JPS5963194A - 発酵法によるｌ−ヒスチジンの製造法 - Google Patents
発酵法によるｌ−ヒスチジンの製造法Info
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- JPS5963194A JPS5963194A JP17166182A JP17166182A JPS5963194A JP S5963194 A JPS5963194 A JP S5963194A JP 17166182 A JP17166182 A JP 17166182A JP 17166182 A JP17166182 A JP 17166182A JP S5963194 A JPS5963194 A JP S5963194A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は発酵法１こよるＩ、−ヒスチジンの製造法ｔこ
関する。
関する。
発酵法ｔこよるし一ヒスチジンの製造θくとしては、ブ
レビバクテリウム属又はコリネバクテリウム属の２−チ
アゾールアラニン（ヒスチジンアナログ）耐性変顕株を
用いる方法（米国特許第３７１６４５３号）、２−チア
ゾールアラニン及びナルファ剤に耐性を有するし一ヒス
チジン生産菌を用いる方法（特公昭５１−２３５９４号
公報）、央ｔこ２−チアゾールアラニン耐性の他ｔこＬ
−アルギニン、Ｌ−メチオニン、Ｌ−フェニルアラニン
、Ｌ−プロリン等のし一アミノ酸又はキサンチン、グア
ニン等を要求する変顕株を使用する方法（特公昭５１−
２３５９３．５１−２４５９４号公報）等が知られてい
る。
レビバクテリウム属又はコリネバクテリウム属の２−チ
アゾールアラニン（ヒスチジンアナログ）耐性変顕株を
用いる方法（米国特許第３７１６４５３号）、２−チア
ゾールアラニン及びナルファ剤に耐性を有するし一ヒス
チジン生産菌を用いる方法（特公昭５１−２３５９４号
公報）、央ｔこ２−チアゾールアラニン耐性の他ｔこＬ
−アルギニン、Ｌ−メチオニン、Ｌ−フェニルアラニン
、Ｌ−プロリン等のし一アミノ酸又はキサンチン、グア
ニン等を要求する変顕株を使用する方法（特公昭５１−
２３５９３．５１−２４５９４号公報）等が知られてい
る。
本発明者等はまり高収率でＬ−ヒスチジンを生産する微
生物を育種することを目的として種々研究した結果、ブ
レビバクテリウム属のし一ヒスチジン生産菌１こサイア
ミンアンタゴニスト耐性を付怪した変異株がより高い収
率でＬ−ヒスチジンを生産することを見い出した。本発
明はこの発見ｔこ基づいて完成されたものである。
生物を育種することを目的として種々研究した結果、ブ
レビバクテリウム属のし一ヒスチジン生産菌１こサイア
ミンアンタゴニスト耐性を付怪した変異株がより高い収
率でＬ−ヒスチジンを生産することを見い出した。本発
明はこの発見ｔこ基づいて完成されたものである。
本発明ｔこ於て用いられる微生物は、ブレビバクテリウ
ム属ｔこ属し、サイアミンアンタゴニストに耐性を有し
、更にＬ−ヒスチジン生＋！６＃こ必要な性′眞、例え
ばヒスチジンアナログ耐性等を有する変異株であり、代
表的なものとして次のような変？４株が挙げられる。
ム属ｔこ属し、サイアミンアンタゴニストに耐性を有し
、更にＬ−ヒスチジン生＋！６＃こ必要な性′眞、例え
ばヒスチジンアナログ耐性等を有する変異株であり、代
表的なものとして次のような変？４株が挙げられる。
