TW201216985A

TW201216985A - Pharmaceutical composition

Info

Publication number: TW201216985A
Application number: TW100136670A
Authority: TW
Inventors: Andrea Pfeifer; Andreas Muhs; Leuven Fred Van; Maria Pihlgren; Oskar Adolfsson
Original assignee: Ac Immune Sa; Univ Leuven Kath
Priority date: 2010-10-07
Filing date: 2011-10-07
Publication date: 2012-05-01
Also published as: MX2013003800A; MX338421B; CA2812865C; MY164376A; ES2548686T3; AU2011311516B2; ZA201302432B; JP6371526B2; PL2625198T3; HK1216897A1; EP2625198B1; CO6710903A2; AU2011311516A1; EP2625198A2; EP2987807A3; AR085198A1; CR20130160A; US9304138B2; CN103502272A; US20120276009A1

Description

201216985 六、發明說明：【發明所屬之技術領域】本發明係關於治療性及診斷性用於仏I1 ^ 用於冶療由神經原纖維纏結引起或與神經原纖維纏結相關之疾病及病症的方法及組合物。特定言之，本發明係關於特異性識別且結合填破化錢性蛋白質τ構象異構體之抗體及涉及該等抗體之治療性及診斷性用於治療包括阿茲海默氏病（八…之^病變的方法及組合物。 φ 【先前技術】神經原纖維纏結及神經纖維網絲（Ν τ)為阿茲海默氏病 (AD)之主要神經病理學標魏。其由已進行轉譯後修飾之微管相關蛋白質τ構成，該等修飾包括天冬醯胺醯基或天冬胺醯基殘基之磷酸化、脫醯胺及異構化。其藉由過磷酸化蛋白質τ及其構象異構體之聚集而產生。AD與許多神經退化性τ病變’特定言之與特定類型之額顳葉型癡呆 (frontotemporal dementia，FTD)共有此病理學。 • 蛋白質τ為一種易溶解「天然未摺疊」蛋白質，其與微管（ΜΤ)親合性結合以促進其裝配及穩定性。“了對於神經元之細胞骨架完整性且由此對於神經元迴路之適當形成及起效，因此對於學習及記憶而言至關重要。1與ΜΤ之結合受動態磷酸化及去磷酸化控制，如主要在活體外及在非神經元細胞中所顯示。歸因於可能之磷酸化位點之數目較多 (>80)，各磷酸化位點之確切貢獻及所負責激酶之身分基本上仍未在活體内得到確定。 159338.doc 201216985 在AD腦中，τ病變顯現遲於且因此可能反應於澱粉樣蛋白病變，此構成澱粉樣蛋白級聯假設之本質。此係基於在 AD及唐氏症候群（Down syndrome)患者中進行之研究且由該等研究指示，且由在患有組合澱粉樣蛋白及τ病變之轉殖基因小鼠中進行之研究確證（Lewis等人，2001 ; Oddo等人 ’ 2004 ; Ribe 等人 ’ 2005 ; Muyllaert 等人，2006 ; 2008 ; Terwel等人，2008)。兩種病變在人類AD患者中之確切時序以及將澱粉樣蛋白與τ病變關聯之機制基本上仍然未知，但提出涉及作用於作為主要「τ激酶」之GSK3及cdk5之神經元信號傳導路徑的活化或由GSK3及cdk5活化神經元信號傳導路徑（由

Muyllaert等人，2006, 2008評述）。 τ病變不為AD中之良性副作用而為主要病理性執行者之假設係基於彼此充分確證之可靠遺傳學、病理學及實驗觀測結果： • 在歸因於殿粉樣蛋白質前驅體（ΑΡΡ)或早老素 (presenilin)中之突變之早期發作家族性ad病例中，絕對病原性病因為澱粉樣蛋白累積，但病變始終包含並行τ病變’與晚期發作偶發性ad病例中之情況一致； • s忍知功能障礙及癡呆之嚴重性與τ病變相關，不與殿粉樣蛋白病變相關，最近由包括對澱粉樣蛋白進行 ΡΙΒ-ΡΕΤ成像且鑑別許多「偽陽性者」：腦澱粉樣蛋白載量較高之認知正常個體的若干臨床1及2期研究 159338.doc 201216985 例示； •在家族性FTD中，τ病變係由突變1引起且直接導致神經退化而無澱粉樣蛋白病變； •在實驗小鼠模型中，由澱粉樣蛋白病變引起之認知缺陷藉由不存在蛋白質1而幾乎完全減輕（Roberson 等人，2007)。組合論據支持以下假設：蛋白質1在八〇及相關神經退化性τ病變中之認知死亡（c〇gniti ve demise)中起主要作用。一種對AD之傑出新興治療係藉由用對假定為神經毒性或突觸毒性之明確澱粉樣蛋白狀及其聚集體具有特異性之 mAb進行的被動免疫療法達成。預期如此處提出之靶向1病變之免疫療法會抵抗已知或假定導致突觸功能障礙及神經退化之病理性蛋白質τ構象異構體。提出所致澱粉樣蛋白病變與過璘酸化蛋白質丁之神經元内聚集體在導致輕度認知障礙（Mci)成為重度心廢呆之病理性事件的認知及退化性級聯中起協同作用。因此，與當前單療法相tb，,定向藥物療法與澱粉樣蛋白定向（或任何其他）藥物療法之組合將構成較佳且實質上更有效之AD治療。缺乏靶向蛋白質τ之其他治療方法且其主要包含： • δ忍為會在病理程度上增加τ之磷酸化之激酶的抑制劑 •阻斷過磷酸化蛋白質τ之細胞質聚集之化合物。此等方法會遇到特異性及功效之各種缺點，此為其在試圖改變ΑΡΡ及澱粉樣蛋白之代謝時所共有的問題，所有皆 159338.doc 201216985 強調持續搜索其他治療方案，包括針對免疫療要性。 ’、叼垔在實踐中，.無努力已致力於活體内確定病理性τ構象異構體，更不用說活體内靶向病理性1構象異構體。在AM] II期臨床試驗中，纏結病變似乎未經充分考慮亦未經深度分析（Nicoll等人，2003 ; Masliah等人，2〇〇5)。另—方面，靶向患有組合AD樣病變之臨床前小鼠模型中之澱粉樣蛋白的實驗免疫療法亦證明儘管τ聚集體存留，但對工病變具有影響（Oddo等人，2004)。已對藉由免疫療法探討細胞内蛋白質之可行性投有一此疑問。此4疑問已由在τ病變小鼠模型中進行之最新近實驗研究（Asuni等人，20〇7)加以還擊。其顯示藉由接種由蛋白質τ產生之磷酸肽達成纏結病變減輕及功能性改良。此等資料確證靶向帕金森氏病（PD)及路易體（Lewy body)疾病模型中之（X突觸核蛋白（Synuciein)(Masliah等人，2〇〇5, 2011)及肌萎縮性側索硬化（amy〇tr〇phic lateral sclerosis， ALS)模型中之超氧化歧化酶（Urushitiani等人，2007)之免疫療法的先前報導。此等疾病為細胞内蛋白質藉由迄今尚未充分瞭解之機制導致突觸缺陷及神經退化的實例。另一方面，在細菌中產生且自細菌分離之全長重組蛋白質1似乎不適合作為疫苗，但所用佐劑（亦即完全弗氏（Freunds) 佐劑）及百日咳毒素（pertussis toxin)可能已有助於彼研究之陰性結果（Rosenmann等人，2006)。對起抵抗已知或假定導致神經退化性病症之病理性蛋白 159338.doc 201216985 質構象異構體作用之被動及/或活性免疫療法存有未滿足的需要，該等病症諸如例如由過填酸化蛋白質τ之神經元内聚集體導致之AD中的澱粉樣蛋白病變，對於ad而言，該等聚集體與澱粉樣蛋白一樣典型。【發明内容】

此未滿足之需要可在本發明範鳴内藉由提供識別且結合 τ蛋白之主要病理性磷酸化抗原決定基之結合蛋白來滿足。特定言之’本發明提供針對蛋白質τ上，特定言之聚集τ蛋白上之咸信負貴τ病變（包括AD)中之突觸及神經毒性之線性及構形、簡單及複雜磷酸化抗原決定基的特異性抗體。因此，本發明係關於一種抗體，特定言之一種單株抗體或其功能部分，該抗體識別且特異性結合哺乳動物1蛋白或其片段上之磷酸化抗原決定基，其中該抗體對聚集τ蛋白具有高結合親和力，且調節可溶性及不溶性τ含量，特定言之在腦中之含量。在-實施例中’本發明係關於—種結合肽或蛋白質或其功能部分，特定言之係關於一種抗體，特定言之一種單株抗體或其功能部分’該結合肽或蛋白質或抗體識別且特显性結合嗤乳動^蛋白，特定言之人類τ蛋白或其片段上之填酸化抗原決定基，特定言之聚^蛋白上之磷酸化抗原決定基，特定言之識別且特異性結合病理性蛋白^構象異構體，但在-實施财結合相應未磷酸化抗原決定基及/或非相關抗原^基，其中該結合肽或抗體具有高 I59338.doc 201216985 結合親和力，當在如實例中揭示之結合檢定中敎時，解離常數為至少1〇ηΜ、特定言之至少8nM，特定言之至少5 nM，特定言之至少2 nM，特定言之至少i -，特定：之至少500 pM’特定言之至少4⑽pM，特定言之至少_ PM，特定言之至少 pM，特定言之至少⑽pM，特定言之至少50 pM » 在第二實施例中’本發明係關於—種結合肽或蛋白質或其功能部分’特定言之係、關於__種抗體，㈣言之―種單株抗體或其功能部分’特定言之任何先前實施例之一種社合肽或抗體’該結合肽或抗體識別且特異性結合哺乳動^ τ蛋白，特定言之人類1蛋白或其片段上之磷酸化抗原決定基特疋a之識別且特異性結合病理性蛋白質：構象異構體彳在#施例中，不結合相應未鱗酸化抗原決定基及/ 或非相關抗原決^基’丨中當在如實例中揭示之結合檢定中:則定時’該結合肽或抗體之締合速率常數為ΙΟ4 Μ、-丨或 10 M S以上’特定言之介於35χΐ〇4 Μ、丨或“1〇4 丨以上之間，特定言之1〇5 M-V1或1〇5 M-V以上；特定令之2 ^ 10 M s或9χ1〇5 Μ」〆以上；特定言之ι〇6 μ v 或10 M s以上，特定言之ΐ 4χΐ〇6 m.1s.丨或4χΐ〇6 μ、」以上，特定言之1〇7M-丨s-丨或107M-is·丨以上。貫施例中，本發明係關於一種結合肽或蛋白質或其力月bP刀特疋言之係關於一種抗體.，特定言之一種單 :抗體或其功能部分，特定言之任何先前實施例之—種結。肽或抗體’該結合肽或抗體識別且特異性結合哺乳動物 159338.doc 201216985 τ蛋白^特定言之人類τ蛋白或其片段上之填酸化抗原決定基’特疋吕之識別且特異性結合病理性蛋白質：構象異構體仁在f施例中，不結合相應未碟酸化抗原決定基及/ 或非相關抗原決定基，其中該結合狀或抗體具有高結合親和力，當在如實例中揭示之結合檢定中測定時，具有解離常數至少4 nM及締合速率常數1〇5 1^、-1或1〇5 M-ls“以上，特$定言之解離常數至少3 nM&締合速率常數1〇6 Μ.γ1或 1〇6 Μ、1以上，特定言之解離常數至少2 ηΜ及締合速率常 •數ΙΟ4 Μ·丨S·丨或1〇4 ΜΛ-1以上，特定言之解離常數至少1 ηΜ及締合速率常數1〇5 Μ·νι或1〇5 Μ·,〆以上，特定 5之解離常數至少2〇〇 pM及締合速率常數丨〇5 mS-1 或ΙΟ5 Μ、1以上，特定言之解離常數至少1〇〇 pM及締合速率常數或1〇6μ·ι，以上。本發明之一實施例（4)係關於一種結合肽或蛋白質或其功能部分，特定言之係關於一種抗體，特定言之一種單株抗體或其功能部分，特定言之任何先前實施例之一種結合鲁肽或抗體，該結合肽或抗體識別且特異性結合哺乳動物τ 蛋白，特定言之人類τ蛋白或其片段上之磷酸化抗原決定基’特定言之識別且特異性結合病理性蛋白質^^冓象異構體，但在一實施例中，不結合相應未磷酸化抗原決定基及/ 或非相關抗原決定基’其中該結合肽或抗體結合哺乳動物 τ蛋白，特定言之如SEQ ID NO: 67中所示之人類τ蛋白上之抗原決定基’其選自由以下組成之群：在位置18處包含填酸化Tyr(Y18)之τ aa 15-20、在位置409處包含填酸化 159338.doc -9- 201216985

Ser(pS409)之τ aa 405-412、在位置409處包含磷酸化 Ser(pS409)之τ aa 405-411、及在位置212處包含磷酸化 Thr(pT212)且在位置214處包含磷酸化Ser(pS214)之τ aa 208-218 。一實施例（5)係關於任何先前實施例之結合肽或抗體，其中該肽結合哺乳動物τ蛋白，特定言之人類τ蛋白，但尤其如SEQ ID NO: 67中所示之包含在位置18處具有磷酸化 Tyr(Y18)之τ aa 15-20的人類1蛋白上之抗原決定基。一實施例（6)係關於任何先前實施例之結合肽或抗體，其中該狀結合嘴乳動物τ蛋白，特定言之人類τ蛋白，但尤其如SEQ ID NO: 67中所示之包含在位置4〇9處具有磷酸化 Ser(pS409)之τ aa 405-412的人類1蛋白上之抗原決定基。一實施例（7)係關於任何先前實施例之結合肽或抗體，其中該肽結合哺乳動物τ蛋白，特定言之人類τ蛋白，但尤其如SEQ ID NO: 67中所示之包含在位置4〇9處具有磷酸化 Ser(PS409)之τ aa 405-411的人類7蛋白上之抗原決定基。一實施例（8)係關於任何先前實施例之結合肽或抗體，其中該肽結合哺乳動物τ蛋白，特定言之人類τ蛋白，但尤其如SEQ ID NO: 67中所示之包含在位置212處具有磷酸化 Thr(PT212)且在位置214處具有磷酸化Ser(pS214)之τ aa 208-218的人類τ蛋白上之抗原決定基。在另一實施例（9)中’本發明係關於一種結合肽或蛋白質或其功能部分，特定言之係關於—種抗體，特定言之一種單株U或其功能部分’肖^：言之任何先前實施例之一 159338.doc 201216985

種結合肽或抗體，該結合肽或抗體識別且特異性結合哺乳動物τ蛋白，特定言之人類τ蛋白或其片段上之磷酸化抗原決定基，特定言之識別且特異性結合病理性蛋白質τ構象異構體，但在一實施例中，不結合相應未磷酸化抗原決定基及/或非相關抗原決定基，其中該結合肽或抗體包含第一結合域，其特定言之依次含有具有展示於SEQ ID NO: 21、24、27、28、29 ' 32、73、81、93、101、106 中之胺基酸序列、或與以上胺基酸序列至少70%，特定言之至少 80%，特定言之至少85%，特定言之至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%，特定言之至少95%，特定言之至少96%，特定言之至少97%，特定言之至少98%，特定言之至少99%或100%—致之胺基酸序列的CDR1 ;具有展示於 SEQ ID NO: 22、25、30、33、74、82、94、 1 02、107中之胺基酸序列、或與以上胺基酸序列至少 90%、至少91%、至少92%、至少93°/。、至少94%，特定言之至少95%，特定言之至少96%，特定言之至少97%，特定言之至少98%，特定言之至少99%或100%—致之胺基酸序列的CDR2 ;及具有展示於SEQ ID NO: 23、26、31、 34、75、83、95、103、108中之胺基酸序歹>J、或與以上胺基酸序列至少60%，特定言之至少70%，特定言之至少 80%，特定言之至少85%，特定言之至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%，特定言之至少95%，特定言之至少96%，特定言之至少97%，特定言之至少98%，特定言之至少99%或100%—致之胺基酸序列的CDR3 ;及/ 159338.doc 201216985 或第二結合域，其依次含有具有展示於SEQ ID NO: 12、 15、 18、70、78、89、98中之胺基酸序列、或與以上胺基酸序列至少90%、至少91%、至少92%、至少93°/。、至少 94%，特定言之至少95%，特定言之至少96%，特定言之至少97%，特定言之至少98%，特定言之至少99%或100% 一致之胺基酸序列的CDR1 ;具有展示於SEQ ID NO: 13、 16、 19、71、79、90、99、115中之胺基酸序列、或與以上胺基酸序列至少80%，特定言之至少85%，特定言之至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%，特定言之至少95%，特定言之至少96%，特定言之至少97%，特定言之至少98%，特定言之至少99%或100%—致之胺基酸序列的CDR2 ;及具有展示於SEQ ID NO: 14、17、20、 72、80、91、100中之胺基酸序列、或與以上胺基酸序列至少60%、至少70%、至少80%，特定言之至少85%，特定言之至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少 94%，特定言之至少95%，特定言之至少96%，特定言之至少97%，特定言之至少98%，特定言之至少99%或100% 一致之胺基酸序列的CDR3。本發明之一實施例（10)係關於一種結合肽或蛋白質或其功能部分，特定言之係關於一種抗體，特定言之一種單株抗體或其功能部分，特定言之任何先前實施例之一種結合肽或抗體，該結合肽或抗體識別且特異性結合哺乳動物τ 蛋白，特定言之人類τ蛋白或其片段上之磷酸化抗原決定基，特定言之識別且特異性結合病理性蛋白質τ構象異構 159338.doc -12- 201216985

體，但在一實施例中，不結合相應未磷酸化抗原決定基及/ 或非相關抗原決定基，其中該結合肽或抗體包含第一結合域，其依次含有具有展示於SEQ ID NO: 21、24、27、 28、29、32、73、81中之胺基酸序列、或與以上胺基酸序列至少85°/。一致之胺基酸序列的CDR1 ;具有展示於SEQ ID NO: 22、25、30、33、74、82中之胺基酸序列、或與以上胺基酸序列至少95°/。一致之胺基酸序列的CDR2 ;及具有展示於SEQ ID NO: 23、26、31、34、75、83 中之胺基酸序列、或與以上胺基酸序列至少80% —致之胺基酸序列的CDR3 ;及/或某一抗體域，其含有具有展示於SEQ ID NO: 12、15、18、70、78中之胺基酸序列、或與以上胺基酸序列至少95% —致之胺基酸序列的CDR1 ;具有展示於 SEQ ID NO: 13、16、19、71、79中之胺基酸序列、或與以上胺基酸序列至少85%—致之胺基酸序列的CDR2 ;及具有展示於SEQ ID NO: 14、17、20、72、80中之胺基酸序列、或與以上胺基酸序列至少85% —致之胺基酸序列的 CDR3。本發明之一實施例（11)係關於一種結合肽或蛋白質或其功能部分，特定言之係關於一種抗體，特定言之一種單株抗體或其功能部分，特定言之任何先前實施例之一種結合狀或抗體’ §亥結合狀或抗體識別且特異性結合哺乳動物τ 蛋白’特定言之人類τ蛋白或其片段上之磷酸化抗原決定基，特定言之識別且特異性結合病理性蛋白質1構象異構體，但在一實施例中，不結合相應未磷酸化抗原決定基及/ 159338.doc • 13- 201216985 或非相關抗原決定基，其中該結合肽或抗體包含第一結合域，其依次含有具有展示於SEQ ID NO: 21、24、27、 28、29、32、73、81中之胺基酸序列、或與以上胺基酸序列至少90%—致之胺基酸序列的CDR1 ;具有展示於SEQ ID NO: 22、25、30、33、74、82中之胺基酸序列、或與以上胺基酸序列至少95%—致之胺基酸序列的CDR2 ;及具有展示於SEQ ID NO: 23、26、31、34、75、83 中之胺基酸序列、或與以上胺基酸序列至少90% —致之胺基酸序列的CDR3 ;及/或第二結合域，其依次含有具有展示於SEQ ID NO: 12、15、18、70、78中之胺基酸序列、或與以上胺基酸序列至少95%—致之胺基酸序列的CDR1 ;具有展示於SEQ ID NO: 13、16、19、71、79中之胺基酸序列、或與以上胺基酸序列至少95% —致之胺基酸序列的CDR2 ;及具有展示於SEQ ID NO: 14、17、20、72、80中之胺基酸序列、或與以上胺基酸序列至少90% —致之胺基酸序列的 CDR3。本發明之一實施例（12)係關於一種結合肽或蛋白質或其功能部分’特定言之係關於一種抗體，特定言之一種單株抗體或其功能部分’特定言之任何先前實施例之一種結合肽或抗體，該結合肽或抗體識別且特異性結合哺乳動物τ 蛋白’特定言之人類τ蛋白或其片段上之磷酸化抗原決定基，特定言之識別且特異性結合病理性蛋白質1構象異構體，但在一實施例中，不結合相應未磷酸化抗原決定基及/ 或非相關抗原決定基，其中該結合肽或抗體包含第一結合 159338.doc •14- 201216985 域（抗體域），其依次含有具有展示於SEQ ID NO: 21、24、

27、 28、29、32、73、81中之胺基酸序列、或與以上胺基酸序列至少90% —致之胺基酸序列的CDR1 ;具有展示於 SEQ ID NO: 22、25、30、33、74、82 中之胺基酸序列的 CDR2 ;及具有展示於SEQ ID NO: 23、26、31、34、75、 83中之胺基酸序列、或與以上胺基酸序列至少90% —致之胺基酸序列的CDR3 ;及/或第二結合域，其依次含有具有展示於SEQ ID NO: 12、15、18、70、78中之胺基酸序列的 CDR1 ;具有展示於SEQ ID NO: 13、16、19、71、79 中之胺基酸序列、或與以上胺基酸序列至少95% —致之胺基酸序列的CDR2 ;及具有展示於SEQ ID NO: 14、17、20、 72、80中之胺基酸序列、或與以上胺基酸序列至少9〇% — 致之胺基酸序列的CDR3。本發明之一實施例（13)係關於一種結合肽或蛋白質或其功能部分’特定言之係關於一種抗體，特定言之一種單株抗體或其功能部分’特定言之任何先前實施例之一種結合肽或抗體，該結合肽或抗體識別且特異性結合哺乳動物τ 蛋白，特定言之人類τ蛋白或其片段上之磷酸化抗原決定基，特定言之識別且特異性結合病理性蛋白質^^構象異構體，但在一實施例中，不結合相應未磷酸化抗原決定基及/ 或非相關抗原決定基中該結合肽或抗體包含第一結合域其依次含有具有展示於SEQ Π) NO: 21、24、27、 28、 29、32中之胺基酸序列、或與以上胺基酸序列至少 98%—致之胺基酸序列的CDR1 ;具有展示於seq ι〇 n〇: 159338.doc -15- 201216985 22、25、30、33中之胺基酸序列的CDR2 ;及具有展示於 SEQ ID NO: 23、26、31、34中之胺基酸序列、或與以上胺基酸序列至少95%—致之胺基酸序列的CDR3 ;及/或第一結合域’其依次含有具有展示於SEQ ID NO: 12、1 5、 18中之胺基酸序列的CDR1 ;具有展示於SEq id NO: 13、 16、 19中之胺基酸序列、或與以上胺基酸序列至少95%一致之胺基酸序列的CDR2 ;及具有展示於SEq id NO: 14、 17、 20中之胺基酸序列、或與以上胺基酸序列至少9〇% 一致之胺基酸序列的CDR3。本發明之一實施例（14)係關於一種結合肽或蛋白質或其功能部分’特定言之係關於一種抗體，特定言之一種單株抗體或其功能部分’特定言之任何先前實施例之一種結合肽或抗體’該結合肽或抗體識別且特異性結合哺乳動物τ 蛋白，特定言之人類τ蛋白或其片段上之磷酸化抗原決定基’特定言之識別且特異性結合病理性蛋白質^:構象異構體’但在一實施例中，不結合相應未磷酸化抗原決定基及/ 或非相關抗原決定基’其中該結合肽或抗體包含第一結合域，其依次含有具有展示於SEQ ID NO: 21、24、27、 28、29、32中之胺基酸序列、或與以上胺基酸序列至少 98%—致之胺基酸序列的CDR1 ;具有展示於SEQ ID NO: 22、25、30、33中之胺基酸序列的CDR2 ;及具有展示於 SEQ ID NO: 23、26、31、34中之胺基酸序列、或與以上胺基酸序列至少98% —致之胺基酸序列的CDR3 ;及/或第二結合域’其依次含有具有展示於SEQ ID NO: 12、15、 159338.doc -16- 201216985 18中之胺基酸序列的CDRl ;具有展示於SEQ ID NO: 13、 16、 19中之胺基酸序列、或與以上胺基酸序列至少9 8 °/〇 — 致之胺基酸序列的CDR2 ;及具有展示於SEQ ID NO: 14、 17、 20中之胺基酸序列、或與以上胺基酸序列至少90% — 致之胺基酸序列的CDR3。

本發明之一實施例（15)係關於一種結合肽或蛋白質或其功能部分，特定言之係關於一種抗體，特定言之一種單株抗體或其功能部分’特定言之任何先前實施例之一種結合肽或抗體，該結合肽或抗體識別且特異性結合哺乳動物τ 蛋白’特定言之人類τ蛋白或其片段上之磷酸化抗原決定基’特定言之識別且特異性結合病理性蛋白質τ構象異構體’但在一實施例中，不結合相應未磷酸化抗原決定基及/ 或非相關抗原決定基’其中該結合肽或抗體包含第一結合域，其依次含有具有展示於SEQ ID NO: 21、24、27、 28、29、32、73、81、93、101或1〇ό中之胺基酸序列的 CDR1 ;具有展示於 SEQ ID NO: 22、25、30、33、74、 82、94、102或107中之胺基酸序列的CDR2 ;及具有展示於 SEQ ID NO: 23、26、31、34、75、83、95、103 或 1〇8 中之胺基酸序列的CDR3，及/或第二結合域，其依次含有具有展示於 SEQ ID NO: 12、15、18、70、78、89 或 98 中之胺基酸序列的CDR1 ;具有展示於SEQ ID NO: 13、16、 19、71、79、90、99或115中之胺基酸序列的CDR2 ;及具有展示於 SEQ ID NO: 14、17、20、72、80、91 或 100 中之胺基酸序列的CDR3。 159338.doc •17· 201216985 本發明之一實施例（16)係關於一種結合肽或蛋白質或其功能部分，特定言之係關於一種抗體，特定言之一種單株抗體或其功能部分，特定言之任何先前實施例之一種結合肽或抗體，該結合肽或抗體識別且特異性結合哺乳動物τ 蛋白，特定言之人類τ蛋白或其片段上之磷酸化抗原決定基，特定言之識別且特異性結合病理性蛋白質τ構象異構體，但在一實施例中，不結合相應未磷酸化抗原決定基及/ 或非相關抗原決定基，其中該結合肽或抗體包含第一結合域，其依次含有具有展示於SEQ ID NO: 21中之胺基酸序列或與以上胺基酸序列至少76°/。，特定言之至少80%，特定言之至少85%，特定言之至少90%，特定言之至少 95%，特定言之至少98%，特定言之至少99%—致之胺基酸序列的CDR1 ;具有展示於SEQ ID NO: 22中之胺基酸序列或與以上胺基酸序列至少95°/。，特定言之98%，特定言之99%—致之胺基酸序列的CDR2 ;及具有展示於SEQ ID NO: 23中之胺基酸序列或與以上胺基酸序列至少66%，特定言之至少70%，特定言之至少75%，特定言之至少 80%，特定言之至少85%，特定言之至少90%，特定言之至少95%，特定言之至少98%，特定言之至少99% —致之胺基酸序列的CDR3 ;及/或第二結合域，其依次含有具有展示於SEQ ID NO: 12中之胺基酸序列或與以上胺基酸序列至少95%，特定言之98%，特定言之99% —致之胺基酸序列的CDR1 ;具有展示於SEQ ID NO: 13中之胺基酸序列或與以上胺基酸序列至少88%，特定言之至少90%，特定 159338.doc •18- 201216985 言之至少95%，特定言之至少98%，特定言之至少99%— 致之胺基酸序列的CDR2 ;及具有展示於SEQ ID NO: 14中之胺基酸序列或與以上胺基酸序列至少66%，特定言之至少70%，特定言之至少75%，特定言之至少80%，特定言之至少85%，特定言之至少90%，特定言之至少95%，特定言之至少98%，特定言之至少99% —致之胺基酸序列的 CDR3。

本發明之一實施例（17)係關於一種結合肽或蛋白質或其功能部分，特定言之係關於一種抗體，特定言之一種單株抗體或其功能部分，特定言之任何先前實施例之一種結合肽或抗體，該結合肽或抗體識別且特異性結合哺乳動物τ 蛋白，特定言之人類τ蛋白或其片段上之磷酸化抗原決定基，特定言之識別且特異性結合病理性蛋白質τ構象異構體，但在一實施例中，不結合相應未磷酸化抗原決定基及/ 或非相關抗原決定基，其中該結合肽或抗體包含第一結合域，其依次含有具有展示於SEQ ID NO: 24或SEQ ID NO: 27或SEQ ID NO: 28中之胺基酸序列或與以上胺基酸序列至少88%，特定言之至少85%，特定言之至少90°/。，特定言之至少95%，特定言之至少98%，特定言之至少99°/〇 — 致之胺基酸序列的CDR1 ;具有展示於SEQ ID NO·· 25中之胺基酸序列或與以上胺基酸序列至少95%，特定言之 98%，特定言之99%—致之胺基酸序列的CDR2 ;及具有展示於SEQ ID NO: 26中之胺基酸序列或與以上胺基酸序列至少66%，特定言之至少70%，特定言之至少75%，特定 159338.doc -19- 201216985 言之至少80%，特定言之至少85%，特定言之至少90%，特定言之至少95%，特定言之至少98%，特定言之至少 99%—致之胺基酸序列的CDR3 ;及/或第二結合域，其依次含有具有展示於SEQ ID NO: 12中之胺基酸序列或與以上胺基酸序列至少95°/。，特定言之98%，特定言之99%— 致之胺基酸序列的CDR1 ;具有展示於SEQ ID NO: 13中之胺基酸序列或與以上胺基酸序列至少88°/。，特定言之至少 90%，特定言之至少95%，特定言之至少98%，特定言之至少99% —致之胺基酸序列的CDR2 ;及具有展示於SEQ ID NO: 14中之胺基酸序列或與以上胺基酸序列至少66%，特定言之至少70%，特定言之至少75%，特定言之至少 80%，特定言之至少85%，特定言之至少90%，特定言之至少95%，特定言之至少98%，特定言之至少99% —致之胺基酸序列的CDR3。本發明之一實施例（1 8)係關於一種根據實施例（1 5)之包含第一結合域之結合肽或蛋白質或其功能部分，特定言之係關於一種抗體，特定言之一種單株抗體或其功能部分，其中CDR1具有展示於SEQ ID NO: 27中之胺基酸序列或與以上胺基酸序列至少88%—致之胺基酸序列。本發明之一實施例（19)係關於一種根據實施例（15)之包含第一結合域之結合肽或蛋白質或其功能部分，特定言之係關於一種抗體，特定言之一種單株抗體或其功能部分，其中CDR1具有展示於SEQ ID NO: 28中之胺基酸序列或與以上胺基酸序列至少88%—致之胺基酸序列。 159338.doc -20- 201216985

本發明之一實施例（20)係關於一種結合肽或蛋白質或其功能部分，特定言之係關於一種抗體，特定言之一種單株抗體或其功能部分，特定言之任何先前實施例之一種結合肽或抗體，該結合肽或抗體識別且特異性結合哺乳動物τ 蛋白，特定言之人類τ蛋白或其片段上之磷酸化抗原決定基，特定言之識別且特異性結合病理性蛋白質τ構象異構體，但在一實施例中，不結合相應未磷酸化抗原決定基及/ 或非相關抗原決定基，其中該結合肽或抗體包含第一結合域，其依次含有具有展示於SEQ ID NO: 29中之胺基酸序列的CDR1 ;具有展示於SEQ ID NO: 30中之胺基酸序列的 CDR2 ;及具有展示於SEQ ID NO: 31中之胺基酸序列、或與以上胺基酸序列至少95%，特定言之98%，特定言之 99%—致之胺基酸序列的CDR3 ;及/或第二結合域，其依次含有具有展示於SEQ ID NO: 15中之胺基酸序列、或與以上胺基酸序列至少95%，特定言之98%，特定言之99% 一致之胺基酸序列的CDR1 ;具有展示於SEQ ID NO·· 16中之胺基酸序列、或與以上胺基酸序列至少94%、95%、 96%、97%、98%或99%—致之胺基酸序列的CDR2 ;及具有展示於SEQ ID NO: 17中之胺基酸序列、或與以上胺基酸序列至少36%，特定言之至少40%，特定言之至少 50%，特定言之至少60%，特定言之至少70%，特定言之至少75%，特定言之至少80%，特定言之至少85%，特定言之至少90°/。，特定言之至少95%，特定言之至少98%，特定言之至少99%—致之胺基酸序列的CDR3。 159338.doc -21 · 201216985 本發明之一實施例（21)係關於一種結合肽或蛋白質或其功能部分，特定言之係關於一種抗體，特定言之一種單株抗體或其功能部分，特定言之任何先前實施例之一種結合肽或抗體，該結合肽或抗體識別且特異性結合哺乳動物τ 蛋白，特定言之人類τ蛋白或其片段上之磷酸化抗原決定基，特定言之識別且特異性結合病理性蛋白質τ構象異構體，但在一實施例中，不結合相應未磷酸化抗原決定基及/ 或非相關抗原決定基，其中該結合肽或抗體包含第一結合域，其依次含有具有展示於SEQ ID NO: 32中之胺基酸序列的CDR1 ;具有展示於SEQ ID NO: 33中之胺基酸序列的 CDR2 ;及具有展示於SEQ ID NO·· 34中之胺基酸序列、或與以上胺基酸序列至少95%，特定言之98%，特定言之 99°/。一致之胺基酸序列的CDR3 ;及/或第二結合域，其依次含有具有展示於SEQ ID NO: 18中之胺基酸序列、或與以上胺基酸序列至少95%，特定言之98%，特定言之99% 一致之胺基酸序列的CDR1 ;具有展示於SEQ ID NO: 19中之胺基酸序列、或與以上胺基酸序列至少95%、96%、 97%、98%或99%—致之胺基酸序列的CDR2 ;及具有展示於SEQ ID NO: 20中之胺基酸序列、或與以上胺基酸序列至少63%，特定言之至少70%，特定言之至少75%，特定言之至少80%，特定言之至少85%，特定言之至少90%，特定言之至少95%，特定言之至少98%，特定言之至少 99%—致之胺基酸序列的CDR3。本發明之一實施例（22)係關於一種結合肽或蛋白質或其 159338.doc •22- 201216985

功能部分，特定言之係關於一種抗體，特定言之一種單株抗體或其功能部分，特定言之任何先前實施例之一種結合肽或抗體，該結合肽或抗體識別且特異性結合哺乳動物τ 蛋白，特定言之人類τ蛋白或其片段上之磷酸化抗原決定基，特定言之識別且特異性結合病理性蛋白質τ構象異構體，但在一實施例中，不結合相應未磷酸化抗原決定基及/ 或非相關抗原決定基，其中該結合肽或抗體包含第一結合域，其依次含有具有展示於SEQ ID NO: 73中之胺基酸序列的CDR1 ;具有展示於SEQ ID NO: 74中之胺基酸序列的 CDR2 ;及具有展示於SEQ ID NO: 75中之胺基酸序列、或與以上胺基酸序列至少60%、至少70%、至少80%，特定言之至少85%，特定言之至少90%、至少91°/。、至少92%、至少93%、至少94%，特定言之至少95%，特定言之至少 96%，特定言之至少97%，特定言之至少98%，特定言之至少99%或100%—致之胺基酸序列的CDR3 ;及/或第二結合域，其依次含有具有展示於SEQ ID NO: 70中之胺基酸序列、或與以上胺基酸序列至少95%，特定言之98%，特定言之99%—致之胺基酸序列的CDR1 ;具有展示於SEQ ID NO: 71中之胺基酸序列、或與以上胺基酸序列至少 94%、95%、96%、97%、98%或99%—致之胺基酸序列的 CDR2 ;及具有展示於SEQ ID NO: 72中之胺基酸序列、或與以上胺基睃序列至少60%、至少70%、至少80%，特定言之至少85%，特定言之至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%，特定言之至少95%，特定言之至少 159338.doc •23· 201216985 96%，特定言之至少97%，特定言之至少98%，特定言之至少99%或100%—致之胺基酸序列的CDR3。本發明之一實施例（23)係關於一種結合肽或蛋白質或其功能部分，特定言之係關於一種抗體，特定言之一種單株抗體或其功能部分，特定言之任何先前實施例之一種結合肽或抗體，該結合肽或抗體識別且特異性結合哺乳動物τ 蛋白，特定言之人類τ蛋白或其片段上之磷酸化抗原決定基，特定言之識別且特異性結合病理性蛋白質τ構象異構體，但在一實施例中，不結合相應未磷酸化抗原決定基及/ 或非相關抗原決定基，其中該結合肽或抗體包含第一結合域，其依次含有具有展示於SEQ ID NO: 81中之胺基酸序列的CDR1 ;具有展示於SEQ ID NO: 82中之胺基酸序列的 CDR2 ;及具有展示於SEQ ID NO: 83中之胺基酸序列、或與以上胺基酸序列至少60%、至少70%、至少80%，特定言之至少85%，特定言之至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%，特定言之至少95%，特定言之至少 96%，特定言之至少97%，特定言之至少98%，特定言之至少99%或100%—致之胺基酸序列的CDR3 ;及/或第二結合域，其依次含有具有展示於SEQ ID NO: 78中之胺基酸序列的CDR1 ;具有展示於SEQ ID NO: 79中之胺基酸序列的CDR2 ;及具有展示於SEQ ID NO: 80中之胺基酸序列、或與以上胺基酸序列至少60%、至少70%、至少80%，特定言之至少85%，特定言之至少90%、至少91%、至少 92%、至少93%、至少94%，特定言之至少95%，特定言之 159338.doc -24- 201216985 至少96%，特定言之至少97%，特定言之至少98%，特定言之至少99%或100%—致之胺基酸序列的CDR3。

本發明之一實施例（24)係關於一種結合肽或蛋白質或其功能部分，特定言之係關於一種抗體，特定言之一種單株抗體或其功能部分，特定言之任何先前實施例之一種結合肽或抗體，該結合肽或抗體識別且特異性結合哺乳動物τ 蛋白，特定言之人類τ蛋白或其片段上之磷酸化抗原決定基，特定言之識別且特異性結合病理性蛋白質τ構象異構體，但在一實施例中，不結合相應未磷酸化抗原決定基及/ 或非相關抗原決定基，其中該結合肽或抗體包含第一結合域，其依次含有具有展示於SEQ ID NO: 93中之胺基酸序列的CDR1 ;具有展示於SEQ ID NO·· 94中之胺基酸序列的 CDR2 ;及具有展示於SEQ ID NO: 95中之胺基酸序列 '或與以上CDR之任一者至少60%、至少70%、至少80%，特定言之至少85%，特定言之至少90%、至少91%、至少 92%、至少93%、至少94%，特定言之至少95%，特定言之至少96%，特定言之至少97%，特定言之至少98%，特定言之至少99%或100%—致之胺基酸序列的CDR3 ;及/或第二結合域，其依次含有具有展示於SEQ ID NO: 89中之胺基酸序列的CDR1 ;具有展示於SEQ ID NO: 90中之胺基酸序列的CDR2 ;及具有展示於SEQ ID NO: 91中之胺基酸序列、或與以上CDR之任一者至少60%、至少70%、至少 80%，特定言之至少85%，特定言之至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%，特定言之至少95%，特定 159338.doc -25· 201216985 言之至少96%，特定言之至少97%，特定言之至少98%，特定言之至少99%或100%—致之胺基酸序列的CDR3。本發明之一實施例（25)係關於一種結合肽或蛋白質或其功能部分，特定言之係關於一種抗體，特定言之一種單株抗體或其功能部分，特定言之任何先前實施例之一種結合肽或抗體，該結合肽或抗體識別且特異性結合哺乳動物τ 蛋白，特定言之人類τ蛋白或其片段上之磷酸化抗原決定基，特定言之識別且特異性結合病理性蛋白質τ構象異構體，但在一實施例中，不結合相應未磷酸化抗原決定基及/ 或非相關抗原決定基，其中該結合肽或抗體包含第一結合域，其依次含有具有展示於SEQ ID NO: 101中之胺基酸序列的CDR1 ;具有展示於SEQ ID NO: 102中之胺基酸序列的CDR2 ;及具有展示於SEQ ID NO: 103中之胺基酸序列、或與以上CDR之任一者至少60%、至少70%、至少 80%，特定言之至少85%，特定言之至少90%、至少91°/〇、至少92%、至少93%、至少94%，特定言之至少95%，特定言之至少96%，特定言之至少97%，特定言之至少98%，特定言之至少99%或100%—致之胺基酸序列的CDR3 ;及/ 或第二結合域，其依次含有具有展示於SEQ ID NO: 98中之胺基酸序列的CDR1 ;具有展示於SEQ ID NO: 99中之胺基酸序列的CDR2 ;及具有展示於SEQ ID NO: 100中之胺基酸序列、或與以上CDR之任一者至少60%、至少70%、至少80%，特定言之至少85%，特定言之至少90%、至少 91%、至少92%、至少93%、至少94%，特定言之至少 159338.doc -26- 201216985 95%，特定言之至少96%，特定言之至少97%，特定言之至少98%，特定言之至少99%或100%—致之胺基酸序列的 CDR3。

本發明之一實施例（26)係關於一種結合肽或蛋白質或其功能部分，特定言之係關於一種抗體，特定言之一種單株抗體或其功能部分，特定言之任何先前實施例之一種結合肽或抗體，該結合肽或抗體識別且特異性結合哺乳動物τ 蛋白，特定言之人類τ蛋白或其片段上之磷酸化抗原決定基，特定言之識別且特異性結合病理性蛋白質τ構象異構體，但在一實施例中，不結合相應未磷酸化抗原決定基及/ 或非相關抗原決定基，其中該結合肽或抗體包含第一結合域，其依次含有具有展示於SEQ ID NO: 106中之胺基酸序列的CDR1 ;具有展示於SEQ ID NO: 107中之胺基酸序列的CDR2 ;及具有展示於SEQ ID NO: 108中之胺基酸序列、或與以上CDR之任一者至少60%、至少70%、至少 80%，特定言之至少85%，特定言之至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%，特定言之至少95%，特定言之至少96%，特定言之至少97%，特定言之至少98%，特定言之至少99%或100%—致之胺基酸序列的CDR3 ;及/ 或第二結合域，其依次含有具有展示於SEQ ID NO: 89中之胺基酸序列的CDR1 ;具有展示於SEQ ID NO: 115中之胺基酸序列的CDR2 ;及具有展示於SEQ ID NO: 91中之胺基酸序列、或與以上CDR之任一者至少60°/。、至少70%、至少80%，特定言之至少85%，特定言之至少90%、至少 159338.doc •27- 201216985 91。/。、至少92%、至少93%、至少94%，特定言之至少 95% ’特定言之至少96%，特定言之至少97%，特定言之至少98。/。’特定言之至少99%或ι〇〇%一致之胺基酸序列的 CDR3。本發明之一實施例（27)係關於一種結合肽或蛋白質或其功能部分’特定言之係關於一種抗體，特定言之一種單株抗體或其功能部分’特定言之任何先前實施例之一種結合狀或抗體’該結合肽或抗體識別且特異性結合哺乳動物τ 蛋白’特定言之人類τ蛋白或其片段上之磷酸化抗原決定基’特定言之識別且特異性結合病理性蛋白質1構象異構體’但在一實施例中’不結合相應未磷酸化抗原決定基及/ 或非相關抗原決定基’其中該結合肽或抗體包含第一結合域’其含有展示於SEQ ID NO: 6、7、8、9、10、11中之胺基酸序列或與以上胺基酸序列至少9〇% 一致之胺基酸序列；及/或第二結合域，其含有展示於SEq ID NO: 1、2、 3、4、5中之胺基酸序列或與以上胺基酸序列至少8 5 % 一致之胺基酸序列。在一實施例（28)中’本發明係關於一種結合肽或蛋白質或其功能部分’特定δ之係關於一種抗體，特定言之一種單株抗體或其功能部分’特定言之任何先前實施例之一種結合肽或抗體’該結合肽或抗體識別且特異性結合哺乳動物τ蛋白，特定言之人類τ蛋白或其片段上之磷酸化抗原決定基，特定言之識別且特異性結合病理性蛋白質τ構象異構體，但在一實施例中，不結合相應未磷酸化抗原決定基 159338.doc -28- 201216985 及/或非相關抗原決定基，其中該結合肽或抗體包含第一結合域，其含有展示於SEQ ID NO: 6、7、8、9、10、11 中之胺基酸序列或與以上胺基酸序列至少90% —致之胺基酸序列；及/或第二結合域，其含有展示於SEQ ID NO: 1、2、3、4、5中之胺基酸序列或與以上胺基酸序列至少 91%—致之胺基酸序列。本發明之一實施例（29)係關於一種結合肽或蛋白質或其功能部分，特定言之係關於一種抗體，特定言之一種單株 • 抗體或其功能部分，特定言之任何先前實施例之一種結合肽或抗體，該結合肽或抗體識別且特異性結合哺乳動物τ 蛋白，特定言之人類τ蛋白或其片段上之磷酸化抗原決定基，特定言之識別且特異性結合病理性蛋白質1：構象異構體，但在一實施例中，不結合相應未磷酸化抗原決定基及/ 或非相關抗原決定基，其中該結合肽或抗體包含第一結合域（抗體域），其含有展示於SEQ id NO: 6、7、8、9、10、 11中之胺基酸序列或與以上胺基酸序列至少95%一致之胺 • 基酸序列；及/或第二結合域，其含有展示於SEQ ID NO: 1、2、3、4、5中之胺基酸序列或與以上胺基酸序列至少 91 % —致之胺基酸序列。在另-實施例（30)中，本發明係關於—種結合肽或蛋白質或其功能部分，特定言之係關於一種抗體，特定言之一種單株抗體或其功能部分，特定言之任何先前實施例之一種結合肽或抗體，該結合肽或抗體識別且特異性結合哺乳動物τ蛋白’特定言之人類❻白或其片段上之磷酸化抗原 159338.doc •29· 201216985 決定基’特定言之識別且特異性結合病理性蛋白質τ構象異構體’但在一實施例中，不結合相應未磷酸化抗原決定基及/或非相關抗原決定基，其中該結合肽或抗體包含第一結合域，其含有展示於SEQ ID NO: 69、77、116/92、 97、105中之胺基酸序列或與以上胺基酸序列特定言之至少85%，特定言之至少90%、至少91%、至少92%、至少 93/0、至少94%，特定言之至少95 %，特定言之至少96%，特定言之至少97%，特定言之至少98%，特定言之至少 99°/。或100%—致之胺基酸序列；及/或第二結合域，其含有展示於SEQ ID NO: 68、76、88、96、104中之胺基酸序列或與以上胺基酸序列至少80%，特定言之至少85%，特定言之至少86%，特定言之至少87%，特定言之至少 88°/。’特定言之至少89%，特定言之至少9〇%、至少91〇/〇、至少92%、至少93%、至少94%，特定言之至少95%，特定 s之至少96%，特定言之至少97%，特定言之至少98%，特定言之至少99%或100% —致之胺基酸序列。本發明之一實施例（3 1)係關於一種結合肽或蛋白質或其功能部分’特定言之係關於一種抗體，特定言之一種單株抗體或其功能部分，特定言之任何先前實施例之一種結合肽或抗體’該結合肽或抗體識別且特異性結合哺乳動物τ 蛋白’特定言之人類τ蛋白或其片段上之磷酸化抗原決定基’特定言之識別且特異性結合病理性蛋白質τ構象異構體’但在一實施例中，不結合相應未磷酸化抗原決定基及/ 或非相關抗原決定基’其中該結合肽或抗體包含第一結合 159338.doc -30· 201216985 域，其含有展示於SEQ ID NO: 6或SEQ ID NO·· 7中之胺基酸序列或與以上胺基酸序列分別至少90%及94% 一致之胺基酸序列；及/或第二結合域，其含有展示於犯卩ID NO: 1中之胺基酸序列或與以上胺基酸序列至少91%—致之胺基酸序列。

