TW202031684A - Fn14抗體及其用途 - Google Patents

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Abstract

本發明提供結合至Fn14的抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段為Fn14之拮抗劑及非促效劑。

Description

FN14抗體及其用途
本文提供抗Fn14抗體及其醫藥組合物、方法及用途。
Fn14為15 kDa細胞表面受體，其為TNF受體超家族(TNFRSF12A)的一員，其最初鑑定為在經纖維母細胞生長因子I或II刺激之細胞中具有增強之表現的蛋白質(參見Meighan-Mantha, R.L.等人, 1999, J. Biol. Chem. 274(46):33166-76；Feng, S.L.等人, 2000, Am. J. Pathol. 156(4):1253-61；Wiley, S.R.等人,  2001 Immunity 15(5):837-46)。後來發現TWEAK (TNFSF12)為此受體的配位體(Wiley, S.R.等人, 2001 Immunity 15(5):837-46)且為迄今為止唯一已知的配位體。TWEAK能夠對表現Fn14之細胞誘導多種效應，包括細胞凋亡(Wiley, S.R.等人, 1995 Immunity 3(6):673-82；Chicheportiche, Y.等人, 1997, J. Biol. Chem. 272(51):32401-10)、血管生成(Lynch, C.N.等人, 1999, J. Biol. Chem. 274(13):8455-9；Ho, D.H.等人, 2004 Cancer Res. 64(24):8968-72)、增殖(Chen, H.N.等人, 2012, Mol. Biol. Rep. 39(8):8231-41)、發炎介體釋放(回顧於Campbell, S.等人, 2004, Front Biosci. 9:2273-84)及纖維化介體上調(Chen, H.N.等人, 2012, Mol. Biol. Rep. 39(8):8231-41；Son, A.等人, 2013 Mucosal Immunol. 6(6):1131-42；Zheng, L.等人, 2017, Pediatr. Surg. Int. 33(5):593-599)。
在正常組織中，Fn14受到表現的水準極低直至可以忽略，然而在組織損傷之後，Fn14上調。可以誘導多種細胞類型(包括上皮細胞、內皮細胞、肌纖維母細胞、角質細胞、軟骨細胞、脂肪細胞、腎小球膜細胞、間葉幹細胞及星形細胞)中的Fn14表現。TWEAK由多種細胞類型(包括巨噬細胞及樹突狀細胞)表現且可以可溶性或膜結合形式存在(Nakayama, M.等人, 2002, J. Immunol. 168(2):734-43)。TWEAK-Fn14相互作用的正常功能為促進組織及傷口修復，然而在發生組成性發炎或組織損傷的情形中，路徑可能變得調節異常，導致發炎增強及纖維化發展。
使用小鼠發炎或纖維化模型的活體內研究已鑑定Fn14-TWEAK路徑(包括腎功能)在以下疾病中的角色：狼瘡性腎炎(Xia, Y.等人, 2015, J. Am. Soc. Nephrol. 26(5):1053-70)、慢性腎病(Gomez, I.G.等人, 2016, J. Am. Soc. Nephrol. 27(12):3639-3652)、發炎性腸病(Dohi, T.等人, 2009, Gastroenterology 136(3):912-23)、慢性肝纖維化(Wilhelm, A.等人, 2016, J. Pathol. 239(1):109-21)、癌症誘導的惡病質(Johnston, A.J.等人, 2015, Cell 162(6):1365-78)及肌肉萎縮(Dogra, C.等人, 2016, J. Biol. Chem. 281(15):10327-36；Dogra, C.等人, 2007, FASEB J. 21(8):1857-69；Mittal, A.等人, 2010, Am. J. Pathol. 177(4):1732-42；Yadava, R.S.等人, 2015, Hum. Mol. Genet. 24(7):2035-48；Yadava, R.S.等人, 2016, PLoS One, 11(2):e0150192)。
在腎病的腎毒性血清腎炎模型中，經中和型抗TWEAK mAb (純系P5G9)治療的Fn14基因剔除(KO)小鼠及野生型(WT)小鼠發生的蛋白尿症及腎組織病變相較於經同型對照物治療的WT小鼠顯著減輕(Xia, Y.等人, 2012, Clin. Immunol. 145(2):108-21)。亦已有若干報導表明，TWEAK及Fn14在單側輸尿管阻塞(UUO)模型中增加。TWEAK KO小鼠在此模型中的腎纖維化減少且無潛在腎病之小鼠中的TWEAK過度表現誘導腎臟發炎及纖維化(Sanchez-Nino, M.D.等人, 2013, Biochim. Biophys. Acta 1832(12):2232-43)。在UUO模型中，相較於WT小鼠，Fn14 KO小鼠得以避免腎臟纖維化、發炎及血管不穩定性(Gomez, I.G.等人, 2016, J. Am. Soc. Nephrol. 27(12):3639-3652)。另外，相較於經同型對照物治療的小鼠，中和型抗TWEAK mAb遞送至易患慢性腎病的小鼠(艾博特小鼠(Alport's mice)阻斷腎病及器官功能異常的進展(Gomez, I.G.等人, 2016, J. Am. Soc. Nephrol. 27(12):3639-3652)。綜合而言，此等結果表明TWEAK-Fn14在急性與慢性腎臟疾病中的角色。
亦報導此路徑在多種自體免疫小鼠模型中具有重要作用。在慢性移植物抗宿主疾病模型化紅斑狼瘡模型中，經中和型抗TWEAK mAb治療之Fn14 KO小鼠或WT小鼠發生的腎臟疾病、腎臟IgG沈積、發炎介體及發炎細胞向腎臟的浸潤相對於未治療之WT小鼠顯著減少(Zhao, Z.等人, 2007, J. Immunol. 179(11):7949-58)。在類風濕性關節炎的膠原蛋白誘導關節炎(CIA)模型中，中和型抗TWEAK mAb顯著地改善爪腫脹、滑膜增生以及發炎細胞浸潤及促炎性細胞介素誘導(Perper, S.J.等人, 2006, J. Immunol. 177(4):2610-20)。在自發的自體免疫關節炎模型中，Fn14-Fc能夠使關節炎的臨床及組織學分數降低(Park, J.S.等人, 2017, Histol. Histopathol. 32(5):481-490)。在MRL/lpr自發狼瘡模型中，Fn14 KO小鼠的皮膚疾病相對於WT小鼠顯著減輕(Doerner, J.L.等人, 2015, J. Invest. Dermatol. 135(8):1986-95)。
另外，有證據表明TWEAK-Fn14路徑涉及許多人類疾病。此路徑的許多情形存在於自體免疫疾病的範圍內，且實例包括相對於無病灶或健康供者皮膚切片，Fn14與TWEAK在RA患者之滑膜組織中呈陽性染色(van Kuijk, A.W.等人, 2010, Ann. Rheum. Dis. 69(1):301-4)、TWEAK及Fn14高度表現於蕁麻疹性血管炎患者之皮膚病灶的真皮血管壁(Li, M.等人, 2013, J. Dermatol. 40(11):891-5)及盤狀皮膚狼瘡患者之病灶(Liu, Y.等人, 2017, Front Immunol. 8:651)。TWEAK-Fn14路徑亦涉及多種纖維化腎臟疾病，包括IgA腎病變(Sasaki, Y.等人, 2015, BMC Nephrol. 16:27)及蛋白尿腎臟疾病(Sanchez-Nino, M.D.等人, 2013, Biochim. Biophys. Acta, 1832(12):2232-43)及肌肉萎縮疾病，包括肌強直性營養障礙1 (Sidler D.等人, 2017, Nature Communications 8: 15395；Claus M.等人, 2018, Am. J. Transplant 18: 1636；Yadava, R.S.等人, 2015, Hum. Mol. Genet. 24(7):2035-48；Yadava, R.S.等人, 2016, PLoS One 11(2):e0150192；Sydow, J.F.等人, 2014, PLoS One, 9(6):e100736)。
因此，此項技術中需要具有強拮抗劑活性且無促效劑活性或促效劑活性最小的抗Fn14 mAb，其在TWEAK-Fn14路徑活化的疾病中將有益於減少發炎及纖維化。
在一個態樣中，本文提供一種結合至Fn14的抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段為Fn14拮抗劑，且其中 (a)該抗體或其抗原結合片段不為Fn14促效劑； (b)該抗體或其抗原結合片段結合人類、食蟹獼猴、大鼠及小鼠Fn14；及/或 (c)該抗體或其抗原結合片段結合包含人類Fn14之胺基酸30-50、具有SEQ ID NO: 2之胺基酸序列的亞域1。
在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段減弱TWEAK誘導的信號傳導路徑且/或減弱TWEAK對Fn14的結合。
在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段減弱TWEAK誘導的趨化因子表現，其中該趨化因子視情況選自由以下組成之群：IL-8、CCL2、IL-1β、TGFβ、CCL21、TNFα、IL-6、CXCL1、CCL3、CCL4、CXCL12、CCL5、CXCL10及CXCL16。
在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段減少TWEAK誘導的IL-8分泌。
在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段減弱TWEAK誘導的ICAM-1表現。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段減弱TWEAK誘導的細胞凋亡。
在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段不為Fn14促效劑。
在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段在TWEAK不存在的情況下不誘導IL-8分泌。
在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段結合人類、食蟹獼猴、大鼠及小鼠Fn14。
在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段結合包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 2之人類Fn14之胺基酸30-50的亞域1。
在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段與APGTAPCSRGSSWSADLDKCM之胺基酸序列(SEQ ID NO: 182)中的一或多個胺基酸殘基相互作用。
在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段與人類Fn14蛋白質之選自由以下組成之群的一或多個胺基酸殘基相互作用：Gly32、Thr33、Ala34、Pro35、Trp42、Ala44、Asp45、Leu46、Asp47、Lys48、Cys49或其組合。在一個特定實施例中，抗體或其抗原結合片段與人類Fn14蛋白質的所有胺基酸殘基Gly32、Thr33、Ala34、Pro35、Trp42、Ala44、Asp45、Leu46、Asp47、Lys48及Cys49相互作用。
在一些實施例中，如表面電漿子共振方法所測定，抗體或抗原結合片段以小於100 nM的KD結合人類Fn14，其中如表面電漿子共振方法所測定，抗體或抗原結合片段以小於100 nM的KD結合食蟹獼猴Fn14，其中如表面電漿子共振方法所測定，抗體或抗原結合片段以小於100 nM的KD結合大鼠Fn14，且其中如表面電漿子共振方法所測定，抗體或抗原結合片段以小於100 nM的KD結合小鼠Fn14。
在一些實施例中，如表面電漿子共振方法所測定，抗體或抗原結合片段以小於10 nM的KD結合人類Fn14，其中如表面電漿子共振方法所測定，抗體或抗原結合片段以小於10 nM的KD結合食蟹獼猴Fn14，其中如表面電漿子共振方法所測定，抗體或抗原結合片段以小於10 nM的KD結合大鼠Fn14，且其中如表面電漿子共振方法所測定，抗體或抗原結合片段以小於10 nM的KD結合小鼠Fn14。
在一些實施例中，如表面電漿子共振方法所測定，抗體或抗原結合片段以小於1 nM的KD結合人類Fn14，其中如表面電漿子共振方法所測定，抗體或抗原結合片段以小於1 nM的KD結合食蟹獼猴Fn14，其中如表面電漿子共振方法所測定，抗體或抗原結合片段以小於1 nM的KD結合大鼠Fn14，且其中如表面電漿子共振方法所測定，抗體或抗原結合片段以小於1 nM的KD結合小鼠Fn14。
在一些實施例中，抗原結合片段係選自由以下組成之群：Fab、Fab'、F(ab')2 、Fv、scFv、dsFv、雙功能抗體、三功能抗體、四功能抗體及由抗體片段形成之多特異性抗體。
在一些實施例中，抗體為小鼠抗體。在一些實施例中，抗體為嵌合抗體。在一些實施例中，抗體為完全人類抗體或其抗原結合片段。
在一些實施例中，抗體或抗原結合片段為人類化抗體或其抗原結合片段。
在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段係以重組方式產生。
在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段係由融合瘤產生。
在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含： (a)重鏈可變區(VH)，其包含 (i)包含GYX1 FX2 DYNMH之胺基酸序列(SEQ ID NO: 184)的VH互補決定區1 (CDR H1)，其中X1為T、I或R，且X2為T或Q； (ii)包含X3 INPX4 NX5 X6 TNYNX9 KFX10 G之胺基酸序列(SEQ ID NO: 257)的VH互補決定區2 (CDR H2)，其中X3 為Y或S，X4 為N或R，X5 為A或G，X6 為G或W，X9 為Q或D，且X10 為K、G、H或D；以及 (iii)包含SGWFTY之胺基酸序列(SEQ ID NO: 121)的VH互補決定區3 (CDR H3)；以及 (b)輕鏈可變區(VL)，其包含 (i)包含KSSQSLLNSAGKTYLN之胺基酸序列(SEQ ID NO: 127)的VL互補決定區1 (CDR L1)； (ii)包含LVX11 X12 LDX13 之胺基酸序列(SEQ ID NO: 258)的VL互補決定區2 (CDR L2)，其中X11 為S或A，X12 為Q或E，且X13 為S或D；及 (iii)包含WQGTX7 X8 PWT之胺基酸序列(SEQ ID NO: 186)的VL互補決定區3 (CDR L3)，其中X7 為H或F，且X8 為F或Y。
在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含： (a)重鏈可變區(VH)，其包含 (i)包含選自由SEQ ID NO: 119及SEQ ID NO: 122組成之群之胺基酸序列的VH互補決定區1 (CDR H1)； (ii)包含選自由以下組成之群之胺基酸序列的VH互補決定區2 (CDR H2)：SEQ ID NO: 120、SEQ ID NO: 123、SEQ ID NO: 124、SEQ ID NO: 125、SEQ ID NO: 126、SEQ ID NO: 149；SEQ ID NO: 247、SEQ ID NO: 248、SEQ ID NO: 249及SEQ ID NO: 250；及 (iii)包含SEQ ID NO: 121之胺基酸序列的VH互補決定區3 (CDR H3)，以及 (b)輕鏈可變區(VL)，其包含 (i)包含SEQ ID NO: 127之胺基酸序列的VL互補決定區1 (CDR L1)； (ii)包含選自由以下組成之群之胺基酸序列的VL互補決定區2 (CDR L2)：SEQ ID NO: 128、SEQ ID NO: 254、SEQ ID NO: 255及SEQ ID NO: 256；及 (iii)包含選自由SEQ ID NO: 129、SEQ ID NO: 130及SEQ ID NO: 131組成之群之胺基酸序列的VL互補決定區3 (CDR L3)。
在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含： (a)重鏈可變區(VH)，其包含 (i)包含GYX1 FX2 DYNMH之胺基酸序列(SEQ ID NO: 184)的VH互補決定區1 (CDR H1)，其中X1為T、I或R，且X2為T或Q； (ii)包含X3 INPX4 NX5 X6 TNYNQKFKG之胺基酸序列(SEQ ID NO: 185)的VH互補決定區2 (CDR H2)，其中X3為Y或S，X4為N或R；X5 為A或G，且X6 為G或W；及 (iii)包含SGWFTY之胺基酸序列(SEQ ID NO: 121)的VH互補決定區3 (CDR H3)；以及 (b)輕鏈可變區(VL)，其包含 (i)包含KSSQSLLNSAGKTYLN之胺基酸序列(SEQ ID NO: 127)的VL互補決定區1 (CDR L1)； (ii)包含LVSQLDS之胺基酸序列(SEQ ID NO: 128)的VL互補決定區2 (CDR L2)；及 (iii)包含WQGTX7 X8 PWT之胺基酸序列(SEQ ID NO: 186)的VL互補決定區3 (CDR L3)，其中X7 為H或F，且X8 為F或Y。
在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含： (a)重鏈可變區(VH)，其包含 (i)包含選自由SEQ ID NO: 119及SEQ ID NO: 122組成之群之胺基酸序列的VH互補決定區1 (CDR H1)； (ii)包含選自由以下組成之群之胺基酸序列的VH互補決定區2 (CDR H2)：SEQ ID NO: 120、SEQ ID NO: 123、SEQ ID NO: 124、SEQ ID NO: 125、SEQ ID NO: 126及SEQ ID NO: 149；及 (iii)包含SEQ ID NO: 121之胺基酸序列的VH互補決定區3 (CDR H3)，以及 (b)輕鏈可變區(VL)，其包含 (i)包含SEQ ID NO: 127之胺基酸序列的VL互補決定區1 (CDR L1)； (ii)包含SEQ ID NO: 128之胺基酸序列的VL互補決定區2 (CDR L2)；及 (iii)包含選自由SEQ ID NO: 129、SEQ ID NO: 130及SEQ ID NO: 131組成之群之胺基酸序列的VL互補決定區3 (CDR L3)。
在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO: 119之CDR H1、SEQ ID NO: 120之CDR H2、SEQ ID NO: 121之CDR H3、SEQ ID NO: 127之CDR L1、SEQ ID NO: 128之CDR L2及SEQ ID NO: 129之CDR L3。
在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO: 119之CDR H1、SEQ ID NO: 123之CDR H2、SEQ ID NO: 121之CDR H3、SEQ ID NO: 127之CDR L1、SEQ ID NO: 128之CDR L2及SEQ ID NO: 129之CDR L3。
在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO: 119之CDR H1、SEQ ID NO: 124之CDR H2、SEQ ID NO: 121之CDR H3、SEQ ID NO: 127之CDR L1、SEQ ID NO: 128之CDR L2及SEQ ID NO: 129之CDR L3。
在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO: 119之CDR H1、SEQ ID NO: 125之CDR H2、SEQ ID NO: 121之CDR H3、SEQ ID NO: 127之CDR L1、SEQ ID NO: 128之CDR L2及SEQ ID NO: 129之CDR L3。
在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO: 119之CDR H1、SEQ ID NO: 126之CDR H2、SEQ ID NO: 121之CDR H3、SEQ ID NO: 127之CDR L1、SEQ ID NO: 128之CDR L2及SEQ ID NO: 129之CDR L3。
在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO: 119之CDR H1、SEQ ID NO: 149之CDR H2、SEQ ID NO: 121之CDR H3、SEQ ID NO: 127之CDR L1、SEQ ID NO: 128之CDR L2及SEQ ID NO: 129之CDR L3。
在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO: 119之CDR H1、SEQ ID NO: 120之CDR H2、SEQ ID NO: 121之CDR H3、SEQ ID NO: 127之CDR L1、SEQ ID NO: 128之CDR L2及SEQ ID NO: 130之CDR L3。
在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO: 119之CDR H1、SEQ ID NO: 123之CDR H2、SEQ ID NO: 121之CDR H3、SEQ ID NO: 127之CDR L1、SEQ ID NO: 128之CDR L2及SEQ ID NO: 130之CDR L3。
在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO: 119之CDR H1、SEQ ID NO: 124之CDR H2、SEQ ID NO: 121之CDR H3、SEQ ID NO: 127之CDR L1、SEQ ID NO: 128之CDR L2及SEQ ID NO: 130之CDR L3。
在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO: 119之CDR H1、SEQ ID NO: 125之CDR H2、SEQ ID NO: 121之CDR H3、SEQ ID NO: 127之CDR L1、SEQ ID NO: 128之CDR L2及SEQ ID NO: 130之CDR L3。
在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO: 119之CDR H1、SEQ ID NO: 126之CDR H2、SEQ ID NO: 121之CDR H3、SEQ ID NO: 127之CDR L1、SEQ ID NO: 128之CDR L2及SEQ ID NO: 130之CDR L3。
在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO: 119之CDR H1、SEQ ID NO: 149之CDR H2、SEQ ID NO: 121之CDR H3、SEQ ID NO: 127之CDR L1、SEQ ID NO: 128之CDR L2及SEQ ID NO: 130之CDR L3。
在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO: 119之CDR H1、SEQ ID NO: 120之CDR H2、SEQ ID NO: 121之CDR H3、SEQ ID NO: 127之CDR L1、SEQ ID NO: 128之CDR L2及SEQ ID NO: 131之CDR L3。
在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO: 119之CDR H1、SEQ ID NO: 123之CDR H2、SEQ ID NO: 121之CDR H3、SEQ ID NO: 127之CDR L1、SEQ ID NO: 128之CDR L2及SEQ ID NO: 131之CDR L3。
在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO: 119之CDR H1、SEQ ID NO: 124之CDR H2、SEQ ID NO: 121之CDR H3、SEQ ID NO: 127之CDR L1、SEQ ID NO: 128之CDR L2及SEQ ID NO: 131之CDR L3。
在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO: 119之CDR H1、SEQ ID NO: 125之CDR H2、SEQ ID NO: 121之CDR H3、SEQ ID NO: 127之CDR L1、SEQ ID NO: 128之CDR L2及SEQ ID NO: 131之CDR L3。
在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO: 119之CDR H1、SEQ ID NO: 126之CDR H2、SEQ ID NO: 121之CDR H3、SEQ ID NO: 127之CDR L1、SEQ ID NO: 128之CDR L2及SEQ ID NO: 131之CDR L3。
在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO: 119之CDR H1、SEQ ID NO: 149之CDR H2、SEQ ID NO: 121之CDR H3、SEQ ID NO: 127之CDR L1、SEQ ID NO: 128之CDR L2及SEQ ID NO: 131之CDR L3。
在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO: 122之CDR H1、SEQ ID NO: 120之CDR H2、SEQ ID NO: 121之CDR H3、SEQ ID NO: 127之CDR L1、SEQ ID NO: 128之CDR L2及SEQ ID NO: 129之CDR L3。
在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO: 122之CDR H1、SEQ ID NO: 123之CDR H2、SEQ ID NO: 121之CDR H3、SEQ ID NO: 127之CDR L1、SEQ ID NO: 128之CDR L2及SEQ ID NO: 129之CDR L3。
在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO: 122之CDR H1、SEQ ID NO: 124之CDR H2、SEQ ID NO: 121之CDR H3、SEQ ID NO: 127之CDR L1、SEQ ID NO: 128之CDR L2及SEQ ID NO: 129之CDR L3。
在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO: 122之CDR H1、SEQ ID NO: 125之CDR H2、SEQ ID NO: 121之CDR H3、SEQ ID NO: 127之CDR L1、SEQ ID NO: 128之CDR L2及SEQ ID NO: 129之CDR L3。
在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO: 122之CDR H1、SEQ ID NO: 126之CDR H2、SEQ ID NO: 121之CDR H3、SEQ ID NO: 127之CDR L1、SEQ ID NO: 128之CDR L2及SEQ ID NO: 129之CDR L3。
在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO: 122之CDR H1、SEQ ID NO: 149之CDR H2、SEQ ID NO: 121之CDR H3、SEQ ID NO: 127之CDR L1、SEQ ID NO: 128之CDR L2及SEQ ID NO: 129之CDR L3。
在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO: 122之CDR H1、SEQ ID NO: 120之CDR H2、SEQ ID NO: 121之CDR H3、SEQ ID NO: 127之CDR L1、SEQ ID NO: 128之CDR L2及SEQ ID NO: 130之CDR L3。
在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO: 122之CDR H1、SEQ ID NO: 123之CDR H2、SEQ ID NO: 121之CDR H3、SEQ ID NO: 127之CDR L1、SEQ ID NO: 128之CDR L2及SEQ ID NO: 130之CDR L3。
在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO: 122之CDR H1、SEQ ID NO: 124之CDR H2、SEQ ID NO: 121之CDR H3、SEQ ID NO: 127之CDR L1、SEQ ID NO: 128之CDR L2及SEQ ID NO: 130之CDR L3。
在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO: 122之CDR H1、SEQ ID NO: 125之CDR H2、SEQ ID NO: 121之CDR H3、SEQ ID NO: 127之CDR L1、SEQ ID NO: 128之CDR L2及SEQ ID NO: 130之CDR L3。
在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO: 122之CDR H1、SEQ ID NO: 126之CDR H2、SEQ ID NO: 121之CDR H3、SEQ ID NO: 127之CDR L1、SEQ ID NO: 128之CDR L2及SEQ ID NO: 130之CDR L3。
在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO: 122之CDR H1、SEQ ID NO: 149之CDR H2、SEQ ID NO: 121之CDR H3、SEQ ID NO: 127之CDR L1、SEQ ID NO: 128之CDR L2及SEQ ID NO: 130之CDR L3。
在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO: 122之CDR H1、SEQ ID NO: 249之CDR H2、SEQ ID NO: 121之CDR H3、SEQ ID NO: 127之CDR L1、SEQ ID NO: 128之CDR L2及SEQ ID NO: 130之CDR L3。
在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO: 122之CDR H1、SEQ ID NO: 120之CDR H2、SEQ ID NO: 121之CDR H3、SEQ ID NO: 127之CDR L1、SEQ ID NO: 128之CDR L2及SEQ ID NO: 131之CDR L3。
在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO: 122之CDR H1、SEQ ID NO: 123之CDR H2、SEQ ID NO: 121之CDR H3、SEQ ID NO: 127之CDR L1、SEQ ID NO: 128之CDR L2及SEQ ID NO: 131之CDR L3。
在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO: 122之CDR H1、SEQ ID NO: 124之CDR H2、SEQ ID NO: 121之CDR H3、SEQ ID NO: 127之CDR L1、SEQ ID NO: 128之CDR L2及SEQ ID NO: 131之CDR L3。
在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO: 122之CDR H1、SEQ ID NO: 125之CDR H2、SEQ ID NO: 121之CDR H3、SEQ ID NO: 127之CDR L1、SEQ ID NO: 128之CDR L2及SEQ ID NO: 131之CDR L3。
在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO: 122之CDR H1、SEQ ID NO: 126之CDR H2、SEQ ID NO: 121之CDR H3、SEQ ID NO: 127之CDR L1、SEQ ID NO: 128之CDR L2及SEQ ID NO: 131之CDR L3。
在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO: 122之CDR H1、SEQ ID NO: 149之CDR H2、SEQ ID NO: 121之CDR H3、SEQ ID NO: 127之CDR L1、SEQ ID NO: 128之CDR L2及SEQ ID NO: 131之CDR L3。
在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含： (a)重鏈可變區(VH)，其包含 (i)包含GYIFQDYNMH之胺基酸序列(SEQ ID NO: 122)的VH互補決定區1 (CDR H1)； (ii)包含X3 INPRNX5 X6 TNYNX9 KFX10 G之胺基酸序列(SEQ ID NO: 259)的VH互補決定區2 (CDR H2)，其中X3 為Y或S，X5 為A或G；X6 為G或W，X9 為Q或D，且X10 為K、G、H或D；及 (iii)包含SGWFTY之胺基酸序列(SEQ ID NO: 121)的VH互補決定區3 (CDR H3)；以及 (b)輕鏈可變區(VL)，其包含 (i)包含KSSQSLLNSAGKTYLN之胺基酸序列(SEQ ID NO: 127)的VL互補決定區1 (CDR L1)； (ii)包含LVX11 X12 LDX13 之胺基酸序列(SEQ ID NO: 258)的VL互補決定區2 (CDR L2)，其中X11 為S或A，X12 為Q或E，且X13 為S或D；及 (iii)包含WQGTX7 YPWT之胺基酸序列(SEQ ID NO: 188)的VL互補決定區3 (CDR L3)，其中X7 為H或F。
在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含： (a)重鏈可變區(VH)，其包含 (i)包含SEQ ID NO: 122之胺基酸序列的VH互補決定區1 (CDR H1)； (ii)包含選自由以下組成之群之胺基酸序列的VH互補決定區2 (CDR H2)：SEQ ID NO: 123、SEQ ID NO: 124、SEQ ID NO: 126、SEQ ID NO: 247、SEQ ID NO: 248、SEQ ID NO: 249、SEQ ID NO: 250；及 (iii)包含SEQ ID NO: 121之胺基酸序列的VH互補決定區3 (CDR H3)；以及 (b)輕鏈可變區(VL)，其包含 (i)包含SEQ ID NO: 127之胺基酸序列的VL互補決定區1 (CDR L1)； (ii)包含選自由以下組成之群之胺基酸序列的VL互補決定區2 (CDR L2)：SEQ ID NO: 128、SEQ ID NO: 254、SEQ ID NO: 255及SEQ ID NO: 256；及 (iii)包含選自由SEQ ID NO: 130及SEQ ID NO: 131組成之群之胺基酸序列的VL互補決定區3 (CDR L3)。
在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含： (a)重鏈可變區(VH)，其包含 (i)包含GYIFQDYNMH之胺基酸序列(SEQ ID NO: 122)的VH互補決定區1 (CDR H1)； (ii)包含X3 INPRNX5 X6 TNYNQKFKG之胺基酸序列(SEQ ID NO: 187)的VH互補決定區2 (CDR H2)，其中X3 為Y或S，X5 為A或G；且X6 為G或W；及 (iii)包含SGWFTY之胺基酸序列(SEQ ID NO: 121)的VH互補決定區3 (CDR H3)；以及 (b)輕鏈可變區(VL)，其包含 (i)包含KSSQSLLNSAGKTYLN之胺基酸序列(SEQ ID NO: 127)的VL互補決定區1 (CDR L1)； (ii)包含LVSQLDS之胺基酸序列(SEQ ID NO: 128)的VL互補決定區2 (CDR L2)；及 (iii)包含WQGTX7 YPWT之胺基酸序列(SEQ ID NO: 188)的VL互補決定區3 (CDR L3)，其中X7 為H或F。
在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含： (a)重鏈可變區(VH)，其包含 (i)包含SEQ ID NO: 122之胺基酸序列的VH互補決定區1 (CDR H1)； (ii)包含選自由SEQ ID NO: 123、SEQ ID NO: 124及SEQ ID NO: 126組成之群之胺基酸序列的VH互補決定區2 (CDR H2)；及 (iii)包含SEQ ID NO: 121之胺基酸序列的VH互補決定區3 (CDR H3)，以及 (b)輕鏈可變區(VL)，其包含 (i)包含SEQ ID NO: 127之胺基酸序列的VL互補決定區1 (CDR L1)； (ii)包含SEQ ID NO: 128之胺基酸序列的VL互補決定區2 (CDR L2)；及 (iii)包含選自由SEQ ID NO: 130及SEQ ID NO: 131組成之群之胺基酸序列的VL互補決定區3 (CDR L3)。
在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含：包含CDR H1、CDR H2及CDR H3的VH，該CDR H1、CDR H2及CDR H3包含選自由以下組成之群之VH胺基酸序列中所含之CDR H1、CDR H2及CDR H3的胺基酸序列：SEQ ID NO: 35、SEQ ID NO: 50、SEQ ID NO: 54、SEQ ID NO: 60、SEQ ID NO: 56及SEQ ID NO: 181；以及包含CDR L1、CDR L2及CDR L3的VL，該CDR L1、CDR L2及CDR L3包含選自由以下組成之群之VL胺基酸序列中所含之CDR L1、CDR L2及CDR L3的胺基酸序列：SEQ ID NO: 40、SEQ ID NO: 52及SEQ ID NO: 58。
在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含：包含CDR H1、CDR H2及CDR H3的VH，該CDR H1、CDR H2及CDR H3包含選自由以下組成之群之VH胺基酸序列中所含之CDR H1、CDR H2及CDR H3的胺基酸序列：SEQ ID NO: 179、SEQ ID NO: 66、SEQ ID NO: 68、SEQ ID NO: 70、SEQ ID NO: 72、SEQ ID NO: 74、SEQ ID NO: 76、SEQ ID NO: 78、SEQ ID NO: 80、SEQ ID NO: 82、SEQ ID NO: 84、SEQ ID NO: 86、SEQ ID NO: 88、SEQ ID NO: 90、SEQ ID NO: 106、SEQ ID NO: 108、SEQ ID NO: 110、SEQ ID NO: 203、SEQ ID NO: 205、SEQ ID NO: 207、SEQ ID NO: 209、SEQ ID NO: 211、SEQ ID NO: 213、SEQ ID NO: 215、SEQ ID NO: 217、SEQ ID NO: 219、SEQ ID NO: 221、SEQ ID NO: 223、SEQ ID NO: 225及SEQ ID NO: 227；以及包含CDR L1、CDR L2及CDR L3的VL，該CDR L1、CDR L2及CDR L3包含選自由以下組成之群之VL胺基酸序列中所含之CDR L1、CDR L2及CDR L3的胺基酸序列：SEQ ID NO: 92、SEQ ID NO: 94、SEQ ID NO: 96、SEQ ID NO: 98、SEQ ID NO: 100、SEQ ID NO: 102、SEQ ID NO: 104、SEQ ID NO: 112、SEQ ID NO: 229、SEQ ID NO: 231、SEQ ID NO: 233、SEQ ID NO: 235及SEQ ID NO: 237。
在一些實施例中，CDR H1、CDR H2、CDR H3、CDR L1、CDR L2及CDR L3係根據Kabat編號、AbM編號、Chothia編號、接觸編號或IMGT編號或其組合確定。
在一些實施例中，CDR H1、CDR H2、CDR H3、CDR L1、CDR L2及CDR L3係根據Kabat編號及Chothia編號來確定。
在一些實施例中，CDR H1、CDR H2、CDR H3、CDR L1、CDR L2及CDR L3根據Kabat編號來確定。
在一些實施例中，CDR H1、CDR H2、CDR H3、CDR L1、CDR L2及CDR L3根據AbM編號來確定。
在一些實施例中，CDR H1、CDR H2、CDR H3、CDR L1、CDR L2及CDR L3根據Chothia編號來確定。
在一些實施例中，CDR H1、CDR H2、CDR H3、CDR L1、CDR L2及CDR L3根據接觸編號來確定。
在一些實施例中，CDR H1、CDR H2、CDR H3、CDR L1、CDR L2及CDR L3根據IMGT編號確定。
在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段進一步包含： (i)包含SEQ ID NO: 132之胺基酸序列的VH構架1 (FR1)； (ii)包含SEQ ID NO: 138之胺基酸序列的VH構架2 (FR2)； (iii)包含SEQ ID NO: 145之胺基酸序列的VH構架3 (FR3)； (iv)包含SEQ ID NO: 158之胺基酸序列的VH構架4 (FR4)； (v)包含SEQ ID NO: 160之胺基酸序列的VL FR1； (vi)包含SEQ ID NO: 163之胺基酸序列的VL FR2； (vii)包含SEQ ID NO: 169之胺基酸序列的VL FR3；及 (viii)包含SEQ ID NO: 171之胺基酸序列的VL FR4。
在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段進一步包含： (i)包含選自由以下組成之群之胺基酸序列的VH FR1：SEQ ID NO: 133、SEQ ID NO: 134、SEQ ID NO: 135、SEQ ID NO: 136、SEQ ID NO: 137、SEQ ID NO: 238及SEQ ID NO: 239； (ii)包含選自由以下組成之群之胺基酸序列的VH FR2：SEQ ID NO: 139、SEQ ID NO: 140、SEQ ID NO: 141、SEQ ID NO: 142、SEQ ID NO: 143、SEQ ID NO: 144、SEQ ID NO: 173、SEQ ID NO: 240、SEQ ID NO: 241、SEQ ID NO: 242、SEQ ID NO: 243、SEQ ID NO: 244、SEQ ID NO: 245及SEQ ID NO: 246； (iii)包含選自由以下組成之群之胺基酸序列的VH FR3：SEQ ID NO: 146、SEQ ID NO: 147、SEQ ID NO: 148、SEQ ID NO: 150、SEQ ID NO: 151、SEQ ID NO: 152、SEQ ID NO: 153、SEQ ID NO: 154、SEQ ID NO: 155、SEQ ID NO: 156、SEQ ID NO: 157、SEQ ID NO: 174及SEQ ID NO: 251； (iv)包含SEQ ID NO: 159之胺基酸序列的VH FR4； (v)包含選自由SEQ ID NO: 161及SEQ ID NO: 162組成之群之胺基酸序列的VL FR1； (vi)包含選自由以下組成之群之胺基酸序列的VL FR2：SEQ ID NO: 163、SEQ ID NO: 164、SEQ ID NO: 165、SEQ ID NO: 166、SEQ ID NO: 167、SEQ ID NO: 168、SEQ ID NO: 252及SEQ ID NO: 253； (vii)包含SEQ ID NO: 170之胺基酸序列的VL FR3；及 (viii)包含選自由SEQ ID NO: 171及SEQ ID NO: 172組成之群之胺基酸序列的VL FR4。
在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含：VH，其包含選自由以下組成之群的胺基酸序列：SEQ ID NO: 35、SEQ ID NO: 50、SEQ ID NO: 54、SEQ ID NO: 60、SEQ ID NO: 56及SEQ ID NO: 181；及VL，其包含選自由以下組成之群的胺基酸序列：SEQ ID NO: 40、SEQ ID NO: 52及SEQ ID NO: 58。
在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含：VH，其包含選自由以下組成之群之胺基酸序列：SEQ ID NO: 179、SEQ ID NO: 66、SEQ ID NO: 68、SEQ ID NO: 70、SEQ ID NO: 72、SEQ ID NO: 74、SEQ ID NO: 76、SEQ ID NO: 78、SEQ ID NO: 80、SEQ ID NO: 82、SEQ ID NO: 84、SEQ ID NO: 86、SEQ ID NO: 88、SEQ ID NO: 90、SEQ ID NO: 106、SEQ ID NO: 108及SEQ ID NO: 110、SEQ ID NO: 203、SEQ ID NO: 205、SEQ ID NO: 207、SEQ ID NO: 209、SEQ ID NO: 211、SEQ ID NO: 213、SEQ ID NO: 215、SEQ ID NO: 217、SEQ ID NO: 219、SEQ ID NO: 221、SEQ ID NO: 223、SEQ ID NO: 225及SEQ ID NO: 227；以及VL，其包含選自由以下組成之群之胺基酸序列：SEQ ID NO: 92、SEQ ID NO: 94、SEQ ID NO: 96、SEQ ID NO: 98、SEQ ID NO: 100、SEQ ID NO: 102、SEQ ID NO: 104、SEQ ID NO: 112、SEQ ID NO: 229、SEQ ID NO: 231、SEQ ID NO: 233、SEQ ID NO: 235及SEQ ID NO: 237。
在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段與藥劑結合。
在一些實施例中，該藥劑係選自由以下組成之群：細胞毒性劑、放射性同位素、金屬螯合劑、酶、螢光化合物、生物發光化合物、化學發光化合物，及肽。
在另一態樣中，本文提供一種醫藥組合物，其包含本文提供之抗體或抗原結合片段及醫藥學上可接受之賦形劑。
在又另一態樣中，本文提供一種治療及/或預防疾病或病症之方法，其包含向個體投與治療有效量之本文所提供之抗體或其抗原結合片段。
在一些實施例中，疾病或病症為由Fn14及/或TWEAK介導、誘導及/或延長之疾病或病症。
在一些實施例中，疾病或病症係選自由以下組成之群：影響關節、皮膚、腎臟、肝臟、腸、心臟、肺或肌肉的自體免疫及/或發炎疾病，其中視情況，該疾病或病症疾病或病症係選自由以下組成之群：類風濕性關節炎、類天疱瘡、盤狀皮膚狼瘡、蕁麻疹性血管炎、亨諾-許蘭過敏性紫斑症(Henoch-Schonlein Purpura)、IgA腎病、異位性皮膚炎(異位性濕疹)、牛皮癬(尋常型牛皮癬)、脂漏性濕疹、哮喘、蛋白尿腎臟疾病、肝臟疾病、狼瘡性腎炎、多發性肌炎、皮肌炎、鈣調神經磷酸酶抑制劑誘導性腎毒性、肌強直性營養障礙、心臟功能異常及衰竭、亞柏氏症候群(Alport syndrome)、潰瘍性結腸炎、克羅恩氏病(Crohn's disease)、皮膚血管炎、惡病質及發炎性腸病，且其中視情況，該疾病或病症與纖維化有關且視情況選自由以下組成之群：組織纖維化、特發性肺纖維化、間質性肺病、硬皮病(全身性硬化症)、癌症、癌症相關惡病質、肌肉萎縮、瘢瘤、包涵體性肌炎及組織重建。
在一些實施例中，個體為人類個體。
在另一態樣中，本文提供一種聚核苷酸，其包含編碼本文所提供之抗體或其抗原結合片段的核苷酸序列或其一部分。
在一些實施例中，聚核苷酸包含選自由表36及表37中所列之聚核苷酸序列組成之群的聚核苷酸序列。
在另一態樣中，本發明提供一種載體，其包含本文所提供之聚核苷酸。
在另一態樣中，本文提供一種細胞，其包含本文所提供之聚核苷酸。在一些實施例中，本文所提供之細胞包含本文所提供之載體。
在又另一態樣中，本文提供一種製備抗體或其抗原結合片段之方法，其包含培養本文所提供之細胞以表現抗體或其抗原結合片段。
相關申請案之交叉參考 本申請案主張2018年12月20日申請之美國臨時專利申請案第62/782,912號的權益，該臨時專利申請案以全文引用之方式併入本文中。
序列表 本申請案以引入的方式合併以正文格式隨本申請案一起提交的序列表，其名稱為14233-010-185_SEQ_LISTING.txt，於2019年12月4日建立，大小為185,980個位元組。
本發明提供新穎的Fn14抗體、包含其的醫藥組合物，及其用途。更特定言之，本發明提供拮抗Fn14的抗體、包含此等抗體的醫藥組合物，及其用途。
抗Fn14 mAb已有描述(參見例如Johnston, A.J.等人, 2015 Cell 162(6):1365-78；Sanchez-Nino, M.D.等人,Biochim Biophys Acta , 2013, 1832(12):2232-43；Zhao, Z.等人,J Immunol , 2007, 179(11):7949-58)。舉例而言，Johnston等人產生了若干種抗Fn14 mAb (001、002及004)且對其進行活體外與活體內表徵(Johnston, A.J.等人,Cell , 2015, 162(6):1365-78；Johnston, A.J.等人,Curr Opin Clin Nutr Metab Care , 2016, 19(4):316-8)。單株抗體的活體外表徵揭露，所有三種純系在NFκB報導體分析中均為拮抗劑/非促效劑，但僅001及002能夠在細胞毒性分析中阻斷TWEAK誘導細胞死亡。然而，001在A375細胞-IL-8分泌分析中展示為促效劑、非拮抗劑(US2013/0273036 A1)。其鑑定001、002及004結合至稱為亞域2 (Fn14 AA 51-70)、而非亞域1 (Fn14 AA 31-50)的抗原決定基。亞域1及2包含Fn14胞外域的大部分(Johnston, A.J.等人,Cell , 2015, 162(6):1365-78)。
在某些實施例中，本文提供新穎的抗Fn14拮抗劑、非促效劑單株抗體，其以高親和力結合人類、食蟹獼猴、大鼠及小鼠Fn14。如下文章節6中所示，本文所提供之抗體經由Fn14穩固地中和TWEAK誘導之發炎及促纖維化信號傳導。此在活體外功能分析中得以證明，該等活體外功能分析係利用NF-κB報導體細胞株、A375黑色素瘤細胞株、人類腎源細胞株及人類初級腎小球膜細胞量測TWEAK結合、TWEAK誘導的趨化因子表現、IL-8分泌及ICAM-1表現。在此等分析中之任一者中，此等抗體在TWEAK不存在的情況下不誘導促效劑活性。對Fn14胞外區之亞域1的結合抗原決定基進行定位且藉由Fn14與兩種抗Fn14 Fab的共結晶研究來進一步界定。
本文所提供之抗體提供如下文章節6中所示之資料所證明的許多優勢。舉例而言，先前報導的拮抗劑Fn14抗體 - 純系ITEM-4(Nakayama, M.等人,J Immunol , 2003, 170(1):341-8)展現促效劑活性(Nakayama, M.等人,J Immunol , 2003, 170(1):341-8；Potrovita, I.等人,JNeurosci , 2004, 24(38):8237-44)以及拮抗劑特性(Nakayama, M.等人,JImmunol , 2003, 170(1):341-8；Potrovita, I.等人,J Neurosci , 2004, 24(38):8237-44；Justo, P.等人,Kidney Int , 2006, 70(10):1750-8)。5.1 定義
本文所述或所提及之技術及程序包括熟習此項技術者使用習知方法已普遍充分瞭解且/或通常使用的彼等技術及程序，諸如以下文獻中所述的廣泛利用方法：Sambrook等人, Molecular Cloning: A Laboratory Manual (第3版, 2001)；Current Protocols in Molecular Biology (Ausubel等人編, 2003); Therapeutic Monoclonal Antibodies: From Bench to Clinic (An編, 2009); Monoclonal Antibodies: Methods and Protocols (Albitar編, 2010)；及Antibody Engineering 第1及2卷(Kontermann及Dübel編, 第2版, 2010)。
除非本文中另外規定，否則本說明書中所使用之技術及科學術語具有一般熟習此項技術者通常所理解之含義。出於解釋本說明書之目的，將應用以下術語說明且只要適當，則以單數形式使用之術語亦將包括複數形式且反之亦然。在所列術語之任何說明與以引用之方式併入本文中之任何文獻存在衝突之情況下，以下文闡述之術語說明為準。
術語「抗體」、「免疫球蛋白」或「Ig」在本文中可互換地使用，且在最廣泛的意義上使用且特別涵蓋例如單株抗體(包括促效劑、拮抗劑、中和抗體、全長或完整單株抗體)、具有多抗原決定基或單抗原決定基特異性的抗體組合物、多株或單價抗體、多價抗體、由至少兩種完整抗體形成的多特異性抗體(例如雙特異性抗體，只要其展現所需生物活性)、單鏈抗體，及其片段，如下文所述。抗體可為人類、人類化、嵌合及/或親和力成熟抗體，以及來自其他物種(例如小鼠及兔等)的抗體。術語「抗體」意欲包括免疫球蛋白多肽類別內的B細胞多肽產物，其能夠結合至特定分子抗原且由兩對相同的多肽鏈構成，其中各對具有一條重鏈(約50-70 kDa)及一條輕鏈(約25 kDa)，各鏈之各胺基端部分包括約100至約130個或更多個胺基酸之可變區，且各鏈之各羧基端部分包括恆定區。參見例如Antibody Engineering (Borrebaeck編, 第2版, 1995); and Kuby,Immunology (第3版, 1997)。在特定實施例中，特定分子抗原可以被本文所提供之抗體結合，包括多肽或抗原決定基。抗體亦包括但不限於合成抗體、重組產生之抗體、駱駝化抗體或其人類化變異體、胞內抗體、抗個體基因型(抗Id)抗體，及上述任一者之功能片段(例如抗原結合片段)，該等功能片段係指抗體重鏈或輕鏈多肽之一部分，該部分保留衍生該片段之抗體的一些或全部結合活性。功能片段(例如抗原結合片段)之非限制性實例包括單鏈Fv (scFv)(例如包括單特異性、雙特異性等)、Fab片段、F(ab')片段、F(ab)2 片段、F(ab')2 片段、二硫鍵連接的Fv (dsFv)、Fd片段、Fv片段、雙功能抗體、三功能抗體、四功能抗體及微型抗體。特定言之，本文所提供之抗體包括免疫球蛋白分子及免疫球蛋白分子之免疫活性部分，例如含有結合至抗原之抗原結合位點的抗原結合域或分子(例如抗體的一或多個CDR)。此類抗體片段可見於例如Harlow及Lane,Antibodies: A Laboratory Manual (1989)；Mol. Biology and Biotechnology: A Comprehensive Desk Reference (Myers編, 1995)；Huston等人, 1993,Cell Biophysics 22:189-224；Plückthun及Skerra, 1989,Meth. Enzymol . 178:497-515；及Day,Advanced Immunochemistry (第2版, 1990)。本文所提供之抗體可以屬於免疫球蛋白分子的任何類別(例如IgG、IgE、IgM、IgD及IgA)或任何子類(例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1及IgA2)。抗體可為促效抗體或拮抗抗體。
「抗原」為抗體可以選擇性結合的結構。目標抗原可為多肽、碳水化合物、核酸、脂質、半抗原或其他天然存在的或合成的化合物。在一些實施例中，目標抗原為多肽。在某些實施例中，抗原與細胞相關，例如存在於細胞上或細胞中。
「拮抗劑」抗體為抑制或減少其所結合之抗原之生物活性的抗體。舉例而言，拮抗劑抗體可以基本上或完全地抑制抗原之生物活性。如本文所用，Fn14的「拮抗劑」或「抑制劑」係指能夠抑制或以其他方式減少Fn14之一或多種生物活性的分子。舉例而言，在一些實施例中，Fn14之拮抗劑(例如本文所提供之拮抗抗體)可藉由抑制或以其他方式減少表現Fn14之細胞之活化及/或細胞信號傳導路徑來起作用，從而相對於Fn14在拮抗劑不存在下介導之生物活性，抑制或限制Fn14介導之細胞生物活性。
如本文所用的拮抗劑抗體與「促效劑」抗體形成對比，「促效劑」抗體為觸發反應的抗體，例如模擬所關注多肽(例如Fn14)之至少一種功能活性的抗體。促效劑抗體包括作為配位體模擬物之抗體，舉例而言，其中配位體結合至細胞表面受體且該結合經由細胞間的細胞信號傳導路徑誘導細胞信號傳導或活化且其中抗體誘導類似的細胞信號傳導或活化。Fn14促效劑係指能夠活化或以其他方式增強Fn14之一或多種生物活性的分子，諸如經由表現Fn14而對TWEAK作出反應之細胞上的分子。在一些實施例中，Fn14促效劑可以例如藉由增強Fn14活性、從而引起表現Fn14之細胞之活化及/或細胞信號傳導路徑增強來起作用，從而相對於Fn14在促效劑不存在下介導的生物活性，增強Fn14介導的細胞生物活性。
「完整」抗體為包含抗原結合位點以及CL及至少重鏈恆定區CH1、CH2及CH3的抗體。恆定區可包括人類恆定區或其胺基酸序列變異體。在某些實施例中，完整抗體具有一或多種效應功能。
術語「抗原結合片段」、「抗原結合域」、「抗原結合區」及類似術語係指抗體中包含與抗原相互作用之胺基酸殘基且賦予結合劑其針對抗原之特異性及親和力的部分(例如CDR)。如本文所用，「抗原結合片段」包括「抗體片段」，其包含完整抗體之一部分，諸如完整抗體之抗原結合區或可變區。抗體片段之實例包括(但不限於) Fab、Fab'、F(ab')2 及Fv片段；雙功能抗體及雙-雙功能抗體(參見例如Holliger等人,Proc Natl Acad Sci 1993, 90:6444-48；Lu等人, J Biol Chem, 2005, 280:19665-72；Hudson等人,Nat Med , 2003, 9:129-34；WO 93/11161；及美國專利第5,837,242號及第6,492,123號)；單鏈抗體分子(參見例如美國專利第4,946,778號；第5,260,203號；第5,482,858號；及第5,476,786號)；雙重可變域抗體(參見例如美國專利第7,612,181號)；單一可變域抗體(sdAbs)(參見例如Woolven等人,Immunogenetics , 1999,  50: 98-101；及Streltsov等人,Proc Natl Acad Sci USA . 2004, 101:12444-49)；及由抗體片段形成的多特異性抗體。
術語「結合(binds)」或「結合(binding)」係指分子間的相互作用，包括例如形成複合物。相互作用可為例如非共價相互作用，包括氫鍵、離子鍵、疏水相互作用及/或凡得瓦爾相互作用(van der Waals interactions)。複合物亦可包括兩個或更多個分子的結合，其藉由共價或非共價鍵、相互作用或力結合在一起。抗體上之單個抗原結合位點與目標分子(諸如抗原)之單個抗原決定基之間的總非共價相互作用力為抗體或功能片段針對該抗原決定基之親和力。結合分子相對於單價抗原之解離速率(koff )對結合速率(kon )的比率(koff /kon )為解離常數KD ，該解離常數與親和力逆相關。KD 值愈低，則抗體親和力愈高。KD 值因抗體與抗原之不同複合物而變且視kon 與koff 而定。本文所提供之抗體的解離常數KD 可以使用本文所提供的任何方法或熟習此項技術者熟知的任何其他方法測定。一個結合位點處之親和力不能始終反映抗體與抗原之間的真實相互相用力。當含有多個重複抗原決定子之複合抗原(諸如多價抗原)與含有多個結合位點之抗體接觸時，抗體與抗原在一個位點處之相互相用將增加第二個位點處的反應機率。多價抗體與抗原之間的此類多重相互作用力稱為親合力。
關於本文所述之抗體或抗原結合片段，諸如「結合至」、「特異性結合至」之術語及類似術語亦可在本文中互換地使用且係指具有特異性結合至抗原（諸如多肽）之抗原結合域之抗體。結合至或特異性結合至抗原之抗體或抗原結合域可與相關抗原發生交叉反應。在某些實施例中，結合至或特異性結合至抗原之抗體或抗原結合域與其他抗原不發生交叉反應。可藉由例如免疫分析法、Octet® 、Biacore® 或熟習此項技術者已知的其他技術鑑定結合至或特異性結合至抗原之抗體或抗原結合域。在一些實施例中，如使用諸如放射免疫分析法(RIA)及酶聯免疫吸附分析法(ELISA)之實驗技術測定，抗體或抗原結合域當以比針對任何交叉反應性抗原更高的親和力結合至抗原時，其結合至或特異性結合至抗原。典型地，特異性或選擇性反應為背景信號或雜訊的至少兩倍且可超過背景的10倍。關於結合特異性的論述，參見例如Fundamental Immunology 332-36 (Paul編, 第2版, 1989)。在某些實施例中，抗體或抗原結合域對「非目標」蛋白質之結合程度小於該抗體或抗原結合域與其特定目標抗原之結合的約10%，例如藉由螢光活化細胞分選(FACS)分析或RIA所測定。諸如「特異性結合」、「特異性結合至」或「特異性針對」之術語意謂可量測地不同於非特異性相互作用之結合。特異性結合可例如藉由與對照分子之結合對比、測定分子之結合來量測，對照分子通常為結構類似、不具有結合活性的分子。舉例而言，特異性結合可以依據與類似於目標(例如過量的未標記目標)之對照分子的競爭來測定。在此情況下，若過量的未標記目標競爭性地抑制經標記之目標結合至探針，則表示特異性結合。結合至抗原之抗體或抗原結合域包括能夠以足夠親和力結合抗原，使得抗體或抗原結合片段適用作例如靶向抗原之診斷或治療劑的抗體或抗原結合域。在某些實施例中，結合至抗原之抗體或抗原結合域的解離常數(KD )小於或等於1000 nM、800 nM、500 nM、250 nM、100 nM、50 nM、10 nM、5 nM、4 nM、3 nM、2 nM、1 nM、0.9 nM、0.8 nM、0.7 nM、0.6 nM、0.5 nM、0.4 nM、0.3 nM、0.2 nM或0.1 nM。在某些實施例中，抗體或抗原結合域結合至抗原之抗原決定基，該抗原決定基在來自不同物種之抗原中(例如在人類與食蟹獼猴物種之間)具有保守性。
「結合親和力」通常指分子(例如結合蛋白，諸如抗體)之單一結合位點與其結合搭配物(例如抗原)之間的非共價相互作用力總和。除非另外指明，否則如本文所使用，「結合親和力」係指反映結合對(例如抗體與抗原)成員之間1:1相互作用之固有結合親和力。結合分子X對其結合搭配物Y之親和力通常可由解離常數(KD )表示。可藉由此項技術中已知之常見方法(包括本文所述之方法)量測親和力。低親和力抗體一般緩慢結合抗原且傾向於容易解離，而高親和力抗體一般較快結合抗原且傾向於較長時間保持結合狀態。此項技術中已知多種量測結合親和力的方法，其中任一者可用於本發明之目的。特定說明性實施例包括以下。在一個實施例中，「KD 」或「KD 值」可藉由此項技術中已知的分析量測，例如藉由結合分析。KD 可以利用RIA量測，例如使用所關注抗體之Fab形式及其抗原進行(Chen等人,J . Mol Biol , 1999, 293:865-81)。KD 或KD 值亦可藉由使用生物層干涉量測術(BLI)或表面電漿子共振(SPR)分析、藉由Octet® (使用例如Octet®Red96系統)，或藉由Biacore® (使用例如Biacore® 2000或Biacore® 3000)來量測。「結合速率(on-rate)」或「結合速率(rate of association)」或「結合速率(association rate)」或「kon 」亦可利用上述相同的生物層干涉量測術(BLI)或表面電漿子共振(SPR)技術、使用例如Octet®Red96、Biacore® 2000或Biacore® 3000系統測定。
在某些實施例中，抗體或抗原結合片段可包含「嵌合」序列，其中重鏈及/或輕鏈之一部分與來源於特定物種或屬於特定抗體類別或子類別之抗體中之對應序列一致或同源，而該(等)鏈之其餘部分與來源於另一物種或屬於另一抗體類別或子類別之抗體以及此類抗體之片段中之對應序列一致或同源，只要其展現所需生物活性即可(參見美國專利第4,816,567號；及Morrison等人, 1984, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81:6851-55)。
在某些實施例中，抗體或抗原結合片段可包含作為嵌合抗體之非人類（例如鼠類）抗體「人類化」形式的一部分，該等嵌合抗體包括人類免疫球蛋白(例如受者抗體)，其中原生CDR殘基經來自非人類物種(諸如小鼠、大鼠、兔或非人類靈長類動物)之具有所需特異性、親和性及能力之相應CDR (例如供者抗體)的殘基置換。在一些情況下，人類免疫球蛋白之一或多個FR區殘基經相應的非人類殘基置換。此外，人類化抗體可以包含受者抗體或供者抗體中未發現之殘基。此等修飾係為了進一步改進抗體效能而達成。人類化抗體重鏈或輕鏈可以包含至少一或多個可變區中的基本上全部，其中全部或基本上全部的CDR對應於非人類免疫球蛋白之CDR且全部或基本上全部的FR為人類免疫球蛋白序列之FR。在某些實施例中，人類化抗體將包含免疫球蛋白恆定區(Fc)之至少一部分，典型地為人類免疫球蛋白之至少一部分。關於其他細節，參見Jones等人, 1986,Nature 321:522-25；Riechmann等人, 1988, Nature 332:323-29；Presta, 1992,Curr. Op. Struct. Biol. 2:593-96；Carter等人, 1992,Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:4285-89；美國專利第6,800,738號；第6,719,971號；第6,639,055號；第6,407,213號；及第6,054,297號。
在某些實施例中，抗體或抗原結合片段可包含「完全人類抗體」或「人類抗體」之部分，其中該等術語在本文中可互換使用且係指包含人類可變區及例如人類恆定區之抗體。在特定實施例中，該術語係指包含人類來源之可變區及恆定區的抗體。在某些實施例中，「完全人類」抗體亦可涵蓋結合多肽且由核酸序列編碼的抗體，該等核酸序列為人類生殖系免疫球蛋白核酸序列之天然存在之體細胞變異體。術語「完全人類抗體」包括具有對應於人類生殖系免疫球蛋白序列之可變區及恆定區的抗體，如Kabat等人所述(參見Kabat等人(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest , 第五版, 美國健康及人類服務部(U.S. Department of Health and Human Services), NIH公開號91-3242）。「人類抗體」為胺基酸序列對應於人類產生之抗體之胺基酸序列的抗體及/或已使用用於製備人類抗體之任一種技術製備的抗體。人類抗體之此定義特別排除包含非人類抗原結合殘基之人類化抗體。人類抗體可以使用此項技術中已知的各種技術產生，包括噬菌體呈現庫(Hoogenboom及Winter, 1991, J. Mol. Biol. 227:381；Marks等人, 1991, J. Mol. Biol. 222:581)及酵母展示庫(Chao等人, 2006, Nature Protocols 1: 755-68)。亦可用於製備人類單株抗體之方法描述於Cole等人,Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy 77 (1985)；Boerner等人, 1991, J. Immunol. 147(1):86-95；及van Dijk及van de Winkel, 2001, Curr. Opin. Pharmacol. 5: 368-74。人類抗體可以藉由將抗原投與轉殖基因動物(例如小鼠)來製備，該基因轉殖動物已經修飾以回應於抗原攻擊而產生此類抗體，但內源基因座已失能(關於XENOMOUSETM 技術，參見例如Jakobovits, 1995, Curr. Opin. Biotechnol. 6(5):561-66；Brüggemann及Taussing, 1997, Curr. Opin. Biotechnol. 8(4):455-58；及美國專利第6,075,181號及第6,150,584號)。關於經由人類B細胞融合瘤技術產生的人類抗體，亦參見例如Li等人, 2006, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 103:3557-62。
在某些實施例中，抗體或抗原結合片段可包含「重組人類抗體」之部分，其中該片語包括藉由重組方式製備、表現、產生或分離的人類抗體，諸如使用轉染至宿主細胞中之重組表現載體表現的抗體；自重組組合性人類抗體庫分離的抗體；自人類免疫球蛋白基因之轉殖基因及/或轉殖染色體動物(例如小鼠或乳牛)分離的抗體(參見例如Taylor, L. D.等人(1992)Nucl . Acids Res . 20:6287-6295)，或藉由任何其他方式製備、表現、產生或分離的抗體，包括將人類免疫球蛋白基因序列拼接至其他DNA序列。此類重組人類抗體可以具有來源於人類生殖系免疫球蛋白序列之可變區及恆定區(參見Kabat, E. A.等人(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest , 第五版, 美國健康及人類服務部, NIH公開號91-3242)。然而，在某些實施例中，對此類重組人類抗體進行活體外突變誘發(或，當使用人類Ig序列轉殖基因動物時，為活體內體細胞突變誘發)，且因此重組抗體之VH及VL區之胺基酸序列為雖然來源於人類生殖系VH及VL序列且與人類生殖系VH及VL序列相關、但可以天然不存在於活體內人類抗體生殖系譜系內的序列。
在某些實施例中，抗體或抗原結合片段可包含「單株抗體」之一部分，其中如本文所用，該術語係指自基本上均質抗體之群體獲得之抗體，例如除可能少量存在的可天然存在之突變以外，組成該群體之個別抗體為一致的，且各單株抗體典型地將識別抗原上之單一抗原決定基。在特定實施例中，如本文所用之「單株抗體」為由單一融合瘤或其他細胞產生之抗體。術語「單株」不限於用於製備抗體之任何特定方法。舉例而言，適用於本發明的單株抗體可以藉由首次由Kohler等人, 1975, Nature 256:495描述的融合瘤方法製備，或可以在細菌或真核動物或植物細胞中使用重組DNA方法製備(參見例如美國專利第4,816,567號)。「單株抗體」亦可使用例如Clackson等人, 1991, Nature 352:624-28及Marks等人, 1991, J. Mol. Biol., 222:581-97中所述之技術、自噬菌體抗體庫中分離。用於製備純系細胞株及由其表現之單株抗體的其他方法在此項技術中已熟知。參見例如Short Protocols in Molecular Biology (Ausubel等人編, 第5版, 2002)。
典型的4鏈抗體單元為雜四聚醣蛋白，其由兩條相同輕(L)鏈及兩條相同重(H)鏈構成。在lgG的情況下，4鏈單元通常為約150,000道爾頓。各L鏈經一個共價二硫鍵連接至H鏈，而兩條H鏈彼此經一或多個二硫鍵連接，此視H鏈同型而定。各H鏈及L鏈亦具有有規律地間隔之鏈內二硫橋鍵。各H鏈在N端具有可變域(VH)、繼之為三個恆定域(CH)(對於α及γ鏈中之每一者而言)以及四個CH域(對於μ及ε同型而言)。各L鏈在N端具有可變域(VL)，繼之為位於其另一端的恆定域(CL)。將VL與VH對齊，且將CL與重鏈之第一恆定域(CH1)對齊。咸信特定胺基酸殘基形成輕鏈與重鏈可變域之間的界面。VH與VL一起成對形成單一抗原結合位點。關於不同類抗體之結構及特性，參見例如Basic and Clinical Immunology 71 (Stites等人編, 第8版, 1994)；及Immunobiology (Janeway等人編, 第5版 2001)。
術語「Fab」或「Fab區」係指結合至抗原的抗體區域。習知IgG通常包含兩個Fab區，各存在於Y形IgG結構之兩個臂之一上。各Fab區典型地由重鏈及輕鏈中之每一者之一個可變區及一個恆定區構成。更特定言之，Fab區中之重鏈可變區及恆定區為VH及CH1區，且Fab區中之輕鏈可變區及恆定區為VL及CL區。Fab區中之VH、CH1、VL及CL可根據本發明以不同方式排列以賦予抗原結合能力。舉例而言，VH及CH1區可位於一個多肽上，且VL及CL區可位於單獨多肽上，類似於習知IgG之Fab區。或者，VH、CH1、VL及CL區皆可位於同一多肽上且以不同次序定向，如下文章節中更詳細地描述。
術語「可變區」、「可變域」、「V區」或「V域」係指抗體之輕鏈或重鏈的一部分，其通常位於輕鏈或重鏈之胺基端且在重鏈中具有約120至130個胺基酸的長度且在輕鏈中具有約100至110個胺基酸的長度，且用於各特定抗體對其特定抗原之結合及特異性。重鏈可變區可稱為「VH」。輕鏈可變區可稱為「VL」。術語「可變」係指可變區之某些區段的序列在抗體間廣為不同之事實。V區介導抗原結合且限定特定抗體對其特定抗原之特異性。然而，可變性不均勻分佈於可變區之110個胺基酸跨度內。實情為，V域由以下組成：約15-30個胺基酸之較小可變性(例如相對恆定)片段(稱為構架區(FR))，該等片段被較短的較大可變性(例如極度可變性)區域(稱為「高變區」，各約9-12個胺基酸長)分隔。重鏈及輕鏈之可變區各自包含基本上採用β片組態之四個FR，該等FR由三個高變區連接，該等高變區形成連接β片結構之環且在一些情況下形成β片結構之一部分。各鏈中之高變區藉由FR與來自其他鏈之高變區緊密結合在一起，促進抗體之抗原結合位點形成(參見例如Kabat等人,Sequences of Proteins of Immunological Interest (第5版, 1991))。恆定區不直接涉及抗體對抗原之結合，而展現多種效應功能，諸如使抗體參與抗體依賴性細胞的細胞毒性(ADCC)及補體依賴性細胞毒性(CDC)。可變區的序列在不同抗體之間廣泛不同。在特定實施例中，可變區為人類可變區。
術語「根據Kabat之可變區殘基編號」或「如Kabat中之胺基酸位置編號」及其變化形式係指上文Kabat等人中用於編譯抗體之重鏈可變區或輕鏈可變區的編號系統。使用此編號系統，實際線性胺基酸序列可以含有對應於可變域之FR或CDR之縮短或插入的較少或額外胺基酸。舉例而言，重鏈可變域可以包括位於殘基52之後的單一胺基酸插入(殘基52a，根據Kabat)及位於殘基82之後的三個插入殘基(例如殘基82a、82b及82c等，根據Kabat)。可藉由在抗體序列之同源區與「標準」Kabat編號序列比對來確定所指定抗體之殘基的Kabat編號。當提及可變域中之殘基(大致為輕鏈之殘基1-107及重鏈之殘基1-113)時，通常使用Kabat編號系統(例如Kabat等人，同上)。當提及免疫球蛋白重鏈恆定區中之殘基時，通常使用「EU編號系統」或「EU索引」(例如Kabat等人所報導的EU索引，同上)。「如Kabat中之EU索引」係指人類IgG1 EU抗體之殘基編號。已藉由例如AbM、Chothia、接觸、IMGT及AHon描述其他編號系統。
術語「重鏈」當結合抗體使用時，係指約50-70 kDa之多肽鏈，其中胺基端部分包括約120至130或更多個胺基酸之可變區，且羧基端部分包括恆定區。基於重鏈恆定區之胺基酸序列，恆定區可為五種不同類型(例如同型)之一，稱為alpha (α)、delta (δ)、epsilon (ε)、gamma (γ)及mu (µ)。不同重鏈之尺寸不同：α、δ及γ含有約450個胺基酸，而µ及ε含有約550個胺基酸。此等不同類型的重鏈當與輕鏈組合時，產生五種熟知的抗體類別(例如同型)，分別為IgA、IgD、IgE、IgG及IgM，包括IgG的四種亞類，亦即IgG1、IgG2、IgG3及IgG4。
術語「輕鏈」當結合抗體使用時，係指約25 kDa之多肽鏈，其中胺基端部分包括約100至約110個或更多個胺基酸之可變區，且羧基端部分包括包括恆定區。輕鏈之大致長度為211至217個胺基酸。基於恆定域之胺基酸序列，存在兩種不同類型，稱為kappa (κ)或lambda (λ)。
如本文所用，術語「高變區」、「HVR」、「互補決定區」及「CDR」可互換地使用。「CDR」係指免疫球蛋白(Ig或抗體) VH β片狀構架之非構架區內的三個高變區(H1、H2或H3)之一，或抗體VL β片狀構架之非構架區內的三個高變區(L1、L2或L3)之一。因此，CDR為散置於構架區序列內之可變區序列。
CDR區已為熟習此項技術者熟知且已藉由熟知編號系統定義。舉例而言，Kabat互補決定區(CDR)係基於序列可變性且最常用(參見例如Kabat等人，同上)。Chothia實際上關於結構環之位置(參見例如Chothia及Lesk, 1987, J. Mol. Biol. 196:901-17)。利用Kabat編號公約編號時，Chothia CDR-H1環的末端在H32與H34之間變化，此視環的長度而定(此原因為Kabat編號方案將插入置於H35A及H35B；若既不存在35A、亦不存在35B，則環末端位於32；若僅存在35A，則環末端位於33；若35A與35B均存在，則環末端位於34)。AbM高變區代表Kabat CDR與Chothia結構環之間的折衷，且用於Oxford Molecular的AbM抗體模型化軟體中(參見例如Antibody Engineering 第2卷(Kontermann及Dübel編, 第2版, 2010))。「接觸」高變區係基於可獲得的複雜晶體結構之分析。已開發及廣泛採用的另一種通用編號系統為ImMunoGeneTics (IMGT) Information System® (Lafranc等人, 2003, Dev. Comp. Immunol. 27(1):55-77)。IMGT為專用於人類及其他脊椎動物之免疫球蛋白(IG)、T細胞受體(TCR)及主要組織相容複合體(MHC)的整合式資訊系統。本文中，依據胺基酸序列與輕鏈或重鏈內的位置提及CDR。由於免疫球蛋白可變域結構內之CDR的「位置」在物種之間為保守的且存在於稱為環的結構中，因此使用根據結構特徵比對可變域序列的編號系統容易鑑定CDR及構架殘基。此資訊可用於將來自一個物種之免疫球蛋白之CDR殘基移植及置換至典型地來自人類抗體之受體構架中。Honegger及Plückthun, 2001, J. Mol. Biol. 309: 657-70已開發出另一種編號系統(AHon)。編號系統(包括例如Kabat編號及IMGT獨特編號系統)之間的一致性已為熟習此項技術者熟知(參見例如Kabat，同上；Chothia及Lesk，同上；Martin，同上；Lefranc等人，同上)。來自此等高變區或CDR中之每一者的殘基標註如下。表 25
環 Kabat AbM Chothia 接觸 IMGT
CDR L1 L24--L34 L24--L34 L24--L34 L30--L36 L27--L38
CDR L2 L50--L56 L50--L56 L50--L56 L46--L55 L56--L65
CDR L3 L89--L97 L89--L97 L89--L97 L89--L96 L105-L117
CDR H1 H31--H35B H26--H35B H26--H32..34 H30--H35B H27--H38
(Kabat編號)
CDR H1 H31--H35 H26--H35 H26--H32 H30--H35
(Chothia編號)
CDR H2 H50--H65 H50--H58 H52--H56 H47--H58 H56--H65
CDR H3 H95--H102 H95--H102 H95--H102 H93--H101 H105-H117
所指定CDR的邊界可根據用於鑑定的方案而變化。因此，除非另外說明，否則術語所指定抗體之「CDR」及「互補決定區」或其區域，諸如可變區，以及抗體之個別CDR (例如CDR-H1、CDR-H2)或其區域，應理解為涵蓋如依據任一上述已知方案定義之互補決定區。在一些情況下，說明用於鑑定一或多種特定CDR的方案，諸如藉由Kabat、Chothia或接觸方法所定義的CDR。在其他情況下，明示CDR的特定胺基酸序列。
高變區可以包含如下「延長的高變區」：VL中的24-36或24-34 (L1)、46-56或50-56 (L2)，及89-97或89-96 (L3)；以及VH中的26-35或26-35A (H1)、50-65或49-65 (H2)及93-102、94-102或95-102 (H3)。
術語「恆定區」或「恆定域」係指輕鏈及重鏈之羧基端部分，其不直接涉及抗體對抗原之結合，但展現多種效應功能，諸如與Fc受體之相互相用。該術語係指免疫球蛋白分子之一部分，該部分相對於該免疫球蛋白之含有抗原結合位點的另一部分(可變區)具有更保守的胺基酸序列。恆定區可以含有重鏈之CH1、CH2及CH3區以及輕鏈之CL區。
術語「構架」或「FR」殘基係指側接CDR之彼等可變區殘基。FR殘基存在於例如嵌合、人類化、人類、域抗體、雙功能抗體、線性抗體及雙特異性抗體中。FR殘基為除高變區殘基或CDR殘基之外的彼等可變域殘基。VH及VL區域中之每一者中典型地存在四個FR區。VH中之FR區為VH FR1、VH FR2、VH FR3及VH FR4 (或FR H1、FR H2、FR H3及FR H4)。VL中之FR區為VL FR1、VL FR2、VL FR3及VL FR4 (或FR L1、FR L2、FR L3及FR L4)。
在本文中，術語「Fc區」用於定義免疫球蛋白重鏈之C端區域，包括例如原生序列Fc區、重組型Fc區及變異型Fc區。儘管免疫球蛋白重鏈之Fc區之邊界可能變化，但人類IgG重鏈Fc區通常定義為位置Cys226之胺基酸殘基或Pro230至其羧基端的片段。可移除Fc區之C端離胺酸(殘基447，根據EU編號系統)，例如在抗體之製備或純化期間，或藉由以重組方式工程改造編碼抗體重鏈的核酸。因此，完整抗體之組合物可包含所有K447殘基均被移除之抗體群、K447殘基未移除之抗體群，以及含有具有及不具有K447殘基之抗體之混合物的抗體群。「功能Fc片段」具有原生序列Fc區之「效應功能」。例示性「效應功能」包括C1q結合；CDC；Fc受體結合；ADCC；吞噬作用；細胞表面受體(例如B細胞受體)之下調等。此類效應功能通常需要Fc區與結合區或結合域(例如抗體可變區或域)組合且可使用熟習此項技術者已知之各種分析法評估。「變異型Fc區」包含與原生序列Fc區之差異為至少一個胺基酸修飾(例如取代、添加或缺失)的胺基酸序列。在某些實施例中，變異型Fc區相較於原生序列Fc區或相較於親本多肽之Fc區，在原生序列Fc區中或在親本多肽之Fc區中具有至少一個胺基酸取代，例如約一個至約十個胺基酸取代，或約一個至約五個胺基酸取代。本文中，變異型Fc區與原生序列Fc區及/或親本多肽Fc區可以具有至少約80%同源性，或與其具有至少約90%同源性，例如與其具有至少約95%同源性。
當關於抗原或抗體使用時，術語「變異體」可指相較於原生或未修飾序列，包含一或多個(諸如約1至約25個、約1至約20個、約1至約15個、約1至約10個或約1至約5個)胺基酸序列取代、缺失及/或添加之肽或多肽。舉例而言，Fn14變異體可由原生Fn14胺基酸序列之一或多個(諸如約1至約25個、約1至約20個、約1至約15個、約1至約10個或約1至約5個)變化產生。亦舉例而言，抗Fn14抗體變異體可以由原生或先前未修飾之抗Fn14抗體之胺基酸序列的一或多個(諸如約1至約25個、約1至約20個、約1至約15個、約1至約10個或約1至約5個)變化產生。變異體可為天然存在的，諸如對偶基因或剪接變異體，或可以人工構築。多肽變異體可由編碼變異體之相應核酸分子製備。在特定實施例中，Fn14變異體或抗Fn14抗體變異體至少分別保持Fn14或抗Fn14抗體功能活性。在特定實施例中，抗Fn14抗體變異體結合Fn14且/或拮抗Fn14活性。在某些實施例中，變異體係由編碼Fn14或抗Fn14 抗體VH或VL區或子區域(諸如一或多個CDR)之核酸分子的單核苷酸多型性(SNP)變異體編碼。
術語「一致性」係指兩種或更多種多肽分子或兩種或更多種核酸分子之序列之間的關係，如藉由比對及比較該等序列所測定。相對於參考多肽序列之「胺基酸序列一致性百分比(%)」定義為在比對序列且引入空位(若需要)以達到最大序列一致性百分比之後，候選序列中之與參考多肽序列胺基酸殘基一致的胺基酸殘基百分比，且任何保守取代不視為序列一致性之一部分。出於測定胺基酸序列一致性百分比之目的之比對可以此項技術中之技能範圍內的各種方式達成，例如使用公開可獲得的電腦軟體，如BLAST、BLAST-2、ALIGN或MEGALIGN (DNAStar, Inc.)軟體。熟習此項技術者可確定適用於比對序列之參數，包括在所比較序列之全長內達成最大比對所需的任何算法。
胺基酸殘基/位置之「修飾」係指主要胺基酸序列相較於起始胺基酸序列之變化，其中該變化起因於涉及該等胺基酸殘基/位置之序列變異。舉例而言，典型的修飾包括殘基被另一胺基酸取代(例如保守或非保守取代)、與該殘基/位置相鄰之一或多個(例如通常少於5、4或3個)胺基酸的插入，及/或該殘基/位置之缺失。
如本文中所用，「抗原決定基」為此項技術中之術語且係指抗體或抗原結合片段可特異性結合之抗原的局部區域。抗原決定基可為線性抗原決定基或構形、非線性或不連續之抗原決定基。舉例而言，在多肽抗原之情況下，抗原決定基可為多肽之連續胺基酸(「線性」抗原決定基)或抗原決定基可包含來自多肽之兩個或更多個非連續區域的胺基酸(「構形」、「非線性」或「不連續」抗原決定基)。熟習此項技術者應瞭解，一般而言，線性抗原決定基可以或可以不依賴於二級、三級或四級結構。舉例而言，在一些實施例中，抗體結合至一組胺基酸，不論其是否摺疊成天然三維蛋白質結構。在其他實施例中，抗體需要構成抗原決定基的胺基酸殘基展現特定構形(例如彎曲、扭轉、轉彎或摺疊)以便識別及結合抗原決定基。
術語「多肽」及「肽」及「蛋白質」在本文中可互換使用且指任何長度之胺基酸聚合物。聚合物可為線性或分支的，其可以包含經修飾之胺基酸，且其可以間雜有非胺基酸。該等術語亦涵蓋已經天然修飾或藉由干預修飾之胺基酸聚合物；例如二硫鍵形成、糖基化、脂質化、乙醯化、磷酸化，或任何其他操縱或修飾。定義內亦包括例如含有胺基酸之一或多種類似物(包括(但不限於)非天然胺基酸)以及此項技術中已知之其他修飾的多肽。應理解，由於本發明之多肽可基於抗體或免疫球蛋白超家族之其他成員，因此在某些實施例中，「多肽」可以單鏈或作為兩條或更多條結合的鏈存在。
術語「載體」係指用於攜載或包括核酸序列以將核酸序列(包括例如編碼如本文所述之抗體或抗原結合片段之核酸序列)引入宿主細胞的物質。適用的載體包括例如表現載體、質體、噬菌體載體、病毒載體、游離基因體及人工染色體，其可包括可操作以穩定整合至宿主細胞染色體中的選擇序列或標記物。另外，載體可以包括一或多個可選標記物基因及適當的表現控制序列。可以包括的可選標記物基因提供例如針對抗生素或毒素的抗性、補充營養缺陷型不足，或供應培養基中不存在之關鍵營養。表現控制序列可以包括此項技術中熟知之組成型及誘導型啟動子、轉錄增強子、轉錄終止子及其類似物。當兩種或更多種核酸分子共表現(例如抗體重鏈與輕鏈或抗體VH與VL)時，兩種核酸分子均可以插入例如單一表現載體或單獨的表現載體中。對於單一載體表現而言，編碼核酸可操作地連接至一個共同表現控制序列，或連接至不同表現控制序列，諸如一個誘導型啟動子及一個組成型啟動子。可使用此項技術中熟知之方法證實核酸分子引入宿主細胞中。此類方法包括例如核酸分析，諸如北方墨點法或mRNA之聚合酶鏈反應(PCR)擴增；或基因產物表現之免疫墨點法，或測試所引入之核酸序列或其相應基因產物之表現的其他適合分析方法。熟習此項技術者應理解，核酸分子係以足以產生所需產物之量表現，且亦應理解，表現量可使用此項技術中熟知之方法最佳化以獲得足夠表現。
如本文所用，術語「宿主」係指動物，諸如哺乳動物(例如人類)。
如本文所用，術語「宿主細胞」係指可用核酸分子轉染之特定個體細胞及此類細胞之後代或潛在後代。由於繼代中可能存在的突變或環境影響或核酸分子整合至宿主細胞基因組中，因此此類細胞之後代可能與核酸分子轉染之親本細胞不相同。
「經分離之核酸」為一種核酸，例如RNA、DNA或混合型核酸，其基本上與天然伴隨原生序列之其他基因組DNA序列以及蛋白質或複合物(諸如核糖體及聚合酶)分離。「分離」的核酸分子為與存在於該核酸分子之天然來源中之其他核酸分子分離的核酸分子。此外，「分離」的核酸分子(諸如cDNA分子)可以基本上不含其他細胞材料或培養基(當藉由重組技術製備時)，或基本上不含化學前驅體或其他化學物質(當化學合成時)。在一個特定實施例中，分離或純化一或多種編碼如本文所述之抗體的核酸分子。該術語涵蓋已自天然存在之環境中移除的核酸序列，且包括重組型或經選殖之DNA分離株及化學合成類似物或生物學上藉由異源系統合成之類似物。基本上純的分子可以包括分離的分子形式。
如本文中可互換地使用，「聚核苷酸」或「核酸」係指任何長度的核苷酸聚合物且包括DNA及RNA。核苷酸可為去氧核糖核苷酸、核糖核苷酸、經修飾之核苷酸或鹼基，及/或其類似物，或可藉由DNA或RNA聚合酶或藉由合成反應併入聚合物中之任何受質。聚核苷酸可以包含經修飾之核苷酸，諸如甲基化核苷酸及其類似物。如本文所用，「寡核苷酸」係指短的、通常單股的合成聚核苷酸，其長度通常(但不一定)少於約200個核苷酸。術語「寡核苷酸」與「聚核苷酸」相互不排斥。以上關於聚核苷酸之描述同樣且完全適用於寡核苷酸。產生本發明之抗體或抗原結合片段的細胞可包括親本融合瘤細胞，以及編碼抗體之核酸已引入其中的細菌及真核宿主細胞。除非另有說明，否則本文揭示之任何單股聚核苷酸序列之左手端為5'端；雙股聚核苷酸序列之左手方向稱為5'方向。初生RNA轉錄物之5'至3'加成方向稱為轉錄方向；DNA股上具有與RNA轉錄物相同之序列且相對於RNA轉錄物5'端為5'之序列區域稱為「上游序列」；DNA股上具有與RNA轉錄物相同之序列且相對於RNA轉錄物3'端為3'之序列區域稱為「下游序列」。
如本文所用，術語「醫藥學上可接受」意謂聯邦或州政府之管制機構批准或列於美國藥典 (United States Pharmacopeia ) 、歐洲藥典 ( European Pharmacopeia ) 或其他公認藥典中用於動物，尤其人類。
「賦形劑」意謂醫藥學上可接受之材料、組合物或媒劑，諸如液體或固體填充劑、稀釋劑、溶劑或囊封材料。賦形劑包括例如囊封材料或添加劑，諸如吸收加速劑、抗氧化劑、黏合劑、緩衝劑、載劑、包衣劑、著色劑、稀釋劑、崩解劑、乳化劑、增量劑、填充劑、調味劑、保濕劑、潤滑劑、香料、防腐劑、推進劑、釋放劑、滅菌劑、甜味劑、增溶劑、濕潤劑及其混合物。術語「賦形劑」亦可指稀釋劑、佐劑(例如弗氏佐劑(Freunds' adjuvant)(完全或不完全)或媒劑。
在一些實施例中，賦形劑為醫藥學上可接受之賦形劑。醫藥學上可接受之賦形劑之實例包括緩衝劑，諸如磷酸鹽、檸檬酸鹽及其他有機酸；抗氧化劑，包括抗壞血酸；低分子量(例如少於約10個胺基酸殘基)多肽；蛋白質，諸如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白；親水性聚合物，諸如聚乙烯吡咯啶酮；胺基酸，諸如甘胺酸、麩醯胺酸、天冬醯胺、精胺酸或離胺酸；單醣、雙醣及其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合劑，諸如EDTA；糖醇，諸如甘露糖醇或山梨糖醇；成鹽相對離子，諸如鈉；及/或非離子性界面活性劑，諸如TWEEN™、聚乙二醇(PEG)及PLURONICS™。醫藥學上可接受之賦形劑之其他實例描述於Remington及Gennaro, Remington's Pharmaceutical Sciences (第18版, 1990)中。
在一個實施例中，就以下而言，各組分為「醫藥學上可接受的」：與醫藥調配物之其他成分相容且適用於與人類及動物之組織或器官接觸而無過度毒性、刺激、過敏反應、免疫原性或其他問題或併發症，與合理益處/風險比相稱。參見例如Lippincott Williams & Wilkins: Philadelphia, PA, 2005; Handbook of Pharmaceutical Excipients, 第6版; Rowe等人編; The Pharmaceutical Press and the American Pharmaceutical Association: 2009；Handbook of Pharmaceutical Additives, 第3版; Ash及Ash編; Gower Publishing Company: 2007; Pharmaceutical Preformulation and Formulation, 第2版; Gibson編; CRC Press LLC: Boca Raton, FL, 2009。在一些實施例中，醫藥學上可接受之賦形劑在所用劑量及濃度下對暴露於其之細胞或哺乳動物無毒。在一些實施例中，醫藥學上可接受之賦形劑為水性pH緩衝溶液。
在一些實施例中，賦形劑為無菌液體，諸如水及油，包括石油、動物、植物或合成來源之油，諸如花生油、大豆油、礦物油、芝麻油及其類似物。靜脈內投與組合物(例如醫藥組合物)時，水為例示性賦形劑。亦可使用生理鹽水溶液及右旋糖水溶液及甘油溶液作為液體賦形劑，尤其用於可注射溶液。賦形劑亦可包括澱粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明膠、麥芽、稻穀、麵粉、白堊、矽膠、硬脂酸鈉、單硬脂酸甘油酯、滑石、氯化鈉、脫脂乳粉、甘油、丙烯、二醇、水、乙醇及其類似物。必要時，組合物亦可含有少量濕潤劑或乳化劑，或pH緩衝劑。組合物可呈溶液、懸浮液、乳液、錠劑、丸劑、膠囊、散劑、持續釋放調配物及其類似物之形式。口服組合物(包括調配物)可以包括標準賦形劑，諸如醫藥級甘露糖醇、乳糖、澱粉、硬脂酸鎂、鈉糖精、纖維素、碳酸鎂等。
組合物，包括醫藥化合物，可含有抗體或抗原結合片段(例如呈分離或純化之形式)，以及適量賦形劑。
如本文所用，術語「有效量」或「治療有效量」係指足以產生所需結果之本文所提供抗體或抗原結合片段或醫藥組合物的量。
術語「個體」與「患者」可互換使用。如本文所用，在某些實施例中，個體為哺乳動物，諸如非靈長類動物(例如乳牛、豬、馬、貓、犬、大鼠等)或靈長類動物(例如猴及人類)。在特定實施例中，個體為人類。在一個實施例中，個體為哺乳動物，例如診斷患有病狀或病症的人類。在另一實施例中，個體為哺乳動物，例如處於產生病狀或病症之風險中的人類。
「投與」或「投藥」係指將如存在於體外之物質注射或以其他方式物理性地遞送至患者之動作，諸如藉由黏膜、皮內、靜脈內、肌肉內、皮下遞送，及/或本文所述或此項技術中已知的任何其他物理學遞送方法。
如本文所用，術語「治療(treat/treatment/treating)」係指疾病或病狀之進展、嚴重程度及/或持續時間因投與一或多種療法而減少或改善。治療可如下確定：評估與潛在病症相關之一或多種症狀是否已減少、緩解及/或緩和，從而觀測到患者之改善，儘管患者可能仍罹患該潛在病症。術語「治療」包括管理與改善疾病。術語「管理(manage/managing/management)」係指個體自療法獲得之有利作用，其未必引起疾病治癒。
術語「預防(prevent/preventing/prevention)」係指減少疾病、病症、病狀或相關症狀發作(或復發)的可能性。
術語「約」或「大約」意謂在指定值或範圍的20%以內、15%以內、10%以內、9%以內、8%以內、7%以內、6%以內、5%以內、4%以內、3%以內、2%以內、1%或更小值以內。
除非上下文另有明確規定，否則如本發明及申請專利範圍中所用，單數形式「一(a/an)」及「該(the)」包括複數形式。
應理解，每當在本文中用術語「包含」描述實施例時，亦提供用術語「由……組成」及/或「基本上由……組成」描述之另外類似的實施例。亦應理解，每當在本文中用片語「基本上由……組成」描述實施例時，亦提供用術語「由……組成」描述之另外類似的實施例。
如在諸如「在A與B之間」或「在A-B之間」之片語中使用的術語「在……之間」係指包括A與B之範圍。
如本文中在諸如「A及/或B」之片語中所使用的術語「及/或」意欲包括A與B；A或B；A (單獨)；及B(單獨)。同樣，諸如「A、B及/或C」之片語中所用之術語「及/或」意欲涵蓋以下實施例中之每一者：A、B及C；A、B或C；A或C；A或B；B或C；A及C；A及B；B及C；A (單獨)；B (單獨)；及C (單獨)。5.2 抗 Fn14 抗體及相關分子 5.2.1 抗 Fn14 抗體
本文所提供之抗體包括(但不限於)合成抗體、單株抗體、以重組方式產生之抗體、多特異性抗體(包括雙特異性抗體)、人類抗體、人類化抗體、嵌合抗體、胞內抗體、單鏈Fv (scFv)(例如包括單特異性、雙特異性等)、駱駝化抗體、Fab片段、F(ab')片段、二硫鍵連接的Fv (sdFv)、抗個體基因型(anti-Id)抗體及上述任一者之抗原決定基結合片段。
特定言之，本文所提供之抗體包括免疫球蛋白分子及免疫球蛋白分子之免疫活性部分，亦即含有免疫特異性結合至Fn14抗原之抗原結合位點的分子。本文所提供之免疫球蛋白分子可為免疫球蛋白分子之任何類型(例如IgG、IgE、IgM、IgD、IgA及IgY)、類別(例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1及IgA2)或子類。在一個特定實施例中，本文所提供之抗體為IgG抗體，諸如IgG1抗體、IgG2抗體或IgG4抗體(例如IgG4剔除型抗體及IgG4抗體變異體)。
抗體之變異體及衍生物包括保持特異性結合至抗原決定基之能力的抗體片段。例示性片段包括Fab片段(含有抗原結合域且包含藉由二硫鍵橋連之輕鏈與重鏈一部分的抗體片段)；Fab' (含有單一抗結合域、包含經由鉸鏈區連接之Fab與重鏈之另一部分的抗體片段)；F(ab')2 (藉由重鏈鉸鏈區中之鏈間二硫鍵連接的兩個Fab'分子；Fab'分子可以針對相同或不同抗原決定基)；雙特異性Fab (具有兩個抗原結合域的Fab分子，其中之每一者可以針對不同抗原決定基)；包含可變區的單鏈Fab鏈，亦稱為scFv (抗體之單一輕鏈及重鏈的可變、抗原結合決定區，其藉由10-25個胺基酸之鏈連在一起)；二硫鍵連接的Fv，或dsFv (抗體之單一輕鏈與重鏈的可變、抗原結合決定區，其藉由二硫鍵連在一起)；駱駝化VH (抗體之單一重鏈的可變、抗原結合決定區，其中VH界面處的一些胺基酸為天然存在之駱駝抗體之重鏈中所發現的彼等胺基酸)；雙特異性scFv (具有兩個抗原結合域的scFv或dsFv分子，其中之每一者可以針對不同抗原決定基)；雙功能抗體(當第一scFv之VH域與第二scFv之VL域組裝以及第一scFv之VL域與第二scFv之VH域組裝時形成的二聚scFv；雙功能抗體的兩個抗原結合區可以針對相同或不同抗原決定基)；三功能抗體(以類似於雙功能抗體之方式形成的三聚scFv，但其中在單一複合物中產生三個抗原結合域；該等三個抗原結合域可以針對相同或不同抗原決定基)；以及四功能抗體(以類似於雙功能抗體之方式形成的四聚scFv，但其中在單一複合物中產生四個抗原結合域；該等四個抗原結合域可以針對相同或不同抗原決定基)。抗體衍生物亦包括抗體組合位點之一或多個CDR序列。當存在兩個或更多個CDR序列時，CDR序列可在支架上連接在一起。在某些實施例中，本文所提供之抗體包含單鏈Fv (「scFv」)。scFv為包含抗體VH及VL域之抗體片段，其中此等域存在於單一多肽鏈中。一般而言，scFv多肽進一步包含介於VH與VL域之間的多肽連接子，其使得scFv能夠形成用於抗原結合的所需結構。關於scFv之評述，參見Pluckthun於The Pharmacology of Monoclonal Antibodies , 第113卷, Rosenburg及Moore編, Springer-Verlag, New York, 第269-315頁(1994)。
本文所提供之抗體可以來自任何動物來源，包括鳥類及哺乳動物(例如人類、猴、鼠類、驢、綿羊、兔、山羊、天竺鼠、駱駝、馬或雞)。在某些實施例中，本文所提供之抗體為人類或人類化單株抗體。如本文所用，「人類」抗體包括具有人類免疫球蛋白之胺基酸序列的抗體且包括自人類免疫球蛋白庫或自表現來自人類基因之抗體之小鼠中分離出的抗體。
在某些實施例中，抗體為完全小鼠抗體。在某些實施例中，抗體為小鼠-人類嵌合抗體。在某些實施例中，抗體為人類化抗體。在某些實施例中，抗體為完全人類抗體，諸如免疫特異性結合Fn14多肽、Fn14多肽片段或Fn14抗原決定基的完全人類抗體。在其他實施例中，本文所提供之抗體為結合Fn14 (包括Fn14多肽、Fn14多肽片段或Fn14抗原決定基)的人類化抗體(例如包含人類恆定區及構架區)。
本文所提供之抗體可具單特異性、雙特異性、三特異性或更多特異性。舉例而言，在某些實施例中，雙特異性抗體對Fn14多肽之一個抗原決定基具有一種特異性且對Fn14多肽之第二抗原決定基具有第二特異性。在其他實施例中，雙特異性抗體具有一種針對Fn14多肽的特異性以及針對異源抗原決定基(諸如異源多肽或固體載體材料)的第二特異性。
在某些實施例中，本文所提供之抗體結合至人類Fn14。在其他實施例中，本文所提供之抗體結合至食蟹獼猴Fn14。在又其他實施例中，本文所提供之抗體結合至大鼠Fn14。在又其他實施例中，本文所提供之抗體結合至小鼠Fn14。在又其他實施例中，本文所提供之抗體結合至人類、食蟹獼猴、大鼠及小鼠Fn14。
除非另有說明，否則術語「Fn14」及「Fn14多肽」涵蓋來自任何脊椎動物來源(包括哺乳動物，諸如靈長類動物(例如人類及食蟹獼猴(cynomolgus macaque))、犬及嚙齒動物(例如小鼠及大鼠))之多肽(「多肽」及「蛋白質」在本文中可互換地使用），包括任何原生多肽。術語「Fn14」亦涵蓋「全長」的未處理Fn14，以及細胞內或細胞外處理而產生之Fn14之任何形式。「相關Fn14多肽」包括可以保持Fn14活性的對偶基因變異體(例如SNP變異體)；剪接變異體；片段；衍生物；取代、缺失及插入變異體；融合多肽；種間同源物；以及種間嵌合體。如熟習此項技術者將瞭解，本文所提供之抗Fn14抗體可結合至Fn14多肽、Fn14多肽片段、Fn14抗原及/或Fn14抗原決定基。「抗原決定基」可為較大Fn14抗原之一部分，可為較大Fn14多肽片段之一部分，該部分又可為較大Fn14多肽之一部分。Fn14可以原生或變性形式存在。本文所述之Fn14多肽可自多種來源分離，諸如自人類組織類型或自另一來源分離，或藉由重組或合成方法製備。此項技術中亦熟知Fn14多肽之直系同源物。
實例1中之表13列舉例示性人類、食蟹獼猴、大鼠及小鼠Fn14胺基酸及核苷酸序列。在一些實施例中，本文所提供之抗體結合SEQ ID NO: 2之肽或其片段。在一些實施例中，本文所提供之抗體結合SEQ ID NO: 4之肽或其片段。在其他實施例中，本文所提供之抗體結合SEQ ID NO: 6之肽或其片段。在其他實施例中，本文所提供之抗體結合SEQ ID NO: 8之肽或其片段。在其他實施例中，本文所提供之抗體結合SEQ ID NO: 10之肽或其片段。
在一些實施例中，本文提供之抗體或抗原結合片段結合至胺基酸序列為SEQ ID NO: 2之人類Fn14的胺基酸殘基30-50。在一些實施例中，本文提供之抗體或抗原結合片段結合至包含APGTAPCSRGSSWSADLDKCM之胺基酸序列(SEQ ID NO: 182)的亞域1。在一些實施例中，本文提供之抗體或抗原結合片段與選自由以下組成之群之人類Fn14蛋白的一或多個胺基酸殘基相互作用：Gly32、Thr33、Ala34、Pro35、Trp42、Ala44、Asp45、Leu46、Asp47、Lys48、Cys49或其組合。
在一些實施例中，本文提供之抗體或抗原結合片段以小於1000 nM之KD 結合Fn14。在一些實施例中，本文提供之抗體或抗原結合片段以小於100 nM之KD 結合Fn14。在一些實施例中，本文提供之抗體或抗原結合片段以小於50 nM之KD 結合Fn14。在一些實施例中，本文提供之抗體或抗原結合片段以小於40 nM之KD 結合Fn14。在一些實施例中，本文提供之抗體或抗原結合片段以小於30 nM之KD 結合Fn14。在一些實施例中，本文提供之抗體或抗原結合片段以小於20 nM之KD 結合Fn14。在一些實施例中，本文提供之抗體或抗原結合片段以小於10 nM之KD 結合Fn14。在一些實施例中，本文提供之抗體或抗原結合片段以小於9 nM之KD 結合Fn14。在一些實施例中，本文提供之抗體或抗原結合片段以小於8 nM之KD 結合Fn14。在一些實施例中，本文提供之抗體或抗原結合片段以小於7 nM之KD 結合Fn14。在一些實施例中，本文提供之抗體或抗原結合片段以小於6 nM之KD 結合Fn14。在一些實施例中，本文提供之抗體或抗原結合片段以小於5 nM之KD 結合Fn14。在一些實施例中，本文提供之抗體或抗原結合片段以小於4 nM之KD 結合Fn14。在一些實施例中，本文提供之抗體或抗原結合片段以小於3 nM之KD 結合Fn14。在一些實施例中，本文提供之抗體或抗原結合片段以小於2 nM之KD 結合Fn14。在一些實施例中，本文提供之抗體或抗原結合片段以小於1 nM之KD 結合Fn14。在一些實施例中，本文提供之抗體或抗原結合片段以小於0.1 nM之KD 結合Fn14。在一些實施例中，本文提供之抗體或抗原結合片段以小於0.01 nM之KD 結合Fn14。KD 或KD 值亦可藉由此項技術中已知的任何方法量測，例如使用生物層干涉量測術(BLI)或表面電漿子共振(SPR)分析，藉由Octet® (使用例如Octet®Red96系統)，或藉由Biacore® (使用例如Biacore®TM-2000或Biacore®TM-3000)量測。「結合速率(on-rate)」或「結合之速率(rate of association)」或「結合速率(association rate)」或「kon」亦可利用上述相同的生物層干涉量測術(BLI)或表面電漿子共振(SPR)技術、使用例如Octet®Red96、Biacore®TM-2000或Biacore®TM-3000系統測定。在一個特定實施例中，藉由Biacore®分析測定KD 。 在一些實施例中，Fn14為人類Fn14。在一些實施例中，Fn14為食蟹獼猴Fn14。在一些實施例中，Fn14為大鼠Fn14。在其他實施例中，Fn14為小鼠Fn14。
在一些實施例中，如表面電漿子共振方法(例如Biacore®分析)所測定，本文提供之抗體或抗原結合片段以小於100 nM的KD 結合人類Fn14；如表面電漿子共振方法(例如Biacore®分析)所測定，抗體或抗原結合片段以小於100 nM的KD 結合食蟹獼猴Fn14；如表面電漿子共振方法(例如Biacore®分析)所測定，抗體或抗原結合片段以小於100 nM的KD 結合大鼠Fn14；且如表面電漿子共振方法(例如Biacore®分析)所測定，抗體或抗原結合片段以小於100 nM的KD 結合小鼠Fn14。
在一些實施例中，如表面電漿子共振方法(例如Biacore®分析)所測定，本文提供之抗體或抗原結合片段以小於90 nM的KD 結合人類Fn14；如表面電漿子共振方法(例如Biacore®分析)所測定，抗體或抗原結合片段以小於90 nM的KD 結合食蟹獼猴Fn14；如表面電漿子共振方法(例如Biacore®分析)所測定，抗體或抗原結合片段以小於90 nM的KD 結合大鼠Fn14；且如表面電漿子共振方法(例如Biacore®分析)所測定，抗體或抗原結合片段以小於90 nM的KD 結合小鼠Fn14。
在一些實施例中，如表面電漿子共振方法(例如Biacore®分析)所測定，本文提供之抗體或抗原結合片段以小於80 nM的KD 結合人類Fn14；如表面電漿子共振方法(例如Biacore®分析)所測定，抗體或抗原結合片段以小於80 nM的KD 結合食蟹獼猴Fn14；如表面電漿子共振方法(例如Biacore®分析)所測定，抗體或抗原結合片段以小於80 nM的KD 結合大鼠Fn14；且如表面電漿子共振方法(例如Biacore®分析)所測定，抗體或抗原結合片段以小於80 nM的KD 結合小鼠Fn14。
在一些實施例中，如表面電漿子共振方法(例如Biacore®分析)所測定，本文提供之抗體或抗原結合片段以小於70 nM的KD 結合人類Fn14；如表面電漿子共振方法(例如Biacore®分析)所測定，抗體或抗原結合片段以小於70 nM的KD 結合食蟹獼猴Fn14；如表面電漿子共振方法(例如Biacore®分析)所測定，抗體或抗原結合片段以小於70 nM的KD 結合大鼠Fn14；且如表面電漿子共振方法(例如Biacore®分析)所測定，抗體或抗原結合片段以小於70 nM的KD 結合小鼠Fn14。
在一些實施例中，如表面電漿子共振方法(例如Biacore®分析)所測定，本文提供之抗體或抗原結合片段以小於60 nM的KD 結合人類Fn14；如表面電漿子共振方法(例如Biacore®分析)所測定，抗體或抗原結合片段以小於60 nM的KD 結合食蟹獼猴Fn14；如表面電漿子共振方法(例如Biacore®分析)所測定，抗體或抗原結合片段以小於60 nM的KD 結合大鼠Fn14；且如表面電漿子共振方法所測定，抗體或抗原結合片段以小於60 nM的KD 結合小鼠Fn14(例如Biacore®分析)。
在一些實施例中，如表面電漿子共振方法(例如Biacore®分析)所測定，本文提供之抗體或抗原結合片段以小於50 nM的KD 結合人類Fn14；如表面電漿子共振方法(例如Biacore®分析)所測定，抗體或抗原結合片段以小於50 nM的KD 結合食蟹獼猴Fn14；如表面電漿子共振方法(例如Biacore®分析)所測定，抗體或抗原結合片段以小於50 nM的KD 結合大鼠Fn14；且如表面電漿子共振方法(例如Biacore®分析)所測定，抗體或抗原結合片段以小於50 nM的KD 結合小鼠Fn14。
在一些實施例中，如表面電漿子共振方法(例如Biacore®分析)所測定，本文提供之抗體或抗原結合片段以小於40 nM的KD 結合人類Fn14；如表面電漿子共振方法(例如Biacore®分析)所測定，抗體或抗原結合片段以小於40 nM的KD 結合食蟹獼猴Fn14；如表面電漿子共振方法(例如Biacore®分析)所測定，抗體或抗原結合片段以小於40 nM的KD 結合大鼠Fn14；且如表面電漿子共振方法(例如Biacore®分析)所測定，抗體或抗原結合片段以小於40 nM的KD 結合小鼠Fn14。
在一些實施例中，如表面電漿子共振方法(例如Biacore®分析)所測定，本文提供之抗體或抗原結合片段以小於30 nM的KD 結合人類Fn14；如表面電漿子共振方法(例如Biacore®分析)所測定，抗體或抗原結合片段以小於30 nM的KD 結合食蟹獼猴Fn14；如表面電漿子共振方法(例如Biacore®分析)所測定，抗體或抗原結合片段以小於30 nM的KD 結合大鼠Fn14；且如表面電漿子共振方法(例如Biacore®分析)所測定，抗體或抗原結合片段以小於30 nM的KD 結合小鼠Fn14。
在一些實施例中，如表面電漿子共振方法(例如Biacore®分析)所測定，本文提供之抗體或抗原結合片段以小於20 nM的KD 結合人類Fn14；如表面電漿子共振方法(例如Biacore®分析)所測定，抗體或抗原結合片段以小於20 nM的KD 結合食蟹獼猴Fn14；如表面電漿子共振方法(例如Biacore®分析)所測定，抗體或抗原結合片段以小於20 nM的KD 結合大鼠Fn14；且如表面電漿子共振方法(例如Biacore®分析)所測定，抗體或抗原結合片段以小於20 nM的KD 結合小鼠Fn14。
在一些實施例中，如表面電漿子共振方法(例如Biacore®分析)所測定，本文提供之抗體或抗原結合片段以小於10 nM的KD 結合人類Fn14；如表面電漿子共振方法(例如Biacore®分析)所測定，抗體或抗原結合片段以小於10 nM的KD 結合食蟹獼猴Fn14；如表面電漿子共振方法(例如Biacore®分析)所測定，抗體或抗原結合片段以小於10 nM的KD 結合大鼠Fn14；且如表面電漿子共振方法(例如Biacore®分析)所測定，抗體或抗原結合片段以小於10 nM的KD 結合小鼠Fn14。
在一些實施例中，如表面電漿子共振方法(例如Biacore®分析)所測定，本文提供之抗體或抗原結合片段以小於9 nM的KD 結合人類Fn14；如表面電漿子共振方法(例如Biacore®分析)所測定，抗體或抗原結合片段以小於9 nM的KD 結合食蟹獼猴Fn14；如表面電漿子共振方法(例如Biacore®分析)所測定，抗體或抗原結合片段以小於9 nM的KD 結合大鼠Fn14；且如表面電漿子共振方法(例如Biacore®分析)所測定，抗體或抗原結合片段以小於9 nM的KD 結合小鼠Fn14。
在一些實施例中，如表面電漿子共振方法(例如Biacore®分析)所測定，本文提供之抗體或抗原結合片段以小於8 nM的KD 結合人類Fn14；如表面電漿子共振方法(例如Biacore®分析)所測定，抗體或抗原結合片段以小於8 nM的KD 結合食蟹獼猴Fn14；如表面電漿子共振方法(例如Biacore®分析)所測定，抗體或抗原結合片段以小於8 nM的KD 結合大鼠Fn14；且如表面電漿子共振方法(例如Biacore®分析)所測定，抗體或抗原結合片段以小於8 nM的KD 結合小鼠Fn14。
在一些實施例中，如表面電漿子共振方法(例如Biacore®分析)所測定，本文提供之抗體或抗原結合片段以小於7 nM的KD 結合人類Fn14；如表面電漿子共振方法(例如Biacore®分析)所測定，抗體或抗原結合片段以小於7 nM的KD 結合食蟹獼猴Fn14；如表面電漿子共振方法(例如Biacore®分析)所測定，抗體或抗原結合片段以小於7 nM的KD 結合大鼠Fn14；且如表面電漿子共振方法(例如Biacore®分析)所測定，抗體或抗原結合片段以小於7 nM的KD 結合小鼠Fn14。
在一些實施例中，如表面電漿子共振方法(例如Biacore®分析)所測定，本文提供之抗體或抗原結合片段以小於6 nM的KD 結合人類Fn14；如表面電漿子共振方法(例如Biacore®分析)所測定，抗體或抗原結合片段以小於6 nM的KD 結合食蟹獼猴Fn14；如表面電漿子共振方法(例如Biacore®分析)所測定，抗體或抗原結合片段以小於6 nM的KD 結合大鼠Fn14；且如表面電漿子共振方法(例如Biacore®分析)所測定，抗體或抗原結合片段以小於6 nM的KD 結合小鼠Fn14。
在一些實施例中，如表面電漿子共振方法(例如Biacore®分析)所測定，本文提供之抗體或抗原結合片段以小於5 nM的KD 結合人類Fn14；如表面電漿子共振方法(例如Biacore®分析)所測定，抗體或抗原結合片段以小於5 nM的KD 結合食蟹獼猴Fn14；如表面電漿子共振方法(例如Biacore®分析)所測定，抗體或抗原結合片段以小於5 nM的KD 結合大鼠Fn14；且如表面電漿子共振方法(例如Biacore®分析)所測定，抗體或抗原結合片段以小於5 nM的KD 結合小鼠Fn14。
在一些實施例中，如表面電漿子共振方法(例如Biacore®分析)所測定，本文提供之抗體或抗原結合片段以小於4 nM的KD 結合人類Fn14；如表面電漿子共振方法(例如Biacore®分析)所測定，抗體或抗原結合片段以小於4 nM的KD 結合食蟹獼猴Fn14；如表面電漿子共振方法(例如Biacore®分析)所測定，抗體或抗原結合片段以小於4 nM的KD 結合大鼠Fn14；且如表面電漿子共振方法(例如Biacore®分析)所測定，抗體或抗原結合片段以小於4 nM的KD 結合小鼠Fn14。
在一些實施例中，如表面電漿子共振方法(例如Biacore®分析)所測定，本文提供之抗體或抗原結合片段以小於3 nM的KD 結合人類Fn14；如表面電漿子共振方法(例如Biacore®分析)所測定，抗體或抗原結合片段以小於3 nM的KD 結合食蟹獼猴Fn14；如表面電漿子共振方法(例如Biacore®分析)所測定，抗體或抗原結合片段以小於3 nM的KD 結合大鼠Fn14；且如表面電漿子共振方法(例如Biacore®分析)所測定，抗體或抗原結合片段以小於3 nM的KD 結合小鼠Fn14。
在一些實施例中，如表面電漿子共振方法(例如Biacore®分析)所測定，本文提供之抗體或抗原結合片段以小於2 nM的KD 結合人類Fn14；如表面電漿子共振方法(例如Biacore®分析)所測定，抗體或抗原結合片段以小於2 nM的KD 結合食蟹獼猴Fn14；如表面電漿子共振方法(例如Biacore®分析)所測定，抗體或抗原結合片段以小於2 nM的KD 結合大鼠Fn14；且如表面電漿子共振方法(例如Biacore®分析)所測定，抗體或抗原結合片段以小於2 nM的KD 結合小鼠Fn14。
在一些實施例中，如表面電漿子共振方法(例如Biacore®分析)所測定，本文提供之抗體或抗原結合片段以小於1 nM的KD 結合人類Fn14；如表面電漿子共振方法(例如Biacore®分析)所測定，抗體或抗原結合片段以小於1 nM的KD 結合食蟹獼猴Fn14；如表面電漿子共振方法(例如Biacore®分析)所測定，抗體或抗原結合片段以小於1 nM的KD 結合大鼠Fn14；且如表面電漿子共振方法(例如Biacore®分析)所測定，抗體或抗原結合片段以小於1 nM的KD 結合小鼠Fn14。
在一些實施例中，如表面電漿子共振方法(例如Biacore®分析)所測定，本文提供之抗體或抗原結合片段以小於0.5 nM的KD 結合人類Fn14；如表面電漿子共振方法(例如Biacore®分析)所測定，抗體或抗原結合片段以小於0.5 nM的KD 結合食蟹獼猴Fn14；如表面電漿子共振方法(例如Biacore®分析)所測定，抗體或抗原結合片段以小於0.5 nM的KD 結合大鼠Fn14；且如表面電漿子共振方法(例如Biacore®分析)所測定，抗體或抗原結合片段以小於0.5 nM的KD 結合小鼠Fn14。
在一些實施例中，如表面電漿子共振方法(例如Biacore®分析)所測定，本文提供之抗體或抗原結合片段以小於0.1 nM的KD 結合人類Fn14；如表面電漿子共振方法(例如Biacore®分析)所測定，抗體或抗原結合片段以小於0.1 nM的KD 結合食蟹獼猴Fn14；如表面電漿子共振方法(例如Biacore®分析)所測定，抗體或抗原結合片段以小於0.1 nM的KD 結合大鼠Fn14；且如表面電漿子共振方法(例如Biacore®分析)所測定，抗體或抗原結合片段以小於0.1 nM的KD 結合小鼠Fn14。
在一些實施例中，如表面電漿子共振方法(例如Biacore®分析)所測定，本文提供之抗體或抗原結合片段以小於0.01 nM的KD 結合人類Fn14；如表面電漿子共振方法(例如Biacore®分析)所測定，抗體或抗原結合片段以小於0.01 nM的KD 結合食蟹獼猴Fn14；如表面電漿子共振方法(例如Biacore®分析)所測定，抗體或抗原結合片段以小於0.01 nM的KD 結合大鼠Fn14；且如表面電漿子共振方法(例如Biacore®分析)所測定，抗體或抗原結合片段以小於0.01 nM的KD 結合小鼠Fn14。
在一些實施例中，如表面電漿子共振方法(例如Biacore®分析)所測定，本文提供之抗體或抗原結合片段以1 nM至0.001 nM的KD 結合人類Fn14；如表面電漿子共振方法(例如Biacore®分析)所測定，抗體或抗原結合片段以1 nM至0.001 nM的KD 結合食蟹獼猴Fn14；如表面電漿子共振方法(例如Biacore®分析)所測定，抗體或抗原結合片段以1 nM至0.001 nM的KD 結合大鼠Fn14；且如表面電漿子共振方法(例如Biacore®分析)所測定，抗體或抗原結合片段以1 nM至0.001 nM的KD 結合小鼠Fn14。
在一個態樣中，本文提供特異性結合至Fn14且可調節Fn14活性及/或表現(例如，抑制Fn14介導之信號傳導)的抗體。在某些實施例中，本文提供Fn14拮抗劑，其為特異性結合至Fn14且抑制(包括部分抑制)至少一種Fn14活性之本文所述抗體。在一些實施例中，本文所提供之抗體抑制(包括部分抑制或減少) Fn14對其配位體之結合。
Fn14活性可與Fn14之任何活性有關，諸如此項技術中已知或所述之彼等活性。在某些實施例中，Fn14活性與Fn14信號傳導(或Fn14介導之信號傳導)在本文中可互換地使用。在某些態樣中，Fn14活性係藉由TWEAK誘導(例如經由Fn14結合至TWEAK)。在某些實施例中，本文提供的抗體特異性結合至Fn14且抑制(或減少)趨化因子及/或細胞介素產生。在一些實施例中，本文所提供之抗體不抑制Fn14對TWEAK之結合，但仍然抑制或減少Fn14介導或TWEAK介導之信號傳導。
在某些實施例中，本文所述之抗體減弱(例如部分地減弱) Fn14活性。在一些實施例中，本文所提供之抗體使Fn14活性減弱至少約10%。在一些實施例中，本文所提供之抗體使Fn14活性減弱至少約20%。在一些實施例中，本文所提供之抗體使Fn14活性減弱至少約30%。在一些實施例中，本文所提供之抗體使Fn14活性減弱至少約40%。在一些實施例中，本文所提供之抗體使Fn14活性減弱至少約50%。在一些實施例中，本文所提供之抗體使Fn14活性減弱至少約60%。在一些實施例中，本文所提供之抗體使Fn14活性減弱至少約70%。在一些實施例中，本文所提供之抗體使Fn14活性減弱至少約80%。在一些實施例中，本文所提供之抗體使Fn14活性減弱至少約90%。在一些實施例中，本文所提供之抗體使Fn14活性減弱至少約95%。在某些實施例中，本文所述之抗體可使Fn14活性減弱(例如部分減弱)至少約15%至約65%。在某些實施例中，本文所述之抗體可使Fn14活性減弱(例如部分減弱)至少約20%至約65%。在某些實施例中，本文所述之抗體可使Fn14活性減弱(例如部分減弱)至少約30%至約65%。
在特定實施例中，Fn14活性之減弱係藉由本文所述之方法評估。在特定實施例中，Fn14活性之減弱係藉由熟習此項技術者已知之方法評估。在某些實施例中，Fn14活性之減弱係相對於在任何抗Fn14抗體不存在下、在刺激存在下的Fn14活性。在某些實施例中，Fn14活性之減弱係相對於在無關抗體(例如不特異性結合至Fn14的抗體)存在下、在刺激存在下的Fn14活性。
Fn14活性之非限制性實例為Fn14介導之信號傳導。因此，在某些實施例中，本文所述之抗體使Fn14介導之信號傳導減弱(例如部分減弱)。在一些實施例中，本文所提供之抗體使Fn14介導之信號傳導減弱至少約10%。在一些實施例中，本文所提供之抗體使Fn14介導之信號傳導減弱至少約20%。在一些實施例中，本文所提供之抗體使Fn14介導之信號傳導減弱至少約30%。在一些實施例中，本文所提供之抗體使Fn14介導之信號傳導減弱至少約40%。在一些實施例中，本文所提供之抗體使Fn14介導之信號傳導減弱至少約50%。在一些實施例中，本文所提供之抗體使Fn14介導之信號傳導減弱至少約60%。在一些實施例中，本文所提供之抗體使Fn14介導之信號傳導減弱至少約70%。在一些實施例中，本文所提供之抗體使Fn14介導之信號傳導減弱至少約80%。在一些實施例中，本文所提供之抗體使Fn14介導之信號傳導減弱至少約90%。在一些實施例中，本文所提供之抗體使Fn14介導之信號傳導減弱至少約95%。在某些實施例中，本文所述之抗體可使Fn14介導之信號傳導減弱(例如部分減弱)至少約15%至約65%。在某些實施例中，本文所述之抗體可使Fn14介導之信號傳導減弱(例如部分減弱)至少約20%至約65%。在某些實施例中，本文所述之抗體可使Fn14介導之信號傳導減弱(例如部分減弱)至少約30%至約65%。
Fn14活性之另一非限制性實例為結合至TWEAK。因此，在某些實施例中，本文所述之抗體減弱(例如部分減弱)Fn14對TWEAK的結合。在一些實施例中，本文所提供之抗體使Fn14對TWEAK的結合減弱至少約10%。在一些實施例中，本文所提供之抗體使Fn14對TWEAK的結合減弱至少約20%。在一些實施例中，本文所提供之抗體使Fn14對TWEAK的結合減弱至少約30%。在一些實施例中，本文所提供之抗體使Fn14對TWEAK的結合減弱至少約40%。在一些實施例中，本文所提供之抗體使Fn14對TWEAK的結合減弱至少約50%。在一些實施例中，本文所提供之抗體使Fn14對TWEAK的結合減弱至少約60%。在一些實施例中，本文所提供之抗體使Fn14對TWEAK的結合減弱至少約70%。在一些實施例中，本文所提供之抗體使Fn14對TWEAK的結合減弱至少約80%。在一些實施例中，本文所提供之抗體使Fn14對TWEAK的結合減弱至少約90%。在一些實施例中，本文所提供之抗體使Fn14對TWEAK的結合減弱至少約95%。在某些實施例中，本文所述之抗體可使Fn14對TWEAK的結合減弱(例如部分減弱)至少約15%至約65%。在某些實施例中，本文所述之抗體可使Fn14對TWEAK的結合減弱(例如部分減弱)至少約20%至約65%。在某些實施例中，本文所述之抗體可使Fn14對TWEAK的結合減弱(例如部分減弱)至少約30%至約65%。
Fn14活性之另一非限制性實例為TWEAK介導之信號傳導。因此，在某些實施例中，本文所述之抗體減弱(例如部分減弱) TWEAK介導之信號傳導。在一些實施例中，本文所提供之抗體使TWEAK介導之信號傳導減弱至少約10%。在一些實施例中，本文所提供之抗體使TWEAK介導之信號傳導減弱至少約20%。在一些實施例中，本文所提供之抗體使TWEAK介導之信號傳導減弱至少約30%。在一些實施例中，本文所提供之抗體使TWEAK介導之信號傳導減弱至少約40%。在一些實施例中，本文所提供之抗體使TWEAK介導之信號傳導減弱至少約50%。在一些實施例中，本文所提供之抗體使TWEAK介導之信號傳導減弱至少約60%。在一些實施例中，本文所提供之抗體使TWEAK介導之信號傳導減弱至少約70%。在一些實施例中，本文所提供之抗體使TWEAK介導之信號傳導減弱至少約80%。在一些實施例中，本文所提供之抗體使TWEAK介導之信號傳導減弱至少約90%。在一些實施例中，本文所提供之抗體使TWEAK介導之信號傳導減弱至少約95%。在某些實施例中，本文所述之抗體可使TWEAK介導之信號傳導減弱(例如部分減弱)至少約15%至約65%。在某些實施例中，本文所述之抗體可使TWEAK介導之信號傳導減弱(例如部分減弱)至少約20%至約65%。在某些實施例中，本文所述之抗體可使TWEAK介導之信號傳導減弱(例如部分減弱)至少約30%至約65%。
在特定實施例中，本文所提供之抗體特異性結合至Fn14且抑制TWEAK誘導的一或多種細胞介素及/或趨化因子分泌。在一些實施例中，一或多種細胞介素及/或趨化因子係選自由以下組成之群：IL-8、CCL2、IL-1β、TGFβ、CCL21、TNFα、IL-6、CXCL1、CCL3、CCL4、CXCL12、CCL5、CXCL10及CXCL16。
舉例而言，在一個實施例中，本文所提供之抗體特異性結合至Fn14且將IL-8分泌抑制至少約5%。在一個實施例中，本文所提供之抗體特異性結合至Fn14且將IL-8分泌抑制至少約10%。在一個實施例中，本文所提供之抗體特異性結合至Fn14且將IL-8分泌抑制至少約15%。在一個實施例中，本文所提供之抗體特異性結合至Fn14且將IL-8分泌抑制至少約20%。在一個實施例中，本文所提供之抗體特異性結合至Fn14且將IL-8分泌抑制至少約25%。在一個實施例中，本文所提供之抗體特異性結合至Fn14且將IL-8分泌抑制至少約30%。在一個實施例中，本文所提供之抗體特異性結合至Fn14且將IL-8分泌抑制至少約35%。在一個實施例中，本文所提供之抗體特異性結合至Fn14且將IL-8分泌抑制至少約40%。在一個實施例中，本文所提供之抗體特異性結合至Fn14且將IL-8分泌抑制至少約45%。在一個實施例中，本文所提供之抗體特異性結合至Fn14且將IL-8分泌抑制至少約50%。在一個實施例中，本文所提供之抗體特異性結合至Fn14且將IL-8分泌抑制至少約55%。在一個實施例中，本文所提供之抗體特異性結合至Fn14且將IL-8分泌至少約60%。在一個實施例中，本文所提供之抗體特異性結合至Fn14且將IL-8分泌抑制至少約65%。在一個實施例中，本文所提供之抗體特異性結合至Fn14且將IL-8分泌抑制至少約70%。在一個實施例中，本文所提供之抗體特異性結合至Fn14且將IL-8分泌抑制至少約75%。在一個實施例中，本文所提供之抗體特異性結合至Fn14且將IL-8分泌抑制至少約80%。在一個實施例中，本文所提供之抗體特異性結合至Fn14且將IL-8分泌抑制至少約85%。在一個實施例中，本文所提供之抗體特異性結合至Fn14且將IL-8分泌抑制至少約90%。在一個實施例中，本文所提供之抗體特異性結合至Fn14且將IL-8分泌抑制至少約95%。在一個實施例中，本文所提供之抗體特異性結合至Fn14且將IL-8分泌抑制至少約96%。在一個實施例中，本文所提供之抗體特異性結合至Fn14且將IL-8分泌抑制至少約97%。在一個實施例中，本文所提供之抗體特異性結合至Fn14且將IL-8分泌抑制至少約98%。在一個實施例中，本文所提供之抗體特異性結合至Fn14且將IL-8分泌抑制至少約99%。在一些實施例中，IL-8分泌之抑制係藉由本文所述之方法評估。在其他實施例中，IL-8分泌之抑制係藉由熟習此項技術者已知之方法評估。在一個特定實施例中，相對於抗Fn14抗體不存在下的IL-8分泌，IL-8分泌受到抑制。在其他實施例中，相對於無關抗體(例如不特異性結合至Fn14之抗體)存在下的IL-8分泌，IL-8分泌受到抑制。
在一個實施例中，本文所提供之抗體特異性結合至Fn14且將CCL2表現抑制至少約5%。在一個實施例中，本文所提供之抗體特異性結合至Fn14且將CCL2表現抑制至少約10%。在一個實施例中，本文所提供之抗體特異性結合至Fn14且將CCL2表現抑制至少約15%。在一個實施例中，本文所提供之抗體特異性結合至Fn14且將CCL2表現抑制至少約20%。在一個實施例中，本文所提供之抗體特異性結合至Fn14且將CCL2表現抑制至少約25%。在一個實施例中，本文所提供之抗體特異性結合至Fn14且將CCL2表現抑制至少約30%。在一個實施例中，本文所提供之抗體特異性結合至Fn14且將CCL2表現抑制至少約35%。在一個實施例中，本文所提供之抗體特異性結合至Fn14且將CCL2表現抑制至少約40%。在一個實施例中，本文所提供之抗體特異性結合至Fn14且將CCL2表現抑制至少約45%。在一個實施例中，本文所提供之抗體特異性結合至Fn14且將CCL2表現抑制至少約50%。在一個實施例中，本文所提供之抗體特異性結合至Fn14且將CCL2表現抑制至少約55%。在一個實施例中，本文所提供之抗體特異性結合至Fn14且將CCL2表現抑制至少約60%。在一個實施例中，本文所提供之抗體特異性結合至Fn14且將CCL2表現抑制至少約65%。在一個實施例中，本文所提供之抗體特異性結合至Fn14且將CCL2表現抑制至少約70%。在一個實施例中，本文所提供之抗體特異性結合至Fn14且將CCL2表現抑制至少約75%。在一個實施例中，本文所提供之抗體特異性結合至Fn14且將CCL2表現抑制至少約80%。在一個實施例中，本文所提供之抗體特異性結合至Fn14且將CCL2表現抑制至少約85%。在一個實施例中，本文所提供之抗體特異性結合至Fn14且將CCL2表現抑制至少約90%。在一個實施例中，本文所提供之抗體特異性結合至Fn14且將CCL2表現抑制至少約95%。在一個實施例中，本文所提供之抗體特異性結合至Fn14且將CCL2表現抑制至少約96%。在一個實施例中，本文所提供之抗體特異性結合至Fn14且將CCL2表現抑制至少約97%。在一個實施例中，本文所提供之抗體特異性結合至Fn14且將CCL2表現抑制至少約98%。在一個實施例中，本文所提供之抗體特異性結合至Fn14且將CCL2表現抑制至少約99%。在一些實施例中，CCL2表現之抑制係藉由本文所述之方法評估。在其他實施例中，CCL2表現之抑制藉由熟習此項技術者已知之方法評估。在一特定實施例中，相對於抗Fn14抗體不存在下的CCL2表現，CCL2表現受到抑制。在其他實施例中，相對於無關抗體(例如不特異性結合至Fn14的抗體)存在下的CCL2表現，CCL2表現受到抑制。
在一個實施例中，本文所提供之抗體特異性結合至Fn14且抑制TWEAK誘導之ICAM-1表現。在一些實施例中，本文所提供之抗體特異性結合至Fn14且將ICAM-1表現抑制至少約5%。在一個實施例中，本文所提供之抗體特異性結合至Fn14且將ICAM-1表現抑制至少約10%。在一個實施例中，本文所提供之抗體特異性結合至Fn14且將ICAM-1表現抑制至少約15%。在一個實施例中，本文所提供之抗體特異性結合至Fn14且將ICAM-1表現抑制至少約20%。在一個實施例中，本文所提供之抗體特異性結合至Fn14且將ICAM-1表現抑制至少約25%。在一個實施例中，本文所提供之抗體特異性結合至Fn14且將ICAM-1表現抑制至少約30%。在一個實施例中，本文所提供之抗體特異性結合至Fn14且將ICAM-1表現抑制至少約35%。在一個實施例中，本文所提供之抗體特異性結合至Fn14且將ICAM-1表現抑制至少約40%。在一個實施例中，本文所提供之抗體特異性結合至Fn14且將ICAM-1表現抑制至少約45%。在一個實施例中，本文所提供之抗體特異性結合至Fn14且將ICAM-1表現抑制至少約50%。在一個實施例中，本文所提供之抗體特異性結合至Fn14且將ICAM-1表現抑制至少約55%。在一個實施例中，本文所提供之抗體特異性結合至Fn14且將ICAM-1表現抑制至少約60%。在一個實施例中，本文所提供之抗體特異性結合至Fn14且將ICAM-1表現抑制至少約65%。在一個實施例中，本文所提供之抗體特異性結合至Fn14且將ICAM-1表現抑制至少約70%。在一個實施例中，本文所提供之抗體特異性結合至Fn14且將ICAM-1表現抑制至少約75%。在一個實施例中，本文所提供之抗體特異性結合至Fn14且將ICAM-1表現抑制至少約80%。在一個實施例中，本文所提供之抗體特異性結合至Fn14且將ICAM-1表現抑制至少約85%。在一個實施例中，本文所提供之抗體特異性結合至Fn14且將ICAM-1表現抑制至少約90%。在一個實施例中，本文所提供之抗體特異性結合至Fn14且將ICAM-1表現抑制至少約95%。在一個實施例中，本文所提供之抗體特異性結合至Fn14且將ICAM-1表現抑制至少約96%。在一個實施例中，本文所提供之抗體特異性結合至Fn14且將ICAM-1表現抑制至少約97%。在一個實施例中，本文所提供之抗體特異性結合至Fn14且將ICAM-1表現抑制至少約98%。在一個實施例中，本文所提供之抗體特異性結合至Fn14且將ICAM-1表現抑制至少約99%。在一些實施例中，ICAM-1表現之抑制係藉由本文所述之方法評估。在其他實施例中，ICAM-1表現之抑制係藉由熟習此項技術者已知之方法評估。在一個特定實施例中，相對於抗Fn14抗體不存在下的ICAM-1表現，ICAM-1表現受到抑制。在其他實施例中，相對於無關抗體(例如不特異性結合至Fn14的抗體)存在下的ICAM-1表現，ICAM-1表現受到抑制。
本文所提供之抗體不為Fn14促效劑。在一些實施例中，本文提供的抗體或抗原結合片段不刺激Fn14活性。在一些實施例中，本文所提供之抗體或抗原結合片段不刺激Fn14介導之信號傳導。在一些實施例中，本文所提供之抗體或抗原結合片段不刺激TWEAK介導之信號傳導。
在一些實施例中，本文提供的抗體或其抗原結合片段包含來自下文章節6所述之抗體(包括抗體KO41c、KO42d、R35B9及其變異體)的一或多個CDR。
在一些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段為抗體KO42d或其變異體。在一些實施例中，本文提供之抗體或其抗原結合片段包含：CDR H1，其包含SEQ ID NO: 113之胺基酸序列；CDR H2，其包含SEQ ID NO: 114之胺基酸序列；CDR H3，其包含SEQ ID NO: 115之胺基酸序列；CDR L1，其包含SEQ ID NO: 116之胺基酸序列；CDR L2，其包含SEQ ID NO: 117之胺基酸序列；CDR L3，其包含SEQ ID NO: 118之胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之抗體或其抗原結合片段包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 44之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 48之VL。
在其他實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段為KO41c、R35B9或其變異體。
在一些實施例中，本文提供之抗體或其抗原結合片段包含： (a)重鏈可變區(VH)，其包含：(i)包含GYX1 FX2 DYNMH之胺基酸序列(SEQ ID NO: 184)的VH互補決定區1 (CDR H1)，其中X1為T、I或R，且X2為T或Q；(ii)包含X3 INPX4 NX5 X6 TNYNX9 KFX10 G之胺基酸序列(SEQ ID NO: 257)的VH互補決定區2 (CDR H2)，其中X3 為Y或S，X4 為N或R，X5 為A或G，X6 為G或W，X9 為Q或D，且X10 為K、G、H或D；(iii)包含SGWFTY之胺基酸序列(SEQ ID NO: 121)的VH互補決定區3 (CDR H3)； (b)輕鏈可變區(VL)，其包含：(i)包含KSSQSLLNSAGKTYLN之胺基酸序列(SEQ ID NO: 127)的VL互補決定區1 (CDR L1)；(ii)包含LVX11 X12 LDX13 之胺基酸序列(SEQ ID NO: 258)的VL互補決定區2 (CDR L2)，其中X11 為S或A，X12 為Q或E，且X13 為S或D；(iii)包含WQGTX7 X8 PWT之胺基酸序列(SEQ ID NO: 186)的VL互補決定區3 (CDR L3)，其中X7 為H或F，且X8 為F或Y。
在一些實施例中，本文提供之抗體或其抗原結合片段包含： (a)重鏈可變區(VH)，其包含：(i)包含GYX1 FX2 DYNMH之胺基酸序列(SEQ ID NO: 184)的VH互補決定區1 (CDR H1)，其中X1為T、I或R，且X2為T或Q；(ii)包含X3 INPX4 NX5 X6 TNYNQKFKG之胺基酸序列(SEQ ID NO: 185)的VH互補決定區2 (CDR H2)，其中X3為Y或S，X4為N或R；X5 為A或G，且X6 為G或W；(iii)包含SGWFTY之胺基酸序列(SEQ ID NO: 121)的VH互補決定區3 (CDR H3)； (b)輕鏈可變區(VL)，其包含：(i)包含KSSQSLLNSAGKTYLN之胺基酸序列(SEQ ID NO: 127)的VL互補決定區1 (CDR L1)；(ii)包含LVSQLDS之胺基酸序列(SEQ ID NO: 128)的VL互補決定區2 (CDR L2)；(iii)包含WQGTX7 X8 PWT之胺基酸序列(SEQ ID NO: 186)的VL互補決定區3 (CDR L3)，其中X7 為H或F，且X8 為F或Y。
在一些實施例中，X1 為T或I。
在一些實施例中，本文所提供之抗體包含下表26中所列之一或多個CDR。 表26. 例示性抗體之CDR
   CDR1 CDR2 CDR3
VH SEQ ID NO: 119 SEQ ID NO: 122 SEQ ID NO: 120 SEQ ID NO: 123 SEQ ID NO: 124 SEQ ID NO: 125 SEQ ID NO: 126 SEQ ID NO: 149 SEQ ID NO: 247 SEQ ID NO: 248 SEQ ID NO: 249 SEQ ID NO: 250 SEQ ID NO: 121
VL SEQ ID NO: 127 SEQ ID NO: 128 SEQ ID NO: 254 SEQ ID NO: 255 SEQ ID NO: 256 SEQ ID NO: 129 SEQ ID NO: 130 SEQ ID NO: 131
在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含： (a)重鏈可變區(VH)，其包含：(i)包含選自由SEQ ID NO: 119及SEQ ID NO: 122組成之群之胺基酸序列的VH互補決定區1 (CDR H1)；(ii)包含選自由以下組成之群之胺基酸序列的VH互補決定區2 (CDR H2)：SEQ ID NO: 120、SEQ ID NO: 123、SEQ ID NO: 124、SEQ ID NO: 125、SEQ ID NO: 126、SEQ ID NO: 149、SEQ ID NO: 247、SEQ ID NO: 248、SEQ ID NO: 249及SEQ ID NO: 250；及(iii)包含SEQ ID NO: 121之胺基酸序列的VH互補決定區3 (CDR H3)，以及 (b)輕鏈可變區(VL)，其包含：(i)包含SEQ ID NO: 127之胺基酸序列的VL互補決定區1 (CDR L1)；(ii)包含選自由以下組成之群之胺基酸序列的VL互補決定區2 (CDR L2)：SEQ ID NO: 128、SEQ ID NO: 254、SEQ ID NO: 255及SEQ ID NO: 256；以及(iii)包含選自由以下組成之群之胺基酸序列的VL互補決定區3 (CDR L3)：SEQ ID NO: 129、SEQ ID NO: 130及SEQ ID NO: 131。
在一些實施例中，本文提供之抗體或其抗原結合片段包含： (a)重鏈可變區(VH)，其包含：(i)包含選自由SEQ ID NO: 119及SEQ ID NO: 122組成之群之胺基酸序列的VH互補決定區1 (CDR H1)；(ii)包含選自由以下組成之群之胺基酸序列的VH互補決定區2 (CDR H2)：SEQ ID NO: 120、SEQ ID NO: 123、SEQ ID NO: 124、SEQ ID NO: 125、SEQ ID NO: 126及SEQ ID NO: 149；及(iii)包含SEQ ID NO: 121之胺基酸序列的VH互補決定區3 (CDR H3)，以及 (b)輕鏈可變區(VL)，其包含：(i)包含SEQ ID NO: 127之胺基酸序列的VL互補決定區1 (CDR L1)；(ii)包含SEQ ID NO: 128之胺基酸序列的VL互補決定區2 (CDR L2)；及(iii)包含選自由以下組成之群之胺基酸序列的VL互補決定區3 (CDR L3)：SEQ ID NO: 129、SEQ ID NO:130及SEQ ID NO: 131。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列選自由SEQ ID NO: 119及SEQ ID NO: 122組成之群的CDR H1。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 119的CDR H1。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 122的CDR H1。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列選自由以下組成之群的CDR H2：SEQ ID NO: 120、SEQ ID NO: 123、SEQ ID NO: 124、SEQ ID NO: 125、SEQ ID NO: 126、SEQ ID NO: 149、SEQ ID NO: 247、SEQ ID NO: 248、SEQ ID NO: 249及SEQ ID NO: 250。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 120的CDR H2。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 123的CDR H2。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 124的CDR H2。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 125的CDR H2。在一些實施例中，抗體包含胺基酸為SEQ ID NO: 126的CDR H2。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 149的CDR H2。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 247的CDR H2。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 248的CDR H2。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 249的CDR H2。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 250的CDR H2。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 121的CDR H3。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 127的CDR L1。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列選自由以下組成之群的CDR L2：SEQ ID NO: 128、SEQ ID NO: 254、SEQ ID NO: 255及SEQ ID NO: 256。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 128的CDR L2。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 254的CDR L2。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 255的CDR L2。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 256的CDR L2。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列選自由以下組成之群的CDR L3：SEQ ID NO: 129、SEQ ID NO: 130及SEQ ID NO: 131。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 129的CDR L3。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO:130的CDR L3。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 131的CDR L3。