ブレビバクテリウム９フラバム ＡＪ Ｉ １８４５
ＦＥＲＭ−Ｐ ６４７Ｂ（２ＴＡ※、トリアゾールカ
ルボキサミド耐性）（※ ２ＴＡ ： ２−チアゾール
アラニノ）本発明でいうサイアミンアンタゴニストとは
、ブレビバクテリウム属微生物の生育を阻害し７、その
生育阻害がサイアミン（塩酸塩）の冷力１目こまって部
分的に又は完全に解除されるような化学を剤をいい、例
えば、ビリサイアミン、オキシキイアミン、トリアゾー
ルカルボキサミド等が挙げられる。
ＦＥＲＭ−Ｐ ６４７Ｂ（２ＴＡ※、トリアゾールカ
ルボキサミド耐性）（※ ２ＴＡ ： ２−チアゾール
アラニノ）本発明でいうサイアミンアンタゴニストとは
、ブレビバクテリウム属微生物の生育を阻害し７、その
生育阻害がサイアミン（塩酸塩）の冷力１目こまって部
分的に又は完全に解除されるような化学を剤をいい、例
えば、ビリサイアミン、オキシキイアミン、トリアゾー
ルカルボキサミド等が挙げられる。
これらサイアミンアンタゴニスト耐性のＬ−ヒスチジン
生産菌に、Ｌ−ヒスチジン生産性を高めるのｔこ有効な
公知の性質、例えばＬ−メチオニ／、■、−トリプトフ
ァン、Ｌ−フェニルアラニン等の要求性、サルファ剤、
５−メチルトリプトファン削性等を付学したし一ヒスチ
ジン生産能の高い菌株を使用することが望ましく本発明
をより一層効果的に実施することができる。
生産菌に、Ｌ−ヒスチジン生産性を高めるのｔこ有効な
公知の性質、例えばＬ−メチオニ／、■、−トリプトフ
ァン、Ｌ−フェニルアラニン等の要求性、サルファ剤、
５−メチルトリプトファン削性等を付学したし一ヒスチ
ジン生産能の高い菌株を使用することが望ましく本発明
をより一層効果的に実施することができる。
本発明で使用する剥異株は、ブレビバクテリウム属ｔこ
属しヒスチジンアナログ剛性のし一ヒスチジン生産菌を
親株とし、これｔこｊ［１常の変異処理、例えば紫外線
照射あるいはＮ−メチル−Ｎ゛−ニトロ−Ｎ−二トロン
グアニジン（以下、ＮＧと略す）、亜硝酸等で新人処理
し、次いで変異処理した菌体を親株が生育できない触の
サイアミンアンタゴニストを含有する寒天平板培地で培
養し、該・１１仮培地上Ｐこ生育するコロニーをサイア
ミンアンタゴニスト耐性株として分離し、Ｌ−ヒスチジ
ン生産能の高いものを選択することｔこよって採取され
る。
属しヒスチジンアナログ剛性のし一ヒスチジン生産菌を
親株とし、これｔこｊ［１常の変異処理、例えば紫外線
照射あるいはＮ−メチル−Ｎ゛−ニトロ−Ｎ−二トロン
グアニジン（以下、ＮＧと略す）、亜硝酸等で新人処理
し、次いで変異処理した菌体を親株が生育できない触の
サイアミンアンタゴニストを含有する寒天平板培地で培
養し、該・１１仮培地上Ｐこ生育するコロニーをサイア
ミンアンタゴニスト耐性株として分離し、Ｌ−ヒスチジ
ン生産能の高いものを選択することｔこよって採取され
る。
上記親株としてはヒスチジンアナログ剛性を有するし一
ヒスチジノ生産菌の他Ｖこ、Ｌ−ヒスチジン生産１こ有
用な公知の性質を有するし一ヒスチジン生ｍ ＦｔＪ
、例えば、し−スレオニン、又はグアニン要求性（特公
昭５１−２４５９４号）、サルファ剤耐性、コバラミン
剛性（特開昭５０−７０５９１号公報）のし−ヒスチジ
ン生産菌等が使用され、具体的１こは次のようなものが
挙げられる。
ヒスチジノ生産菌の他Ｖこ、Ｌ−ヒスチジン生産１こ有
用な公知の性質を有するし一ヒスチジン生ｍ ＦｔＪ
、例えば、し−スレオニン、又はグアニン要求性（特公
