BR112021005585A2

BR112021005585A2 - proteínas de ligação a sirpa e métodos de uso das mesmas

Info

Publication number: BR112021005585A2
Application number: BR112021005585-1A
Authority: BR
Inventors: Mahan Abbasian; Carlo Steven Santos; Jeonghoon Sun; Christina Valerie Trout; Henry H. Chan; Laure Escoubet; Gustavo Fenalti; Kandasamy Hariharan; Monica Wai Ling Leung; Konstantinos Mavrommatis; David P. Mikolon; Heather K. Raymon
Original assignee: Celgene Corporation
Priority date: 2018-09-27
Filing date: 2019-09-24
Publication date: 2021-06-29
Also published as: MX2021003393A; WO2020068752A1; CN113166245A; US12084499B2; JP2022502051A; CL2021000738A1; SG11202102851XA; KR20210086619A; US20240034789A1; AU2019349651A1; IL281783A; JP2023078167A; AU2019349651B2; TW202028237A; CO2021003724A2; PE20211491A1; EP3856787A4; EP3856787A1; WO2020068752A8; JP7266670B2

Abstract

PROTEÍNAS DE LIGAÇÃO A SIRPa E MÉTODOS DE USO DAS MESMAS. São fornecidos neste documento composições, métodos e usos que envolvem anticorpos que se ligam especificamente à proteína reguladora de sinal a (SIRPa) e modulam a atividade de SIRPa.

Description

PROTEÍNAS DE LIGAÇÃO A SIRPα E MÉTODOS DE USO DAS MESMAS

REFERÊNCIA CRUZADA A PEDIDOS RELACIONADOS

[0001] Este pedido reivindica o benefício de prioridade para o Pedido de Patente Provisório US nº. 62/737.782, depositado em 27 de setembro de 2018, e o Pedido de Patente Provisório US nº. 62/853.997, depositado em 29 de maio de 2019, cujas divulgações são incorporadas neste documento por referência em sua totalidade.

1. CAMPO DA INVENÇÃO

[0002] São fornecidas neste documento composições, métodos e usos que envolvem anticorpos que se ligam especificamente à proteína reguladora de sinal α (SIRPα) e modulam a atividade de SIRPα.

2. SUMÁRIO

[0003] A presente divulgação fornece proteínas que se ligam à SIRPα (por exemplo, SIRPα humana, SEQ ID NO: 146), incluindo proteínas de ligação, tais como anticorpos que se ligam à SIRPα. Essas proteínas de ligação, incluindo anticorpos, podem se ligar a um polipeptídeo SIRPα, um fragmento SIRPα e/ou um epítopo SIRPα. Essas proteínas de ligação, incluindo anticorpos, podem ser antagonistas ou um anticorpo bloqueador de SIRPα que compete com o ligante SIRPα (por exemplo, CD47) pela interação com SIRPα. Em algumas modalidades, é fornecido neste documento um anticorpo. Em outras modalidades, é fornecido neste documento um fragmento de ligação ao antígeno do anticorpo.

[0004] Em um aspecto, é fornecido neste documento um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que (a) se liga a um epítopo de SIRPα humana reconhecido por um anticorpo compreendendo uma região variável de cadeia leve com uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 67 e uma região variável da cadeia pesada possuindo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 80; ou (b) compete pela ligação à SIRPα humana com um anticorpo compreendendo uma região variável da cadeia leve possuindo uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 67 e uma região variável da cadeia pesada possuindo uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 80.

[0005] Em outro aspecto, é fornecido neste documento um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga ao SIRPα, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende: (a) uma região variável da cadeia leve (VL) que compreende a região determinante de complementaridade de VL 1 (CDR1), VL CDR2 e VL CDR3 de qualquer um dos anticorpos SIRPAB-11, SIRPAB-12, SIRPAB-1, SIRPAB-2, SIRPAB-3, SIRPAB-4, SIRPAB-5, SIRPAB-6, SIRPAB-7, SIRPAB -8, SIRPAB-9, SIRPAB-10 ou SIRPAB-13 conforme estabelecido na Tabela 1; e/ou (b) uma região variável de cadeia pesada (VH) que compreende a região determinante de complementaridade de VH 1 (CDR1), VH CDR2 e VH CDR3 de qualquer um dos anticorpos SIRPAB-11, SIRPAB-12, SIRPAB-1, SIRPAB-2, SIRPAB-3, SIRPAB-4, SIRPAB-5, SIRPAB-6, SIRPAB-7, SIRPAB-8, SIRPAB-9, SIRPAB-10 ou SIRPAB-13 conforme estabelecido na Tabela 2.

[0006] Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento compreende: (a) uma região variável de cadeia leve (VL) compreendendo ainda VL framework 1 (FR1), VL FR2, VL FR3 e VL FR4 de qualquer um dos anticorpos SIRPAB-11, SIRPAB-12, SIRPAB- 1, SIRPAB-2, SIRPAB-3, SIRPAB-4, SIRPAB-5, SIRPAB-6, SIRPAB-7, SIRPAB-8, SIRPAB-9, SIRPAB-10 ou SIRPAB -13 conforme estabelecido na Tabela 3; e/ou (b) uma região variável de cadeia pesada (VH) compreendendo ainda VH framework 1 (FR1), VH FR2, VH FR3 e VH FR4 de qualquer um dos anticorpos SIRPAB-11, SIRPAB-12, SIRPAB-1, SIRPAB-2, SIRPAB-3, SIRPAB-4, SIRPAB-5, SIRPAB-6, SIRPAB-7, SIRPAB-8, SIRPAB-9, SIRPAB-10 ou SIRPAB-13 conforme estabelecido na Tabela 4.

[0007] Em certas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento compreende VL CDR1, VL CDR2 e VL CDR3 compreendendo sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 62, 63 e 65, respectivamente, e VH CDR1, VH CDR2, e VH CDR3 compreendendo sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 78, 69 e 57, respectivamente.

[0008] Em certas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento compreende VL CDR1, VL CDR2 e VL CDR3 compreendendo sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 62, 63 e 65, respectivamente, e VH CDR1, VH CDR2, e VH CDR3 compreendendo sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 82, 83 e 57, respectivamente.

[0009] Em certas modalidades, o anticorpo ou seu fragmento de ligação ao antígeno compreende uma VL compreendendo uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 18. Em certas modalidades, o anticorpo ou seu fragmento de ligação ao antígeno compreende uma VL compreendendo uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 46. Em certas modalidades, o anticorpo ou seu fragmento de ligação ao antígeno compreende uma VL compreendendo uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 67.

[0010] Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende um VH que compreende uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:9. Em certas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende um VH que compreende uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:22. Em certas modalidades, o anticorpo ou seu fragmento de ligação ao antígeno compreende uma VH compreendendo uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:27. Em certas modalidades, o anticorpo ou seu fragmento de ligação ao antígeno compreende uma VH compreendendo uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:32. Em certas modalidades, o anticorpo ou seu fragmento de ligação ao antígeno compreende uma VH compreendendo uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:36. Em certas modalidades, o anticorpo ou seu fragmento de ligação ao antígeno compreende uma VH compreendendo uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:42. Em certas modalidades, o anticorpo ou seu fragmento de ligação ao antígeno compreende uma VH compreendendo uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:50. Em certas modalidades, o anticorpo ou seu fragmento de ligação ao antígeno compreende uma VH compreendendo uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:60. Em certas modalidades, o anticorpo ou seu fragmento de ligação ao antígeno compreende uma VH compreendendo uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:71. Em certas modalidades, o anticorpo ou seu fragmento de ligação ao antígeno compreende uma VH compreendendo uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:76. Em certas modalidades, o anticorpo ou seu fragmento de ligação ao antígeno compreende uma VH compreendendo uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:80. Em certas modalidades, o anticorpo ou seu fragmento de ligação ao antígeno compreende uma VH compreendendo uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:85. Em certas modalidades, o anticorpo ou seu fragmento de ligação ao antígeno compreende uma VH compreendendo uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:90.

[0011] Em outras modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende: (a) um VL compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 18; e (b) um VH compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:9. Em certas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende: (a) um VL compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 18; e (b) um VH compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 22. Em outra modalidade, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende: (a) um VL compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 18; e (b) um VH compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 27. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende: (a) um VL compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 18; e (b) um VH compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 32. Em certas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende: (a) um VL compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 18; e (b) um VH compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 36. Em outras modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende: (a) um VL compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 46; e (b) um VH compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 42. Em outra modalidade, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende: (a) um VL compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 46; e (b) um VH compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 50. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende: (a) um VL compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 67; e (b) um VH compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 60. Em certas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende: (a) um VL compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 67; e (b) um VH compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 71. Em outras modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende: (a) um VL compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 67; e (b) um VH compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 76. Em outra modalidade, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende: (a) um VL compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 67; e (b) um VH compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 80. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende: (a) um VL compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 67; e (b) um VH compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 85. Em certas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende: (a) um VL compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 67; e (b) um VH compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 90.

[0012] Em certas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende: (a) um VL compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NOS:18, 46 e 67; e (b) um VH compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NOS:9, 22, 27, 32, 36, 42, 50, 60, 71, 76, 80, 85 e

90.

[0013] Em outras modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende uma região Fc de IgG1 humana ou um mutante desta. Em outra modalidade, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende uma região Fc de IgG1-K322A humana. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende uma região Fc de IgG1-AAS humana.

[0014] Em outras modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende uma região Fc de IgG4 humana ou um mutante desta. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende uma região Fc de IgG4P humana. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende uma região Fc de IgG4PE humana. Em outra modalidade, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende uma região Fc da cadeia pesada que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NOS: 144, 155-159.

[0015] Em algumas modalidades, o anticorpo ou seu fragmento de ligação ao antígeno compreende uma região constante da cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:211.

[0016] Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende: (a) uma região constante da cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 211; e (b) uma região Fc de cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NOS: 144, 155-159.

[0017] Em algumas modalidades, o anticorpo ou seu fragmento de ligação ao antígeno compreende uma região de cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:143. Em certas modalidades, o anticorpo ou seu fragmento de ligação ao antígeno compreende uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:142. Em outras modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende: (a) uma cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 143; e (b) uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 142.

[0018] Em algumas modalidades, o anticorpo ou seu fragmento de ligação ao antígeno compreende uma região de cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:200. Em algumas modalidades, o anticorpo ou seu fragmento de ligação ao antígeno compreende uma região de cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:202. Em algumas modalidades, o anticorpo ou seu fragmento de ligação ao antígeno compreende uma região de cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:143. Em algumas modalidades, o anticorpo ou seu fragmento de ligação ao antígeno compreende uma região de cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:208. Em algumas modalidades, o anticorpo ou seu fragmento de ligação ao antígeno compreende uma região de cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:209. Em algumas modalidades, o anticorpo ou seu fragmento de ligação ao antígeno compreende uma região de cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:210. Em certas modalidades, o anticorpo ou seu fragmento de ligação ao antígeno compreende uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:212. Em certas modalidades, o anticorpo ou seu fragmento de ligação ao antígeno compreende uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:213. Em certas modalidades, o anticorpo ou seu fragmento de ligação ao antígeno compreende uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:214. Em certas modalidades, o anticorpo ou seu fragmento de ligação ao antígeno compreende uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:215. Em certas modalidades, o anticorpo ou seu fragmento de ligação ao antígeno compreende uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:216. Em certas modalidades, o anticorpo ou seu fragmento de ligação ao antígeno compreende uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:217. Em certas modalidades, o anticorpo ou seu fragmento de ligação ao antígeno compreende uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:218. Em certas modalidades, o anticorpo ou seu fragmento de ligação ao antígeno compreende uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:219. Em certas modalidades, o anticorpo ou seu fragmento de ligação ao antígeno compreende uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:220. Em certas modalidades, o anticorpo ou seu fragmento de ligação ao antígeno compreende uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:221. Em certas modalidades, o anticorpo ou seu fragmento de ligação ao antígeno compreende uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:142. Em certas modalidades, o anticorpo ou seu fragmento de ligação ao antígeno compreende uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:204. Em certas modalidades, o anticorpo ou seu fragmento de ligação ao antígeno compreende uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:222. Em certas modalidades, o anticorpo ou seu fragmento de ligação ao antígeno compreende uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:223. Em certas modalidades, o anticorpo ou seu fragmento de ligação ao antígeno compreende uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:207. Em certas modalidades, o anticorpo ou seu fragmento de ligação ao antígeno compreende uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:117. Em certas modalidades, o anticorpo ou seu fragmento de ligação ao antígeno compreende uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:110. Em certas modalidades, o anticorpo ou seu fragmento de ligação ao antígeno compreende uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:148.

[0019] Em outras modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende: (a) uma cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 200; e (b) uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 212. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende: (a) uma cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 200; e (b) uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 213. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende: (a) uma cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 200; e (b) uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 214. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende: (a) uma cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 200; e (b) uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 215. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende: (a) uma cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 200; e (b) uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 216. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende: (a) uma cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 202; e (b) uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 217. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende: (a) uma cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 202; e (b) uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 218. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende: (a) uma cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 143; e (b) uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 219. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende: (a) uma cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 143; e (b) uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 220. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende: (a) uma cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 143; e (b) uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 221. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende: (a) uma cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 143; e (b) uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 142. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende: (a) uma cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 143; e (b) uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 204. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende: (a) uma cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 143; e (b) uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 222. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende: (a) uma cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 200; e (b) uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 223. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende: (a) uma cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 200; e (b) uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 207. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende: (a) uma cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 208; e (b) uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 117. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende: (a) uma cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 209; e (b) uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 110. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende: (a) uma cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 210; e (b) uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 148.

[0020] Em certas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende: (a) uma cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NOS: 143, 200, 202, 208, 209 e 210; e (b) uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NOS: 212, 213, 214, 215, 216, 217, 218, 219, 220, 221, 142, 204, 222, 223, 207, 117, 110, 148, 119, 98, 120, 112, 205, 106, 118 e 111.

[0021] Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, quando ligado à SIRPα, se liga a pelo menos um dos resíduos 67-98 dentro de uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 146. Em certas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, quando ligado à SIRPα, se liga a pelo menos um dos resíduos 67-74 dentro de uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:146. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, quando ligado à SIRPα, se liga a pelo menos um dos resíduos 93-98 dentro de uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 146. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, quando ligado à SIRPα, se liga a pelo menos um dos resíduos 30-93 dentro de uma sequência de aminoácidos de

SEQ ID NO: 146.

[0022] Em modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, quando ligado à SIRPα, se liga a pelo menos um resíduo selecionado do grupo que consiste em L30, I36, Q52, T67, R69, F74, K93, R95, K96 e S98 dentro de uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 146. Em algumas modalidades, o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, quando ligado à SIRPα, liga-se a L30 dentro de uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:146. Em algumas modalidades, o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, quando ligado à SIRPα, liga-se a I36 dentro de uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:146. Em algumas modalidades, o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, quando ligado à SIRPα, liga-se a Q52 dentro de uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:146. Em algumas modalidades, o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, quando ligado à SIRPα, liga-se a T67 dentro de uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:146. Em algumas modalidades, o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, quando ligado à SIRPα, liga-se a R69 dentro de uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:146. Em algumas modalidades, o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, quando ligado à SIRPα, liga-se a F74 dentro de uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:146. Em algumas modalidades, o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, quando ligado à SIRPα, liga-se a K93 dentro de uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:146. Em algumas modalidades, o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, quando ligado à SIRPα, liga-se a R95 dentro de uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:146. Em algumas modalidades, o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, quando ligado à SIRPα, liga-se a K96 dentro de uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:146. Em algumas modalidades, o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, quando ligado à SIRPα, liga-se a S98 dentro de uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:146. Em algumas modalidades, o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, quando ligado à SIRPα, liga-se a T67, R69, R95, K96 e S98 dentro de uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:146.

[0023] Em certas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo reduz a ligação entre SIRPα e CD47. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo reduz a ligação entre SIRPα e CD47, em que o SIRPα compreende um haplótipo no domínio IgV selecionado do grupo consiste em SEQ ID NOS: 149, 150, 151, 152, 153, e 154. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo reduz a ligação de CD47 a cada um dos 6 haplótipos SIRPα, em que os 6 haplótipos SIRPα consistem em SIRPα v1, SIRPα v2, SIRPα v3, SIRPα v4, SIRPα v5 e SIRPα v6, e em que SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO: 149 no domínio IgV, SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO: 150 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO: 151 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO: 152 no domínio IgV, SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO: 153 no domínio IgV, e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO: 154 no domínio IgV.

[0024] Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo reduz a ligação entre SIRPα e CD47, em que a redução na ligação de CD47-SIRPα é de 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% ou 99%.

[0025] Em certas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo reduz a ligação entre SIRPα e CD47, em que o EC50 do anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo para reduzir a ligação de CD47-SIRPα é de cerca de 1 pM a cerca de 10 pM, de cerca de 10 pM a cerca de 100 pM, de cerca de 100 pM a cerca de 1 nM, de cerca de 1 nM a cerca de 10 nM, ou de cerca de 10 nM a cerca de 100 nM. Em outras modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo reduz a ligação entre SIRPα e CD47, em que o EC50 do anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo para reduzir a ligação de CD47-SIRPα é cerca de 2 nM, cerca de 2,1 nM, cerca de 2,2 nM, cerca de 2,3 nM, cerca de 2,4 nM, cerca de 2,5 nM, cerca de 2,6 nM, cerca de 2,7 nM, cerca de 2,8 nM, cerca de 2,9 nM, cerca de 3 nM, cerca de 3,1 nM, cerca de 3,2 nM, cerca de 3,3 nM, cerca de 3,4 nM, cerca de 3,5 nM, cerca de 3,6 nM, cerca de 3,7 nM, cerca de 3,8 nM, cerca de 3,9 nM, cerca de 4,0 nM, cerca de 4,1 nM, cerca de 4,2 nM, cerca de 4,3 nM, cerca de 4,4 nM, cerca de 4,5 nM, cerca de 4,6 nM, cerca de 4,7 nM, cerca de 4,8 nM, cerca de 4,9 nM, cerca de 5,0 nM, cerca de 5,1 nM, cerca de 5,2 nM, cerca de 5,3 nM, cerca de 5,4 nM, cerca de 5,5 nM, cerca de 5,6 nM, cerca de 5,7 nM, cerca de 5,8 nM, cerca de 5,9 nM, ou cerca de 6,0 nM.

[0026] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento atinge cerca de 100% ou cerca de ou pelo menos 95%, 90%, 85%, 80% ou 75% de ocupação do receptor SIRPα em cerca de 24 horas após a administração em um paciente. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-SIRPα ou seu fragmento de ligação ao antígeno fornecido neste documento atinge cerca de ou pelo menos 95% de ocupação do receptor SIRPα em cerca de 6, 12, 24, 36, 48, 60 ou 72 horas após a administração a um paciente. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento atinge cerca de ou pelo menos 90% de ocupação do receptor SIRPα em cerca de 6, 12, 24, 36, 48, 60, ou 72 horas após a administração em um paciente. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-SIRPα ou seu fragmento de ligação ao antígeno fornecido neste documento atinge cerca de ou pelo menos 85% de ocupação do receptor SIRPα em cerca de 6, 12, 24, 36, 48, 60 ou 72 horas após a administração a um paciente. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-SIRPα ou seu fragmento de ligação ao antígeno fornecido neste documento atinge cerca de ou pelo menos 80% de ocupação do receptor SIRPα em cerca de 6, 12, 24, 36, 48, 60, ou 72 horas após a administração em um paciente.

Em algumas modalidades, o anticorpo anti-SIRPα ou seu fragmento de ligação ao antígeno fornecido neste documento atinge cerca de ou pelo menos 75% de ocupação do receptor SIRPα em cerca de 6, 12, 24, 36, 48, 60 ou 72 horas após a administração a um paciente.

Em algumas modalidades, o anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno fornecido neste documento atinge cerca de 100% de ocupação do receptor SIRPα em cerca de 24 horas após a administração em um paciente e mantém cerca de 100% de ocupação por cerca de ou pelo menos 6, 12, 24, 36, 48, 60, 72, 84 ou 96 horas a mais.

Em algumas modalidades, o anticorpo anti-SIRPα ou seu fragmento de ligação ao antígeno fornecido neste documento atinge cerca de ou pelo menos 95% de ocupação do receptor SIRPα em cerca de 24 horas após a administração em um paciente e mantém cerca de ou pelo menos 95% de ocupação por cerca ou pelo menos 6, 12, 24, 36, 48, 60, 72, 84 ou 96 horas a mais.

Em algumas modalidades, o anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno fornecido neste documento atinge cerca de 90% de ocupação do receptor SIRPα em cerca de 24 horas após a administração em um paciente e mantém cerca de ou pelo menos 90% de ocupação por cerca de ou pelo menos 6, 12, 24, 36, 48, 60, 72, 84 ou 96 horas a mais.

Em algumas modalidades, o anticorpo anti-SIRPα ou seu fragmento de ligação ao antígeno fornecido neste documento atinge cerca de ou pelo menos 85% de ocupação do receptor SIRPα em cerca de 24 horas após a administração em um paciente e mantém cerca de ou pelo menos 85% de ocupação por cerca ou pelo menos 6, 12, 24, 36, 48, 60, 72, 84 ou 96 horas a mais.

Em algumas modalidades, o anticorpo anti-SIRPα ou seu fragmento de ligação ao antígeno fornecido neste documento atinge cerca de ou pelo menos 80% de ocupação do receptor SIRPα em cerca de 24 horas após a administração em um paciente e mantém cerca de ou pelo menos 80% de ocupação por cerca ou pelo menos 6, 12, 24, 36, 48, 60, 72, 84 ou 96 horas a mais.

Em algumas modalidades, o anticorpo anti-SIRPα ou seu fragmento de ligação ao antígeno fornecido neste documento atinge cerca de ou pelo menos 100%, cerca de ou pelo menos 95%, cerca de ou pelo menos 90%, cerca de ou pelo menos 85%, ou cerca de ou pelo menos 80% de ocupação do receptor SIRPα em cerca de 24 horas após a administração em um paciente e mantém cerca de ou pelo menos 80% de ocupação por cerca de ou pelo menos 6, 12, 24, 36, 48, 60, 72, 84 ou 96 horas a mais.

Em algumas modalidades, o anticorpo anti-SIRPα ou seu fragmento de ligação ao antígeno fornecido neste documento atinge cerca de 100%, cerca de ou pelo menos 95%, cerca de ou pelo menos 90%, cerca de ou pelo menos 85%, ou cerca de ou pelo menos 80% de ocupação do receptor SIRPα em cerca de 24 após a administração a um paciente e mantém cerca de ou pelo menos 95%, cerca de ou pelo menos 90%, cerca de ou pelo menos 85%, ou cerca de ou pelo menos 80% de ocupação por cerca de ou pelo menos 6, 12, 24, 36, 48, 60, 72, 84 ou 96 horas a mais.

Em algumas modalidades, o anticorpo anti-SIRPα ou seu fragmento de ligação ao antígeno fornecido neste documento atinge cerca de ou pelo menos 100%, cerca de ou pelo menos 95%, cerca de ou pelo menos 90%, cerca de ou pelo menos 85%, ou cerca de ou pelo menos 80% de ocupação do receptor SIRPα em cerca de 24 horas após a administração em um paciente e mantém cerca de ou pelo menos 80% de ocupação por cerca de ou pelo menos 24 horas a mais.

Em algumas modalidades, o anticorpo anti-SIRPα ou seu fragmento de ligação ao antígeno fornecido neste documento atinge cerca de ou pelo menos 100%, cerca de ou pelo menos 95%, cerca de ou pelo menos 90%, cerca de ou pelo menos 85%, ou cerca de ou pelo menos 80% de ocupação do receptor SIRPα em cerca de 24 horas após a administração em um paciente e mantém cerca de ou pelo menos

80% de ocupação por mais 24 horas.

Em algumas modalidades, o anticorpo anti- SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno fornecido neste documento atinge cerca de 100% de ocupação do receptor SIRPα em cerca de 24 horas após a administração em um paciente e mantém cerca de 80% de ocupação por cerca de ou pelo menos 24 horas a mais.

Em algumas modalidades, o anticorpo anti- SIRPα ou seu fragmento de ligação ao antígeno fornecido neste documento atinge cerca de ou pelo menos 95% de ocupação do receptor SIRPα em cerca de 24 horas após a administração em um paciente e mantém cerca de ou pelo menos 80% de ocupação por cerca ou pelo menos 24 horas a mais.

Em algumas modalidades, o anticorpo anti-SIRPα ou seu fragmento de ligação ao antígeno fornecido neste documento atinge cerca de ou pelo menos 90% de ocupação do receptor SIRPα em 24 horas após a administração em um paciente e mantém cerca de ou pelo menos 80% de ocupação por cerca ou pelo menos 24 horas a mais.

Em algumas modalidades, o anticorpo anti-SIRPα ou seu fragmento de ligação ao antígeno fornecido neste documento atinge cerca de ou pelo menos 85% de ocupação do receptor SIRPα em cerca de 24 horas após a administração em um paciente e mantém cerca de ou pelo menos 80% de ocupação por cerca ou pelo menos 24 horas a mais.

Em algumas modalidades, o anticorpo anti-SIRPα ou seu fragmento de ligação ao antígeno fornecido neste documento atinge cerca de ou pelo menos 80% de ocupação do receptor SIRPα em cerca de 24 horas após a administração em um paciente e mantém cerca de ou pelo menos 80% de ocupação por cerca de ou pelo menos 24 horas a mais.

Em algumas modalidades, a ocupação do receptor divulgada nesse parágrafo pode ser alcançada e/ou mantida como fornecido nesse parágrafo com uma dose única de 0,1 mg/kg, 0,2 mg/kg, 0,3 mg/kg, 0,4 mg/kg, 0,5 mg/kg, 0,6 mg/kg, 0,7 mg/kg, 0,8 mg/kg, 0,9 mg/kg, 1,0 mg/kg, 1,1 mg/kg, 1,2 mg/kg, 1,3 mg/kg, 1,4 mg/kg, 1,5 mg/kg, 1,6 mg/kg, 1,7 mg/kg, 1,8 mg/kg, 1,9 mg/kg, 2,0 mg/kg, 2,1 mg/kg,

2,2 mg/kg, 2,3 mg/kg, 2,4 mg/kg, 2,5 mg/kg, 2,6 mg/kg, 2,7 mg/kg, 2,8 mg/kg, 2,9 mg/kg ou 3,0 mg/kg de um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento. Em algumas modalidades, a ocupação do receptor divulgada nesse parágrafo pode ser alcançada e/ou mantida como fornecido nesse parágrafo com uma dose única de 25 mg, 30 mg, 40 mg, 50 mg, 60 mg, 70 mg, 80 mg, 90 mg, 100 mg, 150 mg, 200 mg, 250 mg, 300 mg, 350 mg, 400 mg, 450 mg, 500 mg, 550 mg, 600 mg, 650 mg, 700 mg, 750 mg, 800 mg, 850 mg, 900 mg, 950 mg, 1000 mg, 1050 mg, 1100 mg, 1150 mg, 1200 mg, 1250 mg, 1300 mg, 1350 mg, 1400 mg, 1450 mg, 1500 mg, 1550 mg, 1600 mg, 1650 mg, 1700 mg, 1750 mg, 1800 mg, 1850 mg, 1900 mg, 1950 mg, 2000 mg, 2100 mg, 2200 mg, 2300 mg, 2400 mg, 2500 mg, 2600 mg, 2700 mg, 2800 mg, 2900 mg, 3000 mg, 3100 mg, 3200 mg, 3300 mg, 3400 mg, 3500 mg, 3600 mg, 3700 mg, 3800 mg, 3900 mg ou 4000 mg de um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento.

[0027] Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno especificamente liga a um ou mais dos 6 haplótipos SIRPα, em que os 6 haplótipos SIRPα consistem em SIRPα v1, SIRPα v2, SIRPα v3, SIRPα v4, SIRPα v5 e SIRPα v6, e em que SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO: 149 no domínio IgV, SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO: 150 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO: 151 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO: 152 no domínio IgV, SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO: 153 no domínio IgV, e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO: 154 no domínio IgV. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo se liga a cada um dos 6 haplótipos SIRPα. Em outras modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo se liga a cada um dos 6 haplótipos SIRPα com uma constante de dissociação (KD) de não mais do que 5 nM.

[0028] Em certas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo se liga ao SIRPα v1 purificado com um KD de não mais do que 0,2 nM. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo se liga ao SIRPα v1 purificado com uma constante de dissociação (KD) de cerca de 0,13 nM. Em certas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo se liga ao SIRPα v2 purificado com um KD de não mais do que 5 nM. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo se liga ao SIRPα v2 purificado com um KD de cerca de 4,4 nM. Em certas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo se liga ao SIRPα v3 purificado com um KD de não mais do que 0,2 nM. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo se liga ao SIRPα v3 purificado com um KD de cerca de 0,15 nM. Em certas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo se liga ao SIRPα v4 purificado com um KD de não mais do que 2 nM. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo se liga ao SIRPα v4 purificado com um KD de cerca de 1,5 nM. Em certas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo se liga ao SIRPα v5 purificado com um KD de não mais do que 0,7 nM. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo se liga ao SIRPα v5 purificado com um KD de cerca de 0,6 nM. Em certas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo se liga ao SIRPα v6 purificado com um KD de não mais do que 0,2 nM. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo se liga ao SIRPα v6 purificado com um KD de cerca de 0,18 nM.

[0029] Em outras modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo se liga à SIRPα humana expresso em uma célula com um EC50 de cerca de 1 pM a cerca de 10 pM, de cerca de 10 pM a cerca de 100 pM, de cerca de 100 pM a cerca de 1 nM, de cerca de 1 nM a cerca de 10 nM, ou de cerca de 10 nM a cerca de 100 nM. Em certas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo se liga à SIRPα humana expresso em uma célula com um EC50 de cerca de 2 nM, cerca de 2,1 nM, cerca de 2,2 nM, cerca de 2,3 nM, cerca de 2,4 nM, cerca de 2,5 nM, cerca de 2,6 nM, cerca de 2,7 nM, cerca de 2,8 nM, cerca de 2,9 nM, cerca de 3 nM, cerca de 3,1 nM, cerca de 3,2 nM, cerca de 3,3 nM, cerca de 3,4 nM, cerca de 3,5 nM, cerca de 3,6 nM, cerca de 3,7 nM, cerca de 3,8 nM, cerca de 3,9 nM, cerca de 4,0 nM, cerca de 4,1 nM, cerca de 4,2 nM, cerca de 4,3 nM, cerca de 4,4 nM, cerca de 4,5 nM, cerca de 4,6 nM, cerca de 4,7 nM, cerca de 4,8 nM, cerca de 4,9 nM, cerca de 5,0 nM, cerca de 5,1 nM, cerca de 5,2 nM, cerca de 5,3 nM, cerca de 5,4 nM, cerca de 5,5 nM, cerca de 5,6 nM, cerca de 5,7 nM, cerca de 5,8 nM, cerca de 5,9 nM ou cerca de 6,0 nM.

[0030] Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo se liga especificamente à SIRPα humana e/ou SIRPα de macaco, mas não ao SIRPα de roedor. Em certas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo se liga à SIRPα de cinomolgo (cyno) expressa em uma célula com um EC50 de cerca de 1 pM a cerca de 10 pM, de cerca de 10 pM a cerca de 100 pM, de cerca de 100 pM a cerca de 1 nM, de cerca de 1 nM a cerca de 10 nM, ou de cerca de 10 nM a cerca de 100 nM. Em certas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo se liga à SIRPα humana expresso em uma célula com um EC50 de cerca de 2 nM, cerca de 2,1 nM, cerca de 2,2 nM, cerca de 2,3 nM, cerca de 2,4 nM, cerca de 2,5 nM, cerca de 2,6 nM, cerca de 2,7 nM, cerca de 2,8 nM, cerca de 2,9 nM, cerca de 3 nM, cerca de 3,1 nM, cerca de 3,2 nM, cerca de 3,3 nM, cerca de 3,4 nM, cerca de 3,5 nM, cerca de 3,6 nM, cerca de 3,7 nM, cerca de 3,8 nM, cerca de 3,9 nM, cerca de 4,0 nM, cerca de 4,1 nM, cerca de 4,2 nM, cerca de 4,3 nM, cerca de 4,4 nM, cerca de 4,5 nM, cerca de 4,6 nM, cerca de 4,7 nM, cerca de 4,8 nM, cerca de 4,9 nM, cerca de 5,0 nM, cerca de 5,1 nM, cerca de 5,2 nM, cerca de 5,3 nM, cerca de 5,4 nM, cerca de 5,5 nM, cerca de 5,6 nM, cerca de 5,7 nM, cerca de 5,8 nM, cerca de 5,9 nM ou cerca de 6,0 nM.

[0031] Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo aumenta a fagocitose de células cancerosas por macrófagos cocultivados em comparação com macrófagos não tratados ou por macrófagos tratados com um anticorpo isotipo de controle. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo aumenta a fagocitose de células cancerosas por macrófagos cocultivados em comparação com macrófagos não tratados ou por macrófagos tratados com um anticorpo isotipo de controle, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é usado como um único agente terapêutico.

[0032] Em certas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo aumenta a fagocitose de células cancerosas por macrófagos cocultivados em comparação com macrófagos não tratados ou por macrófagos tratados com um anticorpo de isotipo de controle, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é usado em combinação com um segundo agente terapêutico. Em algumas modalidades, o segundo agente terapêutico é cetuximabe ou rituximabe. Em uma modalidade, o segundo agente terapêutico é o cetuximabe. Em outra modalidade, o segundo agente terapêutico é rituximabe.

[0033] Em certas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo aumenta a fagocitose de células cancerosas por macrófagos cocultivados em comparação com macrófagos não tratados ou por macrófagos tratados com um anticorpo de isotipo de controle, em que SIRPα é expresso no macrófago, nas células cancerosas, ou ambos nos macrófagos e nas células cancerosas. Em algumas modalidades, o SIRPα no macrófago e/ou nas células cancerosas é um ou mais dos 6 haplótipos SIRPα, em que os 6 haplótipos SIRPα consistem em SIRPα v1, SIRPα v2, SIRPα v3, SIRPα v4, SIRPα v5 e SIRPα v6, e em que SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO: 149 no domínio IgV, SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO: 150 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO: 151 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO: 152 no domínio IgV, SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO: 153 no domínio IgV, e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO: 154 no domínio IgV.

[0034] Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo aumenta uma porcentagem mínima de macrófagos fagocitóticos em uma população de macrófagos para cerca de 10%, 20%, 30%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% ou 99%. Em outras modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo aumenta a fagocitose do macrófago em cerca de 10%, 20%, 30%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 100%, 125%, 150%, 175%, 200%, 250%, 300%, 400%, 500%, 600%, 700%, 800%, 900% ou 1000%, em comparação com macrófagos não tratados ou macrófagos tratados com um anticorpo isotipo de controle.

[0035] Em certas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo aumenta a fagocitose de células cancerosas por macrófagos cocultivados em comparação com macrófagos não tratados ou por macrófagos tratados com um anticorpo de isotipo de controle, em que as células cancerosas são de câncer colorretal, carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço, leucemia mieloide aguda ou linfoma difuso de grandes células B (DLBCL). Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo aumenta a fagocitose de células cancerosas por macrófagos cocultivados em comparação com macrófagos não tratados ou por macrófagos tratados com um anticorpo isotipo de controle, em que as células cancerosas são de linfoma não-Hodgkin (NHL), como DLBCL, linfoma folicular, linfoma de zona marginal e linfoma de células do manto. Em outras modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo aumenta a fagocitose de células cancerosas por macrófagos cocultivados em comparação com macrófagos não tratados ou por macrófagos tratados com um anticorpo de isotipo de controle, em que as células cancerosas são de Linfoma folicular de grau 1, Linfoma folicular de grau 2, Linfoma folicular de grau 3a, linfoma folicular de grau 3b, linfoma folicular recorrente (incluindo, por exemplo, grau 1, 2, 3a e 3b), linfoma folicular refratário (incluindo, por exemplo, grau 1, 2, 3a e 3b), DLBCL recidivante ou DLBCL refratário.

[0036] Em certas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo sinergiza com um segundo agente terapêutico no aumento da fagocitose de células cancerosas por macrófagos cocultivados em comparação com macrófagos não tratados ou por macrófagos tratados com um anticorpo de isotipo de controle. Em algumas modalidades, o segundo agente terapêutico é cetuximabe ou rituximabe. Em uma modalidade, o segundo agente terapêutico é o cetuximabe. Em outra modalidade, o segundo agente terapêutico é rituximabe.

[0037] Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo sinergiza com um segundo agente terapêutico no aumento da fagocitose de células cancerosas por macrófagos cocultivados em comparação com macrófagos não tratados ou por macrófagos tratados com um anticorpo de isotipo de controle, em que SIRPα é expresso no macrófago, nas células cancerosas, ou tanto no macrófago quanto nas células cancerosas. Em algumas modalidades, o SIRPα no macrófago e/ou nas células cancerosas é um ou mais dos 6 haplótipos SIRPα, em que os 6 haplótipos SIRPα consistem em SIRPα v1, SIRPα v2, SIRPα v3, SIRPα v4, SIRPα v5 e SIRPα v6, e em que SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO: 149 no domínio IgV, SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO: 150 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO: 151 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO: 152 no domínio IgV, SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO: 153 no domínio IgV, e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO: 154 no domínio IgV.

[0038] Em certas modalidades, a diferença entre a porcentagem dos macrófagos fagocitóticos induzidos sinergicamente e a soma da porcentagem fagocitótica induzida pelo anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno e o segundo agente terapêutico separadamente é de cerca de 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65% ou 70%. Em outras modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno e o segundo agente terapêutico aumentam sinergicamente a porcentagem dos macrófagos fagocitóticos sobre a soma da porcentagem fagocitótica induzida pelo anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno e o segundo agente terapêutico separadamente em cerca de 10%, 20%, 30%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 100%, 125%, 150%, 175%, 200%, 250%, 300% ou 400%.

[0039] Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno e o segundo agente terapêutico aumentam sinergicamente a fagocitose de células cancerosas, em que as células cancerosas são de câncer colorretal, carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço, leucemia mieloide aguda ou DLBCL. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno e o segundo agente terapêutico aumentam sinergicamente a fagocitose de células cancerosas, em que as células cancerosas são de NHL, como DLBCL, linfoma folicular, linfoma de zona marginal e linfoma de células do manto. Em outras modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno e o segundo agente terapêutico aumentam sinergicamente a fagocitose de células cancerosas, em que as células cancerosas são de linfoma folicular de grau 1, linfoma folicular de grau 2, linfoma folicular de grau 3a, linfoma folicular de grau 3b, linfoma folicular recidivo (incluindo, por exemplo, grau 1, 2, 3a e 3b), linfoma folicular refratário (incluindo, por exemplo, grau 1, 2, 3a e 3b), DLBCL recidivante ou DLBCL refratário.

[0040] Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo tem atividade ADCC atenuada em comparação com um anticorpo isotipo de controle, atividade ADCP atenuada em comparação com um anticorpo de controle de isotipo, e/ou atividade CDC atenuada em comparação com um anticorpo isotipo de controle. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo tem atividade ADCC atenuada em comparação com um anticorpo de controle de isotipo. Em certas modalidades, a atividade ADCC máxima do anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo não é mais do que cerca de 5%, 10%, 20%, 30% ou 40% de citotoxicidade, conforme medido pela porcentagem de células alvo mortas. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo tem atividade ADCP atenuada em comparação com um anticorpo de controle de isotipo. Em outras modalidades, a atividade máxima de ADCP do anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo não é mais do que cerca de 5%, 10%, 20% ou 30% dos macrófagos fagocitóticos que alvejam células T autólogas e/ou monócitos. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo tem atividade CDC atenuada em comparação com um anticorpo de controle de isotipo. Em outra modalidade, o EC50 do anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo em um ensaio de CDC é de pelo menos 100 µM.

[0041] Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo não induz a liberação de citocina mais do que um nível de liberação de citocina induzida por um anticorpo de controle de isotipo.

[0042] Em algumas modalidades, é fornecido neste documento um anticorpo. Em outras modalidades, é fornecido neste documento um fragmento de ligação ao antígeno do anticorpo.

[0043] Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é um anticorpo monoclonal. Em certas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é um anticorpo humanizado, humano ou quimérico. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é um anticorpo desimunizado ou um anticorpo humano composto. Em outras modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é um Fab, um Fab', um F(ab')2, um Fv, um scFv, um dsFv, um diacorpo, um triacorpo, um tetracorpo ou um anticorpo multiespecífico formada a partir de fragmentos de anticorpos.

[0044] Em certas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é conjugado a um agente. Em algumas modalidades, o agente conjugado ao anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é selecionado do grupo que consiste em um radioisótopo, um quelante de metal, uma enzima, um composto fluorescente, um composto bioluminescente e um composto quimioluminescente.

[0045] Em outro aspecto, é fornecida neste documento uma composição que compreende um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento, e um carreador farmaceuticamente aceitável.

[0046] Em um aspecto, é fornecido neste documento um polinucleotídeo compreendendo sequências de ácido nucleico que codificam um anticorpo fornecido neste documento. Em algumas modalidades, é fornecido neste documento um polinucleotídeo compreendendo sequências de ácido nucleico que codificam um fragmento de ligação ao antígeno de um anticorpo fornecido neste documento.

[0047] Em outro aspecto, é fornecido neste documento um polinucleotídeo compreendendo sequências de ácido nucleico que codificam um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga à SIRPα, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende: (a) VL CDR1, VL CDR2 e VL CDR3 de qualquer um dos anticorpos SIRPAB-11, SIRPAB-12, SIRPAB-1, SIRPAB-2, SIRPAB-3, SIRPAB-4, SIRPAB-5, SIRPAB-6, SIRPAB-7, SIRPAB- 8, SIRPAB-9, SIRPAB-10 ou SIRPAB-13 conforme estabelecido na Tabela 1; e/ou (b) VH CDR1, VH CDR2 e VH CDR3 de qualquer um dos anticorpos SIRPAB-11, SIRPAB-12, SIRPAB-1, SIRPAB-2, SIRPAB-3, SIRPAB-4, SIRPAB-5, SIRPAB-6, SIRPAB-7, SIRPAB-8, SIRPAB-9, SIRPAB-10, SIRPAB-12 ou SIRPAB-13 conforme estabelecido na Tabela 2. Em algumas modalidades, é fornecido neste documento um polinucleotídeo compreendendo sequências de ácido nucleico que codificam um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga ao SIRPα, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende: (a) VL compreendendo ainda um VL FR1, VL FR2, VL FR3 e VL FR4 de qualquer um dos anticorpos SIRPAB-11, SIRPAB -12, SIRPAB-1, SIRPAB- 2, SIRPAB-3, SIRPAB-4, SIRPAB-5, SIRPAB-6, SIRPAB-7, SIRPAB-8, SIRPAB-9, SIRPAB-10 ou SIRPAB-13 conforme estabelecido na Tabela 3; e/ou (b) um VH FR1, VH FR2, VH FR3 e VH FR4 de qualquer um dos anticorpos SIRPAB-11, SIRPAB-12, SIRPAB-1, SIRPAB-2, SIRPAB-3, SIRPAB-4, SIRPAB-5, SIRPAB-6, SIRPAB-7, SIRPAB-8, SIRPAB-9, SIRPAB-10 ou SIRPAB-13 conforme estabelecido na Tabela 4.

[0048] Em ainda outro aspecto, é fornecido neste documento um polinucleotídeo compreendendo sequências de nucleotídeos que codificam um VH, um VL ou ambos um VH e um VL do anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento. Em algumas modalidades, o polinucleotídeo compreende sequências de nucleotídeos que codificam uma cadeia pesada, uma cadeia leve ou uma cadeia pesada e uma cadeia leve de um anticorpo fornecido neste documento. Em certas modalidades, o polinucleotídeo está operativamente ligado a um promotor.

[0049] Em alguns aspectos, é fornecido neste documento um vetor que compreende o polinucleotídeo divulgado neste documento.

[0050] Em outros aspectos, é fornecida neste documento uma célula que compreende o polinucleotídeo divulgado neste documento. Em outro aspecto, é fornecida neste documento uma célula que compreende um vetor divulgado neste documento. Em outras modalidades, a divulgação fornece uma célula isolada que produz o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento.

[0051] Em alguns aspectos, a divulgação também fornece um kit compreendendo o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento.

[0052] Em um aspecto, é fornecido neste documento um método para fazer um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento que se liga especificamente a um epítopo de SIRPα humana, compreendendo a cultura de uma célula fornecida neste documento para expressar o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo. Em algumas modalidades, o método de produção de um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende a expressão do polinucleotídeo fornecido neste documento.

[0053] Em outro aspecto, é fornecido neste documento um método para aumentar a fagocitose por um macrófago, em que o método compreende o contato do macrófago com uma quantidade eficaz de um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno fornecido neste documento, em que a fagocitose por um macrófago é aumentada em comparação com por macrófagos não tratados ou por macrófagos tratados com um anticorpo de isotipo de controle. Em certas modalidades dos métodos, a atividade fagocitótica pelo macrófago é aumentada em cerca de 10%, 20%, 30%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 100%, 125%, 150%, 175%, 200%, 250%, 300%, 400%, 500%, 600%, 700%, 800%, 900% ou 1000%.

[0054] Em outro aspecto, é fornecido neste documento um método para aumentar uma porcentagem de macrófagos fagocitóticos em uma população de macrófagos, em que o método compreende o contato dos macrófagos com uma quantidade eficaz de um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno descrito neste documento, em que a porcentagem de macrófagos fagocitóticos em uma população de macrófagos é aumentada em comparação com macrófagos não tratados ou macrófagos tratados com um anticorpo de isotipo de controle. Em algumas modalidades do método, a porcentagem mínima de macrófagos fagocitóticos na população de macrófagos é aumentada para cerca de 10%, 20%, 30%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% ou 99%.

[0055] Em um aspecto, é fornecido neste documento um método para aumentar a fagocitose de células cancerosas por uma população de macrófagos, em que o método compreende o contato das células cancerosas, dos macrófagos ou de ambas as células cancerosas e os macrófagos com uma quantidade eficaz de um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento, em que a fagocitose de células cancerosas por uma população de macrófagos é aumentada em comparação com macrófagos não tratados ou por macrófagos tratados com um anticorpo de isotipo de controle. Em certas modalidades dos métodos de aumento da fagocitose de células cancerosas por uma população de macrófagos, a porcentagem mínima de macrófagos fagocitóticos na população de macrófagos é aumentada para cerca de 10%, 20%, 30%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% ou 99%.

[0056] Em algumas modalidades dos métodos, a fagocitose por macrófagos é medida por cocultura de macrófagos marcados com um primeiro corante fluorescente e células cancerosas marcadas com um segundo corante fluorescente, em que o primeiro corante fluorescente e o segundo corante fluorescente são diferentes. Em certas modalidades dos métodos, a porcentagem de macrófagos fagocitóticos é medida pela determinação da porcentagem de macrófagos que compreendem células cancerosas.

[0057] Em outro aspecto, é fornecido neste documento um método para aumentar a fagocitose de células cancerosas em um sujeito, em que o método compreende a administração de uma quantidade eficaz de um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno fornecido neste documento ao sujeito, pelo que a fagocitose de células cancerosas em um sujeito é aumentada em comparação com aquele em um sujeito não tratado ou em um sujeito tratado com um anticorpo de controle de isotipo.

[0058] Em certo aspecto, é fornecido neste documento um método para aumentar a eliminação de células cancerosas por fagocitose em um sujeito, em que o método compreende a administração de uma quantidade eficaz de um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno fornecido neste documento ao sujeito.

[0059] Em algum aspecto, a divulgação também fornece um método de direcionamento de células cancerosas para imunodepleção em um sujeito, em que o método compreende a administração de uma quantidade eficaz de um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno fornecido neste documento ao sujeito.

[0060] Em um aspecto adicional, a divulgação também fornece um método de tratamento de um câncer em um sujeito, em que o método compreende a administração de uma quantidade eficaz de um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno fornecido neste documento ao sujeito.

[0061] Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, o câncer é selecionado do grupo que consiste em câncer colorretal, carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço, leucemia mieloide aguda e DLBCL. Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, o câncer é NHL, como DLBCL, linfoma folicular, linfoma de zona marginal e linfoma de células do manto. Em certas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, o câncer é selecionado do grupo que consiste em linfoma folicular de grau 1, linfoma folicular de grau 2, linfoma folicular de grau 3a, linfoma folicular de grau 3b, linfoma folicular recidivante (incluindo, por exemplo, grau 1, 2, 3a e 3b), linfoma folicular refratário (incluindo, por exemplo, grau 1, 2, 3a e 3b), DLBCL recidivante ou DLBCL refratário. Em outras modalidades dos métodos, as células cancerosas, os macrófagos ou ambas as células cancerosas e os macrófagos nos métodos expressam SIRPα.

[0062] Em certas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, as células cancerosas, os macrófagos ou ambas as células cancerosas e os macrófagos expressam SIRPα, em que SIRPα é um ou mais dos 6 haplótipos SIRPα selecionados do grupo que consiste em SIRPα v1, SIRPα v2, SIRPα v3, SIRPα v4, SIRPα v5 e SIRPα v6. Em certas modalidades, o SIRPα v1 compreende SEQ ID NO: 149 no domínio IgV. Em algumas modalidades, o SIRPα v2 compreende a SEQ ID NO: 150 no domínio IgV. Em uma modalidade, o SIRPα v3 compreendeu a SEQ ID NO: 151 no domínio IgV. Em outras modalidades, o SIRPα v4 compreende a SEQ ID NO: 152 no domínio IgV. Em algumas modalidades, o SIRPα v5 compreende a SEQ ID NO: 153 no domínio IgV. Em outras modalidades, o SIRPα v6 compreende a SEQ ID NO: 154 no domínio IgV.

[0063] Em outras modalidades dos métodos fornecidos neste documento,

o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é coadministrado com um segundo agente terapêutico. Em algumas modalidades dos métodos, o segundo agente terapêutico é cetuximabe ou rituximabe. Em uma modalidade, o segundo agente terapêutico é o cetuximabe. Em outra modalidade, o segundo agente terapêutico é rituximabe.

[0064] Em certas modalidades dos métodos fornecidos neste documento, o sujeito é selecionado do grupo que consiste em um humano, um macaco, um camundongo, um cão e um rato. Em uma modalidade específica, o sujeito é um humano.

3. BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS

[0065] A FIG. 1 mostra um resumo de um esquema de geração, triagem, identificação e maturação de afinidade de anticorpo anti-SIRPα.

[0066] A FIG. 2 mostra a identificação dos polimorfismos SIRPα mais prevalentes em torno da interface CD47:SIRPα. DLN = os polimorfismos SIRPα mais prevalentes em torno da interface CD47:SIRPα. Os resíduos de aminoácidos em vermelho correspondem às diferenças identificadas cobrindo aproximadamente 95% dos polimorfismos SIRPα na interface de ligação CD47- SIRPα na população humana.

[0067] A FIG. 3 mostra a ligação de células de camundongo positivas para CD11b com vários anticorpos SIRPα, demonstrando que os anticorpos SIRPAB- 11 e SIRPAB-12 não se ligam à SIRPα de camundongo; enquanto o SIRPAB-17 se liga ao SIRPα de camundongo.

[0068] As FIGS. 4A-4D mostram a ligação de SIRPAB-11 a células humanas e de macaco cinomolgo SIRPα superexpressando células de ovário-K1 de hamster chinês, mas não a células de roedor que superexpressam SIRPα, e a determinação de EC50 de ligação de SIRPAB-11. (A) EC50 de ligação de SIRPAB-11- K322A à SIRPα humana expressa ectopicamente em células CHO é de 2,06 nM.

(B) EC50 de ligação de SIRPAB-11-K322A à SIRPα de cyno ectopicamente expressa em células CHO é 1,9 nM. (C) SIRPAB-11 não se liga à SIRPα-CHO-K1 de rato, uma vez que a ligação de SIRPAB-11 à SIRPα-CHO-K1 de rato está apenas em um nível comparável ao de um controle de isotipo IgG; enquanto o controle positivo, anticorpo anti-SIRPα de rato OX-41, demonstra ligação robusta no mesmo ensaio. (D) SIRPAB-11 não se liga à SIRPα-CHO-K1 de camundongo, uma vez que a ligação de SIRPAB-11 à SIRPα-CHO-K1 de camundongo está apenas em um nível comparável ao de um controle de isotipo IgG; enquanto o controle positivo, anticorpo anti-SIRPα de camundongo P84, demonstra ligação robusta no mesmo ensaio. AF647 = Alexa Fluor 647 nm; CHO = ovário de hamster chinês; cyno = macaco cinomolgo; MFI geométrica = intensidade de fluorescência geométrica média; K322A = imunoglobulina G1 com Lys322Ala.

[0069] As FIGS. 5A-5F mostram a ligação de anticorpos anti-SIRPα a células que expressam SIRPα. (A) Ligação (manifestada como cocoloração) de população primária humana (esquerda) e cinomolgo (direita) positiva para CD14 com SIRPAB-11-K322A. (B) Perfil de ligação de SIRPAB-11-K322A em subconjuntos de células imunes humanas em células mononucleares de sangue periférico humano mostrado como nível de ligação de SIRPAB-11-K322A a várias células imunes, conforme indicado. AF647 = Alexa Fluor 647 nM; gMFI = intensidade de fluorescência geométrica média; ID = identificação; Células NK = células assassinas naturais; Células NKT = células T assassinas naturais. (C) Ensaios de ligação adicionais de subconjuntos de células imunes humanas primárias com SIRPAB-11-K322A. (D) Ensaios de ligação de subconjuntos de células imunes de cinomolgo primárias com SIRPAB-11-K322A. Em (C) e (D), gMFI = intensidade fluorescente geométrica média; mDC = células dendríticas mieloides; NK = assassino natural; ns = não significativo; PBMC = célula mononuclear de sangue periférico. (E) Ligação do anticorpo SIRPAB-11-4PE com dois doadores cinomolgos e o EC50 de SIRPAB-11-4PE para ligação aos dois doadores cinomolgos. (F) Ligação e afinidade de SIRPAB-17, SIRPAB-19, SIRPAB-20, SIRPAB-21 e SIRPAB-18 para células que expressam SIRPα. SIRPAB-19, SIRPAB- 20 e SIRPAB-21 ligam-se ao SIRPα de camundongo com a maior afinidade. A ligação de controles de anticorpos isotípicos também foi realizada como um controle negativo.

[0070] As FIGS. 6A-6B mostram que o anticorpo anti-SIRPα bloqueia a ligação entre SIRPα e CD47. (A) O valor EC50 de SIRPAB-11-K322A no bloqueio da interação entre domínio extracelular CD47 e SIRPα conforme determinado em Biacore. CD = cluster de diferenciação; nM = nanomolar; RU = unidade de refração. (B) Atividade de bloqueio de anticorpos anti-SIRPα de camundongo contra a ligação entre os macrófagos CD47 e C57/BL6 de camundongo recombinante.

[0071] As FIGS. 7A-7B mostram a estrutura cristalina de SIRPAB-11-Fab ligado ao domínio SIRPα 1. (A) A estrutura cristalina de SIRPAB-11-Fab ligado ao domínio SIRPα 1 e os resíduos em SIRPα que interage com SIRPAB-11-Fab. HC = cadeia pesada; LC = cadeia leve. A HC SIRPAB-11-Fab (colorido em azul) do SIRPAB-11-Fab medeia a maioria das interações (linhas pontilhadas em amarelo) com SIRPα (colorido em magenta) e exibe uma HC CDR3 centralmente localizada (seta preta) que se projeta da superfície do fragmento de ligação ao antígeno e se insere no bolso grande do SIRPα. Três principais interações eletrostáticas são observadas e indicadas por asteriscos pretos. Interações adicionais também são observadas entre LC SIRPAB-11-Fab (colorido em cinza) e SIRPα. (B) Comparação dos locais de interação SIRPAB-11-Fab e CD47 em SIRPα. Fab = fragmento de ligação ao antígeno; HC = cadeia pesada. A HC CDR3 do SIRPAB-11-Fab (desenho azul) ocupa o mesmo bolso principal no SIRPα (superfícies magenta e laranja) reconhecido pela alça CD47 F-G (desenho amarelo). O LC de SIRPAB-11-Fab é omitido para maior clareza.

[0072] A FIG. 8 mostra o crescimento celular e o título para a produção de SIRPAB-11-K322A em células de ovário de hamster chinês Expi.

[0073] As FIGS. 9A-9K mostram atividade de citotoxicidade celular dependente de anticorpo, atividade dependente de complemento e atividade de fagocitose celular dependente de anticorpo de SIRPAB-11-K322A. (A) SIRPAB- 11 não induziu citotoxicidade celular dependente de anticorpo da linha celular MOLM-13 humana que expressa SIRPα. ADCC = citotoxicidade celular dependente de anticorpos; G&P = G&P Biosciences; HuMy 9,6 = anticorpo monoclonal humanizado 9,6; IgG1 = imunoglobulina G1; K322A = imunoglobulina G1 com Lys322Ala, MOLM-13 = linha celular de leucemia mieloide aguda. (B) O tratamento com SIRPAB-11-K322A não induziu citotoxicidade celular dependente de anticorpos contra células T CD4 positivas autólogas no estado não ativado. (C) O tratamento com SIRPAB-11-K322A não induziu citotoxicidade celular dependente de anticorpo contra células T CD4 positivas autólogas em estado ativado. (D) O tratamento com SIRPAB-11-K322A não causou citotoxicidade celular dependente de anticorpos contra células T CD8 positivas autólogas no estado não ativado. (E) O tratamento com SIRPAB-11- K322A não causou citotoxicidade celular dependente de anticorpo contra células T CD8 positivas autólogas em estado ativado. (F) e (G) Tratamento com SIRPAB- 11-K322A não induziu citotoxicidade celular dependente de anticorpos contra monócitos autólogos, conforme medido por citometria de fluxo (F) e por citometria fluorescente Mirrorball (G). Em (B) a (G), Ab = anticorpo; ADCC = citotoxicidade celular dependente de anticorpos; CD = cluster de diferenciação; Fc = fragmento cristalizável; IgG = imunoglobulina; K322A = imunoglobulina G1 com Lys322Ala; Máx = máximo; NK = células assassinas naturais. (H) e (I) Ausência de atividade dependente do complemento mediada por variantes cristalizáveis do fragmento SIRPAB-11 na presença de soro do complemento de coelho. IgG1 = imunoglobulina G1; 4PE = imunoglobulina G4 com mutações Ser228Pro e Leu235Glu; mAb = anticorpo monoclonal; RLU = unidade de luz relativa; SIRPα = proteína reguladora de sinal alfa. (J) Fagocitose de macrófagos de células T autólogas do Doador 224. (K) Fagocitose de macrófagos de células T autólogas do Doador 224. Em (J) e (K), CD = cluster de diferenciação; IgG1 = imunoglobulina G1; K322A = imunoglobulina G1 com Lys322Ala; 4PE = imunoglobulina G4 com mutações Ser228Pro e Leu235Glu; SIRPα = proteína reguladora de sinal alfa.

[0074] FIGS. 10A-10B show analysis of antibody immunogenicity. (A) EpiMatrix Antibody Immunogenicity Scale, observed ADA responses in known antibodies, and predicted ADA responses in submitted VH/VL pairs of SIRPAB- 11-K322A and à SIRPα reference antibody that has a light chain of an amino acid sequence of SEQ ID NO:224 and a heavy chain of an amino acid sequence of SEQ ID NO:225. Todas as previsões são ajustadas para a presença de Tregitopes. (B) Predição de imunogenicidade de anticorpo SIRPAB-11-K322A.

[0075] As FIGS. 11A-11J mostram o perfil de liberação de citocinas de células imunes humanas tratadas com SIRPAB-11. (A) a (I) Amostra de dados de ensaio de liberação de citocina para células tratadas com SIRPAB-11-K322A, incluindo interleucina 1β (A), interleucina 6 (B) e fator de necrose tumoral alfa (TNFα) (C), interleucina 12p70 (D), fator de estimulador de colônia de granulócitos macrófagos (GM-CSF) (E), interleucina 2 (F), interferon gama (IFN- γ) (G), interleucina 10 (H) e interleucina 8 (I). Em (A) a (I), IgG1 = imunoglobulina G1; IL = interleucina; PBMC = célula mononuclear de sangue periférico. (J) Resumo dos dados de liberação de citocinas de células tratadas com SIRPAB-11- K322A e a análise estatística relacionada.

[0076] As FIGS. 12A-12H mostram o perfil de liberação de citocinas em

PBMC tratadas com SIRPAB-11 com ou sem estimulação adicional. (A) e (B) SIRPAB-11-K322A não induziu interleucina-1β em células mononucleares de sangue periférico com (B) ou sem (A) estimulação de lipopolissacarídeo. Em (A) e (B), IgG1 = imunoglobulina G1; IL-1β = Interleucina 1β; LPS = lipopolissacarídeo; K322A = imunoglobulina G1 com Lys322Ala. (C) Resultados detalhados de (A) e (B). (D), (E) e (F) O tratamento de SIRPAB-11-K322A não alterou o nível de interferon γ em células mononucleares do sangue periférico com 1 ng/ml (E), com 100 ng/ml (F), ou sem (D) estimulação da enterotoxina b estafilocócica. Em (D), (E) e (F), IgG1 = imunoglobulina G1; IFN-γ = interferon gama; K322A = imunoglobulina G1 com Lys322Ala; SEB = Enterotoxina estafilocócica B. (G) e (H) Resultados detalhados de (E) e (F), respectivamente.

[0077] As FIGS. 13A-13I mostram a atividade de SIRPAB-11 no aumento da fagocitose tumoral, sozinho ou em combinação com um segundo anticorpo. (A) a (C) Níveis de superfície de SIRPα (A), CD47 (B) e EGFR (C) das quatro linhas celulares de câncer colorretal mutantes KRAS resistentes a cetuximabe por coloração com SIRPAB-11-IgG4PE, anti-CD47 e anti-EGFR. (D) a (F) Avaliação da fagocitose tumoral mediada por SIRPAB-11-K322A sozinho ou em combinação com cetuximabe em quatro linhas celulares de câncer colorretal mutantes KRAS, incluindo GP5d (D), GP2d (E) e SW480 (F). Em (D) a (F), CD = cluster de diferenciação; IgG1 = imunoglobulina G1; K322A = imunoglobulina G1 com uma mutação de lisina para alanina na posição 322. (G) e (H) Efeito da concentração de cetuximabe na fagocitose de linhas celulares GP2d de câncer colorretal mutante KRAS (G) e GP5d (H). (I) Avaliação da fagocitose de carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço FaDu mediada por SIRPAB-11-K322A em combinação com cetuximabe. CD = cluster de diferenciação; FaDu = linha de células de carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço; IgG1 = imunoglobulina G1.

[0078] A FIG. 14 mostra a avaliação da fagocitose de células DLBCL mediada por SIRPAB-11-K322A em combinação com rituximabe ou SIRPAB-11-4PE em combinação com rituximabe. IgG1 = imunoglobulina G1; K322A = imunoglobulina G1 com Lys322Ala; OCI-LY3 = linha celular DLBCL.

[0079] As FIGS. 15A-15F mostram o efeito das variantes SIRPAB-11 Fc como um único agente na fagocitose de células humanas e o efeito das variantes SIRPAB-11 Fc na fagocitose de macrófago de camundongo ou cinomolgo. (A) Efeito de SIRPAB-11-K322A e SIRPAB-11-IgG4PE como um único agente na promoção da atividade de fagocitose direcionada à linha de células de leucemia mieloide aguda MOLM-13. (B) Efeito de SIRPAB-11-K322A e SIRPAB-11-IgG4PE como um único agente na promoção da atividade de fagocitose direcionada à linha de células de leucemia mieloide aguda OCI-AML2. (C) Efeito de SIRPAB-11- K322A e SIRPAB-11-IgG4PE como um único agente na promoção da atividade de fagocitose direcionada à linha de células de leucemia mieloide aguda MV-4-11. (D) Efeito de SIRPAB-11-K322A e SIRPAB-11-IgG4PE como um único agente na promoção da atividade de fagocitose direcionada ao xenoenxerto P1202 derivado de paciente com leucemia mieloide aguda. (E) Efeito de SIRPAB-11- K322A e SIRPAB-11-IgG4PE como um agente único na promoção da atividade de fagocitose direcionada ao xenoenxerto P5478 derivado de paciente com leucemia mieloide aguda. Em (A) a (E), CD = cluster de diferenciação; IgG = imunoglobulina G1; K322A = imunoglobulina G1 com Lys322Ala; 4PE = imunoglobulina G4 com mutações Ser228Pro e Leu235Glu; OCI-AML2 = linha celular de leucemia mieloide aguda (AML). (F) Efeito de SIRPAB-11-K322A como um único agente na promoção da atividade de fagocitose de macrófagos cinomolgos direcionados à linha de células de leucemia mieloide aguda OCI- AML2. CD = cluster de diferenciação; Hr = hora; IgG = imunoglobulina G1; K322A = imunoglobulina G1 com Lys322Ala; NS = não significativo.

[0080] As FIGS. 16A-16C mostram a expressão de superfície de (A) SIRPα, (B) CD20 e (C) CD47 em células OCI-LY3, RIVA, Karpas 422 e Pfeiffer. Nas FIGS. 16A-16C, AF647 = Alexa Fluor 647; Geo MFI = média geométrica de intensidade de fluorescência; IgG1 = imunoglobulina G1; e RSV = vírus sincicial respiratório.

[0081] As FIGS. 17A-17C mostram estudos adicionais de fagocitose de 3 células DLBCL mediadas por SIRPAB-11-K322A em combinação com rituximabe. São ilustrados os efeitos de SIRPAB-11-K322A como um agente único ou em combinação com rituximabe na promoção da atividade de fagocitose direcionada a (A) células OCI-LY3, (B) células RIVA, e (C) células Karpas 422. IgG1 K322A = imunoglobulina G1 com Lys322Ala; nM = nanomolar; RSV = vírus sincicial respiratório.

[0082] As FIGS. 18A-18D mostram estudos adicionais de fagocitose de células de Pfeiffer mediada por SIRPAB-11-K322A em combinação com rituximabe. São ilustrados os efeitos de SIRPAB-11-K322A como um agente único ou em combinação com rituximabe na promoção da atividade de fagocitose direcionada a células Pfeiffer usando macrófagos de (A) doador 1, (B) doador 2, (C) doador 3 e (D) doador 4. IgG1 K322A = imunoglobulina G1 com Lys322Ala; nM = nanomolar; RSV = vírus sincicial respiratório.

[0083] As FIGS. 19A-19B mostram o projeto e validação do ensaio de ocupação do receptor SIRPα. (A) Representação esquemática do ensaio de ocupação do receptor SIRPα, conforme descrito na Seção 5.13. (B) Gráficos de pontos FACS mostrando a validação do ensaio, com coloração SIRPAB-11-K322A mostrada no painel esquerdo superior, coloração anti-SIRPα-29 mostrada no painel direito superior, um gráfico de pontos exemplificativo de nenhuma ocupação de receptor mostrado no painel esquerdo inferior, e um gráfico de pontos exemplificativo de ocupação completa do receptor mostrado no painel inferior direito.

4. DESCRIÇÃO DETALHADA

[0084] Proteínas de ligação, tais como anticorpos que se ligam à SIRPα, incluindo SIRPα humana e/ou de cyno, são fornecidas neste documento. Em algumas modalidades, as proteínas de ligação fornecidas neste documento, como anticorpos que se ligam à SIRPα humana e/ou de cinomolgo (cyno), não se ligam à SIRPα de roedor. Em certas modalidades, as proteínas de ligação à SIRPα, incluindo anticorpos divulgados neste documento, são antagonistas (por exemplo, podem bloquear a ligação do ligante SIRPα e bloquear a sinalização SIRPα induzida por ligante). Em algumas modalidades, as proteínas de ligação, tais como anticorpos para SIRPα fornecidos neste documento (i) se ligam à SIRPα humana e/ou de cyno, (ii) competem pela ligação com o ligante SIRPα (por exemplo, CD47), e/ou (iii) bloqueiam a sinalização de SIRPα. Em uma modalidade, os anticorpos SIRPα se ligam à SIRPα humana. Em uma modalidade, os anticorpos SIRPα se ligam à SIRPα de cyno. Em uma modalidade, os anticorpos SIRPα se ligam tanto à SIRPα humana quanto à SIRPα de cyno. Em algumas modalidades, os anticorpos SIRPα competem com CD47 pela ligação à SIRPα. Em outras modalidades, os anticorpos SIRPα bloqueiam a sinalização SIRPα. Em ainda outra modalidade, os anticorpos SIRPα bloqueiam a sinalização de SIRPα que é induzida por CD47.

[0085] Em algumas modalidades, os anticorpos SIRPα fornecidos neste documento se ligam à SIRPα humana e SIRPα de cyno. Em modalidades específicas, os anticorpos SIRPα fornecidos neste documento se ligam a cada um de pelo menos 6 haplótipos SIRPα incluindo SIRPα v1, SIRPα v2, SIRPα v3, SIRPα v4, SIRPα v5 e SIRPα v6. Em outras modalidades específicas, os anticorpos SIRPα fornecidos neste documento se ligam a pelo menos um dos 6 haplótipos SIRPα incluindo SIRPα v1, SIRPα v2, SIRPα v3, SIRPα v4, SIRPα v5 e SIRPα v6. Em outra modalidade específica, os anticorpos SIRPα fornecidos neste documento se ligam a haplótipos SIRPα no domínio IgV cobrindo não menos do que 95% do polimorfismo SIRPα da população humana. Em algumas modalidades, a ligação, competição e/ou sinalização é ensaiada in vitro, por exemplo, em um ensaio baseado em células. Em outras modalidades, a ligação, competição e/ou sinalização é ensaiada ex vivo, por exemplo, em um ensaio de fagocitose de macrófago. Noutras modalidades, a ligação, competição e/ou sinalização é ensaiada utilizando uma amostra de um sujeito (por exemplo, um sujeito humano). Em certas modalidades, os ensaios incluem (1) um ensaio de fagocitose de macrófagos humanos ou de cyno (ver, por exemplo, Exemplo 9); (2) um ensaio de ligação competitiva baseado em células (ver, por exemplo, Exemplo 2); (3) um ensaio de ligação competitiva de ressonância plasmônica de superfície (SPR) (ver, por exemplo 2). Em certas modalidades, proteínas de ligação, como anticorpos anti-SIRPα, conforme descrito neste documento, bloqueiam atividades de CD47 que são consistentes com a função biológica natural de CD47, incluindo as atividades induzidas por ligação de CD47 e SIRPα. Em algumas modalidades, as atividades de bloqueio de anticorpos anti-SIRPα são exibidas in vitro. Em outras modalidades, as atividades de bloqueio dos anticorpos anti-SIRPα são exibidas ex vivo.

[0086] Em algumas modalidades da presente divulgação, um anticorpo anti-SIRPα induz não mais do que ou induz um nível comparável de citocinas (por exemplo IL-1β, IL-2, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12p70, TNFα, interferon gama e fator estimulador de colônia de granulócitos macrófagos) em comparação com um controle de anticorpo de isotipo negativo. Em algumas modalidades específicas, os níveis de citocinas (por exemplo IL-1β, IL-2, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12p70, TNFα, interferon gama e fator estimulador de colônia de granulócito macrófago) induzido por anticorpos anti-SIRPα fornecidos neste documento estão dentro de 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 vezes os níveis de citocinas daqueles induzidos por um controle de anticorpo de isotipo negativo. Em certas modalidades, o anticorpo de controle de isotipo negativo é cetuximabe.

[0087] Em algumas modalidades, as proteínas de ligação, como anticorpos que se ligam à SIRPα, fornecidas neste documento aumentam a fagocitose de células cancerosas por macrófagos cocultivados e/ou aumentam a porcentagem de macrófagos fagocitóticos em uma população de macrófagos cocultivados com células cancerosas. Em outras modalidades, as proteínas de ligação, tais como anticorpos que se ligam à SIRPα, fornecidas neste documento aumentam a fagocitose de células cancerosas por macrófagos em um sujeito, e/ou aumentam a porcentagem de macrófagos fagocitóticos em uma população de macrófagos em um sujeito com câncer.

[0088] Em modalidades específicas, as proteínas de ligação, tais como anticorpos que se ligam à SIRPα, fornecidos neste documento compartilham a característica comum de competir entre si pela ligação de SIRPα. Esta inibição competitiva pode indicar que cada anticorpo se liga à mesma região de SIRPα (por exemplo, o mesmo epítopo), afirmando assim efeitos semelhantes. Em certas modalidades, os anticorpos anti-SIRPα fornecidos neste documento incluem anticorpos anti-SIRPα humanas, tais como SIRPAB-1, SIRPAB-2, SIRPAB- 3, SIRPAB-4, SIRPAB-5, SIRPAB-6, SIRPAB-7, SIRPAB-8, SIRPAB-9, SIRPAB-10, SIRPAB-11, SIRPAB-12 ou SIRPAB-13, ou aqueles derivados de ou baseados nestes anticorpos. Em outras modalidades, os anticorpos anti-SIRPα fornecidos neste documento competem pela ligação com um anticorpo que é, ou derivado de, ou baseado em SIRPAB-1, SIRPAB-2, SIRPAB-3, SIRPAB-4, SIRPAB-5, SIRPAB- 6, SIRPAB-7, SIRPAB-8, SIRPAB-9, SIRPAB-10, SIRPAB-11, SIRPAB-12 ou SIRPAB-

13. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-SIRPα têm sequências de CDR conforme descrito nas Tabelas 1-2. Em certas modalidades, os anticorpos anti- SIRPα se ligam a um domínio específico ou epítopo de SIRPα humana (por exemplo, resíduos 67-98, 67-74, 93-98 ou 30-93 de SEQ ID NO: 146; ver Exemplo 3). Além disso, essa ligação pode ser amplamente atribuída a resíduos de aminoácidos específicos dentro da região (por exemplo, T67, R69, R95, K96 e S98; ver Exemplo 3), que compreendem o epítopo reconhecido pelos anticorpos anti-SIRPα descritos neste documento. Tomados em conjunto, os resultados descritos neste documento demonstram que os efeitos observados para um anticorpo anti-SIRPα que é, é derivado de, ou é baseado em SIRPAB-11, incluindo um anticorpo tendo um ou mais CDRs descritos nas Tabelas 1-2, podem ser extrapolados para outros anticorpos anti-SIRPα descritos neste documento tendo a mesma especificidade de epítopo ou similar (por exemplo, CDRs iguais ou semelhantes). Por exemplo, as atividades dos anticorpos como mostrado nos Exemplos 2, 3, 9, 10, 11 e 12, para um anticorpo anti-SIRPα humanizado exemplificativo, são representativas das atividades e efeitos dos anticorpos anti- SIRPα descritos neste documento.

[0089] Em algumas modalidades da presente divulgação, as proteínas de ligação, como anticorpos anti-SIRPα, podem compreender regiões variáveis de imunoglobulina que compreendem uma ou mais CDRs, conforme descrito nas Tabelas 1-2. Em tais proteínas de ligação (por exemplo, anticorpos anti-SIRPα), os CDRs podem ser unidos com uma ou mais regiões de andaime ou regiões de estrutura (FRs), que orienta(m) o(s) CDR(s) de modo que as propriedades de ligação ao antígeno adequadas do(s) CDR(s) é alcançado. Essas proteínas de ligação, incluindo anticorpos anti-SIRPα como descritos neste documento, podem bloquear ou inibir a ligação de CD47 à sinalização de SIRPα induzida por SIRPα e CD47.

4.1 Técnicas Gerais

[0090] As técnicas e procedimentos descritos ou referenciados neste documento incluem aqueles que são geralmente bem compreendidos e/ ou comumente empregados usando metodologia convencional por aqueles versados na técnica, tais como, por exemplo, as metodologias amplamente utilizadas descritas em Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual (3d ed. 2001); Current Protocols in Molecular Biology (Ausubel et al. Eds., 2003); Therapeutic Monoclonal Antibodies: From Bench to Clinic (An ed. 2009); Monoclonal Antibodies: Methods and Protocols (Albitar ed. 2010); e Antibody Engineering Vols 1 e 2 (Kontermann e Dübel eds., 2d ed. 2010).

4.2 Terminologia

[0091] A menos que descrito de outra forma, todos os termos técnicos e científicos usados neste documento têm o mesmo significado que é comumente entendido por um versado na técnica. Para fins de interpretação desta especificação, a seguinte descrição de termos será aplicada e, sempre que apropriado, os termos usados no singular também incluirão o plural e vice-versa. Todas as patentes, pedidos, pedidos publicados e outras publicações são incorporadas por referência em suas totalidades. No caso de qualquer descrição dos termos estabelecidos entrar em conflito com qualquer documento incorporado neste documento por referência, a descrição do termo estabelecido abaixo deverá prevalecer.

[0092] Os termos "SIRPa" "SIRPα" "Proteína SIRPα," "polipeptídeo SIRPα," "SIRPA," "SIRP-A," "SIRP-alfa," ou "SIRPalpha" (também conhecido como BIT, MFR, MYD1, P84, PTPNS1, SHPS1, CD172a) destina-se a significar um polipeptídeo ("polipeptídeo" e "proteína" são usados indistintamente neste documento), que é um membro da família semelhante a imunoglobulina (semelhante a Ig) e que em humanos é codificado pelo gene da proteína alfa reguladora de sinal no cromossomo humano 20p13. Exemplos de SIRPα englobam qualquer polipeptídeo nativo de qualquer fonte de vertebrados, incluindo mamíferos, como primatas (por exemplo, humanos e macacos cinomolgos (cynos)), cães e roedores (por exemplo, camundongos e ratos), a menos que indicado de outra forma. Em certas modalidades, os termos incluem "polipeptídeos SIRPα relacionados", incluindo suas variantes SNP. O termo "SIRPα" também abrange SIRPα "de comprimento total" não processado, bem como qualquer forma de SIRPα que resulte do processamento na célula. Em algumas modalidades, o SIRPα humana tem uma sequência de aminoácidos de

EEELQVIQPDKSVLVAAGETATLRCTATSLIPVGPIQWFRGAGPGRELIYNQKEGHFPRVT TVSDLTKRNNMDFSIRIGNITPADAGTYYCVKFRKGSPDDVEFKSGAGTELSVRAKPSAPV VSGPAARATPQHTVSFTCESHGFSPRDITLKWFKNGNELSDFQTNVDPVGESVSYSIHST AKVVLTREDVHSQVICEVAHVTLQGDPLRGTANLSETIRVPPTLEVTQQPVRAENQVNVT CQVRKFYPQRLQLTWLENGNVSRTETASTVTENKDGTYNWMSWLLVNVSAHRDDVKL TCQVEHDGQPAVSKSHDLKVSAHPKEQGSNTAAENTGSNERNIYIVVGVVCTLLVALLM

AALYLVRIRQKKAQGSTSSTRLHEPEKNAREITQDTNDITYADLNLPKGKKPAPQAAEPNN HTEYASIQTSPQPASEDTLTYADLDMVHLNRTPKQPAPKPEPSFSEYASVQVPRK (SEQ ID NO:146). Em outras modalidades, o SIRPα tem uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 145, que é a SEQ ID NO: 146 com um peptídeo sinal exemplificativo. Sequência de Referência NCBI NP_001035111.1, NP_001035112.1, NP_001317657.1, NP_542970.1, XP_005260727.1, XP_024307604.1, XP_006723608.1, e XP_011527475.1, e UniProtKB: P78324 fornece outras sequências de aminoácidos SIRPα exemplificativas. Número de acesso GENBANK 140885, Sequências de referência NCBI NM_001040022.1, NM_001040023.1, NM_001330728.1, NM_080792.2, XM_005260670.3, XM_024451836.1, XM_006723545.4 e XM_011529173.2 sequência de ácido nucleico SIRPα humano exemplar. Em algumas modalidades, a SIRPα de cinomolgo inclui ou tem da sequência de

MEPAGPAPGRLGPLLCLLLTASCAWSGVLGEEELQVIQPEKSVSVAAGESATLNCTATSLI PVGPIQWFRGVGPGRELIYSQKEGHFPRVTPVSDPTKRNNMDFSIRISNITPADAGTYYC VKFRKGSPDVELKSGAGTELSVRAKPSAPVVSGPAVRATAEHTVSFTCESHGFSPRDITLK WFKNGNELSDFQTNVDPAGKSVSYSIRSTARVVLTRRDVHSQVICEVAHVTLQGDPLRG TANLSEAIRVPPFLEVTQQSMRADNQVNVTCQVTKFYPQRLQLTWLENGNVSRTEMAS

ALPENKDGTYNWTSWLLVNVSAHRDDVKLTCQVEHDGQPAVNKSFSVKVSAHPKEQG SNTAAENTGTNERNIY (SEQ ID NO:115). Em certas modalidades, a SIRPα de camundongo inclui ou tem a sequência de

MEPAGPAPGRLGPLLLCLLLSASCFCTGATGKELKVTQPEKSVSVAAGDSTVLNCTLTSLLP VGPIRWYRGVGPSRLLIYSFAGEYVPRIRNVSDTTKRNNMDFSIRISNVTPADAGIYYCVKF QKGSSEPDTEIQSGGGTEVYVLAKPSPPEVSGPADRGIPDQKVNFTCKSHGFSPRNITLK WFKDGQELHPLETTVNPSGKNVSYNISSTVRVVLNSMDVNSKVICEVAHITLDRSPLRGIA NLSNFIRVSPTVKVTQQSPTSMNQVNLTCRAERFYPEDLQLIWLENGNVSRNDTPKNLTK

NTDGTYNYTSLFLVNSSAHREDVVFTCQVKHDQQPAITRNHTVLGFAHSSDQGSMQTFP DNNATHNWN (SEQ ID NO:102). Em outras modalidades, a SIRPα de camundongo é a SIRPα de camundongo NOD/SCID, que inclui ou tem a sequência de

MEPAGPAPGRLGPLLLCLLLSASCFCTGATRTEVKVIQPEKSVSVAAGDSTVLNCTLTSLLP VGPIRWYRGVGQSRQLIYSFTTEHFPRVTNVSDATKRSNLDFSIRISNVTPEDAGTYYCVK FQRGSPDTEIQSGGGTEVYVLAKPSPPEVSGPADRGIPDQKVNFTCKSHGFSPRNITLKW FKDGQELHPLETTVNPSGKNVSYNISSTVRVVLNSMDVNSKVICEVAHITLDRSPLRGIAN LSNFIRVSPTVKVTQQSPTSMNQVNLTCRAERFYPEDLQLIWLENGNVSRNDTPKNLTKN

TDGTYNYTSLFLVNSSAHREDVVFTCQVKHDQQPAITRNHTVLGFAHSSDQGSMQTFPD NNATHNWN (SEQ ID NO: 100).

[0093] Tal como utilizado neste documento, o termo "domínio IgV", também conhecido como "domínio tipo V semelhante a Ig", "domínio V", "domínio IgSF N-terminal", "domínio SIRPα 1" ou "domínio V N-terminal, " quando usado em referência à SIRPα, destina-se a significar um polipeptídeo que em um polimorfismo humano tem os resíduos de aminoácidos de 1 a 107

(EEELQVIQPDKSVLVAAGETATLRCTATSLIPVGPIQWFRGAGPGRELIYNQKEGHFPRV TTVSDLTKRNNMDFSIRIGNITPADAGTYYCVKFRKGSPDDVEFKSG SEQ ID NO:203) de SIRPα humana que tem SEQ ID NO:146 e que tem a dobra Ig tipo V, e seu equivalente em outros polimorfismos SIRPα humanas e outros SIRPα de qualquer fonte de vertebrados, incluindo mamíferos como primatas (por exemplo, humanos e macacos cinomolgos (cynos)), cães e roedores (por exemplo, camundongos e ratos), exceto quando indicado o contrário.

[0094] Tal como utilizado neste documento, o termo "variante de SIRPα" pretende significar uma proteína SIRPα compreendendo um ou mais (tal como, por exemplo, cerca de 1 a cerca de 25, cerca de 1 a cerca de 20, cerca de 1 a cerca de 15, cerca de 1 a cerca de 10, ou cerca de 1 a cerca de 5) substituições, deleções e/ou adições de sequência de aminoácidos em comparação com uma sequência nativa ou não modificada. Por exemplo, uma variante de SIRPα pode resultar de um ou mais (tal como, por exemplo, cerca de 1 a cerca de 25, cerca de 1 a cerca de 20, cerca de 1 a cerca de 15, cerca de 1 a cerca de 10, ou cerca de 1 a cerca de 5) mudanças a uma sequência de aminoácidos de uma SIRPα nativa. As variantes SIRPα incluem variantes de SIRPα de ocorrência natural, incluindo variantes alélicas (por exemplo, variantes SNP); variantes de emenda; fragmentos; e homólogos interespécies, que retêm a atividade SIRPα. Como tal, as variantes SIRPα também abrangem SIRPα codificado pelo gene SIRPα, incluindo um ou mais polimorfismos de nucleotídeo único (SNPs), em humanos ou outras espécies, e "haplótipo SIRPα". Um "haplótipo SIRPα" refere-se a uma variante SIRPα com SNPs que tendem a ser herdados juntos. Assim, um "haplótipo SIRPα" é um polimorfismo do tipo SIRPα e pode incluir uma combinação de qualquer conjunto de polimorfismos de nucleotídeo único (SNPs) encontrados no gene SIRPα, em que o conjunto de SNPs tende a ser herdado em conjunto. Como aqueles versados na técnica apreciarão, um anticorpo anti-

SIRPα fornecido neste documento pode se ligar a uma variante de SIRPα, incluindo um haplótipo SIRPα. Conforme descrito mais abaixo, 6 haplótipos SIRPα no domínio IgV de SIRPα, incluindo SIRPα v1, SIRPα v2, SIRPα v3, SIRPα v4, SIRPα v5 e SIRPα v6, respondem por 95% dos polimorfismos nas regiões de ligação a CD47 de SIRPα na população humana. Estes 6 haplótipos SIRPα, SIRPα v1, SIRPα v2, SIRPα v3, SIRPα v4, SIRPα v5 e SIRPα v6, no domínio IgV compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 149, 150, 151, 152, 153 e 154, respectivamente, conforme mostrado na Tabela 5. Tabela 5: Haplótipos no domínio SIRPα IgV na interface de ligação SIRPα/CD47 Haplótipos no domínio SIRPα IgV Sequências na interface de ligação SIRPα/CD47 SIRPα v1 RELIYNQKEGHFPRVTTVSDLTKRNNMDFSI (SEQ ID NO:149) SIRPα v2 RELIYNQKEGHFPRVTTVSESTKRENMDFSI (SEQ ID NO:150) SIRPα v3 RELIYNQKEGHFPRVTTVSDLTKRENMDFSI (SEQ ID NO:151) SIRPα v4 RELIYNQKEGHFPRVTTVSESTKRKNMDFSI (SEQ ID NO:152) SIRPα v5 RELIYNQKEGHFPRVTTVSEPTKRNNMDFSI (SEQ ID NO:153) SIRPα v6 RELIYNQKEGHFPRVTTVSELTKRENMDFSI (SEQ ID NO:154)

[0095] "Polipeptídeos SIRPα relacionados" incluem variantes alélicas (por exemplo, variantes SNP); variantes de emenda; fragmentos; derivados; variantes de substituição, exclusão e inserção; polipeptídeos de fusão; e homólogos interespécies, que podem reter a atividade SIRPα. Como aqueles versados na técnica apreciarão, um anticorpo anti-SIRPα fornecido neste documento pode se ligar a um polipeptídeo SIRPα, um fragmento de polipeptídeo SIRPα, um antígeno SIRPα e/ou um epítopo SIRPα. Um "epítopo" pode ser parte de um antígeno SIRPα maior, que pode ser parte de um fragmento polipeptídico SIRPα maior, que, por sua vez, pode ser parte de um polipeptídeo SIRPα maior. SIRPα pode existir em uma forma nativa ou desnaturada. Os polipeptídeos SIRPα descritos neste documento podem ser isolados de uma variedade de fontes, tais como a partir de tipos de tecido humano ou a partir de outra fonte, ou preparados por métodos recombinantes ou sintéticos. Os ortólogos do polipeptídeo de SIRPα são também bem conhecidos na técnica.

[0096] As sequências de domínio extracelular SIRPα exemplificativas que compreendem um dos 6 haplótipos SIRPα (SIRPα v1, SIRPα v2, SIRPα v3, SIRPα v4, SIRPα v5 ou SIRPα v6) são mostradas na Tabela 6 abaixo. Tabela 6: Sequências de domínio extracelular SIRPα exemplificativas compreendendo um dos 6 haplótipos SIRPα. Sequências de domínio Sequências extracelular SIRPα

MEPAGPAPGRLGPLLCLLLAASCAWSGVAGEEELQVIQPDKSVLVA AGETATLRCTATSLIPVGPIQWFRGAGPGRELIYNQKEGHFPRVTT

VSDLTKRNNMDFSIRIGNITPADAGTYYCVKFRKGSPDDVEFKSGA SIRPα1

GTELSVRAKPSAPVVSGPAARATPQHTVSFTCESHGFSPRDITLKW FKNGNELSDFQTNVDPVGESVSYSIHSTAKVVLTREDVHSQVICEV AHVTLQGDPLRGTANLSETIRVPPTLEVTQQPVRAENQVNVTCQV

Sequências de domínio Sequências extracelular SIRPα

RKFYPQRLQLTWLENGNVSRTETASTVTENKDGTYNWMSWLLV

NVSAHRDDVKLTCQVEHDGQPAVSKSHDLKVSAHPKEQGSNTAA ENTGSNERNIY (SEQ ID NO:101)

MEPAGPAPGRLGPLLCLLLAASCAWSGVAGEEELQVIQPDKSVSVA AGESAILHCTVTSLIPVGPIQWFRGAGPARELIYNQKEGHFPRVTT VSESTKRENMDFSISISNITPADAGTYYCVKFRKGSPDTEFKSGAGT

ELSVRAKPSAPVVSGPAARATPQHTVSFTCESHGFSPRDITLKWFK SIRPα2 NGNELSDFQTNVDPVGESVSYSIHSTAKVVLTREDVHSQVICEVAH

VTLQGDPLRGTANLSETIRVPPTLEVTQQPVRAENQVNVTCQVRK FYPQRLQLTWLENGNVSRTETASTVTENKDGTYNWMSWLLVNV

SAHRDDVKLTCQVEHDGQPAVSKSHDLKVSAHPKEQGSNTAAEN TGSNERNIY (SEQ ID NO:103)

MEPAGPAPGRLGPLLCLLLAASCAWSGVAGEEELQVIQPDKSVLVA AGETATLRCTATSLIPVGPIQWFRGAGPGRELIYNQKEGHFPRVTT VSDLTKRENMDFSIRIGNITPADAGTYYCVKFRKGSPDDVEFKSGA

GTELSVRAKPSAPVVSGPAARATPQHTVSFTCESHGFSPRDITLKW SIRPα3 FKNGNELSDFQTNVDPVGESVSYSIHSTAKVVLTREDVHSQVICEV

AHVTLQGDPLRGTANLSETIRVPPTLEVTQQPVRAENQVNVTCQV RKFYPQRLQLTWLENGNVSRTETASTVTENKDGTYNWMSWLLV

NVSAHRDDVKLTCQVEHDGQPAVSKSHDLKVSAHPKEQGSNTAA ENTGSNERNIY (SEQ ID NO:105)

MEPAGPAPGRLGPLLCLLLAASCAWSGVAGEEELQVIQPDKSVLVA SIRPα4

AGETATLRCTATSLIPVGPIQWFRGAGPGRELIYNQKEGHFPRVTT

Sequências de domínio Sequências extracelular SIRPα

VSESTKRKNMDFSIRIGNITPADAGTYYCVKFRKGSPDDVEFKSGA GTELSVRAKPSAPVVSGPAARATPQHTVSFTCESHGFSPRDITLKW FKNGNELSDFQTNVDPVGESVSYSIHSTAKVVLTREDVHSQVICEV AHVTLQGDPLRGTANLSETIRVPPTLEVTQQPVRAENQVNVTCQV RKFYPQRLQLTWLENGNVSRTETASTVTENKDGTYNWMSWLLV

NVSAHRDDVKLTCQVEHDGQPAVSKSHDLKVSAHPKEQGSNTAA ENTGSNERNIY (SEQ ID NO:93)

MEPAGPAPGRLGPLLCLLLAASCAWSGVAGEEELQVIQPDKSVLVA AGETATLRCTATSLIPVGPIQWFRGAGPGRELIYNQKEGHFPRVTT VSEPTKRNNMDFSIRIGNITPADAGTYYCVKFRKGSPDDVEFKSGA

GTELSVRAKPSAPVVSGPAARATPQHTVSFTCESHGFSPRDITLKW SIRPα5 FKNGNELSDFQTNVDPVGESVSYSIHSTAKVVLTREDVHSQVICEV

NVSAHRDDVKLTCQVEHDGQPAVSKSHDLKVSAHPKEQGSNTAA ENTGSNERNIY (SEQ ID NO:95)

VSELTKRENMDFSIRIGNITPADAGTYYCVKFRKGSPDDVEFKSGA SIRPα6 GTELSVRAKPSAPVVSGPAARATPQHTVSFTCESHGFSPRDITLKW

FKNGNELSDFQTNVDPVGESVSYSIHSTAKVVLTREDVHSQVICEV AHVTLQGDPLRGTANLSETIRVPPTLEVTQQPVRAENQVNVTCQV RKFYPQRLQLTWLENGNVSRTETASTVTENKDGTYNWMSWLLV

Sequências de domínio Sequências extracelular SIRPα

NVSAHRDDVKLTCQVEHDGQPAVSKSHDLKVSAHPKEQGSNTAA ENTGSNERNIY (SEQ ID NO:97)

[0097] O termo "SIRPAB-11-K322A" refere-se à variante SIRPAB-11 com uma substituição K322A na região IgG1 Fc. Em certas modalidades, a variante SIRPα-K322A tem uma sequência de aminoácidos de cadeia pesada de HC_SIRPα-K322A (SEQ ID NO:119).

[0098] O termo "SIRPAB-11-AAS" refere-se à variante de SIRPAB-11 com uma região Fc de IgG1 AAS. Em certas modalidades, a variante do anticorpo anti- SIRPα tem uma sequência de aminoácidos de cadeia pesada de HC_SIRPAB-11- IgG1-AAS (SEQ ID NO:98).

[0099] O termo "SIRPAB-11-4PE" refere-se à variante de SIRPAB-11 com uma sequência de aminoácidos de cadeia pesada de IgG4PE como HC_SIRPAB- 11-IgG4PE (SEQ ID NO:120).

[00100] O termo "ligante SIRPα" refere-se a uma molécula que se liga à SIRPα, por exemplo, in vivo ou in vitro. Exemplos não limitativos de ligante SIRPα incluem ligantes de ocorrência natural, por exemplo, CD47, e ligantes gerados artificialmente.

[00101] O termo "CD47", também conhecido como "proteína associada à integrina", "IAP" ou "Cluster de Diferenciação 47" pretende significar uma proteína transmembrana que pertence à superfamília de imunoglobulinas e que em humanos é codificada pelo gene CD47 em cromossomos humanos 3. Exemplos de CD47 abrangem qualquer polipeptídeo nativo de qualquer fonte de vertebrados, incluindo mamíferos como primatas (por exemplo, humanos e macacos cinomolgos (cynos)), cães e roedores (por exemplo, camundongos e ratos), a menos que indicado de outra forma. Em certas modalidades, o termo inclui todas as variantes naturais de CD47, incluindo variantes alélicas (por exemplo, variantes SNP); variantes de emenda; fragmentos; e derivados. O termo "CD47" também abrange CD47 não processado de "comprimento total", bem como qualquer forma de CD47 que resulte do processamento na célula. Em algumas modalidades, o domínio extracelular de CD47 tem uma sequência de aminoácidos de

MYRMQLLSCIALSLALVTNSQLLFNKTKSVEFTFCNDTVVIPCFVTNMEAQNTTEVYVKW

KFKGRDIYTFDGALNKSTVPTDFSSAKIEVSQLLKGDASLKMDKSDAVSHTGNYTCEVTEL TREGETIIELKYRVV (SEQ ID NO:116). NCBI Sequências de Referência NP_001768.1, NP_942088.1, XP_005247966.1, XP_005247965.1 e XP_016863025.1, e banco de dados Uniprot UniProtKB-Q08722 fornece outras sequências de aminoácidos exemplificativas de CD47. GenBank ™ ID número 961, NCBI Reference Sequences NM_001777.3, NM_198793.2, XM_005247909.2, XM_005247908.2, e XM_017007536.1 fornecem exemplo de sequência de ácido nucleico de CD47 humano.

[00102] Conforme usado neste documento, o termo "antagonista", quando usado em referência à SIRPα ou uma função SIRPα, destina-se a significar uma molécula que é capaz de inibir, diminuir, atenuar, reduzir ou, de outra forma, bloquear completamente uma ou mais das atividades biológicas ou funções do SIRPα. Um antagonista de uma função SIRPα inclui uma molécula que pode bloquear, inibir, atenuar ou reduzir a sinalização mediada por SIRPα ou dependente de SIRPα em uma célula que expressa uma SIRPα. Um antagonista de uma função SIRPα também inclui uma molécula que pode bloquear, inibir, atenuar ou reduzir a sinalização SIRPα, incluindo sinalização a jusante induzida por ligação ou engajamento entre SIRPα e CD47. Em alguns exemplos, um antagonista de SIRPα inclui ainda moléculas que podem bloquear, inibir, atenuar ou reduzir a ligação de SIRPα a uma molécula de ligação natural de SIRPα. Em outros exemplos, um antagonista de SIRPα inclui adicionalmente moléculas que podem bloquear, inibir ou reduzir a ligação de SIRPα a um ligante de SIRPα, como CD47. Um "antagonista" de SIRPα é "antagonista" para a função SIRPα ou SIRPα. Em algumas modalidades, são fornecidos neste documento anticorpos anti- SIRPα antagonistas ou fragmentos dos mesmos.

[00103] Um anticorpo de "bloqueio", um anticorpo "neutralizante" ou um anticorpo "antagonista" quando usado em referência à SIRPα ou uma função SIRPα, destina-se a significar um anticorpo que se liga à SIRPα e atua como um antagonista para SIRPα ou atividades ou funções SIRPα. Por exemplo, anticorpos bloqueadores ou anticorpos antagonistas podem inibir substancialmente ou completamente a atividade biológica de SIRPα ou a ligação de CD47 à SIRPα. Em algumas modalidades, são fornecidos neste documento anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos dos mesmos.

[00104] O termo "proteína de ligação" refere-se a uma proteína que compreende uma porção (por exemplo, uma ou mais regiões de ligação, como CDRs) que se liga à SIRPα, incluindo SIRPα humana e/ou de cyno e, opcionalmente, uma porção de suporte ou de estrutura (por exemplo, um ou mais regiões de esqueleto ou estrutura) que permite que a porção de ligação adote uma conformação que promove a ligação da proteína de ligação a um polipeptídeo, fragmento ou epítopo SIRPα. Exemplos de tais proteínas de ligação incluem anticorpos, tais como um anticorpo humano, um anticorpo humanizado, um anticorpo quimérico, um anticorpo recombinante, um anticorpo de cadeia simples, um corpo de diacorpo, um triacorpo, um tetracorpo, um fragmento Fab, um fragmento F(ab’)2, um anticorpo IgD, um anticorpo IgE, um anticorpo IgM, um anticorpo IgG1, um anticorpo IgG2, um anticorpo IgG3 ou um anticorpo IgG4 e fragmentos dos mesmos.

A proteína de ligação pode compreender, por exemplo, um andaime de proteína alternativo ou um suporte artificial com CDRs enxertados ou derivados de CDR.

Tais andaimes incluem, mas não estão limitados a andaimes derivados de anticorpos que compreendem mutações introduzidas para, por exemplo, estabilizar a estrutura tridimensional da proteína de ligação, bem como suportes inteiramente sintéticos que compreendem, por exemplo, um polímero biocompatível.

Ver, por exemplo, Korndorfer et al., 2003, Proteins: Structure, Function, and Bioinformatics 53 (1): 121-29; e Roque et al., 2004, Biotechnol.

Prog. 20:639-54. Além disso, miméticos de anticorpos de peptídeos ("PAMs") podem ser usados, bem como suportes à base de miméticos de anticorpos que utilizam componentes de fibronectina como um andaime.

No contexto da presente divulgação, diz-se que uma proteína de ligação se liga especificamente ou se liga seletivamente à SIRPα, por exemplo, quando a constante de dissociação (KD) é ≤10-7 M.

Em algumas modalidades, as proteínas de ligação (por exemplo, anticorpos) pode se ligar especificamente à SIRPα com um KD de cercade 10-7 M a cerca de 10-12 M.

Em certas modalidades, a proteína de ligação (por exemplo, anticorpo) pode se ligar especificamente à SIRPα com alta afinidade quando o KD é ≤10- 8 M ou KD é ≤10-9 M.

Em uma modalidade, as proteínas de ligação (por exemplo, anticorpos) podem se ligar especificamente à SIRPα humana purificado com um KD de 1 x10-9 M a 10 x10-9 M conforme medido por Biacore®. Em outra modalidade, as proteínas de ligação (por exemplo, anticorpos) podem se ligar especificamente à SIRPα humana purificado com um KD de 0,1 x10-9 M a 1 x10-9 M conforme medido por KinExA ™ (Sapidyne, Boise, ID). Em ainda outra modalidade, as proteínas de ligação (por exemplo, anticorpos) se ligam especificamente à SIRPα humana expresso em células com um KD de 0,1 x10-9 M a 10 x10-9 M.

Em certas modalidades, as proteínas de ligação (por exemplo, anticorpos) se ligam especificamente à SIRPα humana expressa em células com um KD de 0,1 x10-9 M a 1 x10-9 M. Em algumas modalidades, as proteínas de ligação (por exemplo, anticorpos) se ligam especificamente à SIRPα humana expressa em células com um KD de 1 x10-9 M a 10 x10-9 M. Em certas modalidades, as proteínas de ligação (por exemplo, anticorpos) se ligam especificamente à SIRPα humana expressa em células com um KD de cerca de 0,1 x10-9 M, cerca de 0,5 x10-9 M, cerca de 1 x10-9 M, cerca de 5 x10-9 M, cerca de 10 x10-9 M, ou qualquer faixa ou intervalo dos mesmos. Em ainda outra modalidade, as proteínas de ligação (por exemplo, anticorpos) podem se ligar especificamente à SIRPα de ciyno expressa em células com um KD de 0,1 x10-9 M a 10 x10-9 M. Em certas modalidades, as proteínas de ligação (por exemplo, anticorpos) se ligam especificamente à SIRPα de cyno expressa em células com um KD de 0,1 x10-9 M a 1 x10-9 M. Em algumas modalidades, as proteínas de ligação (por exemplo, anticorpos) se ligam especificamente à SIRPα de cyno expressaem células com um KD de 1 x10-9 M a 10 x10-9 M. Em certas modalidades, as proteínas de ligação (por exemplo, anticorpos) se ligam especificamente à SIRPα de cyno expressa em células com um KD de cerca de 0,1 x10-9 M, cerca de 0,5 x10-9 M, cerca de 1 x10-9 M, cerca de 5 x10-9 M, cerca de 10 x10-9 M, ou qualquer faixa ou intervalo dos mesmos.

[00105] O termo "anticorpo", "imunoglobulina" ou "Ig" é usado indistintamente neste documento, e é usado no sentido mais amplo e abrange especificamente, por exemplo, anticorpos monoclonais anti-SIRPα individuais (incluindo anticorpos agonistas, antagonistas, neutralizantes, anticorpos monoclonais completos ou intactos), composições de anticorpos anti-SIRPα com especificidade poliepitópica ou monoepitópica, anticorpos policlonais ou monovalentes, anticorpos multivalentes, anticorpos multiespecíficos (por exemplo, anticorpos biespecíficos desde que exibam a atividade biológica desejada), formados a partir de pelo menos dois anticorpos intactos, anticorpos anti-SIRPα de cadeia simples e fragmentos de anticorpos anti-SIRPα, como descrito abaixo.

Um anticorpo pode ser humano, humanizado, quimérico e/ou maturado por afinidade, bem como um anticorpo de outras espécies, por exemplo, camundongo e coelho, etc.

O termo "anticorpo" pretende incluir um produto polipeptídico de células B na classe de polipeptídeos de imunoglobulina que é capaz de se ligar a um antígeno molecular específico e é composto por dois pares idênticos de cadeias polipeptídicas, em que cada par tem uma cadeia pesada (cerca de 50-70 kDa) e uma cadeia leve (cerca de 25 kDa), cada porção amino-terminal de cada cadeia inclui uma região variável de cerca de 100 a cerca de 130 ou mais aminoácidos, e cada porção de carboxi-terminal de cada cadeia inclui um região constante.

Ver, por exemplo, Antibody Engineering (Borrebaeck ed., 2d ed. 1995); e Kuby, Immunology (3d ed. 1997). Em modalidades específicas, o antígeno molecular específico pode ser ligado por um anticorpo fornecido neste documento, incluindo um polipeptídeo SIRPα, um fragmento SIRPα ou um epítopo SIRPα.

Os anticorpos também incluem, mas não estão limitados a, anticorpos sintéticos, anticorpos produzidos de forma recombinante, anticorpos camelizados, intracorpos, anticorpos anti-idiotípicos (anti-Id) e fragmentos funcionais (por exemplo, fragmentos de ligação ao antígeno, tais como fragmentos de ligação SIRPα) de qualquer um dos acima, que se refere a uma porção de um polipeptídeo de cadeia pesada ou leve de anticorpo que retém parte ou toda a atividade de ligação do anticorpo a partir do qual o fragmento foi derivado.

Exemplos não limitativos de fragmentos funcionais (por exemplo, fragmentos de ligação a antígeno, como fragmentos de ligação SIRPα) incluem Fvs de cadeia única (scFv) (por exemplo, incluindo monoespecífico, biespecífico, etc.), fragmentos Fab, fragmentos F (ab'), Fragmentos F (ab)2, fragmentos F (ab') 2, Fvs ligados por dissulfeto (dsFv),

fragmentos Fd, fragmentos Fv, diacorpo, triacorpo, tetracorpo e minicorpo. Em particular, os anticorpos fornecidos neste documento incluem moléculas de imunoglobulina e porções imunologicamente ativas de moléculas de imunoglobulina, por exemplo, domínios ou moléculas de ligação ao antígeno que contêm um sítio de ligação ao antígeno que se liga a um antígeno de SIRPα (por exemplo, uma ou mais CDRs de um anticorpo anti-SIRPα). Esses fragmentos de anticorpo podem ser encontrados, por exemplo, em Harlow e Lane, Antibodies: A Laboratory Manual (1989); Mol. Biology and Biotechnology: A Comprehensive Desk Reference (Myers ed., 1995); Huston et al., 1993, Cell Biophysics 22: 189- 224; Plückthun e Skerra, 1989, Meth. Enzymol. 178: 497-515; e Day, Advanced Immunochemistry (2 ed. 1990). Os anticorpos fornecidos neste documento podem ser de qualquer classe (por exemplo, IgG, IgE, IgM, IgD e IgA) ou qualquer subclasse (por exemplo, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 e IgA2) da molécula de imunoglobulina. Os anticorpos anti-SIRPα podem ser anticorpos agonísticos ou anticorpos antagonistas. São fornecidos neste documento anticorpos antagonistas para SIRPα, incluindo anticorpos que reduzem ou bloqueiam a sinalização de SIRPα e/ou bloqueiam ou reduzem a ligação entre CD47 e SIRPα.

[00106] Um "antígeno" é um antígeno predeterminado ao qual um anticorpo pode se ligar seletivamente. Um antígeno alvo pode ser um polipeptídeo, carboidrato, ácido nucleico, lipídio, hapteno ou outro composto natural ou sintético. Em algumas modalidades, o antígeno alvo é um polipeptídeo.

[00107] Os termos "fragmento de ligação ao antígeno", "domínio de ligação ao antígeno", "região de ligação ao antígeno" e termos semelhantes referem-se à porção de um anticorpo, que compreende os resíduos de aminoácidos que interagem com um antígeno e conferem ao agente de ligação sua especificidade e afinidade pelo antígeno (por exemplo, as CDRs).

[00108] Os termos "liga" ou "ligação" referem-se a uma interação entre moléculas, incluindo, por exemplo, para formar um complexo.

Interações podem ser, por exemplo, interações não covalentes, incluindo ligações de hidrogênio, ligações iônicas, interações hidrofóbicas e/ou interações de van der Waals.

Um complexo também pode incluir a ligação de duas ou mais moléculas mantidas juntas por ligações, interações ou forças covalentes ou não covalentes.

A intensidade das interações não covalentes totais entre um sítio único de ligação ao antígeno num anticorpo e um único epítopo de uma molécula alvo, tal como SIRPα, é a afinidade do anticorpo ou fragmento funcional para esse epítopo.

A razão entre a taxa de dissociação (koff) e a taxa de associação (kon) de um anticorpo a um antígeno monovalente (koff/kon) é a constante de dissociação KD, que está inversamente relacionada à afinidade.

Quanto mais baixo o valor KD, maior a afinidade do anticorpo.

O valor de KD varia para diferentes complexos de anticorpos e antígenos e depende tanto de kon e koff.

A constante de dissociação KD para um anticorpo fornecido neste documento pode ser determinada usando qualquer método fornecido neste documento ou qualquer outro método bem conhecido pelos versados na técnica.

A afinidade em um local de ligação nem sempre reflete a verdadeira força da interação entre um anticorpo e um antígeno.

Quando antígenos complexos contendo múltiplos determinantes antigênicos repetitivos, como uma SIRPα polivalente, entram em contato com anticorpos contendo múltiplos sítios de ligação, a interação do anticorpo com o antígeno em um sítio aumentará a probabilidade de uma reação em um segundo sítio.

A força dessas múltiplas interações entre um anticorpo multivalente e o antígeno é chamada de avidez.

A avidez de um anticorpo pode ser uma medida melhor da sua capacidade de ligação do que a afinidade dos seus locais de ligação individuais.

Por exemplo, a alta avidez pode compensar a baixa afinidade como às vezes é encontrada para anticorpos IgM pentaméricos, que podem ter uma afinidade menor que a IgG, mas a alta avidez de IgM, resultante de sua multivalência, permite que ela se ligue efetivamente ao antígeno.

[00109] Os termos "anticorpos que se ligam especificamente à SIRPα", "anticorpos que se ligam especificamente a um epítopo SIRPα" e termos análogos também são usados indistintamente neste documento e referem-se a anticorpos que se ligam especificamente a um polipeptídeo SIRPα, como um antígeno SIRPα, ou fragmento, ou epítopo (por exemplo, SIRPα humana, como um polipeptídeo, antígeno ou epítopo SIRPα humana). Um anticorpo que se liga especificamente à SIRPα (por exemplo, SIRPα humana) pode se ligar ao domínio extracelular ou peptídeo derivado do domínio extracelular de SIRPα. Um anticorpo que se liga especificamente a um antígeno SIRPα (por exemplo, SIRPα humana) pode apresentar reatividade cruzada com antígenos relacionados (por exemplo, SIRPα de cyno). Em certas modalidades, um anticorpo que se liga especificamente a um antígeno de SIRPα não reage de forma cruzada com outros antígenos. Um anticorpo que se liga especificamente a um antígeno SIRPα pode ser identificado, por exemplo, por imunoensaios, Biacore® ou outras técnicas conhecidas pelos versados na técnica. Um anticorpo se liga especificamente a um antígeno SIRPα quando se liga a um antígeno SIRPα com maior afinidade do que qualquer antígeno de reatividade cruzada, conforme determinado usando técnicas experimentais, tais como radioimunoensaios (RIA) e ensaios de imunoabsorção enzimática (ELISAs). Tipicamente, uma reação específica ou seletiva será de pelo menos duas vezes sinal de fundo ou ruído e pode ser mais do que 10 vezes de sinal fundo. Ver, por exemplo, Fundamental Immunology 332-36 (Paul ed., 2d ed. 1989) para uma discussão a respeito da especificidade do anticorpo. Um anticorpo que "se liga a um antígeno de interesse" (por exemplo, um antígeno alvo, como SIRPα) é aquele que se liga ao antígeno com afinidade suficiente de modo que o anticorpo seja útil como um agente terapêutico no direcionamento de uma célula ou tecido que expressa o antígeno, e não apresenta reação cruzada significativa com outras proteínas.

Em tais modalidades, a extensão da ligação do anticorpo a uma proteína "não-alvo" será inferior a cerca de 10% da ligação do anticorpo a sua proteína alvo, por exemplo, tal como determinado por análise de triagem de células ativadas por fluorescência (FACS) ou RIA.

No que diz respeito à ligação de um anticorpo a uma molécula alvo, o termo "ligação específica" ou "liga-se especificamente a" ou "é específico para" um polipeptídeo particular ou um epítopo num alvo de polipeptídeo particular significa ligação que é mensuravelmente diferente de uma interação não específica.

A ligação específica pode ser medida, por exemplo, por meio da determinação da ligação de uma molécula em comparação com a ligação de uma molécula de controle, a qual geralmente é uma molécula de estrutura semelhante que não tem atividade de ligação.

Por exemplo, a ligação específica pode ser determinada por competição com uma molécula de controle que é semelhante ao alvo, por exemplo, um excesso de alvo não marcado.

Nesse caso, a ligação específica é indicada se a ligação do alvo marcado a uma sonda é inibida competitivamente pelo excesso de alvo não marcado.

O termo "anticorpo anti-SIRPα" ou "um anticorpo que se liga à SIRPα" inclui um anticorpo que é capaz de se ligar à SIRPα com afinidade suficiente para que o anticorpo seja útil, por exemplo, como um agente no direcionamento de SIRPα.

O termo "ligação específica", "liga-se especificamente a" ou "é específico para" um determinado polipeptídeo ou um epítopo em um determinado polipeptídeo alvo, tal como utilizado neste documento, refere-se à ligação onde uma molécula se liga a um determinado polipeptídeo ou epítopo em um determinado polipeptídeo sem se ligar substancialmente a qualquer outro polipeptídeo ou epítopo polipeptídico.

Em certas modalidades, um anticorpo que se liga à SIRPα tem uma constante de dissociação (KD) menor ou igual a 10 nM, 5 nM, 4 nM, 3 nM, 2 nM, 1 nM, 0,9 nM, 0,8 nM, 0,7 nM, 0,6 nM, 0,5 nM, 0,4 nM, 0,3 nM, 0,2 nM ou 0,1 nM. Em certas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα se liga a um epítopo de SIRPα que é conservado entre SIRPα de diferentes espécies (por exemplo, entre SIRPα humana e cyno). Em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα se liga a um epítopo de SIRPα que é a região que entra em contato com o CD47 quando o CD47 está ligado à SIRPα.

