JP2024512135A - 免疫エフェクター細胞再指向のための材料及び方法 - Google Patents

免疫エフェクター細胞再指向のための材料及び方法 Download PDF

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Abstract

ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞と会合する又はＮＫ細胞を活性化するための第１の手段と、腫瘍細胞と結合するための第２の手段と、を含む分子であって、腫瘍細胞に対するＮＫ細胞依存性細胞傷害を誘導することができる、分子。

Description

（関連出願の相互参照）
本出願は、２０２１年３月３１日に出願された米国特許出願第６３／１６８，６０５号、２０２１年３月３１日に出願された同第６３／１６８，６１１号、２０２１年３月３１日に出願された同第６３／１６８，６１８号、２０２１年３月３１日に出願された同第６３／１６８，６２１号、２０２１年３月３１日に出願された同第６３／１６８，６２８号の利益を主張し、各々が参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
（電子的に提出された配列表の参照）
本出願は、ＡＳＣＩＩ形式の配列表としてＥＦＳ－Ｗｅｂを介して電子的に提出され、ファイル名が「１４６２０－６４８－２２８＿ＳＥＱ＿ＬＩＳＴＩＮＧ」で、２０２２年３月２４日に作成され、１８１，３３２バイトのサイズを有する配列表を含む。ＥＦＳ－Ｗｅｂを介して提出された配列表は、本明細書の一部であり、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
（発明の分野）
本開示は、とりわけ、抗ＮＫＧ２ｄ分子、抗ＮＫｐ４６分子、及びそれら又はそれらの断片を含む多重特異性分子を含むナチュラルキラー細胞係合因子、並びに分子をコードする核酸及び発現ベクター、これらのベクターを含む組換え細胞、及びこれらの分子を含む組成物に関する。腫瘍細胞に対して免疫エフェクター細胞を再指向するための分子の作製方法及び使用方法も提供される。
腫瘍細胞は、抗体による破壊のために治療的に標的化され得る。治療用抗体は免疫エフェクター細胞に係合し、多くの機構を使用して、腫瘍細胞を破壊のために標的とすることができる。エフェクター細胞は、腫瘍細胞及びエフェクター細胞と結合してそれらを近接させる二重特異性抗体（bispecific antibody、ｂｓＡｂ）を使用して、腫瘍細胞に対して再指向され得る。あるいは、モノクローナル抗体（monoclonal antibody、ｍＡｂ）は、それらの可変領域を介して腫瘍細胞に係合し、Ｆｃ領域と、主に単球、マクロファージ、及びＮＫ細胞上に発現されるＦｃ ｇ受容体との間の相互作用を介してエフェクター細胞を動員することができる。
本発明者らは、ナチュラルキラー（Natural Killer、ＮＫ）細胞上に発現される第１の抗原と結合する第１の結合ドメインと、腫瘍細胞上に発現される第２の抗原と結合する第２の結合ドメインと、を含む、本明細書に記載される多重特異性抗体を初めて発見した。
一態様では、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞上で発現される第１の抗原と結合する第１の結合ドメインと、第２の抗原と結合する第２の結合ドメインと、を含む、多重特異性抗体が本明細書で提供される。
本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、第１の抗原は、ＮＫ細胞活性化受容体である。
本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、第１の抗原は、ＮＫＧ２ｄである。
本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、（ａ）配列番号４のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（complementarity determining region、ＣＤＲ）１、配列番号５のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号６のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、（ｂ）配列番号１０のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号１１のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号１２のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、（ｃ）配列番号１６のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号１７のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号１８のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、（ｄ）配列番号２２のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号２３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号２４のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、又は（ｅ）配列番号２８のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号２９のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号３０のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、を含む、重鎖可変領域（ＶＨ）と、（ａ）配列番号７のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号８のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号９のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号１４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号１５のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、（ｃ）配列番号１９のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号２０のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号２１のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、（ｄ）配列番号２５のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号２６のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号２７のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、又は（ｅ）配列番号３１のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号３２のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号３３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、を含む、軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含む。
本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、配列番号２のアミノ酸配列を有するＶＨと、配列番号３のアミノ酸配列を有するＶＬと、を含む。
本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、（ｉ）（ａ）配列番号３６のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号３７のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号３８のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、（ｂ）配列番号４２のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号４３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号４４のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、（ｃ）配列番号４８のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号４９のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号５０のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、（ｄ）配列番号５４のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号５５のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号５６のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、又は（ｅ）配列番号６０のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号６１のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号６２のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、を含む、重鎖可変領域（ＶＨ）と、（ｉｉ）（ａ）配列番号３９のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号４０のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号４１のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、（ｂ）配列番号４５のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号４６のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号４７のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、（ｃ）配列番号５１のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号５２のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号５３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、（ｄ）配列番号５７のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号５８のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号５９のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、又は（ｅ）配列番号６３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号６４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号６５のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、を含む、軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含む。
本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、配列番号３４のアミノ酸配列を有するＶＨと、配列番号３５のアミノ酸配列を有するＶＬと、を含む。
本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、第１の抗原は、ＮＫｐ４６である。
本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、（ｉ）（ａ）配列番号６９のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号７０のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号７１のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、（ｂ）配列番号７５のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号７６のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号７７のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、（ｃ）配列番号８１のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号８２のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号８３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、（ｄ）配列番号８７のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号８８のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号８９のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、又は（ｅ）配列番号９３のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号９４のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号９５のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、を含む、重鎖可変領域（ＶＨ）と、（ｉｉ）（ａ）配列番号７２のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号７３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号７４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、（ｂ）配列番号７８のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号７９のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号８０のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、（ｃ）配列番号８４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号８５のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号８６のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、（ｄ）配列番号９０のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号９１のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号９２のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、又は（ｅ）配列番号９６のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号９７のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号９８のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、を含む、軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含む。
本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、配列番号６７のアミノ酸配列を有するＶＨと、配列番号６８のアミノ酸配列を有するＶＬと、を含む。
本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、第２の抗原は、細胞表面上にある。
本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、第２の抗原は、腫瘍細胞上で発現される。
本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、第２の抗原は、腫瘍特異的抗原（tumor specific antigen、ＴＳＡ）又は腫瘍関連抗原（tumor associated antigen、ＴＡＡ）である。
本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、第２の抗原は、ＢＣＭＡである。
本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、第２の抗原は、ＧＰＲＣ５ｄである。
本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、ヒト化されている。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、ヒト化されている。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、第１の結合ドメイン及び第２の結合ドメインの両方は、ヒト化されている。
本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、ＩｇＧ抗体である。
本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、ＩｇＧ抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４抗体である。
本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、ＩｇＧ抗体は、ＩｇＧ１抗体である。
本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、ＩｇＧ１は、サイレント変異を含む。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、ＩｇＧ１は、ＡＡＳ変異を含む。いくつかの実施形態では、ＡＡＳ変異を含む多重特異性抗体は、腫瘍細胞のＮＫ細胞依存性細胞傷害を誘導することができる。
本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、ＩｇＧ１は、抗体のエフェクター機能を増強するための変異を含む。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、ＩｇＧ１は、Ｋ２４８Ｅ／Ｔ４３７Ｒ変異を含む。いくつかの実施形態では、Ｋ２４８Ｅ／Ｔ４３７Ｒ変異を含む多重特異性抗体は、抗ＮＫ細胞細胞傷害性を欠く。
本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、脱フコシル化されている。
本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、二重特異性抗体である。
本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、二重特異性抗体は、Ｂｉｐｏｄ足場構造である。
本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、Ｆａｂ領域であり、第２の結合ドメインは、ｓｃＦｖ領域である。
本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、二重特異性抗体は、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ足場構造である。
本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、２つのＦａｂ領域を含み、第２の結合ドメインは、２つのｓｃＦｖ領域を含む。
本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、抗ＮＫ細胞細胞傷害性を欠く。
本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、インビトロで腫瘍細胞のＮＫ細胞依存性細胞傷害を約５００ｐＭ未満のＩＣ５０で誘導する。いくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、インビトロで腫瘍細胞のＮＫ細胞依存性細胞傷害を約３００ｐＭ未満のＩＣ５０で誘導する。いくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、インビトロで腫瘍細胞のＮＫ細胞依存性細胞傷害を約１００ｐＭ未満のＩＣ５０で誘導する。いくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、インビトロで腫瘍細胞のＮＫ細胞依存性細胞傷害を約５０ｐＭ未満のＩＣ５０で誘導する。いくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、インビトロで腫瘍細胞のＮＫ細胞依存性細胞傷害を約２０ｐＭ未満のＩＣ５０で誘導する。いくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、インビトロで腫瘍細胞のＮＫ細胞依存性細胞傷害を約１５ｐＭ未満のＩＣ５０で誘導する。いくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、インビトロで腫瘍細胞のＮＫ細胞依存性細胞傷害を約１０ｐＭ未満のＩＣ５０で誘導する。
本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、ＩＣ５０は、ＮＫエフェクター細胞と第２の抗原を発現する標的細胞との混合物を用いて評価される。
本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、エフェクター細胞対標的細胞の比は、約０．０１：１～約１０：１である。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、エフェクター細胞対標的細胞の比は、約０．０１：１～約５：１である。いくつかの実施形態では、エフェクター細胞対標的細胞の比は、約０．１対１～約２対１である。いくつかの実施形態では、エフェクター細胞対標的細胞の比は、約１：１である。
別の態様では、本明細書で提供される多重特異性抗体をコードする核酸が提供される。また、本明細書で提供される多重特異性抗体をコードする核酸を含むベクターも提供される。また、本明細書で提供される多重特異性抗体をコードする核酸を含むベクターを含む宿主細胞も提供される。また、本明細書で提供される多重特異性抗体をコードする核酸を含むベクターと、そのためのパッケージと、を含む、キットが提供される。
別の態様では、ＮＫＧ２ｄと結合する抗体が本明細書で提供され、（ｉ）（ａ）配列番号４のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号５のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号６のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、（ｂ）配列番号１０のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号１１のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号１２のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、（ｃ）配列番号１６のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号１７のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号１８のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、（ｄ）配列番号２２のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号２３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号２４のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、又は（ｅ）配列番号２８のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号２９のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号３０のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、を含む、重鎖可変領域（ＶＨ）と、（ｉｉ）（ａ）配列番号７のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号８のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号９のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号１４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号１５のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、（ｃ）配列番号１９のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号２０のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号２１のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、（ｄ）配列番号２５のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号２６のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号２７のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、又は（ｅ）配列番号３１のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号３２のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号３３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、を含む、軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含む。
本明細書で提供されるＮＫＧ２ｄと結合する抗体のいくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、配列番号２のアミノ酸配列を有するＶＨと、配列番号３のアミノ酸配列を有するＶＬと、を含む。
別の態様では、ＮＫＧ２ｄと結合する抗体が本明細書で提供され、（ｉ）（ａ）配列番号３６のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号３７のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号３８のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、（ｂ）配列番号４２のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号４３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号４４のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、（ｃ）配列番号４８のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号４９のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号５０のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、（ｄ）配列番号５４のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号５５のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号５６のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、又は（ｅ）配列番号６０のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号６１のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号６２のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、を含む、重鎖可変領域（ＶＨ）と、（ｉｉ）（ａ）配列番号３９のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号４０のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号４１のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、（ｂ）配列番号４５のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号４６のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号４７のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、（ｃ）配列番号５１のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号５２のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号５３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、（ｄ）配列番号５７のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号５８のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号５９のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、又は（ｅ）配列番号６３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号６４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号６５のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、を含む、軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含む。
本明細書で提供されるＮＫＧ２ｄと結合する抗体のいくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、配列番号３４のアミノ酸配列を有するＶＨと、配列番号３５のアミノ酸配列を有するＶＬと、を含む。
別の態様では、ＮＫｐ４６と結合する抗体が本明細書で提供され、（ｉ）（ａ）配列番号６９のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号７０のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号７１のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、（ｂ）配列番号７５のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号７６のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号７７のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、（ｃ）配列番号８１のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号８２のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号８３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、（ｄ）配列番号８７のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号８８のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号８９のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、又は（ｅ）配列番号９３のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号９４のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号９５のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、を含む、重鎖可変領域（ＶＨ）と、（ｉｉ）（ａ）配列番号７２のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号７３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号７４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、（ｂ）配列番号７８のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号７９のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号８０のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、（ｃ）配列番号８４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号８５のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号８６のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、（ｄ）配列番号９０のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号９１のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号９２のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、又は（ｅ）配列番号９６のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号９７のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号９８のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、を含む、軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含む。
本明細書で提供されるＮＫｐ４６と結合する抗体のいくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、配列番号６７のアミノ酸配列を有するＶＨと、配列番号６８のアミノ酸配列を有するＶＬと、を含む。
別の態様では、本明細書で提供される抗体をコードする核酸が本明細書で提供される。また、本明細書で提供される抗体をコードする核酸を含む、ベクターが提供される。また、本明細書で提供される抗体をコードする核酸を含むベクターを含む、宿主細胞が提供される。また、本明細書で提供される抗体をコードする核酸を含むベクターと、そのためのパッケージとを含む、キットが提供される。
更に別の態様では、医薬組成物であって、本明細書で提供される多重特異性抗体と、医薬的に許容される担体と、を含み、多重特異性抗体が、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞上で発現される第１の抗原と結合する第１の結合ドメインと、第２の抗原と結合する第２の結合ドメインと、を含む、医薬組成物が本明細書で提供される。
本明細書で提供される医薬組成物のいくつかの実施形態では、第１の抗原は、ＮＫ細胞活性化受容体である。
本明細書で提供される医薬組成物のいくつかの実施形態では、第１の抗原は、ＮＫＧ２ｄである。
本明細書で提供される医薬組成物のいくつかの実施形態では、第１の抗原は、ＮＫｐ４６である。
本明細書で提供される医薬組成物のいくつかの実施形態では、第２の抗原は、細胞表面上にある。
本明細書で提供される医薬組成物のいくつかの実施形態では、第２の抗原は、腫瘍細胞上で発現される。
本明細書で提供される医薬組成物のいくつかの実施形態では、第２の抗原は、腫瘍特異抗原（ＴＳＡ）又は腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）である。
本明細書で提供される医薬組成物のいくつかの実施形態では、第２の抗原は、ＢＣＭＡである。
本明細書で提供される医薬組成物のいくつかの実施形態では、第２の抗原は、ＧＰＲＣ５ｄである。
本明細書で提供される医薬組成物のいくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、ヒト化されている。本明細書で提供される医薬組成物のいくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、ヒト化されている。本明細書で提供される医薬組成物のいくつかの実施形態では、第１の結合ドメイン及び第２の結合ドメインの両方は、ヒト化されている。
本明細書で提供される医薬組成物のいくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、ＩｇＧ抗体である。
本明細書で提供される医薬組成物のいくつかの実施形態では、ＩｇＧ抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４抗体である。
本明細書で提供される医薬組成物のいくつかの実施形態では、ＩｇＧ抗体は、ＩｇＧ１抗体である。
本明細書で提供される医薬組成物のいくつかの実施形態では、ＩｇＧ１は、サイレント変異を含む。本明細書で提供される医薬組成物のいくつかの実施形態では、ＩｇＧ１は、ＡＡＳ変異を含む。
本明細書で提供される医薬組成物のいくつかの実施形態では、ＩｇＧ１は、抗体のエフェクター機能を増強するための変異を含む。本明細書で提供される医薬組成物のいくつかの実施形態では、ＩｇＧ１は、Ｋ２４８Ｅ／Ｔ４３７Ｒ変異を含む。
本明細書で提供される医薬組成物のいくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、脱フコシル化されている。
本明細書で提供される医薬組成物のいくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、二重特異性抗体である。
本明細書で提供される医薬組成物のいくつかの実施形態では、二重特異性抗体は、Ｂｉｐｏｄ足場構造である。
本明細書で提供される医薬組成物のいくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、Ｆａｂ領域であり、第２の結合ドメインは、ｓｃＦｖ領域である。
本明細書で提供される医薬組成物のいくつかの実施形態では、二重特異性抗体は、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ足場構造である。
本明細書で提供される医薬組成物のいくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、２つのＦａｂ領域を含み、第２の結合ドメインは、２つのｓｃＦｖ領域を含む。
本明細書で提供される医薬組成物のいくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、インビトロで腫瘍細胞のＮＫ細胞依存性細胞傷害を約５００ｐＭ未満のＩＣ５０で誘導する。いくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、インビトロで腫瘍細胞のＮＫ細胞依存性細胞傷害を約３００ｐＭ未満のＩＣ５０で誘導する。いくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、インビトロで腫瘍細胞のＮＫ細胞依存性細胞傷害を約１００ｐＭ未満のＩＣ５０で誘導する。いくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、インビトロで腫瘍細胞のＮＫ細胞依存性細胞傷害を約５０ｐＭ未満のＩＣ５０で誘導する。いくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、インビトロで腫瘍細胞のＮＫ細胞依存性細胞傷害を約２０ｐＭ未満のＩＣ５０で誘導する。いくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、インビトロで腫瘍細胞のＮＫ細胞依存性細胞傷害を約１５ｐＭ未満のＩＣ５０で誘導する。いくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、インビトロで腫瘍細胞のＮＫ細胞依存性細胞傷害を約１０ｐＭ未満のＩＣ５０で誘導する。
本明細書で提供される医薬組成物のいくつかの実施形態では、ＩＣ５０は、ＮＫエフェクター細胞と第２の抗原を発現する標的細胞との混合物を用いて評価される。
本明細書で提供される医薬組成物のいくつかの実施形態では、エフェクター細胞対標的細胞の比は、約０．０１対１～約１０対１である。本明細書で提供される医薬組成物のいくつかの実施形態では、エフェクター細胞対標的細胞の比は、約０．０１対１～約５対１である。いくつかの実施形態では、エフェクター細胞対標的細胞の比は、約０．１対１～約２対１である。いくつかの実施形態では、エフェクター細胞対標的細胞の比は、約１：１である。
更に別の態様では、多重特異性抗体を作製するためのプロセスであって、ＮＫ細胞上で発現される第１の抗原と結合する第１の結合ドメインと、第２の抗原と結合する第２の結合ドメインと、をコードする１つ又は２つ以上の核酸を宿主細胞に導入することを含む、プロセスが本明細書で提供される。
本明細書で提供される多重特異性抗体を作製するためのプロセスのいくつかの実施形態では、第１の抗原は、ＮＫ細胞活性化受容体である。
本明細書で提供される多重特異性抗体を作製するためのプロセスのいくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、本明細書で提供される多重特異性抗体である。
本明細書で提供される多重特異性抗体を作製するためのプロセスのいくつかの実施形態では、第１の抗原は、ＮＫｐ４６である。本明細書で提供される多重特異性抗体を作製するためのプロセスのいくつかの実施形態では、第１の抗原は、ＮＫＧ２ｄである。
本明細書で提供される多重特異性抗体を作製するためのプロセスのいくつかの実施形態では、第２の抗原は、細胞表面上にある。
本明細書で提供される多重特異性抗体を作製するためのプロセスのいくつかの実施形態では、第２の抗原は、腫瘍細胞上で発現される。
本明細書で提供される多重特異性抗体を作製するためのプロセスのいくつかの実施形態では、第２の抗原は、腫瘍特異的抗原（ＴＳＡ）又は腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）である。
本明細書で提供される多重特異性抗体を作製するためのプロセスのいくつかの実施形態では、第２の抗原は、ＢＣＭＡである。
本明細書で提供される多重特異性抗体を作製するためのプロセスのいくつかの実施形態では、第２の抗原は、ＧＰＲＣ５ｄである。
本明細書で提供される多重特異性抗体を作製するためのプロセスのいくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、ヒト化されている。本明細書で提供される多重特異性抗体を作製するためのプロセスのいくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、ヒト化されている。本明細書で提供される多重特異性抗体を作製するためのプロセスのいくつかの実施形態では、第１の結合ドメイン及び第２の結合ドメインの両方は、ヒト化されている。
本明細書で提供される多重特異性抗体を作製するためのプロセスのいくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、ＩｇＧ抗体である。
本明細書で提供される多重特異性抗体を作製するためのプロセスのいくつかの実施形態では、ＩｇＧ抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４抗体である。
本明細書で提供される多重特異性抗体を作製するためのプロセスのいくつかの実施形態では、ＩｇＧ抗体は、ＩｇＧ１抗体である。
本明細書で提供されるプロセスのいくつかの実施形態では、ＩｇＧ１は、サイレント変異を含む。本明細書で提供されるプロセスのいくつかの実施形態では、ＩｇＧ１は、ＡＡＳ変異を含む。
本明細書で提供されるプロセスのいくつかの実施形態では、ＩｇＧ１は、抗体のエフェクター機能を増強するための変異を含む。本明細書で提供されるプロセスのいくつかの実施形態では、ＩｇＧ１は、Ｋ２４８Ｅ／Ｔ４３７Ｒ変異を含む。
本明細書で提供されるプロセスのいくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、脱フコシル化されている。
本明細書で提供される多重特異性抗体を作製するためのプロセスのいくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、二重特異性抗体である。
本明細書で提供される多重特異性抗体を作製するためのプロセスのいくつかの実施形態では、二重特異性抗体は、Ｂｉｐｏｄ足場構造である。
本明細書で提供される多重特異性抗体を作製するためのプロセスのいくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、Ｆａｂ領域であり、第２の結合ドメインは、ｓｃＦｖ領域である。
本明細書で提供される多重特異性抗体を作製するためのプロセスのいくつかの実施形態では、二重特異性抗体は、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ足場構造である。
本明細書で提供される多重特異性抗体を作製するためのプロセスのいくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、２つのＦａｂ領域を含み、第２の結合ドメインは、２つのｓｃＦｖ領域を含む。
本明細書で提供される多重特異性抗体を作製するためのプロセスのいくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、インビトロで腫瘍細胞のＮＫ細胞依存性細胞傷害を約５００ｐＭ未満のＩＣ５０で誘導する。いくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、インビトロで腫瘍細胞のＮＫ細胞依存性細胞傷害を約３００ｐＭ未満のＩＣ５０で誘導する。いくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、インビトロで腫瘍細胞のＮＫ細胞依存性細胞傷害を約１００ｐＭ未満のＩＣ５０で誘導する。いくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、インビトロで腫瘍細胞のＮＫ細胞依存性細胞傷害を約５０ｐＭ未満のＩＣ５０で誘導する。いくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、インビトロで腫瘍細胞のＮＫ細胞依存性細胞傷害を約２０ｐＭ未満のＩＣ５０で誘導する。いくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、インビトロで腫瘍細胞のＮＫ細胞依存性細胞傷害を約１５ｐＭ未満のＩＣ５０で誘導する。いくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、インビトロで腫瘍細胞のＮＫ細胞依存性細胞傷害を約１０ｐＭ未満のＩＣ５０で誘導する。
本明細書で提供される多重特異性抗体を作製するためのプロセスのいくつかの実施形態では、ＩＣ５０は、ＮＫエフェクター細胞と第２の抗原を発現する標的細胞との混合物を用いて評価される。
本明細書で提供される多重特異性抗体を作製するためのプロセスのいくつかの実施形態では、エフェクター細胞対標的細胞の比は、約０．０１対１～約１０対１である。本明細書で提供される多重特異性抗体を作製するためのプロセスのいくつかの実施形態では、エフェクター細胞対標的細胞の比は、約０．０１対１～約５対１である。いくつかの実施形態では、エフェクター細胞対標的細胞の比は、約０．１対１～約２対１である。いくつかの実施形態では、エフェクター細胞対標的細胞の比は、約１：１である。
更に別の態様では、ＮＫ細胞を標的細胞に指向させる方法であって、ＮＫ細胞を多重特異性抗体と接触させ、それによってＮＫ細胞を標的細胞に指向させることを含み、多重特異性抗体が、ＮＫ細胞上の第１の抗原と結合する第１の結合ドメインと、標的細胞上の第２の抗原と結合する第２の結合ドメインとを含む、方法が本明細書で提供される。
別の態様では、ＮＫ細胞を標的細胞に指向させるための多重特異性抗体の使用であって、ＮＫ細胞を多重特異性抗体と接触させ、それによってＮＫ細胞を標的細胞に指向させることを含み、多重特異性抗体が、ＮＫ細胞上の第１の抗原と結合する第１の結合ドメインと、標的細胞上の第２の抗原と結合する第２の結合ドメインとを含む、使用が本明細書で提供される。
別の態様では、ＮＫ細胞を活性化する方法であって、ＮＫを多重特異性抗体と接触させることを含み、多重特異性抗体が、ＮＫ細胞上の第１の抗原と結合する第１の結合ドメインと、標的細胞上の第２の抗原と結合する第２の結合ドメインとを含む、方法が本明細書で提供される。
別の態様では、ＮＫ細胞を活性化するための多重特異性抗体の使用であって、ＮＫを多重特異性抗体と接触させることを含み、多重特異性抗体が、ＮＫ細胞上の第１の抗原と結合する第１の結合ドメインと、標的細胞上の第２の抗原と結合する第２の結合ドメインとを含む、使用が本明細書で提供される。
別の態様では、細胞表面上で第２の抗原を発現する標的細胞の成長又は増殖を阻害する方法であって、標的細胞を多重特異性抗体と接触させることを含み、多重特異性抗体が、ＮＫ細胞上の第１の抗原と結合する第１の結合ドメインと、第２の抗原と結合する第２の結合ドメインとを含む、方法が本明細書で提供される。
別の態様では、細胞表面上で第２の抗原を発現する標的細胞の成長又は増殖を阻害するための多重特異性抗体の使用であって、多重特異性抗体の使用が、標的細胞を多重特異性抗体と接触させることを含み、多重特異性抗体が、ＮＫ細胞上の第１の抗原と結合する第１の結合ドメインと、第２の抗原と結合する第２の結合ドメインとを含む、使用が本明細書で提供される。
別の態様では、対象において第２の抗原を発現する標的細胞を除去する方法、あるいは第２の抗原を発現する標的細胞によって全部若しくは一部が引き起こされる疾患又は障害を治療する方法であって、有効量の多重特異性抗体を対象に投与することを含み、多重特異性抗体が、ＮＫ細胞上の第１の抗原と結合する第１の結合ドメインと、第２の抗原と結合する第２の結合ドメインとを含む、方法が本明細書で提供される。
別の態様では、対象において第２の抗原を発現する標的細胞を除去する方法、あるいは第２の抗原を発現する標的細胞によって全部若しくは一部が引き起こされる疾患又は障害を治療するための多重特異性抗体の使用であって、有効量の多重特異性抗体を対象に投与することを含み、多重特異性抗体が、ＮＫ細胞上の第１の抗原と結合する第１の結合ドメインと、第２の抗原と結合する第２の結合ドメインとを含む、使用が本明細書で提供される。
いくつかの実施形態では、対象は、その治療を必要としている対象である。いくつかの実施形態では、対象は、ヒトである。
いくつかの実施形態では、疾患又は障害は、がんである。いくつかの実施形態では、がんは、血液がんである。いくつかの実施形態では、がんは、固形腫瘍がんである。
本明細書で提供される方法のいくつかの実施形態では、第１の抗原は、ＮＫ細胞活性化受容体である。
本明細書で提供される方法のいくつかの実施形態では、第１の抗原は、ＮＫＧ２ｄである。本明細書で提供される方法のいくつかの実施形態では、第１の抗原は、ＮＫｐ４６である。いくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、本明細書で提供される多重特異性抗体である。
本明細書で提供される方法のいくつかの実施形態では、第２の抗原は、細胞表面上にある。
本明細書で提供される方法のいくつかの実施形態では、第２の抗原は、腫瘍細胞上で発現される。
本明細書で提供される方法のいくつかの実施形態では、第２の抗原は、腫瘍特異抗原（ＴＳＡ）又は腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）である。
本明細書で提供される方法のいくつかの実施形態では、第２の抗原は、ＢＣＭＡである。
本明細書で提供される方法のいくつかの実施形態では、第２の抗原は、ＧＰＲＣ５ｄである。
本明細書で提供される方法のいくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、ヒト化されている。本明細書で提供される方法のいくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、ヒト化されている。本明細書で提供される方法のいくつかの実施形態では、第１の結合ドメイン及び第２の結合ドメインの両方は、ヒト化されている。
本明細書で提供される方法のいくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、ＩｇＧ抗体である。
本明細書で提供される方法のいくつかの実施形態では、ＩｇＧ抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４抗体である。
本明細書で提供される方法のいくつかの実施形態では、ＩｇＧ抗体は、ＩｇＧ１抗体である。
本明細書で提供される方法のいくつかの実施形態では、ＩｇＧ１は、サイレント変異を含む。本明細書で提供される方法のいくつかの実施形態では、ＩｇＧ１は、ＡＡＳ変異を含む。
本明細書で提供される方法のいくつかの実施形態では、ＩｇＧ１は、抗体のエフェクター機能を増強するための変異を含む。本明細書で提供される方法のいくつかの実施形態では、ＩｇＧ１は、Ｋ２４８Ｅ／Ｔ４３７Ｒ変異を含む。
本明細書で提供される方法のいくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、脱フコシル化されている。
本明細書で提供される方法のいくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、二重特異性抗体である。
本明細書で提供される方法のいくつかの実施形態では、二重特異性抗体は、Ｂｉｐｏｄ足場構造である。
本明細書で提供される方法のいくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、Ｆａｂ領域であり、第２の結合ドメインは、ｓｃＦｖ領域である。
本明細書で提供される方法のいくつかの実施形態では、二重特異性抗体は、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ足場構造である。
本明細書で提供される方法のいくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、２つのＦａｂ領域を含み、第２の結合ドメインは、２つのｓｃＦｖ領域を含む。
本明細書で提供される方法のいくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、インビトロで腫瘍細胞のＮＫ細胞依存性細胞傷害を約５００ｐＭ未満のＩＣ５０で誘導する。いくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、インビトロで腫瘍細胞のＮＫ細胞依存性細胞傷害を約３００ｐＭ未満のＩＣ５０で誘導する。いくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、インビトロで腫瘍細胞のＮＫ細胞依存性細胞傷害を約１００ｐＭ未満のＩＣ５０で誘導する。いくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、インビトロで腫瘍細胞のＮＫ細胞依存性細胞傷害を約５０ｐＭ未満のＩＣ５０で誘導する。いくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、インビトロで腫瘍細胞のＮＫ細胞依存性細胞傷害を約２０ｐＭ未満のＩＣ５０で誘導する。いくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、インビトロで腫瘍細胞のＮＫ細胞依存性細胞傷害を約１５ｐＭ未満のＩＣ５０で誘導する。いくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、インビトロで腫瘍細胞のＮＫ細胞依存性細胞傷害を約１０ｐＭ未満のＩＣ５０で誘導する。
本明細書で提供される方法のいくつかの実施形態では、ＩＣ５０は、ＮＫエフェクター細胞と第２の抗原を発現する標的細胞との混合物を用いて評価される。
本明細書で提供される方法のいくつかの実施形態では、エフェクター細胞対標的細胞の比は、約０．０１対１～約１０対１である。本明細書で提供される方法のいくつかの実施形態では、エフェクター細胞対標的細胞の比は、約０．０１対１～約５対１である。いくつかの実施形態では、エフェクター細胞対標的細胞の比は、約０．１対１～約２対１である。いくつかの実施形態では、エフェクター細胞対標的細胞の比は、約０．５対１である。いくつかの実施形態では、エフェクター細胞対標的細胞の比は、約１：１である。
別の態様では、ＮＫ細胞と会合する又はＮＫ細胞を活性化するための第１の手段と、腫瘍細胞と結合するための第２の手段と、を含む分子が提供され、本分子は、腫瘍細胞に対するＮＫ細胞依存性細胞傷害を誘導することができる。
本明細書で提供される分子のいくつかの実施形態では、第１の手段は、ＮＫ細胞上に発現される第１の抗原と結合する第１の結合ドメインを含み、第２の手段は、腫瘍細胞上に発現される第２の抗原と結合する第２の結合ドメインを含む。
本明細書で提供される分子のいくつかの実施形態では、第１の抗原は、ＮＫ細胞活性化受容体である。
本明細書で提供される分子のいくつかの実施形態では、第１の抗原は、ＮＫＧ２ｄである。
本明細書で提供される分子のいくつかの実施形態では、第１の抗原は、ＮＫｐ４６である。
本明細書で提供される分子のいくつかの実施形態では、第２の抗原は、腫瘍特異抗原（ＴＳＡ）又は腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）である。
本明細書で提供される分子のいくつかの実施形態では、第２の抗原は、ＢＣＭＡである。
本明細書で提供される分子のいくつかの実施形態では、第２の抗原は、ＧＰＲＣ５ｄである。
別の態様では、１つを超える標的分子と結合する抗体を作製するプロセスであって、ＮＫ細胞上の第１の抗原と結合することができる結合ドメインを得る機能を実行する工程と、腫瘍細胞上の第２の抗原と結合することができる結合ドメインを得る機能を実行する工程と、第１の抗原及び第２の抗原と結合することができる分子を提供する機能を実行する工程と、を含む、プロセスが提供される。
別の態様では、ＮＫ細胞を標的細胞に指向する方法であって、ＮＫ細胞を本明細書で提供される分子と接触させることを含む、方法が本明細書で提供される。
別の態様では、ＮＫ細胞を本明細書で提供される分子と接触させることを含む、ＮＫ細胞を活性化する方法が本明細書で提供される
別の態様では、標的細胞の成長又は増殖を阻害する方法が本明細書で提供され、本方法は、標的細胞を本明細書で提供される分子と接触させることを含む。
別の態様では、対象において第２の抗原を発現する標的細胞を除去する方法、あるいは第２の抗原を発現する標的細胞によって全部若しくは一部が引き起こされる疾患又は障害を治療する方法であって、有効量の本明細書で提供される分子を投与することを含む、方法が本明細書で提供される。
ＮＫＧＷ１で免疫化したＯｍｎｉラットの血清力価の結果を示す。 ＮＫ細胞アゴニズムについてのビーズ系アッセイを示す。 ＮＫｐ４６で免疫化したＯｍｎｉラットの血清力価の結果を示す。 ｂｓＡｂの構造を示す。 ＮＫ細胞系細胞傷害性を媒介するＢｓＡｂの能力の分析結果を示す。 ＮＫ細胞系細胞傷害性を媒介するＢｓＡｂの能力の分析結果を示す。 ＮＫ細胞系細胞傷害性を媒介するＢｓＡｂの能力の分析結果を示す。 ＮＫ細胞系細胞傷害性を媒介するＢｓＡｂの能力の分析結果を示す。 更なるＢＣＭＡ結合一価ｍＡｂ及びｂｓＡｂの構造を示す。 １ｎｇ／ｍｌのＴＧＦｂでの７２時間の前処理によるＡＤＣＣにおけるＮＫ細胞の増強作用、及びエフェクター分子Ｎ４６Ｂ１０．ＡＦＵにおけるＮＫｐ４６結合アームの組み込みによるＡＤＣＣの機能的レスキューを示す。 ＮＫｐ４６結合アームを含まないＢＣＭＢ１１０６．ＡＦＵと比較した、エフェクター分子Ｎ４６Ｂ１０．ＡＦＵにおけるＮＫｐ４６結合アームの組み込みによる低酸素条件下でのＡＤＣＣにおけるＮＫ細胞の増強を示す。 ＮＫｐ４６結合アームを含まないＢＣＭＢ１１０６．ＡＦＵと比較した、エフェクター分子Ｎ４６Ｂ１０．ＡＦＵにおけるＮＫｐ４６結合アームの組み込みによる低酸素条件下でのＡＤＣＣにおけるＮＫ細胞の増強を示す。 ＮＫｐ４６結合アームを含まないＢＣＭＢ１１０６．ＡＦＵと比較した、エフェクター分子Ｎ４６Ｂ１０．ＡＦＵにおけるＮＫｐ４６結合アームの組み込みによる低酸素条件下でのＡＤＣＣにおけるＮＫ細胞の増強を示す。 力価可能な抗ＮＫ ＣＤＣ死滅を示す抗ＣＤ３８陽性対照ｍＡｂとは対照的に、ヒト血清の存在下でＢＣＭＡ×ＮＫｐ４６二重特異性分子による抗ＮＫ ＣＤＣ活性の欠如を示す。
本開示は、ＮＫ細胞上の抗原と結合する新規分子及びそれ又はその断片を含む多重特異性結合分子、並びにこれらの新規分子の高度な特性、例えば、ＮＫ細胞上に存在する第１の抗原と結合することができる第１の手段、及び例えば腫瘍細胞上の第２の抗原と結合することができる第２の手段に部分的に基づく。
定義
本明細書に記載又は参照されている技術及び手順には、当業者が概ねよく理解しているもの、及び／又は当業者が従来の手法を使用して通常採用しているもの、例えば、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ｅｔ ａｌ．，３ｄ ｅｄ．２００１）、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ａｕｓｕｂｅｌ，ｅｔ ａｌ．ｅｄｓ．，２００３）、Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｆｒｏｍ Ｂｅｎｃｈ ｔｏ Ｃｌｉｎｉｃ（Ａｎ ｅｄ．２００９）、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ（Ａｌｂｉｔａｒ，ｅｄ．２０１０）、及びＡｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｖｏｌｓ １ ａｎｄ ２（Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ ａｎｄ Ｄｕｂｅｌ，ｅｄｓ．，２ｄ ｅｄ．２０１０）に記載されている広く利用されている手法などが含まれる。
本明細書で別途定義されていない限り、本明細書で使用されている技術用語及び科学用語は、当業者によって通常理解される意味を有する。この明細書を解釈するために、以下の用語の説明が適用され、必要に応じて、単数形で使用される用語は複数形も含まれ、その逆もまた同様である。記載された用語の任意の説明が、参照により本明細書に組み込まれる任意の文書と矛盾する場合、以下に記載された用語の説明が優先するものとする。
「抗体」、「免疫グロブリン」、又は「Ｉｇ」という用語は、本明細書で互換的に使用され、最も広い意味で使用され、具体的には、例えば、以下に記載されるように、モノクローナル抗体（アゴニスト、アンタゴニスト、中和抗体、完全長又はインタクトモノクローナル抗体を含む）、ポリエピトープ又はモノエピトープ特異性を有する抗体組成物、ポリクローナル又は一価抗体、多価抗体、及び少なくとも２つのインタクト抗体から形成された多重特異性抗体（例えば、所望の生物学的活性を示す限りにおいて、二重特異性抗体）を包含する。抗体は、ヒト、ヒト化、キメラ、及び／又は親和性成熟されたものであり、また他の種、例えば、マウス及びウサギなどからの抗体であり得る。「抗体」という用語は、特定の分子抗原に結合することができ、２つの同一の対のポリペプチド鎖で構成される、ポリペプチドの免疫グロブリンクラス内のＢ細胞のポリペプチド産物を含むことを意図しており、各対は、１つの重鎖（約５０～７０ｋＤａ）及び１つの軽鎖（約２５ｋＤａ）を有し、各鎖の各アミノ末端部分は、約１００～約１３０個以上のアミノ酸の可変領域を含み、各鎖の各カルボキシ末端部分は、定常領域を含む。例えば、Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ（Ｂｏｒｒｅｂａｅｃｋ，ｅｄ．，２ｄ ｅｄ．１９９５）、及びＫｕｂｙ，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（３ｄ ｅｄ．１９９７）を参照されたい。具体的な実施形態では、特定の分子抗原は、ポリペプチド又はエピトープを含む、本明細書で提供される抗体によって結合され得る。また、抗体には、合成抗体、組換え産生抗体、ラクダ化抗体又はそれらのヒト化バリアント、細胞内抗体、及び抗イディオタイプの（抗Ｉｄ）抗体が含まれるが、これらに限定されない。本明細書で使用される「抗体」という用語はまた、Ｆｃ領域及び上記のうちのいずれかの機能的断片（例えば、抗原結合断片）を有する任意の結合分子を含み、機能的断片は、断片が由来する抗体の結合活性の一部又は全部を保持する抗体重鎖又は軽鎖ポリペプチドの一部を指す。機能的断片（例えば、抗原結合断片）の非限定的な例としては、単鎖Ｆｖｓ（single-chain Fv、ｓｃＦｖ）（例えば、単一特異性、二重特異性などを含む）、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）断片、Ｆ（ａｂ）２断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、ジスルフィド結合Ｆｖｓ（disulfide-linked Fv、ｄｓＦｖ）、Ｆｄ断片、Ｆｖ断片、ダイアボディ、トライアボディ、テトラボディ、及びミニボディが挙げられる。特に、本明細書で提供される抗体は、免疫グロブリン分子及び免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な部分、例えば、抗原と結合する抗原結合部位（例えば、抗体の１つ又は２つ以上のＣＤＲ）を含む抗原結合ドメイン又は分子を含む。そのような抗体断片は、例えば、Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（１９８９）、Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ａ Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ｄｅｓｋ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ（Ｍｙｅｒｓ，ｅｄ．，１９９５）、Ｈｕｓｔｏｎ，ｅｔ ａｌ．，１９９３，Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃｓ ２２：１８９－２２４、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ ａｎｄ Ｓｋｅｒｒａ，１９８９，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．１７８：４９７－５１５、及びＤａｙ，Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（２ｄ ｅｄ．１９９０）に見出すことができる。本明細書で提供される抗体は、免疫グロブリン分子のいずれのクラス（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、及びＩｇＡ）又はいずれのサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２）であってもよい。抗体は、アゴニスト抗体であってもアンタゴニスト抗体であってもよい。
「抗原」とは、抗体が選択的に結合することができる構造である。標的抗原は、ポリペプチド、炭水化物、核酸、脂質、ハプテン、又は他の天然に存在する化合物若しくは合成化合物であり得る。いくつかの実施形態では、標的抗原は、ポリペプチドである。ある特定の実施形態では、抗原は、細胞と関連し、例えば、細胞上又は細胞内に存在する。
「インタクト」抗体とは、抗原結合部位、並びに定常ドメイン（ＣＬ）並びに少なくとも重鎖定常領域ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３を含むものである。定常領域には、ヒト定常領域又はそのアミノ酸配列のバリアントが含まれ得る。ある特定の実施形態では、インタクト抗体は、１つ又は２つ以上のエフェクター機能を有する。
「結合（binds）」又は「結合すること（binding）」という用語は、例えば、複合体を形成することを含む分子間の相互作用を指す。相互作用は、例えば、水素結合、イオン結合、疎水性相互作用、及び／又はファンデルワールス相互作用を含む非共有相互作用であり得る。複合体には、共有結合若しくは非共有結合、相互作用、又は力によって一緒に保持された２つ以上の分子の結合も含まれ得る。抗体の単一の抗原結合部位と、抗原などの標的分子の単一のエピトープとの間の非共有相互作用全体の強さが、そのエピトープに対する抗体又は機能的断片の親和性である。一価の抗原に対する結合分子（例えば、抗体）の解離速度（ｋｏｆｆ）と会合速度（ｋｏｎ）との比（ｋｏｆｆ／ｋｏｎ）は、解離定数ＫＤであり、親和性とは逆の関係にある。ＫＤ値が低いほど、抗体の親和性は高くなる。ＫＤの値は、抗体及び抗原の異なる複合体によって様々であり、ｋｏｎ及びｋｏｆｆの両方に依存する。本明細書で提供される抗体の解離定数ＫＤは、本明細書で提供されている任意の方法、又は当業者に周知である任意の他の方法を使用して決定することができる。１つの結合部位での親和性は、必ずしも抗体と抗原との間の相互作用の真の強さを反映するものではない。多価抗原などの複数の繰り返し抗原決定基を含む複雑な抗原が、複数の結合部位を含む抗体と接触した場合、ある部位での抗体の抗原との相互作用は、第２部位での反応の確率を増加させることになる。そのような多価抗体と抗原との間の複数の相互作用の強さは、親和力と呼ばれる。
本明細書に記載されている抗体に関連して、「に結合する」、「に特異的に結合する」などの用語、及び類似の用語も本明細書では互換的に使用され、ポリペプチドなどの抗原に特異的に結合する抗原結合ドメインの抗体を指す。抗原に結合するか、又は抗原に特異的に結合する抗体又は抗原結合ドメインは、関連する抗原と交差反応し得る。ある特定の実施形態では、抗原に結合するか、又は抗原に特異的に結合する抗体又は抗原結合ドメインは、他の抗原と交差反応しない。抗原に結合するか、又は抗原に特異的に結合する抗体又は抗原結合ドメインは、例えば、イムノアッセイ、Ｏｃｔｅｔ（登録商標）、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）、又は当業者に既知の他の技術によって同定することができる。いくつかの実施形態では、抗体又は抗原結合ドメインは、ラジオイムノアッセイ（radioimmunoassay、ＲＩＡ）及び酵素結合免疫吸着アッセイ（enzyme linked immunosorbent assay、ＥＬＩＳＡ）などの実験技術を使用して決定される任意の交差反応性抗原よりも高い親和性で抗原に結合する場合、抗原に結合するか、又は抗原に特異的に結合する。典型的には、特異的又は選択的な反応は、バックグラウンドの信号又はノイズの少なくとも２倍であり、バックグラウンドの１０倍を超える場合がある。結合特異性に関する考察については、例えば、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ３３２－３６（Ｐａｕｌ，ｅｄ．，２ｄ ｅｄ．１９８９）を参照されたい。ある特定の実施形態では、「非標的」タンパク質に対する抗体又は抗原結合ドメインの結合の程度は、例えば、蛍光活性化細胞選別（fluorescence activated cell sorting、ＦＡＣＳ）分析又はＲＩＡによって決定される、その特定の標的抗原に対する抗体又は抗原結合ドメインの結合の約１０％未満である。「特異的結合」、「に特異的に結合する」、又は「に特異的な」などの用語に関しては、結合は、非特異的な相互作用とは測定可能に異なる結合を意味する。特異的結合は、例えば、概して結合活性を有していない類似構造の分子である対照分子の結合と比較して、分子の結合を決定することによって測定することができる。例えば、特異的結合は、標的に類似した対照分子、例えば、過剰な非標識標的との競合によって決定することができる。この場合、標識標的のプローブへの結合が、過剰な非標識標的によって競合的に阻害される場合、特異的結合が示される。抗原に結合する抗体又は抗原結合ドメインには、その抗体が、例えば、抗原を標的とした診断薬又は治療薬として有用であるように、十分な親和性で抗原に結合することが可能なものが含まれる。ある特定の実施形態では、抗原に結合する抗体又は抗原結合ドメインは、１０００ｎＭ、８００ｎＭ、５００ｎＭ、２５０ｎＭ、１００ｎＭ、５０ｎＭ、１０ｎＭ、５ｎＭ、４ｎＭ、３ｎＭ、２ｎＭ、１ｎＭ、０．９ｎＭ、０．８ｎＭ、０．７ｎＭ、０．６ｎＭ、０．５ｎＭ、０．４ｎＭ、０．３ｎＭ、０．２ｎＭ、又は０．１ｎＭ以下の解離定数（ＫＤ）を有する。ある特定の実施形態では、抗体又は抗原結合ドメインは、異なる種に由来する抗原間（例えば、ヒトとカニクイザル種との間）で保存されている抗原のエピトープに結合する。
「結合親和性」とは、概して、分子の単一の結合部位（例えば、抗体などの結合タンパク質）と、その結合パートナー（例えば、抗原）との間の非共有相互作用の総和の強さを指す。別途記載されない限り、本明細書で使用されるとき、「結合親和性」とは、結合対（例えば、抗体及び抗原）のメンバー間の１：１の相互作用を反映する固有の結合親和性を指す。結合分子Ｘのその結合パートナーＹに対する親和性は、概して、解離定数（ＫＤ）で表すことができる。親和性は、本明細書に記載されているものを含む、当該技術分野で既知である一般的な方法で測定することができる。低親和性抗体は、概して、抗原とゆっくり結合し、容易に解離する傾向があるが、高親和性抗体は、概して、抗原とより速く結合し、より長く結合を維持する傾向がある。結合親和性を測定する様々な方法が当該技術分野で既知であり、そのいずれもが本開示の目的のために使用することができる。具体的な例示的実施形態としては、以下のものが挙げられる。一実施形態では、「ＫＤ」又は「ＫＤ値」は、当該技術分野で既知であるアッセイによって、例えば、結合アッセイによって測定することができる。ＫＤは、例えば、目的の抗体のＦａｂバージョン及びその抗原を用いて行われるＲＩＡで測定され得る（Ｃｈｅｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ，１９９９，２９３：８６５－８１）。また、ＫＤ又はＫＤ値は、バイオレイヤー干渉法（biolayer interferometry、ＢＬＩ）、又は、例えばＯｃｔｅｔ（登録商標）Ｒｅｄ９６システムを使用するＯｃｔｅｔ（登録商標）による、又は、例えばＢｉａｃｏｒｅ（登録商標）２０００若しくはＢｉａｃｏｒｅ（登録商標）３０００を使用するＢｉａｃｏｒｅ（登録商標）による表面プラズモン共鳴（surface plasmon resonance、ＳＰＲ）アッセイを使用することによって、測定することができる。また、「オンレート」又は「会合の速度」又は「会合速度」又は「ｋｏｎ」は、例えば、Ｏｃｔｅｔ（登録商標）Ｒｅｄ９６、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）２０００、又はＢｉａｃｏｒｅ（登録商標）３０００システムを使用して、上述した同じバイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）又は表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）技術で決定することができる。
ある特定の実施形態では、抗体は、重鎖及び／又は軽鎖の一部が、特定の種に由来するか、又は特定の抗体クラス若しくはサブクラスに属する抗体の対応する配列と同一又は相同である一方、鎖の残りの部分が、別の種に由来するか、又は別の抗体クラス若しくはサブクラスに属する抗体の対応する配列と同一又は相同である、「キメラ」配列を含むことができるが、これは、それらが所望の生物活性を示す場合に限る（米国特許第４，８１６，５６７号、及びＭｏｒｒｉｓｏｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１９８４，８１：６８５１－５５）。キメラ配列は、ヒト化配列を含み得る。
ある特定の実施形態では、抗体は、ネイティブＣＤＲ残基が、所望の特異性、親和性、及び能力を有するマウス、ラット、ウサギ、又は非ヒト霊長類などの非ヒト種（例えば、ドナー抗体）の対応するＣＤＲからの残基に置き換えられている、ヒト免疫グロブリン（例えば、レシピエント抗体）を含むキメラ抗体である、非ヒト（例えば、マウス）抗体の形態の「ヒト化」形態の部分を含み得る。場合によっては、ヒト免疫グロブリンの１つ又は２つ以上のＦＲ領域残基が、対応する非ヒト残基に置き換えられる。更に、ヒト化抗体は、レシピエント抗体又はドナー抗体で見出されない残基を含むことができる。これらの修飾は、抗体の性能を更に改良するために行われる。ヒト化抗体の重鎖又は軽鎖は、少なくとも１つ又は２つ以上の可変領域の実質的に全てを含むことができ、その場合、ＣＤＲの全て又は実質的に全てが非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、ＦＲの全て又は実質的に全てがヒト免疫グロブリン配列のものである。ある特定の実施形態では、ヒト化抗体は、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、典型的には、ヒト免疫グロブリンの少なくとも一部分を含む。更なる詳細については、Ｊｏｎｅｓ，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，１９８６，３２１：５２２－２５、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，１９８８，３３２：３２３－２９、Ｐｒｅｓｔａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．，１９９２，２：５９３－９６、Ｃａｒｔｅｒ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１９９２，８９：４２８５－８９、米国特許第６，８００，７３８号、同第６７１９９７１号、同第６６３９０５５号、同第６，４０７，２１３号、及び同第６，０５４，２９７号を参照されたい。
ある特定の実施形態では、抗体は、「完全ヒト抗体」又は「ヒト抗体」の一部を含むことができ、これらの用語は、本明細書で互換的に使用され、ヒト可変領域、及び、例えば、ヒト定常領域を含む、抗体を指す。具体的な実施形態では、これらの用語は、ヒト起源の可変領域及び定常領域を含む抗体を指す。「完全ヒト」抗体は、ある特定の実施形態では、ポリペプチドに結合し、ヒト生殖細胞系列免疫グロブリン核酸配列の天然に存在する体細胞バリアントである核酸配列によってコードされる、抗体も包含することができる。「完全ヒト抗体」という用語には、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．により記載されたようにヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列に対応する可変領域及び定常領域を有する抗体が含まれる（Ｋａｂａｔ，ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．９１－３２４２を参照されたい）。「ヒト抗体」とは、ヒトによって産生される抗体のアミノ酸配列に対応するアミノ酸配列を有するもの、及び／又はヒト抗体を作製するための技術のうちのいずれかを使用して作製されたものである。このヒト抗体の定義では、具体的には、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を除外している。ヒト抗体は、当該技術分野で既知の様々な技術を使用して産生することができ、その中には、ファージディスプレイライブラリ（Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ａｎｄ Ｗｉｎｔｅｒ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９９１，２２７：３８１；Ｍａｒｋｓ，ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９９１，２２２：５８１）及び酵母ディスプレイライブラリ（Ｃｈａｏ，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，２００６，１：７５５－６８）が含まれる。また、ヒトモノクローナル抗体の調製には、Ｃｏｌｅ，ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ ７７（１９８５）；Ｂｏｅｒｎｅｒ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９９１，１４７（１）：８６－９５；及びｖａｎ Ｄｉｊｋ ａｎｄ ｖａｎ ｄｅ Ｗｉｎｋｅｌ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，２００１，５：３６８－７４に記載されている方法も利用可能である。ヒト抗体は、抗原チャレンジに応答してそのような抗体を産生するように修飾されているが、その内因性遺伝子座が無効化されているトランスジェニック動物、例えば、マウスに抗原を投与することによって調製することができる（例えば、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，１９９５，６（５）：５６１－６６、Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ ａｎｄ Ｔａｕｓｓｉｎｇ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，１９９７，８（４）：４５５－５８；並びに、ＸＥＮＯマウス（商標）技術に関する米国特許第６，０７５，１８１号及び同第６，１５０，５８４号を参照されたい）。また、例えば Ｌｉ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，２００６，１０３：３５５７－６２（ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術を介して生成されたヒト抗体に関する）も参照されたい。
ある特定の実施形態では、抗体は、「組換えヒト抗体」の部分を含むことができ、この語句には、組換え手段によって調製、発現、作成、若しくは単離されたヒト抗体、例えば、宿主細胞にトランスフェクトされた組換え発現ベクターを使用して発現された抗体、組換えコンビナトリアルヒト抗体ライブラリから単離された抗体、ヒト免疫グロブリン遺伝子のトランスジェニック及び／又はトランス染色体である動物（例えば、マウス又はウシ）から単離された抗体（例えば、Ｔａｙｌｏｒ，Ｌ．Ｄ．，ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，１９９２ ２０：６２８７－６２９５）、又は、ヒト免疫グロブリン遺伝子配列を他のＤＮＡ配列にスプライシングすることを伴う任意の他の手段によって調製、発現、作成、若しくは単離された抗体が含まれる。そのような組換えヒト抗体は、ヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域及び定常領域を有することができる（Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．，ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．９１－３２４２を参照されたい）。しかしながら、ある特定の実施形態では、そのような組換えヒト抗体は、インビトロ変異誘発（又は、ヒトＩｇ配列のトランスジェニックである動物を使用する場合は、インビボ体細胞変異誘発）を受けており、したがって、組換え抗体のＶＨ及びＶＬ領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖細胞系列のＶＨ配列及ＶＬ配列に由来し、関連しているが、インビボでのヒト抗体生殖細胞系列レパートリ内に天然には存在しない場合がある配列である。
ある特定の実施形態では、抗体は、「モノクローナル抗体」の一部を含むことができ、本明細書で使用されるこの用語は、実質的に均質な抗体の集団から得られた抗体を指し、例えば、集団を含む個々の抗体は、微量で存在し得る天然に存在する起こり得る変異を除いて同一であり、各モノクローナル抗体は、典型的には、抗原上の単一のエピトープを認識する。具体的な実施形態では、本明細書で使用される「モノクローナル抗体」とは、単一のハイブリドーマ又は他の細胞によって産生される抗体である。「モノクローナル」という用語は、抗体を作製するための特定の方法に限定されるものではない。例えば、本開示で有用なモノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９７５，Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５によって最初に記載されたハイブリドーマ法によって調製され得るか、又は細菌若しくは真核動物若しくは植物細胞で組換えＤＮＡ法を使用して作製され得る（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号を参照されたい）。また、「モノクローナル抗体」は、例えば、Ｃｌａｃｋｓｏｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，１９９１，３５２：６２４－２８ ａｎｄ Ｍａｒｋｓ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９９１，２２２：５８１－９７に記載されている技術を使用して、ファージ抗体ライブラリから単離され得る。クローン細胞株及びそれによって発現するモノクローナル抗体を調製するための他の方法は、当該技術分野で周知である。例えば、Ｓｈｏｒｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．ｅｄｓ．，５ｔｈ ｅｄ．２００２）を参照されたい。
典型的な４鎖抗体ユニットは、２本の同一の軽鎖（Ｌ）及び２本の同一の重鎖（Ｈ）で構成されるヘテロ四量体糖タンパク質である。ＩｇＧの場合、４鎖ユニットは、概して、約１５０，０００ダルトンである。各Ｌ鎖は、１つの共有ジスルフィド結合でＨ鎖によって連結され、２つのＨ鎖は、Ｈ鎖のアイソタイプに応じて１つ又は２つ以上のジスルフィド結合によって互いに連結される。また、各Ｈ鎖及びＬ鎖は、規則的間隔の鎖内ジスルフィド架橋を有する。各Ｈ鎖は、Ｎ末端に可変ドメイン（ＶＨ）に続いて、α鎖及びγ鎖の各々に３つの定常ドメイン（ＣＨ）を、μ及びεのアイソタイプには４つのＣＨドメインを有する。各Ｌ鎖は、Ｎ末端に可変ドメイン（ＶＬ）に続いて、もう一方の末端に定常ドメイン（ＣＬ）を有する。ＶＬは、ＶＨとアラインメントし、ＣＬは、重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）とアラインメントしている。特定のアミノ酸残基が、軽鎖及び重鎖の可変ドメイン間の界面を形成すると考えられる。ＶＨ及びＶＬの対合は、単一の抗原結合部位をともに形成する。異なるクラスの抗体の構造及び特性については、例えば、Ｂａｓｉｃ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ７１（Ｓｔｉｔｅｓ，ｅｔ ａｌ．ｅｄｓ．，８ｔｈ ｅｄ．１９９４）；ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ（Ｊａｎｅｗａｙ，ｅｔ ａｌ．ｅｄｓ．，５ｔｈ ｅｄ．２００１）を参照されたい。
「Ｆａｂ」又は「Ｆａｂ領域」という用語は、抗原に結合する抗体領域を指す。従来のＩｇＧは通常、２つのＦａｂ領域を含み、各々がＹ字型ＩｇＧ構造の２つのアームのうちの１つに存在する。各Ｆａｂ領域は、典型的には、重鎖及び軽鎖の各々の１つの可変領域及び１つの定常領域で構成されている。より具体的には、Ｆａｂ領域における重鎖の可変領域及び定常領域は、ＶＨ及びＣＨ１領域であり、Ｆａｂ領域における軽鎖の可変領域及び定常領域は、ＶＬ及びＣＬ領域である。Ｆａｂ領域におけるＶＨ、ＣＨ１、ＶＬ、及びＣＬは、本開示に従って抗原結合能力を付与するために様々な方式で配置することができる。例えば、ＶＨ領域及びＣＨ１領域は、１つのポリペプチド上にあり、ＶＬ領域及びＣＬ領域は、従来のＩｇＧのＦａｂ領域と同様に、別個のポリペプチド上にあり得る。あるいは、ＶＨ領域、ＣＨ１領域、ＶＬ領域、ＣＬ領域の全てが同じポリペプチド上に存在し、以下の節でより詳細に説明するように、異なる順序で配向することも可能である。
「可変領域」、「可変ドメイン」、「Ｖ領域」、又は「Ｖドメイン」という用語は、軽鎖又は重鎖のアミノ末端に概して位置し、重鎖では約１２０～１３０アミノ酸、軽鎖では約１００～１１０アミノ酸の長さを有する抗体の軽鎖又は重鎖の一部を指し、各特定の抗体のその特定の抗原に対する結合及び特異性に使用される。重鎖の可変領域は、「ＶＨ」と称され得る。軽鎖の可変領域は、「ＶＬ」と称され得る。「可変」という用語は、可変領域のある特定のセグメントが、抗体間で配列が大きく異なることを指す。Ｖ領域は、抗原の結合を媒介し、特定の抗原に対する特定の抗体の特異性を決定する。しかしながら、可変領域の１１０アミノ酸のスパン全体では、その可変性は均一ではない。代わりに、Ｖ領域は、各々が約９～１２アミノ酸の長さである「超可変領域」と呼ばれるより大きな可変性（例えば、極端な可変性）のより短い領域によって分離された、約１５～３０アミノ酸のフレームワーク領域（framework region、ＦＲ）と呼ばれるより可変性の低い（例えば、比較的不変の）ストレッチからなる。重鎖及び軽鎖の可変領域は各々４つのＦＲを含み、大部分はβシート構造をとり、３つの超可変領域によって接続され、βシート構造を接続するループを形成し、場合によってはβシート構造の一部を形成する。各鎖内の超可変領域は、ＦＲによってともに近接して保持され、他の鎖の超可変領域とともに、抗体の抗原結合部位の形成に寄与している（例えば、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（５ｔｈ ｅｄ．１９９１）を参照されたい）。定常領域は、抗体を抗原に結合することには直接関与しないが、抗体依存性細胞傷害（antibody dependent cellular cytotoxicity、ＡＤＣＣ）及び補体依存性細胞傷害（complement dependent cytotoxicity、ＣＤＣ）への抗体の関与など、様々なエフェクター機能を示す。可変領域は、異なる抗体間で配列が大きく異なる。具体的な実施形態では、可変領域は、ヒト可変領域である。
「Ｋａｂａｔによる可変領域残基番号付け」又は「Ｋａｂａｔにあるようなアミノ酸位置番号付け」という用語、及びその変形は、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．（上記）の抗体の編集物の重鎖可変領域又は軽鎖可変領域に使用される番号付けシステムを指す。この番号付けシステムを使用すると、実際の直鎖状アミノ酸配列は、可変ドメインのＦＲ若しくはＣＤＲの短縮又はこれらへの挿入に対応する、より少ない又は追加のアミノ酸を含み得る。例えば、重鎖可変ドメインは、残基５２の後に単一のアミノ酸挿入（Ｋａｂａｔによる残基５２ａ）と、残基８２の後に３つの挿入された残基（例えば、Ｋａｂａｔによる残基８２ａ、８２ｂ、及び８２ｃなど）とを含み得る。残基のＫａｂａｔ番号付けは、所与の抗体に対して、その抗体の配列と「標準」Ｋａｂａｔ番号付け配列とを相同領域でアラインメントすることにより、決定することができる。Ｋａｂａｔ番号付けシステムは、可変ドメインの残基（軽鎖のおおよそ１～１０７残基、重鎖のおおよそ１～１１３残基）を参照する際に概して使用される（例えば、上記のＫａｂａｔ ｅｔ ａｌ．）。「ＥＵ番号付けシステム」又は「ＥＵインデックス」は、免疫グロブリン重鎖定常領域内の残基に言及する際に概して使用される（例えば、上記のＫａｂａｔ ｅｔ ａｌ．で報告されているＥＵインデックス）。「ＫａｂａｔにあるようなＥＵインデックス」は、ヒトＩｇＧ１ ＥＵ抗体の残基番号付けを指す。他の番号付けシステムは、例えば、ＡｂＭ、Ｃｈｏｔｈｉａ、Ｃｏｎｔａｃｔ、ＩＭＧＴ、及びＡＨｏｎによって記載されている。
抗体に関して使用される場合の「重鎖」という用語は、約５０～７０ｋＤａのポリペプチド鎖であって、アミノ末端部分が約１２０～１３０個以上のアミノ酸の可変領域を含み、カルボキシ末端部分が定常領域を含むものを指す。定常領域は、重鎖定常領域のアミノ酸配列に基づいて、アルファ（α）、デルタ（δ）、イプシロン（ε）、ガンマ（γ）、及びミュー（μ）と称される５つの明確に異なるタイプ（例えば、アイソタイプ）のうちの１つであり得る。明確に異なる重鎖の大きさは異なり、α、δ、及びγはおおよそ４５０個のアミノ酸を含み、μ及びεはおおよそ５５０個のアミノ酸を含む。軽鎖と組み合わせられると、これらの明確に異なるタイプの重鎖は、それぞれ５つの周知のクラス（アイソタイプなど）の抗体、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭ（ＩｇＧの４つのサブクラス、すなわち、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４も含まれる）を生じさせる。
抗体に関して使用される場合の「軽鎖」という用語は、約２５ｋＤａのポリペプチド鎖であって、アミノ末端部分が約１００～約１１０個以上のアミノ酸の可変領域を含み、カルボキシ末端部分が定常領域を含むものを指す。軽鎖のおおよその長さは、２１１～２１７アミノ酸である。定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ（κ）又はラムダ（λ）と称される２つの異なるタイプがある。
本明細書で使用される場合、「超可変領域」、「hypervariable region、ＨＶＲ」、「相補性決定領域」、及び「ＣＤＲ」という用語は、互換的に使用される。「ＣＤＲ」は、免疫グロブリン（Ｉｇ又は抗体）ＶＨ β－シートフレームワークの非フレームワーク領域内の３つの超可変領域のうちの１つ（Ｈ１、Ｈ２、若しくはＨ３）、又は抗体ＶＬ β－シートフレームワークの非フレームワーク領域内の３つの超可変領域のうちの１つ（Ｌ１、Ｌ２、若しくはＬ３）を指す。したがって、ＣＤＲは、フレームワーク領域配列内に散在する可変領域配列である。
ＣＤＲ領域は、当業者に周知であり、周知の番号付けシステムによって定義されている。例えば、Ｋａｂａｔ相補性決定領域（ＣＤＲ）は、配列の可変性に基づいており、最も一般的に使用されている（例えば、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．、上記を参照されたい）。Ｃｈｏｔｈｉａは、それに代えて、構造ループの位置を指す（例えば、Ｃｈｏｔｈｉａ及びＬｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９８７，１９６：９０１－１７を参照されたい）。Ｋａｂａｔ番号付け規則を使用して番号付けされたときのＣｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ－Ｈ１ループの末端は、ループの長さに応じてＨ３２からＨ３４まで変化する（これは、Ｋａｂａｔ番号付けスキームが、Ｈ３５Ａ及びＨ３５Ｂに挿入を配置するためであり、３５Ａも３５Ｂも存在しない場合、ループは３２で終わり、３５Ａのみが存在する場合、ループは３３で終わり、３５Ａ及び３５Ｂの両方が存在する場合、ループは３４で終わる）。ＡｂＭ超可変領域は、Ｋａｂａｔ ＣＤＲとＣｈｏｔｈｉａ構造ループとの間の妥協案を表し、Ｏｘｆｏｒｄ ＭｏｌｅｃｕｌａｒのＡｂＭ抗体モデリングソフトウェアによって使用されている（例えばＡｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｖｏｌ．２ （Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ ａｎｄ Ｄｕｂｅｌ，ｅｄｓ．，２ｄ ｅｄ．２０１０）を参照されたい）。「ｃｏｎｔａｃｔ」超可変領域は、利用可能な複合結晶構造の分析に基づく。開発され、広く採用されている別の世界共通の番号付けシステムは、ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ（ＩＭＧＴ）Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ（登録商標）である（Ｌａｆｒａｎｃ，ｅｔ ａｌ．，Ｄｅｖ．Ｃｏｍｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２００３，２７（１）：５５－７７）。ＩＭＧＴは、免疫グロブリン（ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ、ＩＧ）、Ｔ細胞受容体（Ｔ ｃｅｌｌ ｒｅｃｅｐｔｏｒ、ＴＣＲ）、並びにヒト及び他の脊椎動物の主要組織適合性複合体（major histocompatibility complex、ＭＨＣ）専門の統合情報システムである。本明細書において、ＣＤＲは、アミノ酸配列と、軽鎖又は重鎖内の位置との両方の観点において言及される。免疫グロブリン可変ドメインの構造内のＣＤＲの「位置」は、種の間で保存され、ループと称される構造に存在するため、可変ドメイン配列を構造的特徴に従ってアラインメントする番号付けシステムを使用することにより、ＣＤＲ及びフレームワーク残基は容易に同定される。この情報は、１つの種の免疫グロブリンからのＣＤＲ残基を、典型的にはヒト抗体からのアクセプタフレームワーク内に移植及び置き換えることに使用され得る。Ｈｏｎｅｇｇｅｒ ａｎｄ Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２００１，３０９：６５７－７０によって、追加の番号付けシステム（ＡＨｏｎ）が開発されている。例えば、Ｋａｂａｔ番号付け及びＩＭＧＴ固有の番号付けシステムを含む番号付けシステム間の対応関係は、当業者に周知である（例えば、Ｋａｂａｔ、上記；Ｃｈｏｔｈｉａ及びＬｅｓｋ、上記；Ｍａｒｔｉｎ、上記；Ｌｅｆｒａｎｃ，ｅｔ ａｌ．、上記、を参照されたい）。これらの超可変領域又はＣＤＲの各々の残基を以下に示す。
Figure 2024512135000002
所与のＣＤＲの境界は、同定に使用されるスキームに応じて異なり得る。したがって、別途指定されない限り、可変領域などの所与の抗体又はその領域の「ＣＤＲ」及び「相補性決定領域」という用語、並びに抗体又はその領域の個々のＣＤＲ（例えば、「ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２」）は、本明細書で上述した既知のスキームのうちのいずれかによって定義される相補性決定領域を包含すると理解されるべきである。場合によっては、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、又はＣｏｎｔａｃｔ法で定義されたＣＤＲなど、特定のＣＤＲ又は複数のＣＤＲの同定のためのスキームが指定されている。他の場合には、ＣＤＲの特定のアミノ酸配列が挙げられる。
超可変領域は、次のような「拡張超可変領域」を含み得る：ＶＬ内の２４～３６又は２４～３４（Ｌ１）、４６～５６又は５０～５６（Ｌ２）、及び８９～９７又は８９～９６（Ｌ３）、並びにＶＨ内の２６～３５又は２６～３５Ａ（Ｈ１）、５０～６５又は４９～６５（Ｈ２）、及び９３～１０２、９４～１０２、又は９５～１０２（Ｈ３）。
