KR20240025597A - 비푸코실화 항-cd70 항체 및 cd47 길항제의 조합으로 암을 치료하는 방법 - Google Patents

비푸코실화 항-cd70 항체 및 cd47 길항제의 조합으로 암을 치료하는 방법 Download PDF

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다니엘 디올라이티
쉬라 가르다이
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씨젠 인크.
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Abstract

본 발명은 CD47 길항제와 조합하여 비푸코실화 항-CD70 항체로, 암, 예컨대 골수이형성 증후군 (MDS) 및 급성 골수성 백혈병 (AML)을 포함하는 골수성 악성종양을 치료하는 방법을 제공한다.

Description

비푸코실화 항-CD70 항체 및 CD47 길항제의 조합으로 암을 치료하는 방법
관련된 출원에 대한 교차 참조
본 출원은 2021년 6월 29일 출원된 미국 가특허 출원 번호 63/216,233, 및 2022년 3월 11일 출원된 미국 가특허 출원 번호 63/318,920의 이익을 주장하고, 이들 모두는 그들 전체가 참조로 본원에 편입된다.
서열 목록에 대한 참조
0070-00812PC_ST25.txt로 지정되었고, 15 킬로바이트의 크기를 갖는 서열 목록은 참조로 편입된다.
기술 분야
본 발명은 CD47 길항제와 조합하여 비푸코실화 항-CD70 항체로, 암, 예컨대 골수이형성 증후군 (MDS) 및 급성 골수성 백혈병 (AML)을 포함하는 골수성 악성종양을 치료하는 방법에 관한 것이다.
배경
CD70은 다양한 정상 및 악성 세포 유형에 의해 발현되는 세포 막-결합되고 분비된 분자의 종양 괴사 인자 (TNF) 패밀리의 구성원이다. CD70의 1차 아미노산 (AA) 서열은 이의 카르복실 말단이 세포의 외부에 노출되고 이의 아미노 말단이 형질 막의 시토졸 측면에서 발견된 막관통 유형 II 단백질을 예측한다 (Bowman 등, 1994, J. Immunol. 152:1756-61; Goodwin 등, 1993, Cell 73:447-56). 인간 CD70은 20개의 AA 세포질 도메인, 18개의 AA 막관통 도메인, 및 2개의 잠재적 N-결합 글리코실화 부위를 갖는 155개의 AA 세포질외 도메인으로 구성된다 (Bowman 등, 상기; Goodwin 등, 상기). 항-CD70 항체에 의한 방사성 동위원소-표지 CD70-발현 세포의 특이적 면역침전은 29 및 50 kDa의 폴리펩티드를 산출한다 (Goodwin 등, 상기; Hintzen 등, 1994, J. Immunol. 152:1762-73). TNF-알파 및 TNF-베타에 대한 이의 상동성에 기초하여, 특히 구조적 가닥 C, D, H 및 1에서, 삼량체성 구조는 CD70에 대하여 예측된다 (Petsch 등, 1995, Mol. Immunol. 32:761-72)
원래 면역조직학적 연구는 CD70이 편도, 피부, 및 장에서 배 중심 B 세포 및 희귀 T 세포 상에서 발현되는 것을 밝혀내었다 (Hintzen 등, 1994, Int. Immunol.　6:477-80). 후속적으로, CD70은 최근 항원-활성화 T 및 B 림프구의 세포 표면 상에서 발현되는 것으로 보고되었고, 이의 발현은 항원성 자극의 제거 후 쇠퇴한다 (Lens 등, 1996, Eur. J. Immunol. 26:2964-71; Lens 등,1997, Immunology 90:38-45). 림프계 내에서, 활성화된 자연 살해 세포 (Orengo 등, 1997, Clin. Exp. Immunol. 107:608-13) 및 마우스 성숙한 말초 수지상 세포 (Akiba 등, 2000, J. Exp. Med. 191:375-80)는 또한 CD70을 발현한다. 비-림프성 계열에서, CD70은 흉선 수질 상피 세포 상에서 검출되었다 (Hintzen 등, 1994, 상기; Hishima 등, 2000, Am. J. Surg Pathol. 24:742-46).
CD70은 정상 비-조혈 세포 상에서는 발현되지 않는다. CD70 발현은 생리학적 조건 하에서 최근 항원-활성화 T 및 B 세포로 대부분 국한되고, 이의 발현은 항원성 자극이 중지하는 때 하향-조절된다. 동물 모델로부터의 증거는 CD70이 면역학적 장애 예컨대, 예를 들면, 류마티스 관절염 (Brugnoni 등, 1997, Immunol. Lett. 55:99-104), 건선성 관절염 (Brugnoni 등, 1997, Immunol. Lett. 55:99-104), 및 루푸스 (Oelke 등, 2004, Arthritis Rheum. 50:1850-60)의 원인이 될 수 있음을 시사한다. 염증성 반응에서의 이의 잠재적 역할 이외에도, CD70은 림프종 B 세포, 호지킨 및 리드-스턴버그 세포, 신경 기원의 악성 세포, 및 다수의 암종을 포함하는 다양한 형질전환된 세포 상에서 또한 발현된다. 연구는 급성 골수성 백혈병 (AML) 및 골수이형성 질환 (MDS) 환자들로부터의 줄기 세포가 양쪽 CD70 및 이의 수용체, CD27을 발현함을 보여주었다. 이 리간드-수용체 쌍 사이 상호작용은 백혈병 모세포 생존 및 증식을 촉진시킬 수 있다.
포유류 숙주 세포에서 생산된 단클론성 항체는 글리코실화를 포함하는 다양한 번역후 변형을 가질 수 있다. 단클론성 항체, 예컨대 IgG1은 각 중쇄의 아스파라긴 297 (Asn297)의 N-결합 글리코실화 부위를 갖는다 (온전한 항체당 2개). 항체 상의 Asn297에 부착된 글리칸은 소량의 말단 시알산 및 가변량의 갈락토스가 있는 극소 또는 무 양분성 N-아세틸글루코사민 (양분성 GlcNAc)을 가진 전형적으로 복합 이중안테나 구조이다. 글리칸은 또한 보통 높은 수준의 코어 푸코실화를 갖는다. 항체에서 코어 푸코실화의 감소는 Fc 이펙터 기능, 특히 Fc감마 수용체 결합 및 ADCC 활성을 변경시키는 것으로 밝혀졌다. 이 관찰은 조작 세포주에서 관심으로 이어져서 이들이 감소된 코어 푸코실화를 가진 항체를 생산한다.
코어 푸코실화를 감소시키도록 세포주를 조작하는 방법은 유전자 녹-아웃, 유전자 녹-인 및 RNA 간섭 (RNAi)을 포함한다. 유전자 녹-아웃에서, FUT8 (알파 1,6-푸코실트랜스퍼라제 효소)을 인코딩하는 유전자는 불활성화된다. FUT8은 GDP-푸코스로부터 N-글리칸의 Asn-결합 (N-결합) GlcNac의 위치 6으로의 푸코실 잔기의 전달을 촉매한다. FUT8은 Asn297에서 N-결합 이중안테나 탄수화물에 푸코스를 부가하는 것을 담당하는 유일한 효소인 것으로 보고된다. 유전자 녹-인은 효소 예컨대 GNTIII 또는 골지 알파 만노시다제 II를 인코딩하는 유전자를 부가한다. 세포에서 이러한 효소의 수준에서의 증가는 단클론성 항체를 푸코실화 경로로부터 전환시키고 (감소된 코어 푸코실화로 이어짐), 증가된 양의 양분성 N-아세틸글루코사민을 갖는다. RNAi는 전형적으로 FUT8 유전자 발현을 또한 표적화하여, 감소된 mRNA 전사물 수준, 또는 녹아웃 유전자 발현을 전적으로 유발시킨다.
세포주 조작하기에 대한 대안은 글리코실화 경로에서 효소에 작용하는 소 분자 억제제의 사용을 포함한다. 억제제 예컨대 카스타노스페르민은 글리코실화 경로에서 초기 작용하여, 미성숙한 글리칸 (예를 들면, 높은 수준의 만노스) 및 낮은 푸코실화 수준을 가진 항체를 생산한다. 이러한 방법에 의해 생산된 항체는 일반적으로 성숙한 항체와 회합된 복합 N-결합 글리칸 구조가 결여된다. 소 분자 푸코스 유사체는 복합 N-결합 글리칸을 갖지만, 감소된 코어 푸코실화를 갖는 재조합 항체를 생성하는데 또한 사용될 수 있다.
인테그린 회합된 단백질 (IAP)로서 또한 알려진, 분화 클러스터 47 (CD47)은 단백질의 면역글로불린 수퍼패밀리에 속하는 막관통 수용체이다. CD47은 세포 상에서 도처에 발현되고 자가-인식을 위한 마커의 역할을 하고, "나를 먹지 마세요" 신호의 역할을 함으로써 식세포작용을 예방한다. CD47은 트롬보스폰딘 (TSP) 및 신호 조절성 단백질-알파 (SIRPα)를 포함하는 여러 다른 단백질과의 상호작용을 통해서 이의 효과를 매개한다. 포식 세포 상의 SIRPα와 표적 세포 상의 CD47 사이 상호작용은 표적 세포가 삼켜지지 않는 보장을 돕는다. 특정 암은 암 세포의 세포 표면 상에서 CD47의 발현을 증가시킴으로써 세포의 CD47-기반 면역 회피 기전을 선택하여서, 면역 시스템에 의한 제거를 피한다.
CD70 발현과 연관된 암을 치료하기 위한 개선된 요법이 필요하다. 항-CD70 항체, 예컨대 특히 비-CD70-발현 세포 상에서 바람직하지 않은 효과 발휘 없이, CD70-발현 세포 상에서 임상적으로 유용한 세포독성, 세포증식억제성, 또는 면역조절성 효과를 발휘할 수 있는 감소된 코어 푸코실화를 가진 항-CD70 항체, 및 CD47을 길항하는 제제의 조합으로, 암, 예컨대 CD70을 발현하는 암을 치료하는 방법이 본원에 제공된다. 특히, 모두 클론성 줄기-세포 (HSC) 또는 전구 악성 장애인, 급성　골수성　백혈병 (AML), 골수증식성 장애 (MPDS), 골수이형성 증후군 (MDS) 및 골수이형성/골수증식성 증후군을 포함하는, 골수성　악성종양을 치료하는 방법이 본원에 제공된다 (TIU 등,　Leukemia, vol. 21(8), p: 1648-57, 2007).
MDS는 단일-계통 이형성증이 있는 MDS, 고리 철적모세포가 있는 MDS, 다계통 이형성증이 있는 MDS, 과도한 모세포가 있는 MDS, 단리된 del(5q)이 있는 MDS, 및 분류할 수 없는 MDS를 포함하는 여러 아형을 포괄한다 (ARBER 등, Blood, vol. 127, p: 2391-405, 2016). MDS는 골수의 계통 중 하나 이상에서 비효율적 조혈을 특징으로 한다. 초기 MDS는 대부분 과도한 세포사멸 및 조혈 세포 이형성증을 시연한다 (CLAESSENS 등,　Blood, vol. 99, p: 1594-601, 2002; CLASESSENS 등,　Blood, vol. 105, p: 4035-42, 2005). MDS 환자들의 약 3분의 1에서, 이 비효율적 조혈은 2차 AML (sAML)로의 진행보다 먼저 발생한다. 특이적 MDS 아형 (ELBERT 등, Nature, vol. 451(7176), p: 335-9, 2008) 또는 질환 변환 (BRAUN 등, Blood, vol. 107(3), p: 1156-65, 2006)과 연관된 일부 분자성 이벤트가 확인되었어도, 근본적인 분자성 결함은 아직 잘 이해되지 않는다. 형태학적 특질을 제외하고, 초기 진단 및 예후에 현재 이용가능한 생물학적 마커는 없다.
급성　골수성　백혈병　(AML)은 백혈구의 골수성　계통의 악성 종양이다. 이 울혈 형성은 보통 치료하지 않고 방치하면 몇 주에서 몇 개월 내에 치명적인 혈액 및 골수 질환이다. 미국에서 30,000개의 AML이 있고 유럽 연합에서 47,000개의 AML 추정치가 있다 (맷슨-잭에 의해 확인된 2010년 유병률 데이터, 2010). AML은 성인 급성 백혈병의 가장 만연한 형태 (약 90%)이고 새로운 백혈병 사례의 약 33%를 담고 있다. AML로 진단된 환자들의 중앙 연령은 67세이었다. 미국에서, AML은 암 사망의 대략 1.2%를 차지한다.
AML은 비-특이적 증상 예컨대 체중 감소, 피로, 발열 및 야간 발한을 유발시킨다. AML은 혈액 테스트, 골수 테스트, 및 실험실 테스트에 의해 진단되어 AML 아형을 결정하고 치료 결정을 내린다.
특허 출원, 특허 간행물, 및 과학 문헌을 포함하는 본원에 인용된 모든 참고문헌은 마치 각 개별 참고문헌이 참조로 편입되도록 구체적이고 개별적으로 표시된 것처럼 그들 전체가 참조로 본원에 편입된다.
개요
대상체에서 암을 치료하는 방법으로서, 대상체에게 비푸코실화 항-CD70 항체 및 CD47 길항제를 투여하는 것을 포함하는 방법에 있어서, 본 방법이 대상체에서 암 세포의 고갈을 초래하고, 본 방법이 대상체에서 CD70+ T 조절성 세포 (CD70+ Treg)의 고갈을 초래하지 않고, 항-CD70 항체가 중쇄 가변 영역, 경쇄 가변 영역 및 Fc 도메인을 포함하고, 중쇄 가변 영역이
(i) 서열번호:8의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1;
(ii) 서열번호:9의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및
(iii) 서열번호:10의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3
을 포함하고; 경쇄 가변 영역이
(i) 서열번호:11의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1;
(ii) 서열번호:12의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 및
(iii) 서열번호:13의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3
을 포함하고, 암이 골수이형성 증후군 (MDS) 및 급성 골수성 백혈병 (AML)으로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 방법이 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 항-CD70 항체는 서열번호:1의 아미노산 서열에 적어도 85% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호:2의 아미노산 서열에 적어도 85% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-CD70 항체는 서열번호:1의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호:2의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-CD70 항체의 Fc 도메인은 항체-의존적 세포성 세포독성 (ADCC), 항체-의존적 세포성 식세포작용 (ADCP), 및 보체-의존적 세포성 세포독성 (CDC) 중 하나 이상을 매개하는 항체 이펙터 도메인이다. 일부 구현예에서, 항-CD70 항체의 Fc 도메인은 ADCC를 매개하는 항체 이펙터 도메인이다. 일부 구현예에서, 항-CD70 항체의 Fc 도메인은 인간 Fc 도메인이다. 일부 구현예에서, 항-CD70 항체는 보르세투주맙의 비푸코실화 형태이다. 일부 구현예에서, 항-CD70 항체는 치료적 제제에 접합된다. 일부 구현예에서, 치료적 제제는 화학치료적 제제 또는 면역조절성 제제이다. 일부 구현예에서, 치료적 제제는 화학치료적 제제이다. 일부 구현예에서, 화학치료적 제제는 모노메틸 아우리스타틴 E (MMAE) 또는 모노메틸 아우리스타틴 F (MMAF)이다. 일부 구현예에서, 치료적 제제는 면역조절성 제제이다. 일부 구현예에서, 본 방법은 항-CD70 항체의 집단을 투여하는 것을 포함하고, 여기서 항-CD70 항체의 집단에서 각 항체는 중쇄 가변 영역, 경쇄 가변 영역, 및 Fc 도메인을 포함하고, 여기서 중쇄 가변 영역은
(i) 서열번호:8의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1;
(ii) 서열번호:9의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및
(iii) 서열번호:10의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3
을 포함하고; 경쇄 가변 영역은
(i) 서열번호:11의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1;
(ii) 서열번호:12의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 및
(iii) 서열번호:13의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3
을 포함하고, 여기서 항-CD70 항체의 집단에서 항-CD70 항체의 적어도 50%는 코어 푸코실화가 결여된다. 일부 구현예에서, 항-CD70 항체의 집단에서 항-CD70 항체의 적어도 70%는 코어 푸코실화가 결여된다. 일부 구현예에서, 항-CD70 항체의 집단에서 항-CD70 항체의 적어도 90%는 코어 푸코실화가 결여된다. 일부 구현예에서, 항-CD70 항체는 약 1-30 mg/kg의 대상체의 체중의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 항-CD70 항체는 약 10-20 mg/kg의 대상체의 체중의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 항-CD70 항체는 약 10 mg/kg의 대상체의 체중의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 항-CD70 항체는 약 15 mg/kg의 대상체의 체중의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 항-CD70 항체는 약 20 mg/kg의 대상체의 체중의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 항-CD70 항체는 약 매 1-4 주 1회 투여된다. 일부 구현예에서, 항-CD70 항체는 약 매 2 주 1회 투여된다. 일부 구현예에서, CD47 길항제는 CD47과 SIRPα 사이 상호작용을 억제시킨다.일부 구현예에서, CD47 길항제는 종양 세포의 식세포작용을 증가시킨다. 일부 구현예에서, CD47 길항제는 CD47에 결합하는 항체, 또는 이의 항원-결합 단편, 및 SIRPα에 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 및 SIRPα, 또는 이의 단편, 및 항체, 또는 이의 단편을 포함하는 융합 단백질로 이루어지는 군으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, SIRPα, 또는 이의 단편, 및 항체, 또는 이의 단편을 포함하는 융합 단백질은 항체의 Fc 영역에 공유적으로 결합된 SIRPα, 또는 이의 면역글로불린 V-유사 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, CD47 길항제는 IgG1 또는 IgG4 항체이다. 일부 구현예에서, CD47 길항제는 마그롤리맙, CC-90002, ALX148, RRx-001, TTI-622, TTI-621, 및 KWAR23으로 이루어지는 군으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, CD47 길항제는 마그롤리맙이다. 일부 구현예에서, CD47 길항제는 1-50 mg/kg의 대상체의 체중의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, CD47 길항제는 1-30 mg/kg의 대상체의 체중의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, CD47 길항제는 1 mg/kg의 대상체의 체중의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, CD47 길항제는 15 mg/kg의 대상체의 체중의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, CD47 길항제는 30 mg/kg의 대상체의 체중의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, CD47 길항제는 준최적 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, CD47 길항제는 약 매 1-4 주 1회 투여된다. 일부 구현예에서, CD47 길항제는 약 매주 1회 투여된다. 일부 구현예에서, CD47 길항제는 약 매 2 주 1회 투여된다. 일부 구현예에서, CD47 길항제는 제1 4-주 주기의 1, 4, 8, 11, 15, 및 22 일차에 초기에 투여된다. 일부 구현예에서, CD47 길항제는 제2 4-주 주기의 1, 8, 15, 및 22 일차에 투여된다. 일부 구현예에서, CD47 길항제는 제3 4-주 주기의 1 및 15 일차에 투여된다. 일부 구현예에서, 암은 MDS이다. 일부 구현예에서, MDS는 재발성 또는 불응성 MDS이다. 일부 구현예에서, 대상체는 MDS에 대하여 선행 저메틸화 제제 (HMA) 요법 후 치료 실패를 경험하였다. 일부 구현예에서, 암은 AML이다. 일부 구현예에서, AML은 재발성 또는 불응성 AML이다. 일부 구현예에서, 대상체는 AML을 치료하기 위해 2개의 선행 치료 용법을 받았다. 일부 구현예에서, 대상체는 AML을 치료하기 위해 3개의 선행 치료 용법을 받았다. 일부 구현예에서, 암 세포의 적어도 약 0.1%, 적어도 약 1%, 적어도 약 2%, 적어도 약 3%, 적어도 약 4%, 적어도 약 5%, 적어도 약 6%, 적어도 약 7%, 적어도 약 8%, 적어도 약 9%, 적어도 약 10%, 적어도 약 15%, 적어도 약 20%, 적어도 약 25%, 적어도 약 30%, 적어도 약 35%, 적어도 약 40%, 적어도 약 45%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 또는 적어도 약 80%는 CD70을 발현한다. 일부 구현예에서, 암 세포의 적어도 약 0.1%, 적어도 약 1%, 적어도 약 2%, 적어도 약 3%, 적어도 약 4%, 적어도 약 5%, 적어도 약 6%, 적어도 약 7%, 적어도 약 8%, 적어도 약 9%, 적어도 약 10%, 적어도 약 15%, 적어도 약 20%, 적어도 약 25%, 적어도 약 30%, 적어도 약 35%, 적어도 약 40%, 적어도 약 45%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 또는 적어도 약 80%는 CD47을 발현한다. 일부 구현예에서, 대상체에게 비푸코실화 항-CD70 항체 및 CD47 길항제를 투여하는 것은 대상체에게 비푸코실화 항-CD70 항체 및 CD47 길항제를 투여하기 전 암 세포의 양과 비교하여 적어도 약 5%, 적어도 약 6%, 적어도 약 7%, 적어도 약 8%, 적어도 약 9%, 적어도 약 10%, 적어도 약 15%, 적어도 약 20%, 적어도 약 25%, 적어도 약 30%, 적어도 약 35%, 적어도 약 40%, 적어도 약 45%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 또는 약 100% 만큼 암 세포의 고갈을 초래한다. 일부 구현예에서, 대상체에게 비푸코실화 항-CD70 항체 및 CD47 길항제를 투여하는 것은 대상체에게 아푸코실화 항-CD70 항체 및 CD47 길항제를 투여하기 전 CD70+ Treg의 양과 비교하여 약 20%, 약 10%, 약 9%, 약 8%, 약 7%, 약 6%, 약 5%, 약 4%, 약 3%, 약 2%, 약 1%, 또는 약 0.1% 이하의 CD70+ Treg의 고갈을 초래한다. 일부 구현예에서, 대상체에서 하나 이상의 치료적 효과는 기준선에 비해 비푸코실화 항-CD70 항체 및 CD47 길항제의 투여 후 개선된다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 치료적 효과는 다음으로 이루어지는 군으로부터 선택된다: 객관적 반응률, 반응의 지속기간, 반응까지의 시간, 무진행 생존 및 전체 생존. 일부 구현예에서, 객관적 반응률은 적어도 약 20%, 적어도 약 25%, 적어도 약 30%, 적어도 약 35%, 적어도 약 40%, 적어도 약 45%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 또는 적어도 약 80%이다. 일부 구현예에서, 대상체는 비푸코실화 항-CD70 항체 및 CD47 길항제의 투여 후 적어도 약 1 개월, 적어도 약 2 개월, 적어도 약 3 개월, 적어도 약 4 개월, 적어도 약 5 개월, 적어도 약 6 개월, 적어도 약 7 개월, 적어도 약 8 개월, 적어도 약 9 개월, 적어도 약 10 개월, 적어도 약 11 개월, 적어도 약 12 개월, 적어도 약 18 개월, 적어도 약 2 년, 적어도 약 3 년, 적어도 약 4 년, 또는 적어도 약 5 년의 무진행 생존을 나타낸다. 일부 구현예에서, 대상체는 비푸코실화 항-CD70 항체 및 CD47 길항제의 투여 후 적어도 약 1 개월, 적어도 약 2 개월, 적어도 약 3 개월, 적어도 약 4 개월, 적어도 약 5 개월, 적어도 약 6 개월, 적어도 약 7 개월, 적어도 약 8 개월, 적어도 약 9 개월, 적어도 약 10 개월, 적어도 약 11 개월, 적어도 약 12 개월, 적어도 약 18 개월, 적어도 약 2 년, 적어도 약 3 년, 적어도 약 4 년, 또는 적어도 약 5 년의 전체 생존을 나타낸다. 일부 구현예에서, 항-CD70 항체 및 CD47 길항제에 대한 반응의 지속기간은 비푸코실화 항-CD70 항체 및 CD47 길항제의 투여 후 적어도 약 1 개월, 적어도 약 2 개월, 적어도 약 3 개월, 적어도 약 4 개월, 적어도 약 5 개월, 적어도 약 6 개월, 적어도 약 7 개월, 적어도 약 8 개월, 적어도 약 9 개월, 적어도 약 10 개월, 적어도 약 11 개월, 적어도 약 12 개월, 적어도 약 18 개월, 적어도 약 2 년, 적어도 약 3 년, 적어도 약 4 년, 또는 적어도 약 5 년이다. 일부 구현예에서, 항-CD70 항체에 대하여 투여의 루트는 정맥내이다. 일부 구현예에서, CD47 길항제에 대하여 투여의 루트는 정맥내이다. 일부 구현예에서, 대상체는 인간이다. 일부 구현예에서, 본 방법은 아자시티딘의 투여를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 아자시티딘은 75 mg/m2의 대상체의 신체 표면적의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 아자시티딘은 4-주 주기의 1 내지 7 일차에 투여된다. 일부 구현예에서, 아자시티딘은 4-주 주기의 1 내지 5 및 8 내지 9 일차에 투여된다. 일부 구현예에서, 본 방법은 베네토클락스의 투여를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 본 방법은 플루오로퀴날론의 투여를 추가로 포함한다.
암의 치료를 위한 약학적 조성물로서, 비푸코실화 항-CD70 항체 및 적어도 하나의 약학적으로 상용가능한 구성성분을 포함하는 조성물에 있어서, 항-CD70 항체가 중쇄 가변 영역, 경쇄 가변 영역, 및 Fc 도메인을 포함하고, 중쇄 가변 영역이
(i) 서열번호:8의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1;
(ii) 서열번호:9의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및
(iii) 서열번호:10의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3
을 포함하고; 경쇄 가변 영역이
(i) 서열번호:11의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1;
(ii) 서열번호:12의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 및
(iii) 서열번호:13의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3
을 포함하고, 약학적 조성물이 CD47 길항제와 조합하여 사용하기 위한 것이고, 조성물이 본원에 구현예들 중 임의의 방법에서 사용하기 위한 것인, 조성물이 본원에 또한 제공된다.
비푸코실화 항-CD70 항체 및 CD47 길항제, 및 본원에 구현예들 중 임의의 방법에서 상기 항-CD70 항체를 사용하기 위한 지침을 포함하는 키트에 있어서, 항-CD70 항체가 중쇄 가변 영역, 경쇄 가변 영역, 및 Fc 도메인을 포함하고, 중쇄 가변 영역이
(i) 서열번호:8의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1;
(ii) 서열번호:9의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및
(iii) 서열번호:10의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3
을 포함하고; 경쇄 가변 영역이
(i) 서열번호:11의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1;
(ii) 서열번호:12의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 및
(iii) 서열번호:13의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3
을 포함하는, 키트가 본원에 또한 제공된다.
본원에 기재된 다양한 구현예의 특성들 중 하나, 일부, 또는 모두가 조합되어 본 발명의 다른 구현예를 형성할 수 있음이 이해되어야 한다. 본 발명의 이들 및 다른 양태는 당업자에 명백해질 것이다. 본 발명의 이들 및 다른 구현예는 하기 상세한 설명에 의해 추가로 기재된다.
도면의 간단한 설명
도 1은 MV4-11 AML 이종이식 모델에서 종양 성장에 관해 SEA-CD70 단독, h5F9-G4 (마그롤리맙) 단독, 또는 h5F9-G4와 조합하여 SEA-CD70의 효과를 평가하는 그래프이다. 평균 종양 부피 (± SEM)는 각 치료 아암에 대하여 보고된다. 각 치료 그룹에 대하여, 데이터는 각 그룹내 제1 동물이 종양 크기 >1000 mm3에 도달하는 경우 희생된 때까지 플롯팅된다.
도 2는 MV411 급성 골수성 백혈병 이종이식 마우스 모델에서 종양 성장에 관해 h5F9-G4 (마그롤리맙) 및 아자시티딘 (Vidaza®)과 조합하여 SEA-CD70의 효과를 평가하는 그래프이다. 평균 종양 부피 (± SEM)는 각 치료 아암에 대하여 보고된다. 각 단일 치료 그룹에 대하여, 데이터는 각 그룹내 제1 동물이 종양 크기 >750 mm3에 도달하는 경우 희생된 때까지 플롯팅된다.
상세한 설명
I. 정의
달리 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 모든 기술 및 과학 용어는 기재된 방법 및 조성물에 관한 당업자에 의해 통상적으로 이해된 바와 동일한 의미를 갖는다. 본원에서 상표명이 사용되는 경우, 출원인은 상표명 제품 제형, 제네릭 약물, 및 상표명 제품의 활성 약학적 구성성분(들)을 독립적으로 포함하도록 의도한다. 본원에 사용된 경우에, 하기 용어 및 어구는 달리 명시되지 않는 한 그에 부여된 의미를 갖는다.
본원에 사용된 경우 용어 "및/또는"은 다른 것과 함께 또는 다른 것 없이 2개 명시된 특질 또는 구성요소의 각각의 구체적 개시로서 취급되어야 한다. 그래서, 본원에 어구 예컨대 "A 및/또는 B"에서 사용된 경우에 용어 "및/또는"은 "A 및 B", "A 또는 B", "A" (단독), 및 "B" (단독)를 포함하도록 의도된다. 마찬가지로, 어구 예컨대 "A, B, 및/또는 C"에 사용된 경우에 용어 "및/또는"은 하기 양태들의 각각을 포괄하도록 의도된다: A, B, 및 C; A, B, 또는 C; A 또는 C; A 또는 B; B 또는 C; A 및 C; A 및 B; B 및 C; A (단독); B (단독); 및 C (단독).
본원에 기재된 본 발명의 양태 및 구현예가 양태 및 구현예"를 포함하는", "로 이루어지는", 및 "로 본질적으로 이루어지는" 것을 포함함이 이해된다.
단위, 접두어, 및 기호는 그들의 시스템 인터내셔날 드 유니테스 (SI) 허용 형태로 표시된다. 수치적 범위는 범위를 규정하는 숫자를 포함한다. 본원에 제공된 표제는 본 개시내용의 다양한 양태의 제한이 아니고, 본 명세서를 전체로서 참조할 수 있다. 따라서, 바로 아래에 정의된 용어는 본 명세서에 이 전체를 참조로 더욱 충분히 정의된다.
본원에 사용된 경우에 용어 "CD70 결합 제제" 및 "항-CD70 결합 제제"는 항-CD70 항체, 항-CD70 항체의 유도체 또는 단편, 또는 CD70에 결합하고 CD70 결합 항체, 또는 이의 유도체의 적어도 하나의 CDR 또는 가변 영역을 포함하는 다른 제제를 의미한다.
용어 "CD47"은 본원에 사용된 경우에 다양한 정상 세포 및 종양 세포 상에서 도처에 발현된 막관통 단백질인 세포 표면 항원 CD47을 지칭한다. CD47은 면역글로불린 수퍼패밀리 수용체 SIRPα에 대한 리간드이다. CD47은 "항원성 표면 결정기 단백질 OA3", "인테그린-연관 단백질 (IAP)" 및 "단백질 MER6"으로서 또한 지칭된다. 용어 CD47은 본원에 사용된 경우에 CD47 단백질의 모든 다형성 변이체를 포괄하도록 의도된다.
용어 "SIRPα"는 본원에 사용된 경우에 SHP 기질 1 (SHPS-1 ), 티로신-기반 활성화 모티프를 가진 뇌 Ig-유사 분자 (Bit), CD172 항원-유사 패밀리 구성원 A, 억제성 수용체 SHPS-1, 대식세포 융합 수용체, MyD-1 항원, SIRPαl, SIRPα2, SIRPα3, p84, 및 CD172a로서 또한 알려지는 "신호-조절성 단백질 알파"를 지칭한다. SIRPα는 면역글로불린 수퍼패밀리의 한 구성원이고 대식세포 및 수지상 세포를 포함하는 포식 세포 상에서 발현된 막관통 단백질이다. 이는 CD47에 대한 수용체이다. 용어 SIRPα는 본원에 사용된 경우에 SIRPα 단백질의 모든 다형성 변이체를 포괄하도록 의도된다.
용어 "SIRPα 항체 분자 융합 단백질"은 SIRPα 단백질 또는 이의 단편 및 항체 분자를 포함하는 융합 단백질을 의미하도록 의도된다. 항체 분자는 본원에 다른 곳에 정의된 경우에 전장 항체 분자, 예를 들어 전장 IgG 항체일 수 있다. 대안적으로, 항체 분자는 본원에 다른 곳에 정의된 경우에 항체의 항원 결합 단편일 수 있다. SIRPα 단백질 또는 이의 단편은 항체 분자 상의 임의의 적당한 자리에서 항체 분자에 융합될 수 있다. 예를 들어, SIRPα 단백질 또는 이의 단편은 항체 분자의 중쇄 또는 경쇄의 N-말단 또는 C-말단에 융합될 수 있다. 특정 구현예에서, SIRPα 항체 분자 융합 단백질은 전장 SIRPα 단백질을 포함하지 않을 것이지만 이의 단편, 특히 CD47에 결합할 수 있는 단편을 포함할 것이다. 예를 들어, SIRPα 항체 분자 융합 단백질은 SIRPα 면역글로불린 V-유사 도메인의 하나 이상의 카피를 포함할 수 있다.
용어 "특이적으로 결합하다"는 결합 제제가, 고도로 선택적 방식으로, 이의 상응하는 항원과 반응할 것이고 다수의 다른 항원 (예를 들면, 비-CD70 분자 또는 비-CD47 분자)과 반응하지 않을 것임을 의미한다.
본원에 사용된 경우에, CD70 결합 제제 또는 CD47 비딩 제제의 맥락에서 용어 "기능적"은 결합 제제가 CD70 또는 CD47에 결합할 수 있음을 나타낸다.
본원에 사용된 경우에 용어 "억제하다" 또는 "의 억제"는 측정가능한 양만큼 감소시키거나, 또는 완전히 방지하는 것을 의미한다.
CD70-발현 세포 상에서 CD70-결합 제제의 효과의 맥락에서 용어 "고갈시키다"는 CD70-발현 세포의 수에서의 감소 또는 이의 제거를 지칭한다. 유사하게, CD47-발현 세포 상에서 CD47-결합 제제의 효과의 맥락에서 용어 "고갈시키다"는 CD47-발현 세포의 수에서의 감소 또는 이의 제거를 지칭한다.
"온전한 항체" 및 "온전한 면역글로불린"은, 2개의 동일한 경 (L) 쇄 및 2개의 동일한 중 (H) 쇄로 구성된, 전형적으로 약 150,000 달톤의 이종사량체성 당단백질로서 본원에 정의된다. 각 경쇄는 디술피드 결합에 의해 중쇄에 공유적으로 결합되어 이종이량체를 형성한다. 이종이량체는 이러한 이종이량체들의 2개 동일한 중쇄들 사이 공유 디술피드 연결기에 의해 형성된다. 경쇄 및 중쇄가 디술피드 결합에 의해 함께 결합되어도, 2개 중쇄 사이 디술피드 연결기의 수는 면역글로불린 (Ig) 아이소타입에 의해 가변한다. 각 중쇄 및 경쇄는 또한 규칙적으로 이격된 쇄내 디술피드 브릿지를 갖는다. 각 중쇄는 아미노-말단에서 가변 도메인 (VH), 이어서 3개의 또는 4개의 불변 도메인 (CH1, CH2, CH3, 및/또는 CH4), 뿐만 아니라 CH1과 CH2 사이 힌지 (J) 영역을 갖는다. 각 경쇄는 2개의 도메인, 아미노-말단 가변 도메인 (VL) 및 카르복시-말단 불변 도메인 (CL)을 갖는다. VL 도메인은 VH 도메인과 비-공유적으로 회합하고, 반면에 CL 도메인은 디술피드 결합을 통해 CH1 도메인에 흔히 공유적으로 결합된다. 특정한 아미노산 잔기는 경쇄 및 중쇄 가변 도메인 사이 계면을 형성하는 것으로 믿어진다 (Chothia 등, 1985, J. Mol. Biol. 186:651-663).
용어 "초가변"은 항체들 중에 서열에서 광범위하게 상이하고 이의 특이적 항원성 결정기에 대하여 각 특정한 항체의 결합 및 특이성에 직접적으로 연루되는 잔기를 함유하는 가변 도메인 내에서 특정 서열을 지칭한다. 초가변성은, 양쪽 경쇄 및 중쇄 가변 도메인에서, 상보성 결정 영역 (CDR) 또는 초가변 루프 (HVL)로서 알려진 3개의 세그먼트에 집중된다. CDR은 Kabat 등, 1991, In: Sequences of Proteins of Immunological Interest, 제5판 Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, M.D.에서 서열 비교에 의해 정의되고, 반면에 HVL은 Chothia 및 Lesk, 1987, J. Mol. Biol. 196:901-917에 의해 기재된 대로, 가변 도메인의 3-차원 구조에 따라 구조적으로 정의된다. 이들 2개의 방법이 CDR의 약간 상이한 식별을 초래하는 경우, 구조적 정의는 바람직하다. Kabat (Kabat 등, "Sequences of proteins of immunological interest, 제5판, Pub. No. 91-3242, U.S. Dept. Health & Human Services, NIH, Bethesda, M.D., 1991 참조)에 의해 정의된 경우에, 경쇄 가변 도메인에서 CDR-L1은 약 잔기 24-34에, CDR-L2는 약 잔기 50-56에, 그리고 CDR-L3은 약 잔기 및 89-97에 위치하고 중쇄 가변 도메인에서 CDR-H1내 약 31-35, CDR-H2내 약 50-65, 및 CDR-H3내 약 95-102에 위치한다.