[00110] O termo "competir" quando usado no contexto de anticorpos anti- SIRPα (por exemplo, anticorpos antagonistas e proteínas de ligação que se ligam à SIRPα e competem pelo mesmo epítopo ou sítio de ligação em um alvo) significa competição conforme determinado por um ensaio no qual o anticorpo (ou fragmento de ligação) do mesmo em estudo evita ou inibe a ligação específica de uma molécula de referência (por exemplo, um ligante de referência ou proteína de ligação ao antígeno de referência, como um anticorpo de referência) a um antígeno comum (por exemplo, SIRPα ou um fragmento do mesmo) Numerosos tipos de ensaios de ligação competitiva podem ser usados para determinar se um anticorpo de teste compete com um anticorpo de referência para se ligar à SIRPα (por exemplo, SIRPα humana). Exemplos de ensaios que podem ser empregados incluem RIA direto ou indireto em fase sólida, imunoensaio enzimático direto ou indireto em fase sólida (EIA), ensaio de competição em sanduíche (ver, por exemplo, Stahli et al., 1983, Methods in Enzymology 9: 242-53), EIA de biotina-avidina direto de fase sólida (ver, por exemplo, Kirkland et al., 1986, J. Immunol. 137: 3614-19), ensaio de fase sólida marcado direto, ensaio de sanduíche marcado direto de fase sólida (ver, por exemplo, Harlow e Lane, Antibodies, A Laboratory Manual (1988)), RIA com marcador direto de fase sólida usando marcador I-125 (ver, por exemplo, Morel et al., 1988, Mol. Immunol. 25: 7-15), e RIA marcado direto (Moldenhauer et al., 1990, Scand. J. Immunol. 32: 77-82). Normalmente, tal ensaio envolve o uso de um antígeno purificado (por exemplo, SIRPα tal como SIRPα humana) ligado a uma superfície sólida, ou células portadoras de uma proteína de ligação ao antígeno de teste não marcada (por exemplo, anticorpo anti-SIRPα de teste) ou uma proteína de ligação ao antígeno de referência marcada (por exemplo, anticorpo anti-SIRPα de referência). A inibição competitiva pode ser medida pela determinação da quantidade da marcação ligada à superfície sólida ou células na presença da proteína de ligação ao antígeno de teste. Geralmente a proteína de ligação ao antígeno de teste está presente em excesso. Os anticorpos identificados pelo ensaio de competição (anticorpos de competição) incluem anticorpos que se ligam ao mesmo epítopo que o anticorpo de referência e/ou anticorpos que se ligam a um epítopo adjacente suficientemente próximo ao epítopo ligado pela referência para que o bloqueio estérico de anticorpos ocorra. Detalhes adicionais relativos a métodos para determinar a ligação competitiva são descritos neste documento. Normalmente, quando uma proteína de anticorpo competidor está presente em excesso, ela inibirá a ligação específica de um anticorpo de referência a um antígeno comum em pelo menos 30%, por exemplo 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70% ou 75%. Em alguns casos, a ligação é inibida em pelo menos 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou mais.

[00111] Um anticorpo "isolado" é substancialmente livre de material celular ou outras proteínas contaminantes da célula ou tecido fonte e/ou outros componentes contaminantes dos quais o anticorpo é derivado, ou substancialmente livre de precursores químicos ou outros produtos químicos quando quimicamente sintetizado. A linguagem "substancialmente livre de material celular" inclui preparações de um anticorpo em que o anticorpo é separado dos componentes celulares das células das quais é isolado ou produzido de forma recombinante. Assim, um anticorpo que é substancialmente isento de material celular inclui preparações de anticorpo com menos de cerca de 30%, 25%, 20%, 15%, 10%, 5% ou 1% (por peso seco) de proteína heteróloga (também referida neste documento como uma "proteína contaminante"). Em certas modalidades, quando o anticorpo é produzido de forma recombinante, é substancialmente livre de meio de cultura, por exemplo, o meio de cultura representa menos do que cerca de 20%, 15%, 10%, 5% ou 1% do volume da preparação de proteína.

Em certas modalidades, quando o anticorpo é produzido por síntese química, é substancialmente isento de precursores químicos ou outros produtos químicos, por exemplo, é separado de precursores químicos ou outros produtos químicos que estão envolvidos na síntese da proteína.

Por conseguinte, tais preparações do anticorpo têm menos de cerca de 30%, 25%, 20%, 15%, 10%, 5% ou 1% (em peso seco) de precursores químicos ou compostos diferentes do anticorpo de interesse.

Os componentes contaminantes também podem incluir, mas não estão limitados a materiais que iriam interferir com usos terapêuticos para o anticorpo, e podem incluir enzimas, hormônios e outros solutos proteináceos ou não proteináceos.

Em certas modalidades, o anticorpo será purificado (1) para mais de 95% em peso de anticorpo, conforme determinado pelo método de Lowry (Lowry et al., 1951, J.

Bio.

Chem. 193:265-75), tal como 96%, 97%, 98% ou 99%, (2) até um grau suficiente para obter pelo menos 15 resíduos de sequência N-terminal ou sequência interna de aminoácidos pela utilização de um sequenciador de copo giratório, ou (3) até à homogeneidade por SDS-PAGE sob condições redutoras ou não redutoras utilizando corante azul ou prata Coomassie.

Anticorpo isolado inclui o anticorpo in situ dentro de células recombinantes, visto que pelo menos um componente do ambiente natural do anticorpo não estará presente.

Normalmente, contudo, o anticorpo isolado será preparado por pelo menos uma etapa de purificação.

Em modalidades específicas, os anticorpos fornecidos nesse documento são isolados.

[00112] Uma unidade de anticorpo de 4 cadeias é uma glicoproteína heterotetramérica composta por duas cadeias leves (L) idênticas e duas cadeias pesadas (H) idênticas. No caso da IgG, a unidade de 4 cadeias é geralmente de cerca de 150.000 daltons. Cada cadeia L está ligada a uma cadeia H por uma ligação de dissulfeto covalente, enquanto as duas cadeias H estão ligadas entre si por uma ou mais ligações de dissulfeto, dependendo do isotipo de cadeia H. Cada cadeia H e L também possui pontes de dissulfeto intracadeia regularmente espaçadas. Cada cadeia H tem, no N-terminal, um domínio variável (VH), seguido por três domínios constantes (CH) para cada uma das cadeias α e γ e quatro domínios CH para isotipos μ e ɛ. Cada cadeia L tem no terminal N, um domínio variável (VL) seguido por um domínio constante (CL) em sua outra extremidade. O VL está alinhado com o VH e o CL está alinhado com o primeiro domínio constante da cadeia pesada (CH1). Acredita-se que os resíduos de aminoácidos específicos formem uma interface entre os domínios variáveis de cadeia leve e de cadeia pesada. O emparelhamento de uma VH e VL em conjunto forma um único sítio de ligação ao antígeno. Para a estrutura e propriedades das diferentes classes de anticorpos, ver, por exemplo, Basic and Clinical Immunology 71 (Stites et al. Eds., 8ª ed. 1994).

[00113] O termo "região variável", "domínio variável", "região V" ou "domínio V" refere-se a uma porção das cadeias leves ou pesadas de um anticorpo que geralmente está localizado no terminal amino da cadeia leve ou pesada e tem um comprimento de cerca de 120 a 130 aminoácidos na cadeia pesada e cerca de 100 a 110 aminoácidos na cadeia leve e são utilizados na ligação e especificidade de cada anticorpo particular para o seu antígeno particular. A região variável da cadeia pesada pode ser referida como "VH". A região variável da cadeia leve pode ser referida como "VL". O termo "variável" se refere ao fato de que determinados segmentos das regiões variáveis diferem extensivamente na sequência entre os anticorpos. A região V medeia a ligação ao antígeno e define a especificidade de um anticorpo particular para o seu antígeno particular. No entanto, a variabilidade não é distribuída uniformemente em toda a extensão de 110 aminoácido das regiões variáveis. Em vez disso, as regiões V consistem em trechos menos variáveis (por exemplo, relativamente invariantes) chamados regiões de estrutura (FRs) de cerca de 15- 30 aminoácidos separados por regiões mais curtas de maior variabilidade (por exemplo, variabilidade extrema) chamadas "regiões hipervariáveis" que são cada cerca de 9-12 aminoácidos de comprimento. As regiões variáveis de cadeias leves e pesadas, cada um, compreendem quatro FRs, amplamente adotando uma configuração β-folha, conectada por três regiões hipervariáveis, que formam alças que conectam, e em alguns casos formam parte, da estrutura de β-folha. As regiões hipervariáveis em cada cadeia são mantidas juntas em proximidade estreita por FRs e, com as regiões hipervariáveis da outra cadeia, contribuem para a formação do sítio de ligação de antígeno de anticorpos (ver, por exemplo, Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest (5a. ed. 1991)). As regiões constantes não estão envolvidas diretamente na ligação de um anticorpo a um antígeno, mas exibem várias funções efetoras, tais como participação do anticorpo na citoxicidade celular dependente de anticorpos (ADCC) e citotoxicidade dependente de complemento (CDC). As regiões variáveis diferem extensivamente em sequência entre diferentes anticorpos. Em modalidades específicas, a região variável é uma região variável humana.

[00114] O termo "numeração de resíduo de região variável como em Kabat" ou "numeração de posição de aminoácido como em Kabat", e variações dos mesmos, referem-se ao sistema de numeração usado para regiões variáveis de cadeia pesada ou regiões variáveis de cadeia leve da compilação de anticorpos em Kabat et al., supra. Usando esse sistema de numeração, a sequência de aminoácidos linear real pode conter mais ou menos aminoácidos adicionais correspondentes a um encurtamento, ou inserção, uma FR ou CDR do domínio variável. Por exemplo, um domínio variável de cadeia pesada pode incluir a inserção de um único aminoácido (resíduo 52a segundo Kabat) depois do resíduo 52 e três resíduos inseridos (por exemplo, resíduos 82a, 82b e 82c etc. segundo Kabat) depois do resíduo 82. A numeração de Kabat de resíduos pode ser determinada para um dado anticorpo pelo alinhamento em regiões de homologia da sequência do anticorpo com uma sequência de Kabat "padrão" numerada. O sistema de numeração de Kabat é geralmente usado ao se referir a um resíduo no domínio variável (aproximadamente resíduos 1-107 da cadeia leve e resíduos 1-113 da cadeia pesada) (por exemplo, Kabat et al. supra). O "sistema de numeração EU" ou "índice EU" é geralmente usado ao se referir a um resíduo em uma região constante de cadeia pesada de imunoglobulina (por exemplo, o índice EU relatado em Kabat et al. supra). O "índice EU como em Kabat" refere-se à numeração dos resíduos do anticorpo EU IgG1 humano. Outros sistemas de numeração foram descritos, por exemplo, pela AbM, Chothia, Contato, IMGT e AHon.

[00115] Um anticorpo "intacto" é um compreendendo um local de ligação ao antígeno, bem como uma região constante de CL e pelo menos cadeia pesada, CH1, CH2 e CH3. As regiões constantes podem incluir regiões constantes humanas ou suas sequências de aminoácidos. Em certas modalidades, um anticorpo intacto tem uma ou mais funções efetoras.

[00116] "Fragmentos de anticorpo" compreendem uma porção de um anticorpo intacto, tal como ligação ao antígeno ou região variável do anticorpo intacto. Exemplos de fragmentos de anticorpo incluem, sem limitação, fragmentos Fab, Fab', F(ab')2 e Fv; diacorpos e di-diacorpos (ver, por exemplo, Holliger et al., 1993, Proc. Natl. Acad. Sci. 90: 6444-48; Lu et al., 2005, J. Biol.

Chem. 280: 19665-72; Hudson et al., 2003, Nat. Med. 9: 129-34; WO 93/11161; e Pedidos de Patente US nº. 5.837.242 e 6.492.123); moléculas de anticorpo de cadeia simples (ver, por exemplo, Pedidos de Patente US nº. 4.946.778;

5.260.203; 5.482.858; e 5.476.786); anticorpos de domínio variável duplo (ver, por exemplo, Pedido de Patente US nº. 7.612.181); anticorpos de domínio variável único (sdAbs) (ver, por exemplo, Woolven et al., 1999, Immunogenetics 50: 98-101; e Streltsov et al., 2004, Proc Natl Acad Sci USA. 101: 12444-49); e anticorpos multiespecíficos formados a partir de fragmentos de anticorpos.

[00117] Um "fragmento funcional", "fragmento de ligação" ou "fragmento de ligação ao antígeno" de um anticorpo terapêutico exibirá pelo menos uma, se não algumas ou todas as funções biológicas atribuídas ao anticorpo intacto, a função compreendendo pelo menos a ligação ao antígeno alvo (por exemplo, um fragmento ou fragmento de ligação SIRPα que se liga à SIRPα).

[00118] O termo "proteína de fusão", como utilizado neste documento, refere-se a um polipeptídeo que compreende uma sequência de aminoácidos de um anticorpo e uma sequência de aminoácidos de um polipeptídeo ou proteína heterólogos (por exemplo, um polipeptídeo ou proteína que normalmente não faz parte do anticorpo (por exemplo, um anticorpo de ligação ao antígeno não- anti-SIRPα)). O termo "fusão" quando utilizado em relação à SIRPα ou a um anticorpo anti-SIRPα refere-se à união de um peptídeo ou polipeptídeo, ou fragmento, variante, e/ou derivado deste, com um peptídeo ou polipeptídeo heterólogo. Em certas modalidades, a proteína de fusão retém a atividade biológica do anticorpo SIRPα ou anti-SIRPα. Em certas modalidades, a proteína de fusão compreende uma região do anticorpo anti-SIRPα VH, VL, CDR VH (uma, duas ou três CDRs VH) e/ou CDR VL (uma, duas ou três CDRs VL), em que a proteína de fusão se liga a um epítopo de SIRPα, um fragmento de SIRPα e/ou um polipeptídeo de SIRPα.

[00119] O termo "cadeia pesada" quando utilizado em referência a um anticorpo refere-se a uma cadeia polipeptídica de cerca de 50-70 kDa, em que a porção amino-terminal inclui uma região variável de cerca de 120 a 130 ou mais aminoácidos e uma porção de terminal carboxi inclui uma região constante. A região constante pode ser um dos cinco tipos distintos (por exemplo, isotipos) referidos como alfa (α), delta (δ), épsilon (ε), gama (γ) e mu (µ), com base na sequência de aminoácidos da região constante da cadeia pesada. As cadeias pesadas distintas diferem em tamanho: α, δ e γ contêm aproximadamente 450 aminoácidos, enquanto µ e ε contêm aproximadamente 550 aminoácidos. Quando combinados com uma cadeia leve, esses tipos distintos de cadeias pesadas dão origem a cinco classes bem conhecidas (por exemplo, isotipos) de anticorpos, IgA, IgD, IgE, IgG e IgM, respectivamente, incluindo quatro subclasses de IgG, nomeadamente IgG1, IgG2, IgG3 e IgG4. Uma cadeia pesada pode ser uma cadeia pesada humana.

[00120] O termo "cadeia leve" quando utilizado em referência a um anticorpo refere-se a uma cadeia polipeptídica de cerca de 25 kDa, em que a porção amino-terminal inclui uma região variável de cerca de 100 a cerca de 110 ou mais aminoácidos e uma porção carboxi-terminal inclui uma região constante. O comprimento aproximado de uma cadeia leve é de 211 a 217 aminoácidos. Existem dois tipos distintos, referidos como kappa (κ) ou lambda (λ) com base na sequência de aminoácidos dos domínios constantes. As sequências de aminoácidos de cadeia leve são bem conhecidas na técnica. Uma cadeia leve pode ser uma cadeia leve humana.

[00121] O termo "hospedeiro" como usado neste documento refere-se a um animal, tal como um mamífero (por exemplo, um humano).

[00122] O termo "célula hospedeira", tal como utilizado neste documento, refere-se a uma célula em particular que pode ser transfectada com uma molécula de ácido nucleico e a descendência ou potencial descendência de tal célula. A descendência de tal célula pode não ser idêntica à célula parental transfectada com a molécula de ácido nucleico devido a mutações ou influências ambientais que podem ocorrer em gerações sucessivas ou integração da molécula de ácido nucleico no genoma da célula hospedeira.

[00123] O termo "anticorpo monoclonal", tal como é utilizado neste documento, refere-se a um anticorpo obtido a partir de uma população de anticorpos substancialmente homogêneos, por exemplo, os anticorpos individuais compreendendo a população são idênticos, com exceção de possíveis mutações de ocorrência natural que podem estar presentes em quantidades menores, e cada anticorpo monoclonal reconhecerá tipicamente um único epítopo no antígeno. Em modalidades específicas, um "anticorpo monoclonal", tal como utilizado neste documento, é um anticorpo produzido por um único hibridoma ou outra célula, em que o anticorpo se liga a apenas um epítopo SIRPα conforme determinado, por exemplo, por ELISA ou outra ligação ao antígeno ou ensaio de ligação competitiva conhecido na técnica. O termo "monoclonal" não está limitado a qualquer método particular para fazer o anticorpo. Por exemplo, os anticorpos monoclonais úteis na presente divulgação podem ser preparados pela metodologia de hibridoma descrita pela primeira vez por Kohler. et al., 1975, Nature 256: 495, ou podem ser preparados utilizando métodos de DNA recombinante em células animais ou vegetais de origem bacteriana ou eucariótica (ver, por exemplo, Pedido de Patente US nº. 4.816.567). Os "anticorpos monoclonais" também podem ser isolados de bibliotecas de anticorpos fágicos usando as técnicas descritas em Clackson. et al., 1991, Nature 352: 624-28 e Marks et al, 1991, J. Mol. Biol. 222:581-97, por exemplo. Outros métodos para a preparação de linhas celulares clonais e de anticorpos monoclonais assim expressos são bem conhecidos na técnica. Ver, por exemplo,

Short Protocols in Molecular Biology (Ausubel et al. eds., 5ª ed. 2002). Métodos exemplares de produção de anticorpos monoclonais são fornecidos nos Exemplos neste documento.

[00124] O termo "nativo" quando usado em conexão com materiais biológicos tais como moléculas de ácido nucléico, polipeptídeos, células hospedeiras, e similares, refere-se àqueles que são encontrados na natureza e não manipulados, modificados e/ou alterados (por exemplo, isolados, purificados, selecionados) por um ser humano.

[00125] Os anticorpos monoclonais fornecidos neste documento podem incluir anticorpos "quiméricos" nos quais uma porção da cadeia pesada e/ou leve é idêntica a ou homóloga a sequências correspondentes em anticorpos derivados de uma espécie particular ou pertencendo a uma classe ou subclasse de anticorpo particular, enquanto o restante da(s) cadeia(s) é idêntico a ou homólogo a sequências correspondentes em anticorpos derivados uma outra espécie ou pertencendo a uma outra classe ou subclasse de anticorpo, bem como fragmentos de tais anticorpos, desde que exibam a atividade biológica desejada (ver Pedido de Patente US nº. 4.816.567; e Morrison et al (1984) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6851-55).

[00126] Formas "humanizadas" de anticorpos não humanos (por exemplo, murinos) são anticorpos quiméricos que incluem imunoglobulinas humanas (por exemplo, anticorpo receptor) em que os resíduos de CDR nativos são substituídos por resíduos do CDR correspondente de uma espécie não humana (por exemplo, anticorpo doador), tais como camundongo, rato, coelho ou primata não humano com a especificidade, afinidade e capacidade desejadas. Em alguns casos, um ou mais resíduos da região FR da imunoglobulina humana são substituídos por resíduos não humanos correspondentes. Além disso, os anticorpos humanizados podem compreender resíduos que não são encontrados no anticorpo receptor ou no anticorpo doador. Estas modificações são feitas para adicionalmente refinar o desempenho do anticorpo. Uma cadeia pesada ou leve de anticorpo humanizado pode compreender substancialmente todas de pelo menos uma ou mais regiões variáveis, nas quais todas ou substancialmente todas as CDRs correspondem àquelas de uma imunoglobulina não humana e todas ou substancialmente todas as FRs são as de uma sequência de imunoglobulina humana. Em certas modalidades, o anticorpo humanizado compreenderá também, pelo menos, uma parte de uma região constante de imunoglobulina (Fc), normalmente o de uma imunoglobulina humana. Para mais detalhes, ver Jones et al., 1986, Nature 321: 522-25; Riechmann et al., Nature 332: 323-29 1988; Presta, 1992, Curr. Op. Struct. Biol. 2: 593-96; Carter et al., 1992, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89: 4285-89; Pedidos de Patente US nº.:

6.800.738; 6.719.971; 6.639.055; 6.407.213; e 6.054.297.

[00127] Um "anticorpo humano" é um que possui uma sequência de aminoácidos que corresponde àquela de um anticorpo produzido por um humano e/ou que foi produzido utilizando qualquer uma das técnicas para a produção de anticorpos humanos como divulgado neste documento. Essa definição de um anticorpo humano exclui especificamente um anticorpo humanizado compreendendo resíduos de ligação ao antígeno não humano. Os anticorpos humanos podem ser produzidos usando várias técnicas conhecidas na técnica, incluindo bibliotecas de exibição de fago (Hoogenboom e Winter, 1991, J. Mol. Biol. 227: 381; Marks et al., 1991, J. Mol. Biol. 222: 581) e bibliotecas de exibição de levedura (Chao et al., 2006, Nature Protocols 1: 755-68). Também estão disponíveis para a preparação de anticorpos monoclonais humanos métodos descritos em Cole et al., Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy 77 (1985); Boerner et al., 1991, J. Immunol.147(1):86-95; e van Dijk e van de Winkel, 2001, Curr. Opin. Pharmacol. 5: 368-74. Anticorpos humanos podem ser preparados pela administração do antígeno a um animal transgênico que foi modificado para produzir tais anticorpos em resposta ao desafio antigênico, mas cujos loci endógenos foram desativados, por exemplo, camundongos (ver, por exemplo, Jakobovits, 1995, Curr. Opin. Biotechnol. 6(5):561-66; Brüggemann e Taussing, 1997, Curr. Opin. Biotechnol. 8 (4): 455-58; e Pedidos de Patente US nº. 6.075.181 e 6.150.584 em relação à tecnologia XENOMOUSETM). Ver também, por exemplo, Li et al., 2006, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 103:3557-62 em relação aos anticorpos humanos gerados através de uma tecnologia de hibridoma de células B humanas.

[00128] Uma "CDR" refere-se a uma das três regiões hipervariáveis (H1, H2 ou H3) dentro da região não estrutural da estrutura de folha VH de imunoglobulina (Ig ou anticorpo), ou uma de três regiões hipervariáveis (L1, L2 ou L3) dentro da região não-estrutura do framework da folha β-VL do anticorpo. Por conseguinte, as CDRs são sequências de regiões variáveis intercaladas dentro das sequências da região de estrutura. As regiões CDR são bem conhecidas por aqueles versados na técnica e foram definidas, por exemplo, por Kabat como as regiões de maior hipervariabilidade dentro dos domínios variáveis do anticorpo (V) (Kabat et al. 1997, J. Biol. Chem. 252:6609-16; Kabat, 1978, Adv. Prot. Chem. 32:1-75). As sequências de região CDR também foram definidas estruturalmente por Chothia como aqueles resíduos que não fazem parte do framework de folha β conservado e, deste modo, são capazes de adaptar diferentes conformações (Chothia e Lesk, 1987, J. Mol. Biol. 196:901-17). Ambas as terminologias são bem reconhecidas na técnica. As sequências da região CDR também foram definidas por AbM, Contato e IMGT. As posições de CDRs dentro de uma região variável de anticorpo canônico foram determinadas por comparação de numerosas estruturas (Al-Lazikani et al., 1997, J. Mol. Biol. 273: 927-48; Morea et al., 2000, Methods 20: 267-79). Como o número de resíduos dentro de uma região hipervariável varia em diferentes anticorpos, resíduos adicionais em relação às posições canônicas são convencionalmente numerados com a, b, c e assim por diante próximo ao número de resíduos no esquema de numeração de região variável canônica (Al-Lazikani et al., supra). Tal nomenclatura é similarmente bem conhecida pelos versados na técnica.

[00129] O termo "região hipervariável", "HVR," ou "HV", quando utilizado neste documento, refere-se às regiões de uma região variável de anticorpo que são hipervariáveis em sequência e/ou formam alças estruturalmente definidas. Geralmente, os anticorpos compreendem seis regiões hipervariáveis, três no VH (H1, H2, H3) e três no VL (L1, L2, L3). Um certo número de delineações da região hipervariável estão em uso e são englobadas neste documento. As Regiões Determinantes de Complementaridade de Kabat (CDRs) são baseadas na variabilidade da sequência e são as mais comumente usadas (ver, por exemplo, Kabat et al., Supra). Chothia refere-se, em vez disso, à localização das alças estruturais (ver, por exemplo, Chothia e Lesk, 1987, J. Mol. Biol. 196: 901-17). A extremidade da alça de CDR-H1 de Chothia, quando numerada usando a convenção de numeração de Kabat, varia entre H32 e H34, dependendo do comprimento da alça (isto porque o esquema da numeração de Kabat coloca as inserções em H35A e H35B; se nem 35A ou 35B estiverem presentes, a alça termina em 32; se apenas 35A estiver presente, a alça termina em 33; se ambas 35A e 35B estiverem presentes, a alça termina em 34). As regiões hipervariáveis da AbM representam um compromisso entre as alças estruturais de CDRs e Chothia de Kabat e são usadas pelo software de modelagem de anticorpos AbM da Oxford Molecular (ver, por exemplo, Antibody Engineering Vol. 2 (Kontermann e Dübel eds., 2d ed. 2010)). As regiões hipervariáveis de "contato" são baseadas em uma análise das estruturas cristalinas complexas disponíveis. Os resíduos de cada uma dessas regiões hipervariáveis ou CDRs são indicados abaixo.

[00130] Recentemente, um sistema de numeração universal foi desenvolvido e amplamente adotado, ImMunoGeneTics (IMGT) Information System® (Lafranc et al., 2003, Dev. Comp. Immunol. 27(1): 55-77). O IMGT é um sistema integrado de informações especializado em imunoglobulinas (IG), receptores de células T (TCR) e complexo principal de histocompatibilidade (MHC) de humanos e outros vertebrados. Neste documento, as CDRs são referidas em termos da sequência de aminoácidos e da localização dentro da cadeia leve ou pesada. Como a "localização" das CDRs dentro da estrutura do domínio variável da imunoglobulina é conservada entre espécies e presente em estruturas chamadas alças, usando sistemas de numeração que alinham sequências de domínio variável de acordo com características estruturais, CDR e resíduos de estrutura são prontamente identificados. Esta informação pode ser utilizada no enxerto e substituição de resíduos de CDR de imunoglobulinas de uma espécie num framework aceptor de, tipicamente, um anticorpo humano. Um sistema de numeração adicional (AHon) foi desenvolvido por Honegger e Plückthun, 2001, J. Mol. Biol. 309: 657-70. A correspondência entre o sistema de numeração, incluindo, por exemplo, a numeração de Kabat e o sistema de numeração único IMGT, é bem conhecida por aqueles versados na técnica (ver, por exemplo, Kabat, supra; Chothia e Lesk, supra; Martin, supra; Lefranc et al., supra). IMGT Kabat AbM Chothia Contato VH CDR1 27-38 31-35 26-35 26-32 30-35 VH CDR2 56-65 50-65 50-58 53-55 47-58 VH CDR3 105-117 95-102 95-102 96-101 93-101 VL CDR1 27-38 24-34 24-34 26-32 30-36 VL CDR2 56-65 50-56 50-56 50-52 46-55

IMGT Kabat AbM Chothia Contato VL CDR3 105-117 89-97 89-97 91-96 89-96

[00131] As regiões hipervariáveis podem compreender "regiões hipervariáveis estendidas" como a seguir: 24-36 ou 24-34 (L1), 46-56 ou 50-56 (L2) e 89-97 ou 89-96 (L3) na VL, e 26-35 ou 26-35A (H1), 50-65 ou 49-65 (H2) e 93-102, 94-102 ou 95-102 (H3) na VH. Como usado neste documento, os termos "HVR" e "CDR" são usados indistintamente.

[00132] O termo "região constante" ou "domínio constante" refere-se a uma porção carboxi-terminal da cadeia leve e pesada que não está diretamente envolvida na ligação do anticorpo ao antígeno, mas exibe várias funções efetoras, como interação com o receptor Fc. O termo refere-se à porção de uma molécula de imunoglobulina possuindo uma sequência de aminoácidos mais conservada relativamente à outra porção da imunoglobulina, a região variável, que contém o local de ligação ao antígeno. A região constante pode conter as regiões CH1, CH2 e CH3 da cadeia pesada e a região CL da cadeia leve.

[00133] O termo "framework" ou "FR" refere-se àqueles resíduos da região variável que flanqueiam as CDRs. Os resíduos de FR estão presentes, por exemplo, em anticorpos quiméricos, humanizados, de domínio humano, diacorpos, anticorpos lineares e anticorpos biespecíficos. Resíduos de FR são aqueles resíduos de domínio variável que não os resíduos da região hipervariável ou resíduos de CDR.

[00134] Um anticorpo "amadurecido por afinidade" é aquele com uma ou mais alterações (por exemplo, variações na sequência de aminoácidos, incluindo alterações, adições e/ou deleções) em uma ou mais das suas HVRs que resultam numa melhoria da afinidade do anticorpo para o antígeno, em comparação com um anticorpo parental que não possua essa(s) alteração(ões). Os anticorpos maturados por afinidade podem ter afinidades nanomolares ou mesmo picomolares para o antígeno alvo. Os anticorpos maturados por afinidade são produzidos por procedimentos conhecidos na técnica. Para revisão, ver Hudson e Souriau, 2003, Nature Medicine 9: 129-34; Hoogenboom, 2005, Nature Biotechnol. 23: 1105-16; Quiroz e Sinclair, 2010, Revista Ingeneria Biomedia 4:39-51.

[00135] "Afinidade de ligação" geralmente se refere à força da soma total de interações não-covalentes entre um único sítio de ligação de uma molécula (por exemplo, uma proteína de ligação, como um anticorpo) e seu parceiro de ligação (por exemplo, um antígeno). A menos que indicado de outra forma, como usado neste documento, "afinidade de ligação" se refere à afinidade de ligação intrínseca que reflete uma interação de 1:1 entre membros de um par de ligação (por exemplo, anticorpo e antígeno). A afinidade de uma molécula de ligação X pelo seu parceiro de ligação Y geralmente pode ser representada pela constante de dissociação (KD). A afinidade pode ser medida por métodos comuns conhecidos na técnica, incluindo aqueles descritos neste documento. Os anticorpos de baixa afinidade geralmente se ligam ao antígeno lentamente e tendem a se dissociar facilmente, enquanto os anticorpos de alta afinidade geralmente se ligam ao antígeno mais rapidamente e tendem a permanecer ligado por mais tempo. Uma variedade de métodos para medir a afinidade de ligação são conhecidos na técnica, qualquer um dos quais pode ser usado para as finalidades da presente divulgação. Modalidades ilustrativas específicas incluem as seguintes. Em uma modalidade, o "KD" ou "valor KD" pode ser medido por ensaios conhecidos na técnica, por exemplo, por um ensaio de ligação. O KD pode ser medido em um RIA, por exemplo, realizado com a versão Fab de um anticorpo de interesse e seu antígeno (Chen et al., 1999, J. Mol Biol 293:865-81). O valor KD ou KD também pode ser medido usando ensaios de ressonância de plasmônica de superfície por Biacore®, usando, por exemplo, um Biacore®TM-

2000 ou um Biacore®TM-3000, ou por interferometria de biocamada usando, por exemplo, o sistema Octet®QK384. Uma "taxa de ligação" ou "taxa de associação" ou "kon" pode também ser determinada com as mesmas técnicas de ressonância plasmônica de superfície ou interferometria de biocamada descritas acima usando, por exemplo, um Biacore®TM-2000 ou um Biacore®TM-3000 ou o sistema Octet®QK384.

[00136] A frase "substancialmente similar" ou "substancialmente o mesmo" denota um grau suficientemente elevado de similaridade entre dois valores numéricos (por exemplo, um associado com um anticorpo da presente divulgação e o outro associado com um anticorpo de referência) tal que um versado na técnica consideraria a diferença entre os dois valores como tendo pouca ou nenhuma importância biológica e/ou estatística no contexto da característica biológica medida pelos valores (por exemplo, valores KD). Por exemplo, a diferença entre os dois valores pode ser inferior a cerca de 50%, inferior a cerca de 40%, inferior a cerca de 30%, inferior a cerca de 20%, inferior a cerca de 10% ou inferior a cerca de 5%, como a função do valor para o anticorpo de referência.

[00137] A frase "substancialmente aumentada", "substancialmente reduzida" ou "substancialmente diferente", como usada neste documento, denota um grau de diferença suficientemente alto entre dois valores numéricos (por exemplo, um associado a um anticorpo da presente divulgação e o outro associado a um anticorpo de referência) tal que um versado na técnica consideraria a diferença entre os dois valores como sendo de significância estatística dentro do contexto da característica biológica medida pelos valores. Por exemplo, a diferença entre os referidos dois valores pode ser maior que cerca de 10%, maior que cerca de 20%, maior que cerca de 30%, maior que cerca de 40%, ou maior que cerca de 50%, em função do valor para o anticorpo de referência.

[00138] "Funções efetoras" de anticorpos referem-se às atividades biológicas atribuíveis à região Fc (por exemplo, uma região Fc de variante de sequência de aminoácido ou região Fc de sequência nativa) de um anticorpo e variam com o isotipo do anticorpo. Exemplos de funções efetoras de anticorpos incluem: ligação de C1q; CDC; Ligação ao receptor Fc; e ADCC.

[00139] O termo "quantidade eficaz", tal como é utilizado neste documento, refere-se à quantidade de um anticorpo ou composição farmacêutica fornecida neste documento que é suficiente para resultar no resultado desejado.

[00140] O termo "região Fc" é usado neste documento para definir a região de terminal C de uma cadeia pesada de imunoglobulina, incluindo, por exemplo, regiões Fc de sequência nativa, regiões Fc recombinantes e regiões Fc variantes. Embora os limites da região Fc de uma cadeia pesada de imunoglobulina possam variar, a região Fc de cadeia pesada de IgG humana está habitualmente definida como alongando a partir de um resíduo de aminoácido na posição Cys226, ou desde Pro230, até o terminal carboxil da mesma. A lisina C-terminal (resíduo 447 de acordo com o sistema de numeração da EU) da região Fc pode ser removida, por exemplo, durante a produção ou a purificação do anticorpo, ou por manipulação recombinante do ácido nucleico que codifica uma cadeia pesada do anticorpo. Consequentemente, uma composição de anticorpos intactos pode compreender populações de anticorpos com todos os resíduos K447 removidos, populações de anticorpos com nenhum resíduo K447 removido, e populações de anticorpo com uma mistura de anticorpos com e sem o resíduo K447.

[00141] Uma "região Fc funcional" possui uma "função efetora" de uma região Fc de sequência nativa. "Funções efetoras" exemplificativas incluem ligação de C1q; CDC; ligação ao receptor de Fc; ADCC; fagocitose; regulação negativa dos receptores da superfície celular (por exemplo, receptor de células B), etc. Tais funções efetoras geralmente requerem que a região Fc seja combinada com uma região de ligação ou domínio de ligação (por exemplo, uma região ou domínio variável de anticorpo) e pode ser avaliado utilizando vários ensaios, como divulgado.

[00142] Uma "região Fc de sequência nativa" compreende uma sequência de aminoácidos idêntica à sequência de aminoácidos de uma região Fc encontrada na natureza, e não manipulada ou modificada (por exemplo, isolada, purificada, selecionada, incluindo ou combinando com outras sequências, como sequências de regiões variáveis) por um humano. Regiões Fc de IgG1 humanas de sequência nativa incluem uma região Fc de sequência nativa de IgG1 humana (alotipos A e não A); região Fc de sequência nativa de IgG2 humana; região Fc de sequência nativa de IgG3 humana; e região Fc de sequência nativa de IgG4 humana, bem como variantes de ocorrência natural das mesmas. Por exemplo, uma regi Fc de IgG1 humana nativa sequência de aminoácidos é fornecida abaixo:

ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSG LYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSV FLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTY RVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTK

NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQ GNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO:155, K322 enfatizado).

[00143] Uma sequência exemplificativa de região Fc de sequência nativa de IgG4 humana nativa é fornecida abaixo:

ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSG LYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPSCPAPEFLGGPSVFLF PPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRV VSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQ

VSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNV FSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK (SEQ ID NO:156, S228 e L235 enfatizados).

[00144] Uma "região Fc variante" compreende uma sequência de aminoácidos que difere daquela de uma região Fc de sequência nativa em virtude de pelo menos uma modificação de aminoácido (por exemplo, substituição, adição ou deleção). Em certas modalidades, a região Fc variante tem pelo menos uma substituição de aminoácido em comparação com uma região Fc de sequência nativa ou com a região Fc de um polipeptídeo parental, por exemplo, de cerca de uma a cerca de dez substituições de aminoácidos, ou de cerca de uma a cerca de cinco substituições de aminoácidos numa região Fc de sequência nativa ou na região Fc de um polipeptídeo parental. A região Fc variante, neste documento, pode possuir pelo menos cerca de 80% de homologia com uma região Fc de sequência nativa e/ou com uma região Fc de um polipeptídeo parental, ou pelo menos cerca de 90% de homologia com esta, por exemplo, pelo menos cerca de 95% de homologia com esta. Por exemplo, uma variante com uma mudança de amino ácido K para A na posição 322 na sequência de aminoácidos Fc de IgG1 humana, a região Fc de IgG1-K322A, é fornecida abaixo:

ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSG LYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSV FLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTY RVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCAVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTK

NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQ GNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO:157, substituição K322A enfatizada).

[00145] Uma variante exemplificativa com mudança de dois amino ácidos

LL para AA em posições 234-235, e uma mudança de amino ácido D para S na posição 265 na sequência de amino ácido Fc de IgG1 humana, região Fc de IgG1- AAS, é fornecida abaixo:

ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGL YSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSV FLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTY RVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKN

QVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGN VFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO:144, substituições LL por AA e D por S enfatizadas).

[00146] Uma variante exemplificativa com uma mudança de amino ácido S para P em posição 228 na sequência de aminoácidos Fc de IgG4 humana, região Fc IgG4P humano, é fornecida abaixo:

ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGL YSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFP PKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVV SVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVS

LTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSC SVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK (SEQ ID NO:158, substituição S228P enfatizada).

[00147] Uma variante exemplificativa com duas alterações de amino ácidos nas posições 228 e 235 na sequência de aminoácidos Fc de IgG4 humana, região Fc de IgG4PE, é fornecida abaixo:

ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVL QSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFEGGP SVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFN STYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEM TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQ

EGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK (SEQ ID NO:159, substituições S228P e L235E enfatizadas).

[00148] O termo "variante" quando utilizado em relação a um anticorpo anti-SIRPα pode referir-se a um peptídeo ou polipeptídeo compreendendo um ou mais (tal como, por exemplo, cerca de 1 a cerca de 25, cerca de 1 a cerca de 20, cerca de 1 a cerca de 15, cerca de 1 a cerca de 10, ou cerca de 1 a cerca de 5) substituições, deleções e/ou adições de sequências de aminoácidos em comparação com uma sequência nativa ou não modificada. Por exemplo, uma variante de um anticorpo anti-SIRPα pode resultar de uma ou mais (tal como, por exemplo, cerca de 1 a cerca de 25, cerca de 1 a cerca de 20, cerca de 1 a cerca de 15, cerca de 1 a cerca de 10, ou cerca de 1 a cerca de 5) alterações a uma sequência de aminoácidos de um anticorpo anti-SIRPα nativo ou não modificado anteriormente. As variantes de anticorpos anti-SIRPα podem ocorrer naturalmente, como variantes alélicas ou de splice, ou podem ser construídas artificialmente. As variantes do anticorpo anti-SIRPα podem ser preparadas a partir das moléculas de ácido nucleico correspondentes que codificam as variantes. Em modalidades específicas, a variante de anticorpo anti-SIRPα pelo menos retém a atividade funcional do anticorpo anti-SIRPα (por exemplo, atividades antagonistas para ligação de CD47 e/ou sinalização de SIRPα induzida por CD47). Em modalidades específicas, uma variante de anticorpo anti-SIRPα se liga a SIRPα e/ou é antagônica à ligação de CD47 à SIRPα e/ou atividade de SIRPα. Em certas modalidades, a variante é codificada por uma variante de polimorfismo de nucleotídeo único (SNP) de uma molécula de ácido nucleico que codifica regiões ou sub-regiões VH ou VL de anticorpo SIRPα, tal como uma ou mais CDRs.

[00149] O termo "vetor" refere-se a uma substância que é usada para transportar ou incluir uma sequência de ácido nucleico, incluindo, por exemplo,

uma sequência de ácido nucleico que codifica um anticorpo anti-SIRPα como descrito neste documento, a fim de introduzir uma sequência de ácido nucléico em uma célula hospedeira.

Os vectores aplicáveis para utilização incluem, por exemplo, vetores de expressão, plasmídeos, vetores de fagos, vetores virais, epissomas e cromossomas artificiais, que podem incluir sequências de seleção ou marcadores operáveis para integração estável no cromossoma de uma célula hospedeira.

Além disso, os vetores podem incluir um ou mais genes marcadores selecionáveis e sequências de controle de expressão adequada.

Os genes marcadores selecionáveis que podem ser incluídos, por exemplo, fornecem a resistência a antibióticos ou toxinas, complementam as deficiências auxotróficas ou fornecem nutrientes críticos que não estão presentes nos meios de cultura.

As sequências de controle de expressão podem incluir promotores constitutivos e induzíveis, intensificadores de transcrição, terminadores da transcrição e semelhantes, que são bem conhecidos na técnica.

Quando duas ou mais moléculas de ácido nucleico devem ser coexpressas (por exemplo, uma cadeia pesada e leve de anticorpo ou um anticorpo VH e VL), ambas as moléculas de ácido nucleico podem ser inseridas, por exemplo, em um único vetor de expressão ou em vetores de expressão separados.

Para a expressão de vetor único, os ácidos nucleicos codificadores podem ser operacionalmente ligados a uma sequência comum de controle de expressão ou ligados a sequências de controle de expressão diferentes, como um promotor induzível e um promotor constitutivo.

A introdução de moléculas de ácido nucleico em uma célula hospedeira pode ser confirmada usando métodos bem conhecidos na técnica.

Tais métodos incluem, por exemplo, análise de ácido nucleico, como Northern blots ou amplificação de mRNA de reação em cadeia da polimerase (PCR), immunoblotting para expressão de produtos gênicos, ou outros métodos analíticos adequados para testar a expressão de uma sequência de ácido nucleico introduzida ou seu correspondente produto do gene. É entendido pelos versados na técnica que as moléculas de ácido nucleico são expressas numa quantidade suficiente para produzir um produto desejado (por exemplo, um anticorpo anti-SIRPα tal como descrito neste documento) e entende-se ainda que os níveis de expressão podem ser otimizados para obter expressão suficiente utilizando métodos bem conhecidos na técnica.

[00150] "Citotoxicidade dependente do anticorpo mediado por células" ou "ADCC" refere-se a uma forma de citotoxicidade em que imunoglobulina secretada ligada a receptores Fc (FcRs) presentes em certas células citotóxicas (por exemplo, células Natural Killer (NK), neutrófilos e macrófagos) ativam estas células efetoras citotóxicas que se ligam especificamente a uma célula-alvo portadoras de antígeno e subsequentemente mata a célula-alvo com citotoxinas. Os anticorpos "armam" as células citotóxicas e são absolutamente necessários para tal ato de matar. As células NK, as células primárias para a mediação de ADCC, expressam apenas FcγRIII, enquanto os monócitos expressam FcγRI, FcγRII e FcγRIII. A expressão de FcR em células hematopoiéticas é conhecida (ver, por exemplo, Ravetch e Kinet, 1991, Annu. Rev. Immunol. 9:457-92). Para avaliar a atividade ADCC de uma molécula de interesse, um ensaio ADCC in vitro (ver, por exemplo, Pedidos de Patente US nº. 5.500.362 e

5.821.337) pode ser realizado. As células efetoras úteis para tais ensaios incluem células mononucleares do sangue periférico (PBMC) e células Natural Killer (NK). Alternativamente ou adicionalmente, a atividade ADCC da molécula de interesse pode ser avaliada in vivo, por exemplo, em um modelo animal (ver, por exemplo, Clynes et al., 1998, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95: 652-56). Anticorpos com pouca ou nenhuma atividade ADCC podem ser selecionados para uso.

[00151] "Fagocitose celular dependente de anticorpos" ou "ADCP" refere- se à destruição de células alvo via monócitos ou fagocitose mediada por macrófagos quando a imunoglobulina ligada a receptores Fc (FcRs) presentes em certas células fagocitóticas (por exemplo, neutrófilos, monócitos e macrófagos) permitem que essas células fagocitóticas se liguem especificamente a uma célula-alvo portadora de antígeno e, subsequentemente, matam a célula-alvo. Para avaliar a atividade de ADCP de uma molécula de interesse, ensaio ADCP in vitro (ver, por exemplo, Bracher et al., 2007, J. Immunol. Methods 323: 160-71) pode ser realizado. As células fagocitóticas úteis para tais ensaios incluem células mononucleares do sangue periférico (PBMC), monócitos purificados de PBMC, ou células U937 diferenciadas para o tipo mononuclear. Alternativamente ou adicionalmente, a atividade ADCP da molécula de interesse pode ser avaliada in vivo, por exemplo, em um modelo animal (ver, por exemplo, Wallace et al., 2001, J. Immunol. Methods 248:167-82). Anticorpos com pouca ou nenhuma atividade ADCP podem ser selecionados para uso.

[00152] "Receptor Fc" ou "FcR" descreve um receptor que se liga à região Fc de um anticorpo. Um FcR exemplificativo é um FcR humano de sequência nativa. Além disso, um FcR exemplificativo é aquele que se liga a um anticorpo IgG (por exemplo, um receptor gama) e inclui receptores das subclasses FcγRI, FcγRII e FcγRIII, incluindo variantes alélicas e formas de splicing alternativo desses receptores. Os receptores FcγRII incluem FcγRIIA (um "receptor de ativação") e FcγRIIB (um "receptor de inibição"), que têm sequências de aminoácidos semelhantes que diferem principalmente em seus domínios citoplasmáticos (ver, por exemplo, Daëron, 1997, Annu. Rev. Immunol. 15:203- 34). Vários FcRs são conhecidos (ver, por exemplo, Ravetch e Kinet, 1991, Annu. Rev. Immunol. 9:457-92; Capel et al., 1994, Immunomethods 4:25-34; e de Haas et al., 1995, J. Lab. Clin. Med. 126: 330-41). Outros FcRs, incluindo aqueles a serem identificados no futuro, são englobados pelo termo "FcR" neste documento. O termo também inclui o receptor neonatal, FcRn, que é responsável pela transferência de IgGs maternos para o feto (ver, por exemplo, Guyer et al., 1976, J. Immunol. 117:587-93; e Kim et al., 1994, Eu. J. Immunol. 24:2429-34). Variantes de anticorpos com ligação melhorada ou diminuída a FcRs foram descritas (ver, por exemplo, WO 2000/42072; Pedidos de Patente US nº. 7.183.387; 7.332.581; e 7.335.742; Shields et al. 2001, J. Biol. Chem. 9(2):6591-604).

[00153] "Citotoxicidade dependente do complemento" ou "CDC" refere-se a lise de uma célula alvo na presença de complemento. A ativação da via clássica do complemento é iniciada pela ligação do primeiro componente do sistema do complemento (C1q) a anticorpos (da subclasse apropriada) que estão ligados ao seu antígeno cognato. Para avaliar a ativação do complemento, um ensaio CDC (ver, por exemplo, Gazzano-Santoro et al., 1996, J. Immunol. Methods 202:163), pode ser realizado. Variantes de polipeptídeos com sequências de aminoácidos da região Fc alteradas (polipeptídeos com uma região Fc variante) e capacidade de ligação de C1q aumentada ou diminuída foram descritas (ver, por exemplo, Pedido de Patente US nº. 6.194.551; WO 1999/51642; Idusogie et al., 2000, J. Immunol. 164:4178-84). Anticorpos com pouca ou nenhuma atividade CDC podem ser selecionados para uso.

[00154] Um polipeptídeo SIRPα de "domínio extracelular" ou "ECD" refere- se a uma forma do polipeptídeo SIRPα que é essencialmente isenta dos domínios transmembranar e citoplasmático. Por exemplo, um ECD de polipeptídeo SIRPα pode ter menos de 1% de tais domínios transmembranares e/ou citoplasmáticos e pode ter menos de 0,5% de tais domínios.

[00155] O termo "identidade" se refere a uma relação entre as sequências de duas ou mais moléculas polipeptídicas ou duas ou mais moléculas de ácidos nucleicos, como determinado pelo alinhamento e comparação das sequências. "Percentual (%) de identidade da sequência de aminoácidos" em relação a uma sequência polipeptídica de referência é definida como a porcentagem de resíduos de aminoácidos em uma sequência candidata que são idênticos aos resíduos de aminoácidos na sequência polipeptídica de referência, após o alinhamento das sequências e introdução de lacunas, se necessário, para atingir o percentual de identidade de sequência máxima, e não levando em consideração quaisquer substituições conservativas como parte da identidade de sequência. O alinhamento para fins de determinação do percentual de identidade da sequência de aminoácidos pode ser atingido de muitas formas no estado da técnica, por exemplo, usando software de computador livre, tal como BLAST, BLAST-2, ALIGN ou MEGALIGN (DNASTAR, Inc.). Aqueles versados na técnica podem determinar os parâmetros apropriados para o alinhamento das sequências, incluindo quaisquer algoritmos necessários para atingir o alinhamento máximo sobre o comprimento total das sequências sendo comparadas.

[00156] Uma "modificação" de um resíduo/posição de aminoácido refere- se a uma alteração de uma sequência de aminoácidos primária em comparação com uma sequência de aminoácidos inicial, em que a alteração resulta de uma alteração de sequência envolvendo o referido resíduo/posição de aminoácido. Por exemplo, modificações típicas incluem a substituição do resíduo por outro aminoácido (por exemplo, uma substituição conservativa ou não conservativa), a inserção de um ou mais (por exemplo, geralmente menos de 5, 4 ou 3) aminoácidos adjacentes do referido resíduo/posição, e/ou deleção do referido resíduo/posição.

[00157] Um "epítopo" é o local na superfície de uma molécula de antígeno ao qual uma única molécula de anticorpo se liga, como uma região localizada na superfície de um antígeno, como um polipeptídeo SIRPα, um fragmento de polipeptídeo SIRPα, que é capaz de ser ligado a uma ou mais regiões de ligação ao antígeno de um anticorpo, e que tem atividade antigênica ou imunogênica em um animal, como um mamífero (por exemplo, um humano), que é capaz de desencadear uma resposta imunológica. Um epitopo com atividade imunogênica é uma fração de um polipeptídeo que induz uma resposta de anticorpo em um animal. Um epitopo com atividade antigênica é uma fração de um polipeptídeo ao qual um anticorpo se liga conforme determinado por qualquer método bem conhecido na técnica, incluindo, por exemplo, por um imunoensaio. Os epítopos antigênicos não precisam necessariamente ser imunogênicos. Os epítopos frequentemente consistem geralmente em agrupamentos de superfície quimicamente ativos de moléculas, como aminoácidos ou cadeias laterais de açúcar e têm características estruturais tridimensionais específicas, bem como características de carga específicas. Os epítopos de anticorpo podem ser epítopos lineares ou epítopos conformacionais. Os epítopos lineares são formados por uma sequência contínua de aminoácidos em uma proteína. Os epítopos conformacionais são formados por aminoácidos que são descontínuos na sequência proteica, mas que são reunidos mediante a dobramento da proteína na sua estrutura tridimensional. Os epítopos induzidos são formados quando a estrutura tridimensional da proteína está em uma conformação alterada, tal como após a ativação ou ligação de outra proteína ou ligante. Em certas modalidades, um epitopo SIRPα é um recurso de superfície tridimensional de um polipeptídeo SIRPα. Em outras modalidades, um epitopo SIRPα é um recurso linear de um polipeptídeo SIRPα. Geralmente, um antígeno tem vários ou muitos epítopos diferentes e pode reagir com muitos anticorpos diferentes.

[00158] Um anticorpo liga-se a "um epítopo", "essencialmente o mesmo epítopo" ou "o mesmo epítopo" que um anticorpo de referência, quando os dois anticorpos reconhecem epítopos idênticos, sobrepostos ou adjacentes em um espaço tridimensional. Os métodos mais amplamente utilizados e rápidos para determinar se dois anticorpos se ligam a epítopos idênticos, sobrepostos ou adjacentes em um espaço tridimensional são ensaios de competição, que podem ser configurados em vários formatos diferentes, por exemplo, usando antígeno marcado ou anticorpo marcado. Em alguns ensaios, o antígeno é imobilizado em uma placa de 96 poços, ou expresso em uma superfície celular, e a capacidade de anticorpos não marcados de bloquear a ligação de anticorpos marcados é medida utilizando marcadores radioativos, fluorescentes ou enzimáticos.

[00159] "Mapeamento de epítopos" é o processo de identificação dos sítios de ligação ou epítopos de anticorpos em seus antígenos-alvo. "Binning de epítopo" é o processo de agrupar anticorpos com base nos epítopos que eles reconhecem. Mais particularmente, o binning de epítopos compreende métodos e sistemas para discriminar as propriedades de reconhecimento de epítopos de diferentes anticorpos, utilizando ensaios de competição combinados com processos computacionais para agrupar anticorpos com base nas suas propriedades de reconhecimento de epítopos e identificar anticorpos possuindo especificidades de ligação distintas.

[00160] "Carreadores", conforme usado neste documento, inclui carreadores, excipientes ou estabilizadores farmaceuticamente aceitáveis que não sejam tóxicos para a célula ou para o mamífero exposto a eles nas dosagens e concentrações utilizadas. Frequentemente, o carreador fisiologicamente aceitável é uma solução aquosa tamponada de pH. Exemplos de carreadores aceitáveis incluem tampões, como fosfato, citrato e outros ácido orgânicos; antioxidantes, incluindo ácido ascórbico; polipeptídeos de baixo peso molecular (por exemplo, menos de cerca de 10 resíduos de aminoácidos); proteínas, tais como albumina sérica, gelatina ou imunoglobulinas; polímeros hidrofílicos, tais como polivinilpirrolidona, aminoácidos, tais como glicina, glutamina,

asparaginas, arginina ou lisina; monossacarídeos, dissacarídeos e outros carboidratos, incluindo glicose, manose, ou dextrinas; agentes quelantes, tais como EDTA; álcoois de açúcar, tais como manitol ou sorbitol; contraíons formadores de sal, tais como sódio; e/ou surfactantes aniônicos, tais como TWEEN™, glicol polietileno (PEG) e PLURONICS™. O termo "carreador" também pode se referir a um diluente, adjuvante (por exemplo, adjuvante de Freund (completo ou incompleto)), excipiente ou veículo.

Tais carreadores, inclusive carreadores farmacêuticos, podem ser líquidos, tais como água e óleos, incluindo aqueles de origem animal, vegetal, de petróleo ou sintética, tal como óleo de amendoim, óleo de soja, óleo mineral, óleo de sésamo e similares.

A água é um carreador exemplar quando uma composição (por exemplo, uma composição farmacêutica) é administrada por via intravenosa.

Soluções salinas e soluções de glicerol e dextrose aquosa também podem ser empregadas como carreadores líquidos, particularmente para soluções injetáveis.

Excipientes adequados (por exemplo, excipientes farmacêuticos) incluem amido, glicose, lactose, sacarose, gelatina, malte, arroz, farinha, giz, sílica gel, estearato de sódio, monoestearato de glicerol, talco, cloreto de sódio, leite desnatado seco, glicerol, propileno, glicol, água, etanol e semelhantes.

A composição, se desejado, também pode conter quantidades menores de agentes molhantes ou emulsificantes, ou agentes tamponantes de pH.

As composições podem assumir a forma de soluções, suspensões, emulsões, comprimidos, pílulas, cápsulas, pós, formulações de liberação sustentada e semelhantes.

Composições orais, incluindo formulações, podem incluir carreadores padrões tais como notas farmacêuticas de manitol, lactose, amido, estearato de magnésio, sacarina de sódio, celulose, carbonato de magnésio, etc.

Exemplos de carreadores farmacêuticos adequados são descritos em Remington e Gennaro, Remington’s Pharmaceutical Sciences (18th ed. 1990). As composições, incluindo compostos farmacêuticos, podem conter um anticorpo anti-SIRPα, por exemplo, na forma isolada ou purificada, juntamente com uma quantidade adequada de veículos.

[00161] O termo "farmaceuticamente aceitável", tal como utilizado neste documento, significa ser aprovado por uma agência reguladora do governo federal ou estadual, ou listado na Farmacopeia dos Estados Unidos, Farmacopeia Europeia ou outra farmacopeia geralmente reconhecida para uso em animais e mais particularmente em humanos.

[00162] "Anticorpos policlonais", como utilizado neste documento, refere- se a uma população de anticorpos gerada em uma resposta imunológica para uma proteína com muitos epítopos e, deste modo, inclui uma variedade de anticorpos diferentes dirigidos para os mesmos ou diferentes epítopos dentro da proteína. Os métodos de produção de anticorpos policlonais são conhecidos na técnica (ver, por exemplo, Short Protocols in Molecular Biology (Ausubel et al. Eds., 5ª ed. 2002)).

[00163] Um "ácido nucleico isolado" é um ácido nucleico, por exemplo, um RNA, DNA ou um ácido nucleico misto, que é substancialmente separado de outras sequências de DNA do genoma, assim como proteínas ou complexos, como ribossomos e polimerases, que naturalmente acompanham uma sequência nativa. Uma molécula de ácido nucleico "isolada" é aquela que é separada de outras moléculas de ácido nucleico que estão presentes na fonte natural da molécula de ácido nucleico. Além disso, uma molécula de ácido nucleico "isolada", tal como uma molécula de cDNA, pode ser substancialmente livre de outro material celular ou meio de cultura, quando produzida por técnicas recombinantes, ou substancialmente livres de precursores químicos ou outros produtos químicos, quando quimicamente sintetizada. Numa modalidade específica, uma ou mais moléculas de ácido nucleico que codificam um anticorpo, como descrito neste documento, são isoladas ou purificadas. O termo engloba sequências de ácido nucleico que foram removidas do seu ambiente que ocorre naturalmente e inclui isolados de DNA recombinantes ou clonados e análogos sintetizados quimicamente ou análogos sintetizados biologicamente por sistemas heterólogos. Uma molécula substancialmente pura pode incluir formas isoladas da molécula.

[00164] "Polinucleotídeo" ou "ácido nucleico", como utilizado neste indistintamente, refere-se a polímeros de nucleotídeos de qualquer comprimento e inclui DNA e RNA. Os nucleotídeos podem ser desoxirribonucleotídeos, ribonucleotídeos, nucleotídeos modificados ou bases, e/ou seus análogos ou qualquer substrato que pode ser incorporado a um polímero por DNA ou RNA polimerase ou por uma reação sintética. Um polinucleotídeo pode compreender nucleotídeos modificados, como nucleotídeos metilados e seus análogos. "Oligonucleotídeo", como utilizado neste documento, refere-se a polinucleotídeos curtos, de fita simples, geralmente sintéticos, que geralmente, mas não obrigatoriamente, menos do que cerca de 200 nucleotídeos. Os termos "oligonucleotídeos" e "polinucleotídeos" não são mutuamente exclusivos. A descrição acima para polinucleotídeos é igualmente e totalmente aplicável aos oligonucleotídeos. Uma célula que produz um anticorpo anti-SIRPα da presente divulgação pode incluir uma célula de hibridoma parental, bem como células hospedeiras bacterianas e eucarióticas nas quais os ácidos nucleicos que codificam os anticorpos foram introduzidos. Células hospedeiras adequadas são divulgadas abaixo.

[00165] A menos que especificado de outro modo, a extremidade esquerda de qualquer sequência polinucleotídica de fita simples divulgada neste documento é a extremidade 5'; a direção à esquerda de sequências polinucleotídicas de fita dupla é referida como a direção 5'. A direção da adição de 5' a 3' de transcritos de RNA nascentes é referida como a direção da transcrição; as regiões da sequência na cadeia de DNA com a mesma sequência que o transcrito de RNA que estão 5' para a extremidade 5' do transcrito de RNA são referidas como "sequências a montante"; as regiões da sequência na cadeia de DNA com a mesma sequência que o transcrito de RNA que estão 3' para a extremidade 3' do transcrito de RNA são referidas como "sequências a jusante".

[00166] O termo "anticorpo recombinante" refere-se a um anticorpo que é preparado, expresso, criado ou isolado por meios recombinantes. Os anticorpos recombinantes podem ser anticorpos expressos através do uso de um vetor de expressão recombinante transfectado em uma célula hospedeira, anticorpos isolados de uma biblioteca de anticorpos combinatória recombinante, anticorpos isolados de um animal (por exemplo, um camundongo ou vaca) que seja transgênico e/ou transcromossômico para imunoglobulina humana genes (ver, por exemplo, Taylor et al., 1992, Nucl. Acids Res. 20: 6287-95), ou anticorpos preparados, expressos, criados ou isolados por qualquer outro meio que envolva o splicing de sequências de genes de imunoglobulina para outras sequências de DNA. Esses anticorpos recombinantes podem ter regiões variáveis e constantes, incluindo aquelas derivadas de sequências de imunoglobulina da linha germinativa humana (ver Kabat et al., Supra). Em certas modalidades, no entanto, esses anticorpos recombinantes podem ser submetidos a mutagênese in vitro (ou, quando é usado um transgênico animal para sequências Ig humanas, mutagênese somática in vivo), assim as sequências de aminoácidos das regiões VH e VL dos anticorpos recombinantes são sequências que, embora derivadas e relacionadas com sequências VH e VL de linha germinativa humana, podem não existir naturalmente no repertório de linha germinativa de anticorpos humanos in vivo.

[00167] Os termos "indivíduo" e "paciente" podem ser usados de forma intercambiável. Conforme utilizado neste documento, em certas modalidades, um sujeito é um mamífero, como um não primata (por exemplo, vaca, porco, cavalo, gato, cachorro, rato, etc.) ou um primata (por exemplo, macaco e humano). Em modalidades específicas, o sujeito é um humano.

[00168] "Substancialmente todos" refere-se a pelo menos cerca de 60%, pelo menos cerca de 65%, pelo menos cerca de 70%, pelo menos cerca de 75%, pelo menos cerca de 80%, pelo menos cerca de 85%, pelo menos cerca de 90%, pelo menos cerca de 95%, pelo menos cerca de 98%, pelo menos cerca de 99%, ou cerca de 100%.

[00169] Os termos "agente detectável" ou "molécula detectável" são usados indistintamente neste documento e se referem a uma substância que pode ser usada para determinar a existência ou presença de uma molécula desejada, como um anticorpo anti-SIRPα, conforme descrito neste documento, em uma amostra ou sujeito. Um agente detectável pode ser uma substância que pode ser visualizada ou uma substância que pode ser determinada e/ou medida (por exemplo, por quantificação).

[00170] O termo "elevado" ou "regulado positivamente", quando usado em referência à SIRPα ou uma citocina, pretende significar que o nível de SIRPα ou a citocina é maior do que uma faixa de referência normal ou um sujeito de controle correspondente. Essa SIRPα ou citocinas "elevada" ou "reguladas positivamente" podem ser 110%, 120%, 130%, 140%, 150%, 160%, 170%, 180%, 190%, 200%, 250%, 300%, 400 %, 500%, 600%, 700%, 800%, 900%, 10 vezes, 20 vezes, 30 vezes, 40 vezes, 50 vezes, 100 vezes, 200 vezes, 300 vezes, 400 vezes, 500 vezes, 600 vezes, 700 vezes, 800 vezes, 1000 vezes ou maior do que em um sujeito de controle ou da faixa de referência normal.

[00171] O termo "ácido nucleico codificador" ou seus equivalentes gramaticais, como é usado em referência a molécula de ácido nucleico, refere-

se a uma molécula de ácido nucleico no seu estado nativo, ou quando manipulado por métodos bem conhecidos dos versados na técnica que podem ser transcritos para produzir mRNA, que é então traduzido num polipeptídeo e/ou em um fragmento do mesmo. A cadeia antisense é o complemento de tal molécula de ácido nucleico, e a sequência de codificação pode ser deduzida a partir daí.

[00172] O termo "excipiente" refere-se a uma substância inerte que é comumente usada como um diluente, veículo, conservante, aglutinante ou agente estabilizador e inclui, mas não está limitado a, proteínas (por exemplo, albumina sérica, etc.), aminoácidos (por exemplo, ácido aspártico, ácido glutâmico, lisina, arginina, glicina, histidina, etc.), ácidos graxos e fosfolipídios (por exemplo, alquil sulfonatos, caprilato, etc.), surfactantes (por exemplo, SDS, polissorbato, surfactante não iônico, etc.), sacarídeos (por exemplo, sacarose, maltose, trealose, etc.) e polióis (por exemplo, manitol, sorbitol, etc.). Ver, também, Remington e Gennaro, Remington's Pharmaceutical Sciences (18ª ed. 1990), que é incorporado neste documento por referência na sua totalidade.

[00173] No contexto de um peptídeo ou polipeptídeo, o termo "fragmento", como utilizado neste documento, refere-se a um peptídeo ou polipeptídeo que compreende menos do que a sequência de aminoácidos de comprimento total. Esse fragmento pode surgir, por exemplo, de uma truncagem no terminal amino, uma truncagem no terminal carboxi e/ou uma deleção interna de resíduo(s) da sequência de aminoácidos. Os fragmentos podem, por exemplo, resultar de splicing alternativo de RNA ou da atividade de protease in vivo. Em certas modalidades, os fragmentos SIRPα ou fragmentos de anticorpo anti-SIRPα incluem polipeptídeos compreendendo uma sequência de aminoácidos de pelo menos 5 resíduos de aminoácidos contíguos, pelo menos 10 resíduos de aminoácidos contíguos, pelo menos 15 resíduos de aminoácidos contíguos, pelo menos 20 resíduos de aminoácidos contíguos resíduos, pelo menos 25 resíduos de aminoácidos contíguos, pelo menos 30 resíduos de aminoácidos contíguos, pelo menos 40 resíduos de aminoácidos contíguos, pelo menos 50 resíduos de aminoácidos contíguos, pelo menos 60 resíduos de aminoácidos contíguos, pelo menos 70 resíduos de aminoácidos contíguos, em pelo menos 80 resíduos de aminoácidos contíguos, pelo menos 90 resíduos de aminoácidos contíguos, pelo menos 100 resíduos de aminoácidos contíguos, pelo menos 125 resíduos de aminoácidos contíguos, pelo menos 150 resíduos de aminoácidos contíguos, pelo menos 175 resíduos de aminoácidos contíguos, pelo menos 200 resíduos de aminoácidos contíguos, pelo menos 250, pelo menos 300, pelo menos 350, pelo menos 400, pelo menos 450, pelo menos 500, pelo menos 550, pelo menos 600, pelo menos 650, pelo menos 700, pelo menos 750, pelo menos 800, pelo menos 850, pelo menos 900 ou pelo menos 950 resíduos de aminoácidos contíguos da sequência de aminoácidos de um polipeptídeo SIRPα ou um anticorpo anti-SIRPα. Em uma modalidade específica, um fragmento de um polipeptídeo SIRPα ou um anticorpo anti-SIRPα retém pelo menos 1, pelo menos 2, pelo menos 3 ou mais funções do polipeptídeo ou anticorpo.

[00174] Os termos "cerca de" e "aproximadamente" significam dentro de 20%, dentro de 15%, dentro de 10%, dentro de 9%, dentro de 8%, dentro de 7%, dentro de 6%, dentro de 5%, dentro de 4%, dentro de 3%, dentro de 2%, dentro de 1% ou menos de um determinado valor ou faixa.

[00175] "Administrar" ou "administração" refere-se ao ato de injetar ou de outra forma distribuir fisicamente uma substância como ela existe fora do corpo (por exemplo, um anticorpo anti-SIRPα conforme descrito neste documento) em um paciente, como por via mucosa, intradérmica, intravenosa, entrega intramuscular e/ou qualquer outro método de entrega física descrita neste documento ou conhecido na técnica.

[00176] No contexto de tumores sólidos, "inibição" pode ser avaliada pela inibição da progressão da doença, inibição do crescimento do tumor, redução do tumor primário, alívio de sintomas relacionados ao tumor, inibição de fatores secretados pelo tumor, atraso no aparecimento de tumores primários ou secundários, desenvolvimento retardado de tumores primários ou secundários, diminuição da ocorrência de tumores primários ou secundários, retardo ou diminuição da gravidade dos efeitos secundários da doença, crescimento do tumor retido e regressão de tumores, aumento do tempo para progressão (TTP), aumento da sobrevida livre de progressão (PFS), aumento da sobrevida geral (OS), entre outros. OS conforme usado neste documento significa o tempo desde a randomização (por exemplo, data da primeira dose) até a morte por qualquer causa e é medida na população com intenção de tratar. TTP conforme usado neste documento significa o tempo desde a randomização (por exemplo, data da primeira dose) até a progressão objetiva do tumor; TTP não inclui mortes. Conforme usado neste documento, PFS significa o tempo desde a randomização (por exemplo, data da primeira dose) até a progressão ou morte objetiva do tumor. Em uma modalidade, as taxas de PFS são computadas usando as estimativas de Kaplan-Meier.

[00177] Em certas modalidades, o tratamento de tumores sólidos pode ser avaliado por Critérios de Avaliação de Resposta em Tumores Sólidos (RECIST 1.1) ver Eisenhauer EA, et al. Eur J Cancer 2009;45(2):228-247. A avaliação por RECIST

1.1 é resumida abaixo.

[00178] A resposta geral deve ser avaliada de acordo com a Tabela 7 para indivíduos com lesões alvo e a Tabela 8 para sujeitos com apenas lesões não alvo. Tabela 7: Resposta de Ponto de Tempo: sujeitos com doença alvo (± não alvo) Resposta a lesões Resposta à lesão não Novas lesões Resposta alvo alvo geral CR CR Não CR CR Não CR/não PD Não PR CR Não avaliado Não PR PR Não PD ou nem todos Não PR avaliados SD Não PD ou nem todos Não SD avaliados Nem todos Não PD Não NE avaliados PD Qualquer Sim ou não PD Qualquer PD Sim ou não PD Qualquer Qualquer Sim PD CR = resposta completa, PR = resposta parcial, SD = doença estável, PD = doença progressiva, NE = não avaliável.

Tabela 8: Resposta de ponto de tempo: indivíduos apenas com doença não alvo Resposta de lesões não Novas lesões Resposta geral direcionadas CR Não CR Não CR/não PD Não Não CR/não Pda) Nem todos avaliados Não NE PD inequívoca Sim ou não PD Qualquer Sim PD CR = resposta completa, SD = doença estável, PD = doença progressiva, NE

= não avaliável. a "Não CR/não PD" é preferido em vez de "doença estável" para doença não alvo

[00179] Com relação à avaliação das lesões alvo, a resposta completa (CR) é o desaparecimento de todas as lesões alvo, sendo a resposta parcial (PR) de pelo menos 30% de diminuição na soma do maior diâmetro das lesões alvo, tomando como referência a soma da linha de base do maior diâmetro, em que a doença progressiva (PD) é de pelo menos 20% de aumento na soma do maior diâmetro de lesões alvo, tomando como referência a menor soma do maior diâmetro registrado desde o início do tratamento ou o aparecimento de uma ou mais novas lesões, em que a doença estável (SD) não seja encolhimento suficiente para se qualificar para resposta parcial nem aumento suficiente para se qualificar para doença progressiva, tomando como referência a menor soma do maior diâmetro desde o início do tratamento.

[00180] Com relação à avaliação de lesões não alvo, em que CR é o desaparecimento de todas as lesões não alvo e a normalização do nível de marcadores tumorais, resposta incompleta/não CR/não PD seja a persistência de uma ou mais lesões não alvo e/ou a manutenção do nível do marcador tumoral acima dos limites normais, e PD seja o surgimento de uma ou mais novas lesões e/ou progressão inequívoca de lesões não alvo existentes.

[00181] Diretrizes para critérios de resposta para uso em triagens que testam imunoterapêuticos (Seymour et al. Lancet Oncol. 2017; 18: e143 – e152) pode ser acessado online em: https://www.thelancet.com/journals/lanonc/article/PIIS1470-2045(17)30074-8

[00182] Em certas modalidades, o tratamento de tumores sólidos pode ser avaliado por meio de alterações no status de desempenho do Eastern Cooperative Oncology Group (ECOG) (também referido como ECOG PS) (Oken et al. Am J Clin Oncol. 1982;5(6):649-55). Conforme utilizado neste documento, ECOG PS é definido como a seguir. Pontuação Descrição

ECOG PS 0 Totalmente ativo, capaz de continuar com todo desempenho pré-doença sem restrição 1 Restrito em atividade fisicamente extenuante, mas ambulatorial e capaz de realizar trabalhos de natureza leve ou sedentária, por exemplo, trabalho doméstico leve, trabalho de escritório. 2 Ambulatorial e capaz de todo autocuidado, mas incapaz de realizar qualquer atividade laboral. Ativo e disposto por mais de 50% das horas de vigília. 3 Capaz apenas de autocuidado limitado, confinado à cama ou cadeira mais de 50% das horas de vigília. 4 Completamente deficiente. Não pode continuar com qualquer autocuidado. Totalmente confinado à cama ou cadeira 5 Morto

[00183] Em certas modalidades, a eficácia para o tratamento de NHL é avaliada de acordo com os "Critérios de Lugano", que incorporam os Critérios de Resposta do Grupo de Trabalho Internacional (IWG) para NHL (Cheson BD, et al., J Clin Oncol. 32 (27): 3059-3068 (2014)) e os Critérios de Deauville para a interpretação da tomografia por emissão de pósitrons de fluorodeoxiglicose (FDG PET) (Itti E, et al., Eur J Nucl Med Mol Imaging. 40(9):1312-20 (2013)). Conforme utilizado neste documento, os Critérios de Lugano incluem os critérios de avaliação inicial para o envolvimento do sítio, e os critérios de avaliação da resposta, ambos descritos em mais detalhes nos dois parágrafos abaixo.

[00184] Critérios para Envolvimento do Sítio Sítio de tecido Clínico Avidez FDG Teste Descoberta Positiva Linfonodos Palpável Histologias PET-CT Aumentar absorção ávidas por FDG CT de FDG Doença de Aumento inexplicado Nonavid de nódulos Baço Palpável Histologias PET-CT Absorção difusa, ávidas por FDG CT massa solitária, Doença de lesões miliares, Nonavid nódulos > 13 cm de comprimento vertical, massa, nódulos Fígado Palpável Histologias PET-CT Absorção difusa, ávidas por FDG CT nódulos de massa Doença de Nonavid CNS Sinais, CT Lesão(ões) em massa sintomas MRI Infiltração CSF leptomeníngea, avaliação lesões em massa Citologia, citometria de fluxo

Outros (por Dependente do PET-CTa, Envolvimento de exemplo, pele, sítio biópsia linfoma pulmão, trato GI, osso, medula óssea) CNS = sistema nervoso central; CSF = líquido cefalorraquidiano; CT = tomografia computadorizada; FDG = fluorodeoxiglucose; GI = gastrointestinal; MRI = ressonância magnética; PET = tomografia por emissão de pósitrons. a PET-CT é adequada para determinação do envolvimento da medula óssea e pode ser considerada altamente sugestiva para envolvimento de outros sítios extralinfáticos. A confirmação da biópsia desses sítios pode ser considerada, se necessário.

[00185] Critérios para Avaliação de Resposta RESPOSTA E RESPOSTA BASEADA EM PET- RESPOSTA BASEADA EM

SÍTIO CT CT Completo Resposta metabólica Resposta radiológica completa completa (todos os seguintes) Linfonodos e Pontuação 1, 2 ou 3a com ou Nódulos alvo/massas sítios sem uma massa residual em nodais devem regredir extralinfáticos 5PSb para ≤ 1,5 cm em LDi É reconhecido que no anel de Sem sítios extralinfáticos Waldeyer ou sítios extranodais de doença com alta captação fisiológica ou com ativação no baço ou medula (por exemplo, com

RESPOSTA E RESPOSTA BASEADA EM PET- RESPOSTA BASEADA EM

SÍTIO CT CT quimioterapia ou fatores estimuladores de colônia mieloide), a captação pode ser maior do que o mediastino e/ou fígado normais. Nesta circunstância, a resposta metabólica completa pode ser inferida se a absorção nos sítios de envolvimento inicial não for maior do que o tecido normal circundante, mesmo se o tecido tiver alta absorção fisiológica Lesão não medida Não aplicável Ausente Aumento de Não aplicável Voltar ao normal órgãos Novas lesões Nenhum Nenhum Medula óssea Nenhuma evidência de doença Normal por morfologia; ávida por FDG na medula se indeterminado, IHC negativo Parcial Resposta metabólica parcial Remissão parcial (todos os seguintes) Linfonodos e Pontuação 4 ou 5b com ≥ 50% de redução na sítios absorção reduzida em soma dos diâmetros extralinfáticos comparação com a linha de perpendiculares (SPD) de

RESPOSTA E RESPOSTA BASEADA EM PET- RESPOSTA BASEADA EM

SÍTIO CT CT base e massa(s) residual(ais) até 6 nódulos de qualquer tamanho mensuráveis alvo e sítios Nesse ínterim, essas extranodais descobertas sugerem doença Quando uma lesão é em resposta muito pequena para medir No final do tratamento, esses na CT, atribua 5 mm × 5 achados indicam doença mm como o valor padrão residual Quando não estiver mais visível, 0 × 0 mm Para um nódulo > 5 mm × 5 mm, mas menor do que o normal, usar a medição real para o cálculo Lesão não Não aplicável Ausente/normal, medida regrediu, mas sem aumento Aumento de Não aplicável O baço deve ter regredido órgãos > 50% em comprimento além do normal Novas lesões Nenhum Nenhum Medula óssea Absorção residual superior à Não aplicável absorção na medula normal, mas reduzida em comparação com a linha de base (absorção

RESPOSTA E RESPOSTA BASEADA EM PET- RESPOSTA BASEADA EM

SÍTIO CT CT difusa compatível com alterações reativas da quimioterapia permitida). Se houver alterações focais persistentes na medula, no contexto de uma resposta nodal, deve-se considerar uma avaliação adicional com MRI ou biópsia ou uma varredura de intervalo Sem resposta ou Sem resposta metabólica Doença estável doença estável Nódulos Pontuação 4 ou 5b sem Redução <50% da linha de alvo/massas alteração significativa na base no SPD de até 6 nodais, lesões absorção de FDG da linha de nódulos mensuráveis extranodais base no ínterim ou no final do dominantes e sítios tratamento extranodais; nenhum critério para doença progressiva é atendido Lesão não medida Não aplicável Nenhum aumento consistente com a progressão Aumento de Não aplicável Nenhum aumento órgãos consistente com a progressão

RESPOSTA E RESPOSTA BASEADA EM PET- RESPOSTA BASEADA EM

SÍTIO CT CT Novas lesões Nenhum Nenhum Medula óssea Sem alteração da linha de base Não aplicável Doença Resposta metabólica A doença progressiva progressiva progressiva exige pelo menos 1 dos seguintes Nódulos alvo Pontuação 4 ou 5b com um Progressão do PPD: individuais/lesões aumento na intensidade de Um nódulo/lesão extranodais de absorção da linha de base individual deve ser massas nodais e/ou anormal com: Novos focos ávidos por FDG LDi> 1,5 cm e consistentes com linfoma na Aumentar em ≥ 50% do avaliação intermediária ou nadir de PPD e final do tratamento Um aumento no LDi ou SDi a partir do nadir 0,5 cm para lesões ≤ 2 cm 1,0 cm para lesões> 2 cm No cenário de esplenomegalia, o comprimento do baço deve aumentar em> 50% da extensão de seu aumento anterior além da linha de base (por exemplo, um baço de 15 cm deve aumentar para>

RESPOSTA E RESPOSTA BASEADA EM PET- RESPOSTA BASEADA EM

SÍTIO CT CT 16 cm). Se não houver esplenomegalia anterior, deve aumentar em pelo menos 2 cm da linha de base Esplenomegalia nova ou recorrente Lesões não Nenhum Progressão nova ou clara medidas de lesões preexistentes não medidas Novas lesões Novos focos ávidos por FDG Novo crescimento de consistentes com linfoma, em lesões A previamente vez de outra etiologia (por resolvidas novo nódulo> exemplo, infecção, 1,5 cm em qualquer eixo inflamação). Se houver dúvida Um novo sítio extranodal quanto à etiologia de novas > 1,0 cm em qualquer lesões, biópsia ou varredura eixo, se < 1,0 cm em de intervalo pode ser qualquer eixo, sua considerada presença deve ser inequívoca e deve ser atribuída ao linfoma Doença avaliável de qualquer tamanho inequivocamente atribuível ao linfoma

RESPOSTA E RESPOSTA BASEADA EM PET- RESPOSTA BASEADA EM

SÍTIO CT CT Medula óssea Focos novos ou recorrentes Envolvimento novo ou ávidos por FDG recorrente 5PS = escala de 5 pontos; CT = tomografia computadorizada; FDG = fluorodeoxiglucose; GI = gastrointestinal; IHC = imuno-histoquímica; LDi = maior diâmetro transversal de uma lesão; MRI = ressonância magnética; PET = tomografia por emissão de pósitrons; PPD = produto vetorial do LDi e diâmetro perpendicular; SDi = menor eixo perpendicular ao LDi; SPD = soma do produto dos diâmetros perpendiculares para lesões múltiplas. a Uma pontuação de 3 em muitos sujeitos indica um bom prognóstico com o tratamento padrão, especialmente se no momento de uma varredura intermediária. No entanto, em estudos envolvendo PET em que o descalonamento é investigado, pode ser preferível considerar uma pontuação de 3 como uma resposta inadequada (para evitar o subtratamento). Lesões dominantes medidas: até seis dos maiores nódulos dominantes, massas nodais e lesões extranodais selecionadas para serem claramente mensuráveis em dois diâmetros. Os nódulos devem ser preferencialmente de regiões distintas do corpo e devem incluir, quando aplicável, áreas mediastinais e retroperitoneais. Lesões não nodais incluem aquelas em órgãos sólidos (por exemplo, fígado, baço, rins e pulmões), envolvimento gastrointestinal, lesões cutâneas ou aquelas observadas na palpação. Lesões não medidas: Qualquer doença não selecionada como medida, doença dominante e doença verdadeiramente avaliável deve ser considerada não medida. Esses sítios incluem quaisquer nódulos, massas nodais e sítios extranodais não selecionados como dominantes ou mensuráveis, ou que não atendam aos requisitos de mensurabilidade, mas ainda são considerados anormais, assim como doença verdadeiramente avaliável, que seja qualquer sítio de doença suspeita que seria difícil de acompanhar quantitativamente com medição, incluindo derrames pleurais, ascite, lesões ósseas, doença leptomeníngea, massas abdominais e outras lesões que não podem ser confirmadas e acompanhadas por imagem. No anel de Waldeyer ou em sítios extranodais (por exemplo, trato GI, fígado, medula óssea), a absorção de FDG pode ser maior do que no mediastino com resposta metabólica completa, mas não deve ser maior do que a absorção fisiológica normal circundante (por exemplo, com ativação da medula como resultado de quimioterapia ou fatores de crescimento mieloide). b PET 5PS: 1, sem absorção acima do fundo; 2, absorção <mediastino; 3, captação> mediastino, mas <fígado; 4, absorção moderada> fígado; 5, absorção marcadamente maior do que no fígado e/ou novas lesões; X, novas áreas de absorção improváveis de estarem relacionadas ao linfoma.

[00186] A escala de cinco pontos de Deauville (5PS) é uma escala internacionalmente recomendada para rotina clínica e triagens clínicas usando FDG-PET/CT no estágio inicial e avaliação da resposta ao tratamento no linfoma de Hodgkin (LH) e certos tipos de NHL (ver Itti E, et al., Eur J Nucl Med Mol Imaging. 40(9):1312-20 (2013); Meignan M, et al., Leuk Lymphoma. 55(1):31-7 (2014)).

[00187] A escala de cinco pontos de Deauville é uma ferramenta simples baseada na interpretação visual da absorção de FDG. Tira-se proveito de dois pontos de referência do paciente individual, que demonstraram absorção relativamente constante em imagens seriais. Os dois órgãos de referência são o mediastino (também conhecido como pool de sangue) e o fígado. A escala varia de 1 a 5, onde 1 é o melhor e 5 é o pior, conforme listado abaixo. Cada lesão ávida por FDG (ou anteriormente ávida por FDG) é avaliada independentemente.

1. sem absorção ou absorção residual (quando usado provisoriamente)

2. leve absorção, mas abaixo do acúmulo de sangue (mediastino)

3. absorção acima do mediastino, mas abaixo ou igual à absorção no fígado

4. absorção ligeiramente a moderadamente maior do que o fígado

5. aumenta acentuadamente a absorção ou qualquer nova lesão (na avaliação da resposta)

[00188] Em algumas modalidades, a resposta ao tratamento de acordo com a escala de cinco pontos de Deauville é avaliada da seguinte forma: • resposta completa (CR): pontuações 1, 2 ou 3 juntamente com a ausência de lesão (ões) da medula óssea ávida por FDG são interpretadas como resposta metabólica completa (CR), independentemente de uma massa persistente na CT • resposta parcial (PR): uma pontuação de Deauville de 4 ou 5, desde que: − absorção é diminuída em comparação com a linha de base e − ausência de desenvolvimento de progressão estrutural na CT • doença estável (SD), também chamada de nenhuma resposta metabólica: uma pontuação de Deauville de 4 ou 5 sem mudança significativa na absorção de FDG a partir da linha de base. • doença progressiva (DP): uma pontuação de Deauville de 4 a 5 com intensidade crescente em comparação com a linha de base ou qualquer varredura intermediária, e/ou qualquer novo foco ávido por FDG consistente com linfoma maligno.

[00189] No contexto do câncer, um câncer "refratário", por exemplo NHL refratário, linfoma folicular refratário, ou DLBCL refratário, é um câncer que não respondeu ao tratamento inicial. O termo câncer refratário inclui, portanto, cânceres nos quais os efeitos esperados do tratamento inicial não são observados. Um câncer refratário pode ser um câncer que está piorando ou que permanece o mesmo. Um câncer "recidivante", por exemplo NHL recidivante, linfoma folicular recidivante ou DLBCL recidivante, é um câncer que respondeu a um tratamento, por exemplo, parou de progredir, progrediu mais lentamente do que quando não tratado, regrediu ou mesmo desapareceu principalmente ou completamente, mas em seguida, para de responder ou retorna.

[00190] No contexto de um polipeptídeo, o termo "análogo", tal como utilizado neste documento, refere-se a um polipeptídeo que possui uma função semelhante ou idêntica a um polipeptídeo SIRPα, um fragmento de um polipeptídeo SIRPα, ou um anticorpo anti-SIRPα, mas não necessariamente compreende um sequência de aminoácidos semelhante ou idêntica de um polipeptídeo SIRPα, um fragmento de um polipeptídeo SIRPα ou um anticorpo anti-SIRPα, ou possui uma estrutura semelhante ou idêntica de um polipeptídeo SIRPα, um fragmento de um polipeptídeo SIRPα ou um anticorpo anti-SIRPα. Um polipeptídeo que possui uma sequência de aminoácidos semelhante refere-se a um polipeptídeo que satisfaz pelo menos um dos seguintes: (a) um polipeptídeo com uma sequência de aminoácidos que é de pelo menos 30%, pelo menos 35%, pelo menos 40%, em pelo menos 45%, pelo menos 50%, pelo menos 55%, pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos pelo menos 95% ou pelo menos 99% idêntica à sequência de aminoácidos de um polipeptídeo SIRPα, um fragmento de um polipeptídeo SIRPα ou um anticorpo anti-SIRPα descrito neste documento; (b) um polipeptídeo codificado por uma sequência de nucleotídeos que hibridiza sob condições severas com uma sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo SIRPα, um fragmento de um polipeptídeo SIRPα ou um anticorpo anti-SIRPα (ou região VH ou VL do mesmo), descrita neste documento, pelo menos 5 resíduos de aminoácidos, pelo menos 10 resíduos de aminoácidos, pelo menos 15 resíduos de aminoácidos, pelo menos 20 resíduos de aminoácidos, pelo menos 25 resíduos de aminoácidos, pelo menos 30 resíduos de aminoácidos, pelo menos 40 resíduos de aminoácidos, pelo menos 50 aminoácidos resíduos de ácido, pelo menos 60 resíduos de aminoácidos, pelo menos 70 resíduos de aminoácidos, pelo menos 80 resíduos de aminoácidos, pelo menos 90 resíduos de aminoácidos, pelo menos 100 resíduos de aminoácidos, pelo menos 125 resíduos de aminoácidos ou pelo menos 150 resíduos de aminoácidos resíduos (ver, por exemplo, Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual (2001); e Maniatis et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual (1982)); ou (c) um polipeptídeo codificado por uma sequência de nucleotídeos que é de pelo menos 30%, pelo menos 35%, pelo menos 40%, pelo menos 45%, pelo menos 50%, pelo menos 55%, pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95% ou pelo menos 99% idêntica à sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo SIRPα, um fragmento de um polipeptídeo SIRPα, ou um anticorpo anti-SIRPα (ou região VH ou VL do mesmo) descrito neste documento. Um polipeptídeo com estrutura semelhante a um polipeptídeo SIRPα, um fragmento de um polipeptídeo SIRPα ou um anticorpo anti-SIRPα descrito neste documento, refere-se a uma polipeptídeo que possui uma estrutura secundária, terciária ou quaternária semelhante a um polipeptídeo SIRPα, um fragmento de um polipeptídeo SIRPα, ou um anticorpo anti-SIRPα descrito neste documento. A estrutura de um polipeptídeo pode ser determinada por métodos conhecidos por aqueles versados na técnica, incluindo, mas não limitados a cristalografia de raios X, ressonância magnética nuclear e microscopia eletrônica cristalográfica.

[00191] No contexto de um polipeptídeo, o termo "derivado", tal como utilizado neste documento, refere-se a um polipeptídeo que compreende uma sequência de aminoácidos de um polipeptídeo SIRPα, um fragmento de um polipeptídeo SIRPα ou um anticorpo que se liga a um polipeptídeo SIRPα que foi alterado pela introdução de substituições, deleções ou adições de resíduos de aminoácidos. O termo "derivado", tal como utilizado neste documento, também se refere a um polipeptídeo SIRPα, um fragmento de um polipeptídeo SIRPα ou um anticorpo que se liga a um polipeptídeo SIRPα que foi quimicamente modificado, por exemplo, pela ligação covalente de qualquer tipo de molécula ao polipeptídeo. Por exemplo, mas não como limitação, um polipeptídeo SIRPα, um fragmento de um polipeptídeo SIRPα ou um anticorpo anti-SIRPα pode ser quimicamente modificado, por exemplo, por glicosilação, acetilação, peguilação, fosforilação, amidação, derivatização por proteção/grupos de bloqueio, clivagem proteolítica, clivagem química, formulação, síntese metabólica de tunicamicina, ligação a um ligante celular ou outra proteína, etc. Os derivados são modificados de um modo que é diferente do peptídeo ou polipeptídeos de ocorrência natural ou de partida, quer no tipo ou na localização das moléculas ligadas. Derivados incluem adicionalmente a deleção de um ou mais grupos químicos que estão naturalmente presentes no peptídeo ou polipeptídeo. Além disso, um derivado de um polipeptídeo SIRPα, um fragmento de um polipeptídeo SIRPα ou um anticorpo anti-SIRPα pode conter um ou mais aminoácidos não clássicos. Um derivado de polipeptídeo possui uma função semelhante ou idêntica a um polipeptídeo SIRPα, um fragmento de um polipeptídeo SIRPα ou um anticorpo anti-SIRPα descrito neste documento.

[00192] O termo "composição" engloba um produto contendo os ingredientes especificados (por exemplo, um anticorpo fornecido neste documento), opcionalmente, nas quantidades especificadas.

4.3 Composições e Métodos Para Produção de Iguais

[00193] São fornecidos neste documento anticorpos que se ligam a um polipeptídeo SIRPα, um fragmento de polipeptídeo SIRPα, um peptídeo SIRPα ou um epitopo SIRPα.

[00194] Em certas modalidades, os anticorpos fornecidos neste documento ligam-se à SIRPα humano e/ou cyno. Em uma modalidade, os anticorpos SIRPα ligam-se à SIRPα humana. Em uma modalidade, os anticorpos SIRPα ligam-se à SIRPα de cyno. Em uma modalidade, os anticorpos SIRPα se ligam tanto à SIRPα humana quanto à SIRPα de cyno. Em outras modalidades, os anticorpos fornecidos neste documento não se ligam à SIRPα de roedor.

[00195] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-SIRPα se ligam ao domínio extracelular (ECD) de SIRPα. Em certas modalidades, os anticorpos anti- SIRPα se ligam a um epítopo no ECD de SIRPα, que se sobrepõe ao sítio de ligação de CD47. Em certas modalidades, os anticorpos anti-SIRPα se ligam a um epítopo no ECD de SIRPα, que é o mesmo que o sítio de ligação de CD47.

[00196] Também são fornecidos anticorpos que bloqueiam competitivamente um anticorpo anti-SIRPα fornecido neste documento contra a ligação a um polipeptídeo SIRPα.

[00197] Também são fornecidos anticorpos que competem pela ligação a um polipeptídeo SIRPα com um anticorpo anti-SIRPα fornecido neste documento.

[00198] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-SIRPα bloqueiam a ligação de CD47 a um polipeptídeo SIRPα. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-SIRPα competem pela ligação de CD47 a um polipeptídeo SIRPα.

[00199] Em certas modalidades, a ligação de CD47 à SIRPα é inibida pelos anticorpos fornecidos neste documento. Em outras modalidades, a ligação de CD47 à SIRPα é bloqueada pelos anticorpos fornecidos neste documento.

[00200] Os anticorpos anti-SIRPα fornecidos neste documento também podem ser conjugados ou fundidos de forma recombinante, por exemplo, a um agente detectável. Além disso, são fornecidas composições que compreendem um anticorpo anti-SIRPα.

[00201] Também são fornecidas neste documento moléculas de ácido nucleico isoladas que codificam uma cadeia pesada de imunoglobulina, cadeia leve, região VH, região VL, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2 e/ou VL CDR3 de anticorpos anti-SIRPα que se ligam a um polipeptídeo SIRPα, um fragmento de polipeptídeo SIRPα, um peptídeo SIRPα ou um epitopo SIRPα.

[00202] São fornecidos adicionalmente vetores e células hospedeiras compreendendo moléculas de ácido nucleico que codificam anticorpos anti- SIRPα que se ligam a um polipeptídeo SIRPα, um fragmento de polipeptídeo SIRPα, um peptídeo SIRPα ou um epitopo SIRPα. Também são fornecidos métodos para produção de anticorpos que se ligam a um polipeptídeo SIRPα, um fragmento de polipeptídeo SIRPα, um peptídeo SIRPα ou um epitopo SIRPα.

4.3.1 Anticorpos anti-SIRPα

[00203] Em uma modalidade, a presente divulgação fornece anticorpos anti-SIRPα que podem ser úteis neste documento como agentes terapêuticos. Os anticorpos exemplificativos incluem anticorpos policlonais, monoclonais, humanizados, humanos, biespecíficos e heteroconjugados, bem como variantes destes possuindo afinidade melhorada ou outras propriedades.

[00204] Em algumas modalidades, são fornecidos neste documento anticorpos que se ligam à SIRPα, incluindo um polipeptídeo SIRPα, um fragmento de polipeptídeo SIRPα, um peptídeo SIRPα ou um epitopo SIRPα. Em certas modalidades, os anticorpos fornecidos neste documento ligam-se à SIRPα humano e/ou cyno. Em outras modalidades, os anticorpos fornecidos neste documento não se ligam à SIRPα de roedor (por exemplo, uma SIRPα de camundongo). Em uma modalidade, um anticorpo fornecido neste documento se liga à SIRPα humana. Em outra modalidade, um anticorpo fornecido neste documento se liga à SIRPα de cyno. Em outra modalidade, um anticorpo fornecido neste documento se liga à SIRPα humana e à SIRPα de cyno. Em algumas modalidades, um anticorpo fornecido neste documento se liga à SIRPα humana e não se liga a uma SIRPα de roedor (por exemplo, uma SIRPα de camundongo). Em algumas modalidades, um anticorpo fornecido neste documento se liga à SIRPα de cyno e não se liga a uma SIRPα de roedor (por exemplo, uma SIRPα de camundongo). Em algumas modalidades, um anticorpo fornecido neste documento se liga à SIRPα humana, liga-se a uma SIRPα de cyno e não se liga a uma SIRPα de roedor (por exemplo, uma SIRPα de camundongo). Em algumas modalidades, os anticorpos anti-SIRPα bloqueiam ou inibem a ligação de CD47 a um polipeptídeo SIRPα. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-SIRPα competem com CD47 pela ligação a um polipeptídeo SIRPα. Em outras modalidades, os anticorpos anti-SIRPα são anticorpos humanos ou humanizados (por exemplo, compreendendo regiões constantes humanas) que se ligam à SIRPα, incluindo um polipeptídeo SIRPα, um fragmento de polipeptídeo SIRPα, um peptídeo SIRPα ou um epitopo SIRPα.

[00205] Em certas modalidades, o anticorpo anti-SIRPα compreende uma região VH, região VL, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2 e/ou VL CDR3 de qualquer um dentre os anticorpos monoclonais descritos neste documento, como uma sequência de aminoácidos representada nas Tabelas 1- 4 e 9-10. Por conseguinte, em algumas modalidades, o anticorpo isolado ou fragmento funcional do mesmo, fornecido neste documento, compreende um, dois e/ou três CDRs de cadeia pesada e/ou um, dois e/ou três CDRs de cadeia leve de: (a) o anticorpo SIRPAB-1, (b) o anticorpo SIRPAB-2, (c) o anticorpo SIRPAB-3, (d) o anticorpo SIRPAB-4, (e) o anticorpo SIRPAB-5, (f) o anticorpo SIRPAB-6, (g) o anticorpo SIRPAB-7, (h) o anticorpo SIRPAB-8, (i) o anticorpo SIRPAB-9, (j) o anticorpo SIRPAB-10, (k) o anticorpo SIRPAB-11, (l) o anticorpo SIRPAB-12, (m) o anticorpo SIRPAB-13, (n) o anticorpo SIRPAB-17, (o) o anticorpo

SIRPAB-18, (p) o anticorpo SIRPAB-19, (q) o anticorpo SIRPAB-20, ou (r) o anticorpo SIRPAB-21, conforme mostrado nas Tabelas 1-2. Tabela 1. Sequências de Aminoácidos VL CDR Anticorpo VL CDR1 (SEQ ID NO:) VL CDR2 (SEQ ID VL CDR3 (SEQ ID NO:) NO:) SIRPAB-1 QASQDISNYLN DASNLAT QQFAYLPWT (SEQ ID NO:11) (SEQ ID NO:13) (SEQ ID NO:15) SIRPAB-2 QASQDISNYLN DASNLAT QQFAYLPWT (SEQ ID NO:11) (SEQ ID NO:13) (SEQ ID NO:15) SIRPAB-3 QASQDISNYLN DASNLAT QQFAYLPWT (SEQ ID NO:11) (SEQ ID NO:13) (SEQ ID NO:15) SIRPAB-4 QASQDISNYLN DASNLAT QQFAYLPWT (SEQ ID NO:11) (SEQ ID NO:13) (SEQ ID NO:15) SIRPAB-5 QASQDISNYLN DASNLAT QQFAYLPWT (SEQ ID NO:11) (SEQ ID NO:13) (SEQ ID NO:15) SIRPAB-6 QASQDISNYLN DASNLET QQFAYLPYT (SEQ ID NO:11) (SEQ ID NO:43) (SEQ ID NO:44) SIRPAB-7 QASQDISNYLN DASNLET QQFAYLPYT (SEQ ID NO:11) (SEQ ID NO:43) (SEQ ID NO:44) SIRPAB-8 RASQGISSWLA AASNLQS QQGASFPIT (SEQ ID NO:62) (SEQ ID NO:63) (SEQ ID NO:65) SIRPAB-9 RASQGISSWLA AASNLQS QQGASFPIT (SEQ ID NO:62) (SEQ ID NO:63) (SEQ ID NO:65) SIRPAB- RASQGISSWLA AASNLQS QQGASFPIT 10 (SEQ ID NO:62) (SEQ ID NO:63) (SEQ ID NO:65) SIRPAB- RASQGISSWLA AASNLQS QQGASFPIT 11 (SEQ ID NO:62) (SEQ ID NO:63) (SEQ ID NO:65)

SIRPAB- RASQGISSWLA AASNLQS QQGASFPIT 12 (SEQ ID NO:62) (SEQ ID NO:63) (SEQ ID NO:65) SIRPAB- RASQGISSWLA AASNLQS QQGASFPIT 13 (SEQ ID NO:62) (SEQ ID NO:63) (SEQ ID NO:65) SIRPAB- QASQDISNYLN DASNLAT QQFAYLPWT 17 (SEQ ID NO:11) (SEQ ID NO:13) (SEQ ID NO:15) SIRPAB- QASQDISNYLN DASNLAT QQFAYLPWT 18 (SEQ ID NO:11) (SEQ ID NO:13) (SEQ ID NO:15) SIRPAB- QASDDISDYLN DASNIED QQFAYLPWT 19 (SEQ ID NO:130) (SEQ ID NO:131) (SEQ ID NO:15) SIRPAB- QASQDISDYLN DADNLET QQFAYLPWT 20 (SEQ ID NO:135) (SEQ ID NO:136) (SEQ ID NO:15) SIRPAB- QASDDISDYLN DASNLET QQFAYLPWT 21 (SEQ ID NO:130) (SEQ ID NO:43) (SEQ ID NO:15) Tabela 2. Sequências de Aminoácidos VH CDR Anticorpo VH CDR1 (SEQ ID VH CDR2 (SEQ ID NO:) VH CDR3 (SEQ ID NO:) NO:) SIRPAB-1 GSISSGGYYWS SIYYSGSTYYNPSLKS AREGYHSGMDV (SEQ ID NO:2) (SEQ ID NO:4) (SEQ ID NO:6) SIRPAB-2 GSISSGGDYWA YIYPSGFTYYNPSLKS AREGYHSGMDV (SEQ ID NO:19) (SEQ ID NO:20) (SEQ ID NO:6) SIRPAB-3 GSISSGGWYWQ TIYYSGSTFYNPSLKS AREGYHSGMDV (SEQ ID NO:24) (SEQ ID NO:25) (SEQ ID NO:6) SIRPAB-4 GSISSGSPYWS YIYASGFTYYNPSLKS AREGYHSGMDV (SEQ ID NO:29) (SEQ ID NO:30) (SEQ ID NO:6) SIRPAB-5 GSISSGPAYWS TIYYSGSTFYNPSLKS AREGYHSGMDV (SEQ ID NO:34) (SEQ ID NO:25) (SEQ ID NO:6)

SIRPAB-6 GSISSGGYYWS YIYYSGSTYYNPSLKS AREGLDGSYGSSA (SEQ ID NO:2) (SEQ ID NO:38) (SEQ ID NO:39) SIRPAB-7 GSISSGEYYWE YIYSSGFTYYNPSLKS AREGLDGSYGSSA (SEQ ID NO:47) (SEQ ID NO:48) (SEQ ID NO:39) SIRPAB-8 YTFTSYGIS WISPYNGNTNYAQKLQG AREAGSSWYDFDL (SEQ ID NO:53) (SEQ ID NO:55) (SEQ ID NO:57) SIRPAB-9 YTFGGYGIS WISAYGGETNYAQKLQG AREAGSSWYDFDL (SEQ ID NO:68) (SEQ ID NO:69) (SEQ ID NO:57) SIRPAB- YTFTGYPIS WIYAYGGNTNYAQKLQG AREAGSSWYDFDL 10 (SEQ ID NO:73) (SEQ ID NO:74) (SEQ ID NO:57) SIRPAB- YTFRGYGIS WISAYGGETNYAQKLQG AREAGSSWYDFDL 11 (SEQ ID NO:78) (SEQ ID NO:69) (SEQ ID NO:57) SIRPAB- YTFTGYGIV WISAYAGETNYAQKLQG AREAGSSWYDFDL 12 (SEQ ID NO:82) (SEQ ID NO:83) (SEQ ID NO:57) SIRPAB- YTFHGYGIS WISAYSGETNYAQKLQG AREAGSSWYDFDL 13 (SEQ ID NO:87) (SEQ ID NO:88) (SEQ ID NO:57) SIRPAB- GSISSGGYYWS AIYYSGPIYYNPSLKS AREGYHSGMDV 17 (SEQ ID NO:2) (SEQ ID NO:121) (SEQ ID NO:6) SIRPAB- GSISSGGYYWS AIYYSGPIYYNPSLKS SKEGYHSGMDV 18 (SEQ ID NO:2) (SEQ ID NO:121) (SEQ ID NO:125) SIRPAB- GSISSGGYYWS AIYYSGPIYYNPSLKS SKEGYHSGMDV 19 (SEQ ID NO:2) (SEQ ID NO:121) (SEQ ID NO:125) SIRPAB- GSISSGGYYWS AIYYSGPIYYNPSLKS SKEGYHSGMDV 20 (SEQ ID NO:2) (SEQ ID NO:121) (SEQ ID NO:125) SIRPAB- GSISSGGYYWS AIYYSGPIYYNPSLKS SKEGYHSGMDV 21 (SEQ ID NO:2) (SEQ ID NO:121) (SEQ ID NO:125)

[00206] Em algumas modalidades, um anticorpo fornecido neste documento compreende ou consiste em seis CDRs, por exemplo, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2 e/ou VL CDR3 identificados nas Tabelas 1-2. Em algumas modalidades, um anticorpo fornecido neste documento pode compreender menos do que seis CDRs. Em algumas modalidades, o anticorpo compreende ou consiste em um, dois, três, quatro ou cinco CDRs selecionados do grupo que consiste em VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2 e/ou VL CDR3 identificados nas Tabelas 1-2. Em algumas modalidades, o anticorpo compreende ou consiste em um, dois, três, quatro ou cinco CDRs selecionados do grupo que consiste em VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2 e/ou VL CDR3 do monoclonal anticorpo selecionado a partir do grupo que consiste em: (a) o anticorpo SIRPAB-1, (b) o anticorpo SIRPAB-2, (c) o anticorpo SIRPAB- 3, (d) o anticorpo SIRPAB-4, (e) o anticorpo SIRPAB-5, (f) o anticorpo SIRPAB-6, (g) o anticorpo SIRPAB-7, (h) o anticorpo SIRPAB-8, (i) o anticorpo SIRPAB-9, (j) o anticorpo SIRPAB-10, (k) o anticorpo SIRPAB-11, (l) o anticorpo SIRPAB-12, (m) o anticorpo SIRPAB-13, (n) o anticorpo SIRPAB-17, (o) o anticorpo SIRPAB-18, (p) o anticorpo SIRPAB-19, (q) o anticorpo SIRPAB-20 e (r) o anticorpo SIRPAB-21, descrito neste documento. Por conseguinte, em algumas modalidades, o anticorpo compreende ou consiste em um, dois, três, quatro ou cinco CDRs de qualquer um dos VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2 e/ou VL CDR3 identificado nas Tabelas 1-2.

[00207] Em algumas modalidades, os anticorpos fornecidos neste documento compreendem um ou mais (por exemplo, um, dois ou três) VH CDRs listados na Tabela 2. Em outras modalidades, os anticorpos fornecidos neste documento compreendem um ou mais (por exemplo, um, dois ou três) VL CDRs listados na Tabela 1. Em ainda outras modalidades, os anticorpos fornecidos neste documento compreendem um ou mais (por exemplo, um, dois ou três) VH CDRs listados na Tabela 2 e um ou mais VL CDRs listados na Tabela 1. Por conseguinte, em algumas modalidades, os anticorpos compreendem um VH CDR1 com uma sequência de aminoácidos de qualquer uma das SEQ ID NOS: 78 e 82. Em algumas modalidades, os anticorpos compreendem um VH CDR2 que possui uma sequência de aminoácidos de qualquer uma das SEQ ID NOS: 69 e

83. Em algumas modalidades, os anticorpos compreendem um VH CDR3 tendo uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 57. Em algumas modalidades, os anticorpos compreendem um VH CDR1 e/ou um VH CDR2 e/ou um VH CDR3 de modo independente, selecionado a partir de qualquer uma (das) sequência(s) de aminoácidos VH CDR1, VH CDR2 e VH CDR3, conforme representado na Tabela

2. Em algumas modalidades, os anticorpos compreendem um VL CDR1 tendo uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 62. Em outra modalidade, os anticorpos compreendem um VL CDR2 tendo uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 63. Em algumas modalidades, os anticorpos compreendem uma VL CDR3 tendo uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:65. Em algumas modalidades, os anticorpos compreendem um VL CDR1 e/ou um VL CDR2, e/ou um VL CDR3 selecionado independentemente a partir de qualquer uma das sequências de aminoácidos de VL CDR1, VL CDR2 e VL CDR3, conforme representado na Tabela 1.

[00208] Em certas modalidades, os anticorpos fornecidos neste documento compreendem uma região VH compreendendo: (1) um VH CDR1 que possui uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 78; (2) um VH CDR2 que possui uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 69; e (3) um VH CDR3 que possui uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 57; e uma região VL compreendendo: (1) um VL CDR1 possuindo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 62; (2) um VL CDR2 possuindo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 63; e (3) um VL CDR3 possuindo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 65.

[00209] Em certas modalidades, os anticorpos fornecidos neste documento compreendem uma região VH compreendendo: (1) um VH CDR1 que possui uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 82; (2) um VH CDR2 possuindo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 83; e (3) um VH CDR3 possuindo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 57; e uma região VL compreendendo: (1) uma VL CDR1 que possui um aminoácido de SEQ ID NO: 62; (2) um VL CDR2 possuindo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 63; e (3) um VL CDR3 possuindo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 65.

[00210] Em algumas modalidades, os anticorpos fornecidos neste documento compreendem uma região VH que compreende: (1) uma VH CDR1 com uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 78; (2) um VH CDR2 possuindo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 69; e (3) um VH CDR3 possuindo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 57.

[00211] Em outras modalidades, os anticorpos fornecidos neste documento compreendem uma região VL compreendendo: (1) um VL CDR1 que possui uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 62; (2) um VL CDR2 que possui uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 63; e (3) um VL CDR3 possui uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 65.

[00212] Em algumas modalidades, os anticorpos fornecidos neste documento compreendem uma região VH compreendendo: (1) um VH CDR1 que possui uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 82; (2) um VH CDR2 que possui uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 83; e (3) um VH CDR3 que possui uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 57.