本發明之一實施例（32)係關於一種結合肽或蛋白質或其功能部分，特定言之係關於一種抗體，特定言之一種單株抗體或其功能部分，特定言之任何先前實施例之一種結合肽或抗體，該結合肽或抗體識別且特異性結合哺乳動物τ 蛋白，特定言之人類τ蛋白或其片段上之磷酸化抗原決定基’特定言之識別且特異性結合病理性蛋白質τ構象異構體’但在一實施例甲，不結合相應未磷酸化抗原決定基及/ 或非相關抗原決定基，其中該結合肽或抗體包含第一結合域’其含有展示於SEQ ID NO: 8中之胺基酸序列或與以上胺基酸序列至少95% —致之胺基酸序列；及/或第二結合域，其含有展示於SEQ ID NO: 2中之胺基酸序列或與以上胺基酸序列至少90% —致之胺基酸序列。本發明之一實施例（33)係關於一種結合肽或蛋白質或其功能部分’特定言之係關於一種抗體，特定言之一種單株抗體或其功能部分，特定言之任何先前實施例之一種結合肽或抗體，該結合肽或抗體識別且特異性結合哺乳動物τ 蛋白，特定言之人類τ蛋白或其片段上之磷酸化抗原決定基，特疋s之識別且特異性結合病理性蛋白質1；構象異構體，但在一實施例中，不結合相應未磷酸化抗原決定基及/ 159338.doc •31· 201216985 或非相關抗原決定基，其中該結合肽或抗體包含第一結合域，其含有展示於SEQ ID NO: 9中之胺基酸序列或與以上胺基酸序列至少95% —致之胺基酸序列；及/或第二結合域，其含有展示於SEQ ID NO: 3中之胺基酸序列或與以上胺基酸序列至少90% —致之胺基酸序列。本發明之一實施例（34)係關於一種結合肽或蛋白質或其功能部分’特定言之係關於一種抗體，特定言之一種單株抗體或其功能部分，特定言之任何先前實施例之一種結合肽或抗體，該結合肽或抗體識別且特異性結合哺乳動物τ 蛋白’特定言之人類τ蛋白或其片段上之磷酸化抗原決定基’特疋δ之識別且特異性結合病理性蛋白質τ構象異構體，但在一實施例中，不結合相應未磷酸化抗原決定基及/ 或非相關抗原決定基，其中該結合肽或抗體包含第一結合域’其含有展示於SEQ ID NO: 10中之胺基酸序列或與以上胺基酸序列至少9W/。一致之胺基酸序列；及/或第二結合域，其含有展示於SEQ ID NO: 4中之胺基酸序列或與以上胺基酸序列至少89%—致之胺基酸序列。本發明之一貫施例（3 5)係關於一種結合肽或蛋白質或其功能部分，特定言之係關於一種抗體，特定言之一種單株抗體或其功能部》，特定言之任何先前實施例之一種結合狀或抗體，該結合肽或抗冑識別1特異性結合哺乳動物τ 蛋白，特定言之人類1[蛋白或其片段上之磷酸化抗原決定基，特疋5之識別且特異性結合病理性蛋白質^構象異構體但在f施例中，不結合相應未鱗酸化抗原決定基及/ 159338.doc 201216985 或非相關抗原決定基，其中該結合狀或抗體包含第—結合域，其含有展示於SEQ ID NO: 11中之胺基酸序列或與以上胺基酸序列至少98%—致之胺基酸序列；及/或第二結合域，其含有展示於SEQ ID NO: 5中之胺基酸序列或與以上胺基酸序列至少87%—致之胺基酸序列。本發明之一實施例（36)係關於一種結合肽或蛋白質或其功能部分，特定言之係關於一種抗體，特定言之一種單株抗體或其功能部分，特定言之任何先前實施例之一種結合肽或抗體，該結合肽或抗體識別且特異性結合哺乳動物τ 蛋白’特定言之人類τ蛋白或其片段上之磷酸化抗原決定基’特定言之識別且特異性結合病理性蛋白質τ構象異構體’但在一實施例十’不結合相應未磷酸化抗原決定基及/ 或非相關抗原決定基’其中該結合肽或抗體包含第一結合域’其含有展示於SEQ ID NO: 69中之胺基酸序列或與以上胺基酸序列至少98%或99%—致之胺基酸序列；及/或第二結合域’其含有展示於SEQ ID NO: 68中之胺基酸序列或與以上胺基酸序列至少9〇%、91 %、92%或93% —致之胺基酸序列。本發明之一實施例（37)係關於一種結合肽或蛋白質或其功月b部为，特疋§之係關於一種抗體，特定言之一種單株抗體或其功能部分’特定言之任何先前實施例之一種結合肽或抗H，該結合肽或抗體識別且特異性、结合哺乳動物工蛋白，特定言之人類1蛋白或其片段上之磷酸化抗原決定基特定°之識別且特異性結合病理性蛋白質τ構象異構 159338.doc •33- 201216985 體’但在一實施例中，不結合相應未磷酸化抗原決定基及/ 或非相關抗原決定基’其中該結合肽或抗體包含第一結合域，其含有展示於SEQ ID NO: 77中之胺基酸序列或與以上胺基酸序列至少93°/。、94%或95% —致之胺基酸序列；及/或第二結合域，其含有展示於SEQ ID NO: 76中之胺基酸序列或與以上胺基酸序列至少88%、89%或90% —致之胺基酸序列。本發明之一實施例（38)係關於一種結合肽或蛋白質或其功能部分’特定言之係關於一種抗體，特定言之一種單株抗體或其功能部分，特定言之任何先前實施例之一種結合肽或抗體，該結合肽或抗體識別且特異性結合哺乳動物τ 蛋白，特定言之人類τ蛋白或其片段上之磷酸化抗原決定基’特定言之識別且特異性結合病理性蛋白質τ構象異構體，但在一實施例中，不結合相應未磷酸化抗原決定基及/ 或非相關抗原決定基’其中該結合肽或抗體包含第一結合域，其含有展示於SEQ ID NO: 116、92或118中之胺基酸序列或與以上胺基酸序列至少93%、94%或95% —致之胺基酸序列；及/或第二結合域，其含有展示於SEQ ID NO: 8 8中之胺基酸序列或與以上胺基酸序列至少90%、91 %、 9 2 °/。或9 3 % —致之胺基酸序列。本發明之一實施例（39)係關於一種結合肽或蛋白質或其功能部分，特定言之係關於一種抗體，特定言之一種單株抗體或其功能部分，特定言之任何先前實施例之一種結合肽或抗體’該結合肽或抗體識別且特異性結合哺乳動物τ 159338.doc -34- 201216985

蛋白，特定言之人類τ蛋白或其片段上之磷酸化抗原決定基’特定s之識別且特異性結合病理性蛋白質τ構象異構體，但在一實施例中’不結合相應未磷酸化抗原決定基及/ 或非相關抗原決定基，其中該結合肽或抗體包含第一結合域’其含有展示於SEQ ID NO: 97中之胺基酸序列或與以上胺基酸序列至少99%—致之胺基酸序列；及/或第二結合域，其含有展示於SEQ ID NO: 96中之胺基酸序列或與以上胺基酸序列至少86%、87%%、88%或90%—致之胺基酸序列。本發明之一實施例（40)係關於一種結合肽或蛋白質或其功能部分，特定言之係關於一種抗體，特定言之一種單株抗體或其功能部分，特定言之任何先前實施例之一種結合肽或抗體，該結合肽或抗體識別且特異性結合哺乳動物τ 蛋白’特定言之人類τ蛋白或其片段上之磷酸化抗原決定基，特定言之識別且特異性結合病理性蛋白質！；構象異構體’但在一實施例中，不結合相應未磷酸化抗原決定基及/ 或非相關抗原決定基，其中該結合肽或抗體包含第一結合域’其含有展示於SEQ ID NO: 105中之胺基酸序列或與以上胺基酸序列至少98%或99%—致之胺基酸序列；及/或第二結合域，其含有展示於SEQ ID NO: 104中之胺基酸序列或與以上胺基酸序列至少88%、89%或90% —致之胺基酸序列。在另一實施例（41)中，本發明係關於一種根據實施例 (22)-(24)之結合肽或蛋白質或其功能部分，特定言之係關 159338.doc •35· 201216985 於一種抗體，特定言之一種單株抗體或其功能部分，其中該第一結合域含有如SEQ ID NO: 21-34中所示之CDR，且該第二結合域含有如SEQ ID NO: 12-20中所示之CDR。本發明之一實施例（42)係關於一種根據實施例（3 1)之結合肽或蛋白質或其功能部分，特定言之係關於一種抗體，特定言之一種單株抗體或其功能部分，其中該第一結合域含有分別如SEQ ID NO: 21-23及SEQ ID NO: 24-26中所示之CDR，且該第二結合域含有如SEQ ID NO: 12-14中所示之 CDR。本發明之一實施例（43)係關於一種根據實施例（32)之結合肽或蛋白質或其功能部分，特定言之係關於一種抗體，特定言之一種單株抗體或其功能部分，其中該第一結合域含有如SEQ ID NO: 27、25、26中所示之CDR，且該第二結合域含有如SEQ ID NO: 12-14中所示之CDR。本發明之一實施例（44)係關於一種根據實施例（33)之結合肽或蛋白質或其功能部分，特定言之係關於一種抗體，特定言之一種單株抗體或其功能部分，其中該第一結合域含有如SEQ ID NO: 28、25、26中所示之CDR，且該第二結合域含有如SEQ ID NO: 12-14中所示之CDR。本發明之一實施例（45)係關於一種根據實施例（34)之結合肽或蛋白質或其功能部分，特定言之係關於一種抗體，特定言之一種單株抗體或其功能部分，其中該第一結合域含有如SEQ ID NO: 29-31中所示之CDR，且該第二結合域含有如SEQ ID NO: 15-17中所示之CDR。 159338.doc -36- 201216985 本發明之一實施例（46)係關於一種根據實施例（35)之結合肽或蛋白質或其功能部分，特定言之係關於一種抗體，特定言之一種單株抗體或其功能部分，其中該第一結合域含有如SEQ ID NO: 32-34中所示之CDR，且該第二結合域含有如SEQ ID NO: 18-20中所示之CDR。

本發明之一實施例（47)係關於一種根據實施例（27)之結合肽或蛋白質或其功能部分，特定言之係關於一種抗體，特定言之一種單株抗體或其功能部分，其中該第一結合域含有如SEQ ID NO: 73-75中所示之CDR，且該第二結合域含有如SEQ ID NO: 70-72中所示之CDR。本發明之一實施例（48)係關於一種根據實施例（27)之結合肽或蛋白質或其功能部分，特定言之係關於一種抗體，特定言之一種單株抗體或其功能部分，其中該第一結合域含有如SEQ ID NO: 81-83中所示之CDR，且該第二結合域含有如SEQ ID NO: 78-80中所示之CDR。本發明之一實施例（49)係關於一種根據實施例（27)之結合肽或蛋白質或其功能部分，特定言之係關於一種抗體，特定言之一種單株抗體或其功能部分，其中該第一結合域含有如SEQ ID NO: 101-103中所示之CDR，且該第二結合域含有如SEQ ID NO: 98-100中所示之CDR。本發明之一實施例（50)係關於一種根據實施例（27)之結合肽或蛋白質或其功能部分，特定言之係關於一種抗體，特定言之一種單株抗體或其功能部分，其中該第一結合域含有如SEQ ID NO: 89、115及91中所示之CDR，且該第二 159338.doc -37- 201216985 結合域含有如SEQiDNO: 106_108中所示之CDR。在另實施例（5丨）中，本發明係關於一種結合肽或蛋白質或其功能部分，特定言之係關於一種抗體，特定言之一種單株抗體或其功能部分，特定言之任何先前實施例之一種結合肽或抗體’該結合肽或抗體識別且特異性結合哺乳動物τ蛋白，特定言之人類1蛋白或其片段上之磷酸化抗原決疋基’特定言之識別且特異性結合病理性蛋白質τ構象異構體，但在一實施例中，不結合相應未磷酸化抗原決定基及/或非相關抗原決定基，其中該結合肽或抗體包含： a·含有展示於SEQ ID NO: 6中之胺基酸序列的第一結合域及/或含有展示於SEQ ID NO: 1中之胺基酸序列的第二結合域；或 b.含有展示於SEQ ID NO: 7中之胺基酸序列的第一結合域及/或含有展示於SEQ ID NO: 1中之胺基酸序列的第二結合域；或 c·含有展示於SEQ ID NO: 8中之胺基酸序列的第一結合域及/或含有展示於SEQ ID NO: 2中之胺基酸序列的第二結合域；或 d. 含有展示於SEQ ID NO: 9中之胺基酸序列的第一結合域及/或含有展示於SEQ ID NO: 3中之胺基酸序列的第二結合域；或 e. 含有展示於SEQ ID NO: 10中之胺基酸序列的第一結合域及/或含有展示於SEQ ID NO: 4中之胺基酸序列的第二結合域；或 159338.doc -38 · 201216985 f. 含有展示於SEQ ID NO: 11中之胺基酸序列的第一結合域及/或含有展示於SEq ID NO: 5中之胺基酸序列的第二結合域；或 g. 含有展示於SEQ ID NO: 69中之胺基酸序列的第一結合域及/或含有展示於SEQ ID NO: 68中之胺基酸序列的第二結合域；或

h. 含有展示於SEQ ID NO: 77中之胺基酸序列的第一結合域及/或含有展示於SEQ ID NO: 76中之胺基酸序列的第二結合域；或 i. 含有展示於SEQ ID NO: 11 6中之胺基酸序列的第一結合域及/或含有展示於SEQ ID NO: 88中之胺基酸序列的第二結合域；或 j·含有展示於SEQ ID NO: 92中之胺基酸序列的第一結合域及/或含有展示於SEQ ID NO: 88中之胺基酸序列的第二結合域；或 k·含有展示於SEQ ID NO: 97中之胺基酸序列的第一結合域及/或含有展示於SEQ ID NO: 6中之胺基酸序列的第二結合域；或 L 含有展示於SEQ ID NO: 105中之胺基酸序列的第一結合域及/或含有展示於SEQ ID NO: 104中之胺基酸序列的第二結合域。在本發明之一實施例（52)中，任何先前實施例之結合肽為抗體’特定言之具有1§〇21>或IgG3同型之抗體，特定言之多株抗體、單株抗體、嵌合抗體、人類化抗體或完全人 159338.doc •39· 201216985 類抗體。本發明之一實施例（48)係關於一種編碼任一先前實施例之結合肽之聚核苷酸。在一實施例（53)中，該聚核苷酸包含選自由以下組成之群之核酸分子： a. 包含編碼某一多肽之核苷酸序列之核酸分子，該多肽包含如 SEQ ID NO: 3 5-45、SEQ ID NO: 84-87、 SEQ ID NO: 109-112及117中描述之胺基酸序列； b. 包含與展示於SEQIDNO:35-45、SEQIDNO:84-87、SEQ ID NO: 109-112及117中之序列具有至少 8 5 %序列一致性之核苦酸序列的核酸分子； c. 包含與展示於8£()10>^0:35-45、8£(^10]^0:84-87、SEQ ID NO: 109-112及117中之序列具有至少 90°/。序列一致性之核苷酸序列的核酸分子； d. 包含與展示於8£()10 1^0:35-45、3£(5 10>10:84-87、SEQ ID NO: 109-112及117中之序列具有至少 95%序列一致性之核苷酸序列的核酸分子； e. 包含與展示於8丑(^10>10:35-45、8£(5 10]^0:84-87、SEQ ID NO: 109-112及117中之序列具有至少 98%序列一致性之核苷酸序列的核酸分子； f. 包含與展示於8丑(^10 1^0:35-45、3£()10 1^0:84-87、SEQ ID NO·· 109-112及117中之序列具有至少 99°/。序列一致性之核苷酸序列的核酸分子； g. 包含互補股與任何a)-f)之核酸分子雜交之核苷酸序 159338.doc -40- 201216985 列的核酸分子； h·包含由於遺傳密碼之簡併性而與任何a)_g)中定義之核苦酸序列有偏差之核苷酸序列的核酸分子，其中如任何a)-h)中定義之該核酸分子識別且特異性結合哺乳動物τ蛋白’特定言之人類τ蛋白或其片段，特定言之如SEQ ID NO: 67中所示之人類τ蛋白上之磷酸化抗原決定基’其選自由以下組成之群：在位置18處包含磷酸化

Tyr(Y18)之τ aa 15-20、在位置409處包含構酸化Ser(pS409) 之τ aa 405-412、在位置409處包含磷酸化Ser(pS409)之τ aa 405-411、及在位置212處包含磷酸化Thr(pT212)且在位置 214處包含磷酸化Ser(pS214)之τ aa 208-218、在位置396處包含磷酸化Ser(pS396)之τ aa 393-401、在位置396處包含磷酸化Ser(pS396)之τ aa 396-401、在位置396處包含磷酸化Ser(pS396)之τ aa 394-400、在位置404處包含麟酸化 Ser(pS404)之τ aa 4〇2_406、及在位置396處包含磷酸化 Ser(pS396)之τ aa 393-400，其中，在一實施例中，該結合肽具有高結合親和力，具有解離常數至少10 nM，特定言之至少8 nM，特定言之至少5 nM，特定言之至少2 nM，特定言之至少1 nM，特定言之至少500 pM，特定言之至少 400 pM，特定言之至少300 pM，特定言之至少200 pM，特定言之至少100 pM，特定言之至少5 0 pM及/或具有締合速率常數Ιί/Μ·^·1或ΙΟ4!^-、·1以上，特定言之介於 3-5χ104 Μ、]或5χ104 M·丨s-i以上之間，特定言之1〇5 M.V1 或 105 Μ·、·1 以上，特定言之 6-9χ105 Μ、·1 或 9χ1〇5 ΜΎ1 159338.doc •41- 201216985 特定言之ΙΟ6 Μ·丨s-〗弋,λ6 或 4χ106Μ·Λ10 ΜΛ_1 以上，特定言或以上，但在—實祐3/上，特定言之1〇W 結合檢定中測定時，不中’當在如實例中揭示之或非相關抗原決定基相應未碟酸化抗原決定基及/ 實::：種實施例(54)中，提供-種根據任-先前 :之:Γ肽或其功能部分’特定言之-種抗體，特定體或其功能部分、或聚核《或其組合，其此夠特異性識別且結合哺㈣物τ蛋白，特心蛋白’特定言之微管相關蛋，衫言之聚集微管相關且_酸化蛋白質τ(諸如以作為神經原纖維纏結、神經纖維網絲及營養不良性神經突t之主要結構之成對螺旋長絲（PHF)形式存在的聚集微管相關且㈣酸化蛋白質^上之峨酸化抗原衫基，但在_實施例中，不結合相應未鱗酸化抗原決定基及/或非相關抗原決定基。在本發明之一特定實施例（55)中，人類1蛋白為如seq ID NO: 67中所示之人類τ蛋白。根據任一先前實施例之結合肽及抗體因此可用於（56)調節’特定言之降低含有增加含量之可溶性及/或不溶性丈蛋白及/或可溶性及/或不溶性麟酸化1：蛋白之哺乳動物或人類的腦中’特定言之腦皮質及/或海馬中總可溶性及/或不溶性τ蛋白，特定言之可溶性及/或不溶性磷酸化1蛋白之含量。根據任一先前實施例之結合肽及抗體亦可用於（57)降低 159338.doc -42- 201216985 含有增加含量（Ρτ成對螺旋長絲（ρτ PHF)之哺乳動物或人類的腦中，特定言之腦皮質及/或海馬中該含有過磷酸化τ 蛋白之成對螺旋長絲（ρτ PHF)的含量。降低含有促進哺乳動物或人類中之τ蛋白相關疾病、病症或病狀之增加含量之1蛋白變異體的該哺乳動物或人類之腦中，特定言之腦皮質及/或海馬中之該總可溶性τ蛋白及/或可溶性磷酸化τ蛋白及/或^成對螺旋長絲（ρτ phf)的含量可導致與此等τ蛋白相關疾病、病症或病狀相關之症狀改良及/或減輕（58) » 因此’根據任一先前實施例之結合肽及抗體可用於（59) 減緩或阻止τ蛋白相關疾病、病症或病狀之進展的療法中，特定言之人類療法中。根據任一先前實施例之結合肽及抗體可用於（6〇)改良或減輕τ蛋白相關疾病、病症或病狀之症狀的療法中，特定 s之人類療法中’該等症狀諸如認知功能，包括推理、情况判斷、§己憶也力、學習、特定導航（Special navigation) 等之障礙或喪失。在一實施例（61)中，本發明係關於根據任一先前實施例之結合肽及抗體，其用於療法中，特定言之用於治療1病變，即一組τ蛋白相關疾病及病症或減輕與τ病變相關之症狀的療法中。在一實施例（62)中，本發明係關於根據任一先前實施例之結合肽及抗體’其用於維持或增加罹患τ病變之哺乳動物之認知記憶能力。 159338.doc •43· 201216985 在本發明之一特定實施例（63)中，包含抗體ACI-36-2B6-

Abl、ACI-36-2B6-Ab2、ACI-36-3A8-Abl 及 ACI-36-3A8-

Ab2之分別如 SEQ ID NO: 25、26、27 及 SEQ ID NO: 21、 22、23中給出之輕鏈CDR之至少一者或全部、及/或抗體 ACI_36-2B6-Abl、ACI-36-2B6-Ab2、ACI_36-3A8-Abl 及 ACI-3 6-3A8-Ab2之如 SEQ ID NO: 12、13、14 中給出之重鏈CDR之至少一者或全部的結合肽及抗體用於改良或減輕

與τ蛋白相關疾病、病症或病狀相關之症狀之療法中，特定言之人類療法中，該等症狀諸如認知功能，包括推理、情況判斷、記憶、學習、特定導航等之障礙或喪失》在本發明之另一特定實施例（64)中，包含抗體ACI-36-2B6-Abl、ACI-36-2B6-Ab2、ACI-36-3A8-Abl 及 ACI-36-3 A8-Ab2之分別如 SEQ ID NO: 8及 SEQ ID NO: 6、7 中給出之輕鏈、及/或抗體 ACI-36-2B6-Abl、ACI-36-2B6-Abl2、 ACI-36-3A8-Abl 及 ACI-36-3A8-Ab2 之分別如 SEQ ID NO: 1 及SEQ ID NO: 2中給出之重鏈的抗體用於改良或減輕與τ 蛋白相關疾病、病症或病狀相關之症狀之療法中，特定言 | 之人類療法中，該等症狀諸如認知功能，包括推理、情況判斷、記憶、學習、特定導航等之障礙或喪失。在本發明之另一特定實施例（65)中，包含抗體ACI-33-6C10-Abl 及 ACI-33-6C10-Ab2 之如 SEQ ID NO: 29、30、31 中給出之輕鏈CDR之至少一者或全部、及/或抗體ACI-33-6C10-Abl 及 ACI-33-6C10-Ab2 之如 SEQ ID NO: 15、16、17 中給出之重鏈CDR之至少一者或全部的結合肽及抗體用於 I59338.doc -44- 201216985 改良或減輕與τ蛋白相關疾病、病症或病狀相關之症狀之療法中，特定言之人類療法中，該等症狀諸如認知功能，包括推理、情況判斷、記憶、學習、特定導航等之障礙或喪失。在本發明之另一特定實施例（66)中’包含抗體aci_4i_ 7C2-Abl 及 ACI-41-7C2-Ab2 之如 SEQ ID NO: 32、33、34 中給出之輕鏈CDR之至少一者或全部、及/或抗體aci_4i_ 7C2-Abl 及 ACI-41-7C2-Ab2 之如 SEQ ID NO: 18、19、20 中 • 給出之重鏈CDR之至少一者或全部的結合肽及抗體用於改良或減輕與τ蛋白相關疾病、病症或病狀相關之症狀之療法中，特定言之人類療法中，該等症狀諸如認知功能，包括推理、情況判斷、記憶、學習、特定導航等之障礙或喪失。在本發明之另—特定實施例（67)中，包含抗體八(：1-35-2A1-Abl ； ACI-35-2Al-Ab2 ； ACI-35-4A6-Ab 1 ； ACI-35-4A6-Ab2 ; ACI-35-1D2-AM ; ACI-35-2G5-Abl 之如 SEQ ID 籲 N0: 73-75、81-83、93-95、101-103、106-108中給出之輕鏈CDR之至少一者或全部、及/或抗體ACI-35-2Al-Abl ; ACI-35-2Al-Ab2 ； ACI-35-4A6-Ab 1 ； ACI-35-4A6-Ab2 ； ACI-35-1D2-AM ; ACI-35-2G5-Abl 2WSEQIDNO:70-72、78-80、89-91、98-100中給出之重鏈CDR之至少一者或全部的結合肽及抗體用於改良或減輕與τ蛋白相關疾病、病症或病狀相關之症狀之療法中，特定言之人類療法中’ s玄等症狀諸如認知功能，包括推理、情況判斷、記 159338.doc • 45- 201216985 憶、學習、特定導航等之障礙或喪失。在本發明之另一特定實施例（68)中，包含抗體aci_35_ 2G5-Ab2; ACI-35-2G5-Ab3之如 SEQ ID NO: 106-108 中給出之輕鏈CDR之至少一者或全部、及/或抗體aci_35_2G5_

Ab2; ACI-35-2G5-Ab3之如 SEQ ID NO: 89、115及 91 中給出之重鏈CDR之至少一者或全部的結合肽及抗體用於改良或減輕與τ蛋白相關疾病、病症或病狀相關之症狀之療法中，特定言之人類療法中，該等症狀諸如認知功能，包括推理、情況判斷、記憶、學習、特定導航等之障礙或喪失。根據先前實施例之肽或抗體與腦τ纏結及ρτ之結合可分別藉由對所選腦切片應用蛋白f免疫反應性測試及藉由對腦組織勻漿進行西方墨點分析來測定，如實例中所述。在另-實施例(69) t，本發明提供一種包含治療有效量之根據任-先前實施例之結合肽s戈其功能部A，特定古之抗體，特定言之單株抗體或其功能部分、或聚核苦酸或其級合以及醫藥學上可接受之載劑的醫藥組合物。在-實施例(70)中，根據任一先前實施例之結合肽或1 功能部分，特定言之抗體，特定言之單株抗體或其功能部分、或聚核苦酸或醫藥組合物或其組合用於治療或減輕τ 蛋白相關疾病或病症’包括神經退化性病，症，諸如τ病變之症狀的療法中，特定言之人類療法中。根據任—先前實施例之結合肽、抗體及/或醫藥組合物可因此用於㈤在向罹患,蛋白相關疾病或病狀之㈣，特 159338.doc * 46 · 201216985 定言之哺乳動物，特定言之特定言之人類投與該等結合肽、抗體及/或醫藥組合物後減緩或阻止該種τ蛋白相關疾病、病症或病狀之進展。根據任一先前實施例之結合肽、抗體及/或醫藥組合物可另外用於（72)在向罹患τ蛋白相關疾病或病狀之動物，特定言之哺乳動物，特定言之人類投與該等結合肽、抗體及/ 或醫藥組合物後改良或減輕與此等τ蛋白相關疾病、病症或病狀相關之症狀，諸如認知功能，包括推理、情況判 % 斷、記憶能力、學習、特定導航等之障礙或喪失。在一實施例（73)中，根據任一先前實施例之結合肽或其功能部分，特定言之抗體，特定言之單株抗體或其功能部分、或聚核苷酸或醫藥組合物或其組合用於治療由神經原纖維病變形成引起或與神經原纖維病變形成相關之疾病及病症，神經原纖維病變為τ病變中之主要腦病變，τ病變包含一組異質神經退化性疾病或病症，包括顯示1及澱粉樣蛋白病變共存之疾病或病症’包括（但不限於）阿茲海默氏籲病、庫賈氏病（Creutzfeldt-Jacob disease)、拳擊員癡呆 (Dementia pugilistica)、唐氏症候群（D〇wn丨s Syndr〇me)、格斯特曼-斯脫司勒-史茵克病（Gerstmann-Straussler_ Scheinker disease)、包涵體肌炎、及普里昂（pri〇n)蛋白質殿粉樣腦血管病’創傷性腦損傷，及不顯示明顯澱粉樣蛋白病變之其他疾病或病症’包括（但不限於）肌萎縮性側索硬化/關島型帕金森氏症-癡呆複合症（parkinsonism_ dementia complex 〇f Guam)、伴有神經原纖維纏結之非關 159338.doc • 47· 201216985 島型運動神經元病、嗜銀顆粒癡呆（argyrophilic grain dementia)、皮質基底核退化症（corticobasal degeneration)、伴有的化之瀰漫性神經原纖維纏結、伴有與染色體17相關之帕金森氏症的額顳葉型癡呆、哈勒沃登-施帕茨病（Hallevorden-Spatz disease)、多發性系統萎縮

症（multiple system atrophy)、C型尼曼-皮克病（Niemann-Pick disease)、蒼白球腦橋-黑質變性（pallid〇-p0nt〇-nigral degeneration)、皮克氏病（Pick's disease)、進行性皮質下神經膠增殖病（progressive subcortical gliosis)、進行性核上眼神經麻痒症（progressive supranuclear palsy)、亞急性硬化性泛腦炎（Subacute sclerosing panencephalitis)、僅纏結癡呆、腦炎後帕金森氏症（postencephalitic Parkinsonism)、肌強直營養不良（Myotonic dystrophy)。在一實施例（74)中’根據任一先前實施例之結合肽或其功能部分，特定言之抗體，特定言之單株抗體或其功能部分、或聚核苷酸或醫藥組合物或其組合用於治療阿茲海默氏病。

在本發明之一實施例（75)中，提供一種降低含有增加含置之可溶性τ蛋白及/或可溶性磷酸蛋白之動物，特定言之哺乳動物或人類之腦中，特定言之腦皮質及/或海馬中的可洛性τ蛋白，特定言之可溶性磷酸化1蛋白之含量的方法，其包含向該動物’特定言之該哺乳動物或人類投與根據任一先前實施例之結合肽或其功能部分，特定言之抗體’特^言之單株抗體或其功能部分、或聚核㈣或醫藥 159338.doc -48- 201216985 組合物或其組合。在本發明之一實施例（76)中，提供一種降低含有增加含量之Ρτ成對螺旋長絲（pT PHF)之動物，特定言之哺乳動物或人類之腦中，特定言之腦皮質及/或海馬中的該等含有過磷酸化τ蛋白之成對螺旋長絲（ρτ PHF)之含量的方法，其包含向該動物，特定言之該哺乳動物或人類投與根據任一先前實施例之結合肽或其功能部分，特定言之抗體，特定吕之單株抗體或其功能部分、或聚核普酸或醫藥組合物或 Β 其組合。在一實施例（77)中，本發明係關於一種減緩或阻止動物’特定言之哺乳動物或人類中之τ蛋白相關疾病、病症’ 或病狀之進展的方法，其包含向羅患該種疾病或病狀之該動物’特定言之該哺乳動物或人類投與根據任一先前實施例之結合肽或其功能部分’特定言之抗體，特定言之單株抗體或其功能部分、或聚核苷酸或醫藥組合物或其組合。在一實施例（78)中，本發明係關於一種改良或減輕動 • 物，特定言之哺乳動物或人類中之與τ蛋白相關疾病、病症或病狀相關之症狀’諸如認知功能，包括推理、情況判斷、記憶能力、學習、特定導航等之障礙或喪失的方法，其包含向罹患該種疾病或病狀之該動物，特定言之該哺乳動物或人類投與根據任一先前實施例之結合肽或其功能部分，特定言之抗體，特定言之單株抗體或其功能部分、或聚核苷酸或醫藥紕合物或其纽合。在一實施例（79)中，本發明係關於一種維持或增加罹患工 159338.doc • 49· 201216985 病變之哺乳動物之認知記憶能力的方法。在本發明之另一實施例（80)中，提供_種治療工蛋白相關疾病或病，症，包括神經退化性疾病或病症’諸^病變的方法’其包含向罹患該種疾病或病症之動物，特定+之哺乳動物，但尤其人類投與根據任一先前實施例之結^肽或其功能部分，特定言之抗體，特定言之單株抗體功能部分、或聚核苷酸或醫藥組合物或其組合。

在本發明之一實施例（81)中，提供一種治療由神經原纖維病變形成引起或與神經原纖維病變形成相關之疾病及病症的方法，神經原纖維病變為τ病變中之主要腦病變，

變包含一組異質神經退化性疾病或病症，包括顯示τ及澱粉樣蛋白病變共存之疾病或病症，包括（但不限於）阿兹海默氏病、庫賈氏病、拳擊員癡呆、唐氏症候群、格斯特曼-斯脫司勒-史茵克病、包涵體肌炎、及普里昂蛋白質澱叙樣腦血g病’創傷性腦損傷，及不顯示明顯澱粉樣蛋白病變之其他疾病或病症，包括（但不限於）肌萎縮㈣_硬化/關島型帕金森氏症癡呆複合症、伴有神經原纖維纏結之非關島型運動神經元病、嗜銀顆粒癡呆、皮質基底料化症、伴有鈣化之瀰漫性神經原纖維纏結、伴有與染色體 17相關之帕金森氏症的額顳葉型癡呆、哈勒沃登-施帕茇 =、多發性系統萎縮症、C型尼曼_皮克病、f白球_腦橋_ 黑質變性、皮克氏病、進行性皮質下神經膠增殖病、進行性核^眼神經麻痺症、亞急性硬化性泛腦炎、僅纏結礙呆腦人後帕金森氏症、肌強直營養不良該方法包含向 159338.doc •50· 201216985 罹患該種疾病或病症之動物，特定言之哺乳動物，但人類投與根據任一先前實施例之結合肽或其功能部分，特定言之抗體，特定言之單株抗體或其功能部分、或聚核苦酸或醫藥組合物或其組合。在本發明之另—實施例（82)中，提供—種誘導罹患神經退化性病症’諸如τ病變之動物’特定言之哺乳動物或人類中之被動免疫反應的方法，該誘導係藉由向該動物或人

類投與根據任-先前實施例之結合肽或其功能部分，特定言之抗體，特定言之單株抗體或其功能部分、或聚核苦酸或醫藥組合物或其組合達成。在本發明之另-實施例（83)中，提供一種診斷患者中之τ 蛋白相關疾病、病症或病狀的方法，《包含偵測根據任一先前實施例之結合肽或其活性片@，特定言之抗體，特定言之單株抗體或其功能部分與樣品中之τ蛋白之抗原決基的免疫特異性結合’或就地偵測該免疫特異性結合，、該偵測包括以下步驟： a. 使疑似含有該τ蛋白之該樣品或特定身體部分或身體區域與根據任一先前實施例之結合肽或其片段，特定言之抗體，特定言之單株抗體或其功能部分接觸，其中該結合肽或抗體或其片段會結合該τ蛋白之抗原決定基； b. 使該結合肽，特定言之該抗體，特定言之該單株抗體或其功能部分結合該τ蛋白以形成免疫複合物； c·偵測該免疫複合物之形成；及 159338.doc •51· 201216985 丄關聯存在或不存在該免疫複合物與該樣品或特定身體部分或區域中存在或不存在1：蛋白。在本發明之另一實施例（84)中，提供一種診斷患者中之^ 蛋白相關疾病、病症或病狀之傾向（predisp〇siti〇n)的方法，其包含偵測根據任一先前實施例之結合肽或其活性片段’特定言之抗體’特定言之單株抗體或其功能部分與樣品中之τ蛋白之抗原決定基的免疫特異性結合或就地偵測該免疫特異性結合，該偵測包括以下步驟： a.使疑似含有τ抗原之該樣品或特定身體部分或身體區域與根據任一先前實施例之結合肽或其活性片段，特定言之抗體’特定言之單株抗體或其功能部分接觸，該肽或其片段會結合該τ蛋白之抗原決定基； b·使該結合肽’特定言之該抗體，特定言之該單株抗體或其功能部分結合該τ抗原以形成免疫複合物； c.偵測該免疫複合物之形成；及 d·關聯存在或*存在該免疫複合物與該樣品或特定身體部分或區域中存在或不存在1抗原；比較該免疫複合物之量與正常對照值；其中相較於正常對照值’該聚集體之量之增加指示該患者正罹患τ蛋白相關疾病或病狀或處於顯現㉛白相關疾病或病狀之風險中。 =發明之另—實施例（85)中，提供—種在用根據任〆 '施例之結合肽或其功能部分，特定言之抗體，特定言之單株抗體或其功能部分、或聚核普酸或醫藥組合物治 159338.doc •52. 201216985 療之後監測最小殘餘疾病的方法，其中該方法包含： a. 使疑似含有τ抗原之樣品或特定身體部分或身體區域與根據任一先前實施例之結合肽或其功能部分，特定言之抗體，特定言之單株抗體或其功能部分接觸，s亥肽或其片段會結合τ蛋白之抗原決定基； b. 使該結合肽，特定言之該抗體，特定言之該單株抗體或其功能部分結合該τ抗原以形成免疫複合物； c. 偵測該免疫複合物之形成；及 d. 關聯存在或不存在該免疫複合物與該樣品或特定身體部为或區域中存在或不存在τ抗原； e. 比較該免疫複合物之量與正常對照值，其中相較於正常對照值，該聚集體之量之增加指示該患者仍然罹患最小殘餘疾病。在一實施例（86)中，提供一種預測正用根據任一先前實施例之結合肽或其功能部分，特定言之抗體，特定言之單株抗體或其功能部分、或聚核苷酸或醫藥組合物治療之患者之反應性的方法，其包含： a. 使疑似含有τ抗原之樣品或特定身體部分或身體區域與根據任一先前實施例之結合肽或其活性片段，特定言之抗體，特定言之單株抗體或其功能部分接觸，該肽或其片段會結合該τ蛋白之抗原決定基； b. 使該結合肽，特定言之該抗體，特定言之該單株抗體或其功能部分結合該^；抗原以形成免疫複合物； c. 偵測該免疫複合物之形成；及 159338.doc •53· 201216985 d. 關聯存在或不存在該免疫複合物與該樣品或特定身體部分或區域中存在或不存在!；抗原； e. 比較開始治療之前及之後該免疫複合物之量，其中该聚集體之量之減小指示該患者對治療起反應之潛力較高。在另一實施例（87)中，本發明係關於—種偵測及診斷1蛋白相關疾病、病症或病狀之測試套組’其包含根據任—先前實施例之結合肽或其活性片段，特定言之抗體，特定古之單株抗體或其功能部分。在一實施例（88)中’該測試套組包含容納根據任一先前實施例之一或多種結合肽或其活性片段，特定言之抗體，特定言之單株抗體或其功能部分的容器及出於結合τ抗原來形成免疫複合物及偵測該免疫複合物之形成以便存在或不存在該免疫複合物與存在或不存在1：抗原關聯之目的使用結合肽或抗體的說明書。在另一實施例（89)中’本發明係關於一種選自由以下組成之群之抗原決定基：SEQ ID NO: 67中所示之人類τ蛋白之在位置18處包含峨酸化Tyr(Y18)的τ aa 15-20、在位置 409處包含填酸化Ser(pS409)之τ aa 405-412、在位置409處包含磷酸化Ser(pS409)之τ aa 405-411、及在位置212處包含磷酸化Thr(pT212)且在位置214處包含磷酸化Ser(pS214) 之τ aa 208-218。在一實施例（90)中，該抗原決定基由在位置18處具有磷酸化 Tyr(Y18)之 τ aa 15-20 組成。 159338.doc -54- 201216985 在一實施例（91)中，該抗原決定基由在位置4〇9處具有磷酸化 Ser(pS409)之T：aa 405-412組成。在一實施例（92)中，該抗原決定基由在位置4〇9處具有麟酸化 Ser(pS409)之 Taa 405-411 組成。在另一實施例（93) t，本發明係關於一種產生根據任— 先前實施例之結合狀或其活性片段，特定言之抗體，特定言之單株抗體或其功能部分的細胞株。在一實施例（12 0)中，根據任一先前實施例之抗體可為多株抗體、單株抗體、嵌合抗體、人類化抗體、人類抗體、駱駝科抗體、雙功能抗體或經修飾或工程改造抗體。在一實施例（121)中，結合肽或其功能部分可為包含重鏈及/或輕鏈’特定言之如SEQ ID NO: 1-5中所示之重鍵及/或如SEQ ID NO: 6-11中所示之輕鏈之片段，特定言之Fab或 F(ab')2>i 段。在一特定實施例（122)中，本發明係關於一種如SEQ m NO: 1-5中所示之重鏈。在另一特定實施例（123)中，本發明係關於一種如SEQ ID NO: 6-11中所示之輕鏈。在一實施例（124)中，本發明提供一種產生任一先前實施例之結合肽或抗體之方法，其包含以下步驟：在適合培養基中培養任何先前實施例之細胞株，及視情況自該細胞株或培養基純化結合肽或抗體。【實施方式】術語之定義 159338.doc •55· 201216985 如本文所用之術s吾「多狀」、「狀」及「蛋白質」可互換且經定義以意謂由經肽鍵連接之胺基酸構成之生物分子。術S吾「狀」或「結合狀」在本文中可互換使用且係指α 破經由肽鍵連接之胺基酸（通常L-胺基酸）之鏈，該等狀鍵藉由1個胺基酸之α碳之羧基與另一胺基酸之α碳之胺基之間的縮合反應形成。在鏈之一端（亦即胺基端）之末端胺基酸具有游離胺基，而在鏈之另一端（亦即羧基端）之末端胺基酸具有游離羧基。因而，術語「胺基端」（縮寫為]^端）係指在肽之胺基端處之胺基酸上的游離α胺基、或在肽内任何其他位置處之胺基酸的α胺基（當參與肽鍵時為亞胺基）。類似地，術語「羧基端」（縮寫為c端）係指在肽之羧基端處之胺基酸上的游離羧基、或在肽内任何其他位置處之胺基酸的羧基。結合肽可包括如本文定義之抗體（諸如多株或單株抗體、人類或人類化抗體、雙功能抗體、駱駝科抗體等）或其功能部分。如本文所用之術語「其片段」或「片段」係指（生物）活陡基本上與本文定義之肽相同之功能性肽片段（例如分別如SEQ ID ΝΟ 2至9中所示），亦即該等片段仍然能夠在生物體中>ί旦特定吕之在動物，特定言之哺乳動物或人類内引發冋度特異性，特定言之構形特異性免疫反應，該免疫反應问度有效且能夠預防或減輕τ病變或與τ病變相關之症狀。特疋s之，該等片段仍然含有如本文使用及定義之τ 肽之-或多個特異性病理,_酸化抗原決定基。通構成肽之胺基酸按次序編號，起始於胺基端且在 159338.doc 201216985 :肽之缓基端之方向上增加。因&，tl個胺基酸據稱為「跟隨」另一胺基酸時，彼胺基酸定位於比之前胺基酸更接近肽之叛基端。在本文中使用術語「殘基」來指代藉由醯胺鍵併入肽中之胺基酸。因而，胺基酸可為天然產生之胺基酸或除非另外限制，否則可涵蓋天然胺基酸之以與天然產生之胺基酸類似之方式起作用的已知類似物（亦即胺基酸模擬物）。此

外’醯胺鍵模擬物包括熟習此項技術者熟知之肽骨架修飾0 在本文中使用片語「基本上由…組成」來排除將實質上改變該片語所指代之狀之主要性質的任何要素。因此，「基本上由…組成」之肽之描述排除將實質上改變彼肽之生物活性之任何胺基酸取代、添加或缺失。此外，熟習此項技術者將認識到如上所提及，在編碼序列中改變、添加或缺失單一胺基酸或小百分比之胺基酸 (通常小於5%、更通常小於1%)之個別取代、缺失或添加為保守修飾變化形式，其中改變會導致某一胺基酸經化學類似胺基酸取代。此項技術中熟知提供功能類似胺基酸之保守性取代表。以下六組各自含有對於彼此而言為保守性取代之胺基酸： 1) 丙胺酸（A)、絲胺酸（S)、蘇胺酸（T); 2) 天冬胺酸（D)、麩胺酸（E); 3) 天冬醯胺（N)、麩醯胺酸（Q); 4) 精胺酸（R)、離胺酸（K); 159338.doc -57- 201216985 5)異白胺酸⑴、白胺酸（L)、甲硫胺酸（Μ)、纈胺酸 (V);及 6)苯丙胺酸（F)、酪胺酸（Υ)、色胺酸（W)。片浯「經分離」或「生物學上純淨」係指物質實質上或基本上不含通常伴隨其之如在其天然、⑼態下所見的組分。因此’本文所述之肽不含有通常與其就地環境相關之物質。通常，本文所述之經分離免疫原性肽之純度為至少約 80/〇、通常至少約9〇%、且較佳至少約95%，如藉由銀染色凝膠上之條帶強度所量度。蛋白質純度或均質性可藉由此項技術中熟知之許多方法才曰示，諸如蛋白質樣品之聚丙烯醯胺凝膠電泳，隨後在染色後進行觀測。出於某些目的，將需要高解析度且利用 HPLC或類似純化手段。當免疫原性肽長度相對較短（亦即小於約5〇個胺基酸）時，其常使用標準化學肽合成技術來合成。序列之C端胺基酸與不溶性支撐物連接，隨後依序添加序列中之其餘胺基酸之固相合成為一種化學合成本文所述之免疫原性肽之較佳方法。固相合成之技術為熟習此項技術者所知。或者，使用重組核酸方法合成本文所述之免疫原性肽。一般而言，此涉及產生編碼肽之核酸序列，置放該核酸於在特定啟動子控制下之表現卡匣中，在宿主中表現該肽，分離表現之肽或多肽，及必要時使該肽複性。足以指導熟習此項技術者瞭解此等程序之技術見於文獻中。 159338.doc -58- 201216985 一旦重組肽經表現’即可根據標準程序純化該等重組肽’該等程序包括（但不限於）硫酸錄沈澱、親和力管柱、管柱層析、凝膠電泳及其類似程序。對於用作治療劑而言，實質上純淨之組合物之均質性較佳為約5〇%至95〇/〇，且最佳為80%至95%或95%以上。熟習此項技術者將認識到在化學合成、生物表現或純化之後，免疫原性肽可具有實質上不同於構成狀之天然構形的構形。在此情況下’常必須使抗增殖性肽變性及還原且接著使肽再摺疊成較佳構形。使蛋白質還原及變性且誘導再摺疊之方法為熟習此項技術者所熟知。可例如藉由證明與免疫血清或針對蛋白質自身產生之抗血清反應來確認純化蛋白質之抗原性。凡如本文所用之術語「一個（種）」及「該」經定義以意謂「-或多個(種)」且除非上下文不宜，否則包括複數。如本文所用之術語「彳貞測」或「經㈣」意謂使用用於貞！生物刀子之已知技術(諸如免疫化學或組織學方法)且係指定性或定#確定所研究生物分子之存在或漠度。就「經分離」而言，其意謂生物分子不含至少—些其與之一起天然產生的組分。如本文所用之術語「把·科 4·、Γ 4+ , 仰Μ抗體」或「其功能部分」為技術公㈣語且應理解為係指結合已知抗原之分子或分子之活性片段’特定言之係指免疫球蛋白分子及免疫球蛋白分子之免疫活性部分’亦即含有免疫特異性結合抗原之結合位點之刀子纟發明之免疫球蛋白可具有免疫球蛋白分子之任 159338.doc •59- 201216985 何類型（IgG、IgM、IgD、IgE、IgA 及 IgY)或類別（igGl、 IgG2、IgG3、IgG4、IgAl 及 IgA2)或子類。在本發明範疇内’「抗體」意欲包括單株抗體、多株抗體、嵌合抗體、單鏈抗體、雙特異性抗體、猴類化抗體、人類抗體及人類化抗體、駱駝科抗體、雙功能抗體以及其功能部分或活性片段。結合已知抗原之分子之活性片段的實例包括Fab及F(ab')2片段（包括Fab免疫球蛋白表現文庫之產物）及以上提及之任何抗體及片段之抗原決定基結合片段。此等活性片段可藉由許多技術自本發明抗體產生。舉例而言，經純化單株抗體可用諸如胃蛋白酶（pepsin)之酶裂解，且進行HPLC凝膠過濾。可接著收集含有Fab片段之適當溶離份且藉由膜過濾及其類似技術加以濃縮。關於用於分離抗體之活性片段之一般技術的其他描述，參見例如