在一些實施例中，抗體包含：CDR H1，其包含選自由SEQ ID NO: 119及SEQ ID NO: 122組成之群的胺基酸序列；及CDR H2，其包含選自由以下組成之群的胺基酸序列：SEQ ID NO: 120、SEQ ID NO: 123、SEQ ID NO: 124、SEQ ID NO: 125、SEQ ID NO: 126、SEQ ID NO: 149、SEQ ID NO: 247、SEQ ID NO: 248、SEQ ID NO: 249及SEQ ID NO: 250。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 119的CDR H1及胺基酸序列為SEQ ID NO: 120的CDR H2。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 119的CDR H1及胺基酸序列為SEQ ID NO: 123的CDR H2。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 119的CDR H1及胺基酸序列為SEQ ID NO: 124的CDR H2。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 119的CDR H1及胺基酸序列為SEQ ID NO: 125的CDR H2。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 119的CDR H1及胺基酸序列為SEQ ID NO: 126的CDR H2。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 119的CDR H1及胺基酸序列為SEQ ID NO: 149的CDR H2。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 119的CDR H1及胺基酸序列為SEQ ID NO: 247的CDR H2。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 119的CDR H1及胺基酸序列為SEQ ID NO: 248的CDR H2。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 119的CDR H1及胺基酸序列為SEQ ID NO: 249的CDR H2。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 119的CDR H1及胺基酸序列為SEQ ID NO: 250的CDR H2。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 122的CDR H1及胺基酸序列為SEQ ID NO: 120的CDR H2。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 122的CDR H1及胺基酸序列為SEQ ID NO: 123的CDR H2。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 122的CDR H1及胺基酸序列為SEQ ID NO: 124的CDR H2。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 122的CDR H1及胺基酸序列為SEQ ID NO: 125的CDR H2。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 122的CDR H1及胺基酸序列為SEQ ID NO: 126的CDR H2。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 122的CDR H1及胺基酸序列為SEQ ID NO: 149的CDR H2。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 122的CDR H1及胺基酸序列為SEQ ID NO: 247的CDR H2。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 122的CDR H1及胺基酸序列為SEQ ID NO: 248的CDR H2。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 122的CDR H1及胺基酸序列為SEQ ID NO: 249的CDR H2。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 122的CDR H1及胺基酸序列為SEQ ID NO: 250的CDR H2。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列選自由SEQ ID NO: 119及SEQ ID NO: 122組成之群的CDR H1及胺基酸為SEQ ID NO: 121的CDR H3。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 119的CDR H1及胺基酸序列為SEQ ID NO: 121的CDR H3。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 122的CDR H1及胺基酸序列為SEQ ID NO: 121的CDR H3。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列選自由以下組成之群的CDR H2：SEQ ID NO: 123、SEQ ID NO: 124及SEQ ID NO: 126、SEQ ID NO: 247、SEQ ID NO: 248、SEQ ID NO: 249及SEQ ID NO: 250，以及胺基酸序列為SEQ ID NO: 121的CDR H3。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 123的CDR H2及胺基酸序列為SEQ ID NO: 121的CDR H3。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 124的CDR H2及胺基酸序列為SEQ ID NO: 121的CDR H3。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 126的CDR H2及胺基酸序列為SEQ ID NO: 121的CDR H3。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 247的CDR H2及胺基酸序列為SEQ ID NO: 121的CDR H3。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 248的CDR H2及胺基酸序列為SEQ ID NO: 121的CDR H3。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 249的CDR H2及胺基酸序列為SEQ ID NO: 121的CDR H3。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 250的CDR H2及胺基酸序列為SEQ ID NO: 121的CDR H3。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 127的CDR L1及胺基酸序列為SEQ ID NO: 128、SEQ ID NO: 254、SEQ ID NO: 255或SEQ ID NO: 256的CDR L2。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 127的CDR L1及胺基酸序列為SEQ ID NO: 128的CDR L2。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 127的CDR L1及胺基酸序列為SEQ ID NO: 254的CDR L2。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 127的CDR L1及胺基酸序列為SEQ ID NO: 255的CDR L2。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 127的CDR L1及胺基酸序列為SEQ ID NO: 256的CDR L2。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 127的CDR L1及胺基酸序列選自由以下組成之群的CDR L3：SEQ ID NO: 129、SEQ ID NO: 130及SEQ ID NO: 131。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 127的CDR L1及胺基酸序列為SEQ ID NO: 129的CDR L3。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 127的CDR L1及胺基酸序列為SEQ ID NO: 130的CDR L3。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 127的CDR L1及胺基酸序列為SEQ ID NO: 131的CDR L3。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 128、SEQ ID NO: 254、SEQ ID NO: 255或SEQ ID NO: 256的CDR L2及胺基酸序列選自由以下組成之群的CDR L3：SEQ ID NO: 129、SEQ ID NO: 130及SEQ ID NO: 131。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 128的CDR L2及胺基酸序列為SEQ ID NO: 129的CDR L3。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 128的CDR L2及胺基酸序列為SEQ ID NO: 130的CDR L3。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 128的CDR L2及胺基酸序列為SEQ ID NO: 131的CDR L3。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 254的CDR L2及胺基酸序列為SEQ ID NO: 129的CDR L3。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 254的CDR L2及胺基酸序列為SEQ ID NO: 130的CDR L3。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 254的CDR L2及胺基酸序列為SEQ ID NO: 131的CDR L3。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 255的CDR L2及胺基酸序列為SEQ ID NO: 129的CDR L3。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 255的CDR L2及胺基酸序列為SEQ ID NO: 130的CDR L3。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 255的CDR L2及胺基酸序列為SEQ ID NO: 131的CDR L3。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 256的CDR L2及胺基酸序列為SEQ ID NO: 129的CDR L3。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 256的CDR L2及胺基酸序列為SEQ ID NO: 130的CDR L3。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 256的CDR L2及胺基酸序列為SEQ ID NO: 131的CDR L3。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列選自由SEQ ID NO: 119及SEQ ID NO: 122組成之群的CDR H1；胺基酸序列選自由以下組成之群的CDR H2：SEQ ID NO: 120、SEQ ID NO: 123、SEQ ID NO: 124、SEQ ID NO: 125、SEQ ID NO: 126、SEQ ID NO: 149、SEQ ID NO: 247、SEQ ID NO: 248、SEQ ID NO: 249及SEQ ID NO: 250；以及胺基酸序列為SEQ ID NO: 121的CDR H3。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 119的CDR H1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 247的CDR H2及胺基酸序列為SEQ ID NO: 121的CDR H3。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 119的CDR H1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 248的CDR H2及胺基酸序列為SEQ ID NO: 121的CDR H3。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 119的CDR H1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 249的CDR H2及胺基酸序列為SEQ ID NO: 121的CDR H3。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 119的CDR H1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 250的CDR H2及胺基酸序列為SEQ ID NO: 121的CDR H3。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 122的CDR H1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 247的CDR H2及胺基酸序列為SEQ ID NO: 121的CDR H3。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 122的CDR H1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 248的CDR H2及胺基酸序列為SEQ ID NO: 121的CDR H3。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 122的CDR H1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 249的CDR H2及胺基酸序列為SEQ ID NO: 121的CDR H3。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 122的CDR H1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 250的CDR H2及胺基酸序列為SEQ ID NO: 121的CDR H3。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 119的CDR H1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 120的CDR H2及胺基酸序列為SEQ ID NO: 121的CDR H3。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 119的CDR H1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 123的CDR H2及胺基酸序列為SEQ ID NO: 121的CDR H3。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 119的CDR H1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 124的CDR H2及胺基酸序列為SEQ ID NO: 121的CDR H3。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 119的CDR H1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 125的CDR H2及胺基酸序列為SEQ ID NO: 121的CDR H3。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 119的CDR H1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 126的CDR H2及胺基酸序列為SEQ ID NO: 121的CDR H3。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 119的CDR H1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 149的CDR H2及胺基酸序列為SEQ ID NO: 121的CDR H3。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 122的CDR H1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 120的CDR H2及胺基酸序列為SEQ ID NO: 121的CDR H3。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 122的CDR H1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 123的CDR H2及胺基酸序列為SEQ ID NO: 121的CDR H3。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 122的CDR H1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 124的CDR H2及胺基酸序列為SEQ ID NO: 121的CDR H3。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 122的CDR H1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 125的CDR H2及胺基酸序列為SEQ ID NO: 121的CDR H3。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 122的CDR H1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 126的CDR H2及胺基酸序列為SEQ ID NO: 121的CDR H3。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 122的CDR H1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 149的CDR H2及胺基酸序列為SEQ ID NO: 121的CDR H3。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 127的CDR L1；胺基酸序列為SEQ ID NO: 128、SEQ ID NO: 254、SEQ ID NO: 255或SEQ ID NO: 256的CDR L2；以及胺基酸序列選自由以下組成之群的CDR L3：SEQ ID NO: 129、SEQ ID NO: 130及SEQ ID NO: 131。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 127的CDR L1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 254的CDR L2及胺基酸序列為SEQ ID NO: 129的CDR L3。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 127的CDR L1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 254的CDR L2及胺基酸序列為130的CDR L3。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 127的CDR L1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 254的CDR L2及胺基酸序列為131的CDR L3。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 127的CDR L1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 255的CDR L2及胺基酸序列為SEQ ID NO: 129的CDR L3。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 127的CDR L1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 255的CDR L2及胺基酸序列為130的CDR L3。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 127的CDR L1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 255的CDR L2及胺基酸序列為131的CDR L3。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 127的CDR L1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 256的CDR L2及胺基酸序列為129的CDR L3。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 127的CDR L1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 256的CDR L2及胺基酸序列為130的CDR L3。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 127的CDR L1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 256的CDR L2及胺基酸序列為131的CDR L3。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 127的CDR L1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 128的CDR L2及胺基酸序列為129的CDR L3。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 127的CDR L1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 128的CDR L2及胺基酸序列為130的CDR L3。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 127的CDR L1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 128的CDR L2及胺基酸序列為131的CDR L3。
在一些實施例中，抗體包含選自胺基酸序列由SEQ ID NO: 119及SEQ ID NO: 122組成之群的CDR H1；胺基酸序列選自由以下組成之群的CDR H2：SEQ ID NO: 120、SEQ ID NO: 123、SEQ ID NO: 124、SEQ ID NO: 125、SEQ ID NO: 126、SEQ ID NO: 149、SEQ ID NO: 247、SEQ ID NO: 248、SEQ ID NO: 249及SEQ ID NO: 250；胺基酸序列為SEQ ID NO: 121的CDR H3；胺基酸序列為SEQ ID NO: 127的CDR L1；胺基酸序列選自由以下組成之群的CDR L2：SEQ ID NO: 128、SEQ ID NO: 254、SEQ ID NO: 255及SEQ ID NO: 256；以及胺基酸序列選自由以下組成之群的CDR L3：SEQ ID NO: 129、SEQ ID NO: 130及SEQ ID NO: 131。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 119的CDR H1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 120的CDR H2、胺基酸序列為SEQ ID NO: 121的CDR H3、胺基酸序列為SEQ ID NO: 127的CDR L1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 128的CDR L2及胺基酸序列為SEQ ID NO: 129的CDR L3。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 119的CDR H1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 120的CDR H2、胺基酸序列為SEQ ID NO: 121的CDR H3、胺基酸序列為SEQ ID NO: 127的CDR L1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 128的CDR L2及胺基酸序列為SEQ ID NO: 130的CDR L3。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 119的CDR H1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 120的CDR H2、胺基酸序列為SEQ ID NO: 121的CDR H3、胺基酸序列為SEQ ID NO: 127的CDR L1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 128的CDR L2及胺基酸序列為SEQ ID NO: 131的CDR L3。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 119的CDR H1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 120的CDR H2、胺基酸序列為SEQ ID NO: 121的CDR H3、胺基酸序列為SEQ ID NO: 127的CDR L1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 254的CDR L2及胺基酸序列為SEQ ID NO: 129的CDR L3。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 119的CDR H1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 120的CDR H2、胺基酸序列為SEQ ID NO: 121的CDR H3、胺基酸序列為SEQ ID NO: 127的CDR L1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 254的CDR L2及胺基酸序列為SEQ ID NO: 130的CDR L3。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 119的CDR H1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 120的CDR H2、胺基酸序列為SEQ ID NO: 121的CDR H3、胺基酸序列為SEQ ID NO: 127的CDR L1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 254的CDR L2及胺基酸序列為SEQ ID NO: 131的CDR L3。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 119的CDR H1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 120的CDR H2、胺基酸序列為SEQ ID NO: 121的CDR H3、胺基酸序列為SEQ ID NO: 127的CDR L1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 255的CDR L2及胺基酸序列為SEQ ID NO: 129的CDR L3。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 119的CDR H1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 120的CDR H2、胺基酸序列為SEQ ID NO: 121的CDR H3、胺基酸序列為SEQ ID NO: 127的CDR L1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 255的CDR L2及胺基酸序列為SEQ ID NO: 130的CDR L3。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 119的CDR H1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 120的CDR H2、胺基酸序列為SEQ ID NO: 121的CDR H3、胺基酸序列為SEQ ID NO: 127的CDR L1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 255的CDR L2及胺基酸序列為SEQ ID NO: 131的CDR L3。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 119的CDR H1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 120的CDR H2、胺基酸序列為SEQ ID NO: 121的CDR H3、胺基酸序列為SEQ ID NO: 127的CDR L1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 256的CDR L2及胺基酸序列為SEQ ID NO: 129的CDR L3。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 119的CDR H1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 120的CDR H2、胺基酸序列為SEQ ID NO: 121的CDR H3、胺基酸序列為SEQ ID NO: 127的CDR L1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 256的CDR L2及胺基酸序列為SEQ ID NO: 130的CDR L3。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 119的CDR H1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 120的CDR H2、胺基酸序列為SEQ ID NO: 121的CDR H3、胺基酸序列為SEQ ID NO: 127的CDR L1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 256的CDR L2及胺基酸序列為SEQ ID NO: 131的CDR L3。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 119的CDR H1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 123的CDR H2、胺基酸序列為SEQ ID NO: 121的CDR H3、胺基酸序列為SEQ ID NO: 127的CDR L1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 128的CDR L2及胺基酸序列為SEQ ID NO: 129的CDR L3。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 119的CDR H1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 123的CDR H2、胺基酸序列為SEQ ID NO: 121的CDR H3、胺基酸序列為SEQ ID NO: 127的CDR L1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 128的CDR L2及胺基酸序列為SEQ ID NO: 130的CDR L3。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 119的CDR H1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 123的CDR H2、胺基酸序列為SEQ ID NO: 121的CDR H3、胺基酸序列為SEQ ID NO: 127的CDR L1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 128的CDR L2及胺基酸序列為SEQ ID NO: 131的CDR L3。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 119的CDR H1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 123的CDR H2、胺基酸序列為SEQ ID NO: 121的CDR H3、胺基酸序列為SEQ ID NO: 127的CDR L1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 254的CDR L2及胺基酸序列為SEQ ID NO: 129的CDR L3。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 119的CDR H1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 123的CDR H2、胺基酸序列為SEQ ID NO: 121的CDR H3、胺基酸序列為SEQ ID NO: 127的CDR L1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 254的CDR L2及胺基酸序列為SEQ ID NO: 130的CDR L3。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 119的CDR H1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 123的CDR H2、胺基酸序列為SEQ ID NO: 121的CDR H3、胺基酸序列為SEQ ID NO: 127的CDR L1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 254的CDR L2及胺基酸序列為SEQ ID NO: 131的CDR L3。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 119的CDR H1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 123的CDR H2、胺基酸序列為SEQ ID NO: 121的CDR H3、胺基酸序列為SEQ ID NO: 127的CDR L1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 255的CDR L2及胺基酸序列為SEQ ID NO: 129的CDR L3。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 119的CDR H1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 123的CDR H2、胺基酸序列為SEQ ID NO: 121的CDR H3、胺基酸序列為SEQ ID NO: 127的CDR L1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 255的CDR L2及胺基酸序列為SEQ ID NO: 130的CDR L3。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 119的CDR H1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 123的CDR H2、胺基酸序列為SEQ ID NO: 121的CDR H3、胺基酸序列為SEQ ID NO: 127的CDR L1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 255的CDR L2及胺基酸序列為SEQ ID NO: 131的CDR L3。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 119的CDR H1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 123的CDR H2、胺基酸序列為SEQ ID NO: 121的CDR H3、胺基酸序列為SEQ ID NO: 127的CDR L1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 256的CDR L2及胺基酸序列為SEQ ID NO: 129的CDR L3。
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在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 122的CDR H1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 249的CDR H2、胺基酸序列為SEQ ID NO: 121的CDR H3、胺基酸序列為SEQ ID NO: 127的CDR L1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 128的CDR L2及胺基酸序列為SEQ ID NO: 131的CDR L3。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 122的CDR H1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 249的CDR H2、胺基酸序列為SEQ ID NO: 121的CDR H3、胺基酸序列為SEQ ID NO: 127的CDR L1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 254的CDR L2及胺基酸序列為SEQ ID NO: 129的CDR L3。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 122的CDR H1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 249的CDR H2、胺基酸序列為SEQ ID NO: 121的CDR H3、胺基酸序列為SEQ ID NO: 127的CDR L1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 254的CDR L2及胺基酸序列為SEQ ID NO: 130的CDR L3。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 122的CDR H1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 249的CDR H2、胺基酸序列為SEQ ID NO: 121的CDR H3、胺基酸序列為SEQ ID NO: 127的CDR L1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 254的CDR L2及胺基酸序列為SEQ ID NO: 131的CDR L3。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 122的CDR H1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 249的CDR H2、胺基酸序列為SEQ ID NO: 121的CDR H3、胺基酸序列為SEQ ID NO: 127的CDR L1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 255的CDR L2及胺基酸序列為SEQ ID NO: 129的CDR L3。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 122的CDR H1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 249的CDR H2、胺基酸序列為SEQ ID NO: 121的CDR H3、胺基酸序列為SEQ ID NO: 127的CDR L1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 255的CDR L2及胺基酸序列為SEQ ID NO: 130的CDR L3。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 122的CDR H1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 249的CDR H2、胺基酸序列為SEQ ID NO: 121的CDR H3、胺基酸序列為SEQ ID NO: 127的CDR L1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 255的CDR L2及胺基酸序列為SEQ ID NO: 131的CDR L3。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 122的CDR H1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 249的CDR H2、胺基酸序列為SEQ ID NO: 121的CDR H3、胺基酸序列為SEQ ID NO: 127的CDR L1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 256的CDR L2及胺基酸序列為SEQ ID NO: 129的CDR L3。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 122的CDR H1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 249的CDR H2、胺基酸序列為SEQ ID NO: 121的CDR H3、胺基酸序列為SEQ ID NO: 127的CDR L1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 256的CDR L2及胺基酸序列為SEQ ID NO: 130的CDR L3。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 122的CDR H1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 249的CDR H2、胺基酸序列為SEQ ID NO: 121的CDR H3、胺基酸序列為SEQ ID NO: 127的CDR L1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 256的CDR L2及胺基酸序列為SEQ ID NO: 131的CDR L3。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 122的CDR H1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 250的CDR H2、胺基酸序列為SEQ ID NO: 121的CDR H3、胺基酸序列為SEQ ID NO: 127的CDR L1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 128的CDR L2及胺基酸序列為SEQ ID NO: 129的CDR L3。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 122的CDR H1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 250的CDR H2、胺基酸序列為SEQ ID NO: 121的CDR H3、胺基酸序列為SEQ ID NO: 127的CDR L1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 128的CDR L2及胺基酸序列為SEQ ID NO: 130的CDR L3。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 122的CDR H1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 250的CDR H2、胺基酸序列為SEQ ID NO: 121的CDR H3、胺基酸序列為SEQ ID NO: 127的CDR L1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 128的CDR L2及胺基酸序列為SEQ ID NO: 131的CDR L3。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 122的CDR H1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 250的CDR H2、胺基酸序列為SEQ ID NO: 121的CDR H3、胺基酸序列為SEQ ID NO: 127的CDR L1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 254的CDR L2及胺基酸序列為SEQ ID NO: 129的CDR L3。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 122的CDR H1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 250的CDR H2、胺基酸序列為SEQ ID NO: 121的CDR H3、胺基酸序列為SEQ ID NO: 127的CDR L1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 254的CDR L2及胺基酸序列為SEQ ID NO: 130的CDR L3。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 122的CDR H1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 250的CDR H2、胺基酸序列為SEQ ID NO: 121的CDR H3、胺基酸序列為SEQ ID NO: 127的CDR L1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 254的CDR L2及胺基酸序列為SEQ ID NO: 131的CDR L3。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 122的CDR H1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 250的CDR H2、胺基酸序列為SEQ ID NO: 121的CDR H3、胺基酸序列為SEQ ID NO: 127的CDR L1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 255的CDR L2及胺基酸序列為SEQ ID NO: 129的CDR L3。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 122的CDR H1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 250的CDR H2、胺基酸序列為SEQ ID NO: 121的CDR H3、胺基酸序列為SEQ ID NO: 127的CDR L1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 255的CDR L2及胺基酸序列為SEQ ID NO: 130的CDR L3。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 122的CDR H1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 250的CDR H2、胺基酸序列為SEQ ID NO: 121的CDR H3、胺基酸序列為SEQ ID NO: 127的CDR L1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 255的CDR L2及胺基酸序列為SEQ ID NO: 131的CDR L3。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 122的CDR H1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 250的CDR H2、胺基酸序列為SEQ ID NO: 121的CDR H3、胺基酸序列為SEQ ID NO: 127的CDR L1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 256的CDR L2及胺基酸序列為SEQ ID NO: 129的CDR L3。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 122的CDR H1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 250的CDR H2、胺基酸序列為SEQ ID NO: 121的CDR H3、胺基酸序列為SEQ ID NO: 127的CDR L1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 256的CDR L2及胺基酸序列為SEQ ID NO: 130的CDR L3。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 122的CDR H1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 250的CDR H2、胺基酸序列為SEQ ID NO: 121的CDR H3、胺基酸序列為SEQ ID NO: 127的CDR L1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 256的CDR L2及胺基酸序列為SEQ ID NO: 131的CDR L3。
在一些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含具有下述表6、表28、表29、表31、表5及表17中之VH及VL序列中所含之CDR之胺基酸序列的CDR。
在一些實施例中，抗體包含VH，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 35之VH中所含之CDR之胺基酸序列的CDR；及VL，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 40之VL中所含之CDR之胺基酸序列的CDR。
在一些實施例中，抗體包含VH，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 35之VH中所含之CDR之胺基酸序列的CDR；及VL，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 52之VL中所含之CDR之胺基酸序列的CDR。
在一些實施例中，抗體包含VH，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 35之VH中所含之CDR之胺基酸序列的CDR；及VL，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 58之VL中所含之CDR之胺基酸序列的CDR。
在一些實施例中，抗體包含VH，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 35之VH中所含之CDR之胺基酸序列的CDR；及VL，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 200之VL中所含之CDR之胺基酸序列的CDR。
在一些實施例中，抗體包含VH，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 50之VH中所含之CDR之胺基酸序列的CDR；及VL，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 40之VL中所含之CDR之胺基酸序列的CDR。
在一些實施例中，抗體包含VH，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 50之VH中所含之CDR之胺基酸序列的CDR；及VL，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 52之VL中所含之CDR之胺基酸序列的CDR。
在一些實施例中，抗體包含VH，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 50之VH中所含之CDR之胺基酸序列的CDR；及VL，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 58之VL中所含之CDR之胺基酸序列的CDR。
在一些實施例中，抗體包含VH，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 50之VH中所含之CDR之胺基酸序列的CDR；及VL，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 200之VL中所含之CDR之胺基酸序列的CDR。
在一些實施例中，抗體包含VH，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 54之VH中所含之CDR之胺基酸序列的CDR；及VL，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 40之VL中所含之CDR之胺基酸序列的CDR。
在一些實施例中，抗體包含VH，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 54之VH中所含之CDR之胺基酸序列的CDR；及VL，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 52之VL中所含之CDR之胺基酸序列的CDR。
在一些實施例中，抗體包含VH，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 54之VH中所含之CDR之胺基酸序列的CDR；及VL，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 58之VL中所含之CDR之胺基酸序列的CDR。
在一些實施例中，抗體包含VH，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 54之VH中所含之CDR之胺基酸序列的CDR；及VL，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 200之VL中所含之CDR之胺基酸序列的CDR。
在一些實施例中，抗體包含VH，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 56之VH中所含之CDR之胺基酸序列的CDR；及VL，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 40之VL中所含之CDR之胺基酸序列的CDR。
在一些實施例中，抗體包含VH，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 56之VH中所含之CDR之胺基酸序列的CDR；及VL，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 52之VL中所含之CDR之胺基酸序列的CDR。
在一些實施例中，抗體包含VH，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 56之VH中所含之CDR之胺基酸序列的CDR；及VL，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 58之VL中所含之CDR之胺基酸序列的CDR。
在一些實施例中，抗體包含VH，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 56之VH中所含之CDR之胺基酸序列的CDR；及VL，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 200之VL中所含之CDR之胺基酸序列的CDR。
在一些實施例中，抗體包含VH，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 60之VH中所含之CDR之胺基酸序列的CDR；及VL，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 40之VL中所含之CDR之胺基酸序列的CDR。
在一些實施例中，抗體包含VH，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 60之VH中所含之CDR之胺基酸序列的CDR；及VL，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 52之VL中所含之CDR之胺基酸序列的CDR。
在一些實施例中，抗體包含VH，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 60之VH中所含之CDR之胺基酸序列的CDR；及VL，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 58之VL中所含之CDR之胺基酸序列的CDR。
在一些實施例中，抗體包含VH，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 60之VH中所含之CDR之胺基酸序列的CDR；及VL，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 200之VL中所含之CDR之胺基酸序列的CDR。
在一些實施例中，抗體包含VH，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 181之VH中所含之CDR之胺基酸序列的CDR；及VL，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 40之VL中所含之CDR之胺基酸序列的CDR。
在一些實施例中，抗體包含VH，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 181之VH中所含之CDR之胺基酸序列的CDR；及VL，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 52之VL中所含之CDR之胺基酸序列的CDR。
在一些實施例中，抗體包含VH，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 181之VH中所含之CDR之胺基酸序列的CDR；及VL，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 58之VL中所含之CDR之胺基酸序列的CDR。
在一些實施例中，抗體包含VH，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 181之VH中所含之CDR之胺基酸序列的CDR；及VL，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 200之VL中所含之CDR之胺基酸序列的CDR。
在一些實施例中，抗體包含VH，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 190之VH中所含之CDR之胺基酸序列的CDR；及VL，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 40之VL中所含之CDR之胺基酸序列的CDR。
在一些實施例中，抗體包含VH，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 190之VH中所含之CDR之胺基酸序列的CDR；及VL，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 52之VL中所含之CDR之胺基酸序列的CDR。
在一些實施例中，抗體包含VH，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 190之VH中所含之CDR之胺基酸序列的CDR；及VL，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 58之VL中所含之CDR之胺基酸序列的CDR。
在一些實施例中，抗體包含VH，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 190之VH中所含之CDR之胺基酸序列的CDR；及VL，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 200之VL中所含之CDR之胺基酸序列的CDR。
在一些實施例中，抗體包含VH，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 192之VH中所含之CDR之胺基酸序列的CDR；及VL，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 40之VL中所含之CDR之胺基酸序列的CDR。
在一些實施例中，抗體包含VH，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 192之VH中所含之CDR之胺基酸序列的CDR；及VL，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 52之VL中所含之CDR之胺基酸序列的CDR。
在一些實施例中，抗體包含VH，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 192之VH中所含之CDR之胺基酸序列的CDR；及VL，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 58之VL中所含之CDR之胺基酸序列的CDR。
在一些實施例中，抗體包含VH，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 192之VH中所含之CDR之胺基酸序列的CDR；及VL，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 200之VL中所含之CDR之胺基酸序列的CDR。
在一些實施例中，抗體包含VH，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 194之VH中所含之CDR之胺基酸序列的CDR；及VL，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 40之VL中所含之CDR之胺基酸序列的CDR。
在一些實施例中，抗體包含VH，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 194之VH中所含之CDR之胺基酸序列的CDR；及VL，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 52之VL中所含之CDR之胺基酸序列的CDR。
在一些實施例中，抗體包含VH，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 194之VH中所含之CDR之胺基酸序列的CDR；及VL，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 58之VL中所含之CDR之胺基酸序列的CDR。
在一些實施例中，抗體包含VH，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 194之VH中所含之CDR之胺基酸序列的CDR；及VL，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 200之VL中所含之CDR之胺基酸序列的CDR。
在一些實施例中，抗體包含VH，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 196之VH中所含之CDR之胺基酸序列的CDR；及VL，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 40之VL中所含之CDR之胺基酸序列的CDR。
在一些實施例中，抗體包含VH，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 196之VH中所含之CDR之胺基酸序列的CDR；及VL，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 52之VL中所含之CDR之胺基酸序列的CDR。
在一些實施例中，抗體包含VH，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 196之VH中所含之CDR之胺基酸序列的CDR；及VL，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 58之VL中所含之CDR之胺基酸序列的CDR。
在一些實施例中，抗體包含VH，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 196之VH中所含之CDR之胺基酸序列的CDR；及VL，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 200之VL中所含之CDR之胺基酸序列的CDR。
在一些實施例中，抗體包含VH，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 198之VH中所含之CDR之胺基酸序列的CDR；及VL，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 40之VL中所含之CDR之胺基酸序列的CDR。
在一些實施例中，抗體包含VH，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 198之VH中所含之CDR之胺基酸序列的CDR；及VL，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 52之VL中所含之CDR之胺基酸序列的CDR。
在一些實施例中，抗體包含VH，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 198之VH中所含之CDR之胺基酸序列的CDR；及VL，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 58之VL中所含之CDR之胺基酸序列的CDR。
在一些實施例中，抗體包含VH，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 198之VH中所含之CDR之胺基酸序列的CDR；及VL，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 200之VL中所含之CDR之胺基酸序列的CDR。
來自此等CDR區中之每一者的殘基標註於本文提供的序列表中。在一些實施例中，CDR係根據Kabat編號。在一些實施例中，CDR係根據AbM編號。在其他實施例中，CDR係根據Chothia編號。在其他實施例中，CDR係根據接觸編號。在一些實施例中，CDR係根據IMGT編號。在某些實施例中，抗體中之CDR可根據不同編號系統之組合(例如Kabat與Chothia之組合)確定。在某些實施例中，抗體中之一或多個CDR係根據Kabat編號確定且抗體中之其他CDR係根據Chothia編號確定。
在某些實施例中，本文提供的抗體或其抗原結合片段進一步包含來自本文所提供之抗體的一或多個FR區。 表27.例示性小鼠構架
   FR1 FR2 FR3 FR4
VH SEQ ID NO: 132    SEQ ID NO: 138    SEQ ID NO: 145    SEQ ID NO: 158
VL SEQ ID NO: 160    SEQ ID NO: 163    SEQ ID NO: 169 SEQ ID NO: 171   
在一些實施例中，本文所提供之抗體包含上述表27中的一或多個小鼠構架區。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 132的FR H1。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 138的FR H2。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 145的FR H3。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 158的FR H4。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 160的FR L1。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 163的FR L2。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 169的FR L3。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 171的FR L4。
在一些實施例中，本文所提供之抗體包含VH，該VH包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 132的FR H1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 138的FR H2、胺基酸序列為SEQ ID NO: 145的FR H3及胺基酸序列為SEQ ID NO: 158的FR H4。
在一些實施例中，本文所提供之抗體包含VL，該VL包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 160的FR L1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 163的FR L2、胺基酸序列為SEQ ID NO: 169的FR L3及胺基酸序列為SEQ ID NO: 171的FR L4。
在一些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含具有下述表28、表29及表30中之VH及VL序列中所含之FR之胺基酸序列的FR。
在一些實施例中，抗體包含VH，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 35之VH中所含之CDR之胺基酸序列的CDR；及VL，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 40之VL中所含之CDR之胺基酸序列的CDR。
在一些實施例中，抗體包含VH，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 35之VH中所含之FR之胺基酸序列的FR；及VL，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 52之VL中所含之FR之胺基酸序列的FR。
在一些實施例中，抗體包含VH，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 35之VH中所含之FR之胺基酸序列的FR；及VL，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 58之VL中所含之FR之胺基酸序列的FR。
在一些實施例中，抗體包含VH，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 35之VH中所含之FR之胺基酸序列的FR；及VL，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 200之VL中所含之FR之胺基酸序列的FR。
在一些實施例中，抗體包含VH，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 50之VH中所含之FR之胺基酸序列的FR；及VL，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 40之VL中所含之FR之胺基酸序列的FR。
在一些實施例中，抗體包含VH，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 50之VH中所含之FR之胺基酸序列的FR；及VL，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 52之VL中所含之FR之胺基酸序列的FR。
在一些實施例中，抗體包含VH，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 50之VH中所含之FR之胺基酸序列的FR；及VL，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 58之VL中所含之FR之胺基酸序列的FR。
在一些實施例中，抗體包含VH，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 50之VH中所含之FR之胺基酸序列的FR；及VL，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 200之VL中所含之FR之胺基酸序列的FR。
在一些實施例中，抗體包含VH，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 54之VH中所含之FR之胺基酸序列的FR；及VL，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 40之VL中所含之FR之胺基酸序列的FR。
在一些實施例中，抗體包含VH，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 54之VH中所含之FR之胺基酸序列的FR；及VL，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 52之VL中所含之FR之胺基酸序列的FR。
在一些實施例中，抗體包含VH，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 54之VH中所含之FR之胺基酸序列的FR；及VL，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 58之VL中所含之FR之胺基酸序列的FR。
在一些實施例中，抗體包含VH，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 54之VH中所含之FR之胺基酸序列的FR；及VL，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 200之VL中所含之FR之胺基酸序列的FR。
在一些實施例中，抗體包含VH，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 56之VH中所含之FR之胺基酸序列的FR；及VL，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 40之VL中所含之FR之胺基酸序列的FR。
在一些實施例中，抗體包含VH，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 56之VH中所含之FR之胺基酸序列的FR；及VL，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 52之VL中所含之FR之胺基酸序列的FR。
在一些實施例中，抗體包含VH，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 56之VH中所含之FR之胺基酸序列的FR；及VL，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 58之VL中所含之FR之胺基酸序列的FR。
在一些實施例中，抗體包含VH，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 56之VH中所含之FR之胺基酸序列的FR；及VL，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 200之VL中所含之FR之胺基酸序列的FR。
在一些實施例中，抗體包含VH，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 60之VH中所含之FR之胺基酸序列的FR；及VL，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 40之VL中所含之FR之胺基酸序列的FR。
在一些實施例中，抗體包含VH，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 60之VH中所含之FR之胺基酸序列的FR；及VL，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 52之VL中所含之FR之胺基酸序列的FR。
在一些實施例中，抗體包含VH，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 60之VH中所含之FR之胺基酸序列的FR；及VL，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 58之VL中所含之FR之胺基酸序列的FR。
在一些實施例中，抗體包含VH，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 60之VH中所含之FR之胺基酸序列的FR；及VL，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 200之VL中所含之FR之胺基酸序列的FR。
在一些實施例中，抗體包含VH，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 181之VH中所含之FR之胺基酸序列的FR；及VL，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 40之VL中所含之FR之胺基酸序列的FR。
在一些實施例中，抗體包含VH，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 181之VH中所含之FR之胺基酸序列的FR；及VL，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 52之VL中所含之FR之胺基酸序列的FR。
在一些實施例中，抗體包含VH，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 181之VH中所含之FR之胺基酸序列的FR；及VL，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 58之VL中所含之FR之胺基酸序列的FR。
在一些實施例中，抗體包含VH，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 181之VH中所含之FR之胺基酸序列的FR；及VL，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 200之VL中所含之FR之胺基酸序列的FR。
在一些實施例中，抗體包含VH，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 190之VH中所含之FR之胺基酸序列的FR；及VL，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 40之VL中所含之FR之胺基酸序列的FR。
在一些實施例中，抗體包含VH，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 190之VH中所含之FR之胺基酸序列的FR；及VL，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 52之VL中所含之FR之胺基酸序列的FR。
在一些實施例中，抗體包含VH，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 190之VH中所含之FR之胺基酸序列的FR；及VL，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 58之VL中所含之FR之胺基酸序列的FR。
在一些實施例中，抗體包含VH，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 190之VH中所含之FR之胺基酸序列的FR；及VL，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 200之VL中所含之FR之胺基酸序列的FR。
在一些實施例中，抗體包含VH，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 192之VH中所含之FR之胺基酸序列的FR；及VL，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 40之VL中所含之FR之胺基酸序列的FR。
在一些實施例中，抗體包含VH，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 192之VH中所含之FR之胺基酸序列的FR；及VL，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 52之VL中所含之FR之胺基酸序列的FR。
在一些實施例中，抗體包含VH，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 192之VH中所含之FR之胺基酸序列的FR；及VL，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 58之VL中所含之FR之胺基酸序列的FR。
在一些實施例中，抗體包含VH，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 192之VH中所含之FR之胺基酸序列的FR；及VL，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 200之VL中所含之FR之胺基酸序列的FR。
在一些實施例中，抗體包含VH，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 194之VH中所含之FR之胺基酸序列的FR；及VL，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 40之VL中所含之FR之胺基酸序列的FR。
在一些實施例中，抗體包含VH，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 194之VH中所含之FR之胺基酸序列的FR；及VL，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 52之VL中所含之FR之胺基酸序列的FR。
在一些實施例中，抗體包含VH，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 194之VH中所含之FR之胺基酸序列的FR；及VL，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 58之VL中所含之FR之胺基酸序列的FR。
在一些實施例中，抗體包含VH，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 194之VH中所含之FR之胺基酸序列的FR；及VL，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 200之VL中所含之FR之胺基酸序列的FR。
在一些實施例中，抗體包含VH，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 196之VH中所含之FR之胺基酸序列的FR；及VL，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 40之VL中所含之FR之胺基酸序列的FR。
在一些實施例中，抗體包含VH，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 196之VH中所含之FR之胺基酸序列的FR；及VL，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 52之VL中所含之FR之胺基酸序列的FR。
在一些實施例中，抗體包含VH，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 196之VH中所含之FR之胺基酸序列的FR；及VL，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 58之VL中所含之FR之胺基酸序列的FR。
在一些實施例中，抗體包含VH，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 196之VH中所含之FR之胺基酸序列的FR；及VL，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 200之VL中所含之FR之胺基酸序列的FR。
在一些實施例中，抗體包含VH，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 198之VH中所含之FR之胺基酸序列的FR；及VL，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 40之VL中所含之FR之胺基酸序列的FR。
在一些實施例中，抗體包含VH，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 198之VH中所含之FR之胺基酸序列的FR；及VL，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 52之VL中所含之FR之胺基酸序列的FR。
在一些實施例中，抗體包含VH，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 198之VH中所含之FR之胺基酸序列的FR；及VL，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 58之VL中所含之FR之胺基酸序列的FR。
在一些實施例中，抗體包含VH，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 198之VH中所含之FR之胺基酸序列的FR；及VL，其包含具有胺基酸序列為SEQ ID NO: 200之VL中所含之FR之胺基酸序列的FR。
在某些實施例中，本文提供之抗體或其抗原結合片段進一步包含來自本文提供之人類化抗體的一或多個FR區。來自本文提供之人類化抗體的FR區更詳細地描述於下文章節5.2.5中。
基於CDR編號系統之邊界來確定本文所述之構架區。換言之，若CDR藉由例如Kabat、IMGT或Chothia或其任何組合確定，則構架區為如下形式(自N端至C端)中之可變區中之CDR周圍的胺基酸殘基：FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4。舉例而言，FR1定義為如藉由例如Kabat編號系統、IMGT編號系統及/或Chothia編號系統所定義之CDR1胺基酸殘基之N端的胺基酸殘基，FR2定義為如藉由例如Kabat編號系統、IMGT編號系統及/或Chothia編號系統所定義之介於CDR1與CDR2胺基酸殘基之間的胺基酸殘基，FR3定義為如藉由例如Kabat編號系統、IMGT編號系統及/或Chothia編號系統所定義之介於CDR2與CDR3胺基酸殘基之間的胺基酸殘基，且FR4定義為如藉由例如Kabat編號系統、IMGT編號系統及/或Chothia編號系統所定義之CDR3胺基酸殘基之C端的胺基酸殘基。
在某些實施例中，本文所提供的抗體或抗原結合片段包含本文所提供之抗體的VH及/VL區，包括下文章節6中所述的彼等區域。
在一些實施例中，本文所提供的抗體或抗原結合片段包含如下表28中所列的一或多個VH序列。 表28. 例示性小鼠抗體的VH胺基酸序列
重鏈載體 ID VH 名稱 可變區序列
A291 41c-VH SEQ ID NO: 35
A402 R35B9-VH SEQ ID NO: 50
A448 R35B9(Y50G57)-VH SEQ ID NO: 54
A490 R35B9(Y50A56G57)-VH SEQ ID NO: 56
A486 R35B9(A56)-VH SEQ ID NO: 60
A437 R35B9(Y50)-VH SEQ ID NO: 181
A428 R35B9(G57)-VH SEQ ID NO: 190
A435 R35B9(T28)-VH SEQ ID NO: 192
A436 R35B9(T30)-VH SEQ ID NO: 194
A438 R35B9(N54)-VH SEQ ID NO: 196
A450 41C(R28Q30R54)-VH SEQ ID NO: 198
在一些實施例中，VH為包含SEQ ID NO: 35之胺基酸序列的41c-VH。在一些實施例中，VH為包含胺基酸序列SEQ ID NO: 50之R35B9-VH。在一些實施例中，VH為包含胺基酸序列SEQ ID NO: 54之R35B9(Y50G57)-VH。在一些實施例中，VH為包含胺基酸序列SEQ ID NO: 56之R35B9(Y50A56G57)-VH。在一些實施例中，VH為包含胺基酸序列SEQ ID NO: 60之R35B9(A56)-VH。在一些實施例中，VH為包含胺基酸序列SEQ ID NO: 181之R35B9(Y50)-VH。在一些實施例中，VH為包含胺基酸序列SEQ ID NO: 190之R35B9(G57)-VH。在一些實施例中，VH為包含胺基酸序列SEQ ID NO: 192之R35B9(T28)-VH。在一些實施例中，VH為包含胺基酸序列SEQ ID NO: 194之R35B9(T30)-VH。在一些實施例中，VH為包含胺基酸序列SEQ ID NO: 196之R35B9(N54)-VH。在一些實施例中，VH為包含SEQ ID NO: 198之胺基酸序列的41C(R28Q30R54)-VH。
在一些實施例中，本文所提供之抗體包含如下表29中所列之一或多個VL序列。 表29. 例示性小鼠抗體之VL胺基酸序列
輕鏈載體 ID VL 名稱 可變區序列
A290 41c-VL SEQ ID NO: 40
A403 R35B9-VL SEQ ID NO: 52
A439 R35B9(H98)-VL SEQ ID NO: 58
A440 R35B9(F99)-VL SEQ ID NO: 200
在一些實施例中，VL為包含SEQ ID NO: 40之胺基酸序列的41c-VL。在一些實施例中，VL為包含SEQ ID NO: 52之胺基酸序列的R35B9-VL。在一些實施例中，VL為包含SEQ ID NO: 58之胺基酸序列的R35B9(H98)-VL。在一些實施例中，VL為包含SEQ ID NO: 200之胺基酸序列的R35B9(F99)-VL。
在其他實施例中，本文所提供之抗體包含來自下表30之VH及/或VL。 表30. 例示性小鼠抗體之胺基酸序列
抗體名稱 VH VL
A291/A290 SEQ ID NO: 35 SEQ ID NO: 40
A291/A403 SEQ ID NO: 35 SEQ ID NO: 52
A291/A439 SEQ ID NO: 35 SEQ ID NO: 58
A291/A440 SEQ ID NO: 35 SEQ ID NO: 200
A402/A290 SEQ ID NO: 50 SEQ ID NO: 40
A402/A403 SEQ ID NO: 50 SEQ ID NO: 52
A402/A439 SEQ ID NO: 50 SEQ ID NO: 58
A402/A440 SEQ ID NO: 50 SEQ ID NO: 200
A448/A290 SEQ ID NO: 54 SEQ ID NO: 40
A448/A403 SEQ ID NO: 54 SEQ ID NO: 52
A448/A439 SEQ ID NO: 54 SEQ ID NO: 58
A448/A440 SEQ ID NO: 54 SEQ ID NO: 200
A490/A290 SEQ ID NO: 56 SEQ ID NO: 40
A490/A403 SEQ ID NO: 56 SEQ ID NO: 52
A490/A439 SEQ ID NO: 56 SEQ ID NO: 58
A490/A440 SEQ ID NO: 56 SEQ ID NO: 200
A486/A290 SEQ ID NO: 60 SEQ ID NO: 40
A486/A403 SEQ ID NO: 60 SEQ ID NO: 52
A486/A439 SEQ ID NO: 60 SEQ ID NO: 58
A486/A440 SEQ ID NO: 60 SEQ ID NO: 200
A437/A290 SEQ ID NO: 181 SEQ ID NO: 40
A437/A403 SEQ ID NO: 181 SEQ ID NO: 52
A437/A439 SEQ ID NO: 181 SEQ ID NO: 58
A437/A440 SEQ ID NO: 181 SEQ ID NO: 200
A428/A290 SEQ ID NO: 190 SEQ ID NO: 40
A428/A403 SEQ ID NO: 190 SEQ ID NO: 52
A428/A439 SEQ ID NO: 190 SEQ ID NO: 58
A428/A440 SEQ ID NO: 190 SEQ ID NO: 200
A435/A290 SEQ ID NO: 192 SEQ ID NO: 40
A435/A403 SEQ ID NO: 192 SEQ ID NO: 52
A435/A439 SEQ ID NO: 192 SEQ ID NO: 58
A435/A440 SEQ ID NO: 192 SEQ ID NO: 200
A436/A290 SEQ ID NO: 194 SEQ ID NO: 40
A436/A403 SEQ ID NO: 194 SEQ ID NO: 52
A436/A439 SEQ ID NO: 194 SEQ ID NO: 58
A436/A440 SEQ ID NO: 194 SEQ ID NO: 200
A438/A290 SEQ ID NO: 196 SEQ ID NO: 40
A438/A403 SEQ ID NO: 196 SEQ ID NO: 52
A438/A439 SEQ ID NO: 196 SEQ ID NO: 58
A438/A440 SEQ ID NO: 196 SEQ ID NO: 200
A450/A290 SEQ ID NO: 198 SEQ ID NO: 40
A450/A403 SEQ ID NO: 198 SEQ ID NO: 52
A450/A439 SEQ ID NO: 198 SEQ ID NO: 58
A450/A440 SEQ ID NO: 198 SEQ ID NO: 200
在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 35之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 40之VL的A291/A290。
在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 35之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 52之VL的A291/A403。
在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 35之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 58之VL的A291/A439。
在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 35之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 200之VL的A291/A440。
在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 50之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 40之VL的A402/A290。
在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 50之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 52之VL的A402/A403。
在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 50之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 58之VL的A402/A439。
在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 50之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 200之VL的A402/A440。
在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 54之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 40之VL的A448/A290。
在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 54之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 52之VL的A448/A403。
在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 54之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 58之VL的A448/A439。
在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 54之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 200之VL的A448/A440。
在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 56之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 40之VL的A490/A290。
在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 56之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 52之VL的A490/A403。
在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 56之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 58之VL的A490/A439。
在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 56之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 200之VL的A490/A440。
在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 60之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 40之VL的A486/A290。
在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 60之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 52之VL的A486/A403。
在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 60之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 58之VL的A486/A439。
在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 60之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 200之VL的A486/A440。
在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 181之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 40之VL的A437/A290。
在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 181之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 52之VL的A437/A403。
在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 181之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 58之VL的A437/A439。
在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 181之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 200之VL的A437/A440。
在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 190之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 40之VL的A428/A290。
在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 190之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 52之VL的A428/A403。
在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 190之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 58之VL的A428/A439。
在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 190之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 200之VL的A428/A440。
在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 192之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 40之VL的A435/A290。
在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 192之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 52之VL的A435/A403。
在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 192之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 58之VL的A435/A439。
在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 192之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 200之VL的A435/A440。
在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 194之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 40之VL的A436/A290。
在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 194之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 52之VL的A436/A403。
在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 194之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 58之VL的A436/A439。
在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 194之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 200之VL的A436/A440。
在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 196之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 40之VL的A438/A290。
在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 196之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 52之VL的A438/A403。
在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 196之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 58之VL的A438/A439。
在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 196之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 200之VL的A438/A440。
在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 198之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 40之VL的A450/A290。
在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 198之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 52之VL的A450/A403。
在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 198之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 58之VL的A450/A439。
在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 198之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 200之VL的A450/A440。
在又另一態樣中，本文提供與上述抗體或其抗原結合片段中之一者競爭的抗體。此類抗體亦可與上述抗體之一結合至相同的抗原決定基，或重疊的抗原決定基。預期與上述抗體競爭或結合至相同抗原決定基之抗體及片段展示類似功能特性。例示的抗原結合蛋白及片段包括具有本文所提供之VH區、VL區及CDR的彼等物，包括本文所提供之序列表及表26-35中的彼等物。
在某些實施例中，本文所述之抗體或其抗原結合片段包含相對於上述抗體(包括下述章節6中所述之例示性抗體)具有特定一致性百分比的胺基酸序列。
測定兩個序列(例如胺基酸序列或核酸序列)之間的一致性百分比可以使用數學算法來完成。用於比較兩個序列之數學算法的較佳非限制性實例為Karlin及Altschul, 1990,Proc . Natl . Acad . Sci . U . S . A . 87:2264 2268之算法，如Karlin及Altschul, 1993,Proc . Natl . Acad . Sci . U . S . A . 90:5873 5877中所修改。將此類算法併入Altschul等人, 1990,J . Mol . Biol . 215:403之NBLAST及XBLAST程式中。可利用NBLAST核苷酸程式參數集(例如分數=100，字長=12)進行BLAST核苷酸搜尋，以獲得與本文所述之核酸分子同源的核苷酸序列。可以利用XBLAST程序參數集(例如分數50，字長=3)進行BLAST蛋白質搜尋，以獲得與本文所述之蛋白質分子同源的胺基酸序列。為使空位比對達成比較目的，可如Altschul等人, 1997, Nucleic Acids Res. 25:3389 3402中所述使用空位BLAST。或者，可以利用PSI BLAST進行迭代搜尋，從而偵測分子間之遠緣關係(同上)。當利用BLAST、空位BLAST及PSI Blast程式時，可使用相應程式(例如XBLAST及NBLAST)之預設參數(參見例如全球資訊網ncbi.nlm.nih.gov上之國家生物技術資訊中心(NCBI))。用於比較序列之數學算法的另一個較佳非限制實例為Myers及Miller, 1988, CABIOS 4:11 17之算法。此類算法併入ALIGN程式(2.0版)中，該ALIGN程式為GCG序列比對套裝軟體之一部分。當利用ALIGN程式來比較胺基酸序列時，可使用PAM120權重殘基表、空位長度罰分12及空位罰分4。
兩個序列之間的一致性百分比可在允許或不允許有空位的情況下，使用與上文所述類似的技術來測定。在計算一致性百分比時，典型地僅對精確匹配進行計數。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 35之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區及/或與SEQ ID NO: 40具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 35中所含之CDR之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 40中所含之CDR之胺基酸序列至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 35中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 40中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 35之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 52具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 35中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 52中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 35中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 52中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 35之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區及/或與SEQ ID NO: 58具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 35中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 58中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 35中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 58中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 35之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 200具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 35中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 200中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 35中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 200中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 50之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 40具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 50中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 40中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 50中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 40中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 50之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 52具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 50中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 52中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 50中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 52中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 50之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 58具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 50中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 58中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 50中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 58中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 50之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 200具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 50中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 200中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 50中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 200中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 54之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 40之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 54中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 40中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 54中所含之構架區胺基酸序列序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 40中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 54之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 52之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 54中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 52中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 54中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 52中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 54之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 58之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 54中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 58中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 54中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 58中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 54之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 200之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 54中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 200中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 54中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 200中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 56之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 40之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 56中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 40中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 56中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 40中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 56之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 52之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 56中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 52中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 56中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 52中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 56之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 58之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 56中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 58中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 56中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 58中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 56之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 200之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 56中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 200中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 56中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 200中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 60之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 40之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 60中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 40中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 60中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 40中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 60之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 52之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 60中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 52中所含之CDR之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 60中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 52中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 60之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 58之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 60中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 58中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 60中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 58中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 60之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 200之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 60中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 200中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 60中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 200中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 181之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 40具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 181中所含之CDR之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 40中所含之CDR之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 181中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 40中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 181之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 52之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 181中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 52中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 181中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 52中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 181之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 58之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 181中所含之CDR之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 58中所含之CDR之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 181中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 58中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 181之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 200之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 181中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 200中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 181中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 200中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 190之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 40之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 190中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 40中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 190中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 40中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 190之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 52之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 190中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 52中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 190中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 52中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 190之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 58之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 190中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 58中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 190中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 58中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 190之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 200具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 190中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 200中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 190中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 200中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 192之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區及/或與SEQ ID NO: 40之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 192中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 40中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 192中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 40中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 192之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 52具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 192中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 52中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 192中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 52中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 192之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 58具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 192中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或包含CDR與SEQ ID NO: 58中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 192中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 58中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 192之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 200具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 192中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 200中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 192中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 200中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 194之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 40具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 194中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 40中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 194中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 40中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 194之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 52具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 194中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 52中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 194中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 52中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 194之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 58之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 194中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 58中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 194中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 58中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 194之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 200之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 194中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 200中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 194中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 200中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 196之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 40之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 196中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 40中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 196中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 40中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 196之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 52之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 196中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 52中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 196中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 52中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 196之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 58具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 196中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 58中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 196中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 58中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 196之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 200具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 196中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 200中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 196中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 200中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 198之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 40之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 198中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 40中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 198中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 40中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 198之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 52之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 198中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 52中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 198中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 52中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 198之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 58之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 198中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 58中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 198中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 58中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 198之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 200之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 198中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 200中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 198中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 200中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。5.2.2 多株抗體