[00213] Também são fornecidos neste documento anticorpos compreendendo um ou mais (por exemplo, um, dois ou três) VH CDRs e um ou mais (por exemplo, um, dois ou três) VL CDRs listados nas Tabelas 1-2. Em particular, é fornecido neste documento um anticorpo compreendendo um VH CDR1 (SEQ ID NOS: 78 ou 82) e um VL CDR1 (SEQ ID NO: 62). Em uma modalidade,

o anticorpo compreende um VH CDR1 (SEQ ID NOS: 78 ou 82) e um VL CDR2 (SEQ ID NO: 63). Em outras modalidades, o anticorpo compreende um VH CDR1 (SEQ ID NOS: 78 ou 82) e um VL CDR3 (SEQ ID NO: 65). Em outra modalidade, o anticorpo compreende um VH CDR2 (SEQ ID NOS: 69 ou 83) e um VL CDR1 (SEQ ID NO: 62). Em algumas modalidades, o anticorpo compreende um VH CDR2 (SEQ ID NOS: 69 ou 83) e um VL CDR2 (SEQ ID NO: 63). Em uma modalidade, o anticorpo compreende um VH CDR2 (SEQ ID NOS: 69 ou 83) e um VL CDR3 (SEQ ID NO: 65). Em outra modalidade, o anticorpo compreende um VH CDR3 (SEQ ID NO: 57) e um VL CDR1 (SEQ ID NO: 62). Em outras modalidades, o anticorpo compreende um VH CDR3 (SEQ ID NO: 57) e um VL CDR2 (SEQ ID NO: 63). Em algumas modalidades, o anticorpo compreende um VH CDR3 (SEQ ID NO: 57) e um VL CDR3 (SEQ ID NO: 65). Em outra modalidade, o anticorpo compreende um VH CDR1 (SEQ ID NO: 78 ou 82), um VH CDR2 (SEQ ID NO: 69 ou 83) e um VL CDR1 (SEQ ID NO: 62). Em uma modalidade, o anticorpo compreende um VH CDR1 (SEQ ID NOS: 78 ou 82), um VH CDR2 (SEQ ID NOS: 69 ou 83) e um VL CDR2 (SEQ ID NO: 63). Em outras modalidades, o anticorpo compreende um VH CDR1 (SEQ ID NOS: 78 ou 82), um VH CDR2 (SEQ ID NOS: 69 ou 83) e um VL CDR3 (SEQ ID NO: 65). Em outra modalidade, o anticorpo compreende um VH CDR2 (SEQ ID NO: 69 ou 83), um VH CDR3 (SEQ ID NO: 57) e um VL CDR1 (SEQ ID NO: 62). Em algumas modalidades, o anticorpo compreende um VH CDR2 (SEQ ID NO: 69 ou 83), um VH CDR3 (SEQ ID NO: 57) e um VL CDR2 (SEQ ID NO: 63). Em uma modalidade, o anticorpo compreende um VH CDR2 (SEQ ID NO: 69 ou 83), um VH CDR3 (SEQ ID NO: 57) e um VL CDR3 (SEQ ID NO: 65). Em outra modalidade, o anticorpo compreende um VH CDR1 (SEQ ID NOS:78 ou 82), um VH CDR3 (SEQ ID NO:57) e um VL CDR1 (SEQ ID NO:62). Em outras modalidades, o anticorpo compreende um VH CDR1 (SEQ ID NO: 78 ou 82), um VH CDR3 (SEQ ID NO: 57) e um VL CDR2 (SEQ ID NO: 63). Em algumas modalidades, o anticorpo compreende um VH CDR1 (SEQ ID NO: 78 ou 82), um VH CDR3 (SEQ ID NO: 57) e um VL CDR3 (SEQ ID NO: 65). Em outra modalidade, o anticorpo compreende um VH CDR1 (SEQ ID NO: 78 ou 82), um VL CDR1 (SEQ ID NO: 62) e um VL CDR2 (SEQ ID NO: 63). Em uma modalidade, o anticorpo compreende um VH CDR1 (SEQ ID NO: 78 ou 82), um VL CDR1 (SEQ ID NO: 62) e um VL CDR3 (SEQ ID NO: 65). Em outras modalidades, o anticorpo compreende um VH CDR1 (SEQ ID NOS:78 ou 82), um VL CDR2 (SEQ ID NO:63) e um VL CDR3 (SEQ ID NO:65). Em outra modalidade, o anticorpo compreende um VH CDR2 (SEQ ID NO: 69 ou 83), um VL CDR1 (SEQ ID NO: 62) e um VL CDR2 (SEQ ID NO: 63). Em algumas modalidades, o anticorpo compreende um VH CDR2 (SEQ ID NOS:69 ou 83), um VL CDR1 (SEQ ID NO:62) e um VL CDR3 (SEQ ID NO:65). Em uma modalidade, o anticorpo compreende um VH CDR2 (SEQ ID NO: 69 ou 83), um VL CDR2 (SEQ ID NO: 63) e um VL CDR3 (SEQ ID NO: 65). Em outra modalidade, o anticorpo compreende um VH CDR3 (SEQ ID NO: 57), um VL CDR1 (SEQ ID NO: 62) e um VL CDR2 (SEQ ID NO: 63). Em outras modalidades, o anticorpo compreende um VH CDR3 (SEQ ID NO: 57), um VL CDR1 (SEQ ID NO: 62) e um VL CDR3 (SEQ ID NO: 65). Em algumas modalidades, o anticorpo compreende um VH CDR3 (SEQ ID NO: 57), um VL CDR2 (SEQ ID NO: 63) e um VL CDR3 (SEQ ID NO: 65). Em outra modalidade, o anticorpo compreende um VH CDR1 (SEQ ID NOS:78 ou 82), um VH CDR2 (SEQ ID NOS:69 ou 83), um VH CDR3 (SEQ ID NO:57) e um VL CDR1 (SEQ ID NO:62). Em uma modalidade, o anticorpo compreende um VH CDR1 (SEQ ID NOS:78 ou 82), um VH CDR2 (SEQ ID NOS:69 ou 83), um VH CDR3 (SEQ ID NO:57) e um VL CDR2 (SEQ ID NO:63). Em outras modalidades, o anticorpo compreende um VH CDR1 (SEQ ID NOS:78 ou 82), um VH CDR2 (SEQ ID NOS:69 ou 83), um VH CDR3 (SEQ ID NO:57) e um VL CDR3 (SEQ ID NO:65). Em uma modalidade, o anticorpo compreende um VH CDR1 (SEQ ID NOS:78 ou 82), um VH CDR2 (SEQ ID NOS:69 ou 83), um VL CDR1 (SEQ ID NO:62) e um VL CDR2 (SEQ ID NO:63). Em algumas modalidades, o anticorpo compreende um VH CDR1 (SEQ ID NOS:78 ou 82), um VH CDR2 (SEQ ID NOS:69 ou 83), um VL CDR1 (SEQ ID NO:62) e um VL CDR3 (SEQ ID NO:65). Em uma modalidade, o anticorpo compreende um VH CDR1 (SEQ ID NOS:78 ou 82), um VH CDR2 (SEQ ID NOS:69 ou 83), um VL CDR2 (SEQ ID NO:63) e um VL CDR3 (SEQ ID NO:65). Em outra modalidade, o anticorpo compreende um VH CDR1 (SEQ ID NOS:78 ou 82), um VH CDR3 (SEQ ID NO:57), um VL CDR1 (SEQ ID NO:62) e um VL CDR2 (SEQ ID NO:63). Em outras modalidades, o anticorpo compreende um VH CDR1 (SEQ ID NOS:78 ou 82), um VH CDR3 (SEQ ID NO:57), um VL CDR1 (SEQ ID NO:62) e um VL CDR3 (SEQ ID NO:65). Em algumas modalidades, o anticorpo compreende um VH CDR1 (SEQ ID NOS:78 ou 82), um VH CDR3 (SEQ ID NO:57), um VL CDR2 (SEQ ID NO:63) e um VL CDR3 (SEQ ID NO:65). Em outra modalidade, o anticorpo compreende um VH CDR2 (SEQ ID NOS:69 ou 83), um VH CDR3 (SEQ ID NO:57), um VL CDR1 (SEQ ID NO:62) e um VL CDR2 (SEQ ID NO:63). Em uma modalidade, o anticorpo compreende um VH CDR2 (SEQ ID NOS:69 ou 83), um VH CDR3 (SEQ ID NO:57), um VL CDR1 (SEQ ID NO:62) e um VL CDR3 (SEQ ID NO:65). Em outras modalidades, o anticorpo compreende um VH CDR2 (SEQ ID NOS: 69 ou 83), um VH CDR3 (SEQ ID NO: 57), um VL CDR2 (SEQ ID NO: 63) e um VL CDR3 (SEQ ID NO: 65). Em outra modalidade, o anticorpo compreende um VH CDR1 (SEQ ID NOS:78 ou 82), um VH CDR2 (SEQ ID NOS:69 ou 83), um VH CDR3 (SEQ ID NO:57), um VL CDR1 (SEQ ID NO:62) e um VL CDR2 (SEQ ID NO:63). Em algumas modalidades, o anticorpo compreende um VH CDR1 (SEQ ID NOS:78 ou 82), um VH CDR2 (SEQ ID NOS:69 ou 83), um VH CDR3 (SEQ ID NO:57), um VL CDR1 (SEQ ID NO:62) e um VL CDR3 (SEQ ID NO:65). Em uma modalidade, o anticorpo compreende um VH CDR1 (SEQ ID NOS:78 ou 82), um VH CDR2 (SEQ ID NOS:69 ou 83), um VH CDR3 (SEQ ID NO:57), um VL CDR2 (SEQ ID NO:63) e um VL CDR3 (SEQ ID NO:65). Em outra modalidade, o anticorpo compreende um VH CDR1 (SEQ ID NOS:78 ou 82), um

VH CDR2 (SEQ ID NOS:69 ou 83), um VL CDR1 (SEQ ID NO:62), um VL CDR2 (SEQ ID NO:63) e um VL CDR3 (SEQ ID NO:65). Em outras modalidades, o anticorpo compreende um VH CDR1 (SEQ ID NOS:78 ou 82), um VH CDR3 (SEQ ID NO:57), um VL CDR1 (SEQ ID NO:62), um VL CDR2 (SEQ ID NO:63) e um VL CDR3 (SEQ ID NO:65). Em algumas modalidades, o anticorpo compreende um VH CDR2 (SEQ ID NOS:69 ou 83), um VH CDR3 (SEQ ID NO:57), um VL CDR1 (SEQ ID NO:62), um VL CDR2 (SEQ ID NO:63) e um VL CDR3 (SEQ ID NO:65). Em outra modalidade, o anticorpo compreende um VH CDR1 (SEQ ID NOS:78 ou 82), um VL CDR1 (SEQ ID NO:62), um VL CDR2 (SEQ ID NO:63) e um VL CDR3 (SEQ ID NO:65). Em uma modalidade, o anticorpo compreende um VH CDR2 (SEQ ID NOS:69 ou 83), um VL CDR1 (SEQ ID NO:62), um VL CDR2 (SEQ ID NO:63) e um VL CDR3 (SEQ ID NO:65). Em outras modalidades, o anticorpo compreende um VH CDR3 (SEQ ID NO:57), um VL CDR1 (SEQ ID NO:62), um VL CDR2 (SEQ ID NO:63) e um VL CDR3 (SEQ ID NO:65). Em outra modalidade, o anticorpo compreende qualquer combinação dos mesmos entre os VH CDRs e VL CDRs listados nas Tabelas 1-2.

[00214] Em ainda outro aspecto, os CDRs divulgados neste documento incluem sequências de consenso derivadas de grupos de anticorpos relacionados (ver, por exemplo, Tabelas 1-2). Como descrito neste documento, uma "sequência de consenso" refere-se a sequências de aminoácidos que possuem aminoácidos conservados comuns entre várias sequências e aminoácidos variáveis que variam dentro de uma determinada sequência de aminoácidos.

[00215] Em algumas modalidades, o anticorpo isolado ou fragmento funcional do mesmo, fornecido neste documento, compreende adicionalmente um, dois, três e/ou quatro FRs de cadeia pesada, e/ou um, dois, três e/ou quatro FRs de cadeia leve de: (a) o anticorpo SIRPAB-1, (b) o anticorpo SIRPAB-2, (c) o anticorpo SIRPAB-3, (d) o anticorpo SIRPAB-4, (e) o anticorpo SIRPAB-5, (f) o anticorpo SIRPAB-6, (g) o anticorpo SIRPAB-7, (h) o anticorpo SIRPAB-8, (i) o anticorpo SIRPAB-9, (j) o anticorpo SIRPAB-10, (k) o anticorpo SIRPAB-11, (l) o anticorpo SIRPAB-12, (m) o anticorpo SIRPAB-13, (n) o anticorpo SIRPAB-17, (o) o anticorpo SIRPAB-18, (p) o anticorpo SIRPAB-19, (q) o anticorpo SIRPAB-20 e (r) o anticorpo SIRPAB-21, conforme mostrado nas Tabelas 3-4. Tabela 3. Sequências de aminoácidos de VL FR Antic VL FR1 VL FR2 VL FR3 VL FR4 orpo (SEQ ID NO:) (SEQ ID (SEQ ID NO:) (SEQ ID NO:) NO:)

SIRPA DIQMTQSPSSLSAS WYQQKPGK GVPSRFSGSGSGTDFTFTI FGGGT B-1 VGDRVTITC APKLLIY SSLQPEDIATYYC KVEIK (SEQ ID NO:10) (SEQ ID (SEQ ID NO:14) (SEQ ID NO:12) NO:16)

SIRPA DIQMTQSPSSLSAS WYQQKPGK GVPSRFSGSGSGTDFTFTI FGGGT B-2 VGDRVTITC APKLLIY SSLQPEDIATYYC KVEIK (SEQ ID NO:10) (SEQ ID (SEQ ID NO:14) (SEQ ID NO:12) NO:16)

SIRPA DIQMTQSPSSLSAS WYQQKPGK GVPSRFSGSGSGTDFTFTI FGGGT B-3 VGDRVTITC APKLLIY SSLQPEDIATYYC KVEIK (SEQ ID NO:10) (SEQ ID (SEQ ID NO:14) (SEQ ID NO:12) NO:16)

SIRPA DIQMTQSPSSLSAS WYQQKPGK GVPSRFSGSGSGTDFTFTI FGGGT B-4 VGDRVTITC APKLLIY SSLQPEDIATYYC KVEIK (SEQ ID NO:10) (SEQ ID (SEQ ID NO:14) (SEQ ID NO:12) NO:16)

Antic VL FR1 VL FR2 VL FR3 VL FR4 orpo (SEQ ID NO:) (SEQ ID (SEQ ID NO:) (SEQ ID NO:) NO:)

SIRPA DIQMTQSPSSLSAS WYQQKPGK GVPSRFSGSGSGTDFTFTI FGGGT B-5 VGDRVTITC APKLLIY SSLQPEDIATYYC KVEIK (SEQ ID NO:10) (SEQ ID (SEQ ID NO:14) (SEQ ID NO:12) NO:16)

SIRPA DIQLTQSPSSLSASV WYQQKPGK GVPSRFSGSGSGTDFTFTI FGGGT B-6 GDRVTITC APKLLIY SSLQPEDIATYYC KVEIK (SEQ ID NO:197) (SEQ ID (SEQ ID NO:14) (SEQ ID NO:12) NO:16)

SIRPA DIQLTQSPSSLSASV WYQQKPGK GVPSRFSGSGSGTDFTFTI FGGGT B-7 GDRVTITC APKLLIY SSLQPEDIATYYC KVEIK (SEQ ID NO:197) (SEQ ID (SEQ ID NO:14) (SEQ ID NO:12) NO:16)

SIRPA DIQMTQSPSSVSAS WYQQKPGK GVPSRFSGSGSGTDFTLTIS FGGGT B-8 VGDRVTITC APKLLIY SLQPEDFATYYC KVEIK (SEQ ID NO:61) (SEQ ID (SEQ ID NO:64) (SEQ ID NO:12) NO:16)

SIRPA DIQMTQSPSSVSAS WYQQKPGK GVPSRFSGSGSGTDFTLTIS FGGGT B-9 VGDRVTITC APKLLIY SLQPEDFATYYC KVEIK (SEQ ID NO:61) (SEQ ID (SEQ ID NO:64) (SEQ ID NO:12) NO:16)

SIRPA DIQMTQSPSSVSAS WYQQKPGK GVPSRFSGSGSGTDFTLTIS FGGGT B-10 VGDRVTITC APKLLIY SLQPEDFATYYC KVEIK (SEQ ID NO:61) (SEQ ID (SEQ ID NO:64) (SEQ ID NO:12) NO:16)

SIRPA DIQMTQSPSSVSAS WYQQKPGK GVPSRFSGSGSGTDFTLTIS FGGGT B-11 VGDRVTITC APKLLIY SLQPEDFATYYC KVEIK (SEQ ID NO:61) (SEQ ID (SEQ ID NO:64) (SEQ ID NO:12) NO:16)

SIRPA DIQMTQSPSSVSAS WYQQKPGK GVPSRFSGSGSGTDFTLTIS FGGGT B-12 VGDRVTITC APKLLIY SLQPEDFATYYC KVEIK (SEQ ID NO:61) (SEQ ID (SEQ ID NO:64) (SEQ ID NO:12) NO:16)

SIRPA DIQMTQSPSSVSAS WYQQKPGK GVPSRFSGSGSGTDFTLTIS FGGGT B-13 VGDRVTITC APKLLIY SLQPEDFATYYC KVEIK (SEQ ID NO:61) (SEQ ID (SEQ ID NO:64) (SEQ ID NO:12) NO:16)

SIRPA DIQMTQSPSSLSAS WYQQKPGK GVPSRFSGSGSGTDFTFTI FGGGT B-17 VGDRVTITC APKLLIY SSLQPEDIATYYC KVEIK (SEQ ID NO:10) (SEQ ID (SEQ ID NO:14) (SEQ ID NO:12) NO:16)

SIRPA DIQMTQSPSSLSAS WYQQKPGK GVPSRFSGSGSGTDFTFTI FGGGT B-18 VGDRVTITC APKLLIY SSLQPEDIATYYC KVEIK (SEQ ID NO:10) (SEQ ID (SEQ ID NO:14) (SEQ ID NO:12) NO:16)

SIRPA DIQMTQSPSSLSAS WYQQKPGK GVPSRFSGSGSGTDFTFTI FGGGT B-19 VGDRVTITC APKLLIY SSLQPEDIATYYC KVEIK (SEQ ID NO:10) (SEQ ID (SEQ ID NO:14) (SEQ ID NO:12) NO:16)

SIRPA DIQMTQSPSSLSAS WYQQKPGK GVPSRFSGSGSGTDFTFTI FGGGT B-20 VGDRVTITC APKLLIY SSLQPEDIATYYC KVEIK (SEQ ID NO:10) (SEQ ID (SEQ ID NO:14) (SEQ ID NO:12) NO:16)

SIRPA DIQMTQSPSSLSAS WYQQKPGK GVPSRFSGSGSGTDFTFTI FGGGT B-21 VGDRVTITC APKLLIY SSLQPEDIATYYC KVEIK (SEQ ID NO:10) (SEQ ID (SEQ ID NO:14) (SEQ ID NO:12) NO:16) Tabela 4. Sequências de aminoácidos VH FR Antic VH FR1 VH FR2 VH FR3 VH FR4 orpo (SEQ ID NO:) (SEQ ID (SEQ ID NO:) (SEQ ID NO:) NO:)

SIRPA QVQLQESGPGLVKP WIRQHPGK RVTISVDTSKNQFSLKLS WGQGT B-1 SQTLSLTCTVSG GLEWIG SVTAADTAVYYC TVTVSS (SEQ ID NO:1) (SEQ ID (SEQ ID NO:5) (SEQ ID NO:3) NO:7)

SIRPA QVQLQESGPGLVKP WIRQHPGK RVTISVDTSKNQFSLKLS WGQGT B-2 SQTLSLTCTVSG GLEWIG SVTAADTAVYYC TVTVSS (SEQ ID NO:1) (SEQ ID (SEQ ID NO:5) (SEQ ID NO:3) NO:7)

SIRPA QVQLQESGPGLVKP WIRQHPGK RVTISVDTSKNQFSLKLS WGQGT B-3 SQTLSLTCTVSG GLEWIG SVTAADTAVYYC TVTVSS (SEQ ID NO:1) (SEQ ID (SEQ ID NO:5) (SEQ ID NO:3) NO:7)

Antic VH FR1 VH FR2 VH FR3 VH FR4 orpo (SEQ ID NO:) (SEQ ID (SEQ ID NO:) (SEQ ID NO:) NO:)

SIRPA QVQLQESGPGLVKP WIRQHPGK RVTISVDTSKNQFSLKLS WGQGT B-4 SQTLSLTCTVSG GLEWIG SVTAADTAVYYC TVTVSS (SEQ ID NO:1) (SEQ ID (SEQ ID NO:5) (SEQ ID NO:3) NO:7)

SIRPA QVQLQESGPGLVKP WIRQHPGK RVTISVDTSKNQFSLKLS WGQGT B-5 SQTLSLTCTVSG GLEWIG SVTAADTAVYYC TVTVSS (SEQ ID NO:1) (SEQ ID (SEQ ID NO:5) (SEQ ID NO:3) NO:7)

SIRPA QVQLQESGPGLVKP WIRQHPGK RVTISVDTSKNQFSLKLS WGQGT B-6 SQTLSLTCTVSG GLEWIG SVTAADTAVYYC LVTVSS (SEQ ID NO:1) (SEQ ID (SEQ ID NO:5) (SEQ ID NO:3) NO: 40)

SIRPA QVQLQESGPGLVKP WIRQHPGK RVTISVDTSKNQFSLKLS WGQGT B-7 SQTLSLTCTVSG GLEWIG SVTAADTAVYYC LVTVSS (SEQ ID NO:1) (SEQ ID (SEQ ID NO:5) (SEQ ID NO:3) NO: 40)

SIRPA QVQLVQSGAEVKKP WVRQAPGQ RVTMTTDTSTSTAYME WGRGTL B-8 GASVKVSCKASG GLEWMG LRSLRSDDTAVYYC VTVSS (SEQ ID NO:52) (SEQ ID (SEQ ID NO:56) (SEQ ID NO:54) NO:58)

SIRPA QVQLVQSGAEVKKP WVRQAPGQ RVTMTTDTSTSTAYME WGRGTL B-9 GASVKVSCKASG GLEWMG LRSLRSDDTAVYYC VTVSS (SEQ ID NO:52) (SEQ ID (SEQ ID NO:56) (SEQ ID NO:54) NO:58)

SIRPA QVQLVQSGAEVKKP WVRQAPGQ RVTMTTDTSTSTAYME WGRGTL B-10 GASVKVSCKASG GLEWMG LRSLRSDDTAVYYC VTVSS (SEQ ID NO:52) (SEQ ID (SEQ ID NO:56) (SEQ ID NO:54) NO:58)

SIRPA QVQLVQSGAEVKKP WVRQAPGQ RVTMTTDTSTSTAYME WGRGTL B-11 GASVKVSCKASG GLEWMG LRSLRSDDTAVYYC VTVSS (SEQ ID NO:52) (SEQ ID (SEQ ID NO:56) (SEQ ID NO:54) NO:58)

SIRPA QVQLVQSGAEVKKP WVRQAPGQ RVTMTTDTSTSTAYME WGRGTL B-12 GASVKVSCKASG GLEWMG LRSLRSDDTAVYYC VTVSS (SEQ ID NO:52) (SEQ ID (SEQ ID NO:56) (SEQ ID NO:54) NO:58)

SIRPA QVQLVQSGAEVKKP WVRQAPGQ RVTMTTDTSTSTAYME WGRGTL B-13 GASVKVSCKASG GLEWMG LRSLRSDDTAVYYC VTVSS (SEQ ID NO:52) (SEQ ID (SEQ ID NO:56) (SEQ ID NO:54) NO:58)

SIRPA QVQLQESGPGLVKP WIRQHPGK RVTISVDTSKNQFSLKLS WGQGT B-17 SQTLSLTCTVSG GLEWIG SVTAADTAVYYC TVTVSS (SEQ ID NO:1) (SEQ ID (SEQ ID NO:5) (SEQ ID NO:3) NO:7)

SIRPA QVQLQESGPGLVKP WIRQHPGK RVTISVDTSKNQFSLKLS WGQGT B-18 SQTLSLTCTVSG GLEWIG SVTAADTAVYYC TVTVSS (SEQ ID NO:1) (SEQ ID (SEQ ID NO:5) (SEQ ID NO:3) NO:7)

SIRPA QVQLQESGPGLVKP WIRQHPGK RVTISVDTSKNQFSLKLS WGQGT B-19 SQTLSLTCTVSG GLEWIG SVTAADTAVYYC TVTVSS (SEQ ID NO:1) (SEQ ID (SEQ ID NO:5) (SEQ ID NO:3) NO:7)

SIRPA QVQLQESGPGLVKP WIRQHPGK RVTISVDTSKNQFSLKLS WGQGT B-20 SQTLSLTCTVSG GLEWIG SVTAADTAVYYC TVTVSS (SEQ ID NO:1) (SEQ ID (SEQ ID NO:5) (SEQ ID NO:3) NO:7)

SIRPA QVQLQESGPGLVKP WIRQHPGK RVTISVDTSKNQFSLKLS WGQGT B-21 SQTLSLTCTVSG GLEWIG SVTAADTAVYYC TVTVSS (SEQ ID NO:1) (SEQ ID (SEQ ID NO:5) (SEQ ID NO:3) NO:7)

[00216] Em certas modalidades, o anticorpo isolado ou fragmento funcional do mesmo, fornecido neste documento, compreende adicionalmente um, dois, três e/ou quatro FRs de cadeia pesada a partir de: (a) o anticorpo SIRPAB-1, (b) o anticorpo SIRPAB-2, (c) o anticorpo SIRPAB-3, (d) o anticorpo SIRPAB-4, (e) o anticorpo SIRPAB-5, (f) o anticorpo SIRPAB-6, (g) o anticorpo SIRPAB-7, (h) o anticorpo SIRPAB-8, (i) o anticorpo SIRPAB-9, (j) o anticorpo SIRPAB-10, (k) o anticorpo SIRPAB-11, (l) o anticorpo SIRPAB-12, (m) o anticorpo SIRPAB-13, (n) o anticorpo SIRPAB-17, (o) o anticorpo SIRPAB-18, (p) o anticorpo SIRPAB-19, (q) o anticorpo SIRPAB-20 e (r) o anticorpo SIRPAB-21, conforme mostrado na Tabela 4. Em algumas modalidades, o(s) FR(s) de cadeia pesada do anticorpo é/são do anticorpo SIRPAB-1. Em algumas modalidades, o(s) FR(s) da cadeia pesada do anticorpo é/são do anticorpo SIRPAB-2. Em outras modalidades, o(s) FR(s) de cadeia pesada do anticorpo é/são do anticorpo SIRPAB-3. Em certas modalidades, o(s) FR(s) de cadeia pesada do anticorpo é/são do anticorpo SIRPAB-4. Em outras modalidades, o(s) FR(s) de cadeia pesada do anticorpo é/são do anticorpo SIRPAB-5. Em algumas modalidades, o(s) FR(s) de cadeia pesada do anticorpo é/são do anticorpo SIRPAB-6. Em algumas modalidades, o(s) FR(s) de cadeia pesada do anticorpo é/são do anticorpo SIRPAB-7. Em algumas modalidades, o(s) FR(s) de cadeia pesada do anticorpo é/são do anticorpo SIRPAB-8. Em certas modalidades, o(s) FR(s) de cadeia pesada do anticorpo é/são do anticorpo SIRPAB-9. Em algumas modalidades, o(s) FR(s) de cadeia pesada do anticorpo é/são do anticorpo SIRPAB-10. Em algumas modalidades, o(s) FR(s) de cadeia pesada do anticorpo é/são do anticorpo SIRPAB-11. Em certas modalidades, o(s) FR(s) de cadeia pesada do anticorpo é/são do anticorpo SIRPAB-12. Em algumas modalidades, o(s) FR(s) de cadeia pesada do anticorpo é/são do anticorpo SIRPAB-13. Em algumas modalidades, o(s) FR(s) de cadeia pesada do anticorpo é/são do anticorpo SIRPAB-17. Em certas modalidades, o(s) FR(s) de cadeia pesada do anticorpo é/são do anticorpo SIRPAB-18. Em algumas modalidades, o(s) FR(s) de cadeia pesada do anticorpo é/são do anticorpo SIRPAB-19. Em certas modalidades, o(s) FR(s) de cadeia pesada do anticorpo é/são do anticorpo SIRPAB-20. Em outra modalidade, o(s) FR (s) de cadeia pesada do anticorpo é/são do anticorpo SIRPAB-21.

[00217] Em algumas modalidades, o anticorpo isolado ou fragmento funcional do mesmo, fornecido neste documento, compreende adicionalmente um, dois, três e/ou quatro FRs de cadeia leve a partir de: (a) o anticorpo SIRPAB- 1, (b) o anticorpo SIRPAB-2, (c) o anticorpo SIRPAB-3, (d) o anticorpo SIRPAB-4, (e) o anticorpo SIRPAB-5, (f) o anticorpo SIRPAB-6, (g) o anticorpo SIRPAB-7, (h) o anticorpo SIRPAB-8, (i) o anticorpo SIRPAB-9, (j) o anticorpo SIRPAB-10, (k) o anticorpo SIRPAB-11, (l) o anticorpo SIRPAB-12, (m) o anticorpo SIRPAB-13, (n) o anticorpo SIRPAB-17, (o) o anticorpo SIRPAB-18, (p) o anticorpo SIRPAB-19, (q) o anticorpo SIRPAB-20, e (r) o anticorpo SIRPAB-21, conforme mostrado na Tabela

3. Em algumas modalidades, o(s) FR(s) de cadeia leve do anticorpo é/são do anticorpo SIRPAB-1. Em algumas modalidades, o(s) FR(s) da cadeia leve do anticorpo é/são do anticorpo SIRPAB-2. Em outras modalidades, o(s) FR(s) de cadeia leve do anticorpo é/são do anticorpo SIRPAB-3. Em certas modalidades, o(s) FR(s) de cadeia leve do anticorpo é/são do anticorpo SIRPAB-4. Em outras modalidades, o(s) FR(s) de cadeia leve do anticorpo é/são do anticorpo SIRPAB-

5. Em algumas modalidades, o(s) FR(s) de cadeia leve do anticorpo é/são do anticorpo SIRPAB-6. Em algumas modalidades, o(s) FR(s) de cadeia leve do anticorpo é/são do anticorpo SIRPAB-7. Em algumas modalidades, o(s) FR(s) de cadeia leve do anticorpo é/são do anticorpo SIRPAB-8. Em uma modalidade, o(s) FR(s) de cadeia leve do anticorpo é do anticorpo SIRPAB-9. Em algumas modalidades, o(s) FR(s) de cadeia leve do anticorpo é/são do anticorpo SIRPAB-

10. Em algumas modalidades, o(s) FR(s) de cadeia leve do anticorpo é/são do anticorpo SIRPAB-11. Em certas modalidades, o(s) FR(s) de cadeia leve do anticorpo é/são do anticorpo SIRPAB-12. Em algumas modalidades, o(s) FR(s) de cadeia leve do anticorpo é/são do anticorpo SIRPAB-13. Em algumas modalidades, o(s) FR(s) de cadeia leve do anticorpo é/são do anticorpo SIRPAB-

17. Em certas modalidades, o(s) FR(s) de cadeia leve do anticorpo é/são do anticorpo SIRPAB-18. Em algumas modalidades, o(s) FR(s) de cadeia leve do anticorpo é/são do anticorpo SIRPAB-19. Em certas modalidades, o(s) FR(s) de cadeia leve do anticorpo é/são do anticorpo SIRPAB-20. Em outra modalidade, o(s) FR(s) de cadeia leve do anticorpo é/são do anticorpo SIRPAB-21.

[00218] Em certas modalidades, um anticorpo ou fragmento deste, descrito neste documento, compreende uma região VH que compreende: (1) um VH FR1 que possui uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 52; (2) um VH FR2 que possui uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 54; (3) um VH FR3 que possui uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 56; e/ou (4) um VH FR4 que possui uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 58. Nas modalidades específicas, o anticorpo compreende uma região VH compreendendo todos os quatro VH FR1, VH FR2, VH FR3 e VH FR4 referenciados acima.

[00219] Portanto, em algumas modalidades, o anticorpo humanizado compreende uma região VH que inclui uma VH FR1 que possui uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:52. Em algumas modalidades, o anticorpo humanizado compreende uma região VH que inclui uma VH FR2 que possui uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 54. Em algumas modalidades, o anticorpo humanizado compreende uma região VH que inclui uma VH FR3 que possui uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 56. Em outras modalidades, o anticorpo humanizado compreende uma região VH que inclui uma VH FR4 que possui uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 58.

[00220] Em certas modalidades, um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno descrito neste documento compreende uma região VL que compreende: (1) uma VL FR1 tendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 61; (2) um VL FR2 tendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 12; (3) um VL FR3 tendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:64; e/ou (4) uma VL FR4 tendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:16.

[00221] Portanto, em algumas modalidades, o anticorpo humanizado compreende uma região VL que inclui uma VL FR1 tendo uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 61. Em certas modalidades, o anticorpo humanizado compreende uma região VL que inclui uma VL FR2 tendo uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 12. Em outras modalidades, o anticorpo humanizado compreende uma região VL que inclui uma VL FR3 tendo uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 64. Em outras modalidades ainda, o anticorpo humanizado compreende uma região VL que inclui uma VL FR4 tendo uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 16.

[00222] Em certas modalidades, um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno descrito neste documento compreende uma região VH e uma região VL, em que a região VH compreende: (1) uma VH FR1 tendo uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 52; (2) um VH FR2 tendo uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 54; (3) um VH FR3 tendo uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 56; e/ou (4) um VH FR4 tendo uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 58; e em que a região VL compreende: (1) uma VL FR1 tendo uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 61; (2) um VL FR2 tendo uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 12; (3) um VL FR3 tendo uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 64; e/ou (4) uma VL FR4 tendo uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 16. Em algumas modalidades, o anticorpo compreende uma região VH compreendendo todas as quatro VH FR1, VH FR2, VH FR3 e VH FR4 acima referenciadas. Em outras modalidades, o anticorpo compreende uma região VL compreendendo todas as quatro VL FR1, VL FR2, VL FR3 e VL FR4 acima referenciadas. Ainda noutras modalidades, o anticorpo compreende uma região VH compreendendo todas as quatro VH FR1, VH FR2, VH FR3 e VH FR4 acima referenciadas, e uma região VL compreendendo todas as quatro acima referidas VL FR1, VL FR2, VL FR3 e VL FR4.

[00223] Também são fornecidos neste documento anticorpos que compreendem um ou mais (por exemplo, um, dois, três ou quatro) VH FRs e um ou mais (por exemplo, um, dois, três ou quatro) VL FRs listados nas Tabelas 3-4. Em particular, é fornecido neste documento um anticorpo compreendendo um VH FR1 (SEQ ID NO: 52) e um VL FR1 (SEQ ID NO: 61). Em uma modalidade, o anticorpo compreende uma VH FR1 (SEQ ID NO: 52) e uma VL FR2 (SEQ ID NO: 12). Em algumas modalidades, o anticorpo compreende um VH FR1 (SEQ ID NO:

52) e um VL FR3 (SEQ ID NO: 64). Em outra modalidade, o anticorpo compreende uma VH FR1 (SEQ ID NOS:52) e uma VL FR4 (SEQ ID NO: 16). Em outras modalidades, o anticorpo compreende uma VH FR2 (SEQ ID NO: 54) e uma VL FR1 (SEQ ID NO: 61). Em uma modalidade, o anticorpo compreende uma VH FR2 (SEQ ID NO: 54) e uma VL FR2 (SEQ ID NO: 12). Em algumas modalidades, o anticorpo compreende um VH FR2 (SEQ ID NO: 54) e um VL FR3 (SEQ ID NO: 64). Em outra modalidade, o anticorpo compreende um VH FR2 (SEQ ID NO: 54) e um VL FR4 (SEQ ID NO: 16). Em uma modalidade, o anticorpo compreende uma VH FR3 (SEQ ID NO: 56) e uma VL FR1 (SEQ ID NO: 61). Em outras modalidades, o anticorpo compreende um VH FR3 (SEQ ID NO: 56) e um VL FR2 (SEQ ID NO: 12). Em outra modalidade, o anticorpo compreende um VH FR3 (SEQ ID NO: 56) e um VL FR3 (SEQ ID NO: 64). Em algumas modalidades, o anticorpo compreende um VH FR3 (SEQ ID NO: 56) e um VL FR4 (SEQ ID NO: 16). Em uma modalidade, o anticorpo compreende uma VH FR4 (SEQ ID NO: 58) e uma VL FR1 (SEQ ID NO: 61). Em outra modalidade, o anticorpo compreende uma VH FR4 (SEQ ID NO: 58) e uma VL FR2 (SEQ ID NO: 12). Em uma modalidade, o anticorpo compreende uma VH FR4 (SEQ ID NO: 58) e uma VL FR3 (SEQ ID NO: 64). Em algumas modalidades, o anticorpo compreende um VH FR4 (SEQ ID NO: 58) e um VL FR4 (SEQ ID NO: 16). Em outra modalidade, o anticorpo compreende um VH FR1 (SEQ ID NO: 52), um VH FR2 (SEQ ID NO: 54) e um VL FR1 (SEQ ID NO: 61). Em outras modalidades, o anticorpo compreende um VH FR1 (SEQ ID NO: 52), um VH FR2 (SEQ ID NO: 54) e um VL FR2 (SEQ ID NO: 12). Em outra modalidade, o anticorpo compreende um VH FR1 (SEQ ID NO: 52), um VH FR2 (SEQ ID NO: 54) e um VL FR3 (SEQ ID NO: 64). Em outra modalidade, o anticorpo compreende um VH FR1 (SEQ ID NO: 52), um VH FR2 (SEQ ID NO: 54) e um VL FR4 (SEQ ID NO: 16). Em algumas modalidades, o anticorpo compreende um VH FR2 (SEQ ID NO: 54), um VH FR3 (SEQ ID NO: 56) e um VL FR1 (SEQ ID NO: 61). Em uma modalidade, o anticorpo compreende um VH FR2 (SEQ ID NO: 54), um VH FR3 (SEQ ID NO: 56) e um VL FR2 (SEQ ID NO: 12). Em outra modalidade, o anticorpo compreende um VH FR2 (SEQ ID NO: 54), um VH FR3 (SEQ ID NO: 56) e um VL FR3 (SEQ ID NO: 64). Em outras modalidades, o anticorpo compreende um VH FR2 (SEQ ID NO: 54), um VH FR3 (SEQ ID NO: 56) e um VL FR4 (SEQ ID NO: 16). Em algumas modalidades, o anticorpo compreende um VH FR1 (SEQ ID NO: 52), um VL FR1 (SEQ ID NO: 61) e um VL FR2 (SEQ ID NO: 12). Em outra modalidade, o anticorpo compreende um VH FR1 (SEQ ID NO: 52), um VL FR1 (SEQ ID NO: 61) e um VL FR3 (SEQ ID NO: 64). Em uma modalidade, o anticorpo compreende um VH FR1 (SEQ ID NO: 52), um VL FR1 (SEQ ID NO: 61) e um VL FR4 (SEQ ID NO: 16). Em uma modalidade, o anticorpo compreende um VH FR1 (SEQ ID NO: 52), um VL FR2 (SEQ ID NO: 12) e um VL FR3 (SEQ ID NO: 64). Em outra modalidade, o anticorpo compreende um VH FR1 (SEQ ID NO: 52), um VH FR2 (SEQ ID NO: 12) e um VL FR4 (SEQ ID NO: 16). Em algumas modalidades, o anticorpo compreende um VH FR1 (SEQ ID NO: 52), um VL FR3 (SEQ ID NO: 64) e um VL FR4 (SEQ ID NO: 16). Em outras modalidades, o anticorpo compreende um VH FR2 (SEQ ID NO: 54), um VL FR1 (SEQ ID NO: 61) e um VL FR2 (SEQ ID NO: 12). Em outra modalidade, o anticorpo compreende um VH FR2 (SEQ ID NO: 54), um VH FR4 (SEQ ID NO: 58), um VL FR1 (SEQ ID NO: 61) e um VL FR3 (SEQ ID NO: 64). Em uma modalidade, o anticorpo compreende um VH FR2 (SEQ ID NO: 54), um VL FR1 (SEQ ID NO: 61) e um VL FR4 (SEQ ID NO: 16). Em algumas modalidades, o anticorpo compreende um VH FR2 (SEQ ID NO: 54), um VL FR2 (SEQ ID NO: 12) e um VL FR3 (SEQ ID NO: 64). Em outra modalidade, o anticorpo compreende um VH FR2 (SEQ ID NO: 54), um VH FR2 (SEQ ID NO: 12) e um VL FR4 (SEQ ID NO: 16). Em uma modalidade, o anticorpo compreende um VH FR2 (SEQ ID NO: 54), um VL FR3 (SEQ ID NO: 64) e um VL FR4 (SEQ ID NO: 16). Em outra modalidade, o anticorpo compreende um VH FR3 (SEQ ID NO: 56), um VL FR1 (SEQ ID NO: 61)

e um VL FR2 (SEQ ID NO: 12). Em outras modalidades, o anticorpo compreende um VH FR3 (SEQ ID NO: 56), um VL FR1 (SEQ ID NO: 61) e um VL FR3 (SEQ ID NO: 64). Em algumas modalidades, o anticorpo compreende um VH FR3 (SEQ ID NO: 56), um VL FR1 (SEQ ID NO: 61) e um VL FR4 (SEQ ID NO: 16). Em outra modalidade, o anticorpo compreende um VH FR3 (SEQ ID NO: 56), um VL FR2 (SEQ ID NO: 12) e um VL FR3 (SEQ ID NO: 64). Em uma modalidade, o anticorpo compreende um VH FR3 (SEQ ID NO: 56), um VL FR2 (SEQ ID NO: 12) e um VL FR4 (SEQ ID NO: 16). Em uma modalidade, o anticorpo compreende um VH FR3 (SEQ ID NO: 56), um VL FR3 (SEQ ID NO: 64) e um VL FR4 (SEQ ID NO: 16). Em outra modalidade, o anticorpo compreende um VH FR4 (SEQ ID NO: 58), um VL FR1 (SEQ ID NO: 61) e um VL FR2 (SEQ ID NO: 12). Em algumas modalidades, o anticorpo compreende um VH FR4 (SEQ ID NO: 58), um VL FR1 (SEQ ID NO: 61) e um VL FR3 (SEQ ID NO: 64). Noutras modalidades, o anticorpo compreende uma VH FR4 (SEQ ID NO: 58), uma VL FR1 (SEQ ID NO: 61) e uma VL FR4 (SEQ ID NO: 16). Em outra modalidade, o anticorpo compreende um VH FR4 (SEQ ID NO: 58), um VL FR2 (SEQ ID NO: 12) e um VL FR3 (SEQ ID NO: 64). Em uma modalidade, o anticorpo compreende um VH FR4 (SEQ ID NO: 58), um VL FR2 (SEQ ID NO: 12) e um VL FR4 (SEQ ID NO: 16). Em algumas modalidades, o anticorpo compreende um VH FR4 (SEQ ID NO: 58), um VL FR3 (SEQ ID NO: 64) e um VL FR4 (SEQ ID NO: 16). Em outra modalidade, o anticorpo compreende um VH FR1 (SEQ ID NO: 52), um VH FR2 (SEQ ID NO: 54), um VH FR3 (SEQ ID NO: 56) e um VL FR1 (SEQ ID NO: 61) Em uma modalidade, o anticorpo compreende um VH FR1 (SEQ ID NO: 52), um VH FR2 (SEQ ID NO: 54), um VH FR3 (SEQ ID NO: 56) e um VL FR2 (SEQ ID NO: 12). Em outras modalidades, o anticorpo compreende um VH FR1 (SEQ ID NO: 52), um VH FR2 (SEQ ID NO: 54), um VH FR3 (SEQ ID NO: 56) e um VL FR3 (SEQ ID NO: 64). Em outra modalidade, o anticorpo compreende um VH FR1 (SEQ ID NO: 52), um VH FR2 (SEQ ID NO: 54), um VH FR3 (SEQ ID NO:

56) e um VL FR4 (SEQ ID NO: 16). Em algumas modalidades, o anticorpo compreende um VH FR1 (SEQ ID NO: 52), um VH FR2 (SEQ ID NO: 54), um VH FR4 (SEQ ID NO: 58) e um VL FR1 (SEQ ID NO: 61). Em uma modalidade, o anticorpo compreende um VH FR1 (SEQ ID NO: 52), um VH FR2 (SEQ ID NO: 54), um VH FR4 (SEQ ID NO: 58) e um VL FR2 (SEQ ID NO: 12). Em outra modalidade, o anticorpo compreende um VH FR1 (SEQ ID NO: 52), um VH FR2 (SEQ ID NO: 54), um VH FR4 (SEQ ID NO: 58) e um VL FR3 (SEQ ID NO: 64). Em uma modalidade, o anticorpo compreende um VH FR1 (SEQ ID NO: 52), um VH FR2 (SEQ ID NO: 54), um VH FR4 (SEQ ID NO: 58) e um VL FR4 (SEQ ID NO: 16). Em algumas modalidades, o anticorpo compreende um VH FR1 (SEQ ID NO: 52), um VH FR3 (SEQ ID NO: 56), um VH FR4 (SEQ ID NO: 58) e um VL FR1 (SEQ ID NO: 61). Em outra modalidade, o anticorpo compreende um VH FR1 (SEQ ID NO: 52), um VH FR3 (SEQ ID NO: 56), um VH FR4 (SEQ ID NO: 58) e um VL FR2 (SEQ ID NO: 12). Em outras modalidades, o anticorpo compreende um VH FR1 (SEQ ID NO: 52), VH FR3 (SEQ ID NO: 56), um VH FR4 (SEQ ID NO: 58) e um VL FR3 (SEQ ID NO: 64). Em uma modalidade, o anticorpo compreende um VH FR1 (SEQ ID NO: 52), um VH FR3 (SEQ ID NO: 56), um VH FR4 (SEQ ID NO: 58) e um VL FR4 (SEQ ID NO: 16). Em outra modalidade, o anticorpo compreende um VH FR2 (SEQ ID NO: 54), um VH FR3 (SEQ ID NO: 56), um VH FR4 (SEQ ID NO: 58) e um VL FR1 (SEQ ID NO: 61). Em algumas modalidades, o anticorpo compreende um VH FR2 (SEQ ID NO: 54), um VH FR3 (SEQ ID NO: 56), um VH FR4 (SEQ ID NO: 58) e um VL FR2 (SEQ ID NO: 12). Em uma modalidade, o anticorpo compreende um VH FR2 (SEQ ID NO: 54), VH FR3 (SEQ ID NO: 56), um VH FR4 (SEQ ID NO: 58) e um VL FR3 (SEQ ID NO: 64). Em outra modalidade, o anticorpo compreende um VH FR2 (SEQ ID NO: 54), um VH FR3 (SEQ ID NO: 56), um VH FR4 (SEQ ID NO: 58) e um VL FR4 (SEQ ID NO: 16). Em outras modalidades, o anticorpo compreende um VH FR1 (SEQ ID NO: 52), um VH FR2 (SEQ ID NO: 54), um VL FR1 (SEQ ID NO: 61) e um VL FR2 (SEQ ID

NO: 12). Em algumas modalidades, o anticorpo compreende um VH FR1 (SEQ ID NO: 52), um VH FR2 (SEQ ID NO: 54), um VL FR1 (SEQ ID NO: 61) e um VL FR3 (SEQ ID NO: 64). Em outra modalidade, o anticorpo compreende um VH FR1 (SEQ ID NO:52), um VH FR2 (SEQ ID NO:54), um VL FR1 (SEQ ID NO:61) e um VL FR4 (SEQ ID NO:16). Em uma modalidade, o anticorpo compreende um VH FR1 (SEQ ID NO:52), um VH FR2 (SEQ ID NO:54), um VL FR2 (SEQ ID NO:12) e um VL FR3 (SEQ ID NO:64). Em outra modalidade, o anticorpo compreende um VH FR1 (SEQ ID NO:52), um VH FR2 (SEQ ID NO:54), um VL FR2 (SEQ ID NO:12) e um VL FR4 (SEQ ID NO:16). Em outra modalidade, o anticorpo compreende um VH FR1 (SEQ ID NO:52), um VH FR2 (SEQ ID NO:54), um VL FR3 (SEQ ID NO:64) e um VL FR4 (SEQ ID NO:16). Em algumas modalidades, o anticorpo compreende um VH FR1 (SEQ ID NO: 52), um VH FR3 (SEQ ID NO: 56), um VL FR1 (SEQ ID NO: 61) e um VL FR2 (SEQ ID NO: 12). Em outras modalidades, o anticorpo compreende um VH FR1 (SEQ ID NO:52), um VH FR3 (SEQ ID NO:56), um VL FR1 (SEQ ID NO:61) e um VL FR3 (SEQ ID NO:64). Em uma modalidade, o anticorpo compreende um VH FR1 (SEQ ID NO:52), um VH FR3 (SEQ ID NO:56), um VL FR1 (SEQ ID NO:61) e um VL FR4 (SEQ ID NO:16). Em uma modalidade, o anticorpo compreende um VH FR1 (SEQ ID NO:52), um VH FR3 (SEQ ID NO:56), um VL FR2 (SEQ ID NO:12) e um VL FR3 (SEQ ID NO:64). Em algumas modalidades, o anticorpo compreende um VH FR1 (SEQ ID NO:52), um VH FR3 (SEQ ID NO:56), um VL FR2 (SEQ ID NO:12) e um VL FR4 (SEQ ID NO:16). Em outra modalidade, o anticorpo compreende um VH FR1 (SEQ ID NO:52), um VH FR3 (SEQ ID NO:56), um VL FR3 (SEQ ID NO:64) e um VL FR4 (SEQ ID NO:16). Em uma modalidade, o anticorpo compreende um VH FR1 (SEQ ID NO:52), um VH FR4 (SEQ ID NO:58), um VL FR1 (SEQ ID NO:61) e um VL FR2 (SEQ ID NO:12). Em outras modalidades, o anticorpo compreende um VH FR1 (SEQ ID NO:52), um VH FR4 (SEQ ID NO:58), um VL FR1 (SEQ ID NO:61) e um VL FR3 (SEQ ID NO:64). Em outra modalidade, o anticorpo compreende um

VH FR1 (SEQ ID NO:52), um VH FR4 (SEQ ID NO:58), um VL FR1 (SEQ ID NO:61) e um VL FR4 (SEQ ID NO:16). Em algumas modalidades, o anticorpo compreende um VH FR1 (SEQ ID NO: 52), um VH FR4 (SEQ ID NO: 58), um VL FR2 (SEQ ID NO: 12) e um VL FR3 (SEQ ID NO: 64). Em uma modalidade, o anticorpo compreende um VH FR1 (SEQ ID NO: 52), um VH FR4 (SEQ ID NO: 58), um VL FR2 (SEQ ID NO: 12) e um VL FR4 (SEQ ID NO: 16). Em outra modalidade, o anticorpo compreende um VH FR1 (SEQ ID NO:52), um VH FR4 (SEQ ID NO:58), um VL FR3 (SEQ ID NO:64) e um VL FR4 (SEQ ID NO:16). Em uma modalidade, o anticorpo compreende um VH FR2 (SEQ ID NO:54), um VH FR3 (SEQ ID NO:56), um VL FR1 (SEQ ID NO:61) e um VL FR2 (SEQ ID NO:12). Em algumas modalidades, o anticorpo compreende um VH FR2 (SEQ ID NO:54), um VH FR3 (SEQ ID NO:56), um VL FR1 (SEQ ID NO:61) e um VL FR3 (SEQ ID NO:64). Em outra modalidade, o anticorpo compreende um VH FR2 (SEQ ID NO:54), um VH FR3 (SEQ ID NO:56), um VL FR1 (SEQ ID NO:61) e um VL FR4 (SEQ ID NO:16). Em outras modalidades, o anticorpo compreende um VH FR2 (SEQ ID NO:54), um VH FR3 (SEQ ID NO:56), um VL FR2 (SEQ ID NO:12) e um VL FR3 (SEQ ID NO:64). Em uma modalidade, o anticorpo compreende um VH FR2 (SEQ ID NO:54), um VH FR3 (SEQ ID NO:56), um VL FR2 (SEQ ID NO:12) e um VL FR4 (SEQ ID NO:16). Em outra modalidade, o anticorpo compreende um VH FR2 (SEQ ID NO:54), um VH FR3 (SEQ ID NO:56), um VL FR3 (SEQ ID NO:64) e um VL FR4 (SEQ ID NO:16). Em algumas modalidades, o anticorpo compreende um VH FR2 (SEQ ID NO:54), um VH FR4 (SEQ ID NO:58), um VL FR1 (SEQ ID NO:61) e um VL FR2 (SEQ ID NO:12). Em outra modalidade, o anticorpo compreende um VH FR2 (SEQ ID NO: 54), um VL FR1 (SEQ ID NO: 61) e um VL FR3 (SEQ ID NO: 64). Em outra modalidade, o anticorpo compreende um VH FR2 (SEQ ID NO:54), um VH FR4 (SEQ ID NO:58), um VL FR1 (SEQ ID NO:61) e um VL FR4 (SEQ ID NO:16). Em outras modalidades, o anticorpo compreende um VH FR2 (SEQ ID NO:54), um VH FR4 (SEQ ID NO:58), um VL FR2 (SEQ ID NO:12) e um VL FR3 (SEQ ID

NO:64). Em algumas modalidades, o anticorpo compreende um VH FR2 (SEQ ID NO:54), um VH FR4 (SEQ ID NO:58), um VL FR2 (SEQ ID NO:12) e um VL FR4 (SEQ ID NO:16). Em outra modalidade, o anticorpo compreende um VH FR2 (SEQ ID NO:54), um VH FR4 (SEQ ID NO:58), um VL FR3 (SEQ ID NO:64) e um VL FR4 (SEQ ID NO:16). Em uma modalidade, o anticorpo compreende um VH FR3 (SEQ ID NO: 56), um VH FR4 (SEQ ID NO: 58), um VL FR1 (SEQ ID NO: 61) e um VL FR2 (SEQ ID NO: 12). Em uma modalidade, o anticorpo compreende um VH FR3 (SEQ ID NO: 56), um VH FR4 (SEQ ID NO: 58), um VL FR1 (SEQ ID NO: 61) e um VL FR3 (SEQ ID NO: 64). Em outra modalidade, o anticorpo compreende um VH FR3 (SEQ ID NO:56), um VH FR4 (SEQ ID NO:58), um VL FR1 (SEQ ID NO:61) e um VL FR4 (SEQ ID NO:16). Em algumas modalidades, o anticorpo compreende um VH FR3 (SEQ ID NO:56), um VH FR4 (SEQ ID NO:58), um VL FR2 (SEQ ID NO:12) e um VL FR3 (SEQ ID NO:64). Em outras modalidades, o anticorpo compreende um VH FR3 (SEQ ID NO:56), um VH FR4 (SEQ ID NO:58), um VL FR2 (SEQ ID NO:12) e um VL FR4 (SEQ ID NO:16). Em outra modalidade, o anticorpo compreende um VH FR3 (SEQ ID NO:56), um VH FR4 (SEQ ID NO:58), um VL FR3 (SEQ ID NO:64) e um VL FR4 (SEQ ID NO:16). Em uma modalidade, o anticorpo compreende um VH FR1 (SEQ ID NO:52), um VL FR1 (SEQ ID NO:61), um VL FR2 (SEQ ID NO:12) e um VL FR3 (SEQ ID NO:64). Em algumas modalidades, o anticorpo compreende um VH FR1 (SEQ ID NO:52), um VL FR1 (SEQ ID NO:61), um VL FR2 (SEQ ID NO:12) e um VL FR4 (SEQ ID NO:16). Em outra modalidade, o anticorpo compreende um VH FR1 (SEQ ID NO:52), um VL FR1 (SEQ ID NO:61), um VL FR3 (SEQ ID NO:64) e um VL FR4 (SEQ ID NO:16). Em uma modalidade, o anticorpo compreende um VH FR1 (SEQ ID NO:52), um VL FR2 (SEQ ID NO:12), um VL FR3 (SEQ ID NO:64) e um VL FR4 (SEQ ID NO:16). Em outras modalidades, o anticorpo compreende um VH FR2 (SEQ ID NO:54), um VL FR1 (SEQ ID NO:61), um VL FR2 (SEQ ID NO:12) e um VL FR3 (SEQ ID NO:64). Em outra modalidade, o anticorpo compreende um

VH FR2 (SEQ ID NO:54), um VL FR1 (SEQ ID NO:61), um VL FR2 (SEQ ID NO:12) e um VL FR4 (SEQ ID NO:16). Em algumas modalidades, o anticorpo compreende um VH FR2 (SEQ ID NO:54), um VL FR1 (SEQ ID NO:61), um VL FR3 (SEQ ID NO:64) e um VL FR4 (SEQ ID NO:16). Em uma modalidade, o anticorpo compreende um VH FR2 (SEQ ID NO:54), um VL FR2 (SEQ ID NO:12), um VL FR3 (SEQ ID NO:64) e um VL FR4 (SEQ ID NO:16). Em outra modalidade, o anticorpo compreende um VH FR3 (SEQ ID NO:56), um VL FR1 (SEQ ID NO:61), um VL FR2 (SEQ ID NO:12) e um VL FR3 (SEQ ID NO:64). Em uma modalidade, o anticorpo compreende um VH FR3 (SEQ ID NO:56), um VL FR1 (SEQ ID NO:61), um VL FR2 (SEQ ID NO:12) e um VL FR4 (SEQ ID NO:16). Em algumas modalidades, o anticorpo compreende um VH FR3 (SEQ ID NO:56), um VL FR1 (SEQ ID NO:61), um VL FR3 (SEQ ID NO:64) e um VL FR4 (SEQ ID NO:16). Em outra modalidade, o anticorpo compreende um VH FR3 (SEQ ID NO:56), um VL FR2 (SEQ ID NO:12), um VL FR3 (SEQ ID NO:64) e um VL FR4 (SEQ ID NO:16). Em outras modalidades, o anticorpo compreende um VH FR4 (SEQ ID NO:58), um VL FR1 (SEQ ID NO:61), um VL FR2 (SEQ ID NO:12) e um VL FR3 (SEQ ID NO:64). Em uma modalidade, o anticorpo compreende um VH FR4 (SEQ ID NO:58), um VL FR1 (SEQ ID NO:61), um VL FR2 (SEQ ID NO:12) e um VL FR4 (SEQ ID NO:16). Em outra modalidade, o anticorpo compreende um VH FR4 (SEQ ID NO:58), um VL FR1 (SEQ ID NO:61), um VL FR3 (SEQ ID NO:64) e um VL FR4 (SEQ ID NO:16). Em algumas modalidades, o anticorpo compreende um VH FR4 (SEQ ID NO:58), um VL FR2 (SEQ ID NO:12), um VL FR3 (SEQ ID NO:64) e um VL FR4 (SEQ ID NO:16). Em uma modalidade, o anticorpo compreende um VH FR1 (SEQ ID NO:52), um VH FR2 (SEQ ID NO:54), um VH FR3 (SEQ ID NO:56), um VH FR4 (SEQ ID NO:58) e um VL FR1 (SEQ ID NO:61). Em outra modalidade, o anticorpo compreende um VH FR1 (SEQ ID NO:52), um VH FR2 (SEQ ID NO:54), um VH FR3 (SEQ ID NO:56), um VH FR4 (SEQ ID NO:58) e um VL FR2 (SEQ ID NO:12). Em outras modalidades, o anticorpo compreende um VH FR1 (SEQ ID

NO:52), um VH FR2 (SEQ ID NO:54), um VH FR3 (SEQ ID NO:56), um VH FR4 (SEQ ID NO:58) e um VL FR3 (SEQ ID NO:64). Em algumas modalidades, o anticorpo compreende um VH FR1 (SEQ ID NO:52), um VH FR2 (SEQ ID NO:54), um VH FR3 (SEQ ID NO:56), um VH FR4 (SEQ ID NO:58) e um VL FR4 (SEQ ID NO:16). Em outra modalidade, o anticorpo compreende um VH FR1 (SEQ ID NO:52), um VH FR2 (SEQ ID NO:54), um VH FR3 (SEQ ID NO:56), um VL FR1 (SEQ ID NO:61) e um VL FR2 (SEQ ID NO:12). Em uma modalidade, o anticorpo compreende um VH FR1 (SEQ ID NO:52), um VH FR2 (SEQ ID NO:54), um VH FR3 (SEQ ID NO:56), um VL FR1 (SEQ ID NO:61) e um VL FR3 (SEQ ID NO:64). Em uma modalidade, o anticorpo compreende um VH FR1 (SEQ ID NO:52), um VH FR2 (SEQ ID NO:54), um VH FR3 (SEQ ID NO:56), um VL FR1 (SEQ ID NO:61) e um VL FR4 (SEQ ID NO:16). Em outra modalidade, o anticorpo compreende um VH FR1 (SEQ ID NO:52), um VH FR2 (SEQ ID NO:54), um VH FR3 (SEQ ID NO:56), um VL FR2 (SEQ ID NO:12) e um VL FR3 (SEQ ID NO:64). Em algumas modalidades, o anticorpo compreende um VH FR1 (SEQ ID NO: 52), um VH FR2 (SEQ ID NO: 54), um VH FR3 (SEQ ID NO: 56), um VL FR2 (SEQ ID NO: 12) e um VL FR4 (SEQ ID NO: 16). Em outras modalidades, o anticorpo compreende um VH FR1 (SEQ ID NO: 52), um VH FR2 (SEQ ID NO: 54), um VH FR3 (SEQ ID NO: 56), um VL FR3 (SEQ ID NO: 64) e um VL FR4 (SEQ ID NO: 16). Em outra modalidade, o anticorpo compreende um VH FR1 (SEQ ID NO: 52), um VH FR2 (SEQ ID NO: 54), um VH FR4 (SEQ ID NO: 58), um VL FR1 (SEQ ID NO: 61) e um VL FR2 (SEQ ID NO: 12). Em uma modalidade, o anticorpo compreende um VH FR1 (SEQ ID NO: 52), um VH FR2 (SEQ ID NO: 54), um VH FR4 (SEQ ID NO: 58), um VL FR1 (SEQ ID NO: 61) e um VL FR3 (SEQ ID NO: 64). Em algumas modalidades, o anticorpo compreende um VH FR1 (SEQ ID NO: 52), um VH FR2 (SEQ ID NO: 54), um VH FR4 (SEQ ID NO: 58), um VL FR1 (SEQ ID NO: 61) e um VL FR4 (SEQ ID NO: 16). Em outra modalidade, o anticorpo compreende um VH FR1 (SEQ ID NO: 52), um VH FR2 (SEQ ID NO: 54), um VH FR4

(SEQ ID NO: 58), um VL FR2 (SEQ ID NO: 12) e um VL FR3 (SEQ ID NO: 64). Em uma modalidade, o anticorpo compreende um VH FR1 (SEQ ID NO: 52), um VH FR2 (SEQ ID NO: 54), um VH FR4 (SEQ ID NO: 58), um VL FR2 (SEQ ID NO: 12) e um VL FR4 (SEQ ID NO: 16). Em outras modalidades, o anticorpo compreende um VH FR1 (SEQ ID NO: 52), um VH FR2 (SEQ ID NO: 54), um VH FR4 (SEQ ID NO: 58), um VL FR3 (SEQ ID NO: 64) e um VL FR4 (SEQ ID NO: 16). Em outra modalidade, o anticorpo compreende um VH FR1 (SEQ ID NO: 52), um VH FR3 (SEQ ID NO: 56), um VH FR4 (SEQ ID NO: 58), um VL FR1 (SEQ ID NO: 61) e um VL FR2 (SEQ ID NO: 12). Em algumas modalidades, o anticorpo compreende um VH FR1 (SEQ ID NO: 52), um VH FR3 (SEQ ID NO: 56), um VH FR4 (SEQ ID NO: 58), um VL FR1 (SEQ ID NO: 61) e um VL FR3 (SEQ ID NO: 64). Em uma modalidade, o anticorpo compreende um VH FR1 (SEQ ID NO: 52), um VH FR3 (SEQ ID NO: 56), um VH FR4 (SEQ ID NO: 58), um VL FR1 (SEQ ID NO: 61) e um VL FR4 (SEQ ID NO: 16). Em outra modalidade, o anticorpo compreende um VH FR1 (SEQ ID NO: 52), um VH FR3 (SEQ ID NO: 56), um VH FR4 (SEQ ID NO: 58), um VL FR2 (SEQ ID NO: 12) e um VL FR3 (SEQ ID NO: 64). Em uma modalidade, o anticorpo compreende um VH FR1 (SEQ ID NO: 52), um VH FR3 (SEQ ID NO: 56), um VH FR4 (SEQ ID NO: 58), um VL FR2 (SEQ ID NO: 12) e um VL FR4 (SEQ ID NO: 16). Em algumas modalidades, o anticorpo compreende um VH FR1 (SEQ ID NO: 52), um VH FR3 (SEQ ID NO: 56), um VH FR4 (SEQ ID NO: 58), um VL FR3 (SEQ ID NO: 64) e um VL FR4 (SEQ ID NO: 16). Em outra modalidade, o anticorpo compreende um VH FR2 (SEQ ID NO: 54), um VH FR3 (SEQ ID NO: 56), um VH FR4 (SEQ ID NO: 58), um VL FR1 (SEQ ID NO: 61) e um VL FR2 (SEQ ID NO: 12). Em outras modalidades, o anticorpo compreende um VH FR2 (SEQ ID NO: 54), um VH FR3 (SEQ ID NO: 56), um VH FR4 (SEQ ID NO: 58), um VL FR1 (SEQ ID NO: 61) e um VL FR3 (SEQ ID NO: 64). Em uma modalidade, o anticorpo compreende um VH FR2 (SEQ ID NO: 54), um VH FR3 (SEQ ID NO: 56), um VH FR4 (SEQ ID NO: 58), um VL FR1 (SEQ ID NO:

61) e um VL FR4 (SEQ ID NO: 16). Em outra modalidade, o anticorpo compreende um VH FR2 (SEQ ID NO:54), um VH FR3 (SEQ ID NO:56), um VH FR4 (SEQ ID NO:58), um VL FR2 (SEQ ID NO:12) e um VL FR3 (SEQ ID NO:64). Em algumas modalidades, o anticorpo compreende um VH FR2 (SEQ ID NO: 54), um VH FR3 (SEQ ID NO: 56), um VH FR4 (SEQ ID NO: 58), um VL FR2 (SEQ ID NO: 12) e um VL FR4 (SEQ ID NO: 16). Em uma modalidade, o anticorpo compreende um VH FR2 (SEQ ID NO: 54), um VH FR3 (SEQ ID NO: 56), um VH FR4 (SEQ ID NO: 58), um VL FR3 (SEQ ID NO: 64) e um VL FR4 (SEQ ID NO: 16). Em outra modalidade, o anticorpo compreende um VH FR1 (SEQ ID NO: 52), um VH FR2 (SEQ ID NO: 54), um VL FR1 (SEQ ID NO: 61), um VL FR2 (SEQ ID NO: 12) e um VL FR3 (SEQ ID NO: 64). Em outras modalidades, o anticorpo compreende um VH FR1 (SEQ ID NO: 52), um VH FR2 (SEQ ID NO: 54), um VL FR1 (SEQ ID NO: 61), um VL FR2 (SEQ ID NO: 12) e um VL FR4 (SEQ ID NO: 16). Em algumas modalidades, o anticorpo compreende um VH FR1 (SEQ ID NO: 52), um VH FR2 (SEQ ID NO: 54), um VL FR1 (SEQ ID NO: 61), um VL FR3 (SEQ ID NO: 64) e um VL FR4 (SEQ ID NO: 16). Em outra modalidade, o anticorpo compreende um VH FR1 (SEQ ID NO: 52), um VH FR2 (SEQ ID NO: 54), um VL FR2 (SEQ ID NO: 12), um VL FR3 (SEQ ID NO: 64) e um VL FR4 (SEQ ID NO: 16). Em uma modalidade, o anticorpo compreende um VH FR1 (SEQ ID NO: 52), um VH FR3 (SEQ ID NO: 56), um VL FR1 (SEQ ID NO: 61), um VL FR2 (SEQ ID NO: 12) e um VL FR3 (SEQ ID NO: 64). Em uma modalidade, o anticorpo compreende um VH FR1 (SEQ ID NO: 52), um VH FR3 (SEQ ID NO: 56), um VL FR1 (SEQ ID NO: 61), um VL FR2 (SEQ ID NO: 12) e um VL FR4 (SEQ ID NO: 16). Em outra modalidade, o anticorpo compreende um VH FR1 (SEQ ID NO: 52), um VH FR3 (SEQ ID NO: 56), um VL FR1 (SEQ ID NO: 61), um VL FR3 (SEQ ID NO: 64) e um VL FR4 (SEQ ID NO: 16). Em algumas modalidades, o anticorpo compreende um VH FR1 (SEQ ID NO: 52), um VH FR3 (SEQ ID NO: 56), um VL FR2 (SEQ ID NO: 12), um VL FR3 (SEQ ID NO: 64) e um VL FR4 (SEQ ID NO: 16). Em outras modalidades, o anticorpo compreende um VH FR1 (SEQ ID NO: 52), um VH FR4 (SEQ ID NO: 58), um VL FR1 (SEQ ID NO: 61), um VL FR2 (SEQ ID NO: 12) e um VL FR3 (SEQ ID NO: 64). Em outra modalidade, o anticorpo compreende um VH FR1 (SEQ ID NO: 52), um VH FR4 (SEQ ID NO: 58), um VL FR1 (SEQ ID NO: 61), um VL FR2 (SEQ ID NO: 12) e um VL FR4 (SEQ ID NO: 16). Em uma modalidade, o anticorpo compreende um VH FR1 (SEQ ID NO: 52), um VH FR4 (SEQ ID NO: 58), um VL FR1 (SEQ ID NO: 61), um VL FR3 (SEQ ID NO: 64) e um VL FR4 (SEQ ID NO: 16). Em algumas modalidades, o anticorpo compreende um VH FR1 (SEQ ID NO: 52), um VH FR4 (SEQ ID NO: 58), um VL FR2 (SEQ ID NO: 12), um VL FR3 (SEQ ID NO: 64) e um VL FR4 (SEQ ID NO: 16). Em outra modalidade, o anticorpo compreende um VH FR2 (SEQ ID NO: 54), um VH FR3 (SEQ ID NO: 56), um VL FR1 (SEQ ID NO: 61), um VL FR2 (SEQ ID NO: 12) e um VL FR3 (SEQ ID NO: 64). Em uma modalidade, o anticorpo compreende um VH FR2 (SEQ ID NO: 54), um VH FR3 (SEQ ID NO: 56), um VL FR1 (SEQ ID NO: 61), um VL FR2 (SEQ ID NO: 12) e um VL FR4 (SEQ ID NO: 16). Em outras modalidades, o anticorpo compreende um VH FR2 (SEQ ID NO: 54), um VH FR3 (SEQ ID NO: 56), um VL FR1 (SEQ ID NO: 61), um VL FR3 (SEQ ID NO: 64) e um VL FR4 (SEQ ID NO: 16). Em outra modalidade, o anticorpo compreende um VH FR2 (SEQ ID NO: 54), um VH FR3 (SEQ ID NO: 56), um VL FR2 (SEQ ID NO: 12), um VL FR3 (SEQ ID NO: 64) e um VL FR4 (SEQ ID NO: 16). Em algumas modalidades, o anticorpo compreende um VH FR2 (SEQ ID NO: 54), um VH FR4 (SEQ ID NO: 58), um VL FR1 (SEQ ID NO: 61), um VL FR2 (SEQ ID NO: 12) e um VL FR3 (SEQ ID NO: 64). Em uma modalidade, o anticorpo compreende um VH FR2 (SEQ ID NO: 54), um VH FR4 (SEQ ID NO: 58), um VL FR1 (SEQ ID NO: 61), um VL FR2 (SEQ ID NO: 12) e um VL FR4 (SEQ ID NO: 16). Em outra modalidade, o anticorpo compreende um VH FR2 (SEQ ID NO: 54), um VH FR4 (SEQ ID NO: 58), um VL FR1 (SEQ ID NO: 61), um VL FR3 (SEQ ID NO: 64) e um VL FR4 (SEQ ID NO: 16). Em uma modalidade, o anticorpo compreende um VH FR2 (SEQ ID NO: 54), um VH FR4 (SEQ ID NO: 58), um VL FR2 (SEQ ID NO: 12), um VL FR3 (SEQ ID NO: 64) e um VL FR4 (SEQ ID NO: 16). Em algumas modalidades, o anticorpo compreende um VH FR3 (SEQ ID NO: 56), um VH FR4 (SEQ ID NO: 58), um VL FR1 (SEQ ID NO: 61), um VL FR2 (SEQ ID NO: 12) e um VL FR3 (SEQ ID NO: 64). Em outra modalidade, o anticorpo compreende um VH FR3 (SEQ ID NO: 56), um VH FR4 (SEQ ID NO: 58), um VL FR1 (SEQ ID NO: 61), um VL FR2 (SEQ ID NO: 12) e um VL FR4 (SEQ ID NO: 16). Em outras modalidades, o anticorpo compreende um VH FR3 (SEQ ID NO: 56), um VH FR4 (SEQ ID NO: 58), um VL FR1 (SEQ ID NO: 61), um VL FR3 (SEQ ID NO: 64) e um VL FR4 (SEQ ID NO: 16). Em uma modalidade, o anticorpo compreende um VH FR3 (SEQ ID NO: 56), um VH FR4 (SEQ ID NO: 58), um VL FR2 (SEQ ID NO: 12), um VL FR3 (SEQ ID NO: 64) e um VL FR4 (SEQ ID NO: 16). Em outra modalidade, o anticorpo compreende um VH FR1 (SEQ ID NO: 52), um VL FR1 (SEQ ID NO: 61), um VL FR2 (SEQ ID NO: 12), um VL FR3 (SEQ ID NO: 64) e um VL FR4 (SEQ ID NO: 16). Em algumas modalidades, o anticorpo compreende um VH FR2 (SEQ ID NO: 54), um VL FR1 (SEQ ID NO: 61), um VL FR2 (SEQ ID NO: 12), um VL FR3 (SEQ ID NO: 64) e um VL FR4 (SEQ ID NO: 16). Em uma modalidade, o anticorpo compreende um VH FR3 (SEQ ID NO: 56), um VL FR1 (SEQ ID NO: 61), um VL FR2 (SEQ ID NO: 12), um VL FR3 (SEQ ID NO: 64) e um VL FR4 (SEQ ID NO: 16). Em outra modalidade, o anticorpo compreende um VH FR4 (SEQ ID NO: 58), um VL FR1 (SEQ ID NO: 61), um VL FR2 (SEQ ID NO: 12), um VL FR3 (SEQ ID NO: 64) e um VL FR4 (SEQ ID NO: 16). Em outras modalidades, o anticorpo compreende um VH FR1 (SEQ ID NO:52), um VH FR2 (SEQ ID NO:54), um VH FR3 (SEQ ID NO:56), um VH FR4 (SEQ ID NO:58), um VL FR1 (SEQ ID NO:61) e um VL FR2 (SEQ ID NO:12). Em algumas modalidades, o anticorpo compreende um VH FR1 (SEQ ID NO: 52), um VH FR2 (SEQ ID NO: 54), um VH FR3 (SEQ ID NO: 56), um VH FR4 (SEQ ID NO: 58), um VL FR1 (SEQ ID NO: 61) e um VL FR3 (SEQ ID NO: 64). Em outra modalidade, o anticorpo compreende um VH FR1 (SEQ ID NO: 52), um VH FR2 (SEQ ID NO: 54), um VH FR3 (SEQ ID NO: 56), um VH FR4 (SEQ ID NO: 58), um VL FR1 (SEQ ID NO: 61) e um VL FR4 (SEQ ID NO: 16). Em uma modalidade, o anticorpo compreende um VH FR1 (SEQ ID NO: 52), um VH FR2 (SEQ ID NO: 54), um VH FR3 (SEQ ID NO: 56), um VH FR4 (SEQ ID NO: 58), um VL FR2 (SEQ ID NO: 12) e um VL FR3 (SEQ ID NO: 64). Em uma modalidade, o anticorpo compreende um VH FR1 (SEQ ID NO:52), um VH FR2 (SEQ ID NO:54), um VH FR3 (SEQ ID NO:56), um VH FR4 (SEQ ID NO:58), um VL FR2 (SEQ ID NO:12) e um VL FR4 (SEQ ID NO:16). Em outra modalidade, o anticorpo compreende um VH FR1 (SEQ ID NO:52), um VH FR2 (SEQ ID NO:54), um VH FR3 (SEQ ID NO:56), um VH FR4 (SEQ ID NO:58), um VL FR3 (SEQ ID NO:64) e um VL FR4 (SEQ ID NO:16). Em algumas modalidades, o anticorpo compreende um VH FR1 (SEQ ID NO:52), um VH FR2 (SEQ ID NO:54), uma VH FR3 (SEQ ID NO:56), um VL FR1 (SEQ ID NO:61), um VL FR2 (SEQ ID NO:12) e um VL FR3 (SEQ ID NO:64). Em outras modalidades, o anticorpo compreende um VH FR1 (SEQ ID NO: 52), um VH FR2 (SEQ ID NO: 54), um VH FR3 (SEQ ID NO: 56), um VL FR1 (SEQ ID NO: 61), um VL FR2 (SEQ ID NO: 12) e um VL FR4 (SEQ ID NO: 16). Em outra modalidade, o anticorpo compreende um VH FR1 (SEQ ID NO:52), um VH FR2 (SEQ ID NO:54), um VH FR3 (SEQ ID NO:56), um VL FR1 (SEQ ID NO:61), um VL FR3 (SEQ ID NO:64) e um VL FR4 (SEQ ID NO:16). Em uma modalidade, o anticorpo compreende um VH FR1 (SEQ ID NO: 52), um VH FR2 (SEQ ID NO: 54), um VH FR3 (SEQ ID NO: 56), um VL FR2 (SEQ ID NO: 12), um VL FR3 (SEQ ID NO: 64) e um VL FR4 (SEQ ID NO: 16). Em algumas modalidades, o anticorpo compreende um VH FR1 (SEQ ID NO:52), um VH FR2 (SEQ ID NO:54), um VH FR4 (SEQ ID NO:58), um VL FR1 (SEQ ID NO:61), um VL FR2 (SEQ ID NO:12) e um VL FR3 (SEQ ID NO:64). Em outra modalidade, o anticorpo compreende um VH FR1 (SEQ ID NO: 52), um VH FR2 (SEQ ID NO: 54), um VH FR4 (SEQ ID NO: 58), um VL FR1 (SEQ ID NO: 61), um VL FR2 (SEQ ID NO: 12) e um VL FR4 (SEQ ID NO:

16). Em uma modalidade, o anticorpo compreende um VH FR1 (SEQ ID NO:52), um VH FR2 (SEQ ID NO:54), um VH FR4 (SEQ ID NO:58), um VL FR1 (SEQ ID NO:61), um VL FR3 (SEQ ID NO:64) e um VL FR4 (SEQ ID NO:16). Em outras modalidades, o anticorpo compreende um VH FR1 (SEQ ID NO:52), um VH FR2 (SEQ ID NO:54), um VH FR4 (SEQ ID NO:58), um VL FR2 (SEQ ID NO:12), um VL FR3 (SEQ ID NO:64) e um VL FR4 (SEQ ID NO:16). Em outra modalidade, o anticorpo compreende um VH FR1 (SEQ ID NO:52), um VH FR3 (SEQ ID NO:56), um VH FR4 (SEQ ID NO:58), um VL FR1 (SEQ ID NO:61), um VL FR2 (SEQ ID NO:12) e um VL FR3 (SEQ ID NO:64). Em algumas modalidades, o anticorpo compreende um VH FR1 (SEQ ID NO:52), um VH FR3 (SEQ ID NO:56), um VH FR4 (SEQ ID NO:58), um VL FR1 (SEQ ID NO:61), um VL FR2 (SEQ ID NO:12) e um VL FR4 (SEQ ID NO:16). Em uma modalidade, o anticorpo compreende um VH FR1 (SEQ ID NO:52), um VH FR3 (SEQ ID NO:56), um VH FR4 (SEQ ID NO:58), um VL FR1 (SEQ ID NO:61), um VL FR3 (SEQ ID NO:64) e um VL FR4 (SEQ ID NO:16). Em outra modalidade, o anticorpo compreende um VH FR1 (SEQ ID NO: 52), um VH FR3 (SEQ ID NO: 56), um VH FR4 (SEQ ID NO: 58), um VL FR2 (SEQ ID NO: 12), um VL FR3 (SEQ ID NO: 64) e um VL FR4 (SEQ ID NO: 16). Em uma modalidade, o anticorpo compreende um VH FR2 (SEQ ID NO: 54), um VH FR3 (SEQ ID NO: 56), um VH FR4 (SEQ ID NO: 58), um VL FR1 (SEQ ID NO: 61), um VL FR2 (SEQ ID NO: 12) e um VL FR3 (SEQ ID NO: 64). Em algumas modalidades, o anticorpo compreende um VH FR2 (SEQ ID NO:54), um VH FR3 (SEQ ID NO:56), um VH FR4 (SEQ ID NO:58), um VL FR1 (SEQ ID NO:61), um VL FR2 (SEQ ID NO:12) e um VL FR4 (SEQ ID NO:16). Em outra modalidade, o anticorpo compreende um VH FR2 (SEQ ID NO:54), um VH FR3 (SEQ ID NO:56), um VH FR4 (SEQ ID NO:58), um VL FR1 (SEQ ID NO:61), um VL FR3 (SEQ ID NO:64) e um VL FR4 (SEQ ID NO:16). Em outras modalidades, o anticorpo compreende um VH FR2 (SEQ ID NO:54), um VH FR3 (SEQ ID NO:56), um VH FR4 (SEQ ID NO:58), um VL FR2 (SEQ ID NO:12), um

VL FR3 (SEQ ID NO:64) e um VL FR4 (SEQ ID NO:16). Em uma modalidade, o anticorpo compreende um VH FR1 (SEQ ID NO:52), um VH FR2 (SEQ ID NO:54), um VL FR1 (SEQ ID NO:61), um VL FR2 (SEQ ID NO:12), um VL FR3 (SEQ ID NO:64) e um VL FR4 (SEQ ID NO:16). Em outra modalidade, o anticorpo compreende um VH FR1 (SEQ ID NO:52), um VH FR3 (SEQ ID NO:56), um VL FR1 (SEQ ID NO:61), um VL FR2 (SEQ ID NO:12), um VL FR3 (SEQ ID NO:64) e um VL FR4 (SEQ ID NO:16). Em algumas modalidades, o anticorpo compreende um VH FR1 (SEQ ID NO: 52), um VH FR4 (SEQ ID NO: 58), um VL FR1 (SEQ ID NO: 61), um VL FR2 (SEQ ID NO: 12), um VL FR3 (SEQ ID NO: 64) e um VL FR4 (SEQ ID NO: 16). Em uma modalidade, o anticorpo compreende um VH FR2 (SEQ ID NO: 54), um VH FR3 (SEQ ID NO: 56), um VL FR1 (SEQ ID NO: 61), um VL FR2 (SEQ ID NO: 12), um VL FR3 (SEQ ID NO: 64) e um VL FR4 (SEQ ID NO: 16). Em outra modalidade, o anticorpo compreende um VH FR2 (SEQ ID NO:54), a um VH FR4 (SEQ ID NO:58), um VL FR1 (SEQ ID NO:61), um VL FR2 (SEQ ID NO:12), um VL FR3 (SEQ ID NO:64) e um VL FR4 (SEQ ID NO:16). Em outras modalidades, o anticorpo compreende um VH FR3 (SEQ ID NO:56), um VH FR4 (SEQ ID NO:58), um VL FR1 (SEQ ID NO:61), um VL FR2 (SEQ ID NO:12), um VL FR3 (SEQ ID NO:64) e um VL FR4 (SEQ ID NO:16). Em algumas modalidades, o anticorpo compreende um VH FR1 (SEQ ID NO:52), um VH FR2 (SEQ ID NO:54), um VH FR3 (SEQ ID NO:56), um VH FR4 (SEQ ID NO:58), um VL FR1 (SEQ ID NO:61), um VL FR2 (SEQ ID NO:12) e um VL FR3 (SEQ ID NO:64). Em outra modalidade, o anticorpo compreende um VH FR1 (SEQ ID NO:52), um VH FR2 (SEQ ID NO:54), um VH FR3 (SEQ ID NO:56), um VH FR4 (SEQ ID NO:58), um VL FR1 (SEQ ID NO:61), um VL FR2 (SEQ ID NO:12) e um VL FR4 (SEQ ID NO:16). Em uma modalidade, o anticorpo compreende um VH FR1 (SEQ ID NO:52), um VH FR2 (SEQ ID NO:54), um VH FR3 (SEQ ID NO:56), um VH FR4 (SEQ ID NO:58), um VL FR1 (SEQ ID NO:61), um VL FR3 (SEQ ID NO:64) e um VL FR4 (SEQ ID NO:16). Em uma modalidade, o anticorpo compreende um

VH FR1 (SEQ ID NO:52), um VH FR2 (SEQ ID NO:54), um VH FR3 (SEQ ID NO:56), um VH FR4 (SEQ ID NO:58), um VL FR2 (SEQ ID NO:12), um VL FR3 (SEQ ID NO:64) e um VL FR4 (SEQ ID NO:16). Em outra modalidade, o anticorpo compreende um VH FR1 (SEQ ID NO:52), um VH FR2 (SEQ ID NO:54), um VH FR3 (SEQ ID NO:56), um VL FR1 (SEQ ID NO:61), um VL FR2 (SEQ ID NO:12), um VL FR3 (SEQ ID NO:64) e um VL FR4 (SEQ ID NO:16). Em algumas modalidades, o anticorpo compreende um VH FR1 (SEQ ID NO:52), um VH FR2 (SEQ ID NO:54), um VH FR4 (SEQ ID NO:58), um VL FR1 (SEQ ID NO:61), um VL FR2 (SEQ ID NO:12), um VL FR3 (SEQ ID NO:64) e um VL FR4 (SEQ ID NO:16). Em outras modalidades, o anticorpo compreende um VH FR1 (SEQ ID NO:52), um VH FR3 (SEQ ID NO:56), um VH FR4 (SEQ ID NO:58), um VL FR1 (SEQ ID NO:61), um VL FR2 (SEQ ID NO:12), um VL FR3 (SEQ ID NO:64) e um VL FR4 (SEQ ID NO:16). Em uma modalidade, o anticorpo compreende um VH FR2 (SEQ ID NO:54), um VH FR3 (SEQ ID NO:56), um VH FR4 (SEQ ID NO:58), um VL FR1 (SEQ ID NO:61), um VL FR2 (SEQ ID NO:12), um VL FR3 (SEQ ID NO:64) e um VL FR4 (SEQ ID NO:16). Em algumas modalidades, o anticorpo compreende qualquer combinação dos VH FRs (SEQ ID NOS:52, 54, 56, 58) e dos VL FRs (SEQ ID NOS:61, 12, 64, 16) listados nas Tabelas 3-4.

[00224] Em algumas modalidades, os anticorpos fornecidos neste documento compreendem uma região VH ou domínio VH. Em outras modalidades, os anticorpos fornecidos neste documento compreendem uma região VL ou domínio VL. Em certas modalidades, os anticorpos fornecidos neste documento têm uma combinação de (i) um domínio VH ou região VH; e/ou (ii) um domínio VL ou região VL. Em ainda outras modalidades, os anticorpos fornecidos neste documento têm uma combinação de (i) um domínio VH ou região VH; e/ou (ii) um domínio VL ou região VL selecionada a partir do grupo que consiste na SEQ ID NOS: 18, 46, 67, 133, 138, 141, 9, 22, 27, 32, 36, 42, 50,

60, 71, 76, 80, 85, 90, 123 e 127, conforme estabelecido nas Tabelas 9-10. Em ainda outras modalidades, os anticorpos fornecidos neste documento têm uma combinação de (i) um domínio VH ou região VH; e/ou (ii) um domínio VL ou região VL de qualquer um dos anticorpos SIRPAB-1, SIRPAB-2, SIRPAB-3, SIRPAB- 4, SIRPAB-5, SIRPAB-6, SIRPAB-7, SIRPAB-8, SIRPAB-9, SIRPAB-10, SIRPAB-11, SIRPAB-12, SIRPAB-13, SIRPAB-17, SIRPAB-18, SIRPAB-19, SIRPAB-20, ou SIRPAB- 21, conforme estabelecido nas Tabelas 9-10.

[00225] Em certas modalidades, os anticorpos fornecidos neste documento compreendem uma região VH que compreende: (1) um VH CDR1 com uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste na SEQ ID NOS: 78 e 82; (2) um VH CDR2 com uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste na SEQ ID NOS: 69 e 83; e (3) um VH CDR3 com uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 57; e uma região VL selecionada a partir do grupo que consiste na SEQ ID NOS: 18, 46, 67, 133, 138 e 141, conforme estabelecido na Tabela 9. Em algumas modalidades, a região VL possui uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 18. Em outras modalidades, a região VL possui uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:46. Em algumas modalidades, a região VL possui uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:67.

[00226] Em outras modalidades, os anticorpos fornecidos neste documento compreendem uma região VH selecionada do grupo que consiste na SEQ ID NOS: 9, 22, 27, 32, 36, 42, 50, 60, 71, 76, 80, 85, 90, 123, e 127 conforme estabelecido na Tabela 10; e uma região VL compreendendo: (1) um VL CDR1 que possui uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 62; (2) um VL CDR2 que possui uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 63; e (3) um VL CDR3 que possui uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 65. Em algumas modalidades, a região VH tem uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 9.

Em algumas modalidades, a região VH tem uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 22. Em algumas modalidades, a região VH possui uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 27. Em algumas modalidades, a região VH possui uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 32. Em algumas modalidades, a região VH possui uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 36. Em algumas modalidades, a região VH possui uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:

42. Em algumas modalidades, a região VH possui uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 50. Em algumas modalidades, a região VH possui uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 60. Em algumas modalidades, a região VH possui uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 71. Em algumas modalidades, a região VH possui uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 76. Em algumas modalidades, a região VH possui uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:

80. Em algumas modalidades, a região VH possui uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 85. Em algumas modalidades, a região VH possui uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 90. Em algumas modalidades, a região VH possui uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 123. Em algumas modalidades, a região VH possui uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 127. Tabela 9. Sequências de aminoácidos do domínio VL Anti VL (SEQ ID NO:) corp o

SIRP DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQDISNYLNWYQQKPGKAPKLLIYDASN AB-1 LATGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQFAYLPWTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:18)

SIRP DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQDISNYLNWYQQKPGKAPKLLIYDASN AB-2 LATGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQFAYLPWTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:18)

Anti VL (SEQ ID NO:) corp o

SIRP DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQDISNYLNWYQQKPGKAPKLLIYDASN AB-3 LATGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQFAYLPWTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:18)

SIRP DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQDISNYLNWYQQKPGKAPKLLIYDASN AB-4 LATGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQFAYLPWTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:18)

SIRP DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQDISNYLNWYQQKPGKAPKLLIYDASN AB-5 LATGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQFAYLPWTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:18)

SIRP DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQDISNYLNWYQQKPGKAPKLLIYDASNL AB-6 ETGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQFAYLPYTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:46)

SIRP DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQDISNYLNWYQQKPGKAPKLLIYDASNL AB-7 ETGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQFAYLPYTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:46)

SIRP DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYAASN AB-8 LQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGASFPITFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:67)

SIRP DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYAASN AB-9 LQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGASFPITFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:67)

SIRP DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYAASN AB- LQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGASFPITFGGGTKVEIK 10 (SEQ ID NO:67)

Anti VL (SEQ ID NO:) corp o

SIRP DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYAASN AB- LQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGASFPITFGGGTKVEIK 11 (SEQ ID NO:67)

SIRP DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYAASN AB- LQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGASFPITFGGGTKVEIK 12 (SEQ ID NO:67)

SIRP DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYAASN AB- LQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGASFPITFGGGTKVEIK 13 (SEQ ID NO:67)

SIRP DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQDISNYLNWYQQKPGKAPKLLIYDASN AB- LATGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQFAYLPWTFGGGTKVEIK 17 (SEQ ID NO:18)

SIRP DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQDISNYLNWYQQKPGKAPKLLIYDASN AB- LATGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQFAYLPWTFGGGTKVEIK 18 (SEQ ID NO:18)

SIRP DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASDDISDYLNWYQQKPGKAPKLLIYDASNI AB- EDGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQFAYLPWTFGGGTKVEIK 19 (SEQ ID NO:133)

SIRP DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQDISDYLNWYQQKPGKAPKLLIYDADN AB- LETGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQFAYLPWTFGGGTKVEIK 20 (SEQ ID NO:138)

SIRP DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASDDISDYLNWYQQKPGKAPKLLIYDASNL AB- ETGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQFAYLPWTFGGGTKVEIK 21 (SEQ ID NO:141)

Tabela 10. Sequências de aminoácidos de domínio VH Ant VH (SEQ ID NO:) icor po

SIR QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISSGGYYWSWIRQHPGKGLEWIGSIY

PAB YSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAREGYHSGMDV -1 WGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:9)

SIR QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISSGGDYWAWIRQHPGKGLEWIGYI

PAB YPSGFTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAREGYHSGMDV -2 WGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:22)

SIR QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISSGGWYWQWIRQHPGKGLEWIGT

PAB IYYSGSTFYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAREGYHSGMD -3 VWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:27)

SIR QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISSGSPYWSWIRQHPGKGLEWIGYIY

PAB ASGFTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAREGYHSGMDV -4 WGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:32)

SIR QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISSGPAYWSWIRQHPGKGLEWIGTIY

PAB YSGSTFYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAREGYHSGMDV -5 WGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:36)

SIR QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISSGGYYWSWIRQHPGKGLEWIGYIY

PAB YSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAREGLDGSYGSSA -6 WGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 42)

SIR QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISSGEYYWEWIRQHPGKGLEWIGYIY

PAB SSGFTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAREGLDGSYGSSA -7 WGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:50)

SIR QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYGISWVRQAPGQGLEWMGWI PAB SPYNGNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCAREAGSS

Ant VH (SEQ ID NO:) icor po -8 WYDFDLWGRGTLVTVSS (SEQ ID NO:60)

SIR QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFGGYGISWVRQAPGQGLEWMGW

PAB ISAYGGETNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCAREAGSS -9 WYDFDLWGRGTLVTVSS (SEQ ID NO:71)

SIR QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYPISWVRQAPGQGLEWMGWI

PAB YAYGGNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCAREAGSS -10 WYDFDLWGRGTLVTVSS (SEQ ID NO:76)

SIR QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFRGYGISWVRQAPGQGLEWMGW

PAB ISAYGGETNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCAREAGSS -11 WYDFDLWGRGTLVTVSS (SEQ ID NO:80)

SIR QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYGIVWVRQAPGQGLEWMGW

PAB ISAYAGETNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCAREAGSS -12 WYDFDLWGRGTLVTVSS (SEQ ID NO:85)

SIR QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFHGYGISWVRQAPGQGLEWMGW

PAB ISAYSGETNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCAREAGSS -13 WYDFDLWGRGTLVTVSS (SEQ ID NO:90)

SIR QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISSGGYYWSWIRQHPGKGLEWIGAI

PAB YYSGPIYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAREGYHSGMDV -17 WGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:123)

SIR QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISSGGYYWSWIRQHPGKGLEWIGAI

PAB YYSGPIYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCSKEGYHSGMDV -18 WGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:127)

SIR QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISSGGYYWSWIRQHPGKGLEWIGAI PAB YYSGPIYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCSKEGYHSGMDV

Ant VH (SEQ ID NO:) icor po -19 WGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:127)

SIR QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISSGGYYWSWIRQHPGKGLEWIGAI

PAB YYSGPIYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCSKEGYHSGMDV -20 WGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:127)

SIR QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISSGGYYWSWIRQHPGKGLEWIGAI

PAB YYSGPIYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCSKEGYHSGMDV -21 WGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:127)

[00227] Também são fornecidas neste documento moléculas de ácido nucleico isoladas que codificam uma cadeia pesada de imunoglobulina, cadeia leve, região VH, região VL, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2 e/ou VL CDR3 de anticorpos anti-SIRPα que se ligam a um polipeptídeo SIRPα, um fragmento de polipeptídeo SIRPα, um peptídeo SIRPα ou um epitopo SIRPα. As sequências de ácido nucleico exemplares para a região VL e a região VH de qualquer um dos anticorpos SIRPAB-1, SIRPAB-2, SIRPAB-3, SIRPAB-4, SIRPAB-5, SIRPAB-6, SIRPAB-7, SIRPAB-8, SIRPAB-9, SIRPAB-10, SIRPAB-11, SIRPAB-12, SIRPAB-13, SIRPAB-18, SIRPAB-19, SIRPAB-20 ou SIRPAB-21, são mostrados nas Tabelas 11-12. Tabela 11. Sequências de ácidos nucleicos VL Anticorpo Sequências nucleotídicas SIRPAB-1 GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAG

GAGACAGAGTCACCATCACTTGCCAGGCGAGTCAGGACATTAGCA ACTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGC TCCTGATCTACGATGCATCCAATTTGGCAACAGGGGTCCCATCAAG GTTCAGTGGAAGTGGATCTGGGACAGATTTTACTTTCACCATCAG

Anticorpo Sequências nucleotídicas

CAGCCTGCAGCCTGAAGATATTGCAACATATTACTGTCAGCAGTTC

GCCTACCTCCCTTGGACTTTTGGCGGAGGGACCAAGGTTGAGATC AAA (SEQ ID NO:17) SIRPAB-2 GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAG

GAGACAGAGTCACCATCACTTGCCAGGCGAGTCAGGACATTAGCA ACTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGC TCCTGATCTACGATGCATCCAATTTGGCAACAGGGGTCCCATCAAG GTTCAGTGGAAGTGGATCTGGGACAGATTTTACTTTCACCATCAG CAGCCTGCAGCCTGAAGATATTGCAACATATTACTGTCAGCAGTTC

GCCTACCTCCCTTGGACTTTTGGCGGAGGGACCAAGGTTGAGATC AAA (SEQ ID NO:23) SIRPAB-3 GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAG

GCCTACCTCCCTTGGACTTTTGGCGGAGGGACCAAGGTTGAGATC AAA (SEQ ID NO:28) SIRPAB-4 GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAG

GAGACAGAGTCACCATCACTTGCCAGGCGAGTCAGGACATTAGCA ACTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGC TCCTGATCTACGATGCATCCAATTTGGCAACAGGGGTCCCATCAAG GTTCAGTGGAAGTGGATCTGGGACAGATTTTACTTTCACCATCAG CAGCCTGCAGCCTGAAGATATTGCAACATATTACTGTCAGCAGTTC GCCTACCTCCCTTGGACTTTTGGCGGAGGGACCAAGGTTGAGATC

Anticorpo Sequências nucleotídicas AAA (SEQ ID NO:33) SIRPAB-5 GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAG

GCCTACCTCCCTTGGACTTTTGGCGGAGGGACCAAGGTTGAGATC AAA (SEQ ID NO:37) SIRPAB-6 GACATCCAGTTGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAG

GAGACAGAGTCACCATCACTTGCCAGGCGAGTCAGGACATTAGCA ACTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGC TCCTGATCTACGATGCATCCAATTTGGAAACAGGGGTCCCATCAA GGTTCAGTGGAAGTGGATCTGGGACAGATTTTACTTTCACCATCA GCAGCCTGCAGCCTGAAGATATTGCAACATATTACTGTCAGCAGTT

CGCCTACCTCCCTTACACTTTTGGCGGAGGGACCAAGGTTGAGAT CAAA (SEQ ID NO:45) SIRPAB-7 GACATCCAGTTGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAG

CGCCTACCTCCCTTACACTTTTGGCGGAGGGACCAAGGTTGAGAT CAAA (SEQ ID NO:51) SIRPAB-8 GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCTTCCGTGTCTGCATCTGTAG

Anticorpo Sequências nucleotídicas

GAGACAGAGTCACCATCACTTGTCGGGCGAGTCAGGGTATTAGCA GCTGGTTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGC TCCTGATCTATGCTGCATCCAATTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAG GTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAG CAGCCTGCAGCCTGAAGATTTTGCAACTTATTACTGTCAGCAGGG

AGCCAGTTTCCCTATCACTTTTGGCGGAGGGACCAAGGTTGAGAT CAAA (SEQ ID NO:66) SIRPAB-9 GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCTTCCGTGTCTGCATCTGTAG

AGCCAGTTTCCCTATCACTTTTGGCGGAGGGACCAAGGTTGAGAT CAAA (SEQ ID NO:72) SIRPAB-10 GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCTTCCGTGTCTGCATCTGTAG

AGCCAGTTTCCCTATCACTTTTGGCGGAGGGACCAAGGTTGAGAT CAAA (SEQ ID NO:77) SIRPAB-11 GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCTTCCGTGTCTGCATCTGTAG

GAGACAGAGTCACCATCACTTGTCGGGCGAGTCAGGGTATTAGCA GCTGGTTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGC

Anticorpo Sequências nucleotídicas

TCCTGATCTATGCTGCATCCAATTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAG GTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAG CAGCCTGCAGCCTGAAGATTTTGCAACTTATTACTGTCAGCAGGG

AGCCAGTTTCCCTATCACTTTTGGCGGAGGGACCAAGGTTGAGAT CAAA (SEQ ID NO:81) SIRPAB-12 GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCTTCCGTGTCTGCATCTGTAG

AGCCAGTTTCCCTATCACTTTTGGCGGAGGGACCAAGGTTGAGAT CAAA (SEQ ID NO:86) SIRPAB-13 GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCTTCCGTGTCTGCATCTGTAG

AGCCAGTTTCCCTATCACTTTTGGCGGAGGGACCAAGGTTGAGAT CAAA (SEQ ID NO:91) SIRPAB-17 GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAG

Anticorpo Sequências nucleotídicas

CAGCCTGCAGCCTGAAGATATTGCAACATATTACTGTCAGCAGTTC

GCCTACCTCCCTTGGACTTTTGGCGGAGGGACCAAGGTTGAGATC AAA (SEQ ID NO:124) SIRPAB-18 GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAG

GCCTACCTCCCTTGGACTTTTGGCGGAGGGACCAAGGTTGAGATC AAA (SEQ ID NO:128) SIRPAB-19 GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAG

GAGACAGAGTCACCATCACTTGCCAGGCGAGTGACGACATTAGCG ACTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGC TCCTGATCTACGATGCATCCAATATCGAAGACGGGGTCCCATCAA GGTTCAGTGGAAGTGGATCTGGGACAGATTTTACTTTCACCATCA GCAGCCTGCAGCCTGAAGATATTGCAACATATTACTGTCAGCAGTT

CGCCTACCTCCCTTGGACTTTTGGCGGAGGGACCAAGGTTGAGAT CAAA (SEQ ID NO:132) SIRPAB-20 GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAG

GAGACAGAGTCACCATCACTTGCCAGGCGAGTCAGGACATTTCCG ACTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGC TCCTGATCTACGACGCAGACAATTTGGAAACAGGGGTCCCATCAA GGTTCAGTGGAAGTGGATCTGGGACAGATTTTACTTTCACCATCA GCAGCCTGCAGCCTGAAGATATTGCAACATATTACTGTCAGCAGTT CGCCTACCTCCCTTGGACTTTTGGCGGAGGGACCAAGGTTGAGAT

Anticorpo Sequências nucleotídicas CAAA (SEQ ID NO:137) SIRPAB-21 GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAG

GAGACAGAGTCACCATCACTTGCCAGGCGAGTGACGACATTAGCG ACTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGC TCCTGATCTACGACGCATCCAATTTGGAAACAGGGGTCCCATCAA GGTTCAGTGGAAGTGGATCTGGGACAGATTTTACTTTCACCATCA GCAGCCTGCAGCCTGAAGATATTGCAACATATTACTGTCAGCAGTT

CGCCTACCTCCCTTGGACTTTTGGCGGAGGGACCAAGGTTGAGAT CAAA (SEQ ID NO:140) Tabela 12. Sequências de ácidos nucleicos VH Anticorpo Sequências nucleotídicas SIRPAB-1 CAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTC

ACAGACCCTGTCCCTCACCTGTACTGTCTCTGGTGGCTCCATCAGC AGTGGTGGTTACTACTGGAGCTGGATCCGCCAGCACCCAGGGAA GGGCCTGGAGTGGATTGGGTCAATCTATTACAGTGGGAGCACCTA CTACAACCCGTCCCTCAAGAGTCGAGTTACCATATCAGTAGACACG TCTAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGTTCTGTGACCGCCGCA GACACGGCGGTGTACTACTGCGCCAGAGAGGGATACCACTCAGG

AATGGACGTATGGGGCCAGGGAACAACTGTCACCGTCTCCTCA ((SEQ ID NO:8) SIRPAB-2 CAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTC

ACAGACCCTGTCCCTCACCTGTACTGTCTCTGGTGGCTCCATCAGC AGTGGTGGTGATTACTGGGCTTGGATCCGCCAGCACCCAGGGAA GGGCCTGGAGTGGATTGGGTACATCTATCCTAGTGGGTTTACCTA CTACAACCCGTCCCTCAAGAGTCGAGTTACCATATCAGTAGACACG TCTAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGTTCTGTGACCGCCGCA

Anticorpo Sequências nucleotídicas

GACACGGCGGTGTACTACTGCGCCAGAGAGGGATACCACTCAGG

AATGGACGTATGGGGCCAGGGAACAACTGTCACCGTCTCCTCA (SEQ ID NO:21) SIRPAB-3 CAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTC

ACAGACCCTGTCCCTCACCTGTACTGTCTCTGGTGGCTCCATCAGC AGTGGTGGTTGGTACTGGCAGTGGATCCGCCAGCACCCAGGGAA GGGCCTGGAGTGGATTGGGACGATCTATTACAGTGGGAGCACCT TTTACAACCCGTCCCTCAAGAGTCGAGTTACCATATCAGTAGACAC GTCTAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGTTCTGTGACCGCCGC AGACACGGCGGTGTACTACTGCGCCAGAGAGGGATACCACTCAG

GAATGGACGTATGGGGCCAGGGAACAACTGTCACCGTCTCCTCA (SEQ ID NO:26) SIRPAB-4 CAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTC

ACAGACCCTGTCCCTCACCTGTACTGTCTCTGGTGGCTCCATCAGC AGTGGTAGTCCGTACTGGAGCTGGATCCGCCAGCACCCAGGGAA GGGCCTGGAGTGGATTGGGTACATCTATGCTAGTGGGTTTACCTA CTACAACCCGTCCCTCAAGAGTCGAGTTACCATATCAGTAGACACG TCTAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGTTCTGTGACCGCCGCA GACACGGCGGTGTACTACTGCGCCAGAGAGGGATACCACTCAGG

AATGGACGTATGGGGCCAGGGAACAACTGTCACCGTCTCCTCA (SEQ ID NO:31) SIRPAB-5 CAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTC

ACAGACCCTGTCCCTCACCTGTACTGTCTCTGGTGGCTCCATCAGC AGTGGTCCGGCTTACTGGAGCTGGATCCGCCAGCACCCAGGGAA GGGCCTGGAGTGGATTGGGACTATCTATTACAGTGGGAGCACCTT TTACAACCCGTCCCTCAAGAGTCGAGTTACCATATCAGTAGACACG

Anticorpo Sequências nucleotídicas

TCTAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGTTCTGTGACCGCCGCA GACACGGCGGTGTACTACTGCGCCAGAGAGGGATACCACTCAGG

AATGGACGTATGGGGCCAGGGAACAACTGTCACCGTCTCCTCA (SEQ ID NO:35) SIRPAB-6 CAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTC

ACAGACCCTGTCCCTCACCTGTACTGTCTCTGGTGGCTCCATCAGC AGTGGTGGTTACTACTGGAGCTGGATCCGCCAGCACCCAGGGAA GGGCCTGGAGTGGATTGGGTACATCTATTACAGTGGGAGCACCTA CTACAACCCGTCCCTCAAGAGTCGAGTTACCATATCAGTAGACACG TCTAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGTTCTGTGACCGCCGCA GACACGGCGGTGTACTACTGCGCCAGAGAGGGCTTGGACGGATC

CTACGGTTCAAGCGCATGGGGACAGGGTACATTGGTCACCGTCTC CTCA (SEQ ID NO:41) SIRPAB-7 CAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTC

ACAGACCCTGTCCCTCACCTGTACTGTCTCTGGTGGCTCCATCAGC AGTGGTGAGTACTACTGGGAGTGGATCCGCCAGCACCCAGGGAA GGGCCTGGAGTGGATTGGGTACATCTATTCTAGTGGGTTTACCTA CTACAACCCGTCCCTCAAGAGTCGAGTTACCATATCAGTAGACACG TCTAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGTTCTGTGACCGCCGCA GACACGGCGGTGTACTACTGCGCCAGAGAGGGCTTGGACGGATC

CTACGGTTCAAGCGCATGGGGACAGGGTACATTGGTCACCGTCTC CTCA (SEQ ID NO:49) SIRPAB-8 CAGGTTCAGCTGGTGCAGTCTGGAGCTGAGGTGAAGAAGCCTGG

GGCCTCAGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGTTACACCTTTACC AGCTATGGTATCAGCTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCT TGAGTGGATGGGATGGATCAGCCCTTACAATGGTAACACAAACTA

Anticorpo Sequências nucleotídicas

TGCACAGAAGCTCCAGGGCAGAGTCACCATGACCACAGACACATC CACGAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGGAGCCTGAGATCTGACG ACACGGCGGTGTACTACTGCGCCAGAGAAGCCGGAAGCAGCTGG

TACGACTTCGACCTATGGGGGAGAGGTACATTGGTCACCGTCTCC TCA (SEQ ID NO:59) SIRPAB-9 CAGGTTCAGCTGGTGCAGTCTGGAGCTGAGGTGAAGAAGCCTGG

GGCCTCAGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGTTACACCTTTGG GGGTTATGGTATCAGCTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGC TTGAGTGGATGGGATGGATCAGCGCTTACGGGGGTGAGACAAAC TATGCACAGAAGCTCCAGGGCAGAGTCACCATGACCACAGACACA TCCACGAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGGAGCCTGAGATCTGAC GACACGGCGGTGTACTACTGCGCCAGAGAAGCCGGAAGCAGCTG

GTACGACTTCGACCTATGGGGGAGAGGTACATTGGTCACCGTCTC CTCA (SEQ ID NO:70) SIRPAB-10 CAGGTTCAGCTGGTGCAGTCTGGAGCTGAGGTGAAGAAGCCTGG

GGCCTCAGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGTTACACCTTTACC GGTTATCCTATCAGCTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTT GAGTGGATGGGATGGATCTATGCTTACGGGGGTAACACAAACTAT GCACAGAAGCTCCAGGGCAGAGTCACCATGACCACAGACACATCC ACGAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGGAGCCTGAGATCTGACGA CACGGCGGTGTACTACTGCGCCAGAGAAGCCGGAAGCAGCTGGT

ACGACTTCGACCTATGGGGGAGAGGTACATTGGTCACCGTCTCCT CA (SEQ ID NO:75) SIRPAB-11 CAGGTTCAGCTGGTGCAGTCTGGAGCTGAGGTGAAGAAGCCTGG

GGCCTCAGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGTTACACCTTTAG GGGGTATGGTATCAGCTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGC

Anticorpo Sequências nucleotídicas

TTGAGTGGATGGGATGGATCAGCGCTTACGGGGGTGAGACAAAC TATGCACAGAAGCTCCAGGGCAGAGTCACCATGACCACAGACACA TCCACGAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGGAGCCTGAGATCTGAC GACACGGCGGTGTACTACTGCGCCAGAGAAGCCGGAAGCAGCTG

GTACGACTTCGACCTATGGGGGAGAGGTACATTGGTCACCGTCTC CTCA (SEQ ID NO:79) SIRPAB-12 CAGGTTCAGCTGGTGCAGTCTGGAGCTGAGGTGAAGAAGCCTGG

GGCCTCAGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGTTACACCTTTACC GGGTATGGTATCGTTTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCT TGAGTGGATGGGATGGATCAGCGCTTACGCTGGTGAGACAAACT ATGCACAGAAGCTCCAGGGCAGAGTCACCATGACCACAGACACAT CCACGAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGGAGCCTGAGATCTGAC GACACGGCGGTGTACTACTGCGCCAGAGAAGCCGGAAGCAGCTG

GTACGACTTCGACCTATGGGGGAGAGGTACATTGGTCACCGTCTC CTCA (SEQ ID NO:84) SIRPAB-13 CAGGTTCAGCTGGTGCAGTCTGGAGCTGAGGTGAAGAAGCCTGG

GGCCTCAGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGTTACACCTTTCAT GGGTATGGTATCAGCTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCT TGAGTGGATGGGATGGATCAGCGCTTACTCGGGTGAGACAAACT ATGCACAGAAGCTCCAGGGCAGAGTCACCATGACCACAGACACAT CCACGAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGGAGCCTGAGATCTGAC GACACGGCGGTGTACTACTGCGCCAGAGAAGCCGGAAGCAGCTG

GTACGACTTCGACCTATGGGGGAGAGGTACATTGGTCACCGTCTC CTCA (SEQ ID NO:89) SIRPAB-17 CAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTC

ACAGACCCTGTCCCTCACCTGTACTGTCTCTGGTGGCTCCATCAGC

Anticorpo Sequências nucleotídicas

AGTGGTGGTTACTACTGGAGCTGGATCCGCCAGCACCCAGGGAA GGGCCTGGAGTGGATTGGGGCTATCTATTACAGTGGGCCGATCTA CTACAACCCGTCCCTCAAGAGTCGAGTTACCATATCAGTAGACACG TCTAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGTTCTGTGACCGCCGCA GACACGGCGGTGTACTACTGCGCCAGAGAGGGATACCACTCAGG

AATGGACGTATGGGGCCAGGGAACAACTGTCACCGTCTCCTCA (SEQ ID NO:122) SIRPAB-18 CAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTC

ACAGACCCTGTCCCTCACCTGTACTGTCTCTGGTGGCTCCATCAGC AGTGGTGGTTACTACTGGAGCTGGATCCGCCAGCACCCAGGGAA GGGCCTGGAGTGGATTGGGGCTATCTATTACAGTGGGCCGATCTA CTACAACCCGTCCCTCAAGAGTCGAGTTACCATATCAGTAGACACG TCTAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGTTCTGTGACCGCCGCA GACACGGCGGTGTACTACTGCAGTAAGGAGGGATACCACTCAGG

AATGGACGTATGGGGGCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCA (SEQ ID NO:126) SIRPAB-19 CAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTC

AATGGACGTATGGGGGCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCA (SEQ ID NO:129) SIRPAB-20 CAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTC

Anticorpo Sequências nucleotídicas

AATGGACGTATGGGGGCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCA (SEQ ID NO:134) SIRPAB-21 CAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTC

AATGGACGTATGGGGGCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCA (SEQ ID NO:139)

[00228] Em algumas modalidades, um anticorpo fornecido neste documento tem uma sequência de aminoácidos VH e VL de SIRPAB-1. Em algumas modalidades, um anticorpo compreende uma sequência de aminoácidos VH da SEQ ID NO: 9 e uma sequência de aminoácidos VL da SEQ ID NO: 18.

[00229] Em outras modalidades, um anticorpo fornecido neste documento tem uma sequência de aminoácidos VH e VL de SIRPAB-2. Em algumas modalidades, um anticorpo compreende uma sequência de aminoácidos VH da SEQ ID NO: 22 e uma sequência de aminoácidos VL da SEQ ID NO: 18.

[00230] Em algumas modalidades, um anticorpo fornecido neste documento tem uma sequência de aminoácidos de SIRPAB-3. Em algumas modalidades, um anticorpo compreende uma sequência de aminoácidos VH da SEQ ID NO: 27 e uma sequência de aminoácidos VL da SEQ ID NO: 18.

[00231] Em outras modalidades, um anticorpo fornecido neste documento possui uma sequência de aminoácidos VH e VL de SIRPAB-4. Em algumas modalidades, um anticorpo compreende uma sequência de aminoácidos VH de SEQ ID NO: 32 e uma sequência de aminoácidos VL de SEQ ID NO: 18.

[00232] Em algumas modalidades, um anticorpo fornecido neste documento possui uma sequência de aminoácidos de SIRPAB-5. Em algumas modalidades, um anticorpo compreende uma sequência de aminoácidos VH da SEQ ID NO: 36 e uma sequência de aminoácidos VL da SEQ ID NO: 18.

[00233] Além disso, em algumas modalidades, um anticorpo compreende uma sequência de aminoácidos VH da SEQ ID NO: 42 e uma sequência de aminoácidos VL da SEQ ID NO: 18. Em algumas modalidades, um anticorpo compreende uma sequência de aminoácidos VH da SEQ ID NO: 50 e uma sequência de aminoácidos VL da SEQ ID NO: 18. Em algumas modalidades, um anticorpo compreende uma sequência de aminoácidos VH da SEQ ID NO: 60 e uma sequência de aminoácidos VL da SEQ ID NO: 18. Em algumas modalidades, um anticorpo compreende uma sequência de aminoácidos VH da SEQ ID NO: 71 e uma sequência de aminoácidos VL da SEQ ID NO: 18. Em algumas modalidades, um anticorpo compreende uma sequência de aminoácidos VH da SEQ ID NO: 76 e uma sequência de aminoácidos VL da SEQ ID NO: 18. Em algumas modalidades, um anticorpo compreende uma sequência de aminoácidos VH da SEQ ID NO: 80 e uma sequência de aminoácidos VL da SEQ ID NO: 18. Em algumas modalidades, um anticorpo compreende uma sequência de aminoácidos VH da SEQ ID NO: 85 e uma sequência de aminoácidos VL da SEQ ID NO: 18. Em algumas modalidades,

um anticorpo compreende uma sequência de aminoácidos VH da SEQ ID NO: 90 e uma sequência de aminoácidos VL da SEQ ID NO: 18. Em algumas modalidades, um anticorpo compreende uma sequência de aminoácidos VH da SEQ ID NO: 123 e uma sequência de aminoácidos VL da SEQ ID NO: 18. Em algumas modalidades, um anticorpo compreende uma sequência de aminoácidos VH da SEQ ID NO: 127 e uma sequência de aminoácidos VL da SEQ ID NO: 18.

[00234] Em outras modalidades, um anticorpo fornecido neste documento possui uma sequência de aminoácidos VH e VL de SIRPAB-6. Em algumas modalidades, um anticorpo compreende uma sequência de aminoácidos VH de SEQ ID NO: 42 e uma sequência de aminoácidos VL de SEQ ID NO: 46.

[00235] Em algumas modalidades, um anticorpo fornecido neste documento possui uma sequência de aminoácidos de VH e um VL de SIRPAB-7. Em algumas modalidades, um anticorpo compreende uma sequência de aminoácidos VH da SEQ ID NO: 50 e uma sequência de aminoácidos VL da SEQ ID NO: 46.

[00236] Além disso, em algumas modalidades, um anticorpo compreende uma sequência de aminoácidos VH de SEQ ID NO: 9 e uma sequência de aminoácidos VL de SEQ ID NO: 46. Em algumas modalidades, um anticorpo compreende uma sequência de aminoácidos VH da SEQ ID NO: 22 e uma sequência de aminoácidos VL da SEQ ID NO: 46. Em algumas modalidades, um anticorpo compreende uma sequência de aminoácidos VH da SEQ ID NO: 27 e uma sequência de aminoácidos VL da SEQ ID NO: 46. Em algumas modalidades, um anticorpo compreende uma sequência de aminoácidos VH da SEQ ID NO: 32 e uma sequência de aminoácidos VL da SEQ ID NO: 46. Em algumas modalidades, um anticorpo compreende uma sequência de aminoácidos VH da SEQ ID NO: 36 e uma sequência de aminoácidos VL da SEQ ID NO: 46. Em algumas modalidades, um anticorpo compreende uma sequência de aminoácidos VH da SEQ ID NO: 60 e uma sequência de aminoácidos VL da SEQ ID NO: 46. Em algumas modalidades, um anticorpo compreende uma sequência de aminoácidos VH da SEQ ID NO: 71 e uma sequência de aminoácidos VL da SEQ ID NO: 46. Em algumas modalidades, um anticorpo compreende uma sequência de aminoácidos VH da SEQ ID NO: 76 e uma sequência de aminoácidos VL da SEQ ID NO: 46. Em algumas modalidades, um anticorpo compreende uma sequência de aminoácidos VH da SEQ ID NO: 80 e uma sequência de aminoácidos VL da SEQ ID NO: 46. Em algumas modalidades, um anticorpo compreende uma sequência de aminoácidos VH da SEQ ID NO: 85 e uma sequência de aminoácidos VL da SEQ ID NO: 46. Em algumas modalidades, um anticorpo compreende uma sequência de aminoácidos VH da SEQ ID NO: 90 e uma sequência de aminoácidos VL da SEQ ID NO: 46. Em algumas modalidades, um anticorpo compreende uma sequência de aminoácidos VH da SEQ ID NO: 123 e uma sequência de aminoácidos VL da SEQ ID NO: 46. Em algumas modalidades, um anticorpo compreende uma sequência de aminoácidos VH da SEQ ID NO: 127 e uma sequência de aminoácidos VL da SEQ ID NO: 46.

