KR20230163485A - 면역 이펙터 세포 재유도를 위한 물질 및 방법 - Google Patents
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Abstract
자연 살해(NK) 세포를 인게이징(engaging) 또는 활성화하기 위한 제1 수단 및 종양 세포를 결합하기 위한 제2 수단을 포함하는 분자로서, 상기 종양 세포에 대한 NK 세포 의존성 세포독성을 유도할 수 있는, 분자.
Description
관련 출원의 상호 참조
본 출원은 2021년 3월 31일자로 출원된 미국 특허 출원 제63/168,605호; 2021년 3월 31일자로 출원된 미국 특허 출원 제63/168,611호; 2021년 3월 31일자로 출원된 미국 특허 출원 제63/168,618호; 2021년 3월 31일자로 출원된 미국 특허 출원 제63/168,621호; 2021년 3월 31일자로 출원된 미국 특허 출원 제63/168,628호의 이익을 주장하며, 이들 각각은 전체적으로 본 명세서에 참고로 포함된다.
전자적으로 제출된 서열 목록에 대한 참조
본 출원은 파일명이 "14620-648-228_SEQ_LISTING"이고, 작성일이 2022년 3월 24일이며, 크기가 181,332 바이트인 ASCII 포맷 서열 목록으로서 EFS-웹을 통해 전자적으로 제출된 서열 목록을 포함한다. EFS-웹을 통해 제출된 서열 목록은 본 명세서의 일부이며, 전체적으로 본 명세서에 참고로 포함된다.
기술분야
본 발명은 특히, 항-NKG2d 분자, 항-NKp46 분자, 및 상기 분자 또는 이의 단편을 포함하는 다중특이성 분자를 포함한 자연 살해 세포 인게이저(engager)뿐만 아니라, 상기 분자를 인코딩하는 핵산 및 발현 벡터, 상기 벡터를 함유하는 재조합 세포, 및 상기 분자를 포함하는 조성물에 관한 것이다. 상기 분자의 제조 방법, 및 상기 분자를 사용하여 종양 세포에 대해 면역 이펙터 세포를 재유도(redirect)하는 방법이 또한 제공된다.
종양 세포는 항체에 의한 파괴를 위해 치료적으로 표적화될 수 있다. 치료용 항체는 다수의 기전을 사용하여 파괴를 위해 면역 이펙터 세포와 인게이징하여 종양 세포를 표적화할 수 있다. 종양 세포와 이펙터 세포에 결합하는 이중특이성 항체(bsAb)를 사용하여 이들이 근접해지게 하여, 이펙터 세포가 종양 세포에 대해 재유도될 수 있다. 대안적으로, 단일클론 항체(mAb)가 그의 가변 영역을 통해 종양 세포와 인게이징하고, 단핵구, 대식세포, 및 NK 세포 상에 주로 발현되는 Fc g 수용체와 Fc 영역 사이의 상호작용을 통해 이펙터 세포를 동원할 수 있다.
본 발명자들은 자연 살해(NK) 세포 상에 발현되는 제1 항원에 결합하는 제1 결합 도메인 및 종양 세포 상에 발현되는 제2 항원에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함하는 본 명세서에 기재된 다중특이성 항체를 최초로 알아내었다.
일 태양에서, 자연 살해(NK) 세포 상에 발현되는 제1 항원에 결합하는 제1 결합 도메인 및 제2 항원에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함하는 다중특이성 항체가 본 명세서에 제공된다.
본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, 제1 항원은 NK 세포 활성화 수용체이다.
본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, 제1 항원은 NKG2d이다.
본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인은, (a) 서열 번호 4의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 5의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 6의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3; (b) 서열 번호 10의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 11의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 12의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3; (c) 서열 번호 16의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 17의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 18의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3; (d) 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 23의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 24의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3; 또는 (e) 서열 번호 28의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 29의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 30의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및 (a) 서열 번호 7의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 8의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 9의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3; (b) 서열 번호 13의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 14의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 15의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3; (c) 서열 번호 19의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 20의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 21의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3; (d) 서열 번호 25의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 26의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 27의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3; 또는 (e) 서열 번호 31의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 32의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 33의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함한다.
본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인은 서열 번호 2의 아미노산 서열을 갖는 VH, 및 서열 번호 3의 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함한다.
본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인은, (i) (a) 서열 번호 36의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 37의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 38의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3; (b) 서열 번호 42의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 43의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 44의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3; (c) 서열 번호 48의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 49의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 50의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3; (d) 서열 번호 54의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 55의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 56의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3; 또는 (e) 서열 번호 60의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 61의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 62의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및 (ii) (a) 서열 번호 39의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 40의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 41의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3; (b) 서열 번호 45의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 46의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 47의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3; (c) 서열 번호 51의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 52의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 53의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3; (d) 서열 번호 57의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 58의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 59의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3; 또는 (e) 서열 번호 63의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 64의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 65의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함한다.
본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인은 서열 번호 34의 아미노산 서열을 갖는 VH, 및 서열 번호 35의 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함한다.
본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, 제1 항원은 NKp46이다.
본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인은, (i) (a) 서열 번호 69의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 70의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 71의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3; (b) 서열 번호 75의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 76의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 77의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3; (c) 서열 번호 81의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 82의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 83의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3; (d) 서열 번호 87의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 88의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 89의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3; 또는 (e) 서열 번호 93의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 94의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 95의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및 (ii) (a) 서열 번호 72의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 73의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 74의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3; (b) 서열 번호 78의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 79의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 80의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3; (c) 서열 번호 84의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 85의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 86의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3; (d) 서열 번호 90의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 91의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 92의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3; 또는 (e) 서열 번호 96의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 97의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 98의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함한다.
본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인은 서열 번호 67의 아미노산 서열을 갖는 VH, 및 서열 번호 68의 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함한다.
본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, 제2 항원은 세포 표면 상에 존재한다.
본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, 제2 항원은 종양 세포 상에 발현된다.
본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, 제2 항원은 종양-특이적 항원(TSA) 또는 종양-관련 항원(TAA)이다.
본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, 제2 항원은 BCMA이다.
본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, 제2 항원은 GPRC5d이다.
본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인은 인간화 형태이다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, 제2 결합 도메인은 인간화 형태이다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인 및 제2 결합 도메인 둘 모두는 인간화 형태이다.
본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 IgG 항체이다.
본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, IgG 항체는 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4 항체이다.
본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, IgG 항체는 IgG1 항체이다.
본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, IgG1은 침묵 돌연변이를 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, IgG1은 AAS 돌연변이를 포함한다. 일부 실시 형태에서, AAS 돌연변이를 포함하는 다중특이성 항체는 종양 세포의 NK 세포 의존성 세포독성을 유도할 수 있다.
본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, IgG1은 항체의 이펙터 기능의 향상을 위한 돌연변이를 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, IgG1은 K248E/T437R 돌연변이를 포함한다. 일부 실시 형태에서, K248E/T437R 돌연변이를 포함하는 다중특이성 항체는 항-NK 세포 세포독성의 부재(lack)이다.
본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, Fc 영역은 비푸코실화(afucosylate)된다.
본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 이중특이성 항체이다.
본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, 이중특이성 항체는 바이포드-스캐폴드 입체구조(bipod-scaffold configuration)이다.
본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인은 Fab 영역이고, 제2 결합 도메인은 scFv 영역이다.
본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, 이중특이성 항체는 모리슨(Morrison)-스캐폴드 입체구조이다.
본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인은 2개의 Fab 영역을 포함하고, 제2 결합 도메인은 2개의 scFv 영역을 포함한다.
본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 항-NK 세포 세포독성의 부재이다.
본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 약 500 pM 미만의 IC50으로 시험관내(in vitro)에서 종양 세포의 NK 세포 의존성 세포독성을 유도한다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 약 300 pM 미만의 IC50으로 시험관내에서 종양 세포의 NK 세포 의존성 세포독성을 유도한다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 약 100 pM 미만의 IC50으로 시험관내에서 종양 세포의 NK 세포 의존성 세포독성을 유도한다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 약 50 pM 미만의 IC50으로 시험관내에서 종양 세포의 NK 세포 의존성 세포독성을 유도한다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 약 20 pM 미만의 IC50으로 시험관내에서 종양 세포의 NK 세포 의존성 세포독성을 유도한다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 약 15 pM 미만의 IC50으로 시험관내에서 종양 세포의 NK 세포 의존성 세포독성을 유도한다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 약 10 pM 미만의 IC50으로 시험관내에서 종양 세포의 NK 세포 의존성 세포독성을 유도한다.
본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, IC50은 NK 이펙터 세포와 제2 항원을 발현하는 표적 세포의 혼합물을 사용하여 평가된다.
본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, 이펙터 세포 대 표적 세포 비는 약 0.01:1 내지 약 10:1이다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, 이펙터 세포 대 표적 세포 비는 약 0.01:1 내지 약 5:1이다. 일부 실시 형태에서, 이펙터 세포 대 표적 세포 비는 약 0.1:1 내지 약 2:1이다. 일부 실시 형태에서, 이펙터 세포 대 표적 세포 비는 약 1:1이다.
다른 태양에서, 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체를 인코딩하는 핵산이 제공된다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체를 인코딩하는 핵산을 포함하는 벡터가 또한 제공된다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체를 인코딩하는 핵산을 포함하는 벡터를 포함하는 숙주 세포가 또한 제공된다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체를 인코딩하는 핵산을 포함하는 벡터 및 이를 위한 패키징을 포함하는 키트가 또한 제공된다.
다른 태양에서, NKG2d에 결합하는 항체가 본 명세서에 제공되며, 상기 항체는, (i) (a) 서열 번호 4의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 5의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 6의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3; (b) 서열 번호 10의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 11의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 12의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3; (c) 서열 번호 16의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 17의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 18의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3; (d) 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 23의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 24의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3; 또는 (e) 서열 번호 28의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 29의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 30의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및 (ii) (a) 서열 번호 7의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 8의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 9의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3; (b) 서열 번호 13의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 14의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 15의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3; (c) 서열 번호 19의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 20의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 21의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3; (d) 서열 번호 25의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 26의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 27의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3; 또는 (e) 서열 번호 31의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 32의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 33의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함한다.
본 명세서에 제공된 NKG2d에 결합하는 항체의 일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인은 서열 번호 2의 아미노산 서열을 갖는 VH, 및 서열 번호 3의 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함한다.
다른 태양에서, NKG2d에 결합하는 항체가 본 명세서에 제공되며, 상기 항체는, (i) (a) 서열 번호 36의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 37의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 38의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3; (b) 서열 번호 42의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 43의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 44의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3; (c) 서열 번호 48의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 49의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 50의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3; (d) 서열 번호 54의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 55의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 56의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3; 또는 (e) 서열 번호 60의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 61의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 62의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및 (ii) (a) 서열 번호 39의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 40의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 41의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3; (b) 서열 번호 45의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 46의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 47의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3; (c) 서열 번호 51의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 52의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 53의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3; (d) 서열 번호 57의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 58의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 59의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3; 또는 (e) 서열 번호 63의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 64의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 65의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함한다.
본 명세서에 제공된 NKG2d에 결합하는 항체의 일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인은 서열 번호 34의 아미노산 서열을 갖는 VH, 및 서열 번호 35의 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함한다.
다른 태양에서, NKp46에 결합하는 항체가 본 명세서에 제공되며, 상기 항체는, (i) (a) 서열 번호 69의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 70의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 71의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3; (b) 서열 번호 75의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 76의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 77의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3; (c) 서열 번호 81의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 82의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 83의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3; (d) 서열 번호 87의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 88의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 89의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3; 또는 (e) 서열 번호 93의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 94의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 95의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및 (ii) (a) 서열 번호 72의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 73의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 74의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3; (b) 서열 번호 78의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 79의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 80의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3; (c) 서열 번호 84의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 85의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 86의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3; (d) 서열 번호 90의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 91의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 92의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3; 또는 (e) 서열 번호 96의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 97의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 98의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함한다.
본 명세서에 제공된 NKp46에 결합하는 항체의 일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인은 서열 번호 67의 아미노산 서열을 갖는 VH, 및 서열 번호 68의 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함한다.
다른 태양에서, 본 명세서에 제공된 항체를 인코딩하는 핵산이 본 명세서에 제공된다. 본 명세서에 제공된 항체를 인코딩하는 핵산을 포함하는 벡터가 또한 제공된다. 본 명세서에 제공된 항체를 인코딩하는 핵산을 포함하는 벡터를 포함하는 숙주 세포가 또한 제공된다. 본 명세서에 제공된 항체를 인코딩하는 핵산을 포함하는 벡터 및 이를 위한 패키징을 포함하는 키트가 또한 제공된다.
또 다른 태양에서, 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물이 본 명세서에 제공되며, 상기 약제학적 조성물에서 다중특이성 항체는 자연 살해(NK) 세포 상에 발현되는 제1 항원에 결합하는 제1 결합 도메인 및 제2 항원에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함한다.
본 명세서에 제공된 약제학적 조성물의 일부 실시 형태에서, 제1 항원은 NK 세포 활성화 수용체이다.
본 명세서에 제공된 약제학적 조성물의 일부 실시 형태에서, 제1 항원은 NKG2d이다.
본 명세서에 제공된 약제학적 조성물의 일부 실시 형태에서, 제1 항원은 NKp46이다.
본 명세서에 제공된 약제학적 조성물의 일부 실시 형태에서, 제2 항원은 세포 표면 상에 존재한다.
본 명세서에 제공된 약제학적 조성물의 일부 실시 형태에서, 제2 항원은 종양 세포 상에 발현된다.
본 명세서에 제공된 약제학적 조성물의 일부 실시 형태에서, 제2 항원은 종양-특이적 항원(TSA) 또는 종양-관련 항원(TAA)이다.
본 명세서에 제공된 약제학적 조성물의 일부 실시 형태에서, 제2 항원은 BCMA이다.
본 명세서에 제공된 약제학적 조성물의 일부 실시 형태에서, 제2 항원은 GPRC5d이다.
본 명세서에 제공된 약제학적 조성물의 일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인은 인간화 형태이다. 본 명세서에 제공된 약제학적 조성물의 일부 실시 형태에서, 제2 결합 도메인은 인간화 형태이다. 본 명세서에 제공된 약제학적 조성물의 일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인 및 제2 결합 도메인 둘 모두는 인간화 형태이다.
본 명세서에 제공된 약제학적 조성물의 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 IgG 항체이다.
본 명세서에 제공된 약제학적 조성물의 일부 실시 형태에서, IgG 항체는 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4 항체이다.