중쇄 및 경쇄들의 각각 내에서 3개의 CDR은 덜 가변적인 경향인 서열을 함유하는 프레임워크 영역 (FR)에 의해 분리된다. 중쇄 및 경쇄 가변 도메인의 아미노 말단부터 카르복시 말단까지, FR 및 CDR은 순서대로 배열된다: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, 및 FR4. FR의 주로 β-시트 배치는 각각의 쇄 내에서 CDR을 서로 뿐만 아니라 다른 쇄로부터의 CDR과 근접하게 만든다. 모든 CDR 잔기가 반드시 항원 결합에 직접 연루되는 것은 아니어도, 생성된 형태는 항원 결합 부위에 기여한다 (Kabat 등, 1991, NIH Publ No 91-3242, Vol I, pages 647-669 참조).
FR 잔기 및 Ig 불변 도메인은 전형적으로 항원 결합에 직접적으로 연루되지 않지만, 항원 결합에 기여할 수 있거나 항체 이펙터 기능을 매개할 수 있다. 일부 FR 잔기는 적어도 3개의 식으로: 에피토프에 직접적으로 비공유적으로 결합함으로써, 하나 이상의 CDR 잔기와 상호작용함으로써, 그리고 중쇄와 경쇄 사이 계면에 영향을 미침으로써 항원 결합에 관한 유의미한 효과를 가질 수 있다. 불변 도메인은 다양한 Ig 이펙터 기능, 예컨대 항체 의존적 세포성 세포독성 (ADCC), 보체 의존적 세포독성 (CDC) 및/또는 항체 의존적 세포성 식세포작용 (ADCP)에서 항체의 참가를 매개한다.
척추동물 면역글로불린의 경쇄는 불변 도메인의 아미노산 서열에 기초하여 2개의 분명히 구분된 부류, 카파 (k) 및 람다 (λ) 중 하나로 할당된다. 비교로, 포유류 면역글로불린의 중쇄는 불변 도메인의 서열에 따라 5개의 주요 부류: IgA, IgD, IgE, IgG, 및 IgM 중 하나로 할당된다. IgG 및 IgA는 하위부류 (아이소타입), 예를 들면, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA, 및 IgA2로 추가로 분할된다. 면역글로불린의 상이한 부류에 상응하는 중쇄 불변 도메인은 α, δ, ε, γ, 및 μ, 각각으로 불린다. 천연 면역글로불린의 부류의 아단위 구조 및 3-차원 배치는 잘 알려진다.
용어 "항체", "항-CD70 항체", "인간화된 항-CD70 항체", "변이체 인간화된 항-CD70 항체", "항-CD47 항체", "인간화된 항-CD47 항체", 및 "변이체 인간화된 항-CD47 항체"는 가장 넓은 의미로 본원에 사용되고 전장 및 천연 항체, 단클론성 항체 (전장 단클론성 항체 포함), 다클론성 항체, 다중특이적 항체 (예를 들면, 이중특이적 항체), 및 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 예컨대 원하는 생물학적 활성, 예를 들면, CD70 결합 또는 CD47 결합을 나타내는 항체의 가변 도메인 및 다른 부문을 구체적으로 포괄한다.
용어 "단클론성 항체" (mAb)는 실질적으로 동질 항체의 집단으로부터 수득된 항체를 지칭하고; 즉, 집단을 포함하는 개별 항체는 미량으로 존재할 수 있는 자연 발생 돌연변이를 제외하고 동일하다. 단클론성 항체는 고도로 특이적이고, 에피토프로서 또한 지칭된 단일 항원성 결정기에 대해 지시된다. 수식어 "단클론성"은 동일한 에피토프에 대한 항체의 실질적으로 동질 집단을 나타내고 임의의 특정한 방법에 의한 항체의 생산을 요구하는 것으로 해석되지 않아야 한다. 단클론성 항체는 당업계에 알려진 임의의 기법 또는 방법론; 예를 들어, 등, 1975, Nature 256:495에 의해 최초 기재된 하이브리도마 방법, 또는 당업계에 알려진 재조합 DNA 방법 (예를 들면, 미국 특허 번호 4,816,567 참조)에 의해 만들어질 수 있다. 또 다른 예에서, 단클론성 항체는, Clackson 등, 1991, Nature 352: 624-628, 및 Marks 등, 1991, J. Mol. Biol. 222:581-597에 기재된 기법을 사용하여, 파지 항체 라이브러리로부터 또한 단리될 수 있다.
대조적으로, 다클론성 항체의 제조에서 항체는 전형적으로 면역글로불린 아이소타입 및/또는 부류의 이질 집단이고 다양한 에피토프 특이성을 또한 나타낸다.
용어 "키메릭" 항체는, 본원에 사용된 경우에, 중쇄 및/또는 경쇄의 하나 이상의 영역 또는 도메인에서 한 부문의 또는 완전 아미노산 서열이 또 다른 종으로부터 또는 또 다른 면역글로불린 부류 또는 아이소타입에 속하는 단클론성 항체에서, 또는 공통 서열로부터 상응하는 서열과 동일하거나, 이와 상동이거나, 이의 변이체인 단클론성 항체의 한 유형이다. 키메릭 항체는 이러한 항체의 단편을 포함하고, 단 항체 단편은 이의 모체 항체의 원하는 생물학적 활성, 예를 들어 동일한 에피토프에 대한 결합을 나타낸다 (예를 들면, 미국 특허 번호 4,816,567; 및 Morrison 등, 1984, Proc. Natl. Acad Sci. USA 81:6851-6855 참조). 키메릭 항체를 생산하는 방법은 당업계에 알려진다. (예를 들면, Morrison, 1985. Science 229:1202; Oi 등, 1986, BioTechniques 4:214; Gillies 등, 1989, J. Immunol. Methods 125:191-202; 미국 특허 번호 5,807,715; 4,816,567; 및 4,816,397. 참조)
용어 "항체 단편", "항-CD70 항체 단편", "인간화된 항-CD70 항체 단편", "변이체 인간화된 항-CD70 항체 단편", "항-CD47 항체 단편", "인간화된 항-CD47 항체 단편", 및 "변이체 인간화된 항-CD47 항체 단편"은 가변 영역 또는 기능적 능력, 예를 들어, 특이적 CD70 또는 CD47 에피토프 결합이 유지되는 전장 항-CD70 항체 또는 항-CD47 항체의 한 부문을 지칭한다. 항체 단편의 예는, 비제한적으로, Fab, Fab', F(ab')2, Fd, Fv, scFv 및 scFv-Fc 단편, 디아바디, 트리아바디, 테트라바디, 선형 항체, 단일-쇄 항체, 및 항체 단편으로부터 형성된 다른 다중특이적 항체를 포함한다. (Holliger 및 Hudson, 2005, Nat. Biotechnol. 23:1126-1136. 참조)
"단일-쇄 Fv" 또는 "scFv" 항체 단편은 도메인이 단일 폴리펩티드 쇄에서 존재하고 항원을 인식 및 결합할 수 있는 항체의 VH 및 VL 도메인을 포함하는 단일 쇄 Fv 변이체이다. scFv 폴리펩티드는 임의로 scFv가 항원 결합에 대하여 원하는 3-차원 구조를 형성할 수 있도록 하는 VH 및 VL 도메인 사이 위치한 폴리펩티드 링커를 함유한다 (예를 들면, Pluckthun, 1994, In The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, Vol. 113, Rosenburg 및 Moore eds., Springer-Verlag, New York, pp. 269-315 참조).
용어 "디아바디"는 2개의 항원-결합 부위를 갖는 소 항체 단편을 지칭한다. 각 단편은 경쇄 가변 도메인 (VL)에 연결된 중쇄 가변 도메인 (VH)을 함유하여 VH - VL 또는 VL - VH 폴리펩티드를 형성한다. 동일한 쇄 상에서 2개의 도메인 사이 짝짓기를 허용하기에 너무 짧은 링커를 사용함으로써, 결합된 VH-VL 도메인은 또 다른 쇄의 상보적 도메인과 강제로 짝짓기되어, 2개의 항원-결합 부위를 창출한다. 디아바디는, 예를 들어, EP　404　097; WO 93/11161; 및 Hollinger 등, 1993, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444-6448에 더욱 충분히 기재된다.
용어 "선형 항체"는 항원 결합 영역의 한 쌍을 형성하는 탠덤 Fd 세그먼트 (VH -CH1- VH -CH1)의 한 쌍을 포함하는 항체를 지칭한다. 선형 항체는 Zapata 등, 1995, Protein Eng. 8(10):1057-1062에 기재된 대로 이중특이적 또는 단일특이적일 수 있다.
"인간화된 항체"는 예정된 항원에 결합할 수 있는 그리고 인간 면역글로불린의 아미노산 서열을 실질적으로 갖는 프레임워크 영역 및 비-인간 면역글로불린의 아미노산 서열을 실질적으로 갖는 CDR(들)을 갖는 가변 영역 폴리펩티드 쇄를 포함하는 면역글로불린 아미노산 서열 변이체 또는 이의 단편을 지칭한다.
일반적으로, 인간화된 항체는 비-인간인 공급원으로부터 이에 도입된 하나 이상의 아미노산 잔기를 갖는다. 이들 비-인간 아미노산 잔기는 "유입" 항체 도메인, 특히 가변 도메인으로부터 전형적으로 취해지는 "유입" 잔기로서 본원에 지칭된다. 유입 잔기, 서열, 또는 항체는 본원에 논의된 대로 원하는 친화도 및/또는 특이성, 또는 다른 바람직한 항체 생물학적 활성을 갖는다.
일반적으로, 인간화된 항체는 CDR 영역의 모두 또는 실질적으로 모두가 비-인간 면역글로불린의 것들에 상응하고 프레임워크 영역의 모두 또는 실질적으로 모두가 인간 면역글로불린 서열의 것들, 예컨대 예를 들어, 공통 또는 생식계열 서열 출신인 적어도 1개, 및 전형적으로 2개, 가변 도메인의 실질적으로 모두를 포함할 것이다. 인간화된 항체는 임의로 또한 면역글로불린 Fc 도메인의 적어도 한 부문, 전형적으로 인간 면역글로불린의 것을 포함할 것이다. 예를 들어, 항체는 경쇄 뿐만 아니라 적어도 중쇄의 가변 도메인 양쪽을 함유할 수 있다. 항체는 또한 적절한 경우에 중쇄의 CH1, 힌지 (J), CH2, CH3, 및/또는 CH4 영역을 포함할 수 있다.
인간화된 항체는 IgM, IgG, IgD, IgA 및 IgE를 포함하는 면역글로불린의 임의의 부류, 및 IgG1, IgG2, IgG3 및 lgG4를 포함하는 임의의 아이소타입으로부터 선택될 수 있다. 불변 영역 또는 도메인은, 예를 들어, 인간화된 항체가 세포독성 활성을 나타내는 것이 바람직한 보체 고정 불변 도메인 (예를 들면, IgG1)을 포함할 수 있다. 이러한 세포독성 활성이 바람직하지 않은 경우, 불변 도메인은 또 다른 부류 (예를 들면, IgG2)의 것일 수 있다. 인간화된 항체는 1개 초과 부류 또는 아이소타입으로부터 서열을 포함할 수 있고, 원하는 이펙터 기능을 최적화하기 위해 특정한 불변 도메인을 선택하는 것은 당업계에 통상의 기술 내에 있다.
인간화된 항체의 FR 및 CDR 영역은 모체 서열에 정확하게 상응할 필요가 없고, 예를 들면, 유입 CDR 또는 공통 FR은 그 부위에 CDR 또는 FR 잔기가 공통 또는 유입 항체 어느 한쪽에 상응하지 않도록 적어도 하나의 잔기의 치환, 삽입 또는 결실에 의해 변경될 수 있다. 이러한 돌연변이는 전형적으로 광범위하지 않을 것이다. 보통, 인간화된 항체 잔기의 적어도 75%, 더욱 종종 적어도 90%, 및 가장 종종 95% 초과는 모체 FR 및 CDR 서열의 것들에 상응할 것이다.
용어 "항체 이펙터 기능(들)"은 본원에 사용된 경우에 Ig의 Fc 도메인(들)에 의해 기여된 기능을 지칭한다. 이러한 기능은, 예를 들어, 항체-의존적 세포성 세포독성, 항체-의존적 세포성 식세포작용 또는 보체-의존적 세포독성일 수 있다. 이러한 기능은, 예를 들어, 포식 또는 용해 활성이 있는 면역 세포 상에서 Fc 수용체에 Fc 이펙터 도메인(들)의 결합에 의해 또는 보체 시스템의 구성요소에 Fc 이펙터 도메인(들)의 결합에 의해 영향받을 수 있다. 전형적으로, Fc-결합 세포 또는 보체 구성요소에 의해 매개된 효과(들)는 CD70 표적화된 세포의 억제 및/또는 고갈을 초래한다. 임의의 특정한 이론에 의해 구속되도록 의도함 없이, 항체의 Fc 영역은 Fc 수용체 (FcR)-발현 세포를 동원할 수 있고 이들을 항체-코팅 표적 세포와 병치할 수 있다. FcγRIII (CD16), FcγRII (CD32) 및 FcγRIII (CD64)을 포함하는 IgG에 대하여 표면 FcR을 발현하는 세포는 IgG-코팅 세포의 파괴를 위한 이펙터 세포로서 작용할 수 있다. 이러한 이펙터 세포는 단핵구, 대식세포, 자연 살해 (NK) 세포, 호중구 및 호산구를 포함한다. IgG에 의한 FcγR의 관여는 항체-의존적 세포성 세포독성 (ADCC) 또는 항체-의존적 세포성 식세포작용 (ADCP)을 활성화시킨다. ADCC는 막 기공-형성 단백질 및 프로테아제의 분비를 통해서 CD16+ 이펙터 세포에 의해 매개되고, 한편 식세포작용은 CD32+ 및 CD64+ 이펙터 세포에 의해 매개된다 (Fundamental Immunology, 제4판, Paul ed., Lippincott-Raven, N.Y., 1997, Chapters 3, 17 및 30; Uchida 등, 2004, J. Exp. Med. 199:1659-69; Akewanlop 등, 2001, Cancer Res. 61:4061-65; Watanabe 등, 1999, Breast Cancer Res. Treat. 53:199-207 참조). ADCC 및 ADCP 이외에, 세포-결합 항체의 Fc 영역은 보체 고전적 경로를 또한 활성화시켜 보체-의존적 세포독성 (CDC)을 유도해낼 수 있다. 보체 시스템의 C1q는 이들이 항원과 복합체화되는 때 항체의 Fc 영역에 결합한다. 세포-결합 항체에 C1q의 결합은 C4 및 C2의 단백질분해성 활성화를 연루시키는 일련의 이벤트를 개시하여 C3 컨버타제를 생성할 수 있다. C3 컨버타제에 의한 C3의 C3b로의 절단은 C5b, C6, C7, C8 및 C9를 포함하는 말단 보체 구성요소의 활성화를 가능하게 한다. 일괄하여, 이들 단백질은 항체-코팅 세포 상에서 막-공격 복합체 기공을 형성한다. 이들 기공은 세포 막 무결성을 파괴시켜, 표적 세포를 살해한다 (Immunobiology, 제6판, Janeway 등, Garland Science, N. Y., 2005, Chapter 2참조).
용어 "항체-의존적 세포성 세포독성", 또는 ADCC는 용해 활성을 소유하는 면역 세포 (또한 이펙터 세포로서 지칭됨)와 항체-코팅 표적 세포의 상호작용에 의존하는 세포사를 유도하기 위한 기전이다. 이러한 이펙터 세포는 자연 살해 세포, 단핵구/대식세포 및 호중구를 포함한다. 이펙터 세포는 그들의 항원-조합 부위를 통해 표적 세포에 결합된 Ig의 Fc 이펙터 도메인(들)에 부착한다. 항체-코팅 표적 세포의 사멸은 이펙터 세포 활성의 결과로서 발생한다.
용어 "항체-의존적 세포성 식세포작용", 또는 ADCP는 항체-코팅 세포가 Ig의 Fc 이펙터 도메인(들)에 결합하는 포식 면역 세포 (예를 들면, 대식세포, 호중구 및 수지상 세포)에 의해 전체적으로 또는 부분적으로 어느 한쪽 내재화되는 공정을 지칭한다.
용어 "보체-의존적 세포독성", 또는 CDC는 표적-결합 항체의 Fc 이펙터 도메인(들)이 표적 세포 막에서 홀의 형성으로 정점을 이루는 일련의 효소적 반응을 활성화시키는 세포사를 유도하기 위한 기전을 지칭한다. 전형적으로, 항원-항체 복합체 예컨대 항체-코팅 표적 세포 상에서의 것들은 보체 구성요소 C1q를 결합 및 활성화시키고 이것은 차례로 보체 캐스케이드를 활성화시켜 표적 세포사를 유발시킨다. 보체의 활성화는 백혈구 상에서 결합 보체 수용체 (예를 들면, CR3)에 의해 ADCC를 용이하게 하는 표적 세포 표면에서 보체 구성요소의 침착을 또한 초래할 수 있다.
"면역 세포"는 본원에 사용된 경우에 면역 반응을 조절하는데 연루된 조혈 계통의 세포를 지칭한다. 전형적 구현예에서, 면역 세포는 T 림프구, B 림프구, NK 세포, 단핵구/대식세포, 또는 수지상 세포이다.
"이펙터 세포"는 본원에 사용된 경우에 면역글로불린의 Fc 도메인에 대한 표면 수용체 (FcR)를 발현하는 세포를 지칭한다. 예를 들어, FcγRIII (CD16), FcγRII (CD32) 및 FcγRIII (CD64)을 포함하는 IgG에 대한 표면 FcR을 발현하는 세포는 이펙터 세포로서 작용할 수 있다. 이러한 이펙터 세포는 단핵구, 대식세포, 자연 살해 (NK) 세포, 호중구 및 호산구를 포함한다.
"치료적 제제"는 암 세포, 활성화된 면역 세포 또는 다른 표적 세포 집단에 관해 세포독성, 세포증식억제성, 및/또는 면역조절성 효과를 발휘하는 제제이다. 치료적 제제의 예는 세포독성 제제, 화학치료적 제제, 세포증식억제성 제제, 및 면역조절성 제제를 포함한다.
"세포독성 효과"는 표적 세포의 고갈, 제거 및/또는 살해를 지칭한다. "세포독성 제제"는 세포 상에서 세포독성 효과를 갖는 제제를 지칭한다. 상기 용어는 방사성 동위원소 (예컨대 I131, I125, Y90, 및 Re186), 화학치료적 제제, 및 독소 예컨대 박테리아성, 진균성, 식물, 또는 동물 기원의 효소적으로 활성 독소, 및 이들의 단편을 포함하도록 의도된다. 이러한 세포독성 제제는 항체, 예를 들면, 인간화된 항-CD70 항체 또는 항-CD47 항체에 커플링될 수 있고, 예를 들어, 요법에 대하여 지시된 환자를 항체로 치료하는데 사용될 수 있다. 일 구현예에서, "세포독성 제제"는 단클론성 항체, 예를 들면, 본원에 기재된 인간화된 항체와 조합하여 사용된 항체를 포함한다.
"화학치료적 제제"는 암의 치료에서 유용한 화학적 화합물이다. 화학치료적 제제의 예는 알킬화 제제 예컨대 티오테파 및 시클로포스파미드 (CYTOXAN™); 알킬 술포네이트 예컨대 부술판, 임프로술판, 및 피포술판; 아지리딘 예컨대 벤조도파, 카르보쿠온, 메투레도파, 및 우레도파; 알트레타민, 트리에틸렌멜라민, 트리에틸렌포스포르아미드, 트리에틸렌티오포스포르아미드, 및 트리메틸올로멜라민을 포함하는 에틸렌이민 및 메틸라멜라민; 아세토게닌 (특히 불라타신 및 불라타시논); 캄프토테신 (합성 유사체 토포테칸 포함); 브리오스타틴; 칼리스타틴; CC-1065 (이의 아도젤레신, 카르젤레신, 및 비젤레신 합성 유사체 포함) 및 이의 유도체; 크립토피신 (특히 크립토피신 1 및 크립토피신 8); 돌라스타틴, 아우리스타틴 (유사체 모노메틸-아우리스타틴 E 및 모노메틸-아우리스타틴 F 포함 (예를 들면, 이 전체가 본원에 편입된 2005년 10월 27일 공개된 미국 공개 출원 번호 2005-0238649 참조); 두오카르마이신 (합성 유사체, KW-2189 및 CBI-TMI 포함); 엘레우테로빈; 판크라티스타틴; 사르코딕티인; 스폰지스타틴; 질소 머스타드 예컨대 클로람부실, 클로르나파진, 콜로포스파미드, 에스트라무스틴, 이포스파미드, 메클로레타민, 메클로레타민 옥시드 히드로클로라이드, 멜팔란, 노벰비킨, 페네스테린, 프레드니무스틴; 트로포스파미드, 우라실 머스타드; 니트로스우레아 예컨대 카르무스틴, 클로로조토신, 포테무스틴, 로무스틴, 니무스틴, 라니무스틴; 항생제 예컨대 에네디인 항생제 (예를 들면, 칼리케아미신, 특히 칼리케미신 감마1I 및 칼리케아미신 파이I1, 예를 들어, Agnew, Chem. Intl. Ed. Engl., 33:183-186 참조); 다이네미신 A를 포함하는 다이네미신; 비스포스포네이트, 예컨대 클로드로네이트; 에스페라미신; 뿐만 아니라 네오카르지노스타틴 발색단 및 관련된 색소단백질 에네디인 항생제 발색단), 아클라시노마이신, 악티노마이신, 아우트라마이신, 아자세린, 블레오마이신, 칵티노마이신, 카라비신, 카르미노마이신, 카르지노필린, 크로모마이신, 닥티노마이신, 다우노루비신, 데토루비신, 6-디아조-5-옥소-L-노르류신, 독소루비신 (Adriamycin™) (모르폴리노-독소루비신, 시아노모르폴리노-독소루비신, 2-피롤리노-독소루비신, 및 데옥시독소루비신 포함), 에피루비신, 에소루비신, 이다루비신, 마르셀로마이신, 미토마이신 예컨대 미토마이신 C, 마이코페놀산, 노갈라마이신, 올리보마이신, 페플로마이신, 포트피로마이신, 푸로마이신, 쿠엘라마이신, 로도루비신, 스트렙토니그린, 스트렙토조신, 투베르시딘, 우베니멕스, 지노스타틴, 조루비신; 항-대사물 예컨대 메토트렉세이트 및 5-플루오로우라실 (5-FU); 엽산 유사체 예컨대 데노프테린, 메토트렉세이트, 프테로프테린, 트리메트렉세이트; 퓨린 유사체 예컨대 플루다라빈, 6-메르캅토퓨린, 티아미프린, 티오구아닌; 피리미딘 유사체 예컨대 안시타빈, 아자시티딘, 6-아자우리딘, 카르모푸르, 시타라빈, 디데옥시우리딘, 독시플루리딘, 에노시타빈, 플록수리딘; 안드로겐 예컨대 칼루스테론, 드로모스타놀론 프로피오네이트, 에피티오스타놀, 메피티오스탄, 테스토락톤; 항-부신제 예컨대 아미노글루테티미드, 미토탄, 트릴로스탄; 엽산 보충제 예컨대 프롤린산; 아세글라톤; 알도포스파미드 글리코시드; 아미노레불린산; 에닐우라실; 암사크린; 베스트라부실; 비산트렌; 에다트락세이트; 데포파민; 데메콜신; 디아지쿠온; 엘포르니틴; 엘립티늄 아세테이트; 에포틸론; 에토글루시드; 질산갈륨; 히드록시우레아; 렌티난; 로니다민; 메이탄시노이드 예컨대 메이탄신 및 안사미토신; 미토구아존, 미톡산트론; 모피다몰; 니트라크린; 펜토스타틴; 페나메트; 피라루비신; 로속산트론; 포도필린산; 2-에틸히드라지드; 프로카르바진; PSK®; 라족산; 리족신; 시조피란; 스피로게르마늄; 테누아존산; 트리아지쿠온; 2,2',2"-트리클로로트리에틸아민; 트리코테센 (특히 T-2 독소, 베라큐린 A, 로리딘 A 및 안구이딘); 우레탄; 빈데신; 다카르바진; 만노무스틴; 미타브로니톨; 미토락톨; 피포브로만; 가시토신; 아라비노시드 ("Ara-C"); 시클로포스파미드; 티오테파; 탁소이드, 예를 들면, 파클리탁셀 (TAXOL®, Bristol-Myers Squibb Oncology, Princeton, NJ) 및 도세탁셀 (TAXOTERE®, Rorer, Antony, 프랑스); 클로람부실; 겜시타빈 (Gemzar™); 6-티오구아닌; 메르캅토퓨린; 메토트렉세이트; 백금 유사체 예컨대 시스플라틴 및 카르보플라틴; 빈블라스틴; 백금; 에토포시드 (VP-16); 이포스파미드; 미톡산트론; 빈크리스틴; 비노렐빈 (Navelbine™); 노반트론; 테니포시드; 에다트렉세이트; 다우노마이신; 아미노프테린; 젤로다; 이반드로네이트; CPT-11; 토포이소머라제 억제제 RFS 2000; 디플루오로메틸오르니틴 (DMFO); 레티노이드 예컨대 레티노산; 카페시타빈; 및 상기 중 임의의 것의 약학적으로 허용가능한 염, 산, 또는 유도체를 포함한다. 종양 상에서 호르몬 작용을 조절 또는 억제하도록 작용하는 항-호르몬성 제제 예컨대 항-에스트로겐 및 예를 들어 타목시펜 (Nolvadex™ 포함), 랄록시펜, 드롤록시펜, 4-히드록시타목시펜, 트리옥시펜, 케옥시펜, LY117018, 오나프리스톤, 및 토레미펜 (Fareston™)을 포함하는 선택적 에스트로겐 수용체 조정제 (SERM); 부신에서 에스트로겐 생산을 조절하는 효소 아로마타제를 억제하는 아로마타제 억제제, 예컨대, 예를 들어, 4(5)-이미다졸, 아미노글루테티미드, 메게스트롤 아세테이트 (Megace™), 엑세메스탄, 포르메스탄, 파드로졸, 보로졸 (Rivisor™), 레트로졸 (Femara™), 및 아나스트로졸 (Arimidex™); 및 항-안드로겐 예컨대 플루타미드, 닐루타미드, 비칼루타미드, 류프롤리드, 및 고세렐린; 및 상기 중 임의의 것의 약학적으로 허용가능한 염, 산, 또는 유도체가 또한 이 정의에서 포함된다.
용어 "전구약물"은 본원에 사용된 경우에 모체 약물과 비교하여 종양 세포에 대해 덜 세포독성이고 효소적으로 활성화되거나 더욱 활성 모체 형태로 전환될 수 있는 약학적으로 활성 서브스턴스의 전구체 또는 유도체 형태를 지칭한다. 예를 들어, Wilman, 1986, "Prodrugs in Cancer Chemotherapy", In Biochemical Society Transactions, 14, pp 375-382, 615th Meeting Belfast; 및 Stella 등, 1985, "Prodrugs: A Chemical Approach to Targeted Drug Delivery, In: "Directed Drug Delivery, Borchardt 등, (ed), pp 247-267, Humana Press 참조. 유용한 전구약물은, 비제한적으로, 포스페이트-함유 전구약물, 티오포스페이트-함유 전구약물, 술페이트-함유 전구약물, 펩티드-함유 전구약물, D-아미노산-변형 전구약물, 글리코실화된 전구약물, β-락탐-함유 전구약물, 임의로 치환된 페녹시아세트아미드-함유 전구약물, 및 더욱 활성 세포독성 유리 약물로 전환될 수 있는 임의로 치환된 페닐아세트아미드-함유 전구약물, 5-플루오로시토신 및 다른 5-플루오로우리딘 전구약물을 포함한다. 전구약물 형태로 유도체화될 수 있는 세포독성 약물의 예는, 비제한적으로, 상기 기재된 그들 화학치료적 제제를 포함한다.
"세포증식억제성 효과"는 세포 증식의 억제를 지칭한다. "세포증식억제성 제제"는 세포에 관해 세포증식억제성 효과를 가짐으로써, 세포의 특정 하위세트의 성장 및/또는 확장을 억제하는 제제를 지칭한다.
용어 "면역조절성 효과"는 본원에 사용된 경우에 면역학적 반응의 발생 또는 유지의 자극 (면역자극성) 또는 억제 (면역억압적)를 지칭한다. 억제는, 예를 들어, 면역 세포 (예를 들면, T 또는 B 림프구)의 제거; 다른 세포의 기능적 능력을 조정 (예를 들면, 하향-조절)할 수 있는 면역 세포의 유도 또는 생성; 면역 세포에서의 미반응성 상태 (예를 들면, 무반응)의 유도; 또는 예를 들어, 이들 세포에 의해 발현된 단백질의 패턴 변경하기 (예를 들면, 특정 부류의 분자 예컨대 사이토카인, 케모카인, 성장 인자, 전사 인자, 키나제, 공자극성 분자 또는 다른 세포 표면 수용체, 및 기타 등등의 변경된 생산 및/또는 분비)을 포함하는, 면역 세포의 활성 또는 기능을 증가, 감소 또는 변화시킴으로써 영향받을 수 있다. "면역조절성 제제"는 세포에 관해 면역조절성 효과를 갖는 제제를 지칭한다. 일부 구현예에서, 면역조절성 제제는 면역 반응을 촉진하는 면역 세포에 관해 세포독성 또는 세포증식억제성 효과를 갖는다.
용어 "표지"는 항체에 직접적으로 또는 간접적으로 접합되는 검출가능한 화합물 또는 조성물을 지칭한다. 표지는 자체 검출가능할 수 있거나 (예를 들면, 방사성동위원소 표지 또는 형광성 표지), 효소적 표지의 경우에, 검출가능한 기질 화합물 또는 조성물의 화학적 변경을 촉매할 수 있다. 표지된 항-CD70 항체는 시험관내 및 생체내 진단을 포함하는 다양한 응용분야에서 제조 및 사용될 수 있다.
"단리된" 핵산 분자는 핵산의 천연 공급원에서 통상적으로 회합되는 적어도 하나의 오염물 핵산 분자로부터 확인 및 분리되는 핵산 분자이다. 단리된 핵산 분자는 자연에서 발견되는 형태 또는 설정 이외의 것이다. 단리된 핵산 분자는 그러므로 자연 세포에 실재함에 따라 핵산 분자와 구별된다. 하지만, 단리된 핵산 분자는, 예를 들어, 핵산 분자가 자연 세포의 것과 상이한 염색체성 자리에 있는 경우 항체를 통상적으로 발현하는 세포에 함유된 핵산 분자를 포함한다.
용어 "제어 서열"은 특정한 숙주 유기체에서 작동가능하게 결합된 코딩 서열의 발현에 필요한 폴리뉴클레오티드 서열을 지칭한다. 원핵 세포에서 사용에 적합한 제어 서열은, 예를 들어, 프로모터, 오퍼레이터, 및 리보솜 결합 부위 서열을 포함한다. 진핵 제어 서열은, 비제한적으로, 프로모터, 폴리아데닐화 신호, 및 인핸서를 포함한다. 이들 제어 서열은 원핵 및 진핵 숙주 세포에서 항-CD70 결합 제제의 발현 및 생산에 활용될 수 있다.
핵산 서열은 또 다른 핵산 서열과 기능적 관계로 배치되는 때 "작동가능하게 결합"된다. 예를 들어, 핵산 프리서열 또는 분비성 리더는 폴리펩티드의 분비에 참가하는 프리단백질로서 발현되면 폴리펩티드를 인코딩하는 핵산에 작동가능하게 결합되거나; 프로모터 또는 인핸서는 서열의 전사에 영향을 미치면 코딩 서열에 작동가능하게 결합되거나; 리보솜 결합 부위는 번역을 용이하게 하기 위해 위치되면 코딩 서열에 작동가능하게 결합된다. 일반적으로, "작동가능하게 결합된"은 결합되는 DNA 서열이 인접하고, 분비성 리더의 경우에서, 인접하고 판독틀 내에 있음을 의미한다. 하지만, 인핸서는 임의로 인접한다. 결합은 편리한 제한 부위에 결찰에 의해 성취될 수 있다. 이러한 부위가 실재하지 않으면, 합성 올리고뉴클레오티드 어댑터 또는 링커는 DNA 서열을 결합하는데 사용될 수 있다.
용어 "폴리펩티드"는 아미노산의 중합체 및 이의 등가물를 지칭하고 특정 길이의 산물을 지칭하지 않고; 그래서, "펩티드" 및 "단백질"은 폴리펩티드의 정의 내에 포함된다. 본원에 정의된 경우에 "항체"가 폴리펩티드의 정의 내에 또한 포함된다. "폴리펩티드 영역"은, 예를 들어, 하나 이상의 도메인 또는 모티프를 함유할 수 있는 폴리펩티드의 세그먼트를 지칭한다 (예를 들면, 항체의 폴리펩티드 영역은, 예를 들어, 하나 이상의 상보성 결정 영역 (CDR)을 함유할 수 있다). 용어 "단편"은 전형적으로 폴리펩티드의 적어도 20개의 연속 또는 적어도 50개의 연속 아미노산을 갖는 폴리펩티드의 한 부문을 지칭한다. "유도체"는 제2 폴리펩티드에 비해 하나 이상의 비-보존적 또는 보존적 아미노산 치환을 갖는 폴리펩티드 또는 이의 단편; 또는 제2 분자의 공유 부착에 의해 예컨대, 예를 들면, 이종 폴리펩티드의 부착에 의해, 또는 글리코실화, 아세틸화, 인산화, 및 기타 등등에 의해 변형되는 폴리펩티드 또는 이의 단편이다. 예를 들어, 양쪽 자연적으로 및 비-자연적으로 발생하는 아미노산의 하나 이상의 유사체 (예를 들면, 비천연 아미노산 및 기타 등등)를 함유하는 폴리펩티드, 미치환된 연결기를 가진 폴리펩티드, 뿐만 아니라 당업계에 알려진 다른 변형이 "유도체"의 정의 내에 추가로 포함된다.
"단리된" 폴리펩티드는 이의 자연 환경의 구성요소로부터 확인 및 분리 및/또는 회수된 것이다. 이의 자연 환경의 오염물 구성요소는 폴리펩티드에 대하여 진단적 또는 치료적 용도를 방해할 물질이고, 효소, 호르몬, 및 다른 단백질성 또는 비단백질성 용질을 포함할 수 있다. 단리된 폴리펩티드는 단리된 항체, 또는 이의 단편 또는 유도체를 포함한다. 항체의 자연 환경의 적어도 하나의 성분이 존재하지 않을 것이므로 "항체"는 재조합 세포 내에서 제자리 항체를 포함한다.
특정 구현예에서, 항체는 (1) 로우리 (Lowry) 방법에 의해 결정된 경우에 항체의 95 중량% 초과로, 및 다른 양태에서 99 중량% 초과로, (2) 스피닝 컵 서열분석기의 사용에 의해 N-말단 또는 내부 아미노산 서열의 적어도 15개 잔기를 수득하기에 충분한 정도로, 또는 (3) 쿠마시 블루 또는, 바람직하게는, 은 염색을 사용하여 환원 또는 비환원 조건 하에서 SDS-PAGE에 의해 균질까지 정제될 것이다.
폴리펩티드의 맥락에서 용어 "이종"은 또 다른 폴리펩티드와 비교된 경우에 상이한 공급원 (예를 들면, 세포, 조직, 유기체, 또는 종) 출신임을 의미하고, 이로써 2개의 폴리펩티드는 상이하다. 전형적으로, 이종 폴리펩티드는 상이한 종 출신이다.
면역글로불린 폴리펩티드 또는 이의 단편의 맥락에서, "보존적 치환"은 항원에 면역글로불린 폴리펩티드 또는 이의 단편의 (예를 들면, KD에 의해 측정된 경우에) 특이적 결합을 실질적으로 감소시키지 않는 하나 이상의 아미노산 치환 (즉, 표준 결합 검정 예컨대, 예를 들면, ELISA에 의해 결정된 경우에, 결합 친화도를 증가시키는, 결합 친화도를 유의미하게 변경시키지 않는, 또는 결합 친화도를 약 40% 이하, 전형적으로 약 30% 이하, 더욱 전형적으로 약 20% 이하, 더더욱 전형적으로 약 10% 이하, 또는 가장 전형적으로 약 5% 이하 만큼 감소시키는 치환)을 의미한다.
2개 이상의 핵산 또는 폴리펩티드 서열의 맥락에서 용어 "동일한" 또는 "퍼센트 동일성"은, 최대 상응성을 위하여 비교 및 정렬된 경우, 동일한 뉴클레오티드 또는 아미노산 잔기의 명시된 백분율을 갖거나 동일한 2개 이상의 서열 또는 하위서열을 지칭한다. 퍼센트 동일성을 결정하기 위해, 서열은 최적 비교 목적으로 정렬된다 (예를 들면, 갭은 제2 아미노 또는 핵산 서열과의 최적 정렬을 위하여 제1 아미노산의 서열 또는 핵산 서열에서 도입될 수 있다). 상응하는 아미노산 위치 또는 뉴클레오티드 위치에 아미노산 잔기 또는 뉴클레오티드는 그 다음 비교된다. 제1 서열에서의 위치가 제2 서열에서의 상응하는 위치와 동일한 아미노산 잔기 또는 뉴클레오티드에 의해 점유되는 경우, 분자는 그 위치에 동일하다. 2개의 서열 사이 퍼센트 동일성은 서열에 의해 공유된 동일한 위치의 수의 함수이다 (즉, % 동일성 = 동일한 위치의 #/위치의 총 # (예를 들면, 중첩 위치) x 100). 일부 구현예에서, 2개의 서열은 동일한 길이이다.