[00237] Em outras modalidades, um anticorpo fornecido neste documento possui uma sequência de aminoácidos VH e VL de SIRPAB-8. Em algumas modalidades, um anticorpo compreende uma sequência de aminoácidos VH da SEQ ID NO: 60 e uma sequência de aminoácidos VL da SEQ ID NO: 67.

[00238] Em algumas modalidades, um anticorpo fornecido neste documento possui uma sequência de aminoácidos de VH e um VL de SIRPAB-9. Em algumas modalidades, um anticorpo compreende uma sequência de aminoácidos VH da SEQ ID NO: 71 e uma sequência de aminoácidos VL da SEQ ID NO: 67.

[00239] Em outras modalidades, um anticorpo fornecido neste documento possui uma sequência de aminoácidos VH e VL de SIRPAB-10. Em algumas modalidades, um anticorpo compreende uma sequência de aminoácidos VH da

SEQ ID NO: 76 e uma sequência de aminoácidos VL da SEQ ID NO: 67.

[00240] Em algumas modalidades, um anticorpo fornecido neste documento possui uma sequência de aminoácidos de VH e um VL de SIRPAB-11. Em algumas modalidades, um anticorpo compreende uma sequência de aminoácidos VH da SEQ ID NO: 80 e uma sequência de aminoácidos VL da SEQ ID NO: 67.

[00241] Em outras modalidades, um anticorpo fornecido neste documento possui uma sequência de aminoácidos VH e VL de SIRPAB-12. Em algumas modalidades, um anticorpo compreende uma sequência de aminoácidos VH da SEQ ID NO: 85 e uma sequência de aminoácidos VL da SEQ ID NO: 67.

[00242] Em algumas modalidades, um anticorpo fornecido neste documento possui uma sequência de aminoácidos de VH e um VL de SIRPAB-13. Em algumas modalidades, um anticorpo compreende uma sequência de aminoácidos VH da SEQ ID NO: 90 e uma sequência de aminoácidos VL da SEQ ID NO: 67.

[00243] Além disso, em algumas modalidades, um anticorpo compreende uma sequência de aminoácidos VH da SEQ ID NO: 9 e uma sequência de aminoácidos VL da SEQ ID NO: 67. Em algumas modalidades, um anticorpo compreende uma sequência de aminoácidos VH da SEQ ID NO: 22 e uma sequência de aminoácidos VL da SEQ ID NO: 67. Em algumas modalidades, um anticorpo compreende uma sequência de aminoácidos VH da SEQ ID NO: 27 e uma sequência de aminoácidos VL da SEQ ID NO: 67. Em algumas modalidades, um anticorpo compreende uma sequência de aminoácidos VH da SEQ ID NO: 32 e uma sequência de aminoácidos VL da SEQ ID NO: 67. Em algumas modalidades, um anticorpo compreende uma sequência de aminoácidos VH da SEQ ID NO: 36 e uma sequência de aminoácidos VL da SEQ ID NO: 67. Em algumas modalidades, um anticorpo compreende uma sequência de aminoácidos VH da SEQ ID NO: 42 e uma sequência de aminoácidos VL da SEQ ID NO: 67. Em algumas modalidades, um anticorpo compreende uma sequência de aminoácidos VH da SEQ ID NO: 50 e uma sequência de aminoácidos VL da SEQ ID NO: 67. Em algumas modalidades, um anticorpo compreende uma sequência de aminoácidos VH da SEQ ID NO: 123 e uma sequência de aminoácidos VL da SEQ ID NO: 67. Em algumas modalidades, um anticorpo compreende uma sequência de aminoácidos VH da SEQ ID NO: 127 e uma sequência de aminoácidos VL da SEQ ID NO: 67.

[00244] Em algumas modalidades, um anticorpo fornecido neste documento possui uma sequência de aminoácidos de VH e um VL de SIRPAB-17. Em algumas modalidades, um anticorpo compreende uma sequência de aminoácidos VH da SEQ ID NO: 123 e uma sequência de aminoácidos VL da SEQ ID NO: 18.

[00245] Em outras modalidades, um anticorpo fornecido neste documento possui uma sequência de aminoácidos VH e um VL de SIRPAB-18. Em algumas modalidades, um anticorpo compreende uma sequência de aminoácidos VH da SEQ ID NO: 127 e uma sequência de aminoácidos VL da SEQ ID NO: 18.

[00246] Em algumas modalidades, um anticorpo fornecido neste documento possui uma sequência de aminoácidos de VH e um VL de SIRPAB-19. Em algumas modalidades, um anticorpo compreende uma sequência de aminoácidos VH da SEQ ID NO: 127 e uma sequência de aminoácidos VL da SEQ ID NO: 133.

[00247] Além disso, em algumas modalidades, um anticorpo compreende uma sequência de aminoácidos VH da SEQ ID NO: 9 e uma sequência de aminoácidos VL da SEQ ID NO: 133. Em algumas modalidades, um anticorpo compreende uma sequência de aminoácidos VH da SEQ ID NO: 22 e uma sequência de aminoácidos VL da SEQ ID NO: 133. Em algumas modalidades, um anticorpo compreende uma sequência de aminoácidos VH da SEQ ID NO: 27 e uma sequência de aminoácidos VL da SEQ ID NO: 133. Em algumas modalidades, um anticorpo compreende uma sequência de aminoácidos VH da SEQ ID NO: 32 e uma sequência de aminoácidos VL da SEQ ID NO: 133. Em algumas modalidades, um anticorpo compreende uma sequência de aminoácidos VH da SEQ ID NO: 36 e uma sequência de aminoácidos VL da SEQ ID NO: 133. Em algumas modalidades, um anticorpo compreende uma sequência de aminoácidos VH da SEQ ID NO: 42 e uma sequência de aminoácidos VL da SEQ ID NO: 133. Em algumas modalidades, um anticorpo compreende uma sequência de aminoácidos VH da SEQ ID NO: 50 e uma sequência de aminoácidos VL da SEQ ID NO: 133. Em algumas modalidades, um anticorpo compreende uma sequência de aminoácidos VH da SEQ ID NO: 60 e uma sequência de aminoácidos VL da SEQ ID NO: 133. Em algumas modalidades, um anticorpo compreende uma sequência de aminoácidos VH da SEQ ID NO: 71 e uma sequência de aminoácidos VL da SEQ ID NO: 133. Em algumas modalidades, um anticorpo compreende uma sequência de aminoácidos VH da SEQ ID NO: 76 e uma sequência de aminoácidos VL da SEQ ID NO: 133. Em algumas modalidades, um anticorpo compreende uma sequência de aminoácidos VH da SEQ ID NO: 80 e uma sequência de aminoácidos VL da SEQ ID NO: 133. Em algumas modalidades, um anticorpo compreende uma sequência de aminoácidos VH da SEQ ID NO: 85 e uma sequência de aminoácidos VL da SEQ ID NO: 133. Em algumas modalidades, um anticorpo compreende uma sequência de aminoácidos VH da SEQ ID NO: 90 e uma sequência de aminoácidos VL da SEQ ID NO: 133. Em algumas modalidades, um anticorpo compreende uma sequência de aminoácidos VH da SEQ ID NO: 123 e uma sequência de aminoácidos VL da SEQ ID NO: 133.

[00248] Em outras modalidades, um anticorpo fornecido neste documento possui uma sequência de aminoácidos VH e um VL de SIRPAB-20. Em algumas modalidades, um anticorpo compreende uma sequência de aminoácidos VH da

SEQ ID NO: 127 e uma sequência de aminoácidos VL da SEQ ID NO: 138.

[00249] Além disso, em algumas modalidades, um anticorpo compreende uma sequência de aminoácidos VH da SEQ ID NO: 9 e uma sequência de aminoácidos VL da SEQ ID NO: 138. Em algumas modalidades, um anticorpo compreende uma sequência de aminoácidos VH da SEQ ID NO: 22 e uma sequência de aminoácidos VL da SEQ ID NO: 138. Em algumas modalidades, um anticorpo compreende uma sequência de aminoácidos VH da SEQ ID NO: 27 e uma sequência de aminoácidos VL da SEQ ID NO: 138. Em algumas modalidades, um anticorpo compreende uma sequência de aminoácidos VH da SEQ ID NO: 32 e uma sequência de aminoácidos VL da SEQ ID NO: 138. Em algumas modalidades, um anticorpo compreende uma sequência de aminoácidos VH da SEQ ID NO: 36 e uma sequência de aminoácidos VL da SEQ ID NO: 138. Em algumas modalidades, um anticorpo compreende uma sequência de aminoácidos VH da SEQ ID NO: 42 e uma sequência de aminoácidos VL da SEQ ID NO: 138. Em algumas modalidades, um anticorpo compreende uma sequência de aminoácidos VH da SEQ ID NO: 50 e uma sequência de aminoácidos VL da SEQ ID NO: 138. Em algumas modalidades, um anticorpo compreende uma sequência de aminoácidos VH da SEQ ID NO: 60 e uma sequência de aminoácidos VL da SEQ ID NO: 138. Em algumas modalidades, um anticorpo compreende uma sequência de aminoácidos VH da SEQ ID NO: 71 e uma sequência de aminoácidos VL da SEQ ID NO: 138. Em algumas modalidades, um anticorpo compreende uma sequência de aminoácidos VH da SEQ ID NO: 76 e uma sequência de aminoácidos VL da SEQ ID NO: 138. Em algumas modalidades, um anticorpo compreende uma sequência de aminoácidos VH da SEQ ID NO: 80 e uma sequência de aminoácidos VL da SEQ ID NO: 138. Em algumas modalidades, um anticorpo compreende uma sequência de aminoácidos VH da SEQ ID NO: 85 e uma sequência de aminoácidos VL da SEQ ID NO: 138. Em algumas modalidades, um anticorpo compreende uma sequência de aminoácidos VH da SEQ ID NO: 90 e uma sequência de aminoácidos VL da SEQ ID NO: 138. Em algumas modalidades, um anticorpo compreende uma sequência de aminoácidos VH da SEQ ID NO: 123 e uma sequência de aminoácidos VL da SEQ ID NO: 138.

[00250] Em algumas modalidades, um anticorpo fornecido neste documento possui uma sequência de aminoácidos de VH e um VL de SIRPAB-21. Em algumas modalidades, um anticorpo compreende uma sequência de aminoácidos VH da SEQ ID NO: 127 e uma sequência de aminoácidos VL da SEQ ID NO: 141.

[00251] Além disso, em algumas modalidades, um anticorpo compreende uma sequência de aminoácidos VH da SEQ ID NO: 9 e uma sequência de aminoácidos VL da SEQ ID NO: 141. Em algumas modalidades, um anticorpo compreende uma sequência de aminoácidos VH da SEQ ID NO: 22 e uma sequência de aminoácidos VL da SEQ ID NO: 141. Em algumas modalidades, um anticorpo compreende uma sequência de aminoácidos VH da SEQ ID NO: 27 e uma sequência de aminoácidos VL da SEQ ID NO: 141. Em algumas modalidades, um anticorpo compreende uma sequência de aminoácidos VH da SEQ ID NO: 32 e uma sequência de aminoácidos VL da SEQ ID NO: 141. Em algumas modalidades, um anticorpo compreende uma sequência de aminoácidos VH da SEQ ID NO: 36 e uma sequência de aminoácidos VL da SEQ ID NO: 141. Em algumas modalidades, um anticorpo compreende uma sequência de aminoácidos VH da SEQ ID NO: 42 e uma sequência de aminoácidos VL da SEQ ID NO: 141. Em algumas modalidades, um anticorpo compreende uma sequência de aminoácidos VH da SEQ ID NO: 50 e uma sequência de aminoácidos VL da SEQ ID NO: 141. Em algumas modalidades, um anticorpo compreende uma sequência de aminoácidos VH da SEQ ID NO: 60 e uma sequência de aminoácidos VL da SEQ ID NO: 141. Em algumas modalidades, um anticorpo compreende uma sequência de aminoácidos VH da SEQ ID NO: 71 e uma sequência de aminoácidos VL da SEQ ID NO: 141. Em algumas modalidades, um anticorpo compreende uma sequência de aminoácidos VH da SEQ ID NO: 76 e uma sequência de aminoácidos VL da SEQ ID NO: 141. Em algumas modalidades, um anticorpo compreende uma sequência de aminoácidos VH da SEQ ID NO: 80 e uma sequência de aminoácidos VL da SEQ ID NO: 141. Em algumas modalidades, um anticorpo compreende uma sequência de aminoácidos VH da SEQ ID NO: 85 e uma sequência de aminoácidos VL da SEQ ID NO: 141. Em algumas modalidades, um anticorpo compreende uma sequência de aminoácidos VH da SEQ ID NO: 90 e uma sequência de aminoácidos VL da SEQ ID NO: 141. Em algumas modalidades, um anticorpo compreende uma sequência de aminoácidos VH da SEQ ID NO: 123 e uma sequência de aminoácidos VL da SEQ ID NO: 141.

[00252] Em certas modalidades, um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, descrito neste documento, o qual se liga especificamente a um polipeptídeo SIRPα (por exemplo, um ECD de SIRPα, por exemplo SIRPα humana), compreende uma cadeia leve e uma cadeia pesada, em que a cadeia leve compreende uma região constante possuindo uma sequência de aminoácidos de:

RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESV TEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO:211).

[00253] Em outras modalidades, um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, descrito neste documento, o qual se liga especificamente a um polipeptídeo SIRPα (por exemplo, um ECD de SIRPα, por exemplo SIRPα humano), compreende uma cadeia leve e uma cadeia pesada, em que a cadeia pesada compreende uma região Fc de IgG1 humana que possui uma sequência de aminoácidos de:

[00254] Em algumas modalidades, um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, descrito neste documento, o qual se liga especificamente a um polipeptídeo SIRPα (por exemplo, um ECD de SIRPα, por exemplo SIRPα humana), compreende uma cadeia leve e uma cadeia pesada, em que a cadeia pesada não compreende uma região Fc de IgG1 humana que possui uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 155.

[00255] Em certas modalidades, um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, descrito neste documento, o qual se liga especificamente a um polipeptídeo SIRPα (por exemplo, um ECD de SIRPα, por exemplo SIRPα humano), compreende uma cadeia leve e uma cadeia pesada, em que a cadeia pesada compreende uma região de IgG1-Fc K322A humana tendo uma sequência de aminoácidos de:

NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQ GNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO:157, enfatizada substituição de K322A).

[00256] Em algumas modalidades, um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, descrito neste documento, o qual se liga especificamente a um polipeptídeo SIRPα (e.g., um ECD de SIRPα, por exemplo SIRPα humano), compreende uma cadeia leve e uma cadeia pesada, em que a cadeia pesada compreende uma região Fc de IgG4 humana que possui uma sequência de aminoácidos de:

VSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNV FSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK (SEQ ID NO:156, S228 e L235 enfatizado).

[00257] Em outra modalidade, um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, descrito neste documento, o qual se liga especificamente a um polipeptídeo SIRPα (por exemplo, um ECD de SIRPα, por exemplo SIRPα humano), compreende uma cadeia leve e uma cadeia pesada, em que a cadeia pesada compreende uma região IgG4P Fc humano possuindo uma sequência de aminoácidos de:

ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSG LYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLF PPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRV VSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQ

VSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNV FSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK (SEQ ID NO:158, S228P substituição enfatizada).

[00258] Em ainda outra modalidade, um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno descrito neste documento, o qual se liga especificamente a um polipeptídeo SIRPα(por exemplo, um ECD de SIRPα, por exemplo SIRPα humano), compreende uma cadeia leve e uma cadeia pesada, em que a cadeia pesada compreende uma região de IgG4PE Fc humana possuindo uma sequência de aminoácidos de:

ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSG LYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFEGGPSVFLF PPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRV VSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQ

VSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNV FSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK (SEQ ID NO:159, S228P e L235E substituições enfatizadas).

[00259] Em algumas modalidades, um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, descrito neste documento, o qual se liga especificamente a um polipeptídeo SIRPα (por exemplo, um ECD de SIRPα, por exemplo SIRPα humana), compreende uma cadeia leve e uma cadeia pesada, em que a cadeia pesada não compreende uma região IgG4PE Fc humana que possui uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 159.

[00260] Em ainda outra modalidade, um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno descrito neste documento, o qual se liga especificamente a um polipeptídeo SIRPα (por exemplo, um ECD de SIRPα, por exemplo SIRPα humano), compreende uma cadeia leve e uma cadeia pesada, em que a cadeia leve compreende uma região constante com uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 211; e a cadeia pesada compreende uma região Fc com uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NOS: 144 e 155-159.

[00261] Em certas modalidades, um anticorpo descrito neste documento, o qual se liga especificamente a um polipeptídeo SIRPα (por exemplo, um ECD de SIRPα, por exemplo SIRPα humano), compreende uma cadeia leve e uma cadeia pesada, em que a cadeia leve compreende uma sequência de aminoácidos como segue:

DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYAASNLQS GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGASFPITFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFP

PSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTL TLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO:143, LC_SIRPAB-11).

[00262] Em algumas modalidades, um anticorpo descrito neste documento, o qual se liga especificamente a um polipeptídeo SIRPα (por exemplo, um ECD de SIRPα, por exemplo SIRPα humano), compreende uma cadeia leve e uma cadeia pesada, em que a cadeia pesada compreende uma sequência de aminoácidos como segue:

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFRGYGISWVRQAPGQGLEWMGWISA YGGETNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCAREAGSSWYDFDLWG RGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHT FPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPA PELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKP REEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLP

PSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTV DKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO:142, HC_SIRPAB- 11, K322 enfatizado).

[00263] Em outras modalidades, um anticorpo descrito neste documento, o qual se liga especificamente a um polipeptídeo SIRPα (por exemplo, um ECD de SIRPα, por exemplo SIRPα humano), compreende uma cadeia leve e uma cadeia pesada, em que a cadeia pesada compreende uma sequência de aminoácidos como segue:

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFRGYGISWVRQAPGQGLEWMGWISA YGGETNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCAREAGSSWYDFDLWG RGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHT FPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPA PELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKP REEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCAVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTL

PPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTV DKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO:119, HC_SIRPAB- 11-IgG1-K322A, K322A substituição enfatizado).

[00264] Em algumas modalidades, um anticorpo descrito neste documento, o qual se liga especificamente a um polipeptídeo SIRPα (por exemplo, um ECD de SIRPα, por exemplo SIRPα humano), compreende uma cadeia leve e uma cadeia pesada, em que a cadeia pesada compreende uma sequência de aminoácidos como segue:

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFRGYGISWVRQAPGQGLEWMGWISA YGGETNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCAREAGSSWYDFDLWG RGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHT FPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEF LGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPRE EQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPS

QEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDK SRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK (SEQ ID NO:112, HC_ SIRPAB-11- IgG4P, IgG4P Fc estrutura principal em itálico e sublinhado).

[00265] Em algumas modalidades, um anticorpo descrito neste documento, o qual se liga especificamente a um polipeptídeo SIRPα (por exemplo, um ECD de SIRPα, por exemplo SIRPα humano), compreende uma cadeia leve e uma cadeia pesada, em que a cadeia pesada compreende uma sequência de aminoácidos como segue:

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFRGYGISWVRQAPGQGLEWMGWISA YGGETNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCAREAGSSWYDFDLWG RGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHT FPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEF EGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPRE EQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPS

QEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDK SRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK (SEQ ID NO:120, HC_ SIRPAB-11- IgG4PE, IgG4PE Fc estrutura principal em itálico e sublinhado).

[00266] Em algumas modalidades, um anticorpo descrito neste documento, o qual se liga especificamente a um polipeptídeo SIRPα (por exemplo, um ECD de SIRPα, por exemplo SIRPα humano), compreende uma cadeia leve e uma cadeia pesada, em que a cadeia pesada compreende uma sequência de aminoácidos como segue:

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFRGYGISWVRQAPGQGLEWMGWISA YGGETNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCAREAGSSWYDFDLWG RGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHT FPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPA PEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTK PREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTL

PPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTV DKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO:98, HC_ SIRPAB-11- IgG1-AAS, IgG1-AAS Fc estrutura principal em itálico e sublinhado).

[00267] Em ainda outra modalidade particular, um anticorpo descrito neste documento, o qual se liga especificamente a um polipeptídeo SIRPα (por exemplo, um ECD de SIRPα, por exemplo SIRPα humano), compreende uma cadeia leve e uma cadeia pesada, em que (i) a cadeia leve compreende uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 143; e (ii) a cadeia pesada compreende uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 142.

[00268] Em ainda outra modalidade particular, um anticorpo descrito neste documento, o qual se liga especificamente a um polipeptídeo SIRPα (por exemplo, um ECD de SIRPα, por exemplo SIRPα humano), compreende uma cadeia leve e uma cadeia pesada, em que (i) a cadeia leve compreende uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 143; e (ii) a cadeia pesada compreende uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 119.

[00269] Em algumas modalidades, um anticorpo descrito neste documento, que se liga especificamente a um polipeptídeo SIRPα (por exemplo, um ECD de SIRPα, por exemplo SIRPα humano), compreende uma cadeia leve e uma cadeia pesada, em que (i) a cadeia leve compreende um aminoácido sequência de SEQ ID NO: 143; e (ii) a cadeia pesada compreende uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 98.

[00270] Em algumas modalidades, um anticorpo descrito neste documento, o qual se liga especificamente a um polipeptídeo SIRPα (por exemplo, um ECD de SIRPα, por exemplo SIRPα humano), compreende uma cadeia leve e uma cadeia pesada, em que (i) a cadeia leve compreende um aminoácido sequência de SEQ ID NO: 143; e (ii) a cadeia pesada compreende uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 120.

[00271] Em algumas modalidades, um anticorpo descrito neste documento, que se liga especificamente a um polipeptídeo SIRPα (por exemplo, um ECD de SIRPα, por exemplo SIRPα humano), compreende uma cadeia leve e uma cadeia pesada, em que (i) a cadeia leve compreende um aminoácido sequência de SEQ ID NO: 143; e (ii) a cadeia pesada compreende uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 112.

[00272] Em algumas modalidades, um anticorpo descrito neste documento, o qual se liga especificamente a um polipeptídeo SIRPα (por exemplo, um ECD de SIRPα, por exemplo SIRPα humano), compreende uma cadeia leve e uma cadeia pesada, em que (i) a cadeia leve compreende um aminoácido sequência de SEQ ID NO: 143; e (ii) a cadeia pesada compreende uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 204.

[00273] Em algumas modalidades, um anticorpo descrito neste documento, o qual se liga especificamente a um polipeptídeo SIRPα (por exemplo, um ECD de SIRPα, por exemplo SIRPα humano), compreende uma cadeia leve e uma cadeia pesada, em que (i) a cadeia leve compreende um aminoácido sequência de SEQ ID NO: 143; e (ii) a cadeia pesada compreende uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 205.

[00274] Em ainda outra modalidade particular, um anticorpo descrito neste documento, o qual se liga especificamente a um polipeptídeo SIRPα (por exemplo, um ECD de SIRPα, por exemplo SIRPα humano), compreende uma cadeia leve e uma cadeia pesada, em que (i) a cadeia leve compreende uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 200; e (ii) a cadeia pesada compreende uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 212.

[00275] Em algumas modalidades, um anticorpo descrito neste documento, o qual se liga especificamente a um polipeptídeo SIRPα (por exemplo, um ECD de SIRPα, por exemplo SIRPα humano), compreende uma cadeia leve e uma cadeia pesada, em que (i) a cadeia leve compreende um aminoácido sequência de SEQ ID NO: 200; e (ii) a cadeia pesada compreende uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 213.

[00276] Em algumas modalidades, um anticorpo descrito neste documento, o qual se liga especificamente a um polipeptídeo SIRPα (por exemplo, um ECD de SIRPα, por exemplo SIRPα humano), compreende uma cadeia leve e uma cadeia pesada, em que (i) a cadeia leve compreende um aminoácido sequência de SEQ ID NO: 200; e (ii) a cadeia pesada compreende uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 214.

[00277] Em algumas modalidades, um anticorpo descrito neste documento, o qual se liga especificamente a um polipeptídeo SIRPα (por exemplo, um ECD de SIRPα, por exemplo SIRPα humano), compreende uma cadeia leve e uma cadeia pesada, em que (i) a cadeia leve compreende um aminoácido sequência de SEQ ID NO: 200; e (ii) a cadeia pesada compreende uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 215.

[00278] Em algumas modalidades, um anticorpo descrito neste documento, o qual se liga especificamente a um polipeptídeo SIRPα (por exemplo, um ECD de SIRPα, por exemplo SIRPα humano), compreende uma cadeia leve e uma cadeia pesada, em que (i) a cadeia leve compreende um aminoácido sequência de SEQ ID NO: 200; e (ii) a cadeia pesada compreende uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 216.

[00279] Em algumas modalidades, um anticorpo descrito neste documento, o qual se liga especificamente a um polipeptídeo SIRPα (por exemplo, um ECD de SIRPα, por exemplo SIRPα humano), compreende uma cadeia leve e uma cadeia pesada, em que (i) a cadeia leve compreende um aminoácido sequência de SEQ ID NO: 202; e (ii) a cadeia pesada compreende uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 217.

[00280] Em algumas modalidades, um anticorpo descrito neste documento, o qual se liga especificamente a um polipeptídeo SIRPα (por exemplo, um ECD de SIRPα, por exemplo SIRPα humano), compreende uma cadeia leve e uma cadeia pesada, em que (i) a cadeia leve compreende um aminoácido sequência de SEQ ID NO: 202; e (ii) a cadeia pesada compreende uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 218.

[00281] Em algumas modalidades, um anticorpo descrito neste documento, o qual se liga especificamente a um polipeptídeo SIRPα (por exemplo, um ECD de SIRPα, por exemplo SIRPα humano), compreende uma cadeia leve e uma cadeia pesada, em que (i) a cadeia leve compreende um aminoácido sequência de SEQ ID NO: 143; e (ii) a cadeia pesada compreende uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 219.

[00282] Em algumas modalidades, um anticorpo descrito neste documento, que se liga especificamente a um polipeptídeo SIRPα (por exemplo, um ECD de SIRPα, por exemplo SIRPα humana), compreende uma cadeia leve e uma cadeia pesada, em que (i) a cadeia leve compreende um aminoácido sequência de SEQ ID NO: 143; e (ii) a cadeia pesada compreende uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 220.

[00283] Em algumas modalidades, um anticorpo descrito neste documento, que se liga especificamente a um polipeptídeo SIRPα (por exemplo, um ECD de SIRPα, por exemplo SIRPα humana), compreende uma cadeia leve e uma cadeia pesada, em que (i) a cadeia leve compreende um aminoácido sequência de SEQ ID NO: 143; e (ii) a cadeia pesada compreende uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 221.

[00284] Em algumas modalidades, um anticorpo descrito neste documento, que se liga especificamente a um polipeptídeo SIRPα (por exemplo, um ECD de SIRPα, por exemplo SIRPα humana), compreende uma cadeia leve e uma cadeia pesada, em que (i) a cadeia leve compreende um aminoácido sequência de SEQ ID NO: 143; e (ii) a cadeia pesada compreende uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 222.

[00285] Em algumas modalidades, um anticorpo descrito neste documento, que se liga especificamente a um polipeptídeo SIRPα (por exemplo, um ECD de SIRPα, por exemplo SIRPα humana), compreende uma cadeia leve e uma cadeia pesada, em que (i) a cadeia leve compreende um aminoácido sequência de SEQ ID NO: 200; e (ii) a cadeia pesada compreende uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 223.

[00286] Em algumas modalidades, um anticorpo descrito neste documento, que se liga especificamente a um polipeptídeo SIRPα (por exemplo, um ECD de SIRPα, por exemplo SIRPα humana), compreende uma cadeia leve e uma cadeia pesada, em que (i) a cadeia leve compreende um aminoácido sequência de SEQ ID NO: 200; e (ii) a cadeia pesada compreende uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 207.

[00287] Em algumas modalidades, um anticorpo descrito neste documento, que se liga especificamente a um polipeptídeo SIRPα (por exemplo, um ECD de SIRPα, por exemplo SIRPα humana), compreende uma cadeia leve e uma cadeia pesada, em que (i) a cadeia leve compreende um aminoácido sequência de SEQ ID NO: 208; e (ii) a cadeia pesada compreende uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 117.

[00288] Em algumas modalidades, um anticorpo descrito neste documento, que se liga especificamente a um polipeptídeo SIRPα (por exemplo, um ECD de SIRPα, por exemplo SIRPα humana), compreende uma cadeia leve e uma cadeia pesada, em que (i) a cadeia leve compreende um aminoácido sequência de SEQ ID NO: 209; e (ii) a cadeia pesada compreende uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 110.

[00289] Em algumas modalidades, um anticorpo descrito neste documento, que se liga especificamente a um polipeptídeo SIRPα (por exemplo, um ECD de SIRPα, por exemplo SIRPα humana), compreende uma cadeia leve e uma cadeia pesada, em que (i) a cadeia leve compreende um aminoácido sequência de SEQ ID NO: 210; e (ii) a cadeia pesada compreende uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 148.

[00290] Em algumas modalidades, um anticorpo descrito neste documento, que se liga especificamente a um polipeptídeo SIRPα (por exemplo, um ECD de SIRPα, por exemplo SIRPα humana), compreende uma cadeia leve e uma cadeia pesada, em que (i) a cadeia leve compreende um aminoácido sequência de SEQ ID NO: 143; e (ii) a cadeia pesada compreende uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 106.

[00291] Em algumas modalidades, um anticorpo descrito neste documento, que se liga especificamente a um polipeptídeo SIRPα (por exemplo, um ECD de SIRPα, por exemplo SIRPα humana), compreende uma cadeia leve e uma cadeia pesada, em que (i) a cadeia leve compreende um aminoácido sequência de SEQ ID NO: 143; e (ii) a cadeia pesada compreende uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 118.

[00292] Em algumas modalidades, um anticorpo descrito neste documento, que se liga especificamente a um polipeptídeo SIRPα (por exemplo, um ECD de SIRPα, por exemplo SIRPα humana), compreende uma cadeia leve e uma cadeia pesada, em que (i) a cadeia leve compreende um aminoácido sequência de SEQ ID NO: 143; e (ii) a cadeia pesada compreende uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 111.

[00293] As sequências de cadeia leve e de cadeia pesada exemplares estão resumidas na seguinte Tabela 13: Tabela 13: sequências de cadeia leve e cadeia pesada Tipo de Sequências de aminoácidos Cadeia Cadeia leve DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQDISNYLNWYQQKPGKAPKLLI (SIRPAB-1, YDASNLATGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQFAYLPW SIRPAB-2, TFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAK SIRPAB-3, VQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVY SIRPAB-4, ACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO:200) SIRPAB-5, SIRPAB-17,

Tipo de Sequências de aminoácidos Cadeia SIRPAB-18) Cadeia leve DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQDISNYLNWYQQKPGKAPKLLI (SIRPAB-6, YDASNLETGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQFAYLPYTF SIRPAB-7) GGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKV

QWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYA CEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO:202) Cadeia leve DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGISSWLAWYQQKPGKAPKLL (SIRPAB-8, IYAASNLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGASFPI SIRPAB-9, TFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAK SIRPAB-10, VQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVY SIRPAB-11, ACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO:143) SIRPAB-12, SIRPAB-13) Cadeia leve DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASDDISDYLNWYQQKPGKAPKLLI (SIRPAB-19) YDASNIEDGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQFAYLPWT

FGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKV

QWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYA CEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO:208) Cadeia leve DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQDISDYLNWYQQKPGKAPKLLI (SIRPAB-20) YDADNLETGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQFAYLPW

TFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAK

VQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVY ACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 209) Cadeia leve DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASDDISDYLNWYQQKPGKAPKLLI (SIRPAB-21) YDASNLETGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQFAYLPWT

Tipo de Sequências de aminoácidos Cadeia

FGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKV

QWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYA CEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO:210) Cadeia QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFRGYGISWVRQAPGQGLE pesada WMGWISAYGGETNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDT (SIRPAB-11) AVYYCAREAGSSWYDFDLWGRGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTS

GGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSS VVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAP ELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYV DGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSN KALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYP

SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQG NVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO:142) Cadeia QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFRGYGISWVRQAPGQGLE pesada WMGWISAYGGETNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDT (SIRPAB-11- AVYYCAREAGSSWYDFDLWGRGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTS K322A) GGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSS

VVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAP ELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYV DGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCAVSN KALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYP

SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQG NVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO:119) Cadeia QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYGIVWVRQAPGQGLE pesada WMGWISAYAGETNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDT

Tipo de Sequências de aminoácidos Cadeia (SIRPAB-12) AVYYCAREAGSSWYDFDLWGRGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTS

SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQG NVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO:204) Cadeia QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYGIVWVRQAPGQGLE pesada WMGWISAYAGETNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDT (SIRPAB-12- AVYYCAREAGSSWYDFDLWGRGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTS K322A) GGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSS

SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQG NVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO:205) Cadeia QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFRGYGISWVRQAPGQGLE pesada WMGWISAYGGETNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDT (SIRPAB-11- AVYYCAREAGSSWYDFDLWGRGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTS AAS) GGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSS

VVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAP EAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYV DGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSN

Tipo de Sequências de aminoácidos Cadeia

KALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYP

SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQG NVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO:98) Cadeia QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFRGYGISWVRQAPGQGLE pesada WMGWISAYGGETNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDT (SIRPAB-11- AVYYCAREAGSSWYDFDLWGRGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRST 4PE) SESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLS

SVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEF EGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVD GVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNK GLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPS

DIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGN VFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK (SEQ ID NO:120) Cadeia QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFRGYGISWVRQAPGQGLE pesada WMGWISAYGGETNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDT (SIRPAB-11- AVYYCAREAGSSWYDFDLWGRGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRST 4P) SESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLS

SVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEF LGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDG VEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKG LPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSD

IAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVF SCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK (SEQ ID NO:112) Cadeia QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISSGGYYWSWIRQHPGKGL pesada EWIGSIYYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYC

Tipo de Sequências de aminoácidos Cadeia (SIRPAB-1) AREGYHSGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAA

LGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVP SSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGG PSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEV HNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPA PIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAV

EWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSC SVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO:212) Cadeia QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISSGGDYWAWIRQHPGKG pesada LEWIGYIYPSGFTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYY (SIRPAB-2) CAREGYHSGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTA

ALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTV PSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLG GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVE VHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALP APIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIA

VEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFS CSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO:213) Cadeia QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISSGGWYWQWIRQHPGKG pesada LEWIGTIYYSGSTFYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYY (SIRPAB-3) CAREGYHSGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTA

ALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTV PSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLG GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVE VHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALP

Tipo de Sequências de aminoácidos Cadeia

APIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIA

VEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFS CSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO:214) Cadeia QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISSGSPYWSWIRQHPGKGL pesada EWIGYIYASGFTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYC (SIRPAB-4) AREGYHSGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAA

EWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSC SVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO:215) Cadeia QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISSGPAYWSWIRQHPGKGL pesada EWIGTIYYSGSTFYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYC (SIRPAB-5) AREGYHSGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAA

EWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSC SVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO:216) Cadeia QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISSGGYYWSWIRQHPGKGL pesada EWIGYIYYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYC

Tipo de Sequências de aminoácidos Cadeia (SIRPAB-6) AREGLDGSYGSSAWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTA

VEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFS CSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO:217) Cadeia QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISSGEYYWEWIRQHPGKGL pesada EWIGYIYSSGFTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYC (SIRPAB-7) AREGLDGSYGSSAWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTA

VEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFS CSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO:218) Cadeia QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYGISWVRQAPGQGLE pesada WMGWISPYNGNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDT (SIRPAB-8) AVYYCAREAGSSWYDFDLWGRGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTS

GGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSS VVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAP ELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYV DGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSN

Tipo de Sequências de aminoácidos Cadeia

KALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYP

SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQG NVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO:219) Cadeia QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFGGYGISWVRQAPGQGLE pesada WMGWISAYGGETNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDT (SIRPAB-9) AVYYCAREAGSSWYDFDLWGRGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTS

SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQG NVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO:220) Cadeia QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYPISWVRQAPGQGLE pesada WMGWIYAYGGNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDT (SIRPAB-10) AVYYCAREAGSSWYDFDLWGRGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTS

SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQG NVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO:221) Cadeia QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFHGYGISWVRQAPGQGLE pesada WMGWISAYSGETNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDT

Tipo de Sequências de aminoácidos Cadeia (SIRPAB-13) AVYYCAREAGSSWYDFDLWGRGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTS

SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQG NVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO:222) Cadeia QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISSGGYYWSWIRQHPGKGL pesada EWIGAIYYSGPIYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYC (SIRPAB-17) AREGYHSGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAA

EWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSC SVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO:223) Cadeia QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISSGGYYWSWIRQHPGKGL pesada EWIGAIYYSGPIYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYC (SIRPAB-18) SKEGYHSGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAAL

GCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPS SSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGP SVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVH NAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPI

Tipo de Sequências de aminoácidos Cadeia

EKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVE

WESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCS VMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO:207) Cadeia QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISSGGYYWSWIRQHPGKGL pesada EWIGAIYYSGPIYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYC (SIRPAB-19) SKEGYHSGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAAL

GCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPS SSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGP SVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVH NAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPI EKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVE

WESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCS VMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO:117) Cadeia QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISSGGYYWSWIRQHPGKGL pesada EWIGAIYYSGPIYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYC (SIRPAB-20) SKEGYHSGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAAL

WESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCS VMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO:110) Cadeia QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISSGGYYWSWIRQHPGKGL pesada EWIGAIYYSGPIYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYC

Tipo de Sequências de aminoácidos Cadeia (SIRPAB-21) SKEGYHSGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAAL

WESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCS VMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO:148) Cadeia QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYGIVWVRQAPGQGLE pesada WMGWISAYAGETNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDT (SIRPAB-12- AVYYCAREAGSSWYDFDLWGRGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTS AAS) GGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSS

VVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAP EAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYV DGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSN KALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYP

SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQG NVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO:106) Cadeia QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYGIVWVRQAPGQGLE pesada WMGWISAYAGETNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDT (SIRPAB-12- AVYYCAREAGSSWYDFDLWGRGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRST 4PE) SESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLS

SVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEF EGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVD GVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNK

Tipo de Sequências de aminoácidos Cadeia

GLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPS

DIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGN VFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK (SEQ ID NO:118) Cadeia QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYGIVWVRQAPGQGLE pesada WMGWISAYAGETNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDT (SIRPAB-12- AVYYCAREAGSSWYDFDLWGRGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRST 4P) SESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLS

IAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVF SCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK (SEQ ID NO:111)

[00294] Em algumas modalidades, o anticorpo fornecido neste documento compreende qualquer uma das cadeias leves fornecidas neste documento e qualquer uma das cadeias pesadas fornecidas neste documento, em qualquer combinação ou permutação. Em certas modalidades, o anticorpo fornecido neste documento inclui pares de cadeia leve e cadeia pesada, conforme listado na Tabela 14 a seguir: Tabela 14: pares de cadeia leve e cadeia pesada exemplares para os anticorpos anti-SIRPα Anticorpo Cadeia Leve Cadeia Pesada SIRPAB-1 SEQ ID NO:200 SEQ ID NO:212 SIRPAB-2 SEQ ID NO:200 SEQ ID NO:213 SIRPAB-3 SEQ ID NO:200 SEQ ID NO:214

Anticorpo Cadeia Leve Cadeia Pesada SIRPAB-4 SEQ ID NO:200 SEQ ID NO:215 SIRPAB-5 SEQ ID NO:200 SEQ ID NO:216 SIRPAB-6 SEQ ID NO:202 SEQ ID NO:217 SIRPAB-7 SEQ ID NO:202 SEQ ID NO:218 SIRPAB-8 SEQ ID NO:143 SEQ ID NO:219 SIRPAB-9 SEQ ID NO:143 SEQ ID NO:220 SIRPAB-10 SEQ ID NO:143 SEQ ID NO:221 SIRPAB-11 SEQ ID NO:143 SEQ ID NO:142 SIRPAB-12 SEQ ID NO:143 SEQ ID NO:204 SIRPAB-13 SEQ ID NO:143 SEQ ID NO:222 SIRPAB-17 SEQ ID NO:200 SEQ ID NO:223 SIRPAB-18 SEQ ID NO:200 SEQ ID NO:207 SIRPAB-19 SEQ ID NO:208 SEQ ID NO:117 SIRPAB-20 SEQ ID NO:209 SEQ ID NO:110 SIRPAB-21 SEQ ID NO:210 SEQ ID NO:148 SIRPAB-11-K322A SEQ ID NO:143 SEQ ID NO:119 SIRPAB-11-AAS SEQ ID NO:143 SEQ ID NO:98 SIRPAB-11-4PE SEQ ID NO:143 SEQ ID NO:120 SIRPAB-11-4P SEQ ID NO:143 SEQ ID NO:112 SIRPAB-12-K322A SEQ ID NO:143 SEQ ID NO:205 SIRPAB-12-AAS SEQ ID NO:143 SEQ ID NO:106 SIRPAB-12-4PE SEQ ID NO:143 SEQ ID NO:118 SIRPAB-12-4P SEQ ID NO:143 SEQ ID NO:111

[00295] Em ainda outra modalidade particular, um anticorpo descrito neste documento, que se liga especificamente a um polipeptídeo SIRPα (por exemplo, um ECD de SIRPα, por exemplo SIRPα humana), compreende uma cadeia leve e uma cadeia pesada, em que (i) a cadeia leve compreende uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 200; e (ii) a cadeia pesada compreende uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 213.

[00296] Ainda num outro aspecto, são fornecidos anticorpos que competem com um dos anticorpos exemplificados ou fragmentos funcionais para ligação à SIRPα. Tais anticorpos podem também ligar-se ao mesmo epítopo que um dos anticorpos exemplificados neste documento, ou um epítopo sobreposto. Espera-se que os anticorpos e fragmentos que competem ou se ligam ao mesmo epítopo que os anticorpos exemplificados exibam propriedades funcionais semelhantes. As proteínas e fragmentos de ligação ao antígeno exemplificados incluem aqueles com as regiões VH e VL, e as CDRs fornecidas neste documento, incluindo aquelas nas Tabelas 1-4 e 9-10. Assim, como um exemplo específico, os anticorpos fornecidos incluem aqueles que competem com um anticorpo compreendendo: (a) 1, 2, 3, 4, 5 ou todos os 6 CDRs listados para um anticorpo listado nas Tabelas 1-2; (b) um VH e um VL selecionados das regiões VH e VL listadas para um anticorpo listado nas Tabelas 9-10; ou (c) duas cadeias leves e duas cadeias pesadas compreendendo um VH e um VL conforme especificado para um anticorpo listado nas Tabelas 9-10. Em algumas modalidades, o anticorpo é SIRPAB-1. Em algumas modalidades, o anticorpo é SIRPAB-2. Em algumas modalidades, o anticorpo é SIRPAB-3. Em algumas modalidades, o anticorpo é SIRPAB-4. Em algumas modalidades, o anticorpo é SIRPAB-5. Em algumas modalidades, o anticorpo é SIRPAB-6. Em algumas modalidades, o anticorpo é SIRPAB-7. Em algumas modalidades, o anticorpo é SIRPAB-8. Em algumas modalidades, o anticorpo é SIRPAB-9. Em algumas modalidades, o anticorpo é SIRPAB-10. Em algumas modalidades, o anticorpo é SIRPAB-11. Em algumas modalidades, o anticorpo é SIRPAB-12. Em algumas modalidades, o anticorpo é SIRPAB-13. Em algumas modalidades, o anticorpo é

SIRPAB-17. Em algumas modalidades, o anticorpo é SIRPAB-18. Em algumas modalidades, o anticorpo é SIRPAB-19. Em algumas modalidades, o anticorpo é SIRPAB-20. Em algumas modalidades, o anticorpo é SIRPAB-21.

[00297] Noutro aspecto, os anticorpos ou seus fragmentos de ligação ao antígeno fornecidos neste documento se ligam a uma região, incluindo um epítopo, de SIRPα humana ou SIRPα de cyno. Por exemplo, em algumas modalidades, um anticorpo fornecido neste documento se liga a uma região do SIRPα humana (SEQ ID NO: 146) compreendendo os resíduos de aminoácidos 30 a 98 do SIRPα humana. Em ainda outro aspecto, os anticorpos fornecidos neste documento se ligam a um epítopo específico de SIRPα humana.

[00298] Em certas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, quando ligado à SIRPα, se liga a pelo menos um dos resíduos 30-36 (SEQ ID NO: 147) dentro de uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 146. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, quando ligado à SIRPα, se liga a pelo menos um dos resíduos 30-52 (SEQ ID NO: 160) dentro de uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 146. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, quando ligado à SIRPα, se liga a pelo menos um dos resíduos 30-67 (SEQ ID NO:161) dentro de uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 146. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, quando ligado à SIRPα, se liga a pelo menos um dos resíduos 30-69 (SEQ ID NO:162) dentro de uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 146. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, quando ligado à SIRPα, se liga a pelo menos um dos resíduos 30-74 (SEQ ID NO:163) dentro de uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 146. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, quando ligado à SIRPα, se liga a pelo menos um dos resíduos 30-93 (SEQ ID NO:164) dentro de uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 146. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, quando ligado à SIRPα, se liga a pelo menos um dos resíduos 30-95 (SEQ ID NO:165) dentro de uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 146. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, quando ligado à SIRPα, se liga a pelo menos um dos resíduos 30-96 (SEQ ID NO:166) dentro de uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 146. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, quando ligado à SIRPα, se liga a pelo menos um dos resíduos 30-98 (SEQ ID NO:167) dentro de uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 146.

[00299] Em certas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, quando ligado à SIRPα, se liga a pelo menos um dos resíduos 36-52 (SEQ ID NO:168) dentro de uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:146. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, quando ligado à SIRPα, se liga a pelo menos um dos resíduos 36-67 (SEQ ID NO:169) dentro de uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 146. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, quando ligado à SIRPα, se liga a pelo menos um dos resíduos 36-69 (SEQ ID NO:170) dentro de uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 146. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, quando ligado à SIRPα, se liga a pelo menos um dos resíduos 36-74 (SEQ ID NO:171) dentro de uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 146. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, quando ligado à SIRPα, se liga a pelo menos um dos resíduos 36-93 (SEQ ID NO:172) dentro de uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 146. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, quando ligado à SIRPα, se liga a pelo menos um dos resíduos 36-95 (SEQ ID NO:173) dentro de uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 146. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, quando ligado à SIRPα, se liga a pelo menos um dos resíduos 36-96 (SEQ ID NO:174) dentro de uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 146. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, quando ligado à SIRPα, se liga a pelo menos um dos resíduos 36-98 (SEQ ID NO:175) dentro de uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 146.

[00300] Em certas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, quando ligado à SIRPα, se liga a pelo menos um dos resíduos 52-67 (SEQ ID NO:176) dentro de uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:146. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, quando ligado à SIRPα, se liga a pelo menos um dos resíduos 52-69 (SEQ ID NO:177) dentro de uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 146. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, quando ligado à SIRPα, se liga a pelo menos um dos resíduos 52-74 (SEQ ID NO:178) dentro de uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 146. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, quando ligado à SIRPα, se liga a pelo menos um dos resíduos 52-93 (SEQ ID NO:179) dentro de uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 146. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, quando ligado à SIRPα, se liga a pelo menos um dos resíduos 52-95 (SEQ ID NO:180) dentro de uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 146. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, quando ligado à SIRPα, se liga a pelo menos um dos resíduos 52-96 (SEQ ID NO:181) dentro de uma sequência de aminoácidos de

SEQ ID NO: 146. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, quando ligado à SIRPα, se liga a pelo menos um dos resíduos 52-98 (SEQ ID NO:182) dentro de uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 146.

[00301] Em certas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, quando ligado à SIRPα, se liga a pelo menos um dos resíduos 67-69 (tendo a sequência de aminoácidos de TKR) dentro de uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 146. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, quando ligado à SIRPα, se liga a pelo menos um dos resíduos 67-74 (SEQ ID NO:183) dentro de uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 146. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, quando ligado à SIRPα, se liga a pelo menos um dos resíduos 67-93 (SEQ ID NO:184) dentro de uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 146. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, quando ligado à SIRPα, se liga a pelo menos um dos resíduos 67-95 (SEQ ID NO:185) dentro de uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 146. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, quando ligado à SIRPα, se liga a pelo menos um dos resíduos 67-96 (SEQ ID NO:186) dentro de uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 146. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, quando ligado à SIRPα, se liga a pelo menos um dos resíduos 67-98 (SEQ ID NO:187) dentro de uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 146.

[00302] Em certas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, quando ligado à SIRPα, se liga a pelo menos um dos resíduos 69-74 (SEQ ID NO:188) dentro de uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:146. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, quando ligado à SIRPα, se liga a pelo menos um dos resíduos 69-93 (SEQ ID NO:189) dentro de uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 146. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, quando ligado à SIRPα, se liga a pelo menos um dos resíduos 69-95 (SEQ ID NO:190) dentro de uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 146. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, quando ligado à SIRPα, se liga a pelo menos um dos resíduos 69-96 (SEQ ID NO:191) dentro de uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 146. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, quando ligado à SIRPα, se liga a pelo menos um dos resíduos 69-98 (SEQ ID NO:192) dentro de uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 146.

[00303] Em certas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, quando ligado à SIRPα, se liga a pelo menos um dos resíduos 74-93 (SEQ ID NO:193) dentro de uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:146. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, quando ligado à SIRPα, se liga a pelo menos um dos resíduos 74-95 (SEQ ID NO:194) dentro de uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 146. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, quando ligado à SIRPα, se liga a pelo menos um dos resíduos 74-96 (SEQ ID NO:195) dentro de uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 146. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, quando ligado à SIRPα, se liga a pelo menos um dos resíduos 74-98 (SEQ ID NO:196) dentro de uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 146.

[00304] Em certas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, quando ligado à SIRPα, se liga a pelo menos um dos resíduos 93-95 (tendo a sequência de aminoácidos de KFR) dentro de uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 146. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, quando ligado à SIRPα, se liga a pelo menos um dos resíduos 93-96 (SEQ ID NO:198) dentro de uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 146. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, quando ligado à SIRPα, se liga a pelo menos um dos resíduos 93-98 (SEQ ID NO:199) dentro de uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 146. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, quando ligado à SIRPα, se liga a pelo menos um dos resíduos 95-96 (tendo a sequência de aminoácidos de RK) dentro de uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:

146. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, quando ligado à SIRPα, se liga a pelo menos um dos resíduos 95-98 (SEQ ID NO:201) dentro de uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 146. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, quando ligado à SIRPα, se liga a pelo menos um dos resíduos 96-98 (tendo a sequência de aminoácidos de KGS) dentro de uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 146.

[00305] Em modalidades particulares, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, quando ligado à SIRPα, se liga a pelo menos um resíduo selecionado do grupo que consiste em L30, I36, Q52, T67, R69, F74, K93, R95, K96 e S98 dentro de uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 146. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, quando ligado à SIRPα, se liga a pelo menos um resíduo selecionado do grupo que consiste em T67, R69, R95, K96 e S98 dentro de uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 146.

[00306] Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, quando ligado à SIRPα, se liga a dois ou mais resíduos selecionados do grupo que consiste em L30, I36, Q52, T67, R69, F74, K93, R95, K96 e S98 dentro de uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 146. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, quando ligado à SIRPα, se liga a dois ou mais resíduos selecionados do grupo que consiste em T67, R69, R95, K96 e S98 dentro de uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 146.

[00307] Em outras modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, quando ligado à SIRPα, se liga a três ou mais resíduos selecionados do grupo que consiste em L30, I36, Q52, T67, R69, F74, K93, R95, K96 e S98 dentro de uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 146. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, quando ligado à SIRPα, se liga a três ou mais resíduos selecionados do grupo que consiste em T67, R69, R95, K96 e S98 dentro de uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 146.

[00308] Em certas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, quando ligado à SIRPα, se liga a quatro ou mais resíduos selecionados do grupo que consiste em L30, I36, Q52, T67, R69, F74, K93, R95, K96 e S98 dentro de uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 146. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, quando ligado à SIRPα, se liga a quatro ou mais resíduos selecionados do grupo que consiste em T67, R69, R95, K96 e S98 dentro de uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 146.

[00309] Em uma modalidade, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, quando ligado à SIRPα, se liga a cinco ou mais resíduos selecionados do grupo que consiste em L30, I36, Q52, T67, R69, F74, K93, R95, K96 e S98 dentro de uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 146. Em outras modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, quando ligado à SIRPα, se liga a cinco resíduos que consistem em T67, R69, R95, K96 e S98 dentro de uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:

146.

[00310] Em outra modalidade, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, quando ligado à SIRPα, se liga a seis ou mais resíduos selecionados do grupo que consiste em L30, I36, Q52, T67, R69, F74, K93, R95, K96 e S98 dentro de uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 146.

[00311] Em ainda outra modalidade, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, quando ligado à SIRPα, se liga a sete ou mais resíduos selecionados do grupo que consiste em L30, I36, Q52, T67, R69, F74, K93, R95, K96 e S98 dentro de uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 146.

[00312] Em ainda outra modalidade, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, quando ligado à SIRPα, se liga a oito ou mais resíduos selecionados do grupo que consiste em L30, I36, Q52, T67, R69, F74, K93, R95, K96 e S98 dentro de uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 146.

[00313] Em certas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, quando ligado à SIRPα, se liga a nove ou mais resíduos selecionados do grupo que consiste em L30, I36, Q52, T67, R69, F74, K93, R95, K96 e S98 dentro de uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 146.

[00314] Em outras modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, quando ligado à SIRPα, se liga a todos os dez resíduos do grupo que consiste em L30, I36, Q52, T67, R69, F74, K93, R95, K96 e S98 dentro de uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 146.

[00315] Noutra modalidade, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, quando ligado à SIRPα, liga-se a L30 numa sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:146. Noutra modalidade, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, quando ligado à SIRPα, liga-se a I36 numa sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:146. Em uma modalidade, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, quando ligado à SIRPα, liga-se a Q52 numa sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:146. Noutra modalidade específica, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, quando ligado à SIRPα, liga-se a T67 numa sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:146. Em algumas modalidades, o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, quando ligado à SIRPα, liga-se a R69 dentro de uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:146. Em outras modalidades, o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, quando ligado à SIRPα, liga-se a F74 dentro de uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:146. Noutra modalidade, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, quando ligado à SIRPα, liga-se a K93 numa sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:146. Noutra modalidade ainda, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, quando ligado à SIRPα, liga-se a R95 numa sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:146. Noutra modalidade ainda, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, quando ligado à SIRPα, liga-se a K96 numa sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:146. Em algumas modalidades, o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, quando ligado à SIRPα, liga-se a S98 dentro de uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:146. Qualquer combinação de dois, três, quatro, cinco, seis, sete, oito, nove ou dez dos sítios de ligação de aminoácidos SIRPα acima referenciados também contemplada.

[00316] Em um aspecto, são fornecidos neste documento anticorpos que se ligam especificamente à SIRPα e podem reduzir a ligação entre SIRPα e CD47. Como é do conhecimento de um versado na técnica, existem muitos polimorfismos SIRPα de ocorrência natural. Os anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento podem se ligar a um, dois, três, quatro, cinco, seis, sete, oito, nove, dez ou mais ou todos os polimorfismos SIRPα conhecidos por um versado na técnica, para exemplo um, dois, três, quatro, cinco, seis, sete, oito, nove, dez ou mais, ou todo o polimorfismo SIRPα descrito em Takenaka K, et al., Nat Immunol. Dezembro de 2007; 8 (12): 1313-

23. Em algumas modalidades específicas, os anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento podem se ligar a um ou mais polimorfismos SIRPα selecionados do grupo que consiste em SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO: 149 no domínio IgV, SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO: 150 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO: 151 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO: 152 no domínio IgV, SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO: 153 no domínio IgV, e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO: 154 no domínio IgV, e/ou reduzir a ligação entre CD47 e um ou mais polimorfismos SIRPα selecionados do grupo que consiste em SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO: 149 no domínio IgV, SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO: 150 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO: 151 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO: 152 no domínio IgV, SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO: 153 no IgV -domínio e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO: 154 no domínio IgV.

[00317] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento podem se ligar a dois ou mais polimorfismos SIRPα selecionados do grupo que consiste em SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO: 149 no domínio IgV, SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO: 150 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO: 151 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO: 152 no domínio IgV, SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO: 153 no domínio IgV, e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO: 154 no domínio IgV, e/ou reduzir a ligação entre CD47 e dois ou mais polimorfismos SIRPα selecionados do grupo que consiste em SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO: 149 no domínio IgV, SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO: 150 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO: 151 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO: 152 no domínio IgV, SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO: 153 no IgV- domínio e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO: 154 no domínio IgV.

[00318] Nas modalidades específicas, os anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento podem se ligar a três ou mais polimorfismos SIRPα selecionados do grupo que consiste em SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO: 149 no domínio IgV, SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO: 150 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO: 151 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO: 152 no domínio IgV, SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO: 153 no domínio IgV, e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO: 154 no domínio IgV, e/ou reduzir a ligação entre CD47 e três ou mais polimorfismos SIRPα selecionados do grupo que consiste em SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO: 149 no domínio IgV, SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO: 150 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO: 151 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO: 152 no domínio IgV, SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO: 153 no IgV -domínio e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO: 154 no domínio IgV.

[00319] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento podem se ligar a quatro ou mais polimorfismos SIRPα selecionados do grupo que consiste em SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO: 149 no domínio IgV, SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO: 150 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO: 151 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO: 152 no domínio IgV, SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO: 153 no domínio IgV, e SIRPα v6 compreendendo

SEQ ID NO: 154 no domínio IgV, e/ou reduzir a ligação entre CD47 e quatro ou mais polimorfismos SIRPα selecionados do grupo que consiste em SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO: 149 no domínio IgV, SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO: 150 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO: 151 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO: 152 no domínio IgV, SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO: 153 no IgV- domínio e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO: 154 no domínio IgV.

[00320] Em determinadas modalidades, os anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento podem se ligar a cinco ou mais polimorfismos SIRPα selecionados do grupo que consiste em SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO: 149 no domínio IgV, SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO: 150 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO: 151 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO: 152 no domínio IgV, SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO: 153 no domínio IgV, e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO: 154 no domínio IgV, e/ou reduzir a ligação entre CD47 e cinco ou mais polimorfismos SIRPα selecionados do grupo que consiste em SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO: 149 no domínio IgV, SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO: 150 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO: 151 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO: 152 no domínio IgV, SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO: 153 no IgV- domínio e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO: 154 no domínio IgV.

[00321] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento podem se ligar a todos os seis polimorfismos SIRPα consistindo em SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO: 149 no domínio IgV, SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO: 150 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO: 151 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO: 152 no domínio IgV, SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO: 153 no domínio IgV, e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO: 154 no domínio IgV, e/ou reduzir a ligação entre CD47 e todos os seis polimorfismos SIRPα consistindo em SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO: 149 no domínio IgV, SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO: 150 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO: 151 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO: 152 no domínio IgV, SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO: 153 no domínio IgV, e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO: 154 no domínio IgV.

[00322] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-SIRPα ou seus fragmentos fornecidos neste documento podem se ligar à SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO: 149 no domínio IgV e/ou reduzir a ligação entre CD47 e SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO: 149 no domínio IgV. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento podem se ligar à SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO: 150 no domínio IgV e/ou reduzir a ligação entre CD47 e SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO: 150 no domínio IgV. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-SIRPα ou seus fragmentos fornecidos neste documento podem se ligar à SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO: 151 no domínio IgV e/ou reduzir a ligação entre CD47 e SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO: 151 no domínio IgV. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento podem se ligar à SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO: 152 no domínio IgV e/ou reduzir a ligação entre CD47 e SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO: 152 no domínio IgV. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-SIRPα ou seus fragmentos fornecidos neste documento podem se ligar à SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO: 153 no domínio IgV e/ou reduzir a ligação entre CD47 e SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO: 153 no domínio IgV. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento podem se ligar à SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO: 154 no domínio IgV e/ou reduzir a ligação entre CD47 e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO: 154 no domínio IgV.

[00323] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento podem se ligar à SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO: 149 no domínio IgV e SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO: 150 no domínio IgV e/ou reduzir a ligação entre o CD47 e o referido SIRPα v1 e a ligação entre o CD47 e o referido SIRPα v2. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento podem se ligar à SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO: 149 no domínio IgV e SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO: 151 no domínio IgV e/ou reduzir a ligação entre o CD47 e o referido SIRPα v1 e a ligação entre o CD47 e o referido SIRPα v3. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento podem se ligar à SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO: 149 no domínio IgV e SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO: 152 no domínio IgV e/ou reduzir a ligação entre o CD47 e o referido SIRPα v1 e a ligação entre o CD47 e o referido SIRPα v4. Em algumas modalidades, os anticorpos anti- SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento podem se ligar à SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO: 149 no domínio IgV e SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO: 153 no domínio IgV e/ou reduzir a ligação entre o CD47 e o referido SIRPα v1 e a ligação entre o CD47 e o referido SIRPα v5. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento podem se ligar à SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO: 149 no domínio IgV e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO: 154 no domínio IgV e/ou reduzir a ligação entre o CD47 e o referido SIRPα v1 e a ligação entre o CD47 e o referido SIRPα v6.

[00324] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento podem se ligar à SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO: 150 no domínio IgV e SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO: 151 no domínio IgV e/ou reduzir a ligação entre o CD47 e o referido SIRPα v2 e a ligação entre o CD47 e o referido SIRPα v3. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento podem se ligar à SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO: 150 no domínio IgV e SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO: 152 no domínio IgV e/ou reduzir a ligação entre o CD47 e o referido SIRPα v2 e a ligação entre o CD47 e o referido SIRPα v4. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento podem se ligar à SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO: 150 no domínio IgV e SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO: 153 no domínio IgV e/ou reduzir a ligação entre o CD47 e o referido SIRPα v2 e a ligação entre o CD47 e o referido SIRPα v5. Em algumas modalidades, os anticorpos anti- SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento podem se ligar à SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO: 150 no domínio IgV e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO: 154 no domínio IgV e/ou reduzir a ligação entre o CD47 e o referido SIRPα v2 e a ligação entre o CD47 e o referido SIRPα v6.

[00325] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento podem se ligar à SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO: 151 no domínio IgV e SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO: 152 no domínio IgV e/ou reduzir a ligação entre o CD47 e o referido SIRPα v3 e a ligação entre o CD47 e o referido SIRPα v4. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento podem se ligar à SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO: 151 no domínio IgV e SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO: 153 no domínio IgV e/ou reduzir a ligação entre o CD47 e o referido SIRPα v3 e a ligação entre o CD47 e o referido SIRPα v5. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento podem se ligar à SIRPα v3 compreendendo

SEQ ID NO: 151 no domínio IgV e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO: 154 no domínio IgV e/ou reduzir a ligação entre o CD47 e o referido SIRPα v3 e a ligação entre o CD47 e o referido SIRPα v6.

[00326] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento podem se ligar à SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO: 152 no domínio IgV e SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO: 153 no domínio IgV e/ou reduzir a ligação entre o CD47 e o referido SIRPα v4 e a ligação entre o CD47 e o referido SIRPα v5. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento podem se ligar à SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO: 152 no domínio IgV e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO: 154 no domínio IgV e/ou reduzir a ligação entre o CD47 e o referido SIRPα v4 e a ligação entre o CD47 e o referido SIRPα v6. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento podem se ligar à SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO: 153 no domínio IgV e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO: 154 no domínio IgV e/ou reduzir a ligação entre o CD47 e o referido SIRPα v5 e a ligação entre o CD47 e o referido SIRPα v6.

[00327] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento podem se ligar à SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO: 149 no domínio IgV, SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO: 150 no domínio IgV e SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO: 151 no domínio IgV, e/ou reduzir a ligação de CD47 a cada um dos referidos SIRPα v1, SIRPα v2 e SIRPα v3. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento podem se ligar à SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO: 149 no domínio IgV, SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO: 150 no domínio IgV, e SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO: 152 no domínio IgV, e/ou reduzir a ligação de CD47 a cada um dos referidos SIRPα v1,

SIRPα v2 e SIRPα v4. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento podem se ligar à SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO: 149 no domínio IgV, SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO: 150 no domínio IgV e SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO: 153 no domínio IgV, e/ou reduzir a ligação de CD47 a cada um dos referidos SIRPα v1, SIRPα v2 e SIRPα v5. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento podem se ligar à SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO: 149 no domínio IgV, SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO: 150 no domínio IgV, e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO: 154 no domínio IgV, e/ou reduzir a ligação de CD47 a cada um dos referidos SIRPα v1, SIRPα v2 e SIRPα v6.

[00328] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento podem se ligar à SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO: 149 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO: 151 no domínio IgV, e SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO: 152 no domínio IgV, e/ou reduzir a ligação de CD47 a cada um dos referidos SIRPα v1, SIRPα v3 e SIRPα v4. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento podem se ligar à SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO: 149 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO: 151 no domínio IgV e SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO: 153 no domínio IgV, e/ou reduzir a ligação de CD47 a cada um dos referidos SIRPα v1, SIRPα v3 e SIRPα v5. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento podem se ligar à SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO: 149 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO: 151 no domínio IgV, e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO: 154 no domínio IgV, e/ou reduzir a ligação de CD47 a cada um dos referidos SIRPα v1, SIRPα v3 e SIRPα v6.

[00329] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento podem se ligar à SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO: 149 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO: 152 no domínio IgV e SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO: 153 no domínio IgV, e/ou reduzir a ligação de CD47 a cada um dos referidos SIRPα v1, SIRPα v4 e SIRPα v5. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento podem se ligar à SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO: 149 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO: 152 no domínio IgV, e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO: 154 no domínio IgV, e/ou reduzir a ligação de CD47 a cada um dos referidos SIRPα v1, SIRPα v4 e SIRPα v6.

[00330] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento podem se ligar à SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO: 149 no domínio IgV, SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO: 153 no domínio IgV, e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO: 154 no domínio IgV, e/ou reduzir a ligação de CD47 a cada um dos referidos SIRPα v1, SIRPα v5 e SIRPα v6.

[00331] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento podem se ligar à SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO: 150 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO: 151 no domínio IgV, e SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO: 152 no domínio IgV, e/ou reduzir a ligação de CD47 a cada um dos referidos SIRPα v2, SIRPα v3 e SIRPα v4. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento podem se ligar à SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO: 150 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO: 151 no domínio IgV e SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO: 153 no domínio IgV, e/ou reduzir a ligação de CD47 a cada um dos referidos SIRPα v2,

SIRPα v3 e SIRPα v5. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento podem se ligar à SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO: 150 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO: 151 no domínio IgV, e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO: 154 no domínio IgV, e/ou reduzir a ligação de CD47 a cada um dos referidos SIRPα v2, SIRPα v3 e SIRPα v6.

[00332] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento podem se ligar à SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO: 151 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO: 152 no domínio IgV e SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO: 153 no domínio IgV, e/ou reduzir a ligação de CD47 a cada um dos referidos SIRPα v3, SIRPα v4 e SIRPα v5. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento podem se ligar à SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO: 151 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO: 152 no domínio IgV e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO: 154 no domínio IgV, e/ou reduzir a ligação de CD47 a cada um dos referidos SIRPα v3, SIRPα v4 e SIRPα v6. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento podem se ligar à SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO: 152 no domínio IgV, SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO: 153 no domínio IgV, e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO: 154 no domínio IgV, e/ou reduzir a ligação de CD47 a cada um dos referidos SIRPα v4, SIRPα v5 e SIRPα v6.

[00333] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento podem se ligar à SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO: 149 no domínio IgV, SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO: 150 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO: 151 no domínio IgV, e SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO: 152 no domínio IgV, e/ou reduzir a ligação de CD47 a cada um dos referidos SIRPα v1, SIRPα v2, SIRPα v3 e SIRPα v4. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento podem se ligar à SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO: 149 no domínio IgV, SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO: 150 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO: 151 no domínio IgV e SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO: 153 no domínio IgV, e/ou reduzir a ligação de CD47 a cada um dos referidos SIRPα v1, SIRPα v2, SIRPα v3 e SIRPα v5. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento podem se ligar à SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO: 149 no domínio IgV, SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO: 150 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO: 151 no domínio IgV, e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO: 154 no domínio IgV, e/ou reduzir a ligação de CD47 a cada um dos referidos SIRPα v1, SIRPα v2, SIRPα v3 e SIRPα v6.

[00334] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento podem se ligar à SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO: 149 no domínio IgV, SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO: 150 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO: 152 no domínio IgV e SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO: 153 no domínio IgV, e/ou reduzir a ligação de CD47 a cada um dos referidos SIRPα v1, SIRPα v2, SIRPα v4 e SIRPα v5. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento podem se ligar à SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO: 149 no domínio IgV, SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO: 150 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO: 152 no domínio IgV, e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO: 154 no domínio IgV, e/ou reduzir a ligação de CD47 a cada um dos referidos SIRPα v1, SIRPα v2, SIRPα v4 e SIRPα v6. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento podem se ligar à SIRPα v1 compreendendo SEQ ID

NO: 149 no domínio IgV, SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO: 150 no domínio IgV, SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO: 153 no domínio IgV, e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO: 154 no domínio IgV, e/ou reduzir a ligação de CD47 a cada um dos referidos SIRPα v1, SIRPα v2, SIRPα v5 e SIRPα v6.

[00335] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento podem se ligar à SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO: 149 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO: 151 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO: 152 no domínio IgV e SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO: 153 no domínio IgV, e/ou reduzir a ligação de CD47 a cada um dos referidos SIRPα v1, SIRPα v3, SIRPα v4 e SIRPα v5. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento podem se ligar à SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO: 149 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO: 151 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO: 152 no domínio IgV, e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO: 154 no domínio IgV, e/ou reduzir a ligação de CD47 a cada um dos referidos SIRPα v1, SIRPα v3, SIRPα v4 e SIRPα v6. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento podem se ligar à SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO: 149 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO: 151 no domínio IgV, SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO: 153 no domínio IgV, e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO: 154 no domínio IgV, e/ou reduzir a ligação de CD47 a cada um dos referidos SIRPα v1, SIRPα v3, SIRPα v5 e SIRPα v6.

[00336] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento podem se ligar à SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO: 149 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO: 152 no domínio IgV, SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO: 153 no domínio IgV, e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO: 154 no domínio IgV, e/ou reduzir a ligação de CD47 a cada um dos referidos SIRPα v1, SIRPα v4, SIRPα v5 e SIRPα v6.

[00337] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento podem se ligar à SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO: 150 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO: 151 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO: 152 no domínio IgV e SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO: 153 no domínio IgV, e/ou reduzir a ligação de CD47 a cada um dos referidos SIRPα v2, SIRPα v3, SIRPα v4 e SIRPα v5. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento podem se ligar à SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO: 150 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO: 151 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO: 152 no domínio IgV, e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO: 154 no domínio IgV, e/ou reduzir a ligação de CD47 a cada um dos referidos SIRPα v2, SIRPα v3, SIRPα v4 e SIRPα v6. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento podem se ligar à SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO: 150 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO: 151 no domínio IgV, SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO: 153 no domínio IgV, e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO: 154 no domínio IgV, e/ou reduzir a ligação de CD47 a cada um dos referidos SIRPα v2, SIRPα v3, SIRPα v5 e SIRPα v6.

[00338] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento podem se ligar à SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO: 150 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO: 152 no domínio IgV, SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO: 153 no domínio IgV, e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO: 154 no domínio IgV, e/ou reduzir a ligação de CD47 a cada um dos referidos SIRPα v2, SIRPα v4, SIRPα v5 e SIRPα v6. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento podem se ligar à SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO: 151 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO: 152 no domínio IgV, SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO: 153 no domínio IgV, e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO: 154 no domínio IgV, e/ou reduzir a ligação de CD47 a cada um dos referidos SIRPα v3, SIRPα v4, SIRPα v5 e SIRPα v6.

[00339] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento podem se ligar à SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO: 149 no domínio IgV, SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO: 150 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO: 151 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO: 152 no domínio IgV, e SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO: 153 no domínio IgV, e/ou reduzir a ligação de CD47 a cada um e todos os referidos SIRPα v1, SIRPα v2, SIRPα v3, SIRPα v4 e SIRPα v5. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento podem se ligar à SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO: 149 no domínio IgV, SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO: 150 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO: 151 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO: 152 no domínio IgV, e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO: 154 no domínio IgV, e/ou reduzir a ligação de CD47 a cada um dos referidos SIRPα v1, SIRPα v2, SIRPα v3, SIRPα v4 e SIRPα v6. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento podem se ligar à SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO: 149 no domínio IgV, SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO: 150 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO: 151 no domínio IgV, SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO: 153 no domínio IgV, e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO: 154 no domínio IgV, e/ou reduzir a ligação de CD47 a cada um e todos os referidos SIRPα v1, SIRPα v2, SIRPα v3, SIRPα v5 e SIRPα v6. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento podem se ligar à SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO: 149 no domínio IgV, SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO: 150 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO: 152 no domínio IgV, SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO: 153 no domínio IgV, e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO: 154 no domínio IgV, e/ou reduzir a ligação de CD47 a cada um e todos os referidos SIRPα v1, SIRPα v2, SIRPα v4, SIRPα v5 e SIRPα v6. Em algumas modalidades, os anticorpos anti- SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento podem se ligar à SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO: 149 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO: 151 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO: 152 no domínio IgV, SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO: 153 no domínio IgV, e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO: 154 no domínio IgV, e/ou reduzir a ligação de CD47 a cada um e todos os referidos SIRPα v1, SIRPα v3, SIRPα v4, SIRPα v5 e SIRPα v6. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento podem se ligar à SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO: 150 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO: 151 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO: 152 no domínio IgV, SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO: 153 no domínio IgV, e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO: 154 no domínio IgV, e/ou reduzir a ligação de CD47 a cada um e todos os referidos SIRPα v2, SIRPα v3, SIRPα v4, SIRPα v5 e SIRPα v6.

[00340] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento podem se ligar à SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO: 149 no domínio IgV, SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO: 150 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO: 151 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO: 152 no domínio IgV, SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO: 153 no domínio IgV, e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO: 154 no domínio IgV e/ou reduzir a ligação de CD47 a cada um dos referidos SIRPα v1, SIRPα v2, SIRPα v3, SIRPα v4, SIRPα v5 e SIRPα v6.

[00341] Em modalidades específicas, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento deste fornecido neste documento se insere em uma grande bolsa SIRPα formada predominantemente pelos resíduos Phe74, Ile36, Leu30, Lys93 e Asn52 de SIRPα tendo SEQ ID NO: 146, que é a mesma bolsa reconhecida e interagido pelo loop CD47 F-G. Como tal, em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento do mesmo fornecido neste documento se liga a cerca de 50% ou pelo menos 50% dos polimorfismos SIRPα na interface de ligação de CD47 no domínio Ig-V de SIRPα. Em certas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento do mesmo fornecido neste documento se liga a cerca de 55% ou pelo menos 55% dos polimorfismos SIRPα na interface de ligação de CD47 no domínio Ig-V de SIRPα. Em algumas modalidades, um anticorpo anti- SIRPα ou fragmento do mesmo fornecido neste documento se liga a cerca de 60% ou pelo menos 60% dos polimorfismos SIRPα na interface de ligação de CD47 no domínio Ig-V de SIRPα. Em certas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento do mesmo fornecido neste documento se liga a cerca de 65% ou pelo menos 65% dos polimorfismos SIRPα na interface de ligação de CD47 no domínio Ig-V de SIRPα. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento do mesmo fornecido neste documento se liga a cerca de 70% ou pelo menos 70% dos polimorfismos SIRPα na interface de ligação de CD47 no domínio Ig-V de SIRPα. Em certas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento do mesmo fornecido neste documento se liga a cerca de 75% ou pelo menos 75% dos polimorfismos SIRPα na interface de ligação de CD47 no domínio Ig-V de SIRPα. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento do mesmo fornecido neste documento se liga a cerca de 80% ou pelo menos 80% dos polimorfismos SIRPα na interface de ligação de CD47 no domínio Ig-V de SIRPα. Em certas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento do mesmo fornecido neste documento se liga a cerca de 85% ou pelo menos 85% dos polimorfismos SIRPα na interface de ligação de CD47 no domínio Ig-V de SIRPα. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento do mesmo fornecido neste documento se liga a cerca de 90% ou pelo menos 90% dos polimorfismos SIRPα na interface de ligação de CD47 no domínio Ig-V de SIRPα. Em certas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento do mesmo fornecido neste documento se liga a cerca de 95% ou pelo menos 95% dos polimorfismos SIRPα na interface de ligação de CD47 no domínio Ig-V de SIRPα. Em outras modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento do mesmo fornecido neste documento se liga a cerca de 99% ou pelo menos 99% dos polimorfismos SIRPα na interface de ligação de CD47 no domínio Ig-V de SIRPα.

[00342] Conforme descrito nos parágrafos anteriores, os anticorpos anti- SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento podem se ligar à SIRPα e/ou reduzir a ligação de CD47 à SIRPα (por exemplo, qualquer um ou qualquer combinação de dois, três, quatro, cinco ou seis de SIRPα selecionado do grupo que consiste em haplótipos SIRPα v1, v2, v3, v4, v5 e v6), a redução na ligação de CD47-SIRPα pode ser de cerca de 10%, cerca de 20%, cerca de 30%, cerca de 40%, cerca de 50%, cerca de 60%, cerca de 70%, cerca de 80%, cerca de 90%, cerca de 95%, cerca de 99% ou cerca de 99,99%. Da mesma forma, a redução na ligação de CD47-SIRPα (por exemplo Ligação de CD47 a qualquer um ou qualquer combinação de dois, três, quatro, cinco ou seis de SIRPα selecionados do grupo que consiste em haplótipos SIRPα v1, v2, v3, v4, v5 e v6) pelos anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecido neste documento pode ser pelo menos 10%, pelo menos 20%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos pelo menos 95%, pelo menos 99% ou pelo menos 99,99%. Além disso, a redução na ligação CD47-SIRPα (por exemplo

Ligação de CD47 a qualquer um ou qualquer combinação de dois, três, quatro, cinco ou seis de SIRPα selecionados do grupo que consiste em haplótipos SIRPα v1, v2, v3, v4, v5 e v6) pelos anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos dos mesmos pode variar de cerca de 50% a cerca de 90%, cerca de 60% a cerca de 90%, cerca de 70% a cerca de 90%, cerca de 80% a cerca de 90%, cerca de 50% a cerca de 99%, cerca de 60% a cerca de 99%, cerca de 70% a cerca de 99%, cerca de 80% a cerca de 99% ou cerca de 90% a cerca de 99%.

[00343] Em outro aspecto, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento do mesmo fornecido neste documento que se liga especificamente à SIRPα pode modular a atividade de SIRPα (por exemplo, inibir a sinalização de SIRPα). Em certas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento funcional deste fornecido neste documento é um anticorpo descrito neste documento que se liga especificamente a um ECD de SIRPα humana e ativa (por exemplo, ativa parcialmente) pelo menos uma atividade SIRPα (por exemplo, aumenta a produção e/ou secreção de certas citocinas).

[00344] Em algumas modalidades específicas, os anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos funcionais dos mesmos fornecidos neste documento ligam-se à SIRPα (por exemplo, qualquer um ou qualquer combinação de dois, três, quatro, cinco ou seis de SIRPα selecionados do grupo que consiste em SIRPα v1, v2, v3, v4, v5 e v6 haplótipos) com um valor KD de cerca de 1 pM a cerca de 10 pM, de cerca de 10 pM a cerca de 100 pM, de cerca de 100 pM a cerca de 1 nM, de cerca de 1 nM a cerca de 10 nM, de cerca de 10 nM a cerca de 100 nM, de cerca de 1 pM a cerca de 100 pM, de cerca de 10 pM a cerca de 1 nM, de cerca de 100 pM a cerca de 10 nM, de cerca de 1 nM a cerca de 100 nM, ou de cerca de 10 nM a cerca de 1000 nM, e/ou reduzir a ligação de CD47 à SIRPα (por exemplo, qualquer um ou qualquer combinação de dois, três, quatro, cinco ou seis SIRPα selecionados do grupo que consiste em SIRPα v1, v2, v3, v4, haplótipos v5 e v6)

com EC50de cerca de 1 pM a cerca de 10 pM, de cerca de 10 pM a cerca de 100 pM, de cerca de 100 pM a cerca de 1 nM, de cerca de 1 nM a cerca de 10 nM, de cerca de 10 nM a cerca de 100 nM, de cerca de 1 pM a cerca de 100 pM, de cerca de 10 pM a cerca de 1 nM, de cerca de 100 pM a cerca de 10 nM, de cerca de 1 nM a cerca de 100 nM, ou de cerca de 10 nM a cerca de 1000 nM.

[00345] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα fornecido neste documento se liga à SIRPα com um valor KD de cerca de 0,01 nM, cerca de 0,02 nM, cerca de 0,03 nM, cerca de 0,04 nM, cerca de 0,05 nM, cerca de 0,06 nM, cerca de 0,07 nM, cerca de 0,08 nM, cerca de 0,09 nM, cerca de 0,1 nM, cerca de 0,11 nM, cerca de 0,12 nM, cerca de 0,13 nM, cerca de 0,14 nM, cerca de 0,15 nM, cerca de 0,16 nM, cerca de 0,17 nM, cerca de 0,18 nM, cerca de 0,19 nM, cerca de 0,2 nM, cerca de 0,3 nM, cerca de 0,4 nM, cerca de 0,5 nM, cerca de 0,6 nM, cerca de 0,7 nM, cerca de 0,8 nM, cerca de 0,9 nM, cerca de 1,0 nM, cerca de 1,2 nM, cerca de 1,3 nM, cerca de 1,4 nM, cerca de 1,5 nM, cerca de 1,6 nM, cerca de 1,7 nM, cerca de 1,8 nM, cerca de 1,9 nM, 2 nM, cerca de 2,1 nM, cerca de 2,2 nM, cerca de 2,3 nM, cerca de 2,4 nM, cerca de 2,5 nM, cerca de 2,6 nM, cerca de 2,7 nM, cerca de 2,8 nM, cerca de 2,9 nM, cerca de 3 nM, cerca de 3,1 nM, cerca de 3,2 nM, cerca de 3,3 nM, cerca de 3,4 nM, cerca de 3,5 nM, cerca de 3,6 nM, cerca de 3,7 nM, cerca de 3,8 nM, cerca de 3,9 nM, cerca de 4,0 nM, cerca de 4,1 nM, cerca de 4,2 nM, cerca de 4,3 nM, cerca de 4,4 nM, cerca de 4,5 nM, cerca de 4,6 nM, cerca de 4,7 nM, abo ut 4,8 nM, cerca de 4,9 nM, cerca de 5,0 nM, cerca de 5,1 nM, cerca de 5,2 nM, cerca de 5,3 nM, cerca de 5,4 nM, cerca de 5,5 nM, cerca de 5,6 nM, cerca de 5,7 nM, cerca de 5,8 nM, cerca de 5,9 nM, cerca de 6,0 nM, cerca de 6,1 nM, cerca de 6,2 nM, cerca de 6,3 nM, cerca de 6,4 nM, cerca de 6,5 nM, cerca de 6,6 nM, cerca de 6,7 nM, cerca de 6,8 nM, cerca de 6,9 nM, cerca de 7,0 nM, cerca de 7,1 nM, cerca de 7,2 nM, cerca de 7,3 nM, cerca de 7,4 nM, cerca de 7,5 nM, cerca de 7,6 nM, cerca de 7,7 nM, cerca de 7,8 nM, cerca de 7,9 nM, cerca de 8,0 nM, cerca de 8,1 nM, cerca de 8,2 nM, cerca de 8,3 nM, cerca de 8,4 nM, cerca de 8,5 nM, cerca de 8,6 nM, cerca de 8,7 nM, cerca de 8,8 nM, cerca de 8,9 nM, cerca de 9,0 nM, cerca de 9,1 nM, cerca de 9,2 nM, cerca de 9,3 nM, cerca de 9,4 nM, cerca de 9,5 nM, cerca de 9,6 nM, cerca de 9,7 nM, cerca de 9,8 nM, cerca de 9,9 nM ou cerca de 10,0 nM.

Em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα fornecido neste documento se liga à SIRPα com um valor KD de não mais que 0,01 nM, não mais que 0,02 nM, não mais que 0,03 nM, não mais que 0,04 nM, não mais que 0,05 nM, não mais do que 0,06 nM, não mais do que 0,07 nM, não mais do que 0,08 nM, não mais do que 0,09 nM, não mais do que 0,1 nM, não mais do que 0,11 nM, não mais do que 0,12 nM, não mais do que 0,13 nM, não mais do que 0,14 nM, não mais do que 0,15 nM, não mais do que 0,16 nM, não mais do que 0,17 nM, não mais do que 0,18 nM, não mais do que 0,19 nM, não mais do que 0,2 nM, não mais do que 0,3 nM, não mais do que 0,4 nM, não mais do que 0,5 nM, não mais do que 0,6 nM, não mais do que 0,7 nM, não mais do que 0,8 nM, não mais do que 0,9 nM, não mais do que 1,0 nM, não mais do que 1,2 nM, não mais do que 1,3 nM, não mais do que 1,4 nM, não mais do que 1,5 nM, não mais do que 1,6 nM, não mais do que 1,7 nM, não mais do que 1,8 nM, não mais do que 1,9 nM, 2 nM, não mais do que 2,1 nM, não mais do que 2,2 nM, não mais do que 2,3 nM, não mais do que 2,4 nM, não mais do que 2,5 nM, não mais do que 2,6 nM, não mais do que 2,7 nM, não mais do que 2,8 nM, não mais do que 2,9 nM, não mais do que 3 nM, não mais do que 3,1 nM, não mais do que 3,2 nM, não mais do que 3,3 nM, não mais do que 3,4 nM, não mais do que 3,5 nM, não mais do que 3,6 nM, não mais do que 3,7 nM, não mais do que 3,8 nM, não mais do que 3,9 nM, não mais do que 4,0 nM, não mais do que 4,1 nM, não mais do que 4,2 nM, não mais do que 4,3 nM, não mais do que 4,4 nM, não mais do que 4,5 nM, não mais do que 4,6 nM, não mais do que 4,7 nM, não mais do que 4,8 nM, não mais do que 4,9 nM, não mais do que 5,0 nM, não mais do que 5,1 nM, não mais do que 5,2 nM, não mais do que 5,3 nM, não mais do que 5,4 nM, não mais do que 5,5 nM, não mais do que 5,6 nM, não mais do que 5,7 nM, não mais do que 5,8 nM, não mais do que 5,9 nM, não mais do que 6,0 nM, não mais do que 6,1 nM, não mais do que 6,2 nM, não mais do que 6,3 nM, não mais do que 6,4 nM, não mais do que 6,5 nM, não mais do que 6,6 nM, não mais do que 6,7 nM, não mais do que 6,8 nM, não mais do que 6,9 nM, não mais do que 7,0 nM, não mais do que 7,1 nM, não mais do que 7,2 nM, não mais do que 7,3 nM, não mais do que 7,4 nM, não mais do que 7,5 nM, não mais do que 7,6 nM, não mais do que 7,7 nM, não mais do que 7,8 nM, não mais do que 7,9 nM, não mais do que 8,0 nM, não mais do que 8,1 nM, não mais do que 8,2 nM, não mais do que 8,3 nM, não mais do que 8,4 nM, não mais do que 8,5 nM, não mais do que 8,6 nM, não mais do que 8,7 nM, não mais do que 8,8 nM, não mais do que 8,9 nM, não mais do que 9,0 nM, não mais do que 9,1 nM, não mais do que 9,2 nM, não mais do que 9,3 nM, não mais do que 9,4 nM, não mais do que 9,5 nM, não mais do que 9,6 nM, não mais do que 9,7 nM, não mais do que 9,8 nM, não mais do que 9,9 nM, ou não mais do que 10,0 nM.

Em algumas modalidades, o anticorpo anti-SIRPα ou fragmento funcional do mesmo é um anticorpo anti-SIRPα.

Em algumas modalidades, o anticorpo anti-SIRPα ou fragmento funcional do mesmo é um fragmento funcional de um anticorpo anti-SIRPα.

Em algumas modalidades, o SIRPα é selecionado de haplótipos SIRPα v1, v2, v3, v4, v5 e v6. Em algumas modalidades, o SIRPα é um SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO: 149 no domínio IgV.

Em algumas modalidades, o SIRPα é um SIRPα v2 compreendendo a SEQ ID NO: 150 no domínio IgV.

Em algumas modalidades, o SIRPα é um SIRPα v3 compreendendo a SEQ ID NO: 151 no domínio IgV.

Em algumas modalidades, o SIRPα é um SIRPα v4 compreendendo a SEQ ID NO: 152 no domínio IgV.

Em algumas modalidades, o SIRPα é um SIRPα v5 compreendendo a SEQ ID NO: 153 no domínio IgV. Em algumas modalidades, o SIRPα é um SIRPα v6 compreendendo a SEQ ID NO: 154 no domínio IgV. Em algumas modalidades, o SIRPα é um cynomolgus SIRPα.

[00346] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα fornecido neste documento reduz a ligação de CD47 à SIRPα com um EC50 de cerca de 0,01 nM, cerca de 0,02 nM, cerca de 0,03 nM, cerca de 0,04 nM, cerca de 0,05 nM, cerca de 0,06 nM, cerca de 0,07 nM, cerca de 0,08 nM, cerca de 0,09 nM, cerca de 0,1 nM, cerca de 0,11 nM, cerca de 0,12 nM, cerca de 0,13 nM, cerca de 0,14 nM, cerca de 0,15 nM, cerca de 0,16 nM, cerca de 0,17 nM, cerca de 0,18 nM, cerca de 0,19 nM, cerca de 0,2 nM, cerca de 0,3 nM, cerca de 0,4 nM, cerca de 0,5 nM, cerca de 0,6 nM, cerca de 0,7 nM, cerca de 0,8 nM, cerca de 0,9 nM, cerca de 1,0 nM, cerca de 1,2 nM, cerca de 1,3 nM, cerca de 1,4 nM, cerca de 1,5 nM, cerca de 1,6 nM, cerca de 1,7 nM, cerca de 1,8 nM, cerca de 1,9 nM, 2 nM, cerca de 2,1 nM, cerca de 2,2 nM, cerca de 2,3 nM, cerca de 2,4 nM, cerca de 2,5 nM, cerca de 2,6 nM, cerca de 2,7 nM, cerca de 2,8 nM, cerca de 2,9 nM, cerca de 3 nM, cerca de 3,1 nM, cerca de 3,2 nM, cerca de 3,3 nM, cerca de 3,4 nM, cerca de 3,5 nM, cerca de 3,6 nM, cerca de 3,7 nM, cerca de 3,8 nM, cerca de 3,9 nM, cerca de 4,0 nM, cerca de 4,1 nM, cerca de 4,2 nM, cerca de 4,3 nM, cerca de 4,4 nM, cerca de 4,5 nM, cerca de 4,6 nM, cerca de 4,7 nM, abo ut 4,8 nM, cerca de 4,9 nM, cerca de 5,0 nM, cerca de 5,1 nM, cerca de 5,2 nM, cerca de 5,3 nM, cerca de 5,4 nM, cerca de 5,5 nM, cerca de 5,6 nM, cerca de 5,7 nM, cerca de 5,8 nM, cerca de 5,9 nM, cerca de 6,0 nM, cerca de 6,1 nM, cerca de 6,2 nM, cerca de 6,3 nM, cerca de 6,4 nM, cerca de 6,5 nM, cerca de 6,6 nM, cerca de 6,7 nM, cerca de 6,8 nM, cerca de 6,9 nM, cerca de 7,0 nM, cerca de 7,1 nM, cerca de 7,2 nM, cerca de 7,3 nM, cerca de 7,4 nM, cerca de 7,5 nM, cerca de 7,6 nM, cerca de 7,7 nM, cerca de 7,8 nM, cerca de 7,9 nM, cerca de 8,0 nM, cerca de 8,1 nM, cerca de 8,2 nM, cerca de 8,3 nM, cerca de 8,4 nM, cerca de 8,5 nM, cerca de 8,6 nM, cerca de 8,7 nM, cerca de 8,8 nM, cerca de 8,9 nM, cerca de 9,0 nM, cerca de 9,1 nM, cerca de 9,2 nM, cerca de 9,3 nM, cerca de 9,4 nM, cerca de 9,5 nM, cerca de 9,6 nM, cerca de 9,7 nM, cerca de 9,8 nM, cerca de 9,9 nM ou cerca de 10,0 nM.

Em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα fornecido neste documento reduz a ligação de CD47 à SIRPα com um EC50 de não mais que 0,01 nM, não mais que 0,02 nM, não mais que 0,03 nM, não mais do que 0,04 nM, não mais do que 0,05 nM, não mais do que 0,06 nM, não mais do que 0,07 nM, não mais do que 0,08 nM, não mais do que 0,09 nM, não mais do que 0,1 nM, não mais do que 0,11 nM, não mais do que 0,12 nM, não mais do que 0,13 nM, não mais do que 0,14 nM, não mais do que 0,15 nM, não mais do que 0,16 nM, não mais do que 0,17 nM, não mais do que 0,18 nM, não mais do que 0,19 nM, não mais do que 0,2 nM, não mais do que 0,3 nM, não mais do que 0,4 nM, não mais do que 0,5 nM, não mais do que 0,6 nM, não mais do que 0,7 nM, não mais do que 0,8 nM, não mais do que 0,9 nM, não mais do que 1,0 nM, não mais do que 1,2 nM, não mais do que 1,3 nM, não mais do que 1,4 nM, não mais do que 1,5 nM, não mais do que 1,6 nM, não mais do que 1,7 nM, não mais do que 1,8 nM, não mais do que 1,9 nM, 2 nM, não mais do que 2,1 nM, não mais do que 2,2 nM, não mais do que 2,3 nM, não mais do que 2,4 nM, não mais do que 2,5 nM, não mais do que 2,6 nM, não mais do que 2,7 nM, não mais do que 2,8 nM, não mais do que 2,9 nM, não mais do que 3 nM, não mais do que 3,1 nM, não mais do que 3,2 nM, não mais do que 3,3 nM, não mais do que 3,4 nM, não mais do que 3,5 nM, não mais do que 3,6 nM, não mais do que 3,7 nM, não mais do que 3,8 nM, não mais do que 3,9 nM, não mais do que 4,0 nM, não mais do que 4,1 nM, não mais do que 4,2 nM, não mais do que 4,3 nM, não mais do que 4,4 nM, não mais do que 4,5 nM, não mais do que 4,6 nM, não mais do que 4,7 nM, não mais do que 4,8 nM, não mais do que 4,9 nM, não mais do que 5,0 nM, não mais do que 5,1 nM, não mais do que 5,2 nM, não mais do que 5,3 nM, não mais do que 5,4 nM, não mais do que 5,5 nM, não mais do que 5,6 nM, não mais do que 5,7 nM, não mais do que 5,8 nM, não mais do que 5,9 nM, não mais do que 6,0 nM, não mais do que 6,1 nM, não mais do que 6,2 nM, não mais do que 6,3 nM, não mais do que 6,4 nM, não mais do que 6,5 nM, não mais do que 6,6 nM, não mais do que 6,7 nM, não mais do que 6,8 nM, não mais do que 6,9 nM, não mais do que 7,0 nM, não mais do que 7,1 nM, não mais do que 7,2 nM, não mais do que 7,3 nM, não mais do que 7,4 nM, não mais do que 7,5 nM, não mais do que 7,6 nM, não mais do que 7,7 nM, não mais do que 7,8 nM, não mais do que 7,9 nM, não mais do que 8,0 nM, não mais do que 8,1 nM, não mais do que 8,2 nM, não mais do que 8,3 nM, não mais do que 8,4 nM, não mais do que 8,5 nM, não mais do que 8,6 nM, não mais do que 8,7 nM, não mais do que 8,8 nM, não mais do que 8,9 nM, não mais do que 9,0 nM, não mais do que 9,1 nM, não mais do que 9,2 nM, não mais do que 9,3 nM, não mais do que 9,4 nM, não mais do que 9,5 nM, não mais do que 9,6 nM, não mais do que 9,7 nM, não mais do que 9,8 nM, não mais do que 9,9 nM ou não mais do que 10,0 nM.

Em algumas modalidades, o anticorpo anti-SIRPα ou fragmento funcional do mesmo é um fragmento funcional de um anticorpo anti- SIRPα.

Em algumas modalidades, o SIRPα é um SIRPα v5 compreendendo a SEQ ID NO: 153 no domínio IgV.

Em algumas modalidades, o SIRPα é um SIRPα v6 compreendendo a SEQ ID NO: 154 no domínio IgV.

[00347] Em algumas modalidades, o SIRPα é um cynomolgus SIRPα. Em outras modalidades, um anticorpo anti-SIRPα fornecido neste documento se liga à SIRPα e reduz a ligação de CD47 à SIRPα.

[00348] Em um aspecto, os anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento têm imunogenicidade reduzida quando comparados a um anticorpo de referência. Em uma modalidade, os anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento têm imunogenicidade reduzida quando comparados a um anticorpo de referência, em que o anticorpo de referência é um controle de isotipo IgG1, IgG2, IgG3 ou IgG4. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento têm imunogenicidade reduzida quando comparados a um anticorpo de referência, em que o anticorpo de referência é um anticorpo anti-SIRPα de referência. Em certas modalidades, os anticorpos anti-SIRPα ou seus fragmentos fornecidos neste documento têm uma imunogenicidade reduzida, quando comparado com um anticorpo de referência anti-SIRPα, em que o anticorpo de referência anti-SIRPα compreende uma cadeia leve que compreende ou que consiste em uma sequência de aminoácidos de

QIVLTQSPAIMSASPGEKVTLTCSASSSVSSSYLYWYQQKPGSSPKLWIYSTSNLASGVPAR FSGSGSGTSYSLTISSMEAEDAASYFCHQWSSYPRTFGAGTKLELKRTVAAPSVFIFPPSDE

QLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSK ADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO:224) e uma cadeia pesada que compreende ou que consiste em uma sequência de aminoácidos de

EVQLQQSGAELVKPGASVKLSCTASGFNIKDYYIHWVQQRTEQGLEWIGRIDPEDGETKY APKFQDKATITADTSSNTAYLHLSSLTSEDTAVYYCARWGAYWGQGTLVTVSAASTKGPS VFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSV VTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPK PKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSV LTVLHQDWLNGKEYKCAVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSL

TCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFS CSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO:225).

[00349] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento têm imunogenicidade reduzida quando comparados a um anticorpo de referência, tal como um controle de isotipo IgG1 ou um anticorpo anti-SIRPα de referência, em que a redução na imunogenicidade pode ser de cerca de 10%, cerca de 20%, cerca de 30%, cerca de 40%, cerca de 50%, cerca de 60%, cerca de 70%, cerca de 80%, cerca de 90%, cerca de 95%, cerca de 99% ou cerca de 99,99%. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento têm imunogenicidade reduzida quando comparados a um anticorpo de referência, tal como um controle de isotipo IgG1 ou um anticorpo anti-SIRPα de referência, em que a redução na imunogenicidade pode ser de pelo menos 10%, pelo menos 20%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 99%, ou pelo menos 99,99%. Além disso, a redução na imunogenicidade pode variar de cerca de 50% a cerca de 90%, cerca de 60% a cerca de 90%, cerca de 70% a cerca de 90%, cerca de 80% a cerca de 90%, cerca de 50% a cerca de 99%, cerca de 60% a cerca de 99%, cerca de 70% a cerca de 99%, cerca de 80% a cerca de 99% ou cerca de 90% a cerca de 99%.

[00350] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento têm imunogenicidade reduzida quando comparados a um anticorpo de referência, tal como um controle de isotipo IgG1 ou um anticorpo anti-SIRPα de referência, em que a imunogenicidade dos anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos dos mesmos não é mais do que 20%, não mais do que 19%, não mais do que 18%, não mais do que 17%, não mais do que 16%, não mais do que 15%, não mais do que 14%, não mais do que 13%, não mais do que 12%, não mais do que 11%, não mais do que 10%, não mais do que 9,5%, não mais do que 9%, não mais do que 8,5%, não mais do que 8%, não mais do que 7,5%, não mais do que 7%, não mais do que 6,5%, não mais do que 6%, não mais do que 5,5%, não mais do que 5%, não mais do que 4,5%, não mais do que 4%, não mais do que 3,5%, não mais do que 3%, não mais do que 2,5%, não mais do que 2%, não mais do que 1,5%, não mais do que 1%, não mais do que 0,9%, não mais do que 0,8%, não mais do que 0,7%, não mais do que 0,6%, não mais do que 0,5%, não mais do que 0,4%, não mais do que 0,3%, não mais do que 0,2%, não mais do que 0,1% ou menos, conforme determinado na Escala de Imunogenicidade de Anticorpo EpiMatrix conforme descrito adicionalmente no Exemplo 7. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento têm o limite superior da imunogenicidade descrita na frase anterior e um limite inferior de 0,01 ou 0,001%, conforme determinado na Escala de Imunogenicidade de Anticorpo EpiMatrix conforme descrito no Exemplo 7.

[00351] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento têm imunogenicidade reduzida quando comparados a um anticorpo de referência, tal como um controle de isotipo IgG1 ou um anticorpo anti-SIRPα de referência, em que a imunogenicidade dos anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos dos mesmos é cerca de 1%, cerca de 0,9%, cerca de 0,8%, cerca de 0,7%, cerca de 0,6%, cerca de 0,5%, cerca de 0,4%, cerca de 0,3%, cerca de 0,2%, cerca de 0,15%, cerca de 0,1% ou inferior, conforme determinado em EpiMatrix Antibody Immunogenicity Scale como descrito no Exemplo 7.

[00352] Em algumas modalidades, os valores KD e EC50 são avaliados por métodos descritos neste documento. Em outras modalidades, os valores de KD e EC50 são avaliados por outros métodos conhecidos por aqueles versados na técnica (por exemplo, Ressonância de Plasmon de Superfície implementada em BiaCore®, ensaio de ligação baseado em separação de células ativadas por fluorescência (FACS) e/ou ensaios ELISA). Em uma modalidade específica, os valores de KD e EC50 são avaliados pela Surface Plasmon Resonance implementada em ensaios BiaCore®, ensaios de ligação baseados em classificação de células ativadas por fluorescência (FACS) e/ou ensaios ELISA.

[00353] Em um aspecto, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno fornecido neste documento se liga especificamente à SIRPα humana (por exemplo, qualquer um ou qualquer combinação de dois, três, quatro, cinco ou seis de SIRPα selecionados do grupo que consiste em SIRPα v1, v2, v3, v4, v5 e v6 haplótipos) e aumenta a fagocitose de células cancerosas por macrófagos cocultivados em comparação com um controle de nenhum tratamento ou um anticorpo de controle de isotipo, em que as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem um, dois, três, quatro, cinco, seis, sete, oito, nove, dez ou mais ou todo o polimorfismo SIRPα conhecido por um versado na técnica, por exemplo, um, dois, três, quatro, cinco, seis, sete, oito, nove, dez ou mais, ou todo o polimorfismo SIRPα descrito em Takenaka K, et al., Nat Immunol. Dezembro de 2007; 8 (12): 1313-23, que é incorporado neste documento em sua totalidade por referência.

[00354] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno fornecido neste documento se liga especificamente à SIRPα humana (por exemplo, qualquer um ou qualquer combinação de dois, três, quatro, cinco ou seis de SIRPα selecionados do grupo que consiste em SIRPα v1, v2, v3, v4, v5 e v6 haplótipos) e aumenta a fagocitose de células cancerosas por macrófagos cocultivados em comparação com um controle de nenhum tratamento ou um anticorpo de controle de isotipo, em que as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem qualquer um ou qualquer combinação de dois, três, quatro, cinco ou seis de SIRPα selecionados do grupo que consiste em haplótipos SIRPα v1, v2, v3, v4, v5 e v6 (SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO: 149 no domínio IgV, SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO: 150 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO: 151 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO: 152 no domínio IgV, SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO: 153 no domínio IgV e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO: 154 no domínio IgV).

[00355] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno fornecido neste documento se liga especificamente à SIRPα humana (por exemplo, qualquer um ou qualquer combinação de dois, três, quatro, cinco ou seis SIRPα selecionados do grupo que consiste em SIRPα v1, v2, v3, v4, v5 e v6 haplótipos) e aumenta a fagocitose de células cancerosas por macrófagos cocultivados em comparação com um controle de nenhum tratamento ou um anticorpo de controle de isotipo, em que as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem qualquer um polimorfismo SIRPα selecionado do grupo que consiste em SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO: 149 no domínio IgV, SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO: 150 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO: 151 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO: 152 no domínio IgV, SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO: 153 no domínio IgV, e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO: 154 no domínio IgV.

[00356] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno fornecido neste documento se liga especificamente à SIRPα humana (por exemplo, qualquer um ou qualquer combinação de dois, três, quatro, cinco ou seis de SIRPα selecionados do grupo que consiste em SIRPα v1,

v2, v3, v4, v5 e v6 haplótipos) e aumenta a fagocitose de células cancerosas por macrófagos cocultivados em comparação com um controle de nenhum tratamento ou um anticorpo de controle de isotipo, em que as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem dois ou mais polimorfismos SIRPα selecionados do grupo que consiste em SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO: 149 no domínio IgV, SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO: 150 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO: 151 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO: 152 no domínio IgV, SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO: 153 no domínio IgV, e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO: 154 no domínio IgV.

[00357] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno fornecido neste documento se liga especificamente à SIRPα humana (por exemplo, qualquer um ou qualquer combinação de dois, três, quatro, cinco ou seis SIRPα selecionados do grupo que consiste em SIRPα v1, v2, v3, v4, v5 e v6 haplótipos) e aumenta a fagocitose de células cancerosas por macrófagos cocultivados em comparação com um controle de nenhum tratamento ou um anticorpo de controle de isotipo, em que as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem três ou mais polimorfismos SIRPα selecionado do grupo que consiste em SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO: 149 no domínio IgV, SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO: 150 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO: 151 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO: 152 no domínio IgV, SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO: 153 no domínio IgV, e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO: 154 no domínio IgV.

[00358] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno fornecido neste documento se liga especificamente à SIRPα humana (por exemplo, qualquer um ou qualquer combinação de dois, três, quatro, cinco ou seis de SIRPα selecionados do grupo que consiste em SIRPα v1,

v2, v3, v4, v5 e v6 haplótipos) e aumenta a fagocitose de células cancerosas por macrófagos cocultivados em comparação com um controle de nenhum tratamento ou um anticorpo de controle de isotipo, em que as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem quatro ou mais polimorfismos SIRPα selecionados do grupo que consiste em SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO: 149 no domínio IgV, SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO: 150 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO: 151 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO: 152 no domínio IgV, SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO: 153 no domínio IgV, e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO: 154 no domínio IgV.

[00359] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno fornecido neste documento se liga especificamente à SIRPα humana (por exemplo, qualquer um ou qualquer combinação de dois, três, quatro, cinco ou seis de SIRPα selecionados do grupo que consiste em SIRPα v1, v2, v3, v4, v5 e v6 haplótipos) e aumenta a fagocitose de células cancerosas por macrófagos cocultivados em comparação com um controle de nenhum tratamento ou um anticorpo de controle de isotipo, em que as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem cinco ou mais polimorfismos SIRPα selecionados do grupo que consiste em SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO: 149 no domínio IgV, SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO: 150 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO: 151 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO: 152 no domínio IgV, SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO: 153 no domínio IgV, e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO: 154 no domínio IgV.

[00360] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno fornecido neste documento se liga especificamente à SIRPα humana (por exemplo, qualquer um ou qualquer combinação de dois, três,

quatro, cinco ou seis de SIRPα selecionados do grupo que consiste em SIRPα v1, v2, v3, v4, v5 e v6 haplótipos) e aumenta a fagocitose de células cancerosas por macrófagos cocultivados em comparação com um controle de nenhum tratamento ou um anticorpo de controle de isotipo, em que as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem seis ou mais polimorfismos SIRPα incluindo SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO: 149 no domínio IgV, SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO: 150 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO: 151 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO: 152 no domínio IgV, SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO: 153 no domínio IgV e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO: 154 no domínio IgV.

[00361] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno fornecido neste documento se liga especificamente à SIRPα humana (por exemplo, qualquer um ou qualquer combinação de dois, três, quatro, cinco ou seis SIRPα selecionados do grupo que consiste em SIRPα v1, v2, v3, v4, v5 e haplótipos v6) e aumenta a fagocitose de células cancerosas por macrófagos cocultivados, em que as células cancerosas e/ou macrófagos incluem SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO: 149 no domínio IgV. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno fornecido neste documento se liga especificamente à SIRPα humana (por exemplo, qualquer um ou qualquer combinação de dois, três, quatro, cinco ou seis de SIRPα selecionados do grupo que consiste em SIRPα v1, v2, v3, v4, v5 e v6 haplótipos) e aumenta a fagocitose de células cancerosas por macrófagos cocultivados, em que as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO: 150 no domínio IgV. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno fornecido neste documento se liga especificamente à SIRPα humana (por exemplo, qualquer um ou qualquer combinação de dois, três, quatro, cinco ou seis SIRPα selecionados do grupo que consiste em SIRPα v1, v2, v3, v4, v5 e haplótipos v6) e aumenta a fagocitose de células cancerosas por macrófagos cocultivados, em que as células cancerosas e/ou macrófagos incluem SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO: 151 no domínio IgV. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno fornecido neste documento se liga especificamente à SIRPα humana (por exemplo, qualquer um ou qualquer combinação de dois, três, quatro, cinco ou seis de SIRPα selecionados do grupo que consiste em SIRPα v1, v2, v3, v4, v5 e v6 haplótipos) e aumenta a fagocitose de células cancerosas por macrófagos cocultivados, em que as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO: 152 no domínio IgV. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno fornecido neste documento se liga especificamente à SIRPα humana (por exemplo, qualquer um ou qualquer combinação de dois, três, quatro, cinco ou seis SIRPα selecionados do grupo que consiste em SIRPα v1, v2, v3, v4, v5 e haplótipos v6) e aumenta a fagocitose de células cancerosas por macrófagos cocultivados, em que as células cancerosas e/ou macrófagos incluem SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO: 153 no domínio IgV. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno fornecido neste documento se liga especificamente à SIRPα humana (por exemplo, qualquer um ou qualquer combinação de dois, três, quatro, cinco ou seis de SIRPα selecionados do grupo que consiste em SIRPα v1, v2, v3, v4, v5 e v6 haplótipos) e aumenta a fagocitose de células cancerosas por macrófagos cocultivados, em que as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO: 154 no domínio IgV.

[00362] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno fornecido neste documento se liga especificamente à SIRPα humana (por exemplo, qualquer um ou qualquer combinação de dois, três,

quatro, cinco ou seis de SIRPα selecionados do grupo que consiste em SIRPα v1, v2, v3, v4, v5 e v6 haplótipos) e aumenta a fagocitose de células cancerosas por macrófagos cocultivados, em que as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO: 149 no domínio IgV e SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO: 150 no domínio IgV.

Em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno fornecido neste documento se liga especificamente à SIRPα humana (por exemplo, qualquer um ou qualquer combinação de dois, três, quatro, cinco ou seis SIRPα selecionados do grupo que consiste em SIRPα v1, v2, v3, v4, v5 e haplótipos v6) e aumenta a fagocitose de células cancerosas por macrófagos cocultivados, em que as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO: 149 no domínio IgV e SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO: 151 no domínio IgV.

Em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno fornecido neste documento se liga especificamente à SIRPα humana (por exemplo, qualquer um ou qualquer combinação de dois, três, quatro, cinco ou seis de SIRPα selecionados do grupo que consiste em SIRPα v1, v2, v3, v4, v5 e v6 haplótipos) e aumenta a fagocitose de células cancerosas por macrófagos cocultivados, em que as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO: 149 no domínio IgV e SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO: 152 no domínio IgV.

Em algumas modalidades, um anticorpo anti- SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno fornecido neste documento se liga especificamente à SIRPα humana (por exemplo, qualquer um ou qualquer combinação de dois, três, quatro, cinco ou seis SIRPα selecionados do grupo que consiste em SIRPα v1, v2, v3, v4, v5 e haplótipos v6) e aumenta a fagocitose de células cancerosas por macrófagos cocultivados, em que as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO: 149 no domínio IgV e SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO: 153 no domínio IgV.

Em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno fornecido neste documento se liga especificamente à SIRPα humana (por exemplo, qualquer um ou qualquer combinação de dois, três, quatro, cinco ou seis de SIRPα selecionados do grupo que consiste em SIRPα v1, v2, v3, v4, v5 e v6 haplótipos) e aumenta a fagocitose de células cancerosas por macrófagos cocultivados, em que as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO: 149 no domínio IgV e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO: 154 no domínio IgV.

[00363] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno fornecido neste documento se liga especificamente à SIRPα humana (por exemplo, qualquer um ou qualquer combinação de dois, três, quatro, cinco ou seis SIRPα selecionados do grupo que consiste em SIRPα v1, v2, v3, v4, v5 e haplótipos v6) e aumenta a fagocitose de células cancerosas por macrófagos cocultivados, em que as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO: 150 no domínio IgV e SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO: 151 no domínio IgV. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno fornecido neste documento se liga especificamente à SIRPα humana (por exemplo, qualquer um ou qualquer combinação de dois, três, quatro, cinco ou seis de SIRPα selecionados do grupo que consiste em SIRPα v1, v2, v3, v4, v5 e v6 haplótipos) e aumenta a fagocitose de células cancerosas por macrófagos cocultivados, em que as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO: 150 no domínio IgV e SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO: 152 no domínio IgV. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno fornecido neste documento se liga especificamente à SIRPα humana (por exemplo, qualquer um ou qualquer combinação de dois, três, quatro, cinco ou seis SIRPα selecionados do grupo que consiste em SIRPα v1, v2,

v3, v4, v5 e haplótipos v6) e aumenta a fagocitose de células cancerosas por macrófagos cocultivados, em que as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO: 150 no domínio IgV e SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO: 153 no domínio IgV. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno fornecido neste documento se liga especificamente à SIRPα humana (por exemplo, qualquer um ou qualquer combinação de dois, três, quatro, cinco ou seis de SIRPα selecionados do grupo que consiste em SIRPα v1, v2, v3, v4, v5 e v6 haplótipos) e aumenta a fagocitose de células cancerosas por macrófagos cocultivados, em que as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO: 150 no domínio IgV e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO: 154 no domínio IgV.

[00364] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno fornecido neste documento se liga especificamente à SIRPα humana (por exemplo, qualquer um ou qualquer combinação de dois, três, quatro, cinco ou seis de SIRPα selecionados do grupo que consiste em SIRPα v1, v2, v3, v4, v5 e v6 haplótipos) e aumenta a fagocitose de células cancerosas por macrófagos cocultivados, em que as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO: 151 no domínio IgV e SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO: 152 no domínio IgV. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno fornecido neste documento se liga especificamente à SIRPα humana (por exemplo, qualquer um ou qualquer combinação de dois, três, quatro, cinco ou seis SIRPα selecionados do grupo que consiste em SIRPα v1, v2, v3, v4, v5 e haplótipos v6) e aumenta a fagocitose de células cancerosas por macrófagos cocultivados, em que as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO: 151 no domínio IgV e SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO: 153 no domínio IgV.