본 명세서에 제공된 약제학적 조성물의 일부 실시 형태에서, IgG 항체는 IgG1 항체이다.
본 명세서에 제공된 약제학적 조성물의 일부 실시 형태에서, IgG1은 침묵 돌연변이를 포함한다. 본 명세서에 제공된 약제학적 조성물의 일부 실시 형태에서, IgG1은 AAS 돌연변이를 포함한다.
본 명세서에 제공된 약제학적 조성물의 일부 실시 형태에서, IgG1은 항체의 이펙터 기능의 향상을 위한 돌연변이를 포함한다. 본 명세서에 제공된 약제학적 조성물의 일부 실시 형태에서, IgG1은 K248E/T437R 돌연변이를 포함한다.
본 명세서에 제공된 약제학적 조성물의 일부 실시 형태에서, Fc 영역은 비푸코실화된다.
본 명세서에 제공된 약제학적 조성물의 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 이중특이성 항체이다.
본 명세서에 제공된 약제학적 조성물의 일부 실시 형태에서, 이중특이성 항체는 바이포드-스캐폴드 입체구조이다.
본 명세서에 제공된 약제학적 조성물의 일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인은 Fab 영역이고, 제2 결합 도메인은 scFv 영역이다.
본 명세서에 제공된 약제학적 조성물의 일부 실시 형태에서, 이중특이성 항체는 모리슨-스캐폴드 입체구조이다.
본 명세서에 제공된 약제학적 조성물의 일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인은 2개의 Fab 영역을 포함하고, 제2 결합 도메인은 2개의 scFv 영역을 포함한다.
본 명세서에 제공된 약제학적 조성물의 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 약 500 pM 미만의 IC50으로 시험관내에서 종양 세포의 NK 세포 의존성 세포독성을 유도한다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 약 300 pM 미만의 IC50으로 시험관내에서 종양 세포의 NK 세포 의존성 세포독성을 유도한다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 약 100 pM 미만의 IC50으로 시험관내에서 종양 세포의 NK 세포 의존성 세포독성을 유도한다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 약 50 pM 미만의 IC50으로 시험관내에서 종양 세포의 NK 세포 의존성 세포독성을 유도한다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 약 20 pM 미만의 IC50으로 시험관내에서 종양 세포의 NK 세포 의존성 세포독성을 유도한다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 약 15 pM 미만의 IC50으로 시험관내에서 종양 세포의 NK 세포 의존성 세포독성을 유도한다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 약 10 pM 미만의 IC50으로 시험관내에서 종양 세포의 NK 세포 의존성 세포독성을 유도한다.
본 명세서에 제공된 약제학적 조성물의 일부 실시 형태에서, IC50은 NK 이펙터 세포와 제2 항원을 발현하는 표적 세포의 혼합물을 사용하여 평가된다.
본 명세서에 제공된 약제학적 조성물의 일부 실시 형태에서, 이펙터 세포 대 표적 세포 비는 약 0.01:1 내지 약 10:1이다. 본 명세서에 제공된 약제학적 조성물의 일부 실시 형태에서, 이펙터 세포 대 표적 세포 비는 약 0.01:1 내지 약 5:1이다. 일부 실시 형태에서, 이펙터 세포 대 표적 세포 비는 약 0.1:1 내지 약 2:1이다. 일부 실시 형태에서, 이펙터 세포 대 표적 세포 비는 약 1:1이다.
또 다른 태양에서, 다중특이성 항체의 제조 공정이 본 명세서에 제공되며, 상기 공정은 NK 세포 상에 발현되는 제1 항원에 결합하는 제1 결합 도메인 및 제2 항원에 결합하는 제2 결합 도메인을 인코딩하는 하나 이상의 핵산을 숙주 세포 내로 도입하는 단계를 포함한다.
본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 제조 공정의 일부 실시 형태에서, 제1 항원은 NK 세포 활성화 수용체이다.
본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 제조 공정의 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체이다.
본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 제조 공정의 일부 실시 형태에서, 제1 항원은 NKp46이다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 제조 공정의 일부 실시 형태에서, 제1 항원은 NKG2d이다.
본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 제조 공정의 일부 실시 형태에서, 제2 항원은 세포 표면 상에 존재한다.
본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 제조 공정의 일부 실시 형태에서, 제2 항원은 종양 세포 상에 발현된다.
본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 제조 공정의 일부 실시 형태에서, 제2 항원은 종양-특이적 항원(TSA) 또는 종양-관련 항원(TAA)이다.
본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 제조 공정의 일부 실시 형태에서, 제2 항원은 BCMA이다.
본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 제조 공정의 일부 실시 형태에서, 제2 항원은 GPRC5d이다.
본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 제조 공정의 일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인은 인간화 형태이다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 제조 공정의 일부 실시 형태에서, 제2 결합 도메인은 인간화 형태이다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 제조 공정의 일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인 및 제2 결합 도메인 둘 모두는 인간화 형태이다.
본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 제조 공정의 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 IgG 항체이다.
본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 제조 공정의 일부 실시 형태에서, IgG 항체는 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4 항체이다.
본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 제조 공정의 일부 실시 형태에서, IgG 항체는 IgG1 항체이다.
본 명세서에 제공된 공정의 일부 실시 형태에서, IgG1은 침묵 돌연변이를 포함한다. 본 명세서에 제공된 공정의 일부 실시 형태에서, IgG1은 AAS 돌연변이를 포함한다.
본 명세서에 제공된 공정의 일부 실시 형태에서, IgG1은 항체의 이펙터 기능의 향상을 위한 돌연변이를 포함한다. 본 명세서에 제공된 공정의 일부 실시 형태에서, IgG1은 K248E/T437R 돌연변이를 포함한다.
본 명세서에 제공된 공정의 일부 실시 형태에서, Fc 영역은 비푸코실화된다.
본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 제조 공정의 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 이중특이성 항체이다.
본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 제조 공정의 일부 실시 형태에서, 이중특이성 항체는 바이포드-스캐폴드 입체구조이다.
본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 제조 공정의 일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인은 Fab 영역이고, 제2 결합 도메인은 scFv 영역이다.
본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 제조 공정의 일부 실시 형태에서, 이중특이성 항체는 모리슨-스캐폴드 입체구조이다.
본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 제조 공정의 일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인은 2개의 Fab 영역을 포함하고, 제2 결합 도메인은 2개의 scFv 영역을 포함한다.
본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 제조 공정의 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 약 500 pM 미만의 IC50으로 시험관내에서 종양 세포의 NK 세포 의존성 세포독성을 유도한다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 약 300 pM 미만의 IC50으로 시험관내에서 종양 세포의 NK 세포 의존성 세포독성을 유도한다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 약 100 pM 미만의 IC50으로 시험관내에서 종양 세포의 NK 세포 의존성 세포독성을 유도한다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 약 50 pM 미만의 IC50으로 시험관내에서 종양 세포의 NK 세포 의존성 세포독성을 유도한다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 약 20 pM 미만의 IC50으로 시험관내에서 종양 세포의 NK 세포 의존성 세포독성을 유도한다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 약 15 pM 미만의 IC50으로 시험관내에서 종양 세포의 NK 세포 의존성 세포독성을 유도한다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 약 10 pM 미만의 IC50으로 시험관내에서 종양 세포의 NK 세포 의존성 세포독성을 유도한다.
본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 제조 공정의 일부 실시 형태에서, IC50은 NK 이펙터 세포와 제2 항원을 발현하는 표적 세포의 혼합물을 사용하여 평가된다.
본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 제조 공정의 일부 실시 형태에서, 이펙터 세포 대 표적 세포 비는 약 0.01:1 내지 약 10:1이다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 제조 공정의 일부 실시 형태에서, 이펙터 세포 대 표적 세포 비는 약 0.01:1 내지 약 5:1이다. 일부 실시 형태에서, 이펙터 세포 대 표적 세포 비는 약 0.1:1 내지 약 2:1이다. 일부 실시 형태에서, 이펙터 세포 대 표적 세포 비는 약 1:1이다.
다른 태양에서, NK 세포를 표적 세포로 유도하는 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 상기 NK 세포를 다중특이성 항체와 접촉시켜 상기 NK 세포를 상기 표적 세포로 유도하는 단계를 포함하며, 상기 다중특이성 항체는 NK 세포 상의 제1 항원에 결합하는 제1 결합 도메인 및 표적 세포 상의 제2 항원에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함한다.
다른 태양에서, NK 세포를 표적 세포로 유도하기 위한 다중특이성 항체의 용도가 본 명세서에 제공되며, 상기 용도는 상기 NK 세포를 상기 다중특이성 항체와 접촉시켜 상기 NK 세포를 상기 표적 세포로 유도하는 단계를 포함하며, 상기 다중특이성 항체는 NK 세포 상의 제1 항원에 결합하는 제1 결합 도메인 및 표적 세포 상의 제2 항원에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함한다.
다른 태양에서, NK 세포를 활성화하는 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 상기 NK를 다중특이성 항체와 접촉시키는 단계를 포함하며, 상기 다중특이성 항체는 상기 NK 세포 상의 제1 항원에 결합하는 제1 결합 도메인 및 표적 세포 상의 제2 항원에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함한다.
다른 태양에서, NK 세포를 활성화하기 위한 다중특이성 항체의 용도가 본 명세서에 제공되며, 상기 용도는 상기 NK를 상기 다중특이성 항체와 접촉시키는 단계를 포함하며, 상기 다중특이성 항체는 상기 NK 세포 상의 제1 항원에 결합하는 제1 결합 도메인 및 표적 세포 상의 제2 항원에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함한다.
다른 태양에서, 세포 표면 상에 제2 항원을 발현하는 상기 표적 세포의 성장 또는 증식을 억제하는 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 상기 표적 세포를 다중특이성 항체와 접촉시키는 단계를 포함하며, 상기 다중특이성 항체는 NK 세포 상의 제1 항원에 결합하는 제1 결합 도메인 및 상기 제2 항원에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함한다.
다른 태양에서, 세포 표면 상에 제2 항원을 발현하는 상기 표적 세포의 성장 또는 증식을 억제하기 위한 다중특이성 항체의 용도가 본 명세서에 제공되며, 상기 다중특이성 항체의 용도는 상기 표적 세포를 상기 다중특이성 항체와 접촉시키는 단계를 포함하며, 상기 다중특이성 항체는 NK 세포 상의 제1 항원에 결합하는 제1 결합 도메인 및 상기 제2 항원에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함한다.
다른 태양에서, 대상체에서 제2 항원을 발현하는 표적 세포를 제거하거나, 또는 상기 제2 항원을 발현하는 표적 세포에 의해 전부 또는 부분적으로 야기되는 질병 또는 장애를 치료하기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 다중특이성 항체의 유효량을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하며, 상기 다중특이성 항체는 NK 세포 상의 제1 항원에 결합하는 제1 결합 도메인 및 상기 제2 항원에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함한다.
다른 태양에서, 대상체에서 제2 항원을 발현하는 표적 세포를 제거하거나, 또는 상기 제2 항원을 발현하는 표적 세포에 의해 전부 또는 부분적으로 야기되는 질병 또는 장애를 치료하기 위한 다중특이성 항체의 용도가 본 명세서에 제공되며, 상기 용도는 상기 다중특이성 항체의 유효량을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하며, 상기 다중특이성 항체는 NK 세포 상의 제1 항원에 결합하는 제1 결합 도메인 및 상기 제2 항원에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 대상체는 이를 필요로 하는 대상체이다. 일부 실시 형태에서, 대상체는 인간이다.
일부 실시 형태에서, 질병 또는 장애는 암이다. 일부 실시 형태에서, 암은 혈액암이다. 일부 실시 형태에서, 암은 고형 종양 암이다.
본 명세서에 제공된 방법의 일부 실시 형태에서, 제1 항원은 NK 세포 활성화 수용체이다.
본 명세서에 제공된 방법의 일부 실시 형태에서, 제1 항원은 NKG2d이다. 본 명세서에 제공된 방법의 일부 실시 형태에서, 제1 항원은 NKp46이다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체이다.
본 명세서에 제공된 방법의 일부 실시 형태에서, 제2 항원은 세포 표면 상에 존재한다.
본 명세서에 제공된 방법의 일부 실시 형태에서, 제2 항원은 종양 세포 상에 발현된다.
본 명세서에 제공된 방법의 일부 실시 형태에서, 제2 항원은 종양-특이적 항원(TSA) 또는 종양-관련 항원(TAA)이다.
본 명세서에 제공된 방법의 일부 실시 형태에서, 제2 항원은 BCMA이다.
본 명세서에 제공된 방법의 일부 실시 형태에서, 제2 항원은 GPRC5d이다.
본 명세서에 제공된 방법의 일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인은 인간화 형태이다. 본 명세서에 제공된 방법의 일부 실시 형태에서, 제2 결합 도메인은 인간화 형태이다. 본 명세서에 제공된 방법의 일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인 및 제2 결합 도메인 둘 모두는 인간화 형태이다.
본 명세서에 제공된 방법의 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 IgG 항체이다.
본 명세서에 제공된 방법의 일부 실시 형태에서, IgG 항체는 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4 항체이다.
본 명세서에 제공된 방법의 일부 실시 형태에서, IgG 항체는 IgG1 항체이다.
본 명세서에 제공된 방법의 일부 실시 형태에서, IgG1은 침묵 돌연변이를 포함한다. 본 명세서에 제공된 방법의 일부 실시 형태에서, IgG1은 AAS 돌연변이를 포함한다.
본 명세서에 제공된 방법의 일부 실시 형태에서, IgG1은 항체의 이펙터 기능의 향상을 위한 돌연변이를 포함한다. 본 명세서에 제공된 방법의 일부 실시 형태에서, IgG1은 K248E/T437R 돌연변이를 포함한다.
본 명세서에 제공된 방법의 일부 실시 형태에서, Fc 영역은 비푸코실화된다.
본 명세서에 제공된 방법의 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 이중특이성 항체이다.
본 명세서에 제공된 방법의 일부 실시 형태에서, 이중특이성 항체는 바이포드-스캐폴드 입체구조이다.
본 명세서에 제공된 방법의 일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인은 Fab 영역이고, 제2 결합 도메인은 scFv 영역이다.
본 명세서에 제공된 방법의 일부 실시 형태에서, 이중특이성 항체는 모리슨-스캐폴드 입체구조이다.
본 명세서에 제공된 방법의 일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인은 2개의 Fab 영역을 포함하고, 제2 결합 도메인은 2개의 scFv 영역을 포함한다.