2개의 핵산 또는 폴리펩티드의 맥락에서 용어 "실질적으로 동일한"은 (예를 들면, 하기 제시된 방법들 중 하나를 사용하여 결정된 경우에) 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 또는 적어도 65% 동일성; 전형적으로 적어도 70% 또는 적어도 75% 동일성; 더욱 전형적으로 적어도 80% 또는 적어도 85% 동일성; 및 더더욱 전형적으로 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 98% 동일성을 갖는 2개 이상의 서열 또는 하위서열을 지칭한다.
2개 이상의 폴리펩티드 서열의 맥락에서 용어 "유사성" 또는 "퍼센트 유사성"은, 하기 제시된 방법들 중 하나를 사용하여 측정된 경우에, 최대 상응성을 위하여 비교 및 정렬된 경우 동일하거나 보존적으로 치환되는 아미노산 잔기의 명시된 백분율을 갖는 2개 이상의 서열 또는 하위서열을 지칭한다. 예로써, 제1 아미노산 서열은 제1 아미노산 서열이 적어도 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 90%, 또는 95% 동일한 경우 제2 아미노산 서열과 유사한 것으로, 또는 제1 서열에서 함유된 수와 똑같은 수의 아미노산과 비교된 경우, 또는 예를 들면, 하기 제시된 방법들 중 하나에 의해 정렬된 폴리펩티드의 정렬과 비교된 경우 제2 아미노산 서열에 보존적으로 치환된 것으로 간주될 수 있다.
폴리펩티드 서열의 맥락에서 용어 "실질적 유사성" 또는 "실질적으로 유사한"은 폴리펩티드 영역이 참조 서열과 적어도 70%, 전형적으로 적어도 80%, 더욱 전형적으로 적어도 85%, 또는 적어도 90% 또는 적어도 95% 서열 유사성이 있는 서열을 가짐을 나타낸다. 예를 들어, 폴리펩티드는, 예를 들어, 2개의 펩티드가 하나 이상의 보존적 치환(들)에 의해 상이한 경우, 제2 폴리펩티드와 실질적으로 유사하다.
항-CD70 항체, 또는 이의 유도체의 맥락에서, 항-CD70 항체의 하나 이상의 항원-결합 영역 (예를 들면, 중쇄 또는 경쇄 가변 영역, 또는 중쇄 또는 경쇄 CDR)과 실질적으로 동일하거나 실질적으로 유사한 하나 이상의 폴리펩티드 영역을 갖는 단백질은, 당업계에 알려진 다양한 표준 면역검정들 중 임의의 것을 사용하여 결정된 경우에 또는 본원에 지칭된 경우에, 항-CD70 항체에 의해 인식된 CD70의 에피토프에 특이적 결합을 보유한다.
항-CD47 항체, 또는 이의 유도체의 맥락에서, 항-CD47 항체의 하나 이상의 항원-결합 영역 (예를 들면, 중쇄 또는 경쇄 가변 영역, 또는 중쇄 또는 경쇄 CDR)과 실질적으로 동일하거나 실질적으로 유사한 하나 이상의 폴리펩티드 영역을 갖는 단백질은, 당업계에 알려진 다양한 표준 면역검정들 중 임의의 것을 사용하여 결정된 경우에 또는 본원에 지칭된 경우에, 항-CD47 항체에 의해 인식된 CD47의 에피토프에 특이적 결합을 보유한다.
항-SIRPα 항체, 또는 이의 유도체의 맥락에서, 항-SIRPα 항체의 하나 이상의 항원-결합 영역 (예를 들면, 중쇄 또는 경쇄 가변 영역, 또는 중쇄 또는 경쇄 CDR)과 실질적으로 동일하거나 실질적으로 유사한 하나 이상의 폴리펩티드 영역을 갖는 단백질은, 당업계에 알려진 다양한 표준 면역검정들 중 임의의 것을 사용하여 결정된 경우에 또는 본원에 지칭된 경우에, 항-SIRPα 항체에 의해 인식된 SIRPα의 에피토프에 특이적 결합을 보유한다.
2개의 서열 사이 퍼센트 동일성 또는 퍼센트 유사성의 결정은 수학적 알고리즘을 사용하여 성취될 수 있다. 2개의 서열의 비교에 활용된 수학적 알고리즘의 바람직한, 비-제한 예는, Karlin 및 Altschul, 1993, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:5873-5877에서 처럼 변형된, Karlin 및 Altschul, 1990, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:2264-2268의 알고리즘이다. 이러한 알고리즘은 Altschul 등, 1990, J. Mol. Biol. 215:403-410의 NBLAST 및 XBLAST 프로그램에 편입된다. BLAST 뉴클레오티드 검색은, 관심의 단백질을 인코딩하는 핵산에 상동인 뉴클레오티드 서열을 수득하기 위해, NBLAST 프로그램, 스코어 = 100, 워드길이 = 12로 수행될 수 있다. BLAST 단백질 검색은, 관심의 단백질에 상동인 아미노산 서열을 수득하기 위해, XBLAST 프로그램, 스코어 = 50, 워드길이 = 3으로 수행될 수 있다. 비교 목적으로 갭핑된 정렬을 수득하기 위해, 갭핑된 BLAST는 Altschul 등, 1997, Nucleic Acids Res. 25:3389-3402에 기재된 대로 활용될 수 있다. 대안적으로, PSI-Blast는 분자들 사이 먼 관계를 검출하는 반복된 검색을 수행하는데 사용될 수 있다 (Id.). BLAST, 갭핑된 BLAST, 및 PSI-Blast 프로그램을 활용하는 경우, 각각의 프로그램 (예를 들면, XBLAST 및 NBLAST)의 디폴트 파라미터가 사용될 수 있다. 서열의 비교에 활용된 수학적 알고리즘의 또 다른 비-제한 예는 Myers 및 Miller, CABIOS (1989)의 알고리즘이다. 이러한 알고리즘은 GCG 서열 정렬 소프트웨어의 부분인 ALIGN 프로그램 (버전 2.0)에 편입된다. 아미노산 서열을 비교하기 위하여 ALIGN 프로그램을 이용하는 경우, PAM120 가중 잔기 표, 12의 갭 길이 패널티, 및 4의 갭 패널티가 사용될 수 있다. 서열 분석을 위한 추가의 알고리즘은 당업계에 알려지고 Torellis 및 Robotti, 1994, Comput. Appl. Biosci. 10:3-5에 기재된 대로 ADVANCE and ADAM; 및 Pearson 및 Lipman, 1988, Proc. Natl. Acad. Sci.USA 85:2444-8에 기재된 FASTA를 포함한다. FASTA 내에서, ktup는 검색의 감도 및 속도를 설정하는 제어 옵션이다. ktup=2이면, 비교되는 2개의 서열에서 유사한 영역은 정렬된 잔기의 쌍을 관찰함으로써 발견되고; ktup=1이면, 단일 정렬된 아미노산은 검사된다. ktup는 단백질 서열의 경우에 2 또는 1, 또는 DNA 서열의 경우에 1 내지 6으로 설정될 수 있다. ktup가 명시되지 않으면 디폴트는 단백질의 경우에 2 그리고 DNA의 경우에 6이다. 대안적으로, 단백질 서열 정렬은, Higgins 등, 1996, Methods Enzymol. 266:383-402에 의해 기재된 대로, CLUSTAL W 알고리즘을 사용하여 실시될 수 있다.
본원에 사용된 경우에, 표현 "세포", "세포주", 및 "세포 배양물"은 교환가능하게 사용되고 모든 이러한 명칭은 이의 자손을 포함한다. 그래서, "형질전환체" 및 "형질전환된 세포"는 전달의 횟수와 관계없이 1차 대상체 세포 및 그로부터 유래된 배양물을 포함한다. 모든 자손이, 고의적 또는 자연 발생 돌연변이로 인해, DNA 함량이 정확하게 동일하지 않을 수 있음이 또한 이해된다. 원래 형질전환된 세포에서 스크리닝된 것과 동일한 기능 또는 생물학적 활성을 갖는 돌연변이체 자손이 포함된다. 별개의 명칭이 의도되는 경우, 이는 문맥으로부터 명백할 것이다.
치료의 목적으로 용어 "대상체"는 인간, 가축 및 농장 동물, 및 동물원, 스포츠, 또는 애완 동물, 예컨대 개, 말, 고양이, 소, 및 기타 등등을 포함하는, 임의의 동물, 특히 포유동물로서 분류된 동물을 지칭한다. 바람직하게는, 대상체는 인간이다.
본원에 사용된 경우에, "장애", 및 용어 "CD70-연관 장애" 및 "CD70-연관 질환"은 본원에 기재된 경우에 항-CD70 결합 제제를 이용한 치료로부터 이익을 얻을 임의의 병태를 지칭한다. "CD70-연관 장애" 및 "CD70-연관 질환"은 전형적으로 세포 표면 상에서 CD70, 또는 이의 단편을 발현한다. 이것은 포유동물이 당해 장애에 대한 소인이 있는 병리학적 병태를 포함하는 만성 및 급성 장애 또는 질환을 포함한다. 본원에 치료되여야 하는 비-제한 예 또는 장애는 암, 골수성 악성종양, 혈액 악성종양, 양성 및 악성 종양, 백혈병 및 림프성 악성종양, 암종, 및 염증성, 혈관신생성 및 면역학적 장애를 포함한다. 장애의 구체적 예는 하기 개시된다. 유사하게, 용어 "CD47-연관 장애" 및 "CD47-연관 질환"은 본원에 기재된 경우에 항-CD47 결합 제제 또는 다른 CD47 길항제를 이용한 치료로부터 이익을 얻을 임의의 병태를 지칭한다. "CD47-연관 장애" 및 "CD47-연관 질환"은 전형적으로 세포 표면 상에서 CD47, 또는 이의 단편을 발현한다. 이것은 포유동물이 당해 장애에 대한 소인이 있는 병리학적 병태를 포함하는 만성 및 급성 장애 또는 질환을 포함한다. 본원에 치료되여야 하는 비-제한 예 또는 장애는 암, 골수성 악성종양, 혈액 악성종양, 양성 및 악성 종양, 백혈병 및 림프성 악성종양, 암종, 및 염증성, 혈관신생성 및 면역학적 장애를 포함한다. 장애의 구체적 예는 하기 개시된다.
용어 "치료" 및 "요법", 및 기타 등등은, 본원에 사용된 경우에, 비제한적으로 질환 또는 장애의 하나 이상의 증상의 완화 또는 경감, 퇴행, 진행의 둔화 또는 중지를 포함하는, 임의의 임상적으로 바람직하거나 유익한 효과를 유발하는 질환 또는 장애에 대한 치료적 뿐만 아니라 예방적, 또는 억압적 조치를 포함하는 것으로 의미된다. 그래서, 예를 들어, 용어 치료는 질환 또는 장애의 증상의 발병 전에 또는 후에 제제의 투여, 이로써 질환 또는 장애의 모든 징후를 예방 또는 제거하는 것을 포함한다. 또 다른 예로서, 상기 용어는 질환의 증상을 퇴치하기 위해 질환의 임상 징후 후에 제제의 투여를 포함한다. 추가로, 투여가 질환 또는 장애의 임상 파라미터, 예컨대 조직 손상의 정도 또는 전이의 양 또는 범위에 영향을 미치는 경우 임상 증상이 발생한 후 및 발병 후 제제의 투여는, 치료가 질환의 호전으로 이어지는지에 관계없이, 본원에 사용된 경우에 "치료" 또는 "요법"을 포함한다.
본원에 사용된 경우에, 용어 "예방" 또는 "예방하다"는 (a) CD70-발현 및/또는 CD47-발현 암 또는 면역학적 장애, 또는 이의 임상적 또는 진단적 증상들 중 하나 이상의 발생 또는 발병을 차단하거나, (b) CD70-발현 및/또는 CD47-발현 암 또는 면역학적 장애의 발병의 중증도를 억제하거나, (c) CD70-발현 및/또는 CD47-발현 암 또는 면역학적 장애의 발병의 가능성을 줄이기 위해 CD70-발현 및/또는 CD47-발현 암 또는 면역학적 장애의 임상적 또는 진단적 증상의 발병 전에 대상체에게 항-CD70 결합 제제 및/또는 CD47 길항제의 투여 (예를 들면, CD70-발현 및/또는 CD47-발현 암 또는 면역학적 장애를 획득하는 소인이 있거나 또는 이의 위험이 높은 개체에게 투여)를 지칭한다.
용어 "정맥내 주입"은 제제, 예를 들면, 치료적 제제를 대략 15 분 초과, 일반적으로 대략 30 내지 90 분의 기간 동안 동물 또는 인간 환자의 정맥 내로의 도입을 지칭한다.
용어 "정맥내 볼루스" 또는 "정맥내 푸시"는 신체가 대략 15 분 이하, 일반적으로 5 분 이하 내에 약물을 받도록 동물 또는 인간의 정맥 내로의 약물 투여를 지칭한다.
용어 "피하 투여"는 약물 리셉터클로부터의 비교적 느린, 지속된 전달에 의해, 전형적으로 피부와 기저 조직 사이 포켓 내에서, 동물 또는 인간 환자의 피부 아래에, 제제, 예를 들면, 치료적 제제의 도입을 지칭한다. 피부를 기저 조직으로부터 상하로 핀칭 또는 드로잉하는 것은 포켓을 창출할 수 있다.
용어 "패키지 삽입물"은 이러한 치료적 제품의 사용에 관한 적응증, 용법, 투여, 금기사항 및/또는 경고에 대한 정보가 들어있는, 치료적 제품의 상업용 패키지에 통상적으로 포함된 지침을 지칭하는데 사용된다.
"리포솜"은 포유동물에게 약물 (예컨대 항체)의 전달에 유용한 다양한 유형의 지질, 인지질 및/또는 계면활성제로 구성된 작은 소포이다. 리포솜의 성분은 생물학적 막의 지질 배열과 유사한 이중층 대형으로 통상적으로 배열된다.
용어 "피하 주입"은, 비제한적으로, 30 분 이하, 또는 90 분 이하를 포함하는 시기 동안 약물 리셉터클로부터 비교적 느린, 지속된 전달에 의해, 바람직하게는 피부와 기저 조직 사이 포켓 내에서, 동물 또는 인간 환자의 피부 아래에 약물의 도입을 지칭한다. 임의로, 주입은 동물 또는 인간 환자의 피부 아래에 이식된 약물 전달 펌프의 피하 이식에 의해 이루어질 수 있고, 여기서 펌프는 예정된 양의 약물을 예정된 시기, 예컨대 30 분, 90 분, 또는 치료 용법의 기간에 걸친 시기 동안 전달한다.
용어 "피하 볼루스"는 동물 또는 인간 환자의 피부 밑에 약물 투여를 지칭하고, 여기에서 볼루스 약물 전달은 대략 15 분 미만; 또 다른 양태에서, 5 분 미만, 및 더욱 또 다른 양태에서, 60 초 미만이다. 더욱더 또 다른 양태에서, 투여는 피부와 기저 조직 사이 포켓 내이고, 여기에서 포켓은 피부를 기저 조직으로부터 상하로 핀칭 또는 드로잉함으로써 창출될 수 있다.
용어 "유효량"은 대상체에서 CD70-발현 및/또는 CD47-발현 암 또는 면역학적 장애의 하나 이상의 임상적 또는 진단적 증상을 호전 또는 이의 발생을 억제하는데 충분한 항-CD70 결합 제제 (예를 들면, 항체 또는 유도체 또는 다른 결합 제제) 또는 CD47 길항제의 양을 지칭한다. 제제의 유효량은 "유효 용법"에서 본원에 기재된 방법에 따라 투여된다. 용어 "유효 용법"은 CD70-발현 및/또는 CD47-발현 암 또는 면역학적 장애의 치료 또는 예방을 성취하는데 적당한 투약 빈도 및 제제의 양의 조합을 지칭한다.
용어 "치료적으로 유효량"은 유익한 환자 성과, 예를 들어, 세포의 성장 정지 효과 또는 결실을 갖는 치료적 제제의 양을 지칭하는데 사용된다. 일 양태에서, 치료적으로 유효량은 세포사멸적 활성을 갖거나, 또는 세포사를 유도할 수 있다. 또 다른 양태에서, 치료적으로 유효량은, 예를 들어, 질환 진행 둔화시키에 효과적인 것으로 나타난 표적 혈청 농도를 지칭한다. 효능은 치료되어야 하는 병태에 따라, 종래 방식으로 측정될 수 있다. 예를 들어, CD70 및/또는 CD47을 발현하는 세포를 특징으로 하는 신생물성 질환 또는 장애에서, 효능은 질환 진행까지의 시간 (TTP)을 평가 또는 반응률 (RR)을 결정함으로써 측정될 수 있다.
본원에 사용된 경우에, "완전 반응" 또는 "CR"은 모든 표적 병변의 소멸을 지칭하고; "부분적 반응" 또는 "PR"은, 기준선 SLD를 참조하여, 표적 병변의 최장 직경의 합계 (SLD)에서 적어도 30% 감소를 지칭하고; "안정한 질환" 또는 "SD"는, 치료를 시작한 이후 최소 SLD를 참조하여, PR의 경우 적격하도록 표적 병변의 충분한 수축도, PD의 경우 적격하도록 충분한 증가도 아닌 것을 지칭한다.
본원에 사용된 경우에, "무진행 생존" 또는 "PFS"는 치료 동안 및 치료 후에 치료되는 질환 (예를 들면, 암)이 악화하지 않은 동안의 시간의 기간을 지칭한다. 무진행 생존은 환자가 완전 반응 또는 부분적 반응을 경험한 시간의 양, 뿐만 아니라 환자가 안정한 질환을 경험한 시간의 양을 포함할 수 있다.
본원에 사용된 경우에, "전체 반응률" 또는 "ORR"은 완전 반응 (CR) 율 및 부분적 반응 (PR) 율의 합계를 지칭한다.
본원에 사용된 경우에, "전체 생존" 또는 "OS"는 시간의 특정한 지속기간 후 살아있을 것 같은 그룹에서 개체들의 백분율을 지칭한다.
"유해 이벤트" (AE)는 본원에 사용된 경우에 의학적 치료의 사용과 연관된 임의의 불리하고 일반적으로 의도되지 않거나 바람직하지 않은 징후 (비정상적 실험실 소견 포함), 증상, 또는 질환이다. 의학적 치료는 하나 이상의 연관된 AE를 가질 수 있고 각 AE는 동일하거나 상이한 수준의 중증도를 가질 수 있다. "유해 이벤트를 변경"시킬 수 있는 방법 지칭은 상이한 치료 용법의 사용과 연관된 하나 이상의 AE의 발생률 및/또는 중증도를 감소시키는 치료 용법을 의미한다.
"심각한 유해 이벤트" 또는 "SAE"는 본원에 사용된 경우에 하기 기준들 중 하나를 충족시키는 유해 이벤트이다:
· 치명적이거나 또는 생명-위협 (심각한 유해 이벤트의 정의에 사용된 경우에, "생명-위협"은 환자가 이벤트의 시점에 사망의 위험에 있었던 이벤트를 지칭하고; 이는 더욱 중증이었다면 가설상 사망을 유발할 수 있었던 이벤트를 지칭하지 않음).
· 지속적 또는 유의미한 장애/불능을 초래함
· 선천성 이상/출생 결함을 구성함
· 의학적으로 유의미함, 즉, 환자를 위태롭게 하거나 상기 열거된 성과들 중 하나를 예방하기 위해 의학적 또는 외과적 개입을 필요로 할 수 있는 이벤트로서 정의됨. 의학적 및 과학적 판단은 AE가 "의학적으로 유의미한"지 결정함에 있어서 수행되어야 함.
· 하기를 제외하고, 입원환자 입원 또는 기존 입원의 연장을 필요로 함: 1) 병태에서의 임의의 악화와 연관되지 않은 기저 질환의 상용 치료 또는 모니터링; 2) 연구 중인 적응증과 관련되지 않고 사전 동의서에 서명한 이래로 악화하지 않은 기존 병태에 대한 선택적 또는 사전-계획된 치료; 및 3) 환자의 일반 병태에서의 임의의 악화의 부재 하에서 사회적 이유 및 임시 간호.
대안 (예를 들면, "또는")의 사용은 대안들 중 한쪽 양쪽, 또는 이의 임의의 조합 어느 한쪽을 의미하도록 이해되어야 한다. 본원에 사용된 경우에, 부정관사 "한" 또는 "하나"는 임의의 인용된 또는 열거된 구성요소 중 "하나 이상"을 지칭하도록 이해되어야 한다.
용어 "약" 또는 "으로 본질적으로 포함하는"은, 값 또는 조성이 측정 또는 결정되는 방법, 즉, 측정 시스템의 한계에 부분적으로 의존할, 당업자에 의해 결정된 경우에 특정한 값 또는 조성에 대하여 허용가능한 오차 범위 내에 있는 값 또는 조성을 지칭한다. 예를 들어, "약" 또는 "으로 본질적으로 포함하는"은 당업계에 실시에 따라 1 또는 1 초과 표준 편차 이내를 의미할 수 있다. 대안적으로, "약" 또는 "으로 본질적으로 포함하는"은 최대 20%의 범위를 의미할 수 있다. 게다가, 특히 생물학적 시스템 또는 공정과 관련하여, 상기 용어는 값의 최대 한 자릿수 또는 최대 5-배를 의미할 수 있다. 특정한 값 또는 조성이 본 출원 및 청구항에서 제공되는 경우, 달리 언급되지 않는 한, "약" 또는 "으로 본질적으로 포함하는"의 의미는 그 특정한 값 또는 조성에 대하여 허용가능한 오차 범위 내에 있는 것으로 추정되어야 한다.
용어 "약학적으로 허용가능한"은 본원에 사용된 경우에 동물에서, 그리고 더욱 특히 인간에서 사용에 대하여 연방 또는 주 정부의 규제 기관에 의해 승인되었거나 또는 미국 약전 또는 다른 일반적으로 인정된 약전에 열거되었음을 의미한다. 용어 "약학적으로 상용가능한 구성성분"은 항-CD70-결합 제제 또는 CD47 길항제와 함께 투여되는 약학적으로 허용가능한 희석제, 아주반트, 부형제, 또는 비히클을 지칭한다.
어구 "약학적으로 허용가능한 염"은, 본원에 사용된 경우에, 항-CD70 결합 제제 또는 치료적 제제 또는 CD47 길항제 또는 치료적 제제의 약학적으로 허용가능한 유기 또는 무기 염을 지칭한다. 항-CD70 결합 제제 또는 치료적 제제 또는 CD47 길항제 또는 치료적 제제는 적어도 하나의 아미노 기를 함유하고, 따라서 산 부가염은 이 아미노 기 또는 다른 적합한 기와 형성될 수 있다. 예시적 염은, 비제한적으로, 술페이트, 시트레이트, 아세테이트, 옥살레이트, 클로리드, 브로미드, 요오디드, 니트레이트, 비술페이트, 포스페이트, 산 포스페이트, 이소니코티네이트, 락테이트, 살리실레이트, 산 시트레이트, 타르트레이트, 올레에이트, 탄네이트, 판토테네이트, 비타르트레이트, 아스코르베이트, 숙시네이트, 말레에이트, 겐티시네이트, 푸마레이트, 글루코네이트, 글루쿠로네이트, 사카레이트, 포르메이트, 벤조에이트, 글루타메이트, 메탄술포네이트, 에탄술포네이트, 벤젠술포네이트, p 톨루엔술포네이트, 및 파모에이트 (즉, 1,1' 메틸렌 비스 -(2 히드록시 3 나프토에이트)) 염을 포함한다. 약학적으로 허용가능한 염은 또 다른 분자 예컨대 아세테이트 이온, 숙시네이트 이온 또는 다른 반대이온의 포함을 수반할 수 있다. 반대이온은 모체 화합물 상의 전하를 안정화시키는 임의의 유기 또는 무기 모이어티일 수 있다. 게다가, 약학적으로 허용가능한 염은 이의 구조내 1개 초과의 하전된 원자를 가질 수 있다. 다중 하전된 원자가 약학적으로 허용가능한 염의 부분인 경우는 다중 반대 이온을 가질 수 있다. 따라서, 약학적으로 허용가능한 염은 하나 이상의 하전된 원자 및/또는 하나 이상의 반대이온을 가질 수 있다.
"약학적으로 허용가능한 용매화물" 또는 "용매화물"은 하나 이상의 용매 분자 및 항-CD70 결합 제제 및/또는 치료적 제제 또는 CD47 길항제 및/또는 치료적 제제의 회합을 지칭한다. 약학적으로 허용가능한 용매화물을 형성하는 용매의 예는, 비제한적으로, 물, 이소프로판올, 에탄올, 메탄올, DMSO, 에틸 아세테이트, 아세트산, 및 에탄올아민을 포함한다.
약어 "AFP"는 디메틸발린-발린-돌라이소류인-돌라프로인-페닐알라닌-p-페닐렌디아민을 지칭한다.
약어 "MMAE"는 모노메틸 아우리스타틴 E를 지칭한다.
약어 "AEB"는 아우리스타틴 E를 파라아세틸 벤조산과 반응시킴으로써 생산된 에스테르를 지칭한다.
약어 "AEVB"는 아우리스타틴 E를 벤조일발레르산과 반응시킴으로써 생산된 에스테르를 지칭한다.
약어 "MMAF"는 도발린-발린-돌라이소류인-돌라프로인-페닐알라닌을 지칭한다.
약어 "fk" 및 "phe-lys"는 링커 페닐알라닌-리신을 지칭한다.
용어 "Treg" 또는 "조절성 T 세포"는 CD4+CD25+ 및 CD8+ T 세포 증식 및/또는 이펙터 기능을 억압하는, 또는 면역 반응을 하향-조절하는 CD4+ T 세포를 지칭한다. 특히, Treg는 자연 살해 세포, 자연 살해 T 세포 뿐만 아니라 다른 면역 세포에 의해 매개된 면역 반응을 하향-조절할 수 있다.
용어 "조절성 T 세포 기능" 또는 "Treg의 기능"은 CD4+CD25+ 또는 CD8+ T 세포 증식에서 감소 또는 이펙터 T 세포-매개 면역 반응에서 감소를 초래하는 Treg의 임의의 생물학적 기능을 지칭하기 위해 교환가능하게 사용된다. Treg 기능은 당업계에 확립된 기법을 통해 측정될 수 있다. Treg 기능을 측정하기 위하여 유용한 시험관내 검정의 비-제한 예는 트랜스웰 억압 검정 뿐만 아니라 인간 말초 혈액 또는 제대혈 (또는 뮤린 비장 또는 림프절)로부터 정제된 표적 종래 T 세포 (Tconv) 및 Treg가 항-CD3+ 항-CD28 코팅된 비드 (또는 항원-제시 세포 (APC) 예컨대, 예를 들면, 조사된 비장세포 또는 정제된 수지상 세포 (DC) 또는 조사된 PBMC)에 의해 임의로 활성화되고 이어서 (예를 들면, 방사성 뉴클레오티드 (예컨대, 예를 들면, [ H]-티미딘) 또는 형광성 뉴클레오티드의 편입을 측정함으로써, 또는 케이만 케미컬 (Cayman Chemical) MTT 세포 증식 검정 키트에 의해, 또는 녹색 형광색소 에스테르 CFSE 또는 세미나프타로다플루오르 (SNARF-1) 염료의 희석을 유세포 분석에 의해 모니터링함으로써) 종래 T 세포 증식의 시험관내 검출되는 시험관내 검정을 포함한다. 다른 공통 검정은 T 세포 사이토카인 반응을 측정한다. Treg 기능의 유용한 생체내 검정은, 예를 들면, (1) 항상성 모델 (Treg에 의해 주로 억압되는 표적 세포로서 나이브 항상성으로 확장하는 CD4+ T 세포를 사용함), (2) 염증성 장 질환 (IBD) 회복 모델 (Treg에 의해 주로 억압되는 표적 세포로서 Thl T 세포 (Thl7)를 사용함), (3) 실험적 자가면역 뇌척수염 (EAE) 모델 (Treg에 의해 주로 억압되는 표적 세포로서 Thl 7 및 Thl T 세포를 사용함), (4) B16 흑색종 모델 (항종양 면역의 억압) (Treg에 의해 주로 억압되는 표적 세포로서 CD8+ T 세포를 사용함), (5) 나이브 CD4+CD45RBM Tconv 세포가 RagV 마우스로 전달되는 입양 전달 결장염에서 결장 염증의 억압, 및 (6) Foxp3 구출 모델 (Treg에 의해 주로 억압되는 표적 세포로서 림프구를 사용함)을 포함하는, Treg가 중요한 역할을 하는 질환의 동물 모델에서의 검정을 포함한다. 일 프로토콜에 따라, 모든 모델은 공여체 T 세포 집단을 위한 마우스 뿐만 아니라 수용자를 위한 Ragl-/- 또는 Foxp3 마우스를 필요로 한다. 다양한 유용한 검정에 관한 더욱 상세에 대하여, 예를 들면, Collison 및 Vignali, In Vitro Treg Suppression Assays, Chapter 2 in Regulatory T Cells: Methods and Protocols, Methods in Molecular Biology, Kassiotis 및 Liston eds., Springer, 2011, 707:21-37; Workman 등, In Vivo Treg Suppression Assays, Chapter 9 in Regulatory T Cells: Methods and Protocols, Methods in Molecular Biology, Kassiotis 및 Liston eds., Springer, 2011, 119-156; Takahashi 등, Int. Immunol, 1998, 10: 1969-1980; Thornton 등, J. Exp. Med., 1998, 188:287-296; Collison 등, J. Immunol, 2009, 182:6121-6128; Thornton 및 Shevach, J. Exp. Med., 1998, 188:287-296; Asseman 등, J. Exp. Med., 1999, 190:995-1004; Dieckmann 등, J. Exp. Med., 2001, 193: 1303-1310; Belkaid, Nature Reviews, 2007, 7:875-888; Tang 및 Bluestone, Nature Immunology, 2008, 9:239-244; Bettini 및 Vignali, Curr. Opin. Immunol, 2009, 21 :612-618; Dannull 등, J Clin Invest, 2005, 115(12):3623-33; Tsaknaridis, 등, J Neurosci Res., 2003, 74:296-308 참조.
본원에 기재된 경우에, 임의의 농도 범위, 백분율 범위, 비 범위, 또는 정수 범위는, 달리 나타내지 않는 한, 언급된 범위 이내 임의의 정수의 값, 및 적절한 경우, 이의 분율 (예컨대 정수의 1/10 및 1/100)을 포함하도록 이해되어야 한다.
본 개시내용의 다양한 양태는 하기 서브섹션에서 추가로 상세히 기재된다.
II. 항-CD70 항체
본 발명은 항-CD70 항체, 예컨대 마우스 항체 1F6으로부터 유래된 인간화된 항체를 제공한다. 1F6은 CD70에 대한 뮤린 면역글로불린 G1 (IgG1) 단클론성 항체이다. 1F6 및 인간화된 1F6 변이체는 미국 특허 번호 8,067,546 및 국제 특허 공개 WO 2006/113909에 기재된다. 일부 구현예에서, 항-CD70 항체는 비푸코실화된다.
마우스 1F6 항체의 인간화된 형태의 결합 친화도 (즉, 해리 상수, KD)는 바람직하게는 인간 CD70에 대하여 마우스 항체 1F6의 5배 또는 2배 이내이다. 인간화된 1F6 항체는 이들이 유래된 마우스 항체와 마찬가지로 천연 형태로 및/또는 중국 햄스터 난소 (CHO) 세포로부터 재조합적으로 발현된 인간 CD70에 특이적으로 결합한다. 바람직한 인간화된 1F6 항체는 인간 CD70에 대하여 1F6의 것과 동일하거나 초과 (즉, 측정내 오차를 넘어 초과)인 친화도 (예를 들어, 1F6의 친화도의 1.1 내지 5배, 1.1 내지 3배, 1.5 내지 3-배, 1.7 내지 2.3-배 또는 1.7 내지 2.1-배 또는 친화도의 약 2배)를 갖는다. 바람직한 인간화된 1F6 항체는 동일한 에피토프에 결합하고/거나 인간 CD70에의 결합에 대하여 1F6와 경쟁한다.
일부 구현예에서, 본 발명의 항체는 동물 모델 또는 임상 시험에서, 배양물에서 번식하는 암성 세포에 관해 나타난 대로 암 (예를 들면, 유기체에 대한 세포의 성장, 전이 및/또는 치사성)을 억제한다. 동물 모델은 CD70-발현 인간 종양 세포주를 적절한 면역결핍 설치류 균주, 예를 들면, 무흉선 누드 마우스 또는 SCID 마우스에 이식함으로써 형성될 수 있다. 이들 종양 세포주는 면역결핍 설치류 숙주에서 피하 주사에 의해 고형 종양으로서 또는 정맥내 주사에 의해 파종성 종양으로서 어느 한쪽 확립될 수 있다.
일단 숙주 내에서 확립되면, 이들 종양 모델은, 실시예에서 기재된 대로, 항-CD70 항체, 또는 이의 접합된 형태의 치료적 효능을 평가하기 위해 적용될 수 있다.
일반적으로, 본 개시내용의 항-CD70 항체는 CD70, 예를 들면, 인간 CD70을 결합시키고, 악성 세포, 예컨대 암 세포 상에서 세포증식억제성 및 세포독성 효과를 발휘한다. 본 개시내용의 항-CD70 항체는 바람직하게는 단클론성이고, 다중특이적, 인간, 인간화된 또는 키메릭 항체, 단일 쇄 항체, Fab 단편, F(ab') 단편, Fab 발현 라이브러리에 의해 생산된 단편, 및 상기의 임의의 것의 CD70 결합 단편일 수 있다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항-CD70 항체는 CD70을 특이적으로 결합시킨다. 본 개시내용의 면역글로불린 분자는 면역글로불린 분자의 임의의 유형 (예를 들면, IgG, IgE, IgM, IgD, IgA 및 IgY), 부류 (예를 들면, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2) 또는 하위부류의 것일 수 있다.
본 개시내용의 특정 구현예에서, 항-CD70 항체는 본원에 기재된 경우에 항원-결합 단편 (예를 들면, 인간 항원-결합 단편)이고, 비제한적으로, Fab, Fab' 및 F(ab')2, Fd, 단일-쇄 Fvs (scFv), 단일-쇄 항체, 디술피드-결합 Fvs (sdFv) 및 VL 또는 VH 도메인 어느 한쪽을 포함하는 단편을 포함한다. 단일-쇄 항체를 포함하는 항원-결합 단편은 가변 영역(들)을 단독으로 또는 하기의 전체 또는 한 부문과 조합하여 포함할 수 있다: 힌지 영역, CH1, CH2, CH3 및 CL 도메인. 힌지 영역, CH1, CH2, CH3 및 CL 도메인과 가변 영역(들)의 임의의 조합을 포함하는 항원-결합 단편이 본 개시내용에 또한 포함된다. 일부 구현예에서, 항-CD70 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간, 뮤린 (예를 들면, 마우스 및 랫트), 당나귀, 양, 토끼, 염소, 기니 피그, 낙타류, 말, 또는 닭이다.
본 개시내용의 항-CD70 항체는 단일특이적, 이중특이적, 삼중특이적일 수 있거나 더욱 큰 다중 특이성일 수 있다. 다중특이적 항체는 CD70의 상이한 에피토프에 특이적일 수 있거나 CD70 뿐만 아니라 이종 단백질 양쪽에 특이적일 수 있다. 예를 들면, PCT 공개 WO 93/17715; WO 92/08802; WO 91/00360; WO 92/05793; Tutt, 등, 1991, J. Immunol. 147:60 69; 미국 특허 번호 4,474,893; 4,714,681; 4,925,648; 5,573,920; 5,601,819; Kostelny 등, 1992, J. Immunol. 148:1547 1553 참조.