昭５１−２４５９４号）、サルファ剤耐性、コバラミン
剛性（特開昭５０−７０５９１号公報）のし−ヒスチジ
ン生産菌等が使用され、具体的１こは次のようなものが
挙げられる。
プレビバクテリウノ、・フラバム Ａ、＋３２２
５ ＡＴＣＣ２１４０６（２’ＦＡ耐性） ブレビバクテリウム・フラバム Ａ、Ｔａ２０５
ＦＥＲＭ−Ｐ２１７０（Ｌ−スレオニン要求性、２Ｔ
Ａ耐性）ＡＴＣＣ２１４０７（２ＴＡ耐性） 再Ｖこ本発明のし一ヒスチジン生産菌は次ｔこ示すよう
な、いわゆるコリネフォームのし一グルタミン酸生産蘭
を親株とし、これｔこヒスチジンアナログ剛性及びサイ
アミンアンタゴニスト耐性を順次又は（モ意の順ｔこイ
」学することによって誘導することができる。
５ ＡＴＣＣ２１４０６（２’ＦＡ耐性） ブレビバクテリウム・フラバム Ａ、Ｔａ２０５
ＦＥＲＭ−Ｐ２１７０（Ｌ−スレオニン要求性、２Ｔ
Ａ耐性）ＡＴＣＣ２１４０７（２ＴＡ耐性） 再Ｖこ本発明のし一ヒスチジン生産菌は次ｔこ示すよう
な、いわゆるコリネフォームのし一グルタミン酸生産蘭
を親株とし、これｔこヒスチジンアナログ剛性及びサイ
アミンアンタゴニスト耐性を順次又は（モ意の順ｔこイ
」学することによって誘導することができる。
ブレビバクテリウム・デイバリカタム Ａ’ｒ
ＣＣ１４０２０ブレビバクテリウム・フラバム
ＡＴＣＣ＋４０６７プレビバクテリウム・ラク
トフェルメンタム ＡＴＣＣ１３８６９ブレビバクテ
リウム・サラカロリティカム ＡＴＣＣ１４０６６
コリネバクテリウム・アセトアシドフィルム ＡＴＣ
Ｃ１３８７０コリネバクテリウム・グルタミクム
ＡＴＣＣ１３０３２以下の実験例Ｖこて、本発明
の変異（′トの具体的誘導力法の１例と４ｊイアミンア
ンタゴニストに対する耐性度を示す。
ＣＣ１４０２０ブレビバクテリウム・フラバム
ＡＴＣＣ＋４０６７プレビバクテリウム・ラク
トフェルメンタム ＡＴＣＣ１３８６９ブレビバクテ
リウム・サラカロリティカム ＡＴＣＣ１４０６６
コリネバクテリウム・アセトアシドフィルム ＡＴＣ
Ｃ１３８７０コリネバクテリウム・グルタミクム
ＡＴＣＣ１３０３２以下の実験例Ｖこて、本発明
の変異（′トの具体的誘導力法の１例と４ｊイアミンア
ンタゴニストに対する耐性度を示す。
実施例
ブレビバクテリウム・フラバムＡＪ３２２５ＡＴＣＣ２
１４０６をイースト・ブイヨン寒天スラント培地で培養
し、生育した菌体を集めて０．０２Ｍリン酸緩衝液（ｐ
）１７．ｏ ） ｔこ背面し、これに２００ ｐｆ／ｍ
ｅ （１） ＮＧを加え室（ｌｉｊにａｏ分間（呆楯し
た。このようにＮＧ変異処理した菌体を同緩衝液で洗滌
した後、トリアゾールカルボキサミドを１０００μｙ／
ｎｅ含む最少寒天プレート上（第１表）１こ塗布、３１
．５ｔｌ”で４日間培養した。
１４０６をイースト・ブイヨン寒天スラント培地で培養
し、生育した菌体を集めて０．０２Ｍリン酸緩衝液（ｐ
）１７．ｏ ） ｔこ背面し、これに２００ ｐｆ／ｍ
ｅ （１） ＮＧを加え室（ｌｉｊにａｏ分間（呆楯し
た。このようにＮＧ変異処理した菌体を同緩衝液で洗滌
した後、トリアゾールカルボキサミドを１０００μｙ／
ｎｅ含む最少寒天プレート上（第１表）１こ塗布、３１
．５ｔｌ”で４日間培養した。
第１表培地組成
グルコース ２０ ２０
ｙ／を硫酸アンモニウム ５２ 尿 素 ２ ２
〃ＫＨ，ＰＯ４１１Ｎ Ｋ、ＨＰＯ４３ ＭｇＳＯ４・７Ｈ２０２’２ ｐｐｍ廿 廿 Ｆ ｅ １Ｍ ｎ イオン ２ 、