「定常領域」又は「定常ドメイン」という用語は、抗原に対する抗体の結合に直接関与しないが、Ｆｃ受容体との相互作用などの様々なエフェクター機能を示す軽鎖及び重鎖のカルボキシ末端部分を指す。この用語は、抗原結合部位を含む可変領域である免疫グロブリンの他の部分と比較してより保存されたアミノ酸配列を有する免疫グロブリン分子の部分を指す。定常領域は、重鎖のＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３領域、並びに軽鎖のＣＬ領域を含み得る。
「フレームワーク」又は「ＦＲ」という用語は、ＣＤＲに隣接する可変領域の残基を指す。ＦＲ残基は、例えば、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、ドメイン抗体、ダイアボディ、直鎖抗体、及び二重特異性抗体中に存在する。ＦＲ残基は、超可変領域残基又はＣＤＲ残基以外の可変ドメイン残基である。典型的には、ＶＨ領域及びＶＬ領域の各々に４つのＦＲ領域がある。ＶＨにおけるＦＲ領域は、ＶＨ ＦＲ１、ＶＨ ＦＲ２、ＶＨ ＦＲ３、及びＶＨ ＦＲ４（又はＦＲ Ｈ１、ＦＲ Ｈ２、ＦＲ Ｈ３及びＦＲ Ｈ４）である。ＶＬにおけるＦＲ領域は、ＶＬ ＦＲ１、ＶＬ ＦＲ２、ＶＬ ＦＲ３及びＶＬ ＦＲ４（又はＦＲ Ｌ１、ＦＲ Ｌ２、ＦＲ Ｌ３及びＦＲ Ｌ４）である。
本明細書において、「Ｆｃ領域」という用語は、例えば、天然配列Ｆｃ領域、組換えＦｃ領域、及びバリアントＦｃ領域を含む、免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するために使用される。免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域の境界は様々であり得るが、ヒトＩｇＧ重鎖のＦｃ領域は、Ｃｙｓ２２６位のアミノ酸残基、又はＰｒｏ２３０位のアミノ酸残基からカルボキシル末端まで伸びると定義されることが多い。Ｆｃ領域のＣ末端リジン（ＥＵの番号付けシステムによる残基４４７）は、例えば、抗体の産生若しくは精製中に、又は抗体の重鎖をコードする核酸を組換え操作することによって除去され得る。したがって、インタクト抗体の組成物は、全てのＫ４４７残基が除去された抗体集団、Ｋ４４７残基が除去されていない抗体集団、及びＫ４４７残基のある抗体とない抗体との混合物を有する抗体集団を含み得る。「機能的Ｆｃ領域」は、天然配列Ｆｃ領域の「エフェクター機能」を有する。例示的な「エフェクター機能」には、Ｃ１ｑ結合、ＣＤＣ、Ｆｃ受容体結合、ＡＤＣＣ、貪食作用、細胞表面の受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）のダウンレギュレーションなどが含まれる。そのようなエフェクター機能は、概して、Ｆｃ領域が結合領域又は結合ドメイン（例えば、抗体可変領域又はドメイン）と組み合わせられることを必要とし、当業者に既知の様々なアッセイを使用して評価することができる。「バリアントＦｃ領域」は、少なくとも１つのアミノ酸修飾（例えば、置換、付加、又は欠失）により、天然配列Ｆｃ領域のアミノ酸配列とは異なるアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、バリアントＦｃ領域は、天然配列Ｆｃ領域又は親ポリペプチドのＦｃ領域と比較して、少なくとも１つのアミノ酸置換を有しており、例えば、天然配列Ｆｃ領域又は親ポリペプチドのＦｃ領域において、約１～約１０個のアミノ酸置換、又は約１～約５個のアミノ酸置換を有する。本明細書のバリアントＦｃ領域は、天然配列Ｆｃ領域及び／又は親ポリペプチドのＦｃ領域と少なくとも約８０％の相同性、又はそれと少なくとも約９０％の相同性、例えば、それと少なくとも約９５％の相同性を有し得る。
抗原又は抗体に関して使用される場合、「バリアント」という用語は、天然又は未修飾の配列と比較して、１つ又は２つ以上（例えば、約１～約２５個、約１～約２０個、約１～約１５個、約１～約１０個、又は約１～約５個）のアミノ酸配列置換、欠失、及び／又は付加を含むペプチド又はポリペプチドを指し得る。
「同一性」という用語は、配列をアラインメント及び比較することによって決定される、２つ以上のポリペプチド分子又は２つ以上の核酸分子の配列間の関係を指す。参照ポリペプチド配列に対する「アミノ酸配列同一性パーセント（％）」は、最大配列同一性パーセントを達成するように、配列同一性の一部としていずれの保存的置換も考慮することなく、配列をアラインメントし、必要に応じてギャップを導入した後の、参照ポリペプチド配列中のアミノ酸残基と同一である候補配列中のアミノ酸残基の百分率として定義される。アミノ酸配列同一性パーセントを決定する目的のためのアラインメントは、当該技術分野における技能の範囲内である様々な方法、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、ＡＬＩＧＮ、又はＭＥＧＡＬＩＧＮ（ＤＮＡＳｔａｒ，Ｉｎｃ．）ソフトウェアなどの公的に入手可能なコンピュータソフトウェアを使用して達成することができる。当業者は、比較される配列の完全長にわたって最大のアラインメントを達成するために必要な任意のアルゴリズムを含む、配列をアラインメントするための適切なパラメータを決定することができる。
アミノ酸残基／位置の「修飾」とは、出発アミノ酸配列と比較した一次アミノ酸配列の変化を指し、変化は、当該アミノ酸残基／位置を伴う配列変化から生じる。例えば、典型的な修飾には、残基の別のアミノ酸による置換（例えば、保存的置換又は非保存的置換）、当該残基／位置に隣接する１つ又は２つ以上（例えば、一般的には５個、４個、又は３個未満）のアミノ酸の挿入、及び／又は当該残基／位置欠失が含まれる。
本明細書で使用される場合、「エピトープ」とは、当該技術分野の用語であり、抗体が特異的に結合することができる抗原の局在領域を指す。エピトープは、線状エピトープ又は立体構造エピトープ、非線状エピトープ、又は不連続エピトープであり得る。ポリペプチド抗原の場合、例えば、エピトープは、ポリペプチドの連続したアミノ酸（「線状」エピトープ）であり得るか、又はエピトープは、ポリペプチドの２つ以上の非連続領域からのアミノ酸（「立体構造」、「非線状」、又は「不連続」エピトープ）を含み得る。概して、線状エピトープは、二次、三次、又は四次構造に依存する場合もあれば、依存しない場合もあることが当業者によって理解されるであろう。例えば、いくつかの実施形態では、抗体は、アミノ酸が天然の三次元タンパク質構造に折り畳まれているかどうかにかかわらず、アミノ酸の群に結合する。他の実施形態では、抗体は、エピトープを認識して結合するために、エピトープを構成するアミノ酸残基が特定の立体構造（例えば、屈曲、ねじれ、回転、又はフォールディング）を示すことを必要とする。
「ポリペプチド」、「ペプチド」、及び「タンパク質」という用語は、本明細書では互換的に使用され、任意の長さのアミノ酸のポリマーを指す。ポリマーは、直鎖又は分岐鎖であってもよく、修飾されたアミノ酸を含んでもよく、非アミノ酸により中断されてもよい。この用語はまた、天然に修飾されているか、又は介入によって修飾されているアミノ酸ポリマー、介入の例としては、例えば、ジスルフィド結合形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化、又は任意の他の操作若しくは修飾がある。また、定義には、例えば、非天然アミノ酸を含むがこれらに限定されない、アミノ酸の１つ又は２つ以上の類似体を含むポリペプチド、並びに当該技術分野で既知の他の修飾も含まれる。本開示のポリペプチドは、抗体又は免疫グロブリンスーパーファミリーの他のメンバーに基づき得るため、ある特定の実施形態では、「ポリペプチド」は、一本鎖として、又は２つ以上の関連鎖として生じ得ることが理解される。
「ベクター」という用語は、核酸配列を宿主細胞に導入するために、例えば、本明細書に記載されている抗体をコードする核酸配列などの核酸配列を運ぶ又は含むために使用される物質を指す。使用に適用可能なベクターには、例えば、発現ベクター、プラスミド、ファージベクター、ウイルスベクター、エピソーム、及び人工染色体が含まれ、これらは、宿主細胞の染色体に安定的に組み込むことができる選択配列又はマーカーを含み得る。加えて、ベクターは、１つ又は２つ以上の選択可能マーカー遺伝子及び適切な発現制御配列を含み得る。含めることができる選択マーカー遺伝子は、例えば、抗生物質又は毒素への耐性を提供し、補助栄養要求性の欠乏を補完し、又は培養液にない重要な栄養素を供給するものである。発現制御配列は、当該技術分野で周知である構成的及び誘導性プロモーター、転写エンハンサー、転写ターミネーターなどを含み得る。２つ以上の核酸分子を共発現させる場合（例えば、抗体の重鎖及び軽鎖の両方、又は抗体ＶＨ及びＶＬ）、両方の核酸分子は、例えば、単一の発現ベクター又は別個の発現ベクターに挿入され得る。単一ベクターでの発現の場合、コード核酸は、１つの共通の発現制御配列に動作可能に連結されるか、又は１つの誘導性プロモーター及び１つの構成的プロモーターなどの異なる発現制御配列に連結され得る。宿主細胞への核酸分子の導入は、当該技術分野で周知である方法を使用して確認することができる。そのような方法としては、例えば、ノーザンブロット又はポリメラーゼ連鎖反応（polymerase chain reaction、ＰＣＲ）によるｍＲＮＡの増幅などの核酸分析、遺伝子産物の発現のための免疫ブロッティング、又は導入した核酸配列若しくはその対応する遺伝子産物の発現を試験するための好適な分析方法が挙げられる。当業者は、核酸分子が所望の産物を産生するのに十分な量で発現されることを理解しており、更に、当該技術分野で周知である方法を使用して十分な発現を得るために発現レベルを最適化することができることを理解している。
本明細書で使用する「宿主」という用語は、哺乳動物（例えば、ヒト）などの動物を指す。
本明細書で使用される「宿主細胞」という用語は、核酸分子をトランスフェクションされ得る特定の対象細胞、及びそのような細胞の子孫又は可能性のある子孫を指す。そのような細胞の子孫は、核酸分子で遺伝子導入された親細胞とは、宿主細胞ゲノムへの核酸分子の後続の生成又は集積において生じ得る、変異又は環境からの影響により、同一ではないことがある。
「単離核酸」とは、核酸、例えば、ＲＮＡ、ＤＮＡ、又は混合核酸であり、他のゲノムＤＮＡ配列、並びに天然配列に天然に会合するリボソーム及びポリメラーゼなどのタンパク質又は複合体から実質的に分離されたものである。「単離」核酸分子とは、核酸分子の天然の供給源に存在する他の核酸分子から分離されたものである。更に、ｃＤＮＡ分子などの「単離」核酸分子は、組換え技術によって製造された場合には、他の細胞材料又は培養液を実質的に含まなくてもよく、化学合成された場合には、化学前駆体又は他の化学物質を実質的に含まなくてもよい。具体的な実施形態では、本明細書に記載の抗体をコードする１つ又は２つ以上の核酸分子が単離又は精製される。この用語は、天然に存在する環境から取り出された核酸配列を包含し、組換え又はクローン化されたＤＮＡ単離物、及び化学的に合成された類似体、又は異種系によって生物学的に合成された類似体を含む。実質的に純粋な分子には、その分子の単離形態が含まれることがある。
本明細書で互換的に使用される「ポリヌクレオチド」、「ヌクレオチド」、又は「核酸」は、任意の長さのヌクレオチドのポリマーを指し、ＤＮＡ及びＲＮＡを含む。ヌクレオチドは、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、修飾ヌクレオチド又は塩基、及び／又はそれらの類似体、又はＤＮＡ又はＲＮＡポリメラーゼによって、又は合成反応によってポリマーに組み込むことができる任意の基質であり得る。ポリヌクレオチドは、メチル化ヌクレオチド及びその類似体などの修飾ヌクレオチドを含み得る。本明細書で使用される「オリゴヌクレオチド」は、長さが約２００ヌクレオチド未満であるが、概して必ずしも必須ではなく、短く、概して一本鎖の合成ポリヌクレオチドを指す。「オリゴヌクレオチド」及び「ポリヌクレオチド」という用語は、相互に排他的なものではない。ポリヌクレオチドに関する上記の説明は、オリゴヌクレオチドにも同様に完全に適用できる。本開示の抗体を産生する細胞には、親ハイブリドーマ細胞、並びに抗体をコードする核酸が導入された細菌及び真核宿主細胞が挙げられ得る。別途指定されない限り、本明細書で開示されている任意の一本鎖ポリヌクレオチド配列の左端は、５’末端である。二本鎖ポリヌクレオチド配列の左方向は、５’方向と称される。新生ＲＮＡ転写物の５’から３’への付加の方向は、転写方向と称される。ＲＮＡ転写物の５’から５’末端にあるＲＮＡ転写物と同じ配列を有するＤＮＡ鎖上の配列領域は、「上流配列」と称され、ＲＮＡ転写物の３’から３’末端にあるＲＮＡ転写物と同じ配列を有するＤＮＡ鎖上の配列領域は、「下流配列」と称される。
本明細書で使用される場合、「多重特異性抗体」という用語は、複数の免疫グロブリン可変ドメイン配列を含む抗体を指し、複数のうちの第１の免疫グロブリン可変ドメイン配列は、第１のエピトープに対する結合特異性を有し、複数のうちの第２の免疫グロブリン可変ドメイン配列は、第２のエピトープに対する結合特異性を有する。ある実施形態では、第１及び第２のエピトープは、重複しないか、又は実質的に重複しない。ある実施形態では、第１及び第２のエピトープは、異なる抗原上、例えば、異なるタンパク質（又は多量体タンパク質の異なるサブユニット）上にある。ある実施形態では、多重特異性抗体は、第３、第４、又は第５の免疫グロブリン可変ドメインを含む。ある実施形態では、多重特異性抗体は、二重特異性抗体分子、三重特異性抗体分子、又は四重特異性抗体分子である。
本明細書で使用される場合、「二重特異性抗体」という用語は、２つ以下のエピトープ又は２つの抗原に結合する多重特異性抗体を指す。二重特異性抗体は、第１のエピトープ（例えば、ＮＫＧ２ｄ又はＮＫｐ４６抗原上のエピトープ）に対する結合特異性を有する第１の免疫グロブリン可変ドメイン配列、及び第２のエピトープ（例えば、腫瘍関連抗原（例えば、ＢＣＭＡ又はＧＰＲＣ５ｄ抗原）に対する結合特異性を有する第２の免疫グロブリン可変ドメイン配列によって特徴付けられる。ある実施形態では、第１及び第２のエピトープは、異なる抗原上、例えば、異なるタンパク質（又は多量体タンパク質の異なるサブユニット）上にある。ある実施形態では、二重特異性抗体は、第１のエピトープに対する結合特異性を有する重鎖可変ドメイン配列及び軽鎖可変ドメイン配列と、第２のエピトープに対する結合特異性を有する重鎖可変ドメイン配列及び軽鎖可変ドメイン配列とを含む。ある実施形態では、二重特異性抗体は、第１のエピトープに対する結合特異性を有する半抗体又はその断片と、第２のエピトープに対する結合特異性を有する半抗体又はその断片とを含む。ある実施形態では、二重特異性抗体は、第１のエピトープに対する結合特異性を有するｓｃＦｖ又はその断片と、第２のエピトープに対する結合特異性を有するｓｃＦｖ又はその断片とを含む。ある実施形態では、第１のエピトープはＮＫＧ２ｄに位置し、第２のエピトープはＢＣＭＡに位置する。ある実施形態では、第１のエピトープはＮＫＧ２ｄに位置し、第２のエピトープはＧＰＲＣ５ｄに位置する。ある実施形態では、第１のエピトープはＮＫｐ４６に位置し、第２のエピトープはＢＣＭＡに位置する。ある実施形態では、第１のエピトープはＮＫｐ４６に位置し、第２のエピトープはＧＰＲＣ５ｄに位置する。
本明細書で使用される場合、「ＮＫＧ２ｄ」という用語は、ＮＫＧ２－Ｄ ＩＩ型内在性膜タンパク質を指す。ＮＫＧ２ｄは、「ＮＫ細胞受容体Ｄ」、「ＮＫＧ２－Ｄ活性化ＮＫ受容体」、「ＣＤ３１４」と呼ぶこともできる。「ＮＫＧ２ｄ」という用語は、特に断りのない限り、細胞（ＮＫ細胞を含む）によって天然に発現されるか、又はそのポリペプチドをコードする遺伝子若しくはｃＤＮＡでトランスフェクトされた細胞上で発現され得る、任意のＮＫＧ２ｄバリアント、アイソフォーム、及び種相同体を含み、特定の実施形態では、「ＮＫＧ２ｄ」は、ヒトＮＫＧ２ｄである。
本明細書で使用される場合、「ＮＫｐ４６」という用語は、ナチュラルキラー細胞ｐ４６関連タンパク質を指す。ＮＫｐ４６は、「天然細胞傷害性誘発受容体１」、「ＮＫ－ｐ４６」、「ＣＤ３３５」と呼ぶこともできる。「ＮＫｐ４６」という用語は、特に断りのない限り、細胞（ＮＫ細胞を含む）によって天然に発現されるか、又はそのポリペプチドをコードする遺伝子若しくはｃＤＮＡでトランスフェクトされた細胞上で発現され得る、任意のＮＫｐ４６バリアント、アイソフォーム、及び種相同体を含み、特定の実施形態では、「ＮＫｐ４６」は、ヒトＮＫｐ４６である。
本明細書で使用される場合、「ＢＣＭＡ」という用語は、Ｂ細胞成熟抗原を指し、ＴＮＦＲＳＦ１７又はＣＤ２６９とも呼ばれ、腫瘍壊死因子受容体（tumor necrosis factor receptor、ＴＮＦＲ）スーパーファミリーのメンバーである。「ＢＣＭＡ」という用語は、特に断りのない限り、細胞（がん細胞を含む）によって天然に発現されるか、又はそのポリペプチドをコードする遺伝子若しくはｃＤＮＡでトランスフェクトされた細胞上で発現され得る、任意のＢＣＭＡバリアント、アイソフォーム、及び種相同体を含み、特定の実施形態では、「ＢＣＭＡ」は、ヒトＢＣＭＡである。
本明細書で使用される場合、「ＧＰＲＣ５ｄ」という用語は、Ｇタンパク質共役受容体ファミリーＣグループ５メンバーＤを指す。「ＧＰＲＣ５ｄ」という用語は、特に断りのない限り、細胞（がん細胞を含む）によって天然に発現されるか、又はそのポリペプチドをコードする遺伝子若しくはｃＤＮＡでトランスフェクトされた細胞上で発現され得る、任意のＧＰＲＣ５ｄバリアント、アイソフォーム、及び種相同体を含み、特定の実施形態では、「ＧＰＲＣ５ｄ」は、ヒトＧＰＲＣ５ｄである。
本明細書で使用される「医薬的に許容される」という用語は、動物における使用について、より具体的にはヒトにおける使用について、連邦政府又は州政府の規制機関によって承認されているか、又は米国薬局方、欧州薬局方、若しくは他の一般的に認められている薬局方に列挙されていることを意味する。
「賦形剤」とは、液体又は固体の充填剤、希釈剤、溶媒、カプセル化材料などの、医薬的に許容される材料、組成物、又はビヒクルを指す。賦形剤としては、例えば、吸収促進剤、抗酸化剤、結合剤、緩衝剤、担体、コーティング剤、着色剤、希釈剤、崩壊剤、乳化剤、拡張剤、充填剤、香味剤、湿潤剤、潤滑剤、香料、防腐剤、推進剤、放出剤、殺菌剤、甘味料、可溶化剤、湿潤剤及びこれらの混合物などのカプセル化材料又は添加剤が挙げられる。また、「賦形剤」という用語は、希釈剤、アジュバント（例えば、フロイントアジュバント（完全又は不完全））又はビヒクルを指すことができる。
いくつかの実施形態では、賦形剤は、医薬的に許容される賦形剤である。医薬的に許容される賦形剤の例としては、リン酸塩、クエン酸塩、及びその他の有機酸などの緩衝剤；アスコルビン酸を含む抗酸化剤；低分子量（例えば、約１０アミノ酸残基未満）のポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、又は免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニン、又はリジンなどのアミノ酸；単糖類、二糖類、及びグルコース、マンノース、又はデキストリンを含むその他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート剤；マンニトール又はソルビトールなどの糖アルコール；ナトリウムなどの塩形成対イオン；並びに／又はＴＷＥＥＮ（商標）、ポリエチレングリコール（polyethylene glycol、ＰＥＧ）、及びＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）などの非イオン性界面活性剤が挙げられる。医薬的に許容される賦形剤の他の例は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ ａｎｄ Ｇｅｎｎａｒｏ，Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（１８ｔｈ ｅｄ．１９９０）に記載されている。
一実施形態では、各成分は、医薬製剤の他の成分と適合性があるという意味で「医薬的に許容される」ものであり、過度の毒性、刺激性、アレルギー反応、免疫原性、又はその他の問題又は合併症がなく、妥当な利点／リスク比に見合って、ヒト及び動物の組織又は器官と接触して使用するために好適である。例えば、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ：Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡ，２００５；Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ，６ｔｈ ｅｄ．；Ｒｏｗｅ ｅｔ ａｌ．，Ｅｄｓ．；Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ ａｎｄ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ：２００９；Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ａｄｄｉｔｉｖｅｓ，３ｒｄ ｅｄ．；Ａｓｈ ａｎｄ Ａｓｈ Ｅｄｓ．；Ｇｏｗｅｒ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ：２００７；Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ，２ｎｄ ｅｄ．；Ｇｉｂｓｏｎ Ｅｄ．；ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ ＬＬＣ：Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，ＦＬ，２００９を参照されたい。いくつかの実施形態では、医薬的に許容される賦形剤は、採用される用量及び濃度で、それに曝露される細胞又は哺乳動物に対して非毒性である。いくつかの実施形態では、医薬的に許容される賦形剤は、ｐＨ緩衝水溶液である。
いくつかの実施形態では、賦形剤は、水、及び石油、動物、植物、又は合成物由来のものを含む油、例えば、落花生油、大豆油、鉱油、ゴマ油などの無菌液体であってもよい。水は、組成物（例えば、医薬組成物）が静脈内投与される場合の例示的な賦形剤である。生理食塩水並びに水性デキストロース及びグリセロール溶液も、特に注射溶液用の液体賦形剤として採用され得る。賦形剤としては、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、コメ、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセリン、タルク、塩化ナトリウム、乾燥スキムミルク、グリセリン、プロピレン、グリコール、水、エタノールなども挙げることができる。必要に応じて、組成物は、少量の湿潤剤若しくは乳化剤、又はｐＨ緩衝剤を更に含み得る。組成物は、液剤、懸濁剤、乳剤、錠剤、丸剤、カプセル剤、散剤、徐放性製剤などの形態を取り得る。製剤を含む経口組成物は、医薬品グレードのマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウムなどの標準的な賦形剤を含み得る。
医薬化合物を含む組成物は、例えば、単離又は精製された形の抗体を、好適な量の賦形剤とともに含み得る。
本明細書で使用される「有効量」又は「治療有効量」という用語は、所望の結果をもたらすのに十分である、本明細書で提供される抗体又は医薬組成物の量を指す。
「対象」及び「患者」という用語は、本明細書では互換的に使用することができる。本明細書で使用される場合、ある特定の実施形態では、対象は、非霊長類（例えば、ウシ、ブタ、ウマ、ネコ、イヌ、ラットなど）又は霊長類（例えば、サル及びヒト）などの哺乳動物である。具体的な実施形態では、対象は、ヒトである。一実施形態では、対象は、病態又は障害と診断された哺乳動物、例えば、ヒトである。別の実施形態では、対象は、病態又は障害を発症するリスクのある哺乳動物、例えば、ヒトである。
「投与する」又は「投与」とは、本明細書に記載されているか、又は当該技術分野で既知の、粘膜、皮内、静脈内、筋肉内、皮下送達、及び／又は他の任意の物理的送達方法などによって、体外に存在する物質を患者に注射又は他の方法で物理的に送達する行為を指す。
本明細書で使用される場合、「治療／処置する」、「治療／処置」、及び「治療／処置すること」という用語は、１つ又は２つ以上の治療法を投与することによって生じる、疾患又は病態の進行、重症度、及び／又は持続期間の減少又は寛解を指す。治療は、患者がまだ基礎疾患に罹患している場合があるにもかかわらず、患者に改善が観察されるように、基礎疾患と関連する１つ又は２つ以上の症状の減少、軽減及び／又は緩和があったかどうかを評価することによって決定され得る。「治療／処置すること」という用語は、疾患の管理及び寛解の両方を含む。「管理する」、「管理すること」、及び「管理」という用語は、対象が治療から得られる有益な効果を指し、必ずしも疾患の治癒をもたらすとは限らない。
「予防する」、「予防すること」、及び「予防」という用語は、疾患、障害、病態、又は関連する症状の発症（又は再発）の可能性を低減することを指す。
「約」及び「おおよそ」という用語は、所与の値又は範囲の２０％以内、１５％以内、１０％以内、９％以内、８％以内、７％以内、６％以内、５％以内、４％以内、３％以内、２％以内、１％以内、又はそれ未満を指す。
本開示及び特許請求の範囲で使用されるように、単数形「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は、文脈により別途明確に示されない限り、複数形を含む。
実施形態が「含む」という用語を伴って本明細書に記載される場合は常に、そうでなければ「からなる」及び／又は「から本質的になる」に関して記載される他の類似の実施形態もまた提供されることが理解される。実施形態が「から本質的になる」という語句を伴って本明細書に記載される場合は常に、そうでなければ「からなる」に関して記載される類似の実施形態もまた提供されることも理解される。
「ＡとＢとの間」又は「Ａ～Ｂの間」などの語句において使用される「間」という用語は、Ａ及びＢの両方を含む範囲を指す。
本明細書の「Ａ及び／又はＢ」などの語句において使用される「及び／又は」という用語は、Ａ及びＢの両方、Ａ又はＢ；Ａ（単独）；及びＢ（単独）を含むことを意図している。同様に、「Ａ、Ｂ、及び／又はＣ」などの語句において使用される「及び／又は」という用語は、以下の各実施形態：Ａ、Ｂ、及びＣ；Ａ、Ｂ、又はＣ；Ａ又はＣ；Ａ又はＢ；Ｂ又はＣ；Ａ及びＣ；Ａ及びＢ；Ｂ及びＣ；Ａ（単独）；Ｂ（単独）；及びＣ（単独）を含むことを意図している。
結合分子
ＮＫ細胞結合分子
一態様では、ＮＫ細胞の細胞表面抗原と結合する抗体又はその断片などの結合分子が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、抗原は、ＮＫＧ２ｄである。いくつかの実施形態では、抗原は、ＮＫｐ４６である。
一態様では、ＮＫＧ２ｄと結合する抗体が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、抗体は、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含む。いくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄ抗体は、単一ドメイン抗体又はナノボディではない。いくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄ抗体は、ヒト化抗体である。
いくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄと特異的に結合し、ＮＫ細胞活性を調節することができる抗体が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるＮＫＧ２ｄ抗体は、ＮＫ細胞の会合を調節することができる。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるＮＫＧ２ｄ抗体は、ＮＫ細胞を活性化することができる。特定の実施形態では、ＮＫ細胞は、ヒトＮＫ細胞である。
ある特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体のうちのいずれか１つのＶＨ領域、ＶＬ領域、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及び／又はＶＬ ＣＤＲ３を含む抗ＮＫＧ２ｄ抗体が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体のうちのいずれか１つのＶＨ領域を含む抗ＮＫＧ２ｄ抗体が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体のうちのいずれか１つのＶＬ領域を含む抗ＮＫＧ２ｄ抗体が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体のうちのいずれか１つのＶＨ領域と、本明細書に記載される抗体のうちのうちのいずれか１つのＶＬ領域とを含む、抗ＮＫＧ２ｄ抗体が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体のうちのいずれか１つのＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含む抗ＮＫＧ２ｄ抗体が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体のうちのいずれか１つのＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含む抗ＮＫＧ２ｄ抗体が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体のうちのいずれか１つのＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３と、本明細書に記載される抗体のうちのいずれか１つのＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３とを含む、抗ＮＫＧ２ｄ抗体が本明細書で提供される。本明細書で提供されるＮＫＧ２ｄ抗体のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、代表的なＶＨ及びＶＬアミノ酸配列は、配列表並びに表３、４、７、及び８に提供される。
いくつかの実施形態では、抗体は、ヒト化抗体である。ある特定の実施形態では、抗体は、ＩｇＧ抗体である。他の実施形態では、抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４アイソタイプである。いくつかの実施形態では、抗体は、二重特異性抗体である。ある特定の実施形態では、抗体は、多価である。他の実施形態では、抗体は、少なくとも３つの抗原に結合することができる。いくつかの実施形態では、抗体は、少なくとも５つの抗原に結合することができる。
ある特定の実施形態では、インタクト抗体である抗ＮＫＧ２ｄ抗体が提供される。他の実施形態では、抗ＮＫＧ２ｄ抗体の抗原結合断片である抗ＮＫＧ２ｄ抗体が提供される。いくつかの実施形態では、抗ＮＫＧ２ｄ抗体の抗原結合断片は、機能的断片である。いくつかの実施形態では、抗原結合断片は、ダイアボディである。いくつかの実施形態では、抗原結合断片は、Ｆａｂである。いくつかの実施形態では、抗原結合断片は、Ｆａｂ’である。いくつかの実施形態では、抗原結合断片は、Ｆ（ａｂ’）２である。いくつかの実施形態では、抗原結合断片は、Ｆｖ断片である。いくつかの実施形態では、抗原結合断片は、ジスルフィド安定化Ｆｖ断片（ｄｓＦｖ）である。いくつかの実施形態では、抗原結合断片は、（ｄｓＦｖ）２である。いくつかの実施形態では、抗原結合断片は、二重特異性ｄｓＦｖ（ｄｓＦｖ－ｄｓＦｖ’）である。いくつかの実施形態では、抗原結合断片は、ジスルフィド安定化ダイアボディ（ｄｓダイアボディ）である。いくつかの実施形態では、抗原結合断片は、単鎖抗体分子（ｓｃＦｖ）である。いくつかの実施形態では、抗原結合断片は、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）である。いくつかの実施形態では、抗原結合断片は、ｓｃＦｖ二量体（二価ダイアボディ）である。いくつかの実施形態では、抗原結合断片は、１つ又は２つ以上のＣＤＲを含む抗体の一部分から形成される多重特異性抗体である。いくつかの実施形態では、抗原結合断片は、ドメイン抗体である。いくつかの実施形態では、抗原結合断片は、二価ドメイン抗体である。いくつかの実施形態では、抗原結合断片は、抗原と結合するが、完全な抗体構造を含まない抗体断片である。
特定の実施形態では、ＮＫＧ２ｄ抗体は、ＶＨ領域とＶＬ領域とを含む。いくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄ抗体は、単鎖抗体である。いくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄ抗体は、単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態では、抗原結合断片は、ラクダ化単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄ抗体は、ナノボディである。ある特定の実施形態では、ＮＫＧ２ｄ抗体は、ＶＨＨ抗体である。ある特定の実施形態では、ＮＫＧ２ｄ抗体は、ラマ抗体である。いくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄ抗体は、単鎖抗体ではない。いくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄ抗体は、単一ドメイン抗体ではない。いくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄ抗体は、ナノボディではない。ある特定の実施形態では、ＮＫＧ２ｄ抗体は、ＶＨＨ抗体ではない。ある特定の実施形態では、ＮＫＧ２ｄ抗体は、ラマ抗体ではない。いくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄ抗体は、多重特異性抗体である。他の実施形態では、ＮＫＧ２ｄは、二重特異性抗体である。ある特定の実施形態では、多重特異性抗体は、本明細書で提供されるＮＫＧ２ｄ抗体の抗原結合断片を含む。他の実施形態では、二重特異性抗体は、本明細書で提供されるＮＫＧ２ｄ抗体の抗原結合断片を含む。いくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄ抗体は、アゴニスト抗体である。ある特定の実施形態では、ＮＫＧ２ｄ抗体は、ＮＫ細胞を活性化する。いくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄ抗体は、ＮＫ細胞の活性を調節する。いくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄ抗体は、ＮＫ細胞を活性化することも、活性を不活化することもない。特定の実施形態では、ＮＫ細胞は、ヒトＮＫ細胞である。
いくつかの実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３配列は、Ｋａｂａｔ番号付けシステムに従う。いくつかの実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３配列は、Ｃｈｏｔｈｉａ番号付けシステムに従う。いくつかの実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３配列は、例示的な番号付けシステムに従う。いくつかの実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３配列は、Ｃｏｎｔａｃｔ番号付けシステムに従う。いくつかの実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３配列は、ＩＭＧＴ番号付けシステムに従う。いくつかの実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３配列は、ＡｂＭ番号付けシステムに従う。ある特定の抗体実施形態の６つのＣＤＲ（ＶＨ ＣＤＲ１～３及びＶＬ ＣＤＲ１～３）の例示的なセットが本明細書で提供される。他のＣＤＲセットも企図され、本明細書で提供される抗体実施形態の範囲内である。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、ＮＫＧ２ｄと結合する。いくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄと結合する抗体は、配列番号２の、それぞれ、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有する、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含む、ＶＨを含む。いくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄと結合する抗体は、配列番号３の、それぞれ、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有する、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含む、ＶＬを含む。いくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄと結合する抗体は、（ｉ）配列番号２の、それぞれ、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有する、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨと、（ｉｉ）配列番号３の、それぞれ、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有する、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬと、を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、又はＣＤＲ３は、Ｋａｂａｔ番号付けスキーム、ＩＭＧＴ番号付けスキーム、ＡｂＭ番号付けスキーム、Ｃｈｏｔｈｉａ番号付けスキーム、Ｃｏｎｔａｃｔ番号付けスキーム、又はそれらの組み合わせに従って決定される。いくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄと結合する抗体は、配列番号２のアミノ酸配列を有するＶＨを含む。いくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄと結合する抗体は、配列番号３のアミノ酸配列を有するＶＬを含む。いくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄと結合する抗体は、配列番号２のアミノ酸配列を有するＶＨと、配列番号３のアミノ酸配列を有するＶＬと、を含む。
いくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄと結合する抗体は、（ｉ）それぞれ、配列番号４、５、及び６のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨと、（ｉｉ）それぞれ、配列番号７、８、及び９のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬと、を含む。いくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄと結合する抗体は、（ｉ）それぞれ、配列番号１０、１１、及び１２のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨと、（ｉｉ）それぞれ、配列番号１３、１４、及び１５のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬと、を含む。いくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄと結合する抗体は、（ｉ）それぞれ、配列番号１６、１７、及び１８のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨと、（ｉｉ）それぞれ、配列番号１９、２０、及び２１のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬと、を含む。いくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄと結合する抗体は、（ｉ）それぞれ、配列番号２２、２３、及び２４のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨと、（ｉｉ）それぞれ、配列番号２５、２６、及び２７のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬと、を含む。いくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄと結合する抗体は、（ｉ）それぞれ、配列番号２８、２９、及び３０のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨと、（ｉｉ）それぞれ、配列番号３１、３２、及び３３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬと、を含む。
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号２及び／又は配列番号３の１つ又は２つ以上のフレームワーク領域を更に含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体はヒト化抗体である。本明細書に記載のフレームワーク領域は、ＣＤＲ番号付けシステムの境界に基づいて決定される。言い換えれば、ＣＤＲが、例えば、Ｋａｂａｔ、ＩＭＧＴ、又はＣｈｏｔｈｉａによって決定されている場合、フレームワーク領域はＮ末端からＣ末端まで、すなわち、ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４のフォーマット上の可変領域のＣＤＲを囲むアミノ酸残基である。例えば、ＦＲ１は、例えば、Ｋａｂａｔ番号付けシステム、ＩＭＧＴ番号付けシステム、又はＣｈｏｔｈｉａ番号付けシステムによって定義されるＣＤＲ１アミノ酸残基のＮ末端のアミノ酸残基として定義され、ＦＲ２は、例えば、Ｋａｂａｔ番号付けシステム、ＩＭＧＴ番号付けシステム、又はＣｈｏｔｈｉａ番号付けシステムによって定義されるＣＤＲ１アミノ酸残基とＣＤＲ２アミノ酸残基との間のアミノ酸残基として定義され、ＦＲ３は、例えば、Ｋａｂａｔ番号付けシステム、ＩＭＧＴ番号付けシステム、又はＣｈｏｔｈｉａ番号付けシステムによって定義されるＣＤＲ２アミノ酸残基とＣＤＲ３アミノ酸残基との間のアミノ酸残基として定義され、ＦＲ４は、例えば、Ｋａｂａｔ番号付けシステム、ＩＭＧＴ番号付けシステム、又はＣｈｏｔｈｉａ番号付けシステムで定義されるＣＤＲ３アミノ酸残基のＣ末端のアミノ酸残基と定義される。
いくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄと結合する抗体は、配列番号３４の、それぞれ、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有する、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含む、ＶＨを含む。いくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄと結合する抗体は、配列番号３５の、それぞれ、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有する、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含む、ＶＬを含む。いくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄと結合する抗体は、（ｉ）配列番号３４の、それぞれ、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有する、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨと、（ｉｉ）配列番号３５の、それぞれ、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有する、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬと、を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、又はＣＤＲ３は、Ｋａｂａｔ番号付けスキーム、ＩＭＧＴ番号付けスキーム、ＡｂＭ番号付けスキーム、Ｃｈｏｔｈｉａ番号付けスキーム、Ｃｏｎｔａｃｔ番号付けスキーム、又はそれらの組み合わせに従って決定される。いくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄと結合する抗体は、配列番号３４のアミノ酸配列を有するＶＨを含む。いくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄと結合する抗体は、配列番号３５のアミノ酸配列を有するＶＬを含む。いくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄと結合する抗体は、配列番号３４のアミノ酸配列を有するＶＨと、配列番号３５のアミノ酸配列を有するＶＬと、を含む。
いくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄと結合する抗体は、（ｉ）それぞれ、配列番号３６、３７、及び３８のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨと、（ｉｉ）それぞれ、配列番号３９、４０、及び４１のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬと、を含む。いくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄと結合する抗体は、（ｉ）それぞれ、配列番号４２、４３、及び４４のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨと、（ｉｉ）それぞれ、配列番号４５、４６、及び４７のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬと、を含む。いくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄと結合する抗体は、（ｉ）それぞれ、配列番号４８、４９、及び５０のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨと、（ｉｉ）それぞれ、配列番号５１、５２、及び５３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬと、を含む。いくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄと結合する抗体は、（ｉ）それぞれ、配列番号５４、５５、及び５６のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨと、（ｉｉ）それぞれ、配列番号５７、５８、及び５９のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬと、を含む。いくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄと結合する抗体は、（ｉ）それぞれ、配列番号６０、６１、及び６２のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨと、（ｉｉ）それぞれ、配列番号６３、６４、及び６５のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬと、を含む。
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号３４及び／又は配列番号３５の１つ又は２つ以上のフレームワーク領域を更に含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体はヒト化抗体である。本明細書に記載のフレームワーク領域は、ＣＤＲ番号付けシステムの境界に基づいて決定される。言い換えれば、ＣＤＲが、例えば、Ｋａｂａｔ、ＩＭＧＴ、又はＣｈｏｔｈｉａによって決定されている場合、フレームワーク領域はＮ末端からＣ末端まで、すなわち、ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４のフォーマット上の可変領域のＣＤＲを囲むアミノ酸残基である。例えば、ＦＲ１は、例えば、Ｋａｂａｔ番号付けシステム、ＩＭＧＴ番号付けシステム、又はＣｈｏｔｈｉａ番号付けシステムによって定義されるＣＤＲ１アミノ酸残基のＮ末端のアミノ酸残基として定義され、ＦＲ２は、例えば、Ｋａｂａｔ番号付けシステム、ＩＭＧＴ番号付けシステム、又はＣｈｏｔｈｉａ番号付けシステムによって定義されるＣＤＲ１アミノ酸残基とＣＤＲ２アミノ酸残基との間のアミノ酸残基として定義され、ＦＲ３は、例えば、Ｋａｂａｔ番号付けシステム、ＩＭＧＴ番号付けシステム、又はＣｈｏｔｈｉａ番号付けシステムによって定義されるＣＤＲ２アミノ酸残基とＣＤＲ３アミノ酸残基との間のアミノ酸残基として定義され、ＦＲ４は、例えば、Ｋａｂａｔ番号付けシステム、ＩＭＧＴ番号付けシステム、又はＣｈｏｔｈｉａ番号付けシステムで定義されるＣＤＲ３アミノ酸残基のＣ末端のアミノ酸残基と定義される。
ある特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体又はその抗原結合性断片は、上記の抗体のうちのいずれか１つと比較して一定パーセントの同一性を有するアミノ酸配列を含む。
２つの配列（例えば、アミノ酸配列又は核酸配列）間の同一性パーセントの決定は、数学的アルゴリズムを使用して達成することができる。２つの配列の比較に利用される数学的アルゴリズムの非限定的な例は、Ｋａｒｌｉｎ ａｎｄ Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８７：２２６４ ２２６８（１９９０），ｍｏｄｉｆｉｅｄ ａｓ ｉｎ Ｋａｒｌｉｎ ａｎｄ Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９０：５８７３ ５８７７（１９９３）のアルゴリズムである。そのようなアルゴリズムは、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３（１９９０）のＮＢＬＡＳＴ及びＸＢＬＡＳＴプログラムに組み込まれる。ＢＬＡＳＴヌクレオチド検索は、ＮＢＬＡＳＴヌクレオチドプログラムのパラメータを、例えば、スコア＝１００、ワード長＝１２に設定して実行し、本明細書に記載された核酸分子に相同なヌクレオチド配列を取得することができる。ＢＬＡＳＴタンパク質検索は、ＸＢＬＡＳＴプログラムのパラメータを、例えば、スコア５０、ワード長＝３に設定して実行し、本明細書に記載されたタンパク質分子に相同なアミノ酸配列を取得することができる。比較目的でギャップありアラインメントを取得するために、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５：３３８９ ３４０２（１９９７）に記載されるようにＧａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴを用いることができる。代替的に、ＰＳＩ ＢＬＡＳＴを使って、分子間の離れた関係を検出する反復検索を行うこともできる（同上）。ＢＬＡＳＴ、Ｇａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴ、ＰＳＩ Ｂｌａｓｔプログラムを用いる際には、それぞれのプログラム（例えば、ＸＢＬＡＳＴ及びＮＢＬＡＳＴ）のデフォルトのパラメータを使用することができる（例えば、ワールドワイドウェブのｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖでＮａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ）を参照）。配列の比較に用いられる数学的アルゴリズムの別の非限定的な例は、Ｍｙｅｒｓ ａｎｄ Ｍｉｌｌｅｒ，ＣＡＢＩＯＳ ４：１１－１７（１９９８）のアルゴリズムである。そのようなアルゴリズムは、ＧＣＧ配列アラインメントソフトウェアパッケージの一部であるＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれている。アミノ酸配列を比較するためにＡＬＩＧＮプログラムを利用する場合、ＰＡＭ１２０重量残基テーブル、ギャップ長ペナルティ１２、ギャップペナルティ４を使用することができる。２つの配列間の同一性パーセントは、ギャップを許容するかどうかにかかわらず、上述のものと同様の技術を使用して決定することができる。同一性パーセントを計算する際には、典型的には、完全に一致したものだけがカウントされる。
いくつかの実施形態では、配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも約７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％のうちのいずれか１つの配列同一性を有するＶＨを含む、抗ＮＫＧ２ｄ抗体が提供される。いくつかの実施形態では、配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも約７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％のうちのいずれか１つの配列同一性を有するＶＬを含む、抗ＮＫＧ２ｄ抗体が提供される。いくつかの実施形態では、配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも約７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％のうちのいずれか１つの配列同一性を有するＶＨと、配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも約７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％のうちのいずれか１つの配列同一性を有するＶＬと、を含む、抗ＮＫＧ２ｄ抗体が提供される。
いくつかの実施形態では、配列番号３４のアミノ酸配列に対して少なくとも約７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％のうちのいずれか１つの配列同一性を有するＶＨを含む、抗ＮＫＧ２ｄ抗体が提供される。いくつかの実施形態では、配列番号３５のアミノ酸配列に対して少なくとも約７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％のうちのいずれか１つの配列同一性を有するＶＬを含む、抗ＮＫＧ２ｄ抗体が提供される。いくつかの実施形態では、配列番号３４のアミノ酸配列に対して少なくとも約７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％のうちのいずれか１つの配列同一性を有するＶＨと、配列番号３５のアミノ酸配列に対して少なくとも約７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％のうちのいずれか１つの配列同一性を有するＶＬと、を含む、抗ＮＫＧ２ｄ抗体が提供される。
いくつかの実施形態では、少なくとも約７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性のうちのいずれか１つを有するＶＨ配列又はＶＬ配列は、参照配列と比較して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、又は欠失を含むが、その配列を含む抗体はＮＫＧ２ｄと結合する能力を保持する。いくつかの実施形態では、合計１～１０個のアミノ酸が置換、挿入、及び／又は欠失されている。いくつかの実施形態では、置換、挿入、又は欠失は、ＣＤＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ内）で起こる。
別の態様では、ＮＫＧ２ｄとの結合について本明細書に記載されるＮＫＧ２ｄ抗体のうちのいずれかと競合する抗体が本明細書で提供される。別の態様では、本明細書に記載されるＮＫＧ２ｄ抗体のうちのいずれかと同じエピトープと結合する抗体が本明細書で提供される。別の態様では、本明細書に記載されるＮＫＧ２ｄ抗体によって結合されたＮＫＧ２ｄ上のエピトープと重複するＮＫＧ２ｄ上のエピトープと結合するＮＫＧ２ｄ抗体が提供される。
一態様では、ＮＫＧ２ｄとの結合についてＮＫＧ２ｄ参照抗体と競合する抗体が提供される。別の態様では、ＮＫＧ２ｄ参照抗体と同じＮＫＧ２ｄエピトープと結合するＮＫＧ２ｄ抗体が提供される。別の態様では、ＮＫＧ２ｄ参照抗体によって結合されたＮＫＧ２ｄ上のエピトープと重複するＮＫＧ２ｄ上のエピトープと結合するＮＫＧ２ｄ抗体が提供される。
一実施形態では、ＮＫＧ２ｄ参照抗体は、（ｉ）配列番号２のアミノ酸配列を有するＶＨの、それぞれ、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有する、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨと、（ｉｉ）配列番号３のアミノ酸配列を有するＶＬの、それぞれ、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有する、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬとを含む。一実施形態では、ＮＫＧ２ｄ参照抗体は、（ｉ）配列番号３４のアミノ酸配列を有するＶＨの、それぞれ、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有する、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨと、（ｉｉ）配列番号３５のアミノ酸配列を有するＶＬの、それぞれ、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有する、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬとを含む。
一態様では、ＮＫｐ４６と結合する抗体が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、抗体は、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含む。いくつかの実施形態では、ＮＫｐ４６抗体は、単一ドメイン抗体又はナノボディではない。いくつかの実施形態では、ＮＫｐ４６抗体は、ヒト化抗体である。
いくつかの実施形態では、ＮＫｐ４６と特異的に結合し、ＮＫ細胞活性を調節することができる抗体が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるＮＫｐ４６抗体は、ＮＫ細胞の会合を調節することができる。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるＮＫｐ４６抗体は、ＮＫ細胞を活性化することができる。特定の実施形態では、ＮＫ細胞は、ヒトＮＫ細胞である。
ある特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体のうちのいずれか１つのＶＨ領域、ＶＬ領域、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及び／又はＶＬ ＣＤＲ３を含む抗ＮＫｐ４６抗体が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体のうちのいずれか１つのＶＨ領域を含む抗ＮＫｐ４６抗体が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体のうちのいずれか１つのＶＬ領域を含む抗ＮＫｐ４６抗体が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体のうちのいずれか１つのＶＨ領域と、本明細書に記載される抗体のうちのいずれか１つのＶＬ領域とを含む、抗ＮＫｐ４６抗体が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体のうちのいずれか１つのＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含む抗ＮＫｐ４６抗体が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体のうちのいずれか１つのＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含む抗ＮＫｐ４６抗体が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体のうちのいずれか１つのＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３と、本明細書に記載される抗体のうちのいずれか１つのＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３とを含む、抗ＮＫｐ４６抗体が本明細書で提供される。本明細書で提供されるＮＫｐ４６抗体のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、代表的なＶＨ及びＶＬアミノ酸配列は、配列表並びに表１４～１５に提供される。
いくつかの実施形態では、抗体は、ヒト化抗体である。ある特定の実施形態では、抗体は、ＩｇＧ抗体である。他の実施形態では、抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４アイソタイプである。いくつかの実施形態では、抗体は、二重特異性抗体である。ある特定の実施形態では、抗体は、多価である。他の実施形態では、抗体は、少なくとも３つの抗原に結合することができる。いくつかの実施形態では、抗体は、少なくとも５つの抗原に結合することができる。
ある特定の実施形態では、インタクト抗体であるＮＫｐ４６抗体が提供される。他の実施形態では、ＮＫｐ４６抗体の抗原結合断片であるＮＫｐ４６抗体が提供される。いくつかの実施形態では、ＮＫｐ４６抗体の抗原結合断片は、機能的断片である。いくつかの実施形態では、抗原結合断片は、ダイアボディである。いくつかの実施形態では、抗原結合断片は、Ｆａｂである。いくつかの実施形態では、抗原結合断片は、Ｆａｂ’である。いくつかの実施形態では、抗原結合断片は、Ｆ（ａｂ’）２である。いくつかの実施形態では、抗原結合断片は、Ｆｖ断片である。いくつかの実施形態では、抗原結合断片は、ジスルフィド安定化Ｆｖ断片（ｄｓＦｖ）である。いくつかの実施形態では、抗原結合断片は、（ｄｓＦｖ）２である。いくつかの実施形態では、抗原結合断片は、二重特異性ｄｓＦｖ（ｄｓＦｖ－ｄｓＦｖ’）である。いくつかの実施形態では、抗原結合断片は、ジスルフィド安定化ダイアボディ（ｄｓダイアボディ）である。いくつかの実施形態では、抗原結合断片は、単鎖抗体分子（ｓｃＦｖ）である。いくつかの実施形態では、抗原結合断片は、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）である。いくつかの実施形態では、抗原結合断片は、ｓｃＦｖ二量体（二価ダイアボディ）である。いくつかの実施形態では、抗原結合断片は、１つ又は２つ以上のＣＤＲを含む抗体の一部分から形成される多重特異性抗体である。いくつかの実施形態では、抗原結合断片は、ドメイン抗体である。いくつかの実施形態では、抗原結合断片は、二価ドメイン抗体である。いくつかの実施形態では、抗原結合断片は、抗原と結合するが、完全な抗体構造を含まない抗体断片である。
特定の実施形態では、ＮＫｐ４６抗体は、ＶＨ領域とＶＬ領域とを含む。いくつかの実施形態では、ＮＫｐ４６抗体は、単鎖抗体である。いくつかの実施形態では、ＮＫｐ４６抗体は、単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態では、抗原結合断片は、ラクダ化単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態では、ＮＫｐ４６抗体は、ナノボディである。ある特定の実施形態では、ＮＫｐ４６抗体は、ＶＨＨ抗体である。ある特定の実施形態では、ＮＫｐ４６抗体は、ラマ抗体である。いくつかの実施形態では、ＮＫｐ４６抗体は、単鎖抗体ではない。いくつかの実施形態では、ＮＫｐ４６抗体は、単一ドメイン抗体ではない。いくつかの実施形態では、ＮＫｐ４６抗体は、ナノボディではない。ある特定の実施形態では、ＮＫｐ４６抗体は、ＶＨＨ抗体ではない。ある特定の実施形態では、ＮＫｐ４６抗体は、ラマ抗体ではない。いくつかの実施形態では、ＮＫｐ４６抗体は、多重特異性抗体である。他の実施形態では、ＮＫｐ４６は、二重特異性抗体である。ある特定の実施形態では、多重特異性抗体は、本明細書で提供されるＮＫｐ４６抗体の抗原結合断片を含む。他の実施形態では、二重特異性抗体は、本明細書で提供されるＮＫｐ４６抗体の抗原結合断片を含む。いくつかの実施形態では、ＮＫｐ４６抗体は、アゴニスト抗体である。ある特定の実施形態では、ＮＫｐ４６抗体は、ＮＫ細胞を活性化する。いくつかの実施形態では、ＮＫｐ４６抗体は、ＮＫ細胞の活性を調節する。いくつかの実施形態では、ＮＫｐ４６抗体は、ＮＫ細胞を活性化することも、活性を不活化することもない。特定の実施形態では、ＮＫ細胞は、ヒトＮＫ細胞である。
いくつかの実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３配列は、Ｋａｂａｔ番号付けシステムに従う。いくつかの実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３配列は、Ｃｈｏｔｈｉａ番号付けシステムに従う。いくつかの実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３配列は、例示的な番号付けシステムに従う。いくつかの実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３配列は、Ｃｏｎｔａｃｔ番号付けシステムに従う。いくつかの実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３配列は、ＩＭＧＴ番号付けシステムに従う。いくつかの実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３配列は、ＡｂＭ番号付けシステムに従う。ある特定の抗体実施形態の６つのＣＤＲ（ＶＨ ＣＤＲ１～３及びＶＬ ＣＤＲ１～３）の例示的なセットが本明細書で提供される。他のＣＤＲセットも企図され、本明細書で提供される抗体実施形態の範囲内である。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、ＮＫｐ４６と結合する。いくつかの実施形態では、ＮＫｐ４６と結合する抗体は、配列番号６７の、それぞれ、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含む、ＶＨを含む。いくつかの実施形態では、ＮＫｐ４６と結合する抗体は、配列番号６８の、それぞれ、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有する、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含む、ＶＬを含む。いくつかの実施形態では、ＮＫｐ４６と結合する抗体は、（ｉ）配列番号６７の、それぞれ、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有する、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨと、（ｉｉ）配列番号６８の、それぞれ、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有する、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬと、を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、又はＣＤＲ３は、Ｋａｂａｔ番号付けスキーム、ＩＭＧＴ番号付けスキーム、ＡｂＭ番号付けスキーム、Ｃｈｏｔｈｉａ番号付けスキーム、Ｃｏｎｔａｃｔ番号付けスキーム、又はそれらの組み合わせに従って決定される。いくつかの実施形態では、ＮＫｐ４６と結合する抗体は、配列番号６７のアミノ酸配列を有するＶＨを含む。いくつかの実施形態では、ＮＫｐ４６と結合する抗体は、配列番号６８のアミノ酸配列を有するＶＬを含む。いくつかの実施形態では、ＮＫｐ４６と結合する抗体は、配列番号６７のアミノ酸配列を有するＶＨと、配列番号６８のアミノ酸配列を有するＶＬと、を含む。
いくつかの実施形態では、ＮＫｐ４６と結合する抗体は、（ｉ）それぞれ、配列番号６９、７０、及び７１のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨと、（ｉｉ）それぞれ、配列番号７２、７３、及び７４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬと、を含む。いくつかの実施形態では、ＮＫｐ４６と結合する抗体は、（ｉ）それぞれ、配列番号７５、７６、及び７７のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨと、（ｉｉ）それぞれ、配列番号７８、７９、及び８０のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬと、を含む。いくつかの実施形態では、ＮＫｐ４６と結合する抗体は、（ｉ）それぞれ、配列番号８１、８２、及び８３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨと、（ｉｉ）それぞれ、配列番号８４、８５、及び８６のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬと、を含む。いくつかの実施形態では、ＮＫｐ４６と結合する抗体は、（ｉ）それぞれ、配列番号８７、８８、及び８９のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨと、（ｉｉ）それぞれ、配列番号９０、９１、及び９２のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬと、を含む。いくつかの実施形態では、ＮＫｐ４６と結合する抗体は、（ｉ）それぞれ、配列番号９３、９４、及び９５のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨと、（ｉｉ）それぞれ、配列番号９６、９７、及び９８のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬと、を含む。
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号６７及び／又は配列番号６８の１つ又は２つ以上のフレームワーク領域を更に含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体はヒト化抗体である。本明細書に記載のフレームワーク領域は、ＣＤＲ番号付けシステムの境界に基づいて決定される。言い換えれば、ＣＤＲが、例えば、Ｋａｂａｔ、ＩＭＧＴ、又はＣｈｏｔｈｉａによって決定されている場合、フレームワーク領域はＮ末端からＣ末端まで、すなわち、ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４のフォーマット上の可変領域のＣＤＲを囲むアミノ酸残基である。例えば、ＦＲ１は、例えば、Ｋａｂａｔ番号付けシステム、ＩＭＧＴ番号付けシステム、又はＣｈｏｔｈｉａ番号付けシステムによって定義されるＣＤＲ１アミノ酸残基のＮ末端のアミノ酸残基として定義され、ＦＲ２は、例えば、Ｋａｂａｔ番号付けシステム、ＩＭＧＴ番号付けシステム、又はＣｈｏｔｈｉａ番号付けシステムによって定義されるＣＤＲ１アミノ酸残基とＣＤＲ２アミノ酸残基との間のアミノ酸残基として定義され、ＦＲ３は、例えば、Ｋａｂａｔ番号付けシステム、ＩＭＧＴ番号付けシステム、又はＣｈｏｔｈｉａ番号付けシステムによって定義されるＣＤＲ２アミノ酸残基とＣＤＲ３アミノ酸残基との間のアミノ酸残基として定義され、ＦＲ４は、例えば、Ｋａｂａｔ番号付けシステム、ＩＭＧＴ番号付けシステム、又はＣｈｏｔｈｉａ番号付けシステムで定義されるＣＤＲ３アミノ酸残基のＣ末端のアミノ酸残基と定義される。
ある特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体又はその抗原結合性断片は、上記の抗体のうちのいずれか１つと比較して一定パーセントの同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、配列番号６７のアミノ酸配列に対して少なくとも約７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％のうちのいずれか１つの配列同一性を有するＶＨを含む、抗ＮＫｐ４６抗体が提供される。いくつかの実施形態では、配列番号６８のアミノ酸配列に対して少なくとも約７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％のうちのいずれか１つの配列同一性を有するＶＬを含む、抗ＮＫｐ４６抗体が提供される。いくつかの実施形態では、配列番号６７のアミノ酸配列に対して少なくとも約７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％のうちのいずれか１つの配列同一性を有するＶＨと、配列番号６８のアミノ酸配列に対して少なくとも約７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％のうちのいずれか１つの配列同一性を有するＶＬと、を含む、抗ＮＫｐ４６抗体が提供される。
いくつかの実施形態では、少なくとも約７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性のうちのいずれか１つを有するＶＨ配列又はＶＬ配列は、参照配列と比較して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、又は欠失を含むが、その配列を含む抗体はＮＫｐ４６と結合する能力を保持する。いくつかの実施形態では、合計１～１０個のアミノ酸が置換、挿入及び／又は欠失されている。いくつかの実施形態では、置換、挿入、又は欠失は、ＣＤＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ内）で起こる。
別の態様では、ＮＫｐ４６との結合について本明細書に記載されるＮＫｐ４６抗体のうちのいずれかと競合する抗体が本明細書で提供される。別の態様では、本明細書に記載されるＮＫｐ４６抗体のうちのいずれかと同じエピトープと結合する抗体が本明細書で提供される。別の態様では、本明細書に記載されるＮＫｐ４６抗体によって結合されたＮＫｐ４６上のエピトープと重複するＮＫｐ４６上のエピトープと結合するＮＫｐ４６抗体が提供される。
一態様では、ＮＫｐ４６との結合についてＮＫｐ４６参照抗体と競合する抗体が提供される。別の態様では、ＮＫｐ４６参照抗体と同じＮＫｐ４６エピトープと結合するＮＫｐ４６抗体が提供される。別の態様では、ＮＫｐ４６参照抗体によって結合されたＮＫｐ４６上のエピトープと重複するＮＫｐ４６上のエピトープと結合するＮＫｐ４６抗体が提供される。
一実施形態では、ＮＫｐ４６参照抗体は、（ｉ）配列番号６７のアミノ酸配列を有するＶＨの、それぞれ、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有する、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨと、（ｉｉ）配列番号６８のアミノ酸配列を有するＶＬの、それぞれ、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有する、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬとを含む。
本明細書で提供される抗体は、鳥類及び哺乳動物（例えば、ヒト、サル、ネズミ、ロバ、ヒツジ、ウサギ、ヤギ、モルモット、ラクダ、ウマ、又はニワトリ）を含む任意の動物起源に由来し得る。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、ヒト又はヒト化モノクローナル抗体である。本明細書で使用される場合、「ヒト」抗体は、ヒト免疫グロブリンのアミノ酸配列を有する抗体を含み、ヒト免疫グロブリンライブラリから、又はヒト遺伝子由来の抗体を発現するマウスから単離された抗体を含む。
ある特定の実施形態では、抗体は、完全マウス抗体である。ある特定の実施形態では、抗体は、マウス－ヒトキメラ抗体である。ある特定の実施形態では、抗体は、ヒト化抗体である。ある特定の実施形態では、抗体は、完全ヒト抗体である。他の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、ヒト化抗体（例えば、ヒト定常領域及びフレームワーク領域を含む）である。本明細書で提供される抗体は、二重特異性、三重特異性、又はそれ以上の多重特異性であり得る。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体又は抗原結合断片は、１０００ｎＭ未満のＫＤでＮＫＧ２ｄと結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体又は抗原結合断片は、１００ｎＭ未満のＫＤでＮＫＧ２ｄと結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体又は抗原結合断片は、５０ｎＭ未満のＫＤでＮＫＧ２ｄと結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体又は抗原結合断片は、４０ｎＭ未満のＫＤでＮＫＧ２ｄと結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体又は抗原結合断片は、３０ｎＭ未満のＫＤでＮＫＧ２ｄと結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体又は抗原結合断片は、２０ｎＭ未満のＫＤでＮＫＧ２ｄと結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体又は抗原結合断片は、１０ｎＭ未満のＫＤでＮＫＧ２ｄと結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体又は抗原結合断片は、９ｎＭ未満のＫＤでＮＫＧ２ｄと結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体又は抗原結合断片は、８ｎＭ未満のＫＤでＮＫＧ２ｄと結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体又は抗原結合断片は、７ｎＭ未満のＫＤでＮＫＧ２ｄと結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体又は抗原結合断片は、６ｎＭ未満のＫＤでＮＫＧ２ｄと結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体又は抗原結合断片は、５ｎＭ未満のＫＤでＮＫＧ２ｄと結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体又は抗原結合断片は、４ｎＭ未満のＫＤでＮＫＧ２ｄと結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体又は抗原結合断片は、３ｎＭ未満のＫＤでＮＫＧ２ｄと結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体又は抗原結合断片は、２ｎＭ未満のＫＤでＮＫＧ２ｄと結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体又は抗原結合断片は、１ｎＭ未満のＫＤでＮＫＧ２ｄと結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体又は抗原結合断片は、０．１ｎＭ未満のＫＤでＮＫＧ２ｄと結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体又は抗原結合断片は、０．０１ｎＭ未満のＫＤでＮＫＧ２ｄと結合する。また、ＫＤ又はＫＤ値は、当該技術分野で既知の任意の方法によって、例えば、Ｏｃｔｅｔ（登録商標）（例えばＯｃｔｅｔ（登録商標）Ｒｅｄ９６システムを使用）による、又はＢｉａｃｏｒｅ（登録商標）（例えばＢｉａｃｏｒｅ（登録商標）ＴＭ－２０００又はＢｉａｃｏｒｅ（登録商標）ＴＭ－３０００を使用）による、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）又は表面プラズモン共鳴法（ＳＰＲ）を使用して、測定することもできる。また、「オンレート」又は「会合の速度」又は「会合速度」又は「ｋｏｎ」は、例えば、Ｏｃｔｅｔ（登録商標）Ｒｅｄ９６、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）ＴＭ－２０００、又はＢｉａｃｏｒｅ（登録商標）ＴＭ－３０００のシステムを使用して、上記と同じバイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）又は表面プラズモン共鳴法（ＳＰＲ）手法を用いて測定することもできる。特定の実施形態では、ＫＤは、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）アッセイによって決定される。いくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄは、ヒトＮＫＧ２ｄである。いくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄは、カニクイザルＮＫＧ２ｄである。いくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄは、ラットＮＫＧ２ｄである。他の実施形態では、ＮＫＧ２ｄは、マウスＮＫＧ２ｄである。
他の実施形態では、本明細書で提供される抗体又は抗原結合断片は、１０００ｎＭ未満のＫＤでＮＫｐ４６と結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体又は抗原結合断片は、１００ｎＭ未満のＫＤでＮＫｐ４６と結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体又は抗原結合断片は、５０ｎＭ未満のＫＤでＮＫｐ４６と結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体又は抗原結合断片は、４０ｎＭ未満のＫＤでＮＫｐ４６と結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体又は抗原結合断片は、３０ｎＭ未満のＫＤでＮＫｐ４６と結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体又は抗原結合断片は、２０ｎＭ未満のＫＤでＮＫｐ４６と結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体又は抗原結合断片は、１０ｎＭ未満のＫＤでＮＫｐ４６と結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体又は抗原結合断片は、９ｎＭ未満のＫＤでＮＫｐ４６と結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体又は抗原結合断片は、８ｎＭ未満のＫＤでＮＫｐ４６と結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体又は抗原結合断片は、７ｎＭ未満のＫＤでＮＫｐ４６と結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体又は抗原結合断片は、６ｎＭ未満のＫＤでＮＫｐ４６と結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体又は抗原結合断片は、５ｎＭ未満のＫＤでＮＫｐ４６と結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体又は抗原結合断片は、４ｎＭ未満のＫＤでＮＫｐ４６と結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体又は抗原結合断片は、３ｎＭ未満のＫＤでＮＫｐ４６と結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体又は抗原結合断片は、２ｎＭ未満のＫＤでＮＫｐ４６と結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体又は抗原結合断片は、１ｎＭ未満のＫＤでＮＫｐ４６と結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体又は抗原結合断片は、０．１ｎＭ未満のＫＤでＮＫｐ４６と結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体又は抗原結合断片は、０．０１ｎＭ未満のＫＤでＮＫｐ４６と結合する。また、ＫＤ又はＫＤ値は、当該技術分野で既知の任意の方法によって、例えば、Ｏｃｔｅｔ（登録商標）（例えばＯｃｔｅｔ（登録商標）Ｒｅｄ９６システムを使用）又はＢｉａｃｏｒｅ（登録商標）（例えばＢｉａｃｏｒｅ（登録商標）ＴＭ－２０００又はＢｉａｃｏｒｅ（登録商標）ＴＭ－３０００を使用）による、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）又は表面プラズモン共鳴法（ＳＰＲ）を使用して、測定することもできる。また、「オンレート」又は「会合の速度」又は「会合速度」又は「ｋｏｎ」は、例えば、Ｏｃｔｅｔ（登録商標）Ｒｅｄ９６、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）ＴＭ－２０００、又はＢｉａｃｏｒｅ（登録商標）ＴＭ－３０００のシステムを使用して、上記と同じバイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）又は表面プラズモン共鳴法（ＳＰＲ）手法を用いて測定することができる。特定の実施形態では、ＫＤは、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）アッセイによって決定される。いくつかの実施形態では、ＮＫｐ４６は、ヒトＮＫｐ４６である。いくつかの実施形態では、ＮＫｐ４６は、カニクイザルＮＫｐ４６である。いくつかの実施形態では、ＮＫｐ４６は、ラットＮＫｐ４６である。他の実施形態では、ＮＫｐ４６は、マウスＮＫｐ４６である。
いくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄと特異的に結合し、ＮＫ細胞活性を調節することができる抗体が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄと特異的に結合し、ＮＫＧ２ｄを発現する免疫エフェクター細胞活性を調節することができる抗体が本明細書で提供される。
いくつかの実施形態では、ＮＫｐ４６と特異的に結合し、ＮＫ細胞活性を調節することができる抗体が本明細書で提供される。
いくつかの実施形態では、ＮＫｐ４６と特異的に結合し、ＮＫｐ４６を発現する免疫エフェクター細胞活性を調節することができる抗体が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、ＮＫｐ４６を発現する免疫エフェクター細胞は、Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、ガンマデルタＴ細胞である。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、自然リンパ球細胞の粘膜集団である。
いくつかの実施形態では、ＮＫｐ４６と特異的に結合し、Ｔ細胞活性を調節することができる抗体が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、ガンマデルタＴ細胞である。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、自然リンパ球細胞の粘膜集団である。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ＮＫ細胞を活性化することができる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ＮＫ細胞活性を少なくとも約１０％活性化する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ＮＫ細胞活性を少なくとも約２０％活性化する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ＮＫ細胞活性を少なくとも約３０％活性化する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ＮＫ細胞活性を少なくとも約４０％活性化する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ＮＫ細胞活性を少なくとも約５０％活性化する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ＮＫ細胞活性を少なくとも約６０％活性化する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ＮＫ細胞活性を少なくとも約７０％活性化する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ＮＫ細胞活性を少なくとも約８０％活性化する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ＮＫ細胞活性を少なくとも約９０％活性化する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ＮＫ細胞活性を少なくとも約９５％活性化する。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ＮＫ細胞活性を少なくとも約１５％～約６５％活性化する。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ＮＫ細胞活性を少なくとも約２０％～約６５％活性化する。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ＮＫ細胞活性を少なくとも約３０％～約６５％活性化する。特定の実施形態では、ＮＫ細胞は、ヒトＮＫ細胞である。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ＮＫ細胞によるＩＦＮｇ産生を促進することができる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ＮＫ細胞によるＩＦＮｇ産生を少なくとも１０％促進する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ＮＫ細胞によるＩＦＮｇ産生を少なくとも２０％促進する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ＮＫ細胞によるＩＦＮｇ産生を少なくとも３０％促進する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ＮＫ細胞によるＩＦＮｇ産生を少なくとも４０％促進する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ＮＫ細胞によるＩＦＮｇ産生を少なくとも５０％促進する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ＮＫ細胞によるＩＦＮｇ産生を少なくとも６０％促進する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ＮＫ細胞によるＩＦＮｇ産生を少なくとも７０％促進する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ＮＫ細胞によるＩＦＮｇ産生を少なくとも８０％促進する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ＮＫ細胞によるＩＦＮｇ産生を少なくとも９０％促進する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ＮＫ細胞によるＩＦＮｇ産生を少なくとも９５％促進する。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ＮＫ細胞によるＩＦＮｇ産生を少なくとも約１５％～約６５％促進する。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ＮＫ細胞によるＩＦＮｇ産生を少なくとも約２０％～約６５％促進する。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ＮＫ細胞によるＩＦＮｇ産生を少なくとも約３０％～約６５％促進する。特定の実施形態では、ＮＫ細胞は、ヒトＮＫ細胞である。
多重特異性分子
本明細書で提供される多重特異性分子は、ＮＫ細胞上に存在する抗原と結合することができる結合ドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗原は、ＮＫＧ２ｄである。いくつかの実施形態では、抗原は、ＮＫｐ４６である。いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、記載されるとおりであるか、又は上記の抗体に由来する。
上記のドメインに加えて、本明細書で提供される多重特異性分子は、第２の抗原と結合することができる更なるドメインを含む。いくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、腫瘍細胞上に発現される抗原と結合することができる。いくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、腫瘍特異的抗原（ＴＳＡ）又は腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）と結合することができる。いくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、ＢＣＭＡと結合することができる。いくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、ＧＰＲＣ５ｄと結合することができる。
腫瘍抗原は、免疫応答、特にＴ細胞媒介免疫応答を誘発することができる腫瘍細胞によって産生されるタンパク質である。例示的な腫瘍抗原としては、神経膠腫関連抗原、がん胎児性抗原（carcinoembryonic antigen、ＣＥＡ）、β－ヒト絨毛性性腺刺激ホルモン、アルファフェトプロテイン（alphafetoprotein、ＡＦＰ）、レクチン反応性ＡＦＰ、サイログロブリン、ＲＡＧＥ－１、ＭＮ－ＣＡＩＸ、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素、ＲＵ１、ＲＵ２（ＡＳ）、腸カルボキシルエステラーゼ、ｍｕｔ ｈｓｐ７０－２、Ｍ－ＣＳＦ、プロスターゼ、前立腺特異的抗原（prostate-specific antigen、ＰＳＡ）、ＰＡＰ、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＬＡＧＥ－ｌａ、ｐ５３、プロステイン、ＰＳＭＡ、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、サバイビン及びテロメラーゼ、前立腺がん腫瘍抗原－１（prostate-carcinoma tumor antigen-1、ＰＣＴＡ－１）、ＭＡＧＥ、ＥＬＦ２Ｍ、好中球エラスターゼ、エフリンＢ２、インスリン増殖因子（insulin growth factor、ＩＧＦ）－Ｉ、ＩＧＦ－ＩＩ、ＩＧＦ－Ｉ受容体、並びにメソテリンが挙げられるが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態では、腫瘍抗原は、悪性腫瘍に関連する１つ又は２つ以上の抗原性がんエピトープを含む。悪性腫瘍は、免疫攻撃の標的抗原として機能し得る多数のタンパク質を発現する。これらの分子としては、黒色腫におけるＭＡＲＴ－１、チロシナーゼ及びｇｐ１００など組織特異的抗原、並びに前立腺がんにおける前立腺酸性ホスファターゼ（prostatic acid phosphatase、ＰＡＰ）及び前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）が挙げられるが、これらに限定されない。他の標的分子は、がん遺伝子ＨＥＲ２／Ｎｅｕ／ＥｒｂＢ－２など形質転換関連分子の群に属する。標的抗原の更に別の群は、がん胎児性抗原（ＣＥＡ）など腫瘍胎児抗原である。
いくつかの実施形態では、腫瘍抗原は、腫瘍特異的抗原（ＴＳＡ）又は腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）である。ＴＳＡは腫瘍細胞に特有であり、体内の他の細胞には存在しない。ＴＡＡ関連抗原は、腫瘍細胞に特有ではなく、代わりに、抗原に対する免疫寛容の状態を誘導することができない条件下で正常細胞上でも発現する。腫瘍上での抗原の発現は、免疫系が抗原に応答することを可能にする条件下で起こり得る。ＴＡＡは、免疫系が未成熟であり、応答することができない胎児発生期間に正常細胞上に発現する抗原であり得るか、又はそれらは、正常細胞上に非常に低いレベルで通常存在するが、腫瘍細胞上にはるかに高いレベルで発現する抗原であり得る。
ＴＳＡ又はＴＡＡ抗原の非限定的な例としては、ＭＡＲＴ－１／ＭｅｌａｎＡ（ＭＡＲＴ－Ｉ）、ｇｐ１００（Ｐｍｅｌ １７）、チロシナーゼ、ＴＲＰ－１、ＴＲＰ－２など分化抗原、及びＭＡＧＥ－１、ＭＡＧＥ－３、ＢＡＧＥ、ＧＡＧＥ－１、ＧＡＧＥ－２、ｐｌ５など腫瘍特異的多系統抗原；ＣＥＡなど過剰発現した胚性抗原；ｐ５３、Ｒａｓ、ＨＥＲ２／ｎｅｕなど過剰発現したがん遺伝子及び変異した腫瘍抑制遺伝子；染色体転座から生じた固有の腫瘍抗原；ＢＣＲ－ＡＢＬ、Ｅ２Ａ－ＰＲＬ、Ｈ４－ＲＥＴ、ＩＧＨ－ＩＧＫ、ＭＹＬ－ＲＡＲなど；並びにウイルス抗原、例えば、エプスタイン・バーウイルス抗原ＥＢＶＡ及びヒト乳頭腫ウイルス（ＨＰＶ）抗原Ｅ６及びＥ７が挙げられる。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される多重特異性分子は、多重特異性抗体である。本明細書で提供される抗体には、合成抗体、モノクローナル抗体、組換え生産された抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体などが含まれるが、これらに限定されない。
特に、本明細書で提供される抗体には、免疫グロブリン分子及び免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な部分、すなわち、抗原と免疫特異的に結合する抗原結合部位を含む分子が含まれる。本明細書で提供される免疫グロブリン分子は、免疫グロブリン分子の任意のタイプ（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、及びＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２）、又はサブクラスであり得る。いくつかの実施形態では、抗体は、ＩｇＧ抗体である。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ抗体は、ＩｇＧ１抗体である。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ抗体は、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４抗体である。
本明細書で提供される様々な多重特異性分子のいくつかの実施形態では、エピトープと特異的に結合する能力を保持する抗体断片を含む抗体のバリアント及び／又は誘導体を含む。本明細書で提供される様々な多重特異性分子の他の実施形態では、第１の結合ドメイン及び／又は第２の結合ドメインは、エピトープと特異的に結合する能力を保持する抗体断片を含む抗体のバリアント及び／又は誘導体である。例示的な断片としては、Ｆａｂ断片（抗原結合ドメインを含み、ジスルフィド結合によって架橋された軽鎖及び重鎖の一部を含む抗体断片）、Ｆａｂ’（Ｆａｂ及びヒンジ領域を通る重鎖の追加部分を含む単一の抗結合ドメインを含む抗体断片）、Ｆ（ａｂ’）２（重鎖のヒンジ領域において鎖間ジスルフィド結合によって連結された２つのＦａｂ’分子であり、Ｆａｂ’分子は、同じ又は異なるエピトープに指向され得る）、二重特異性Ｆａｂ（２つの抗原結合ドメインを有するＦａｂ分子であり、その各々が異なるエピトープに指向され得る）、ｓｃＦｖとしても知られる可変領域を含む単鎖Ｆａｂ鎖（１０～２５アミノ酸の鎖によって一緒に連結された抗体の単一軽鎖及び重鎖の可変の抗原結合決定領域）、ジスルフィド結合Ｆｖ、又はｄｓＦｖ（ジスルフィド結合によって一緒に連結された抗体の単一軽鎖及び重鎖の可変抗原結合決定領域）、ラクダ化ＶＨ（ＶＨ界面のいくつかのアミノ酸が天然ラクダ抗体の重鎖に見られるものである、抗体の単一重鎖の可変抗原結合決定領域）、二重特異性ｓｃＦｖ（２つの抗原結合ドメインを有するｓｃＦｖ又はｄｓＦｖ分子であり、その各々が異なるエピトープに指向され得る）、ダイアボディ（第１のｓｃＦｖのＶＨドメインが第２のｓｃＦｖのＶＬドメインと会合し、第１のｓｃＦｖのＶＬドメインが第２のｓｃＦｖのＶＨドメインと会合するときに形成される二量体化ｓｃＦｖ、ダイアボディの２つの抗原結合領域は、同じ又は異なるエピトープに対して指向され得る）、トリアボディ（三量体化ｓｃＦｖであり、ダイアボディと同様の様式で形成されるが、３つの抗原結合ドメインが単一の複合体で作製され、３つの抗原結合ドメインは、同じ又は異なるエピトープに対して指向され得る）、及びテトラボディ（四量体化ｓｃＦｖであり、ダイアボディと同様の様式で形成されるが、４つの抗原結合ドメインが単一の複合体で作製され、４つの抗原結合ドメインは、同じ又は異なるエピトープに対して指向され得る）が含まれる。抗体の誘導体はまた、抗体結合部位の１つ又は２つ以上のＣＤＲ配列を含む。ＣＤＲ配列は、２つ又はそれ以上のＣＤＲ配列が存在する場合、足場上で一緒に連結され得る。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、単鎖Ｆｖ（「ｓｃＦｖ」）を含む。ｓｃＦｖは、抗体のＶＨドメイン及びＶＬドメインを含む抗体断片であり、これらのドメインは単一のポリペプチド鎖中に存在する。概して、ｓｃＦｖポリペプチドは、ＶＨドメインとＶＬドメインとの間に、ｓｃＦｖが抗原結合のために所望の構造を形成することを可能にするポリペプチドリンカーを更に含む。ｓｃＦｖの概説については、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ ｉｎ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ ａｎｄ Ｍｏｏｒｅ ｅｄｓ．Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ｐｐ．２６９－３１５（１９９４）を参照されたい。