본 개시내용의 항-CD70 항체는 인간화된 항체일 수 있다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항-CD70 항체는 마우스 항체 1F6의 인간화된 항체이다. 1F6의 인간화된 버전은 미국 특허 번호 8,067,546에 기재된다. 인간화된 항체는 비-인간 "공여체" 항체로부터 CDR이 인간 "수용체" 항체 서열에 그라프팅되는 유전적으로 조작된 항체이다 (예를 들면, Queen, US 5,530,101 및 5,585,089; Winter, US 5,225,539; Carter, US 6,407,213; Adair, US 5,859,205; 및 Foote, US 6,881,557 참조). 수용체 항체 서열은, 예를 들어, 성숙한 인간 항체 서열, 이러한 서열의 복합물, 인간 항체 서열의 공통 서열, 또는 생식계열 영역 서열일 수 있다. 중쇄의 경우 바람직한 수용체 서열은 생식계열 VH 엑손 VHl-2 (또한 문헌에서 HV1-2로서 지칭됨) (Shin 등, 1991, EMBO J. 10:3641-3645)이고 힌지 영역 (JH)의 경우, 엑손 JH-6 (Mattila 등, 1995, Eur. J. Immunol. 25:2578-2582)이다. 경쇄의 경우, 바람직한 수용체 서열은 엑손 VK2-30 (또한 문헌에서 KV2-30으로서 지칭됨)이고 힌지 영역의 경우 엑손 JK-4 (Hieter 등, 1982, J. Biol. Chem. 257:1516-1522)이다. 그래서, 인간화된 항체는 공여체 항체 및 가변 영역 프레임워크 서열로부터 전적으로 또는 실질적으로 일부 또는 모든 CDR 및, 존재한다면, 인간 항체 서열로부터 전적으로 또는 실질적으로 불변 영역을 갖는 항체이다. 유사하게, 인간화된 중쇄는 공여체 항체 중쇄로부터 전적으로 또는 실질적으로 적어도 1개, 2개 및 보통 모두 3개의 CDR, 및, 존재한다면, 인간 중쇄 가변 영역 프레임워크 및 불변 영역 서열로부터 실질적으로 중쇄 가변 영역 프레임워크 서열 및 중쇄 불변 영역을 갖는다. 유사하게 인간화된 경쇄는 공여체 항체 경쇄로부터 전적으로 또는 실질적으로 적어도 1개, 2개 및 보통 모두 3개의 CDR, 및, 존재한다면, 인간 경쇄 가변 영역 프레임워크 및 불변 영역 서열로부터 실질적으로 경쇄 가변 영역 프레임워크 서열 및 경쇄 불변 영역을 갖는다. 나노바디 및 dAb 이외에, 인간화된 항체는 인간화된 중쇄 및 인간화된 경쇄를 포함한다. 인간화된 항체에서 CDR은 (카밧에 의해 정의된 경우에) 상응하는 잔기의 적어도 60%, 85%, 90%, 95% 또는 100%가 각각의 CDR들 사이 동일한 경우 비-인간 항체에서 실질적으로 상응하는 CDR 출신이다. 항체 쇄의 가변 영역 프레임워크 서열 또는 항체 쇄의 불변 영역은 카밧에 의해 정의된 상응하는 잔기의 적어도 85%, 90%, 95% 또는 100%가 동일한 경우 실질적으로 각각 인간 가변 영역 프레임워크 서열 또는 인간 불변 영역 출신이다.
인간화된 항체가 마우스 항체로부터 (바람직하게는 카밧에 의해 정의된 경우에) 모두 6개의 CDR을 종종 편입하여도, 이들은 마우스 항체로부터 모든 CDR 미만 (예를 들면, 적어도 3, 4, 또는 5개의) CDR로 또한 만들어질 수 있다 (예를 들면, Pascalis 등, J. Immunol. 169:3076, 2002; Vajdos 등, Journal of Molecular Biology, 320: 415-428, 2002; Iwahashi 등, Mol. Immunol. 36:1079-1091, 1999; Tamura 등, Journal of Immunology, 164:1432-1441, 2000).
인간 가변 영역 프레임워크 잔기로부터 특정 아미노산은 항원에의 결합 및/또는 CDR 형태에 관해 그들의 가능한 영향에 기초하여 치환을 위하여 선택될 수 있다. 이러한 가능한 영향의 조사는 모델링, 특정한 자리에 아미노산의 특징의 검사, 또는 특정한 아미노산의 치환 또는 돌연변이유발의 효과의 경험적 관찰에 의한다.
예를 들어, 아미노산이 뮤린 가변 영역 프레임워크 잔기와 선택된 인간 가변 영역 프레임워크 잔기 사이 상이한 경우, 인간 프레임워크 아미노산은 아미노산이
(1) 직접적으로 항원을 비공유적으로 결합시킴,
(2) CDR 영역에 인접함,
(3) 달리 CDR 영역과 상호작용함 (예를 들면 CDR 영역의 약 6 A 내에 있음); 또는
(4) 중쇄와 경쇄 사이의 상호작용을 매개함
이 합리적으로 예상되는 경우 마우스 항체로부터 동등한 프레임워크 아미노산에 의해 치환될 수 있다.
본 개시내용의 항-CD70 항체는 이들이 포함하는 특정한 CDR의 관점에서 기재 또는 명시될 수 있다. 주어진 CDR 또는 FR의 정확한 아미노산 서열 경계는 Kabat 등 (1991), "Sequences of Proteins of Immunological Interest", 제5판 Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD ("카밧" 넘버링 스킴); Al-Lazikani 등, (1997) JMB 273,927-948 ("초티아" 넘버링 스킴); MacCallum 등, J. Mol. Biol. 262:732-745 (1996), "Antibody-antigen interactions: Contact analysis and binding site topography", J. Mol. Biol. 262, 732-745." ("컨택" 넘버링 스킴); Lefranc MP 등, "IMGT unique numbering for immunoglobulin and T cell receptor variable domains and Ig superfamily V-like domains", Dev Comp Immunol, 2003 Jan;27(1):55-77 ("IMGT" 넘버링 스킴); Honegger A 및 A, "Yet another numbering scheme for immunoglobulin variable domains: an automatic modeling and analysis tool", J Mol Biol, 2001 Jun 8;309(3):657-70, ("Aho" 넘버링 스킴); 및 Martin 등, "Modeling antibody hypervariable loops: a combined algorithm", PNAS, 1989, 86(23):9268-9272, ("AbM" 넘버링 스킴)에 의해 기재된 것들을 포함하는, 다수의 잘-알려진 스킴의 임의의 것을 사용하여 용이하게 결정될 수 있다. 주어진 CDR의 경계는 확인에 사용된 스킴에 따라 달라질 수 있다. 일부 구현예에서, 주어진 항체 또는 이의 영역 (예를 들면, 이의 가변 영역)의 "CDR" 또는 "상보성 결정 영역", 또는 개별 명시된 CDR (예를 들면, CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3)은 상기언급된 스킴들 중 임의의 것에 의해 정의된 대로 (또는 특이적) CDR을 포괄하는 것으로 이해되어야 한다. 예를 들어, 특정한 CDR (예를 들면, CDR-H3)이 주어진 VH 또는 VL 영역 아미노산 서열에서 상응하는 CDR의 아미노산 서열을 함유하는 것으로 언급된 경우, 이러한 CDR이 상기언급된 스킴들 중 임의의 것에 의해 정의된 대로, 가변 영역 내에서 상응하는 CDR (예를 들면, CDR-H3)의 서열을 갖는 것이 이해된다. 특정한 CDR 또는 CDR들, 예컨대 카바트, 초티아, AbM 또는 IMGT 방법에 의해 정의된 경우에 CDR의 확인을 위한 스킴은 명시될 수 있다.
본원에 기재된 항-CD70 항체 및 항-CD70 항체-약물의 CDR 서열은, 달리 명시되지 않는 한, Kabat 등 (1991), "Sequences of Proteins of Immunological Interest", 제5판 Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD에 기재된 대로 카밧 넘버링 스킴에 따른다.
본원에 기재된 항-CD70 항체의 일부 구현예에서, 중쇄 가변 영역 CDR 서열은 하기를 포함한다:
a) CDR-H1: NYGMN (서열번호:8);
b) CDR-H2: WINTYTGEPTYADAFKG (서열번호:9); 및
c) CDR-H3: DYGDYGMDY (서열번호:10).
본원에 기재된 항-CD70 항체의 일부 구현예에서, 경쇄 가변 영역 CDR 서열은 하기를 포함한다:
a) CDR-L1: RASKSVSTSGYSFMH (서열번호:11);
b) CDR-L2: LASNLES (서열번호:12); 및
c) CDR-L3: QHSREVPWT (서열번호:13).
일 양태에서, 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-CD70 항체가 본원에 제공되고, 여기서 중쇄 가변 영역은 (i) 서열번호:8의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, (ii) 서열번호:9의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 (iii) 서열번호:10의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하고; 여기서 경쇄 가변 영역은 (i) 서열번호:11의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, (ii) 서열번호:12의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 (iii) 서열번호:13의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하고, 여기서 항-CD70 항체의 CDR은 카밧 넘버링 스킴에 의해 정의된다.
일 양태에서, 서열번호:1의 3개 CDR을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호:2의 3개 CDR을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-CD70 항체가 본원에 제공되고, 여기서 항-CD70 항체의 CDR은 카밧 넘버링 스킴에 의해 정의된다. 일부 구현예에서, 항-CD70 항체는 추가로 Fc 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-CD70 항체는 비푸코실화된다.
본원에 기재된 항-CD70 항체는 임의의 적합한 프레임워크 가변 도메인 서열을 포함할 수 있고, 단 항체는 CD70 (예를 들면, 인간 CD70)을 결합시키는 능력을 보유한다. 본원에 사용된 경우에, 중쇄 프레임워크 영역은 "HC-FR1-FR4"로 지정되고 경쇄 프레임워크 영역은 "LC-FR1-FR4"로 지정된다.
본원에 기재된 항-CD70 항체의 일부 구현예에서, 중쇄 가변 도메인은 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYGMNWVRQAPGQGLKWMGWINTYTGEPTYADAFKGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCARDYGDYGMDYWGQGTTVTVSS (서열번호:1)의 아미노산 서열을 포함하고 경쇄 가변 도메인은 DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCRASKSVSTSGYSFMHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLES GVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQHSREVPWTFGQGTKVEIK (서열번호:2)의 아미노산 서열을 포함한다.
본원에 기재된 항-CD70 항체의 일부 구현예에서, 중쇄 가변 도메인은 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYGMNWVRQAPGQGLKWMGWINTYTGEPTYADAFKGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCARDYGDYGMDYWGQGTTVTVSS (서열번호:1)의 아미노산 서열을 포함하고 경쇄 가변 도메인은 DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCRASKSVSTSGYSFMHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLES GVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQHSREVPWTFGQGTKVEIKR (서열번호:7)의 아미노산 서열을 포함한다.
일 양태에서, 서열번호:1의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인을 포함하거나 서열번호:2의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는 항-CD70 항체가 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 중쇄 가변 도메인의 N-말단 글루타민은 고리화되어 피로글루탐산을 형성한다. 일 양태에서, 서열번호:1의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인을 포함하고 서열번호:2의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는 항-CD70 항체가 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 중쇄 가변 도메인의 N-말단 글루타민은 고리화되어 피로글루탐산을 형성한다.
일 양태에서, 서열번호:1의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인을 포함하거나 서열번호:7의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는 항-CD70 항체가 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 중쇄 가변 도메인의 N-말단 글루타민은 고리화되어 피로글루탐산을 형성한다. 일 양태에서, 서열번호:1의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인을 포함하고 서열번호:7의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는 항-CD70 항체가 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 중쇄 가변 도메인의 N-말단 글루타민은 고리화되어 피로글루탐산을 형성한다.
일부 구현예에서, 서열번호:1의 아미노산 서열에 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인을 포함하는 항-CD70 항체가 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 중쇄 가변 도메인의 N-말단 글루타민은 고리화되어 피로글루탐산을 형성한다. 특정 구현예에서, 서열번호:1의 아미노산 서열에 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인은 참조 서열에 비해 치환 (예를 들면, 보존적 치환), 삽입, 또는 결실을 함유하고 CD70 (예를 들면, 인간 CD70)에 결합하는 능력을 보유한다. 특정 구현예에서, 총 1 내지 10개의 아미노산은 서열번호:1에서 치환, 삽입 및/또는 결실된다. 특정 구현예에서, 치환, 삽입, 또는 결실 (예를 들면, 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 아미노산)은 CDR 외부 영역에서 (즉, FR에서) 발생한다. 일부 구현예에서, 항-CD70 항체는 그 서열의 번역후 변형을 포함하는 서열번호:1의 중쇄 가변 도메인 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 중쇄 가변 도메인의 N-말단 글루타민은 고리화되어 피로글루탐산을 형성한다.
일부 구현예에서, 서열번호:2의 아미노산 서열에 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는 항-CD70 항체가 본원에 제공된다. 특정 구현예에서, 서열번호:2의 아미노산 서열에 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인은 참조 서열에 비해 치환 (예를 들면, 보존적 치환), 삽입, 또는 결실을 함유하고 CD70 (예를 들면, 인간 CD70)에 결합하는 능력을 보유한다. 특정 구현예에서, 총 1 내지 10개의 아미노산은 서열번호:2에서 치환, 삽입 및/또는 결실된다. 특정 구현예에서, 치환, 삽입, 또는 결실 (예를 들면, 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 아미노산)은 CDR 외부 영역에서 (즉, FR에서) 발생한다. 일부 구현예에서, 항-CD70 항체는 그 서열의 번역후 변형을 포함하는 서열번호:2의 경쇄 가변 도메인 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 서열번호:7의 아미노산 서열에 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는 항-CD70 항체가 본원에 제공된다. 특정 구현예에서, 서열번호:5의 아미노산 서열에 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인은 참조 서열에 비해 치환 (예를 들면, 보존적 치환), 삽입, 또는 결실을 함유하고 CD70 (예를 들면, 인간 CD70)에 결합하는 능력을 보유한다. 특정 구현예에서, 총 1 내지 10개의 아미노산은 서열번호:7에서 치환, 삽입 및/또는 결실된다. 특정 구현예에서, 치환, 삽입, 또는 결실 (예를 들면, 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 아미노산)은 CDR 외부 영역에서 (즉, FR에서) 발생한다. 일부 구현예에서, 항-CD70 항체는 그 서열의 번역후 변형을 포함하는 서열번호:7의 경쇄 가변 도메인 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 아미노산 서열 QVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYTFT NYGMNWVRQA PGQGLKWMGW INTYTGEPTY ADAFKGRVTM TRDTSISTAY MELSRLRSDD TAVYYCARDY GDYGMDYWGQ GTTVTVSSAS TKGPSVFPLA PSSKSTSGGT AALGCLVKDY FPEPVTVSWN SGALTSGVHT FPAVLQSSGL YSLSSVVTVP SSSLGTQTYI CNVNHKPSNT KVDKKVEPKS CDKTHTCPPC PAPELLGGPS VFLFPPKPKD TLMISRTPEV TCVVVDVSHE DPEVKFNWYV DGVEVHNAKT KPREEQYNST YRVVSVLTVL HQDWLNGKEY KCKVSNKALP APIEKTISKA KGQPREPQVY TLPPSRDELT KNQVSLTCLV KGFYPSDIAV EWESNGQPEN NYKTTPPVLD SDGSFFLYSK LTVDKSRWQQ GNVFSCSVMH EALHNHYTQK SLSLSPGK (서열번호:3)에 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 항-CD70 항체가 본원에 제공된다. 특정 구현예에서, 서열번호:3의 아미노산 서열에 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄는 참조 서열에 비해 치환 (예를 들면, 보존적 치환), 삽입, 또는 결실을 함유하고 CD70 (예를 들면, 인간 CD70)에 결합하는 능력을 보유한다. 특정 구현예에서, 총 1 내지 10개의 아미노산은 서열번호:3에서 치환, 삽입 및/또는 결실된다. 특정 구현예에서, 치환, 삽입, 또는 결실 (예를 들면, 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 아미노산)은 CDR 외부 영역에서 (즉, FR에서) 발생한다. 일부 구현예에서, 항-CD70 항체는 그 서열의 번역후 변형을 포함하는 서열번호:3의 중쇄 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, DIVMTQSPDS LAVSLGERAT INCRASKSVS TSGYSFMHWY QQKPGQPPKL LIYLASNLES GVPDRFSGSG SGTDFTLTIS SLQAEDVAVY YCQHSREVPW TFGQGTKVEI KRTVAAPSVF IFPPSDEQLK SGTASVVCLL NNFYPREAKV QWKVDNALQS GNSQESVTEQ DSKDSTYSLS STLTLSKADY EKHKVYACEV THQGLSSPVT KSFNRGEC (서열번호:4)의 아미노산 서열에 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 항-CD70 항체가 본원에 제공된다. 특정 구현예에서, 서열번호:4의 아미노산 서열에 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄는 참조 서열에 비해 치환 (예를 들면, 보존적 치환), 삽입, 또는 결실을 함유하고 CD70 (예를 들면, 인간 CD70)에 결합하는 능력을 보유한다. 특정 구현예에서, 총 1 내지 10개의 아미노산은 서열번호:4에서 치환, 삽입 및/또는 결실된다. 특정 구현예에서, 치환, 삽입, 또는 결실 (예를 들면, 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 아미노산)은 CDR 외부 영역에서 (즉, FR에서) 발생한다. 일부 구현예에서, 항-CD70 항체는 그 서열의 번역후 변형을 포함하는 서열번호:4의 경쇄 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 항-CD70 항체는 상기 제공된 구현예들 중 임의의 것에서와 같이 중쇄 가변 도메인, 및 상기 제공된 구현예들 중 임의의 것에서와 같이 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 일 구현예에서, 항체는, 그들 서열의 번역후 변형을 포함하는, 서열번호:1의 중쇄 가변 도메인 서열 및 서열번호:2의 경쇄 가변 도메인 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 중쇄 가변 도메인의 N-말단 글루타민은 고리화되어 피로글루탐산을 형성한다.
일부 구현예에서, 항-CD70 항체는 i) 서열번호:1의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역에 적어도 85% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열, 및 ii) 서열번호:2의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역에 적어도 85% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 중쇄 가변 도메인의 N-말단 글루타민은 고리화되어 피로글루탐산을 형성한다.
일부 구현예에서, 항-CD70 항체는 단클론성 항체이다.
일부 구현예에서, 항-CD70 항체는 미국 특허 번호 8,067,546, 미국 특허 번호 8,562,987, 미국 특허 번호 9,428,585, 미국 특허 번호 9,701,752, US 2009/0148942, US 2012/0045436, US 2014/0178936, US 2017/0022282 또는 국제 특허 공개 WO 2006/113909에 기재된 항-CD70 항체의 3개 CDR을 포함하는 중쇄 가변 영역 또는 3개 CDR을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-CD70 항체는 미국 특허 번호 8,067,546, 미국 특허 번호 8,562,987, 미국 특허 번호 9,428,585, 미국 특허 번호 9,701,752, US 2009/0148942, US 2012/0045436, US 2014/0178936, US 2017/0022282 또는 국제 특허 공개 WO 2006/113909에 기재된 항-CD70 항체의 3개 CDR을 포함하는 중쇄 가변 영역 또는 3개 CDR을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, CDR은 카밧 넘버링 스킴에 의해 정의된다.
일부 구현예에서, 항-CD70 항체는 미국 특허 번호 8,067,546, 미국 특허 번호 8,562,987, 미국 특허 번호 9,428,585, 미국 특허 번호 9,701,752, US 2009/0148942, US 2012/0045436, US 2014/0178936, US 2017/0022282 또는 국제 특허 공개 WO 2006/113909에 기재된 항-CD70 항체의 중쇄 가변 영역 또는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-CD70 항체는 미국 특허 번호 8,067,546, 미국 특허 번호 8,562,987, 미국 특허 번호 9,428,585, 미국 특허 번호 9,701,752, US 2009/0148942, US 2012/0045436, US 2014/0178936, US 2017/0022282 또는 국제 특허 공개 WO 2006/113909에 기재된 항-CD70 항체의 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일부 구현예에서, 항-CD70 항체는 미국 특허 번호 8,067,546, 미국 특허 번호 8,562,987, 미국 특허 번호 9,428,585, 미국 특허 번호 9,701,752, US 2009/0148942, US 2012/0045436, US 2014/0178936, US 2017/0022282 또는 국제 특허 공개 WO 2006/113909에 기재된 대로 항-CD70 항체, 예컨대 인간화된 1F6 변이체이다. 일부 구현예에서, 항-CD70 항체는 미국 특허 번호 8,067,546, 미국 특허 번호 8,562,987, 미국 특허 번호 9,428,585, 미국 특허 번호 9,701,752, US 2009/0148942, US 2012/0045436, US 2014/0178936, US 2017/0022282 또는 국제 특허 공개 WO 2006/113909에 기재된 대로 항-CD70 항체, 예컨대 인간화된 1F6 변이체의 비푸코실화 형태이다.
일부 구현예에서, 항-CD70 항체는 항-CD70 항체 보르세투주맙의 3개 CDR을 포함하는 중쇄 가변 영역 또는 3개 CDR을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-CD70 항체는 항-CD70 항체 보르세투주맙의 3개 CDR을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 3개 CDR을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, CDR은 카밧 넘버링 스킴에 의해 정의된다.
일부 구현예에서, 항-CD70 항체는 항-CD70 항체 보르세투주맙의 중쇄 가변 영역 또는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-CD70 항체는 항-CD70 항체 보르세투주맙의 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일부 구현예에서, 항-CD70 항체는 보르세투주맙의 비푸코실화 형태이다.
본 발명의 항-CD70 항체는 CD70 (예를 들면, 인간 CD70)에 대한 그들의 결합 친화도의 관점에서 또한 기재 또는 명시될 수 있다. 바람직한 결합 친화도는 5 x10-2 M, 10-2 M, 5x10-3 M, 10-3 M, 5x10-4 M, 10-4 M, 5x10-5 M, 10-5 M, 5x10-6 M, 10-6 M, 5x10-7 M, 10-7 M, 5x10-8 M, 10-8M, 5x10-9 M, 10-9 M, 5x10-10 M, 10-10 M, 5x10-11 M, 10-11 M, 5x10-12 M, 10-12 M, 5x10-13 M, 10-13 M, 5x10-14 M, 10-14 M, 5x10-15 M, 또는 10-15 M 미만의 해리 상수 또는 KD를 가진 것들을 포함한다.
α, δ, ε, γ 및 μ, 각각으로 지정된 중쇄를 갖는 면역글로불린의 5개 부류: IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM가 있다. γ 및 α 부류는 하위부류로 추가로 나뉘고, 예를 들면, 인간은 하기 하위부류: IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2를 발현한다. IgG1 항체는 본원에 구현예들 중 일부에서 사용에 적합한 임의의 (Jefferis 및 Lefranc 2009. mAbs Vol 1 Issue 4 1-7에서 검토된) 동종이형으로 불리는 다중 다형성 변이체로 실재할 수 있다. 인간 집단에서 공통 동종이형성 변이체는 문자 a, f, n, z 또는 이들의 조합에 의해 지정된 것들이다. 본원에 구현예들 중 임의의 것에서, 항체는 인간 IgG Fc 영역을 포함하는 중쇄 Fc 영역을 포함할 수 있다. 추가 구현예에서, 인간 IgG Fc 영역은 인간 IgG1을 포함한다.
일부 구현예에서, 항-CD70 항체는 상기 제공된 구현예들 중 임의의 것에서와 같이 중쇄 가변 도메인, 및 상기 제공된 구현예들 중 임의의 것에서와 같이 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 일 구현예에서, 항체는, 그들 서열의 번역후 변형을 포함하는, AS TKGPSVFPLA PSSKSTSGGT AALGCLVKDY FPEPVTVSWN SGALTSGVHT FPAVLQSSGL YSLSSVVTVP SSSLGTQTYI CNVNHKPSNT KVDKKVEPKS CDKTHTCPPC PAPELLGGPS VFLFPPKPKD TLMISRTPEV TCVVVDVSHE DPEVKFNWYV DGVEVHNAKT KPREEQYNST YRVVSVLTVL HQDWLNGKEY KCKVSNKALP APIEKTISKA KGQPREPQVY TLPPSRDELT KNQVSLTCLV KGFYPSDIAV EWESNGQPEN NYKTTPPVLD SDGSFFLYSK LTVDKSRWQQ GNVFSCSVMH EALHNHYTQK SLSLSPGK (서열번호:5)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 불변 영역 및 TVAAPSVF IFPPSDEQLK SGTASVVCLL NNFYPREAKV QWKVDNALQS GNSQESVTEQ DSKDSTYSLS STLTLSKADY EKHKVYACEV THQGLSSPVT KSFNRGEC (서열번호:6)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 불변 영역을 포함한다.
항체는 또한, 즉, 공유 부착이 항체가 CD70에 결합하는 것 또는 세포에 관해 세포증식억제성 또는 세포독성 효과를 발휘하는 것을 막지 않도록 항체에 대한 임의의 유형의 분자의 공유 부착에 의해 변형되는 유도체를 포함한다. 예를 들어, 그러나 비제한적으로, 항체 유도체는, 예를 들면, 글리코실화, 아세틸화, PEG화, 인산화, 아미드화, 알려진 보호기/차단기에 의한 유도체화, 단백질분해적 절단, 세포성 리간드 또는 다른 단백질에 대한 연결, 등에 의해 변형된 항체를 포함한다. 수많은 화학적 변형들 중 임의의 것은, 비제한적으로 특이적 화학적 절단, 아세틸화, 포르밀화, 투니카마이신의 대사적 합성, 등을 포함하는, 알려진 기법에 의해 실시될 수 있다. 추가적으로, 유도체는 하나 이상의 비-고전적 아미노산을 함유할 수 있다.
CD70-결합 제제는 CD70-발현 표적 세포에 대한 ADCC, ADCP 및/또는 CDC 반응을 매개 또는 자극하는 항체 이펙터 도메인을 임의로 포함할 수 있다. 이펙터 도메인(들)은, 예를 들어, Ig 분자의 Fc 도메인 또는 도메인들일 수 있다. 이러한 CD70-결합 제제는, 예를 들어, CD70-발현 암 또는 면역학적 장애, 각각의 치료에서, CD70-발현 암 세포에 관해 세포독성 또는 세포증식억제성 효과를 발휘할 수 있거나, 활성화된 림프구 또는 수지상 세포에 관해 세포독성, 세포증식억제성, 또는 면역조절성 효과를 발휘할 수 있다. 전형적으로, CD70-결합 제제는 세포독성 백혈구 (예를 들면, 자연 살해 (NK) 세포, 포식 세포 (예를 들면, 대식세포), 및/또는 혈청 보체 성분)를 동원하고/거나 활성화시킨다.
항-CD70 항체는 인간화된 항체, 단일 쇄 항체, scFv, 디아바디, Fab, 미니바디, scFv-Fc, Fv, 또는 기타 등등일 수 있다. 일부 구현예에서, CD70 항원-결합 영역은 이펙터 도메인 또는 도메인들, 예컨대 예를 들어, 면역글로불린의 힌지-CH2-CH3 도메인, 또는 이펙터 기능을 갖는 이펙터 도메인(들)의 한 부문 또는 단편에 연결될 수 있다. 단일-쇄 항체를 포함하는 항원-결합 항체 단편은, 예를 들어, 이펙터 도메인의 전체 또는 한 부문과 조합하여 (예를 들면, CH2 및/또는 CH3 도메인 단독 또는 CH1, 힌지 및/또는 CL 도메인과 조합하여) 가변 영역(들)을 포함할 수 있다. 또한, 항원-결합 단편은 이펙터 도메인의 임의의 조합을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 항-CD70 항체는 힌지-CH2-CH3 도메인에 연결된 CD70-결합 가변 영역을 포함하는 단일 쇄 항체일 수 있다.
항-CD70 항체의 이펙터 도메인은 임의의 적합한 인간 면역글로불린 아이소타입 출신일 수 있다. 예를 들어, CDC 및 ADCC/ADCP를 매개하는 인간 면역글로불린의 능력은 일반적으로 IgM
Figure pct00004
IgG1IgG3>IgG2>IgG4 및 IgG1
Figure pct00006
IgG3>IgG2/IgM/IgG4, 각각의 순서이다. CD70-결합 폴리펩티드는 원하는 이펙터 기능(들)을 산출하기 위해 적절한 불변 도메인을 포함하는 재조합 융합 단백질로서 발현될 수 있다. 표적 세포에 결합시, 항-CD70 항체 또는 유도체는 항체 이펙터 기능, 예컨대 ADCC, CDC, 및 ADCP를 통해서 시험관내 및 생체내 표적 세포 파괴를 촉발할 수 있다.
CD70-결합 제제는 임의로 치료적 제제, 예컨대 세포독성, 세포증식억제성 또는 면역조절성 제제에 접합될 수 있다. 세포독성 또는 면역조절성 제제의 유용한 부류는, 예를 들어, 항튜불린 제제, 아우리스타틴, DNA 작은 홈 결합제, DNA 복제 억제제, 알킬화 제제 (예를 들면, 백금 착물 예컨대 시스-플라틴, 모노(백금), 비스(백금) 및 삼핵 백금 착물 및 카르보플라틴), 안트라사이클린, 항생제, 항엽산, 항대사물, 화학요법 증감제, 두오카르마이신, 에토포시드, 플루오르화 피리미딘, 이오노포어, 렉시트롭신, 니트로소우레아, 플라티놀, 사전-형성 화합물, 퓨린 항대사물, 퓨로마이신, 방사선 증감제, 스테로이드, 탁산, 토포이소머라제 억제제, 빈카 알칼로이드, 및 기타 등등을 포함한다. 일부 전형적 구현예에서, 치료적 제제는 세포독성 제제이다. 적합한 세포독성 제제는, 예를 들어, 돌라스타틴 (예를 들면, 아우리스타틴 E, AFP, MMAF, MMAE), DNA 작은 홈 결합제 (예를 들면, 에네디인 및 렉시트롭신), 두오카르마이신, 탁산 (예를 들면, 파클리탁셀 및 도세탁셀), 퓨로마이신, 빈카 알칼로이드, CC-1065, SN-38, 토포테칸, 모르폴리노-독소루비신, 리족신, 시아노모르폴리노-독소루비신, 에키노마이신, 콤브레타스타틴, 네트롭신, 에포틸론 A 및 B, 에스트라무스틴, 크립토피신, 세마도틴, 메이탄시노이드, 디스코데르몰리드, 엘레우테로빈, 및 미톡산트론을 포함한다. 구체적 구현예에서, 세포독성 또는 세포증식억제성 제제는 아우리스타틴 E (또한 당업계에 돌라스타틴-10으로서 알려됨) 또는 이의 유도체이다. 전형적으로, 아우리스타틴 E 유도체는, 예를 들면, 아우리스타틴 E와 케토 산 사이 형성된 에스테르이다. 예를 들어, 아우리스타틴 E는 파라아세틸 벤조산 또는 벤조일발레르산과 반응되어 AEB 및 AEVB, 각각을 생산할 수 있다. 다른 전형적 아우리스타틴 유도체는 AFP, MMAF, 및 MMAE를 포함한다. 아우리스타틴 E 및 이의 유도체의 합성 및 구조는 미국 특허 출원 공개 번호 20030083263 및 20050009751), 국제 특허 출원 번호 PCT/US03/24209, 국제 특허 출원 번호 PCT/US02/13435, 및 미국 특허 번호 6,323,315; 6,239,104; 6,034,065; 5,780,588; 5,665,860; 5,663,149; 5,635,483; 5,599,902; 5,554,725; 5,530,097; 5,521,284; 5,504,191; 5,410,024; 5,138,036; 5,076,973; 4,986,988; 4,978,744; 4,879,278; 4,816,444; 및 4,486,414에 기재된다. 구체적 구현예에서, 세포독성 제제는 DNA 작은 홈 결합 제제이다. (예를 들면, 미국 특허 번호 6,130,237. 참조) 예를 들어, 일부 구현예에서, 작은 홈 결합 제제는 CBI 화합물이다. 다른 구현예에서, 작은 홈 결합 제제는 에네디인 (예를 들면, 칼리케아미신)이다. 항-튜불린 제제의 예는, 비제한적으로, 탁산 (예를 들면, Taxol® (파클리탁셀), Taxotere® (도세탁셀)), T67 (Tularik), 빈카 알칼로이드 (예를 들면, 빈크리스틴, 빈블라스틴, 빈데신, 및 비노렐빈), 및 돌라스타틴 (예를 들면, 아우리스타틴 E, AFP, MMAF, MMAE, AEB, AEVB)을 포함한다. 다른 항튜불린 제제는, 예를 들어, 바카틴 유도체, 탁산 유사체 (예를 들면, 에포틸론 A 및 B), 노코다졸, 콜키신 및 콜시미드, 에스트라무스틴, 크립토피신, 세마도틴, 메이탄시노이드, 콤브레타스타틴, 디스코데르몰리드, 및 엘레우테로빈을 포함한다. 일부 구현예에서, 세포독성 제제는 항-튜불린 제제의 또 다른 그룹인 메이탄시노이드이다. 예를 들어, 구체적 구현예에서, 메이탄시노이드는 메이탄신 또는 DM-1이다 (ImmunoGen, Inc.; 또한 Chari 등, 1992, Cancer Res. 52:127-131 참조).
일부 구현예에서, 인간 또는 비-인간 Fc 영역 또는 이의 부문을 포함하는 항-CD70 항체는 키메릭일 수 있다. 예를 들어, 항체는 비-인간 기원, 예를 들면, 설치류 (예를 들면, 마우스 또는 랫트), 당나귀, 양, 토끼, 염소, 기니 피그, 낙타류, 말, 닭 또는 원숭이 (예를 들면, 마카크, 레서스 또는 기타 등등)의 Fc 도메인 또는 부문을 포함할 수 있다.
항-CD70 결합 제제, 예컨대 항체는 단일특이적, 이중특이적, 삼중특이적일 수 있거나, 또는 더욱 큰 다중특이성일 수 있다. 다중특이적 항체는 CD70의 상이한 에피토프에 특이적일 수 있고/거나 양쪽 CD70에 뿐만 아니라 이종 단백질에 특이적일 수 있다. (예를 들면, PCT 공개 WO 93/17715, WO 92/08802, WO　91/00360, 및 WO 92/05793; Tutt 등, 1991, J. Immunol. 147:60-69; 미국 특허 번호 4,474,893; 4,714,681; 4,925,648; 5,573,920; 및 5,601,819; Kostelny 등, 1992, J. Immunol. 148:1547-1553. 참조) 본원에 기재된 방법 실시하기에 유용한, 이중특이적 및 삼중특이적 항체를 포함하는 다중특이적 항체는 양쪽 CD70 (비제한적으로 단클론성 항체 1F6의 CDR을 갖는 항체 포함) 및 ADCC, ADCP, 및/또는 CDC를 매개하는 제2 세포 표면 수용체 또는 수용체 복합체, 예컨대 CD16/FcγRIII, CD64/FcγRI, 살해 억제성 또는 활성화 수용체, 또는 보체 제어 단백질 CD59에 면역특이적으로 결합하는 항체이다. 일부 구현예에서, 제2 세포 표면 분자 또는 수용체 복합체에 대한 다중특이적 항체의 부문의 결합은 항-CD70 항체 또는 다른 CD70 결합 제제의 이펙터 기능을 향상시킬 수 있다.
항체는 당업계에 알려진 방법에 의해 생성될 수 있다. 예를 들어, 단클론성 항체는, 예를 들면, 하이브리도마, 재조합, 및 파지 디스플레이 기술, 또는 이들의 조합의 사용을 포함하는 매우 다양한 기법을 사용하여 제조될 수 있다. 하이브리도마 기법은 일반적으로, 예를 들어, Harlow 등, Antibodies: A Laboratory Manual (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2nd ed., 1988); 및 Hammerling 등, In Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas, pp. 563-681 (Elsevier, N.Y., 1981)에 논의된다. 항-CD70 항체를 만드는데 사용될 수 있는 파지 디스플레이 방법의 예는, 예를 들면, Hoogenboom 및 Winter, 1991, J. Mol. Biol. 227:381; Marks 등, 1991, J. Mol. Biol. 222:581; Quan 및 Carter, 2002, The rise of monoclonal antibodies as therapeutics in Anti-IgE and Allergic Disease, Jardieu 및 Fick Jr., eds., Marcel Dekker, New York, NY, Chapter 20, pp. 427-469; Brinkman 등, 1995, J. Immunol. Methods 182:41-50; Ames 등, 1995, J. Immunol. Methods 184:177-186; Kettleborough 등, 1994, Eur. J. Immunol. 24:952-958; Persic 등, 1997, Gene 187:9-18; Burton 등, 1994, Advances in Immunology 57:191-280; PCT 출원 번호 PCT/GB91/01134; PCT 공개 WO 90/02809, WO 91/10737, WO 92/01047, WO 92/18619, WO 93/11236, WO 95/15982, WO 95/20401, 및 미국 특허 번호 5,698,426; 5,223,409; 5,403,484; 5,580,717; 5,427,908; 5,750,753; 5,821,047; 5,571,698; 5,427,908; 5,516,637; 5,780,225; 5,658,727; 5,733,743 및 5,969,108 (이들의 개시내용은 본원에 참조로 편입됨)에 개시된 것들을 포함한다.
단일-쇄 항체를 생산하는데 사용될 수 있는 기법의 예는 미국 특허 4,946,778 및 5,258,498; Huston 등, 1991, Methods in Enzymology 203:46-88; Shu 등, 1993, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:7995-7999; 및 Skerra 등, 1988, Science 240:1038-1040에 기재된 것들을 포함한다.
이중특이적 항체를 만드는 방법은 당업계에 알려진다. 전장 이중특이적 항체의 전통적 생산은 2개 면역글로불린 중쇄-경쇄 쌍의 공발현에 기초하고, 여기에서 2개의 쇄는 상이한 특이성을 갖는다 (예를 들면, Milstein 등, 1983, Nature 305:537-39 참조). 면역글로불린 중쇄 및 경쇄의 무작위 편성 때문에, 이들 하이브리도마 (쿼드로마)는 10개의 상이한 항체 분자들의 잠재적 혼합물을 생산하고, 이들 중 일부는 정확한 이중특이적 구조를 갖는다. 유사한 절차는 국제 공개 번호 WO 93/08829에서, 그리고 Traunecker 등, 1991, EMBO J. 10:3655-59에 개시된다.