Em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno fornecido neste documento se liga especificamente à SIRPα humana (por exemplo, qualquer um ou qualquer combinação de dois, três, quatro, cinco ou seis de SIRPα selecionados do grupo que consiste em SIRPα v1, v2, v3, v4, v5 e v6 haplótipos) e aumenta a fagocitose de células cancerosas por macrófagos cocultivados, em que as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO: 151 no domínio IgV e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO: 154 no domínio IgV.

[00365] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno fornecido neste documento se liga especificamente à SIRPα humana (por exemplo, qualquer um ou qualquer combinação de dois, três, quatro, cinco ou seis SIRPα selecionados do grupo que consiste em SIRPα v1, v2, v3, v4, v5 e haplótipos v6) e aumenta a fagocitose de células cancerosas por macrófagos cocultivados, em que as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO: 152 no domínio IgV e SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO: 153 no domínio IgV. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno fornecido neste documento se liga especificamente à SIRPα humana (por exemplo, qualquer um ou qualquer combinação de dois, três, quatro, cinco ou seis de SIRPα selecionados do grupo que consiste em SIRPα v1, v2, v3, v4, v5 e v6 haplótipos) e aumenta a fagocitose de células cancerosas por macrófagos cocultivados, em que as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO: 152 no domínio IgV e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO: 154 no domínio IgV. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno fornecido neste documento se liga especificamente à SIRPα humana (por exemplo, qualquer um ou qualquer combinação de dois, três, quatro, cinco ou seis de SIRPα selecionados do grupo que consiste em SIRPα v1,

v2, v3, v4, v5 e v6 haplótipos) e aumenta a fagocitose de células cancerosas por macrófagos cocultivados, em que as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO: 153 no domínio IgV e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO: 154 no domínio IgV.

[00366] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento se ligam especificamente à SIRPα humana (por exemplo, qualquer um ou qualquer combinação de dois, três, quatro, cinco ou seis de SIRPα selecionados do grupo que consiste em SIRPα v1, v2, v3, v4, v5 e v6 haplótipos) e aumenta a fagocitose de células cancerosas por macrófagos cocultivados, em que as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO: 149 no domínio IgV, SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO: 150 no domínio IgV, e SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO: 151 no domínio IgV. Em algumas modalidades, os anticorpos anti- SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento se ligam especificamente à SIRPα humana (por exemplo, qualquer um ou qualquer combinação de dois, três, quatro, cinco ou seis de SIRPα selecionados do grupo que consiste em SIRPα v1, v2, v3, v4, v5 e v6 haplótipos) e aumenta a fagocitose de células cancerosas por macrófagos cocultivados, em que as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO: 149 no domínio IgV, SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO: 150 no domínio IgV, e SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO: 152 no domínio IgV. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento se ligam especificamente à SIRPα humana (por exemplo, qualquer um ou qualquer combinação de dois, três, quatro, cinco ou seis de SIRPα selecionados do grupo que consiste em SIRPα v1, v2, v3, v4, v5 e v6 haplótipos) e aumenta a fagocitose de células cancerosas por macrófagos cocultivados, em que as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO: 149 no domínio IgV, SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO: 150 no domínio IgV, e SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO: 153 no domínio IgV. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento se ligam especificamente à SIRPα humana (por exemplo, qualquer um ou qualquer combinação de dois, três, quatro, cinco ou seis de SIRPα selecionados do grupo que consiste em SIRPα v1, v2, v3, v4, v5 e v6 haplótipos) e aumenta a fagocitose de células cancerosas por macrófagos cocultivados, em que as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO: 149 no domínio IgV, SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO: 150 no domínio IgV, e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO: 154 no domínio IgV.

[00367] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento se ligam especificamente à SIRPα humana (por exemplo, qualquer um ou qualquer combinação de dois, três, quatro, cinco ou seis de SIRPα selecionados do grupo que consiste em SIRPα v1, v2, v3, v4, v5 e v6 haplótipos) e aumenta a fagocitose de células cancerosas por macrófagos cocultivados, em que as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO: 149 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO: 151 no domínio IgV, e SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO: 152 no domínio IgV. Em algumas modalidades, os anticorpos anti- SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento se ligam especificamente à SIRPα humana (por exemplo, qualquer um ou qualquer combinação de dois, três, quatro, cinco ou seis de SIRPα selecionados do grupo que consiste em SIRPα v1, v2, v3, v4, v5 e v6 haplótipos) e aumenta a fagocitose de células cancerosas por macrófagos cocultivados, em que as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO: 149 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO: 151 no domínio IgV,

e SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO: 153 no domínio IgV. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento se ligam especificamente à SIRPα humana (por exemplo, qualquer um ou qualquer combinação de dois, três, quatro, cinco ou seis de SIRPα selecionados do grupo que consiste em SIRPα v1, v2, v3, v4, v5 e v6 haplótipos) e aumenta a fagocitose de células cancerosas por macrófagos cocultivados, em que as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO: 149 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO: 151 no domínio IgV, e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO: 154 no domínio IgV.

[00368] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento se ligam especificamente à SIRPα humana (por exemplo, qualquer um ou qualquer combinação de dois, três, quatro, cinco ou seis de SIRPα selecionados do grupo que consiste em SIRPα v1, v2, v3, v4, v5 e v6 haplótipos) e aumenta a fagocitose de células cancerosas por macrófagos cocultivados, em que as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO: 149 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO: 152 no domínio IgV, e SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO: 153 no domínio IgV. Em algumas modalidades, os anticorpos anti- SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento se ligam especificamente à SIRPα humana (por exemplo, qualquer um ou qualquer combinação de dois, três, quatro, cinco ou seis de SIRPα selecionados do grupo que consiste em SIRPα v1, v2, v3, v4, v5 e v6 haplótipos) e aumenta a fagocitose de células cancerosas por macrófagos cocultivados, em que as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO: 149 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO: 152 no domínio IgV, e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO: 154 no domínio IgV.

[00369] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento se ligam especificamente à SIRPα humana (por exemplo, qualquer um ou qualquer combinação de dois, três, quatro, cinco ou seis de SIRPα selecionados do grupo que consiste em SIRPα v1, v2, v3, v4, v5 e v6 haplótipos) e aumenta a fagocitose de células cancerosas por macrófagos cocultivados, em que as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO: 149 no domínio IgV, SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO: 153 no domínio IgV, e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO: 154 no domínio IgV.

[00370] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento se ligam especificamente à SIRPα humana (por exemplo, qualquer um ou qualquer combinação de dois, três, quatro, cinco ou seis de SIRPα selecionados do grupo que consiste em SIRPα v1, v2, v3, v4, v5 e v6 haplótipos) e aumenta a fagocitose de células cancerosas por macrófagos cocultivados, em que as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO: 150 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO: 151 no domínio IgV, e SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO: 152 no domínio IgV. Em algumas modalidades, os anticorpos anti- SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento se ligam especificamente à SIRPα humana (por exemplo, qualquer um ou qualquer combinação de dois, três, quatro, cinco ou seis de SIRPα selecionados do grupo que consiste em SIRPα v1, v2, v3, v4, v5 e v6 haplótipos) e aumenta a fagocitose de células cancerosas por macrófagos cocultivados, em que as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO: 150 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO: 151 no domínio IgV, e SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO: 153 no domínio IgV. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento se ligam especificamente à SIRPα humana (por exemplo, qualquer um ou qualquer combinação de dois, três, quatro, cinco ou seis de SIRPα selecionados do grupo que consiste em SIRPα v1, v2, v3, v4, v5 e v6 haplótipos) e aumenta a fagocitose de células cancerosas por macrófagos cocultivados, em que as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO: 150 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO: 151 no domínio IgV, e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO: 154 no domínio IgV.

[00371] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento se ligam especificamente à SIRPα humana (por exemplo, qualquer um ou qualquer combinação de dois, três, quatro, cinco ou seis de SIRPα selecionados do grupo que consiste em SIRPα v1, v2, v3, v4, v5 e v6 haplótipos) e aumenta a fagocitose de células cancerosas por macrófagos cocultivados, em que as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO: 151 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO: 152 no domínio IgV, e SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO: 153 no domínio IgV. Em algumas modalidades, os anticorpos anti- SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento se ligam especificamente à SIRPα humana (por exemplo, qualquer um ou qualquer combinação de dois, três, quatro, cinco ou seis de SIRPα selecionados do grupo que consiste em SIRPα v1, v2, v3, v4, v5 e v6 haplótipos) e aumenta a fagocitose de células cancerosas por macrófagos cocultivados, em que as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO: 151 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO: 152 no domínio IgV, e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO: 154 no domínio IgV. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento se ligam especificamente à SIRPα humana (por exemplo,

qualquer um ou qualquer combinação de dois, três, quatro, cinco ou seis de SIRPα selecionados do grupo que consiste em SIRPα v1, v2, v3, v4, v5 e v6 haplótipos) e aumenta a fagocitose de células cancerosas por macrófagos cocultivados, em que as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO: 152 no domínio IgV, SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO: 153 no domínio IgV, e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO: 154 no domínio IgV.

[00372] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento se ligam especificamente à SIRPα humana (por exemplo, qualquer um ou qualquer combinação de dois, três, quatro, cinco ou seis de SIRPα selecionados do grupo que consiste em SIRPα v1, v2, v3, v4, v5 e v6 haplótipos) e aumenta a fagocitose de células cancerosas por macrófagos cocultivados, em que as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO: 149 no domínio IgV, SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO: 150 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO: 151 no domínio IgV, e SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO: 152 no domínio IgV. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento se ligam especificamente à SIRPα humana (por exemplo, qualquer um ou qualquer combinação de dois, três, quatro, cinco ou seis de SIRPα selecionados do grupo que consiste em SIRPα v1, v2, v3, v4, v5 e v6 haplótipos) e aumenta a fagocitose de células cancerosas por macrófagos cocultivados, em que as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO: 149 no domínio IgV, SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO: 150 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO: 151 no domínio IgV, e SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO: 153 no domínio IgV. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento se ligam especificamente à SIRPα humana (por exemplo, qualquer um ou qualquer combinação de dois, três, quatro, cinco ou seis de SIRPα selecionados do grupo que consiste em SIRPα v1, v2, v3, v4, v5 e v6 haplótipos) e aumenta a fagocitose de células cancerosas por macrófagos cocultivados, em que as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO: 149 no domínio IgV, SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO: 150 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO: 151 no domínio IgV, e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO: 154 no domínio IgV.

[00373] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento se ligam especificamente à SIRPα humana (por exemplo, qualquer um ou qualquer combinação de dois, três, quatro, cinco ou seis de SIRPα selecionados do grupo que consiste em SIRPα v1, v2, v3, v4, v5 e v6 haplótipos) e aumenta a fagocitose de células cancerosas por macrófagos cocultivados, em que as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO: 149 no domínio IgV, SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO: 150 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO: 152 no domínio IgV, e SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO: 153 no domínio IgV. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento se ligam especificamente à SIRPα humana (por exemplo, qualquer um ou qualquer combinação de dois, três, quatro, cinco ou seis de SIRPα selecionados do grupo que consiste em SIRPα v1, v2, v3, v4, v5 e v6 haplótipos) e aumenta a fagocitose de células cancerosas por macrófagos cocultivados, em que as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO: 149 no domínio IgV, SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO: 150 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO: 152 no domínio IgV, e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO: 154 no domínio IgV. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento se ligam especificamente à SIRPα humana (por exemplo, qualquer um ou qualquer combinação de dois, três, quatro, cinco ou seis de SIRPα selecionados do grupo que consiste em SIRPα v1, v2, v3, v4, v5 e v6 haplótipos) e aumenta a fagocitose de células cancerosas por macrófagos cocultivados, em que as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO: 149 no domínio IgV, SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO: 150 no domínio IgV, SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO: 153 no domínio IgV, e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO: 154 no domínio IgV.

[00374] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento se ligam especificamente à SIRPα humana (por exemplo, qualquer um ou qualquer combinação de dois, três, quatro, cinco ou seis de SIRPα selecionados do grupo que consiste em SIRPα v1, v2, v3, v4, v5 e v6 haplótipos) e aumenta a fagocitose de células cancerosas por macrófagos cocultivados, em que as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO: 149 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO: 151 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO: 152 no domínio IgV, e SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO: 153 no domínio IgV. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento se ligam especificamente à SIRPα humana (por exemplo, qualquer um ou qualquer combinação de dois, três, quatro, cinco ou seis de SIRPα selecionados do grupo que consiste em SIRPα v1, v2, v3, v4, v5 e v6 haplótipos) e aumenta a fagocitose de células cancerosas por macrófagos cocultivados, em que as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO: 149 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO: 151 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO: 152 no domínio IgV, e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO: 154 no domínio IgV. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento se ligam especificamente à SIRPα humana (por exemplo, qualquer um ou qualquer combinação de dois, três, quatro, cinco ou seis de SIRPα selecionados do grupo que consiste em SIRPα v1, v2, v3, v4, v5 e v6 haplótipos) e aumenta a fagocitose de células cancerosas por macrófagos cocultivados, em que as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO: 149 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO: 151 no domínio IgV, SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO: 153 no domínio IgV, e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO: 154 no domínio IgV.

[00375] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento se ligam especificamente à SIRPα humana (por exemplo, qualquer um ou qualquer combinação de dois, três, quatro, cinco ou seis de SIRPα selecionados do grupo que consiste em SIRPα v1, v2, v3, v4, v5 e v6 haplótipos) e aumenta a fagocitose de células cancerosas por macrófagos cocultivados, em que as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO: 149 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO: 152 no domínio IgV, SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO: 153 no domínio IgV, e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO: 154 no domínio IgV.

[00376] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento se ligam especificamente à SIRPα humana (por exemplo, qualquer um ou qualquer combinação de dois, três, quatro, cinco ou seis de SIRPα selecionados do grupo que consiste em SIRPα v1, v2, v3, v4, v5 e v6 haplótipos) e aumenta a fagocitose de células cancerosas por macrófagos cocultivados, em que as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO: 150 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO: 151 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO: 152 no domínio IgV, e SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO: 153 no domínio IgV. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento se ligam especificamente à SIRPα humana (por exemplo, qualquer um ou qualquer combinação de dois, três, quatro, cinco ou seis de SIRPα selecionados do grupo que consiste em SIRPα v1, v2, v3, v4, v5 e v6 haplótipos) e aumenta a fagocitose de células cancerosas por macrófagos cocultivados, em que as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO: 150 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO: 151 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO: 152 no domínio IgV, e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO: 154 no domínio IgV. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento se ligam especificamente à SIRPα humana (por exemplo, qualquer um ou qualquer combinação de dois, três, quatro, cinco ou seis de SIRPα selecionados do grupo que consiste em SIRPα v1, v2, v3, v4, v5 e v6 haplótipos) e aumenta a fagocitose de células cancerosas por macrófagos cocultivados, em que as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO: 150 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO: 151 no domínio IgV, SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO: 153 no domínio IgV, e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO: 154 no domínio IgV.

[00377] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento se ligam especificamente à SIRPα humana (por exemplo, qualquer um ou qualquer combinação de dois, três, quatro, cinco ou seis de SIRPα selecionados do grupo que consiste em SIRPα v1, v2, v3, v4, v5 e v6 haplótipos) e aumenta a fagocitose de células cancerosas por macrófagos cocultivados, em que as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO: 150 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO: 152 no domínio IgV, SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO: 153 no domínio IgV, e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO: 154 no domínio IgV. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento se ligam especificamente à SIRPα humana (por exemplo, qualquer um ou qualquer combinação de dois, três, quatro, cinco ou seis de SIRPα selecionados do grupo que consiste em SIRPα v1, v2, v3, v4, v5 e v6 haplótipos) e aumenta a fagocitose de células cancerosas por macrófagos cocultivados, em que as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO: 151 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO: 152 no domínio IgV, SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO: 153 no domínio IgV, e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO: 154 no domínio IgV.

[00378] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento se ligam especificamente à SIRPα humana (por exemplo, qualquer um ou qualquer combinação de dois, três, quatro, cinco ou seis de SIRPα selecionados do grupo que consiste em SIRPα v1, v2, v3, v4, v5 e v6 haplótipos) e aumenta a fagocitose de células cancerosas por macrófagos cocultivados, em que as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO: 149 no domínio IgV, SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO: 150 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO: 151 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO: 152 no domínio IgV e SIRPα v5 compreendendo a SEQ ID NO: 153 no domínio IgV. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento se ligam especificamente à SIRPα humana (por exemplo, qualquer um ou qualquer combinação de dois, três, quatro, cinco ou seis de SIRPα selecionados do grupo que consiste em SIRPα v1, v2, v3, v4, v5 e v6 haplótipos) e aumenta a fagocitose de células cancerosas por macrófagos cocultivados, em que as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO: 149 no domínio IgV, SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO: 150 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO: 151 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO: 152 no domínio IgV e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO: 154 no domínio IgV.

Em algumas modalidades, os anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento se ligam especificamente à SIRPα humana (por exemplo, qualquer um ou qualquer combinação de dois, três, quatro, cinco ou seis de SIRPα selecionados do grupo que consiste em SIRPα v1, v2, v3, v4, v5 e v6 haplótipos) e aumenta a fagocitose de células cancerosas por macrófagos cocultivados, em que as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO: 149 no domínio IgV, SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO: 150 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO: 151 no domínio IgV, SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO: 153 no domínio IgV e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO: 154 no domínio IgV.

Em algumas modalidades, os anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento se ligam especificamente à SIRPα humana (por exemplo, qualquer um ou qualquer combinação de dois, três, quatro, cinco ou seis de SIRPα selecionados do grupo que consiste em SIRPα v1, v2, v3, v4, v5 e v6 haplótipos) e aumenta a fagocitose de células cancerosas por macrófagos cocultivados, em que as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO: 149 no domínio IgV, SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO: 150 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO: 152 no domínio IgV, SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO: 153 no domínio IgV e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO: 154 no domínio IgV.

Em algumas modalidades, os anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento se ligam especificamente à SIRPα humana (por exemplo, qualquer um ou qualquer combinação de dois, três, quatro, cinco ou seis de SIRPα selecionados do grupo que consiste em SIRPα v1, v2, v3, v4, v5 e v6 haplótipos) e aumenta a fagocitose de células cancerosas por macrófagos cocultivados, em que as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO: 149 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO: 151 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO: 152 no domínio IgV, SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO: 153 no domínio IgV e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO: 154 no domínio IgV. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento se ligam especificamente à SIRPα humana (por exemplo, qualquer um ou qualquer combinação de dois, três, quatro, cinco ou seis de SIRPα selecionados do grupo que consiste em SIRPα v1, v2, v3, v4, v5 e v6 haplótipos) e aumenta a fagocitose de células cancerosas por macrófagos cocultivados, em que as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO: 150 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO: 151 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO: 152 no domínio IgV, SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO: 153 no domínio IgV e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO: 154 no domínio IgV.

[00379] Como é conhecido por um versado na técnica, uma avaliação clínica de agentes biológicos direcionados aos antígenos celulares é a ocupação do receptor (RO), para demonstrar que a droga está se ligando ao alvo apropriado. RO pode ser avaliada por métodos conhecidos por um versado na técnica, por exemplo, como descrito em Liang M. et al., Cytometry B Clin Cytom. 2016 Mar; 90(2): 117–127, que é incorporado neste documento em sua totalidade por referência. A divulgação fornece ainda um ensaio de ligação ao receptor competitivo. Este ensaio utiliza um anticorpo anti-SIRPα não competitivo que pode ser usado para identificar moléculas SIRPα ligadas e não ligadas por SIRPAB-11-K322A nas células que expressam SIRPα. Em resumo, o sangue total foi incubado com anticorpos marcados com fluorescência para identificar subconjuntos de leucócitos-chave, bem como dois anticorpos específicos para SIRPα, um que se liga na presença de SIRPAB-11-K322A (não competitivo) marcado com alexa fluor 488, e um que apenas se liga na ausência de SIRPAB-11-K322A (competitivo) marcado com alexa fluor 647. Os níveis de pigmentação dos dois anticorpos SIRPα são calculados para subgrupos de leucócitos e, a partir disso, os níveis de ocupância do receptor por SIRPAB-11- K322A podem ser calculados usando esta equação: % SIRPα RO = 100%* ((1- (competitivo AF647 real/pré-dose de AF647 competitivo) ÷ (AF488 não competitivo/pré-dose de AF488 não competitivo)).

[00380] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno fornecido neste documento atinge cerca de 100% de ocupação do receptor SIRPα em cerca de 6, 12, 24, 36, 48, 60 ou 72 horas após a administração a um paciente. Em algumas modalidades, um anticorpo anti- SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno deste fornecido neste documento atinge cerca de ou pelo menos 95% de ocupação do receptor SIRPα em cerca de 6, 12, 24, 36, 48, 60 ou 72 horas após a administração a um paciente. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento atinge cerca de ou pelo menos 90% de ocupação do receptor SIRPα em cerca de 6, 12, 24, 36, 48, 60 ou 72 horas após a administração a um paciente. Em algumas modalidades, um anticorpo anti- SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento atinge cerca de ou pelo menos 85% de ocupação do receptor SIRPα em cerca de 6, 12, 24, 36, 48, 60 ou 72 horas após a administração a um paciente. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento atinge cerca de ou pelo menos 80% de ocupação do receptor SIRPα em cerca de 6, 12, 24, 36, 48, 60 ou 72 horas após a administração a um paciente.

Em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento atinge cerca de ou pelo menos 75% de ocupação do receptor SIRPα em cerca de 6, 12, 24, 36, 48, 60 ou 72 horas após a administração a um paciente.

Em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno deste fornecido neste documento atinge cerca de ou pelo menos 70% de ocupação do receptor SIRPα em cerca de 6, 12, 24, 36, 48, 60 ou 72 horas após a administração a um paciente.

Em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno deste fornecido neste documento atinge cerca de ou pelo menos 65% de ocupação do receptor SIRPα em cerca de 6, 12, 24, 36, 48, 60 ou 72 horas após a administração a um paciente.

Em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento atinge cerca de ou pelo menos 60% de ocupação do receptor SIRPα em cerca de 6, 12, 24, 36, 48, 60 ou 72 horas após a administração a um paciente.

Em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento atinge cerca de ou pelo menos 55% de ocupação do receptor SIRPα em cerca de 6, 12, 24, 36, 48, 60 ou 72 horas após a administração a um paciente.

Em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento atinge cerca de ou pelo menos 50% de ocupação do receptor SIRPα em cerca de 6, 12, 24, 36, 48, 60 ou 72 horas após a administração a um paciente.

Em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento atinge cerca de ou pelo menos 45% de ocupação do receptor SIRPα em cerca de 6, 12, 24, 36, 48, 60 ou 72 horas após a administração a um paciente.

Em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno deste fornecido neste documento atinge cerca de ou pelo menos 40% de ocupação do receptor SIRPα em cerca de 6, 12, 24, 36, 48, 60 ou 72 horas após a administração a um paciente. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento atinge cerca de ou pelo menos 35% de ocupação do receptor SIRPα em cerca de 6, 12, 24, 36, 48, 60 ou 72 horas após a administração a um paciente. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento atinge cerca de ou pelo menos 30% de ocupação do receptor SIRPα em cerca de 6, 12, 24, 36, 48, 60 ou 72 horas após a administração a um paciente.

[00381] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento atinge cerca de 100% de ocupação do receptor SIRPα em cerca de 6, 12, 24, 36, 48, 60 ou 72 horas após a administração em um paciente e mantém cerca de 100% de ocupação por mais 6, 12, 24, 36, 48, 60, 72, 84 ou 96 horas. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento atinge cerca de ou pelo menos 95% de ocupação do receptor SIRPα em cerca de 6, 12, 24, 36, 48, 60 ou 72 horas após a administração em um paciente e mantém cerca de ou em pelo menos 95% de ocupação por mais 6, 12, 24, 36, 48, 60, 72, 84 ou 96 horas. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno deste fornecido neste documento atinge cerca de ou pelo menos 90% de ocupação do receptor SIRPα em cerca de 6, 12, 24, 36, 48, 60 ou 72 horas após a administração em um paciente e mantém cerca de pelo menos 90% de ocupação por mais 6, 12, 24, 36, 48, 60, 72, 84 ou 96 horas. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento atinge cerca de ou pelo menos 85% de ocupação do receptor SIRPα em cerca de 6, 12, 24, 36, 48, 60 ou 72 horas após a administração em um paciente e mantém cerca de ou em pelo menos 85% de ocupação por mais 6, 12, 24, 36, 48, 60, 72, 84 ou 96 horas.

Em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento atinge cerca de ou pelo menos 80% de ocupação do receptor SIRPα em cerca de 6, 12, 24, 36, 48, 60 ou 72 horas após a administração em um paciente e mantém cerca de ou em pelo menos 80% de ocupação por mais 6, 12, 24, 36, 48, 60, 72, 84 ou 96 horas.

Em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento atinge cerca de ou pelo menos 75% de ocupação do receptor SIRPα em cerca de 6, 12, 24, 36, 48, 60 ou 72 horas após a administração em um paciente e mantém cerca de ou em pelo menos 75% de ocupação por mais 6, 12, 24, 36, 48, 60, 72, 84 ou 96 horas.

Em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento atinge cerca de ou pelo menos 70% de ocupação do receptor SIRPα em cerca de 6, 12, 24, 36, 48, 60 ou 72 horas após a administração em um paciente e mantém cerca de ou em pelo menos 70% de ocupação por mais 6, 12, 24, 36, 48, 60, 72, 84 ou 96 horas.

Em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento atinge cerca de ou pelo menos 65% de ocupação do receptor SIRPα em cerca de 6, 12, 24, 36, 48, 60 ou 72 horas após a administração em um paciente e mantém cerca de ou em pelo menos 65% de ocupação por mais 6, 12, 24, 36, 48, 60, 72, 84 ou 96 horas.

Em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno deste fornecido neste documento atinge cerca de ou pelo menos 60% de ocupação do receptor SIRPα em cerca de 6, 12, 24, 36, 48, 60 ou 72 horas após a administração em um paciente e mantém cerca de ou em pelo menos 60% de ocupação por mais 6, 12, 24, 36, 48, 60, 72, 84 ou 96 horas.

Em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento atinge cerca de ou pelo menos 55% de ocupação do receptor SIRPα em cerca de 6, 12, 24, 36, 48, 60 ou 72 horas após a administração em um paciente e mantém cerca de ou em pelo menos 55% de ocupação por mais 6, 12, 24, 36, 48, 60, 72, 84 ou 96 horas.

Em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento atinge cerca de ou pelo menos 50% de ocupação do receptor SIRPα em cerca de 6, 12, 24, 36, 48, 60 ou 72 horas após a administração em um paciente e mantém cerca de ou em pelo menos 50% de ocupação por mais 6, 12, 24, 36, 48, 60, 72, 84 ou 96 horas.

Em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno deste fornecido neste documento atinge cerca de ou pelo menos 45% de ocupação do receptor SIRPα em cerca de 6, 12, 24, 36, 48, 60 ou 72 horas após a administração em um paciente e mantém cerca de ou em pelo menos 45% de ocupação por mais 6, 12, 24, 36, 48, 60, 72, 84 ou 96 horas.

Em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento atinge cerca de ou pelo menos 40% de ocupação do receptor SIRPα em cerca de 6, 12, 24, 36, 48, 60 ou 72 horas após a administração em um paciente e mantém cerca de ou em pelo menos 40% de ocupação por mais 6, 12, 24, 36, 48, 60, 72, 84 ou 96 horas.

Em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento atinge cerca de ou pelo menos 35% de ocupação do receptor SIRPα em cerca de 6, 12, 24, 36, 48, 60 ou 72 horas após a administração em um paciente e mantém cerca de ou em pelo menos 35% de ocupação por mais 6, 12, 24, 36, 48, 60, 72, 84 ou 96 horas.

Em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento atinge cerca de ou pelo menos 30% de ocupação do receptor SIRPα em cerca de 6, 12, 24, 36, 48, 60 ou 72 horas após a administração em um paciente e mantém cerca de ou em pelo menos 30% de ocupação por mais 6, 12, 24, 36, 48, 60, 72, 84 ou 96 horas.

[00382] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento atinge cerca de 100% de ocupação do receptor SIRPα em cerca de 6, 12, 24, 36, 48, 60 ou 72 horas após a administração em um paciente e mantém cerca de ou pelo menos 90% de ocupação por mais 6, 12, 24, 36, 48, 60, 72, 84 ou 96 horas. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento atinge cerca de ou pelo menos 95% de ocupação do receptor SIRPα em cerca de 6, 12, 24, 36, 48, 60 ou 72 horas após a administração em um paciente e mantém cerca de pelo menos 85% de ocupação por mais 6, 12, 24, 36, 48, 60, 72, 84 ou 96 horas. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno deste fornecido neste documento atinge cerca de ou pelo menos 90% de ocupação do receptor SIRPα em cerca de 6, 12, 24, 36, 48, 60 ou 72 horas após a administração em um paciente e mantém cerca de ou em pelo menos 80% de ocupação por mais 6, 12, 24, 36, 48, 60, 72, 84 ou 96 horas. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento atinge cerca de ou pelo menos 85% de ocupação do receptor SIRPα em cerca de 6, 12, 24, 36, 48, 60 ou 72 horas após a administração em um paciente e mantém cerca de ou em pelo menos 75% de ocupação por mais 6, 12, 24, 36, 48, 60, 72, 84 ou 96 horas. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento atinge cerca de ou pelo menos 80% de ocupação do receptor SIRPα em cerca de 6, 12, 24, 36, 48, 60 ou 72 horas após a administração em um paciente e mantém cerca de ou em pelo menos 70% de ocupação por mais 6, 12, 24, 36, 48, 60, 72, 84 ou 96 horas.

Em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento atinge cerca de ou pelo menos 75% de ocupação do receptor SIRPα em cerca de 6, 12, 24, 36, 48, 60 ou 72 horas após a administração em um paciente e mantém cerca de ou em pelo menos 65% de ocupação por mais 6, 12, 24, 36, 48, 60, 72, 84 ou 96 horas.

Em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento atinge cerca de ou pelo menos 70% de ocupação do receptor SIRPα em cerca de 6, 12, 24, 36, 48, 60 ou 72 horas após a administração em um paciente e mantém cerca de ou em pelo menos 60% de ocupação por mais 6, 12, 24, 36, 48, 60, 72, 84 ou 96 horas.

Em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento atinge cerca de ou pelo menos 65% de ocupação do receptor SIRPα em cerca de 6, 12, 24, 36, 48, 60 ou 72 horas após a administração em um paciente e mantém cerca de ou em pelo menos 55% de ocupação por mais 6, 12, 24, 36, 48, 60, 72, 84 ou 96 horas.

Em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno deste fornecido neste documento atinge cerca de ou pelo menos 60% de ocupação do receptor SIRPα em cerca de 6, 12, 24, 36, 48, 60 ou 72 horas após a administração em um paciente e mantém cerca de ou em pelo menos 50% de ocupação por mais 6, 12, 24, 36, 48, 60, 72, 84 ou 96 horas.

Em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento atinge cerca de ou pelo menos 55% de ocupação do receptor SIRPα em cerca de 6, 12, 24, 36, 48, 60 ou 72 horas após a administração em um paciente e mantém cerca de ou em pelo menos 45% de ocupação por mais 6, 12, 24, 36, 48, 60, 72, 84 ou 96 horas. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno deste fornecido neste documento atinge cerca de ou pelo menos 50% de ocupação do receptor SIRPα em cerca de 6, 12, 24, 36, 48, 60 ou 72 horas após a administração em um paciente e mantém cerca de ou em pelo menos 40% de ocupação por mais 6, 12, 24, 36, 48, 60, 72, 84 ou 96 horas. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento atinge cerca de ou pelo menos 45% de ocupação do receptor SIRPα em cerca de 6, 12, 24, 36, 48, 60 ou 72 horas após a administração em um paciente e mantém cerca de ou em pelo menos 35% de ocupação por mais 6, 12, 24, 36, 48, 60, 72, 84 ou 96 horas. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento atinge cerca de ou pelo menos 40% de ocupação do receptor SIRPα em cerca de 6, 12, 24, 36, 48, 60 ou 72 horas após a administração em um paciente e mantém cerca de ou em pelo menos 30% de ocupação por mais 6, 12, 24, 36, 48, 60, 72, 84 ou 96 horas. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento atinge cerca de ou pelo menos 35% de ocupação do receptor SIRPα em cerca de 6, 12, 24, 36, 48, 60 ou 72 horas após a administração em um paciente e mantém cerca de ou em pelo menos 25% de ocupação por mais 6, 12, 24, 36, 48, 60, 72, 84 ou 96 horas. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento atinge cerca de ou pelo menos 30% de ocupação do receptor SIRPα em cerca de 6, 12, 24, 36, 48, 60 ou 72 horas após a administração em um paciente e mantém cerca de ou em pelo menos 20% de ocupação por mais 6, 12, 24, 36, 48, 60, 72, 84 ou 96 horas.

[00383] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento atinge cerca de 100% de ocupação do receptor SIRPα em cerca de 6, 12, 24, 36, 48, 60 ou 72 horas após administração a um paciente e mantém cerca de ou pelo menos 80% de ocupação por adicionalmente 6, 12, 24, 36, 48, 60, 72, 84 ou 96 horas.

Em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento atinge cerca de ou pelo menos de 95% de ocupação do receptor SIRPα em cerca de 6, 12, 24, 36, 48, 60 ou 72 horas após administração a um paciente e mantém cerca de ou pelo menos 75% de ocupação durante outras 6, 12, 24, 36, 48, 60, 72, 84 ou 96 horas.

Em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento atinge cerca de ou pelo menos 90% de ocupação do receptor SIRPα em cerca de 6, 12, 24, 36, 48, 60 ou 72 horas após administração a um paciente e mantém cerca de ou pelo menos 70% de ocupação durante outras 6, 12, 24, 36, 48, 60, 72, 84 ou 96 horas.

Em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento atinge cerca de ou pelo menos 85% de ocupação do receptor SIRPα em cerca de 6, 12, 24, 36, 48, 60 ou 72 horas após administração a um paciente e mantém cerca de ou pelo menos 65% de ocupação durante outras 6, 12, 24, 36, 48, 60, 72, 84 ou 96 horas.

Em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento atinge cerca de ou pelo menos 80% de ocupação do receptor SIRPα em cerca de 6, 12, 24, 36, 48, 60 ou 72 horas após administração a um paciente e mantém cerca de ou pelo menos 60% de ocupação durante outras 6, 12, 24, 36, 48, 60, 72, 84 ou 96 horas.

Em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento atinge cerca de ou pelo menos 75% de ocupação do receptor SIRPα em cerca de 6, 12, 24, 36, 48, 60 ou 72 horas após administração a um paciente e mantém cerca de ou pelo menos 55% de ocupação durante outras 6, 12, 24, 36, 48, 60, 72, 84 ou 96 horas.

Em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento atinge cerca de ou pelo menos 70% de ocupação do receptor SIRPα em cerca de 6, 12, 24, 36, 48, 60 ou 72 horas após administração a um paciente e mantém cerca de ou pelo menos 50% de ocupação durante outras 6, 12, 24, 36, 48, 60, 72, 84 ou 96 horas.

Em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento atinge cerca de ou pelo menos 65% de ocupação do receptor SIRPα em cerca de 6, 12, 24, 36, 48, 60 ou 72 horas após administração a um paciente e mantém cerca de ou pelo menos 45% de ocupação durante outras 6, 12, 24, 36, 48, 60, 72, 84 ou 96 horas.

Em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento atinge cerca de ou pelo menos 60% de ocupação do receptor SIRPα em cerca de 6, 12, 24, 36, 48, 60 ou 72 horas após administração a um paciente e mantém cerca de ou pelo menos 40% de ocupação durante outras 6, 12, 24, 36, 48, 60, 72, 84 ou 96 horas.

Em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento atinge cerca de ou pelo menos 55% de ocupação do receptor SIRPα em cerca de 6, 12, 24, 36, 48, 60 ou 72 horas após administração a um paciente e mantém cerca de ou pelo menos 35% de ocupação durante outras 6, 12, 24, 36, 48, 60, 72, 84 ou 96 horas.

Em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento atinge cerca de ou pelo menos 50% de ocupação do receptor SIRPα em cerca de 6, 12, 24, 36, 48, 60 ou 72 horas após administração a um paciente e mantém cerca de ou pelo menos 30% de ocupação durante outras 6, 12, 24, 36, 48, 60, 72, 84 ou 96 horas.

Em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento atinge cerca de ou pelo menos 45% de ocupação do receptor SIRPα em cerca de 6, 12, 24, 36, 48, 60 ou 72 horas após administração a um paciente e mantém cerca de ou pelo menos 25% de ocupação durante outras 6, 12, 24, 36, 48, 60, 72, 84 ou 96 horas. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento atinge cerca de ou pelo menos 40% de ocupação do receptor SIRPα em cerca de 6, 12, 24, 36, 48, 60 ou 72 horas após administração a um paciente e mantém cerca de ou pelo menos 20% de ocupação durante outras 6, 12, 24, 36, 48, 60, 72, 84 ou 96 horas. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento atinge cerca de ou pelo menos 35% de ocupação do receptor SIRPα em cerca de 6, 12, 24, 36, 48, 60 ou 72 horas após administração a um paciente e mantém cerca de ou pelo menos 15% de ocupação durante outras 6, 12, 24, 36, 48, 60, 72, 84 ou 96 horas. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento atinge cerca de ou pelo menos 30% de ocupação do receptor SIRPα em cerca de 6, 12, 24, 36, 48, 60 ou 72 horas após administração a um paciente e mantém cerca de ou pelo menos 10% de ocupação durante outras 6, 12, 24, 36, 48, 60, 72, 84 ou 96 horas.

[00384] Em algumas modalidades, a ocupação do receptor divulgada nos 4 parágrafos anteriores pode ser alcançada e/ou mantida com uma dose única de 0,1 mg/kg, 0,2 mg/kg, 0,3 mg/kg, 0,4 mg/kg, 0,5 mg/kg, 0,6 mg/kg, 0,7 mg/kg, 0,8 mg/kg, 0,9 mg/kg, 1,0 mg/kg, 1,1 mg/kg, 1,2 mg/kg, 1,3 mg/kg, 1,4 mg/kg, 1,5 mg/kg, 1,6 mg/kg, 1,7 mg/kg, 1,8 mg/kg, 1,9 mg/kg, 2,0 mg/kg, 2,1 mg/kg, 2,2 mg/kg, 2,3 mg/kg, 2,4 mg/kg, 2,5 mg/kg, 2,6 mg/kg, 2,7 mg/kg, 2,8 mg/kg, 2,9 mg/kg ou 3,0 mg/kg de um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento.

[00385] Como é conhecido por uma pessoa versada na técnica, a fagocitose de células cancerosas por macrófagos cocultivados pode ser determinada como porcentagem de macrófagos fagocitóticos e os aumentos na fagocitose de células cancerosas por macrófagos cocultivados podem ser determinados como porcentagem ou aumento de vezes, ou como mudanças na porcentagem de macrófagos fagocitóticos. Como tal, em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento se liga especificamente à SIRPα humana (por exemplo, qualquer um ou qualquer combinação de dois, três, quatro, cinco ou seis SIRPα selecionados do grupo que consiste em haplótipos de SIRPα v1, v2, v3, v4, v5 e v6) e aumenta a porcentagem de macrófagos fagocitóticos em uma população de macrófagos (por exemplo, uma população de macrófagos cocultivados com células cancerosas) para cerca de 10%, cerca de 15%, cerca de 20%, cerca de 25%, cerca de 30%, cerca de 35%, cerca de 40%, cerca de 45%, cerca de 50%, cerca de 55%, cerca de 60%, cerca de 65%, cerca de 70%, cerca de 75%, cerca de 80%, cerca de 85%, cerca de 90%, cerca de 95% ou cerca de 99%.

[00386] Em outras modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento se liga especificamente à SIRPα humana (por exemplo, qualquer um ou qualquer combinação de dois, três, quatro, cinco ou seis SIRPα selecionados do grupo que consiste em haplótipos de SIRPα v1, v2, v3, v4, v5 e v6) e aumenta a porcentagem de macrófagos fagocitóticos em uma população de macrófagos (por exemplo, uma população de macrófagos cocultivados com células cancerosas) para pelo menos 10%, pelo menos 15%, pelo menos 20%, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 35%, pelo menos 40%, pelo menos 45%, pelo menos 50%, pelo menos 55%, pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95% ou pelo menos 99%.

[00387] Em certas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento se liga especificamente à SIRPα humana (por exemplo, qualquer um ou qualquer combinação de dois, três, quatro, cinco ou seis de SIRPα selecionados do grupo que consiste em haplótipos de SIRPα v1, v2, v3, v4, v5 e v6) e aumenta a fagocitose do macrófago (por exemplo, macrófagos cocultivados com células cancerosas) em cerca de 10%, cerca de 20%, cerca de 30%, cerca de 40%, cerca de 45%, cerca de 50%, cerca de 55%, cerca de 60%, cerca de 65%, cerca de 70%, cerca de 75%, cerca de 80%, cerca de 85%, cerca de 90%, cerca de 95%, cerca de 100%, cerca de 125%, cerca de 150%, cerca de 175%, cerca de 200%, cerca de 250%, cerca de 300%, cerca de 400%, cerca de 500%, cerca de 600%, cerca de 700%, cerca de 800%, cerca de 900% ou cerca de 1000%, em comparação com um controle de nenhum tratamento ou um anticorpo de controle de isotipo. Em outras modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento se liga especificamente à SIRPα humana (por exemplo, qualquer um ou qualquer combinação de dois, três, quatro, cinco ou seis SIRPα selecionados do grupo que consiste em haplótipos de SIRPα v1, v2, v3, v4, v5 e v6) e aumenta a fagocitose do macrófago (por exemplo, macrófagos cocultivados com células cancerosas) em pelo menos 10%, pelo menos 20%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 45%, pelo menos 50%, pelo menos 55%, pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 100%, pelo menos 125%, pelo menos 150%, pelo menos 175%, pelo menos 200%, pelo menos 250%, pelo menos 300%, pelo menos 400%, pelo menos 500%, pelo menos 600%, pelo menos 700%, pelo menos

800%, pelo menos 900% ou pelo menos 1000%, em comparação com um controle de nenhum tratamento ou um anticorpo de controle de isotipo.

[00388] Em algumas modalidades, o aumento na fagocitose de certas células cancerosas por macrófagos cocultivados descritos acima resulta da redução da ligação entre CD47 em certas células cancerosas e SIRPα em macrófagos, redução da ligação entre SIRPα em certas células cancerosas e CD47 em macrófagos, e/ou redução da ligação entre CD47 em certas células cancerosas e SIRPα em macrófagos e a ligação entre SIRPα em certas células cancerosas e CD47 em macrófagos. A divulgação fornece adicionalmente que as células cancerosas podem ser de câncer colorretal, carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço, leucemia mieloide aguda ou DLBCL que têm uma célula que expressa CD47, SIRPα ou ambos CD47 e SIRPα. A divulgação fornece adicionalmente que as células cancerosas podem ser de NHL, tal como DLBCL, linfoma folicular, linfoma de zona marginal e linfoma de células do manto que têm uma célula que expressa CD47, SIRPα ou ambos CD47 e SIRPα. A divulgação fornece adicionalmente que as células cancerosas podem ser de linfoma folicular de grau 1, linfoma folicular de grau 2, linfoma folicular de grau 3a, linfoma folicular de grau 3b, linfoma folicular recidivante (incluindo, por exemplo, grau 1, 2, 3a e 3b), linfoma folicular refratário (incluindo, por exemplo, Grau 1, 2, 3a e 3b), DLBCL recidivante ou DLBCL refratário, em que o câncer tem uma célula que expressa CD47, SIRPα ou ambos CD47 e SIRPα.

[00389] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento aumenta a atividade fagocitótica dos macrófagos (por exemplo, macrófagos cocultivados com células cancerosas) como uma monoterapia, por exemplo, como o único agente terapêutico para a eliminação das células cancerosas cocultivadas com os macrófagos. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento aumenta a atividade fagocitótica dos macrófagos (por exemplo, macrófagos cocultivados com células cancerosas) quando um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é usado em combinação com um segundo agente terapêutico para a eliminação das células cancerosas, por exemplo, um segundo agente terapêutico selecionado do grupo que consiste em cetuximabe e rituximabe. Em uma modalidade, o segundo agente terapêutico é o cetuximabe. Em outra modalidade, o segundo agente terapêutico é rituximabe.

[00390] A divulgação fornece adicionalmente que, em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento sinergiza com um segundo agente terapêutico no aumento da atividade fagocitótica dos macrófagos (por exemplo, macrófagos cocultivados com células cancerosas). Tal sinergia no aumento da atividade fagocitótica refere-se a que um anticorpo anti-SIRPα (ou fragmento de ligação ao antígeno) do mesmo fornecido neste documento e um segundo agente terapêutico, quando usados em combinação, produzem um aumento na atividade fagocitótica dos macrófagos maior do que a soma dos aumentos induzidos pelo anticorpo anti-SIRPα (ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo) e o segundo agente terapêutico separadamente. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento se liga especificamente à SIRPα humana (por exemplo, qualquer um ou qualquer combinação de dois, três, quatro, cinco ou seis SIRPα selecionados do grupo que consiste em haplótipos de SIRPα v1, v2, v3, v4, v5 e v6) e sinergiza com um segundo agente terapêutico no aumento da atividade fagocitótica dos macrófagos (por exemplo, macrófagos cocultivados com células cancerosas), em que a diferença entre a porcentagem dos macrófagos fagocitóticos induzida sinergicamente e a soma da porcentagem fagocitótica induzida pelo anticorpo anti-SIRPα (ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo) e o segundo agente terapêutico separadamente (por exemplo, matematicamente: Porcentagem Fagocitótica de sinergia – (Porcentagem Fagocitótica de anti-SIRPα + Porcentagem Fagocitótica de segundo agente)) é pelo menos 10%, pelo menos 15%, pelo menos 20%, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 35%, pelo menos 40%, pelo menos 45%, pelo menos 50%, pelo menos 55%, pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75% ou pelo menos 80%. Em outras modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento se liga especificamente à SIRPα humana (por exemplo, qualquer um ou qualquer combinação de dois, três, quatro, cinco ou seis SIRPα selecionados do grupo que consiste em haplótipos de SIRPα v1, v2, v3, v4, v5 e v6) e sinergiza com um segundo agente terapêutico no aumento da atividade fagocitótica dos macrófagos (por exemplo, macrófagos cocultivados com células cancerosas), em que a diferença entre a porcentagem dos macrófagos fagocitóticos induzida sinergicamente e a soma da porcentagem fagocitótica induzida pelo anticorpo anti-SIRPα (ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo) e o segundo agente terapêutico separadamente é de cerca de 10%, cerca de 15%, cerca de 20%, cerca de 25%, cerca de 30%, cerca de 35%, cerca de 40%, cerca de 45%, cerca de 50%, cerca de 55%, cerca de 60%, cerca de 65%, cerca de 70%, cerca de 75% ou cerca de 80%.

[00391] Os ensaios para fagocitose, incluindo fagocitose de macrófagos (por exemplo, macrófagos humanos) são conhecidos para uma pessoa versada na técnica. Em um ensaio de fagocitose exemplificativo, a avaliação de um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento no bloqueio da ligação de CD47 e aumento da fagocitose de células cancerosas é determinada in vitro por contagem automática de células cancerosas "comidas" marcadas com um primeiro corante dentro de macrófagos marcados com um segundo corante.

Resumidamente, anticorpos anti-SIRPα titulados ou fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos fornecidos neste documento são adicionados a macrófagos pré-diferenciados, seguido por cocultura com células cancerosas marcadas com éster succinimidílico de carboxifluoresceína (CSFE, o primeiro corante) opsonizadas com anticorpos anti- SIRPα específicos ou fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos fornecidos neste documento (agente único ou monoterapia), ou um segundo anticorpo direcionado ao câncer e anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos fornecidos neste documento (para combinação). A atividade de fagocitose é determinada quantitativamente pelo número de células cancerosas marcadas dentro dos macrófagos marcados com aloficocianina (APC, o segundo corante) (por exemplo, macrófago marcado com CD14 APC). A intensidade do verde (CFSE) é medida em cada um dos macrófagos marcados com APC, e uma porta de limiar é usada para identificar macrófagos positivos para CFSE.

Em algumas modalidades, um limiar de aproximadamente 1000 MFI, com variação de não mais do que algumas centenas de MFI são observados através dos experimentos.

Para cada amostra, a porcentagem calculada de fagocitose é determinada como: [(Número de macrófagos positivos CFSE)/(número de macrófagos totais)] × 100. Outros ensaios de fagocitose também são conhecidos para uma pessoa versada na técnica e fornecidos neste documento, por exemplo, conforme descrito em Hamczyk MR et al., Methods Mol Biol. 2015;1339:235-46 e Yan, Q et al., Bio Protoc. 20 de fevereiro de 2015; 5(4): e1406, que são incorporados em sua totalidade por referência.

Os formatos/kits de ensaio comerciais para fagocitose também estão disponíveis e são fornecidos neste documento, incluindo, por exemplo, Ensaio de Fagocitose IncuCyte® por Essen BioScience (Ann Arbor, Michigan) e Ensaios de Fagocitose

CytoSelect™ por Cell Biolabs, Inc. (San Diego, CA).

[00392] Como é claro a partir das descrições ao longo de toda a divulgação, em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento aumenta a atividade fagocitótica de macrófagos ou outras células imunes com atividade fagocitótica, em que SIRPα (por exemplo, qualquer um ou qualquer combinação de dois haplótipos de SIRPα selecionados do grupo que consiste em SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO:149 no domínio IgV, SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO:150 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO:151 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO:152 no domínio IgV, SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO:153 no domínio IgV, e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO:154 no domínio IgV) é expresso no macrófago e/ou outras células imunes com atividade fagocitótica. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento aumenta a atividade fagocitótica de macrófagos ou outras células imunes com atividade fagocitótica, em que SIRPα (por exemplo, qualquer um ou qualquer combinação de dois haplótipos de SIRPα selecionados do grupo que consiste em SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO:149 no domínio IgV, SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO:150 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO:151 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO:152 no domínio IgV, SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO:153 no domínio IgV e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO:154 no domínio IgV) é expresso nas células cancerosas. Em outras modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento aumenta a atividade fagocitótica de macrófagos ou outras células imunes com atividade fagocitótica, em que SIRPα (por exemplo, qualquer um ou qualquer combinação de dois haplótipos de SIRPα selecionados do grupo que consiste em SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO:149 no domínio IgV, SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO:150 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO:151 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO:152 no domínio IgV, SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO:153 no domínio IgV, e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO:154 no domínio IgV) é expresso em ambas as células cancerosas e células imunes com atividade fagocitótica, incluindo macrófagos.

[00393] Os anticorpos que induzem a reticulação alvo de linhagens T, NK ou monocíticas humanas têm o potencial de iniciar uma cascata de liberação sistêmica de certas citocinas pró-inflamatórias, resultando em potencial reação imune sistêmica adversa. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento se liga à SIRPα humana (por exemplo, qualquer um ou qualquer combinação de dois, três, quatro, cinco ou seis SIRPα selecionados do grupo que consiste em haplótipos de SIRPα v1, v2, v3, v4, v5 e v6), aumenta a fagocitose do macrófago (por exemplo, macrófagos cocultivados com células cancerosas), mas não resulta em um aumento da liberação de citocinas pró-inflamatórias incluindo, por exemplo, IL-1β, IL-2, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12p70, TNFα, interferon gama e fator estimulador de colônia de granulócitos-macrófagos, em um animal (por exemplo, um humano ou um macaco) ou células cultivadas (por exemplo, células imunes cultivadas ou células mononucleares do sangue periférico). Em certas modalidades, a ausência de um aumento da liberação de citocinas pró- inflamatórias em um animal (por exemplo, um humano ou um macaco) ou em células cultivadas (por exemplo, células imunes cultivadas ou células mononucleares do sangue periférico) é avaliada comparando a liberação das citocinas pró-inflamatórias após o tratamento de um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento e que após o tratamento de um anticorpo de controle (por exemplo, anticorpos seguros clinicamente comprovados, tal como cetuximabe) e ausência de um aumento da liberação de citocina pró-inflamatória é determinada quando os níveis de liberação de citocina pró-inflamatória induzida pela ligação de um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento não é significativamente diferente daquela induzida pelo anticorpo de controle. Em certas modalidades, o anticorpo de controle é um anticorpo de controle de isotipo de anticorpo. Em outras modalidades, o anticorpo de controle é um anticorpo terapêutico seguro aprovado clinicamente. Em algumas modalidades, o anticorpo aprovado clinicamente é o cetuximabe.

[00394] Em outras modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento se liga à SIRPα humana (por exemplo, qualquer um ou qualquer combinação de dois, três, quatro, cinco ou seis SIRPα selecionados do grupo que consiste em haplótipos de SIRPα v1, v2, v3, v4, v5 e v6), aumenta a fagocitose do macrófago (por exemplo, macrófagos cocultivados com células cancerosas), mas não aumenta a liberação de qualquer um ou qualquer combinação de dois, três, quatro, cinco, seis, sete, oito ou nove citocinas pró-inflamatórias selecionadas do grupo que consiste em IL-1β, IL-2, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12p70, TNFα, interferon gama e fator estimulador de colônia de granulócitos-macrófagos, em um animal (por exemplo, um humano ou um macaco) ou células cultivadas (por exemplo, células imunes cultivadas ou células mononucleares do sangue periférico).

[00395] Conforme discutido acima, em certas situações, ADCC, ADCP e/ou CDC podem ser citotoxicidade indesejável adversa às células ou aos animais. Em algumas modalidades, são fornecidos neste documento anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos com atividade atenuada de ADCC, ADCP e/ou CDC em comparação com um anticorpo de controle de isotipo.

Em certas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento tem atividade atenuada de ADCC em comparação com um anticorpo de controle de isotipo. Em outras modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento tem atividade atenuada de CDC em comparação com um anticorpo de controle de isotipo. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento tem atividade atenuada de ADCP em comparação com um anticorpo de controle de isotipo. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento tem atividade atenuada de ADCC e atividade atenuada de CDC em comparação com um anticorpo de controle de isotipo. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento tem atividade atenuada de ADCC e atividade atenuada de ADCP em comparação com um anticorpo de controle de isotipo. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento tem atividade atenuada de CDC e atividade atenuada de CDC em comparação com um anticorpo de controle de isotipo. Em outras modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento tem atividade atenuada de ADCC, atividade atenuada de ADCP e atividade atenuada de CDC em comparação com um anticorpo de controle de isotipo.

[00396] Como é conhecido para uma pessoa versada na técnica e conforme descrito acima, em uma modalidade, a atividade de ADCC de um anticorpo pode ser quantificada como porcentagem de células alvo mortas por células efetoras (tais como células NK) tratadas com o anticorpo, (matematicamente como 100×(células-alvo mortas)/(células-alvo totais)), por exemplo, conforme realizado em Tang, Y et al., J Immunol, 2007, 179 (5) 2815-2823, que é incorporado neste documento em sua totalidade por referência. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento tem atividade atenuada de ADCC de modo que a atividade de ADCC máxima é cerca de 5%, cerca de 10%, cerca de 15%, cerca de 20%, cerca de 25%, cerca de 30%, cerca de 35%, cerca de 40%, cerca de 45% ou cerca de 50% de citotoxicidade conforme medido pela porcentagem de células alvo mortas. Em outras modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno fornecido neste documento tem atividade ADCC atenuada de modo que a atividade ADCC máxima não seja mais de 5%, não mais de 10%, não mais de 15%, não mais de 20%, não mais de 25%, não mais de 30%, não mais de 35%, não mais de 40%, não mais de 45% ou não mais de 50% de citotoxicidade conforme medido pela porcentagem de células alvo mortas.

[00397] Como também é conhecido para uma pessoa versada na técnica e conforme descrito acima, em uma modalidade, a atividade de ADCP de um anticorpo pode ser quantificada como porcentagem de células efetoras fagocitóticas (tais como macrófagos) quando as células efetoras são cocultivadas com as células alvo tratadas com o anticorpo (matematicamente como 100×(células efetoras que devoraram uma ou mais células alvo)/(células efetoras totais)). Em algumas modalidades específicas, a atividade de ADCP de um anticorpo pode ser quantificada como porcentagem de macrófagos fagocitóticos cocultivados com células imunes CD3+ autólogas (autoalvo) opsonizadas com o anticorpo. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento tem atividade atenuada de ADCP de modo que a atividade máxima de ADCP seja cerca de 1%, cerca de 2%, cerca de 3%, cerca de 4%, cerca de 5%, cerca de 6%, cerca de 7%, cerca de 8%, cerca de 9%, cerca de 10%, cerca de 10%, cerca de 11%, cerca de

12%, cerca de 13%, cerca de 14%, cerca de 15%, cerca de 16%, cerca de 17%, cerca de 18%, cerca de 19%, cerca de 20%, cerca de 25%, cerca de 30%, cerca de 35%, cerca de 40%, cerca de 45% ou cerca de 50% dos macrófagos fagocitóticos que visam células T autólogas e/ou monócitos. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento atenuou a atividade de ADCP de modo que a atividade máxima de ADCP não seja mais de 1%, não mais de 2%, não mais de 3%, não mais de 4%, não mais de 5%, não mais de 6%, não mais de 7%, não mais de 8%, não mais de 9%, não mais de 10%, não mais de 10%, não mais de 11%, não mais de 12%, não mais de 13%, não mais de 14%, não mais de não mais de 15%, não mais de 16%, não mais de 17%, não mais de 18%, não mais de 19%, não mais de 20%, não mais de 25%, não mais de 30%, não mais de 35%, não mais de 40%, não mais de 45% ou não mais de 50% dos macrófagos fagocitóticos que visam células T autólogas e/ou monócitos.

[00398] Da mesma forma, conforme conhecido por uma pessoa versada na técnica, a atividade de CDC de um anticorpo pode ser avaliada de acordo com a EC50 do anticorpo que induz CDC. Em tal avaliação, um anticorpo com um valor mais alto de EC50 para CDC indicaria que o anticorpo atenuou a atividade de CDC em comparação com outro anticorpo com um valor mais baixo de EC50. Em algumas modalidades específicas, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento atenuou a atividade de CDC de modo que seu valor de EC50 para CDC seja de cerca de 50 nM, cerca de 100 nM, cerca de 200 nM, cerca de 300 nM, cerca de 400 nM, cerca de 500 nM, cerca de 600 nM, cerca de 700 nM, cerca de 800 nM, cerca de 900 nM, cerca de 1000 nM, cerca de 2000 nM, cerca de 3000 nM, cerca de 4000 nM, cerca de 5000 nM, cerca de 6000 nM, cerca de 7000 nM, cerca de 8000 nM, cercade 9000 nM, cerca de 104 nM, cerca de 105 nM, cerca de 106 nM, cerca de 107 nM, cerca de 108 nM, cerca de 109 nM, cerca de 1010 nM, cerca de 1011 nM, cerca de 1012 nM, cerca de 1013 nM, cerca de 1014 nM, cerca de 1015 nM, cerca de 1016 nM ou cerca de 1017 nM. Em outras modalidades específicas, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento tem atividade atenuada de CDC de modo que seu valor de EC50 para CDC seja pelo menos 50 nM, pelo menos 100 nM, pelo menos 200 nM, pelo menos 300 nM, pelo menos 400 nM, pelo menos 500 nM, pelo menos 600 nM, pelo menos 700 nM, pelo menos 800 nM, pelo menos 900 nM, pelo menos 1000 nM, pelo menos 2000 nM, pelo menos 3000 nM, pelo menos 4000 nM, pelo menos 5000 nM, pelo menos 6000 nM, pelo menos 7000 nM, pelo menos 8000 nM, pelo menos 9000 nM, pelo menos 104 nM, pelo menos 105 nM, pelo menos 106 nM, pelo menos 107 nM, pelo menos 108 nM, pelo menos 109 nM, pelo menos 1010 nM, pelo menos 1011 nM, pelo menos 1012 nM, pelo menos 1013 nM, pelo menos 1014 nM, pelo menos 1015 nM, pelo menos 1016 nM ou pelo menos 1017 nM.

4.3.1.1 Anticorpos Policlonais

[00399] Os anticorpos da presente divulgação podem compreender anticorpos policlonais. Os métodos de preparação de anticorpos policlonais são conhecidos pela pessoa versada na técnica. Os anticorpos policlonais podem ser criados em um mamífero, por exemplo, por uma ou mais injeções de um agente imunizante e, se desejado, um adjuvante. Tipicamente, o agente imunizante e/ou adjuvante será injetado no mamífero por múltiplas injeções subcutâneas ou intraperitoneais. O agente imunizante pode incluir um polipeptídeo SIRPα ou uma proteína de fusão do mesmo. Pode ser útil conjugar o agente imunizante a uma proteína que se sabe ser imunogênica no mamífero a ser imunizado ou imunizar o mamífero com a proteína e um ou mais adjuvantes. Exemplos de tais proteínas imunogênicas incluem, mas não se limitam a hemocianina de lapa californiana, albumina sérica, tiroglobulina bovina e inibidor de tripsina de soja.

Os exemplos de adjuvantes que podem ser empregados incluem Ribi, CpG, Poly 1C, adjuvante completo de Freund e adjuvante MPL-TDM (monofosforil Lipídeo A, dicorinomicolato de trealose sintético). O protocolo de imunização pode ser selecionado por uma pessoa versada na técnica sem experimentação indevida. Assim, o mamífero pode ser sangrado e o soro analisado para título de anticorpo anti-SIRPα. Se desejado, o mamífero pode ser reforçado até que o título de anticorpo aumente ou atinja um platô. Adicionalmente ou alternativamente, os linfócitos podem ser obtidos a partir do animal imunizado para fusão e preparação de anticorpos monoclonais a partir do hibridoma, conforme descrito abaixo.

4.3.1.2 Anticorpos Monoclonais

[00400] Os anticorpos da presente divulgação podem ser alternativamente anticorpos monoclonais. Os anticorpos monoclonais podem ser produzidos usando o método de hibridoma descrito pela primeira vez por Kohler et al., 1975, Nature 256:495-97, ou podem ser produzidos por métodos de DNA recombinante (ver, por exemplo, Pedido de Patente US nº. 4.816.567).

[00401] No método de hibridoma, um camundongo ou outro animal hospedeiro apropriado, tal como um hamster, é imunizado conforme descrito acima, para provocar linfócitos que produzem ou são capazes de produzir anticorpos que se ligam especificamente à proteína usada para imunização. Alternativamente, os linfócitos podem ser imunizados in vitro. Após a imunização, os linfócitos são isolados e depois fundidos com uma linhagem celular de mieloma usando um agente de fusão adequado, tal como polietilenoglicol, para formar uma célula de hibridoma (Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice 59-103 (1986)).

[00402] As células de hibridoma então preparadas são semeadas e crescidas em um meio de cultura adequado que, em certas modalidades, contém uma ou mais substâncias que inibem o crescimento ou sobrevivência de células de mieloma parentais não fundidas (também referidas como parceiras de fusão). Por exemplo, se as células de mieloma parentais não possuírem a enzima hipoxantina guanina fosforribosil transferase (HGPRT ou HPRT), o meio de cultura seletivo para os hibridomas tipicamente incluirá hipoxantina, aminopterina e timidina (meio HAT), que evitam o crescimento de células deficientes em HGPRT.

[00403] As células de mieloma parceiras de fusão exemplificativas são aquelas que se fundem de modo eficiente, suportam a produção estável de alto nível de anticorpo pelas células produtoras de anticorpo selecionadas, e são sensíveis a um meio seletivo que seleciona contra as células parentais não fundidas. As linhagens celulares de mieloma exemplificativas são linhagens de mieloma murino, tais como SP-2 e derivados, por exemplo, células X63-Ag8-653 disponíveis a partir da American Type Culture Collection (Manassas, VA), e aquelas derivadas de tumores de camundongo MOPC-21 e MPC-11 disponíveis a partir da Salk Institute Cell Distribution Center (São Diego, CA). As linhagens celulares de mieloma humano e de heteromieloma de camundongo-humano também foram descritas para a produção de anticorpos monoclonais humanos (Kozbor, 1984, Immunol. 133:3001-05; and Brodeur et al., Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications 51-63 (1987)).

[00404] O meio de cultura em que as células de hibridoma estão crescendo é analisado quanto à produção de anticorpos monoclonais direcionados contra o antígeno. A especificidade de ligação de anticorpos monoclonais produzidos por células de hibridoma é determinada por imunoprecipitação ou por um ensaio de ligação in vitro, tal como RIA ou ELISA. A afinidade de ligação do anticorpo monoclonal pode, por exemplo, ser determinada pela análise de Scatchard descrita em Munson et al., 1980, Anal. Biochem. 107:220-39.

[00405] Uma vez que as células de hibridoma que produzem anticorpos da especificidade, afinidade e/ou atividade desejada são identificadas, os clones podem ser subclonados por procedimentos de diluição limitantes e crescidos por métodos padrão (Goding, supra). Meios de cultura adequados para esse fim incluem, por exemplo, meio DMEM ou RPMI-1640. Além disso, as células de hibridoma podem ser crescidas in vivo como tumores de ascite em um animal, por exemplo, por injeção intraperitoneal das células em camundongos.

[00406] Os anticorpos monoclonais secretados pelos subclones são adequadamente separados do meio de cultura, fluido de ascite ou soro por procedimentos de purificação de anticorpo convencionais, tais como, por exemplo, cromatografia por afinidade (por exemplo, usando a proteína A ou proteína G-Sefarose) ou cromatografia por troca de íons, cromatografia de hidroxiapaptita, eletroforese em gel, diálise, etc.

[00407] O DNA que codifica os anticorpos monoclonais é facilmente isolado e sequenciado usando procedimentos convencionais (por exemplo, usando sondas de oligonucleotídeos que são capazes de se ligar especificamente a genes que codificam as cadeias pesadas e leves de anticorpos murinos). As células de hibridoma podem servir como uma fonte de tal DNA. Uma vez isolado, o DNA pode ser colocado em vetores de expressão, que são então transfectados para células hospedeiras, tais como células de E. coli, células COS de símio, células de Ovário de Hamster Chinês (CHO) ou células de mieloma que de outro modo não produzem proteína de anticorpo, para obter a síntese de anticorpos monoclonais nas células hospedeiras recombinantes. Artigos de revisão sobre expressão recombinante em bactérias de DNA que codifica o anticorpo incluem Skerra et al., 1993, Curr. Opinion in Immunol. 5:256-62 e Plückthun, 1992, Immunol. Revs. 130:151-88.

[00408] Em algumas modalidades, um anticorpo que se liga a um epítopo

SIRPα compreende uma sequência de aminoácido de um domínio VH e/ou uma sequência de aminoácido de um domínio VL codificado por uma sequência nucleotídica que se hibridiza para (1) o complemento de uma sequência nucleotídica que codifica qualquer um dos domínios VH e/ou VL descritos neste documento sob condições rigorosas (por exemplo, hibridização ao DNA ligado a filtro em 6X cloreto de sódio/citrato de sódio (SSC) a cerca de 45 °C seguida por uma ou mais lavagens em 0,2X SSC/0,1% de SDS a cerca de 50 a 65 °C), sob altas condições rigorosas (por exemplo, hibridização ao ácido nucleico ligado a filtro em 6X SSC a cerca de 45 °C seguido de uma ou mais lavagens em 0,1X SSC/0,2% de SDS a cerca de 68 °C), ou sob outras condições de hibridização rigorosas, que são conhecidas por pessoas versadas na técnica. Ver, por exemplo, Current Protocols in Molecular Biology Vol. I, 6.3.1-6.3.6 e 2.10.3 (Ausubel et al. eds., 1989).

[00409] Em algumas modalidades, um anticorpo que se liga a um epítopo SIRPα compreende uma sequência de aminoácidos de um VH CDR ou uma sequência de aminoácidos de um VL CDR codificado por uma sequência de nucleotídeos que hibridiza com o complemento de uma sequência de nucleotídeos que codifica qualquer um dos VH CDRs e/ou VL CDRs representados nas Tabelas 1-2 sob condições rigorosas (por exemplo, hibridização para DNA ligado a filtro em 6X SSC a cerca de 45 °C seguido por uma ou mais lavagens em 0,2X SSC/0,1% SDS a cerca de 50-65 °C), sob condições altamente rigorosas (por exemplo, hibridização com ácido nucleico ligado a filtro em 6X SSC a cerca de 45 °C seguido por uma ou mais lavagens em 0,1X SSC/0,2% SDS a cerca de 68 °C), ou sob outras condições de hibridização rigorosas que são conhecidas por pessoas versadas na técnica (ver, por exemplo, Ausubel et al., supra).

[00410] Em uma modalidade adicional, os anticorpos monoclonais ou fragmentos de anticorpos podem ser isolados a partir de bibliotecas de fagos de anticorpos gerados usando as técnicas descritas, por exemplo, em Antibody Phage Display: Methods and Protocols (O'Brien e Aitken eds., 2002). A princípio, os clones de anticorpo sintético são selecionados por triagem de bibliotecas de fago contendo fagos que exibem vários fragmentos da região variável de anticorpo (Fv) fundidos com a proteína de revestimento de fago. Essas bibliotecas de fagos são triadas contra o antígeno desejado. Os clones que expressam fragmentos Fv capazes de se ligarem ao antígeno desejado são adsorvidos ao antígeno e, portanto, separados dos clones sem ligação na biblioteca. Os clones de ligação são então eluídos a partir do antígeno e podem ser adicionalmente enriquecidos por ciclos adicionais de adsorção/eluição de antígeno.

[00411] Os domínios variáveis podem ser apresentados de modo funcional no fago, ou como fragmentos Fv de cadeia única (scFv), em que VH e VL são ligados de modo covalente através de um peptídeo flexível e curto, ou como fragmentos Fab, em que eles são, cada um, fundidos a um domínio constante e interagem de modo não covalente, conforme descrito, por exemplo, em Winter et al., 1994, Ann. Rev. Immunol. 12:433-55.

[00412] Os repertórios dos genes de VH e VL podem ser clonados separadamente por PCR e recombinados aleatoriamente em bibliotecas de fagos, que podem então ser pesquisados quanto a clones de ligação ao antígeno, conforme descrito em Winter et al., supra. As bibliotecas de fontes imunizadas fornecem anticorpos de alta afinidade ao imunogênio sem a necessidade de construir hibridomas. Alternativamente, o repertório não exposto pode ser clonado para fornecer uma única fonte de anticorpos humanos para uma ampla faixa de antígenos não próprios e também próprios sem qualquer imunização conforme descrito por Griffiths et al., 1993, EMBO J 12:725-34. Por fim, as bibliotecas não expostas também podem ser feitas sinteticamente, clonando-se os segmentos de gene V não rearranjados de células-tronco, e usando primers de PCR contendo sequência aleatória para codificar as regiões CDR3 altamente variáveis e para realizar o rearranjo in vitro, conforme descrito, por exemplo, por Hoogenboom e Winter, 1992, J. Mol. Biol. 227:381-88.

[00413] A triagem das bibliotecas pode ser realizada por várias técnicas conhecidas na técnica. Por exemplo, SIRPα (por exemplo, um polipeptídeo, fragmento ou epítopo SIRPα) pode ser usado para revestir os poços das placas de adsorção, expresso em células hospedeiras afixadas em placas de adsorção ou usado na classificação de células, conjugado com biotina para captura com grânulos revestidos com estreptavidina ou usado em qualquer outro método para panning de bibliotecas de exibição. A seleção de anticorpos com cinética de dissociação lenta (por exemplo, boas afinidades de ligação) podem ser promovidas pelo uso de lavagens longas e exibição de fagos monovalentes conforme descrito em Bass et al., 1990, Proteins 8:309-14 e WO 92/09690, e pelo uso de uma baixa densidade de revestimento de antígeno, conforme descrito em Marks et al., 1992, Biotechnol. 10:779-83.

[00414] Os anticorpos anti-SIRPα podem ser obtidos por projeção de procedimento de triagem de antígeno adequado para selecionar para o clone de fago de interesse seguido de construção de um clone de anticorpo anti-SIRPα de comprimento total usando as sequências VH e/ou VL (por exemplo, as sequências Fv) ou várias sequências CDR a partir de sequências VH e VL, a partir do clone de fago de interesse e sequências de região constante adequada (por exemplo, Fc) descritas em Kabat et al., supra.

[00415] Em outra modalidade, o anticorpo anti-SIRPα é gerado usando métodos conforme descrito em Bowers et al., 2011, Proc Natl Acad Sci USA. 108:20455-60, por exemplo, a plataforma SHM-XHLTM (AnaptysBio, San Diego, CA). Resumidamente, nesta abordagem, uma biblioteca totalmente humana de

IgGs é construída em uma linhagem celular de mamífero (por exemplo, HEK293) como uma biblioteca inicial. As células de mamífero que exibem imunoglobulina que se liga a um peptídeo ou epítopo alvo são selecionadas (por exemplo, por classificação FACS), então a hipermutação somática induzida por ativação da citidina desaminase (AID) é reproduzida em vitro para expandir a diversidade do pool de anticorpos inicialmente selecionado. Após várias rodadas de maturação de afinidade por acoplamento de um visor de superfície celular de mamífero com hipermutação somática in vitro, anticorpos anti-SIRPα de alta especificidade e alta afinidade são gerados. Outros métodos que podem ser usados para gerar bibliotecas de anticorpos e/ou maturação por afinidade de anticorpos são divulgados, por exemplo, em Patentes US nº. 8.685.897 e 8.603.930, e Patente US nº. 2014/0170705, 2014/0094392, 2012/0028301, 2011/0183855 e 2009/0075378, cada um dos quais são incorporados neste documento por referência.

4.3.1.3 Fragmentos de Anticorpo

[00416] A presente divulgação fornece anticorpos e fragmentos de anticorpos que se ligam ao SIRPα. Em certas circunstâncias existem vantagens de uso de fragmentos de anticorpos em vez de anticorpos inteiros. O tamanho menor dos fragmentos permite uma depuração rápida e pode levar a um acesso melhorado às células, tecidos ou órgãos. Para uma revisão de certos fragmentos de anticorpos, ver Hudson et al., 2003, Nature Med. 9:129-34.

[00417] Várias técnicas foram desenvolvidas para a produção de fragmentos de anticorpos. Tradicionalmente, esses fragmentos eram derivados por meio de digestão proteolítica de anticorpos intactos (ver, por exemplo, Morimoto et al., 1992, J. Biochem. Biophys. Methods 24:107-17; e Brennan et al., 1985, Science 229:81-83). No entanto, esses fragmentos agora podem ser produzidos diretamente por células hospedeiras recombinantes. Os fragmentos de anticorpos Fab, Fv e scFv podem todos ser expressos e secretados a partir de E. coli ou células de levedura permitindo, assim, a produção fácil de grandes quantidades desses fragmentos. Os fragmentos de anticorpos podem ser isolados das bibliotecas de fago de anticorpos discutidas acima. Alternativamente, os fragmentos Fab'-SH podem ser recuperados diretamente a partir de E. coli e quimicamente acoplados para formar fragmentos F(ab')2 (Carter et al., 1992, Bio/Technology 10:163-67). De acordo com outra abordagem, fragmentos F(ab')2 podem ser isolados diretamente de uma cultura de células hospedeiras recombinantes. O fragmento Fab e F(ab')2 com meia-vida in vivo aumentada compreendendo resíduos de epítopo de ligação ao receptor de salvamento são descritos em, por exemplo, Patente US nº. 5.869.046. Outras técnicas para a produção de fragmentos de anticorpos ficarão evidentes para as pessoas versadas na técnica. Em certas modalidades, um anticorpo é um fragmento Fv de cadeia simples (scFv) (ver, por exemplo, WO 93/16185; Patentes US nº. 5.571.894 e 5.587.458). Fv e scFv têm sítios de combinação intactos que são desprovidos de regiões constantes; portanto, eles podem ser adequados para ligação não específica reduzida durante o uso in vivo. As proteínas de fusão de scFv podem ser construídas para render a fusão de uma proteína efetora em tanto o terminal amino quanto o terminal carboxi de um scFv (ver, por exemplo, Borrebaeck ed., supra). O fragmento de anticorpo pode também ser um "anticorpo linear", por exemplo, conforme descrito nas referências citadas acima. Tais anticorpos lineares podem ser monoespecíficos ou multiespecíficos, tais como biespecíficos.

[00418] As estruturas de ligação derivadas de anticorpos menores são os domínios variáveis separados (domínios V) também denominados anticorpos de domínio variável único (sdAbs). Certos tipos de organismos, os camelídeos e os peixes cartilaginosos, possuem domínios do tipo V simples de alta afinidade montados em uma estrutura de domínio equivalente a Fc como parte de seu sistema imune. (Woolven et al., 1999, Immunogenetics 50: 98-101; e Streltsov et al., 2004, Proc Natl Acad Sci USA. 101:12444-49). Os domínios do tipo V (chamados VhH em camelídeos e V-NAR em tubarões) tipicamente exibem alças de superfície longa, que permitem a penetração de cavidades de antígenos alvo. Eles também estabilizam domínios VH isolados mascarando remendos de superfície hidrofóbica.

[00419] Esses domínios VhH e V-NAR foram usados para projetar sdAbs. As variantes do domínio V humano foram projetadas usando seleção a partir de bibliotecas de fago e outras abordagens que resultaram em domínios derivados de VL e VH estáveis de alta ligação.

[00420] Os anticorpos fornecidos neste documento incluem, mas não estão limitados a moléculas de imunoglobulina e porções imunologicamente ativas de moléculas de imunoglobulina, por exemplo, moléculas que contêm um sítio de ligação ao antígeno que se liga a um epítopo SIRPα. As moléculas de imunoglobulina fornecidas neste documento podem ser de qualquer classe (por exemplo, IgG, IgE, IgM, IgD e IgA) ou qualquer subclasse (por exemplo, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 e IgA2) da molécula de imunoglobulina.

[00421] Variantes e derivados de anticorpos incluem fragmentos funcionais de anticorpo que retêm a capacidade de se ligar a um epítopo SIRPα. Fragmentos funcionais exemplificativos incluem fragmentos Fab (por exemplo, um fragmento de anticorpo que contém o domínio de ligação ao antígeno e compreende uma cadeia leve e parte de uma cadeia pesada ligada por uma ligação dissulfeto); Fab' (por exemplo, um fragmento de anticorpo contendo um único domínio de ligação ao antígeno compreendendo um Fab e uma porção adicional da cadeia pesada através da região de dobradiça); F(ab')2 (por exemplo, duas moléculas Fab' unidas por ligações dissulfeto intercadeias nas regiões de dobradiça das cadeias pesadas; as moléculas Fab' podem ser direcionadas para o mesmo ou diferentes epítopos); um Fab biespecífico (por exemplo, uma molécula Fab com dois domínios de ligação ao antígeno, cada um dos quais pode ser direcionado a um epítopo diferente); uma cadeia simples compreendendo uma região variável, também conhecida como scFv (por exemplo, a região variável determinante de ligação ao antígeno de uma cadeia simples leve e pesada de um anticorpo ligadas entre si por uma cadeia de 10 a 25 aminoácidos); um Fv ligado por dissulfeto, ou dsFv (por exemplo, a região variável determinante de ligação ao antígeno de uma cadeia simples leve e pesada de um anticorpo ligadas entre si por uma ligação dissulfeto); um VH camelizado (por exemplo, a região variável determinante de ligação ao antígeno de uma cadeia simples pesada de um anticorpo em que alguns aminoácidos na interface VH são aqueles encontrados na cadeia pesada de anticorpos de camelo de ocorrência natural); um scFv biespecífico (por exemplo, um scFv ou uma molécula dsFv com dois domínios de ligação ao antígeno, cada um dos quais pode ser direcionado a um epítopo diferente); um diacorpo (por exemplo, um scFv dimerizado formado quando o domínio VH de um primeiro scFv se monta com o domínio VL de um segundo scFv e o domínio VL do primeiro scFv se monta com o domínio VH do segundo scFv; as duas regiões de ligação ao antígeno do diacorpo podem ser direcionadas para o mesmo ou diferentes epítopos); e um triacorpo (por exemplo, um scFv trimerizado, formado de maneira semelhante a um diacorpo, mas no qual três domínios de ligação ao antígeno são criados em um único complexo; os três domínios de ligação ao antígeno podem ser direcionados para o mesmo ou diferentes epítopos).

4.3.1.4 Anticorpos Humanizados

[00422] Em algumas modalidades, os anticorpos fornecidos neste documento podem ser anticorpos humanizados que se ligam à SIRPα, incluindo

SIRPα humana e/ou cyno. Por exemplo, os anticorpos humanizados da presente divulgação podem compreender um ou mais CDRs conforme mostrado nas Tabelas 1-2. Vários métodos para humanizar anticorpos não humanos são conhecidos na técnica. Por exemplo, um anticorpo humanizado pode ter um ou mais resíduos de aminoácidos introduzidos a partir de uma fonte que não é humana. Esses resíduos de aminoácidos não humanos são muitas vezes denominados como resíduos de "importação", que são tirados tipicamente de um domínio variável de "importação". A humanização pode ser realizada, por exemplo, seguindo o método de Jones et al., 1986, Nature 321:522-25; Riechmann et al., 1988, Nature 332:323-27; e Verhoeyen et al., 1988, Science 239:1534-36), substituindo sequências da região hipervariável pelas sequências correspondentes de um anticorpo humano.

[00423] Em alguns casos, os anticorpos humanizados são construídos por enxerto de CDR, em que as sequências de aminoácido dos seis CDRs do anticorpo não humano parental (por exemplo, roedor) são enxertados em um framework de anticorpo humano. Por exemplo, Padlan et al. determinou que apenas cerca de um terço dos resíduos nos CDRs realmente contatam o antígeno, e os denominaram os "resíduos determinantes da especificidade", ou SDRs (Padlan et al., 1995, FASEB J. 9:133-39). Na técnica de enxerto de SDR, apenas os resíduos de SDR são enxertados no framework do anticorpo humano (ver, por exemplo, Kashmiri et al., 2005, Methods 36:25-34).

[00424] A escolha de domínios variáveis humanos, tanto leves quanto pesados, para serem usados na fabricação dos anticorpos humanizados pode ser importante para reduzir a antigenicidade. Por exemplo, de acordo com o denominado método do "melhor ajuste", a sequência do domínio variável de um anticorpo não-humano (por exemplo, roedor) é triada contra toda a biblioteca de sequências de domínio variável humano conhecidas. A sequência humana que está mais próxima daquela do roedor pode ser selecionada como o framework humano para o anticorpo humanizado (Sims et al., 1993, J. Immunol. 151:2296-308; e Chothia et al., 1987, J. Mol. Biol. 196:901-17). Outro método usa um framework particular derivada da sequência de consenso de todos os anticorpos humanos de um subgrupo particular de cadeias leves ou pesadas. O mesmo framework pode ser usado para vários anticorpos humanizados diferentes (Carter et al., 1992, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:4285-89; e Presta et al., 1993, J. Immunol. 151:2623- 32). Em alguns casos, o framework é derivado das sequências de consenso das subclasses humanas mais abundantes, VL subgrupo I (VLI) e VH subgrupo III (VHIII). Em outro método, os genes da linhagem germinativa humana são usados como a fonte das regiões de framework.

[00425] Em um paradigma alternativo baseado na comparação de CDRs, chamado de super-humanização, a homologia FR é irrelevante. O método consiste na comparação da sequência não humana com o repertório funcional do gene da linha germinativa humana. Os genes que codificam as mesmas estruturas canônicas ou estreitamente relacionadas com as sequências murinas são então selecionados. Em seguida, dentro dos genes que compartilham as estruturas canônicas com o anticorpo não humano, aqueles com maior homologia dentro das CDRs são escolhidos como doadores FR. Finalmente, os CDRs não humanos são enxertados nesses FRs (ver, por exemplo, Tan et al., 2002, J. Immunol. 169:1119-25).

[00426] É geralmente adicionalmente desejado que os anticorpos sejam humanizados com retenção de sua afinidade para o antígeno e outras propriedades biológicas favoráveis. Para alcançar este objetivo, de acordo com um método, os anticorpos humanizados são preparados por um processo de análise das sequências parentais e de vários produtos humanizados conceituais usando modelos tridimensionais das sequências parentais e humanizadas.

Modelos tridimensionais de imunoglobulina estão comumente disponíveis e são familiares para as pessoas versadas na técnica. Estão disponíveis programas de computador que ilustram e exibem estruturas conformacionais tridimensionais prováveis de sequências de imunoglobulina candidatas selecionadas. Estes incluem, por exemplo, WAM (Whitelegg e Rees, 2000, Protein Eng. 13:819-24), Modeller (Sali e Blundell, 1993, J. Mol. Biol. 234:779-815) e Swiss PDB Viewer (Guex e Peitsch, 1997, Electrophoresis 18:2714-23). A inspeção destas exibições permite a análise do papel provável dos resíduos no funcionamento da sequência de imunoglobulina do candidato, por exemplo, a análise dos resíduos que influenciam a capacidade de imunoglobulina do candidato para ligar seu antígeno. Desta forma, os resíduos de FR podem ser selecionados e combinados a partir das sequências de recipiente e de importação, de modo que a característica do anticorpo desejado, como maior afinidade para os antígenos alvos, seja alcançada. Em geral, os resíduos da região hipervariável estão diretamente e mais substancialmente envolvidos em influenciar a ligação de antígeno.

[00427] Outro método para humanização de anticorpo é baseado em uma métrica de humanismo de anticorpo denominada Teor de Cadeia Humana (HSC). Este método compara a sequência de camundongo com o repertório de genes da linhagem germinativa humana e as diferenças são classificadas como HSC. A sequência alvo é então humanizada maximizando seu HSC em vez de usar uma medida de identidade global para gerar diversas variantes humanizadas (Lazar et al., 2007, Mol. Immunol. 44:1986-98).

[00428] Além dos métodos descritos acima, métodos empíricos podem ser usados para gerar e selecionar anticorpos humanizados. Estes métodos incluem aqueles que são baseados na geração de grandes bibliotecas de variantes humanizadas e na seleção dos melhores clones usando tecnologias de enriquecimento ou técnicas de triagem de alto rendimento. As variantes de anticorpos podem ser isoladas de bibliotecas de exibição de fagos, ribossomos e leveduras, assim como por triagem de colônias bacterianas (ver, por exemplo, Hoogenboom, 2005, Nat. Biotechnol. 23:1105-16; Dufner et al., 2006, Trends Biotechnol. 24:523-29; Feldhaus et al., 2003, Nat. Biotechnol. 21:163-70; e Schlapschy et al., 2004, Protein Eng. Des. Sel. 17:847-60).

[00429] Na abordagem da biblioteca FR, uma coleção de variantes de resíduos é introduzida em posições específicas no FR, seguido de triagem da biblioteca para selecionar o FR que melhor suporta a CDR enxertada. Os resíduos a serem substituídos podem incluir alguns ou todos os resíduos "Vernier" identificados como potencialmente contribuindo para a estrutura de CDR (ver, por exemplo, Foote e Winter, 1992, J. Mol. Biol. 224:487-99), ou do conjunto mais limitado de resíduos alvo identificados por Baca et al. (1997, J. Biol. Chem. 272:10678-84).

[00430] No embaralhamento de FR, os FRs inteiros são combinados com as CDRs não humanas em vez de criar bibliotecas combinatórias de variantes de resíduos selecionados (ver, por exemplo, Dall'Acqua et al., 2005, Methods 36:43- 60). As bibliotecas podem ser triadas para ligação em um processo de duas etapas, primeiro humanizando VL, seguido por VH. Alternativamente, um processo de embaralhamento de FR de uma etapa pode ser usado. Tal processo demonstrou ser mais eficiente do que a triagem de duas etapas, pois os anticorpos resultantes exibiram propriedades bioquímicas e físico-químicas melhoradas, incluindo expressão melhorada, maior afinidade e estabilidade térmica (ver, por exemplo, Damschroder et al., 2007, Mol. Immunol. 44:3049- 60).

[00431] O método de "humanização" baseia-se na identificação experimental de determinantes de especificidade mínima (MSDs) essenciais e baseia-se na substituição sequencial de fragmentos não humanos em bibliotecas de FRs humanas e na avaliação da ligação. Começa com regiões da CDR3 de cadeias VH e VL não humanas e substitui progressivamente outras regiões do anticorpo não humano nas FRs humanas, incluindo as CDR1 e CDR2 tanto de VH como de VL. Esta metodologia resulta tipicamente na retenção de epítopos e na identificação de anticorpos de múltiplas subclasses com CDRs de segmento V humanas distintas. O procedimento de "humanização" permite o isolamento de anticorpos que são de 91 a 96% homólogos aos anticorpos do gene da linhagem germinativa humana (ver, por exemplo, Alfenito, Cambridge Healthtech Institute's Third Annual PEGS, The Protein Engineering Summit, 2007).

[00432] O método de "engenharia humana" envolve a alteração de um anticorpo ou fragmento de anticorpo não humano, tal como um anticorpo ou fragmento de anticorpo quimérico ou de camundongo, fazendo alterações específicas na sequência de aminoácidos do anticorpo para produzir um anticorpo modificado com imunogenicidade reduzida em um humano que, no entanto, retém as propriedades de ligação desejáveis dos anticorpos originais não humanos. Geralmente, a técnica envolve a classificação de resíduos de aminoácidos de um anticorpo não humano (por exemplo, camundongo) como resíduos de "baixo risco", "risco moderado" ou "alto risco". A classificação é realizada usando um cálculo global de risco/recompensa que avalia os benefícios previstos de uma substituição específica (por exemplo, para imunogenicidade em humanos) contra o risco de a substituição afetar o dobramento do anticorpo resultante. O resíduo de aminoácido humano específico a ser substituído em uma dada posição (por exemplo, risco baixo ou moderado) de uma sequência de anticorpo não humano (por exemplo, camundongo) pode ser selecionado por alinhamento de uma sequência de aminoácidos das regiões variáveis do anticorpo não humano com a região correspondente de uma sequência de anticorpo humano específica ou de consenso. Os resíduos de aminoácidos nas posições de baixo risco ou moderado na sequência não humana podem ser substituídos pelos resíduos correspondentes na sequência do anticorpo humano de acordo com o alinhamento. As técnicas para fazer proteínas humanas manipuladas são descritas em maior detalhe em Studnicka et al., 1994, Protein Engineering 7:805-14; Patente US nº. 5.766.886; 5.770.196; 5.821.123; e

5.869.619; e Publicação PCT WO 93/11794.

4.3.1.5 Anticorpos Humanos

[00433] Os anticorpos anti-SIRPα humanas podem ser construídos combinando a(s) sequência(s) do(s) domínio(s) variável(eis) do clone Fv de bibliotecas de exibição de fago derivadas de humanos com sequência(s) do domínio constante humano conhecida(s). Alternativamente, os anticorpos monoclonais humanos anti-SIRPα da presente divulgação podem ser produzidos pelo método do hibridoma. Linhagens celulares de mieloma humano e de heteromieloma camundongo-humano para a produção de anticorpos monoclonais humanos foram descritas, por exemplo, por Kozbor, 1984, J. Immunol. 133:3001-05; Brodeur et al., Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications 51-63 (1987); e Boerner et al., 1991, J. Immunol. 147:86-95.

[00434] Também é possível produzir animais transgênicos (por exemplo, camundongos) que são capazes, após a imunização, de produzir um repertório completo de anticorpos humanos na ausência de produção endógena de imunoglobulina. Camundongos transgênicos que expressam repertórios de anticorpos humanos foram usados para gerar anticorpos monoclonais de sequência humana de alta afinidade contra uma ampla variedade de alvos potenciais de fármacos (ver, por exemplo, Jakobovits, A., 1995, Curr. Opin. Biotechnol. 6(5):561-66; Brüggemann e Taussing, 1997, Curr. Opin. Biotechnol.

8(4):455-58; Patentes US nº. 6.075.181 e 6.150.584; e Lonberg et al., 2005, Nature Biotechnol. 23:1117-25).

[00435] Alternativamente, o anticorpo humano pode ser preparado por meio de imortalização de linfócitos B humanos produzindo um anticorpo direcionado contra um antígeno alvo (por exemplo, tais linfócitos B podem ser recuperados de um indivíduo ou podem ter sido imunizados in vitro) (ver, por exemplo, Cole et al., Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy (1985); Boerner et al., 1991, J. Immunol. 147(1):86-95; e Patente US nº. 5.750.373).

[00436] O embaralhamento genético pode também ser usado para derivar anticorpos humanos a partir de anticorpos não humanos, por exemplo, anticorpos de roedor, em que o anticorpo humano tem afinidades e especificidades semelhantes às do anticorpo não humano de partida. De acordo com este método, que também é chamado de "impressão de epítopos" ou "seleção guiada", tanto a região variável de cadeia pesada ou leve de um fragmento de anticorpo não humano obtido por técnicas de exibição de fago, conforme descrito neste documento, é substituída por um repertório de genes humanos de domínio V, criando uma população de quimeras scFv ou Fab de cadeia humana/cadeia não humana. A seleção com o antígeno resulta no isolamento de um scFv ou Fab quimérico de cadeia não humana/cadeia humana em que a cadeia humana restaura o sítio de ligação ao antígeno destruído após remoção da cadeia não humana correspondente no clone de exibição de fago primário (por exemplo, o epítopo orienta (imprime) a escolha do parceiro da cadeia humana). Quando o processo é repetido para substituir a cadeia não humana restante, é obtido um anticorpo humano (ver, por exemplo, PCT WO 93/06213; e Osbourn et al., 2005, Methods 36:61-68). Ao contrário da humanização tradicional de anticorpos não humanos por enxerto de CDR, esta técnica fornece anticorpos completamente humanos, que não têm resíduos FR ou CDR de origem não humana. Exemplos de seleção guiada para humanizar anticorpos de camundongo para antígenos de superfície celular incluem a proteína de ligação ao folato presente em células de câncer de ovário (ver, por exemplo, Figini et al., 1998, Cancer Res. 58:991-96) e CD147, que é altamente expresso no carcinoma hepatocelular (ver, por exemplo, Bao et al., 2005, Cancer Biol. Ther. 4:1374-80).

[00437] Uma desvantagem potencial da abordagem de seleção guiada é que o embaralhamento de uma cadeia de anticorpo, mantendo a outra constante, pode resultar em deriva de epítopo. Para manter o epítopo reconhecido pelo anticorpo não humano, a retenção de CDR pode ser aplicada (ver, por exemplo, Klimka et al., 2000, Br. J. Cancer. 83:252-60; e Beiboer et al., 2000, J. Mol. Biol. 296:833-49). Neste método, a VH CDR3 não humana é geralmente retida, uma vez que esta CDR pode estar no centro do sítio de ligação ao antígeno e pode ser a região mais importante do anticorpo para reconhecimento de antígeno. Em alguns casos, no entanto, VH CDR3 e VL CDR3, assim como VH CDR2, VL CDR2 e VL CDR1 do anticorpo não humano podem ser retidos.

4.3.1.6 Anticorpos Biespecíficos

[00438] Os anticorpos biespecíficos são anticorpos monoclonais que têm especificidades de ligação para pelo menos dois antígenos diferentes. Em certas modalidades, os anticorpos biespecíficos são anticorpos humanos ou humanizados. Em certas modalidades, uma das especificidades de ligação é para SIRPα e a outra é para qualquer outro antígeno. Em algumas modalidades, uma das especificidades de ligação é para SIRPα e a outra é para outro antígeno de superfície expresso em células que expressam SIRPα. Em certas modalidades, os anticorpos biespecíficos podem se ligar a dois epítopos diferentes de SIRPα. Os anticorpos biespecíficos podem ser preparados como anticorpos de comprimento completo ou fragmentos de anticorpo (por exemplo, F(ab')2 anticorpos biespecíficos).

[00439] Os métodos para produzir anticorpos biespecíficos são conhecidos na técnica, tal como, por coexpressão de dois pares de cadeia pesada-cadeia leve de imunoglobulina, em que as duas cadeias pesadas têm especificidades diferentes (ver, por exemplo, Milstein e Cuello, 1983, Nature 305:537-40). Para mais detalhes sobre a geração de anticorpos biespecíficos, ver, por exemplo, Bispecific Antibodies (Kontermann ed., 2011).

[00440] Em algumas modalidades, o anticorpo biespecífico compreende um anticorpo anti-SIRPα compreendendo um VL CDR1, VL CDR2, VL CDR3 de um anticorpo conforme estabelecido na Tabela 1 e um VH CDR1, VH CDR2 e VH CDR3 de um anticorpo conforme estabelecido na Tabela 2. Em algumas modalidades, o anticorpo biespecífico compreende um anticorpo anti-SIRPα compreendendo um VL CDR1, VL CDR2, VL CDR3, VH CDR1, VH CDR2 e VH CDR3 de SIRPAB-1. Em algumas modalidades, o anticorpo biespecífico compreende um anticorpo anti- SIRPα compreendendo um VL CDR1, VL CDR2, VL CDR3, VH CDR1, VH CDR2 e VH CDR3 de SIRPAB-2. Em algumas modalidades, o anticorpo biespecífico compreende um anticorpo anti-SIRPα compreendendo um VL CDR1, VL CDR2, VL CDR3, VH CDR1, VH CDR2 e VH CDR3 de SIRPAB-3. Em algumas modalidades, o anticorpo biespecífico compreende um anticorpo anti-SIRPα compreendendo um VL CDR1, VL CDR2, VL CDR3, VH CDR1, VH CDR2 e VH CDR3 de SIRPAB-4. Em algumas modalidades, o anticorpo biespecífico compreende um anticorpo anti- SIRPα compreendendo um VL CDR1, VL CDR2, VL CDR3, VH CDR1, VH CDR2 e VH CDR3 de SIRPAB-5. Em algumas modalidades, o anticorpo biespecífico compreende um anticorpo anti-SIRPα compreendendo um VL CDR1, VL CDR2, VL CDR3, VH CDR1, VH CDR2 e VH CDR3 de SIRPAB-6. Em algumas modalidades, o anticorpo biespecífico compreende um anticorpo anti-SIRPα compreendendo um VL CDR1, VL CDR2, VL CDR3, VH CDR1, VH CDR2 e VH CDR3 de SIRPAB-7. Em algumas modalidades, o anticorpo biespecífico compreende um anticorpo anti- SIRPα compreendendo um VL CDR1, VL CDR2, VL CDR3, VH CDR1, VH CDR2 e VH CDR3 de SIRPAB-8. Em algumas modalidades, o anticorpo biespecífico compreende um anticorpo anti-SIRPα compreendendo um VL CDR1, VL CDR2, VL CDR3, VH CDR1, VH CDR2 e VH CDR3 de SIRPAB-9. Em algumas modalidades, o anticorpo biespecífico compreende um anticorpo anti-SIRPα compreendendo um VL CDR1, VL CDR2, VL CDR3, VH CDR1, VH CDR2 e VH CDR3 de SIRPAB-10. Em algumas modalidades, o anticorpo biespecífico compreende um anticorpo anti-SIRPα compreendendo um VL CDR1, VL CDR2, VL CDR3, VH CDR1, VH CDR2 e VH CDR3 de SIRPAB-11. Em algumas modalidades, o anticorpo biespecífico compreende um anticorpo anti-SIRPα compreendendo um VL CDR1, VL CDR2, VL CDR3, VH CDR1, VH CDR2 e VH CDR3 de SIRPAB-12. Em algumas modalidades, o anticorpo biespecífico compreende um anticorpo anti-SIRPα compreendendo um VL CDR1, VL CDR2, VL CDR3, VH CDR1, VH CDR2 e VH CDR3 de SIRPAB-13. Em algumas modalidades, o anticorpo biespecífico compreende um anticorpo anti-SIRPα compreendendo um domínio VL de um anticorpo conforme estabelecido na Tabela 9 e um domínio VH de um anticorpo conforme estabelecido na Tabela 10. Em algumas modalidades, o anticorpo biespecífico compreende um anticorpo anti-SIRPα compreendendo um domínio VL e um domínio VH de SIRPAB-1. Em algumas modalidades, o anticorpo biespecífico compreende um anticorpo anti-SIRPα compreendendo um domínio VL e um domínio VH de SIRPAB-2. Em algumas modalidades, o anticorpo biespecífico compreende um anticorpo anti-SIRPα compreendendo um domínio VL e um domínio VH de SIRPAB-3. Em algumas modalidades, o anticorpo biespecífico compreende um anticorpo anti-SIRPα compreendendo um domínio VL e um domínio VH de SIRPAB-4. Em algumas modalidades, o anticorpo biespecífico compreende um anticorpo anti-SIRPα compreendendo um domínio VL e um domínio VH de SIRPAB-5. Em algumas modalidades, o anticorpo biespecífico compreende um anticorpo anti-SIRPα compreendendo um domínio VL e um domínio VH de SIRPAB-6. Em algumas modalidades, o anticorpo biespecífico compreende um anticorpo anti-SIRPα compreendendo um domínio VL e um domínio VH de SIRPAB-7. Em algumas modalidades, o anticorpo biespecífico compreende um anticorpo anti-SIRPα compreendendo um domínio VL e um domínio VH de SIRPAB-8. Em algumas modalidades, o anticorpo biespecífico compreende um anticorpo anti-SIRPα compreendendo um domínio VL e um domínio VH de SIRPAB-9. Em algumas modalidades, o anticorpo biespecífico compreende um anticorpo anti-SIRPα compreendendo um domínio VL e um domínio VH de SIRPAB-10. Em algumas modalidades, o anticorpo biespecífico compreende um anticorpo anti-SIRPα compreendendo um domínio VL e um domínio VH de SIRPAB-11. Em algumas modalidades, o anticorpo biespecífico compreende um anticorpo anti-SIRPα compreendendo um domínio VL e um domínio VH de SIRPAB-12. Em algumas modalidades, o anticorpo biespecífico compreende um anticorpo anti-SIRPα compreendendo um domínio VL e um domínio VH de SIRPAB-13.

[00441] Em certas modalidades, o anticorpo biespecífico compreende (i) um anticorpo anti-SIRPα fornecido neste documento e (ii) cetuximabe. Em outra modalidade, o anticorpo biespecífico compreende (i) um anticorpo anti-SIRPα fornecido neste documento e (ii) rituximabe.

[00442] Em algumas modalidades, o anticorpo biespecífico compreende (i) um anticorpo anti-SIRPα compreendendo um VL CDR1, VL CDR2 e VL CDR3 de um anticorpo conforme estabelecido na Tabela 1, e um VH CDR1, VH CDR2 e VH CDR3 de um anticorpo conforme estabelecido na Tabela 2 e (ii) cetuximabe. Em algumas modalidades, o anticorpo biespecífico compreende um anticorpo anti-

SIRPα compreendendo um VL CDR1, VL CDR2, VL CDR3, VH CDR1, VH CDR2 e VH CDR3 de SIRPAB-1 e (ii) cetuximabe.

Em algumas modalidades, o anticorpo biespecífico compreende um anticorpo anti-SIRPα compreendendo um VL CDR1, VL CDR2, VL CDR3, VH CDR1, VH CDR2 e VH CDR3 de SIRPAB-2 e (ii) cetuximabe.

Em algumas modalidades, o anticorpo biespecífico compreende um anticorpo anti-SIRPα compreendendo um VL CDR1, VL CDR2, VL CDR3, VH CDR1, VH CDR2 e VH CDR3 de SIRPAB-3 e (ii) cetuximabe.

Em algumas modalidades, o anticorpo biespecífico compreende um anticorpo anti-SIRPα compreendendo um VL CDR1, VL CDR2, VL CDR3, VH CDR1, VH CDR2 e VH CDR3 de SIRPAB-4 e (ii) cetuximabe.

Em algumas modalidades, o anticorpo biespecífico compreende um anticorpo anti-SIRPα compreendendo um VL CDR1, VL CDR2, VL CDR3, VH CDR1, VH CDR2 e VH CDR3 de SIRPAB-5 e (ii) cetuximabe.

Em algumas modalidades, o anticorpo biespecífico compreende um anticorpo anti-SIRPα compreendendo um VL CDR1, VL CDR2, VL CDR3, VH CDR1, VH CDR2 e VH CDR3 de SIRPAB-6 e (ii) cetuximabe.

Em algumas modalidades, o anticorpo biespecífico compreende um anticorpo anti-SIRPα compreendendo um VL CDR1, VL CDR2, VL CDR3, VH CDR1, VH CDR2 e VH CDR3 de SIRPAB-7 e (ii) cetuximabe.

Em algumas modalidades, o anticorpo biespecífico compreende um anticorpo anti-SIRPα compreendendo um VL CDR1, VL CDR2, VL CDR3, VH CDR1, VH CDR2 e VH CDR3 de SIRPAB-8 e (ii) cetuximabe.

Em algumas modalidades, o anticorpo biespecífico compreende um anticorpo anti-SIRPα compreendendo um VL CDR1, VL CDR2, VL CDR3, VH CDR1, VH CDR2 e VH CDR3 de SIRPAB-9 e (ii) cetuximabe.

Em algumas modalidades, o anticorpo biespecífico compreende um anticorpo anti-SIRPα compreendendo um VL CDR1, VL CDR2, VL CDR3, VH CDR1, VH CDR2 e VH CDR3 de SIRPAB-10 e (ii) cetuximabe.

Em algumas modalidades, o anticorpo biespecífico compreende um anticorpo anti-SIRPα compreendendo um VL CDR1, VL CDR2, VL CDR3, VH CDR1, VH CDR2 e VH CDR3 de SIRPAB-11 e (ii) cetuximabe.

Em algumas modalidades, o anticorpo biespecífico compreende um anticorpo anti-SIRPα compreendendo um VL CDR1, VL CDR2, VL CDR3, VH CDR1, VH CDR2 e VH CDR3 de SIRPAB-12 e (ii) cetuximabe.

Em algumas modalidades, o anticorpo biespecífico compreende um anticorpo anti-SIRPα compreendendo um VL CDR1, VL CDR2, VL CDR3, VH CDR1, VH CDR2 e VH CDR3 de SIRPAB-13 e (ii) cetuximabe.

Em algumas modalidades, o anticorpo biespecífico compreende um anticorpo anti-SIRPα compreendendo um domínio VL de um anticorpo conforme estabelecido na Tabela 9 e um domínio VH de um anticorpo conforme estabelecido na Tabela 10 e (ii) cetuximabe.

Em algumas modalidades, o anticorpo biespecífico compreende um anticorpo anti-SIRPα compreendendo um domínio VL e um domínio VH de SIRPAB-1 e (ii) cetuximabe.

Em algumas modalidades, o anticorpo biespecífico compreende um anticorpo anti-SIRPα compreendendo um domínio VL e um domínio VH de SIRPAB-2 e (ii) cetuximabe.

Em algumas modalidades, o anticorpo biespecífico compreende um anticorpo anti-SIRPα compreendendo um domínio VL e um domínio VH de SIRPAB-3 e (ii) cetuximabe.

Em algumas modalidades, o anticorpo biespecífico compreende um anticorpo anti-SIRPα compreendendo um domínio VL e um domínio VH de SIRPAB-4 e (ii) cetuximabe.

Em algumas modalidades, o anticorpo biespecífico compreende um anticorpo anti-SIRPα compreendendo um domínio VL e um domínio VH de SIRPAB-5 e (ii) cetuximabe.

Em algumas modalidades, o anticorpo biespecífico compreende um anticorpo anti-SIRPα compreendendo um domínio VL e um domínio VH de SIRPAB-6 e (ii) cetuximabe.

Em algumas modalidades, o anticorpo biespecífico compreende um anticorpo anti-SIRPα compreendendo um domínio VL e um domínio VH de SIRPAB-7 e (ii) cetuximabe.

Em algumas modalidades, o anticorpo biespecífico compreende um anticorpo anti-SIRPα compreendendo um domínio VL e um domínio VH de SIRPAB-8 e (ii) cetuximabe.

Em algumas modalidades, o anticorpo biespecífico compreende um anticorpo anti-SIRPα compreendendo um domínio VL e um domínio VH de

SIRPAB-9 e (ii) cetuximabe. Em algumas modalidades, o anticorpo biespecífico compreende um anticorpo anti-SIRPα compreendendo um domínio VL e um domínio VH de SIRPAB-10 e (ii) cetuximabe. Em algumas modalidades, o anticorpo biespecífico compreende um anticorpo anti-SIRPα compreendendo um domínio VL e um domínio VH de SIRPAB-11 e (ii) cetuximabe. Em algumas modalidades, o anticorpo biespecífico compreende um anticorpo anti-SIRPα compreendendo um domínio VL e um domínio VH de SIRPAB-12 e (ii) cetuximabe. Em algumas modalidades, o anticorpo biespecífico compreende um anticorpo anti-SIRPα compreendendo um domínio VL e um domínio VH de SIRPAB-13 e (ii) cetuximabe.

[00443] Em algumas modalidades, o anticorpo biespecífico compreende (i) um anticorpo anti-SIRPα compreendendo um VL CDR1, VL CDR2 e VL CDR3 de um anticorpo conforme estabelecido na Tabela 1, e um VH CDR1, VH CDR2 e VH CDR3 de um anticorpo conforme estabelecido na Tabela 2 e (ii) rituximabe. Em algumas modalidades, o anticorpo biespecífico compreende um anticorpo anti- SIRPα compreendendo um VL CDR1, VL CDR2, VL CDR3, VH CDR1, VH CDR2 e VH CDR3 de SIRPAB-1 e (ii) rituximabe. Em algumas modalidades, o anticorpo biespecífico compreende um anticorpo anti-SIRPα compreendendo um VL CDR1, VL CDR2, VL CDR3, VH CDR1, VH CDR2 e VH CDR3 de SIRPAB-2 e (ii) rituximabe. Em algumas modalidades, o anticorpo biespecífico compreende um anticorpo anti-SIRPα compreendendo um VL CDR1, VL CDR2, VL CDR3, VH CDR1, VH CDR2 e VH CDR3 de SIRPAB-3 e (ii) rituximabe. Em algumas modalidades, o anticorpo biespecífico compreende um anticorpo anti-SIRPα compreendendo um VL CDR1, VL CDR2, VL CDR3, VH CDR1, VH CDR2 e VH CDR3 de SIRPAB-4 e (ii) rituximabe. Em algumas modalidades, o anticorpo biespecífico compreende um anticorpo anti-SIRPα compreendendo um VL CDR1, VL CDR2, VL CDR3, VH CDR1, VH CDR2 e VH CDR3 de SIRPAB-5 e (ii) rituximabe. Em algumas modalidades, o anticorpo biespecífico compreende um anticorpo anti-SIRPα compreendendo um VL CDR1, VL CDR2, VL CDR3, VH CDR1, VH CDR2 e VH CDR3 de SIRPAB-6 e (ii) rituximabe.

Em algumas modalidades, o anticorpo biespecífico compreende um anticorpo anti-SIRPα compreendendo um VL CDR1, VL CDR2, VL CDR3, VH CDR1, VH CDR2 e VH CDR3 de SIRPAB-7 e (ii) rituximabe.

Em algumas modalidades, o anticorpo biespecífico compreende um anticorpo anti-SIRPα compreendendo um VL CDR1, VL CDR2, VL CDR3, VH CDR1, VH CDR2 e VH CDR3 de SIRPAB-8 e (ii) rituximabe.

Em algumas modalidades, o anticorpo biespecífico compreende um anticorpo anti-SIRPα compreendendo um VL CDR1, VL CDR2, VL CDR3, VH CDR1, VH CDR2 e VH CDR3 de SIRPAB-9 e (ii) rituximabe.

Em algumas modalidades, o anticorpo biespecífico compreende um anticorpo anti-SIRPα compreendendo um VL CDR1, VL CDR2, VL CDR3, VH CDR1, VH CDR2 e VH CDR3 de SIRPAB-10 e (ii) rituximabe.

Em algumas modalidades, o anticorpo biespecífico compreende um anticorpo anti-SIRPα compreendendo um VL CDR1, VL CDR2, VL CDR3, VH CDR1, VH CDR2 e VH CDR3 de SIRPAB-11 e (ii) rituximabe.

Em algumas modalidades, o anticorpo biespecífico compreende um anticorpo anti-SIRPα compreendendo um VL CDR1, VL CDR2, VL CDR3, VH CDR1, VH CDR2 e VH CDR3 de SIRPAB-12 e (ii) rituximabe.

Em algumas modalidades, o anticorpo biespecífico compreende um anticorpo anti-SIRPα compreendendo um VL CDR1, VL CDR2, VL CDR3, VH CDR1, VH CDR2 e VH CDR3 de SIRPAB-13 e (ii) rituximabe.

Em algumas modalidades, o anticorpo biespecífico compreende um anticorpo anti-SIRPα compreendendo um domínio VL de um anticorpo conforme estabelecido na Tabela 9 e um domínio VH de um anticorpo conforme estabelecido na Tabela 10 e (ii) rituximabe.

Em algumas modalidades, o anticorpo biespecífico compreende um anticorpo anti-SIRPα compreendendo um domínio VL e um domínio VH de SIRPAB-1 e (ii) rituximabe.

Em algumas modalidades, o anticorpo biespecífico compreende um anticorpo anti-SIRPα compreendendo um domínio VL e um domínio VH de SIRPAB-2 e (ii)

rituximabe. Em algumas modalidades, o anticorpo biespecífico compreende um anticorpo anti-SIRPα compreendendo um domínio VL e um domínio VH de SIRPAB-3 e (ii) rituximabe. Em algumas modalidades, o anticorpo biespecífico compreende um anticorpo anti-SIRPα compreendendo um domínio VL e um domínio VH de SIRPAB-4 e (ii) rituximabe. Em algumas modalidades, o anticorpo biespecífico compreende um anticorpo anti-SIRPα compreendendo um domínio VL e um domínio VH de SIRPAB-5 e (ii) rituximabe. Em algumas modalidades, o anticorpo biespecífico compreende um anticorpo anti-SIRPα compreendendo um domínio VL e um domínio VH de SIRPAB-6 e (ii) rituximabe. Em algumas modalidades, o anticorpo biespecífico compreende um anticorpo anti-SIRPα compreendendo um domínio VL e um domínio VH de SIRPAB-7 e (ii) rituximabe. Em algumas modalidades, o anticorpo biespecífico compreende um anticorpo anti-SIRPα compreendendo um domínio VL e um domínio VH de SIRPAB-8 e (ii) rituximabe. Em algumas modalidades, o anticorpo biespecífico compreende um anticorpo anti-SIRPα compreendendo um domínio VL e um domínio VH de SIRPAB-9 e (ii) rituximabe. Em algumas modalidades, o anticorpo biespecífico compreende um anticorpo anti-SIRPα compreendendo um domínio VL e um domínio VH de SIRPAB-10 e (ii) rituximabe. Em algumas modalidades, o anticorpo biespecífico compreende um anticorpo anti-SIRPα compreendendo um domínio VL e um domínio VH de SIRPAB-11 e (ii) rituximabe. Em algumas modalidades, o anticorpo biespecífico compreende um anticorpo anti-SIRPα compreendendo um domínio VL e um domínio VH de SIRPAB-12 e (ii) rituximabe. Em algumas modalidades, o anticorpo biespecífico compreende um anticorpo anti-SIRPα compreendendo um domínio VL e um domínio VH de SIRPAB-13 e (ii) rituximabe.

4.3.1.7 Anticorpos Multivalentes

[00444] Um anticorpo multivalente pode ser internalizado (e/ou catabolizado) mais rapidamente do que um anticorpo bivalente por uma célula que expressa um antígeno ao qual os anticorpos se ligam.