本發明之抗體可以包含多株抗體。熟習此項技術者已知製備多株抗體之方法。多株抗體可以在哺乳動物中產生，例如藉由一或多次注射免疫劑及必要時佐劑來產生。典型地，免疫劑及/或佐劑將藉由多次皮下或腹膜內注射來注射至哺乳動物中。免疫劑可以包括Fn14多肽或其融合蛋白。使免疫劑與已知在待免疫之哺乳動物中具有免疫原性之蛋白質結合或在哺乳動物中免疫接種蛋白質及一或多種佐劑可為適用的。此類免疫原性蛋白質之實例包括(但不限於)匙孔螺血氰蛋白、血清白蛋白、牛甲狀腺球蛋白及大豆胰蛋白酶抑制劑。可使用之佐劑之實例包括Ribi、CpG、聚(I:C）、弗氏完全佐劑(Freund's complete adjuvant)，及MPL-TDM佐劑(單磷醯基脂質A、合成海藻糖二黴菌酸酯)。熟習此項技術者可以選擇免疫接種方案而無需過度實驗。接著可將哺乳動物抽血，且分析血清中之抗Fn14抗體效價。必要時，哺乳動物可以增強免疫直至抗體效價增加或平穩。另外地或可替代地，可自經免疫之動物獲得淋巴球用於融合及利用融合瘤製備單株抗體，如下文所述。5.2.3 單株抗體
本發明之抗體可替代地為單株抗體。單株抗體可以使用首次由Kohler等人, 1975, Nature 256:495-97所述的融合瘤方法製得，或可以藉由重組DNA方法製得(參見例如美國專利第4,816,567號)。
在融合瘤方法中，如上文所述將小鼠或其他適當宿主動物(諸如倉鼠)免疫接種，以誘使淋巴球產生或能夠產生將特異性結合至免疫接種用之蛋白質的抗體。或者，可在活體外免疫接種淋巴球。免疫接種之後，分離出淋巴球且接著使用適合的融合劑(諸如聚乙二醇)使其與骨髓瘤細胞株融合，以形成融合瘤細胞(Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice 59-103 (1986))。
接種由此製備之融合瘤細胞且在適合的培養基中生長，在某些實施例中，該培養基含有一或多種抑制未融合之親本骨髓瘤細胞生長或存活的物質(亦稱為融合搭配物)。舉例而言，若親本骨髓瘤細胞缺乏酵素次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖基轉移酶(HGPRT或HPRT)，則用於融合瘤之選擇性培養基典型地包括次黃嘌呤、胺基蝶呤及胸苷(HAT培養基)，該等物質阻止缺乏HGPRT之細胞生長。
例示性融合搭配物骨髓瘤細胞為有效融合、支持所選產抗體細胞穩定高量產生抗體且對選擇性針對未融合之親本細胞之選擇性培養基敏感的細胞。例示性骨髓瘤細胞株為鼠類骨髓瘤株，諸如SP-2及衍生物，例如獲自美國菌種保藏中心(American Type Culture Collection, Manassas, VA)之X63-Ag8-653細胞，及獲自沙克研究所細胞分配中心(Salk Institute Cell Distribution Center, San Diego, CA)之MOPC-21及MPC-11小鼠腫瘤所產生的彼等細胞。用於產生人類單株抗體之人類骨髓瘤及小鼠-人類雜骨髓瘤細胞株亦已描述(Kozbor, 1984,Immunol . 133:3001-05；及Brodeur等人, 1987,Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications 51-63)。
分析融合瘤細胞正生長於其中之培養基中針對抗原之單株抗體的產生情況。融合瘤細胞產生之單株抗體的結合特異性係藉由免疫沈澱或藉由活體外結合分析(諸如RIA或ELISA)來測定。單株抗體之結合親和力可例如藉由Munson等人, 1980,Anal . Biochem . 107:220-39中所述之史卡查分析(Scatchard analysis)測定。
鑑別出產生具有所要特異性、親和力及/或活性之抗體的融合瘤細胞之後，可藉由限制稀釋程序次選殖純系且藉由標準方法使其生長(Goding，同上)。適用於此目的之培養基包括例如DMEM或RPMI-1640培養基。此外，融合瘤細胞可在動物中以腹水腫瘤形式活體內生長，例如藉由腹膜內注射細胞至小鼠中。
次純系所分泌之單株抗體宜藉由習知抗體純化程序(諸如親和層析(例如使用蛋白質A或蛋白質G-瓊脂糖)或離子交換層析、羥磷灰石層析、凝膠電泳、滲析等))、自培養基、腹水液或血清中分離。
編碼單株抗體之DNA容易使用習知程序(例如藉由使用能夠特異性結合至編碼鼠類抗體重鏈及輕鏈之基因的寡核苷酸探針)分離及測序。融合瘤細胞可充當此類DNA之來源。DNA一經分離，則可置放於表現載體中，接著轉染至原本不產生抗體蛋白質的宿主細胞(諸如大腸桿菌細胞、猿猴COS細胞、中國倉鼠卵巢(CHO)細胞或骨髓瘤細胞)中，以在重組宿主細胞中達成單株抗體之合成。關於編碼抗體之DNA在細菌中重組表現的評論文章包括Skerra等人, 1993, Curr. Opinion in Immunol. 5:256-62及Plückthun, 1992, Immunol. Revs. 130:151-88。
在一些實施例中，結合Fn14抗原決定基的抗體包含VH域之胺基酸序列及/或VL域之胺基酸序列，該等胺基酸序列由核苷酸序列編碼，該核苷酸序列與(1)編碼本文所述之VH及/或VL域中之任一者之核苷酸序列之補體在以下條件下雜交：嚴格條件(例如在約45℃下，在6X氯化鈉/檸檬酸鈉(SSC)中與過濾器結合的DNA雜交，隨後在約50-65℃下，在0.2X SSC/0.1% SDS中洗滌一或多次)、高度嚴格條件(例如在約45℃下，在6X SSC中與過濾器結合的核酸雜交，隨後在約68℃下，在0.1X SSC/0.2% SDS中洗滌一或多次)，或熟習此項技術者已知的其他嚴格雜交條件。參見例如Current Protocols in Molecular Biology第I卷, 6.3.1-6.3.6及2.10.3 (Ausubel等人編, 1989)。
在一些實施例中，結合Fn14抗原決定基的抗體包含VH CDR之胺基酸序列或VL CDR之胺基酸序列，該等胺基酸序列由核苷酸序列編碼，該核苷酸序列與編碼本文所提供之序列表中所描繪之VH CDR及/或VL CDR中之任一者之核苷酸序列的補體在以下條件下雜交：嚴格條件(例如在約45℃下，在6X SSC中與過濾器結合的DNA雜交，隨後在約50-65℃下，在0.2X SSC/0.1% SDS中洗滌一或多次)、高度嚴格條件(例如在約45℃下，在6X SSC中與過濾器結合的核酸雜交，隨後在約68℃下，在0.1X SSC/0.2% SDS中洗滌一或多次)，或熟習此項技術者已知的其他嚴格雜交條件(參見例如Ausubel等人，同上)。
在另一個實施例中，可以自使用例如Antibody Phage Display: Methods and Protocols (O'Brien及Aitken編, 2002)所述之技術所產生的抗體噬菌體庫中分離出單株抗體或抗體片段。在噬菌體呈現方法中，功能抗體域呈現於攜載編碼其之聚核苷酸序列之噬菌體顆粒的表面上。可用於製備本文所述之抗體的噬菌體呈現方法之實例包括以下文獻中所揭示之方法：Brinkman等人, 1995, J. Immunol. Methods 182:41-50；Ames等人, 1995, J. Immunol. Methods 184:177-186；Kettleborough等人, 1994, Eur. J. Immunol. 24:952-958；Persic等人, 1997, Gene 187:9-18；Burton等人, 1994, Advances in Immunology 57:191-280；PCT申請案第PCT/GB91/O1 134號；國際公開案第WO 90/02809號、第WO 91/10737號、第WO 92/01047號、第WO 92/18619號、第WO 93/1 1236號、第WO 95/15982號、第WO 95/20401號及第WO97/13844號；以及美國專利5,698,426號、第5,223,409號、第5,403,484號、第5,580,717號、第5,427,908號、第5,750,753號、第5,821,047號、第5,571,698號、第5,427,908號、第5,516,637號、第5,780,225號、第5,658,727號、第5,733,743號及第5,969,108號。
原則上，合成抗體純系藉由篩選噬菌體庫來選擇，該等噬菌體庫含有呈現與噬菌體鞘蛋白融合之抗體可變區(Fv)之各種片段的噬菌體。針對所需抗原篩選此類噬菌體庫。能夠結合至所要抗原的表現Fv片段之純系吸附至抗原且因此與庫中之非結合純系分離。結合純系接著自抗原溶離，且可藉由額外的抗原吸附/溶離循環進一步增濃。
可變域在功能上可以單鏈Fv (scFv)片段形式(其中VH與VL經由短柔性肽共價連接)或Fab片段形式(其中其各自與恆定域融合且發生非共價相互作用)呈現於噬菌體上，如例如Winter等人, 1994, Ann. Rev. Immunol. 12:433-55中所述。
VH及VL基因譜系可以藉由PCR分別選殖且在噬菌體庫中隨機重組，接著可以如Winter等人(同上)中所述搜尋抗原結合純系。來自免疫來源之庫提供針對免疫原之高親和力抗體而無需構築融合瘤。或者，可選殖原生譜系以提供針對廣泛範圍之非自體抗原以及自體抗原之單一人類抗體來源而無需任何免疫接種，如Griffiths等人, 1993, EMBO J 12:725-34所述。最後，亦可以合成方式如下製備原生庫：自幹細胞選殖未重排V基因區段，且使用含有隨機序列之PCR引子編碼高度可變CDR3區域及實現活體外重排，如Hoogenboom及Winter, 1992, J. Mol. Biol. 227:381-88所述。
可藉由此項技術中已知的多種技術實現庫之篩選。舉例而言，可以使用Fn14 (例如Fn14多肽、片段或抗原決定基)塗佈吸附盤之各孔，在黏附於吸附盤的宿主細胞上表現或用於細胞分選，與生物素結合以便塗佈抗生蛋白鏈菌素之珠粒捕捉，或在淘選呈現庫之任何其他方法中使用。選擇具有緩慢解離動力學(例如良好結合親和力)之抗體可藉由使用長時間洗滌及單價噬菌體呈現來促進(如Bass等人, 1990, Proteins, 8:309-14及WO 92/09690中所述)，及藉由使用抗原之低塗佈密度來促進(如Marks等人, 1992, Biotechnol. 10:779-83中所述)。
抗Fn14抗體可以如下獲得：設計適於選擇所關注之噬菌體純系的抗原篩選程序，隨後使用VH及/或VL序列(例如Fv序列)或來自VH及VL序列的多個CDR序列、由所關注之噬菌體純系及Kabat等人(同上)所述的適合恆定區(例如Fc)序列構築全長抗體純系。
本文所述之抗體亦可例如包括嵌合抗體。嵌合抗體為其中抗體之不同部分來源於不同免疫球蛋白分子的分子。舉例而言，嵌合抗體可含有與人類抗體恆定區融合的小鼠或大鼠單株抗體可變區。用於產生嵌合抗體之方法在此項技術中已知。參見例如Morrison, 1985, Science 229:1202；Oi等人, 1986, BioTechniques 4:214；Gillies等人, 1989, J. Immunol. Methods 125:191-202；及美國專利第5,807,715號、第4,816,567號、第4,816,397號及第6,331,415號。
使用諸如本文所述之彼等技術的技術產生的抗體或抗原結合片段可使用熟知的標準技術加以分離。舉例而言，抗體或抗原結合片段宜藉由習知免疫球蛋白純化程序(諸如蛋白質A-瓊脂糖、羥磷灰石層析、凝膠電泳、透析或親和層析)自例如培養基、腹水液、血清、細胞溶胞物、合成反應材料或其類似物中分離。如本文所用，「經分離」或「經純化」之抗體基本上不含來自衍生抗體之細胞或組織源的細胞材料或其他蛋白質，或當以化學方式合成時基本上不含化學前驅物或其他化學物質。
在一些特定實施例中，使用以下章節6中所例示之方法產生單株抗體。在一些特定實施例中，使用如下章節6中所例示之方法產生融合瘤。在一些特定實施例中，使用如下章節6中所例示之方法產生嵌合抗體。5.2.4 抗體片段
本發明提供結合至Fn14之抗體及抗體片段。在某些情形中，使用抗體片段優於完整抗體。較小的片段尺寸允許快速清除，且可以改良對細胞、組織或器官的近接。關於某些抗體片段之評述，參見Hudson等人, 2003, Nature Med. 9:129-34。
已開發出用於產生抗體片段的多種技術。傳統上，此等片段係經由完整抗體之蛋白水解消化而得到(參見例如Morimoto等人, 1992, J. Biochem. Biophys. Methods 24:107-17；及Brennan等人, 1985, Science 229:81-83)。然而，此等片段現可由重組宿主細胞直接產生。Fab、Fv及ScFv抗體片段皆可表現於大腸桿菌或酵母細胞中及由其分泌，從而允許便捷地產生大量的此等片段。抗體片段可自上文所論述之抗體噬菌體庫中分離。或者，Fab'-SH片段可以自大腸桿菌中直接回收且以化學方式偶聯而形成F(ab')2 片段(Carter等人, 1992, Bio/Technology 10:163-67)。根據另一方法，可以自重組宿主細胞培養物中直接分離出F(ab')2片段。活體內半衰期延長且包含救助受體結合抗原決定基殘基之Fab及F(ab')2 片段描述於例如美國專利第5,869,046號中。產生抗體片段的其他技術對於熟習此項技術者而言為顯而易見的。在某些實施例中，抗體為單鏈Fv片段(scFv)(參見例如WO 93/16185；美國專利第5,571,894號及第5,587,458號)。Fv及scFv具有不含恆定區之完整組合位點；因此，其可適用於活體內使用期間減少之非特異性結合。可以構築scFv融合蛋白，以產生效應蛋白在scFv之胺基或羧基端的融合物(參見例如Borrebaeck編，同上)。抗體片段亦可為「線性抗體」，例如如上文所引用之參考文獻中所述。此類線性抗體可為單特異性或多特異性抗體，諸如雙特異性抗體。
較小的抗體源結合結構為單獨的可變域(V域），亦稱為單一可變域抗體(sdAb)。某些類型的生物體(駱駝科及軟骨魚)具有固定於Fc等效域結構上之高親和力單一V樣域作為其免疫系統的一部分。(Woolven等人, 1999, Immunogenetics 50: 98-101；及Streltsov等人, 2004, Proc Natl Acad Sci USA. 101:12444-49)。V樣域(駱駝科中稱為VhH且鯊魚中稱為V-NAR)典型地呈現長表面環，從而允許滲入目標抗原之空腔中。其亦藉由遮蔽疏水性表面斑點而使經分離之VH域穩定。
此等VhH及V-NAR域已用於對sdAb進行工程改造。已使用自噬菌體庫選擇及產生穩定、高度結合VL及VH源域之其他方法設計人類V域變異體。
本文所提供之抗體包括(但不限於)免疫球蛋白分子及免疫球蛋白分子之免疫活性部分，例如含有結合至Fn14抗原決定基之抗原結合位點的分子。本文所提供的免疫球蛋白分子可以屬於免疫球蛋白分子的任何類別(例如IgG、IgE、IgM、IgD及IgA)或任何子類(例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1及IgA2)。
抗體之變異體及衍生物包括保持結合至Fn14抗原決定基之能力的抗體功能片段。例示性片段包括Fab片段(含有抗原結合域且包含藉由二硫鍵橋連之輕鏈與重鏈一部分的抗體片段)；Fab' (含有單一抗結合域、包含經由鉸鏈區連接之Fab與重鏈之另一部分的抗體片段)；F(ab')2 (藉由重鏈鉸鏈區中之鏈間二硫鍵連接的兩個Fab'分子；Fab'分子可以針對相同或不同抗原決定基)；雙特異性Fab (例如具有兩個抗原結合域的Fab分子，其中之每一者可以針對不同抗原決定基)；包含可變區的單鏈，亦稱為scFv (例如抗體之單一輕鏈及重鏈的可變、抗原結合決定區，其藉由10-25個胺基酸之鏈連在一起)；二硫鍵連接的Fv，或dsFv (例如抗體之單一輕鏈與重鏈的可變、抗原結合決定區，其藉由二硫鍵連在一起)；駱駝化VH (例如抗體之單一重鏈的可變、抗原結合決定區，其中VH界面處的一些胺基酸為天然存在之駱駝抗體之重鏈中所發現的彼等胺基酸)；雙特異性scFv (例如具有兩個抗原結合域的scFv或dsFv分子，其中之每一者可以針對不同抗原決定基)；雙功能抗體(例如當第一scFv之VH域與第二scFv之VL域組裝以及第一scFv之VL域與第二scFv之VH域組裝時形成的二聚scFv；雙功能抗體的兩個抗原結合區可以針對相同或不同抗原決定基)；三功能抗體(例如以類似於雙功能抗體之方式形成的三聚scFv，但其中在單一複合物中產生三個抗原結合域；該等三個抗原結合域可以針對相同或不同抗原決定基)；以及四功能抗體(例如以類似於雙功能抗體之方式形成的四聚scFv，但其中在單一複合物中產生四個抗原結合域；該等四個抗原結合域可以針對相同或不同抗原決定基)。5.2.5 人類化抗體
本文所述之抗體可例如包括人類化抗體，例如去免疫型或複合人類抗體。
人類化抗體可包含人類構架區及人類恆定區序列。舉例而言，人類化抗體可包含人類恆定區序列。在某些實施例中，人類化抗體可選自任何類別之免疫球蛋白，包括IgM、IgG、IgD、IgA及IgE；及任何同型，包括IgG1、IgG2、IgG3及IgG4 (例如IgG4及IgG4剔除型抗體之變異體)。在某些實施例中，人類化抗體可包含κ或λ輕鏈恆定序列。
人類化抗體可使用此項技術中已知之多種技術產生，包括(但不限於) CDR移植(歐洲專利第EP 239,400號；國際公開案第WO 91/09967號；及美國專利第5,225,539號、第5,530,101號及第5,585,089號)、鑲飾或表面再塑(歐洲專利第EP 592,106號及第EP 519,596號；Padlan, 1991, Molecular Immunology 28(4/5):489-498；Studnicka等人, 1994, Protein Engineering 7(6):805-814；及Roguska等人, 1994, PNAS 91:969-973)、鏈改組(美國專利第5,565,332號)，及以下文獻中所揭示的技術：例如美國專利第6,407,213號、美國專利第5,766,886號、WO 93/17105；Tan等人, J. Immunol. 169:1119 25 (2002), Caldas等人, Protein Eng. 13(5):353-60 (2000), Morea等人, Methods 20(3):267 79 (2000), Baca等人, J. Biol. Chem. 272(16):10678-84 (1997), Roguska等人, Protein Eng. 9(10):895 904 (1996), Couto等人, Cancer Res. 55 (增刊23):5973s- 5977s (1995), Couto等人, Cancer Res. 55(8):1717-22 (1995), Sandhu JS, Gene 150(2):409-10 (1994)及Pedersen等人, J. Mol. Biol. 235(3):959-73 (1994)。亦參見美國專利公開案第US 2005/0042664 A1號(2005年2月24日)，其中之每一者均以全文引用之方式併入本文中。
在一些實施例中，本文所提供之抗體可為結合Fn14 (包括人類、食蟹獼猴、大鼠及小鼠Fn14)之人類化抗體。舉例而言，本發明之人類化抗體可包含如本文所提供之序列表中所示之一或多個CDR。使非人類抗體發生人類化的多種方法在此項技術中已知。舉例而言，人類化抗體中可以引入一或多個來自非人類來源的胺基酸殘基。此等非人類胺基酸殘基通常稱為「輸入」殘基，其典型地取自「輸入」可變域。人類化可以依循例如Jones等人, 1986, Nature 321:522-25；Riechmann等人, 1988, Nature 332:323-27；及Verhoeyen等人, 1988, Science 239:1534-36)之方法，藉由用高變區序列取代人類抗體的相應序列來執行。
在一些情況下，藉由CDR移植來構築人類化抗體，其中將親本非人類抗體(例如嚙齒動物)之六個CDR的胺基酸序列移植至人類抗體構架上。舉例而言，Padlan等人測定CDR中僅約三分之一的殘基實際上接觸抗原，且將此等殘基稱為「特異性決定殘基」或SDR (Padlan等人, 1995, FASEB J. 9:133-39)。在SDR移植技術中，僅將SDR殘基移植至人類抗體構架上(參見例如Kashmiri等人, 2005, Methods 36:25-34)。
選用於製備人類化抗體的人類可變域(輕鏈與重鏈)對於減少抗原性而言可為重要的。舉例而言，根據所謂的「最佳擬合」方法，針對已知人類可變域序列之整個庫篩選非人類(例如嚙齒動物)抗體之可變域序列。可以選擇最接近嚙齒動物之人類序列作為人類化抗體之人類構架(Sims等人, 1993, J. Immunol. 151:2296-308；及Chothia等人, 1987, J. Mol. Biol. 196:901-17)。另一方法係使用來源於輕鏈或重鏈之特定亞群之所有人類抗體共同序列的特定構架。相同構架可以用於若干不同人類化抗體(Carter等人, 1992, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:4285-89；及Presta等人, 1993, J. Immunol. 151:2623-32)。在一些情況下，構架來源於最豐裕的人類亞類(VL6亞群I (VL6I)及VH亞群III (VHIII))之共同序列。在另一方法中，使用人類生殖系基因作為構架區來源。
在基於比較CDR之一個替代範例(稱為超人類化)中，FR同源性為無關的。該方法由非人類序列與人類生殖系功能基因譜系的比較組成。接著選擇編碼與鼠類序列相同或緊密相關之典型結構的彼等基因。接著，在與非人類抗體共有典型結構之基因內，選擇在CDR內具有最高同源性之基因作為FR供體。最後，將非人類CDR移植至此等FR上(參見例如Tan等人, 2002, J. Immunol. 169:1119-25)。
通常進一步需要使抗體發生人類化以保持其對抗原的親和力及其他有利生物特性。為了達成此目標，根據一種方法，人類化抗體係藉由使用親本及人類化序列的三維模型分析親本序列及各種概念性人類化產物的方法製備。三維免疫球蛋白模型通常可獲得且為熟習此項技術者所熟悉。可利用說明且顯示所選候選免疫球蛋白序列之可能三維構形結構的電腦程式。此等電腦程式包括例如WAM (Whitelegg及Rees, 2000, Protein Eng. 13:819-24)、Modeller (Sali及Blundell, 1993, J. Mol. Biol. 234:779-815)，及Swiss PDB Viewer (Guex及Peitsch, 1997, Electrophoresis 18:2714-23)。此等檢查顯示可分析殘基在候選免疫球蛋白序列之功能中的可能作用，例如分析影響候選免疫球蛋白結合其抗原之能力的殘基。以此方式，可以選擇FR殘基且與接受者及輸入序列組合，以便達成所需抗體特徵，諸如對目標抗原的親和力增強。一般而言，高變區殘基直接且最實質性涉及影響抗原結合。
另一種用於抗體人類化之方法係基於抗體人類化的量度，稱為人類肽段含量(Human String Content，HSC)。此方法比較小鼠序列與人類生殖系基因譜系且依HSC對差異進行評分。接著藉由最大化目標序列之HSC而非使用總體一致性量度來使目標序列發生人類化，以產生多種不同人類化變異體(Lazar等人, 2007, Mol. Immunol. 44:1986-98)。
除上述方法之外，可使用經驗方法產生及選擇人類化抗體。此等方法包括基於產生人類化變異體之大型庫及使用富集技術或高生產量篩選技術選擇最佳純系的方法。抗體變異體可以自噬菌體、核糖體及酵母展示庫中分離以及藉由細菌群落篩選來分離(參見例如Hoogenboom, 2005, Nat. Biotechnol. 23:1105-16；Dufner等人, 2006, Trends Biotechnol. 24:523-29；Feldhaus等人, 2003, Nat. Biotechnol. 21:163-70；及Schlapschy等人, 2004, Protein Eng. Des. Sel. 17:847-60)。
在FR庫方法中，在FR中之特定位置引入一組殘基變異體，隨後篩選庫以選擇最佳支持所移植CDR之FR。待取代之殘基可以包括鑑別為潛在促成CDR結構之「游標」殘基中的一些或全部(參見例如Foote及Winter, 1992, J. Mol . Biol. 224:487-99)，或來自Baca等人(1997, J. Biol. Chem. 272:10678-84)所鑑別之一組更有限的目標殘基。
在FR改組中，將整個FR與非人類CDR組合，而非產生所選殘基變異體之組合庫(參見例如Dall'Acqua等人, 2005, Methods 36:43-60)。可用兩步法(首先使VL發生人類化，隨後使VH發生人類化)篩選用於結合的庫。或者，可使用一步FR改組方法。已展示此類方法比兩步篩選更有效，因為所得抗體展現改良之生物化學及物理化學特性，包括增強之表現、增強之親和力及熱穩定性(參見例如Damschroder等人, 2007, Mol. Immunol. 44:3049-60)。
「人類化工程改造」方法係基於基本最小特異性決定子(MSD)之實驗鑑別且基於非人類片段依序置換至人類FR庫中及對結合的評估。其始於非人類VH及VL鏈之CDR3區域且將非人類抗體之其他區域逐漸置換至人類FR中，包括VH與VL之CDR1及CDR2。此方法典型地引起抗原決定基保持及自具有不同人類V區段CDR之多個亞類中鑑別抗體。人類化工程改造允許分離與人類生殖系基因抗體具有91-96%同源性之抗體(參見例如Alfenito, Cambridge Healthtech Institute's Third Annual PEGS, The Protein Engineering Summit, 2007)。
「人類工程改造」方法涉及藉由使抗體之胺基酸序列產生特定變化以便產生經修飾之抗體來改變非人類抗體或抗體片段，諸如小鼠或嵌合抗體或抗體片段，該經修飾之抗體在人類中的免疫原性減小，然而仍保持原始非人類抗體之所需結合特性。通常，該技術涉及將非人類(例如小鼠)抗體之胺基酸殘基依「低風險」、「中度風險」或「高風險」殘基分類。分類係使用總體風險/獎勵計算來執行，其針對取代將影響所產生抗體摺疊的風險來評估產生特定取代的預測益處(例如針對人體中的免疫原性)。可以藉由將來自非人類抗體可變區的胺基酸序列與特定或共同人類抗體序列之相應區域比對來選擇在非人類(例如小鼠)抗體序列之指定位置(例如低或中度風險)待取代的特定人類胺基酸殘基。根據比對，非人類序列中低風險或中度風險位置處之胺基酸殘基可取代人類抗體序列中之相應殘基。用於製備人類工程化蛋白質的技術更詳細地描述於Studnicka等人, 1994, Protein Engineering 7:805-14；美國專利第5,766,886號、第5,770,196號、第5,821,123號及第5,869,619號；及PCT公開案WO 93/11794中。
複合人類抗體可使用例如Composite Human Antibody™技術(Antitope Ltd., Cambridge, United Kingdom)來產生。為產生複合人類抗體，以避免T細胞抗原決定基的方式由多個人類抗體可變區序列之片段設計可變區序列，藉此使所得抗體之免疫原性最小化。此類抗體可包含人類恆定區序列，例如人類輕鏈及/或重鏈恆定區。
去免疫型抗體為其中T細胞抗原決定基已移除之抗體。用於產生去免疫型抗體之方法已有描述。參見例如Jones等人, Methods Mol Biol. 2009;525:405-23, xiv, 及De Groot等人, Cell. Immunol. 244:148-153(2006))。去免疫型抗體包含T細胞抗原決定基耗乏之可變區及人類恆定區。簡言之，選殖抗體之VH及VL且隨後在T細胞增殖分析中藉由測試來源於該抗體VH及VL之重疊肽來鑑別T細胞抗原決定基。經由電腦模擬方法鑑別T細胞抗原決定基以鑑別結合至人類II類MHC之肽。在VH及VL中引入突變以消除與人類II類MHC之結合。接著利用突變之VH及VL產生去免疫型抗體。
在一些特定實施例中，使用如下章節6中所例示之方法產生人類化抗體。
在一些實施例中，人類化抗體包含表26中所列及/或上述章節5.2.1中所述的一或多個CDR。
更特定言之，在一些實施例中，本文所提供之人類化抗體或其抗原結合片段包含： (a)重鏈可變區(VH)，其包含：(i)包含GYX1 FX2 DYNMH之胺基酸序列(SEQ ID NO: 184)的VH互補決定區1 (CDR H1)，其中X1為T、I或R，且X2為T或Q；(ii)包含X3 INPX4 NX5 X6 TNYNQKFKG之胺基酸序列(SEQ ID NO: 185)的VH互補決定區2 (CDR H2)，其中X3 為Y或S，X4 為N或R；X5 為A或G，且X6 為G或W；(iii)包含SGWFTY之胺基酸序列(SEQ ID NO: 121)的VH互補決定區3 (CDR H3)； (b)輕鏈可變區(VL)，其包含：(i)包含KSSQSLLNSAGKTYLN之胺基酸序列(SEQ ID NO: 127)的VL互補決定區1 (CDR L1)；(ii)包含LVSQLDS之胺基酸序列(SEQ ID NO: 128)的VL互補決定區2 (CDR L2)；(iii)包含WQGTX7 X8 PWT之胺基酸序列(SEQ ID NO: 186)的VL互補決定區3 (CDR L3)，其中X7 為H或F，且X8 為F或Y。
在一些更特定的實施例中，本文所提供之人類化抗體或其抗原結合片段包含： (a)重鏈可變區(VH)，其包含：(i)包含GYIFQDYNMH之胺基酸序列(SEQ ID NO: 122)的VH互補決定區1 (CDR H1)；(ii)包含X3 INPRNX5 X6 TNYNQKFKG之胺基酸序列(SEQ ID NO: 187)的VH互補決定區2 (CDR H2)，其中X3 為Y或S，X5 為A或G；且X6 為G或W；及(iii)包含SGWFTY之胺基酸序列(SEQ ID NO: 121)的VH互補決定區3 (CDR H3)； (b)輕鏈可變區(VL)，其包含：(i)包含KSSQSLLNSAGKTYLN之胺基酸序列(SEQ ID NO: 127)的VL互補決定區1 (CDR L1)；(ii)包含LVSQLDS之胺基酸序列(SEQ ID NO: 128)的VL互補決定區2 (CDR L2)；(iii)包含WQGTX7 YPWT之胺基酸序列(SEQ ID NO: 188)的VL互補決定區3 (CDR L3)，其中X7 為H或F。
在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含： (a)重鏈可變區(VH)，其包含：(i)包含GYIFQDYNMH之胺基酸序列(SEQ ID NO: 122)的VH互補決定區1 (CDR H1)；(ii)包含X3 INPRNX5 X6 TNYNX9 KFX10 G之胺基酸序列(SEQ ID NO: 259)的VH互補決定區2 (CDR H2)，其中X3 為Y或S，X5 為A或G；X6 為G或W，X9 為Q或D，且X10 為K、G、H或D；(iii)包含SGWFTY之胺基酸序列(SEQ ID NO: 121)的VH互補決定區3 (CDR H3)； (b)輕鏈可變區(VL)，其包含：(i)包含KSSQSLLNSAGKTYLN之胺基酸序列(SEQ ID NO: 127)的VL互補決定區1 (CDR L1)；(ii)包含LVX11 X12 LDX13 之胺基酸序列(SEQ ID NO: 258)的VL互補決定區2 (CDR L2)，其中X11 為S或A，X12 為Q或E，且X13 為S或D；(iii)包含WQGTX7 YPWT之胺基酸序列(SEQ ID NO: 188)的VL互補決定區3 (CDR L3)，其中X7 為H或F。
在其他更特定實施例中，本文所提供之人類化抗體或其抗原結合片段包含一或多個來自下表31之CDR。 表31.例示性人類化抗體之CDR
   CDR1 CDR2 CDR3
VH SEQ ID NO: 122 SEQ ID NO: 123 SEQ ID NO: 124 SEQ ID NO: 126 SEQ ID NO: 247 SEQ ID NO: 248 SEQ ID NO: 249 SEQ ID NO: 250 SEQ ID NO: 121
VL SEQ ID NO: 127 SEQ ID NO: 128 SEQ ID NO: 254 SEQ ID NO: 255 SEQ ID NO: 256 SEQ ID NO: 130 SEQ ID NO: 131
因此，在一些更特定的實施例中，本文所提供之人類化抗體或其抗原結合片段包含： (a)重鏈可變區(VH)，其包含：(i)包含SEQ ID NO: 122之胺基酸序列的VH互補決定區1 (CDR H1)；(ii)包含選自由以下組成之群之胺基酸序列的VH互補決定區2 (CDR H2)：SEQ ID NO: 123、SEQ ID NO: 124、SEQ ID NO: 126、SEQ ID NO: 247、SEQ ID NO: 248、SEQ ID NO: 249及SEQ ID NO: 250；及 (iii)包含SEQ ID NO: 121之胺基酸序列的VH互補決定區3 (CDR H3)，以及 (b)輕鏈可變區(VL)，其包含：(i)包含SEQ ID NO: 127之胺基酸序列的VL互補決定區1 (CDR L1)；(ii)包含選自由以下組成之群之胺基酸序列的VL互補決定區2 (CDR L2)：SEQ ID NO: 128、SEQ ID NO: 254、SEQ ID NO: 255及SEQ ID NO: 256；及(iii)包含選自由SEQ ID NO: 130及SEQ ID NO: 131組成之群之胺基酸序列的VL互補決定區3 (CDR L3)。
在其他更特定實施例中，本文所提供之人類化抗體或其抗原結合片段包含VH，其包含的CDR包含選自由以下組成之群之VH中所含之CDR的胺基酸序列：SEQ ID NO: 179、SEQ ID NO: 66、SEQ ID NO: 68、SEQ ID NO: 70、SEQ ID NO: 72、SEQ ID NO: 74、SEQ ID NO: 76、SEQ ID NO: 78、SEQ ID NO: 80、SEQ ID NO: 82、SEQ ID NO: 84、SEQ ID NO: 86、SEQ ID NO: 88、SEQ ID NO: 90、SEQ ID NO: 106、SEQ ID NO: 108、SEQ ID NO: 110、SEQ ID NO: 203、SEQ ID NO: 205、SEQ ID NO: 207、SEQ ID NO: 209、SEQ ID NO: 211、SEQ ID NO: 213、SEQ ID NO: 215、SEQ ID NO: 217、SEQ ID NO: 219、SEQ ID NO: 221、SEQ ID NO: 223、SEQ ID NO: 225及SEQ ID NO: 227；及VL，其包含的CDR包含選自由以下組成之群之VL中所含之CDR的胺基酸序列：SEQ ID NO: 92、SEQ ID NO: 94、SEQ ID NO: 96、SEQ ID NO: 98、SEQ ID NO: 100、SEQ ID NO: 102、SEQ ID NO: 104、SEQ ID NO: 112、SEQ ID NO: 229、SEQ ID NO: 231、SEQ ID NO: 233、SEQ ID NO: 235及SEQ ID NO: 237。
來自此等CDR區中之每一者的殘基標註於本文提供的序列表中。在一些實施例中，CDR係根據Kabat編號。在一些實施例中，CDR係根據AbM編號。在其他實施例中，CDR係根據Chothia編號。在其他實施例中，CDR係根據接觸編號。在一些實施例中，CDR係根據IMGT編號。在某些實施例中，抗體中之CDR可根據不同編號系統之組合(例如Kabat與Chothia之組合)確定。在某些實施例中，抗體中之一或多個CDR係根據Kabat編號確定且抗體中之其他CDR係根據Chothia編號確定。
在一些實施例中，本文所提供之人類化抗體或抗原結合片段進一步包含來自本文所述之人類化抗體的一或多個FR，包括下述章節6中之FR。在一些實施例中，本文所提供之人類化抗體或其抗原結合片段包含下表32中所列的一或多個FR序列。 表32.例示性人類化抗體之FR
   FR1 FR2 FR3 FR4
VH SEQ ID NO: 133 SEQ ID NO: 134 SEQ ID NO: 135 SEQ ID NO: 136 SEQ ID NO: 137 SEQ ID NO: 238 SEQ ID NO: 239 SEQ ID NO: 139 SEQ ID NO: 140 SEQ ID NO: 141 SEQ ID NO: 142 SEQ ID NO: 143 SEQ ID NO: 144 SEQ ID NO: 173 SEQ ID NO: 240 SEQ ID NO: 241 SEQ ID NO: 242 SEQ ID NO: 243 SEQ ID NO: 244 SEQ ID NO: 245 SEQ ID NO: 246    SEQ ID NO: 146 SEQ ID NO: 147 SEQ ID NO: 148 SEQ ID NO: 150 SEQ ID NO: 151 SEQ ID NO: 152 SEQ ID NO: 153 SEQ ID NO: 154 SEQ ID NO: 155 SEQ ID NO: 156 SEQ ID NO: 157 SEQ ID NO: 174 SEQ ID NO: 251 SEQ ID NO: 159
VL SEQ ID NO: 161 SEQ ID NO: 162 SEQ ID NO: 163 SEQ ID NO: 164 SEQ ID NO: 165 SEQ ID NO: 166 SEQ ID NO: 167 SEQ ID NO: 168 SEQ ID NO: 252 SEQ ID NO: 253 SEQ ID NO: 170 SEQ ID NO: 171 SEQ ID NO: 172
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列選自由以下組成之群的FR H1：SEQ ID NO: 133、SEQ ID NO: 134、SEQ ID NO: 135、SEQ ID NO: 136、SEQ ID NO: 137、SEQ ID NO: 238及SEQ ID NO: 239。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 133的FR H1。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 134的FR H1。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 135的FR H1。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 136的FR H1。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 137的FR H1。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 238的FR H1。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 239的FR H1。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列選自由以下組成之群的FR H2：SEQ ID NO: 139、SEQ ID NO: 140、SEQ ID NO: 141、SEQ ID NO: 142及SEQ ID NO: 143、SEQ ID NO: 144、SEQ ID NO: 173、SEQ ID NO: 240、SEQ ID NO: 241、SEQ ID NO: 242、SEQ ID NO: 243、SEQ ID NO: 244、SEQ ID NO: 245及SEQ ID NO: 246。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 139的FR H2。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 140的FR H2。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 141的FR H2。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 142的FR H2。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 143的FR H2。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 144的FR H2。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 173的FR H2。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 240的FR H2。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 241的FR H2。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 242的FR H2。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 243的FR H2。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 244的FR H2。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 245的FR H2。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 246的FR H2。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列選自由以下組成之群的FR H3：SEQ ID NO: 146、SEQ ID NO: 147、SEQ ID NO: 148、SEQ ID NO: 150、SEQ ID NO: 151、SEQ ID NO: 152、SEQ ID NO: 153、SEQ ID NO: 154、SEQ ID NO: 155、SEQ ID NO: 156、SEQ ID NO: 157、SEQ ID NO: 174及SEQ ID NO: 251。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 146的FR H3。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 147的FR H3。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 148的FR H3。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 150的FR H3。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 151的FR H3。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 152的FR H3。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 153的FR H3。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 154的FR H3。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 155的FR H3。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 156的FR H3。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 157的FR H3。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 174的FR H3。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 251的FR H3。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 159的FR H4。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列選自由SEQ ID NO: 161及SEQ ID NO: 162組成之群的FR L1。在一些實施例中，抗體包含SEQ ID NO: 161之FR L1。在一些實施例中，抗體包含SEQ ID NO: 162之FR L1。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列選自由以下組成之群的FR L2：SEQ ID NO: 163、SEQ ID NO: 164、SEQ ID NO: 165、SEQ ID NO: 166、SEQ ID NO: 167、SEQ ID NO: 168、SEQ ID NO: 252及SEQ ID NO: 253。在一些實施例中，抗體包含SEQ ID NO: 163之FR L2。在一些實施例中，抗體包含SEQ ID NO: 164之FR L2。在一些實施例中，抗體包含SEQ ID NO: 165之FR L2。在一些實施例中，抗體包含SEQ ID NO: 166之FR L2。在一些實施例中，抗體包含SEQ ID NO: 167之FR L2。在一些實施例中，抗體包含SEQ ID NO: 168之FR L2。在一些實施例中，抗體包含SEQ ID NO: 252之FR L2。在一些具體例中，抗體包含SEQ ID NO: 253之FR L2。
在一些實施例中，抗體包含SEQ ID NO: 170之FR L3。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列選自由SEQ ID NO: 171及SEQ ID NO: 172組成之群的FR L4。在一些實施例中，抗體包含SEQ ID NO: 171之FR L4。在一些實施例中，抗體包含SEQ ID NO: 172之FR L4。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 133的FR H1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 139的FR H2、胺基酸序列為SEQ ID NO: 146的FR H3，及胺基酸序列為SEQ ID NO: 159的FR H4。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 133的FR H1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 142的FR H2、胺基酸序列為SEQ ID NO: 146的FR H3，及胺基酸序列為SEQ ID NO: 159的FR H4。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 133的FR H1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 142的FR H2、胺基酸序列為SEQ ID NO: 148的FR H3，及胺基酸序列為SEQ ID NO: 159的FR H4。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 133的FR H1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 142的FR H2、胺基酸序列為SEQ ID NO: 155的FR H3，及胺基酸序列為SEQ ID NO: 159的FR H4。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 133的FR H1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 143的FR H2、胺基酸序列為SEQ ID NO: 152的FR H3，及胺基酸序列為SEQ ID NO: 159的FR H4。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 133的FR H1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 144的FR H2、胺基酸序列為SEQ ID NO: 154的FR H3，及胺基酸序列為SEQ ID NO: 159的FR H4。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 133的FR H1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 173的FR H2、胺基酸序列為SEQ ID NO: 174的FR H3，及胺基酸序列為SEQ ID NO: 159的FR H4。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 134的FR H1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 140的FR H2、胺基酸序列為SEQ ID NO: 147的FR H3，及胺基酸序列為SEQ ID NO: 159的FR H4。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 134的FR H1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 140的FR H2、胺基酸序列為SEQ ID NO: 151的FR H3，及胺基酸序列為SEQ ID NO: 159的FR H4。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 134的FR H1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 141的FR H2、胺基酸序列為SEQ ID NO: 147的FR H3，及胺基酸序列為SEQ ID NO: 159的FR H4。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 134的FR H1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 141的FR H2、胺基酸序列為SEQ ID NO: 150的FR H3，及胺基酸序列為SEQ ID NO: 159的FR H4。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 135的FR H1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 139的FR H2、胺基酸序列為SEQ ID NO: 153的FR H3，及胺基酸序列為SEQ ID NO: 159的FR H4。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 136的FR H1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 141的FR H2、胺基酸序列為SEQ ID NO: 156的FR H3，及胺基酸序列為SEQ ID NO: 159的FR H4。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 136的FR H1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 240的FR H2、胺基酸序列為SEQ ID NO: 156的FR H3，及胺基酸序列為SEQ ID NO: 159的FR H4。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 136的FR H1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 241的FR H2、胺基酸序列為SEQ ID NO: 156的FR H3，及胺基酸序列為SEQ ID NO: 159的FR H4。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 136的FR H1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 242的FR H2、胺基酸序列為SEQ ID NO: 156的FR H3，及胺基酸序列為SEQ ID NO: 159的FR H4。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 136的FR H1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 243的FR H2、胺基酸序列為SEQ ID NO: 156的FR H3，及胺基酸序列為SEQ ID NO: 159的FR H4。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 136的FR H1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 244的FR H2、胺基酸序列為SEQ ID NO: 156的FR H3，及胺基酸序列為SEQ ID NO: 159的FR H4。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 137的FR H1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 144的FR H2、胺基酸序列為SEQ ID NO: 157的FR H3，及胺基酸序列為SEQ ID NO: 159的FR H4。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 238的FR H1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 245的FR H2、胺基酸序列為SEQ ID NO: 251的FR H3，及胺基酸序列為SEQ ID NO: 159的FR H4。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 238的FR H1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 246的FR H2、胺基酸序列為SEQ ID NO: 251的FR H3，及胺基酸序列為SEQ ID NO: 159的FR H4。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 239的FR H1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 245的FR H2、胺基酸序列為SEQ ID NO: 251的FR H3，及胺基酸序列為SEQ ID NO: 159的FR H4。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 161的FR L1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 252的FR L2、胺基酸序列為SEQ ID NO: 170的FR L3，及胺基酸序列為SEQ ID NO: 171的FR L4。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 161的FR L1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 252的FR L2、胺基酸序列為SEQ ID NO: 170的FR L3，及胺基酸序列為SEQ ID NO: 172的FR L4。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 161的FR L1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 253的FR L2、胺基酸序列為SEQ ID NO: 170的FR L3，及胺基酸序列為SEQ ID NO: 171的FR L4。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 161的FR L1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 253的FR L2、胺基酸序列為SEQ ID NO: 170的FR L3，及胺基酸序列為SEQ ID NO: 172的FR L4。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 162的FR L1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 252的FR L2、胺基酸序列為SEQ ID NO: 170的FR L3，及胺基酸序列為SEQ ID NO: 171的FR L4。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 162的FR L1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 252的FR L2、胺基酸序列為SEQ ID NO: 170的FR L3，及胺基酸序列為SEQ ID NO: 172的FR L4。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 162的FR L1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 253的FR L2、胺基酸序列為SEQ ID NO: 170的FR L3，及胺基酸序列為SEQ ID NO: 171的FR L4。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 162的FR L1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 253的FR L2、胺基酸序列為SEQ ID NO: 170的FR L3，及胺基酸序列為SEQ ID NO: 172的FR L4。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 161的FR L1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 163的FR L2、胺基酸序列為SEQ ID NO: 170的FR L3，及胺基酸序列為SEQ ID NO: 171的FR L4。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 161的FR L1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 164的FR L2、胺基酸序列為SEQ ID NO: 170的FR L3，及胺基酸序列為SEQ ID NO: 171的FR L4。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 161的FR L1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 165的FR L2、胺基酸序列為SEQ ID NO: 170的FR L3，及胺基酸序列為SEQ ID NO: 171的FR L4。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 161的FR L1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 166的FR L2、胺基酸序列為SEQ ID NO: 170的FR L3，及胺基酸序列為SEQ ID NO: 171的FR L4。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 161的FR L1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 167的FR L2、胺基酸序列為SEQ ID NO: 170的FR L3，及胺基酸序列為SEQ ID NO: 171的FR L4。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 161的FR L1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 168的FR L2、胺基酸序列為SEQ ID NO: 170的FR L3，及胺基酸序列為SEQ ID NO: 171的FR L4。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 161的FR L1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 163的FR L2、胺基酸序列為SEQ ID NO: 170的FR L3，及胺基酸序列為SEQ ID NO: 172的FR L4。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 161的FR L1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 164的FR L2、胺基酸序列為SEQ ID NO: 170的FR L3，及胺基酸序列為SEQ ID NO: 172的FR L4。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 161的FR L1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 165的FR L2、胺基酸序列為SEQ ID NO: 170的FR L3，及胺基酸序列為SEQ ID NO: 172的FR L4。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 161的FR L1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 166的FR L2、胺基酸序列為SEQ ID NO: 170的FR L3，及胺基酸序列為SEQ ID NO: 172的FR L4。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 161的FR L1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 167的FR L2、胺基酸序列為SEQ ID NO: 170的FR L3，及胺基酸序列為SEQ ID NO: 172的FR L4。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 161的FR L1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 168的FR L2、胺基酸序列為SEQ ID NO: 170的FR L3，及胺基酸序列為SEQ ID NO: 172的FR L4。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 162的FR L1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 163的FR L2、胺基酸序列為SEQ ID NO: 170的FR L3，及胺基酸序列為SEQ ID NO: 171的FR L4。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 162的FR L1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 164的FR L2、胺基酸序列為SEQ ID NO: 170的FR L3，及胺基酸序列為SEQ ID NO: 171的FR L4。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 162的FR L1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 165的FR L2、胺基酸序列為SEQ ID NO: 170的FR L3，及胺基酸序列為SEQ ID NO: 171的FR L4。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 162的FR L1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 166的FR L2、胺基酸序列為SEQ ID NO: 170的FR L3，及胺基酸序列為SEQ ID NO: 171的FR L4。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 162的FR L1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 167的FR L2、胺基酸序列為SEQ ID NO: 170的FR L3，及胺基酸序列為SEQ ID NO: 171的FR L4。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 162的FR L1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 168的FR L2、胺基酸序列為SEQ ID NO: 170的FR L3，及胺基酸序列為SEQ ID NO: 171的FR L4。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 162的FR L1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 163的FR L2、胺基酸序列為SEQ ID NO: 170的FR L3，及胺基酸序列為SEQ ID NO: 172的FR L4。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 162的FR L1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 164的FR L2、胺基酸序列為SEQ ID NO: 170的FR L3，及胺基酸序列為SEQ ID NO: 172的FR L4。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 162的FR L1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 165的FR L2、胺基酸序列為SEQ ID NO: 170的FR L3，及胺基酸序列為SEQ ID NO: 172的FR L4。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 162的FR L1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 166的FR L2、胺基酸序列為SEQ ID NO: 170的FR L3，及胺基酸序列為SEQ ID NO: 172的FR L4。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 162的FR L1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 167的FR L2、胺基酸序列為SEQ ID NO: 170的FR L3，及胺基酸序列為SEQ ID NO: 172的FR L4。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 162的FR L1、胺基酸序列為SEQ ID NO: 168的FR L2、胺基酸序列為SEQ ID NO: 170的FR L3，及胺基酸序列為SEQ ID NO: 172的FR L4。
在其他更特定實施例中，本文所提供之人類化抗體或其抗原結合片段包含：VH，其包含的FR包含選自由以下組成之群之VH中所含之FR的胺基酸序列：SEQ ID NO: 179、SEQ ID NO: 66、SEQ ID NO: 68、SEQ ID NO: 70、SEQ ID NO: 72、SEQ ID NO: 74、SEQ ID NO: 76、SEQ ID NO: 78、SEQ ID NO: 80、SEQ ID NO: 82、SEQ ID NO: 84、SEQ ID NO: 86、SEQ ID NO: 88、SEQ ID NO: 90、SEQ ID NO: 106、SEQ ID NO: 108、SEQ ID NO: 110、SEQ ID NO: 203、SEQ ID NO: 205、SEQ ID NO: 207、SEQ ID NO: 209、SEQ ID NO: 211、SEQ ID NO: 213、SEQ ID NO: 215、SEQ ID NO: 217、SEQ ID NO: 219、SEQ ID NO: 221、SEQ ID NO: 223、SEQ ID NO: 225及SEQ ID NO: 227；以及VL，其包含的FR包含選自由以下組成之群之VL中所含之FR的胺基酸序列：SEQ ID NO: 92、SEQ ID NO: 94、SEQ ID NO: 96、SEQ ID NO: 98、SEQ ID NO: 100、SEQ ID NO: 102、SEQ ID NO: 104、SEQ ID NO: 112、SEQ ID NO: 229、SEQ ID NO: 231、SEQ ID NO: 233、SEQ ID NO: 235及SEQ ID NO: 237。
如上文所述，本文所述之構架區係基於CDR編號系統之邊界確定。換言之，若CDR藉由例如Kabat、IMGT或Chothia或其任何組合確定，則構架區為如下形式(自N端至C端)中之可變區中之CDR周圍的胺基酸殘基：FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4。舉例而言，FR1定義為如藉由例如Kabat編號系統、IMGT編號系統及/或Chothia編號系統所定義之CDR1胺基酸殘基之N端的胺基酸殘基，FR2定義為如藉由例如Kabat編號系統、IMGT編號系統及/或Chothia編號系統所定義之介於CDR1與CDR2胺基酸殘基之間的胺基酸殘基，FR3定義為如藉由例如Kabat編號系統、IMGT編號系統及/或Chothia編號系統所定義之介於CDR2與CDR3胺基酸殘基之間的胺基酸殘基，且FR4定義為如藉由例如Kabat編號系統、IMGT編號系統及/或Chothia編號系統所定義之CDR3胺基酸殘基之C端的胺基酸殘基。
在一些實施例中，本文所提供之人類化抗體或其抗原結合片段包含下表33中所列的VH。 表33.例示性人類化抗體之VH胺基酸序列
重鏈載體 ID VH 名稱 可變區序列
A700 hzR35B9-HV0 SEQ ID NO: 179
A454 hzR35B9-HV5a SEQ ID NO: 66
A455 hzR35B9-HV5b SEQ ID NO: 68
A456 hzR35B9-HV6a SEQ ID NO: 70
A457 hzR35B9-HV6b SEQ ID NO: 72
A458 hzR35B9-HV6c SEQ ID NO: 74
A459 hzR35B9-HV7a SEQ ID NO: 76
A460 hzR35B9-HV7b SEQ ID NO: 78
A461 hzR35B9-HV7c SEQ ID NO: 80
A462 hzR35B9-HV9a SEQ ID NO: 82
A463 hzR35B9-HV9b SEQ ID NO: 84
A464 hzR35B9-HV10 SEQ ID NO: 86
A465 hzR35B9-HV11 SEQ ID NO: 88
A466 hzR35B9-HV18 SEQ ID NO: 90
A512 hzR35B9(A56)-HV11 SEQ ID NO: 108
A515 hzR35B9(Y50A56G57)-HV7b SEQ ID NO: 110
A553 hzR35B9(A56)-HV7c SEQ ID NO: 106
A631 hzR35B9(A56)-HV12a SEQ ID NO: 203
A632 hzR35B9(A56)-HV12b SEQ ID NO: 205
A633 hzR35B9(A56)-HV13a SEQ ID NO: 207
A634 hzR35B9(A56)-HV13b SEQ ID NO: 209
A636 hzR35B9(A56)-HV13d SEQ ID NO: 211
A638 hzR35B9(A56)-HV13f SEQ ID NO: 213
A639 hzR35B9(A56)-HV13g SEQ ID NO: 215
A641 hzR35B9(A56)-HV16 SEQ ID NO: 217
A642 hzR35B9(A56)-HV17a SEQ ID NO: 219
A643 hzR35B9(A56)-HV17b SEQ ID NO: 221
A645 hzR35B9(A56)-HV17d SEQ ID NO: 223
A648 hzR35B9(A56)-HV17g SEQ ID NO: 225
A650 hzR35B9(A56)-HV17i SEQ ID NO: 227
在一些實施例中，VH為包含SEQ ID NO: 203之胺基酸序列的hzR35B9(A56)-HV12a。在一些實施例中，VH為包含SEQ ID NO: 205之胺基酸序列的hzR35B9(A56)-HV12b。在一些實施例中，VH為包含SEQ ID NO: 207之胺基酸序列的hzR35B9(A56)-HV13a。在一些實施例中，VH為包含SEQ ID NO: 209之胺基酸序列的hzR35B9(A56)-HV13b。在一些實施例中，VH為包含SEQ ID NO: 211之胺基酸序列的hzR35B9(A56)-HV13d。在一些實施例中，VH為包含SEQ ID NO: 213之胺基酸序列的hzR35B9(A56)-HV13f。在一些實施例中，VH為包含SEQ ID NO: 215之胺基酸序列的hzR35B9(A56)-HV13g。在一些實施例中，VH為包含SEQ ID NO: 217之胺基酸序列的hzR35B9(A56)-HV16。在一些實施例中，VH為包含SEQ ID NO: 219之胺基酸序列的hzR35B9(A56)-HV17a。在一些實施例中，VH為包含SEQ ID NO: 221之胺基酸序列的hzR35B9(A56)-HV17b。在一些實施例中，VH為包含SEQ ID NO: 223之胺基酸序列的hzR35B9(A56)-HV17d。在一些實施例中，VH為包含SEQ ID NO: 225之胺基酸序列的hzR35B9(A56)-HV17g。在一些實施例中，VH為包含SEQ ID NO: 227之胺基酸序列的hzR35B9(A56)-HV17i。
在一些實施例中，VH為包含SEQ ID NO: 179之胺基酸序列的hzR35B9-HV0。在一些實施例中，VH為包含SEQ ID NO: 66之胺基酸序列的hzR35B9-HV5a。在一些實施例中，VH為包含SEQ ID NO: 68之胺基酸序列的AhzR35B9-HV5b。在一些實施例中，VH為包含SEQ ID NO: 70之胺基酸序列的hzR35B9-HV6a。在一些實施例中，VH為包含SEQ ID NO: 72之胺基酸序列的hzR35B9-HV6b。在一些實施例中，VH為包含SEQ ID NO: 74之胺基酸序列的hzR35B9-HV6c。在一些實施例中，VH為包含SEQ ID NO: 76之胺基酸序列的hzR35B9-HV7a。在一些實施例中，VH為包含SEQ ID NO: 78之胺基酸序列的hzR35B9-HV7b。在一些實施例中，VH為包含SEQ ID NO: 80之胺基酸序列的hzR35B9-HV7c。在一些實施例中，VH為包含SEQ ID NO: 82之胺基酸序列的hzR35B9-HV9a。在一些實施例中，VH為包含SEQ ID NO: 84之胺基酸序列的hzR35B9-HV9b。在一些實施例中，VH為包含SEQ ID NO: 86之胺基酸序列的hzR35B9-HV10。在一些實施例中，VH為包含SEQ ID NO: 88之胺基酸序列的hzR35B9-HV11。在一些實施例中，VH為包含SEQ ID NO: 90之胺基酸序列的hzR35B9-HV18。在一些實施例中，VH為包含SEQ ID NO: 108之胺基酸序列的hzR35B9(A56)-HV11。在一些實施例中，VH為包含SEQ ID NO: 110之胺基酸序列的hzR35B9(Y50A56G57)-HV7b。在一些實施例中，VH為包含SEQ ID NO: 106之胺基酸序列的hzR35B9(A56)-HV7c。
在一些實施例中，本文所提供之人類化抗體或其抗原結合片段包含下表34中所列之VL。 表34.例示性人類化抗體之VL胺基酸序列
輕鏈載體 ID VL 名稱 可變區序列
A467 hzR35B9-LV0 SEQ ID NO: 92
A468 hzR35B9-LV1a SEQ ID NO: 94
A469 hzR35B9-LV1b SEQ ID NO: 96
A470 hzR35B9-LV3a SEQ ID NO: 98
A471 hzR35B9-LV3b SEQ ID NO: 100
A472 hzR35B9-LV4 SEQ ID NO: 102
A473 hzR35B9-LV5 SEQ ID NO: 104
A518 hzR35B9(H98)-LV1a SEQ ID NO: 112
A651 hzR35B9(A56)-LV2a SEQ ID NO: 229
A652 hzR35B9(A56)-LV2b SEQ ID NO: 231
A653 hzR35B9(A56)-LV2c SEQ ID NO: 233
A654 hzR35B9(A56)-LV2d SEQ ID NO: 235
A656 hzR35B9(A56)-LV2f SEQ ID NO: 237
在一些實施例中，VL為包含SEQ ID NO: 92之胺基酸序列的hzR35B9-LV0。在一些實施例中，VL為包含SEQ ID NO: 94之胺基酸序列的hzR35B9-LV1a。在一些實施例中，VL為包含SEQ ID NO: 96之胺基酸序列的hzR35B9-LV1b。在一些實施例中，VL為包含SEQ ID NO: 98之胺基酸序列的hzR35B9-LV3a。在一些實施例中，VL為包含SEQ ID NO: 100之胺基酸序列的hzR35B9-LV3b。在一些實施例中，VL為包含SEQ ID NO: 102之胺基酸序列的hzR35B9-LV4。在一些實施例中，VL為包含SEQ ID NO: 104之胺基酸序列的hzR35B9-LV5。在一些實施例中，VL為包含SEQ ID NO: 112之胺基酸序列的hzR35B9(H98)-LV1a。
在一些實施例中，VL為包含SEQ ID NO: 229之胺基酸序列的hzR35B9(A56)-LV2a。在一些實施例中，VL為包含SEQ ID NO: 231之胺基酸序列的hzR35B9(A56)-LV2b。在一些實施例中，VL為包含SEQ ID NO: 233之胺基酸序列的hzR35B9(A56)-LV2c。在一些實施例中，VL為包含SEQ ID NO: 235之胺基酸序列的hzR35B9(A56)-LV2d。在一些實施例中，VL為包含SEQ ID NO: 237之胺基酸序列的hzR35B9(A56)-LV2f。
在某些實施例中，本文所提供之人類化抗體或其抗原結合片段包含表35中之VH及/或VL。 表35.例示性人類化抗體之胺基酸序列
抗體名稱 VH VL
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A634/A653 SEQ ID NO: 209 SEQ ID NO: 233
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A636/A467 SEQ ID NO: 211 SEQ ID NO: 92
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在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 215之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 92之VL的A639/A467。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 215之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 94之VL的A639/A468。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 215之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 96之VL的A639/A469。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 215之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 98之VL的A639/A470。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 215之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 100之VL的A639/A471。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 215之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 102之VL的A639/A472。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 215之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 104之VL的A639/A473。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 215之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 112之VL的A639/A518。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 215之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 229之VL的A639/A651。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 215之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 231之VL的A639/A652。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 215之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 233之VL的A639/A653。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 215之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 235之VL的A639/A654。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 215之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 237之VL的A639/A656。
在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 217之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 92之VL的A641/A467。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 217之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 94之VL的A641/A468。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 217之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 96之VL的A641/A469。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 217之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 98之VL的A641/A470。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 217之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 100之VL的A641/A471。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 217之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 102之VL的A641/A472。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 217之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 104之VL的A641/A473。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 217之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 112之VL的A641/A518。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 217之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 229之VL的A641/A651。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 217之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 231之VL的A641/A652。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 217之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 233之VL的A641/A653。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 217之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 235之VL的A641/A654。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 217之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 237之VL的A641/A656。
在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 219之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 92之VL的A642/A467。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 219之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 94之VL的A642/A468。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 219之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 96之VL的A642/A469。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 219之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 98之VL的A642/A470。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 219之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 100之VL的A642/A471。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 219之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 102之VL的A642/A472。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 219之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 104之VL的A642/A473。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 219之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 112之VL的A642/A518。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 219之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 229之VL的A642/A651。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 219之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 231之VL的A642/A652。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 219之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 233之VL的A642/A653。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 219之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 235之VL的A642/A654。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 219之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 237之VL的A642/A656。
在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 221之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 92之VL的A643/A467。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 221之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 94之VL的A643/A468。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 221之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 96之VL的A643/A469。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 221之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 98之VL的A643/A470。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 221之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 100之VL的A643/A471。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 221之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 102之VL的A643/A472。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 221之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 104之VL的A643/A473。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 221之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 112之VL的A643/A518。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 221之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 229之VL的A643/A651。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 221之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 231之VL的A643/A652。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 221之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 233之VL的A643/A653。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 221之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 235之VL的A643/A654。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 221之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 237之VL的A643/A656。
在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 223之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 92之VL的A645/A467。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 223之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 94之VL的A645/A468。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 223之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 96之VL的A645/A469。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 223之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 98之VL的A645/A470。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 223之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 100之VL的A645/A471。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 223之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 102之VL的A645/A472。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 223之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 104之VL的A645/A473。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 223之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 112之VL的A645/A518。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 223之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 229之VL的A645/A651。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 223之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 231之VL的A645/A652。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 223之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 233之VL的A645/A653。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 223之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 235之VL的A645/A654。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 223之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 237之VL的A645/A656。
在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 225之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 92之VL的A648/A467。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 225之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 94之VL的A648/A468。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 225之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 96之VL的A648/A469。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 225之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 98之VL的A648/A470。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 225之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 100之VL的A648/A471。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 225之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 102之VL的A648/A472。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 225之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 104之VL的A648/A473。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 225之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 112之VL的A648/A518。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 225之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 229之VL的A648/A651。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 225之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 231之VL的A648/A652。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 225之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 233之VL的A648/A653。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 225之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 235之VL的A648/A654。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 225之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 237之VL的A648/A656。
在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 227之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 92之VL的A650/A467。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 227之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 94之VL的A650/A468。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 227之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 96之VL的A650/A469。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 227之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 98之VL的A650/A470。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 227之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 100之VL的A650/A471。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 227之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 102之VL的A650/A472。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 227之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 104之VL的A650/A473。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 227之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 112之VL的A650/A518。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 227之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 229之VL的A650/A651。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 227之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 231之VL的A650/A652。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 227之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 233之VL的A650/A653。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 227之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 235之VL的A650/A654。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 227之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 237之VL的A650/A656。
在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 179之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 92之VL的A700/A467。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 179之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 94之VL的A700/A468。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 179之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 96之VL的A700/A469。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 179之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 98之VL的A700/A470。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 179之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 100之VL的A700/A471。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 179之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 102之VL的A700/A472。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 179之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 104之VL的A700/A473。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 179之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 112之VL的A700/A518。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 179之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 229之VL的A700/A651。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 179之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 231之VL的A700/A652。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 179之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 233之VL的A700/A653。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 179之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 235之VL的A700/A654。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 179之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 237之VL的A700/A656。
在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 66之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 92之VL的A454/A467。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 66之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 94之VL的A454/A468。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 66之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 96之VL的A454/A469。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 66之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 98之VL的A454/A470。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 66之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 100之VL的A454/A471。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 66之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 102之VL的A454/A472。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 66之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 104之VL的A454/A473。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 66之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 112之VL的A454/A518。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 66之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 229之VL的A454/A651。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 66之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 231之VL的A454/A652。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 66之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 233之VL的A454/A653。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 66之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 235之VL的A454/A654。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 66之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 237之VL的A454/A656。
在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 68之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 92之VL的A455/A467。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 68之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 94之VL的A455/A468。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 68之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 96之VL的A455/A469。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 68之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 98之VL的A455/A470。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 68之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 100之VL的A455/A471。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 68之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 102之VL的A455/A472。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 68之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 104之VL的A455/A473。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 68之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 112之VL的A455/A518。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 68之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 229之VL的A455/A651。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 68之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 231之VL的A455/A652。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 68之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 233之VL的A455/A653。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 68之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 235之VL的A455/A654。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 68之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 237之VL的A455/A656。
在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 70之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 92之VL的A456/A467。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 70之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 94之VL的A456/A468。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 70之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 96之VL的A456/A469。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 70之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 98之VL的A456/A470。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 70之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 100之VL的A456/A471。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 70之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 102之VL的A456/A472。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 70之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 104之VL的A456/A473。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 70之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 112之VL的A456/A518。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 70之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 229之VL的A456/A651。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 70之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 231之VL的A456/A652。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 70之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 233之VL的A456/A653。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 70之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 235之VL的A456/A654。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 70之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 237之VL的A456/A656。
在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 72之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 92之VL的A457/A467。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 72之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 94之VL的A457/A468。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 72之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 96之VL的A457/A469。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 72之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 98之VL的A457/A470。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 72之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 100之VL的A457/A471。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 72之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 102之VL的A457/A472。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 72之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 104之VL的A457/A473。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 72之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 112之VL的A457/A518。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 72之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 229之VL的A457/A651。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 72之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 231之VL的A457/A652。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 72之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 233之VL的A457/A653。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 72之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 235之VL的A457/A654。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 72之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 237之VL的A457/A656。
在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 74之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 92之VL的A458/A467。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 74之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 94之VL的A458/A468。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 74之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 96之VL的A458/A469。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 74之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 98之VL的A458/A470。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 74之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 100之VL的A458/A471。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 74之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 102之VL的A458/A472。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 74之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 104之VL的A458/A473。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 74之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 112之VL的A458/A518。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 74之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 229之VL的A458/A651。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 74之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 231之VL的A458/A652。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 74之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 233之VL的A458/A653。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 74之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 235之VL的A458/A654。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 74之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 237之VL的A458/A656。
在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 76之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 92之VL的A459/A467。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 76之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 94之VL的A459/A468。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 76之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 96之VL的A459/A469。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 76之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 98之VL的A459/A470。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 76之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 100之VL的A459/A471。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 76之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 102之VL的A459/A472。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 76之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 104之VL的A459/A473。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 76之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 112之VL的A459/A518。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 76之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 229之VL的A459/A651。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 76之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 231之VL的A459/A652。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 76之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 233之VL的A459/A653。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 76之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 235之VL的A459/A654。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 76之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 237之VL的A459/A656。
在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 78之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 92之VL的A460/A467。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 78之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 94之VL的A460/A468。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 78之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 96之VL的A460/A469。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 78之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 98之VL的A460/A470。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 78之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 100之VL的A460/A471。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 78之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 102之VL的A460/A472。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 78之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 104之VL的A460/A473。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 78之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 112之VL的A460/A518。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 78之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 229之VL的A460/A651。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 78之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 231之VL的A460/A652。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 78之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 233之VL的A460/A653。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 78之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 235之VL的A460/A654。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 78之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 237之VL的A460/A656。
在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 80之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 92之VL的A461/A467。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 80之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 94之VL的A461/A468。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 80之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 96之VL的A461/A469。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 80之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 98之VL的A461/A470。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 80之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 100之VL的A461/A471。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 80之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 102之VL的A461/A472。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 80之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 104之VL的A461/A473。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 80之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 112之VL的A461/A518。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 80之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 229之VL的A461/A651。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 80之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 231之VL的A461/A652。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 80之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 233之VL的A461/A653。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 80之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 235之VL的A461/A654。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 80之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 237之VL的A461/A656。
在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 82之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 92之VL的A462/A467。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 82之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 94之VL的A462/A468。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 82之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 96之VL的A462/A469。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 82之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 98之VL的A462/A470。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 82之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 100之VL的A462/A471。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 82之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 102之VL的A462/A472。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 82之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 104之VL的A462/A473。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 82之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 112之VL的A462/A518。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 82之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 229之VL的A462/A651。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 82之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 231之VL的A462/A652。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 82之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 233之VL的A462/A653。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 82之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 235之VL的A462/A654。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 82之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 237之VL的A462/A656。