상이한 접근법에 따라, 원하는 결합 특이성이 있는 항체 가변 도메인 (항체-항원 조합 부위)은 면역글로불린 불변 도메인 서열에 융합된다. 융합은 전형적으로, 힌지, CH2, 및 CH3 영역의 적어도 부분을 포함하여, 면역글로불린 중쇄 불변 도메인과 이루어진다. 일부 구현예에서, 융합은, 융합의 적어도 하나에서 존재하는, 경쇄 결합에 필요한 부위를 함유하는 제1 중-쇄 불변 영역 (CH1)을 포함한다. 면역글로불린 중쇄 융합을 인코딩하는 서열 및, 원한다면, 면역글로불린 경쇄가 있는 핵산은 별도 발현 벡터에 삽입되고, 적합한 숙주 유기체에 공-형질감염된다. 이것은 작제에서 사용된 3개 폴리펩티드 쇄의 부등 비가 최적 수율을 제공하는 때 구현예에서 3개 폴리펩티드 단편의 상호 분율을 조정하는데 큰 유연성을 제공한다. 하지만, 동등 비로 적어도 2개 폴리펩티드 쇄의 발현이 고 수율을 초래하는 때 또는 비가 특정한 유의성이 없는 때 하나의 발현 벡터내 2개 또는 모두 3개의 폴리펩티드 쇄에 대하여 코딩 서열을 삽입하는 것이 가능하다.
이 접근법의 한 구현예에서, 이중특이적 항체는 하나의 아암에서 제1 결합 특이성이 있는 하이브리드 면역글로불린 중쇄, 및 다른 아암에서 (제2 결합 특이성을 제공하는) 하이브리드 면역글로불린 중쇄-경쇄 쌍을 갖는다. 이중특이적 분자의 한쪽 절반에만 면역글로불린 경쇄의 존재가 용이한 분리 방식을 제공함에 따라, 이 비대칭 구조는 원치않는 면역글로불린 쇄 조합으로부터 원하는 이중특이적 화합물의 분리를 용이하게 한다 (이 전체가 참조로 본원에 편입되는, 예를 들면, 국제 공개 번호 WO 94/04690, 참조).
이중특이적 항체의 추가 논의에 대하여, 예를 들어, Suresh 등, 1986, Methods in Enzymology 121:210; Rodrigues 등, 1993, J. Immunology 151:6954-61; Carter 등, 1992, Bio/Technology 10:163-67; Carter 등, 1995, J. Hematotherapy 4:463-70; Merchant 등, 1998, Nature Biotechnology 16:677-81 참조. 이러한 기법을 사용하여, 이중특이적 항체는 본원에 정의된 대로 질환의 치료 또는 예방에서 사용을 위하여 제조될 수 있다.
이중기능적 항체는 유럽 특허 공개 번호 EPA 0 105 360에 또한 기재된다. 이 참고문헌에 개시된 대로, 하이브리드 또는 이중기능적 항체는 어느 한쪽 생물학적으로, 즉, 세포 융합 기법에 의해, 또는 화학적으로, 특히 가교 제제 또는 디술피드-브릿지 형성 시약으로 유래될 수 있고, 전체 항체 또는 이의 단편을 포함할 수 있다. 이러한 하이브리드 항체를 수득하는 방법은 예를 들어 이들 양쪽이 참조로 본원에 편입되는 국제 공개 WO 83/03679 및 유럽 특허 공개 번호 EPA　0　217　577에 개시된다.
일부 구현예에서, 인간 프레임워크 영역에서의 프레임워크 잔기는 CDR 공여체 항체로부터 상응하는 잔기로 치환되어 항원 결합을 변경, 바람직하게는 개선할 것이다. 이들 프레임워크 치환은 당업계에 잘 알려진 방법에 의해, 예를 들면, 항원 결합에 중요한 프레임워크 잔기를 확인하기 위한 CDR 및 프레임워크 잔기의 상호작용의 모델링 및 특정한 위치에 특이한 프레임워크 잔기를 확인하기 위한 서열 비교에 의해 확인된다. (예를 들면, 미국 특허 번호 5,585,089; Riechmann 등, 1988, Nature 332:323. 참조) 항체는, 예를 들어, CDR-그라프팅 (see, 예를 들면, EP　0　239 400; PCT 공개 WO 91/09967; 미국 특허 번호 5,225,539; 5,530,101; 및 5,585,089), 베니어링 또는 재표면화 (예를 들면, EP 0 592 106; EP 0 519 596; Padlan, 1991, Molecular Immunology 28(4/5):489-498; Studnicka 등, 1994, Protein Engineering 7(6):805-814; Roguska 등, 1994, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91:969-973 참조), 및 쇄 셔플링 (예를 들면, 미국 특허 번호 5,565,332 참조) (이들 참조문헌들의 모두는 본원에 참조로 편입됨)을 포함하는 당업계에 알려진 다양한 기법을 사용하여 인간화될 수 있다.
인간화된 단클론성 항체는 당업계에 알려진 재조합 DNA 기법에 의해, 예를 들어 국제 공개 번호 WO 87/02671; 유럽 특허 공개 번호 0 184 187; 유럽 특허 공개 번호 0 171 496; 유럽 특허 공개 번호 0 173 494; 국제 공개 번호 WO 86/01533; 미국 특허 번호 4,816,567; 유럽 특허 공개 번호 0 012 023; Berter 등, 1988, Science 240:1041-43; Liu 등, 1987, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84:3439-43; Liu 등, 1987, J. Immunol. 139:3521-26; Sun 등, 1987, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84:214-18; Nishimura 등, 1987, Cancer. Res. 47:999-1005; Wood 등, 1985, Nature 314:446-449; Shaw 등, 1988, J. Natl. Cancer Inst. 80:1553-59; Morrison, 1985, Science 229:1202-07; Oi 등, 1986, BioTechniques 4:214; 미국 특허 번호 5,225,539; Jones 등, 1986, Nature 321:552-25; Verhoeyan 등, 1988, Science 239:1534; 및 Beidler 등, 1988, J. Immunol. 141:4053-60에 기재된 방법을 사용하여 생산될 수 있고; 이들의 각각은 이 전체가 참조로 본원에 편입된다.
상기 제시된 대로, CD70 결합 제제는 항-CD70 항체의 유도체일 수 있다. 일반적으로, 항-CD70 항체 유도체는 항-CD70 항체 (예를 들면, 항원-결합 단편 또는 보존적으로 치환된 폴리펩티드 포함) 및 항-CD70 항체에 이종인 적어도 하나의 폴리펩티드 영역 또는 다른 모이어티를 포함한다. 예를 들어, 항-CD70 항체는, 예를 들면, 임의의 유형의 분자의 공유 부착에 의해 변형될 수 있다. 전형적 변형은, 예를 들면, 글리코실화, 아세틸화, peg화, 인산화, 아미드화, 알려진 보호기/차단기에 의한 유도체화, 단백질분해적 절단, 세포성 리간드 (예를 들면, 알부민-결합 분자) 또는 다른 단백질에 대한 연결, 및 기타 등등을 포함한다. 수많은 화학적 변형들 중 임의의 것은 비제한적으로 특이적 화학적 절단, 아세틸화, 포르밀화, 튜니카마이신의 대사적 합성, 등을 포함하는 알려진 기법에 의해 실시될 수 있다.
일부 구현예에서, 공유 부착은 이펙터 기능을 방해하지 않고, 예를 들면, 항체 유도체가 항원-결합 영역 또는 그로부터 유래된 영역을 통해 CD70에 특이적으로 결합하는 것, 또는 이펙터 도메인(들)이 Fc 수용체를 특이적으로 결합하는 것을 방지하지 않는다.
일부 구현예에서, 항체 유도체는 하나 이상의 단량체를 포함하는 다량체, 예컨대, 예를 들어, 이량체이고, 여기에서 각 단량체는 (i) 항-CD70 항체의 항원-결합 영역, 또는 (예컨대, 예를 들면, 하나 이상의 아미노산의 보존적 치환에 의해) 그로부터 유래된 폴리펩티드 영역, 및 (ii) 다량체화 (예를 들면, 이량체화) 폴리펩티드 영역을 포함하여, 이로써 항체 유도체는 CD70에 특이적으로 결합하는 다량체 (예를 들면, 동종이량체)를 형성한다. 전형적 구현예에서, 항-CD70 항체의 항원-결합 영역, 또는 그로부터 유래된 폴리펩티드 영역은 이종 단백질과 재조합적으로 또는 화학적으로 융합되고, 여기서 이종 단백질은 이량체화 또는 다량체화 도메인을 포함한다. 면역학적 장애 또는 CD70-발현 암 치료하기 또는 예방하기의 목적으로 대상체에게 항체 유도체의 투여에 앞서, 유도체는 동종이량체 또는 이종이량체의 형성을 가능하게 하는 조건에 적용된다. 이종이량체는, 본원에 사용된 경우에, 동일한 이량체화 도메인 그러나 상이한 CD70 항원-결합 영역, 동일한 CD70 항원-결합 영역 그러나 상이한 이량체화 도메인, 또는 상이한 CD70 항원-결합 영역 및 이량체화 도메인을 포함할 수 있다.
전형적 이량체화 도메인은 전사 인자들로부터 기원하는 것들이다. 일 구현예에서, 이량체화 도메인은 염기성 영역 류신 지퍼 ("bZIP")의 것이다 (Vinson 등, 1989, Science 246:911-916 참조). 유용한 류신 지퍼 도메인은, 예를 들어, 효모 전사 인자 GCN4, 포유류 전사 인자 CCAAT/인핸서-결합 단백질 C/EBP, 및 종양유전자 산물, Fos 및 Jun에서의 핵 형질전환체의 것들을 포함한다. (예를 들면, Landschultz 등, 1988, Science 240:1759-64; Baxevanis 및 Vinson, 1993, Curr. Op. Gen. Devel. 3:278-285; O'Shea 등, 1989, Science 243:538-542. 참조) 또 다른 구현예에서, 이량체화 도메인은 염기성-영역 헬릭스-루프-헬릭스 ("bHLH") 단백질의 것이다. (예를 들면, Murre 등, 1989, Cell 56:777-783 참조. 또한 Davis 등, 1990, Cell 60:733-746; Voronova 및 Baltimore, 1990, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:4722-26. 참조) 특히 유용한 hHLH 단백질은 myc, max, 및 mac이다.
더욱 다른 구현예에서, 이량체화 도메인은 면역글로불린 불변 영역 예컨대, 예를 들어, 중쇄 불변 영역 또는 이의 도메인 (예를 들면, CH1 도메인, CH2 도메인, 및/또는 CH3 도메인)이다. (예를 들면, 미국 특허 번호 5,155,027; 5,336,603; 5,359,046; 및 5,349,053; EP 0 367 166; 및 WO 96/04388. 참조)
이종이량체는 Fos와 Jun 사이 (Bohmann 등, 1987, Science 238:1386-1392), ATF/CREB 패밀리의 구성원들 중에서 (Hai 등, 1989, Genes Dev. 3:2083-2090), C/EBP 패밀리의 구성원들 중에서 (Cao 등, 1991, Genes Dev. 5:1538-52; Williams 등, 1991, Genes Dev. 5:1553-67; Roman 등, 1990, Genes Dev. 4:1404-15), 그리고 ATF/CREB 및 Fos/Jun 패밀리들의 구성원들 사이 (Hai 및 Curran, 1991, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88:3720-24) 형성하는 것으로 알려진다. 그러므로, CD70-결합 단백질은 대상체에게 상이한 이량체화 도메인을 포함하는 이종이량체로서 투여되는 때, 상기의 임의의 조합은 사용될 수 있다.
다른 구현예에서, 항-CD70 항체 유도체는 제2 항체에 접합된 항-CD70 항체 ("항체 이종접합체")이다 (예를 들면, 미국 특허 번호 4,676,980 참조). 본 방법을 실시하는데 유용한 이종접합체는 CD70에 결합하는 항체 (예를 들면, 단클론성 항체 1F6의 CDR 및/또는 중쇄를 갖는 항체) 및 ADCC, 식세포작용, 및/또는 CDC를 매개하는 표면 수용체 또는 수용체 복합체, 예컨대 CD16/FcgRIII, CD64/FcgRI, 살해 세포 활성화 또는 억제성 수용체, 또는 보체 제어 단백질 CD59에 결합하는 항체를 포함한다. 전형적 구현예에서, 제2 세포 표면 분자 또는 수용체 복합체에 다중특이적 항체의 부문의 결합은 항-CD70 항체의 이펙터 기능을 향상시킨다. 다른 구현예에서, 항체는 치료적 제제일 수 있다. 적합한 항체 치료적 제제는 본원에 기재된다.
일부 구현예에서, 본원에 기재된 항-CD70 항체의 임의의 것은 비푸코실화된다.
일부 구현예에서, 본원에 기재된 경우에 복수의 항-CD70 항체를 포함하는 항-CD70 항체의 집단이 본원에 제공되고, 여기서 항-CD70 항체의 집단에서 항-CD70 항체는 감소된 코어 푸코실화를 갖는다. 일부 구현예에서, 항-CD70 항체의 집단에서 항체의 적어도 20%는 코어 푸코실화가 결여된다. 일부 구현예에서, 항-CD70 항체의 집단에서 항체의 적어도 30%는 코어 푸코실화가 결여된다. 일부 구현예에서, 항-CD70 항체의 집단에서 항체의 적어도 40%는 코어 푸코실화가 결여된다. 일부 구현예에서, 항-CD70 항체의 집단에서 항체의 적어도 50%는 코어 푸코실화가 결여된다. 일부 구현예에서, 항-CD70 항체의 집단에서 항체의 적어도 60%는 코어 푸코실화가 결여된다. 일부 구현예에서, 항-CD70 항체의 집단에서 항체의 적어도 70%는 코어 푸코실화가 결여된다. 일부 구현예에서, 항-CD70 항체의 집단에서 항체의 적어도 80%는 코어 푸코실화가 결여된다. 일부 구현예에서, 항-CD70 항체의 집단에서 항체의 적어도 90%는 코어 푸코실화가 결여된다. 일부 구현예에서, 항-CD70 항체의 집단에서 항체의 적어도 95%는 코어 푸코실화가 결여된다. 일부 구현예에서, 항-CD70 항체의 집단에서 항체의 적어도 98%는 코어 푸코실화가 결여된다. 일부 구현예에서, 항-CD70 항체의 집단에서 항체의 적어도 99%는 코어 푸코실화가 결여된다. 일부 구현예에서, 항-CD70 항체의 집단에서 항체의 적어도 99.5%는 코어 푸코실화가 결여된다. 일부 구현예에서, 항-CD70 항체의 집단에서 항체의 실질적으로 아무도 (즉, 0.5% 미만) 코어 푸코실화를 갖지 않는다. 일부 구현예에서, 항-CD70 항체의 집단에서 항체들의 모두는 코어 푸코실화가 결여된다.
미국 특허 번호 10,196,445에 기재된 대로, 항체 글리코실화의 변형은, 예를 들어, 변경된 글리코실화 기구가 있는 숙주 세포에서 항체를 발현시킴으로써 성취될 수 있다. 변경된 글리코실화 기구가 있는 세포는 기재되었고 본 개시내용의 재조합 항체를 발현시켜서 변경된 글리코실화가 있는 항체를 생산하는 숙주 세포로서 사용될 수 있다. 예를 들어, 세포주 Ms704, Ms705, 및 Ms709는 푸코실트랜스퍼라제 유전자, FUT8 (α-(1,6) 푸코실트랜스퍼라제)이 결여되어 (미국 특허 출원 공개 번호 20040110704; Yamane-Ohnuki 등 (2004)　Biotechnol. Bioeng.　87: 614 참조), 이로써 이들 세포주에서 발현된 항체는 그들의 탄수화물 상에서 푸코스가 결여된다. 또 다른 예로서, EP 1176195는 또한 기능적으로 파괴된 FUT8 유전자가 있는 세포주 뿐만 아니라 항체의 Fc 영역에 결합하는 N-아세틸글루코사민에 푸코스를 부가하는 활성을 거의 또는 전혀 갖지 않는 세포주, 예를 들어, 랫트 골수종 세포주 YB2/0 (ATCC CRL 1662)을 기재한다. PCT 공개 WO 03/035835는, 그 숙주 세포에서 발현된 항체의 저푸코실화를 또한 초래하는, Asn(297)-결합 탄수화물에 푸코스를 부착하는 능력이 감소된 변이체 CHO 세포주, Lec13을 기재한다. 또한 Shields 등 (2002)　J. Biol. Chem.　277:26733 참조. 변형된 글리코실화 프로파일이 있는 항체는 PCT 공개 번호 WO 2006/089231에 기재된 대로, 계란에서 또한 생산될 수 있다. 대안적으로, 변형된 글리코실화 프로파일이 있는 항체는 식물 세포, 예컨대 렘나(Lemna)에서 생산될 수 있다. 예를 들면 미국 공개 번호 2012/0276086 참조. PCT 공개 번호 WO 99/54342는 조작된 세포주에서 발현된 항체가 항체의 증가된 ADCC 활성을 초래하는 증가된 양분성 GlcNac 구조를 나타내도록 당단백질-변형 글리코실 트랜스퍼라제 (예를 들면, 베타(1,4)-N-아세틸글루코사미닐트랜스퍼라제 III (GnTIII))를 발현하도록 조작된 세포주를 기재한다. 또한 등 (1999)　Nat. Biotech.　17:176 참조. 대안적으로, 항체의 푸코스 잔기는 푸코시다제 효소를 사용하여 절단제거될 수 있다. 예를 들어, 효소 알파-L-푸코시다제는 항체로부터 푸코실 잔기를 제거한다. Tarentino 등 (1975)　Biochem.　14:5516. 감소된 코어 푸코실화가 있는 항체는 유전자 녹-아웃, 유전자 녹-인, 또는 RNAi를 사용하여 코어 푸코실화를 감소시키도록 조작된 세포주에서 항체를 생산함으로써 제조될 수 있다. 글리코실화 경로에서 효소에 작용하는 소 분자 억제제는 감소된 코어 푸코실화가 있는 항체를 생성하는데 또한 사용될 수 있다. 이러한 방법은 미국 특허 번호 8,163,551에 기재된다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 경우에 감소된 코어 푸코실화가 있는 항-CD70 항체는 숙주 세포에 의해 생산된 항체 또는 항체 유도체의 복합 N-글리코시드-결합 당 쇄 내에 푸코스의 편입을 감소시키는 푸코스 유사체의 유효량을 포함하는 배양 배지에서 항체를 발현하는 숙주 세포를 배양함으로써 생성된다. 미국 특허 번호 8,163,551 참조. 비푸코실화 항체를 생산하는 방법은 Pereira 등 (2018) MAbs 10(5):693-711에 또한 기재된다.
일부 구현예에서, 항-CD70 항체 또는 이의 유도체는 경쟁적 결합을 결정하기 위하여 당업계에 알려진 임의의 방법 (예컨대 예를 들면, 본원에 기재된 면역검정)에 의해 결정된 경우에, CD70에 mAb 1F6의 결합을 경쟁적으로 억제시킨다. 전형적 구현예에서, 항체는 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 또는 적어도 75% 만큼 CD70에 1F6의 결합을 경쟁적으로 억제시킨다. 다른 구현예에서, 항체는 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95% 만큼 CD70에 1F6의 결합을 경쟁적으로 억제시킨다.
항체는 다양한 알려진 방법들 중 임의의 것에 의해 CD70에 대한 특이적 결합에 대하여 검정될 수 있다. 사용될 수 있는 면역검정은, 예를 들어, 기법 예컨대 웨스턴 블롯, 방사선면역검정, ELISA (효소 결합 면역흡착 검정), "샌드위치" 면역검정, 면역침전 검정, 침강소 반응, 겔 확산 침강소 반응, 면역확산 검정, 응집 검정, 보체-고정 검정, 면역방사측정 검정, 형광성 면역검정, 및 단백질 A 면역검정을 사용하는 경쟁적 및 비-경쟁적 검정 시스템을 포함한다. 이러한 검정은 일상적이고 당업계에 잘-알려진다. (예를 들면, Ausubel 등, eds., Short Protocols in Molecular Biology (John Wiley 및 Sons, Inc., New York, 제4판 1999); Harlow 및 Lane, Using Antibodies: A Laboratory Manual (Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., 1999. 참조)
추가로, CD70에 대한 항체의 결합 친화도 및 항체 CD70 상호작용의 오프-레이트는 경쟁적 결합 검정에 의해 결정될 수 있다. 경쟁적 결합 검정의 하나의 예는 증가하는 양의 표지되지 않은 CD70의 존재 하에서 관심 항체와 표지된 CD70 (예를 들면, 3H 또는 125I)의 인큐베이션, 및 표지된 CD70에 결합된 항체의 검출을 포함하는 방사선면역검정이다. CD70에 대한 항체의 친화도 및 결합 오프-레이트는 그 다음 스캐차드 플롯 분석에 의한 데이터로부터 결정될 수 있다. 제2 항체 (예컨대 예를 들면, mAb 1F6)와의 경쟁은 방사선면역검정을 사용하여 또한 결정될 수 있다. 이 경우에, CD70은 증가하는 양의 표지되지 않은 제2 항체의 존재 하에서 표지된 화합물 (예를 들면, 3H 또는 125I)에 접합된 관심 항체와 인큐베이션된다. 대안적으로, CD70에 대한 항체의 결합 친화도 및 항체-CD70 상호작용의 온- 및 오프-레이트는 표면 플라즈몬 공명에 의해 결정될 수 있다. 일부 구현예에서, 항-CD70 항체 또는 이의 유도체는 CD70-발현 세포의 막에 표적화되고 이에 축적될 수 있다.
항-CD70 항체 및 이의 유도체는 단백질의 합성에 대하여 당업계에 알려진 방법에 의해, 전형적으로, 예를 들면, 재조합 발현 기법에 의해 생산될 수 있다. CD70에 결합하는 항체 또는 이의 유도체의 재조합 발현은 전형적으로 항체 또는 이의 유도체를 인코딩하는 핵산을 함유하는 발현 벡터의 작제를 포함한다. 단백질 분자의 생산을 위한 벡터는 당업계에 알려진 기법을 사용하여 재조합 DNA 기술에 의해 생산될 수 있다. 표준 기법 예컨대, 예를 들어, Sambrook 및 Russell, Molecular Cloning: A Laboratory Manual (Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., 제3판, 2001); Sambrook 등, Molecular Cloning: A Laboratory Manual (Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., 제2판, 1989); Short Protocols in Molecular Biology (Ausubel 등, John Wiley 및 Sons, New York, 제4판, 1999); 및 Glick 및 Pasternak, Molecular Biotechnology: Principles and Applications of Recombinant DNA (ASM Press, Washington, D.C., 제2판, 1998)에 기재된 것들은 재조합 핵산 방법, 핵산 합성, 세포 배양, 이식유전자 편입, 및 재조합 단백질 발현에 사용될 수 있다.
예를 들어, 항-CD70 항체의 재조합 발현을 위하여, 발현 벡터는 프로모터에 작동가능하게 결합된 이의 중쇄 또는 경쇄, 또는 중쇄 또는 경쇄 가변 도메인을 인코딩할 수 있다. 발현 벡터는, 예를 들어, 항체 분자의 불변 영역을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있고 (예를 들면, PCT 공개 WO 86/05807; PCT 공개 WO 89/01036; 및 미국 특허 번호 5,122,464 참조), 항체의 가변 도메인은 전체 중쇄 또는 경쇄의 발현을 위하여 이러한 벡터로 클로닝될 수 있다. 발현 벡터는 종래 기법에 의해 숙주 세포로 전달되고, 형질감염된 세포는 그 다음 종래 기법에 의해 배양되어 항-CD70 항체를 생산한다. 이중-쇄화된 항체의 발현에 대하여 전형적 구현예에서, 양쪽 중쇄 및 경쇄를 인코딩하는 벡터는 전체 면역글로불린 분자의 발현을 위하여 숙주 세포에서 공-발현될 수 있다.
다양한 원핵 및 진핵 숙주-발현 벡터 시스템은 항-CD70 항체 또는 이의 유도체를 발현시키는데 이용될 수 있다. 전형적으로, 진핵 세포는, 특히 전체 재조합 항-CD70 항체 분자의 경우에, 재조합 단백질의 발현에 사용된다. 예를 들어, 포유류 세포 예컨대 중국 햄스터 난소 세포 (CHO)는, 벡터 예컨대 인간 사이토메갈로바이러스로부터의 주요 중간 초기 유전자 프로모터 요소와 공동으로, 항-CD70 항체 및 이의 유도체의 생산을 위한 효과적 발현 시스템이다 (예를 들면, Foecking 등, 1986, Gene 45:101; Cockett 등, 1990, Bio/Technology 8:2 참조).
다른 숙주-발현 시스템은, 예를 들어, 박테리아성 세포에서 플라스미드-기반 발현 시스템 (예를 들면, Ruther 등, 1983, EMBO 1,2:1791; Inouye 및 Inouye, 1985, Nucleic Acids Res. 13:3101-3109; Van Heeke 및 Schuster, 1989, J. Biol. Chem. 24:5503-5509 참조); 곤충 시스템 예컨대, 예를 들면, 스포도프테라 프루기페르다(Spodoptera frugiperda) 세포에서의 아우토그라파 칼리포르니카(Autographa californica) 핵 다각체병 바이러스 (AcNPV) 발현 벡터의 사용; 및 포유류 세포에서의 바이러스성-기반 발현 시스템, 예컨대, 예를 들면, 아데노바이러스성-기반 시스템 (예를 들면, Logan 및 Shenk, 1984, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81:355-359; Bittner 등, 1987, Methods in Enzymol. 153:51-544 참조)을 포함한다.
이외에도, 삽입된 서열의 발현을 조정하거나, 유전자 산물을 원하는 특정 방식으로 변형 및 가공하는 숙주 세포 균주는 선정될 수 있다. 적절한 세포주 또는 숙주 시스템은 발현된 단백질의 정확한 변형 및 가공 (예를 들면, 글리코실화, 인산화, 및 절단)을 보장하기 위해 선정될 수 있다. 이를 위해, 1차 전사물 및 유전자 산물의 적절한 가공을 위한 세포성 기구를 소유하는 진핵 숙주 세포가 사용될 수 있다. 이러한 포유류 숙주 세포는, 예를 들어, CHO, VERO, BHK, HeLa, COS, MDCK, 293, 3T3, 및 W138을 포함한다.
안정한 발현 시스템은 재조합 항-CD70 항체 또는 이의 유도체 또는 다른 CD70 결합 제제의 장기간, 고-수율 생산에 전형적으로 사용된다. 예를 들어, 항-CD70 항체 또는 이의 유도체를 안정하게 발현하는 세포주는 적절한 발현 제어 요소 (예를 들면, 프로모터 및 인핸서 서열, 전사 종결인자, 폴리아데닐화 부위) 및 선택가능한 마커에 의해 제어된 DNA를 이용한 숙주 세포의 형질전환, 이어서 선택적 배지에서 형질전환된 세포의 성장에 의해 조작될 수 있다. 선택가능한 마커는 선택에 저항성을 부여하고 세포가 DNA를 그들의 염색체로 안정하게 통합시키고 성장하여 차례로 세포주로 클로닝 및 확장될 수 있는 초점을 형성한다. tk-, hgprt- 또는 aprt- 세포, 각각에서 이용될 수 있는, 예를 들어, 단순 포진 바이러스 티미딘 키나제, 하이포크산틴구아닌 포스포리보실트랜스퍼라제, 및 아데닌 포스포리보실트랜스퍼라제 유전자를 포함하는, 다수의 선택 시스템이 사용될 수 있다. 또한, 항대사물 저항성은 하기 유전자에 대하여 선택의 기초로서 사용될 수 있다: 메토트렉세이트에 대한 저항성을 부여하는 dhfr; 마이코페놀산에 대한 저항성을 부여하는 gpt; 아미노글리코시드 G-418에 대한 저항성을 부여하는 neo; 및 하이그로마이신에 대한 저항성을 부여하는 hygro. 재조합 DNA 기술의 당업계에 통상적으로 알려진 방법은 원하는 재조합 클론을 선택하기 위해 일상적으로 적용될 수 있고, 이러한 방법은, 예를 들어, Current Protocols in Molecular Biology (Ausubel 등 eds., John Wiley 및 Sons, N.Y., 1993); Kriegler, Gene Transfer and Expression, A Laboratory Manual (Stockton Press, N.Y., 1990); Current Protocols in Human Genetics (Dracopoli 등 eds., John Wiley 및 Sons, N.Y., 1994, Chapters 12 및 13); 및 Colberre-Garapin 등, 1981, J. Mol. Biol. 150:1에 기재된다.
항체 또는 유도체의 발현 수준은 벡터 증폭에 의해 증가될 수 있다. (일반적으로, 예를 들면, Bebbington 및 Hentschel, The Use of Vectors Based on Gene Amplification for the Expression of Cloned Genes in Mammalian Cells in DNA Cloning, Vol. 3 (Academic Press, New York, 1987). 참조) 항-CD70 항체 또는 이의 유도체를 발현하는 벡터 시스템에서 마커가 증폭가능한 경우, 숙주 세포 배양 배지에 존재하는 억제제의 수준에서의 증가는 억제제에 대한 저항성을 부여하는 마커 유전자의 증가된 카피 수를 갖는 숙주 세포를 선택할 것이다. 회합된 항체 유전자의 카피 수는 또한 증가될 것이고, 이에 의해 항체 또는 이의 유도체의 발현을 증가시킬 것이다 (Crouse 등, 1983, Mol. Cell. Biol. 3:257 참조).
항-CD70 항체가 양쪽 중쇄 및 경쇄 또는 이들의 유도체를 포함하는 경우, 숙주 세포는 2개의 발현 벡터, 중쇄 단백질을 인코딩하는 제1 벡터 및 경쇄 단백질을 인코딩하는 제2 벡터로 공-형질감염될 수 있다. 2개의 벡터는 중쇄 및 경쇄 단백질의 똑같은 발현을 가능하게 하는 동일한 선택가능한 마커를 함유할 수 있다. 대안적으로, 양쪽 중쇄 및 경쇄 단백질을 인코딩하고, 이를 발현시킬 수 있는 단일 벡터가 사용될 수 있다. 이러한 상황에서, 경쇄는 과량의 무독성 중쇄를 피하기 위해 중쇄 앞에 전형적으로 위치된다 (Proudfoot, 1986, Nature 322:52; Kohler, 1980, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:2197 참조). 중쇄 및 경쇄를 위한 코딩 서열은 cDNA 또는 게놈성 DNA를 포함할 수 있다.
일단 항-CD70 항체 또는 이의 유도체가 (예를 들면, 동물, 화학적 합성, 또는 재조합 발현에 의해) 생산되었다면, 예를 들어, 크로마토그래피 (예를 들면, 이온 교환 또는 친화도 크로마토그래피 (예컨대, 예를 들어, 온전한 Fc 영역을 갖는 항체의 정제를 위한 단백질 A 크로마토그래피)), 원심분리, 차등 용해도에 의한, 또는 단백질의 정제를 위한 임의의 다른 표준 기법에 의한 것을 포함하는, 단백질의 정제를 위한 임의의 적합한 방법에 의해 정제될 수 있다. 항-CD70 항체 또는 이의 유도체는, 예를 들어, 마커 서열, 예컨대 펩티드에 융합되어, 친화도 크로마토그래피에 의한 정제를 용이하게 할 수 있다. 적합한 마커 아미노산 서열은, 예를 들면, 헥사-히스티딘 펩티드, 예컨대 pQE 벡터에서 제공된 태그 (QIAGEN, Inc, Chatsworth, CA, 91311), 및 인플루엔자 헤마글루티닌 단백질로부터 유래된 에피토프에 상응하는 "HA" 태그 (Wilson 등, 1984, Cell 37:767), 및 "플래그" 태그를 포함한다.
일단 항-CD70 항체 또는 이의 유도체가 생산되면, CD70-발현 암 세포에 관해 세포증식억제성 또는 세포독성 효과 또는 CD70-발현 면역 세포에 관해 면역조절성 효과를 발휘하는 이의 능력은 하기 기재된 방법에 의해 또는 당업계에 알려진 대로 결정된다.
활성화된 면역 세포 또는 CD70-발현 암 세포 외부에서 항-CD70 항체의 활성을 최소화하기 위해, 세포 막-결합 CD70에는 특이적으로 결합하지만, 가용성 CD70에 결합하지 않는 항체는 사용될 수 있어서, 항-CD70 항체는 활성화된 면역 세포 또는 CD70-발현 암 세포의 세포 표면에 농축된다.
전형적으로, 항-CD70 항체 또는 유도체는 실질적으로 정제된다 (예를 들면, 이의 효과를 제한하거나 바람직하지 않은 부작용을 생산하는 서브스턴스가 실질적으로 없음). 일부 구현예에서, 항-CD70 항체 또는 유도체는 적어도 약 40% 순수하거나, 적어도 약 50% 순수하거나, 적어도 약 60% 순수하다. 일부 구현예에서, 항-CD70 항체 또는 유도체는 적어도 약 60-65%, 65-70%, 70-75%, 75-80%, 80-85%, 85-90%, 90-95%, 또는 95-98% 순수하다. 일부 구현예에서, 항-CD70 항체 또는 유도체는 대략 99% 순수하다.
III. CD47 길항제
본 발명은 CD47 길항제를 제공한다. 일부 구현예에서, CD47 길항제는 CD47과 SIRPα 사이 상호작용을 억제시킨다. 일부 구현예에서, CD47 길항제는 종양 세포의 식세포작용을 증가시킨다. 일부 구현예에서, CD47 길항제는 CD47의 소 분자 억제제, SIRPα의 소 분자 억제제, CD47에 결합하는 항체, 또는 이의 항원-결합 단편, SIRPα에 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 및 SIRPα, 또는 이의 단편, 및 항체, 또는 이의 단편을 포함하는 융합 단백질로 이루어지는 군으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, CD47 길항제는 CD47의 소 분자 억제제이다. 일부 구현예에서, CD47 길항제는 SIRPα의 소 분자 억제제이다. 일부 구현예에서, CD47 길항제는 CD47에 결합하는 항체, 또는 이의 항원-결합 단편이다. 일부 구현예에서, CD47 길항제는 SIRPα에 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다. 일부 구현예에서, CD47 길항제는 SIRPα, 또는 이의 단편을 포함하는 융합 단백질이다. 일부 구현예에서, SIRPα, 또는 이의 단편, 및 항체, 또는 이의 단편을 포함하는 융합 단백질은 항체의 Fc 영역에 공유적으로 결합된 SIRPα, 또는 이의 면역글로불린 V-유사 도메인을 포함한다.
일부 구현예에서, CD47 길항제는 항체, 또는 이의 항원-결합 단편이다. 본 개시내용의 항체는 바람직하게는 단클론성이고, 다중특이적, 인간, 인간화된 또는 키메릭 항체, 단일 쇄 항체, Fab 단편, F(ab') 단편, Fab 발현 라이브러리에 의해 생산된 단편, 및 상기의 임의의 것의 CD47 결합 단편일 수 있다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 CD47 길항제 항체는 CD47을 특이적으로 결합시킨다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 CD47 길항제 항체는 SIRPα를 특이적으로 결합시킨다. 본 개시내용의 면역글로불린 분자는 면역글로불린 분자의 임의의 유형 (예를 들면, IgG, IgE, IgM, IgD, IgA 및 IgY), 부류 (예를 들면, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2) 또는 하위부류의 것일 수 있다. 일부 구현예에서, 항체는 IgG1 또는 IgG4 항체이다. 일부 구현예에서, 항체는 IgG1 항체이다. 일부 구현예에서, 항체는 IgG4 항체이다. 본 개시내용의 특정 구현예에서, 항체는 본원에 기재된 경우에 항원-결합 단편 (예를 들면, 인간 항원-결합 단편)이고, 비제한적으로, Fab, Fab' 및 F(ab')2, Fd, 단일-쇄 Fvs (scFv), 단일-쇄 항체, 디술피드-결합 Fvs (sdFv) 및 어느 한쪽 VL 또는 VH 도메인을 포함하는 단편을 포함한다. 단일-쇄 항체를 포함하는 항원-결합 단편은 가변 영역(들)을 단독으로 또는 하기의 전체 또는 한 부문과 조합하여 포함할 수 있다: 힌지 영역, CH1, CH2, CH3 및 CL 도메인. 힌지 영역, CH1, CH2, CH3 및 CL 도메인과 가변 영역(들)의 임의의 조합을 포함하는 항원-결합 단편이 본 개시내용에 또한 포함된다. 일부 구현예에서, CD47 길항제 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간, 뮤린 (예를 들면, 마우스 및 랫트), 당나귀, 양, 토끼, 염소, 기니 피그, 낙타류, 말, 또는 닭이다.
본 개시내용의 CD47 길항제 항체는 단일특이적, 이중특이적, 삼중특이적일 수 있거나 더욱 큰 다중 특이성일 수 있다. 다중특이적 항체는 동일한 분자의 상이한 에피토프에 특이적일 수 있거나 이종 단백질에 특이적일 수 있다. 예를 들면, PCT 공개 WO 93/17715; WO 92/08802; WO 91/00360; WO 92/05793; Tutt, 등, 1991, J. Immunol. 147:60 69; 미국 특허 번호 4,474,893; 4,714,681; 4,925,648; 5,573,920; 5,601,819; Kostelny 등, 1992, J. Immunol. 148:1547 1553 참조.
일부 구현예에서, CD47 길항제 항체는 인간 항체이다. 일부 구현예에서, CD47 길항제 항체는 인간화된 항체이다. 일부 구현예에서, CD47 길항제 항체는 키메릭 항체이다.