Khaw，B. A·等人 J. Nucl. Med. 23:1011-1019 (1982); R〇usSeaux等人Methods Enzym〇1〇gy，121:663 69,心以―。

Press，（1986)。「人類化抗體」係指一種類型之工程改造抗體，其具有一或多個源於非人類供者免疫球蛋白之CDR，分子之其餘免疫球蛋白源性部分源於一種（或多種）人類免疫球蛋白。人類化抗體可另外係指具有可變區之抗體，該可變區之構架區之-或多者具有人類或靈長類動物胺基酸。此外，可改變構架支撑殘基以保留結合親和力。獲得「人類化抗體」之方法為熟習此項技術者所熟知。（參見例如Queen等 159338.doc 201216985 人，Proc. Natl Acad Sci USA, 86:10029-10032 (1989); Hodgson等人，Bio/Technoloy, 9:421 (1991)) ° 亦可藉由使能夠在大型動物（諸如兔）中產生親和力成熟之人類樣多株抗體之新穎遺傳工程改造方法 (http://www.rctech.com/bioventures/therapeutic.php)獲得「人類化抗體」。術語「完全人類抗體」或「人類」抗體意欲指代源於攜帶人類抗體基因之轉殖基因小鼠或源於人類細胞之抗體。然而，對於人類免疫系統，「完全人類」抗體、「人類」抗體及「人類化」抗體之間的差異可忽略或不存在且因而所有二者皆可具有同等功效及安全性。術語「單株抗體」亦為此項技術中所充分公認且係指在實驗室中自單-⑽大量生產且僅識別—種抗原之抗體。單株抗體係通常藉由使通常短命之抗體產生8細胞與快速生=之細胞，諸如癌細胞（有時稱為「永生」細胞）融合加以製備。所得雜交細胞或融合瘤快速繁殖，從而產生會產生大量抗體之純系。〜術°°抗原」係指可在生物體，特定言之動物，更特定 ^甫乳動物（包括人類）中誘導免疫反應之實體或其片段。該術語包括負責抗原性之免疫原及區域或抗原子如本文所用，術語「可溶性」意謂部分或完全溶解液中。亦如本文所用’術語「免疫原性」係、指物質會引發或增 159338.doc • 61 - 201216985 強針對免疫原性試劑之抗體、τ細胞及其他反應性免疫細胞之產生且促進人類或動物中之免疫反應。當個體產生足夠之針對所投與之本發明免疫原性組合物的抗體、Τ細胞及其他反應性免疫細胞時，發生免疫反應以緩和或減輕欲治療之病症。術語「融合瘤」為技術公認的且由一般技術者理解為係指藉由抗體產生細胞與永生細胞，例如多發性骨髓瘤細胞融合所產生的細胞。此雜交細胞能夠產生連續抗體供給。對於融合方法之更詳細描述，參見以上「單株抗體」之定義及以下實例。如本文所用之術語「載體」意謂抗原肽或超分子構築體可併入或可與之締合，藉此將抗原肽或肽之一部分呈現或暴露於人類或動物之免疫系統的結構。可適用於動物或人類療法中之任何粒子，諸如微脂粒、粒子或顆粒體可用作本發明之情形内之載體。、術語「載體」另外包含傳遞方法，以包含抗原狀之超分子抗原構築體組合物可藉由傳遞機制轉運至所要部位。该種傳遞系統之—實例利用膠態金屬，諸如膠態金。可用於本發明之超分子抗原構築體組合物中之載體蛋白 Τ包括（但不限於）麥芽糖結合肽「ΜΒΡ」；牛血清白蛋白「 J I 孔螺血氰蛋白（keyhole lympet hemocyanin) KLH」，卵白蛋白（〇valbumin);鞭毛蛋白⑺哪山n);甲狀腺球蛋白(thyr〇gI〇buHn);任何物種之血清白蛋白·任何物種之丫球蛋白；同系細胞；冑帶抗原之同系細胞； 159338.doc 201216985 及D-胺基酸及/或L-胺基酸之聚合物。另外’術語「治療有效量」或「醫藥有效量」係指當向人類或動物投與時’足以在該人類或動物中產生治療效應之結合肽的量。一般技術者易於遵循常規程序確定有效量。「ρτ PHF」、「PHF」及「成對螺旋長絲」在本文中同義使用且係指用電子顯微鏡術可見之以丨6〇 nm之週期繞成螺旋之約10 nm長絲的配對。寬度在丨〇與22 nm之間變化。 PHF為阿茲海默氏病（AD)之神經原纖維纏結及神經纖維網絲之主要結構^ PHF亦可見於一些但非所有與神經炎斑塊相關之營養不良性神經突中。PHF之主要組分為過磷酸化形式之微管相關蛋白質τ。PHF由二硫化物連接之反平行過磷酸化τ蛋白構成。PHF (：端2〇個胺基酸殘基可經截短。潛伏在PHF形成下之機制為不確定的但τ之過磷酸化可使其自微管脫離，從而增加可溶性τ池。在本發明範疇内，據證明對本發明之抗原組合物之抗體誘導反應主要為Τ細胞非依賴性反應。裸小鼠模型用於此態樣中且對裸小鼠接種並量測抗體反應以評估由本發明之抗原組合物在經免疫裸小鼠中誘導之Αρ特異性抗體反應。裸小鼠攜帶Foxnlnu突變且因此由於缺乏適當胸腺而具有降低之T細胞功能。如本文所用之「醫藥有效量」係指醫藥組合物中之足以治癒或至少部分遏止欲治療疾病、病症或病狀之症狀或與此相關之任何併發症之活性成分的劑量。 159338.doc -63- 201216985 本發明提供識別且結合τ蛋白之主要病理性麟酸化抗原決定基之結合肽。特定言之，本發明提供針對蛋白質1：上之咸信負責τ病變（包括AD)中之突觸及神經毒性之線性及構形、簡單及複雜磷酸化抗原決定基的特異性抗體。因此，在一實施例中，本發明係關於一種結合肽或其功迠部分，特定言之係關於一種抗體，特定言之一種單株抗體或其功能部分，該結合肽或抗體識別且特異性結合哺乳動物τ蛋白，特定言之人類1：蛋白或其片段上之磷酸化抗原決疋基，特定言之識別且特異性結合病理性蛋白質τ構象異構體’但在-實施例中’不結合相應未磷酸化抗原決定基及/或非相關抗原決定基，其中該結合肽或抗體具有高結合親和力，當在如實例中揭示之結合檢定_载時，具

有解離常數至少10 ηΜ ’特定言之至少8 ηΜ，特定言之玉少5 ηΜ’特定言之至少2 ηΜ，特定言之至μ福特戈言之至少500 ρΜ，特定言之至少4〇〇 ρΜ，特定言…

、ΡΜ特疋吕之至少2〇〇 ρΜ，特定言之至少_ ρΜ，特定言之至少50 ρΜ »

在一實施例中，本發明提供一種醫藥組合物，其包含; 之根據本文所述及主張之任-實施㈣結合I 部八：分，特定言之抗體’特定言之單株抗體或其功, =、2包含編碼該結合肽或抗體之核酸序列之聚核化或其組合以及醫藥學上可接受之載劑。 ==載劑、稀釋劑及/或賦形劑在此項技術中為〗包_如⑽11緩衝鹽水溶液、水、乳液（諸如分 159338.doc • 64 · 201216985 水乳液）、各種類型之濕潤劑、無菌溶液等。包括抗體’敎言之單株抗體及其活性片段之本發明之結合肽可使用已知技術以生理學上可接受之調配物形式製備且可包含醫藥學上可接受之載劑、稀釋劑及/或賦形劑。舉例而言，包括任何功能等效結合肽或其功能部分之根據本發明且如本文所述的結合肽，特定言之包括任何功能等效抗體或其功能部分之本發明的單株抗體與醫藥學上可接受之載劑、稀釋劑及/或賦形劑組合以形成治療組合物。適合醫藥載劑、稀釋劑及/或賦形劑在此項技術中: 熟知的且包括例如磷酸鹽緩衝鹽水溶液、水、乳液（諸如油/水乳液）、各種類型之濕潤劑、無菌溶液等。本發明之醫藥組合物之調配物可根據一般技術者已知之標準方法達成。本發明組合物可以固體、液體或氣霧劑形式在適合醫藥有效劑量下向個體投與。固體組合物之實例包括丸劑、乳膏及可植入劑量單位。丸劑可經口投與。治療性乳膏可表面投與。可植入劑量單位可局部投#，例如在腫瘤部位處投與，或可植入以達成全身釋放治療組合物，例如皮下植入。液體組合物之實例包括適合於肌肉内、皮下、靜脈内動脈内注射之調配物及用於表面及眼内投藥之調配物。氣霧劑調配物之實例包括用於向肺投與之吸入器調配物。組合物可藉由標準投藥途徑加以投與。一般而言，組合物可藉由表面、經口、經直腸、經鼻、皮内、腹膜内或非 159338.doc •65- 201216985 經腸（例如靜脈内、皮下或肌肉内）途徑加以投與。此外，組合物可併入持續釋放基質，諸如生物可降解聚合物中，該等聚合物植入在需要傳遞之位置附近，例如在腫瘤部位處。方法包括投與單一劑量、在預定時間間隔下投與重複劑量、及持續一段預定時期進行持續投藥。如本文所用之持續釋放基質為由可藉由酶促水解或酸/ 鹼水解或藉由溶解而降解之物質（通常為聚合物）製成的基質。一旦插入身體中，酶及體液即對基質起作用。合乎需要地持續釋放之基質係根據生物相容物質，諸如脂質體、聚乳酸交酯（聚乳酸）、聚乙交酯（乙醇酸之聚合物）、聚乳酸交酯共乙交酯（乳酸與乙醇酸之共聚物）、聚酸酐、聚 (原）酯、多肽、玻尿酸（hyaluronic acid)、膠原蛋白 (collagen)、硫酸軟骨素（chondroitin sulfate)、羧酸、脂肪酸、磷脂、多醣、核酸、聚胺基酸、胺基酸（諸如苯丙胺酸、酪胺酸、異白胺酸）、聚核苷酸、聚乙烯基丙烯、聚乙烯吡咯啶酮及聚矽氧加以選擇。一種較佳可生物降解基質為聚乳酸交酯、聚乙交酯或聚乳酸交酯共乙交酯（乳酸與乙醇酸之共聚合物）之一之基質。一般熟習相關技術者熟知組合物之劑量將視各種因素而定’該等因素諸如所‘療之病狀、所用特定組合物及其他臨床因素’諸如患者之重量、身材、性別及總體健康狀況；體表面積；欲投與之特定化合物或組合物；正同時投與之其他藥物；及投藥途徑。本發明組合物可與包含生物活性物f或化合物之其他組 159338.doc •66· 201216985 合物組合投與’該生物活 » / -¾ ® ^ 4M 貞4化合物诸如用於τ病變 ,,,^ .ΒΛ , 、7茲海默氏病中涉及之澱粉樣蛋白，堵如殿粉樣β蛋白相 Ρ ± &人仏關之疾病及病症）之藥物療法中的已知化合物。其他生物活性物質或化合物可藉由與本發明之治療性疫苗相同或類似之機制或藉由無關作用機制或藉由多重相關及/或無關作用機制施加其生物效應。

般而。其他生物活性化合物可包括中子透射增強劑、精神治療藥物、乙醯膽鹼酯酶抑制劑、鈣通道阻斷劑、生物胺、苯并二氮呼鎮定劑'乙酿膽驗合成物、儲存或釋放增強劑、乙賴驗突觸後受體促效劑、單胺氧化酶 Α或單胺氧化酶Β抑制劑、Ν_曱基_D_天冬胺酸麵胺酸受體拮抗劑、非類固醇消炎藥、抗氧化劑及血清素激導性 (serotonergic)受體拮抗劑。特疋§之，生物活性藥劑或化合物可包含至少一種選自由以下組成之群之化合物：對抗氧化應激之化合物、抗細胞凋亡化合物、金屬螯合劑、DNA修復抑制劑（諸如哌侖西平（pirenzepin))及代謝物（3·胺基丙烷磺酸（3Aps)、 1，3-丙烧二磺酸酯（i，3PDS))、分泌酵素活化劑、[p]_分泌酵素及7-分泌酵素抑制劑、τ蛋白、神經傳遞質、β_片破壞劑、消炎性分子、「非典型抗精神病藥」（諸如氯氮平 (clozapine)、齊拉西酮（ziprasid〇ne)、利培酮 (risperidone)、阿立哌唑（aripipraz〇le)或奥氮平 (olanzapine))或膽鹼酯酶抑制劑（chEI)(諸如塔克林 159338.doc -67· 201216985 (tacrine)、雷斯替明（rivastigmjne)、冬尼培 0坐（d〇nepezil) 及/或加蘭他敏（galantamine))及其他藥物及營養補充劑（諸如維生素B12、半胱胺酸、乙醯膽鹼前驅體、卵磷脂、膽鹼、銀杏（Ginkgo biloba)、乙醯基-L-肉鹼、艾地苯醌 (idebenone)、丙戊茶驗（pr0pent0fyiiine)、或黃嗓吟衍生物）’連同本發明之結合肽，包括抗體，特定言之單株抗體及其活性片段及視情況醫藥學上可接受之載劑及/或稀釋劑及/或賦形劑及治療疾病之說明書。在另一實施例中’本發明組合物可包含菸酸（niacin)或美金剛（memantine)以及本發明之結合肽（包括抗體，特定 s之單株抗體及其活性片段）及視情況醫藥學上可接受之載劑及/或稀釋劑及/或賦形劑。在本發明之另一實施例中’提供包含治療陽性及陰性精神病症狀，包括幻覺、妄想、思想障礙（由明顯不連貫性、出軌（derailment)、離題（tangentiality))、及行為奇異或混亂以及快感缺乏、情感平淡（flattened affect)、冷漠及社交退縮（social withdrawal)之「非典型抗精神病藥」（諸如氣氮平、齊拉西酮、利培酮、阿立哌唑或奥氮平）、以及本發明之結合肽（包括抗體，特定言之單株抗體及其活性片段）及視情況醫藥學上可接受之載劑及/或稀釋劑及/或賦形劑的組合物。除本發明之結合肽之外，亦可適用於組合物中之其他化合物為例如於WO 2004/058258(尤其參見第16及17頁）中揭示之化合物’包括治療藥物目標（第36-39頁）、烧績酸及院 159338.doc • 68 · 201216985 醇硫酸（第39-51頁）、膽鹼酯酶抑制劑（第51-56頁）、NMDA 受體结抗劑（第56-58頁）、雌激素（第58_59頁）、非類固醇消炎藥（第60-61頁）、抗氧化劑（第61-62頁）、過氧化體增生物活化受體（PPAR)促效劑（第63-67頁）、膽固醇降低劑（第68-75頁）、澱粉樣蛋白抑制劑（第75_77頁）、澱粉樣蛋白形成抑制劑（第77-78頁）、金屬螯合劑（第78_79頁）、抗精神病藥及抗抑鬱劑（第80-82頁）、營養補充劑（第83_89頁）及增加腦中生物活性物質之可用性之化合物（參見第89_93頁）及前藥 (第93及94頁），該文獻，但尤其以上指示之頁碼上所提及之化合物以引用的方式併入本文中。蛋白醫藥活性物可以介於每劑i叫與1〇 mg之間的量存在。般而έ ’投藥方案應在介於0.1 pg與1 〇 mg本發明抗體之間的範圍内，特定言之在1〇料至丨〇 mg之範圍内，且更特定言之在介於1.0㈣與丨⑽之間的範圍内，其中屬於此等範圍内之所有個別數值亦為本發明之一部分。若投藥經由連續輸注進行，則更適當劑量可在每小時每公斤體重介於0.01 Pg與10 mg單位之間的範圍内，其中屬於此等範圍内之所有個別數值亦為本發明之一部分。投藥將通常為非經腸，例如靜脈内投藥。用於非經腸投藥之製劑包括無g水性或非水性溶液、懸浮液及乳液。非水性溶劑包括（不限於）丙二醇、聚乙二醇、植物油（諸如撤欖油）、及可注射有機酯（諸如油酸乙酯）。水性溶劑可選自由以下組成之群：水、醇/水溶液、乳液或懸浮液，包括鹽水及緩衝介質。非經腸媒劑包括氯化㈣液、林格氏 159338.doc -69- 201216985 (Ringer’s)右旋糖、右旋糖及氣化鈉、乳酸鹽林格氏液 (lactated Ringeh)、或不揮發性油。靜脈内媒劑包括流體及營養補充劑、電解質補充劑（諸如基於林格氏右旋糖之補充劑）及其他媒劑。亦可存在防腐劑，諸如抗微生物劑、抗氧化劑、螯合劑、惰性氣體等。醫藥組合物可另外包含蛋白載體，諸如血清白蛋白或免疫球蛋白，特定言之人類來源之蛋白載體。視本發明醫藥組合物之預定用途而定，本發明醫藥組合物中可存在其他生物活性劑。當結合目標位於腦中時，本發明之某些實施例提供本發明之結合肽，包括抗體，特定言之單株抗體及其活性片段以橫穿血腦障壁。某些神經退化性疾病與血腦障壁之滲透性增加相關’因此本發明之結合肽，包括抗體，特定言之單株抗體或其活性片段可易於引入腦中β當血腦障壁保持完整時’存在若干此項技術已知之用於跨越血腦障壁轉運分子的方法’包括（但不限於）物理方法、基於脂質之方法及基於受體及通道之方法。跨越血腦障壁轉運本發明之結合肽，包括抗體，特定言之單株抗體或其活性片段之物理方法包括（但不限於）完全繞過血腦障壁或藉由在血腦障壁中產生開口。繞過方法包括（但不限於）直接注射入腦ι|7 (參見例如papanastassi〇U等人，Gene Therapy 9: 398-4Q6 (2002))及在腦中植入傳遞裝置（參見例如 Gill 等人，Nature Med. 9: 589-595 (2003);及 Gliadel Wafers(TM), Guildford Pharmaceutical)。在屏障中 159338.doc -70- 201216985

產生開口之方法包括（但不限於）超音波（參見例如美國專利公開案第20〇2/0038086號）、滲透壓（例如藉由投與高張甘露糖醇（Neuwelt，E. A., Implication of the Blood-Brain Barrier and its Manipulation，第 1及 2卷，Plenum Press, N. Y. (1989)))、藉由例如緩激肽（bradykinin)或渗透劑A-7進行滲透（參見例如美國專利第5,112,596號、第5,268,164 號、第5,506,206號及第5,686,416號）、及用含有編碼結合肽或抗原結合片段之基因之載體轉染跨於血腦障壁上之神經元（參見例如美國專利公開案第2003/0083299號）。跨越血腦障壁轉運本發明之結合肽，包括抗體，特定言之單株抗體或其活性片段之基於脂質之方法包括（但不限於）囊封本發明之結合肽，包括抗體，特定言之單株抗體或其活性片段於脂質體中，該等脂質體與該結合肽之結合血腦障壁之血管内皮上之受體的活性片段偶合（參見例如美國專利申請公開案第200200253 13號）；及將本發明之結合肽，包括抗體，特定言之單株抗體或其活性片段包覆於低密度脂蛋白粒子（參見例如美國專利申請公開案第 20040204354號）或脂蛋白元E(apolipoprotein E)(參見例如美國專利申請公開案第20040131692號）中。跨越血腦障壁轉運本發明之結合肽，包括抗體，特定言之單株抗體或其活性片段之基於受體及通道之方法包括 (但不限於）使用糖皮質激素阻斷劑以增加血腦障壁之滲透性（參見例如美國專利申請公開案第2002/0065259號、第 2003/0162695號及第2005/0124533號）；活化鉀通道（參見 159338.doc -71 - 201216985 例如美國專射m案第簡侧⑽號）；抑制概藥物轉運體（參見例如美國專利申請公開案第2⑽胸73⑴ 號轉鐵蛋白（transferrin)包覆抗體並調節—或多種轉鐵蛋白受體之活性(參見例如美國專利申請公開索第 2003/0129186號）；及使抗體陽離子化（參見例如美國專利第 5,004,697號）。可對個體提供單次或歷經延長時期重複投與本發明之結。肽（匕括抗體’特定s之單株抗體或其活性片段）或本發明之醫藥組合物。投藥之持續時間可介於旧與多達⑽ 月或1 2個月以上之問。扃主 1在此時間期間’結合肽、抗體或醫藥、.且口物可一週一次；|兩週、三週、四週一次等；或視欲治療之個體之需要而定在較高或較低頻率下投與。在另一實施例中，本發明提供探測及診斷τ蛋白相關疾病、病症或病狀，包括神經退化性疾病或病症，諸如㈣變之方法及套組’ τ病變包含一組異質神經退化性疾病或病症，包括顯示τ及澱粉樣蛋白病變共存之疾病或病症，包括（但不限於）阿茲海默氏病、庫賈氏病、拳擊員癡呆、唐氏症候群、格斯特曼-斯脫司勒_史茵克病、包涵體肌炎、及普里昂蛋白質澱粉樣腦血管病，創傷性腦損傷，及不顯示明顯澱粉樣蛋白病變之其他疾病或病症，包括（但不限於）肌萎縮性側索硬化/關島型帕金森氏症-癡呆複合症、伴有神經原纖維纏結之非關島型運動神經元病、嗜銀顆粒癡呆皮質基底核退化症、伴有約化之彌漫性神經原纖維纏結、伴有與染色體17相關之帕金森氏症的額顳葉型 159338.doc •72- 201216985 癡呆、哈㈣登·施帕茨病、多發性系統萎縮症、c型尼曼-皮克病、蒼白球_腦橋_黑f變性、皮克氏病、進行性皮質下神經膠增殖病、進行性核上眼神經麻痺症、亞急性硬化性泛腦炎、僅纏結癡呆、腦炎後⑼金森氏症、肌強直營養不良。病理性異常可由神經原纖維病變形成⑽或與神經原纖維病變形成相關，神經原纖維病變為τ病變中之主要腦病變。

另外’本發明提供用於診斷τ蛋白相關疾病、病症或病狀’包括神經退化性疾病或病症，諸如τ病變（包含—組異質神左退化性疾病或病纟’包括顯示τ及澱粉樣蛋白病變共存之疾病或病症）之傾向m監測患者中之最小殘餘疾病’或用於預測患者對用本發明之結合肽(包括抗體，衫言之單株抗體及其活性片段）或根據本發明且如本文所述之組合物進行之治療之反應性的方法及套組。此荨方法包括通常用於_或^量生物樣品或就地條件下之物質的已知免疫學方法。診斷有需要之個體’特別是哺乳動物，更特別是人類之 "蛋白相關疾病或病狀或傾向於τ蛋白相關疾病或病狀，包括砷經退化性疾病或病症，諸如τ病變（包含—群異質神經退化吐疾病或病症，包括顯示τ及殿粉樣蛋白病變共存之疾病或病症）’可由偵測本發明之結合肽，特別是抗體，特別是單株抗體或其活性片段與樣品中或原位置蛋白 :抗原決定基的免疫特異性結合達成，其包括使疑似含有 ^蛋白之該樣品或特定身體部分或身體區域與結合該τ蛋】59338.d〇c •73· 201216985 白之抗原決定基之抗體接觸，使該抗體結合該！；蛋白以形成免疫複合物’偵測該免疫複合物之形成，及使存在或不存在該免疫複合物與該樣品或特定身體部分或區域中存在或不存在τ蛋白相關聯，視情況比較該免疫複合物之量與正常對照值’其中相較於正常對照值，該免疫複合物之量增加指示該個體正罹患τ蛋白相關疾病或病狀或有發生工蛋白相關疾病或病狀之風險。監測個體，特別是哺乳動物，更別是人類在用本發明之結合肽（包括抗體，特別是單株抗體及其活性片段）或本發明之組合物治療之後之最小殘餘疾病可由偵測本發明之結合肽，特別是抗體，特別是單株抗體或其活性片段與樣品中或原位置之τ蛋白之抗原決定基的免疫特異性結合達成，其包括使疑似含有該巧白之該樣品或特定身體部分或身體區域與結合該τ蛋白之抗原決定基之本發明之結合狀，包括抗體’特別是單株抗體及其活性片段接觸，使本發明之該結合肽’包括抗體，特別是單株抗體及其活性片段結合該τ蛋白以形成务疬銘人& & , 风免疫複合物，偵測該免疫複合物之形成’及使存在或不存在却备虎仔在該免疫複合物與該樣品或特定身體部分或區域中存在哎不在/疋隹次不存在τ蛋白相關聯，視情況比較該免疫複合物之量盥正t^ 一正*對照值，其中相較於正常對照值，該免疫複合物之量; 殘餘疾病。量增加“该個體可能仍然羅患最小之 π π疋'用乳動物妹人肽ί包衽浐舯人何別疋入頰對用本發明 — 抗體，特別是單株抗體及其活性片段）或本 159338.doc •74- 201216985 發明之組合物治療的反應性可由偵測結合肽，特別是單株抗體或其活性片段與樣品中或原位置之1蛋白之抗原決定基的免疫特異性結合達成，其包括使疑似含有該1蛋白之該樣品或特定身體部分或身體區域與結合該τ蛋白之抗原決疋基之本發明之結合肽，包括抗體，特別是單株抗體及其活性片段接觸，使本發明之該結合肽，包括抗體，特別是單株抗體及其活性片段結合該τ蛋白以形成免疫複合物，偵測該免疫複合物之形成，及使存在或不存在該免疫 ^ 複合物與該樣品或特定身體部分或區域中存在或不存在τ 蛋白相關聯，視情況比較開始治療之前及之後該免疫複合物之量，其中該免疫複合物之量減小指示該患者對該治療反應之潛力高。可用於診斷τ蛋白相關疾病或病狀、用於診斷傾向於τ蛋白相關疾病或病狀，包括神經退化性疾病或病症，諸如τ 病變（包含一群異質神經退化性疾病或病症，包括顯示丁及羸粉樣蛋白病變共存之疾病或病症）、或用於監測患者之最小殘餘疾病或用於預測患者對用本發明之結合肽（包括抗體，特別是單株抗體及其活性片段）或根據本發明且如本文所述之組合物治療之反應性的生物樣品為例如流體，諸如血清、血漿、唾液、胃分泌液、黏液、腦脊髓液、淋巴流體及其類似物；或自生物體獲得之組織或細胞樣品，諸如神經組織、腦組織、心臟組織或血管組織。對於確定樣°°中存在或不存在τ蛋白，可使用一般熟習技術者已知之任何免疫檢定，諸如利用間接偵測方法使用二級偵測試 159338.doc -75· 201216985 劑之檢定、ELISA檢定及免疫沈澱及凝集檢定。此等檢定之詳細描述示於例如Harlow及Lane, Antibodies: A Laboratory Manual (Cold Spring Harbor Laboratory, New

York 1988 555-612)、Maertens及 Stuyver之 WO 96/13590、 Zrein等人（1998)及 WO 96/29605。對於就地診斷，本發明之結合肽（包括本發明之抗體，特定言之單株抗體及其活性片段）或其任何活性及功能部分可諸如以靜脈内、鼻内、腹膜内、腦内、動脈内注射方式向欲用此項技術中已知之方法診斷之生物體投與以便在本發明抗體與爽粉樣蛋白質上之抗原決定區之間可能發生特異性結合。結合肽/抗原複合物宜經由與本發明之結合肽，包括抗體，特定言之單株抗體或其功能片段連接之標記或任何其他此項技術已知之偵測方法偵測。用於診斷應用或診斷τ蛋白相關疾病或病狀，包括神經退化性疾病或病症，諸如τ病變（包含一組異質神經退化性疾病或病症，包括顯示τ及澱粉樣蛋白病變共存之疾病或病症）之傾向之應用中、或用於監測患者中之最小殘餘疾病或用於預測患者對用本發明之結合肽（包括抗體，特定吕之單株抗體及其活性片段）或根據本發明且如本文所述之組合物進行之治療之反應性的免疫檢定通常依賴經標記抗原、結合肽或二級偵測試劑。此等蛋白質或試劑可用通常為一般技術者所知之化合物標記，該等化合物包括酶、放射性同位素及螢光物質、發光物質及顯色物質，包括 (但不限於）染色粒子，諸如膠態金及乳膠珠粒。在此等化 159338.doc 201216985 合物中，放射性標記可用於幾乎所有類型之檢定及大多數變化形式。酶結合之標記在放射能必須避免時或在需要快速結果時特別適用。儘管使用螢光染料需要昂貴設備，但螢光染料提供極敏感之偵測方法。適用於此等檢定中之結合肽為本文所揭示及主張之結合肽，包括抗體，特定言之單株抗體、多株抗體及親和力純化之多株抗體。或者，本發明之結合肽，包括抗體，特定言之單株抗體及其活性片段可藉由與對免疫球蛋白具有親和力之經標記物質，諸如蛋白質八或(5或第二抗體反應來間接標記。本發明之結合肽，包括抗體，特定言之單株抗體及其活性片段可與第二物質結合且用對與抗體結合之該第二物質具有親和力的經標記第三物質偵測。舉例而言，本發明之結合肽，包括抗體，特定言之單株抗體及其活性片段可與生物素結合且使用經標記抗生蛋白（avidin)或抗生蛋白鏈菌素 (streptavidin)偵測結合肽/生物素結合物。類似地，結合肽可與半抗原結合且使用經標記抗半抗原結合肽偵測結合肽/ 半抗原結合物。一般技術者將瞭解可根據本發明採用之此等及其他適合標記。此等標記與結合肽或其片段之結合可使用一般技術者通常所知之標準技術達成。典型技術藉由Kennedy, 了. H.，等人 ’ 1976 (Clin· Chim. Acta 70:1·31)及 Sehurs，A. Η· W. M.，等人 1977 (Clin. Chim. Acta 57··1-40)描述。後者中提及之偶合技術為戊二醛方法、過碘酸鹽方法、二順丁烯二醯亞胺方法及其他方法，所有該等方法皆以引用的方式 159338.doc •77- 201216985 併入本文中。當前免疫檢定利用偵測分析物之存在之雙抗體法，其中 ^體藉由與已用可偵測標記標記之第二抗體之反應性間接標記。第二抗體較佳為會結合單株抗體所源於之動物之抗體的抗體。換言之’若單株抗體為小鼠抗體，則經標記第 ^體為抗丨鼠抗體。對於本文所述之檢定中欲使用之抗體，此標記較佳為抗體塗佈之珠粒，特定言之為磁性珠粒。對於本文所述之免疫檢定中欲採用之抗體，標記較佳為可偵測分子，諸如放射性螢光或電化學發光物質。在本發明範疇内，亦可採用一種替代性雙抗體系統，因為其適於快速確定分析物之存在而常稱為快速形式系統。該系統要求抗體與分析物之間具有高親和力。根據本發明之一實施例，使用一對各自對澱粉樣蛋白質具有特異性之抗體來確定澱粉樣蛋白質之存在。該等對抗體之一者在本文中稱為「偵測物抗體」且該對抗體之另一者在本文中稱為「捕捉抗體」。本發明之單株抗體可用作捕捉抗體或偵測物抗體。本發明之單株抗體亦可在單一檢定中同時用作捕捉抗體與偵測物抗體兩者。因此因此，本發明之一實施例使用雙抗體夾心方法來偵測生物流體樣品中之澱粉樣蛋白質。在此方法中，分析物（澱粉樣蛋白質）夾在偵測物抗體與捕捉抗體之間’捕捉抗體不可逆地固定於固體支樓物上。偵測物抗體將含有可偵測標記以鑑別抗體-分析物夾心之存在且因此鑑別分析物之存在。例示性固相物質包括（但不限於）放射免疫檢定及酶免疫 I59338.doc •78- 201216985 檢定領域中熟知之微量滴定板、聚苯乙烯試管、磁性珠粒、塑料珠粒或玻璃珠粒及載片。使抗體與固相偶合之方法亦為一般技術者所熟知。更近來，許多多孔材料，諸如耐綸、硝化纖維素、乙酸纖維素、玻璃纖維及其他多孔聚合物已用作固體支撐物。

本發明亦係關於一種偵測生物樣品中之τ蛋白之包含如上定義之組合物的診斷套組。此外，本發明係關於除如上定義之組合物之外亦包含如上定義之偵測試劑的上述診斷套組。術語「診斷套組」一般係指此項技術中已知之任何診斷套組。更詳言之，上述術語係指如Zrein等人（1998)中所述之診斷套組。本發明之另一目標在於提供用於偵測及診斷τ蛋白相關疾病及病狀之新穎免疫探針及測試套組，其包含本發明之結合狀。對於免疫探針’結合狀直接或間接與適合報導分子’例如酶或放射性核種連接。測試套組包括容納本發明之一或多種結合肽之容器及出於結合τ抗原以形成免疫複合物及偵測該免疫複合物之形成以便存在或不存在該免疫複合物與存在或不存在τ抗原關聯之目的使用結合肽的說明書。實例實例1: 產生及篩檢融合瘤及抗體此研究之目標在於產生且篩檢抗τ mAb(單株抗體）^藉由使τ疫苗免疫之小鼠脾與骨髓瘤細胞株融合來產生融合瘤。評估融合瘤針對磷酸化與非磷酸化全長τ蛋白兩者、 159338.doc •79· 201216985 以及疫苗製劑中使用之磷酸化及非磷酸化τ抗原肽的反應性。亦使用用τ轉殖基因小鼠腦薄片進行之免疫化學分析，針對融合瘤上清液對τ纏結之反應性來進行融合瘤篩檢。 1.1方法 1.1.1融合

用ACI-33(t5-20 [ρΥ18])接種之野生型C57BL/6小鼠用於融合瘤產生。在第〇天，接著再次在第4天用ACI-33疫苗使小鼠增強免疫且在第7天進行融合。173 xlO6個（ACI-33)來自經免疫小鼠之脾細胞與SP2-0-Ag 14骨髓瘤細胞在5個脾細胞/1個骨髓瘤細胞之比率下融合。用 ACI-35(t393-408 [pS396，pS404])接種之野生型 C5 7BL/6小鼠用於融合瘤產生。小鼠在第〇天，接著再於第 4天追加ACI-35疫苗，且在第7天進行融合。6><107個（ACI-35)來自經免疫小鼠之脾細胞與2xl07個SP2-0-Agl4骨髓瘤細胞在3個脾細胞/1個骨髓瘤細胞之比率下融合。用 ACI-36(t401-41 8 [pS404/S409])接種之野生型 C57BL/6 小鼠用於融合瘤產生。在第0天，接著再次在第4天用ACI-36疫苗使小鼠增強免疫且在第7天進行融合。84 χΙΟ6個來自經免疫小鼠之脾細胞與SP2-0-Ag 14骨聽瘤細胞在5個脾細胞/1個骨髓瘤細胞之比率下融合。用 ACI-41(t206-221 [pT212/pS214]與 τ196-211 [pS202/ pT205]之混合物）接種之野生型C57BL/6小鼠用於融合瘤產生。在第0天，接著再次在第4天用ACI-41疫苗使小鼠增強 159338.doc -80- 201216985 免疫且在第8天進行融合。162 xlO6個來自經免疫小鼠之脾細胞與SP2-0-Ag 14骨髓瘤細胞在5個脾細胞/1個骨髓瘤細胞之比率下融合。 4個融合獲得8個96孔板且根據板（1-8)，接著列（A-G)及最後行（1-12)來命名純系。 1.1.2選擇純系之篩檢方法

首先針對IgG表現篩檢8個96孔板兩次。陽性表現純系接著轉移於24孔板中且在τ ELISA篩檢及免疫組織化學 TAUPIR篩檢中測試生長細胞之細胞上清液（=純系）。 ELISA及/或TAUPIR中之陽性上清液轉移至T25燒瓶中且再次針對IgG表現在τ ELISA篩檢及TAUPIR篩檢中篩檢純系。 1.1.3 IgG 篩檢在4°C下，.Elisa板用每孔50 μΐ含抗小鼠IgG抗體（CER Groupe，Marioie，Belgium)之塗佈緩衝液塗佈16小時。在用 PBS/吐溫（Tween)洗滌各板之後，在室溫下施加每孔100 μΐ 阻斷溶液，持續1小時。在室溫下培育5 〇 μΐ未稀釋融合瘤上清液1小時》在洗滌步驟之後，在室溫下，辣根過氧化酶（HRP)結合之抗小鼠 igGl、IgG2a、IgG2b 及 IgG3(Ab 861^6〇，1^161£11，：^(：，1；8八）塗覆在各板上1小時。在最後洗滌之後，用HRP之磷酸酶受質TMB(3-3，,5,5，-四甲基聯苯胺）進行偵測’且使用ELISA板讀取器在405 nm下讀取各板。結果表示為O.D.(光學密度）。 1.1.4融合瘤τ ELISA篩檢 159338.doc -81 - 201216985 對 ρτ肽（ACI-33，Τ1·5 : τ5-20 [ρΥ18] ; ACI-36，T4.5 : x401-418[pS404/S409] ； ACI-41 > T8.5 ： τ206-221 [pT212/ pS214]及 T9.5 : τ196-211 [pS202/pT205]，PolyPeptide

Laboratories，Hillerod，Denmark)、相應 τ 肽（ACI-33， T1.6 : τ5-20 ; ACI-36，T4.6 : τ401-4 ; ACI-41，T8.6 : τ206-221 及 T9·6 : τ 196-211，PolyPeptide Laboratories, Hiller0d，Denmark)、填酸化全長（441 aa)i:蛋白（ρτ蛋白， Vandebroek等人，2005)及全長（441 aa)T蛋白（τ蛋白， SignalChem，Richmond, Canada)進行融合瘤 ELISA篩檢。最後，牛血清白蛋白（BSA)用作陰性對照。在4°C下，各板用10 pg/ml之相應τ肽及1 pg/ml之相應τ 蛋白塗佈隔夜。在用PBS-0.05%吐溫20洗滌各孔且用含1% BSA之PBS-0.05%吐溫20阻斷之後，未稀釋融合瘤上清液或培養基陰性對照添加至各板中且在37°C下培育2小時。在洗滌之後，各板在37°C下與鹼性磷酸酯酶（AP)結合之抗小鼠 IgG 完全抗體（Jackson Laboratories, Baltimore, PA， USA)—起培育2小時。在洗滌之後，各板與AP之磷酸酶受質pNPP(對硝基-笨基-磷酸鹽）一起培育，且使用ELISA板讀取器在405 nm下讀取。結果表示為〇.D.(光學密度）。 1.1.5融合瘤IHC篩檢：抗τ抗體與來自轉殖基因小鼠之腦切片中之纏結的結合（TAUPIR) 根據實例2.1.2之方案進行丁八1^1尺實驗。 1.1.6 Τ25燒瓶IgG篩檢在4°C下’ Elisa板用含5 gg/ml之抗小鼠IgG F(ab，）2片段 159338.doc • 82 - 201216985

特異性抗體（Jackson Laboratories，Baltimore，PA，USA)之碳酸鹽-碳酸氫鹽塗佈緩衝液（pH 9.6)(Sigma, Buchs, Switzerland)塗佈隔夜。在洗滌各板之後，在室溫下培育未稀釋融合瘤上清液、陽性對照IgGl抗體（6E10，1 pg/ml : Covance，Emeryville, CA，USA)或陰性對照（單獨培養基）1小時。在洗滌步驟之後，二次AP結合之山羊抗小鼠 IgG(子類l+2a+2b+3)Fcy片段特異性抗體（Jackson Laboratories, Baltimore，PA，USA)在 37°C 下在各板上培育 2 小時。在最後洗滌之後，用AP之磷酸酶受質pNPP(對硝基· 苯基-磷酸鹽）進行偵測，且使用ELISA板讀取器在405 nm 下讀取各板。結果表示為O.D.(光學密度）》 1.2結果 1.2.1 ACI-33 融合瘤針對IgG之產生篩檢來自由融合獲得之8個96孔板之細胞上清液。在所測試之768個孔（8x96個孔）中，277個孔為 IgG表現陽性且轉移至24孔板中。在24孔板中，使79個純系生長且分析來自彼等細胞之上清液。陽性純系另外轉移於T25燒瓶中且藉由ELISA及TAUPIR針對IgG產生篩檢上清液（表2)。純系6C10為3次篩檢中之唯--個陽性純系且選擇用於次選殖。 1.2.2 ACI-36融合瘤針對IgG之產生篩檢來自由融合獲得之8個96孔板之細胞上清液。在所測試之768個孔（8x96個孔）中，333個孔為 159338.doc -83 · 201216985

IgG表現陽性且轉移至24孔板中。在24孔板中，使75個純系生長且分析來自彼等細胞之上清液。陽性純系另外轉移於T25燒瓶中且藉由ELISA及TAUPIR針對IgG產生篩檢上清液（表3 )。為了選擇用於下一步驟之純系，基於ELISA及TAUPIR結果對IgG/ELIS A/TAUPIR篩檢之所有上清液陽性物進行分級。如方法章節中所說明對ELISA及TAUPIR結果進行分級。五個第一純系之TAUPIR染色幾乎相同且此符合ELISA 結果。丟棄4C12，因為其見於與4C1相同之板中，此增加 2個純系為相同（識別相同抗原決定基）之可能性。所選4個最佳純系為3A8、2B6、4C1及6H1。其他6個純系（4C12、 2G1、2F9、7D6、3B9、4E12)作為備份保存。對在ELISA篩檢及TAUPIR篩檢中顯示陽性之1〇個純系進行分級以選擇最佳純系（表4)。用灰色強調的為5個最佳純系。 1.2,3 ACI-41 融合瘤針對IgG之產生篩檢來自由融合獲得之8個96孔板之細胞上清液。在所測試之768個孔（8x96個孔）中，215個孔為 IgG表現陽性且轉移至24孔板中。在24孔板中，使81個純系生長且分析來自彼等細胞之上清液。陽性純系另外轉移於T25燒瓶中且藉由ELISA及TAUPIR針對IgG產生筛檢上清液（表5)。純系5D10及7C2為3次篩檢中僅有之陽性純系且選擇用於次選殖。純系5D10僅結合肽T8.5，而純系7C2結合ACI_ 159338.doc -84· 201216985 41疫苗之兩種肽（T8.5及Τ9·5)(參見PCT申請案 PCT/EP2010/054418 中之圖 10)。來源於5D10之次純系5D10A4對ρτ肽具有特異性。 1.3.結論產生之抗體已顯示對ρτ肽之高特異性，對非麟酸化肽僅具有微小結合。自3個融合（ACI-33、ACI-36及ACI-41)，總計7個純系寄存在DSMZ(表1)且選擇用於進一步次選殖。

以上提及之陽性母純系進一步在96孔板、接著24孔板且最後Τ25燒瓶中培養。在各階段，藉由ELISA、Taupir及西方墨點法篩檢融合瘤純系之上清液。實例2: 選殖抗體輕鏈及重鏈可變區選殖來自融合瘤細胞之抗體重及輕可變區基因且確定 DNA序列及互補決定區（CDR)之位置以及抗體結合特徵。使用Qiagen RNeasy小型套組（目錄號：74104)自3xi〇6個融合瘤細胞（1小瓶）製備總RNA。RNA於5 0 mL水中溶離且在1.2%瓊脂糖凝膠上檢查。使用逆轉錄酶以及IgG及κ恆定區引子製備VH及v

K cDNA。藉由使用一大組信號序列引子進行PCR來擴增第一股cDNA。擴增之DNA經凝膠純化且選殖入載體pGem® γ Easy(Promega)中。針對預期大小之插入物篩檢獲得之Vh 及VK純系。藉由自動DNA定序在兩個方向上測定所選純系之DNA序列。參考其他抗體序列（Kabat EA等人，1991)來確定序列中之互補決定區（CDR)的位置。由自動DNA定序 159338.doc • 85 - 201216985

獲得之DNA序列及相應胺基酸序列提供於表1 〇及11中。實例3 : 結合研究I 目標在於量測自源於用τ脂質體疫苗免疫之小鼠之次選殖融合瘤產生的抗體之填酸τ(ρτ)結合。為測試此結合，酶聯免疫吸附檢定（ELISA)用於量測經純化抗體與碟酸化與非磷酸化全長τ蛋白兩者以及用於脂質體疫苗製備之璘酸化及非磷酸化τ抗原肽的結合。藉由兩種其他方法完成篩檢。使用抗τ抗體作為一次抗體對來自τ轉殖基因動物之腦切片進行免疫組織化學（ihc) 分析（TAUPIR)。另外，使用抗τ抗體作為點墨抗體對來自τ 轉殖基因小鼠之腦蛋白質組織勻漿進行西方墨點（WB)分析。 3.1方法 3.1.1磷酸τ結合檢定自經脂質體τ接種之小鼠產生抗磷酸τ抗體（小鼠igG3同型）。脂質體疫苗為磷酸τ(ρτ)肽之磷酸化製劑。藉由限制稀釋法自母純系選擇產生抗τ抗體之融合瘤次純系。進行同型確定以指示存在單一同型純系。在滾瓶（r〇ller_b〇ttle) 中產生抗體，藉由親和力層析純化，進行無菌0.22 μιη過濾並定量。為測試抗體與τ及ρτ之結合，使用ELISA檢定。簡言之 ’ Nunc MaxiSorp 96孔板（Nunc, Roskilde，Denmark) 用 1 Kg/mL 之全長（441 aa)T 蛋白（SignalChem，Richmond， Canada)或磷酸化全長（441 aa)i:蛋白（Vandebroek等人， 2005)塗佈。另外，各板用i〇源性肽塗佈。為測 I59338.doc • 86 - 201216985

試與未用於疫苗製劑中之τ及ρτ序列之交叉反應性，各板用10 pg/inL之以下肽塗佈：τ5-20(在Υ18上磷酸化或未磷酸化）、τ393-408(在S396及S404上磷酸化或未磷酸化）、 τ401-418(在S404及S409上磷酸化或未麟酸化）、τ2〇6-221(在Τ212及S214上磷酸化或未磷酸化）、及1196-211(在 S202及T205上攝酸化或未構酸化）。在4°C下於鱗酸鹽緩衝鹽水（PBS)中進行塗佈隔夜。各板用0.05%吐溫20/PBS澈底洗滌且接著在37°C下用含1%牛血清白蛋白（BSA)之0.05% 吐溫20/PBS阻斷1小時。接著添加以8或16個樣品在20與0 gg/mL之間兩倍連續稀釋的所測試抗體，且使其在37〇c下培育2小時。接著如先前所述洗滌各板，且在37艺下添加於0.05%吐溫20/PBS中稀釋6000倍之AP結合之抗小鼠IgG 二次抗體（Jackson ImmunoResearch Laboratories, Suffolk， England) ’持續2小時。在洗滌之後，各板與對硝基苯基磷酸二納六水合物（pNPP ; Sigma-Aldrich，Buchs，Switzerland) 磷酸酶受質溶液一起培育，且在培育2或16小時之後使用 ELISA板讀取器在405 nm下讀取。結果表示為光學密度 (O.D_)。 H2抗τ抗體與來自τ轉殖基因動物之腦切片中之τ纏結的結合(TAUPIR) 所用腦薄片來自年長（>18個月大）雙重轉殖基因 biGT(GSK-3p轉殖基因小鼠與含有人類τ之具有P301L突變之最長同功異型物（441 aa)的TPLH小鼠雜交）轉殖基因小鼠。另外，亦使用來自τ基因剔除小鼠（TKO ; 6個月大）之 159338.doc •87· 201216985 切片。腦切片於PBS中洗滌5分鐘，接著在室溫下於含 1.5% H2〇2之PBS:MeOH(l:l)中培育15分鐘以阻斷内源性過氧化酶活性。在於PBST(PBS/0.1% 曲通 XlOO(TritonXlOO)) 中洗滌切片3次之後，其在室溫下於PBST+10% FCS(胎牛血清）阻斷溶液中培育30分鐘。在4它下在指定稀釋度下於 PBST/10% FCS中進行與所測試之抗τ抗體一起培育隔夜。接著於PBST中洗滌切片3次，隨後在室溫下與HRP結合之山羊抗小鼠（購自Dako，Glostrup, Denmark)二次抗體一起於PBST/10% FCS中培育1小時。在偵測之前，切片用PBST 洗滌3次且於50〇1]^11'1^/11(：1(?117.6)中培育5分鐘。藉由於二胺基聯苯胺（DAB: 1錠於 10 ml 50 mM Tris.HCl+3 μΐ 30% Η2Ο2 中；ΜΡ Biomedicals，Solon，ΟΗ，USA)中培育切片3分鐘來進行偵測。藉由於PBST中洗滌切片3次來終止反應。切片接著轉移於矽烷化玻璃板上且在50°C下在溫熱板上空氣乾燥2小時。使用與邁爾氏蘇木精（Mayers hematoxylin)(Fluka Chemie，Buchs，Switzerland)— 起培育 1 分鐘，隨後於操作自來水中進行洗滌步驟4分鐘來進行對比染色（Counterstaining)。切片藉由於 50%、70%、90%及 2 次100%乙醇浴，接著持續1分鐘2次於二甲苯中通過來脫水。最後，切片用 DePeX(BDH Chemicals Ltd.，P〇〇le，