在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 84之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 92之VL的A463/A467。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 84之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 94之VL的A463/A468。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 84之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 96之VL的A463/A469。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 84之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 98之VL的A463/A470。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 84之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 100之VL的A463/A471。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 84之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 102之VL的A463/A472。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 84之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 104之VL的A463/A473。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 84之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 112之VL的A463/A518。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 84之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 229之VL的A463/A651。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 84之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 231之VL的A463/A652。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 84之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 233之VL的A463/A653。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 84之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 235之VL的A463/A654。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 84之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 237之VL的A463/A656。
在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 86之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 92之VL的A464/A467。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 86之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 94之VL的A464/A468。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 86之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 96之VL的A464/A469。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 86之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 98之VL的A464/A470。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 86之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 100之VL的A464/A471。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 86之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 102之VL的A464/A472。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 86之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 104之VL的A464/A473。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 86之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 112之VL的A464/A518。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 86之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 229之VL的A464/A651。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 86之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 231之VL的A464/A652。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 86之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 233之VL的A464/A653。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 86之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 235之VL的A464/A654。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 86之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 237之VL的A464/A656。
在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 88之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 92之VL的A465/A467。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 88之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 94之VL的A465/A468。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 88之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 96之VL的A465/A469。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 88之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 98之VL的A465/A470。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 88之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 100之VL的A465/A471。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 88之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 102之VL的A465/A472。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 88之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 104之VL的A465/A473。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 88之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 112之VL的A465/A518。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 88之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 229之VL的A465/A651。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 88之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 231之VL的A465/A652。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 88之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 233之VL的A465/A653。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 88之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 235之VL的A465/A654。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 88之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 237之VL的A465/A656。
在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 90之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 92之VL的A466/A467。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 90之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 94之VL的A466/A468。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 90之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 96之VL的A466/A469。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 90之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 98之VL的A466/A470。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 90之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 100之VL的A466/A471。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 90之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 102之VL的A466/A472。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 90之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 104之VL的A466/A473。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 90之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 112之VL的A466/A518。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 90之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 229之VL的A466/A651。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 90之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 231之VL的A466/A652。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 90之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 233之VL的A466/A653。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 90之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 235之VL的A466/A654。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 90之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 237之VL的A466/A656。
在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 108之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 92之VL的A512/A467。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 108之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 94之VL的A512/A468。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 108之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 96之VL的A512/A469。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 108之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 98之VL的A512/A470。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 108之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 100之VL的A512/A471。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 108之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 102之VL的A512/A472。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 108之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 104之VL的A512/A473。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 108之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 112之VL的A512/A518。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 108之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 229之VL的A512/A651。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 108之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 231之VL的A512/A652。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 108之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 233之VL的A512/A653。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 108之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 235之VL的A512/A654。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 108之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 237之VL的A512/A656。
在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 110之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 92之VL的A515/A467。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 110之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 94之VL的A515/A468。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 110之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 96之VL的A515/A469。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 110之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 98之VL的A515/A470。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 110之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 100之VL的A515/A471。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 110之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 102之VL的A515/A472。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 110之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 104之VL的A515/A473。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 110之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 112之VL的A515/A518。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 110之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 229之VL的A515/A651。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 110之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 231之VL的A515/A652。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 110之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 233之VL的A515/A653。在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 110之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 235之VL的A515/A654。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 110之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 237之VL的A515/A656。
在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 106之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 92之VL的A553/A467。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 106之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 94之VL的A553/A468。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 106之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 96之VL的A553/A469。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 106之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 98之VL的A553/A470。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 106之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 100之VL的A553/A471。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 106之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 102之VL的A553/A472。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 106之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 104之VL的A553/A473。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 106之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 112之VL的A553/A518。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 106之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 229之VL的A553/A651。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 106之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 231之VL的A553/A652。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 106之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 233之VL的A553/A653。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 106之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 235之VL的A553/A654。在一些實施例中，抗體為包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 106之VH及胺基酸序列為SEQ ID NO: 237之VL的A553/A656。
在另一態樣中，本文提供與上述人類化抗體或其抗原結合片段之一競爭的抗體。此類抗體亦可與上述抗體之一結合至相同的抗原決定基，或重疊的抗原決定基。預期與上述抗體競爭或結合至相同抗原決定基之抗體及片段展示類似功能特性。
在某些實施例中，本文所述之抗體或其抗原結合片段包含相對於上述人類化抗體具有特定一致性百分比的胺基酸序列。兩個序列之間的一致性百分比可在允許或不允許有空位的情況下，使用與上文所述類似的技術來測定。在計算一致性百分比時，典型地僅對精確匹配進行計數。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 179之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 92之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 179中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 92中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 179中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 92中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 179之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 94之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 179中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 94中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 179中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 94中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 179之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 96之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 179中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 96中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 179中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 96中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 179之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 98之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 179中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 98中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 179中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 98中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 179之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 100具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 179中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 100中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 179中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 100中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 179之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 102之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 179中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 102中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 179中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 102中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 179之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 104具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 179中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 104中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 179中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 104中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 179之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 112具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 179中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 112中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 179中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 112中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 66之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 92具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含有包含與SEQ ID NO: 66中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 92中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 66中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 92中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 66之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 94具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 66中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 94中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%胺基酸序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 66中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 94中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 66之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 96之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 66中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 96中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 66中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 96中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 66之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 98之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含有包含與SEQ ID NO: 66中所含有之CDR之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性之CDR的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 98中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 66中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 98中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 66之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 100具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 66中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 100中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 66中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 100中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 66之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 102之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 66中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 102中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 66中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 102中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 66之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 104具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 66中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 104中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 66中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 104中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 66之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 112具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 66中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 112中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 66中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 112中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 68之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 92具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 68中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 92中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 68中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 92中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 68之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 94之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 68中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 94中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 68中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 94中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 68之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 96之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 68中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 96中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 68中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 96中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 68之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 98之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 68中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 98中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 68中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 98中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 68之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 100之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 68中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 100中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 68中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 100中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 68之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 102之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 68中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 102中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 68中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 102中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 68之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 104之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 68中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 104中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 68中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 104中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 68之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 112之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 68中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 112中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 68中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 112中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 70之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 92具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 70中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 92中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 70中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 92中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 70之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 94之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 70中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 94中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 70中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 94中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 70之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 96之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 70中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 96中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 70中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 96中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 70之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 98之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 70中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 98中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 70中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 98中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 70之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 100之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 70中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 100中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 70中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 100中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 70之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 102具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 70中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 102中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 70中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 102中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 70之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 104具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 70中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 104中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 70中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 104中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 70之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO. 112之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 70中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 112中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 70中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 112中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 72之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 92之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 72中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 92中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 72中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 92中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 72之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 94之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 72中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 94中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 72中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 94中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 72之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 96之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 72中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 96中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 72中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 96中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 72之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 98之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 72中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 98中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 72中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 98中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 72之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 100之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 72中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 100中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 72中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 100中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 72之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 102之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 72中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 102中所含之CDR序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 72所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 102中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 72之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 104具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 72中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 104中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 72中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 104中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 72之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 112之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 72中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 112中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 72中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 112中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 74之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 92之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 74中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 92中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 74中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 92中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 74之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 94之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 74中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 94中所含之CDR之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 74中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 94中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 74之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 96之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 74中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 96中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 74中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 96中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 74之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 98之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 74中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 98中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 74中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 98中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 74之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 100之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 74中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 100中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 74中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 100中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 74之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 102之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 74中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 102中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 74中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 102中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 74之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 104之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 74中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 104中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%胺基酸之CDR的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 74中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 104中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 74之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 112具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 74中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 112中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 74中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 112中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 76之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 92之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 76中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 92中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 76中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 92中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 76之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 94之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 76中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 94中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 76中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 94中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 76之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 96之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 76中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 96中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 76中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 96中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 76之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 98之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 76中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 98中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 76中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 98中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 76之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 100之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 76中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 100中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 76中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 100中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 76之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 102之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 76中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 102中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 76中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 102中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 76之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 104之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 76中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 104中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 76中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 104中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 76之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 112之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 76中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 112中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 76中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 112中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 78之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 92之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 78中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 92中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 78中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 92中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 78之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 94之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 78中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 94中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 78中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 94中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 78之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 96之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 78中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 96中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 78中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 96中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 78之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 98之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 78中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 98中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 78中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 98中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 78之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 100之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 78中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 100中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 78中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 100中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 78之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 102之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 78中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 102中所含之CDR胺基酸序列具有具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 78中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 102中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 78之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 104之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 78中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 104中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 78中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 104中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 78之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 112之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 78中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 112中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 78中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 112中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 80之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 92之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 80中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 92中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 80中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 92中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 80之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 94之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 80中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 94中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 80中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 94中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 80之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 96之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 80中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 96中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 80中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 96中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 80之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 98之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 80中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 98中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 80中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 98中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 80之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 100之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 80中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 100中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 80中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 100中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 80之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 102之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 80中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 102中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 80中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 102中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 80之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 104之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 80中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 104所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中抗體抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 80中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 104中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 80之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 112具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 80中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 112所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 80中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 112中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 82之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 92之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 82中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 92中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 82中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 92中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 82之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 94具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 82中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 94中所含之CDR胺基酸序列至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 82中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 94中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 82之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 96之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 82中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 96中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 82中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 96中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 82之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 98之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 82中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 98中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 82中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 98中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 82之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 100具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 82中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 100中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 82中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 100中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 82之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 102之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 82中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 102中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 82中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 102中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 82之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 104之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 82中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 104中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 82中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 104中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 82之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 112之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 82中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 112中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 82中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 112中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 84之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 92之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 84中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 92中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 84中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 92中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 84之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 94具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 84中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 94中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 84中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 94中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 84之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 96之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 84中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 96中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 84中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 96中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 84之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 98具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 84中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 98中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 84中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 98中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 84之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 100具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 84中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 100中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 84中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 100中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 84之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 102之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 84中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 102中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 84中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 102中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 84之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 104之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 84中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 104中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 84中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 104中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 84之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 112之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 84中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 112中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 84中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 112中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 86之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 92之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 86中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 92中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 86中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 92中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 86之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 94之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 86中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 94中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 86中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 94中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 86之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 96之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 86中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 96中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 86中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 96中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 86之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 98之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 86中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 98中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 86中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 98中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 86之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 100具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 86中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 100中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 86中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 100中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 86之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 102之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 86中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 102所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 86中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 102中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 86之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 104之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 86中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 104中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 86中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 104中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 86之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 112之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 86中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 112中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 86中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 112中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 88之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 92之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 88中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 92中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 88中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 92中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 88之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 94具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14  在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 88中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性之CDR的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 94中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 88中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 94中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 88之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 96之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 88中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 96中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 88中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 96中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 88之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 98之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 88中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 98中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 88中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 98中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 88之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 100之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 88中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 100中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 88中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 100中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 88之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 102之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 88中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 102中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 88中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 102中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 88之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 104之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 88中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 104中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 88中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 104中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 88之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 112之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 88中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 112中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 88中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 112中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 90之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 92之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 90中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 92中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 90中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 92中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 90之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 94之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 90中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 94中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 90中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 94中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 90之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 96之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 90中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 96中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 90中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 96中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 90之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 98之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 90中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 98中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 90中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 98中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 90之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 100之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 90中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 100中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 90中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 100中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 90之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 102之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 90中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 102中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 90中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 102中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 90之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 104之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 90中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性之CDR的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 104中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 90中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 104中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 90之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 112之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 90中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 112中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 90中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 112中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 108之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 92之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 108中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 92中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 108中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 92中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 108之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 94之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 108中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 94中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 108中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 94中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 108之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 96之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 108中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 96中所含之CDR胺基酸序列至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 108中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 96中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 108之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 98之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 108中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 98中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 108中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 98中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 108之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 100之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 108中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 100中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 108中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 100中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 108之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 102之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 108中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 102中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 108中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 102中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 108之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 104之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 108中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 104中所含有之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 108中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 104中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 108之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 112之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 108中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 112中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%胺基酸序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 108中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 112中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 110之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 92之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 110中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 92中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 110中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 92中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 110之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 94之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 110中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 94中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 110中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 94中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 110之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 96之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 110中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 96中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 110中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 96中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 110之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 98之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 110中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 98中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 110中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 98中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 110之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 100之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 110中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 100中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 110中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 100中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 110之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 102之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 110中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 102所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 110中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 102中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 110之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 104之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 110中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 104中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 110中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 104中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 110之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 112具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 110中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 112所含之CDR序列一致性具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 110中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 112中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 110之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 231之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 110中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 231中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 110中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 231中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 106之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 92之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 106中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 92中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 106中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 92中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 106之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 94之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 106中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 94中所含有之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 106中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 94中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 106之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 96之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 106中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 96中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 106中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 96中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 106之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 98之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 106中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 98中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 106中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 98中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 106之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 100之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 106中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 100中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 106中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 100中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 106之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 102之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 106中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 102中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 106中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 102中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 106之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 104之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 106中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 104中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 106中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 104中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 106之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 112之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 106中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 112中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 106中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 112中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 106之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 231之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 106中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 231中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 106中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 231中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 108之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 235之胺基酸序列有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 108中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 235中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中抗體抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 108中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 235中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 203之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 94之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 203中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 94中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 203中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 94中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 108之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 229之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 108中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 229中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 108中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 229中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 108之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 231之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 108中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 231中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 108中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 231中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 209之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 94之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 209中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 94中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 209中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 94中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 211之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 94之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 211中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 94中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 211中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 94中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 221之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 94之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 221中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 94中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 221中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 94中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 108之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 233之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 108中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 233中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 108中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 233中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 205之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 94之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 205中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 94中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 205中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 94中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 223之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，/或與SEQ ID NO: 94之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 223中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 94中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 223中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 94中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 225之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 92之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 225中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 92中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 225中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 92中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 225之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 94之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 225中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 94中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 225中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 94中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 225之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 96之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 225中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 96中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 225中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 96中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 225之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 98之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 225中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 98中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 225中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 98中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 225之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 100之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 225中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 100中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 225中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 100中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 225之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 102之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 