본 개시내용의 CD47 길항제 항체는 이들이 포함하는 특정한 CDR의 관점에서 기재 또는 명시될 수 있다. 주어진 CDR 또는 FR의 정확한 아미노산 서열 경계는 Kabat 등 (1991), "Sequences of Proteins of Immunological Interest", 제5판 Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD ("카밧" 넘버링 스킴); Al-Lazikani 등, (1997) JMB 273,927-948 ("초티아" 넘버링 스킴); MacCallum 등, J. Mol. Biol. 262:732-745 (1996), "Antibody-antigen interactions: Contact analysis and binding site topography", J. Mol. Biol. 262, 732-745." ("컨택" 넘버링 스킴); Lefranc MP 등, "IMGT unique numbering for immunoglobulin and T cell receptor variable domains and Ig superfamily V-like domains", Dev Comp Immunol, 2003 Jan;27(1):55-77 ("IMGT" 넘버링 스킴); Honegger A 및 A, "Yet another numbering scheme for immunoglobulin variable domains: an automatic modeling and analysis tool", J Mol Biol, 2001 Jun 8;309(3):657-70, ("Aho" 넘버링 스킴); 및 Martin 등, "Modeling antibody hypervariable loops: a combined algorithm", PNAS, 1989, 86(23):9268-9272, ("AbM" 넘버링 스킴)에 의해 기재된 것들을 포함하는, 다수의 잘-알려진 스킴의 임의의 것을 사용하여 용이하게 결정될 수 있다. 주어진 CDR의 경계는 확인에 사용된 스킴에 따라 달라질 수 있다. 일부 구현예에서, 주어진 항체 또는 이의 영역 (예를 들면, 이의 가변 영역)의 "CDR" 또는 "상보성 결정 영역", 또는 개별 명시된 CDR (예를 들면, CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3)은 상기언급된 스킴들 중 임의의 것에 의해 정의된 대로 (또는 특이적) CDR을 포괄하는 것으로 이해되어야 한다. 예를 들어, 특정한 CDR (예를 들면, CDR-H3)이 주어진 VH 또는 VL 영역 아미노산 서열에서 상응하는 CDR의 아미노산 서열을 함유하는 것으로 언급된 경우, 이러한 CDR이 상기언급된 스킴들 중 임의의 것에 의해 정의된 대로, 가변 영역 내에서 상응하는 CDR (예를 들면, CDR-H3)의 서열을 갖는 것이 이해된다. 특정한 CDR 또는 CDR들, 예컨대 카바트, 초티아, AbM 또는 IMGT 방법에 의해 정의된 경우에 CDR의 확인을 위한 스킴은 명시될 수 있다.
CD47 길항제 항체의 CDR 서열은, 달리 명시되지 않는 한, Kabat 등 (1991), "Sequences of Proteins of Immunological Interest", 제5판 Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD에 기재된 대로 카밧 넘버링 스킴에 따른다.
본 발명의 CD47 길항제 항체는 그들의 결합 친화도 (예를 들면, 인간 CD47 또는 인간 SIRPα)의 관점에서 또한 기재 또는 명시될 수 있다. 바람직한 결합 친화도는 5 x10-2 M, 10-2 M, 5x10-3 M, 10-3 M, 5x10-4 M, 10-4 M, 5x10-5 M, 10-5 M, 5x10-6 M, 10-6 M, 5x10-7 M, 10-7 M, 5x10-8 M, 10-8M, 5x10-9 M, 10-9 M, 5x10-10 M, 10-10 M, 5x10-11 M, 10-11 M, 5x10-12 M, 10-12 M, 5x10-13 M, 10-13 M, 5x10-14 M, 10-14 M, 5x10-15 M, 또는 10-15 M 미만의 해리 상수 또는 KD를 가진 것들을 포함한다.
α, δ, ε, γ 및 μ, 각각으로 지정된 중쇄를 갖는 면역글로불린의 5개 부류: IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM가 있다. γ 및 α 부류는 하위부류로 추가로 나뉘고, 예를 들면, 인간은 하기 하위부류: IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2를 발현한다. IgG1 항체는 본원에 구현예들 중 일부에서 사용에 적합한 임의의 (Jefferis 및 Lefranc 2009. mAbs Vol 1 Issue 4 1-7에서 검토된) 동종이형으로 불리는 다중 다형성 변이체로 실재할 수 있다. 인간 집단에서 공통 동종이형성 변이체는 문자 a, f, n, z 또는 이들의 조합에 의해 지정된 것들이다. 본원에 구현예들 중 임의의 것에서, 항체는 인간 IgG Fc 영역을 포함하는 중쇄 Fc 영역을 포함할 수 있다. 추가 구현예에서, 인간 IgG Fc 영역은 인간 IgG1을 포함한다. 추가 구현예에서, 인간 IgG Fc 영역은 인간 IgG4를 포함한다.
항체는 또한, 즉, 공유 부착이 항체가 CD47 또는 SIRPα에 결합하는 것, 또는 세포에 관해 세포증식억제성 또는 세포독성 효과를 발휘하는 것을 막지 않도록 항체에 대한 임의의 유형의 분자의 공유 부착에 의해 변형되는 유도체를 포함한다. 예를 들어, 그러나 비제한적으로, 항체 유도체는, 예를 들면, 글리코실화, 아세틸화, PEG화, 인산화, 아미드화, 알려진 보호기/차단기에 의한 유도체화, 단백질분해적 절단, 세포성 리간드 또는 다른 단백질에 대한 연결, 등에 의해 변형된 항체를 포함한다. 수많은 화학적 변형들 중 임의의 것은, 비제한적으로 특이적 화학적 절단, 아세틸화, 포르밀화, 튜니카마이신의 대사적 합성, 등을 포함하는, 알려진 기법에 의해 실시될 수 있다. 추가적으로, 유도체는 하나 이상의 비-고전적 아미노산을 함유할 수 있다.
CD47 길항제 항체는 CD47-발현 표적 세포에 대한 ADCC, ADCP 및/또는 CDC 반응을 매개 또는 자극하는 항체 이펙터 도메인을 임의로 포함할 수 있다. 이펙터 도메인(들)은, 예를 들어, Ig 분자의 Fc 도메인 또는 도메인들일 수 있다. 이러한 CD47 길항제 항체는, 예를 들어, CD47-발현 암 또는 면역학적 장애, 각각의 치료에서, CD47-발현 암 세포에 관해 세포독성 또는 세포증식억제성 효과를 발휘할 수 있거나, 활성화된 림프구 또는 수지상 세포에 관해 세포독성, 세포증식억제성, 또는 면역조절성 효과를 발휘할 수 있다. 전형적으로, CD47 길항제 항체는 세포독성 백혈구 (예를 들면, 자연 살해 (NK) 세포, 포식 세포 (예를 들면, 대식세포), 및/또는 혈청 보체 성분)를 동원하고/거나 활성화시킨다.
본원에 기재된 CD47 길항제 항체는 표적, 예를 들면, CD47 또는 SIRPα에의 특이적 결합에 대하여, 그리고 항-CD70 항체의 경우에 본원에 기재된 대로 기법을 사용하는 결합 친화도에 대하여 검정될 수 있다.
본원에 기재된 CD47 길항제 항체는 항-CD70 항체에 대하여 본원에 기재된 대로 기법을 사용하여 생산될 수 있다.
일부 구현예에서 CD47 길항제는 마그롤리맙 (Forty Seven, Inc.; Gilead Sciences, Inc.), CC-90002 (Celgene Corporation), ALX148 (ALX Oncology), Vx-1004 (Corvus Pharmaceutical), NI-1701 (Novimmune S.A.), NI-1801 (Novimmune S.A.), RCT-1938 (Radiation Control Technologies, Inc.), KWAR23 (See WO2015138600), FSI-189 (Forty Seven Inc.; Gilead Sciences, Inc. (GS-0189로서 또한 알려짐)), ES-004 (Elpiscience), BI765063 (OSE Immunotherapeutics (OSE-172로서 또한 알려짐), ADU-1805 (Aduro Biotech), CC-95251 (Celgene), AL-008 (Alector), RRx-001 (EpicentRx), CTX-5861 (Compass Therapeutics), TTI-621 (Trillium Therapeutics), 및 TTI-622 (Trillium Therapeutics)로 이루어지는 군으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, CD47 길항제는 WO200140307, WO2002092784, WO2007133811, WO2009046541, WO2010083253, WO2011076781, WO2013056352, WO2015138600, WO2016179399, WO2016205042, WO2017178653, WO2018026600, WO2018057669, WO2018107058, WO2018190719, WO2018210793, WO2019023347, WO2019042470, WO2019175218, WO2019183266, WO2020013170 또는 WO2020068752에 개시된다.
일부 구현예에서, CD47 길항제는 Hu5F9-G4 및 h5F9-G4로서 또한 알려지는 마그롤리맙이다. 미국 특허 번호 9,017,675 참조. 일부 구현예에서, CD47 길항제는 마그롤리맙의 3개의 중쇄 CDR 및 3개의 경쇄 CDR을 포함한다. 일부 구현예에서, CD47 길항제는 마그롤리맙의 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, CD47 길항제는 마그롤리맙의 바이오시밀러이다.
일부 구현예에서, CD47 길항제는 미국 특허 번호 9,017,675에 개시된 항체이다. 일부 구현예에서, CD47 길항제는 미국 특허 번호 9,017,675에 개시된 항체의 3개의 중쇄 CDR 및 3개의 경쇄 CDR을 포함한다. 일부 구현예에서, CD47 길항제는 미국 특허 번호 9,017,675에 개시된 항체의 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, CD47 길항제는 미국 특허 번호 9,017,675에 개시된 항체의 바이오시밀러이다.
일부 구현예에서, CD47 길항제는 US2019/0185561에 개시된 항체이다. 일부 구현예에서, CD47 길항제는 US2019/0185561에 개시된 항체의 3개의 중쇄 CDR 및 3개의 경쇄 CDR을 포함한다. 일부 구현예에서, CD47 길항제는 US2019/0185561에 개시된 항체의 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, CD47 길항제는 US2019/0185561에 개시된 항체의 바이오시밀러이다.
전형적으로, CD47 길항제 또는 유도체는 실질적으로 정제된다 (예를 들면, 이의 효과를 제한하거나 바람직하지 않은 부작용을 생산하는 서브스턴스가 실질적으로 없음). 일부 구현예에서, CD47 길항제 또는 유도체는 적어도 약 40% 순수하거나, 적어도 약 50% 순수하거나, 적어도 약 60% 순수하다. 일부 구현예에서, CD47 길항제 또는 유도체는 적어도 약 60-65%, 65-70%, 70-75%, 75-80%, 80-85%, 85-90%, 90-95%, 또는 95-98% 순수하다. 일부 구현예에서, CD47 길항제 또는 유도체는 대략 99% 순수하다.
IV. 치료의 방법
본 발명은, 대상체에게 치료적으로 유효량의 항-CD70 항체, 예컨대 본원에 기재된 경우에 비푸코실화 항-CD70 항체, 및 본원에 기재된 경우에 CD47 길항제를 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 암, 예컨대 골수성 악성종양을 치료하는 방법을 제공한다. 일부 구현예에서, 암은 CD70을 발현한다. 일부 구현예에서, 암은 CD47을 발현한다. 일부 구현예에서, 암은 CD70 및 CD47을 발현한다. 골수성　악성종양은 모든 클론성 줄기-세포 (HSC) 또는 전구 악성 장애인 급성　골수성　백혈병 (AML), 골수증식성 장애 (MPDS), 골수이형성 증후군 (MDS) 및 골수이형성/골수증식성 증후군을 포함한다. 일부 구현예에서, 암은 MDS이다. 일부 구현예에서, 암은 AML이다. MDS는 단일-계통 이형성증이 있는 MDS, 고리 철적모세포가 있는 MDS, 다계통 이형성증이 있는 MDS, 과다 모세포가 있는 MDS, 단리된 del(5q)이 있는 MDS, 및 분류할 수 없는 MDS를 포함하는 여러 아형을 포괄한다. MDS는 골수의 계통 중 하나 이상에서 비효율적 조혈을 특징으로 한다. 초기 MDS는 대부분 과도한 세포사멸 및 조혈 세포 이형성증을 시연한다. MDS 환자들의 약 3분의 1에서, 이 비효율적 조혈은 2차 AML (sAML)로의 진행보다 먼저 발생한다. AML은 백혈구의 골수성　계통의 악성 종양이다. 일부 구현예에서, 본 방법은 비푸코실화 항-CD70 항체 및 CD47 길항제를 대상체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 항-CD70 항체는 서열번호:1의 3개의 CDR을 포함하는 중쇄 가변 영역, 서열번호:2의 3개의 CDR을 포함하는 경쇄 가변 영역, 및 Fc 도메인을 포함하고, 여기서 항-CD70 항체의 CDR은 카밧 넘버링 스킴에 의해 정의된다. 일부 구현예에서, 대상체에게 투여된 항-CD70 항체의 양은 치료적으로 유효량이다. 일부 구현예에서, 대상체에게 투여된 항-CD70 항체의 양은 치료량이하 또는 준최적 양이다. 일부 구현예에서, 대상체에게 투여된 CD47 길항제의 양은 치료적으로 유효량이다. 일부 구현예에서, 대상체에게 투여된 CD47 길항제의 양은 치료량이하 또는 준최적 양이다. 일부 구현예에서, 본 방법은 CD47 길항제 및 항-CD70 항체의 집단을 대상체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 항-CD70 항체의 집단에서 항-CD70 항체의 적어도 30%는 코어 푸코실화가 결여된다. 일부 구현예에서, 본 방법은 CD47 길항제 및 항-CD70 항체의 집단을 대상체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 항-CD70 항체의 집단에서 항-CD70 항체의 적어도 40%는 코어 푸코실화가 결여된다. 일부 구현예에서, 본 방법은 CD47 길항제 및 항-CD70 항체의 집단을 대상체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 항-CD70 항체의 집단에서 항-CD70 항체의 적어도 50%는 코어 푸코실화가 결여된다. 일부 구현예에서, 본 방법은 CD47 길항제 및 항-CD70 항체의 집단을 대상체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 항-CD70 항체의 집단에서 항-CD70 항체의 적어도 60%는 코어 푸코실화가 결여된다. 일부 구현예에서, 본 방법은 CD47 길항제 및 항-CD70 항체의 집단을 대상체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 항-CD70 항체의 집단에서 항-CD70 항체의 적어도 70%는 코어 푸코실화가 결여된다. 일부 구현예에서, 본 방법은 CD47 길항제 및 항-CD70 항체의 집단을 대상체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 항-CD70 항체의 집단에서 항-CD70 항체의 적어도 80%는 코어 푸코실화가 결여된다. 일부 구현예에서, 본 방법은 CD47 길항제 및 항-CD70 항체의 집단을 대상체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 항-CD70 항체의 집단에서 항-CD70 항체의 적어도 90%는 코어 푸코실화가 결여된다. 일부 구현예에서, 본 방법은 CD47 길항제 및 항-CD70 항체의 집단을 대상체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 항-CD70 항체의 집단에서 항-CD70 항체의 적어도 95%는 코어 푸코실화가 결여된다. 일부 구현예에서, 본 방법은 CD47 길항제 및 항-CD70 항체의 집단을 대상체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 항-CD70 항체의 집단에서 항-CD70 항체의 적어도 98%는 코어 푸코실화가 결여된다. 일부 구현예에서, 본 방법은 CD47 길항제 및 항-CD70 항체의 집단을 대상체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 항-CD70 항체의 집단에서 항-CD70 항체의 적어도 99%는 코어 푸코실화가 결여된다. 일부 구현예에서, 본 방법은 CD47 길항제 및 항-CD70 항체의 집단을 대상체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 항-CD70 항체의 집단에서 항-CD70 항체의 적어도 99.5%는 코어 푸코실화가 결여된다. 일부 구현예에서, CD47 길항제 및 항-CD70 항체는 저메틸화 제제 (HMA)와 조합하여 투여된다. 일부 구현예에서, HMA는 아자시티딘이다. 일부 구현예에서, CD47 길항제 및 항-CD70 항체는 BH3-모방체와 조합하여 투여된다. 일부 구현예에서, CD47 길항제 및 항-CD70 항체는 베네토클락스 (VENCLEXTA®)와 조합하여 투여된다. 일부 구현예에서, CD47 길항제 및 항-CD70 항체는 HMA 및 BH3-모방체와 조합하여 투여된다. 일부 구현예에서, CD47 길항제 및 항-CD70 항체는 HMA 및 베네토클락스와 조합하여 투여된다. 일부 구현예에서, CD47 길항제 및 항-CD70 항체는 아자시티딘 및 BH3-모방체와 조합하여 투여된다. 일부 구현예에서, CD47 길항제 및 항-CD70 항체는 아자시티딘 및 베네토클락스와 조합하여 투여된다.
일부 구현예에서, 본원에 기재된 항-CD70 항체 및 본원에 기재된 CD47 길항제를 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 MDS를 치료하는 방법이 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, MDS의 암 세포는 CD70을 발현한다. 일부 구현예에서, MDS의 암 세포는 CD47을 발현한다. 일부 구현예에서, MDS의 암 세포는 CD70 및 CD47을 발현한다.일부 구현예에서, 항-CD70 항체는 비푸코실화된다. 일부 구현예에서, MDS는 재발성 또는 불응성 MDS이다. 일부 구현예에서, MDS는 재발성 MDS이다. 일부 구현예에서, MDS는 불응성 MDS이다. 일부 구현예에서, 대상체에게 투여된 항-CD70 항체의 양은 치료적으로 유효량이다. 일부 구현예에서, 대상체에게 투여된 항-CD70 항체의 양은 치료량이하 또는 준최적 양이다. 일부 구현예에서, 대상체에게 투여된 CD47 길항제의 양은 치료적으로 유효량이다. 일부 구현예에서, 대상체에게 투여된 CD47 길항제의 양은 치료량이하 또는 준최적 양이다. 일부 구현예에서, 대상체는 MDS에 대하여 선행 저메틸화 제제 (HMA) 요법 후에 치료 실패를 경험하였다. HMA (또한 탈메틸화제로서 공지됨)는 DNA 메틸화를 억제하는 약물이다. 일부 구현예에서, HMA는 DNA 메틸트랜스퍼라제 억제제이다. 일부 구현예에서, HMA는 아자시티딘이다. 일부 구현예에서, HMA는 데시타빈이다.
일부 구현예에서, 본원에 기재된 항-CD70 항체 및 본원에 기재된 CD47 길항제를 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 AML을 치료하는 방법이 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, AML의 암 세포는 CD70을 발현한다. 일부 구현예에서, AML의 암 세포는 CD47을 발현한다. 일부 구현예에서, AML의 암 세포는 CD70 및 CD47을 발현한다.일부 구현예에서, 항-CD70 항체는 비푸코실화된다. 일부 구현예에서, AML은 재발성 또는 불응성 AML이다. 일부 구현예에서, AML은 재발성 AML이다. 일부 구현예에서, AML은 불응성 AML이다. 일부 구현예에서, 대상체에게 투여된 항-CD70 항체의 양은 치료적으로 유효량이다. 일부 구현예에서, 대상체에게 투여된 항-CD70 항체의 양은 치료량이하 또는 준최적 양이다. 일부 구현예에서, 대상체에게 투여된 CD47 길항제의 양은 치료적으로 유효량이다. 일부 구현예에서, 대상체에게 투여된 CD47 길항제의 양은 치료량이하 또는 준최적 양이다. 일부 구현예에서, 대상체는 AML을 치료하기 위해 1개의 선행 치료 요법을 받았다. 일부 구현예에서, 대상체는 AML을 치료하기 위해 2개의 선행 치료 요법을 받았다. 일부 구현예에서, 대상체는 AML을 치료하기 위해 3개의 선행 치료 요법을 받았다.
일부 구현예에서, 대상체로부터 암 세포의 적어도 약 0.1%, 적어도 약 1%, 적어도 약 2%, 적어도 약 3%, 적어도 약 4%, 적어도 약 5%, 적어도 약 6%, 적어도 약 7%, 적어도 약 8%, 적어도 약 9%, 적어도 약 10%, 적어도 약 15%, 적어도 약 20%, 적어도 약 25%, 적어도 약 30%, 적어도 약 35%, 적어도 약 40%, 적어도 약 45%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 또는 적어도 약 80%는 CD70을 발현한다. 일부 구현예에서, 대상체로부터 암 세포의 적어도 0.1%, 적어도 1%, 적어도 2%, 적어도 3%, 적어도 4%, 적어도 5%, 적어도 6%, 적어도 7%, 적어도 8%, 적어도 9%, 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 또는 적어도 80%는 CD70을 발현한다. 일부 구현예에서, CD70을 발현하는 세포의 백분율은 면역조직화학 (IHC)을 사용하여 결정된다. 일부 구현예에서, CD70을 발현하는 세포의 백분율은 유세포 분석을 사용하여 결정된다. 일부 구현예에서, CD70을 발현하는 세포의 백분율은 효소-결합 면역흡착 검정 (ELISA)을 사용하여 결정된다.
일부 구현예에서, 대상체로부터 암 세포의 적어도 약 0.1%, 적어도 약 1%, 적어도 약 2%, 적어도 약 3%, 적어도 약 4%, 적어도 약 5%, 적어도 약 6%, 적어도 약 7%, 적어도 약 8%, 적어도 약 9%, 적어도 약 10%, 적어도 약 15%, 적어도 약 20%, 적어도 약 25%, 적어도 약 30%, 적어도 약 35%, 적어도 약 40%, 적어도 약 45%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 또는 적어도 약 80%는 CD47을 발현한다. 일부 구현예에서, 대상체로부터 암 세포의 적어도 0.1%, 적어도 1%, 적어도 2%, 적어도 3%, 적어도 4%, 적어도 5%, 적어도 6%, 적어도 7%, 적어도 8%, 적어도 9%, 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 또는 적어도 80%는 CD47을 발현한다. 일부 구현예에서, CD47을 발현하는 세포의 백분율은 면역조직화학 (IHC)을 사용하여 결정된다. 일부 구현예에서, CD70을 발현하는 세포의 백분율은 유세포 분석을 사용하여 결정된다. 일부 구현예에서, CD47을 발현하는 세포의 백분율은 효소-결합 면역흡착 검정 (ELISA)을 사용하여 결정된다.
일 양태에서, 본원에 기재된 경우에 항-CD70 항체 및 본원에 기재된 경우에 CD47 길항제로 암을 치료하는 방법은 기준선에 비해 항체의 투여 후 대상체에서 하나 이상의 치료적 효과에서의 개선을 초래한다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 치료적 효과는 객관적 반응률, 반응의 지속기간, 반응까지의 시간, 무진행 생존, 전체 생존, 또는 이들의 임의의 조합이다. 일 구현예에서, 하나 이상의 치료적 효과는 안정한 질환이다. 일 구현예에서, 하나 이상의 치료적 효과는 부분적 반응이다. 일 구현예에서, 하나 이상의 치료적 효과는 완전 반응이다. 일 구현예에서, 하나 이상의 치료적 효과는 객관적 반응률이다. 일 구현예에서, 하나 이상의 치료적 효과는 반응의 지속기간이다. 일 구현예에서, 하나 이상의 치료적 효과는 반응까지의 시간이다. 일 구현예에서, 하나 이상의 치료적 효과는 무진행 생존이다. 일 구현예에서, 하나 이상의 치료적 효과는 전체 생존이다. 일 구현예에서, 하나 이상의 치료적 효과는 암 퇴행이다.
본원에 제공된 방법 또는 용도 또는 용도를 위한 생산물의 일 구현예에서, 본원에 기재된 경우에 항-CD70 항체 및 본원에 기재된 경우에 CD47 길항제를 이용한 치료에 대한 반응은 하기 기준 (체손(Cheson) 기준)을 포함할 수 있다:
본원에 제공된 방법 또는 용도 또는 용도를 위한 생산물의 일 구현예에서, 본원에 기재된 경우에 항-CD70 항체 및 본원에 기재된 경우에 CD47 길항제를 이용한 치료에 대한 반응은 하기 기준 (체손 기준)을 포함할 수 있다:
본원에 제공된 방법 또는 용도 또는 용도를 위한 생산물의 일 구현예에서, 본원에 기재된 경우에 항-CD70 항체 및 본원에 기재된 CD47 길항제를 사용한 치료의 유효성은 객관적 반응률을 측정함으로써 평가된다. 일부 구현예에서, 객관적 반응률은 최소 기간 동안 그리고 사전정의된 양의 종양 크기 감소가 있는 환자의 분율이다. 일부 구현예에서 객관적 반응률은 체손 기준에 기초한다. 일 구현예에서, 객관적 반응률은 적어도 약 20%, 적어도 약 25%, 적어도 약 30%, 적어도 약 35%, 적어도 약 40%, 적어도 약 45%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 또는 적어도 약 80%이다. 일 구현예에서, 객관적 반응률은 적어도 약 20%-80%이다. 일 구현예에서, 객관적 반응률은 적어도 약 30%-80%이다. 일 구현예에서, 객관적 반응률은 적어도 약 40%-80%이다. 일 구현예에서, 객관적 반응률은 적어도 약 50%-80%이다. 일 구현예에서, 객관적 반응률은 적어도 약 60%-80%이다. 일 구현예에서, 객관적 반응률은 적어도 약 70%-80%이다. 일 구현예에서, 객관적 반응률은 적어도 약 80%이다. 일 구현예에서, 객관적 반응률은 적어도 약 85%이다. 일 구현예에서, 객관적 반응률은 적어도 약 90%이다. 일 구현예에서, 객관적 반응률은 적어도 약 95%이다. 일 구현예에서, 객관적 반응률은 적어도 약 98%이다. 일 구현예에서, 객관적 반응률은 적어도 약 99%이다. 일 구현예에서, 객관적 반응률은 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 또는 적어도 80%이다. 일 구현예에서, 객관적 반응률은 적어도 20%-80%이다. 일 구현예에서, 객관적 반응률은 적어도 30%-80%이다. 일 구현예에서, 객관적 반응률은 적어도 40%-80%이다. 일 구현예에서, 객관적 반응률은 적어도 50%-80%이다. 일 구현예에서, 객관적 반응률은 적어도 60%-80%이다. 일 구현예에서, 객관적 반응률은 적어도 70%-80%이다. 일 구현예에서, 객관적 반응률은 적어도 80%이다. 일 구현예에서, 객관적 반응률은 적어도 85%이다. 일 구현예에서, 객관적 반응률은 적어도 90%이다. 일 구현예에서, 객관적 반응률은 적어도 95%이다. 일 구현예에서, 객관적 반응률은 적어도 98%이다. 일 구현예에서, 객관적 반응률은 적어도 99%이다. 일 구현예에서, 객관적 반응률은 100%이다.
본원에 기재된 방법 또는 용도 또는 용도를 위한 생산물의 일 구현예에서, 본원에 기재된 경우에 항-CD70 항체 및 본원에 기재된 CD47 길항제를 사용한 치료에 대한 반응은 본원에 기재된 항-CD70 항체 및 본원에 기재된 CD47 길항제의 투여 후 무진행 생존의 시간을 측정함으로써 평가된다. 일부 구현예에서, 대상체는 본원에 기재된 항-CD70 항체 및 본원에 기재된 CD47 길항제의 투여 후 적어도 약 1 개월, 적어도 약 2 개월, 적어도 약 3 개월, 적어도 약 4 개월, 적어도 약 5 개월, 적어도 약 6 개월, 적어도 약 7 개월, 적어도 약 8 개월, 적어도 약 9 개월, 적어도 약 10 개월, 적어도 약 11 개월, 적어도 약 12 개월, 적어도 약 18 개월, 적어도 약 2 년, 적어도 약 3 년, 적어도 약 4 년, 또는 적어도 약 5 년의 무진행 생존을 나타낸다. 일부 구현예에서, 대상체는 본원에 기재된 항-CD70 항체 및 본원에 기재된 CD47 길항제의 투여 후 적어도 약 6 개월의 무진행 생존을 나타낸다. 일부 구현예에서, 대상체는 본원에 기재된 항-CD70 항체 및 본원에 기재된 CD47 길항제의 투여 후 적어도 약 1 년의 무진행 생존을 나타낸다. 일부 구현예에서, 대상체는 본원에 기재된 항-CD70 항체 및 본원에 기재된 CD47 길항제의 투여 후 적어도 약 2 년의 무진행 생존을 나타낸다. 일부 구현예에서, 대상체는 본원에 기재된 항-CD70 항체 및 본원에 기재된 CD47 길항제의 투여 후 적어도 약 3 년의 무진행 생존을 나타낸다. 일부 구현예에서, 대상체는 본원에 기재된 항-CD70 항체 및 본원에 기재된 CD47 길항제의 투여 후 적어도 약 4 년의 무진행 생존을 나타낸다. 일부 구현예에서, 대상체는 본원에 기재된 항-CD70 항체 및 본원에 기재된 CD47 길항제의 투여 후 적어도 약 5 년의 무진행 생존을 나타낸다. 일부 구현예에서, 대상체는 본원에 기재된 항-CD70 항체 및 본원에 기재된 CD47 길항제의 투여 후 적어도 1 개월, 적어도 2 개월, 적어도 3 개월, 적어도 4 개월, 적어도 5 개월, 적어도 6 개월, 적어도 7 개월, 적어도 8 개월, 적어도 9 개월, 적어도 10 개월, 적어도 11 개월, 적어도 12 개월, 적어도 18 개월, 적어도 2 년, 적어도 3 년, 적어도 4 년, 또는 적어도 5 년의 무진행 생존을 나타낸다. 일부 구현예에서, 대상체는 본원에 기재된 항-CD70 항체 및 본원에 기재된 CD47 길항제의 투여 후 적어도 6 개월의 무진행 생존을 나타낸다. 일부 구현예에서, 대상체는 본원에 기재된 항-CD70 항체 및 본원에 기재된 CD47 길항제의 투여 후 적어도 1 년의 무진행 생존을 나타낸다. 일부 구현예에서, 대상체는 본원에 기재된 항-CD70 항체 및 본원에 기재된 CD47 길항제의 투여 후 적어도 2 년의 무진행 생존을 나타낸다. 일부 구현예에서, 대상체는 본원에 기재된 항-CD70 항체 및 본원에 기재된 CD47 길항제의 투여 후 적어도 3 년의 무진행 생존을 나타낸다. 일부 구현예에서, 대상체는 본원에 기재된 항-CD70 항체 및 본원에 기재된 CD47 길항제의 투여 후 적어도 4 년의 무진행 생존을 나타낸다. 일부 구현예에서, 대상체는 본원에 기재된 항-CD70 항체 및 본원에 기재된 CD47 길항제의 투여 후 적어도 5 년의 무진행 생존을 나타낸다.
본원에 기재된 방법 또는 용도 또는 용도를 위한 생산물의 일 구현예에서, 본원에 기재된 항-CD70 항체 및 본원에 기재된 CD47 길항제를 사용한 치료에 대한 반응은 본원에 기재된 항-CD70 항체 및 본원에 기재된 CD47 길항제의 투여 후 전체 생존의 시간을 측정함으로써 평가된다. 일부 구현예에서, 대상체는 본원에 기재된 항-CD70 항체 및 본원에 기재된 CD47 길항제의 투여 후 적어도 약 1 개월, 적어도 약 2 개월, 적어도 약 3 개월, 적어도 약 4 개월, 적어도 약 5 개월, 적어도 약 6 개월, 적어도 약 7 개월, 적어도 약 8 개월, 적어도 약 9 개월, 적어도 약 10 개월, 적어도 약 11 개월, 적어도 약 12 개월, 적어도 약 18 개월, 적어도 약 2 년, 적어도 약 3 년, 적어도 약 4 년, 또는 적어도 약 5 년의 전체 생존을 나타낸다. 일부 구현예에서, 대상체는 본원에 기재된 항-CD70 항체 및 본원에 기재된 CD47 길항제의 투여 후 적어도 약 6 개월의 전체 생존을 나타낸다. 일부 구현예에서, 대상체는 본원에 기재된 항-CD70 항체 및 본원에 기재된 CD47 길항제의 투여 후 적어도 약 1 년의 전체 생존을 나타낸다. 일부 구현예에서, 대상체는 본원에 기재된 항-CD70 항체 및 본원에 기재된 CD47 길항제의 투여 후 적어도 약 2 년의 전체 생존을 나타낸다. 일부 구현예에서, 대상체는 본원에 기재된 항-CD70 항체 및 본원에 기재된 CD47 길항제의 투여 후 적어도 약 3 년의 전체 생존을 나타낸다. 일부 구현예에서, 대상체는 본원에 기재된 항-CD70 항체 및 본원에 기재된 CD47 길항제의 투여 후 적어도 약 4 년의 전체 생존을 나타낸다. 일부 구현예에서, 대상체는 본원에 기재된 항-CD70 항체 및 본원에 기재된 CD47 길항제의 투여 후 적어도 약 5 년의 전체 생존을 나타낸다. 일부 구현예에서, 대상체는 본원에 기재된 항-CD70 항체 및 본원에 기재된 CD47 길항제의 투여 후 적어도 1 개월, 적어도 2 개월, 적어도 3 개월, 적어도 4 개월, 적어도 5 개월, 적어도 6 개월, 적어도 7 개월, 적어도 8 개월, 적어도 9 개월, 적어도 10 개월, 적어도 11 개월, 적어도 약 12 개월, 적어도 18 개월, 적어도 2 년, 적어도 3 년, 적어도 4 년, 또는 적어도 5 년의 전체 생존을 나타낸다. 일부 구현예에서, 대상체는 본원에 기재된 항-CD70 항체 및 본원에 기재된 CD47 길항제의 투여 후 적어도 6 개월의 전체 생존을 나타낸다. 일부 구현예에서, 대상체는 본원에 기재된 항-CD70 항체 및 본원에 기재된 CD47 길항제의 투여 후 적어도 1 년의 전체 생존을 나타낸다. 일부 구현예에서, 대상체는 본원에 기재된 항-CD70 항체 및 본원에 기재된 CD47 길항제의 투여 후 적어도 2 년의 전체 생존을 나타낸다. 일부 구현예에서, 대상체는 본원에 기재된 항-CD70 항체 및 본원에 기재된 CD47 길항제의 투여 후 적어도 3 년의 전체 생존을 나타낸다. 일부 구현예에서, 대상체는 본원에 기재된 항-CD70 항체 및 본원에 기재된 CD47 길항제의 투여 후 적어도 4 년의 전체 생존을 나타낸다. 일부 구현예에서, 대상체는 본원에 기재된 항-CD70 항체 및 본원에 기재된 CD47 길항제의 투여 후 적어도 5 년의 전체 생존을 나타낸다.
본원에 기재된 방법 또는 용도 또는 용도를 위한 생산물의 일 구현예에서, 본원에 기재된 항-CD70 항체 및 본원에 기재된 CD47 길항제를 사용한 치료에 대한 반응은 본원에 기재된 항-CD70 항체 및 본원에 기재된 CD47 길항제의 투여 후 본원에 기재된 항-CD70 항체 및 본원에 기재된 CD47 길항제에 대한 반응의 지속기간을 측정함으로써 평가된다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 항-CD70 항체 및 본원에 기재된 CD47 길항제에 대한 반응의 지속기간은 본원에 기재된 항-CD70 항체 및 본원에 기재된 CD47 길항제의 투여 후 적어도 약 1 개월, 적어도 약 2 개월, 적어도 약 3 개월, 적어도 약 4 개월, 적어도 약 5 개월, 적어도 약 6 개월, 적어도 약 7 개월, 적어도 약 8 개월, 적어도 약 9 개월, 적어도 약 10 개월, 적어도 약 11 개월, 적어도 약 12 개월, 적어도 약 18 개월, 적어도 약 2 년, 적어도 약 3 년, 적어도 약 4 년, 또는 적어도 약 5 년이다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 항-CD70 항체 및 본원에 기재된 CD47 길항제에 대한 반응의 지속기간은 본원에 기재된 항-CD70 항체 및 본원에 기재된 CD47 길항제의 투여 후 적어도 약 6 개월이다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 항-CD70 항체 및 본원에 기재된 CD47 길항제에 대한 반응의 지속기간은 본원에 기재된 항-CD70 항체 및 본원에 기재된 CD47 길항제의 투여 후 적어도 약 1 년이다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 항-CD70 항체 및 본원에 기재된 CD47 길항제에 대한 반응의 지속기간은 본원에 기재된 항-CD70 항체 및 본원에 기재된 CD47 길항제의 투여 후 적어도 약 2 년이다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 항-CD70 항체 및 본원에 기재된 CD47 길항제에 대한 반응의 지속기간은 본원에 기재된 항-CD70 항체 및 본원에 기재된 CD47 길항제의 투여 후 적어도 약 3 년이다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 항-CD70 항체 및 본원에 기재된 CD47 길항제에 대한 반응의 지속기간은 본원에 기재된 항-CD70 항체 및 본원에 기재된 CD47 길항제의 투여 후 적어도 약 4 년이다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 항-CD70 항체 및 본원에 기재된 CD47 길항제에 대한 반응의 지속기간은 본원에 기재된 항-CD70 항체 및 본원에 기재된 CD47 길항제의 투여 후 적어도 약 5 년이다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 항-CD70 항체 및 본원에 기재된 CD47 길항제에 대한 반응의 지속기간은 본원에 기재된 항-CD70 항체 및 본원에 기재된 CD47 길항제의 투여 후 적어도 1 개월, 적어도 2 개월, 적어도 3 개월, 적어도 4 개월, 적어도 5 개월, 적어도 6 개월, 적어도 7 개월, 적어도 8 개월, 적어도 9 개월, 적어도 10 개월, 적어도 11 개월, 적어도 12 개월, 적어도 18 개월, 적어도 2 년, 적어도 3 년, 적어도 4 년, 또는 적어도 5 년이다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 항-CD70 항체 및 본원에 기재된 CD47 길항제에 대한 반응의 지속기간은 본원에 기재된 항-CD70 항체 및 본원에 기재된 CD47 길항제의 투여 후 적어도 6 개월이다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 항-CD70 항체 및 본원에 기재된 CD47 길항제에 대한 반응의 지속기간은 본원에 기재된 항-CD70 항체 및 본원에 기재된 CD47 길항제의 투여 후 적어도 1 년이다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 항-CD70 항체 및 본원에 기재된 CD47 길항제에 대한 반응의 지속기간은 본원에 기재된 항-CD70 항체 및 본원에 기재된 CD47 길항제의 투여 후 적어도 2 년이다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 항-CD70 항체 및 본원에 기재된 CD47 길항제에 대한 반응의 지속기간은 본원에 기재된 항-CD70 항체 및 본원에 기재된 CD47 길항제의 투여 후 적어도 3 년이다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 항-CD70 항체 및 본원에 기재된 CD47 길항제에 대한 반응의 지속기간은 본원에 기재된 항-CD70 항체 및 본원에 기재된 CD47 길항제의 투여 후 적어도 4 년이다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 항-CD70 항체 및 본원에 기재된 CD47 길항제에 대한 반응의 지속기간은 본원에 기재된 항-CD70 항체 및 본원에 기재된 CD47 길항제의 투여 후 적어도 5 년이다.