England)封固在玻璃蓋玻片下。另外，稀釋10倍之融合瘤上清液（表1中所示之所有ACI-35源性抗體）用於點墨含有經SDS-PAGE自τ轉殖基因小鼠、野生型小鼠或τ基因剔除小鼠分離之腦組織勻漿蛋白 159338.doc -88 - 201216985 質的膜。 3.1.2抗τ抗體與來自AD及τ病變患者之腦切片中之τ纏結的結合（TAUPIR)

藉由TAUPIR對抗ρτ抗體ACI-36-3A8-Abl與人類腦中之 ρτ之免疫反應進行檢定。腦石螺切片藉由以下方式去石蠟：持續5分鐘2次於二甲苯中及持續1分鐘2次於100°/〇 EtOH中通過，隨後於90%、70%及50% EtOH及蒸餾水中洗滌1分鐘，接著持續5分鐘於PBS中洗滌2次。對於抗原擷取，藉由於0.01 Μ檸檬酸水溶液（pH 6.0)中加熱10分鐘來處理切片且冷卻20分鐘。切片在室溫下於含1.5% H2〇2之 PBS:MeOH(l:l)中培育15分鐘以阻斷内源性過氧化酶活性。在於PBST(PBS/0.05%吐溫-20)中洗滌切片3次之後，其在室溫下於作為阻斷溶液之PBST+10%胎牛血清（FCS)中培育30分鐘。在4°C下進行與一次抗ρτ抗體八(：1-36-3八8-Abl(410 ng/mL於阻斷緩衝液中）一起培育隔夜。接著於 PBST中洗滌切片3次，隨後在室溫下與於PBST/10% FCS中稀釋500倍之HRP結合之山羊抗小鼠二次抗體（Dako, Glostrup，Denmark)—起培育1小時》在偵測之前，切片用 PBS洗滌3次且於50mMTris/HCl(pH7.6)中培育5分鐘。藉由於二胺基聯苯胺（DAB : 1錠於10 mL 50 mM Tris-HCl+3 μι 30% Η2〇2 中；MP Biomedicals，Solon, OH，USA)中培育切片3分鐘來進行偵測。藉由於PBS中洗滌切片3次來終止反應。使用與邁爾氏蘇木精（Fluka Chemie，Buchs， Switzerland) —起培育1分鐘，隨後於操作自來水中洗滌4 159338.doc • 89 · 201216985 分鐘來進行對比染色。切片藉由穿過50%、70%、90%及2 次100°/。乙醇浴，隨後持續1分鐘2次穿過二曱苯來脫水。最後，切片用 DePeX(BDH Chemicals Ltd.，P〇〇le， England)封固在玻璃蓋玻片下。藉由白光顯微術研究經染色切片且用3CCD攝影機（Leica，Wetzlar，Germany)拍攝數位影像。使用專用軟體（IM5〇〇，Leica)捕捉並分析影像。影像以20x1.6放大率展示。 3.1.3 & ^ S Mi(WB) 藉由WB對測試抗體與來自轉殖基因動物之腦提取物中之ρτ的結合進行分析。在以下緩衝液中對來自野生型 FVB、TPLH、biGT及ΤΚΟ小鼠之腦進行均質化：25 mM Tris/HCl(pH7.6)、150 mM NaCl、1 mM EDTA、l mM EGTA、30 mM NaF、0.2 mM Na3V〇4、1 nM岡田井酸 (Okadaic acid)、1 mM苯曱基項醯基氟化物（PMSF)、5 mM Na4P；j〇7、每1 2 ml總體積1鍵完全蛋白酶抑制劑混合物 (CPIC)。為獲得完全腦組織勻漿，在冰（1體積/重量半球 (ml/g))上在700 rpm下用馬達驅動棒磨樣玻璃管/鐵敗龍 (teflon)研杵對腦進行均質化。完全腦組織勻漿於樣品緩衝液（125 mM Tris/HCl(pH 6.8)、4°/〇(w/v)十二烧基硫酸納 (SDS)、20% 甘油、0.01 % 演紛藍（bromophenol blue)及 5% β-巯基-乙醇）中稀釋1半，接著快速加熱至95°C。樣品保持 5分鐘，於樣品緩衝液中稀釋4倍，再次加熱至95°C，且接著冷卻且在14.000 rpm下離心5分鐘以清除未溶解之碎片。收集上清液並裝載於SDS-PAGE凝膠上。於轉移緩衝液（25 159338.doc -90· 201216985 mM Tris(pH 8.6)、190 mM甘胺酸、20%甲醇）中進行向>6肖化纖維素膜（Hybond-ECL)之轉移。膜轉移至阻斷溶液（含 0.1%吐溫之TBS(50 mM Tris.HCl(pH 7.6)、150 mM NaCl及 5%乳粉））中，隨後在4°C下與於阻斷溶液中稀釋之測試抗體一起培育隔夜。在室溫下進行與於阻斷溶液中稀釋 10,000倍之二次抗體HRP結合之山羊抗小鼠（Dako, Glostrup, Denmark) —起的培育1小時。使用來自GE Healthcare之EC1西方墨點偵測試劑進行偵測。

3.2結果 3,2.1於轉殖基因1：小鼠中進行之1入1[?111研究量測抗體針對用作免疫原之磷酸化τ肽及針對磷酸化全長人類τ蛋白之結合。此為人類τ蛋白之由441個胺基酸組成之最長同功異型物。亦包括相應非磷酸化肽及全長人類 τ蛋白。如表ό中所指示，抗體對磷酸化他顯示高結合，對磷酸化全長人類！；蛋白僅具有有限結合或無結合。未觀測到與相應非磷酸化τ肽或非磷酸化全長人類1蛋白之結合。此證明抗τ抗體與磷酸化人類工肽之結合較高。為測試與其他磷酸化及非磷酸化τ序列之非特異性結合，測試抗體與5種磷酸及非磷酸1：肽之結合，其中之一用作抗原狀序列。未觀測到與除疫苗中使用之肽以外之磷酸或非磷酸τ肽的交叉反應性，甚至在高濃度之肽下亦如此。藉由TAUPIR染色及藉由WB評估抗τ抗體與丁轉殖基因小乳之腦中之ρτ的結合（圖υ。抗體顯示與存在於τ轉殖基因 159338.doc -91 · 201216985 (biGT)小鼠之腦中之1纏結結合。抗τ抗體亦在使用來自野生型FVB、TPLH、biGT及ΤΚΟ小鼠之完全腦組織勻漿進行之WB中用作一次抗體。2種商品化抗ρτ抗體MCI及τ5用作對照。所有抗τ抗體皆與存在於7轉殖基因小鼠之腦中之 ρτ結合。觀測到抗τ抗體之染色與MC丨及τ5抗體相當。在含有經SDS-PAGE自τ轉殖基因小鼠、野生型小鼠及τ 基因剔除小鼠分離之蛋白質組織勻漿之膜上，所有Aci_35 抗體（揭示於表1中）皆結合具有與τ&ρτ一致之46 kDa遷移樣式的蛋白質條帶（資料未展示）。 3-2.2用來自人0及1病變患者之腦切片進行之丁人1]卩11(研究藉由TAUPIR免疫組織化學分析研究抗體ACI-36-3A8-Ab 1結合容納於來自患有經診斷τ病變（包括ad、FAD、 AGD、FTDP-17、CBD及PSP)之個體之人類腦切片中之τ聚集體的能力（圖2)。抗ρτ抗體ACI-36-3A8-Abl結合人類腦切片中含有ρτ之神經原纖維纏結（NFT)、神經纖維網絲、及存在於神經元及膠質細胞類型中之其他形式之ρτ累積物。更詳言之’ ACI-36-3A8-Abl使NFT、神經纖維網絲及圍繞AD腦中之澱粉樣蛋白斑塊之營養不良性神經突顯著染色’澱粉樣蛋白斑塊在診斷有AD及FAD之個體中顯而易見。在來自AGD之腦切片中，ACI-36-3A8-Abl使NFT與神經纖維網絲兩者染色，其中多個嗜銀顆粒明顯可見（圖2)。用ACI-36-3A8-Abl對來自PSP之腦切片進行之染色展示 NFT、神經纖維網絲及營養不良性神經突。另外，明顯注意到作為PSP中之充分特徵的皮克體（Pick body)樣包涵物 159338.doc •92· 201216985 及毛叢狀ρτ陽性星形膠質細胞’其中ρτ染色在整個細胞中延伸’包括在端突（distal process)中。在FTDP-17中，染色樣式亦說明疾病之已知異質性，其中偵測到不僅NFT而且無色感「氣球樣」神經元。The ACI-36-3A8-AM抗體亦使具有微弱τ陽性之作為CBD之主要特性的腫脹無色感神經元染色。亦藉由ACI-3 6-3A8-Abl抗體充分偵測到CBD之另一顯著病理性特徵，亦即少突神經膠質細胞包涵物，稱為螺旋體（coiled body)。在AT8陰性對照個體中未偵測到染色’而在AT8陽性對照個體中鑑別出微弱染色。對來自先前診斷有不同形式之!；病變之個體的人類腦切片使用TAUPIR ’抗ρτ抗體ACI-36-3A8-Abl對存在於此等個體之腦中之各種已知富含ρτ之病理性特徵顯示良好結合。實例4 : 結合研究Π 該研究之目標在於使用表面電漿子共振（SPR)測定抗τ抗體與磷酸τ肽之間的結合親和力。磷酸τ肽對應於用於疫苗製劑中以產生抗τ抗體之肽序列。為研究此相互作用，磷酸肽固定至感測器晶片之表面且在使抗體在晶片上通過後使用SPR即時監測結合。 4.1方法 4.1.1 SPR結合檢定

所有SPR實驗皆在Biacore X儀器（GE Healthcare)上進行。用於固定之試劑（EDC、NHS及乙醇胺）、感測器晶片 CM5(羧曱基葡聚糖）以及操作緩衝液HBS-EP購自GE 159338.doc -93- 201216985

Healthcare。以l:l(v/v)比率將磷酸1肽溶解於pBS/乙酸鈉緩衝液（10 mM，pH 5.0)中為獲得25〇 Mg/mi之最終肽濃度。此肽溶液接著偶合至CM5感測器晶片之使用edc/nhs 預活化的流量槽（fc)2。在偶合之後，使乙醇胺在表面上通過且產生218 RU之最終固定程度。藉由使用操作緩衝液連續稀釋來檢定5種濃度之抗τ抗體。自最低濃度起始進行注射且在30 pL/min之流速下持續18〇秒在fc i與fc 2兩者上通過。流量槽1未經衍生且反應自fc 2減去以校正儀器雜訊及整體折射變化。在注射完成之後，即刻用操作緩衝液洗滌表面300秒。為自晶片移除剩餘結合抗體，藉由注射一脈衝（通常3 μΐ)含8 mM NaOH之i M NaC1水溶液來進行表面再生。使用BIAevaluati〇n 3.0，利用用於數值積分及整體分析之演算法進行動力學分析。疊加所獲得之不同濃度抗體注射液的感測器圖譜且基線調整至零點。對於曲線擬 °所有資料白相對於1:1齊次（朗谬爾（Langmuir))模型同時擬合。或者，使用Biacore X儀器將經固定經生物素標記之T3 肽（T3.30)固定至抗生蛋白鏈菌素Biac〇re sA晶片（GE Healthcare)。抗體於HBS_EP操作緩衝液（GE心^加咖）中稀釋且在50 μΐ/min下持續120秒注射，隨後進行！〇〇秒解離。使用一脈衝（1-3 μ1)16 mM NaOH進行表面再生。使用 BIAevaluation且假定1:1朗繆爾結合相互作用進行擬合。 159338.doc -94· 201216985 所用肽 T1.5 H-K(Ac)K(Ac)-RQEFEVMEDHAGTY[P03H2]GL- K(Ac)K(Ac)-NH2 批次 AW11309D T4.5 H-K(Ac)K(Ac)- GDTS[P03H2]PRHLS[P03H2]NVSSTGSID- K(Ac)K(Ac)-NH2 批次 CF09168 T3.30 生物素-LC 連接子-GVYKS[P03H2]PVVSGDTS [P03H2]PRHL-NH2 批次 MI89P9-P12-2 4.2結果

使用SPR即時監測抗τ抗體與磷酸化τ肽之結合。抗體結合之締合及解離相之分析可用於測定締合速率常數〇a)、解離速率常數（Ard)以及解離常數KD »在3.7 — 367 nM抗體之範圍内，歷經未衍生化羧曱基葡聚糖表面，抗體ACI-33-6C10-Abl特異性結合肽T1.5。感測器圖譜之動力學分析揭示快速締合速率常數9.46χ105 Μ、·1及解離速率常數 3.27xl0_3 /(表7)。因此，解離常數KD確定為3.46 ηΜ，顯示抗體識別磷酸肽Τ1.5之親和力極高。所有經測試抗體皆對其用於免疫及融合瘤產生之各別磷酸肽顯示高親和力，但其對未磷酸肽顯示少許親和力。實例5 : 抗ρτ抗體之抗原決定基定位 5.1方法藉由使用不同磷酸及非磷酸肽文庫進行ELISA來進行抗磷酸τ小鼠單株抗體的抗原決定基定位。所用肽文庫之胺基酸序列展示於表8中。各文庫由涵蓋存在於肽疫苗中之磷酸及非磷酸序列的經生物素標記之短肽組成《肽文庫購自ANAWA Trading SA。根據製造商（Mimotopes)之說明書 159338.doc • 95- 201216985 進行抗原決定基定位。簡言之，用抗生蛋白鏈菌素塗佈之板（NUNC)在4°C下用含0.1°/。BSA之磷酸鹽緩衝鹽水（PBS) 阻斷隔夜。在用PBS-0.05%吐溫2〇洗滌之後，各板在室溫下用來自各文庫之不同肽塗佈1小時，於含0.1% BSA、 0.1 %疊氮化納之PBS中稀釋至最終濃度1〇 μΜ。在洗務之後’各板在室溫下與欲測試之於含2% BSA及0.1%疊氮化鈉之PBS中稀釋至40 ng/ml的抗體一起培育1小時。各板再次洗滌且在室溫下與稀釋6000倍之AP結合之抗小鼠IgG二次抗體（Jackson ImmunoResearch Laboratories, Suffolk, England)—起培育1小時。在最後洗滌之後，各板與對硝基苯基填酸二鈉六水合物（pNPP ; Sigma-Aldrich，Buchs， Switzerland)磷酸酶受質溶液一起培育，且在培育2小時之後使用ELISA板讀取器在405 nm下讀取。若光學密度 (O.D.)超過背景0.D·至少2倍，則結合視為陽性。 5.2結果作為抗原決定基定位實驗之結果，可鑑別包括本文揭示之抗體特異性結合之所需磷酸化胺基酸殘基（參見表9)的抗原決定基。 • τ aa 15-20，具有所需物 pYl 8(6C 10F9C12A11 ; 6C10E5E9C12) • τ aa 405-412，具有所需物 PS409(6H1A11C11 ; 6H1G6E6) • τ aa 405-411，具有所需物 pS409(2B6A10Cll ; 2B6G7A12 ； 3A8A12G7 ； 3A8E12H8) • τ aa 208-218 ，具有所需物 pT212 及 pS214 159338.doc ·96· 201216985 (7C2(1)F10C10D3) • τ aa 393-401，具有所需物 pS396(A4-2Al-18 ; A4-2A1-40) • τ aa 396-401，具有所需物pS396(A4-4A6-18) • τ aa 394-400，具有所需物pS396(A6-lD2-12) • τ aa 402-406，具有所需物 pS404(A6-2G5-08) τ aa 393-400，具有所需物 p396(A6-2G5-30 ; A6-2G5-41) 實例6 : τ轉殖基因小鼠之1週被動免疫 6.1.方法

對於所有活體内研究，使用τ轉殖基因小鼠且投與如下表中所示之治療抗體。用於活體内研究之轉殖基因小鼠及抗體

研究編號 τ轉殖基因模型研究開始時之小鼠年齡 (月）研究持續時間 (週）投與之抗體劑量 (mg/kg) 腹膜内 (i.p.)投藥次數讀數 1 ΤΜΗΤ 〇{Γαιιν337Μ/Μ〇^ 6.3 1 ACI-36-2B6- Abl 0*、3 或 10 2 MSD 、 IHC ' WB ACI-36-3A8- Abl 0或3 2 ΤΜΗΤ 〇iTauV337M/R406W) 4.2 4 ACI-36-2B6- Abl 或 ACI-36-3A8- Abl 0、1或3 4 MSD 、 IHC 、 WB 、 MWM 3 ΤΜΗΤ ^auV337Jm406W^ 3.0 12 ACI-36-2B6- Abl 或 ACI-36-3A8- Abl 0、1或3 13 MSD 、 IHC 、 WB 、 MWM 4 biGT (hTau顺、hGSK 3β) 4.5 12 ACI-36-2B6- Abl 或 ACI-36-3A8- Abl 0、1或3 13 WB *對於所有研究，使用媒劑對照；腹膜内（i.p.) 159338.doc -97· 201216985 6 Λ. 1,小鼠及治療 1號研究（參見上表）使用雌性及雄性6.3個月大（±3天）之 Tg小鼠’其過度表現全長人類τ同功異型物TAU441，攜帶在鼠類Thy-Ι啟動子控制下之誤義突變V337M及 R406W( TMHT小鼠）。在末次投藥之後丨天使小鼠安樂死以確定腦中之τ病變。動物鑑別及舍飼在尾部切尖以確定基因型之過程中，藉由經典耳標記法對動物連續編號。所有動物在開始研究之前皆再確定基因型。根據基於國際標準之jSW標準操作程序飼養小鼠。動物於個別通風籠中在由Rettenmaier(g)供應之標準化齧齒動物墊料上舍飼。溫度維持在約24〇c下且相對濕度維持在 4〇°/°與70%之間。動物在恆定光照循環（12小時光照/黑暗）下舍飼。乾燥丸粒化標準齧齒動物食物（Altr〇min⑧）及常規自來水可供動物任意採食。定期檢查各個別動物之在個別動物資料表中指示的任何臨床徵象。 6-1.3活體内放血在首次免疫之前7天，藉由自面部靜脈/動脈進行下頜取樣來進行活體内放血。血液樣品為靜脈血與動脈血之混合物。為得到血漿，血液收集於肝素（heparin)管中且離心 (lOOOxg，10分鐘，室溫）。以2個等分試樣冷凍血漿直至使用。 6·1 4，免疫組織化學（IHC)定量分析所有低溫冷床腦半球。徑向切割每個層次（總共5個 159338.doc •98· 201216985 層次）15個低溫切片，各自1〇#111厚（1^〇玨0^ 30503)。根據Paxinos 及 Franklin 之形態圖集「The Mouse Brain」（第 2 版）選擇腦層次。5個層次之切割以隨機薄片起始，接著持續均一且系統取樣’始終連續維持每個層次15個薄片且丟棄在各層次之間的1 50 μηι。對於確定海馬及杏仁核中之τ 病變’使用 AT180(# ΜΝ1040 ’ Thermo Scientific)及 HT7(# MN1000 ’ Thermo Scientific)抗體對每個腦區域及動物5個薄片（各層次1個薄片）進行染色。藉由Cy-3偶合之二次抗體

(Jackson Laboratories)觀測一次抗體且隨後使用image Pro

Plus(v6.2)軟體評估免疫反應性面積β 在尺寸限制（杏仁核中30 μιη2，海馬中7 μιη2)以上及在動態強度臨限值以上量測免疫反應性目標。目標之總面積及強度及個別臨限值自動歸檔《若使用，則動態臨限值定義為「ΑΟΙ内之平均強度加因數乘以AOI内之像素強度之標準偏差」。在任何情況下’值必須超出最小設定臨限值。精確臨限值等級在下表中給出。臨限值最小值動態因數 AT180杏仁核 25 2 AT180海馬 28 . HT7杏仁核 35 2 HT7海馬 25 0.5 藉由手動描繪海馬及杏仁核量測區域尺寸。HT7及 AT1 80 IR面積資料相對於區域尺寸進行校正。根據克默果夫史密謹夫正態檢定（K〇lm〇g〇r〇v 159338.doc -99- 201216985

Smirnovnormality test)，所有n>4之IHC相關資料皆遵檐尚斯分佈（Gaussian distribution)且表示為平均值+SEM °對於僅由4個動物組成，因此對於正態檢定而言太少之媒劑組，假定為高斯分佈。藉助於用GraphPadPrism軟體依次計算之參數單因子ANOVA及紐曼柯爾斯事後檢定（Newman Keuls post hoc testing)來計算組差異。α誤差程度設疋為 0.05。使用ΑΤ180(抗ρτ)及ΗΤ7(抗τ)抗體，藉由免疫組織化學 (IHC)定量來確定海馬及杏仁核中之腦τ病變。此外’使用探測ρτ及總τ之MesoScale Discovery(MSD)雙螺旋技術量測對可溶性組織勻漿部分中之皮質及海馬中之可溶性Ρτ& τ 的治療效應β 用於IHC或MSD檢定之抗體皆不具有與此研究中使用之2 種治療抗體重疊的抗原決定基。 6.1.5.產生用於定量Tg小鼠之可溶性腦部分中之可溶性τ蛋白含量的部分在第二次投藥之後1天使根據方法6.1 · 1.處理之小鼠安樂死以確定腦中之τ病變。簡言之，來自1個腦半球之可溶性皮質樣品於100至200 μί冷提取緩衝液（25 mM Tris-HCl(pH = 7.4)、150 mM NaC卜 1 mM EDTA、1 mM EGTA、10 mM β-甘油填酸鹽、30 mM NaF、2 mM Na3V〇4、蛋白酶及填酸酶抑制劑混合物）中均質化。離心組織勻漿（74,20〇xg， 15分鐘，4°C )且上清液用於分析可溶性τ。藉由BCA蛋白質定量檢定（Thermo Fisher Scientific，Rockford，IL，USA)測 159338.doc -100- 201216985 定皮質樣品之可溶性部分中之總蛋白質的濃度。 6Λ.6.藉由西方墨點分析ρτ存在

為探測投與 ACI-36-2B6-Ab2 及 ACI-36-3A8-Ab2 之小鼠之腦中的免疫反應性，報導結合ρτ PHF抗原決定基之2種抗體（Greenberg 等人，1992 ; Reig 等人，1995 ; Hoffmann 等人，1997)用於西方墨點（WB)檢定中。藉由添加相等體積之樣品緩衝液A(125 mM Tris-HCl(pH 6.8)、4% [w/v]十二烷基硫酸鈉[SDS]、20%甘油、0.01%溴酚藍、5% β-巯基乙醇）來稀釋來自皮質之可溶性部分，且加熱樣品至 95°C，持續10分鐘。30 pg樣品裝載於4-12% Bis-Tris凝膠 (Invitrogen，Basel, Switzerland)上且在 MOPS SDS 緩衝液 (Invitrogen)中操作。蛋白質於轉移緩衝液（25 mM Tris(pH 8·6)、190 mM甘胺酸、20%甲醇）中轉移至0.45 μιη PVDF膜中。為驗證蛋白質轉移，膜用麗春紅S(Ponceau S)染色5分鐘，洗滌，且於阻斷緩衝液（含5% BSA之TBS [50 mM Tris-HCl(pH 7.6)、150 mM NaCl])中阻斷 1小時。膜在4°C 下用含一次抗體之0.1 %吐溫阻斷緩衝液點墨隔夜。用於 WB之2種ρτ PHF特異性一次抗體為：抗pS396(PHF-13抗原決定基；AbCam，Cambridge，UK ;在 3 pg/mL下使用），對人類或鼠類ρτ之磷酸化Ser396(pS396)(Hoffmann等人， 1997)具有特異性；及AD2(PHF-1抗原決定基；BioRad， Reinach，Switzerland;在0.4 pg/mL下使用），對人類及鼠類pS396及磷酸化Ser404(pS404 ; Reig等人，1995)具有特異性。對於總τ WB，使用τ5(0.5 pg/mL)，一種結合人類與 159338.doc -101- 201216985 鼠類τ兩者之抗體（BD Biosciences，Allschwil，Switzerland)。在與一次抗體一起培育之後，膜用含0.1%吐溫之TBS洗滌，且與二次抗體：山羊抗小鼠IRDye800或山羊抗兔 IRDye680(兩者均來自 Li-Cor Biosciences, NE，USA)(兩者均於BB及0.1%吐溫中稀釋15000倍）一起培育。膜接著在室溫下避光培育1小時，用含0.1 %吐溫之TBS持續1 5分鐘洗滌3次且用1TBS持續5分鐘洗務2次，且使用Li-Cor Odyssey 近紅外成像系統（Li-Cor)對條帶定量。相對於β-肌動蛋白表現（AbCam ;在0.4 pg/mL下使用）校正條帶。為驗證相對於小鼠内源性τ條帶對人類轉殖基因τ條帶的鑑別，用對人類總τ具有特異性之抗體（τ 13，AbCam ;未展示）探測墨點。另外，膜用抗小鼠一次抗體探測以驗證治療抗體ACI-36_2B6_Ab2 及 ACI-36-3A8_Ab2 不以足以干擾抗 pS396 或 AD2之結合的量存在於變性測試樣品中。在用於此研究之樣品中未偵測到完整或變性治療抗體（結果未展示）。 6.1. 7.統計分析使用非參數克拉斯卡-瓦立斯秩和統計（Kruskal-Wallis rank sum statistics)分析資料，且若在尸<0.05程度上顯著，則使用比較所有組之鄧恩氏事後檢定（Dunn's post-hoc test)(GraphPad Prism，GraphPad Software，CA，USA)。結果呈現為展示平均值士 SEM之個別資料點。Ρ<0·05之差異視為統計顯著。 6.2結果 6.2.1. 藉由免疫組織化學（IHC)定量確定腦τ病變 159338.doc -102- 201216985 在研究時期期間，2次腹膜内注射ACI-36-2B6-Ab2及 ACI-3 6-3A8-Ab2不顯示任何嚴重不良反應。藉由ihc進行之使用AT180對pT231及pS235之染色顯示在ACI-36-3A8-Ab2治療之後，杏仁核中之免疫反應性面積（IR)增加。用3 mg/kg ACI-36-2B6-Ab2治療之小鼠具有顯著較小之於海馬中的AT180 IR面積。

相較於PBS組，ACI-36-3A8-AB2治療增加杏仁核中之 AT180 IR ρτ。在海馬中，ACI-36-2B6-AB2 治療使 ρτ 減少。ΑΤ180特異性標記ρτ。在ACI-36-2B6-AB2治療之小鼠中，AT 180 IR細胞之頻率減少。此效應在低劑量（3 mg/kg) 組（ACI-36-2B6-AB2 LD)中較強。各組之間的神經元體細胞染色樣式無差異。在較高10 mg/kg劑量下，當相較於媒劑對照處理之小鼠時，對於ACI-36-2B6-Ab2與ACI-36-3A8-Ab2兩者觀察到海馬中之ATI 80 IR較小的不顯著趨勢。在定性方面，ACI-36-2B6-Ab2治療之動物展示較少數目之具有高度強烈 AT180標記之海馬神經元。 6.2.2.在被動免疫之後腦部分中之總τ含量降低使用MSD雙螺旋檢定量測治療對含有可溶性蛋白質之腦部分中之ρτ及τ的效應。用ACI-36-2B6-Ab2及ACI-36-3A8-Ab2治療之小鼠中之皮質中之總可溶性τ的含量顯著降低〇?<0.01 ;圖3上部版面）。可溶性ρτ之含量亦顯著降低 (ρ<0·05 ;圖3下部版面），其中3 mg/kg劑量之ACI-36-2B6-Ab2顯示最大減少（；?<〇.〇 1)。ρτ與總τ之比率保持不變。來 159338.doc •103· 201216985 自海馬之樣品中之可溶性τ及ρτ之含量不改變（此處未展示）。 6.2.3.ACI-36-2B6-Ab2AACI-36-3A8-Ab2^; Μ M^Μ Μ 螺旋長絲（PHF)中之磷酸τ抗原決定基之存在的影響

在結構上，神經原纖維纏結（NFT)由成對螺旋長絲（PHF) 組成，該等成對螺旋長絲由主要以過磷酸化狀態被見之微管相關蛋白質τ構成（Alonso等人’ 1997)。此研究之目標在於在投與ACI-36-2B6-Ab2及ACI-36-3A8-Ab2之後，使用識別ρτ PHF之抗體來探測並定量τ轉殖基因小鼠之腦中之此等ρτ PHF抗原決定基。

為量測 2次 ACI-36-2B6-Ab2 或 ACI-36-3A8-Ab2投藥對充分證明之τ PHF磷酸化抗原決定基之量的影響，使用WB，用AD2(PHF-1抗原決定基，pS396/pS404)及抗pS396抗體 (PHF-13抗原決定基，pS396)探測來自經治療τ Tg小鼠之腦皮質可溶性部分。使用紅外成像系統定量免疫反應性。使用探測pS396及pS404(i:之2個先前證明之PHF磷酸殘基）之 AD2 來確定 ACI-36-3A8-AB2 及 ACI-36-2B6-AB2 對 τ Tg 小鼠之皮質中之AD2 PHF免疫反應性的治療效應（Greenberg等人，1992 ; Reig等人，1995) » 使用Li-Cor紅外成像系統對使用AD2(PHF-1)抗體指示在 S396及S404上磷酸化之人類及小鼠ρτ的條帶定量。測定個別小鼠之值以及平均值士SEM。觀測到轉殖基因人類ρτ條帶之AD-2陽性ρτ免疫反應性降低的不顯著趨勢。然而，觀測到用3 mg/kg ACI-36-2B6- I59338.doc •104- 201216985

Ab2治療之小鼠中之小鼠AD2陽性ρτ的量顯著降低，且當用 10 mg/kg ACI-36-2B6-Ab2 或 ACI-36-3A8-Ab2 治療時，觀測到不顯著趨勢。

當特異性識別ρτ pS396之不同抗體用於染色時（Hoffmann 等人，1997)，觀測到甚至更大影響。用3 mg/kg ACI-36-2B6-Ab2治療之小鼠具有顯著較小之PS396陽性人類轉殖基因ρτ及小鼠内源性ρτ，當用10 mg/kg ACI-36-2B6-Ab2或 ACI-36-3A8-Ab2治療時，有降低趨勢。為評估對包括非磷酸化τ與所有ρτ之總人類及小鼠τ之影響，用τ5抗體探測墨點。相較於媒劑對照，總τ不受在10 mg/kg下投與之ACI-36-2B6-Ab2或ACI-36-3A8-Ab2調節，然而觀測到以3 mg/kg投與ACI-36-2B6-Ab2之小鼠有總τ降低之趨勢。 6.2.4概述用抗ρτ抗體ACI-36-3A8-Ab2對τ Tg小鼠進行之2次周邊投藥顯著降低腦皮質中之可溶性τ及可溶性ρτ。用抗ρτ抗體ACI-36-2B6-Ab2對τ Tg小鼠進行之2次周邊投藥顯著降低腦皮質中之可溶性τ及可溶性ρτ。另外，ACI-36-2B6-Ab2顯著降低海馬中之ρτ免疫反應性。此等結果證明使用 ACI-36-2B6-Ab2及ACI-36-3A8-Ab2進行之被動抗ρτ免疫能夠減輕τ病變。 ACI-36-2B6-Ab2在3 mg/kg下向τ Tg小鼠之2次周邊投藥降低皮質中ρτ PHF抗原決定基之存在，如藉由西方墨點法所量測。在較高劑量10 mg/kg下，ACI-36-2B6-Ab2與ACI-36-3A8-Ab2兩者均顯示ρτ PHF抗原決定基免疫反應性降低 159338.doc • 105· 201216985 之趨勢。此等結果顯示ACI-36-2B6-Ab2及ACI-36-3A8-Ab2 抗體可適用於針對τ病變，諸如阿茲海默氏病之被動免疫療法中。實例7 : 人類τ過度表現小鼠之1個月治療 7.1方法 7.1.1小鼠及治療使用τ轉殖基因小鼠且投與如方法6. i .中之表中所示之治療抗體（2號研究）。 7.1.2.行為測试-莫里斯水迷宮（M〇rris water_maze，mwm) 任務

在末次投藥之後，進行水迷宮（MWM)任務以測試根據 6.1.1治療之小鼠的空間記憶表現。在開始之後4週内用所有圈養動物進行MWM測試^ MWM由直徑100 cm，填充有溫度為21±2°C之自來水的白色圓形池組成。池實際上分成 4個扇區。透明平台（直徑8 cm)置放在水表面之下約〇 $ cm。在所有測試階段期間，平台位於池之西南象限中。在連續四天之每—天，各小鼠必須進行3次試驗4次試驗持續做多丨分鐘^此時間期間，錢㈣會發現隱藏透明目標。在各試驗之後，使小窟太I 尺*氣在十台上靜息10-15秒以在環境中定向。在第4天之東-欠对路十从^ , ρ不八心木•人忒驗之後至少1小時小鼠必須完成所謂探測試驗〇>丁）。在ΡΤ期間，平台自池移除且由實驗者記錄跨越先前目標位晋夕+缸不祖置之次數以及在此象限中之駐留。對於在ΡΤ中定量逃逸等待眸寺得時間（小鼠發現隱藏平台且因此自水逃逸所需之時間丨秒 n Lb』）、路徑（到達目標之軌線 159338.doc -106- 201216985 長度[公尺])、目標區跨越次數及在目標象限中之駐留，使用電腦化追蹤系統（Biobserve Software)。所有動物在最後一天PT之後皆必須進行視力測試以排除觀看能力不足對行為結果之影響。 7.1.3. 藉由免疫組織化學（IHC)定量確定腦τ病變

在MWM之後1天（在末次投藥之後1週）使小鼠安樂死以確定腦中之τ病變。藉由使用ΑΤ180(抗ρτ，pT231/pS235)及 HT7(人類特異性抗τ)抗體進行免疫組織化學（IHC)定量來確定海馬及杏仁核中之腦τ病變。此外，使用探測ρτ (ρΤ23 1)及總 τ 之 MesoScale Discovery(MSD)雙螺旋技術量測對組織勻漿部分中之皮質及海馬中之可溶性ρτ及可溶性 τ的治療效應。用於IHC或MSD檢定之抗體皆不具有與此研究中使用之治療抗體重疊的抗原決定基。 7.1.4. 用於分析皮質及海馬中之可溶性τ之樣品製備在末次治療投藥之後1週使小鼠安樂死以收集組織。皮質及海馬於100至200 pL冷提取緩衝液1(25 mM Tris HC1 (pH=7.4)、150 mM NaC卜 1 mM EDTA、1 mM EGTA、10 mM β-甘油磷酸鹽、30 mM NaF、2 mM Na3V04、蛋白酶及磷酸酶抑制劑混合物）中均質化。離心組織勻漿（74,200 g，15分鐘，4°C )且上清液用於分析皮質及海馬中之可溶性τ(圖4)。離心塊再懸浮於100-200 μί提取緩衝液2(10 mM Tris HCl(pH=7.4)、800 mM Naa、300 mM蔗糖、1 mM EGTA、蛋白酶及磷酸酶抑制劑混合物）中且轉移至1.5 mL 管中。離心溶液（4,000 g，20分鐘，4°C)且上清液轉移至 I59338.doc • 107· 201216985 超速離心管中。接著添加十二烷基肌胺酸鈉（30%水溶液）以獲得1 %之最終濃度且在室溫下培育1.5小時。在離心 (74,200 g，30分鐘，4°C)之後，丟棄上清液且離心塊再懸浮於 100 μ!^ 緩衝液 3(50 mM Tris-HCl(pH=7.4))中。再懸浮之離心塊用作皮質及海馬中之十二烷基肌胺酸鈉不溶性 (SinT)i:。藉由BCA蛋白質定量檢定（Thermo Fisher Scientific，Rockford, IL，USA)測定可溶性及SinT部分樣品中之總蛋白質的濃度。 7.1.5. ρτ PHF及τ之西方墨點為評估ACI-3 6-2B6-Abl投藥對腦皮質及海馬中之ρτ PHF 之存在的影響，報導結合ρτ PHF抗原決定基之2種抗體 (Greenberg 等人，1992 ; Reig 等人，1995 ; Hoffmann 等人，1997)用於西方墨點（WB)檢定中。藉由添加相等體積之樣品緩衝液 A(125 mM Tris-HCl(pH 6.8)、4% [w/v]十二烷基硫酸鈉[SDS]、20%甘油、0.01%溴酚藍、5% β-疏基乙醇）來稀釋來自皮質及海馬之可溶性及SinT部分，且加熱樣品至95°C，持續10分鐘。30 pg樣品裝載於4-12% Bis-Tris 凝膠（Invitrogen，Basel，Switzerland)上且在 MOPS SDS 緩衝液（Invitrogen)中操作。蛋白質於轉移緩衝液（25 mM Tris(pH 8.6)、190 mM甘胺酸、20%甲醇）中轉移至 0·45 μιη PVDF膜中。為驗證蛋白質轉移，膜用麗春紅S染色5分鐘。膜接著洗滌，且於阻斷緩衝液（含5% BSA之TBS [50 mM Tris-HCl(pH 7.6)、150 mM NaCl])中阻斷 1小時。膜在 4°C下用含一次抗體之0.1 %吐溫阻斷緩衝液點墨隔夜。 159338.doc •108· 201216985

用於WB之2種ρτ PHF特異性一次抗體為：抗pS396(PHF-13抗原決定基；AbCam，Cambridge，UK;在3 pg/mL下使用），對人類或鼠類ρτ之填酸化Ser396(pS396)(Hoffmann等人，1997)具有特異性；及AD2( PHF-1抗原決定基； BioRad，Reinach，Switzerland ;在 0.4 pg/mL下使用），對人類及鼠類pS396及磷酸化Ser404(pS404 ; Reig等人，1995) 具有特異性。對於偵測目標影響，1.6 pg/mL之ACI-36-2B6-Abl用於點墨。對於總τ WB，使用0.5 pg/mL之τ5，一種結合人類與鼠類τ兩者之抗體（BD Biosciences，All schwil， Switzerland)。另外針對β-肌動蛋白（AbCam;在0.4 pg/mL 下使用）點墨所有膜以校正蛋白質裝載量。在與一次抗體一起培育之後，膜用含0.1 °/〇吐溫之TBS洗滌，且與二次抗體：山羊抗小鼠IRDye800或山羊抗兔 IRDye680(兩者均來自 Li-Cor Biosciences，NE，USA)(兩者均於BB及0.1%吐溫中稀釋15,000倍）一起培育。膜接著在室溫下避光培育1小時，用含0.1%吐溫之TBS持續15分鐘洗務3次且用TBS持續5分鐘洗務2次，且使用Li-Cor Odyssey近紅外成像系統（Li-Cor)對條帶定量。相關條帶相對於β-肌動蛋白表現進行校正。為驗證相對於小鼠内源性 τ條帶對人類轉殖基因τ條帶的鑑別，用對人類總τ具有特異性且不與鼠類τ交叉反應之抗體（τ13，AbCam ;未展示）探測墨點。另外’膜用抗小鼠一次抗體探測以驗證治療抗體不以足以干擾一次點墨抗體之結合的量存在於變性測試樣品中。在用於此研究之樣品中未偵測到完整或變性治療 159338.doc •109· 201216985 抗體（結果未展示）。值表示為任意β-肌動蛋白校正之免疫反應性（IR) » 7.1.6.統計分析依次使用單因子ANOVA及鄧尼特氏多重比較事後檢定 (Dunnett's multiple comparison post-hoc test)(GraphPad Prism，GraphPad Software，CA，USA)分析資料，從而比較各治療劑治療小鼠與Tg對照治療小鼠。結果呈現為展示平均值土SEM之個別資料點。p<0.05之差異視為統計顯著。排除藉由格如比氏極端史都登化偏差檢定（Grubb，s extreme studentized deviate test)鑑別為顯著（p<〇.05)離群值之單值。 7.2結果 7.2.1.行為測試-在被動免疫之後進行之莫里斯水迷宮 (MWM)任務歷經4週時期在3 mg/kg或1 mg/kg下4次腹膜内注射每週投與之ACI-36-2B6-Abl不顯示任何嚴重不良反應。在末週治療期間’評估動物之空間導航學習及記憶。動物必須完成每天3次試驗之4天訓練，隨後為丨次探測試驗及視力測試。評估逃逸等待時間（小鼠發現隱藏平台且因此自水逃逸所需之時間[秒])、路徑（到達目標之執線長度 [公尺])、游泳速度（路徑與逃逸等待時間之計算商）、目標跨越次數及在目標象限中之駐留。當歷經4個測試日評估徘、由 T估逃逸等待時間及到達平台之游泳路徑之長度時，用媒劑虚饰七卞劑處理之Tg(組A)以及nTg(F)對照動 159338.doc •110· 201216985 物顯示預期學習曲線。如藉由扁平學習曲線所示，相較於 nTg對照動物（F) ’ Tg對照（Α)動物在逃逸等待時間及游泳路徑方面具有顯著學習障礙。在訓練第3天及第4天逃逸等待時間及游泳路徑顯著（雙因子ANOVA)較長（pco.ooj ; 邦弗朗尼氏事後檢定（Bonferroni's post test))。相較於Tg 對照動物（組A)，用低劑量或高劑量之ACI_36_2B6_Abl& ACI-36-3A8-Abl(分別為組3及C以及組D及E)進行之治療不促使空間學習此力顯者改良且顯示類似學習曲線。當調. • 整各組之第1天表現至100%且所有其他天為第1天之百分比時，可見ACI-36-3A8-Abl治療之小鼠的改良（兩種劑量）。在第3天（組D ρ<〇.〇1且組e p<〇.〇5)及第4天（組D p<〇.05)對游泳路徑長度之影響達到統計顯著。對於ACI-3 6-2B6-Abl治療之小鼠（兩種劑量），可見游泳路徑長度之略微改良’但不具有統計顯著性。就在所有4個訓練日之游泳速度而言，未偵測到治療組之間的差異。籲由MWM測試獲得之結果顯示用ACI-36_2B6_Abl及ACI- 36-3 A8-Abl治療之小鼠具有空間學習改良的趨勢。 7.2.2.藉由免疫絚織化學（1HC)定量確定腦τ病變八丁180抗體會使内源性及人類？1：(在丁111*231及以1*235處經雙重磷酸化）染色。測定在 ACI-36-2B6-AB1 及 ACI-36-3A8-AB1 免疫之後杏仁核及海馬中之ΑΤ180 IR。量測杏仁核及海馬中之ΑΤ180 IR面積百分比。 159338.doc 111· 201216985 相較於Tg組，nTg對照中之神經元體細胞内ρτ之量顯著較低（ρ<0.001)。在杏仁核中，觀測到3 mg/kg ACI-36-2B6-Ab 1治療使神經元體細胞ρτ增加之趨勢。相反，相較於媒劑處理之動物’兩種劑量之ACI-36-2B6-Abl傾向於使海馬中之ρτ降低。在所有轉殖基因組中，平均染色強度類似。 ACI-36-3A8-Abl治療不改變海馬及杏仁核中之神經元體細胞ρτ且杏仁核及海馬中之神經元ρτ含量在治療之轉殖基因組之間不顯著不同。在所有轉殖基因組中，染色強度之平均值及總和類似。因為ΗΤ7抗體對人類τ具有特異性，所以在nTg對照中僅量測到由尺寸在7像素以上之脂褐素點之自發螢光產生的少許信號。相較於媒劑對照（PBS)，ACI-36-2B6-Abl治療不改變海馬中之神經元體細胞HT7陽性IR面積。在杏仁核中’就IR面積而言，接受較低劑量之ACI_36_2B6_Abl之小鼠傾向於具有較高含量之總人類τ(Τ檢定：p=〇〇954)。此增加亦定性可見為個別神經元體細胞中之染色面積及染色強度增加❶在海馬神經元中，未觀測到治療誘導之統計顯著差異。相較於媒劑對照（PBS) ’ ACI-36-3A8-Abl治療不顯著改變杏仁核及海馬中之神經元體細胞HT7陽性IR面積《在所有轉殖基因組中，染色強度之平均值及總和類似（資料未展示）。腦τ病變不顯示腦可溶性部分中之總1或ρτ含量之變化，然而’腦切片之免疫染色顯示用ACI_36_2B6_Abl治療之小 159338.doc .112· 201216985 鼠中之海馬ρτ降低。 7.2.3.抗τ抗體投藥對存在於成對螺旋長絲（PHF)中之磷酸τ 坑原決定基的影響

阿茲海默氏病（AD)由神經原纖維纏結（NFT ; Braak, Braak及Bohl, 1993)神經病理性表徵。在結構上，NFT由成對螺旋長絲（PHF)組成，該等成對螺旋長絲由主要以過磷酸化狀態被見之微管相關蛋白質τ構成（Alonso等人， 1997)。此研究之目標在於藉由4次投與抗ρτ抗體ACI-36-2Β6-ΑΒ1及ACI-36-3A8-AB1來降低τ轉殖基因小鼠之腦中之此等ρτ PHF抗原決定基。為量測4次ACI-36-2B6-AM投藥對充分證明之τ PHF磷酸化抗原決定基之量的影響，使用WB，用AD2(PHF-1抗原決定基，pS396/pS404)及抗pS396抗體（PHF-13抗原決定基，pS396)探測來自經治療τ Tg小鼠之腦皮質及海馬可溶性及SinT部分。作為τ PHF之標記，先前已證明存在 pS396/pS404(Greenberg等人，1992 ; Reig等人，1995)，且更詳言之pS396位點（Hoffmann等人，1997)。在τ Tg小鼠中，τ表示為内源性鼠類τ及人類τ轉殖基因，當點墨抗體結合來自兩個物種之τ且來自2種不同轉錄物之τ足量表現時，在WB上可明顯鑑別分子量差異。因此，當可能時，鑑別内源性小鼠及人類轉殖基因τ條帶之各點墨抗體並分別定量。為驗證吾人之WB檢定中之此等τ條帶的遷移樣式，一種結合總τ但為人類特異性且因此僅顯示τ Tg腦中之人類轉殖基因之抗τ抗體（τ 13)用於τ Tg對照樣品以驗證τ轉 159338.doc •113· 201216985 T基因小鼠中之人類及小鼠τ的遷移樣式。另夕卜所有定量條帶皆相對於β-肌動蛋白進行校正。在ACI-36-2B6-Abl治療之小鼠及ACI 36 3A8 Abi治療之小鼠中’在來自腦皮質之可溶性部分中探測之所存在的 PHF抗原決疋基降低。使用對於之pSw6(pHF l3)抗體’此降低對於小鼠與人類條帶兩者而言均顯著（圖从及圖 5B)。當 AD2(PHF-1 ’ PS396/PS404)抗體用於來自 ACI-36-2B6-