225中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 102中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 225中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 102中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 225之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 104之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 225中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 104中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 225中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 104中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 225之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 112之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 225中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 112所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 225中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 112中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 225之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 229之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 225中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 229中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 225中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 229中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 225之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 231之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 225中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 231中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 225中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 231所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 225之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 233之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 225中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 233中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 225中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 233中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 225之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 235之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 225中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 235中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 225中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 235中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 225之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 237之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 225中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 237中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 225中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 237中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 215之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 94之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 215中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 94中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 215中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 94中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 108之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 237之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 108中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 237中所含之CDR胺基酸序列至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 108中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 237中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 207之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 94之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 207中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 94中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 207中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 94中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 213之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 94之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 213中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 94中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 213中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 94中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 217之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 92之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 217中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 92中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 217中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 92中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 217之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 94之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 217中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 94中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 217中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 94中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 217之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 96之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 217中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 96中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 217中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 96中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 217之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 98之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 217中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 98中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 217中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 98中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 217之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 100之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 217中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 100中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 217中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 100中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 217之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 102之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 217中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 102中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 217中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 102中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 217之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 104之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 217中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 104中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 217中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 104中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 217之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 112之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 217中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 112中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%胺基酸序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 217中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 112中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 217之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 229之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 217中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 229中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 217中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 229中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 217之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 231之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 217中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 231中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 217中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 231中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 217之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 233之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含有包含與SEQ ID NO: 217中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 233中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 217中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 233中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 217之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 235之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 217中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 235中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 217中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 235中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 217之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 237之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 217中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 237中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 217中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 237中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 219之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 94之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 219中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 94中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 219中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 94中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 227之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 92之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 227中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性之CDR的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 92中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 227中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 92中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 227之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 94之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 227中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 94中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 227中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 94中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 227之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 96之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 227中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 96中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 227中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 96中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 227之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 98之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 227中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 98中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 227中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 98中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 227之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 100之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 227中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 100中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 227中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 100中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 227之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 102之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 227中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 102中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 227中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 102中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 227之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 104之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 227中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 104中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 227中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 104中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 227之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 112之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 227中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 112中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 227中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 112中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 227之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 229之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 227中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 229中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 227中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 229中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 227之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 231之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 227中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 231中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 227中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 231中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 227之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 233之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 227中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 233中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 227中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 233中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 227之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 235之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 227中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 235中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 227中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 235中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 227之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或與SEQ ID NO: 237之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含CDR與SEQ ID NO: 227中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性R的VH區，及/或CDR與SEQ ID NO: 237中所含之CDR胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含VH構架區與SEQ ID NO: 227中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH區，及/或VL構架區與SEQ ID NO: 237中所含之構架區胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL區，其中該抗體免疫特異性結合至Fn14。5.2.6 人類抗體
在特定實施例中，抗體為完全人類的抗人類抗體。完全人類抗體可以藉由此項技術中已知之任何方法產生。本文所提供之人類抗Fn14抗體(例如結合至Fn14之雙重拮抗劑抗體)可藉由組合選自人源噬菌體呈現庫之Fv純系可變域序列與已知人類恆定域序列來構築。或者，本發明之人類單株抗體可藉由融合瘤方法製得。用於產生人類單株抗體之人類骨髓瘤及小鼠-人類雜骨髓瘤細胞株已描述於例如Kozbor, 1984, J. Immunol. 133:3001-05；Brodeur等人, Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications 51-63 (1987)；及Boerner等人, 1991, J. Immunol. 147:86-95。
亦可產生轉殖基因動物(例如小鼠)，其在免疫接種後，能夠在不產生內源免疫球蛋白的情況下產生完整譜系的人類抗體。表現人類抗體譜系的轉殖基因小鼠已用於產生針對多種潛在藥物目標的高親和性人類序列單株抗體(參見例如Jakobovits, A., 1995, Curr. Opin. Biotechnol. 6(5):561-66；Brüggemann及Taussing, 1997, Curr. Opin. Biotechnol. 8(4):455-58；美國專利第6,075,181號及第6,150,584號；及Lonberg等人, 2005, Nature Biotechnol. 23:1117-25)。
或者，可以經由人類B淋巴球之永生化、從而產生針對目標抗原的抗體來製備人類抗體(例如此類B淋巴球可以自個體回收或可已在活體外免疫接種)(參見例如Cole等人, Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy (1985)；Boerner等人, 1991, J. Immunol. 147(1):86-95；及美國專利第5,750,373號)。
亦可以使用基因改組自非人類(例如嚙齒動物)抗體衍生人類抗體，其中人類抗體與初始非人類抗體具有相似的親和力及特異性。根據此方法(其亦稱為「抗原決定基印跡」或「引導選擇」)，用人類V域基因之基因譜系置換藉由如本文所述之噬菌體呈現技術獲得之非人類抗體片段的重鏈或輕鏈可變區，從而產生非人類鏈/人類鏈scFv或Fab嵌合體之群體。抗原選擇引起非人類鏈/人類鏈嵌合scFv或Fab分離，其中人類鏈恢復了在初始噬菌體呈現純系之相應非人類鏈移除後所毀壞的抗原結合位點(例如抗原決定基導引(印記)人類鏈搭配物的選擇)。當重複執行該方法以置換殘餘非人類鏈時，獲得人類抗體(參見例如PCT WO 93/06213；及Osbourn等人, 2005, Methods 36:61-68)。不同於藉由CDR移植使非人類抗體發生人類化之傳統方式，此技術提供不具有非人類來源之FR或CDR殘基的完全人類抗體。對針對細胞表面抗原之人類化小鼠抗體執行導引式選擇的實例包括存在於卵巢癌細胞上的葉酸結合蛋白(參見例如Figini等人, 1998, Cancer Res. 58:991-96)及高度表現於肝細胞癌上的CD147 (參見例如Bao等人, 2005, Cancer Biol. Ther. 4:1374-80)。
導引式選擇方案之潛在缺點為，改組一個抗體鏈的同時保持另一個恆定可能引起抗原決定基漂移。為了維持非人類抗體所識別的抗原決定基，可以應用CDR保留(參見例如Klimka等人, 2000, Br. J. Cancer. 83:252-60；及Beiboer等人, 2000, J. Mol. Biol. 296:833-49)。在此方法中，通常保留非人類VH CDR3，因為此CDR可位於抗原結合位點之中心且可能為抗體用於抗原識別之最重要區域。然而，在一些情況下，可保留非人類抗體之VH CDR3及VL CDR3，以及VH CDR2、VL CDR2及VL CFR1。5.2.7 多特異性抗體
多特異性抗體(諸如雙特異性抗體)為對至少兩種不同抗原具有結合特異性之單株抗體。在某些實施例中，多特異性抗體可基於本文所提供之抗體之序列(例如本文所提供之序列表中所列之CDR序列)來構築。在某些實施例中，本文所提供之多特異性抗體為雙特異性抗體。在某些實施例中，雙特異性抗體為小鼠、嵌合、人類或人類化抗體。在某些實施例中，結合特異性之一係針對Fn14且另一者係針對任何其他抗原。在一些實施例中，結合特異性之一係針對Fn14且另一者係針對另一種抗原，諸如細胞介素或趨化因子。在某些實施例中，雙特異性抗體可以結合至Fn14的兩種不同抗原決定基。雙特異性抗體可製備為全長抗體或抗體片段(例如F(ab')2 雙特異性抗體)。
用於製備多特異性抗體之方法為此項技術中已知的，諸如藉由兩個免疫球蛋白重鏈-輕鏈對之共表現，其中兩個重鏈具有不同特異性(參見例如Milstein及Cuello, 1983, Nature 305:537-40)。關於產生多特異性抗體(例如雙特異性抗體)之其他細節，參見例如Bispecific Antibodies (Kontermann編, 2011)。5.2.8 多價抗體
多價抗體被表現抗體所結合之抗原之細胞內化(及/或分解代謝)的速度可以快於二價抗體。本發明之抗體可為具有三個或更多個抗原結合位點的多價抗體(例如四價抗體)(除IgM類別之外)，其可以容易藉由編碼抗體多肽鏈之核酸的重組表現來產生。多價抗體可以包含二聚域及三個或更多個抗原結合位點。在某些實施例中，二聚域包含(或組成為) Fc區或鉸鏈區。在此情境下，抗體將包含Fc區及Fc區胺基端的三個或更多個抗原結合位點。在某些實施例中，多價抗體包含(或組成為)三個至約八個抗原結合位點。在一個此類實施例中，多價抗體包含(或組成為)四個抗原結合位點。多價抗體包含至少一個多肽鏈(例如兩個多肽鏈)，其中多肽鏈包含兩個或更多個可變域。舉例而言，多肽鏈可以包含VD1-(X1)n-VD2-(X2)n-Fc，其中VD1為第一可變域，VD2為第二可變域，Fc為Fc區的一個多肽鏈，X1及X2表示胺基酸或多肽，且n為0或1。舉例而言，多肽鏈可以包含：VH-CH1-柔性連接子-VH-CH1-Fc區鏈；或VH-CH1-VH-CH1-Fc區鏈。本文中的多價抗體可以進一步包含至少兩個(例如四個)輕鏈可變域多肽。本文中的多價抗體可以例如包含約兩個至約八個輕鏈可變域多肽。本文所涵蓋的輕鏈可變域多肽包含輕鏈可變域且視情況進一步包含CL域。5.2.9 Fc 工程化
可能需要藉由Fc工程化來修飾本文所提供之抗體。在某些實施例中，對抗體Fc區的修飾使得抗體之效應功能減少或消除。在某些實施例中，效應功能為ADCC、ADCP及/或CDC。在一些實施例中，效應功能為ADCC。在其他實施例中，效應功能為ADCP。在其他實施例中，效應功能為CDC。在一個實施例中，效應功能為ADCC及ADCP。在一個實施例中，效應功能為ADCC及CDC。在一個實施例中，效應功能為ADCP及CDC。在一個實施例中，效應功能為ADCC、ADCP及CDC。此可以藉由將一或多個胺基酸取代引入抗體Fc區中來達成。
為延長抗體之血清半衰期，可以將救助受體結合抗原決定基併入抗體(尤其抗體片段)中，如例如美國專利第5,739,277號中所述。術語「救助受體結合抗原決定基」係指IgG分子(例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4)之Fc區的抗原決定基，其負責延長IgG分子之活體內血清半衰期。5.2.10 替代的結合劑
本發明涵蓋非免疫球蛋白結合劑，其與本文揭示之抗體特異性結合至相同抗原決定基。在一些實施例中，非免疫球蛋白結合劑經鑑別為競爭性結合分析中置換本發明之抗體或被本發明之抗體置換的藥劑。此等替代結合劑可以包括例如此項技術中已知的任何工程化蛋白質支架。此類支架可以包含如表24所示的一或多個CDR。此類支架包括例如抗運載蛋白(anticalins)，其係基於脂質運載蛋白支架，一種蛋白質結構，其特徵為支撐形成配位體結合位點之四個高變環的剛性β-圓筒。新穎的結合特異性可以藉由環區域中之靶向隨機突變誘發與功能呈現及導引式選擇的組合來工程化(參見例如Skerra, 2008, FEBS J. 275:2677-83)。其他適合的支架可以包括例如基於人類纖維結合蛋白III之第十個胞外域的纖連蛋白或單功能抗體(參見例如Koide and Koide, 2007, Methods Mol. Biol. 352: 95-109)；基於葡萄球菌蛋白質A之Z域的親和抗體(參見例如Nygren等人, 2008, FEBS J. 275:2668-76)；基於錨蛋白重複蛋白的達爾平(DARPins)(參見例如Stumpp等人, 2008, Drug. Discov. Today 13:695-701)；基於人類Fyn蛋白激酶之SH3域的非諾莫(fynomers)(參見例如Grabulovski等人, 2007, J. Biol. Chem. 282:3196-204)；基於來自嗜酸熱硫化葉菌(Sulfolobus acidolarius)之Sac7d的親和素(參見例如Krehenbrink等人, 2008, J. Mol. Biol. 383:1058-68)；基於y-B-晶狀體球蛋白之阿非林(affilins)(參見例如Ebersbach等人, 2007, J. Mol. Biol. 372:172-85)；基於膜受體蛋白之A域的高親合性多聚體(參見例如Silverman等人, 2005, Biotechnol. 23:1556-61)；富含半胱胺酸之打結素肽(參見例如Kolmar, 2008, FEBS J. 275:2684-90)；及工程化昆尼茲型(Kunitz-type)抑制劑(參見例如Nixon及Wood, 2006, Curr. Opin. Drug. Discov. Dev. 9:261-68)。欲回顧，參見例如Gebauer及Skerra, 2009, Curr. Opin. Chem. Biol. 13:245-55。5.2.11 抗體變異體
在一些實施例中，涵蓋本文所提供之結合至Fn14之抗體或抗原結合片段的胺基酸序列修飾。舉例而言，可能需要改良抗體之結合親和力及/或其他生物特性，包括(但不限於)特異性、熱穩定性、表現量、效應功能、糖基化、減小之免疫原性或溶解性。因此，除本文所述之抗體之外，預期可以製備抗體變異體。舉例而言，抗體變異體可以藉由在編碼DNA中引入適當核苷酸變化及/或藉由合成所需抗體或多肽來製備。熟習此項技術者將瞭解，胺基酸變化可改變抗體之轉譯後過程，諸如改變糖基化位點之數目或位置或改變膜錨定特徵。
在一些實施例中，本文所提供之抗體經化學修飾，例如藉由使任何類型的分子共價連接至抗體。抗體衍生物可包括如下已經化學修飾之抗體：例如糖基化、乙醯化、聚乙二醇化、磷酸化、醯胺化、藉由已知保護/封端基團之衍生化、蛋白質裂解、與細胞配位體或其他蛋白質之連接等。許多化學修飾中之任一者可藉由包括(但不限於)以下之已知技術來進行：特異性化學裂解、乙醯化、調配、衣黴素之代謝合成等。另外，該抗體可含有一或多種非典型胺基酸。
變異可為編碼抗體或多肽之一或多個密碼子的取代、缺失或插入，相較於原生序列抗體或多肽，其引起胺基酸序列變化。胺基酸取代可為一個胺基酸被具有類似結構及/或化學特性之另一胺基酸置換的結果，諸如白胺酸被絲胺酸置換，例如保守胺基酸置換。熟習此項技術者已知的標準技術可以用於將突變引入編碼本文所提供分子的核苷酸序列中，包括例如引起胺基酸取代的定點誘變及PCR介導誘變。插入或缺失視情況可在約1至5個胺基酸範圍內。在某些實施例中，相對於原始分子，取代、缺失或插入包括少於25個胺基酸取代、少於20個胺基酸取代、少於15個胺基酸取代、少於10個胺基酸取代、少於5個胺基酸取代、少於4個胺基酸取代、少於3個胺基酸取代，或少於2個胺基酸取代。在一個特定實施例中，取代為在一或多個所預測之非必需胺基酸殘基處產生的保守胺基酸取代。允許發生的變異可藉由在序列中系統地產生胺基酸插入、缺失或取代且測試所得變異體之全長或成熟原生序列所展現的活性來確定。
胺基酸序列插入包括長度在一個殘基至含有一百個或更多個殘基之多肽範圍內的胺基末端及/或羧基末端融合，以及單一或多個胺基酸殘基之序列內插入。末端插入之實例包括具有N端甲硫胺醯基殘基之抗體。抗體分子之其他插入變異體包括抗體之N端或C端與延長抗體之血清半衰期之酶(例如抗體定向酶前藥療法)或多肽的融合。
「保守胺基酸取代」為胺基酸殘基被具有類似電荷之側鏈之胺基酸殘基置換的取代。側鏈具有類似電荷之胺基酸殘基家族在此項技術中已定義。此等家族包括具有鹼性側鏈(例如離胺酸、精胺酸、組胺酸)、酸性側鏈(例如天冬胺酸、麩胺酸)、不帶電極性側鏈(例如甘胺酸、天冬醯胺、麩醯胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、酪胺酸、半胱胺酸)、非極性側鏈(例如丙胺酸、纈胺酸、白胺酸、異白胺酸、脯胺酸、苯丙胺酸、甲硫胺酸、色胺酸)、β分支鏈側鏈(例如蘇胺酸、纈胺酸、異白胺酸)及芳族側鏈(例如酪胺酸、苯丙胺酸、色胺酸、組胺酸)之胺基酸。或者，突變可以沿著編碼序列之全部或一部分隨機引入，諸如藉由飽和突變誘發，且可以根據生物活性篩選所得突變體以鑑別保持活性的突變體。突變誘發之後，可以表現所編碼蛋白質且可以測定蛋白質活性。
抗體生物特性之實質修飾係藉由選擇維持以下之作用顯著不同的取代來實現：(a)多肽主鏈在取代區域中的結構，例如呈片狀或螺旋狀構形；(b)分子在靶點處之電荷或疏水性；或(c)側鏈之堆積。或者，可以產生保守(例如在具有類似特性及/或側鏈之胺基酸基團內)取代，以便維持特性或使特性變化不顯著。胺基酸可根據其側鏈特性之相似性分組(參見例如Lehninger, Biochemistry 73-75 (第2版, 1975))：(1)非極性：Ala (A)、Val (V)、Leu (L)、Ile (I)、Pro (P)、Phe (F)、Trp (W)、Met (M)；(2)不帶電荷的極性：Gly (G)、Ser (S)、Thr (T)、Cys (C)、Tyr (Y)、Asn (N)、Gln (Q)；(3)酸性：Asp (D)、Glu (E)；及(4)鹼性：Lys (K)、Arg (R)、His (H)。
或者，天然存在之殘基可以基於共同的側鏈特性來分組：(1)疏水性：正白胺酸、Met、Ala、Val、Leu、Ile；(2)中性、親水性：Cys、Ser、Thr、Asn、Gln；(3)酸性：Asp、Glu；(4)鹼性：His、Lys、Arg；(5)影響鏈取向的殘基：Gly、Pro；及(6)芳族：Trp、Tyr、Phe。
非保守取代需要將此等類別中之一者之成員換成另一類別。此類經取代之殘基亦可引入保守性取代位點中或引入其餘(非保守性)位點中。相應地，在一個實施例中，結合至Fn14抗原決定基之抗體或其抗原結合片段包含與本文所述之抗體(例如下文章節6所述的抗體)之胺基酸序列至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少99%一致的胺基酸序列。
在一個實施例中，結合至Fn14抗原決定基之抗體或其抗原結合片段包含與本文所述抗體之胺基酸序列至少35%一致的胺基酸序列。在一個實施例中，結合至Fn14抗原決定基之抗體或其抗原結合片段包含與本文所述抗體之胺基酸序列至少40%一致的胺基酸序列。在一個實施例中，結合至Fn14抗原決定基之抗體或其抗原結合片段包含與本文所述抗體之胺基酸序列至少45%一致的胺基酸序列。在一個實施例中，結合至Fn14抗原決定基之抗體或其抗原結合片段包含與本文所述抗體之胺基酸序列至少50%一致的胺基酸序列。在一個實施例中，結合至Fn14抗原決定基之抗體或其抗原結合片段包含與本文所述抗體之胺基酸序列至少55%一致的胺基酸序列。在一個實施例中，結合至Fn14抗原決定基之抗體或其抗原結合片段包含與本文所述抗體之胺基酸序列至少60%一致的胺基酸序列。在一個實施例中，結合至Fn14抗原決定基之抗體或其抗原結合片段包含與本文所述抗體之胺基酸序列至少65%一致的胺基酸序列。在一個實施例中，結合至Fn14抗原決定基之抗體或其抗原結合片段包含與本文所述抗體之胺基酸序列至少70%一致的胺基酸序列。在一個實施例中，結合至Fn14抗原決定基之抗體或其抗原結合片段包含與本文所述抗體之胺基酸序列至少75%一致的胺基酸序列。在一個實施例中，結合至Fn14抗原決定基之抗體或其抗原結合片段包含與本文所述抗體之胺基酸序列至少80%一致的胺基酸序列。在一個實施例中，結合至Fn14抗原決定基之抗體或其抗原結合片段包含與本文所述抗體之胺基酸序列至少90%一致的胺基酸序列。在一個實施例中，結合至Fn14抗原決定基之抗體或其抗原結合片段包含與本文所述抗體之胺基酸序列至少95%一致的胺基酸序列。在一個實施例中，結合至Fn14抗原決定基之抗體或其抗原結合片段包含與本文所述抗體之胺基酸序列至少99%一致的胺基酸序列。
在一些實施例中，本文提供一種抗體或其抗原結合片段，其結合至Fn14抗原決定基且包含胺基酸序列與本文所提供之序列表中所描繪之胺基酸序列至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少99%一致的VH區，及/或胺基酸序列與本文所提供之序列表中所描繪之胺基酸序列至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少99%一致的VL區。
在一些實施例中，本文提供一種抗體或其抗原結合片段，其結合至Fn14抗原決定基且包含胺基酸序列與本文所提供之序列表及表26-35中所描繪之胺基酸序列至少35%一致的VH區。在一些實施例中，本文提供一種抗體或其抗原結合片段，其結合至Fn14抗原決定基且包含胺基酸序列與本文提供之序列表及表26-35中所描繪之胺基酸序列至少40%一致的VH區。在一些實施例中，本文提供一種抗體或其抗原結合片段，其結合至Fn14抗原決定基且包含胺基酸序列與本文提供之序列表及表26-35中所描繪之胺基酸序列至少45%一致的VH區。在一些實施例中，本文提供一種抗體或其抗原結合片段，其結合至Fn14抗原決定基且包含胺基酸序列與本文提供之序列表及表26-35中所描繪之胺基酸序列至少50%一致的VH區。在一些實施例中，本文提供一種抗體或其抗原結合片段，其結合至Fn14抗原決定基且包含胺基酸序列與本文提供之序列表及表26-35中所描繪之胺基酸序列至少55%一致的VH區。在一些實施例中，本文提供一種抗體或其抗原結合片段，其結合至Fn14抗原決定基且包含胺基酸序列與本文提供之序列表及表26-35中所描繪之胺基酸序列至少60%一致的VH區。在一些實施例中，本文提供一種抗體或其抗原結合片段，其結合至Fn14抗原決定基且包含胺基酸序列與本文提供之序列表及表26-35中所描繪之胺基酸序列至少65%一致的VH區。在一些實施例中，本文提供一種抗體或其抗原結合片段，其結合至Fn14抗原決定基且包含胺基酸序列與本文提供之序列表及表26-35中所描繪之胺基酸序列至少70%一致的VH區。在一些實施例中，本文提供一種抗體或其抗原結合片段，其結合至Fn14抗原決定基且包含胺基酸序列與本文提供之序列表及表26-35中所描繪之胺基酸序列至少75%一致的VH區。在一些實施例中，本文提供一種抗體或其抗原結合片段，其結合至Fn14抗原決定基且包含胺基酸序列與本文提供之序列表及表26-35中所描繪之胺基酸序列至少80%一致的VH區。在一些實施例中，本文提供一種抗體或其抗原結合片段，其結合至Fn14抗原決定基且包含胺基酸序列與本文提供之序列表及表26-35中所描繪之胺基酸序列至少85%一致的VH區。在一些實施例中，本文提供一種抗體或其抗原結合片段，其結合至Fn14抗原決定基且包含胺基酸序列與本文提供之序列表及表26-35中所描繪之胺基酸序列至少90%一致的VH區。在一些實施例中，本文提供一種抗體或其抗原結合片段，其結合至Fn14抗原決定基且包含胺基酸序列與本文提供之序列表及表26-35中所描繪之胺基酸序列至少95%一致的VH區。在一些實施例中，本文提供一種抗體或其抗原結合片段，其結合至Fn14抗原決定基且包含胺基酸序列與本文提供之序列表及表26-35中所描繪之胺基酸序列至少99%一致的VH區。
在一些實施例中，本文提供一種抗體或其抗原結合片段，其結合至Fn14抗原決定基且包含胺基酸序列與本文提供之序列表及表26-35中所描繪之胺基酸序列至少35%一致的VL區。在一些實施例中，本文提供一種抗體或其抗原結合片段，其結合至Fn14抗原決定基且包含胺基酸序列與本文提供之序列表及表26-35中所描繪之胺基酸序列至少40%一致的VL區。在一些實施例中，本文提供一種抗體或其抗原結合片段，其結合至Fn14抗原決定基且包含胺基酸序列與本文提供之序列表及表26-35中所描繪之胺基酸序列至少45%一致的VL區。在一些實施例中，本文提供一種抗體或其抗原結合片段，其結合至Fn14抗原決定基且包含胺基酸序列與本文提供之序列表及表26-35中所描繪之胺基酸序列至少50%一致的VL區。在一些實施例中，本文提供一種抗體或其抗原結合片段，其結合至Fn14抗原決定基且包含胺基酸序列與本文提供之序列表及表26-35中所描繪之胺基酸序列至少55%一致的VL區。在一些實施例中，本文提供一種抗體或其抗原結合片段，其結合至Fn14抗原決定基且包含胺基酸序列與本文提供之序列表及表26-35中所描繪之胺基酸序列至少60%一致的VL區。在一些實施例中，本文提供一種抗體或其抗原結合片段，其結合至Fn14抗原決定基且包含胺基酸序列與本文提供之序列表及表26-35中所描繪之胺基酸序列至少65%一致的VL區。在一些實施例中，本文提供一種抗體或其抗原結合片段，其結合至Fn14抗原決定基且包含胺基酸序列與本文提供之序列表及表26-35中所描繪之胺基酸序列至少70%一致的VL區。在一些實施例中，本文提供一種抗體或其抗原結合片段，其結合至Fn14抗原決定基且包含胺基酸序列與本文提供之序列表及表26-35中所描繪之胺基酸序列至少75%一致的VL區。在一些實施例中，本文提供一種抗體或其抗原結合片段，其結合至Fn14抗原決定基且包含胺基酸序列與本文提供之序列表及表26-35中所描繪之胺基酸序列至少80%一致的VL區。在一些實施例中，本文提供一種抗體或其抗原結合片段，其結合至Fn14抗原決定基且包含胺基酸序列與本文提供之序列表及表26-35中所描繪之胺基酸序列至少85%一致的VL區。在一些實施例中，本文提供一種抗體或其抗原結合片段，其結合至Fn14抗原決定基且包含胺基酸序列與本文提供之序列表及表26-35中所描繪之胺基酸序列至少90%一致的VL區。在一些實施例中，本文提供一種抗體或其抗原結合片段，其結合至Fn14抗原決定基且包含胺基酸序列與本文提供之序列表及表26-35中所描繪之胺基酸序列至少95%一致的VL區。在一些實施例中，本文提供一種抗體或其抗原結合片段，其結合至Fn14抗原決定基且包含胺基酸序列與本文提供之序列表及表26-35中所描繪之胺基酸序列至少99%一致的VL區。
在又另一個實施例中，結合至Fn14抗原決定基的抗體或其抗原結合片段包含與本文所提供之序列表及表26-35中所描繪之VH CDR胺基酸序列及/或VL CDR胺基酸序列至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少99%一致的VH CDR及/或VL CDR胺基酸序列。
在又另一個實施例中，結合至Fn14抗原決定基的抗體或其抗原結合片段包含與本文提供之序列表及表26-35中所描繪之VH CDR胺基酸序列及/或所描繪之VL CDR胺基酸序列至少35%一致的VH CDR及/或VL CDR胺基酸序列。在又另一個實施例中，結合至Fn14抗原決定基的抗體或其抗原結合片段包含與本文提供之序列表及表26-35中所描繪之VH CDR胺基酸序列及/或VL CDR胺基酸序列至少40%一致的VH CDR及/或VL CDR胺基酸序列。在又另一個實施例中，結合至Fn14抗原決定基的抗體或其抗原結合片段包含與本文提供之序列表及表26-35中所描繪之VH CDR胺基酸序列及/或VL CDR胺基酸序列至少45%一致的VH CDR及/或VL CDR胺基酸序列。在又另一個實施例中，結合至Fn14抗原決定基的抗體或其抗原結合片段包含與本文提供之序列表及表26-35中所描繪之VH CDR胺基酸序列及/或VL CDR胺基酸序列至少50%一致的VH CDR及/或VL CDR胺基酸序列。在又另一個實施例中，結合至Fn14抗原決定基的抗體或其抗原結合片段包含與本文提供之序列表及表26-35中所描繪之VH CDR胺基酸序列及/或VL CDR胺基酸序列至少55%一致的VH CDR及/或VL CDR胺基酸序列。在又另一個實施例中，結合至Fn14抗原決定基的抗體或其抗原結合片段包含與本文提供之序列表及表26-35中所描繪之VH CDR胺基酸序列及/或VL CDR胺基酸序列至少60%一致的VH CDR及/或VL CDR胺基酸序列。在又另一個實施例中，結合至Fn14抗原決定基的抗體或其抗原結合片段包含與本文提供之序列表及表26-35中所描繪之VH CDR胺基酸序列及/或VL CDR胺基酸序列至少65%一致的VH CDR及/或VL CDR胺基酸序列。在又另一個實施例中，結合至Fn14抗原決定基的抗體或其抗原結合片段包含與本文提供之序列表及表26-35中所描繪之VH CDR胺基酸序列及/或VL CDR胺基酸序列至少70%一致的VH CDR及/或VL CDR胺基酸序列。在又另一個實施例中，結合至Fn14抗原決定基的抗體或其抗原結合片段包含與本文提供之序列表及表26-35中所描繪之VH CDR胺基酸序列及/或VL CDR胺基酸序列至少75%一致的VH CDR及/或VL CDR胺基酸序列。在又另一個實施例中，結合至Fn14抗原決定基的抗體或其抗原結合片段包含與本文提供之序列表及表26-35中所描繪之VH CDR胺基酸序列及/或VL CDR胺基酸序列至少80%一致的VH CDR及/或VL CDR胺基酸序列。在又另一個實施例中，結合至Fn14抗原決定基的抗體或其抗原結合片段包含與本文提供之序列表及表26-35中所描繪之VH CDR胺基酸序列及/或VL CDR胺基酸序列至少85%一致的VH CDR及/或VL CDR胺基酸序列。在又另一個實施例中，結合至Fn14抗原決定基的抗體或其抗原結合片段包含與本文提供之序列表及表26-35中所描繪之VH CDR胺基酸序列及/或VL CDR胺基酸序列至少90%一致的VH CDR及/或VL CDR胺基酸序列。在又另一個實施例中，結合至Fn14抗原決定基的抗體或其抗原結合片段包含與本文提供之序列表及表26-35中所描繪之VH CDR胺基酸序列及/或VL CDR胺基酸序列至少95%一致的VH CDR及/或VL CDR胺基酸序列。在又另一個實施例中，結合至Fn14抗原決定基的抗體或其抗原結合片段包含與本文提供之序列表及表26-35中所描繪之VH CDR胺基酸序列及/或VL CDR胺基酸序列至少99%一致的VH CDR及/或VL CDR胺基酸序列。
可以使用此項技術中已知之方法產生變異，諸如寡核苷酸介導(定點)誘變、丙胺酸掃描及PCR誘變。可以對所選殖的DNA進行定點誘變(參見例如Carter, 1986, Biochem J. 237:1-7；及Zoller等人, 1982, Nucl. Acids Res. 10:6487-500)、卡匣誘變(參見例如Wells等人, 1985, Gene 34:315-23)或其他已知技術，以產生抗Fn14抗體變異體DNA。
任何不涉及維持本文所提供之抗體之適當構形的半胱胺酸殘基亦可經取代，例如經另一種胺基酸(諸如丙胺酸或絲胺酸)取代，以改良分子之氧化穩定性及防止異常交聯。相反，可向抗體中添加半胱胺酸鍵以改良其穩定性(例如在抗體為諸如Fv片段之抗體片段的情況下)。
在一些實施例中，本發明之抗體分子為「去免疫」抗體。「去免疫」抗體為來源於人類化或嵌合抗體的抗體，其胺基酸序列具有一或多個變異，從而使抗體免疫原性相較於對應的原始未去免疫抗體降低。用於產生此類抗體突變體之程序之一涉及鑑別及移除抗體分子之T細胞抗原決定基。第一步，可以藉由若干方法測定抗體分子之免疫原性，例如藉由活體外測定T細胞抗原決定基或電腦模擬預測此類抗原決定基，如此項技術中所知。一旦已鑑別出T細胞抗原決定基功能之關鍵殘基，則可以產生突變以移除免疫原性且保持抗體活性。欲回顧，參見例如Jones等人, 2009, Methods in Molecular Biology 525:405-23。5.2.12 活體外親和力成熟
在一些實施例中，可藉由活體外親和力成熟來製備相較於親本抗體具有改良之特性(諸如親和力、穩定性或表現量)的抗體變異體。如同天然原型，活體外親和力成熟係基於突變及選擇之原理。抗體庫呈現於生物體(例如噬菌體、細菌、酵母或哺乳動物細胞)表面上或與其編碼mRNA或DNA結合(例如共價或非共價)。所呈現抗體之親和力選擇允許分離攜帶編碼抗體之遺傳資訊的生物體或複合物。使用呈現方法(諸如噬菌體呈現)之兩或三輪突變及選擇通常產生親和力在低奈莫耳濃度範圍內之抗體片段。親和力成熟抗體可以對目標抗原具有奈莫耳濃度或甚至皮莫耳濃度之親和力。
噬菌體呈現為廣泛用於呈現及選擇抗體的方法。抗體作為與細菌噬菌體外殼蛋白的融合物呈現於Fd或M13噬菌體表面上。選擇涉及暴露於抗原以允許噬菌體所呈現的抗體結合其目標，一種稱為「淘選」的方法。回收結合至抗原的噬菌體且用於感染細菌，以產生噬菌體供另外多輪選擇。欲回顧，參見例如Hoogenboom, 2002, Methods. Mol. Biol. 178:1-37；及Bradbury及Marks, 2004, J. Immunol. Methods 290:29-49。
在酵母展示系統(參見例如Boder等人, 1997, Nat. Biotech. 15:553-57；及Chao等人, 2006, Nat. Protocols 1:755-68)中，抗體可以與酵母凝集素蛋白Aga2p之黏著性亞單元融合，該亞單元經由與Aga1p之二硫鍵連接至酵母細胞壁。蛋白質經由Aga2p呈現使該蛋白質突出而遠離細胞表面，從而使與酵母細胞壁上的其他分子之潛在相互作用最小化。使用磁性分離及流式細胞術篩選庫，以選擇親和力或穩定性改良的抗體。對所關注之可溶性抗原的結合係藉由用經生物素標記之抗原及二級試劑(諸如與螢光團結合的抗生蛋白鏈菌素)標記酵母來測定。抗體在表面上表現的變化可經由側接scFv之紅血球凝集素或c-Myc抗原決定基標籤之免疫螢光標記來量測。已顯示表現與所呈現蛋白質之穩定性相關，且因此可針對改良之穩定性以及親和力選擇抗體(參見例如Shusta等人, 1999, J. Mol. Biol. 292:949-56)。酵母展示之另一優點在於，所呈現之蛋白質在真核酵母細胞之內質網中摺疊，從而利用內質網伴隨蛋白及品質控制機器。一旦完全成熟，則可以在酵母表面上呈現的同時方便地「滴定」抗體親和力，從而消除表現及純化各種純系的需要。酵母表面呈現之理論侷限性為功能庫尺寸潛在地比其他呈現方法小；然而，最新方法係使用酵母細胞匹配系統產生大小經估算為1014 的組合多樣性(參見例如美國專利公開案2003/0186374；及Blaise等人, 2004, Gene 342:211-18)。
在核糖體呈現時，產生抗體-核糖體-mRNA (ARM)複合物以便在無細胞系統中選擇。使編碼特定抗體庫的DNA庫與缺乏終止密碼子的間隔子序列進行基因融合。此間隔子序列當轉譯時，仍連接至肽基tRNA且佔據核糖體隧道，且從而允許所關注之蛋白質自核糖體突出且摺疊。mRNA、核糖體及蛋白質之所得複合物可以結合至表面所結合的配位體，從而允許經由配位體的親和力捕捉來同時分離抗體及編碼其的mRNA。接著使核糖體結合的mRNA逆轉錄回cDNA，cDNA接著可以經歷誘變且用於下一輪選擇(參見例如Fukuda等人, 2006, Nucleic Acids Res. 34:e127)。在mRNA呈現時，抗體與mRNA之間的共價鍵係使用嘌呤黴素作為轉接分子來建立(Wilson等人, 2001, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 98:3750-55)。
由於此等方法完全在活體外執行，因此其提供優於其他選擇技術的兩個主要優勢。首先，庫多樣性不受細菌細胞轉型效率的限制，而僅受存在於試管中之核糖體及不同mRNA分子的數目限制。其次，在每輪選擇(例如藉由非校正聚合酶)之後，可以容易地引入隨機突變，因為庫在任何多樣化步驟之後無需轉型。
在一些實施例中，可使用哺乳動物呈現系統。
亦可以靶向方式或經由隨機引入將多樣性引入抗體庫之CDR中。先前方法包括經由高量或低量誘變或靶向分離之體細胞超突變熱點來依序靶向抗體的所有CDR(參見例如Ho等人, 2005, J. Biol. Chem. 280:607-17)或基於實驗或結構原因而懷疑影響親和力的殘基。亦可藉由DNA改組或類似技術置換天然多樣化的區域來引入多樣性(參見例如Lu等人, 2003, J. Biol. Chem. 278:43496-507；美國專利第5,565,332號及第6,989,250號)。替代的技術靶向延伸至構架區殘基的高變環(參見例如Bond等人, 2005, J. Mol. Biol. 348:699-709)，在CDR中採用環缺失及插入或使用基於雜交的多樣化(參見例如美國專利公開案第2004/0005709號)。在CDR中產生多樣性的其他方法揭示於例如美國專利第7,985,840號中。可以用於產生抗體庫及/或抗體親和力成熟的其他方法揭示於例如美國專利第8,685,897號及第8,603,930號中，及美國公開案第2014/0170705號、第2014/0094392號、第2012/0028301號、第2011/0183855號及第2009/0075378號中，該等文獻中之每一者以引用之方式併入本文中。
可藉由此項技術中已知的多種技術實現庫之篩選。舉例而言，抗體可固定於固體載體、管柱、銷或纖維素/聚(偏二氟乙烯)膜/其他過濾器上，在附著至吸附盤之宿主細胞上表現或用於細胞分選中，或與生物素結合以便經抗生蛋白鏈菌素塗佈之珠粒捕捉或用於淘選呈現庫之任何其他方法中。
關於活體外親和力成熟方法的評述，參見例如Hoogenboom, 2005, Nature Biotechnology 23:1105-16；Quiroz及Sinclair, 2010, Revista Ingeneria Biomedia 4:39-51；及其中的參考文獻。
在一些特定實施例中，抗體親和力成熟可使用以下章節6中所例示之方法進行。5.2.13 抗體修飾
本發明之範疇內包括對結合至Fn14之本文所提供抗體的共價修飾。共價修飾包括使抗體之目標胺基酸殘基與有機衍生劑反應，該有機衍生劑能夠與抗體之所選側鏈或N端或C端殘基反應。其他修飾包括麩醯胺醯基及天冬醯胺醯基殘基分別去醯胺化而形成相應的麩胺醯基及天冬胺醯基殘基、脯胺酸及離胺酸之羥基化、絲胺醯基或蘇胺醯基殘基之羥基磷酸化、離胺酸、精胺酸及組胺酸側鏈之α-胺基甲基化(參見例如Creighton,Proteins : Structure and Molecular Properties 79-86 (1983))、N端胺之乙醯化，及任何C端羧基之醯胺化。
包括於本發明範疇內的對本文所提供抗體進行的其他類型之共價修飾包括改變抗體或多肽之原生糖基化模式(參見例如Beck等人, 2008, Curr. Pharm. Biotechnol. 9:482-501；及Walsh, 2010, Drug Discov. Today 15:773-80)，及以例如以下文獻中闡述之方式使抗體連接至多種非蛋白質聚合物之一(例如聚乙二醇(PEG)、聚丙二醇或聚氧化烯)：美國專利第4,640,835號；第4,496,689號；第4,301,144號；第4,670,417號；第4,791,192號；或第4,179,337號。
本發明之抗體亦可經修飾以形成嵌合分子，其包含與另一種異源多肽或胺基酸序列(例如抗原決定基標籤)融合的抗體(參見例如Terpe, 2003, Appl. Microbiol. Biotechnol. 60:523-33)或IgG分子之Fc區(參見例如Aruffo,Antibody Fusion Proteins 221-42 (Chamow及Ashkenazi編, 1999))。
本文亦提供融合蛋白，其包含結合至Fn14的本文所提供抗體及異源多肽。
本文亦提供結合至Fn14抗原的一組抗體。在特定實施例中，該組抗體對Fn14抗原具有不同結合速率、不同解離速率、不同親和力，且/或對Fn14抗原具有不同特異性。在一些實施例中，該組抗體包含約10、約25、約50、約75、約100、約125、約150、約175、約200、約250、約300、約350、約400、約450、約500、約550、約600、約650、約700、約750、約800、約850、約900、約950或約1000種或更多種抗體或由該等抗體組成。該組抗體可以用於例如96孔或384孔盤中，供諸如ELISA之分析用。5.2.14 免疫結合物
本發明亦提供結合物，其包含藉由合成連接子共價結合至一或多種非抗體藥劑的本發明任一種抗體。
在一些實施例中，本文所提供之抗體與例如治療劑(例如細胞毒性劑)或診斷性或可偵測分子結合或以重組方式融合。結合或以重組方式融合之抗體可適用於例如治療或預防疾病或病症，諸如Fn14介導之疾病。結合或以重組方式融合的抗體可以適用於例如監測或預後Fn14介導性疾病之發作、發展、進展及/或嚴重程度。
此類診斷及偵測可以藉由例如使抗體與以下偶合來達成：可偵測物質，包括(但不限於)各種酶，諸如(但不限於)辣根過氧化酶、鹼性磷酸酶、β-半乳糖苷酶或乙醯膽鹼酯酶；輔基，諸如(但不限於)抗生蛋白鏈菌素/生物素或抗生物素蛋白/生物素；螢光材料，諸如(但不限於)傘酮、螢光素、異硫氰酸螢光素、若丹明(rhodamine)、二氯三嗪基胺螢光素、丹磺醯氯或藻紅素；發光材料，諸如(但不限於)魯米諾(luminol)；生物發光材料，諸如(但不限於)基於吖錠的化合物或HALOTAG；放射性材料，諸如(但不限於)碘(131I、125I、123I及121I)、碳(14C)、硫(35S)、氚(3H)、銦(115In、113In、112In及111In)、鎝(99Tc)、鉈(201Ti)、鎵(68Ga及67Ga)、鈀(103Pd)、鉬(99Mo)、氙(133Xe)、氟(18F)、153Sm、177Lu、159Gd、149Pm、140La、175Yb、166Ho、90Y、47Sc、186Re、188Re、142Pr、105Rh、97Ru、68Ge、57Co、65Zn、85Sr、32P、153Gd、169Yb、51Cr、54Mn、75Se、113Sn或117Sn；正電子發射金屬(使用各種正電子發射斷層攝影)；及非放射性順磁金屬離子。
本文亦提供與異源蛋白質或多肽(或其片段，例如約10、約20、約30、約40、約50、約60、約70、約80、約90或約100個胺基酸之多肽)重組融合或化學結合(共價或非共價結合)的抗體，以產生融合蛋白；以及其用途。特定言之，本文提供融合蛋白，其包含本文所提供之抗體的抗原結合片段(例如CDR1、CDR2及/或CDR3)及異源蛋白質、多肽或肽。在一個實施例中，與抗體融合之異源蛋白質、多肽或肽適用於將抗體靶向特定細胞類型。
此外，本文所提供之抗體可與標記物或「標籤」序列(諸如肽)融合，以促進純化。在特定實施例中，標記物或標籤胺基酸序列為六組胺酸肽，諸如pQE載體中所提供的標籤(參見例如QIAGEN, Inc.)，其中多者可市購。舉例而言，如Gentz等人, 1989, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86:821-24中所述，六組胺酸為融合蛋白之純化提供方便。適用於純化之其他肽標籤包括(但不限於)紅血球凝集素(「HA」)標籤，其對應於來源於流感紅血球凝集素蛋白質之抗原決定基(Wilson等人, 1984, Cell 37:767-78）；及「FLAG」標籤。
用於各部分(包括多肽)與抗體融合或結合的方法已知(參見例如Arnon等人, Monoclonal Antibodies for Immunotargeting of Drugs in Cancer Therapy, in Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy 243-56 (Reisfeld等人編, 1985)；Hellstrom等人, Antibodies for Drug Delivery, in Controlled Drug Delivery623-53 (Robinson等人編, 第2版, 1987)；Thorpe, Antibody Carriers of Cytotoxic Agents in Cancer Therapy: A Review, in Monoclonal Antibodies: Biological and Clinical Applications 475-506 (Pinchera等人編, 1985)；Analysis, Results, and Future Prospective of the Therapeutic Use of Radiolabeled Antibody in Cancer Therapy, in Monoclonal Antibodies for Cancer Detection and Therapy 303-16 (Baldwin等人編, 1985)；Thorpe 等人, 1982,Immunol. Rev. 62:119-58；美國專利第5,336,603號、第5,622,929號、第5,359,046號、第5,349,053號、第5,447,851號、第5,723,125號、第5,783,181號、第5,908,626號、第5,844,095號及第5,112,946號；EP 307,434；EP 367,166；EP 394,827；PCT公開案WO 91/06570、WO 96/04388、WO 96/22024、WO 97/34631及WO 99/04813；Ashkenazi等人, 1991, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 88: 10535-39；Traunecker等人, 1988, Nature, 331:84-86；Zheng等人, 1995, J. Immunol. 154:5590-600；及Vil等人, 1992, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:11337-41)。
融合蛋白可經由例如基因改組、基元改組、外顯子改組及/或密碼子改組(統稱為「DNA改組」)之技術產生。DNA改組可以用於改變如本文所提供之抗體的活性，包括例如具有較高親和力及較低解離速率的抗體(參見例如美國專利第5,605,793號、第5,811,238號、第5,830,721號、第5,834,252號及第5,837,458號；Patten等人, 1997, Curr. Opinion Biotechnol. 8:724-33；Harayama, 1998, Trends Biotechnol. 16(2):76-82；Hansson等人, 1999, J. Mol. Biol. 287:265-76；及Lorenzo及Blasco, 1998, Biotechniques 24(2):308-13)。抗體或所編碼的抗體在重組之前可以藉由進行易錯PCR之隨機誘變、隨機核苷酸插入或其他方法來改變。編碼本文所提供之抗體的聚核苷酸可以與一或多種異源分子的一或多個組分、基元、區段、部分、結構域、片段等重組。
本文所提供之抗體亦可與第二抗體結合以形成抗體雜結合物，如例如美國專利第4,676,980號中所述。
抗體亦可連接至特別適用於目標抗原之免疫分析或純化的固體載體。此類固體載體包括(但不限於)玻璃、纖維素、聚丙烯醯胺、耐綸、聚苯乙烯、聚氯乙烯或聚丙烯。
連接子可為促進結合劑在細胞中釋放的「可裂解連接子」，但本文中亦涵蓋不可裂解連接子。用於本發明之結合物中的連接子包括(但不限於)酸不穩定性連接子(例如腙連接子)、含有二硫化物的連接子、肽酶敏感性連接子(例如包含胺基酸(例如纈胺酸及/或瓜胺酸)的肽連接子，諸如瓜胺酸-纈胺酸或苯丙胺酸-離胺酸)、光不穩定性連接子、二甲基連接子(參見例如Chari等人, 1992, Cancer Res. 52:127-31；及美國專利第5,208,020號)、硫醚連接子，或為了規避多藥轉運體介導抗藥性的親水性連接子(參見例如Kovtun等人, 2010, Cancer Res. 70:2528-37)。
抗體與藥劑之結合物可以使用多種雙官能蛋白質偶合劑製備，雙官能蛋白質偶合劑諸如BMPS、EMCS、GMBS、HBVS、LC-SMCC、MBS、MPBH、SBAP、SIA、SIAB、SMCC、SMPB、SMPH、磺基-EMCS、磺基-GMBS、磺基-KMUS、磺基-MBS、磺基-SIAB、磺基-SMCC、磺基-SMPB及SVSB (丁二醯亞胺基-(4-乙烯基碸)苯甲酸酯)。本發明進一步預期抗體與藥劑之結合物可以使用如此項技術中所揭示的任何適合方法製備(參見例如Bioconjugate Techniques (Hermanson編, 第2版, 2008))。
抗體與藥劑之習知結合策略已基於涉及Lys殘基之ε-胺基或Cys殘基之硫醇基的隨機結合化學反應，從而產生異質結合物。最近開發的技術允許與抗體定點結合，從而產生均質負載且避免結合物亞群的抗原結合或藥物動力學發生變化。此等技術包括對「硫基單抗」進行工程改造，包含在重鏈及輕鏈之位置上進行半胱胺酸取代，從而提供反應性硫醇基且不中斷免疫球蛋白摺疊及組裝或改變抗原結合(參見例如Junutula等人, 2008, J. Immunol. Meth. 332: 41-52；及Junutula等人, 2008, Nature Biotechnol. 26:925-32)。在另一方法中，硒半胱胺酸係藉由對終止密碼子UGA再編碼(自終止至硒半胱胺酸插入)而以共轉譯方式插入抗體序列中，從而允許在其他天然胺基酸存在下在硒半胱胺酸之親核硒醇基團處發生定點共價結合(參見例如Hofer等人, 2008, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 105:12451-56；及Hofer等人, 2009, Biochemistry 48(50):12047-57)。5.3 聚核苷酸
在某些實施例中，本發明涵蓋編碼本文所述之抗體的聚核苷酸。術語「編碼多肽的聚核苷酸」涵蓋僅包括多肽編碼序列的聚核苷酸以及包括其他編碼序列及/或非編碼序列的聚核苷酸。本發明之聚核苷酸可呈RNA形式或呈DNA形式。DNA包括cDNA、基因組DNA及合成DNA；且可為雙股或單股，且若為單股，則可為編碼股或非編碼(反義)股。
在某些實施例中，聚核苷酸包含用於多肽之編碼序列，該編碼序列與有助於例如自宿主細胞表現及分泌多肽的聚核苷酸(例如充當分泌序列以控制多肽轉運之前導序列)在同一閱讀框架中融合。多肽可使前導序列藉由宿主細胞裂解以形成多肽之「成熟」形式。
在某些實施例中，聚核苷酸包含多肽之編碼序列，該編碼序列與標記物或標籤序列在同一閱讀框架中融合。舉例而言，在一些實施例中，標記物序列為由載體供應之六組胺酸標籤，其允許在細菌宿主之情況下有效純化與標記物融合之多肽。在一些實施例中，標記物係與其他親和標籤結合使用。
在某些實施例中，本文所提供之聚核苷酸係選自本文所提供之序列表中所列出之聚核苷酸或其任何組合。在某些實施例中，本文所提供之聚核苷酸係選自下表36中所列之聚核苷酸。 表36.例示性小鼠抗體之聚核苷酸序列
抗體名稱 VH VL
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在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 34之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 39之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 34之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 51之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 34之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 57之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 34之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 199之VL核苷酸序列。
在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 49之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 39之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 49之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 51之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 49之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 57之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 49之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 199之VL核苷酸序列。
在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 53之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 39之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 53之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 51之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 53之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 57之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 53之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 199之VL核苷酸序列。
在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 55之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 39之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 55之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 51之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 55之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 57之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 55之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 199之VL核苷酸序列。
在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 59之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 39之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 59之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 51之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 59之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 57之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 59之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 199之VL核苷酸序列。
在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 180之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 39之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 180之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 51之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 180之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 57之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 180之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 199之VL核苷酸序列。
在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 189之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 39之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 189之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 51之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 189之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 57之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 189之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 199之VL核苷酸序列。
在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 191之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 39之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 191之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 51之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 191之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 57之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 191之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 199之VL核苷酸序列。
在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 193之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 39之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 193之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 51之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 193之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 57之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 193之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 199之VL核苷酸序列。
在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 195之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 39之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 195之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 51之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 195之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 57之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 195之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 199之VL核苷酸序列。
在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 197之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 39之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 197之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 51之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 197之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 57之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 197之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 199之VL核苷酸序列。
在一些實施例中，本文所提供之聚核苷酸係選自下表37。 表37.人類化抗體之聚核苷酸序列
抗體名稱 VH VL
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A650/A656 SEQ ID NO: 226 SEQ ID NO: 236
在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 202之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 91之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 202之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 93之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 202之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 95之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 202之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 97之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 202之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 99之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 202之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 101之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 202之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 103之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 202之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 111之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 202之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 228之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 202之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 230之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 202之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 232之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 202之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 234之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 202之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 236之VL核苷酸序列。
在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 204之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 91之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 204之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 93之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 204之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 95之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 204之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 97之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 204之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 99之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 204之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 101之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 204之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 103之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 204之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 111之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 204之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 228之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 204之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 230之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 204之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 232之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 204之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 234之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 204之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 236之VL核苷酸序列。
在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 206之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 91之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 206之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 93之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 206之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 95之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 206之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 97之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 206之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 99之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 206之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 101之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 206之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 103之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 206之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 111之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 206之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 228之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 206之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 230之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 206之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 232之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 206之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 234之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 206之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 236之VL核苷酸序列。
在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 208之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 91之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 208之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 93之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 208之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 95之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 208之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 97之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 208之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 99之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 208之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 101之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 208之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 103之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 208之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 111之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 208之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 228之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 208之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 230之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 208之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 232之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 208之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 234之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 208之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 236之VL核苷酸序列。
在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 210之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 91之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 210之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 93之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 210之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 95之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 210之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 97之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 210之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 99之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 210之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 101之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 210之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 103之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 210之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 111之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 210之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 228之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 210之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 230之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 210之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 232之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 210之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 234之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 210之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 236之VL核苷酸序列。
在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 212之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 91之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 212之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 93之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 212之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 95之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 212之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 97之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 212之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 99之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 212之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 101之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 212之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 103之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 212之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 111之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 212之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 228之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 212之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 230之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 212之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 232之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 212之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 234之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 212之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 236之VL核苷酸序列。
在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 214之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 91之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 214之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 93之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 214之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 95之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 214之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 97之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 214之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 99之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 214之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 101之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 214之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 103之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 214之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 111之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 214之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 228之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 214之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 230之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 214之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 232之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 214之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 234之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 214之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 236之VL核苷酸序列。
在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 216之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 91之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 216之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 93之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 216之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 95之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 216之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 97之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 216之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 99之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 216之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 101之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 216之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 103之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 216之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 111之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 216之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 228之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 216之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 230之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 216之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 232之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 216之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 234之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 216之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 236之VL核苷酸序列。
在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 218之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 91之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 218之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 93之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 218之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 95之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 218之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 97之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 218之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 99之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 218之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 101之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 218之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 103之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 218之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 111之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 218之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 228之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 218之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 230之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 218之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 232之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 218之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 234之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 218之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 236之VL核苷酸序列。
在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 220之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 91之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 220之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 93之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 220之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 95之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 220之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 97之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 220之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 99之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 220之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 101之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 220之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 103之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 220之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 111之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 220之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 228之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 220之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 230之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 220之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 232之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 220之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 234之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 220之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 236之VL核苷酸序列。
在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 222之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 91之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 222之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 93之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 222之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 95之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 222之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 97之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 222之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 99之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 222之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 101之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 222之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 103之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 222之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 111之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 222之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 228之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 222之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 230之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 222之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 232之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 222之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 234之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 222之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 236之VL核苷酸序列。
在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 224之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 91之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 224之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 93之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 224之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 95之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 224之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 97之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 224之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 99之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 224之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 101之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 224之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 103之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 224之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 111之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 224之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 228之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 224之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 230之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 224之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 232之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 224之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 234之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 224之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 236之VL核苷酸序列。
在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 226之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 91之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 226之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 93之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 226之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 95之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 226之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 97之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 226之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 99之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 226之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 101之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 226之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 103之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 226之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 111之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 226之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 228之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 226之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 230之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 226之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 232之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 226之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 234之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 226之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 236之VL核苷酸序列。
在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 65之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 91之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 65之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 93之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 65之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 95之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 65之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 97之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 65之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 99之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 65之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 101之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 65之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 103之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 65之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 111之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 65之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 228之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 65之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 230之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 65之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 232之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 65之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 234之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 65之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 236之VL核苷酸序列。
在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 67之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 91之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 67之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 93之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 67之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 95之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 67之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 97之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 67之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 99之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 67之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 101之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 67之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 103之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 67之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 111之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 67之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 228之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 67之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 230之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 67之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 232之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 67之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 234之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 67之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 236之VL核苷酸序列。
在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 69之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 91之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 69之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 93之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 69之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 95之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 69之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 97之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 69之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 99之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 69之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 101之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 69之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 103之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 69之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 111之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 69之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 228之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 69之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 230之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 69之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 232之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 69之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 234之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 69之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 236之VL核苷酸序列。
在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 71之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 91之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 71之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 93之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 71之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 95之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 71之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 97之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 71之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 99之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 71之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 101之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 71之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 103之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 71之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 111之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 71之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 228之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 71之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 230之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 71之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 232之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 71之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 234之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 71之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 236之VL核苷酸序列。
