JPS62181791A - 発酵法によるｌ−アミノ酸又は５′−イノシン酸の製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （ｆｆｒ業上の利用分野） 本発明は調味料、飼料添加剤、医薬等に広く利用さンし
ているし一グルタミン酸、Ｌ−リジン、Ｌ−グルタミン
、Ｌ−アルギニン、Ｌ−７エニルアラニン、Ｌ−スレオ
ニン、Ｌ−インロイシン、Ｌ−ヒスチジン、Ｌ　−バリ
ン、Ｌ−セリン、Ｌ−オルニチン、Ｌ−シトルリン、Ｌ
−チロシン、Ｌ−トリブトファンおよびＬ−ロイシンな
どのし一アミノ酸及び５′−イノシン看の製造法に関す
るものである。

（従来の技術） 従来よりブレビバクテリウム属、コリネバクテリウム属
、バチルス属又はエセリヒア属等妃属する微生物により
、Ｌ−グルタミン酸、Ｌ−リジン。

Ｌ−グルタミン、Ｌ−アルギニン、Ｌ−フェニルアラニ
ン、Ｌ−スレオニン、Ｌ−インロイシン、Ｌ−ヒスチジ
ン、Ｌ−ｆロリン、Ｌ−バリン、Ｌ−セリン、Ｌ−オル
ニチン、Ｌ−シトルリン、Ｌ−チロシン、Ｌ−トリブト
ファンおよびＬ−ロイシンなどのＬ−アミノ酸及び５′
−イノシン酸は発酵法により工業的に生産されている。

（発明が解決しようとする問題点） 製造する方法を開発すること忙ある。

（問題点を解決するための半没） ねた結果、Ｎ−メチルグリシンＣ以下ＭＧと略す、）。

Ｎ、Ｎ−ジメチルグリシン（以下ＤＭＧと略す、）、Ｎ
、Ｎ、Ｎ　−トリメチルグリシン（以下ＴＭＧと略す、
）及び〔２−ハイドロキシエチル〕トリメチルアンモニ
ウム（以下ＨＥＴＭＡと略す、）より成る群より選ばれ
る物質の１種以上を培地中に一定量添加して発酵するこ
と忙より目的とするＬ−アミノ酸又は核酸の収量が著し
く向上することを見出した。

本発明は工業的に従来以上に安価なＬ−アミノ酸又は５
′−イノシン酸を生産する方法を開発すべく。

する微生物をＭＧ％ＤＭＧ、　ＴＭＧ及びＨＥＴＭＡよ
り成る−１（）ＹＸはＷの喪這法に関する〇 ＭＧ、　ＤＭＧ　、　ＴＭＧ　、　１１ＥＴＭＡ　ｔ−
糖質その他の主炭素源ない・わずかにシュードモナス属
もしくはエシェリヒア属を用いてＬ−ベタインからのＬ
−セリン発酵（特開昭４９−１３４８９０　）及びシュ
ードモナス属を用いてコリンを主炭素源としたＬ−アミ
ノ酸発酵（特開昭５２−１５４５９４　）が知られてい
る。

しかしながらベタインからのＬ−セリン発酵ではベタイ
ンがセリンの前駆体として特定された４のであり、かつ
このことから広くＬ−アミノ酸発酵の収量増加を容易に
類推させるものではない。

ま几コリンを主炭素源とするＬ−アミノ酸発酵において
もコリン母唯−の主炭素源としたものでありＬ−アミノ
酸の収量も微量である。

一方、ビート糖の製造工程で副生されるステラフェン廃
液を一定量培地に添加する事によりＬ−アミノ酸又は５
′−イノシン酸の発酵収率が著るしく向上する事が知ら
れている（特開昭５９−２１６５９３）が、ステラフェ
ン廃液を添加した培地に於てもＭＧ、ＤＭＧ％ＴＭＧ　
、ＨＥＴＭＡを更に添加し、Ｌ−アミノ酸又は５′−イ
ノシン酸の発酵収量を着るしく向収量増加が可能となる
新規な発見にもとづいておりかつ工業的にも極めて有用
性が高い。

本発明でいうＬ−アミノ酸とはＬ−グルタミン酸、Ｌ−
リジン、Ｌ−グルタミン、Ｌ−アルギニン、Ｌ−フェニ
ルアラニン、Ｌ−スレオニン、Ｌ−インロイシン、Ｌ−
ヒスチジン、Ｌ−グロリン。

Ｌ−バリン、Ｌ−セリン、Ｌ−オルニチン、Ｌ−シトル
リン、Ｌ−チロシン、Ｌ−トリプトファンおよびＬ−ロ
イシンなどのＬ−アミノ酸であり。

ここに例示したＬ−アミノ酸以外でも発酵法により生産
されるＬ−アミノ酸であれば本発明の方法は使用可能で
ある〇 本発明で用いるＬ−アミノ酸生産菌は上記のＬ−アミノ
酸を生産する微生物であればどのような微生物を用いて
もよい。