Abl及ACI-36-3A8-Abl治療之小鼠之提取物的％8時，觀測到顯著降低（圖5C)。應注意儘管用於此等WB之2種PHF特異性抗體具有類似抗原決定基且對其碟酸化目標具有良好特異性，但 pS396(PHF-13)抗體似乎具有較佳信雜比且為用於此等wB 之較佳總抗體。分別使用ACI-36-2B6-Abl及ACI-36-2B6-Abl作為點墨抗體探測治療抗體在皮質中之直接目標效應。此抗ρτ抗體與此研究中使用之治療抗體結合相同磷酸τ抗原決定基。墨點先前已僅用二次抗小鼠IgG抗體探測。使用紅外成像系統對條帶定量。測定個別小鼠之值以及平均值±SEM。未偵測到背景以上之信號，從而驗證治療抗體在此等樣品中缺乏阻斷效應或干擾（資料未展示）。在ACI-36-2B6-Abl治療之小鼠中，觀測到信號向下降低至對照處理之nTg小鼠之程度的趨勢，指示具有直接目標 159338.doc •114- 201216985 效應（圖5G)。在ACI_36_3A8_Abl治療之小鼠中，未觀測到顯著治療效應（圖5 G)。使用結合内源性小鼠τ與轉殖基因人類1兩者之β點墨抗體，觀測到ACI-36-2B6_Abl對τ Tg小鼠之可溶性皮質中之總τ的顯著治療效應（圖511及51)。對於腦皮質之可溶性部分中之内源性小鼠τ與轉殖基因人類1兩者’觀測到總工顯著降低。使用紅外成像系統對指示小鼠Α)及人類8)總τ(τ5)之條帶定量。測定個別小鼠之值以及平均值±SEM。藉由製備十二烷基肌胺酸鈉不溶性（SinT)腦部分來確定清潔劑不溶性τ部分中之PHF抗原決定基之存在。使用紅外成像系統對條帶定量。測定個別小鼠之值以及平均值±SEM。當相較於可溶性τ部分時，少得多之τ存在於皮質中與海馬中之此部分中。此可能歸因於此研究中使用之τ Tg小鼠之4個月大之年齡’其可能尚未在海馬及皮質中累積顯著量之不溶性及聚集τ。因此，當探測SinT部分中之PHF抗原決定基時’僅AD2(PHF-1，PS396/pS404)抗體提供足以可靠定量條帶之信號。分別用 1 mg/kg ACI-36-2B6-Abl 及 1 mg/kg ACI-36-3A8-

Ab 1治療之小鼠之表示内源性小鼠τ之條帶中的PHF -1抗原決定基顯著降低（圖5C)。觀測到轉殖基因人類條帶之信號對於可靠定量而言不足夠強烈。亦使用與用於皮質之抗體及部分相同的抗體及部分探測 159338.doc •115- 201216985 海馬°相較於皮質之信號，偵測到所有點墨抗體在來自海馬之部分中之信號皆較低。確定 ACI-36-2B6-AB1 及 ACI-36-3A8-AB1 對 τ Tg小鼠之可溶性海馬中之pS396(PHF_13)免疫反應性的治療效應。使用紅外成像系統對指示小鼠A)及人類Β)ρτ pS396(PHF- 13)抗原決定基之條帶定量。測定個別小鼠之值以及平均值土SEM。 ACI-3 6-2B6-Abl治療不顯著改變小鼠1可溶性海馬部分中之pS396(PHF-13)抗原決定基之存在，人類轉殖基因條帶中有較小降低趨勢。 ACI-36-3A8-Abl治療顯示小鼠1：可溶性海馬部分及人類轉殖基因條帶中之PS396(PHF-13)抗原決定基之存在降低的趨勢。與對PS396(PHF-13)WB之觀測結果類似，偵測到ACI_ 36-2B6-AB1治療之小鼠之提取物與ACI 36 3A8 AB1治療之小鼠之提取物兩者中人類τ可溶性海馬部分中之總τ信號均降低的趨勢。與皮質SinT樣品類似，來自海馬之以”部分含有極低含董之 ρτ。分別用 ACI-36-2B6-AB1 及 ACI-36-3A8-AB1 治療之小鼠之表不内源性小鼠τ之條帶中的ρΗΙΜ(ρ3396/ρ84〇4) 抗原決定基無變化。觀測到轉殖基因人類條帶之信號對於可靠定量而言不足夠強烈。 7.2.4概述研究指示使用磷酸位點特異性抗ρτ抗體ACI_36_2B6_AB1 159338.doc -116 - 201216985 及ACI-3 6-3A8-AB1抗體進行4次投藥會改良空間學習且減輕腦ρτ病變。

在1及3 mg/kg下，抗ρτ抗體ACI-36-2B6-Abl對τ Tg小鼠進行之4次周邊投藥降低皮質中之ρτ PHF抗原決定基之存在，如藉由西方墨點法所量測。觀測到海馬中有降低趨勢。類似地，亦觀測到總τ降低。觀測到不溶性皮質部分中之ρτ PHF-1免疫反應性顯著降低，且亦觀測到指示抗體治療之直接目標效應之趨勢。此等結果為抗ρτ抗體ACI-36-2Β6-ΑΒ1及ACI-36-3A8-AB1用於針對τ病變，諸如阿茲海默氏病之被動免疫療法中提供進一步支持。實例8 : 人類τ過度表現小鼠之3個月治療 8.1方法 8.1.1小鼠及治療使用轉殖基因小鼠且投與如方法6.1.中之表中所示之治療抗體（3號研究），且將小鼠歸為如下表中所述之4個不同治療組。組小鼠品系基因型開始時之年齡性別 η 治療 A TMHT Tg 3個月(±2週）混合 15+1 PBS (對照） i.p. 10 μΐ/g b.w. 每週一次 B TMHT Tg 3個月(±2週）混合 15+1 ACI-36-2Β6-ΑΜ (1 g/kg) i.p. 10 μΐ/g b.w. 每週一次 C TMHT Tg 3個月(±2週）混合 15+1 ACI-36-2B6-bl (3 mg/kg) i.p. 10 μΐ/g b.w. 每週一次 F TMHT nTg 3個月(±2週）混合 15+1 PBS (對照） i.p. 10 μΐ/g b.w. 每週一次 159338.doc -117- 201216985 分配至治療組八至c之總計45隻Tg小鼠加3隻備用小鼠及 1 5隻nTg小鼠加J隻備用小鼠（組F)在第〇、7、丨4、21、 28、35 ' 42 ' 49、56、63、70、77及84天藉由腹膜内注射 PBS(媒劑對照）或抗 Ρτ抗體 ACI-36-2B6-AM 或 ACI-36-3A8-Abl來處理（治療）。動物隨機圈養於包含所有治療組之動物的5個不同起始組（尺度）中。限制1個尺度中之動物之數目以讀保相同年齡及統一處理。在第丨2次投藥之後，進行水迷宮（MWM)任務以測試空間記憶表現。在MWM之後，在向小鼠投與1次測試物品（第丨3次注射），隨後在24小時後使小鼠安樂死以確定τ病變。藉由使用AT18〇(抗ρτ， pT231/pS235)抗體進行免疫組織化學（ΙΗ〇定量來確定海馬及杏仁核中之腦τ病變。此外，使用探測ρτ(ρΤ231及pS396) 及總τ之MesoScale Discovery(MSD)技術量測對皮質及海馬中之可溶性及十二烧基肌胺酸納不溶性τ及ρ τ的治療效應。 8.1.2·行為測試-莫里斯水迷宮（MWM)任務根據實例7.1.2.中描述之方案進行此實驗。在第12週，在莫里斯水迷宮（MWM)中測試空間導航以評估學習及記憶。 8.1丄分子生物學藉由使用來自MesoScale Discovery(MSD)之免疫吸附劑檢定來定量Tg動物之腦組織勻漿中之總τ及在Thr231及 pS396處經碗酸化之τ。 8.1.4.藉由免疫組織化學（IHC)定量確定腦τ病變 159338.doc -118- 201216985 根據實例7.1.3.中描述之方案進行此實驗。根據每組8個動物之海馬及杏仁核中之AT1 80免疫反應性確定τ病變。 8.1.5. 3個月抗τ抗體投藥對存在於成對螺旋長絲（PHF)中之嗔酸τ抗原決定基的影響

根據7.1.4.、7.1_5·及7.1.6·中描述之方案進行此實驗。為量測4次ACI-36-2B6-Abl及ACI-5404投藥對充分證明之τ PHF磷酸化抗原決定基之量的影響，使用WB，用AD2 (PHF-1 抗原決定基，pS396/pS404)、抗 pS396 抗體（PHF-13 抗原決定基，pS396)及AT180(pT23 l/pS235)探測來自經治療τ Tg小鼠之腦皮質及海馬可溶性及SinT部分。 8.1.6. 使用biGT τ雙轉基因小鼠進行之3個月技^抗體投藥對磷酸τ抗原決定基之影響的研究使用如方法6.1.中所示之雙轉基因τ小鼠進行4號研究。使用用於西方墨點法之總組織勻漿（ΤΗ)或可溶性部分（S1) 如下圖中所示製備腦皮質樣品。使用以下針對ρτ或總點墨抗體探測膜： • HT-7(26 ng/ml)，對總人類τ具有特異性 • PHF-13(pS396)，稀釋 7500 倍 • AT180(pT231)，2.47 pg/ml • AT8(pS202)，3 pg/ml • pS404，稀釋 5000倍 • pS400，稀釋 5000 倍所有定量皆相對於β-肌動蛋白校正。 159338.doc •119- 201216985

(離心塊）\ ♦十二烷基肌胺酸鈉 ( 可溶性（月 1小#培137^ iO min

(上清液）十二烷基肌胺酸鈉可溶性部分

(離心塊）十二烷基肌胺酸鈉不，溶性部分

8.2 ACI-36-2B6-Abl 抗髏之結果歷經12週研究時期在1 mg/kg或3 mg/kg下13次腹膜内注射每週投與之ACI-36-2B6-Abl不顯示任何嚴重不良反應。 8.2.1行為結果-莫里斯水迷宮由MWM測試獲得之結果顯示用ACI-36-2B6-Abl治療之小鼠有空間學習改良之強烈趨勢（圖9)。在末週治療期間，評估動物之空間導航學習及記憶。動物必須完成每天3次試驗之4天訓練，隨後為1次探測試驗及視力測試。評估逃逸等待時間（小鼠發現隱藏平台且因此自水逃逸所需之時間[秒])、路徑（到達目標之軌線長度 [公尺])、游泳速度（路徑與逃逸等待時間之計算商）、目標跨越次數及在目標象限中之駐留。就歷經4個測試日之逃逸等待時間及到達平台之游泳路徑之長度而言，媒劑處理之Tg(組A)以及nTg(組F)對照動物顯示預期學習曲線。相 159338.doc -120- 201216985 較於nTg對照動物（組F)，Tg對照（A)動物顯示顯著學習能力障礙，反映在逃逸等待時間及游泳路徑之扁平學習曲線中。在第3(p<0.01，等待時間；ρ<〇.〇〇ι，長度；邦弗朗尼氏事後檢定）及第4(p<〇.〇1 ;邦弗朗尼氏事後檢定）訓練曰’逃逸等待時間及游泳路徑顯著（雙因子ANOVA)不同。相較於Tg對照動物（A)，用低劑量或高劑量之 Abl(B及C)進行之治療不顯著改良空間學習能力。當調整各組在第1訓練日之表現至10〇%且所有其他天為第1天之百分比時’可見ACI-36-2B6-Abl治療之小鼠（低劑量及高劑量）在游泳路徑長度方面之略微改良，但不具有統計顯著性。當計算所有4個訓練曰之游泳速度時，未偵測到治療組之間的差異。在探測試驗（PT)中，記錄在目標象限（西南象限）中之駐留以及目標區跨越次數。相對於Tg對照（組 A)，nTg對照（組F)在目標象限中花費更多時間且更頻繁跨越目標區，但不具有統計顯著性。如PT中所評估，相較於Tg對照小鼠，既不用低劑量亦不用高劑量進行之治療促使空間學習能力改良。 8.2.2分子生物學 8.2.2Λ皮質組織勻漿之可溶性部分中之τ 評估來自組 A(Tg媒劑組；PBS)、B(Tg，ACI-36-2B6-Abl，1 mg/kg)及 c(Tg，ACI-36-2B6-AM，3 mg/kg)之 n=l 6個動物之皮質組織勻漿的可溶性部分中之總τ、 ρ231τ、Ρ396τ 及 ρτ 與總 τ之比率。用 ACI-36-2B6-Abl 進行之治療不顯著影響可溶性皮質組織勻漿中之總τ及ρτ。然 159338.doc •121· 201216985 而，在ACI-36-2B6-Abl治療後觀測到平均總τ、ρ231τ及 ρ396τ之略微增加（不具有顯著性）。評估為ρτ與總τ之比率之τ填酸化未受影響。 8.2.2.2皮質組織勻漿之十二烷基肌胺酸鈉不溶性部分中之τ 評估來自組 A(Tg媒劑組；PBS)、B(Tg，ACI-36-2B6-Abl，1 mg/kg)及 C(Tg，ACI-36-2B6-Ab 1，3 mg/kg)之 n=l 6個動物之皮質組織勻漿的十二烷基肌胺酸鈉不溶性部分中之總τ、ρ231τ、ρ396τ及ρτ與總τ之比率。用ACI-36-2B6-Ab 1進行之治療不顯著影響十二烷基肌胺酸鈉不溶性皮質組織勻漿中之總τ及ρτ。在ACI-36-2B6-Abl治療後觀測到平均總τ及ρ23 1τ之略微減少（不具有顯著性）。評估為 ρτ與總τ之比率之τ構酸化未受影響。 8.2.2.3海馬組織勻漿之可溶性部分中之τ 評估來自組 A(Tg媒劑組；PBS)、B(Tg，ACI-36-2B6-Abl，1 mg/kg)及 C(Tg，ACI-36-2B6-Ab 1，3 mg/kg)之 n=l 6個動物之海馬組織勻漿的可溶性部分中之總τ、 ρ23 1τ、ρ396τ及 ρτ與總 τ之比率。用 ACI-36-2B6-Abl 進行之治療不顯著影響可溶性海馬組織勻漿中之總τ及ρτ。在 ACI-3 6-2B6-AM治療後觀測到評估為ρτ與總τ之比率之τ石舞酸化的略微減少（不具有顯著性）。 8.2.2.4海馬組織勻漿之十二烷基肌胺酸鈉不溶性部分中之τ 評估來自組 A(Tg媒劑組；PBS)、B(Tg，ACI-36-2B6-Ab 1，1 mg/kg)及 C(Tg，ACI-36-2B6-Ab 1，3 mg/kg)之 n=l 6個動物之海馬組織勻漿的十二烷基肌胺酸鈉不溶性部 159338.doc -122- 201216985 分中之總τ、ρ231τ、ρ396τ及ρτ與總τ之比率。用ACI-36- 2B6-Ab 1進行之治療不顯著影響十二院基肌胺酸鈉不溶性海馬組織勻漿中之總τ及ρτ。用3 mg/kg進行之治療使平均總τ、ρ231τ以及Ρ3 96τ增加，但未達到顯著性，而在 1 mg/kg治療後觀測到平均總τ、ρ23ΐτ以及ρ396τ略微降低。在3 mg/kg ACI-36-2B6-Abl治療後，評估為^與總以比率之τ磷酸化略微增加。 8.2.2.6 biGTi:雙轉基因小鼠中之τ 用ACI-36-2B6-Abl治療3個月之biGT小鼠之腦皮質可溶 14 为中之總τ顯著降低（圖6A及6B)。觀測到ρτ抗原決定基 ρΤ231/ΑΤ18〇(圖 6C及 6D)、pS2〇2/AT8(圖 όΕ)及 PS396(圖 6F及6G)顯著降低。亦觀測到總組織勻漿（TH)中之γ抗原決定基pS400(圖6Η及61)與pS4〇4(圖6L及6Μ)兩者均顯著降低。此外，亦觀測到可溶性部分中之ρτ抗原決定基pS4〇〇 "、頁著降低（圖6J及6K)及ρτ抗原決定基pS4〇4之降低趨勢（圖 6N及 60)。 8 · 2.3組織學 m 1形態測定法·測定區域面積在整個所有研究之腦中，量測之海馬及杏仁核區域面積不顯者不同，此量測排除解剖及IHC或染色期間對組織之負面影響(例如明择收縮、不同剖切)及在-定程度上治療誘發之萎縮。由於例如執行標記方案期間之組織摺疊或切片之某些部分損失’個別切片可能偏離個別及組平均值。因此藉由计算區域面積内之經標記面積之百分比[經標 159338.doc •123· 201216985 記面積/(區域面積X 10.000)]’任何標記之總免疫反應性面積[以μηι計]相對於切片之個別區域面積[以mm2計]進行校正° 8.2.3.2 AT180 IH之結采 AT 180抗體偵測内源性及人類ρτ(在Thr23 1及Ser235處經雙重磷酸化）。相較於Tg組，nTg對照中之神經元體細胞内 ρτ之量顯著較低（ρ<〇·〇1以及pco.ooi)。相較於媒劑處理之動物，在杏仁核中’較高劑量之ACI-36-2B6-Abl(；3 mg/kg_ 組C)使神經元體細胞ρτ顯著減少（圖7，左）。較低劑量（j mg/kg-組C)展示相同趨勢但未達到顯著性。在海馬中可偵測相同效應，其中ACI-36-2B6-Abl以劑量依賴性方式使ρτ 降低，較高劑量具有顯著性且較低劑量具有趨勢（圖7，右）。此減少亦定性可見為個別神經元體細胞中之染色面積及染色強度減少。相對於神經元體細胞中之經量測 ΑΤ180 IR之ΑΟΙ大小進行校正之總染色強度的結果與經量測ΑΤ180 IR面積百分比類似，包括較高劑量在杏仁核中之較大效應的顯著劑量依賴性。在海馬令，事後比較未達到顯著性程度。 8.2.4概述如藉由MSD量測之腦τ病變不顯示顯著變化，然而腦切片之免疫染色顯示神經元體細胞中之AT180(pT231/pS2；3〇免疫染色之多達60°/。的劑量依賴性降低。研究顯示使用13次磷酸位點特異性抗ρτ抗體aci_36_ 2B6-Abl投藥進行之被動免疫可改良空間學習且顯著減輕 159338.doc •124· 201216985 腦ρτ病變》 8·3 ACl-36-3A8-Abl抗體之結果歷經12週研究時期在i mg/kg或3 mg/kg下13次腹膜内注射母週投與之ACI-36-3A8-AM不顯示任何嚴重不良反應。行為結果·莫里斯水迷宮由MWM測試獲得之結果顯示用3 mg/kg acI-36-3 A8-Abl 治療之小鼠之空間學習改良的顯著效應（圖1〇)。

就歷經4個測試日之逃逸等待時間及到達平台之游泳路徑之長度而言，媒劑處理之Tg(組A)以及nTg(組F)對照動物顯示預期學習曲線。相較於nTg對照動物（組F)，Tg對照 (A)動物顯示顯著學習能力障礙，反映在逃逸等待時間及游泳路徑之扁平學習曲線中。在第3(ρ<〇〇1，等待時間； p<0.001 ’長度；邦弗朗尼氏事後檢定）及第4(p<〇〇1 ;邦弗朗尼氏事後檢定）訓練日，逃逸等待時間及游泳路徑顯著（雙因子ANOVA)不同。當分析絕對值時，相較於Tg對照動物（A)，用低劑量或高劑量之ACI-36-3A8-Abl(D及E)進行之治療不顯著改良空間學習能力◊當調整各組在第1訓練曰之表現至100%且所有其他天為第1天之百分比時，在 ACI-36-3A8-Abl治療（低劑量及高劑量）後，可見學習及記憶能力改良。相較於Tg對照（組A)，用低劑量之ACI-36-3A8-AM(組D)治療之動物在MWM中之表現僅略微較佳。用3 mg/kg ACI-36-3A8-Abl(組E)進行之每週治療之效應更明顯且幾乎恢復nTg動物之表現。相較於Tg對照（A)，3 mg/kg ACI-36-3 A8-AM對第3天及第4天游泳路徑長度之效 159338.doc -125· 201216985 應具有..先°十顯著性（p<〇〇5)。冑計算所有4個訓練曰之游泳速度時，未偵測到治療組之間的差異。在探/則4驗（PT)中，記錄在目標象限（西南象限）中之駐留以及目標區跨越次數。相對於Tg對照（組A)，nTg對照 (組F)在目標象限中花費更多時間且更頻繁跨越目標區，但不具有統叶顯著性。如pT中所評估，相較於對照小鼠’既不用低劑量亦不用高劑量進行之治療導致統計顯著改良。然而，相較於Tg對照，ACI-36-3A8-Abl治療之動物具有更多目標區跨越次數（但不具有統計顯著性），此與歷經4個訓練日之游泳長度之結果一致。 8.3.2分子生物學 8.3.2.1皮質組織勻漿之可溶性部分中之τ 評估來自組A(Tg媒劑組；PBS)及D(Tg，ACI-36-3A8-Abl ’ 1 mg/kg)之n=16個動物及來自組以以，ACI_36_3A8_ Ab 1 , 3 mg/kg)之η=ι 5個動物之皮質組織勻襞的可溶性部分中之總τ、ρ23 1τ、ρ396τ及ρτ與總τ之比率。用ACI-36- 3A8-Abl進行之治療不顯著影響可溶性皮質組織勻漿中之總τ及ρτ。然而’在ACI-36-3A8-Abl治療後觀測到平均總 τ、ρ231τ及ρ396τ之略微增加（不具有顯著性）。在用3 mg/kg ACI-36-3A8-AB1治療之後，評估為ρ231τ與總！；之比率之在231處的τ磷酸化略微減少。 8.3.2.2皮質組織勾漿之十二烷基肌胺酸鈉不溶性部分中之工評估來自組A(Tg媒劑組；PBS)及D(Tg，ACI-36-3A8-Abl，1 mg/kg)之n=16個動物及來自組E(Tg，ACI-36-3A8- 159338.doc •126· 201216985

Ab 1，3 mg/kg)之n= 15個動物之皮質組織勻漿的十二烧基肌胺酸納不溶性部分中之總τ、ρ23 1τ、ρ396τ及ρτ與總τ之比率。用ACI-36-3A8-Abl進行之治療不顯著影響十二烷基肌胺酸鈉不溶性皮質組織勻衆中之總τ及ρτ。在1 mg/kg ACI-36-3A8-Abl治療後觀測到平均總τ、ρ231τ及ρ396τ之略微減少（不具有顯著性）。另外，相較於媒劑處理之動物，1 mg/kg ACI-3 6-3A8-AM治療之動物的ρ231τ與總τ之比率顯示略微較低變化性（但在F檢定中缺乏顯著性： ρ=0· 1 84)，2組之ρ23 1 τ與總τ的平均比率不改變。對於1 mg/kg及 3 mg/kg ACI-36-3 A8-Ab 1 台療之、组，觀湏!J 至ρ396τ 構酸化略微增加。 8.海馬組織句漿之可溶性部分中之τ 評估來自組A(Tg媒劑組；PBS)及D(Tg，ACI-36-3A8-Abl，1 mg/kg)之n=16個動物及來自組£(丁§，八(^1-36-3八8-Ab 1，3 mg/kg)之n= 15個動物之海馬組織勻漿的可溶性部分中之總τ、ρ23 1τ、ρ396τ及ρτ與總τ之比率。IRN6301(組 D)之可溶性海馬部分中之τ及ρτ含量為離群值且加以排除。用ACI-36-3A8-Abl進行之治療不顯著影響可溶性海馬組織勻漿中之總τ及ρτ。在ACI-36-3A8-AM治療後觀測到評估為ρ23 1 τ與總τ之比率之在23 1處的τ磷酸化略微減少（不具有顯著性）。 8.2.2 Α海馬組織勻漿之十二烷基肌胺酸鈉不溶性部分中之τ 評估來自組 A(Tg媒劑組；PBS)、B(Tg ACI-36-3A8-Abl，1 mg/kg)及 C(Tg，ACI-36-3A8-Abl, 3 mg/kg)之n=16 159338.doc -127- 201216985 個動物之海馬組織勻漿的十二烷基肌胺酸鈉不溶性部分中之總 τ、ρ23 1τ、ρ3 96τ及 ρτ與總 τ之比率。用 ACI-36-3 A8-Ab 1進行之治療不顯著影響十二烷基肌胺酸鈉不溶性海馬組織勻漿中之總τ及ρτ。在ACI-36-3A8-Abl治療後觀測到平均總τ、ρ231τ以及ρ396τ之略微增加（不具有顯著性）。評估為ρ231τ與總τ之比率之τ磷酸化未受影響且用1 mg/kg ACI-3 6-3A8-Abl進行之治療使ρ396τ與總τ之比率略微降低。 8.2.2.6 biGT τ雙轉基因小鼠中之τ 用ACI-3 6-3A8-Abl治療3個月之biGT小鼠之腦皮質可溶性部分中之總τ顯著降低（圖6A及6B)。觀測到ρτ抗原決定基 ρΤ231/ΑΤ180(圖 6C及 6D)、pS202/AT8(圖 6Ε)及 pS396(圖 6F及6G)顯著降低。亦觀測到總組織勻漿（TH)中之ρτ抗原決定基pS400(圖6Η及61)與pS404(圖6L及6Μ)兩者均顯著降低。此外，亦觀測到可溶性部分中之ρτ抗原決定基pS400 顯著降低（圖6J及6K)及ρτ抗原決定基pS404之降低趨勢（圖 6N及 60)。 8.3.3組織學 8.3.3.1形態測定法-測定區域面積參見實例8.2.3.1。 8.3.3.2 AT180 IH之結果八1[180抗體偵測内源性及人類91：(在1^231及86^35處經雙重填酸化）。相較於Tg組，nTg對照中之神經元體細胞内 ρτ之量顯著較低（ρ<0·001)。相較於媒劑處理之動物，在杏 159338.doc -128- 201216985 仁核中，兩種劑量之ACI-36-3A8-Abl [1 mg/kg(組D)及3 mg/kg(組E)]均使神經元體細胞ρτ顯著減少（圖8，左）。在海馬中可偵測類似效應，其中較低劑量之ACI-36-3A8-Abl 使ρτ降低，然而，在此情況下，較高劑量之效用較小且僅導致趨勢性減少（圖8，右）。此減少亦定性可見為個別神經元體細胞中之染色面積及染色強度減少。在杏仁核中，神經元體細胞中之經量測AT1 8〇 IR之校正強度總和的結果與經量測AT180 IR面積百分比類似，但僅較高劑量達到顯著

性°在海馬中，結果完全與IR面積百分比類似。 8.3,4概述如藉由MSD量測之腦τ病變不顯示顯著變化，然而腦切片之免疫染色顯示神經元體細胞中2AT18〇(pT23i/pS235) 免疫染色之多達40%的劑量依賴性降低。研究顯示使用丨3次磷酸位點特異性抗ρτ抗體aci_36_ 1A8^M投藥進行之被動免疫會改良空間學習且顯著減輕

159338.doc 129· 201216985 智锶韜运^埤嚓，瓦处一 : i 抗體 ACI-33-6C10-Abl ACI-33-6C10-Ab2 ACI-36-6Hl-Abl | ACI-36-6Hl-Ab2 ACI-36-2B6-Abl ACI-36-2B6-Ab2 i ACI-36-3A8-Abl ACI-36-3A8-Ab2 ACI-41-7C2-Abl ACI-41-7C2-Abl | ACI-35-4A6-Ab2 ] ACI-35-2G5-Ab2 ACI-35-2G5-Ab3 | ACI-35-2Al-Abl | ACI-35-2Al-Ab2 ACI-35-lD2-Abl 融合瘤 6C10F9C12A11 6C10E5E9C12 6H1A11C11 | ,6H1G6E6 2B6A10C11 2B6G7A12 3A8A12G7 3A8E12H8 s o U o E /—s Q 卜 7C2(2)B9F11D5 | A4-4A6-48 | A6-2G5-30 A6-2G5-41 | A4-2AM8 | A4-2A1-40 A6-1D2-12 序列*、長度⑻、序列ID號 RQEFEVMEDHAGTY(p)GL(n=16)(SEQ ID NO: 59) PGSRSRT(p)PS(p)LPTPPTR(n=16)(SEQ ID NO: 60) GYSSPGS(p)PGT(p)PGSRSR(n=16)(SEQ ID NO: 61) GDTS(p)PRHLS(p)NVSSTGSID(n=18)(SEQ ID NO: 63) VYKS(p)PVVSGDTS(p)PRHL(n=16)(SEQ ID NO: 62) RENAKAKTDHGAEIVYKS(p)PVVSGDTS(p)PRHL(n=30)(SEQ ID NO: 58) PGSRSRT(p)PS(p)LPTPPTR(n=16)(SEQ ID NO: 60) GYSSPGS(p)PGT(p)PGSRSR(n=16)(SEQ ID NO: 61) PGS(p)PGT(p)PGSRSRT(p)PS(p)LP(n=17)(SEQ ID NO: 64) HLS(p)NVSSTGSID(n=12)(SEQ ID NO: 65) VSGDTS(p)PRHL(n=10)(SEQ ID NO: 66) 疫苗 ACI-33 i ACI-41 ACI-36 ACI-35 ACI-37 ACI-39 ACI-40 ACI-34 ACI-42 ACI-43 描述 T1 :序列1 : τ5-20[ρΥ18] T8 :序列8 : τ 206-221 [ρΤ2Π， pS214] T9 :序列9 : τ 196-211 [pS202， ρΊΓ205] T4 :序列4 : τ 401·418 [pS404， pS409] T3丄序列3 : τ 393408 [pS396， pS404] T5 :對照序列：τ 379*408 ! [pS396 ， pS404] T8 :序列8 : τ 206-221 [pT212， pS2141 T9 :序列9 : τ 196-211 [pS202， pT2051 1 T2 :庠列 2 : τ 200-216 [pS202+pT205及 pT212+pS214] T10 :序列 10 : τ407-418 [pS409] Til :岸列 11 : T399~408 [pS404] 。硪歆^毽替长ιΐ。(1?1)荽刹畹贫函本嗽WIMIV食硪* 159338.doc -130- 201216985

表2 : ACI-33融合瘤篩檢結果 24孔板篩檢 Τ25燒瓶篩檢 ELISA中之陽性物 TAUPIR中之陽性物 IgG篩檢中之陽性物 ELISA中之陽性物 TAUPIR中之陽性物 1A7 1A7 1A11 1C11 1C11 2C9 2C9 3C3 3C3 3C3 3C5 3C5 3E8 3E8 3G10 3G10 3G10 3G10 ，_ΐ(Γ '' .6d 6010^ - .· .. r麵、、: 6F3 6F3 6F8 6F8 表3 : ACI-3 6融合瘤篩檢結果 24孔板篩檢 T25燒瓶篩檢 —' ELISA中之 TAUPIR中之 IgG篩檢中之 ELISA中之 TAUPIR tiT 陽性物陽性物陽性物 ΒΆ,ΙΔ, AtL 陽性物陽性物 ‘2B6f. “ ΐ' 瓣·，.. 2B6 4.' ：:. ¥ <2F齡. »：： - - · r · ' 2F9 2G1 :-¾ ·ν.^-：、c: $31 又：'2<αΓ~ 3A8 3A8 X 3Α8; 3A8 3A8 3B9 .*ϊ ,. 、·、..·. V X<v f i·. f1 3B9 3B9 3F11 3F11 3F11 3F11 4A3 4 A3 — 4C1 ；；v.：4Cl. 4C12 4C12. \ -,4pi2 ； s 4C12 ^~ 4E12 Λ r 4Εί2： [ 4E12 : 1 .、 . 1 ,-rrr— 4E.12 5E10 5Ε10 5E10 . _ 5F5 5F5 5F5 翁、::¾ 、’7D启〇以於 C 7D56：、 7D6 '、、.植;:Π 6H1 ΨΚ. …>6Η1.λ r 砸： 159338.doc • 131 - 201216985 表4:八(：1-3 6之£1^13八及丁八1；?111中之陽性純系的分級 ELISA分級 TAUPIR分級 3A8 6H1 . . _ - ^ 2B6 甿 1 .τ'. ' …7 4C1 3Α8 ; ' 6H1 4C12 4C12 2Β6 " 2G1 2F9 2F9 3Β9 7D6 2G1 3B9 7D6 4E12 4Ε12

表5 : ACI-41融合瘤篩檢結果

24孔板篩檢 τ25燒瓶篩檢 ELISA中之 TAUPIR中之 IgG篩檢中之 ELISA中之 TAUPIR中之陽性物陽性物陽性物陽性物陽性物 3D11 3D11 3D11 4H6 4H6 4H6 5D10 5D10 5D10 5D10 5D10 5E6 5E6 5F10 5F10 6B7 6B7 6B7 7C2 7C2 7C2 7C2 7C2 8G8 8G8 8H8 8H8 8H8 159338.doc -132- 201216985

表6 :與目標結合之融合瘤之篩檢融合瘤抗體 ELISA TAUPIR 西方墨點 τρΜ τ狀全長ρτ 全長τ 6C10F9C12A11 ACI-33- 6C10-Abl + - +/- - + - 6C10E5E9C12 ACI-33- 6C10-Ab2 + - +/- - + - 6H1A11C11 ACI-36- 6H1-AM + - + - + + 6H1G6E6 ACI-36- 6H1-Ab2 + - + - + + 2B6A10C11 ACI-36- 2B6-AM + + + + 2B6G7A12 ACI-36- 2B6-Ab2 + - + - + + 3A8A12G7 ACI-36- 3A8-Abl + - + - + + 3A8E12H8 ACI-36- 3A8-Ab2 + + -/+ + + 7C2(1)F10C10D3 ACI-41- 7C2-Abl + - + + - 7C2(2)B9F11D5 ACI-41- 7C2-Ab2 + - + + - A4-2A1-18 ACI-35- 2A1-Abl + - + - A4-2A1-40 ACI-35- 2A1-Ab2 + + _ A4-4A6-18 ACI-35- 4A6-Abl + - - + A4-4A6-48 ACI-35- 4A6-Ab2 A6-1D2-12 ACI-35- 1D2-Abl + + - A6-2G5-08 ACI-35- 2G5-Abl + _ - - A6-2G5-30 ACI-35- 2G5-Ab2 + + A6-2G5-41 ACI-35- 2G5-Ab3 + - + - 159338.doc •133- 201216985 表7 :抗τ抗體之結合親和力融合瘤抗體締合速率常數解離速率常數解離常數 (A：d)(l/Ms) ⑹(1/S) (Κ〇)(ηΜ) 6C10F9C12A11 ACI-33-6C10-AM 9.46x10s 3.27xl〇·3 3.46 6H1A11C11 ACI-36-6Hl-Abl 3.53xl04 6.8〇χ10·5 1.93 6H1G6E6 ACI-36-6Hl-Ab2 9.99χ104 9.58χ10·5 0.96 2B6A10C11 ACI-36-2B6-Abl 6.9〇xl05 1.63Χ10·4 0.24 2B6G7A12 ACI-36-2B6-Ab2 9.11xl05 Ι.ΙΙχΗΤ4 0.12 3A8A12G7 ACI-36-3A8-Abl l.OlxlO6 1.09Χ10"4 0.11 3Α8Ε12Η8 ACI-36-3A8-Ab2 8.43xl05 1.43x1ο*4 0.17 Α4-4Α6-18 ACI-35-4A6-AM 2·00χ105 3·1〇χ10·3 16 A6-1D2-12 ACI-35-1D2-AM 1.6〇xl03 9.3〇χ10'6 <6 A6-2G5-08 ACI-35-2G5-Abl 4·8〇χ105 5.3〇χ1〇·3 10 159338.doc 134· 201216985 2 O 〇〇〇〇〇〇〇〇〇〇〇、 r~、r'r 、r、r、r、r、，—、，—、厂、r、〇〇 W T-H ^ ^ ^ ^-( ^-( 5h h hhhhhhhhhhh S ο ΟϋϋϋϋΟΟϋϋϋϋ <<<<<<<<<<< 2 B κκκκκκκκκκ 2 Q PQQQQQQQQ S tH WWWWtQWWW ® > >>>>>> σν w ω ω ω w ω 00 pL, [Jh b (X( n3 o >

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31-SI-9V 1^0=¾13= A o^v= Ή 159338.doc •158· 201216985 表13 :人類τ之最長同功異型物（441 aa)，亦稱為τ40 人類τ之最長同功異型物(441 aa)，亦稱為t40(SEQ ID NO: 67) 微管相關蛋白質τ同功異型物2[智人] NCBI參考序列：ΝΡ_005901.2

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美國專利公開案第2002/0038086號美國專利公開案第2003/0083299號美國專利公開案第2002/00253 13號美國專利公開案第2004/0204354號美國專利公開案第2004/0 13 1692號美國專利公開案第2002/0065259號美國專利公開案第2003/0 162695號美國專利公開案第2005/0124533號美國專利公開案第2005/0089473號美國專利公開案第2003/0073713號美國專利公開案第2003/0129186號美國專利第5，112,596號美國專利第5,268，164號美國專利第5,506,206號美國專利第5,686,416號美國專利第5,004,697號【圖式簡單說明】 159338.doc -162- 201216985 圖1展示在使用TAUPIR之情況下獲得之抗體與來自 biGTO雙轉基因）小鼠之腦切片中之填酸1的結合。圖2展示在使用利用ACI-36-3A8-AM抗體進行之TAUPIR 之情況下獲得之抗體與來自AD及τ病變患者之腦切片中之磷酸τ的結合。圖3展示在使用MSD之情況下獲得之在1週活體内研究之後，抗τ抗體治療對ρτ抗原決定基ρΤ23 1的影響。

圖4展示說明如何將腦製備成可溶性及十二烷基肌胺酸鈉（sarkosyl)不溶性（SinT)i:蛋白部分之圖式。圖5展示在活體内研究中在抗^:抗體治療1個月（圖5 A、 5B、5C、5G、5H、51)或 3個月（圖 5D、5E、5F)之後的 ρτ 抗原決定基西方墨點結果。圖6展示在使用biGT雙轉基因小鼠進行之活體内研究中在抗τ抗體治療3個月之後的ρτ抗原決定基西方墨點結果。圖7展示在3個月之活體内研究中在用ACI-36-2B6-AM進行之抗τ抗體治療之後的IHC。圖8展示在3個月之活體内研究中在用ACI-36-3A8-AM進行之抗τ抗體治療之後的IHC。圖9展示在3個月之活體内研究中在用ACI-36-2B6-Abl進行之抗τ抗體治療之後的莫里斯水迷宮結果。圖10展示在3個月之活體内研究中在用ACI-36-3A8-Abl 進行之抗τ抗體治療之後的莫里斯水迷宮結果。序列 SEQ ID NO: 1描述由融合瘤細胞株3A8A12G7產生之單 159338.doc -163· 201216985 株抗體ACI-36-3A8-Abl之重鏈可變區（VH)的胺基酸序列。 SEQ ID NO: 2描述由融合瘤細胞株2B6A10C11產生之單株抗體ACI-36-2B6-Abl之重鏈可變區（VH)的胺基酸序列。 SEQ ID NO: 3描述分別由融合瘤細胞株6H1A11C11及 6HlG6E6產生之單株抗體ACl·3 6-6Hl-Abl及ACI_3 6-6Hl-Ab2之重鍵可變區（VH)的胺基酸序列。

SEQ ID NO: 4描述分別由融合瘤細胞株6C10E5E9C12及 6C10F9C12A11 產生之單株抗體 ACI-33-6C10-Ab2 及 ACI-33-6C10-Abl之重鏈可變區（VH)的胺基酸序列。 SEQ ID NO: 5描述分別由融合瘤細胞株7C2(1)F10C10D3 及 7C2(2)B9F11D5 產生之單株抗體 ACI-41-7C2-Abl 及 ACI-41-7C2-Ab2之重鏈可變區（VH)的胺基酸序列。 SEQ ID NO: 6描述分別由融合瘤細胞株3A8A12G7及 3A8E12H8產生之單株抗體 ACI-36-3A8-AblVK.AD 及 ACI-36-3A8-Ab2VK_AD之輕鏈可變區（VK)的胺基酸序列。 SEQ ID NO: 7描述分別由融合瘤細胞株3A8A12G7及 3A8E12H8產生之單株抗體 ACI-3 6-3A8-AblVK_GAACI-3 6- φ 3A8-Ab2VK-G之輕鏈可變區（VK)的胺基酸序列。 SEQ ID NO: 8描述分別由融合瘤細胞株2B6A10C11及 2B6G7A12產生之單株抗體 ACI-36-2B6_Abl及 ACI-36-2B6-Ab2之輕鏈可變區（VK)的胺基酸序列。 SEQ ID NO: 9描述分別由融合瘤細胞株6H1A11C11及 6H1G6E6產生之單株抗體 ACI-36-6Hl-Abl及 ACI-36-6H1-Ab2之輕鏈可變區（VK)的胺基酸序列。 159338.doc -164- 201216985 SEQ ID NO: 10描述分別由融合瘤細胞株6C10E5E9C12 及 6C10F9C12A11產生之單株抗體 ACI-33-6C10-Ab2 及 ACI-33-6C10-Abl之輕鏈可變區（VK)的胺基酸序列。 SEQ ID NO: 11描述分別由融合瘤細胞株 7C2(1)F10C10D3 及 7C2(2)B9F11D5 產生之單株抗體 ACI-41-7C2-Abl及ACI-41-7C2-Ab2之輕鏈可變區（VK)的胺基酸序列。

SEQ ID NO: 12描述分別由融合瘤細胞株3A8A12G7、 3A8E12H8、2B6A10C11、2B6G7A12、6H1A11C11 及 6H1G6E6產生之單株抗體人(：1-36-3八8-八131、八(：1-36-3八8-Ab2、ACI-36-2B6-Abl、ACI-36-2B6-Ab2、ACI-36-6H1-Abl及ACI-36-6Hl-Ab2之重鏈可變區（VH)之CDR1的胺基酸序列β SEQ ID NO: 13描述分別由融合瘤細胞株3A8A12G7、 3A8E12H8、2B6A10C11 、2B6G7A12、6H1A11C11 及 6H1G6E6產生之單株抗體八0：1-36-3八8-八131、入(：1-36-3入8-Ab2、ACI-36-2B6-Abl、ACI-36-2B6-Ab2、ACI-36-6H1-Abl及ACI-3 6_6Hl-Ab2之重鏈可變區（VH)之CDR2的胺基酸序列。 SEQ ID NO: 14描述分別由融合瘤細胞株3A8A12G7、 3A8E12H8、2B6A10C11、2B6G7A12、6H1A11C11 及 6H1G6E6產生之單株抗體八(：1-36-3八8-八131、入(：1-36-3八8-Ab2、ACI-36-2B6-Abl、ACI-36-2B6-Ab2、ACI-36-6H1-Abl及ACI-3 6-6Hl-Ab2之重鏈可變區（VH)之CDR3的胺基 159338.doc •165- 201216985 酸序列。 SEQ ID NO: 15描述分別由融合瘤細胞株6C10E5E9C12 及 6C10F9C12A11產生之單株抗體 ACI-33-6Cl0-Ab2及 ACI-3 3-6(：10-八1)1之重鏈可變區(^11)之€〇111的胺基酸序列。 SEQ ID NO: 16描述分別由融合瘤細胞株6C10E5E9C12 及 6C10F9C12A11產生之單株抗體 ACI_33-6C10-Ab2 及 ACI-3 3-6(：10-八1)1之重鏈可變區（乂11)之€〇112的胺基酸序列。

SEQ ID NO: 17描述分別由融合瘤細胞株6C10E5E9C12 及 6C10F9C12A11產生之單株抗體 ACI-33-6C10-Ab2 及 ACI-33-6C10-Abl之重鏈可變區（VH)之CDR3的胺基酸序列。 SEQ ID NO: 18描述分別由融合瘤細胞株 7C2(1)F10C10D3 及 7C2(2)B9F11D5 產生之單株抗體 ACI-41-7C2-Abl 及 ACI-41-7C2-Ab2之重鏈可變區（VH)之 CDR1 的胺基酸序列。 SEQ ID NO: 19描述分別由融合瘤細胞株 7C2(1)F10C10D3 及 7C2(2)B9F11D5 產生之單株抗體 ACI-41-7C2-Abl A ACI-41-7C2-Ab2-^ ί # «Γ ^ [a (VH)^, CDR2 · 的胺基酸序列。 SEQ ID NO: 20描述分別由融合瘤細胞株 7C2(1)F10C10D3 及 7C2(2)B9F11D5 產生之單株抗體 ACI-41-7C2-Abl 及 ACI-41-7C2-Ab2之重鏈可變區（vh)之 CDR3 的胺基酸序列。 SEQ ID NO: 21描述分別由融合瘤細胞株3A8A12G7及 3A8E12H8產生之單株抗體 ACI-36-3A8-AblVK_AD&ACI-36- 159338.doc 166- 201216985 3A8-Ab2VK_AD之輕鏈可變區（VK)之CDR1的胺基酸序列。 SEQ ID NO: 22描述分別由融合瘤細胞株3A8A12G7及 3A8E12H8^ ^ ^ ^ ACI-3 6-3A8-Abl vk-ad^L ACI-3 6- 3 A8-Ab2VK_AD之輕鏈可變區（VK)之CDR2的胺基酸序列。 SEQ ID NO: 23描述分別由融合瘤細胞株3A8A12G7及 3A8E12H8產生之單株抗體ACI-3 6-3A8-Ablvκ_AD及ACI-3 6-3A8-Ab2VK.AD之輕鏈可變區（VK)之CDR3的胺基酸序列。

SEQ ID NO: 24描述分別由融合瘤細胞株3A8A12G7及 3入8丑12118產生之單株抗體八(：1-3 6-3八8-八13 1以.(}及八(：1-36-3A8-Ab2VK.G之輕鏈可變區（VK)之CDR1的胺基酸序列。 SEQ ID NO: 25描述分別由融合瘤細胞株3A8A12G7、 3A8E12H8、2B6A10C11、2B6G7A12、6H1A11C11 及 6H1G6E6產生之單株抗體八(：1-36-3八8-八131；^_(3、八(：1-36-3A8-Ab2VK_G、ACI-36-2B6-AM、ACI-36-2B6-Ab2、ACI-36-6Hl-Abl 及 ACI-36-6Hl-Ab2 之輕鏈可變區（VK)之 CDR2 的胺基酸序列。 SEQ ID NO: 26描述分別由融合瘤細胞株3A8A12G7、 3A8E12H8、2B6A10C11、2B6G7A12、6H1A11C11 及 6H1G6E6 產生之单株抗體 ACI-36-3 A8-Ab 1 νκ-G、ACI-3 、 ACI-36-2B6-Abl 、 ACI-36-2B6-Ab2 、 ACI-3 6-6Hl-Abl 及 ACI-36-6Hl-Ab2之輕鏈可變區（VK)之 CDR3 的胺基酸序列。 SEQ ID NO: 27描述分別由融合瘤細胞株2B6A10C11及 2B6G7A12產生之單株抗體 ACI-36-2B6-Abl及 ACI-36-2B6- 159338.doc -167- 201216985

Ab2之輕鏈可變區（VK)之CDR1的胺基酸序列。 SEQ ID NO: 28描述分別由融合瘤細胞株6H1A11C11及 6H1G6E6產生之單株抗體 ACI-36-6Hl-Abl 及 ACI-36-6H1-Ab2之輕鏈可變區（VK)之CDR1的胺基酸序列。 SEQ ID NO: 29描述分別由融合瘤細胞株6C10E5E9C12 及 6C10F9C12A11產生之單株抗體 ACI-33-6C10-Ab2 及 ACI-33-6C10-Abl之輕鏈可變區（VK)之CDR1的胺基酸序列。

SEQ ID NO: 3 0描述分別由融合瘤細胞株6C10E5E9C12 及 6C10F9C12A11產生之單株抗體 ACI-3 3-6C10-Ab2 及 ACI· 33-6C10-Abl之輕鏈可變區（VK)之CDR2的胺基酸序列。 SEQ ID NO: 31描述分別由融合瘤細胞株6C10E5E9C12 及 6C10F9C12A11產生之單株抗體 ACI-33-6C10-Ab2 及 ACI-3 3-6(：10-八1?1之輕鏈可變區（乂1〇之€〇113的胺基酸序列。 SEQ ID NO: 32描述分別由融合瘤細胞株 7C2(1)F10C10D3 及 7C2(2)B9F11D5 產生之單株抗體 ACI-41-7C2-Abl 及 ACI-41-7C2-Ab2之輕鏈可變區（VK)之 CDR1 的胺基酸序列。 SEQ ID NO: 33描述分別由融合瘤細胞株 7C2(1)F10C10D3 及 7C2(2)B9F11D5 產生之單株抗體 ACI-41-7C2-AM 及 ACI-4 卜7C2-Ab2之輕鏈可變區（VK)之 CDR2 的胺基酸序列。 SEQ ID NO: 34描述分別由融合瘤細胞株 7C2(1)F10C10D3 及 7C2(2)B9F11D5 產生之單株抗體 ACI-41-7C2-Abl 及 ACI-41-7C2-Ab2 之輕鏈可變區（VK)之 CDR3 159338.doc -168 · 201216985 的胺基酸序列。 SEQ ID NO: 35描述分別由融合瘤細胞株3A8A12G7及 3八8丑121€8產生之單株抗體八(：1-36-3八8-八1)1及八0：1-36-3八8-Ab2之重鏈可變區（VH)的核苷酸序列。 SEQ ID NO: 36描述分別由融合瘤細胞株2B6A10C11及 2B6G7A12產生之單株抗體 ACI-36-2B6-Abl 及 ACI-36-2B6-Ab2之重鏈可變區（VH)的核苷酸序列。