본 명세서에 제공된 방법의 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 약 500 pM 미만의 IC50으로 시험관내에서 종양 세포의 NK 세포 의존성 세포독성을 유도한다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 약 300 pM 미만의 IC50으로 시험관내에서 종양 세포의 NK 세포 의존성 세포독성을 유도한다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 약 100 pM 미만의 IC50으로 시험관내에서 종양 세포의 NK 세포 의존성 세포독성을 유도한다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 약 50 pM 미만의 IC50으로 시험관내에서 종양 세포의 NK 세포 의존성 세포독성을 유도한다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 약 20 pM 미만의 IC50으로 시험관내에서 종양 세포의 NK 세포 의존성 세포독성을 유도한다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 약 15 pM 미만의 IC50으로 시험관내에서 종양 세포의 NK 세포 의존성 세포독성을 유도한다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 약 10 pM 미만의 IC50으로 시험관내에서 종양 세포의 NK 세포 의존성 세포독성을 유도한다.
본 명세서에 제공된 방법의 일부 실시 형태에서, IC50은 NK 이펙터 세포와 제2 항원을 발현하는 표적 세포의 혼합물을 사용하여 평가된다.
본 명세서에 제공된 방법의 일부 실시 형태에서, 이펙터 세포 대 표적 세포 비는 약 0.01:1 내지 약 10:1이다. 본 명세서에 제공된 방법의 일부 실시 형태에서, 이펙터 세포 대 표적 세포 비는 약 0.01:1 내지 약 5:1이다. 일부 실시 형태에서, 이펙터 세포 대 표적 세포 비는 약 0.1:1 내지 약 2:1이다. 일부 실시 형태에서, 이펙터 세포 대 표적 세포 비는 약 0.5:1이다. 일부 실시 형태에서, 이펙터 세포 대 표적 세포 비는 약 1:1이다.
다른 태양에서, NK 세포를 인게이징(engaging) 또는 활성화하기 위한 제1 수단 및 종양 세포를 결합하기 위한 제2 수단을 포함하는 분자가 본 명세서에 제공되며, 상기 분자는 상기 종양 세포에 대한 NK 세포 의존성 세포독성을 유도할 수 있다.
본 명세서에 제공된 분자의 일부 실시 형태에서, 제1 수단은 NK 세포 상에 발현되는 제1 항원에 결합하는 제1 결합 도메인을 포함하고, 제2 수단은 종양 세포 상에 발현되는 제2 항원에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함한다.
본 명세서에 제공된 분자의 일부 실시 형태에서, 제1 항원은 NK 세포 활성화 수용체이다.
본 명세서에 제공된 분자의 일부 실시 형태에서, 제1 항원은 NKG2d이다.
본 명세서에 제공된 분자의 일부 실시 형태에서, 제1 항원은 NKp46이다.
본 명세서에 제공된 분자의 일부 실시 형태에서, 제2 항원은 종양-특이적 항원(TSA) 또는 종양-관련 항원(TAA)이다.
본 명세서에 제공된 분자의 일부 실시 형태에서, 제2 항원은 BCMA이다.
본 명세서에 제공된 분자의 일부 실시 형태에서, 제2 항원은 GPRC5d이다.
다른 태양에서, 하나 초과의 표적 분자에 결합하는 분자를 제조하기 위한 공정이 본 명세서에 제공되며, 상기 공정은 NK 세포 상의 제1 항원에 결합할 수 있는 결합 도메인을 얻는 기능을 수행하기 위한 단계; 종양 세포 상의 제2 항원에 결합할 수 있는 결합 도메인을 얻는 기능을 수행하기 위한 단계; 및 상기 제1 항원 및 상기 제2 항원에 결합할 수 있는 분자를 제공하는 기능을 수행하기 위한 단계를 포함한다.
다른 태양에서, NK 세포를 표적 세포로 유도하는 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 상기 NK 세포를 본 명세서에 제공된 분자와 접촉시키는 단계를 포함한다.
다른 태양에서, NK 세포를 활성화하는 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 상기 NK 세포를 본 명세서에 제공된 분자와 접촉시키는 단계를 포함한다.
다른 태양에서, 표적 세포의 성장 또는 증식을 억제하는 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 상기 표적 세포를 본 명세서에 제공된 분자와 접촉시키는 단계를 포함한다.
다른 태양에서, 대상체에서 제2 항원을 발현하는 표적 세포를 제거하거나, 또는 상기 제2 항원을 발현하는 표적 세포에 의해 전부 또는 부분적으로 야기되는 질병 또는 장애를 치료하기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 본 명세서에 제공된 분자의 유효량을 투여하는 단계를 포함한다.
도 1은 NKGW1로 면역화된 OmniRat에 대한 혈청 역가의 결과를 예시한다.
도 2는 NK 세포 효능작용(agonism)에 대한 비드-기반 검정을 예시한다.
도 3은 NKp46으로 면역화된 OmniRat에 대한 혈청 역가의 결과를 예시한다.
도 4는 bsAb의 입체구조를 예시한다.
도 5a 내지 도 5d는 NK 세포-기반 세포독성을 매개할 수 있는 bsAb의 능력의 분석 결과를 예시한다.
도 6은 추가의 BCMA-결합 1가 mAb 및 bsAb의 입체구조를 예시한다.
도 7은 1 ng/ml의 TGFb를 사용한 72시간 전처리에 의한 ADCC에 있어서의 NK 세포의 탈증강(depotentiation), 및 이펙터 분자 N46B10.AFU 내에의 NKp46 결합 아암(arm)의 도입에 의한 ADCC의 기능적 구제(functional rescue)를 예시한다.
도 8a 내지 도 8c는 NKp46 결합 아암을 함유하지 않는 BCMB1106.AFU와 대비하여, 이펙터 분자 N46B10.AFU 내에의 NKp46 결합 아암의 도입에 의한 저산소 조건 하에서의 ADCC에 있어서의 NK 세포의 증강을 예시한다.
도 9는, 적정가능한 항-NK CDC 살해를 나타내는 항-CD38 양성 대조군 mAb와 대조적으로, 인간 혈청의 존재 하에서의 BCMA x NKp46 이중특이성 분자에 의한 항-NK CDC 활성의 부재를 예시한다.
도 2는 NK 세포 효능작용(agonism)에 대한 비드-기반 검정을 예시한다.
도 3은 NKp46으로 면역화된 OmniRat에 대한 혈청 역가의 결과를 예시한다.
도 4는 bsAb의 입체구조를 예시한다.
도 5a 내지 도 5d는 NK 세포-기반 세포독성을 매개할 수 있는 bsAb의 능력의 분석 결과를 예시한다.
도 6은 추가의 BCMA-결합 1가 mAb 및 bsAb의 입체구조를 예시한다.
도 7은 1 ng/ml의 TGFb를 사용한 72시간 전처리에 의한 ADCC에 있어서의 NK 세포의 탈증강(depotentiation), 및 이펙터 분자 N46B10.AFU 내에의 NKp46 결합 아암(arm)의 도입에 의한 ADCC의 기능적 구제(functional rescue)를 예시한다.
도 8a 내지 도 8c는 NKp46 결합 아암을 함유하지 않는 BCMB1106.AFU와 대비하여, 이펙터 분자 N46B10.AFU 내에의 NKp46 결합 아암의 도입에 의한 저산소 조건 하에서의 ADCC에 있어서의 NK 세포의 증강을 예시한다.
도 9는, 적정가능한 항-NK CDC 살해를 나타내는 항-CD38 양성 대조군 mAb와 대조적으로, 인간 혈청의 존재 하에서의 BCMA x NKp46 이중특이성 분자에 의한 항-NK CDC 활성의 부재를 예시한다.
본 발명은 NK 세포 상의 항원에 결합하는 신규한 분자, 및 상기 분자 또는 이의 단편을 포함하는 다중특이성 결합 분자, 그리고 이들 신규한 분자, 예컨대, NK 세포 상에 존재하는 제1 항원에 결합할 수 있는 제1 수단; 및 제2 항원, 예를 들어 종양 세포 상의 항원에 결합할 수 있는 제2 수단을 포함하는 분자의 진보된 특성에 부분적으로 기초한다.
정의
본 명세서에 기재되거나 언급된 기법 및 절차는, 예를 들어, 문헌[Molecular Cloning: A Laboratory Manual (Sambrook, et al., 3d ed. 2001)]; 문헌[Current Protocols in Molecular Biology (Ausubel, et al. eds., 2003)]; 문헌[Therapeutic Monoclonal Antibodies: From Bench to Clinic (An, ed. 2009)]; 문헌[Monoclonal Antibodies: Methods and Protocols (Albitar, ed. 2010)]; 및 문헌[Antibody Engineering Vols 1 and 2 (Kontermann and Dbel, eds., 2d ed. 2010)]에 기재된 광범위하게 이용되는 방법과 같은, 일반적으로 당업자에 의해 잘 이해되고/되거나 통상적인 방법을 사용하여 일반적으로 사용되는 것들을 포함한다.
본 명세서에 달리 정의되지 않는 한, 상세한 설명에 사용된 기술 용어 및 과학 용어는 당업자에 의해 일반적으로 이해되는 의미를 갖는다. 본 명세서를 해석하려는 목적으로, 하기의 용어 설명이 적용될 것이며, 적절한 경우에는 언제든지, 단수로 사용되는 용어는 또한 복수형을 포함할 것이고, 역으로도 성립할 것이다. 제시된 용어의 임의의 설명이 본 명세서에 참고로 포함된 임의의 문헌과 상충되는 경우에는, 하기에 제시된 용어의 설명이 우선할 것이다.
용어 "항체", "면역글로불린", 또는 "Ig"는 본 명세서에서 상호교환 가능하게 사용되며, 가장 넓은 의미로 사용되고, 하기 기재된 바와 같이 2개 이상의 온전한 항체로부터 형성된, 예를 들어, 단일클론 항체(효능제(agonist), 길항제, 중화 항체, 전장(full length) 또는 온전한 단일클론 항체를 포함함), 폴리에피토프 또는 모노에피토프 특이성을 갖는 항체 조성물, 다중클론 또는 1가 항체, 다가 항체, 및 다중특이성 항체(예를 들어, 원하는 생물학적 활성을 나타내는 한 이중특이성 항체)를 구체적으로 망라한다. 항체는 인간, 인간화, 키메라, 및/또는 친화성 성숙될 수 있을 뿐만 아니라 다른 종, 예를 들어 마우스 및 토끼 등으로부터의 항체일 수 있다. 용어 "항체"는 특이적 분자 항원에 결합할 수 있고 2개의 동일한 폴리펩티드 사슬의 쌍으로 구성된 폴리펩티드의 면역글로불린 부류 내의 B 세포의 폴리펩티드 생성물을 포함하도록 의도되며, 여기서 각각의 쌍은 하나의 중쇄(약 50 내지 70 kDa) 및 하나의 경쇄(약 25 kDa)를 갖고, 각각의 사슬의 각각의 아미노-말단 부분은 약 100 내지 약 130개 이상의 아미노산의 가변 영역을 포함하며, 각각의 사슬의 각각의 카르복시-말단 부분은 불변 영역을 포함한다. 예를 들어, 문헌[Antibody Engineering (Borrebaeck, ed., 2d ed. 1995)]; 및 문헌[Kuby, Immunology (3d ed. 1997)]을 참조한다. 구체적인 실시 형태에서, 특이적 분자 항원은 폴리펩티드 또는 에피토프를 포함한 본 명세서에 제공된 항체에 의해 결합될 수 있다. 항체는 또한 합성 항체, 재조합적으로 생성된 항체, 낙타화 항체 또는 이들의 인간화 변이체, 인트라바디, 및 항-이디오타입(항-Id) 항체를 포함하지만 이로 한정되지 않는다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "항체"는 또한 상기 중 임의의 것의 Fc 영역 및 기능성 단편(예를 들어, 항원-결합 단편)을 갖는 임의의 결합 분자를 포함하며, 이는 단편이 유래된 항체의 결합 활성의 일부 또는 전부를 유지하는 항체 중쇄 또는 경쇄 폴리펩티드의 일부를 지칭한다. 기능성 단편(예를 들어, 항원-결합 단편)의 비제한적인 예는 단일-사슬 Fv(scFv)(예를 들어, 단일특이성, 이중특이성 등을 포함함), Fab 단편, F(ab') 단편, F(ab)2 단편, F(ab')2 단편, 다이설파이드-연결된 Fv(dsFv), Fd 단편, Fv 단편, 다이아바디, 트라이아바디, 테트라바디, 및 미니바디를 포함한다. 특히, 본 명세서에 제공된 항체는 면역글로불린 분자 및 면역글로불린 분자의 면역학적으로 활성인 부분, 예를 들어, 항원에 결합하는 항원-결합 부위를 함유하는 항원-결합 도메인 또는 분자(예를 들어, 항체의 하나 이상의 CDR)를 포함한다. 그러한 항체 단편은, 예를 들어, 문헌[Harlow and Lane, Antibodies: A Laboratory Manual (1989)]; 문헌[Mol . Biology and Biotechnology: A Comprehensive Desk Reference (Myers, ed., 1995)]; 문헌[Huston, et al., 1993, Cell Biophysics 22:189-224]; 문헌[Plckthun and Skerra, 1989, Meth . Enzymol. 178:497-515]; 및 문헌[Day, Advanced Immunochemistry (2d ed. 1990)]에서 확인할 수 있다. 본 명세서에 제공된 항체는 임의의 부류(예를 들어, IgG, IgE, IgM, IgD, 및 IgA), 또는 임의의 하위부류(예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1, 및 IgA2)의 면역글로불린 분자일 수 있다. 항체는 효능적 항체 또는 길항적 항체일 수 있다.
"항원"은 항체가 선택적으로 결합할 수 있는 구조이다. 표적 항원은 폴리펩티드, 탄수화물, 핵산, 지질, 합텐, 또는 다른 자연 발생 또는 합성 화합물일 수 있다. 일부 실시 형태에서, 표적 항원은 폴리펩티드이다. 소정 실시 형태에서, 항원은 세포와 회합되며, 예를 들어, 세포 상에 또는 세포 내에 존재한다.
"온전한" 항체는 항원-결합 부위뿐만 아니라 불변 영역(CL) 및 적어도 중쇄 불변 영역, CH1, CH2, 및 CH3을 포함하는 것이다. 불변 영역은 인간 불변 영역 또는 이의 아미노산 서열 변이체를 포함할 수 있다. 소정 실시 형태에서, 온전한 항체는 하나 이상의 이펙터 기능을 갖는다.