Os anticorpos da presente divulgação podem ser anticorpos multivalentes (que são diferentes que os da classe IgM) com três ou mais sítios de ligação ao antígeno (por exemplo, anticorpos tetravalentes), que podem ser produzidos facilmente por expressão recombinante de ácido nucleico que codifica as cadeias polipeptídicas do anticorpo.

O anticorpo multivalente pode compreender um domínio de dimerização e três ou mais sítios de ligação ao antígeno.

Em certas modalidades, o domínio de dimerização compreende (ou consiste em) uma região Fc ou uma região de dobradiça.

Neste cenário, o anticorpo compreenderá uma região Fc e três ou mais sítios de ligação ao antígeno amino-terminal em relação à região Fc.

Em certas modalidades, um anticorpo multivalente compreende (ou consiste em) três a cerca de oito sítios de ligação ao antígeno.

Em tal modalidade, um anticorpo multivalente compreende (ou consiste em) quatro sítios de ligação ao antígeno.

O anticorpo multivalente compreende pelo menos uma cadeia polipeptídica (por exemplo, duas cadeias polipeptídicas), em que a(s) cadeia(s) polipeptídica(s) compreendem dois ou mais domínios variáveis.

Por exemplo, a(s) cadeia(s) polipeptídica(s) podem compreender VD1- (X1)n-VD2-(X2)n-Fc, em que VD1 é um primeiro domínio variável, VD2 é um segundo domínio variável, Fc é uma cadeia polipeptídica de uma região Fc, X1 e X2 representam um aminoácido ou polipeptídeo e n é 0 ou 1. Por exemplo, a(s) cadeia(s) polipeptídica(s) podem compreender: cadeia da região VH-CH1-ligante flexível- VH-CH1-Fc; ou cadeia da região VH-CH1-VH-CH1-Fc.

O anticorpo multivalente neste documento pode adicionalmente compreender pelo menos dois (por exemplo, quatro) polipetídeos de domínio variável de cadeia leve.

O anticorpo multivalente neste documento pode, por exemplo, compreender de cerca de dois a cerca de oito polipeptídeos de domínio variável de cadeia leve.

Os polipeptídeos do domínio variável de cadeia leve contemplados neste documento compreendem um domínio variável de cadeia leve e, opcionalmente, compreendem adicionalmente um domínio CL.

4.3.1.8 Manipulação de Fc

[00445] Pode ser desejável modificar um anticorpo anti-SIRPα fornecido neste documento por manipulação de Fc. Em certas modalidades, a modificação da região Fc do anticorpo resulta na diminuição ou eliminação de uma função efetora do anticorpo. Em certas modalidades, a função efetora é ADCC, ADCP e/ou CDC. Em algumas modalidades, a função efetora é ADCC. Em outras modalidades, a função efetora é ADCP. Em outras modalidades, a função efetora é CDC. Em uma modalidade, a função efetora é ADCC e ADCP. Em uma modalidade, a função efetora é ADCC e CDC. Em uma modalidade, a função efetora é ADCP e CDC. Em uma modalidade, a função efetora é ADCC, ADCP e CDC. Isto pode ser alcançado através da introdução de uma ou mais substituições de aminoácidos em uma região Fc do anticorpo. Por exemplo, substituições em IgG1 humana usando resíduos de IgG2 nas posições 233-236 e resíduos de IgG4 nas posições 327, 330 e 331 mostraram reduzir muito ADCC e CDC (ver, por exemplo, Armour et al., 1999, Eur. J. Immunol. 29(8):2613-24; e Shields et al., 2001, J. Biol. Chem. 276(9): 6591-604). Outras variantes Fc são fornecidas em outro lugar neste documento.

[00446] Para aumentar a meia-vida sérica do anticorpo, pode-se incorporar um epítopo de ligação ao receptor de salvamento no anticorpo (especialmente um fragmento de anticorpo), por exemplo, conforme descrito na Patente US nº.

5.739.277. O termo "epítopo de ligação ao receptor de salvamento" refere-se a um epítopo da região Fc de uma molécula de IgG (por exemplo, IgG1, IgG2, IgG3 ou IgG4) que é responsável pelo aumento da meia-vida sérica in vivo da molécula de IgG.

4.3.1.9 Agentes de Ligação Alternativa

[00447] A presente divulgação engloba agentes de ligação a não imunoglobulina que se ligam especificamente ao mesmo epítopo que um anticorpo anti-SIRPα divulgado neste documento. Em algumas modalidades, um agente de ligação a não imunoglobulina é identificado como um agente que desloca ou é deslocado por um anticorpo anti-SIRPα da presente divulgação em um ensaio de ligação competitivo. Estes agentes de ligação alternativos podem incluir, por exemplo, qualquer um dos andaimes de proteína manipulada conhecidos na técnica. Tais andaimes podem compreender um ou mais CDRs, conforme mostrado nas Tabelas 1-2. Tais andaimes incluem, por exemplo, anticalinas, que se baseiam em andaime de lipocalina, uma estrutura de proteína caracterizada por um barril beta rígido que suporta quatro alças hipervariáveis, que formam o sítio de ligação do ligante. Especificidades de ligação novas podem ser manipuladas por mutagênese aleatória direcionada nas regiões de alça, em combinação com exibição funcional e seleção guiada (ver, por exemplo, Skerra, 2008, FEBS J. 275:2677-83). Outros andaimes adequados podem incluir, por exemplo, adnectinas ou monocorpos, com base no décimo domínio extracelular da fibronectina III humana (ver, por exemplo, Koide e Koide, 2007, Methods Mol. Biol. 352: 95-109); affibodies, com base no domínio Z da proteína A estafilocócica (ver, por exemplo, Nygren et al., 2008, FEBS J. 275:2668-76); DARPins, com base em proteínas de repetição de anquirina (ver, por exemplo, Stumpp et al., 2008, Drug. Discov. Today 13:695-701); fynomers, com base no domínio SH3 da proteína quinase Fyn (ver, por exemplo, Grabulovski et al., 2007, J. Biol. Chem. 282:3196-204); afitinas, com base em Sac7d de Sulfolobus acidolarius (ver, por exemplo, Krehenbrink et al., 2008, J. Mol. Biol. 383:1058-68); afilinas, com base na y-B-cristalina humana (ver, por exemplo, Ebersbach et al., 2007, J. Mol. Biol. 372:172-85); avímeros, com base no domínio A de proteínas receptoras de membrana (ver, por exemplo, Silverman et al., 2005, Biotechnol. 23:1556-61); peptídeos de knottin ricos em cisteína (ver, por exemplo, Kolmar, 2008, FEBS J. 275:2684-90); e inibidores manipulados do tipo Kunitz (ver, por exemplo, Nixon e Wood, 2006, Curr. Opin. Drug. Discov. Dev. 9:261-68). Para uma revisão, ver, por exemplo, Gebauer e Skerra, 2009, Curr. Opin. Chem. Biol. 13:245-55.

4.3.2 Variantes de Anticorpo

[00448] Em algumas modalidades, modificação(ões) de sequência de aminoácido(s) dos anticorpos que se ligam à SIRPα ou descritos neste documento é(são) contemplada(s). Por exemplo, pode ser desejável melhorar a afinidade de ligação e/ou outras propriedades biológicas do anticorpo, incluindo, mas sem limitação, especificidade, termoestabilidade, nível de expressão, funções efetoras, glicosilação, imunogenicidade reduzida ou solubilidade. Assim, além dos anticorpos anti-SIRPα descritos neste documento, é contemplado que possam ser preparadas variantes do anticorpo anti-SIRPα. Por exemplo, as variantes do anticorpo anti-SIRPα podem ser preparadas através da introdução de alterações nucleotídicas apropriadas no DNA de codificação e/ou por síntese do anticorpo ou polipeptídeo desejado. As pessoas versadas na técnica que apreciam que as alterações de aminoácidos podem alterar os processos pós- traducionais do anticorpo anti-SIRPα, tais como mudando o número ou posição de sítios de glicosilação ou alterando as características de ancoragem na membrana.

[00449] Em algumas modalidades, os anticorpos fornecidos neste documento são quimicamente modificados, por exemplo, pela ligação covalente de qualquer tipo de molécula ao anticorpo. Os derivados de anticorpos podem incluir anticorpos que foram quimicamente modificados, por exemplo, por glicosilação, acetilação, peguilação, fosforilação, amidação, derivatização por grupos de proteção/bloqueio conhecidos, clivagem proteolítica, ligação a um ligante celular ou outra proteína, etc. Qualquer uma das inúmeras modificações químicas pode ser realizada por técnicas conhecidas, incluindo, mas não se limitando a clivagem química específica, acetilação, formulação, síntese metabólica de tunicamicina, etc. Adicionalmente, o anticorpo pode conter um ou mais aminoácidos não clássicos.

[00450] As variações podem ser uma substituição, deleção ou inserção de um ou mais códons que codificam o anticorpo ou polipeptídeo que resulta em uma mudança na sequência de aminoácidos em comparação com o anticorpo ou polipeptídeo de sequência nativa. As substituições de aminoácidos podem ser o resultado da substituição de um aminoácido por outro aminoácido com propriedades estruturais e/ou químicas semelhantes, tais como a substituição de uma leucina por uma serina, por exemplo, substituições conservativas de aminoácidos. Inserções ou deleções podem opcionalmente estar na faixa de cerca de 1 a 5 aminoácidos. Em certas modalidades, a substituição, deleção ou inserção inclui menos de 25 substituições de aminoácidos, menos de 20 substituições de aminoácidos, menos de 15 substituições de aminoácidos, menos de 10 substituições de aminoácidos, menos de 5 substituições de aminoácidos, menos de 4 substituições de aminoácidos, menos de 3 substituições de aminoácidos ou menos de 2 substituições de aminoácidos em relação à molécula original. Em uma modalidade específica, a substituição é uma substituição conservativa de aminoácidos feita em um ou mais resíduos de aminoácidos não essenciais previstos. A variação permitida pode ser determinada fazendo sistematicamente inserções, deleções ou substituições de aminoácidos na sequência e testando as variantes resultantes para atividade exibida pela sequência nativa de comprimento total ou madura.

[00451] As inserções de sequência de aminoácidos incluem fusões amino e/ou carboxi-terminais que variam em comprimento de um resíduo para polipeptídeos que contém cem ou mais resíduos, assim como inserções intrassequenciais de resíduos de aminoácidos únicos ou múltiplos. Exemplos de inserções de terminal incluem um anticorpo com um resíduo de metionil do terminal N. Outras variantes de inserção da molécula de anticorpo incluem a fusão ao terminal N ou C do anticorpo a uma enzima (por exemplo, para terapia pró-fármaco de enzima direcionada a anticorpo) ou um polipeptídeo que aumenta a meia-vida sérica do anticorpo.

[00452] Modificações substanciais nas propriedades biológicas do anticorpo são alcançadas selecionando substituições que se diferem de modo significativo em seus efeitos de manutenção (a) da estrutura da cadeia principal de polipeptídeo na área da substituição, por exemplo, como uma conformação helicoidal ou de folha, (b) da carga ou hidrofobicidade da molécula no sítio alvo ou (c) do total da cadeia lateral. Alternativamente, substituições conservativas (por exemplo, dentro de um grupo de aminoácidos com propriedades e/ou cadeias laterais semelhantes) podem ser feitas, de modo a manter ou não alterar significativamente as propriedades. Os aminoácidos podem ser agrupados de acordo com as semelhanças nas propriedades de suas cadeias laterais (ver, por exemplo, Lehninger, Biochemistry 73-75 (2ª ed. 1975)): (1) não polar: Ala (A), Val (V), Leu (L), Ile (I), Pro (P), Phe (F), Trp (W), Met (M); (2) polar sem carga: Gly (G), Ser (S), Thr (T), Cys (C), Tyr (Y), Asn (N), Gln (Q); (3) ácidos: Asp (D), Glu (E); e (4) básicos: Lys (K), Arg (R), His (H).

[00453] Alternativamente, os resíduos de ocorrência natural podem ser divididos em grupos com base em propriedades comuns da cadeia lateral: (1) hidrofóbico: Norleucina, Met, Ala, Val, Leu, Ile; (2) hidrofílico neutro: Cys, Ser, Thr, Asn, Gln; (3) ácido: Asp, Glu; (4) básico: His, Lys, Arg; (5) resíduos que influenciam a orientação da cadeia: Gly, Pro; e (6) aromáticos: Trp, Tyr, Phe.

[00454] As substituições não conservativas implicam a troca de um membro de uma dessas classes por outra classe.

Tais resíduos substituídos também podem ser introduzidos nos sítios de substituição conservativa ou nos sítios restantes (não conservados). Consequentemente, em uma modalidade, um anticorpo ou fragmento do mesmo que se liga a um epítopo SIRPα compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 35%, pelo menos 40%, pelo menos 45%, pelo menos 50%, pelo menos 55%, pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, ou pelo menos 99% idêntica à sequência de aminoácidos de um anticorpo monoclonal murino descrito neste documento.

Em uma modalidade, um anticorpo ou fragmento do mesmo que se liga a um epítopo SIRPα compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 35%, pelo menos 40%, pelo menos 45%, pelo menos 50%, pelo menos 55%, pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95% ou pelo menos 99% idêntica a uma sequência de aminoácidos representada nas Tabelas 1-4 e 9-10. Em ainda outra modalidade, um anticorpo ou um fragmento do mesmo que se liga a um epítopo SIRPα compreende uma sequência de aminoácidos VH CDR e/ou VL CDR que é pelo menos 35%, pelo menos 40%, pelo menos 45%, pelo menos 50%, pelo menos 55%, pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, ou pelo menos pelo menos 99% idêntica a uma sequência de aminoácidos VH CDR representada na Tabela 2 e/ou uma sequência de aminoácidos VL CDR representada na Tabela 1. As variações podem ser feitas usando métodos conhecidos na técnica, tais como mutagênese mediada por oligonucleotídeos (direcionada ao sítio), triagem de alaninas e mutagênese por PCR.

A mutagênese direcionada ao sítio (ver, por exemplo, Carter, 1986, Biochem J. 237:1-7; e Zoller et al., 1982, Nucl.

Acids Res. 10:6487-500),

mutagênese de cassete (ver, por exemplo, Wells et al., 1985, Gene 34:315-23), ou outras técnicas conhecidas podem ser realizadas no DNA clonado para produzir o DNA variante do anticorpo anti-SIRPα.

[00455] Qualquer resíduo de cisteína não envolvido na manutenção da conformação adequada do anticorpo anti-SIRPα pode também ser substituído, por exemplo, por outro aminoácido, tal como alanina ou serina, para melhorar a estabilidade oxidativa da molécula e prevenir reticulação aberrante. Por outro lado, ligação(ões) de cisteína pode(m) ser adicionada(s) ao anticorpo anti-SIRPα para melhorar a sua estabilidade (por exemplo, quando o anticorpo é um fragmento de anticorpo tal como um fragmento Fv).

[00456] Em algumas modalidades, uma molécula de anticorpo anti-SIRPα da presente divulgação é um anticorpo "desimunizado". Um anticorpo anti- SIRPα "desimunizado" é um anticorpo derivado de um anticorpo anti-SIRPα humanizado ou quimérico, que possui uma ou mais alterações em sua sequência de aminoácidos, resultando em uma redução da imunogenicidade do anticorpo, comparado com o respectivo anticorpo original não desimunizado. Um dos procedimentos para gerar tais mutantes de anticorpo envolve a identificação e remoção de epítopos de células T da molécula de anticorpo. Em uma primeira etapa, a imunogenicidade da molécula de anticorpo pode ser determinada por vários métodos, por exemplo, por determinação in vitro de epítopos de células T ou predição in silico de tais epítopos, conforme conhecido na técnica. Uma vez que os resíduos críticos para a função do epítopo da célula T forem identificados, as mutações podem ser feitas para remover a imunogenicidade e reter a atividade do anticorpo. Para revisão, ver, por exemplo, Jones et al., 2009, Methods in Molecular Biology 525:405-23.

4.3.2.1 Maturação da Afinidade in vitro

[00457] Em algumas modalidades, as variantes de anticorpo com uma propriedade melhorada, tal como afinidade, estabilidade ou nível de expressão, em comparação com um anticorpo parental, podem ser preparadas por maturação por afinidade in vitro. Como o protótipo natural, a maturação por afinidade in vitro é baseada nos princípios de mutação e seleção. As bibliotecas de anticorpos são apresentadas como fragmentos do domínio Fab, scFv ou V, ou na superfície de um organismo (por exemplo, fagos, bactérias, leveduras ou células de mamíferos) ou em associação (por exemplo, covalentemente ou não covalentemente) com o seu mRNA ou DNA de codificação. A seleção por afinidade dos anticorpos exibidos permite o isolamento de organismos ou complexos que transportam a informação genética que codifica os anticorpos. Duas ou três rodadas de mutação e seleção usando métodos de exibição, tal como exibição de fago, geralmente resultam em fragmentos de anticorpos com afinidades na faixa nanomolar baixa. Os anticorpos maturados por afinidade podem ter afinidades nanomolares ou mesmo picomolares para o antígeno alvo.

[00458] A exibição de fago é um método difundido para exibição e seleção de anticorpos. Os anticorpos são exibidos na superfície dos bacteriófagos Fd ou M13 como fusões para a proteína de revestimento do bacteriófago. A seleção envolve a exposição ao antígeno para permitir que anticorpos exibidos por fagos liguem seus alvos, um processo denominado "panning". Os fagos ligados ao antígeno são recuperados e usados para infectar bactérias para produzir fagos para rodadas adicionais de seleção. Para revisão, ver, por exemplo, Hoogenboom, 2002, Methods. Mol. Biol. 178:1-37; e Bradbury e Marks, 2004, J. Immunol. Methods 290:29-49.

[00459] Em um sistema de exibição de levedura (ver, por exemplo, Boder et al., 1997, Nat. Biotech. 15:553–57; e Chao et al., 2006, Nat. Protocols 1:755- 68), o anticorpo pode ser exibido como fusões variáveis de cadeia única (scFv) em que as cadeias pesadas e leves são conectadas por um ligante flexível. A scFv é fundida à subunidade de adesão da proteína de aglutinina de levedura Aga2p, que se liga à parede celular de levedura através de ligações dissulfeto para Aga1p.

A exibição de uma proteína por meio de Aga2p projeta a proteína para longe da superfície da célula, minimizando interações potenciais com outras moléculas na parede celular da levedura.

Separação magnética e citometria de fluxo são usadas para triagem da biblioteca para selecionar anticorpos com afinidade ou estabilidade melhoradas.

A ligação a um antígeno solúvel de interesse é determinada por marcação de levedura com antígeno biotinilado e um reagente secundário, tal como estreptavidina conjugada com um fluoróforo.

As variações na expressão de superfície do anticorpo podem ser medidas através de marcação imunofluorescente de tanto hemaglutinina quanto marcação de epítopo c-Myc que flanqueia o scFv.

Foi demonstrado que a expressão se correlaciona com a estabilidade da proteína exibida e, portanto, os anticorpos podem ser selecionados para estabilidade melhorada, assim como afinidade (ver, por exemplo, Shusta et al., 1999, J.

Mol.

Biol. 292:949-56). Uma vantagem adicional da exibição de levedura é que as proteínas exibidas são dobradas no retículo endoplasmático das células de levedura eucarióticas, tirando vantagem de chaperonas de retículo endoplasmático e maquinário de controle de qualidade.

Uma vez que a maturação está completa, a afinidade do anticorpo pode ser convenientemente "titulada" enquanto exibida na superfície da levedura, eliminando a necessidade de expressão e purificação de cada clone.

Uma limitação teórica da exibição da superfície de levedura é o tamanho da biblioteca funcional potencialmente menor do que o de outros métodos de exibição; no entanto, uma abordagem recente usa o sistema de acoplamento de células de levedura para criar diversidade combinatória estimada ser 1014 em tamanho (ver, por exemplo, Publicação de Patente US 2003/0186374; e Blaise et al., 2004, Gene 342:211–18).

[00460] Na exibição de ribossomo, complexos de anticorpo-ribossomo- mRNA (ARM) são gerados para seleção em um sistema livre de células. A biblioteca de DNA que codifica para uma biblioteca específica de anticorpos é geneticamente fundida a uma sequência espaçadora sem um códon de parada. Esta sequência espaçadora, quando traduzida, ainda está ligada ao peptidil tRNA e ocupa o túnel ribossomal e, assim, permite que a proteína de interesse se projete para fora do ribossomo e se dobre. O complexo resultante de mRNA, ribossomo e proteína pode se ligar ao ligante ligado à superfície, permitindo o isolamento simultâneo do anticorpo e de seu mRNA codificador através de captura por afinidade com o ligante. O mRNA ligado ao ribossomo é então transcrito reversamente em cDNA, que pode então sofrer mutagênese e ser usado na próxima rodada de seleção (ver, por exemplo, Fukuda et al., 2006, Nucleic Acids Res. 34:e127). Na exibição de mRNA, uma ligação covalente entre o anticorpo e o mRNA é estabelecida usando puromicina como uma molécula adaptadora (Wilson et al., 2001, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 98:3750-55).

[00461] Como esses métodos são realizados inteiramente in vitro, eles fornecem duas vantagens principais sobre outras tecnologias de seleção. Em primeiro lugar, a diversidade da biblioteca não é limitada pela eficiência de transformação das células bacterianas, mas apenas pelo número de ribossomos e diferentes moléculas de mRNA presentes no tubo de ensaio. Em segundo lugar, mutações aleatórias podem ser introduzidas facilmente após cada rodada de seleção, por exemplo, por polimerases não revisadas, já que nenhuma biblioteca deve ser transformada após qualquer etapa de diversificação.

[00462] Em um sistema de exibição de células de mamíferos (ver, por exemplo, Bowers et al., 2011, Proc Natl Acad Sci USA. 108:20455-60), uma biblioteca totalmente humana de IgGs é construída com base na sequência germinativa de segmentos de gene V unidos a regiões D(J) precombinadas. As regiões V de comprimento total para a cadeia pesada e a cadeia leve são montadas com as regiões constantes da cadeia pesada e da cadeia leve humana e transfectadas em uma linhagem celular de mamífero (por exemplo, HEK293). A biblioteca transfectada é expandida e submetida a várias rodadas de seleção negativa contra grânulos magnéticos acoplados a estreptavidina (SA), seguido por uma rodada de seleção positiva contra grânulos magnéticos acoplados a SA revestidos com proteína alvo biotinilada, fragmento de peptídeo ou epítopo. As células positivamente selecionadas são expandidas e, então, separadas por rodadas de FACS para isolar clones de células únicas exibindo anticorpos que se ligam especificamente à proteína alvo, ao fragmento peptídico ou epítopo. Os pares de cadeia leve e pesada destes clones de célula única são retransfectados com AID para maturação adicional. Várias rodadas de exibição de célula de mamífero, acoplada com hipermutação somática desencadeada por AID, geram anticorpos de alta especificidade e alta afinidade.

[00463] A diversidade também pode ser introduzida nas CDRs ou em todos os genes V das bibliotecas de anticorpos de uma maneira direcionada ou por meio de introdução aleatória. A abordagem anterior inclui alvejar sequencialmente todos as CDRs de um anticorpo por meio de um nível alto ou baixo de mutagênese ou alvejar "hot spots" isolados de hipermutações somáticas (ver, por exemplo, Ho et al., 2005, J. Biol. Chem. 280:607-17) ou resíduos suspeitos de afetar a afinidade em uma base experimental ou razões estruturais. Em uma modalidade específica, a hipermutação somática é realizada por hipermutação somática desencadeada por AID, por exemplo, usando a plataforma SHM-XELTM (AnaptysBio, San Diego, CA). As mutações aleatórias podem ser introduzidas ao longo de todo o gene V usando cepas mutantes de E. coli, replicação propensa a erros com polimerases de DNA (ver, por exemplo, Hawkins et al., 1992, J. Mol. Biol. 226:889-96), ou replicases de RNA. A diversidade também pode ser introduzida pela substituição de regiões que são naturalmente diversas por meio de embaralhamento de DNA ou técnicas semelhantes (ver, por exemplo, Lu et al., 2003, J. Biol. Chem. 278:43496-507; Patentes US nº. 5.565.332 e 6.989.250). As técnicas alternativas visam alças hipervariáveis que se estendem em resíduos da região de framework (ver, por exemplo, Bond et al., 2005, J. Mol. Biol. 348:699-709) empregam deleções e inserções de alça em CDRs ou usam diversificação baseada em hibridização (ver, por exemplo, Publicação de Patente US nº. 2004/0005709). Métodos adicionais de geração de diversidade em CDRs são divulgados, por exemplo, na Patente US nº. 7.985.840. Outros métodos que podem ser usados para gerar bibliotecas de anticorpos e/ou maturação por afinidade de anticorpos são divulgados, por exemplo, em Patentes US nº. 8.685.897 e 8.603.930, e Patente US nº. 2014/0170705, 2014/0094392, 2012/0028301, 2011/0183855 e 2009/0075378, cada um dos quais são incorporados neste documento por referência.

[00464] A triagem das bibliotecas pode ser realizada por várias técnicas conhecidas na técnica. Por exemplo, o SIRPα pode ser imobilizado em suportes sólidos, colunas, pinos ou membranas/outros filtros de celulose/poli(fluoreto de vinilideno), expresso em células hospedeiras afixadas a placas de adsorção ou usado em classificação de células, ou conjugado a biotina para captura com grânulos revestidos com estreptavidina ou usado em qualquer outro método para panning de bibliotecas de exibição.

[00465] Para revisão de métodos de maturação de afinidade in vitro, ver, por exemplo, Hoogenboom, 2005, Nature Biotechnology 23:1105-16; Quiroz e Sinclair, 2010, Revista Ingeneria Biomedia 4:39-51; e referências neste documento.

4.3.2.2 Modificações de Anticorpos Anti-SIRPα

[00466] As modificações covalentes de anticorpos anti-SIRPα estão incluídas no escopo da presente divulgação. As modificações covalentes incluem a reação de resíduos de aminoácidos direcionados de um anticorpo anti-SIRPα com um agente de derivatização orgânico que é capaz de reagir com cadeias laterais selecionadas ou os resíduos N- ou C- terminais do anticorpo anti-SIRPα. Outras modificações incluem a desamidação de resíduos glutaminil e asparaginil para os resíduos de glutamil e aspartil correspondentes, respectivamente, hidroxilação de prolina e lisina, fosforilação de grupos hidroxil de resíduos de seril ou treonil, metilação dos grupos α-amino das cadeias laterais de lisina, arginina e histidina (ver, por exemplo, Creighton, Proteins: Structure and Molecular Properties 79-86 (1983)), acetilação da amina N-terminal e amidação de qualquer grupo carboxil C-terminal.

[00467] Outros tipos de modificação covalente do anticorpo anti-SIRPα incluídas no escopo da presente divulgação incluem a alteração do padrão de glicosilação nativo do anticorpo ou polipeptídeo (ver, por exemplo, Beck et al., 2008, Curr. Pharm. Biotechnol. 9:482-501 e Walsh, 2010, Drug Discov. Today 15:773-80), e ligando o anticorpo a um de uma variedade de polímeros não proteicos, por exemplo, polietilenoglicol (PEG), polipropilenoglicol ou polioxialquilenos, na maneira estabelecida, por exemplo, nas Patentes US nº.

4.640.835; 4.496.689; 4.301.144; 4.670.417; 4.791.192; ou 4.179.337.

[00468] Um anticorpo anti-SIRPα da presente divulgação também pode ser modificado para formar moléculas quiméricas compreendendo um anticorpo anti-SIRPα fundido a outro polipeptídeo heterólogo ou sequência de aminoácidos, por exemplo, um marcador de epítopo (ver, por exemplo, Terpe, 2003, Appl. Microbiol. Biotechnol. 60:523-33) ou a região Fc de uma molécula de IgG (ver, por exemplo, Aruffo, Antibody Fusion Proteins 221-42 (Chamow e Ashkenazi eds., 1999)).

[00469] Também são fornecidas neste documento proteínas de fusão compreendendo um anticorpo fornecido neste documento que se liga a um antígeno SIRPα e um polipeptídeo heterólogo. Em algumas modalidades, o polipeptídeo heterólogo ao qual o anticorpo é fundido é útil para direcionar o anticorpo a células tendo SIRPα expresso na superfície celular.

[00470] Também são fornecidos neste documento painéis de anticorpos que se ligam a um antígeno SIRPα. Em modalidades específicas, os painéis de anticorpos têm diferentes taxas de associação, diferentes taxas de dissociação, diferentes afinidades para um antígeno SIRPα e/ou diferentes especificidades para um antígeno SIRPα. Em algumas modalidades, os painéis compreendem ou consistem em cerca de 10, cerca de 25, cerca de 50, cerca de 75, cerca de 100, cerca de 125, cerca de 150, cerca de 175, cerca de 200, cerca de 250, cerca de 300, cerca de 350, cerca de 400, cerca de 450, cerca de 500, cerca de 550, cerca de 600, cerca de 650, cerca de 700, cerca de 750, cerca de 800, cerca de 850, cerca de 900, cerca de 950 ou cerca de 1000 anticorpos ou mais. Os painéis de anticorpos podem ser usados, por exemplo, em placas de 96 poços ou 384 poços, para ensaios tais como ELISAs.

4.3.3 Preparação de anticorpos anti-SIRPα

[00471] Os anticorpos anti-SIRPα podem ser produzidos através da cultura de células transformadas ou transfectadas com um vetor contendo ácidos nucleicos que codificam o anticorpo anti-SIRPα. As sequências polinucleotídicas que codificam os componentes polipeptídicos do anticorpo da presente divulgação podem ser obtidas usando técnicas recombinantes padrão. As sequências polinucleotídicas desejadas podem ser isoladas e sequenciadas a partir de células produtoras de anticorpos, tais como células de hibridoma. Alternativamente, os polinucleotídeos podem ser sintetizados usando técnicas de PCR ou sintetizador de nucleotídeo. Uma vez obtidas, as sequências que codificam os polipeptídeos são inseridas em um vetor recombinante capaz de replicar e expressar polinucleotídeos heterólogos em células hospedeiras. Muitos vetores que estão disponíveis e conhecidos na técnica podem ser usados para a finalidade da presente divulgação. A seleção de um vetor apropriado dependerá principalmente do tamanho dos ácidos nucleicos a serem inseridos no vetor e da célula hospedeira específica a ser transformada com o vetor. As células hospedeiras adequadas para a expressão de anticorpos da presente divulgação incluem procariotas, tais como Archaebacteria e Eubacteria, incluindo organismos Gram-negativos ou Gram-positivos, micróbios eucarióticos, tais como fungos ou leveduras filamentosas, células de invertebrados, tais como células de insetos ou plantas, e células de vertebrados, tais como linhagens de células hospedeiras de mamíferos. As células hospedeiras são transformadas com os vetores de expressão descritos acima e cultivadas em meios nutrientes convencionais modificados conforme apropriado para induzir promotores, selecionar transformantes ou amplificar os genes que codificam as sequências desejadas. Os anticorpos produzidos pelas células hospedeiras são purificados usando métodos de purificação de proteínas padrão conforme conhecidos na técnica.

[00472] Os métodos para a produção de anticorpos, incluindo a construção, expressão e purificação do vetor, são adicionalmente descritos em Plückthun et al., Antibody Engineering: Produzindo antibodies in Escherichia coli: From PCR to fermentation 203-52 (McCafferty et al. eds., 1996); Kwong e Rader, E. coli Expression and Purification of Fab Antibody Fragments, in Current Protocols in Protein Science (2009); Tachibana e Takekoshi, Production of Antibody Fab Fragments in Escherischia coli, em Antibody Expression and Production (Al- Rubeai ed., 2011); e Therapeutic Monoclonal Antibodies: From Bench to Clinic (An ed., 2009).

[00473] É, evidentemente, contemplado que métodos alternativos, que são bem conhecidos na técnica, possam ser empregados para preparar anticorpos anti-SIRPα. Por exemplo, a sequência de aminoácidos apropriada, ou porções da mesma, pode ser produzida por síntese direta de peptídeos usando técnicas de fase sólida (ver, por exemplo, Stewart et al., Solid-Phase Peptide Synthesis (1969); e Merrifield, 1963, J. Am. Chem. Soc. 85:2149-54). A síntese proteica in vitro pode ser realizada usando técnicas manuais ou por automação. Várias porções do anticorpo anti-SIRPα podem ser quimicamente sintetizadas separadamente e combinadas usando métodos químicos ou enzimáticos para produzir o anticorpo anti-SIRPα desejado. Alternativamente, os anticorpos podem ser purificados a partir de células ou fluidos corporais, tais como leite, de um animal transgênico manipulado para expressar o anticorpo, conforme divulgado, por exemplo, nas Patentes US nº. 5.545.807 e 5.827.690.

4.3.4 Imunoconjugados

[00474] A presente divulgação também fornece conjugados compreendendo qualquer um dos anticorpos anti-SIRPα da presente divulgação covalentemente vinculado por um ligante sintético a um ou mais agentes não- anticorpo.

[00475] Em algumas modalidades, os anticorpos fornecidos neste documento são conjugados ou fundidos de forma recombinante, por exemplo, a uma molécula detectável.

[00476] Tal detecção pode ser realizada, por exemplo, acoplando o anticorpo a substâncias detectáveis incluindo, mas não limitado a, várias enzimas, tais como, mas não limitado a, peroxidase de rábano, fosfatase alcalina, beta-galactosidase ou acetilcolinesterase; grupos prostéticos, tais como, mas não limitados a, estreptavidina/biotina ou avidina/biotina; materiais fluorescentes, tais como, mas não limitados a, umbeliferona, fluoresceína, isotiocinato de fluoresceína, rodamina, diclorotriazinilamina fluoresceína,

cloreto de dansil ou ficoeritrina; materiais luminescentes, tais como, mas não limitado a, luminol; materiais bioluminescentes, tais como, mas não limitados a, luciferase, luciferina ou aequorina; material quimioluminescente, tal como, mas não limitado a, um composto à base de acridínio ou um HALOTAG; materiais radioativos, tais como, mas não limitados a, iodo (131I, 125I, 123I e 121I,), carbono (14C), enxofre (35S), trítio (3H), índio (115In, 113In, 112In e 111In), tecnécio (99Tc), tálio (201Ti), gálio (68Ga e 67 Ga), paládio (103Pd), molibdênio (99Mo), xenônio (133Xe), flúor (18F), 153Sm, 177Lu, 159Gd, 149Pm, 140La, 175Yb, 166Ho, 90Y, 47Sc, 186Re, 188Re, 142Pr, 105 Rh, 97Ru, 68Ge, 57Co, 65Zn, 85Sr, 32P, 153Gd, 169Yb, 51Cr, 54Mn, 75Se, 113Sn ou 117Sn; metais emissores de pósitrons usando várias tomografias de emissão de pósitrons; e íons metálicos paramagnéticos não radioativos.

[00477] São também fornecidos neste documento anticorpos que são recombinantemente fundidos ou quimicamente conjugados (conjugações covalentes ou não covalentes) a uma proteína ou polipeptídeo heterólogo (ou fragmento do mesmo, por exemplo, a um polipeptídeo de cerca de 10, cerca de 20, cerca de 30, cerca de 40, cerca de 50, cerca de 60, cerca de 70, cerca de 80, cerca de 90 ou cerca de 100 aminoácidos) para gerar proteínas de fusão, assim como os usos do mesmo. Em particular, são fornecidas neste documento proteínas de fusão compreendendo um fragmento de ligação ao antígeno de um anticorpo fornecido neste documento (por exemplo, um fragmento Fab, fragmento Fc, fragmento Fv, fragmento F(ab)2, um domínio VH, um VH CDR, um domínio VL, ou um VL CDR) e uma proteína, polipeptídeo ou peptídeo heterólogo. Em uma modalidade, a proteína, polipeptídeo ou peptídeo heterólogo ao qual o anticorpo é fundido é útil para direcionar o anticorpo para um tipo de célula específico, tal como uma célula que expressa SIRPα. Por exemplo, um anticorpo que se liga a um receptor de superfície celular expresso por um tipo de célula específico pode ser fundido ou conjugado com um anticorpo modificado fornecido neste documento.

[00478] Além disso, os anticorpos fornecidos neste documento podem ser fundidos a sequências marcadoras ou "tag", tal como um peptídeo, para facilitar a purificação. Em modalidades específicas, a sequência de aminoácidos do marcador ou tag é um peptídeo hexa-histidina, tal como a tag fornecida em um vetor pQE (ver, por exemplo, QIAGEN, Inc.), entre outros, muitos dos quais estão comercialmente disponíveis. Por exemplo, conforme descrito em Gentz et al., 1989, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86:821-24, a hexa-histidina fornece uma purificação conveniente da proteína de fusão. Outros marcadores de peptídeo úteis para purificação incluem, mas não estão limitados ao marcador de hemaglutinina ("HA"), que corresponde a um epítopo derivado da proteína hemaglutinina da gripe (Wilson et al., 1984, Cell 37:767-78), e o marcador "FLAG".

[00479] Os métodos para fundir ou conjugar frações (incluindo polipeptídeos) a anticorpos são conhecidos (ver, por exemplo, Arnon et al., Monoclonal Antibodies for Immunotargeting of Drugs in Cancer Therapy, in Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy 243-56 (Reisfeld et al. eds., 1985); Hellstrom et al., Antibodies for Drug Delivery, in Controlled Drug Delivery 623-53 (Robinson et al. eds., 2ª ed. 1987); Thorpe, Antibody Carriers of Cytotoxic Agents in Cancer Therapy: A Review, in Monoclonal Antibodies: Biological and Clinical Applications 475-506 (Pinchera et al. eds., 1985); Analysis, Results, and Future Prospective of therapeutic Use of Radiolabeled Antibody in Cancer Therapy, in Monoclonal Antibodies for Cancer Detection and Therapy 303-16 (Baldwin et al. eds., 1985); Thorpe et al., 1982, Immunol. Rev. 62:119-58; Patentes US nº.

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5.908.626; 5.844.095; e 5.112.946; EP 307.434; EP 367.166; EP 394.827; Publicações PCT WO 91/06570, WO 96/04388, WO 96/22024, WO 97/34631 e

WO 99/04813; Ashkenazi et al., 1991, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 88: 10535-39; Traunecker et al., 1988, Nature, 331:84-86; Zheng et al., 1995, J. Immunol. 154:5590-600; e Vil et al., 1992, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:11337-41).

[00480] As proteínas da fusão podem ser geradas, por exemplo, através das técnicas de embaralhamento de genes, embaralhamento de motivo, embaralhamento de éxon e/ou embaralhamento de códon (coletivamente referido como "embaralhamento de DNA"). O embaralhamento de DNA pode ser empregado para alterar as atividades de anticorpos anti-SIRPα conforme fornecido neste documento, incluindo, por exemplo, anticorpos com afinidades mais altas e taxas de dissociação mais baixas (ver, por exemplo, Patentes US nº.

5.605.793; 5.811.238; 5.830.721; 5.834.252; e 5.837.458; Patten et al., 1997, Curr. Opinion Biotechnol. 8:724-33; Harayama, 1998, Trends Biotechnol. 16(2):76-82; Hansson et al., 1999, J. Mol. Biol. 287:265-76; e Lorenzo e Blasco, 1998, Biotechniques 24(2):308-13). Anticorpos, ou os anticorpos codificados, podem ser alterados por serem submetidos a mutagênese aleatória por PCR propensa a erros, inserção aleatória de nucleotídeos ou outros métodos antes da recombinação. Um polinucleotídeo que codifica um anticorpo fornecido neste documento pode ser recombinado com um ou mais componentes, motivos, seções, partes, domínios, fragmentos, etc. de uma ou mais moléculas heterólogas.

[00481] Um anticorpo fornecido neste documento também pode ser conjugado a um segundo anticorpo para formar um heteroconjugado de anticorpo conforme descrito, por exemplo, na Patente US nº. 4.676.980.

[00482] Anticorpos que se ligam a SIRPα, conforme fornecido neste documento, podem também ser ligados a suportes sólidos, que são particularmente úteis para imunoensaios ou purificação do antígeno alvo. Tais suportes sólidos incluem, mas não estão limitados a vidro, celulose,

poliacrilamida, nylon, poliestireno, cloreto de polivinil ou polipropileno.

[00483] O ligante pode ser um "ligante clivável" facilitando a liberação do agente conjugado na célula, mas os ligantes não cliváveis também são contemplados neste documento. Os ligantes para uso nos conjugados da presente divulgação incluem, sem limitação, ligantes ácido lábeis (por exemplo, ligantes hidrazona), ligantes contendo dissulfeto, ligantes sensíveis à peptidase (por exemplo, ligantes peptídicos compreendendo aminoácidos, por exemplo, valina e/ou citrulina, tal como citrulina-valina ou fenilalanina-lisina), ligantes fotolábeis, ligantes dimetil (ver, por exemplo, Chari et al., 1992, Cancer Res. 52:127-31; e Patente US nº. 5.208.020), ligantes tioéter ou ligantes hidrofílicos projetados para evitar resistência mediada por transportador de múltiplos fármacos (ver, por exemplo, Kovtun et al., 2010, Cancer Res. 70:2528-37).

[00484] Os conjugados do anticorpo e agente podem ser preparados usando uma variedade de agentes de acoplamento proteicos bifuncionais tais como BMPS, EMCS, GMBS, HBVS, LC-SMCC, MBS, MPBH, SBAP, SIA, SIAB, SMCC, SMPB, SMPH, sulfo-EMCS, sulfo-GMBS, sulfo-KMUS, sulfo-MBS, sulfo-SIAB, sulfo-SMCC, sulfo-SMPB e SVSB (succinimidil-(4-vinilsulfona)benzoato). A presente divulgação contempla ainda que os conjugados de anticorpos e agentes podem ser preparados usando quaisquer métodos adequados, conforme divulgado na técnica (ver, por exemplo, Bioconjugate Techniques (Hermanson ed., 2ª ed. 2008)).

[00485] As estratégias de conjugação convencionais para anticorpos e agentes foram baseadas em químicas de conjugação aleatória envolvendo o grupo ε-amino dos resíduos Lys ou o grupo tiol dos resíduos Cys, o que resulta em conjugados heterogêneos. Técnicas recentemente desenvolvidas permitem a conjugação específica de sítio a anticorpos, resultando em carga homogênea e evitando subpopulações conjugadas com ligação ao antígeno alterado ou farmacocinética. Esses incluem a manipulação de "tiomabes" compreendendo substituições de cisteína em posições nas cadeias pesada e leve que fornecem grupos tiol reativos e não interrompem a dobra da imunoglobulina e montagem ou alteram a ligação ao antígeno (ver, por exemplo, Junutula et al., 2008, J. Immunol. Meth. 332: 41-52; e Junutula et al., 2008, Nature Biotechnol. 26:925- 32). Em outro método, a selenocisteína é inserida cotranslacionalmente em uma sequência de anticorpo recodificando o códon de parada UGA da terminação para a inserção de selenocisteína, permitindo a conjugação covalente específica do sítio no grupo selenol nucleofílico da selenocisteína na presença de outros aminoácidos naturais (ver, por exemplo, Hofer et al., 2008, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 105:12451-56; e Hofer et al., 2009, Biochemistry 48(50):12047-57).

4.4 Métodos de Uso dos Anticorpos e Composições

[00486] São fornecidos neste documento métodos para aumentar a fagocitose por um macrófago, incluindo o contato do macrófago com uma quantidade eficaz de um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento, em que a fagocitose por um macrófago é aumentada em comparação com aquela por um macrófago não tratado ou por um macrófago tratado com um anticorpo de controle de isotipo.

[00487] Também são fornecidos neste documento métodos para aumentar uma porcentagem de macrófagos fagocitóticos em uma população de macrófagos, compreendendo o contato dos macrófagos com uma quantidade eficaz de um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento, em que a porcentagem de macrófagos fagocitóticos em uma população de macrófagos é aumentada em comparação com macrófagos não tratados ou macrófagos tratados com um anticorpo de controle de isotipo.

[00488] São fornecidos neste documento adicionalmente métodos para aumentar a fagocitose de células cancerosas por uma população de macrófagos, compreendendo o contato das células cancerosas, dos macrófagos ou de ambas as células cancerosas e os macrófagos com uma quantidade eficaz de um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento, em que a fagocitose de células cancerosas por uma população de macrófagos é aumentada em comparação com macrófagos não tratados ou por macrófagos tratados com um anticorpo de controle de isotipo.

[00489] Conforme discutido adicionalmente acima, em certas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, as células cancerosas e/ou os macrófagos podem incluir um, dois, três, quatro, cinco, seis, sete, oito, nove, dez ou mais ou todos os haplótipos de SIRPα conhecidos por uma pessoa versada na técnica, por exemplo, um, dois, três, quatro, cinco, seis, sete, oito, nove, dez ou mais, ou todos os polimorfismos de SIRPα descritos em Takenaka K, et al., Nat Immunol. Dezembro de 2007; 8(12):1313-23.

[00490] Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem qualquer um ou qualquer combinação de dois, três, quatro, cinco ou seis de SIRPα selecionados do grupo que consiste em haplótipos de SIRPα v1, v2, v3, v4, v5 e v6 (SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO:149 no domínio IgV, SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO:150 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO:151 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO:152 no domínio IgV, SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO:153 no domínio IgV e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO:154 no domínio IgV).

[00491] Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem um polimorfismo de SIRPα selecionado do grupo que consiste em SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO:149 no domínio IgV, SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO:150 no domínio

IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO:151 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO:152 no domínio IgV, SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO:153 no domínio IgV e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO:154 no domínio IgV.

[00492] Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem dois ou mais polimorfismos de SIRPα selecionados do grupo que consiste em SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO:149 no domínio IgV, SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO:150 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO:151 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO:152 no domínio IgV, SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO:153 no domínio IgV e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO:154 no domínio IgV.

[00493] Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO:149 no domínio IgV. Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO:150 no domínio IgV. Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO:151 no domínio IgV. Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO:152 no domínio IgV. Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO:153 no domínio IgV. Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO:154 no domínio IgV.

[00494] Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO:149 no domínio IgV e SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO:150 no domínio IgV. Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO:149 no domínio IgV e SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO:151 no domínio IgV. Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO:149 no domínio IgV e SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO:152 no domínio IgV. Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO:149 no domínio IgV e SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO:153 no domínio IgV. Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO:149 no domínio IgV e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO:154 no domínio IgV.

[00495] Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO:150 no domínio IgV e SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO:151 no domínio IgV. Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO:150 no domínio IgV e SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO:152 no domínio IgV. Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO:150 no domínio IgV e SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO:153 no domínio IgV. Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO:150 no domínio IgV e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO:154 no domínio IgV.

[00496] Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO:151 no domínio IgV e SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO:152 no domínio IgV. Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO:151 no domínio IgV e SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO:153 no domínio IgV. Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO:151 no domínio IgV e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO:154 no domínio IgV.

[00497] Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO:152 no domínio IgV e SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO:153 no domínio IgV. Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO:152 no domínio IgV e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO:154 no domínio IgV. Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, as células cancerosas e/ou os macrófagos adequados para os métodos fornecidos neste documento incluem SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO:153 no domínio IgV e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO:154 no domínio IgV.

[00498] Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO:149 no domínio IgV, SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO:150 no domínio IgV e SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO:151 no domínio IgV. Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO:149 no domínio IgV, SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO:150 no domínio IgV e SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO:152 no domínio IgV. Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO:149 no domínio IgV, SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO:150 no domínio IgV e SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO:153 no domínio IgV. Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO:149 no domínio IgV, SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO:150 no domínio IgV e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO:154 no domínio IgV.

[00499] Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO:149 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO:151 no domínio IgV e SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO:152 no domínio IgV. Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO:149 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO:151 no domínio IgV e SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO:153 no domínio IgV. Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO:149 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO:151 no domínio IgV e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO:154 no domínio IgV.

[00500] Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO:149 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO:152 no domínio IgV e SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO:153 no domínio IgV. Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO:149 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO:152 no domínio IgV e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO:154 no domínio IgV.

[00501] Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO:149 no domínio IgV, SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO:153 no domínio IgV e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO:154 no domínio IgV.

[00502] Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO:150 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO:151 no domínio IgV e SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO:152 no domínio IgV. Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO:150 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO:151 no domínio IgV e SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO:153 no domínio IgV. Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO:150 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO:151 no domínio IgV e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO:154 no domínio IgV.

[00503] Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO:151 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO:152 no domínio IgV e SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO:153 no domínio IgV. Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO:151 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO:152 no domínio IgV e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO:154 no domínio IgV. Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO:152 no domínio IgV, SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO:153 no domínio IgV e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO:154 no domínio IgV.

[00504] Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO:149 no domínio IgV, SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO:150 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO:151 no domínio IgV e SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO:152 no domínio IgV. Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO:149 no domínio IgV, SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO:150 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO:151 no domínio IgV e SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO:153 no domínio IgV. Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO:149 no domínio IgV, SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO:150 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO:151 no domínio IgV e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO:154 no domínio IgV.

[00505] Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO:149 no domínio IgV, SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO:150 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO:152 no domínio IgV e SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO:153 no domínio IgV. Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO:149 no domínio IgV, SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO:150 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO:152 no domínio IgV e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO:154 no domínio IgV. Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO:149 no domínio IgV, SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO:150 no domínio IgV, SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO:153 no domínio IgV e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO:154 no domínio IgV.

[00506] Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO:149 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO:151 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO:152 no domínio IgV e SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO:153 no domínio IgV. Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO:149 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO:151 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO:152 no domínio IgV e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO:154 no domínio IgV. Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO:149 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO:151 no domínio IgV, SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO:153 no domínio IgV e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO:154 no domínio IgV.

[00507] Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO:149 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO:152 no domínio IgV, SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO:153 no domínio IgV e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO:154 no domínio IgV.

[00508] Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO:150 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO:151 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO:152 no domínio IgV e SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO:153 no domínio IgV. Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO:150 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO:151 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO:152 no domínio IgV e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO:154 no domínio IgV. Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO:150 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO:151 no domínio IgV, SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO:153 no domínio IgV e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO:154 no domínio IgV.

[00509] Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO:150 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO:152 no domínio IgV, SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO:153 no domínio IgV e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO:154 no domínio IgV. Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO:151 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO:152 no domínio IgV, SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO:153 no domínio IgV e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO:154 no domínio IgV.

[00510] Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO:149 no domínio IgV, SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO:150 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO:151 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO:152 no domínio IgV e SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO:153 no domínio IgV. Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO:149 no domínio IgV, SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO:150 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO:151 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO:152 no domínio IgV e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO:154 no domínio IgV. Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO:149 no domínio IgV, SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO:150 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO:151 no domínio IgV, SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO:153 no domínio IgV e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO:154 no domínio IgV. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-SIRPα ou fragmentos dos mesmos fornecidos neste documento se ligam especificamente ao SIRPα humano (por exemplo, qualquer um ou qualquer combinação de dois, três, quatro, cinco ou seis de SIRPα selecionados do grupo que consiste em haplótipos de SIRPα v1, v2, v3, v4, v5 e v6) e aumentam a fagocitose de células cancerosas por macrófagos cocultivados, em que as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO:149 no domínio IgV, SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO: 150 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO: 152 no domínio IgV, SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO: 153 no domínio IgV e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO: 154 no domínio IgV. Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO:149 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO:151 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO:152 no domínio IgV, SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO:153 no domínio IgV e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO:154 no domínio IgV. Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, as células cancerosas e/ou os macrófagos incluem SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO:150 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO:151 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO:152 no domínio IgV, SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO:153 no domínio IgV e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO:154 no domínio IgV.

[00511] São fornecidos neste documento adicionalmente métodos para aumentar a fagocitose de células cancerosas em um sujeito, compreendendo a administração de uma quantidade eficaz de um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento, em que a fagocitose de células cancerosas em um sujeito é aumentada em comparação com aquela em um sujeito não tratado ou em um sujeito tratado com um anticorpo de controle de isotipo.

[00512] São fornecidos neste documento métodos para aumentar a eliminação de células cancerosas por fagocitose em um sujeito, compreendendo a administração de uma quantidade eficaz de um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento.

[00513] São fornecidos neste documento métodos de direcionamento de células cancerosas para imunodepleção em um sujeito, compreendendo a administração de uma quantidade eficaz de um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento.

[00514] Também são fornecidos neste documento métodos para tratar o câncer em um sujeito, compreendendo a administração de uma quantidade eficaz de um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento.

[00515] Em certas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, um sujeito tem um, dois, três, quatro, cinco, seis, sete, oito, nove, dez ou mais ou todos os haplótipos de SIRPα conhecidos por uma pessoa versada na técnica, por exemplo um, dois, três, quatro, cinco, seis, sete, oito, nove, dez ou mais, ou todo o polimorfismo de SIRPα descrito em Takenaka K, et al., Nat Immunol. Dezembro de 2007; 8(12):1313-23.

[00516] Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, um sujeito tem qualquer um ou qualquer combinação de dois, três, quatro, cinco ou seis de SIRPα selecionados do grupo que consiste em haplótipos de SIRPα v1, v2, v3, v4, v5 e v6 (SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO:149 no domínio IgV, SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO:150 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO:151 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO:152 no domínio IgV, SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO:153 no domínio IgV e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO:154 no domínio IgV).

[00517] Em certas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, um sujeito tem um polimorfismo de SIRPα selecionado do grupo que consiste em SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO:149 no domínio IgV, SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO:150 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO:151 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO:152 no domínio IgV, SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO:153 no domínio IgV e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO:154 no domínio IgV.

[00518] Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, um sujeito tem dois ou mais polimorfismos de SIRPα selecionados do grupo que consiste em SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO:149 no domínio IgV, SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO:150 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO:151 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO:152 no domínio IgV, SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO:153 no domínio IgV e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO:154 no domínio IgV.

[00519] Em certas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, um sujeito tem SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO:149 no domínio IgV. Em outras modalidades, em certas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, um sujeito tem SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO:150 no domínio IgV. Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, um sujeito tem SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO:151 no domínio IgV. Em certas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, um sujeito tem SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO:152 no domínio IgV. Em outras modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, um sujeito tem SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO:153 no domínio IgV. Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, um sujeito tem SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO:154 no domínio IgV.

[00520] Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, o sujeito tem SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO:149 no domínio

IgV e SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO:150 no domínio IgV. Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, o sujeito tem SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO:149 no domínio IgV e SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO:151 no domínio IgV. Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, o sujeito tem SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO:149 no domínio IgV e SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO:152 no domínio IgV. Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, o sujeito tem SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO:149 no domínio IgV e SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO:153 no domínio IgV. Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, o sujeito tem SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO:149 no domínio IgV e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO:154 no domínio IgV.

[00521] Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, o sujeito tem SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO:150 no domínio IgV e SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO:151 no domínio IgV. Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, o sujeito tem SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO:150 no domínio IgV e SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO:152 no domínio IgV. Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, o sujeito tem SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO:150 no domínio IgV e SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO:153 no domínio IgV. Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, o sujeito tem SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO:150 no domínio IgV e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO:154 no domínio IgV.

[00522] Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, o sujeito tem SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO:151 no domínio IgV e SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO:152 no domínio IgV. Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, o sujeito tem SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO:151 no domínio IgV e SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO:153 no domínio IgV. Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, o sujeito tem SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO:151 no domínio IgV e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO:154 no domínio IgV.

[00523] Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, o sujeito tem SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO:152 no domínio IgV e SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO:153 no domínio IgV. Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, o sujeito tem SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO:152 no domínio IgV e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO:154 no domínio IgV. Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, o sujeito tem SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO:153 no domínio IgV e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO:154 no domínio IgV.

[00524] Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, o sujeito tem SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO:149 no domínio IgV, SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO:150 no domínio IgV e SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO:151 no domínio IgV. Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, o sujeito tem SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO:149 no domínio IgV, SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO:150 no domínio IgV e SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO:152 no domínio IgV. Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, o sujeito tem SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO:149 no domínio IgV, SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO:150 no domínio IgV e SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO:153 no domínio IgV. Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, o sujeito tem SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO:149 no domínio IgV, SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO:150 no domínio IgV e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO:154 no domínio IgV.

[00525] Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, o sujeito tem SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO:149 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO:151 no domínio IgV e SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO:152 no domínio IgV. Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, o sujeito tem SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO:149 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO:151 no domínio IgV e SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO:153 no domínio IgV. Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, o sujeito tem SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO:149 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO:151 no domínio IgV e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO:154 no domínio IgV.

[00526] Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, o sujeito tem SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO:149 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO:152 no domínio IgV e SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO:153 no domínio IgV. Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, o sujeito tem SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO:149 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO:152 no domínio IgV e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO:154 no domínio IgV.

[00527] Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, o sujeito tem SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO:149 no domínio IgV, SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO:153 no domínio IgV e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO:154 no domínio IgV.

[00528] Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, o sujeito tem SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO:150 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO:151 no domínio IgV e SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO:152 no domínio IgV. Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, o sujeito tem SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO:150 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO:151 no domínio IgV e SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO:153 no domínio IgV. Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, o sujeito tem SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO:150 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO:151 no domínio IgV e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO:154 no domínio IgV.

[00529] Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, o sujeito tem SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO:151 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO:152 no domínio IgV e SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO:153 no domínio IgV. Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, o sujeito tem SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO:151 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO:152 no domínio IgV e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO:154 no domínio IgV. Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, o sujeito tem SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO:152 no domínio IgV, SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO:153 no domínio IgV e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO:154 no domínio IgV.

[00530] Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, o sujeito tem SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO:149 no domínio IgV, SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO:150 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO:151 no domínio IgV e SIRPα v4 compreendendo a SEQ ID NO:152 no domínio IgV. Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, o sujeito tem SIRPα v1 compreendendo SEQ ID

NO:149 no domínio IgV, SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO:150 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO:151 no domínio IgV e SIRPα v5 compreendendo a SEQ ID NO:153 no domínio IgV. Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, o sujeito tem SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO:149 no domínio IgV, SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO:150 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO:151 no domínio IgV e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO:154 no domínio IgV.

[00531] Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, o sujeito tem SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO:149 no domínio IgV, SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO:150 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO:152 no domínio IgV e SIRPα v5 compreendendo a SEQ ID NO:153 no domínio IgV. Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, o sujeito tem SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO:149 no domínio IgV, SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO:150 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO:152 no domínio IgV e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO:154 no domínio IgV. Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, o sujeito tem SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO:149 no domínio IgV, SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO:150 no domínio IgV, SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO:153 no domínio IgV e SIRPα v6 compreendendo a SEQ ID NO:154 no domínio IgV.

[00532] Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, o sujeito tem SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO:149 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO:151 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO:152 no domínio IgV e SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO:153 no domínio IgV. Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, o sujeito tem SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO:149 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO:151 no domínio

IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO:152 no domínio IgV e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO:154 no domínio IgV. Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, o sujeito tem SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO:149 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO:151 no domínio IgV, SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO:153 no domínio IgV e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO:154 no domínio IgV.

[00533] Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, o sujeito tem SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO:149 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO:152 no domínio IgV, SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO:153 no domínio IgV e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO:154 no domínio IgV.

[00534] Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, o sujeito tem SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO:150 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO:151 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO:152 no domínio IgV e SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO:153 no domínio IgV. Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, o sujeito tem SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO:150 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO:151 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO:152 no domínio IgV e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO:154 no domínio IgV. Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, o sujeito tem SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO:150 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO:151 no domínio IgV, SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO:153 no domínio IgV e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO:154 no domínio IgV.

[00535] Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, o sujeito tem SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO:150 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO:152 no domínio IgV, SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO:153 no domínio IgV e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO:154 no domínio IgV. Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, o sujeito tem SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO:151 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO:152 no domínio IgV, SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO:153 no domínio IgV e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO:154 no domínio IgV.

[00536] Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, o sujeito tem SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO:149 no domínio IgV, SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO:150 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO:151 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO:152 no domínio IgV e SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO:153 no domínio IgV. Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, o sujeito tem SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO:149 no domínio IgV, SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO:150 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO:151 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO:152 no domínio IgV e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO:154 no domínio IgV. Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, o sujeito tem SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO:149 no domínio IgV, SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO:150 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO:151 no domínio IgV, SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO:153 no domínio IgV e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO:154 no domínio IgV. Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, o sujeito tem SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO:149 no domínio IgV, SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO:150 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO:152 no domínio IgV, SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO:153 no domínio IgV e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO:154 no domínio IgV. Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, o sujeito tem SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO:149 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO:151 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO:152 no domínio IgV, SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO:153 no domínio IgV e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO:154 no domínio IgV. Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, o sujeito tem SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO:150 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO:151 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO:152 em o domínio IgV, SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO:153 no domínio IgV e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO:154 no domínio IgV.

[00537] Conforme discutido acima, a fagocitose de células cancerosas por macrófagos cocultivados ou fagocitose de células cancerosas por macrófagos em um sujeito pode ser determinada como a porcentagem de macrófagos fagocitóticos e aumenta a fagocitose de células cancerosas por macrófagos cocultivados ou a fagocitose de células cancerosas por macrófagos em um sujeito pode ser determinada como porcentagem ou aumento de vezes da fagocitose, ou como mudanças na porcentagem de macrófagos fagocitóticos. Como tal, a porcentagem de macrófagos fagocitóticos pode ser usada como uma medição para fagocitose por macrófagos e/ou fagocitose de células cancerosas por macrófagos in vitro ou em um sujeito. A porcentagem de macrófagos fagocitóticos em uma população de macrófagos em certas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento aumenta para cerca de 10%, cerca de 15%, cerca de 20%, cerca de 25%, cerca de 30%, cerca de 35%, cerca de 40%, cerca de 45%, cerca de 50%, cerca de 55%, cerca de 60%, cerca de 65%, cerca de 70%, cerca de 75%, cerca de 80%, cerca de 85%, cerca de 90%, cerca de 95% ou cerca de 99%.Em algumas modalidades, a população é uma população de macrófagos cocultivados com células cancerosas ou uma população de macrófagos em um sujeito.

[00538] Em outras modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, a porcentagem de macrófagos fagocitóticos em uma população de macrófagos aumenta para pelo menos 10%, pelo menos 15%, pelo menos 20%, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 35%, pelo menos 40%, pelo menos 45%, pelo menos 50%, pelo menos 55%, pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95% ou pelo menos 99%. Em algumas modalidades, a população é uma população de macrófagos cocultivados com células cancerosas ou uma população de macrófagos em um sujeito.

[00539] Em certas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, a fagocitose pelos macrófagos ou fagocitose das células cancerosas pelos macrófagos aumenta em cerca de 10%, cerca de 20%, cerca de 30%, cerca de 40%, cerca de 45%, cerca de 50%, cerca de 55%, cerca de 60%, cerca de 65%, cerca de 70%, cerca de 75%, cerca de 80%, cerca de 85%, cerca de 90%, cerca de 95%, cerca de 100%, cerca de 125%, cerca de 150%, cerca de 175%, cerca de 200%, cerca de 250%, cerca de 300%, cerca de 400%, cerca de 500%, cerca de 600%, cerca de 700%, cerca de 800%, cerca de 900% ou cerca de 1000% em comparação com aquela por macrófagos não tratados ou por macrófagos tratados com um anticorpo de controle de isotipo. Em outras modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, a fagocitose pelos macrófagos ou fagocitose das células cancerosas pelos macrófagos aumenta em pelo menos 10%, pelo menos 20%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 45%, pelo menos 50%, pelo menos 55%, pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 100%, pelo menos 125%, pelo menos 150%, pelo menos 175%, pelo menos 200%, pelo menos 250%, pelo menos 300%, pelo menos

400%, pelo menos 500%, pelo menos 600%, pelo menos 700%, pelo menos 800%, pelo menos 900% ou pelo menos 1000% em comparação com aquela por macrófagos não tratados ou por macrófagos tratados com um anticorpo de controle de isotipo.Em algumas modalidades, a população é uma população de macrófagos cocultivados com células cancerosas ou uma população de macrófagos em um sujeito.

[00540] A divulgação, portanto, fornece adicionalmente que os métodos fornecidos neste documento podem ser usados para aumentar a fagocitose de células cancerosas de câncer colorretal, carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço, leucemia mieloide aguda ou DLBCL, em que as células cancerosas expressam CD47, SIRPα, ou ambos CD47 e SIRPα. A divulgação também fornece que os métodos fornecidos neste documento podem ser usados para aumentar a fagocitose de células cancerosas de NHL, tais como DLBCL, linfoma folicular, linfoma de zona marginal e linfoma de células do manto, em que as células cancerosas expressam CD47, SIRPα, ou CD47 e SIRPα. A divulgação fornece adicionalmente que os métodos fornecidos neste documento podem ser usados para aumentar a fagocitose de células cancerosas de linfoma folicular de grau 1, linfoma folicular de grau 2, linfoma folicular de grau 3a, linfoma folicular de grau 3b, linfoma folicular recidivante (incluindo, por exemplo, grau 1, 2, 3a e 3b), linfoma folicular refratário (incluindo, por exemplo, grau 1, 2, 3a e 3b), DLBCL recidivante ou DLBCL refratário, em que as células cancerosas expressam CD47, SIRPα ou ambos CD47 e SIRPα. Em algumas modalidades, os métodos fornecidos neste documento podem ser usados para aumentar a fagocitose de células cancerosas de câncer colorretal. Em algumas modalidades, os métodos fornecidos neste documento podem ser usados para aumentar a fagocitose de células cancerosas de câncer colorretal, em que o câncer expressa CD47, SIRPα ou ambos CD47 e SIRPα. Em algumas modalidades,

os métodos fornecidos neste documento podem ser usados para aumentar a fagocitose de células cancerosas de carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço.

Em algumas modalidades, os métodos fornecidos neste documento podem ser usados para aumentar a fagocitose de células cancerosas de carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço, em que as células cancerosas expressam CD47, SIRPα ou ambos CD47 e SIRPα.

Em algumas modalidades, os métodos fornecidos neste documento podem ser usados para aumentar a fagocitose de células cancerosas de leucemia mieloide aguda.

Em algumas modalidades, os métodos fornecidos neste documento podem ser usados para aumentar a fagocitose de células cancerosas de leucemia mieloide aguda, em que as células cancerosas expressam CD47, SIRPα ou ambos CD47 e SIRPα.

Em algumas modalidades, os métodos fornecidos neste documento podem ser usados para aumentar a fagocitose de células cancerosas de DLBCL.

Em algumas modalidades, os métodos fornecidos neste documento podem ser usados para aumentar a fagocitose de células cancerosas de DLBCL, em que as células cancerosas expressam CD47, SIRPα ou ambos CD47 e SIRPα.

Em algumas modalidades, os métodos fornecidos neste documento podem ser usados para aumentar a fagocitose de células cancerosas de linfoma folicular.

Em algumas modalidades, os métodos fornecidos neste documento podem ser usados para aumentar a fagocitose de células cancerosas de linfoma folicular, em que as células cancerosas expressam CD47, SIRPα ou ambos CD47 e SIRPα.

Em algumas modalidades, os métodos fornecidos neste documento podem ser usados para aumentar a fagocitose de células cancerosas de linfoma de zona marginal.

Em algumas modalidades, os métodos fornecidos neste documento podem ser usados para aumentar a fagocitose de células cancerosas de linfoma de zona marginal, em que as células cancerosas expressam CD47, SIRPα ou ambos CD47 e SIRPα.

Em algumas modalidades, os métodos fornecidos neste documento podem ser usados para aumentar a fagocitose de células cancerosas de linfoma de células do manto.

Em algumas modalidades, os métodos fornecidos neste documento podem ser usados para aumentar a fagocitose de células cancerosas de linfoma de células do manto, em que as células cancerosas expressam CD47, SIRPα ou ambos CD47 e SIRPα.

Em algumas modalidades, os métodos fornecidos neste documento podem ser usados para aumentar a fagocitose de células cancerosas de NHL.

Em algumas modalidades, os métodos fornecidos neste documento podem ser usados para aumentar a fagocitose de células cancerosas de NHL, em que as células cancerosas expressam CD47, SIRPα ou ambos CD47 e SIRPα.

Em algumas modalidades, os métodos fornecidos neste documento podem ser usados para aumentar a fagocitose de células cancerosas de linfoma folicular de grau 1. Em algumas modalidades, os métodos fornecidos neste documento podem ser usados para aumentar a fagocitose de células cancerosas de linfoma folicular de grau 1, em que as células cancerosas expressam CD47, SIRPα ou ambos CD47 e SIRPα.

Em algumas modalidades, os métodos fornecidos neste documento podem ser usados para aumentar a fagocitose de células cancerosas de linfoma folicular de grau 2. Em algumas modalidades, os métodos fornecidos neste documento podem ser usados para aumentar a fagocitose de células cancerosas de linfoma folicular de grau 2, em que as células cancerosas expressam CD47, SIRPα ou ambos CD47 e SIRPα.

Em algumas modalidades, os métodos fornecidos neste documento podem ser usados para aumentar a fagocitose de células cancerosas de linfoma folicular de grau 3a.

Em algumas modalidades, os métodos fornecidos neste documento podem ser usados para aumentar a fagocitose de células cancerosas de linfoma folicular de grau 3a, em que as células cancerosas expressam CD47, SIRPα ou ambos CD47 e SIRPα.

Em algumas modalidades, os métodos fornecidos neste documento podem ser usados para aumentar a fagocitose de células cancerosas de linfoma folicular de grau 3b.

Em algumas modalidades, os métodos fornecidos neste documento podem ser usados para aumentar a fagocitose de células cancerosas de linfoma folicular de grau 3b, em que as células cancerosas expressam CD47, SIRPα ou ambos CD47 e SIRPα.

Em algumas modalidades, os métodos fornecidos neste documento podem ser usados para aumentar a fagocitose de células cancerosas de linfoma folicular recidivante (incluindo, por exemplo, grau 1, 2, 3a e 3b). Em algumas modalidades, os métodos fornecidos neste documento podem ser usados para aumentar a fagocitose de células cancerosas de linfoma folicular recidivante (incluindo, por exemplo, grau 1, 2, 3a e 3b), em que as células cancerosas expressam CD47, SIRPα ou ambos CD47 e SIRPα.

Em algumas modalidades, os métodos fornecidos neste documento podem ser usados para aumentar a fagocitose de células cancerosas de linfoma folicular refratário (incluindo, por exemplo, grau 1, 2, 3a e 3b). Em algumas modalidades, os métodos fornecidos neste documento podem ser usados para aumentar a fagocitose de células cancerosas de linfoma folicular refratário (incluindo, por exemplo, grau 1, 2, 3a e 3b), em que as células cancerosas expressam CD47, SIRPα ou ambos CD47 e SIRPα.

Em algumas modalidades, os métodos fornecidos neste documento podem ser usados para aumentar a fagocitose de células cancerosas de DLBCL recidivante.

Em algumas modalidades, os métodos fornecidos neste documento podem ser usados para aumentar a fagocitose de células cancerosas de DLBCL recidivante, em que as células cancerosas expressam CD47, SIRPα ou ambos CD47 e SIRPα.

Em algumas modalidades, os métodos fornecidos neste documento podem ser usados para aumentar a fagocitose de células cancerosas de DLBCL refratário.

Em algumas modalidades, os métodos fornecidos neste documento podem ser usados para aumentar a fagocitose de células cancerosas de DLBCL refratário, em que as células cancerosas expressam CD47, SIRPα ou ambos CD47 e SIRPα.

[00541] Em certas modalidades, o linfoma folicular pode ser classificado de acordo com a classificação da Organização Mundial da Saúde (OMS) (Nathwani BN, et al., Follicular lymphoma World Health Organization Classification of Tumours. Pathology & Genetics of Tumours of Haematopoietic and Lymphoid Tissues Lyon: IARC Press; 162–167, Jaffe ES, Harris NL, Stein H, Vardiman JW (eds) (2001)). Em algumas modalidades, o sistema de três graus (graus 1–3) adotado pela OMS é baseado na contagem do número absoluto de centroblastos em 10 folículos neoplásicos, expresso por campo microscópico de alta potência (h.p.f.) de 0,159 mm2. Linfoma folicular de grau 1 tem 0–5 centroblastos por h.p.f., linfoma folicular de grau 2 tem 6–15 centroblastos por h.p.f. e linfoma folicular de grau 3 tem >15 centroblastos por h.p.f. Este método de classificação histológica pode prever tanto a sobrevida geral (OS) quanto a sobrevida livre de falha (FFS) (ver, por exemplo, Martin AR, et al., Blood. 85:3671–3678 (1995)). Além disso, o linfoma folicular de grau 3 pode ser subdividido de acordo com o número de centroblastos. No linfoma folicular de grau 3a, há >15 centroblastos por h.p.f., mas os centrócitos ainda estão presentes, enquanto o linfoma folicular de grau 3b tem camadas sólidas de centroblastos sem centrócitos.

[00542] Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, usa-se um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento como uma monoterapia, por exemplo, como o único agente terapêutico nos métodos. Em outras modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é usado em combinação com um segundo agente terapêutico para a eliminação das células cancerosas. Em certas modalidades, o segundo agente terapêutico é cetuximabe ou rituximabe. Em uma modalidade, o segundo agente terapêutico é o cetuximabe. Em outra modalidade, o segundo agente terapêutico é rituximabe.

[00543] São fornecidos neste documento métodos para aumentar a fagocitose de células cancerosas em um sujeito, compreendendo a administração de uma quantidade eficaz de um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento e um anticorpo anti-EGFR, em que a fagocitose de células cancerosas em um sujeito é aumentada em comparação com aquele em um sujeito não tratado ou em um sujeito tratado com um anticorpo de controle de isotipo.

[00544] Além disso, são fornecidos neste documento métodos para aumentar a eliminação de células cancerosas por fagocitose em um sujeito, compreendendo a administração de uma quantidade eficaz de um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento e um anticorpo anti-EGFR.

[00545] Além disso, são fornecidos neste documento métodos de direcionamento de células cancerosas para imunodepleção em um sujeito, compreendendo a administração de uma quantidade eficaz de um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento e um anticorpo anti-EGFR.

[00546] Também são fornecidos neste documento métodos para tratar o câncer em um sujeito, compreendendo a administração de uma quantidade eficaz de um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento e um anticorpo anti-EGFR.

[00547] São fornecidos neste documento métodos para aumentar a fagocitose por um macrófago, incluindo o contato do macrófago com uma quantidade eficaz de um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento e um anticorpo anti-EGFR, em que a fagocitose por um macrófago é aumentada em comparação com aquele por um macrófago não tratado ou por um macrófago tratado com um anticorpo de controle de isotipo.

[00548] Também são fornecidos neste documento métodos para aumentar uma porcentagem de macrófagos fagocitóticos em uma população de macrófagos, compreendendo o contato dos macrófagos com uma quantidade eficaz de um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento e um anticorpo anti-EGFR, em que a porcentagem de macrófagos fagocitóticos em uma população de macrófagos é aumentada em comparação com macrófagos não tratados ou macrófagos tratados com um anticorpo de controle de isotipo.

[00549] São fornecidos neste documento adicionalmente métodos para aumentar a fagocitose de células cancerosas por uma população de macrófagos, compreendendo o contato das células cancerosas, dos macrófagos ou de ambas as células cancerosas e os macrófagos com uma quantidade eficaz de um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento e um anticorpo anti-EGFR, em que a fagocitose de células cancerosas por uma população de macrófagos é aumentada em comparação com macrófagos não tratados ou por macrófagos tratados com um anticorpo de controle de isotipo.

[00550] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-EGFR incluem um anticorpo anti-EGFR que bloqueia a dimerização de EGFR e um anticorpo anti- EGFR que compete pela ligação ligante-receptor pela oclusão da ligação ao ligante no receptor do acesso ao ligante. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-EGFR é selecionado a partir do grupo que consiste em cetuximabe, panitumumabe, nimotuzumabe, zalutumumabe, necitumumabe e matuzumabe, todos os quais são anticorpos anti-EGFR usados ou testados em terapias contra o câncer bem conhecidas por uma pessoa versada na técnica. Outros anticorpos anti-EGFR terapêuticos que podem ser usados nos métodos fornecidos neste documento são descritos em Martinelli E et al., Clinical and Experimental Immunology, 158:1–9; Russell JS et al., Chemother Res Pract. 2012; 2012: 761518; Capdevila J et al., Cancer Treatment Reviews 2009; 35(4): 354–363, todos os quais são incorporados neste documento em sua totalidade por referência.

[00551] Em algumas modalidades específicas, o anticorpo anti-EGFR é cetuximabe. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-EGFR é panitumumabe. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-EGFR é nimotuzumabe. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-EGFR é zalutumumabe. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-EGFR é necitumumabe. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-EGFR é matuzumabe.

[00552] São fornecidos neste documento métodos para aumentar a fagocitose de células cancerosas em um sujeito, compreendendo a administração de uma quantidade eficaz de um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento e um anticorpo anti-CD20, em que a fagocitose de células cancerosas em um sujeito é aumentada em comparação com aquele em um sujeito não tratado ou em um sujeito tratado com um anticorpo de controle de isotipo.

[00553] Além disso, são fornecidos neste documento métodos para aumentar a eliminação de células cancerosas por fagocitose em um sujeito, compreendendo a administração de uma quantidade eficaz de um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento e um anticorpo anti-CD20.

[00554] Além disso, são fornecidos neste documento métodos de direcionamento de células cancerosas para imunodepleção em um sujeito, compreendendo a administração de uma quantidade eficaz de um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento e um anticorpo anti-CD20.

[00555] Também são fornecidos neste documento métodos para tratar o câncer em um sujeito, compreendendo a administração de uma quantidade eficaz de um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento e um anticorpo anti-CD20.

[00556] São fornecidos neste documento métodos para aumentar a fagocitose por um macrófago, incluindo o contato do macrófago com uma quantidade eficaz de um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento e um anticorpo anti-CD20, em que a fagocitose por um macrófago é aumentada em comparação com aquele por um macrófago não tratado ou por um macrófago tratado com um anticorpo de controle de isotipo.

[00557] Também são fornecidos neste documento métodos para aumentar uma porcentagem de macrófagos fagocitóticos em uma população de macrófagos, compreendendo o contato dos macrófagos com uma quantidade eficaz de um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento e um anticorpo anti-CD20, em que a porcentagem de macrófagos fagocitóticos em uma população de macrófagos é aumentada em comparação com macrófagos não tratados ou macrófagos tratados com um anticorpo de controle de isotipo.

[00558] São fornecidos neste documento adicionalmente métodos para aumentar a fagocitose de células cancerosas por uma população de macrófagos, compreendendo o contato das células cancerosas, dos macrófagos ou de ambas as células cancerosas e os macrófagos com uma quantidade eficaz de um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento e um anticorpo anti-CD20, em que a fagocitose de células cancerosas por uma população de macrófagos é aumentada em comparação com macrófagos não tratados ou por macrófagos tratados com um anticorpo de controle de isotipo.

[00559] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-CD20 é selecionado do grupo que consiste em rituximabe, ocrelizumabe, obinutuzumabe, ofatumumabe, tositumomabe, ocaratuzumabe, veltuzumabe e ublituximabe. Outros anticorpos anti-CD20 terapêuticos que podem ser usados nos métodos fornecidos neste documento são descritos em Alduaij W et al., Blood 117:2993- 3001 (2011); Du, FH et al., Auto Immun Highlights. Dezembro de 2017; 8(1): 12, ambos incorporados neste documento em sua totalidade por referência.

[00560] Em algumas modalidades específicas, o anticorpo anti-CD20 é rituximabe. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-CD20 é ocrelizumabe. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-CD20 é obinutuzumabe. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-CD20 é ofatumumabe. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-CD20 é tositumomabe. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-CD20 é ocaratuzumabe. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-CD20 é veltuzumabe. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-CD20 é ublituximabe.

[00561] Em certas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, o sujeito é um mamífero. Em algumas modalidades, o sujeito é um mamífero selecionado do grupo que consiste em Caviinae (cobaia), Sus (porcos), Macaca Fascicularis (macacos, por exemplo, macaco cinomolgo), hominoideos (gibões, orangotangos, gorilas, chimpanzés e humanos), Canis (cão), Rattus (rato) e Mus musculus (camundongo). Em uma modalidade específica, o sujeito é um humano.

[00562] Em certas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, uma quantidade eficaz de um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo (por exemplo, SIRPAB-11-K322A) é administrada ao sujeito. Uma quantidade terapeuticamente ou profilaticamente eficaz de um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é de cerca de 0,005 a cerca de 1.000 mg por dia, de cerca de 0,01 a cerca de 500 mg por dia, de cerca de 0,01 a cerca de 250 mg por dia, de cerca de 0,01 a cerca de 100 mg por dia, de cerca de 0,1 a cerca de 100 mg por dia, de cerca de 0,5 a cerca de 100 mg por dia, de cerca de 1 a cerca de 100 mg por dia, de cerca de 0,01 a cerca de 50 mg por dia, de cerca de 0,1 a cerca de 50 mg por dia, de cerca de 0,5 a cerca de 50 mg por dia, de cerca de 1 a cerca de 50 mg por dia, de cerca de 0,02 a cerca de 25 mg por dia ou de cerca de 0,05 a cerca de 10 mg por dia. Em uma modalidade, a dose diária recomendada é dada como uma dose única de uma vez ao dia, ou em doses divididas ao longo do dia.

[00563] Em certas modalidades, a eficácia de um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo (por exemplo, SIRPAB-11-K322A) é de cerca de 0,001 a cerca de 100 mg/kg/dia, de cerca de 0,01 a cerca de 50 mg/kg/dia, de cerca de 0,01 a cerca de 25 mg/kg/dia, de cerca de 0,01 a cerca de 10 mg/kg/dia, de cerca de 0,01 a cerca de 9 mg/kg/dia, de cerca de 0,01 a cerca de 8 mg/kg/dia, de cerca de 0,01 a cerca de 7 mg/kg/dia, de cerca de 0,01 a cerca de 6 mg/kg/dia, de cerca de 0,01 a cerca de 5 mg/kg/dia, de cerca de 0,01 a cerca de 4 mg/kg/dia, de cerca de 0,01 a cerca de 3 mg/kg/dia, de cerca de 0,01 a cerca de 2 mg/kg/dia, de cerca de 0,01 a cerca de 1 mg/kg/dia ou de cerca de 0,01 mg/kg/dia a cerca de 0,3 mg/kg/dia. Em uma modalidade, a quantidade de um anticorpo anti-SIRPα é de 100 mg/kg/dia. Em uma modalidade, a quantidade de um anticorpo anti-SIRPα é de 95 mg/kg/dia. Em uma modalidade, a quantidade de um anticorpo anti-SIRPα é de 90 mg/kg/dia. Em uma modalidade, a quantidade de um anticorpo anti-SIRPα é de 85 mg/kg/dia. Em uma modalidade, a quantidade de um anticorpo anti-SIRPα é de 80 mg/kg/dia. Em uma modalidade, a quantidade de um anticorpo anti-SIRPα é de 75 mg/kg/dia. Em uma modalidade, a quantidade de um anticorpo anti-SIRPα é de 70 mg/kg/dia. Em uma modalidade, a quantidade de um anticorpo anti-SIRPα é de 65 mg/kg/dia. Em uma modalidade, a quantidade de um anticorpo anti-SIRPα é de 60 mg/kg/dia. Em uma modalidade, a quantidade de um anticorpo anti-SIRPα é de 55 mg/kg/dia. Em uma modalidade, a quantidade de um anticorpo anti- SIRPα é de 50 mg/kg/dia. Em uma modalidade, a quantidade de um anticorpo anti-SIRPα é de 45 mg/kg/dia. Em uma modalidade, a quantidade de um anticorpo anti-SIRPα é de 40 mg/kg/dia. Em uma modalidade, a quantidade de um anticorpo anti-SIRPα é de 35 mg/kg/dia. Em uma modalidade, a quantidade de um anticorpo anti-SIRPα é de 30 mg/kg/dia. Em uma modalidade, a quantidade de um anticorpo anti-SIRPα é de 25 mg/kg/dia. Em uma modalidade, a quantidade de um anticorpo anti-SIRPα é de 20 mg/kg/dia. Em uma modalidade, a quantidade de um anticorpo anti-SIRPα é de 15 mg/kg/dia. Em uma modalidade, a quantidade de um anticorpo anti-SIRPα é de 10 mg/kg/dia. Em uma modalidade, a quantidade de um anticorpo anti-SIRPα é de 5 mg/kg/dia. Em uma modalidade, a quantidade de um anticorpo anti-SIRPα é de 3 mg/kg/dia. Em uma modalidade, a quantidade de um anticorpo anti-SIRPα é de 1 mg/kg/dia. Em uma modalidade, a quantidade de um anticorpo anti-SIRPα é de 0,5 mg/kg/dia. Em uma modalidade, a quantidade de um anticorpo anti-SIRPα é de 0,3 mg/kg/dia. Em uma modalidade, a quantidade de um anticorpo anti-SIRPα é de 0,1 mg/kg/dia.

[00564] A dose administrada pode também ser expressa em unidades que não sejam mg/kg/dia. Por exemplo, as doses para administração parenteral podem ser expressas em mg/m2/dia. Um versado na técnica saberia facilmente como converter doses de mg/kg/dia para mg/m2/dia a dada a altura ou peso de um sujeito, ou ambos (ver www.fda.gov/cder/cancer/animalframe.htm). Por exemplo, uma dose de 1 mg/kg/dia para um humano 65 kg é aproximadamente igual a 38 mg/m2/dia.

[00565] Em certas modalidades, a quantidade do anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo (por exemplo, SIRPAB-11-K322A) administrada é suficiente para fornecer uma concentração plasmática do anticorpo em estado estacionário, variando de cerca de 0,001 a cerca de 500 μM, cerca de 0,002 a cerca de 200 μM, cerca de 0,005 a cerca de 100 μM, cerca de 0,01 a cerca de 50 μM, de cerca de 1 a cerca de 50 μM, cerca de 0,02 a cerca de 25 μM, de cerca de 0,05 a cerca de 20 μM, de cerca de 0,1 a cerca de 20 μM, de cerca de 0,5 a cerca de 20 μM ou de cerca de 1 a cerca de 20 μM.

[00566] Em outras modalidades, a quantidade do anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo (por exemplo, SIRPAB-11-K322A) administrada é suficiente para fornecer uma concentração plasmática do anticorpo em estado estacionário, variando de cerca de 5 a cerca de 100 nM, cerca de 5 a cerca de 50 nM, cerca de 10 a cerca de 100 nM, cerca de 10 a cerca de 50 nM ou de cerca de 50 a cerca de 100 nM.

[00567] Conforme usado neste documento, o termo "concentração de plasma em estado estacionário" é a concentração alcançada após um período de administração de um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo fornecido neste documento. Uma vez que o estado estacionário é alcançado, há menores picos e vales da curva dependente do tempo da concentração no plasma do anticorpo.

[00568] Em certas modalidades, a quantidade do anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo (por exemplo, SIRPAB-11-K322A) administrada é suficiente para fornecer uma concentração plasmática máxima (concentração de pico) do anticorpo, variando de cerca de 0,001 a cerca de 500 μM, cerca de 0,002 a cerca de 200 μM, cerca de 0,005 a cerca de 100 μM, cerca de 0,01 a cerca de 50 μM, de cerca de 1 a cerca de 50 μM, cerca de 0,02 a cerca de 25 μM, de cerca de 0,05 a cerca de 20 μM, de cerca de 0,1 a cerca de 20 μM,

de cerca de 0,5 a cerca de 20 μM ou de cerca de 1 a cerca de 20 μM.

[00569] Em certas modalidades, a quantidade do anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo (por exemplo, SIRPAB-11-K322A) administrada é suficiente para fornecer uma concentração plasmática mínima (concentração de vale) do anticorpo, variando de cerca de 0,001 a cerca de 500 μM, cerca de 0,002 a cerca de 200 μM, cerca de 0,005 a cerca de 100 μM, cerca de 0,01 a cerca de 50 μM, de cerca de 1 a cerca de 50 μM, cerca de 0,01 a cerca de 25 μM, de cerca de 0,01 a cerca de 20 μM, de cerca de 0,02 a cerca de 20 μM, de cerca de 0,02 a cerca de 20 μM ou de cerca de 0,01 a cerca de 20 μM.

[00570] Em certas modalidades, a quantidade do anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo (por exemplo, SIRPAB-11-K322A) administrada é suficiente para fornecer uma área sob a curva (AUC) do anticorpo, variando de cerca de 100 a cerca de 100.000 ng*h/mL, de cerca de

1.000 a cerca de 50.000 ng*h/mL, de cerca de 5.000 a cerca de 25.000 ng*h/mL ou de cerca de 5.000 a cerca de 10.000 ng*h/mL.

[00571] O anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo (por exemplo, SIRPAB-11-K322A) fornecido neste documento pode ser administrado uma vez ao dia (QD) ou dividido em várias doses diárias, como duas vezes ao dia (BID), três vezes ao dia (TID) e quatro vezes ao dia (QID). Além disso, a administração pode ser contínua (ou seja, por dia durante dias consecutivos ou todos os dias), intermitentes, por exemplo, em ciclos (ou seja, incluindo dias, semanas ou meses de descanso sem drogas). Conforme usado neste documento, o termo "diariamente" se destina a significar que um anticorpo anti-SIRPα fornecido neste documento é administrado uma ou mais do que uma vez por dia, por exemplo, por um período de tempo. O termo "contínuo" se destina a significar que um anticorpo anti-SIRPα fornecido neste documento é administrado diariamente por um período contínuo de pelo menos 10 dias a 52 semanas. O termo "intermitente" ou "intermitentemente" conforme usado neste documento pretende significar parar e iniciar a intervalos regulares ou irregulares. Por exemplo, a administração intermitente do anticorpo anti-SIRPα fornecido neste documento é administração de um a seis dias por semana, em ciclos de administração (por exemplo, administração diária de dois a oito semanas consecutivas, em seguida um período de repouso, sem administração de até uma semana), ou administração em dias alternados. O termo "ciclagem", conforme usado neste documento, destina-se a significar que um anticorpo anti- SIRPα fornecido neste documento é administrado diariamente ou continuamente, mas com um período de repouso.

[00572] Em algumas modalidades, a frequência de administração de um anticorpo anti-SIRPα fornecido neste documento (por exemplo, SIRPAB-11- K322A) está na faixa de cerca de uma dose diária a cerca de uma dose mensal. Em certas modalidades, a administração é de uma vez por dia, duas vezes por dia, três vezes por dia, quatro vezes por dia, uma vez a cada dois dias, duas vezes por semana, uma vez por semana, uma vez a cada duas semanas, uma vez a cada três semanas ou uma vez a cada quatro semanas. Em uma modalidade, um anticorpo anti-SIRPα fornecido neste documento é administrado uma vez ao dia. Em outra modalidade, um anticorpo anti-SIRPα fornecido neste documento é administrado duas vezes ao dia. Em ainda outra modalidade, um anticorpo anti- SIRPα fornecido neste documento é administrado três vezes ao dia. Em ainda outra modalidade, um anticorpo anti-SIRPα fornecido neste documento é administrado quatro vezes ao dia.

[00573] Em certas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα fornecido neste documento (por exemplo, SIRPAB-11-K322A) é administrado uma vez por dia de um dia a seis meses, de uma semana a três meses, de uma semana a quatro semanas, de uma semana a três semanas, ou de uma a duas semanas. Em certas modalidades, um anticorpo anti-SIRPα fornecido neste documento é administrado uma vez por dia durante uma semana, duas semanas, três semanas ou quatro semanas. Em uma modalidade, um anticorpo anti-SIRPα fornecido neste documento é administrado uma vez por dia durante uma semana. Em outra modalidade, um anticorpo anti-SIRPα fornecido neste documento é administrado uma vez por dia durante duas semanas. Em ainda outra modalidade, um anticorpo anti-SIRPα fornecido neste documento é administrado uma vez por dia durante três semanas. Em ainda outra modalidade, um anticorpo anti-SIRPα fornecido neste documento é administrado uma vez por dia durante quatro semanas. Em certas modalidades, a dose é administrada uma vez por semana.

[00574] Em algumas modalidades, a quantidade eficaz de um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo (por exemplo, SIRPAB-11-K322A) é de cerca de 0,001 a cerca de 50 mg/kg, de cerca de 0,01 a cerca de 50 mg/kg, de cerca de 0,01 a cerca de 25 mg/kg, de cerca de 0,01 a cerca de 10 mg/kg, de cerca de 0,01 a cerca de 9 mg/kg, de cerca de 0,01 a cerca de 8 mg/kg, de cerca de 0,01 a cerca de 7 mg/kg, de cerca de 0,01 a cerca de 6 mg/kg, de cerca de 0,01 a cerca de 5 mg/kg, de cerca de 0,01 a cerca de 4 mg/kg, de cerca de 0,01 a cerca de 3 mg/kg, de cerca de 0,01 a cerca de 2 mg/kg ou de cerca de 0,01 a cerca de 1 mg/kg. Em certas modalidades, a quantidade eficaz de um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é cerca de 0,001, cerca de 0,003, cerca de 0,005, cerca de 0,01, cerca de 0,03, cerca de 0,05, cerca de 0,1, cerca de 0,3, cerca de 0,5, cerca de 1, cerca de 3, cerca de 5, cerca de 10, cerca de 30 ou cerca de 50 mg/kg. Em uma modalidade, a quantidade eficaz de um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é de 0,001 mg/kg. Em uma modalidade, a quantidade eficaz de um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é de

0,01 mg/kg. Em uma modalidade, a quantidade eficaz de um anticorpo anti- SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é de 0,1 mg/kg. Em outra modalidade, a quantidade eficaz de um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é de 0,3 mg/kg. Em outra modalidade, a quantidade eficaz de um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é de 0,5 mg/kg. Em ainda outra modalidade, a quantidade eficaz de um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é de 1 mg/kg. Em ainda outra modalidade, a quantidade eficaz de um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é de 3 mg/kg. Em uma modalidade, a quantidade eficaz de um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é de 5 mg/kg. Em outra modalidade, a quantidade eficaz de um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é de 10 mg/kg. Em ainda outra modalidade, a quantidade eficaz de um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é de 30 mg/kg. Em ainda outra modalidade, a quantidade eficaz de um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é de 50 mg/kg. Em certas modalidades, o anticorpo é administrado uma vez por dia. Em certas modalidades, o anticorpo é administrado uma vez por semana. Em certas modalidades, o anticorpo é administrado uma vez por mês.

[00575] Em algumas modalidades, a quantidade eficaz de um anticorpo anti-SIRPα ou fragmento de ligação ao antígeno fornecido neste documento é 25 mg, 30 mg, 40 mg, 50 mg, 60 mg, 70 mg, 80 mg, 90 mg, 100 mg, 150 mg, 200 mg, 250 mg, 300 mg, 350 mg, 400 mg, 450 mg, 500 mg, 550 mg, 600 mg, 650 mg, 700 mg, 750 mg, 800 mg, 850 mg, 900 mg, 950 mg, 1000 mg, 1050 mg, 1100 mg, 1150 mg, 1200 mg, 1250 mg, 1300 mg, 1350 mg, 1400 mg, 1450 mg, 1500 mg, 1550 mg, 1600 mg, 1650 mg, 1700 mg, 1750 mg, 1800 mg, 1850 mg, 1900 mg, 1950 mg, 2000 mg, 2100 mg, 2200 mg, 2300 mg, 2400 mg, 2500 mg, 2600 mg,

2700 mg, 2800 mg, 2900 mg, 3000 mg, 3100 mg, 3200 mg, 3300 mg, 3400 mg, 3500 mg, 3600 mg, 3700 mg, 3800 mg, 3900 mg ou 4000 mg por dose. Em algumas modalidades, a quantidade eficaz fornecida neste parágrafo pode ser combinada em qualquer combinação ou permutação com qualquer frequência de dosagem, conforme fornecido neste documento, por exemplo, uma vez por dia, uma vez por semana, uma vez a cada duas semanas, uma vez a cada três semanas ou uma vez a cada quatro semanas ou uma vez por mês. Em algumas modalidades, a quantidade eficaz fornecida neste parágrafo pode ser administrada em qualquer combinação ou permutação com qualquer frequência de dosagem, conforme fornecido neste documento, por exemplo, uma vez por dia, uma vez por semana, uma vez a cada duas semanas, uma vez a cada três semanas ou uma vez a cada quatro semanas, ou uma vez por mês, por qualquer duração prevista neste documento, por exemplo, por uma semana, duas semanas, três semanas, quatro semanas, um mês, dois meses, três meses, quatro meses, cinco meses, seis meses, sete meses, meses certos, nove meses, dez meses, onze meses, um ano, um ano e meio, dois anos, dois anos e meio ou três anos.

[00576] Em algumas modalidades, a frequência de administração de um anticorpo anti-SIRPα fornecido neste documento (por exemplo, SIRPAB-11- K322A) pode ser uma vez por semana, uma vez a cada duas semanas, uma vez a cada três semanas ou uma vez a cada quatro semanas. Em uma modalidade, um anticorpo anti-SIRPα fornecido neste documento é administrado uma vez por semana. Em outra modalidade, um anticorpo anti-SIRPα fornecido neste documento é administrado uma vez a cada duas semanas. Em ainda outra modalidade, um anticorpo anti-SIRPα fornecido neste documento é administrado uma vez a cada três semanas. Em ainda outra modalidade, um anticorpo anti-SIRPα fornecido neste documento é administrado uma vez a cada quatro semanas.

[00577] Em uma modalidade, um anticorpo anti-SIRPα fornecido neste documento (por exemplo, SIRPAB-11-K322A) é administrado uma vez por semana a uma dosagem de 0,1 mg/kg. Em outra modalidade, um anticorpo anti- SIRPα fornecido neste documento é administrado uma vez por semana a uma dosagem de 0,3 mg/kg. Em ainda outra modalidade, um anticorpo anti-SIRPα fornecido neste documento é administrado uma vez por semana a uma dosagem de 0,5 mg/kg. Em ainda outra modalidade, um anticorpo anti-SIRPα fornecido neste documento é administrado uma vez por semana a uma dosagem de 1 mg/kg. Em uma modalidade, um anticorpo anti-SIRPα fornecido neste documento é administrado uma vez por semana a uma dosagem de 3 mg/kg. Em outra modalidade, um anticorpo anti-SIRPα fornecido neste documento é administrado uma vez por semana a uma dosagem de 5 mg/kg. Em ainda outra modalidade, um anticorpo anti-SIRPα fornecido neste documento é administrado uma vez por semana a uma dosagem de 10 mg/kg. Em ainda outra modalidade, um anticorpo anti-SIRPα fornecido neste documento é administrado uma vez por semana a uma dosagem de 30 mg/kg.

[00578] Em uma modalidade, um anticorpo anti-SIRPα fornecido neste documento (por exemplo, SIRPAB-11-K322A) é administrado uma vez a cada duas semanas a uma dosagem de 0,1 mg/kg. Em outra modalidade, um anticorpo anti-SIRPα fornecido neste documento é administrado uma vez a cada duas semanas a uma dosagem de 0,3 mg/kg. Em ainda outra modalidade, um anticorpo anti-SIRPα fornecido neste documento é administrado uma vez a cada duas semanas a uma dosagem de 0,5 mg/kg. Em ainda outra modalidade, um anticorpo anti-SIRPα fornecido neste documento é administrado uma vez a cada duas semanas a uma dosagem de 1 mg/kg. Em uma modalidade, um anticorpo anti-SIRPα fornecido neste documento é administrado uma vez a cada duas semanas a uma dosagem de 3 mg/kg. Em outra modalidade, um anticorpo anti- SIRPα fornecido neste documento é administrado uma vez a cada duas semanas a uma dosagem de 5 mg/kg. Em ainda outra modalidade, um anticorpo anti- SIRPα fornecido neste documento é administrado uma vez a cada duas semanas a uma dosagem de 10 mg/kg. Em ainda outra modalidade, um anticorpo anti- SIRPα fornecido neste documento é administrado uma vez a cada duas semanas a uma dosagem de 30 mg/kg.

[00579] Em uma modalidade, um anticorpo anti-SIRPα fornecido neste documento (por exemplo, SIRPAB-11-K322A) é administrado uma vez a cada três semanas a uma dosagem de 0,1 mg/kg. Em outra modalidade, um anticorpo anti- SIRPα fornecido neste documento é administrado uma vez a cada três semanas a uma dosagem de 0,3 mg/kg. Em ainda outra modalidade, um anticorpo anti- SIRPα fornecido neste documento é administrado uma vez a cada três semanas a uma dosagem de 0,5 mg/kg. Em ainda outra modalidade, um anticorpo anti- SIRPα fornecido neste documento é administrado uma vez a cada três semanas a uma dosagem de 1 mg/kg. Em uma modalidade, um anticorpo anti-SIRPα fornecido neste documento é administrado uma vez a cada três semanas a uma dosagem de 3 mg/kg. Em outra modalidade, um anticorpo anti-SIRPα fornecido neste documento é administrado uma vez a cada três semanas a uma dosagem de 5 mg/kg. Em ainda outra modalidade, um anticorpo anti-SIRPα fornecido neste documento é administrado uma vez a cada três semanas a uma dosagem de 10 mg/kg. Em ainda outra modalidade, um anticorpo anti-SIRPα fornecido neste documento é administrado uma vez a cada três semanas a uma dosagem de 30 mg/kg.

[00580] Em uma modalidade, um anticorpo anti-SIRPα fornecido neste documento (por exemplo, SIRPAB-11-K322A) é administrado uma vez a cada quatro semanas a uma dosagem de 0,1 mg/kg. Em outra modalidade, um anticorpo anti-SIRPα fornecido neste documento é administrado uma vez a cada quatro semanas a uma dosagem de 0,3 mg/kg. Em ainda outra modalidade, um anticorpo anti-SIRPα fornecido neste documento é administrado uma vez a cada quatro semanas a uma dosagem de 0,5 mg/kg. Em ainda outra modalidade, um anticorpo anti-SIRPα fornecido neste documento é administrado uma vez a cada quatro semanas a uma dosagem de 1 mg/kg. Em uma modalidade, um anticorpo anti-SIRPα fornecido neste documento é administrado uma vez a cada quatro semanas a uma dosagem de 3 mg/kg. Em outra modalidade, um anticorpo anti- SIRPα fornecido neste documento é administrado uma vez a cada quatro semanas a uma dosagem de 5 mg/kg. Em ainda outra modalidade, um anticorpo anti-SIRPα fornecido neste documento é administrado uma vez a cada quatro semanas a uma dosagem de 10 mg/kg. Em ainda outra modalidade, um anticorpo anti-SIRPα fornecido neste documento é administrado uma vez a cada quatro semanas a uma dosagem de 30 mg/kg.

[00581] Dependendo da doença a ser tratada e da condição do sujeito, o anticorpo anti-SIRPα fornecido neste documento (por exemplo, SIRPAB-11- K322A) pode ser administrado por vias de administração parenteral (por exemplo, intramuscular, intraperitoneal, intravenosa, intravenosa contínua, injeção ou infusão de intracistemal, injeção subcutânea ou implante), inalação, nasal, vaginal, retal, sublingual ou tópica (por exemplo, transdérmica ou local). Em uma modalidade, a via de administração é subcutânea. Em outra modalidade, a via de administração é intravenosa. Em ainda outra modalidade, a via de administração é intramuscular. Em ainda outra modalidade, a via de administração é intraperitoneal. Em uma modalidade, a via de administração é intravenosa contínua. Em outra modalidade, a via de administração é injeção intracistemal ou infusão. Em ainda outra modalidade, a via de administração é implante. Em ainda outra modalidade, a via de administração é inalação. Em uma modalidade, a via de administração é nasal. Em outra modalidade, a via de administração é retal. Em ainda outra modalidade, a via de administração é sublingual. Em ainda outra modalidade, a via de administração é transdérmica. Qualquer anticorpo anti-SIRPα fornecido neste documento pode ser formulado, sozinho ou em conjunto, em uma unidade de dosagem adequada com excipientes, carreadores, adjuvantes e veículos farmaceuticamente aceitáveis, apropriados para cada via de administração.

[00582] Em algumas modalidades dos vários métodos fornecidos neste documento, o método compreende ainda administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de um segundo agente ativo ou de uma terapia de suporte. Segundos agentes ativos podem ser moléculas grandes (por exemplo, proteínas) ou moléculas pequenas (por exemplo, inorgânico sintético, organometálico, ou moléculas orgânicas). Em algumas modalidades, os segundos agentes ativos são moléculas pequenas que podem aliviar os efeitos adversos associados à administração de um anticorpo fornecido neste documento. No entanto, como algumas moléculas grandes, muitas são acreditadas para serem capazes de fornecer um efeito sinérgico quando administradas com (por exemplo, antes, depois ou simultaneamente) um anticorpo fornecido neste documento. Exemplos de segundos agentes ativos de pequenas moléculas incluem, mas não estão limitados aos agentes anticancerígenos, agentes anti-inflamatórios, agentes imunossupressores e esteroides. Em uma modalidade, o segundo agente ativo é um anticorpo anti- EGFR. Em uma certa modalidade, o segundo agente ativo é cetuximabe. Em uma modalidade, o segundo agente ativo é um anticorpo anti-CD20. Em outra modalidade, o segundo agente ativo é rituximabe.

4.5 Composições Farmacêuticas

[00583] Em um aspecto, a presente divulgação fornece ainda composições farmacêuticas compreendendo pelo menos um anticorpo anti-SIRPα fornecido neste documento. Em algumas modalidades, uma composição farmacêutica compreende 1) um anticorpo anti-SIRPα e 2) um carreador farmaceuticamente aceitável.

[00584] As composições farmacêuticas que compreendem um anticorpo são preparadas para armazenamento misturando o anticorpo com o grau de pureza desejado com carreadores, excipientes ou estabilizadores fisiologicamente aceitáveis opcionais (ver, por exemplo, Remington, Remington’s Pharmaceutical Sciences (18ª ed. 1980)) na forma de soluções aquosas ou liofilizadas ou outras formas secas.

[00585] Os anticorpos da presente divulgação podem ser formulados em qualquer forma adequada para administração a uma célula/tecido alvo, por exemplo, como microcápsulas ou macroemulsões (Remington, supra; Park et al., 2005, Molecules 10:146-61; Malik et al., 2007, Curr. Drug. Deliv. 4:141-51), como formulações de liberação sustentada (Putney e Burke, 1998, Nature Biotechnol. 16: 153-57), ou em lipossomas (Maclean et al., 1997, Int. J. Oncol. 11:325-32; Kontermann, 2006, Curr. Opin. Mol. Ther. 8:39-45).

[00586] Um anticorpo fornecido neste documento também pode ser aprisionado em uma microcápsula preparada, por exemplo, por técnicas de coacervação ou pela polimerização interfacial, por exemplo, hidroximetilcelulose ou microcápsulas de gelatina e microcápsulas de poli- (metilmetacilato), respectivamente, em sistemas de distribuição de droga coloidais (por exemplo, lipossomas, microesferas de albumina, microemulsões, nanopartículas e nanocápsulas) ou em macroemulsões. Essas técnicas são divulgadas, por exemplo, em Remington, supra.

[00587] Várias composições e sistemas de entrega são conhecidos e podem ser usados com um anticorpo que se liga a SIRPα conforme descrito neste documento, incluindo, sem limitação, encapsulação em lipossomas, micropartículas, microcápsulas, células recombinantes capazes de expressar o anticorpo, endocitose mediada por receptor (ver, por exemplo, Wu e Wu, 1987, J. Biol. Chem. 262:4429-32), construção de um ácido nucleico como parte de um retroviral ou outro vetor, etc. Em outra modalidade, pode ser fornecida uma composição na forma de sistema de liberação prolongada ou controlada. Em uma modalidade, uma bomba pode ser usada para alcançar a liberação controlada ou prolongada (ver, por exemplo, Langer, supra; Sefton, 1987, Crit. Ref. Biomed. Eng. 14:201-40; Buchwald et al., 1980, Surgery 88:507-16; e Saudek et al., 1989, N. Engl. J. Med. 321:569-74). Em outra modalidade, podem ser usados materiais para obter a liberação controlada ou prolongada de um agente profilático ou terapêutico (por exemplo, um anticorpo que se liga a SIRPα, conforme descrito neste documento) ou uma composição da invenção (ver, por exemplo, Medical Applications of Controlled Release (Langer e Wise eds., 1974); Controlled Drug Bioavailability, Drug Product Design and Performance (Smolen e Ball eds., 1984); Ranger and Peppas, 1983, J. Macromol. Sci. Rev. Macromol. Chem. 23:61-126; Levy et al., 1985, Science 228:190-92; During et al., 1989, Ann. Neurol. 25:351-56; Howard et al., 1989, J. Neurosurg. 71:105-12; Patentes US nº.

5.679.377; 5.916.597; 5.912.015; 5.989.463; e 5.128.326; Publicações PCT nº. WO 99/15154 e WO 99/20253). Exemplos de polímeros usados em formulações de liberação sustentada incluem, sem limitação, poli(2-hidroxietilmetacrilato), poli(metilmetacrilato), poli(ácido acrílico), poli(etileno-co-acetato de vinil), poli(ácido metacrílico), poliglicolídeos (PLG), polianidridos, poli(N-vinil pirrolidona), poli(álcool vinílico), poliacrilamida, poli(etilenoglicol), polilactidas (PLA), poli(lactídeo-co-glicolídeos) (PLGA) e poliortoésteres. Em uma modalidade, o polímero usado em uma formulação de liberação prolongada é inerte, livre de impurezas lixiviáveis, estável durante o armazenamento, estéril e biodegradável.

[00588] Em ainda outra modalidade, um sistema de liberação controlada ou prolongada pode ser colocado na proximidade de um tecido alvo em particular, por exemplo: as vias nasais ou pulmonares, exigindo assim apenas uma fração da dose sistêmica (ver, por exemplo, Goodson, Medical Applications of Controlled Release Vol. 2, 115-38 (1984)). Os sistemas de liberação controlada são discutidos, por exemplo, por Langer, 1990, Science 249:1527-33. Qualquer técnica conhecida por um versado na técnica pode ser usada para produzir formulações de liberação sustentada compreendendo um ou mais anticorpos que se ligam a SIRPα conforme descrito neste documento (ver, por exemplo, Patente US nº. 4.526.938, publicação PCT nº. WO 91/05548 e WO 96/20698, Ning et al., 1996, Radiotherapy & Oncology 39:179-89; Song et al., 1995, PDA J. of Pharma. Sci. & Tech. 50:372-97; Cleek et al., 1997, Pro. Int’l. Symp. Control. Rel. Bioact. Mater. 24:853-54; e Lam et al., 1997, Proc. Int’l. Symp. Control Rel. Bioact. Mater. 24:759-60).

4.6 Kits

[00589] Também são fornecidos neste documento kits que compreendem um anticorpo (por exemplo, um anticorpo anti-SIRPα) fornecido neste documento, ou uma composição (por exemplo, uma composição farmacêutica) do mesmo, embalado em material de embalagem adequado. Um kit inclui opcionalmente uma marcação ou inserções de embalagem incluindo uma descrição dos componentes ou instruções para uso in vitro, in vivo ou ex vivo, dos componentes no mesmo.

[00590] O termo "material de embalagem" refere-se a uma estrutura física que aloja os componentes do kit. O material de embalagem pode manter os componentes esterilizados e pode ser feito de um material geralmente usado para tais fins (por exemplo, papel, fibra corrugada, vidro, plástico, folha,

ampolas, frascos, tubos, etc.).

[00591] Os kits fornecidos neste documento podem incluir marcações ou inserções. As marcações ou inserções incluem "material impresso", por exemplo, papel ou papelão, separados ou fixados a um componente, um kit ou material de embalagem (por exemplo, uma caixa) ou anexados, por exemplo, a uma ampola, tubo ou frasco contendo um componente do kit. As marcações ou inserções podem incluir adicionalmente um meio legível por computador, como um disco (por exemplo, disco rígido, cartão, disco de memória), disco óptico, como um CD ou DVD-ROM/RAM, DVD, MP3, fita magnética ou uma mídia de armazenamento elétrico, como memória RAM e ROM, ou híbridos dos mesmos, como mídia de armazenamento magnético/óptico, mídia FLASH ou cartões de memória. As marcações ou inserções podem incluir informações que identificam informações do fabricante, números de lote, localização do fabricante e data.

[00592] Os kits fornecidos neste documento podem incluir, adicionalmente, outros componentes. Cada componente do kit pode ser fechado dentro de um recipiente individual e todos os diversos recipientes podem estar dentro de uma única embalagem. Os kits também podem ser projetados para armazenamento a frio. O kit também pode projetado concebido para conter os anticorpos fornecidos neste documento ou células que contêm ácidos nucleicos que codificam os anticorpos fornecidos neste documento. As células do kit podem ser mantidas em condições adequadas de armazenamento até estarem prontas para uso.

[00593] A menos que definido de outra forma, todos os termos técnicos e científicos usados neste documento têm o mesmo significado conforme comumente entendido por uma pessoa versada na técnica à qual esta invenção pertence. Apesar dos métodos e materiais semelhantes ou equivalentes àqueles descritos neste documento poderem ser usados na prática ou no teste da invenção, métodos e materiais adequados são descritos neste documento.

[00594] Todas os pedidos, publicações, patentes e outras referências, citações do GenBank e citações da ATCC citadas neste documento são incorporadas por referência na sua totalidade. Em caso de conflito, o relatório descritivo, incluindo as definições, servirão de base para controle.

[00595] Conforme usado neste documento, as formas singulares "um", "uma" e "o(a)" incluem as formas do plural referentes, a menos que o contexto indique claramente o contrário. Assim, por exemplo, uma referência a "uma sequência peptídica" inclui uma pluralidade dessas sequências e assim por diante.

[00596] Conforme usado neste documento, os valores numéricos frequentemente são apresentados em um formato de faixa ao longo deste documento. O uso de um formato de faixa se dá meramente por questões de conveniência e brevidade e não deve ser interpretado como uma limitação inflexível no escopo da invenção, a menos que o contexto indique claramente o contrário. Consequentemente, o uso de uma faixa inclui expressamente todas as subfaixas possíveis, todos os valores numéricos individuais dentro dessa faixa e todos os valores numéricos ou faixas numéricas, incluindo números inteiros dentro dessas faixas e frações dos valores ou inteiros dentro das faixas, a menos que o contexto indique claramente o contrário. Essa construção aplica-se independentemente da amplitude da faixa e em todos os contextos ao longo deste documento de patente. Assim, por exemplo, a referência a uma faixa de 90-100% inclui 91-99%, 92-98%, 93-95%, 91-98%, 91-97%, 91-96%, 91-95%, 91- 94%, 91-93% e assim por diante. A referência a uma faixa de 90-100% também inclui 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 95%, 97%, etc., bem como 91,1%, 91,2%, 91,3%, 91,4%, 91,5%, etc., 92,1%, 92,2%, 92,3%, 92,4%, 92,5%, etc., e assim por diante.

[00597] Além disso, a referência a uma faixa de 1-3, 3-5, 5-10, 10-20, 20-

30, 30-40, 40-50, 50-60, 60-70, 70-80, 80- 90, 90-100, 100-110, 110-120, 120- 130, 130-140, 140-150, 150-160, 160-170, 170-180, 180-190, 190-200, 200-225, 225-250 inclui 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, etc. Em um outro exemplo, a referência a uma faixa de 25-250, 250-500, 500-1.000,

1.000-2.500, 2.500-5.000, 5.000-25.000, 25.000-50.000 inclui qualquer valor numérico ou faixa dentro ou abrangendo tais valores, por exemplo, 25, 26, 27, 28, 29… 250, 251, 252, 253, 254… 500, 501, 502, 503, 504…, etc.

[00598] Conforme também usado neste documento, uma série de faixas é divulgada ao longo deste documento. O uso de uma série de faixas inclui combinações das faixas superiores e inferiores para fornecer outra faixa. Essa construção aplica-se independentemente da amplitude da faixa e em todos os contextos ao longo deste documento de patente. Assim, por exemplo, a referência a uma série de faixas, como 5-10, 10-20, 20-30, 30-40, 40-50, 50-75, 75-100, 100-150, inclui faixas como 5 -20, 5-30, 5-40, 5-50, 5-75, 5-100, 5-150 e 10-30, 10-40, 10-50, 10-75, 10-100, 10- 150 e 20-40, 20-50, 20-75, 20-100, 20- 150 e assim por diante.