具体的忙は Ｉ　Ｌ−グルタミン酸生産菌 ブレビバクテリウム・デイパリカタム　　　ＡＴＣＣ１
４０２Ｑブレビバクテリウム・フラバム　　　　　ＡＴ
ＣＣ１４０６７プレｆｉ４クテリウム・ラクトフェルメ
ンタム　ＡＴＣＣ１３８６９ブレビバクテリウム・ラク
トフェルメンタムＦＥＲＭ−Ｐ　５０１２（ＡＪ　１１
３６０）コリネバクテリウム・アセトアシ〜イラム　Ａ
ＴＣＣ１３８７０コリネバクテリウム・グルタミクム　
　　ＡＴＣＣ１３０３２２Ｌ−リジン生産菌 ブレビバクテリウム・フラバム　　　　　　Ｆ震−Ｉ”
　１７０８（ＡＪ　３４１９）コリネバクテリウム・グ
ルタミクム　　　　ＦＩＲＭ−Ｐ　１７０９（ＡＪ　３
４２０）ブレビバクテリウム・ラクトフェルメンタムＦ
ＥＲＭ−Ｐ　１７１２（ＡＪ　３４２５）ブレビバクテ
リウム・ラクトフェルメンタムＦ’ＥＲＭ−Ｐ　１７１
１（ＡＪ　３４２４）ブレビバクテリウム・フラバム　
　　　　　ＡＴＣＣ２１４７５コリネバクテリウム・グ
ルタミクム　　　　ＡＴＣＣ１２４１６コリネパクテリ
ウム・アセトグルタミクム　ＡＴＣＣ１１４７２（ＡＪ
　１１０９４）３　Ｌ−グルタミン生産菌 ブレビバクテリウム・フラバム　　　　　　ＦＥＲＭ　
Ｐ−４２７２コリネバクテリウム・アセトアシドフィラ
ムＡＴＣＣ１３８７０ミクｒｙ９ｆリウム・７ラパム　
　　　　　ＦＥＲＭ　ＢＰ−６６４（ＡＪ　３６８４／
）プレピノぐクテリウム・フラバム　　　　　　ＦＥＲ
Ｍ　ＢＰ−６６２（ＡＪ　３４０９）コリネバクテリウ
ム・アセトアシドブイラム　　ＡＴＣＣ１３８７０コリ
ネバクテリウム・グルタミクム　　　　ＦＥＲＭ　ＢＰ
−６６３（ＡＪ　３６８２）４　Ｌ−アルギニン生産菌 ｆＬ／ビパクテリウム・フラバム　　　　　　Ｆ’ＥＲ
Ｍ　Ｐ−４９４８コリネバクテリウム・グルタミクム　
　　　ＦＥＲＭ−Ｐ　７２７４（ＡＪ　１２０９３）ブ
レビバクテリウム−フラバム　　　　　旧Ｌ　１２２３
５（ＡＪ　１１３３７）コリネバクテリウム・アセトア
シドブイラムＮＲＲＬ　１２２３９（ＡＪ　１１３４２
）５　Ｌ−フェニルアラニン生産菌 ブレビバクテリウム・ラクトフェルメンタムＦＥＢＭ　
Ｐ−５４１７プレビパクテリウム・フラバム　　　　　
　ＦＥＲＭ−Ｐ　１９１６（ＡＪ　３４３９）コリネバ
クテリウム・グルタミクム　　　　ＡＴＣＣ２１６７０
アルスロバクタ−・チトレウス　　　　　　ＡＴＣＣ２
１４２２コリネバクテリウム・アセトアシドブイラムＡ
ＴＣＣ２１４２１ブレビバクテリウム・フラブム　　　
　　　ＮＲＲＬ　１２２６９（ＡＪ　１１４７６）コリ
ネバクテリウム・グルタミクム　　　　ＡＴＣＣ２１６
７０６Ｌ−スレオニン生産菌 エセリヒア・コリ　　　　　　　　　　　　　ＦＥＲＭ
−Ｐ　４９００（ＡＪ　　１１３３４）コリネバクテリ
ウム・グルタミクム　　　　Ｆ’ＥＲＭ−Ｐ　５８３５
（ＡＪ　１１６５４）ブレビバクテリウム・フラバム　
　　　　　ＦＥＲＭ−Ｐ　・１１６４（ＡＪ　１１１７
２）ブレビバクテリウム・ラクトフェルメンタムＦＥＲ
Ｍ−Ｐ　４１８０（ＡＪ　　１１１７８）ブレビバクテ
リウム・フラバム　　　　　　ＡＴＣＣ２１２６９コリ
ネバクテリウム・アセトアシドブイラムＡＴＣＣ２１２
７０７Ｌ−イソロイシン生産菌 ブレビバクテリウム・フラバム　　　　　　ＦＥＲＭ　
Ｐ−３６７２ブレビバクテリウム・ラクトフェルメンタ
ムＦＥＲＡ←Ｐ　４１９２（ＡＪ　１１１９０）コリネ
バクテリウム・グルタミクム　　　　ＦＥＲＭ　ＢＰ−
７５６（ＡＪ　１２１５０）コリネバクテリウム・グル
タミクム　　　　ＦＥＲＭ　ＢＰ−７５７（ＡＪ　１２
１５１）コリネバクテリウム・グルタミクム　　　　Ｆ
’ＥＲＭ　ＢＰ−７５８（ＡＪ　　１２１５３）ブレビ
バクテリウム・フラバム　　　　　　ＦＥＲＭ　ＢＰ−
７５９（ＡＪ　１２１４９）ブレビバクテリウム・フラ
バム　　　　　　ＦＥＲＭ　１３Ｐ−７６０（ＡＪ　１
２１５２）８　Ｌ−ヒスチジン生産菌 ブレビバクテリウム・フラバム　　　　　　ＦＥｌ？Ｍ
　Ｐ−２３１７プレピパクテリウム・ラクトフェルメン
タムＦＥｌ？Ｍ−Ｐ　１５６５（ＡＪ　３３８６）コリ
ネバクテリウム・グルタミクム　　　　ＡＴＣＣ１４２
９７エ）レ ブレビバクテリウム・ラクトフェルメンタムＡＴＣＣ２
１０８６コリネバクテリウム・アセトアシドブイラムＡ
ＴＣＣ２１４０７プレピパクテリウム・フラバム　　　
　　ＡＴＣＣ２１４０６（ＡＪ　３２２５）バチルス・
ズブチリス　　　　　　　　　　ＦＥＲＩＩ／Ｉ　ＢＰ
−２１７（ＡＪ　１１７３３）アルスロバクタ−・チト
レウス　　　　　　ＡＴＣＣ２１４１２９Ｌ−バリン生
産菌 ブレビバクテリウム・ラクトフェルメンタムＦＥＢＭ　
Ｐ−１８４５ブレビバクテリウム・フラバム　　　　　
　４止Ｍ−Ｐ　５１２（ＡＪ　３２７６）コリネバクテ
リウム・ラクトフェルメンタムＦＥＲＭ−Ｐ　１９６８
（ＡＪ　３４５５）エセリヒア・コリ　　　　　　　　
　　　　　ＮＲＲＬ　１２２８５（ＡＪ　１１４７０）
１０　　Ｌ−セリン生産菌 コリネバクテリウム・グリシノフィラム　　ＶＥＲＭ　
Ｐ−１６８７フレヒハクテリウム・ラクトフェルメンタ
ムＦＥＲＭ−Ｐ　１３７１（ＡＪ　３３６０）シュード
モナス・メガルブエッセンス　　　ＦＥＲＭ−Ｐ　４５
３２（ＡＪ　１１２６２）１１　　Ｌ−オルニチン生産
菌 プレヒハクテリウム・ラクトフェルメンタムＦＥＲＭ−
Ｐ　５９３６（ＡＪ　　１１６７８）コリネバクテリウ
ム・グルタミクム　　　　Ｆ’ＥＲＭ−Ｐ　５６４４（
ＡＪ　１１５８９）アルスロバクタ−・チトレウス　　
　　　　ＡＴＣＣ２１０４０コリネバクテリウム・グル
タミクム　　　　ＡＴＣＣ１３２３２１２Ｌ−シトルリ
ン生産菌 コリネバクテリウム・グルタミクム　　　　ＦＥＲＭ−
Ｐ　５６４３（ＡＪ　１１５８８）ブレビバクテリウム
・フラバム　　　　　ＦＥＲＭ−Ｐ　１６４５（ＡＪ　
３４０８）１３　　Ｌ−チロシン生産菌 コリネバクテリウム・グルタミクム　　　　ＦＥＲＭ−
Ｐ　５８３６（ＡＪ　１１６５５）ブレビバクテリウム
・フラバム　　　　　　ＦＥＲＭ−Ｐ　７９１４（ＡＪ
　１２１８０）バチルス・ズブチリス　　　　　　　　
　　口止Ｍ−Ｐ　６７５８（ＡＪ　１１９６８）１４Ｌ
−）リプトファン生産菌 バチルス・ズブチリス　　　　　　　　　　ＦＥＲＭ−
Ｐ　５２８６（ＡＪ　１１．１８３）ブレビバクテリウ
ム・ラクトフェルメンタムＦＥＲＭ−Ｐ　７１２７（Ａ
Ｊ　１２０４４）ブレビバクテリウム・フラバム　　　
　　　ＦＥＲＭ　Ｐ−２５５１フリネパクテリウム・グ
ルタミクム　　　　ＦＥＲＭ−Ｐ　７１２８（ＡＪ　１
２０５２）ブレビバクテリウム・フラバム　　　　　　
ＡＴＣＣ’　　２１４２７プレビパクテリウＡ−７ラパ
ム　　　　　　Ｆ’ＥＲＭ　ＢＰ−１１４（ＡＪ　１１
６６７）バチルス・ズプチルス　　　　　　　　　　Ｆ
ＥＲＭ　ＢＰ−２０８（ＡＪ　１１７１３）ブレビバク
テリウム・フラバム　　　　　　ＦＥＲＭ　ＢＰ−４７
５（ＡＪ　１２０２２）コリネバクテリウム・グルタミ
クム　　　　ＦＥＲＭ　ＢＰ−４７８（ＡＪ　１２１１
８）バチルス・ズプチルス　　　　　　　　　　ＦＥＲ
Ｍ　ＢＰ−２００（ＡＪ　１１７０９）１５　　Ｌ−ロ
イシン生産菌 ブレビバクテリウム・ラクトフェルメンタムＦＦＩ：Ｒ
Ｍ−Ｐ　１７６９（ＡＪ　３４２７）プレピノ９クテリ
ウム・フラバム　　　　　　ＦＥＲＭ−Ｐ　４２０（Ａ
Ｊ　３２２６）コリネバクテリウム・グルタミクム　　
　　Ｆｍ−Ｐ　１９６６（ＡＪ　３４５３）ブレビバク
テリウム・フラバム　　　　　　ＦＥＲＭ　ＢＰ−７５
５（ＡＪ　３６８６）コリネバクテリウム・グルタミク
ム　　　　Ｉｉ’ＥＲＭ　ＢＰ−７５６（ＡＪ　１２１
５０）コリネバクテリウム・グルタミクム　　　　ＦＥ
ＲＭ　ＢＰ−７５７（ＡＪ　１２１５１）ブレビバクテ
リウム・フラバム　　　　　　ＦＥ購ＢＰ−７５９（Ａ
Ｊ　１２１４９）１６５′−イノシン嘴生産菌 コリネバクテリウム・ＳＰ　　　　　　　　　Ｆ’ＥＲ
Ｍ−Ｐ　４９７３（ＡＪ　１１３５２）コリネバクテリ
ウム・エキイ　　　　　　　Ｆ’ＥＲＭ−Ｐ　４９６８
（ＡＪ　１１３４７）Ｉ　　　　　　　　　　　　　ル
ＲＭ−Ｐ　４９７１（ＡＪ　１１３５０）＃　　　　　
　　　　　　　　　ＦＥＲＭ−Ｐ　５３９７（ＡＪ　１
１５５２）ｓ　　　　　　　　　　　　　　Ｆ’ＥＲＭ
−Ｐ　６２６１（ＡＪ　１１７４９）Ｉ　　　　　　　
　　　　　　　ＦＥＲＭ−Ｐ　６２５５（ＡＪ　１１７
４３）ブレビバクテリウム・アンモニアゲネス　ＦＥＲ
Ｍ−Ｐ　７９４９（ＡＪ　１２１９２）パネルス・ズブ
チリス　　　　　　　　　　ＦＥＲＭ−Ｐ　４１２０（
ＡＪ　１１１５８）ｐ　　　　　　　　　　　　　　　
　Ｆ’ＥＲＭ−Ｐ　６４４１（ＡＪ　１１８２０）など
が使用される。