在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 73之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 91之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 73之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 93之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 73之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 95之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 73之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 97之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 73之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 99之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 73之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 101之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 73之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 103之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 73之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 111之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 73之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 228之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 73之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 230之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 73之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 232之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 73之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 234之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 73之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 236之VL核苷酸序列。
在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 75之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 91之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 75之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 93之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 75之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 95之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 75之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 97之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 75之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 99之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 75之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 101之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 75之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 103之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 75之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 111之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 75之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 228之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 75之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 230之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 75之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 232之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 75之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 234之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 75之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 236之VL核苷酸序列。
在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 77之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 91之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 77之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 93之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 77之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 95之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 77之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 97之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 77之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 99之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 77之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 101之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 77之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 103之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 77之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 111之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 77之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 228之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 77之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 230之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 77之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 232之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 77之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 234之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 77之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 236之VL核苷酸序列。
在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 79之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 91之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 79之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 93之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 79之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 95之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 79之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 97之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 79之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 99之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 79之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 101之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 79之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 103之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 79之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 111之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 79之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 228之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 79之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 230之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 79之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 232之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 79之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 234之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 79之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 236之VL核苷酸序列。
在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 81之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 91之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 81之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 93之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 81之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 95之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 81之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 97之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 81之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 99之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 81之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 101之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 81之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 103之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 81之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 111之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 81之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 228之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 81之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 230之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 81之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 232之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 81之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 234之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 81之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 236之VL核苷酸序列。
在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 83之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 91之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 83之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 93之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 83之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 95之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 83之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 97之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 83之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 99之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 83之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 101之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 83之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 103之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 83之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 111之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 83之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 228之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 83之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 230之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 83之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 232之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 83之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 234之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 83之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 236之VL核苷酸序列。
在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 85之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 91之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 85之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 93之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 85之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 95之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 85之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 97之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 85之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 99之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 85之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 101之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 85之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 103之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 85之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 111之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 85之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 228之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 85之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 230之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 85之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 232之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 85之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 234之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 85之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 236之VL核苷酸序列。
在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 87之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 91之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 87之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 93之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 87之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 95之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 87之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 97之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 87之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 99之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 87之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 101之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 87之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 103之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 87之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 111之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 87之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 228之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 87之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 230之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 87之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 232之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 87之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 234之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 87之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 236之VL核苷酸序列。
在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 89之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 91之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 89之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 93之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 89之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 95之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 89之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 97之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 89之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 99之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 89之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 101之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 89之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 103之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 89之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 111之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 89之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 228之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 89之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 230之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 89之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 232之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 89之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 234之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 89之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 236之VL核苷酸序列。
在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 107之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 91之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 107之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 93之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 107之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 95之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 107之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 97之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 107之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 99之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 107之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 101之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 107之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 103之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 107之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 111之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 107之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 228之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 107之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 230之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 107之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 232之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 107之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 234之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 107之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 236之VL核苷酸序列。
在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 109之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 91之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 109之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 93之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 109之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 95之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 109之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 97之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 109之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 99之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 109之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 101之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 109之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 103之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 109之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 111之VL核苷酸序列。
在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 109之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 228之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 109之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 230之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 109之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 232之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 109之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 234之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 109之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 236之VL核苷酸序列。
在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 105之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 91之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 105之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 93之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 105之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 95之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 105之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 97之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 105之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 99之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 105之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 101之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 105之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 103之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 105之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 111之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 105之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 228之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 105之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 230之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 105之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 232之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 105之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 234之VL核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含SEQ ID NO: 105之VH核苷酸序列及/或SEQ ID NO: 236之VL核苷酸序列。
本發明亦關於本文所述之聚核苷酸之變異體，其中該變異體編碼例如多肽之片段、類似物及/或衍生物。在某些實施例中，本發明提供聚核苷酸，包含核苷酸序列與編碼包含本文所述之抗體或其抗原結合片段之多肽的聚核苷酸至少約80%一致、至少約85%一致、至少約90%一致、至少約95%一致且在一些實施例中至少約96%、97%、98%或99%一致的聚核苷酸。
如本文所用，片語「核苷酸序列與參考核苷酸序列至少例如95%「一致」的聚核苷酸」意指該聚核苷酸的核苷酸序列與參考序列一致，但其中聚核苷酸序列可以包括至多五個點突變(以參考核苷酸序列之每100個核苷酸計)。換言之，為了獲得核苷酸序列與參考核苷酸序列至少95%一致的聚核苷酸，參考序列中至多5%的核苷酸可缺失或經另一核苷酸取代，或參考序列中可插入佔參考序列核苷酸總數至多5%的多個核苷酸。參考序列中之此等突變可發生於參考核苷酸序列之5'或3'端位置或彼等末端位置之間的任何位置，此等位置個別地散置於參考序列之核苷酸中或參考序列內的一或多個鄰接基團中。
聚核苷酸變異體可含有編碼區、非編碼區或兩者之變化。在一些實施例中，聚核苷酸變異體含有產生靜默取代、添加或缺失，但不改變所編碼多肽之特性或活性的變化。在一些實施例中，聚核苷酸變異體包含靜默取代，其不引起多肽之胺基酸序列發生變化(由於基因密碼之簡併)。聚核苷酸變異體可出於多種原因產生，例如使特定宿主之密碼子表現最佳化(亦即，將人類mRNA中之密碼子改變為諸如大腸桿菌之細菌宿主所偏好的密碼子)。在一些實施例中，聚核苷酸變異體之序列之的非編碼區或編碼區中包含至少一個靜默突變。
在一些實施例中，產生聚核苷酸變異體以調節或改變經編碼之多肽之表現(或表現量)。在一些實施例中，產生聚核苷酸變異體以增強經編碼多肽之表現。在一些實施例中，產生聚核苷酸變異體以減少經編碼多肽之表現。在一些實施例中，相較於親本聚核苷酸序列，聚核苷酸變異體使經編碼多肽之表現增強。在一些實施例中，相較於親本聚核苷酸序列，聚核苷酸變異體使經編碼多肽之表現減少。
在某些實施例中，本發明提供一種聚核苷酸，其包含與本文提供之序列表中所列之聚核苷酸至少約80%一致、至少約85%一致、至少約90%一致、至少約95%一致且在一些實施例中，至少約96%、97%、98%或99%一致的核苷酸序列。
在某些實施例中，本發明提供一種聚核苷酸，其包含與選自上述表36及表37中所列之聚核苷酸的聚核苷酸至少約80%一致、至少約85%一致、至少約90%一致、至少約95%一致且在一些實施例中至少約96%、97%、98%或99%一致的核苷酸序列。
在某些實施例中，本文所提供之聚核苷酸進一步包含一或多個信號序列，該等信號序列位於上述表36及表37中所列之VH及/或VL序列之前。
在某些實施例中，聚核苷酸經分離。在某些實施例中，聚核苷酸為實質上純的。
亦提供包含本文所述之聚核苷酸的載體及細胞。在一些實施例中，表現載體包含聚核苷酸分子。在一些實施例中，宿主細胞包含含有聚核苷酸分子之表現載體。在一些實施例中，宿主細胞包含一或多個包含聚核苷酸分子之表現載體。在一些實施例中，宿主細胞包含聚核苷酸分子。在一些實施例中，宿主細胞包含一或多個聚核苷酸分子。本文提供之載體構築例示於以下章節6中。5.4 抗體製備方法
在又另一態樣中，本文提供用於製備本文所提供之各種抗體或抗原結合片段的方法。
免疫特異性結合至Fn14抗原(例如Fn14)之本文所提供抗體(例如本文提供的全長抗體、抗體重鏈及/或輕鏈，或單鏈抗體)的重組表現需要構築含有編碼該抗體之聚核苷酸的表現載體。編碼本文所提供之抗體分子、抗體重鏈或輕鏈或其片段(諸如(但不一定)含有重鏈及/或輕鏈可變域)的聚核苷酸一經獲得，即可使用此項技術中熟知的技術、藉由重組DNA技術產生用於產生抗體分子的載體。因此，本文描述藉由表現含有編碼抗體之核苷酸序列的聚核苷酸來製備蛋白質之方法。可使用熟習此項技術者熟知之方法構築含有抗體編碼序列及適當轉錄及轉譯控制信號之表現載體。此等方法包括例如活體外重組DNA技術、合成技術及活體內基因重組。亦提供可複製載體，其包含編碼本文所提供抗體分子、抗體重鏈或輕鏈、抗體重鏈或輕鏈可變域或其片段、或重鏈或輕鏈CDR的核苷酸序列，該核苷酸序列可操作地連接至啟動子。此類載體可以包括編碼抗體分子恆定區的核苷酸序列(參見例如國際公開案第WO 86/05807號及第WO 89/01036號；及美國專利第5,122,464號)且可以將抗體可變域選殖入此載體中以便表現整個重鏈、整個輕鏈，或整個重鏈與輕鏈。
表現載體係藉由習知技術轉移至宿主細胞且接著藉由習知技術培養經轉染的細胞以產生本文所提供之抗體。因此，本文亦提供含有聚核苷酸的宿主細胞，該聚核苷酸編碼本文所提供之抗體或其片段，或其重鏈或輕鏈，或其片段，或本文所提供的單鏈抗體，該聚核苷酸可操作地連接至異源啟動子。在某些實施例中，為了表現雙鏈抗體，可以使編碼重鏈與輕鏈的載體在宿主細胞中共表現以表現整個免疫球蛋白分子，如下詳述。
可以使用多種宿主表現載體系統表現本文所提供的抗體分子(參見例如美國專利第5,807,715號)。此類宿主表現系統不僅代表可藉以產生且隨後純化所關注之編碼序列的媒介物，而且代表在適當核苷酸編碼序列轉型或轉染時，可以原位表現本文所提供之抗體分子的細胞。此等系統包括(但不限於)經含有抗體編碼序列之重組細菌噬菌體DNA、質體DNA或黏質體DNA表現載體轉型的微生物，諸如細菌(例如大腸桿菌及枯草芽孢桿菌(B. subtilis))；經含有抗體編碼序列之重組酵母表現載體轉型的酵母(例如畢赤酵母(Saccharomyces Pichia))；經含有抗體編碼序列之重組病毒表現載體(例如桿狀病毒)感染的昆蟲細胞系統；經重組病毒表現載體(例如花椰菜嵌紋病毒(cauliflower mosaic virus，CaMV)、菸草花葉病毒(tobacco mosaic virus，TMV))感染或經含有抗體編碼序列之重組質體表現載體(例如Ti質體)轉型的植物細胞系統；或具有含有來源於哺乳動物細胞基因組之啟動子(例如金屬硫蛋白啟動子)或來源於哺乳動物病毒之啟動子(例如腺病毒晚期啟動子；痘瘡病毒7.5K啟動子)之重組表現構築體的哺乳動物細胞系統(例如COS、CHO、BHK、293、NS0及3T3細胞)。可以利用諸如大腸桿菌之細菌細胞或尤其用於表現整個重組抗體分子之真核細胞表現重組抗體分子。舉例而言，哺乳動物細胞(諸如中國倉鼠卵巢細胞(CHO))與載體(諸如來自人類細胞巨大病毒之主要中間早期基因啟動子元件)的結合為抗體之有效表現系統(Foecking等人, 1986, Gene 45:101；及Cockett等人, 1990, Bio/Technology 8:2)。在一些實施例中，本文所提供之抗體係在CHO細胞中產生。在一個特定實施例中，編碼免疫特異性結合至Fn14抗原之本文所提供抗體的核苷酸序列之表現係藉由組成型啟動子、誘導型啟動子或組織特異性啟動子調控。
在細菌系統中，多種表現載體可有利地根據所表現之抗體分子的預期用途來選擇。舉例而言，當欲產生大量此類抗體時，為了產生抗體分子之醫藥組合物，可能需要導引易純化之融合蛋白產物高量表現的載體。此類載體包括(但不限於)大腸桿菌表現載體pUR278 (Ruther等人, 1983, EMBO 12:1791)，其中可將抗體編碼序列個別地與lac Z編碼區同框接合至載體中，從而產生融合蛋白；pIN載體(Inouye及Inouye, 1985, Nucleic Acids Res. 13:3101-3109；Van Heeke及Schuster, 1989, J. Biol. Chem. 24:5503-5509)；及其類似載體。亦可使用pGEX載體，使外來多肽以與麩胱甘肽5-轉移酶(GST)的融合蛋白形式表現。一般而言，此類融合蛋白為可溶的，且可藉由吸附及結合至基質麩胱甘肽瓊脂糖珠粒、隨後在游離麩胱甘肽存在下溶離而容易自溶解細胞純化。pGEX載體經設計以包括凝血酶或因子Xa蛋白酶裂解位點，以使得所選殖的目標基因產物可以自GST部分釋放。
在昆蟲系統中，使用苜蓿銀紋夜蛾(Autographa californica )核多角體病毒(AcNPV)作為表現外來基因的載體。病毒在草地黏蟲(Spodoptera frugiperda )細胞中生長。可將抗體編碼序列個別地選殖至病毒之非必需區域(例如多角體蛋白基因)中且置於AcNPV啟動子(例如多角體蛋白啟動子)之控制下。
在哺乳動物宿主細胞中，可以利用多種基於病毒之表現系統。在其中腺病毒用作表現載體之情況下，所關注之抗體編碼序列可接合至腺病毒轉錄/轉譯控制複合物，例如晚期啟動子及三聯前導序列。此嵌合基因接著可以藉由活體外或活體內重組而插入腺病毒基因組中。插入病毒基因組之非必需區域中(例如區域El或E3)將產生可存活且能夠在感染之宿主中表現抗體分子的重組病毒(參見例如Logan及Shenk, 1984, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 8 1:355-359)。特定起始信號亦可為有效轉譯所插入之抗體編碼序列所必需的。此等信號包括ATG起始密碼子及相鄰序列。此外，起始密碼子必須與所要編碼序列的閱讀框同步，以確保整個插入序列轉譯。此等外源轉譯控制信號及起始密碼子可具有多種來源，天然與合成來源。可藉由包括適當轉錄增強子元件、轉錄終止子等來增強表現效率(參見例如Bittner等人, 1987, Methods in Enzymol. 153:51-544)。
另外，可以選擇調節所插入序列之表現或以所需特定方式修飾及處理基因產物之宿主細胞株。蛋白質產物之此類修飾(例如糖基化)及處理(例如裂解)對蛋白質功能而言可能為重要的。不同宿主細胞具有用於蛋白質及基因產物之轉譯後處理及修飾的特徵及特定機制。可選擇適當細胞株或宿主系統以確保所表現之外來蛋白質得到正確修飾及處理。為此目的，可使用具有用於正確處理初級轉錄物、基因產物糖基化及磷酸化的細胞機構之真核宿主細胞。此類哺乳動物宿主細胞包括(但不限於) CHO、VERY、BHK、Hela、COS、MDCK、293、3T3、W138、BT483、Hs578T、HTB2、BT2O及T47D、NS0 (不能內源性產生任何免疫球蛋白鏈之鼠類骨髓瘤細胞株)、CRL7O3O及HsS78Bst細胞。在一些實施例中，本文所提供之完全人類單株抗體係在諸如CHO細胞之哺乳動物細胞中產生。
為了長期高產量產生重組蛋白質，可以利用穩定表現。舉例而言，可以對細胞株進行工程改造以穩定表現抗體分子。宿主細胞可經藉由適當表現控制元件(例如啟動子、增強子序列、轉錄終止子、聚腺苷酸化位點等)及可選標記物控制之DNA轉型，而非使用含有病毒複製起點的表現載體轉型。引入外來DNA之後，可使工程化細胞在富集培養基中生長1-2天，且接著轉換成選擇性培養基。重組質體中之可選標記物賦予選擇抗性，且讓細胞質體穩定地整合至其染色體中且生長而形成變異區，該等變異區又可選殖入細胞株中且擴增。此方法可以有利地用於工程改造表現抗體分子之細胞株。此類工程化細胞株尤其可以適用於篩選及評估與抗體分子直接或間接相互作用之組合物。
可使用多種選擇系統，包括(但不限於)單純疱疹病毒胸苷激酶(Wigler等人, 1977, Cell 11:223)、次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖轉移酶(Szybalska及Szybalski, 1992, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 48:202)及腺嘌呤磷酸核糖轉移酶(Lowy等人, 1980, Cell 22:8-17)基因，其分別可在tk-細胞、hgprt-細胞或aprt-細胞中使用。另外，抗代謝物抗性可以用作選擇以下基因之基礎：dhfr ，其賦予針對甲胺喋呤之抗性(Wigler等人, 1980, Natl. Acad. Sci. USA 77:357；O'Hare等人, 1981, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 78:1527)；gpt ，其賦予針對黴酚酸之抗性(Mulligan及Berg, 1981, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 78:2072)；neo，其賦予針對胺基醣苷G-418之抗性(Wu及Wu, 1991, Biotherapy 3:87-95；Tolstoshev, 1993, Ann. Rev. Pharmacol. Toxicol. 32:573-596；Mulligan, 1993, Science 260:926-932；及Morgan及Anderson, 1993, Ann. Rev. Biochem. 62:191-217；1993年, TIB TECH 11(5):l55-2 15)；及hygro ，其賦予針對潮黴素之抗性(Santerre等人, 1984, Gene 30:147)。重組DNA技術領域中通常已知之方法可常規地應用於選擇所要重組純系，且此類方法描述於例如Ausubel等人(編),Current Protocols in Molecular Biology , John Wiley & Sons, NY (1993)；Kriegler,Gene Transfer and Expression , A Laboratory Manual, Stockton Press, NY (1990)；及在Dracopoli等人(編),Current Protocols in Human Genetics , John Wiley & Sons, NY (1994)之第12及13章中；Colberre-Garapin等人, 1981, J. Mol. Biol. 150:1，該等文獻以全文引用之方式併入本文中。
抗體分子之表現量可藉由載體擴增來增加(欲回顧，參見Bebbington及Hentschel,The use of vectors based on gene amplification for the expression of cloned genes in mammalian cells in DNA cloning , 第3卷(Academic Press, New York, 1987))。當表現抗體之載體系統中的標記物可擴增時，存在於宿主細胞培養物中之抑制劑的含量增加將使標記基因複本之數目增加。由於擴增區域與抗體基因相關，因此抗體之產生亦增加(Crouse等人, 1983, Mol. Cell. Biol. 3:257)。
宿主細胞可以用本文所提供的兩種表現載體(編碼重鏈衍生多肽的第一載體及編碼輕鏈衍生多肽的第二載體)共轉染。兩種載體可含有能夠使重鏈及輕鏈多肽得到等量表現的相同可選標記物。或者，可以使用編碼且能夠表現重鏈與輕鏈多肽的單一載體。在此等情形下，輕鏈應置放在重鏈之前以避免毒性游離重鏈過量(Proudfoot, 1986, Nature 322:52；及Kohler, 1980, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:2197-2199)。重鏈及輕鏈之編碼序列可以包含cDNA或基因組DNA。
本文所提供的抗體分子已藉由重組表現產生後，可藉由此項技術中已知之用於純化免疫球蛋白分子的任何方法將其純化，例如藉由層析(例如離子交換、親和力，尤其在蛋白質A之後藉由針對特定抗原的親和力，及篩分管柱層析)、離心、差異溶解度，或藉由用於純化蛋白質之任何其他標準技術。此外，本文所述之抗體可以與本文所述或此項技術中另外已知之異源多肽序列融合以促進純化。本文所提供之製造抗體或其片段之特定方法描述於下文章節6中。5.5 醫藥組合物
在一個態樣中，本發明亦提供醫藥組合物，其包含至少一種本發明之抗體或其抗原結合片段。在一些實施例中，醫藥組合物包含治療有效量之本文中提供之抗體或其抗原結合片段及醫藥學上可接受之賦形劑。
包含抗體或其抗原結合片段之醫藥組合物係藉由將具有所要純度之融合蛋白與視情況存在之生理學上可接受之賦形劑混合來製備(參見例如Remington, Remington's Pharmaceutical Sciences (第18版, 1980))以水溶液形式或凍乾或其他乾燥形式儲存。
本發明之抗體或其抗原結合片段可以調配成適於遞送至目標細胞/組織的任何形式，例如調配成微膠囊或巨乳液形式(Remington, 同上；Park等人, 2005, Molecules 10:146-61；Malik等人, 2007, Curr. Drug. Deliv. 4:141-51)、持續釋放調配物(Putney及Burke, 1998, Nature Biotechnol. 16:153-57)，或脂質體(Maclean等人, 1997, Int. J. Oncol. 11:325-32；Kontermann, 2006, Curr. Opin. Mol. Ther. 8:39-45)。
亦可將本文所提供之抗體截留於例如藉由凝聚技術或藉由界面聚合所製備的微膠囊(例如分別為羥甲基纖維素或明膠微膠囊及聚(甲基丙烯酸甲酯)微膠囊))中、截留於膠狀藥物遞送系統(例如脂質體、白蛋白微球體、微乳液、奈米粒子及奈米膠囊)中或截留於巨乳液中。此類技術揭示於例如Remington (同上)中。
已知各種組合物及遞送系統且可與如本文所述之抗體或其抗原結合片段一起使用，包括(但不限於)囊封於脂質體、微米粒子、微膠囊中、能夠表現抗體或其抗原結合片段之重組細胞、受體介導之胞吞(參見例如Wu及Wu, 1987, J. Biol. Chem. 262:4429-32)、核酸作為逆轉錄病毒或其他載體之一部分構築等。在另一個實施例中，組合物可以控制釋放或持續釋放系統形式提供。在一個實施例中，可以使用泵浦達成控制或持續釋放(參見例如Langer, 同時；Sefton, 1987, Crit. Ref. Biomed. Eng. 14:201-40；Buchwald等人, 1980, Surgery 88:507-16；及Saudek等人, 1989, N. Engl. J. Med. 321:569-74)。在另一實施例中，可使用聚合物材料使本文所提供之預防劑或治療劑(例如如本文所述之抗體或其抗原結合片段)或組合物達成控制或持續釋放(參見例如Medical Applications of Controlled Release (Langer及Wise編, 1974)；Controlled Drug Bioavailability, Drug Product Design and Performance (Smolen及Ball編, 1984)；Ranger及Peppas, 1983, J. Macromol. Sci. Rev. Macromol. Chem. 23:61-126；Levy等人, 1985, Science 228:190-92；During等人, 1989, Ann. Neurol. 25:351-56；Howard等人, 1989, J. Neurosurg. 71:105-12；美國專利第5,679,377號、第5,916,597號、第5,912,015號、第5,989,463號及第5,128,326號；PCT公開案第WO 99/15154號及第WO 99/20253號)。持續釋放型調配物中所用之聚合物之實例包括(但不限於)聚(甲基丙烯酸2-羥基乙酯)、聚(甲基丙烯酸甲酯)、聚(丙烯酸)、聚(乙烯-共-乙酸乙烯酯)、聚(甲基丙烯酸)、聚乙交酯(PLG)、聚酸酐、聚(N-乙烯吡咯啶酮)、聚(乙烯醇)、聚丙烯醯胺、聚(乙二醇)、聚乳酸交酯(PLA)、聚(丙交酯-共-乙交酯)(PLGA)及聚原酸酯。在一個實施例中，持續釋放型調配物中所用之聚合物呈惰性，不含可浸出雜質，儲存穩定，無菌且可生物降解。
在又另一個實施例中，可以將控制或持續釋放型系統置放於特定目標組織附近，例如鼻腔通道或肺，因此僅需要全身劑量之一部分(參見例如Goodson,Medical Applications of Controlled Release 第2卷, 115-38 (1984))。控制釋放系統論述於例如Langer, 1990, Science 249:1527-33中。熟習此項技術者已知之任何技術可用於產生包含一或多種如本文所述之抗體或其抗原結合片段的持續釋放型調配物(參見例如美國專利第4,526,938號，PCT公開案第WO 91/05548號及第WO 96/20698號，Ning等人, 1996, Radiotherapy & Oncology 39:179-89；Song等人, 1995, PDA J. of Pharma. Sci. & Tech. 50:372-97；Cleek等人, 1997, Pro. Int'l. Symp. Control. Rel. Bioact. Mater. 24:853-54；及Lam等人, 1997, Proc. Int'l. Symp. Control Rel. Bioact. Mater. 24:759-60)。5.6 使用抗體及醫藥組合物的方法
在一個態樣中，本文提供一種減弱細胞上之Fn14活性的方法，其包含使細胞暴露於有效量之本文所提供之抗體或其抗原結合片段。
在一些實施例中，本文所提供之抗體使Fn14活性減弱至少約10%。在一些實施例中，本文所提供之抗體使Fn14活性減弱至少約20%。在一些實施例中，本文所提供之抗體使Fn14活性減弱至少約30%。在一些實施例中，本文所提供之抗體使Fn14活性減弱至少約40%。在一些實施例中，本文所提供之抗體使Fn14活性減弱至少約50%。在一些實施例中，本文所提供之抗體使Fn14活性減弱至少約60%。在一些實施例中，本文所提供之抗體使Fn14活性減弱至少約70%。在一些實施例中，本文所提供之抗體使Fn14活性減弱至少約80%。在一些實施例中，本文所提供之抗體使Fn14活性減弱至少約90%。在一些實施例中，本文所提供之抗體使Fn14活性減弱至少約95%。在某些實施例中，本文所述之抗體可使Fn14活性減弱(例如部分減弱)至少約15%至約65%。在某些實施例中，本文所述之抗體可使Fn14活性減弱(例如部分減弱)至少約20%至約65%。在某些實施例中，本文所述之抗體可使Fn14活性減弱(例如部分減弱)至少約30%至約65%。
Fn14活性之非限制性實例為Fn14介導之信號傳導。因此，在某些實施例中，本文提供一種使細胞中之Fn14介導性信號傳導減弱(例如部分地減弱)的方法，包含使細胞暴露於有效量之本文所提供之抗體或其抗原結合片段。
在一些實施例中，本文所提供之抗體使Fn14介導之信號傳導減弱至少約10%。在一些實施例中，本文所提供之抗體使Fn14介導之信號傳導減弱至少約20%。在一些實施例中，本文所提供之抗體使Fn14介導之信號傳導減弱至少約30%。在一些實施例中，本文所提供之抗體使Fn14介導之信號傳導減弱至少約40%。在一些實施例中，本文所提供之抗體使Fn14介導之信號傳導減弱至少約50%。在一些實施例中，本文所提供之抗體使Fn14介導之信號傳導減弱至少約60%。在一些實施例中，本文所提供之抗體使Fn14介導之信號傳導減弱至少約70%。在一些實施例中，本文所提供之抗體使Fn14介導之信號傳導減弱至少約80%。在一些實施例中，本文所提供之抗體使Fn14介導之信號傳導減弱至少約90%。在一些實施例中，本文所提供之抗體使Fn14介導之信號傳導減弱至少約95%。在某些實施例中，本文所述之抗體可使Fn14介導之信號傳導減弱(例如部分減弱)至少約15%至約65%。在某些實施例中，本文所述之抗體可使Fn14介導之信號傳導減弱(例如部分減弱)至少約20%至約65%。在某些實施例中，本文所述之抗體可使Fn14介導之信號傳導減弱(例如部分減弱)至少約30%至約65%。
Fn14活性之另一非限制性實例為結合至TWEAK。因此，在某些實施例中，本文提供一種減弱(例如部分減弱) Fn14結合至TWEAK的方法，包含使細胞暴露於有效量之本文所提供之抗體或其抗原結合片段。
在一些實施例中，本文所提供之抗體使Fn14對TWEAK的結合減弱至少約10%。在一些實施例中，本文所提供之抗體使Fn14對TWEAK的結合減弱至少約20%。在一些實施例中，本文所提供之抗體使Fn14對TWEAK的結合減弱至少約30%。在一些實施例中，本文所提供之抗體使Fn14對TWEAK的結合減弱至少約40%。在一些實施例中，本文所提供之抗體使Fn14對TWEAK的結合減弱至少約50%。在一些實施例中，本文所提供之抗體使Fn14對TWEAK的結合減弱至少約60%。在一些實施例中，本文所提供之抗體使Fn14對TWEAK的結合減弱至少約70%。在一些實施例中，本文所提供之抗體使Fn14對TWEAK的結合減弱至少約80%。在一些實施例中，本文所提供之抗體使Fn14對TWEAK的結合減弱至少約90%。在一些實施例中，本文所提供之抗體使Fn14對TWEAK的結合減弱至少約95%。在某些實施例中，本文所述之抗體可使Fn14對TWEAK的結合減弱(例如部分減弱)至少約15%至約65%。在某些實施例中，本文所述之抗體可使Fn14對TWEAK的結合減弱(例如部分減弱)至少約20%至約65%。在某些實施例中，本文所述之抗體可使Fn14對TWEAK的結合減弱(例如部分減弱)至少約30%至約65%。
Fn14活性之又一非限制性實例為TWEAK介導之信號傳導。因此，在某些實施例中，本文提供一種減弱(例如部分減弱)細胞中之TWEAK介導性信號傳導的方法，包含使細胞暴露於有效量之本文所提供之抗體或其抗原結合片段。
在一些實施例中，本文所提供之抗體使TWEAK介導之信號傳導減弱至少約10%。在一些實施例中，本文所提供之抗體使TWEAK介導之信號傳導減弱至少約20%。在一些實施例中，本文所提供之抗體使TWEAK介導之信號傳導減弱至少約30%。在一些實施例中，本文所提供之抗體使TWEAK介導之信號傳導減弱至少約40%。在一些實施例中，本文所提供之抗體使TWEAK介導之信號傳導減弱至少約50%。在一些實施例中，本文所提供之抗體使TWEAK介導之信號傳導減弱至少約60%。在一些實施例中，本文所提供之抗體使TWEAK介導之信號傳導減弱至少約70%。在一些實施例中，本文所提供之抗體使TWEAK介導之信號傳導減弱至少約80%。在一些實施例中，本文所提供之抗體使TWEAK介導之信號傳導減弱至少約90%。在一些實施例中，本文所提供之抗體使TWEAK介導之信號傳導減弱至少約95%。在某些實施例中，本文所述之抗體可使TWEAK介導之信號傳導減弱(例如部分減弱)至少約15%至約65%。在某些實施例中，本文所述之抗體可使TWEAK介導之信號傳導減弱(例如部分減弱)至少約20%至約65%。在某些實施例中，本文所述之抗體可使TWEAK介導之信號傳導減弱(例如部分減弱)至少約30%至約65%。
Fn14活性的又一個非限制性實例與TWEAK誘導細胞介素及/或趨化因子的水準有關(例如經由TWEAK對Fn14的結合)。在一些實施例中，一或多種細胞介素及/或趨化因子係選自由以下組成之群：IL-8、CCL2、IL-1β、TGFβ、CCL21、TNFα、IL-6、CXCL1、CCL3、CCL4、CXCL12、CCL5、CXCL10及CXCL16。
在一個實施例中，Fn14活性與IL-8分泌有關。因此，在某些實施例中，本文提供一種抑制細胞中之IL-8分泌的方法，包含使細胞暴露於有效量之本文所提供的抗體或其抗原結合片段。
在一個實施例中，本文所提供之抗體將IL-8分泌抑制至少約5%。在一個實施例中，本文所提供之抗體將IL-8分泌抑制至少約10%。在一個實施例中，本文所提供之抗體將IL-8分泌抑制至少約15%。在一個實施例中，本文所提供之抗體將IL-8分泌抑制至少約20%。在一個實施例中，本文所提供之抗體將IL-8分泌抑制至少約25%。在一個實施例中，本文所提供之抗體將IL-8分泌抑制至少約30%。在一個實施例中，本文所提供之抗體將IL-8分泌抑制至少約35%。在一個實施例中，本文所提供之抗體將IL-8分泌抑制至少約40%。在一個實施例中，本文所提供之抗體將IL-8分泌抑制至少約45%。在一個實施例中，本文所提供之抗體將IL-8分泌抑制至少約50%。在一個實施例中，本文所提供之抗體將IL-8分泌抑制至少約55%。在一個實施例中，本文所提供之抗體將IL-8分泌抑制至少約60%。在一個實施例中，本文所提供之抗體將IL-8分泌抑制至少約65%。在一個實施例中，本文所提供之抗體將IL-8分泌抑制至少約70%。在一個實施例中，本文所提供之抗體將IL-8分泌抑制至少約75%。在一個實施例中，本文所提供之抗體將IL-8分泌抑制至少約80%。在一個實施例中，本文所提供之抗體將IL-8分泌抑制至少約85%。在一個實施例中，本文所提供之抗體將IL-8分泌抑制至少約90%。在一個實施例中，本文所提供之抗體將IL-8分泌抑制至少約95%。在一個實施例中，本文所提供之抗體將IL-8分泌抑制至少約96%。在一個實施例中，本文所提供之抗體將IL-8分泌抑制至少約97%。在一個實施例中，本文所提供之抗體將IL-8分泌抑制至少約98%。在一個實施例中，本文所提供之抗體將IL-8分泌抑制至少約99%。
在另一個實施例中，Fn14活性與ICAM-1表現相關。因此，在某些實施例中，本文提供一種抑制細胞中之ICAM-1表現的方法，包含使細胞暴露於有效量的本文所提供之抗體或其抗原結合片段。
在一個實施例中，本文所提供之抗體將ICAM-1表現抑制至少約5%。在一個實施例中，本文所提供之抗體將ICAM-1表現抑制至少約10%。在一個實施例中，本文所提供之抗體將ICAM-1表現抑制至少約15%。在一個實施例中，本文所提供之抗體將ICAM-1表現抑制至少約20%。在一個實施例中，本文所提供之抗體將ICAM-1表現抑制至少約25%。在一個實施例中，本文所提供之抗體將ICAM-1表現抑制至少約30%。在一個實施例中，本文所提供之抗體將ICAM-1表現抑制至少約35%。在一個實施例中，本文所提供之抗體將ICAM-1表現抑制至少約40%。在一個實施例中，本文所提供之抗體將ICAM-1表現抑制至少約45%。在一個實施例中，本文所提供之抗體將ICAM-1表現抑制至少約50%。在一個實施例中，本文所提供之抗體將ICAM-1表現抑制至少約55%。在一個實施例中，本文所提供之抗體將ICAM-1表現抑制至少約60%。在一個實施例中，本文所提供之抗體將ICAM-1表現抑制至少約65%。在一個實施例中，本文所提供之抗體將ICAM-1表現抑制至少約70%。在一個實施例中，本文所提供之抗體將ICAM-1表現抑制至少約75%。在一個實施例中，本文所提供之抗體將ICAM-1表現抑制至少約80%。在一個實施例中，本文所提供之抗體將ICAM-1表現抑制至少約85%。在一個實施例中，本文所提供之抗體將ICAM-1表現抑制至少約90%。在一個實施例中，本文所提供之抗體將ICAM-1表現抑制至少約95%。在一個實施例中，本文所提供之抗體將ICAM-1表現抑制至少約96%。在一個實施例中，本文所提供之抗體將ICAM-1表現抑制至少約97%。在一個實施例中，本文所提供之抗體將ICAM-1表現抑制至少約98%。在一個實施例中，本文所提供之抗體將ICAM-1表現抑制至少約99%。
在另一個實施例中，Fn14活性與CCL2表現相關。因此，在某些實施例中，本文提供一種抑制細胞中之CCL2表現的方法，包含使細胞暴露於有效量的本文所提供之抗體或其抗原結合片段。
在一個實施例中，本文所提供之抗體將CCL2表現抑制至少約5%。在一個實施例中，本文所提供之抗體將CCL2表現抑制至少約10%。在一個實施例中，本文所提供之抗體將CCL2表現抑制至少約15%。在一個實施例中，本文所提供之抗體將CCL2表現抑制至少約20%。在一個實施例中，本文所提供之抗體將CCL2表現抑制至少約25%。在一個實施例中，本文所提供之抗體將CCL2表現抑制至少約30%。在一個實施例中，本文所提供之抗體將CCL2表現抑制至少約35%。在一個實施例中，本文所提供之抗體將CCL2表現抑制至少約40%。在一個實施例中，本文所提供之抗體將CCL2表現抑制至少約45%。在一個實施例中，本文所提供之抗體將CCL2表現抑制至少約50%。在一個實施例中，本文所提供之抗體將CCL2表現抑制至少約55%。在一個實施例中，本文所提供之抗體將CCL2表現抑制至少約60%。在一個實施例中，本文所提供之抗體將CCL2表現抑制至少約65%。在一個實施例中，本文所提供之抗體將CCL2表現抑制至少約70%。在一個實施例中，本文所提供之抗體將CCL2表現抑制至少約75%。在一個實施例中，本文所提供之抗體將CCL2表現抑制至少約80%。在一個實施例中，本文所提供之抗體將CCL2表現抑制至少約85%。在一個實施例中，本文所提供之抗體將CCL2表現抑制至少約90%。在一個實施例中，本文所提供之抗體將CCL2表現抑制至少約95%。在一個實施例中，本文所提供之抗體將CCL2表現抑制至少約96%。在一個實施例中，本文所提供之抗體將CCL2表現抑制至少約97%。在一個實施例中，本文所提供之抗體將CCL2表現抑制至少約98%。在一個實施例中，本文所提供之抗體將CCL2表現抑制至少約99%。
在另一態樣中，本文提供一種治療個體之疾病或病症的方法，其包含向該個體投與有效量之本文所提供的抗體或其抗原結合片段。在一個實施例中，疾病或病症為Fn14介導的疾病或病症。在一個實施例中，疾病或病症為TWEAK介導的疾病或病症。在一些實施例中，疾病或病症係選自由以下組成之群：影響關節、皮膚、腎臟、肝臟、腸、心臟、肺或肌肉的自體免疫及/或發炎疾病，其中該疾病或病症任意地選自由以下組成之群：類風濕性關節炎、類天疱瘡、盤狀皮膚狼瘡、蕁麻疹性血管炎、亨諾-許蘭過敏性紫斑症(Henoch-Schonlein Purpura)、IgA腎病、異位性皮膚炎(異位性濕疹)、牛皮癬(尋常型牛皮癬)、脂漏性濕疹、哮喘、蛋白尿腎臟疾病、肝臟疾病、狼瘡性腎炎、多發性肌炎、皮肌炎、鈣調神經磷酸酶抑制劑誘導性腎毒性、肌強直性營養障礙、心臟功能異常及衰竭、亞柏氏症候群(Alport syndrome)、潰瘍性結腸炎、克羅恩氏病(Crohn's disease)、皮膚血管炎、惡病質及發炎性腸病，且其中該疾病或病症視情況與纖維化相關且任意地選自由以下組成之群：組織纖維化、特發性肺纖維化、間質性肺病、硬皮病(全身性硬化症)、癌症、癌症相關惡病質、肌肉萎縮、瘢瘤、包涵體性肌炎及組織重建(參見例如van kuijk A.W.R.等人, Ann. Rheum. Dis. 2010, 69: 301；Dharmapatni A. ASSK等人, Arthritis Res. & Ther. 2011, 13: R51；Liu Y.等人, J. Invest. Dermatol. 2017, 137: 1512；Liu Y.等人, Frontiers in Immunol. 2017, 8: 651；Li M.等人, J. Dermatol. 2013, 40: 891；Chen T.等人, Clin. and Exp. Immunol. 2011, 166: 64；Sasaki Y.等人, BMC Nephrol. 2015, 16: 27；Sidler D.等人, Nature Communications 2017, 8: 15395；Zimmermann M.等人, J. Allergy Clin. Immunol. 2011, 127: 200；Chen Y.等人, PLoS ONE 2011, 6: e22202；Cheng H.等人, Exp. Dermatol. 2016, 25: 32；Bilgic Ö.等人, Cytokine 2016, 77: 10；Sanchez-Nino M. D.等人, Biochimica et Biophysica Acta 2013, 1832: 2232；Wilhelm A.等人, J. Pathol. 2016, 239: 109；Michaelson J. S.等人, J. Autoimmun. 2012, 39: 130；Peng Q.等人, Arthritis Res. & Ther. 2014, 16: R26；Claus M.等人, Am. J. Transplant. 2018, 18: 1636；Yadava R. S.等人, Human Molecular Genetics 2015, 24: 2035；Jain M.等人, Circulation 2009, 119: 2058；Ortiz A.等人,  Eur J. Pharmacol. 2015, 759: 205；Kawashima R.等人, Gastroenterol. 2011, 141: 2119；Kaplan M.等人, Inflamm Bowel Dis. 2016, 22: 615；Kaplan M.等人, Inflamm Bowel Dis. 2016, 22: 615；Chen T.等人, PLoS ONE 2013, 8: e56830；Johnston, A.J.等人, 2015, Cell 162(6):1365-78；Dohi, T.等人, 2009, Gastroenterology 136(3):912-23)。
本文亦提供一種治療疾病或病症的方法，其中向個體投與一或多種治療劑與本文所提供之抗體或其抗原結合片段的組合。投藥及給藥方法更詳細地描述於下述章節5.7中。
在另一態樣中，本文提供本文所提供之抗體或其抗原結合片段的用途，其用於製造供治療個體之疾病或病症的藥劑。
在另一態樣中，本文提供本文所提供之醫藥組合物的用途，其用於製造供治療個體之疾病或病症的藥劑。
在另一態樣中，本文提供本文所提供之抗體或其抗原結合片段用於製造藥劑的用途，其中該藥劑用於偵測生物樣品中之Fn14存在的方法，該方法包含使生物樣品與抗體在允許抗體結合至Fn14蛋白質之條件下接觸，及偵測抗體與Fn14蛋白質之間是否形成複合物。
在其他態樣中，本發明之抗體及其片段適用於偵測生物樣品中Fn14之存在。如本文所用，術語「偵測」涵蓋定量或定性偵測。在某些實施例中，生物樣品包含體液、細胞或組織。診斷分析及方法更詳細地描述於下述章節5.9中。5.7 投藥及給藥方法
在一個特定實施例中，本文提供一種用於預防及/或治療疾病或病狀之組合物，其包含本文所提供之抗體或其抗原結合片段。在一個實施例中，本文提供一種用於預防疾病或病狀之組合物，其中該組合物包含本文所提供之抗體或其抗原結合片段。在一個實施例中，本文提供一種用於治療疾病或病狀之組合物，其中該組合物包含本文所提供之抗體或其抗原結合片段。在一些實施例中，該疾病或病狀為Fn14介導性疾病。在一些實施例中，該疾病或病狀為TWEAK介導性疾病。在一些實施例中，疾病或病症係選自由以下組成之群：影響關節、皮膚、腎臟、肝臟、腸、心臟、肺或肌肉的自體免疫及/或發炎疾病，其中該疾病或病症任意地選自由以下組成之群：類風濕性關節炎、類天疱瘡、盤狀皮膚狼瘡、蕁麻疹性血管炎、亨諾-許蘭過敏性紫斑症、IgA腎病、異位性皮膚炎(異位性濕疹)、牛皮癬(尋常型牛皮癬)、脂漏性濕疹、哮喘、蛋白尿腎臟疾病、肝臟疾病、狼瘡性腎炎、多發性肌炎、皮肌炎、鈣調神經磷酸酶抑制劑誘導性腎毒性、肌強直性營養障礙、心臟功能異常及衰竭、亞柏氏症候群、潰瘍性結腸炎、克羅恩氏病、皮膚血管炎、惡病質及發炎性腸病，且其中該疾病或病症視情況與纖維化相關且任意地選自由以下組成之群：組織纖維化、特發性肺纖維化、間質性肺病、硬皮病(全身性硬化症)、癌症、癌症相關惡病質、肌肉萎縮、瘢瘤、包涵體性肌炎及組織重建。
在某些實施例中，個體為有需要之個體。在一些實施例中，個體患有該疾病或病狀。在其他實施例中，個體處於患該疾病或病狀之風險中。在一些實施例中，投藥可以預防、管理、治療或改善該疾病或病狀。
在一個實施例中，本文提供一種用於預防及/或治療疾病或病狀之症狀的組合物，其中該組合物包含本文所提供之抗體或其抗原結合片段。在一個實施例中，本文提供一種用於預防疾病或病狀之症狀的組合物，其中該組合物包含本文所提供之抗體或其抗原結合片段。在一個實施例中，本文提供一種用於治療疾病或病狀之症狀的組合物，其中該組合物包含本文所提供之抗體或其抗原結合片段。在一些實施例中，疾病或病狀為Fn14介導及/或TWEAK介導之疾病。在一些實施例中，疾病或病症係選自由以下組成之群：影響關節、皮膚、腎臟、肝臟、腸、心臟、肺或肌肉的自體免疫及/或發炎疾病，其中該疾病或病症任意地選自由以下組成之群：類風濕性關節炎、類天疱瘡、盤狀皮膚狼瘡、蕁麻疹性血管炎、亨諾-許蘭過敏性紫斑症、IgA腎病、異位性皮膚炎(異位性濕疹)、牛皮癬(尋常型牛皮癬)、脂漏性濕疹、哮喘、蛋白尿腎臟疾病、肝臟疾病、狼瘡性腎炎、多發性肌炎、皮肌炎、鈣調神經磷酸酶抑制劑誘導性腎毒性、肌強直性營養障礙、心臟功能異常及衰竭、亞柏氏症候群、潰瘍性結腸炎、克羅恩氏病、皮膚血管炎、惡病質及發炎性腸病，且其中該疾病或病症視情況與纖維化相關且任意地選自由以下組成之群：組織纖維化、特發性肺纖維化、間質性肺病、硬皮病(全身性硬化症)、癌症、癌症相關惡病質、肌肉萎縮、瘢瘤、包涵體性肌炎及組織重建。
在某些實施例中，個體為有需要之個體。在一些實施例中，個體患有該疾病或病狀。在其他實施例中，個體處於患該疾病或病狀之風險中。在一些實施例中，投藥可以預防或治療該疾病或病狀之症狀。
在另一實施例中，本文提供一種預防及/或治療個體之疾病或病狀的方法，包含投與有效量的本文所提供之抗體或其抗原結合片段。在一個實施例中，本文提供一種預防個體之疾病或病狀的方法，包含投與有效量的本文所提供之抗體或其抗原結合片段。在一個實施例中，本文提供一種治療個體之疾病或病狀的方法，包含投與有效量的本文所提供之抗體或其抗原結合片段。在一些實施例中，疾病或病狀為Fn14介導及/或TWEAK介導之疾病。在一些實施例中，疾病或病症係選自由以下組成之群：影響關節、皮膚、腎臟、肝臟、腸、心臟、肺或肌肉的自體免疫及/或發炎疾病，其中該疾病或病症任意地選自由以下組成之群：類風濕性關節炎、類天疱瘡、盤狀皮膚狼瘡、蕁麻疹性血管炎、亨諾-許蘭過敏性紫斑症、IgA腎病、異位性皮膚炎(異位性濕疹)、牛皮癬(尋常型牛皮癬)、脂漏性濕疹、哮喘、蛋白尿腎臟疾病、肝臟疾病、狼瘡性腎炎、多發性肌炎、皮肌炎、鈣調神經磷酸酶抑制劑誘導性腎毒性、肌強直性營養障礙、心臟功能異常及衰竭、亞柏氏症候群、潰瘍性結腸炎、克羅恩氏病、皮膚血管炎、惡病質及發炎性腸病，且其中該疾病或病症視情況與纖維化相關且任意地選自由以下組成之群：組織纖維化、特發性肺纖維化、間質性肺病、硬皮病(全身性硬化症)、癌症、癌症相關惡病質、肌肉萎縮、瘢瘤、包涵體性肌炎及組織重建。
在某些實施例中，個體為有需要之個體。在一些實施例中，個體患有該疾病或病狀。在其他實施例中，個體處於患該疾病或病狀之風險中。在一些實施例中，投藥可以預防或治療該疾病或病狀。
在另一實施例中，本文提供一種預防及/或治療個體之疾病或病狀之症狀的方法，包含投與有效量的本文所提供之抗體或其抗原結合片段。在一個實施例中，本文提供預防個體之疾病或病狀之症狀的方法，包含投與有效量的本文所提供之抗體或其抗原結合片段。在一個實施例中，本文提供一種治療個體之疾病或病狀之症狀的方法，包含投與有效量的本文所提供之抗體或其抗原結合片段。在一些實施例中，疾病或病狀為Fn14介導及/或TWEAK介導之疾病。在一些實施例中，疾病或病症係選自由以下組成之群：影響關節、皮膚、腎臟、肝臟、腸、心臟、肺或肌肉的自體免疫及/或發炎疾病，其中該疾病或病症任意地選自由以下組成之群：類風濕性關節炎、類天疱瘡、盤狀皮膚狼瘡、蕁麻疹性血管炎、亨諾-許蘭過敏性紫斑症、IgA腎病、異位性皮膚炎(異位性濕疹)、牛皮癬(尋常型牛皮癬)、脂漏性濕疹、哮喘、蛋白尿腎臟疾病、肝臟疾病、狼瘡性腎炎、多發性肌炎、皮肌炎、鈣調神經磷酸酶抑制劑誘導性腎毒性、肌強直性營養障礙、心臟功能異常及衰竭、亞柏氏症候群、潰瘍性結腸炎、克羅恩氏病、皮膚血管炎、惡病質及發炎性腸病，且其中該疾病或病症視情況與纖維化相關且任意地選自由以下組成之群：組織纖維化、特發性肺纖維化、間質性肺病、硬皮病(全身性硬化症)、癌症、癌症相關惡病質、肌肉萎縮、瘢瘤、包涵體性肌炎及組織重建。
在某些實施例中，個體為有需要之個體。在一些實施例中，個體患有該疾病或病狀。在其他實施例中，個體處於患該疾病或病狀之風險中。在一些實施例中，投藥可以預防或治療該疾病或病狀之症狀。
本文亦提供預防及/或治療疾病或病狀的方法，其係藉由向個體投與有效量的本文所提供之抗體或其抗原結合片段或包含本文所提供之抗體或其抗原結合片段的醫藥組合物。在一個態樣中，抗體或其抗原結合片段實質上經純化(亦即，基本上不含限制其作用或產生非所需副作用之物質)。投與療法的個體可為哺乳動物，諸如非靈長類動物(例如牛、豬、馬、貓、犬、大鼠等)或靈長類動物(例如猴，諸如食蟹獼猴，或人類)。在一個實施例中，個體為人類。在另一實施例中，個體為患有疾病或病狀之人類。
已知各種遞送系統且可用於投與預防劑或治療劑(例如本文所提供之抗體或其抗原結合片段)，包括(但不限於)囊封於脂質體、微米粒子、微膠囊、能夠表現抗體或其抗原結合片段之重組細胞、受體介導之胞吞(參見例如Wu及Wu, J. Biol. Chem. 262:4429-4432 (1987))、核酸作為逆轉錄病毒或其他載體之一部分構築等。投與預防劑或治療劑(例如本文所提供之抗體或其抗原結合片段)或醫藥組合物的方法包括(但不限於)非經腸投藥(例如皮內、肌肉內、腹膜內、靜脈內及皮下)、硬膜外及黏膜(例如鼻內及口服途徑)。在一個特定實施例中，預防劑或治療劑(例如本文所提供之抗體或其抗原結合片段)或醫藥組合物係鼻內、肌肉內、靜脈內或皮下投與。預防劑或治療劑或組合物可藉由任何便利途徑投與，例如藉由輸注或快速注射、經由上皮或皮膚黏膜內層(例如口腔黏膜、鼻內黏膜、直腸及腸黏膜等)吸收，且可與其他生物學活性劑一起投與。投藥可為全身或局部的。另外，亦可使用肺部投藥，例如使用吸入器或噴霧器及具有氣霧劑之調配物。參見例如美國專利第6,019,968號、第5,985,320號、第5,985,309號、第5,934,272號、第5,874,064號、第5,855,913號、第5,290,540號及第4,880,078號；及PCT公開案第WO 92/19244號、第WO 97/32572號、第WO 97/44013號、第WO 98/31346號及第WO 99/66903號，該等文獻中之每一者以全文引用之方式併入本文中。
在一個特定實施例中，可能需要向需要治療的區域局部投與預防劑或治療劑，或本文所提供的醫藥組合物。此可以如下達成：例如(而非作為限制)：局部輸注、體表投藥(例如藉由鼻內噴霧)、注射，或藉助於植入物，該植入物為多孔、無孔或膠狀材料，包括膜，諸如矽橡膠膜，或纖維。在一些實施例中，當投與本文所提供之抗體或其抗原結合片段時，必須注意使用不吸收該抗體或其抗原結合片段之材料。
在另一個實施例中，本文所提供的預防劑或治療劑或組合物可以微脂粒(特定而言，脂質體)遞送(參見Langer, 1990, Science 249:1527-1533；Treat等人, 於Liposomes in the Therapy of Infectious Disease and Cancer , Lopez-Berestein及Fidler (編), Liss, New York, 第353- 365頁(1989)；opez-Berestein, 同上, 第317-327頁；大體參見上文)。
在另一個實施例中，本文所提供的預防劑或治療劑或組合物可以控制釋放或持續釋放系統遞送。在一個實施例中，可以使用泵浦達成控制或持續釋放(參見Langer, 同上；Sefton, 1987, CRC Crit. Ref. Biomed. Eng. 14:20；Buchwald等人, 1980, Surgery 88:507；Saudek等人, 1989, N. Engl. J. Med. 321:574)。在另一實施例中，可使用聚合物材料使本文所提供之預防劑或治療劑(例如本文所述之抗體)或組合物達成控制或持續釋放(參見例如Medical Applications of Controlled Release, Langer及Wise (編), CRC Pres., Boca Raton, Florida (1974); Controlled Drug Bioavailability, Drug Product Design and Performance, Smolen and Ball (編), Wiley, New York (1984); Ranger及Peppas, 1983, J., Macromol. Sci. Rev. Macromol. Chem. 23:61；亦參見Levy等人, 1985, Science 228:190；During等人, 1989, Ann. Neurol. 25:351；Howard等人, 1989, J. Neurosurg. 7 1:105)；美國專利第5,679,377號；美國專利第5,916,597號；美國專利第5,912,015號；美國專利第5,989,463號；美國專利第5,128,326號；PCT公開案第WO 99/15154號；及PCT公開案第WO 99/20253號。持續釋放型調配物中所用之聚合物之實例包括(但不限於)聚(甲基丙烯酸2-羥基乙酯)、聚(甲基丙烯酸甲酯)、聚(丙烯酸)、聚(乙烯-共-乙酸乙烯酯)、聚(甲基丙烯酸)、聚乙交酯(PLG)、聚酸酐、聚(N-乙烯吡咯啶酮)、聚(乙烯醇)、聚丙烯醯胺、聚(乙二醇)、聚乳酸交酯(PLA)、聚(丙交酯-共-乙交酯)(PLGA)及聚原酸酯。在一個實施例中，持續釋放型調配物中所用之聚合物呈惰性，不含可浸出雜質，儲存穩定，無菌且可生物降解。在又另一個實施例中，可以將控制或持續釋放系統置放於治療目標附近，例如鼻腔通道或肺，因此僅需要全身劑量之一部分(參見例如Goodson, 於Medical Applications of Controlled Release, 同上, 第2卷, 第115-138頁(1984))。控制釋放系統論述於Langer之評述中(1990, Science 249:1527-1533)。熟習此項技術者已知之任何技術可用於產生包含本文所提供之一或多種抗體或其抗原結合片段的持續釋放型調配物。參見例如美國專利第4,526,938號、PCT公開案WO 91/05548、PCT公開案WO 96/20698；Ning等人, 1996, 「Intratumoral Radioimmunotherapy of a Human Colon Cancer Xenograft Using a Sustained-Release Gel」, Radiotherapy & Oncology 39:179- 189, Song等人, 1995, 「Antibody Mediated Lung Targeting of Long-Circulating Emulsions」, PDA Journal of Pharmaceutical Science & Technology 50:372-397, Cleek等人, 1997, 「Biodegradable Polymeric Carriers for a bFGF Antibody for Cardiovascular Application」, Pro. Int'l. Symp. Control. Rel. Bioact. Mater. 24:853-854, 及Lam等人, 1997, 「Microencapsulation of Recombinant Humanized Monoclonal Antibody for Local Delivery」, Proc. Int'l. Symp. Control Rel. Bioact. Mater. 24:759-760，各文獻以全文引用的方式併入本文中。
在一個特定實施例中，當本文所提供之組合物為編碼預防劑或治療劑(例如本文所提供之抗體或其抗原結合片段)之核酸時，該核酸可活體內投與以促進其所編碼之預防劑或治療劑的表現，此係藉由將其作為適當核酸表現載體之一部分構築及投與其以使得其變成細胞內的，例如藉由使用逆轉錄病毒載體(參見美國專利第4,980,286)號，或藉由直接注射，或藉由使用微粒轟擊(例如基因槍；Biolistic, Dupont)，或用脂質或細胞表面受體或轉染劑塗佈，或藉由將其與已知進入核內之同源盒樣肽連接投與(參見例如Joliot等人, 1991, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88:1864-1868)等。或者，可以將核酸引入細胞內且藉由同源重組而併入宿主細胞DNA內用於表現。
在一個特定實施例中，本文所提供之組合物包含本文所提供之一種、兩種或更多種抗體或其抗原結合片段。在另一個實施例中，本文所提供之組合物包含本文所提供之一種、兩種或更多種抗體或其抗原結合片段及除本文所提供之抗體或其抗原結合片段之外的預防劑或治療劑。在一個實施例中，已知藥劑適用於或已用於或當前正用於預防、管理、治療及/或改善疾病或病狀。除預防劑或治療劑之外，本文所提供的組合物亦可包含賦形劑。
本文所提供的組合物包括適用於製造醫藥組合物(例如適於投與個體或患者的組合物)的散裝藥物組合物，其可以用於製備單位劑型。在一個實施例中，本文所提供的組合物為醫藥組合物。此類組合物包含預防或治療有效量之一或多種預防劑或治療劑(例如本文所提供之抗體或其抗原結合片段或其他預防劑或治療劑)及醫藥學上可接受之賦形劑。醫藥組合物可以調配成適於個體的投藥途徑。
在一個特定實施例中，術語「賦形劑」亦可指稀釋劑、佐劑(例如(完全或不完全)弗氏佐劑)或媒劑。醫藥賦形劑可為無菌液體，諸如水及油，包括石油、動物、植物或合成來源之油，諸如花生油、大豆油、礦物油、芝麻油及其類似物。當靜脈內投與醫藥組合物時，水為例示性載劑。亦可使用生理鹽水溶液及右旋糖水溶液及甘油溶液作為液體賦形劑，尤其用於可注射溶液。適合的醫藥賦形劑包括澱粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明膠、麥芽、稻米、麵粉、白堊、矽膠、硬脂酸鈉、單硬脂酸甘油酯、滑石、氯化鈉、脫脂牛乳、甘油、丙烯、二醇、水、乙醇及其類似物。必要時，組合物亦可含有少量濕潤劑或乳化劑，或pH緩衝劑。此等組合物可呈溶液、懸浮液、乳液、錠劑、丸劑、藥丸、膠囊、散劑、持續釋放型調配物及其類似形式。口服調配物可以包括標準賦形劑，諸如醫藥級甘露糖醇、乳糖、澱粉、硬脂酸鎂、糖精鈉、纖維素、碳酸鎂等。適合醫藥賦形劑的實例描述於Remington ' s Pharmaceutical Sciences (1990) Mack Publishing Co., Easton, PA。此類組合物將含有預防或治療有效量的本文所提供之抗體或其抗原結合片段(諸如呈純化形式)及適量的賦形劑，以便提供正確投與患者之形式。調配物應適於投藥模式。
在一個實施例中，根據常規程序將組合物調配成適於靜脈內投與人類之醫藥組合物。典型地，靜脈內投與之組合物為存在於無菌等張水性緩衝液中之溶液。必要時，組合物亦可包括助溶劑或局部麻醉劑(諸如利諾卡因(lignocamne))以減輕注射部位之疼痛。然而，此類組合物可以藉由除靜脈內之外的途徑投與。
一般而言，本文所提供之組合物的成分係單獨提供或以單位劑型混合在一起，例如呈乾燥凍乾粉末或無水濃縮物形式，其存在於指示活性劑之量的氣密密封式容器(諸如安瓿或藥囊)中。當藉由輸注投與組合物時，可用含有無菌醫藥級水或生理食鹽水之輸液瓶分配組合物。在藉由注射投與組合物的情況下，可提供具有注射用無菌水或生理鹽水之安瓿，以便混合該等成分之後投與。
本文所提供之抗體或其抗原結合片段可封裝於指示抗體之量的氣密密封式容器(諸如安瓿或藥囊)中。在一個實施例中，抗體或其抗原結合片段係在氣密密封式容器中以乾燥滅菌凍乾粉末或無水濃縮物形式供應且可復原(例如用水或生理食鹽水)至投與個體之適當濃度。凍乾抗體或其抗原結合片段可在其原始容器中在2與8℃之間儲存，且抗體或其抗原結合片段可在復原之後12小時內(諸如6小時內、5小時內、3小時內或1小時內)投與。在替代性實施例中，本發明提供之抗體或其抗原結合片段係在指示抗體之量及濃度的氣密密封式容器中以液體形式供應。
本文所提供的組合物可以調配為中性或鹽形式。醫藥學上可接受之鹽包括與陰離子形成之鹽，諸如衍生自鹽酸、磷酸、乙酸、草酸、酒石酸等之鹽；及與陽離子形成之鹽，諸如衍生自氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化銨、氫氧化鈣、氫氧化鐵、異丙胺、三乙胺、2-乙基胺基乙醇、組胺酸、普魯卡因(procaine)等之鹽。
有效預防及/或治療疾病或病狀之本文所提供之預防劑或治療劑(例如本文所提供之抗體或其抗原結合片段)或組合物的量可藉由標準臨床技術確定。另外，視情況可採用活體外分析來幫助鑑別最佳劑量範圍。用於調配物之精確劑量亦視投藥途徑及疾病或病狀之嚴重程度而定，且應根據從業者之判斷及各患者之情況來決定。
可自來源於活體外或動物模型測試系統之劑量反應曲線外推出有效劑量。
在某些實施例中，將一定劑量之本文所提供之抗體或其抗原結合片段投與患者的途徑為鼻內、肌肉內、靜脈內、皮下或其組合，但本文所述之其他途徑亦為可接受的。各劑量可以或可不藉由相同投藥途徑投與。在一些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段可經由多重投藥途徑與本文所提供之相同或不同抗體或其抗原結合片段的其他劑量同時或相繼投與。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或抗原結合片段係預防性或治療性投與個體。本文所提供的抗體或其抗原結合片段可以預防性或治療性投與個體，以便預防、減輕或改善其疾病或症狀。5.8 基因療法
在一個特定實施例中，將包含編碼抗體或其功能衍生物之序列的核酸投與個體以用於本文所提供的方法中，例如藉助於基因療法來預防、管理、治療及/或改善Fn14介導的疾病、病症或病狀。此類療法涵蓋向個體投與經表現或可表現的核酸。在一個實施例中，核酸產生其所編碼之抗體，且抗體介導預防性或治療性作用。
可以使用此項技術中可利用的任何重組基因表現(或基因治療)方法。
為了基因治療方法之一般評述，參見Goldspiel等人, 1993, Clinical Pharmacy 12:488-505；Wu及Wu, 1991, Biotherapy 3:87-95; Tolstoshev, 1993, Ann. Rev. Pharmacol. Toxicol. 32:573-596; Mulligan, 1993, Science 260:926-932; 及Morgan 及 Anderson, 1993, Ann. Rev. Biochem. 62:191-217; 5月, 1993, TIBTECH 11(5):155-215。此項技術中通常已知的可以使用之重組DNA技術方法描述於Ausubel等人(編),Current Protocols in Molecular Biology , John Wiley & Sons, NY (1993); 及Kriegler,Gene Transfer and Expression, A Laboratory Manual , Stockton Press, NY (1990)。
在一個特定實施例中，組合物包含編碼本文所提供之抗體的核酸，該等核酸為在適合宿主中表現抗體或嵌合蛋白或其重鏈或輕鏈之表現載體的一部分。特定言之，此類核酸具有可操作地連接至抗體編碼區的啟動子，諸如異源啟動子，該啟動子為誘導型或組成型且視情況具有組織特異性。在另一特定實施例中，使用核酸分子，其中抗體編碼序列及任何其他所需序列與促進基因組中所需位點處之同源重組之區域側接，從而提供編碼抗體之核酸在染色體內的表現(Koller及Smithies, 1989, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86:8932-8935；Zijlstra等人, 1989, Nature 342:435-438)。在一些實施例中，經表現的抗體分子為單鏈抗體；或者，核酸序列包括編碼抗體之重鏈與輕鏈或其片段的序列。
核酸可以直接遞送至個體，在此情況下，使個體直接暴露於核酸或攜帶核酸的載體，或間接遞送至個體，在此情況下，首先將細胞在活體外用核酸轉型，接著移植入個體內。此兩種方法分別稱為活體內或離體基因療法。
在一個特定實施例中，活體內直接投與核酸序列，其中序列經表現以產生經編碼的產物。此可以藉由此項技術中已知之許多方法中的任一者達成，例如藉由將其作為之適當核酸表現載體的一部分構築且投與該載體以使得序列變成細胞內的，例如使用有缺陷的或減毒的逆轉錄病毒或其他病毒載體感染(參見美國專利第4,980,286號)，或藉由直接注射裸DNA，或藉由使用微粒轟擊(例如基因槍；Biolistic, Dupont)，或用脂質或細胞表面受體或轉染劑塗覆、囊封於脂質體、微米粒子或微膠囊中，或藉由將其與已知進入核內之肽連接投與、藉由將其與經受受體介導之胞吞之配位體連接投與(參見例如Wu及Wu, 1987, J. Biol. Chem. 262:4429-4432)(其可以用於靶向特異性表現該等受體的細胞類型)等。在另一實施例中，可形成核酸-配位體複合物，其中配位體包含促融病毒肽以分裂核內體，從而允許核酸避免溶酶體降解。在又另一個實施例中，可以藉由靶向特定受體而活體內靶向核酸以便細胞特異性吸收及表現(參見例如PCT公開案WO 92/06180；WO 92/22635；WO 92/20316；W093/14188；WO 93/20221)。或者，可以將核酸引入細胞內且藉由同源重組而併入宿主細胞DNA內用於表現(Koller及Smithies, 1989, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86:8932-8935; 及Zijlstra等人, 1989, Nature 342:435-438)。
在一個特定實施例中，使用含有編碼抗體之核酸序列的病毒載體。舉例而言，可使用逆轉錄病毒載體(參見Miller等人, 1993, Meth. Enzymol. 217:581-599)。此等逆轉錄病毒載體含有病毒基因組正確封裝及整合至宿主細胞DNA中所必需的組分。可以將編碼用於基因療法之抗體的核酸序列選殖入一或多種載體中，其促進基因遞送至個體中。關於逆轉錄病毒載體之更多細節可見於例如Boesen等人, 1994, Biotherapy 6:291-302中，其描述使用逆轉錄病毒載體將MDR1基因遞送至造血幹細胞以使幹細胞對化學療法具有更大抗性。說明使用逆轉錄病毒載體進行基因療法的其他參考文獻為：Clowes等人, 1994, J. Clin. Invest. 93:644-651; Klein等人, 1994, Blood 83:1467-1473; Salmons及Gunzberg, 1993, Human Gene Therapy 4:129-141; 及Grossman及Wilson, 1993, Curr. Opin. in Genetics and Devel. 3:110-114。
腺病毒為可以用於重組產生抗體的其他病毒載體。腺病毒為尤其具有吸引力之媒介物，用於遞送基因至呼吸道上皮。腺病毒天然地感染呼吸道上皮，其在呼吸道上皮引起輕度疾病。基於腺病毒之遞送系統的其他目標為肝臟、中樞神經系統、內皮細胞及肌肉。腺病毒具有能夠感染非分裂細胞之優勢。Kozarsky及Wilson, 1993, Current Opinion in Genetics and Development 3:499-503呈現基於腺病毒之基因療法的評述。Bout等人, 1994, Human Gene Therapy 5:3-10展現腺病毒載體用於將基因轉移至恆河猴之呼吸道上皮的用途。在基因療法中使用腺病毒的其他例子可見於Rosenfeld等人, 1991, Science 252:431-434；Rosenfeld等人, 1992, Cell 68:143-155; Mastrangeli等人, 1993, J. Clin. Invest. 91:225-234；PCT公開案WO94/12649; 及Wang等人, 1995, Gene Therapy 2:775-783。在一個特定實施例中，使用腺病毒載體。
亦可使用腺相關病毒(AAV)(Walsh等人, 1993, Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 204:289-300；及美國專利第5,436,146號)。在一個特定實施例中，AAV載體用於表現如本文所提供的抗Fn14抗體。在某些實施例中，AAV包含編碼VH域之核酸。在其他實施例中，AAV包含編碼VL域之核酸。在某些實施例中，AAV包含編碼VH域及VL域之核酸。在本文所提供方法之一些實施例中，向個體投與包含編碼VH域之核酸的AAV及包含編碼VL域之核酸的AAV。在其他實施例中，向個體投與包含編碼VH域及VL域之核酸的AAV。在某些實施例中，過度表現VH及VL域。
基因療法之另一種方法涉及藉由諸如電穿孔、脂質體轉染、磷酸鈣介導之轉染或病毒感染之方法將基因轉移至組織培養細胞中。通常，轉移方法包括將可選標記物轉移至細胞。隨後將細胞置放於選擇條件下，以分離出已吸收且正表現經轉移基因之彼等細胞。接著將此等細胞遞送至個體。
在此實施例中，將核酸引入細胞中，隨後活體內投與所得重組細胞。此類引入可藉由此項技術中已知之任何方法進行，包括(但不限於)轉染、電穿孔、顯微注射、用含有核酸序列之病毒或細菌噬菌體載體感染、細胞融合、染色體介導之基因轉移、微細胞介導之基因轉移、球形質體融合等。用於將外來基因引入細胞的多種技術在此項技術中已知(參見例如Loeffler及Behr, 1993, Meth. Enzymol. 217:599-618; Cohen等人, 1993, Meth. Enzymol. 217:618-644; Clin. Pharma. Ther. 29:69-92 (1985))且可以根據本文所提供之方法使用，其限制條件為不中斷接受者細胞必需的發育及生理功能。該技術應使得核酸穩定轉移至細胞中，使得核酸可由細胞表現且較佳可由其細胞後代遺傳及表現。
所得重組細胞可以藉由此項技術中已知之各種方法遞送至個體。可以靜脈內投與重組血細胞(例如造血幹細胞或祖細胞)。設想供使用的細胞之量視所需作用、患者狀態等而定，且可以由熟習此項技術者確定。
核酸可引入其中以用於基因療法之目的之細胞涵蓋任何所需的、可獲得的細胞類型，且包括(但不限於)上皮細胞、內皮細胞、角質細胞、纖維母細胞、肌肉細胞、肝細胞；血細胞，諸如T淋巴球、B淋巴球、單核球、巨噬細胞、嗜中性球、嗜伊紅血球、巨核細胞、顆粒球；各種幹細胞或祖細胞，特定而言，造血幹細胞或祖細胞，例如自骨髓、臍帶血、周邊血液、胎兒肝臟等獲得。
在一個特定實施例中，用於基因療法之細胞為個體的自體細胞。
在將重組細胞用於基因療法的一個實施例中，將編碼抗體之核酸序列引入細胞，使得其可由細胞或其後代表現，且接著活體內投與重組細胞以獲得治療作用。在一個特定實施例中，使用幹細胞或祖細胞。活體外可以分離且維持的任何幹細胞及/或祖細胞均可以潛在地根據本文所提供方法的該實施例使用(參見例如PCT公開WO 94/08598; Stemple 及Anderson, 1992, Cell 7 1:973-985; Rheinwald, 1980, Meth. Cell Bio. 21A:229; 及Pittelkow及Scott, 1986, Mayo Clinic Proc. 61:771)。
在一個特定實施例中，為了基因療法之目的而引入的核酸包含可操作地連接至編碼區的誘導型啟動子，以便可藉由控制轉錄之適當誘導劑的存在或不存在來控制核酸表現。5.9 診斷分析及偵測方法
免疫特異性結合至Fn14抗原的經標記抗體及其衍生物及類似物可用於診斷目的以偵測、診斷或監測Fn14介導疾病。因此，本文提供用於偵測Fn14介導性疾病的方法，包含：(a)對使用本文所提供之免疫特異性結合至Fn14抗原之一或多種抗體之個體的細胞或組織樣品中之Fn14抗原的表現進行分析；及(b)比較Fn14抗原水準與對照水準，例如正常組織樣品(例如來自未患Fn14介導性疾病之患者或來自疾病發作之前的相同患者)中的水準，其中Fn14抗原的分析水準相較於Fn14抗原對照水準提高指示Fn14介導性疾病。
本文亦提供一種診斷Fn14介導性疾病的診斷分析，包含：(a)對使用本文所提供之免疫特異性結合至Fn14抗原之一或多種抗體的個體之細胞或組織樣品中之Fn14抗原水準進行分析；及(b)比較Fn14抗原水準與對照水準，例如正常組織樣品中之水準，其中所分析之Fn14抗原水準相較於Fn14抗原對照水準提高指示Fn14介導性疾病。本文亦提供一種治療個體之Fn14介導性疾病的方法，包含：(a)對使用本文所提供之免疫特異性結合至Fn14抗原之一或多種抗體的個體之細胞或組織樣品中之Fn14抗原水準進行分析；及(b)比較Fn14抗原水準與對照水準，例如正常組織樣品中之水準，其中所分析之Fn14抗原水準相較於Fn14抗原對照水準提高指示Fn14介導性疾病。在一些實施例中，該方法進一步包含(c)將有效量的本文所提供抗體投與經鑑別患有Fn14介導性疾病的個體。Fn14介導性疾病之較明確診斷可以允許健康專業人士較早採用預防性措施或積極治療，藉此預防Fn14介導性疾病發展或進一步進展。
使用如本文所述或熟習此項技術者已知之經典免疫組織化學方法，可以使用本文所提供之抗體分析生物樣品中的Fn14抗原水準(參見例如Jalkanen等人, 1985, J. Cell. Biol. 101:976-985；及Jalkanen等人, 1987, J. Cell. Biol. 105:3087-3096)。適用於偵測蛋白質基因表現之其他基於抗體的方法包括免疫分析，諸如酶聯免疫吸附分析(ELISA)及放射免疫分析(RIA)。適合的抗體分析標記為此項技術中已知的，且包括酶標記，諸如葡萄糖氧化酶；放射性同位素，諸如碘(125I、121I)、碳(14C)、硫(35S)、氚(3H)、銦(121In)及鎝(99Tc)；發光標記，諸如魯米諾(luminol)；及螢光標記，諸如螢光素及若丹明(rhodamine)，以及生物素。
本文所提供的一個態樣為偵測及診斷人類之Fn14介導性疾病。在一個實施例中，診斷包含：a)將有效量的免疫特異性結合至Fn14抗原之經標記抗體投與(例如非經腸、皮下或腹膜內)個體；b)投藥之後等待允許經標記抗體在個體體內之表現Fn14抗原的位點集中(且清除未結合之經標記分子至背景水準)的時間間隔；c)確定背景水準；及d)偵測個體體內之經標記抗體，因此偵測到經標記抗體高於背景水準指示該個體患有Fn14介導性疾病疾病。背景水準可以藉由各種方法確定，包括對經標記分子的偵測量與先前針對特定系統確定的標準值進行比較。
此項技術中應瞭解，個體體型及所用成像系統將決定為了產生診斷影像而需要的成像部分之量。在放射性同位素部分之情況下，對於人類個體而言，放射能注射量通常在約5至20毫居里(millicuries)之99Tc範圍內。經標記之抗體接著在含有特定蛋白質之細胞位置聚積。活體內腫瘤成像描述於S.W. Burchiel等人. , 「Immunopharmacokinetics of Radiolabeled Antibodies and Their Fragments」. (第13章, 於Tumor Imaging:  The Radiochemical Detection of Cancer, S.W. Burchiel及B.A. Rhodes編, Masson Publishing Inc. (1982)。
視若干變數(包括所用標記類型及投藥模式)而定，投藥之後允許經標記之抗體在個體中之位點集中且清除未結合之經標記抗體至背景水準的時間間隔為6至48小時或6至24小時或6至12小時。在另一個實施例中，投藥後的時間間隔為5至20天或5至10天。
在一個實施例中，監測Fn14介導性疾病係藉由重複執行診斷Fn14介導性疾病之方法來進行，例如在初始診斷之後的一個月、初始診斷之後的六個月、初始診斷之後的一年等。
經標記之分子在個體中的存在可使用此項技術中已知之活體內掃描方法來偵測。此等方法視所用標記的類型而定。熟習此項技術者能夠決定用於偵測特定標記之適當方法。可用於本文所提供之診斷方法中的方法及裝置包括(但不限於)電腦斷層攝影(CT)、全身掃描(諸如正電子發射斷層攝影(PET))、磁共振成像(MRI)及超音波掃描(sonography)。
在一個特定實施例中，分子用放射性同位素標記且使用輻射反應性手術儀器在患者中偵測(Thurston等人，美國專利第5,441,050號)。在另一個實施例中，分子用螢光化合物標記且使用螢光反應性掃描儀器在患者中偵測。在另一個實施例中，分子經正電子發射金屬標記且使用正電子發射斷層攝影術在患者中偵測。在又另一個實施例中，分子用順磁標記進行標記且使用磁共振成像(MRI)在患者中偵測。5.10 套組
本文亦提供套組，其包含封裝於適合封裝材料中之本文所提供抗體(例如抗Fn14抗體)或其組合物(例如醫藥組合物)。套組視情況含有標籤或封裝插頁，其包含組分的說明或其內之組分用於活體外、活體內、或離體的使用說明。
術語「封裝材料」係指容納套組之各組分的物理結構。封裝材料可以維持組分無菌，且可以由常用於此類目的之材料(例如紙、波紋狀纖維、玻璃、塑膠、箔、安瓿、小瓶、管等)製成。
本文所提供的套組可以包括標籤或插頁。標籤或插頁包括「印刷物」，例如紙或紙板，其為單獨的或附著至組分、套組或封裝材料(例如盒)或附接至例如含有套組組分的安瓿、管或小瓶。標籤或插頁可另外包括電腦可讀取媒體，諸如磁碟(例如硬碟、卡、記憶體磁碟)；光碟，諸如CD-ROM/RAM或DVD-ROM/RAM、DVD、MP3、磁帶；或電儲存媒體，諸如RAM及ROM，或此等物之混合體，諸如磁/光學儲存媒體、快閃介質或記憶型卡。標籤或插頁可以包括標識製造商資訊、批號、製造地點及日期的資訊。
本文所提供的套組可以另外包括其他組分。套組之各組分可封閉於個別容器內，且所有各種容器可位於單一封裝內。套組亦可針對冷儲存而設計。套組可以進一步經設計以含有本文所提供之抗體，或含有編碼本文所提供抗體之核酸的細胞。套組中之細胞可以在適當儲存條件下維持直至即用。
本文亦提供一組免疫特異性結合至Fn14抗原的抗體。在特定實施例中，本文提供具有不同結合速率常數、不同解離速率常數、針對Fn14抗原之不同親和力及/或針對Fn14抗原之不同特異性的一組抗體。在某些實施例中，本文提供約10種、較佳約25、約50、約75、約100、約125、約150、約175、約200、約250、約300、約350、約400、約450、約500、約550、約600、約650、約700、約750、約800、約850、約900、約950或約1000種或更多種抗體之組。抗體組可以用於例如96孔或384孔盤中，諸如用於諸如ELISA之分析。
除非另外定義，否則本文所用的所有技術及科學術語均具有與本發明所屬領域中具普通知識者通常所理解相同的含義。儘管類似或等效於本文所述者之方法及材料可用於本發明的實施或測試，但本文描述適合之方法及材料。
如本文所用，通篇本文中的數值通常以範圍格式呈現。範圍格式的使用僅為了方便及簡潔起見且不應理解為對本發明之範疇的不靈活限制，除非上下文另外明確指出。因此，範圍的使用明確地包括所有可能子範圍、該範圍內的所有個別數值，及此類範圍內的所有數值或數值範圍(包括整數)，及範圍內的分數值或整數，除非上下文另外明確指出。不論範圍之廣度，此構造皆適用且適用於通篇此專利文獻中的所有上下文中。因此，舉例而言，提及範圍90-100%包括91-99%、92-98%、93-95%、91-98%、91-97%、91-96%、91-95%、91-94%、91-93%等。提及範圍90-100%亦包括91%、92%、93%、94%、95%、95%、97%等，以及91.1%、91.2%、91.3%、91.4%、91.5%等，92.1%、92.2%、92.3%、92.4%、92.5%等，諸如此類。
另外，提及範圍1-3、3-5、5-10、10-20、20-30、30-40、40-50、50-60、60-70、70-80、80-90、90-100、100-110、110-120、120-130、130-140、140-150、150-160、160-170、170-180、180-190、190-200、200-225、225-250包括1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20等。在另一實例中，提及範圍25-250、250-500、500-1,000、1,000-2,500、2,500-5,000、5,000-25,000、25,000-50,000包括此類值內的任何數值或範圍或涵蓋此類值的任何數值或範圍，例如25、26、27、28、29…250、251、252、253、254…500、501、502、503、504…等。
亦如本文所用，通篇本文中揭示一系列範圍。一系列範圍的使用包括上限與下限範圍的組合以提供另一範圍。不論範圍之廣度，此構造皆適用且適用於通篇此專利文獻中的所有上下文中。因此，舉例而言，提及一系列範圍(諸如5-10、10-20、20-30、30-40、40-50、50-75、75-100、100-150)包括諸如5-20、5-30、5-40、5-50、5-75、5-100、5-150及10-30、10-40、10-50、10-75、10-100、10-150及20-40、20-50、20-75、20-100、20-150之範圍，諸如此類。
為了簡潔起見，本文中使用某些縮寫。一個實例為表示胺基酸殘基之單字母縮寫。胺基酸及其對應的三字母及單字母縮寫如下：
丙胺酸 Ala (A)
精胺酸 Arg (R)
天冬醯胺 Asn (N)
天冬胺酸 Asp (D)
半胱胺酸 Cys (C)
麩胺酸 Glu (E)
麩醯胺酸 Gln (Q)
甘胺酸 Gly (G)
組胺酸 His (H)
異白胺酸 Ile (I)
白胺酸 Leu (L)
離胺酸 Lys (K)
甲硫胺酸 Met (M)
苯丙胺酸 Phe (F)
脯胺酸 Pro (P)
絲胺酸 Ser (S)
蘇胺酸 Thr (T)
色胺酸 Trp (W)
酪胺酸 Tyr (Y)
纈胺酸 Val (V)
本文中藉由使用肯定的語言描述多個實施例來大體揭示本發明。本發明亦特別包括其中特定標的物被完全或部分排除的實施例，諸如物質或材料、方法步驟及條件、方案、程序、分析法或分析。因此，儘管本文中未依本發明不包括的內容來大體表述本發明，但本文揭示了未明確包括於本發明中的態樣。
已描述許多本發明實施例。然而，應瞭解各種潤飾可以在不背離本發明精神及範疇的情況下進行。因此，以下實例旨在舉例說明而非限制申請專利範圍所述的本發明範疇。 6.實例
以下為用於研究之各種方法及材料的描述，且經提出以向一般熟習此項技術者提供如何製造及使用本發明之完全揭示及描述，且不意欲限制本發明人視為其發明內容之內容的範疇，且其亦不意欲表示以下實驗已進行且為所有可進行之實驗。應理解，以現在時態書寫之例示性描述未必進行，而是可進行該等描述以產生與本發明之教示相關之資料及其類似物。已努力確保所用數字(例如量、百分比等)方面的準確度，但應考慮一些誤差及偏差。實例 1 - 產生與小鼠、大鼠及食蟹獼猴 FN14 發生 交叉反應的小鼠抗人類 FN14 拮抗劑、非促效劑抗體
此實例說明用於產生本文所提供之例示性小鼠抗人類Fn14拮抗劑抗體的方法。應理解，此實例中所述的例示性Fn14抗體不意欲表示本發明之完整範疇。抗原製備
製備用於產生重組全長人類、小鼠及獼猴(亦即食蟹獼猴) Fn14蛋白質之哺乳動物表現載體。特定言之，在Fasmac (日本神奈川)藉由DNA Craft人工基因合成術來合成編碼人類、小鼠及食蟹獼猴Fn14的DNA序列且分別展示於SEQ ID NO: 1、5及9中。編碼人類Fn14之DNA具有SEQ ID NO: 1之聚核苷酸序列，且經編碼的人類Fn14具有SEQ ID NO: 2之胺基酸序列(寄存編號NP_057723)。編碼小鼠Fn14之DNA具有SEQ ID NO: 5之聚核苷酸序列，且經編碼的小鼠Fn14具有SEQ ID NO: 6之胺基酸序列(寄存編號NP_038777.2)。編碼小鼠Fn14之DNA具有SEQ ID NO: 7之聚核苷酸序列，且經編碼的小鼠Fn14具有SEQ ID NO: 8之胺基酸序列(寄存編號NP_851600)。編碼食蟹獼猴Fn14之DNA具有SEQ ID NO: 9之聚核苷酸序列，且經編碼的食蟹獼猴Fn14具有SEQ ID NO: 10之胺基酸序列(寄存編號XP_005591081.1)。來自各種來源之Fn14蛋白質之核苷酸及胺基酸序列列於下表13中。 表13. Fn14蛋白質之核苷酸及胺基酸序列
描述 序列(SEQ ID NO)
人類Fn14 (全長)核苷酸序列 ATGGCTCGGGGCTCGCTGCGCCGGTTGCTGCGGCTCCTCGTGCTGGGGCTCTGGCTGGCGTTGCTGCGCTCCGTGGCCGGGGAGCAAGCGCCAGGCACCGCCCCCTGCTCCCGCGGCAGCTCCTGGAGCGCGGACCTGGACAAGTGCATGGACTGCGCGTCTTGCAGGGCGCGACCGCACAGCGACTTCTGCCTGGGCTGCGCTGCAGCACCTCCTGCCCCCTTCCGGCTGCTTTGGCCCATCCTTGGGGGCGCTCTGAGCCTGACCTTCGTGCTGGGGCTGCTTTCTGGCTTTTTGGTCTGGAGACGATGCCGCAGGAGAGAGAAGTTCACCACCCCCATAGAGGAGACCGGCGGAGAGGGCTGCCCAGCTGTGGCGCTGATCCAG (SEQ ID NO: 1)
人類Fn14 (全長)胺基酸序列 MARGSLRRLLRLLVLGLWLALLRSVAGEQAPGTAPCSRGSSWSADLDKCMDCASCRARPHSDFCLGCAAAPPAPFRLLWPILGGALSLTFVLGLLSGFLVWRRCRRREKFTTPIEETGGEGCPAVALIQ (SEQ ID NO: 2)
人類Fn14成熟胞外域(aa28-75)(核苷酸序列) GAGCAAGCGCCAGGCACCGCCCCCTGCTCCCGCGGCAGCTCCTGGAGCGCGGACCTGGACAAGTGCATGGACTGCGCGTCTTGCAGGGCGCGACCGCACAGCGACTTCTGCCTGGGCTGCGCTGCAGCACCTCCTGCCCCCTTC (SEQ ID NO: 3)
人類Fn14成熟胞外域(aa28-75)(胺基酸序列) EQAPGTAPCSRGSSWSADLDKCMDCASCRARPHSDFCLGCAAAPPAPF (SEQ ID NO: 4)
小鼠Fn14 (全長)核苷酸序列 ATGGCTTCGGCTTGGCCGCGGTCTCTGCCGCAGATCCTCGTGTTGGGATTCGGCTTGGTGTTGATGCGCGCCGCGGCCGGGGAGCAAGCACCAGGCACCTCCCCATGCTCTAGCGGCAGCTCCTGGAGCGCGGACCTCGACAAGTGCATGGACTGCGCTTCTTGTCCAGCGCGACCACACAGCGACTTCTGCCTGGGATGCGCCGCAGCACCTCCTGCCCACTTCAGGCTACTGTGGCCCATTCTGGGGGGCGCTCTTAGTCTGGTCCTGGTTTTGGCGCTGGTTTCTAGTTTCCTGGTCTGGAGAAGATGCCGCCGGAGAGAAAAGTTTACTACCCCCATAGAGGAGACTGGTGGAGAGGGCTGCCCAGGTGTGGCACTGATCCAG (SEQ ID NO: 5)
小鼠Fn14 (全長)胺基酸序列 MASAWPRSLPQILVLGFGLVLMRAAAGEQAPGTSPCSSGSSWSADLDKCMDCASCPARPHSDFCLGCAAAPPAHFRLLWPILGGALSLVLVLALVSSFLVWRRCRRREKFTTPIEETGGEGCPGVALIQ (SEQ ID NO: 6)
大鼠Fn14 (全長)核苷酸序列 ATGGCTCCGGGTTGGCCGCGGCCTCTGCCGCAGCTCCTCGTGTTGGGATTCGGGTTGGTGTTGATACGCGCCACGGCCGGGGAGCAAGCACCAGGCAACGCCCCATGCTCAAGCGGCAGCTCCTGGAGCGCGGACCTCGACAAGTGCATGGACTGCGCTTCTTGTCCAGCGCGACCACACAGCGACTTCTGCCTGGGATGCGCAGCAGCACCTCCTGCCCACTTCAGGATGCTATGGCCCATTCTGGGAGGCGCTCTTAGTCTGGCCCTGGTTTTGGCGCTGGTTTCTGGTTTCCTGGTCTGGAGACGATGCCGCCGGAGAGAAAAGTTTACTACCCCCATAGAGGAGACTGGTGGAGAAGGCTGCCCAGGTGTGGCACTGATCCAG (SEQ ID NO: 7)
大鼠Fn14 (全長)胺基酸序列 MAPGWPRPLPQLLVLGFGLVLIRATAGEQAPGNAPCSSGSSWSADLDKCMDCASCPARPHSDFCLGCAAAPPAHFRMLWPILGGALSLALVLALVSGFLVWRRCRRREKFTTPIEETGGEGCPGVALIQ (SEQ ID NO: 8)
食蟹獼猴(Macaca fascicularis ) Fn14 (全長)核苷酸序列 ATGGCTCGGGGTTCGCTGCGCCGGTTGCTGCGGCTCCTCGTGCTGGGGCTCTGGCTGGCGTTGCTGCGCTCCGTGGCTGGGGAGCAAGCGCCAGGCACCGCCCCCTGCTCCCACGGCAGTTCCTGGAGCGCGGACCTGGACAAGTGCATGGACTGCGCGTCTTGCAGGGCGCGACCGCACAGCGACTTCTGCCTGGGCTGCTCTGCGGCACCTCCTGCCCCCTTCCGGCTGCTTTGGCCCATCCTTGGGGGCGCTCTGAGTCTGACCTTCGTGCTGGGGCTGCTTTCTGGCTTTCTGGTCTGGAGACGATGCCGCAGGAGAGAGAAGTTCACCACCCCCATAGAGGAGACCGGCGGAGAGGGCTGCCCAGCTGTGGCGCTGATCCAGTGA (SEQ ID NO: 9)
食蟹獼猴(Macaca fascicularis ) Fn14 (全長)胺基酸序列 MARGSLRRLLRLLVLGLWLALLRSVAGEQAPGTAPCSHGSSWSADLDKCMDCASCRARPHSDFCLGCSAAPPAPFRLLWPILGGALSLTFVLGLLSGFLVWRRCRRREKFTTPIEETGGEGCPAVALIQ (SEQ ID NO: 10)
在基因合成之後，藉由PCR、使用引子自合成的DNA擴增各相應物種的編碼全長Fn14之DNA，該等引子添加適當的5'及3'側接DNA以便插入哺乳動物表現載體pCI或pSI (Promega, Madison, Wisconsin)。藉由連接酶非依賴性選殖(無縫選殖及組裝酶混合物，目錄號A14606，Invitrogen/GeneArt, Carlsbad, California)連接插入序列與載體之後，藉由桑格測序(Sanger sequencing)驗證所得質體。
為了產生供抗體結合分析用的抗原，使用FreeStyle 293表現系統(目錄號K900001, Life Technologies/Invitrogen, Carlsbad, California)將用於人類、食蟹獼猴或小鼠Fn14的pC1或pS1表現載體(上文所述)短暫轉染於293F細胞中。轉染之後的第二天，將細胞用於流式細胞術實驗中。
用於免疫接種之人類Fn14的核苷酸及胺基酸序列分別為SEQ ID NO: 1及SEQ ID NO: 2 (參見表13)。為了產生用於免疫接種之抗原，如下產生穩定表現表面人類Fn14的CHO-K1細胞池：使用Cell Line Nucleofector™套組V (目錄號VCA-1003, Lonza, Basil, Switzerland)，根據製造商說明書，藉由電穿孔將質體pKTABEX-TC26-hFn14 (Kyowa Hakko Kirin，WO2013005649中所述)送入CHO-K1細胞(歐洲經認證的細胞培養保藏中心(European Collection of Authenticated Cell Cultures，ECACC)，目錄號85051005，Port Down, United Kingdom)，隨後選擇含有所表現之質體、具有抗生素抗性的細胞。數週的抗生素選擇之後，利用流式細胞術，根據抗體結合確認表現表面人類Fn14的存活細胞。選殖 His - SUMO - Fn14
產生哺乳動物表現載體用於哺乳動物表現由以下組成的可溶性蛋白質：SEQ ID NO: 4中所示之人類Fn14蛋白質之胞外域的胺基酸28-75，其與串聯6x組胺酸及突變型SUMO標籤(His-SUMO)在胺基端融合，以產生可溶性His-SUMO-huFn14蛋白質。如下文所示，成熟蛋白核苷酸及胺基酸序列分別為SEQ ID NO: 11及SEQ ID NO: 12。His - SUMO - hFn14 核苷酸序列 ：
Figure 02_image001
Figure 02_image003
。His - SUMO - hFn14 胺基酸序列 ：
Figure 02_image005
Figure 02_image007
。
當在蛋白質之胺基端連接時，SUMO蛋白酶可以完全地移除SUMO標籤，在所關注之SUMO處理蛋白質之胺基端得到未經標籤衍生的胺基酸。此SUMO標籤突變體(Lucigen, Middleton, Wisconsin)已藉由胺基酸取代進行工程改造，使得其對天然真核SUMO蛋白酶的去SUMO化具抗性，但可以被稱為SUMO Expresso蛋白酶的工程化突變型SUMO蛋白酶(目錄號30801-2, Lucigen, Middleton, Wisconsin)裂解。
使用熟習此項技術者已知之方法進行表現載體選殖。簡言之，利用重疊PCR，將編碼胺基端His-SUMO標籤(核苷酸SEQ ID NO: 21，胺基酸SEQ ID NO: 22)之cDNA與編碼人類Fn14胞外域(胺基酸28-75)(核苷酸SEQ ID NO: 3，胺基酸SEQ ID NO: 4)同框融合，同時在6x His標籤的5'直接添加真核信號肽序列。在一種PCR反應中，使用DNA引子自Expresso T7 SUMO選殖及表現系統套組(目錄號49003, Lucigen, Middleton, Wisconsin)中所發現的Lucigen原核表現載體組分擴增編碼His-SUMO標籤的DNA，該等引子添加編碼哺乳動物IgG信號肽之5' DNA及與編碼成熟人類Fn14之胺基端之同框DNA同源的3'DNA序列(所有PCR反應均使用KOD熱起始DNA聚合酶(目錄號71086, Millipore Sigma, Burlington, Massachusetts)進行)。同時，第二PCR反應利用不含額外核苷酸的正向引子及在Fn14胺基酸75之密碼子之後添加3'終止密碼子的反向引子對編碼成熟人類Fn14胞外域(胺基酸28-75)的DNA進行擴增。此兩種PCR反應的DNA產物係藉由瓊脂糖凝膠電泳及凝膠萃取(QIAquick凝膠萃取套組，目錄號28704, QIAGEN, Hilden, Germany)純化，接著作為模板在隨後的PCR反應中組合，其中使重疊的兩個DNA模板彼此間黏接且用5'及3'側接引子延長為單一cDNA股，該等引子添加5'及3'突出端以便以連接酶非依賴性方式選殖入pcDNA3.4 (Invitrogen, 目錄號A14697, Carlsbad, California)，根據製造商的產品手冊(無縫選殖及組裝酶混合物，目錄號A14606, Life Technologies/Invitrogen/GeneArt, Carlsbad, California)、利用連接酶非依賴性選殖、用NheI及EcoRI (NEB, Ipswich, Massachusetts)消化。藉由桑格測序來驗證所得質體。
His-SUMO蛋白質標籤的聚核苷酸及胺基酸序列如下：His - SUMO 核苷酸序列 ：
Figure 02_image009
Figure 02_image011
。His - His - SUMO 胺基酸序列 ：
Figure 02_image013
Figure 02_image015
。選殖人類、小鼠及食蟹獼猴可溶性 Fn14 - GST
產生哺乳動物表現載體，用於產生人類、小鼠或食蟹猴(Macaca fascicularis ) Fn14 (aa 28-75)之胞外域，該胞外域與麩胱甘肽S-轉移酶(GST)之胺基端經由連接肽(連接子胺基酸序列為GTLEVLFQGP，且GST核苷酸及胺基酸序列分別展示於SEQ ID NO: 19及SEQ ID NO: 20中)融合。載體如下構築：首先使編碼GST的DNA接合至哺乳動物表現載體INPEP4 (Biogen/IDEC)，用ApaI及BamHI消化。使用引子自Fasmac (日本神奈川)合成的序列對編碼GST的DNA進行PCR擴增，該等引子添加適於接合至載體內的5'及3' DNA。藉由桑格測序驗證完成的載體INPEP4-GST。隨後，利用引子、藉由PCR擴增編碼Fn14胺基酸1-75 (包括內源信號肽，胺基酸序列1-27)的DNA，該等引子添加適於接合至上述所消化之INPEP4-GST載體之BglII及KpnI位點內的側接5'及3' DNA。接合之後，藉由桑格測序驗證上文所列之各Fn14物種的單一Fn14-GST載體純系。隨後，此等Fn14-GST DNA序列亦藉由剪切黏貼消化及接合、利用側接BglII及BamHI限制位點次選殖入哺乳動物表現載體pTC27 (Kyowa Hakko Kirin)中。此等載體亦藉由桑格測序確認。人類-、小鼠-及食蟹獼猴-Fn14-GST的完整核苷酸序列分別展示於SEQ ID NO: 13、17及15中，且相應胺基酸轉譯展示於SEQ ID NO: 14、18及16中(參見表14)。 表14. Fn14-GST的核苷酸及胺基酸序列
描述 序列(SEQ ID NO)
人類Fn14-GST核苷酸序列 ATGGCTCGGGGCTCGCTGCGCCGGTTGCTGCGGCTCCTCGTGCTGGGGCTCTGGCTGGCGTTGCTGCGCTCCGTGGCCGGGGAGCAAGCGCCAGGCACCGCCCCCTGCTCCCGCGGCAGCTCCTGGAGCGCGGACCTGGACAAGTGCATGGACTGCGCGTCTTGCAGGGCGCGACCGCACAGCGACTTCTGCCTGGGCTGCGCTGCAGCACCTCCTGCCCCCTTCGGTACCCTGGAAGTTCTGTTCCAGGGGCCCATGTCCCCTATACTAGGTTATTGGAAAATTAAGGGCCTTGTGCAACCCACTCGACTTCTTTTGGAATATCTTGAAGAAAAATATGAAGAGCATTTGTATGAGCGCGATGAAGGTGATAAATGGCGAAACAAAAAGTTTGAATTGGGTTTGGAGTTTCCCAATCTTCCTTATTATATTGATGGTGATGTTAAATTAACACAGTCTATGGCCATCATACGTTATATAGCTGACAAGCACAACATGTTGGGTGGTTGTCCAAAAGAGCGTGCAGAGATTTCAATGCTTGAAGGAGCGGTTTTGGATATTAGATACGGTGTTTCGAGAATTGCATATAGTAAAGACTTTGAAACTCTCAAAGTTGATTTTCTTAGCAAGCTACCTGAAATGCTGAAAATGTTCGAAGATCGTTTATGTCATAAAACATATTTAAATGGTGATCATGTAACCCATCCTGACTTCATGTTGTATGACGCTCTTGATGTTGTTTTATACATGGACCCAATGTGCCTGGATGCGTTCCCAAAATTAGTTTGTTTTAAAAAACGTATTGAAGCTATCCCACAAATTGATAAGTACTTGAAATCCAGCAAGTATATAGCATGGCCTTTGCAGGGCTGGCAAGCCACGTTTGGTGGTGGCGACCATCCTCCAAAATCGGATTGA (SEQ ID NO: 13)
人類Fn14-GST胺基酸序列 MARGSLRRLLRLLVLGLWLALLRSVAGEQAPGTAPCSRGSSWSADLDKCMDCASCRARPHSDFCLGCAAAPPAPFGTLEVLFQGPMSPILGYWKIKGLVQPTRLLLEYLEEKYEEHLYERDEGDKWRNKKFELGLEFPNLPYYIDGDVKLTQSMAIIRYIADKHNMLGGCPKERAEISMLEGAVLDIRYGVSRIAYSKDFETLKVDFLSKLPEMLKMFEDRLCHKTYLNGDHVTHPDFMLYDALDVVLYMDPMCLDAFPKLVCFKKRIEAIPQIDKYLKSSKYIAWPLQGWQATFGGGDHPPKSD (SEQ ID NO: 14)
獼猴Fn14-GST (食蟹獼猴)核苷酸序列 ATGGCTCGGGGCTCGCTGCGCCGGTTGCTGCGGCTCCTCGTGCTGGGGCTCTGGCTGGCGTTGCTGCGCTCCGTGGCCGGGGAGCAAGCGCCAGGCACCGCCCCCTGCTCCCACGGCAGCTCCTGGAGCGCGGACCTGGACAAGTGCATGGACTGCGCGTCTTGCAGGGCGCGACCGCACAGCGACTTCTGCCTGGGCTGCTCCGCAGCACCTCCTGCCCCCTTCGGTACCCTGGAAGTTCTGTTCCAGGGGCCCATGTCCCCTATACTAGGTTATTGGAAAATTAAGGGCCTTGTGCAACCCACTCGACTTCTTTTGGAATATCTTGAAGAAAAATATGAAGAGCATTTGTATGAGCGCGATGAAGGTGATAAATGGCGAAACAAAAAGTTTGAATTGGGTTTGGAGTTTCCCAATCTTCCTTATTATATTGATGGTGATGTTAAATTAACACAGTCTATGGCCATCATACGTTATATAGCTGACAAGCACAACATGTTGGGTGGTTGTCCAAAAGAGCGTGCAGAGATTTCAATGCTTGAAGGAGCGGTTTTGGATATTAGATACGGTGTTTCGAGAATTGCATATAGTAAAGACTTTGAAACTCTCAAAGTTGATTTTCTTAGCAAGCTACCTGAAATGCTGAAAATGTTCGAAGATCGTTTATGTCATAAAACATATTTAAATGGTGATCATGTAACCCATCCTGACTTCATGTTGTATGACGCTCTTGATGTTGTTTTATACATGGACCCAATGTGCCTGGATGCGTTCCCAAAATTAGTTTGTTTTAAAAAACGTATTGAAGCTATCCCACAAATTGATAAGTACTTGAAATCCAGCAAGTATATAGCATGGCCTTTGCAGGGCTGGCAAGCCACGTTTGGTGGTGGCGACCATCCTCCAAAATCGGAT (SEQ ID NO: 15)
獼猴Fn14-GST (食蟹獼猴)胺基酸序列 MARGSLRRLLRLLVLGLWLALLRSVAGEQAPGTAPCSHGSSWSADLDKCMDCASCRARPHSDFCLGCSAAPPAPFGTLEVLFQGPMSPILGYWKIKGLVQPTRLLLEYLEEKYEEHLYERDEGDKWRNKKFELGLEFPNLPYYIDGDVKLTQSMAIIRYIADKHNMLGGCPKERAEISMLEGAVLDIRYGVSRIAYSKDFETLKVDFLSKLPEMLKMFEDRLCHKTYLNGDHVTHPDFMLYDALDVVLYMDPMCLDAFPKLVCFKKRIEAIPQIDKYLKSSKYIAWPLQGWQATFGGGDHPPKSD (SEQ ID NO: 16)
小鼠Fn14-GST核苷酸序列 ATGGCTTCGGCTTGGCCGCGGTCTCTGCCGCAGATCCTCGTGTTGGGATTCGGCTTGGTGTTGATGCGCGCCGCGGCCGGGGAGCAAGCACCAGGCACCTCCCCATGCTCTAGCGGCAGCTCCTGGAGCGCGGACCTCGACAAGTGCATGGACTGCGCTTCTTGTCCAGCGCGACCACACAGCGACTTCTGCCTGGGATGCGCCGCAGCACCTCCTGCCCACTTCGGTACCCTGGAAGTTCTGTTCCAGGGGCCCATGTCCCCTATACTAGGTTATTGGAAAATTAAGGGCCTTGTGCAACCCACTCGACTTCTTTTGGAATATCTTGAAGAAAAATATGAAGAGCATTTGTATGAGCGCGATGAAGGTGATAAATGGCGAAACAAAAAGTTTGAATTGGGTTTGGAGTTTCCCAATCTTCCTTATTATATTGATGGTGATGTTAAATTAACACAGTCTATGGCCATCATACGTTATATAGCTGACAAGCACAACATGTTGGGTGGTTGTCCAAAAGAGCGTGCAGAGATTTCAATGCTTGAAGGAGCGGTTTTGGATATTAGATACGGTGTTTCGAGAATTGCATATAGTAAAGACTTTGAAACTCTCAAAGTTGATTTTCTTAGCAAGCTACCTGAAATGCTGAAAATGTTCGAAGATCGTTTATGTCATAAAACATATTTAAATGGTGATCATGTAACCCATCCTGACTTCATGTTGTATGACGCTCTTGATGTTGTTTTATACATGGACCCAATGTGCCTGGATGCGTTCCCAAAATTAGTTTGTTTTAAAAAACGTATTGAAGCTATCCCACAAATTGATAAGTACTTGAAATCCAGCAAGTATATAGCATGGCCTTTGCAGGGCTGGCAAGCCACGTTTGGTGGTGGCGACCATCCTCCAAAATCGGATTGA (SEQ ID NO: 17)
小鼠Fn14-GST胺基酸序列 MASAWPRSLPQILVLGFGLVLMRAAAGEQAPGTSPCSSGSSWSADLDKCMDCASCPARPHSDFCLGCAAAPPAHFGTLEVLFQGPMSPILGYWKIKGLVQPTRLLLEYLEEKYEEHLYERDEGDKWRNKKFELGLEFPNLPYYIDGDVKLTQSMAIIRYIADKHNMLGGCPKERAEISMLEGAVLDIRYGVSRIAYSKDFETLKVDFLSKLPEMLKMFEDRLCHKTYLNGDHVTHPDFMLYDALDVVLYMDPMCLDAFPKLVCFKKRIEAIPQIDKYLKSSKYIAWPLQGWQATFGGGDHPPKSD (SEQ ID NO: 18)
GST核苷酸序列 ATGTCCCCTATACTAGGTTATTGGAAAATTAAGGGCCTTGTGCAACCCACTCGACTTCTTTTGGAATATCTTGAAGAAAAATATGAAGAGCATTTGTATGAGCGCGATGAAGGTGATAAATGGCGAAACAAAAAGTTTGAATTGGGTTTGGAGTTTCCCAATCTTCCTTATTATATTGATGGTGATGTTAAATTAACACAGTCTATGGCCATCATACGTTATATAGCTGACAAGCACAACATGTTGGGTGGTTGTCCAAAAGAGCGTGCAGAGATTTCAATGCTTGAAGGAGCGGTTTTGGATATTAGATACGGTGTTTCGAGAATTGCATATAGTAAAGACTTTGAAACTCTCAAAGTTGATTTTCTTAGCAAGCTACCTGAAATGCTGAAAATGTTCGAAGATCGTTTATGTCATAAAACATATTTAAATGGTGATCATGTAACCCATCCTGACTTCATGTTGTATGACGCTCTTGATGTTGTTTTATACATGGACCCAATGTGCCTGGATGCGTTCCCAAAATTAGTTTGTTTTAAAAAACGTATTGAAGCTATCCCACAAATTGATAAGTACTTGAAATCCAGCAAGTATATAGCATGGCCTTTGCAGGGCTGGCAAGCCACGTTTGGTGGTGGCGACCATCCTCCAAAATCGGAT (SEQ ID NO: 19)
GST胺基酸序列 MSPILGYWKIKGLVQPTRLLLEYLEEKYEEHLYERDEGDKWRNKKFELGLEFPNLPYYIDGDVKLTQSMAIIRYIADKHNMLGGCPKERAEISMLEGAVLDIRYGVSRIAYSKDFETLKVDFLSKLPEMLKMFEDRLCHKTYLNGDHVTHPDFMLYDALDVVLYMDPMCLDAFPKLVCFKKRIEAIPQIDKYLKSSKYIAWPLQGWQATFGGGDHPPKSD (SEQ ID NO: 20)
免疫接種
BALB/c小鼠及Fn14基因剔除(KO)小鼠用於免疫接種。BALB/c小鼠係購自查爾斯河實驗室日本有限公司(Charles River Laboratories Japan Inc.)。Fn14 KO小鼠係利用WO2014007198之實例中所述之方法製備。穩定表現hFn14表現載體的hFn14/CHO-K1細胞用作免疫原。收集hFn14/CHO-K1細胞且再懸浮於200 μL Sigma佐劑系統(目錄號S6322, MillporeSigma, Burlington, Massachusetts)或生理鹽水中，接著腹膜內投與(2.5×106 個細胞/動物)。用活體內jetPEI套組(目錄號201-10G, PolyPlus-轉染, Strasbourg, France)製備質體hFn14表現載體DNA。DNA:jetPEI以10:1之比率混合。每個動物腹膜內或靜脈內投與50 μg DNA。
Balb/c或Fn14基因剔除(KO)小鼠腹膜內(i.p.)免疫接種存在於如所述之Sigma佐劑系統中之經人類Fn14 (hFn14)轉染的CHO-K1細胞。首次免疫接種之後的第五天，小鼠接受經Fn14轉染之細胞的增強注射，十天後接受由50 µg Fn14 DNA/5 µL jet-PEI組成的最終增強免疫。所有注射均腹膜內投與。最終增強免疫之後的第三天，處死小鼠且移出脾臟且處理用於產生融合瘤。融合瘤產生
由自Balb/c或Fn14基因剔除(KO)小鼠分離之脾細胞產生融合瘤，該等小鼠免疫接種存在於如所述之Sigma佐劑系統中之經人類Fn14 (hFn14)轉染的CHO-K1細胞。自免疫小鼠移出脾臟之後，將脾臟切成塊且在PBS中輕緩地均質化變成單一細胞懸浮液。
為產生融合瘤，將來自單細胞懸浮液之脾細胞與小鼠骨髓瘤細胞Sp2/0 (美國菌種保藏中心(ATCC)：CRL1581)融合。藉由離心(1500 rpm，3分鐘)使脾細胞懸浮液集結且向冰上的細胞集結粒中添加紅血球溶解緩衝液(Sigma)。接著，細胞用DMEM (Gibco)洗滌兩次且經歷細胞融合。
在具有10% FBS之DMEM中培養的小鼠骨髓瘤細胞Sp2/0用於細胞融合。Sp2/0與小鼠脾細胞以5:1 (Sp2/0:脾細胞)之比率混合，隨後離心(1500 rpm，3分鐘)。在輕緩搖盪下，將1 mL聚乙二醇-1500 (Roche Diagnostics)緩慢添加至細胞集結粒中，隨後在輕緩搖盪下添加5 mL DMEM且接著添加最後10 mL DMEM。細胞溶液在37℃下培育5分鐘，接著離心(1500 rpm，3分鐘)。將所得細胞集結粒以1×106 個細胞/毫升之細胞密度再懸浮於完全培養基(含有10% FBS、50 μmol/L 2-巰基乙醇、50 μg/mL胰島素、10 ng/mL IL-6之DMEM)中。96孔盤每孔接種100 μL細胞懸浮液。將盤在37℃與5% CO2 下培育時。
16小時之後，成功融合之融合瘤細胞藉由在含有HAT之培養基(目錄號H0262，Sigma, St. Louis, Missouri)中培養來經受選擇。將100 μL含有2x HAT之培養基(具有2x HAT培養基補充劑(Sigma)之上述培養基)添加至96孔盤中之細胞懸浮液之各孔中且在37℃及5% CO2 下培育盤。培養基每週用含有HAT的培養基更換3次，直至細胞達到適於篩選的密度。利用融合瘤培養物上清液或經純化之抗體進行篩選。
基於針對抗原結合的篩選來選擇七種融合瘤純系。所測試之Balb/c源單株抗體為17A3、24A8、6A5及35A2，且Fn14 KO小鼠源單株抗體為KO41c、KO42d及KO43b。Fn14 特異性融合瘤抗原結合篩選分析
根據抗體針對不同細胞株上表現之Fn14的結合，評估來自七種所選融合瘤純系之細胞培養上清液。所測試之Balb/c源單株抗體為17A3、24A8、6A5及35A2，且Fn14 KO小鼠源單株抗體為KO41c、KO42d及KO43b。