용어 "결합한다" 또는 "결합하는"은, 예를 들어 복합체를 형성하는 것을 포함한 분자들 사이의 상호작용을 지칭한다. 상호작용은, 예를 들어 비공유 상호작용일 수 있으며, 이에는 수소 결합, 이온 결합, 소수성 상호작용, 및/또는 반데르 발스 상호작용이 포함된다. 복합체는 또한 공유 또는 비공유 결합, 상호작용, 또는 힘에 의해 함께 유지된 2개 이상의 분자의 결합을 포함할 수 있다. 항체 상의 단일 항원-결합 부위와 표적 분자, 예컨대 항원의 단일 에피토프 사이의 총 비공유 상호작용의 강도는 그 에피토프에 대한 항체 또는 기능성 단편의 친화도이다. 1가 항원에 대한 결합 분자(예를 들어, 항체)의 해리 속도(koff) 대 결합 속도(kon)의 비(koff/kon)는 해리 상수 KD이며, 이는 친화도와 역상관된다. KD 값이 낮을수록, 항체의 친화도는 더 높다. KD의 값은 항체와 항원의 상이한 복합체들에 대해 달라지며, kon 및 koff 둘 모두에 좌우된다. 본 명세서에 제공된 항체에 대한 해리 상수 KD는 본 명세서에 제공된 임의의 방법 또는 당업자에게 잘 알려진 임의의 다른 방법을 사용하여 결정될 수 있다. 하나의 결합 부위에서의 친화도는 항체와 항원 사이의 상호작용의 진정한 강도(true strength)를 항상 반영하는 것은 아니다. 다수의 반복되는 항원 결정기를 함유하는 복합 항원, 예컨대 다가 항원이 다수의 결합 부위를 함유하는 항체와 접촉되는 경우, 하나의 부위에서의 항원과 항체의 상호작용은 제2 부위에서의 반응의 확률을 증가시킬 것이다. 다가 항체와 항원 사이의 그러한 다수의 상호작용의 강도를 결합력(avidity)이라 칭한다.
본 명세서에 기재된 항체와 관련하여, "~에 결합하다", "~에 특이적으로 결합하는"과 같은 용어, 및 유사한 용어는 또한 본 명세서에서 상호교환 가능하게 사용되며, 항원에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인의 항체, 예컨대 폴리펩티드를 지칭한다. 항원에 결합하거나 특이적으로 결합하는 항체 또는 항원 결합 도메인은 관련 항원과 교차-반응성일 수 있다. 소정 실시 형태에서, 항원에 결합하거나 특이적으로 결합하는 항체 또는 항원-결합 도메인은 다른 항원과 교차-반응하지 않는다. 항원에 결합하거나 특이적으로 결합하는 항체 또는 항원-결합 도메인은, 예를 들어 면역검정, Octet®, Biacore®, 또는 당업자에게 알려진 다른 기법에 의해 확인될 수 있다. 일부 실시 형태에서, 방사면역검정(RIA) 및 효소 결합 면역흡착 검정(ELISA)과 같은 실험 기법을 사용하여 결정될 때 임의의 교차-반응성 항원보다 더 높은 친화도로 항원에 결합하는 경우에, 항체 또는 항원-결합 도메인은 항원에 결합하거나 특이적으로 결합한다. 전형적으로, 특이적이거나 선택적인 반응은 백그라운드 신호 또는 노이즈의 적어도 2배일 것이며 백그라운드의 10배 초과일 수 있다. 결합 특이성에 관한 논의에 대해서는, 예를 들어 문헌[Fundamental Immunology 332-36 (Paul, ed., 2d ed. 1989)]을 참조한다. 소정 실시 형태에서, 예를 들어 형광 활성화 세포 분류(FACS) 분석 또는 RIA에 의해 결정될 때, "비표적" 단백질에 대한 항체 또는 항원-결합 도메인의 결합의 정도는 그의 특정 표적 항원에 대한 항체 또는 항원-결합 도메인의 결합의 약 10% 미만이다. "특이적 결합", "~에 특이적으로 결합한다", 또는 "~에 특이적인"과 같은 용어에 관해서는, 비특이적 상호작용과는 측정가능하게 상이한 결합을 의미한다. 예를 들어, 일반적으로 결합 활성을 갖지 않는 유사한 구조의 분자인 대조 분자의 결합과 대비하여 분자의 결합을 결정함으로써, 특이적 결합을 측정할 수 있다. 예를 들어, 특이적 결합은 표적과 유사한 대조 분자, 예를 들어 과량의 비표지된 표적과의 경쟁에 의해 결정될 수 있다. 이 경우에, 표지된 표적의 프로브에 대한 결합이 과량의 비표지된 표적에 의해 경쟁적으로 억제된다면 특이적 결합으로 명시된다. 예를 들어, 항원에 결합하는 항체 또는 항원-결합 도메인에는, 항체가, 예를 들어 항원을 표적화하는 데 진단제 또는 치료제로서 유용하도록 충분한 친화도로 항원에 결합할 수 있는 것이 포함된다. 소정 실시 형태에서, 항원에 결합하는 항체 또는 항원-결합 도메인은 1000 nM, 800 nM, 500 nM, 250 nM, 100 nM, 50 nM, 10 nM, 5 nM, 4 nM, 3 nM, 2 nM, 1 nM, 0.9 nM, 0.8 nM, 0.7 nM, 0.6 nM, 0.5 nM, 0.4 nM, 0.3 nM, 0.2 nM, 또는 0.1 nM 이하의 해리 상수(KD)를 갖는다. 소정 실시 형태에서, 항체 또는 항원-결합 도메인은 상이한 종들로부터의 항원 사이(예를 들어, 인간 종과 사이노몰거스 마카크 종 사이)에 보존된 항원의 에피토프에 결합한다.
"결합 친화도"는 일반적으로 분자(예를 들어, 결합 단백질, 예컨대 항체)의 단일 결합 부위와 이의 결합 파트너(예를 들어, 항원) 사이의 비공유 상호작용들의 총합의 강도를 지칭한다. 달리 나타내지 않는 한, 본 명세서에 사용되는 바와 같이, "결합 친화도"는 결합쌍의 구성원들(예를 들어, 항체와 항원) 사이의 1:1 상호작용을 반영하는 고유 결합 친화도를 지칭한다. 결합 분자 X의 그의 결합 파트너 Y에 대한 친화도는 일반적으로 해리 상수(KD)로 나타낼 수 있다. 본 명세서에 기재된 것들을 포함한 당업계에 알려진 통상의 방법에 의해 친화도가 측정될 수 있다. 저친화성 항체는 일반적으로 항원에 천천히 결합하고 쉽게 해리되는 경향이 있는 반면에, 고친화성 항체는 일반적으로 항원에 더 빠르게 결합하고 더 길게 결합이 유지되는 경향이 있다. 결합 친화도를 측정하는 다양한 방법이 당업계에 알려져 있으며, 이들 중 임의의 것이 본 발명의 목적에 사용될 수 있다. 구체적인 예시적인 실시 형태는 하기를 포함한다. 일 실시 형태에서, "KD" 또는 "KD 값"은 당업계에 알려진 검정에 의해, 예를 들어 결합 검정에 의해 측정될 수 있다. KD는, 예를 들어 관심 항체의 Fab 버전 및 이의 항원으로 수행되는 RIA에서 측정될 수 있다(문헌[Chen, et al., J. Mol Biol, 1999, 293:865-81]). KD 또는 KD 값은 또한 생물층 간섭측정법(BLI) 또는 표면 플라즈몬 공명(SPR) 검정을 사용함으로써 측정될 수 있으며, 이들은, 예를 들어 Octet®Red96 시스템을 사용하여 Octet®에 의해, 또는, 예를 들어 Biacore® 2000 또는 Biacore® 3000을 사용하여 Biacore®에 의해 측정될 수 있다. "온-속도" 또는 "결합의 속도" 또는 "결합 속도" 또는 "kon"이 또한, 예를 들어 Octet®Red96, Biacore® 2000, 또는 Biacore® 3000 시스템을 사용하는 전술된 것과 동일한 생물층 간섭측정법(BLI) 또는 표면 플라즈몬 공명(SPR) 기법으로 결정될 수 있다.
소정 실시 형태에서, 항체는 "키메라" 서열을 포함할 수 있는데, 여기서는 중쇄 및/또는 경쇄의 일부분은 특정 종으로부터 유래되거나 특정 항체 부류 또는 하위부류에 속하는 항체 내의 상응하는 서열과 동일하거나 상동인 반면, 사슬(들)의 나머지 부분은, 원하는 생물학적 활성을 나타내는 한, 다른 종으로부터 유래되거나 다른 항체 부류 또는 하위부류에 속하는 항체 내의 상응하는 서열과 동일하거나 상동이다(미국 특허 제4,816,567호 및 문헌[Morrison, et al., Proc. Natl. Acad. Sci . USA, 1984, 81:6851-55] 참조). 키메라 서열은 인간화 서열을 포함할 수 있다.
소정 실시 형태에서, 항체는, 천연 CDR 잔기가, 원하는 특이성, 친화도, 및 능력(capacity)을 갖는 마우스, 래트, 토끼, 또는 비인간 영장류와 같은 비인간 종의 상응하는 CDR(예를 들어, 공여자 항체)로부터의 잔기로 대체된 인간 면역글로불린(예를 들어, 수용자 항체)을 포함하는 키메라 항체인 비인간(예를 들어, 뮤린) 항체의 "인간화" 형태의 부분을 포함할 수 있다. 일부 경우에는, 인간 면역글로불린의 하나 이상의 FR 영역 잔기가 상응하는 비인간 잔기로 대체된다. 더욱이, 인간화 항체는 수용자 항체 또는 공여자 항체에서는 발견되지 않는 잔기를 포함할 수 있다. 이들 변형은 항체 성능을 추가로 개선하도록 이루어진다. 인간화 항체의 중쇄 또는 경쇄는 적어도 하나 이상의 가변 영역의 실질적으로 전부를 포함할 수 있으며, 여기서 CDR의 전부 또는 실질적으로 전부는 비인간 면역글로불린의 것들에 상응하고, FR의 전부 또는 실질적으로 전부는 인간 면역글로불린 서열의 것들이다. 소정 실시 형태에서, 인간화 항체는 면역글로불린 불변 영역(Fc), 전형적으로는 인간 면역글로불린의 불변 영역의 적어도 일부분을 포함할 것이다. 추가의 세부사항에 대해서는, 문헌[Jones, et al., Nature, 1986, 321:522-25]; 문헌[Riechmann, et al., Nature, 1988, 332:323-29]; 문헌[Presta, Curr. Op. Struct. Biol., 1992, 2:593-96]; 문헌[Carter, et al., Proc. Natl. Acad . Sci . USA, 1992, 89:4285-89]; 미국 특허 제6,800,738호; 제6,719,971호; 제6,639,055호; 제6,407,213호; 및 제6,054,297호를 참조한다.
소정 실시 형태에서, 항체는 "완전 인간 항체" 또는 "인간 항체"의 일부분을 포함할 수 있으며, 여기서 이들 용어는 본 명세서에서 상호교환 가능하게 사용되고 인간 가변 영역 및, 예를 들어, 인간 불변 영역을 포함하는 항체를 지칭한다. 구체적인 실시 형태에서, 이들 용어는 인간 기원의 가변 영역 및 불변 영역을 포함하는 항체를 지칭한다. 소정 실시 형태에서, "완전 인간" 항체는 또한, 폴리펩티드에 결합하고 인간 생식세포계열 면역글로불린 핵산 서열의 자연 발생 체세포 변이체인 핵산 서열에 의해 인코딩되는 항체를 포함할 수 있다. 용어 "완전 인간 항체"는 카바트(Kabat) 등에 의해 기재된 바와 같은 인간 생식세포계열 면역글로불린 서열에 상응하는 가변 영역 및 불변 영역을 갖는 항체를 포함한다(문헌[Kabat, et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242] 참조). "인간 항체"는 인간에 의해 생성된 항체의 것에 상응하고/하거나 인간 항체를 제조하기 위한 기법 중 임의의 것을 사용하여 제조된 것에 상응하는 아미노산 서열을 보유하는 것이다. 인간 항체의 이러한 정의는 비인간 항원-결합 잔기를 포함하는 인간화 항체를 명확히 배제한다. 인간 항체는 파지-디스플레이 라이브러리(문헌[Hoogenboom and Winter, J. Mol . Biol ., 1991, 227:381]; 문헌[Marks, et al., 1991, J. Mol . Biol ., 1991, 222:581]) 및 효모 디스플레이 라이브러리(문헌[Chao, et al., Nature Protocols, 2006, 1: 755-68])를 포함하는 당업계에 알려진 다양한 기법을 사용하여 생성될 수 있다. 또한, 인간 단일클론 항체의 제조를 위해, 문헌[Cole, et al., Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy 77 (1985)]; 문헌[Boerner, et al., J. Immunol ., 1991, 147(1):86-95]; 및 문헌[van Dijk and van de Winkel, Curr . Opin . Pharmacol ., 2001, 5: 368-74]에 기재된 방법이 이용가능하다. 인간 항체는, 항원 시험접종(antigenic challenge)에 반응하여 그러한 항체를 생성하도록 변형되었지만 그의 내인성 유전자좌가 불능화된 유전자도입 동물, 예를 들어, 마우스에 항원을 투여함으로써 제조될 수 있다(예를 들어, 문헌[Jakobovits, Curr . Opin . Biotechnol ., 1995, 6(5):561-66]; 문헌[Brggemann and Taussing, Curr . Opin . Biotechnol ., 1997, 8(4):455-58]; 및 XENOMOUSETM 기술에 관한 미국 특허 제6,075,181호 및 제6,150,584호 참조). 또한, 예를 들어, 인간 B-세포 하이브리도마 기술을 통해 생성된 인간 항체에 관한 문헌[Li, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 2006, 103:3557-62]을 참조한다.