본원에 기재된 방법 또는 용도 또는 용도를 위한 생산물의 일부 구현예에서, 본원에 기재된 항-CD70 항체, 예컨대 비푸코실화 항-CD70 항체, 및 본원에 기재된 CD47 길항제를 대상체에게 투여하는 것은 대상체에서 암 세포의 고갈을 초래한다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 항-CD70 항체, 예컨대 비푸코실화 항-CD70 항체, 및 본원에 기재된 CD47 길항제를 투여하는 것은 대상체에게 항-CD70 항체 및 CD47 길항제 투여하기 전 암 세포의 양과 비교하여 적어도 약 5%, 적어도 약 6%, 적어도 약 7%, 적어도 약 8%, 적어도 약 9%, 적어도 약 10%, 적어도 약 15%, 적어도 약 20%, 적어도 약 25%, 적어도 약 30%, 적어도 약 35%, 적어도 약 40%, 적어도 약 45%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 또는 약 100% 만큼 암 세포의 고갈을 초래한다. 일부 구현예에서, 암 세포는 대상체에게 항-CD70 항체 및 CD47 길항제 투여하기 전 암 세포의 양과 비교하여 적어도 약 5% 만큼 고갈된다. 일부 구현예에서, 암 세포는 대상체에게 항-CD70 항체 및 CD47 길항제 투여하기 전 암 세포의 양과 비교하여 적어도 약 10% 만큼 고갈된다. 일부 구현예에서, 암 세포는 대상체에게 항-CD70 항체 및 CD47 길항제 투여하기 전 암 세포의 양과 비교하여 적어도 약 20% 만큼 고갈된다. 일부 구현예에서, 암 세포는 대상체에게 항-CD70 항체 및 CD47 길항제 투여하기 전 암 세포의 양과 비교하여 적어도 약 30% 만큼 고갈된다. 일부 구현예에서, 암 세포는 대상체에게 항-CD70 항체 및 CD47 길항제 투여하기 전 암 세포의 양과 비교하여 적어도 약 40% 만큼 고갈된다. 일부 구현예에서, 암 세포는 대상체에게 항-CD70 항체 및 CD47 길항제 투여하기 전 암 세포의 양과 비교하여 적어도 약 50% 만큼 고갈된다. 일부 구현예에서, 암 세포는 대상체에게 항-CD70 항체 및 CD47 길항제 투여하기 전 암 세포의 양과 비교하여 적어도 약 60% 만큼 고갈된다. 일부 구현예에서, 암 세포는 대상체에게 항-CD70 항체 및 CD47 길항제 투여하기 전 암 세포의 양과 비교하여 적어도 약 70% 만큼 고갈된다. 일부 구현예에서, 암 세포는 대상체에게 항-CD70 항체 및 CD47 길항제 투여하기 전 암 세포의 양과 비교하여 적어도 약 80% 만큼 고갈된다. 일부 구현예에서, 암 세포는 대상체에게 항-CD70 항체 및 CD47 길항제 투여하기 전 암 세포의 양과 비교하여 적어도 약 90% 만큼 고갈된다. 일부 구현예에서, 암 세포는 대상체에게 항-CD70 항체 및 CD47 길항제 투여하기 전 암 세포의 양과 비교하여 적어도 약 95% 만큼 고갈된다. 일부 구현예에서, 암 세포는 대상체에게 항-CD70 항체 및 CD47 길항제 투여하기 전 암 세포의 양과 비교하여 적어도 약 99% 만큼 고갈된다. 일부 구현예에서, 암 세포는 대상체에게 항-CD70 항체 및 CD47 길항제 투여하기 전 암 세포의 양과 비교하여 적어도 약 100% 만큼 고갈된다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 항-CD70 항체, 예컨대 비푸코실화 항-CD70 항체, 및 본원에 기재된 CD47 길항제를 투여하는 것은 대상체에게 항-CD70 항체 및 CD47 길항제 투여하기 전 암 세포의 양과 비교하여 적어도 5%, 적어도 6%, 적어도 7%, 적어도 8%, 적어도 9%, 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 95%, 또는 100% 만큼 암 세포의 고갈을 초래한다. 일부 구현예에서, 암 세포는 대상체에게 항-CD70 항체 및 CD47 길항제 투여하기 전 암 세포의 양과 비교하여 적어도 약 5% 만큼 고갈된다. 일부 구현예에서, 암 세포는 대상체에게 항-CD70 항체 및 CD47 길항제 투여하기 전 암 세포의 양과 비교하여 적어도 약 10% 만큼 고갈된다. 일부 구현예에서, 암 세포는 대상체에게 항-CD70 항체 및 CD47 길항제 투여하기 전 암 세포의 양과 비교하여 적어도 약 20% 만큼 고갈된다. 일부 구현예에서, 암 세포는 대상체에게 항-CD70 항체 및 CD47 길항제 투여하기 전 암 세포의 양과 비교하여 적어도 약 30% 만큼 고갈된다. 일부 구현예에서, 암 세포는 대상체에게 항-CD70 항체 및 CD47 길항제 투여하기 전 암 세포의 양과 비교하여 적어도 약 40% 만큼 고갈된다. 일부 구현예에서, 암 세포는 대상체에게 항-CD70 항체 및 CD47 길항제 투여하기 전 암 세포의 양과 비교하여 적어도 약 50% 만큼 고갈된다. 일부 구현예에서, 암 세포는 대상체에게 항-CD70 항체 및 CD47 길항제 투여하기 전 암 세포의 양과 비교하여 적어도 약 60% 만큼 고갈된다. 일부 구현예에서, 암 세포는 대상체에게 항-CD70 항체 및 CD47 길항제 투여하기 전 암 세포의 양과 비교하여 적어도 약 70% 만큼 고갈된다. 일부 구현예에서, 암 세포는 대상체에게 항-CD70 항체 및 CD47 길항제 투여하기 전 암 세포의 양과 비교하여 적어도 약 80% 만큼 고갈된다. 일부 구현예에서, 암 세포는 대상체에게 항-CD70 항체 및 CD47 길항제 투여하기 전 암 세포의 양과 비교하여 적어도 약 90% 만큼 고갈된다. 일부 구현예에서, 암 세포는 대상체에게 항-CD70 항체 및 CD47 길항제 투여하기 전 암 세포의 양과 비교하여 적어도 약 95% 만큼 고갈된다. 일부 구현예에서, 암 세포는 대상체에게 항-CD70 항체 및 CD47 길항제 투여하기 전 암 세포의 양과 비교하여 적어도 약 99% 만큼 고갈된다. 일부 구현예에서, 암 세포는 대상체에게 항-CD70 항체 및 CD47 길항제 투여하기 전 암 세포의 양과 비교하여 적어도 약 100% 만큼 고갈된다.
본원에 기재된 방법 또는 용도 또는 용도를 위한 생산물의 일부 구현예에서, 본원에 기재된 항-CD70 항체, 예컨대 비푸코실화 항-CD70 항체, 및 본원에 기재된 CD47 길항제를 대상체에게 투여하는 것은 대상체에서 CD70+ T 조절성 세포 (CD70+ Treg)의 고갈을 초래하지 않는다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 항-CD70 항체, 예컨대 비푸코실화 항-CD70 항체, 및 본원에 기재된 CD47 길항제를 투여하는 것은 대상체에게 항-CD70 항체 및 CD47 길항제 투여하기 전 CD70+ Treg의 양과 비교하여 약 50%, 약 40%, 약 30%, 약 20%, 약 10%, 약 9%, 약 8%, 약 7%, 약 6%, 약 5%, 약 4%, 약 3%, 약 2%, 약 1%, 또는 약 0.1% 이하의 CD70+ Treg의 고갈을 초래한다. 일부 구현예에서, CD70+ Treg는 대상체에게 항-CD70 항체 및 CD47 길항제 투여하기 전 CD70+ Treg의 양과 비교하여 약 50% 이하 만큼 고갈된다. 일부 구현예에서, CD70+ Treg는 대상체에게 항-CD70 항체 및 CD47 길항제 투여하기 전 CD70+ Treg의 양과 비교하여 약 40% 이하 만큼 고갈된다. 일부 구현예에서, CD70+ Treg는 대상체에게 항-CD70 항체 및 CD47 길항제 투여하기 전 CD70+ Treg의 양과 비교하여 약 30% 이하 만큼 고갈된다. 일부 구현예에서, CD70+ Treg는 대상체에게 항-CD70 항체 및 CD47 길항제 투여하기 전 CD70+ Treg의 양과 비교하여 약 20% 이하 만큼 고갈된다. 일부 구현예에서, CD70+ Treg는 대상체에게 항-CD70 항체 및 CD47 길항제 투여하기 전 CD70+ Treg의 양과 비교하여 약 10% 이하 만큼 고갈된다. 일부 구현예에서, CD70+ Treg는 대상체에게 항-CD70 항체 및 CD47 길항제 투여하기 전 CD70+ Treg의 양과 비교하여 약 5% 이하 만큼 고갈된다. 일부 구현예에서, CD70+ Treg는 대상체에게 항-CD70 항체 및 CD47 길항제 투여하기 전 CD70+ Treg의 양과 비교하여 약 1% 이하 만큼 고갈된다. 일부 구현예에서, CD70+ Treg는 대상체에게 항-CD70 항체 및 CD47 길항제 투여하기 전 CD70+ Treg의 양과 비교하여 약 0.1% 이하 만큼 고갈된다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 항-CD70 항체, 예컨대 비푸코실화 항-CD70 항체, 및 본원에 기재된 CD47 길항제를 투여하는 것은 대상체에게 항-CD70 항체 및 CD47 길항제 투여하기 전 CD70+ Treg의 양과 비교하여 50%, 40%, 30%, 20%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 또는 0.1% 이하의 CD70+ Treg의 고갈을 초래한다. 일부 구현예에서, CD70+ Treg는 대상체에게 항-CD70 항체 및 CD47 길항제 투여하기 전 CD70+ Treg의 양과 비교하여 약 50% 이하 만큼 고갈된다. 일부 구현예에서, CD70+ Treg는 대상체에게 항-CD70 항체 및 CD47 길항제 투여하기 전 CD70+ Treg의 양과 비교하여 약 40% 이하 만큼 고갈된다. 일부 구현예에서, CD70+ Treg는 대상체에게 항-CD70 항체 및 CD47 길항제 투여하기 전 CD70+ Treg의 양과 비교하여 약 30% 이하 만큼 고갈된다. 일부 구현예에서, CD70+ Treg는 대상체에게 항-CD70 항체 및 CD47 길항제 투여하기 전 CD70+ Treg의 양과 비교하여 약 20% 이하 만큼 고갈된다. 일부 구현예에서, CD70+ Treg는 대상체에게 항-CD70 항체 및 CD47 길항제 투여하기 전 CD70+ Treg의 양과 비교하여 약 10% 이하 만큼 고갈된다. 일부 구현예에서, CD70+ Treg는 대상체에게 항-CD70 항체 및 CD47 길항제 투여하기 전 CD70+ Treg의 양과 비교하여 약 5% 이하 만큼 고갈된다. 일부 구현예에서, CD70+ Treg는 대상체에게 항-CD70 항체 및 CD47 길항제 투여하기 전 CD70+ Treg의 양과 비교하여 약 1% 이하 만큼 고갈된다. 일부 구현예에서, CD70+ Treg는 대상체에게 항-CD70 항체 및 CD47 길항제 투여하기 전 CD70+ Treg의 양과 비교하여 약 0.1% 이하 만큼 고갈된다.
일부 구현예에서, 푸코실화 항-CD70 항체는 동일한 중쇄 및 경쇄 아미노산 서열을 포함하는 항-CD70 항체의 비푸코실화 형태보다 더 큰 정도로 대상체에서 CD70+ Treg를 고갈시킨다. 일부 구현예에서, 푸코실화 항-CD70 항체는 대상체가 고 친화도 FcγRIIIa 수용체 (V/V 158)에 대하여 동형접합성인 경우 동일한 중쇄 및 경쇄 아미노산 서열을 포함하는 항-CD70 항체의 비푸코실화 형태보다 더 큰 정도로 대상체에서 CD70+ Treg를 고갈시킨다. 일부 구현예에서, 푸코실화 항-CD70 항체는 대상체가 저 친화도 FcγRIIIa 수용체 (F/F 158)에 대하여 동형접합성인 경우 동일한 중쇄 및 경쇄 아미노산 서열을 포함하는 항-CD70 항체의 비푸코실화 형태와 동일한 정도로 대상체에서 CD70+ Treg를 고갈시킨다. 일부 구현예에서, 푸코실화 항-CD70 항체도 중쇄 및 경쇄 아미노산 서열을 포함하는 항-CD70 항체의 비푸코실화 형태도 대상체가 고 친화도 FcγRIIIa 수용체 (V/V 158)에 대하여 동형접합성인 경우 CD8 T 세포를 고갈시키지 않는다. 일부 구현예에서, 푸코실화 항-CD70 항체도 동일한 중쇄 및 경쇄 아미노산 서열을 포함하는 항-CD70 항체의 비푸코실화 형태도 대상체가 저 친화도 FcγRIIIa 수용체 (F/F 158)에 대하여 동형접합성인 경우 CD8 T 세포를 고갈시키지 않는다.
V. 세포독성, 세포증식억제성, 및 면역조절성 활성에 대한 검정
항체가 표적 세포에 대한 이펙터 기능을 매개하는지 결정하는 방법은 알려진다. 이러한 방법의 예시적 예가 하기 기재된다.
항-CD70 항체 및/또는 CD47 길항제가 활성화된 면역 세포, CD70-발현 암 세포, 및/또는 CD47-발현 암 세포에 대한 항체-의존적 세포성 세포독성을 매개하는지 결정하기 위하여, 항체 및 이펙터 면역 세포의 존재 하에서 표적 세포사를 측정하는 검정이 사용될 수 있다. 이 유형의 세포독성을 측정하는데 사용된 검정은 이펙터 세포 및 표적-특이적 항체의 존재 하에서 인큐베이션 후 대사적으로-표지된 표적 세포로부터 51Cr 방출의 결정에 기초할 수 있다 (예를 들면, Perussia 및 Loza, 2000, Methods in Molecular Biology 121:179-92; 및 "51Cr Release Assay of Antibody-Dependent Cell-Mediated Cytotoxicity (ADCC)" in Current Potocols in Immunology, Coligan 등 eds., Wileyand Sons, 1993 참조). 예를 들어, Na2 51CrO4로 표지된 그리고 96-웰 플레이트의 웰당 5,000개 세포의 밀도로 플레이팅된 활성화된 면역 세포 (예를 들면, 활성화된 림프구) 또는 CD70-발현 암 세포는 가변 농도의 항-CD70 항체로 30 분 동안 치료 그 다음 정상 인간 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC)와 4 시간 동안 혼합될 수 있다. 표적 세포사를 동반하는 막 파괴는 세포독성 활성의 척도로서 방사능에 대하여 수집 및 평가될 수 있는 배양 상청액 내로 51Cr을 방출한다. ADCC를 측정하기 위한 다른 검정은 비방사성 표지를 연루할 수 있거나 또는 특이적 효소의 유도된 방출에 기초할 수 있다. 예를 들어, 시간-분해 형광측정법에 기초한 비-방사성 검정은 상업적으로 이용가능하다 (Delphia, Perkin Elmer). 이 검정은 세포 막을 침투하고 그 다음 가수분해하여 막 불투과성 친수성 리간드 (TDA)를 형성하는 형광 향상 리간드 (BATDA)의 아세톡시메틸 에스테르를 표적 세포에 로딩하는 것에 기초한다. 표적 특이적 항체 및 PBMC 이펙터 세포와 혼합된 때, TDA는 용해된 세포로부터 방출되고 유로퓸과 혼합된 때 고도로 형광성 킬레이트를 형성하는데 이용가능하다. 시간-분해 형광계로 측정된 신호는 세포 용해의 양과 상관관계가 있다. 유사한 검정은 CD47 길항제로 실시될 수 있다.
항-CD70 항체 또는 CD47 길항제가 활성화된 면역 세포, CD70-발현 암 세포, 및/또는 CD47-발현 암 세포에 대한 항체-의존적 세포성 식세포작용을 매개하는지 결정하기 위해, 이펙터 면역 세포 (예를 들면, 신선하게 배양된 대식세포 또는 확립된 대식세포-유사 세포주)에 의한 표적 세포 내재화를 측정하는 검정이 사용될 수 있다 (예를 들면, Munn 및 Cheung, 1990, J. Exp. Med. 172:231-37; Keler 등, 2000, J. Immunol. 164:5746-52; Akewanlop 등, 2001, Cancer Res. 61:4061-65 참조). 예를 들어, 표적 세포는 친유성 막 염료 예컨대 PKH67 (Sigma)로 표지될 수 있고, 표적-특이적 항체로 코팅될 수 있고, 이펙터 면역 세포와 4-24 시간 동안 혼합될 수 있다. 이펙터 세포는 그 다음 포식 세포 표면 마커 (예를 들면, CD14)에 특이적인 형광색소-표지된 항체로의 대조염색에 의해 확인될 수 있고, 세포는 2-색상 유세포 분석 또는 형광 현미경검사에 의해 분석될 수 있다. 이중-양성 세포는 내재화된 표적 세포를 갖는 이펙터 세포를 나타낸다. 이들 검정의 경우, 이펙터 세포는 M-CSF 또는 GM-CSF로 5-10 일 동안 배양에 의해 대식세포로 분화된 PBMC로부터 유래된 단핵구일 수 있다 (예를 들면, Munn 및 Cheung, 상기 참조). ATCC로부터 이용가능한 인간 대식세포-유사 세포주 U937 (Larrick 등, 1980, J. Immunology 125:6-12) 또는 THP-1 (Tsuchiya 등, 1980, Int. J. Cancer 26:171-76)은 대안적 포식 세포 공급원으로서 사용될 수 있다.
항체가 표적 세포에 결합시 보체-의존적 세포독성을 매개하는지 결정하는 방법이 또한 알려진다. 동일한 방법은 항-CD70 항체가 활성화된 면역 세포 또는 CD70-발현 암 세포 상에서 CDC를 매개하는지 결정하는데 적용될 수 있다. 동일한 방법은 CD47 길항제가 활성화된 면역 세포 또는 CD47-발현 암 세포 상에서 CDC를 매개하는지 결정하는데 또한 적용될 수 있다. 이러한 방법의 예시적 예가 하기 기재된다.
활성 보체의 공급원은 어느 한쪽 정상 인간 혈청일 수 있거나 토끼를 포함하는 실험실 동물로부터 정제될 수 있다. 표준 검정에서, 항-CD70 항체는 보체의 존재 하에서 CD70-발현 활성화된 면역 세포 (예를 들면, 활성화된 림프구) 또는 CD70-발현 암 세포와 인큐베이션된다. 세포 용해를 매개하는 이러한 항-CD70 항체의 능력은 여러 판독치에 의해 결정될 수 있다. 하나의 예에서, Na51CrO4 방출 검정이 사용된다. 이 검정에서, 표적 세포는 Na51CrO4로 표지된다. 편입되지 않은 Na51CrO4는 세정제거되고 세포는 96-웰 플레이트에서 적합한 밀도, 전형적으로 5,000 내지 50,000개 세포/웰로 플레이팅된다. 정상 혈청 또는 정제된 보체의 존재 하에서 항-CD70 항체와 인큐베이션은 전형적으로 5% CO2 대기에서 37℃에 2-6 시간 지속한다. 세포 용해를 나타내는 방출된 방사능은 감마선 계수에 의해 배양 상청액의 분취량에서 결정된다. 최대 세포 용해는 세제 (0.5-1% NP-40 또는 Triton X-100) 치료에 의해 편입된 Na51CrO4를 방출함으로써 결정된다. 자발적 배경 세포 용해는 보체만이 임의의 항-CD70 항체 없이 존재하는 웰에서 결정된다. 백분율 세포 용해는 (항-CD70 항체-유도된 용해 - 자발적 용해)/최대 세포 용해)로서 계산된다. 제2 판독치는 생존가능한 세포에 의한 대사성 염료, 예를 들면, 알라마 블루(Alamar Blue)의 감소이다. 이 검정에서, 표적 세포는 보체가 있는 항-CD70 항체와 인큐베이션되고 상기 기재된 대로 인큐베이션된다. 인큐베이션의 끝에, 1/10 부피의 알라마 블루 (Biosource International, Camarillo, CA)가 첨가된다. 인큐베이션은 5% CO2 대기에서 37℃에 최대 16 시간 동안 계속된다. 대사적으로 활성 생존가능한 세포의 지표로서 알라마 블루의 감소는 530 nm에 여기 및 590 nm에 방출이 있는 형광측정성 분석에 의해 결정된다. 제3 판독치는 요오드화프로피듐 (PI)에 대한 세포성 막 투과성이다. 보체 활성화의 결과로서 형질 막에서 기공의 형성은 핵으로 확산하고 DNA를 결합시킬 세포에 PI의 진입을 용이하게 한다. DNA에 결합시, 600 nm에서 PI 형광은 상당히 증가한다. 항-CD70 항체 및 보체를 사용한 표적 세포의 치료는 상기 기재된 대로 실시된다. 인큐베이션의 끝에, PI는 5 μg/ml의 최종 농도로 첨가된다. 세포 현탁액은 그 다음 여기에 대하여 488 nm 아르곤 레이저를 사용하는 유세포 분석에 의해 검사된다. 용해된 세포는 600 nm에 형광 방출에 의해 검출된다. 유사한 검정은 CD47 길항제로 실시될 수 있다.
VI. 항-CD70 항체를 포함하는 약학적 조성물 및 이의 투여
항-CD70 항체를 포함하는 조성물은 암, 예컨대 CD70-발현 암을 갖거나 가질 위험이 있는 대상체에게 투여될 수 있다. 본 발명은 암, 예컨대 CD70-발현 암의 예방 또는 치료를 위한 의약의 제조에서 항-CD70 항체의 용도를 추가로 제공한다. 용어 "대상체"는 본원에 사용된 경우에, 예를 들면, 인간 및 비-인간 포유동물, 예컨대 영장류, 설치류, 및 개를 포함하는, CD70-결합 제제가 투여될 수 있는 임의의 포유류 환자를 의미한다. 본원에 기재된 방법을 사용하는 치료에 구체적으로 의도된 대상체는 인간을 포함한다. 항체는 암, 예컨대 CD70-발현 암의 예방 또는 치료에서 어느 한쪽 단독으로 또는 다른 조성물과 조합하여 투여될 수 있다.
CD47 길항제를 포함하는 조성물은 암, 예컨대 CD47-발현 암을 갖거나 가질 위험이 있는 대상체에게 투여될 수 있다. 본 발명은 암, 예컨대 CD47-발현 암의 예방 또는 치료를 위한 의약의 제조에서 CD47 길항제의 용도를 추가로 제공한다. 용어 "대상체"는 본원에 사용된 경우에, 예를 들면, 인간 및 비-인간 포유동물, 예컨대 영장류, 설치류, 및 개를 포함하는, CD47 길항제가 투여될 수 있는 임의의 포유류 환자를 의미한다. 본원에 기재된 방법을 사용하는 치료에 구체적으로 의도된 대상체는 인간을 포함한다. 길항제는 암, 예컨대 CD47-발현 암의 예방 또는 치료에서 어느 한쪽 단독으로 또는 다른 조성물과 조합하여 투여될 수 있다.
다양한 전달 시스템이 알려지고 항-CD70 항체 또는 CD47 길항제를 투여하는데 사용될 수 있다. 도입의 방법은 비제한적으로 피내, 근육내, 복강내, 정맥내, 피하, 비강내, 경막외, 및 경구 경로를 포함한다. 항-CD70 항체 또는 CD47 길항제는, 예를 들어 주입 또는 볼루스 주사 (예를 들면, 정맥내 또는 피하)에 의해, 상피 또는 점막피부 내벽 (예를 들면, 구강 점막, 직장 및 장 점막, 및 기타 등등)을 통해서 흡수에 의해 투여될 수 있고 다른 생물학적으로 활성 제제 예컨대 화학치료적 제제와 함께 투여될 수 있다. 투여는 전신 또는 국소일 수 있다. 일 구현예에서, 본원에 기재된 항-CD70 항체는 비경구로 투여된다. 일 구현예에서, 본원에 기재된 CD47 길항제는 비경구로 투여된다. 비경구 투여는 보통 주사에 의한, 경장 및 국부 투여 이외 투여의 모드를 지칭하고, 표피, 정맥내, 근육내, 동맥내, 척수강내, 피막내, 안와내, 심장내, 피내, 복강내, 건내, 경기관, 피하, 각피하, 관절내, 피막하, 지주막하, 척수내, 두개내, 흉곽내, 경막외 및 흉골내 주사 및 주입을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 항-CD70 항체의 투여의 루트는 정맥내 주사 또는 주입이다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 항-CD70 항체의 투여의 루트는 정맥내 주입이다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 CD47 길항제의 투여의 루트는 정맥내 주사 또는 주입이다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 CD47 길항제의 투여의 루트는 정맥내 주입이다.
특이적 구현예에서, 항-CD70 항체 및/또는 CD47 길항제 조성물은 주사에 의해, 카테터에 의해, 좌제에 의해, 또는 이식물에 의해 투여되고, 이식물은 막, 예컨대 시알라스틱 막, 또는 섬유를 포함하는 다공성, 비-다공성, 또는 젤라틴성 물질이다. 전형적으로, 조성물을 투여하는 때, 항-CD70 항체 및/또는 CD47 길항제가 흡수하지 않는 물질이 사용된다.
항-CD70 항체 또는 CD47 길항제는 치료적으로 유효량의 항체 및 하나 이상의 약학적으로 상용가능한 구성성분을 포함하는 약학적 조성물로서 투여될 수 있다. 예를 들어, 약학적 조성물은 전형적으로 하나 이상의 약학적 담체 (예를 들면, 멸균 액체, 예컨대 물 및 석유, 동물, 식물 또는 합성 기원의 것, 예컨대 땅콩 오일, 대두 오일, 미네랄 오일, 참깨 오일 및 기타 등등을 포함하는 오일)를 포함한다. 물은 약학적 조성물이 정맥내로 투여되는 때 더욱 전형적 담체이다. 염수 용액 및 수성 덱스트로스 및 글리세롤 용액은 또한 액체 담체로서, 특히 주사가능한 용액으로 이용될 수 있다. 적합한 약학적 부형제는, 예를 들어, 전분, 글루코스, 락토스, 수크로스, 젤라틴, 맥아, 쌀, 밀가루, 백악, 실리카 겔, 스테아르산나트륨, 글리세롤 모노스테아레이트, 활석, 염화나트륨, 건조 탈지유, 글리세롤, 프로필렌, 글리콜, 물, 에탄올, 및 기타 등등을 포함한다. 조성물은, 원하는 경우, 또한 미량의 습윤화 또는 유화 제제, 또는 pH 완충 제제를 함유할 수 있다. 이들 조성물은 용액, 현탁액, 에멀젼, 정제, 환제, 캡슐, 분말, 지속-방출 제형 및 기타 등등의 형태를 취할 수 있다. 조성물은 전통적 결합제 및 담체 예컨대 트리글리세리드와, 좌제로서 제형화될 수 있다. 경구 제형은 표준 담체 예컨대 약학적 등급의 만니톨, 락토스, 전분, 스테아르산마그네슘, 사카린나트륨, 셀룰로스, 탄산마그네슘, 등을 포함할 수 있다. 적합한 약학적 담체의 예는 E.W. Martin의 "Remington's Pharmaceutical Sciences"에 기재된다. 이러한 조성물은 환자에게 적절한 투여를 위한 형태를 제공하기 위해 적합한 양의 담체와 함께, 치료적으로 유효량의 단백질을, 전형적으로 정제된 형태로, 함유할 것이다. 제형은 투여의 모드에 상응한다.
전형적 구현예에서, 약학적 조성물은 인간에게 정맥내 투여에 적합화된 약학적 조성물로서 일상적 절차에 따라 제형화된다. 전형적으로, 정맥내 투여를 위한 조성물은 멸균 등장성 수성 완충액 중 용액이다. 필요한 경우, 약제는 또한 가용화 제제 및 주사의 부위에서의 통증을 완화시키기 위한 국소 마취제 예컨대 리그노카인을 포함할 수 있다. 일반적으로, 구성성분은 단위 투약 형태로, 예를 들어, 활성 제제의 양을 나타내는 밀폐하여 밀봉된 용기 예컨대 앰풀 또는 사쉐에서 건조한 동결건조된 분말 또는 무수 농축물로서 어느 한쪽 개별적으로 또는 함께 혼합되어 공급된다. 약제가 주입에 의해 투여되는 경우, 이는 멸균 약학적 등급 물 또는 염수를 함유하는 주입 병으로 분배될 수 있다. 약제가 주사에 의해 투여되는 경우, 구성성분이 투여에 앞서 혼합될 수 있도록 멸균 주사용수 또는 염수의 앰풀이 제공될 수 있다.
추가로, 약학적 조성물은 (a) 동결건조된 형태로 항-CD70 항체 또는 CD47 길항제를 함유하는 용기 및 (b) 주사를 위한 약학적으로 허용가능한 희석제 (예를 들면, 멸균수)를 함유하는 제2 용기를 포함하는 약학적 키트로서 제공될 수 있다. 약학적으로 허용가능한 희석제는 동결건조된 항-CD70 항체 또는 CD47 길항제의 재구성 또는 희석에 사용될 수 있다. 인간 투여를 위한 제조, 사용 또는 판매의 기관에 의한 승인을 반영하는, 약제 또는 생물학적 제품의 제조, 사용 또는 판매를 규제하는 정부 기관에 의해 규정된 형태로 통지서가 이러한 용기(들)와 임의로 회합될 수 있다.
암의 치료 또는 예방에서 효과적인 항-CD70 항체 및/또는 CD47 길항제의 양은 표준 임상적 기법에 의해 결정될 수 있다. 이외에도, 시험관내 검정은 최적 투약 범위 확인을 돕는데 임의로 이용될 수 있다. 제형에서 이용되어야 하는 정확한 용량은 투여의 루트, 및 암의 병기에 또한 의존할 것이고, 진료의의 판단 및 각 환자의 상황에 따라 결정되어야 한다. 효과적 용량은 시험관내 또는 동물 모델 테스트 시스템으로부터 유래된 용량-반응 곡선으로부터 외삽될 수 있다.
예를 들어, 항-CD70 항체 및/또는 CD47 길항제의 독성 및 치료적 효능은 LD50 (집단의 50%에 치명적인 용량) 및 ED50 (집단의 50%에서 치료적으로 효과적인 용량)을 결정하기 위하여 표준 약학적 절차에 의해 세포 배양물 또는 실험실 동물에서 결정될 수 있다. 독성 및 치료적 효과 사이 용량 비는 치료적 지수이고 이는 LD50/ED50 비로서 표현될 수 있다. 큰 치료적 지수를 나타내는 항-CD70 항체 및/또는 CD47 길항제가 바람직하다. 항-CD70 항체가 독성 부작용을 나타내는 경우, 이환된 조직의 부위에 항-CD70 항체를 표적하는 전달 시스템은 비-CD70-발현 세포에 잠재적 손상을 최소화하고, 이에 의해, 부작용을 감소시키는데 사용될 수 있다. CD47 길항제가 독성 부작용을 나타내는 경우, 이환된 조직의 부위에 CD47 길항제를 표적하는 전달 시스템은 비-CD47-발현 세포에 잠재적 손상을 최소화하고, 이에 의해, 부작용을 감소시키는데 사용될 수 있다.
세포 배양 검정 및 동물 연구로부터 수득된 데이터는 인간에서 사용을 위한 투약의 범위를 제형화하는데 사용될 수 있다. 항-CD70 항체 또는 CD47 길항제의 투약량은 전형적으로 거의 또는 전혀 독성이 없는 ED50을 포함하는 순환 농도의 범위 내에 있다. 투약량은 이용된 투약 형태 및 활용된 투여의 루트에 따라 이 범위 내에서 다양할 수 있다. 본 방법에서 사용된 항-CD70 항체 또는 CD47 길항제의 경우, 치료적으로 유효 용량은 세포 배양 검정으로부터 초기에 추정될 수 있다. 용량은 세포 배양에서 결정된 경우에 IC50 (즉, 증상의 반수-최대 억제를 달성하는 테스트 화합물의 농도)을 포함하는 순환 혈장 농도 범위를 달성하기 위해 동물 모델에서 제형화될 수 있다. 이러한 정보는 인간에서 유용한 용량을 더욱 정확하게 결정하는데 사용될 수 있다. 혈장내 수준은, 예를 들어, 고성능 액체 크로마토그래피에 의해 측정될 수 있다.
일반적으로, 암이 있는 환자에게 투여된 항-CD70 항체의 투약량은 약 0.1 mg/kg 내지 100 mg/kg의 대상체의 체중이다. 더욱 전형적으로, 대상체에게 투여된 항-CD70 항체의 투약량은 0.1 mg/kg 내지 50 mg/kg의 대상체의 체중, 더더욱 전형적으로 1 mg/kg 내지 30 mg/kg, 1 mg/kg 내지 20 mg/kg, 1 mg/kg 내지 15 mg/kg, 1 mg/kg 내지 12 mg/kg, 1 mg/kg 내지 10 mg/kg, 또는 1 mg/kg 내지 7.5 mg/kg의 대상체의 체중이다. 일부 구현예에서, 항-CD70 항체의 용량은 약 1.5 mg/kg이다. 일부 구현예에서, 항-CD70 항체의 용량은 약 5 mg/kg이다. 일부 구현예에서, 항-CD70 항체의 용량은 약 10 mg/kg 내지 약 20 mg/kg이다. 일부 구현예에서, 항-CD70 항체의 용량은약 10 mg/kg이다. 일부 구현예에서, 항-CD70 항체의 용량은 약 15 mg/kg이다. 일부 구현예에서, 항-CD70 항체의 용량은 약 20 mg/kg이다. 일반적으로, 인간 항체는 외래 단백질에 대한 면역 반응으로 인해 다른 종으로부터 항체보다 인간 신체 내에서 더 긴 반감기를 갖는다. 그래서, 인간화된 또는 키메릭 항체를 포함하는 항-CD70 항체의 더 낮은 투약량 및 덜 빈번한 투여가 종종 가능하다.
항-CD70 항체의 용량은, 예를 들어, 매일, 1주에 1회 (매주), 1주에 2회, 1주에 3회, 1주에 4회, 1주에 5회, 격주, 매월 또는 필요에 따라 달리 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 항-CD70 항체는 약 매 2 주 1회 투여된다. 일부 구현예에서, 항-CD70 항체는 매 2 주 1회 투여된다.
일부 구현예에서, 항-CD70 항체의 투약량은 준최적 투약량 (즉, 항-CD70 항체에 대하여 EC50 미만)에 상응한다. 예를 들어, 항-CD70 항체의 투약량은 치료적 윈도우의 최저 25%, 최저 15%, 최저 10% 또는 최저 5%로부터 선택된 투약량을 포함할 수 있다. 본원에 사용된 경우에, 용어 "치료적 윈도우"는 안전하고 효과적인 요법을 제공하는 신체 시스템에서 약물의 투약량의 또는 이의 농도의 범위를 지칭한다.
일부 구현예에서, 항-CD70 항체의 투약량은 약 0.05 mg/kg 내지 약 1 mg/kg, 또는 약 0.1 mg/kg 내지 약 0.9 mg/kg, 또는 약 0.15 내지 약 0.75 mg/kg의 대상체의 체중이다. 이러한 투약량은 1주에 1 내지 약 15 회 투여될 수 있다. 각 용량은 동일 또는 상이할 수 있다. 예를 들어, 항-CD70 항체의 약 0.15 mg/kg의 투약량은 4 일, 5 일, 6 일 또는 7 일 기간에 1 내지 10 회 투여될 수 있다.