本発明で使用するＬ−アミノ酸又は５′−イノシン酸生
産基本培地としては、従来より知られているＬ−アミノ
酸生産菌に適し念し−アミノ酷生産培地及び５′−イノ
シン酸発酵に適し念生産培地が使用可能である。

さらに詳しくは、主炭素源にはグルコース、シュークロ
ース、フラクトース、マルトースや甘蔗糖蜜、甘蔗廃糖
蜜、てん菜糖蜜、てん菜廃糖蚕。

粗糖、殿粉糖化液、セルロース糖化液、・！ルプ糖化液
、乳糖などの糖質類、酢酸、ｆロピオン酸、安息香酸な
どの脂肪酸類、ピルビン酸、クエン酸。

コハク酸、フマール酸、リンが酸などの有機酸類。

エチルアルコール、ブチルアルコールなどのアルコール
類等を単独ｋ又は混合して使用できるＯ更には目的のＬ
−アミノ酸の生合成系路の前駆物質等を用いることもで
きる０ 窒素源としては硫酸アンモニウム、塩化アンモニウム、
硝酸アンモニウム、酢酸アンモニウムのようなアンモニ
ウム塩、尿素、液体アンモニア。

アンモニア水、更忙は有機窒素化合物であるアミノ酸混
合物、コーンスチープリカー、カデミノ實。

酵母エキス、大豆加水分解物、（プトン、肉エキス等を
使用することができる０無機塩としてはリン酸塩、マグ
ネシウム塩、カルシウム塩、カリ塩。

ナトリウム塩、鉄塩、マンがン塩、亜鉛塩、銅塩その他
の微量金属を必要に応じて使用する。又。

必要に応じ、ビオチン、サイアミン等のビタミン類を使
用する。

本発明における培養条件は通常のアミノ酸発酵における
条件と同じであり、目的とするＬ−アミノ酸や使用する
菌株間で多少異なるが培養温度は２０−４０℃が良く、
と（ｌｃ２８〜３７℃が好適である０−１は培養中、中
性付近にコントロールする方が良好な結果金得る・通気
、攪拌、振とり培養などの好気的条件で培養する培養期
間は通常１−７日間であるが、さらに連続培養等により
期間を延長することができる０各アミノ酸発酵液からの
各々のアミノ酸の単離方法はイオン交換樹脂処理法、そ
の他の既知の方法により回収される。

本発明に使用するＭＧ　（ＣＨ，ＮＨＣＨ２Ｃ００Ｈ）
、ＤＭＧ（（ＣＨ，）２ＮＣＨ２０００Ｂ）　、　ＴＭ
Ｇ（（ＣＨ５）、Ｎ”ＣＨ３ＣＯＯ−又は（ＯＨ）−（
ＣＩ、）、Ｎ”ＣＨ２Ｃ００Ｈ）、ＨＫＴＭＡ（（ＯＨ
）−（Ｃ）Ｉ、）〆１２ＣＨ２０Ｈ）、及びこれらの塩
類は、試薬としてはもちろん工業生産物として安価大量
に入手可能である＠ＭＧはデルフ７７として知られ天然
にはハナゴケなど忙存在し、合成ではメチルアミンとク
ロル酢酸トの縮合反応やストレッカーのアミノ酸合成法
などによって得られる。ＤＭＧはクロル酢酸にツメチル
アミンを作用させて得られる。ＴＭＧはグリシンベタイ
ンとして知られ、サトクダイコン、綿実等に多く含有し
、クロル酢酸とトリメチルアミンの反応などｋよって合
成される・ＨＥＴＭＡはコリンとしてＫよって合成され
る＠又、これらの種々な塩類は商品化されており１例え
ばＭＧＫついてはす）　ＩＪウム塩、ＤＭＧ及びＴＭＧ
については塩酸塩、ＨＥＴＭＡＫりいては塩化塩、酒石
酸水素塩、クエン酸二水素塩、グルフン酸塩等が工業的
に生産されており容易に入手できる。

本発明で用いる鵬、　ＤＭＧ、ＴＭＧ又はＩＩＥＴＭＡ
はそれらの塩類であっても良いしこれらを含む天然物で
代替してもよい０ 本発明でのＭＯ，ＤＭＧ、　ＴＭＧ　、　ＨＥＴＭＡの
使用方法はこれらを単ａＫあるいは二種以上組合せて発
酵培地中に０．０１から５％の濃度、好ましくは０．０
５から２．０チのａ［Ｋなるように含有せしめれば良い
。これらの発酵培地中への添加方法はあらかじめ発酵培
地に加えて培養を開始しても良いし、培養中Ｋ１回にあ
るいは数回にわけであるいは連続的建途中添加しても良
い。又種母培養に加えておいて主発酵へ持込ませても良
い〇 実施例１ クル：Ｆ　　２３　ｇ／ｄｌ　　ＫＨ２ＰＯ４０，１９
／ｄｉ　ｙｔｉｘｓｏ４−’ｎ＋２゜Ｏ，０５ｇ／ｄｅ
　　ＦｅＳＯ４”７Ｈ２０１１Ｑ／ｄｔ　　ＭｎＳＯ４
”４Ｈ２０１１１９／ｄｌ尿素０．５　ｇ／ｉｔ　　ピ
オチン３０μＩ／ｌサイアミン塩酸塩１００μＥｌ／ｌ
　　大豆蛋白加水分解液を全窒素として５０ＩＩＴｇ／
ｄｔを含む種母培地をｐｉ（７，５に調節し、その５０
１１Ｉｔを５００　ｍｌ容肩付フラスコに入れ加熱殺菌
した。ブレビバクテリウム・ラクトフェルメンタムＡＴ
ＣＣ１３８６９を接種し３１．５℃に保ちつつ１６時間
振盪培養した。

一方グルタミン酸生産培地としてケーンモラセス（糖と
して）　８．０ｇ／ｄｔ　、　ＫＨ２ＰＯ４０，２Ｊｉ
ｌ／＃　。

ＭｇＳＯ４・７Ｈ２００，１９／ｄｌ　−ＦｅＳＯ４・
４Ｈ２０２，０謹ｔ、゛サイアミン・塩酸塩２００μｍ
１／ｌ　、大豆蛋白加水分解物（全窒素として）　３０
１１９７ｄｔ　、ステラフェン濃縮廃液（総窒素濃度２
．０９７ｄｌ）を総窒素濃度として２００〜７１１１、
更にＴＭＧ　ｉ　０．０１〜５ｆｉ／ｄｌ含む培地ｔｖ
４堰し、ｐＨ７，８に調節後１．０１容の小型発酵槽に
夫々２８５Ｉｎ／ずつ分注し、１１５℃、１０分間加熱
、滅菌した〇 夫々の培地に予め培養して得られた種培養液１５１１１
／ずつを接種し３１．５℃で通気攪拌培養を開始した０
培養期間中、培養液のｐ１４をアンモニアガスにてｐＨ
７，８に保つと共に予め殺菌したケーンモラセスを添加
して培養液中の糖をシュークロース換算で２〜４；ｌ／
ｄｌＦｃ調整しつつ培養した０又培養途中適当な時期に
ポリオキシエテレンソルビタンモノノやルミテートを添
加し培養を行い、糖の消費速度が実質的に低下した時点
で糖の供給を停止し。