[00599] Por uma questão de concisão, certas abreviaturas são usadas neste documento. Um exemplo é a abreviatura com uma única letra para representar resíduos de aminoácidos. Os aminoácidos e suas respectivas abreviaturas com três letras e uma única letra são: alanina Ala (A) arginina Arg (R) asparagina Asn (N) ácido Asp (D) aspártico cisteína Cys (C) ácido Glu (E)

glutâmico glutamina Gln (Q) glicina Gly (G) histidina His (H) isoleucina Ile (I) leucina Leu (L) lisina Lys (K) metionina Met (M) fenilalanina Phe (F) prolina Pro (P) serina Ser (S) treonina Thr (T) triptofano Trp (W) tirosina Tyr (Y) valina Val (V)

[00600] Aspectos da divulgação e as inúmeras modalidades são geralmente descritos neste documento usando linguagem afirmativa. Aspectos da divulgação também incluem especificamente modalidades nas quais o assunto específico é excluído, total ou parcialmente, tais como substâncias ou materiais, etapas e condições do método, protocolos, procedimentos, ensaios ou análises. Assim, embora a divulgação geralmente não seja expressa neste documento em termos do que a divulgação não inclui, aspectos que não estão expressamente incluídos nas várias modalidades ou descrições da divulgação são, no entanto, divulgados neste documento.

[00601] Um número de modalidades foi descrito. No entanto, será entendido que várias modificações podem ser feitas sem se afastar do espírito e do escopo da divulgação. Consequentemente, os exemplos a seguir destinam-se a ilustrar, mas não limitam o escopo conforme descrito nas reivindicações.

5. EXEMPLOS

[00602] Os exemplos nesta seção (ou seja, na Seção 5) são oferecidos a título de ilustração, não como limitação.

5.1 Exemplo 1: Geração de Anticorpos Anti-SIRPα

5.1.1 Geração de Anticorpos Anti-SIRPα

[00603] A triagem e descoberta de anticorpos de imunoglobulina G (IgG) totalmente humana contra SIRPα foram realizadas utilizando a plataforma de exibição de levedura (FIG. 1). O domínio extracelular de SIRPα humano recombinante (ECD) foi usado como isca para isolar ligantes de oito bibliotecas, totalizando ~1010 anticorpos IgG totalmente humanos expressos em células de levedura. Cadeias pesadas (HCs) de saídas de seleção foram ainda embaralhadas contra nove bibliotecas de cadeia leve (LC) para diversidade adicional. Rodadas sucessivas de classificação seletiva renderam mais de 1300 isolados não expostos para sequenciamento e foram posteriormente triados até 564 para produção, ligação e análise de bloqueio de CD47. O teste identificou sete ligantes de IgG não expostos para maturação de afinidade; a cadeia pesada da região determinante de complementaridade focada (CDRH)1 e bibliotecas de CDRH2 para cada linhagem (cada > 108) foram emparelhadas com as cadeias leves correspondentes e examinadas para ligantes SIRPα humanos e cyno de alta afinidade. Mais de 350 "descendentes" de 6 linhagens parentais foram sequenciados e produzidos para caracterização em relação à ligação SIRPα, cobertura polimórfica e perfis de reatividade cruzada. Os 24 melhores clones, em seis linhagens, foram distribuídos para caracterização interna, incluindo ligação celular, determinação de afinidade por ressonância plasmônica de superfície (SPR), bloqueio de ligante e ensaios funcionais in vitro. (Ver a FIG. 1 para um esboço do processo)

[00604] Incorporando a análise de imunogenicidade EpiVax com matriz de pontuação de desenvolvimento de reagente de poliespecificidade (PSR), conforme descrito em Xu Y, et al., Protein Eng Des Sel. outubro de 2013;26(10):663-70 (que é incorporado neste documento em sua totalidade por referência), SIRPAB-11 foi identificado como um clone anti-SIRPα exemplificativo, com afinidade potente para SIRPα e SIRPγ, atividade celular e perfil de reatividade cruzada de cinomolgo favorável (descrito mais abaixo). Este clone foi escolhido para manipulação de variante Fc adicional para avaliar os requisitos da função efetora Fc e testes adicionais in vitro e in vivo.

5.1.2 Geração de anticorpos anti-SIRPα com alta cobertura de haplótipos SIRPα

[00605] A análise de polimorfismo do domínio SIRPα IgV, especialmente resíduos que abrangem a interface de ligação CD47, identificou vários haplótipos cobrindo > 95% dos polimorfismos na interface de ligação CD47 na população humana (Takenaka K, et al., Nat Immunol. dezembro de 2007;8(12):1313-23). Como parte da campanha de triagem, o haplótipo mais prevalente (SIRPα V1: DLN, FIG. 2) foi utilizado para a triagem da primeira rodada, com maturação de afinidade de acompanhamento para os dois polimorfismos principais (SIRPα V1: DLN e SIRPα V2: ESE, FIG. 2). Como parte da avaliação in vitro, a ligação de KD para cada anticorpo foi realizada nos seis haplótipos principais (FIG. 2), incluindo SIRPα v1 compreendendo a SEQ ID NO:149 no domínio IgV, SIRPα v2 compreendendo a SEQ ID NO:150 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo a SEQ ID NO:151 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo a SEQ ID NO:152 no domínio IgV, SIRPα v5 compreendendo a SEQ ID NO:153 no domínio IgV, e SIRPα v6 compreendendo a SEQ ID NO:154 no domínio IgV (ver mais abaixo para medições de afinidade). Como resultado, o SIRPAB-11 tem um perfil de cobertura de ligação pan em > 95% dos polimorfismos SIRPα na interface de ligação CD47 em humanos.

5.1.3 Geração de variantes de anticorpos anti-SIRPα

[00606] Para estudos de anticorpos subsequentes, o par VH/VL do anticorpo anti-SIRPα foi gerado. Para gerar o anticorpo anti-SIRPα, o VL foi fundido a uma região constante kappa humana WT, o VH foi fundido a uma região Fc de IgG1 humana. O anticorpo SIRPAB-11 IgG1 (SIRPAB-11-IgG1 ou SIRPAB-11) e as variantes modificadas com Fc, como o anticorpo IgG4PE (SIRPAB- 11-4PE) foram gerados. SIRPAB-11-4PE foi projetado para ter uma função efetora mediada por Fc significativamente menor. A região CH, γ4 contém duas substituições de aminoácidos não padrão, S228P e L235E (sistemas de numeração da UE, Kabat e Wu, J Immunol. 1 de setembro de 1991;147(5):1709- 19; Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest (5ª ed. 1991)). A serina 228, um tipo comum de aminoácido na dobradiça de IgG4, foi alterada para prolina, um tipo de aminoácido menos comumente observado na IgG4 e um aminoácido altamente conservado na IgG1. Essa alteração reduziu significativamente o nível de "metade do anticorpo", o que é comumente observado na produção do anticorpo da subclasse IgG4. A leucina 235, um dos aminoácidos fundamentais envolvidos nas interações da cadeia pesada com os receptores Fc, foi alterada para ácido glutâmico. A substituição L235E reduziu significativamente a interação da cadeia γ4 em FcγR, eliminando a eliminação mediada por ADCC e receptores Fc de células normais que expressam SIRPα. Além disso, a falta inerente de ligação do complemento pela cadeia pesada γ4 torna a molécula SIRPAB-11-4PE desprovida da função CDC.

[00607] Duas outras variantes foram geradas para minimizar a afinidade de ligação a C1q para CDC reduzido. Para gerar SIRPAB-11-K322A, a lisina 322 foi substituída por alanina em SIRPAB-11-IgG1. A substituição de K322A é relatada para suprimir a ligação de C1q ao rituximabe, um anticorpo quimérico com um

Fc de IgG1 humano (Idusogie et al., 2000, J. Immunol. 164(8):4178-84). SIRPAB- 11-4P foi gerado convertendo a estrutura principal de Fc do SIRPAB-11-IgG1 na estrutura principal de Fc de IgG4 com substituição de S228P. A substituição S228P de reduziu significativamente o nível de "meio anticorpo", o que é geralmente observado na produção do anticorpo da subclasse IgG4. Foi relatado que o anticorpo IgG4 atenuou a função ADCC e CDC (Overdijk et al., 2012, J. Immunol. 189(7):3430-38). SIRPAB-11-4PE foi gerado convertendo a estrutura principal de Fc do SIRPAB-11-IgG1 na estrutura principal de Fc de IgG4 com substituições de S228P e L235E. Todas as alterações foram criadas na região CH sem alterações nas regiões variáveis. As sequências de aminoácidos das cadeias leve e pesada de SIRPAB-11-IgG1 são referidas como LC_SIRPAB-11-IgG1 e HC_SIRPAB-11-IgG1, respectivamente. As duas variantes de cadeia pesada incluem HC_SIRPAB-11-IgG1-K322A e HC_SIRPAB-11-IgG4PE. LC_SIRPAB-11- IgG1 de cadeia leve é emparelhado com as três cadeias pesadas individuais para gerar SIRPAB-11-IgG1 (SEQ ID NO:142), SIRPAB-11-K322A (SEQ ID NO:119) e SIRPAB-11-4PE (SEQ ID NO:120), respectivamente. Outros anticorpos e variantes, como as cadeias pesadas de SIRPAB-11-4P (SEQ ID NO:112), SIRPAB- 11-AAS (SEQ ID NO:98), SIRPAB-12 (SEQ ID NO:204) e variantes correspondentes de SIRPAB-12 foram geradas de forma semelhante.

[00608] Todas as variantes de SIRPAB-11 foram geradas pelo método de mutagênese padrão (por exemplo, mutagênese dirigida ao sítio) ou pela fusão de VH a uma variante Fc de IgG humano. Por exemplo, a cadeia pesada de SIRPAB-11-K322A também foi gerada pela fusão de VH a um Fc de IgG1 humano com uma substituição de aminoácido lisina por alanina na posição 322 (SEQ ID NO:119, com mutação K322A, sistemas de numeração da UE; Kabat, et al., J Immunol. 1 de setembro de 1991;147(5):1709-19).

5.1.4 Geração de anticorpos anti-SIRPα de camundongo

[00609] Os anticorpos anti-SIRPα gerados na campanha descrita acima usando SIRPα humano recombinante como antígeno não se ligaram a SIRPα de roedor (por exemplo, camundongo) (FIG. 3). Portanto, uma campanha de subdescoberta foi realizada para identificar anticorpos contra WT C57/BL6 ou NOD-SCID SIRPα. Rodadas iniciais de seleção de SIRPα de camundongo identificaram dois anticorpos (SIRPAB-5 e SIRPAB-17) demonstrando ligação de NOD-SCID SIRPα (FIG. 3). A maturação de afinidade adicional com SIRPAB-17 resultou em seis ligantes de progênie com afinidade de ligação de WT e NOD- SCID SIRPα significativamente melhorada. Três clones exemplificativos, SIRPAB- 19, SIRPAB-20 e SIRPAB-21 foram avaliados adicionalmente para afinidades de ligação e atividades de bloqueio de CD47 (ver abaixo). Cada um foi fundido com mIgG2a Fc para estudos de eficácia in vitro e in vivo.

5.2 Exemplo 2: Caracterização de Anticorpos Anti-SIRPα

5.2.1 Caracterização das propriedades de ligação de anticorpos anti- SIRPα humanos

[00610] As caracterizações iniciais para a ligação do anticorpo à célula SIRPα humana ou cyno foram realizadas com SIRPAB-11-4PE, uma variante Fc de IgG4PE projetada para ter função efetora FcγR atenuada. As células CHO que superexpressam SIRPα humano ou cyno foram obtidas por transfecção estável ou transfecção transitória. Anticorpos diluídos em série foram adicionados às células, seguido por lavagem e incubação adicional com um anticorpo de detecção IgG-AF647 anti-humano secundário. Os níveis de ligação do anticorpo foram analisados determinando a intensidade média de fluorescência (MFI) por citometria de fluxo. SIRPAB-11-K322A se liga a células SIRPα-CHO humanas com uma EC50 de 2,06 nM e SIRPα-CHO cyno a uma EC50 de 1,9 nM, e não se liga a SIRPα-CHO de rato ou camundongo (FIG. 4A-4D).

[00611] Em outros ensaios, o anticorpo SIRPAB-11-K322A purificado foi analisado em Biacore T200 para ligação a antígenos SIRPα v1-DLN (por exemplo, SIRPα1), SIRPβ e SIRPγ usando método de captura. Para realizar os ensaios de ligação, domínio extracelular de SIRPα v1-DLN (por exemplo, SIRPα1) com a sequência da SEQ ID NO:101, SIRPβ com a sequência de

MPVPASWPHLPSPFLLMTLLLGRLTGVAGEDELQVIQPEKSVSVAAGESATLCCAMTSLI PVGPIMWFRGAGAGRELIYNQKEGHFPRVTTVSELTKRNNLDFSISISNITPADAGTYYCV KFRKGSPDDVEFKSGAGTELSVRAKPSAPVVSGPAVRATPEHTVSFTCESHGFSPRDITLK WFKNGNELSDFQTNVDPAGDSVSYSIHSTARVVLTRGDVHSQVICEMAHITLQGDPLRG TANLSEAIRVPPTLEVTQQPMRAENQANVTCQVSNFYPRGLQLTWLENGNVSRTETAST

LIENKDGTYNWMSWLLVNTCAHRDDVVLTCQVEHDGQQAVSKSYALEISAHQKEHGSD ITHEPALAPTAPL (SEQ ID NO:108) e SIRPγ com a sequência de

MPVPASWPHPPGPFLLLTLLLGLTEVAGEEELQMIQPEKLLLVTVGKTATLHCTVTSLLPV GPVLWFRGVGPGRELIYNQKEGHFPRVTTVSDLTKRNNMDFSIRISSITPADVGTYYCVKF RKGSPENVEFKSGPGTEMALGAKPSAPVVLGPAARTTPEHTVSFTCESHGFSPRDITLKW FKNGNELSDFQTNVDPTGQSVAYSIRSTARVVLDPWDVRSQVICEVAHVTLQGDPLRGT ANLSEAIRVPPTLEVTQQPMRVGNQVNVTCQVRKFYPQSLQLTWSENGNVCQRETAST

LTENKDGTYNWTSWFLVNISDQRDDVVLTCQVKHDGQLAVSKRLALEVTVHQKDQSSD ATP (SEQ ID:114) foram preparados.

[00612] Um chip de Proteína A da GE Healthcare (número de catálogo 29127556) foi usado para capturar o anticorpo, o anticorpo SIRPAB-11-K322A purificado foi capturado no canal 2 e os antígenos SIRP fluíram em ambos os canais 1 e 2 usando uma série de diluição de cinco vezes de 20 nM a 0,16 nM para determinar a cinética de ligação. A superfície do chip foi regenerada entre cada concentração de antígeno usando 10 mM de glicina, pH 1,5. Um exemplo de ka, kd e o KD calculado para o anticorpo SIRPAB-11-K322A e SIRPα, SIRPβ e SIRPγ são mostrados na Tabela 15 abaixo. Tabela 15: Medições Biacore de parâmetros de ligação entre SIRPAB-11-

K322A e cada um dentre SIRPα, SIRPβ e SIRPγ SIRPAB-11- SIRPAB-11- SIRPAB-11- K322A ligando-se K322A ligando-se K322A ligando- a SIRPα a SIRPβ se a SIRPγ ka (constante de taxa de 7,75×106 (1/Ms) 5,06×104 (1/Ms) 1,71×107 (1/Ms) associação) kd (constante de taxa de 1,18×10–4 (1/s) 6,14×10–4 (1/s) 1,88×10–4 (1/s) dissociação) KD (constante de 1,52×10–11 M 1,21×10–8 M 1,01×10–11 M equilíbrio) Rmax (RU = unidade de 12,48 RU 30,09 RU 9,4 RU resposta)

[00613] Além disso, as afinidades entre os anticorpos anti-SIRPα e seis haplótipos SIRPα humanos mais prevalentes (incluindo SIRPα v1 a v6 conforme descrito acima, SEQ ID NOs:101, 103, 105, 93, 95, 97), SIRPβ humano (SEQ ID NO:108), SIRPγ humano (SEQ ID NO:114), SIRPα de cyno (SEQ ID NO:115), SIRPα de camundongo (SEQ ID NO:102) e SIRPα de camundongo NOD/SCID (SEQ ID NO: 100) foram determinados e comparados em Octet Systems (da Pall ForteBio). Os vários construtos de SIRPα, β, e y foram fundidos por meio de um ligante GS (glicina-serina) para IGHG1_Fc humana com a sequência de

DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVD GVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDS DGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID

NO:109). As proteínas de fusão resultantes, incluindo vários SIRPα-Fc humanos, SIRPα-Fc cyno (SEQ ID NO:104), SIRPβ-Fc humano (SEQ ID NO:92), SIRPγ-Fc humano (SEQ ID NO:113), SIRPα-Fc de camundongo (SEQ ID NO:96) e SIRPα-Fc de camundongo NOD/SCID (SEQ ID NO:94) foram preparadas e usadas para medições de afinidade em Octet. As medições de Octet Systems são úteis para estudar as interações de um grande número de pares de ligação em um formato de alto rendimento e comparar as interações dos vários pares de ligação. Resumidamente, os antígenos foram capturados nos biossensores e mergulhados em soluções contendo os anticorpos para medições de alto rendimento. Os resultados, incluindo o kon, koff e KD, foram resumidos na Tabela

16. Tabela 16 Resumo do Perfil de Ligação de Anticorpos Anti-SIRPα Humanos

Antic Medi Ligação de SIRPABs a SIRPα, SIRPβ Reatividade orpo ções ou SIRPγ Humano Cruzada KD (nM) s 2 5 1 (p (p (p or V3 4 or 6 or ex (por (por ex (por ex e exe exe e exe em m mpl mpl m mpl IR IR yn Ms plo pl o, o, pl o, Pβ Pγ o , o, SIR SIR o, SIR SIR SI Pα3 Pα4 SI Pα6 Pα RP ) ) RP ) 1) α2 α5 ) ) Ligaç 4, 1, ão 2,9 4, 11 54, 61 43 P.F 4,8 N.B 29 KD 5 22 ,3 9 . (nM)

SIRP kon 0, 1, AB-1 (M- 89 04 0,9 0, 0,0 1, 0,1 1 -1 s ) - - 0,41 8 13 85 17 1 (×106 )

Antic Medi Ligação de SIRPABs a SIRPα, SIRPβ Reatividade orpo ções ou SIRPγ Humano Cruzada KD (nM) s 2 5 1 (p (p (p or V3 4 or 6 or ex (por (por ex (por ex e exe exe e exe em m mpl mpl m mpl IR IR yn Ms plo pl o, o, pl o, Pβ Pγ o , o, SIR SIR o, SIR SIR SI Pα3 Pα4 SI Pα6 Pα RP ) ) RP ) 1) α2 α5 ) ) Koff 1, 4, [ (s-1) 7, 57, 1 9 8,9 46, - 32 - 119 (×10– 2 9 4 4 ) Ligaç 0, 0, SIRP ão 0,2 10 12, 32, 1, 11, 89 14 19 P.F.

AB-2 KD 99 ,7 2 6 95 9 ,3 (nM)

Antic Medi Ligação de SIRPABs a SIRPα, SIRPβ Reatividade orpo ções ou SIRPγ Humano Cruzada KD (nM) s 2 5 1 (p (p (p or V3 4 or 6 or ex (por (por ex (por ex e exe exe e exe em m mpl mpl m mpl IR IR yn Ms plo pl o, o, pl o, Pβ Pγ o , o, SIR SIR o, SIR SIR SI Pα3 Pα4 SI Pα6 Pα RP ) ) RP ) 1) α2 α5 ) ) kon 1, 1, (M- 24 46 0, 1,3 0, 0,6 0,9 1, 0,7 1 -1 s ) 81 - 9 69 1 22 43 5 (×106 1 ) Koff 11 2 (s-1) 4,1 73 73, 89, ,1 15 301 28 - – (×10 3 ,9 7 1 7 4 )

Antic Medi Ligação de SIRPABs a SIRPα, SIRPβ Reatividade orpo ções ou SIRPγ Humano Cruzada KD (nM) s 2 5 1 (p (p (p or V3 4 or 6 or ex (por (por ex (por ex e exe exe e exe em m mpl mpl m mpl IR IR yn Ms plo pl o, o, pl o, Pβ Pγ o , o, SIR SIR o, SIR SIR SI Pα3 Pα4 SI Pα6 Pα RP ) ) RP ) 1) α2 α5 ) ) Ligaç 0, 0, ão P.F 10, 0, 9,4 22 11 7, 0,2 P.F. 12,6 KD . 5 9 7 8 95 (nM)

SIRP kon 1, 1, AB-3 (M- 43 69 1,5 0,6 2, 1,2 1, 1 -1 s ) 1,04 5 4 26 1 07 (×106 )

Antic Medi Ligação de SIRPABs a SIRPα, SIRPβ Reatividade orpo ções ou SIRPγ Humano Cruzada KD (nM) s 2 5 1 (p (p (p or V3 4 or 6 or ex (por (por ex (por ex e exe exe e exe em m mpl mpl m mpl IR IR yn Ms plo pl o, o, pl o, Pβ Pγ o , o, SIR SIR o, SIR SIR SI Pα3 Pα4 SI Pα6 Pα RP ) ) RP ) 1) α2 α5 ) ) Koff 3, 2 (s-1) 67, 20 19 3,1 114 85 131 (×10– 6 ,3 4 ) Ligaç 1, 0, SIRP ão 0,4 18 2, 15, 00 14 19 P.F. 18 72,8 AB-4 KD 5 ,2 51 4 4 (nM)

Antic Medi Ligação de SIRPABs a SIRPα, SIRPβ Reatividade orpo ções ou SIRPγ Humano Cruzada KD (nM) s 2 5 1 (p (p (p or V3 4 or 6 or ex (por (por ex (por ex e exe exe e exe em m mpl mpl m mpl IR IR yn Ms plo pl o, o, pl o, Pβ Pγ o , o, SIR SIR o, SIR SIR SI Pα3 Pα4 SI Pα6 Pα RP ) ) RP ) 1) α2 α5 ) ) kon 1, 1, (M- 21 39 1,2 0, 0,6 1, 0,8 0, 1 -1 s ) 0,13 9 74 1 52 8 82 (×106 ) Koff 12 2 (s-1) 5,8 13 38 ,1 14 57 136 95,3 – (×10 2 4 ,1 9 4 )

Antic Medi Ligação de SIRPABs a SIRPα, SIRPβ Reatividade orpo ções ou SIRPγ Humano Cruzada KD (nM) s 2 5 1 (p (p (p or V3 4 or 6 or ex (por (por ex (por ex e exe exe e exe em m mpl mpl m mpl IR IR yn Ms plo pl o, o, pl o, Pβ Pγ o , o, SIR SIR o, SIR SIR SI Pα3 Pα4 SI Pα6 Pα RP ) ) RP ) 1) α2 α5 ) ) Ligaç 0, 0, 0, ão 0,1 27 9,3 7,9 15 15 5, P.F. 52 7,51 KD 65 ,5 4 6 4 42 6 (nM)

SIRP kon 1, 1, AB-5 (M- 33 3 0, 1,2 0, 0,6 1, 0,8 1 -1 s ) 77 0,628 2 55 1 6 37 (×106 5 )

Antic Medi Ligação de SIRPABs a SIRPα, SIRPβ Reatividade orpo ções ou SIRPγ Humano Cruzada KD (nM) s 2 5 1 (p (p (p or V3 4 or 6 or ex (por (por ex (por ex e exe exe e exe em m mpl mpl m mpl IR IR yn Ms plo pl o, o, pl o, Pβ Pγ o , o, SIR SIR o, SIR SIR SI Pα3 Pα4 SI Pα6 Pα RP ) ) RP ) 1) α2 α5 ) ) Koff 2, 2 (s-1) 2,0 15 8, 66, 00 57 42 47,2 (×10– 2 1 43 6 4 ) Ligaç P.F 8, SIRP ão 6,0 N. 77, 63, 38 . 36 P.F N.B.

N.B.

AB-6 KD 7 B. 8 3 ,6 . (nM)

Antic Medi Ligação de SIRPABs a SIRPα, SIRPβ Reatividade orpo ções ou SIRPγ Humano Cruzada KD (nM) s 2 5 1 (p (p (p or V3 4 or 6 or ex (por (por ex (por ex e exe exe e exe em m mpl mpl m mpl IR IR yn Ms plo pl o, o, pl o, Pβ Pγ o , o, SIR SIR o, SIR SIR SI Pα3 Pα4 SI Pα6 Pα RP ) ) RP ) 1) α2 α5 ) ) kon 1, (M- 0, 14 1,1 0,1 0,6 1 -1 s ) 98 3 61 0 (×106 5 ) Koff 95 (s-1) 6 38 ,3 125 378 (×10– 8,7 1 4 )

Antic Medi Ligação de SIRPABs a SIRPα, SIRPβ Reatividade orpo ções ou SIRPγ Humano Cruzada KD (nM) s 2 5 1 (p (p (p or V3 4 or 6 or ex (por (por ex (por ex e exe exe e exe em m mpl mpl m mpl IR IR yn Ms plo pl o, o, pl o, Pβ Pγ o , o, SIR SIR o, SIR SIR SI Pα3 Pα4 SI Pα6 Pα RP ) ) RP ) 1) α2 α5 ) ) Ligaç 2, 0, ão 0,1 13 10, 0,9 0, 12, 56 1 4, P.F. KD 5 ,2 2 5 66 2 59 (nM)

SIRP kon 1, 1, AB-7 (M- 53 94 1,8 0, 0,7 1,7 2, 0,9 1, 1 -1 s ) 4 73 02 4 17 07 19 6 (×10 )

Antic Medi Ligação de SIRPABs a SIRPα, SIRPβ Reatividade orpo ções ou SIRPγ Humano Cruzada KD (nM) s 2 5 1 (p (p (p or V3 4 or 6 or ex (por (por ex (por ex e exe exe e exe em m mpl mpl m mpl IR IR yn Ms plo pl o, o, pl o, Pβ Pγ o , o, SIR SIR o, SIR SIR SI Pα3 Pα4 SI Pα6 Pα RP ) ) RP ) 1) α2 α5 ) ) Koff 39 2 (s-1) 2,7 95 71, 16, 14 ,1 54 111 (×10– 1 ,6 8 5 ,3 ,6 4 ) Ligaç P.F P.F SIRP ão P.F N. 22, P.F . . N.

P.F. P.F. N.B.

AB-8 KD . B. 3 . B. (nM)

Antic Medi Ligação de SIRPABs a SIRPα, SIRPβ Reatividade orpo ções ou SIRPγ Humano Cruzada KD (nM) s 2 5 1 (p (p (p or V3 4 or 6 or ex (por (por ex (por ex e exe exe e exe em m mpl mpl m mpl IR IR yn Ms plo pl o, o, pl o, Pβ Pγ o , o, SIR SIR o, SIR SIR SI Pα3 Pα4 SI Pα6 Pα RP ) ) RP ) 1) α2 α5 ) ) kon (M- 1,0 1 -1 s ) 2 (×106 ) Koff (s-1) 226 – (×10 4 )

Antic Medi Ligação de SIRPABs a SIRPα, SIRPβ Reatividade orpo ções ou SIRPγ Humano Cruzada KD (nM) s 2 5 1 (p (p (p or V3 4 or 6 or ex (por (por ex (por ex e exe exe e exe em m mpl mpl m mpl IR IR yn Ms plo pl o, o, pl o, Pβ Pγ o , o, SIR SIR o, SIR SIR SI Pα3 Pα4 SI Pα6 Pα RP ) ) RP ) 1) α2 α5 ) ) Ligaç 2, 1, ão 0,7 23 0,5 7,6 4, 1,5 79 37 18 N.B. KD 14 ,0 3 9 75 6 ,8 (nM)

SIRP kon 1, 1, AB-9 (M- 02 17 1,0 0, 0,9 1,0 0, 1,1 1, 1 -1 s ) 6 81 8 1 97 7 13 6 (×10 )

Antic Medi Ligação de SIRPABs a SIRPα, SIRPβ Reatividade orpo ções ou SIRPγ Humano Cruzada KD (nM) s 2 5 1 (p (p (p or V3 4 or 6 or ex (por (por ex (por ex e exe exe e exe em m mpl mpl m mpl IR IR yn Ms plo pl o, o, pl o, Pβ Pγ o , o, SIR SIR o, SIR SIR SI Pα3 Pα4 SI Pα6 Pα RP ) ) RP ) 1) α2 α5 ) ) Koff 28 16 (s-1) 7,5 18 5,1 77, 46 18, ,4 ,1 21 (×10– 7 5 5 7 ,2 2 2 4 ) Ligaç 0, 0,

SIRP ão 0,2 1, 0,2 1,9 1, 0,3 34 85 4, AB- N.B. KD 5 06 1 3 58 8 89 10 (nM)

Antic Medi Ligação de SIRPABs a SIRPα, SIRPβ Reatividade orpo ções ou SIRPγ Humano Cruzada KD (nM) s 2 5 1 (p (p (p or V3 4 or 6 or ex (por (por ex (por ex e exe exe e exe em m mpl mpl m mpl IR IR yn Ms plo pl o, o, pl o, Pβ Pγ o , o, SIR SIR o, SIR SIR SI Pα3 Pα4 SI Pα6 Pα RP ) ) RP ) 1) α2 α5 ) ) kon 1, 1, (M- 40 45 1, 1,2 1,3 1, 1,2 1, 1 -1 s ) 1,4 25 4 8 13 8 40 (×106 ) Koff 4, 12 (s-1) 3,4 13 2,6 26, 17 4,9 77 ,3 68 (×10– 5 ,2 1 7 ,8 1 ,3 4 )

Antic Medi Ligação de SIRPABs a SIRPα, SIRPβ Reatividade orpo ções ou SIRPγ Humano Cruzada KD (nM) s 2 5 1 (p (p (p or V3 4 or 6 or ex (por (por ex (por ex e exe exe e exe em m mpl mpl m mpl IR IR yn Ms plo pl o, o, pl o, Pβ Pγ o , o, SIR SIR o, SIR SIR SI Pα3 Pα4 SI Pα6 Pα RP ) ) RP ) 1) α2 α5 ) ) Ligaç 0, 0, 0, ão 0,1 4, 0,1 1,5 0,1 32 13 4, 61 N.B.

KD 3 4 45 2 83 9 1 SIRP (nM) AB- kon 1, 1, 11 (M- 49 57 1,4 1, 1,3 1,5 1, 1,9 1, 1 -1 s ) 9 27 8 0 73 4 77 6 (×10 )

Antic Medi Ligação de SIRPABs a SIRPα, SIRPβ Reatividade orpo ções ou SIRPγ Humano Cruzada KD (nM) s 2 5 1 (p (p (p or V3 4 or 6 or ex (por (por ex (por ex e exe exe e exe em m mpl mpl m mpl IR IR yn Ms plo pl o, o, pl o, Pβ Pγ o , o, SIR SIR o, SIR SIR SI Pα3 Pα4 SI Pα6 Pα RP ) ) RP ) 1) α2 α5 ) ) Koff 4, 2, (s-1) 55 22, 10 3,5 73 05 86 2 2 (×10– ,9 8 ,6 6 ,9 4 ) Ligaç 3, 1,

SIRP ão 0,8 15 0,5 8,1 4, 1,5 35 49 P.F AB- N.B. KD 1 ,4 3 3 87 8 . 12 (nM)

Antic Medi Ligação de SIRPABs a SIRPα, SIRPβ Reatividade orpo ções ou SIRPγ Humano Cruzada KD (nM) s 2 5 1 (p (p (p or V3 4 or 6 or ex (por (por ex (por ex e exe exe e exe em m mpl mpl m mpl IR IR yn Ms plo pl o, o, pl o, Pβ Pγ o , o, SIR SIR o, SIR SIR SI Pα3 Pα4 SI Pα6 Pα RP ) ) RP ) 1) α2 α5 ) ) kon 1, 1, (M- 33 46 1,3 0, 1,3 1,3 1, 1,6 1 -1 s ) 1 98 1 5 43 3 (×106 ) Koff 44 21 (s-1) 10, 15 6,9 69 25, ,5 ,8 109 (×10– 7 1 4 ,7 6 4 )

Antic Medi Ligação de SIRPABs a SIRPα, SIRPβ Reatividade orpo ções ou SIRPγ Humano Cruzada KD (nM) s 2 5 1 (p (p (p or V3 4 or 6 or ex (por (por ex (por ex e exe exe e exe em m mpl mpl m mpl IR IR yn Ms plo pl o, o, pl o, Pβ Pγ o , o, SIR SIR o, SIR SIR SI Pα3 Pα4 SI Pα6 Pα RP ) ) RP ) 1) α2 α5 ) ) Ligaç 4, 4, ão 1,6 17 0,8 11, 7, 2,7 52 12 14 N.B.

KD 5 ,2 3 4 73 1 ,9 SIRP (nM) AB- kon 1, 1, 13 (M- 21 35 1,2 1, 1,1 1, 1,3 1, 1 -1 s ) 1,2 4 00 7 16 5 32 6 (×10 )

Antic Medi Ligação de SIRPABs a SIRPα, SIRPβ Reatividade orpo ções ou SIRPγ Humano Cruzada KD (nM) s 2 5 1 (p (p (p or V3 4 or 6 or ex (por (por ex (por ex e exe exe e exe em m mpl mpl m mpl IR IR yn Ms plo pl o, o, pl o, Pβ Pγ o , o, SIR SIR o, SIR SIR SI Pα3 Pα4 SI Pα6 Pα RP ) ) RP ) 1) α2 α5 ) ) Koff 54 55 (s-1) 20, 17 9,6 89 36, ,4 ,8 19 137 (×10– 5 2 5 2 4 7 4 ) SIRPABs = anticorpos anti-SIRPα; Cyno = cinomolgo; Ms = camundongo; N.B. = sem ligação; P.F. = ajuste inadequado, indicando medições imprecisa

[00614] A ligação entre certos anticorpos SIRPα que são capazes de se ligar a SIRPα de camundongo e SIRPα-Fc de camundongo (SEQ ID NO:96) ou SIRPα-Fc de camundongo NOD/SCID (SEQ ID NO:94), também foi determinada em Octet Systems (da Pall ForteBio) conforme descrito acima. Em experimentos adicionais, a ligação entre certos anticorpos SIRPα que são capazes de se ligar a SIRPα de camundongo e células CHO-K1 que expressam SIRPα de camundongo também foi determinada como aumento de vezes sobre o fundo na concentração de 100 nM de anticorpos.

Os resultados dos ensaios de ligação de Octet e ensaios de ligação de células CHO foram resumidos na Tabela 17 abaixo.

Tabela 17 Resumo da Ligação entre Alguns Anticorpos Anti-SIRPα e SIRPα de camundongo Célula CHO-K1 SIRPα Ms Aumento Abs SIRPα-Fc Ms SIRPα-Fc Ms NOD/SCID de Vezes de Ligação Sobre o Fundo (100 nM) Ligação kon (M- Koff Ligação kon (M- Koff (s- 1 -1 KD (nM) s ) (s-1) KD (nM) 1 -1 s ) 1 ) (×106) (×10– (×106) (×10– 4 4 ) ) SIRPAB- 17,3 0,22 37,3 152 0,15 228 448,7 17 SIRPAB- 2,2 0,29 6,45 28,1 0,16 45,8 2513 18 SIRPAB- 1,02 0,64 6,56 4,02 0,46 18,3 2737 19 SIRPAB- 0,39 0,76 2,92 3,84 0,53 20,2 4393 20 SIRPAB- 1,46 0,49 7,08 5,43 0,35 19,0 2439

Abs=anticorpos; Ms=camundongo

[00615] Da mesma forma, a ligação entre os anticorpos SIRPα e células CHO-K1 que expressam SIRPα de cyno ou humana também foi determinada como aumento de vezes sobre o fundo na concentração de 100 nM de anticorpos e mostrada na Tabela 18 abaixo: Tabela 18: Resumo da Ligação Entre Anticorpos Anti-SIRPα e células CHO- K1 que expressam SIRPα de cyno ou humana. Célula CHO-K1 SIRPα Célula CHO-K1 SIRPα Hu de Cyno Aumento de Vezes de Anticorpos Aumento de Vezes de Ligação Sobre o Fundo Ligação Sobre o Fundo (100 nM) (100 nM) SIRPAB-1 1762 1610 SIRPAB-2 1982 2116 SIRPAB-3 2048 2284 SIRPAB-4 1582 1583 SIRPAB-5 2259 2679 SIRPAB-6 1981 1538 SIRPAB-7 2100 2391 SIRPAB-8 1310 1023 SIRPAB-9 2649 2295 SIRPAB-10 1168 1068 SIRPAB-11 1894 1951 SIRPAB-12 2347 2216 SIRPAB-13 1940 1948 Hu=humano.

[00616] A ligação de células primárias com a variante SIRPAB-11-K322A foi realizada para comparar a porcentagem relativa de monócitos que se ligam a células mononucleares de sangue periférico humano e cyno (PBMCs). Cinco PBMCs de doadores humanos foram cocorados com SIRPAB-11-K322A- AlexaFluor647 e o marcador monocítico CD14, seguido por análise por citometria de fluxo (FIG. 5A, painel esquerdo). Dos cinco doadores humanos, uma média de 22% dos PBMCs coraram CD14 positivo (monócitos), dos quais a maioria mostrou coligação a SIRPAB-11-K322A (FIG. 5A; painel esquerdo). Da mesma forma, cinco PBMCs de doadores cyno foram cocorados com SIRPAB-11- K322A e os anticorpos CD14 de reação cruzada (FIG. 5A; painel direito). Em comparação com as células humanas, uma população inferior de monócitos positivos para CD14 estava presente em cynos. No entanto, semelhante às células humanas, a maioria das células cyno positivas para CD14 também se ligam a SIRPAB-11-K322A (FIG. 5A; painel direito).

[00617] Além disso, marcadores de linhagem linfoide e mieloide de superfície foram usados para definir subconjuntos de células imunes humanas primárias: monócitos (CD14+ CD19-); células B (CD14- CD19+); células T (CD14- CD19- CD56- CD3 +); células natural killer (NK) (CD14- CD19- CD56+ CD3-). Os clones de reação cruzada do marcador de superfície do macaco cinomolgo foram selecionados para este painel de citometria de fluxo. SIRPAB-11-K322A e controle negativo, controle de isotipo IgG1-K322A, foram marcados diretamente com Alexa Fluor 647 (SIRPAB-11-K322A-AF647 e controle de isotipo IgG1-K322A- AF647, respectivamente).

[00618] SIRPAB-11-K322A ligado a monócitos CD14+, células dendríticas mieloides CD14- CD11b+ HLA-DR+ e células T CD3+ (FIG. 5B). SIRPAB-11-K322A não se ligou a células natural killer (NK) ou células B. Em 11 dadores humanos testados, a ligação de SIRPAB-11-K322A foi muito maior em monócitos (média geométrica de intensidade de fluorescência [gMFI] = 8575,8 ± 1843) do que em células T (gMFI = 687,7 ± 211,9). A maioria das células ligadas a SIRPAB-11-K322A em PBMCs humanos eram monócitos CD14+. A porcentagem de células SIRPAB- 11+ CD14+ (17,0 ± 5,7) foi comparável à de monócitos CD14+ (16,4 ± 6,0) em PBMCs humanos.

[00619] Para comparar ainda mais a ligação dos anticorpos anti-SIRPα com várias espécies, uma imunofenotipagem detalhada de subpopulações imunes em PBMCs de cinomolgo foi realizada e analisada por citometria de fluxo multiparâmetro. Um painel de anticorpos de reação cruzada para marcadores de superfície humanos/primatas foi adicionado a um conjunto de cinco PBMCs de doadores humanos ou de cinomolgos juntamente com SIRPAB-11-K322A ou controle de isotipo IgG-K322A. Depois de definir e bloquear adequadamente para células B, T, NK, dendríticas (DCs) e populações de monócitos conforme descrito acima, a quantidade de coloração SIRPAB-11-K322A foi comparada entre células humanas e de cinomolgos, conforme resumido nas FIGS. 5C-5D. A ligação de SIRPAB-11-K322A a subconjuntos de células imunes de macaco cinomolgo foi comparável a humana e foi restrita a monócitos CD14+, células dendríticas mieloides e células T (FIGS. 5C-5D); PBMCs de macaco cinomolgo: SIRPAB-11-K322A versus controle de isotipo IgG-K322A para monócitos, p = 0,001; células dendríticas mieloides, p = 0,017; e células T, p < 0,001). Dos cinco doadores humanos e de macacos cinomolgos testados, uma média de 22% e 9%, respectivamente, dos PBMCs coraram positivos para CD14. Semelhante aos PBMCs humanos, o principal subconjunto imune reconhecido pelo SIRPAB-11- K322A foi monócitos CD14+ em PBMCs de macaco cinomolgo. O número absoluto de moléculas de anticorpo SIRPAB-11-K322A ligadas a monócitos CD14+ de macaco cinomolgo foi menor do que o número ligado a monócitos CD14+ humanos (gMFI = 7245 ± 490 versus 32532 ± 12672, respectivamente)

devido à menor expressão de SIRPα em monócitos de macaco cinomolgo.

[00620] Além disso, a ligação de SIRPAB-11-4PE ao sangue total cyno foi avaliada. Sangue total fresco de dois doadores de cinomolgo foi bloqueado com Fc antes da adição de anticorpos SIRPAB-11 conjugados com PE diluídos em série ou de controle de isotipo IgG-4PE em poços duplicados. Anti-CD14-APC também foi adicionado a cada amostra para corar para a população de monócitos. A citometria de fluxo foi realizada para detectar a ligação do anticorpo. A intensidade média de fluorescência para cada amostra testada dentro da população CD14+ fechada foi plotada conforme mostrado na FIG. 5E. Entre dois doadores cyno, SIRPAB-11-4PE demonstrou ligação dependente da dose com uma EC50 calculada de 0,43 nM e 0,39 nM. O controle de isotipo IgG-4PE, em ambos os doadores, apresentou coloração mínima na dose mais alta testada (400 nM).

[00621] Para testar a ligação entre anti-SIRPα de camundongo a SIRPα de camundongo, seis exemplos de anticorpos anti-SIRPα de camundongo com IgG2a de camundongo foram titulados por dose e verificados quanto à ligação a células de monócitos CD11b+ de camundongo C57BL/6 por citometria de fluxo (FIG. 5F). SIRPAB-19, SIRPAB-20 e SIRPAB-21 demonstraram a ligação mais forte, com EC50 de 0,28 nM a 0,63 nM.

5.2.2 Caracterização da atividade de anticorpos anti-SIRPα no bloqueio da ligação CD47-SIRPα

[00622] A capacidade de SIRPAB-11-K322A para bloquear a interação de SIRPα para CD47 foi analisada usando o instrumento Biacore T200. O CD47-ECD humano recombinante foi produzido em células HEK293 e a proteína SIRPα recombinante foi adquirida da Novoprotein (número de catálogo C385). O CD47- ECD tem a sequência da SEQ ID NO:116. O CD47-ECD foi fundido com uma tag Avi-His com a sequência de RSGGGLNDIFEAQKIEWHEHHHHHH (SEQ ID NO:107),

para gerar o CD47-ECD marcado com his (SEQ ID NO:99). Para o ensaio de bloqueio, CD47-ECD foi imobilizado a um nível de cerca de 4022 RU no canal de fluxo 2 e o ensaio foi feito por pré-incubação de uma concentração fixa de SIRPα a 20 nM e uma série de diluição de 3 vezes de SIRPAB-11 -K322A de 100 nM a 0,4 nM. O antígeno SIRPα pré-incubado e as amostras de SIRPAB-11-K322A fluíram sobre os canais 1 e 2 e os dados foram analisados usando o modelo Afinidade em Solução no Biacore T200. Os dados representativos são mostrados na FIG. 6A. O valor de IC50 calculado foi de 12,59 nM. Na concentração mais alta testada, 100 nM de SIRPAB-11-K322A, 97,43% da proteína SIRPα humana recombinante (20 nM) foi inibida de se ligar ao CD47 imobilizado.

[00623] Além disso, para testar a atividade de bloqueio de CD47 de anticorpos anti-SIRPα de camundongo, os anticorpos anti-SIRPα de camundongo foram incubados contra 6,7 nM de mCD47-hFc (previamente determinado mCD47-hFc de ligação a EC50) para ligação com macrófagos C57/BL6. Após a lavagem, a quantidade restante de mCD47-hFc ligado foi determinada por citometria de fluxo com um anticorpo de detecção de Fc anti-humano. Conforme mostrado na FIG. 6B, quatro anticorpos anti-SIRPα de camundongo, incluindo SIRPAB-19, SIRPAB-20, SIRPAB-21 e SIRPAB-18 inibiram significativamente a ligação de CD47 a macrófagos de camundongo, entre os quais três anticorpos anti-SIRPα de camundongo (SIRPAB-19, SIRPAB-20 e SIRPAB-21) foram eficazes no bloqueio de > 90% da ligação de mCD47 a uma concentração igual ou superior a 0,5 nM.

5.3 Exemplo 3: Mapeamento de Epítopo

[00624] O epítopo SIRPAB-11-K322A foi determinado resolvendo a estrutura de cristal da ligação ao antígeno do fragmento SIRPAB-11 (Fab) em complexo com o domínio 1 extracelular SIRPα humano (também conhecido como domínio SIRPα IgV) em resolução de 2,2 Å (FIG. 7A). As interações

SIRPα:Fab ocorrem na porção mais distal da região SIRPα em relação ao domínio transmembrana. No geral, o sítio de interação SIRPα:Fab caracterizado se sobrepõe ao sítio de ligação de CD47 (FIG. 7B) e é consistente com a observação de que SIRPAB-11-K322A pode bloquear totalmente a ligação de CD47. A alça CDR3 HC de SIRPAB-11-Fab medeia a maioria das interações polares SIRPα/Fab e é parcialmente inserida em uma grande bolsa SIRPα formada predominantemente pelos resíduos Phe74, Ile36, Leu30, Lys93 e Asn52 (FIG. 7A). Esta mesma bolsa também é reconhecida pela alça CD47 F-G (FIG. 7B). Três importantes resíduos carregados negativamente no Fab HC (Glu57, Glu99 e Asp106) estabelecem interações eletrostáticas principais com resíduos SIRPα carregados positivamente (Arg95, Lys96 e Arg69, respectivamente) (FIG. 7A). As ligações de hidrogênio adicionais na interface complexa são observadas entre o Fab HC Asn59 e SIRPα Ser98, Fab HC Ser102 e SIRPα Arg69, e Fab LC Asn53 e SIRPα Thr67 (FIG. 7A).

5.4 Exemplo 4: Linhagens Celulares para Expressão de Anticorpos e Produção de Anticorpos

5.4.1 Clonagem Molecular da Cadeia Pesada e Leve

[00625] Para expressar os anticorpos anti-SIRPα, múltiplas versões do vetor de expressão de mamífero pTT5 (National Research Council of Canada, Ottowa, Canadá) foram construídas com peptídeos de sinal otimizados por códons, uma região stuffer VH ou VL configurada para clonagem contínua e regiões constantes de LC ou HC (ATUM, Newark, CA). Especificamente, o vetor LC usado foi pDT5-SP6-Vk-kappa-Hs_257445, e o vetor HC usado foi pDT5-SP1-VH- IgG1_K322A_KEMA_257440 (onde KEMA representa aminoácidos que compõem o mesmo alotipo misto usado em Herceptina, e pDT5 indica a estrutura principal pTT5 reconfigurada para clonagem contínua). As regiões variáveis foram convertidas em DNAs sintetizados otimizados com códons e subclonadas em regiões stuffer dos vetores descritos usando métodos de clonagem contínua (ATUM). O vetor HC é denominado pDT5-SP1-JDS-1462 e o vetor LC é pDT5-JDS-SP6-1464_261066.

5.4.2 Produção Transiente de Proteína

[00626] Os anticorpos anti-SIRPα foram fabricados, por exemplo, em escala laboratorial em frascos agitados de 3 L para estudos de eficácia in vitro e in vivo. O sistema de expressão ExpiCHO foi usado para transfecção transitória de células ExpiCHO usando um protocolo padrão da Life Technologies (ThermoFisher Scientific). Uma razão de 1:1 de LC versus HC foi usada para a mistura de DNA a 0,5 mg/L de cultura durante a transfecção. As células foram semeadas a 6 × 106 células/mL em um frasco agitador de 3 L com 1 L de volume de trabalho a 37 °C mais 5% de CO2, as células foram então transfectadas usando protocolos padrão da Life Technologies. No dia 1 após a transfecção, os potencializadores padrão 1 e 2 foram adicionados. A viabilidade celular e o título foram monitorados todos os dias e o sobrenadante foi colhido no Dia 8 após a transfecção, um instrumento VICELL foi usado para análise de viabilidade e o Octeto red equipado com sensor de Proteína A foi usado para a análise do título. As células e o sobrenadante foram colhidos usando filtração em profundidade GE Lifesciences e colunas de esterilização. As cápsulas ULTA Prime GF de 5 µM foram usadas para filtração em profundidade, seguidas de cápsulas de esterilização ULTA Pure HC de 0,6/0,2 µM. O crescimento e a viabilidade celular, bem como o título, são mostrados na FIG. 8.

5.4.3 Purificação de anticorpos anti-SIRPα

[00627] A purificação dos anticorpos anti-SIRPα expressos foi realizada por uma série de etapas de purificação a jusante, incluindo cromatografia de afinidade de Proteína A e inativação de vírus de baixo pH, seguida por etapas de cromatografia de interação IEX (CAPTO Adhere e CAPTO SP ImpRes).

[00628] Resumidamente, a cromatografia de afinidade de Proteína A foi realizada com MABSELECT SURE (GE Healthcare Life Sciences), projetado para capturar o produto e remover impurezas relacionadas ao processo. A etapa de inativação do vírus subsequente foi realizada sob condições ácidas (pH 3,4 ± 0,1), seguido de condicionamento do pool de inativação a pH 5,5 ± 0,1. Após a inativação do vírus, um trocador aniônico foi usado em um modo de fluxo para a etapa de polimento intermediário usando CAPTO Adhere para remover impurezas, como agregados, DNA, proteína da célula hospedeira e endotoxinas. O pH do pool de produtos foi ajustado a pH 6,5 ± 0,1 e a condutividade foi reduzida para 2 mS/cm antes da próxima etapa do processo. O trocador catiônico CAPTO SP ImpRes foi usado como etapa de polimento e o produto foi resolvido a 10 mS/cm. O anticorpo foi então trocado por tampão em solução estoque (10 mM de succinato, 9% de sacarose, 0,05% de PS 20, pH 5,5) e concentrado a 18,6 mg/mL. O pool de produtos foi então filtrado através de um filtro de 0,2 µM e dividido em alíquotas.

[00629] Para a expressão e purificação de SIRPα e Fab de SIRPAB-11-K322A para estudos cristalográficos, o gene do domínio 1 WT SIRPα (SHPS1, resíduos 31-149, identificador UNIPROT P78324-1 isoforma 1) foi sintetizado por GENSCRIPT com otimização de códon para expressão em S. frugiperda, e clonado em um vetor pFastBac1 (Invitrogen) entre os sítios BamH1 e Xho1. A sequência do peptídeo sinal de GP67 (MLLVNQSHQGFNKEHTSKMVSAIVLYVLLAAAAHSAFA (SEQ ID NO:206)) foi usada para a secreção de SIRPα. Um sítio de clivagem de trombina e uma tag de histidina 6X foram adicionados ao C-terminal da proteína para facilitar a purificação. Baculovírus recombinantes foram gerados usando o sistema BAC-TO-BAC (Invitrogen) e foram usados para infectar células. As células infectadas foram cultivadas a 27 °C durante 48 horas na presença de kifunesina para limitar a glicosilação da proteína; os sobrenadantes da cultura foram mantidos para purificação da proteína superexpressa. Os sobrenadantes foram submetidos a purificação por afinidade usando uma coluna Ni-NTA de 5 mL (resina de purificação COMPLETE His-Tag, Roche) a uma taxa de fluxo de 5 mL/minuto em um sistema de cromatografia Äcta Pure. As frações contendo a proteína de interesse foram desglicosiladas usando a enzima ENDO-H e purificadas adicionalmente através de uma etapa de cromatografia de exclusão de tamanho seguida por uma etapa de cromatografia de troca aniônica. O fragmento de ligação ao antígeno de SIRPAB-11-K322A IgG1 foi preparado usando o Pierce Fab Preparation Kit. Para experimentos de cristalização, SIRPα e Fab foram misturados em razões estequiométricas iguais e concentrados a 18 mg/mL. Os cristais de SIRPα/Fab SIRPAB-11-K322A foram obtidos em 0,1 M de ácido 4-morfolinaetanossulfônico, pH 6,5, 25% p/v de éter metílico de polietilenoglicol 550 e 0,01 M de sulfato de zinco.

5.5 Exemplo 5: Caracterização da Ligação do Anticorpo ao Receptor Gama Cristalizável de Fragmento.

[00630] A região Fc de uma IgG pode interagir com FcγR de alta e baixa afinidade, mediando funções efetoras imunes, incluindo citotoxicidade celular dependente de anticorpos (ADCC) e fagocitose celular dependente de anticorpos (ADCP) (Nimmerjahn F, et al., Immunity. Janeiro de 2006;24(1):19-28; Abès R, et al., Expert Rev Clin Immunol. Novembro de 2009;5(6):735-47; Desjarlais JR, et al., Exp Cell Res. 15 de maio de 2011;317(9):1278-85).

[00631] A capacidade de ligação de SIRPAB-11 e suas variantes com diferentes estruturas principais de Fc foi avaliada em diferentes células HEK293 manipuladas por FcγR. Mostrado resumidamente na Tabela 19, SIRPAB-11- K322A demonstrou ligação a FcγR1-3 humano com EC50s comparáveis a um anticorpo de controle de isotipo IgG1 do tipo selvagem (WT) e outro IgG1 disponível comercialmente.

Tabela 19: Resumo da Determinação de EC50 de Ligação Celular de SIRPAB- 11-K322A versus Controle EC50 nM Controle de SIRPAB-11- IgG1 Isotipo IgG1 K322A Comercialmente Disponível FcγR1 (CD64) 1,18 0,79 0,83 FcγR2A (CD32aH131) 137 200 361 FcγR2A (CD32aR131) 90,2 194 188 FcγR2B 1200 2478 1325 FcγR3A (CD16aV158) 448,6 795,1 574,6 FcγR3A (CD16aF158) 311,3 1200 1270 FcγR = receptor gama cristalizável de fragmento.

[00632] A capacidade de ligação de SIRPAB-11 com uma IgG1K322A, IgG1AAS ou uma variante de IgG4PE foi avaliada adicionalmente em diferentes células HEK293 manipuladas por FcγR. Conforme mostrado na Tabela 20, SIRPAB-11-K322A mostrou ligação a FcγR1-3 humano com EC50s comparáveis como um anticorpo controle de isotipo IgG1. Conforme esperado, as variantes SIRPAB-11-4PE ou SIRPAB-11-AAS com regiões Fc atenuadas demonstraram ligação significativamente mais baixa contra todas as linhas FcγR Tabela 20. Tabela 20: EC50 nM de Ligação de Linhagem Celular do Receptor Gama Cristalizável de Fragmento de Resumo de Variantes de SIRPAB-11 EC50 nM SIRPAB-11 Controle de K322A AAS 4PE Isotipo IgG1 FcγR1 (CD64) 0,98 0,79 3175 756 FcγR2B 2245 2709 > 20000 5178

EC50 nM SIRPAB-11 Controle de K322A AAS 4PE Isotipo IgG1 FcγR3A 127 142 15100 2061 (CD16aV158) FcγR = receptor gama cristalizável de fragmento; IgG1 = imunoglobulina G1.

5.6 Exemplo 6: Caracterização do ADCC, CDC e ADCP dos Anticorpos Anti-SIRPα

[00633] ADCC é um mecanismo imunológico conhecido no qual as interações de ligação de avidez desencadeadas por FcγR3 (baixa afinidade) ativam as células NK para lisar as células alvo ligadas ao anticorpo. Porque SIRPAB-11 demonstrou ligar FcγRs (ver Tabela 19 e 20 acima), a capacidade do SIRPAB-11 para induzir ADCC de células que expressam SIRPα foi examinada. A indução de ADCC mediada por SIRPAB-11 direcionando a linhagem celular humana MOLM-13 foi testada in vitro por ensaios de cocultura de 3 horas usando PBMCs humanos ativados por IL-2 de cinco doadores como células efetoras. As células efetoras tratadas com três anticorpos anti-CD33 diferentes foram usadas como controles positivos; células tratadas com controle de isotipo IgG1-K322A e um controle de isotipo IgG1 foram usados como controles negativos. As células foram incubadas com anticorpos em uma razão de células efetoras-alvo (E:T) de 80:1. A lise celular foi determinada por citometria fluorescente usando o citômetro de fluorescência Mirrorball.

[00634] A expressão de SIRPα e CD33 em níveis robustos em células MOLM- 13 foi confirmada por citometria de fluxo usando SIRPAB-11-IgG4PE-AF647 conjugado com corante fluorescente diretamente e anticorpos anti-CD33- ficoeritrina (PE). Usando PBMCs de três doadores, o nível percentual médio de ADCC foi 0,5 ± 2 a 200 nM de SIRPAB-11-K322A, a concentração mais alta testada

(ver a FIG 9A, por exemplo). Este nível foi semelhante aos níveis basais de ADCC percentuais definidos pelo anticorpo controle de isotipo IgG1 (-1,0 ± 1,2) e o anticorpo controle de isotipo IgG1-K322A (-1,0 ± 2,2). Em ensaios usando PBMCs de dois doadores adicionais, o tratamento com 133 nM de SIRPAB-11-K322A, a concentração mais alta testada, demonstrou um nível percentual médio de ADCC de -1,2 ± 3,1, que foi o mesmo que o nível de base para um anticorpo controle de isotipo IgG1 (-1,3 ± 1,8), e semelhante ao anticorpo controle de isotipo IgG1-K322A (2,3 ± 3,2) (ver a FIG 9A, por exemplo). Os três anticorpos anti-CD33 de controle positivo (dois com formato IgG1 e um com formato IgG4) demonstraram ADCC com uma faixa de 14,4% a 22,1% de ADCC na concentração mais alta testada entre os 5 doadores. Estes ensaios demonstraram que SIRPAB- 11-K322A não induz ADCC direcionado para células MOLM-13.

[00635] Além disso, o ADCC mediado por SIRPAB-11-K322A, direcionando células T CD4+ e CD8+ autólogas que expressam SIRPγ e monócitos SIRPα positivos autólogos, foi avaliado usando células NK ativadas por IL-2 como efetores. As células efetoras foram incubadas com células alvo (monócitos, células T não ativadas ou células T ativadas com enterotoxina B estafilocócica [SEB]) em uma razão de 10:1 durante 3 horas antes que a lise celular fosse medida por citometria de fluxo ou citometria fluorescente. As células T alvo pré- incubadas com anti-CD3 IgG1 e anti-CD4 IgG1 foram usadas como controles positivos, e controle de isotipo IgG1-K322A, um controle de isotipo IgG1 ou anti- CD3 Fc nulo foram usados como controles negativos. Para os ensaios com monócitos como a célula alvo, a pré-incubação das células alvo com anti-CD33 IgG1 foi testada e o controle de isotipo IgG1-K322A e um controle de isotipo IgG1 foram usados como controles negativos.

[00636] Para determinar se a expressão de SIRPγ foi alterada com base no estado de ativação das células T CD4+ e CD8+, o SIRPAB-11-IgG4PE conjugado diretamente com Alexa647 foi usado para análise de citometria de fluxo, juntamente com um anticorpo anti-CD69-APC/Fire 750 que se liga a células T ativadas. O gMFI médio de células T SIRPAB-11-IgG4PE+ CD4+ não ativadas e ativadas, em três doadores individuais, foi de 412 ± 90,2 e 445 ± 109,7, respectivamente, indicando nenhuma alteração na expressão de SIRPγ na ausência ou presença de estimulação SEB. Dados de ligação SIRPAB-11-IgG4PE semelhantes foram gerados em células T CD8+ não ativadas e ativadas de dois doadores individuais (gMFIs médios: 267 ± 202 e 301 ± 223, respectivamente).

[00637] Ensaios de citotoxicidade usando coculturas de células efetoras NK autólogas e células T CD4+ alvo de três doadores demonstraram que o tratamento com SIRPAB-11-K322A não induziu ADCC de células T CD4+ autólogas em estados não ativados ou ativados por SEB (por exemplo, ver as FIGs. 9B-9C). As células natural killer cocultivadas com células T CD4+ pré-incubadas com SIRPAB-11-K322A (20 nM) exibiram baixas porcentagens de morte específica por citotoxicidade em poços com (1,2 ± 5,8) ou sem (2,2 ± 4,2) ativação de SEB (n = 3). Dados semelhantes foram gerados com 100 nM de SIRPAB-11-K322A em dois dos três doadores (ver a FIG. 9A). Este nível de citotoxicidade foi comparável ao observado com o controle de isotipo negativo, controle de isotipo IgG1-K322A e poços de linha de base contendo células alvo e efetoras sem anticorpo. Ambos os controles positivos, anti-CD3 IgG1 e anti-CD4 IgG1, induziram níveis mais elevados de citotoxicidade a 20 nM. Com o tratamento com anticorpo anti-CD3- IgG1, as porcentagens médias de ADCC em todos os três doadores foram de 37,3 ± 10,3 e 44,5 ± 18,4, com e sem ativação de SEB, respectivamente. Com o tratamento com anticorpo anti-CD4-IgG1, as porcentagens médias de ADCC em todos os três doadores foram de 26,0 ± 8,2 sem SEB e 17,1 ± 3,0 com ativação de SEB.

[00638] Ensaios de citotoxicidade usando coculturas de células efetoras NK autólogas e células T CD8+ alvo de dois doadores demonstraram que o tratamento com SIRPAB-11-K322A não induziu ADCC de células T CD8+ autólogas em estados não ativados ou ativados por SEB (por exemplo, ver as FIGs. 9D-9E). As células natural killer cocultivadas com células T CD8+ pré-incubadas com SIRPAB-11-K322A (100 nM) exibiram baixos níveis de citotoxicidade com ou sem ativação SEB (porcentagens médias [n = 2]; -1,7 ± 1,1 e 0,3 ± 0,5 de morte específica por citotoxicidade, respectivamente). Este nível de citotoxicidade foi comparável ao observado com o controle de isotipo negativo, controle de isotipo IgG1-K322A. O anticorpo anti-CD3-IgG1 de controle positivo induziu maiores porcentagens de citotoxicidade a 100 nM, com (20,1 ± 15,5, média n = 2) ou sem (29,5 ± 16,0, média n = 2) ativação de SEB, em comparação com aqueles observados com SIRPAB-11-K322A.

[00639] Da mesma forma, os ensaios de citotoxicidade usando coculturas de células efetoras NK autólogas (anteriormente usadas para os experimentos de ADCC de células T) e monócitos alvo de um único doador demonstraram que o tratamento com SIRPAB-11-K322A não induziu ADCC de monócitos autólogos nas condições de ensaio testadas (FIGs. 9F-9G). A citotoxicidade medida por citometria de fluxo (FIG. 9F) e por citometria fluorescente Mirrorball (FIG. 9G) rendeu resultados semelhantes. As células natural killer cocultivadas com monócitos pré-incubados com SIRPAB-11-K322A (100 nM) exibiram baixos níveis de citotoxicidade e eram comparáveis ao controle de isotipo negativo, controle de isotipo anti-IgG1-K322A (-0,5% de SIRPAB-11-K322A versus -0,9% de controle de isotipo IgG1-K322A de morte específica por citotoxicidade). O tratamento com anti-CD33 IgG1 foi testado neste sistema de cocultura, uma vez que induziu ADCC contra células tumorais MOLM-13, mas não demonstrou morte celular (- 0,6% de anti-CD33-IgG1 versus -0,8% de controle de isotipo-IgG1 de morte específica por citotoxicidade).

[00640] A citotoxicidade dependente do complemento (CDC) foi identificada como um mecanismo imune no qual os alvos opsonizados por anticorpos (por exemplo, micróbios e células) são esgotados por componentes da cascata do complemento. A capacidade de SIRPAB-11 e suas variantes Fc manipuladas para induzir CDC foi avaliada usando a linhagem celular de linfoma REC-1, identificada para expressar SIRPα e CD20. Para permitir a avaliação de CDC, a expressão alvo de superfície da linhagem celular de linfoma não Hodgkin REC-1 foi determinada. As células foram coradas com SIRPAB-11-K322A ou SIRPAB-11-IgG4PE. A ligação foi detectada com um anticorpo IgG anti-humano Alexa Fluor 647. Os anticorpos controle de isotipo IgG1 humano e controle de isotipo IgG4-4PE foram usados como controles de isotipo negativo. Um anticorpo anti-CD20 foi usado como um controle de coloração positiva. Os ensaios de citotoxicidade dependente de complemento foram realizados incubando células REC-1 com SIRPAB-11-K322A, SIRPAB-11-IgG4PE ou um anticorpo anti-CD20 em uma faixa de concentração. Soro de coelho diluído foi adicionado como uma fonte de complemento antes da determinação da viabilidade celular por um ensaio de viabilidade celular luminescente. Os anticorpos controle de isotipo IgG1 e controle de isotipo IgG4-4PE foram usados como controles negativos.

[00641] A ligação a células de linfoma não Hodgkin humano positivo para SIRPα REC-1 por SIRPAB-11-K322A, SIRPAB-11-IgG4PE e anticorpo anti-CD20- mIgG2a humano, a uma concentração fixa de 66,7 nM, foi confirmada por citometria de fluxo usando anticorpos secundários conjugados com fluorescência. Conforme descrito acima, a região Fc SIRPAB-11-K322A foi manipulada com uma mutação de lisina 322 para alanina (K322A) para silenciar as interações C1q do complemento. A capacidade do SIRPAB-11-K322A para fixar o complemento foi comparada com o SIRPAB-11-IgG4PE (que não se espera que se ligue ao complemento devido à estrutura principal de IgG4PE) ao longo de uma faixa de concentração de 0,021 nM a 333,3 nM na presença de soro de coelho com 3 a 4 semanas de idade, usando um ensaio de viabilidade celular luminescente. O anticorpo de controle positivo anti-CD20 IgG1 humano (hIgG1), demonstrou lise dependente da concentração de células alvo REC-1 na presença de soro de complemento de coelho, com um valor de EC50 de 0,012 nM. SIRPAB- 11-K322A, SIRPAB-11-IgG4PE e controle de isotipo-IgG1 e controle de isotipo IgG4-4PE não demonstrou atividade de CDC discernível em concentrações de até 333,3 nM, a concentração mais alta testada (FIG. 9I).

[00642] Além disso, outra variante Fc de SIRPAB-11, SIRPAB-11-AAS, na dose mais alta testada, não demonstrou atividade de CDC na presença de 5% de complemento de coelho (FIG. 9H). Em contraste, o controle positivo de um anticorpo anti-CD20 comercial mostrou atividade de CDC potente (FIG. 9H).

[00643] A fagocitose celular mediada por anticorpos (ADCP) é um mecanismo efetor imune mediado pela ligação de Fc a FcγR1 expresso em macrófagos. Uma vez que SIRPAB-11-K322A se liga a FcγR1 com EC50s comparáveis a IgG1 humana WT conforme descrito acima, a capacidade de ADCP autólogo com SIRPAB-11-K322A foi avaliada com macrófagos derivados de monócitos humanos (efetores) e células imunes autólogas CD3+ opsonizadas de anticorpos (alvos próprios) que expressam SIRPγ e SIRPα, respectivamente.

[00644] A capacidade de SIRPAB-11-K322A para induzir ADCP por macrófagos que direcionam células T autólogas e monócitos foi investigada usando células efetoras e alvo isoladas de dois doadores. A fagocitose celular dependente de anticorpos foi determinada por codetecção de células alvo marcadas com fluorescência em macrófagos efetores. O nível percentual de fagocitose foi calculado como o número de células duplamente positivas dividido pelo número total de macrófagos plaqueados por poço. Cada ensaio foi realizado duas vezes com células de cada doador ao longo de uma faixa de concentração de 0,033 nM a 200 nM. Para avaliar a contribuição da fagocitose mediada pelo efetor Fc, SIRPAB-11-K322A foi testado junto com o anticorpo SIRPAB-11-IgG4PE desafinado de função efetora, que compartilha regiões variáveis idênticas com SIRPAB-11-K322A, mas tem uma estrutura principal de Fc diferente. Um anticorpo anti-CD3 IgG1 humano, anteriormente conhecido por mediar ADCC de células T autólogas, foi usado como um controle para avaliar ADCP de células T autólogas. Um anticorpo anti-CD33 IgG1 humano, anteriormente usado como um controle positivo para avaliar ADCC direcionado a tumor, foi incluído como um controle para avaliar ADCP de monócitos autólogos.

[00645] Em ensaios de cocultura que avaliam a atividade ADCP mediada por SIRPAB-11-K322A usando macrófagos autólogos e células T alvo, o nível de porcentagem de fagocitose foi de 1,14 e 1,98 para o Doador 224 e 2,06 e 1,38 para o Doador 345 (n = 2 para cada doador) a 200 nM, a concentração mais alta testada (FIG. 9J e Tabela 21 para o Doador 224). Estes níveis foram semelhantes aos 200 nM do anticorpo de controle de isotipo IgG1-K322A (faixa de 0,99% a 2,34% de macrófagos fagocíticos em doadores e replicados), bem como o anticorpo SIRPAB-11-IgG4PE e seu respectivo controle, controle de isotipo IgG4- 4PE. O anticorpo anti-CD3 de controle positivo induziu níveis de fagocitose variando de 21,13% a 39,72% para os dois doadores. Tabela 21: Resultados do Ensaio de Fagocitose de Células T nas Concentrações Mais Altas Testadas para o Doador 224 Tratamento Concentração Porcentagem de ADCP (média de 3 poços) SIRPAB-11-K322A 200 nM 1,14 ± 0,24 SIRPAB-11-IgG4PE 200 nM 0,91 ± 0,31

Tratamento Concentração Porcentagem de ADCP (média de 3 poços) Controle de isotipo 200 nM 1,69 ± 0,27 IgG1-K322A Controle de isotipo 200 nM 2,2 ± 0,75 IgG4-4PE Anti-CD3 20 nM 39,72 ± 12,98 ADCP = fagocitose celular dependente de anticorpos; CD = cluster de diferenciação.

[00646] Em ensaios usando monócitos autólogos como alvos, os níveis de fagocitose para coculturas tratadas com SIRPAB-11-K322A foram de 1,99% e 2,09% para o Doador 224, e 1,19% e 3,92% para o Doador 345 (n = 2 para cada doador) a 200 nM, a concentração mais alta testada (FIG. 9K e Tabela 22 para o Doador 345). Estes níveis foram semelhantes aos do anticorpo de controle de isotipo IgG1-K322A (faixa de 0,63% a 2,29% de macrófagos fagocíticos em doadores e replicados), bem como o anticorpo SIRPAB-11-IgG4PE e seu respectivo controle, controle de isotipo IgG4-4PE. O anticorpo anti-CD33 IgG1 exibiu níveis percentuais de fagocitose que eram semelhantes aos controles de isotipo, indicando que neste sistema de ensaio não foi capaz de induzir a fagocitose de monócitos autólogos. Tabela 22: Resultados do Ensaio de Fagocitose de Monócitos nas Concentrações Mais Altas Testadas para o Doador 345 Tratamento Maior Porcentagem de ADCP na Concentração Concentração Mais Alta Testada Testada SIRPAB-11-K322A 200 nM 1,19 ± 1,24 SIRPAB-11-IgG4PE 200 nM 1,07 ± 0,85

Tratamento Maior Porcentagem de ADCP na Concentração Concentração Mais Alta Testada Testada Controle de isotipo 200 nM 0,63 ± 0,62 IgG1-K322A Controle de isotipo 200 nM 0,63 ± 0,60 IgG4-4PE Anti-CD33 200 nM 0,72 ± 0,40 ADCP = fagocitose celular dependente de anticorpos; CD = cluster de diferenciação.

5.7 Exemplo 7: Análise de Imunogenicidade de Anticorpos Anti-SIRPα

[00647] Existem vários elementos que contribuem para a imunogenicidade de anticorpos e proteínas. Foi relatado que as respostas dependentes de células T desempenham um papel importante no desenvolvimento de respostas de anticorpos antidrogas (ADA) a produtos biológicos (Jawa V, et al., Clin Immunol. Dezembro de 2013;149(3):534-55). A Interactive Screening and Protein Reengineering Interface (ISPRI) foi empregada como uma ferramenta para avaliar a imunogenicidade potencial. A Interactive Screening and Protein Reengineering Interface foi desenvolvida por EpiVax (Providence, RI) e é conhecida por ser uma ferramenta de análise in silico dependente de células T clinicamente bem estabelecida. Usando ISPRI, o potencial imunogênico do mAb SIRPAB-11 ou sua variante foi carregado no servidor EpiVax e analisado.

[00648] Primeiro, cadeias pesadas e leves inteiras de SIRPAB-11-K322A foram analisadas por EpiMatrix, que examina todas as sequências de aminoácidos primários quanto à presença de efetores de células T efetoras putativas (Teff) e epítopos de células T reguladoras (Treg). Mais Teff aumenta o potencial imunogênico, enquanto mais Treg diminui o potencial imunogênico de cada sequência em uma escala normalizada. No geral, uma pontuação ajustada de Treg abaixo de -30 é considerada aceitável (Tabela 23). A análise detalhada indicou que a maioria dos CDRs, exceto para CDR L2, inclui muito poucos epítopos de células T efetoras putativas (dados não mostrados). Tabela 23: Relatório de Imunogenicidade Sequência de Comprimento EpiMatrix EpiMatrix Epx Score Proteína Hits Score Ajustada por tReg SIRPAB-11_HC 456 178 -12,54 -35,05 SIRPAB-11_LC 214 92 5,18 -29,48 SIRPAB-11_VH 126 44 -13,79 -40,46 SIRPAB-11_VL 107 50 22,82 -35,49 EpiMatrix Hits é o número de EpiMatrix Z-scores acima de 1,64 encontrado dentro da sequência. O EpiMatrix Score é derivado do número e intensidade dos EpiMatrix Hits normalizados para o comprimento da proteína. Em outras palavras, a pontuação é o excesso ou a deficiência na imunogenicidade agregada prevista em relação a um padrão de peptídeo aleatório. Alelos considerados na análise de proteínas: DRB1*0101, DRB1*0301, DRB1*0401, DRB1*0701, DRB1*0801, DRB1*1101, DRB1*1301, DRB1*1501. Esses alelos em loci HLA de classe II foram usados para a triagem in silico de sequências de anticorpos para domínios de ligação de peptídeos potenciais, resultando em epítopos de células T putativas que podem resultar em imunogenicidade. Jawa V, et al, Clinical Immunology 149; 534-555 (2013).

[00649] Em segundo lugar, o potencial de ADA foi previsto nos domínios VH e VL pelo módulo EpiMatrix Antibody Immunogenicity Prediction. Ao avaliar o potencial imunogênico de sequências de anticorpos, EpiVax caracteriza esses anticorpos de acordo com dois critérios, teor de Treg e teor de Teff. Os anticorpos com baixo teor de Teff e alto teor de Treg são os menos prováveis de serem imunogênicos (Anticorpos Ideais). Os anticorpos com baixo teor de Teff e baixo teor de Treg também são frequentemente não imunogênicos (Anticorpos de Baixo Risco). Os anticorpos nesta categoria frequentemente produzem taxas de resposta de ADA entre 5% e 10%. Os anticorpos com alto teor de Teff e alto teor de Treg são os mais difíceis de caracterizar. No geral, espera-se que os anticorpos desta categoria sejam mais imunogênicos do que os anticorpos de baixo risco (Anticorpos Mistos). Os anticorpos com alto teor de Teff e baixo teor de Treg tendem a ser os mais imunogênicos, com taxas de imunogenicidade frequentemente superiores a 10% (Anticorpos de Alto Risco). A maioria dos anticorpos quiméricos se enquadra nesta categoria. O anticorpo SIRPAB-11- K322A é classificado como um Anticorpo Ideal devido ao seu baixo teor de Teff e alto teor de Treg. (FIG. 10A e FIG. 10B). O anticorpo SIRPAB-11-K322A tem pontuação de imunogenicidade de anticorpo EpiMatrix superior de 0,17%, que é apenas inferior a 1/20 da pontuação de imunogenicidade (3,66%) do anticorpo de referência SIRPα que tem uma cadeia leve de uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:224 e uma cadeia pesada de uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:225.

5.8 Exemplo 8: Ensaios de Liberação de Citocinas

[00650] Os anticorpos que induzem a reticulação alvo de linhagens T, NK ou monocíticas humanas têm o potencial de iniciar uma cascata de liberação sistêmica de citocinas pró-inflamatórias, resultando em potencial reação imune sistêmica fatal. Para determinar se a ligação SIRPAB-11-K322A pode mediar o desencadeamento de uma "tempestade de citocinas", um painel de citocinas foi medido em PBMCs humanos de dez doadores normais para avaliar a liberação sistêmica de citocinas. Resumidamente, PBMCs humanos foram isolados de sangue total usando Ficoll-Paque e, após um período de repouso durante a noite,

foram adicionados a placas pré-revestidas com anticorpo. Após 48 horas, os sobrenadantes foram coletados para determinação e análise de multicitocinas usando um Mesoscale proinflammatory 9-plex (da Meso Scale Diagnostics, LLC). Os dados para um total de dez doadores foram coletados e analisados contra controles de isotipo ou positivos (FIG. 11A a 11J). As seguintes citocinas foram avaliadas: interleucina (IL)-1beta (β), IL-2, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12 p70, fator de necrose tumoral alfa (TNF α), interferon-gama (IFN-γ) e fator estimulador de colônia de granulócitos macrófagos (GM-CSF). Foi usada uma titulação de concentração de SIRPAB-11-K322A de 30 μg/mL a 0,001 μg/mL (3 μg/poço a 0,0001 μg/poço). O anticorpo anti-CD3 (clone OKT-3) e lipopolissacarídeo (LPS) foram usados como controles positivos; controle de isotipo IgG1-K322A humano e um anticorpo IgG1 humano comercial foram usados como controles negativos de isotipo. Dados representativos dos perfis de liberação de citocinas são apresentados para IL-1β, IL-2, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12p70, TNFα, IFN-gama e fator estimulador de colônia de granulócitos macrófagos na FIG. 11A a 11I, com conjunto de dados completo e análise estatística mostrados na FIG. 11J. Os controles positivos do clone do anticorpo anti-CD3 OKT-3 e/ou LPS induziram a liberação de oito citocinas (IL-1β, IL-2, IL-6, IL-10, IL-12p70, TNF-α, IFN-γ e GM- CSF) em PBMCs de todos os 10 doadores. Pouca ou nenhuma IL-8 foi induzida pelos controles positivos. SIRPAB-11-K322A induziu níveis mínimos de liberação de citocinas ou níveis comparáveis aos controles negativos (controle de isotipo IgG1-K322A e controle de isotipo IgG1).

[00651] A capacidade de SIRPAB-11-K322A para induzir a liberação de citocinas de PBMCs humanos ativados por LPS e SEB in vitro também foi examinada. Foram avaliadas as seguintes citocinas: IL-1β, IL-2, IL-6, IL-8, IL-10, IL- 12 p70, TNF-α, IFN-γ e GM-CSF. As concentrações de SIRPAB-11-K322A de 0,03, 3 e 30 μg/mL ou 0,03, 3 e 30 μg/poço foram usadas nos formatos solúvel e ligado a placa (imobilizado), respectivamente. As células mononucleares de sangue periférico foram isoladas de sangue total usando Ficoll-Paque. Para a estimulação de LPS, os PBMCs foram divididos igualmente em tubos com ou sem 100 ng/mL de LPS e adicionados a placas pré-revestidas com anticorpo ou incubados com anticorpo solúvel em poços. Para a estimulação de SEB, os PBMCs foram incubados com 0, 1 ou 100 ng/mL de SEB durante 24 horas, lavados e, em seguida, 0, 1 ou 100 ng/mL de SEB foi adicionado às células antes do plaqueamento em placas pré-revestidas com anticorpo ou incubação com anticorpo solúvel em poços. Os sobrenadantes cultivados foram coletados para análise de citocinas 48 horas após o plaqueamento.

[00652] Para determinar se SIRPAB-11-K322A alterou a função de células mieloides ativadas, a liberação de citocinas de PBMCs estimulados por LPS tratados com SIRPAB-11-K322A solúvel e imobilizado foi avaliada. Em PBMCs não estimulados, os níveis gerais de GM-CSF, IFN-γ, IL-2, IL-12p70, IL-10 e IL-1β foram baixos. A estimulação com LPS elevou a produção de IFN-γ, IL-10, IL-1β e IL-6. Os dados para a liberação de IL-1β de PBMCs não estimulados e estimulados por LPS são mostrados na FIG. 12A e FIG. 12B, respectivamente. Os PBMCs não estimulados demonstraram níveis absolutos de IL-1β que eram baixos e não relevantes biologicamente (FIG. 12A). Em PBMCs estimulados com LPS, o tratamento com SIRPAB-11-K322A não alterou o nível de IL-1β em comparação com o controle de isotipo IgG1-K332A, independentemente de os anticorpos serem solúveis ou imobilizados (FIG. 12B). O tratamento com SIRPAB-11-K322A solúvel ou imobilizado induziu níveis de IL-2, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12p70, GM-CSF, TNF-α e IFN-γ semelhantes aos induzidos por controle negativo, controle de isotipo IgG1-K322A, independentemente de os PBMCs terem sido ativados com LPS. Os dados foram resumidos adicionalmente na FIG. 12C.

[00653] Para determinar se SIRPAB-11-K322A alterou a função de células T pré-ativadas, a liberação de citocinas por PBMCs estimulados por SEB tratados com SIRPAB-11-K322A solúvel e imobilizado foi avaliada. Em PBMCs não estimulados, os níveis de citocinas de GM-CSF, IFN-γ, IL-2, IL-12p70, IL-10 e IL-1β foram baixos. A estimulação com SEB elevou a produção de IFN-γ, IL-10, IL-1β e IL-6 em PBMCs. Os dados para a liberação de IFN-γ de PBMCs não estimulados e estimulados por SEB são mostrados nas FIGs. 12D, 12E e 12F. A estimulação com 1 e 100 ng/mL de SEB não alterou os níveis de IFN-γ em comparação com os de PBMCs não estimulados. O tratamento com SIRPAB-11-K322A solúvel ou imobilizado não alterou os níveis de liberação de IFN-γ de PBMCs não estimulados (FIG. 12D) ou estimulados (FIGs. 12E e 12F) em comparação com o tratamento de controle de isotipo IgG1-K322A. O tratamento com SIRPAB-11- K322A solúvel ou imobilizado resultou em níveis de IL-1β, IL-2, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12p70, GM-CSF e TNF-α semelhantes aos níveis observados com o controle negativo, controle de isotipo IgG1-K322A, independentemente de os PBMCs terem sido ativados com qualquer concentração de SEB. Os dados foram resumidos adicionalmente nas FIGs. 12G e 12H.

5.9 Exemplo 9: Ensaios de Fagocitose

5.9.1 Métodos de Ensaios de Fagocitose

[00654] A atividade de SIRPAB-11-K322A para promover a fagocitose de células tumorais por macrófagos humanos como um agente único ou em combinação com cetuximabe ou rituximabe foi avaliada in vitro por ensaios de cocultura. Cinco linhagens de células tumorais sólidas foram testadas quanto ao efeito de SIRPAB-11-K322A, tanto com cetuximabe quanto como agente único; uma linha DLBCL foi usada para examinar o efeito da combinação com rituximabe. O efeito de agente único de SIRPAB-11-K322A foi avaliado utilizando três linhagens celulares de Leucemia Mieloide Aguda (AML) e duas culturas de PDX. A presença de SIRPα, receptor do fator de crescimento epidérmico (EGFR)

e CD47 em células tumorais foi confirmada por citometria de fluxo usando anticorpos monoclonais marcados com fluorescência (por exemplo, SIRPAB-11- IgG4PE-AF647 para coloração com SIRPα).

[00655] Doses tituladas de SIRPAB-11-K322A (0,001 nM a 20 nM), combinadas com cetuximabe (0,2 nM ou 1 nM), foram testadas usando várias linhagens celulares, incluindo as linhagens celulares de câncer colorretal (CRC), GP2d, GP5d, SW480, e a linhagem de células de carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço (HNSCC), FaDu, como células alvo. Os estudos de combinação com rituximabe (0,1 nM) utilizaram células OCI-LY3 como a linhagem celular alvo. As células que receberam tratamento com cetuximabe ou rituximabe isoladamente ou em combinação com anticorpos de controle de isotipo foram tratadas com a mesma concentração de anticorpo usada nos poços de combinação SIRPAB-11-K322A. As células tumorais foram marcadas com éster succinimidílico de carboxifluoresceína (CSFE), opsonizadas com cetuximabe ou rituximabe e adicionadas a poços contendo 40.000 macrófagos diferenciados de monócitos de doadores humanos (n = 2). As células foram então incubadas com SIRPAB-11-K322A ou anticorpos de controle durante 3 horas antes dos macrófagos serem marcados com anti-CD14-APC e quantificados usando imagens de alta resolução. O nível percentual de fagocitose foi calculado como o número de macrófagos positivos para ambos os corantes dividido pelo número total de macrófagos. O tratamento com anti- CD47 IgG1 sozinho a 20 nM foi usado como um controle positivo e o anticorpo de controle de isotipo IgG1-K322A (20 nM) foi usado como um controle negativo.

[00656] Para avaliar a atividade do agente único, as linhagens celulares AML OCI-AML2, MV-4-1, MOLM-13 e culturas AML PDX, AML PDX P1202 e AML PDX P5378, foram usadas como células alvo. Células tumorais opsonizadas com SIRPAB-11-K322A, SIRPAB-11-IgG4PE ou anticorpos de controle foram adicionadas a poços de cocultura com 40.000 macrófagos derivados de monócitos e as mesmas doses tituladas de SIRPAB-11-K322A, SIRPAB-11-IgG4PE, controle de isotipo IgG1-K322A ou controle de isotipo IgG4-4PE. Os métodos são os mesmos para os experimentos de combinação descritos nesta seção.

5.9.2 Atividade de Anticorpos Anti-SIRPα Isoladamente ou em Combinação com Cetuximabe

[00657] A atividade fagocítica de SIRPAB-11-K322A em combinação com cetuximabe foi avaliada em quatro linhagens celulares de câncer colorretal resistente a cetuximabe (CRC) com alterações identificadas de KRAS (Medico E, et al., Nat Commun. 30 de abril de 2015;6:7002). A combinação de SIRPAB-11- K322A e cetuximabe foi eficaz na promoção da fagocitose em três das quatro linhagens celulares CRC testadas. Estes eram GP2d e GP5d, ambos contendo a mutação KRASG12D; SW480, contendo a mutação KRASG12V. Na quarta linhagem celular onde nenhum aumento na fagocitose foi observado com o tratamento por SIRPAB-11-K322A e cetuximabe, o anticorpo de controle positivo, anti-CD47 IgG1, teve apenas um efeito marginal na fagocitose da linhagem celular em comparação com as outras três linhagens celulares CRC, indicando que esta quarta linhagem celular é menos responsiva à modulação da via CD47/SIRPα (dados não mostrados).

[00658] Para demonstrar a expressão do alvo e da via, a coloração da superfície celular de SIRPα, EGFR e CD47 em células GP2d, GP5d e SW480 foi avaliada por citometria de fluxo (FIGS 13A-13C). Todas as três linhagens celulares exibiram níveis elevados comparáveis de expressão de CD47 e EGFR. A ligação à superfície celular baixa, mas positiva, foi demonstrada com SIRPAB-11-IgG4PE- AF647 em comparação com o controle de isotipo.

[00659] A fagocitose mediada por macrófagos de células tumorais CRC com tratamento com SIRPAB-11-K322A sozinho ou em combinação com cetuximabe é mostrada nas FIGS. 13D-13F.

As coculturas de macrófagos derivados de monócitos e células tumorais alvo, opsonizadas com 0,2 nM ou 1 nM de cetuximabe e tratadas com SIRPAB-11-K322A, ou tratadas com SIRPAB-11- K322A sozinho, demonstraram aumentos dependentes da concentração na fagocitose (FIGS. 13D-13F). O tratamento com SIRPAB-11-K322A aumentou a fagocitose das linhagens celulares GP2d, GP5d e SW480 CRC em combinação com cetuximabe em relação ao tratamento com SIRPAB-11-K322A sozinho.

Os valores médios de EC50 para a porcentagem de macrófagos fagocíticos tratados com a combinação de 1 nM de cetuximabe e SIRPAB-11-K322A variaram entre 0,28 nM e 0,44 nM para essas três linhagens celulares, em comparação com 8,79 nM a > 20 nM para o tratamento de SIRPAB-11-K322A sozinho, que foi calculado para um valor de EC50 ~ 40 vezes inferior para a combinação (Tabela 24). Valores de EC50 médios mais baixos também foram observados com a combinação de 0,2 nM de cetuximabe e SIRPAB-11-K322A em comparação com SIRPAB-11- K322A sozinho, mas houve mais variabilidade entre doadores observada nesta concentração de cetuximabe.

O tratamento com cetuximabe sozinho (1 nM) ou em combinação com o controle de isotipo IgG1-K322A (20 nM) demonstrou níveis percentuais médios de macrófagos fagocíticos (n = 2 doadores) de 24, 10,5 e 21 para as linhagens celulares GP2d, GP5d e SW480 CRC, respectivamente.

Este nível de fagocitose é mais baixo do que a porcentagem média dos níveis de macrófagos fagocíticos para a combinação de 1 nM de cetuximabe e SIRPAB-11- K322A (20 nM, a concentração mais alta testada) nas mesmas linhagens celulares (62, 42,5 e 57 para linhagens celulares GP2d, GP5d e SW480 CRC, respectivamente, n = 2 doadores) indicando um aumento da fagocitose com o tratamento com SIRPAB-11-K322A.

Tabela 24: Metade das Concentrações Efetivas Máximas de SIRPAB-11- K322A em Ensaios de Fagocitose de Combinação de Cetuximabe

Valores de EC50 (nM) GP2d GP5d SW480 FaDu Doador 338 358 Méd 338 358 Méd 338 358 Méd 358 22 ia ia ia 4 Sem 13,1 > 20 > > > > 20 14, 3,3 8,79 > N Cetuxim 10 16,5 20 20 19 93 20 C abe 6 0,2 nM 0,65 16,2 8,43 0,5 0,8 0,71 0,2 2.0 1,13 0,0 N de 7 10 4 43 86 5 00 61 0 75 C Cetuxim abe 1 nM de 0,49 0,24 0,37 0,7 0,1 0,43 0,4 0,1 0,28 0,0 N Cetuxim 5 7 1 14 62 8 61 02 2 49 C abe EC50 = metade da concentração efetiva máxima; FaDu = linhagem celular de carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço; GP2d, GP5d, SW480 = linhagens celulares de câncer colorretal; NC = não calculado; nM = nanomolar.

[00660] Em todos os casos, as coculturas tratadas com controle de isotipo IgG1-K322A sozinho exibiram baixos níveis de fagocitose.

[00661] Para determinar as concentrações de saturação de cetuximabe em células tumorais CRC, ensaios de ligação por citometria de fluxo foram realizados usando células GP2d e GP5d. Com base em seus cálculos EC10, EC50 e EC90, os ensaios de fagocitose de GP2d e GP5d foram realizados na saturação da coloração de cetuximabe ou próximo à mesma, com valores de EC50 e EC90 bem abaixo de 0,2 nM usados nos ensaios de fagocitose. Ensaios de tratamento de combinação in vitro foram realizados para avaliar o efeito de cetuximabe em concentrações abaixo de 0,2 nM na fagocitose de células tumorais GP2d e GP5d

(FIGS 13G e 13H). Uma redução marcada na fagocitose tumoral foi detectada com cetuximabe nas concentrações de EC90, EC50 e EC10 em comparação com 0,2 nM e 1 nM, que foram usadas em ensaios de fagocitose que medem os efeitos dependentes da concentração de SIRPAB-11-K322A.

[00662] Além disso, a FIG. 13H demonstra que SIRPAB-11-K322A sinergiza com cetuximabe na promoção da fagocitose de macrófagos. Por exemplo, 0,67 nM de SIRPAB-11-K322A induziu um aumento na porcentagem de macrófagos fagocíticos; no entanto, o aumento visto com ambos 0,67 nM de SIRPAB-11- K322A e 0,2 nM de cetuximabe é maior do que a soma dos aumentos induzidos por 0,67 nM de SIRPAB-11-K322A ou 0,2 nM de cetuximabe individualmente (compare a segunda barra da esquerda, a terceira barra da direita e a segunda barra da direita na FIG. 13H).

[00663] O potencial fagocítico de SIRPAB-11-K322A combinado com cetuximabe também foi avaliado na linhagem celular HNSCC FaDu (FIG. 13I). Em ensaios de cocultura de combinação, macrófagos derivados de monócitos demonstraram um aumento robusto na fagocitose sobre o tratamento com SIRPAB-11-K322A sozinho, atingindo um platô de aproximadamente 70% de macrófagos fagocíticos em concentrações de SIRPAB-11-K322A ≥ 0,02 nM (para ambos 0,2 nM e 1 nM de cetuximabe). Os valores médios de EC50 para macrófagos fagocíticos percentuais tratados com 0,2 nM ou 1 nM de cetuximabe e SIRPAB-11-K322A foram 0,08 nM e 0,05 nM, respectivamente, em comparação com > 20 nM para o tratamento com SIRPAB-11-K322A sozinho (Tabela 24). Os dados de um segundo doador demonstraram um aumento semelhante da fagocitose com o tratamento com SIRPAB-11-K322A em combinação com 0,2 nM de cetuximabe (porcentagem de macrófagos fagocíticos: 34,8 para 20 nM de SIRPAB-11-K322A em combinação com 0,2 nM de cetuximabe versus 1,84 para SIRPAB-11-K322A sozinho), mas não atingiu os mesmos níveis máximos de fagocitose observados para o primeiro doador, tornando um valor EC50 não calculável. O tratamento com cetuximabe em combinação com o controle de isotipo IgG1-K322A (20 nM) demonstrou níveis percentuais de macrófagos fagocíticos que foram inferiores aos observados com a combinação de cetuximabe e SIRPAB-11-K322A (20 nM), indicando um aumento da fagocitose com o tratamento com SIRPAB-11-K322A (porcentagem de macrófagos fagocíticos para o Doador 358: 1 nM de cetuximabe em combinação com SIRPAB- 11-K322A foi de 72,1 versus 31,8 para 1 nM de cetuximabe em combinação com controle de isotipo IgG1-K322A).

5.9.3 Atividade de Anticorpos Anti-SIRPα em Combinação com Rituximabe

[00664] Para avaliar a atividade de combinação de SIRPAB-11-K322A em malignidades hematológicas, as células da linhagem celular DLBCL OCI-LY3 foram opsonizadas com rituximabe e, em seguida, cocultivadas com macrófagos em meio contendo SIRPAB-11-K322A titulado por concentração ou o anticorpo variante SIRPAB-11-IgG4PE; anticorpos de controle negativo compatíveis com isotipo e Fc foram usados. O tratamento com SIRPAB-11-K322A aumentou a fagocitose da linhagem celular OCI-LY3 em combinação com rituximabe, em relação ao tratamento com rituximabe sozinho (FIG. 14). Os valores médios de EC50 (n = 2 doadores) para a porcentagem de macrófagos fagocíticos tratados com SIRPAB-11-K322A em combinação com 0,1 nM de rituximabe foi de 0,11 nM em comparação com 1,46 nM para rituximabe sozinho; os valores de EC50 de agente único SIRPAB-11-K322A não puderam ser calculados. Resultados de combinação semelhantes foram observados para SIRPAB-11-IgG4PE que tem a mesma região variável que SIRPAB-11-K322A. O tratamento com rituximabe a 0,082 nM (~ 0,1 nM) exibiu fagocitose mínima como um único agente (11,9% e 11,5% de macrófagos fagocíticos, n = 2 doadores), assim como SIRPAB-11-K322A na faixa de concentração testada (< 5% de macrófagos fagocíticos para todas as concentrações, n = 2 doadores). Em contraste, aumentos robustos na fagocitose (até um máximo de 63,1% e 75,3% de macrófagos fagocíticos para 20 nM de SIRPAB-11-K322A e 0,1 nM de rituximabe, n = 2 doadores) foram observados com a combinação de SIRPAB-11-K322A e 0,1 nM de rituximabe começando em baixas concentrações de SIRPAB-11-K322A. Aumentos mínimos na porcentagem de macrófagos fagocíticos foram observados para rituximabe em combinação com o controle de isotipo IgG1-K322A (% de macrófagos fagocíticos, n = 2 doadores: 20,7 e 18,6 para 0,1 nM de rituximabe em combinação com 20 nM de controle de isotipo IgG1-K322A em comparação com 11,9 e 11,5 para 0,082 nM [~ 0,1 nM] de rituximabe sozinho e ≤ 2 para 20 nM de controle de isotipo IgG1- K322A sozinho)

[00665] Além disso, a FIG. 14 demonstra que SIRPAB-11-K322A sinergiza com rituximabe na promoção da fagocitose de macrófagos. Por exemplo, o aumento da fagocitose de macrófagos observada com 0,1 nM de SIRPAB-11- K322A e 0,1 nM de rituximabe é maior do que a soma dos aumentos induzidos por 0,1 nM de SIRPAB-11-K322A ou 0,1 nM de rituximabe individualmente (compare os pontos de dados logo acima de "-1" no eixo x da FIG 14). Sinergia semelhante também foi observada entre SIRPAB-11-Ig4PE e rituximabe, indicando que a sinergia não é exclusiva para uma variante Fc particular.

[00666] Conforme mostrado acima, SIRPAB-11-K322A em combinação com cetuximabe ou rituximabe, promoveu a fagocitose da linhagem celular HNSCC, linhagem celular DLBCL ou linhagem celular CRC em ensaios de cocultura com macrófagos derivados de monócitos humanos. O mecanismo subjacente ao efeito de combinação contra as células testadas pode ser através do bloqueio da interação CD47/SIRPα, que permite o desbloqueio do sinal "não me coma" (Jaiswal S, Cell. 23 de julho de 2009;138(2):271-85; Majeti R, et al., Cell. 23 de julho de 2009;138(2):286-99), o anticorpo parceiro efetor-competente fornece um sinal positivo para os macrófagos através da ligação e ativação de FcγR1. Em contraste, a fagocitose aberrante de células T e monócitos autólogos (fagocitose celular dependente de anticorpos (ADCP)) de autoalvos de células por macrófagos autólogos não ocorre com o tratamento com SIRPAB-11-K322A, conforme descrito acima. A ausência de ADCP com tratamento com SIRPAB-11- K322A, que é desejável, é provável devido à presença de outros mecanismos que inibem a fagocitose de autoalvos de células.

5.9.4 Atividade de Agente Único

[00667] O efeito de SIRPAB-11-K322A sozinho na promoção da fagocitose mediada por macrófagos foi avaliado adicionalmente em três linhagens de tumor de AML e culturas de dois modelos de AML PDX. A expressão de superfície de SIRPα nessas células foi confirmada por análise de ligação por citometria de fluxo usando o anticorpo SIRPAB-11-IgG4PE.

[00668] Em ensaios de fagocitose de agente único, o tratamento com SIRPAB-11-K322A demonstrou aumentos dependentes da concentração nas porcentagens de macrófagos fagocíticos com faixas percentuais máximas: para MOLM 13, 28 a 31, n = 3 macrófagos doadores (FIG. 15A, Doador 345); para OCI- AML2, 45 a 74, n = 3 macrófagos doadores (FIG. 15B, Doador 345); para MV-4- 11, 26 a 48, n = 3 macrófagos doadores (FIG. 15C, Doador 345). Os valores médios de EC50 para fagocitose de agente único foram 0,24 nM, 0,03 nM e 0,41 nM para as linhagens celulares MOLM-13, OCI-AML-2 e MV-4-11 AML, respectivamente (Tabela 25). O tratamento de agente único com anticorpo SIRPAB-11-IgG4PE demonstrou menos fagocitose com as três linhagens celulares AML em comparação com SIRPAB-11-K322A, quando testado em uma faixa de concentração de 0,01 nM a 66,67 nM. No entanto, quando testado em uma única concentração alta, a diferença entre o tratamento com SIRPAB-11-K322A e o anticorpo SIRPAB-11-IgG4PE foi menos clara. Tabela 25: Metade das Concentrações Efetivas Máximas para Ensaios de Fagocitose de Agente Único EC50 SIRPAB-11-K322A (nM) MOLM-13 OCI-AML2 MV-4-11 Doado 345 226 358 M 345 226 358 M 345 226 358 M r EC50 0,5 0,1 0,0 0,2 0,0 0,0 0,0 0,0 0,5 0,1 0,5 0,4 7 0 4 4 4 2 2 3 5 3 6 1 EC50 = metade da concentração máxima; M = média; MOLM-13, MV-4-11 e OCI-AML2 = linhagens celulares de leucemia mieloide aguda (AML).

[00669] Em todos os casos, as coculturas de linhagens celulares AML e macrófagos tratados com controle de isotipo anti-IgG1-K322A e controle de isotipo IgG4-4PE exibiram baixos níveis de fagocitose.

[00670] Dados adicionais de fagocitose de agente único foram gerados com culturas de 2 amostras de pacientes com AML derivadas de modelos de PDX (FIGS. 15D e 15E). O tratamento com SIRPAB-11-K322A demonstrou aumento de macrófagos fagocíticos com valores máximos de 63,35% e 71,54% para modelos de AML PDX P1202 e P5478, respectivamente. Semelhante às linhagens celulares AML, o tratamento de agente único com o anticorpo SIRPAB-11-IgG4PE exibiu menos fagocitose em comparação com os valores máximos de SIRPAB-11-K322A (35,38% e 45,08% de macrófagos fagocíticos para modelos de PDX P1202 e P5478, respectivamente, tratados com o anticorpo SIRPAB-11-IgG4PE). Esses níveis ainda estavam acima do controle de isotipo IgG1-K322A em ambos os casos.

5.9.5 Ensaio de fagocitose de cinomolgo

[00671] A relevância funcional da ligação de SIRPAB-11-K322A a SIRPα de cinomolgos foi determinada avaliando a atividade fagocítica de macrófagos derivados de monócitos de cinomolgos tratados com SIRPAB-11-K322A contra a linhagem de células tumorais humanas, OCI-AML2. Monócitos derivados de PBMC de cinomolgo foram diferenciados em macrófagos e usados em ensaios de cocultura (n = 2). As células tumorais foram marcadas com éster succinimidílico de diacetato de carboxifluoresceína (CFSE), opsonizadas com SIRPAB-11-K322A (0,067 nM a 66,7 nM) ou anticorpos de controle (0,067 a 66,7 nM) e adicionadas a ensaios de cocultura com 40.000 macrófagos de cinomolgo e as mesmas concentrações de SIRPAB-11-K322A, controle de isotipo IgG1- K322A ou CD47 IgG1, durante 1 ou 3 horas. No final do período de incubação, os macrófagos foram marcados com anti-CD14-aloficocianina (APC) e quantificados usando imagens de alta resolução. A porcentagem de macrófagos fagocíticos foi calculada como o número de macrófagos positivos para ambos os corantes dividido pelo número total de macrófagos.

[00672] O tratamento de macrófagos de macacos cinomolgos com SIRPAB- 11-K322A aumentou significativamente a fagocitose de células tumorais humanas OCI-AML2 em comparação com o observado com o controle negativo, controle de isotipo IgG1-K322A (p < 0,0001, incubação de 1 hora; FIG. 15F). Não houve diferença na porcentagem de macrófagos fagocíticos entre as duas concentrações de SIRPAB-11-K322A testadas. Uma repetição do ensaio com macrófagos de um doador de macaco cinomolgo diferente rendeu resultados semelhantes (p < 0,0001 para 0,067 nM, 0,67 nM, 6,67 nM ou 66,7 nM de SIRPAB-11-K322A em comparação com o controle de isotipo de concentração correspondente, controle de isotipo IgG1-K322A em 1 hora de incubação). Estes dados indicam que a ligação de SIRPAB-11-K322A a SIRPα de macaco cinomolgo tem um efeito funcional na promoção das atividades fagocitóticas de macrófagos cocultivados com células tumorais.

5.10 Exemplo 10: Um Estudo de Fase 1, de Rótulo Aberto, para Determinação de Dose de SIRPAB-11-K322A, um Anticorpo Monoclonal Dirigido Contra SIRPα, Sozinho e em Combinação com Cetuximabe em Sujeitos com Cânceres Sólidos Avançados

[00673] O anticorpo SIRPAB-11-K322A deve ser estudado em cânceres sólidos avançados (Parte A, Estágio 1 e Parte B) e em câncer colorretal avançado (CRC) e/ou carcinoma avançado de células escamosas de cabeça e pescoço (SCCHN) (Parte A, Estágio 2 e Parte B).

5.10.1 Objetivos

[00674] Objetivos Primários: •Determinar a segurança e tolerabilidade de SIRPAB-11-K322A sozinho e em combinação com cetuximabe. •Definir a dose não tolerada (NTD), a dose máxima tolerada (MTD) e/ou a dose recomendada da Fase 2 (RP2D) do SIRPAB-11-K322A sozinho e em combinação com cetuximabe.

[00675] Objetivos Secundários: •Fornecer informações sobre a eficácia preliminar do SIRPAB-11-K322A sozinho e em combinação com cetuximabe. •Caracterizar a farmacocinética (PK) do SIRPAB-11-K322A. •Avaliar a presença, frequência e impacto funcional dos anticorpos anti- SIRPAB-11-K322A (ADAs).

5.10.2 Projeto do Estudo

[00676] Este estudo é um estudo de rótulo aberto, de Fase 1, de escalonamento (Parte A) e expansão (Parte B) de dose, primeiro em humanos de SIRPAB-11-K322A em sujeitos com cânceres sólidos avançados. A parte do escalonamento da dose (Parte A) do estudo será conduzida em duas etapas usando a metodologia Bayesiana. O estágio 1 irá avaliar a segurança e tolerabilidade de doses crescentes de SIRPAB-11-K322A, administradas por via intravenosa (IV), para determinar MTD, NTD e/ou RP2D de SIRPAB-11-K322A em sujeitos com cânceres sólidos irressecáveis avançados. O estágio 2 irá avaliar a segurança e tolerabilidade de doses crescentes de SIRPAB-11-K322A, em combinação com cetuximabe semanal, ambos administrados IV, para determinar o NTD, MTD e/ou RP2D de SIRPAB-11-K322A mais cetuximabe em sujeitos com CRC avançado e/ou SCCHN.

[00677] A parte de expansão da dose (Parte B) avaliará ainda a segurança e a eficácia do SIRPAB-11-K322A administrado em ou abaixo do Estágio 2 de MTD em combinação com cetuximabe em coortes de expansão selecionados de até aproximadamente 20 sujeitos avaliáveis, cada um, a fim de determinar o RP2D. As coortes de expansão da Parte B podem testar diferentes doses e/ou cronogramas de SIRPAB-11-K322A com base na segurança e tolerabilidade determinadas na Parte A. As coortes de expansão da Parte B podem incluir sujeitos com CRC avançado (KRAS/NRAS/BRAF do tipo selvagem), CRC (mutante KRAS/NRAS/BRAF), SCCHN e/ou outros cânceres sólidos avançados. Coortes adicionais de sujeitos com tumores sólidos avançados podem ser considerados na Parte B. Todos os tratamentos serão administrados em ciclos de 28 dias até a progressão da doença clinicamente significativa, toxicidade inaceitável ou decisão de descontinuação.

[00678] No Estágio 1 (Parte A), cada sujeito receberá a dose designada de SIRPAB-11-K322A no Ciclo 1, Dia 1 e semanalmente (QW) daí em diante. A dose inicial (Estágio 1, Coorte 1) de SIRPAB-11-K322A será de 0,3 mg/kg. Se a dose inicial de SIRPAB-11-K322A não for tolerada, um nível de dose mais baixo pode ser explorado. O incremento do escalonamento da dose inicial em cada coorte será de aproximadamente 3 vezes.

[00679] A decisão de prosseguir para o Estágio 2 será feita com base na segurança, tolerabilidade, PK, PD e ADA observados em pelo menos 1 coorte do Estágio 1. O Estágio 2 começará após pelo menos uma coorte de dose no Estágio 1 ser determinada como tolerada e pode, portanto, começar antes de estabelecer o MTD ou NTD no Estágio 1. A dose inicial (Estágio 2, Coorte 1) de SIRPAB-11-K322A deve ser determinada para ser tolerada no Estágio 1. Se a dose inicial de SIRPAB- 11-K322A mais cetuximabe não for tolerada, um nível de dose mais baixo de SIRPAB-11-K322A pode ser explorado. As coortes subsequentes no Estágio 2 só serão abertas para inscrição somente após as coortes de dosagem correspondentes no Estágio 1 serem consideradas toleradas. No Estágio 2, a dosagem de cetuximabe será fixa e administrada no Dia 1 do Ciclo 1 (400 mg/m2 IV) e semanalmente depois disso (250 mg/m2 IV QW).

[00680] Durante o escalonamento da dose, a decisão de avaliar sujeitos adicionais dentro de uma coorte de dose, o próximo nível de dose mais alto, níveis de dose intermediários, um intervalo de dosagem alternado ou declarar um MTD será determinada, com base no modelo de regressão de logística Bayesiana, dados de segurança clínica e laboratorial (dados de Toxicidade Limitadora de Dose [DLT] e dados de segurança não DLT), PK, PD e ADA para um determinado nível de dose. A frequência da dosagem de SIRPAB-11-K322A pode ser reduzida com base na revisão de PK e/ou PD de um determinado nível de dose. Se a frequência da dose for reduzida, a intensidade total da dose da coorte subsequente não excederá 3 vezes.

[00681] Na Parte A, após a primeira dose ser administrada em qualquer coorte, os sujeitos em cada coorte devem ser observados por pelo menos 28 dias (Ciclo 1, Dias 1 a 28, janela DLT) antes que a próxima dose mais alta, a coorte de dose especificada pelo protocolo possa começar. Para os dois primeiros sujeitos, um intervalo de uma semana entre o sujeito de dosagem inicial e subsequentemente inscrito será empregado para observar as toxicidades agudas. Após os primeiros dois sujeitos, haverá 1 dia entre a dosagem inicial de novos sujeitos em uma determinada coorte.

[00682] Em sujeitos que recebem monoterapia SIRPAB-11-K322A (Parte A, Estágio 1), um sujeito avaliável para DLT é definido como aquele que: •Recebeu pelo menos 3 de 4 doses completas de SIRPAB-11-K322A durante o Ciclo 1, Dias 1 a 28 (dosagem QW) (ou pelo menos 75% da intensidade de dose total planejada do Ciclo 1) sem experimentar um DLT, ou •Experimentou um DLT após receber pelo menos uma dose de SIRPAB-11- K322A ou fração do mesmo durante o Ciclo 1, Dias 1 a 28.

[00683] Em indivíduos recebendo SIRPAB-11-K322A em combinação com cetuximabe (Parte A, Estágio 2), um indivíduo avaliável para DLT é definido como aquele que: •Recebeu pelo menos 3 de 4 doses completas de cetuximabe e pelo menos 3 de 4 doses completas de SIRPAB-11-K322A durante o Ciclo 1, Dias 1 a 28 (ou pelo menos 75% da intensidade de dose total planejada do Ciclo 1 de cetuximabe e SIRPAB-11-K322A) sem experimentar um DLT, ou •Experimentou um DLT após receber pelo menos uma dose ou fração do mesmo SIRPAB-11-K322A durante o Ciclo 1, Dias 1 a 28.

[00684] Os sujeitos que não podem ser avaliados para DLT serão substituídos. Sujeitos adicionais em qualquer coorte podem ser inscritos para melhor caracterizar PK, PD ou MTD de acordo com o BLRM.

[00685] Após a conclusão do escalonamento da dose (Parte A), coortes selecionadas de até aproximadamente 20 sujeitos com eficácia avaliável por coorte receberão SIRPAB-11-K322A em combinação com cetuximabe. A expansão pode ocorrer no MTD estabelecido na fase de escalonamento de dose de combinação de cetuximabe e/ou em uma dose mais baixa, ou um esquema de dosagem tolerável alternativo, com base na revisão dos dados de segurança, PK, PD e ADA. As coortes podem incluir indivíduos com CRC avançado e irressecável (mutante KRAS, NRAS ou BRAF), CRC (KRAS, NRAS ou BRAF do tipo selvagem), SCCHN e/ou tumores sólidos avançados. Todos os sujeitos com CRC devem ter determinação do status do gene tumoral para mutações RAS (KRAS e NRAS) e BRAF (V600E) (individualmente ou como parte do painel de sequenciamento de próxima geração). Mutações RAS são definidas como mutações somáticas no éxon 2 (códons 12 e 13), éxon 3 (códons 59 e 61) e éxon 4 (códons 117 e 146) de KRAS ou NRAS. O teste de mutações KRAS, NRAS e BRAF nos Estados Unidos deve ser realizado apenas em laboratórios certificados pelas emendas de melhoria de laboratório clínico de 1988 (CLIA-88), qualificados para realizar testes de laboratório clínico de alta complexidade (patologia molecular). O status de mutação será confirmado após a inscrição do sujeito por meio de testes de laboratório central.

[00686] O estudo será conduzido em conformidade com a Conferência Internacional sobre Harmonização (ICH) de Boas Práticas Clínicas (GCPs).

5.10.3 População do Estudo

[00687] Sujeitos (homens ou mulheres) ≥ 18 anos de idade, com cânceres sólidos avançados, incluindo CRC avançado e SCCHN avançado que progrediram (ou não foram capazes de tolerar devido a comorbidades médicas ou toxicidade inaceitável) anticâncer padrão terapia, ou para quem não existe outra terapia convencional aprovada, serão inscritos no estudo.

[00688] O estudo inscreverá aproximadamente 140 sujeitos com cânceres sólidos avançados. Na Parte A, aproximadamente 60 sujeitos (incluindo coortes de escalonamento de dose no Estágio 1 e Estágio 2 de aproximadamente 3 a 6 sujeitos avaliáveis cada um serão inscritos. Na fase de expansão da Parte B, até

20 indivíduos em até 4 coortes podem ser inscritos (até aproximadamente 80 sujeitos no total).

5.10.4 Duração do Estudo

[00689] A inscrição completa deve levar aproximadamente 30 meses para ser concluída (18 meses para a Parte A e 12 meses para a Parte B). A conclusão do tratamento ativo e do acompanhamento pós-tratamento devem levar de 6 a 12 meses adicionais. Espera-se que o estudo todo prossiga por aproximadamente 42 meses.

[00690] O Fim do Ensaio é definido como a data da última visita do último sujeito para completar o acompanhamento pós-tratamento ou a data de recebimento do último ponto de dados do último sujeito que é necessário para as análises primária, secundária e/ou exploratória, como pré-especificado no protocolo, aquele que for mais recente.

5.10.5 Tratamentos do Estudo

[00691] O produto sob investigação (IP), SIRPAB-11-K322A, será fornecido para administração IV.

[00692] Para reduzir o risco de reações relacionadas à infusão (IRR), a pré- medicação com um antipirético e um anti-histamínico é necessária no Ciclo 1. Se um sujeito não apresentar uma IRR durante o Ciclo 1, então a pré-medicação pode ser interrompida para os ciclos de tratamento subsequentes. Para sujeitos que recebem cetuximabe, os pré-medicamentos não precisam ser repetidos antes da dosagem de SIRPAB-11-K322A. O tratamento com SIRPAB-11-K322A continuará até a progressão da doença clinicamente significativa, toxicidade inaceitável ou decisão do sujeito/investigador de descontinuar.