SEQ ID NO: 37描述分別由融合瘤細胞株6H1A11C11及 6H1G6E6產生之單株抗體 ACI-36-6H1-AM 及 ACI-36-6H1-Ab2之重鏈可變區（VH)的核苷酸序列。 SEQ ID NO: 38描述分別由融合瘤細胞株6C10E5E9C12 及6(：10卩9(：12人11產生之單株抗體八0：1-33-6(：10-八52及八(：1-33-6C10-Abl之重鏈可變區（VH)的核苷酸序列。 SEQ ID NO: 39描述分別由融合瘤細胞株 7C2(1)F10C10D3 及 7C2(2)B9F11D5 產生之單株抗體 ACI-41-7C2-Abl及ACI-41-7C2-Ab2之重鏈可變區（VH)的核苷酸序列。 SEQ ID NO: 40描述分別由融合瘤細胞株3A8A12G7及 3A8E12H8產生之單株抗體 ACI-36-3A8-Abl 及 ACI-36-3A8-Ab2之輕鏈可變區（VK)的核苷酸序列。 SEQ ID NO: 41描述分別由融合瘤細胞株3A8A12G7及 3A8E12H8產生之單株抗體 ACI-36-3A8-Abl 及 ACI-36-3A8-Ab2之輕鏈可變區（VK)的核苷酸序列。 SEQ ID NO: 42描述分別由融合瘤細胞株2B6A10C11及 159338.doc -169- 201216985 28607八12產生之單株抗體八(：1-36-286-八1)1及八(：1-3 6-286-Ab2之輕鏈可變區（VK)的核苷酸序列。 SEQ ID NO: 43描述分別由融合瘤細胞株6H1A11C11及 611106£6產生之單株抗體入(：1-36-6111-八13 1及人€：1-3 6-6111-Ab2之輕鏈可變區（VK)的核苷酸序列。 SEQ ID NO: 44描述分別由融合瘤細胞株6C10E5E9C12 及6(：1(^9(：12八11產生之單株抗體八(：1-33-6(：10-八52及八0：1-33-6C10-Abl之輕鏈可變區（VK)的核苷酸序列。 SEQ ID NO: 45描述分別由融合瘤細胞株 7C2(1)F10C10D3 及 7C2(2)B9F11D5 產生之單株抗體 ACI-41-7C2-Abl及ACI-41-7C2-Ab2之輕鏈可變區（VK)的核誓酸序列。 SEQ ID NO: 46-57描述乂11/乂〖正向及反向引子之核皆酸序列。 SEQ ID NO: 58描述τ 379-408[pS396，pS404]之胺基酸序列。 SEQ ID NO: 59描述τ 5‘20 [pY18]之胺基酸序列。 SEQ ID NO: 60描述τ 206-221 [pT212，pS214]之胺基酸序列。 SEQ ID NO: 61 描述τ 196-211 [pS202，pT205]之胺基酸序列。 SEQ ID NO: 62描述τ 393-408 [pS396，pS404]之胺基酸序列。 SEQ ID NO: 63描述τ 401-418 [pS404，pS409]之胺基酸 159338.doc •170· 201216985 序列。 SEQ ID NO: 64 描述 τ 200-216 [pS202+pT205 及 pT212+pS214]之胺基酸序列。 SEQ ID NO: 65描述 τ 407-418 [pS409]之胺基酸序列。 SEQ ID NO: 66 描述 τ 399-408 [pS404]之胺基酸序列。 SEQ ID NO: 67描述人類τ之最長同功異型物（441 aa)，亦稱為τ40之胺基酸序列。

8丑(^101^0:68描述由融合瘤細胞株八4-4八6-18產生之單株抗體ACI-35-4A6-Abl之重鏈可變區（VH)的胺基酸序列。 SEQ ID NO: 69描述由融合瘤細胞株A4-4A6-18產生之單株抗體八(：1-3 5-4八6-八1)1之輕鏈可變區（、反）的胺基酸序列。 SEQ ID NO: 70描述單株抗體Aci_35-4A6-Abl之重鏈可變區（VH)之CDR1的胺基酸序列。 SEQ ID NO: 71描述單株抗體ACI_35_4A6_Abl之重鍵可變區（VH)之CDR2的胺基酸序列。 SEQ ID NO: 72描述單株抗體ACI_35_4A6_Abl之重鏈可變區（VH)之CDR3的胺基酸序歹。 SEQ ID NO: 73描述單株抗體ACI_35 4A6Abl之輕鏈可變區（VK)之CDR1的胺基酸序列。 SEQ ID NO: 74描述單株抗體Aci_35_4A6 -Abl之輕鍵可變區（VK)之CDR2的胺基酸序列。 SEQ ID NO: 75描述單株抗體ACI_35_4A6_AM2輕鏈可變區（VK)之CDR3的胺基酸序列。 SEQ ID NO: 76描述由融合瘤細胞株A6_1D212產生之單 159338.doc •171· 201216985 株抗體ACI-3 5-lD2-Abl之重鏈可變區（VH)的胺基酸序列。 SEQ ID NO: 77描述由融合瘤細胞株A6-1D2-12產生之單株抗體ACI-3 5-lD2-Abl之輕鏈可變區（VK)的胺基酸序列。 SEQ ID NO: 78描述單株抗體ACI-35-lD2-Abl之重鏈可變區（VH)之CDR1的胺基酸序列。 SEQ ID NO: 79描述單株抗體ACI-35-lD2-Abl之重鏈可變區（VH)之CDR2的胺基酸序列。

SEQ ID NO: 80描述單株抗體ACI-35-lD2-Abl之重鏈可變區（VH)之CDR3的胺基酸序列。 SEQ ID NO: 81描述單株抗體ACI-35-lD2-Abl之輕鏈可變區（VK)之CDR1的胺基酸序列。 SEQ ID NO: 82描述單株抗體ACI-35-lD2-Abl之輕鏈可變區（VK)之CDR2的胺基酸序列。 SEQ ID NO: 83描述單株抗體ACI-35-lD2-Abl之輕鏈可變區（VK)之CDR3的胺基酸序列。

SEQ ID NO: 84描述由融合瘤細胞株A4-4A6-18產生之單株抗體ACI-3 5-4A6-Abl之重鏈可變區（VH)的核苷酸序列。 SEQ ID NO: 85描述由融合瘤細胞株A4-4A6-18產生之單株抗體ACI-3 5-4A6-Abl之輕鏈可變區（VK)的核苷酸序列。 SEQ ID NO: 86描述由融合瘤細胞株A6-1D2-12產生之單株抗體ACI-35-lD2-Abl之重鏈可變區（VH)的核苷酸序列。 SEQ ID NO: 87描述由融合瘤細胞株A6-1D2-12產生之單株抗體ACI-3 5-lD2-Abl之輕鏈可變區（VK)的核苷酸序列。 SEQ ID NO: 88描述分別由融合瘤細胞株A4-2A1-18、 159338.doc -172- 201216985 A4-2A1-40及A4-4A6-48產生之分別單株抗體ACI-35-2A1-Abl、ACI-35-2Al-Ab2 及 ACI-35-4A6-Ab2 之重鏈可變區 (VH)的胺基酸序列》 SEQ ID NO: 89描述分別單株抗體 ACI-35-2Al-Abl、 ACI-35-2Al-Ab2、ACI-35_4A6-Ab2、ACI-35-2G5-AB2 及 ACI-35-2G5-AB3之重鏈可變區（VH)之CDR1的胺基酸序列。

SEQ ID NO: 90描述分別單株抗體 ACI-35-2Al-Abl、 ACI-35-2Al-Ab2及 ACI-35-4A6-Ab2之重鏈可變區（VH)之 CDR2的胺基酸序列。 SEQ ID NO: 91描述分別單株抗體八(：1-35-2八1-入131，八0：1-35-2Al-Ab2, ACI-35-4A6-Ab2, ACI-35-2G5-AB2及ACI-35-2G5-AB3之重鏈可變區（VH)之CDR3的胺基酸序列。 SEQ ID NO: 92描述由融合瘤細胞株A4-2A1-40產生之單株抗體ACI-35-2Al_Ab2之輕鏈可變區（VK)的胺基酸序列。 SEQ ID NO: 93描述單株抗體ACI-35-2Al-Ab2之輕鏈可變區（VK)之CDR1的胺基酸序列。 SEQ ID NO: 94描述單株抗體ACI-35-2Al-Ab2之輕鏈可變區（VK)之CDR2的胺基酸序列。 SEQ ID NO: 95描述單株抗體ACI-35-2Al-Ab2之輕鏈可變區（VK)之CDR3的胺基酸序列。 SEQ ID NO: 96描述由融合瘤細胞株A6-2G5-08產生之單株抗體ACI-3 5-2G5-Abl之重鏈可變區（VH)的胺基酸序列。 SEQ ID NO: 97描述由融合瘤細胞株A6-2G5-08產生之單 159338.doc -173- 201216985 株抗體ACI-3 5-2G5-Abl之輕鏈可變區（VK)的胺基酸序列》 SEQ ID NO: 98描述單株抗體ACI-35-2G5-Abl之重鏈可變區（VH)之CDR1的胺基酸序列。 SEQ ID NO: 99描述單株抗體ACI-35-2G5-Abl之重鏈可變區（VH)之CDR2的胺基酸序列。 SEQ ID NO: 100描述單株抗體ACI-35_2G5-Abl之重鏈可變區（VH)之CDR3的胺基酸序列。

SEQ ID NO: 101描述單株抗體ACI-35-2G5-Abl之輕鏈可變區（VK)之CDR1的胺基酸序列。 SEQ ID NO: 102描述單株抗體ACI-35-2G5-Abl之輕鏈可變區（VK)之CDR2的胺基酸序列。 SEQ ID NO: 103描述單株抗體ACI-35-2G5-Abl之輕鏈可變區（VK)之CDR3的胺基酸序列。 SEQ ID NO: 104描述分別由融合瘤細胞株A6-2G5-30及 A6-2G5-41產生之分別單株抗體ACI-35-2G5-AB2及ACI- 35-2G5-AB3之重鏈可變區（VH)的胺基酸序列。 SEQ ID NO: 105描述分別由融合瘤細胞株A6-2G5-30及鲁 A6-2G5-41產生之分別單株抗體ACI-35-2G5-AB2及ACI-35-2G5-AB3之輕鏈可變區（VK)的胺基酸序列。 SEQ ID NO: 106描述分別單株抗體ACI-35-2G5-AB2及 ACI-35-2G5-AB3之輕鏈可變區（VK)之CDR1的胺基酸序列。 SEQ ID NO: 107描述分別單株抗體ACI-35-2G5-AB2及 ACI-35-2G5-AB3之輕鏈可變區（VK)之CDR2的胺基酸序 159338.doc -174- 201216985 列。 SEQ ID NO: 108描述分別單株抗體ACI-35-2G5-AB2及 ACI-35-2G5-AB3之輕鏈可變區（VK)之CDR3的胺基酸序列。 SEQ ID NO: 109描述分別由融合瘤細胞株A4-2A1-18、 A4-2A1-40及A4-4A6-48產生之分別單株抗體ACI-35-2A1-Abl、ACI-35-2Al-Ab2 及 ACI-35-4A6-Ab2 之重鏈可變區 (VH)的核苷酸序列》

SEQ ID NO: 110描述由融合瘤細胞株A4-2A1-40產生之單株抗體ACI-35-2Al-Ab2之輕鏈可變區（VK)的核苷酸序列。 SEQ ID NO: 111描述由融合瘤細胞株A6-2G5-08產生之單株抗體ACI-35-2G5-AB1之重鏈可變區（VH)的核苷酸序列。 SEQ ID NO: 112描述由融合瘤細胞株A6-2G5-08產生之單株抗體ACI-35-2G5-AB1之輕鏈可變區（νκ)的核苷酸序列。 SEQ ID NO: 113描述分別由融合瘤細胞株八6-2〇5-30及 A6-2G5-41產生之分別單株抗體ACI-35-2G5-AB2及ACI-35-2G5-AB3之重鏈可變區（VH)的核苷酸序列。 SEQ ID NO: 114描述分別由融合瘤細胞株人6-2〇5-30及 A6-2G5-41產生之分別單株抗體ACI-35-2G5-AB2及ACI-35-2G5-AB3之輕鏈可變區（VK)的核苷酸序列。 SEQ ID NO: 115描述單株抗體 ACI-35-2G5-AB2及 ACI- 159338.doc •175· 201216985 3 5-2G5-AB3之重鏈可變區（VH)之CDR2的胺基酸序列。 SEQ ID NO: 116描述由融合瘤細胞株A4-2A1-18產生之單株抗體ACI-35-2Al-Abl之輕鏈可變區（VK)的胺基酸序列。 SEQ ID NO: 117描述由融合瘤細胞株A4-2A1-18產生之單株抗體ACI-35-2Al-Abl之輕鏈可變區（VK)的核苷酸序列。 SEQ ID NO: 118描述由融合瘤細胞株A4-4A6-48產生之單株抗體ACI-35-4A6-Ab2之輕鏈可變區（VK)的胺基酸序列。 SEQ ID NO: 119描述由融合瘤細胞株八4-4八6-48產生之單株抗體ACI-35-4A6-Ab2之輕鏈可變區（VK)的核苷酸序列。 SEQ ID NO: 120-221描述VH/VK正向及反向引子之核苷酸序列。 159338.doc -176- 201216985 序列表 <110>瑞士商AC免疫公司 <120>醫藥組合物

<130>P2654 PCT/ABS <140100136670 <141> 2011-10-07 <150> 10186810.7; 11174248.2 <151>2010-10-07; 2011-07-15 <160> 221 <I70> BiSSAP 1.0 <210> 1 <2Π> 115 <212> PRT <213>小家鼠 <220> <221> SOURCE <222> 1..115 <223> /分子類型=「蛋白質」/生物體=「小家鼠」

<400> 1

Glu Val Gin Leu Gin Gin Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15

Ser Val Lys lie Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30

Tyr Met Asn Trp Val Lys Gin Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp lie 35 40 45

Gly Asp He Asn Pro Asn Arg Gly Gly Thr Thr Tyr Asn Gin Lys Phe 50 55 60

Lys Gly Lys Aia Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser I^u Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Ser Tyr Tyr Ala Val Gly Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Thr Leu Thr 100 105 110 Val Ser Ser 115 <210> 2 <21i> 115 <212> PRT <213>小家鼠 <220> <22l> SOURCE <222> 1.,115 <223> /分子類型=「蛋白質」/生物體=「小家鼠」 <400> 2

Giu Val Gin Leu Gin Gin Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Thr 15 10 15

Ser Val Lys lie Scr Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30

Tyr Met Asn Trp Val Lys Gin Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp lie 35 40 45

Gly Asp lie Asn Pro Asn Arg Gly Gly Thr Thr Tyr Asn Gin Lys Phe 50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Leii Thi Val Asp Lys Set Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Scr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Ser Tyr Tyr Ala Val Gly Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Thr Leu Thr 100 105 110

Val Scr Ser 115 159338-序列表.doc 201216985 <210> 3 <211> 115 <212> PRT <213>小家鼠 <220> <221> SOURCE <222> 1..115 <223> /分子類型=「蛋白質」/生物體=「小家鼠」 <40〇> 3

Glu Val Gin Leu Gin Gin Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 15 10 15

Ser Val Lys He Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30

Tyr Met Asn Trp Val Lys Gin Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp lie 35 40 45 G!y Asp lie Asn Pro Asn Arg Gly G]y Thr Thr Tyr Asn Gin Lys Phe 50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ser Scr Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Ser Tyr Tyr Ala Val Gly Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Thr Leu Thr 100 105 110

Val Ser Ser 115 PRT 小家鼠

<210> 4 <211> 120 <212> <213> <220>

<221> SOURCE <222> 1..120 <223> /分子類型=「蛋白質」/生物趙=「小家鼠」 <4〇〇> 4

Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 15 10 15

Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Pro Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr 20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45

Ala Tyr lie Ser Ser Gly Ser Ser TTir lie Tyr Tyr Gly Asp Thr Val 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80

Leu Gin Met Thr Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Arg Gly Gin Leu Arg Leu Arg Leu Phe Ala Tyr Trp Gly Gin 100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala 115 120

<210> 5 <211> 119 <2J2> PRT 小家鼠 <220> <221> SOURCE <222> 1..119 /分子類型=「蛋白質」/生物趙=「小家鼠」 <400> 5

Glu Val Lys Leu Met Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val His Fro Gly Ala 15 10 15

Ser Leu Arg Leu Tyr Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 159338-序列表.doc 201216985

Tyr Met SeT Trp Val Arg Gin Pro Pro Gly Lys Ala Pro Glu Trp Leu 35 40 45

Ala Leu lie Arg Asn Lys Ala Asn Gly Tyr Thr Thr Glu Tyr Thr Ala 50 55 60

Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr He Ser Arg Asp Asn Ser Gin Asn lie 65 70 75 80

Leu Tyr Leu Gin Met Asn Thr Leu Arg Ala Glu Asp Ser Ala Thr Tyr 85 90 95

Tyr Cys Val Lys Ala Leu Gly Arg Tyr Phe Asp Val Trp Gly Thr Gly 100 105 110

Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 6 <2il> 113 <212> PRT <213>小家鼠 <220> <221> SOURCE <222> 1..113 /分子類型=「蛋白質」/生物逋=「小家鼠j <400> 6

Asp lie Val Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ala Met Ser Val Gly 15 10 15

Gin Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gin Ser Val Phe Asn Ser 20 25 30

Gly Asn Gin Lys Asn Ser Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin 35 40 45

Ser Pro Lys Leu Leu Val Tyr Phe Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60

Pro Asp Arg Phe He Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ser Leu Thr 65 70 75 m lie Ser Ser Val Gin Ala Glu Asp Leu Ala Asp Tyr Phe Cys Gin Glu S5 90 95

His Tyr Thr Thr Pro Pro Thr Phe Gly Thr Gly Thr Lys Ixu Glu Uu 100 105 110

Lys <210> 7 <21l> 112 <212> m 小家鼠 <220> <221> SOURCE <222> 1..112 /分子類型=「蛋白質」/生物體=「小家鼠j <400> 7

Asp Val Val Met Tin Gin Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val SeT Leu Gly 15 10 15

Asp Gin Ala Ser lie Ser Cys Arg Ser Ser Gin Arg Leu Val His Ser 20 25 30

His Gly Lys Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gin Lys Pro Gly Gin Ser 35 40 45

Pro Lys Leu Leu lie Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie 65 70 75 80

Scr Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gin Thr 85 90 95

Ala His Phe Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lvs Leu Glu lie Lys 100 105 110 <210> 8 <211> 112 <212> PRT <213>小家鼠 <220> 159338-序列表.doc 201216985

<221> SOURCE <222> 1..112 <223> /分子類型=「蛋白質」/生物趙=「小家鼠j <400> 8

Asp Val Va】Thf Gin Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly 15 10 15

Asp Gin Ala Ser lie Ser Cys Arg Ser Ser Gin Ser Leu Val His Ser 20 25 30

His Gly Lys Thr Tyi Leu His Trp Tyr Leu Gin Lys Pro Gly Gin Ser 35 40 45

Pro Lys Leu Leu lie Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr L«u Lys lie 65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gin Thr 85 90 95

Ala His Phe Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys 100 105 110 <210> 9 <211> 112 <212> PRT <213>小家鼠 <220>

<223> SOJRCE <222> 1 ..112

<223〉/分子類型=「蛋白質」/生物體=「小家鼠」 <400> 9

Asp Val Val Met Thr Gin Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly 15 10 15

Asp Gin Ala Ser 11c Ser Cys Arg Ser Ser Gin Ser Leu Leu His Ser 20 25 30

His Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gin Lys Pro Gly Gin Ser 35 40 45

Pro Lys Leu Leu He Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie 65 70 75 80

Scr Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Scr Gin Thr 85 90 95

Ala His Phe Pro Tyr Thr Plie Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys ]〇0 105 110 <210> 10 <211> 107 <212> PRT <213>小家鼠 <220> <221> SOURCE <222> 1..107 <223> /分子類型=「蛋白質」/生物體=「小家鼠」

<400> 10

Asp lie Val Met Thr Gin Ser Kis Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly 15 10 15

Asp Arg Val Ser lie Thr Cys Lys Ala Ser Gin Asp Val Ser Thr Ala 20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ser Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45

Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr lie Ser Ser Val Gin Ala 65 70 75 80

Glu Asp Leu Ala Val Tyr 丁yr Cys Gin Gin His Tyr Thr Thr Pro Leu 85 90 95

Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys 100 L05 159338-序列表.doc 201216985 <210> 11 <211> 113 <212> PRT <213>小家鼠 <220> <221> SCXJRCE <222> 1.,113 <223> /分子類型=「蛋白質」/生物體=「小家鼠」 <400> 11 Asp lie Val 3 Glu Lys Val Ser Asn Gin 35 Ser Pro Lys 50 Pro Asp Arg 65 lie Ser Ser Tyr Tyr Ser Lys

Mel Ser Gin Ser Pro 5 Cys Lys

Thr Met Ser 20 Lys Asn Tyr Leu Leu He Phe Thr Gly 70 Val Lys Ala 85 Tyr Pro Phe 100

Leu Ala 40 Tyr Trp 55 Ser Gly Glu Asp Thr Phe

Ser Ser 10 Sex Sei 25 Trp Tyr Ala Ser Scr Gly

Leu Ala Val Ser Gin Ser Gin Gin

Thr Arg 60 Thr Asp 75 Val Tyr

Leu Leu 30 Lys Pro 45 Glu Ser

Leu Ala 90 Gly Scr Gly Thr 105

Phe Thr Tyr Cys Lys Leu 110

Val Gly 15 Tyr Ser Gly Gin Gly Val Leu Thr 80 Gin Gin 95 Glu lie <210> 12 <211> 10 <212> PRT <213>小家鼠 <220> <221> SOURCE <222> 1..10 <223> /分子類型=「蛋白質」/生物體=「小家鼠_ <400> 12

Gly Tyr Tlir Phe Thr Asp Tyr Tyr Met Asn 1 5 10 <210> 13 <211> 17 <212> PRT <213>小家鼠 <220> <221> SOURCE <222> 1..17 <223> /分子類型=「蛋白質」/生物體=「小家鼠 <400> 13

Asp 11c Asn Pro Ksn Arg Gly Gly Thr Thr Tyr Asn Gin Lys Phe Lys 15 10 15

Gly 鼠 T家 146^小 07l7kp 1i 11 1- u <2<2<2<2 <220>

<221> SOURCE <222> 1..6 <223> /分子類型=「蛋白質」/生物體=「小家鼠」 <400> 14

Tyr Tyr Ala Val Gly Tyr 159338-序列表 _doc 201216985 型鼠Έ^ 5'?子 11 P /. 31/ 0>1>2>3>0>1>2>3> ml 2222 「蛋白質」/生物體=「小家鼠」 <400> 15 Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr Gly Met His 1 5 l〇 <210> 16 <211> 17 <212> PRT <2】3>小家鼠 <220> <221> SOJRCH <222> 1..17 <223> /分子類型=「蛋白質」/生物體= 小家鼠. <400> 16 , lie Ser Ser Gly Ser Ser Thr lie Tyr Tyr Gly Asp Thr Val Lys 5 10 15 Gly

Tyr <210> 17 <211> 11 <212> PRT <213>小家鼠 <220> <221> ^)URCE <222> 1..11 <223> /分子類型= '蛋白質」/生物號=「小家鼠. <400> 17 Arg Gly Gin Leu Arg Leu Arg Leu Phe Ala Tyr 1 5 10 鼠丁家 1810卯小 ^ > > > <51 之 3 1^* 11111 <2<2<2<2 <220> <221> SOURCE <222> 1..10 <223> /分子類型=「蛋白質」/生物趙=「小家鼠」 <400> 18

Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr Tyr Met Ser 1 5 l〇 <210> 19 <21l> 19 <212> PRT <213>小家鼠 <220> <221> SOURCE <222> 1.. 19 <223> /分子類型=「蛋白質」/生物體=「小家鼠」 <400> 19 6- 159338-序列表.doc 201216985

Leu lie Arg Asn Lys Ala Asn Gly Tyr Thr Thr Glu Tyr Thr Ala Ser 15 10 15

Val Lys Gly <210> 20 <211> 8 <212> PRT <213>小家鼠 <220> <221> SOURCE <222> 1 8 <223> /#子類型=「蛋白質」/生物體=「小家鼠」 <400> 20

Ala Leu Gly Arg Tyr Phe Asp Val <210> 21 <2I1> 17 <212> PRT 小家鼠 <220> <221> SOJRCE <222> 1..17

<223>/分子類型=「蛋白質」/生物體=「小家鼠」 <400> 21

Lys Ser Ser Gin Ser Val Phe Asn Ser Gly Asn Gin Lys Asn Ser Leu 1 5 10 15

Ala <210〉 22 <211> 7 <212> PRT <213>小家鼠 <220> <221> SOURCE <222> 1 7 <223> /各子類型=「蛋白質」/生物體=「小家鼠」 <400> 22

Phe Ala Ser ΊΙιγ Arg Glu Ser <210> 23 <211> 9 <212> PRT <21Ϊ>小家鼠 <220> <221> SOURCE <222> 1..9 <223>/分子類型=「蛋白質」/生物雖=「小家鼠」 <400> 23

Gin Glu His Tyr Thr Thr Pro Pro Thr <210> 24 <211> 16 <222> PRT 小家鼠 <220> <221> SOURCE <222> 1..16 -7- 159338-序列表.doc 201216985 <223> /分子類型=「蛋白質」/生物體=「小家鼠」 <400> 24

Arg Ser Ser Gin Arg Leu Val His Ser His Gly Lys Thr Tyr Leu His 15 10 15 <210> 25 <211> 7 <212> PRT <213>小家鼠 <220>

<22]> SOURCE <222> <223> /分子類型=「蛋白質」/生物逋=「小家鼠」 <400> 25

Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser <210> 26 <211> 9 <212> PRT <213>小家鼠 <220> <221> SOURCE <222> 1 9 <223> 子類型=「蛋白質」/生物體==「小家鼠」 <400> 26

Ser Gin Thr Ala His Phe Pro Tyr Thr I 5 型鼠 E 類 T 家URC.16J 2716PR小SOI./^ 0>1>2>3>0>1>2>3> 1111 2222 質白蛋

<400> 27 Arg Ser Ser Gin Ser Leu VbI <210> 28 <211> 16 <212> PRT <213>小家鼠 <220> <221> SOURCE <222> 1..16 <2幻> /分子類型=「蛋白質」 <400> 28 Arg Ser Ser Gin Ser Leu Leu /生物趙=「 His Ser His 10 /生物體=「 His Ser His 10 小家鼠」 Gly Lys Thr Tyr 小家鼠j Gly Asn Thr Tyr

Leu His 15

Leu His 15 鼠 T家 9 1 R 、 2 1 P /. ^ > > >b> Λ 0123 D1ζ 1 υ 1 1 2 2 2 <2<2<2<2<2<2<2 159338·序列表 _doc 201216985 <223> /分子類型=「蛋白質」/生物趙=「小家鼠」 <400> 29

Lys Ala Ser Gin Asp Val Ser Thr Ala Val Ala 10 <210> 30 <211> 7 <212> PRT <213>小家鼠 <220> <221> SOURCE <222> 1,.7 <223> /$子類型=「蛋白質」/生物艘=「小家鼠」 <400> 30

Ser Ala Scr Tyr Arg Tyr llir 1 5 <210> 31 <211> 9 <212> PRT <213>小家鼠 <220>

<22\> SOURCE <222> 1..9 /分子類型=「蛋白質」/生物趙=「小家鼠」 <400> 31

Gin Gin His Tyr Thr Thr Pro Leu Thr 1 5 <210> 32 <211> 17 <2)2> PRT <213>小家鼠 <22〇> <221> SOURCE <222〉 1..17 /分子類型=「蛋白質」/生物趙=「小家鼠」 <400> 32

Lys Ser Ser Gin Ser Leu Leu Tyr Ser Ser Asn Gin Lys Asn Tyr Leu <210> 33 <211> 7 <212> PRT <213>小家鼠 <220> <221> SOURCE <222> 1..7 <223> /分子類型=「蛋白質」/生物趙=「小家鼠」 <400> 33

Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser <210> 34 <211> 9 <212> PRT <213>小家鼠 <220> 159338-序列表.doc . 201216985 <22l> SOURCE <222> 1..9 <223> 子類型=「蛋白質」/生物體=「小家鼠」 <400> 34 Gin Gin Tyr Tyr Ser Tyr Pro Phe Thr 1 5 <210> 35 <211> 345 <212> DNA 小家鼠 <220> <221> source <222> 1..345 <223>/分子類型=「DNAj /生物體=「小家鼠」 <400> 35 gaggtccagc tgcaacaatc tggacctgaa ctggtgaagc ctggggcttc agtgaagaca 60 tcctgtaagg cttciggata tacgitcact gactactaca tgaactgggt gaagcagagc 120 catggaaaga gccttgagtg gattggagat attaatccta accgtggtfig aactacttac 180 aaccagaagt tcaagggcaa ggccacgUg actgtagaca agtcctccag cacagcctac 240 atggaactcc gcagcctgac atctgaggac tctgcagtct attactgtgc aagttactac 300 gccgtgggct actggggcca aggcaccact ctcacagtct cctca 345

<210> 36 <21i> 345 <212> DNA <2Π>小家鼠 <220> <221> source <222> 1. J45 <223>/分子類型：=「DNA」/生物體=「小家鼠」 <400> 36 gaggtccagc tgcaacaatc tggacctgaa ctggtgaagc ctgggacttc agtgaagata 60 tcctgtaagg cttctggata tacgttcact gactactaca tgaactgggt gaagcagagc 120 catggaaaga gccttgagtg gattggagat attaaiccta accgtggtgg aactacttac 180 aaccagaagt ttaagggcaa ggccacgUg actgtagaca agtcctccag cacagcctac 240 atggaactcc gcagcctgac atctgaggac tctgcagtct attactgtgc aagttactac 300 gccgtgggct actggsscca aggcaccact ctcacagtct ccica 345

<210> 37 <211> 345 <212> DNA <2U>小家鼠 <220> <221> source <m> 1..345 <223> /分子類型=「DNA」/生物體=「小家鼠」 <400> 37 gaggtccagc tgcaacaatc tggacctgaa ctggtgaagc ctggggcttc agtgaagata 60 tcctgtaags cttctggata cacgttcact gactactaca tgaactgggt gaagcagagc 120 159338·序列表.doc •10- 201216985 catggaaaga gcctigagtg gattggagat attaatccta accgtggtgg aactacttac 180 aaccagaagt tcaagfigcaa ggccacgttg actgtagaca cgtcciccag cacagcctac 240 atggagctcc gcagcctgac atctgaggac tctgcagtct attactgtgc aagttactac 300 gccgtgggct actggggcca aggcaccact ctcacagtct cctca 345 <210> 38 <211> 360 <212> DNA <213>小家鼠 <220> <221> source <222> 1..360 <223>/分子類型=「DNA」/生物體=「小家鼠」 <400> 38

gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttagtgaagc ciggagggtc cctgaaactc 60 tcctgtgcac cctctggatt cactttcagt gactatggaa tgcactgggl tcgtcaggct 120 ccagagaagg gactggagtg ggitgcatac attagtagtg gcagtagtac catctactat 180 ggagacacag tgaagggccg attcaccatc tccagagaca atgccaagaa caccotgttc 240 ctgcaaatga ccagtctgag gtctgaggac acggccatgt aitactgtgc aagaagggga 300 cagctcaggc tacgcctgtt tgcttaclgg ggccaaggga ctctggtcac tgtctctgca 360 <210> 39 <211> 357 <212> ΙλΝΑ <213>小家鼠 <220> <221> source <222> 1..357 <223>/分子類型=「DNA」/生物體=「小家鼠」 <400> 39

gaggtgaagc tgatggaatc tggaggaggc ttggtacacc ctggggcttc tctgagactc 60 tactgtgcag cttctggatt cacctttact gattactaca tgagctgggt ccgccagcct 120 ccagggaagg cacctgagtg gttggctttg attagaaaca aagctaatgg ttacacaaca 180 gagtatactg catctgttaa gggtcggttc accatctcca gagataattc ccaaaacatc 240 ctctatcttc aaatgaacac cctgagggct gaggacagtg ccacttatta ctgtgtaaaa 300 gctctgggac gttacttcga tgtctggggc acagggacca cggtcaccgt ctcctca 357 <210 40 <211> 339 <212> mk <213>小家鼠 <220> <221> source <222> 1..339 <223> /S子類型=「DNA」/生物體=「小家鼠」 <400> 40 gacattgtga tgacacagtc iccatcctcc ctggctatgt cagtaggaca gaaggtcact 60 atgagctgca agtccagtca gagtgttttt aata&tggca atcaaaagaa ctctttggcc 120 159338-序列表.doc -11 - 201216985 tggtaccagc agaaaccagg acagtctcct aaacttctgg tatactttgc atccactagg 180 gaatctgggg tccctgatcg cttcataggc agtggatctg ggacagattt cagtcttacc 240 atcagcagtg tgcaggctga ggacctggca gattacttct gtcaggaaca ttataccact 300 cctcccacgt tcggtactgg gaccaagctg gagctgaaa 339 <2IO> 41 <211> 336 <212> DMA <213>小家鼠 <220> <221> source <222> 1..336 <223>/分子類型=「DNA」/生物體==「小家鼠」 <400> 41 gatgttgtga tgacccaaac tccactctcc ctgcctgtca gtcttggaga tcaagcctcc 60 atctcttgca gatctagtca gaggcttgta cacagtcatg gaaaaaccta tttacattgg 120 tacctgcaga agccaggcca gtctccaaag ctcctgatct acaaagtttc caaccggttt 180 tctggggtcc cagacaggtt cagtggcagt ggatcaggga cagatttcac actcaagatc 240 agcagagtgg aggctgagga tctgggagtt tatttctgtt ctcaaactgc acattttccg 300 tacacgttcg gaggggggac caagctggaa ataaaa 336

<210> A2 <211> 336 <212> DNA <213>小家鼠 <220> <221> source <222〉 1..336 <223>/分子類型=「DNA」/生物體=「小家鼠」 <400> 42 gatgttgtga tgacccaaac tccactctcc ctgcctgtca gtcttggaga tcaagcctcc 60 atctcttgca gatctagtca gagccttgta cacagtcatg gaaaaaccta tttacattgg 120 tacctgcaga agccaggcca gtctccaaag ctcctgatct acaaagtttc caaccggttt 180 tctggggtcc cagacaggtt cagtggcagt ggatcaggga cagatttcac actcaagatc 240 agcagagtgg aggctgagga tctgggagtt tatttctgtt ctcaaactgc acattitccg 300 tacacgttcg gaggggggac caagctggaa ataaaa 336

<210> 43 <211> 336 <212> DNA <213>小家鼠 <220> <221> source <222> 1..336 <223> /分子類型=「DNAj /生物體=「小家鼠」 <400> 43 gatgttgtga tgacccaaac tccactctcc ctgcctgtca gtcttggaga tcaagcctcc 60 atctcttgca gatctagtca gagccttcta cacagtcatg gaaacaccta tttacattgg 120 159338-序列表.doc 12· 201216985 tacctgcaga agccaggcca gtctccaaag ctcctgatct acaaagtttc caaccggttt 180 tctggggtcc cagacaggtt cagtggcagt ggatcaggga cagatttcac actcaagatc 240 agcagagtgg aggctgagga tctgggagtt tatttctgct ctcaaactgc acattttccg 300 tacacgttcg gaggggggac caagctggaa ataaaa 336 <210> 44 <211> 321 <212> DNA <^3>小家鼠 <220> <221> source <222> 1..321 <223>/分子類型=「DNA」/生物體=「小家鼠」 <400> 44

gacattgtga tgacccagtc tcacaaattc atgtccacat cagtaggaga cagggtcagc 60 atcacctgca aggccagtca ggatgtgagt actgctgtag cctggtatca acagaaacca 120 ggacaatctc ctaaactact gatttactcg gcatcctacc ggtacactgg agtccctgat 180 cgcttcactg gcagtggatc tgggacggat ttcactttca ccatcagcag tgtgcaggct 240 gaagacctgg cagtttatta ctgtcagcaa cattatacta ctccgctcac gttcggtgct 300 gggaccaagc tggagctgaa a 321 <210> 45 <211> 339 <212> DNA 小家鼠 <220> <221> source <222> 1..339 <223>/各·子類钽=「DNA」/生物tt=「小家鼠」 <400> 45

gacattgtga tgtcacagtc tccatcctcc ctagctgtgt cagttggaga gaaggttact 60 atgagctgca agtccagtca gagcctttta tatagtagca atcaaaagaa ctacttggcc 120 tggtaccagc agaaaccagg gcagtclcct aaactgctga tttaclgggc atccactagg 180 gaatctgggg tccctgatcg cttcacaggc agtggatctg ggacagattt cactctcacc 240 atcagcagtg tgaaggctga agacctggca gtttattact gicagcaata ttatagctai 300 ccattcacgt tcggctcggg gacaaagttg gaaataaaa 339 <210> 46 <211> 34 <212> DNA <213>人工序列 <220> <221> source <222> 1..34 <223> /分子類型=「DMA」/註釋=「人工序列之描述：引子」 /生物體=「人工序列j <400> 46 gggaattcat graatgsasc tgggtywtyc tctt 34 159338·序列表 _doc 13- 201216985 <210> 47 <211> 35 <212> DNA <213>人工序列 <220> <221> source <222> 1..35 <223> /分子'類型=「DNA」/註釋=「人工序列之描述：引子」/ 生物體==「人工序列」 <220> <221> variation <222> 30..30 <223> /置換=「n = ij <400> 47 cccaagcttc cagg£rccar kggataracn grtgg 35 <210> 48 <211> 32 <212> DNA <213>人工序列 <220> <221> source <222> 1..32 <223> /分子類型=「DNA」/註釋=「人工序列之描述：引子」/ 圭物ύ=「人工序歹1ί」 <400> 48 gggaattcat gragwcacak wcycaggtct it 32 <210> 49 <211> 41 <212> DNA <213>人工序列 <220> <221> source <222> 1..41 <223> /分子類型=「DNA」/註釋=「人工序列之描述：引子」/ 4物®=「人工序歹·ί」 <400> 49 actagtcgac atgggcwtca agatgragtc acakwyycwg g 41 <210> 50 <21l> 39 <212> DNA <213>人工序列 <220> <221> source <222> 1..39 <223> /分子類型=「dnAj /註釋=「人工序列之描述：引子」/ 生物體=「人工序列」 <400> 50 actagtcgac atgaagttgc ctgttaggct gttggtgct 39 <210> 51 <2】1> 30 <212> DNA <2J3>人工序列 <220> •14-

159338-序列表.doc 30201216985 <221> source <m> 1..30 <223> /分子類型=「DNAj /註釋= 生物體=「人工序列」 '人工序列之描述：引子. <400> 51 cccaagctca ciggatggtg ggaagatgga <210> 52 <211> 36 <212> DNA <213>人工序列 <220> <221> source <222> L J6 /分子類型=「DNAj /註釋= 生物體=「人工序列」人工序列之描述：引子」/ <400> 52 actagtcgac atgggatgga gctrtatcat sytctt 36 <210> 53 <2ll> 33 <212> DNA <213>人工序列 <220> <221> source <222> 1..33 /分子類型=「DNA」/註釋=「人工序列之描述：引子」/ 生物無=「人工序列j <400> 53 gggaallcat grasttskgg ytmarctkgr ttt 33 <210> 54 <211> 39 <212> DNA <213>人工序列 <220> <221> source <222〉 1..39 <223> /分子類型=「DNA」/註釋=「人工序列之描述：引子生物體=「人工序列」 <400> 54 actagtcgac atggactcca ggctcaattt agttttcct 39 列序 A工‘ 5533DN人 0>1>2>3> <21<21<21<21 <220> <221> source <222> 1..33 /分子類型=「DNA」/註釋=「人工序列之描述：引子」/ 生物體=「人工序列」 <400> 55 actagtcgac atgaagwtgt ggbtraactg grt 33 <210> 56 15- 159338-序列表.doc 201216985 <211> 39 <212> DNA <213>人工序列 <220> <221> source <222> 1..39 <223> /分子類型=「DNA」/註釋=「人工序列之描述：引子」/ 生物體=「人工序列」 <220> <221>misc feature <222> 27..27 <223> /註釋=「n = i j <400> 56 actagtcgac atggagwcag acacacnsct gytatgggt 39 <210> 57 <211> 37 <212> DNA <213>人工序列 <220> <221> source <222> 1..37 <223> /分子類型=「DNA」/註釋==「人工序列之描述：引子」/ 圭物會=「人工序歹ί」 <400> 57 actagtcgac atggiyctya tvttrctgct gctatgg 37 <210> 58 <2ll> 30 <212> PRT <213>人工序列 <220> <22]> SOURCE <222〉 1..30 <223> /分子類型=「蛋白質」/註釋=「人工序列之描述：ACI-37」 /生物體=「人工序列」 <220> <221> VARIANT <222> 18.. 18 <223>磷酸化絲胺酸 <220> <221> VARIANT <222> 26..26 <223>磷酸化絲胺酸 <400> 58

Arg Glu Asn Ala Lys Ala Lys Thr Asp His Gly Ala Glu lie Va! Tyr 15 10 15

Lys Ser Pro Val Val Ser Gly Asp Thr Ser Pro Arg His Leu 20 25 30 <210> 59 <211> 16 <212> PRT <213>人工序列 <220> <221> SOURCE <222> 1..16 <223>/分子類型=「蛋白質」/註釋=「人工序列之描述：ACI-33」/ 圭物ίΐ=「人工序列」 -16- 159338-序列表 _doc 201216985 <220> <221> VARIANT <222> 14..14 <223>磷酸化絲胺酸 <400> 59

Arg Gin GIu Phe Glu Val Met Glu Asp His Ala Gly Thr Tyr Gly Leu 15 10 15 <210> 60 <211> 16 <212> PRT <213>人工序列 <220> <221> SOURCE <222> 1..16 <223> /分子類型=「蛋白質」/註釋=「人工序列之描述：ACI-39」/ 生物體=「人工序列」 <220> <221〉VARIANT <222> 7..7, <223>磷酸化蘇胺酸 <220>

<22I> VARIANT <222> 9 9 <223>蠄‘化絲胺酸 <400> 60

Pro Gly Scr Arg Ser Arg Thr Pro Ser Leu Pro Thr Pro Pro Thr Arg 15 10 15 <210> 61 <211> 16 <212> PRT <213>人工序列 <220> <221> SOURCE <222> 1..16 <223> /分子類型=「蛋白質」/註釋=「人工序列之描述：ACI-39」/ 土物邊=「人工序列」 <220>

<22I> VARIANT

<222> 1.J <223> ?^酸化絲胺酸 <220> <22i> VARIANT <222> 10..10 <223>磷酸化蘇胺酸 <400> 61

Gly Tyr Ser Ser Pro Gly Ser Pro Gly Thx Pro Gly Ser Arg Ser Arg 10 15 <210> 62 <211> 16 <212> PRT <213>人工序列 <220> <221> SOURCE <222> 1..16 <223> /分子類型=「蛋白質」/註釋=「人工序列之描述：ACI-35j /生物體=「人工序列」 <220> -17· 159338·序列表.doc 201216985 <221> VARIANT <222> 4..4 <22：3> ^酸化絲胺酸 <220>

<221> VARIANT <222> 12..12 <223>磷酸化絲胺酸 <400> 62

Va】Tyr Lys Ser Pro Val Val Ser Gly Asp Thr Ser Pro Arg His Leu 1 5 10 15 <210> 63 <211> 18 <212> PRT <213>人工序列 <220> <22]> SOURCE <222> 1..18 <223> /分子類型=「蛋白質」/註釋=「人工序列之描述：ACI_36j /生物體=「人工序列」 <220> <221> VARIANT <222> 4..4 <223>磷酸化絲胺酸 <220> <221> VARIANT <223> 化絲胺酸 <400> 63

Gly Asp Thr Ser Pro Arg His Leu Ser Asn Val Ser Ser Tht Gly Ser 15 10 15 lie Asp <210> 64 <211> 17 <212> PRT <213>人工序列 <220> <221> SCARCE <222> 1..17 <223> /分子類型==「蛋白質」/註釋=「人工序列之描述：ACI-34」 /生物體=「人工序列」 <220>

<221> VARIANT <722> 3 3 <223> &酸化絲胺酸 <220> <221> VARIANT <222> 6..6 <223>磷酸化蘇胺酸 <220> <221> VARIANT <222> 13..13 <223>磷酸化蘇胺酸 <220> <221> VARIAKT <222> 15..15 <223>磷酸化絲胺酸 <400> 64

Pro Gly Ser Pro Gly Thr Pro Gly Ser Arg Ser Arg Thr Pro Ser Leu 18·

159338-序列表 _doc 201216985 1 5 10 15

Pro <210> 65 <211> 12 <212> PRT <213>人工序列 <220> <221 > SOURCE <222> 1..12 <223> /分子類型=「蛋白質」/註釋=「人工序列之描述：ACI-42J /±森逢=「人工序列」 <220> <221> VARIANT <222> 3..3 <223>磷酸化絲胺酸 <400> 65

His IvCU Ser Asn Val Ser Scr Thr Gly Ser He Asp 1 5 10

<210> 66 <2ll> 10 <212> PRT <213>人工序列 <220> <221> SOURCE <222> L.10 /分子類型=「蛋白質」/註釋=「人工序列之描述：ACI-43」 /生物體=「人工序列」 <220>

<221> VARIANT <222> 6..6 <223>磷酸化絲胺酸 <400> 66

Val Ser Gly Asp Thr Ser Pro Arg His Leu 1 5 10 <210> 67 <211> 441 <212> PRT <213>智人 <220> <221> SOURCE <222> 1..441 <223> /分子類型=「蛋白質」/生物體=「智人」 <400> 67

Met Ala Glu Pro Arg Gin Glu Phe Glu Val Met Glu Asp His Ala Gly 15 10 15

Thr Tyr Gly Leu Gly Asp Arg Lys Asp Gin Gly Gly Tyr Thr Met His 20 25 30

Gin Asp Gin Glu Gly Asp Thr Asp Ala Gly Leu Lys Glu Ser Pro Leu 35 40 45

Gin Thr Pro Thr Glu Asp Gly Ser Glu Glu Pro Gly Scr Glu Thr Scr 50 55 60

Asp Ala Lys Scr Thr Pro Thr Ala Glu Asp Val Thr Ala Pro Leu Val 65 70 75 80

Asp Glu Gly Ala Pro Gly Lys Gin Ala Ala Ala Gin Pro His Thr Glu 85 90 95 lie Pro Glu Gly Thr Thr Ala Glu Glu Ala Gly He Gly Asp Thr Pro 100 105 110

Ser Leu Glu Asp Glu Ala Ala Gly His Val Thr Gin Ala Arg Met Val 115 120 125

Scr Lys Ser Lys Asp Gly Tlir Gly Scr Asp Asp Lys Lys Ala Lys Gly 19- 159338-序列表.doc 201216985 130 135 140