２８〜４０時間で培養を終了し九〇夫々の培養液中のＬ
−グルタミン酸の蓄積量を常法により測定し、対糖収率
を求めた◎その結果ｆｔ！１表に示す。

ｘｉ表 ０　　　　　　　　　１０．０　９／ｄｌ　　　　　　
　５２．０　　　　係０．０１　　　　　　　　　１０
．３　　　　　　　　　　　　　５２．５０．０５　　
　　　　　　　１０．５　　　　　　　　　　　　　５
３．１０．２５　　　　　　　　　１０．７　　　　　
　　　　　　　　５３．６０．５　　　　　　　　　　
１０．７　　　　　　　　　　　　５４．７１．０　　
　　　　　　　　１０．８　　　　　　　　　　　　　
５５．５２．０　　　　　　　　　　１０．５　　　　
　　　　　　　　５３．８３．０　　　　　　　　　　
１０．５　　　　　　　　　　　　　５２．５５．０　
　　　　　　　　　　９．８　　　　　　　　　　　　
５１．５実施例２ グ／ｌ／　：Ｆ−ス５１／ｄｔ　、　　（ＮＨ４）２Ｓ
０４０．２９７ｄｔ、尿素０、２　’ｊ／ｄｔ％　ＫＨ
２ＰＯ４０，１５９／ｄｌ　、　　ＭｇＳＯ４・７Ｈ２
００、０４ｊｊ／ｄｉ　、　Ｆ’ｅＳＯ４４Ｈ２０１’
９７ｄｌ　、サイアミンＨＣ２１００μｍ１／ｌ　、ピ
オチン３μ９／ｌ、大豆蛋白酸分解液を総窒素量として
３０す／１１ｇを含む種母培地ｔ　ｐＨ７，０に調節し
その５０ｒＲｔを５００　ａｌｌｌｌ性フラスコに入れ
加熱殺菌した＠これにグルタミン発酵菌ブレビバクテリ
ウム・フラバム　ＦＥＲＭ　ＢＰ−６６２を接種し、３
１．５℃に保ちつつ１２時間振盪した。

一方、グルコース１３９／ｄ１．　ＫＨ２ＰＯ４０，２
５，！ｉｌ／ｄｌ　、　　ＭｇＳＯ４拳７Ｈ２０４０１
１ｇ７ｄｌ　、　　　（Ｎｌ（４）２Ｓｏ４１．５　ｆ
ｉ／ｄｉ、Ｎａ２８０４　Ｌ５１１／ｄｉ、　ＦｅＳＯ
４−７Ｈ２００，１１１Ｑ／ｄｉ、ピオチン３．５μｇ
／ｌ　、サイアミン・塩酸塩３５０μ９／ｌ。

ビート製糖工場のステラフェン法工程で副生される濃縮
ステラフェン廃液を総窒素濃度として５００ダ／ｄｌ　
４ＣＨＩＴ凧を０．０１〜５１／ｒｉｇ添加し、−６，
５に調整した培地２８５　ｌｉｔを１１！容シャーファ
ーメンタ−に入れ殺菌した。これ忙上記種母培養ｔＬを
それぞれ１５＊／ずつ接種した。培養は３１．５℃にて
闇、ガスにてｐｉ４６．５ないし６．ＯＫ保持しつつ通
気攪拌下に残グルコースが０．５１／ｄｔになる迄行っ
たＯ Ｌ−グルタミンの対糖重量収率は第２表に示す通りであ
る。

第２表 ＯＣ７１ｄｔ　　　　　　４１．、ＯＳｏ、０１　　　
　　　　　　　４１．５０．０５　　　　　　　　　　
４２．００．２５　　　　　　　　　　４２．５０．５
　　　　　　　　　　　４３．０１．０　　　　　　　
　　　　４４．０２．０　　　　　　　　　　　４３．
０３．０　　　　　　　　　　　４１．５５．８　　　
　　　　　　　　４０．０１１ＥＴＭＡ　Ｏ，０１〜３
ｊｉ／ｄｉ添加した区で対照より収率が向上していたａ
　）ＩＥＴＭＡ　１．０１　／ｄｊ添加した区の培養液
ｌｌを得、これより遠心分離にて菌体を除き。

上清を強酸性イオン交換樹脂「ダイヤイオ／」５Ｋ−Ｉ
　Ｂ　（Ｎｉ１４＋型）Ｋ通過させ友。、樹脂を水洗後
２　Ｎ　−ＮＨ４ＯＨにて溶出し、次いで溶出ｗＬを濃
縮し、これよりＬ−グルタミンの粗結晶３５．９ＪＦｔ
得たＯ実施例３ グルコース１３９７ｄｉ、　　（ＮＨ４）、５ｏ４６　
Ｉｉ／ｌｉｔ。

ＫＨ２ＰＯ４０，１９／ｄｉ　、　ＭｇＳＯ４・７１１
２００．０４１／ｄｔ、ＦａＳＯ４’７Ｈ２０１ｍＱ／
ｄｔ　、　　ＭｎＳＯ４・４Ｈ２０１１Ｗ９／ｄｉ　、
サイアミン・塩酸塩１００μｇ／ｌ　、ビオチン５０μ
９７１゜ビート製糖工場のステラフェン法工程で副生さ
れる濃縮ステラフェン廃液を総窒素濃度として５００１
ｎＱ／ｄｉ　Ｋ　ＨＥＴＭＡ　０．０１〜３．０　ｇ／
ｄｌ添加し、これに炭酸カルシウム５９／ｄｔｃ別殺＠
）ｔ−含む培地をｐ１４７、０に調節し、その２０＃Ｉ
ｔを５ＱＯｍＪ容肩付フラスコに入れ加熱殺菌した０ これにブレビバクテリウム・フラバムＮＲＲＬ１２２３
７を一白金耳接種し、３１．５℃に保ちつつ４日間振盪
した。Ｌ−アルギニノの対ｍ重量収率は８ｇ３表に示す
通りである０ 第３表 ＨＥＴＭＡ添加量　　　Ｌ−アルギニン収率０　１１７
ｄｌ　　　　　　　３０．５　　係０．０１．　　　　
　　　　３１．０ ０．０５　　　　　　　　　３１．３ ０．２５　　　　　　　　　３２．０ ０．５　　　　　　　　　　３３．０ １．０　　　　　　　　　　３２．０ ２．６　　　　　　　　　３１．０ ３．０　　　　　　　　　２９．５ ン又換樹脂「アンバーライトＪ　ＣＣ−５０（ＮＨ４＞
に通過させた。樹脂を水洗後２　Ｎ　−ＮＨ４ＯＨＫて
Ｌ−アルギニンを溶出し、次いで溶出液を濃縮し、これ
よシム−アルギニンの粗結晶３０．５＃を得念０実施例
４ グルコースを炭素源として含有する＠４表に示す組成の
培地にＤＭＧ　０．０１〜３９７ｄｌ添加してＬ−イソ
ロイシン生産用培地ｔ−調製し、−を７．２に調節後、
　５０　Ｑ、ａｄ容の振盪フラスコに夫々２０ｄ宛分注
し１１５℃にで１０分間加熱、滅菌した。