特定の実施形態では、ＮＫＧ２ｄと結合する抗体は、ＶＨ領域及びＶＬ領域を含む。いくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄ抗体は、単鎖抗体である。いくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄ抗体は、単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄ抗体は、ナノボディである。ある特定の実施形態では、ＮＫＧ２ｄ抗体は、ＶＨＨ抗体である。ある特定の実施形態では、ＮＫＧ２ｄ抗体は、ラマ抗体である。いくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄ抗体は、単鎖抗体ではない。いくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄ抗体は、単一ドメイン抗体ではない。いくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄ抗体は、ナノボディではない。ある特定の実施形態では、ＮＫＧ２ｄ抗体は、ＶＨＨ抗体ではない。ある特定の実施形態では、ＮＫＧ２ｄ抗体は、ラマ抗体ではない。いくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄ抗体は、多重特異性抗体である。他の実施形態では、ＮＫＧ２ｄ抗体は、二重特異性抗体である。ある特定の実施形態では、多重特異性抗体は、本明細書で提供されるＮＫＧ２ｄ抗体の抗原結合断片を含む。他の実施形態では、二重特異性抗体は、本明細書で提供されるＮＫＧ２ｄ抗体の抗原結合断片を含む。
別の態様では、ＮＫＧ２ｄと結合する多重特異性抗体が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、二重特異性抗体である。いくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、三重特異性抗体である。いくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、四重特異性抗体である。一実施形態では、多重特異性ＮＫＧ２ｄ抗体は、（ａ）ＮＫＧ２ｄに結合する第１の結合ドメインと、（ｂ）第２の標的に結合する第２の結合ドメインと、を含む。一実施形態では、多重特異性ＮＫＧ２ｄ抗体は、（ａ）ＮＫＧ２ｄに結合する第１の結合ドメインと、（ｂ）第２の標的に結合する第２の結合ドメインと、（ｃ）第３の標的に結合する第３の結合ドメインと、を含む。一実施形態では、多重特異性ＮＫＧ２ｄ抗体は、（ａ）ＮＫＧ２ｄに結合する第１の結合ドメインと、（ｂ）第２の標的に結合する第２の結合ドメインと、（ｃ）第３の標的に結合する第３の結合ドメインと、（ｄ）第４の標的に結合する第４の結合ドメインと、を含む。
ある特定の実施形態では、（ａ）ＮＫＧ２ｄと結合する第１の結合ドメイン、及び（ｂ）ＮＫＧ２ｄではない第２の標的と結合する第２の結合ドメイン、を含む二重特異性抗体が本明細書で提供される。別の態様では、（ａ）ＮＫＧ２ｄと結合する第１の結合ドメイン、及び（ｂ）腫瘍細胞上で発現される抗原と結合する第２の標的と結合する第２の結合ドメインを含む二重特異性抗体が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、ＢＣＭＡに結合する。いくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、ＧＰＲＣ５ｄと結合する。
ある特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体のうちのいずれか１つのＶＨ領域、ＶＬ領域、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及び／又はＶＬ ＣＤＲ３を有するＮＫＧ２ｄに結合する結合ドメインを含む、抗ＮＫＧ２ｄ二重特異性抗体が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体のうちのいずれか１つのＶＨ領域を有するＮＫＧ２ｄと結合する結合ドメインを含む、抗ＮＫＧ２ｄ二重特異性抗体が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体のうちのいずれか１つのＶＬ領域を有するＮＫＧ２ｄと結合する結合ドメインを含む、抗ＮＫＧ２ｄ二重特異性抗体が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体のうちのいずれか１つのＶＨ領域と、本明細書に記載される抗体のうちのいずれか１つのＶＬ領域とを有するＮＫＧ２ｄと結合する結合ドメインを含む、抗ＮＫＧ２ｄ二重特異性抗体が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、記載される抗体のうちのいずれか１つのＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を有するＮＫＧ２ｄと結合する結合ドメインを含む、抗ＮＫＧ２ｄ二重特異性抗体が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体のうちのいずれか１つのＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を有するＮＫＧ２ｄと結合する結合ドメインを含む、抗ＮＫＧ２ｄ二重特異性抗体が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体のうちのいずれか１つのＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３と、本明細書に記載される抗体のうちのいずれか１つのＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３とを有するＮＫＧ２ｄに結合する結合ドメイン含む、抗ＮＫＧ２ｄ二重特異性抗体が本明細書で提供される。
ある特定の実施形態では、抗ＮＫＧ２ｄ抗体は、二重特異性抗体である。いくつかの実施形態では、抗ＮＫＧ２ｄ二重特異性抗体は、本明細書で提供される抗ＢＣＭＡ抗体のＶＨ領域、ＶＬ領域、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及び／又はＶＬ ＣＤＲ３を有するＢＣＭＡと結合する、第２の結合ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、抗ＮＫＧ２ｄ二重特異性抗体は、本明細書で提供される抗ＢＣＭＡ抗体のＶＨ領域を有するＢＣＭＡと結合する、第２の結合ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、抗ＮＫＧ２ｄ二重特異性抗体は、本明細書で提供される抗ＢＣＭＡ抗体のＶＬ領域を有するＢＣＭＡと結合する、第２の結合ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、抗ＮＫＧ２ｄ二重特異性抗体は、本明細書で提供される抗ＢＣＭＡ抗体のＶＨ領域と、本明細書で提供される抗ＢＣＭＡ抗体のＶＬ領域とを有するＢＣＭＡに結合する、第２の結合ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、抗ＮＫＧ２ｄ二重特異性抗体は、本明細書で提供される抗ＢＣＭＡ抗体のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を有するＢＣＭＡと結合する、第２の結合ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、抗ＮＫＧ２ｄ二重特異性抗体は、本明細書で提供される抗ＢＣＭＡ抗体のＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を有するＢＣＭＡと結合する、第２の結合ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、抗ＮＫＧ２ｄ二重特異性抗体は、本明細書で提供される抗ＢＣＭＡ抗体のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３と、本明細書で提供される抗ＢＣＭＡ抗体のＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３とを有するＢＣＭＡと結合する、第２の結合ドメインを更に含む。
ある特定の実施形態では、抗ＮＫＧ２ｄ抗体は、二重特異性抗体である。いくつかの実施形態では、抗ＮＫＧ２ｄ二重特異性抗体は、本明細書で提供される抗ＧＰＲＣ５ｄ抗体のＶＨ領域、ＶＬ領域、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及び／又はＶＬ ＣＤＲ３を有するＧＰＲＣ５ｄと結合する、第２の結合ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、抗ＮＫＧ２ｄ二重特異性抗体は、本明細書で提供される抗ＧＰＲＣ５ｄ抗体のＶＨ領域を有するＧＰＲＣ５ｄと結合する、第２の結合ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、抗ＮＫＧ２ｄ二重特異性抗体は、本明細書で提供される抗ＧＰＲＣ５ｄ抗体のＶＬ領域を有するＧＰＲＣ５ｄと結合する、第２の結合ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、抗ＮＫＧ２ｄ二重特異性抗体は、本明細書で提供される抗ＧＰＲＣ５ｄ抗体のＶＨ領域と、本明細書で提供される抗ＧＰＲＣ５ｄ抗体のＶＬ領域とを有するＧＰＲＣ５ｄと結合する、第２の結合ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、抗ＮＫＧ２ｄ二重特異性抗体は、本明細書で提供される抗ＧＰＲＣ５ｄ抗体のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を有するＧＰＲＣ５ｄと結合する、第２の結合ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、抗ＮＫＧ２ｄ二重特異性抗体は、本明細書で提供される抗ＧＰＲＣ５ｄ抗体のＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を有するＧＰＲＣ５ｄと結合する、第２の結合ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、抗ＮＫＧ２ｄ二重特異性抗体は、本明細書で提供される抗ＧＰＲＣ５ｄ抗体のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３と、本明細書で提供される抗ＧＰＲＣ５ｄ抗体のＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３とを有するＧＰＲＣ５ｄと結合する、第２の結合ドメインを更に含む。
いくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄと結合する第１の結合ドメインは、記載のとおりであるか、又は上記の抗体に由来する。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの特定の実施形態では、ＮＫＧ２ｄと結合する第１の結合ドメインは、（ｉ）それぞれ、配列番号４、５、及び６のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨと、（ｉｉ）それぞれ、配列番号７、８、及び９のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬと、を含む。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄと結合する第１の結合ドメインは、（ｉ）それぞれ、配列番号１０、１１、及び１２のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨと、（ｉｉ）それぞれ、配列番号１３、１４、及び１５のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬと、を含む。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄと結合する第１の結合ドメインは、（ｉ）それぞれ、配列番号１６、１７、及び１８のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨと、（ｉｉ）それぞれ、配列番号１９、２０、及び２１のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬと、を含む。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄと結合する第１の結合ドメインは、（ｉ）それぞれ、配列番号２２、２３、及び２４のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨと、（ｉｉ）それぞれ、配列番号２５、２６、及び２７のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬと、を含む。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄと結合する第１の結合ドメインは、（ｉ）それぞれ、配列番号２８、２９、及び３０のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨと、（ｉｉ）それぞれ、配列番号３１、３２、及び３３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬと、を含む。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄと結合する第１の結合ドメインは、配列番号２の、それぞれ、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含む、ＶＨを含む。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄと結合する第１の結合ドメインは、配列番号３の、それぞれ、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含む、ＶＬを含む。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄと結合する第１の結合ドメインは、（ｉ）配列番号２の、それぞれ、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨと、（ｉｉ）配列番号３の、それぞれ、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬと、を含む。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄと結合する第１の結合ドメインは、配列番号２のアミノ酸配列を有するＶＨを含む。いくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄと結合する第１の結合ドメインは、配列番号３のアミノ酸配列を有するＶＬを含む。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄと結合する第１の結合ドメインは、配列番号２のアミノ酸配列を有するＶＨと、配列番号３のアミノ酸配列を有するＶＬとを含む。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄと結合する第１の結合ドメインは、配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨを含む。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄと結合する第１の結合ドメインは、配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬを含む。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄと結合する第１の結合ドメインは、配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨと、配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬと、を含む。
本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄと結合する第１の結合ドメインは、（ｉ）それぞれ、配列番号３６、３７、及び３８のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨと、（ｉｉ）それぞれ、配列番号３９、４０、及び４１のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬと、を含む。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄと結合する第１の結合ドメインは、（ｉ）それぞれ、配列番号４２、４３、及び４４のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨと、（ｉｉ）それぞれ、配列番号４５、４６、及び４７のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬと、を含む。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄと結合する第１の結合ドメインは、（ｉ）それぞれ、配列番号４８、４９、及び５０のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨと、（ｉｉ）それぞれ、配列番号５１、５２、及び５３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬと、を含む。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄと結合する第１の結合ドメインは、（ｉ）それぞれ、配列番号５４、５５、及び５６のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨと、（ｉｉ）それぞれ、配列番号５７、５８、及び５９のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬと、を含む。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄと結合する第１の結合ドメインは、（ｉ）それぞれ、配列番号６０、６１、及び６２のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨと、（ｉｉ）それぞれ、配列番号６３、６４、及び６５のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬと、を含む。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄと結合する第１の結合ドメインは、配列番号３４の、それぞれ、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含む、ＶＨを含む。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄと結合する第１の結合ドメインは、配列番号３５の、それぞれ、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含む、ＶＬを含む。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄと結合する第１の結合ドメインは、（ｉ）配列番号３４の、それぞれ、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨと、（ｉｉ）配列番号３５の、それぞれ、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬと、を含む。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄと結合する第１の結合ドメインは、配列番号３４のアミノ酸配列を有するＶＨを含む。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄと結合する第１の結合ドメインは、配列番号３５のアミノ酸配列を有するＶＬを含む。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄと結合する第１の結合ドメインは、配列番号３４のアミノ酸配列を有するＶＨと、配列番号３５のアミノ酸配列を有するＶＬとを含む。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄと結合する第１の結合ドメインは、配列番号３４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨを含む。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄと結合する第１の結合ドメインは、配列番号３５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬを含む。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄと結合する第１の結合ドメインは、配列番号３４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨと、配列番号３５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬと、を含む。
いくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄに結合する第１の結合ドメインのＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列は、Ｋａｂａｔ番号付けシステムに従う。いくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄに結合する第１の結合ドメインのＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列は、Ｃｈｏｔｈｉａ番号付けシステムに従う。いくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄに結合する第１の結合ドメインのＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列は、ＡｂＭ番号付けシステムに従う。いくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄに結合する第１の結合ドメインのＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列は、Ｃｏｎｔａｃｔ番号付けシステムに従う。いくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄに結合する第１の結合ドメインのＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列は、ＩＭＧＴ番号付けシステムに従う。
本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ抗体のいくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、ＮＫＧ２ｄ抗原と結合する。いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、ＮＫＧ２ｄエピトープと結合する。いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、ＮＫＧ２ｄと特異的に結合する。いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインのＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３は、ＮＫＧ２ｄの抗原に対する結合部位を形成する。いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインのＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３は、ＮＫＧ２ｄのエピトープに対する結合部位を形成する。いくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄは、ＮＫ細胞の表面上に存在する。
別の態様では、本明細書に記載されるＮＫＧ２ｄ抗体のうちのいずれかとＮＫＧ２ｄとの結合について競合する多重特異性抗体が本明細書で提供される。別の態様では、本明細書に記載されるＮＫＧ２ｄ抗体のうちのいずれかと同じエピトープに結合する多重特異性抗体が本明細書で提供される。別の態様では、本明細書に記載されるＮＫＧ２ｄ抗体によって結合されたＮＫＧ２ｄ上のエピトープと重複するＮＫＧ２ｄ上のエピトープと結合する多重特異性ＮＫＧ２ｄ抗体が提供される。
一態様では、ＮＫＧ２ｄとの結合についてＮＫＧ２ｄ参照抗体と競合する多重特異性抗体が提供される。別の態様では、ＮＫＧ２ｄ参照抗体と同じＮＫＧ２ｄエピトープに結合する多重特異性ＮＫＧ２ｄ抗体が提供される。別の態様では、ＮＫＧ２ｄ参照抗体によって結合されたＮＫＧ２ｄ上のエピトープと重複するＮＫＧ２ｄ上のエピトープと結合する多重特異性ＮＫＧ２ｄ抗体が提供される。
一実施形態では、ＮＫＧ２ｄ参照抗体は、（ｉ）配列番号２のアミノ酸配列を有するＶＨの、それぞれ、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有する、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨと、（ｉｉ）配列番号３のアミノ酸配列を有するＶＬの、それぞれ、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有する、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬとを含む。一実施形態では、ＮＫＧ２ｄ参照抗体は、（ｉ）配列番号３４のアミノ酸配列を有するＶＨの、それぞれ、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有する、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨと、（ｉｉ）配列番号３５のアミノ酸配列を有するＶＬの、それぞれ、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有する、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬとを含む。
本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ抗体のいくつかの実施形態では、第２の標的は、ＮＫＧ２ｄ抗原ではない。本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ抗体のいくつかの実施形態では、第３の標的は、ＮＫＧ２ｄ抗原ではない。本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ抗体のいくつかの実施形態では、第４の標的は、ＮＫＧ２ｄ抗原ではない。本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ抗体のいくつかの実施形態では、第２の標的は、ＮＫＧ２ｄ抗原ではなく、第３の標的は、ＮＫＧ２ｄ抗原ではない。本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ抗体のいくつかの実施形態では、第２の標的は、ＮＫＧ２ｄ抗原ではなく、第４の標的は、ＮＫＧ２ｄ抗原ではない。本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ抗体のいくつかの実施形態では、第３の標的は、ＮＫＧ２ｄ抗原ではなく、第４の標的は、ＮＫＧ２ｄ抗原ではない。本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ抗体のいくつかの実施形態では、第２の標的は、ＮＫＧ２ｄ抗原ではなく、第３の標的は、ＮＫＧ２ｄ抗原ではなく、第４の標的は、ＮＫＧ２ｄ抗原ではない。本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ抗体のいくつかの実施形態では、第２の標的は、ＮＫＧ２ｄエピトープではない。本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ抗体のいくつかの実施形態では、第３の標的は、ＮＫＧ２ｄエピトープではない。本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ抗体のいくつかの実施形態では、第４の標的は、ＮＫＧ２ｄエピトープではない。本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ抗体のいくつかの実施形態では、第２の標的は、ＮＫＧ２ｄエピトープではなく、第３の標的は、ＮＫＧ２ｄエピトープではない。本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ抗体のいくつかの実施形態では、第２の標的は、ＮＫＧ２ｄエピトープではなく、第４の標的は、ＮＫＧ２ｄエピトープではない。本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ抗体のいくつかの実施形態では、第３の標的は、ＮＫＧ２ｄエピトープではなく、第４の標的は、ＮＫＧ２ｄエピトープではない。本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ抗体のいくつかの実施形態では、第２の標的は、ＮＫＧ２ｄエピトープではなく、第３の標的は、ＮＫＧ２ｄエピトープではなく、第４の標的は、ＮＫＧ２ｄエピトープではない。本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ抗体のいくつかの実施形態では、第２の標的は、ＢＣＭＡである。本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ抗体のいくつかの実施形態では、第２の標的は、ＧＰＲＣ５ｄである。
ＮＫ細胞の表面上に存在するＮＫＧ２ｄに対する本明細書で提供される多重特異性抗体の結合、及び第２の標的細胞の表面上に存在する第２の標的抗原の結合は、例えば、第２の標的細胞の死滅をもたらすことができる。他の実施形態では、ＮＫ細胞表面上に存在するＮＫＧ２ｄとの本明細書で提供される多重特異性抗体の結合、及び第２の標的抗原の結合は、例えば、ＮＫ細胞の活性化をもたらし得る。いくつかの実施形態では、（ａ）ＮＫＧ２ｄと結合する第１の結合ドメインと、（ｂ）がん細胞の表面上に存在するがん抗原と結合する第２の結合ドメインとを含む、二重特異性抗体が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、がん細胞の表面上の抗原は、腫瘍特異的抗原である。いくつかの実施形態では、がん細胞の表面上の抗原は、腫瘍関連抗原である。いくつかの実施形態では、がん細胞の表面上の抗原は、新抗原である。ある特定の実施形態では、二重特異性抗体の第１の結合ドメインは、ＮＫＧ２ｄと特異的に結合する。いくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄは、ＮＫ細胞の表面上に存在する。いくつかの実施形態では、二重特異性抗体がＮＫ細胞の表面上のＮＫＧ２ｄ及びがん細胞の表面上の抗原と結合すると、がん細胞は死滅する。
別の態様では、（ａ）ＮＫＧ２ｄと結合する第１の結合ドメインと、（ｂ）ＢＣＭＡと結合する第２の結合ドメインとを含む、二重特異性抗体が本明細書で提供される。ある特定の実施形態では、二重特異性抗体の第１の結合ドメインは、ＮＫＧ２ｄに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄは、ＮＫ細胞の表面上に存在する。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡは、細胞の表面上にある。ある特定の実施形態では、ＮＫＧ２ｄは、ＮＫ細胞の表面上に存在し、ＢＣＭＡは、細胞の表面上にある。いくつかの実施形態では、二重特異性抗体がＮＫ細胞の表面上のＮＫＧ２ｄ及び細胞の表面上のＢＣＭＡに結合すると、表面上にＢＣＭＡを有する細胞が死滅する。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡは、がん細胞の表面上にある。ある特定の実施形態では、ＮＫＧ２ｄは、ＮＫ細胞の表面上に存在し、ＢＣＭＡは、がん細胞の表面上にある。いくつかの実施形態では、二重特異性抗体がＮＫ細胞の表面上のＮＫＧ２ｄ及びがん細胞の表面上のＢＣＭＡと結合すると、がん細胞は死滅する。ある特定の実施形態では、第１の結合ドメインとして本明細書で提供されるＮＫＧ２ｄ抗体のうちのいずれかを含む二重特異性抗体が企図される。加えて、ある特定の実施形態では、第１の結合ドメインとして本明細書で提供されるＮＫＧ２ｄ抗体のうちのいずれかと、ＢＣＭＡと結合する第２の結合ドメインとを含む二重特異性抗体もまた企図される。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される多重特異性抗体は、（ａ）ＮＫＧ２ｄと結合する第１の結合ドメインと、（ｂ）ＢＣＭＡと結合する第２の結合ドメインと、を含む、二重特異性抗体であり、ＢＣＭＡと結合する第２の結合ドメインは、（ｉ）それぞれ、配列番号１０１、１０２、及び１０３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨと、（ｉｉ）それぞれ、配列番号１０４、１０５、及び１０６のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬと、を含む。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、ＢＣＭＡと結合する第２の結合ドメインは、（ｉ）それぞれ、配列番号１０７、１０８、及び１０９のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨと、（ｉｉ）それぞれ、配列番号１１０、１１１、及び１１２のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬと、を含む。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、ＢＣＭＡと結合する第２の結合ドメインは、（ｉ）それぞれ、配列番号１１３、１１４、及び１１５のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨと、（ｉｉ）それぞれ、配列番号１１６、１１７、及び１１８のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬと、を含む。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、ＢＣＭＡと結合する第２の結合ドメインは、（ｉ）それぞれ、配列番号１１９、１２０、及び１２１のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨと、（ｉｉ）それぞれ、配列番号１２２、１２３、及び１２４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬと、を含む。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、ＢＣＭＡと結合する第２の結合ドメインは、（ｉ）それぞれ、配列番号１２５、１２６、及び１２７のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨと、（ｉｉ）それぞれ、配列番号１２８、１２９、及び１３０のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬと、を含む。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、ＢＣＭＡと結合する第２の結合ドメインは、配列番号９９の、それぞれ、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含む、ＶＨを含む。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、ＢＣＭＡと結合する第２の結合ドメインは、配列番号１００の、それぞれ、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含む、ＶＬを含む。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、ＢＣＭＡと結合する第２の結合ドメインは、（ｉ）配列番号９９の、それぞれ、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨと、（ｉｉ）配列番号１００の、それぞれ、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬと、を含む。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、ＢＣＭＡと結合する第２の結合ドメインは、配列番号９９のアミノ酸配列を有するＶＨを含む。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、ＢＣＭＡと結合する第２の結合ドメインは、配列番号１００のアミノ酸配列を有するＶＬを含む。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、ＢＣＭＡと結合する第２の結合ドメインは、配列番号９９のアミノ酸配列を有するＶＨと、配列番号１００のアミノ酸配列を有するＶＬとを含む。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、ＢＣＭＡと結合する第２の結合ドメインは、配列番号９９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨを含む。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、ＢＣＭＡと結合する第２の結合ドメインは、配列番号１００のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬを含む。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、ＢＣＭＡと結合する第２の結合ドメインは、配列番号９９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨと、配列番号１００のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬと、を含む。
別の態様では、（ａ）ＮＫＧ２ｄと結合する第１の結合ドメインと、（ｂ）ＧＰＲＣ５ｄと結合する第２の結合ドメインとを含む、二重特異性抗体が本明細書で提供される。ある特定の実施形態では、二重特異性抗体の第１の結合ドメインは、ＮＫＧ２ｄと特異的に結合する。いくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄは、ＮＫ細胞の表面上に存在する。いくつかの実施形態では、ＧＰＲＣ５ｄは、細胞の表面上にある。ある特定の実施形態では、ＮＫＧ２ｄは、ＮＫ細胞の表面上に存在し、ＧＰＲＣ５ｄは、細胞の表面上にある。いくつかの実施形態では、二重特異性抗体がＮＫ細胞の表面上のＮＫＧ２ｄ及び細胞の表面上のＧＰＲＣ５ｄと結合すると、表面上にＧＰＲＣ５ｄを有する細胞は、死滅する。いくつかの実施形態では、ＧＰＲＣ５ｄは、がん細胞の表面上にある。ある特定の実施形態では、ＮＫＧ２ｄは、ＮＫ細胞の表面上に存在し、ＧＰＲＣ５ｄは、がん細胞の表面上にある。いくつかの実施形態では、二重特異性抗体が、ＮＫ細胞の表面上のＮＫＧ２ｄ及びがん細胞の表面上のＧＰＲＣ５ｄと結合すると、がん細胞は、死滅する。ある特定の実施形態では、第１の結合ドメインとして本明細書で提供されるＮＫＧ２ｄ抗体のうちのいずれかを含む二重特異性抗体が企図される。加えて、ある特定の実施形態では、第１の結合ドメインとして本明細書で提供されるＮＫＧ２ｄ抗体のうちのいずれかと、ＧＰＲＣ５ｄに結合する第２の結合ドメインとを含む二重特異性抗体もまた企図される。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される多重特異性抗体は、（ａ）ＮＫＧ２ｄと結合する第１の結合ドメインと、（ｂ）ＧＰＲＣ５ｄと結合する第２の結合ドメインと、を含む、二重特異性抗体であり、ＧＰＲＣ５ｄと結合する第２の結合ドメインは、（ｉ）それぞれ、配列番号１３３、１３４、及び１３５のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨと、（ｉｉ）それぞれ、配列番号１３６、１３７、及び１３８のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬと、を含む。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、ＧＰＲＣ５ｄと結合する第２の結合ドメインは、（ｉ）それぞれ、配列番号１３９、１４０、及び１４１のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨと、（ｉｉ）それぞれ、配列番号１４２、１４３、及び１４４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬと、を含む。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、ＧＰＲＣ５ｄと結合する第２の結合ドメインは、（ｉ）それぞれ、配列番号１４５、１４６、及び１４７のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨと、（ｉｉ）それぞれ、配列番号１４８、１４９、及び１５０のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬと、を含む。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、ＧＰＲＣ５ｄと結合する第２の結合ドメインは、（ｉ）それぞれ、配列番号１５１、１５２、及び１５３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨと、（ｉｉ）それぞれ、配列番号１５４、１５５、及び１５６のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬと、を含む。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、ＧＰＲＣ５ｄと結合する第２の結合ドメインは、（ｉ）それぞれ、配列番号１５７、１５８、及び１５９のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨと、（ｉｉ）それぞれ、配列番号１６０、１６１、及び１６２のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬと、を含む。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、ＧＰＲＣ５ｄと結合する第２の結合ドメインは、配列番号１３１の、それぞれ、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含む、ＶＨを含む。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、ＧＰＲＣ５ｄと結合する第２の結合ドメインは、配列番号１３２の、それぞれ、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含む、ＶＬを含む。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、ＧＰＲＣ５ｄと結合する第２の結合ドメインは、（ｉ）配列番号１３１の、それぞれ、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨと、（ｉｉ）配列番号１３２の、それぞれ、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬと、を含む。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、ＧＰＲＣ５ｄと結合する第２の結合ドメインは、配列番号１３１のアミノ酸配列を有するＶＨを含む。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、ＧＰＲＣ５ｄと結合する第２の結合ドメインは、配列番号１３２のアミノ酸配列を有するＶＬを含む。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、ＧＰＲＣ５ｄと結合する第２の結合ドメインは、配列番号１３１のアミノ酸配列を有するＶＨと、配列番号１３２のアミノ酸配列を有するＶＬとを含む。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、ＧＰＲＣ５ｄと結合する第２の結合ドメインは、配列番号１３１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨを含む。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、ＧＰＲＣ５ｄと結合する第２の結合ドメインは、配列番号１３２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬを含む。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、ＧＰＲＣ５ｄと結合する第２の結合ドメインは、配列番号１３１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨと、配列番号１３２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬと、を含む。
特定の実施形態では、ノブインホール（knob-in-hole）形式で本明細書で提供されるＮＫＧ２ｄ抗体を含む、多重特異性抗体が提供される。特定の実施形態では、ノブインホール形式で本明細書で提供されるＮＫＧ２ｄ抗体を含む、二重特異性抗体が提供される。特定の実施形態では、ノブインホール形式で本明細書で提供されるＮＫＧ２ｄ抗体を含む、三重特異性抗体が提供される。特定の実施形態では、ノブインホール形式で本明細書で提供されるＮＫＧ２ｄ抗体を含む、四重特異性抗体が提供される。他の特異性は、当該技術分野で周知の方法を使用して、ノブインホール形式で抗体に付加することができる（例えば、ｓｃＦｖをＮ末端又はＣ末端に付加すること）。更に、多重特異性抗体を作製する他の形式及び方法もまた、当該技術分野で既知であり、企図される。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるＮＫＧ２ｄ抗体は、二重特異性抗体に含まれる。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるＮＫＧ２ｄ抗体は、三重特異性抗体に含まれる。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるＮＫＧ２ｄ抗体は、四重特異性抗体に含まれる。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるＮＫＧ２ｄ二重特異性抗体は、多重特異性抗体に含まれる。
ある特定の実施形態では、本明細書で提供される多重特異性抗体は、第１のＮＫＧ２ｄエピトープと結合する本明細書で提供されるＮＫＧ２ｄ抗体を含む第１の結合ドメインと、第２のエピトープと結合する第２の結合ドメインとを含み、第１のＮＫＧ２ｄエピトープ及び第２のエピトープは、同じではない。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される二重特異性抗体は、第１のＮＫＧ２ｄエピトープと結合する本明細書で提供されるＮＫＧ２ｄ抗体を含む第１の結合ドメインと、第２のエピトープと結合する第２の結合ドメインとを含み、第１のＮＫＧ２ｄエピトープ及び第２のエピトープは、同じではない。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される三重特異性抗体は、第１のＮＫＧ２ｄピトープと結合する本明細書で提供されるＮＫＧ２ｄ抗体を含む第１の結合ドメインと、第２のエピトープと結合する第２の結合ドメインと、第３のエピトープと結合する第３の結合ドメインとを含み、第１のＮＫＧ２ｄエピトープ、第２のエピトープ、及び第３のエピトープは、同じではない。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される四重特異性抗体は、第１のＮＫＧ２ｄエピトープと結合する本明細書で提供されるＮＫＧ２ｄ抗体を含む第１の結合ドメインと、第２のエピトープと結合する第２の結合ドメインと、第３のエピトープと結合する第３の結合ドメインと、第４のエピトープと結合する第４の結合ドメインとを含み、第１のＮＫＧ２ｄエピトープ、第２のエピトープ、第３のエピトープ、及び第４のエピトープは、同じではない。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される多重特異性抗体は、第１のＮＫＧ２ｄ抗原と結合する本明細書で提供されるＮＫＧ２ｄ抗体を含む第１の結合ドメインと、第２の抗原と結合する第２の結合ドメインとを含み、第１のＮＫＧ２ｄ抗原及び第２の抗原は、同じではない。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される二重特異性抗体は、第１のＮＫＧ２ｄ抗原と結合する本明細書で提供されるＮＫＧ２ｄ抗体を含む第１の結合ドメインと、第２の抗原と結合する第２の結合ドメインとを含み、第１のＮＫＧ２ｄ抗原及び第２の抗原は、同じではない。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される三重特異性抗体は、第１のＮＫＧ２ｄ抗原と結合する本明細書で提供されるＮＫＧ２ｄ抗体を含む第１の結合ドメインと、第２の抗原と結合する第２の結合ドメインと、第３の抗原と結合する第３の結合ドメインとを含み、第１のＮＫＧ２ｄ抗原、第２の抗原、及び第３の抗原は、同じではない。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される四重特異性抗体は、第１のＮＫＧ２ｄ抗原と結合する本明細書で提供されるＮＫＧ２ｄ抗体を含む第１の結合ドメインと、第２の抗原と結合する第２の結合ドメインと、第３の抗原と結合する第３の結合ドメインと、第４の抗原と結合する第４の結合ドメインとを含み、第１のＮＫＧ２ｄ抗原、第２の抗原、第３の抗原、及び第４の抗原は、同じではない。特定の実施形態では、本明細書で提供されるＮＫＧ２ｄ抗体又はその抗原結合断片は、ＮＫＧ２ｄと特異的に結合する。
いくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含む。いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含む。いくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含む。いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、第２の結合ドメインは、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含む。いくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄ抗体は、単一ドメイン抗体又はナノボディではない。いくつかの実施形態では、第３の結合ドメインは、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含む。いくつかの実施形態では、第４の結合ドメインは、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含む。
ある特定の実施形態では、ＮＫＧ２ｄ多重特異性抗体又はその抗原結合断片は、ＮＫＧ２ｄに位置する第１のエピトープ及び第２の標的抗原の第２のエピトープと結合する。いくつかの実施形態では、（ａ）ＮＫＧ２ｄ抗原と結合する第１の結合ドメインと、（ｂ）第２の標的抗原と結合する第２の結合ドメインとを含む、多重特異性抗体が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、（ａ）ＮＫＧ２ｄ抗原に特異的に結合する第１の結合ドメインと、（ｂ）第２の標的抗原に特異的に結合する第２の結合ドメインとを含む、多重特異性抗体が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、（ａ）ＮＫＧ２ｄ抗原上の第１のエピトープに結合する第１の結合ドメインと、（ｂ）第２の標的抗原上の第２のエピトープに結合する第２の結合ドメインとを含む、多重特異性抗体が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、（ａ）ＮＫＧ２ｄ抗原上の第１のエピトープに特異的に結合する第１の結合ドメインと、（ｂ）第２の標的抗原上の第２のエピトープに特異的に結合する第２の結合ドメインとを含む、多重特異性抗体が本明細書で提供される。
特定の実施形態では、ＮＫＧ２ｄ抗原は、ＮＫ細胞の表面上にある。ある特定の実施形態では、第２の標的抗原は、ＮＫＧ２ｄではない。ＮＫ細胞の表面上に存在するＮＫＧ２ｄとのＮＫＧ２ｄ多重特異性抗体の結合、及び第２の標的細胞の表面上に存在する第２の標的抗原の結合は、例えば、第２の標的細胞の死滅をもたらすことができる。他の実施形態では、ＮＫ細胞の表面上に存在するＮＫＧ２ｄとのＮＫＧ２ｄ多重特異性抗体の結合、及び第２の標的抗原の結合は、例えば、ＮＫ細胞の活性化をもたらすことができる。
別の態様では、ＮＫＧ２ｄと結合する第１の結合ドメインと、ＢＣＭＡと結合する第２の結合ドメインとを含む、多重特異性抗体（「多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＢＣＭＡ抗体」）が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＢＣＭＡ抗体は、二重特異性抗体である。いくつかの実施形態では、多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＢＣＭＡ抗体は、三重特異性抗体である。いくつかの実施形態では、多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＢＣＭＡ抗体は、四重特異性抗体である。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＢＣＭＡ抗体は、（ａ）ＮＫＧ２ｄと結合する第１の結合ドメインと、（ｂ）ＢＣＭＡと結合する第２の結合ドメインとを含む。一実施形態では、多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＢＣＭＡ抗体は、（ａ）ＮＫＧ２ｄと結合する第１の結合ドメインと、（ｂ）ＢＣＭＡと結合する第２の結合ドメインと、（ｃ）第３の標的と結合する第３の結合ドメインとを含む。一実施形態では、多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＢＣＭＡ抗体は、（ａ）ＮＫＧ２ｄと結合する第１の結合ドメインと、（ｂ）ＢＣＭＡと結合する第２の結合ドメインと、（ｃ）第３の標的に結合する第３の結合ドメインと、（ｄ）第４の標的と結合する第４の結合ドメインとを含む。
本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＢＣＭＡ抗体のいくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄと結合する第１の結合ドメインは、配列番号２のアミノ酸配列を有するＶＨの、それぞれ、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有する、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含む、ＶＨを含む。本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＢＣＭＡ抗体のいくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄと結合する第１の結合ドメインは、配列番号３のアミノ酸配列を有するＶＬの、それぞれ、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有する、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含む、ＶＬを含む。本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＢＣＭＡ抗体のいくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄと結合する第１の結合ドメインは、（ｉ）配列番号２のアミノ酸配列を有するＶＨの、それぞれ、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有する、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含む、ＶＨと、（ｉｉ）配列番号３のアミノ酸配列を有するＶＬの、それぞれ、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有する、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含む、ＶＬとを含む。本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＢＣＭＡ抗体のいくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄと結合する第１の結合ドメインは、配列番号２のアミノ酸配列を有するＶＨを含む。本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＢＣＭＡ抗体のいくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄと結合する第１の結合ドメインは、配列番号３のアミノ酸配列を有するＶＬを含む。本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＢＣＭＡ抗体のいくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄと結合する第１の結合ドメインは、配列番号２のアミノ酸配列を有するＶＨと、配列番号３のアミノ酸配列を有するＶＬとを含む。
本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＢＣＭＡ抗体のいくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄと結合する第１の結合ドメインは、配列番号３４のアミノ酸配列を有するＶＨの、それぞれ、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有する、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含む、ＶＨを含む。本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＢＣＭＡ抗体のいくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄと結合する第１の結合ドメインは、配列番号３５のアミノ酸配列を有するＶＬの、それぞれ、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有する、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含む、ＶＬを含む。本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＢＣＭＡ抗体のいくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄと結合する第１の結合ドメインは、（ｉ）配列番号３４のアミノ酸配列を有するＶＨの、それぞれ、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有する、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含む、ＶＨと、（ｉｉ）配列番号３５のアミノ酸配列を有するＶＬの、それぞれ、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有する、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含む、ＶＬとを含む。本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＢＣＭＡ抗体のいくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄと結合する第１の結合ドメインは、配列番号３４のアミノ酸配列を有するＶＨを含む。本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＢＣＭＡ抗体のいくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄと結合する第１の結合ドメインは、配列番号３５のアミノ酸配列を有するＶＬを含む。本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＢＣＭＡ抗体のいくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄと結合する第１の結合ドメインは、配列番号３４のアミノ酸配列を有するＶＨと、配列番号３５のアミノ酸配列を有するＶＬとを含む。
本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＢＣＭＡ抗体のいくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄと結合する第１の結合ドメインのＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列は、Ｋａｂａｔ番号付けシステムに従う。本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＢＣＭＡ抗体のいくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄと結合する第１の結合ドメインのＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列は、Ｃｈｏｔｈｉａ番号付けシステムに従う。本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＢＣＭＡ抗体のいくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄと結合する第１の結合ドメインのＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列は、ＡｂＭ番号付けシステムに従う。本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＢＣＭＡ抗体のいくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄと結合する第１の結合ドメインのＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列は、Ｃｏｎｔａｃｔ番号付けシステムに従う。本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＢＣＭＡ抗体のいくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄと結合する第１の結合ドメインのＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列は、ＩＭＧＴ番号付けシステムに従う。
本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＢＣＭＡ抗体のいくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、ＮＫＧ２ｄ抗原と結合する。本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＢＣＭＡ抗体のいくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、ＮＫＧ２ｄエピトープと結合する。本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＢＣＭＡ抗体のいくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、ＮＫＧ２ｄと特異的に結合する。本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＢＣＭＡ抗体のいくつかの実施形態では、第１の結合ドメインのＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３は、ＮＫＧ２ｄの抗原に対する結合部位を形成する。本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＢＣＭＡ抗体のいくつかの実施形態では、第１の結合ドメインのＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３は、ＮＫＧ２ｄのエピトープに対する結合部位を形成する。本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＢＣＭＡ抗体のいくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄは、ＮＫ細胞の表面上に存在する。
本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＢＣＭＡ抗体のいくつかの実施形態では、ＢＣＭＡと結合する第２の結合ドメインは、配列番号９９の、それぞれ、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含む、ＶＨを含む。本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＢＣＭＡ抗体のいくつかの実施形態では、ＢＣＭＡと結合する第２の結合ドメインは、配列番号１００の、それぞれ、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含む、ＶＬを含む。本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＢＣＭＡ抗体のいくつかの実施形態では、ＢＣＭＡと結合する第２の結合ドメインは、（ｉ）配列番号９９の、それぞれ、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨと、（ｉｉ）配列番号１００の、それぞれ、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬと、を含む。本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＢＣＭＡ抗体のいくつかの実施形態では、ＢＣＭＡと結合する第２の結合ドメインは、配列番号９９のアミノ酸配列を有するＶＨを含む。本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＢＣＭＡ抗体のいくつかの実施形態では、ＢＣＭＡと結合する第２の結合ドメインは、配列番号１００のアミノ酸配列を有するＶＬを含む。本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＢＣＭＡ抗体のいくつかの実施形態では、ＢＣＭＡと結合する第２の結合ドメインは、配列番号９９のアミノ酸配列を有するＶＨと、配列番号１００のアミノ酸配列を有するＶＬとを含む。
本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＢＣＭＡ抗体のいくつかの実施形態では、ＢＣＭＡと結合する第２の結合ドメインのＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列は、Ｋａｂａｔ番号付けシステムに従う。本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＢＣＭＡ抗体のいくつかの実施形態では、ＢＣＭＡと結合する第２の結合ドメインのＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列は、Ｃｈｏｔｈｉａ番号付けシステムに従う。本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＢＣＭＡ抗体のいくつかの実施形態では、ＢＣＭＡと結合する第２の結合ドメインのＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列は、ＡｂＭ番号付けシステムに従う。本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＢＣＭＡ抗体のいくつかの実施形態では、ＢＣＭＡと結合する第２の結合ドメインのＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列は、Ｃｏｎｔａｃｔ番号付けシステムに従う。本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＢＣＭＡ抗体のいくつかの実施形態では、ＢＣＭＡと結合する第２の結合ドメインのＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列は、ＩＭＧＴ番号付けシステムに従う。
本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＢＣＭＡ抗体のいくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、ＢＣＭＡ抗原と結合する。本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＢＣＭＡ抗体のいくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、ＢＣＭＡエピトープと結合する。本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＢＣＭＡ抗体のいくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、ＢＣＭＡと特異的に結合する。本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＢＣＭＡ抗体のいくつかの実施形態では、第２の結合ドメインのＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３は、ＢＣＭＡの抗原に対する結合部位を形成する。いくつかの実施形態では、第２の結合ドメインのＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３は、ＢＣＭＡのエピトープに対する結合部位を形成する。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡは、腫瘍細胞の表面上に存在する。
本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＢＣＭＡ抗体のいくつかの実施形態では、第３の標的は、ＮＫＧ２ｄ抗原ではない。本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＢＣＭＡ抗体のいくつかの実施形態では、第４の標的は、ＮＫＧ２ｄ抗原ではない。本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＢＣＭＡ抗体のいくつかの実施形態では、第３の標的は、ＮＫＧ２ｄ抗原ではなく、第４の標的は、ＮＫＧ２ｄ抗原ではない。本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＢＣＭＡ抗体のいくつかの実施形態では、第３の標的は、ＢＣＭＡ抗原ではない。本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＢＣＭＡ抗体のいくつかの実施形態では、第４の標的は、ＢＣＭＡ抗原ではない。本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＢＣＭＡ抗体のいくつかの実施形態では、第３の標的は、ＢＣＭＡ抗原ではなく、第４の標的は、ＢＣＭＡ抗原ではない。本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＢＣＭＡ抗体のいくつかの実施形態では、第３の標的は、ＮＫＧ２ｄエピトープではない。本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＢＣＭＡ抗体のいくつかの実施形態では、第４の標的は、ＮＫＧ２ｄエピトープではない。本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＢＣＭＡ抗体のいくつかの実施形態では、第３の標的は、ＮＫＧ２ｄエピトープではなく、第４の標的は、ＮＫＧ２ｄエピトープではない。本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＢＣＭＡ抗体のいくつかの実施形態では、第３の標的は、ＢＣＭＡエピトープではない。本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＢＣＭＡ抗体のいくつかの実施形態では、第４の標的は、ＢＣＭＡエピトープではない。本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＢＣＭＡ抗体のいくつかの実施形態では、第３の標的は、ＢＣＭＡエピトープではなく、第４の標的は、ＢＣＭＡエピトープではない。
特定の実施形態では、標的は、哺乳動物に由来する。特定の実施形態では、標的は、ラットに由来する。特定の実施形態では、標的は、マウスに由来する。特定の実施形態では、標的は、霊長類に由来する。特定の実施形態では、標的は、ヒトに由来する。
特定の実施形態では、ノブインホール形式の多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＢＣＭＡ抗体が提供される。特定の実施形態では、ノブインホール形式の二重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＢＣＭＡ抗体が提供される。特定の実施形態では、ノブインホール形式の三重特異性抗体が提供される。特定の実施形態では、ノブインホール形式の四重特異性抗体が提供される。他の特異性は、当該技術分野で周知の方法を使用して、ノブインホール形式で抗体に付加することができる（例えば、ｓｃＦｖをＮ末端又はＣ末端に付加すること）。更に、多重特異性抗体を作製する他の形式及び方法もまた、当該技術分野で既知であり、企図される。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるＮＫＧ２ｄ／ＢＣＭＡ抗体は、二重特異性抗体に含まれる。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるＮＫＧ２ｄ／ＢＣＭＡ抗体は、三重特異性抗体に含まれる。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるＮＫＧ２ｄ／ＢＣＭＡ抗体は、四重特異性抗体に含まれ得る。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるＮＫＧ２ｄ／ＢＣＭＡ二重特異性抗体は、多重特異性抗体に含まれる。
ある特定の実施形態では、本明細書で提供される三重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＢＣＭＡ抗体は、ＮＫＧ２ｄエピトープと結合する本明細書で提供されるＮＫＧ２ｄ抗体を含む第１の結合ドメインと、ＢＣＭＡエピトープと結合する本明細書で提供されるＢＣＭＡ抗体を含む第２の結合ドメインと、第３のエピトープと結合する第３の結合ドメインとを含み、ＮＫＧ２ｄエピトープ、ＢＣＭＡエピトープ、及び第３のエピトープは、同じではない。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される四重特異性抗体は、ＮＫＧ２ｄエピトープと結合する本明細書で提供されるＮＫＧ２ｄ抗体を含む第１の結合ドメインと、ＢＣＭＡエピトープと結合する本明細書で提供されるＢＣＭＡ抗体を含む第２の結合ドメインと、第３のエピトープと結合する第３の結合ドメインと、第４のエピトープと結合する第４の結合ドメインとを含み、ＮＫＧ２ｄエピトープ、ＢＣＭＡエピトープ、第３のエピトープ、及び第４のエピトープは、同じではない。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される三重特異性抗体は、ＮＫＧ２ｄ抗原と結合する本明細書で提供されるＮＫＧ２ｄ抗体を含む第１の結合ドメインと、ＢＣＭＡ抗原と結合する本明細書で提供されるＢＣＭＡ抗体を含む第２の結合ドメインと、第３の抗原と結合する第３の結合ドメインとを含み、ＮＫＧ２ｄ抗原、ＢＣＭＡ抗原、及び第３の抗原は、同じではない。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される四重特異性抗体は、ＮＫＧ２ｄ抗原、ＢＣＭＡ抗原と結合する本明細書で提供されるＢＣＭＡ抗体を含む第２の結合ドメイン、第３の抗原と結合する第３の結合ドメイン、第４の抗原と結合する第４の結合ドメインと結合し、
ＮＫＧ２ｄ抗原、ＢＣＭＡ抗原、第３の抗原、及び第４の抗原は、同じではない。本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＢＣＭＡ抗体のある特定の実施形態では、ＮＫＧ２ｄと結合する第１の結合ドメインは、ＮＫＧ２ｄと特異的に結合する。本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＢＣＭＡ抗体の他の実施形態では、ＢＣＭＡと結合する第２の結合ドメインは、ＢＣＭＡと特異的に結合する。本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＢＣＭＡ抗体の更に他の実施形態では、ＮＫＧ２ｄと結合する第１の結合ドメインは、ＮＫＧ２ｄと特異的に結合し、ＢＣＭＡと結合する第２の結合ドメインは、ＢＣＭＡと特異的に結合する。
いくつかの実施形態では、多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＢＣＭＡ抗体は、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含む。いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含む。いくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含む。いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、第２の結合ドメインは、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含む。いくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄ抗体は、単一ドメイン抗体又はナノボディではない。いくつかの実施形態では、第３の結合ドメインは、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含む。いくつかの実施形態では、第４の結合ドメインは、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含む。
ある特定の実施形態では、ＮＫＧ２ｄ／ＢＣＭＡ多重特異性抗体又はその抗原結合断片は、ＮＫＧ２ｄ上に位置する第１のエピトープ及びＢＣＭＡ上に位置する第２のエピトープと結合する。いくつかの実施形態では、（ａ）ＮＫＧ２ｄ抗原と結合する第１の結合ドメインと、（ｂ）ＢＣＭＡ抗原と結合する第２の結合ドメインとを含む、多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＢＣＭＡ抗体が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、（ａ）ＮＫＧ２ｄ抗原と特異的に結合する第１の結合ドメインと、（ｂ）ＢＣＭＡ抗原と特異的に結合する第２の結合ドメインとを含む、多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＢＣＭＡ抗体が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、（ａ）ＮＫＧ２ｄ抗原上の第１のエピトープと結合する第１の結合ドメインと、（ｂ）ＢＣＭＡ抗原上の第２のエピトープと結合する第２の結合ドメインとを含む、多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＢＣＭＡ抗体が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、（ａ）ＮＫＧ２ｄ抗原上の第１のエピトープと特異的に結合する第１の結合ドメインと、（ｂ）ＢＣＭＡ抗原上の第２のエピトープと特異的に結合する第２の結合ドメインとを含む、多重特異性抗体が本明細書で提供される。
特定の実施形態では、ＮＫＧ２ｄ抗原は、ＮＫ細胞の表面上にある。特定の実施形態では、ＢＣＭＡ抗原は、腫瘍細胞の表面上にある。ＮＫ細胞の表面上に存在するＮＫＧ２ｄ及び腫瘍細胞の表面上に存在するＢＣＭＡとのＮＫＧ２ｄ／ＢＣＭＡ多重特異性抗体の結合は、例えば、腫瘍細胞の死滅をもたらし得る。他の実施形態では、ＮＫ細胞の表面上に存在するＮＫＧ２ｄ及び腫瘍細胞の表面上に存在するＢＣＭＡとのＮＫＧ２ｄ／ＢＣＭＡ多重特異性抗体の結合は、例えば、ＮＫ細胞の活性化をもたらし得る。
別の態様では、ＮＫＧ２ｄと結合する第１の結合ドメインと、ＧＰＲＣ５ｄと結合する第２の結合ドメインとを含む、多重特異性抗体（「多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＧＰＲＣ５ｄ抗体」）が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＧＰＲＣ５ｄ抗体は、二重特異性抗体である。いくつかの実施形態では、多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＧＰＲＣ５ｄ抗体は、三重特異性抗体である。いくつかの実施形態では、多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＧＰＲＣ５ｄ抗体は、四重特異性抗体である。
一実施形態では、多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＧＰＲＣ５ｄ抗体は、（ａ）ＮＫＧ２ｄと結合する第１の結合ドメインと、（ｂ）ＧＰＲＣ５ｄと結合する第２の結合ドメインとを含む。一実施形態では、多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＧＰＲＣ５ｄ抗体は、（ａ）ＮＫＧ２ｄと結合する第１の結合ドメインと、（ｂ）ＧＰＲＣ５ｄと結合する第２の結合ドメインと、（ｃ）第３の標的と結合する第３の結合ドメインとを含む。一実施形態では、多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＧＰＲＣ５ｄ抗体は、（ａ）ＮＫＧ２ｄと結合する第１の結合ドメインと、（ｂ）ＧＰＲＣ５ｄと結合する第２の結合ドメインと、（ｃ）第３の標的と結合する第３の結合ドメインと、（ｄ）第４の標的と結合する第４の結合ドメインとを含む。
本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＧＰＲＣ５ｄ抗体のいくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄと結合する第１の結合ドメインは、配列番号２のアミノ酸配列を有するＶＨの、それぞれ、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有する、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含む、ＶＨを含む。本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＧＰＲＣ５ｄ抗体のいくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄと結合する第１の結合ドメインは、配列番号３のアミノ酸配列を有するＶＬの、それぞれ、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有する、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含む、ＶＬを含む。本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＧＰＲＣ５ｄ抗体のいくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄと結合する第１の結合ドメインは、（ｉ）配列番号２のアミノ酸配列を有するＶＨの、それぞれ、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有する、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含む、ＶＨと、（ｉｉ）配列番号３のアミノ酸配列を有するＶＬの、それぞれ、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有する、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含む、ＶＬとを含む。本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＧＰＲＣ５ｄ抗体のいくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄと結合する第１の結合ドメインは、配列番号２のアミノ酸配列を有するＶＨを含む。本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＧＰＲＣ５ｄ抗体のいくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄと結合する第１の結合ドメインは、配列番号３のアミノ酸配列を有するＶＬを含む。本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＧＰＲＣ５ｄ抗体のいくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄと結合する第１の結合ドメインは、配列番号２のアミノ酸配列を有するＶＨと、配列番号３のアミノ酸配列を有するＶＬとを含む。
本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＧＰＲＣ５ｄ抗体のいくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄと結合する第１の結合ドメインは、配列番号３４のアミノ酸配列を有するＶＨの、それぞれ、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有する、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含む、ＶＨを含む。本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＧＰＲＣ５ｄ抗体のいくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄと結合する第１の結合ドメインは、配列番号３５のアミノ酸配列を有するＶＬの、それぞれ、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有する、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含む、ＶＬを含む。本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＧＰＲＣ５ｄ抗体のいくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄと結合する第１の結合ドメインは、（ｉ）配列番号３４のアミノ酸配列を有するＶＨの、それぞれ、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有する、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含む、ＶＨと、（ｉｉ）配列番号３５のアミノ酸配列を有するＶＬの、それぞれ、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有する、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含む、ＶＬとを含む。本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＧＰＲＣ５ｄ抗体のいくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄと結合する第１の結合ドメインは、配列番号３４のアミノ酸配列を有するＶＨを含む。本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＧＰＲＣ５ｄ抗体のいくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄと結合する第１の結合ドメインは、配列番号３５のアミノ酸配列を有するＶＬを含む。本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＧＰＲＣ５ｄ抗体のいくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄと結合する第１の結合ドメインは、配列番号３４のアミノ酸配列を有するＶＨと、配列番号３５のアミノ酸配列を有するＶＬとを含む。
本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＧＰＲＣ５ｄ抗体のいくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄと結合する第１の結合ドメインのＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列は、Ｋａｂａｔ番号付けシステムに従う。本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＧＰＲＣ５ｄ抗体のいくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄと結合する第１の結合ドメインのＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列は、Ｃｈｏｔｈｉａ番号付けシステムに従う。本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＧＰＲＣ５ｄ抗体のいくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄと結合する第１の結合ドメインのＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列は、ＡｂＭ番号付けシステムに従う。本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＧＰＲＣ５ｄ抗体のいくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄと結合する第１の結合ドメインのＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列は、Ｃｏｎｔａｃｔ番号付けシステムに従う。本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＧＰＲＣ５ｄ抗体のいくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄと結合する第１の結合ドメインのＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列は、ＩＭＧＴ番号付けシステムに従う。
本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＧＰＲＣ５ｄ抗体のいくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、ＮＫＧ２ｄ抗原と結合する。本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＧＰＲＣ５ｄ抗体のいくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、ＮＫＧ２ｄエピトープと結合する。本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＧＰＲＣ５ｄ抗体のいくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、ＮＫＧ２ｄに特異的に結合する。本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＧＰＲＣ５ｄ抗体のいくつかの実施形態では、第１の結合ドメインのＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３は、ＮＫＧ２ｄの抗原に対する結合部位を形成する。本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＧＰＲＣ５ｄ抗体のいくつかの実施形態では、第１の結合ドメインのＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３は、ＮＫＧ２ｄのエピトープに対する結合部位を形成する。本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＧＰＲＣ５ｄ抗体のいくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄは、ＮＫ細胞の表面上に存在する。
本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＧＰＲＣ５ｄ抗体のいくつかの実施形態では、ＧＰＲＣ５ｄと結合する第２の結合ドメインは、配列番号１３１の、それぞれ、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含む、ＶＨを含む。本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＧＰＲＣ５ｄ抗体のいくつかの実施形態では、ＧＰＲＣ５ｄと結合する第２の結合ドメインは、配列番号１３２の、それぞれ、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含む、ＶＬを含む。本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＧＰＲＣ５ｄ抗体のいくつかの実施形態では、ＧＰＲＣ５ｄと結合する第２の結合ドメインは、（ｉ）配列番号１３１の、それぞれ、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含む、ＶＨと、（ｉｉ）配列番号１３２の、それぞれ、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含む、ＶＬとを含む。本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＧＰＲＣ５ｄ抗体のいくつかの実施形態では、ＧＰＲＣ５ｄと結合する第２の結合ドメインは、配列番号１３１のアミノ酸配列を有するＶＨを含む。本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＧＰＲＣ５ｄ抗体のいくつかの実施形態では、ＧＰＲＣ５ｄと結合する第２の結合ドメインは、配列番号１３２のアミノ酸配列を有するＶＬを含む。本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＧＰＲＣ５ｄ抗体のいくつかの実施形態では、ＧＰＲＣ５ｄと結合する第２の結合ドメインは、配列番号１３１のアミノ酸配列を有するＶＨと、配列番号１３２のアミノ酸配列を有するＶＬとを含む。
本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＧＰＲＣ５ｄ抗体のいくつかの実施形態では、ＧＰＲＣ５ｄと結合する第２の結合ドメインのＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列は、Ｋａｂａｔ番号付けシステムに従う。本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＧＰＲＣ５ｄ抗体のいくつかの実施形態では、ＧＰＲＣ５ｄと結合する第２の結合ドメインのＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列は、Ｃｈｏｔｈｉａ番号付けシステムに従う。本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＧＰＲＣ５ｄ抗体のいくつかの実施形態では、ＧＰＲＣ５ｄと結合する第２の結合ドメインのＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列は、ＡｂＭ番号付けシステムに従う。本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＧＰＲＣ５ｄ抗体のいくつかの実施形態では、ＧＰＲＣ５ｄと結合する第２の結合ドメインのＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列は、Ｃｏｎｔａｃｔ番号付けシステムに従う。本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＧＰＲＣ５ｄ抗体のいくつかの実施形態では、ＧＰＲＣ５ｄと結合する第２の結合ドメインのＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列は、ＩＭＧＴ番号付けシステムに従う。
本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＧＰＲＣ５ｄ抗体のいくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、ＧＰＲＣ５ｄ抗原と結合する。本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＧＰＲＣ５ｄ抗体のいくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、ＧＰＲＣ５ｄエピトープと結合する。本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＧＰＲＣ５ｄ抗体のいくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、ＧＰＲＣ５ｄと特異的に結合する。本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＧＰＲＣ５ｄ抗体のいくつかの実施形態では、第２の結合ドメインのＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３は、ＧＰＲＣ５ｄの抗原に対する結合部位を形成する。いくつかの実施形態では、第２の結合ドメインのＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３は、ＧＰＲＣ５ｄのエピトープに対する結合部位を形成する。いくつかの実施形態では、ＧＰＲＣ５ｄは、腫瘍細胞の表面上に存在する。