소정 실시 형태에서, 항체는 "재조합 인간 항체"의 일부분을 포함할 수 있으며, 여기서 이 어구는 재조합 수단에 의해 제조되거나, 발현되거나, 생성되거나, 단리된 인간 항체, 예컨대 숙주 세포 내로 형질감염된 재조합 발현 벡터를 사용하여 발현된 항체, 재조합, 조합 인간 항체 라이브러리로부터 단리된 항체, 인간 면역글로불린 유전자에 대해 유전자도입되고/되거나 염색체도입된 동물(예를 들어, 마우스 또는 소)로부터 단리된 항체(예를 들어, 문헌[Taylor, L. D., et al., Nucl. Acids Res., 1992 20:6287-6295] 참조) 또는 인간 면역글로불린 유전자 서열을 다른 DNA 서열에 스플라이싱하는 것을 포함하는 임의의 다른 수단에 의해 제조되거나, 발현되거나, 생성되거나, 단리된 항체를 포함한다. 그러한 재조합 인간 항체는 인간 생식세포계열 면역글로불린 서열로부터 유래된 가변 영역 및 불변 영역을 가질 수 있다(문헌[Kabat, E. A., et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242] 참조). 그러나, 소정 실시 형태에서는, 그러한 재조합 인간 항체에 시험관내 돌연변이생성(또는 인간 Ig 서열에 대해 유전자도입된 동물이 사용되는 경우, 생체내(in vivo) 체세포 돌연변이생성)을 적용하며, 따라서 재조합 항체의 VH 및 VL 영역의 아미노산 서열은, 인간 생식세포계열 VH 및 VL 서열로부터 유래되고 이에 관련되지만 생체내에서 인간 항체 생식세포계열 레퍼토리 내에 천연적으로 존재하지 않을 수 있는 서열이다.
소정 실시 형태에서, 항체는 "단일클론 항체"의 일부를 포함할 수 있으며, 여기서 이 용어는 본 명세서에 사용되는 바와 같이 실질적으로 균질한 항체의 집단으로부터 얻어진 항체를 지칭하고, 예를 들어, 집단을 구성하는 개별 항체는 미량으로 존재할 수 있는 가능한 자연 발생 돌연변이를 제외하고는 동일하며, 각각의 단일클론 항체는 전형적으로 항원 상의 단일 에피토프를 인식할 것이다. 구체적인 실시 형태에서, 본 명세서에 사용되는 바와 같이 "단일클론 항체"는 단일 하이브리도마 또는 다른 세포에 의해 생성된 항체이다. 용어 "단일클론"은 항체를 제조하기 위한 임의의 특정 방법으로 제한되지 않는다. 예를 들어, 본 발명에 유용한 단일클론 항체는 문헌[Kohler et al., 1975, Nature 256:495]에 의해 최초로 기재된 하이브리도마 방법에 의해 제조될 수 있거나, 세균 또는 진핵 동물 또는 식물 세포에서 재조합 DNA 방법을 사용하여 제조될 수 있다(예를 들어, 미국 특허 제4,816,567호 참조). "단일클론 항체"는 또한, 예를 들어, 문헌[Clackson, et al., Nature, 1991, 352:624-28] 및 문헌[Marks, et al., J. Mol . Biol ., 1991, 222:581-97]에 기재된 기법을 사용하여 파지 항체 라이브러리로부터 단리될 수 있다. 클론 세포주의 제조 및 이에 의해 발현되는 단일클론 항체의 제조를 위한 다른 방법이 당업계에 잘 알려져 있다. 예를 들어, 문헌[Short Protocols in Molecular Biology (Ausubel et al. eds., 5th ed. 2002)]을 참조한다.
전형적인 4-사슬 항체 단위는 2개의 동일한 경쇄(L 사슬) 및 2개의 동일한 중쇄(H 사슬)로 구성된 이종사량체성(heterotetrameric) 당단백질이다. IgG의 경우에, 4-사슬 단위는 일반적으로 약 150,000 달톤이다. 각각의 L 사슬은 하나의 공유적 이황화물 결합에 의해 H 사슬에 연결되는 반면에, 2개의 H 사슬은 H 사슬 동종형에 따라 하나 이상의 이황화물 결합에 의해 서로 연결된다. 각각의 H 사슬 및 L 사슬은 또한 규칙적으로 이격된 사슬내 이황화물 가교를 갖는다. 각각의 H 사슬은 N-말단에 가변 도메인(VH)에 이어서 α 및 γ 사슬 각각에 대한 3개의 불변 도메인(CH) 및 μ 및 ε 동종형에 대한 4개의 CH 도메인을 갖는다. 각각의 L 사슬은 N-말단에 가변 도메인(VL)에 이어서 불변 도메인(CL)을 그의 다른 단부에 갖는다. VL은 VH와 정렬되고, CL은 중쇄(CH1)의 제1 불변 도메인과 정렬된다. 특정 아미노산 잔기가 경쇄 가변 도메인과 중쇄 가변 도메인 사이에 계면을 형성하는 것으로 여겨진다. VH와 VL이 함께 쌍을 이루는 것은 단일 항원-결합 부위를 형성한다. 상이한 부류의 항체의 구조 및 특성에 대해서는, 예를 들어, 문헌[Basic and Clinical Immunology 71 (Stites, et al. eds., 8th ed. 1994)]; 및 문헌[Immunobiology (Janeway, et al. eds., 5th ed. 2001)]을 참조한다.
용어 "Fab" 또는 "Fab 영역"은 항원에 결합하는 항체 영역을 지칭한다. 통상적인 IgG는 통상적으로 2개의 Fab 영역을 포함하며, 각각은 Y형 IgG 구조의 2개의 아암 중 하나 상에 존재한다. 각각의 Fab 영역은 전형적으로 중쇄 및 경쇄 각각의 하나의 가변 영역 및 하나의 불변 영역으로 구성된다. 더 구체적으로는, Fab 영역 내의 중쇄의 가변 영역 및 불변 영역은 VH 및 CH1 영역이고, Fab 영역 내의 경쇄의 가변 영역 및 불변 영역은 VL 및 CL 영역이다. Fab 영역 내의 VH, CH1, VL, 및 CL은 본 발명에 따른 항원 결합 능력을 부여하도록 다양한 방식으로 배열될 수 있다. 예를 들어, 통상적인 IgG의 Fab 영역과 유사하게, VH 및 CH1 영역은 하나의 폴리펩티드 상에 존재할 수 있고, VL 및 CL 영역은 별도의 폴리펩티드 상에 존재할 수 있다. 대안적으로, VH, CH1, VL, 및 CL 영역은 모두 동일한 폴리펩티드 상에 존재할 수 있고, 하기 섹션에 더 상세히 기재된 바와 같이 상이한 순서로 배향될 수 있다.
용어 "가변 영역", "가변 도메인", "V 영역", 또는 "V 도메인"은, 경쇄 또는 중쇄의 아미노-말단에 일반적으로 위치하며 길이가 중쇄에서는 약 120 내지 130개의 아미노산이고 경쇄에서는 약 100 내지 110개의 아미노산이고, 그의 특정 항원에 대한 각각의 특정 항체의 결합 및 특이성에 사용되는, 항체의 경쇄 또는 중쇄 부분을 지칭한다. 중쇄의 가변 영역은 "VH"로 지칭될 수 있다. 경쇄의 가변 영역은 "VL"로 지칭될 수 있다. 용어 "가변"은 가변 영역의 소정 세그먼트가 항체들 사이에서 서열이 광범위하게 상이하다는 사실을 지칭한다. V 영역은 항원 결합을 매개하고 특정 항체의 그의 특정 항원에 대한 특이성을 한정한다. 그러나, 가변성은 가변 영역의 110-아미노산 스팬에 걸쳐 균일하게 분포되지 않는다. 그 대신에, V 영역은 길이가 각각 약 9 내지 12개의 아미노산인 "초가변 영역"이라고 칭하는 더 큰 가변성(예를 들어, 극단적 가변성)의 더 짧은 영역에 의해 분리된 약 15 내지 30개의 아미노산의 프레임워크 영역(FR)이라고 칭하는 덜 가변성인(예를 들어, 비교적 불변성) 구간으로 이루어진다. 중쇄 및 경쇄 각각의 가변 영역은, 대체로 β-시트 입체구조를 채택하는 4개의 FR 영역을 포함하며, 이들 FR 영역은 3개의 초가변 영역에 의해 연결되며, 이들 초가변 영역은 β-시트 구조를 연결하는 루프를 형성하고, 일부 경우에는 이의 일부를 형성한다. 각각의 사슬 내의 초가변 영역은 FR에 의해 매우 근접하여 함께 유지되며, 다른 사슬로부터의 초가변 영역은 항체의 항원-결합 부위의 형성에 기여한다(예를 들어, 문헌[Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest (5th ed. 1991)] 참조). 불변 영역은 항체를 항원에 결합하는 데에는 직접 관여하지 않지만, 다양한 이펙터 기능, 예컨대 항체-의존성 세포성 세포독성(ADCC) 및 보체-의존성 세포독성(CDC)에 있어서의 항체의 참여를 나타낸다. 가변 영역은 상이한 항체들 사이에서 서열이 광범위하게 상이하다. 구체적인 실시 형태에서, 가변 영역은 인간 가변 영역이다.
용어 "카바트에 따른 가변 영역 잔기 넘버링" 또는 "카바트에서와 같은 아미노산 위치 넘버링", 및 이의 변형 형태는 문헌[Kabat et al., 상기 문헌]에서의 항체 편집의 중쇄 가변 영역 또는 경쇄 가변 영역에 사용되는 넘버링 체계를 지칭한다. 이러한 넘버링 체계를 사용하여, 실제 선형 아미노산 서열은 가변 도메인의 FR 또는 CDR의 단축, 또는 이들 내로의 삽입에 상응하는 더 적거나 추가의 아미노산을 함유할 수 있다. 예를 들어, 중쇄 가변 도메인은 잔기 52 뒤에 단일 아미노산 삽입(카바트에 따른 잔기 52a) 및 잔기 82 뒤에 삽입된 3개의 잔기(예를 들어, 카바트에 따른 잔기 82a, 82b, 및 82c 등)를 포함할 수 있다. 잔기의 카바트 넘버링은 주어진 항체에 대해 "표준" 카바트 넘버링 서열과 해당 항체 서열의 상동성 영역에서의 정렬에 의해 결정될 수 있다. 카바트 넘버링 체계는 일반적으로 가변 도메인 내의 잔기(대략 경쇄의 잔기 1 내지 107 및 중쇄의 잔기 1 내지 113)를 지칭하는 경우에 사용된다(예를 들어, 문헌[Kabat et al., 상기 문헌]). "EU 넘버링 체계" 또는 "EU 인덱스"는 일반적으로 면역글로불린 중쇄 불변 영역 내의 잔기를 지칭하는 경우에 사용된다(예를 들어, 문헌[Kabat et al., 상기 문헌]에 보고된 EU 인덱스). "카바트에서와 같은 EU 인덱스"는 인간 IgG1 EU 항체의 잔기 넘버링을 지칭한다. 다른 넘버링 체계는, 예를 들어, AbM, 초티아(Chothia), Contact, IMGT, 및 AHon에 의해 기재되어 있다.
항체에 관련하여 사용될 경우에, 용어 "중쇄"는 약 50 내지 70 kDa의 폴리펩티드 사슬을 지칭하며, 여기서 아미노-말단 부분은 약 120 내지 130개 또는 그 이상의 아미노산의 가변 영역을 포함하고, 카르복시-말단 부분은 불변 영역을 포함한다. 불변 영역은 중쇄 불변 영역의 아미노산 서열에 기초하여 알파(α), 델타(δ), 엡실론(ε), 감마(γ), 및 뮤(μ)로 지칭되는 5개의 별개의 유형(예를 들어, 동종형) 중 하나일 수 있다. 별개의 중쇄들은 크기가 상이하다: α, δ, 및 γ는 대략 450개의 아미노산을 함유하는 반면에, μ 및 ε은 대략 550개의 아미노산을 함유한다. 경쇄와 조합되는 경우에, 이러한 별개의 유형의 중쇄는, IgG의 4개의 하위부류, 즉, IgG1, IgG2, IgG3, 및 IgG4를 포함하는 5개의 잘 알려진 부류(예를 들어, 동종형)의 항체, IgA, IgD, IgE, IgG, 및 IgM을 각각 생성한다.
항체에 관련하여 사용될 경우에, 용어 "경쇄"는 약 25 kDa의 폴리펩티드 사슬을 지칭하며, 여기서 아미노-말단 부분은 약 100 내지 약 110개 이상의 아미노산의 가변 영역을 포함하고, 카르복시-말단 부분은 불변 영역을 포함한다. 경쇄의 대략적인 길이는 211 내지 217개의 아미노산이다. 불변 도메인의 아미노산 서열에 기초하여 카파(κ) 또는 람다(λ)로 지칭되는 2개의 별개의 유형이 존재한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "초가변 영역", "HVR", "상보성 결정 영역", 및 "CDR"은 상호교환 가능하게 사용된다. "CDR"은 면역글로불린(Ig 또는 항체) VH β-시트 프레임워크의 비-프레임워크 영역 내의 3개의 초가변 영역(H1, H2 또는 H3) 중 하나, 또는 항체 VL β-시트 프레임워크의 비-프레임워크 영역 내의 3개의 초가변 영역(L1, L2 또는 L3) 중 하나를 지칭한다. 따라서, CDR은 프레임워크 영역 서열 내에 산재된 가변 영역 서열이다.
CDR 영역은 당업자에게 잘 알려져 있고, 잘 알려진 넘버링 체계에 의해 정의되어 있다. 예를 들어, 카바트 상보성 결정 영역(CDR)은 서열 가변성에 기초하며 가장 일반적으로 사용된다(예를 들어, 문헌[Kabat et al., 상기 문헌] 참조). 초티아는 대신에 구조적 루프의 위치를 나타낸다(예를 들어, 문헌[Chothia and Lesk, J. Mol . Biol ., 1987, 196:901-17] 참조). 카바트 넘버링 체계를 사용하여 넘버링될 경우에 초티아 CDR-H1 루프의 단부는 루프의 길이에 따라 H32와 H34 사이에서 변동된다(이는 카바트 넘버링 체계가 H35A 및 H35B에 삽입을 배치하기 때문이고; 35A 및 35B 중 어느 것도 존재하지 않는 경우에, 루프는 32에서 종결되며; 35A만 존재하는 경우에, 루프는 33에서 종결되고; 35A 및 35B 둘 모두가 존재하는 경우에, 루프는 34에서 종결된다). AbM 초가변 영역은 카바트 CDR과 초티아 구조적 루프 사이의 절충을 나타내며, Oxford Molecular의 AbM 항체 모델링 소프트웨어에 의해 사용된다(예를 들어, 문헌[Antibody Engineering Vol. 2 (Kontermann and Dbel, eds., 2d ed. 2010)] 참조). "Contact" 초가변 영역은 이용가능한 복합체 결정 구조의 분석에 기초한다. 개발되어 널리 채택되고 있는 다른 범용 넘버링 체계는 ImMunoGeneTics (IMGT) Information System®이다(문헌[Lafranc, et al., Dev. Comp. Immunol ., 2003, 27(1):55-77]). IMGT는 인간 및 다른 척추동물의 면역글로불린(IG), T-세포 수용체(TCR) 및 주요 조직적합성 복합체(MHC)에 특화된 통합 정보 시스템이다. 여기서, CDR은 아미노산 서열 및 경쇄 또는 중쇄 내의 위치 둘 모두의 관점에서 나타낸다. 면역글로불린 가변 도메인의 구조 내의 CDR의 "위치"는 종들 사이에서 보존되고 루프로 불리는 구조에 존재하기 때문에, 구조적 특징에 따라 가변 도메인 서열들을 정렬하는 넘버링 체계를 사용함으로써, CDR 및 프레임워크 잔기가 용이하게 확인된다. 이러한 정보는 하나의 종의 면역글로불린으로부터의 CDR 잔기를, 전형적으로 인간 항체로부터의 수용체 프레임워크 내로 그래프팅 및 대체하는 데 사용될 수 있다. 추가의 넘버링 체계(AHon)가 Honegger 및 Plckthun(문헌[Honegger and Plckthun, J. Mol . Biol ., 2001, 309: 657-70])에 의해 개발되어 있다. 예를 들어, 카바트 넘버링 및 IMGT 고유 넘버링 체계를 포함한 넘버링 체계 사이의 상응성은 당업자에게 잘 알려져 있다(예를 들어, 문헌[Kabat, 상기 참조]; 문헌[Chothia and Lesk, 상기 참조]; 문헌[Martin, 상기 참조]; 문헌[Lefranc et al., 상기 참조] 참조). 이들 초가변 영역 또는 CDR 각각으로부터의 잔기는 하기에 언급된다.