[00693] Para sujeitos que recebem cetuximabe em combinação com SIRPAB-11-K322A, cetuximabe será administrado (por bula e prática padrão institucional) no Dia 1 do Ciclo 1 (400 mg/m2 IV como uma infusão de 120 minutos) e semanalmente depois (250 mg/m2 IV QW infundido mais de 60 minutos). Os sujeitos receberão infusão de cetuximabe antes de iniciar a infusão de SIRPAB-11-K322A nos dias que receberam ambos os tratamentos. Os sujeitos que recebem cetuximabe devem receber pré-medicação com um antagonista H1 (como 50 mg de difenidramina IV) 30 a 60 minutos antes da primeira dose. A pré-medicação adicional, como um corticosteroide, pode ser administrada de acordo com o padrão institucional de tratamento e as informações do produto cetuximabe do país. Para sujeitos com histórico de IRR de Grau 2 com infusão anterior de cetuximabe, é recomendada a pré-medicação com corticosteroides (por exemplo, dexametasona 10 mg ou equivalente). O pré-medicamento deve ser administrada para infusões de cetuximabe subsequentes com base no julgamento clínico e na presença/gravidade de IRRs anteriores. Para sujeitos que apresentam IRRs de Grau 1 ou 2 e IRRs não graves de Grau 3, a taxa de infusão de cetuximabe deve ser reduzida em 50%. Para reações graves à perfusão, que requeiram intervenção médica e/ou hospitalização, o cetuximabe deve ser descontinuado imediata e definitivamente. As reduções de dose para erupção acneiforme de Grau 3 ou 4 são permitidas de acordo com a bula do cetuximabe. Consulte o rótulo Erbitux aprovado pelo FDA, referência ID 4258364, revisado em maio de 2018, Seção 2.4, em accessdata.fda.gov/drugsatfda_docs/label/2018/125084Orig1s268lbl.pdf.

[00694] Na expansão da Parte B, com base nas avaliações de segurança, PK, PD e ADA do agente único SIRPAB-11-K322A e escalonamento de dose de combinação de cetuximabe, os sujeitos podem receber SIRPAB-11-K322A no MTD e/ou em uma dose mais baixa e em um esquema de dosagem QW, Q2W ou alternativo.

5.10.6 Visão Geral das Principais Avaliações de Eficácia

[00695] A variável de eficácia primária é a taxa de resposta. Os sujeitos serão avaliados quanto à eficácia após os ciclos 2, 4 e 6; e depois a cada 3 ciclos. Todos os sujeitos tratados serão incluídos nas análises de eficácia. Para tumores sólidos, a avaliação será baseada nos Critérios de Avaliação de Resposta em Tumores Sólidos (RECIST 1.1) (Eisenhauer EA, et al. Eur J Cancer 2009;45(2):228- 247) como o método primário, bem como RECIST 1.1 modificado para terapêutica de base imunológica (iRECIST) (Seymour L, et al. Lancet Oncol. 2017;18:e143–e152) como um método exploratório complementar.

[00696] Uma análise descritiva da evidência da atividade antitumoral será fornecida com base em avaliações clínicas, laboratoriais e radiográficas, que incluem avaliação da lesão-alvo, lesão não-alvo, nova lesão e resposta geral. As respostas confirmadas e não confirmadas pelos critérios RECIST 1.1 serão avaliadas.

[00697] A variável de eficácia do foco para a Parte A será a taxa de resposta objetiva (ORR). As variáveis de eficácia adicionais a serem analisadas incluem o tempo de resposta e a duração da resposta.

[00698] Para a Parte B, as variáveis de eficácia a serem analisadas incluem ORR, tempo de resposta, duração da resposta, sobrevida livre de progressão (PFS) e sobrevida global (OS).

[00699] Se o tratamento for interrompido por outras razões que não a progressão da doença, início de uma nova terapia anticâncer ou retirada do consentimento de todo o estudo, os sujeitos serão solicitados a continuar as avaliações do tumor de acordo com o cronograma de avaliação do tumor especificado até a progressão da doença e/ou início de novas terapias anticâncer sistêmicas. O status de sobrevida será determinado após a progressão da doença, aproximadamente a cada 12 semanas por até 1 ano. Além disso, as terapias anticâncer serão coletadas após a progressão da doença.

[00700] As variáveis de eficácia irão amadurecer quando o último sujeito em cada coorte tiver se retirado do estudo ou completado 6 ciclos.

[00701] A variável de eficácia primária para a Parte A é ORR. Para a Parte B, as variáveis de eficácia a serem analisadas incluem ORR, tempo de resposta, duração da resposta, PFS e OS. Estimativas de pontos e intervalos de confiança de 95% nos dois lados da ORR serão relatados. Para os desfechos de tempo até o evento, análises de sobrevida Kaplan-Meier serão realizadas.

5.10.7 Critérios de Inclusão

[00702] Os sujeitos devem atender os seguintes critérios para serem inscritos no estudo:

1. O sujeito deve compreender e assinar voluntariamente um formulário de consentimento informado (ICF) antes de realizar quaisquer avaliações/procedimentos relacionados ao estudo.

2. O sujeito (homem ou mulher) deve ter ≥ 18 anos no momento da assinatura do termo de consentimento informado (ICF).

3. O sujeito deve ter progredido (ou não foi capaz de tolerar devido a comorbidades médicas ou toxicidade inaceitável) terapia anticâncer padrão ou para quem não existe outra terapia convencional aprovada e tem confirmação histológica ou citológica de: • Na Parte A, Estágio 1, tumores sólidos irressecáveis avançados.

• Na Parte A, Estágio 2, câncer colorretal não ressecável avançado ou carcinoma de células escamosas da cabeça e pescoço. • Na Parte B, − Coorte 1: câncer colorretal não ressecável avançado com documentação molecular de uma mutação em RAS ((KRAS ou NRAS) ou BRAF (V600E). Mutações RAS são definidas como mutações somáticas no éxon 2 (códons 12 e 13), éxon 3 (códons 59 e 61) e éxon 4 (códons 117 e 146) de KRAS ou NRAS.

− Coorte 2: câncer colorretal não ressecável avançado com RAS do tipo selvagem (sem mutações somáticas nos éxons 2, 3 e 4 de KRAS ou NRAS) e BRAF WT para V600E. − Coorte 3: carcinoma espinocelular não ressecável avançado de cabeça e pescoço. − Coorte 4: tumores sólidos não ressecáveis avançados.

4. O sujeito autoriza a recuperação de tecido tumoral de arquivo fixado em formalina e embebido em parafina (FFPE), tanto em blocos de tumor quanto em amostras seccionadas/montadas.

5. Para os sujeitos que participam das coortes intensivas de PD da Parte A e Parte B apenas, o sujeito consente e tem o tumor acessível para biópsias de tumor pareadas durante a triagem e o Ciclo 1.

6. O sujeito deve ter pelo menos um sítio de doença mensurável, conforme determinado pelo RECIST v1.1.

7. O sujeito tem um ECOG PS de 0 ou 1.

8. Os sujeitos devem ter os seguintes valores de laboratório: • Contagem absoluta de neutrófilos (ANC) ≥ 1,5 x 109/L sem suporte de fator de crescimento por 7 dias (14 dias se pegfilgrastim). • Hemoglobina (Hgb) ≥ 8 g/dL.

• Plaquetas (plt) ≥ 75 x 109/L sem transfusão por 7 dias.

• Aspartato aminotransferase (AST/SGOT) e alanina aminotransferase (ALT / SGPT) ≤ 2,5 x Limite Superior do Normal (ULN) ou ≤ 5,0 x ULN se houver tumor de fígado. • Bilirrubina sérica ≤ 1,5 x ULN.

• Depuração de creatinina sérica estimada ≥ 45 mL/min usando a equação de Cockcroft-Gault ou depuração de creatinina medida usando coleta de urina de 24 horas.

• Razão normalizada internacional (INR) < 1,5 x ULN e tempo de tromboplastina parcial (PTT) < 1,5 x ULN.

9. Mulheres com potencial para engravidar (FCBP) devem: • Comprometer-se com a verdadeira abstinência de contato heterossexual (que deve ser revisado mensalmente e a fonte documentada) ou concorda em usar e ser capaz de cumprir, pelo menos, dois métodos anticoncepcionais eficazes (oral, injetável ou anticoncepcional hormonal implantável; tubário ligadura; dispositivo intrauterino; anticoncepcional de barreira com espermicida; ou parceiro vasectomizado), um dos quais deve ser uma barreira, para assinar o ICF, durante a participação no estudo, durante interrupções de dose e por até 56 dias após a última dose de SIRPAB-11-K322A; e • Realizar dois testes de gravidez negativos antes de iniciar o SIRPAB-11- K322A. Ela deve concordar com o teste de gravidez contínuo durante o curso do estudo e 56 dias após o final do tratamento do estudo. Isso se aplica mesmo que o sujeito pratique a verdadeira abstinência de contato heterossexual. O sujeito não pode receber SIRPAB-11-K322A até que o resultado do teste de gravidez seja negativo; e • Tenha um teste de gravidez de soro negativo (sensibilidade de pelo menos 25 mIU/mL) na Triagem. • Ter um teste de gravidez sérico ou urinário negativo 72 horas antes do Ciclo 1, Dia -1 do tratamento do estudo, e dentro de 72 horas antes do Dia -1 de cada ciclo subsequente (observe que o teste de gravidez de soro de triagem pode ser usado como o teste anterior ao Dia -1 do tratamento do estudo se for realizado nas 72 horas anteriores). Um teste de gravidez de soro ou urina também deve ser realizado no final do estudo para cada FCBP; e • Evitar conceber por 56 dias após a última dose de SIRPAB-11-K322A.

• Mulheres com potencial para engravidar que recebem cetuximabe devem usar métodos anticoncepcionais eficazes durante o tratamento com cetuximabe e por 2 meses após a última dose de cetuximabe.

10. Os homens devem praticar a abstinência verdadeira (que deve ser revisada mensalmente e a fonte documentada) ou concordar em usar um preservativo (um preservativo de látex é recomendado) durante o contato sexual com uma mulher grávida ou um FCBP e evitarão conceber ao assinar o ICF, durante a participação no estudo, durante as interrupções da dose e por pelo menos 56 dias após a interrupção do SIRPAB-11-K322A, mesmo se ele foi submetido a uma vasectomia com bem-sucedida.

11. O sujeito deve estar disposto e capaz de cumprir com o cronograma de visita do estudo e outros requisitos protocolares.

5.10.8 Critérios de Exclusão

[00703] A presença de qualquer um dos seguintes itens excluirá o sujeito da inscrição:

1. O sujeito recebeu terapia experimental anterior direcionada a CD47 ou SIRPα.

2. O sujeito tem câncer com envolvimento sintomático do sistema nervoso central.

3. O sujeito está em terapia imunossupressora sistêmica crônica ou corticosteroides (por exemplo, prednisona ou equivalente excedendo uma dose total de 140 mg nos últimos 14 dias). Injeções intranasais, inaladas, tópicas ou locais de corticosteroides (por exemplo, injeção intra-articular) ou esteroides como pré-medicação para reações de hipersensibilidade (por exemplo, pré- medicação de tomografia computadorizada [TC]) são exceções a este critério.

4. Sujeitos com histórico de insuficiência cardíaca congestiva (ICC) classe III ou IV ou cardiomiopatia não isquêmica grave, angina instável, infarto do miocárdio ou arritmia ventricular nos 6 meses anteriores.

5. O sujeito teve um tratamento prévio direcionado ao câncer sistêmico ou modalidades de investigação ≤ 5 meias-vidas ou 4 semanas antes de iniciar SIRPAB-11-K322A, o que for mais curto.

6. O sujeito foi submetido a uma grande cirurgia ≤ 2 semanas antes de iniciar SIRPAB-11-K322A. Os sujeitos devem ter se recuperado de quaisquer efeitos clinicamente significativos da cirurgia recente.

7. O sujeito é uma mulher grávida ou que está amamentando.

8. O sujeito possui infecção pelo vírus da imunodeficiência humana (HIV) conhecida.

9. Infecção crônica ativa pela hepatite B ou C (HBV/HCV).

10. Tratamento em andamento com dosagem terapêutica crônica de anticoagulantes (por exemplo, varfarina, heparina de baixo peso molecular, inibidores do Fator Xa)

11. Histórico de anemia hemolítica autoimune ou trombocitopenia autoimune.

12. Histórico de segundos cânceres simultâneos que requerem tratamento sistêmico ativo e contínuo.

13. O sujeito possui qualquer condição médica significativa, anormalidade laboratorial ou doença psiquiátrica que impeça o sujeito de participar do estudo.

14. O sujeito possui qualquer condição, incluindo a presença de anormalidades laboratoriais, que coloque o sujeito em risco inaceitável caso participasse do estudo.

15. O sujeito possui qualquer condição que confunda a capacidade de interpretar dados do estudo.

16. Para sujeitos que recebem cetuximabe, histórico conhecido de intolerância ao cetuximabe, incluindo reações à infusão de Grau 3 ou 4; erupção cutânea acneiforme grave e persistente que requer a interrupção do cetuximabe; ou doença pulmonar intersticial.

17. Para sujeitos que participam de avaliações de ressonância magnética com ferumoxitol nas coortes intensivas de PD da Parte A: • Histórico de reação alérgica a qualquer produto de ferro intravenoso.

• Hipersensibilidade conhecida ao ferumoxitol ou a qualquer um de seus componentes (por exemplo, ferro, dextrano ou polissacarídeos de peso molecular ≥ 1000 daltons). • Qualquer contraindicação ao exame de ressonância magnética, por exemplo, material/dispositivos metálicos embutidos. • Histórico conhecido de hemocromatose com sobrecarga de ferro.

5.11 Exemplo 11: Um Estudo de Fase 1, de Rótulo Aberto, para Determinação de Dose de SIRPAB-11-K322A, um Anticorpo Monoclonal Dirigido Contra SIRPα, Sozinho e em Combinação com Cetuximabe ou Rituximabe em Sujeitos com Cânceres Sólidos e Hematológicos Avançados

[00704] O anticorpo SIRPAB-11-K322A deve ser estudado em cânceres sólidos avançados (Parte A, Estágio 1 e Parte B), em câncer colorretal avançado (CRC) e/ou carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço avançado (SCCHN) (Parte A, Estágio 2 e Parte B), e em NHL positivo para CD20, como DLBCL (incluindo DLBCL recidivante e DLBCL refratário), linfoma folicular (incluindo linfoma folicular recidivante e refratário de grau 1, grau 2, grau 3a, grau 3b), linfoma de zona marginal e linfoma de células do manto. (Parte A, Etapa 3 e Parte C).

5.11.1 Objetivos

[00705] Objetivos Primários: •Determinar a segurança e tolerabilidade de SIRPAB-11-K322A sozinho e em combinação com cetuximabe ou rituximabe.

•Definir a dose não tolerada (NTD), a dose máxima tolerada (MTD) e/ou a dose recomendada da Fase 2 (RP2D) do SIRPAB-11-K322A sozinho e em combinação com cetuximabe ou rituximabe.

[00706] Objetivos Secundários: •Fornecer informações sobre a eficácia preliminar do SIRPAB-11-K322A sozinho e em combinação com cetuximabe ou rituximabe. •Caracterizar a farmacocinética (PK) do SIRPAB-11-K322A. •Avaliar a presença, frequência e impacto funcional dos anticorpos anti- SIRPAB-11-K322A (ADAs).

5.11.2 Projeto do Estudo

[00707] Este estudo é um estudo de rótulo aberto, de Fase 1, de escalonamento (Parte A) e expansão (Partes B e C) de dose, primeiro em humanos de SIRPAB-11-K322A em sujeitos com cânceres sólidos e hematológicos avançados. A parte do escalonamento da dose (Parte A) do estudo será conduzida em três etapas usando a metodologia Bayesiana. O estágio 1 irá avaliar a segurança e tolerabilidade de doses crescentes de SIRPAB- 11-K322A, administradas por via intravenosa (IV), para determinar MTD, NTD e/ou RP2D de SIRPAB-11-K322A em sujeitos com cânceres sólidos irressecáveis avançados. O estágio 2 irá avaliar a segurança e tolerabilidade de doses crescentes de SIRPAB-11-K322A, em combinação com cetuximabe semanal, ambos administrados IV, para determinar o NTD, MTD e/ou RP2D de SIRPAB-11- K322A mais cetuximabe em sujeitos com CRC avançado e/ou SCCHN. O estágio 3 avaliará a segurança e tolerabilidade de doses crescentes de SIRPAB-11-K322A em combinação com rituximabe, ambos administrados IV, para estabelecer o MTD, NTD e/ou RP2D de SIRPAB-11-K322A mais rituximabe em sujeitos com NHL positivo para CD20, incluindo DLBCL, linfoma folicular de grau 1, 2 e 3a, linfoma de zona marginal e linfoma de células do manto.

[00708] A parte de expansão da dose (Parte B) avaliará ainda a segurança e a eficácia do SIRPAB-11-K322A administrado em ou abaixo do Estágio 2 de MTD em combinação com cetuximabe em coortes de expansão selecionados de até aproximadamente 20 sujeitos avaliáveis, cada um, a fim de determinar o RP2D.

[00709] As coortes de expansão da Parte B podem testar diferentes doses e/ou cronogramas de SIRPAB-11-K322A com base na segurança e tolerabilidade determinadas na Parte A. As coortes de expansão da Parte B podem incluir sujeitos com CRC avançado (KRAS/NRAS/BRAF do tipo selvagem), CRC (mutante KRAS/NRAS/BRAF), SCCHN e/ou outros cânceres sólidos avançados. As coortes adicionais de sujeitos com tumores sólidos avançados podem ser consideradas na Parte B.

[00710] A expansão da dose da Parte C avaliará ainda a segurança e a eficácia do SIRPAB-11-K322A administrado em ou abaixo do Estágio 3 de MTD de SIRPAB-11-K322A em combinação com rituximabe em coortes de expansão selecionados de até aproximadamente 20 (linfoma folicular) ou 30 (DLBCL) sujeitos avaliáveis, cada um, a fim de determinar o RP2D para a combinação de SIRPAB-11-K322A e rituximabe.

[00711] As coortes de expansão da Parte C também podem testar diferentes doses e/ou cronogramas de SIRPAB-11-K322A com base na segurança e tolerabilidade determinadas na Parte A. As coortes de expansão da Parte C podem incluir DLBCL recidivante e/ou refratário e/ou linfoma folicular (FL) de grau 1, 2 e 3a.

[00712] Todos os tratamentos serão administrados em ciclos de 28 dias até a progressão da doença clinicamente significativa, toxicidade inaceitável ou decisão de descontinuação.

[00713] No Estágio 1 (Parte A), cada sujeito receberá a dose designada de SIRPAB-11-K322A no Ciclo 1, Dia 1 e semanalmente (QW) daí em diante. A dose inicial (Estágio 1, Coorte 1) de SIRPAB-11-K322A será de 0,3 mg/kg. Se a dose inicial de SIRPAB-11-K322A não for tolerada, um nível de dose mais baixo pode ser explorado. O incremento do escalonamento da dose inicial em cada coorte será de aproximadamente 3 vezes.

[00714] A decisão de prosseguir para o Estágio 2 será feita com base na segurança, tolerabilidade, PK, PD e ADA observados em pelo menos dois estágios do Estágio 1. O Estágio 2 ou 3 pode começar antes de estabelecer o MTD ou NTD no Estágio 1. A dose inicial (Estágio 2, Coorte 1) de SIRPAB-11-K322A no Estágio 2 será pelo menos um nível de dose abaixo da dose que foi determinada como tolerada no Estágio 1. O Estágio 3 começará após pelo menos dois níveis de dose na Etapa 1 serem concluídos. A dose inicial (Estágio 3, Coorte 1) de SIRPAB-11- K322A no Estágio 3 não será maior do que a dose mais alta que foi determinada para ser tolerada no Estágio 1.

[00715] Se a dose inicial de SIRPAB-11-K322A em combinação com cetuximabe ou rituximabe não for tolerada, um nível de dose mais baixo de SIRPAB-11-K322A pode ser explorado. As coortes subsequentes nos Estágios 2 e 3 serão abertas para inscrição somente após as coortes de dosagem correspondentes no Estágio 1 serem consideradas toleradas.

[00716] No Estágio 2, a dose inicial de cetuximabe (Estágio 2, Coorte 1a) será 250 mg/m2 IV no Dia 1 do Ciclo 1 seguido por 150 mg/m2 IV semanalmente no Ciclo 1. Se esta dose reduzida de cetuximabe for tolerada por um ciclo, pode ocorrer um aumento da dose intrapaciente para 250 mg/m2 IV semanalmente. Se o nível de dose de cetuximabe na Coorte 1a do Estágio 2 for considerado tolerável, a segunda coorte do Estágio 2 (Estágio 2, Coorte 1b) tratará os sujeitos com a mesma dose de SIRPAB-11-K322A com cetuximabe a 400 mg/m2 IV no Dia 1 do Ciclo 1 seguido de 250 mg/m2 IV semanalmente depois (400/250 mg/m2). Se a Coorte 1b for tolerada, as coortes subsequentes receberão cetuximabe

(400/250 mg/m2) com doses crescentes de SIRPAB-11-K322A.

[00717] No Estágio 3, a dosagem de rituximabe será fixada em 375 mg/m2 IV. O rituximabe será administrado semanalmente por 4 doses (Dias 1, 8, 15 e 22 do Ciclo 1), no Dia 1 dos Ciclos 2 a 5 e no Dia 1 de cada outro ciclo do Ciclo 6 ao

24.

[00718] Durante o escalonamento da dose, a decisão de avaliar sujeitos adicionais dentro de uma coorte de dose, o próximo nível de dose mais alto, níveis de dose intermediários, um intervalo de dosagem alternado ou declarar um MTD será determinada, com base no modelo de regressão de logística Bayesiana, dados de segurança clínica e laboratorial (dados de Toxicidade Limitadora de Dose [DLT] e dados de segurança não DLT), PK, PD e ADA para um determinado nível de dose. A frequência da dosagem de SIRPAB-11-K322A pode ser reduzida com base na revisão de PK e/ou PD de um determinado nível de dose. Se a frequência da dose for reduzida, a intensidade total da dose da coorte subsequente não excederá 3 vezes.

[00719] Na Parte A, após a primeira dose ser administrada em qualquer coorte, os sujeitos em cada coorte devem ser observados por pelo menos 28 dias (Ciclo 1, Dias 1 a 28, janela DLT) antes que a próxima dose mais alta, a coorte de dose especificada pelo protocolo possa começar. Para os dois primeiros sujeitos, um intervalo de uma semana entre o sujeito de dosagem inicial e subsequentemente inscrito será empregado para observar as toxicidades agudas. Após os primeiros dois sujeitos, não mais do que um sujeito por dia será inscrito em uma determinada coorte de escalonamento de dose.

[00720] Em sujeitos que recebem monoterapia SIRPAB-11-K322A (Parte A, Estágio 1), um sujeito avaliável para DLT é definido como aquele que: •Recebeu pelo menos 3 de 4 doses completas de SIRPAB-11-K322A durante o Ciclo 1, Dias 1 a 28 (dosagem QW) (ou pelo menos 75% da intensidade de dose total planejada do Ciclo 1) sem experimentar um DLT, ou •Experimentou um DLT após receber pelo menos uma dose de SIRPAB-11- K322A ou fração do mesmo durante o Ciclo 1, Dias 1 a 28.

[00721] Em indivíduos recebendo SIRPAB-11-K322A em combinação com cetuximabe (Parte A, Estágio 2) ou rituximabe (Parte A, Estágio 3), um indivíduo avaliável para DLT é definido como aquele que: •Recebeu pelo menos 3 de 4 doses completas de cetuximabe ou rituximabe e pelo menos 3 de 4 doses completas de SIRPAB-11-K322A durante o Ciclo 1, Dias 1 a 28 (ou pelo menos 75% da intensidade de dose total planejada do Ciclo 1 de cetuximabe, rituximabe e SIRPAB-11-K322A) sem experimentar um DLT, ou •Experimentou um DLT após receber pelo menos uma dose ou fração do mesmo SIRPAB-11-K322A durante o Ciclo 1, Dias 1 a 28.

[00722] Os sujeitos que não podem ser avaliados para DLT serão substituídos. Sujeitos adicionais em qualquer coorte podem ser inscritos para melhor caracterizar PK, PD ou MTD de acordo com o BLRM.

[00723] Após a conclusão do escalonamento da dose (Parte A), coortes selecionadas de até aproximadamente 20 (tumores sólidos, linfoma folicular) ou 30 (DLBCL) sujeitos com eficácia avaliável por coorte receberão SIRPAB-11- K322A em combinação com cetuximabe (Parte B) ou rituximabe (Parte C). A expansão pode ocorrer nos MTDs estabelecidos nos escalonamentos de dose de combinação (Parte A, Estágios 2 e 3) e/ou em doses mais baixas, ou em um esquema de dosagem tolerável alternativo, com base na revisão dos dados de segurança, PK, PD e ADA.

[00724] As coortes da Parte B podem incluir indivíduos com CRC avançado e irressecável (mutante KRAS, NRAS ou BRAF), CRC (KRAS, NRAS, ou BRAF do tipo selvagem), SCCHN e/ou tumores sólidos avançados. Todos os sujeitos com CRC devem ter determinação do status do gene tumoral para mutações RAS (KRAS e NRAS) e BRAF (V600E) (individualmente ou como parte do painel de sequenciamento de próxima geração). As mutações NRAS e KRAS referem-se a certas mutações pontuais somáticas. O teste de mutações KRAS, NRAS e BRAF nos Estados Unidos deve ser realizado apenas em laboratórios certificados pelas emendas de melhoria de laboratório clínico de 1988 (CLIA-88), qualificados para realizar testes de laboratório clínico de alta complexidade (patologia molecular). O status de mutação será confirmado após a inscrição do sujeito por meio de testes de laboratório central.

[00725] As coortes de expansão da Parte C podem incluir DLBCL recidivante e/ou refratário, não especificado de outra forma (NOS) e linfoma folicular recidivante e/ou refratário.

[00726] O estudo será conduzido em conformidade com a Conferência Internacional sobre Harmonização (ICH) de Boas Práticas Clínicas (GCPs).

5.11.3 População do Estudo

[00727] Sujeitos (homens ou mulheres) ≥ 18 anos de idade, com cânceres sólidos avançados, incluindo CRC avançado, SCCHN avançado e LNH positivo para CD20 que progrediram (ou não foram capazes de tolerar devido a comorbidades médicas ou toxicidade inaceitável) anticâncer padrão terapia, ou para quem não existe outra terapia convencional aprovada, serão inscritos no estudo.

[00728] O estudo inscreverá até 230 sujeitos com cânceres sólidos e hematológicos avançados. Na Parte A, aproximadamente 100 sujeitos (incluindo coortes de escalonamento de dose nos Estágios 1, 2 e 3 de aproximadamente 3 a 6 sujeitos avaliáveis cada um serão inscritos. Na fase de expansão da Parte B, até 20 indivíduos em até 4 coortes podem ser inscritos (até aproximadamente

80 sujeitos no total). Na fase de expansão da Parte C, coortes de até 20 sujeitos com FL e até 30 sujeitos com DLBCL podem ser inscritos (até aproximadamente 50 sujeitos no total).

5.11.4 Duração do Estudo

[00729] A inscrição completa deve levar aproximadamente 30 meses para ser concluída (18 meses para a Parte A e 12 meses para as Partes B e C). A conclusão do tratamento ativo e do acompanhamento pós-tratamento devem levar de 30 a 36 meses adicionais. Espera-se que o estudo todo prossiga por aproximadamente 66 meses.

[00730] O Fim do Ensaio é definido como a data da última visita do último sujeito para completar o acompanhamento pós-tratamento ou a data de recebimento do último ponto de dados do último sujeito que é necessário para as análises primária, secundária e/ou exploratória, como pré-especificado no protocolo, aquele que for mais recente.

5.11.5 Tratamentos do Estudo

[00731] O produto sob investigação (IP), SIRPAB-11-K322A, será fornecido para administração IV.

[00732] Para sujeitos que apresentam reações relacionadas à infusão (IRR) com SIRPAB-11-K322A, tratamento, pré-medicação (por exemplo, um antipirético, um anti-histamínico ou um corticosteroide) serão necessários com a dosagem subsequente. Para sujeitos que recebem cetuximabe ou rituximabe, os pré-medicamentos não precisam ser repetidos antes da dosagem de SIRPAB- 11-K322A. O tratamento com SIRPAB-11-K322A continuará até a progressão da doença clinicamente significativa, toxicidade inaceitável ou decisão do sujeito/investigador de descontinuar.

[00733] Para sujeitos que recebem cetuximabe em combinação com SIRPAB-11-K322A, cetuximabe será administrado no Dia 1 do Ciclo 1 (250 ou 400 mg/m2 IV como uma infusão de 120 minutos) e semanalmente depois (150 ou 250 mg/m2 IV QW infundido mais de 60 minutos). Os sujeitos receberão infusão de cetuximabe antes de iniciar a infusão de SIRPAB-11-K322A nos dias que receberam ambos os tratamentos. Os sujeitos que recebem cetuximabe devem receber pré-medicação com um antagonista H1 (como 50 mg de difenidramina IV) 30 a 60 minutos antes da primeira dose. A pré-medicação adicional, como um corticosteroide, pode ser administrada de acordo com o padrão institucional de tratamento e as informações do produto cetuximabe do país. Para sujeitos com histórico de IRR de Grau 2 com infusão anterior de cetuximabe, é recomendada a pré-medicação com corticosteroides (por exemplo, dexametasona 10 mg ou equivalente). O pré-medicamento deve ser administrada para infusões de cetuximabe subsequentes com base no julgamento clínico e na presença/gravidade de IRRs anteriores. Para sujeitos que apresentam IRRs de Grau 1 ou 2 e IRRs não graves de Grau 3, a taxa de infusão de cetuximabe deve ser reduzida em 50%. Para reações graves à perfusão, que requeiram intervenção médica e/ou hospitalização, o cetuximabe deve ser descontinuado imediata e definitivamente. As reduções de dose para erupção acneiforme de Grau 3 ou 4 são permitidas de acordo com a bula do cetuximabe. Consulte o rótulo Erbitux aprovado pelo FDA, referência ID 4258364, revisado em maio de 2018, Seção 2.4, em accessdata.fda.gov/drugsatfda_docs/label/2018/125084Orig1s268lbl.pdf.

[00734] Para sujeitos que receberam rituximabe em combinação com SIRPAB-11-K322A, rituximabe será administrado (por bula de Rituximabe (consulte o rótulo Rituxan aprovado pelo FDA, referência ID 4274293, revisado em junho de 2018, em accessdata.fda.gov/drugsatfda_docs/label/2018/103705s5450lbl.pdf) e prática padrão institucional) a uma dose fixa de 375 mg/m2 IV nos Dias 1, 8, 15 e 22 do

Ciclo 1, Dia 1 dos Ciclos 2 a 5 e Dia 1 dos Ciclos 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22 e

24. Os sujeitos receberão infusão de rituximabe antes de iniciar a infusão de SIRPAB-11-K322A nos dias que receberam ambos os tratamentos. Os sujeitos que recebem rituximabe devem ser medicados com um antipirético (por exemplo, paracetamol 650 - 1000 mg) e um anti-histamínico (por exemplo, difenidramina 25 - 50 mg ou anti-histamínico não sedativo equivalente, como loratadina ou cetirizina 10 mg) antes das infusões de rituximabe.

[00735] Nas expansões da Parte B e C, com base nas avaliações de segurança, PK, PD e ADA do agente único SIRPAB-11-K322A e escalonamentos de dose de combinação, os sujeitos podem receber SIRPAB-11-K322A no MTD e/ou em uma dose mais baixa e em um esquema de dosagem QW, Q2W ou alternativo.

5.11.6 Visão Geral das Principais Avaliações de Eficácia

[00736] A variável de eficácia primária é a taxa de resposta. Os sujeitos serão avaliados quanto à eficácia após os ciclos 2, 4 e 6; e depois a cada 3 ciclos. Todos os sujeitos tratados serão incluídos nas análises de eficácia. Para tumores sólidos, a avaliação será baseada nos Critérios de Avaliação de Resposta em Tumores Sólidos (RECIST 1.1) (Eisenhauer EA, et al. Eur J Cancer 2009; 45 (2): 228-247) como o método primário, bem como RECIST 1.1 modificado para terapêutica de base imunológica (iRECIST) (Seymour L, et al. Lancet Oncol. 2017; 18: e143 – e152) como um método complementar. Para NHL, os "Critérios de Lugano", que incorporam os Critérios de Resposta do Grupo de Trabalho Internacional (IWG) para NHL (Cheson BD, et al. J Clin Oncol. 2014; 32 (27): 3059- 3068) e Critérios de Deauville para fluorodeoxiglicose-pósitron interpretação de tomografia por emissão (PET FDG) (Itti E, et al. Eur J Nucl Med Mol Imaging. setembro de 2013; 40 (9): 1312-20; Meignan M, et al. Leuk Lymphoma. janeiro de 2014; 55 (1) : 31-7) serão utilizados para avaliações de eficácia.

[00737] Uma análise descritiva da evidência da atividade antitumoral será fornecida com base em avaliações clínicas, laboratoriais e radiográficas, que incluem avaliação da lesão-alvo, lesão não-alvo, nova lesão e resposta geral. As respostas confirmadas e não confirmadas pelos critérios RECIST 1.1 e Lugano serão avaliadas.

[00738] A variável de eficácia do foco para a Parte A será a taxa de resposta objetiva (ORR). As variáveis de eficácia adicionais a serem analisadas incluem o tempo de resposta e a duração da resposta.

[00739] Para a Parte B e Parte C, as variáveis de eficácia a serem analisadas incluem ORR, tempo de resposta, duração da resposta, sobrevida livre de progressão (PFS) e sobrevida global (OS).

[00740] Se o tratamento for interrompido por outras razões que não a progressão da doença, início de uma nova terapia anticâncer ou retirada do consentimento de todo o estudo, os sujeitos serão solicitados a continuar as avaliações do tumor de acordo com o cronograma de avaliação do tumor especificado até a progressão da doença e/ou início de novas terapias anticâncer sistêmicas. O status de sobrevida será determinado após a progressão da doença, aproximadamente a cada 12 semanas por até 1 ano na Parte B e até 2 anos na Parte C. Além disso, o uso de terapias anticâncer subsequentes, incluindo transplante de células-tronco, será coletado após a progressão da doença.

[00741] As variáveis de eficácia irão amadurecer quando o último sujeito em cada coorte tiver se retirado do estudo ou completado 6 ciclos.

[00742] A variável de eficácia primária para a Parte A é ORR. Para a Parte B e Parte C, as variáveis de eficácia a serem analisadas incluem ORR, tempo de resposta, duração da resposta, PFS e OS. Estimativas de pontos e intervalos de confiança de 95% nos dois lados da ORR serão relatados. Para os desfechos de tempo até o evento, análises de sobrevida Kaplan-Meier serão realizadas.

5.11.7 Critérios de Inclusão

[00743] Os sujeitos devem atender os seguintes critérios para serem inscritos no estudo:

• Na Parte A, Estágio 2, câncer colorretal não ressecável avançado ou carcinoma de células escamosas da cabeça e pescoço. • Na Parte A, Estágio 3, linfoma não Hodgkin positivo para CD20 (incluindo DLBCL, Linfoma folicular de Grau 1, 2 e 3a, linfoma de zona marginal e linfoma de células do manto) • Na Parte B, − Coorte 1: câncer colorretal não ressecável avançado com documentação molecular de uma mutação em RAS (KRAS ou NRAS) ou BRAF (V600E). As mutações NRAS e KRAS referem-se a certas mutações pontuais somáticas. − Coorte 2: câncer colorretal não ressecável avançado com RAS do tipo selvagem (sem as mesmas mutações pontuais somáticas NRAS que as incluídas na coorte 1 e sem as mesmas mutações pontuais somáticas KRAS que as incluídas na coorte 1) e BRAF WT para V600E. − Coorte 3: carcinoma espinocelular não ressecável avançado de cabeça e pescoço. − Coorte 4: tumores sólidos não ressecáveis avançados. • Na Parte C − Coorte 1: DLBCL, não especificado de outra forma (NOS; inclui DLBCL transformado de histologia indolente, linfoma de células B de alto grau com histologia de DLBCL, linfoma de células B mediastinal primário e linfoma folicular de Grau 3b) − Coorte 2: linfoma folicular (grau 1, 2 e 3a)

5. Para os sujeitos que participam das coortes intensivas de PD da Parte A, Parte B e Parte C, o sujeito consente e tem o tumor acessível para biópsias de tumor pareadas durante a triagem e o Ciclo 1.

6. Os sujeitos com tumores sólidos devem ter pelo menos um local de doença mensurável, conforme determinado pelo RECIST v1.1. Sujeitos com NHL devem ter doença mensurável bidimensionalmente em imagem transversal por TC ou MRI, conforme definido pelos critérios de Lugano/IWG (Cheson BD, et al. J Clin Oncol. 2014; 32 (27): 3059-3068).

7. O sujeito tem um ECOG PS de 0 ou 1.

• Plaquetas (plt) ≥ 75 x 109/L sem transfusão por 7 dias.

• Aspartato aminotransferase (AST / SGOT) e alanina aminotransferase (ALT / SGPT) ≤ 2,5 x Limite Superior do Normal (ULN) ou ≤ 5,0 x ULN se houver tumor de fígado. • Bilirrubina sérica ≤ 1,5 x ULN.

• Depuração de creatinina sérica estimada ≥ 45 mL/min usando a equação de Cockcroft-Gault ou depuração de creatinina medida usando coleta de urina de 24 horas. • Razão normalizada internacional (INR) < 1,5 x ULN e tempo de tromboplastina parcial (PTT) < 1,5 x ULN.

9. Mulheres com potencial para engravidar (FCBP) devem: • Comprometer-se com a verdadeira abstinência de contato heterossexual (que deve ser revisado mensalmente e a fonte documentada) ou concorda em usar e ser capaz de cumprir, pelo menos, dois métodos anticoncepcionais eficazes (oral, injetável ou anticoncepcional hormonal implantável; tubário ligadura; dispositivo intrauterino; anticoncepcional de barreira com espermicida; ou parceiro vasectomizado), um dos quais deve ser uma barreira, para assinar a CIF, durante a participação no estudo, durante interrupções de dose e por até 56 dias após a última dose de SIRPAB-11-K322A; e • Realizar dois testes de gravidez quantitativos negativos no soro ou na urina antes de iniciar o SIRPAB-11-K322A. Ela deve concordar com o teste de gravidez contínuo durante o curso do estudo e 56 dias após o final do tratamento do estudo. Isso se aplica mesmo que o sujeito pratique a verdadeira abstinência de contato heterossexual. O sujeito não pode receber SIRPAB-11-K322A até que o resultado do teste de gravidez seja negativo; e • Tenha um teste de gravidez de soro quantitativo negativo (sensibilidade de pelo menos 25 mIU/mL) na Triagem. • Ter um teste de gravidez sérico ou urinário negativo 72 horas antes do

Ciclo 1, Dia -1 do tratamento do estudo, e dentro de 72 horas antes do Dia -1 de cada ciclo subsequente (observe que o teste de gravidez de soro de triagem pode ser usado como o teste anterior ao Dia -1 do tratamento do estudo se for realizado nas 72 horas anteriores). Um teste de gravidez de soro ou urina também deve ser realizado no final do estudo para cada FCBP; e • Evitar conceber por 56 dias após a última dose de SIRPAB-11-K322A.

• Mulheres com potencial para engravidar que recebem cetuximabe (Parte A, Fase 2 e Parte B) devem usar métodos anticoncepcionais eficazes durante o tratamento com cetuximabe e por 2 meses após a última dose de cetuximabe. • Mulheres com potencial para engravidar que recebem rituximabe (Parte A, Estágio 3 e Parte C) devem usar métodos anticoncepcionais eficazes durante o tratamento com rituximabe e por 12 meses após a última dose de rituximabe.

5.11.8 Critérios de Exclusão

[00744] A presença de qualquer um dos seguintes itens excluirá o sujeito da inscrição:

2. Linfomas de alto grau (Burkitt ou linfoblástico).

3. O sujeito tem câncer com envolvimento sintomático do sistema nervoso central (SNC).

4. O sujeito está em terapia imunossupressora sistêmica crônica ou corticosteroides (por exemplo, prednisona ou equivalente excedendo uma dose total de 140 mg nos últimos 14 dias). Injeções intranasais, inaladas, tópicas ou locais de corticosteroides (por exemplo, injeção intra-articular) ou esteroides como pré-medicação para reações de hipersensibilidade (por exemplo, pré- medicação de tomografia computadorizada [TC]) são exceções a este critério.

5. Sujeitos com histórico de insuficiência cardíaca congestiva (ICC) classe III ou IV ou cardiomiopatia não isquêmica grave, angina instável, infarto do miocárdio ou arritmia ventricular nos 6 meses anteriores.

6. O sujeito teve um tratamento prévio direcionado ao câncer sistêmico ou modalidades de investigação ≤ 5 meias-vidas ou 4 semanas antes de iniciar SIRPAB-11-K322A, o que for mais curto.

7. O sujeito recebeu tratamento com terapia CAR-T ≤ 4 semanas antes de iniciar SIRPAB-11-K322A.

8. O sujeito foi submetido a uma grande cirurgia ≤ 2 semanas antes de iniciar SIRPAB-11-K322A. Os sujeitos devem ter se recuperado de quaisquer efeitos clinicamente significativos da cirurgia recente.

9. O sujeito é uma mulher grávida ou que está amamentando.

10. O sujeito possui infecção pelo vírus da imunodeficiência humana (HIV) conhecida.

11. Infecção crônica ativa pela hepatite B ou C (HBV/HCV). a. Sujeitos com NHL recebendo rituximabe sem infecção ativa por hepatite B (por exemplo, HBsAg negativo, anti-HBc positivo) que estão sob profilaxia adequada contra a reativação do VHB são elegíveis.

12. Transplante autólogo prévio de células-tronco ≤ 3 meses antes do início do SIRPAB-11-K322A.

13. Transplante de células-tronco alogênico prévio com condicionamento de intensidade padrão ou reduzida ≤ 6 meses antes do início do SIRPAB-11-K322A.

14. Tratamento em andamento com dosagem terapêutica crônica de anticoagulantes (por exemplo, varfarina, heparina de baixo peso molecular, inibidores do Fator Xa).

15. Histórico de anemia hemolítica autoimune ou trombocitopenia autoimune.

16. Histórico de segundos cânceres simultâneos que requerem tratamento sistêmico ativo e contínuo.

17. O sujeito possui qualquer condição médica significativa, anormalidade laboratorial ou doença psiquiátrica que impeça o sujeito de participar do estudo.

18. O sujeito possui qualquer condição, incluindo a presença de anormalidades laboratoriais, que coloque o sujeito em risco inaceitável caso participasse do estudo.

19. O sujeito possui qualquer condição que confunda a capacidade de interpretar dados do estudo.

20. Para sujeitos que recebem cetuximabe, histórico conhecido de intolerância ao cetuximabe, incluindo reações à infusão de Grau 3 ou 4; erupção cutânea acneiforme grave e persistente que requer a interrupção do cetuximabe; ou doença pulmonar intersticial.

21. Para sujeitos com tumores sólidos que participam de avaliações de ressonância magnética com ferumoxitol nas coortes intensivas de PD da Parte A: • Histórico de reação alérgica a qualquer produto de ferro intravenoso.

5.12 Exemplo 12: Estudos Adicionais sobre a Atividade de Anticorpos Anti-SIRPα em Combinação com Rituximabe

[00745] Em um segundo estudo semelhante ao descrito na Seção 5.9.3, os efeitos fagocíticos de SIRPAB-11-K322A (0,001 nM a 20 nM) com ou sem rituximabe (0,67 nM ou 0,1 nM) foram avaliados usando 4 linhagens celulares NHL DLBCL:OCI-LY3 (da Coleção Alemã de Microrganismos e Culturas de Células (DSMZ)), RIVA (da DSMZ), Karpas 422 (da DSMZ) e Pfeiffer (da American Type Culture Collection (ATCC)). Duas das linhagens, OCI-LY3 e RIVA, são semelhantes a células B ativadas; as outras duas linhagens, Pfeiffer e Karpas, 422 são semelhantes a células B do centro germinativo.

[00746] Em resumo, a expressão de superfície de SIRPα, CD47 e CD20 foi medida por citometria de fluxo em todas as linhas celulares com SIRPAB-11- IgG4PE marcado com Alexa Fluor 647, rituximabe e anticorpo anti-CD47 hIgG1 (TPP-23). O IgG4PE anti-RSV marcado com Alexa Fluor 647 foi usado como controle negativo. As células Pfeiffer deram positivas para SIRPα; As células OCI- LY3, RIVA e Karpas 422 não exibiram coloração de SIRPα (FIG. 16A). Todas as quatro linhagens deram positivas para CD20 e CD47 com RIVA mostrando os níveis mais altos de coloração (FIG. 16B e 16C).

[00747] Para o ensaio de fagocitose, células tumorais marcadas com diacetato de carboxifluoresceína succinimidil éster foram opsonizadas com rituximabe ou deixadas sem tratamento, adicionadas a poços contendo macrófagos diferenciados de monócitos de doadores humanos (n = 4),

incubados com SIRPAB-11-K322A ou anticorpos de controle por 3 horas, marcado com anti-CD14-aloficocianina e quantificado usando imagens de alta resolução. Os níveis de fagocitose foram medidos e comparados com SIRPAB-11- K322A ou tratamento com rituximabe sozinho em 4 macrófagos de doadores normais. O IgG1K322A anti-RSV foi usado como controle negativo.

[00748] A fagocitose do macrófago foi maior quando SIRPAB-11-K322A foi adicionado em combinação com rituximabe (concentração de rituximabe abaixo do ideal predeterminado de 0,1 nM para OCI-LY3 e RIVA ou 0,67 nM para Pfeiffer e Karpas 422) em comparação com o agente único SIRPAB-11-K322A todas as linhagens celulares testadas (FIGS. 17A-17C e FIGS. 18A-18D). Quando testado contra células OCI-LY3 ou RIVA, SIRPAB-11-K322A em combinação com fagocitose intensificada com rituximabe 0,1 nM em todos os 4 macrófagos doadores em comparação com o tratamento com SIRPAB-11-K322A sozinho (FIG. 17A-17B, dados exemplificativos de um doador mostrado). Quando testado em combinação em células Karpas 422, SIRPAB-11-K322A com rituximabe 0,67 nM aumentou a fagocitose em 3 de 4 doadores (FIG. 17C, dados exemplificativos de um doador mostrado). Quando testado contra células Pfeiffer, SIRPAB-11- K322A sozinho demonstrou atividade fagocítica de macrófagos para pelo menos 3 doadores, com o EC50 calculado variando de 0,60 nM a 2,90 nM (FIGS. 18A- 18D). Nesta linhagem celular, a combinação de SIRPAB-11-K322A com rituximabe 0,67 nM aumentou a fagocitose em 3 de 4 macrófagos doadores (FIGS. 18A-18D). A atividade de combinação não foi estatisticamente significativa em relação ao tratamento com SIRPAB-11-K322A sozinho para um doador onde a atividade do agente único foi observada (FIG. 18A).

[00749] Em todas as linhagens celulares e doadores testados, os valores de EC50 de fagocitose de macrófagos para SIRPAB-11-K322A em combinação com rituximabe (0,1 nM ou 0,67 nM) variaram de 0,0208 nM a 1,17 nM, e foram consistentemente menores do que os valores de EC50 para SIRPAB-11 -K322A sozinho (p <0,0001 a 0,234). Estes resultados demonstram o efeito combinatório de SIRPAB-11-K322A e rituximabe na mediação do aumento da atividade de fagocitose de macrófagos em comparação com SIRPAB-11-K322A.

5.13 Exemplo 13: Ocupância do receptor de SIRPAB-11-K322A do ensaio clínico de Fase 1

[00750] SIRPAB-11-K322A liga-se à SIRPα em monócitos circulantes, neutrófilos e células dendríticas e algumas células tumorais. Uma avaliação clínica de agentes biológicos direcionados a antígenos celulares é a ocupância do receptor (RO), para demonstrar que o fármaco está se ligando ao alvo apropriado. Os ensaios de ocupância do receptor podem fornecer dados valiosos que podem ser usados para gerar modelos matemáticos do nível de ocupância previsto para levar a um efeito biológico. Um ensaio RO foi validado para SIRPα para permitir a determinação precisa da ligação de SIRPAB-11-K322A à SIRPα em monócitos, neutrófilos e células dendríticas em sangue total retirado de pacientes. Este ensaio utiliza um anticorpo anti-SIRPα não competitivo que pode ser usado para identificar moléculas SIRPα ligadas e não ligadas por SIRPAB-11- K322A em células que expressam SIRPα (FIG. 19A). O objetivo é quantificar o engajamento e a saturação do alvo para cada grupo de dose do SIRPAB-11- K322A.

[00751] Em resumo, o sangue total foi incubado com anticorpos marcados com fluorescência para identificar subconjuntos de leucócitos-chave, bem como dois anticorpos específicos para SIRPα, um que se liga na presença de SIRPAB- 11-K322A (não competitivo) marcado com alexa fluor 488, e um que apenas se liga na ausência de SIRPAB-11-K322A (competitivo) marcado com alexa fluor

647. Os níveis de pigmentação dos dois anticorpos SIRPα são calculados para subgrupos de leucócitos e, a partir disso, os níveis de ocupância do receptor por

SIRPAB-11-K322A podem ser calculados usando esta equação: % SIRPα RO = 100%* ((1-(competitivo AF647 real/pré-dose de AF647 competitivo) ÷ (AF488 não competitivo/pré-dose de AF488 não competitivo)) (FIGS. 19A-19B). A ocupância do receptor quase completa foi alcançada em monócitos, neutrófilos e células dendríticas 24 horas e 48 horas após a dose em doses de 0,3 mg/kg e 1 mg/kg, conforme mostrado na Tabela 26 e Tabela 27. Tabela 26. A porcentagem de ocupância do receptor representativa foi medida 24 horas após a dose com SIRPAB-11-K322A de pacientes tratados com coortes de dose de 0,3 mg/kg e 1 mg/kg para o estudo clínico de fase 1. Paciente Dose Monócitos Neutrófilos Células (mg/kg) dendríticas 1 0,3 98 94 96 2 0,3 99 97 100 3 1 100 98 100 4 1 100 95 90 5 1 98 85 98 Tabela 27. A porcentagem de ocupância do receptor representativa foi medida 48 horas após a dose com SIRPAB-11-K322A de pacientes tratados com coortes de dose de 0,3 mg/kg e 1 mg/kg para o estudo clínico de fase 1. (Observação: os dados de 48 horas para o paciente 5 não estão disponíveis) Paciente Dose Monócitos Neutrófilos Células (mg/kg) dendríticas 1 0,3 87 83 79 2 0,3 93 93 94 3 1 99 95 99 4 1 100 82 87

5.14 Exemplo 14: Porcentagem de células T, células B, monócitos e células natural killer pós-dose com SIRPAB-11-K322A do ensaio clínico de fase 1

[00752] Os leucócitos humanos podem ser divididos em quatro subconjuntos principais de populações com base em sua função biológica e expressão de antígeno de superfície celular: linfócitos T (CD3+), linfócitos B (CD19+), monócitos (CD14) e linfócitos NK (CD16+CD56+). O reagente BD Multitest TBNK (BD Biosciences, San Jose, CA EUA), que foi validado para também quantificar monócitos, foi usado para determinar a porcentagem desses subconjuntos de células após a dose com SIRPAB-11-K322A. SIRPAB-11- K322A foi dosado QW (semanalmente).

[00753] As porcentagens representativas de subconjuntos de leucócitos em pacientes tratados com SIRPAB-11-K322A no Dia 1 antes da dose e no Dia 29 após a dose de 0,3 mg/kg são mostradas na Tabela 28 abaixo. Tabela 28. Porcentagens representativas de subconjuntos de leucócitos em pacientes tratados com SIRPAB-11-K322A a uma dose de 0,3 mg/ml (porcentagem de células CD45 + (linfócitos)). Células T Células B CD3– Monócitos CD3+ CD19+ (CD16+CD56)+ CD14+ Células Natural Killer Dia 1 Pré-dose 65,9 21,4 10,1 7,6 Dia 29 pós- 64,9 19,4 13,9 9,3 dose

[00754] As porcentagens representativas de subconjuntos de leucócitos em pacientes tratados com SIRPAB-11-K322A no Dia 1 antes da dose e no Dia 29 após a dose de 1 mg/kg são mostradas na Tabela 29. Tabela 29: Porcentagens representativas de subconjuntos de leucócitos em pacientes tratados com SIRPAB-11-K322A a uma dose de 1 mg/ml (porcentagem de células CD45 + (linfócitos)). Células T Células B CD3– Monócitos CD3+ CD19+ (CD16+CD56)+ CD14+ Células Natural Killer Dia 1 Pré-dose 66,7 9,3 20,6 8,0 Dia 29 pós- 59,0 14,2 26,0 6,5 dose

[00755] Nenhuma mudança significativa nas porcentagens de subconjuntos de células foi observada após a dosagem de SIRPAB-11-K322A QW até um mês em pacientes tratados com uma dose de 0,3 mg/kg ou 1 mg/kg. As alterações observadas estavam dentro do desvio do ensaio e dentro do intervalo normal para sujeitos saudáveis. Estes dados clínicos demonstram o perfil de segurança superior do SIRPAB-11-K322A.

5.15 Exemplo 15: Comparação de anticorpos anti-SIRPα fornecidos neste documento e anticorpos anti-SIRPα de referência em sua ligação para SIRPα, SIRPβ e SIRPγ

[00756] A ligação de anticorpos anti-SIRPα e de controle aos antígenos SIRPα, SIRPβ e SIRPγ humanos foi determinada e comparada por ressonância plasmônica de superfície usando o instrumento Biacore T200. Os anticorpos comparados neste estudo incluem SIRPAB-11-K322A, SIRPAB-12-K322A, um anticorpo de referência SIRPα que tem uma cadeia leve de uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 224 e uma cadeia pesada de uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 225 (como ANTICORPO DE REFERÊNCIA neste Exemplo), e controle de isotipo-anticorpo K322A. Em resumo, SIRPAB-11-K322A, SIRPAB-11-K322A, ANTICORPO DE REFERÊNCIA e anticorpos de controle de isotipo -K322A foram capturados no canal 2 do chip Protein A Series S da GE Healthcare (Cat #: 29127556) a 0,5ug/mL. Os antígenos SIRα, SIRPβ e SIRγ humanos foram então injetados via microfluídica a uma taxa de 30 μL por minuto nos canais 1 e 2. O sinal de ressonância durante um intervalo de 300 segundos para o tempo de associação do antígeno e 300 segundos para o tempo de dissociação do antígeno em cada concentração de antígeno foi capturado, analisado e ajustado a um modelo de Langmuir 1: 1 usando o software Biacore BIAevaluation. As afinidades de ligação determinadas a partir das curvas ajustadas estão listadas na Tabela 30 abaixo. Conforme mostrado na Tabela 30, SIRPAB-11-K322A e SIRPAB-12-K322A têm afinidades de ligação superiores sobre o ANTICORPO DE REFERÊNCIA na ligação aos antígenos SIRPα, SIRPβ e SIRPγ humanos. Tabela 30: Afinidades de ligação (constante de equilíbrio, KD, em M) determinadas a partir dos estudos comparativos. hSIRPα –ECD (v1) hSIRPβ –ECD hSIRPγ –ECD SIRPAB-11-K322A 9,23×1011 3,80×10–10 6,32×10-11 SIRPAB-12-K322A 4,24×10–10 2,08×10–09 3,51×10–10

ANTICORPO DE 3,65×10–09 2,98×10–09 1,47×10–09

REFERÊNCIA ECD = domínio extracelular ANTICORPO DE REFERÊNCIA = o anticorpo anti-SIRPα de referência que possui uma cadeia leve de uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 224 e uma cadeia pesada de uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 225.

6. LISTAGEM DE SEQUÊNCIAS

[00757] O presente relatório descritivo está sendo depositado com uma cópia em forma legível por computador (CRF) da Listagem de Sequência. A CRF intitulada 10624-442-228_SEQ_LISTING.txt, que foi criada em 20 de setembro de 2019 e tem 298.057 bytes de tamanho, é idêntica à cópia em papel da Listagem de Sequência e está incorporada neste documento para referência, em sua totalidade.

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que: (a) se liga a um epítopo de SIRPα humana reconhecido por um anticorpo compreendendo uma região variável de cadeia leve possuindo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:67 e uma região variável de cadeia pesada possuindo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:80; ou (b) compete pela ligação a SIRPα humana com um anticorpo compreendendo uma região variável de cadeia leve tendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:67 e uma região variável de cadeia pesada tendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:80.

2. Um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, em que se liga à SIRPα, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende: (a) uma região variável de cadeia leve (VL) que compreende a região determinante de complementaridade VL 1 (CDR1), VL CDR2 e VL CDR3 de qualquer um dos anticorpos SIRPAB-11, SIRPAB-12, SIRPAB-1, SIRPAB-2, SIRPAB- 3, SIRPAB -4, SIRPAB-5, SIRPAB-6, SIRPAB-7, SIR PAB-8, SIRPAB-9, SIRPAB-10 ou SIRPAB-13, conforme estabelecido na Tabela 1; e/ou (b) uma região variável de cadeia pesada (VH) que compreende a região determinante de complementaridade VH 1 (CDR1), VH CDR2 e VH CDR3 de qualquer um dos anticorpos SIRPAB-11, SIRPAB-12, SIRPAB-1, SIRPAB-2, SIRPAB- 3, SIRPAB -4, SIRPAB-5, SIRPAB-6, SIRPAB-7, SIRPAB-8, SIRPAB-9, SIRPAB-10 ou SIRPAB-13, conforme estabelecido na Tabela 2.

3. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da reivindicação 2, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende: (a) uma região variável de cadeia leve (VL) que compreende ainda VL framework 1 (FR1), VL FR2, VL FR3 e VL FR4 de qualquer um dos anticorpos SIRPAB-11, SIRPAB-12, SIRPAB-1, SIRPAB-2, SIRPAB-3, SIRPAB -4, SIRPAB-5, SIRPAB-6, SIRPAB-7, SIRPAB-8, SIRPAB-9, SIRPAB-10 ou SIRPAB-13, conforme estabelecido na Tabela 3; e/ou (b) uma região variável de cadeia pesada (VH) que compreende ainda VH framework 1 (FR1), VH FR2, VH FR3 e VH FR4 de qualquer um dos anticorpos SIRPAB-11, SIRPAB-12, SIRPAB-1, SIRPAB-2, SIRPAB-3, SIRPAB -4, SIRPAB-5, SIRPAB-6, SIRPAB-7, SIRPAB-8, SIRPAB-9, SIRPAB-10 ou SIRPAB-13, conforme estabelecido na Tabela 4.

4. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da reivindicação 2, em que as VL CDR1, VL CDR2 e VL CDR3 compreendem sequências de aminoácidos de SEQ ID NOs: 62, 63 e 65, respectivamente, e as VH CDR1, VH CDR2 e VH CDR3 compreendem sequências de aminoácidos de SEQ ID NOs:78, 69 e 57, respectivamente.

5. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da reivindicação 2, em que as VL CDR1, VL CDR2 e VL CDR3 compreendem sequências de aminoácidos de SEQ ID NOs:62, 63 e 65, respectivamente, e as VH CDR1, VH CDR2 e VH CDR3 compreendem sequências de aminoácidos de SEQ ID NOs:82, 83 e 57, respectivamente.

6. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da reivindicação 2, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende uma VL compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:18.

7. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da reivindicação 2, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende uma VL compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:46.

8. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da reivindicação 2, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende uma VL compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:67.

9. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1-3 e 6-8, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende uma VH compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:9.

10. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1-3 e 6-8, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende uma VH compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:22.

11. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1-3 e 6-8, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende uma VH compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:27.

12. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1-3 e 6-8, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende uma VH compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:32.

13. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1-3 e 6-8, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende uma VH compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:36.

14. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1-3 e 6-8, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende uma VH compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:42.

15. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1-3 e 6-8, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende uma VH compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:50.

16. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1-3 e 6-8, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende uma VH compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:60.

17. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1-3 e 6-8, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende uma VH compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 71.

18. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1-3 e 6-8, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende uma VH compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:76.

19. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1-3 e 6-8, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende uma VH compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:80.

20. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1-3 e 6-8, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende uma VH compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:85.

21. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1-3 e 6-8, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende uma VH compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:90.

22. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da reivindicação 2, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende: (a) uma VL compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:18; e (b) uma VH compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:9.

23. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da reivindicação 2, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende: (a) uma VL compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:18; e (b) uma VH compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:22.

24. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da reivindicação 2, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende: (a) uma VL compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:18; e (b) uma VH compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:27.

25. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da reivindicação 2, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende: (a) uma VL compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID

NO:18; e (b) uma VH compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:32.

26. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da reivindicação 2, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende: (a) uma VL compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:18; e (b) uma VH compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:36.

27. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da reivindicação 2, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende: (a) uma VL compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:46; e (b) uma VH compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:42.

28. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da reivindicação 2, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende: (a) uma VL compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:46; e (b) uma VH compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:50.

29. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da reivindicação 2, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende:

(a) uma VL compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:67; e (b) uma VH compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:60.

30. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da reivindicação 2, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende: (a) uma VL compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:67; e (b) uma VH compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:71.

31. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da reivindicação 2, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende: (a) uma VL compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:67; e (b) uma VH compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:76.

32. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da reivindicação 2, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende: (a) uma VL compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:67; e (b) uma VH compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:80.

33. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da reivindicação 2, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende: (a) uma VL compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:67; e (b) uma VH compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:85.

34. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da reivindicação 2, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende: (a) uma VL compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:67; e (b) uma VH compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:90.

35. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da reivindicação 2, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende: (a) uma VL que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 18, 46 e 67; e (b) uma VH que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 9, 22, 27, 32, 36, 42, 50, 60, 71, 76, 80, 85 e 90.

36. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1-35, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende uma região Fc da IgG1 humana ou uma mutante da mesma.

37. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1-36, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende uma região Fc da IgG1-K322A humana.

38. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1-35, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende uma região Fc da IgG1-AAS humana.

39. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1-35, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende uma região Fc da IgG4 humana ou uma mutante da mesma.

40. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1-35 e 39, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende uma região Fc da IgG4P humana.

41. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1-35 e 39, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende uma região Fc IgG4PE humana.

42. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1-35, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende uma região Fc da cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 144 e 155-159.

43. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1-42, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende ainda uma região constante de cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:211.

44. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1-35, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende: (a) uma região constante de cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:211; e (b) uma região Fc de cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 144 e 155 a 159.

45. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1-4, 8, 29-34 e 35, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende uma cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:143.

46. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1-4, 19, 32 e 35, em que o anticorpo ou anticorpo de ligação ao antígeno do mesmo compreende uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:142.

47. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1-4, 8, 19, 32 e 35, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende: (a) uma cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:143; e (b) uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:142.

48. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1-46, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende uma cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:200.

49. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1-46, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende uma cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:202.

50. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1-46, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende uma cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:143.

51. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1-46, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende uma cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:208.

52. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1-46, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende uma cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:209.

53. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1-46, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende uma cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:210.

54. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1-46, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:142.

55. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1-46, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:119.

56. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1-46, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:204.

57. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1-46, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:205.

58. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1-46, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:98.

59. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1-46, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:120.

60. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1-46, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:112.

61. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1-46, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:106.

62. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1-46, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:118.

63. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1-46, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:111.

64. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1-46, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:212.

65. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1-46, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:213.

66. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1-46, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:214.

67. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1-46, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:215.

68. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1-46, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:216.

69. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1-46, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:217.

70. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1-46, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:218.

71. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1-46, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:219.

72. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1-46, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:220.

73. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1-46, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:221.

74. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1-46, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:222.

75. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1-46, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:223.

76. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1-46, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:207.

77. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1-46, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:117.

78. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1-46, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:110.

79. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1-46, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:148.

80. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1-46, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende: (a) uma cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:200; e (b) uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:212.

81. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1-46, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende: (a) uma cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:200; e (b) uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:213.

82. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1-46, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende: (a) uma cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:200; e (b) uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:214.

83. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1-46, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende: (a) uma cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:200; e (b) uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:215.

84. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1-46, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende: (a) uma cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:200; e (b) uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:216.

85. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1-46, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende: (a) uma cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:202; e (b) uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:217.

86. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1-46, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende: (a) uma cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:202; e (b) uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:218.

87. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1-46, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende: (a) uma cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:143; e (b) uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:219.

88. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1-46, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende: (a) uma cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:143; e (b) uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:220.

89. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1-46, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende: (a) uma cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:143; e (b) uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:221.

90. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1-46, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende: (a) uma cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:143; e (b) uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:142.

91. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1-46, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende: (a) uma cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:143; e (b) uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:204.

92. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1-46, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende: (a) uma cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:143; e (b) uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:222.

93. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1-46, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende: (a) uma cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:200; e (b) uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos de

SEQ ID NO:223.

94. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1-46, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende: (a) uma cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:200; e (b) uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:207.

95. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1-46, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende: (a) uma cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:208; e (b) uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:117.

96. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1-46, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende: (a) uma cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:209; e (b) uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:110.

97. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1-46, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende: (a) uma cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:143; e

(b) uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:119.

98. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1-46, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende: (a) uma cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:143; e (b) uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:98.

99. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1-46, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende: (a) uma cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:143; e (b) uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:120.

100. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1-46, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende: (a) uma cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:143; e (b) uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:112.

101. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1-46, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende: (a) uma cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos de

SEQ ID NO:143; e (b) uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:205.

102. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1-46, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende: (a) uma cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:143; e (b) uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:106.

103. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1-46, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende: (a) uma cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:143; e (b) uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:118.

104. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1-46, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende: (a) uma cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:143; e (b) uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:111.

105. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1-46, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende:

(a) uma cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 143, 200, 202, 208, 209 e 210; e (b) uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 212, 213, 214, 215, 216, 217, 218, 219, 220, 221, 142, 204, 222, 223, 207, 117, 110, 148, 119, 98, 120, 112, 205, 106, 118 e 111.

106. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1-105, em que, quando ligado a SIRPα, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno se liga a pelo menos um dos resíduos 67-98 dentro de uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:146.

107. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da reivindicação 106, em que, quando ligado a SIRPα, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno se liga a pelo menos um dos resíduos 67-74 dentro de uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:146.

108. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da reivindicação 106, em que, quando ligado a SIRPα, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno se liga a pelo menos um dos resíduos 93-98 dentro de uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:146.

109. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1-105, em que, quando ligado a SIRPα, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno se liga a pelo menos um dos resíduos 30-93 dentro de uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:146.

110. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1-109, em que, quando ligado a SIRPα, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno se liga a pelo menos um resíduo selecionado do grupo consistindo em L30, I36, Q52, T67, R69, F74, K93, R95, K96 e S98 dentro de uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:146.

111. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da reivindicação 110, em que, quando ligado a SIRPα, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno se liga a L30 dentro de uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:146.

112. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da reivindicação 110, em que, quando ligado a SIRPα, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno se liga a I36 dentro de uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:146.

113. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da reivindicação 110, em que, quando ligado a SIRPα, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno se liga a Q52 dentro de uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:146.

114. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da reivindicação 110, em que, quando ligado a SIRPα, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno se liga a T67 dentro de uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:146.

115. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da reivindicação 110, em que, quando ligado a SIRPα, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno se liga a R69 dentro de uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:146.

116. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da reivindicação 110, em que, quando ligado a SIRPα, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno se liga a F74 dentro de uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:146.

117. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da reivindicação 110, em que, quando ligado a SIRPα, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno se liga a K93 dentro de uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:146.

118. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da reivindicação 110, em que, quando ligado a SIRPα, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno se liga a R95 dentro de uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:146.

119. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da reivindicação 110, em que, quando ligado a SIRPα, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno se liga a K96 dentro de uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:146.

120. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da reivindicação 110, em que, quando ligado a SIRPα, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno se liga a S98 dentro de uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:146.

121. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da reivindicação 110, em que, quando ligado a SIRPα, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno se liga a T67, R69, R95, K96 e S98 dentro de uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:146.

122. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1-121, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo reduz a ligação entre SIRPα e CD47.

123. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da reivindicação 122, em que a SIRPα compreende um haplótipo no domínio IgV selecionado do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 149, 150, 151, 152, 153 e 154.

124. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da reivindicação 122 ou 123, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo reduz a ligação de CD47 a cada um dos 6 haplótipos de

SIRPα, em que os 6 haplótipos de SIRPα consistem em SIRPα v1, SIRPα v2, SIRPα v3, SIRPα v4, SIRPα v5 e SIRPα v6, e em que SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO:149 no domínio IgV, SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO:150 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO:151 em o domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO:152 no domínio IgV, SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO:153 no domínio IgV, e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO:154 no domínio IgV.

125. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 122-124, em que a redução na ligação de CD47- SIRPα é de 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% ou 99%.

126. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 122-125, em que o EC50 do anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo para reduzir a ligação de CD47- SIRPα é de cerca de 1 pM a cerca de 10 pM, de cerca de 10 pM a cerca de 100 pM, de cerca de 100 pM a cerca de 1 nM, de cerca de 1 nM a cerca de 10 nM, ou de cerca de 10 nM a cerca de 100 nM.

127. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 122-126, em que o EC50 do anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo para reduzir a ligação de CD47- SIRPα é de cerca de 2 nM, cerca de 2,1 nM, cerca de 2,2 nM, cerca de 2,3 nM, cerca de 2,4 nM, cerca de 2,5 nM, cerca de 2,6 nM, cerca de 2,7 nM, cerca de 2,8 nM, cerca de 2,9 nM, cerca de 3 nM, cerca de 3,1 nM, cerca de 3,2 nM, cerca de 3,3 nM, cerca de 3,4 nM, cerca de 3,5 nM, cerca de 3,6nM, cerca de 3,7 nM, cerca de 3,8 nM, cerca de 3,9 nM, cerca de 4,0 nM, cerca de 4,1 nM, cerca de 4,2 nM, cerca de 4,3 nM, cerca de 4,4 nM, cerca de 4,5 nM, cerca de 4,6 nM, cerca de 4,7 nM, cerca de 4,8 nM, cerca de 4,9 nM, cerca de 5,0 nM, cerca de 5,1 nM,

cerca de 5,2 nM, cerca de 5,3 nM, cerca de 5,4 nM, cerca de 5,5 nM, cerca de 5,6 nM, cerca de 5,7 nM, cerca de 5,8 nM, cerca de 5,9 nM, ou cerca de 6,0 nM.

128. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1-121, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo se liga especificamente a um ou mais dos 6 haplótipos de SIRPα, em que os 6 haplótipos de SIRPα consistem em SIRPα v1, SIRPα v2, SIRPα v3, SIRPα v4, SIRPα v5 e SIRPα v6, e em que SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO:149 no domínio IgV, SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO:150 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO:151 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO:152 no domínio IgV, SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO:153 no domínio IgV, e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO:154 no domínio IgV.

129. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da reivindicação 128, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo se liga a cada um dos 6 haplótipos de SIRPα.

130. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da reivindicação 129, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo se liga a cada um dos 6 haplótipos de SIRPα com uma constante de dissociação (KD) de não mais do que 5 nM.

131. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 128-130, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo se liga à SIRPα v1 purificada com um KD de não mais do que 0,2 nM.

132. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 128-131, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo se liga à SIRPα v1 purificada com um KD de cerca de 0,13 nM.

133. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 128-132, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo se liga à SIRPα v2 purificada com um K D de não mais do que 5 nM.

134. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 128-133, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo se liga à SIRPα v2 purificada com um K D de cerca de 4,4 nM.

135. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 128-134, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo se liga à SIRPα v3 purificada com um KD de não mais do que 0,2 nM.

136. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 128-135, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo se liga à SIRPα v3 purificada com um KD de cerca de 0,15 nM.

137. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 128-136, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo se liga à SIRPα v4 purificada com um K D de não mais do que 2 nM.

138. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 128-137, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo se liga à SIRPα v4 purificada com um K D de cerca de 1,5 nM.

139. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 128-138, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo se liga à SIRPα v5 purificada com um K D de não mais do que 0,7 nM.

140. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 128-139, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo se liga à SIRPα v5 purificada com um K D de cerca de 0,6 nM.

141. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 128-140, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo se liga à SIRPα v6 purificada com um K D de não mais do que 0,2 nM.

142. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 128-141, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo se liga à SIRPα v6 purificada com um K D de cerca de 0,18 nM.

143. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1-142, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo se liga à SIRPα humana expressa em uma célula com um EC50 de cerca de 1 pM a cerca de 10 pM, de cerca de 10 pM a cerca de 100 pM, de cerca de 100 pM a cerca de 1 nM, de cerca de 1 nM a cerca de 10 nM, ou de cerca de 10 nM a cerca de 100 nM.

144. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da reivindicação 143, em que EC50 é cerca de 2 nM, cerca de 2,1 nM, cerca de 2,2 nM, cerca de 2,3 nM, cerca de 2,4 nM, cerca de 2,5 nM, cerca de 2,6 nM, cerca de 2,7 nM, cerca de 2,8 nM, cerca de 2,9 nM, cerca de 3 nM, cerca de 3,1 nM, cerca de 3,2 nM, cerca de 3,3 nM, cerca de 3,4 nM, cerca de 3,5 nM, cerca de 3,6 nM, cerca de 3,7 nM, cerca de 3,8 nM, cerca de 3,9 nM, cerca de 4,0 nM, cerca de 4,1 nM, cerca de 4,2 nM, cerca de 4,3 nM, cerca de 4,4 nM, cerca de 4,5 nM,

cerca de 4,6 nM, cerca de 4,7 nM, cerca de 4,8 nM, cerca de 4,9 nM, cerca de 5,0 nM, cerca de 5,1 nM, cerca de 5,2 nM, cerca de 5,3 nM, cerca de 5,4 nM, cerca de 5,5 nM, cerca de 5,6 nM, cerca de 5,7 nM, cerca de 5,8 nM, cerca de 5,9 nM ou cerca de 6,0 nM.

145. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1-144, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo se liga especificamente a SIRPα humana e/ou SIRPα de macaco, mas não SIRPα de roedor.

146. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1-145, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo se liga à SIRPα de cinomolgo expressa em uma célula com um EC50 de cerca de 1 pM a cerca de 10 pM, de cerca de 10 pM a cerca de 100 pM, de cerca de 100 pM a cerca de 1 nM, de cerca de 1 nM a cerca de 10 nM, ou de cerca de 10 nM a cerca de 100 nM.

147. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da reivindicação 146, em que EC50 é cerca de 2 nM, cerca de 2,1 nM, cerca de 2,2 nM, cerca de 2,3 nM, cerca de 2,4 nM, cerca de 2,5 nM, cerca de 2,6 nM, cerca de 2,7 nM, cerca de 2,8 nM, cerca de 2,9 nM, cerca de 3 nM, cerca de 3,1 nM, cerca de 3,2 nM, cerca de 3,3 nM, cerca de 3,4 nM, cerca de 3,5 nM, cerca de 3,6 nM, cerca de 3,7 nM, cerca de 3,8 nM, cerca de 3,9 nM, cerca de 4,0 nM, cerca de 4,1 nM, cerca de 4,2 nM, cerca de 4,3 nM, cerca de 4,4 nM, cerca de 4,5 nM, cerca de 4,6 nM, cerca de 4,7 nM, cerca de 4,8 nM, cerca de 4,9 nM, cerca de 5,0 nM, cerca de 5,1 nM, cerca de 5,2 nM, cerca de 5,3 nM, cerca de 5,4 nM, cerca de 5,5 nM, cerca de 5,6 nM, cerca de 5,7 nM, cerca de 5,8 nM, cerca de 5,9 nM ou cerca de 6,0 nM.

148. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1-147, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo aumenta a fagocitose de células cancerosas por macrófagos cocultivados.

149. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da reivindicação 148, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é usado como um único agente terapêutico.

150. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da reivindicação 148, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é usado em combinação com um segundo agente terapêutico.

151. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da reivindicação 150, em que o segundo agente terapêutico é selecionado do grupo consistindo em cetuximabe e rituximabe.

152. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 148-151, em que SIRPα é expressa no macrófago, nas células cancerosas ou em ambos os macrófagos e células cancerosas.

153. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da reivindicação 152, em que SIRPα é um ou mais dos 6 haplótipos de SIRPα, em que os 6 haplótipos de SIRPα consistem em SIRPα v1, SIRPα v2, SIRPα v3, SIRPα v4, SIRPα v5 e SIRPα v6, e em que SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO:149 no domínio IgV, SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO:150 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO:151 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO:152 no domínio IgV, SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO:153 no domínio IgV e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO:154 no domínio IgV.

154. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 148-153, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo aumenta uma porcentagem mínima de macrófagos fagocitóticos em uma população de macrófagos para cerca de 10%, 20%, 30%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% ou 99%.

155. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 148-154, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo aumenta a fagocitose do macrófago em cerca de 10%, 20%, 30%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 100%, 125%, 150%, 175%, 200%, 250%, 300%, 400%, 500%, 600%, 700%, 800%, 900% ou 1000%.

156. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 148-155, em que as células cancerosas são selecionadas do grupo consistindo em câncer colorretal, carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço, leucemia mieloide aguda e linfoma difuso de grandes células B.

157. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1-147, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo sinergiza com um segundo agente terapêutico no aumento da fagocitose de células cancerosas por macrófagos cocultivados.

158. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da reivindicação 157, em que o segundo agente terapêutico é selecionado do grupo consistindo em cetuximabe e rituximabe.

159. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da reivindicação 157 ou 158, em que SIRPα é expressa no macrófago, nas células cancerosas ou em ambos os macrófagos e células cancerígenas.

160. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da reivindicação 159, em que SIRPα é um ou mais dos 6 haplótipos de SIRPα, em que os 6 haplótipos de SIRPα consistem em SIRPα v1, SIRPα v2, SIRPα v3, SIRPα v4, SIRPα v5 e SIRPα v6, e em que SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO:149 no domínio IgV, SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO:150 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO:151 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO:152 no domínio IgV, SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO:153 no domínio IgV e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO:154 no domínio IgV.

161. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 157-160, em que a diferença entre a porcentagem dos macrófagos fagocitóticos induzidos sinergicamente e a soma da porcentagem fagocitótica induzida pelo anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno e o segundo agente terapêutico separadamente é cerca de 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65% ou 70%.

162. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 157-160, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno e o segundo agente terapêutico aumentam sinergicamente a porcentagem dos macrófagos fagocitóticos sobre a soma da porcentagem fagocitótica induzida pelo anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno e o segundo agente terapêutico separadamente em cerca de 10%, 20%, 30%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 100%, 125%, 150%, 175%, 200%, 250%, 300% ou 400%.

163. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 157-162, em que as células cancerosas são selecionadas do grupo consistindo em câncer colorretal, carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço, leucemia mieloide aguda e linfoma difuso de grandes células B.

164. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1-163, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo tem atividade de ADCC atenuada, atividade de ADCP atenuada e/ou atividade de CDC atenuada em comparação com um anticorpo de controle isotípico.

165. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da reivindicação 164, em que a atividade máxima de ADCC não é mais do que cerca de 5%, 10%, 20%, 30% ou 40% de citotoxicidade, conforme medido pela porcentagem de células alvo mortas.

166. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da reivindicação 164, em que a atividade máxima de ADCP não é mais do que cerca de 5%, 10%, 20% ou 30% dos macrófagos fagocitóticos que alvejam células T autólogas e/ou monócitos.

167. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da reivindicação 164, em que o EC50 do anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo em um ensaio de CDC é de pelo menos 100 µM.

168. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1-167, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo não induz a liberação de citocina mais do que um nível de liberação de citocina induzida por um anticorpo de controle isotípico.

169. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1-168, em que o anticorpo é um anticorpo monoclonal.

170. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1-169, em que o referido anticorpo é um anticorpo humanizado, humano ou quimérico.

171. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da reivindicação 170, em que o anticorpo humanizado é um anticorpo desimunizado ou um anticorpo humano composto.

172. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1-171, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é um Fab, um Fab’, um F(ab’) 2, um Fv, um scFv, um dsFv, um diabody, um triabody, um tetrabody, ou um anticorpo multiespecífico formado por fragmentos de anticorpos.

173. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1-172, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é conjugado a um agente.

174. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da reivindicação 173, em que o agente é selecionado do grupo que consiste em um radioisótopo, um quelante de metal, uma enzima, um composto fluorescente, um composto bioluminescente e um composto quimioluminescente.

175. Uma composição compreendendo o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1-174, e um carreador farmaceuticamente aceitável.

176. Um polinucleotídeo compreendendo sequências de nucleotídeo que codificam uma VH, uma VL ou tanto uma VH quanto uma VL do anticorpo de qualquer uma das reivindicações 1-175.

177. Um polinucleotídeo compreendendo sequências de nucleotídeos que codificam uma cadeia pesada, uma cadeia leve, ou tanto uma cadeia pesada quanto uma cadeia leve do anticorpo de qualquer uma das reivindicações 1-176.

178. O polinucleotídeo da reivindicação 176 ou 177, em que o polinucleotídeo está operacionalmente ligado a um promotor.

179. Um vetor compreendendo o polinucleotídeo da reivindicação 176 ou

177.

180. Uma célula compreendendo o polinucleotídeo da reivindicação 176 ou

177.

181. Uma célula compreendendo o vetor da reivindicação 179.

182. Uma célula isolada que produz o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1-174.

183. Um kit compreendendo o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1-174.

184. Um método para produzir um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga especificamente a um epítopo de SIRPα humana, compreendendo a cultura da célula de qualquer uma das reivindicações 180 a 182 para expressar o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo.

185. Um método de produção de um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga especificamente a um epítopo de SIRPα humana, compreendendo a expressão do polinucleotídeo de qualquer uma das reivindicações 176 a 178.

186. Um método para aumentar a fagocitose por um macrófago, compreendendo o contato do macrófago com uma quantidade eficaz de um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1 a 174.

187. O método da reivindicação 186, em que a atividade fagocitótica pelo macrófago é aumentada em cerca de 10%, 20%, 30%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 100%, 125%, 150%, 175%, 200%, 250%, 300%, 400%, 500%, 600%, 700%, 800%, 900% ou 1000%.

188. Um método para aumentar uma porcentagem de macrófagos fagocitóticos em uma população de macrófagos, compreendendo o contato dos macrófagos com uma quantidade eficaz de um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1 a 174.

189. O método da reivindicação 188, em que a porcentagem mínima de macrófagos fagocitóticos na população de macrófagos é aumentada para cerca de 10%, 20%, 30%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% ou 99%.

190. Um método para aumentar a fagocitose de células cancerosas por uma população de macrófagos, compreendendo o contato das células cancerosas, dos macrófagos ou de tanto as células cancerosas quanto os macrófagos com uma quantidade eficaz de um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1 a 174.

191. O método da reivindicação 190, em que uma porcentagem mínima de macrófagos fagocitóticos na população de macrófagos é aumentada para cerca de 10%, 20%, 30%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% ou 99%.

192. O método de qualquer uma das reivindicações 186-191, em que a fagocitose por macrófagos é medida por cocultura de macrófagos marcados com um primeiro corante fluorescente e células cancerosas marcadas com um segundo corante fluorescente, em que o primeiro corante fluorescente e o segundo corante fluorescente são corantes diferentes.

193. Um método de qualquer uma das reivindicações 188, 189, 191 e 192, em que a porcentagem de macrófagos fagocitóticos é medida pela determinação da porcentagem de macrófagos que compreendem células cancerosas.

194. Um método para aumentar a fagocitose de células cancerosas em um sujeito, compreendendo a administração de uma quantidade eficaz de um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1 a 174, ao sujeito.

195. Um método para aumentar a eliminação de células cancerosas por fagocitose em um sujeito, compreendendo a administração de uma quantidade eficaz de um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1 a 174 ao sujeito.

196. Um método de direcionamento de células cancerosas para imunodepleção em um sujeito, compreendendo a administração de uma quantidade eficaz de um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1 a 174, ao sujeito.

197. Um método para tratar câncer em um sujeito, compreendendo administrar uma quantidade eficaz de um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1 a 174, ao sujeito.

198. O método de qualquer uma das reivindicações 194-197, em que o câncer é um câncer selecionado do grupo consistindo em câncer colorretal, carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço, leucemia mieloide aguda, linfoma difuso de grandes células B, linfoma folicular, linfoma de zona marginal e linfoma de células do manto.

199. O método de qualquer uma das reivindicações 194-197, em que o câncer é linfoma não-Hodgkin.

200. O método de qualquer uma das reivindicações 194-197, em que o câncer é um câncer selecionado do grupo consistindo em linfoma folicular de grau 1, linfoma folicular de grau 2, linfoma folicular de grau 3a, linfoma folicular de grau 3b, linfoma folicular recidivante, linfoma folicular refratário, DLBCL recidivante e DLBCL refratário.

201. O método de qualquer uma das reivindicações 186-200, em que as células cancerosas, os macrófagos, ou tanto as células cancerosas quanto os macrófagos expressam SIRPα.

202. O método da reivindicação 201, em que SIRPα é um ou mais dos 6 haplótipos de SIRPα, em que os 6 haplótipos de SIRPα consistem em SIRPα v1, SIRPα v2, SIRPα v3, SIRPα v4, SIRPα v5 e SIRPα v6, e em que SIRPα v1 compreendendo SEQ ID NO:149 no domínio IgV, SIRPα v2 compreendendo SEQ ID NO:150 no domínio IgV, SIRPα v3 compreendendo SEQ ID NO:151 no domínio IgV, SIRPα v4 compreendendo SEQ ID NO:152 no IgV- domínio, SIRPα v5 compreendendo SEQ ID NO:153 no domínio IgV e SIRPα v6 compreendendo SEQ ID NO:154 no domínio IgV.

203. O método de qualquer uma das reivindicações 186 a 202, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é coadministrado com um segundo agente terapêutico.

204. O método da reivindicação 203, em que o segundo agente terapêutico é selecionado do grupo consistindo em cetuximabe e rituximabe.

205. O método de qualquer uma das reivindicações 194-204, em que o sujeito é selecionado do grupo consistindo em um humano, um macaco, um camundongo, um cão e um rato.

Triagens de Bibliotecas de IgG Não Ligação Ligantes de Anti- Expostas, diversidade > SIRPα Inicial > 1300 1010

Petição 870210046422, de 21/05/2021, pág. 501/547 Telas Funcionais

Selecionar para Maturação de Afinidade e Triagem Dúzias de Anti-SIRPα Dúzias de Anti-SIRPα Inicial Inicial 1/46

Avaliação e Triagens Adicionais Anti-SIRPα Candidato Principal

Domínio V

Petição 870210046422, de 21/05/2021, pág. 503/547 Conservação 3/46

Qualidade Consenso

Haplótipos de interface de Cobertura ligação de SIRPα/CD47 Populacional

Continuação

Medula Óssea Sangue

Petição 870210046422, de 21/05/2021, pág. 504/547 Contagem

Contagem Anticorpo Controle N° 1 Anticorpo Controle N° 2 FL2-H::PE anti-humano FL2-H::PE anti-humano 4/46

Macrófagos Macrófagos Ativados

Contagem Contagem

FL2-H::PE anti-humano FL2-H::PE anti-humano

SIRPα-CHO-K1 Humano SIRPα-CHO-K1 de Cino

Controle de isótipo-K322A-AF647

Petição 870210046422, de 21/05/2021, pág. 505/547 Controle de isótipo-K322A- AF647

MFI Geométrico (Ligação) MFI Geométrico (Ligação) Anticorpo [Log nM] Anticorpo [Log nM]

SIRPα-CHO-K1 de Rato 5/46

SIRPα-CHO-K1 de Camundongo

Controle de isótipo-K322A Controle de isótipo-K322A

Isótipo de IgG2a de Camundongo Isótipo de IgG1a de Rato 2° Apenas -AF647 2° Apenas

MFI Geométrico (Ligação) MFI Geométrico (Ligação)

Anticorpo [Log nM] Anticorpo [Log nM]

Humano Cino

Petição 870210046422, de 21/05/2021, pág. 506/547 6/46

Nome de Contagem Nome de Contagem Nome de Amostra Subconjunto Nome de Amostra Subconjunto Humano_B5_B05-005.fcs Células Únicas Cino_C6_C06-014.fcs Células Únicas

Humano_B2_B02-002.fcs Células Únicas Cino_C3_C03-011.fcs Células Únicas

Controle de Isótipo-K322A

Petição 870210046422, de 21/05/2021, pág. 507/547 Ligação de SIRPAB-11-K322A-AF647 (gMFI) Células B Células NK Células NKT Células T Monócitos ID de Doador 7/46

Petição 870210046422, de 21/05/2021, pág. 508/547 Ligação de SIRPAB-11-K322A-AF647 (gMFI) Isótipo de células B IgG1-K322A Células B SIRPAB-11-K322A Isótipo de memória B IgG1-K322A Isótipo de memória B SIRPAB-11-K322A Isótipo não exposto B IgG1-K322A Isótipo não exposto B SIRPAB-11-K322A Células Linfoides

Isótipo de células T IgG1-K322A Isótipo de células T SIRPAB-11-K322A Isótipo de monócitos IgG1-K322A PBMCs Humanos

Isótipo de monócitos SIRPAB-11-K322A Isótipo de mDC IgG1-K322A Isótipo de mDC SIRPAB-11-K322A Células Mieloides

Isótipo de células NK IgG1-K322A Isótipo de células NK SIRPAB-11-K322A Doador 2

Doador 3

Doador 4

Doador 5 Doador 1 8/46

Petição 870210046422, de 21/05/2021, pág. 509/547 Ligação de SIRPAB-11-K322A-AF647 (gMFI) Isótipo de células B IgG1-K322A Células B SIRPAB-11-K322A Isótipo de memória B IgG1-K322A Isótipo de memória B SIRPAB-11-K322A Isótipo não exposto B IgG1-K322A Isótipo não exposto B SIRPAB-11-K322A Células Linfoides

Isótipo de células T IgG1-K322A Isótipo de células T SIRPAB- 11-K322A Isótipo de monócitos IgG1- K322A Isótipo de monócitos SIRPAB-11-K322A PBMCs de Macaco Cinomolgo

Isótipo de mDC IgG1-K322A Isótipo de mDC SIRPAB-11-K322A Células Mieloides

Isótipo de células NK IgG1-K322A Isótipo de células NK SIRPAB-11-K322A Doador 1

Doador 3 Doador 2

Doador 5 Doador 4 9/46

Petição 870210046422, de 21/05/2021, pág. 510/547 Doador 1 Controle de Isótipo-4PE

Doador 2 Controle de Isótipo-4PE 10/46

Log de Anticorpo (nM)

Intensidade de Fluorescência Mediana Doador 1 Doador 2

Ligação de Células C57BL/6-CD11b+

Petição 870210046422, de 21/05/2021, pág. 511/547 11/46

Controle de Isótipo

Intensidade de Fluorescência Mediana Log de Anticorpo (nM)

Petição 870210046422, de 21/05/2021, pág. 512/547 Resposta Equilíbrio ligado Ligação de Inibição Atividade de Bloqueio de CD47-SIRPα (RU) à concentração CD47 Percentual calculado (nM) Percentual 12/46

% Inibição de Ligação de CD47

Bloqueio de mCD47-hFC (6,7 nM)

Petição 870210046422, de 21/05/2021, pág. 513/547 13/46

Controle de isótipo

Intensidade de Fluorescência Mediana Log de Anticorpo (nM)

Complexo de SIRPα/Fab Complexo de SIRPα/CD47

Petição 870210046422, de 21/05/2021, pág. 515/547 15/46 alça CD47 F-G

Viabilidade (%) Contagem Celular (x células 10E6/mL)

Petição 870210046422, de 21/05/2021, pág. 516/547 Dia 1 Dia 2 Dia 4 Dia 7 Dia 1 Dia 2 Dia 4 Dia 7 16/46

Concentração (ug/mL)

Dia 1 Dia 2 Dia 4 Dia 7

ADCC de Doador (5)

Petição 870210046422, de 21/05/2021, pág. 517/547 Anti-CD33 IgG4 (Anticorpo Absoluto)

Controle de isótipo -IgG1 17/46

Controle de isótipo -K322A

MOLM-13 Apenas

% Morte Específica para Citotoxicidade (PI) Log de Anticorpo (nM)

Células CD4 T ADCC NK:CD4 Isoladas (10:1) Inativadas % Morte Específica para

Anti-CD3-Fc-Nulo Citotoxicidade (PI)

Controle de Isótipo-K332A

Controle de Isótipo IgG1

NK+Alvo Sozinhas Lise Máxima

Células Alvo Sozinhas

Células CD4 T ADCC NK:CD4 Isoladas (10:1) Inativadas % Morte Específica para Citotoxicidade (PI)

Anti-CD3-Fc-Nulo

Controle de Isótipo-K332A

Controle de Isótipo IgG1

NK+Alvo Sozinhas Lise Máxima

Células Alvo Sozinhas

Células CD8 T ADCC NK:CD8 Isoladas (10:1) Inativadas % Morte Específica para Citotoxicidade (PI)

Controle de Isótipo-K332A

Anti-CD3-FcNulo

NK+Alvo Sozinhas Lise Máxima

Células Alvo Sozinhas

Controle de Isótipo-K332A

Anti-CD3-FcNulo

NK+Alvo Sozinhas Lise Máxima

Células Alvo Sozinhas

NK:Monócitos (10:1) Doador 3 Monócitos (CD14-FITC) por Citometria de Fluxo % Morte Específica para Citotoxicidade (PI)

Controle de Isótipo IgG1

Controle de Isótipo-K332A

NK+Alvo Sozinhas Lise Máxima

Células Alvo Sozinhas

NK:Monócitos (10:1) Doador 3 Monócitos (Pigmentação Violeta CellTrace) por Mirrorball % Morte Específica para Citotoxicidade (PI)

Controle de Isótipo IgG1

Controle de Isótipo-K332A

NK+Alvo Sozinhas

Lise Máxima

Células Alvo Sozinhas

Anticorpo anti-CD20 IgG1 Comercial

Controle de Isótipo-IgG1 Controle de Isótipo-4PE

Anticorpo anti-CD20 IgG1 Comercial

Fagocitose de Macrófagos de Célula T (Doador de Macrófagos e Células T 224) % Macrófagos Fagocitóticos

Controle de Isótipo-K322A

Controle de Isótipo-4PE

Log de Anticorpo (nM) (em 10% de Soro Humano)

Fagocitose de Macrófagos de Monócitos (Doador de Macrófago e Monócitos 345) % Macrófagos Fagocitóticos

Controle de Isótipo-K322A

Controle de Isótipo-4PE

Log de Anticorpo (nM) (em 10% de Soro Humano)

Ab de Referência SIRPA (3,66%) (2,9%) (0,17%)

Potenciais Imunogênicos Categorizados

Anticorpos Ideais (Baixo Teor Efetor – Alto Teor de Tregítopos) Tregítopo – Pontuação Resposta de de Proteína EpiMatrix Teor de Resposta de Anticorpo Tregítopo2 Ab Prevista Ab Observada Ajustada1

Petição 870210046422, de 21/05/2021, pág. 524/547 Anticorpos de Baixo Risco (Baixo Teor Efetor – Baixo Teor de Tregítopos) Tregítopo – Pontuação de Proteína EpiMatrix Teor de Resposta de Resposta de Anticorpo Ajustada1 Tregítopo2 Ab Prevista Ab Observada 24/46

Anticorpos Misturados (Alto Teor Efetor – Alto Teor de Tregítopos) Tregítopo – Pontuação de Proteína EpiMatrix Teor de Resposta de Resposta de Anticorpo Ajustada1 Tregítopo2 Ab Prevista Ab Observada

Anticorpos de Alto Risco (Alto Teor Efetor – Baixo Teor de Tregítopos) Tregítopo – Pontuação Teor de Anticorpo de Proteína EpiMatrix Resposta de Resposta de Ajustada1 Tregítopo2 Ab Prevista Ab Observada

1 Tregítopo-Pontuação de EpiMatrix ajustada: Valores maiores do que zero representam alto teor de epítopo efetor. 2 Teor de Tregítopo: Valores maiores do que +20 representam alto teor de tregítopo. 3 Imunogenicidade observada de Erbitux subestimada de acordo com o inserto de pacote.

Petição 870210046422, de 21/05/2021, pág. 525/547 100 ng/poço de LPS 1 ug/poço de Isótipo de mlgG2a 1 ug/poço de OKT3 1 ug/poço de Isótipo de IgG1 1 ug/poço de IgG1 comercial 1 ug/poço de Isótipo de IgG1-K322A 3 ug/poço de SIRPAB-11-K322A 1 ug/poço de SIRPAB-11-K322A 0,1 ug/poço de SIRPAB-11-K322A 0,01 ug/poço de SIRPAB-11-K322A 0,001 ug/poço de SIRPAB-11-K322A 0,0001 ug/poço de SIRPAB-11-K322A Doador 9 Doador 5 Doador 4 Doador 1

Doador 6 Doador 2 Doador 3

Doador 7 Doador 8

Doador 10

100 ng/poço de LPS 1 ug/poço de Isótipo de mlgG2a 1 ug/poço de OKT3 1 ug/poço de Isótipo de IgG1 1 ug/poço de IgG1 comercial 1 ug/poço de Isótipo de IgG1-K322A 3 ug/poço de SIRPAB-11-K322A 1 ug/poço de SIRPAB-11-K322A 0,1 ug/poço de SIRPAB-11-K322A 0,01 ug/poço de SIRPAB-11-K322A 0,001 ug/poço de SIRPAB-11-K322A 0,0001 ug/poço de SIRPAB-11-K322A Doador 1

Doador 2

Doador 7 Doador 5 Doador 3 Doador 4

Doador 6

Doador 8 Doador 9

Doador 10 25/46

Petição 870210046422, de 21/05/2021, pág. 526/547 100 ng/poço de LPS 1 ug/poço de Isótipo de mlgG2a 1 ug/poço de OKT3 1 ug/poço de Isótipo de IgG1 1 ug/poço de IgG1 comercial 1 ug/poço de Isótipo de IgG1-K322A 3 ug/poço de SIRPAB-11-K322A 1 ug/poço de SIRPAB-11-K322A 0,1 ug/poço de SIRPAB-11-K322A 0,01 ug/poço de SIRPAB-11-K322A 0,001 ug/poço de SIRPAB-11-K322A 0,0001 ug/poço de SIRPAB-11-K322A Doador 9 Doador 1

Doador 8 Doador 2

Doador 6 Doador 3

Doador 7 Doador 5 Doador 4

Doador 10

100 ng/poço de LPS 1 ug/poço de Isótipo de mlgG2a 1 ug/poço de OKT3 1 ug/poço de Isótipo de IgG1 1 ug/poço de IgG1 comercial 1 ug/poço de Isótipo de IgG1-K322A 3 ug/poço de SIRPAB-11-K322A 1 ug/poço de SIRPAB-11-K322A 0,1 ug/poço de SIRPAB-11-K322A 0,01 ug/poço de SIRPAB-11-K322A 0,001 ug/poço de SIRPAB-11-K322A 0,0001 ug/poço de SIRPAB-11-K322A

Doador 4 Doador 2

Doador 7 Doador 1

Doador 3

Doador 5

Doador 9 Doador 8 Doador 6

Doador 10 26/46

Petição 870210046422, de 21/05/2021, pág. 527/547 100 ng/poço de LPS 1 ug/poço de Isótipo de mlgG2a 1 ug/poço de OKT3 1 ug/poço de Isótipo de IgG1 1 ug/poço de IgG1 comercial 1 ug/poço de Isótipo de IgG1- K322A 3 ug/poço de SIRPAB-11-K322A 1 ug/poço de SIRPAB-11-K322A 0,1 ug/poço de SIRPAB-11-K322A 0,01 ug/poço de SIRPAB-11-K322A 0,001 ug/poço de SIRPAB-11-K322A 0,0001 ug/poço de SIRPAB-11-K322A Doador 8 Doador 2

Doador 7 Doador 3

Doador 9 Doador 1

Doador 6 Doador 5 Doador 4

Doador 10

Doador 7 Doador 1

Doador 5 Doador 6 Doador 2

Doador 4

Doador 8 Doador 3

Doador 9 Doador 10 27/46

Petição 870210046422, de 21/05/2021, pág. 528/547 100 ng/poço de LPS 1 ug/poço de Isótipo de mlgG2a 1 ug/poço de OKT3 1 ug/poço de Isótipo de IgG1 1 ug/poço de IgG1 comercial 1 ug/poço de Isótipo de IgG1-K322A 3 ug/poço de SIRPAB-11-K322A 1 ug/poço de SIRPAB-11-K322A 0,1 ug/poço de SIRPAB-11-K322A 0,01 ug/poço de SIRPAB-11-K322A 0,001 ug/poço de SIRPAB-11-K322A 0,0001 ug/poço de SIRPAB-11-K322A Doador 2

Doador 7 Doador 6

Doador 9 Doador 8 Doador 1

Doador 3

Doador 5 Doador 4

Doador 10

Doador 5

Doador 8 Doador 6 Doador 1

Doador 7

Doador 9 Doador 4 Doador 2

Doador 3

Doador 10 28/46

Petição 870210046422, de 21/05/2021, pág. 529/547 100 ng/poço de LPS 1 ug/poço de Isótipo de mlgG2a 1 ug/poço de OKT3 1 ug/poço de Isótipo de IgG1 1 ug/poço de IgG1 comercial 1 ug/poço de Isótipo de IgG1-K322A 3 ug/poço de SIRPAB-11-K322A 1 ug/poço de SIRPAB-11-K322A 0,1 ug/poço de SIRPAB-11-K322A 0,01 ug/poço de SIRPAB-11-K322A 0,001 ug/poço de SIRPAB-11-K322A 0,0001 ug/poço de SIRPAB-11-K322A Doador 1 Doador 2

Doador 5

Doador 8 Doador 3

Doador 6 Doador 7

Doador 9 Doador 4

Doador 10 29/46

Comparação* Meio Comparação Meio Comparação* Meio Comparação* Meio Comparação* * 100 ng/poço de LPS Meio 1 ug/poço de Isótipo de mlgG2a

1 ug/poço de OKT3 1 ug/poço de Isótipo de IgG1-K322A

Petição 870210046422, de 21/05/2021, pág. 530/547 1 ug/poço de IgG1 comercial

3 ug/poço de SIRPAB-11-K322A 1 ug/poço de SIRPAB-11-K322A 0,1 ug/poço de SIRPAB-11-K322A 0,01 ug/poço de SIRPAB-11-K322A 0,001 ug/poço de SIRPAB-11-K322A

0,0001 ug/poço de SIRPAB-11-K322A *vs.

Isótipo de IgG1-K322A 30/46

Meio Comparação* Meio Comparação* Meio Comparação* Meio Comparação*

100 ng/poço de LPS 1 ug/poço de Isótipo de mlgG2a

1 ug/poço de OKT3 1 ug/poço de IgG1 comercial 1 ug/poço de Isótipo de IgG1-K322A 3 ug/poço de SIRPAB-11-K322A 0,0001 ug/poço de SIRPAB-11-K322A ANOVA de Via Única 1 ug/poço de SIRPAB-11-K322A 0,1 ug/poço de SIRPAB-11-K322A 0,01 ug/poço de SIRPAB-11-K322A ns = não significativo 0,001 ug/poço de SIRPAB-11-K322A

*vs.

Isótipo de IgG1-K322A

Petição 870210046422, de 21/05/2021, pág. 531/547 30 ug/mL de SIRPAB-11-K322A 3 ug/mL de SIRPAB-11-K322A 0,3 ug/mL de SIRPAB-11-K322A ug/mL de controle de isótipo K322A 3 ug/mL de controle de isótipo K322A Solúvel

0,3 ug/mL de controle de isótipo K322A Meios Sozinhos 30 ug/mL de SIRPAB-11-K322A 3 ug/mL de SIRPAB-11-K322A 0,3 ug/mL de SIRPAB-11-K322A 30 ug/mL de controle de isótipo K322A 3 ug/mL de controle de isótipo K322A Imobilizado

0,3 ug/mL de controle de isótipo K322A Meios Sozinhos + LPS de 100ng/mL Doador 1 Doador 2

30 ug/mL de SIRPAB-11-K322A 3 ug/mL de SIRPAB-11-K322A 0,3 ug/mL de SIRPAB-11-K322A 30 ug/mL de controle de isótipo K322A 3 ug/mL de controle de isótipo K322A Solúvel

0,3 ug/mL de controle de isótipo K322A Meios Sozinhos + LPS de 100ng/mL 30 ug/mL de SIRPAB-11-K322A 3 ug/mL de SIRPAB-11-K322A 0,3 ug/mL de SIRPAB-11-K322A 30 ug/mL de controle de isótipo K322A 3 ug/mL de controle de isótipo K322A Imobilizado 0,3 ug/mL de controle de isótipo K322A Meios Sozinhos + LPS de 100ng/mL

Doador 1 Doador 2 31/46

Valor Valor Valor Valor de de de de Valor de Dobra Dobra Dobra Dobra Dobra P- Max. P- Max. P- Max. P- Max. P- Máximo Dif. Dif. Dif. Dif.

Petição 870210046422, de 21/05/2021, pág. 532/547 Citocina Doador valor valor valor valor valor Aquoso SIRP-11 vs Não Sim Não Não Não Controle de Não Não Não Não Não isótipo-K322A Imobilizado Não Sim Não Não Não Não Não Não Não Não Valor Valor Valor Valor 32/46 de de de de Dobra Dobra Dobra Dobra Max. P- Max. Max. Dif. P- P- P- Max. Dif. valor Dif. Dif. Citocina Doador valor valor valor Aquoso SIRP-11 vs Não Não Não Não Controle de Não Não Não Não isótipo-K322A Imobilizado Não Não Não Não Não Não Não Não

Petição 870210046422, de 21/05/2021, pág. 533/547 Meios Sozinhos 30 ug/mL de SIRPAB-11-K322A 3 ug/mL de SIRPAB-11-K322A Solúvel

0,3 ug/mL de SIRPAB-11-K322A ug/mL de controle de isótipo K322A Meios Sozinhos 3,0 ug/mL de SIRPAB-11-K322A 0,3 ug/mL de SIRPAB-11-K322A Imobilizado

0,03 ug/mL de SIRPAB-11-K322A 3,0 ug/mL de controle de isótipo-K322A Doador 1 Doador 2

Meios Sozinhos 30 ug/mL de SIRPAB-11-K322A 3 ug/mL de SIRPAB-11-K322A Solúvel

0,3 ug/mL de SIRPAB-11-K322A 30 ug/mL de controle de isótipo K322A Meios Sozinhos 3,0 ug/mL de SIRPAB-11-K322A 0,3 ug/mL de SIRPAB-11-K322A Imobilizado

0,03 ug/mL de SIRPAB-11-K322A 3,0 ug/mL de controle de isótipo-K322A Doador 2 Doador 1 33/46

Petição 870210046422, de 21/05/2021, pág. 534/547 Meios Sozinhos 30 ug/mL de SIRPAB-11-K322A 3 ug/mL de SIRPAB-11-K322A Solúvel

0,3 ug/mL de SIRPAB-11-K322A

30 ug/mL de controle de isótipo K322A

Meios Sozinhos 34/46

3,0 ug/mL de SIRPAB-11-K322A

0,3 ug/mL de SIRPAB-11-K322A Imobilizado

0,03 ug/mL de SIRPAB-11-K322A

3,0 ug/mL de controle de isótipo-K322A Doador 2 Doador 1

Valor Valor Valor Valor Valor de P- de de de de Dobra valor Dobra Dobra Dobra Dobra Máximo.

Max.

P- Max.

P- Dif.

Dif.

Citocina Doador valor valor valor valor

Petição 870210046422, de 21/05/2021, pág. 535/547 Aquoso SIRP-11-K322A Não Não Não Não Não vs Controle de Não Não Não Não Não isótipo-K322A Imobilizado Não Não Não Não Não Não Não Não Não Não

Valor Valor Valor Valor de de 35/46 de de Dobra Dobra Dobra Dobra P- Max.

P- Max.

Max.

P- Max.

Dif.

P- Dif.

Dif.

Citocina Doador valor valor valor valor

Aquoso SIRP-11-K322A Não Não ND ND Não Não vs Controle de Não Não ND ND Não Não isótipo-K322A Imobilizado Não Não ND ND Não Não Não Não ND ND Não Não

Valor Valor Valor Valor Valor de de de de de Dobra Dobra Dobra Dobra Dobra Máximo.

P- Max.

Max.

P- Max.

P- Dif.

Dif.

P- Dif.

Dif.

Citocina Doador valor valor valor valor valor

Petição 870210046422, de 21/05/2021, pág. 536/547 SIRP-11-K322A Aquoso vs Controle de Não Não Não Não Não isótipo-K322A Não Não Não Não Não Imobilizado Não Não Não Não Não Não Não Não Não Não

Valor Valor Valor Valor 36/46 de de de de Dobra Dobra Dobra Dobra P- Max.

P- Max.

Dif.

Citocina Doador valor valor valor valor

Aquoso SIRP-11-K322A vs Controle de Não Não ND ND Não Não isótipo-K322A Não Não ND ND Não Não Imobilizado Não Não ND ND Não Não Não Não ND ND Não Não

Petição 870210046422, de 21/05/2021, pág. 537/547 Isótipo de controle Isótipo de controle Isótipo de controle Isótipo de controle Isótipo de controle Isótipo de controle Isótipo de controle Isótipo de controle Isótipo de controle 37/46

(Doador 338) Sem Cetuximab % Macrófagos Fagocitóticos

0,2 nM de Cetuximab

1 nM de Cetuximab Controle de Isótipo -K322A

20 nM de Controle de Isótipo - K322A + 0,2 nM de Cetuximab

20 nM de Controle de Isótipo - Log de Anticorpo (nM) K322A + 1 nM de Cetuximab

(em 10% de Soro Humano)

(Doador 338) Sem Cetuximab % Macrófagos Fagocitóticos

0,2 nM de Cetuximab

1 nM de Cetuximab Controle de Isótipo -K322A

20 nM de Controle de Isótipo - K322A + 0,2 nM de Cetuximab 20 nM de Controle de Isótipo - Log de Anticorpo (nM) K322A + 1 nM de Cetuximab

(em 10% de Soro Humano)

(Doador 338) Sem Cetuximab % Macrófagos Fagocitóticos

0,2 nM de Cetuximab

1 nM de Cetuximab Controle de Isótipo -K322A

20 nM de Controle de Isótipo - K322A + 0,2 nM de Cetuximab

20 nM de Controle de Isótipo - Log de Anticorpo (nM) K322A + 1 nM de Cetuximab (em 10% de Soro Humano)

Fagocitose de Macrófagos de GP2d Doador 364 Sem SIRPAB-11-K322A

% Macrófagos Fagocitóticos 0,67 nM de SIRPAB-11-K322A 6,70 nM de SIRPAB-11-K322A

Fagocitose de Macrófagos de GP5d Doador 364 Sem SIRPAB-11-K322A 0,67 nM de SIRPAB-11-K322A % Macrófagos Fagocitóticos

6,70 nM de SIRPAB-11-K322A

Sem Cetuximab (Doador 358) % Macrófagos Fagocitóticos

0,2 nM de Cetuximab

1 nM de Cetuximab Controle de Isótipo -K322A 20 nM de Controle de Isótipo - K322A + 0,2 nM de Cetuximab

20 nM de Controle de Isótipo - K322A + 1 nM de Cetuximab

Log de Anticorpo (nM) (em 10% de Soro Humano)

SIRP-11-K322A; Sem Rituximab SIRP-11-K322A; 0,1 nM de Rituxumab Doador 358

Petição 870210046422, de 21/05/2021, pág. 540/547 SIRP-11-4PE; 0,1 nM de Rituxumab

SIRP-11-4PE; sem Rituxumab

Anti-CD47 IgG1; Sem Rituximab

Anti-CD47 IgG1; 0,1 nM de Rituxumab Controle de isótipo-K322A; Sem Rituximab 40/46

Controle de isótipo-K322A; 0,1 nM de Rituximab

Controle de isótipo-4PE; sem Rituximab

% Macrófagos Fagocitóticos Controle de isótipo-4PE; 0,1 nM de Rituximab

Controle de isótipo-IgG1; sem Rituximab

Log de Anticorpo (nM) (em 10% de Soro Humano)

Doador 345 Doador 345

Controle de Isótipo de IgG1- Controle de Isótipo de IgG1-K322A Controle K322A de Isótipo de IgG4PE

Controle de Isótipo de IgG4PE

Petição 870210046422, de 21/05/2021, pág. 541/547 % Macrófagos Fagocitóticos % Macrófagos Fagocitóticos Log de Anticorpo (nM) Log de Anticorpo (nM)

(em 10% de Soro Humano) (em 10% de Soro Humano) 41/46

Doador 345

Controle de Isótipo de IgG1-K322A Controle de Isótipo de IgG4PE

% Macrófagos Fagocitóticos Log de Anticorpo (nM)

(em 10% de Soro Humano)

% Macrófagos Fagocitóticos Doador 358

Controle de Isótipo de IgG1-K322A

Log de Anticorpo (nM) (em 10% de Soro Humano) % Macrófagos Fagocitóticos

Doador 358

Controle de Isótipo de IgG1-K322A

Log de Anticorpo (nM)

(em 10% de Soro Humano)

Fagocitose de Macrófagos de Cinomolgo OCI-AML2 (1 hora; 10% de Soro Humano) % Macrófagos Fagocitóticos

Sem Anticorpo

Controle de Isótipo

Log de Anticorpo (nM) (em 10% de Soro Humano)

+ 0,1 nM de Rituxumab + 0,1 nM de Rituxumab

Petição 870210046422, de 21/05/2021, pág. 544/547 + 0,1 nM de Rituxumab + 0,1 nM de Rituxumab

Células Sozinhas Células Sozinhas

% Macrófagos Fagocitóticos

% Macrófagos Fagocitóticos Log de Anticorpo (nM)

(em 10% de Soro Humano) (emLog 10%dedeAnticorpo (nM) Soro Humano) 44/46

+ 0,1 nM de Rituxumab

Células Sozinhas

% Macrófagos Fagocitóticos Log de Anticorpo (nM)

(em 10% de Soro Humano)

Petição 870210046422, de 21/05/2021, pág. 545/547 % Macrófagos Fagocitóticos % Macrófagos Fagocitóticos Log de Anticorpo (nM) Log de Anticorpo (nM) (em 10% de Soro Humano) (em 10% de Soro Humano)

+ 0,1 nM de Rituxumab 45/46

+ 0,1 nM de Rituxumab

Células Sozinhas % Macrófagos Fagocitóticos

% Macrófagos Fagocitóticos Log de Anticorpo (nM) Log de Anticorpo (nM)

(em 10% de Soro Humano) (em 10% de Soro Humano)

Sem Ocupância de Receptor Receptor Ocupado

Petição 870210046422, de 21/05/2021, pág. 546/547 Competidor-AF647 Competidor-AF647

Não Competidor-AF488 Não Competidor-AF488 Ocupância de Sem Ocupância de Receptor Completa 46/46

Receptor

Célula Célula SIRPα+ SIRPα+