Ala Asp Gly Lys Thr Lys He Ala Thr Pro Arg Gly Ala Ala Pro Pro 145 150 155 160

Gly Gin Lys Gly Gin Ala Asn Ala Thr Arg lie Pro Ala Lys Thr Pro 165 170 175

Pro Ala Pro Lys Thr Pro Pro Ser Ser Gly Glu Pro Pro Lys Ser Gly 180 185 190

Asp Arg Ser Gly Tyr Ser Ser Pro Gly Ser Pro Gly Thr Pro Gly Ser 195 200 205

Arg Ser ATg Thr Pro Ser Leu Pro Thr Pro Pro Thr Arg Glu Pro Lys 210 215 220

Lys Val Ala Val Val Arg Thr Pro Pro Lys Ser Pro Scr Ser Ala Lys 225 230 235 240

Ser Arg Leu Gin Thr Ala Pro Val Pro Met Pro Asp Leu Lys Asn Val 245 250 255

Lys Ser Lys lie Gly Ser Thr Glu Asn Leu Lys His Gin Pro Gly Gly 260 265 270

Gly Lys Val Gin lie lie Asn Lys Lys Leu Asp Leu Ser Asn Val Gin 275 280 285

Ser Lys Cys Gly Ser Lys Asp ksn lie Lys His Val Pro Gly Gly Gly 290 295 300

Ser Vai Gin lie Val Tyr Lys Pro Val Asp Leu Ser Lys Val Thr Ser 305 310 315 320

Lys Cys Gly Ser Leu Gly Asn lie His His Lys Pro Gly Gly Gly Gin 325 330 335

Val G]u Va】Lys Ser Giu Lys Leu Asp Phe Lys Asp Arg Va) Gin Ser 340 345 350

Lys lie Gly Ser Leu Asp Asn lie Thr His Val Pro Gly Gly Gly Asn 355 360 365

Lys Lys lie Glu Thr His Lys Leu Thr Phe Arg Glu Asn Ala Lys Ala 370 375 380

Lys Thr Asp His Gly Ala Glu He Val Tyr Lys Ser Pro Val Val Ser 385 390 395 400

Gly Asp Thr Ser Pro Arg His Leu Ser Asn Val Ser Ser Thr Gly Ser 405 410 415 lie Asp Met Val Asp Ser Pro Gin Leu Ala Thr Leu Ala Asp Glu Val 420 425 430

Ser Ala Ser Leu Ala Lys Gin Gly Leu 435 440 <210> 68 <211> 117 <212> PRT <213>小家鼠 <220> <221> SOURCE <222> 1. JJ.7 <223>/分子類型=「蛋白質」/生物體==「小家鼠」 <400> 68

Gin Val Gin Leu Gin Gin Pro Gly Ala Glu Leu Leu Lys Pro Gly Ala 15 10 15

Ser Val Lys Leu Sei Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30

Trp Met His Trp Val Lys Gin Arg Pro Gly Arg Gly Leu Glu Ττρ iie 35 40 45

Gly Arg lie Asp Pro Asn Ser Asp Arg Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Arg Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Scr Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Gin Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Asp Asp Tyr Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu 100 105 110

Val Thr Val Ser Ala 115 <210> 69 <211> 112 <212> PKT <213>小家鼠 <220> -20- 159338·序列表.doc 201216985

<221> SOURCE <222> 1..112 <223> /分子類型=「蛋白質」/生物體=「小家鼠」 <400> 69

Asp Val Leu Met Thr Gin Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly 15 10 15

Asp Gin Ala Ser lie Ser Cys Arg Ser Ser Gin Scr lie Val His Ser 20 25 30

Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gin Lys Pro Gly Gin Ser 35 40 45

Pro Lys Leu Leu lie Tyr Lys Leu Ser Asn Arg Phc Ser Gly Val Pro 50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie 65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gin Gly 85 90 95

Ser His Val Pro Pro T^r Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys 100 105 110 <210> 70 <211> 10 <212> PRT <213>小家鼠 <220>

<221> SOURCE <222> 1..10

<223> /分子類型==「蛋白質」/生物體=「小家鼠」 <400> 70

Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Trp Met His 1 5 10 <210> 71 <211> 17 <212> PRT <213>小家鼠 <220> <221> SCXJRCE <222> 1..17 <223> /分子類型=「蛋白質」/生物體=「小家鼠」 <400> 71

Arg lie Asp Pro Asn Ser Asp Arg Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Lys 15 10 15

Arg

<210> 72 <211> 8 <212> PRT <^13>小家鼠 <220> <221> SOURCE <222> 1 8 <223> A子類型=「蛋白質」/生物艘=「小家鼠」 <400> 72

Asp Asp Tyr Ala Trp Phe Ala Tyr <210> 73 <211> 16 <212> PRT <213>小家鼠 <220>

<221> SOJRCE -21 - 159338-序列表.doc 201216985 <222> 1..16 <223> /分子類型=「蛋白質」/生物體=「小家鼠」 <400> 73

Arg Ser Ser Gin Ser lie Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu 15 10 15 <210> 74 <21)> 7 <212> PRT <2〗3>小家鼠 <220> <221> SOURCE <222> 1..7 <223> /分子類型=「蛋占貧」/生物體=「小家鼠」 <400> 74

Lys Leu Ser Asn Arg Phe Ser <210> 75 <211> 9 <212> PRT <213>小家鼠 <220> <221> SOURCE <222> 1..9 <223> /分子類型=「蛋白質」/生物體=「小家鼠」 <400> 75

Phe Gin Gly Ser His Val Pro Pro Thr <210> 76 <211> 119 <212> PRT <213>小家鼠 <220> <221> SOURCE <222> 1..119 <223>/^子類型=「蛋白質」/生物體=「小家鼠」 <400> 76

Gin Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly lie Leu Gin Ser vSer Gin 15 10 15

Thr I^u Ser Leu Thr Cys Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser 20 25 30

Gly Met Gly Val Ser Trp lie Arg Gin Pro Ser Gly Lys Gly Leu Glu 35 40 45

Trp Leu Ala His lie Tyr Trp Asp Asp Asp Lys Arg Tyr Asn Ala Ser 50 55 60

Leu Lys Ser Arg Lea Thr lie Ser Lys Asp Thr Ser Arg Asn Gin Val 65 70 75 80

Phe Leu Lys lie Thr Cys Val Asp Thr Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr 85 90 95

Cys Ala Arg Leu Leu Arg Pro Tyr Aia Leu Asp Tyr Trp Gly GJn Gly 100 105 110

Thr Scr Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 77 <211> 112 <212> PRT. <213>小家鼠 <220> <221> SOURCE <222> 1..112 22-

159338-序列表.doc 201216985 <223> /分子類型=「蛋白質」/生物體=「小家鼠」 <400> 77

Asn lie Leu Met Thr Gin Scr Pro Ser Ser Leu Ala Val Scr Ala Gly 15 10 15

Clu Lys Vat Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gin Ser Val Leu Tyr Ser 20 25 30

Ser Asn Gin Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin 35 40 45

Ser Pro Lys Leu Leu lie Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Giu Ser Gly Val 50 55 60

Pro Asp Arg Phe Thr Gly Scr Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80

He Ser Ser Val GIti Ala Glu Asp Leu Ala Vai Tyr Tyr Cys Leu Gin 85 90 95

Tyr Leu Ser Ser Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys 100 105 110 <210> 78 <211> 12 <212> PRT <21.3>小家鼠 <220>

<221> SOURCE <222> 1..12 <223> /分子類型=「蛋白質」/生物體=「小家鼠」

<400> 78

Gly Phe Scr Leu Ser Thr Ser Gly Met Gly Val Ser 1 5 10 <210> 79 <211> 16 <2\2> PRT <213>小家鼠 <m> <221> SOURCE <222> 1..16 <223> /分子類型=「蛋白質」/生物體=「小家鼠」 <400> 79

His lie Tyr Trp Asp Asp Asp Lys Arg Tyr Asn Ala Ser I^eu Lys Ser 】 5 10 15 <210> 80 <21i> 9 <212> PRT <213>小家鼠 <220> <221> SOURCE <222> 1 9 <223> /谷子類型==「蛋白質」/生物體=「小家鼠」 <400> 80

Leu Leu Arg Pro Tyr Ala Leu Asp Tyr <210> 81 <211> 17 <212> PRT <213>小家鼠 <220> <221> SOURCE <222> 1..17 <223> /分子類型=「蛋白質j /生物體=「小家鼠j 23- 159338-序列表.doc 201216985 <400> 81

Lys Ser Ser G]n Ser Val Leu Tyr Ser Ser Asn Gin Lys Asn Tyr Leu <210> 82 <211> 7 <212> PRT <213>小家鼠 <220> <221> SOURCE <222> 1..7 <223> /分子類型=「蛋白質」/生物體=「小家鼠」 <400> 82

Trp Ala Sei* Thr Arg Glu Ser 1 5 <210> 83 <211> 8 <212> PRT <213>小家鼠 <220> <221> SOURCE <222> 1 8 <223>/#子類型=「蛋白質」/生物體=「小家鼠」 <400> 83

Leu Gin Tyr Leu Ser Ser Leu Thr <210> 84 <211> 351 <212> DNA <213>小家鼠 <220> <221> source <222> 1..351 <223> /分子類型=「DNA」/生物體=「小家鼠」 ctggggcttc agtgaaactg tgcactgggt gaagcagagg atagtgatcg tactaagtac aatcctccag cacagcctac attattgtgc aagggatgat ctgtctctgc a <400> 84 caggtccaac tcctgcaagg cctggacgag aatgagaagt atgcagctca tacgcctggt tgcagcagcc ct tctggcta gccttgagtg tcaagcgcaa gcagcctgac ttgcttactg tggggctgag caccttcacc gattggaagg ggccacactg atctgaggac gggccaaggg cttctgaagc agctactgga attgatccta actgtagaca tctgcggtct actctggtca <210> 85 <211> 336 <212> DNA <213>小家鼠 <220> <221> source <222> 1,.336 <223> /分子類型=「DNA」/生物體=「小家鼠」 <400> 85 gatgttttga tgacccaaac tccactctcc ctgcctglca gtcttggaga tcaagcctcc -24 - 159338-序列表.doc 201216985 atctcttgca gatctagtca gagcattgta catagtaatg gaaacaccta tttagaatgg 120 tacctgcaga aaccaggcca gtctccaaag ctcctgatct acaaactttc caaccgattt 180 tctggggtcc cagacaggtt cagtggcagt ggatcaggga cagatttcac actcaagatc 240 agcagagigg aggctgagga tctgggagtt tattactgct ttcaaggttc acatgttcct 300 ccgacgttcg gtggaggcac caagciggaa atcaaa 336 鼠 7A^ 8635DN小 Q>]>2>3> 1i -~11 11 <2<2<2<2 <220> 小家鼠」 <221> source <222> 1.,357 <223> /分子類型=「DNA」/生物體= 6G 120 180 240 300 357 <400> 86 caggttactc acttgttctt cagccttcag tataacgcat ttcctcaaga ctgcgtcctt igaaagagtc tctctgggtt gaaagggtct ccctgaagag icacctgtgt atgctttgga tggccctggg ttcactgagc ggagtggctg ccggctcaca ggacactgca ctactggggt atattgcagt acttctggta gcacacattt atctccaagg gatactgcca caaggaacct cctcccagac tgggtgtgag actgggatga atacctccag catactactg cagtcaccgt cctcagtGtg ctggattcgt tgacaagcgc aaaccaggta tgctcggtta ctcctca <210> 87 <211> 336 <212> DNA <213>小家鼠 <220> <221> source <222> 1..336 <223> /分子類型=「DNA」/生物體=「小家鼠」 <400> 87 aacattttga tgacacagtc gccatcatct ctggctgtgt ctgcaggaga aaaggtcact 60 atgagctgta agtccagtca aagtgtttta lacagttcaa atcagaagaa ctacttggcc 120 tggtaccagc agaaaccagg gcagtctcct aaactgctga tctactgggc atccactagg 180 gaatctggtg tcccigatcg cttcacaggc agtggatctg ggacagatti tactcltacc 240 atcagcagtg tacaagctga agacctggca gtttattact gtcttcaata cctctcctcg 300 cicacgttcg gtgctgggac caagctggag ctgaaa 336 <210> 88 <211> 115 <212> PRT <213>小家鼠 <220> <221> SOURCE <222> 1..115 <223> /分子類型=「蛋白質」/生物體=「小家鼠」 <400> 88

Glu Val Gin Leu Gin Gin Ser Gly Pro G3u Leu Val Lys Pro Gly Ala 15 10 15 25- 159338-序列表.doc

s, 90]eA 0>" op y 4 s 1 < A 1G c 5 phl $ Ly n G] n s Γ TV Γ eo SI Γ Th ,y y G1 n As n s A 5 201216985

Ser Val Lys lie Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30

Tyr Met Asn Trp Val Lys Gin Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp lie 35 40 45

Gly Asp lie Asn Pro Asn Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gin Lys Phe 50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Uu Thr Val Asp Lys Scr Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Val Arg Glu Gly Arg Phe Ala Tyr Trp Gly His Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110

Val Ser Ala 115 <210> 89 <211> 10 <212> PRT <2i3>小家鼠 <220> <221> S3URCE <222> 1..10 <223>/分子類型=「蛋白質j /生物體==「小家鼠j <400> 89

Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr Tyr Met Asn 1 5 10 <210> 90 <211> 17 <212> PRT <213>小家鼠 <220> <221> SOJRCE <222> 1..17 <223> /分子類型=「蛋白質」/生物體=「小家鼠」 <210> 91 <211> 6 <212> PRT <213>小家鼠 <220> <221> SOURCE <222> 1..6 <223> /分子類型=「蛋白質」/生物體=「小家鼠」 <400> 91

Glu Gly Arg Phe Ala Tyr 1 5

212p^ITE..3xaJou].. 91 p / S3X SI 0>1>2>3>0>1>2>3>0>1>2> 1111 2222 222 ，為或 • 26- 159338-序列表.doc 201216985 <223> /分子類型=「蛋白質」/生物體=「小家鼠」 <400> 92

Asp lie Xaa Met Thr Gin Ala Ala Pro Ser Val Pro Val Thr Pro Gly 15 10 15

Glu Set Val Ser lie Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser 20 25 30

Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr Trp Phe Leu Gin Arg Pro Gly Gin Ser 35 40 45

Pro Gin Leu Leu lie Tyr Arg Met Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ala Phe Thr Leu Arg lie 65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Va】Tyr Tyr Cys Met Gin His 85 90 95 l^u Lys Scr Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys 100 105 110 鼠 T家 9316沔小 «X 11 1/ <2<2<2<2 <220> <221> SOURCE <222> 1..36 <223> /分子類型=「蛋白質」/生物體=「小家鼠」 <400> 93 Arg Sec Ser Lys Ser Leu Leu His Ser A$n Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr 1 5 10 15 <210> 94 <211> 7 <212> PRT <213>小家鼠 <220> <221> SOURCE <222> 1..7 <223> /分子類型= 蛋白質」/生物體=「小家鼠j <400> 94 Arg Met Ser Asn Leu Ala Ser <210> 95 <211> 9 <212> PRT <213>小家鼠 <220> <221> SOURCE <222> 1..9 <223> 子類型=「蛋白質」/生物體=「小家鼠」 <40Q> 95 Met Gin His Leu Lys Ser Pro Tyr Thr <210> 96 <211> 115 <212> PRT <213>小家鼠 <220> <221> SOURCE <222> 1..115 <223>/分子類型= 蛋白質」/生物體=「小家鼠」 159338-序列表.doc •27· 201216985 <400> 96

Gin Val Gin Leu Lys Gin Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ala 15 10 15

Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30

Tyr lie Asn Trp Val Lys Gin Arg Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp lie 35 40 45

Ala Arg lie Tyr Pro Gly Arg Gly Asn lie Tyr Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Leu ITir Ala Glu Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Gin Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95

Ala Arg Phe Trp Asp Val Thr Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110

Va】Ser Ala 115 <2I0> 97 <2U> 112 <212> PRT <2]3>小家鼠 <220> <22l> SOJRCE <222> 1..112 <223> /分子類型=「蛋白質」/生物趙=「小家鼠」 <400> 97

Asp Val Leu Met Thr Gin Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly 15 10 15

Asp Gin Ala Ser lie Ser Cys Arg Ser Ser Gin Ser lie Val His Ser 20 25 30

Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Phe Leu Gin Lys Pro Gly Gin Ser 35 40 45

Pro Lys Leu Leu Tie Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie 65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gin Gly 85 90 95

Ser His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys 100 105 110 <210> 98 <211> 10 <212> m <213>小家鼠 <220> <221> SOURCE <222> 1..10

<223> /分子類型=「蛋白質」/生物體=「小家鼠」 <400> 9S

Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr Tyr lie Asn 1 5 10 <210> 99 <211> 17 <212> PRT <213>小家鼠 <220> <221> SOURCE <222> l..J7 <223> /分子類型=「蛋白質」/生物體=「小家鼠」 <400> 99

Arg lie Tyr Pro Gly Arg Gly Asn lie Tyr Tyr Asn Glu Lys Phe Lys 1 5 10 15

Gly 28- 159338-序列表.doc 201216985 <210> 100 <211> 6 <212> PRT <213>小家鼠 <220>

<221> SOURCE <222> 1..6 <223> /分子類麼=「蛋白質」/生物趙=「小家鼠」 <400> 100

Phe Ττρ Asp Val Thr Tyr 1 5 <210> 101 <211> 16 <212> PRT <2〗3>小家鼠 <220> <221> SOURCE <222> 1..16 <223> /分子類型=「蛋白質」/生物艘=「小家鼠」 <400> 101

Arg Ser Ser Gin Scr lie Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu

1 5 10 15

<210> 102 <211> 7 <212> PRT <213>小家鼠 <220> <221> SOURCE <222> 1 7 <223> /谷子類型=「蛋白質」/生物體=「小家鼠」 <400> 102

Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser <210> 103 <211> 9 <212> PRT <213>小家鼠 <220> <221> SCRJRCE <222> 1..9 <223> /分子類型=「蛋白質」/生物體=「小家鼠」 <400> 103

Phe Gin Gly Ser His Val Pro Tyr Thr 1 5 <210> 104 <211> 315 <212> PRT <213>小家鼠 <220> <221> SOURCE <222> 1..115 <223>/分子類型=「蛋白質」/生物趙=「小家鼠」 <400> 104

Glu Val Gin Leu Gin Gin Ser Gly Pto Glu Leu Val Lys Pio Gly Ala 29- 159338-序列表.doc 201216985 15 10 15

Ser Val Lys lie Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30

Tyr Met Asn Trp Val Lys Gin Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp lie 35 40 45

Gly Asp ]lc Asn Pro Asn Asn Gly Gly Thr Ser Tyr His Gin Lys Phe 50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Val Arg Glu Gly Arg Phe Ala Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Ήιγ 100 105 110

Val Ser Ala 115 <210> 105 <211> 107 <232> PRT <213>小家鼠 <220> <221> SOURCE <222> 1..107 <223> /分子類型=「蛋白質」/生物體=「小家鼠」 <400> 105

Asp lie Val Met Thr Gin Ser Gin Lys Pile Met Ser Thr Ser Val Gly 1 5 10 15

Asp Arg Val Ser Val Thr Cys Lys Ala Ser Gin Asn Val Gly Thr Asn 20 25 30

Vai Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ser Pro Lys Ala Leu I】e 35 40 45

Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Tlu Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Asn Val Gin Ser 65 70 75 80

Glu Asp Leu Ala Glu Tyr Phe Cys Gin Gin Tyr Asn Ser Tyr Pro Tyr 85 90 95

Thr Pbe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys 100 105 <210> 106 <211> 11 <212> PRT <213>小家鼠 <220> <221> SOURCE <222> 1..11 <223> /分子類型=「蛋白質」/生物體=「小家鼠」 <400> 106

Lys Ala Ser Gin Asn Val Gly Thr Asn Val Ala 1 5 10 <210> 107 <211> 7 <212> PRT <2i3>小家鼠 <220> <221> SOURCE <222> 1..7 <223> /分子類型=「蛋白質」/生物體=「小家鼠」 <400> 107

Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser 1 5 <2)0> 108 <2Π> 9 30·

159338-序列表.doc 201216985 .<212> PRT <213>小家鼠 <220> <221> SOURCE <222> 1,.9 <223> /分子類型=「蛋白質」/生物體=「小家鼠」 <400> 108 Gin Gin Tyr Asn Ser Tyr Pro Tyr Thr <210> 109 <211> 345 <212> DNA <2Π>小家鼠 <220> <221> source <222> 1.,345 <223> /分子類型=「DNA」/生物通=「小家鼠」 <400> 109

gaggtccagc tgcaacaatc tggacctgag ctggtgaagc ctggggcttc agtgaagata 60 tcctgtaagg cttctggata cacgttcact gactactaca tgaactgggt gaagcagagc 120 catggaaaga gccttgagtg gattggagat attaatccta acaatggtgg tactagctac 180 aaccagaagt tcaagggcaa ggccacattg actgtagaca agtcctccag cacagcctac 240 atggagctcc gcagtctgac atctgaggac tctgcagtct attattgtgt aagagagggg 300 cggtttgctt actggggtca tgggactctg gtcactgtct ctgca 345 <210> 110 <211> 336 <212> DNA <213>小家鼠 <220> <221> source <222> 1..336<223> /分子類型=rDNA」/生物體二「小家鼠」 <400> 110

gatatirtga tgactcaggc tgcaccctct gtacctgtca ctcctggaga gtcagtatcc 60 atctcctgca ggtctagtaa gagtctcctg catagtaatg gcaacactta cugtattgg 120 ttcctgcaga ggccaggcca gtctcctcag ctcctgatat atcggatgtc caaccttgcc 180 tcaggagicc cagacaggtt cagtggcagt gggtcaggaa ctgctttcac actgagaatc 240 agtagagtgg aggctgagga tgtgggtgtt tattactgta tgcaacatct aaaatctccg 300 tacacgttcg gaggggggac caagctggaa ataaaa 336 <210〉 111 <211> 345 <212> DNA <213>小家鼠 <220> <221> source <222> 1..345 <223> /分子類型=「DNA」/生物體=「小家鼠」 <400> 111 159338-序列表.doc •31 - 201216985 caggtccagc igaagca^tc tggggctgag ctggtgaggc ctggggcttc agtgaaacts 60 tcctgcaagg cttctggcta caclttcaci gaclactata taaactgggt gaagcagagg 120 cctggacagg gacttgagtg gattgcaagg atttatcctg gaagaggtaa latuaclac 180 aatgagaagt tcaagggcaa ggccacactg actgcagaaa aatcctccag cactgcctac 240 atgcagctca gcagcctgac atctgaggac tctgctgtct atttctgtgc aagattctgg 300 gacgtgactt actggggcca agggactctg gtcactgtct ctgca 345 <210> 112 <211> 336 <212> DHA <213>小家鼠 <220> <221> source <222> 1..336 <223>/分子類型=「DNAj /生物醴=「小家鼠」 <40O> 112 gaigttttga tgacccaaac tccactctcc ctgcctgtca gtcttggaga tcaagcctcc 60 atctcttgca gatciagtca gagcattgta cataglaatg gaaacaccta tttagaatgg 120 ttcctgcaga aaccaggcca gtctccaaag ctcctgatct acaaagtttc caaccgattt 180 tctggggtcc cagacaggtt cagtggcagt ggatcaggga cagatltcac actcaagatc 240 agcaeagtgg aggctgagga tctmagtt tattactgct ttcaaggtic acatgttccg 300 tacacgitcg gaggggggac caagctggaa ataaaa 336

<210> 113 <211> 345 <212> DNA 小家鼠 <220> <221> source <222> 1..345 <223> /分子類型=「DNA」/生物體=「小家鼠」 <400> 113 gaggtccagc tgcaacaatc tggaccigag ciggtgaagc ctggggcttc agtgaagata 60 tcctgtaagg cttctggatt cacgttcact gactactaca tgaactgggi gaagcagagc 120 catggaaaga gccttgagtg gattggagat attaatccta acaatggtgg tactagctac 180 caccagaagt tcaagggcaa ggccacattg actgtagaca agtcctccag cacagcctac 240 atggagctcc gcagcctgac atctgaggac tctgcagtct attactgtgt aagagaggga 300 agatttgctt actggggcca agggactctg gtcactgtct ctgca 345

<210> 114 <211> 321 <212> DNA <213>小家鼠 <220> <221> source <222> 1..321 <223>/分子類型=「DNA」/生物體=「小家鼠」 <400> 114 159338-序列表.doc 32- 60201216985 gacattgtga tgacccagtc tcaaaaattc atgtccacat cagtaggaga cagggtcagc gtcacctgca aggccagtca gaatgtgggt actaatgtag cctggtatca acagaaacca gggcaatctc ctaaagcact gatttactcg gcatcctacc ggtacagtgg agtccctgat cgcttcacag gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcaa tgtgcagtct gaagacttgg cagagtattt ctgtcagcaa tataacagct atccgtacac gttcggaggg gggaccaagc tggaaataaa a 120 180 240 300 321 <210> 115 <211> 17 <212> PRT <213>小家鼠 <220> <221〉SOURCE <222> 1..17 <223> /分子類型=「蛋白質」/生物體=「小家鼠」 <400> 115 Asp lie Asn Pro Asn Asn Gly Gly Thr Ser Tyr His Gin Lys Phe Lys

<2!0> 116 <2il> 112 <212> PRT <213>小家鼠 <220> <221> SCKJRCE<222> 1..112 <223> /分子類型=「蛋白質」/生物體=「小家鼠」

<400> 116 Asp He Val Met Thr Gin Ala Ala Pro SeT Val Pro Val Thr Pro Gly 15 10 15 Glu Ser Val Ser lie Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Uu Leu His Ser 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr Trp Phe Leu Gin Arg Pro G!y Gin Ser 35 40 45 Pro Gin Leu Leu lie His Arg Met Ser Asn Leu Ala Ser Gly Vai Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ala Phe Thr Leu Arg He 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gin His 85 90 95 Leu Lys Ser Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys 100 105 110 <210> 117 <211> 336 <212> DNA <213>小家鼠 <220> <221> source <222> 1..336 <223> /分子類型=「DNA」/生物體=「小家鼠」 <400> 117 gatattgtga tgactcaggc tgcaccctci gtacctgtca ctcctggaga gtcagtatcc atctcctgca ggtctagtaa gagtctcctg catagtaaig gcaacactta cttgtattgg ttcctgcaga ggccaggcca gtctcctcag ctcctgatac atcggatgtc caaccttgcc

60 120 ISO 159338·序列表.doc 33- 201216985 tcaggagtcc cagacaggtt cagtggcagt gggtcaggaa ctgctttcac actgagaatc 240 agtagagtgg aggctgagga tgtgggtgtt tattactgta tgcaacatct aaaatctccg 300 tacacgttcg gaggggggac caagctggaa ataaaa 336 <210> 118 <211> 112 <212> PRT <213>小家鼠 <220> <221> SOURCE <222> 1..112 <223> /分子類型=「蛋白質」/生物趙=「小家鼠」 <400> 118

Asp lie Val Met Thr Gin Ala Ala Pro Ser Val Pro Val Thr Pro Gly 15 10 15

Glu Ser Val Ser He Scr Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser 20 25 30

Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr Trp Phe Leu Gin Arg Pro Gly Gin Scr 35 40 45

Pro Gin Leu Leu lie Tyr Arg Met Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60

Asp Arg Phe 5er Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ala Phe Tlir Lea Arg I]e 65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gin His 85 90 95

Leu Lys Ser Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys 100 105 310 <210> 119 <211> 336 <212> DNA <213>小家鼠 <220> <221> source <222> 1..336 <223> /分子類型=「DNA」/生物體=「小家鼠」 <400> 119 gatattgtga tgactcaggc tgcaccctct gtacctgtca ctcctggaga gtcagtatcc 60 atctcctgca ggldagtaa gagtctcctg catagtaatg gcaacactta cttgtattgg 120 ttcctgcaga ggccaggcca gtctcctcag ctcctgatat atcggatgtc caaccttgcc 180 tcaggagtcc cagacaggtt cagtggcagt gggtcaggaa ctgctttcac actgagaatc 240 agtagagtgg aggctgagga tgtgggtgtt tattactgta tgcaacatct aaaatctccg 300 tacacgttcg gaggggggac caagctggaa ataaaa 336 <210> 120 <211> 34 <212> DNA <213>人工序列 <220> <221> source <222> 1..34 <223> /分子類型=「DNA」/註釋=「人工序列之描述：引子」/ _4物邊=「人工序歹ΐ」 <400> 120 gggaattcat ggaatgeage tgggtttttc tett 34 34-

159338-序列表.doc 34 201216985 列序 13q <220> <221> source <222> 1..34 <223> /分子類型=「DNA」/註釋=「人工序列之描述：引子」 /生「人工序列」 <400> 121 gggaattcat ggaatggagc tgggtctttc tctt <210> 122 <211> 34 <212> DNA <213>人工序列 <220> <221> source <222> 1..34 <223> /分子類型=rDNAj /註釋=「人工序列之描述：引子 /生物體=「人工序列」 <400> 122 gggaattcat ggaatgcagc tgggtcattc tctt 34 <210> 123 <2Π> 34 <212> im <213:>人工序列 <220> <221> source <222> 1..34 <223> /分子類型 /生物體「DNA」/註釋= 「人工序列」 '人工序列之描述：引子. <400> 123 gggaattcat ggaatggagc tgggtttttc tctt 34 <210> 124 <211> 34 <212> DNA <213>人工序列 <220> <221> source <222> 1..34 <223> /分子類型=「DNA」/註釋=「人工序列之描述：引子」 /圣4命=「人工序列」 <400> 124 gggaattcat ggaatggagc tgggttattc tctt 34 <210> 125 <211> 34 <212> DNA <213>人工序列 <220> <221> source <222> 1..34 <223>/分子類型= /生物體=「「DNA」/註釋= 人工序列j '人工序列之描述：引子. 159338·序列表.doc 35- 201216985 <400> 125 gggaattcat ggaatggagc tgggttattc tctt 列序 6 A工‘ 1234DN人 0>1>2>3> <21<21<21<21 <220> <221> source <222〉 1..34 <223> /分子類型=「DNA」/註釋=「人工序列之据述：引子」 /生物趙=「人工序列j <400> 126 gggaattcat ggaatgcagc tgggiciicc tctt 34 <210> 127 <211> 35 <212> DNA <213>人工序列 <220> <221> source <222> 1..35 <223> /分子類型=「DNA」/註釋=「人工序列之描述：引子」 /生物體=「人工序列j <400〉 127 gggaattcat ggaatggagc tgggttttcc tcttc 35 b> Λ > & li 3 1 li J 1-<2<2<2<2

列序 <220> <221〉 source <222> 1..34 <223> /分子類型=「DNA」/註釋=「人工序列之描述：引子」 /生物®=「人工序列」 <400> 128 cccaagcttc cagggaccaa tggataacgg gtgg 34 <210> 129 <211> 34 <212> DNA <213>人工序列 <220> <221> source <222> 1..34 <223> /分子類型=「DNA」/註釋=「人工序列之描述：引子」「人工序列」

<400> 129 cccaagcttc cagggaccaa tggataaacg atgg <210> 130 <211> 34 <212> DNA <213>人工序列 <220> 159338·序列表.doc •36· 201216985 <221> source <222> 1..34 β23〉/分子類型=「DNA」/註釋=「人工序列之描述：引子」 /生物體=「人工序列j <400> 130 cccaagcttc cagggaccaa tggataaacg gtgg <210> 131 <211> 35 <212> DNA <213>人工序列 <220> <221> source <222> 1..35 <223> /分子類「DNA」/註釋=「人工序列之描述：引子」 /生物艘=「人工序列j <400> 131 cccaagcttc cagggaccaa tggataaacg gatgg 列序 2 A ^ 1335g人 07^2737

<220> <221〉 source <222> 1..35 <223> /分子類型=「DNA」/註釋=「人工序列之描述：引子」 /生物餿=「人工序列j <400> 132 cccaagcttc cagggaccag tggatagacg ggtgg <210> 133 <211> 34 <212> DNA <213>人工序列 <220> <221> source <W> 1..34 <223> /分子類型=「DNA」/註釋=「人工序列之描述：引子」 /生物艘=「人工序列」 <400> 133 cccaaecttc ca&figaccaa gggatagatg atg£ <210> 134 <2I1> 35 <212> DNA <213>人工序列 •<220> <221> source <222> 1..35 <223> /分子類型=「DNA」/註釋=「人工序列之描述：引子 /生物通=「人工序列」 <400> 134 cccaagcttc caggggccaa tggataaacg ggtgg <210> 135 37- 159338-序列表.doc 201216985 <2Π> 34 <2Ι2> DNA <213>人工序列 <220> <221> source <222> 1..34 <223> /分子類型=「DNA」/註釋=「人工序列之描述：引子」 /生物體=「人工序列」 <400> 135 cccaagcttc caggggccaa tggataaacg atgg 34 <210> 136 <211> 34 <212> DNA <213>人工序列 <220> <221> source <222> 1·.34 ^223〉/分子類型==「DNA」/註釋=「人工序列之描述：引子」 /±森邊=「人工扁列j <400> 136 gggaattcat ggaatggagc igggtcatic tctt 34 <210> 137 <211> 34 <212> C^'A <213>人工序列 <220> <221> source <222> 1..34 <223> /分子類型=「DNA」/註釋=「人工序列之描述：引子」 /生物體=「人土序列」 <400> 137 gggaattcat ggaatgcacc tgggttttcc tctt 34 <210> 138 <211> 34 <212> DNA <213>人工序列 <220> <221> source <222> 1..34 <223> /分子類型=「DNA」/註釋=「人工序列之描述：引子」 /生物逋=「人工序列j <400> 138 gggaattcat ggaatggagc isggtcttcc tctt 34 <210> 139 <211> 34 <212> DNA <213>人工序列 <220> <221> source <222> 1..34 <223> /分子類型=「DNA」/註釋=「人工序列之描述：引子」 /生物體=「人工序列」 -38 - 159338-序列表.doc 201216985 <400> 139 gggaaitcat ggaatggagc tgggtcatcc tctt <210> 140 <211> 34 <212> m <213>人工序列 <220> <221> source <222> 1.,34 <223>/分子類型=「DNAj /註釋=「人工序列之描述：引子」 /生物體=「人工序列」 <400> 140 actagtcgac atgggatgag cttatcatcc tctt <210> 141 <211> 33 <212> mk <213>人工序列 <220> <221> source <222> 1..33

<223> /分子類型==「DNA」/註釋==「人工序列之描述：引子」 /生物妞=「人工序列」 <400> 141 cccaagcltc caggggccaa tggataacgg tgg <210> 142 <211> 36 <212> IX^A <213>人工序列 <220> <22l> source <222> L.36 <223> /分子類型=「DNA」/往釋=「人工序列之描述··引子」 /生物體=「人工序列j <400> 142 cccaagcttc cagggaccag tgggataaac gggtgg <210> 143 <211> 35 <212> DKA <213>人工序列 <221> source <222> L.35 <223> /分子類型=「DNA」/註釋=「人工序列之描述：引子」 /生物體=「人工序列」 <400> 143

cccaagcttc cagggaccaa gggatagacg ggtgg <210> 144 <211> 35 <212> DNA 人工序列 <220> <221> source -39- 159338·序列表.doc 201216985 <222> 1..35 <223> /分子類型=「DNA」/註釋=「人工序列之描述：引子」 /生物體=「人工序列」 <400> 144 cccaagcttc cagggaccaa gggataaacg gatgg 35 <210> 145 <211> 35 <232> DNA <213>人工序列 <220> <221> source <222> 1..35 <223> /分子類型=「DNA」/註釋=「人工序列之描述：引子」 /生物體=「人工序列」 <400> 145 cccaagcttc cagggaccag gggataaacg gatgg 35 <210> 146 <211> 34 <212> DNA <213>人工序列 <220> <22\> source <222> 1..34 <223> /分子類型=rDNAj /註釋=「人工序列之描述：引子」 /生物體=「人工序列j <400> 146 cccaagcttc caggggccag ggataaacgg gtgg 34 <210> 147 <211> 35 <212> DMA <213>人工序列 <220> <221> source <222> 1..35 <223> /分子類型=「DNA」/註釋=「人工序列之描述：引子」 /生物體=「人工序列j <400> 147 cccaagcttc caggggccaa tggataaacc ggtgg 35 <210> 148 <211> 34 <212> DNA <213>人工序列 <220> <221> source <222> 1..34 <223> /分子類型=「DNA」/註釋=「人工序列之描述：引子」 /生物體=「人工序列j <400> 148 cccaagcttc cagggaccag tggataaace gtgg 34 <21Q> 149 <211> 35 40· 159338·序列表.doc 201216985 <212> DNA <2B>人工序列 <220> <223> source <222> 1..35 /分子類型=「DNA」/註釋=「人工序列之描述•引子」 /生物體=「人工序列」 <400> 149 actagtcgac atggtgtcca cagctcagtt ccttg <210> 150 <211> 34 <212> DNA <213>人工序列 <220> <221> source <222> 1..34 <223> /分子類型=「DNAj /註釋=「人工序列之描述：引子」 /圭扁也=「人工序列」 <400> 150 gggaattcat gaaatggagc tgggicttcc tctt

<210> 151 <2Π> 34 <212> IM <2]3>人工序列 <220> <221> source <222> 1.,34 <223> /分子類型=「DNA」/註釋=「人工序列之描述：引子」 /生物艘=「人工序列」 <400> 151 gggaattcat ggaatgcagc tgggttatic tctt <210> 152 <211> 34 <212> DNA <213>人工序列 <220> <221> source <222> 1..34 <223> /分子類型=「DNA」/註釋=「人工序列之描述：引子」 /生物通=「人工序列」 <400> 152 gggaatttal ggaatggagc tgggtcttcc tctt <210> 153 <211> 34 <212> <213>人工序列 <220> <221> source <222> 1..34 /分子類型==「DNA」/註釋=「人工序列之描述：引子」 /生物體=「人工序列」 <400> 153 •41 · 159338-序列表.doc 201216985 • 34 gggaattcat ggaatgcagc tgggtcatcc tell <210> 154 <211> 34 <212> DNA <213>人工序列 <220> <221> source <222> 1..34 <223> /分子類型=「dnAj /註釋=「人工序列之描述：引子」 /生物體=「人工序列j <400> 154 gggaattcat ggaatgcagc tgggttttcc tctt 34 <210> 155 <211> 34 <212> DNA <2]3>人工序列 <220> <221> source <222> 1..34 <223> /分子類型=「DNA」/註釋=「人工序列之描述：引子」 /生物姐=「人工序列」

<400> 155 gggaattcat ggaatgcagc tgggtctttc tctt 34 <210> 156 <211> 36 <212> DNA <213>人工序列 <220> <221> source <222> 1..36

/分子類型=「DNA」/註釋=「人工序列之描述：引子J /生物體=「人工序列J <400> 156 actagtcgac atgggatgga gctatatcat cctctt 36 <210> 157 <21l> 35 <212> DNA <213>人工序列 <220>

<221> source <222> 1..35 <223> /分子類型=「DNAj /註釋=「人工序列之描述：引子」 /生物體=「人工序列」 <400> 157 actagtcgac atgggatgga gcttatcatc ttctt 35 <210> 158 <211> 33 <2)2> DNA <213>人工序列 <220> <223> source <222> 1..33 42- 159338·序列表.doc 33201216985 <223> /分子類型=「DNAj /註釋= /生物趙=「人工序列」人工序列之描述：引子」 <4〇〇> 158 actagtcgac atgtagatgt ggttaaactg ggt <210> 159 <211> 35 <212> DMA <213>人工序列 <220> <221> source <222> 1..35 /分子類型= /生物體=「 rDNAj /註釋= 人工序列j '人工序列之描述：引子j <400> 159 cccaagcitc caggggccag gggataaacg gatgg 35 <210> 160 <211> 35 <212> DNA <213>人工序列 <220> <221> source <222> 1..35 <223> /分子類型= /生物體=「「DNA」/註釋= 人工序列j 「人工序列之描述：引子」 <400> 160 cccaagcttc caggggccaa gggatagacg gatgg 35 <210> 161 <211> 35 <212> DNA <213>人工序列 <220> <221> source <222> 1..35 /分子類型= /生物體=r :「DNA」/註釋= 人工序列」 '人工序列之描述：引子j <400> 161 cccaagcttc cagggaccag gggatagacg ggtgg 35

列序 2 A工 1635DN人 0>1>2>3> <21<21<21<21 <220> <22i> source <222> 1..35 <223> /分子類型=「DNA」/註釋=「人工序列之描述：引子」 /生物體=「人工序列」 <400> 162 cccaagcttc cagggaccag gggatagacg gatgg 35

<210> 163 <21t> 35 <212> IM 43- 159338·序列表.doc 201216985 <213>人工序列 <220> <221> source <222> 1..35 <223> /分子類型=「DNA」/註釋=「人工序列之描述：引子」 /生物體=「人工序列j <400> 163 cccaagcttc caggggccag tggataaacg gatgg 列序 4 A工 1633咖人 0>1>12>3> <21<21<21<21 <220> <221> source <222> 1..33 <223> /分子類型=「DNAj /註釋=「人工序列之描述：引子」 /生物體=「人工序列j <400> 164 cccaagcttc caggggccaa tggataacga tgg 33 <210> 165 <211> 34 <212> BNA <213>人工序列 <220> <221> source <222> 1..34 <223> /分子類型=「DNA」/註釋=「人工序列之描述：引子」 /生物體=「人工序列」 <400> 165 cccaagcttc caggggccag tggataaacg atgg # 34 <210> 166 <211> 34 <212> DNA d13》人工序列 <220> <221> source <222> 1..34 <223> /分子類型=「DNA」/註釋=「人工序列之描述：引子」 /生物體=「人工序列」 <400> 166 cccaagcttc cagggaccag tggataaacg atgg 34 <210> 167 <211> 33 <212> m <21.3>人工序列 <220> <221> source <222> 1..33 /分子類型=「DNA」/註釋=「人工序列之描述：引子j /生物體=「人工序列j <400> 167 cccaagcttc cagggaccaa tggataacga tgg 159338-序列表.doc 44- 201216985 /aJ 列 - Γ人 -Γ 列型= 和 e類趙工IC34子物 fm ^OU:分生 1 3 D > s 1 ./ 0>1>2>3>0>1>2>3> 1111 2222 述描之列序工人子 <400> 168 cccaagcttc cagggaccat ggataaacgg gtgg 列 9tt'x 1641隞人 <220> <221> source <222> 1..41 /分子類型=「DNA」/註釋=「人工序列之描述：引子」 /生物趙=「人工序列」 <400> 169 actagtcgac atgggcatca agatgaagtc acatactctg g 41 <210> 170 <211> 40 <212> DNA <213>人工序列 <220> <221> source <222> 1..40 <223> /分子類型=「DNA」/註釋= /生物體=「人工序列j '人工序列之描述：引子. <400> 170 actagtcgac atgggcatca agatgagtca catactctgg 40 <210> 171 <211> 38 <212> DNA 人工序列 <220> <221〉 source <222> 1..38 <〇 /分子類型= 「DNA」/註釋= 人工序列」 '人工序列之描述··引子. <400> 171 actagtcgac tgggcaicag atgagtcaca tactctgg <210> 172 <211> 41 <212> <213>人工序列 <220> <221> source <222> 1..41 <223> /分子類型= /生物逋=r 「DNA」/註釋= 人工序列j '人工序列之描述：引子」 159338-序列表.doc 45- 201216985 <400> 172 aclagtcgac aLgggcalca agatgaagtc acagacccag g 41 <210> 173 <211> 41 <212> DNA <213>人工序列 <220> <221> source <222> 1..41 <223> /分子類型=「DNA」/註釋=「人工序列之描述：引子」 /生物逋=「人工序列」 <400> 173 actagtcgac atgggcttca agatgaagtc acattctctg g 41 <210> 174 <211> 41 <212> DNA <213>人工序列 <220> <221> source <222〉-1..41 <223> /分子類型=「DNA」/註釋=「人工序列之描述：引子」 /生物體=「人工序列」 <4〇〇> 174 actagtcgac atgggcttca agatgaagtc acatattcag g 41 <210> 175 <211> 34 <212> DNA <213>人工序列 <220> <221> source <222> 1..34 <223> /分子類型=「DNA」/註釋=「人工序列之描述：引子」 /生物體=「人工序列」 <400> 175 actagtcgac atggatggag cttatcatcc tctt 34 <210> 176 <211> 34 <212> DNA <213>人工序列 <220> <221> source <222> 1..34 <223> /分子類型=「DNA」/註釋=「人工序列之描述：引子」 /生物體=「人工序列」 <400> 176 cccaagcttc cagggaccaa gggataaacg gtgg 34 <210> 177 <211> 35 <212> DMA <213>人工序列 46-

159338-序列表.doc 201216985 <22〇> <22L> source <222> 1..35 /分子類型=「DNA」/註釋=「人工序列之描述：引子」 /生物體=「人工序列」 <400> 177 cccaagcttc caggggccag tggataaacg ggtgg <210> 178 <211> 36 <212> DNA <213>人工序列 <220> <221> source <222> 1..36 <223> /分子類型=「Dna」/註釋=「人工序列之描述：引子」 /生物體=「人工序列」 <400> 178 36 actagtcgac atgaggtact cggctcagtt cctggg

列 9 w工 1736DN人 10>]>12>3> <21<21<21<21 <221> source <222> 1..36 <223> /分子類型=「DNAj /註釋=「人工序列之描述：引子」 /生物體=「人工序列」 <400> 179 actagtcgac atgaggtccc cggctcagtt cctggg <210> 180 <211> 36 <212> DNA <213>人工序列 <220> <22Ϊ> source <222> 1..36 <223> /分子類型=「dna」/註釋=「人工序列之描述：引子」 /生物體==「人工序列j <400> 180 actagtcgac atgaggacgt cgattcagtt cttggg 36 36 <210> 181 <211> 34 <212> DNA <之13>人工序列 <220> <22i> source <222> 1..34 <223> /分子類型= /生物體=r 「DNA」/註釋=「人工序列之描述：引子人工序列」 <400> 181 gggaattcat ggaatggacc tgggtcatcc tctt 159338-序列表.doc 47- 201216985 <210> 182 <211> 34 <2J2> DNA <213>人工序列 <220> <221> source <222> 1..34 <223> /分子類型=「DNA」/註释=「人工序列之描述：引子」 /生物體=「人工序列」 <400> 182 gggaattcat ggaatgeage tgggttatcc tett 列序3^工 1833i 人 07ί7β 11 11 n 11 <2<2<2<2 <220> <221> source <222> 1..33 <223> /分子類型=「DNA」/註釋==「人工序列之描述：引子」 /生物體=「人工序列」 <400> 183 gggaattcat gaatggatct gggttattct ett 33 列序4 A工 1835g 人 10>n>12>13> VV < < <220> <221> source <222> 1..35 <223> /分子類型=「DNA」/註释=「人工序列之描述：引子」 /生物體=「人工序列」 <400> 184 cccaagcttc cagggaccag gggataaacg ggtgg 35 <210> 185 <211> 31 <212> UNA <213>人工序列 <220> <221> source <222> 1..31 /分子類型=「DNAj /註釋=「人工序列之描述：引子」 /生物體=「人工序列」 <400> 185 cccaagcttc cagggaccaa gggacgggtg g

<210> 1S6 <211> 35 <2i2> DMA <213>人工序列 <220> <221〉 source <222> 1..35 /分子類型=「DNA」/註釋=「人工序列之描述：引子」 /生物體=「人工序列j 48- 159338-序列表.doc 201216985 <400> 186 cccaagcttc cagggaccaa tggataaaca gatgg <210> 187 <211> 35 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223> source <222〉 1..35 ^235* /分子類型=「DNA」/註釋=「人工序列之描述：引子」 /生物體=「人工序列」 <400> 187 cccaagcttc cagggaccaa gggataaacg ggtgg <210> 188 <211> 32 <212> CtJA <213>人工序列 <220> <221> source <222> 1,,32

<223> /分子類型=「DNA」/註釋=「人工序列之描述：引子」 /生物體=「人工序列」 <400> 188 gggaattcat ggagacacat tcccaggtct tt <210> 189 <211> 32 <212> DNA <213>人工序列 <220> <221> source <222> 1..32 <223> /分子類型=「DNA」/註释=「人工序列之描述：引子」 /生物體=「人工序列j <400> 189 gggaattcat ggagtcacag tctcaggtct tt <210> 190 <211> 41 <212> DNA <213>人工序列 <221> source <222> 1..41 <223> /分子類型=「DNA」/註釋=「人工序列之描述：引子」 /生物體=「人工序列」 <400> 190 actagtcgac atgggcttca agatggagtc acattttcag g <210> 191 <211> 41 <212> DNA <213>人工序列 -49- 159338·序列表.doc 201216985 <220> <221> source <222> 1..41 <223> /分子類型=「DNA」/註釋=「人工序列之描述：引子」「人工扁列」 <400> 191 actagtcgac atgggcatca agatgaagtc acatattcag g 41 <210> 192 <211> 41 <212> DNA <213>人工序列 <220> <221> source <222> 1..41 <223> /分子類型=「DNA」/註釋=「人工序列之描述：引子」 /生物體=「人工序列j <400> 192 actagtcgac atgggcttca agatgaagtc acattctcag g 41 <210> 193 <211> 35 <212> DNA <213>人工序列 <220> <221> source <222> 1..35 <223> /分子類型=「DNA」/註釋=「人工序列之描述：引子」 /生物體=「人工序列」 <400> 193 actagtcgac atgggatgga gcttatcatg ttctt 35 <210> 194 <211> 35 <212> DNA <213>人工序列 <220> <221> source <222> 1..35 <223> /分子類型=「DNA」/註釋=「人工序列之描述：引子」 /圣备趙=「人工房列」 <400> 194 actagtcgac atgggatgga gcttatcatg ctctt 35 <210> 195 <211> 34 <212> DNA <213>人工序列 <220> <221> source <222> 1..34 <223> /分子類型=「DNA」/註釋=「人工序列之描述：引子」 /±爲邊=「人工岸列」 <400> 195 gggaattcat ggaatggacc tgggttttcc tctt 34 50-