주어진 CDR의 경계는 확인에 사용되는 체계(scheme)에 따라 변동될 수 있다. 따라서, 달리 명시되지 않는 한, 주어진 항체 또는 이의 영역, 예컨대 가변 영역의 용어 "CDR" 및 "상보성 결정 영역"뿐만 아니라 항체 또는 이의 영역의 개별 CDR(예를 들어, CDR-H1, CDR-H2)은 상기 본 명세서에 기재된 알려진 체계 중 임의의 것에 의해 정의된 바와 같은 상보성 결정 영역을 포함하는 것으로 이해되어야 한다. 일부 경우에는, 카바트, 초티아, 또는 Contact 방법에 의해 정의되는 바와 같은 CDR과 같이, 특정 CDR 또는 CDR들의 확인을 위한 체계가 명시된다. 다른 경우에는, CDR의 특정 아미노산 서열이 주어진다.
초가변 영역은 다음과 같은 "연장된 초가변 영역"을 포함할 수 있다: VL 내의 24 내지 36 또는 24 내지 34(L1), 46 내지 56 또는 50 내지 56(L2) 및 89 내지 97 또는 89 내지 96(L3) 및 VH 내의 26 내지 35 또는 26 내지 35A(H1), 50 내지 65 또는 49 내지 65(H2) 및 93 내지 102, 94 내지 102, 또는 95 내지 102(H3).
용어 "불변 영역" 또는 "불변 도메인"은, 항원에 대한 항체의 결합에 직접적으로 관여하지는 않지만 Fc 수용체와의 상호작용과 같은 다양한 이펙터 기능을 나타내는 경쇄 및 중쇄의 카르복시 말단부를 지칭한다. 이 용어는 항원-결합 부위를 함유하는 면역글로불린의 다른 부분, 즉 가변 영역에 비하여 더 보존된 아미노산 서열을 갖는 면역글로불린 분자의 일부분을 지칭한다. 불변 영역은 중쇄의 CH1, CH2, 및 CH3 영역 및 경쇄의 CL 영역을 함유할 수 있다.
용어 "프레임워크" 또는 "FR"은 CDR을 플랭킹하는 가변 영역 잔기이다. FR 잔기는, 예를 들어 키메라 항체, 인간화 항체, 인간 항체, 도메인 항체, 다이아바디, 선형 항체, 및 이중특이성 항체 내에 존재한다. FR 잔기는 초가변 영역 잔기 또는 CDR 잔기 이외의 가변 도메인 잔기이다. 전형적으로 VH 및 VL 영역 각각에 4개의 FR 영역이 존재한다. VH 내의 FR 영역은 VH FR1, VH FR2, VH FR3, 및 VH FR4(또는 FR H1, FR H2, FR H3, 및 FR H4)이다. VL 내의 FR 영역은 VL FR1, VL FR2, VL FR3, 및 VL FR4(또는 FR L1, FR L2, FR L3, 및 FR L4)이다.
본 명세서에서, 용어 "Fc 영역"은, 예를 들어 천연 서열 Fc 영역, 재조합 Fc 영역, 및 변이체 Fc 영역을 포함한, 면역글로불린 중쇄의 C-말단 영역을 한정하는 데 사용된다. 면역글로불린 중쇄의 Fc 영역의 경계는 변동될 수 있지만, 인간 IgG 중쇄 Fc 영역은 종종 위치 Cys226에서의 아미노산 잔기로부터, 또는 Pro230으로부터 이의 카르복실-말단까지 신장되도록 한정된다. Fc 영역의 C-말단 라이신(EU 넘버링 체계에 따라 잔기 447)은, 예를 들어 항체의 생성 또는 정제 동안에, 또는 항체의 중쇄를 인코딩하는 핵산을 재조합적으로 조작함으로써 제거될 수 있다. 따라서, 온전한 항체의 조성물은 모든 K447 잔기가 제거된 항체 집단, K447 잔기가 제거되지 않은 항체 집단, 및 K447 잔기가 있거나 없는 항체의 혼합물을 갖는 항체 집단을 포함할 수 있다. "기능성 Fc 영역"은 천연 서열 Fc 영역의 "이펙터 기능"을 갖는다. 예시적인 "이펙터 기능"은 C1q 결합; CDC; Fc 수용체 결합; ADCC; 식세포작용; 세포 표면 수용체(예를 들어, B 세포 수용체)의 하향조절 등을 포함한다. 그러한 이펙터 기능은 일반적으로 Fc 영역이 결합 영역 또는 결합 도메인(예를 들어, 항체 가변 영역 또는 도메인)과 조합되는 것을 필요로 하며, 당업자에게 알려진 다양한 검정을 사용하여 평가할 수 있다. "변이체 Fc 영역"은 하나 이상의 아미노산 변형(예를 들어, 치환, 부가, 또는 결실)에 의해 천연 서열 Fc 영역의 것과는 상이한 아미노산 서열을 포함한다. 소정 실시 형태에서, 변이체 Fc 영역은 천연 서열 Fc 영역 또는 모(parent) 폴리펩티드의 Fc 영역과 대비하여 적어도 하나의 아미노산 치환, 예를 들어, 천연 서열 Fc 영역 또는 모 폴리펩티드의 Fc 영역 내에 약 1 내지 약 10개의 아미노산 치환, 또는 약 1 내지 약 5개의 아미노산 치환을 갖는다. 본 명세서의 변이체 Fc 영역은 천연 서열 Fc 영역 및/또는 모 폴리펩티드의 Fc 영역과 적어도 약 80%의 상동성, 또는 이들과 적어도 약 90%의 상동성, 예를 들어, 이들과 적어도 약 95%의 상동성을 보유할 수 있다.
항원 또는 항체에 관련하여 사용될 경우에 용어 "변이체"는 천연 또는 변형되지 않은 서열과 대비하여 하나 이상(예를 들어, 약 1 내지 약 25개, 약 1 내지 약 20개, 약 1 내지 약 15개, 약 1 내지 약 10개, 또는 약 1 내지 약 5개)의 아미노산 서열 치환, 결실, 및/또는 부가를 포함하는 펩티드 또는 폴리펩티드를 지칭할 수 있다.
용어 "동일성"은, 서열을 정렬 및 비교함으로써 결정되는 바와 같이, 2개 이상의 폴리펩티드 분자 또는 2개 이상의 핵산 분자의 서열들 사이의 관계를 지칭한다. 참조 폴리펩티드 서열에 대한 "퍼센트(%) 아미노산 서열 동일성"은, 서열을 정렬하고, 필요하다면 갭(gap)을 도입하여 최대 퍼센트 서열 동일성을 달성한 후에, 참조 폴리펩티드 서열 내의 아미노산 잔기와 동일한 후보 서열 내의 아미노산 잔기의 백분율로서 정의되며, 이때 서열 동일성의 일부로서 어떠한 보존적 치환도 고려하지 않는다. % 아미노산 서열 동일성을 결정하기 위한 정렬은 당업계의 기술 범위 내에 있는 다양한 방법으로, 예를 들어 공개적으로 입수가능한 컴퓨터 소프트웨어, 예컨대 BLAST, BLAST-2, ALIGN, 또는 MEGALIGN(DNAStar, Inc.) 소프트웨어를 사용하여 달성될 수 있다. 당업자는 비교되는 서열들의 전장에 걸쳐 최대한의 정렬을 달성하는 데 필요한 임의의 알고리즘을 비롯하여, 서열을 정렬하기 위한 적절한 파라미터를 결정할 수 있다.
아미노산 잔기/위치의 "변형"은 시작 아미노산 서열과 대비하여 1차 아미노산 서열의 변화를 지칭하며, 여기서 변화는 상기 아미노산 잔기/위치를 포함하는 서열 변경으로부터 생성된다. 예를 들어, 전형적인 변형은 다른 아미노산에 의한 잔기의 치환(예를 들어, 보존적 또는 비보존적 치환), 상기 잔기/위치에 인접한 하나 이상(예를 들어, 일반적으로 5, 4, 또는 3개 미만)의 아미노산의 삽입, 및/또는 상기 잔기/위치의 결실을 포함한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, "에피토프"는 당업계의 용어이며, 항체가 특이적으로 결합할 수 있는 항원의 국부화된 영역을 지칭한다. 에피토프는 선형 에피토프 또는 입체형태, 비선형, 또는 불연속 에피토프일 수 있다. 예를 들어, 폴리펩티드 항원의 경우에, 에피토프는 폴리펩티드의 인접한 아미노산일 수 있거나("선형" 에피토프), 에피토프는 폴리펩티드의 2개 이상의 비인접 영역으로부터의 아미노산을 포함할 수 있다("입체형태", "비선형", 또는 "불연속" 에피토프). 일반적으로, 선형 에피토프는 2차, 3차, 또는 4차 구조에 의존하거나 의존하지 않을 수 있음을 당업자는 인정할 것이다. 예를 들어, 일부 실시 형태에서, 항체는 아미노산의 군이 천연 3차원 단백질 구조로 접혀 있는지의 여부에 무관하게 아미노산의 군에 결합한다. 다른 실시 형태에서, 에피토프를 인식하고 결합하기 위해 항체는 에피토프를 이루는 아미노산 잔기가 특정 입체형태를 나타낼 것(예를 들어, 굽혀지거나, 비틀리거나, 방향전환되거나, 접힐 것)을 필요로 한다.
용어 "폴리펩티드" 및 "펩티드" 및 "단백질"은 본 명세서에서 상호교환 가능하게 사용되며, 임의의 길이의 아미노산의 중합체를 지칭한다. 중합체는 선형 또는 분지형일 수 있으며, 그것은 변형된 아미노산을 포함할 수 있고, 그것에는 비-아미노산이 개재될 수 있다. 그 용어는 또한 천연적으로 또는 개입; 예를 들어, 이황화물 결합 형성, 글리코실화, 지질화, 아세틸화, 인산화, 또는 임의의 다른 조작 또는 변형에 의해 변형된 아미노산 중합체를 포함한다. 예를 들어, 아미노산의 하나 이상의 유사체 - 이는 비천연 아미노산을 포함하지만 이로 한정되지 않음 - 를 함유하는 폴리펩티드뿐만 아니라 당업계에 알려진 다른 변형이 정의 내에 또한 포함된다. 본 발명의 폴리펩티드는 면역글로불린 슈퍼패밀리의 항체 또는 다른 구성원에 기반할 수 있기 때문에, 소정 실시 형태에서, "폴리펩티드"는 단일쇄로서 또는 2개 이상의 회합된 사슬로서 발생할 수 있음이 이해된다.
용어 "벡터"는 핵산 서열을 숙주 세포 내로 도입하기 위해, 예를 들어, 본 명세서에 기재된 바와 같은 항체를 인코딩하는 핵산 서열을 포함하는 핵산 서열을 운반하거나 포함하기 위해 사용되는 물질을 지칭한다. 사용에 적용가능한 벡터는, 예를 들어, 발현 벡터, 플라스미드, 파지 벡터, 바이러스 벡터, 에피솜, 및 인공 염색체를 포함하며, 이들은 숙주 세포의 염색체 내로의 안정한 통합을 위해 작동가능한 선택 서열 또는 마커를 포함할 수 있다. 또한, 벡터는 하나 이상의 선택가능한 마커 유전자 및 적절한 발현 제어 서열을 포함할 수 있다. 포함될 수 있는 선택가능한 마커 유전자는, 예를 들어, 항생제 또는 독소에 대한 저항성을 제공하거나, 영양요구성 결핍을 보충하거나, 배양 배지 내에 없는 중요한 영양소를 공급한다. 발현 제어 서열은 당업계에 잘 알려진 구성적 및 유도성 프로모터, 전사 인핸서, 전사 종결자 등을 포함할 수 있다. 2개 이상의 핵산 분자가 공발현되어야 하는 경우에(예를 들어, 항체 중쇄 및 경쇄 또는 항체 VH 및 VL 둘 모두), 예를 들어, 단일 발현 벡터 내로, 또는 별도의 발현 벡터 내에 둘 모두의 핵산 분자가 삽입될 수 있다. 단일 벡터 발현의 경우에, 인코딩 핵산은 하나의 공통 발현 제어 서열에 작동가능하게 연결되거나, 상이한 발현 제어 서열, 예컨대 하나의 유도성 프로모터 및 하나의 구성적 프로모터에 연결될 수 있다. 숙주 세포 내로의 핵산 분자의 도입은 당업계에 잘 알려진 방법을 사용하여 확인할 수 있다. 그러한 방법은, 예를 들어, mRNA의 노던 블롯 또는 폴리머라제 연쇄 반응(PCR) 증폭과 같은 핵산 분석, 유전자 생성물의 발현에 대한 면역블로팅, 또는 도입된 핵산 서열의 발현 또는 그의 상응하는 유전자 생성물을 시험하기 위한 다른 적합한 분석 방법을 포함한다. 당업자는 핵산 분자가 원하는 생성물을 생성하기에 충분한 양으로 발현됨을 이해하며, 당업계에 잘 알려진 방법을 사용하여 충분한 발현을 얻기 위해 발현 수준을 최적화할 수 있음을 추가로 이해한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "숙주"는 포유류(예를 들어, 인간)와 같은 동물을 지칭한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "숙주 세포"는 핵산 분자로 형질감염될 수 있는 특정 대상 세포 및 그러한 세포의 자손 또는 잠재적 자손을 지칭한다. 이러한 세포의 자손은 후속 세대에서 발생할 수 있는 돌연변이 또는 환경적 영향 또는 숙주 세포 게놈 내로의 핵산 분자의 통합으로 인해 핵산 분자로 형질감염된 모세포와 동일하지 않을 수 있다.