第４表 グルコース　　　　　　　　１５．０　１１７ｄｉ（Ｎ
Ｈ４）２８０４１．０　１／ｄｉ ＫＨ２Ｐ０４　　　　　　　　　　　　０．１５９　／
ｄ１ＭｇＢＯ４・７Ｈ２００，０４１７／ｄｌＦｅＳＯ
４’４Ｈ２８１，０１１９／ｄ１Ｍｎ８０４”４Ｈ２０
１，Ｏｍ９／ｄａサイアミン・塩酸塩　　　　　　３０
０．０μｍ１７１大豆蛋白酸分解液（Ｔ−Ｎ）　　　　
　　２５．０　　ｍｌ）／ｄｔピオチン　　　　　　　
　　　　　　　　５．０μｍ１／１１（炭酸カルシウム
別殺菌添加　５．０　１１７ｄｉ）夫々の培地に、予め
培養して得られたプレビノスクテリウム・フラバムＦＥ
ＢＭ　ＢＰ−７５９を接種し、３１．５℃にてグルコー
スが消失するまで振盪培養したＯ Ｌ−インロイシンの対ｍ重量収率を第５表に示した０ ？Ｘ５表 ＤＭＧ添加ｉ　　　　　　Ｌ−イソロイシン収率０９７
ｄ２　　　　　　　　　１２．０　　％０．０１　　　
　　　　　　　１２．５０．０５　　　　　　　　　　
１２．７０．２５　　　　　　　　　　１３．００．５
　　　　　　　　　　　１３．３１．０　　　　　　　
　　　　１３．５２．０　　　　　　　　　　　１３．
０３．０　　　　　　　　　　　１１．５実施例５ グルコースを炭素源として含有する第６表に示す培地に
ＴＭＧを０．０１〜３　ｇ／ｄｌ添加してＬ−−ぐリン
生産用培地を調展し、ＰＨを７．０に調節後、５００ｍ
１容の振盪フラスコ忙夫々２０ＩＲ１宛分注し１１５℃
にて１０分間加熱、滅菌した０ 第６表 グルコース　　　　　　　　　１５．０ｇ／ｄｉ（ＮＨ
４）２３０４３．０　　！／ｄｌＫＨ２ＰＯ４０，１！
！／ｄ１ ＭｇＳＯ４・７Ｈ２００，０４９／ｄｌＦｅＳＯ４−４
Ｈ２０１，０１ｎ９／ｄ１ＭｎＳＯ４’４Ｈ２０１，Ｏ
ｍｔｐ／ｌｔｔサイアミン・塩酸塩　　　　　　　　３
０．０μ９７１大豆蛋白酸分解液（Ｔ−Ｎ）８０．０　
　卿／１１１ＤＬ−メチオニｙ　　　　　　　　　　６
０．Ｏｍｙｌｄｌピオチン　　　　　　　　　　　　　
　　５．０μｇ／ｌステッフェン廃液（総窒素）　　　
　２００　　〜／ｃｔｔ（炭酸カルシウム別殺菌添加　
　５．０　　、ｑ／ｄｌ）夫々の培地に、予め培養して
得られたブレビバクテリウム・ラクトフェルメンタムＦ
ＥＲＭ　Ｐ−１８４５を接種し、３１．５℃にてグルコ
ースが消費するまで振盪培養したＯ Ｌ−バリンの対糖収率を＠７表に示す。

＠７表 ０　１／ｄｉ　　　　　　　　　　１２．０　　％０．
０１　　　　　　　　　　　　　１２．５０．０５　　
　　　　　　　　　　　１３．００．２５　　　　　　
　　　　　　　１３．５０・５　　　　　　　　　　　
　　　１４．０１．０　　　　　　　　　　　　　　１
３．５２・０　　　　　　　　　　　　　　１２．５３
．０　　　　　　　　　　　　　　１１．５実施例６ 第８表の組成の種母培地ｔ−５００ｍ１容の振盪フラス
コに５０ａｊ宛分注し、１１０Ｃにて５分間加熱滅菌し
た後ブレビバクテリウム・フラバムＡＴＣＣ２１４７５
ｆｔ接種Ｌ３１，５℃、２０時間振盪培養を行い１種培
ｆ！！液を得た〇一方、第４表に示すし一リジン生産用
培地２９ｍ１を坂ロフラスコに夫々分注して殺菌した・
これＫあらかじめ乾熱殺菌した炭酸カルシウム１．５Ｊ
を夫々に添加し、次いで上記種培養液をそれぞれｌ　ｔ
ｔｒｌ宛接種して３１．５℃にて往復振とう培養した。

培養２４時間目にＴＭＧを培地当り０．０．０１　、０
．０５．０．２５．１．０．２．０゜第９表 ０１／ｌｔｔ　　　　　　　　　３．８３Ｖｄｇ　　　
　　　　２５．５　　％０．０１　　　　　　　　　　
　　４．１０　　　　　　　　　　　２７．３０．０５
　　　　　　　　　　　　４．２２　　　　　　　　　
　　２８．１０．２５　　　　　　　　　　　　４．５
６　　　　　　　　　　　３０．４１．０　　　　　　
　　　　　　４．３５　　　　　　　　　　　２９．０
２．０　　　　　　　　　　　　４．２３　　　　　　
　　　　　２８．２５．０　　　　　　　　　　　　　
４．０５　　　　　　　　　　　２７．０℃ＭＧ添加量
ｏ、ｚ５１／ｅｘｔ区の培養終了液を集め遠心分離によ
って、菌体及びカルシウム塩を除いた上清液１ノを強酸
性イオン交換樹脂（「アンパー９４　トＪ　ＩＲ−１２
０ＣＨｆｆｉ　）　Ｋ通過させ、Ｌ−リジンを吸着させ
た・次いで、３１アンモニア水で吸着したＬ−リジンを
溶出し、溶出液を減圧濃縮したＯ 睦縮液に塩ｆ！２ｔ−添加したのち冷却し、Ｌ、！Ｊレ
ジン、Ｌ−リジン塩酸塩ｗＸ２水和物として析出させ、
結晶３６．５Ｉｉを得ｆｔ。

実施例７ グルコース３ｇ／ｄｔ、（ＮＨ４）２Ｓ０４０．２　ｇ
／ｄｌ　、尿素０．２　Ｆｌ／ｄｌ　、　　ＩＧ（２Ｐ
Ｏ４０，１５ｊｊ／ｄｉ　、　　ＭｇＳＯ４・７Ｈ２０
ｏ、　０４９／ｃｉｔ　、ＦｅＳＯ４”７Ｈ２０１Ｉｎ
９／ｄｔ、サイアミ７−）ＩＣｔ１００μｆｊ／ｌ　、
ピオチン３００μｇ／ｌ　、大豆蛋白酸加水分解液を全
窒素として１４０　ｍ７１ｄｌを含む種母培地を−７，
ＯＫ調節し、その５　Ｑ　ｗｔｌ　ｆ　５００　ｍｌｌ
容性付フラスコ入れ加熱殺菌した。ブレビバクテリウム
・フラバムＡＴＣＣ２１２６９およびエセリヒア・コリ
ＦＥＲＭ−Ｐ　４９００（ＡＪ　１１３３４）を夫々接
種し、３１．５℃に保ちつつ、１２時間振盪培養し種母
培養液を得た〇 一方、グルコース１３９／ｄｌ　、　ＫＨ２ＰＯ４０，
２５ｇ／ｄ１．　Ｍｇ８０４・７Ｈ２０４０■／ｄｔ、
Ｃ洲、）２ｓｏ４ｚ、ｏｌ／ｄｉ。

ＭｎＳＯ４’　４Ｈ２０１ａ７／ｄｌ　、Ｆ＠Ｓｏ＜　
”　７１２０１　ｍ９７ｄｌ、Ｌ−イソロイシン４　ｏ
ｗ／ｄｔ、ピオチン５０μｍ７ｇ、’ｔイアミン・ＨＣ
ｌ　５μＩ／ｌｔｔ、大豆蛋白酸加水分解液を全窒素と
して３２ｍｇ／ｄ、ステラフェン廃液（全窒素として）
２００ＩＩ９／ｄｔｆ：含むｐＨ６，５Ｋ調製した培地
とこれＫ　ＴＭＧ　０．０１〜５１／／ｄｌｔ−加えた
培地夫夫２０１１１７ｔ−５００ｄ！容肩付フラスコに
分注し、１１０℃、１０分間蒸気殺菌したＯこれｋあら
かじめ乾熱滅菌した炭酸カルシウム２ｇをそれぞれに添
加し、さらに上記種母培養ｗＸＩＲ１宛加えて３１．５
℃にて培養したＯ培養後に得られたＬ−スレオニンの対
糖収率を第１０表に示したＯ 第１０表 ブレビバクテリウム・フラノ々ムのＴＭＧ添加０．２５
９／ｄ１区の培養液１ノを得、その培養液より遠心分離
によって菌体及び炭酸カルシウムを除き、そのｓ　ｏ　
ｏ　ａｔを強酸性カチオン交換樹脂（「アンバーライト
Ｊ　ＩＲ−１２０（Ｈ＋型））のカラムに流した０３チ
アンモニア水で溶出し、アミノ酸画分を集め脱塩及び脱
色を行い、減圧濃縮した。アルコール品 を添加し冷却下に保存した後、生成した結メを集めて乾
燥した結果、純度９８４以上のスレオニン結晶が７．６
１！得られた。