２ ｐｆ／ｌビオチン
ｓ ｏ ５ｏ ｚ；サイアミノ
塩「液塩 １００ −
ＮＬ−グルタミン酸 −３４４Ｍ
プレート上に生育したコロニーのうち大きなものを耐性
株として採取した。、このようｔこして得られた耐性株
の中ｔこけ親株より１７−ヒスチジノ生産性の高いもの
が多く見い出された。この内、最も生産能の高い菌株Ａ
Ｊｉ１８４５を撰択した。
ｙ／を硫酸アンモニウム ５２ 尿 素 ２ ２
〃ＫＨ，ＰＯ４１１Ｎ Ｋ、ＨＰＯ４３ ＭｇＳＯ４・７Ｈ２０２’２ ｐｐｍ廿 廿 Ｆ ｅ １Ｍ ｎ イオン ２ 、
２ ｐｆ／ｌビオチン
ｓ ｏ ５ｏ ｚ；サイアミノ
塩「液塩 １００ −
ＮＬ−グルタミン酸 −３４４Ｍ
プレート上に生育したコロニーのうち大きなものを耐性
株として採取した。、このようｔこして得られた耐性株
の中ｔこけ親株より１７−ヒスチジノ生産性の高いもの
が多く見い出された。この内、最も生産能の高い菌株Ａ
Ｊｉ１８４５を撰択した。
次ｔこ、第１表に示す組成の生育測定用ｊｊ〜地に第２
表Ｖこ示す濃度の各薬剤を添加し、夫々試験管ｔこ３、
〇−宛分注し１１０ｔ？で１０分間加熱した。この培地
ｅこ、各試験菌を接種しく接種危１０７個／ｍｌ）、３
１Ｕで４８時間振盪培養した。培養液を水で２６倍に希
釈し、その５６２ ｎｍに於る吸光度を測定して生育度
を求めた。その結果を第２表１こ示す。第２表ンこけ薬
剤無添加時の生育度を１００とする相ヌ・ｊ値を示した
。
表Ｖこ示す濃度の各薬剤を添加し、夫々試験管ｔこ３、
〇−宛分注し１１０ｔ？で１０分間加熱した。この培地
ｅこ、各試験菌を接種しく接種危１０７個／ｍｌ）、３
１Ｕで４８時間振盪培養した。培養液を水で２６倍に希
釈し、その５６２ ｎｍに於る吸光度を測定して生育度
を求めた。その結果を第２表１こ示す。第２表ンこけ薬
剤無添加時の生育度を１００とする相ヌ・ｊ値を示した
。
第２表 薬剤耐性度
薬 剤 菌 株 （ΔＴＡ）
これらの微生物を培養する培地は炭素源、窒素源、無機
イオン及び更に必要「こ応じ、その他の有機微暇栄養素
を含有する通常の培地である。
これらの微生物を培養する培地は炭素源、窒素源、無機
イオン及び更に必要「こ応じ、その他の有機微暇栄養素
を含有する通常の培地である。
炭素源としてはグルコース、シュークロース、澱粉加水
分解物などの炭水化物、酢酸等の有機酸等その能が使用
できる。
分解物などの炭水化物、酢酸等の有機酸等その能が使用
できる。
窒素曲としてはアンモニアガス、アンモニア水、アンモ
ニウム塩、尿素等が好適である。
ニウム塩、尿素等が好適である。
培養は好気的条件が望ましく、培徨の間培地のｐＨを４
／、Ｃいし８に、温度を２５ないし３７ｔｒｔｎ調節し
つつ行えばより好ましい結果が得られる。
／、Ｃいし８に、温度を２５ないし３７ｔｒｔｎ調節し
つつ行えばより好ましい結果が得られる。
かくして、１ないし７日間も培養すれば培地中１こ著鼠
のし一ヒスチジンが生成蓄積される。
のし一ヒスチジンが生成蓄積される。
Ｊにイ（液よりＬ−ヒスチジンを採取する方法はイオン
交換樹脂１こよる方法等通常の方法で採取できろ。
交換樹脂１こよる方法等通常の方法で採取できろ。
以下、実施例にて説明する。
実施例
グルコースｌｏ ｙ ／ｄｅ、 硫酸アンモニウム４．
５ｆ ／ｄｅ、 ＫＨ，ＰＯ４０，２ｆ／ｄｅ、 Ｍｇ
ＳＯ４・７Ｈ９Ｕｏ、１ｙ／ｒｔ１！、ＦｅおよびＭｎ
イオン各２ｐｐｍ１ ビオチン１００γ／１１サイアミ