本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＧＰＲＣ５ｄ抗体のいくつかの実施形態では、第３の標的は、ＮＫＧ２ｄ抗原ではない。本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＧＰＲＣ５ｄ抗体のいくつかの実施形態では、第４の標的は、ＮＫＧ２ｄ抗原ではない。本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＧＰＲＣ５ｄ抗体のいくつかの実施形態では、第３の標的は、ＮＫＧ２ｄ抗原ではなく、第４の標的は、ＮＫＧ２ｄ抗原ではない。本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＧＰＲＣ５ｄ抗体のいくつかの実施形態では、第３の標的は、ＧＰＲＣ５ｄ抗原ではない。本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＧＰＲＣ５ｄ抗体のいくつかの実施形態では、第４の標的は、ＧＰＲＣ５ｄ抗原ではない。本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＧＰＲＣ５ｄ抗体のいくつかの実施形態では、第３の標的は、ＧＰＲＣ５ｄ抗原ではなく、第４の標的はＧＰＲＣ５ｄ抗原ではない。本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＧＰＲＣ５ｄ抗体のいくつかの実施形態では、第３の標的は、ＮＫＧ２ｄエピトープではない。本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＧＰＲＣ５ｄ抗体のいくつかの実施形態では、第４の標的は、ＮＫＧ２ｄエピトープではない。本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＧＰＲＣ５ｄ抗体のいくつかの実施形態では、第３の標的は、ＮＫＧ２ｄエピトープではなく、第４の標的は、ＮＫＧ２ｄエピトープではない。本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＧＰＲＣ５ｄ抗体のいくつかの実施形態では、第３の標的は、ＧＰＲＣ５ｄエピトープではない。本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＧＰＲＣ５ｄ抗体のいくつかの実施形態では、第４の標的は、ＧＰＲＣ５ｄエピトープではない。本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ ＧＰＲＣ５ｄ抗体のいくつかの実施形態では、第３の標的は、ＧＰＲＣ５ｄエピトープではなく、第４の標的は、ＧＰＲＣ５ｄエピトープではない。
特定の実施形態では、標的は、哺乳動物に由来する。特定の実施形態では、標的は、ラットに由来する。特定の実施形態では、標的は、マウスに由来する。特定の実施形態では、標的は、霊長類に由来する。特定の実施形態では、標的は、ヒトに由来する。
特定の実施形態では、ノブインホール形式の多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＧＰＲＣ５ｄ抗体が提供される。特定の実施形態では、ノブインホール形式の二重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＧＰＲＣ５ｄ抗体が提供される。具体的な実施形態では、ノブインホール形式の三重特異性抗体が提供される。具体的な実施形態では、ノブインホール形式の四重特異性抗体が提供される。他の特異性は、当該技術分野で周知の方法を使用して、ノブインホール形式で抗体に付加することができる（例えば、ｓｃＦｖをＮ末端又はＣ末端に付加すること）。更に、多重特異性抗体を作製する他の形式及び方法もまた、当該技術分野で既知であり、企図される。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるＮＫＧ２ｄ／ＧＰＲＣ５ｄ抗体は、二重特異性抗体に含まれる。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるＮＫＧ２ｄ／ＧＰＲＣ５ｄ抗体は、三重特異性抗体に含まれる。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるＮＫＧ２ｄ／ＧＰＲＣ５ｄ抗体は、四重特異性抗体に含まれる。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるＮＫＧ２ｄ／ＧＰＲＣ５ｄ二重特異性抗体は、多重特異性抗体に含まれる。
ある特定の実施形態では、本明細書で提供される三重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＧＰＲＣ５ｄ抗体は、ＮＫＧ２ｄエピトープと結合する本明細書で提供されるＮＫＧ２ｄ抗体を含む第１の結合ドメインと、ＧＰＲＣ５ｄエピトープと結合する本明細書で提供されるＧＰＲＣ５ｄ抗体を含む第２の結合ドメインと、第３のエピトープと結合する第３の結合ドメインとを含み、ＮＫＧ２ｄエピトープ、ＧＰＲＣ５ｄエピトープ、及び第３のエピトープは、同じではない。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される四重特異性抗体は、ＮＫＧ２ｄエピトープと結合する本明細書で提供されるＮＫＧ２ｄ抗体を含む第１の結合ドメインと、ＧＰＲＣ５ｄエピトープと結合する本明細書で提供されるＧＰＲＣ５ｄ抗体を含む第２の結合ドメインと、第３のエピトープと結合する第３の結合ドメインと、第４のエピトープと結合する第４の結合ドメインとを含み、ＮＫＧ２ｄエピトープ、ＧＰＲＣ５ｄエピトープ、第３のエピトープ、及び第４エピトープは、同じではない。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される三重特異性抗体は、ＮＫＧ２ｄ抗原と結合する本明細書で提供されるＮＫＧ２ｄ抗体を含む第１の結合ドメインと、ＧＰＲＣ５ｄ抗原と結合する本明細書で提供されるＧＰＲＣ５ｄ抗体を含む第２の結合ドメインと、第３の抗原と結合する第３の結合ドメインとを含み、ＮＫＧ２ｄ抗原、ＧＰＲＣ５ｄ抗原、第３の抗原は、同じではない。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される四重特異性抗体は、ＮＫＧ２ｄ抗原、ＧＰＲＣ５ｄ抗原と結合する本明細書で提供されるＧＰＲＣ５ｄ抗体を含む第２の結合ドメイン、第３の抗原と結合する第３の結合ドメイン、及び第４の抗原と結合する第４の結合ドメインと結合し、ＮＫＧ２ｄ抗原、ＧＰＲＣ５ｄ抗原、第３の抗原、及び第４の抗原は、同じではない。本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＧＰＲＣ５ｄ抗体のある特定の実施形態では、ＮＫＧ２ｄと結合する第１の結合ドメインは、ＮＫＧ２ｄと特異的に結合する。本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＧＰＲＣ５ｄ抗体の他の実施形態では、ＧＰＲＣ５ｄと結合する第２の結合ドメインは、ＧＰＲＣ５ｄと特異的に結合する。本明細書で提供される多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＧＰＲＣ５ｄ抗体の更に他の実施形態では、ＮＫＧ２ｄと結合する第１の結合ドメインは、ＮＫＧ２ｄと特異的に結合し、ＧＰＲＣ５ｄと結合する第２の結合ドメインは、ＧＰＲＣ５ｄと特異的に結合する。
いくつかの実施形態では、多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＧＰＲＣ５ｄ抗体は、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含む。いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含む。いくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含む。いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、第２の結合ドメインは、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含む。いくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄ抗体は、単一ドメイン抗体又はナノボディではない。いくつかの実施形態では、第３の結合ドメインは、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含む。いくつかの実施形態では、第４の結合ドメインは、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含む。
ある特定の実施形態では、ＮＫＧ２ｄ／ＧＰＲＣ５ｄ多重特異性抗体又はその抗原結合断片は、ＮＫＧ２ｄ上に位置する第１のエピトープ及びＧＰＲＣ５ｄ上に位置する第２のエピトープと結合する。いくつかの実施形態では、（ａ）ＮＫＧ２ｄ抗原と結合する第１の結合ドメインと、（ｂ）ＧＰＲＣ５ｄ抗原と結合する第２の結合ドメインとを含む、多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＧＰＲＣ５ｄ抗体が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、（ａ）ＮＫＧ２ｄ抗原と特異的に結合する第１の結合ドメインと、（ｂ）ＧＰＲＣ５ｄ抗原と特異的に結合する第２の結合ドメインとを含む、多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＧＰＲＣ５ｄ抗体が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、（ａ）ＮＫＧ２ｄ抗原上の第１のエピトープと結合する第１の結合ドメインと、（ｂ）ＧＰＲＣ５ｄ抗原上の第２のエピトープと結合する第２の結合ドメインとを含む、多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＧＰＲＣ５ｄ抗体が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、（ａ）ＮＫＧ２ｄ抗原上の第１のエピトープと特異的に結合する第１の結合ドメインと、（ｂ）ＧＰＲＣ５ｄ抗原上の第２のエピトープと特異的に結合する第２の結合ドメインとを含む、多重特異性抗体が本明細書で提供される。
特定の実施形態では、ＮＫＧ２ｄ抗原は、ＮＫ細胞の表面上にある。特定の実施形態では、ＧＰＲＣ５ｄ抗原は、腫瘍細胞の表面上にある。ＮＫ細胞の表面上に存在するＮＫＧ２ｄ及び腫瘍細胞の表面上に存在するＧＰＲＣ５ｄとのＮＫＧ２ｄ／ＧＰＲＣ５ｄ多重特異性抗体の結合は、例えば、腫瘍細胞の死滅をもたらし得る。他の実施形態では、ＮＫ細胞の表面上に存在するＮＫＧ２ｄ及び腫瘍細胞の表面上に存在するＧＰＲＣ５ｄとのＮＫＧ２ｄ／ＧＰＲＣ５ｄ多重特異性抗体の結合は、例えば、ＮＫ細胞の活性化をもたらし得る。
特定の実施形態では、ＮＫｐ４６抗体は、ＶＨ領域とＶＬ領域とを含む。いくつかの実施形態では、ＮＫｐ４６抗体は、単鎖抗体である。いくつかの実施形態では、ＮＫｐ４６抗体は、単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態では、ＮＫｐ４６抗体は、ナノボディである。ある特定の実施形態では、ＮＫｐ４６抗体は、ＶＨＨ抗体である。ある特定の実施形態では、ＮＫｐ４６抗体は、ラマ抗体である。いくつかの実施形態では、ＮＫｐ４６抗体は、単鎖抗体ではない。いくつかの実施形態では、ＮＫｐ４６抗体は、単一ドメイン抗体ではない。いくつかの実施形態では、ＮＫｐ４６抗体は、ナノボディではない。ある特定の実施形態では、ＮＫｐ４６抗体は、ＶＨＨ抗体ではない。ある特定の実施形態では、ＮＫｐ４６抗体は、ラマ抗体ではない。いくつかの実施形態では、ＮＫｐ４６抗体は、多重特異性抗体である。他の実施形態では、ＮＫｐ４６は、二重特異性抗体である。ある特定の実施形態では、多重特異性抗体は、本明細書で提供されるＮＫｐ４６抗体の抗原結合断片を含む。他の実施形態では、二重特異性抗体は、本明細書で提供されるＮＫｐ４６抗体の抗原結合断片を含む。
別の態様では、ＮＫｐ４６と結合する多重特異性抗体が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、二重特異性抗体である。いくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、三重特異性抗体である。いくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、四重特異性抗体である。一実施形態では、多重特異性ＮＫｐ４６抗体は、（ａ）ＮＫｐ４６に結合する第１の結合ドメインと、（ｂ）第２の標的に結合する第２の結合ドメインと、を含む。一実施形態では、多重特異性ＮＫｐ４６抗体は、（ａ）ＮＫｐ４６に結合する第１の結合ドメインと、（ｂ）第２の標的に結合する第２の結合ドメインと、（ｃ）第３の標的に結合する第３の結合ドメインと、を含む。一実施形態では、多重特異性ＮＫｐ４６抗体は、（ａ）ＮＫｐ４６に結合する第１の結合ドメインと、（ｂ）第２の標的に結合する第２の結合ドメインと、（ｃ）第３の標的に結合する第３の結合ドメインと、（ｄ）第４の標的に結合する第４の結合ドメインと、を含む。
別の態様では、（ａ）ＮＫｐ４６と結合する第１の結合ドメインと、（ｂ）ＮＫｐ４６ではない第２の標的と結合する第２の結合ドメインとを含む、二重特異性抗体が本明細書で提供される。別の態様では、（ａ）ＮＫｐ４６と結合する第１の結合ドメインと、（ｂ）腫瘍細胞上で発現される抗原と結合する第２の標的と結合する第２の結合ドメインとを含む、二重特異性抗体が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、ＢＣＭＡに結合する。いくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、ＧＰＲＣ５ｄと結合する。
ある特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体のうちのいずれか１つのＶＨ領域、ＶＬ領域、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及び／又はＶＬ ＣＤＲ３を有するＮＫｐ４６に結合する結合ドメインを含む、抗ＮＫｐ４６二重特異性抗体が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体のうちのいずれか１つのＶＨ領域を有するＮＫｐ４６と結合する結合ドメインを含む、抗ＮＫｐ４６二重特異性抗体が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体のうちのいずれか１つのＶＬ領域を有するＮＫｐ４６と結合する結合ドメインを含む、抗ＮＫｐ４６二重特異性抗体が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体のうちのいずれか１つのＶＨ領域と、本明細書に記載される抗体のうちのいずれか１つのＶＬ領域とを有するＮＫｐ４６と結合する結合ドメインを含む、抗ＮＫｐ４６二重特異性抗体が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、記載される抗体のうちのいずれか１つのＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を有するＮＫｐ４６と結合する結合ドメインを含む、抗ＮＫｐ４６二重特異性抗体が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体のうちのいずれか１つのＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を有するＮＫｐ４６と結合する結合ドメインを含む、抗ＮＫｐ４６二重特異性抗体が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体のうちのいずれか１つのＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３と、本明細書に記載される抗体のうちのいずれか１つのＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３とを有するＮＫｐ４６に結合する結合ドメイン含む、抗ＮＫｐ４６二重特異性抗体が本明細書で提供される。
ある特定の実施形態では、抗ＮＫｐ４６抗体は、二重特異性抗体である。いくつかの実施形態では、抗ＮＫｐ４６二重特異性抗体は、本明細書で提供される抗ＢＣＭＡ抗体のＶＨ領域、ＶＬ領域、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及び／又はＶＬ ＣＤＲ３を有するＢＣＭＡと結合する、第２の結合ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、抗ＮＫｐ４６二重特異性抗体は、本明細書で提供される抗ＢＣＭＡ抗体のＶＨ領域を有するＢＣＭＡと結合する、第２の結合ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、抗ＮＫｐ４６二重特異性抗体は、本明細書で提供される抗ＢＣＭＡ抗体のＶＬ領域を有するＢＣＭＡと結合する、第２の結合ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、抗ＮＫｐ４６二重特異性抗体は、本明細書で提供される抗ＢＣＭＡ抗体のＶＨ領域と、本明細書で提供される抗ＢＣＭＡ抗体のＶＬ領域とを有するＢＣＭＡに結合する、第２の結合ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、抗ＮＫｐ４６二重特異性抗体は、本明細書で提供される抗ＢＣＭＡ抗体のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を有するＢＣＭＡと結合する、第２の結合ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、抗ＮＫｐ４６二重特異性抗体は、本明細書で提供される抗ＢＣＭＡ抗体のＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を有するＢＣＭＡと結合する、第２の結合ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、抗ＮＫｐ４６二重特異性抗体は、本明細書で提供される抗ＢＣＭＡ抗体のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３と、本明細書で提供される抗ＢＣＭＡ抗体のＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３とを有するＢＣＭＡと結合する、第２の結合ドメインを更に含む。
ある特定の実施形態では、抗ＮＫｐ４６抗体は、二重特異性抗体である。いくつかの実施形態では、抗ＮＫｐ４６二重特異性抗体は、本明細書で提供される抗ＧＰＲＣ５ｄ抗体のＶＨ領域、ＶＬ領域、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及び／又はＶＬ ＣＤＲ３を有するＧＰＲＣ５ｄと結合する、第２の結合ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、抗ＮＫｐ４６二重特異性抗体は、本明細書で提供される抗ＧＰＲＣ５ｄ抗体のＶＨ領域を有するＧＰＲＣ５ｄに結合する、第２の結合ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、抗ＮＫｐ４６二重特異性抗体は、本明細書で提供される抗ＧＰＲＣ５ｄ抗体のＶＬ領域を有するＧＰＲＣ５ｄと結合する、第２の結合ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、抗ＮＫｐ４６二重特異性抗体は、本明細書で提供される抗ＧＰＲＣ５ｄ抗体のＶＨ領域と、本明細書で提供される抗ＧＰＲＣ５ｄ抗体のＶＬ領域とを有するＧＰＲＣ５ｄと結合する、第２の結合ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、抗ＮＫｐ４６二重特異性抗体は、本明細書で提供される抗ＧＰＲＣ５ｄ抗体のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を有するＧＰＲＣ５ｄと結合する、第２の結合ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、抗ＮＫｐ４６二重特異性抗体は、本明細書で提供される抗ＧＰＲＣ５ｄ抗体のＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を有するＧＰＲＣ５ｄと結合する、第２の結合ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、抗ＮＫｐ４６二重特異性抗体は、本明細書で提供される抗ＧＰＲＣ５ｄ抗体のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３と、本明細書で提供される抗ＧＰＲＣ５ｄ抗体のＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３とを有するＧＰＲＣ５ｄと結合する、第２の結合ドメインを更に含む。
本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、ＮＫｐ４６と結合する第１の結合ドメインは、記載のとおりであるか、又は上記の抗体に由来する。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの特定の実施形態では、ＮＫｐ４６と結合する第１の結合ドメインは、（ｉ）それぞれ、配列番号６９、７０、及び７１のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨと、（ｉｉ）それぞれ、配列番号７２、７３、及び７４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬと、を含む。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、ＮＫｐ４６と結合する第１の結合ドメインは、（ｉ）それぞれ、配列番号７５、７６、及び７７のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨと、（ｉｉ）それぞれ、配列番号７８、７９、及び８０のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬと、を含む。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、ＮＫｐ４６と結合する第１の結合ドメインは、（ｉ）それぞれ、配列番号８１、８２、及び８３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨと、（ｉｉ）それぞれ、配列番号８４、８５、及び８６のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬと、を含む。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、ＮＫｐ４６と結合する第１の結合ドメインは、（ｉ）それぞれ、配列番号８７、８８、及び８９のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨと、（ｉｉ）それぞれ、配列番号９０、９１、及び９２のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬと、を含む。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、ＮＫｐ４６と結合する第１の結合ドメインは、（ｉ）それぞれ、配列番号９３、９４、及び９５のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨと、（ｉｉ）それぞれ、配列番号９６、９７、及び９８のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬと、を含む。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、ＮＫｐ４６と結合する第１の結合ドメインは、配列番号６７の、それぞれ、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含む、ＶＨを含む。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、ＮＫｐ４６と結合する第１の結合ドメインは、配列番号６８の、それぞれ、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含む、ＶＬを含む。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、ＮＫｐ４６と結合する第１の結合ドメインは、（ｉ）配列番号６７の、それぞれ、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨと、（ｉｉ）配列番号６８の、それぞれ、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬと、を含む。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、ＮＫｐ４６と結合する第１の結合ドメインは、配列番号６７のアミノ酸配列を有するＶＨを含む。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、ＮＫｐ４６と結合する第１の結合ドメインは、配列番号６８のアミノ酸配列を有するＶＬを含む。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、ＮＫｐ４６と結合する第１の結合ドメインは、配列番号６７のアミノ酸配列を有するＶＨと、配列番号６８のアミノ酸配列を有するＶＬとを含む。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、ＮＫｐ４６と結合する第１の結合ドメインは、配列番号６７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨを含む。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、ＮＫｐ４６と結合する第１の結合ドメインは、配列番号６８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬを含む。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、ＮＫｐ４６と結合する第１の結合ドメインは、配列番号６７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨと、配列番号６８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬと、を含む。
いくつかの実施形態では、ＮＫｐ４６に結合する第１の結合ドメインのＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列は、Ｋａｂａｔ番号付けシステムに従う。いくつかの実施形態では、ＮＫｐ４６に結合する第１の結合ドメインのＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列は、Ｃｈｏｔｈｉａ番号付けシステムに従う。いくつかの実施形態では、ＮＫｐ４６に結合する第１の結合ドメインのＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列は、ＡｂＭ番号付けシステムに従う。いくつかの実施形態では、ＮＫｐ４６に結合する第１の結合ドメインのＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列は、Ｃｏｎｔａｃｔ番号付けシステムに従う。いくつかの実施形態では、ＮＫｐ４６に結合する第１の結合ドメインのＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列は、ＩＭＧＴ番号付けシステムに従う。
本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６抗体のいくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、ＮＫｐ４６抗原と結合する。いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、ＮＫｐ４６エピトープと結合する。いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、ＮＫｐ４６に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインのＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３は、ＮＫｐ４６の抗原に対する結合部位を形成する。いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインのＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３は、ＮＫｐ４６のエピトープに対する結合部位を形成する。いくつかの実施形態では、ＮＫｐ４６は、ＮＫ細胞の表面上に存在する。
別の態様では、本明細書に記載されるＮＫｐ４６抗体のうちのいずれかとＮＫｐ４６との結合について競合する多重特異性抗体が本明細書で提供される。別の態様では、本明細書に記載されるＮＫｐ４６抗体のうちのいずれかと同じエピトープと結合する多重特異性抗体が本明細書で提供される。別の態様では、本明細書に記載されるＮＫｐ４６抗体によって結合されたＮＫｐ４６上のエピトープと重複するＮＫｐ４６上のエピトープと結合する多重特異性ＮＫｐ４６抗体が提供される。
一態様では、ＮＫｐ４６との結合についてＮＫｐ４６参照抗体と競合する多重特異性抗体が提供される。別の態様では、ＮＫｐ４６参照抗体と同じＮＫｐ４６エピトープと結合する多重特異性ＮＫｐ４６抗体が提供される。別の態様では、ＮＫｐ４６参照抗体によって結合されたＮＫｐ４６上のエピトープと重複するＮＫｐ４６上のエピトープと結合するＮＫｐ４６抗体が提供される。
一実施形態では、ＮＫｐ４６参照抗体は、（ｉ）配列番号６７のアミノ酸配列を有するＶＨの、それぞれ、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有する、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨと、（ｉｉ）配列番号６８のアミノ酸配列を有するＶＬの、それぞれ、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有する、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬとを含む。
本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６抗体のいくつかの実施形態では、第２の標的は、ＮＫｐ４６抗原ではない。本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６抗体のいくつかの実施形態では、第３の標的は、ＮＫｐ４６抗原ではない。本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６抗体のいくつかの実施形態では、第４の標的は、ＮＫｐ４６抗原ではない。本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６抗体のいくつかの実施形態では、第２の標的は、ＮＫｐ４６抗原ではなく、第３の標的は、ＮＫｐ４６抗原ではない。本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６抗体のいくつかの実施形態では、第２の標的は、ＮＫｐ４６抗原ではなく、第４の標的は、ＮＫｐ４６抗原ではない。本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６抗体のいくつかの実施形態では、第３の標的は、ＮＫｐ４６抗原ではなく、第４の標的は、ＮＫｐ４６抗原ではない。本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６抗体のいくつかの実施形態では、第２の標的は、ＮＫｐ４６抗原ではなく、第３の標的は、ＮＫｐ４６抗原ではなく、第４の標的は、ＮＫｐ４６抗原ではない。本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６抗体のいくつかの実施形態では、第２の標的は、ＮＫｐ４６エピトープではない。本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６抗体のいくつかの実施形態では、第３の標的は、ＮＫｐ４６エピトープではない。本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６抗体のいくつかの実施形態では、第４の標的は、ＮＫｐ４６エピトープではない。本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６抗体のいくつかの実施形態では、第２の標的は、ＮＫｐ４６エピトープではなく、第３の標的は、ＮＫｐ４６エピトープではない。本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６抗体のいくつかの実施形態では、第２の標的は、ＮＫｐ４６エピトープではなく、第４の標的は、ＮＫｐ４６エピトープではない。本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６抗体のいくつかの実施形態では、第３の標的は、ＮＫｐ４６エピトープではなく、第４の標的は、ＮＫｐ４６エピトープではない。本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６抗体のいくつかの実施形態では、第２の標的は、ＮＫｐ４６エピトープではなく、第３の標的は、ＮＫｐ４６エピトープではなく、第４の標的は、ＮＫｐ４６エピトープではない。本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６抗体のいくつかの実施形態では、第２の標的は、ＢＣＭＡである。本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６抗体のいくつかの実施形態では、第２の標的は、ＧＰＲＣ５ｄである。
ＮＫ細胞の表面上に存在するＮＫｐ４６に対する本明細書で提供される多重特異性抗体の結合、及び第２の標的細胞の表面上に存在する第２の標的抗原の結合は、例えば、第２の標的細胞の死滅をもたらすことができる。他の実施形態では、ＮＫ細胞の表面上に存在するＮＫｐ４６との本明細書で提供される多重特異性抗体の結合、及び第２の標的抗原の結合は、例えば、ＮＫ細胞の活性化をもたらすことができる。いくつかの実施形態では、（ａ）ＮＫｐ４６と結合する第１の結合ドメインと、（ｂ）がん細胞の表面上に存在するがん抗原と結合する第２の結合ドメインとを含む、二重特異性抗体が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、がん細胞の表面上の抗原は、腫瘍特異的抗原である。いくつかの実施形態では、がん細胞の表面上の抗原は、腫瘍関連抗原である。いくつかの実施形態では、がん細胞の表面上の抗原は、新抗原である。ある特定の実施形態では、二重特異性抗体の第１の結合ドメインは、ＮＫｐ４６に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、ＮＫｐ４６は、ＮＫ細胞の表面上に存在する。いくつかの実施形態では、二重特異性抗体がＮＫ細胞の表面上のＮＫｐ４６及びがん細胞の表面上の抗原と結合すると、がん細胞は死滅する。
Ｔ細胞の表面上に存在するＮＫｐ４６に対する本明細書で提供される多重特異性抗体の結合、及び第２の標的細胞の表面上に存在する第２の標的抗原の結合は、例えば、第２の標的細胞の死滅をもたらすことができる。他の実施形態では、Ｔ細胞表面上に存在するＮＫｐ４６との本明細書で提供される多重特異性抗体の結合、及び第２の標的抗原の結合は、例えば、Ｔ細胞の活性化をもたらすことができる。いくつかの実施形態では、（ａ）ＮＫｐ４６と結合する第１の結合ドメインと、（ｂ）がん細胞の表面上に存在するがん抗原と結合する第２の結合ドメインとを含む、二重特異性抗体が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、がん細胞の表面上の抗原は、腫瘍特異的抗原である。いくつかの実施形態では、がん細胞の表面上の抗原は、腫瘍関連抗原である。いくつかの実施形態では、がん細胞の表面上の抗原は、新抗原である。ある特定の実施形態では、二重特異性抗体の第１の結合ドメインは、ＮＫｐ４６と特異的に結合する。いくつかの実施形態では、ＮＫｐ４６は、Ｔ細胞の表面上に存在する。いくつかの実施形態では、二重特異性抗体が、Ｔ細胞の表面上のＮＫｐ４６及びがん細胞の表面上の抗原と結合すると、がん細胞は死滅する。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、ガンマデルタＴ細胞である。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、自然リンパ球細胞の粘膜集団である。
別の態様では、（ａ）ＮＫｐ４６と結合する第１の結合ドメインと、（ｂ）ＢＣＭＡと結合する第２の結合ドメインとを含む、二重特異性抗体が本明細書で提供される。ある特定の実施形態では、二重特異性抗体の第１の結合ドメインは、ＮＫｐ４６に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、ＮＫｐ４６は、ＮＫ細胞の表面上に存在する。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡは、細胞の表面上にある。ある特定の実施形態では、ＮＫｐ４６は、ＮＫ細胞の表面上に存在し、ＢＣＭＡは、細胞の表面上にある。いくつかの実施形態では、二重特異性抗体がＮＫ細胞の表面上のＮＫｐ４６及び細胞の表面上のＢＣＭＡに結合すると、表面上にＢＣＭＡを有する細胞が死滅する。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡは、がん細胞の表面上にある。ある特定の実施形態では、ＮＫｐ４６は、ＮＫ細胞の表面上に存在し、ＢＣＭＡは、がん細胞の表面上にある。いくつかの実施形態では、二重特異性抗体が、細胞の表面上のＮＫｐ４６及びがん細胞の表面上のＢＣＭＡと結合すると、がん細胞は死滅する。ある特定の実施形態では、第１の結合ドメインとして本明細書で提供されるＮＫｐ４６抗体のうちのいずれかを含む二重特異性抗体が企図される。加えて、ある特定の実施形態では、第１の結合ドメインとして本明細書で提供されるＮＫｐ４６抗体のうちのいずれかと、ＢＣＭＡと結合する第２の結合ドメインとを含む二重特異性抗体もまた企図される。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される多重特異性抗体は、（ａ）ＮＫｐ４６と結合する第１の結合ドメインと、（ｂ）ＢＣＭＡと結合する第２の結合ドメインと、を含む、二重特異性抗体であり、ＢＣＭＡと結合する第２の結合ドメインは、（ｉ）それぞれ、配列番号１０１、１０２、及び１０３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨと、（ｉｉ）それぞれ、配列番号１０４、１０５、及び１０６のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬと、を含む。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、ＢＣＭＡと結合する第２の結合ドメインは、（ｉ）それぞれ、配列番号１０７、１０８、及び１０９のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨと、（ｉｉ）それぞれ、配列番号１１０、１１１、及び１１２のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬと、を含む。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、ＢＣＭＡと結合する第２の結合ドメインは、（ｉ）それぞれ、配列番号１１３、１１４、及び１１５のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨと、（ｉｉ）それぞれ、配列番号１１６、１１７、及び１１８のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬと、を含む。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、ＢＣＭＡと結合する第２の結合ドメインは、（ｉ）それぞれ、配列番号１１９、１２０、及び１２１のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨと、（ｉｉ）それぞれ、配列番号１２２、１２３、及び１２４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬと、を含む。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、ＢＣＭＡと結合する第２の結合ドメインは、（ｉ）それぞれ、配列番号１２５、１２６、及び１２７のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨと、（ｉｉ）それぞれ、配列番号１２８、１２９、及び１３０のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬと、を含む。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、ＢＣＭＡと結合する第２の結合ドメインは、配列番号９９の、それぞれ、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含む、ＶＨを含む。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、ＢＣＭＡと結合する第２の結合ドメインは、配列番号１００の、それぞれ、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含む、ＶＬを含む。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、ＢＣＭＡと結合する第２の結合ドメインは、（ｉ）配列番号９９の、それぞれ、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨと、（ｉｉ）配列番号１００の、それぞれ、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬと、を含む。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、ＢＣＭＡと結合する第２の結合ドメインは、配列番号９９のアミノ酸配列を有するＶＨを含む。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、ＢＣＭＡと結合する第２の結合ドメインは、配列番号１００のアミノ酸配列を有するＶＬを含む。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、ＢＣＭＡと結合する第２の結合ドメインは、配列番号９９のアミノ酸配列を有するＶＨと、配列番号１００のアミノ酸配列を有するＶＬとを含む。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、ＢＣＭＡと結合する第２の結合ドメインは、配列番号９９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨを含む。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、ＢＣＭＡと結合する第２の結合ドメインは、配列番号１００のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬを含む。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、ＢＣＭＡと結合する第２の結合ドメインは、配列番号９９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨと、配列番号１００のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬと、を含む。
別の態様では、（ａ）ＮＫｐ４６と結合する第１の結合ドメインと、（ｂ）ＧＰＲＣ５ｄと結合する第２の結合ドメインとを含む、二重特異性抗体が本明細書で提供される。ある特定の実施形態では、二重特異性抗体の第１の結合ドメインは、ＮＫｐ４６に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、ＮＫｐ４６は、ＮＫ細胞の表面上に存在する。いくつかの実施形態では、ＧＰＲＣ５ｄは、細胞の表面上にある。ある特定の実施形態では、ＮＫｐ４６は、ＮＫ細胞の表面上に存在し、ＧＰＲＣ５ｄは、細胞の表面上にある。いくつかの実施形態では、二重特異性抗体がＮＫ細胞の表面上のＮＫｐ４６及び細胞の表面上のＧＰＲＣ５ｄと結合すると、表面上にＧＰＲＣ５ｄを有する細胞は、死滅する。いくつかの実施形態では、ＧＰＲＣ５ｄは、がん細胞の表面上にある。ある特定の実施形態では、ＮＫｐ４６は、ＮＫ細胞の表面上に存在し、ＧＰＲＣ５ｄは、がん細胞の表面上にある。いくつかの実施形態では、二重特異性抗体が、ＮＫ細胞の表面上のＮＫｐ４６及びがん細胞の表面上のＧＰＲＣ５ｄと結合すると、がん細胞は、死滅する。ある特定の実施形態では、第１の結合ドメインとして本明細書で提供されるＮＫｐ４６抗体のうちのいずれかを含む二重特異性抗体が企図される。加えて、ある特定の実施形態では、第１の結合ドメインとして本明細書で提供されるＮＫｐ４６抗体のうちのいずれかと、ＧＰＲＣ５ｄに結合する第２の結合ドメインとを含む二重特異性抗体もまた企図される。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される多重特異性抗体は、（ａ）ＮＫｐ４６と結合する第１の結合ドメインと、（ｂ）ＧＰＲＣ５ｄと結合する第２の結合ドメインと、を含む、二重特異性抗体であり、ＧＰＲＣ５ｄと結合する第２の結合ドメインは、（ｉ）それぞれ、配列番号１３３、１３４、及び１３５のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨと、（ｉｉ）それぞれ、配列番号１３６、１３７、及び１３８のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬと、を含む。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、ＧＰＲＣ５ｄと結合する第２の結合ドメインは、（ｉ）それぞれ、配列番号１３９、１４０、及び１４１のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨと、（ｉｉ）それぞれ、配列番号１４２、１４３、及び１４４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬと、を含む。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、ＧＰＲＣ５ｄと結合する第２の結合ドメインは、（ｉ）それぞれ、配列番号１４５、１４６、及び１４７のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨと、（ｉｉ）それぞれ、配列番号１４８、１４９、及び１５０のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬと、を含む。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、ＧＰＲＣ５ｄと結合する第２の結合ドメインは、（ｉ）それぞれ、配列番号１５１、１５２、及び１５３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨと、（ｉｉ）それぞれ、配列番号１５４、１５５、及び１５６のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬと、を含む。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、ＧＰＲＣ５ｄと結合する第２の結合ドメインは、（ｉ）それぞれ、配列番号１５７、１５８、及び１５９のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨと、（ｉｉ）それぞれ、配列番号１６０、１６１、及び１６２のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬと、を含む。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、ＧＰＲＣ５ｄと結合する第２の結合ドメインは、配列番号１３１の、それぞれ、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含む、ＶＨを含む。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、ＧＰＲＣ５ｄと結合する第２の結合ドメインは、配列番号１３２の、それぞれ、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含む、ＶＬを含む。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、ＧＰＲＣ５ｄと結合する第２の結合ドメインは、（ｉ）配列番号１３１の、それぞれ、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨと、（ｉｉ）配列番号１３２の、それぞれ、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬと、を含む。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、ＧＰＲＣ５ｄと結合する第２の結合ドメインは、配列番号１３１のアミノ酸配列を有するＶＨを含む。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、ＧＰＲＣ５ｄと結合する第２の結合ドメインは、配列番号１３２のアミノ酸配列を有するＶＬを含む。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、ＧＰＲＣ５ｄと結合する第２の結合ドメインは、配列番号１３１のアミノ酸配列を有するＶＨと、配列番号１３２のアミノ酸配列を有するＶＬとを含む。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、ＧＰＲＣ５ｄと結合する第２の結合ドメインは、配列番号１３１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨを含む。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、ＧＰＲＣ５ｄと結合する第２の結合ドメインは、配列番号１３２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬを含む。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、ＧＰＲＣ５ｄと結合する第２の結合ドメインは、配列番号１３１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨと、配列番号１３２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬと、を含む。
特定の実施形態では、ノブインホール形式で本明細書で提供されるＮＫｐ４６抗体を含む、多重特異性抗体が提供される。特定の実施形態では、ノブインホール形式で本明細書で提供されるＮＫｐ４６抗体を含む、二重特異性抗体が提供される。特定の実施形態では、ノブインホール形式で本明細書で提供されるＮＫｐ４６抗体を含む、三重特異性抗体が提供される。特定の実施形態では、ノブインホール形式で本明細書で提供されるＮＫｐ４６抗体を含む、四重特異性抗体が提供される。他の特異性は、当該技術分野で周知の方法を使用して、ノブインホール形式で抗体に付加することができる（例えば、ｓｃＦｖをＮ末端又はＣ末端に付加すること）。更に、多重特異性抗体を作製する他の形式及び方法もまた、当該技術分野で既知であり、企図される。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるＮＫｐ４６抗体は、二重特異性抗体に含まれる。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるＮＫｐ４６抗体は、三重特異性抗体に含まれる。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるＮＫｐ４６抗体は、四重特異性抗体に含まれる。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるＮＫｐ４６二重特異性抗体は、多重特異性抗体に含まれる。
ある特定の実施形態では、本明細書で提供される多重特異性抗体は、第１のＮＫｐ４６エピトープと結合する本明細書で提供されるＮＫｐ４６抗体を含む第１の結合ドメインと、第２のエピトープと結合する第２の結合ドメインとを含み、第１のＮＫｐ４６エピトープ及び第２のエピトープは、同じではない。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される二重特異性抗体は、第１のＮＫｐ４６エピトープと結合する本明細書で提供されるＮＫｐ４６抗体を含む第１の結合ドメインと、第２のエピトープと結合する第２の結合ドメインとを含み、第１のＮＫｐ４６エピトープ及び第２のエピトープは、同じではない。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される三重特異性抗体は、第１のＮＫｐ４６ピトープと結合する本明細書で提供されるＮＫｐ４６抗体を含む第１の結合ドメインと、第２のエピトープと結合する第２の結合ドメインと、第３のエピトープと結合する第３の結合ドメインとを含み、第１のＮＫｐ４６エピトープ、第２のエピトープ、及び第３のエピトープは、同じではない。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される四重特異性抗体は、第１のＮＫｐ４６エピトープと結合する本明細書で提供されるＮＫｐ４６抗体を含む第１の結合ドメインと、第２のエピトープと結合する第２の結合ドメインと、第３のエピトープと結合する第３の結合ドメインと、第４のエピトープと結合する第４の結合ドメインとを含み、第１のＮＫｐ４６エピトープ、第２のエピトープ、第３のエピトープ、及び第４のエピトープは、同じではない。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される多重特異性抗体は、第１のＮＫｐ４６抗原と結合する本明細書で提供されるＮＫｐ４６抗体を含む第１の結合ドメインと、第２の抗原と結合する第２の結合ドメインとを含み、第１のＮＫｐ４６抗原及び第２の抗原は、同じではない。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される二重特異性抗体は、第１のＮＫｐ４６抗原と結合する本明細書で提供されるＮＫｐ４６抗体を含む第１の結合ドメインと、第２の抗原と結合する第２の結合ドメインとを含み、第１のＮＫｐ４６抗原及び第２の抗原は、同じではない。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される三重特異性抗体は、第１のＮＫｐ４６抗原と結合する本明細書で提供されるＮＫｐ４６抗体を含む第１の結合ドメインと、第２の抗原と結合する第２の結合ドメインと、第３の抗原と結合する第３の結合ドメインとを含み、第１のＮＫｐ４６抗原、第２の抗原、及び第３の抗原は、同じではない。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される四重特異性抗体は、第１のＮＫｐ４６抗原と結合する本明細書で提供されるＮＫｐ４６抗体を含む第１の結合ドメインと、第２の抗原と結合する第２の結合ドメインと、第３の抗原と結合する第３の結合ドメインと、第４の抗原と結合する第４の結合ドメインとを含み、第１のＮＫｐ４６抗原、第２の抗原、第３の抗原、及び第４の抗原は、同じではない。特定の実施形態では、本明細書で提供されるＮＫｐ４６抗体又はその抗原結合断片は、ＮＫｐ４６と特異的に結合する。
いくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含む。いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含む。いくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含む。いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、第２の結合ドメインは、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含む。いくつかの実施形態では、ＮＫｐ４６抗体は、単一ドメイン抗体又はナノボディではない。いくつかの実施形態では、第３の結合ドメインは、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含む。いくつかの実施形態では、第４の結合ドメインは、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含む。
ある特定の実施形態では、ＮＫｐ４６多重特異性抗体又はその抗原結合断片は、ＮＫｐ４６上に位置する第１のエピトープ及び第２の標的抗原の第２のエピトープと結合する。いくつかの実施形態では、（ａ）ＮＫｐ４６抗原と結合する第１の結合ドメインと、（ｂ）第２の標的抗原と結合する第２の結合ドメインとを含む、多重特異性抗体が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、（ａ）ＮＫｐ４６抗原と特異的に結合する第１の結合ドメインと、（ｂ）第２の標的抗原と特異的に結合する第２の結合ドメインとを含む、多重特異性抗体が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、（ａ）ＮＫｐ４６抗原上の第１のエピトープと結合する第１の結合ドメインと、（ｂ）第２の標的抗原上の第２のエピトープと結合する第２の結合ドメインとを含む、多重特異性抗体が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、（ａ）ＮＫｐ４６抗原上の第１のエピトープと特異的に結合する第１の結合ドメインと、（ｂ）第２の標的抗原上の第２のエピトープと特異的に結合する第２の結合ドメインとを含む、多重特異性抗体が本明細書で提供される。
特定の実施形態では、ＮＫｐ４６抗原は、ＮＫ細胞の表面上にある。ある特定の実施形態では、第２の標的抗原は、ＮＫｐ４６ではない。ＮＫ細胞の表面上に存在するＮＫｐ４６とのＮＫｐ４６多重特異性抗体の結合、及び第２の標的細胞の表面上に存在する第２の標的抗原の結合は、例えば、第２の標的細胞の死滅をもたらすことができる。他の実施形態では、ＮＫ細胞の表面上に存在するＮＫｐ４６とのＮＫｐ４６多重特異性抗体の結合、及び第２の標的抗原の結合は、例えば、ＮＫ細胞の活性化をもたらすことができる。
特定の実施形態では、ＮＫｐ４６抗原は、Ｔ細胞の表面上に存在する。ある特定の実施形態では、第２の標的抗原は、ＮＫｐ４６ではない。Ｔ細胞の表面上に存在するＮＫｐ４６とのＮＫｐ４６多重特異性抗体の結合、及び第２の標的細胞の表面上に存在する第２の標的抗原の結合は、例えば、第２の標的細胞の死滅をもたらすことができる。他の実施形態では、Ｔ細胞の表面上に存在するＮＫｐ４６とのＮＫｐ４６多重特異性抗体の結合、及び第２の標的抗原の結合は、例えば、Ｔ細胞の活性化をもたらすことができる。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、ガンマデルタＴ細胞である。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、自然リンパ球である。
別の態様では、ＮＫｐ４６と結合する第１の結合ドメインと、ＢＣＭＡと結合する第２の結合ドメインとを含む、多重特異性抗体（「多重特異性ＮＫｐ４６／ＢＣＭＡ抗体」）が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、多重特異性ＮＫｐ４６／ＢＣＭＡ抗体は、二重特異性抗体である。いくつかの実施形態では、多重特異性ＮＫｐ４６／ＢＣＭＡ抗体は、三重特異性抗体である。いくつかの実施形態では、多重特異性ＮＫｐ４６／ＢＣＭＡ抗体は、四重特異性抗体である。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６／ＢＣＭＡ抗体は、（ａ）ＮＫｐ４６と結合する第１の結合ドメインと、（ｂ）ＢＣＭＡと結合する第２の結合ドメインとを含む。一実施形態では、多重特異性ＮＫｐ４６／ＢＣＭＡ抗体は、（ａ）ＮＫｐ４６と結合する第１の結合ドメインと、（ｂ）ＢＣＭＡと結合する第２の結合ドメインと、（ｃ）第３の標的と結合する第３の結合ドメインとを含む。一実施形態では、多重特異性ＮＫｐ４６／ＢＣＭＡ抗体は、（ａ）ＮＫｐ４６と結合する第１の結合ドメインと、（ｂ）ＢＣＭＡと結合する第２の結合ドメインと、（ｃ）第３の標的に結合する第３の結合ドメインと、（ｄ）第４の標的と結合する第４の結合ドメインとを含む。
本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６／ＢＣＭＡ抗体のいくつかの実施形態では、ＮＫｐ４６と結合する第１の結合ドメインは、配列番号６７のアミノ酸配列を有するＶＨの、それぞれ、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有する、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含む、ＶＨを含む。本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６／ＢＣＭＡ抗体のいくつかの実施形態では、ＮＫｐ４６と結合する第１の結合ドメインは、配列番号６８のアミノ酸配列を有するＶＬの、それぞれ、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有する、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含む、ＶＬを含む。本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６／ＢＣＭＡ抗体のいくつかの実施形態では、ＮＫｐ４６と結合する第１の結合ドメインは、（ｉ）配列番号６７のアミノ酸配列を有するＶＨの、それぞれ、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有する、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含む、ＶＨと、（ｉｉ）配列番号６８のアミノ酸配列を有するＶＬの、それぞれ、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有する、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含む、ＶＬとを含む。本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６／ＢＣＭＡ抗体のいくつかの実施形態では、ＮＫｐ４６と結合する第１の結合ドメインは、配列番号６７のアミノ酸配列を有するＶＨを含む。本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６／ＢＣＭＡ抗体のいくつかの実施形態では、ＮＫｐ４６と結合する第１の結合ドメインは、配列番号６８のアミノ酸配列を有するＶＬを含む。本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６／ＢＣＭＡ抗体のいくつかの実施形態では、ＮＫｐ４６と結合する第１の結合ドメインは、配列番号６７のアミノ酸配列を有するＶＨと、配列番号６８のアミノ酸配列を有するＶＬとを含む。
本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６／ＢＣＭＡ抗体のいくつかの実施形態では、ＮＫｐ４６と結合する第１の結合ドメインのＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列は、Ｋａｂａｔ番号付けシステムに従う。本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６／ＢＣＭＡ抗体のいくつかの実施形態では、ＮＫｐ４６と結合する第１の結合ドメインのＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列は、Ｃｈｏｔｈｉａ番号付けシステムに従う。本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６／ＢＣＭＡ抗体のいくつかの実施形態では、ＮＫｐ４６と結合する第１の結合ドメインのＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列は、ＡｂＭ番号付けシステムに従う。本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６／ＢＣＭＡ抗体のいくつかの実施形態では、ＮＫｐ４６と結合する第１の結合ドメインのＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列は、Ｃｏｎｔａｃｔ番号付けシステムに従う。本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６／ＢＣＭＡ抗体のいくつかの実施形態では、ＮＫｐ４６と結合する第１の結合ドメインのＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列は、ＩＭＧＴ番号付けシステムに従う。
本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６／ＢＣＭＡ抗体のいくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、ＮＫｐ４６抗原と結合する。本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６／ＢＣＭＡ抗体のいくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、ＮＫｐ４６エピトープと結合する。本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６／ＢＣＭＡ抗体のいくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、ＮＫｐ４６と特異的に結合する。本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６／ＢＣＭＡ抗体のいくつかの実施形態では、第１の結合ドメインのＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３は、ＮＫｐ４６の抗原に対する結合部位を形成する。本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６／ＢＣＭＡ抗体のいくつかの実施形態では、第１の結合ドメインのＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３は、ＮＫｐ４６のエピトープに対する結合部位を形成する。本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６／ＢＣＭＡ抗体のいくつかの実施形態では、ＮＫｐ４６は、ＮＫ細胞の表面上に存在する。
本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６／ＢＣＭＡ抗体のいくつかの実施形態では、ＢＣＭＡと結合する第２の結合ドメインは、配列番号９９の、それぞれ、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含む、ＶＨを含む。本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６／ＢＣＭＡ抗体のいくつかの実施形態では、ＢＣＭＡと結合する第２の結合ドメインは、配列番号１００の、それぞれ、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含む、ＶＬを含む。本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６／ＢＣＭＡ抗体のいくつかの実施形態では、ＢＣＭＡと結合する第２の結合ドメインは、（ｉ）配列番号９９の、それぞれ、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨと、（ｉｉ）配列番号１００の、それぞれ、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬと、を含む。本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６／ＢＣＭＡ抗体のいくつかの実施形態では、ＢＣＭＡと結合する第２の結合ドメインは、配列番号９９のアミノ酸配列を有するＶＨを含む。本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６／ＢＣＭＡ抗体のいくつかの実施形態では、ＢＣＭＡと結合する第２の結合ドメインは、配列番号１００のアミノ酸配列を有するＶＬを含む。本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６／ＢＣＭＡ抗体のいくつかの実施形態では、ＢＣＭＡと結合する第２の結合ドメインは、配列番号９９のアミノ酸配列を有するＶＨと、配列番号１００のアミノ酸配列を有するＶＬとを含む。
本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６／ＢＣＭＡ抗体のいくつかの実施形態では、ＢＣＭＡと結合する第２の結合ドメインのＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列は、Ｋａｂａｔ番号付けシステムに従う。本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６／ＢＣＭＡ抗体のいくつかの実施形態では、ＢＣＭＡと結合する第２の結合ドメインのＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列は、Ｃｈｏｔｈｉａ番号付けシステムに従う。本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６／ＢＣＭＡ抗体のいくつかの実施形態では、ＢＣＭＡと結合する第２の結合ドメインのＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列は、ＡｂＭ番号付けシステムに従う。本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６／ＢＣＭＡ抗体のいくつかの実施形態では、ＢＣＭＡと結合する第２の結合ドメインのＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列は、Ｃｏｎｔａｃｔ番号付けシステムに従う。本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６／ＢＣＭＡ抗体のいくつかの実施形態では、ＢＣＭＡと結合する第２の結合ドメインのＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列は、ＩＭＧＴ番号付けシステムに従う。
本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６／ＢＣＭＡ抗体のいくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、ＢＣＭＡ抗原と結合する。本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６／ＢＣＭＡ抗体のいくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、ＢＣＭＡエピトープと結合する。本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６／ＢＣＭＡ抗体のいくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、ＢＣＭＡと特異的に結合する。本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６／ＢＣＭＡ抗体のいくつかの実施形態では、第２の結合ドメインのＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３は、ＢＣＭＡの抗原に対する結合部位を形成する。いくつかの実施形態では、第２の結合ドメインのＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３は、ＢＣＭＡのエピトープに対する結合部位を形成する。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡは、腫瘍細胞の表面上に存在する。
本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６／ＢＣＭＡ抗体のいくつかの実施形態では、第３の標的は、ＮＫｐ４６抗原ではない。本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６／ＢＣＭＡ抗体のいくつかの実施形態では、第４の標的は、ＮＫｐ４６抗原ではない。本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６／ＢＣＭＡ抗体のいくつかの実施形態では、第３の標的は、ＮＫｐ４６抗原ではなく、第４の標的は、ＮＫｐ４６抗原ではない。本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６／ＢＣＭＡ抗体のいくつかの実施形態では、第３の標的は、ＢＣＭＡ抗原ではない。本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６／ＢＣＭＡ抗体のいくつかの実施形態では、第４の標的は、ＢＣＭＡ抗原ではない。本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６／ＢＣＭＡ抗体のいくつかの実施形態では、第３の標的は、ＢＣＭＡ抗原ではなく、第４の標的は、ＢＣＭＡ抗原ではない。本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６／ＢＣＭＡ抗体のいくつかの実施形態では、第３の標的は、ＮＫｐ４６エピトープではない。本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６／ＢＣＭＡ抗体のいくつかの実施形態では、第４の標的は、ＮＫｐ４６エピトープではない。本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６／ＢＣＭＡ抗体のいくつかの実施形態では、第３の標的は、ＮＫｐ４６エピトープではなく、第４の標的は、ＮＫｐ４６エピトープではない。本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６／ＢＣＭＡ抗体のいくつかの実施形態では、第３の標的は、ＢＣＭＡエピトープではない。本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６／ＢＣＭＡ抗体のいくつかの実施形態では、第４の標的は、ＢＣＭＡエピトープではない。本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６／ＢＣＭＡ抗体のいくつかの実施形態では、第３の標的は、ＢＣＭＡエピトープではなく、第４の標的は、ＢＣＭＡエピトープではない。
特定の実施形態では、標的は、哺乳動物に由来する。特定の実施形態では、標的は、ラットに由来する。特定の実施形態では、標的は、マウスに由来する。特定の実施形態では、標的は、霊長類に由来する。特定の実施形態では、標的は、ヒトに由来する。
特定の実施形態では、ノブインホール形式の多重特異性ＮＫｐ４６／ＢＣＭＡ抗体が提供される。特定の実施形態では、ノブインホール形式の二重特異性ＮＫｐ４６／ＢＣＭＡ抗体が提供される。特定の実施形態では、ノブインホール形式の三重特異性抗体が提供される。特定の実施形態では、ノブインホール形式の四重特異性抗体が提供される。他の特異性は、当該技術分野で周知の方法を使用して、ノブインホール形式で抗体に付加することができる（例えば、ｓｃＦｖをＮ末端又はＣ末端に付加すること）。更に、多重特異性抗体を作製する他の形式及び方法もまた、当該技術分野で既知であり、企図される。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるＮＫｐ４６／ＢＣＭＡ抗体は、二重特異性抗体に含まれる。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるＮＫｐ４６／ＢＣＭＡ抗体は、三重特異性抗体に含まれる。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるＮＫｐ４６／ＢＣＭＡ抗体は、四重特異性抗体に含まれ得る。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるＮＫｐ４６／ＢＣＭＡ二重特異性抗体は、多重特異性抗体に含まれる。
ある特定の実施形態では、本明細書で提供される三重特異性ＮＫｐ４６／ＢＣＭＡ抗体は、ＮＫｐ４６エピトープと結合する本明細書で提供されるＮＫｐ４６抗体を含む第１の結合ドメインと、ＢＣＭＡエピトープと結合する本明細書で提供されるＢＣＭＡ抗体を含む第２の結合ドメインと、第３のエピトープと結合する第３の結合ドメインとを含み、ＮＫｐ４６エピトープ、ＢＣＭＡエピトープ、及び第３のエピトープは、同じではない。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される四重特異性抗体は、ＮＫｐ４６エピトープと結合する本明細書で提供されるＮＫｐ４６抗体を含む第１の結合ドメインと、ＢＣＭＡエピトープと結合する本明細書で提供されるＢＣＭＡ抗体を含む第２の結合ドメインと、第３のエピトープと結合する第３の結合ドメインと、第４のエピトープと結合する第４の結合ドメインとを含み、ＮＫｐ４６エピトープ、ＢＣＭＡエピトープ、第３のエピトープ、及び第４のエピトープは、同じではない。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される三重特異性抗体は、ＮＫｐ４６抗原と結合する本明細書で提供されるＮＫｐ４６抗体を含む第１の結合ドメインと、ＢＣＭＡ抗原と結合する本明細書で提供されるＢＣＭＡ抗体を含む第２の結合ドメインと、第３の抗原と結合する第３の結合ドメインとを含み、ＮＫｐ４６抗原、ＢＣＭＡ抗原、及び第３の抗原は、同じではない。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される四重特異性抗体は、ＮＫｐ４６抗原、ＢＣＭＡ抗原と結合する本明細書で提供されるＢＣＭＡ抗体を含む第２の結合ドメイン、第３の抗原と結合する第３の結合ドメイン、第４の抗原と結合する第４の結合ドメインと結合し、
ＮＫｐ４６抗原、ＢＣＭＡ抗原、第３の抗原、及び第４の抗原は、同じではない。本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６／ＢＣＭＡ抗体のある特定の実施形態では、ＮＫｐ４６と結合する第１の結合ドメインは、ＮＫｐ４６と特異的に結合する。本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６／ＢＣＭＡ抗体の他の実施形態では、ＢＣＭＡと結合する第２の結合ドメインは、ＢＣＭＡと特異的に結合する。本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６／ＢＣＭＡ抗体の更に他の実施形態では、ＮＫｐ４６と結合する第１の結合ドメインは、ＮＫｐ４６と特異的に結合し、ＢＣＭＡと結合する第２の結合ドメインは、ＢＣＭＡと特異的に結合する。
いくつかの実施形態では、多重特異性ＮＫｐ４６／ＢＣＭＡ抗体は、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含む。いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含む。いくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含む。いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、第２の結合ドメインは、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含む。いくつかの実施形態では、ＮＫｐ４６抗体は、単一ドメイン抗体又はナノボディではない。いくつかの実施形態では、第３の結合ドメインは、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含む。いくつかの実施形態では、第４の結合ドメインは、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含む。
ある特定の実施形態では、ＮＫｐ４６／ＢＣＭＡ多重特異性抗体又はその抗原結合断片は、ＮＫｐ４６上に位置する第１のエピトープ及びＢＣＭＡ上に位置する第２のエピトープと結合する。いくつかの実施形態では、（ａ）ＮＫｐ４６抗原と結合する第１の結合ドメインと、（ｂ）ＢＣＭＡ抗原と結合する第２の結合ドメインとを含む、多重特異性ＮＫｐ４６／ＢＣＭＡ抗体が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、（ａ）ＮＫｐ４６抗原と特異的に結合する第１の結合ドメインと、（ｂ）ＢＣＭＡ抗原と特異的に結合する第２の結合ドメインとを含む、多重特異性ＮＫｐ４６／ＢＣＭＡ抗体が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、（ａ）ＮＫｐ４６抗原上の第１のエピトープと結合する第１の結合ドメインと、（ｂ）ＢＣＭＡ抗原上の第２のエピトープと結合する第２の結合ドメインとを含む、多重特異性ＮＫｐ４６／ＢＣＭＡ抗体が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、（ａ）ＮＫｐ４６抗原上の第１のエピトープと特異的に結合する第１の結合ドメインと、（ｂ）ＢＣＭＡ抗原上の第２のエピトープと特異的に結合する第２の結合ドメインとを含む、多重特異性抗体が本明細書で提供される。
特定の実施形態では、ＮＫｐ４６抗原は、ＮＫ細胞の表面上にある。特定の実施形態では、ＢＣＭＡ抗原は、腫瘍細胞の表面上にある。ＮＫ細胞の表面上に存在するＮＫｐ４６及び腫瘍細胞の表面上に存在するＢＣＭＡとのＮＫｐ４６／ＢＣＭＡ多重特異性抗体の結合は、例えば、腫瘍細胞の死滅をもたらすことができる。他の実施形態では、ＮＫ細胞の表面上に存在するＮＫｐ４６及び腫瘍細胞の表面上に存在するＢＣＭＡとのＮＫｐ４６／ＢＣＭＡ多重特異性抗体の結合は、例えば、ＮＫ細胞の活性化をもたらすことができる。
特定の実施形態では、ＮＫｐ４６抗原は、Ｔ細胞の表面上に存在する。ある特定の実施形態では、ＢＣＭＡ抗原は、腫瘍細胞の表面上にある。Ｔ細胞の表面上に存在するＮＫｐ４６及び腫瘍細胞の表面上に存在するＢＣＭＡとのＮＫｐ４６／ＢＣＭＡ多重特異性抗体の結合は、例えば、腫瘍細胞の死滅をもたらすことができる。他の実施形態では、Ｔ細胞の表面上に存在するＮＫｐ４６及び腫瘍細胞の表面上に存在するＢＣＭＡとのＮＫｐ４６／ＢＣＭＡ多重特異性抗体の結合は、例えば、Ｔ細胞の活性化をもたらすことができる。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、ガンマデルタＴ細胞である。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、自然リンパ球である。
別の態様では、ＮＫｐ４６と結合する第１の結合ドメインと、ＧＰＲＣ５ｄと結合する第２の結合ドメインとを含む、多重特異性抗体（「多重特異性ＮＫｐ４６／ＧＰＲＣ５ｄ抗体」）が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、多重特異性ＮＫｐ４６／ＧＰＲＣ５ｄ抗体は、二重特異性抗体である。いくつかの実施形態では、多重特異性ＮＫｐ４６／ＧＰＲＣ５ｄ抗体は、三重特異性抗体である。いくつかの実施形態では、多重特異性ＮＫｐ４６／ＧＰＲＣ５ｄ抗体は、四重特異性抗体である。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６／ＧＰＲＣ５ｄ抗体は、（ａ）ＮＫｐ４６と結合する第１の結合ドメインと、（ｂ）ＧＰＲＣ５ｄと結合する第２の結合ドメインとを含む。一実施形態では、多重特異性ＮＫｐ４６／ＧＰＲＣ５ｄ抗体は、（ａ）ＮＫｐ４６と結合する第１の結合ドメインと、（ｂ）ＧＰＲＣ５ｄと結合する第２の結合ドメインと、（ｃ）第３の標的と結合する第３の結合ドメインとを含む。一実施形態では、多重特異性ＮＫｐ４６／ＧＰＲＣ５ｄ抗体は、（ａ）ＮＫｐ４６と結合する第１の結合ドメインと、（ｂ）ＧＰＲＣ５ｄと結合する第２の結合ドメインと、（ｃ）第３の標的と結合する第３の結合ドメインと、（ｄ）第４の標的と結合する第４の結合ドメインとを含む。
本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６／ＧＰＲＣ５ｄ抗体のいくつかの実施形態では、ＮＫｐ４６と結合する第１の結合ドメインは、配列番号６７のアミノ酸配列を有するＶＨの、それぞれ、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有する、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含む、ＶＨを含む。本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６／ＧＰＲＣ５ｄ抗体のいくつかの実施形態では、ＮＫｐ４６と結合する第１の結合ドメインは、配列番号６８のアミノ酸配列を有するＶＬの、それぞれ、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有する、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含む、ＶＬを含む。本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６／ＧＰＲＣ５ｄ抗体のいくつかの実施形態では、ＮＫｐ４６と結合する第１の結合ドメインは、（ｉ）配列番号６７のアミノ酸配列を有するＶＨの、それぞれ、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有する、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含む、ＶＨと、（ｉｉ）配列番号６８のアミノ酸配列を有するＶＬの、それぞれ、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有する、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含む、ＶＬとを含む。本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６／ＧＰＲＣ５ｄ抗体のいくつかの実施形態では、ＮＫｐ４６と結合する第１の結合ドメインは、配列番号６７のアミノ酸配列を有するＶＨを含む。本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６／ＧＰＲＣ５ｄ抗体のいくつかの実施形態では、ＮＫｐ４６と結合する第１の結合ドメインは、配列番号６８のアミノ酸配列を有するＶＬを含む。本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６／ＧＰＲＣ５ｄ抗体のいくつかの実施形態では、ＮＫｐ４６と結合する第１の結合ドメインは、配列番号６７のアミノ酸配列を有するＶＨと、配列番号６８のアミノ酸配列を有するＶＬとを含む。
本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６／ＧＰＲＣ５ｄ抗体のいくつかの実施形態では、ＮＫｐ４６と結合する第１の結合ドメインのＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列は、Ｋａｂａｔ番号付けシステムに従う。本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６／ＧＰＲＣ５ｄ抗体のいくつかの実施形態では、ＮＫｐ４６と結合する第１の結合ドメインのＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列は、Ｃｈｏｔｈｉａ番号付けシステムに従う。本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６／ＧＰＲＣ５ｄ抗体のいくつかの実施形態では、ＮＫｐ４６と結合する第１の結合ドメインのＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列は、ＡｂＭ番号付けシステムに従う。本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６／ＧＰＲＣ５ｄ抗体のいくつかの実施形態では、ＮＫｐ４６と結合する第１の結合ドメインのＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列は、Ｃｏｎｔａｃｔ番号付けシステムに従う。本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６／ＧＰＲＣ５ｄ抗体のいくつかの実施形態では、ＮＫｐ４６と結合する第１の結合ドメインのＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列は、ＩＭＧＴ番号付けシステムに従う。
本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６／ＧＰＲＣ５ｄ抗体のいくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、ＮＫｐ４６抗原と結合する。本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６／ＧＰＲＣ５ｄ抗体のいくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、ＮＫｐ４６エピトープと結合する。本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６／ＧＰＲＣ５ｄ抗体のいくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、ＮＫｐ４６と特異的に結合する。本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６／ＧＰＲＣ５ｄ抗体のいくつかの実施形態では、第１の結合ドメインのＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３は、ＮＫｐ４６の抗原に対する結合部位を形成する。本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６／ＧＰＲＣ５ｄ抗体のいくつかの実施形態では、第１の結合ドメインのＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３は、ＮＫｐ４６のエピトープに対する結合部位を形成する。本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６／ＧＰＲＣ５ｄ抗体のいくつかの実施形態では、ＮＫｐ４６は、ＮＫ細胞の表面上に存在する。
本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６／ＧＰＲＣ５ｄ抗体のいくつかの実施形態では、ＧＰＲＣ５ｄと結合する第２の結合ドメインは、配列番号１３１の、それぞれ、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含む、ＶＨを含む。本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６／ＧＰＲＣ５ｄ抗体のいくつかの実施形態では、ＧＰＲＣ５ｄと結合する第２の結合ドメインは、配列番号１３２の、それぞれ、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含む、ＶＬを含む。本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６／ＧＰＲＣ５ｄ抗体のいくつかの実施形態では、ＧＰＲＣ５ｄと結合する第２の結合ドメインは、（ｉ）配列番号１３１の、それぞれ、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含む、ＶＨと、（ｉｉ）配列番号１３２の、それぞれ、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含む、ＶＬとを含む。本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６／ＧＰＲＣ５ｄ抗体のいくつかの実施形態では、ＧＰＲＣ５ｄと結合する第２の結合ドメインは、配列番号１３１のアミノ酸配列を有するＶＨを含む。本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６／ＧＰＲＣ５ｄ抗体のいくつかの実施形態では、ＧＰＲＣ５ｄと結合する第２の結合ドメインは、配列番号１３２のアミノ酸配列を有するＶＬを含む。本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６／ＧＰＲＣ５ｄ抗体のいくつかの実施形態では、ＧＰＲＣ５ｄと結合する第２の結合ドメインは、配列番号１３１のアミノ酸配列を有するＶＨと、配列番号１３２のアミノ酸配列を有するＶＬとを含む。
本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６／ＧＰＲＣ５ｄ抗体のいくつかの実施形態では、ＧＰＲＣ５ｄと結合する第２の結合ドメインのＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列は、Ｋａｂａｔ番号付けシステムに従う。本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６／ＧＰＲＣ５ｄ抗体のいくつかの実施形態では、ＧＰＲＣ５ｄと結合する第２の結合ドメインのＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列は、Ｃｈｏｔｈｉａ番号付けシステムに従う。本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６／ＧＰＲＣ５ｄ抗体のいくつかの実施形態では、ＧＰＲＣ５ｄと結合する第２の結合ドメインのＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列は、ＡｂＭ番号付けシステムに従う。本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６／ＧＰＲＣ５ｄ抗体のいくつかの実施形態では、ＧＰＲＣ５ｄと結合する第２の結合ドメインのＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列は、Ｃｏｎｔａｃｔ番号付けシステムに従う。本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６／ＧＰＲＣ５ｄ抗体のいくつかの実施形態では、ＧＰＲＣ５ｄと結合する第２の結合ドメインのＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列は、ＩＭＧＴ番号付けシステムに従う。
本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６／ＧＰＲＣ５ｄ抗体のいくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、ＧＰＲＣ５ｄ抗原と結合する。本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６／ＧＰＲＣ５ｄ抗体のいくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、ＧＰＲＣ５ｄエピトープと結合する。本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６／ＧＰＲＣ５ｄ抗体のいくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、ＧＰＲＣ５ｄと特異的に結合する。本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６／ＧＰＲＣ５ｄ抗体のいくつかの実施形態では、第２の結合ドメインのＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３は、ＧＰＲＣ５ｄの抗原に対する結合部位を形成する。いくつかの実施形態では、第２の結合ドメインのＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３は、ＧＰＲＣ５ｄのエピトープに対する結合部位を形成する。いくつかの実施形態では、ＧＰＲＣ５ｄは、腫瘍細胞の表面上に存在する。
本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６／ＧＰＲＣ５ｄ抗体のいくつかの実施形態では、第３の標的は、ＮＫｐ４６抗原ではない。本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６／ＧＰＲＣ５ｄ抗体のいくつかの実施形態では、第４の標的は、ＮＫｐ４６抗原ではない。本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６／ＧＰＲＣ５ｄ抗体のいくつかの実施形態では、第３の標的は、ＮＫｐ４６抗原ではなく、第４の標的は、ＮＫｐ４６抗原ではない。本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６／ＧＰＲＣ５ｄ抗体のいくつかの実施形態では、第３の標的は、ＧＰＲＣ５ｄ抗原ではない。本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６／ＧＰＲＣ５ｄ抗体のいくつかの実施形態では、第４の標的は、ＧＰＲＣ５ｄ抗原ではない。本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６／ＧＰＲＣ５ｄ抗体のいくつかの実施形態では、第３の標的は、ＧＰＲＣ５ｄ抗原ではなく、第４の標的はＧＰＲＣ５ｄ抗原ではない。本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６／ＧＰＲＣ５ｄ抗体のいくつかの実施形態では、第３の標的は、ＮＫｐ４６エピトープではない。本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６／ＧＰＲＣ５ｄ抗体のいくつかの実施形態では、第４の標的は、ＮＫｐ４６エピトープではない。本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６／ＧＰＲＣ５ｄ抗体のいくつかの実施形態では、第３の標的は、ＮＫｐ４６エピトープではなく、第４の標的は、ＮＫｐ４６エピトープではない。本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６／ＧＰＲＣ５ｄ抗体のいくつかの実施形態では、第３の標的は、ＧＰＲＣ５ｄエピトープではない。本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６／ＧＰＲＣ５ｄ抗体のいくつかの実施形態では、第４の標的は、ＧＰＲＣ５ｄエピトープではない。本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６／ＧＰＲＣ５ｄ抗体のいくつかの実施形態では、第３の標的は、ＧＰＲＣ５ｄエピトープではなく、第４の標的はＧＰＲＣ５ｄエピトープではない。
特定の実施形態では、標的は、哺乳動物に由来する。特定の実施形態では、標的は、ラットに由来する。特定の実施形態では、標的は、マウスに由来する。特定の実施形態では、標的は、霊長類に由来する。特定の実施形態では、標的は、ヒトに由来する。
特定の実施形態では、ノブインホール形式の多重特異性ＮＫｐ４６／ＧＰＲＣ５ｄ抗体が提供される。特定の実施形態では、ノブインホール形式の二重特異性ＮＫｐ４６／ＧＰＲＣ５ｄ抗体が提供される。具体的な実施形態では、ノブインホール形式の三重特異性抗体が提供される。具体的な実施形態では、ノブインホール形式の四重特異性抗体が提供される。他の特異性は、当該技術分野で周知の方法を使用して、ノブインホール形式で抗体に付加することができる（例えば、ｓｃＦｖをＮ末端又はＣ末端に付加すること）。更に、多重特異性抗体を作製する他の形式及び方法もまた、当該技術分野で既知であり、企図される。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるＮＫｐ４６／ＧＰＲＣ５ｄ抗体は、二重特異性抗体に含まれる。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるＮＫｐ４６／ＧＰＲＣ５ｄ抗体は、三重特異性抗体に含まれる。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるＮＫｐ４６／ＧＰＲＣ５ｄ抗体は、四重特異性抗体に含まれる。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるＮＫｐ４６／ＧＰＲＣ５ｄ二重特異性抗体は、多重特異性抗体に含まれる。