実施例８ 第１１表に示すＬ−ヒスチジン生産用培地にＭＧ　０．
０１〜３１７ｄｌ添加し、ｐＨ７，２に調節後５ＱＱ＋
７！容振盪フラスコに夫々２６ｍ１ずつ分注し、１１５
℃にて１０分間加熱、滅菌した。

第１１表 成　　　　　分　　　　　　　　　　濃　　度グルコー
ス　　　　　　　　１３．Ｏｊ９／ｄｌ（ＮＨ４）２Ｓ
Ｏ４５，Ｏｇ／ｄｅ ＩＧＩ２ＰＯ４０，１ｆｉ／ｄｅ ＭｇＳＯ４・７Ｈ２００，０４９／ｄｉＦｅ８０４・４
Ｂ２０　　　　　　　　　　　　　１．０　　’９７ｄ
ｉＭｎＳＯ４”４Ｈ２０１，０１Ｎ！？／ｄｉサイアミ
ン・塩酸塩　　　　　　　５０．０μ９／１大豆ｆＨ白
酸分解液（Ｔ−Ｎ）　　　　　　３０．０　１１１１／
／ｄｌビオチン　　　　　　　　　　　　　　５０．０
　ａ９７１ステッフェン廃液（Ｔ−Ｎ）　　　　　１０
０　　　Ｗ／ｄｌ（炭酸カルシウム別殺菌添加　　５．
Ｏｊｉ／ｄｌ）夫々の培地に、予めブイヨンスラント上
で培養して得られたブレビバクテリウム・フラバムＡＴ
ＣＣ２１４０６１！を接穂し、３１．５℃にてグルコー
スが酌失するまで振盪した・ Ｌ−ヒスチジンの対糖収率を第１２表に示した。

第１２表 ０　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１０．０
０．０１　　　　　　　　　　　　　　　　　１０．５
０．０２５　　　　　　　　　　　　　　　　１１．０
０．５　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１１．
５１．０　　　　　　　　　　　　　　　　　　１２．
０２．８　　　　　　　　　　　　　　　　　　１１．
０３．０　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　９
．５ＭＧ０．５ぴ／ａ添加区の培養液１７から菌体及び
炭酸カルシウムを除き上清を強酸性イオン交換樹脂（「
アンバーライトＪ　ＩＲ−１２０（Ｈ＋型））Ｋ通過さ
せ、Ｌ−ヒスチジンを吸着させた・その後３チアンモニ
ア水で吸着したＴ１−ヒスチジンを溶出し、溶出液を減
圧濃縮した。濃縮液を冷却し、放置したところ、Ｌ−ヒ
スチジンの結晶が析出した◎結晶を乾燥し、７．　Ｉ　
Ｉｉを得た＠実施例９ シュークロースを炭素源として含有する！１３表に示す
組成の培地Ｋ　ＤＭＱ　０．０１〜３．０９７ｄｌ添加
し、Ｌ−フェニルアラニン生産用培地を調製し。

Ｐｌｉ　ｔ−７，ＯＫ調節後、５００　ａｔ容の振盪フ
ラｘ＝ｒに夫々２０１ｊ宛分注し１１５℃にて１ｏ分間
加熱、滅菌した〇 第１３表 成　　　　分　　　　　　　　　濃　度シ、−りｏ　−
ｘ　　　　　　　１３．０　１／ｄｌＩＧＩ２ＰＯ４１
，５ｇ／ｄｌ （ＮＨ４）２Ｓｏ４１．０１／ｄ１ Ｍｇ８０４＠７Ｈ２００，１１／ｄ１ ＭｎＳＯ４’４Ｈ２０１，ｏ　Ｉ／ｃｔｔＦ＠ＳＯ４”
７Ｈ２０１，０８９／ｄｔサイアミン・塩酸塩　　　　
　　　　２０．０μｍ１／ＩＤＬ−メチ、ｔ＝ン　　　
　　　　　　５０．Ｏｊ！／＃Ｌ−チロシン　　　　　
　　　　　　４０．０　　ダ／ａ大豆蛋白酸分解液（Ｔ
−Ｎ）　　　　　１００．０　１１ｇ／ｄｉ７−ｒル＠
　　　　　　　　　　　　　　　　１．０　１／ｄｌピ
オチン　　　　　　　　　　　　　　　５．０　μｍ１
／１酢　　＃１０．３　　ｄ／ｄｌ グルタミンｒｅ　　　　　　　　　　　　　　Ｏ，２ｇ
７ｔｔｔステッフェン廃液（Ｔ−Ｎ）　　　　　　１０
０　　ｍＱ／ｄｉ（炭酸カルシウム別殺、Ｉｉ添加　　
５．０　１／／ｄＧ夫々の培地Ｋ、予めブイヨンスラン
ト上で培養して得られたブレビバクテリウム・ラクトフ
ェルメンタムＡＴＣＣ２１４２０を接種し、３１．５℃
にてグルコースが消失するまで振盪培養した・フェニル
アラニンの対糖収率は＠１４表に示す通にであった。

第１４表 ０９７ｄｉ　　　　　　　９．０　　１０．０１　　　
　　　　　９．５ ０．０２　　　　　　　　１０．５ ０．５　　　　　　　　１１．０ １．０　　　　　　　　１１．５ ２．０　　　　　　　　１１．０ ３．０　　　　　　　　１０．５ 実施例１０ グルコースを炭素源として含有する第１５表に示す組成
の培地１ｃ　’ｒＭＧ　Ｏ，０１〜５９７ｄｌ添加しテ
Ｌ−トリグトファン生産用培地を調饗し、−７，０に調
節後５００Ｗ１１容の振盪フラスコに夫々２０ｔｄｆつ
分注し、１１５℃忙て１ｏ分間加熱、滅菌し九〇第１５
表 成　　　分　　　　　　　　　　濃　度グルコース　　
　　　　　　１３．Ｏｊｉ／ｄｌ（間、）２ＳＯ４４，
０１／ｄｔ 訂ｌ２ＰＯ４０，１１／ｄ１ ＭｇＳ０４・７Ｈ２００，０４１／ｄｌＦ＠ＳＯ４・７
Ｈ２０１，Ｏｙｉｙ／ｌｔＭｎＳＯ４’４Ｈ２０１，０
１１Ｑ／ｄｌサイアミン・塩酸塩　　　　　　２００．
０μｌ／１カデミノ酸　　　　　　　　　　　　　　　
０．１　１７７ｄｉ大豆蛋白酸分解液（Ｔ−Ｎ）　　　
　　　３０．０　　ｋ！ｊ／ｄｌＬ−７エニルアラニン
　　　　　　　２０．０　１９７ｄｔビオチン　　　　
　　　　　　　　　３００．０μ９／１１（炭酸カルシ
ウム別殺菌　　　　５．０　７７７ｄｌ）夫々の培地ｋ
、予め培養して得られた／４チルス・ズブチリスＦＥＲ
Ｍ　ＢＰ−２０８を接種し、３０℃忙てグルコースが消
失するまで振盪培養した０Ｌ−）す７”）７丁ンの対糖
収塞ａｇｉａ表の通りである。

第１６表 ０９７ｄｉ　　　　　　　　　　　５．０　　　係０．
０１　　　　　　　　　　　　　　６．００．６２　　
　　　　　　　　　　　　６．５０・５７．０ １、Ｑ　　　　　　　　　　　　　　　　７．５２．８
　　　　　　　　　　　　　　　６．５３．０　　　　
　　　　　６：。