特定言之，藉由流式細胞術(FCM)評估融合瘤培養上清液或經純化之抗體對表現Fn14之細胞的結合活性。藉由FCM評估的細胞株為經Fn14轉染的人類胚胎腎臟293F細胞(ThermoFisher，目錄號R79007)及內源性表現Fn14的兩種細胞株：人類腎源HK2細胞(ATCC，目錄號CRL-2190)及大鼠腎源NRK-52E細胞(日本研究生物資源細胞庫保藏中心(Japanese Collection of Research Bioresources Cell Bank，JCRB)，目錄號IF050480)。在FCM分析中，利用0.25%胰蛋白酶-EDTA (Nacalai Tesque)收集Fn14表現細胞，用PBS洗滌且再懸浮於SM (染色培養基：含有2% FBS、1 mM EDTA、0.05%疊氮化鈉的PBS)中。接著以每孔1×105 個細胞將細胞接種於96孔盤中。添加融合瘤上清液或純化抗體(1 µg/mL最終濃度)且在4℃下培育細胞60分鐘。細胞接著用SM洗滌，再懸浮於山羊F(ab')2抗小鼠IgG-PE (Southern Biotech Inc.)中，在SM中1:500稀釋且在4℃下培育60分鐘。細胞用SM洗滌且最後再懸浮於50 μL SM中。藉由FCM (BD Biosciences, FACS CantoII)量測螢光強度且利用FlowJo軟體(Tomy Digital Biology Co., Ltd.)分析資料。
更特定言之，相較於經空載體轉染的陰性對照細胞，表現小鼠與人類Fn14之細胞與KO41c、KO42d及KO43b上清液一起培育之後，展現螢光強度發生位移(參見圖1)。此結果指示Fn14 KO小鼠源單株抗體結合至小鼠與人類Fn14。
在此等分析中評估以下抗Fn14抗體：市售單株抗體ITEM-1、ITEM-4 (參見Nakayama M.等人, 2003, J. Immunol. 170: 341-348)、Fn14 KO小鼠源單株抗體KO41c、KO42d及KO43b，以及Balb/c源單株抗體17A3、24A8、6A5及35A2。來源於Fn14 KO小鼠的抗體(KO41c、KO42d及KO43b)結合至人類及小鼠Fn14，以及大鼠Fn14 (KO43b未測試)(參見圖1及圖2A及2B)。來源於BALB/c小鼠的抗體能夠結合人類Fn14，而非大鼠Fn14 (參見圖2A及2B)。Fn14 特異性融合瘤 TWEAK 中和篩選分析
經純化之Fn14抗體的生物活性係藉由篩選其中和Fn14介導細胞凋亡之TNF樣弱誘導因子(TWEAK)誘導CCL2表現的能力來評估。藉由即時PCR量測Fn14抗體減弱TWEAKR誘導HK2及NRK-52E細胞中之CCL2基因表現的能力。收集HK2細胞或NRK-52E細胞且且以每孔2×105 個細胞接種至24孔細胞培養微量盤中，接著與30 ng/mL人類TWEAK (hTWEAK)(R&D Systems，目錄號1090-TW-025)及10 μg/mL經純化之候選小鼠抗體一起在37℃與5% CO2 下培育。培育6小時之後，移除培養基且使用RNeasy小型套組及QIA切碎機(QIAGEN)提取總RNA。接著，使用PrimeScrip RT預混液(Takara-bio)將RNA逆轉錄。為了定量CCL2表現，使用所製備之cDNA及用於人類及大鼠CCL2基因之特異性引子進行即時PCR。引子組(人類CCL2、大鼠CCL2、人類GAPDH及大鼠GAPDH)係購自Takara-bio的完美即時引子支持系統(Perfect Real Time Primer Support System)。使用SYBR預混物Ex Taq II (Takara-bio)及7900HT快速即時PCR系統(Applied Biosystems)進行實驗。CCL2表現資料相對於GAPDH表現歸一化。
在人類腎臟HK2細胞中，候選Fn14抗體17A3、20B2、24A8、KO41c及KO42d藉由減少hTWEAK誘導CCL2表現來展示針對人類Fn14之拮抗劑活性(圖3A)。另一方面，僅KO41c及KO42d展現針對大鼠腎臟NRK-52E細胞中之大鼠Fn14的拮抗劑活性(圖3B)。此結果與展示BALB/c源mAb不能結合大鼠Fn14之資料一致(參見圖2A及2B)。KO43b對HK2細胞不展現拮抗劑活性，且在使用HK2細胞的分析中未測試到6A5及35A2抗體的活性(市售Fn14抗體(ITEM4)用作陽性對照)。NRK - 52E 細胞中之 NF - κB 螢光素酶報導體篩選分析
NF-κB螢光素酶報導體篩選分析用於進一步評估候選Fn14單株抗體之拮抗劑活性。製備NK52E-A15/Luc細胞，其中大鼠腎源細胞株NRK-52E內源性表現Fn14。hTWEAK刺激此等細胞引起下游基因上調，諸如CCL2 (趨化因子C-C基元配位體2)及ICAM1 (細胞間黏附分子1，亦稱為CD54，分化叢集54)。鑒於NRK-52E細胞對TWEAK/Fn14接合有反應，增殖快速，且有利於產生穩定轉染體，因此選擇其產生NF-κB/螢光素酶報導體細胞株。使用FuGENE HD轉染劑(Roche)將pGL4.32 [luc2P/NFκB-RE/Hygro]載體(Promega)引入NRK-52E細胞中。三天後，以限制稀釋法將細胞接種於96孔盤的培養基(含有5% FBS的DMEM)中且將0.3 mg/mL潮黴素B (WAKO)添加至培養基中以獲得單一純系株系。hTWEAK或hTNFα刺激之後，獲得能夠產生螢光素酶的穩定株系(A15)。使用Steady-Glo螢光素酶分析系統(Promega)量測螢光素酶活性。簡言之，向各孔中添加100 μL受質溶液，混合，接著使用Veritas微量盤光度計(Promega)量測螢光素酶活性。配位體(hTWEAK或hTNFα，R & D Systems)以0.1、0.5、1、5、10、50及100 ng/mL之濃度添加至NRK52E-A15細胞中且在6小時之後量測螢光素酶活性。5 ng/mL的TWEAK刺激足以誘導S/B比率大於5的螢光素酶活性。
測試Fn14候選抗體中和NRK52E-A15/Luc細胞中之經hTWEAK刺激之NF-κB-螢光素酶活性的能力。含有NFκB-螢光素酶報導體之NRK52E-A15/Luc細胞用指定濃度(0-100 ng/mL)的hTWEAK或人類腫瘤壞死因子α (hTNFα)(已知活化NF-κB的刺激物)刺激。在光度計上量測的NF-κB-螢光素酶活性以每秒計數報導(Luc [cps])。結果表明，類似於TNFα，hTWEAK以劑量依賴型方式誘導NFκB活化(參見圖4A)。
細胞在指示濃度之經純化抗Fn14 mAb KO41c及KO42d或對照小鼠IgG1抗體(0 -50 µg/mL)存在下用hTWEAK (5 ng/mL)刺激(參見圖4B)。相較於mIgG1同型對照抗體(nega)，抗Fn14單株抗體KO41c及KO42d以劑量依賴性方式中和hTWEAK NF-κB活化(參見圖4B)。實例 2 - 小鼠抗體製備及序列分析 自融合瘤細胞選殖編碼抗 Fn14 抗體之 VH 及 VL 的基因
藉由對VH及VL基因進行測序來測定抗體可變區之核苷酸序列，該等基因係藉由5' RACE-PCR擴增自提取自純系融合瘤細胞之RNA分離。使用RNeasy小型套組(目錄號74104，QIAGEN, Hilden, Germany)及QIA切碎機(目錄號79654, QIAGEN, Hilden, Germany)，自1×106 個產生KO41c及KO42d抗體的融合瘤細胞製備總RNA。第一股cDNA係使用SMARTer RACE cDNA擴增套組(目錄號634859, Clontech, Mountain View, California)、使用1 μg總RNA (各融合瘤)合成。使用第一股cDNA作為模板，獲得各獨特VH及VL之cDNA序列。使用特異性針對小鼠IgG2a、小鼠IgG2b之引子與通用引子A (SMARTer® RACE cDNA擴增套組中所提供)的組合進行PCR，以擴增各抗體的VH cDNA片段。另外，使用特異性針對小鼠Ig(κ)之引子與通用引子A進行PCR，以便擴增各抗體的VL cDNA片段。隨後，對各PCR反應物進行凝膠電泳且使用QIAquick凝膠提取套組(目錄號28704, QIAGEN, Hilden, Germany)純化經擴增之片段。使用Zero Blunt TOPO PCR選殖套組(目錄號K280020, Life Technologies, Carlsbad, California)將所得基因片段中之每一者插入pCR4載體中。
將含有經擴增之可變基因核苷酸序列的所得質體引入大腸桿菌DH5α中用於擴增且在LB-瓊脂盤上使用適當抗生素選擇。隨後藉由在液體LB培養液中、在抗生素選擇下培養個別細菌純系而擴增DNA質體，且接著使用自動化質體分離器(Kurabo)提取質體。
各抗體純系之VH及VL的完整序列係藉由使用M13F/R引子對PCR獲得之各純系之多個質體的插入進行桑格測序來測定。每一者之共同核苷酸序列經測定為全長VH或VL cDNA (包括5'端之推定ATG起始密碼子)。由此等物推導出各別VH及VL胺基酸序列。可變區序列之分析
抗體KO41c及KO42d之完整VH核苷酸序列分別由SEQ ID NO: 31及41表示。由此等核苷酸序列推導出的完整胺基酸序列(包括信號序列)分別由SEQ ID NO: 32及42表示。抗體KO41c及KO42d之完整VL核苷酸序列分別由SEQ ID NO: 36及45表示。由此等核苷酸序列推導出的完整胺基酸序列(包括信號序列)分別由SEQ ID NO: 37及46表示。KO41c及KO42d之VH胺基酸序列(不包括信號序列)分別由SEQ ID NO: 35及44表示。KO41c及KO42d之VL胺基酸序列(不包括信號)分別由SEQ ID NO: 40及48表示(參見表15)。 表15. 抗體KO41c及KO42d之VH及VL核苷酸及胺基酸序列
描述 序列 (SEQ ID NO)
41C-VH (信號肽)(未進行密碼子最佳化) ATGGGATGGAGCTGGATCTTTCTCTTTCTCCTGTCAGAAACTGCAGGTGTCCTCTCTGAGGTCCAGCTGCAACAGTCTGGACCTGAGCTGGTGAAGCCTGGGGCTTCAGTGAAGATGTCCTGCAAGGCTTCTGGATACACATTCACTGACTACAACATGCACTGGGTGAAGCAGAGCCATGGAAAGAGCCTTGAATGGATTGGATATATTAACCCTAACAATGGTGGTACTAACTACAACCAGAAGTTCAAGGGCAAGGCCACATTGACTGTAAACAAGTCCTCCAGGTCAGCCTACATGGAGTTCCGCAGCCTGACATCGGAGGATTCTGCAGTCTATTACTGTGCCTCGTCGGGATGGTTTACTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTGCA (SEQ ID NO: 31)
41C-VH (具有信號肽) MGWSWIFLFLLSETAGVLSEVQLQQSGPELVKPGASVKMSCKASGYTFTDYNMHWVKQSHGKSLEWIGYINPNNGGTNYNQKFKGKATLTVNKSSRSAYMEFRSLTSEDSAVYYCASSGWFTYWGQGTLVTVSA (SEQ ID NO: 32)
41C-VH (無信號肽)(未進行密碼子最佳化) GAGGTCCAGCTGCTCCAGTCTGGACCTGAGCTGGTGAAGCCTGTGGCTTCAGTGAAGATGTCCTGCAAGGCTTCTGGATACACATTCACTGACTACAACATTCACTGGGTGAAGCAGAGCCATGGAAAGAGCCTTGAGTGGATTGGATATATTAACCCTAACAATGGTGTTACTGGCTACAACCAGAAGTTCAGGGGCAAGGCCACATTGACTGTTAACAGGTCCTCCAACACAGCCTACATGGACCTCCGCAGCCTGACATCGGAGGATTCTGCAGTCTATTACTGTACAAGACGCTATGGTGACTACGTCCATGCTATGGACTGCTGGGGTCAAGGAACCTCAGTCACCGTCTCCTCA (SEQ ID NO: 33)
41C-VL (無信號肽)(密碼子最佳化) GAAGTGCAGCTGCAGCAGTCTGGCCCCGAGCTCGTGAAACCTGGCGCCTCCGTGAAGATGTCCTGCAAGGCCTCCGGCTACACCTTCACCGACTACAACATGCACTGGGTCAAGCAGTCCCACGGCAAGTCCCTGGAATGGATCGGCTACATCAACCCCAACAACGGCGGCACCAACTACAACCAGAAGTTCAAGGGCAAGGCTACCCTGACCGTGAACAAGTCCTCCAGATCCGCCTACATGGAATTTCGGTCCCTGACCTCCGAGGACTCCGCCGTGTACTACTGCGCCTCCTCTGGCTGGTTCACCTACTGGGGCCAGGGCACCCTCGTGACCGTGTCTGCT (SEQ ID NO: 34)
41C-VH (無信號肽) EVQLQQSGPELVKPGASVKMSCKASGYTFTDYNMHWVKQSHGKSLEWIGYINPNNGGTNYNQKFKGKATLTVNKSSRSAYMEFRSLTSEDSAVYYCASSGWFTYWGQGTLVTVSA (SEQ ID NO: 35)
41C-VL (具有信號肽)(未進行密碼子最佳化) ATGATGAGTCCTGCCCAGTTCCTGTTTCTGTTAGTGCTCTGGATTCGGGAAACCAACGGTGATGTTGTGATGACCCAGACTCCACTCACTTTGTCGGTTGCCATTGGACAACCAGCCTCCATCTCTTGCAAGTCAAGTCAGAGCCTCTTAAATAGTGCTGGAAAGACATATTTGAATTGGTTGTTACAGAGGCCAGGCCAGTCTCCAAAGCGCCTAATTTATCTGGTGTCTCAACTGGACTCTGGAGTCCCTGACAGGTTCACTGGCAGTGGATCAGGGACAGATTTCACACTGAAAATCAGCAGAGTGGAGGCTGAGGATTTGGGAGTTTATTATTGCTGGCAAGGTACACATTTTCCGTGGACGTTCGGTGGAGGCACCAAGCTGGAAATCAAA (SEQ ID NO: 36)
41C-VL (具有信號肽) MMSPAQFLFLLVLWIRETNGDVVMTQTPLTLSVAIGQPASISCKSSQSLLNSAGKTYLNWLLQRPGQSPKRLIYLVSQLDSGVPDRFTGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCWQGTHFPWTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO: 37)
41C-VL (無信號肽)(未進行密碼子最佳化) GATGTTGTGATGACCCAGACTCCACTCACTTTGTCGGTTGCCATTGGACAACCAGCCTCCATCTCTTGCAAGTCAAGTCAGAGCCTCTTAAATAGTGCTGGAAAGACATATTTGAATTGGTTGTTACAGAGGCCAGGCCAGTCTCCAAAGCGCCTAATTTATCTGGTGTCTCAACTGGACTCTGGAGTCCCTGACAGGTTCACTGGCAGTGGATCAGGGACAGATTTCACACTGAAAATCAGCAGAGTGGAGGCTGAGGATTTGGGAGTTTATTATTGCTGGCAAGGTACACATTTTCCGTGGACGTTCGGTGGAGGCACCAAGCTGGAAATCAAA (SEQ ID NO: 38)
41C-VL (無信號肽)(密碼子最佳化) GACGTCGTGATGACCCAGACCCCCCTGACACTGTCTGTGGCCATCGGCCAGCCTGCCTCCATCTCCTGCAAGTCCTCCCAGTCCCTGCTGAACTCCGCCGGCAAGACCTACCTGAACTGGCTGCTGCAGCGGCCTGGCCAGTCCCCCAAGAGACTGATCTACCTGGTGTCCCAGCTGGACTCCGGCGTGCCCGATAGATTCACCGGCTCTGGCTCTGGCACCGACTTCACCCTGAAGATCAGCCGGGTGGAAGCCGAGGACCTGGGCGTGTACTACTGCTGGCAGGGCACCCACTTCCCTTGGACCTTTGGCGGAGGCACCAAGCTGGAAATCAAG (SEQ ID NO: 39)
41C-VL (無信號肽) DVVMTQTPLTLSVAIGQPASISCKSSQSLLNSAGKTYLNWLLQRPGQSPKRLIYLVSQLDSGVPDRFTGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCWQGTHFPWTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO: 40)
42d-VH (具有信號肽) ATGGGATGGAGCTGGATCTTTCTCTTTCTCCTGTCAGAAACTGCAGGTGTCCTCTCTGAGGTCCAGCTGCTCCAGTCTGGACCTGAGCTGGTGAAGCCTGTGGCTTCAGTGAAGATGTCCTGCAAGGCTTCTGGATACACATTCACTGACTACAACATTCACTGGGTGAAGCAGAGCCATGGAAAGAGCCTTGAGTGGATTGGATATATTAACCCTAACAATGGTGTTACTGGCTACAACCAGAAGTTCAGGGGCAAGGCCACATTGACTGTTAACAGGTCCTCCAACACAGCCTACATGGACCTCCGCAGCCTGACATCGGAGGATTCTGCAGTCTATTACTGTACAAGACGCTATGGTGACTACGTCCATGCTATGGACTGCTGGGGTCAAGGAACCTCAGTCACCGTCTCCTCA (SEQ ID NO: 41)
42d-VH (具有信號肽) MGWSWIFLFLLSETAGVLSEVQLLQSGPELVKPVASVKMSCKASGYTFTDYNIHWVKQSHGKSLEWIGYINPNNGVTGYNQKFRGKATLTVNRSSNTAYMDLRSLTSEDSAVYYCTRRYGDYVHAMDCWGQGTSVTVSS (SEQ ID NO: 42)
42d-VH (無信號肽) GAGGTCCAGCTGCTCCAGTCTGGACCTGAGCTGGTGAAGCCTGTGGCTTCAGTGAAGATGTCCTGCAAGGCTTCTGGATACACATTCACTGACTACAACATTCACTGGGTGAAGCAGAGCCATGGAAAGAGCCTTGAGTGGATTGGATATATTAACCCTAACAATGGTGTTACTGGCTACAACCAGAAGTTCAGGGGCAAGGCCACATTGACTGTTAACAGGTCCTCCAACACAGCCTACATGGACCTCCGCAGCCTGACATCGGAGGATTCTGCAGTCTATTACTGTACAAGACGCTATGGTGACTACGTCCATGCTATGGACTGCTGGGGTCAAGGAACCTCAGTCACCGTCTCCTCA (SEQ ID NO: 43)
42d-VH (無信號肽) EVQLLQSGPELVKPVASVKMSCKASGYTFTDYNIHWVKQSHGKSLEWIGYINPNNGVTGYNQKFRGKATLTVNRSSNTAYMDLRSLTSEDSAVYYCTRRYGDYVHAMDCWGQGTSVTVSS (SEQ ID NO: 44)
42d-VL (具有信號肽) ATGGACATGAGGGCTCCTGCACAGATTTTTGGCTTCTTGTTGCTCTTGTTTCCAGGTACCAGATGTGACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCTTATCTGCCTCTCTGGGAGAAAGAGTCAGTCTCACTTGTCGGGCAAGTCAGGACATTGGTAGTAGGTTAAACTGGCTTCAGCAGGAACCAGATGGAACTATTAAACGCCTGATCTACGCCACATCCAGTTTAGATTCTGGTGTCCCCAAAAGGTTCAGTGGCAGTAGGTCTGGGTCAGATTATTCTCTCACCATCAGCAGCCTTGAGTCTGAAGATTTTGTAGACTATTACTGTCTACAATATGCTAGTTCTCCGTACACATTCGGAGGGGGGACCAAGCTGGAAATAAAA (SEQ ID NO: 45)
42d-VL (具有信號肽) MDMRAPAQIFGFLLLLFPGTRCDIQMTQSPSSLSASLGERVSLTCRASQDIGSRLNWLQQEPDGTIKRLIYATSSLDSGVPKRFSGSRSGSDYSLTISSLESEDFVDYYCLQYASSPYTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO: 46)
42d-VL (無信號肽) GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCTTATCTGCCTCTCTGGGAGAAAGAGTCAGTCTCACTTGTCGGGCAAGTCAGGACATTGGTAGTAGGTTAAACTGGCTTCAGCAGGAACCAGATGGAACTATTAAACGCCTGATCTACGCCACATCCAGTTTAGATTCTGGTGTCCCCAAAAGGTTCAGTGGCAGTAGGTCTGGGTCAGATTATTCTCTCACCATCAGCAGCCTTGAGTCTGAAGATTTTGTAGACTATTACTGTCTACAATATGCTAGTTCTCCGTACACATTCGGAGGGGGGACCAAGCTGGAAATAAAA (SEQ ID NO: 47)
42d-VL (無信號肽) DIQMTQSPSSLSASLGERVSLTCRASQDIGSRLNWLQQEPDGTIKRLIYATSSLDSGVPKRFSGSRSGSDYSLTISSLESEDFVDYYCLQYASSPYTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO: 48)
相較於小鼠抗體之已知序列資料(參見Sequences of Proteins of Immunological Interest，美國健康及人類服務部(US Dept. Health and Human Services)(1991))，發現經分離之cDNA為包括分泌信號序列的全長cDNA，其分別編碼KO41c抗體及KO42d抗體。藉由與已知抗體胺基酸序列比較來鑑別各單株抗體之VH及VL CDR。使用Kabat定義(參見Kabat等人(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest ，第五版，美國健康人類服務部，NIH公告第91-3242號)界定互補決定區(CDR)，但其中VH CDR1 (亦稱為HCDR1或CDR H1)除外，其改用Cho (Chothia及Lesk, 1987,J . Mol . Biol . 196:901-17)與Kabat定義之組合。特定言之，使用Chothia定義HCDR1的胺基端，同時藉由Kabat定義羧基端，且包括彼等邊界之間的所有胺基酸。
來自KO41c VH之HCDR1、HCDR2及HCDR3之胺基酸序列分別由SEQ ID NO: 119、120及121表示。來自KO41c VL之LCDR1、LCDR2及LCDR3之胺基酸序列分別由SEQ ID NO: 127、128及129表示。來自KO42d VH之VH CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列分別由SEQ ID NO: 113、114及115表示。來自KO42d VL之CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列分別由SEQ ID NO: 116、117及118表示。41c及41d抗體之VH、VL及CDR胺基酸序列概述於下表16中。 表16. KO41c及KO42d之VH、VL及CDR胺基酸序列
   KO41c (41c) KO42d (42d)
VH EVQLQQSGPELVKPGASVKMSCKASGYTFTDYNMHWVKQSHGKSLEWIGYINPNNGGTNYNQKFKGKATLTVNKSSRSAYMEFRSLTSEDSAVYYCASSGWFTYWGQGTLVTVSA (SEQ ID NO: 35) EVQLLQSGPELVKPVASVKMSCKASGYTFTDYNIHWVKQSHGKSLEWIGYINPNNGVTGYNQKFRGKATLTVNRSSNTAYMDLRSLTSEDSAVYYCTRRYGDYVHAMDCWGQGTSVTVSS (SEQ ID NO: 44)
HCDR1 GYTFTDYNMH (SEQ ID NO: 119) GYTFTDYNIH (SEQ ID NO: 113)
HCDR2 YINPNNGGTNYNQKFKG (SEQ ID NO: 120) YINPNNGVTGYNQKFRG (SEQ ID NO: 114)
HCDR3 SGWFTY (SEQ ID NO: 121) RYGDYVHAMDC (SEQ ID NO: 115)
VL DVVMTQTPLTLSVAIGQPASISCKSSQSLLNSAGKTYLNWLLQRPGQSPKRLIYLVSQLDSGVPDRFTGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCWQGTHFPWTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO: 40) DIQMTQSPSSLSASLGERVSLTCRASQDIGSRLNWLQQEPDGTIKRLIYATSSLDSGVPKRFSGSRSGSDYSLTISSLESEDFVDYYCLQYASSPYTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO: 48)
LCDR1 KSSQSLLNSAGKTYLN (SEQ ID NO: 127) RASQDIGSRLN (SEQ ID NO: 116)
LCDR2 LVSQLDS (SEQ ID NO: 128) ATSSLDS (SEQ ID NO: 117)
LCDR3 WQGTHFPWT (SEQ ID NO: 129) LQYASSPYT (SEQ ID NO: 118)
選殖抗體表現載體
使抗體純系KO41c (41c)再形成重組小鼠IgG1 (D265A) κ抗體。使用添加5'及3'側接DNA的引子、藉由PCR擴增編碼純系41c之信號肽及VH區的DNA (核苷酸SEQ ID NO:31中所示)，該側接DNA適於與編碼小鼠IgG1鏈恆定區的DNA (載有已知減少IgG Fc結合至FcγR的D265A突變)同框插入哺乳動物表現載體中(Baudino等人, J Immunol, 2008,181(9):6664)。編碼信號肽及41c VL的DNA (核苷酸SEQ ID NO: 36中所示)以類似方式與編碼小鼠κ恆定序列(核苷酸SEQ ID NO: 23中所示)同框插入哺乳動物表現載體中。具有信號肽之41c VH之胺基酸序列展示於SEQ ID NO: 32中，不具有信號序列之41c VH胺基酸序列展示於SEQ ID NO: 35中。具有信號肽之41c VL之胺基酸序列展示於SEQ ID NO: 37中，不具有信號序列之41c VL胺基酸序列展示於SEQ ID NO: 40中。完整成熟41c mIgG1 (D265A)、κ抗體重鏈及輕鏈之胺基酸序列分別由VH SEQ ID NO: 35與IgG恆定SEQ ID NO: 26之級聯及VL SEQ ID NO: 40與κ恆定SEQ ID NO: 24之級聯表示。
用於產生各種重組小鼠IgG1 (D265A)、κ抗體的其他抗體表現載體係使用熟習此項技術者已知之類似標準方法產生，但分別使用通用小鼠IgG或κ信號序列用於重鏈或輕鏈表現。舉例而言，使用引子、藉由擴增編碼41c可變重鏈(VH)之cDNA來產生具有外源信號肽之41c之小鼠IgG1 (D265A)重鏈表現載體，該等引子添加5'及3'重疊序列以便以連接酶非依賴性方式選殖入哺乳動物表現載體pTC26-spmIgG1 (D265A)(Kyowa Hakko Kirin)或pcDNA3.4 spmIgG1 (D265A)(自pcDNA3.4修改，Life Technologies/Invitrogen, Carlsbad California)，該哺乳動物表現載體用限制性核酸內切酶SfoI及NruI消化(新英格蘭生物實驗室(New England Biolabs), Ipswich, Massachusetts)。使用無縫選殖及組裝酶混合物(目錄號A14606, Life Technologies/Invitrogen/GeneArt, Carlsbad, California)，根據製造商說明書，VH cDNA當插入經消化的載體中時，在框內介於編碼小鼠IgG信號肽之5'序列與編碼小鼠IgG1 (D265A)恆定域之3'序列之間(核苷酸SEQ ID NO: 25及胺基酸SEQ ID NO: 26所示)。
類似地，使用引子、藉由擴增編碼41c可變輕鏈(VL)之cDNA來產生41c之小鼠κ輕鏈表現載體，該等引子添加5'及3'重疊序列以便以連接酶非依賴性方式選殖入哺乳動物表現載體pTC26-spmK (Kyowa Hakko Kirin)或pcDNA3.4-spmK (自pcDNA3.4修改，Life Technologies/Invitrogen, Carlsbad, California)，用限制性核酸內切酶SfoI及NruI (新英格蘭生物實驗室)消化。根據製造商說明書，使用無縫選殖及組裝酶混合物(目錄號A14606, Life Technologies/Invitrogen/GeneArt, Carlsbad, California)，VL cDNA當插入經消化的載體中時，在框內介於編碼小鼠κ信號肽之5'序列與編碼小鼠κ恆定域之3'序列之間(編碼胺基酸SEQ ID NO: 24的核苷酸SEQ ID NO: 23)。
此方法的執行方式就以小鼠IgG1(D265A) κ形式表現的所有其他抗體純系而言均相同。以此方式，由編碼CRCBT-06-002 (US2013/0273036 A1中所述)之VH及VL序列的合成cDNA產生抗Fn14抗體純系CRCBT-06-002 (CRCBT)的表現載體(由Invitrogen/GeneArt, Regensburg, Germany執行)，該等表現載體接著用作PCR模板且以上述相同方式次選殖入小鼠IgG1(D265A) κ表現載體中。藉由桑格測序來驗證所有質體序列。
上述特定恆定域序列列舉如下：小鼠 IgG1 ( D265A ) 恆定域核苷酸序列 ：
Figure 02_image017
Figure 02_image019
小鼠 IgG1 ( D265A ) 恆定域胺基酸序列
Figure 02_image021
小鼠 κ 恆定域核苷酸序列 ：
Figure 02_image023
小鼠 κ 恆定域胺基酸序列 ：
Figure 02_image025
實例 3 - 自哺乳動物細胞產生及純化重組抗體及蛋白質
哺乳動物細胞產生重組抗體係使用Freestyle293、Expi293或ExpiCHO短暫表現系統(分別為目錄號s K900001、A14635及A29133，Life Technologies/Invitrogen, Carlsbad, California)進行。用於重鏈及輕鏈的獨立哺乳動物表現載體分別以一比一或一比三比率組合，且使用製造商手冊中所述的方法轉染。轉染之後的第五至十天，收集培養基且藉由離心澄清，隨後進行0.22微米過濾(諸如目錄號S2GPU05RE, Stericup®過濾單元, EMD Millipore, Bedford, Massachusetts)。
使用Freestyle293或Expi293短暫表現系統(分別為目錄號s K900001及A14635，Invitrogen, Carlsbad, California)，依循製造商手冊中所述的方法來產生所有Fn14-GST及His-SUMO-Fn14重組蛋白，隨後如上所述澄清含有蛋白質的條件培養基，隨後純化或直接用於分析。抗體純化
使用重組MabSelect SuRe蛋白質A親和樹脂(GE Healthcare Life Sciences, Pittsburgh, PA)自培養基純化重組小鼠單株抗體。條件培養基經0.22 µm真空過濾器單元(Millipore, Bedford, ΜΑ)過濾且裝載至HiTrap MabSelect SuRe管柱(GE Healthcare Life Sciences, Pittsburgh, PA)上，該管柱具有適當容量以與培養基中的抗體含量匹配。管柱用6倍管柱體積的PBS pH 7.4 (Sigma Aldrich粉末袋)徹底洗滌，抗體用0.1 Μ Gly-HCl、0.15 M NaCl pH 3.6溶離且用1Μ Tris-HCl pH 8.0中和。藉由SDS-PAGE分析溶離份且混合陽性溶離份且相對於PBS pH 7.4 (Sigma Aldrich粉末袋)透析。透析之後，用離心過濾濃縮器(Vivaspin，30,000 MWCO: Sartorius, Goettingen, Germany)濃縮抗體樣品。最後，使用具有0.22 µm孔徑之針筒過濾器對抗體進行過濾滅菌且藉由洛瑞方法(Lowry method)測定抗體濃度。使用FDA特許之Endosafe-PTS鱟變形細胞溶菌液(Limulus Amebocyte Lysate；LAL)分析法(查爾斯河實驗室)測定熱原質含量。此分析法之偵測極限為1-0.01 EU/mL之內毒素。若測試為陰性，則認為樣品不含內毒素。組胺酸標記之 ( His 標籤 ) 蛋白質純化
His標籤蛋白質係使用若干不同方法純化，此視特定蛋白質而定。舉例而言，His標記的SUMO-Fn14重組蛋白係使用固著化金屬離子親和層析法(IMAC)(GE Healthcare，目錄號17524701)純化。使用HisTrap HP親和管柱(預裝有鎳離子(Ni2+)的瓊脂糖鎳高效能培養基)(GE Healthcare Life Sciences, Pittsburgh, PA)自培養基純化其他經His標記的重組人類蛋白質。條件培養基(培養上清液)用20 mM Tris-HCl pH 8.0、0.5 M NaCl緩衝液稀釋且用0.22 µm真空過濾器單元(Millipore, Bedford, ΜΑ)過濾。在即將純化之前添加20 mM咪唑及1 mM DTT (最終濃度)。將樣品裝載至用20 mM Tris-HCl pH 8.0、0.5 M NaCl、20 mM咪唑平衡之5 mL HisTrap HP管柱(GE Healthcare Life Sciences, Pittsburgh, PA)上。裝載樣品時，用6倍管柱體積(CV)的20 mM Tris-HCl pH 8.0、0.5 M NaCl、20 mM咪唑徹底洗滌管柱。蛋白質用25倍管柱體積的20 mM-600 mM咪唑梯度溶離，且用5 mM EDTA及5 mM DTT (最終濃度)中和。藉由SDS-PAGE分析溶離份且混合陽性溶離份且相對於PBS pH 7.4 (Sigma Aldrich粉末袋)透析。透析之後，用離心過濾濃縮器(Vivaspin 30,000 MWCO: Sartorius, Goettingen, Germany)濃縮蛋白質樣品。最後，使用具有0.22 µm孔徑之針筒過濾器對蛋白質進行過濾滅菌，且使用洛瑞方法測定蛋白質濃度。使用FDA特許之Endosafe-PTS鱟變形細胞溶菌液(LAL)分析法(查爾斯河實驗室)測定熱原質含量。此分析法之偵測極限為1-0.01 EU/mL之內毒素。若測試為陰性，則認為樣品不含內毒素。實例 4 - 41C 之親和力成熟
41c純系經由噬菌體呈現(Smith, G.P.,Science , 1985, 228(4705):1315-7)及淘選41c Fab之隨機突變庫進行親和力成熟。此工作由Abwiz Bio (San Diego, California)執行。為此目的，產生41c Fab的四個獨立噬菌質體庫，其各自具有在目標CDR內之選定胺基酸位置發生隨機突變的單一互補決定區(CDR)：重鏈CDR1 (HCDR1)、重鏈CDR2 (HCDR2)、重鏈CDR3 (HCDR3)或輕鏈CDR3 (LCDR3)。藉由淘選與固相培養基結合之重組His-SUMO-Fn14蛋白質來篩選由此等庫產生的噬菌體。富集高親和力41c變異體且選擇抗原結合增強的純系。
特定言之，藉由將編碼41c VH及VL之合成DNA片段依序與小鼠IgG1重鏈恆定域1 (CH1)及κ恆定域之DNA分別同框插入Abwiz的專有噬菌粒中來產生用於噬菌體表面表現41c Fab的噬菌粒。構築突變庫之前，藉由將終止密碼子同框插入四個目標CDR (HCDR1、HCDR2、HCDR3或LCDR3)之一來產生四個獨立噬菌粒用作獨立庫模板，其各根據該庫中之突變所靶向的CDR。執行此係為了排除未突變的噬菌粒以防主導庫，原因為突變過程效率低。使用終止密碼子經修飾(含有去氧尿嘧啶的單股DNA)的dU-ssDNA噬菌粒模板，使用Kunkel誘變方法(Kunkel, T.A., Proc Natl Acad Sci U S A, 1985, 82(2):488-92)產生四種隨機突變CDR庫中之每一者，且寡核苷酸在各庫之各別目標CDR內的選定胺基酸基因座處隨機突變。所靶向之胺基酸基因座的數目侷限於每個CDR五個以限制總體理論多樣性，且確保每種純系在選擇期間均存在於噬菌體池中。選擇以隨機突變為目標之胺基酸位置係基於對41c序列與生殖系之相似性的分析、基於生物信息學對具有相似序列之抗體的比較。為了使隨機化CDR庫之多樣性最大化，在各突變CDR位置使用NNK密碼子。NNK密碼子(其中各字母表示三磷酸去氧核苷之混合物，N = 腺苷(A)/胞苷(C)/鳥苷(G)/胸苷(T)，且K = G/T)為編碼20種標準胺基酸中之任一者之32種密碼子的隨機化混合物。作為Kunkel誘變之第一步驟，使CDR中含有終止密碼子之四個41c噬菌粒分別在大腸桿菌菌株CJ236中轉型。作為各庫模板，噬菌體係由CJ236細胞產生，且dU-ssDNA係自噬菌體純化。使基於以上原理設計之隨機化寡核苷酸池與各庫的dU-ssDNA模板黏接，隨後藉由DNA聚合酶合成互補股且接合以產生共價閉合環狀DNA庫(CCC-DNA)。藉由對來自經庫轉型之大腸桿菌的24個獨特菌落測序來評估價庫品質。各庫含有72%與85%之間的重組非親本開放閱讀框架。用於各庫之表現Fab之噬菌體接著由經轉型的大腸桿菌ER2738細胞產生。各庫的多樣性在5.3E+08與1.4E+09之間，經計算為理論庫多樣性的16-42倍。
接著根據對經His-SUMO-Fn14蛋白質塗佈的培養盤的結合來「淘選」各噬菌體庫。保持結合至經Fn14塗佈之培養盤的噬菌體用酸溶離且藉由感染大腸桿菌來繁殖，此繁殖又產生更多噬菌體用於下一輪淘選。此方法針對經減量之His-SUMO-Fn14蛋白質塗佈的培養盤重複三次，且洗滌次數增加，以便選擇表現較高親和力41c變異體的噬菌體。每一輪藉由ELISA篩選出特異性結合至His-SUMO-Fn14的噬菌體，且逆向篩選出非特異性結合至單獨His-SUMO蛋白質或牛血清白蛋白(BSA)的噬菌體。每一輪產生噬菌體池，其中His-SUMO-Fn14特異性結合的ELISA信號增強，但非Fn14蛋白質的ELISA信號很少或沒有。
使用得自四輪淘選之噬菌體感染大腸桿菌，且對來自個別群落之抗體可變區進行測序。根據親和力成熟的第一次嘗試，分析第四輪噬菌體的測序資料表明HCDR1、HCDR2及LCDR3庫含有其各別突變CDR內之多種不同序列，而HCDR3庫含有親本或幾乎親本之序列。
定量經測序之噬菌粒感染細菌上清液中的Fab之後，量測各Fab對抗原的相對結合親和力。釋放至上清液中之Fab蛋白質的量藉由ELISA定量，且藉由ELISA、藉由在His-SUMO-Fn14塗佈的盤上滴定來量測各Fab對抗原的相對結合親和力。在同一ELISA盤上的平行分析中，比較Fab純系對Fn14的結合與親本41c Fab的結合。雖然許多純系對His-SUMO-Fn14展示的結合近似等效於親本41c Fab，但該等純系中無一者相對於親本41c展現增強的結合。
第二次嘗試為自四個先前篩選之庫產生單一較高多樣性庫以自隨機化庫中找到較高親和力41c Fab。此新雜合體庫如下產生：使用重疊PCR、使用重疊PCR VH庫將三個先前淘選之個別VH庫HCDR1、HCDR2及HCDR3 (得自第3輪或第4輪淘選)中之每一者的隨機化CDR部分組合成單一雜合體。藉由PCR個別地擴增得自三個經淘選之VH庫中之每一者的隨機化CDR以及一些側接構架。接著將得自所有三者的純化PCR產物合併成單一重疊PCR反應物，從而使所有隨機化CDR融合成所有三個CDR均隨機化的單一VH庫。將此雜合體VH庫DNA次選殖入得自第三輪淘選的LCDR3輕鏈庫。四個CDR (HCDR1、HCDR2、HCDR3及LCDR3)隨機化的所得庫用於產生新噬菌體，隨後並行使用多種高嚴格度洗滌條件、根據Fn14結合進行淘選。使庫噬菌體在37℃下暴露於經高(100 pM)或低(10 pM)濃度之His-SUMO-Fn14塗佈之盤1.5小時，隨後將盤洗滌十次。接著在添加或不添加0.5 µM可溶性His-SUMO-Fn14蛋白質的情況下，將盤在洗滌緩衝液中、在37℃下培育4或18小時。最後洗滌之後，將盤結合的噬菌體溶離且如前所述繁殖。使所得經淘選的庫噬菌體暴露於相同淘選方法兩次以上。
最後淘選之後剩餘的噬菌體藉由限制稀釋法選殖且擴增。此第二次嘗試分離出經第二輪或第三輪淘選之噬菌體感染的許多大腸桿菌純系。
藉由淘選與固相培養基結合之重組His-SUMO-Fn14蛋白質來篩選由此等庫產生的噬菌體。富集高親和力41c變異體且選擇抗原結合增強的純系。親和力成熟 Fab 純系的選擇
篩選出對Fn14之親和力高於親本41c的親和力成熟Fab純系。藉由ELISA分析自個別純系分泌的Fab對Fn14塗佈之盤的結合滴定。為比較純系，定量各純系之Fab蛋白且如先前所述進行兩次重複抗原結合ELISA滴定。然而，一個盤使用標準洗滌條件洗滌，而重複盤用更嚴格的1.5小時洗滌步驟洗滌，在37℃培育。藉由比較此等抗原結合ELISA中之每一者中之相對信號對Fab純系進行排序，在約1 nM Fab下量測。選擇結合類似於或大於重組親本41c Fab之結合的十個Fab純系用於進一步分析。
自噬菌體感染之大腸桿菌提取重組Fab蛋白質且藉由桑格測序測定相應VH及VL (資料未展示)。藉由信號電漿子共振(SPR)分析含有來自此等十種純系之Fab之粗製細菌上清液在His-SUMO-Fn14塗佈之晶片上的相對解離速率(Kd)(資料未展示)。使最高七者再形成完整的小鼠IgG1(D265A) κ抗體，由哺乳動物細胞表現且純化。親和力成熟純系 R35B9 的選擇
分析所選抗體之生物物理學特性、結合親和力(在Biacore中)及活性(在活體外拮抗劑及促效劑功能分析中)。基於生物物理學特性、對hFn14之親和力增加(參見表8及9以及圖5及6)及在基於細胞之活體外分析中的效能(參見圖10及圖11A、11B及11C)，選擇純系R35B9作為41c之主要親和力成熟形式且用於產生VH及VL變異體，如下文實例13中更詳細地論述。
純系R35B9之VH及VL胺基酸序列分別展示於SEQ ID NO 50及52中(參見下表18)。比較完整小鼠IgG1(D265A)、κ R35B9抗體與親本純系41c及抗Fn14抗體CRCBT-06-002，以評估其對Fn14的親和力及其在基於細胞之活體外分析中的效能。
純系R35B9的抗體產生及序列分析如上述實例2及3中所述執行。
R35B9之VH、VL及CDR的胺基酸序列概述於下表18中。 表18. R35B9之VH、VL及CDR的胺基酸序列
VH EVQLQQSGPELVKPGASVKMSCKASGYIFQDYNMHWVKQSHGKSLEWIGSINPRNGWTNYNQKFKGKATLTVNKSSRSAYMEFRSLTSEDSAVYYCASSGWFTYWGQGTLVTVSA (SEQ ID NO: 50) VL DVVMTQTPLTLSVAIGQPASISCKSSQSLLNSAGKTYLNWLLQRPGQSPKRLIYLVSQLDSGVPDRFTGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCWQGTFYPWTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO: 52)
HCDR1 GYIFQDYNMH (SEQ ID NO: 122) LCDR1 KSSQSLLNSAGKTYLN (SEQ ID NO: 127)
HCDR2 SINPRNGWTNYNQKFKG (SEQ ID NO: 123) LCDR2 LVSQLDS (SEQ ID NO: 128)
HCDR3 SGWFTY (SEQ ID NO: 121) LCDR3 WQGTFYPWT (SEQ ID NO: 130)
親本41c抗體與親和力成熟純系R35B9的比較如下表19。如所示，親和力成熟已產生兩種純系之間不同的五種VH胺基酸：T28I、T30Q、Y50S、N54R、G57W (在HCDR1及HCDR2中)，及兩種VL胺基酸變化：H98F及F99Y (在LCDR3中)。 表19. 41c與R35B9的比較
名稱 目的 重鏈載體ID 輕鏈載體ID HCDR1 HCDR2 LCDR3
41c  (小鼠) 親本 A291 A290 --T-T----- Y---N--G--------- ----HF---
R35B9 (小鼠) 親和力成熟 A402 A403 --I-Q----- S---R--W--------- ----FY---
實例 5 - 產生 R35B9 變異體
藉由使用熟習此項技術者已知之重疊PCR方法使cDNA在特定密碼子發生突變來產生R35B9 VH及VL胺基酸序列變異體。簡言之，使用含有所需密碼子取代的引子、藉由重疊PCR來擴增可變區cDNA。如先前所述，將突變的可變序列選殖入用於所需同型之抗體表現載體中。在兩種純系之間不同的七(7)個胺基酸基因座中之每一者處，藉由個別地或組合地在41c中發現之胺基酸特性與R35B9中發現之胺基酸特性之間切換來設計此等變異體。R35B9特異性胺基酸包含位置28之VH胺基酸異白胺酸(Iso28)、位置30之麩醯胺酸(Gln30)、位置50之絲胺酸(Ser50)、位置54之精胺酸(Arg54)及位置57之色胺酸(Trp57)，及位置98之VL胺基酸苯丙胺酸(Phe98)及位置99之酪胺酸(Tyr99)。
R35B9及其變異體之VH及VL核苷酸及胺基酸序列展示於下表20中。 表20. R35B9 VH及VL及變異體之核苷酸及胺基酸序列。
描述 序列 (SEQ ID NO)
R35B9-VH GAGGTGCAGCTGCAGCAAAGCGGCCCGGAGCTGGTGAAACCGGGTGCGAGCGTTAAAATGAGCTGCAAGGCGAGCGGTTACATTTTTCAGGATTATAATATGCATTGGGTTAAACAGAGCCACGGTAAAAGCCTGGAGTGGATCGGCTCTATTAATCCGCGTAATGGTTGGACCAACTATAACCAAAAGTTCAAAGGCAAGGCGACCCTGACCGTGAACAAGAGCAGCCGTAGCGCGTACATGGAGTTTCGTAGCCTGACCAGCGAAGATAGCGCGGTTTACTATTGCGCGTCTTCGGGGTGGTTCACGTATTGGGGTCAAGGCACCCTGGTGACCGTTAGCGCG (SEQ ID NO: 49)
R35B9-VH EVQLQQSGPELVKPGASVKMSCKASGYIFQDYNMHWVKQSHGKSLEWIGSINPRNGWTNYNQKFKGKATLTVNKSSRSAYMEFRSLTSEDSAVYYCASSGWFTYWGQGTLVTVSA (SEQ ID NO: 50)
R35B9-VL GACGTGGTTATGACCCAAACCCCGCTGACCCTGAGCGTGGCGATTGGTCAGCCGGCGAGCATTAGCTGCAAGAGCAGCCAAAGCCTGCTGAACAGCGCGGGTAAAACCTACCTGAACTGGCTGCTGCAGCGTCCGGGTCAAAGCCCGAAGCGTCTGATCTATCTGGTGAGCCAGCTGGACAGCGGTGTGCCGGACCGTTTCACCGGTAGCGGTAGCGGCACCGACTTTACCCTGAAAATTAGCCGTGTGGAGGCGGAAGATCTGGGTGTTTACTATTGCTGGCAAGGTACTTTTTATCCGTGGACCTTTGGTGGCGGTACCAAGCTGGAGATCAAA (SEQ ID NO: 51)
R35B9-VL DVVMTQTPLTLSVAIGQPASISCKSSQSLLNSAGKTYLNWLLQRPGQSPKRLIYLVSQLDSGVPDRFTGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCWQGTFYPWTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO: 52)
R35B9(Y50G57)-VH GAGGTGCAGCTGCAGCAAAGCGGCCCGGAGCTGGTGAAACCGGGTGCGAGCGTTAAAATGAGCTGCAAGGCGAGCGGTTACATTTTTCAGGATTATAATATGCATTGGGTTAAACAGAGCCACGGTAAAAGCCTGGAGTGGATCGGCTaTATTAATCCGCGTAATGGTgGGACCAACTATAACCAAAAGTTCAAAGGCAAGGCGACCCTGACCGTGAACAAGAGCAGCCGTAGCGCGTACATGGAGTTTCGTAGCCTGACCAGCGAAGATAGCGCGGTTTACTATTGCGCGTCTTCGGGGTGGTTCACGTATTGGGGTCAAGGCACCCTGGTGACCGTTAGCGCG (SEQ ID NO: 53)
R35B9(Y50G57)-VH EVQLQQSGPELVKPGASVKMSCKASGYIFQDYNMHWVKQSHGKSLEWIGYINPRNGGTNYNQKFKGKATLTVNKSSRSAYMEFRSLTSEDSAVYYCASSGWFTYWGQGTLVTVSA (SEQ ID NO: 54)
R35B9(Y50A56G57)-VH GAGGTGCAGCTGCAGCAAAGCGGCCCGGAGCTGGTGAAACCGGGTGCGAGCGTTAAAATGAGCTGCAAGGCGAGCGGTTACATTTTTCAGGATTATAATATGCATTGGGTTAAACAGAGCCACGGTAAAAGCCTGGAGTGGATCGGCTaTATTAATCCGCGTAATgccGGGACCAACTATAACCAAAAGTTCAAAGGCAAGGCGACCCTGACCGTGAACAAGAGCAGCCGTAGCGCGTACATGGAGTTTCGTAGCCTGACCAGCGAAGATAGCGCGGTTTACTATTGCGCGTCTTCGGGGTGGTTCACGTATTGGGGTCAAGGCACCCTGGTGACCGTTAGCGCG (SEQ ID NO: 55)
R35B9(Y50A56G57)-VH EVQLQQSGPELVKPGASVKMSCKASGYIFQDYNMHWVKQSHGKSLEWIGYINPRNAGTNYNQKFKGKATLTVNKSSRSAYMEFRSLTSEDSAVYYCASSGWFTYWGQGTLVTVSA (SEQ ID NO: 56)
R35B9(H98)-VL GACGTGGTTATGACCCAAACCCCGCTGACCCTGAGCGTGGCGATTGGTCAGCCGGCGAGCATTAGCTGCAAGAGCAGCCAAAGCCTGCTGAACAGCGCGGGTAAAACCTACCTGAACTGGCTGCTGCAGCGTCCGGGTCAAAGCCCGAAGCGTCTGATCTATCTGGTGAGCCAGCTGGACAGCGGTGTGCCGGACCGTTTCACCGGTAGCGGTAGCGGCACCGACTTTACCCTGAAAATTAGCCGTGTGGAGGCGGAAGATCTGGGTGTTTACTATTGCTGGCAAGGTACTcaTTATCCGTGGACCTTTGGTGGCGGTACCAAGCTGGAGATCAAA (SEQ ID NO: 57)
R35B9(H98)-VL DVVMTQTPLTLSVAIGQPASISCKSSQSLLNSAGKTYLNWLLQRPGQSPKRLIYLVSQLDSGVPDRFTGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCWQGTHYPWTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO: 58)
R35B9(A56)-VH GAGGTGCAGCTGCAGCAAAGCGGCCCGGAGCTGGTGAAACCGGGTGCGAGCGTTAAAATGAGCTGCAAGGCGAGCGGTTACATTTTTCAGGATTATAATATGCATTGGGTTAAACAGAGCCACGGTAAAAGCCTGGAGTGGATCGGCTCTATTAATCCGCGTAATGcTTGGACCAACTATAACCAAAAGTTCAAAGGCAAGGCGACCCTGACCGTGAACAAGAGCAGCCGTAGCGCGTACATGGAGTTTCGTAGCCTGACCAGCGAAGATAGCGCGGTTTACTATTGCGCGTCTTCGGGGTGGTTCACGTATTGGGGTCAAGGCACCCTGGTGACCGTTAGCGCG (SEQ ID NO: 59)
R35B9(A56)-VH EVQLQQSGPELVKPGASVKMSCKASGYIFQDYNMHWVKQSHGKSLEWIGSINPRNAWTNYNQKFKGKATLTVNKSSRSAYMEFRSLTSEDSAVYYCASSGWFTYWGQGTLVTVSA (SEQ ID NO: 60)
R35B9(Y50)-VH GAGGTGCAGCTGCAGCAAAGCGGCCCGGAGCTGGTGAAACCGGGTGCGAGCGTTAAAATGAGCTGCAAGGCGAGCGGTTACATTTTTCAGGATTATAATATGCATTGGGTTAAACAGAGCCACGGTAAAAGCCTGGAGTGGATCGGCTaTATTAATCCGCGTAATGGTTGGACCAACTATAACCAAAAGTTCAAAGGCAAGGCGACCCTGACCGTGAACAAGAGCAGCCGTAGCGCGTACATGGAGTTTCGTAGCCTGACCAGCGAAGATAGCGCGGTTTACTATTGCGCGTCTTCGGGGTGGTTCACGTATTGGGGTCAAGGCACCCTGGTGACCGTTAGCGCG (SEQ ID NO: 180)
R35B9(Y50)-VH EVQLQQSGPELVKPGASVKMSCKASGYIFQDYNMHWVKQSHGKSLEWIGYINPRNGWTNYNQKFKGKATLTVNKSSRSAYMEFRSLTSEDSAVYYCASSGWFTYWGQGTLVTVSA (SEQ ID NO: 181)
R35B9(F99)-VL GACGTGGTTATGACCCAAACCCCGCTGACCCTGAGCGTGGCGATTGGTCAGCCGGCGAGCATTAGCTGCAAGAGCAGCCAAAGCCTGCTGAACAGCGCGGGTAAAACCTACCTGAACTGGCTGCTGCAGCGTCCGGGTCAAAGCCCGAAGCGTCTGATCTATCTGGTGAGCCAGCTGGACAGCGGTGTGCCGGACCGTTTCACCGGTAGCGGTAGCGGCACCGACTTTACCCTGAAAATTAGCCGTGTGGAGGCGGAAGATCTGGGTGTTTACTATTGCTGGCAAGGTACTTTTTtTCCGTGGACCTTTGGTGGCGGTACCAAGCTGGAGATCAAA (SEQ ID NO: 199)
R35B9(F99)-VL DVVMTQTPLTLSVAIGQPASISCKSSQSLLNSAGKTYLNWLLQRPGQSPKRLIYLVSQLDSGVPDRFTGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCWQGTFFPWTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO: 200)
R35B9及其變異體之VH、VL及CDR胺基酸序列亦概述於以下表1、表2及表3中(亦參見圖20、圖21及圖22)。完整的R35B9 VH序列展示於表1中(SEQ ID NO: 50)，且含有取代之HCDR1及HCDR2之胺基酸序列展示於表3中(分別為SEQ ID NO. 122及123)。完整的R35B9 VL序列展示於表1中(SEQ ID NO: 52)，且含有取代之LCDR3之胺基酸序列展示於表2中(SEQ ID NO: 130)。此等七種胺基酸中之每一者個別或組合地恢復為親本41c特性，特定言之，恢復為位置28之41c特異性VH胺基酸蘇胺酸(Thr28)、位置30之蘇胺酸(Thr30)、位置50之酪胺酸(Tyr50)、位置54之天冬醯胺(Asn54)或位置57之甘胺酸(Gly57)，或位置98之41c特異性VL胺基酸組胺酸(His98)或位置99之苯丙胺酸(Phe99)。完整41c VH及VL胺基酸序列展示於表1中(分別為SEQ ID NO: 35及40)，且41c HCDR1、HCDR2及LCDR3序列展示於表3 (SEQ ID NO. 119及120)及表2 (SEQ ID NO: 129)中。 表1. Fn14拮抗劑單株抗體之小鼠VH及VL胺基酸序列
VH 名稱 ( 重鏈載體 ID) 可變序列 (SEQ ID NO)
41c (A291) EVQLQQSGPELVKPGASVKMSCKASGYTFTDYNMHWVKQSHGKSLEWIGYINPNNGGTNYNQKFKGKATLTVNKSSRSAYMEFRSLTSEDSAVYYCASSGWFTYWGQGTLVTVSA (SEQ ID NO: 35)
42d EVQLLQSGPELVKPVASVKMSCKASGYTFTDYNIHWVKQSHGKSLEWIGYINPNNGVTGYNQKFRGKATLTVNRSSNTAYMDLRSLTSEDSAVYYCTRRYGDYVHAMDCWGQGTSVTVSS (SEQ ID NO: 44)
R35B9 (A402, A451) EVQLQQSGPELVKPGASVKMSCKASGYIFQDYNMHWVKQSHGKSLEWIGSINPRNGWTNYNQKFKGKATLTVNKSSRSAYMEFRSLTSEDSAVYYCASSGWFTYWGQGTLVTVSA (SEQ ID NO: 50)
R35B9(Y50G57) (A448, A474) EVQLQQSGPELVKPGASVKMSCKASGYIFQDYNMHWVKQSHGKSLEWIGYINPRNGGTNYNQKFKGKATLTVNKSSRSAYMEFRSLTSEDSAVYYCASSGWFTYWGQGTLVTVSA (SEQ ID NO: 54)
R35B9(A56) (A486) EVQLQQSGPELVKPGASVKMSCKASGYIFQDYNMHWVKQSHGKSLEWIGSINPRNAWTNYNQKFKGKATLTVNKSSRSAYMEFRSLTSEDSAVYYCASSGWFTYWGQGTLVTVSA (SEQ ID NO: 60)
R35B9(Y50A56G57) (A490) EVQLQQSGPELVKPGASVKMSCKASGYIFQDYNMHWVKQSHGKSLEWIGYINPRNAGTNYNQKFKGKATLTVNKSSRSAYMEFRSLTSEDSAVYYCASSGWFTYWGQGTLVTVSA (SEQ ID NO: 56)
R35B9(Y50) (A437) EVQLQQSGPELVKPGASVKMSCKASGYIFQDYNMHWVKQSHGKSLEWIGYINPRNGWTNYNQKFKGKATLTVNKSSRSAYMEFRSLTSEDSAVYYCASSGWFTYWGQGTLVTVSA (SEQ ID NO: 181)
VL 名稱 ( 輕鏈載體 ID) 可變序列 (SEQ ID NO)
41c (A290) DVVMTQTPLTLSVAIGQPASISCKSSQSLLNSAGKTYLNWLLQRPGQSPKRLIYLVSQLDSGVPDRFTGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCWQGTHFPWTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO: 40)
42d DIQMTQSPSSLSASLGERVSLTCRASQDIGSRLNWLQQEPDGTIKRLIYATSSLDSGVPKRFSGSRSGSDYSLTISSLESEDFVDYYCLQYASSPYTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO: 48)
R35B9 (A403, A452) DVVMTQTPLTLSVAIGQPASISCKSSQSLLNSAGKTYLNWLLQRPGQSPKRLIYLVSQLDSGVPDRFTGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCWQGTFYPWTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO: 52)
R35B9(H98) (A439) DVVMTQTPLTLSVAIGQPASISCKSSQSLLNSAGKTYLNWLLQRPGQSPKRLIYLVSQLDSGVPDRFTGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCWQGTHYPWTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO: 58)
表2. VL胺基酸序列分解成具有相應SEQ ID NO.的構架及CDR序列
名稱    (輕鏈載體ID) L-FR1 LCDR1 (Kabat) L-FR2 LCDR2 (Kabat) L-FR3 LCDR3 (Kabat) L-FR4
41c VL    (A290, A370)    小鼠 DVVMTQTPLTLSVAIGQPASISC (SEQ ID NO: 160) KSSQSLLNSAGKTYLN (SEQ ID NO: 127) WLLQRPGQSPKRLIY (SEQ ID NO: 163) LVSQLDS (SEQ ID NO: 128) GVPDRFTGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYC (SEQ ID NO: 169) WQGTHFPWT (SEQ ID NO: 129) FGGGTKLEIK (SEQ ID NO: 171)
R35B9 VL    (A403, A452)    小鼠 DVVMTQTPLTLSVAIGQPASISC (SEQ ID NO: 160) KSSQSLLNSAGKTYLN (SEQ ID NO: 127) WLLQRPGQSPKRLIY (SEQ ID NO: 163) LVSQLDS (SEQ ID NO: 128) GVPDRFTGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYC (SEQ ID NO: 169) WQGTFYPWT (SEQ ID NO: 130) FGGGTKLEIK (SEQ ID NO: 171)
AAQ02700.1    (N/A)    人類 DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISC (SEQ ID NO:161) ------ WFQQRPGQSPRRLIY (SEQ ID NO:164) ------ GVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYC (SEQ ID NO:170) ------ FGGGTKVEIK (SEQ ID NO:172)
hzR35B9-LV0    (A467)    人類化 DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISC (SEQ ID NO: 161) KSSQSLLNSAGKTYLN (SEQ ID NO: 127) WFQQRPGQSPRRLIY (SEQ ID NO: 164) LVSQLDS (SEQ ID NO: 128) GVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYC (SEQ ID NO: 170) WQGTFYPWT (SEQ ID NO: 130) FGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 172)
hzR35B9-LV1a    (A468)    人類化 DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISC (SEQ ID NO: 161) KSSQSLLNSAGKTYLN (SEQ ID NO: 127) WLQQRPGQSPRRLIY (SEQ ID NO: 165) LVSQLDS (SEQ ID NO: 128) GVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYC (SEQ ID NO: 170) WQGTFYPWT (SEQ ID NO: 130) FGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 172)
hzR35B9-LV1b    (A469)    人類化 DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISC (SEQ ID NO: 161) KSSQSLLNSAGKTYLN (SEQ ID NO: 127) WFLQRPGQSPRRLIY (SEQ ID NO: 166) LVSQLDS (SEQ ID NO: 128) GVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYC (SEQ ID NO: 170) WQGTFYPWT (SEQ ID NO: 130) FGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 172)
hzR35B9-LV3a    (A470)    人類化 DVVMTQSPLSLPVTIGQPASISC (SEQ ID NO: 162) KSSQSLLNSAGKTYLN (SEQ ID NO: 127) WFLQRPGQSPKRLIY (SEQ ID NO: 167) LVSQLDS (SEQ ID NO: 128) GVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYC (SEQ ID NO: 170) WQGTFYPWT (SEQ ID NO: 130) FGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 172)
hzR35B9-LV3b    (A471)    人類化 DVVMTQSPLSLPVTIGQPASISC (SEQ ID NO: 162) KSSQSLLNSAGKTYLN (SEQ ID NO: 127) WLLQRPGQSPRRLIY (SEQ ID NO: 168) LVSQLDS (SEQ ID NO: 128) GVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYC (SEQ ID NO: 170) WQGTFYPWT (SEQ ID NO: 130) FGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 172)
hzR35B9-LV4    (A472)    人類化 DVVMTQSPLSLPVTIGQPASISC (SEQ ID NO: 162) KSSQSLLNSAGKTYLN (SEQ ID NO: 127) WLLQRPGQSPKRLIY (SEQ ID NO: 163) LVSQLDS (SEQ ID NO: 128) GVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYC (SEQ ID NO: 170) WQGTFYPWT (SEQ ID NO: 130) FGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 172)
hzR35B9-LV5    (A473)    人類化 DVVMTQSPLSLPVTIGQPASISC (SEQ ID NO: 162) KSSQSLLNSAGKTYLN (SEQ ID NO: 127) WLLQRPGQSPKRLIY (SEQ ID NO: 163) LVSQLDS (SEQ ID NO: 128) GVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYC (SEQ ID NO: 170) WQGTFYPWT (SEQ ID NO: 130) FGGGTKLEIK (SEQ ID NO: 171)
hzR35B9(H98)-LV1a    (A518)    人類化 DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISC (SEQ ID NO: 161) KSSQSLLNSAGKTYLN (SEQ ID NO: 127) WLQQRPGQSPRRLIY (SEQ ID NO: 165) LVSQLDS (SEQ ID NO: 128) GVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYC (SEQ ID NO: 170) WQGTHYPWT (SEQ ID NO: 131) FGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 172)
hzR35B9(A56)-LV2a    (A651)    人類化 DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISC (SEQ ID NO: 161) KSSQSLLNSAGKTYLN (SEQ ID NO: 127) WLQQRPGQSPRRGIY (SEQ ID NO: 252) LVSQLDS (SEQ ID NO: 128) GVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYC (SEQ ID NO: 170) WQGTFYPWT (SEQ ID NO: 130) FGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 172)
hzR35B9(A56)-LV2b    (A652)    人類化 DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISC (SEQ ID NO: 161) KSSQSLLNSAGKTYLN (SEQ ID NO: 127) WLQQRPGQSPRRLAY (SEQ ID NO: 253) LVSQLDS (SEQ ID NO: 128) GVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYC (SEQ ID NO: 170) WQGTFYPWT (SEQ ID NO: 130) FGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 172)
hzR35B9(A56)-LV2c    (A653)    人類化 DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISC (SEQ ID NO: 161) KSSQSLLNSAGKTYLN (SEQ ID NO: 127) WLQQRPGQSPRRLIY (SEQ ID NO: 165) LVSELDS (SEQ ID NO: 255) GVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYC (SEQ ID NO: 170) WQGTFYPWT (SEQ ID NO: 130) FGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 172)
hzR35B9(A56)-LV2d    (A654)    人類化 DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISC (SEQ ID NO: 161) KSSQSLLNSAGKTYLN (SEQ ID NO: 127) WLQQRPGQSPRRLIY (SEQ ID NO: 165) LVSQLDD (SEQ ID NO: 254) GVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYC (SEQ ID NO: 170) WQGTFYPWT (SEQ ID NO: 130) FGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 172)
hzR35B9(A56)-LV2f    (A656)    人類化 DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISC (SEQ ID NO: 161) KSSQSLLNSAGKTYLN (SEQ ID NO: 127) WLQQRPGQSPRRLIY (SEQ ID NO: 165) LVAQLDS (SEQ ID NO: 256) GVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYC (SEQ ID NO: 170) WQGTFYPWT (SEQ ID NO: 130) FGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 172)
表3. VH胺基酸序列分解成具有相應SEQ ID NO的構架及CDR序列
名稱    (重鏈載體ID)    物種 H-FR1    H-CDR1 (Chothia) H-FR2    H-CDR2 (Kabat) H-FR3 H-CDR3 (Kabat) H-FR4   
41c VH    (A291, A369)    小鼠 EVQLQQSGPELVKPGASVKMSCKAS (SEQ ID NO: 132) GYTFTDYNMH (SEQ ID NO: 119) WVKQSHGKSLEWIG (SEQ ID NO: 138) YINPNNGGTNYNQKFKG (SEQ ID NO: 120) KATLTVNKSSRSAYMEFRSLTSEDSAVYYCAS (SEQ ID NO: 145) SGWFTY (SEQ ID NO: 121) WGQGTLVTVSA (SEQ ID NO: 158)
R35B9 VH    (A402)    小鼠 EVQLQQSGPELVKPGASVKMSCKAS (SEQ ID NO: 132) GYIFQDYNMH (SEQ ID NO: 122) WVKQSHGKSLEWIG (SEQ ID NO: 138) SINPRNGWTNYNQKFKG (SEQ ID NO: 123) KATLTVNKSSRSAYMEFRSLTSEDSAVYYCAS (SEQ ID NO: 145) SGWFTY (SEQ ID NO: 121) WGQGTLVTVSA (SEQ ID NO: 158)
R35B9(Y50) VH    (A437)    小鼠 EVQLQQSGPELVKPGASVKMSCKAS (SEQ ID NO: 132) GYIFQDYNMH (SEQ ID NO: 122) WVKQSHGKSLEWIG (SEQ ID NO: 138) YINPRNGWTNYNQKFKG (SEQ ID NO: 149) KATLTVNKSSRSAYMEFRSLTSEDSAVYYCAS (SEQ ID NO: 145) SGWFTY (SEQ ID NO: 121) WGQGTLVTVSA (SEQ ID NO:158)
R35B9(Y50G57) VH    (A448, A474)    小鼠 EVQLQQSGPELVKPGASVKMSCKAS (SEQ ID NO: 132) GYIFQDYNMH (SEQ ID NO: 122) WVKQSHGKSLEWIG (SEQ ID NO: 138) YINPRNGGTNYNQKFKG (SEQ ID NO: 125) KATLTVNKSSRSAYMEFRSLTSEDSAVYYCAS (SEQ ID NO: 145) SGWFTY (SEQ ID NO: 121) WGQGTLVTVSA (SEQ ID NO: 158)
hSGHI(1)    (N/A)    人類模板 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKAS (SEQ ID NO: 133) ------ WVRQAPGQGLEWMG (SEQ ID NO: 173) ------ RVTITADTSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAR (SEQ ID NO: 174) ------ WGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 159)
hzR35B9-HV0    (A700)    人類化 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKAS (SEQ ID NO: 133) GYIFQDYNMH (SEQ ID NO: 122) WVRQAPGQGLEWMG (SEQ ID NO: 173) SINPRNGWTNYNQKFKG (SEQ ID NO: 123) RVTITADTSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAR (SEQ ID NO: 174) SGWFTY (SEQ ID NO: 121) WGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 159)
hzR35B9-HV5a    (A454)    人類化 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKAS (SEQ ID NO: 133) GYIFQDYNMH (SEQ ID NO: 122) WVRQAPGQGLEWIG (SEQ ID NO: 139) SINPRNGWTNYNQKFKG (SEQ ID NO: 123) RATITADTSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAS (SEQ ID NO: 146) SGWFTY (SEQ ID NO: 121) WGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 159)
hzR35B9-HV5b    (A455)    人類化 QVQLVQSGAEVVKPGASVKVSCKAS (SEQ ID NO: 134) GYIFQDYNMH (SEQ ID NO: 122) WVRQAHGQGLEWMG (SEQ ID NO: 140) SINPRNGWTNYNQKFKG (SEQ ID NO: 123) RVTITADTSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAS (SEQ ID NO: 147) SGWFTY (SEQ ID NO: 121) WGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 159)
hzR35B9-HV6a    (A456)    人類化 QVQLVQSGAEVVKPGASVKVSCKAS (SEQ ID NO: 134) GYIFQDYNMH (SEQ ID NO: 122) WVRQAHGQSLEWMG (SEQ ID NO: 141) SINPRNGWTNYNQKFKG (SEQ ID NO: 123) RVTITADTSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAS (SEQ ID NO: 147) SGWFTY (SEQ ID NO: 121) WGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 159)
hzR35B9-HV6b    (A457)    人類化 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKAS (SEQ ID NO: 133) GYIFQDYNMH (SEQ ID NO: 122) WVRQAHGQGLEWIG (SEQ ID NO: 142) SINPRNGWTNYNQKFKG (SEQ ID NO: 123) RATITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAR (SEQ ID NO: 148) SGWFTY (SEQ ID NO: 121) WGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 159)
hzR35B9-HV6c    (A458)    人類化 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKAS (SEQ ID NO: 133) GYIFQDYNMH (SEQ ID NO: 122) WVRQAHGQGLEWIG (SEQ ID NO: 142) SINPRNGWTNYNQKFKG (SEQ ID NO: 123) RATITADTSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAS (SEQ ID NO: 146) SGWFTY (SEQ ID NO: 121) WGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 159)
hzR35B9-HV7a    (A459)    人類化 QVQLVQSGAEVVKPGASVKVSCKAS (SEQ ID NO: 134) GYIFQDYNMH (SEQ ID NO: 122) WVRQAHGQSLEWMG (SEQ ID NO: 141) SINPRNGWTNYNQKFKG (SEQ ID NO: 123) RVTITADTSTRTAYMELSSLRSEDTAVYYCAS (SEQ ID NO: 150) SGWFTY (SEQ ID NO: 121) WGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 159)
hzR35B9-HV7b    (A460)    人類化 QVQLVQSGAEVVKPGASVKVSCKAS (SEQ ID NO: 134) GYIFQDYNMH (SEQ ID NO: 122) WVRQAHGQGLEWMG (SEQ ID NO: 140) SINPRNGWTNYNQKFKG (SEQ ID NO: 123) RVTITADKSTRTAYMELSSLRSEDTAVYYCAS (SEQ ID NO: 151) SGWFTY (SEQ ID NO: 121) WGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 159)
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hzR35B9-HV9b    (A463)    人類化 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKAS (SEQ ID NO: 133) GYIFQDYNMH (SEQ ID NO: 122) WVKQAHGQSLEWIG (SEQ ID NO: 144) SINPRNGWTNYNQKFKG (SEQ ID NO: 123) RATITADTSTSTAYMEFSSLRSEDTAVYYCAS (SEQ ID NO: 154) SGWFTY (SEQ ID NO: 121) WGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 159)
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hzR35B9-HV11    (A465)   人類化 QVQLVQSGPEVVKPGASVKVSCKAS (SEQ ID NO: 136) GYIFQDYNMH (SEQ ID NO: 122) WVRQAHGQSLEWMG (SEQ ID NO: 141) SINPRNGWTNYNQKFKG (SEQ ID NO: 123) RATITVDKSTRTAYMELSSLRSEDTAVYYCAS (SEQ ID NO: 156) SGWFTY (SEQ ID NO: 121) WGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 159)
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hzR35B9(A56)-HV12a    (A631)    人類化 QVQLVQSGPEVVKPGASVKVSCKAS (SEQ ID NO: 136) GYIFQDYNMH (SEQ ID NO: 122) WVRQADGQSLEWMG (SEQ ID NO: 240) SINPRNAWTNYNQKFKG (SEQ ID NO: 124) RATITVDKSTRTAYMELSSLRSEDTAVYYCAS (SEQ ID NO: 156) SGWFTY (SEQ ID NO: 121) WGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 159)
hzR35B9(A56)-HV12b    (A632)    人類化 QVQLVQSGPEVVKPGASVKVSCKAS (SEQ ID NO: 136) GYIFQDYNMH (SEQ ID NO: 122) WVRQAPGQSLEWMG (SEQ ID NO: 241) SINPRNAWTNYNQKFKG (SEQ ID NO: 124) RATITVDKSTRTAYMELSSLRSEDTAVYYCAS (SEQ ID NO: 156) SGWFTY (SEQ ID NO: 121) WGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 159)
hzR35B9(A56)-HV13a    (A633)    人類化 QVQLVQSGPEVVKPGASVKVSCKAS (SEQ ID NO: 136) GYIFQDYNMH (SEQ ID NO: 122) WVREAHGQSLEWMG (SEQ ID NO: 242) SINPRNAWTNYNQKFKG (SEQ ID NO: 124) RATITVDKSTRTAYMELSSLRSEDTAVYYCAS (SEQ ID NO: 156) SGWFTY (SEQ ID NO: 121) WGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 159)
hzR35B9(A56)-HV13b    (A634)    人類化 QVQLVQSGPEVVKPGASVKVSCKAS (SEQ ID NO: 136) GYIFQDYNMH (SEQ ID NO: 122) WVRQAHGQSLEWMG (SEQ ID NO: 141) SINPRNAWTNYNQKFGG (SEQ ID NO: 247) RATITVDKSTRTAYMELSSLRSEDTAVYYCAS (SEQ ID NO: 156) SGWFTY (SEQ ID NO: 121) WGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 159)
hzR35B9(A56)-HV13d    (A636)    人類化 QVQLVQSGPEVVKPGASVKVSCKAS (SEQ ID NO: 136) GYIFQDYNMH (SEQ ID NO: 122) WGRQAHGQSLEWMG (SEQ ID NO: 243) SINPRNAWTNYNQKFKG (SEQ ID NO: 124) RATITVDKSTRTAYMELSSLRSEDTAVYYCAS (SEQ ID NO: 156) SGWFTY (SEQ ID NO: 121) WGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 159)
hzR35B9(A56)-HV13f    (A638)    人類化 QVQLVQSGPEVVKPGASVKVSCKAS (SEQ ID NO: 136) GYIFQDYNMH (SEQ ID NO: 122) WVRQAHGQSLEWMG (SEQ ID NO: 141) SINPRNAWTNYNDKFKG (SEQ ID NO: 249) RATITVDKSTRTAYMELSSLRSEDTAVYYCAS (SEQ ID NO: 156) SGWFTY (SEQ ID NO: 121) WGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 159)
hzR35B9(A56)-HV13g    (A639)    人類化 QVQLVQSGPEVVKPGASVKVSCKAS (SEQ ID NO: 136) GYIFQDYNMH (SEQ ID NO: 122) WVRQAHGDSLEWMG (SEQ ID NO: 244) SINPRNAWTNYNQKFKG (SEQ ID NO: 124) RATITVDKSTRTAYMELSSLRSEDTAVYYCAS (SEQ ID NO: 156) SGWFTY (SEQ ID NO: 121) WGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 159)
hzR35B9(A56)-HV16    (A641)    人類化 QVQLQQSGPEVVKPGASVKVSCKAS (SEQ ID NO: 238) GYIFQDYNMH (SEQ ID NO: 122) WVKQAHGQSLEWMG (SEQ ID NO: 245) SINPRNAWTNYNQKFKG (SEQ ID NO: 124) KATLTVDKSTRTAYMELSSLRSEDTAVYYCAS (SEQ ID NO: 251) SGWFTY (SEQ ID NO: 121) WGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 159)
hzR35B9(A56)-HV17a    (A642)    人類化 QVQLQQSGPEVVKPGASVKVSCKAS (SEQ ID NO: 238) GYIFQDYNMH (SEQ ID NO: 122) WVKQGHGQSLEWMG (SEQ ID NO: 246) SINPRNAWTNYNQKFKG (SEQ ID NO: 124) KATLTVDKSTRTAYMELSSLRSEDTAVYYCAS (SEQ ID NO: 251) SGWFTY (SEQ ID NO: 121) WGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 159)
hzR35B9(A56)-HV17b    (A643)    人類化 QVQLQQSGPEVVKPGASVKVSCKAS (SEQ ID NO: 238) GYIFQDYNMH (SEQ ID NO: 122) WVKQAHGQSLEWMG (SEQ ID NO: 245) SINPRNAWTNYNQKFHG (SEQ ID NO: 250) KATLTVDKSTRTAYMELSSLRSEDTAVYYCAS (SEQ ID NO: 251) SGWFTY (SEQ ID NO: 121) WGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 159)
hzR35B9(A56)-HV17d    (A645)    人類化 QVQLQQSGPEVVKPGASVKVSCKAS (SEQ ID NO: 238) GYIFQDYNMH (SEQ ID NO: 122) WVKQAHGQSLEWMG (SEQ ID NO: 245) SINPRNAWTNYNQKFDG (SEQ ID NO: 248) KATLTVDKSTRTAYMELSSLRSEDTAVYYCAS (SEQ ID NO: 251) SGWFTY (SEQ ID NO: 121) WGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 159)
hzR35B9(A56)-HV17g    (A648)    人類化 QVQLQQSGPEVVKPGASVKVSCKAS (SEQ ID NO: 238) GYIFQDYNMH (SEQ ID NO: 122) WVKQAHGQSLEWMG (SEQ ID NO: 245) SINPRNAWTNYNDKFKG (SEQ ID NO: 249) KATLTVDKSTRTAYMELSSLRSEDTAVYYCAS (SEQ ID NO: 251) SGWFTY (SEQ ID NO: 121) WGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 159)
hzR35B9(A56)-HV17i    (A650)    人類化 QVQLQQSGPEVAKPGASVKVSCKAS (SEQ ID NO: 239) GYIFQDYNMH (SEQ ID NO: 122) WVKQAHGQSLEWMG (SEQ ID NO: 245) SINPRNAWTNYNQKFKG (SEQ ID NO: 124) KATLTVDKSTRTAYMELSSLRSEDTAVYYCAS (SEQ ID NO: 251) SGWFTY (SEQ ID NO: 121) WGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 159)
使用上文所述之方法，用含有41c及R35B9衍生之各種VH及VL胺基酸特性的重鏈及輕鏈之各種組合產生完整抗體。例示性抗體列於下表21中。測試此等抗體變異體之結合親和力及/或活體外功能活性。 表21. R35B39變異體
名稱 目的 重鏈載體 ID 輕鏈載體 ID CDR-H CDR-L
41c (小鼠) 親本 A291 A290 41c 41c
R35B9 (小鼠) 親和力成熟 A402 A403 R35B9 R35B9
A448 / A403 變異體(mo) A448 A403 R35B9(Y50G57) R35B9
A428 / A403 變異體(mo) A428 A403 R35B9(G57) R35B9
A437 / A403 變異體(mo) A437 A403 R35B9(Y50) R35B9
A402 / A440 變異體(mo) A402 A440 R35B9 R35B9(F99)
A402 / A439 變異體(mo) A402 A439 R35B9 R35B9(H98)
A402 / A290 變異體(mo) A402 A290 R35B9 41c
A448 / A439 變異體(mo) A448 A439 R35B9(Y50G57) R35B9(H98)
A437 / A290 變異體(mo) A437 A290 R35B9(Y50) 41c
A448 / A290 變異體(mo) A448 A290 R35B9(Y50G57) 41c
A428 / A290 變異體(mo) A428 A290 R35B9(G57) 41c
A291 / A403 變異體(mo) A291 A403 41c R35B9
A436 / A403 變異體(mo) A436 A403 R35B9(T30) R35B9
A438 / A403 變異體(mo) A438 A403 R35B9(N54) R35B9
A291 / A449 變異體(mo) A291 A449 41c 41C(R101)
A435 / A403 變異體(mo) A435 A403 R35B9(T28) R35B9
A450 / A290 變異體(mo) A450 A290 41C(R28Q30R54) 41c
作為結果，選擇三個CDR取代變異體：R35B9(Y50G57)VH，其中HCDR2內的R35B9 VH胺基酸位置50及57分別恢復為41c胺基酸酪胺酸(Tyr)及甘胺酸(Gly)(表1中所示之VH胺基酸序列，SEQ ID NO: 54)；R35B9(Y50)VH，其中HCDR2內的R35B9 VH胺基酸位置50恢復為41c胺基酸酪胺酸(Tyr)(表1中所示之胺基酸序列，SEQ ID NO: 181)；及R35B9(H98)VL，其中R35B9 VL LCDR3胺基酸位置98恢復為41c胺基酸組胺酸(His)(表1中所示之胺基酸序列，SEQ ID NO: 58)。
使用此等變異體重鏈或輕鏈可變序列產生三種完整小鼠IgG1(D265A) κ抗體純系(參見表21中加粗的抗體A448/A439、A437/A290，及A448/A290)。特定言之，抗體A448/A290及A448/A439係藉由分別表現含有R35B9(Y50G57) VH (A448) (SEQ ID NO: 54)之重鏈與含有41c VL (A290) (SEQ ID NO: 40)之輕鏈或含有R35B9(H98) VL(A439) (SEQ ID NO: 58)之輕鏈組合來產生。抗體A437/A290係藉由表現含有R35B9(Y50) VH (A437) (SEQ ID NO: 181)之重鏈與含有41c VL (A290) (SEQ ID NO: 40)之輕鏈的組合來產生。在活體外分析中測試所得純化抗體之結合及功能活性。實例 6 - R35B9 變異體的功能評估 抗 Fn14 mAb R35B9 最佳化純系拮抗 TWEAK 誘導的 IL - 8 表現
分析最佳化純系阻斷TWEAK誘導HRMC釋放IL-8的能力。將HRMC與0.8325 nM抗Fn14或同型對照mAb一起培育30分鐘，且接著將rhTWEAK以250 ng/mL添加至孔中維持24小時。收集上清液且使用IL-8 ELISA套組測試IL-8。在0.125 µg/mL (0.833 nM)的抗體濃度下，經測試的所有最佳化純系(A437/A290、A448/A290，及A448/A439)能夠以類似於R35B9的水準且以優於CRCBT-06-002及ITEM-4的水準阻斷TWEAK誘導IL-8(參見圖12)。抗 Fn14 mAb R35B9 最佳化純系不促進 TWEAK 誘導 IL - 8 表現
亦測試最佳化R35B9純系(亦即，A437/A290、A448/A290，及A448/A439)對HRMC的促效劑活性。所有三種最佳化純系在高達40 µg/mL (266 nM)的mAb濃度下未展示可偵測到的促效劑活性(IL-8釋放)，該濃度濃度為最高測試濃度(參見圖16A及圖16B)。如先前所觀測，ITEM-4在較高mAb濃度下展現劑量依賴性促效劑活性(參見圖16A)。抗 Fn14 mAb R35B9 最佳化純系拮抗 TWEAK 誘導 ICAM - 1 表現
為確定最佳化純系阻斷纖維化介體之能力，測試其阻斷TWEAK誘導HRMC上之ICAM-1上調的能力。藉由添加三種最佳化純系A437/A290、A448/A290及A448/A439來重複執行ICAM-1表現分析。簡言之，將HRMC與單獨培養基一起或與不同濃度的抗Fn14或同型對照mAb一起培育30分鐘且接著將具有或不具有rhTWEAK (250 ng/mL)的培養基添加至細胞中維持24小時。細胞用胰蛋白酶解離且針對表面ICAM-1表現進行染色。使用流式細胞儀(BD Biosciences Fortessa)量測表面ICAM-1表現強度，基於活細胞進行閘選。
結果證明最佳化純系能夠以類似於R35B9的程度阻斷TWEAK誘導表面ICAM-1上調，因為所有三種此等純系均能夠比CRCBT-06-002及ITEM-4更好地阻斷此上調(圖19及表12)。 表12. 抗Fn14 R35B9最佳化純系拮抗TWEAK誘導HRMC上的ICAM-1表現
  mAb (0.1 µg/mL) ICAM-1 MFI*
250 ng/mL rhTWEAK 41c 13,107
R35B9 5,828
A437/A290 5,112
A448/A290 6,429
A448/A439 5,484
ITEM-4 9,620
CRCBT 11,785
mIgG1 33,254
mIgG2b 34,696
(MFI* = 平均螢光強度.)實例 7 - 移除 R35B9 VH 內的傾向序列
選擇上述純系A448/A290及A448/A439以及R35B9進一步進行人類化且排除位於重鏈CDR2的潛在去醯胺位點。抗體CDR內的天冬醯胺殘基已知容易發生去醯胺或異構化事件(Chelius, D.等人,Anal Chem , 2005, 77(18):6004-11; Sydow, J.F.等人,PLoS One , 2014, 9(6):100736)，尤其當甘胺酸殘基在天冬醯胺的羧基側鍵結時，例如Asn-Gly (NG)。此類NG序列存在於41c及R35B9之HCDR2中的位置55-56。為了確定在天冬醯胺或甘胺酸位置是否可能被其他胺基酸取代的同時保持抗原結合，產生三種變異體。麩醯胺酸或天冬胺酸在位置55經取代，分別由Q55或D55表示，或丙胺酸在R35B9重鏈內之位置56 (A56)經取代，且接著產生含有單一胺基酸取代中之每一者的各別小鼠抗體。
基於Biacore分析，已確定抗體A486/A452中所含之R35B9(A56) VH單一取代(VH及VL胺基酸序列分別展示於表1的SEQ ID NO. 60及52中)保持最佳結合親和力(參見下表4)。從而，將此A56取代引入若干R35B9抗體變異體中，包括R35B9(Y50G57) VH (A448)(展示於核苷酸SEQ ID NO: 53及胺基酸SEQ ID NO: 54中)，從而產生R35B9(Y50A56G57)VH (A490)(展示於表1的核苷酸SEQ ID NO: 55、胺基酸SEQ ID NO: 56中)。其亦用於產生含有R35B9(Y50A56G57) VH (A490)重鏈與R35B9 VL輕鏈(A452)之嵌合小鼠-人類IgG4剔除型κ抗體490/A452 (展示於表1的SEQ ID NO: 52中)。 表4.去醯胺化固定R35B9(A56) mAb對人類Fn14之結合動力學
  His-Sumo-huFn14濃度範圍0.111 nM-9 nM
抗Fn14 mAbs kd (1/s) ka (1/Ms) (KD) Rmax
R35B9 (A451/A452) 9.938E-04 7525000 0.1321nM 31.85
R35B9 (A56) (A486/A452) 3.541E-04 4961000 71.38pM 61.16
實例 8 - R35B9 人類化 人類抗體構架區 ( FR ) 的 選擇
基於序列同源性及免疫原性風險評估，使用各種VL及VH胺基酸序列設計人類化R35B9變異型抗體，統稱為hzR35B9抗體。
首先，為了選擇適於移植R35B9抗體CDR胺基酸序列之已知人類抗體構架區(FR)胺基酸，使用BLASTP資料庫(國家生物技術資訊中心(The National Center for Biotechnology Information))搜尋與R35B9抗體之VL及VH FR胺基酸序列具有高度同源性的人類抗體FR胺基酸序列。GenBank寄存編號AAQ02700.1 (免疫球蛋白κ輕鏈可變區，部分)及PIR寄存編號PN0444 (人類Ig重鏈V區前驅體(片段))中所示的FR胺基酸序列與R35B9抗體之VL及VH FR胺基酸序列具有最高同源性。
使用Epibase In Silico Services for Biotherapeutics (Lonza, Basil Switzerland)進行免疫原性風險預測。藉由將CDR移植至上述VH之FR序列而獲得之序列的預測免疫原性風險未顯著減小。因此，比較Kabat等人, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 美國健康與人類服務部(1991)所報導的與人類FR共同序列之同源性。hSGHI與R35B9抗體之VH內的FR具有最高同源性，因此吾人接著藉由將CDR移植入hSGHI中來檢查。當使用共同序列時，使用hSGHI之預測免疫原性風險優於使用PN0444。產生人類化 hzR35B9 HV0 及 hzR35B9 LV0
相應地，將SEQ ID NO: 127、128及130中分別所示之R35B9 VL之LCDR1、LCDR2及LCDR3胺基酸序列(如Kabat所定義)移植至AAQ02700.1 FR胺基酸序列中的適當位置以設計hzR35B9 LV0 (SEQ ID NO: 92)，如表2及6所示。
將SEQ ID NO: 122、123及121中分別所示之R35B9 VH之HCDR1 (包含Chothia與Kabat定義組合所涵蓋的序列)(Al-Lazikani, B.,J Mol Biol , 1997, 273(4):927-48)、HCDR2及HCDR3 (如Kabat所定義)胺基酸序列移植至hSGHI FR胺基酸序列中的適當位置以設計hzR35B9 HV0 (SEQ ID NO: 179)，如表3及6所示。由於在Kabat定義的HCDR1外部(但包括於Chothia定義的HCDR1內)發現增強Fn14親和力所必需之R35B9 VH中之兩個胺基酸取代：異白胺酸28 (Iso28)及麩醯胺酸30 (Gln30)，因此在人類化期間，在VH內使用此混合CDR定義。出於此原因，吾人使用Chothia與Kabat HCDR1定義之組合以涵蓋吾人考慮HCDR1之整個胺基酸序列。產生人類化 hzR35B9 HV0 及 hzR35B9 LV0 之變異體
僅藉由將嚙齒動物源抗體之CDR胺基酸序列移植至人類抗體FR之胺基酸序列而獲得的人類化抗體通常展現減少的結合活性。為了克服直接CDR移植之此類限制，可以將小鼠與人類之間不同且視為影響抗體之結合活性的FR胺基酸殘基自人類修飾為嚙齒動物序列。如下文所述鑑別且修飾視為影響抗體之結合活性的FR胺基酸殘基。VL及VH中分別設計有hzR35B9 LV0及hzR35B9 HV0的抗體稱為hzR35B9 LV0HV0抗體或簡稱為hzR35B9 LV0HV0。其他hzR35B9抗體以相同方式標示。
利用電腦模型化構築hzR35B9 LV0HV0及R35B9抗體可變區的三維結構(Discovery Studio, Accelrys)。在hzR35B9 LV0HV0之VL及VH FR的胺基酸序列中，不同於R35B9的胺基酸殘基經R35B9抗體之對應胺基酸殘基取代以產生新雜合體序列。產生三維結構且在所製備的R35B9、hzR35B9 LV0HV0及隨後經修飾之形式之間加以比較，以便鑑別經預測影響mAb之結合活性的胺基酸殘基。基於此分析，預測hzR35B9 LV0HV0可變區之以下胺基酸FR殘基改變抗原結合位點之三維結構且影響mAb結合活性：SEQ ID NO: 92中之Leu (15)、Phe (41)、Gln (42)、Arg (50)及Val (109)；及SEQ ID NO: 179中之Gln (1)、Ala (9)、Lys (12)、Val (20)、Arg (38)、Pro (41)、Gly (44)、Met (48)、Arg (67)、Val (68)、Ile (70)、Ala (72)、Thr (74)、Ser (77)、Leu (83)及Arg (98)。
此等所選胺基酸殘基中之至少一或多者經R35B9之對應胺基酸殘基取代以設計具有不同修飾之人類化抗體的VL及VH。特定言之，將SEQ ID NO: 92中以Ile取代Leu (15)、Leu取代Phe (41)、Leu取代Gln (42)、Lys取代Arg (50)及Leu取代Val (109)的至少一個胺基酸修飾引入VL中。以此方式設計hzR35B9 LV0 (SEQ ID NO: 92)、LV1a (SEQ ID NO: 94)、LV1b (SEQ ID NO: 96)、LV3a (SEQ ID NO: 98)、LV3b (SEQ ID NO: 100)、LV4 (SEQ ID NO: 102)及LV5 (SEQ ID NO: 104)作為hzR35B9抗體之VL，且其各別胺基酸序列展示於表6中(亦參見圖24)。
將SEQ ID NO: 179中以Glu取代Gln (1)、Pro取代Ala (9)、Val取代Lys (12)、Met取代Val (20)、Lys取代Arg (38)、His取代Pro (41)、Ser取代Gly (44)、Ile取代Met (48)、Lys取代Arg (67)、Ala取代Val (68)、Leu取代Ile (70)、Val取代Ala (72)、Lys取代Thr (74)、Arg取代Ser (77)、Phe取代Leu (83)及Ser取代Arg (98)的至少一個胺基酸修飾引入VH中。以此方式設計hzR35B9 HV0 (SEQ ID NO: 179)、HV5a (SEQ ID NO: 66)、HV5b (SEQ ID NO: 68)、HV6a (SEQ ID NO: 70)、HV6b (SEQ ID NO: 72)、HV6c (SEQ ID NO: 74)、HV7a (SEQ ID NO: 76)、HV7b (SEQ ID NO: 78)、HV7c (SEQ ID NO: 80)、HV9a (SEQ ID NO: 82)、HV9b (SEQ ID NO: 84)、HV10 (SEQ ID NO: 86)、HV11 (SEQ ID NO: 88)及HV18 (SEQ ID NO: 90)作為hzR35B9抗體之VH，且其各別胺基酸序列展示於表6中且相應核苷酸序列展示於表22中。例示性人類化抗體VH及VL區域中的CDR及FR序列展示於上述表2-3中。 表6.具有相應SEQ ID NO的人類化VH及VL胺基酸序列
重鏈載體 ID VH 名稱 人類化構架 可變序列
A700 hzR35B9-HV0 HV0 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYIFQDYNMHWVRQAPGQGLEWMGSINPRNGWTNYNQKFKGRVTITADTSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSGWFTYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 179)
A454 hzR35B9-HV5a HV5a QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYIFQDYNMHWVRQAPGQGLEWIGSINPRNGWTNYNQKFKGRATITADTSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCASSGWFTYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 66)
A455 hzR35B9-HV5b HV5b QVQLVQSGAEVVKPGASVKVSCKASGYIFQDYNMHWVRQAHGQGLEWMGSINPRNGWTNYNQKFKGRVTITADTSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCASSGWFTYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 68)
A456 hzR35B9-HV6a HV6a QVQLVQSGAEVVKPGASVKVSCKASGYIFQDYNMHWVRQAHGQSLEWMGSINPRNGWTNYNQKFKGRVTITADTSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCASSGWFTYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 70)
A457 hzR35B9-HV6b HV6b QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYIFQDYNMHWVRQAHGQGLEWIGSINPRNGWTNYNQKFKGRATITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSGWFTYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 72)
A458 hzR35B9-HV6c HV6c QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYIFQDYNMHWVRQAHGQGLEWIGSINPRNGWTNYNQKFKGRATITADTSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCASSGWFTYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 74)
A459 hzR35B9-HV7a HV7a QVQLVQSGAEVVKPGASVKVSCKASGYIFQDYNMHWVRQAHGQSLEWMGSINPRNGWTNYNQKFKGRVTITADTSTRTAYMELSSLRSEDTAVYYCASSGWFTYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 76)
A460 hzR35B9-HV7b HV7b QVQLVQSGAEVVKPGASVKVSCKASGYIFQDYNMHWVRQAHGQGLEWMGSINPRNGWTNYNQKFKGRVTITADKSTRTAYMELSSLRSEDTAVYYCASSGWFTYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 78)
A461 hzR35B9-HV7c HV7c QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYIFQDYNMHWVKQAPGQGLEWIGSINPRNGWTNYNQKFKGKATITADTSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCASSGWFTYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 80)
A462 hzR35B9-HV9a HV9a QVQLVQSGAEVKKPGASVKMSCKASGYIFQDYNMHWVRQAPGQGLEWIGSINPRNGWTNYNQKFKGRATLTVDTSTSTAYMEFSSLRSEDTAVYYCASSGWFTYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 82)
A463 hzR35B9-HV9b HV9b QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYIFQDYNMHWVKQAHGQSLEWIGSINPRNGWTNYNQKFKGRATITADTSTSTAYMEFSSLRSEDTAVYYCASSGWFTYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 84)
A464 hzR35B9-HV10 HV10 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYIFQDYNMHWVRQAHGQGLEWIGSINPRNGWTNYNQKFKGKATITADKSTRTAYMEFSSLRSEDTAVYYCASSGWFTYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 86)
A465 hzR35B9-HV11 HV11 QVQLVQSGPEVVKPGASVKVSCKASGYIFQDYNMHWVRQAHGQSLEWMGSINPRNGWTNYNQKFKGRATITVDKSTRTAYMELSSLRSEDTAVYYCASSGWFTYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 88)
A466 hzR35B9-HV18 HV18 EVQLVQSGPEVVKPGASVKMSCKASGYIFQDYNMHWVKQAHGQSLEWIGSINPRNGWTNYNQKFKGKATLTVDKSTRTAYMEFSSLRSEDTAVYYCASSGWFTYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 90)
A512 hzR35B9(A56)-HV11 HV11 QVQLVQSGPEVVKPGASVKVSCKASGYIFQDYNMHWVRQAHGQSLEWMGSINPRNAWTNYNQKFKGRATITVDKSTRTAYMELSSLRSEDTAVYYCASSGWFTYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 108)
A515 hzR35B9(Y50A56G57)-HV7b HV7b QVQLVQSGAEVVKPGASVKVSCKASGYIFQDYNMHWVRQAHGQGLEWMGYINPRNAGTNYNQKFKGRVTITADKSTRTAYMELSSLRSEDTAVYYCASSGWFTYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 110)
A553 hzR35B9(A56)-HV7c HV7c QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYIFQDYNMHWVKQAPGQGLEWIGSINPRNAWTNYNQKFKGKATITADTSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCASSGWFTYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 106)   
輕鏈載體 ID VL 名稱 人類化構架 可變序列
A467 hzR35B9-LV0 LV0 DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCKSSQSLLNSAGKTYLNWFQQRPGQSPRRLIYLVSQLDSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCWQGTFYPWTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 92)
A468 hzR35B9-LV1a LV1a DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCKSSQSLLNSAGKTYLNWLQQRPGQSPRRLIYLVSQLDSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCWQGTFYPWTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 94)
A469 hzR35B9-LV1b LV1b DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCKSSQSLLNSAGKTYLNWFLQRPGQSPRRLIYLVSQLDSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCWQGTFYPWTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 96)
A470 hzR35B9-LV3a LV3a DVVMTQSPLSLPVTIGQPASISCKSSQSLLNSAGKTYLNWFLQRPGQSPKRLIYLVSQLDSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCWQGTFYPWTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 98)
A471 hzR35B9-LV3b LV3b DVVMTQSPLSLPVTIGQPASISCKSSQSLLNSAGKTYLNWLLQRPGQSPRRLIYLVSQLDSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCWQGTFYPWTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 100)
A472 hzR35B9-LV4 LV4 DVVMTQSPLSLPVTIGQPASISCKSSQSLLNSAGKTYLNWLLQRPGQSPKRLIYLVSQLDSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCWQGTFYPWTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 102)
A473 hzR35B9-LV5 LV5 DVVMTQSPLSLPVTIGQPASISCKSSQSLLNSAGKTYLNWLLQRPGQSPKRLIYLVSQLDSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCWQGTFYPWTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO: 104)
A518 hzR35B9(H98)-LV1a LV1a DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCKSSQSLLNSAGKTYLNWLQQRPGQSPRRLIYLVSQLDSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCWQGTHYPWTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 112)
表22.具有相應SEQ ID NO之人類化VH及VL核苷酸序列
VH 名稱 序列 (SEQ ID NO)
     
hzR35B9-VH_HV5a CAAGTGCAACTGGTGCAAAGCGGAGCTGAAGTAAAGAAGCCTGGAGCATCCGTCAAGGTAAGTTGCAAGGCTAGTGGCTATATCTTCCAGGACTATAATATGCATTGGGTACGCCAGGCTCCCGGACAAGGGCTGGAGTGGATAGGGAGCATCAATCCACGCAACGGATGGACCAACTACAATCAGAAGTTCAAAGGACGAGCAACTATCACTGCAGATACATCAACCTCCACTGCTTACATGGAATTGAGTTCCCTGCGTTCCGAAGACACCGCAGTGTACTATTGTGCCAGTTCAGGGTGGTTTACTTACTGGGGACAAGGCACACTGGTGACCGTTTCTAGC (SEQ ID NO: 65)
hzR35B9-VH_HV5b CAAGTTCAGCTTGTCCAGAGCGGTGCTGAAGTGGTCAAACCAGGCGCAAGTGTTAAAGTTTCTTGCAAGGCATCTGGATATATTTTTCAGGACTACAACATGCACTGGGTACGACAAGCCCACGGTCAGGGATTGGAATGGATGGGATCCATCAACCCAAGAAACGGTTGGACAAATTACAATCAAAAGTTCAAAGGCAGGGTAACAATCACCGCAGACACAAGCACCAGTACCGCTTACATGGAGCTGAGCTCTTTGAGATCAGAGGACACTGCTGTGTACTATTGCGCATCTAGCGGGTGGTTCACTTACTGGGGACAGGGCACTCTTGTGACTGTGAGCTCT (SEQ ID NO: 67)
hzR35B9-VH_HV6a CAAGTTCAACTTGTTCAATCAGGCGCAGAAGTAGTGAAACCTGGTGCTTCTGTGAAGGTGTCATGTAAGGCCAGCGGTTATATCTTTCAGGACTACAATATGCATTGGGTTCGCCAAGCACATGGGCAGTCCCTGGAGTGGATGGGGTCTATCAATCCTCGCAATGGCTGGACCAACTATAACCAAAAGTTCAAGGGTAGGGTCACTATCACTGCTGACACATCCACCTCTACCGCCTACATGGAATTGTCATCTTTGCGCTCTGAGGACACTGCTGTGTACTATTGCGCTTCATCAGGCTGGTTCACCTATTGGGGACAGGGCACATTGGTGACTGTGTCTTCC (SEQ ID NO: 69)
hzR35B9-VH_HV6b CAAGTCCAACTGGTGCAAAGCGGAGCTGAAGTGAAGAAGCCAGGTGCCAGTGTCAAGGTATCCTGCAAGGCAAGTGGTTATATTTTCCAGGACTATAATATGCATTGGGTTAGGCAGGCACATGGACAGGGGCTCGAATGGATCGGGAGTATTAACCCACGTAATGGGTGGACTAATTACAACCAGAAGTTCAAAGGAAGGGCCACCATTACAGCCGACAAATCAACCTCAACTGCTTATATGGAGCTTAGCAGCCTGCGTTCTGAGGACACTGCTGTATACTATTGTGCCCGTTCAGGTTGGTTCACCTACTGGGGACAGGGCACTCTTGTTACAGTCAGTTCT (SEQ ID NO: 71)
hzR35B9-VH_HV6c CAGGTACAGCTCGTTCAAAGCGGTGCCGAGGTAAAAAAGCCTGGGGCCTCTGTTAAAGTTTCATGCAAGGCCTCAGGATATATCTTTCAAGACTACAACATGCATTGGGTGCGTCAGGCACATGGCCAGGGCCTCGAATGGATCGGCAGCATAAATCCACGGAACGGTTGGACCAACTACAACCAGAAATTCAAAGGAAGGGCCACTATAACCGCCGACACATCTACTTCTACCGCATACATGGAACTCTCCAGTCTCAGGTCAGAAGATACAGCCGTCTACTATTGCGCCAGTAGCGGTTGGTTTACATACTGGGGGCAAGGAACTCTCGTTACCGTGTCCAGC (SEQ ID NO: 73)
hzR35B9-VH_HV7a CAGGTACAACTGGTACAGTCTGGAGCTGAGGTGGTTAAGCCAGGGGCCAGCGTCAAAGTATCCTGTAAGGCTTCCGGATATATATTCCAGGACTACAATATGCACTGGGTTCGGCAAGCCCACGGACAATCTCTGGAGTGGATGGGCTCCATCAATCCCAGGAATGGATGGACCAATTACAATCAGAAGTTCAAGGGGCGAGTCACAATCACAGCTGATACAAGTACTAGAACCGCTTACATGGAGCTTTCTTCATTGAGGTCCGAGGATACAGCTGTCTACTACTGCGCTTCCTCAGGATGGTTTACTTATTGGGGTCAAGGAACTCTGGTGACAGTTAGCAGC (SEQ ID NO: 75)
hzR35B9-VH_HV7b CAAGTGCAGCTCGTTCAGTCTGGAGCCGAGGTAGTCAAGCCCGGCGCATCTGTTAAAGTCAGTTGCAAAGCTTCCGGCTATATCTTCCAGGATTACAACATGCACTGGGTCAGACAGGCTCACGGTCAAGGGCTCGAATGGATGGGAAGTATTAACCCTCGTAATGGATGGACTAACTATAACCAAAAGTTTAAGGGGAGGGTGACTATTACAGCAGATAAGTCTACTCGCACTGCCTATATGGAGCTTAGCTCACTCCGCTCCGAAGACACCGCTGTGTATTACTGTGCTAGTTCCGGGTGGTTCACCTATTGGGGGCAAGGAACTCTTGTAACAGTTTCCTCT  (SEQ ID NO: 77)
hzR35B9-VH_HV7c CAAGTTCAACTGGTGCAGTCTGGCGCTGAGGTAAAAAAACCCGGCGCCTCTGTTAAAGTAAGTTGTAAAGCATCTGGGTATATCTTTCAAGATTACAACATGCACTGGGTTAAGCAGGCTCCCGGACAGGGTCTTGAGTGGATAGGGTCCATAAATCCCCGCAATGGCTGGACTAATTATAACCAAAAGTTCAAAGGAAAAGCCACCATCACAGCAGACACCAGTACATCTACCGCCTACATGGAATTGAGTTCTCTGCGGAGCGAGGATACCGCAGTCTATTACTGCGCCTCATCTGGATGGTTTACTTACTGGGGTCAGGGCACTCTGGTGACTGTTTCAAGT  (SEQ ID NO: 79)
hzR35B9-VH_HV9a CAAGTTCAGCTCGTGCAGTCTGGAGCAGAGGTAAAGAAACCCGGCGCATCAGTGAAGATGAGTTGTAAGGCTAGTGGTTATATATTCCAGGATTATAATATGCACTGGGTACGACAGGCTCCAGGCCAAGGGCTTGAATGGATAGGCAGCATTAACCCCCGAAACGGCTGGACTAATTACAACCAGAAATTCAAGGGACGCGCAACCCTCACTGTGGATACTTCCACATCTACTGCTTACATGGAGTTTTCATCACTCAGGTCAGAAGACACAGCAGTGTACTACTGTGCCTCCTCTGGGTGGTTCACATATTGGGGACAAGGCACATTGGTGACAGTCTCCTCT (SEQ ID NO: 81)
hzR35B9-VH_HV9b CAGGTCCAACTGGTACAGTCCGGCGCTGAAGTAAAAAAACCAGGCGCTAGTGTCAAGGTATCATGCAAAGCAAGTGGGTATATCTTTCAGGATTATAATATGCACTGGGTAAAACAGGCTCACGGCCAATCCCTGGAGTGGATCGGTTCCATCAATCCACGGAACGGCTGGACCAACTACAACCAGAAGTTTAAGGGCCGTGCTACCATTACAGCCGACACTAGCACTAGCACAGCTTACATGGAATTCTCCTCCCTGCGAAGCGAAGACACCGCAGTGTATTACTGCGCTAGTTCCGGTTGGTTCACTTACTGGGGCCAGGGCACACTCGTCACTGTCTCAAGC (SEQ ID NO: 83)
hzR35B9-VH_HV10 CAGGTGCAACTGGTGCAATCTGGGGCAGAAGTTAAAAAACCAGGCGCTAGCGTAAAAGTTTCTTGCAAAGCAAGTGGGTACATATTCCAAGATTACAATATGCATTGGGTCAGGCAGGCCCACGGTCAGGGATTGGAGTGGATCGGCTCTATCAACCCTAGAAATGGTTGGACTAACTACAACCAGAAGTTCAAAGGAAAAGCCACCATTACCGCCGATAAATCCACCAGGACAGCCTATATGGAGTTTTCTAGCCTTCGTAGCGAAGACACCGCTGTGTATTATTGCGCTTCTAGTGGATGGTTCACTTATTGGGGTCAGGGGACCTTGGTCACTGTTAGTTCT (SEQ ID NO: 85)
hzR35B9-VH_HV11 CAAGTTCAACTTGTCCAATCCGGTCCAGAAGTCGTAAAACCAGGTGCTAGTGTGAAAGTCTCATGCAAGGCTTCAGGCTACATATTTCAAGACTATAATATGCATTGGGTTAGACAGGCACACGGTCAGTCACTGGAATGGATGGGGTCAATCAACCCTCGCAACGGATGGACAAATTACAACCAAAAGTTCAAAGGGAGAGCTACTATCACTGTCGATAAATCTACCAGAACAGCTTACATGGAGCTGAGTAGTCTGAGATCAGAGGACACCGCCGTCTACTATTGTGCTTCTTCTGGGTGGTTTACATACTGGGGGCAGGGGACACTGGTGACTGTGAGTTCT  (SEQ ID NO: 87)
hzR35B9-VH_HV18 GAGGTCCAACTGGTTCAAAGTGGACCAGAGGTGGTGAAACCAGGAGCTAGCGTAAAAATGAGCTGTAAGGCTTCAGGTTATATCTTTCAGGATTACAACATGCACTGGGTAAAACAAGCCCACGGCCAGTCTCTCGAATGGATTGGGTCAATCAATCCCCGAAACGGTTGGACAAACTATAATCAGAAATTCAAAGGTAAAGCAACATTGACTGTTGACAAATCAACCAGGACCGCATACATGGAGTTTTCATCCCTGCGTAGTGAAGACACTGCTGTTTACTACTGTGCTAGTTCTGGGTGGTTCACTTACTGGGGGCAGGGAACTCTTGTCACTGTTTCTTCA  (SEQ ID NO: 89)
VL 名稱 序列 (SEQ ID NO)
hzR35B9-VL_LV0 GACGTAGTGATGACTCAGAGCCCTCTGTCACTCCCCGTCACACTGGGACAACCAGCTTCCATCTCCTGCAAGTCATCTCAATCTTTGTTGAATAGCGCAGGAAAGACATACCTGAACTGGTTCCAACAACGCCCTGGTCAAAGCCCACGCAGGCTGATCTATTTGGTAAGTCAACTGGATAGCGGAGTACCTGACCGTTTCTCTGGAAGTGGAAGTGGTACTGACTTCACCTTGAAAATCTCCAGGGTTGAAGCCGAGGACGTGGGGGTGTATTACTGTTGGCAAGGTACTTTCTACCCTTGGACTTTCGGCGGCGGTACCAAGGTAGAGATTAAA (SEQ ID NO: 91)
hzR35B9-VL_LV1a GATGTAGTAATGACCCAGTCCCCACTTAGCTTGCCCGTTACACTCGGCCAACCCGCAAGCATATCTTGCAAATCCAGTCAGAGCCTCCTGAACTCTGCTGGAAAGACCTATCTGAATTGGCTTCAACAACGTCCCGGTCAATCCCCCAGACGACTTATCTACTTGGTAAGTCAGCTTGACTCCGGGGTTCCAGACAGGTTTTCCGGATCTGGAAGTGGAACTGATTTTACACTCAAAATTAGTCGAGTCGAGGCCGAAGACGTGGGTGTCTATTATTGCTGGCAAGGCACCTTTTATCCATGGACTTTTGGTGGGGGCACCAAGGTTGAAATTAAG (SEQ ID NO: 93)
hzR35B9-VL_LV1b GATGTTGTGATGACACAAAGTCCTCTGAGCCTTCCAGTCACATTGGGTCAGCCTGCATCTATTAGTTGTAAGAGCAGTCAATCACTGCTGAATAGTGCCGGAAAAACATACTTGAATTGGTTCCTTCAGCGCCCAGGCCAGTCTCCTCGGCGGTTGATTTATCTTGTGTCTCAACTGGATTCTGGTGTCCCCGATAGATTTTCAGGTTCAGGGTCAGGGACCGATTTTACACTGAAGATTTCTCGCGTCGAGGCAGAGGACGTTGGGGTTTATTACTGTTGGCAGGGAACATTTTATCCATGGACATTCGGGGGAGGAACCAAGGTAGAGATTAAA (SEQ ID NO: 95)
hzR35B9-VL_LV3a GACGTAGTTATGACTCAGTCTCCACTCTCTCTCCCCGTGACCATTGGACAGCCTGCATCAATATCCTGCAAAAGTAGCCAGTCCTTGCTCAACTCAGCCGGTAAAACCTACCTCAACTGGTTCCTTCAGCGCCCCGGTCAGTCTCCAAAGCGTTTGATATACCTGGTGAGTCAACTCGACTCAGGTGTCCCCGATCGCTTCTCTGGGAGCGGTTCAGGCACAGATTTTACTCTCAAAATATCCAGAGTTGAAGCTGAAGACGTTGGGGTTTACTATTGCTGGCAGGGAACATTCTATCCTTGGACTTTTGGAGGAGGCACAAAGGTTGAGATCAAG (SEQ ID NO: 97)
hzR35B9-VL_LV3b GACGTTGTAATGACCCAAAGTCCACTGTCACTTCCCGTAACCATAGGGCAACCCGCCAGCATCTCCTGCAAATCATCCCAAAGTCTTCTTAACAGTGCCGGAAAAACATACTTGAACTGGCTCTTGCAGAGGCCAGGGCAATCTCCTCGACGACTGATATACCTTGTATCCCAGTTGGATTCTGGCGTGCCCGACAGATTCAGTGGAAGCGGATCTGGCACAGACTTTACCCTTAAAATCAGCCGCGTGGAGGCCGAGGATGTTGGAGTGTACTACTGTTGGCAAGGAACATTTTACCCTTGGACCTTTGGCGGGGGGACCAAAGTCGAGATAAAG (SEQ ID NO: 99)
hzR35B9-VL_LV4 GATGTCGTGATGACACAAAGTCCCCTGAGCTTGCCCGTAACTATTGGGCAACCAGCCTCTATCTCTTGTAAATCATCACAATCTTTGCTCAATTCTGCTGGCAAGACATACCTTAACTGGCTTTTGCAACGCCCTGGTCAAAGCCCTAAGAGATTGATTTATCTCGTCAGCCAGCTGGACTCTGGGGTCCCAGATCGCTTTAGTGGGTCAGGCTCTGGAACCGACTTCACACTGAAGATCTCCAGGGTTGAAGCCGAGGATGTAGGGGTTTATTACTGTTGGCAAGGCACCTTTTATCCCTGGACTTTTGGGGGCGGCACCAAGGTCGAAATAAAG (SEQ ID NO: 101)
hzR35B9-VL_LV5 GATGTTGTCATGACTCAATCACCATTGAGCCTCCCCGTGACAATAGGCCAGCCTGCTTCCATTTCCTGTAAGTCAAGCCAGAGTCTGCTTAATAGTGCCGGGAAGACCTATCTGAACTGGCTCTTGCAGAGACCAGGACAATCTCCAAAACGGTTGATCTACCTGGTCAGCCAGTTGGACAGCGGCGTTCCAGATCGATTCAGTGGCAGTGGATCTGGAACTGATTTTACCTTGAAGATTAGTAGAGTAGAGGCAGAGGACGTGGGAGTATATTACTGCTGGCAGGGAACCTTCTACCCCTGGACCTTTGGCGGCGGCACCAAGCTCGAGATCAAA (SEQ ID NO: 103)
hzR35B9(A56)-VH_HV7c CAAGTTCAACTGGTGCAGTCTGGCGCTGAGGTAAAAAAACCCGGCGCCTCTGTTAAAGTAAGTTGTAAAGCATCTGGGTATATCTTTCAAGATTACAACATGCACTGGGTTAAGCAGGCTCCCGGACAGGGTCTTGAGTGGATAGGGTCCATAAATCCCCGCAATGcCTGGACTAATTATAACCAAAAGTTCAAAGGAAAAGCCACCATCACAGCAGACACCAGTACATCTACCGCCTACATGGAATTGAGTTCTCTGCGGAGCGAGGATACCGCAGTCTATTACTGCGCCTCATCTGGATGGTTTACTTACTGGGGTCAGGGCACTCTGGTGACTGTTTCAAGT (SEQ ID NO: 105)
hzR35B9(A56)-VH_HV11 CAAGTTCAACTTGTCCAATCCGGTCCAGAAGTCGTAAAACCAGGTGCTAGTGTGAAAGTCTCATGCAAGGCTTCAGGCTACATATTTCAAGACTATAATATGCATTGGGTTAGACAGGCACACGGTCAGTCACTGGAATGGATGGGGTCAATCAACCCTCGCAACGCCTGGACAAATTACAACCAAAAGTTCAAAGGGAGAGCTACTATCACTGTCGATAAATCTACCAGAACAGCTTACATGGAGCTGAGTAGTCTGAGATCAGAGGACACCGCCGTCTACTATTGTGCTTCTTCTGGGTGGTTTACATACTGGGGGCAGGGGACACTGGTGACTGTGAGTTCT (SEQ ID NO: 107)
hzR35B9(Y50A56G57)-VH_HV7b CAAGTGCAGCTCGTTCAGTCTGGAGCCGAGGTAGTCAAGCCCGGCGCATCTGTTAAAGTCAGTTGCAAAGCTTCCGGCTATATCTTCCAGGATTACAACATGCACTGGGTCAGACAGGCTCACGGTCAAGGGCTCGAATGGATGGGAtaTATTAACCCTCGTAATGCCGGGACTAACTATAACCAAAAGTTTAAGGGGAGGGTGACTATTACAGCAGATAAGTCTACTCGCACTGCCTATATGGAGCTTAGCTCACTCCGCTCCGAAGACACCGCTGTGTATTACTGTGCTAGTTCCGGGTGGTTCACCTATTGGGGGCAAGGAACTCTTGTAACAGTTTCCTCT (SEQ ID NO: 109)
hzR35B9(H98)-VL_LV1a GATGTAGTAATGACCCAGTCCCCACTTAGCTTGCCCGTTACACTCGGCCAACCCGCAAGCATATCTTGCAAATCCAGTCAGAGCCTCCTGAACTCTGCTGGAAAGACCTATCTGAATTGGCTTCAACAACGTCCCGGTCAATCCCCCAGACGACTTATCTACTTGGTAAGTCAGCTTGACTCCGGGGTTCCAGACAGGTTTTCCGGATCTGGAAGTGGAACTGATTTTACACTCAAAATTAGTCGAGTCGAGGCCGAAGACGTGGGTGTCTATTATTGCTGGCAAGGCACCcaTTATCCATGGACTTTTGGTGGGGGCACCAAGGTTGAAATTAAG (SEQ ID NO: 111)
實例 9 - 將 CDR 變異體引入人類化抗體
基於有利活性來選擇R35B9 VH及VL之若干人類化構架，且引入所選CDR胺基酸取代(參見表6)。
將三種取代引入hzR35B9 HV7b VH中(位置50之酪胺酸(Tyr50)、位置56之丙胺酸(Ala56)及位置57之甘胺酸(Gly57)，以產生具有hzR35B9(Y50A56G57)_HV7b VH (A515)可變區的重鏈(展示於核苷酸SEQ ID NO: 109及胺基酸SEQ ID NO: 110中)。將一個取代引入hzR35B9 HV7c VH中(位置56之丙胺酸(A56)以產生具有hzR35B9(A56)_HV7c VH (A553)可變區的重鏈(展示於核苷酸SEQ ID NO: 105及胺基酸SEQ ID NO: 106中)。將一個取代引入hzR35B9 HV11 VH中(位置56之丙胺酸(A56)以產生具有hzR35B9(A56)_HV11 VH (A512)可變區的重鏈(展示於核苷酸SEQ ID NO: 107及胺基酸SEQ ID NO: 108中)。
將一個取代引入hzR35B9_LV1a VL中(位置98之組胺酸(H98))以產生具有hzR35B9(H98)_LV1a VL (A518)可變區的輕鏈(展示於核苷酸SEQ ID NO: 111及胺基酸SEQ ID NO: 112中)。
此等重鏈及輕鏈用於產生若干人類化抗體(參見表5及6)：包含含有hzR35B9(A56)_HV11 VH (A512)(胺基酸SEQ ID NO: 108)之重鏈及含有hzR35B9_LV1a VL(A468)(胺基酸SEQ ID NO: 94)之輕鏈的抗體A512/A468；包含含有hzR35B9(Y50A56G57)_HV7b VH (A515)可變區(胺基酸SEQ ID NO: 110)之重鏈及含有hzR35B9(H98)_LV1a VL (A518)可變區(胺基酸SEQ ID NO: 112)之輕鏈的抗體A515/A518；及包含含有hzR35B9(A56)_HV7c VH (A553)(SEQ ID NO: 106)之重鏈及含有hzR35B9_LV4 VL (A472)可變區(胺基酸SEQ ID NO: 102)之輕鏈的抗體A553/A472。實例 10 - 進一步經工程改造的人類化抗體
人類化抗體純系A512/A468 (表現分別含有SEQ ID NO. 108及94之VH及VL胺基酸序列的重鏈及輕鏈)進一步加以工程改造。基於A512 VH及A468 VL序列，使用先前所述方法產生具有變異型VH序列的十三種重鏈及具有變異型VL序列的五種輕鏈。
變異型VH序列包括以Gln取代Val (5)、Ala取代Val (12)、Gly取代Val (37)、Lys取代Arg (38)、Glu取代Gln (39)、Gly取代Ala (40)、Asp或Pro取代His (41)、Asp取代Glu (43)、Asp取代Gln (62)、Gly或Asp或His取代Lys (65)、Lys取代Arg (67)，或Leu取代Ile (70)的至少一個胺基酸修飾。以此方式設計HV12a (SEQ ID NO: 203)、HV12b (SEQ ID NO: 205)、HV13a (SEQ ID NO: 207)、HV13b (SEQ ID NO: 209)、HV13d (SEQ ID NO: 211)、HV13f (SEQ ID NO: 213)、HV13g (SEQ ID NO: 215)、HV16 (SEQ ID NO: 217)、HV17a (SEQ ID NO: 219)、HV17b (SEQ ID NO: 221)、HV17d (SEQ ID NO: 223)、HV17g (SEQ ID NO: 225)及HV17i (SEQ ID NO: 227)作為hzR35B9抗體純系A512之VH變異體。基於A512之此等變異型VH序列的核苷酸及胺基酸序列展示於下表5中(亦參見圖22至圖24)。 表5. 基於A512之變異型VH序列的核苷酸及胺基酸序列