ある特定の実施形態では、本明細書で提供される三重特異性ＮＫｐ４６／ＧＰＲＣ５ｄ抗体は、ＮＫｐ４６エピトープと結合する本明細書で提供されるＮＫｐ４６抗体を含む第１の結合ドメインと、ＧＰＲＣ５ｄエピトープと結合する本明細書で提供されるＧＰＲＣ５ｄ抗体を含む第２の結合ドメインと、第３のエピトープと結合する第３の結合ドメインとを含み、ＮＫｐ４６エピトープ、ＧＰＲＣ５ｄエピトープ、及び第３のエピトープは、同じではない。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される四重特異性抗体は、ＮＫｐ４６エピトープと結合する本明細書で提供されるＮＫｐ４６抗体を含む第１の結合ドメインと、ＧＰＲＣ５ｄエピトープと結合する本明細書で提供されるＧＰＲＣ５ｄ抗体を含む第２の結合ドメインと、第３のエピトープと結合する第３の結合ドメインと、第４のエピトープと結合する第４の結合ドメインとを含み、ＮＫｐ４６エピトープ、ＧＰＲＣ５ｄエピトープ、第３のエピトープ、及び第４エピトープは、同じではない。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される三重特異性抗体は、ＮＫｐ４６抗原と結合する本明細書で提供されるＮＫｐ４６抗体を含む第１の結合ドメインと、ＧＰＲＣ５ｄ抗原と結合する本明細書で提供されるＧＰＲＣ５ｄ抗体を含む第２の結合ドメインと、第３の抗原と結合する第３の結合ドメインとを含み、ＮＫｐ４６抗原、ＧＰＲＣ５ｄ抗原、第３の抗原は、同じではない。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される四重特異性抗体は、ＮＫｐ４６抗原、ＧＰＲＣ５ｄ抗原と結合する本明細書で提供されるＧＰＲＣ５ｄ抗体を含む第２の結合ドメイン、第３の抗原と結合する第３の結合ドメイン、及び第４の抗原と結合する第４の結合ドメインと結合し、ＮＫｐ４６抗原、ＧＰＲＣ５ｄ抗原、第３の抗原、及び第４の抗原は、同じではない。ある本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６／ＧＰＲＣ５ｄ抗体の特定の実施形態では、ＮＫｐ４６と結合する第１の結合ドメインは、ＮＫｐ４６と特異的に結合する。本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６／ＧＰＲＣ５ｄ抗体の他の実施形態では、ＧＰＲＣ５ｄと結合する第２の結合ドメインは、ＧＰＲＣ５ｄと特異的に結合する。本明細書で提供される多重特異性ＮＫｐ４６／ＧＰＲＣ５ｄ抗体の更に他の実施形態では、ＮＫｐ４６と結合する第１の結合ドメインは、ＮＫｐ４６と特異的に結合し、ＧＰＲＣ５ｄと結合する第２の結合ドメインは、ＧＰＲＣ５ｄと特異的に結合する。
いくつかの実施形態では、多重特異性ＮＫｐ４６／ＧＰＲＣ５ｄ抗体は、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含む。いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含む。いくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含む。いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、第２の結合ドメインは、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含む。いくつかの実施形態では、ＮＫｐ４６抗体は、単一ドメイン抗体又はナノボディではない。いくつかの実施形態では、第３の結合ドメインは、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含む。いくつかの実施形態では、第４の結合ドメインは、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含む。
ある特定の実施形態では、ＮＫｐ４６／ＧＰＲＣ５ｄ多重特異性抗体又はその抗原結合断片は、ＮＫｐ４６上に位置する第１のエピトープ及びＧＰＲＣ５ｄ上に位置する第２のエピトープと結合する。いくつかの実施形態では、（ａ）ＮＫｐ４６抗原と結合する第１の結合ドメインと、（ｂ）ＧＰＲＣ５ｄ抗原と結合する第２の結合ドメインとを含む、多重特異性ＮＫｐ４６／ＧＰＲＣ５ｄ抗体が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、（ａ）ＮＫｐ４６抗原と特異的に結合する第１の結合ドメインと、（ｂ）ＧＰＲＣ５ｄ抗原と特異的に結合する第２の結合ドメインとを含む、多重特異性ＮＫｐ４６／ＧＰＲＣ５ｄ抗体が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、（ａ）ＮＫｐ４６抗原上の第１のエピトープと結合する第１の結合ドメインと、（ｂ）ＧＰＲＣ５ｄ抗原上の第２のエピトープと結合する第２の結合ドメインとを含む、多重特異性ＮＫｐ４６／ＧＰＲＣ５ｄ抗体が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、（ａ）ＮＫｐ４６抗原上の第１のエピトープと特異的に結合する第１の結合ドメインと、（ｂ）ＧＰＲＣ５ｄ抗原上の第２のエピトープと特異的に結合する第２の結合ドメインとを含む、多重特異性抗体が本明細書で提供される。
特定の実施形態では、ＮＫｐ４６抗原は、ＮＫ細胞の表面上にある。特定の実施形態では、ＧＰＲＣ５ｄ抗原は、腫瘍細胞の表面上にある。ＮＫ細胞の表面上に存在するＮＫｐ４６及び腫瘍細胞の表面上に存在するＧＰＲＣ５ｄとのＮＫｐ４６／ＧＰＲＣ５ｄ多重特異性抗体の結合は、例えば、腫瘍細胞の死滅をもたらすことができる。他の実施形態では、ＮＫ細胞の表面上に存在するＮＫｐ４６及び腫瘍細胞の表面上に存在するＧＰＲＣ５ｄとのＮＫｐ４６／ＧＰＲＣ５ｄ多重特異性抗体の結合は、例えば、ＮＫ細胞の活性化をもたらすことができる。
特定の実施形態では、ＮＫｐ４６抗原は、Ｔ細胞の表面上に存在する。ある特定の実施形態では、ＧＰＲＣ５ｄ抗原は、腫瘍細胞の表面上にある。Ｔ細胞の表面上に存在するＮＫｐ４６及び腫瘍細胞の表面上に存在するＧＰＲＣ５ｄとのＮＫｐ４６／ＧＰＲＣ５ｄ多重特異性抗体の結合は、例えば、腫瘍細胞の死滅をもたらすことができる。他の実施形態では、Ｔ細胞の表面上に存在するＮＫｐ４６及び腫瘍細胞の表面上に存在するＧＰＲＣ５ｄとのＮＫｐ４６／ＧＰＲＣ５ｄ多重特異性抗体の結合は、例えば、Ｔ細胞の活性化をもたらすことができる。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、ガンマデルタＴ細胞である。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、自然リンパ球である。
いくつかの特定の実施形態では、例えば、以下の表２１及び表２２に示すように、以下のセクション７で生成される二重特異性抗体が本明細書で提供される。
いくつかの実施形態では、配列番号２の第１のＶＨ及び配列番号３の第１のＶＬを含む、ＮＫ細胞上の抗原と結合する第１の結合ドメインと、配列番号９９の第２のＶＨ及び配列番号１００の第２のＶＬを含む、腫瘍抗原と結合する第２の結合ドメインとを含む、二重特異性抗体が本明細書で提供される。
いくつかの実施形態では、配列番号２の第１のＶＨ及び配列番号３の第１のＶＬを含む、ＮＫ細胞上の抗原と結合する第１の結合ドメインと、配列番号１３１の第２のＶＨ及び配列番号１３２の第２のＶＬを含む、腫瘍抗原と結合する第２の結合ドメインとを含む、二重特異性抗体が本明細書で提供される。
いくつかの実施形態では、配列番号３４の第１のＶＨ及び配列番号３５の第１のＶＬを含む、ＮＫ細胞上の抗原と結合する第１の結合ドメインと、配列番号９９の第２のＶＨ及び配列番号１００の第２のＶＬを含む、腫瘍抗原と結合する第２の結合ドメインとを含む、二重特異性抗体が本明細書で提供される。
いくつかの実施形態では、配列番号３４の第１のＶＨ及び配列番号３５の第１のＶＬを含む、ＮＫ細胞上の抗原と結合する第１の結合ドメインと、配列番号１３１の第２のＶＨ及び配列番号１３２の第２のＶＬを含む、腫瘍抗原と結合する第２の結合ドメインとを含む、二重特異性抗体が本明細書で提供される。
いくつかの実施形態では、配列番号６７の第１のＶＨ及び配列番号６８の第１のＶＬを含む、ＮＫ細胞上の抗原と結合する第１の結合ドメインと、配列番号９９の第２のＶＨ及び配列番号１００の第２のＶＬを含む、腫瘍抗原と結合する第２の結合ドメインとを含む、二重特異性抗体が本明細書で提供される。
いくつかの実施形態では、配列番号６７の第１のＶＨ及び配列番号６８の第１のＶＬを含む、ＮＫ細胞上の抗原と結合する第１の結合ドメインと、配列番号１３１の第２のＶＨ及び配列番号１３２の第２のＶＬを含む、腫瘍抗原と結合する第２の結合ドメインとを含む、二重特異性抗体が本明細書で提供される。
いくつかの実施形態では、配列番号１６４の第１のポリペプチドと、配列番号１６３の第２のポリペプチドと、配列番号１６５の第３のポリペプチドとを含む、二重特異性抗体が本明細書で提供される。
いくつかの実施形態では、配列番号１６４の第１のポリペプチドと、配列番号１６３の第２のポリペプチドと、配列番号１７４の第３のポリペプチドとを含む、二重特異性抗体が本明細書で提供される。
いくつかの実施形態では、配列番号１６８の第１のポリペプチドと、配列番号１６９の第２のポリペプチドと、配列番号１６５の第３のポリペプチドとを含む、二重特異性抗体が本明細書で提供される。
いくつかの実施形態では、配列番号１７３の第１のポリペプチドと、配列番号１７０の第２のポリペプチドと、配列番号１６５の第３のポリペプチドとを含む、二重特異性抗体が本明細書で提供される。
いくつかの実施形態では、配列番号１６８の第１のポリペプチドと、配列番号１６９の第２のポリペプチドと、配列番号１７４の第３のポリペプチドとを含む、二重特異性抗体が本明細書で提供される。
いくつかの実施形態では、配列番号１７３の第１のポリペプチドと、配列番号１７０の第２のポリペプチドと、配列番号１７４の第３のポリペプチドとを含む、二重特異性抗体が本明細書で提供される。
いくつかの実施形態では、配列番号１７７の第１のポリペプチドと、配列番号１６３の第２のポリペプチドと、配列番号１８０の第３のポリペプチドとを含む、二重特異性抗体が本明細書で提供される。
いくつかの実施形態では、配列番号１９４の第１のポリペプチドと、配列番号１６３の第２のポリペプチドと、配列番号１９６の第３のポリペプチドとを含む、二重特異性抗体が本明細書で提供される。
いくつかの実施形態では、配列番号１６６の第１のポリペプチドと、配列番号１６３の第２のポリペプチドとを含む、二重特異性抗体が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、二重特異性抗体は、各々が配列番号１６６を含む２つのポリペプチド、及び各々が配列番号１６３を含む２つのポリペプチドを含む。
いくつかの実施形態では、配列番号１６７の第１のポリペプチドと、配列番号１６３の第２のポリペプチドとを含む、二重特異性抗体が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、二重特異性抗体は、各々が配列番号１６７を含む２つのポリペプチド、及び各々が配列番号１６３を含む２つのポリペプチドを含む。
いくつかの実施形態では、配列番号１７１の第１のポリペプチドと、配列番号１７０の第２のポリペプチドとを含む、二重特異性抗体が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、二重特異性抗体は、各々が配列番号１７１を含む２つのポリペプチド、及び各々が配列番号１７０を含む２つのポリペプチドを含む。
いくつかの実施形態では、配列番号１７２の第１のポリペプチドと、配列番号１６９の第２のポリペプチドとを含む、二重特異性抗体が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、二重特異性抗体は、各々が配列番号１７２を含む２つのポリペプチド、及び各々が配列番号１６９を含む２つのポリペプチドを含む。
いくつかの実施形態では、配列番号１７５の第１のポリペプチドと、配列番号１７０の第２のポリペプチドとを含む、二重特異性抗体が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、二重特異性抗体は、各々が配列番号１７５を含む２つのポリペプチド、及び各々が配列番号１７０を含む２つのポリペプチドを含む。
いくつかの実施形態では、配列番号１７６の第１のポリペプチドと、配列番号１６９の第２のポリペプチドとを含む、二重特異性抗体が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、二重特異性抗体は、各々が配列番号１７６を含む２つのポリペプチド、及び各々が配列番号１６９を含む２つのポリペプチドを含む。
本明細書で提供される抗体は、鳥類及び哺乳動物（例えば、ヒト、サル、ネズミ、ロバ、ヒツジ、ウサギ、ヤギ、モルモット、ラクダ、ウマ、又はニワトリ）を含む任意の動物起源に由来し得る。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、ヒト又はヒト化モノクローナル抗体である。本明細書で使用される場合、「ヒト」抗体は、ヒト免疫グロブリンのアミノ酸配列を有する抗体を含み、ヒト免疫グロブリンライブラリから、又はヒト遺伝子由来の抗体を発現するマウスから単離された抗体を含む。
ある特定の実施形態では、抗体は、完全マウス抗体である。ある特定の実施形態では、抗体は、マウス－ヒトキメラ抗体である。ある特定の実施形態では、抗体は、ヒト化抗体である。ある特定の実施形態では、抗体は、完全ヒト抗体である。他の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、ヒト化抗体（例えば、ヒト定常領域及びフレームワーク領域を含む）である。本明細書で提供される抗体は、二重特異性、三重特異性、又はそれ以上の多重特異性であり得る。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体又は抗原結合断片は、１０００ｎＭ未満のＫＤでＮＫＧ２ｄと結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体又は抗原結合断片は、１００ｎＭ未満のＫＤでＮＫＧ２ｄと結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体又は抗原結合断片は、５０ｎＭ未満のＫＤでＮＫＧ２ｄと結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体又は抗原結合断片は、４０ｎＭ未満のＫＤでＮＫＧ２ｄと結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体又は抗原結合断片は、３０ｎＭ未満のＫＤでＮＫＧ２ｄと結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体又は抗原結合断片は、２０ｎＭ未満のＫＤでＮＫＧ２ｄと結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体又は抗原結合断片は、１０ｎＭ未満のＫＤでＮＫＧ２ｄと結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体又は抗原結合断片は、９ｎＭ未満のＫＤでＮＫＧ２ｄと結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体又は抗原結合断片は、８ｎＭ未満のＫＤでＮＫＧ２ｄと結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体又は抗原結合断片は、７ｎＭ未満のＫＤでＮＫＧ２ｄと結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体又は抗原結合断片は、６ｎＭ未満のＫＤでＮＫＧ２ｄと結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体又は抗原結合断片は、５ｎＭ未満のＫＤでＮＫＧ２ｄと結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体又は抗原結合断片は、４ｎＭ未満のＫＤでＮＫＧ２ｄと結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体又は抗原結合断片は、３ｎＭ未満のＫＤでＮＫＧ２ｄと結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体又は抗原結合断片は、２ｎＭ未満のＫＤでＮＫＧ２ｄと結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体又は抗原結合断片は、１ｎＭ未満のＫＤでＮＫＧ２ｄと結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体又は抗原結合断片は、０．１ｎＭ未満のＫＤでＮＫＧ２ｄと結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体又は抗原結合断片は、０．０１ｎＭ未満のＫＤでＮＫＧ２ｄと結合する。また、ＫＤ又はＫＤ値は、当該技術分野で既知の任意の方法によって、例えば、Ｏｃｔｅｔ（登録商標）（例えばＯｃｔｅｔ（登録商標）Ｒｅｄ９６システムを使用）による、又はＢｉａｃｏｒｅ（登録商標）（例えばＢｉａｃｏｒｅ（登録商標）ＴＭ－２０００又はＢｉａｃｏｒｅ（登録商標）ＴＭ－３０００を使用）による、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）又は表面プラズモン共鳴法（ＳＰＲ）を使用して、測定することもできる。また、「オンレート」又は「会合の速度」又は「会合速度」又は「ｋｏｎ」は、例えば、Ｏｃｔｅｔ（登録商標）Ｒｅｄ９６、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）ＴＭ－２０００、又はＢｉａｃｏｒｅ（登録商標）ＴＭ－３０００のシステムを使用して、上記と同じバイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）又は表面プラズモン共鳴法（ＳＰＲ）手法を用いて測定することもできる。特定の実施形態では、ＫＤは、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）アッセイによって決定される。いくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄは、ヒトＮＫＧ２ｄである。いくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄは、カニクイザルＮＫＧ２ｄである。いくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄは、ラットＮＫＧ２ｄである。他の実施形態では、ＮＫＧ２ｄは、マウスＮＫＧ２ｄである。
他の実施形態では、本明細書で提供される抗体又は抗原結合断片は、１０００ｎＭ未満のＫＤでＮＫｐ４６と結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体又は抗原結合断片は、１００ｎＭ未満のＫＤでＮＫｐ４６と結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体又は抗原結合断片は、５０ｎＭ未満のＫＤでＮＫｐ４６と結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体又は抗原結合断片は、４０ｎＭ未満のＫＤでＮＫｐ４６と結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体又は抗原結合断片は、３０ｎＭ未満のＫＤでＮＫｐ４６と結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体又は抗原結合断片は、２０ｎＭ未満のＫＤでＮＫｐ４６と結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体又は抗原結合断片は、１０ｎＭ未満のＫＤでＮＫｐ４６と結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体又は抗原結合断片は、９ｎＭ未満のＫＤでＮＫｐ４６と結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体又は抗原結合断片は、８ｎＭ未満のＫＤでＮＫｐ４６と結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体又は抗原結合断片は、７ｎＭ未満のＫＤでＮＫｐ４６と結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体又は抗原結合断片は、６ｎＭ未満のＫＤでＮＫｐ４６と結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体又は抗原結合断片は、５ｎＭ未満のＫＤでＮＫｐ４６と結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体又は抗原結合断片は、４ｎＭ未満のＫＤでＮＫｐ４６と結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体又は抗原結合断片は、３ｎＭ未満のＫＤでＮＫｐ４６と結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体又は抗原結合断片は、２ｎＭ未満のＫＤでＮＫｐ４６と結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体又は抗原結合断片は、１ｎＭ未満のＫＤでＮＫｐ４６と結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体又は抗原結合断片は、０．１ｎＭ未満のＫＤでＮＫｐ４６と結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体又は抗原結合断片は、０．０１ｎＭ未満のＫＤでＮＫｐ４６と結合する。また、ＫＤ又はＫＤ値は、当該技術分野で既知の任意の方法によって、例えば、Ｏｃｔｅｔ（登録商標）（例えばＯｃｔｅｔ（登録商標）Ｒｅｄ９６システムを使用）による、又はＢｉａｃｏｒｅ（登録商標）（例えばＢｉａｃｏｒｅ（登録商標）ＴＭ－２０００又はＢｉａｃｏｒｅ（登録商標）ＴＭ－３０００を使用）による、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）又は表面プラズモン共鳴法（ＳＰＲ）を使用して、測定することもできる。また、「オンレート」又は「会合の速度」又は「会合速度」又は「ｋｏｎ」は、例えば、Ｏｃｔｅｔ（登録商標）Ｒｅｄ９６、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）ＴＭ－２０００、又はＢｉａｃｏｒｅ（登録商標）ＴＭ－３０００のシステムを使用して、上記と同じバイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）又は表面プラズモン共鳴法（ＳＰＲ）手法を用いて測定することができる。特定の実施形態では、ＫＤは、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）アッセイによって決定される。いくつかの実施形態では、ＮＫｐ４６は、ヒトＮＫｐ４６である。いくつかの実施形態では、ＮＫｐ４６は、カニクイザルＮＫｐ４６である。いくつかの実施形態では、ＮＫｐ４６は、ラットＮＫｐ４６である。他の実施形態では、ＮＫｐ４６は、マウスＮＫｐ４６である。
当該技術分野における任意の既知の二重特異性抗体フォーマットを含む、当該技術分野で既知の任意の多重特異性抗体プラットフォーム又はフォーマットを、本開示において使用することができる。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される多重特異性抗体は、本発明に記載されるものなどの、制御されたＦａｂアーム交換を介して得られたダイアボディ、クロスボディ、又は多重特異性抗体である。
いくつかの実施形態では、多重特異性抗体としては、ヘテロ二量体形成を促進する相補性ＣＨ３ドメインを有するＩｇＧ様分子；組換えＩｇＧ様二重標的化分子（この分子の２つの側面は各々、少なくとも２つの異なる抗体のＦａｂ断片又はＦａｂ断片の一部を含む）；ＩｇＧ融合分子（完全長ＩｇＧ抗体が、余分のＦａｂ断片又はＦａｂ断片の一部に融合されている）；Ｆｃ融合分子（一本鎖Ｆｖ分子又は安定化されたダイアボディが、重鎖定常ドメイン、Ｆｃ領域、又はその一部に融合されている）；Ｆａｂ融合分子（異なるＦａｂ断片が一緒に融合されている）；異なる一本鎖Ｆｖ分子又は異なるダイアボディ又は異なる重鎖抗体（例えば、ドメイン抗体、ナノボディ）が互いに、又は別のタンパク質若しくは担体分子に融合されている、ＳｃＦｖ及びダイアボディベースの抗体並びに重鎖抗体（例えば、ドメイン抗体、ナノボディ）が挙げられる。
いくつかの実施形態では、相補性ＣＨ３ドメイン分子を有するＩｇＧ様分子としては、Ｔｒｉｏｍａｂ／Ｑｕａｄｒｏｍａ（Ｔｒｉｏｎ Ｐｈａｒｍａ／Ｆｒｅｓｅｎｉｕｓ Ｂｉｏｔｅｃｈ）、Ｋｎｏｂｓ－ｉｎｔｏ－Ｈｏｌｅｓ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ＣｒｏｓｓＭＡｂｓ（Ｒｏｃｈｅ）及び静電的に調整されたもの（Ａｍｇｅｎ）、ＬＵＺ－Ｙ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ストランドを交換し操作したドメインボディ（Strand Exchange Engineered Domain body、ＳＥＥＤｂｏｄｙ）（ＥＭＤ Ｓｅｒｏｎｏ）、Ｂｉｃｌｏｎｉｃ（Ｍｅｒｕｓ）、並びにＤｕｏＢｏｄｙ（Ｇｅｎｍａｂ Ａ／Ｓ）が挙げられる。
いくつかの実施形態では、組換えＩｇＧ様二重標的化分子としては、Ｄｕａｌ Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ（ＤＴ）－Ｉｇ（ＧＳＫ／Ｄｏｍａｎｔｉｓ）、Ｔｗｏ－ｉｎ－ｏｎｅ Ａｎｔｉｂｏｄｙ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、Ｃｒｏｓｓ－ｌｉｎｋｅｄ Ｍａｂｓ（Ｋａｒｍａｎｏｓ Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｎｔｅｒ）、ｍＡｂ２（Ｆ－Ｓｔａｒ）、及びＣｏｖＸ－ｂｏｄｙ（ＣｏｖＸ／Ｐｆｉｚｅｒ）が挙げられる。
いくつかの実施形態では、ＩｇＧ融合分子としては、Ｄｕａｌ Ｖａｒｉａｂｌｅ Ｄｏｍａｉｎ（ＤＶＤ）－Ｉｇ（Ａｂｂｏｔｔ）、ＩｇＧ－ｌｉｋｅ Ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ（ＩｍＣｌｏｎｅ／Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ）、Ｔｓ２Ａｂ（ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ／ＡＺ）、及びＢｓＡｂ（Ｚｙｍｏｇｅｎｅｔｉｃｓ）、ＨＥＲＣＵＬＥＳ（Ｂｉｏｇｅｎ Ｉｄｅｃ）、並びにＴｖＡｂ（Ｒｏｃｈｅ）が挙げられる。
いくつかの実施形態では、Ｆｃ融合分子としては、ＳｃＦｖ／Ｆｃ Ｆｕｓｉｏｎｓ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎ）、ＳＣＯＲＰＩＯＮ（Ｅｍｅｒｇｅｎｔ ＢｉｏＳｏｌｕｔｉｏｎｓ／Ｔｒｕｂｉｏｎ，Ｚｙｍｏｇｅｎｅｔｉｃｓ／ＢＭＳ）、Ｄｕａｌ Ａｆｆｉｎｉｔｙ Ｒｅｔａｒｇｅｔｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｆｃ－ＤＡＲＴ）（ＭａｃｒｏＧｅｎｉｃｓ）、及びＤｕａｌ（ＳｃＦｖ）２－Ｆａｂ（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ－Ｃｈｉｎａ）が挙げられ得る。
いくつかの実施形態では、Ｆａｂ融合二重特異性抗体としては、Ｆ（ａｂ）２（Ｍｅｄａｒｅｘ／ＡＭＧＥＮ）、Ｄｕａｌ－Ａｃｔｉｏｎ又はＢｉｓ－Ｆａｂ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、Ｄｏｃｋ－ａｎｄ－Ｌｏｃｋ（ＤＮＬ）（ＩｍｍｕｎｏＭｅｄｉｃｓ）、Ｂｉｖａｌｅｎｔ Ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ（Ｂｉｏｔｅｃｎｏｌ）、及びＦａｂ－Ｆｖ（ＵＣＢ－Ｃｅｌｌｔｅｃｈ）が挙げられる。ＳｃＦｖ抗体、ダイアボディに基づく抗体、及びドメイン抗体は、二重特異性Ｔ細胞係合因子（Bispecific T Cell Engager、ＢｉＴＥ）（Ｍｉｃｒｏｍｅｔ）、タンデムダイアボディ（Tandem Diabody、Ｔａｎｄａｂ）（Ａｆｆｉｍｅｄ）、二重親和性再標的技術（Dual Affinity Retargeting Technology、ＤＡＲＴ）（ＭａｃｒｏＧｅｎｉｃｓ）、一本鎖ダイアボディ（Ａｃａｄｅｍｉｃ）、ＴＣＲ様抗体（ＡＩＴ、ＲｅｃｅｐｔｏｒＬｏｇｉｃｓ）、ヒト血清アルブミンＳｃＦｖ融合体（Ｍｅｒｒｉｍａｃｋ）、及びＣＯＭＢＯＤＹ（Ｅｐｉｇｅｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ）、二重標的ナノボディ（Ａｂｌｙｎｘ）、二重標的重鎖のみドメイン抗体を含むが、これらに限定されない。
本明細書で提供される完全長二重特異性抗体は、無細胞環境でインビトロにおいて又は共発現を使用してのいずれかで、異なる特異性を有する２つの抗体半分子のヘテロ二量体を形成するのに好都合になるように、各半分子において重鎖ＣＨ３界面に置換を導入することによって、例えば、２つの単一特異性二価抗体間でのＦａｂアーム交換（又は半分子交換）を使用して生成することができる。Ｆａｂアーム交換反応は、ジスルフィド結合異性化反応及びＣＨ３ドメインの解離－会合の結果である。単一特異性親抗体のヒンジ領域における重鎖ジスルフィド結合は、低減される。単一特異性親抗体のうちの１つについて生じる遊離システインは、第２の単一特異性親抗体分子のシステイン残基と重鎖内ジスルフィド結合を形成し、同時に、親抗体のＣＨ３ドメインは、解離－会合により開放及び再形成する。ＦａｂアームのＣＨ３ドメインは、ホモ二量体形成よりヘテロ二量体形成を有利にするように操作され得る。得られた生成物は、それぞれ異なるエピトープと結合する、２つのＦａｂアーム又は半分子を有する二重特異性抗体である。多重特異性抗体を作製する他の方法は、既知であり、企図される。
本明細書で使用される場合、「ホモ二量体形成」は、同一のＣＨ３アミノ酸配列を有する２本の重鎖の相互作用を意味する。本明細書で使用される場合、「ホモ二量体」は、同一のＣＨ３アミノ酸配列を有する２本の重鎖を有する抗体を意味する。
本明細書で使用される場合、「ヘテロ二量体形成」は、同一でないＣＨ３アミノ酸配列を有する２本の重鎖の相互作用を意味する。本明細書で使用される場合、「ヘテロ二量体」は、同一でないＣＨ３アミノ酸配列を有する２本の重鎖を有する抗体を意味する。
「ノブインホール」ストラテジー（例えば、国際公開第２００６／０２８９３６号を参照されたい）を使用して、完全長二重特異性抗体を生成することができる。簡潔に述べると、ヒトＩｇＧにおけるＣＨ３ドメインの界面を形成する選択されたアミノ酸は、ヘテロ二量体形成を促進するように、ＣＨ３ドメイン相互作用に影響を及ぼす位置において変異され得る。小さな側鎖を有するアミノ酸（ホール）が、第１の抗原に特異的に結合する抗体の重鎖内に導入され、大きな側鎖を有するアミノ酸（ノブ）が、第２の抗原に特異的に結合する抗体の重鎖内に導入される。２つの抗体の共発現後に、ヘテロ二量体が、「ホール」を有する重鎖と「ノブ」を有する重鎖との優先的な相互作用の結果として形成される。ノブ及びホールを形成する例示的なＣＨ３置換の対は、Ｔ３６６Ｙ／Ｆ４０５Ａ、Ｔ３６６Ｗ／Ｆ４０５Ｗ、Ｆ４０５Ｗ／Ｙ４０７Ａ、Ｔ３９４Ｗ／Ｙ４０７Ｔ、Ｔ３９４Ｓ／Ｙ４０７Ａ、Ｔ３６６Ｗ／Ｔ３９４Ｓ、Ｆ４０５Ｗ／Ｔ３９４Ｓ、及びＴ３６６Ｗ／Ｔ３６６Ｓ＿Ｌ３６８Ａ＿Ｙ４０７Ｖである（第１の重鎖の第１のＣＨ３ドメインにおける修飾位置／第２の重鎖の第２のＣＨ３ドメインにおける修飾位置として表現）。
１つのＣＨ３表面における正に荷電した残基及び第２のＣＨ３表面における負に荷電した残基を置換することによる静電的相互作用を使用する重鎖ヘテロ二量体形成の促進などの他のストラテジーを、米国特許出願公開第２０１０／００１５１３３号、米国特許出願公開第２００９／０１８２１２７号、米国特許出願公開第２０１０／０２８６３７号、又は米国特許出願公開第２０１１／０１２３５３２号に記載されるように使用することができる。他のストラテジーでは、ヘテロ二量体形成は、米国特許出願公開第２０１２／０１４９８７６号又は米国特許出願公開第２０１３／０１９５８４９号に記載されるように、下記置換：Ｌ３５１Ｙ＿Ｆ４０５ＡＹ４０７Ｖ／Ｔ３９４Ｗ、Ｔ３６６Ｉ＿Ｋ３９２Ｍ＿Ｔ３９４Ｗ／Ｆ４０５Ａ＿Ｙ４０７Ｖ、Ｔ３６６Ｌ＿Ｋ３９２Ｍ＿Ｔ３９４Ｗ／Ｆ４０５Ａ＿Ｙ４０７Ｖ、Ｌ３５１Ｙ＿Ｙ４０７Ａ／Ｔ３６６Ａ＿Ｋ４０９Ｆ、Ｌ３５１Ｙ＿Ｙ４０７Ａ／Ｔ３６６Ｖ Ｋ４０９Ｆ Ｙ４０７Ａ／Ｔ３６６Ａ＿Ｋ４０９Ｆ、又はＴ３５０Ｖ＿Ｌ３５１Ｙ＿Ｆ４０５Ａ Ｙ４０７Ｖ／Ｔ３５０Ｖ＿Ｔ３６６Ｌ＿Ｋ３９２Ｌ＿Ｔ３９４Ｗ（第１の重鎖の第１のＣＨ３ドメインにおける改変位置／第２の重鎖の第２のＣＨ３ドメインにおける改変位置として表現）により促進され得る。
上記の方法に加えて、本明細書で提供される二重特異性抗体は、国際公開第２０１１／１３１７４６号に記載の方法に従って、２つの単一特異性ホモ二量体抗体のＣＨ３領域に非対称な変異を導入し、ジスルフィド結合の異性化を可能にするための還元条件下において２つの親単一特異性ホモ二量体抗体から二重特異性ヘテロ二量体抗体を形成することによって、無細胞環境でインビトロにおいて生成され得る。この方法において、第１の単一特異性二価抗体及び第２の単一特異性二価抗体は、ヘテロ二量体の安定性を促進するＣＨ３ドメインにおいてある特定の置換を有するように操作され、これらの抗体は、ヒンジ領域におけるシステインがジスルフィド結合を異性化させるために十分な還元条件下においてともにインキュベートされ、それにより、Ｆａｂアーム交換により二重特異性抗体が生成される。インキュベート条件は、任意選択で、非還元条件に戻され得る。使用され得る例示的な還元剤は、２－メルカプトエチルアミン（2-mercaptoethylamine、２－ＭＥＡ）、ジチオスレイトール（dithiothreitol、ＤＴＴ）、ジチオエリスリトール（dithioerythritol、ＤＴＥ）、グルタチオン、トリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン（tris（2-carboxyethyl）phosphine、ＴＣＥＰ）、Ｌ－システイン、及びベータ－メルカプトエタノールであり、好ましくは、２－メルカプトエチルアミン、ジチオスレイトール、及びトリス（２－カルボキシエチル）ホスフィンからなる群から選択される還元剤である。例えば、少なくとも２０℃の温度で、少なくとも２５ｍＭの２－ＭＥＡの存在下又は少なくとも０．５ｍＭのジチオスレイトールの存在下で、ｐＨ５～８、例えばｐＨ７．０又はｐＨ７．４で、少なくとも９０分間のインキュベートが使用され得る。
いくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、二重特異性抗体であり、二重特異性抗体は、Ｂｉｐｏｄ足場構造にある。いくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、Ｂｉｐｏｄ足場構造の二重特異性抗体であり、第１の結合ドメインは、Ｆａｂ領域であり、第２の結合ドメインは、ｓｃＦｖ領域である。いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、ＮＫ細胞上に存在する抗原と結合する。いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、ＮＫＧ２ｄに結合する。いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、ＮＫｐ４６に結合する。いくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、腫瘍細胞上に存在する抗原と結合する。いくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、ＢＣＭＡに結合する。いくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、ＧＰＲＣ５ｄと結合する。
いくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、二重特異性抗体であり、二重特異性抗体は、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ足場構造にある。いくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ足場構造の二重特異性抗体であり、第１の結合ドメインは、２つのＦａｂ領域を含み、第２の結合ドメインは、２つのｓｃＦｖ領域を含む。いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、ＮＫ細胞上に存在する抗原と結合する。いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、ＮＫＧ２ｄと結合する。いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、ＮＫｐ４６と結合する。いくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、腫瘍細胞上に存在する抗原と結合する。いくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、ＢＣＭＡと結合する。いくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、ＧＰＲＣ５ｄと結合する。
本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、ＩｇＧ１サイレント変異を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、ＡＡＳ変異を含む。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、抗体のエフェクター機能を増強するための変異を含む。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、ＣＤＣ増強変異を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、Ｋ２４８Ｅ及びＴ４３７Ｒ変異を含む。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、脱フコシル化されている。
いくつかの実施形態では、ＮＫＧ２ｄと特異的に結合し、ＮＫ細胞活性を調節することができる抗体が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、ＮＫｐ４６と特異的に結合し、ＮＫ細胞活性を調節することができる抗体が本明細書で提供される。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される多重特異性抗体は、ＮＫ細胞を活性化する。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される多重特異性抗体は、ＮＫ細胞を標的細胞に接触させるか、又は指向させる。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される多重特異性抗体は、ＮＫ細胞を標的細胞に接触させるか、又は指向させ、多重特異性抗体は、ＮＫ細胞上の第１の抗原と結合する第１の結合ドメインと、標的細胞上の第２の抗原と結合する第２の結合ドメインとを含む。特定の実施形態では、標的細胞は、腫瘍細胞である。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される多重特異性抗体は、腫瘍細胞のＮＫ細胞依存性細胞傷害を誘導し、多重特異性抗体は、ＮＫ細胞上の第１の抗原と結合する第１の結合ドメインと、標的細胞上の第２の抗原と結合する第２の結合ドメインとを含む。特定の実施形態では、ＮＫ細胞は、ヒトＮＫ細胞である。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＮＫＧ２ｄと結合する多重特異性抗体は、ＮＫ細胞を活性化する。ある特定の実施形態では、本明細書に記載されるＮＫＧ２ｄと結合する多重特異性抗体は、ＮＫ細胞を標的細胞に接触させるか、又は指向させる。ある特定の実施形態では、本明細書に記載されるＮＫＧ２ｄと結合する多重特異性抗体は、ＮＫ細胞を標的細胞に接触させるか、又は指向させ、多重特異性抗体は、ＮＫ細胞上のＮＫＧ２ｄと結合する第１の結合ドメインと、標的細胞上の第２の抗原と結合する第２の結合ドメインとを含む。特定の実施形態では、標的細胞は、腫瘍細胞である。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される多重特異性抗体は、腫瘍細胞のＮＫ細胞依存性細胞傷害を誘導し、多重特異性抗体は、ＮＫ細胞上のＮＫＧ２ｄと結合する第１の結合ドメインと、腫瘍細胞上の第２の抗原と結合する第２の結合ドメインとを含む。特定の実施形態では、ＮＫ細胞は、ヒトＮＫ細胞である。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＮＫｐ４６と結合する多重特異性抗体は、ＮＫ細胞を活性化する。ある特定の実施形態では、本明細書に記載されるＮＫｐ４６と結合する多重特異性抗体は、ＮＫ細胞を標的細胞に接触させるか、又は指向させる。ある特定の実施形態では、本明細書に記載されるＮＫｐ４６と結合する多重特異性抗体は、ＮＫ細胞を標的細胞に接触させるか、又は指向させ、多重特異性抗体は、ＮＫ細胞上のＮＫｐ４６と結合する第１の結合ドメインと、標的細胞上の第２の抗原と結合する第２の結合ドメインとを含む。特定の実施形態では、標的細胞は、腫瘍細胞である。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される多重特異性抗体は、腫瘍細胞のＮＫ細胞依存性細胞傷害を誘導し、多重特異性抗体は、ＮＫ細胞上のＮＫｐ４６と結合する第１の結合ドメインと、腫瘍細胞上の第２の抗原と結合する第２の結合ドメインとを含む。特定の実施形態では、ＮＫ細胞は、ヒトＮＫ細胞である。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される多重特異性抗体は、ＮＫｐ４６発現免疫細胞上に発現されるＮＫｐ４６と結合する。いくつかの実施形態では、ＮＫｐ４６を発現する免疫細胞は、Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、ガンマデルタＴ細胞である。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、自然リンパ球細胞の粘膜集団である。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＮＫｐ４６と結合する多重特異性抗体は、ＮＫｐ４６発現免疫細胞を活性化することができる。ある特定の実施形態では、本明細書に記載されるＮＫｐ４６と結合する多重特異性抗体は、ＮＫｐ４６発現免疫細胞を標的細胞に接触させるか、又は指向させる。ある特定の実施形態では、本明細書に記載されるＮＫｐ４６と結合する多重特異性抗体は、ＮＫｐ４６発現免疫細胞を標的細胞に接触させるか、又は指向させ、多重特異性抗体は、ＮＫｐ４６発現免疫細胞上のＮＫｐ４６と結合する第１の結合ドメインと、標的細胞上の第２の抗原と結合する第２の結合ドメインとを含む。特定の実施形態では、標的細胞は、腫瘍細胞である。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される多重特異性抗体は、腫瘍細胞のＮＫｐ４６発現免疫細胞依存性細胞傷害性を誘導し、多重特異性抗体は、ＮＫｐ４６発現免疫細胞上のＮＫｐ４６と結合する第１の結合ドメインと、腫瘍細胞上の第２の抗原と結合する第２の結合ドメインとを含む。特定の実施形態では、ＮＫ細胞は、ヒトＮＫ細胞である。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される多重特異性抗体は、活性化ＮＫ細胞受容体及びＦｃ受容体の両方を介して機能することによってＮＫ細胞を活性化することができる。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される多重特異性抗体は、ＮＫ細胞を腫瘍細胞に接触させるか、又は指向させる。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される多重特異性抗体は、活性化ＮＫ細胞受容体及びＦｃ受容体の両方を介して機能することによって、腫瘍細胞のＮＫ細胞依存性細胞傷害を誘導する。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される多重特異性抗体は、多重特異性抗体のＦｃ領域がＩｇＧ１サイレント変異を含む場合でも、腫瘍細胞のＮＫ細胞依存性細胞傷害を誘導する。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される多重特異性抗体は、免疫抑制腫瘍環境においてＮＫ細胞を活性化することができる。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される多重特異性抗体は、免疫抑制性腫瘍環境においてＮＫ細胞を腫瘍細胞に接触させるか、又は指向させる。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される多重特異性抗体は、免疫抑制腫瘍環境において腫瘍細胞のＮＫ細胞依存性細胞傷害を誘導する。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される多重特異性抗体は、多重特異性抗体のＦｃ領域がＩｇＧ１サイレント変異を含む場合でも、免疫抑制腫瘍環境において腫瘍細胞のＮＫ細胞依存性細胞傷害を誘導する。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される多重特異性抗体は、ＮＫ細胞に対して有害な影響を及ぼさない。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される多重特異性抗体は、抗ＮＫ細胞細胞傷害性を欠く。いくつかの実施形態では、ＷＴ ＩｇＧ１骨格を有する本明細書に記載される多重特異性抗体は、ＮＫ細胞のＣＤＣ死滅を引き起こさない。いくつかの実施形態では、ＣＤＣを増強する一連の変異（例えば、Ｋ２４８Ｅ／Ｔ４３７Ｒ）を有する本明細書に記載される多重特異性抗体は、ＮＫ細胞のＣＤＣ死滅を引き起こさない。いくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、ＮＫｐ４６×ＢＣＭＡ二重特異性抗体である。いくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、ＮＫＧ２ｄ×ＢＣＭＡ二重特異性抗体である。いくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、ＮＫｐ４６×ＧＰＲＣ５ｄ二重特異性抗体である。いくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、ＮＫＧ２ｄ×ＧＰＲＣ５ｄ二重特異性抗体である。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される多重特異性抗体は、２５％未満のＮＫ細胞溶解を誘導する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される多重特異性抗体は、２０％未満のＮＫ細胞溶解を誘導する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される多重特異性抗体は、１５％未満のＮＫ細胞溶解を誘導する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される多重特異性抗体は、１０％未満のＮＫ細胞溶解を誘導する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される多重特異性抗体は、５％未満のＮＫ細胞溶解を誘導する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される多重特異性抗体は、３％未満のＮＫ細胞溶解を誘導する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される多重特異性抗体は、２％未満のＮＫ細胞溶解を誘導する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される多重特異性抗体は、１％未満のＮＫ細胞溶解を誘導する。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される多重特異性抗体は、ＮＫ細胞を活性化する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される多重特異性抗体は、ＮＫ細胞活性を少なくとも約１０％活性化する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される多重特異性抗体は、ＮＫ細胞活性を少なくとも約２０％活性化する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される多重特異性抗体は、ＮＫ細胞活性を少なくとも約３０％活性化する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される多重特異性抗体は、ＮＫ細胞活性を少なくとも約４０％活性化する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される多重特異性抗体は、ＮＫ細胞活性を少なくとも約５０％活性化する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される多重特異性抗体は、ＮＫ細胞活性を少なくとも約６０％活性化する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される多重特異性抗体は、ＮＫ細胞活性を少なくとも約７０％活性化する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される多重特異性抗体は、ＮＫ細胞活性を少なくとも約８０％活性化する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される多重特異性抗体は、ＮＫ細胞活性を少なくとも約９０％活性化する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される多重特異性抗体は、ＮＫ細胞活性を少なくとも約９５％活性化する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される多重特異性抗体は、ＮＫ細胞活性を少なくとも約９５％活性化する。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される多重特異性抗体は、ＮＫ細胞活性を少なくとも約１５％～約６５％活性化する。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される多重特異性抗体は、ＮＫ細胞活性を少なくとも約２０％～約６５％活性化する。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される多重特異性抗体は、ＮＫ細胞活性を少なくとも約３０％～約６５％活性化する。特定の実施形態では、ＮＫ細胞は、ヒトＮＫ細胞である。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される多重特異性抗体は、ＮＫ細胞によるＩＦＮｇ産生を促進する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される多重特異性抗体は、ＮＫ細胞によるＩＦＮｇ産生を少なくとも１０％促進する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される多重特異性抗体は、ＮＫ細胞によるＩＦＮｇ産生を少なくとも２０％促進する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される多重特異性抗体は、ＮＫ細胞によるＩＦＮｇ産生を少なくとも３０％促進する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される多重特異性抗体は、ＮＫ細胞によるＩＦＮｇ産生を少なくとも４０％促進する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される多重特異性抗体は、ＮＫ細胞によるＩＦＮｇ産生を少なくとも５０％促進する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される多重特異性抗体は、ＮＫ細胞によるＩＦＮｇ産生を少なくとも６０％促進する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される多重特異性抗体は、ＮＫ細胞によるＩＦＮｇ産生を少なくとも７０％促進する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される多重特異性抗体は、ＮＫ細胞によるＩＦＮｇ産生を少なくとも８０％促進する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される多重特異性抗体は、ＮＫ細胞によるＩＦＮｇ産生を少なくとも９０％促進する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される多重特異性抗体は、ＮＫ細胞によるＩＦＮｇ産生を少なくとも９５％促進する。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される多重特異性抗体は、ＮＫ細胞によるＩＦＮｇ産生を少なくとも約１５％～約６５％促進する。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される多重特異性抗体は、ＮＫ細胞によるＩＦＮｇ産生を少なくとも約２０％～約６５％促進する。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される多重特異性抗体は、ＮＫ細胞によるＩＦＮｇ産生を少なくとも約３０％～約６５％促進する。特定の実施形態では、ＮＫ細胞は、ヒトＮＫ細胞である。
本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、腫瘍細胞のＮＫ細胞依存性細胞傷害を少なくとも１０％誘導する。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、腫瘍細胞のＮＫ細胞依存性細胞傷害を少なくとも２０％誘導する。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、腫瘍細胞のＮＫ細胞依存性細胞傷害を少なくとも３０％誘導する。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、腫瘍細胞のＮＫ細胞依存性細胞傷害を少なくとも４０％誘導する。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、腫瘍細胞のＮＫ細胞依存性細胞傷害を少なくとも５０％誘導する。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、腫瘍細胞のＮＫ細胞依存性細胞傷害を少なくとも６０％誘導する。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、腫瘍細胞のＮＫ細胞依存性細胞傷害を少なくとも７０％誘導する。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、腫瘍細胞のＮＫ細胞依存性細胞傷害を少なくとも８０％誘導する。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、腫瘍細胞のＮＫ細胞依存性細胞傷害を少なくとも９０％誘導する。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、腫瘍細胞のＮＫ細胞依存性細胞傷害を少なくとも９５％誘導する。本明細書で提供される多重特異性抗体のある特定の実施形態では、多重特異性抗体は、腫瘍細胞のＮＫ細胞依存性細胞傷害を少なくとも約１５％～約６５％誘導する。本明細書で提供される多重特異性抗体のある特定の実施形態では、多重特異性抗体は、腫瘍細胞のＮＫ細胞依存性細胞傷害を少なくとも約２０％～約６５％誘導する。本明細書で提供される多重特異性抗体のある特定の実施形態では、多重特異性抗体は、腫瘍細胞のＮＫ細胞依存性細胞傷害を少なくとも約３０％～約６５％誘導する。
本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、インビトロで腫瘍細胞のＮＫ細胞依存性細胞傷害を約５００ｐＭ未満のＩＣ５０で誘導する。いくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、インビトロで腫瘍細胞のＮＫ細胞依存性細胞傷害を約３００ｐＭ未満のＩＣ５０で誘導する。いくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、インビトロで腫瘍細胞のＮＫ細胞依存性細胞傷害を約１００ｐＭ未満のＩＣ５０で誘導する。いくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、インビトロで腫瘍細胞のＮＫ細胞依存性細胞傷害を約５０ｐＭ未満のＩＣ５０で誘導する。いくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、インビトロで腫瘍細胞のＮＫ細胞依存性細胞傷害を約２０ｐＭ未満のＩＣ５０で誘導する。いくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、インビトロで腫瘍細胞のＮＫ細胞依存性細胞傷害を約１５ｐＭ未満のＩＣ５０で誘導する。いくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、インビトロで腫瘍細胞のＮＫ細胞依存性細胞傷害を約１０ｐＭ未満のＩＣ５０で誘導する。
本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、ＩＣ５０は、ＮＫエフェクター細胞と第２の抗原を発現する標的細胞との混合物を用いて評価される。
本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、インビトロで腫瘍細胞のＮＫ細胞依存性細胞傷害を約２０００ｐＭ未満のＥＣ５０で誘導する。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、インビトロで腫瘍細胞のＮＫ細胞依存性細胞傷害を約１０００ｐＭ未満のＥＣ５０で誘導する。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、インビトロで腫瘍細胞のＮＫ細胞依存性細胞傷害を約５００ｐＭ未満のＥＣ５０で誘導する。いくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、インビトロで腫瘍細胞のＮＫ細胞依存性細胞傷害を約３００ｐＭ未満のＥＣ５０で誘導する。いくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、インビトロで腫瘍細胞のＮＫ細胞依存性細胞傷害を約１００ｐＭ未満のＥＣ５０で誘導する。いくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、インビトロで腫瘍細胞のＮＫ細胞依存性細胞傷害を約５０ｐＭ未満のＥＣ５０で誘導する。いくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、インビトロで腫瘍細胞のＮＫ細胞依存性細胞傷害を約２０ｐＭ未満のＥＣ５０で誘導する。いくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、インビトロで腫瘍細胞のＮＫ細胞依存性細胞傷害を約１５ｐＭ未満のＥＣ５０で誘導する。いくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、インビトロで腫瘍細胞のＮＫ細胞依存性細胞傷害を約１０ｐＭ未満のＥＣ５０で誘導する。
本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、ＥＣ５０は、ＮＫエフェクター細胞と第２の抗原を発現する標的細胞との混合物を用いて評価される。
本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、エフェクター細胞対標的細胞の比は、約０．０１：１～約１０：１である。本明細書で提供される多重特異性抗体のいくつかの実施形態では、エフェクター細胞対標的細胞の比は、約０．０１：１～約５：１である。いくつかの実施形態では、エフェクター細胞対標的細胞の比は、約０．１：１～約２：１である。いくつかの実施形態では、エフェクター細胞対標的細胞の比は、約１：１である。ある特定の実施形態では、エフェクター対標的細胞の比は、例えば、０．０１：１、０．０２：１、０．０３：１、０．０４：１、０．０５：１、０．０６：１、０．０７：１、０．０８：１、０．０９：１、１：１、２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、又は１０：１であり得る。ある特定の実施形態では、多重特異性抗体又はその抗原結合断片の濃度は、約０．０００００５ｎｇ／ｍＬ、約０．００００５ｎｇ／ｍＬ、約０．０００５、約０．００５ｎｇ／ｍＬ、約０．０１ｎｇ／ｍＬ、約０．０２ｎｇ／ｍＬ、約０．０３ｎｇ／ｍＬ、約０．０４ｎｇ／ｍＬ、約０．０５ｎｇ／ｍＬ、約０．０６ｎｇ／ｍＬ、約０．０７ｎｇ／ｍＬ、約０．０８ｎｇ／ｍＬ、約０．０９ｎｇ／ｍＬ、約０．１ｎｇ／ｍＬ、約０．５ｎｇ／ｍＬ、約１．０ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍＬ、約２０ｎｇ／ｍＬ約、約３０ｎｇ／ｍＬ、約４０ｎｇ／ｍＬ、約５０ｎｇ／ｍＬ、約６０ｎｇ／ｍＬ、約７０ｎｇ／ｍＬ、約８０ｎｇ／ｍＬ、約９０ｎｇ／ｍＬ、約１００ｎｇ／ｍＬ、又は約１０００ｎｇ／ｍＬである。
モノクローナル抗体
本開示の抗体は、モノクローナル抗体であることも、モノクローナル抗体に由来することもできる。モノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９７５，Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５－９７により最初に記載されたハイブリドーマ法を使用して作製され得るか、又は組換えＤＮＡ方法（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号を参照されたい）によって作製され得る。
ハイブリドーマ方法では、マウス、又はハムスターなどの他の適切な宿主動物を、上記で記載したとおりに免疫化して、免疫化のために使用されるタンパク質に特異的に結合する抗体を産生するか、又はこれらを産生することが可能なリンパ球を誘発する。代替的に、リンパ球は、インビトロで免疫化され得る。免疫化の後、リンパ球を単離し、次いで、ポリエチレングリコールなどの好適な融合剤を使用して骨髄腫細胞系と融合させて、ハイブリドーマ細胞を形成する（Ｇｏｄｉｎｇ，モノクローナル抗体：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ５９－１０３（１９８６））。
このようにして調製されたハイブリドーマ細胞を、ある特定の実施形態では、融合されていない親骨髄腫細胞（融合パートナーとも称される）の増殖又は生存を阻害する１つ又は２つ以上の物質を含有する、好適な培養培地中に播種し、増殖させる。例えば、親骨髄腫細胞が、酵素であるヒポキサンチン－グアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＧＰＲＴ又はＨＰＲＴ）を欠く場合、ハイブリドーマのための選択的培養培地は、典型的に、ヒポキサンチン、アミノプテリン、及びチミジンを含み（ＨＡＴ培地）、これらは、ＨＧＰＲＴ欠損細胞の増殖を防止する。
例示的な融合パートナーである骨髄腫細胞は、効率的に融合し、選択された抗体産生細胞による安定的な高レベルの抗体の産生を支援し、融合させていない親細胞に対して選択する選択的培地に感受性である骨髄腫細胞である。例示的な骨髄腫細胞系は、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）から入手可能な、ＳＰ－２細胞及び派生細胞、例えば、Ｘ６３－Ａｇ８－６５３細胞などのマウス骨髄腫系、並びにＳａｌｋ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ Ｃｅｌｌ Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ Ｃｅｎｔｅｒ（Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）から入手可能な、ＭＯＰＣ－２１マウス腫瘍及びＭＰＣ－１１マウス腫瘍に由来する、マウス骨髄腫系である。ヒト骨髄腫及びマウス－ヒトヘテロ骨髄腫細胞株もまた、ヒトモノクローナル抗体の産生について記載されている（Ｋｏｚｂｏｒ，１９８４，Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３３：３００１－０５、及びＢｒｏｄｅｕｒ ｅｔ ａｌ．，１９８７，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ５１－６３）。
ハイブリドーマ細胞が増殖する培養培地を、抗原に対するモノクローナル抗体の産生についてアッセイする。ハイブリドーマ細胞により産生されるモノクローナル抗体の結合特異性を、免疫沈降、又はＲＩＡ若しくはＥＬＩＳＡなどのインビトロにおけるにおける結合アッセイにより決定する。モノクローナル抗体の結合親和性は、例えば、Ｍｕｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９８０，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１０７：２２０－３９において記載されている、スカッチャード分析により決定することができる。
所望の特異性、親和性、及び／又は活性を有する抗体を産生するハイブリドーマ細胞を同定したら、クローンを、限界希釈手順によりサブクローニングし、標準的な方法により増殖させることができる（Ｇｏｄｉｎｇ、上記）。この目的に好適な培養培地は、例えば、ＤＭＥＭ培地又はＲＰＭＩ－１６４０培地を含む。加えて、例えば、細胞のマウスへのｉ．ｐ．注射により、ハイブリドーマ細胞を、インビボにおいて、動物における腹水腫瘍として増殖させ得る。
サブクローンにより分泌されたモノクローナル抗体を、例えば、クロマトグラフィ（例えば、プロテインＡ－セファロース又はプロテインＧ－セファロースを使用して）又はイオン交換クロマトグラフィ、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィ、ゲル電気泳動、透析などの従来の抗体精製手順により、培養培地、腹水、又は血清から、好適に分離する。
モノクローナル抗体をコードするＤＮＡは、従来の手順を使用して（例えば、マウス抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することが可能なオリゴヌクレオチドプローブを使用することにより）、容易に単離され、配列決定される。ハイブリドーマ細胞を、そのようなＤＮＡの供給源として用いることができる。単離したら、ＤＮＡを発現ベクターに入れることができ、次いで、普通であれば抗体タンパク質を産生しないＥ．ｃｏｌｉ細胞、サルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（Chinese Hamster Ovary、ＣＨＯ）細胞、又は骨髄腫細胞などの宿主細胞にこれらをトランスフェクトして、組換え宿主細胞内のモノクローナル抗体の合成を得ることができる。抗体をコードするＤＮＡの、細菌内の組換え発現についての総説論文には、Ｓｋｅｒｒａ ｅｔ ａｌ．，１９９３，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ．５：２５６－６２、及びＰｌｕｃｋｔｈｕｎ，１９９２，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖｓ．１３０：１５１－８８が含まれる。
更なる実施形態では、モノクローナル抗体又は抗体断片は、例えば、例えば、Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｈａｇｅ Ｄｉｓｐｌａｙ：Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ（Ｏ’Ｂｒｉｅｎ ａｎｄ Ａｉｔｋｅｎ ｅｄｓ．，２００２）において記載されている技術を使用して作出された抗体ファージライブラリから単離することができる。ファージディスプレイ方法では、機能的な抗体ドメインを、それらをコードするポリヌクレオチド配列を保有するファージ粒子の表面上に提示させる。本明細書で記載される抗体を作製するのに使用され得るファージディスプレイ方法の例には、Ｂｒｉｎｋｍａｎ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ １８２：４１－５０、Ａｍｅｓ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ １８４：１７７－１８６、Ｋｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈ ｅｔ ａｌ．，１９９４，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：９５２－９５８、Ｐｅｒｓｉｃ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｇｅｎｅ １８７：９－１８、Ｂｕｒｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９９４，Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ５７：１９１－２８０、国際出願第ＧＢ９１／０１１３４号、国際公開第９０／０２８０９号、同第９１／１０７３７号、同第９２／０１０４７号、同第９２／１８６１９号、同第９３／１１２３６号、同第９５／１５９８２号、同第９５／２０４０１号、及び同第９７／１３８４４号、並びに米国特許第５，６９８，４２６号、同第５，２２３，４０９号、同第５，４０３，４８４号、同第５，５８０，７１７号、同第５，４２７，９０８号、同第５，７５０，７５３号、同第５，８２１，０４７号、同第５，５７１，６９８号、同第５，４２７，９０８号、同第５，５１６，６３７号、同第５，７８０，２２５号、同第５，６５８，７２７号、同第５，７３３，７４３号、及び同第５，９６９，１０８号において開示されているファージディスプレイ方法が含まれる。
原則として、合成抗体クローンは、ファージコートタンパク質へと融合させた、抗体可変領域（Ｆｖ）の多様な断片を提示するファージを含むファージライブラリをスクリーニングすることにより選択される。そのようなファージライブラリを、所望の抗原に対してスクリーニングする。所望の抗原への結合が可能なＦｖ断片を発現するクローンは、抗原へと吸着されるので、ライブラリ内の非結合クローンから分離される。次いで、結合クローンを、抗原から溶離させ、抗原への吸着／溶離の更なるサイクルにより、更に濃縮され得る。
可変ドメインは、例えば、Ｗｉｎｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９９４，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２：４３３－５５において記載されているとおり、ＶＨ及びＶＬを、短い可撓性ペプチドを介して共有結合的に連結した単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片として、又はＶＨ及びＶＬの各々を定常ドメインへと融合させ、非共有結合的に相互作用させたＦａｂ断片としてのいずれかで、ファージ上で機能的に提示させることができる。
ＶＨ遺伝子及びＶＬ遺伝子のレパートリは、Ｗｉｎｔｅｒ ｅｔ ａｌ．、上記において記載されているとおり、ＰＣＲにより個別にクローニングされ、ファージライブラリ内でランダムに組換えられることができ、次いで、これらを、抗原結合クローンについて検索することができる。免疫化された起源からのライブラリは、ハイブリドーマを構築する必要性を伴うことなく免疫原に高親和性抗体を提供する。代替的に、Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ ｅｔ ａｌ．，１９９３，ＥＭＢＯ Ｊ １２：７２５－３４により記載されているように、ナイーブレパートリをクローニングして、広範にわたる非自己に対するヒト抗体の単一の供給源をもたらし、また、免疫化を伴わない自己抗原に対するヒト抗体の単一の供給源ももたらすことができる。最後に、ナイーブライブラリはまた、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ａｎｄ Ｗｉｎｔｅｒ，１９９２，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７：３８１－８８により記載されているとおり、幹細胞に由来する、再配列されていないＶ遺伝子セグメントをクローニングし、ランダム配列を含むＰＣＲプライマーを使用して、高度に可変性のＣＤＲ３領域をコードし、インビトロにおける再配列を達成することにより、合成により作ることもできる。
ライブラリのスクリーニングは、当該技術分野で既知の様々な技術によって達成することができる。例えば、ＮＫＧ２ｄ又はＮＫｐ４６（例えば、ＮＫＧ２ｄ又はＮＫｐ４６ポリペプチド、断面、又はエピトープ）は、吸着プレートのウェルをコーティングするのに使用することができ、吸着プレートへと固定した宿主細胞上で発現させることができ、細胞選別において使用することができ、ストレプトアビジンでコーティングされたビーズによる捕捉のためにビオチンへとコンジュゲートさせることができ、パニングディスプレイライブラリのための他の任意の方法において使用することができる。解離反応速度の遅い（例えば、結合親和性が良好な）抗体の選択は、Ｂａｓｓ ｅｔ ａｌ．，１９９０，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ８：３０９－１４及び国際公開第９２／０９６９０号において記載されているように、長時間の洗浄及び一価ファージディスプレイの使用、並びにＭａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１０：７７９－８３において記載されているように、抗原の低コーティング密度の使用により促進することができる。
抗体は、目的のファージクローンを選択するための好適な抗原スクリーニング手順に続き、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．、（上記）に記載されている、目的のファージクローン及び好適な定常領域（例えば、Ｆｃ）配列に由来する、ＶＨ配列及び／又はＶＬ配列（例えば、Ｆｖ配列）、又はＶＨ配列及びＶＬ配列に由来する多様なＣＤＲ配列を使用する、完全長抗体クローンの構築を設計することにより得ることができる。
本明細書で記載される抗体はまた、例えば、キメラ抗体を含み得る。キメラ抗体とは、抗体の異なる部分が異なる免疫グロブリン分子に由来する分子である。例えば、キメラ抗体は、ヒト抗体の定常領域へと融合させたマウスモノクローナル抗体又はラットモノクローナル抗体の可変領域を含み得る。キメラ抗体を産生するための方法は当該技術分野で既知である。例えば、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，１９８５，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２９：１２０２、Ｏｉ ｅｔ ａｌ．，１９８６，ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ４：２１４、Ｇｉｌｌｉｅｓ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ １２５：１９１－２０２、及び米国特許第５，８０７，７１５号、同第４，８１６，５６７号、同第４，８１６，３９７号、及び同第６，３３１，４１５号を参照されたい。
本明細書で記載される技術などの技術を使用して産生される抗体又は抗原結合断片は、周知の標準的な技術を使用して単離することができる。例えば、抗体又は抗原結合断片は、例えば、プロテインＡ－セファロース、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィ、ゲル電気泳動、透析、又は親和性クロマトグラフィなど、従来の免疫グロブリン精製手順により、例えば、培養培地、腹水、血清、細胞溶解物、合成反応材料などから好適に分離することができる。本明細書で使用される場合、「単離」又は「精製」抗体は、抗体が由来する細胞供給源若しくは組織供給源に由来する細胞物質若しくは他のタンパク質を実質的に含まないか、又は化学合成される場合、化学的前駆物質若しくは他の化学物質を実質的に含まない。
抗体断片
本開示は、例えば、ＮＫＧ２ｄ及びＮＫｐ４６と結合する抗体断片を含む抗体（例えば、多重特異性抗体）を提供する。
抗体断片の作製のために様々な手法が開発されている。慣例的に、これらの断片は、インタクト抗体のタンパク質分解消化を介して誘導された（例えば、Ｍｏｒｉｍｏｔｏ ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２４：１０７－１７、及びＢｒｅｎｎａｎ ｅｔ ａｌ．，１９８５，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２９：８１－８３を参照されたい）。しかしながら、これらの断片は現在、組換え宿主細胞によって直接に作製され得る。Ｆａｂ、Ｆｖ、及びＳｃＦｖ抗体断片は全て、Ｅ．ｃｏｌｉ又は酵母細胞内で発現及び分泌できるため、これらの断片を大量に容易に生産することができる。抗体断片は、上記の抗体ファージライブラリから単離することができる。代替的に、Ｆａｂ’－ＳＨ断片は、Ｅ．ｃｏｌｉから直接回収でき、化学的に結合してＦ（ａｂ′）２断片を形成することができる（Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １０：１６３－６７）。別のアプローチにより、Ｆ（ａｂ′）２断片は、組換え宿主細胞培養から直接単離することができる。サルベージ受容体結合エピトープ残基を含む増加したインビボ半減期を有するＦａｂ及びＦ（ａｂ’）２断片は、例えば、米国特許第５，８６９，０４６号に記載されている。抗体断片の産生のための他の技術は、当業者に明らかである。ある特定の実施形態では、抗体は、一本鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）である（例えば、ＷＯ９３／１６１８５、米国特許第５，５７１，８９４号、及び同第５，５８７，４５８号を参照されたい）。Ｆｖ及びｓｃＦｖは、定常領域を欠くインタクトな結合部位を有し、したがって、それらは、インビボでの使用時の非特異的結合の低減に好適であり得る。ｓｃＦｖ融合タンパク質は、ｓｃＦｖのアミノ末端又はカルボキシ末端のいずれかでエフェクタータンパク質の融合をもたらすように構築され得る（例えば、Ｂｏｒｒｅｂａｅｃｋ編、上記を参照されたい）。抗体断片はまた、例えば、上記で引用した参考文献に記載されるような「直鎖状抗体」であってもよい。このような直鎖状抗体は、単一特異性であっても、二重特異性などの多重特異性であってもよい。
より小さな抗体由来結合構造は、単一可変ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）とも呼ばれる別個の可変ドメイン（Ｖドメイン）である。ある種の生物、ラクダ科動物及び軟骨魚類は、それらの免疫系の一部としてＦｃ等価ドメイン構造上にマウントされた高親和性単一Ｖ様ドメインを有する。（Ｗｏｏｌｖｅｎ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ ５０：９８－１０１、及びＳｔｒｅｌｔｓｏｖ ｅｔ ａｌ．，２００４，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ．１０１：１２４４４－４９）。Ｖ様ドメイン（ラクダ科ではＶｈＨと呼ばれ、サメではＶ－ＮＡＲと呼ばれる）は、典型的には、標的抗原の空洞の貫通を可能にする長い表面ループを示す。それらはまた、疎水性表面パッチをマスキングすることによって、単離されたＶＨドメインを安定化する。
これらのＶｈＨ及びＶ－ＮＡＲドメインは、ｓｄＡｂを操作するために使用されてきた。ヒトＶドメインバリアントは、ファージライブラリからの選択及び他のアプローチを使用して設計されており、安定で結合性の高いＶＬ及びＶＨ由来ドメインが得られる。
本明細書で提供される抗体には、免疫グロブリン分子及び免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な部分、例えば、ＮＫＧ２ｄ又はＮＫｐ４６エピトープなどと結合する抗原結合部位を含む分子が含まれるが、これらに限定されない。本明細書で提供される免疫グロブリン分子は、免疫グロブリン分子の任意のクラス（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、及びＩｇＡ）又は任意のサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２）のものであり得る。いくつかの実施形態では、抗体は、ＩｇＧ抗体である。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ抗体は、ＩｇＧ１抗体である。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ抗体は、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４抗体である。
抗体のバリアント及び誘導体は、例えば、ＮＫＧ２ｄ又はＮＫｐ４６エピトープと結合する能力を保持する抗体機能的断片を含む。例示的な機能的としては、Ｆａｂ断片（例えば、抗原結合ドメインを含み、ジスルフィド結合によって架橋された軽鎖及び重鎖の一部を含む抗体断片）、Ｆａｂ’（例えば、Ｆａｂ及びヒンジ領域を通る重鎖の追加部分を含む単一の抗原結合ドメインを含む抗体断片）、Ｆ（ａｂ’）２（例えば、重鎖のヒンジ領域において鎖間ジスルフィド結合によって連結された２つのＦａｂ’分子であり、Ｆａｂ’分子は、同じ又は異なるエピトープに指向され得る）、二重特異性Ｆａｂ（例えば、２つの抗原結合ドメインを有するＦａｂ分子であり、その各々が異なるエピトープに指向され得る）、ｓｃＦｖとしても知られる可変領域を含む単鎖（例えば、１０～２５アミノ酸の鎖によって一緒に連結された抗体の単一軽鎖及び重鎖の可変の抗原結合決定領域）、ジスルフィド結合Ｆｖ、又はｄｓＦｖ（例えば、ジスルフィド結合によって一緒に連結された抗体の単一軽鎖及び重鎖の可変抗原結合決定領域）、ラクダ化ＶＨ（例えば、ＶＨ界面のいくつかのアミノ酸が天然ラクダ抗体の重鎖に見られるものである、抗体の単一重鎖の可変抗原結合決定領域）、二重特異性ｓｃＦｖ（例えば、２つの抗原結合ドメインを有するｓｃＦｖ又はｄｓＦｖ分子であり、その各々が異なるエピトープに指向され得る）、ダイアボディ（例えば、第１のｓｃＦｖのＶＨドメインが第２のｓｃＦｖのＶＬドメインと会合し、第１のｓｃＦｖのＶＬドメインが第２のｓｃＦｖのＶＨドメインと会合するときに形成される二量体化ｓｃＦｖ、ダイアボディの２つの抗原結合領域は、同じ又は異なるエピトープに対して指向され得る）、トリアボディ（例えば、三量体化ｓｃＦｖであり、ダイアボディと同様の様式で形成されるが、３つの抗原結合ドメインが単一の複合体で作製され、３つの抗原結合ドメインは、同じ又は異なるエピトープに対して指向され得る）、及びテトラボディ（例えば、四量体化ｓｃＦｖであり、ダイアボディと同様の様式で形成されるが、４つの抗原結合ドメインが単一の複合体で作製され、４つの抗原結合ドメインは、同じ又は異なるエピトープに対して指向され得る）が含まれる。
いくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、二重特異性抗体である。
いくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、二重特異性抗体であり、二重特異性抗体は、Ｂｉｐｏｄ足場構造にある。いくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、Ｂｉｐｏｄ足場構造の二重特異性抗体であり、第１の結合ドメインは、Ｆａｂ領域であり、第２の結合ドメインは、ｓｃＦｖ領域である。
いくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、二重特異性抗体であり、二重特異性抗体は、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ足場構造にある。いくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ足場構造の二重特異性抗体であり、第１の結合ドメインは、２つのＦａｂ領域を含み、第２の結合ドメインは、２つのｓｃＦｖ領域を含む。
ヒト化抗体
本明細書に記載される抗体（例えば、多重特異性抗体）には、例えば、ヒト化抗体、例えば、脱免疫化ヒト抗体又は複合ヒト抗体が含まれ得る。
ヒト化抗体は、ヒトフレームワーク領域及びヒト定常領域の配列を含み得る。例えば、ヒト化抗体は、ヒト定常領域配列を含み得る。ある特定の実施形態では、ヒト化抗体は、ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、及びＩｇＥを含む免疫グロブリンの任意のクラス、及びＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４を含む任意のアイソタイプ（例えば、ＩｇＧ４のバリアント及びＩｇＧ４ヌルボディ）から選択され得る。ある特定の実施形態では、ヒト化抗体は、カッパ又はラムダの軽鎖定常配列を含み得る。
ヒト化抗体は、ＣＤＲグラフティング（欧州特許第２３９，４００号、国際公開第９１／０９９６７号、米国特許第５，２２５，５３９号、同第５，５３０，１０１号、及び同第５，５８５，０８９号）、ベニヤリング又はリサーフェシング（欧州特許第５９２，１０６号、同第５１９，５９６号、Ｐａｄｌａｎ，１９９１，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ２８（４／５）：４８９－４９８、Ｓｔｕｄｎｉｃｋａ ｅｔ ａｌ．，１９９４，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ７（６）：８０５－８１４、及びＲｏｇｕｓｋａ ｅｔ ａｌ．，１９９４，ＰＮＡＳ ９１：９６９－９７３）、鎖シャッフリング（米国特許第５，５６５，３３２号）、及び例えば、米国特許第６，４０７，２１３号、同第５，７６６，８８６号、国際公開第９３／１７１０５号、Ｔａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６９：１１１９ ２５（２００２）、Ｃａｌｄａｓ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．１３（５）：３５３－６０（２０００）、Ｍｏｒｅａ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ２０（３）：２６７ ７９（２０００）、Ｂａｃａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２（１６）：１０６７８－８４ （１９９７）、Ｒｏｇｕｓｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．９（１０）：８９５ ９０４（１９９６）、Ｃｏｕｔｏ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５５（２３ Ｓｕｐｐ）：５９７３ｓ－ ５９７７ｓ（１９９５）、Ｃｏｕｔｏ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５５（８）：１７１７－２２（１９９５）、Ｓａｎｄｈｕ ＪＳ，Ｇｅｎｅ １５０（２）：４０９－１０（１９９４）、及びＰｅｄｅｒｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２３５（３）：９５９－７３（１９９４）を含むがこれらに限定されない、当該技術分野で既知の様々な技術を使用して産生することができる。各々全体が参照により本明細書に組み込まれる、米国特許出願公開第２００５／００４２６６４（Ａ１）号（２００５年２月２４日）も参照されたい。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、ヒト、カニクイザル、ラット、及びマウスのＮＫＧ２ｄ又はＮＫｐ４６を含む、ＮＫＧ２ｄ又はＮＫｐ４６と結合するヒト化抗体であり得る。例えば、本開示のヒト化抗体は、本明細書で提供される配列表に示される１つ又は２つ以上のＣＤＲを含み得る。非ヒト抗体をヒト化するための様々な方法が、当該技術分野では既知である。例えば、ヒト化抗体は、非ヒトである供給源からそれに導入された１つ又は２つ以上のアミノ酸残基を有し得る。これらの非ヒトアミノ酸残基は、多くの場合「インポート」残基と称され、典型的には、「インポート」可変ドメインから取得される。ヒト化は、例えば、Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，１９８６，Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２－２５、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３－２７、及びＶｅｒｈｏｅｙｅｎ ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３９：１５３４－３６）の方法に従い、超可変領域の配列で、ヒト抗体の対応する配列を置換することにより実施することができる。
場合によっては、ヒト化抗体は、親非ヒト抗体（例えば、齧歯動物）の６つのＣＤＲのアミノ酸配列をヒト抗体フレームワークへとグラフトする、ＣＤＲグラフティングにより構築される。例えば、Ｐａｄｌａｎ ｅｔ ａｌ．は、ＣＤＲの残基の約３分の１だけが実際に抗原と接触することを決定し、これらを「特異性決定残基」又はＳＤＲと呼んだ（Ｐａｄｌａｎ ｅｔ ａｌ．，１９９５，ＦＡＳＥＢ Ｊ．９：１３３－３９）。ＳＤＲグラフティングの技術では、ＳＤＲ残基のみが、ヒト抗体フレームワークにグラフト化される（例えば、Ｋａｓｈｍｉｒｉ ｅｔ ａｌ．，２００５，Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：２５－３４を参照されたい）。
ヒト化抗体を作るのに使用するための軽鎖及び重鎖両方のヒト可変ドメインの選択は、抗原性を低減するのに重要であり得る。例えば、いわゆる「ベストフィット」方法に従い、非ヒト（例えば、齧歯動物）抗体の可変ドメインの配列を、既知のヒト可変ドメイン配列のライブラリの全体に対してスクリーニングする。齧歯動物のヒト配列に最も近いヒト配列は、ヒト化抗体のヒト骨格として選択され得る（Ｓｉｍｓ ｅｔ ａｌ．，１９９３，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２２９６－３０８、及びＣｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，１９８７，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－１７）。別の方法は、軽鎖又は重鎖の特定のサブグループの全てのヒト抗体のコンセンサス配列に由来する特定のフレームワークを使用する。同じフレームワークをいくつかの異なるヒト化抗体に使用することができる（Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：４２８５－８９、及びＰｒｅｓｔａ ｅｔ ａｌ．，１９９３，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２６２３－３２）。場合によっては、フレームワークは、最も存在量が多いヒトサブクラスであるＶＬ６サブグループＩ（ＶＬ６Ｉ）及びＶＨサブグループＩＩＩ（ＶＨＩＩＩ）のコンセンサス配列に由来する。別の方法では、ヒト生殖細胞系列遺伝子をフレームワーク領域の供給源として使用する。
スーパーヒト化と呼ばれるＣＤＲの比較に基づいた代替パラダイムでは、ＦＲの相同性は関係ない。この方法は、非ヒト配列及び機能的ヒト生殖細胞系列遺伝子レパートリを比較することからなる。次いで、マウス配列と同じ又は密接に関連した標準構造をコードする遺伝子が選択される。次に、非ヒト抗体と標準構造を共有する遺伝子のうち、ＣＤＲ内の相同性が最も高い遺伝子をＦＲドナーとして選択する。最後に、非ヒトＣＤＲをこれらのフレームワークにグラフト化する（例えば、Ｔａｎ ｅｔ ａｌ．，２００２，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６９：１１１９－２５）。
更に、抗体は、抗原に対する親和性及びその他の好ましい生物学的特性を保持したままヒト化されることが概して望ましい。この目標を達成するために、ある方法によれば、親配列及びヒト化配列の三次元モデルを使用して、親配列及び様々な概念のヒト化産物を分析するプロセスによって、ヒト化抗体を調製する。三次元の免疫グロブリンモデルが一般的に利用可能であり、当業者に周知である。選択された免疫グロブリン配列候補について確率の高い三次元立体構造を図示及び表示するコンピュータプログラムが利用可能である。これらには、例えば、ＷＡＭ（Ｗｈｉｔｅｌｅｇｇ ａｎｄ Ｒｅｅｓ，２０００，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．１３：８１９－２４）、Ｍｏｄｅｌｌｅｒ（Ｓａｌｉ ａｎｄ Ｂｌｕｎｄｅｌｌ，１９９３，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２３４：７７９－８１５）、Ｓｗｉｓｓ ＰＤＢ Ｖｉｅｗｅｒ（Ｇｕｅｘ ａｎｄ Ｐｅｉｔｓｃｈ，１９９７，Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ １８：２７１４－２３）が挙げられる。これらの表示について精査することにより、免疫グロブリン配列候補の機能において残基が示す可能性の高い働きの分析、例えば、免疫グロブリン候補が、その抗原結合能に影響を及ぼす残基についての分析が可能となる。このようにして、標的抗原に対する親和性の増大など、所望の抗体特性が達成されるように、レシピエント配列及びインポート配列から、ＦＲ残基を選択し組み合わせることができる。概して、超可変領域残基は、抗原結合に直接的に、ほとんど実質的に関与する。
抗体のヒト化の別の方法は、Ｈｕｍａｎ Ｓｔｒｉｎｇ Ｃｏｎｔｅｎｔ（ＨＳＣ）と呼ばれる抗体のヒト性の測定基準に基づいている。この方法では、マウスの配列とヒト生殖細胞系列遺伝子のレパートリを比較し、その違いをＨＳＣとしてスコアリングする。次いで、標的配列は、全体的な同一性測定を使用して多様なヒト化バリアントを生成するのではなく、そのＨＳＣを最大化することによってヒト化される（Ｌａｚａｒ ｅｔ ａｌ．，２００７，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４４：１９８６－９８）。
上記の方法に加えて、経験的な方法を用いてヒト化抗体を生成及び選択することができる。これらの方法には、ヒト化変異体の大規模なライブラリを生成し、濃縮技術又はハイスループットスクリーニング技術を使用する最適なクローンの選択に基づく方法がある。抗体変異体は、ファージ、リボソーム、及び酵母ディスプレイライブラリから、並びに細菌コロニースクリーニングによって、単離することができる（例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ，２００５，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２３：１１０５－１６、Ｄｕｆｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，２００６，Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２４：５２３－２９、Ｆｅｌｄｈａｕｓ ｅｔ ａｌ．，２００３，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２１：１６３－７０、及びＳｃｈｌａｐｓｃｈｙ ｅｔ ａｌ．，２００４，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．Ｄｅｓ．Ｓｅｌ．１７：８４７－６０を参照されたい）。
ＦＲライブラリアプローチでは、ＦＲの特定の位置に複数の残基変異体を導入した後、ライブラリをスクリーニングして、グラフトされたＣＤＲを最もよくサポートするＦＲを選択する。置換される残基は、ＣＤＲ構造に寄与する可能性があると同定された「バーニア」残基の一部又は全て（例えば、Ｆｏｏｔｅ ａｎｄ Ｗｉｎｔｅｒ，１９９２，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２４：４８７－９９を参照されたい）、又はＢａｃａ ｅｔ ａｌによって同定されたより限定された標的残基のセットからのものを含み得る（１９９７，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１０６７８－８４）。
ＦＲシャッフリングでは、全ＦＲを、選択された残基変異体のコンビナトリアルライブラリを創出するのではなく、非ヒトＣＤＲと組み合わせる（例えば、Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ，２００５，３６：４３－６０を参照されたい）。ライブラリは、結合について、まず、ＶＬをヒト化するのに続き、ＶＨをヒト化する、２段階プロセスでスクリーニングすることができる。代替的に、１段階のＦＲシャッフリングプロセスを使用することができる。そのようなプロセスは、得られた抗体が、発現の増強、親和性の増大、及び熱的安定性を含む、生化学的特性及び物理化学的特性の改善を呈したので、２段階スクリーニングより効率的であることが示されている（例えば、Ｄａｍｓｃｈｒｏｄｅｒ ｅｔ ａｌ．，２００７，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４４：３０４９－６０を参照されたい）。
「ヒューマニアリング」方法は、必須の最小特異性決定基（minimum specificity determinant、ＭＳＤ）の実験的同定に基づくものであり、非ヒト断片をヒトＦＲライブラリに順次置き換えし、結合を評価することに基づいている。ヒューマニアリング方法は、非ヒトＶＨ鎖及び非ヒトＶＬ鎖のＣＤＲ３の領域で始まり、ＶＨ及びＶＬの両方の、ＣＤＲ１及びＣＤＲ２を含む、非ヒト抗体の他の領域を、ヒトＦＲへと徐々に置き換える。この手法により、典型的には、エピトープを保持し、ヒトＶセグメントのＣＤＲが明確に異なる複数のサブクラスの抗体を同定する。ヒューマニアリングは、ヒト生殖細胞系列遺伝子抗体に９１～９６％相同な抗体の単離を可能とする（例えば、Ａｌｆｅｎｉｔｏ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｈｅａｌｔｈｔｅｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ’ｓ Ｔｈｉｒｄ Ａｎｎｕａｌ ＰＥＧＳ，Ｔｈｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｓｕｍｍｉｔ，２００７を参照）。
「ヒト操作」方法は、ヒトにおける免疫原性を低減する一方で、元の非ヒト抗体の所望の結合特性を保持する修飾抗体を産生するように、抗体のアミノ酸配列へと特異的変化を施すことにより、マウス抗体又はキメラ抗体若しくは抗体断片などの非ヒト抗体又は抗体断片を変更することを伴う。概して、この技術は、非ヒト（例えば、マウス）抗体のアミノ酸残基を、「低リスク」残基、「中程度のリスク」残基、又は「高リスク」残基として分類することを伴う。分類は、特定の置換を施すことの予測される利益（例えば、ヒトにおける免疫原性のための）を、結果として得られる抗体のフォールディングに置換が影響を及ぼすリスクに対して査定する、グローバルなリスク／有益性の計算を使用して実施する。非ヒト（例えば、マウス）抗体配列の、所与の位置（例えば、低リスク又は中程度のリスク）において置換される、特定のヒトアミノ酸残基は、非ヒト抗体の可変領域に由来するアミノ酸配列を、特異的又はコンセンサスヒト抗体配列の対応する領域とアラインメントすることにより選択することができる。非ヒト配列の低リスク又は中リスクの位置にあるアミノ酸残基は、アラインメントに応じてヒト抗体配列の対応する残基に置き換えることができる。ヒト操作タンパク質を作製するための技術は、Ｓｔｕｄｎｉｃｋａ ｅｔ ａｌ．，１９９４，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ７：８０５－１４、米国特許第５，７６６，８８６号、同第５７７０１９６号、同第５，８２１，１２３号；及び同第５，８６９，６１９号；並びに国際公開第９３／１１７９４号に詳しく記載されている。