５．６　　　　　　　　　　　　　　　５．５実施例１
１ グルコースを炭素源として含有する第１７表に示す組成
の培地Ｋ　ＤＭＧ　Ｏ，０１〜３　ｊｉ／ｄｌ添加しテ
Ｌ−セリン生産用培地を調製し、（１７，ＯＫ調節後５
ｏｏａｊ容の振盪フラスコに夫々２９ｍ１ずつ分注し、 第１７表 グルコース　　　　　　　　１３．０　１１／ｄｌ（Ｎ
Ｈ４）２Ｓｏ４０．２　９／ｄｉ ＫＨ２ＰＯ４，０，２ｆ／／ｄ１ ＭｇＳＯ４−７Ｈ２００，０５ｌ／ｄｌＦ＠５ｏ４−４
Ｈ２０２，Ｏｍ！７／ｄｔ葉　　　酸　　　　　　　　
　　　１０００　　μｍ１／１サイアミン・塩酸塩　　
　　　ｔｏｏｏ　　ａ９／１ニコチン酸アミド　　　　
　　　２５００　μＩ／１大豆蛋白酸分解液（Ｔ−Ｎ）
　　　　　　６０　　〜／ｄｔビオチン　　　　　　　
　　　　　２００　　μ９／１メチオニン　　　　　　
　　　　　　　０．１　７７７ｄｉＬ−ロイシン　　　
　　　　　　　　２０　　　ｔａｑ／ａｔ゛グリシン　
　　　　　　　　　　　　　３．５　９７ｄｌＤＬ−メ
チオニン　　　　　　　　　４０　〜／ｄｌ（炭酸カル
シウム別殺菌添加　　　５．０　９／α）夫、々の培地
に、予め培養して得られたコリネバクテリウム・グリシ
ノフィラムＦＥＲＭ−Ｐ　１６８７を接種し、３４℃に
て振盪培養したＯ Ｌ−セリンの消費グリシンモル収率を第１８表に示した
。

第１８表 ＤＭＧ添加１１　　　　　　　　Ｌ−セリン収率０１／
ｄｌ　　　　　　　　　　　　３６．０　１０．０１　
　　　　　　　　　　　３７．００．０５　　　　　　
　　　　　　３８．０１．０　　　　　　　　　　　　
　３８．５２．０　　　　　　　　　　　　　３７．５
３．０　　　　　　　　　　　　　３５．０実施例１２ ｄｔ添加しｓ　ｏ　ｏ　ｍｔ容容性付フラスコ２０ｄず
つ分注し１２０℃で１０分間加熱滅菌した０この培地に
コリネバクテリウム・エキイＡＪ　１１７４９（ＦＥＲ
Ｍ−Ｐ６２６１）　ｔ−グルコース２０１／ｌ、酵母エ
キス１０ｇ／ｌ、ペグトン１０９／１１．食塩５１／１
．寒天２０９／１（ＰＨ７，２）の組成の斜面地塊で３
１．５℃゛にて１８時間培養して得られた菌体を３白金
耳ずつ接種し、３４℃で２日間培養後、グルコ−１５註
培養を行なっ九◇培養液中に蓄積した５′−イノシン酸
の量を第２０表に示した。

ＨＸ１９表 グルコース　　　　　　　　１３９／ｄｔ酵母エキス　
　　　　　　　ｌｙ 硫　　　安　　　　　　　　　　　　　　０．５　　＃
ＫＨ２ＰＯ４　　　　　　　　　　　２　　＃ＭｇＳＯ
４・７Ｈ２０　　　　　　　　　０．６　　１／やント
テン酸カルシウム　　　　　　　　１　η／ｄｔｐーア
ミノ安息香酸　　　　　　　　　ｌｌアデニン　　　　
　　　　　　　　　　８１ビオチン　　　　　　　　　
　　１０００μｍ１／１大豆蛋白酸加水分解物（Ｔ−Ｎ
）　　　　９０　　ＩＩＩＱ／ｄｌグルタミン酸　　　
　　　　　　　　　　２　　ｌ／ｄｌステッフェン廃１
（Ｔ−Ｎ）　　　　　１００　　ｌｖ／ｄｔＰ）１　　
　　　　　　　　　　６．５第２０表 ０９７ｄｉ　　　　　　　　　　　２８０、１　　　　
　　　　　　　　　　　　　２　８．５０、５　　　　
　　　　　　　　　　　　　２　９１、０　　　　　　
　　　　　　　　　　３　０２、０　　　　　　　　　
　　　　　　　２　９．５３、０　　　　　　　　　　
　　　　　　２　９５、０　　　　　　　　　　　　　
　　　２　７実施例１３ グルコース３　１／ｄｌ　、’　　１ＱＩ２ＰＯ４　０
．１　１／ｄ１．　ＭｇＳＯ４・７Ｈ，Ｏ　Ｏ．０　４
　９７ｄｉ．　ＦｅＳＯ４’７Ｈ２０　ｏ．ｏ　Ｏ　１
　１／ｄｌ　。

ＭｎＳＯ４　・４Ｈ２０　０．０　０　１　ＪＦ　／ｄ
ｌ，尿素０．３９７ｄ１．大豆蛋白酸加水分解液を全窒
素として６０１１Ｉｇ／ｄｊ、サイアミン・ＨＣｌ　３
　０μＪ９　／ｄｌ　、ピオチン２０μＩ／ｄｌｔ−含
む種母培地ｔＰＨ　６．　Ｏ　Ｋ１１ｌｌｉ　Ｌ．　ソ
ｏ　５　０　ｗｉｔ　５００ｍ１容肩付フラスコに入れ
，加熱殺菌した〇これに菌株ブレビバクテリウム・ラク
トフェルメンタムＦＥＲＭ−Ｐ　５９３６（ＡＪ　１１
６７８）　ｔ−接種し．３１．５℃に保ちつつ，１３時
間振盪培養した〇一方、グルコース１３１１／ｄｔ．　
ＩＧＩ２ＰＯ４０．１１／弧ＭｇＳＯ４ー７１２０　０
．Ｇ　４　９／ｄｔ　、Ｆｅ１８０４−７）１２０　０
．０　０　１　９／ｄｔ。

ＭｎＳＯ４”４Ｈ２０　ｏ．ｏ　Ｏ　ｌ　１１ｄｌ，硫
安４．０　９７ｄｔ．大豆蛋白酸加水分解液を全窒素と
して６　５１１４！？／ｄｌ　、サイアミｙ　、　Ｈｃ
ｔ　２　０　ａｌｌｌｄｉ　、ビオチｙ　１　０　ａ９
／ｄｌ　、’Ｌ　−アルギニｙ　７　０　ｍｙ／ｌｔｌ
を含むｐｌ（　７．　Ｏ　Ｋ調節した゛培地とコＲｔｔ
ｃ　ＤＭＧ　０．０　１　〜３　ｐｉｄｔを添加した培
地それぞれ２０１４を５ＱＱａＪ？容肩付フラスコに分
注して。

１１５℃．１０分間加熱滅菌した◎これＫあらかじめ乾
熱滅菌した炭酸カルシウム２ｇを夫々に添加し、更に上
記種母培養液ｌｄずつ加えて３１．５℃にて培養した。

培養終了時のＬ−オルニチンの対軸収率を＠２１表忙示
した。

第２１表 ０　１／ｌｔｔ　　　　　　　　２４．５　　慢０、０
１　　　　　　　　　　２　６．００、０５　　　　　
　　　　　　　　　　　　　２７．５１、０　　　　　
　　　　　２　９．０２、０　　　　　　　　　　２７
．０ ３、０　　　　　　　　　　　　　　　　　　　２　３
。０実施例１４ グルコ−　ス３　１／ｄｌ　、　ＩＧＩ２ＰＯ４　０．
１　１／ｄ１．　Ｗｉｇｓｏ．４・７Ｈ２０　０．０　
４　１／ｄｌ　、ＦｅＳＯ４・７Ｈ２０　０．０　０　
１　ｐｉｄｔ。

ＭｎＳＯ４　・４Ｈ２０　０．０　０　１　ＪＦ　／ｄ
ｌ　、　・尿・素０．３１１７ｄｌ，大豆蛋白酸加水・
分解”液を全−素として６０ＩＩｇ／ｄｌ，サイアミン
・ｕｃｚ　３　（）　４／ｄｌ　＊’ビオチン２　０　
ａｌｌｌｄｉを含む種母培地を−６．σに調節し，その
５Ｑａｊを５００ｍ１容肩付フラスコに入れ、加熱殺菌
し・九。