ン塩酸塩１００γ／ｌ、酢酸アンモニウム＋ 、ｏ ｙ
／ｄｅ、 大豆夕／バク塩酸加水分解液７０ ｍｇ／
ｄｉ （総窒素として）ＣａＣＯ３５ｆ ／ ｄｌ！
を含みｐＨ７，０ｔｎ調節した培地ヲ５００ 献容フラ
スコに２０ ｍｅ 充分注し、＋１０Ｃで１０分間加熱
殺し、別ｆ、ｐ加熱殺菌した炭酸カル７ウム１．Ｏｆを
間冷した。この培地ｔこ、あらかじめブイヨン寒天スラ
ント上に生育させた各試験菌を後行し、３１Ｃにて７２
時間振盪培養した。
５ｆ ／ｄｅ、 ＫＨ，ＰＯ４０，２ｆ／ｄｅ、 Ｍｇ
ＳＯ４・７Ｈ９Ｕｏ、１ｙ／ｒｔ１！、ＦｅおよびＭｎ
イオン各２ｐｐｍ１ ビオチン１００γ／１１サイアミ
ン塩酸塩１００γ／ｌ、酢酸アンモニウム＋ 、ｏ ｙ
／ｄｅ、 大豆夕／バク塩酸加水分解液７０ ｍｇ／
ｄｉ （総窒素として）ＣａＣＯ３５ｆ ／ ｄｌ！
を含みｐＨ７，０ｔｎ調節した培地ヲ５００ 献容フラ
スコに２０ ｍｅ 充分注し、＋１０Ｃで１０分間加熱
殺し、別ｆ、ｐ加熱殺菌した炭酸カル７ウム１．Ｏｆを
間冷した。この培地ｔこ、あらかじめブイヨン寒天スラ
ント上に生育させた各試験菌を後行し、３１Ｃにて７２
時間振盪培養した。
ヒスチジンの定量をＫａｐｅｉｔｅｒ −Ａｌｄｅｒ
反応（Ｂｉｏｃｈｅｍ、 Ｚ、’、 ２ ６
４ 、 １ ３ １ （１９３３） ）
を用いる比色法ｔこよって行った。培養液中へのＬ
−ヒスチジンの蓄積（ｂ−は第３表１こ示すとおりであ
る１、第３表 し−ヒスチジンの蓄積ＩＶ４−。
反応（Ｂｉｏｃｈｅｍ、 Ｚ、’、 ２ ６
４ 、 １ ３ １ （１９３３） ）
を用いる比色法ｔこよって行った。培養液中へのＬ
−ヒスチジンの蓄積（ｂ−は第３表１こ示すとおりであ
る１、第３表 し−ヒスチジンの蓄積ＩＶ４−。
３２２５ ０．５１ １
８ ４ ５ １．３１
１８４６ １．５１ １
８ ４ ７ １．３１
１ ８ ４ ８ １．４
フレヒバクテリウム・フラバムＡＪ１１８４６を１様の
方法で培盲し、培養液を遠心分ｌ！Ｉｌシて不／６：性
物質を除去し、得られた上清１．Ｏｔを強酸性陽イオン
交換樹脂゛′ダイヤイオン ５Ｋ−ＩＢ”（ＮＨ，型）
１こ連灯してＬ−ヒスチジンを吸着させｔこ。ｉ＃ｆ
ｌｌｉを水洗後２Ｎ−アンモニア水ンこてｍ出し、つい
で溶出液を濃縮しこれよりし一ヒスチジンのわ１結晶１
２．５ Ｆを得た。
８ ４ ５ １．３１
１８４６ １．５１ １
８ ４ ７ １．３１
１ ８ ４ ８ １．４
フレヒバクテリウム・フラバムＡＪ１１８４６を１様の
方法で培盲し、培養液を遠心分ｌ！Ｉｌシて不／６：性
物質を除去し、得られた上清１．Ｏｔを強酸性陽イオン
交換樹脂゛′ダイヤイオン ５Ｋ−ＩＢ”（ＮＨ，型）
１こ連灯してＬ−ヒスチジンを吸着させｔこ。ｉ＃ｆ
ｌｌｉを水洗後２Ｎ−アンモニア水ンこてｍ出し、つい
で溶出液を濃縮しこれよりし一ヒスチジンのわ１結晶１
２．５ Ｆを得た。
特許出願人 味の素株式会社
Claims (1)
- ブレビバクテリウム属に属しサイアミンアンタゴニスト
ｔこ耐性を有し、かつＬ−ヒスチジン生産能を有する特
生物を培養して培養液中ｔこＬ−ヒスチジンを生成・著
積せしめ、これを採取することを特徴とする発酵法ｔこ