複合ヒト抗体は、例えば、Ｃｏｍｐｏｓｉｔｅ Ｈｕｍａｎ Ａｎｔｉｂｏｄｙ（商標）テクノロジ（Ａｎｔｉｔｏｐｅ Ｌｔｄ．，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，Ｕｎｉｔｅｄ Ｋｉｎｇｄｏｍ）を使用して生成することができる。複合ヒト抗体を生成するためには、複数のヒト抗体可変領域配列の断片から、Ｔ細胞エピトープを回避する方法で可変領域配列を設計することで、得られる抗体の免疫原性を最小限に抑える。そのような抗体は、ヒト定常領域配列、例えば、ヒト軽鎖定常領域及び／又はヒト重鎖定常領域を含み得る。
脱免疫化抗体は、Ｔ細胞エピトープが除去された抗体である。脱免疫化抗体を作製する方法が記載されている。例えば、Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．２００９；５２５：４０５－２３，ｘｉｖ、及びＤｅ Ｇｒｏｏｔ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４４：１４８－１５３（２００６）を参照されたい）。脱免疫化抗体は、Ｔ細胞エピトープ枯渇可変領域及びヒト定常領域を含む。略述すると、抗体のＶＨ及びＶＬをクローニングし、その後、Ｔ細胞増殖アッセイにおいて、抗体のＶＨ及びＶＬに由来する重複ペプチドを調べることにより、Ｔ細胞エピトープを同定する。Ｔ細胞エピトープは、ヒトＭＨＣクラスＩＩに結合するペプチドを同定するためのインシリコの方法によって同定される。変異は、ヒトＭＨＣクラスＩＩへの結合を無効にするためにＶＨ及びＶＬに導入される。次いで、ＶＨ及びＶＬを利用して、脱免疫化抗体を生成する。
ヒト抗体
特定の実施形態では、本明細書で提供される多重特異性抗体は、完全ヒト抗ヒト抗体又はその断片を含む。完全ヒト抗体は、当該技術分野で既知の任意の方法によって産生され得る。本明細書で提供されるヒト抗体は、ヒト由来ファージディスプレイライブラリから選択されるＦｖクローン可変ドメイン配列（複数可）を既知のヒト定常ドメイン配列（複数可）と組み合わせることによって構築することができる。あるいは、本開示のヒトモノクローナル抗体は、ハイブリドーマ法によって作製することができる。ヒトモノクローナル抗体を産生するためのヒト骨髄腫細胞株及びマウス－ヒトヘテロ骨髄腫細胞株は、例えば、Ｋｏｚｂｏｒ，１９８４，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３３：３００１－０５、Ｂｒｏｄｅｕｒ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ５１－６３ （１９８７）、及びＢｏｅｒｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：８６－９５に記載されている。
免疫化により、内因性免疫グロブリン産生の非存在下でヒト抗体の完全なレパートリを産生することができるトランスジェニック動物（例えば、マウス）を作製することも可能である。ヒト抗体レパートリを発現するトランスジェニックマウスは、可能性のある多種多様な薬物標的に対する高親和性ヒト配列モノクローナル抗体を生成するために使用されている（例えば、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ，Ａ．，１９９５，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．６（５）：５６１－６６、Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ ａｎｄ Ｔａｕｓｓｉｎｇ，１９９７，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．８（４）：４５５－５８、米国特許第６，０７５，１８１号、及び同第６，１５０，５８４号、並びにＬｏｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．，２００５，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２３：１１１７－２５を参照されたい）。
あるいは、ヒト抗体は、標的抗原に対して指向する抗体を産生するヒトＢリンパ球の不死化を介して調製され得る（例えば、そのようなＢリンパ球は、個体から回収され得るか、又はインビトロで免疫化され得る）（例えば、Ｃｏｌｅ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ（１９８５）、Ｂｏｅｒｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７（１）：８６－９５、及び米国特許第５，７５０，３７３号を参照されたい）。
遺伝子シャッフリングを使用して、非ヒト、例えば、齧歯動物の抗体からヒト抗体を誘導することもでき、この場合、ヒト抗体は、出発非ヒト抗体と同様の親和性及び特異性を有する。「エピトープインプリンティング」又は「誘導選択」とも呼ばれるこの方法によれば、本明細書に記載されるファージディスプレイ技術によって得られる非ヒト抗体断片の重鎖可変領域又は軽鎖可変領域のいずれかが、ヒトＶドメイン遺伝子のレパートリで置き換えられ、非ヒト鎖／ヒト鎖ｓｃＦｖ又はＦａｂキメラの集団が作製される。抗原による選択は、非ヒト鎖／ヒト鎖キメラｓｃＦｖ又はＦａｂの単離をもたらし、ヒト鎖は、一次ファージディスプレイクローンにおける対応する非ヒト鎖の除去の際に破壊された抗原結合部位を回復させるを修復する（例えば、エピトープは、ヒト鎖パートナーの選択を誘導（インプリント）する）。残りの非ヒト鎖を置換するためにプロセスを繰り返すと、ヒト抗体が得られる（例えば、国際公開第９３／０６２１３号、及びＯｓｂｏｕｒｎ ｅｔ ａｌ．，２００５，Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：６１－６８を参照されたい）。ＣＤＲグラフティングによる非ヒト抗体の従来のヒト化とは異なり、この技術は、非ヒト起源のＦＲ又はＣＤＲ残基を有しない完全ヒト抗体を提供する。細胞表面抗原に対してマウス抗体をヒト化するための誘導選択の例としては、卵巣がん細胞上に存在する葉酸結合タンパク質（例えば、Ｆｉｇｉｎｉ ｅｔ ａｌ．，１９９８，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５８：９９１－９６を参照されたい）、及び肝細胞がん上で高度に発現されるＣＤ１４７が挙げられる（例えば、Ｂａｏ ｅｔ ａｌ．，２００５，Ｃａｎｃｅｒ Ｂｉｏｌ．Ｔｈｅｒ．４：１３７４－８０を参照されたい）。
誘導選択アプローチに欠点があるとすれば、一方の抗体鎖をシャッフリングしながら他方の抗体鎖を一定に保つと、エピトープのドリフトが生じ得ることである。非ヒト抗体によって認識されるエピトープを維持するために、ＣＤＲ保持を適用することができる（例えば、Ｋｌｉｍｋａ ｅｔ ａｌ．，２０００，Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ．８３：２５２－６０、及びＢｅｉｂｏｅｒ ｅｔ ａｌ．，２０００，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９６：８３３－４９を参照されたい）。この方法において、非ヒトＶＨ ＣＤＲ３は一般に保持され、これは、このＣＤＲが抗原結合部位の中心にあり得、抗原認識のための抗体の最も重要な領域であり得るからである。しかしながら、場合によっては、非ヒト抗体のＶＨ ＣＤＲ３及びＶＬ ＣＤＲ３、並びにＶＨ ＣＤＲ２、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ１が保持される場合がある。
Ｆｃ操作
本明細書で提供される抗体をＦｃ操作によって修飾することが望ましい場合がある。ある特定の実施形態では、抗体のＦｃ領域に対する修飾は、抗体のエフェクター機能の減少又は排除をもたらす。ある特定の実施形態では、エフェクター機能は、ＡＤＣＣ、ＡＤＣＰ、及び／又はＣＤＣである。いくつかの実施形態では、エフェクター機能は、ＡＤＣＣである。他の実施形態では、エフェクター機能は、ＡＤＣＰである。他の実施形態では、エフェクター機能は、ＣＤＣである。一実施形態では、エフェクター機能は、ＡＤＣＣ及びＡＤＣＰである。一実施形態では、エフェクター機能は、ＡＤＣＣ及びＣＤＣである。一実施形態では、エフェクター機能は、ＡＤＣＰ及びＣＤＣである。一実施形態では、エフェクター機能は、ＡＤＣＣ、ＡＤＣＰ、及びＣＤＣである。これは、抗体のＦｃ領域に１つ又は２つ以上のアミノ酸置換を導入することによって達成することができる。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、ＩｇＧ１サイレント変異を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、ＡＡＳ変異を含む。
ある特定の実施形態では、抗体のＦｃ領域に対する修飾は、抗体のエフェクター機能の増強をもたらす。ある特定の実施形態では、エフェクター機能は、ＡＤＣＣ、ＡＤＣＰ、及び／又はＣＤＣである。いくつかの実施形態では、エフェクター機能は、ＡＤＣＣである。他の実施形態では、エフェクター機能は、ＡＤＣＰである。他の実施形態では、エフェクター機能は、ＣＤＣである。一実施形態では、エフェクター機能は、ＡＤＣＣ及びＡＤＣＰである。一実施形態では、エフェクター機能は、ＡＤＣＣ及びＣＤＣである。一実施形態では、エフェクター機能は、ＡＤＣＰ及びＣＤＣである。一実施形態では、エフェクター機能は、ＡＤＣＣ、ＡＤＣＰ、及びＣＤＣである。これは、抗体のＦｃ領域に１つ又は２つ以上のアミノ酸置換を導入することによって達成することができる。ある特定の実施形態では、Ｆｃ領域は、ＣＤＣ増強変異を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、Ｋ２４８Ｅ及びＴ４３７Ｒ変異を含む。
本明細書で提供される抗体のある特定の実施形態では、Ｆｃ領域は、脱フコシル化されている。
抗体の血清半減期を増加させるために、例えば、米国特許第５，７３９，２７７号に記載されているように、サルベージ受容体結合エピトープを抗体（特に抗体断片）に組み込むことができる。「サルベージ受容体結合エピトープ」という用語は、ＩｇＧ分子のインビボ血清半減期の延長に関与するＩｇＧ分子（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４）のＦｃ領域のエピトープを指す。
代替結合剤
本開示は、本明細書に開示される抗体と同じエピトープと特異的に結合する非免疫グロブリン結合剤を包含する。いくつかの実施形態では、非免疫グロブリン結合剤は、競合結合アッセイにおいて本開示の抗体を置き換える又は本開示の抗体によって置き換えられる剤として同定される。これらの代替結合剤は、例えば、当該技術分野で既知の操作されたタンパク質足場のいずれかを含み得る。そのような足場としては、例えば、リガンド結合部位を形成する４つの超可変ループを支持する剛性ベータバレルを特徴とするタンパク質構造である、リポカリン足場に基づく抗カリンが挙げられる。新規の結合特異性は、機能的ディスプレイ及び誘導選択（guided selection）と組み合わせて、ループ領域における標的ランダム突然変異誘発によって操作され得る（例えば、Ｓｋｅｒｒａ，２００８，ＦＥＢＳ Ｊ．２７５：２６７７－８３を参照）。他の好適な足場としては、例えば、ヒトフィブロネクチンＩＩＩの１０番目の細胞外ドメインに基づくアドネクチン又はモノボディ（例えば、Ｋｏｉｄｅ ａｎｄ Ｋｏｉｄｅ，２００７，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３５２：９５－１０９を参照されたい）、ブドウ球菌タンパク質ＡのＺドメインに基づくアフィボディ（例えば、Ｎｙｇｒｅｎ ｅｔ ａｌ．，２００８，ＦＥＢＳ Ｊ．２７５：２６６８－７６を参照されたい）、アンキリン反復タンパク質に基づくＤＡＲＰｉｎ（例えば、Ｓｔｕｍｐｐ ｅｔ ａｌ．，２００８，Ｄｒｕｇ．Ｄｉｓｃｏｖ．Ｔｏｄａｙ １３：６９５－７０１を参照されたい）、ヒトＦｙｎタンパク質キナーゼのＳＨ３ドメインに基づくフィノマー（例えば、Ｇｒａｂｕｌｏｖｓｋｉ ｅｔ ａｌ．，２００７，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８２：３１９６－２０４を参照されたい）、Ｓｕｌｆｏｌｏｂｕｓ ａｃｉｄｏｌａｒｉｕｓのＳａｃ７ｄに基づくアフィチン（例えば、Ｋｒｅｈｅｎｂｒｉｎｋ ｅｔ ａｌ．，２００８，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３８３：１０５８－６８を参照されたい）、ヒトｙ－Ｂ－クリスタリンに基づくアフィリン（例えば、Ｅｂｅｒｓｂａｃｈ ｅｔ ａｌ．，２００７，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３７２：１７２－８５を参照されたい）、膜受容体タンパク質のＡドメインに基づくアビマー（例えば、Ｓｉｌｖｅｒｍａｎ ｅｔ ａｌ．，２００５，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２３：１５５６－６１を参照されたい）、システインリッチノッチンペプチド（例えば、Ｋｏｌｍａｒ，２００８，ＦＥＢＳ Ｊ．２７５：２６８４－９０を参照されたい）、及び操作されたクニッツ型阻害剤（例えば、Ｎｉｘｏｎ ａｎｄ Ｗｏｏｄ，２００６，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｄｒｕｇ．Ｄｉｓｃｏｖ．Ｄｅｖ．９：２６１－６８）を挙げることができる。概説については、例えば、Ｇｅｂａｕｅｒ ａｎｄ Ｓｋｅｒｒａ，２００９，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．１３：２４５－５５を参照されたい。
抗体バリアント
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される、例えば、ＮＫＧ２ｄ、ＮＫｐ４６と結合する抗体又は抗原結合断片のアミノ酸配列修飾が企図される。例えば、抗体の結合親和性及び／又は他の生物学的特性（特異性、熱安定性、発現レベル、エフェクター機能、グリコシル化、免疫原性の低下、又は溶解性を含むがこれらに限定されない）を改善することが望ましい場合がある。したがって、本明細書において記載される抗体に加えて、抗体バリアントも調製され得ることが企図される。例えば、抗体バリアントは、適切なヌクレオチド変化を、コードするＤＮＡに導入することによって、及び／又は所望の抗体又はポリペプチドを合成することによって調製することができる。当業者は、アミノ酸変化が、グリコシル化部位の数若しくは位置の変化、又は膜アンカー特性の変更など、抗体の翻訳後プロセス変更し得ることを理解する。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、例えば、任意のタイプの分子を抗体に共有結合させることによって、化学的に修飾される。抗体誘導体は、例えば、グリコシル化、アセチル化、ペグ化、リン酸化、アミド化、既知の保護（protecting/blocking）基による誘導体化、タンパク質分解切断、細胞のリガンド又は他のタンパク質への連結などにより学修飾された抗体を含み得る。多数の化学的修飾のうちのいずれかは、特異的化学開裂、アセチル化、製剤化、ツニカマイシンの代謝的合成などを含むがこれらに限定されない、既知の技術により実行することができる。加えて、抗体は、１つ又は２つ以上の非古典的アミノ酸を含み得る。
変異は、抗体又はポリペプチドをコードする１つ又は２つ以上のコドンの置換、欠失、又は挿入であって、天然配列の抗体又はポリペプチドと比較してアミノ酸配列の変化を結果としてもたらす、置換、欠失、又は挿入であり得る。アミノ酸置換は、ロイシンのセリンによる置き換え、例えば、保存的アミノ酸の置き換えなど、あるアミノ酸を類似の構造的及び／又は化学的特性を有する別のアミノ酸に置き換えた結果であり得る。当業者に既知である標準的な技術を使用して、例えば、部位特異的変異誘発及びアミノ酸置換をもたらすＰＣＲ媒介変異誘発を含む、本明細書で提供される分子をコードするヌクレオチド配列に変異を導入することができる。挿入又は欠失は、任意選択で、約１～５個のアミノ酸の範囲であり得る。ある特定の実施形態では、置換、欠失、又は挿入は、元の分子と比較して、２５個未満のアミノ酸置換、２０個未満のアミノ酸置換、１５個未満のアミノ酸置換、１０個未満のアミノ酸置換、５つ未満のアミノ酸置換、４つ未満のアミノ酸置換、３つ未満のアミノ酸置換、又は２つ未満のアミノ酸置換を含む。具体的な実施形態では、置換は、１つ又は２つ以上の予測される非必須アミノ酸残基で行われる保存的アミノ酸置換である。許容される変異は、配列内に、アミノ酸の挿入、欠失、又は置換を体系的に施し、結果として得られるバリアントを、完全長天然配列又は成熟天然配列が呈する活性について調べることにより決定することができる。
アミノ酸配列の挿入には、１つの残基から１００個以上の残基を含むポリペプチドまでの長さのアミノ末端及び／又はカルボキシル末端の融合、並びに単一又は複数のアミノ酸残基の配列内挿入が含まれる。末端挿入の例としては、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体が挙げられる。抗体分子の他の挿入バリアントは、抗体のＮ末端又はＣ末端の、酵素（例えば、抗体指向酵素によるプロドラッグ療法）又は抗体の血清半減期を延長するポリペプチドへの融合体を含む。
「保存的アミノ酸置換」は、アミノ酸残基が、同様の電荷を持つ側鎖を有するアミノ酸残基で置き換えられるアミノ酸置換である。類似した電荷を持つ側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーが定義されている。これらのファミリーには、塩基性側鎖（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非電荷極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、ベータ分岐側鎖（例えば、スレオニン、バリン、イソロイシン）、及び芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を有するアミノ酸が含まれる。代替的に、飽和変異誘発などにより、コード配列の全部又は一部に沿ってランダムに変異を導入することができ、得られた突然変異体の生物活性をスクリーニングして、活性を保持する突然変異体を同定することもできる。変異誘発の後、コードされたタンパク質を発現させ、タンパク質の活性を決定することができる。
抗体の生物学的特性における実質的な修飾は、（ａ）置換領域内のポリペプチドの構造骨格、例えば、シート又はヘリックス立体構造、（ｂ）標的部位における分子の電荷若しくは疎水性、又は（ｃ）側鎖のバルク、の維持に対するそれらの効果が著明に異なる置換を選択することにより達成することができる。代替的に、保存的（例えば、同様な特性及び／又は側鎖による、アミノ酸群内の）置換は、特性を維持するか、又は特性を著明に変化させないように施すことができる。アミノ酸は、以下に挙げるその側鎖の特性の類似性に応じてグループ化することができる（例えば、Ｌｅｈｎｉｎｇｅｒ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ７３－－７５（２ｄ ｅｄ．１９７５）参照）：（１）非極性：Ａｌａ（Ａ）、Ｖａｌ（Ｖ）、Ｌｅｕ（Ｌ）、Ｉｌｅ（Ｉ）、Ｐｒｏ（Ｐ）、Ｐｈｅ（Ｆ）、Ｔｒｐ（Ｗ）、Ｍｅｔ（Ｍ）；（２）非荷電極性：Ｇｌｙ（Ｇ）、Ｓｅｒ（Ｓ）、Ｔｈｒ（Ｔ）、Ｃｙｓ（Ｃ）、Ｔｙｒ（Ｙ）、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｇｌｎ（Ｑ）；（３）酸性：Ａｓｐ（Ｄ）、Ｇｌｕ（Ｅ）；及び（４）塩基性：Ｌｙｓ（Ｋ）、Ａｒｇ（Ｒ）、Ｈｉｓ（Ｈ）。
代替的に、天然に存在する残基は、共通の側鎖特性に基づいてグループに分けられることもある：（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；（５）鎖の向きに影響を与える残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。
非保存的置換は、これらのクラスのうちの１つのメンバーを、別のクラスのメンバーと交換することを伴う。そのような置換残基はまた、保存的置換部位に、又は残りの（非保存的）部位に導入され得る。したがって、一実施形態では、ＮＫＧ２ｄエピトープと結合する抗体又はその抗原結合断片は、本明細書に記載される抗体のアミノ酸配列と少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。したがって、一実施形態では、ＮＫｐ４６エピトープと結合する抗体又はその抗原結合断片は、本明細書に記載される抗体のアミノ酸配列と少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
変異は、オリゴヌクレオチド媒介（部位特異的）変異誘発、アラニンスキャニング、ＰＣＲ変異誘発など、当該技術分野で既知の方法を用いて行うことができる。部位特異的変異誘発（例えば、Ｃａｒｔｅｒ，１９８６，Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ．２３７：１－７、及びＺｏｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９８２，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１０：６４８７－５００を参照されたい）、カセット変異誘発（例えば、Ｗｅｌｌｓ ｅｔ ａｌ．，１９８５，Ｇｅｎｅ ３４：３１５－２３を参照されたい）、又は他の既知の技術をクローン化したＤＮＡに対して実行して、抗ＮＫＧ２ｄ又は抗ＮＫｐ４６抗体バリアントＤＮＡを産生することができる。
本明細書で提供される抗体の適切な立体構造の維持に関与していない任意のシステイン残基は、分子の酸化安定性を改善し、異常な架橋を防ぐために、例えば、アラニンやセリンなど別のアミノ酸で置換することもできる。逆に、その安定性を改善するためにシステイン結合を抗体に付加してもよい（例えば、抗体がＦｖ断片などの抗体断片である場合）。
いくつかの実施形態では、本開示の抗体分子は、「脱免疫化」抗体である。「脱免疫化」抗体は、ヒト化抗体又はキメラ抗体に由来する抗体であり、それぞれの元の脱免疫化されていない抗体と比較して、抗体の免疫原性の低減をもたらす、そのアミノ酸配列における１つ又は２つ以上の改変を有する。このような抗体変異体を生成するための手順の１つは、抗体分子のＴ細胞エピトープの同定及び除去を含む。第１の工程では、抗体分子の免疫原性は、当該技術分野で即知のいくつかの方法、例えば、Ｔ細胞エピトープのインビトロ決定又はそのようなエピトープのインシリコ予測によって決定することができる。Ｔ細胞エピトープ機能に重要な残基が同定されたら、免疫原性を除去し、抗体活性を保持するために変異を作製することができる。総説については、例えば、Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，２００９，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ５２５：４０５－２３を参照されたい。
インビトロ親和性成熟
いくつかの実施形態では、親抗体と比較して親和性、安定性、又は発現レベルなどの特性が改善された抗体バリアントは、インビトロ親和性成熟によって調製され得る。天然のプロトタイプと同様に、インビトロでの親和性成熟は、変異及び選択の原理に基づいている。抗体のライブラリは、生物体（例えば、ファージ、細菌、酵母、又は哺乳動物細胞）の表面上に、又はそれらをコードするｍＲＮＡ若しくはＤＮＡと結合して（例えば、共有結合又は非共有結合で）提示される。ディスプレイされた抗体を親和性選択することで、その抗体をコードする遺伝情報を持つ生物又は複合体の単離が可能になる。ファージディスプレイなどのディスプレイ法を用いて、２～３回の変異と選択を繰り返すことで、通常、ナノモル台前半の親和性を持つ抗体断片が得られる。親和性成熟された抗体は、標的抗原に対してナノモル又はピコモルの親和性を有し得る。
ファージディスプレイは、抗体の表示と選択のための広く普及した方法である。抗体は、Ｆｄ又はＭ１３バクテリオファージの表面に、バクテリオファージコートタンパク質への融合物として表示される。選択は、抗原に曝露されて、ファージディスプレイされた抗体を、標的に結合させること、すなわち「パニング」と呼ばれるプロセスを伴う。抗原に結合したファージを回収し、細菌に感染させてファージを産生し、更に選択を繰り返すために使用する。総説については、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ，２００２，Ｍｅｔｈｏｄｓ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１７８：１－３７；及びＢｒａｄｂｕｒｙ ａｎｄ Ｍａｒｋｓ，２００４，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２９０：２９－４９を参照されたい。
酵母ディスプレイシステムでは（例えば、Ｂｏｄｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．１５：５５３－５７、及びＣｈａｏ ｅｔ ａｌ．，２００６，Ｎａｔ．Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ １：７５５－６８を参照されたい）、抗体は、Ａｇａ１ｐとのジスルフィド結合を介して酵母細胞壁に付着する、酵母凝集素タンパク質Ａｇａ２ｐの接着サブユニットに融合され得る。Ａｇａ２ｐを介したタンパク質のディスプレイは、タンパク質を細胞表面から遠ざけ、酵母細胞壁上の他の分子との相互作用の可能性を最小限にする。磁気分離及びフローサイトメトリーを用いてライブラリをスクリーニングし、親和性又は安定性が改善された抗体を選択する。目的の可溶性抗原への結合は、ビオチン化抗原及びフルオロフォアにコンジュゲートしたストレプトアビジンなどの二次試薬で酵母を標識することによって決定される。抗体の表面発現の変形は、ｓｃＦｖに隣接する血球凝集素又はｃ－Ｍｙｃエピトープタグのいずれかを免疫蛍光標識することで測定できる。発現は、ディスプレイされたタンパク質の安定性と相関することが示されているため、抗体を選択して、安定性と親和性を改善させることができる（例えば、Ｓｈｕｓｔａ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９２：９４９－５６を参照されたい）。酵母ディスプレイの追加の利点は、ディスプレイされたタンパク質が真核生物の酵母細胞の小胞体で折り畳まれ、小胞体シャペロンと品質管理機構が利用されることである。成熟が完了すると、酵母の表面に表示されている間、抗体の親和性を便利に「滴定」することができ、各クローンの発現と精製の必要性がなくなる。酵母表面ディスプレイの理論的な限界は、他のディスプレイ方法に比べて機能的なライブラリのサイズが小さくなる可能性があることである。しかし、最近のアプローチでは、酵母細胞の交配系を利用して、１０１４サイズと推定されるコンビナトリアル多様性を創出している（例えば、米国特許出願公開第２００３／０１８６３７４号、及びＢｌａｉｓｅ ｅｔ ａｌ．，２００４，Ｇｅｎｅ ３４２：２１１－１８参照されたい）。
リボソームディスプレイでは、抗体－リボソーム－ｍＲＮＡ（antibody-ribosome-mRNA、ＡＲＭ）の複合体を生成し、無細胞系で選択する。特定の抗体ライブラリをコードするＤＮＡライブラリは、終止コドンを欠くスペーサー配列と遺伝的に融合している。このスペーサー配列は、翻訳されてもペプチジルｔＲＮＡに付着したままリボソームトンネルを占めるため、目的のタンパク質がリボソームから突出して折り畳まれることになる。得られたｍＲＮＡ、リボソーム、及びタンパク質の複合体は、表面に結合したリガンドと結合し、リガンドとの親和性捕捉により、抗体とそれをコードするｍＲＮＡを同時に単離することができる。その後、リボソームに結合したｍＲＮＡを逆転写してｃＤＮＡに戻し、次いで変異誘発を受け、次回の選択に使用することができる（例えば、Ｆｕｋｕｄａ ｅｔ ａｌ．，２００６，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．３４：ｅ１２７を参照されたい）。ｍＲＮＡディスプレイでは、ピューロマイシンをアダプター分子として用いて、抗体とｍＲＮＡとの間に共有結合を形成する（Ｗｉｌｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，２００１，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９８：３７５０－５５を参照されたい）。
これらの方法は完全にインビトロで行われるため、他の選択技術に比べて主に２つの利点がある。最初に、ライブラリの多様性は、細菌細胞の形質転換効率によって制限されるのではなく、試験管内に存在するリボソーム及び異なるｍＲＮＡ分子の数によってのみ制限される。２番目に、各回の選択の後に、例えば、非プルーフリーディングポリメラーゼによって、ランダムな変異を容易に導入することができ、これは、多様化工程の後にライブラリを変換する必要がないためである。
いくつかの実施形態では、哺乳動物のディスプレイシステムを使用することができる。
多様性はまた、標的化された方法で、又はランダムな導入を介して、抗体ライブラリのＣＤＲに導入され得る。前者のアプローチには、高レベル又は低レベルの変異誘発を介して抗体の全てのＣＤＲを順次標的にすること、又は体細胞超変異の単離したホットスポット（例えば、Ｈｏ ｅｔ ａｌ．，２００５，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８０：６０７－１７）、又は実験的根拠若しくは構造的理由から親和性に影響を与えると疑われる残基を標的にすることが含まれる。また、ＤＮＡシャッフリング又は同様の技術を介して、天然に多様性のある領域を置き換えることで、多様性を導入することもできる（例えば、Ｌｕ ｅｔ ａｌ．，２００３，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７８：４３４９６－５０７、米国特許第５，５６５，３３２号及び同第６，９８９，２５０号を参照されたい）。代替技術は、フレームワーク領域の残基に伸びる超可変ループを標的としており（例えば、Ｂｏｎｄ ｅｔ ａｌ．，２００５，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３４８：６９９－７０９を参照されたい）、ＣＤＲにおけるループの欠失及び挿入を採用するか、又はハイブリダイゼーションに基づく多様化を利用している（例えば、米国特許出願公開第２００４／０００５７０９号を参照されたい）。ＣＤＲに多様性を生成する追加的な方法は、例えば、米国特許第７９８５，８４０号に開示されている。抗体ライブラリ及び／又は抗体親和性成熟の生成に使用できる更なる方法は、例えば、米国特許第８，６８５，８９７号及び同第８，６０３，９３０号、並びに米国特許出願公開第２０１４／０１７０７０５号、同第２０１４／００９４３９２号、同第２０１２／００２８３０１号、同第２０１１／０１８３８５５号、及び同第２００９／００７５３７８号に開示されており、これらは各々参照により本明細書に組み込まれる。
ライブラリのスクリーニングは、当該技術分野で既知の様々な技術によって達成することができる。例えば、ドメイン抗体を、固体支持体、カラム、ピン、若しくはセルロース／ポリ（フッ化ビニリデン）膜／他のフィルターに固定化し、吸着プレートに固定される若しくは細胞選別で使用される宿主細胞に発現させる、又はストレプトアビジンでコーティングされたビーズで捕捉のためにビオチンにコンジュゲートさせる、又はディスプレイライブラリをパニングするための任意の他の方法で使用することができる。
インビトロでの親和性成熟法の総説については、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ，２００５，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２３：１１０５－１６、Ｑｕｉｒｏｚ ａｎｄ Ｓｉｎｃｌａｉｒ，２０１０，Ｒｅｖｉｓｔａ Ｉｎｇｅｎｅｒｉａ Ｂｉｏｍｅｄｉａ ４：３９－５１、及びその中の参考文献を参照されたい。
抗体修飾
本明細書で提供される、例えば、ＮＫＧ２ｄ及びＮＫｐ４６と結合する抗体の共有結合修飾は、本開示の範囲内に含まれる。共有結合修飾には、抗体の標的アミノ酸残基を、抗体の選択された側鎖又はＮ末端若しくはＣ末端残基と反応可能な有機誘導体化剤と反応させることが含まれる。他の修飾としては、グルタミニル及びアスパラギニル残基のそれぞれ対応するグルタミル及びアスパルチル残基への脱アミド化、プロリン及びリジンのヒドロキシル化、セリル又はスレオニル残基のヒドロキシル基のリン酸化、リジン、アルギニン及びヒスチジン側鎖のα－アミノ基のメチル化（例えば、Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ７９－８６（１９８３）を参照されたい）、Ｎ末端アミンのアセチル化、並びにＣ末端カルボキシル基のアミド化が挙げられる。
本開示の範囲内に含まれる、本明細書で提供される抗体の他の種類の共有結合修飾には、抗体又はポリペプチドのネイティブなグリコシル化パターンを変更すること（例えば、Ｂｅｃｋ ｅｔ ａｌ．，２００８，Ｃｕｒｒ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．９：４８２－５０１、及びＷａｌｓｈ，２０１０，Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ．Ｔｏｄａｙ １５：７７３－８０を参照されたい）、及び抗体を様々な非タンパク質ポリマー、例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリプロピレングリコール、又はポリオキシアルキレンのうちの１つに、例えば、米国特許第４，６４０，８３５号、同第４，４９６，６８９号、同第４，３０１，１４４号、同第４，６７０，４１７号、同第４，７９１，１９２号、又は同第４，１７９，３３７号に記載されている方法で連結することが含まれる。
本開示の抗体はまた、別の異種ポリペプチド又はアミノ酸配列、例えば、エピトープタグ（例えば、Ｔｅｒｐｅ，２００３，Ａｐｐｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．６０：５２３－３３を参照されたい）、又はＩｇＧ分子のＦｃ領域（例えば、Ａｒｕｆｆｏ，Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｆｕｓｉｏｎ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ２２１－４２（Ｃｈａｍｏｗ ａｎｄ Ａｓｈｋｅｎａｚｉ ｅｄｓ．，１９９９）を参照されたい）に融合された抗体を含むキメラ分子を形成するように修飾され得る。
例えば、ＮＫＧ２ｄ、ＮＫｐ４６、及び異種ポリペプチドと結合する本明細書で提供される抗体を含む融合タンパク質も本明細書で提供される。
また、ＮＫＧ２ｄ、ＮＫｐ４６抗原と結合する抗体のパネルも本明細書で提供される。特定の実施形態では、抗体のパネルは、ＮＫＧ２ｄ、ＮＫｐ４６抗原に対する異なる会合速度、異なる解離速度、異なる親和性、及び／又はＮＫＧ２ｄ、ＮＫｐ４６抗原に対する異なる特異性を有する。いくつかの実施形態では、パネルは、約１０個、約２５個、約５０個、約７５個、約１００個、約１２５個、約１５０個、約１７５個、約２００個、約２５０個、約３００個、約３５０個、約４００個、約４５０個、約５００個、約５５０個、約６００個、約６５０個、約７００個、約７５０個、約８００個、約８５０個、約９００個、約９５０個、又は約１０００個以上の抗体を含むか、又はそれからなる。抗体のパネルは、ＥＬＩＳＡなどのアッセイに例えば、９６ウェル又は３８４ウェルプレートで使用することができる。
免疫コンジュゲート（Immunoconjugates）
本開示はまた、合成リンカーによって１つ又は２つ以上の非抗体因子と共有結合された本開示の抗体のうちのいずれか１つを含むコンジュゲートを提供する。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、例えば、治療剤（例えば、細胞傷害薬剤）、あるいは診断用若しくは検出可能な分子とコンジュゲートされるか、又は組換えにより融合される。コンジュゲート又は組換え融合抗体は、例えば、疾患若しくは障害を治療又は予防するために有用であり得る。コンジュゲート又は組換え融合抗体は、例えば、疾患若しくは障害の発症、発達、進行、及び／又は重症度をモニタリングあるいは予知するために有用であり得る。
このような診断及び検出は、例えば、抗体を検出可能な物質にカップリングさせることにより達成することができ、検出可能な物質には、様々な酵素、例えば、限定されないが、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、ベータ－ガラクトシダーゼ、又はアセチルコリンエステラーゼ；補欠分子族、例えば、限定されないが、ストレプトアビジン／ビオチン及びアビジン／ビオチン；蛍光物質、例えば、限定されないが、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシネート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、ダンシルクロリド、又はフィコエリスリン；発光物質、例えば、限定されないが、ルミノール；生体発光物質、例えば、限定されないが、ルシフェラーゼ、ルシフェリン、又はエクオリン；化学発光物質、例えば、限定されないが、アクリジニウム系化合物又はＨＡＬＯＴＡＧ；放射性物質、例えば、限定されないが、ヨウ素（１３１Ｉ、１２５Ｉ、１２３Ｉ、及び１２１Ｉ）、炭素（１４Ｃ）、硫黄（３５Ｓ）、トリチウム（３Ｈ）、インジウム（１１５Ｉｎ、１１３Ｉｎ、１１２Ｉｎ、１１１Ｉｎ）、テクネチウム（９９Ｔｃ）、タリウム（２０１Ｔｉ）、ガリウム（６８Ｇａ及び６７Ｇａ）、パラジウム（１０３Ｐｄ）、モリブデン（９９Ｍｏ）、キセノン（１３３Ｘｅ）、フッ素（１８Ｆ）、１５３Ｓｍ、１７７Ｌｕ、１５９Ｇｄ、１４９Ｐｍ、１４０Ｌａ、１７５Ｙｂ、１６６Ｈｏ、９０Ｙ、４７Ｓｃ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１４２Ｐｒ、１０５Ｒｈ、９７Ｒｕ、６８Ｇｅ、５７Ｃｏ、６５Ｚｎ、８５Ｓｒ、３２Ｐ、１５３Ｇｄ、１６９Ｙｂ、５１Ｃｒ、５４Ｍｎ、７５Ｓｅ、１１３Ｓｎ、又は１１７Ｓｎ；様々な陽電子放出断層撮影を使用する陽電子放出金属；及び非放射性常磁性金属イオンが含まれる。
また、異種タンパク質若しくはポリペプチド（又はその断片、例えば、約１０、約２０、約３０、約４０、約５０、約６０、約７０、約８０、約９０、若しくは約１００アミノ酸のポリペプチド）に組換えにより融合又は化学的に結合（共有結合又は非共有結合）して融合タンパク質を生成する抗体、及びその使用も本明細書で提供される。特に、本明細書では、本明細書で提供される抗体の抗原結合断片（例えば、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及び／又はＣＤＲ３）と、異種タンパク質、ポリペプチド、又はペプチドとを含む融合タンパク質が提供される。一実施形態では、抗体が融合される異種タンパク質、ポリペプチド、又はペプチドは、抗体を特定の細胞型に標的化するのに有用である。
更に、本明細書で提供される抗体は、精製を容易にするために、ペプチドなどのマーカー又は「タグ」配列と融合させることができる。具体的な実施形態では、マーカー又はタグのアミノ酸配列は、とりわけｐＱＥベクター（例えば、ＱＩＡＧＥＮ，Ｉｎｃ．を参照されたい）に提供されているタグなどのヘキサヒスチジンペプチドであり、その多くが市販されている。例えば、Ｇｅｎｔｚ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：８２１－２４に記載されているように、ヘキサヒスチジンは、融合タンパク質の都合のよい精製を提供する。精製に有用な他のペプチドタグとしては、インフルエンザ血球凝集素タンパク質に由来するエピトープに対応する血球凝集素（「ＨＡ」）タグ（Ｗｉｌｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９８４，Ｃｅｌｌ ３７：７６７－７８）、及び「ＦＬＡＧ」タグが挙げられるが、これらに限定されるものではない。
部位（ポリペプチドを含む）を抗体に融合又はコンジュゲートさせる方法が既知である（例えば、Ａｒｎｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｆｏｒ Ｉｍｍｕｎｏｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｏｆ Ｄｒｕｇｓ ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，ｉｎ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ ２４３－５６（Ｒｅｉｓｆｅｌｄ ｅｔ ａｌ．ｅｄｓ．，１９８５）、Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｆｏｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，ｉｎ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ６２３－５３（Ｒｏｂｉｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ．ｅｄｓ．，２ｄ ｅｄ．１９８７）、Ｔｈｏｒｐｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｃａｒｒｉｅｒｓ ｏｆ Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ａｇｅｎｔｓ ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ：Ａ Ｒｅｖｉｅｗ，ｉｎ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ４７５－５０６（Ｐｉｎｃｈｅｒａ ｅｔ ａｌ．ｅｄｓ．，１９８５）、Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｒｅｓｕｌｔｓ，ａｎｄ Ｆｕｔｕｒｅ Ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ ｏｆ ｔｈｅ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｕｓｅ ｏｆ Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ Ａｎｔｉｂｏｄｙ ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，ｉｎ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｙ ３０３－１６（Ｂａｌｄｗｉｎ ｅｔ ａｌ．ｅｄｓ．，１９８５）、Ｔｈｏｒｐｅ ｅｔ ａｌ．，１９８２，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．６２：１１９－５８、米国特許第５，３３６，６０３号、同第５，６２２，９２９号、同第５，３５９，０４６号、同第５，３４９，０５３号、同第５，４４７，８５１号、同第５，７２３，１２５号、同第５，７８３，１８１号、同第５，９０８，６２６号、同第５，８４４，０９５号、及び同第５，１１２，９４６号、欧州特許第３０７，４３４号、欧州特許第３６７，１６６号、欧州特許第３９４，８２７号、国際公開第９１／０６５７０号、同第９６／０４３８８号、同第９６／２２０２４号、同第９７／３４６３１号、及び同第９９／０４８１３号；Ａｓｈｋｅｎａｚｉ ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８８：１０５３５－３９、Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ｎａｔｕｒｅ，３３１：８４－８６、Ｚｈｅｎｇ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５４：５５９０－６００、並びにＶｉｌ ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：１１３３７－４１を参照されたい）。
融合タンパク質は、例えば、遺伝子シャッフリング、モチーフシャッフリング、エクソンシャッフリング、及び／又はコドンシャッフリング（総称して「ＤＮＡシャッフリング」と呼ばれる）の手法で生成され得る。ＤＮＡシャッフリングを使用して、例えば、より高い親和性及びより低い解離速度を有する抗体を含む、本明細書で提供される抗体の活性を変更することができる（例えば、米国特許第５，６０５，７９３号、同第５，８１１，２３８号、同第５，８３０，７２１号、同第５，８３４，２５２号、及び同第５，８３７，４５８号、Ｐａｔｔｅｎ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．８：７２４－３３、Ｈａｒａｙａｍａ，１９９８，Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１６（２）：７６－８２、Ｈａｎｓｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２８７：２６５－７６、及びＬｏｒｅｎｚｏ ａｎｄ Ｂｌａｓｃｏ，１９９８，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ２４（２）：３０８－１３を参照されたい）。抗体、又はコードされた抗体は、組換えの前に、エラープローンＰＣＲ、ランダムヌクレオチド挿入又は他の方法によるランダム変異誘発を受けることによって変更され得る。本明細書で提供される抗体をコードするポリヌクレオチドは、１つ又は２つ以上の異種分子の１つ又は２つ以上のコンポーネント、モチーフ、セクション、パート、ドメイン、断片などと組換えられ得る。
本明細書で提供される抗体は、例えば、米国特許第４，６７６，９８０号に記載されているように、二次抗体とコンジュゲートして抗体ヘテロコンジュゲートを形成することもできる。
本明細書で提供される抗体は、固体支持体に付着させることもでき、これはイムノアッセイ又は標的抗原の精製に特に有用である。このような固体支持体としては、ガラス、セルロース、ポリアクリルアミド、ナイロン、ポリスチレン、ポリ塩化ビニル、又はポリプロピレンが挙げられるが、これらに限定されない。
リンカーは、細胞内でのコンジュゲート薬剤の放出を促進する「切断性リンカー」であり得るが、非切断性リンカーも本明細書において企図される。本開示のコンジュゲートに使用するリンカーとしては、限定されないが、酸不安定性リンカー（例えば、ヒドラゾンリンカー）、ジスルフィド含有リンカー、ペプチダーゼ感受性リンカー（（例えば、アミノ酸、例えば、バリン及び／又はシトルリン、例えば、シトルリン－バリン又はフェニルアラニン－リジンを含むペプチドリンカー）、光不安定性リンカー、ジメチルリンカー（例えば、Ｃｈａｒｉ ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５２：１２７－３１；及び米国特許第５，２０８，０２０号を参照されたい）、チオエーテルリンカー、又は多剤輸送体を介した耐性を回避するように設計された親水性リンカー（例えば、Ｋｏｖｔｕｎ ｅｔ ａｌ．，２０１０，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．７０：２５２８－３７参照されたい）が含まれる。
抗体及び薬剤のコンジュゲートは、ＢＭＰＳ、ＥＭＣＳ、ＧＭＢＳ、ＨＢＶＳ、ＬＣ－ＳＭＣＣ、ＭＢＳ、ＭＰＢＨ、ＳＢＡＰ、ＳＩＡ、ＳＩＡＢ、ＳＭＣＣ、ＳＭＰＢ、ＳＭＰＨ、スルホ－ＥＭＣＳ、スルホ－ＧＭＢＳ、スルホ－ＫＭＵＳ、スルホ－ＭＢＳ、スルホ－ＳＩＡＢ、スルホ－ＳＭＣＣ、スルホ－ＳＭＰＢ、及びＳＶＳＢ（スクシンイミジル－（４－ビニルスルホン）ベンゾエート）などの様々な二官能性タンパク質カップリング剤を用いて作製することができる。本開示は更に、抗体及び薬剤のコンジュゲートが、当該技術分野で開示されている任意の好適な方法を用いて調製され得ることを企図している（例えば、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ（Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ ｅｄ．，２ｄ ｅｄ．２００８）を参照されたい）。
抗体及び薬剤の従来のコンジュゲーションストラテジーは、Ｌｙｓ残基のε－アミノ基又はＣｙｓ残基のチオール基を伴うランダムなコンジュゲーション化学に基づいており、その結果、不均一なコンジュゲートが生じていた。最近開発された技術により、抗体への部位特異的コンジュゲーションが可能になり、結果として、均一な充填量を実現し、抗原結合又は薬物動態が変化したコンジュゲート亜集団を回避することができる。これらには、反応性チオール基を提供し、また免疫グロブリンの折り畳み及び組み立てを阻害せず、又は抗原結合を変化させない、重鎖及び軽鎖上の位置でのシステイン置換を含む「チオマブ」の操作が挙げられる（例えば、Ｊｕｎｕｔｕｌａ ｅｔ ａｌ．，２００８，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．３３２：４１－５２、及びＪｕｎｕｔｕｌａ ｅｔ ａｌ．，２００８，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２６：９２５－３２を参照されたい）。別の方法では、終止コドンＵＧＡを終結からセレノシステイン挿入に再コードすることにより、セレノシステインを抗体配列に共翻訳的に挿入し、他の天然アミノ酸の存在下でセレノシステインの求核性セレノール基での部位特異的な共有結合的コンジュゲーションを可能にする（例えば、Ｈｏｆｅｒ ｅｔ ａｌ．，２００８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １０５：１２４５１－５６、及びＨｏｆｅｒ ｅｔ ａｌ．，２００９，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ４８（５０）：１２０４７－５７を参照されたい）。
ポリヌクレオチド
ある特定の実施形態では、本開示は、本明細書に記載の抗体をコードするポリヌクレオチドを包含する。「ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド」という用語は、ポリペプチドのコード配列のみを含むポリヌクレオチド、並びに追加のコード配列及び／又は非コード配列を含むポリヌクレオチドを包含する。本開示のポリヌクレオチドは、ＲＮＡの形態又はＤＮＡの形態であり得る。ＤＮＡには、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、及び合成ＤＮＡが挙げられ、これは、二本鎖又は一本鎖であり得、一本鎖の場合は、コード鎖又非コード（アンチセンス）鎖であり得る。
ある特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは、例えば、宿主細胞からのポリペプチドの発現及び分泌を補助するポリヌクレオチド（例えば、ポリペプチドの輸送を制御するための分泌配列として機能するリーダー配列）と同じ読み枠で融合した、ポリペプチドのコード配列を含む。ポリペプチドは、「成熟」型のポリペプチドを形成させるために宿主細胞によって切断されるリーダー配列を有することができる。
ある特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは、マーカー又はタグ配列と同じ読み枠で融合した、ポリペプチドのコード配列を含む。例えば、いくつかの実施形態では、細菌宿主の場合、マーカー配列は、マーカーと融合したポリペプチドの効率的精製を可能にするベクターによって供給されるヘキサヒスチジンタグである。いくつかの実施形態では、マーカーは、他の親和性タグと併せて使用される。
本開示は更に、本明細書に記載されたポリヌクレオチドのバリアントに関し、変異体は、例えば、断片、類似体、及び／又は誘導体をコードする。ある特定の実施形態では、本開示は、本明細書に記載される抗体又はその抗原結合断片を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドと少なくとも約８０％同一、少なくとも約８５％同一、少なくとも約９０％同一、少なくとも約９５％同一、及びいくつかの実施形態では、少なくとも約９６％、９７％、９８％又は９９％同一のヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドを含む、ポリヌクレオチドを提供する。
本明細書で使用される場合、「参照ヌクレオチド配列と少なくとも、例えば９５％「同一」のヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチド」という語句は、ポリヌクレオチド配列が参照ヌクレオチド配列の１００ヌクレオチドごとに最大５個の点変異を含み得ることを除いて、ポリヌクレオチドのヌクレオチド配列が参照配列と同一であることを意味することを意図している。言い換えれば、参照ヌクレオチド配列と少なくとも９５％同一のヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドを得るためには、参照配列のヌクレオチドのうち最大５％が、欠失若しくは別のヌクレオチドで置換され得るか、又は参照配列の全ヌクレオチドのうち最大５％の数のヌクレオチドが、参照配列に挿入され得る。参照配列のこれらの変異は、参照ヌクレオチド配列の５’又は３’の末端位置、又はそれらの末端位置の間の任意の場所で起こり得、参照配列のヌクレオチド間で個別に、又は参照配列内の１つ又は２つ以上の隣接グループで散在する。
ポリヌクレオチドバリアントは、コード領域、非コード領域、又はその両方に変化を含み得る。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドバリアントは、サイレント置換、付加、又は欠失をもたらす変化を含むが、コードされたポリペプチドの特性又は活性を変化させない。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドバリアントは、（遺伝子コードの縮重により）ポリペプチドのアミノ酸配列に変化をもたらさないサイレント置換を含む。ポリヌクレオチドバリアントは、様々な理由のため、例えば、特定の宿主に対するコドン発現を最適化するため（すなわち、ヒトのｍＲＮＡのコドンをＥ．ｃｏｌｉなどの細菌宿主が好むものに変更する）、産生することができる。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドバリアントは、配列の非コード領域又はコード領域における少なくとも１つのサイレント変異を含む。
いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドバリアントは、コードされたポリペプチドの発現（又は発現レベル）を調節又は変更するために産生される。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドバリアントは、コードされたポリペプチドの発現を増加させるために産生される。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドバリアントは、コードされたポリペプチドの発現を減少させるために産生される。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドバリアントは、親ポリヌクレオチド配列と比較して、コードされたポリペプチドの発現が増加している。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドバリアントは、親ポリヌクレオチド配列と比較して、コードされたポリペプチドの発現が減少している。
ある特定の実施形態では、本開示は、本明細書で提供される配列表に列挙されるポリヌクレオチドと少なくとも約８０％同一、少なくとも約８５％同一、少なくとも約９０％同一、少なくとも約９５％同一、いくつかの実施形態では、少なくとも約９６％、９７％、９８％、又は９９％同一であるヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドを提供する。
ある特定の実施形態では、本開示は、本明細書で提供されるポリヌクレオチドから選択されるポリヌクレオチドと少なくとも約８０％同一、少なくとも約８５％同一、少なくとも約９０％同一、少なくとも約９５％同一、いくつかの実施形態では、少なくとも約９６％、９７％、９８％、又は９９％同一であるヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドを提供する。
ある特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは、単離される。ある特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは、実質的に純粋である。
本明細書に記載のポリヌクレオチドを含むベクター及び細胞も提供される。いくつかの実施形態では、発現ベクターは、ポリヌクレオチド分子を含む。いくつかの実施形態では、発現ベクターは、ポリヌクレオチド分子を含む。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、ポリヌクレオチド分子を含む１つ又は２つ以上の発現ベクターを含む。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、ポリヌクレオチド分子を含む。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、１つ又は２つ以上のポリヌクレオチド分子を含む。
抗体を作製する方法又はプロセス
更に別の態様では、本明細書で提供される様々な分子を作製するための方法又はプロセスが本明細書で提供される。別の態様では、１つを超える標的分子と結合する抗体を作製するプロセスであって、ＮＫ細胞の表面上で第１の抗原と結合することができる結合ドメインを得る機能を実行する工程と、第２の抗原と結合することができる結合ドメインを得る機能を実行する工程と、第１の抗原及び第２の抗原と結合することができる分子を提供する機能を実行する工程と、を含む、プロセスが本明細書で提供される。
本明細書で提供される抗体の組換え発現には、抗体又はその抗原結合断片をコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターの構築が必要である。本明細書で提供される抗体分子、抗体の重鎖若しくは軽鎖、又はその断片（例えば、必ずではないが、重鎖及び／又は軽鎖可変ドメインを含む）をコードするポリヌクレオチドが得られたら、抗体分子の産生のためのベクターは、当該技術分野で周知の技術を使用する組換えＤＮＡ技術によって産生することができる。したがって、抗体をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドを発現することによりタンパク質を調製するための方法が、本明細書において記載される。当業者に周知である方法を使用して、抗体コード配列並びに適切な転写及び翻訳制御シグナルを含む発現ベクターを構築することができる。これらの方法としては、例えば、インビトロ組換えＤＮＡ技術、合成技術、及びインビボ遺伝的組換えが挙げられる。プロモーターと作動可能に連結された、本明細書で提供される抗体分子、抗体の重鎖若しくは軽鎖、抗体の重鎖若しくは軽鎖可変ドメイン又はその断片、あるいは重鎖若しくは軽鎖ＣＤＲをコードするヌクレオチド配列を含む、複製可能なベクターも提供される。そのようなベクターは、抗体分子の定常領域をコードするヌクレオチド配列を含み得（例えば、国際公開第８６／０５８０７号及び国際公開第８９／０１０３６号、並びに米国特許第５，１２２，４６４号を参照されたい）、抗体の可変ドメインは、重鎖全体、軽鎖全体、又は重鎖及び軽鎖両方の全体の発現のために、そのようなベクターにクローニングされ得る。
発現ベクターは、従来の技術により宿主細胞に移入され、次いで、トランスフェクションされた細胞は、従来の技術により培養されて、本明細書で提供される抗体を産生する。したがって、異種プロモーターと作動可能に連結された、本明細書で提供される抗体若しくはその断片、あるいはその重鎖若しくは軽鎖又はその断片、あるいは本明細書で提供される一本鎖抗体をコードするポリヌクレオチドを含む、宿主細胞も本明細書で提供される。二本鎖抗体を発現させるためのある特定の実施形態では、下記で詳述されるとおり、免疫グロブリン分子全体の発現のために、重鎖及び軽鎖の両方をコードするベクターが、宿主細胞内で共発現され得る。
本明細書で提供される融合タンパク質を発現させるために、様々な宿主発現ベクター系が利用され得る（例えば、米国特許第５，８０７，７１５号を参照されたい）。そのような宿主発現系は、目的のコード配列が産生され、続いて精製され得るビヒクルを表すが、適切なヌクレオチドコード配列で形質転換又はトランスフェクションされた場合に、本明細書で提供される抗体分子をインサイチュで発現し得る細胞も表す。これらには、抗体コード配列を含む組換えバクテリオファージＤＮＡ、プラスミドＤＮＡ、又はコスミドＤＮＡ発現ベクターで形質転換された細菌（例、Ｅ．ｃｏｌｉ及びＢ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）などの微生物、抗体コード配列を含む組換え酵母発現ベクターで形質転換された酵母（例えば、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ Ｐｉｃｈｉａ）、抗体コード配列を含む組換えウイルス発現ベクター（例えば、バキュロウイルス）を感染させた昆虫細胞系、抗体コード配列を含む組換えウイルス発現ベクター（例えば、カリフラワーモザイクウイルス、ＣａＭＶ、タバコモザイクウイルス、ＴＭＶ）を感染させるか、又は抗体コード配列を含む組換えプラスミド発現ベクター（例えば、Ｔｉプラスミド）で形質転換された植物細胞系、又は、哺乳動物細胞のゲノム由来のプロモーター（例えば、メタロチオネインプロモーター）若しくは哺乳動物ウイルス由来のプロモーター（例えば、アデノウイルス後期プロモーター、ワクシニアウイルス７．５Ｋプロモーター）を含む組換え発現構築物を保有する哺乳動物細胞系（例えば、ＣＯＳ、ＣＨＯ、ＢＨＫ、２９３、ＮＳ０、３Ｔ３細胞）が含まれるが、これらに限定されるものではない。特に組換え抗体分子全体の発現には、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉなどの細菌細胞、又は真核細胞を、組換え抗体分子の発現に使用することができる。例えば、チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）などの哺乳動物細胞は、ヒトサイトメガロウイルス由来の主要中間初期遺伝子プロモーターエレメントなどのベクターと併用することで、抗体の効果的な発現系となる（Ｆｏｅｃｋｉｎｇ ｅｔ ａｌ．，１９８６，Ｇｅｎｅ ４５：１０１、及びＣｏｃｋｅｔｔ ｅｔ ａｌ．，１９９０，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ８：２）。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、ＣＨＯ細胞内で産生される。特定の実施形態では、ＮＫＧ２ｄ抗原と免疫特異的に結合する、本明細書で提供される抗体をコードするヌクレオチド配列の発現は、構成的プロモーター、誘導性プロモーター、又は組織特異的プロモーターによって調節される。特定の実施形態では、ＮＫｐ４６抗原と免疫特異的に結合する、本明細書で提供される抗体をコードするヌクレオチド配列の発現は、構成的プロモーター、誘導性プロモーター、又は組織特異的プロモーターによって調節される。
細菌系では、発現させる抗体分子の意図する用途に応じて、多くの発現ベクターが有利に選択され得る。例えば、そのような抗体を大量に産生する場合、抗体分子の医薬組成物を生成するために、容易に精製される高レベルの融合タンパク質産物の発現を指示するベクターが望ましい場合がある。そのようなベクターとしては、融合タンパク質が産生されるように、抗体コード配列がｌａｃ Ｚコード領域と、インフレームで、個別に、ベクターへとライゲーションされ得るＥ．ｃｏｌｉ発現ベクターｐＵＲ２７８（Ｒｕｔｈｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９８３，ＥＭＢＯ １２：１７９１）、ｐＩＮベクター（Ｉｎｏｕｙｅ＆Ｉｎｏｕｙｅ，１９８５，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１３：３１０１－３１０９、Ｖａｎ Ｈｅｅｋｅ＆Ｓｃｈｕｓｔｅｒ，１９８９，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２４：５５０３－５５０９）、などが挙げられるが、これに限定されるものではない。ｐＧＥＸベクターは、グルタチオン５－トランスフェラーゼ（glutathione 5-transferase、ＧＳＴ）との融合タンパク質として外来ポリペプチドを発現させるためにも使用され得る。概して、このような融合タンパク質は可溶性であり、マトリックスグルタチオンアガロースビーズに吸着及び結合した後、遊離グルタチオンの存在下で溶出することにより、溶解した細胞から容易に精製することができる。ｐＧＥＸベクターは、クローン化された標的遺伝子産物がＧＳＴ部分から放出され得るように、トロンビン又は第Ｘａ因子プロテアーゼ切断部位を含むように設計されている。
昆虫系では、外来遺伝子を発現させるためのベクターとして、Ａｕｔｏｇｒａｐｈａ ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ核多角体病ウイルス（Autographa californica nuclear polyhedrosis virus、ＡｃＮＰＶ）が用いられる。ウイルスは、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ細胞内で増殖する。抗体コード配列は、ウイルスの非必須領域（例えば、ポリヘドリン遺伝子）に個別にクローニングし、ＡｃＮＰＶプロモーター（例えば、ポリヘドリンプロモーター）の制御下に置かれ得る。
哺乳動物の宿主細胞では、多くのウイルスベースの発現系が利用され得る。アデノウイルスが発現ベクターとして使用される場合、目的の抗体コード配列が、アデノウイルス転写／翻訳制御複合体、例えば、後期プロモーター及び三連リーダー配列とライゲーションされ得る。次いで、インビトロ又はインビボにおける組換えにより、このキメラ遺伝子は、アデノウイルスゲノム内に挿入され得る。ウイルスゲノムの非必須領域（例えば、領域Ｅ１又はＥ３）への挿入により、感染した宿主において生存可能であり、抗体分子を発現できる組換えウイルスが生じるであろう（例えば、Ｌｏｇａｎ＆Ｓｈｅｎｋ，１９８４，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８ １：３５５－３５９）。また、挿入された抗体コード配列を効率的に翻訳するためには、特定の開始シグナルが必要となる場合がある。これらのシグナルには、ＡＴＧ開始コドンと隣接する配列が含まれる。更に、挿入全体の翻訳を確実にするためには、開始コドンが所望のコード配列のリーディングフレームと一致している必要がある。これらの外因性の翻訳制御シグナル及び開始コドンは、天然及び合成の両方の様々な起源のものであり得る。発現の効率は、適切な転写エンハンサーエレメント、転写ターミネーターなどを組み入れることにより、増強され得る（例えば、Ｂｉｔｔｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９８７，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌ．１５３：５１－５４４を参照されたい）。
更に、挿入された配列の発現を調節するか、又は所望の特定の方法で遺伝子産物を修飾及び処理する宿主細胞株を選択することもできる。タンパク質産物のそのような修飾（例えば、グリコシル化）及び処理（例えば、切断）は、タンパク質の機能にとって重要であり得る。異なる宿主細胞は、タンパク質及び遺伝子産物の翻訳後の処理及び修飾のための特徴的かつ特異的なメカニズムを有する。適切な細胞株又は宿主系を選択することで、発現した外来タンパク質を正しく修飾及び処理することができる。この目的で、一次転写物の適切な処理、グリコシル化、及び遺伝子産物のリン酸化のための細胞機構を有する真核性宿主細胞が、使用され得る。そのような哺乳動物宿主細胞としては、ＣＨＯ、ＶＥＲＹ、ＢＨＫ、Ｈｅｌａ、ＣＯＳ、ＭＤＣＫ、２９３、３Ｔ３、Ｗ１３８、ＢＴ４８３、Ｈｓ５７８Ｔ、ＨＴＢ２、ＢＴ２Ｏ及びＴ４７Ｄ、ＮＳ０（内因性では免疫グロブリン鎖を全く産生しないマウス骨髄腫細胞株）、ＣＲＬ７Ｏ３Ｏ及びＨｓＳ７８Ｂｓｔ細胞が挙げられるが、これらに限定されるものではない。本明細書で提供される完全ヒトモノクローナル抗体は、ＣＨＯ細胞などの哺乳動物細胞内で産生される。
組換えタンパク質を長期間、高収率で産生するためには、安定した発現を利用することができる。例えば、抗体分子を安定的に発現する細胞株が操作され得る。ウイルスの複製起点を含む発現ベクターを使用するのではなく、適切な発現制御エレメント（例えば、プロモーター、エンハンサー、配列、転写ターミネーター、ポリアデニル化部位など）及び選択可能マーカーによって制御されるＤＮＡで、宿主細胞を形質転換することができる。外来ＤＮＡの導入後に、操作された細胞は、富化培地中で１～２日間増殖させられ得、次いで、選択培地に切り替えられる。組換えプラスミドの選択マーカーは、選択に耐性を付与し、細胞が、染色体中にプラスミドを安定に組み込み、増殖して増殖巣を形成することを可能にし、次にこの増殖巣は、クローン化して細胞株に増殖することができる。この方法は、抗体分子を発現する細胞株を操作するために有利に使用され得る。そのような操作された細胞株は、抗体分子と直接的又は間接的に相互作用する組成物のスクリーニング及び評価に特に有用であり得る。
多数の選択システムを使用することができ、これには、限定されないが、単純ヘルペスウイルスのチミジンキナーゼ（Ｗｉｇｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９７７，Ｃｅｌｌ １１：２２３）、ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（Ｓｚｙｂａｌｓｋａ＆Ｓｚｙｂａｌｓｋｉ，１９９２，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ４８：２０２）、及びアデニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（Ｌｏｗｙ ｅｔ ａｌ．，１９８０，Ｃｅｌｌ ２２：８－１７）が含まれ、遺伝子は、それぞれｔｋ－、ｈｇｐｒｔ－、又はａｐｒｔ－細胞で使用することができる。また、代謝拮抗剤耐性も、以下の遺伝子の選択基準として使用され得る：メトトレキサートに対する耐性を付与するｄｈｆｒ（Ｗｉｇｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９８０，Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：３５７、Ｏ’Ｈａｒｅ ｅｔ ａｌ．，１９８１，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７８：１５２７）、ミコフェノール酸に対する耐性を付与するｇｐｔ（Ｍｕｌｌｉｇａｎ＆Ｂｅｒｇ，１９８１，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７８：２０７２）、アミノグリコシドＧ－４１８に対する耐性を付与するｎｅｏ（Ｗｕ ａｎｄ Ｗｕ，１９９１，Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ ３：８７－９５；Ｔｏｌｓｔｏｓｈｅｖ，１９９３，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．３２：５７３－５９６、Ｍｕｌｌｉｇａｎ，１９９３，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６０：９２６－９３２、及びＭｏｒｇａｎ ａｎｄ Ａｎｄｅｒｓｏｎ，１９９３，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．６２：１９１－２１７；Ｍａｙ，１９９３，ＴＩＢ ＴＥＣＨ １１（５）：ｌ５５－２ １５）、及びハイグロマイシンに対する耐性を付与するｈｙｇｒｏ（Ｓａｎｔｅｒｒｅ ｅｔ ａｌ．，１９８４，Ｇｅｎｅ ３０：１４７）。組換えＤＮＡ技術の当該技術分野で一般に既知の方法を、規定どおりに適用して、所望の組換えクローンを選択することができ、そのような方法については、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる、例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．），Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，ＮＹ（１９９３）、Ｋｒｉｅｇｌｅｒ，Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ ａｎｄ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ（１９９０）、及びＣｈａｐｔｅｒｓ １２ ａｎｄ １３，Ｄｒａｃｏｐｏｌｉ，ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．），Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，ＮＹ（１９９４）、Ｃｏｌｂｅｒｒｅ－Ｇａｒａｐｉｎ ｅｔ ａｌ．，１９８１，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５０：１に記載されている。
抗体分子の発現レベルは、ベクターの増幅により増大させることができる（総説については、Ｂｅｂｂｉｎｇｔｏｎ ａｎｄ Ｈｅｎｔｓｃｈｅｌ，Ｔｈｅ ｕｓｅ ｏｆ ｖｅｃｔｏｒｓ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｇｅｎｅ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｆｏｒ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｃｌｏｎｅｄ ｇｅｎｅｓ ｉｎ ｍａｍｍａｌｉａｎ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ＤＮＡ ｃｌｏｎｉｎｇ，Ｖｏｌ．３（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８７）を参照されたい）。抗体を発現するベクター系のマーカーが増幅可能な場合、宿主細胞の培養中に存在する阻害剤のレベルが上がると、マーカー遺伝子のコピー数が増加する。増幅された領域は抗体遺伝子と関連しているため、抗体の産生も増加する（Ｃｒｏｕｓｅ ｅｔ ａｌ．，１９８３，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．３：２５７）。
宿主細胞は、本明細書で提供される２つ又はそれ以上の発現ベクターで共トランスフェクトされ得る。２つ又はそれ以上のベクターは、例えば、重鎖及び軽鎖ポリペプチドの同等の発現を可能にする同一の選択マーカーを含み得る。代替的に、本発明の抗体の異なる成分ポリペプチド、例えば、重鎖ポリペプチド及び軽鎖ポリペプチドの両方をコードし、発現することができる単一のベクターが使用され得る。コード配列は、ｃＤＮＡ又はゲノムＤＮＡを含み得る。
本明細書で提供される抗体分子が、組換え発現により産生されると、これは、免疫グロブリン分子を精製するための当該技術分野で既知である任意の方法、例えば、クロマトグラフィ（例えば、イオン交換クロマトグラフィ、親和性クロマトグラフィ、特に、プロテインＡクロマトグラフィの後における特異的抗原についての親和性クロマトグラフィ、及びサイズ除外カラムクロマトグラフィ）、遠心分離、示差的可溶性によって、又はタンパク質を精製するための他の任意の標準的な技術によって、精製され得る。更に、本明細書で提供される抗体は、精製を促進するために、本明細書に記載されているか、又は別様に当該技術分野で既知の異種ポリペプチド配列に融合させることができる。
医薬組成物
一態様では、本開示は、本開示の少なくとも１つの抗体又はその抗原結合断片を含む医薬組成物を更に提供する。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、治療有効量の本明細書で提供される抗体又はその抗原結合断片と、医薬的に許容される賦形剤と、を含む。また、医薬組成物を産生する方法であって、本明細書で提供される抗体又はその抗原結合断片を医薬的に許容される担体と組み合わせて医薬組成物を得ることを含む、方法が提供される。
別の一般的な態様では、本明細書で提供される多重特異性抗体及び医薬的に許容される担体を含む、医薬組成物が提供される。ある特定の実施形態では、多重特異性抗体は、単離される。また、医薬組成物を製造する方法が提供され、方法は、多重特異性抗体を薬学的に許容される担体と組み合わせて、医薬組成物を得ることを含む。別の態様では、（ａ）ＮＫＧ２ｄと結合する第１の結合ドメインと、（ｂ）第２の標的と結合する第２の結合ドメインと、薬学的に許容される担体とを含む含む、医薬組成物が本明細書で提供される。別の態様では、（ａ）ＮＫｐ４６と結合する第１の結合ドメインと、（ｂ）第２の標的と結合する第２の結合ドメインと、薬学的に許容される担体とを含む含む、医薬組成物が本明細書で提供される。本明細書で提供される多重特異性抗体のいずれも、医薬組成物中で企図される。ある特定の実施形態では、第２の結合ドメインは、ＢＣＭＡと結合する。ある特定の実施形態では、第２の結合ドメインは、ＧＰＲＣ５ｄと結合する。本明細書で提供される抗体のいずれも、医薬組成物中で企図される。
抗体又はその抗原結合断片を含む医薬組成物は、所望の純度を有するタンパク質と、水溶液又は凍結乾燥若しくは他の乾燥形態にある任意選択の生理学的に許容される賦形剤（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ，Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（１８ｔｈ ｅｄ．１９８０）を参照されたい）とを混合することによって保存用に調製される。
本開示の抗体又はその抗原結合断片は、標的細胞／組織への送達に任意の好適な形態で、例えば、マイクロカプセル又はマクロエマルジョンとして（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ、上記、Ｐａｒｋ ｅｔ ａｌ．，２００５，Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ １０：１４６－６１、Ｍａｌｉｋ ｅｔ ａｌ．，２００７，Ｃｕｒｒ．Ｄｒｕｇ．Ｄｅｌｉｖ．４：１４１－５１）、徐放性製剤として（（Ｐｕｔｎｅｙ ａｎｄ Ｂｕｒｋｅ，１９９８，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１６：１５３－５７）、又はリポソームで（Ｍａｃｌｅａｎ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｏｎｃｏｌ．１１：３２５－３２、Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ，２００６，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．８：３９－４５）製剤化することができる。
また、本明細書で提供される抗体又はその抗原結合断片は、それぞれ、例えばコアセルベーション法によって、又は界面重合によって調製されたマイクロカプセル、例えばヒドロキシメチルセルロース又はゼラチンマイクロカプセル及びポリ－（メチルメタクリレート）マイクロカプセル内に、コロイド状薬剤送達系（例えば、リポソーム、アルブミンマイクロスフェア、マイクロエマルジョン、ナノ粒子、及びナノカプセルなど）中、又はマクロエマルジョン中に封入することができる。そのような技術は、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ（上記）に開示されている。
様々な組成物及び送達システムが知られており、本明細書に記載される抗体又はその抗原結合断片とともに使用することができ、限定されないが、リポソーム、微粒子、マイクロカプセルへの封入、抗体又はその抗原結合断片を発現することができる組換え細胞、受容体媒介エンドサイトーシス（例えば、Ｗｕ ａｎｄ Ｗｕ，１９８７，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２：４４２９－３２を参照されたい）、レトロウイルス又は他のベクターの一部としての核酸の構築などが含まれる。別の実施形態では、組成物は、制御放出システム又は徐放システムとして提供され得る。一実施形態では、制御放出又は徐放を達成するために、ポンプが使用され得る（例えば、Ｌａｎｇｅｒ、上記、Ｓｅｆｔｏｎ，１９８７，Ｃｒｉｔ．Ｒｅｆ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｅｎｇ．１４：２０１－４０、Ｂｕｃｈｗａｌｄ ｅｔ ａｌ．，１９８０，Ｓｕｒｇｅｒｙ ８８：５０７－１６、及びＳａｕｄｅｋ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３２１：５６９－７４を参照されたい）。別の実施形態では、ポリマー材料を使用して、予防薬若しくは治療薬（例えば、本明細書に記載される抗体又はその抗原結合断片）、又は本明細書で提供される組成物の制御放出若しくは徐放を達成することができる（例えば、Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ（Ｌａｎｇｅｒ ａｎｄ Ｗｉｓｅ ｅｄｓ．，１９７４）Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｄｒｕｇ Ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ，Ｄｒｕｇ Ｐｒｏｄｕｃｔ Ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ（Ｓｍｏｌｅｎ ａｎｄ Ｂａｌｌ，ｅｄｓ．，１９８４）、Ｒａｎｇｅｒ ａｎｄ Ｐｅｐｐａｓ，１９８３，Ｊ．Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｓｃｉ．Ｒｅｖ．Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．２３：６１－１２６、Ｌｅｖｙ ｅｔ ａｌ．，１９８５，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２８：１９０－９２、Ｄｕｒｉｎｇ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．２５：３５１－５６、Ｈｏｗａｒｄ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．７１：１０５－１２、米国特許第５，６７９，３７７号、同第５，９１６，５９７号、同第５，９１２，０１５号、同第５，９８９，４６３号、及び同第５，１２８，３２６号、国際公開第９９／１５１５４号及び同第９９／２０２５３号を参照されたい）。徐放性製剤に用いられるポリマーの例としては、ポリ（２－ヒドロキシエチルメタクリレート）、ポリ（メチルメタクリレート）、ポリ（アクリル酸）、ポリ（エチレン－ｃｏ－ビニルアセテート）、ポリ（メタクリル酸）、ポリグリコリド（ＰＬＧ）、ポリ無水物、ポリ（Ｎ－ビニルピロリドン）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリアクリルアミド、ポリ（エチレングリコール）、ポリラクチド（ＰＬＡ）、ポリ（ラクチド－ｃｏ－グリコリド）（ＰＬＧＡ）、及びポリオルトエステルが挙げられるが、これらに限定されない。一実施形態では、徐放性製剤中で使用されるポリマーは、不活性であり、浸出性不純物を含まず、保存時に安定であり、無菌であり、生分解性である。
更に別の実施形態では、制御放出システム又は徐放システムを特定の標的組織、例えば、鼻腔又は肺に近接して配置することができ、その結果、全身用量のほんの一部しか必要としない（例えば、Ｇｏｏｄｓｏｎ，Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ Ｖｏｌ．２，１１５－３８（１９８４）を参照されたい）。制御放出系については、例えば、Ｌａｎｇｅｒ，１９９０，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７－３３により議論されている。当業者に既知の任意の技術を使用して、本明細書に記載の１つ若しくは２つ以上の抗体又はその抗原結合断片を含む徐放性製剤を製造することができる（例えば、米国特許第４，５２６，９３８号、国際公開第９１／０５５４８号及び同第９６／２０６９８号、Ｎｉｎｇ ｅｔ ａｌ．，１９９６，Ｒａｄｉｏｔｈｅｒａｐｙ＆Ｏｎｃｏｌｏｇｙ ３９：１７９－８９、Ｓｏｎｇ ｅｔ ａｌ．，１９９５，ＰＤＡ Ｊ．ｏｆ Ｐｈａｒｍａ．Ｓｃｉ．＆Ｔｅｃｈ．５０：３７２－９７、Ｃｌｅｅｋ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｐｒｏ．Ｉｎｔ’ｌ．Ｓｙｍｐ．Ｃｏｎｔｒｏｌ．Ｒｅｌ．Ｂｉｏａｃｔ．Ｍａｔｅｒ．２４：８５３－５４、並びにＬａｍ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｐｒｏｃ．Ｉｎｔ’ｌ．Ｓｙｍｐ．Ｃｏｎｔｒｏｌ Ｒｅｌ．Ｂｉｏａｃｔ．Ｍａｔｅｒ．２４：７５９－６０を参照されたい）。
使用方法
更に別の態様では、ＮＫＧ２ｄを発現する細胞の濃縮、単離、分離、精製、選別、選択、捕捉、検出、又は枯渇を行う方法であって、ＮＫＧ２ｄを発現する細胞を含む試料を提供することと、試料を本明細書で提供されるＮＫＧ２ｄ抗体と接触させることと、ＮＫＧ２ｄを発現しＮＫＧ２ｄ抗体と結合した細胞の濃縮、単離、分離、精製、選別、選択、捕捉、検出、又は枯渇を行うこととを含む、方法が提供される。
更に別の態様では、ＮＫＧ２ｄを発現する細胞の濃縮、単離、分離、精製、選別、選択、捕捉、検出、又は枯渇を行うための、本明細書で提供されるＮＫＧ２ｄ抗体の使用であって、ＮＫＧ２ｄを発現する細胞を含む試料を提供することと、試料を本明細書で提供されるＮＫＧ２ｄ抗体と接触させることと、ＮＫＧ２ｄを発現しＮＫＧ２ｄ抗体と結合した細胞の濃縮、単離、分離、精製、選別、選択、捕捉、検出、又は枯渇を行うこととを含む、使用が提供される。
別の態様では、ＮＫｐ４６を発現する細胞の濃縮、単離、分離、精製、選別、選択、捕捉、検出、又は枯渇を行う方法であって、ＮＫｐ４６を発現する細胞を含む試料を提供することと、試料を本明細書で提供されるＮＫｐ４６抗体と接触させることと、ＮＫｐ４６を発現しＮＫｐ４６抗体と結合した細胞の濃縮、単離、分離、精製、選別、選択、捕捉、検出、又は枯渇を行うこととを含む、方法が提供される。
別の態様では、ＮＫｐ４６を発現する細胞の濃縮、単離、分離、精製、選別、選択、捕捉、検出、又は枯渇を行うための、本明細書で提供されるＮＫｐ４６抗体の使用であって、ＮＫｐ４６を発現する細胞を含む試料を提供することと、試料を本明細書で提供されるＮＫｐ４６抗体と接触させることと、ＮＫｐ４６を発現しＮＫｐ４６抗体と結合した細胞の濃縮、単離、分離、精製、選別、選択、捕捉、検出、又は枯渇を行うこととを含む、使用が提供される。
いくつかの実施形態では、細胞は、ＮＫ細胞である。いくつかの実施形態では、試料は、血液試料である。他の実施形態では、試料は、組織試料である。
更に別の態様では、ＮＫ細胞を標的細胞に指向させる方法であって、ＮＫ細胞を本明細書で提供される多重特異性抗体と接触させ、それによってＮＫ細胞を標的細胞に指向させることを含み、多重特異性抗体が、ＮＫ細胞上の第１の抗原と結合する第１の結合ドメインと、標的細胞上の第２の抗原と結合する第２の結合ドメインとを含む、方法が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、標的細胞は、腫瘍細胞である。ある特定の実施形態では、多重特異性抗体は、多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＢＣＭＡ抗体であり、第１の標的は、ＮＫＧ２ｄであり、第２の標的は、ＢＣＭＡである。ある特定の実施形態では、多重特異性抗体は、多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＧＰＲＣ５ｄ抗体であり、第１の標的は、ＮＫＧ２ｄであり、第２の標的は、ＧＰＲＣ５ｄである。ある特定の実施形態では、多重特異性抗体は、多重特異性ＮＫｐ４６／ＢＣＭＡ抗体であり、第１の標的は、ＮＫｐ４６であり、第２の標的は、ＢＣＭＡである。ある特定の実施形態では、多重特異性抗体は、多重特異性ＮＫｐ４６／ＧＰＲＣ５ｄ抗体であり、第１の標的は、ＮＫｐ４６であり、第２の標的は、ＧＰＲＣ５ｄである。
更に別の態様では、ＮＫ細胞を標的細胞に指向させるための、本明細書で提供される多重特異性抗体の使用であって、ＮＫ細胞を本明細書で提供される多重特異性抗体と接触させ、それによってＮＫ細胞を標的細胞に指向させることを含み、多重特異性抗体が、ＮＫ細胞上の第１の抗原と結合する第１の結合ドメインと、標的細胞上の第２の抗原と結合する第２の結合ドメインとを含む、方法が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、標的細胞は、腫瘍細胞である。ある特定の実施形態では、多重特異性抗体は、多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＢＣＭＡ抗体であり、第１の標的は、ＮＫＧ２ｄであり、第２の標的は、ＢＣＭＡである。ある特定の実施形態では、多重特異性抗体は、多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＧＰＲＣ５ｄ抗体であり、第１の標的は、ＮＫＧ２ｄであり、第２の標的は、ＧＰＲＣ５ｄである。ある特定の実施形態では、多重特異性抗体は、多重特異性ＮＫｐ４６／ＢＣＭＡ抗体であり、第１の標的は、ＮＫｐ４６であり、第２の標的は、ＢＣＭＡである。ある特定の実施形態では、多重特異性抗体は、多重特異性ＮＫｐ４６／ＧＰＲＣ５ｄ抗体であり、第１の標的は、ＮＫｐ４６であり、第２の標的は、ＧＰＲＣ５ｄである。
更に別の態様では、ＮＫ細胞を活性化する方法であって、ＮＫ細胞を本明細書で提供される多重特異性抗体と接触させることを含み、多重特異性抗体が、ＮＫ細胞上の第１の抗原と結合する第１の結合ドメインと、標的細胞上の第２の抗原と結合する第２の結合ドメインとを含む、方法が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、標的細胞は、腫瘍細胞である。ある特定の実施形態では、多重特異性抗体は、多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＢＣＭＡ抗体であり、第１の標的は、ＮＫＧ２ｄであり、第２の標的は、ＢＣＭＡである。ある特定の実施形態では、多重特異性抗体は、多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＧＰＲＣ５ｄ抗体であり、第１の標的は、ＮＫＧ２ｄであり、第２の標的は、ＧＰＲＣ５ｄである。ある特定の実施形態では、多重特異性抗体は、多重特異性ＮＫｐ４６／ＢＣＭＡ抗体であり、第１の標的は、ＮＫｐ４６であり、第２の標的は、ＢＣＭＡである。ある特定の実施形態では、多重特異性抗体は、多重特異性ＮＫｐ４６／ＧＰＲＣ５ｄ抗体であり、第１の標的は、ＮＫｐ４６であり、第２の標的は、ＧＰＲＣ５ｄである。
更に別の態様では、ＮＫ細胞を活性化するための、本明細書で提供される多重特異性抗体の使用であって、ＮＫ細胞を本明細書で提供される多重特異性抗体と接触させることを含み、多重特異性抗体が、ＮＫ細胞上の第１の抗原と結合する第１の結合ドメインと、標的細胞上の第２の抗原と結合する第２の結合ドメインとを含む、使用が本明細書で提供される。ある特定の実施形態では、多重特異性抗体は、多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＢＣＭＡ抗体であり、第１の標的は、ＮＫＧ２ｄであり、第２の標的は、ＢＣＭＡである。ある特定の実施形態では、多重特異性抗体は、多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＧＰＲＣ５ｄ抗体であり、第１の標的は、ＮＫＧ２ｄであり、第２の標的は、ＧＰＲＣ５ｄである。ある特定の実施形態では、多重特異性抗体は、多重特異性ＮＫｐ４６／ＢＣＭＡ抗体であり、第１の標的は、ＮＫｐ４６であり、第２の標的は、ＢＣＭＡである。ある特定の実施形態では、多重特異性抗体は、多重特異性ＮＫｐ４６／ＧＰＲＣ５ｄ抗体であり、第１の標的は、ＮＫｐ４６であり、第２の標的は、ＧＰＲＣ５ｄである。
更に別の態様では、細胞表面上で第２の抗原を発現する標的細胞の成長又は増殖を阻害する方法であって、標的細胞を本明細書で提供される多重特異性抗体と接触させることを含み、多重特異性抗体が、ＮＫ細胞上の第１の抗原と結合する第１の結合ドメインと、第２の抗原と結合する第２の結合ドメインとを含む、方法が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、第２の標的は、がん細胞上にある。ある特定の実施形態では、多重特異性抗体は、多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＢＣＭＡ抗体であり、第１の標的は、ＮＫＧ２ｄであり、第２の標的は、ＢＣＭＡである。ある特定の実施形態では、多重特異性抗体は、多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＧＰＲＣ５ｄ抗体であり、第１の標的は、ＮＫＧ２ｄであり、第２の標的は、ＧＰＲＣ５ｄである。ある特定の実施形態では、多重特異性抗体は、多重特異性ＮＫｐ４６／ＢＣＭＡ抗体であり、第１の標的は、ＮＫｐ４６であり、第２の標的は、ＢＣＭＡである。ある特定の実施形態では、多重特異性抗体は、多重特異性ＮＫｐ４６／ＧＰＲＣ５ｄ抗体であり、第１の標的は、ＮＫｐ４６であり、第２の標的は、ＧＰＲＣ５ｄである。
更に別の態様では、細胞表面上で第２の抗原を発現する標的細胞の成長又は増殖を阻害するための、本明細書で提供される多重特異性抗体の使用であって、標的細胞を本明細書で提供される多重特異性抗体と接触させることを含み、多重特異性抗体が、ＮＫ細胞上の第１の抗原と結合する第１の結合ドメインと、第２の抗原と結合する第２の結合ドメインとを含む、使用が本明細書で提供される。ある特定の実施形態では、多重特異性抗体は、多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＢＣＭＡ抗体であり、第１の標的は、ＮＫＧ２ｄであり、第２の標的は、ＢＣＭＡである。ある特定の実施形態では、多重特異性抗体は、多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＧＰＲＣ５ｄ抗体であり、第１の標的は、ＮＫＧ２ｄであり、第２の標的は、ＧＰＲＣ５ｄである。ある特定の実施形態では、多重特異性抗体は、多重特異性ＮＫｐ４６／ＢＣＭＡ抗体であり、第１の標的は、ＮＫｐ４６であり、第２の標的は、ＢＣＭＡである。ある特定の実施形態では、多重特異性抗体は、多重特異性ＮＫｐ４６／ＧＰＲＣ５ｄ抗体であり、第１の標的は、ＮＫｐ４６であり、第２の標的は、ＧＰＲＣ５ｄである
更に別の態様では、対象において第２の抗原を発現する標的細胞を除去する方法、あるいは第２の抗原を発現する標的細胞によって全部若しくは一部が引き起こされる疾患又は障害を治療する方法であって、有効量の本明細書で提供される多重特異性抗体を対象に投与することを含み、多重特異性抗体が、ＮＫ細胞上の第１の抗原と結合する第１の結合ドメインと、第２の抗原と結合する第２の結合ドメインとを含む、方法が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、第２の標的は、がん細胞上にある。ある特定の実施形態では、多重特異性抗体は、多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＢＣＭＡ抗体であり、第１の標的は、ＮＫＧ２ｄであり、第２の標的は、ＢＣＭＡである。ある特定の実施形態では、多重特異性抗体は、多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＧＰＲＣ５ｄ抗体であり、第１の標的は、ＮＫＧ２ｄであり、第２の標的は、ＧＰＲＣ５ｄである。ある特定の実施形態では、多重特異性抗体は、多重特異性ＮＫｐ４６／ＢＣＭＡ抗体であり、第１の標的は、ＮＫｐ４６であり、第２の標的は、ＢＣＭＡである。ある特定の実施形態では、多重特異性抗体は、多重特異性ＮＫｐ４６／ＧＰＲＣ５ｄ抗体であり、第１の標的は、ＮＫｐ４６であり、第２の標的は、ＧＰＲＣ５ｄである。
更に別の態様では、対象において第２の抗原を発現する標的細胞を排除するため、あるいは第２の抗原を発現する標的細胞によって全部若しくは一部が引き起こされる疾患も又は障害を治療するための、本明細書で提供される多重特異性抗体の使用であって、有効量の本明細書で提供される多重特異性抗体を対象に投与することを含み、多重特異性抗体が、ＮＫ細胞上の第１の抗原と結合する第１の結合ドメインと、第２の抗原と結合する第２の結合ドメインとを含む、使用が本明細書で提供される。ある特定の実施形態では、多重特異性抗体は、多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＢＣＭＡ抗体であり、第１の標的は、ＮＫＧ２ｄであり、第２の標的は、ＢＣＭＡである。ある特定の実施形態では、多重特異性抗体は、多重特異性ＮＫＧ２ｄ／ＧＰＲＣ５ｄ抗体であり、第１の標的は、ＮＫＧ２ｄであり、第２の標的は、ＧＰＲＣ５ｄである。ある特定の実施形態では、多重特異性抗体は、多重特異性ＮＫｐ４６／ＢＣＭＡ抗体であり、第１の標的は、ＮＫｐ４６であり、第２の標的は、ＢＣＭＡである。ある特定の実施形態では、多重特異性抗体は、多重特異性ＮＫｐ４６／ＧＰＲＣ５ｄ抗体であり、第１の標的は、ＮＫｐ４６であり、第２の標的は、ＧＰＲＣ５ｄである。
更に別の態様では、がんを有する対象におけるがん細胞を阻害又は枯渇させる方法であって、本明細書で提供される多重特異性抗体を対象に投与することを含む、方法が本明細書で提供される。
更に別の態様では、がんを有する対象においてがん細胞を阻害又は枯渇させるための、本明細書で提供される多重特異性抗体の使用であって、本明細書で提供される多重特異性抗体を対象に投与することを含む、使用が本明細書で提供される。
更に別の態様では、対象におけるがんを治療する方法であって、本明細書で提供される多重特異性抗体を対象に投与することを含む、方法が本明細書で提供される。また、対象におけるがんの治療に使用するための、本明細書に記載させる多重特異性抗体も本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、がんは、固形腫瘍がんである。他の実施形態では、がんは、血液がんである。更に別の態様では、医薬として使用するための本明細書に記載させる多重特異性抗体が本明細書で提供される。
別の態様では、有効量の本明細書で提供される抗体又はその抗原結合断片を対象に投与することを含む、対象における疾患又は障害を治療する方法が、本明細書で提供される。疾患又は障害の治療における使用のための、本明細書に記載される抗体又はその抗原結合断片も本明細書で提供される。
別の態様では、有効量の本明細書で提供される多重特異性抗体を対象に投与することを含む、対象における疾患又は障害を治療する方法が、本明細書で提供される。疾患又は障害の治療に使用するための、本明細書に記載される多重特異性抗体も本明細書で提供される。
疾患又は障害を治療する方法であって、対象が、１つ又は２つ以上の治療薬を、本明細書で提供される抗体又はその抗原結合断片と併用して投与される、方法が、本明細書で提供される。
別の態様では、対象における疾患又は障害を治療するための薬剤の製造における、本明細書で提供される抗体又はその抗原結合断片の使用が本明細書で提供される。別の態様では、対象における疾患又は障害を治療するための薬剤の製造における、本明細書で提供される多重特異性抗体の使用が本明細書で提供される。
別の態様では、対象における疾患又は障害を治療するための薬剤の製造における、本明細書で提供される医薬組成物の使用が、本明細書で提供される。
特定の実施形態では、医薬として使用するための組成物であって、抗体又はその抗原結合断片と、医薬的に許容される賦形剤／担体と、を含む、組成物が本明細書で提供される。特定の実施形態では、疾患若しくは病態の予防及び／又は治療に使用するための組成物であって、組成物が、抗体又はその抗原結合断片と、医薬的に許容される賦形剤／担体と、を含む、組成物が本明細書で提供される。一実施形態では、疾患若しくは病態の予防に使用するための組成物であって、組成物が、提供抗体又はその抗原結合断片と、医薬的に許容される賦形剤／担体と、を含む、組成物が本明細書で提供される。一実施形態では、疾患若しくは病態の治療に使用するための組成物であって、組成物が、提供抗体又はその抗原結合断片と、医薬的に許容される賦形剤／担体と、を含む、組成物が本明細書で提供される。一実施形態では、がんの治療に使用するための組成物であって、組成物が、提供抗体又はその抗原結合断片と、医薬的に許容される賦形剤／担体と、を含む、組成物が本明細書で提供される。ある特定の実施形態では、対象は、その治療を必要としている対象である。いくつかの実施形態では、対象は、疾患又は病態を有する。他の実施形態では、対象は、疾患又は病態を有するリスクにある。いくつかの実施形態では、投与は、疾患又は病態の予防、管理、治療又は寛解をもたらす。
一実施形態では、疾患若しくは病態の症状の予防及び／又は治療に使用するための組成物であって、組成物が、提供される抗体又はその抗原結合断片と、医薬的に許容される賦形剤／担体と、を含む、組成物が本明細書で提供される。一実施形態では、疾患若しくは病態の症状の予防に使用するための組成物であって、組成物が、提供抗体又はその抗原結合断片と、医薬的に許容される賦形剤／担体と、を含む、組成物が本明細書で提供される。一実施形態では、疾患若しくは病態の症状の治療に使用するための組成物であって、組成物が、提供抗体又はその抗原結合断片と、医薬的に許容される賦形剤／担体と、を含む、組成物が本明細書で提供される。ある特定の実施形態では、対象は、その治療を必要としている対象である。いくつかの実施形態では、対象は、疾患又は病態を有する。他の実施形態では、対象は、疾患又は病態を有するリスクにある。いくつかの実施形態では、投与は、疾患又は病態の症状の予防又は治療をもたらす。