VH 名稱 序列 (SEQ ID NO)
hzR35B9(A56)-HV12a (A631) CAAGTTCAACTTGTCCAATCCGGTCCAGAAGTCGTAAAACCAGGTGCTAGTGTGAAAGTCTCATGCAAGGCTTCAGGCTACATATTTCAAGACTATAATATGCATTGGGTTAGACAGGCAGACGGTCAGTCACTGGAATGGATGGGGTCAATCAACCCTCGCAACGCCTGGACAAATTACAACCAAAAGTTCAAAGGGAGAGCTACTATCACTGTCGATAAATCTACCAGAACAGCTTACATGGAGCTGAGTAGTCTGAGATCAGAGGACACCGCCGTCTACTATTGTGCTTCTTCTGGGTGGTTTACATACTGGGGGCAGGGGACACTGGTGACTGTGAGTTCT (SEQ ID NO: 202)
hzR35B9(A56)-HV12a (A631) QVQLVQSGPEVVKPGASVKVSCKASGYIFQDYNMHWVRQADGQSLEWMGSINPRNAWTNYNQKFKGRATITVDKSTRTAYMELSSLRSEDTAVYYCASSGWFTYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 203)
hzR35B9(A56)-HV12b (A632) CAAGTTCAACTTGTCCAATCCGGTCCAGAAGTCGTAAAACCAGGTGCTAGTGTGAAAGTCTCATGCAAGGCTTCAGGCTACATATTTCAAGACTATAATATGCATTGGGTTAGACAGGCACCCGGTCAGTCACTGGAATGGATGGGGTCAATCAACCCTCGCAACGCCTGGACAAATTACAACCAAAAGTTCAAAGGGAGAGCTACTATCACTGTCGATAAATCTACCAGAACAGCTTACATGGAGCTGAGTAGTCTGAGATCAGAGGACACCGCCGTCTACTATTGTGCTTCTTCTGGGTGGTTTACATACTGGGGGCAGGGGACACTGGTGACTGTGAGTTCT (SEQ ID NO: 204)
hzR35B9(A56)-HV12b (A632) QVQLVQSGPEVVKPGASVKVSCKASGYIFQDYNMHWVRQAPGQSLEWMGSINPRNAWTNYNQKFKGRATITVDKSTRTAYMELSSLRSEDTAVYYCASSGWFTYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 205)
hzR35B9(A56)-HV13a (A633) CAAGTTCAACTTGTCCAATCCGGTCCAGAAGTCGTAAAACCAGGTGCTAGTGTGAAAGTCTCATGCAAGGCTTCAGGCTACATATTTCAAGACTATAATATGCATTGGGTTAGAGAAGCACACGGTCAGTCACTGGAATGGATGGGGTCAATCAACCCTCGCAACGCCTGGACAAATTACAACCAAAAGTTCAAAGGGAGAGCTACTATCACTGTCGATAAATCTACCAGAACAGCTTACATGGAGCTGAGTAGTCTGAGATCAGAGGACACCGCCGTCTACTATTGTGCTTCTTCTGGGTGGTTTACATACTGGGGGCAGGGGACACTGGTGACTGTGAGTTCT (SEQ ID NO: 206)
hzR35B9(A56)-HV13a (A633) QVQLVQSGPEVVKPGASVKVSCKASGYIFQDYNMHWVREAHGQSLEWMGSINPRNAWTNYNQKFKGRATITVDKSTRTAYMELSSLRSEDTAVYYCASSGWFTYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 207)
hzR35B9(A56)-HV13b (A634) CAAGTTCAACTTGTCCAATCCGGTCCAGAAGTCGTAAAACCAGGTGCTAGTGTGAAAGTCTCATGCAAGGCTTCAGGCTACATATTTCAAGACTATAATATGCATTGGGTTAGACAGGCACACGGTCAGTCACTGGAATGGATGGGGTCAATCAACCCTCGCAACGCCTGGACAAATTACAACCAAAAGTTCGGAGGGAGAGCTACTATCACTGTCGATAAATCTACCAGAACAGCTTACATGGAGCTGAGTAGTCTGAGATCAGAGGACACCGCCGTCTACTATTGTGCTTCTTCTGGGTGGTTTACATACTGGGGGCAGGGGACACTGGTGACTGTGAGTTCT (SEQ ID NO: 208)
hzR35B9(A56)-HV13b (A634) QVQLVQSGPEVVKPGASVKVSCKASGYIFQDYNMHWVRQAHGQSLEWMGSINPRNAWTNYNQKFGGRATITVDKSTRTAYMELSSLRSEDTAVYYCASSGWFTYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 209)
hzR35B9(A56)-HV13d (A636) CAAGTTCAACTTGTCCAATCCGGTCCAGAAGTCGTAAAACCAGGTGCTAGTGTGAAAGTCTCATGCAAGGCTTCAGGCTACATATTTCAAGACTATAATATGCATTGGGGCAGACAGGCACACGGTCAGTCACTGGAATGGATGGGGTCAATCAACCCTCGCAACGCCTGGACAAATTACAACCAAAAGTTCAAAGGGAGAGCTACTATCACTGTCGATAAATCTACCAGAACAGCTTACATGGAGCTGAGTAGTCTGAGATCAGAGGACACCGCCGTCTACTATTGTGCTTCTTCTGGGTGGTTTACATACTGGGGGCAGGGGACACTGGTGACTGTGAGTTCT (SEQ ID NO: 210)
hzR35B9(A56)-HV13d (A636) QVQLVQSGPEVVKPGASVKVSCKASGYIFQDYNMHWGRQAHGQSLEWMGSINPRNAWTNYNQKFKGRATITVDKSTRTAYMELSSLRSEDTAVYYCASSGWFTYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 211)
hzR35B9(A56)-HV13f (A638) CAAGTTCAACTTGTCCAATCCGGTCCAGAAGTCGTAAAACCAGGTGCTAGTGTGAAAGTCTCATGCAAGGCTTCAGGCTACATATTTCAAGACTATAATATGCATTGGGTTAGACAGGCACACGGTCAGTCACTGGAATGGATGGGGTCAATCAACCCTCGCAACGCCTGGACAAATTACAACGATAAGTTCAAAGGGAGAGCTACTATCACTGTCGATAAATCTACCAGAACAGCTTACATGGAGCTGAGTAGTCTGAGATCAGAGGACACCGCCGTCTACTATTGTGCTTCTTCTGGGTGGTTTACATACTGGGGGCAGGGGACACTGGTGACTGTGAGTTCT (SEQ ID NO: 212)
hzR35B9(A56)-HV13f (A638) QVQLVQSGPEVVKPGASVKVSCKASGYIFQDYNMHWVRQAHGQSLEWMGSINPRNAWTNYNDKFKGRATITVDKSTRTAYMELSSLRSEDTAVYYCASSGWFTYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 213)
hzR35B9(A56)-HV13g (A639) CAAGTTCAACTTGTCCAATCCGGTCCAGAAGTCGTAAAACCAGGTGCTAGTGTGAAAGTCTCATGCAAGGCTTCAGGCTACATATTTCAAGACTATAATATGCATTGGGTTAGACAGGCACACGGTGACTCACTGGAATGGATGGGGTCAATCAACCCTCGCAACGCCTGGACAAATTACAACCAAAAGTTCAAAGGGAGAGCTACTATCACTGTCGATAAATCTACCAGAACAGCTTACATGGAGCTGAGTAGTCTGAGATCAGAGGACACCGCCGTCTACTATTGTGCTTCTTCTGGGTGGTTTACATACTGGGGGCAGGGGACACTGGTGACTGTGAGTTCT (SEQ ID NO: 214)
hzR35B9(A56)-HV13g (A639) QVQLVQSGPEVVKPGASVKVSCKASGYIFQDYNMHWVRQAHGDSLEWMGSINPRNAWTNYNQKFKGRATITVDKSTRTAYMELSSLRSEDTAVYYCASSGWFTYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 215)
hzR35B9(A56)-HV16 (A641) CAAGTTCAACTTCAGCAATCCGGTCCAGAAGTCGTAAAACCAGGTGCTAGTGTGAAAGTCTCATGCAAGGCTTCAGGCTACATATTTCAAGACTATAATATGCATTGGGTTAAACAGGCACACGGTCAGTCACTGGAATGGATGGGGTCAATCAACCCTCGCAACGCCTGGACAAATTACAACCAAAAGTTCAAAGGGAAAGCTACTCTGACTGTCGATAAATCTACCAGAACAGCTTACATGGAGCTGAGTAGTCTGAGATCAGAGGACACCGCCGTCTACTATTGTGCTTCTTCTGGGTGGTTTACATACTGGGGGCAGGGGACACTGGTGACTGTGAGTTCT (SEQ ID NO: 216)
hzR35B9(A56)-HV16 (A641) QVQLQQSGPEVVKPGASVKVSCKASGYIFQDYNMHWVKQAHGQSLEWMGSINPRNAWTNYNQKFKGKATLTVDKSTRTAYMELSSLRSEDTAVYYCASSGWFTYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 217)
hzR35B9(A56)-HV17a (A642) CAAGTTCAACTTCAGCAATCCGGTCCAGAAGTCGTAAAACCAGGTGCTAGTGTGAAAGTCTCATGCAAGGCTTCAGGCTACATATTTCAAGACTATAATATGCATTGGGTTAAACAGGGACACGGTCAGTCACTGGAATGGATGGGGTCAATCAACCCTCGCAACGCCTGGACAAATTACAACCAAAAGTTCAAAGGGAAAGCTACTCTGACTGTCGATAAATCTACCAGAACAGCTTACATGGAGCTGAGTAGTCTGAGATCAGAGGACACCGCCGTCTACTATTGTGCTTCTTCTGGGTGGTTTACATACTGGGGGCAGGGGACACTGGTGACTGTGAGTTCT (SEQ ID NO: 218)
hzR35B9(A56)-HV17a (A642) QVQLQQSGPEVVKPGASVKVSCKASGYIFQDYNMHWVKQGHGQSLEWMGSINPRNAWTNYNQKFKGKATLTVDKSTRTAYMELSSLRSEDTAVYYCASSGWFTYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 219)
hzR35B9(A56)-HV17b (A643) CAAGTTCAACTTCAGCAATCCGGTCCAGAAGTCGTAAAACCAGGTGCTAGTGTGAAAGTCTCATGCAAGGCTTCAGGCTACATATTTCAAGACTATAATATGCATTGGGTTAAACAGGCACACGGTCAGTCACTGGAATGGATGGGGTCAATCAACCCTCGCAACGCCTGGACAAATTACAACCAAAAGTTCCACGGGAAAGCTACTCTGACTGTCGATAAATCTACCAGAACAGCTTACATGGAGCTGAGTAGTCTGAGATCAGAGGACACCGCCGTCTACTATTGTGCTTCTTCTGGGTGGTTTACATACTGGGGGCAGGGGACACTGGTGACTGTGAGTTCT (SEQ ID NO: 220)
hzR35B9(A56)-HV17b (A643) QVQLQQSGPEVVKPGASVKVSCKASGYIFQDYNMHWVKQAHGQSLEWMGSINPRNAWTNYNQKFHGKATLTVDKSTRTAYMELSSLRSEDTAVYYCASSGWFTYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 221)
hzR35B9(A56)-HV17d (A645) CAAGTTCAACTTCAGCAATCCGGTCCAGAAGTCGTAAAACCAGGTGCTAGTGTGAAAGTCTCATGCAAGGCTTCAGGCTACATATTTCAAGACTATAATATGCATTGGGTTAAACAGGCACACGGTCAGTCACTGGAATGGATGGGGTCAATCAACCCTCGCAACGCCTGGACAAATTACAACCAAAAGTTCGACGGGAAAGCTACTCTGACTGTCGATAAATCTACCAGAACAGCTTACATGGAGCTGAGTAGTCTGAGATCAGAGGACACCGCCGTCTACTATTGTGCTTCTTCTGGGTGGTTTACATACTGGGGGCAGGGGACACTGGTGACTGTGAGTTCT (SEQ ID NO: 222)
hzR35B9(A56)-HV17d (A645) QVQLQQSGPEVVKPGASVKVSCKASGYIFQDYNMHWVKQAHGQSLEWMGSINPRNAWTNYNQKFDGKATLTVDKSTRTAYMELSSLRSEDTAVYYCASSGWFTYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 223)
hzR35B9(A56)-HV17g (A648) CAAGTTCAACTTCAGCAATCCGGTCCAGAAGTCGTAAAACCAGGTGCTAGTGTGAAAGTCTCATGCAAGGCTTCAGGCTACATATTTCAAGACTATAATATGCATTGGGTTAAACAGGCACACGGTCAGTCACTGGAATGGATGGGGTCAATCAACCCTCGCAACGCCTGGACAAATTACAACGACAAGTTCAAAGGGAAAGCTACTCTGACTGTCGATAAATCTACCAGAACAGCTTACATGGAGCTGAGTAGTCTGAGATCAGAGGACACCGCCGTCTACTATTGTGCTTCTTCTGGGTGGTTTACATACTGGGGGCAGGGGACACTGGTGACTGTGAGTTCT (SEQ ID NO: 224)
hzR35B9(A56)-HV17g (A648) QVQLQQSGPEVVKPGASVKVSCKASGYIFQDYNMHWVKQAHGQSLEWMGSINPRNAWTNYNDKFKGKATLTVDKSTRTAYMELSSLRSEDTAVYYCASSGWFTYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 225)
hzR35B9(A56)-HV17i (A650) CAAGTTCAACTTCAGCAATCCGGTCCAGAAGTCGCCAAACCAGGTGCTAGTGTGAAAGTCTCATGCAAGGCTTCAGGCTACATATTTCAAGACTATAATATGCATTGGGTTAAACAGGCACACGGTCAGTCACTGGAATGGATGGGGTCAATCAACCCTCGCAACGCCTGGACAAATTACAACCAAAAGTTCAAAGGGAAAGCTACTCTGACTGTCGATAAATCTACCAGAACAGCTTACATGGAGCTGAGTAGTCTGAGATCAGAGGACACCGCCGTCTACTATTGTGCTTCTTCTGGGTGGTTTACATACTGGGGGCAGGGGACACTGGTGACTGTGAGTTCT (SEQ ID NO: 226)
hzR35B9(A56)-HV17i (A650) QVQLQQSGPEVAKPGASVKVSCKASGYIFQDYNMHWVKQAHGQSLEWMGSINPRNAWTNYNQKFKGKATLTVDKSTRTAYMELSSLRSEDTAVYYCASSGWFTYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 227)
變異型VL序列包括以Leu (52)取代Gly、Ile (53)取代Ala、Ser (57)取代Ala、Gln (58)取代Glu或Ser (61)取代Asp的至少一個胺基酸修飾。以此方式設計LV2a (SEQ ID NO: 229)、LV2b (SEQ ID NO: 231)、LV2c (SEQ ID NO: 233)、LV2d (SEQ ID NO: 235)及LV2f (SEQ ID NO: 237)作為hzR35B9抗體純系A468之VL變異體。基於A468之變異型VL序列的核苷酸及胺基酸序列展示於表17中(亦參見圖21、圖23及圖24)。 表17.基於A468之變異型VL序列的核苷酸及胺基酸序列
hzR35B9(A56)-LV2a (A651) GATGTAGTAATGACCCAGTCCCCACTTAGCTTGCCCGTTACACTCGGCCAACCCGCAAGCATATCTTGCAAATCCAGTCAGAGCCTCCTGAACTCTGCTGGAAAGACCTATCTGAATTGGCTTCAACAACGTCCCGGTCAATCCCCCAGACGAGGTATCTACTTGGTAAGTCAGCTTGACTCCGGGGTTCCAGACAGGTTTTCCGGATCTGGAAGTGGAACTGATTTTACACTCAAAATTAGTCGAGTCGAGGCCGAAGACGTGGGTGTCTATTATTGCTGGCAAGGCACCTTTTATCCATGGACTTTTGGTGGGGGCACCAAGGTTGAAATTAAG (SEQ ID NO: 228)
hzR35B9(A56)-LV2a (A651) DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCKSSQSLLNSAGKTYLNWLQQRPGQSPRRGIYLVSQLDSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCWQGTFYPWTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 229)
hzR35B9(A56)-LV2b (A652) GATGTAGTAATGACCCAGTCCCCACTTAGCTTGCCCGTTACACTCGGCCAACCCGCAAGCATATCTTGCAAATCCAGTCAGAGCCTCCTGAACTCTGCTGGAAAGACCTATCTGAATTGGCTTCAACAACGTCCCGGTCAATCCCCCAGACGACTTGCCTACTTGGTAAGTCAGCTTGACTCCGGGGTTCCAGACAGGTTTTCCGGATCTGGAAGTGGAACTGATTTTACACTCAAAATTAGTCGAGTCGAGGCCGAAGACGTGGGTGTCTATTATTGCTGGCAAGGCACCTTTTATCCATGGACTTTTGGTGGGGGCACCAAGGTTGAAATTAAG (SEQ ID NO: 230)
hzR35B9(A56)-LV2b (A652) DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCKSSQSLLNSAGKTYLNWLQQRPGQSPRRLAYLVSQLDSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCWQGTFYPWTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 231)
hzR35B9(A56)-LV2c (A653) GATGTAGTAATGACCCAGTCCCCACTTAGCTTGCCCGTTACACTCGGCCAACCCGCAAGCATATCTTGCAAATCCAGTCAGAGCCTCCTGAACTCTGCTGGAAAGACCTATCTGAATTGGCTTCAACAACGTCCCGGTCAATCCCCCAGACGACTTATCTACTTGGTAAGTGAGCTTGACTCCGGGGTTCCAGACAGGTTTTCCGGATCTGGAAGTGGAACTGATTTTACACTCAAAATTAGTCGAGTCGAGGCCGAAGACGTGGGTGTCTATTATTGCTGGCAAGGCACCTTTTATCCATGGACTTTTGGTGGGGGCACCAAGGTTGAAATTAAG (SEQ ID NO: 232)
hzR35B9(A56)-LV2c (A653) DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCKSSQSLLNSAGKTYLNWLQQRPGQSPRRLIYLVSELDSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCWQGTFYPWTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 233)
hzR35B9(A56)-LV2d (A654) GATGTAGTAATGACCCAGTCCCCACTTAGCTTGCCCGTTACACTCGGCCAACCCGCAAGCATATCTTGCAAATCCAGTCAGAGCCTCCTGAACTCTGCTGGAAAGACCTATCTGAATTGGCTTCAACAACGTCCCGGTCAATCCCCCAGACGACTTATCTACTTGGTAAGTCAGCTTGACGACGGGGTTCCAGACAGGTTTTCCGGATCTGGAAGTGGAACTGATTTTACACTCAAAATTAGTCGAGTCGAGGCCGAAGACGTGGGTGTCTATTATTGCTGGCAAGGCACCTTTTATCCATGGACTTTTGGTGGGGGCACCAAGGTTGAAATTAAG (SEQ ID NO: 234)
hzR35B9(A56)-LV2d (A654) DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCKSSQSLLNSAGKTYLNWLQQRPGQSPRRLIYLVSQLDDGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCWQGTFYPWTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 235)
hzR35B9(A56)-LV2f (A656) GATGTAGTAATGACCCAGTCCCCACTTAGCTTGCCCGTTACACTCGGCCAACCCGCAAGCATATCTTGCAAATCCAGTCAGAGCCTCCTGAACTCTGCTGGAAAGACCTATCTGAATTGGCTTCAACAACGTCCCGGTCAATCCCCCAGACGACTTATCTACTTGGTAGCCCAGCTTGACTCCGGGGTTCCAGACAGGTTTTCCGGATCTGGAAGTGGAACTGATTTTACACTCAAAATTAGTCGAGTCGAGGCCGAAGACGTGGGTGTCTATTATTGCTGGCAAGGCACCTTTTATCCATGGACTTTTGGTGGGGGCACCAAGGTTGAAATTAAG (SEQ ID NO: 236)
hzR35B9(A56)-LV2f (A656) DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCKSSQSLLNSAGKTYLNWLQQRPGQSPRRLIYLVAQLDSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCWQGTFYPWTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 237)
使用先前所述之方法，將此等經進一步工程改造之VH及VL選殖至表現載體中，且將所得重鏈及輕鏈與先前所述之各種重鏈或輕鏈共表現以產生其他抗體。以此方式尤其產生抗體A512/A654 (分別含有VH及VL胺基酸SEQ ID NO. 108及235)、A631/A468 (分別含有VH及VL胺基酸SEQ ID NO. 203及94)、A512/A651 (分別含有VH及VL胺基酸SEQ ID NO. 108及229)、A512/A652 (分別含有VH及VL胺基酸SEQ ID NO. 108及231)、A634/A468 (分別含有VH及VL胺基酸SEQ ID NO. 209及94)、A636/A468 (分別含有VH及VL胺基酸SEQ ID NO. 211及94)、A643/A468 (分別含有VH及VL胺基酸SEQ ID NO. 221及94)、A512/A653 (分別含有VH及VL胺基酸SEQ ID NO. 108及233)、A632/A468 (分別含有VH及VL胺基酸SEQ ID NO. 205及94)、A645/A468 (分別含有VH及VL胺基酸SEQ ID NO. 223及94)、A648/A468 (分別含有VH及VL胺基酸SEQ ID NO. 225及94)、A650/A468 (分別含有VH及VL胺基酸SEQ ID NO. 227及94)、A639/A468 (分別含有VH及VL胺基酸SEQ ID NO. 215及94)、A512/A656 (分別含有VH及VL胺基酸SEQ ID NO. 108及237)、A633/A468 (分別含有VH及VL胺基酸SEQ ID NO. 207及94)、A638/A468 (分別含有VH及VL胺基酸SEQ ID NO. 213及94)、A641/A468 (分別含有VH及VL胺基酸SEQ ID NO. 217及94)、A642/A468 (分別含有VH及VL胺基酸SEQ ID NO. 219及94)，如圖23中所示。實例 11 - 人類化抗體的功能分析
使用上述方法測試此等人類化抗體對經rhTWEAK刺激之HRMC的拮抗劑活性。簡言之，將HRMC與0.833 nM人類化抗Fn14抗體、小鼠/人類嵌合CRCBT-06-002 (mu/huCRCBT)、ITEM-4或同型對照mAb一起在37℃下培育30分鐘且接著將rhTWEAK以250 ng/mL添加至孔中維持24小時。收集上清液且使用IL-8 ELISA套組測試IL-8。人類化抗Fn14純系中之每一者能夠比mu/huCRCBT-06-002及ITEM-4明顯更好地阻斷TWEAK誘導IL-8分泌。利用不成對t檢驗來分析資料，從而比較IL-8減少。
在0.125 µg/mL (0.833 nM)的抗體濃度下，A512/A468、A553/A472及A515/A518展示優於小鼠/人類嵌合CRCBT-06-002及ITEM-4的活性(參見圖13)。
亦測試人類化純系A512/A468、A515/A518及A553/A472對HRMC的促效劑活性。簡言之，將HRMC與250 ng/mL rhTWEAK (陽性對照)或單獨培養基(陰性對照)及人類化抗Fn14、小鼠/人類嵌合CRCBT-06-002 (mu/huCRCBT)、ITEM-4或同型對照mAb一起培育24小時。收集上清液且使用IL-8 ELISA套組測試IL-8。所測試之抗Fn14 mAb純系中之每一者誘導最小量之IL8釋放，類似於針對同型對照hIgG4-剔除型抗體mAb或單獨清液層所觀測到之釋放(參見圖17)。此等資料展示該組人類化抗Fn14 mAb純系(A512/A468、A515/A518及A553/A472)不誘導人類細胞產生發炎趨化因子且證明優於活體外展示促效劑活性之先前所述抗Fn14 mAb。實例 12 - 人類化抗體的產生
製造用於表現全長人類化重鏈或輕鏈之哺乳動物表現載體以表現上文所述之所有VH及VL設計。
將編碼所設計可變序列(定製DNA合成，Invitrogen/GeneArt, Regensburg, Germany)中之每一者的合成DNA片段與適當消化之哺乳動物表現載體融合，使得各可變區與N端信號肽及C端人類恆定區同框接合。使用與上文針對構築小鼠IgG1(D265A)、κ重鏈及輕鏈抗體表現載體所述相同的方法產生用於產生嵌合小鼠-人類或人類化IgG4剔除型抗體κ抗體的表現載體，但其中用於PCR擴增VH及VL cDNA的引子添加適當的5'及3'序列，以便以連接酶非依賴性方式選殖入經NruI及NheI消化的哺乳動物重鏈表現載體pKTABEX-TC26-sphuG4剔除型(Kyowa Hakko Kirin)或pcDNA3.4-sphuG4剔除型及經SfoI及BsiWI消化的輕鏈表現載體pKTABEX-TC26-sphuK(KHK)或pcDNA3.4-sphuK中。藉由桑格測序驗證所有經構築之質體序列。人類IgG4 Nullbody®恆定域(編碼胺基酸SEQ ID NO: 30的核苷酸SEQ ID NO: 29)含有三種胺基酸取代：位置228之絲胺酸經脯胺酸取代(S228P)(Eu編號)、位置409之精胺酸經離胺酸取代(R409K)(Eu編號)以減少重鏈之分子間解離從而形成半抗體(參見US 8911726B2)(Angal, S.等人,Mol Immunol , 1993, 30(1):105)，及位置235之白胺酸經麩胺酸取代(L235E)(Eu編號)以減少FcγR相互作用(Alegre, M.L.等人,J Immunol , 1992, 148(11):3461)。所用人類κ恆定核苷酸序列為編碼胺基酸序列SEQ ID NO: 28的SEQ ID NO: 27。以此方式製造抗體41c、R35B9、R35B9變異體、人類化R35B9、人類化R35B9變異體及嵌合CRCBT-06-002之表現載體。上述人類恆定域序列亦列舉如下。人類 κ 恆定域核苷酸序列 ：
Figure 02_image027
Figure 02_image029
人類 κ 恆定域胺基酸序列 ：
Figure 02_image031
人類 IgG4 剔除型 恆定域核苷酸序列 ：
Figure 02_image033
人類 IgG4 剔除型 恆定域胺基酸序列 ：
Figure 02_image035
Figure 02_image037
Figure 02_image039
。
使用此等載體，使用人類化R35B9 VH及VL構架之各種組合、藉由Expi293細胞短暫表現來產生全抗體且純化，如先前所述。例示性人類化抗體展示於圖23中。測試所得抗體的結合及功能活性。實例 13 - 對 抗 FN14 抗體結合至 FN14 進行的 BIACORE 分析 抗體 Fab 產生
使用Biacore分析來量測四種重組抗Fn14 mAb (41c、R35B9、CRCBT-06-002、ITEM-4)對人類及食蟹獼猴GST-Fn14的親和力。使用小鼠IgG1 Fab及F(ab')2製備套組(Thermo Fisher Scientific, #44980)，依據套組中所提供的製造商說明書，獲得以下mAb 41c、R35B9、CRCBT-06-002、ITEM-4的Fab抗體片段。在酶消化之後，藉由SDS-PAGE分析樣品以確認Fab片段產生且隨後相對於PBS pH 7.4 (Sigma Aldrich粉末袋)透析。在透析之後，用離心過濾濃縮器(Vivaspin 3,500 MWCO: Sartorius, Goettingen, Germany)濃縮蛋白質樣品。藉由尺寸排阻層析進一步純化蛋白質，以移除任何污染物或降解產物。藉由SDS-PAGE分析溶離份且混合陽性溶離份且相對於PBS pH 7.4 (Sigma Aldrich粉末袋)透析。測定抗 Fn14 mAb 物種與人類及食蟹獼猴 Fn14 的 交叉反應 ( 人類、食蟹獼猴及小鼠 Fn14 ) 及親和力
為了利用動力學分析抗Fn14小鼠抗體41c、R35B9及CRCBT-06-002對重組人類及食蟹獼猴Fn14蛋白質之結合活性，藉由表面電漿子共振方法(SPR)量測結合活性。如本文所述產生抗體。使用Biacore T200 (GE Healthcare Bio-Sciences)執行所有以下程序。為了測定抗體對人類Fn14之親和力，藉由胺偶合化學反應將重組人類His-SUMO-Fn14固著於CM5感測晶片(GE Healthcare Bio-Sciences)上。特定言之，藉由使約20-30 RU重組蛋白固著於晶片上來執行動力學分析，以便達成較低的蛋白質固著水準。為測定抗體對食蟹獼猴Fn14之親和力，藉由胺偶合化學反應將多株抗GST抗體固著於CM5感測晶片(GE Healthcare Bio-Sciences)上。特定言之，在晶片上固著約1500 RU抗GST捕捉抗體之後，使培養上清液中的食蟹獼猴GST-Fn14以30 μL/min之流量流動5分鐘為達成約20 RU的低捕捉水準。隨後，使自高濃度連續稀釋的抗體Fab片段以30 μL/min的流量在晶片上流動300秒。解離時間為1800秒且在25℃下量測結合曲線。用10 mM甘胺酸pH 1.5進行再生持續30秒。藉由扣除來自不含有經固著之配位體及空白緩衝液之參考流動池的信號來雙重引用原始資料。
獲得對應於各濃度之感測器圖譜(參見圖5)。使用連接至設備之分析軟體Biacore T200評估軟體(Biacore)，使用1:1朗格繆爾擬合模型(Langmuir fit model)進行分析，藉此計算重組Fn14蛋白質之結合速率常數ka [M- 1 s- 1 ]及解離速率常數kd [s- 1 ]。使用此等資料，獲得個別抗體之平衡解離常數KD (kd/ka)。如上文所述量測抗Fn14小鼠抗體與重組小鼠GST-Fn14蛋白質的交叉反應。特定言之，使濃度為20 nM及10 nM之Fab抗體片段以30 μL/min之流量在晶片上流動300秒。解離時間為1800秒且在25℃下量測結合曲線。
根據分析，抗Fn14單株抗體R35B9對人類Fn14蛋白之親和力顯著高於所測試抗體之其餘部分，其表觀KD值在皮莫耳濃度範圍內(參見下表8)。量測R35B9在0.208 nM下結合至hFn14的KD，而針對所測試之其他抗Fn14抗體的KD如下：0.765 nM (CRCBT-06-002)、1.620 nM (ITEM-4)及1.978 nM (41c)(參見表8)。亦測試針對食蟹獼猴Fn14之親和力，產生類似KD結果，其中mAb維持與針對人類Fn14所觀測之排序相同的排序(參見下表9)。亦展現所有測試抗體結合至小鼠Fn14蛋白質(參見圖6A)。 表8. Fn14 Fab對人類Fn14的結合動力學
分析物 胺偶合 擬合模型 ka (1/Ms) kd (1/s) KD (nM) KD (nM) 平均值 ( 標準差 )
R35B9 Fab LM042817 His-Sumo-huFn14 1:1結合 3067000 6.302E-04 0.2055 0.208 (+/0.00347)
1:1結合 2030000 4.271E-04 0.2104
CRCBT-06- 002 Fab LM111816 His-Sumo-huFn14 1:1結合 887600 4.930E-04 0.8589 0.7654 (+/- 0.1322)
1:1結合 806500 5.418E-04 0.6719
41C Fab LM101416 His-Sumo-huFn14 1:1結合 1128000 2.423E-03 2.148 1.978 (+/-0.2404)
1:1結合 1472000 2.661E-03 1.808
Item 4 Fab LM021617 His-Sumo-huFn14 1:1結合 1682000 3.037E-03 1.805 1.6195  (+/-0.2623)
1:1結合 1942000 2.785E-03 1.434
表9. Fn14 Fab對食蟹獼猴Fn14的結合動力學
分析物 被 抗GST 捕捉 擬合模型 ka (1/Ms) kd (1/s) KD (nM) KD (nM) 平均值 ( 標準差 )
R35B9 Fab LM042817 CynoFn14 1:1結合 1457000 3.424E-04 0.235 0.2285 (+/- 0.00926)
1:1結合 1714000 3.804E-04 0.2219
CRCBT-06- 002 Fab LM111816 CynoFn14 1:1結合 486200 4.017E-04 0.8262 0.76205 (+/- 0.0907
1:1結合 554500 3.869E-04 0.6979
41C Fab LM101416 CynoFn14 1:1結合 441200 1.534E-03 3.476 3.38 (+/-0.1386)
1:1結合 678400 2.226E-03 3.280
Item 4 Fab LM021617 CynoFn14 1:1結合 1308000 1.1819E-03 1.390 1.298 (+/-0.1308)
1:1結合 1680000 2.024E-03 1.205
或者，使用稱為「單次循環動力學」之方法，在單次循環中注射濃度增加之His-Sumo-Fn14，注射之間不使表面再生。特定言之，藉由胺偶合化學反應使抗人類Fc特異性抗體固著於CM5感測晶片(目錄號BR100012，GE Healthcare Life Sciences, Pittsburgh, Pennsylvania)上。隨後以約200 RU捕捉人類化抗Fn14抗體，隨後注射濃度增加的重組人類His-Sumo-Fn14蛋白質。結合時間為120秒，且最終解離時間為900秒。分析物注射結束時，用3M MgCl2使表面再生30秒。藉由扣除來自不含有經固著之配位體及空白緩衝液之參考流動池的信號來雙重引用原始資料。獲得對應於各濃度之感測器圖譜(參見圖6B)。使用連接至設備之分析軟體Biacore T200評估軟體，使用1:1朗格繆爾擬合模型進行分析，藉此計算重組Fn14蛋白質之結合速率常數ka [M-1s-1]及解離速率常數kd [s-1](參見表24)。抗Fn14抗體之人類化不影響針對人類Fn14的親和力，如表24中所示。 表24. Fn14 mAb對人類Fn14的結合動力學
配位體 擬合模型 ka (1/Ms) kd (1/s) KD (nM) KD (nM)平均值 (標準差)
A512/A468 1:1結合 3.003e6 6.794e-4 2.262e-10 2.06E-10 (1.77E-11)
1:1結合 3.432e6 6.643e-4 1.936e-10
1:1結合 3.307e6 6.523e-4 1.973e-10
A515/A518 1:1結合 3.113e6 1.435e-3 4.611e-10 4.70E-10 (8.33E-12)
1:1結合 3.248e6 1.537e-3 4.734e-10
1:1結合 3.15e6 1.501e-3 4.766e-10
A553/A472 1:1結合 2.150e6 8.036e-4 3.738e-10 3.58E-10 (1.40E-11)
1:1結合 2.342e6 8.119e-4 3.466e-10
1:1結合 2.26e6 7.989e-4 3.535e-10
A641/A468 1:1結合 2.889e6 7.556e-4 2.615e-10 2.56E-10 (6.56E-12)
1:1結合 3.108e6 7.734e-4 2.489e-10
1:1結合 2.97e6 7.639e-4 2.573e-10
A648/A468 1:1結合 2.776e6 5.312e-4 1.914e-10 2.22E-10 (2.66E-11)
1:1結合 3.193e6 7.556e-4 2.367e-10
1:1結合 3.128e6 7.42e-4 2.372e-10
A650/A468 1:1結合 3.304e6 8.712e-4 2.636e-10 2.78E-10 (1.21E-11)
1:1結合 2.936e6 8.43e-4 2.871e-10
1:1結合 2.923e6 8.249e-4 2.822e-10
實例 14 - 結合至 FN14 肽之抗 FN14 抗體的抗原決定基定位
使用基於Octet的分析，根據抗Fn14 mAb對hFn14之胞外域之兩個亞域的結合執行抗原決定基定位。亞域1由AA30-50組成且亞域2由AA51-70組成。
使用FortéBio Octet Qke儀器(FortéBio)量測經純化抗體結合Fn14肽的能力。在96孔半區域盤(Grenier，目錄號675076)中，在設定為1000 rpm的攪拌下，在動力學緩衝液(在分析套組中提供)中，在30℃下進行分析以最小化非特異性相互作用。在使用之前，使生物感測尖端在動力學緩衝液中平衡600秒。使存在於動力學緩衝液中的經生物素標記之可溶肽(20 μg/ml，亞域1 (AA30-50)：APGTAPCSRGSSWSADLDKCM-[K-Ahx-生物素]-醯胺(SEQ ID NO: 182)及亞域2 (AA51-70)：DCASCRARPHSDFCLGCAAA-[K-Ahx-生物素]-醯胺(SEQ ID NO: 183)，由21st Century Biochemicals合成)在經抗生蛋白鏈菌素塗佈之生物感測器(FortéBio，目錄號18-5020)上固著300秒。一行八個尖端內的典型捕捉變化率不超過0.1 nm。讓經純化的抗體(20 μg/ml)結合所固著的肽。使用高靈敏度動力學配置，量測結合300秒。為了表徵候選抗體之結合特性，記錄自結合步驟開始起在t=120秒時之反應(nm)。將所有值與對照樣品(同型抗體)進行比較。
結果表明，41c及R35B9結合至Fn14之亞域1，而CRCBT-06-002及ITEM-4結合至蛋白質之亞域2 (參見圖7)。此證明41c及親和力成熟的R35B9抗體結合的Fn14抗原決定基不同於先前所述抗Fn14 mAb CRCBT-06-002及ITEM-4所識別的抗原決定基。實例 15 - 產生重組蛋白用於結晶學 選殖經 His 標記的 41c Fab 用於結晶研究
出於結晶之目的，由細菌產生41c與C端6x組胺酸重鏈標籤之重組Fab片段。為此，將41c VL及VH DNA序列次選殖入細菌表現載體中以便表現41c的Fab片段，該Fab片段經由恆定域胺基酸#220 (Eu編號)、繼之七個胺基酸連接子(TSGQAGQ，單胺基酸代碼)及C端6x組胺酸標籤包含全長41c小鼠κ輕鏈及41c小鼠IgG1重鏈片段(對偶基因IGHG1*02)。將各cDNA與5' pelB原核信號肽同框插入載體中，該信號肽將所連接的蛋白質導引至原核周質空間。位於pelB cDNA與編碼兩個其他胺基酸之VH或VL序列之接合點的用於載體插入的限制性核酸內切酶位點在蛋白質合成期間、在pelB信號肽裂解期間未移除，從而在41c重鏈及輕鏈的胺基端分別得到兩個非免疫球蛋白胺基酸：Leu-Glu或Ser-Arg。具有C端His標籤之成熟小鼠41c-His Fab輕鏈及重鏈的胺基酸序列分別為SEQ ID NO: 176、SEQ ID NO: 175。經細菌產生 41c - His Fab
使用熟習此項技術者已知之方法，使用大腸桿菌(E . coli )細菌菌株ER2738產生41c-His Fab蛋白質。簡言之，將經質體轉型的單一細菌群落接種於LB培養基中且在37℃下振盪培養，直至在600 nm波長下所量測的培養物光學密度(OD600)在0.6與1之間，此時藉由將異丙基β-D-1-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)以1 mM的最終濃度添加至培養物中來誘導細菌產生蛋白質。誘導之後的四至六小時，藉由離心、濃縮及與含有300 mM NaCl及10 mM咪唑之50 mM磷酸鹽緩衝液(pH 8.0)進行緩衝交換來澄清含有已自周質空間洩漏之Fab蛋白質的培養物上清液。接著藉由添加硫酸銨以製備60重量/體積%溶液而使蛋白質自樣品中沈澱。接著使所沈澱的蛋白質部分相對於含有0.3 M NaCl的50 mM磷酸鹽緩衝液pH 8.0透析。經濃縮且經緩衝液交換的樣品如上文所述經純化。純化之後，所得41c-His Fab藉由SDS-PAGE估算為＞95%純度，且在ELISA及Biacore中證實結合Fn14。選殖及產生經 His 標記的 R35B9 Fab 用於結晶研究
產生用於原核表現小鼠IgG1、R35B9之κFab的載體。在PCR反應#1中，使用三個重疊正向引子及一個反向引子，藉由PCR自哺乳動物表現載體擴增整個R35B9小鼠κ輕鏈DNA，該等正向引子添加5' pelB信號序列的DNA以及與限制消化原核表現載體pFLAG-CTS (Sigma-Aldrich)之適當區域重疊的15個核苷酸5'延伸部分，該反向引子添加6x組胺酸標籤及用於與PCR反應#2中所擴增之DNA融合的3'側接DNA。在PCR反應#2中，使用正向引子及反向引子，藉由PCR自載體pFLAG-CTS (Sigma-Aldrich)擴增編碼Tac啟動子與pelB信號肽的DNA，該正向引子添加與PCR反應#1之3'端重疊的5'側接DNA序列，該反向引子黏接至且擴增pelB信號肽之3'端，且與來自PCR反應#3之產物的5'DNA序列重疊。在PCR反應#3中，使用正向引子及反向引子，自先前構築的哺乳動物表現載體擴增編碼R35B9重鏈片段(包括整個VH至小鼠IgG1 (對偶基因IGHG1*01)恆定鉸鏈區之胺基酸#221) Fab部分的DNA (Eu編號)，該正向引子添加編碼pelB信號序列、亦與PCR反應#2之3' DNA序列重疊的5' DNA，該反向引子添加3' 6x組胺酸標籤。使用得自三次先前PCR反應的純化DNA片段組合作為模板，進行第四次PCR反應，該反應利用5'及3' DNA延伸部分使所有三個重疊DNA片段融合成單一pelB-輕鏈-啟動子-pelB重鏈-His片段，以便在Tac啟動子下游接合至經NdeI及SalI消化的pFLAG-CTS中。
對擴增的DNA進行凝膠純化且使用GeneArt無縫選殖套組，根據製造商說明書(目錄號A14606, Invitrogen/GeneArt, Carlsbad, California)接合至限制消化的原核表現載體中。藉由桑格測序驗證載體序列。具有C端His標籤之成熟小鼠R35B9-His Fab輕鏈及重鏈的胺基酸序列分別為SEQ ID NO: 178、SEQ ID NO: 177，且如下表23中所示。 表23. 用於結晶的蛋白質胺基酸序列
結晶的41C mIgG1重鏈 LEEVQLQQSGPELVKPGASVKMSCKASGYTFTDYNMHWVKQSHGKSLEWIGYINPNNGGTNYNQKFKGKATLTVNKSSRSAYMEFRSLTSEDSAVYYCASSGWFTYWGQGTLVTVSAAKTTPPSVYPLAPGSAAQTNSMVTLGCLVKGYFPEPVTVTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVPSSTWPSETVTCNVAHPASSTKVDKKIVPRDC TSGQAGQHHHHHH (SEQ ID NO: 175)
結晶的41C mK輕鏈 SRDVVMTQTPLTLSVAIGQPASISCKSSQSLLNSAGKTYLNWLLQRPGQSPKRLIYLVSQLDSGVPDRFTGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCWQGTHFPWTFGGGTKLEIKRADAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC (SEQ ID NO: 176)
結晶的R35B9 mIgG1重鏈fab片段 EVQLQQSGPELVKPGASVKMSCKASGYIFQDYNMHWVKQSHGKSLEWIGSINPRNGWTNYNQKFKGKATLTVNKSSRSAYMEFRSLTSEDSAVYYCASSGWFTYWGQGTLVTVSAAKTTPPSVYPLAPGSAAQTNSMVTLGCLVKGYFPEPVTVTWNSGSLSSGVHTFPAVLESDLYTLSSSVTVPSSPRPSETVTCNVAHPASSTKVDKKIVPRDCGHHHHHH (SEQ ID NO: 177)
結晶的R35B9 mK輕鏈 DVVMTQTPLTLSVAIGQPASISCKSSQSLLNSAGKTYLNWLLQRPGQSPKRLIYLVSQLDSGVPDRFTGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCWQGTFYPWTFGGGTKLEIKRADAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC (SEQ ID NO: 178)
經細菌產生 R35B9 - His - Fab
使R35B9 Fab-His表現載體在細菌菌株W3110中轉型且在37℃下，在225 rpm振盪的同時，使單一的安比西林(ampicillin)抗性純系在液體LB培養液中 + 安比西林中生長6-8小時。將100 µL培養物接種於100 mL LB培養液 + 安比西林中且在37℃下、在225 rpm振盪的同時培育隔夜。次日，量測OD600吸光度，且在約0.05-0.1之OD600下接種大量LB培養液 + 安比西林。如前所述培育此培養物，直至OD600達到0.6至1.0，此時輕緩地使細胞集結且捨棄上清液。將細菌集結粒再懸浮於體積等於原始培養體積的預溫熱37℃ M9培養液(1x M9最低鹽(Sigma-Aldrich，目錄號M6030)，其補充有0.4%葡萄糖、2 mM MgSO4及0.1 mM CaCl2)中，如前所述培育1小時，接著移至22℃培育箱，以225 rpm振盪。
藉由添加IPTG至0.5 mM且培育隔夜來誘導表現。藉由離心使細胞集結且捨棄上清液。藉由將細胞集結粒再懸浮於TS緩衝液(200 mM Tris-HCl pH 8.0、500 mM蔗糖)中且在冰上培育30-60分鐘而使Fab蛋白質自細菌周質中釋放。又藉由離心使細菌集結且含有所釋放之Fab的TS緩衝液經由0.22 µm真空過濾器單元(Millipore, Bedford, ΜΑ)無菌過濾，接著藉由Ni-NTA層析進一步處理以便富集Fab。產生重組 Fn14 用於結晶研究
藉由SUMO表現蛋白酶，根據製造商方案(Lucigen，目錄號30801-2)對His-SUMO-Fn14進行酶處理，獲得裂解的未標記人類Fn14用於結晶研究。如上述實例1中所示製備His-SUMO-Fn14。
在裂解之後，將混合物施加於IMAC管柱(GE Healthcare，目錄號17524701)，且使游離的目標蛋白在流過物中回收，而SUMO標籤及SUMO表現蛋白酶保持結合至IMAC基質。藉由尺寸排阻層析進一步純化Fn14蛋白質，以移除任何污染物或未裂解的物質。藉由SDS-PAGE分析溶離份且混合陽性溶離份且相對於PBS pH 7.4 (Sigma Aldrich粉末袋)透析。重組 41c - His 及 R35B9 - His Fab 純化
使用HisTrap HP親和管柱(預裝有鎳離子(Ni2+)的瓊脂糖鎳高效能培養基)(GE Healthcare Life Sciences, 目錄號17524701)自培養基純化經His標記的重組Fab。條件培養基(培養上清液)用50 mM磷酸鈉pH 8.0、0.3 M NaCl緩衝液稀釋且用0.22 µm真空過濾器單元(Millipore, Bedford, ΜΑ)過濾。即將純化之前，添加咪唑直至20 mM的最終濃度。將樣品裝載於經50 mM磷酸鈉pH 8.0、0.3 M NaCl緩衝液、20 mM咪唑平衡的5 mL HisTrap HP管柱(GE Healthcare Life Sciences，目錄號17524801)上。樣品裝載之後，管柱用6倍管柱體積的50 mM磷酸鈉pH 8.0、0.3 M NaCl緩衝液、20 mM咪唑徹底洗滌。蛋白質用25倍管柱體積的20 mM-600 mM咪唑梯度溶離，且用5 mM EDTA (最終濃度)中和。藉由SDS-PAGE分析溶離份且混合陽性溶離份且相對於PBS pH 7.4 (Sigma Aldrich粉末袋)透析。在透析之後，用離心過濾濃縮器(Vivaspin 3,500 MWCO: Sartorius, Goettingen, Germany)濃縮蛋白質樣品。藉由尺寸排阻層析進一步純化蛋白質，以移除任何污染物或降解產物。藉由SDS-PAGE分析溶離份且混合陽性溶離份且相對於PBS pH 7.4 (Sigma Aldrich粉末袋)透析。實例 16 - 41C - HIS FAB 或 R35B9 - HIS FAB - Fn14 複合物的晶體結構 結晶方法
將經純化之Fn14及經His標記之41c Fab或R35B9 Fab蛋白質以1:1化學計量比率混合，濃縮至1 mg/mL且接著進行結晶。在96孔格式中，在將0.15 µL蛋白質與不同市售結晶篩(JCSG核心+及JCSG核心1篩網)所得之0.15 µL沈澱劑混合的同時，使用奈公升分配液體操作機器人(Phoenix, Art Robbins Ltd.)進行初始結晶試驗。使用沈滴式氣相擴散方法測試逾200種結晶條件且在4℃與22℃下執行結晶試驗。藉由懸滴式及沈滴式方法人工進行所有結晶條件之最佳化。在含有PEG 3350或PEG 6000作為共同沈澱劑的不同條件下獲得晶體且使其生長3天。
藉由沈滴式氣相擴散方法、藉由使含有1 µL蛋白質複合物(1 mg/mL Fn14-41c-His Fab複合物，存在於1X PBS緩衝液pH 7.0中)及1 µL含有20% (w/v) PEG3350及0.2 M酒石酸鉀/鈉之儲備溶液的混合物相對於1 mL儲備溶液平衡而使用於X射線繞射實驗的Fn14-41c-His Fab複合物晶體生長。
類似地，藉由懸滴式氣相擴散方法，在含有0.1 M檸檬酸pH 5.0、20 W/V% PEG 6000的結晶溶液中獲得Fn14-R35B9-His Fab複合物晶體。所有晶體在其含有20%甘油之結晶緩衝液中，在液氮中急驟冷卻以便隨後收集資料。資料收集及改進
使用PILATUS 6M PAD偵測器，在斯坦福同步加速器輻射光源(SSRL)光束線9-2處，在0.97 Å波長及100 K溫度下遠程收集不同晶體的原生繞射資料。利用0.15度振盪及1.25秒暴露時間來收集各影像。使用HKL2000 (Otwinowski, Z.及W. Minor,Methods Enzymol . , 1997, 276:307-326)處理所收集的影像且按比例縮放至1.76 Å (對於Fn14-41c-His Fab複合物)及2.25 Å (對於Fn14-R35B9-His Fab複合物)的總體解析度。Fn14-41c Fab複合物晶體屬於空間群P21 221 (sg 18)，其具有單位晶胞尺寸：a=68.46 Å，b=75.96 Å，c=102.64 Å，α=β=γ=90，而Fn14-R35B9 Fab複合物晶體屬於空間群P1，其具有單位晶胞尺寸：a=89.81 Å，b=102.38 Å，c=120.95 Å，α=89.4˚，β=82.9˚，γ=85.8˚。
分別使用小鼠IgG1 Fab F124 (抗B型肝炎表面抗原mAb，PDB ID 1F11)之L及H鏈作為起始搜尋模型，藉由分子置換方法PHASER-MR (McCoy, A.J.等人,Acta Crystallogr . , 2005, D61(4):458-464)確定不對稱單元中之41c-His Fab位置。以藉由MR獲得初始相開始，首先藉由迭代模型構建循環來逐漸構建41c-His Fab型且隨後使用COOT以人工方式將Fn14構建成Fo-Fc電子密度圖譜(Emsley, P.等人, Acta Crystallogr D Biol Crystallogr, 2004, 60(12):2126-32；Emsley, P.等人,Acta Crystallogr D Biol Crystallogr. , 2010. 66(4):486-501)。在改進的最後階段，使用具有ARP/wARP函數的Refmac程式自動添加水分子。
最終模型用PHENIX/REFMAC (Murshudov, G.N.等人,Acta Crystallogr . , 1997, D53:240-255)改進至1.76 Å解析度，殘餘係數R/R自由 =16.4/19.4。該結構具有良好幾何結構，其中4個殘基(0.89%)為離群值且97.6%殘基處於拉氏圖(Ramachandran plot)之有利區域中。相應地，使用獲自Fn14-41c-His Fab複合物的相位資訊，藉由分子置換來確定Fn14-R35B9-His Fab複合物的結構且將該結構改進至2.3 Å，殘餘係數R/R自由 =20.9/23.3。資料收集及改進統計資料概述於表7中。 表7. Fn14-41c-His Fab及Fn14-R35B9-His Fab複合物的資料收集及改進的統計資料
資料收集統計學 Fn14 - 41c-His Fab 複合物 Fn14 - R35B9-His Fab 複合物
PDB ID    
空間群 P21 221 P1
晶胞維度    
a, b, c, (Å) 68.5, 76.0, 102.6 89.8, 102.4, 121.0
a, b, g(°) 90.00  90.00  90.00 89.40,  82.91,  85.86
解析度範圍(Å) 40 - 1.76 (1.8 - 1.76) 50 - 2.25 (2.33 - 2.25)
[外殼]
獨特反射的數目 53620 193245
Rmeas (%) 10.2 (58.2) 13.5 (65.2)
Rpim (%) 4.4 (26.9) 6.3 (34.8)
多重性 4.9 (4.2) 4.2 (3.0)
平均I/σI 15.4 (1.96) 21.4 (1.6)
完整性(%) 99.4 (99.0) 95.8 (85.7)
     
改進的統計資料    
原子數目 4049 29279
       蛋白質 3623 28238
        配位體 34 30
       水 392 1011
拉氏圖(%)    
       有利 97.56 97.99
       允許 1.56 1.53
       離群值 0.89 0.47
R.m.s.偏差    
       鍵(Å) 0.015 0.015
       角度(°) 1.72 1.73
B因數(Å2 )    
       蛋白質 19.21 53.23
       配位體 80.63 73.3
       水 29.6 54.5
R因數(%) 16.4 18.9
R自由 (%) 19.4 22.3
41c - His Fab - Fn14 複合物之晶體結構
發現41c-His Fab與Fn14之間形成之複合物的不對稱單元中含有一個41c-His Fab分子及一個Fn14分子。最終模型的各單體由41c-His Fab輕鏈殘基1-218及重鏈殘基1-216組成。觀測到SEQ ID NO: 2之Fn14殘基32-68存在正確的電子密度，而用於形成複合物的構築體含有殘基28-75。在晶體結構中，Fn14穩定化係藉由與41c-His Fab之重鏈及輕鏈相互作用而發生。Fn14在重鏈與輕鏈之互補決定區(CDR)環所形成的深裂隙處結合(圖8的部分A)。重鏈與Fn14界面的區域為442 Å2，其中涉及Fn14的14個殘基及41c-His Fab之重鏈區域的11個殘基。類似地，Fn14與41c-His Fab輕鏈之間的界面分別涉及有5及7個殘基，總界面面積為174 Å2。圖8之部分B中展示電子密度圖譜，其展現與41c-His Fab分子之輕鏈環L1及L2接觸的Fn14殘基。因此，重鏈對Fn14接觸的貢獻大於輕鏈。
Fn14與重鏈之全部三個CDR環(H1、H2及H3)形成多個極性接觸，該等接觸涉及主鏈與側鏈相互作用。氫鍵相互作用如下形成：Fn14殘基Lys 48及Cys 49分別與41c-His Fab之H1環中的Tyr 32及Asp 31；Fn14殘基Gly 32、Thr 33及Pro 35與41c-His Fab之重鏈CDR2環；Fn14殘基Asp 45及Asp 47與41c-His Fab之H3環(圖8之部分C)。另外，觀測到Fn14之Ala44與41c-His Fab H3之Trp101之間存在凡德瓦爾氏相互作用(van der Waal's interactions)。
觀測到Fn14與41c-His Fab之L1之間存在離子性相互作用，而L2與L3則不形成此類相互作用。Fn14與L1環(41c-His Fab)之Lys 35及Tyr 37產生極性接觸，其中Fn14之Asp 45與Lys 35形成鹽橋(圖8之部分D)。另外，Fn14之Leu46與41c-His Fab之L2中的Leu 55形成疏水性相互作用。L3為與Fn14殘基不發生相互作用之唯一CDR。總而言之，Fn14與Fab產生14個極性接觸，包括兩個鹽橋，另外觀測到三個凡德瓦爾氏相互作用(參見表10)。R35B9 - His Fab - Fn14 複合物之晶體結構
Fn14-R35B9-His Fab晶體的不對稱單元含有總共8個個別複合物，所有8個複本彼此間完美地疊加。該結構表明在41c與R35B9變異體之間，Fab之重鏈可變區及輕鏈可變區的Fn14相互作用殘基為保守的。在H1及H2環區及重鏈之三個CDR區之間，Fab之41c及R35B9變異體在胺基酸組成方面不同，兩個Fab分子的H2及H3環絕對疊加，而H1區展示主要的變異程度(圖9的部分A)。在H1環中，Thr 28置換為Ile 28引起整個H1環區發生關鍵的構形變化(圖9之部分B)，原因在於Tyr 27的芳族環與Ile 28的側鏈發生抵觸且因此，Tyr 27在R35B9-His Fab中現採取完全不同的取向。此允許芳族Tyr 27中的OH基團與Fn14之Lys 48形成氫鍵接觸(表11，圖9的部分C)。在同一H1環中，Gln 30置換Thr 30對於促成與Fn14的相互作用不起任何作用。類似地，在H2環中，Tyr 50置換為Ser 50、Asn 54置換為Arg 54及Gly 57置換為Trp 57不使Fab分子產生任何構形變化。實際上，Tyr 50現與Trp 57發生疏水性接觸，從而在重鏈之可變區中彼此穩定化。即使Asn 54經長鏈胺基酸Arg 54置換，但由於Fn14之N端區域缺乏帶電荷的殘基，因此Arg 54僅與Fn14中之Pro 35主鏈羰基相互作用且亦可與Fn14之Cys 49之硫氫基形成氫鍵接觸(圖9之部分C)。相較於41c Fab，R35B9之輕鏈CDR1環展示較小的構形調整，朝前向Fn14移動約3 Å，且因此，R35B9 Fab之L1區之Tyr 37可以與Fn14之Ala 44的主鏈原子形成氫鍵接觸(圖9之部分D)。 表10. Fn14與41c-His Fab之重鏈/輕鏈區域之間的相互作用
Fn14 與41c Fab 之重鏈區域的極性相互作用
抗原殘基 (Fn14) 抗體殘基 (41c Fab) 氫鍵距離 (Å)
CYS 49 [N] ASP 31 [O]  2.82
LYS 48 [NZ] TYR 32 [OH]  3.00
GLY 32 [N] ASN 54 [O]  3.67
PRO 35 [O] ASN 52 [ND2]  2.88
PRO 35 [O] ASN 54 [ND2]  2.80
THR 33 [O] ASN 55 [ND2]  2.72
ASP 47 [OD2] GLY 100 [N]  3.07
ASP 47 [O] GLY 100 [N]  2.75
ASP 47 [OD2] TRP 101 [N]  2.91
ASP 45 [O] TRP 101 [NE1]  2.86
ASP 47 [O] SER 99 [OH]  2.80
Fn14 與 41c Fab 之輕鏈區域的極性相互作用
ASP 45 [OD1] TYR 37 [OH]  2.63
ASP 45 [OD2] LYS 35 [NZ]  2.69
    鹽橋距離 (Å)
ASP 45 [OD1] LYS 35 [NZ]  3.08
ASP 45 [OD2] LYS 35 [NZ]  2.69
Fn14 與 41c Fab 之間的凡德瓦爾接觸
TRP 42 ASN 33  (HC) 4.21
ALA 44 TRP 101 (HC) 3.34
LEU 46 LEU 55  (LC) 4.40
表11. Fn14與R35B9-His Fab之重鏈/輕鏈區域之間的相互作用
Fn14 與 R35B9 Fab 之重鏈區域的極性相互作用
抗原殘基 (Fn14) 抗體殘基 (R35B9 Fab) 氫鍵距離 (Å)
CYS 49 [N] ASP 31 [O]  2.95
LYS 48 [NZ] TYR 32 [OH]  3.30
LYS 48 [NZ] TYR 27 [OH] 3.56
PRO 35 [O] ASN 52 [ND2]  3.58
PRO 35 [O] ARG 54 [NH2]  2.85
CYS 49 [SG] ARG 54 [NH2] 3.00
THR 33 [O] ASN 55 [ND2]  3.33
ALA 34 [O] ASN 55 [ND2]  3.78
ASP 47 [OD2] GLY 100 [N]  2.96
ASP 47 [OD2] TRP 101 [N]  2.99
ASP 47 [O] GLY 100 [N]  2.71
ASP 45 [O] TRP 101 [NE1]  2.97
ASP 47 [O] SER 99 [OG]  2.80
Fn14 與 R35B9 Fab 之輕鏈區域的極性相互作用
ASP 45 [OD1] TYR 37 [OH]  2.55
ASP 45 [OD1] LYS 35 [NZ]  3.45
ASP 45 [OD2] LYS 35 [NZ] 3.14
Ala 44 (O) TYR 37 [OH] 3.58
Ala 44 (N) TYR 37 [OH] 3.42
    鹽橋距離 (Å)
ASP 45 [OD1] LYS 35 [NZ]  3.45
ASP 45 [OD2] LYS 35 [NZ] 3.14
實例 17 . 評估抗 FN14 單株抗體活體外拮抗劑活性 使用人類初始腎小球膜細胞進行的 ELISA
人類腎小球膜細胞(HRMC)係購自ScienCell研究實驗室(目錄號4200)且根據製造商說明書培養。在37℃下，用17.5 µg/mL存在於去離子水中的聚-L-離胺酸溶液(ScienCell，目錄號0413)將96孔平底細胞培養盤(Costar，目錄號3596)塗佈30分鐘。30分鐘後，移除聚-L-離胺酸溶液且用無菌去離子水洗滌孔。將HRMC於100 µL腎小球膜細胞培養基(ScienCell，目錄號4201)中以25,000個細胞/孔接種於經聚-L-離胺酸塗佈的盤上。在37℃與5% CO2 下，允許細胞黏附孔1-2小時。接著，使測試抗體在腎小球膜細胞培養基中稀釋至4x最終濃度且將50 µL稀釋抗體或培養基添加至適當孔中。將抗體及細胞在37℃ 5% CO2 培育箱中置放30分鐘。使重組人類TWEAK (R&D Systems，目錄號1090-TW)在腎小球膜細胞培養基中稀釋至4x (1000 ng/mL)且向各孔中添加50 µL rhTWEAK (拮抗劑分析)或培養基(促效劑分析且無rhTWEAK對照物)。將培養盤在37℃ 5% CO2 培育箱中置放隔夜。24小時後，自培育箱移出盤且在室溫下以314xg離心3分鐘。收集上清液且置放於96孔圓底聚丙烯盤(Costar，目錄號3879)中，密封盤且置放於-20℃直至可以進行進一步分析。藉由ELISA (R&D Systems，目錄號DY208)分析上清液中的IL-8含量。
為了分析抗Fn14 mAb阻斷TWEAK誘導IL-8釋放的能力，接種HRMC且將抗Fn14抗體以0.156 µg/mL (1.04 nM)添加至細胞中，隨後添加rhTWEAK。24小時之後，收集上清液且分析IL-8釋放。在此分析中，R35B9阻斷TWEAK介導HRMC釋放IL8的能力顯著優於41c (p≤0.0001，相對於R35B9)、CRCBT-06-002 (p≤0.0001，相對於R35B9)及ITEM-4 (p≤0.0001，相對於R35B9)。結果證明R35B9阻斷TWEAK Fn14路徑誘導發炎反應的能力優於先前所述的抗體(參見圖10)。A375 細胞之拮抗劑及促效劑分析
亦分析此等相同抗Fn14 mAb阻斷TWEAK誘導A375人類黑色素瘤細胞產生IL-8的能力。A375細胞(人類黑色素瘤)係購自美國菌種保藏中心(ATCC，目錄號CRL-1619)且根據製造商說明書培養。將A375於100 µL培養基中以200,000個細胞/孔接種於96孔平底細胞培養盤(Costar，目錄號3596)上。在37℃與5% CO2 下，允許細胞黏附孔2小時。接著，使測試抗體在培養基中稀釋至4x最終濃度且將50 µL稀釋抗體或培養基添加至適當孔中。將抗體及細胞在37℃ 5% CO2 培育箱中置放30分鐘。使重組人類TWEAK (R&D Systems，目錄號1090-TW)在培養基中稀釋至4x (1200 ng/mL)且向各孔中添加50 µL rhTWEAK (拮抗劑分析)或培養基(促效劑分析且無rhTWEAK對照物)。將培養盤在37℃ 5% CO2 培育箱中置放隔夜。24小時後，自培育箱移出盤且在室溫下以314xg離心10分鐘。收集上清液且置放於96孔圓底聚丙烯盤(Costar，目錄號3879)中，密封盤且置放於-20℃直至可以進行進一步分析。藉由ELISA (R&D Systems，目錄號DY208)分析上清液中的IL-8含量。
R35B9在2.5 µg/mL (16.7 nM)下優於41c (p≤0.0001，相對於R35B9)、CRCBT-06-002 (p≤0.0001，相對於R35B9)及ITEM-4 (p≤0.0001，相對於R35B9)(圖11A)，且在10 µg/mL (66.7 nM)下優於41c (p≤0.0001，相對於R35B9)及ITEM-4 (p≤0.01，相對於R35B9)(圖11B)。在較高抗體濃度(266.7 nM)下，R35B9展現類似於CRCBT-06-002及ITEM-4的抑制作用(參見圖11C)。此等資料證明R35B9中和TWEAK誘導多種TWEAK反應細胞釋放IL-8的效能。
為了確定抗Fn14 mAb在rhTWEAK不存在的情況下是否誘導IL-8釋放(促效劑活性)，使細胞(HRMC或A375)暴露於一系列滴定劑量的抗Fn14 mAb，該系列始於40 µg/mL (267 nM)，2倍連續稀釋至0.5 ng/mL (0.004 nM)。使用HRMC測試時，在較高的抗體濃度下，不斷地觀測到ITEM-4的促效劑活性且偶爾觀測到CRCBT-06-002的促效劑活性。重要的是，41c、R35B9在任何測試濃度下均不展現促效劑活性(圖14)。
對A375細胞使用類似促效劑分析，獲得類似結果(圖15)。將A375細胞與300 ng/mL rhTWEAK、抗Fn14或同型對照mAb一起培育24小時。收集上清液且使用IL-8 ELISA套組測試IL-8。在開發治療性阻斷抗體的情況下，促效劑活性為非所需的，因此，基於促效劑活性的缺乏，此分析指示優於41c及R35B9。
基於生物物理學特性、對hFn14之親和力增加(表8及9以及圖5及6)及在基於細胞之活體外分析中的效能(圖10及11)，選擇純系R35B9作為41c之主要親和力成熟形式且用於產生VH及VL變異體，如上文進一步詳述。評估抗 Fn14 mAb 調節纖維化相關蛋白的表現
為確定抗Fn14抗體阻斷纖維化介體之能力，測試其阻斷TWEAK誘導HRMC上之ICAM-1上調的能力。初始HRMC係購自ScienCell研究實驗室(目錄號4200)且根據製造商說明書培養。在37℃下，用17.5 µg/mL存在於去離子水中的聚-L-離胺酸溶液(ScienCell，目錄號0413)將6孔平底細胞培養盤(Costar，目錄號3516)塗佈30分鐘。30分鐘後，移除聚-L-離胺酸溶液且用無菌去離子水洗滌孔。將HRMC於2 mL腎小球膜細胞培養基(ScienCell，目錄號4201)中以700,000個細胞/孔接種於經聚-L-離胺酸塗佈的盤上。在37℃與5% CO2 下，允許細胞黏附孔1-2小時。接著，使測試抗體在腎小球膜細胞培養基中稀釋至4x最終濃度且將1 mL稀釋抗體或培養基添加至含有細胞的各孔中。將抗體及細胞在37℃ 5% CO2 培育箱中置放30分鐘。使重組人類TWEAK (R&D Systems，目錄號1090-TW)在腎小球膜細胞培養基中稀釋至4x (1000 ng/mL)且向適當孔中添加1 mL rhTWEAK (拮抗劑分析)或培養基(促效劑分析且無rhTWEAK對照物)。將培養盤在37℃ 5% CO2 培育箱中置放隔夜。24小時後，自培育箱移出培養盤且移出上清液。細胞孔用1 mL PBS (Gibco，目錄號10010-023)沖洗，隨後暴露於0.25%胰蛋白酶(Gibco，目錄號25200-072)，該胰蛋白酶經PBS 1:1稀釋以達成0.125%的最終胰蛋白酶濃度。將各孔與1 mL 0.125%胰蛋白酶一起在37℃下培育1-2分鐘，隨後添加1 mL完全的腎小球膜細胞培養基。接著，將解離的細胞收集於15 mL錐形管(Falcon，目錄號352097)中且以350xg離心六分鐘。自各管中移出上清液且將細胞再懸浮於100 µL FACS緩衝液(PBS，1% FBS)中且轉移至96孔圓底聚丙烯盤(Costar，目錄號3879)。培養盤在室溫下以350xg離心3分鐘。移除上清液且使細胞集結粒輕輕渦旋。將細胞再懸浮於每孔100 µL Fc阻斷液(含有10 µg/mL人類IgG (Jackson Immunoresearch，目錄號009-00-003)的FACS緩衝液)中且在冰上培育十分鐘。接著向各孔中添加100 µl FACS緩衝液且如上文所述使培養盤離心。細胞接著如下洗滌兩次以上：移除上清液，將培養盤輕輕渦旋，用200 µL FACS緩衝液洗滌細胞且在室溫下以350xg離心3分鐘。向各孔中添加100 µL可固定的活/死染色劑Zombie Aqua (Biolegend，目錄號423101)且在室溫下培育細胞15分鐘。接著如先前所述洗滌細胞。接著，向各孔中添加100 µL於FACS緩衝液中稀釋的經PE標記之抗ICAM-1 mAb (Biolegend，目錄號322708，純系HCD54，5 µL/測試)或經PE標記之同型對照物(Biolegend，目錄號400114，純系MOPC-21，5 µL/測試)且培養盤在冰上培育30分鐘。培育結束時，如先前所述洗滌細胞且藉由添加100微升/孔固定緩衝液(含1%多聚甲醛之PBS)固定且在冰上培育5分鐘。接著如上文所述用FACS緩衝液洗滌細胞且使用Fortessa (BD Biosciences)收集30,000個事件。使用FlowJo及GraphPad Prism進行資料分析。Fn14 mAb R35B9 拮抗 TWEAK 誘導 ICAM - 1 表現
抗Fn14 mAb展示可阻斷TWEAK誘導ICAM-1上調，R35B9阻斷能力優於41c、CRCBT-06-002及ITEM-4 (R35B9相對於41c，p≤0.0001；R35B9相對於CRCBT-06-002，p≤0.0001；R35B9相對於ITEM-4，p≤0.0001；單因子ANOVA，兩種mAb濃度均測試)(圖18)。此表明R35B9可以更有效地阻斷纖維化介體，諸如TWEAK誘導ICAM-1表現上調。評估抗 Fn14 mAb 阻斷 TWEAK 結合至細胞上所表現的 Fn14
HRMC細胞與不同濃度(0.015625-1 µg/mL)的個別抗體一起在室溫下培育30分鐘。接著將重組人類TWEAK (R&D Systems，目錄號1090-TW/CF)添加至細胞中在室溫下培育45分鐘。利用經生物素標記之山羊抗人類TWEAK (R&D Systems，目錄號BAF1090)，隨後藉由抗生蛋白鏈菌素-PE (Biolegend，目錄號405204)偵測TWEAK對HRMC細胞的結合。在Fortessa上獲得經染色之細胞。% 使用下式計算TWEAK阻斷%：100-(樣品的幾何平均螢光強度-不具有TWEAK之細胞的幾何平均螢光強度)/(單獨TWEAK而無抗體的幾何平均螢光強度-不具有TWEAK之細胞的幾何平均螢光強度)*100。
將抗Fn14 mAb以各種濃度與HRMC一起培育，隨後向細胞中添加重組人類TWEAK。抗體A512/A468、A515/A518、A553/A472展示可以劑量依賴型方式阻斷TWEAK結合至HRMC細胞上所表現的Fn14(參見圖25)。結果證明人類化抗Fn14 mAb阻斷TWEAK結合至細胞上所表現的Fn14。實例 18 - 評估進一步經工程改造之人類化抗 FN14 抗體的活性
進行其他研究以如下分析上述實例10中所產生的進一步經工程改造之人類化抗體。使用 HaCaT 細胞及人類表皮角質細胞進行的功能分析
RANTES 分析 ：HaCaT細胞係購自AddexBio (目錄號T0020001)，且根據製造商說明書培養。人類初始成人角質細胞係購自Cell Applications Inc. (目錄號102-05a)，且根據製造商說明書培養。將細胞於100 μL用於HaCaT細胞的DMEM完全培養基(DMEM (Thermo Fisher目錄號10313-021)，其含有10%胎牛血清(FBS)、1%青黴素-鏈黴素、1% L-麩醯胺酸及1%丙酮酸鈉)、用於成人角質細胞(Cell Applications Inc.目錄號141-500a)的完全DMEM或Epivita無血清完全培養基中以每孔20,000個細胞接種於96孔平底盤上。在37℃與5% CO2 下，允許細胞黏附孔2-3小時。接著，移除培養基，且將稀釋至2x最終濃度的測試抗體或培養基添加至適當孔中。將抗體及細胞在37℃ 5% CO2培育箱中置放30分鐘。將稀釋至2x最終濃度(200 ng/mL)的重組人類TWEAK (R&D Systems，目錄號1090-TW)或培養基添加適當孔中。將培養盤在37℃ 5% CO2培育箱中置放48小時。收集上清液且藉由ELISA (R&D Systems，目錄號DY278-05)分析上清液中的RANTES含量。
細胞凋亡分析 ：人類初始新生兒角質細胞係購自Cell Applications Inc. (目錄號102-05n)，且根據製造商說明書培養。將細胞於2 mL培養基(用於新生兒角質細胞的Epivita無血清完全培養基，Cell Applications Inc.，目錄號141-500)中以每孔160,000個細胞接種於6孔盤上。在37℃與5% CO2 下，允許細胞黏附孔2-3小時。接著，移除培養基，且用1.5 µg/mL的測試抗體及100 ng/mL的重組人類TWEAK (R&D Systems，目錄號1090-TW)、10 ng/mL的TNFα (Peprotech，目錄號300-01a-50 µg)、TWEAK與TNFα的組合或培養基處理細胞。將培養盤在37℃ 5% CO2培育箱中置放72小時。使用TrypLE Express (Thermo Fisher，目錄號12604013)收集細胞，用磷脂結合蛋白V及7-AAD (FITC磷脂結合蛋白V細胞凋亡偵測套組，Biolegend，目錄號640922)染色，且在LSR Fortessa (BD Biosciences)上獲取。使用FlowJo進行資料分析。
ICAM - 1 分析 ：根據製造商說明書培養HaCaT細胞。將HaCaT細胞於1 mL DMEM完全培養基中以每孔300,000個細胞接種於12孔盤上。在37℃與5% CO2 下，允許細胞黏附孔2小時。接著，使測試抗體在DMEM完全培養基中稀釋至4x最終濃度且將500 µL稀釋抗體或培養基添加至含有細胞的各孔中。將抗體及細胞在37℃ 5% CO2 培育箱中置放30分鐘。將重組人類TWEAK在DMEM完全培養基中稀釋至4x最終濃度(400 ng/mL)且向適當孔中添加500 µL TWEAK或培養基。將培養盤在37℃ 5% CO2 培育箱中置放48小時。接著使用阿庫酶緩衝液(Accutase buffer)(Innovative Cell Technologies，目錄號AT-104)收集細胞，用Zombie aqua (BioLegend，目錄號423102)、APC-抗人類ICAM-1 (BioLegend，目錄號353112)或同型對照抗體(BioLegend，目錄號400122)染色。接著用FACS緩衝液洗滌細胞且使用LSR Fortessa (BD Biosciences)收集30,000個事件。使用FlowJo進行資料分析。
人類初始新生兒角質細胞根據製造商說明書培養。將角質細胞於1 mL培養基(用於新生兒角質細胞的Epivita無血清完全培養基)中以每孔150,000個細胞接種於12孔盤上。在37℃與5% CO2 下，允許細胞黏附孔2小時。接著，使測試抗體在Epivita培養基中稀釋至4x最終濃度且將500 µL稀釋抗體或培養基添加至含有細胞的各孔中。將抗體及細胞在37℃ 5% CO2 培育箱中置放30分鐘。將重組人類TWEAK在Epivita培養基中稀釋至4x最終濃度(400 ng/mL)且向適當孔中添加500 µL TWEAK或培養基。將培養盤在37℃ 5% CO2 培育箱中置放48小時。接著使用阿庫酶緩衝液(Innovative Cell Technologies，目錄號AT-104)收集細胞，用Zombie aqua (BioLegend，目錄號423102)、APC-抗人類ICAM-1 (BioLegend，目錄號353112)染色。接著用FACS緩衝液洗滌細胞且使用LSR Fortessa (BD Biosciences)收集30,000個事件。使用FlowJo進行資料分析。使用人類真皮纖維母細胞進行的功能分析
人類初始真皮纖維母細胞係購自Cell Applications Inc. (目錄號106-05n)且根據製造商說明書培養。將細胞於100 μL培養基(人類真皮纖維母細胞生長培養基，無異質成分，Cell Applications Inc，目錄號116XF-500)中以每孔20,000個細胞接種於96孔平底盤中。在37℃與5% CO2下，允許細胞黏附孔2-3小時。接著，移除培養基，且將稀釋至2x最終濃度的測試抗體或培養基添加至適當孔中。將培養盤在37℃ 5% CO2培育箱中置放30分鐘。將稀釋至2x最終濃度(200 ng/mL)的重組人類TWEAK或培養基添加適當孔中。將培養盤在37℃ 5% CO2培育箱中置放48小時。收集上清液且藉由ELISA (Thermo Fisher，目錄號88-7066-86)分析上清液中的IL-6含量。結果
如上文所述，對人類化抗體A512/A468進一步工程改造以減少序列傾向。測試二十種經進一步工程改造的抗Fn14 mAb抑制TWEAK誘導HRMC產生IL-8的能力。接種HRMC且將抗Fn14抗體以多種濃度添加至細胞中，隨後添加TWEAK。24小時之後，收集上清液且分析IL-8釋放。在此分析中，所有20種其他純系A631/A468、A634/A468、A635/A468、A636/A468、A512/A652、A648/A468、A650/A468 (參見圖26A)、A512/A653、A633/A468、A638/A468、A641/A468、A642/A468、A647/A468、A512/A656 (參見圖26B)、A632/A468、A639/A468、A643/A468、A645/A468、A512/A651及A512/A654 (參見圖26C)對IL-8產生展示劑量依賴性抑制。
此外，若干純系展現類似於或優於原始純系A512/A468的抑制活性。另外，A631/A468、A512/A652、A648/A468、A650/A468、A641/A468、A642/A468、A639/A468、A643/A468及A512/A654阻斷TWEAK介導HRMC釋放IL-8的能力顯著超過CRCBT-06-002抗Fn14 mAb (參見圖27A)，從而產生較低IC50 (參見圖27B)。
為了確定此等進一步經工程改造的抗Fn14 mAb是否具有任何促效劑活性(亦即在TWEAK不存在的情況下誘導IL-8釋放)，使HRMC暴露於一系列滴定劑量的抗Fn14 mAb，該系列始於40 µg/mL (266.67 nM)，4倍連續稀釋至0.5 ng/mL (0.26 nM)。不斷地觀測到ITEM-4的促效劑活性，尤其在較高對抗體濃度下，且因此，ITEM-4在分析中充當陽性對照物。如圖28A-28C中所示，除兩種純系A635/A468 (參見圖28A)及A647/A468 (參見圖28B)(其在TWEAK不存在的情況下誘導IL-8產生，類似於ITEM-4)之外，大部分純系不展示促效劑活性。
為了確定抗Fn14抗體是否阻斷角質細胞產生趨化因子，測試人類化抗Fn14抗體阻斷TWEAK誘導HaCaT細胞及人類初始表皮角質細胞產生RANTES的能力。首先，將HaCaT細胞或人類成人初始表皮角質細胞與多種濃度的Fn14單株抗體一起培育。接著，用100 ng/mL TWEAK刺激細胞48小時。接著收集細胞上清液且測試RANTES產生。人類化抗Fn14 mAb A512/A468、A515/A518及A553/A472以劑量依賴性方式明顯地抑制HaCaT (參見圖29A)及人類成人初始角質細胞(參見圖29B)釋放RANTES。另外，抗體能夠以劑量依賴性方式完全抑制RANTES產生。此證明此等人類化抗Fn14單株抗體A512/A468、A515/A518及A553/A472有效阻斷角質細胞產生趨化因子。
為了確定抗Fn14單株抗體是否阻斷TWEAK誘導細胞凋亡，將1.5 µg/mL的人類化抗Fn14抗體A512/A468、A515/A518及A553/A472與人類新生兒初始表皮角質細胞在TWEAK (100 ng/mL)、TNFα (10 ng/mL)或TWEAK與TNFα組合的存在下培育72小時。接著收集細胞，用磷脂結合蛋白V及7-AAD染色，且在LSR Fortessa上分析。TWEAK比新生兒表皮角質細胞上之TNFα更多地誘導磷脂結合蛋白V、7-AAD雙陽性晚期凋亡細胞，且TWEAK與TNFα之組合誘導的晚期凋亡細胞百分比最高。人類化抗Fn14抗體A512/A468、A515/A518及A553/A472使TWEAK誘導的凋亡細胞百分比減小(參見圖30)。此等相同Fn14 mAb亦使經TWEAK與TNFα之組合處理之角質細胞中的凋亡細胞百分比減小至單獨TNFα所誘導的水準(參見圖30)。
為了確定抗Fn14單株抗體A512/A468、A515/A518及A553/A472是否阻斷纖維化介體及黏附分子導引白血球遷移，測試其阻斷TWEAK誘導HaCaT細胞及人類新生兒表皮角質細胞上之ICAM-1上調的能力。首先，將抗Fn14或同型對照mAb以多種濃度添加至HaCaT細胞中或以1 µg/mL添加至新生兒表皮角質細胞中。接著，用100 ng/mL TWEAK刺激細胞48小時。接著收集細胞且染色以得知ICAM-1的表面表現。TWEAK誘導HaCaT細胞(參見圖31A)及新生兒表皮角質細胞(參見圖31B)上的ICAM-1表現上調。人類化抗Fn14單株抗體A512/A468、A515/A518及A553/A472以劑量依賴性方式抑制HaCaT細胞上的ICAM-1上調且隨著mAb濃度增加，能夠完全抑制ICAM-1上調(參見圖31A)。類似地，在1 µg/mL下，A512/A468基本上抑制初始角質細胞上的ICAM-1上調，而同型對照抗體不具有任何作用(參見圖31B)。
為了確定抗Fn14單株抗體A512/A468、A515/A518及A553/A472是否阻斷真皮纖維母細胞產生細胞介素，測試其阻斷TWEAK誘導真皮纖維母細胞產生IL-6的能力。首先，將抗Fn14或同型對照mAb以多種濃度與真皮纖維母細胞一起培育，隨後藉由TWEAK (100 ng/mL)刺激48小時。收集上清液且定量IL-6。TWEAK誘導真皮纖維母細胞產生IL-6 (參見圖32)，且人類化抗Fn14單株抗體A512/A468、A515/A518及A553/A472以劑量依賴性方式完全抑制IL-6釋放，其中A512/A468最強(參見圖32)。
根據前述內容，應瞭解，儘管本文中已描述特定實施例用於說明之目的，但在不偏離本文所提供之精神及範疇的情況下可進行各種修改。上文所提及之所有參考文獻均以全文引用之方式併入本文中。
圖1描繪抗Fn14融合瘤上清液對經人類及小鼠Fn14轉染之細胞的結合。藉由流式細胞術獲得的一系列直方圖展現融合瘤上清液(KO41c、KO42d及KO43b)對經人類(暗灰線)或小鼠(黑線) Fn14表現載體或空載體(淺灰線)轉染之293F細胞的反應性。融合瘤上清液結合係利用抗小鼠IgG PE偵測。
圖2A及2B描繪純化抗Fn14單株抗體對內源性表現之Fn14的結合。藉由流式細胞術獲得的一系列直方圖展現純化抗Fn14抗體對HK2細胞(圖2A)及NRK-52E細胞(圖2B)的反應性。使用濃度為1 μg/mL的初級抗體且利用抗小鼠IgG PE偵測結合。
圖3A及3B描繪Fn14拮抗劑單株抗體中和TWEAK誘導的CCL2表現。將HK2 (圖3A)及NRK-52E (圖3B)細胞與指定的純化抗Fn14 mAb (10 μg/mL)一起培育且接著向細胞中添加rhTWEAK (30 ng/mL)。6小時之後，收集細胞的RNA且藉由即時PCR定量CCL2表現。基因表現相對於GAPDH歸一化。圖展示實驗樣品相較於對照樣品的相對CCL2表現量。
圖4A及4B描繪Fn14拮抗劑單株抗體中和TWEAK誘導的NFκB活性。NRK52E-A15/Luc細胞(NFκB-螢光素酶報導體)在純化抗Fn14 mAb或對照小鼠IgG1抗體(0-50 µg/mL)存在下用hTWEAK或hTNFα (0-100 ng/mL)(圖4A)刺激或用hTWEAK (5 ng/mL)(圖4B)刺激。NFκB-螢光素酶活性以Luc [cps]報導。
圖5描繪藉由Biacore所測之個別抗Fn14 Fab結合至人類或食蟹獼猴Fn14的感測圖譜。
圖6A描繪藉由Biacore所測之個別抗Fn14 Fab結合至小鼠Fn14的感測圖譜。
圖6B描繪藉由Biacore所測之六種人類化mAb結合至人類Fn14的感測圖譜。重組人類Fn14在單次循環中以增加的濃度注射，注射之間不使表面再生。藉由胺偶合化學反應將抗人類Fc特異性抗體固著於CM5感測晶片(目錄號BR100012，GE Healthcare Life Sciences, Pittsburgh, Pennsylvania)上。以約200 RU捕捉人類化抗Fn14抗體，隨後以增加的濃度注射重組人類Fn14蛋白。結合時間為120秒，且最終解離時間為900秒。
圖7描繪抗Fn14單株抗體對Fn14亞域發生有差異的結合。將所有值與對照樣品(同型抗體：mIgG1及mIgG2b)進行比較。
圖8描繪Fn14-41c-His Fab複合物之晶體結構。部分A展示Fn14-41c-His Fab複合物的底圖圖像，其中41c Fab分子為透明分子表面。亦示出VH (重鏈可變區)、CH (重鏈恆定區)、VL (輕鏈可變區)、CL (輕鏈恆定區)以及重鏈及輕鏈的N端及C端。Fn14分子以黑色底圖展示且41c-His Fab以灰色底圖結合透明分子表面展示。部分B展示與41c Fab分子之輕鏈環L1及L2接觸之Fn14殘基的代表性2Fo-Fc電子密度圖(在1σ形成輪廓)。部分C展示Fn14 (左側)與41c-His Fab分子重鏈區之環(右側)之間界面中的特異性相互作用殘基。部分D展示Fn14 (左側)與41c-His Fab輕鏈區(右側)的相互作用。Fn14及41c-His Fab的所有相互作用殘基皆以棒展示且氫鍵以黑色虛線展示。所有圖均用PyMOL繪製。
圖9描繪Fn14-R35B9-His Fab複合物的晶體結構。部分A展示Fn14-41c-His Fab (親本)複合物與Fn14-R35B9-His Fab複合物的重疊。展示Fab之親本形式與R35B9形式之間之構形變化的區域被突出顯示。重鏈與輕鏈的N端、C端及可變區及恆定區被標記。部分B展示Fab之H1環區域的結構變化。41c-His Fab之H1環區域殘基以線條展示且用單字母胺基酸代碼標記，而R35B9-His Fab殘基以棒展示且用三字母胺基酸代碼標記。部分C展示R35B9-His Fab (右)與Fn14 (左)之重鏈區CDR之間的相互作用。部分D展示R35B9-His Fab (右)與Fn14 (左)之輕鏈CDR1區之間的特異性相互作用。所有相互作用殘基以棒結合透明底圖展示且黑色虛線表示氫鍵。
圖10描繪Fn14 mAb R35B9強力拮抗TWEAK誘導HRMC分泌IL-8。將HRMC與1.04 nM抗Fn14或同型對照mAb一起在37℃下培育30分鐘且接著將rhTWEAK以250 ng/mL添加至孔中維持24小時。收集上清液且使用IL-8 ELISA套組測試IL-8。使用斯圖登氏t檢驗(Student's t-test)分析資料，將R35B9引起的IL-8減少與41c、ITEM-4及CRCBT-06-002引起的減少進行比較。41c相對於R35B9 p≤0.0001，ITEM-4相對於R35B9 p≤0.0001，CRCBT-06-002相對於R35B9 p≤0.0001。
圖11A、11B及11C描繪Fn14 mAb R35B9強力拮抗TWEAK誘導A375細胞分泌IL-8。將A375細胞與16.7 nM、66.7 nM或266.7 nM抗Fn14或同型對照mAb一起培育30分鐘且接著將rhTWEAK以300 ng/mL添加至孔中維持24小時。收集上清液且使用IL-8 ELISA套組測試IL-8。使用單因子ANOVA分析資料。16.7 nM、66.7 nM或266.7 nM抗Fn14或同型對照mAb的結果分別展示於圖11A、圖11B及圖11C中。R35B9引起之IL-8減少的統計學結果與41c、ITEM-4及CRCBT-06-002引起的結果比較如下：mAb濃度為16.7 nM時：41c相對於R35B9 p≤0.0001，ITEM-4相對於R35B9 p≤0.0001，CRCBT-06-002相對於R35B9 p≤0.0001 (圖11A)；mAb濃度為66.7 nM時：41c相對於R35B9 p≤0.0001，ITEM-4相對於R35B9 p≤0.01，CRCBT-06-002相對於R35B9不顯著(ns)(圖11B)；mAb濃度為266.7 nM時：41c相對於R35B9 p≤0.0001，其他在此分析中不顯著(ns)。
圖12描繪Fn14 mAb R35B9最佳化純系強力拮抗TWEAK誘導HRMC分泌IL-8。將HRMC與0.8325 nM抗Fn14或同型對照mAb一起培育30分鐘，且接著將rhTWEAK以250 ng/mL添加至孔中維持24小時。收集上清液且使用IL-8 ELISA套組測試IL-8。使用斯圖登氏t檢驗分析資料，對IL-8減少進行比較(ITEM-4相對於R35B9 p＜0.01，ITEM-4相對於A437/A290 p＜0.05，ITEM-4相對於A448/A290 p＜0.05，ITEM-4相對於A448/A439 p＜0.05，CRCBT-06-002相對於R35B9 p＜0.001，CRCBT-06-002相對於A437/A290 p＜0.01，CRCBT-06-002相對於A448/A290 p＜0.01，CRCBT-06-002相對於A448/A439 p＜0.01)。
圖13描繪人類化Fn14 mAb強力拮抗TWEAK誘導HRMC分泌IL-8。將HRMC與0.833 nM人類化抗Fn14抗體、小鼠/人類嵌合CRCBT-06-002 (mu/huCRCBT)、ITEM-4或同型對照mAb一起在37℃下培育30分鐘且接著將rhTWEAK以250 ng/mL添加至孔中維持24小時。收集上清液且使用IL-8 ELISA套組測試IL-8。人類化抗Fn14純系中之每一者能夠比mu/huCRCBT-06-002及ITEM-4明顯更好地阻斷TWEAK誘導IL-8分泌。使用不成對t檢驗來分析資料，對IL-8減少進行比較(ITEM-4相對於A512/A468 p＜0.001，ITEM-4相對於A515/A518 p＜0.01，ITEM-4相對於A553/A472 p＜0.01，mu/huCRCBT-06-002相對於A512/A468 p＜0.01，mu/huCRCBT-06-002相對於A515/A518 p＜0.01，mu/huCRCBT-06-002相對於A553/A472 p＜0.05)。
圖14描繪Fn14拮抗劑mAb R35B9不促進Fn14。將HRMC與250 ng/mL rhTWEAK (陽性對照)或單獨培養基(陰性對照)及抗Fn14或同型對照mAb一起培育24小時。收集上清液且使用IL-8 ELISA套組測試IL-8。點線表示未刺激之細胞(單獨培養基)在培養24小時之後的平均上清液IL-8含量(底線：1,775 pg/mL)及經250 ng/mL rhTWEAK刺激24小時之細胞的平均上清液IL-8含量(頂線：12,271 pg/mL)。
圖15描繪Fn14拮抗劑mAb R35B9不促進Fn14。將A375細胞與300 ng/mL rhTWEAK、抗Fn14或同型對照mAb一起培育24小時。收集上清液且使用IL-8 ELISA套組測試IL-8。點線表示經300 ng/mL rhTWEAK刺激24小時之細胞的平均上清液IL-8含量(67,725 pg/mL)。
圖16A及16B描繪Fn14拮抗劑mAb R35B9最佳化純系不促進Fn14。將HRMC與250 ng/mL rhTWEAK (陽性對照)、單獨培養基(陰性對照)、抗Fn14或同型對照mAb一起培育24小時。收集上清液且使用IL-8 ELISA套組測試IL-8。點線表示未刺激之細胞(單獨培養基)在培養24小時之後的平均上清液IL-8含量(A：972.4 pg/mL)或(B：494 pg/mL)。
圖17描繪人類化Fn14拮抗劑mAb不促進Fn14。將HRMC與250 ng/mL rhTWEAK (陽性對照)或單獨培養基(陰性對照)及人類化抗Fn14、小鼠/人類嵌合CRCBT-06-002 (mu/huCRCBT)、ITEM-4或同型對照mAb一起培育24小時。收集上清液且使用IL-8 ELISA套組測試IL-8。點線表示未刺激之細胞(單獨培養基)在培養24小時之後的平均上清液IL-8含量(2,008 pg/mL)及經250 ng/mL rhTWEAK刺激24小時之細胞的平均上清液IL-8含量(23,851 pg/mL)。
圖18描繪Fn14 mAb R35B9強力拮抗TWEAK誘導ICAM表現。將HRMC與單獨培養基或與抗Fn14或同型對照mAb (0.1 µg/mL)一起培育30分鐘，且接著將具有或不具有rhTWEAK (250 ng/mL)之培養基添加至細胞中維持24小時。細胞用胰蛋白酶解離且針對表面ICAM-1表現進行染色。使用流式細胞儀(BD Biosciences Fortessa)量測表面ICAM-1表現強度，基於活細胞進行閘選。利用單因子ANOVA聯合多重比較來分析資料，展示R35B9相對於41c、CRCBT-06-002及ITEM-4的統計學結果(0.1 µg/mL mAb：R35B9相對於41c p≤0.0001，R35B9相對於CRCBT-06-002 p≤0.0001，R35B9相對於ITEM-4 p≤0.0001)。
圖19描繪抗Fn14 mAb R35B9最佳化純系強力拮抗TWEAK誘導的ICAM-1表現。將HRMC與單獨培養基一起或與不同濃度的抗Fn14或同型對照mAb一起培育30分鐘且接著將具有或不具有rhTWEAK (250 ng/mL)的培養基添加至細胞中維持24小時。細胞用胰蛋白酶解離且針對表面ICAM-1表現進行染色。使用流式細胞儀(BD Biosciences Fortessa)量測表面ICAM-1表現的平均螢光強度(MFI)，基於活細胞來閘選。點線表示未刺激之細胞(單獨培養基)在培養24小時之後的ICAM-1 MFI (MFI 4,013)及經250 ng/mL rhTWEAK刺激24小時之細胞的ICAM-1 MFI (MFI 35,608)。
圖20描繪例示性小鼠Fn14拮抗劑單株抗體的VH及VL胺基酸序列。
圖21描繪本文所提供之例示性小鼠及人類化抗體的VL胺基酸序列，其分解為FR及CDR序列。
圖22描繪本文所提供之例示性小鼠及人類化抗體的VH胺基酸序列，其分解為FR及CDR序列。
圖23描繪例示性人類化R35B9系列抗體的CDR。
圖24描繪本文所提供之例示性人類化抗體的VH及VL胺基酸序列。
圖25描繪人類化抗Fn14抗體阻斷TWEAK結合至細胞上所表現的Fn14。將HRMC與不同濃度的個別抗體一起培育30分鐘，隨後與重組人類TWEAK (250 ng/mL)一起培育45分鐘。利用生物素標記之山羊抗人類TWEAK、隨後利用抗生蛋白鏈菌素-PE偵測TWEAK對HRMC細胞的結合。在Fortessa上獲得經染色之細胞。使用下式計算TWEAK阻斷%：100-(樣品的幾何平均螢光強度-不具有TWEAK之細胞的幾何平均螢光強度)/(單獨TWEAK而無抗體的幾何平均螢光強度-不具有TWEAK之細胞的幾何平均螢光強度)*100。
圖26A、26B及26C描繪的結果表明進一步經工程改造的人類化Fn14 mAb拮抗TWEAK誘導HRMC分泌IL-8。將HRMC與6.67至0.2085 nM範圍內之不同濃度的抗Fn14或同型對照mAb一起在37℃下培育30分鐘且接著將TWEAK以250 ng/mL添加至孔中維持24小時。收集上清液且使用IL-8 ELISA套組測試IL-8。用Prism將資料作圖。A512/A468為原始人類化抗體，且其餘為A512/A468進一步經工程改造的純系。抗DNP huIgG4剔除型為Fn14 mAb的同型對照。頂部點線：經TWEAK刺激的細胞產生IL-8。底部點線：未刺激之細胞產生IL-8。
圖27A及27B描繪的結果表明，相較於CRCBT-06-002 Fn14 mAb，進一步經工程改造的人類化Fn14 mAb為TWEAK誘導HRMC分泌IL-8的更強拮抗劑。將HRMC與不同濃度的抗Fn14抗體、小鼠/人類嵌合CRCBT-06-002 (mu/huCRCBT)或同型對照mAb一起在37℃下培育30分鐘且接著將TWEAK以250 ng/mL添加至孔中維持24小時。收集上清液且使用IL-8 ELISA套組測試IL-8。圖27A展示抗體濃度在1.67 nM (0.25 µg/mL)時的資料。圖27B展示抗Fn14純系中之每一者能夠比mu/huCRCBT以更低的IC50、更強地阻斷TWEAK誘導IL-8分泌。頂部點線：經TWEAK刺激的細胞產生IL-8。底部點線：未刺激之細胞產生IL-8。利用不成對t檢驗來分析資料，在經個別抗Fn14 mAb處理之孔與經mu/huCRCBT處理之孔之間比較IL-8含量。***：p ＜0.001，*：p ＜0.01。A512/A468：原始人類化抗Fn14 mAb，且其餘為A512/A468進一步經工程改造的純系。抗DNP huIgG4剔除型：同型對照。
圖28A、28B及28C展示進一步經工程改造的人類化mAb不促進Fn14。將HRMC與266.67至0.26 nM範圍內之不同濃度的抗Fn14或同型對照mAb一起培育24小時。收集上清液且使用IL-8 ELISA套組測試IL-8。點線表示未刺激之細胞(單獨培養基)在24小時之後的平均上清液IL-8含量。抗DNP huIgG4剔除型為Fn14 mAb的同型對照。ITEM-4為展現促效劑活性且用作陽性對照物的市售mAb。mIgG2b為ITEM 4的同型對照抗體。點線：未刺激之細胞產生IL-8。
圖29A展示人類化Fn14 mAb強力拮抗TWEAK誘導HaCaT細胞分泌RANTES。將HaCaT細胞與0.156至10 µg/mL範圍內之不同濃度的抗Fn14或同型對照mAb一起在37℃下培育30分鐘且接著將TWEAK以100 ng/mL添加至孔中維持48小時。收集上清液且利用RANTES ELISA套組測試RANTES。用Prism將資料作圖。抗DNP huIgG4剔除型為Fn14 mAb的同型對照。頂部點線：僅經TWEAK處理而不添加抗體的細胞。底部點線：未經TWEAK刺激的細胞。
圖29B展示人類化Fn14 mAb強力拮抗TWEAK誘導人類初級成年角質細胞分泌RANTES。將初級角質細胞與0.156至10 µg/mL範圍內之不同濃度的抗Fn14或同型對照mAb一起在37℃下培育30分鐘且接著將TWEAK以100 ng/mL添加至孔中維持48小時。收集上清液且利用RANTES ELISA套組測試RANTES。用Prism將資料作圖。抗DNP huIgG4剔除型為Fn14 mAb的同型對照。頂部點線：僅經TWEAK處理而不添加抗體的細胞。未經TWEAK刺激之細胞中的RANTES含量低於偵測極限(未獲得OD值)。
圖30展示人類化Fn14 mAb強力拮抗TWEAK誘導人類初級新生兒表皮角質細胞發生細胞凋亡。將人類初級表皮角質細胞與抗Fn14或同型對照mAb (1.5 µg/mL)、TWEAK (100 ng/mL)、TNFα (10 ng/mL)或TWEAK與TNFα組合一起培育72小時。收集細胞，用磷脂結合蛋白V及7-AAD染色，且在LSR Fortessa上分析。磷脂結合蛋白V+/7-AAD+細胞：晚期細胞凋亡細胞；磷脂結合蛋白V+/7-AAD-細胞：早期細胞凋亡細胞。
圖31A展示人類化Fn14 mAb強力拮抗TWEAK誘導HaCaT細胞上的ICAM-1上調。將HaCaT細胞與0.156至10 µg/mL範圍內之不同濃度的抗Fn14或同型對照mAb一起在37℃下培育30分鐘且接著將TWEAK以100 ng/mL添加至孔中維持48小時。收集細胞，用抗ICAM-1染色，且在LSR Fortessa上分析。抗DNP huIgG4剔除型為Fn14 mAb的同型對照。頂部點線：僅經TWEAK處理而不添加抗體的細胞。底部點線：未經TWEAK處理的細胞。
圖31B展示人類化Fn14 mAb A512/A468強力拮抗TWEAK誘導人類初級新生兒角質細胞上的ICAM-1上調。將初級新生兒角質細胞與1 µg/mL的抗Fn14或同型對照mAb一起在37℃下培育30分鐘且接著將TWEAK以100 ng/mL添加至孔中維持48小時。收集細胞，用抗ICAM-1染色，且在LSR Fortessa上分析。抗DNP huIgG4剔除型為Fn14 mAb的同型對照。
圖32展示人類化Fn14 mAb強力拮抗TWEAK誘導人類初級真皮纖維母細胞分泌IL-6。將人類初級真皮纖維母細胞與0.156至10 µg/mL範圍內之不同濃度的抗Fn14或同型對照mAb一起在37℃下培育30分鐘且接著將TWEAK以100 ng/mL添加至孔中維持48小時。收集上清液且使用IL-6 ELISA套組測試IL-6。用Prism將資料作圖。抗DNP huIgG4剔除型為Fn14 mAb的同型對照。頂部點線：僅經TWEAK處理而不添加抗體的細胞。底部點線：未經TWEAK刺激的細胞。
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Claims (84)

  1. 一種結合至Fn14的抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段為Fn14拮抗劑，且其中 (a)該抗體或其抗原結合片段不為Fn14促效劑； (b)該抗體或其抗原結合片段結合人類、食蟹獼猴、大鼠及小鼠Fn14；及/或 (c)該抗體或其抗原結合片段結合包含人類Fn14之胺基酸30-50、具有SEQ ID NO: 2之胺基酸序列的亞域1。
  2. 如請求項1之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段減弱TWEAK誘導的信號傳導路徑且/或減弱TWEAK對Fn14的結合。
  3. 如請求項1之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段減弱TWEAK誘導的細胞介素及/或趨化因子表現，其中該等細胞介素及趨化因子視情況選自由以下組成之群：IL-8、CCL2、IL-1β、TGFβ、CCL21、TNFα、IL-6、CXCL1、CCL3、CCL4、CXCL12、CCL5、CXCL10及CXCL16。
  4. 如請求項1之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段減少TWEAK誘導的IL-8分泌。
  5. 如請求項1之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段減弱TWEAK誘導的ICAM-1表現；且/或減弱TWEAK誘導的細胞凋亡。
  6. 如請求項1至5中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段不為Fn14促效劑。
  7. 如請求項6之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段在TWEAK不存在/或存在下不誘導IL-8分泌。
  8. 如請求項1至7中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段結合人類、食蟹獼猴、大鼠及小鼠Fn14。
  9. 如請求項1至8中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段結合包含人類Fn14之胺基酸30-50、具有SEQ ID NO: 2之胺基酸序列的亞域1。
  10. 如請求項9之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段與胺基酸序列APGTAPCSRGSSWSADLDKCM (SEQ ID NO: 182)中的一或多個胺基酸殘基相互作用。
  11. 如請求項1至8中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段與人類Fn14蛋白質的一或多個胺基酸殘基相互作用，該等胺基酸殘基選自由以下組成之群：Gly32、Thr33、Ala34、Pro35、Trp42、Ala44、Asp45、Leu46、Asp47、Lys48、Cys49或其組合，且其中視情況，該抗體或其抗原結合片段與人類Fn14蛋白質的所有胺基酸殘基Gly32、Thr33、Ala34、Pro35、Trp42、Ala44、Asp45、Leu46、Asp47、Lys48及Cys49相互作用。
  12. 如請求項1至11中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中如表面電漿子共振方法所測定，該抗體或抗原結合片段以小於100 nM的KD結合人類Fn14；其中如表面電漿子共振方法所測定，該抗體或抗原結合片段以小於100 nM的KD結合食蟹獼猴Fn14；其中如表面電漿子共振方法所測定，該抗體或抗原結合片段以小於100 nM的KD結合大鼠Fn14；且其中如表面電漿子共振方法所測定，該抗體或抗原結合片段以小於100 nM的KD結合小鼠Fn14。
  13. 如請求項1至11中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中如表面電漿子共振方法所測定，該抗體或抗原結合片段以小於10 nM的KD結合人類Fn14；其中如表面電漿子共振方法所測定，該抗體或抗原結合片段以小於10 nM的KD結合食蟹獼猴Fn14；其中如表面電漿子共振方法所測定，該抗體或抗原結合片段以小於10 nM的KD結合大鼠Fn14；且其中如表面電漿子共振方法所測定，該抗體或抗原結合片段以小於10 nM的KD結合小鼠Fn14。
  14. 如請求項1至11中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中如表面電漿子共振方法所測定，該抗體或抗原結合片段以小於1 nM的KD結合人類Fn14；其中如表面電漿子共振方法所測定，該抗體或抗原結合片段以小於1 nM的KD結合食蟹獼猴Fn14；其中如表面電漿子共振方法所測定，該抗體或抗原結合片段以小於1 nM的KD結合大鼠Fn14；且其中如表面電漿子共振方法所測定，該抗體或抗原結合片段以小於1 nM的KD結合小鼠Fn14。
  15. 如請求項1至14中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該抗原結合片段係選自由以下組成之群：Fab、Fab'、F(ab')2、Fv、scFv、dsFv、雙功能抗體、三功能抗體、四功能抗體，及由抗體片段形成之多特異性抗體。
  16. 如請求項1至15中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體為小鼠抗體。
  17. 如請求項1至15中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體為嵌合抗體。
  18. 如請求項1至15中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體為完全人類抗體或其抗原結合片段。
  19. 如請求項1至15中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或抗原結合片段為人類化抗體或其抗原結合片段。
  20. 如請求項1至19中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段係以重組方式產生。
  21. 如請求項1至19中任一項之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段係由融合瘤產生。
  22. 如請求項1至21中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含： (a)重鏈可變區(VH)，其包含 (i)包含GYX1 FX2 DYNMH之胺基酸序列(SEQ ID NO: 184)的VH互補決定區1 (CDR H1)，其中X1為T、I或R，且X2為T或Q； (ii)包含X3 INPX4 NX5 X6 TNYNX9 KFX10 G之胺基酸序列(SEQ ID NO: 257)的VH互補決定區2 (CDR H2)，其中X3 為Y或S，X4 為N或R，X5 為A或G，X6 為G或W，X9 為Q或D，且X10 為K、G、H或D；及 (iii)包含SGWFTY之胺基酸序列(SEQ ID NO: 121)的VH互補決定區3 (CDR H3)；以及 (b)輕鏈可變區(VL)，其包含 (i)包含KSSQSLLNSAGKTYLN之胺基酸序列(SEQ ID NO: 127)的VL互補決定區1 (CDR L1)； (ii)包含LVX11 X12 LDX13 之胺基酸序列(SEQ ID NO: 258)的VL互補決定區2 (CDR L2)，其中X11 為S或A，X12 為Q或E，且X13 為S或D；及 (iii)包含WQGTX7 X8 PWT之胺基酸序列(SEQ ID NO: 186)的VL互補決定區3 (CDR L3)，其中X7 為H或F，且X8 為F或Y。
  23. 如請求項22之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含： (a)重鏈可變區(VH)，其包含 (i)包含選自由SEQ ID NO: 119及SEQ ID NO: 122組成之群之胺基酸序列的VH互補決定區1 (CDR H1)； (ii)包含選自由以下組成之群之胺基酸序列的VH互補決定區2 (CDR H2)：SEQ ID NO: 120、SEQ ID NO: 123、SEQ ID NO: 124、SEQ ID NO: 125、SEQ ID NO: 126、SEQ ID NO: 149；SEQ ID NO: 247、SEQ ID NO: 248、SEQ ID NO: 249及SEQ ID NO: 250；及 (iii)包含SEQ ID NO: 121之胺基酸序列的VH互補決定區3 (CDR H3)，以及 (b)輕鏈可變區(VL)，其包含 (i)包含SEQ ID NO: 127之胺基酸序列的VL互補決定區1 (CDR L1)； (ii)包含選自由以下組成之群之胺基酸序列的VL互補決定區2 (CDR L2)：SEQ ID NO: 128、SEQ ID NO: 254、SEQ ID NO: 255及SEQ ID NO: 256；及 (iii)包含選自由SEQ ID NO: 129、SEQ ID NO: 130及SEQ ID NO: 131組成之群之胺基酸序列的VL互補決定區3 (CDR L3)。
  24. 如請求項1至21中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含： (a)重鏈可變區(VH)，其包含 (i)包含GYX1 FX2 DYNMH之胺基酸序列(SEQ ID NO: 184)的VH互補決定區1 (CDR H1)，其中X1為T、I或R，且X2為T或Q； (ii)包含X3 INPX4 NX5 X6 TNYNQKFKG之胺基酸序列(SEQ ID NO: 185)的VH互補決定區2 (CDR H2)，其中X3為Y或S，X4為N或R；X5 為A或G，且X6 為G或W；及 (iii)包含SGWFTY之胺基酸序列(SEQ ID NO: 121)的VH互補決定區3 (CDR H3)；以及 (b)輕鏈可變區(VL)，其包含 (i)包含KSSQSLLNSAGKTYLN之胺基酸序列(SEQ ID NO: 127)的VL互補決定區1 (CDR L1)； (ii)包含LVSQLDS之胺基酸序列(SEQ ID NO: 128)的VL互補決定區2 (CDR L2)；及 (iii)包含WQGTX7 X8 PWT之胺基酸序列(SEQ ID NO: 186)的VL互補決定區3 (CDR L3)，其中X7 為H或F，且X8 為F或Y。
  25. 如請求項24之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含： (a)重鏈可變區(VH)，其包含 (i)包含選自由SEQ ID NO: 119及SEQ ID NO: 122組成之群之胺基酸序列的VH互補決定區1 (CDR H1)； (ii)包含選自由以下組成之群之胺基酸序列的VH互補決定區2 (CDR H2)：SEQ ID NO: 120、SEQ ID NO: 123、SEQ ID NO: 124、SEQ ID NO: 125、SEQ ID NO: 126及SEQ ID NO: 149；及 (iii)包含SEQ ID NO: 121之胺基酸序列的VH互補決定區3 (CDR H3)；以及 (b)輕鏈可變區(VL)，其包含 (i)包含SEQ ID NO: 127之胺基酸序列的VL互補決定區1 (CDR L1)； (ii)包含SEQ ID NO: 128之胺基酸序列的VL互補決定區2 (CDR L2)；及 (iii)包含選自由SEQ ID NO: 129、SEQ ID NO: 130及SEQ ID NO: 131組成之群之胺基酸序列的VL互補決定區3 (CDR L3)。
  26. 如請求項1至23中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO: 122之CDR H1、SEQ ID NO: 123之CDR H2、SEQ ID NO: 121之CDR H3、SEQ ID NO: 127之CDR L1、SEQ ID NO: 128之CDR L2，及SEQ ID NO: 130之CDR L3。
  27. 如請求項1至23中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO: 122之CDR H1、SEQ ID NO: 124之CDR H2、SEQ ID NO: 121之CDR H3、SEQ ID NO: 127之CDR L1、SEQ ID NO: 128之CDR L2，及SEQ ID NO: 130之CDR L3。
  28. 如請求項1至23中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO: 122之CDR H1、SEQ ID NO: 125之CDR H2、SEQ ID NO: 121之CDR H3、SEQ ID NO: 127之CDR L1、SEQ ID NO: 128之CDR L2，及SEQ ID NO: 130之CDR L3。
  29. 如請求項1至23中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO: 122之CDR H1、SEQ ID NO: 126之CDR H2、SEQ ID NO: 121之CDR H3、SEQ ID NO: 127之CDR L1、SEQ ID NO: 128之CDR L2，及SEQ ID NO: 130之CDR L3。
  30. 如請求項1至23中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO: 122之CDR H1、SEQ ID NO: 149之CDR H2、SEQ ID NO: 121之CDR H3、SEQ ID NO: 127之CDR L1、SEQ ID NO: 128之CDR L2，及SEQ ID NO: 130之CDR L3。
  31. 如請求項1至23中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO: 122之CDR H1、SEQ ID NO: 123之CDR H2、SEQ ID NO: 121之CDR H3、SEQ ID NO: 127之CDR L1、SEQ ID NO: 128之CDR L2，及SEQ ID NO: 131之CDR L3。
  32. 如請求項1至23中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO: 122之CDR H1、SEQ ID NO: 124之CDR H2、SEQ ID NO: 121之CDR H3、SEQ ID NO: 127之CDR L1、SEQ ID NO: 128之CDR L2，及SEQ ID NO: 131之CDR L3。
  33. 如請求項1至23中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO: 122之CDR H1、SEQ ID NO: 125之CDR H2、SEQ ID NO: 121之CDR H3、SEQ ID NO: 127之CDR L1、SEQ ID NO: 128之CDR L2，及SEQ ID NO: 131之CDR L3。
  34. 如請求項1至23中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO: 122之CDR H1、SEQ ID NO: 126之CDR H2、SEQ ID NO: 121之CDR H3、SEQ ID NO: 127之CDR L1、SEQ ID NO: 128之CDR L2，及SEQ ID NO: 131之CDR L3。
  35. 如請求項1至23中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO: 122之CDR H1、SEQ ID NO: 149之CDR H2、SEQ ID NO: 121之CDR H3、SEQ ID NO: 127之CDR L1、SEQ ID NO: 128之CDR L2，及SEQ ID NO: 131之CDR L3。
  36. 如請求項1至23中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO: 122之CDR H1、SEQ ID NO: 124之CDR H2、SEQ ID NO: 121之CDR H3、SEQ ID NO: 127之CDR L1、SEQ ID NO: 254之CDR L2，及SEQ ID NO: 130之CDR L3。
  37. 如請求項1至23中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO: 122之CDR H1、SEQ ID NO: 124之CDR H2、SEQ ID NO: 121之CDR H3、SEQ ID NO: 127之CDR L1、SEQ ID NO: 255之CDR L2，及SEQ ID NO: 130之CDR L3。
  38. 如請求項1至23中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO: 122之CDR H1、SEQ ID NO: 124之CDR H2、SEQ ID NO: 121之CDR H3、SEQ ID NO: 127之CDR L1、SEQ ID NO: 256之CDR L2，及SEQ ID NO: 130之CDR L3。
  39. 如請求項1至23中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO: 122之CDR H1、SEQ ID NO: 247之CDR H2、SEQ ID NO: 121之CDR H3、SEQ ID NO: 127之CDR L1、SEQ ID NO: 128之CDR L2，及SEQ ID NO: 130之CDR L3。
  40. 如請求項1至23中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO: 122之CDR H1、SEQ ID NO: 247之CDR H2、SEQ ID NO: 121之CDR H3、SEQ ID NO: 127之CDR L1、SEQ ID NO: 254之CDR L2，及SEQ ID NO: 130之CDR L3。
  41. 如請求項1至23中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO: 122之CDR H1、SEQ ID NO: 247之CDR H2、SEQ ID NO: 121之CDR H3、SEQ ID NO: 127之CDR L1、SEQ ID NO: 255之CDR L2，及SEQ ID NO: 130之CDR L3。
  42. 如請求項1至23中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO: 122之CDR H1、SEQ ID NO: 247之CDR H2、SEQ ID NO: 121之CDR H3、SEQ ID NO: 127之CDR L1、SEQ ID NO: 256之CDR L2，及SEQ ID NO: 130之CDR L3。
  43. 如請求項1至23中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO: 122之CDR H1、SEQ ID NO: 248之CDR H2、SEQ ID NO: 121之CDR H3、SEQ ID NO: 127之CDR L1、SEQ ID NO: 128之CDR L2，及SEQ ID NO: 130之CDR L3。
  44. 如請求項1至23中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO: 122之CDR H1、SEQ ID NO: 248之CDR H2、SEQ ID NO: 121之CDR H3、SEQ ID NO: 127之CDR L1、SEQ ID NO: 254之CDR L2，及SEQ ID NO: 130之CDR L3。
  45. 如請求項1至23中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO: 122之CDR H1、SEQ ID NO: 248之CDR H2、SEQ ID NO: 121之CDR H3、SEQ ID NO: 127之CDR L1、SEQ ID NO: 255之CDR L2，及SEQ ID NO: 130之CDR L3。
  46. 如請求項1至23中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO: 122之CDR H1、SEQ ID NO: 248之CDR H2、SEQ ID NO: 121之CDR H3、SEQ ID NO: 127之CDR L1、SEQ ID NO: 256之CDR L2，及SEQ ID NO: 130之CDR L3。
  47. 如請求項1至23中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO: 122之CDR H1、SEQ ID NO: 249之CDR H2、SEQ ID NO: 121之CDR H3、SEQ ID NO: 127之CDR L1、SEQ ID NO: 128之CDR L2，及SEQ ID NO: 130之CDR L3。
  48. 如請求項1至23中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO: 122之CDR H1、SEQ ID NO: 249之CDR H2、SEQ ID NO: 121之CDR H3、SEQ ID NO: 127之CDR L1、SEQ ID NO: 254之CDR L2，及SEQ ID NO: 130之CDR L3。
  49. 如請求項1至23中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO: 122之CDR H1、SEQ ID NO: 249之CDR H2、SEQ ID NO: 121之CDR H3、SEQ ID NO: 127之CDR L1、SEQ ID NO: 255之CDR L2，及SEQ ID NO: 130之CDR L3。
  50. 如請求項1至23中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO: 122之CDR H1、SEQ ID NO: 249之CDR H2、SEQ ID NO: 121之CDR H3、SEQ ID NO: 127之CDR L1、SEQ ID NO: 256之CDR L2，及SEQ ID NO: 130之CDR L3。
  51. 如請求項1至23中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO: 122之CDR H1、SEQ ID NO: 250之CDR H2、SEQ ID NO: 121之CDR H3、SEQ ID NO: 127之CDR L1、SEQ ID NO: 128之CDR L2，及SEQ ID NO: 130之CDR L3。
  52. 如請求項1至23中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO: 122之CDR H1、SEQ ID NO: 250之CDR H2、SEQ ID NO: 121之CDR H3、SEQ ID NO: 127之CDR L1、SEQ ID NO: 254之CDR L2，及SEQ ID NO: 130之CDR L3。
  53. 如請求項1至23中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO: 122之CDR H1、SEQ ID NO: 250之CDR H2、SEQ ID NO: 121之CDR H3、SEQ ID NO: 127之CDR L1、SEQ ID NO: 255之CDR L2，及SEQ ID NO: 130之CDR L3。
  54. 如請求項1至23中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO: 122之CDR H1、SEQ ID NO: 250之CDR H2、SEQ ID NO: 121之CDR H3、SEQ ID NO: 127之CDR L1、SEQ ID NO: 256之CDR L2，及SEQ ID NO: 130之CDR L3。
  55. 如請求項1至23中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含： (a)重鏈可變區(VH)，其包含 (i)包含GYIFQDYNMH之胺基酸序列(SEQ ID NO: 122)的VH互補決定區1 (CDR H1)； (ii)包含X3 INPRNX5 X6 TNYNX9 KFX10 G之胺基酸序列(SEQ ID NO: 259)的VH互補決定區2 (CDR H2)，其中X3 為Y或S，X5 為A或G；X6 為G或W，X9 為Q或D，且X10 為K、G、H或D；及 (iii)包含SGWFTY之胺基酸序列(SEQ ID NO: 121)的VH互補決定區3 (CDR H3)；以及 (b)輕鏈可變區(VL)，其包含 (i)包含KSSQSLLNSAGKTYLN之胺基酸序列(SEQ ID NO: 127)的VL互補決定區1 (CDR L1)； (ii)包含LVX11 X12 LDX13 之胺基酸序列(SEQ ID NO: 258)的VL互補決定區2 (CDR L2)，其中X11 為S或A，X12 為Q或E，且X13 為S或D；及 (iii)包含WQGTX7 YPWT之胺基酸序列(SEQ ID NO: 188)的VL互補決定區3 (CDR L3)，其中X7 為H或F。
  56. 如請求項55之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含： (a)重鏈可變區(VH)，其包含 (i)包含SEQ ID NO: 122之胺基酸序列的VH互補決定區1 (CDR H1)； (ii)包含選自由以下組成之群之胺基酸序列的VH互補決定區2 (CDR H2)：SEQ ID NO: 123、SEQ ID NO: 124、SEQ ID NO: 126、SEQ ID NO: 247、SEQ ID NO: 248、SEQ ID NO: 249、SEQ ID NO: 250；及 (iii)包含SEQ ID NO: 121之胺基酸序列的VH互補決定區3 (CDR H3)，以及 (b)輕鏈可變區(VL)，其包含 (i)包含SEQ ID NO: 127之胺基酸序列的VL互補決定區1 (CDR L1)； (ii)包含選自由以下組成之群之胺基酸序列的VL互補決定區2 (CDR L2)：SEQ ID NO: 128、SEQ ID NO: 254、SEQ ID NO: 255及SEQ ID NO: 256；及 (iii)包含選自由SEQ ID NO: 130及SEQ ID NO: 131組成之群之胺基酸序列的VL互補決定區3 (CDR L3)。
  57. 如請求項1至25中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含： (a)重鏈可變區(VH)，其包含 (i)包含GYIFQDYNMH之胺基酸序列(SEQ ID NO: 122)的VH互補決定區1 (CDR H1)； (ii)包含X3 INPRNX5 X6 TNYNQKFKG之胺基酸序列(SEQ ID NO: 187)的VH互補決定區2 (CDR H2)，其中X3 為Y或S，X5 為A或G；且X6 為G或W；及 (iii)包含SGWFTY之胺基酸序列(SEQ ID NO: 121)的VH互補決定區3 (CDR H3)；以及 (b)輕鏈可變區(VL)，其包含 (i)包含KSSQSLLNSAGKTYLN之胺基酸序列(SEQ ID NO: 127)的VL互補決定區1 (CDR L1)； (ii)包含LVSQLDS之胺基酸序列(SEQ ID NO: 128)的VL互補決定區2 (CDR L2)；及 (iii)包含WQGTX7 YPWT之胺基酸序列(SEQ ID NO: 188)的VL互補決定區3 (CDR L3)，其中X7 為H或F。
  58. 如請求項57之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含： (a)重鏈可變區(VH)，其包含 (i)包含SEQ ID NO: 122之胺基酸序列的VH互補決定區1 (CDR H1)； (ii)包含選自由SEQ ID NO: 123、SEQ ID NO: 124及SEQ ID NO: 126組成之群之胺基酸序列的VH互補決定區2 (CDR H2)；及 (iii)包含SEQ ID NO: 121之胺基酸序列的VH互補決定區3 (CDR H3)；以及 (b)輕鏈可變區(VL)，其包含 (i)包含SEQ ID NO: 127之胺基酸序列的VL互補決定區1 (CDR L1)； (ii)包含SEQ ID NO: 128之胺基酸序列的VL互補決定區2 (CDR L2)；及 (iii)包含選自由SEQ ID NO: 130及SEQ ID NO: 131組成之群之胺基酸序列的VL互補決定區3 (CDR L3)。
  59. 如請求項1至21中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含： 包含CDR H1、CDR H2及CDR H3的VH，該CDR H1、CDR H2及CDR H3包含選自由以下組成之群之VH胺基酸序列中所含之CDR H1、CDR H2及CDR H3的胺基酸序列：SEQ ID NO: 35、SEQ ID NO: 50、SEQ ID NO: 54、SEQ ID NO: 60、SEQ ID NO: 56及SEQ ID NO: 181；及 包含CDR L1、CDR L2及CDR L3的VL，該CDR L1、CDR L2及CDR L3包含選自由以下組成之群之VL胺基酸序列中所含之CDR L1、CDR L2及CDR L3的胺基酸序列：SEQ ID NO: 40、SEQ ID NO: 52及SEQ ID NO: 58。
  60. 如請求項1至21中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含： 包含CDR H1、CDR H2及CDR H3的VH，該CDR H1、CDR H2及CDR H3包含選自由以下組成之群之VH胺基酸序列中所含之CDR H1、CDR H2及CDR H3的胺基酸序列：SEQ ID NO: 179、SEQ ID NO: 66、SEQ ID NO: 68、SEQ ID NO: 70、SEQ ID NO: 72、SEQ ID NO: 74、SEQ ID NO: 76、SEQ ID NO: 78、SEQ ID NO: 80、SEQ ID NO: 82、SEQ ID NO: 84、SEQ ID NO: 86、SEQ ID NO: 88、SEQ ID NO: 90、SEQ ID NO: 106、SEQ ID NO: 108、SEQ ID NO: 110、SEQ ID NO: 203、SEQ ID NO: 205、SEQ ID NO: 207、SEQ ID NO: 209、SEQ ID NO: 211、SEQ ID NO: 213、SEQ ID NO: 215、SEQ ID NO: 217、SEQ ID NO: 219、SEQ ID NO: 221、SEQ ID NO: 223、SEQ ID NO: 225及SEQ ID NO: 227；以及 包含CDR L1、CDR L2及CDR L3的VL，該CDR L1、CDR L2及CDR L3包含選自由以下組成之群之VL胺基酸序列中所含之CDR L1、CDR L2及CDR L3的胺基酸序列：SEQ ID NO: 92、SEQ ID NO: 94、SEQ ID NO: 96、SEQ ID NO: 98、SEQ ID NO: 100、SEQ ID NO: 102、SEQ ID NO: 104、SEQ ID NO: 112、SEQ ID NO: 229、SEQ ID NO: 231、SEQ ID NO: 233、SEQ ID NO: 235、SEQ ID NO: 237。
  61. 如請求項59或請求項60之抗體或其抗原結合片段，其中該CDR H1、CDR H2、CDR H3、CDR L1、CDR L2及CDR L3係根據Kabat編號、AbM編號、Chothia編號、接觸編號或IMGT編號或其組合來確定。
  62. 如請求項59或請求項60之抗體或其抗原結合片段，其中該CDR H1、CDR H2、CDR H3、CDR L1、CDR L2及CDR L3係根據Kabat編號及Chothia編號來確定。
  63. 如請求項59或請求項60之抗體或其抗原結合片段，其中該CDR H1、CDR H2、CDR H3、CDR L1、CDR L2及CDR L3係根據Kabat編號測定。
  64. 如請求項59或請求項60之抗體或其抗原結合片段，其中該CDR H1、CDR H2、CDR H3、CDR L1、CDR L2及CDR L3係根據AbM編號來確定。
  65. 如請求項59或請求項60之抗體或其抗原結合片段，其中該CDR H1、CDR H2、CDR H3、CDR L1、CDR L2及CDR L3係根據Chothia編號來確定。
  66. 如請求項59或請求項60之抗體或其抗原結合片段，其中該CDR H1、CDR H2、CDR H3、CDR L1、CDR L2及CDR L3係根據接觸編號來確定。
  67. 如請求項59或請求項60之抗體或其抗原結合片段，其中該CDR H1、CDR H2、CDR H3、CDR L1、CDR L2及CDR L3係根據IMGT編號確定。
  68. 如請求項1至67中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段進一步包含： (i)包含SEQ ID NO: 132之胺基酸序列的VH構架1 (FR1)； (ii)包含SEQ ID NO: 138之胺基酸序列的VH構架2 (FR2)； (iii)包含SEQ ID NO: 145之胺基酸序列的VH構架3 (FR3)； (iv)包含SEQ ID NO: 158之胺基酸序列的VH構架4 (FR4)； (v)包含SEQ ID NO: 160之胺基酸序列的VL FR1； (vi)包含SEQ ID NO: 163之胺基酸序列的VL FR2； (vii)包含SEQ ID NO: 169之胺基酸序列的VL FR3；及 (viii)包含SEQ ID NO: 171之胺基酸序列的VL FR4。
  69. 如請求項1至67中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段進一步包含： (i)包含選自由以下組成之群之胺基酸序列的VH FR1：SEQ ID NO: 133、SEQ ID NO: 134、SEQ ID NO: 135、SEQ ID NO: 136、SEQ ID NO: 137、SEQ ID NO: 238及SEQ ID NO: 239； (ii)包含選自由以下組成之群之胺基酸序列的VH FR2：SEQ ID NO: 139、SEQ ID NO: 140、SEQ ID NO: 141、SEQ ID NO: 142、SEQ ID NO: 143、SEQ ID NO: 144、SEQ ID NO: 173、SEQ ID NO: 240、SEQ ID NO: 241、SEQ ID NO: 242、SEQ ID NO: 243、SEQ ID NO: 244、SEQ ID NO: 245及SEQ ID NO: 246； (iii)包含選自由以下組成之群之胺基酸序列的VH FR3：SEQ ID NO: 146、SEQ ID NO: 147、SEQ ID NO: 148、SEQ ID NO: 150、SEQ ID NO: 151、SEQ ID NO: 152、SEQ ID NO: 153、SEQ ID NO: 154、SEQ ID NO: 155、SEQ ID NO: 156、SEQ ID NO: 157、SEQ ID NO: 174及SEQ ID NO: 251； (iv)包含SEQ ID NO: 159之胺基酸序列的VH FR4； (v)包含選自由SEQ ID NO: 161及SEQ ID NO: 162組成之群之胺基酸序列的VL FR1； (vi)包含選自由以下組成之群之胺基酸序列的VL FR2：SEQ ID NO: 163、SEQ ID NO: 164、SEQ ID NO: 165、SEQ ID NO: 166、SEQ ID NO: 167、SEQ ID NO: 168、SEQ ID NO: 252及SEQ ID NO: 253； (vii)包含SEQ ID NO: 170之胺基酸序列的VL FR3；及 (viii)包含選自由SEQ ID NO: 171及SEQ ID NO: 172組成之群之胺基酸序列的VL FR4。
  70. 如請求項1至23中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含： 包含選自由以下組成之群之胺基酸序列的VH：SEQ ID NO: 35、SEQ ID NO: 50、SEQ ID NO: 54、SEQ ID NO: 60、SEQ ID NO: 56及SEQ ID NO: 181；以及 包含選自由以下組成之群之胺基酸序列的VL：SEQ ID NO: 40、SEQ ID NO: 52及SEQ ID NO: 58。
  71. 如請求項1至23中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含： 包含選自由以下組成之群之胺基酸序列的VH：SEQ ID NO: 179、SEQ ID NO: 66、SEQ ID NO: 68、SEQ ID NO: 70、SEQ ID NO: 72、SEQ ID NO: 74、SEQ ID NO: 76、SEQ ID NO: 78、SEQ ID NO: 80、SEQ ID NO: 82、SEQ ID NO: 84、SEQ ID NO: 86、SEQ ID NO: 88、SEQ ID NO: 90、SEQ ID NO: 106、SEQ ID NO: 108、SEQ ID NO: 110、SEQ ID NO: 203、SEQ ID NO: 205、SEQ ID NO: 207、SEQ ID NO: 209、SEQ ID NO: 211、SEQ ID NO: 213、SEQ ID NO: 215、SEQ ID NO: 217、SEQ ID NO: 219、SEQ ID NO: 221、SEQ ID NO: 223、SEQ ID NO: 225及SEQ ID NO: 227；以及 包含選自由以下組成之群之胺基酸序列的VL：SEQ ID NO: 92、SEQ ID NO: 94、SEQ ID NO: 96、SEQ ID NO: 98、SEQ ID NO: 100、SEQ ID NO: 102、SEQ ID NO: 104、SEQ ID NO: 112、SEQ ID NO: 229、SEQ ID NO: 231、SEQ ID NO: 233、SEQ ID NO: 235及SEQ ID NO: 237。
  72. 如請求項1至71中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段與藥劑結合。
  73. 如請求項72之抗體或其抗原結合片段，其中該藥劑係選自由以下組成之群：細胞毒性劑、放射性同位素、金屬螯合劑、酶、螢光化合物、生物發光化合物、化學發光化合物，及肽。
  74. 一種醫藥組合物，其包含如請求項1至71中任一項之抗體或抗原結合片段及醫藥學上可接受之賦形劑。
  75. 一種治療及/或預防疾病或病症之方法，其包含向個體投與治療有效量之如請求項1至71中任一項之抗體或其抗原結合片段。
  76. 如請求項75之方法，其中該疾病或病症為由Fn14及/或TWEAK介導、誘導及/或延長的疾病或病症。
  77. 如請求項75之方法，其中該疾病或病症係選自由以下組成之群：影響關節、皮膚、腎臟、肝臟、腸、心臟、肺或肌肉的自體免疫及/或發炎疾病，其中該疾病或病症任意地選自由以下組成之群：類風濕性關節炎、類天疱瘡、盤狀皮膚狼瘡、蕁麻疹性血管炎、亨諾-許蘭過敏性紫斑症(Henoch-Schonlein Purpura)、IgA腎病、異位性皮膚炎(異位性濕疹)、牛皮癬(尋常型牛皮癬)、脂漏性濕疹、哮喘、蛋白尿腎臟疾病、肝臟疾病、狼瘡性腎炎、多發性肌炎、皮肌炎、鈣調神經磷酸酶抑制劑誘導性腎毒性、肌強直性營養障礙、心臟功能異常及衰竭、亞柏氏症候群(Alport syndrome)、潰瘍性結腸炎、克羅恩氏病(Crohn's disease)、皮膚血管炎、惡病質及發炎性腸病，且其中該疾病或病症視情況與纖維化相關且任意地選自由以下組成之群：組織纖維化、特發性肺纖維化、間質性肺病、硬皮病(全身性硬化症)、癌症、癌症相關惡病質、肌肉萎縮、瘢瘤、包涵體性肌炎及組織重建。
  78. 如請求項75之方法，其中該個體為人類個體。
  79. 一種聚核苷酸，其包含編碼如請求項1至71中任一項之抗體或其抗原結合片段或其一部分的核苷酸序列。
  80. 如請求項79之聚核苷酸，其中該聚核苷酸包含聚核苷酸序列，該聚核苷酸序列選自由表36、表37、表5、表17及表22中所列之聚核苷酸序列組成之群。
  81. 一種載體，其包含如請求項80之聚核苷酸。
  82. 一種細胞，其包含如請求項80之聚核苷酸。
  83. 一種細胞，其包含如請求項81之載體。
  84. 一種製備抗體或其抗原結合片段的方法，包含培養如請求項82或請求項83之細胞以表現該抗體或其抗原結合片段。
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