よるＬ−ヒスチジンの製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP17166182A JPS5963194A (ja) | 1982-09-30 | 1982-09-30 | 発酵法によるｌ−ヒスチジンの製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP17166182A JPS5963194A (ja) | 1982-09-30 | 1982-09-30 | 発酵法によるｌ−ヒスチジンの製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5963194A true JPS5963194A (ja) | 1984-04-10 |
| JPH0218838B2 JPH0218838B2 (ja) | 1990-04-26 |
Family
ID=15927348
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP17166182A Granted JPS5963194A (ja) | 1982-09-30 | 1982-09-30 | 発酵法によるｌ−ヒスチジンの製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5963194A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP2818554A2 (en) | 2004-10-07 | 2014-12-31 | Ajinomoto Co., Inc. | Method for producing a basic substance |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2496867C2 (ru) | 2011-04-25 | 2013-10-27 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО "АГРИ") | Способ получения l-аминокислоты семейства глутамата с использованием коринеформной бактерии |
-
1982
- 1982-09-30 JP JP17166182A patent/JPS5963194A/ja active Granted
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP2818554A2 (en) | 2004-10-07 | 2014-12-31 | Ajinomoto Co., Inc. | Method for producing a basic substance |
| EP2818555A2 (en) | 2004-10-07 | 2014-12-31 | Ajinomoto Co., Inc. | Method for producing a basic substance |
| EP2818556A2 (en) | 2004-10-07 | 2014-12-31 | Ajinomoto Co., Inc. | Method for producing a basic substance |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0218838B2 (ja) | 1990-04-26 |
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