159338-序列表 _doc 201216985 <210> 196 <211> 34 <212> m <213>人工序列 <220> <221〉 source <222> 1..34 <223> /分子類型=「Dna」/註釋=「人工序列之描述：引子」 /生物體=「人工序列」 <400> 196 gggaattcat ggaatggacc tgggtctttc tctt <210> 197 <211> 34 <212> DNA <213>人工序列 <220> <221> source <222> 1..34 <223> /分子類型=「DNA」/註釋==「人工序列之描述：引子」 /生物體=「人工序列j <400> 197

gggaattcat gaaatggagc tgggttattc tctt <210> 198 <211> 34 <212> DNA <213>人工序列 <220> <221> source <222> 1..34 <223> /分子類型=「DNA」/註釋=「人工序列之描述：引子」 /生物體=「人工序列j <400> 198 cccaagcttc caggggccaa tggatagacg atgg <210> 199 <211> 35 <212> DNA <213>人工序列 <220> <221> source <222> 1..35 <223> /分子類型=「DNA」/註釋=「人工序列之描述：引子」 /生物趙=Γ人工序列」 <400> 199 cccaagcttc cagggaccaa gggatagacg gatgg <210> 200 <211> 34 <212> m <213>人工序列 <220> <221> source <222> 1..34 <223> /分子類型=「DNA」/註釋=「人工序列之描述：引子」 /生物體=「人工序列j -51 - 159338-序列表.doc 201216985 <400> 200 cccaagcttc cagggaccaa gfigatagacg atgg 34 <210> 201 <211> 36 <212> DNA <213>人工序列 <220> <221> source <222> 1..36 /分子類型=「DNA」/註釋=「人工序列之描述：引子」 /±刼龜=「人工序列」 <400> 201 actagtcgac atgatgtacc cggctcagtt tctggg 36 <210> 202 <211> 36 <212> DNA <213>人工序列 <220> <221> source <222> 1..36 <223> /分子類型=「DNA」/註釋=「人工序列之描述：引子」 /生物體=「人工序列」 <400> 202 actagtcgac atgaggactt cgaticagtt cttggg 36 <210> 203 <211> 39 <212> DNA <213>人工序列 <220> <221> source <222> 1..39 <223> /分子類型=「DNA」/註釋=「人工序列之描述：引子」「人工序列j <400> 203 actagtctac atgaagttgc ctgttaggct gttggtgct 39 <210> 204 <2il> 39 <212> DNA <213>人工序列 <220> <221> source <222> 1..39 <223> /&子類型=「DNA」/註釋==「人工序列之描述：引子」 /生物體=「人工序列j <400> 204 actagtcgac atgaagttgt ctgttaggct gttggtgct 39 <210> 205 <211> 26 <212> DNA <213>人工序列 <220> -52- 159338-序列表.doc 201216985 <221> source <222> 1..26 <223> /分子類型=「DNA」/註釋=「人工序列之描述：引子」 /生物體=「人工序列j <400> 205 atgggatgga gctrtatcat sytctt 26 <210> 206 <211> 23 <212> DNA <213>人工序列 <220> <221> source <222> 1..23 <223> /分子類型=「DNA」/註釋=「人工序列之描述：引子」 /生物體=「人工序列j <400> 206 atgaagwtgt ggbtraactg grt 23

<210> 207 <211> 25 <212> DNA <213>人工序列 <220〉 <221> source <222> 1..25 /分子類型=「DNA」/註釋=「人工序列之描述：引子」 /生物體=「人工序列」 <220> <221> variation <222> 15 <223> / 置換=「n=i」 <400> 207 atggratgga sckknrtctt tmtct 25 <210> 208 <211> 26 <212> DNA <213>人工序列 <220> <221> source <222> 1..26 <223> /分子類型=「DNA」/註釋=「人工序列之描述：引子」 /生物體=「人工序列」 <220> <221> variation <222> 21 <223> /置換=「n = ij <400> 208 26 -53- ccagggrcca rkggatarac ngrtgg <210> 209 <211> 25 <212> DNA <213>人工序列 <220> <221> source 159338·序列表.doc 201216985 <222> 1..25 /分子類型=「DNA」/註釋=「人工序列之描述：引子」 /生物體=「人工序列」 <400> 209 atggagacag acacactcct gctat 25 <210> 2ί0 <211> 29 <212> DNA <213>人工序列 <220> <221> source <222> 1..29 <223> /分子類型=「DNA」/註釋=「人工序列之描述：引子」 /生物體=「人工序列j <400> 210 atggagwcag acacactsct gytatgggt 29 <210> 211 <211> 29 <212> DNA <213>人工序列 <220> <221> source <222> 1..29 <223> /分子類型=「DNA」/註釋=「人工序列之描述：引子 /生物體=「人工序列」 <400> 211 atgaagttgc ctgttaggct gttggtgct 29 <210> 2]2 <211> 29 <212> DNA <213>人工序列 <220> <221> source <222> 1..29 <223> /分子類型=「DNA」/註釋=「人工序列之描述：引子」 /生物體=「人工序列」 <400> 212 atggatttwc argtgcagat twtcagctt 29 <210> 213 <211> 27 <212> m <213>人工序列 <220> <221> source <222> 1..27 <223> /分子類型=「Dna」/註釋=「人工序列之描述：引子」 /生物體=「人工序列」 <400> 213 atggtyctya tvtccttgct gttctgg 27 <210> 214 <211> 27 54- 159338·序列表.doc 201216985 <212> DNA <213>人工序列 <220> <221> source <222> 1..27 <223> /分子類型=「DNA」/註釋=「人工序列之描述：引子」 /生物體=「人工序列」 <400> 214 atggtyctya tvttrctgct gctatgg 27 <21Q> 215 <2ll> 21 <212> DNA <213>人工序列 <220> <221> source <222> 1..21 <223> /分子類型=「DNA」/註釋=「人工序列之描述：引子」 /生物趙=「人工序列j <400> 215 actggatggt gggaagatgg a 21

<210〉 216 <211> 26 <212> DNA <213>人工序列 <220> <221> source <222> 1..26 <223> /分子類型=「DNA」/註釋=「人工序列之描述：引子」 /生物體=「人工序列」 <400> 216 atgaaatgca gctggrtyat sttctt 26 <210> 217 <211> 26 <212> 0N5A <2】3>人工序列 <220> <221> source <222> 1..26 <223> /分子類型=「DNA」/註釋=「人工序列之描述：引子」 /圭叙發=「人工序列j

<4〇0> 217 atggrcagrc ttacwtyytc attcct 26 <210> 218 <211> 26 <212> DNA <213>人工序列 <220> <221> source <222> 1..26 <223> /分子類型=「DNA」/註釋=「人工序列之描述：引子」 /生物體==「人工序列j <400> 218 55- 159338-序列表.doc 201216985 atgatggtgi taagtcttct gtacct <210> 219 <211> 24 <212> DNA <2J3>人工序列 <220> <221> source <222> 1..24 /分子類型=「DNA」/註釋=「人工序列之描述：引子J /生物體=「人工序列」 <40〇> 219 atgragwcac akwcycaggt cut <210> 220 <211> 32 <212> DNA <213>人工序列 <220> <22l> source <222> 1..32 <223> /分子類型=「DNA」/註釋=「人工序列之描述：引子」 /生物體=「人工序列」 <220> <221> variation <222> 27 Γ <223> /査換=「n=ij <400> 220 atgaggrccc ctgctcagwt tyttggnwtc tt <210> 22L <211> 31 <2i2> DNA <213> .人工序列 <220> <221> source <222> 1..31 /分子類型=「DNA」/註釋=「人工序列之描述：引子」 /生物體=「人工序列」 <400> 221 atgggcwtca agatgragtc acakwyycwg g -56- 159338·序列表.doc

Claims

201216985 七、申請專利範圍：特別是單株抗體或其功能部分，該抗體識別 ΐ特異性結合哺乳動物1白或其片段上之魏化抗原決疋基（ph〇Sph〇-epit〇pe)，其中該抗體對聚集τ蛋白具有高結合親和力，g难能—P 中如前述請求項之抗體，其中 nM。且調即可溶性及不溶性1含量，特別在腦 2. 該肽之解離常數為至少5 為至少2 3.如前述請求項之抗體，其中該狀之解離常數 nM 4. 如前述請求項之抗體，其中 nM。 δ亥狀之解離常數為至少 5. 如前述請求項之抗體，其中該肽之解離常數為至少5〇〇 ρΜ。 6. 如前述請求項之抗體，其中該肽之解離常數為至少_ ρΜ。 • 7.如前述請求項之抗體，其中該肽之解離常數為至少· ρΜ。 8. 如前述請求項之抗體，其中該肽之解料數為至少⑽ ρΜ 〇 9. 如前述請求項中任一項之抗體，丨中該肽之缔合速率常數為 1〇4 ΜΎ1 或 1〇4 以上。、 10·如前述請求項中任一項之抗體，其中該肽之缔合速率常數為1〇5 M-1s·丨或ίο5 μΛ-1以上。、 159338.doc 201216985 11. 如前述請求數為lo6 項中任一項之抗體， S-1 或 ΙΟ6 ΜΛ·1以上。其中該狀之締合速率常 12·如清求項， 1之抗體，其中該抗體具有高結合親和力，解離常數太 ·'’、至；>、4 nM且締合速率常數為1〇5 Μ.'-ι 項1之杬體，其中該抗體具有高結合親和力，離常數A s 。馬至少3 nM且締合速率常數為ι〇6 M-丨，或ΐ〇6Μ.γι以上。 /項1之抗體，其中該抗體具有高結合親和力，解離常翁炎双马至少2 ηΜ且締合速率常數為1〇4 Μ·、-, 或1〇4 ΜΛ-ι以上。用求項1之抗體，其中該抗體具有高結合親和力，解離常數為至少1 ηΜ且締合速率常數為1〇5 或1 〇 M.1 s·1以上。 16.如請求項丨之抗體，其中該抗體具有高結合親和力，解離节數為至少200 ρΜ且締合速率常數為ι〇5 m^s·1 或1〇5 Μ·丨s·1以上。 17·如請求項丨之抗體，其中該抗體具有高結合親和力，解離常數為至少1〇〇 ρΜ且締合速率常數為1〇6 Μ·%」或1 〇6 Μ·丨s·1以上。 18.如前述請求項中任一項之抗體，其中該肽結合選自由以下組成之群之抗原決定基：τ aa 15-20，包含鱗酸化Tyr 在位置18(Υ18) ; τ aa 405-412 ’包含磷酸化Ser在位置 409(pS409) ; τ aa 405-411 ’ 包含磷酸化 Ser 在位置 159338.doc 201216985 409(pS409);及τ aa 208-218，包含磷酸化Thr在位置 212(卩丁212)及磷酸化861*在位置214(卩8214)。 19. 如請求項13或14之抗體，其中該肽結合包含在位置18具有磷酸化Tyr(Y18)之τ aa 15-20的抗原決定基。 20. 如請求項15或16之抗體，其中該肽結合包含在位置409 具有磷酸化861^8409)之1心405-412的抗原決定基。 21.如請求項17或18之抗體，其中該肽結合包含在位置409 具有填酸化Ser(pS409)之τ aa 405-4 11的抗原決定基。

22.如前述請求項中任一項之抗體，其包含第一結合域，依次特定含有CDR1 ’具有示於SEQ ID NO: 21、24、27、 28、29、32、73、81、93、101、l〇6 中之胺基酸序列，或與該胺基酸序列至少70%，特別至少80%，特別至少 85% ’特別至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94% ’特別至少95% ’特別至少96°/。，特別至少 97%，特別至少98°/。，特別至少99%或1〇〇% 一致之胺基酸序列，CDR2 ’ 具有示於 SEQ ID NO: 22、25、30、 33 74 82 94、1 〇2、107中之胺基酸序列，或與該胺基酸序列至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%’特別至少95% ’特別至少峨，特別至少97%，特別至少98% ’特別至少99%或議一致之胺基酸序列；及CDR3，具有示於犯卩m N〇: 23、^、η、μ、 103 108中之胺基酸序歹，或與該胺基酸序列至少60。/。、特別至少观、特別至少嶋、特別至少 85%、特別至少9G%、至少㈣、至少92%、至少93%、 159338.doc 201216985 至少94%、特別至少95%、特別至少96%、特別至少 97 /〇特別至少98%、特別至少99%或丨〇〇% 一致之胺基酸序列，及/或第二結合域，依次含有CDR1，具有示於 SEQIDNO: 12、15、18、7〇、78、的、⑽中之胺基酸序列，或與該胺基酸序列至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、特別至少咖、特別至少娜、特別至/ 97/。、特別至少98%、特別至少99%或1〇〇% 一致之胺基酸序列；CDR2，具有示於SEQ ID N〇: 13、16、 19 79 9〇 "、115中之胺基酸序列，或與該胺基酸序列至少齡、特別至少85%、特別至少规、至少 91%、至少92%、至少93% '至少94%、特別至少95%、特別至少96%、特別至少97%、特別至少嶋、特別至少 99%或100%—致之胺基酸序列；及(：1^3，具有示於seq ID NO. 14 17、20、72、80、91、1〇〇中之胺基酸序列，或與該胺基酸序列至少6〇%、至少7〇%、至少8〇%、特別至少85。/。、特別至少9〇%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、特別至少95%、特別至少96%、特別至少97%、特別至少98°/〇、特別至少99%或1〇〇% 一致之胺基酸序列。 23.如前述請求項中任—項之抗體，其包含第一結合域，依次含有 CDR1，具有示kSEq id NO: 21、24、27、28、 29、32中之胺基酸序列’或與該胺基酸序列至少7〇%一致之胺基S夂序列，CDR2 ,具有示於SEq ID N〇: 22、 25、30、33中之胺基酸序列，或與該胺基酸序列至少 159338.doc 201216985

90%—致之胺基酸序列；及CDR3，具有示於SEQ ID NO: 23、26、3 1、34中之胺基酸序列，或與該胺基酸序列至少60%—致之胺基酸序列；及/或第二結合域，依次含有 CDR1，具有示於SEQ ID NO·· 12、15、18中之胺基酸序列，或與該胺基酸序列至少90% —致之胺基酸序列； CDR2，具有示於SEQ ID NO: 13、16、19中之胺基酸序列，或與該胺基酸序列至少80%—致之胺基酸序列；及 CDR3，具有示於SEQ ID NO: 14、17、20中之胺基酸序列，或與該胺基酸序列至少60%—致之胺基酸序列。 24.如前述請求項中任一項之抗體，其包含第一結合域，依次含有 CDR1，具有示於SEQ ID NO: 21、24、27、28、 29、32中之胺基酸序列，或與該胺基酸序列至少85%— 致之胺基酸序列；CDR2，具有示於SEQ ID NO: 22、 25、30、33中之胺基酸序列，或與該胺基酸序列至少 95%—致之胺基酸序列；及CDR3，具有示於SEQ ID NO: 23、26、3 1、34中之胺基酸序列，或與該胺基酸序列至少80%—致之胺基酸序列；及/或抗體域，含有CDR1，具有示於SEQ ID NO: 12、15、18中之胺基酸序列，或與該胺基酸序列至少95%—致之胺基酸序列；CDR2，具有示於SEQ ID NO: 13、16、19中之胺基酸序列，或與該胺基酸序列至少85% —致之胺基酸序列；及CDR3，具有示於SEQ ID NO: 14、17、20中之胺基酸序列，或與該胺基酸序列至少85%—致之胺基酸序列。 25.如前述請求項中任一項之抗體，其包含第一結合域，依 159338.doc 201216985 次含有 CDRl，具有示於SEq ID NO: 21、24、27、28、 29、32中之胺基酸序列，或與該胺基酸序列至少90% — 致之胺基酸序列；CDR2，具有示於SEQ ID NO: 22、 25、30、33中之胺基酸序列，或與該胺基酸序列至少 95%—致之胺基酸序列；及CDR3，具有示於SEQ ID NO: 23、26、3 1、34中之胺基酸序列，或與該胺基酸序列至少90%—致之胺基酸序列；及/或第二結合域，依次含有 CDR1，具有示於SEQ ID NO: 12、15、18中之胺基酸序列，或與該胺基酸序列至少95% —致之胺基酸序列； CDR2，具有示於SEQ ID NO: 13、16、19中之胺基酸序列’或與該胺基酸序列至少95% —致之胺基酸序列；及 CDR3 ’具有示於SEQ ID NO: 14、17、20中之胺基酸序列’或與該胺基酸序列至少90%—致之胺基酸序列。 26.如前述請求項中任一項之抗體，其包含第一結合域（抗體域），依次含有CDR1，具有示於SEQ ID NO: 21、24、 27、28、29、32中之胺基酸序列，或與該胺基酸序列至少90%—致之胺基酸序列；CDR2，具有示於SEQ ID NO: 22、25、30、33中之胺基酸序列；及CDR3，具有示於 SEQ ID NO: 23、26、3 1、34中之胺基酸序列，或與該胺基酸序列至少90% —致之胺基酸序列；及/或第二結合域’依次含有CDR1 ’具有示於SEQ ID NO: 12、15、18 中之胺基酸序列；CDR2，具有示於SEQ ID NO: 13、 16、19中之胺基酸序列，或與該胺基酸序列至少95% — 致之胺基酸序列；及CDR3，具有示於SEQ ID NO: 14、 159338.doc -6 · 201216985 17、20中之胺基酸序列，或與該胺基酸序列至少90% — 致之胺基酸序列。

27.如前述請求項中任一項之抗體，其包含第一結合域’依次含有 CDR1，具有示於SEQ ID NO: 21、24、27、28、 29、32中之胺基酸序列，或與該胺基酸序列至少98% — 致之胺基酸序列；CDR2，具有示於SEQ ID NO: 22、 25、30、33中之胺基酸序列；及CDR3，具有示於SEQ ID NO: 23、26、31、34中之胺基酸序列，或與該胺基酸序列至少95%—致之胺基酸序列；及/或第二結合域，依次含有CDR1 ’具有示於SEQ ID NO: 12、15、18中之胺基酸序列；CDR2，具有示於SEQ ID NO: 13、16、19中之胺基酸序列，或與該胺基酸序列至少95%—致之胺基酸序列；及CDR3，具有示於SEQ ID NO: 14、17、20中之胺基酸序列，或與該胺基酸序列至少90%—致之胺基酸序列。 28.如前述請求項中任一項之抗體，其包含第一結合域，依次含有 CDR1 ’ 具有示於SEQ ID NO: 21、24、27、28、 29、32中之胺基酸序列，或與該胺基酸序列至少98% — 致之胺基酸序列；CDR2，具有示於SEQ ID NO: 22、 25、30、33中之胺基酸序列；及CDR3，具有示於SEQ ID NO: 23、26、31、34中之胺基酸序列，或與該胺基酸序列至少98%—致之胺基酸序列；及/或第二結合域，依次含有CDR1，具有示於SEQ ID NO: 12、15、18中之胺基酸序列；CDR2，具有示於SEQ ID NO: 13、16、19中 159338.doc 201216985 之胺基酸序列，或與該胺基酸序列至少98% —致之胺基酸序列；及CDR3，具有示於SEQ ID NO: 14、17、20中之胺基酸序列，或與該胺基酸序列至少90% —致之胺基酸序列。 29. 如前述請求項中任一項之抗體，其包含第一結合域，依次含有 CDR1，具有示於SEQ ID NO: 21、24、27、28、 29、32中之胺基酸序列；CDR2，具有示於SEQ ID NO: 22、25、30、33中之胺基酸序列；及CDR3，具有示於 SEQ ID NO: 23、26、31、34中之胺基酸序列；及/或第二結合域，依次含有CDR1，具有示於SEQ ID NO: 12、 15、18中之胺基酸序列；CDR2，具有示於SEQ ID NO: 13、16、19中之胺基酸序列；及CDR3，具有示於SEQ ID NO: 14、17、20中之胺基酸序列。 30. 如前述請求項中任一項之抗體，其包含第一結合域，依次含有CDR1，具有示於SEQ ID NO: 21中之胺基酸序列，或與該胺基酸序列至少76% —致之胺基酸序列； CDR2，具有示於SEQ ID NO: 22中之胺基酸序列；及 CDR3，具有示於SEQ ID NO: 23中之胺基酸序列，或與該胺基酸序列至少66% —致之胺基酸序列；及/或第二結合域，依次含有CDR1，具有示於SEQ ID NO: 12中之胺基酸序列；CDR2，具有示於SEQ ID NO: 13中之胺基酸序列，或與該胺基酸序列至少88% —致之胺基酸序列；及CDR3，具有示於SEQ ID NO: 14中之胺基酸序列，或與該胺基酸序列至少66%—致之胺基酸序列。 159338.doc 201216985

31. 如前述請求項中任一項之抗體，其包含第一結合域，依次含有CDR1，具有示於SEQ ID NO: 24中之胺基酸序列，或與該胺基酸序列至少88% —致之胺基酸序列； CDR2，具有示於SEQ ID NO: 25中之胺基酸序列；及 CDR3，具有示於SEQ ID NO: 26中之胺基酸序列，或與該胺基酸序列至少66%—致之胺基酸序列；及/或第二結合域，依次含有CDR1，具有示於SEQ ID NO: 12中之胺基酸序列；CDR2，具有示於SEQ ID NO: 13中之胺基酸序列，或與該胺基酸序列至少88% —致之胺基酸序列；及CDR3，具有示於SEQ ID NO: 14中之胺基酸序列，或與該胺基酸序列至少66% —致之胺基酸序列。 32. 如前述請求項之抗體，其包含第一結合域，其中該 CDR1具有示於SEQ ID NO: 27中之胺基酸序列，或與該胺基酸序列至少88%—致之胺基酸序列。 33. 如前述請求項之抗體，其包含第一結合域，其中該 CDR1具有示於SEQ ID NO: 28中之胺基酸序列，或與該胺基酸序列至少88%—致之胺基酸序列。 34. 如前述請求項中任一項之抗體，其包含第一結合域，依次含有CDR1，具有示於SEQ ID NO: 29中之胺基酸序列；CDR2，具有示於SEQ ID NO: 30中之胺基酸序列；及CDR3，具有示於SEQ ID NO: 31中之胺基酸序列；及/ 或第二結合域，依次含有CDR1，具有示於SEQ ID NO: 15中之胺基酸序列；CDR2，具有示於SEQ ID NO: 16中之胺基酸序列，或與該胺基酸序列至少94% —致之胺基 159338.doc -9- 201216985 酸序列；及CDR3，具有示於SEQ ID NO: 17中之胺基酸序列，或與該胺基酸序列至少36% —致之胺基酸序列。 35. 如前述請求項中任一項之抗體，其包含第一結合域，依次含有CDR1，具有示於SEQ ID NO: 32中之胺基酸序列；CDR2，具有示於SEQ ID NO: 33中之胺基酸序列；及CDR3，具有示於SEQ ID NO: 34中之胺基酸序列；及/ 或第二結合域，依次含有CDR1，具有示於SEQ ID NO: 18中之胺基酸序列；CDR2，具有示於SEQ ID NO: 19中之胺基酸序列，或與該胺基酸序列至少95% —致之胺基酸序列；及CDR3，具有示於SEQ ID NO: 20中之胺基酸序列，或與該胺基酸序列至少63%—致之胺基酸序列。 36. 如前述請求項中任一項之抗體，其包含第一結合域，依次含有CDR1，具有示於SEQ ID NO: 73中之胺基酸序列；CDR2，具有示於SEQ ID NO: 74中之胺基酸序列；及CDR3，具有示於SEQ ID NO·· 75中之胺基酸序列，或與該胺基酸序列至少60%、至少70%、至少80%、特別至少85%、特別至少90%、至少91%、至少92%、至少 93%、至少94%、特別至少95%、特別至少96%、特別至少97%、特別至少98%、特別至少99°/。或100%—致之胺基酸序列；及/或第二結合域，依次含有CDR1，具有示於SEQ ID NO: 70中之胺基酸序列，或與該胺基酸序列至少95%、特別98%、特別99% —致之胺基酸序列； CDR2，具有示於SEQ ID NO: 71中之胺基酸序列，或與該胺基酸序列至少94%、95%、96%、97%、98%或99% 159338.doc •10- 201216985 一致之胺基酸序列；及CDR3，具有示於SEQ ID NO: 72 中之胺基酸序列，或與該胺基酸序列至少60%、至少 70%、至少80%、特別至少85%、特別至少90%、至少 91%、至少92%、至少93%、至少94%、特別至少95%、特別至少96%、特別至少97%、特別至少98%、特別至少 99%或100%—致之胺基酸序列。

3 7.如前述請求項中任一項之抗體，其包含第一結合域，依次含有CDR1，具有示於SEQ ID NO: 81中之胺基酸序列；CDR2，具有示於SEQ ID NO: 82中之胺基酸序列；及CDR3，具有示於SEQ ID NO: 83中之胺基酸序歹ij ，或與該胺基酸序列至少60%、至少70%、至少80%、特別至少85%、特別至少90%、至少91%、至少92%、至少 93%、至少94%、特別至少95%、特別至少96%、特別至少97%、特別至少98%、特別至少99%或100%—致之胺基酸序列；及/或第二結合域，依次含有CDR1，具有示於SEQ ID NO: 78中之胺基酸序列；CDR2，具有示於 SEQ ID NO: 79中之胺基酸序列；CDR3，具有示於SEQ ID NO: 80中之胺基酸序列，或與該胺基酸序列至少 60%、至少70%、至少80°/。、特別至少85%、特別至少 90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、特別至少95%、特別至少96%、特別至少97%、特別至少 98%、特別至少99%或100%—致之胺基酸序列。 38.如前述請求項中任一項之抗體，其包含第一結合域，依次含有CDR1，具有示於SEQ ID NCh 93中之胺基酸序 159338.doc 201216985 列；CDR2，具有示於SEQ ID NO: 94中之胺基酸序列；及CDR3，具有示於SEQ ID NO: 95中之胺基酸序列，或與以上CDR之任一者至少60%、至少70%、至少80%、特別至少85%、特別至少90%、至少9 1%、至少92%、至少 93%、至少94°/。、特別至少95%、特別至少96%、特別至少97%、特別至少98%、特別至少99%或100% —致之胺基酸序列；及/或第二結合域，依次含有CDR1，具有示於SEQ ID NO: 89中之胺基酸序列；CDR2，具有示於 SEQ ID NO: 90中之胺基酸序列；及CDR3，具有示於 SEQ ID NO: 91中之胺基酸序列，或與以上CDR之任一者至少60%、至少70%、至少80%、特別至少85%、特別至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、特別至少95%、特別至少96%、特別至少97%、特別至少 98%、特別至少99%或100%—致之胺基酸序列。 39.如前述請求項中任一項之抗體，其包含第一結合域，依次含有CDR1，具有示於SEQ ID NO: 101中之胺基酸序列；CDR2，具有示於SEQ ID NO: 102中之胺基酸序列；及CDR3，具有示於SEQ ID NO: 103中之胺基酸序列，或與以上CDR之任一者至少60%、至少70%、至少80%、特別至少85%、特別至少90%、至少91%、至少92%、至少 93%、至少94%、特別至少95%、特別至少96%、特別至少97°/。、特別至少98%、特別至少99%或100°/◦ —致之胺基酸序列；及/或第二結合域，依次含有CDR1，具有示於SEQ ID NO: 98中之胺基酸序列；CDR2，具有示於 159338.doc 12 201216985 SEQ ID NO: 99中之胺基酸序列；及CDR3，具有示於 SEQ ID NO: 100中之胺基酸序列，或與以上CDR之任一者至少60%、至少70%、至少80%、特別至少85%、特別至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、特別至少95%、特別至少96%、特別至少97%、特別至少 98%、特別至少99%或100%—致之胺基酸序列。

40. 如前述請求項中任一項之抗體，其包含第一結合域，依次含有CDR1，具有示於SEQ ID NO: 106中之胺基酸序歹|J ; CDR2，具有示於SEQ ID NO: 107中之胺基酸序列；及CDR3，具有示於SEQ ID NO: 108中之胺基酸序列，或與以上CDR之任一者至少60%、至少70%、至少80%、特別至少85%、特別至少90%、至少91%、至少92%、至少 93%、至少94%、特別至少95%、特別至少96%、特別至少97%、特別至少98%、特別至少99%或100%—致之胺基酸序列；及/或第二結合域，依次含有CDR1，具有示於SEQ ID NO: 89中之胺基酸序列；CDR2，具有示於 SEQ ID NO: 115中之胺基酸序列；及CDR3，具有示於 SEQ ID NO: 91中之胺基酸序列，或與以上CDR之任一者至少60%、至少70%、至少80%、特別至少85%、特別至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、特別至少95%、特別至少96%、特別至少97%、特別至少 98%、特別至少99%或100%—致之胺基酸序列。 41. 如前述請求項中任一項之抗體，其包含第一結合域，該第一結合域含有示於SEQ ID NO: 6、7、8、9、10、11中 159338.doc -13- 201216985 之胺基酸序列，或與該胺基酸序列至少90% 一致之胺基酸序列；及/或第二結合域，該第二結合域含有示於SEQ ID NO: 1、2、3、4、5中之胺基酸序列’或與該胺基酸序列至少85%—致之胺基酸序列。 42. 如前述請求項中任一項之抗體’其包含第一結合域，該第一結合域含有示於SEQ IDNO:6、7、8、9、1〇、11* 之胺基酸序列，或與該胺基酸序列至少90% —致之胺基酸序列；及/或第二結合域，該第二結合域含有示於SEQ ID NO: 1、2、3、4、5中之胺基酸序列，或與該胺基酸序列至少91%—致之胺基酸序列》 43. 如前述請求項中任一項之抗體，其包含第一結合域（抗體域），該第一結合域含有示於SEQ ID NO: 6、7、8、9、 10、11中之胺基酸序列，或與該胺基酸序列至少95% — 致之胺基酸序列；及/或第二結合域’該第二結合域含有示於SEQ ID NO: 1、2、3、4、5中之胺基酸序列，或與該胺基酸序列至少91%—致之胺基酸序列。 44. 如前述請求項中任一項之抗體，其包含第一結合域，該第一結合域含有示於SEQ ID NO: 69、77、116/92、97、 105中之胺基酸序列，或與該胺基酸序列至少6〇%、至少 70%、至少80%、特別至少85%、特別至少90%、至少 91%、至少92%、至少93%、至少94%、特別至少95%、特別至少96%、特別至少97%、特別至少98%、特別至少 99°/。或100°/。一致之胺基酸序列；及/或第二結合域，該第二結合域含有示於SEQ ID NO: 68、76 ' 88、96、1〇4令 I59338.doc •14· 201216985 之胺基酸序列’或與該胺基酸序列至少6〇%、至少 70%、至少80%、特別至少85%、特別至少9〇%、至少 91%、至少92°/。、至少93%、至少94%、特別至少95〇/〇、特別至少96%、特別至少97%、特別至少98%、特別至少 99%或100%—致之胺基酸序列。

45.如前述請求項中任一項之抗體，其包含第一結合域，該第一結合域含有示於SEQ ID NO: 6或SEQ ID NO: 7中之胺基酸序列’或與該胺基酸序列分別至少90%及94% — 致之胺基酸序列；及/或第二結合域，該第二結合域含有示於SEQ ID NO: 1中之胺基酸序列，或與該胺基酸序列至少91 % —致之胺基酸序列。 46.如前述請求項中任一項之抗體，其包含第一結合域，該第一結合域含有示於SEQ ID NO: 8中之胺基酸序列，或與該胺基酸序列至少95% —致之胺基酸序列；及/或第二結合域’該第二結合域含有示於SEQ ID NO: 2中之胺基酸序列，或與該胺基酸序列至少90% —致之胺基酸序列。 47. 如前述請求項中任一項之抗體，其包含第一結合域，該第一結合域含有示於SEQ ID NO: 9中之胺基酸序列，或與該胺基酸序列至少95%—致之胺基酸序列；及/或第二結合域，該第二結合域含有示於SEQ ID NO: 3中之胺基酸序列’或與該胺基酸序列至少90% 一致之胺基酸序列。 48. 如前述請求項中任一項之抗體，其包含第一結合域，該 159338.doc •15· 201216985 第一結合域含有示於SEQ ID NO: 10中之胺基酸序列，或與該胺基酸序列至少99%—致之胺基酸序列；及/或第二結合域，該第二結合域含有示於SEQ ID NO: 4中之胺基酸序列，或與該胺基酸序列至少89% —致之胺基酸序列。 49. 如前述請求項中任一項之抗體，其包含第一結合域，該第一結合域含有示於SEQ ID NO: 11中之胺基酸序列，或與該胺基酸序列至少98%—致之胺基酸序列；及/或第二結合域，該第二結合域含有示於SEQ ID NO: 5中之胺基酸序列，或與該胺基酸序列至少87% —致之胺基酸序列。 50. 如前述請求項中任一項之抗體，其包含： a. 含有示於SEQ ID NO: 6中之胺基酸序列的第一結合域及/或含有示於SEQ ID NO: 1中之胺基酸序列的第二結合域；或 b. 含有示於SEQ ID NO: 7中之胺基酸序列的第一結合域及/或含有示於SEQ ID NO: 1中之胺基酸序列的第二結合域；或 c. 含有示於SEQ ID NO: 8中之胺基酸序列的第一結合域及/或含有示於SEQ ID NO: 2中之胺基酸序列的第二結合域；或 d. 含有示於SEQ ID NO: 9中之胺基酸序列的第一結合域及/或含有示於SEQ ID NO: 3中之胺基酸序列的第二結合域；或 159338.doc •16· 201216985 e. 含有示於SEQ ID NO: 10中之胺基酸序列的第一結合域及/或含有示於SEQ ID NO: 4中之胺基酸序列的第二結合域；或 f. 含有示於SEQ ID NO: 11中之胺基酸序列的第一結合域及/或含有示於SEQ ID NO: 5中之胺基酸序列的第二結合域；或 g. 含有示於SEQ ID NO: 69中之胺基酸序列的第一結合域及/或含有示於SEQ ID NO: 68中之胺基酸序列的第

h. 含有示於SEQ ID NO: 77中之胺基酸序列的第一結合域及/或含有示於SEQ ID NO: 76中之胺基酸序列的第二結合域；或 i. 含有示於SEQ ID NO: 116中之胺基酸序列的第一結合域及/或含有示於SEQ ID NO: 88中之胺基酸序列的第二結合域；或 j. 含有示於SEQ ID NO: 92中之胺基酸序列的第一結合 # 域及/或含有示於SEQ ID NO: 88中之胺基酸序列的第二結合域；或 k·含有示於SEQ ID NO: 97中之胺基酸序列的第一結合域及/或含有示於SEQ ID NO: 6中之胺基酸序列的第二結合域；或 1. 含有示於SEQ ID NO: 105甲之胺基酸序列的第一結合域及/或含有示於SEQ ID NO: 104中之胺基酸序列的第二結合域。 159338.doc -17- 201216985 杆躲3項之抗體’其為多株抗體、單株抗體、嵌合抗體、人類化抗體或完全人類抗體。 52.如前述請求項中一 π τ作視〈杭體’其為lgG2b或IgG3同型 (isotype) ° 53· —種結合肽或蛋白質，其為如請求項丨至^中任一項之抗體》 54.如刖述請求項中任一項之結合肽、蛋白質或抗體，其中該結合肽、蛋白質或抗體識別且特異性結合哺乳動物、特別是人類τ蛋白或其片段上之磷酸化抗原決定基，特別是聚集τ蛋白上之磷酸化抗原決定基，但不結合相應未磷酸化抗原決定基及/或非相關抗原決定基。 55· —種聚核苷酸’其編碼如前述請求項中任一項之抗體。 56.如請求項47之聚核苷酸’其包含選自由以下組成之群之核酸分子： a·包含核苷酸序列編碼包含如SEQ ID NO: 35-45中所述胺基酸序列之多肽之核酸分子； b. 包含與示於 SEQ ID NO: 35-45、SEQ ID NO: 84-87、 SEQ ID NO: 109-112及117中之序列具有至少85%序列一致性之核苷酸序列的核酸分子； c. 包含與示於 SEQ ID NO: 35-45、SEQ ID NO: 84-87、 SEQ ID NO: 109-112及117中之序列具有至少90%序列一致性之核苷酸序列的核酸分子； d. 包含與示於 SEQ ID NO: 35_45、SEQ ID NO: 84-87、 SEQ ID NO: 109-112及117中之序列具有至少95%序 159338.doc -18· 201216985 列一致性之核苷酸序列的核酸分子； e. 包含與示於SEQ ID NO: 35-45、SEQ ID NO: 84-87、 SEQ ID NO: 109-112及117中之序列具有至少98%序列一致性之核苷酸序列的核酸分子； f. 包含互補股與a)-e)中任一者之核酸分子雜交之核苷酸序列的核酸分子； g. 包含核苷酸序列由於遺傳密碼之簡併性而與a)-f)中任一者所定義之核苷酸序列有偏差之核酸分子， % 其中如a)-g)中任一者所定義之該核酸分子識別且特異性結合哺乳動物、特別是人類τ蛋白或其片段上之磷酸化抗原決定基，特別是特異性結合病理性蛋白質工構象異構體，但不結合相應未磷酸化抗原決定基及/或非相關抗原决疋基其中》亥抗體具有高結合親和力，解離常數為至少 10 ηΜ。 57. 種邊藥組合物，其包含治療有效量之如前述請求項中任一項之結合肽、蛋白質、抗體或聚核㈣、或其组合以及醫藥學上可接受之載劑。 58. 如前述請求項中休一項之抗體、結合肽或蛋白質、聚核 ^ 樂組合物、或其組合，其係用於療法中，特別 1 = «要f哺乳動物、制是人類之神料化丨生病症’諸如τ病變。 59_如前述請求項之扦之柷體、結合肽或蛋白質、物’其係用於治療或減輕知 :、α 動物、特別是人類之認知不足。W叫之哺乳 159338.doc -19- 201216985 60. 如前述請求項之抗體、結合肽或蛋白質、聚核苷酸或醫藥組合物，其中該治療或減輕哺乳動物、特別是人類之認知不足可遏止該等認知不足之進展。 61. 如前述請求項之抗體、結合肽或蛋白質、聚核苷酸或醫藥組合物，其中該治療或減輕哺乳動物、特別是人類之認知不足可使所治療個體之認知記憶能力之保持增強，特別是認知記憶能力完全恢復。 62·如前述請求項之抗體、結合肽或蛋白質、聚核苷酸或醫藥組合物，其係用於治療神經原纖維病變形成所弓丨起戋相關之疾病及病症，τ病變中之主要腦病變包含一群異質神經退化性疾病或病症，包括顯示τ及澱粉樣蛋白病變乓存之疾病或病症，包括（但不限於）阿茲海默氏病 (Alzheimer's Disease)、庫賈氏病（Creutzfeldt Jac〇b disease)、拳擊員癡呆（Dementia pugilistica)、唐氏症候群（Down’s Syndrome)、格斯特曼-斯脫司勒_史茵克病 (Gerstmann-Straussler-Scheinker disease)、包涵體肌炎、及普里昂（prion)蛋白質澱粉樣腦血管病，創傷性腦損傷，及不顯示明顯澱粉樣蛋白病變之其他疾病或病症，包括（但不限於）肌萎縮性側索硬化/關島型帕金森氏症_癡呆複合症（parkinsonism-dementia complex of Guam)、伴有神經原纖維纏結之非關島型運動神經元病、嗜銀顆粒癡呆（argyrophilic grain dementia)、皮質基底核退化症 (cofticobasal degeneration)、伴有弼化之瀰漫性神經原纖維纏結、伴有與染色體17相關之帕金森氏症的額顳葉型 159338.doc •20· 201216985 癡呆、哈勒沃登-施帕茨病（Hallevorden-Spatz disease)、多發性系統萎縮症（multiple system atrophy)、C型尼曼-皮克病（Niemann-Pick disease, type C)、蒼白球-腦橋-黑質變性（Pallido-ponto-nigral degeneration)、皮克氏病 (Pick's disease)、進行性皮質下神經膠增殖病 (progressive subcortical gliosis)、進行性核上眼神經麻

痒症（progressive supranuclear palsy)、亞急性硬化性泛腦炎（Subacute sclerosing panencephalitis)、僅纏結癡呆 (Tangle only dementia)、腦炎後帕金森氏症 (Postencephalitic Parkinsonism)、肌強直營養不良 (Myotonic dystrophy) ° 63.如前述請求項之抗體、結合肽或蛋白質、聚核苷藥組合物’其係用於治療阿茲海默氏病。 64_ —種治療神經退化性疾病或病症（諸如τ病變）之方法，其包含向罹患該疾病或病症之動物，特別是哺乳動物，但、^、疋人類技與如别述請求項令任一項之抗體、結合肽或蛋白質、聚核苷酸或醫藥組合物、或其組合。月】述”月求項之方法，其係用於治療神經原纖維病變形 j斤引（或相關之疾病及病症，τ病變令之主要腦病變包 =群異質神經退化性疾病或病症，包括顯示认殿粉樣白病變共存之疾病或病症’包括(但不限於)阿茲海默 =司：賈氏病、拳擊員瘋呆、唐氏症候群、格斯特曼· 樣腦血管病史因::、包涵體肌炎、及普里昂蛋白質澱粉創傷性腦損傷’及不顯示明顯澱粉樣蛋白 159338.doc 201216985 病變之其他疾病或病症，包括（但不限於）肌萎縮性側索硬化/關島型帕金森氏症_癡呆複合症、伴有神經原纖維纏結之非關島型運動神經元病、嗜銀顆粒癡呆、皮質基底核退化症、伴有鈣化之瀰漫性神經原纖維纏結、伴有與染色體17相關之帕金森氏症的額顳葉型癡呆、哈勒沃登-施帕茨病、多發性系統萎縮症、C型尼曼_ 白球翁黑質變性、皮克氏病、進行性皮質=: 增殖病、進行性核上眼神經麻痒症、亞急性硬化性泛腦炎、僅纏結癡呆、腦炎後帕金森氏症、肌強直營養不良。 66. 67. 一種誘導罹患神經退化性病症（諸如τ病變）之動物、特別是哺乳動物或人類之被動免疫反應的方法，其係由向該動物或人㈣與如前述請求項巾任—項之抗體、結合狀或蛋白質或醫藥組合物、或其組合。一種診斷患者之τ蛋白相關疾病、病症或病狀之方法，其包含偵測抗體或其活性片段與樣品中或原位置之τ蛋白之抗原決定基的免疫特異性結合，包括以下步驟： a. 使疑似含有該τ蛋白之該樣品或特定身體部分或身體區域與如冑述請求項中任一項之抗體或其片段接觸’該肽或其片段結合該τ蛋白之抗原決定基； b. 使該抗體結合該τ蛋白以形成免疫複合物； c. 偵測該免疫複合物之形成；及 d. 將該免疫複合物之存在或不存在與該樣品或特定身體部分或區域中❻白之存在或不存在相關聯。 159338.doc •22· 201216985 68.、種#斷患者蛋白相關疾病、病症或病狀之傾向的方法，其包含偵測抗體或其活性片段與樣品中或原位置之τ 蛋白之抗原决疋基的免疫特異性結合，包括以下步驟： a.使疑似含有該τ抗原之該樣品或特定身體部分或身體區域與如刖述請求項中任一項之抗體或其片段接觸，該肽或其片段結合該τ蛋白之抗原決定基； b ’使該抗體結合該τ抗原以形成免疫複合物； c•偵測該免疫複合物之形成；及 d. 將該免疫複合物之存在或不存在與該樣品或特定身體部分或區域中τ抗原之存在或不存在相關聯； e. 比較該免疫複合物之量與正常對照值，其中相較於正常對照值，該聚集體之量增加表示該患者正罹患τ蛋白相關疾病或病狀或有發生τ蛋白相關疾病或病狀之風險。 69·—種監測患者在如前述請求項中任一項之抗體或醫藥組合物治療之後最小殘餘疾病的方法，其中該方法包含： a·使疑似含有該τ抗原之該樣品或特定身體部分或身體區域與如前述請求項中任一項之抗體或其片段接觸，該肽或其片段結合該τ蛋白之抗原決定基； b·使該抗體結合該τ抗原以形成免疫複合物； c. 偵測該免疫複合物之形成；及 d. 將該免疫複合物之存在或不存在與該樣品或特定身體部分或區域中τ抗原之存在或不存在相關聯； e ·比較該免疫複合物之量與正常對照值， 159338.doc •23- 201216985 其中相較於正常對照值，該聚集體之量增加表示該患者仍然罹患最小殘餘疾病。 70. -種預測用如前述請求項中任一項之抗體或醫藥組合物治療之患者之反應性的方法，其包含· a.使疑似含有該τ抗原之該樣品或特定身體部分或身體區域與如前述請求項中任一項之抗體或其片段接觸，該肽或其片段結合該τ蛋白之抗原決定基； b ·使該抗體結合該τ抗原以形成免疫複合物； c ·偵測該免疫複合物之形成；及 d.將該免疫複合物之存在或不存在與該樣品或特定身體部分或區域中τ抗原之存在或不存在相關聯； e_比較該免疫複合物在該治療開始之前及之後之量，其中該聚集體之量減小表示該患者對該治療有反應之潛力高。 7 1. —種偵測及診斷τ蛋白相關疾病、病症或病狀之測試套組’其包含如前述請求項中任一項之抗體。 7 2.如前述請求項之測試套組，其包含容納一或多種本發明抗體的容器，及使用該等抗體結合τ抗原以形成免疫複合物及偵測該免疫複合物之形成以將該免疫複合物之存在或不存在與τ抗原之存在或不存在相關聯的說明書。 73. —種抗原決定基，其選自由以下組成之群：τ aa 15-20，包含磷酸化Tyr在位置18(Y18) ; τ aa 405-412，包含磷酸化Ser在位置409(pS409) ; τ aa 405-411，包含磷酸化 Ser 在位置409(pS409);及τ aa 208-218，包含磷酸化Thr在 I59338.doc -24- 201216985 位置212(ρΤ212)及磷酸化Ser在位置214(pS214)。 74. 如請求項74之抗原決定基，其包含在位置18具有磷酸化 Tyr(Y18)之τ aa 15-20。 75. 如請求項74之抗原決定基，其中該肽結合包含在位置 409具有填酸化Ser(pS409)之τ aa 405-412的抗原決定基0 76·如請求項74之抗原決定基，其中該肽結合包含在位置 409具有磷酸化Ser(pS409)之τ aa 405-411的抗原決定基。 77_ —種細胞株’其產生如前述請求項中任一項之抗體。 78_ —種細胞株，其包含如請求項55或56之聚核苷酸。 79. —種產生如凊求項i至52、54中任一項之抗體之方法，其包含如請求項77或78之細胞株在適合培養基中培養的步驟。 80. —種產生如請求項1至52、54中任一項之抗體之方法，其包含如請求項77或78中任-項之細胞株在適合培養基中培養的步驟。

81. 如項79或8G之方法’其另外包含自該細胞株或培養基純化該等抗體或該抗體之步驟。 82. 一 f如請求項1至52、54中任-項之抗體、包括其任何力月匕P刀之用途，其係用於製倩供治療τ病變，一群1蛋白相關疾病及病症之藥劑。 83. —種如請求項1至52 功能部分之用、公中任—項之抗體、包括其任何广狀，一群 ' 其係用於製備供治療或減輕1病變相關 ^ T蛋白相關疾病及病症之藥劑。 159338.doc •25· 201216985 84. —種如請求項1至52、54中任一項之抗體、包括其任何功能部分之用途，其係用於製備供維持或增強罹患τ病變之哺乳動物之認知記憶能力的藥劑。 159338.doc 26-