"단리된 핵산"은 다른 게놈 DNA 서열로부터 실질적으로 분리된 핵산, 예를 들어, RNA, DNA, 또는 혼합 핵산뿐만 아니라, 천연 서열을 천연적으로 수반하는 리보솜 및 폴리머라제와 같은 단백질 또는 복합체이다. "단리된" 핵산 분자는 핵산 분자의 천연 공급원 내에 존재하는 다른 핵산 분자로부터 분리된 것이다. 더욱이, "단리된" 핵산 분자, 예컨대 cDNA 분자에는, 재조합 기법에 의해 생성될 때에는 다른 세포 물질, 또는 배양 배지가 실질적으로 없을 수 있거나, 화학적으로 합성될 때에는 화학적 전구체 또는 다른 화학물질이 실질적으로 없을 수 있다. 구체적인 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 바와 같은 항체를 인코딩하는 하나 이상의 핵산 분자는 단리되거나 정제된다. 이 용어는 자연 발생 환경으로부터 제거된 핵산 서열을 포함하며, 재조합 또는 클로닝된 DNA 단리물 및 화학적으로 합성된 유사체 또는 이종성 시스템에 의해 생물학적으로 합성된 유사체를 포함한다. 실질적으로 순수한 분자는 단리된 형태의 분자를 포함할 수 있다.
본 명세서에서 상호교환 가능하게 사용되는 바와 같이, "폴리뉴클레오티드", "뉴클레오티드", 또는 "핵산"은 임의의 길이의 뉴클레오티드의 중합체를 지칭하며, DNA 및 RNA를 포함한다. 뉴클레오티드는 데옥시리보뉴클레오티드, 리보뉴클레오티드, 변형된 뉴클레오티드 또는 염기, 및/또는 이들의 유사체, 또는 DNA 또는 RNA 폴리머라제에 의해, 또는 합성 반응에 의해 중합체 내로 도입될 수 있는 임의의 기질일 수 있다. 폴리뉴클레오티드는 변형된 뉴클레오티드, 예컨대 메틸화된 뉴클레오티드 및 이들의 유사체를 포함할 수 있다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, "올리고뉴클레오티드"는 일반적으로 길이가 약 200개 미만의 뉴클레오티드이지만 반드시 그러하지는 않은, 일반적으로 단일-가닥인 짧은 합성 폴리뉴클레오티드를 지칭한다. 용어 "올리고뉴클레오티드"와 "폴리뉴클레오티드"는 상호 배타적이지 않다. 폴리뉴클레오티드에 대한 상기 설명은 올리고뉴클레오티드에 동일하고 완전하게 적용가능하다. 본 발명의 항체를 생성하는 세포는 모 하이브리도마 세포뿐만 아니라, 항체를 인코딩하는 핵산이 도입된 세균 및 진핵 숙주 세포를 포함할 수 있다. 달리 명시되지 않는 한, 본 명세서에 개시된 임의의 단일-가닥 폴리뉴클레오티드 서열의 좌측 단부는 5' 단부이고; 이중-가닥 폴리뉴클레오티드 서열의 좌측 방향은 5' 방향으로 지칭된다. 신생(nascent) RNA 전사체의 5'으로부터 3'으로의 부가의 방향은 전사 방향으로 지칭되고; RNA 전사체의 5' 단부에 대해 5'에 있는 RNA 전사체와 동일한 서열을 갖는 DNA 가닥 상의 서열 영역은 "상류 서열"로 지칭되며; RNA 전사체의 3' 단부에 대해 3'에 있는 RNA 전사체와 동일한 서열을 갖는 DNA 가닥 상의 서열 영역은 "하류 서열"로 지칭된다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "다중특이성 항체"는 복수의 면역글로불린 가변 도메인 서열들을 포함하는 항체를 지칭하며, 복수의 면역글로불린 가변 도메인 서열들의 제1 면역글로불린 가변 도메인 서열은 제1 에피토프에 대한 결합 특이성을 가지며, 복수의 면역글로불린 가변 도메인 서열들의 제2 면역글로불린 가변 도메인 서열은 제2 에피토프에 대한 결합 특이성을 갖는다. 일 실시 형태에서, 제1 및 제2 에피토프는 중첩되지 않거나 실질적으로 중첩되지 않는다. 일 실시 형태에서, 제1 및 제2 에피토프는 상이한 항원, 예를 들어 상이한 단백질(또는 다량체 단백질의 상이한 하위단위) 상에 있다. 일 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 제3, 제4, 또는 제5 면역글로불린 가변 도메인을 포함한다. 일 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 이중특이성 항체 분자, 삼중특이성 항체 분자, 또는 사중특이성 항체 분자이다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "이중특이성 항체"는 2개 이하의 에피토프 또는 2개 이하의 항원에 결합하는 다중특이성 항체를 지칭한다. 이중특이성 항체는 제1 에피토프(예를 들어, NKG2d 또는 NKp46 항원 상의 에피토프)에 대한 결합 특이성을 갖는 제1 면역글로불린 가변 도메인 서열, 및 제2 에피토프(예를 들어, 종양-관련 항원(예를 들어, BCMA 또는 GPRC5d 항원) 상의 에피토프)에 대한 결합 특이성을 갖는 제2 면역글로불린 가변 도메인 서열을 특징으로 한다. 일 실시 형태에서, 제1 및 제2 에피토프는 상이한 항원, 예를 들어 상이한 단백질(또는 다량체 단백질의 상이한 하위단위) 상에 있다. 일 실시 형태에서, 이중특이성 항체는 제1 에피토프에 대한 결합 특이성을 갖는 중쇄 가변 도메인 서열 및 경쇄 가변 도메인 서열 및 제2 에피토프에 대한 결합 특이성을 갖는 중쇄 가변 도메인 서열 및 경쇄 가변 도메인 서열을 포함한다. 일 실시 형태에서, 이중특이성 항체는 제1 에피토프에 대한 결합 특이성을 갖는 하프 항체(half antibody) 또는 이의 단편 및 제2 에피토프에 대한 결합 특이성을 갖는 하프 항체 또는 이의 단편을 포함한다. 일 실시 형태에서, 이중특이성 항체는 제1 에피토프에 대한 결합 특이성을 갖는 scFv 또는 이의 단편 및 제2 에피토프에 대한 결합 특이성을 갖는 scFv 또는 이의 단편을 포함한다. 일 실시 형태에서, 제1 에피토프는 NKG2d 상에 위치하고, 제2 에피토프는 BCMA 상에 위치한다. 일 실시 형태에서, 제1 에피토프는 NKG2d 상에 위치하고, 제2 에피토프는 GPRC5d 상에 위치한다. 일 실시 형태에서, 제1 에피토프는 NKp46 상에 위치하고, 제2 에피토프는 BCMA 상에 위치한다. 일 실시 형태에서, 제1 에피토프는 NKp46 상에 위치하고, 제2 에피토프는 GPRC5d 상에 위치한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "NKG2d"는 NKG2-D II형 내재성 막 단백질을 지칭한다. NKG2d는 "NK 세포 수용체 D", "NKG2-D-활성 NK 수용체", "CD314"로도 지칭될 수 있다. 용어 "NKG2d"는, 달리 기재되지 않는 한, 임의의 NKG2d 변이체, 아이소형, 및 종 상동체를 포함하는데, 이는 세포(NK 세포를 포함함)에 의해 천연 발현되거나 또는 그러한 폴리펩티드를 인코딩하는 유전자 또는 cDNA로 형질감염된 세포 상에서 발현될 수 있으며, 특정 실시 형태에서 "NKG2d"는 인간 NKG2d이다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "NKp46"은 자연 살해 세포 p46-관련 단백질을 지칭한다. NKp46은 "자연 세포독성 촉발 수용체 1", "NK-p46", "CD335"로도 지칭될 수 있다. 용어 "NKp46"은, 달리 기재되지 않는 한, 임의의 NKp46 변이체, 아이소형, 및 종 상동체를 포함하는데, 이는 세포(NK 세포를 포함함)에 의해 천연 발현되거나 또는 그러한 폴리펩티드를 인코딩하는 유전자 또는 cDNA로 형질감염된 세포 상에서 발현될 수 있으며, 특정 실시 형태에서 "NKp46"은 인간 NKp46이다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "BCMA"는 TNFRSF17 또는 CD269로도 지칭되는 B-세포 성숙 항원을 지칭하며, 종양 괴사 인자 수용체(TNFR) 슈퍼패밀리의 구성원이다. 용어 "BCMA"는, 달리 기재되지 않는 한, 임의의 BCMA 변이체, 아이소형, 및 종 상동체를 포함하는데, 이는 세포(암 세포를 포함함)에 의해 천연 발현되거나 또는 그러한 폴리펩티드를 인코딩하는 유전자 또는 cDNA로 형질감염된 세포 상에서 발현될 수 있으며, 특정 실시 형태에서 "BCMA"는 인간 BCMA이다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "GPRC5d"는 G-단백질 커플링된 수용체 패밀리 C 군 5 구성원 D를 지칭한다. 용어 "GPRC5d"는, 달리 기재되지 않는 한, 임의의 GPRC5d 변이체, 아이소형, 및 종 상동체를 포함하는데, 이는 세포(암 세포를 포함함)에 의해 천연 발현되거나 또는 그러한 폴리펩티드를 인코딩하는 유전자 또는 cDNA로 형질감염된 세포 상에서 발현될 수 있으며, 특정 실시 형태에서 "GPRC5d"는 인간 GPRC5d이다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "약제학적으로 허용되는"은 미연방 또는 주 정부의 규제 기관에 의해 승인되어 있거나 미국 약전, 유럽 약전, 또는 동물에서의, 그리고 더 구체적으로는 인간에서의 사용에 대해 일반적으로 승인된 기타 약전에 열거되어 있음을 의미한다.
"부형제"는 약제학적으로 허용되는 물질, 조성물, 또는 비히클, 예컨대 액체 또는 고체 충전제, 희석제, 용매, 또는 캡슐화 재료를 의미한다. 부형제는, 예를 들어, 캡슐화 재료 또는 첨가제, 예컨대 흡수 촉진제, 산화방지제, 결합제, 완충제, 담체, 코팅제, 착색제, 희석제, 붕해제, 유화제, 증량제, 충전제, 향미제, 보습제, 윤활제, 향료, 보존제, 추진제, 이형제, 살균제, 감미제, 가용화제, 습윤제, 및 이들의 혼합물을 포함한다. 용어 "부형제"는 또한 희석제, 애쥬번트(adjuvant)(예를 들어, 프로인트(Freund) 애쥬번트(완전 또는 불완전)), 또는 비히클을 지칭할 수 있다.
일부 실시 형태에서, 부형제는 약제학적으로 허용되는 부형제이다. 약제학적으로 허용되는 부형제의 예는 완충제, 예컨대 포스페이트, 시트레이트, 및 다른 유기산; 산화방지제(아스코르브산을 포함함); 저분자량(예를 들어, 약 10개 미만의 아미노산 잔기) 폴리펩티드; 단백질, 예컨대 혈청 알부민, 젤라틴, 또는 면역글로불린; 친수성 중합체, 예컨대 폴리비닐피롤리돈; 아미노산, 예컨대 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 아르기닌, 또는 라이신; 단당류, 이당류, 및 글루코스, 만노스, 또는 덱스트린을 포함한 다른 탄수화물; 킬레이트제, 예컨대 EDTA; 당 알코올, 예컨대 만니톨 또는 소르비톨; 염-형성 반대이온, 예컨대 소듐; 및/또는 비이온성 계면활성제, 예컨대 TWEEN™, 폴리에틸렌 글리콜(PEG), 및 PLURONICS™를 포함한다. 약제학적으로 허용되는 부형제의 다른 예는 문헌[Remington and Gennaro, Remington's Pharmaceutical Sciences (18th ed. 1990)]에 기재되어 있다.
일 실시 형태에서, 약제학적 제형의 다른 성분과 상용성이고, 과도한 독성, 자극, 알레르기성 반응, 면역원성, 또는 다른 문제 또는 합병증 없이 인간 및 동물의 조직 또는 장기와 접촉되어 사용하기에 적합하며, 합리적인 이익/위험 비에 상응한다는 의미에서, 각각의 성분은 "약제학적으로 허용가능"하다. 예를 들어, 문헌[Lippincott Williams & Wilkins: Philadelphia, PA, 2005; Handbook of Pharmaceutical Excipients, 6th ed.; Rowe et al., Eds.]; 문헌[The Pharmaceutical Press and the American Pharmaceutical Association: 2009; Handbook of Pharmaceutical Additives, 3rd ed.; Ash and Ash Eds.]; 문헌[Gower Publishing Company: 2007]; 문헌[Pharmaceutical Preformulation and Formulation, 2nd ed.; Gibson Ed.; CRC Press LLC: Boca Raton, FL, 2009]을 참조한다. 일부 실시 형태에서, 약제학적으로 허용되는 부형제는 사용된 투여량 및 농도에서 이에 노출되는 세포 또는 포유류에 대해 비독성이다. 일부 실시 형태에서, 약제학적으로 허용되는 부형제는 수성 pH 완충 용액이다.
일부 실시 형태에서, 부형제는 석유, 동물, 식물 또는 합성 기원의 것들, 예컨대 낙화생유, 대두유, 광유, 참기름 등을 포함하는, 물 및 오일과 같은 멸균 액체이다. 조성물(예를 들어, 약제학적 조성물)이 정맥내 투여되는 경우에 물이 예시적인 부형제이다. 식염수 용액, 및 덱스트로스 및 글리세롤 수용액이 또한, 특히 주사 용액을 위한 액체 부형제로서 사용될 수 있다. 부형제는 또한 전분, 글루코스, 락토스, 수크로스, 젤라틴, 맥아, 쌀, 곡분(flour), 백악, 실리카 겔, 소듐 스테아레이트, 글리세롤 모노스테아레이트, 활석, 염화나트륨, 탈지분유, 글리세롤, 프로필렌, 글리콜, 물, 에탄올 등을 포함할 수 있다. 조성물은, 필요하다면, 미량의 습윤제 또는 유화제, 또는 pH 완충제를 또한 함유할 수 있다. 조성물은 용액, 현탁액, 에멀젼, 정제, 알약, 캡슐, 분말, 지속-방출 제형 등의 형태를 취할 수 있다. 제형을 포함하는 경구 조성물은 제약 등급의 만니톨, 락토스, 전분, 마그네슘 스테아레이트, 소듐 사카린, 셀룰로스, 탄산마그네슘 등과 같은 표준 부형제를 포함할 수 있다.