これに菌株＝リネパクテリウム・グルタミクムＡＴＣＣ
　１３２３２を接種し、３１．５℃に保ちつつ，１３時
間振盪培養した〇 一方、グルコース１　３１１／ｄ１．　Ｋ１２ＰＯ４０
．１９／α。

Ｍｇ　８０４　・７１２０　０．０　４　９　／ｄｌ　
、Ｆｉｌ　８０４　・７Ｈ２０　０．　０　０　１　１
／ｄｌ。

ＭｎＳＯ４　−４Ｈ２０　０．０　０　１　９７ｄｌ　
、硫安４．０！Ｉ／ｄｌ，大豆蛋白酸加水分解液を全窒
素として６５ＩＩＩｇ７ｄｌ、サイアミｙ　−　ＨＣｚ
　２　０　ｔａ！ｌ／ｄｌ、ピオチｙ１０μ９／ａ，ｔ
，−ホモセリン７　０　ｈｗＡｔｔ　を含む−７．　０
に調節した培地とこれにＤＭＧ　０．０　１〜３９７ｄ
ｌを添加した培地それぞれ２０ｍ１ｔ−５ＱＱｔｓｌ容
肩付フラスコに分注して。

１１５℃．１０分間加熱滅菌した・これＫあらかじめ乾
熱滅菌した炭酸カルシウム２ｇを夫々に添加し、更に上
記種母培養液１＃ｌｌずつ加えて３１．５℃にて培養し
九〇培養終了時のＬ−オルニチンの対糖収率ｔ−第２２
表に示した。

第２２表 ０９７ｄｌ　　　　　　　　　　２４．５　係０・０１
　　　　　　　　　２６．０ ０・０５　　　　　　　　　２７．５ １・０　　　　　　　　　２９．０ ２．０　　　　　　　　　２７．０ ３−０　　　　　　　　　　　　２’３．０実施例１５ グルコース３９／ｄｉ、　ＫＨ２ＰＯ４０，１１／ｄｔ
、　ＭｇＳＯ４・７Ｈ，ＯＯ，０４１７ｄｌ　、Ｆｅ３
Ｏ４’７Ｂ２０１．０ＩＱ／ｄｌ、　ＭｎＳＯ４’４Ｈ
２０ｘ、ｏｗ／ｄｌ−尿素０．３１／ａｔ、大豆蛋白酸
加水分解縁を全窒素として６０雫／ａ、サイアミン・Ｈ
Ｃｊ３０ｒ／ｄ１．ビオチン２０　ｒ　／ｄｌを含む種
母培地を−６，０Ｋｉ４節し、その５９ｍ１を５００−
容肩付フラスコに入れ、加熱殺菌した・コリネバクテリ
ウム・グルタミクムＦＥＲＭ−Ｐ　５６４３（ＡＪ　１
１５８８）を接種し。

３１．５℃に保ちつつ、１３時間振盪培俸した。

一方、グルコース１３１１７ｄｌ　、ＫＨ２ＰＯ４０，
１９７ｄｌ、ＭｇＳＯ４−７Ｈ２００，０４ｇ／ｄｔ％
Ｆ’ｅＳＯ４”７Ｈ２０１，Ｏ＃ＩＩ７／ｄｌ。

Ｍｎ　ｓｏ４”　４Ｈ２０１，０１１１Ｑ／ｄｌ　、塩
安３．Ｏｊ９／ｄｉ、大豆蛋白酸加水分解液を全窒素と
して６５１１１９／ｄｌ、サイアミン−１１Ｃｔ　２０
　ｒ　／ｄｉ　、ピオチン１０１７ｄｉ、Ｌ−アルギニ
ン７０η／ａを含む−７，０に調節した培地とこれにＭ
Ｇを０，０１〜３１７７ｄｌ加えた培地それぞれについ
て実施例１４と同様に培養した０培養終了時のＬ−シト
ルリンの対糖収車は第２３表のとおりであり念◎ 第２３表 ０９７ｄａ　　　　　　　　　１３．５係０．０１　　
　　　　　　　１４．０ ０．０５　　　　　　　　　１４．５ １・０　　　　　　　　　　１５．５ ２．０　　　　　　　　　　１４．０ ３．０　　　　　　　　　　１３．０ 実施例１６ 第２４表の組成の種母培地を５００ｍ容の振盪フラスコ
に５０ａｊ宛分注し、１１０℃にて５分間加熱・滅菌し
た後、菌株コリネ、バクテリウム・グルタミクムＦＥＲ
Ｍ−Ｐ　５８３６（ＡＪ　１１６５５）を接種し３１．
５℃で１２時間振盪培養を行い株培養液を得た・一方第
２５表のＬ−チロシン主発酵培地とこれＫ　ＨＥＴＭＡ
　０．０１〜３Ｎ／＃ｔ−加えた培地それぞれを実施例
１４と同様に培養した０培養終了時のＬ−チロシン量は
第２５表に示すとおりであうた０第２４表　培地組成 第２５表 Ｏｇｌｄｔ　　　　　　　　　　　　６．０　　悌０．
０１　　　　　　　　　　　　　　６・５０．０３　　
　　　　　　　　　　　　８．　ＯＱ、５　　　　　　
　　　　　　　　　９．０１．０　　　　　　　　　　
　　　　　８．２２．０　　　　　　　　　　　　　　
　７．５３．０６．０ 実施例１７ グルコース３９／ｄ１．　ＫＨ２ＰＯ４０，１１／ｄ１
．尿素０．３９／ｄ１．　ＭｇＳＯ４・７Ｈ２００，０
４Ｊｉ’　／ｄｌ　、　ＦｅＳＯ４・７Ｈ２０１η／ｌ
ｉｅ　、　ＭｎＳＯ４−４）１２０１　ｍｙ／ｃｔｔ　
、　Ｄ　Ｌ−メチオニ／４０駒ｔ、ピオチン１０μｍ／
／ｌ、サイアミン・塩酸塩２００μＩ／ｌ　、大豆蛋白
酸加水分解液を全窒素としてｓ　ｏ　＃＋１／１ｔｉｔ
を含む種母培地１に−６に調節し、その５０１１Ｉｊを
５００　Ｆｌｉｔ容肩付フラスコに入れ、１２０℃、１
０分間加熱殺菌し九〇これにデレビ／々クテリウム・フ
ラバムＦＥｒｔＭ　ＢＰ−７５５ｔ−接種し、３１．５
℃にて２０時間振盪培養したＯ 一方、てん菜粘蜜（グルコース換算）１３５１／ｄ／、
ＫＨＰＯｏ、１．り／ｄ７！　　、　　（ＮＴ（）　　
Ｓｏ　　　　２．　　Ｏ、（１／ｄｌ　　１ＭｇＳＯ４
・７ＴＩ２００．０４１　／ｄｌ　、　ＦｅＳＯ４’　
７Ｈ２０１’Ｑ／ｄｉ　、　ＭｎＳＯ４’４Ｈ２０１ｍ
９／ｄｌ　％Ｄ　Ｌ−メチオニｙ　１００Ｑ／ｄｉ　、
ビオチン５０μ９／ｌ　、サイアミン塩酸塩３００μ’
ｊ／ｌ　、脱脂大豆酸分解液５０１ｎＱ／ｄｔを含む）
Ｉｌ−１７，０忙調節した培地とこれにＨＥＴＭＡ　Ｏ
，０１〜３ｇ／ｄｔを加えた培地のそれぞれを実施例１
４と同様に培養した０培養終了時のＬ−ロイシンの生成
量は第２６表のとおりであった。

第２６表

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 Ｌ−アミノ酸生産菌又は５′−イノシン酸生産菌をケー
   ンモラセス、シュークロース又はグルコースを主炭素源
   とし、Ｎ−メチルグリシン、Ｎ−Ｎ−ジメチルグリシン
   、Ｎ−Ｎ−Ｎ−トリメチルグリシン及び〔２−ハイドロ
   キシエチル〕トリメチルアンモニウムより成る群より選
   ばれる１種類以上の物質を含有する培地で培養し、Ｌ−
   アミノ酸又は５′−イノシン酸を生成せしめ、これを採
   取することを特徴とする発酵法によるＬ−アミノ酸又は
   ５′−イノシン酸の製造法。