別の実施形態では、対象における疾患若しくは病態を予防及び／又は治療する方法であって、有効量の本明細書で提供される抗体又はその抗原結合断片を投与することを含む、方法が本明細書で提供される。一実施形態では、対象における疾患又は病態を予防する方法であって、有効量の本明細書で提供される抗体又はその抗原結合断片を投与することを含む、方法が本明細書で提供される。一実施形態では、対象における疾患又は病態を治療する方法であって、有効量の本明細書で提供される抗体又はその抗原結合断片を投与することを含む、方法が本明細書で提供される。ある特定の実施形態では、対象は、その治療を必要としている対象である。いくつかの実施形態では、対象は、疾患又は病態を有する。他の実施形態では、対象は、疾患又は病態を有するリスクにある。いくつかの実施形態では、投与は、疾患又は病態の予防又は治療をもたらす。
別の実施形態では、有効量の本明細書で提供される抗体又はその抗原結合断片を投与することを含む、対象における疾患若しくは病態の症状を予防及び／又は治療する方法が本明細書で提供される。一実施形態では、対象における疾患又は病態の症状を予防する方法であって、有効量の本明細書で提供される抗体又はその抗原結合断片を投与することを含む、方法が本明細書で提供される。一実施形態では、対象における疾患又は病態の症状を治療する方法であって、有効量の本明細書で提供される抗体又はその抗原結合断片を投与することを含む、方法が本明細書で提供される。ある特定の実施形態では、対象は、その治療を必要としている対象である。いくつかの実施形態では、対象は、疾患又は病態を有する。他の実施形態では、対象は、疾患又は病態を有するリスクにある。いくつかの実施形態では、投与は、疾患又は病態の症状の予防又は治療をもたらす。
また、有効量の本明細書で提供される抗体若しくはその抗原結合断片、又は本明細書で提供される抗体若しくはその抗原結合断片を含む医薬組成物を対象に投与することによって、疾患若しくは病態を予防及び／又は治療する方法も本明細書で提供される。一態様では、抗体又はその抗原結合断片は、実質的に精製される（すなわち、その効果を制限するか、又は望ましくない副作用を生じさせる物質を実質的に含まない）。治療を施される対象は、非霊長類又は霊長類（例えば、ヒト）などの哺乳動物であり得る。一実施形態では、対象は、ヒトである。別の実施形態では、対象は、疾患又は病態を有するヒトである。
様々な送達システムが知られており、予防剤又は治療剤（例えば、本明細書で提供される抗体又はその抗原結合断片）を投与するために使用することができ、これには、限定されないが、リポソーム、微粒子、マイクロカプセルへの封入、抗体又はその抗原結合断片を発現することができる組換え細胞、受容体媒介エンドサイトーシス（例えば、Ｗｕ ａｎｄ Ｗｕ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２：４４２９－４４３２（１９８７）を参照されたい）、レトロウイルス又は他のベクターの一部としての核酸の構築などが挙げられる。予防剤若しくは治療剤（例えば、本明細書で提供される抗体又はその抗原結合断片）、又は医薬組成物を投与する方法としては、非経口投与（例えば、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内及び皮下）、硬膜外及び粘膜（例えば、鼻腔内及び経口経路）が挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施形態では、予防剤若しくは治療剤（例えば、本明細書で提供される抗体又はその抗原結合断片）、又は医薬組成物は、鼻腔内、筋肉内、静脈内、又は皮下に投与される。予防薬若しくは治療薬、又は組成物は、任意の好都合な経路、例えば、注入又はボーラス注射により、上皮又は皮膚粘膜内壁（例えば、口腔粘膜、鼻腔粘膜、直腸粘膜、及び腸粘膜など）を介する吸収により、投与され得、他の生物学的活性剤ともに投与され得る。投与は、全身性又は局所的であり得る。加えて、例えば、吸入器又は噴霧器、及びエアゾール化剤を伴う製剤の使用による肺内投与を採用することもできる。例えば、各々全体が参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第６，０１９，９６８号、同第５，９８５，３２０号、同第５，９８５，３０９号、同第５，９３４，２７２号、同第５，８７４，０６４号、同第５，８５５，９１３号、同第５，２９０，５４０号、及び同第４，８８０，０７８号、及び国際公開第９２／１９２４４号、同第９７／３２５７２号、同第９７／４４０１３号、同第９８／３１３４６号、及び同第９９／６６９０３号を参照されたい。
具体的な実施形態では、本明細書で提供される予防薬若しくは治療薬、又は医薬組成物を、治療を必要とする領域に局所投与することが望ましい場合がある。これは、例えば、限定を目的とするものではないが、局所注入により、局所投与により（例えば、鼻内噴霧により）、注射により、又はインプラントを用いて達成され得、当該インプラントは、シラスティック膜などの膜又は繊維を含む、多孔性材料、非多孔性材料、又はゼラチン性材料である。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体又はその抗原結合断片を投与する場合、抗体又はその抗原結合断片が吸収しない材料を使用するように注意しなければならない。
別の実施形態では、本明細書で提供される予防薬若しくは治療薬、又は組成物は、ベシクル、特に、リポソームで送達され得る（Ｌａｎｇｅｒ，１９９０，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７－１５３３、Ｔｒｅａｔ ｅｔ ａｌ．，ｉｎ Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ ｉｎ ｔｈｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ，Ｌｏｐｅｚ－Ｂｅｒｅｓｔｅｉｎ ａｎｄ Ｆｉｄｌｅｒ（ｅｄｓ．），Ｌｉｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ｐｐ．３５３－３６５（１９８９）、Ｌｏｐｅｚ－Ｂｅｒｅｓｔｅｉｎ，ｉｂｉｄ．，ｐｐ．３１７－３２７を参照されたい；同書を全般的に参照されたい）。
別の実施形態では、本明細書で提供される予防薬若しくは治療薬、又は組成物は、制御放出システム又は徐放システムで送達されることができる。一実施形態では、ポンプが、制御放出又は徐放を達成するために使用され得る（Ｌａｎｇｅｒ、上記、Ｓｅｆｔｏｎ，１９８７，ＣＲＣ Ｃｒｉｔ．Ｒｅｆ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｅｎｇ．１４：２０、Ｂｕｃｈｗａｌｄ ｅｔ ａｌ．，１９８０，Ｓｕｒｇｅｒｙ ８８：５０７、Ｓａｕｄｅｋ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ、３２１：５７４を参照されたい）。別の実施形態では、ポリマー材料を使用して、予防薬若しくは治療薬（例えば、本明細書で提供される抗体）、又は本明細書で提供される組成物の制御放出又は徐放を達成することができる（例えば、Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ，Ｌａｎｇｅｒ ａｎｄ Ｗｉｓｅ（ｅｄｓ．），ＣＲＣ Ｐｒｅｓ．，Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，Ｆｌｏｒｉｄａ（１９７４）；Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｄｒｕｇ Ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ，Ｄｒｕｇ Ｐｒｏｄｕｃｔ Ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ，Ｓｍｏｌｅｎ ａｎｄ Ｂａｌｌ（ｅｄｓ．），Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８４）、Ｒａｎｇｅｒ ａｎｄ Ｐｅｐｐａｓ，１９８３，Ｊ．Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｓｃｉ．Ｒｅｖ．Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．２３：６１を参照されたい；また、Ｌｅｖｙ ｅｔ ａｌ．，１９８５，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２８：１９０、Ｄｕｒｉｎｇ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．２５：３５１、Ｈｏｗａｒｄ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．７ １：１０５）、米国特許第５，６７９，３７７号、米国特許第５，９１６，５９７号、米国特許第５，９１２，０１５号、米国特許第５，９８９，４６３号；米国特許第５，１２８，３２６号、国際公開第９９／１５１５４号、及び国際公開第９９／２０２５３号も参照されたい）。徐放性製剤に用いられるポリマーの例としては、ポリ（２－ヒドロキシエチルメタクリレート）、ポリ（メチルメタクリレート）、ポリ（アクリル酸）、ポリ（エチレン－ｃｏ－ビニルアセテート）、ポリ（メタクリル酸）、ポリグリコリド（ＰＬＧ）、ポリ無水物、ポリ（Ｎ－ビニルピロリドン）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリアクリルアミド、ポリ（エチレングリコール）、ポリラクチド（ＰＬＡ）、ポリ（ラクチド－ｃｏ－グリコリド）（ＰＬＧＡ）、及びポリオルトエステルが挙げられるが、これらに限定されない。ある実施形態では、徐放性製剤中で使用されるポリマーは、不活性であり、浸出性不純物を含まず、保存時に安定であり、無菌であり、生分解性である。更に別の実施形態では、制御放出システム又は徐放システムを治療標的、すなわち、鼻腔又は肺に近接して配置することができ、その結果、全身用量のほんの一部しか必要としない（例えば、Ｇｏｏｄｓｏｎ，ｉｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｒｅｌｅａｓｅ、上記，ｖｏｌ．２，ｐｐ．１１５－１３８（１９８４）を参照されたい）。制御放出システムがＬａｎｇｅｒ （１９９０，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７－１５３３）による概説において考察されている。当業者に既知の任意の技術を使用して、本明細書で提供される１つ若しくは２つ以上の抗体又はその抗原結合断片を含む徐放性製剤を産生することができる。例えば、各々全体が参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第４，５２６，９３８号、国際公開第９１／０５５４８号、国際公開第９６／２０６９８号、Ｎｉｎｇ ｅｔ ａｌ．，１９９６，「Ｉｎｔｒａｔｕｍｏｒａｌ Ｒａｄｉｏｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ ａ Ｈｕｍａｎ Ｃｏｌｏｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｘｅｎｏｇｒａｆｔ Ｕｓｉｎｇ ａ Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ－Ｒｅｌｅａｓｅ Ｇｅｌ，」Ｒａｄｉｏｔｈｅｒａｐｙ＆Ｏｎｃｏｌｏｇｙ ３９：１７９－ １８９、Ｓｏｎｇ ｅｔ ａｌ．，１９９５，「Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｍｅｄｉａｔｅｄ Ｌｕｎｇ Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｏｆ Ｌｏｎｇ－Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ Ｅｍｕｌｓｉｏｎｓ，」ＰＤＡ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ＆Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ５０：３７２－３９７、Ｃｌｅｅｋ ｅｔ ａｌ．，１９９７，「Ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｂｌｅ Ｐｏｌｙｍｅｒｉｃ Ｃａｒｒｉｅｒｓ ｆｏｒ ａ ｂＦＧＦ Ａｎｔｉｂｏｄｙ ｆｏｒ Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ，」Ｐｒｏ．Ｉｎｔ’ｌ．Ｓｙｍｐ．Ｃｏｎｔｒｏｌ．Ｒｅｌ．Ｂｉｏａｃｔ．Ｍａｔｅｒ．２４：８５３－８５４、及びＬａｍ ｅｔ ａｌ．，１９９７，「Ｍｉｃｒｏｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ Ｈｕｍａｎｉｚｅｄ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ ｆｏｒ Ｌｏｃａｌ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，」Ｐｒｏｃ．Ｉｎｔ’ｌ．Ｓｙｍｐ．Ｃｏｎｔｒｏｌ Ｒｅｌ．Ｂｉｏａｃｔ．Ｍａｔｅｒ．２４：７５９－７６０を参照されたい。
特定の実施形態では、本明細書で提供される組成物が予防剤又は治療剤（例えば、本明細書で提供される抗体又はその抗原結合断片）をコードする核酸である場合、核酸を、適切な核酸発現ベクターの一部として構築し、例えば、レトロウイルスベクターの使用により、核酸が、細胞内核酸となるように、ベクターを投与すること（米国特許第４，９８０，２８６号を参照されたい）により、又は直接注射により、又はマイクロ粒子衝突（例えば、遺伝子銃；Ｂｉｏｌｉｓｔｉｃ、Ｄｕｐｏｎｔ）により、又は脂質若しくは細胞表面受容体若しくはトランスフェクション剤によるコーティングの使用により、又は核に侵入することが既知であるホメオボックス様ペプチドと連結して核酸を投与すること（例えば、Ｊｏｌｉｏｔ，ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８８：１８６４－１８６８を参照されたい）などにより、そのコードされる予防剤又は治療剤の発現を促進するように、核酸を、インビボにおいて投与することができる。代替的に、核酸は、細胞内に導入し、相同組換えによる発現のために、宿主細胞ＤＮＡ内に組み込むことができる。
特定の実施形態では、本明細書で提供される組成物は、本明細書で提供される１つ、２つ、若しくはそれ以上の抗体又はその抗原結合断片を含む。別の実施形態では、本明細書で提供される組成物は、本明細書で提供される１つ、２つ、若しくはそれ以上の抗体又はその抗原結合断片と、本明細書で提供される抗体又はその抗原結合断片以外の予防剤若しくは治療剤と、を含む。一実施形態では、薬剤は、疾患若しくは病態の予防、管理、治療及び／又は寛解に有用であることが既知であるか、又はこれらのために使用されているか、若しくは現在使用されている。予防剤又は治療剤に加えて、本明細書で提供される組成物はまた、賦形剤を含み得る。
本明細書で提供される組成物は、単位剤形の調製に使用され得る医薬組成物（例えば、対象又は患者への投与に好適な組成物）の製造において有用なバルク薬剤組成物を含む。ある実施形態では、本明細書で提供される組成物は、医薬組成物である。そのような組成物は、予防有効量又は治療有効量の１つ又は２つ以上の予防剤又は治療剤例えば、本明細書で提供される抗体若しくはその抗原結合断片、又は他の予防剤若しくは治療剤）と、医薬的に許容される賦形剤と、を含む。医薬組成物は、対象への投与経路に好適であるように製剤化されることができる。
具体的な実施形態では、「賦形剤」という用語は、希釈剤、アジュバント（例えば、フロイントアジュバント（完全又は不完全））又はビヒクルを指すこともできる。医薬用賦形剤は、無菌液体、例えば水、及び落花生油、大豆油、鉱油、ゴマ油などの、石油、動物、植物、又は合成起源のものを含む油であり得る。水は、医薬組成物が静脈内投与される場合の代表的な賦形剤である。生理食塩水並びに水性デキストロース及びグリセロール溶液も、特に注射溶液用の液体賦形剤として採用され得る。好適な医薬用賦形剤としては、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、コメ、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセリン、タルク、塩化ナトリウム、乾燥スキムミルク、グリセリン、プロピレン、グリコール、水、エタノールなどが挙げられる。必要に応じて、組成物は、少量の湿潤剤若しくは乳化剤、又はｐＨ緩衝剤を更に含み得る。これらの組成物は、液剤、懸濁剤、乳剤、錠剤、丸剤、カプセル剤、散剤、徐放性製剤などの形態を取り得る。経口製剤は、医薬品グレードのマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウムなどの標準的な賦形剤を含み得る。好適な医薬用賦形剤の例は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（１９９０）Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡにおいて記載されている。このような組成物は、患者に適切に投与するための形態を提供するために、予防的又は治療的有効量の、例えば、精製された形態の、本明細書で提供される抗体又はその抗原結合断片を、好適な量の賦形剤とともに含有するであろう。その製剤は、投与様式に適するべきである。
ある実施形態では、組成物は、日常的な手順に従って、ヒトへの静脈内投与に適合させた医薬組成物として製剤化される。典型的には、静脈内投与用の組成物は、滅菌水性等張緩衝液中の溶液である。必要な場合、組成物はまた、可溶化剤及び、注射部位の疼痛を和らげるための、リグノカインなどの局所麻酔剤も含み得る。しかしながら、そのような組成物は、静脈内経路以外の経路を介して投与され得る。
概して、本明細書で提供される組成物の成分は、例えば、活性薬剤の量を示すアンプル又は小袋などの密封容器内に、乾燥した凍結乾燥粉末又は水分を含まない濃縮物として、個別に、又は単位剤形中に一体に混合して供給される。組成物が注入により投与される場合、組成物は、医薬品グレードの滅菌水又は生理食塩水の入った注入ボトルによって分注され得る。組成物が注射により投与される場合、投与前に成分が混合され得るように、注射用滅菌水又は生理食塩水のアンプルを提供することができる。
本明細書で提供される抗体又はその抗原結合断片は、抗体の量を示すアンプル又は小袋などの密封容器内に包装され得る。一実施形態では、抗体又はその抗原結合断片を、密封容器に入った乾燥滅菌した凍結乾燥粉末又は水分を含まない濃縮物として供給して、例えば、水又は生理食塩液で、対象への投与に適切な濃度まで復元させることができる。凍結乾燥された抗体又はその抗原結合断片は、その元の容器内で２～８℃で保存され得、抗体又はその抗原結合断片は、復元後１２時間以内（例えば、６時間以内、５時間以内、３時間以内、又は１時間以内）に投与され得る。別の実施形態では、本明細書で提供される抗体又はその抗原結合断片は、抗体の量及び濃度を示す密封容器内の液体形態で供給される。
本明細書で提供される組成物は、中性形態又は塩形態として製剤化され得る。薬学的に許容される塩としては、塩酸、リン酸、酢酸、シュウ酸、酒石酸などに由来するアニオンなどのアニオンともに形成される塩、及びナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、水酸化第二鉄、イソプロピルアミン、トリエチルアミン、２－エチルアミノエタノール、ヒスチジン、プロカインなどに由来するカチオンなどのカチオンともに形成される塩が挙げられる。
疾患又は病態の予防及び／又は治療に有効である、予防薬又は治療薬（例えば、本明細書で提供される抗体又はその抗原結合断片）又は本明細書で提供される組成物の量は、標準的な臨床技術によって決定され得る。加えて、最適な用量範囲を識別するのに役立てるために、任意選択でインビトロアッセイが採用されてもよい。製剤に用いる正確な用量は、投与経路及び疾患又は状態の重症度にも依存し、医師の判断及び各患者の状況に応じて決定する必要がある。
有効用量は、インビトロ又は動物モデル試験系から導出される用量反応曲線から外挿することができる。
ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体又はその抗原結合断片の用量の患者への投与経路は、経鼻内、筋肉内、静脈内、皮下、又はこれらの組み合わせであるが、本明細書に記載される他の経路も許容可能である。各用量は、同一の投与経路で投与される場合もされない場合もある。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体又はその抗原結合断片は、本明細書で提供される同じ又は異なる抗体又はその抗原結合断片の他の用量と同時に、又はその後に、複数の投与経路を介して投与され得る。
ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体又はその抗原結合断片は、対象に対して予防的に又は治療的に投与される。本明細書で提供される抗体又はその抗原結合断片は、疾患又は症状を防止する、減少させる、又は寛解させるように、対象に対して予防的に又は治療的に投与され得る。
遺伝子治療
特定の実施形態では、抗体又はその機能的誘導体をコードする配列を含む核酸は、例えば、遺伝子治療によって、疾患、障害若しくは病態を予防、管理、治療、及び／又は改善するように、本明細書で提供される方法において使用するために対象に投与される。このような治療は、発現された核酸又は発現可能な核酸の対象への投与によって行われる治療を包含する。一実施形態では、核酸は、それらがコードする抗体を産生し、この抗体が予防効果又は治療効果を媒介する。当該技術分野で利用可能な組換え遺伝子発現（又は遺伝子治療）のための任意の方法を使用することができる。
遺伝子治療の方法の一般的な総説については、Ｇｏｌｄｓｐｉｅｌ ｅｔ ａｌ．，１９９３，Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｙ １２：４８８－５０５、Ｗｕ ａｎｄ Ｗｕ，１９９１，Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ ３：８７－９５、Ｔｏｌｓｔｏｓｈｅｖ，１９９３，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．３２：５７３－５９６、Ｍｕｌｌｉｇａｎ，１９９３，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６０：９２６－９３２；及びＭｏｒｇａｎ ａｎｄ Ａｎｄｅｒｓｏｎ，１９９３，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．６２：１９１－２１７；Ｍａｙ，１９９３，ＴＩＢＴＥＣＨ １１（５）：１５５－２１５を参照されたい。使用され得る組換えＤＮＡ技術の分野において一般的に既知の方法は、Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．），Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，ＮＹ（１９９３）、及びＫｒｉｅｇｌｅｒ，Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ ａｎｄ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ（１９９０）に記載されている。
特定の実施形態では、組成物は、本明細書で提供される抗体をコードする核酸を含み、核酸は、好適な宿主において抗体又はキメラタンパク質又はその重鎖若しくは軽鎖を発現する発現ベクターの一部である。特に、そのような核酸は、抗体コード領域と作動可能に連結された異種プロモーターなどのプロモーターを有し、このプロモーターは、誘導性又は構成的であり、任意選択で、組織特異的である。別の特定の実施形態では、抗体コード配列及び任意の他の所望の配列が、ゲノム中の所望の部位での相同組換えを促進する領域に隣接し、したがって、抗体コード核酸の染色体内発現を提供する核酸分子が使用される（Ｋｏｌｌｅｒ ａｎｄ Ｓｍｉｔｈｉｅｓ，１９８９，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：８９３２－８９３５、Ｚｉｊｌｓｔｒａ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｎａｔｕｒｅ ３４２：４３５－４３８）。いくつかの実施形態では、発現される抗体分子が一本鎖抗体であるか、あるいは、核酸配列が、抗体の重鎖及び軽鎖の両方又はその断片をコードする配列を含む。
対象への核酸の送達は、直接的、この場合、対象は核酸又は核酸を運ぶベクターに直接的に曝露され得るか、又は間接的、この場合、細胞は最初にインビトロで核酸で形質転換され、次いで対象に移植され得るかのいずれかである。これらの２つのアプローチは、それぞれインビボ又はエクスビボ遺伝子治療として知られている。
特定の実施形態では、核酸配列は、インビボで直接的に投与され、配列が発現されてコードされた産物が産生される。これは、当該技術分野で既知の多数の方法のいずれかによって、例えば、適切な核酸発現ベクターの一部としてそれらを構築し、配列が細胞内になるようにベクターを投与することにより、例えば、欠損若しくは弱毒化レトロウイルスベクター又は他のウイルスベクター（米国特許第４，９８０，２８６号を参照されたい）を使用する感染により、あるいはネイキッドＤＮＡの直接注入により、あるいはマイクロ粒子衝突（例えば、遺伝子銃；Ｂｉｏｌｉｓｔｉｃ，Ｄｕｐｏｎｔ）の使用により、あるいは脂質若しくは細胞表面受容体若しくはトランスフェクション剤でのコーティング、リポソーム、微粒子、又はマイクロカプセルへの封入、あるいは核に侵入することが知られているペプチドに連結してそれらを投与することにより、受容体媒介エンドサイトーシスを受けるリガンドに連結してそれを投与することなどにより（例えば、Ｗｕ ａｎｄ Ｗｕ，１９８７，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２：４４２９－４４３２を参照されたい）（受容体を特異的に発現する細胞型を標的とするために使用することができる）達成され得る。別の実施形態では、リガンドがエンドソームを破壊する融合誘導性ウイルスペプチドを含む核酸－リガンド複合体を形成することができ、それにより、核酸がリソソーム分解を回避できるようになる。更に別の実施形態では、核酸は、特異的レセプターを標的化することにより、細胞特異的取り込み及び発現のためにインビボで標的化され得る（例えば、国際公開第９２／０６１８０号、国際公開第９２／２２６３５号、国際公開第９２／２０３１６号、国際公開第９３／１４１８８号、国際公開第９３／２０２２１号を参照されたい）。代替的に、相同組換えによって、核酸を細胞内に導入し、発現のために宿主細胞ＤＮＡ内に組み込むことができる（Ｋｏｌｌｅｒ ａｎｄ Ｓｍｉｔｈｉｅｓ，１９８９，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：８９３２－８９３５、及びＺｉｊｌｓｔｒａ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｎａｔｕｒｅ ３４２：４３５－４３８）。
特定の実施形態では、抗体をコードする核酸配列を含むウイルスベクターが使用される。例えば、レトロウイルスベクターを使用することができる（Ｍｉｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９９３，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．２１７：５８１－５９９を参照されたい）。これらのレトロウイルスベクターは、ウイルスゲノムの正確なパッケージング及び宿主細胞ＤＮＡへの組込みに必要な成分を含む。遺伝子治療に使用される抗体をコードする核酸配列は、対象への遺伝子の送達を容易にする１つ又は２つ以上のベクターにクローニングすることができる。レトロウイルスベクターについての更なる詳細は、Ｂｏｅｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，１９９４，Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ ６：２９１－３０２に見出され得、これは、造血幹細胞の化学療法に対する耐性を高めるために、造血幹細胞にＭＤＲ１遺伝子を送達するためのレトロウイルスベクターの使用について記載している。遺伝子治療におけるレトロウイルスベクターの使用を説明する他の参考文献は以下のとおりである：Ｃｌｏｗｅｓ ｅｔ ａｌ．，１９９４，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９３：６４４－６５１、Ｋｌｅｉｎ ｅｔ ａｌ．，１９９４，Ｂｌｏｏｄ ８３：１４６７－１４７３、Ｓａｌｍｏｎｓ ａｎｄ Ｇｕｎｚｂｅｒｇ，１９９３，Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ４：１２９－１４１、及びＧｒｏｓｓｍａｎ ａｎｄ Ｗｉｌｓｏｎ，１９９３，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．ｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌ．３：１１０－１１４。
アデノウイルスは、抗体の組換え産生において使用され得る他のウイルスベクターである。アデノウイルスは、遺伝子を呼吸器上皮に送達するための特に魅力的なビヒクルである。アデノウイルスは自然に呼吸器上皮に感染し、そこで軽度の疾患を引き起こす。アデノウイルスに基づく送達系の他の標的は、肝臓、中枢神経系、内皮細胞、及び筋肉である。アデノウイルスは、非分裂細胞に感染することができるという利点を有する。Ｋｏｚａｒｓｋｙ ａｎｄ Ｗｉｌｓｏｎ，１９９３，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ３：４９９－５０３は、アデノウイルスに基づく遺伝子治療の総説を提示している。Ｂｏｕｔ ｅｔ ａｌ．，１９９４，Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ５：３－１０は、アカゲザルの呼吸器上皮に遺伝子を移入するためのアデノウイルスベクターの使用を実証した。遺伝子治療におけるアデノウイルスの使用の他の例は、Ｒｏｓｅｎｆｅｌｄ ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５２：４３１－４３４、Ｒｏｓｅｎｆｅｌｄ ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ｃｅｌｌ ６８：１４３－１５５、Ｍａｓｔｒａｎｇｅｌｉ ｅｔ ａｌ．，１９９３，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９１：２２５－２３４、国際公開第９４／１２６４９号、及びＷａｎｇ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ２：７７５－７８３．に見出され得る。特定の実施形態では、アデノウイルスベクターが使用される。
アデノ随伴ウイルス（Ａｄｅｎｏ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｖｉｒｕｓ、ＡＡＶ）も利用することができる（Ｗａｌｓｈ ｅｔ ａｌ．，１９９３，Ｐｒｏｃ．Ｓｏｃ．Ｅｘｐ．Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ．２０４：２８９－３００、及び米国特許第５，４３６，１４６号）。特定の実施形態では、ＡＡＶベクターは、本明細書で提供される抗体を発現するために使用される。ある特定の実施形態では、ＡＡＶは、ＶＨドメインをコードする核酸を含む。他の実施形態では、ＡＡＶは、ＶＬドメインをコードする核酸を含む。ある特定の実施形態では、ＡＡＶは、ＶＨドメイン及びＶＬドメインをコードする核酸を含む。本明細書で提供される方法のいくつかの実施形態では、対象には、ＶＨドメインをコードする核酸を含むＡＡＶ及びＶＬドメインをコードする核酸を含むＡＡＶが投与される。他の実施形態では、対象には、ＶＨドメイン及びＶＬドメインをコードする核酸を含むＡＡＶが投与される。ある特定の実施形態では、ＶＨ及びＶＬドメインが過剰発現される。
遺伝子療法への別のアプローチは、エレクトロポレーション、リポフェクション、リン酸カルシウム媒介トランスフェクション、又はウイルス感染などの方法によって組織培養細胞に遺伝子を導入することを伴う。通常、導入方法には、細胞への選択マーカーの導入が含まれる。次いで、細胞を選択下に置いて、導入された遺伝子を取り込んで発現している細胞が単離される。次いで、これらの細胞を対象に送達する。
この実施形態では、得られた組換え細胞をインビボで投与する前に、核酸を細胞に導入する。このような導入は、トランスフェクション、エレクトロポレーション、マイクロインジェクション、核酸配列を含むウイルス又はバクテリオファージベクターによる感染、細胞融合、染色体媒介遺伝子導入、マイクロセル媒介遺伝子導入、スフェロプラスト融合などを含むがこれらに限定されない、当該技術分野で既知の任意の方法によって行うことができる。細胞への外来遺伝子の導入のための多数の技術が当該技術分野で既知であり（例えば、Ｌｏｅｆｆｌｅｒ ａｎｄ Ｂｅｈｒ，１９９３，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．２１７：５９９－６１８、Ｃｏｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，１９９３，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．２１７：６１８－６４４、Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａ．Ｔｈｅｒ．２９：６９－９２（１９８５）を参照されたい）、レシピエント細胞の必要な発生及び生理学的機能が破壊されないという条件で、本明細書で提供される方法に従って使用することができる。この技術は、核酸が細胞によって発現可能であるように、例えば、遺伝可能であり、その細胞子孫によって発現可能であるように、細胞への核酸の安定した移入を提供するものでなければならない。
得られた組換え細胞は、当該技術分野で既知の様々な方法によって対象に送達することができる。組換え血液細胞（例えば、造血幹細胞又は造血前駆細胞）は、静脈内投与され得る。使用が想定される細胞の量は、所望の効果、患者の状態などに依存し、当業者によって決定することができる。
遺伝子治療の目的のために核酸が導入され得る細胞は、任意の所望の利用可能な細胞型を包含し、これには、限定されないが、上皮細胞、内皮細胞、ケラチノサイト、線維芽細胞、筋細胞、肝細胞、Ｔリンパ球、Ｂリンパ球、単球、マクロファージ、好中球、好酸球、巨核球、顆粒球などの血液細胞、様々な幹細胞又は前駆細胞、特に、例えば、骨髄、臍帯血、末梢血、胎児肝臓などから得られるような造血幹細胞又は前駆細胞が含まれる。
特定の実施形態では、遺伝子治療に使用される細胞は、対象に対して自己由来である。
組換え細胞が遺伝子治療に使用される実施形態では、抗体をコードする核酸配列が、細胞又はその子孫によって発現可能となるように細胞に導入され、その後、治療効果を得るために組換え細胞がインビボで投与される。特定の実施形態では、幹細胞又は前駆細胞が使用される。インビトロで単離及び維持され得る任意の幹細胞並びに／又は前駆細胞を、本明細書で提供される方法のこの実施形態に従って使用できる可能性がある（例えば、国際公開第９４／０８５９８号、Ｓｔｅｍｐｌｅ ａｎｄ Ａｎｄｅｒｓｏｎ，１９９２，Ｃｅｌｌ ７ １：９７３－９８５、Ｒｈｅｉｎｗａｌｄ，１９８０，Ｍｅｔｈ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏ．２１Ａ：２２９、及びＰｉｔｔｅｌｋｏｗ ａｎｄ Ｓｃｏｔｔ，１９８６，Ｍａｙｏ Ｃｌｉｎｉｃ Ｐｒｏｃ．６１：７７１を参照されたい）。
特定の実施形態では、遺伝子治療の目的で導入される核酸は、適切な転写誘導物質の存在又は非存在を制御することによって核酸の発現が制御可能であるように、コード領域と作動可能に連結された誘導性プロモーターを含む。
診断アッセイ及び方法
本明細書で提供される抗原に免疫特異的に結合する標識抗体並びにその誘導体及び類似体は、疾患若しくは障害を検出、診断、又はモニタリングするための診断目的に使用することができる。
本明細書で提供される抗体は、本明細書に記載されるような、又は当業者に既知のような古典的な免疫組織学的方法を使用して生体試料中の抗原レベルをアッセイするために使用することができる（例えば、Ｊａｌｋａｎｅｎ ｅｔ ａｌ．，１９８５，Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１０１：９７６－９８５、及びＪａｌｋａｎｅｎ ｅｔ ａｌ．，１９８７，Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１０５：３０８７－３０９６）を参照されたい。タンパク質遺伝子発現を検出するために有用な他の抗体に基づく方法としては、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）及びラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）などのイムノアッセイが挙げられる。好適な抗体アッセイ標識は当該技術分野で既知であり、これには、酵素標識、例えば、グルコースオキシダーゼ、放射性同位体、例えば、ヨウ素（１２５Ｉ、１２１Ｉ）、炭素（１４Ｃ）、硫黄（３５Ｓ）、トリチウム（３Ｈ）、インジウム（１２１Ｉｎ）、及びテクネチウム（９９Ｔｃ）、発光標識、例えば、ルミノール、並びに蛍光標識、例えば、フルオレセイン及びローダミン、並びにビオチンが含まれる。本明細書で提供される一態様は、ヒトにおける疾患又は障害の検出及び診断である。
対象のサイズ及び使用されるイメージングシステムが、診断画像を生成するために必要とされるイメージング部分の量を決定することは、当該技術分野で理解される。放射性同位体部分の場合、ヒト対象について、注入される放射能の量は、通常、９９Ｔｃの約５～２０ミリキュリーの範囲である。次いで、標識された抗体は、特定のタンパク質を含む細胞の位置に蓄積する。インビボ腫瘍イメージングは、Ｓ．Ｗ．Ｂｕｒｃｈｉｅｌ ｅｔ ａｌ．，「Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ ｏｆ Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｔｈｅｉｒ Ｆｒａｇｍｅｎｔｓ．」（Ｃｈａｐｔｅｒ １３ ｉｎ Ｔｕｍｏｒ Ｉｍａｇｉｎｇ：Ｔｈｅ Ｒａｄｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ，Ｓ．Ｗ．Ｂｕｒｃｈｉｅｌ ａｎｄ Ｂ．Ａ．Ｒｈｏｄｅｓ，ｅｄｓ．，Ｍａｓｓｏｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｉｎｃ．（１９８２）に記載されている。
使用される標識のタイプ及び投与の様式を含むいくつかの変数に応じて、標識された抗体が対象の部位に濃縮されることを可能にし、結合していない標識された抗体がバックグラウンドレベルまで除去されるための投与後の時間間隔は、６～４８時間又は６～２４時間又は６～１２時間である。別の実施形態では、投与後の時間間隔は５～２０日又は５～１０日である。
一実施形態では、疾患又は障害のモニタリングは、疾患又は障害を診断するための方法を繰り返すことによって、例えば、最初の診断の１ヶ月後、最初の診断の６ヶ月後、最初の診断の１年後などに行われる。
標識された分子の存在は、インビボスキャニングのための当該技術分野で既知の方法を使用して、対象において検出され得る。これらの方法は、使用される標識のタイプに依存する。当業者は、特定の標識を検出するための適切な方法を決定することができる。本明細書で提供される診断方法において使用され得る方法及びデバイスとしては、コンピュータ断層撮影法（computed tomography、ＣＴ）、陽電子放射断層撮影法（position emission tomography、ＰＥＴ）などの全身スキャン、磁気共鳴画像法（magnetic resonance imaging、ＭＲＩ）、及び超音波検査が挙げられるが、これらに限定されない。
特定の実施形態では、分子は、放射性同位体で標識され、放射線応答性手術器具を使用して患者において検出される（Ｔｈｕｒｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．、米国特許第５，４４１，０５０号）。別の実施形態では、分子は、蛍光化合物で標識され、蛍光応答性走査機器を使用して患者において検出される。別の実施形態では、分子は陽電子放出金属で標識され、陽電子放出断層撮影法を用いて患者において検出される。更に別の実施形態では、分子は、常磁性標識で標識され、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）を使用して患者において検出される。
キット
好適な包装材料に包装された、本明細書で提供される抗体（例えば、抗ＮＫＧ２ｄ多重特異性抗体又は抗ＮＫｐ４６多重特異性抗体）、又はその組成物（例えば、医薬組成物）を含むキットも本明細書で提供される。キットは、任意選択で、成分の説明又はその中の成分のインビトロ、インビボ、若しくはエクスビボでの使用のための指示書を含むラベル又は添付文書を含む。
「包装材料」という用語は、キットの構成要素を収容する物理的構造を指す。包装材料は、構成要素を無菌で維持することができ、そのような目的のために一般的に使用される材料（例えば、紙、段ボール、ガラス、プラスチック、箔、アンプル、バイアル、チューブなど）から作製することができる。
本明細書で提供されるキットは、ラベル又は添付文書を含むことができる。ラベル又は添付文書は、「印刷物」、例えば、構成要素、キット又は包装材料（例えば、箱）とは別個の又はそれに添付された、あるいは例えば、キット構成要素を含むアンプル、チューブ、又はバイアルに取り付けられた紙又は厚紙を含む。ラベル又は添付文書は、ディスク（例えば、ハードディスク、カード、メモリディスク）、ＣＤ若しくはＤＶＤ－ＲＯＭ／ＲＡＭ、ＤＶＤ、ＭＰ３、磁気テープなどの光ディスク、又はＲＡＭ及びＲＯＭなどの電気記憶媒体、又は磁気／光学記憶媒体、ＦＬＡＳＨ媒体、又はメモリタイプカードなどのこれらのハイブリッドなどのコンピュータ可読媒体を更に含むことができる。ラベル又は添付文書は、製造元情報、ロット番号、製造元所在地、及び日付を識別する情報を含むことができる。
本明細書で提供されるキットは、他の構成要素を更に含むことができる。キットの各構成要素は、個々の容器内に封入することができ、様々な容器の全てを単一のパッケージ内に入れることができる。キットは、冷蔵用に設計することもできる。キットは更に、本明細書で提供される抗体、又は本明細書で提供される抗体をコードする核酸を含む細胞を含むように設計することができる。キット中の細胞は、使用の準備ができるまで適切な保存条件下で維持することができる。
抗原、例えば、ＮＫＧ２ｄ又はＮＫｐ４６と免疫特異的に結合する抗体のパネルも本明細書で提供される。特定の実施形態では、抗原に対する異なる結合速度定数、異なる解離速度定数、異なる親和性、及び／又は抗原に対する異なる特異性を有する抗体のパネルが本明細書で提供される。ある特定の実施形態では、約１０個、好ましくは約２５個、約５０個、約７５個、約１００個、約１２５個、約１５０個、約１７５個、約２００個、約２５０個、約３００個、約３５０個、約４００個、約４５０個、約５００個、約５５０個、約６００個、約６５０個、約７００個、約７５０個、約８００個、約８５０個、約９００個、約９５０個、又は約１０００個以上のパネルが本明細書で提供される。抗体のパネルは、例えば、ＥＬＩＳＡなどのアッセイなどのために、９６ウェル又は３８４ウェルプレートにおいて使用することができる。
別途定義されない限り、本明細書で使用されている全ての技術的用語及び科学的用語は、本発明が属する分野の当業者に共通に理解されるものと同じ意味を有している。本明細書に記載のものと同様又は同等の方法及び材料を本発明の実施又は試験に使用することができるが、好適な方法及び材料を本明細書に記載する。
本明細書で使用される場合、数値は、本文書全体をとおして範囲形式で提示されることが多い。範囲形式の使用は、単に便宜のため及び簡潔さのためであり、文脈により別途明確に示されない限り、本発明の範囲に対する柔軟性のない限定として解釈されるべきではない。したがって、範囲の使用には、文脈により別途明確に示されない限り、全ての可能な部分範囲、その範囲内の全ての個々の数値、並びにそのような範囲内の整数及び範囲内の値又は整数の分数を含む全ての数値又は数値範囲が明示的に含まれる。この構成は、範囲の広さにかかわらず、本特許文書全体をとおして全ての文脈において適用される。したがって、例えば、９０～１００％の範囲への言及は、９１～９９％、９２～９８％、９３～９５％、９１～９８％、９１～９７％、９１～９６％、９１～９５％、９１～９４％、９１～９３％（以降同様）を含む。９０～１００％の範囲への言及は、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９５％、９７％など、並びに９１．１％、９１．２％、９１．３％、９１．４％、９１．５％など、９２．１％、９２．２％、９２．３％、９２．４％、９２．５％など（以降同様）も含む。
更に、１～３、３～５、５～１０、１０～２０、２０～３０、３０～４０、４０～５０、５０～６０、６０～７０、７０～８０、８０～９０、９０～１００、１００～１１０、１１０～１２０、１２０～１３０、１３０～１４０、１４０～１５０、１５０～１６０、１６０～１７０、１７０～１８０、１８０～１９０、１９０～２００、２００～２２５、２２５～２５０の範囲への言及は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０などを含む。更なる例では、２５～２５０、２５０～５００、５００～１，０００、１，０００～２５００、２５００～５０００、５０００～２５０００、２５０００～５００００の範囲への言及は、任意の数値又はそのような値内の若しくはそのような値を包含する範囲、例えば、２５、２６、２７、２８、２９．．．２５０、２５１、２５２、２５３、２５４．．．５００、５０１、５０２、５０３、５０４．．．などを含む。
同様に本明細書で使用される場合、一連の範囲が本文書全体にわたって開示される。一連の範囲の使用は、別の範囲を提供するための上限及び下限の範囲の組み合わせを含む。この構成は、範囲の広さにかかわらず、本特許文書全体をとおして全ての文脈において適用される。したがって、例えば、５～１０、１０～２０、２０～３０、３０～４０、４０～５０、５０～７５、７５～１００、１００～１５０などの一連の範囲への言及は、５～２０、５～３０、５～４０、５～５０、５～７５、５～１００、５～１５０、及び１０～３０、１０～４０、１０～５０、１０～７５、１０～１００、１０～１５０、及び２０～４０、２０～５０、２０～７５、２０～１００、２０～１５０（以降同様）などの範囲を含む。
簡潔にするために、ある特定の略語が本明細書で使用される。一例として、アミノ酸残基を表す単一文字の略語がある。アミノ酸及びそれらに対応する３文字及び１文字の略語は以下のとおりである：
Figure 2024512135000003
本発明は、概して、多数の実施形態を説明するために断定的な言葉を使用して本明細書に開示される。また、本発明には、物質又は材料、方法工程及び条件、プロトコール、手順、アッセイ又は分析など、特定の主題が完全に又は部分的に除外されている実施形態も具体的に含まれる。したがって、本発明は、概して、本発明が含まないものの観点からは本明細書に示されていないが、それでもなお、本発明に明示的に含まれていない態様が本明細書で開示される。
本発明の多くの実施形態が説明されてきた。しかしながら、様々な修正が、本発明の趣旨及び範囲から逸脱することなく実行され得ることが、理解されるであろう。したがって、以下の実施例は、特許請求の範囲に記載された発明の範囲を説明することを意図しているが、限定するものではない。
実施形態
本発明は、以下の非限定的な実施形態を提供する。
１つのセットの実施形態（実施形態セットＡ）では、以下が提供される。
Ａ１．多重特異性抗体であって、
（ａ）ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞上で発現される第１の抗原と結合する第１の結合ドメインと、
（ｂ）第２の抗原と結合する第２の結合ドメインと、
を含む、多重特異性抗体。
Ａ２．第１の抗原が、ＮＫ細胞活性化受容体である、実施形態Ａ１に記載の多重特異性抗体。
Ａ３．第１の抗原が、ＮＫＧ２ｄである、実施形態Ａ２に記載の多重特異性抗体。
Ａ４．第１の結合ドメインが、
（ｉ）
（ａ）配列番号４のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号５のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号６のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、
（ｂ）配列番号１０のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号１１のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号１２のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、
（ｃ）配列番号１６のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号１７のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号１８のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、
（ｄ）配列番号２２のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号２３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号２４のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、若しくは
（ｅ）配列番号２８のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号２９のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号３０のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、
を含む、重鎖可変領域（ＶＨ）と、
（ａ）配列番号７のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号８のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号９のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、
（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号１４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号１５のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、
（ｃ）配列番号１９のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号２０のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号２１のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、
（ｄ）配列番号２５のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号２６のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号２７のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、若しくは
（ｅ）配列番号３１のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号３２のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号３３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、
を含む、軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含むか、
又は
（ｉｉ）
（ａ）配列番号３６のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号３７のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号３８のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、
（ｂ）配列番号４２のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号４３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号４４のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、
（ｃ）配列番号４８のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号４９のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号５０のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、
（ｄ）配列番号５４のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号５５のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号５６のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、若しくは
（ｅ）配列番号６０のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号６１のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号６２のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、
を含む、重鎖可変領域（ＶＨ）と、
（ａ）配列番号３９のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号４０のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号４１のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、
（ｂ）配列番号４５のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号４６のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号４７のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、
（ｃ）配列番号５１のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号５２のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号５３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、
（ｄ）配列番号５７のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号５８のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号５９のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、若しくは
（ｅ）配列番号６３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号６４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号６５のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、
を含む、軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含む、
実施形態Ａ３に記載の多重特異性抗体。
Ａ５．第１の結合ドメインが、配列番号２のアミノ酸配列を有するＶＨと、配列番号３のアミノ酸配列を有するＶＬと、を含むか、又は第１の結合ドメインが、配列番号３４のアミノ酸配列を有するＶＨと、配列番号３５のアミノ酸配列を有するＶＬと、を含む、実施形態Ａ４に記載の多重特異性抗体。
Ａ６．第１の抗原が、ＮＫｐ４６である、実施形態Ａ２に記載の多重特異性抗体。
Ａ７．第１の結合ドメインが、
（ｉ）
（ａ）配列番号６９のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号７０のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号７１のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、
（ｂ）配列番号７５のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号７６のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号７７のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、
（ｃ）配列番号８１のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号８２のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号８３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、
（ｄ）配列番号８７のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号８８のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号８９のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、又は
（ｅ）配列番号９３のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号９４のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号９５のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、
を含む、重鎖可変領域（ＶＨ）と、
（ｉｉ）
（ａ）配列番号７２のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号７３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号７４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、
（ｂ）配列番号７８のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号７９のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号８０のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、
（ｃ）配列番号８４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号８５のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号８６のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、
（ｄ）配列番号９０のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号９１のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号９２のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、又は
（ｅ）配列番号９６のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号９７のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号９８のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、
を含む、軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含む、
実施形態Ａ６に記載の多重特異性抗体。
Ａ８．第１の結合ドメインが、配列番号６７のアミノ酸配列を有するＶＨと、配列番号６８のアミノ酸配列を有するＶＬと、を含む、実施形態Ａ７に記載の多重特異性抗体。
Ａ９．第２の抗原が、細胞表面上にある、実施形態Ａ１～Ａ８のいずれか１つに記載の多重特異性抗体。
Ａ１０．第２の抗原が、腫瘍細胞上で発現される、実施形態Ａ１～Ａ８のいずれか１つに記載の多重特異性抗体。
Ａ１１．第２の抗原が、腫瘍特異的抗原（ＴＳＡ）又は腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）である、実施形態Ａ１０に記載の多重特異性抗体。
Ａ１２．第２の抗原が、ＢＣＭＡである、実施形態Ａ１０に記載の多重特異性抗体。
Ａ１３．第２の抗原が、ＧＰＲＣ５ｄである、実施形態Ａ１０に記載の多重特異性抗体。
Ａ１４．第１の結合ドメインが、ヒト化されているか、第２の結合ドメインが、ヒト化されているか、又は第１の結合ドメイン及び第２の結合ドメインの両方が、ヒト化されている、実施形態Ａ１～Ａ１３のいずれか１つに記載の多重特異性抗体。
Ａ１５．多重特異性抗体が、ＩｇＧ抗体である、実施形態Ａ１～Ａ１４のいずれか１つに記載の多重特異性抗体。
Ａ１６．ＩｇＧ抗体が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４抗体である、実施形態Ａ１５に記載の多重特異性抗体。
Ａ１７．ＩｇＧ抗体が、ＩｇＧ１抗体である、実施形態Ａ１６に記載の多重特異性抗体。
Ａ１８．多重特異性抗体が、二重特異性抗体である、実施形態Ａ１～Ａ１７のいずれか１つに記載の多重特異性抗体。
Ａ１９．二重特異性抗体が、Ｂｉｐｏｄ足場構造である、実施形態Ａ１８に記載の多重特異性抗体。
Ａ２０．第１の結合ドメインが、Ｆａｂ領域であり、第２の結合ドメインが、ｓｃＦｖ領域である、実施形態Ａ１９に記載の多重特異性抗体。
Ａ２１．二重特異性抗体が、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ足場構造である、実施形態Ａ１８に記載の多重特異性抗体。
Ａ２２．第１の結合ドメインが、２つのＦａｂ領域を含み、第２の結合ドメインが、２つのｓｃＦｖ領域を含む、実施形態Ａ２１に記載の多重特異性抗体。
Ａ２３．多重特異性抗体が、インビトロで腫瘍細胞のＮＫ細胞依存性細胞傷害を、約５００ｐＭ未満のＩＣ５０で誘導する、実施形態Ａ１０～Ａ２２のいずれか１つに記載の多重特異性抗体。
Ａ２４．多重特異性抗体が、インビトロで腫瘍細胞のＮＫ細胞依存性細胞傷害を、約３００ｐＭ未満のＩＣ５０で誘導する、実施形態Ａ１０～Ａ２２のいずれか１つに記載の多重特異性抗体。
Ａ２５．多重特異性抗体が、インビトロで腫瘍細胞のＮＫ細胞依存性細胞傷害を、約１００ｐＭ未満のＩＣ５０で誘導する、実施形態Ａ１０～Ａ２２のいずれか１つに記載の多重特異性抗体。
Ａ２６．多重特異性抗体が、インビトロで腫瘍細胞のＮＫ細胞依存性細胞傷害を、約５０ｐＭ未満のＩＣ５０で誘導する、実施形態Ａ１０～Ａ２２のいずれか１つに記載の多重特異性抗体。
Ａ２７．多重特異性抗体が、インビトロで腫瘍細胞のＮＫ細胞依存性細胞傷害を、約２０ｐＭ未満のＩＣ５０で誘導する、実施形態Ａ１０～Ａ２２のいずれか１つに記載の多重特異性抗体。
Ａ２８．多重特異性抗体が、インビトロで腫瘍細胞のＮＫ細胞依存性細胞傷害を、約１５ｐＭ未満のＩＣ５０で誘導する、実施形態Ａ１０～Ａ２２のいずれか１つに記載の多重特異性抗体。
Ａ２９．多重特異性抗体が、インビトロで腫瘍細胞のＮＫ細胞依存性細胞傷害を、約１０ｐＭ未満のＩＣ５０で誘導する、実施形態Ａ１０～Ａ２２のいずれか１つに記載の多重特異性抗体。
Ａ３０．ＩＣ５０が、ＮＫエフェクターと第２の抗原を発現する標的細胞との混合物を用いて評価される、実施形態Ａ２３～Ａ２９のいずれか１つに記載の多重特異性抗体。
Ａ３１．エフェクター細胞対標的細胞の比が、約０．０１対１～約５対１である、実施形態Ａ３０に記載の多重特異性抗体。
Ａ３２．エフェクター細胞対標的細胞の比が、約０．１対１～約２対１である、実施形態Ａ３０に記載の多重特異性抗体。
Ａ３３．エフェクター細胞対標的細胞の比が、約１：１である、実施形態Ａ３０に記載の多重特異性抗体。
Ａ３４．実施形態Ａ１～Ａ３３のいずれか１つに記載の多重特異性抗体をコードする、核酸。
Ａ３５．実施形態Ａ３４に記載の核酸を含む、ベクター。
Ａ３６．実施形態Ａ３５に記載のベクターを含む、宿主細胞。
Ａ３７．実施形態Ａ３５に記載のベクターと、そのためのパッケージと、を含む、キット。
Ａ３８．ＮＫＧ２ｄと結合する抗体であって、
（ｉ）
（ａ）配列番号４のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号５のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号６のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、
（ｂ）配列番号１０のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号１１のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号１２のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、
（ｃ）配列番号１６のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号１７のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号１８のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、
（ｄ）配列番号２２のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号２３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号２４のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、若しくは
（ｅ）配列番号２８のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号２９のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号３０のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、
を含む、重鎖可変領域（ＶＨ）と、
（ａ）配列番号７のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号８のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号９のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、
（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号１４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号１５のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、
（ｃ）配列番号１９のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号２０のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号２１のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、
（ｄ）配列番号２５のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号２６のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号２７のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、若しくは
（ｅ）配列番号３１のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号３２のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号３３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、
を含む、軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含むか、
又は
（ｉｉ）
（ａ）配列番号３６のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号３７のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号３８のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、
（ｂ）配列番号４２のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号４３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号４４のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、
（ｃ）配列番号４８のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号４９のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号５０のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、
（ｄ）配列番号５４のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号５５のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号５６のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、若しくは
（ｅ）配列番号６０のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号６１のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号６２のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、
を含む、重鎖可変領域（ＶＨ）と、
（ａ）配列番号３９のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号４０のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号４１のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、
（ｂ）配列番号４５のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号４６のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号４７のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、
（ｃ）配列番号５１のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号５２のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号５３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、
（ｄ）配列番号５７のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号５８のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号５９のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、若しくは
（ｅ）配列番号６３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号６４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号６５のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、
を含む、軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含む、ＮＫＧ２ｄと結合する抗体。
Ａ３９．第１の結合ドメインが、配列番号２のアミノ酸配列を有するＶＨと、配列番号３のアミノ酸配列を有するＶＬと、を含むか、又は第１の結合ドメインが、配列番号３４のアミノ酸配列を有するＶＨと、配列番号３５のアミノ酸配列を有するＶＬと、を含む、実施形態Ａ３８に記載の抗体。
Ａ４０．ＮＫｐ４６と結合する抗体であって、
（ｉ）
（ａ）配列番号６９のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号７０のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号７１のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、
（ｂ）配列番号７５のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号７６のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号７７のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、
（ｃ）配列番号８１のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号８２のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号８３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、
（ｄ）配列番号８７のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号８８のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号８９のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、又は
（ｅ）配列番号９３のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号９４のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号９５のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、
を含む、重鎖可変領域（ＶＨ）と、
（ｉｉ）
（ａ）配列番号７２のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号７３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号７４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、
（ｂ）配列番号７８のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号７９のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号８０のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、
（ｃ）配列番号８４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号８５のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号８６のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、
（ｄ）配列番号９０のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号９１のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号９２のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、又は
（ｅ）配列番号９６のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号９７のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号９８のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、
を含む、軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含む、ＮＫｐ４６と結合する抗体。
Ａ４１．第１の結合ドメインが、配列番号６７のアミノ酸配列を有するＶＨと、配列番号６８のアミノ酸配列を有するＶＬと、を含む、実施形態Ａ４０に記載の抗体。
Ａ４２．実施形態Ａ３８～Ａ４１のいずれか１つに記載の抗体をコードする、核酸。
Ａ４３．実施形態Ａ４２に記載の核酸を含む、ベクター。
Ａ４４．実施形態Ａ４３に記載のベクターを含む、宿主細胞。
Ａ４５．実施形態Ａ４３に記載のベクターと、そのためのパッケージと、を含む、キット。
１つのセットの実施形態（実施形態セットＢ）では、以下が提供される。
Ｂ１．医薬組成物であって、多重特異性抗体と、医薬的に許容される担体と、を含み、多重特異性抗体が
（ａ）ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞上で発現される第１の抗原と結合する第１の結合ドメインと、
（ｂ）第２の抗原と結合する第２の結合ドメインと、
を含む、医薬組成物。
Ｂ２．第１の抗原が、ＮＫ細胞活性化受容体である、実施形態Ｂ１に記載の医薬組成物。
Ｂ３．第１の抗原が、ＮＫＧ２ｄである、実施形態Ｂ２に記載の医薬組成物。
Ｂ４．第１の結合ドメインが、
（ｉ）
（ａ）配列番号４のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号５のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号６のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、
（ｂ）配列番号１０のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号１１のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号１２のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、
（ｃ）配列番号１６のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号１７のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号１８のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、
（ｄ）配列番号２２のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号２３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号２４のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、若しくは
（ｅ）配列番号２８のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号２９のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号３０のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、
を含む、重鎖可変領域（ＶＨ）と、
（ａ）配列番号７のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号８のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号９のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、
（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号１４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号１５のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、
（ｃ）配列番号１９のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号２０のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号２１のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、
（ｄ）配列番号２５のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号２６のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号２７のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、若しくは
（ｅ）配列番号３１のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号３２のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号３３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、
を含む、軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含むか、
又は
（ｉｉ）
（ａ）配列番号３６のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号３７のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号３８のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、
（ｂ）配列番号４２のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号４３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号４４のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、
（ｃ）配列番号４８のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号４９のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号５０のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、
（ｄ）配列番号５４のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号５５のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号５６のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、若しくは
（ｅ）配列番号６０のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号６１のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号６２のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、
を含む、重鎖可変領域（ＶＨ）と、
（ａ）配列番号３９のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号４０のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号４１のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、
（ｂ）配列番号４５のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号４６のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号４７のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、
（ｃ）配列番号５１のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号５２のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号５３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、
（ｄ）配列番号５７のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号５８のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号５９のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、若しくは
（ｅ）配列番号６３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号６４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号６５のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、を含む、軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含む、
実施形態Ｂ３に記載の医薬組成物。
Ｂ５．第１の結合ドメインが、配列番号２のアミノ酸配列を有するＶＨと、配列番号３のアミノ酸配列を有するＶＬと、を含むか、又は第１の結合ドメインが、配列番号３４のアミノ酸配列を有するＶＨと、配列番号３５のアミノ酸配列を有するＶＬと、を含む、実施形態Ｂ４に記載の医薬組成物。
Ｂ６．第１の抗原が、ＮＫｐ４６である、実施形態Ｂ２に記載の医薬組成物。
Ｂ７．第１の結合ドメインが、
（ｉ）
（ａ）配列番号６９のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号７０のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号７１のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、
（ｂ）配列番号７５のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号７６のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号７７のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、
（ｃ）配列番号８１のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号８２のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号８３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、
（ｄ）配列番号８７のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号８８のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号８９のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、又は
（ｅ）配列番号９３のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号９４のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号９５のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、
を含む、重鎖可変領域（ＶＨ）と、
（ｉｉ）
（ａ）配列番号７２のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号７３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号７４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、
（ｂ）配列番号７８のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号７９のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号８０のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、
（ｃ）配列番号８４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号８５のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号８６のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、
（ｄ）配列番号９０のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号９１のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号９２のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、又は
（ｅ）配列番号９６のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号９７のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号９８のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、
を含む、軽鎖可変領域（ＶＬ）と、
を含む、実施形態Ｂ６に記載の医薬組成物。
Ｂ８．第１の結合ドメインが、配列番号６７のアミノ酸配列を有するＶＨと、配列番号６８のアミノ酸配列を有するＶＬと、を含む、実施形態Ｂ７に記載の医薬組成物。
Ｂ９．第２の抗原が、細胞表面上にある、実施形態Ｂ１～Ｂ８のいずれか１つに記載の医薬組成物。
Ｂ１０．第２の抗原が、腫瘍細胞上で発現される、実施形態Ｂ１～Ｂ８のいずれか１つに記載の医薬組成物。
Ｂ１１．第２の抗原が、腫瘍特異的抗原（ＴＳＡ）又は腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）である、実施形態Ｂ１０に記載の医薬組成物。
Ｂ１２．第２の抗原が、ＢＣＭＡである、実施形態Ｂ１０に記載の医薬組成物。
Ｂ１３．第２の抗原が、ＧＰＲＣ５ｄである、実施形態Ｂ１０に記載の医薬組成物。
Ｂ１４．第１の結合ドメインが、ヒト化されているか、第２の結合ドメインが、ヒト化されているか、又は第１の結合ドメイン及び第２の結合ドメインの両方が、ヒト化されている、実施形態Ｂ１～Ｂ１３のいずれか１つに記載の医薬組成物。
Ｂ１５．多重特異性抗体が、ＩｇＧ抗体である、実施形態Ｂ１～Ｂ１４のいずれか１つに記載の医薬組成物。
Ｂ１６．ＩｇＧ抗体が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４抗体である、実施形態Ｂ１５に記載の医薬組成物。
Ｂ１７．ＩｇＧ抗体が、ＩｇＧ１抗体である、実施形態Ｂ１６に記載の医薬組成物。
Ｂ１８．多重特異性抗体が、二重特異性抗体である、実施形態Ｂ１～Ｂ１７のいずれか１つに記載の医薬組成物。
Ｂ１９．二重特異性抗体が、Ｂｉｐｏｄ足場構造である、実施形態Ｂ１８に記載の医薬組成物。
Ｂ２０．第１の結合ドメインが、Ｆａｂ領域であり、第２の結合ドメインが、ｓｃＦｖ領域である、実施形態Ｂ１９に記載の医薬組成物。
Ｂ２１．二重特異性抗体が、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ足場構造である、実施形態Ｂ１８に記載の医薬組成物。
Ｂ２２．第１の結合ドメインが、２つのＦａｂ領域を含み、第２の結合ドメインが、２つのｓｃＦｖ領域を含む、実施形態Ｂ２１に記載の医薬組成物。
Ｂ２３．多重特異性抗体が、インビトロで腫瘍細胞のＮＫ細胞依存性細胞傷害を、約５００ｐＭ未満のＩＣ５０で誘導する、実施形態Ｂ１０～Ｂ２２のいずれか１つに記載の医薬組成物。
Ｂ２４．多重特異性抗体が、インビトロで腫瘍細胞のＮＫ細胞依存性細胞傷害を、約３００ｐＭ未満のＩＣ５０で誘導する、実施形態Ｂ１０～Ｂ２２のいずれか１つに記載の医薬組成物。
Ｂ２５．多重特異性抗体が、インビトロで腫瘍細胞のＮＫ細胞依存性細胞傷害を、約１００ｐＭ未満のＩＣ５０で誘導する、実施形態Ｂ１０～Ｂ２２のいずれか１つに記載の医薬組成物。
Ｂ２６．多重特異性抗体が、インビトロで腫瘍細胞のＮＫ細胞依存性細胞傷害を、約５０ｐＭ未満のＩＣ５０で誘導する、実施形態Ｂ１０～Ｂ２２のいずれか１つに記載の医薬組成物。
Ｂ２７．多重特異性抗体が、インビトロで腫瘍細胞のＮＫ細胞依存性細胞傷害を、約２０ｐＭ未満のＩＣ５０で誘導する、実施形態Ｂ１０～Ｂ２２のいずれか１つに記載の医薬組成物。
Ｂ２８．多重特異性抗体が、インビトロで腫瘍細胞のＮＫ細胞依存性細胞傷害を、約１５ｐＭ未満のＩＣ５０で誘導する、実施形態Ｂ１０～Ｂ２２のいずれか１つに記載の医薬組成物。
Ｂ２９．多重特異性抗体が、インビトロで腫瘍細胞のＮＫ細胞依存性細胞傷害を、約１０ｐＭ未満のＩＣ５０で誘導する、実施形態Ｂ１０～Ｂ２２のいずれか１つに記載の医薬組成物。
Ｂ３０．ＩＣ５０が、ＮＫエフェクター細胞と第２の抗原を発現する標的細胞との混合物を用いて評価される、実施形態Ｂ２３～Ｂ２９のいずれか１つに記載の医薬組成物。
Ｂ３１．エフェクター細胞対標的細胞の比が、約０．０１対１～約５対１である、実施形態Ｂ３０に記載の医薬組成物。
Ｂ３２．エフェクター細胞対標的細胞の比が、約０．１対１～約２対１である、実施形態Ｂ３０に記載の医薬組成物。
Ｂ３３．エフェクター細胞対標的細胞の比が、約１：１である、実施形態Ｂ３０に記載の医薬組成物。
１つのセットの実施形態（実施形態セットＣ）では、以下が提供される。
Ｃ１．多重特異性抗体を作製するためのプロセスであって、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞上で発現される第１の抗原と結合する第１の結合ドメインと、第２の抗原に結合する第２の結合ドメインと、をコードする、１つ又は２つ以上の核酸を宿主細胞に導入することを含む、プロセス。
Ｃ２．第１の抗原が、ＮＫ細胞活性化受容体である、実施形態Ｃ１に記載のプロセス。
Ｃ３．第１の抗原が、ＮＫＧ２ｄである、実施形態Ｃ２に記載のプロセス。
Ｃ４．第１の結合ドメインが、
（ｉ）
（ａ）配列番号４のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号５のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号６のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、
（ｂ）配列番号１０のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号１１のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号１２のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、
（ｃ）配列番号１６のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号１７のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号１８のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、
（ｄ）配列番号２２のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号２３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号２４のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、若しくは
（ｅ）配列番号２８のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号２９のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号３０のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、
を含む、重鎖可変領域（ＶＨ）と、
（ａ）配列番号７のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号８のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号９のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、
（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号１４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号１５のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、
（ｃ）配列番号１９のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号２０のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号２１のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、
（ｄ）配列番号２５のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号２６のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号２７のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、若しくは
（ｅ）配列番号３１のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号３２のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号３３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、
を含む、軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含むか、
又は
（ｉｉ）
（ａ）配列番号３６のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号３７のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号３８のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、
（ｂ）配列番号４２のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号４３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号４４のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、