일반적으로, 암이 있는 환자에게 투여된 CD47 길항제의 투약량은 약 0.1 mg/kg 내지 100 mg/kg의 대상체의 체중이다. 더욱 전형적으로, 대상체에게 투여된 CD47 길항제의 투약량은 0.1 mg/kg 내지 50 mg/kg의 대상체의 체중, 더더욱 전형적으로 1 mg/kg 내지 30 mg/kg, 1 mg/kg 내지 20 mg/kg, 1 mg/kg 내지 15 mg/kg, 1 mg/kg 내지 12 mg/kg, 1 mg/kg 내지 10 mg/kg, 또는 1 mg/kg 내지 7.5 mg/kg의 대상체의 체중이다. 일부 구현예에서, CD47 길항제의 용량은 약 1 mg/kg 내지 약 50 mg/kg이다. 일부 구현예에서, CD47 길항제의 용량은 약 1 mg/kg 내지 약 30 mg/kg이다.일부 구현예에서, CD47 길항제의 용량은 약 1 mg/kg이다. 일부 구현예에서, CD47 길항제의 용량은 약 1.5 mg/kg이다. 일부 구현예에서, CD47 길항제의 용량은 약 5 mg/kg이다. 일부 구현예에서, CD47 길항제의 용량은 약 10 mg/kg이다. 일부 구현예에서, CD47 길항제의 용량은 약 15 mg/kg이다. 일부 구현예에서, CD47 길항제의 용량은 약 20 mg/kg이다. 일부 구현예에서, CD47 길항제의 용량은 약 30 mg/kg이다. 일반적으로, 인간 항체는 외래 단백질에 대한 면역 반응으로 인해 다른 종으로부터 항체보다 인간 신체 내에서 더 긴 반감기를 갖는다. 그래서, 인간화된 또는 키메릭 항체를 포함하는 항-CD47 항체의 더 낮은 투약량 및 덜 빈번한 투여가 종종 가능하다.
CD47 길항제의 용량은, 예를 들어, 매일, 1주에 1회 (매주), 1주에 2회, 1주에 3회, 1주에 4회, 1주에 5회, 격주, 매월 또는 필요에 따라 달리 투여될 수 있다.
일부 구현예에서, CD47 길항제는 제1 4-주 치료 주기의 1, 4, 8, 11, 15, 및 22 일차에 투여된다. 일부 구현예에서, CD47 길항제는 제1 4-주 치료 주기의 1 및 4 일차에 1 mg/kg의 대상체의 체중의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, CD47 길항제는 제1 4-주 치료 주기의 8 일차에 15 mg/kg의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, CD47 길항제는 제1 4-주 치료 주기의 11, 15 및 22 일차에 30 mg/kg의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, CD47 길항제는 제2 4-주 치료 주기의 1, 8, 15, 및 22 일차에 투여된다. 일부 구현예에서, CD47 길항제는 제2 4-주 치료 주기의 1, 8, 15, 및 22 일차에 30 mg/kg의 대상체의 체중의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, CD47 길항제는 제3 4-주 치료 주기의 1 및 15 일차에 투여된다. 일부 구현예에서, CD47 길항제는 제3 4-주 치료 주기의 1 및 15 일차에 30 mg/kg의 대상체의 체중의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, CD47 길항제는 제3 4-주 치료 주기 후 각 4-주 치료 주기 동안 1 및 15 일차에 30 mg/kg의 대상체의 체중의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, CD47은 마그롤리맙이다.
일부 구현예에서, CD47 길항제의 투약량은 준최적 투약량 (즉, CD47 길항제에 대하여 EC50 미만)에 상응한다. 예를 들어, CD47 길항제의 투약량은 치료적 윈도우의 최저 25%, 최저 15%, 최저 10% 또는 최저 5%로부터 선택된 투약량을 포함할 수 있다. 본원에 사용된 경우에, 용어 "치료적 윈도우"는 안전하고 효과적인 요법을 제공하는 신체 시스템에서 약물의 투약량의 또는 이의 농도의 범위를 지칭한다.
일부 구현예에서, CD47 길항제의 투약량은 약 0.05 mg/kg 내지 약 1 mg/kg, 또는 약 0.1 mg/kg 내지 약 0.9 mg/kg, 또는 약 0.15 내지 약 0.75 mg/kg의 대상체의 체중이다. 이러한 투약량은 1주에 1 내지 약 15 회 투여될 수 있다. 각 용량은 동일 또는 상이할 수 있다. 예를 들어, CD47 길항제의 약 0.15 mg/kg의 투약량은 4 일, 5 일, 6 일 또는 7 일 기간에 1 내지 10 회 투여될 수 있다.
일부 구현예에서, 항-CD70 항체 및/또는 CD47 길항제를 포함하는 약학적 조성물은 치료적 제제 (예를 들면, 비-접합된 세포독성 또는 면역조절성 제제 예컨대, 예를 들어, 본원에 기재된 것들 중 임의의 것)를 추가로 포함할 수 있다. 항-CD70 항체 및/또는 CD47 길항제는 또한 암, 예컨대 CD70-발현 및/또는 CD47-발현 암의 치료 또는 예방을 위하여 하나 이상의 치료적 제제와 조합하여 공-투여될 수 있다. 예를 들어, 병용 요법은 치료적 제제 (예를 들면, 세포증식억제성, 세포독성, 또는 면역조절성 제제, 예컨대 접합되지 않은 세포증식억제성, 세포독성, 또는 면역조절성 제제 예컨대 암의 치료에 종래 사용된 것들)를 포함할 수 있다. 병용 요법은, 예를 들면, 활성화된 림프구, 수지상 세포 또는 CD70-발현 및/또는 CD47-발현 암 세포의 표면 상에서 CD70 및/또는 CD47 이외 수용체 또는 수용체 복합체를 표적하는 제제의 투여를 또한 포함할 수 있다. 이러한 제제의 예는 활성화된 림프구, 수지상 세포, 또는 CD70-발현 및/또는 CD47-발현 암 세포의 표면에서 CD70 또는 CD47 이외 분자에 결합하는 항체를 포함한다. 또 다른 예는 이러한 수용체 또는 수용체 복합체를 표적하는 리간드를 포함한다. 전형적으로, 이러한 항체 또는 리간드는 활성화된 림프구, 수지상 세포, 또는 CD70-발현 및/또는 CD47-발현 암 세포 상에서 세포 표면 수용체에 결합하고 활성화된 림프구, 수지상 세포 또는 CD70-발현 및/또는 CD47-발현 암 세포에 세포증식억제성 또는 세포독성 신호를 전달함으로써 항-CD70 항체 및/또는 CD47 길항제의 세포독성 또는 세포증식억제성 효과를 향상시킨다. 이러한 조합형 투여는 질환 파라미터 (예를 들면, 증상의 중증도, 증상의 횟수, 또는 재발의 빈도)에 관해 부가적 또는 상승작용적 효과를 가질 수 있다. 또 다른 예는 저메틸화 제제 (HMA)를 포함한다. 일부 구현예에서, HMA는 아자시티딘 (VIDAZA®)이다. 또 다른 예는 BH3-모방체를 포함한다. 일부 구현예에서, BH3-모방체는 베네토클락스 (VENCLEXTA®)이다. 일부 구현예에서, 약학적 조성물은 항-CD70 항체, CD47 길항제, HMA, 및 BH3-모방체를 포함한다. 일부 구현예에서, 약학적 조성물은 항-CD70 항체, CD47 길항제, HMA, 및 베네토클락스를 포함한다. 일부 구현예에서, 약학적 조성물은 항-CD70 항체, CD47 길항제, 아자시티딘, 및 BH3-모방체를 포함한다. 일부 구현예에서, 약학적 조성물은 항-CD70 항체, CD47 길항제, 아자시티딘, 및 베네토클락스를 포함한다. 병용 요법은 저메틸화 제제 (HMA)를 또한 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, HMA는 아자시티딘 (VIDAZA®)이다. 병용 요법은 BH3-모방체를 또한 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, BH3-모방체는 베네토클락스 (VENCLEXTA®)이다. 일부 구현예에서, 병용 요법은 항-CD70 항체, CD47 길항제, HMA, 및 BH3-모방체를 포함한다. 일부 구현예에서, 병용 요법은 항-CD70 항체, CD47 길항제, HMA, 및 베네토클락스를 포함한다. 일부 구현예에서, 병용 요법은 항-CD70 항체, CD47 길항제, 아자시티딘, 및 BH3-모방체를 포함한다. 일부 구현예에서, 병용 요법은 항-CD70 항체, CD47 길항제, 아자시티딘, 및 베네토클락스를 포함한다. 일부 구현예에서, 아자시티딘은 75 mg/m2의 대상체의 신체 표면적의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 아자시티딘은 각 4-주 치료 주기의 1 내지 7 일차에 투여된다. 일부 구현예에서, 아자시티딘은 각 4-주 치료 주기의 1 내지 5 및 8 내지 9 일차에 투여된다.
일부 구현예에서, 항-CD70 항체는 CD47 길항제와 동시에 투여된다. 일부 구현예에서, CD47 길항제는 항-CD70 항체 전에 또는 후에, 적어도 한 시간 및 최대 수 개월 만큼, 예를 들어 적어도 한 시간, 5 시간, 12 시간, 1 일, 1 주, 1 개월, 또는 3 개월, 항-CD70 항체의 투여 전에 또는 후에 투여된다. 일부 구현예에서, 대상체는 항-CD70 항체 CD47 길항제의 투여 이후 모니터링된다.
VII. 제조 물품 및 키트
또 다른 양태에서, 본원에 기재된 항-CD70 항체 및/또는 본원에 기재된 CD47 길항제를 포함하는 제조 물품 또는 키트가 제공된다. 제조 물품 또는 키트는 본 발명의 방법에서 본원에 기재된 항-CD70 항체 및/또는 본원에 기재된 CD47 길항제의 사용을 위한 지침을 추가로 포함할 수 있다. 그래서, 특정 구현예에서, 제조 물품 또는 키트는 대상체에게 본원에 기재된 항-CD70 항체 및/또는 본원에 기재된 CD47 길항제를 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 암 (예를 들면, 골수성 악성종양)을 치료하는 방법에서 본원에 기재된 항-CD70 항체 및/또는 본원에 기재된 CD47 길항제의 사용을 위한 지침을 포함한다. 일부 구현예에서, 암은 MDS이다. 일부 구현예에서, 암은 AML이다. 일부 구현예에서 암은 재발성 또는 불응성 암이다. 일부 구현예에서, 대상체는 인간이다.
제조 물품 또는 키트는 용기를 추가로 포함할 수 있다. 적합한 용기는, 예를 들어 병, 바이알 (예를 들면, 이중 챔버 바이알), 시린지 (예컨대 단일 또는 이중 챔버 시린지) 및 테스트 튜브를 포함한다. 일부 구현예에서, 용기는 바이알이다. 용기는 다양한 물질 예컨대 유리 또는 플라스틱으로 형성될 수 있다. 용기는 제형을 수용한다.
제조 물품 또는 키트는, 용기 상에 있거나 또는 용기와 회합될 수 있는 표지 또는 패키지 삽입물을 추가로 포함할 수 있고, 제형의 재구성 및/또는 사용에 대한 지시를 나타낼 수 있다. 표지 또는 패키지 삽입물은 제형이 대상체에서 암을 치료하기 위한 피하, 정맥내 (예를 들면, 정맥내 주입), 또는 투여의 다른 모드에 유용하거나 또는 이에 의도되는 것임을 추가로 나타낼 수 있다. 제형을 수용하는 용기는 재구성된 제형의 반복 투여를 허용하는 일회용 바이알 또는 다회용 바이알일 수 있다. 제조 물품 또는 키트는 적합한 희석제를 포함하는 제2 용기를 추가로 포함할 수 있다. 제조 물품 또는 키트는 다른 완충액, 희석제, 필터, 바늘, 시린지, 및 사용을 위한 지침이 있는 패키지 삽입물을 포함하는, 상업적, 치료적, 및 사용자 관점에서 바람직한 다른 물질을 추가로 포함할 수 있다.
본원에 제조 물품 또는 키트는 임의로 추가 의약을 포함하는 용기를 추가로 포함하고, 여기서 항-CD70 항체 및/또는 CD47 길항제는 제1 및/또는 제2 의약이고, 이 물품 또는 키트는 대상체를 유효량으로, 추가 의약을 사용해 치료하기 위한 표지 또는 패키지 삽입물에서 지침을 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 표지 또는 패키지 삽입물은 항-CD70 항체 및/또는 CD47 길항제가 추가 의약과 순차적으로 또는 동시에 투여되어야 함을 나타낸다.
일부 구현예에서, 본원에 기재된 항-CD70 항체 및/또는 CD47 길항제는 동결건조된 분말로서 용기에서 존재한다. 일부 구현예에서, 동결건조된 분말은 활성 제제의 정량을 나타내는, 밀폐하여 밀봉된 용기, 예컨대 바이알, 앰풀 또는 사쉐 내에 있다. 약제가 주사에 의해 투여되는 경우, 멸균 주사용수 또는 염수의 앰풀은, 예를 들어, 구성성분이 투여 전에 혼합될 수 있도록, 임의로 키트의 부분으로서 제공될 수 있다. 이러한 키트는, 원하는 경우에, 당업자에 용이하게 명백할 바와 같이, 다양한 종래 약학적 성분들 중 하나 이상, 예컨대, 예를 들어, 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 담체가 있는 용기, 추가의 용기, 등을 추가로 포함할 수 있다. 어느 한쪽 투여되어야 하는 구성요소의 정량, 투여를 위한 가이드라인, 및/또는 구성요소를 혼합하기 위한 가이드라인을 나타내는, 삽입물로서 또는 표지로서 인쇄된 지침은 키트에서 또한 포함될 수 있다.
본 발명은 하기 실시예를 참조하여 더욱 완전히 이해될 것이다. 이들은, 하지만, 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 해석되지 않아야 한다. 본원에 기재된 실시예 및 구현예가 단지 예시적 목적을 위한 것이고, 이에 비추어 다양한 변형 또는 변화가 당업자에게 제안될 것이고 본 출원의 취지 및 범주 그리고 첨부된 청구항의 범위 내에 포함되어야 하는 것으로 이해된다.
실시예
실시예 1. MV4-11 AML 이종이식 마우스 모델에서 종양 성장에 관해 항-CD47 항체 클론 h5F9와 조합하여 SEA-CD70 (h1F6 SEA)의 효과.
CD47은 선천성 면역 시스템의 세포, 예컨대 대식세포 및 수지상 세포에 의해 매개된 식세포작용의 조절제로서 기능하는 세포 표면 단백질이다. CD47은 차례로 식세포작용을 위한 억제성 신호를 전달하는 이들 선천성 면역 세포, SIRP-알파 상에서 수용체를 위한 리간드의 역할을 한다. 인간 급성 골수성 백혈병 (AML) 세포는 CD47을 발현하고, 그러므로, CD47에 대한 단클론성 항체를 차단하는 것은 식세포작용 및 암 세포의 제거를 가능하게 할 수 있다.
이 연구에서, 아푸코실화 항-CD70 항체 h1F6 SEA (SEA-CD70) 단독, 항-CD47 단클론성 항체 h5F9-G4 (h5F9 hIgG4k, 마그롤리맙) 단독, 또는 h5F9 hIgG4k와 조합하여 SEA-CD70의 투여에 반응하여 종양 성장을 CD70-발현 AML 이종이식 마우스 모델, MV4-11에서 평가하였다. 종양 성장을 부피로서 보고하였고 각 치료 그룹 내에서 동물들에 걸쳐서 평균으로서 계산하였다 (도 1). SCID 마우스를 0 일차에 옆구리에서 피하로 5x10e6 MV4-11 세포로 이식하였다. 50 mm3의 평균 종양 크기 (공식: 부피 (mm3) = 0.5*길이*폭2를 사용함으로써 측정됨, 식중 길이는 더 긴 치수임)를 달성한 때, 마우스를 그룹당 9마리 마우스의 치료 그룹으로 무작위화하였다. 치료를 복강내로 제공하였다. 항체 및 화학요법의 스톡 농도를 적절한 농도로 희석하였고 10 μl/g의 체중으로 동물에 주사하였다. 종양 길이 및 폭, 그리고 동물 체중을 연구 전반에 걸쳐 매주 2 회 측정하였고 종양 부피를 상기 공식을 사용하여 계산하였다. 동물을 종양 부피가 ~1000 mm3로 측정된 때까지 추적하였고, 이때 동물을 안락사시켰다. 동물을 총 5 주기 동안 매 4 일 (Q4dx5) 0.3 및 1 mg/kg의 용량으로 h5F9-G4 또는 10 mg/kg으로 h1F6 SEA로 치료하였다. 치료의 조합을 받은 동물은 단일 치료와 동일한 용량 및 일정으로 각 치료를 받았다. 시간 경과에 따른 종양 부피 변화의 분석은 h1F6 SEA 및 h5F9-G4의 조합이 각 단일 제제보다 더 큰 항종양 활성을 유도함을 보여준다. 특히, 전임상 모델에서 보통 사용되는 것보다 >10 배 낮은 효능이하 용량의 h5F9-G4와 h1F6 SEA의 조합은 상승작용적 효과를 보여주고, 실험적 타임라인 내에서 종양의 지속 가능한 완전 관해를 유도한다.
실시예 2. MV4-11 급성 골수성 백혈병 마우스 모델에서 종양 성장에 관한, 항-CD47 클론 hu5F9-G4, 및 저메틸화 제제 아자시티딘 (Vidaza®)과 조합하여 SEA-CD70 (h1F6 SEA)의 효과.
이 연구에서, 단일 제제 항-CD47 단클론성 항체 hu5F9-G4 (hu5F9 hIgG4k, hu5F9 hIgG4kappa, 마그롤리맙), 또는 단일 저메틸화 제제 아자시티딘 (Vidaza®)과 조합하여, 또는 양쪽의 조합 (삼중 조합)으로 아푸코실화 항-CD70 항체 h1F6 SEA (SEA-CD70)의 투여에 대한 반응으로 인한 종양 성장을 CD70 발현 세포 이종이식 마우스 모델 MV4-11 계통에서 평가하였다. 종양 성장을 부피 (mm3)로서 보고하였고 각 치료 그룹 내에서 동물들에 걸쳐서 평균으로서 계산하였다 (도 2). SCID 마우스를 0 일차에 옆구리에서 피하로 5x10e6 MV4-11 세포로 이식하였다. 50 mm3의 평균 종양 크기 (공식: 부피 (mm3) = 0.5*길이*폭2를 사용함으로써 측정됨, 식중 길이는 더 긴 치수임)를 달성한 때, 마우스를 그룹당 5마리 마우스의 치료 그룹으로 무작위화하였다. 치료를 복강내로 제공하였다. 항체 및 화학요법의 스톡 농도를 적절한 농도로 희석하였고 10 μl/g의 체중으로 동물에 주사하였다. 종양 길이 및 폭, 그리고 동물 체중을 연구 전반에 걸쳐 매주 2 회 측정하였고 종양 부피를 상기 공식을 사용하여 계산하였다. 동물을 종양 부피가 ~750 mm3로 측정된 때까지 추적하였고, 이때 동물을 안락사시켰다. 약물 조합형 효과의 타당한 평가를 허용하기 위해, 동물을 효능이하 용량의 hu5F9-G4 (총 3 주기 동안 매 4 일 (Q4dx3) 0.1 mg/kg), 또는 아자시티딘 (Vidaza®) (3 주기 (총 3 주) 동안 5 연속일 동안 매일 (Q1dx5) 2 mg/kg)으로 치료하였다. h1F6-SEA를 5 주기 동안 매 4 일 (Q5x5) 10 mg/kg으로 용량화하였다. 치료의 조합을 받은 동물은 상기 지시된 대로 단일 치료와 동일한 용량 및 일정으로 각 치료를 받았다. 시간 경과에 따른 종양 부피 변화의 분석은 hu5F9-G4 및 아자시티딘 (Vidaza®)의 조합에, h1F6-SEA의 첨가가 내약성이 좋고 각 가능한 이중 조합 (h1F6-SEA + hu5F9-G4, h1F6-SEA + 아자시티딘 (Vidaza®), 또는 hu5F9-G4 + 아자시티딘 (Vidaza®))보다 더 큰 항종양 활성을 유도함을 보여준다.
SEQUENCE LISTING <110> Seagen Inc. <120> METHODS OF TREATING CANCER WITH A COMBINATION OF A NONFUCOSYLATED ANTI-CD70 ANTIBODY AND A CD47 ANTAGONIST <130> 0070-00812PC <150> US 63/216,233 <151> 2021-06-29 <150> US 63/318,920 <151> 2022-03-11 <160> 13 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> heavy chain variable domain <400> 1 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Lys Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Ala Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Tyr Gly Asp Tyr Gly Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Thr Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 2 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> heavy 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Claims (69)

  1. 대상체에서 암을 치료하는 방법으로서, 상기 방법은 대상체에게 비푸코실화 항-CD70 항체 및 CD47 길항제를 투여하는 단계를 포함하며, 상기 방법은 대상체에서 암 세포의 고갈을 초래하고, 상기 방법은 대상체에서 CD70+ T 조절성 세포 (CD70+ Treg)의 고갈을 초래하지 않고, 상기 항-CD70 항체가 중쇄 가변 영역, 경쇄 가변 영역 및 Fc 도메인을 포함하고, 상기 중쇄 가변 영역이
    (i) 서열번호:8의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1;
    (ii) 서열번호:9의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및
    (iii) 서열번호:10의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3
    을 포함하고; 상기 경쇄 가변 영역이
    (i) 서열번호:11의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1;
    (ii) 서열번호:12의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 및
    (iii) 서열번호:13의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3
    을 포함하고, 상기 암이 골수이형성 증후군 (MDS) 및 급성 골수성 백혈병 (AML)으로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 방법.
  2. 제 1 항에 있어서, 상기 항-CD70 항체가 서열번호:1의 아미노산 서열에 적어도 85% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호:2의 아미노산 서열에 적어도 85% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 방법.
  3. 제 1 항에 있어서, 상기 항-CD70 항체가 서열번호:1의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호:2의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 방법.
  4. 제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-CD70 항체의 Fc 도메인이 항체-의존적 세포성 세포독성 (ADCC), 항체-의존적 세포성 식세포작용 (ADCP), 및 보체-의존적 세포성 세포독성 (CDC) 중 하나 이상을 매개하는 항체 이펙터 도메인인, 방법.
  5. 제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-CD70 항체의 Fc 도메인이 ADCC를 매개하는 항체 이펙터 도메인인, 방법.
  6. 제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-CD70 항체의 Fc 도메인이 인간 Fc 도메인인, 방법.
  7. 제 1 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-CD70 항체가 보르세투주맙의 비푸코실화 형태인, 방법.
  8. 제 1 항 내지 제 7 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-CD70 항체가 치료적 제제에 접합되는, 방법.
  9. 제 8 항에 있어서, 상기 치료적 제제가 화학치료적 제제 또는 면역조절성 제제인, 방법.
  10. 제 8 항에 있어서, 상기 치료적 제제가 화학치료적 제제인, 방법.
  11. 제 10 항에 있어서, 상기 화학치료적 제제가 모노메틸 아우리스타틴 E (MMAE) 또는 모노메틸 아우리스타틴 F (MMAF)인, 방법.
  12. 제 8 항에 있어서, 상기 치료적 제제가 면역조절성 제제인, 방법.
  13. 제 1 항 내지 제 12 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법이 항-CD70 항체의 집단을 투여하는 단계를 포함하고, 항-CD70 항체의 집단에서 각 항체가 중쇄 가변 영역, 경쇄 가변 영역, 및 Fc 도메인을 포함하고, 상기 중쇄 가변 영역이
    (i) 서열번호:8의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1;
    (ii) 서열번호:9의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및
    (iii) 서열번호:10의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3
    을 포함하고; 상기 경쇄 가변 영역이
    (i) 서열번호:11의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1;
    (ii) 서열번호:12의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 및
    (iii) 서열번호:13의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3
    을 포함하고, 상기 항-CD70 항체의 집단에서 항-CD70 항체의 적어도 50%가 코어 푸코실화가 결여되는, 방법.
  14. 제 13 항에 있어서, 상기 항-CD70 항체의 집단에서 항-CD70 항체의 적어도 70%가 코어 푸코실화가 결여되는, 방법.
  15. 제 13 항에 있어서, 상기 항-CD70 항체의 집단에서 항-CD70 항체의 적어도 90%가 코어 푸코실화가 결여되는, 방법.
  16. 제 1 항 내지 제 15 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-CD70 항체가 약 1-30 mg/kg의 대상체의 체중의 용량으로 투여되는, 방법.
  17. 제 16 항에 있어서, 상기 항-CD70 항체가 약 10-20 mg/kg의 대상체의 체중의 용량으로 투여되는, 방법.
  18. 제 16 항에 있어서, 상기 항-CD70 항체가 약 10 mg/kg의 대상체의 체중의 용량으로 투여되는, 방법.
  19. 제 16 항에 있어서, 상기 항-CD70 항체가 약 15 mg/kg의 대상체의 체중의 용량으로 투여되는, 방법.
  20. 제 16 항에 있어서, 상기 항-CD70 항체가 약 20 mg/kg의 대상체의 체중의 용량으로 투여되는, 방법.
  21. 제 1 항 내지 제 20 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-CD70 항체가 약 매 1-4 주 1회 투여되는, 방법.
  22. 제 21 항에 있어서, 상기 항-CD70 항체가 약 매 2 주 1회 투여되는, 방법.
  23. 제 1 항 내지 제 22 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 CD47 길항제가 CD47과 SIRPα 사이 상호작용을 억제시키는, 방법.
  24. 제 1 항 내지 제 23 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 CD47 길항제가 종양 세포의 식세포작용을 증가시키는, 방법.
  25. 제 1 항 내지 제 24 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 CD47 길항제가 CD47에 결합하는 항체, 또는 이의 항원-결합 단편, 및 SIRPα에 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 및 SIRPα, 또는 이의 단편, 및 항체, 또는 이의 단편을 포함하는 융합 단백질로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 방법.
  26. 제 25 항에 있어서, SIRPα, 또는 이의 단편, 및 항체, 또는 이의 단편을 포함하는 융합 단백질이 항체의 Fc 영역에 공유적으로 결합된 SIRPα, 또는 이의 면역글로불린 V-유사 도메인을 포함하는, 방법.
  27. 제 25 항에 있어서, 상기 CD47 길항제가 IgG1 또는 IgG4 항체인, 방법.
  28. 제 25 항에 있어서, 상기 CD47 길항제가 마그롤리맙, CC-90002, ALX148, RRx-001, TTI-622, TTI-621, 및 KWAR23으로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 방법.
  29. 제 28 항에 있어서, 상기 CD47 길항제가 마그롤리맙인, 방법.
  30. 제 1 항 내지 제 29 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 CD47 길항제가 1-50 mg/kg의 대상체의 체중의 용량으로 투여되는, 방법.
  31. 제 30 항에 있어서, 상기 CD47 길항제가 1-30 mg/kg의 대상체의 체중의 용량으로 투여되는, 방법.
  32. 제 31 항에 있어서, 상기 CD47 길항제가 1 mg/kg의 대상체의 체중의 용량으로 투여되는, 방법.
  33. 제 31 항에 있어서, 상기 CD47 길항제가 15 mg/kg의 대상체의 체중의 용량으로 투여되는, 방법.
  34. 제 31 항에 있어서, 상기 CD47 길항제가 30 mg/kg의 대상체의 체중의 용량으로 투여되는, 방법.
  35. 제 1 항 내지 제 29 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 CD47 길항제가 준최적 용량으로 투여되는, 방법.
  36. 제 1 항 내지 제 35 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 CD47 길항제가 약 매 1-4 주 1회 투여되는, 방법.
  37. 제 36 항에 있어서, 상기 CD47 길항제가 약 매주 1회 투여되는, 방법.
  38. 제 36 항에 있어서, 상기 CD47 길항제가 약 매 2 주 1회 투여되는, 방법.
  39. 제 1 항 내지 제 35 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 CD47 길항제가 제1 4-주 주기의 1, 4, 8, 11, 15, 및 22 일차에 초기에 투여되는, 방법.
  40. 제 39 항에 있어서, 상기 CD47 길항제가 제2 4-주 주기의 1, 8, 15, 및 22 일차에 투여되는, 방법.
  41. 제 40 항에 있어서, 상기 CD47 길항제가 제3 4-주 주기의 1일차 및 15 일차에 투여되는, 방법.
  42. 제 1 항 내지 제 41 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 암이 MDS인, 방법.
  43. 제 42 항에 있어서, 상기 MDS가 재발성 또는 불응성 MDS인, 방법.
  44. 제 43 항에 있어서, 상기 대상체가 MDS에 대하여 선행 저메틸화 제제 (HMA) 요법 후 치료 실패를 경험하였던, 방법.
  45. 제 1 항 내지 제 41 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 암이 AML인, 방법.
  46. 제 45 항에 있어서, 상기 AML이 재발성 또는 불응성 AML인, 방법.
  47. 제 46 항에 있어서, 상기 대상체가 AML을 치료하기 위해 2개의 선행 치료 용법을 받았던, 방법.
  48. 제 46 항에 있어서, 상기 대상체가 상기 AML을 치료하기 위해 3개의 선행 치료 용법을 받았던, 방법.
  49. 제 1 항 내지 제 48 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 암 세포의 적어도 약 0.1%, 적어도 약 1%, 적어도 약 2%, 적어도 약 3%, 적어도 약 4%, 적어도 약 5%, 적어도 약 6%, 적어도 약 7%, 적어도 약 8%, 적어도 약 9%, 적어도 약 10%, 적어도 약 15%, 적어도 약 20%, 적어도 약 25%, 적어도 약 30%, 적어도 약 35%, 적어도 약 40%, 적어도 약 45%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 또는 적어도 약 80%가 CD70을 발현하는, 방법.
  50. 제 1 항 내지 제 49 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 암 세포의 적어도 약 0.1%, 적어도 약 1%, 적어도 약 2%, 적어도 약 3%, 적어도 약 4%, 적어도 약 5%, 적어도 약 6%, 적어도 약 7%, 적어도 약 8%, 적어도 약 9%, 적어도 약 10%, 적어도 약 15%, 적어도 약 20%, 적어도 약 25%, 적어도 약 30%, 적어도 약 35%, 적어도 약 40%, 적어도 약 45%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 또는 적어도 약 80%가 CD47을 발현하는, 방법.
  51. 제 1 항 내지 제 50 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체에게 비푸코실화 항-CD70 항체 및 CD47 길항제를 투여하는 것이 대상체에게 비푸코실화 항-CD70 항체 및 CD47 길항제를 투여하기 전 암 세포의 양과 비교하여 적어도 약 5%, 적어도 약 6%, 적어도 약 7%, 적어도 약 8%, 적어도 약 9%, 적어도 약 10%, 적어도 약 15%, 적어도 약 20%, 적어도 약 25%, 적어도 약 30%, 적어도 약 35%, 적어도 약 40%, 적어도 약 45%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 또는 약 100% 만큼 암 세포의 고갈을 초래하는, 방법.
  52. 제 1 항 내지 제 51 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체에게 비푸코실화 항-CD70 항체 및 CD47 길항제를 투여하는 것이 대상체에게 아푸코실화 항-CD70 항체 및 CD47 길항제를 투여하기 전 CD70+ Treg의 양과 비교하여 약 20%, 약 10%, 약 9%, 약 8%, 약 7%, 약 6%, 약 5%, 약 4%, 약 3%, 약 2%, 약 1%, 또는 약 0.1% 이하의 CD70+ Treg의 고갈을 초래하는, 방법.
  53. 제 1 항 내지 제 52 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체에서 하나 이상의 치료적 효과가 기준선에 비해 비푸코실화 항-CD70 항체 및 CD47 길항제의 투여 후 개선되는, 방법.
  54. 제 53 항에 있어서, 상기 하나 이상의 치료적 효과가 다음으로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 방법: 객관적 반응률, 반응의 지속기간, 반응까지의 시간, 무진행 생존 및 전체 생존.
  55. 제 1 항 내지 제 54 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 객관적 반응률이 적어도 약 20%, 적어도 약 25%, 적어도 약 30%, 적어도 약 35%, 적어도 약 40%, 적어도 약 45%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 또는 적어도 약 80%인, 방법.
  56. 제 1 항 내지 제 55 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체가 비푸코실화 항-CD70 항체 및 CD47 길항제의 투여 후 적어도 약 1 개월, 적어도 약 2 개월, 적어도 약 3 개월, 적어도 약 4 개월, 적어도 약 5 개월, 적어도 약 6 개월, 적어도 약 7 개월, 적어도 약 8 개월, 적어도 약 9 개월, 적어도 약 10 개월, 적어도 약 11 개월, 적어도 약 12 개월, 적어도 약 18 개월, 적어도 약 2 년, 적어도 약 3 년, 적어도 약 4 년, 또는 적어도 약 5 년의 무진행 생존을 나타내는, 방법.
  57. 제 1 항 내지 제 56 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체가 비푸코실화 항-CD70 항체 및 CD47 길항제의 투여 후 적어도 약 1 개월, 적어도 약 2 개월, 적어도 약 3 개월, 적어도 약 4 개월, 적어도 약 5 개월, 적어도 약 6 개월, 적어도 약 7 개월, 적어도 약 8 개월, 적어도 약 9 개월, 적어도 약 10 개월, 적어도 약 11 개월, 적어도 약 12 개월, 적어도 약 18 개월, 적어도 약 2 년, 적어도 약 3 년, 적어도 약 4 년, 또는 적어도 약 5 년의 전체 생존을 나타내는, 방법.
  58. 제 1 항 내지 제 57 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-CD70 항체 및 CD47 길항제에 대한 반응의 지속기간이 비푸코실화 항-CD70 항체 및 CD47 길항제의 투여 후 적어도 약 1 개월, 적어도 약 2 개월, 적어도 약 3 개월, 적어도 약 4 개월, 적어도 약 5 개월, 적어도 약 6 개월, 적어도 약 7 개월, 적어도 약 8 개월, 적어도 약 9 개월, 적어도 약 10 개월, 적어도 약 11 개월, 적어도 약 12 개월, 적어도 약 18 개월, 적어도 약 2 년, 적어도 약 3 년, 적어도 약 4 년, 또는 적어도 약 5 년인, 방법.
  59. 제 1 항 내지 제 58 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-CD70 항체에 대하여 투여의 루트가 정맥내인, 방법.
  60. 제 1 항 내지 제 59 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 CD47 길항제에 대하여 투여의 루트가 정맥내인, 방법.
  61. 제 1 항 내지 제 60 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체가 인간인, 방법.
  62. 제 1 항 내지 제 61 항 중 어느 한 항에 있어서, 아자시티딘의 투여를 추가로 포함하는, 방법.
  63. 제 62 항에 있어서, 상기 아자시티딘이 75 mg/m2의 대상체의 신체 표면적의 용량으로 투여되는, 방법.
  64. 제 62 항 또는 제 63 항에 있어서, 상기 아자시티딘이 4-주 주기의 1 내지 7 일차에 투여되는, 방법.
  65. 제 62 항 또는 제 63 항에 있어서, 상기 아자시티딘이 4-주 주기의 1 내지 5 및 8 내지 9 일차에 투여되는, 방법.
  66. 제 1 항 내지 제 65 항 중 어느 한 항에 있어서, 베네토클락스의 투여를 추가로 포함하는, 방법.
  67. 제 1 항 내지 제 66 항 중 어느 한 항에 있어서, 플루오로퀴날론의 투여를 추가로 포함하는, 방법.
  68. 암의 치료를 위한 약학적 조성물로서, 상기 조성물은 비푸코실화 항-CD70 항체 및 적어도 하나의 약학적으로 상용가능한 구성성분을 포함하며, 상기 항-CD70 항체가 중쇄 가변 영역, 경쇄 가변 영역, 및 Fc 도메인을 포함하고, 상기 중쇄 가변 영역이
    (i) 서열번호:8의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1;
    (ii) 서열번호:9의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및
    (iii) 서열번호:10의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3
    을 포함하고; 상기 경쇄 가변 영역이
    (i) 서열번호:11의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1;
    (ii) 서열번호:12의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 및
    (iii) 서열번호:13의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3
    을 포함하고, 상기 약학적 조성물이 CD47 길항제와 조합하여 사용하기 위한 것이고, 상기 조성물이 제 1 항 내지 제 67 항 중 어느 한 항의 방법에서 사용하기 위한 것인, 조성물.
  69. 비푸코실화 항-CD70 항체 및 CD47 길항제, 및 제 1 항 내지 제 67 항 중 어느 한 항의 방법에서 상기 항-CD70 항체를 사용하기 위한 지침을 포함하는 키트에 있어서, 상기 항-CD70 항체가 중쇄 가변 영역, 경쇄 가변 영역, 및 Fc 도메인을 포함하고, 상기 중쇄 가변 영역이
    (i) 서열번호:8의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1;
    (ii) 서열번호:9의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및
    (iii) 서열번호:10의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3
    을 포함하고; 상기 경쇄 가변 영역이
    (i) 서열번호:11의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1;
    (ii) 서열번호:12의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 및
    (iii) 서열번호:13의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3
    을 포함하는, 키트.
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