（ｃ）配列番号４８のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号４９のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号５０のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、
（ｄ）配列番号５４のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号５５のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号５６のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、若しくは
（ｅ）配列番号６０のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号６１のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号６２のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、
を含む、重鎖可変領域（ＶＨ）と、
（ａ）配列番号３９のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号４０のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号４１のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、
（ｂ）配列番号４５のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号４６のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号４７のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、
（ｃ）配列番号５１のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号５２のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号５３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、
（ｄ）配列番号５７のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号５８のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号５９のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、若しくは
（ｅ）配列番号６３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号６４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号６５のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、を含む、軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含む、
実施形態Ｃ３に記載のプロセス。
Ｃ５．第１の結合ドメインが、配列番号２のアミノ酸配列を有するＶＨと、配列番号３のアミノ酸配列を有するＶＬと、を含むか、又は第１の結合ドメインが、配列番号３４のアミノ酸配列を有するＶＨと、配列番号３５のアミノ酸配列を有するＶＬと、を含む、実施形態Ｃ４に記載のプロセス。
Ｃ６．第１の抗原が、ＮＫｐ４６である、実施形態Ｃ２に記載のプロセス。
Ｃ７．第１の結合ドメインが、
（ｉ）
（ａ）配列番号６９のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号７０のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号７１のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、
（ｂ）配列番号７５のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号７６のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号７７のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、
（ｃ）配列番号８１のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号８２のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号８３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、
（ｄ）配列番号８７のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号８８のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号８９のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、又は
（ｅ）配列番号９３のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号９４のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号９５のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、
を含む、重鎖可変領域（ＶＨ）と、
（ｉｉ）
（ａ）配列番号７２のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号７３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号７４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、
（ｂ）配列番号７８のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号７９のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号８０のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、
（ｃ）配列番号８４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号８５のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号８６のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、
（ｄ）配列番号９０のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号９１のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号９２のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、又は
（ｅ）配列番号９６のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号９７のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号９８のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、
を含む、軽鎖可変領域（ＶＬ）と、
を含む、実施形態Ｃ６に記載のプロセス。
Ｃ８．第１の結合ドメインが、配列番号６７のアミノ酸配列を有するＶＨと、配列番号６８のアミノ酸配列を有するＶＬと、を含む、実施形態Ｃ７に記載のプロセス。
Ｃ９．第２の抗原が、細胞表面上にある、実施形態Ｃ１～Ｃ８のいずれか１つに記載のプロセス。
Ｃ１０．第２の抗原が、腫瘍細胞上で発現される、実施形態Ｃ１～Ｃ８のいずれか１つに記載のプロセス。
Ｃ１１．第２の抗原が、腫瘍特異的抗原（ＴＳＡ）又は腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）である、実施形態Ｃ１０に記載のプロセス。
Ｃ１２．第２の抗原が、ＢＣＭＡである、実施形態Ｃ１０に記載のプロセス。
Ｃ１３．第２の抗原が、ＧＰＲＣ５ｄである、実施形態Ｃ１０に記載のプロセス。
Ｃ１４．第１の結合ドメインが、ヒト化されているか、第２の結合ドメインが、ヒト化されているか、又は第１の結合ドメイン及び第２の結合ドメインの両方が、ヒト化されている、実施形態Ｃ１～Ｃ１３のいずれか１つに記載のプロセス。
Ｃ１５．多重特異性抗体が、ＩｇＧ抗体である、実施形態Ｃ１～Ｃ１４のいずれか１つに記載のプロセス。
Ｃ１６．ＩｇＧ抗体が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４抗体である、実施形態Ｃ１５に記載のプロセス。
Ｃ１７．ＩｇＧ抗体が、ＩｇＧ１抗体である、実施形態Ｃ１６に記載のプロセス。
Ｃ１８．多重特異性抗体が、二重特異性抗体である、実施形態Ｃ１～Ｃ１７のいずれか１つに記載のプロセス。
Ｃ１９．二重特異性抗体が、Ｂｉｐｏｄ足場構造である、実施形態Ｃ１８に記載のプロセス。
Ｃ２０．第１の結合ドメインが、Ｆａｂ領域であり、第２の結合ドメインが、ｓｃＦｖ領域である、実施形態Ｃ１９に記載のプロセス。
Ｃ２１．二重特異性抗体が、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ足場構造である、実施形態Ｃ１８に記載のプロセス。
Ｃ２２．第１の結合ドメインが、２つのＦａｂ領域を含み、第２の結合ドメインが、２つのｓｃＦｖ領域を含む、実施形態Ｃ２１に記載のプロセス。
Ｃ２３．多重特異性抗体が、インビトロで腫瘍細胞のＮＫ細胞依存性細胞傷害を、約５００ｐＭ未満のＩＣ５０で誘導する、実施形態Ｃ１０～Ｃ２２のいずれか１つに記載のプロセス。
Ｃ２４．多重特異性抗体が、インビトロで腫瘍細胞のＮＫ細胞依存性細胞傷害を、約３００ｐＭ未満のＩＣ５０で誘導する、実施形態Ｃ１０～Ｃ２２のいずれか１つに記載のプロセス。
Ｃ２５．多重特異性抗体が、インビトロで腫瘍細胞のＮＫ細胞依存性細胞傷害を、約１００ｐＭ未満のＩＣ５０で誘導する、実施形態Ｃ１０～Ｃ２２のいずれか１つに記載のプロセス。
Ｃ２６．多重特異性抗体が、インビトロで腫瘍細胞のＮＫ細胞依存性細胞傷害を、約５０ｐＭ未満のＩＣ５０で誘導する、実施形態Ｃ１０～Ｃ２２のいずれか１つに記載のプロセス。
Ｃ２７．多重特異性抗体が、インビトロで腫瘍細胞のＮＫ細胞依存性細胞傷害を、約２０ｐＭ未満のＩＣ５０で誘導する、実施形態Ｃ１０～Ｃ２２のいずれか１つに記載のプロセス。
Ｃ２８．多重特異性抗体が、インビトロで腫瘍細胞のＮＫ細胞依存性細胞傷害を、約１５ｐＭ未満のＩＣ５０で誘導する、実施形態Ｃ１０～Ｃ２２のいずれか１つに記載のプロセス。
Ｃ２９．多重特異性抗体が、インビトロで腫瘍細胞のＮＫ細胞依存性細胞傷害を、約１０ｐＭ未満のＩＣ５０で誘導する、実施形態Ｃ１０～Ｃ２２のいずれか１つに記載のプロセス。
Ｃ３０．ＩＣ５０が、ＮＫエフェクターと第２の抗原を発現する標的細胞との混合物を用いて評価される、実施形態Ｃ２３～Ｃ２９のいずれか１つに記載のプロセス。
Ｃ３１．エフェクター細胞対標的細胞の比が、約０．０１対１～約５対１である、実施形態Ｃ３０に記載のプロセス。
Ｃ３２．エフェクター細胞対標的細胞の比が、約０．１対１～約２対１である、実施形態Ｃ３０に記載のプロセス。
Ｃ３３．エフェクター細胞対標的細胞の比が、約１：１である、実施形態Ｃ３０に記載のプロセス。
１つのセットの実施形態（実施形態セットＤ）では、以下が提供される。
Ｄ１．ＮＫ細胞を標的細胞に指向させる方法であって、ＮＫ細胞を多重特異性抗体と接触させ、それによってＮＫ細胞を標的細胞に指向させることを含み、多重特異性抗体が、ＮＫ細胞上の第１の抗原と結合する第１の結合ドメインと、標的細胞上の第２の抗原と結合する第２の結合ドメインとを含む、方法。
Ｄ２．ＮＫ細胞を活性化する方法であって、ＮＫを多重特異性抗体と接触させることを含み、多重特異性抗体が、ＮＫ細胞上の第１の抗原と結合する第１の結合ドメインと、標的細胞上の第２の抗原と結合する第２の結合ドメインとを含む、方法。
Ｄ３．細胞表面上で第２の抗原を発現する標的細胞の成長又は増殖を阻害する方法であって、標的細胞を多重特異性抗体と接触させることを含み、多重特異性抗体が、ＮＫ細胞上の第１の抗原と結合する第１の結合ドメインと、第２の抗原と結合する第２の結合ドメインとを含む、方法。
Ｄ４．対象において第２の抗原を発現する標的細胞を除去する方法、あるいは第２の抗原を発現する標的細胞によって全部若しくは一部が引き起こされる疾患又は障害を治療する方法であって、有効量の多重特異性抗体を対象に投与することを含み、多重特異性抗体が、ＮＫ細胞上の第１の抗原と結合する第１の結合ドメインと、第２の抗原と結合する第２の結合ドメインとを含む、方法。
Ｄ５．対象が、治療を必要としている対象である、実施形態Ｄ４に記載の方法。
Ｄ６．対象が、ヒトである、実施形態Ｄ４又は実施形態Ｄ５に記載の方法。
Ｄ７．疾患又は障害が、がんである、実施形態Ｄ４～Ｄ６のいずれか１つに記載の方法。
Ｄ８．がんが、血液がんである、実施形態Ｄ７に記載の方法。
Ｄ９．がんが、固形腫瘍がんである、実施形態Ｄ７に記載の方法。
Ｄ１０．第１の抗原が、ＮＫ細胞活性化受容体である、実施形態Ｄ１～Ｄ９のいずれか１つに記載の方法。
Ｄ１１．第１の抗原が、ＮＫＧ２ｄである、実施形態Ｄ１０に記載の方法。
Ｄ１２．第１の結合ドメインが、
（ｉ）
（ａ）配列番号４のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号５のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号６のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、
（ｂ）配列番号１０のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号１１のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号１２のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、
（ｃ）配列番号１６のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号１７のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号１８のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、
（ｄ）配列番号２２のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号２３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号２４のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、若しくは
（ｅ）配列番号２８のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号２９のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号３０のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、
を含む、重鎖可変領域（ＶＨ）と、
（ａ）配列番号７のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号８のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号９のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、
（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号１４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号１５のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、
（ｃ）配列番号１９のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号２０のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号２１のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、
（ｄ）配列番号２５のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号２６のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号２７のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、若しくは
（ｅ）配列番号３１のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号３２のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号３３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、
を含む、軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含むか、
又は
（ｉｉ）
（ａ）配列番号３６のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号３７のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号３８のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、
（ｂ）配列番号４２のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号４３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号４４のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、
（ｃ）配列番号４８のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号４９のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号５０のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、
（ｄ）配列番号５４のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号５５のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号５６のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、若しくは
（ｅ）配列番号６０のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号６１のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号６２のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、
を含む、重鎖可変領域（ＶＨ）と、
（ａ）配列番号３９のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号４０のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号４１のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、
（ｂ）配列番号４５のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号４６のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号４７のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、
（ｃ）配列番号５１のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号５２のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号５３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、
（ｄ）配列番号５７のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号５８のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号５９のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、若しくは
（ｅ）配列番号６３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号６４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号６５のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、
を含む、軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含む、
実施形態Ｄ１１に記載の方法。
Ｄ１３．第１の結合ドメインが、配列番号２のアミノ酸配列を有するＶＨと、配列番号３のアミノ酸配列を有するＶＬと、を含むか、又は第１の結合ドメインが、配列番号３４のアミノ酸配列を有するＶＨと、配列番号３５のアミノ酸配列を有するＶＬと、を含む、実施形態Ｄ１２に記載の方法。
Ｄ１４．第１の抗原が、ＮＫｐ４６である、実施形態Ｄ１０に記載の方法。
Ｄ１５．第１の結合ドメインが、
（ｉ）
（ａ）配列番号６９のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号７０のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号７１のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、
（ｂ）配列番号７５のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号７６のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号７７のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、
（ｃ）配列番号８１のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号８２のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号８３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、
（ｄ）配列番号８７のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号８８のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号８９のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、又は
（ｅ）配列番号９３のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号９４のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号９５のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、
を含む、重鎖可変領域（ＶＨ）と、
（ｉｉ）
（ａ）配列番号７２のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号７３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号７４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、
（ｂ）配列番号７８のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号７９のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号８０のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、
（ｃ）配列番号８４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号８５のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号８６のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、
（ｄ）配列番号９０のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号９１のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号９２のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、又は
（ｅ）配列番号９６のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号９７のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号９８のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、
を含む、軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含む、
実施形態Ｄ１４に記載の方法。
Ｄ１６．第１の結合ドメインが、配列番号６７のアミノ酸配列を有するＶＨと、配列番号６８のアミノ酸配列を有するＶＬと、を含む、実施形態Ｄ１５に記載の方法。
Ｄ１７．第２の抗原が、細胞表面上にある、実施形態Ｄ１～Ｄ１６のいずれか１つに記載の方法。
Ｄ１８．第２の抗原が、腫瘍細胞上で発現される、実施形態Ｄ１～Ｄ１７のいずれか１つに記載の方法。
Ｄ１９．第２の抗原が、腫瘍特異的抗原（ＴＳＡ）又は腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）である、実施形態Ｄ１８に記載の方法。
Ｄ２０．第２の抗原が、ＢＣＭＡである、実施形態Ｄ１９に記載の方法。
Ｄ２１．第２の抗原が、ＧＰＲＣ５ｄである、実施形態Ｄ１９に記載の方法。
Ｄ２２．第１の結合ドメインが、ヒト化されているか、第２の結合ドメインが、ヒト化されているか、又は第１の結合ドメイン及び第２の結合ドメインの両方が、ヒト化されている、実施形態Ｄ１～Ｄ２１のいずれか１つに記載の方法。
Ｄ２３．多重特異性抗体が、ＩｇＧ抗体である、実施形態Ｄ１～Ｄ２１のいずれか１つに記載の方法。
Ｄ２４．ＩｇＧ抗体が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４抗体である、実施形態Ｄ２３に記載の方法。
Ｄ２５．ＩｇＧ抗体が、ＩｇＧ１抗体である、実施形態Ｄ２４に記載の方法。
Ｄ２６．多重特異性抗体が、二重特異性抗体である、実施形態Ｄ１～Ｄ２５のいずれか１つに記載の方法。
Ｄ２７．二重特異性抗体が、Ｂｉｐｏｄ足場構造である、実施形態Ｄ２６に記載の方法。
Ｄ２８．第１の結合ドメインが、Ｆａｂ領域であり、第２の結合ドメインが、ｓｃＦｖ領域である、実施形態Ｄ２７に記載の方法。
Ｄ２９．二重特異性抗体が、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ足場構造である、実施形態Ｄ２６に記載の方法。
Ｄ３０．第１の結合ドメインが、２つのＦａｂ領域を含み、第２の結合ドメインが、２つのｓｃＦｖ領域を含む、実施形態Ｄ２９に記載の方法。
Ｄ３１．多重特異性抗体が、インビトロで腫瘍細胞のＮＫ細胞依存性細胞傷害を、約５００ｐＭ未満のＩＣ５０で誘導する、実施形態Ｄ１８～Ｄ３０のいずれか１つに記載の方法。
Ｄ３２．多重特異性抗体が、インビトロで腫瘍細胞のＮＫ細胞依存性細胞傷害を、約３００ｐＭ未満のＩＣ５０で誘導する、実施形態Ｄ１８～Ｄ３０のいずれか１つに記載の方法。
Ｄ３３．多重特異性抗体が、インビトロで腫瘍細胞のＮＫ細胞依存性細胞傷害を、約１００ｐＭ未満のＩＣ５０で誘導する、実施形態Ｄ１８～Ｄ３０のいずれか１つに記載の方法。
Ｄ３４．多重特異性抗体が、インビトロで腫瘍細胞のＮＫ細胞依存性細胞傷害を、約５０ｐＭ未満のＩＣ５０で誘導する、実施形態Ｄ１８～Ｄ３０のいずれか１つに記載の方法。
Ｄ３５．多重特異性抗体が、インビトロで腫瘍細胞のＮＫ細胞依存性細胞傷害を、約２０ｐＭ未満のＩＣ５０で誘導する、実施形態Ｄ１８～Ｄ３０のいずれか１つに記載の方法。
Ｄ３６．多重特異性抗体が、インビトロで腫瘍細胞のＮＫ細胞依存性細胞傷害を、約１５ｐＭ未満のＩＣ５０で誘導する、実施形態Ｄ１８～Ｄ３０のいずれか１つに記載の方法。
Ｄ３７．多重特異性抗体が、インビトロで腫瘍細胞のＮＫ細胞依存性細胞傷害を、約１０ｐＭ未満のＩＣ５０で誘導する、実施形態Ｄ１８～Ｄ３０のいずれか１つに記載の方法。
Ｄ３８．ＩＣ５０が、ＮＫエフェクター細胞と第２の抗原を発現する標的細胞との混合物を用いて評価される、実施形態Ｄ３１～Ｄ３７のいずれか１つに記載の方法。
Ｄ３９．エフェクター細胞対標的細胞の比が、約０．０１対１～約５対１である、実施形態Ｄ３８に記載の方法。
Ｄ４０．エフェクター細胞対標的細胞の比が、約０．１対１～約２対１である、実施形態Ｄ３８に記載の方法。
Ｄ４１．エフェクター細胞対標的細胞の比が、約１：１である、実施形態Ｄ３８に記載の方法。
１つのセットの実施形態（実施形態セットＥ）では、以下が提供される。
Ｅ１．ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞と会合する又はＮＫ細胞を活性化するための第１の手段と、腫瘍細胞と結合するための第２の手段と、を含む分子であって、腫瘍細胞に対するＮＫ細胞依存性細胞傷害を誘導することができる、分子。
Ｅ２．第１の手段が、ＮＫ細胞上に発現される第１の抗原と結合する第１の結合ドメインを含み、第２の手段が、腫瘍細胞上に発現される第２の抗原と結合する第２の結合ドメインを含む、実施形態Ｅ１に記載の分子。
Ｅ３．第１の抗原が、ＮＫ細胞活性化受容体である、実施形態Ｅ２に記載の分子。
Ｅ４．第１の抗原が、ＮＫＧ２ｄである、実施形態Ｅ２に記載の分子。
Ｅ５．第１の抗原が、ＮＫｐ４６である、実施形態Ｅ２に記載の分子。
Ｅ６．第２の抗原が、腫瘍特異的抗原（ＴＳＡ）又は腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）である、実施形態Ｅ２に記載の分子。
Ｅ７．第２の抗原が、ＢＣＭＡである、実施形態Ｅ６に記載の分子。
Ｅ８．第２の抗原が、ＧＰＲＣ５ｄである、実施形態Ｅ６に記載の分子。
Ｅ９．１つを超える標的分子と結合する抗体を作製するプロセスであって、ＮＫ細胞上の第１の抗原と結合することができる結合ドメインを得る機能を実行する工程と、腫瘍細胞上の第２の抗原と結合することができる結合ドメインを得る機能を実行する工程と、第１の抗原及び第２の抗原と結合することができる分子を提供する機能を実行する工程と、を含む、プロセス。
Ｅ１０．ＮＫ細胞を標的細胞に指向する方法であって、ＮＫ細胞を実施形態Ｅ１～Ｅ８のいずれか１つに記載の分子と接触させることを含む、方法。
Ｅ１１．ＮＫ細胞を活性化する方法であって、ＮＫを実施形態Ｅ１～Ｅ８のいずれか１つに記載の分子と接触させることを含む、方法。
Ｅ１２．標的細胞の成長又は増殖を阻害する方法であって、標的細胞を実施形態Ｅ１～Ｅ８のいずれか１つに記載の分子と接触させることを含む、方法。
Ｅ１３．対象において第２の抗原を発現する標的細胞を除去する方法、あるいは第２の抗原を発現する標的細胞によって全部若しくは一部が引き起こされる疾患又は障害を治療する方法であって、有効量の実施形態Ｅ１～Ｅ８のいずれか１つに記載の分子を対象に投与することを含む、方法。
本発明の特定の実施形態が本明細書に記載される。前述の説明を読むと、開示された実施形態の変形形態は、当業者に明らかになり得、必要に応じてそのような変形形態を採用し得ることが予想される。したがって、本発明が、本明細書に具体的に記載されるもの以外の方法で実施されること、並びに本発明が、適用法によって許可されるように、本明細書に添付の特許請求の範囲に列挙される主題の全ての修正物及び均等物を含むことが意図される。更に、全ての可能性のあるこれらの変形形態における上記要素の任意の組み合わせは、本明細書において別途示されない限り、又は文脈による別途明確な矛盾がない限り、本明細書に包含される。本発明の多くの実施形態が説明されてきた。しかしながら、様々な修正が、本発明の趣旨及び範囲から逸脱することなく実行され得ることが、理解されるであろう。したがって、実施例のセクションにおける説明は、特許請求の範囲に記載される本発明の範囲を限定するのではなく、例示することを意図するものである。
実施例１：ＮＫ細胞と結合する抗ＮＫＧ２Ｄ抗体の産生
免疫化による抗ＮＫＧ２Ｄ抗体（ＮＫＧＢ１２５）の産生。
ヒトＮＫＧ２ｄに対する結合因子を得るために、ＮＫＧＷ１（ＮＫＧ２ｄ８０－２１６細胞外ドメイン）による免疫化によって抗体発見を行った。ＯｍｎｉラットをヒトＮＫＧＷ１（表１）で免疫化し、７週にわたって毎週の免疫化によって追加免疫し、その後、安楽死させた動物から血清を収集した。
Figure 2024512135000004
鼠径及び膝窩リンパ節を無菌状態で採取し、プールした。８匹全ての動物からの下顎リンパ節も採取した。全血を２匹の動物からＲＮＡチューブに収集した。これら２匹の動物の大腿骨からの骨髄もまた、冷滅菌１×ＰＢＳ（ＨＹＢ：２１２，Ｊｅｎ Ｐｉｔｃｈｅｒ ＥＬＮ：ＮＫＧ２ｄ－０００１１）中に収集した。血清力価を測定して、免疫化に対する免疫応答を決定した（図１）。
免疫化ラットからの全リンパ球を２つの群に組み合わせ、生存細胞数を約６０％と測定した（Ｈａｉ Ｓｈｅｎｇ，ＥＬＮ：ＮＫＧ２ｄ－０００２３）。細胞を遠心分離によって収集した。１：１融合比のＦＯ細胞を収集した。簡潔に述べると、非分泌性Ｂａｌｂ／ｃマウス骨髄腫融合パートナーであるＦＯ細胞の細胞バンクを、Ｊａｎｓｓｅｎ’ｓ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ（ＣＢＳ）をとおして寄託されたＡＴＣＣ（カタログ番号ＣＲＬ－１６４６）から入手した。１つの凍結バイアルを受け取り、ＤＭＥＭ＋ｇｌｕｔａｍａｘ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎカタログ番号１０５６９、ロット番号１６７６８８４）／１０％ＦＢＳ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ１６１４０、ロット１６７１８８４）を使用する培養液に入れた。細胞を数日毎に１：２～１：１０で対数増殖期に分裂する状態で維持した。細胞を遠心分離によって収集し、１×ＰＢＳで１回洗浄して計数し、９６．４％生存率の５ｘ１０７細胞のＦＯを各群の融合に使用した。リンパ球及びＦＯ細胞を一緒に加え、１×ＰＢＳで洗浄し、上清を廃棄し、細胞ペレットをフリックすることによって再懸濁した。各混合細胞集団に、１ｍＬの３７℃ ＰＥＧ ４０００（２ｇ ＰＥＧ（ＥＭＤカタログ番号９７２７．２）、２ｍＬのＤＭＥＭ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎカタログ番号１１９９５、ロット番号１６７６８８４）、４００μＬのＤＭＳＯ（ｓｉｇｍａ Ｄ２６５０）を、１０８細胞毎に加えた（最大１ｍＬ）。細胞混合物を３７℃の水浴中で１分間旋回させた。３７℃のＤＭＥＭ＋Ｇｌｕｔａｍａｘ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎカタログ番号１１９９５、ロット番号１６７６８８４）（４０ｍＬ）を１分間かけて加えて、反応を停止させた。細胞を室温で５分間静置した後、遠心分離して細胞ペレットを収集した。細胞をＭｅｄｉｕｍＥ（ＳｔｅｍＣｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カタログ番号１５Ａ６０９５２、ロット番号１５Ｆ６４２６８）＋ＨＡＴ（Ｇｉｂｃｏカタログ番号２１０６０－０１７）に再懸濁し、次いで、２００μＬ／ウェルでプレーティングし、１．１３×１０４リンパ球／ウェルを得た。細胞を３７℃、５％ ＣＯ２で７日間インキュベートした。次いで、細胞に２００μＬの新鮮な培地（ＳｔｅｍＣｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カタログ番号０３８０５、ロット番号１５Ａ６０９５２）を再供給した。
固定化ヒト及びカニクイザルＮＫＧ２ｄを使用して、上清（Ｍｉｋｅ Ｍｉｌｌｅｒ、ＥＬＮ：ＮＫＧ２ｄ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ－００００１）に対してＥＬＩＳＡ系スクリーニングアッセイを行った。固定化抗原フォーマットについては、簡潔に述べると、プレートを５０μｇ／ウェルで１μｇ／ｍＬのＮＫＧ２ｄでコーティングした。プレートを、２００μＬ／ウェルの０．４％ＢＳＡ－ＰＢＳを加えることによってブロックし、４℃で一晩インキュベートし、次いで３００μＬ／ウェルの１×ＰＢＳ＋０．０２％Ｔｗｅｅｎ ２０を使用して３回洗浄した。次いで、５０μＬの試験上清及び培地対照をウェルに加え、室温で１時間インキュベートした。５０μＬ／ウェルのＡＦＰ２０１６．０１７．ＪＰからの混合血清（ブロッキング緩衝液で１：２０００希釈）を陽性対照として加えた。バックグラウンド対照ウェルにＦＯ培養培地（５０μＬ／ウェル）を加えた。ウェルを１×ＰＢＳ＋０．０２％Ｔｗｅｅｎ ２０で３回洗浄し、次いで５０μＬ／ウェルのヤギ抗ラットＩｇＧ Ｆｃ－ＨＲＰ（Ｊａｃｋｓｏｎカタログ番号１１２－０３６－０７１、ブロッキング緩衝液中で１：１０Ｋ希釈）を加え、室温で３０分間インキュベートし、１×ＰＢＳ＋０．０２％Ｔｗｅｅｎ ２０で３回洗浄し、５０μＬ／ウェルのＴＭＢ基質緩衝液（Ｔｈｅｒｍｏカタログ番号３４０２２）を加え、暗所で約１０分間インキュベートし、次いで２５μＬ／ウェルの４Ｎ Ｈ２ＳＯ４を全てのウェルに加えることによって反応を停止させた。プレートを、Ｂｉｏｔｅｋ（Ｇｅｎ５ソフトウェア）を使用して４５０ｎｍで読み取った。培地バックグラウンド対照の平均の２倍より大きいＯＤ値を有するヒットを、ヒトＮＫＧ２ｄとの結合確認のために選択した。
要約すると、９５個の融合プレートからの培養上清を、ヒトＮＫＧ２ｄとの抗体結合についてスクリーニングした。上清を２つのＥＬＩＳＡフォーマットである直接コーティングＮＫＧ２ｄ及びビオチン化ＮＫＧ２ｄでスクリーニングした。Ｒ分析を使用して、両方の一次スクリーニングについてＥＬＩＳＡデータを分析し、各フォーマットについて別個のプレートマップを生成した。２つのヒットプレートマップ間の重複ヒットを除去して、結合確認のための２５９個のヒットからなる最終編集プレートマップを生成した。２つのリストの間で重複ヒットを除去して、１６８個の確認されたヒトＮＫＧ２ｄ特異的ヒットの最終リストを生成した（表２）。ヒットを、カニクイザルＮＫＧ２ｄとの交差反応性結合について特徴付けた（ＭＰＢハンドオフ後）。抗原を、両方のフォーマット、つまり直接コーティング及びビオチン化でスクリーニングした。陽性結合は、ＯＤ値が平均バックグラウンド対照の２倍より大きいと決定した。１６８個のヒットのうち１６３個のヒットが、２つのアッセイフォーマット（直接コーティング抗原及び／又はビオチン化抗原）のうちの少なくとも一方においてカニクイザルＮＫＧ２ｄタンパク質と交差反応した。
Figure 2024512135000005
ヒトＮＫＧ２ｄで免疫化したＯｍｎｉラットに由来するＮＫＧＹ１融合ハイブリドーマからＲＮＡを単離した（Ｍａｒｉａ ＭａｃＷｉｌｌｉａｍｓ，ＥＬＮ：Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｒｅｑｕｅｓｔｓ－２０１６－００３８７）。このＲＮＡを鋳型として用いて逆転写酵素反応でｃＤＮＡを調製し、次いでこのｃＤＮＡをＩｇ可変領域のＰＣＲ増幅の鋳型として用いた。簡潔に述べると、まずプレートを５００ｘｇで５分間遠心分離した。培地を軽くたたいて落とし、プレートを清潔な領域に静かに接触させて更なる培地を除去した。これらの工程を繰り返して、ウェルから残留培地を除去した。１４０μＬのＲＬＴ＋１４３ｍＭの２－メルカプトエタノールを各ウェルに加えた。プレートをベンチ表面上で１０秒間急速に前後に動かし、次いで９０度回転させ、再び１０秒間振盪した。ＲＮＡを、ＲＮｅａｓｙ ９６プロトコールを用いてＱｉａｇｅｎ Ｂｉｏｒｏｂｏｔ ８０００上で単離した（手順情報については、メタデータタブのＲＮｅａｓｙ ９６ Ｂｉｏｒｏｂｏｔ ８０００キットを参照のされたい）。自動化手順は、ＲＬＴ＋ＢＭＥ細胞溶解工程の直後に開始した。最終溶出体積は１００μＬであった。ＢｉｏＭｅｋロボットは、８μＬの各ＲＮＡ試料をｃＤＮＡ合成のためにマイクロタイタープレートに移し、８０μＬをマイクロタイタープレートに移した。８μＬアリコートを、ｃＤＮＡ合成のための鋳型として直ちに使用した。８０μＬのプレートを各々シーリングフィルムで覆い、次いでホイルで包んだ。これらのプレートを－８０℃で保管した。ｃＤＮＡを調製するために、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｓｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔ ＩＩＩ Ｆｉｒｓｔ Ｓｔｒａｎｄ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ Ｓｙｓｔｅｍ（カタログ番号１８０８０－０５１）を製造業者の指示に従って使用した。簡潔に述べると、８μＬのＲＮＡを２０μＬの反応において使用した。遺伝子特異的プライマー（ｖＨ、ｖＫ、及びｖＬ ｍＲＮＡに対して各１つ）は、抗体可変領域を標的とした。抗体遺伝子ｍＲＮＡを検出し、発現されている抗体鎖上に存在する可変領域の配列を決定するために、ＰＣＲを行った。各ハイブリドーマについて、２つの別々の反応、つまり、ＩｇＧ重鎖についての反応と、ラムダ軽鎖についての反応とを行った。反応のためのプライマー配列は、ＲＴ－ＰＣＲタブのサブタブに列挙される。Ｐｌａｔｉｎｕｍ Ｐｆｘポリメラーゼ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎカタログ番号１１７０８－０２１）を、製造元から適合させた手順で使用した。免疫化動物はラムダ軽鎖のみを産生し、したがってカッパ反応は行わなかった。アガロースゲル分析を実施して、ＰＣＲ産物の存在を確認した。クローンＮＫＧＹ１＿０４５＿Ｆ０４を、ヒト及びカニクイザルＮＫＧ２ｄの両方に対するその特異的結合に基づいて選択した。
要約すると、１２８個のハイブリドーマのうち、約１２５個が目に見えるｖＨ及びｖＬ ＰＣＲ産物を有していた。試料をサンガー配列決定によって配列決定して、ｖ領域配列を得、次いで、ｖ領域をヒトＩｇＧ１シグマ及びラムダ定常領域にクローニングした。クローンＮＫＧＹ１＿０４５＿Ｆ０４は、このようにしてｍＡｂ識別子ＮＫＧＢ１２５を得た。ＮＫＧＢ１２５の可変領域配列を以下の表３に提供する。ＮＫＧＢ１２５のＣＤＲ配列を表４に提供する。抗体パネルは２ｍＬスケールで表され、ＮＫＧＢ１２５は０．３７ｍｇの最終抗体で得られ、これは、抗体収率の上位約６％内に入り（Ｍｉｋｅ Ｄｉｅｍ，ＥＬＮ：Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｒｅｑｕｅｓｔｓ－２０１６－００７３９）、約９７％単量体であった（Ｅｄ Ｓｗｉｆｔ，ＥＬＮ：Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｒｅｑｕｅｓｔｓ－２０１６－００７９６）。
Figure 2024512135000006
Figure 2024512135000007
ＮＫＬ細胞株での免疫によって得られた抗ＮＫＧ２Ｄ抗体の結合活性についてのアッセイ
抗体のパネルを、ＮＫＧ２ｄを発現するＮＫＬ細胞（Ｌａｍａｒ Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ，ＥＬＮ：ＮＫＧ２ｄ－０００４８）と結合するそれらの能力についてスクリーニングした。簡潔に述べると、細胞を洗浄して、約１ｘ１０６細胞／ｍｌをＰＢＳに再懸濁し、これに１μＬの緑色生－死染色液（Ｌ－２３１０１ Ｔｈｅｒｍｏ）を加え、細胞を１００μＬ／ウェルで４℃で３０分間プレーティングした。細胞を２００μＬ染色緩衝液に再懸濁し、４００ｇで５分間遠心し、ＰＢＳで６０、６、及び０．６ｎＭに希釈したＮＫＧ２ｄ抗体又はアイソタイプ対照のいずれか５０μＬで処理した。プレートを４℃で１時間インキュベートした。次いで、細胞を１５０μＬ染色緩衝液に再懸濁し、４００ｇで５分間遠心し、フリックし、２００μＬ染色緩衝液に再懸濁し、４００ｇで５分間遠心し、ＰＢＳ中のヤギ抗ｈｕ－Ｆｃ ＡＦ６４７（Ｊａｃｋｓｏｎ １０９－６０６－０９８、ロット１２２４７３）を２μｇ／ｍｌで加え、５０μＬ／ウェル、４℃、３０分間で加えた。試料をＨｙｐｅｒＣｙｔ（登録商標）オートサンプラー（Ｉｎｔｅｌｌｉｃｙｔｅによる）で取得した。データはＦｏｒｅＣｙｔ（商標）スクリーニングソフトウェアを使用して分析した。ＦｏｒＣｙｔｅからの幾何平均蛍光強度（幾何平均）値を分析に使用した（表５）。ＮＫＧ２ｄを発現しないＨＥＫ２９３細胞との有意な結合を示した抗体はなかった。
Figure 2024512135000008
Figure 2024512135000009
要約すると、１０個の抗体：ＮＫＧＢ１２９、ＮＫＧＢ１３０、ＮＫＧＢ１３８、ＮＫＧＢ１２５、ＮＫＧＢ２２１、ＮＫＧＢ２０６、ＮＫＧＢ２００、ＮＫＧＢ２０２、ＮＫＧＢ２０３、及びＮＫＧＢ２１９が、ＮＫＬ細胞との用量依存的なＮＫＧ２ｄ特異的結合を示した（表５）。
ファージディスプレイライブラリのスクリーニングによる抗ＮＫＧ２Ｄ抗体（ＮＫＧＢ８３）の産生
ヒトＮＫＧ２ｄに対する結合因子を得るために、ファージディスプレイライブラリをスクリーニングすることによって抗体発見を行った（Ｒａｍａ Ｒｅｄｄｙ，ＥＬＮ：Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｒｅｑｕｅｓｔｓ－２０１６－００１３７）。使用したライブラリは、デノボＦａｂ－ｐＩＸファージライブラリ（国際公開第２００９／０８５４６２（Ａ１）号）であった。
デノボＦａｂ－ｐＩＸファージライブラリ（国際公開第２００９／０８５４６２（Ａ１）号）：
Ｖ２．１－重鎖（１－６９、３－２３、５－５１）；生殖細胞系列軽鎖（Ａ２７、Ｂ３、Ｌ６、０１２）
Ｖ３．０－重鎖（１－６９、３－２３、５－５１）；多様化軽鎖（Ａ２７、Ｂ３、Ｌ６、０１２）
１００μＬの各ライブラリを重鎖、例えば｛１－６９＋（Ａ２７、Ｂ３、Ｌ６、０１２）｝ごとにプールして６つのライブラリプールを生成する
Ｖ５．０－クローニング重鎖（１－６９、３－２３、５－５１）；生殖細胞系列軽鎖（Ａ２７、Ｂ３、Ｌ６、０１２）
（ＥＬＮ：デノボ２０１０ファージライブラリＳＲＩ－００５、デノボ２０１０ファージライブラリＳＲＩ－００６、及びデノボ２０１０ファージライブラリＳＲＩ－００７）
各Ｈｃ／Ｌｃ対について各Ｈ３長から１０μＬのライブラリをプールし、パニングのための１１０μＬのライブラリファージを得た。次いで、各ＨＣ対をプールし、パニングのための３つのライブラリを得た。
簡潔に述べると、抗体ライブラリをＰＩＸファージ表面に提示し、固定化ヒトビオチン化ＮＫＧＷ１とのＥＬＩＳＡ系結合によってコロニーを選択した。
ファージをＥ．ｃｏｌｉ中で増幅し、サンガー法を用いてｖ領域によって配列決定した。全体として、４５個の固有な抗体ｖ領域が、ＮＫＧ２ｄと結合することができるものとして同定された。次いで、Ｖ領域をサイレントヒトＩｇＧ１／カッパ定常領域にクローニングし、２ｍＬスケールで発現させた。
ＮＫＬ細胞株上でファージディスプレイライブラリをスクリーニングすることによって得られた抗ＮＫＧ２Ｄ抗体の結合活性についてのアッセイ
抗体を、実施例１．２の抗体と同じ方法で、ＮＫＬ細胞（Ｌａｍａｒ Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ，ＥＬＮ：ＮＫＧ２ｄ－０００３５）と結合するそれらの能力について試験した（表６）。
Figure 2024512135000010
要約すると、１１個の抗体：ＮＫＧＢ１０８、ＮＫＧＢ１１６、ＮＫＧＢ８３、ＮＫＧＢ９５、ＮＫＧＢ９９、ＮＫＧＢ１００、ＮＫＧＢ８８、ＮＫＧＢ９３、ＮＫＧＢ７５、ＮＫＧＢ９８、及びＮＫＧＢ１０２が、ＮＫＬ細胞に対して有意な特異的結合を示した。
ＮＫＧＢ８３の可変領域配列を以下の表７に提供する。ＮＫＧＢ８３のＣＤＲ配列を表８に提供する。
Figure 2024512135000011
Figure 2024512135000012
免疫化及びＮＫＧ２Ｄに対するファージディスプレイライブラリのスクリーニングによって得られた抗ＮＫＧ２Ｄ抗体の結合活性についてのアッセイ
次いで、免疫化（ＨＹＢ：２１２）及びファージディスプレイ（ＡＰＤ１８２）によって得られたＮＫＧ２ｄを標的とする抗体を単一パネルに組み合わせ、次いで、表面プラズモン共鳴によって測定したヒト及びカニクイザルＮＫＧ２ｄに対する結合親和性に関して試験した（Ｊｏｓｅｐｈ Ｂｏｕｒｇｈｏｌ，ＥＬＮ：ＮＫＧ２ｄ－０００７４）（表９）。
Figure 2024512135000013
要約すると、ＮＫＧＢ１２５、ＮＫＧＢ１３０、ＮＫＧＢ２０３、ＮＫＧＢ２０４、ＮＫＧＢ２０６、ＮＫＧＢ２１９、及びＮＫＧＢ２２１の７つの抗体が、ヒト及びカニクイザルＮＫＧ２ｄに対して１ｎＭよりも強い親和性を示した。ＮＫＧＢ８３は、より弱い親和性（約８ｎＭのＫＤ）を示した。
実施例２：抗ＮＫＧ２Ｄ抗体の機能アッセイ
免疫（ＨＹＢ：２１２）及びファージディスプレイ（ＡＰＤ１８２）によって得られたＮＫＧ２ｄを標的とする抗体を単一パネルに組み合わせ、次いで、ＩＦＮｇ産生を測定することによってＮＫ細胞を活性化するそれらの能力について試験した。図２は、架橋活性化受容体を介したＮＫ細胞アゴニズムについてのビーズ系アッセイを示す。
２０００μＬのビーズを、磁石を使用して２～５ｍＬのＰＢＳ／２％ＦＢＳで２回洗浄し、次いで２０００μＬのＰＢＳに再懸濁した。次いで、１０００μＬの洗浄したビーズをファルコンチューブに分注し、１：１０に希釈した。総体積は１０ｍＬであった。次いで、１０μＬの希釈ビーズをアッセイプレートに分注した。１００μＬの抗体を、１０μＬのビーズを含むアッセイプレートに加えた。得られた複合体を振盪しながら４℃で１２０分間インキュベートした。磁石を用いてビーズを２００μＬのＰＢＳで３回洗浄し、次いでアッセイ培地に再懸濁した。１０μＬのアッセイ培地中のビーズを９６ウェル中の割り当てられたウェルに分注し、ウェル毎に１ｘ１０ｅ５ ＮＫ細胞を加えた。ウェル当たりの総体積は２００μＬであった。プレートを３７℃／５％ＣＯ２で１６～２４時間インキュベートし、次いで１３００ＲＰＭＩで３分間スピンした。ＩＦＮｇ産生測定のために上清を収集した。
要約すると、ＩＦＮｇ産生の誘導に基づいて（表１０）、合計１１個の抗体（ＯＭＴラットから４個、ファージディスプレイから７個）がＮＫ細胞を活性化する能力を示し、ＮＫＧＢ１２５、ＮＫＧＢ１３０、ＮＫＧＢ２０８、ＮＫＧＢ２０２は、ＯＭＴラットを使用して発見され、ＮＫＧＢ１１６、ＮＫＧＢ８３、ＮＫＧＢ８９、ＮＫＧＢ９０、ＮＫＧＢ９９、ＮＫＧＢ６３、ＮＫＧＢ６５は、ファージディスプレイを使用して発見された。
Figure 2024512135000014
これらのうち、ＮＫＧＢ１２５及びＮＫＧＢ８３は高レベルの活性化を示した。いくつかの抗体はより高い誘導を示したが、これらの２つの抗体はまた、より高いレベルの細胞結合を示し、これらがインビボでの細胞結合により適していることを示唆した。
実施例３：ＮＫ細胞と結合する抗ＮＫＰ４６抗体の産生
免疫化による抗ＮＫｐ４６抗体（Ｎ４６Ｂ１０５）の産生
ヒトＮＫｐ４６に対する結合因子を得るために、免疫化によって抗体発見を行った。免疫化のためのヒトＮＫｐ４６は５Ｔ４であり、Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ（カタログ番号１８５０－Ｎ）から購入した。
ＯｍｎｉラットをヒトＮＫｐ４６（表１１、Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓカタログ番号１８５０－ＮＫ）で免疫化し、８週間にわたって週２回の免疫化によって追加免疫し、その後、安楽死させた動物から血清を収集した（Ｊｅｎ Ｐｉｔｃｈｅｒ，ＥＬＮ：Ｏｎｃｏｌｏｇｙ Ｔａｒｇｅｔ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ－００１９２）。
Figure 2024512135000015
リンパ節を上記のように得た。血清力価を測定して、免疫化に対する免疫応答を決定した（図３）。
リンパ節及び全血を採取し、ハイブリドーマを上記のように生成した（Ｍｉｋｅ Ｍｉｌｌｅｒ，ＥＬＮ：Ｏｎｃｏｌｏｇｙ Ｔａｒｇｅｔ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ－００２１７）。簡潔に述べると、リンパ球をリンパ節から抽出し、ハイブリドーマ生成のためにＦＯ細胞と融合させた。１００個の融合プレートを作製した。平均融合効率は１５０％であった。リンパ球も全血から得て、ハイブリドーマ生成のためにＦＯ細胞と融合させた。１０個の融合プレートを作製した。平均融合効率は７８％であった。１１０個の融合プレートからの培養上清を、ＮＫｐ４６との抗体結合についてスクリーニングした。ＥＬＩＳＡデータを分析するためにＲ分析を使用し、組み合わせたヒットリスト（Ｒ中央値洗練ヒット及び２×バックグラウンドの両方を使用）に基づいて７９７個のヒットを得た。Ｒ分析は、結合確認のために２６４個のヒットのプレートマップを生成した。全体として、一次スクリーニングからの２６４個のヒットを、ＮＫｐ４６との結合確認について再スクリーニングし、Ｂ７－Ｈ６／Ｆｃに対して交差スクリーニングした。２５８個のヒット（９７％）が、免疫原ＮＫｐ４６に対する陽性結合因子として確認された。１１７個（２５８個中、４５％）が、Ｂ７－Ｈ６／ＦｃのＦｃ部分に対する交差反応性を持たずに、ＮＫｐ４６と特異的に結合する結合因子を確認した。Ｈｉｔ群順位付け”１の高い数に起因して、一次スクリーニングからの更なる１５８個のヒットを、ＮＫｐ４６との結合確認について再スクリーニングし、Ｂ７－Ｈ６／Ｆｃに対して交差スクリーニングした。１５３個のヒット（９７％）が、免疫原ＮＫｐ４６に対する陽性結合因子として確認された。９１個（１５３個中、５９％）が、ＧＩＴＲ／ＦｃのＦｃ部分に対する交差反応性を持たずに、ＮＫｐ４６と特異的に結合する結合因子を確認した。合計で２０８個が、Ｂ７－Ｈ６／Ｆｃ又はＧＩＴＲ／ＦｃのいずれかのＦｃ部分に対する交差反応性を持たずに、ＮＫｐ４６と特異的な結合因子を確認した。ヒットを４８ウェルプレートに拡大した後、１６９個のコンフルエントハイブリドーマを目視検査によって同定し、ｖ領域クローニング及び配列決定に引き継いだ。安全凍結物を調製した。増殖の遅いハイブリドーマを最初のパネルから除去し、引き継ぎの前により高いコンフルエンシーを達成させた。別のラウンドの結合確認後、第２ラウンドのｖ領域クローニングにおいて３５個の更なるヒットが提供された。安全凍結物を調製した。要約すると、合計２０４個のＮＫｐ４６に対する特異的結合因子がｖ領域配列決定に引き継がれた（Ｒｅｑ８７８８及びＲｅｑ８７９９）。合計で、１６８個の配列が回収され（Ｌａｕｒｅｎ Ｐｅｔｅｒｓ，ＥＬＮ：Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｒｅｑｕｅｓｔｓ－２０１５－００８３９）、２ｍＬスケールで発現された。
抗体を、ＥＬＩＳＡ（Ｌａｍａｒ Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ，ＥＬＮ：ＡＤＩＰＯＲ－００１２６）によって組換えＮＫｐ４６と結合するそれらの能力について試験した。簡潔には、組換えＮＫｐ４６をＰＢＳで２μｇ／ｍｌに希釈し、５０μＬ／ウェルを４℃で一晩加えた。プレートをＰＢＳで洗浄し、５０μＬのブロック緩衝液（ＰＢＳ ０．４％ ＢＳＡ）を加えた。プレートを室温で３０分間振盪した。プレートを再度ＰＢＳで洗浄し、１５μｇ／ｍｌのＮＫｐ４６抗体５０μＬをウェルに加えた。プレートを室温で３０分間振盪した。プレートをＰＢＳで洗浄し、５０μＬのヤギ抗ヒトカッパ及びラムダ二次抗体を加えた。プレートを室温で３０分間振盪した。プレートをＰＢＳで洗浄し、５０μＬのＳｉｇｍａ基質を加え、室温で２～４分間インキュベートした。次いで、５０μＬの停止溶液を加えた。プレートを、ＥＬＩＳＡのために４５０ｎｍでＥｎｖｉｓｉｏｎで読み取った。合計で２８個の抗体が有意な結合を示した。
ＮＫＬ細胞株での免疫によって得られた抗ＮＫｐ４６抗体の結合活性についてのアッセイ
次いで、抗体を、上記のようにＮＫＬ細胞と結合するそれらの能力について評価した（Ｌａｍａｒ Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ，ＥＬＮ：ＮＫＧ２ｄ－０００２２）。全体として、１０４個の抗体がＮＫＬ細胞との有意な結合を示した（表１２）。
Figure 2024512135000016
Figure 2024512135000017
Figure 2024512135000018
Figure 2024512135000019
Ｎ４６Ｗ３（ＮＫＰ４６ Ｄ１）に対する抗ＮＫＰ４６抗体の結合活性についてのアッセイ
抗体を、組換え完全長ＮＫｐ４６：Ｎ４６Ｗ１及びＮＫｐ４６ Ｄ１：Ｎ４６Ｗ３と結合するそれらの能力について更に試験した（表１３）（Ｓａｎｊｉｂ Ｄｕｔｔａ，ＥＬＮ：ＮＫＧ２ｄ－０００２６）。Ｎ４６Ｂ１０５及びＮ４６Ｂ７６は、それぞれ３．５及び７０ｎＭのＫＤ値を有するＮＫｐ４６のドメイン１のみを含むＮ４６Ｗ３に対して特異的結合を示した（表１３）。
Figure 2024512135000020
Figure 2024512135000021
Figure 2024512135000022
Figure 2024512135000023
Figure 2024512135000024
Ｎ４６Ｂ１０５の可変領域配列を以下の表１４に提供する。Ｎ４６Ｂ１０５のＣＤＲ配列を表１５に提供する。
Figure 2024512135000025
Figure 2024512135000026
 実施例４：二重特異性抗体の産生
ＢｓＡｂを、抗ＢＣＭＡ又は抗ＧＰＲＣ５ｄ ｓｃＦｖのいずれかを使用して生成した（表１６）。分子を、同一のＮＫ細胞結合性Ｆａｂ領域及びＣ末端腫瘍標的化ｓｃＦｖ部分の２つのセットを保有する、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ足場抗体としてフォーマット化した。分子はまた、腫瘍標的化ｓｃＦｖ及びＮＫ細胞結合Ｆａｂ領域を含むＢｉｐｏｄ足場抗体としてフォーマット化した。全ての分子は、通常のＩｇＧ１を使用して生成した。抗体の構造を図４に示す。
Figure 2024512135000027
抗ＢＣＭＡ抗体の可変領域配列を以下の表１７に提供する。抗ＢＣＭＡ抗体のＣＤＲ配列を表１８に提供する。
Figure 2024512135000028
Figure 2024512135000029
抗ＧＰＲＣ５ｄ抗体の可変領域配列を以下の表１９に提供する。抗ＧＰＲＣ５ｄ抗体のＣＤＲ配列を表２０に提供する。
Figure 2024512135000030
Figure 2024512135000031
例示的な二重特異性抗体の配列（図４のものを含む）を以下の表２１及び表２２に提供する。
Figure 2024512135000032
Figure 2024512135000033
Figure 2024512135000034
Figure 2024512135000035
Figure 2024512135000036
Figure 2024512135000037
Figure 2024512135000038
Figure 2024512135000039
実施例５：二重特異性抗体の細胞傷害特性の評価
ｂｓＡｂを、それらの細胞傷害特性について更に評価した。簡潔に述べると、ＢＣＭＡ及びＧＰＲＣ５ｄを内因的に発現するＨ９２９／ＧＦＰ細胞を標的細胞として使用し、ヒトＰＢＭＣ（Ｈｅｍｃａｒｅ、ＰＢ００９Ｃ－５０、ロット番号１９０５４４５６）をエフェクター細胞として使用した。標的細胞、エフェクター細胞、及び抗体処理物を調製し、６．６：１のエフェクター対標的比で透明底プレート（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ＃６０５７３００）中のウェルに加えた。リアルタイム生細胞イメージングシステムＩｎｃｕｃｙｔｅ（Ｓａｒｔａｒｉｏｕｓ）を使用して１時間毎に細胞をイメージングし、ウェル当たりの全ＧＦＰ統合シグナルを定量化した。平均値及び標準偏差を複製に関して計算した。時点データは、処置が加えられた時間０に対して正規化した。エンドポイント（４７時間）用量反応曲線をこれらの分子についてプロットし、４パラメータ非線形回帰を行って、Ｇｒａｐｈｐａｄ ＰｒｉｓｍによってＩＣ５０を得た。
全体として、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ足場ｂｓＡｂは弱い活性を示したが、これはおそらく標的細胞との結合が弱いためであろう。このフォーマットでは、ＮＧ２ＢＢ２１及びＮＧ２ＧＢ２６のみがＮＫ細胞系細胞傷害を媒介し、ナノモル範囲のＩＣ５０値を有していた（図５Ａ～Ｄ、表２３）。
Figure 2024512135000040
Ｂｉｐｏｄ足場分子は一価であることを特徴とするが、より強力な活性を示した。このフォーマットでは、全てのＢＣＭＡ系ｂｓＡｂは活性を有し、ＮＧ２ＢＢ１０（ＮＫＧＢ１２５ベース）、ＮＧ２ＢＢ９（ＮＫＧＢ８３ベース）、及びＮ４６ＢＢ４（Ｎ４６Ｂ１０５ベース）は全て、通常のＩｇＧ１定常領域を特徴としたが、異なるＮＫ細胞係合因子を特徴とした。これらの分子は全てほぼ同一の活性を有し、ＩＣ５０値は約１０ｐＭであった。この傾向は、ＧＰＲＣ５ｄ標的化Ｂｉｐｏｄ ｂｓＡｂにも当てはまり、定常領域の同一性は、ＮＫ細胞係合因子の同一性よりも顕著にＩＣ５０に影響を及ぼした。
結果は、第１に、３つのＮＫ細胞係合因子：ＮＫＧＢ１２５、ＮＫＧＢ８３、及びＮ４６Ｂ１０５が全て、同様のＮＫ細胞再指向活性を媒介する能力があることを示す。第２に、Ｂｉｐｏｄ系構造は、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ足場ｂｓＡｂ構造と比較して、ＮＫ細胞の再指向により適していた。
実施例６：二重特異性ＮＫ係合因子は、ＮＫ受容体及びＦＣ受容体の両方を活性化することによって機能することにより、優れた細胞傷害特性を有する
二重特異性ＮＫ係合因子の細胞傷害特性を更に調査するために、１つのＮＫｐ４６結合因子であるＮ４６Ｂ１０５を、通常の細胞及び非フコシル化細胞で作製されたサイレント型又は野生型Ｆｃのいずれかを有するＢＣＭＡ結合因子と組み合わせた（図６）。これらの分子に対して、ＮＫ細胞又はＰＭＢＣを直接用いて、又はＴＧＦβ若しくは低酸素下の存在などの免疫抑制性腫瘍環境を模倣することが予想される条件下で、ＡＤＣＣを行った。
ＴＧＦβ研究では、ＰＢＭＣを復活させ、一晩休ませた。ＰＢＭＣからＮＫ細胞（ＣＤ１６＋／ＣＤ５６＋）を単離したら、それらを異なる濃度のＴＧＦβで処理するか、又はＴＧＦβを含まない培地中で７２時間インキュベートし、ＴＧＦβ処理又は未処理のＮＫ細胞を加えた４時間後に、ＤＥＬＦＩＡ－ＥｕＴＤＡ時間分解蛍光細胞傷害キット（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）を使用したＡＤＣＣアッセイを実施した。
図７は、ＢＣＭＡ内因性発現Ｈ９２９細胞に対するＮＫ細胞によるＡＤＣＣ活性を示す。エフェクター細胞をＴＧＦβ、二重特異性ＮＫ係合因子Ｎ４６ＢＢ１０で前処理しなかった。ＡＦＵは、対応する抗体ＢＣＭＢ１１０６よりも優れた性能を示した。ＡＦＵは、ＮＫｐ４６アームが、Ｆｃ受容体、特にＣＤ１６によって誘導される効果に加えて、ＮＫ細胞による更なる細胞傷害効果をもたらすことを示す。エフェクター細胞をＴＧＦβで前処理した後、細胞傷害効果は、ＴＧＦβの免疫抑制特性のために減少した。しかしながら、二重特異性ＮＫ係合因子は、ＮＫｐ４６結合因子を欠く対応する抗体よりも依然として強力であり、ＮＫｐ４６を有することのこの利点が免疫抑制環境に交換されることを示唆している。
低酸素試験では、ＰＢＭＣ（Ｈｅｍａｃａｒｅ ＰＢ００９Ｃ－３ロット１９０５５７８５）を解凍し、反応させ、３７℃、５％ＣＯ２、２％Ｏ２、３．０ＰＳＩの条件下でＡｖａｔａｒ Ｈｉｐｏｘｉａチャンバ（Ｘｃｅｌｌｂｉｏ）内で４日間インキュベートした。次いで、ＭＭ１Ｒ／ＧＦＰ細胞、エフェクター細胞、及び抗体処理物を調製し、１０：１のＰＢＭＣ対標的比で透明底プレート（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ＃６０５７３００）中のウェルに加えた。リアルタイム生細胞イメージングシステムＩｎｃｕｃｙｔｅ（Ｓａｒｔａｒｉｏｕｓ）を使用して１時間毎に細胞をイメージングし、ウェル当たりの全ＧＦＰ統合シグナルを定量化した。平均値及び標準偏差を複製に関して計算した。時点データは、処置が加えられた時間０に対して正規化した。エンドポイント（４８時間）用量反応曲線をこれらの分子についてプロットし、４パラメータ非線形回帰を行って、Ｇｒａｐｈｐａｄ ＰｒｉｓｍによってＩＣ５０を得た。
低酸素細胞傷害動態及びエンドポイントの用量反応を、図８Ａ、８Ｂ、及び８Ｃに示す。ＡＤＣＣ活性は、抗体及びエフェクター細胞を加え、二重特異性ＮＫ係合因子Ｎ４６ＢＢ１０．ＡＦＵ及び対応する抗体ＢＣＭＢ１１０６．ＡＦＵの両方について１日後にプレーティングしてから数時間以内に観察することができる（図８Ａ及び８Ｂ）。ＩｇＧ１サイレント変異を有するＮＫ係合因子バリアント（Ｎ４６ＢＢ１４）単独は、約１．１９１ｎＭのＥＣ５０で約４７％の細胞傷害を誘導することができ（図８Ｃ）、これはＮＫｐ４６再指向単独の細胞傷害効果の寄与を表す。活性野生型Ｆｃ（Ｎ４６ＢＢ１０）又は脱フコシル化Ｆｃ（Ｎ４６ＢＢ１０．ＡＦＵ）を介したＦｃ受容体誘導性細胞傷害の付加は、最大溶解率をそれぞれおおよそ６８％及び７２％に増加させたが、ＥＣ５０値をそれぞれ約０．０７及び０．００６ ｎＭに減少させた。ＮＫｐ４６及びＦｃ受容体の両方を介して機能する脱フコシル化二重特異性ＮＫ係合因子（Ｎ４６ＢＢ１０．ＡＦＵ）を、Ｆｃ受容体のみを介して機能する対応する抗体（ＢＣＭＢ１１０６．ＡＦＵ）と比較すると、最大溶解％及び効力の両方が増加しており、治療薬として二重特異性及び二機能性ＮＫ係合因子が有効性において優位である可能性が示されている。
Ｎ４６ＢＢ１０のアミノ酸配列情報を以下の表２４に列挙した。
Figure 2024512135000041
Ｎ４６ＢＢ１０の核酸配列情報を以下の表２５に列挙した。
Figure 2024512135000042
Figure 2024512135000043
Figure 2024512135000044
Ｎ４６ＢＢ１４のアミノ酸配列情報を以下の表２６に列挙した。
Figure 2024512135000045
Ｎ４６ＢＢ１４の核酸配列情報を以下の表２７に列挙した。
Figure 2024512135000046
Figure 2024512135000047
Figure 2024512135000048
ＢＣＭＢ１１０６のアミノ酸配列情報を以下の表２８に列挙した。
Figure 2024512135000049
ＢＣＭＢ１１０６の核酸配列情報を以下の表２９に列挙した。
Figure 2024512135000050
Figure 2024512135000051
実施例７：抗ＮＫ細胞傷害の欠如
二重特異性ＮＫ係合因子（Ｎ４６ＢＢ１０．ＡＦＵ）がＡＤＣＣ機構によって活性であり、対応する抗体（ＢＣＭＢ１１０６．ＡＦＵ）よりも優れているという発見（図７及び図８Ａ～Ｃ）はまた、二重特異性ＮＫ係合因子がＮＫ細胞に対してフラトリサイド（ｆｒａｔｒｉｃｉｄｅ）の様式で有害な効果を発揮しないことを示した。
ＮＫｐ４６結合因子を含む二重特異性抗体がＣＤＣ機構による抗ＮＫ細胞傷害性をもたらすかを評価するために、精製ＮＫ細胞を、４０％ヒト血清の存在下で二重特異性抗体ともに１２時間インキュベートした。次いで、Ｃｅｌｌ－Ｔｉｔｅｒｇｌｏ（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を製造元によって示されるように使用して、ＮＫ細胞の生存率を測定した。抗ＣＤ３８抗体（ＣＤＣによって抗ＮＫ細胞傷害を引き起こすことが知られている）及び非特異的アイソタイプ対照を、陽性対照及び陰性対照として使用した。図９に示すように、抗ＣＤ３８抗体は、ＣＤＣを介したＮＫ細胞の死滅を示す。対照的に、ＷＴ ＩｇＧ１骨格（Ｎ４６ＢＢ１０．ＡＦＵ）又はＣＤＣを増強する一連の変異（Ｋ２４８Ｅ／Ｔ４３７Ｒ、Ｎ４６ＢＢ１２）を含むＮＫｐ４６ｘＢＣＭＡ二重特異性抗体は、ＮＫ細胞のＣＤＣ死滅を引き起こさない。これらのデータは、試験した二重特異性フォーマットにおけるＮＫｐ４６結合因子の組み込みが、抗ＮＫ細胞傷害をもたらさないことを示す。
実施例８：治療可能性
本発明では、腫瘍を標的とするｂｓＡｂへの抗ＮＫｐ４６結合因子の組み込みが、ＮＫｐ４６を発現する免疫エフェクター細胞による腫瘍標的に対する細胞傷害活を増強できることが示される。最近の研究により、ＮＫｐ４６が排他的にＮＫ細胞上にあるのではなく、ガンマデルタＴ細胞を含むＴ細胞サブセット（Ｍｉｋｕｌａｋ ｅｔ ａｌ，ＪＣＩ Ｉｎｓｉｇｈｔ．２０１９）、及び自然リンパ球の粘膜集団（Ｎａｒｎｉ－Ｍａｎｉｎｅｌｌｉ，ｅｔ ａｌ，ＰＮＡＳ ２０１１）上にも発現されることが明らかになり始め、これらのＮＫｐ４６含有分子は、ＮＫ細胞以外の他のＮＫｐ４６発現免疫細胞型による腫瘍標的死滅を誘導する可能性を有する。複数の免疫エフェクター細胞によるそのような作用機序は、本発明をモノクローナル及び二重特異性治療抗体による他のエフェクター機能と区別することができる。

Claims (45)

  1. 多重特異性抗体であって、
    （ａ）ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞上で発現される第１の抗原と結合する第１の結合ドメインと、
    （ｂ）第２の抗原と結合する第２の結合ドメインと、
    を含む、多重特異性抗体。
  2. 前記第１の抗原が、ＮＫ細胞活性化受容体である、請求項１に記載の多重特異性抗体。
  3. 前記第１の抗原が、ＮＫＧ２ｄである、請求項２に記載の多重特異性抗体。
  4. 前記第１の結合ドメインが、
    （ｉ）
    （ａ）配列番号４のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号５のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号６のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、
    （ｂ）配列番号１０のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号１１のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号１２のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、
    （ｃ）配列番号１６のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号１７のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号１８のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、
    （ｄ）配列番号２２のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号２３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号２４のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、若しくは
    （ｅ）配列番号２８のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号２９のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号３０のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、
    を含む、重鎖可変領域（ＶＨ）と、
    （ａ）配列番号７のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号８のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号９のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、
    （ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号１４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号１５のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、
    （ｃ）配列番号１９のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号２０のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号２１のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、
    （ｄ）配列番号２５のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号２６のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号２７のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、若しくは
    （ｅ）配列番号３１のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号３２のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号３３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、
    を含む、軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含むか、
    又は
    （ｉｉ）
    （ａ）配列番号３６のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号３７のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号３８のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、
    （ｂ）配列番号４２のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号４３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号４４のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、
    （ｃ）配列番号４８のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号４９のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号５０のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、
    （ｄ）配列番号５４のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号５５のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号５６のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、若しくは
    （ｅ）配列番号６０のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号６１のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号６２のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、
    を含む、重鎖可変領域（ＶＨ）と、
    （ａ）配列番号３９のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号４０のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号４１のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、
    （ｂ）配列番号４５のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号４６のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号４７のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、
    （ｃ）配列番号５１のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号５２のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号５３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、
    （ｄ）配列番号５７のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号５８のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号５９のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、若しくは
    （ｅ）配列番号６３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号６４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号６５のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、
    を含む、軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含む、
    請求項３に記載の多重特異性抗体。
  5. 前記第１の結合ドメインが、配列番号２のアミノ酸配列を有するＶＨと、配列番号３のアミノ酸配列を有するＶＬと、を含むか、又は前記第１の結合ドメインが、配列番号３４のアミノ酸配列を有するＶＨと、配列番号３５のアミノ酸配列を有するＶＬと、を含む、請求項４に記載の多重特異性抗体。
  6. 前記第１の抗原が、ＮＫｐ４６である、請求項２に記載の多重特異性抗体。
  7. 前記第１の結合ドメインが、
    （ｉ）
    （ａ）配列番号６９のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号７０のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号７１のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、
    （ｂ）配列番号７５のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号７６のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号７７のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、
    （ｃ）配列番号８１のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号８２のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号８３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、
    （ｄ）配列番号８７のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号８８のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号８９のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、又は
    （ｅ）配列番号９３のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号９４のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号９５のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、
    を含む、重鎖可変領域（ＶＨ）と、
    （ｉｉ）
    （ａ）配列番号７２のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号７３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号７４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、
    （ｂ）配列番号７８のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号７９のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号８０のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、
    （ｃ）配列番号８４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号８５のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号８６のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、
    （ｄ）配列番号９０のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号９１のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号９２のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、又は
    （ｅ）配列番号９６のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号９７のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号９８のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、
    を含む、軽鎖可変領域（ＶＬ）と、
    を含む、請求項６に記載の多重特異性抗体。
  8. 前記第１の結合ドメインが、配列番号６７のアミノ酸配列を有するＶＨと、配列番号６８のアミノ酸配列を有するＶＬと、を含む、請求項７に記載の多重特異性抗体。
  9. 前記第２の抗原が、細胞表面上にある、請求項１～８のいずれか一項に記載の多重特異性抗体。
  10. 前記第２の抗原が、腫瘍細胞上で発現される、請求項１～８のいずれか一項に記載の多重特異性抗体。
  11. 前記第２の抗原が、腫瘍特異的抗原（ＴＳＡ）又は腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）である、請求項１０に記載の多重特異性抗体。
  12. 前記第２の抗原が、ＢＣＭＡである、請求項１０に記載の多重特異性抗体。
  13. 前記第２の抗原が、ＧＰＲＣ５ｄである、請求項１０に記載の多重特異性抗体。
  14. 前記第１の結合ドメインが、ヒト化されているか、前記第２の結合ドメインが、ヒト化されているか、又は前記第１の結合ドメイン及び前記第２の結合ドメインの両方が、ヒト化されている、請求項１～１３のいずれか一項に記載の多重特異性抗体。
  15. 前記多重特異性抗体が、ＩｇＧ抗体である、請求項１～１４のいずれか一項に記載の多重特異性抗体。
  16. 前記ＩｇＧ抗体が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４抗体である、請求項１５に記載の多重特異性抗体。
  17. 前記ＩｇＧ抗体が、ＩｇＧ１抗体である、請求項１６に記載の多重特異性抗体。
  18. 前記多重特異性抗体が、二重特異性抗体である、請求項１～１７のいずれか一項に記載の多重特異性抗体。
  19. 前記二重特異性抗体が、Ｂｉｐｏｄ足場構造である、請求項１８に記載の多重特異性抗体。
  20. 前記第１の結合ドメインが、Ｆａｂ領域であり、前記第２の結合ドメインが、ｓｃＦｖ領域である、請求項１９に記載の多重特異性抗体。
  21. 前記二重特異性抗体が、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ足場構造である、請求項１８に記載の多重特異性抗体。
  22. 前記第１の結合ドメインが、２つのＦａｂ領域を含み、前記第２の結合ドメインが、２つのｓｃＦｖ領域を含む、請求項２１に記載の多重特異性抗体。
  23. 前記多重特異性抗体が、インビトロで前記腫瘍細胞のＮＫ細胞依存性細胞傷害を、約５００ｐＭ未満のＩＣ５０で誘導する、請求項１０～２２のいずれか一項に記載の多重特異性抗体。
  24. 前記多重特異性抗体が、インビトロで前記腫瘍細胞のＮＫ細胞依存性細胞傷害を、約３００ｐＭ未満のＩＣ５０で誘導する、請求項１０～２２のいずれか一項に記載の多重特異性抗体。
  25. 前記多重特異性抗体が、インビトロで前記腫瘍細胞のＮＫ細胞依存性細胞傷害を、約１００ｐＭ未満のＩＣ５０で誘導する、請求項１０～２２のいずれか一項に記載の多重特異性抗体。
  26. 前記多重特異性抗体が、インビトロで前記腫瘍細胞のＮＫ細胞依存性細胞傷害を、約５０ｐＭ未満のＩＣ５０で誘導する、請求項１０～２２のいずれか一項に記載の多重特異性抗体。
  27. 前記多重特異性抗体が、インビトロで前記腫瘍細胞のＮＫ細胞依存性細胞傷害を、約２０ｐＭ未満のＩＣ５０で誘導する、請求項１０～２２のいずれか一項に記載の多重特異性抗体。
  28. 前記多重特異性抗体が、インビトロで前記腫瘍細胞のＮＫ細胞依存性細胞傷害を、約１５ｐＭ未満のＩＣ５０で誘導する、請求項１０～２２のいずれか一項に記載の多重特異性抗体。
  29. 前記多重特異性抗体が、インビトロで前記腫瘍細胞のＮＫ細胞依存性細胞傷害を、約１０ｐＭ未満のＩＣ５０で誘導する、請求項１０～２２のいずれか一項に記載の多重特異性抗体。
  30. 前記ＩＣ５０が、ＮＫエフェクター細胞と前記第２の抗原を発現する標的細胞との混合物を用いて評価される、請求項２３～２９のいずれか一項に記載の多重特異性抗体。
  31. 前記エフェクター細胞対標的細胞の比が、約０．０１対１～約５対１である、請求項３０に記載の多重特異性抗体。
  32. 前記エフェクター細胞対標的細胞の比が、約０．１対１～約２対１である、請求項３０に記載の多重特異性抗体。
  33. 前記エフェクター細胞対標的細胞の比が、約１：１である、請求項３０に記載の多重特異性抗体。
  34. 請求項１～３３のいずれか一項に記載の多重特異性抗体をコードする、核酸。
  35. 請求項３４に記載の核酸を含む、ベクター。
  36. 請求項３５に記載のベクターを含む、宿主細胞。
  37. 請求項３６に記載のベクターと、そのためのパッケージと、を含む、キット。
  38. ＮＫＧ２ｄと結合する抗体であって、
    （ｉ）
    （ａ）配列番号４のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号５のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号６のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、
    （ｂ）配列番号１０のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号１１のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号１２のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、
    （ｃ）配列番号１６のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号１７のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号１８のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、
    （ｄ）配列番号２２のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号２３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号２４のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、若しくは
    （ｅ）配列番号２８のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号２９のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号３０のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、
    を含む、重鎖可変領域（ＶＨ）と、
    （ａ）配列番号７のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号８のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号９のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、
    （ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号１４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号１５のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、
    （ｃ）配列番号１９のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号２０のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号２１のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、
    （ｄ）配列番号２５のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号２６のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号２７のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、若しくは
    （ｅ）配列番号３１のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号３２のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号３３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、
    を含む、軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含むか、
    又は
    （ｉｉ）
    （ａ）配列番号３６のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号３７のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号３８のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、
    （ｂ）配列番号４２のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号４３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号４４のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、
    （ｃ）配列番号４８のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号４９のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号５０のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、
    （ｄ）配列番号５４のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号５５のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号５６のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、若しくは
    （ｅ）配列番号６０のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号６１のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号６２のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、
    を含む、重鎖可変領域（ＶＨ）と、
    （ａ）配列番号３９のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号４０のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号４１のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、
    （ｂ）配列番号４５のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号４６のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号４７のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、
    （ｃ）配列番号５１のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号５２のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号５３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、
    （ｄ）配列番号５７のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号５８のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号５９のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、若しくは
    （ｅ）配列番号６３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号６４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号６５のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、
    を含む、軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含む、
    ＮＫＧ２ｄと結合する抗体。
  39. 前記第１の結合ドメインが、配列番号２のアミノ酸配列を有するＶＨと、配列番号３のアミノ酸配列を有するＶＬと、を含むか、又は前記第１の結合ドメインが、配列番号３４のアミノ酸配列を有するＶＨと、配列番号３５のアミノ酸配列を有するＶＬと、を含む、請求項３８に記載の抗体。
  40. ＮＫｐ４６と結合する抗体であって、
    （ｉ）
    （ａ）配列番号６９のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号７０のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号７１のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、
    （ｂ）配列番号７５のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号７６のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号７７のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、
    （ｃ）配列番号８１のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号８２のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号８３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、
    （ｄ）配列番号８７のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号８８のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号８９のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、又は
    （ｅ）配列番号９３のアミノ酸配列を有するＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号９４のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号９５のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、
    を含む、重鎖可変領域（ＶＨ）と、
    （ｉｉ）
    （ａ）配列番号７２のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号７３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号７４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、
    （ｂ）配列番号７８のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号７９のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号８０のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、
    （ｃ）配列番号８４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号８５のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号８６のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、
    （ｄ）配列番号９０のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号９１のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号９２のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、又は
    （ｅ）配列番号９６のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号９７のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号９８のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、
    を含む、軽鎖可変領域（ＶＬ）と、
    を含む、ＮＫｐ４６と結合する抗体。
  41. 前記第１の結合ドメインが、配列番号６７のアミノ酸配列を有するＶＨと、配列番号６８のアミノ酸配列を有するＶＬと、を含む、請求項４０に記載の抗体。
  42. 請求項３８～４１のいずれか一項に記載の抗体をコードする、核酸。
  43. 請求項４２に記載の核酸を含む、ベクター。
  44. 請求項４３に記載のベクターを含む、宿主細胞。
  45. 請求項４３に記載のベクターと、そのためのパッケージと、を含む、キット。
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