약제학적 화합물을 포함하는 조성물은, 적합한 양의 부형제와 함께, 예를 들어, 단리되거나 정제된 형태로, 항체를 함유할 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "유효량" 또는 "치료적 유효량"은 원하는 결과를 가져오기 충분한 본 명세서에 제공된 항체 또는 약제학적 조성물의 양을 지칭한다.
용어 "대상체"와 "환자"는 상호교환 가능하게 사용될 수 있다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 소정 실시 형태에서, 대상체는 포유류, 예컨대 비영장류(예를 들어, 소, 돼지, 말, 고양이, 개, 래트 등) 또는 영장류(예를 들어, 원숭이 및 인간)이다. 구체적인 실시 형태에서, 대상체는 인간이다. 일 실시 형태에서, 대상체는 질환 또는 장애로 진단된 포유동물, 예를 들어, 인간이다. 다른 실시 형태에서, 대상체는 질환 또는 장애가 발생할 위험이 있는 포유동물, 예를 들어, 인간이다.
"투여하다" 또는 "투여"는, 예컨대 점막, 피내, 정맥내, 근육내, 피하 전달, 및/또는 본 명세서에 기재되거나 당업계에 알려진 임의의 다른 물리적 전달 방법에 의해, 신체 외부에 존재하는 물질을 환자에게 주사하거나 달리 물리적으로 전달하는 행위를 지칭한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "치료하다", "치료", 및 "치료하는"은, 하나 이상의 요법의 투여로부터 발생되는, 질병 또는 질환의 진행, 중증도, 및/또는 지속기간의 감소 또는 호전을 지칭한다. 환자가 여전히 기저 장애를 앓고 있을 수 있음에도 불구하고, 환자에게 개선이 관찰되도록 기저 장애와 관련된 하나 이상의 증상의 감소, 경감, 및/또는 완화가 있었는지의 여부를 평가함으로써 치료를 결정할 수 있다. 용어 "치료"는 질병을 관리 및 호전시키는 것 둘 모두를 포함한다. 용어 "관리하다", "관리하는", 및 "관리"는 대상체가 요법으로부터 얻는 유익한 효과를 지칭하며, 이는 반드시 질병의 치유를 가져오지는 않는다.
용어 "예방하다", "예방하는", 및 "예방"은 질병, 장애, 질환, 또는 관련 증상(들)의 개시(또는 재발)의 가능성을 감소시키는 것을 지칭한다.
용어 "약" 및 "대략"은 주어진 값 또는 범위의 20% 이내, 15% 이내, 10% 이내, 9% 이내, 8% 이내, 7% 이내, 6% 이내, 5% 이내, 4% 이내, 3% 이내, 2% 이내, 1% 이내, 또는 그 미만을 의미한다.
본 명세서 및 청구범위에 사용되는 바와 같이, 단수형("a", "an" 및 "the")은 문맥상 명백히 달리 나타내지 않는 한 복수형을 포함한다.
실시 형태가 용어 "포함하는"으로 본 명세서에 기재되는 경우에는 언제나, "~로 이루어진" 및/또는 "~로 본질적으로 이루어진"의 용어로 기재된 것 이외에는 유사한 실시 형태가 또한 제공됨이 이해된다. 실시 형태가 어구 "~로 본질적으로 이루어진"으로 본 명세서에 기재되는 경우에는 언제나, "~로 이루어진"의 용어로 기재된 것 이외에는 유사한 실시 형태가 또한 제공됨이 또한 이해된다.
"A와 B 사이의" 또는 "A-B 사이의"와 같은 어구에 사용되는 바와 같이, 용어 "사이의"는 A 및 B 둘 모두를 포함하는 범위를 지칭한다.
본 명세서에서 "A 및/또는 B"와 같은 어구에 사용되는 바와 같이, 용어 "및/또는"은 A 및 B 둘 모두; A 또는 B; A(단독); 및 B(단독)를 포함하도록 의도된다. 마찬가지로, "A, B, 및/또는 C"와 같은 어구에 사용되는 바와 같이, 용어 "및/또는"은 하기 실시 형태 각각을 포함하도록 의도된다: A, B, 및 C; A, B, 또는 C; A 또는 C; A 또는 B; B 또는 C; A 및 C; A 및 B; B 및 C; A(단독); B(단독); 및 C(단독).
결합 분자
NK
세포 결합 분자
일 태양에서, NK 세포의 세포 표면 항원에 결합하는 결합 분자, 예컨대 항체 또는 이의 단편이 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, 항원은 NKG2d이다. 일부 실시 형태에서, 항원은 NKp46이다.
일 태양에서, NKG2d에 결합하는 항체가 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, 항체는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시 형태에서, NKG2d 항체는 단일 도메인 항체 또는 나노바디가 아니다. 일부 실시 형태에서, NKG2d 항체는 인간화 항체이다.
일부 실시 형태에서, NKG2d에 특이적으로 결합하고, NK 세포 활성을 조절할 수 있는 항체가 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 NKG2d 항체는 NK 세포의 인게이지먼트(engagement)를 조절할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 NKG2d 항체는 NK 세포를 활성화할 수 있다. 구체적인 실시 형태에서, NK 세포는 인간 NK 세포이다.
소정 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 항체들 중 어느 하나의 VH 영역, VL 영역, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및/또는 VL CDR3을 포함하는 항-NKG2d 항체가 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 항체들 중 어느 하나의 VH 영역을 포함하는 항-NKG2d 항체가 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 항체들 중 어느 하나의 VL 영역을 포함하는 항-NKG2d 항체가 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 항체들 중 어느 하나의 VH 영역, 및 본 명세서에 기재된 항체들 중 어느 하나의 VL 영역을 포함하는 항-NKG2d 항체가 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 항체들 중 어느 하나의 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 항-NKG2d 항체가 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 항체들 중 어느 하나의 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 항-NKG2d 항체가 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 항체들 중 어느 하나의 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3; 및 본 명세서에 기재된 항체들 중 어느 하나의 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 항-NKG2d 항체가 본 명세서에 제공된다. 본 명세서에 제공된 NKG2d 항체의 대표적인 VH 및 VL 아미노산 서열 - VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2 및 VL CDR3 아미노산 서열을 포함함 - 이 서열 목록뿐만 아니라 표 3, 표 4, 표 7 및 표 8에 제공되어 있다.
일부 실시 형태에서, 항체는 인간화 항체이다. 소정 실시 형태에서, 항체는 IgG 항체이다. 다른 실시 형태에서, IgG 항체는 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4 항체이다. 일부 실시 형태에서, 항체는 이중특이성 항체이다. 소정 실시 형태에서, 항체는 다가 형태이다. 다른 실시 형태에서, 항체는 적어도 3개의 항원에 결합할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 항체는 적어도 5개의 항원에 결합할 수 있다.
소정 실시 형태에서, 온전한 항체인 항-NKG2d 항체가 제공된다. 다른 실시 형태에서, 항-NKG2d 항체로서 항-NKG2d 항체의 항원-결합 단편이 제공된다. 일부 실시 형태에서, 항-NKG2d 항체의 항원-결합 단편은 기능성 단편이다. 일부 실시 형태에서, 항원-결합 단편은 다이아바디이다. 일부 실시 형태에서, 항원-결합 단편은 Fab이다. 일부 실시 형태에서, 항원-결합 단편은 Fab'이다. 일부 실시 형태에서, 항원-결합 단편은 F(ab')2이다. 일부 실시 형태에서, 항원-결합 단편은 Fv 단편이다. 일부 실시 형태에서, 항원-결합 단편은 이황화물 안정화된 Fv 단편(dsFv)이다. 일부 실시 형태에서, 항원-결합 단편은 (dsFv)2이다. 일부 실시 형태에서, 항원-결합 단편은 이중특이성 dsFv(dsFv-dsFv')이다. 일부 실시 형태에서, 항원-결합 단편은 이황화물 안정화된 다이아바디(ds 다이아바디)이다. 일부 실시 형태에서, 항원-결합 단편은 단일쇄 항체 분자(scFv)이다. 일부 실시 형태에서, 항원-결합 단편은 단일 도메인 항체(sdAb)이다. 일부 실시 형태에서, 항원-결합 단편은 scFv 이량체(2가 다이아바디)이다. 일부 실시 형태에서, 항원-결합 단편은 하나 이상의 CDR을 포함하는 항체의 일부분으로부터 형성된 다중특이성 항체이다. 일부 실시 형태에서, 항원-결합 단편은 도메인 항체이다. 일부 실시 형태에서, 항원-결합 단편은 2가 도메인 항체이다. 일부 실시 형태에서, 항원-결합 단편은, 항원에 결합하지만 완전 항체 구조를 포함하지 않는 항체 단편이다.
구체적인 실시 형태에서, NKG2d 항체는 VH 영역 및 VL 영역을 포함한다. 일부 실시 형태에서, NKG2d 항체는 단일쇄 항체이다. 일부 실시 형태에서, NKG2d 항체는 단일 도메인 항체이다. 일부 실시 형태에서, 항원-결합 단편은 낙타화 단일 도메인 항체이다. 일부 실시 형태에서, NKG2d 항체는 나노바디이다. 소정 실시 형태에서, NKG2d 항체는 VHH 항체이다. 소정 실시 형태에서, NKG2d 항체는 라마 항체이다. 일부 실시 형태에서, NKG2d 항체는 단일쇄 항체가 아니다. 일부 실시 형태에서, NKG2d 항체는 단일 도메인 항체가 아니다. 일부 실시 형태에서, NKG2d 항체는 나노바디가 아니다. 소정 실시 형태에서, NKG2d 항체는 VHH 항체가 아니다. 소정 실시 형태에서, NKG2d 항체는 라마 항체가 아니다. 일부 실시 형태에서, NKG2d 항체는 다중특이성 항체이다. 다른 실시 형태에서, NKG2d는 이중특이성 항체이다. 소정 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 본 명세서에 제공된 NKG2d 항체의 항원-결합 단편을 포함한다. 다른 실시 형태에서, 이중특이성 항체는 본 명세서에 제공된 NKG2d 항체의 항원-결합 단편을 포함한다. 일부 실시 형태에서, NKG2d 항체는 효능적 항체이다. 소정 실시 형태에서, NKG2d 항체는 NK 세포를 활성화시킨다. 일부 실시 형태에서, NKG2d 항체는 NK 세포의 활성을 조절한다. 일부 실시 형태에서, NKG2d 항체는 NK 세포의 활성을 활성화시키지도 비활성화시키지도 않는다. 구체적인 실시 형태에서, NK 세포는 인간 NK 세포이다.
일부 실시 형태에서, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3 서열은 카바트 넘버링 체계에 따른다. 일부 실시 형태에서, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3 서열은 초티아 넘버링 체계에 따른다. 일부 실시 형태에서, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3 서열은 예시적인 넘버링 체계에 따른다. 일부 실시 형태에서, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3 서열은 Contact 넘버링 체계에 따른다. 일부 실시 형태에서, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3 서열은 IMGT 넘버링 체계에 따른다. 일부 실시 형태에서, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3 서열은 AbM 넘버링 체계에 따른다. 소정 항체 실시 형태의 6개의 CDR(VH CDR1 내지 CDR3 및 VL CDR1 내지 CDR3)의 예시적인 세트가 본 명세서에 제공된다. CDR의 다른 세트가 고려되며 본 명세서에 제공된 항체 실시 형태의 범주 내에 있다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 NKG2d에 결합한다. 일부 실시 형태에서, NKG2d에 결합하는 항체는, 서열 번호 2의, VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3의 아미노산 서열을 각각 갖는 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 VH를 포함한다. 일부 실시 형태에서, NKG2d에 결합하는 항체는, 서열 번호 3의, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3의 아미노산 서열을 각각 갖는 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함한다. 일부 실시 형태에서, NKG2d에 결합하는 항체는 (i) 서열 번호 2의, VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3의 아미노산 서열을 각각 갖는 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 VH; 및 (ii) 서열 번호 3의, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3의 아미노산 서열을 각각 갖는 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함한다. 일부 실시 형태에서, CDR1, CDR2 또는 CDR3은 카바트 넘버링 체계, IMGT 넘버링 체계, AbM 넘버링 체계, 초티아 넘버링 체계, Contact 넘버링 체계, 또는 이들의 조합에 따라 결정된다. 일부 실시 형태에서, NKG2d에 결합하는 항체는 서열 번호 2의 아미노산 서열을 갖는 VH를 포함한다. 일부 실시 형태에서, NKG2d에 결합하는 항체는 서열 번호 3의 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함한다. 일부 실시 형태에서, NKG2d에 결합하는 항체는 서열 번호 2의 아미노산 서열을 갖는 VH, 및 서열 번호 3의 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, NKG2d에 결합하는 항체는 (i) 서열 번호 4, 5, 및 6의 아미노산 서열을 각각 갖는 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 VH, 및 (ii) 서열 번호 7, 8, 및 9의 아미노산 서열을 각각 갖는 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함한다. 일부 실시 형태에서, NKG2d에 결합하는 항체는 (i) 서열 번호 10, 11, 및 12의 아미노산 서열을 각각 갖는 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 VH, 및 (ii) 서열 번호 13, 14, 및 15의 아미노산 서열을 각각 갖는 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함한다. 일부 실시 형태에서, NKG2d에 결합하는 항체는 (i) 서열 번호 16, 17, 및 18의 아미노산 서열을 각각 갖는 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 VH, 및 (ii) 서열 번호 19, 20, 및 21의 아미노산 서열을 각각 갖는 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함한다. 일부 실시 형태에서, NKG2d에 결합하는 항체는 (i) 서열 번호 22, 23, 및 24의 아미노산 서열을 각각 갖는 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 VH, 및 (ii) 서열 번호 25, 26, 및 27의 아미노산 서열을 각각 갖는 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함한다. 일부 실시 형태에서, NKG2d에 결합하는 항체는 (i) 서열 번호 28, 29, 및 30의 아미노산 서열을 각각 갖는 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 VH, 및 (ii) 서열 번호 31, 32, 및 33의 아미노산 서열을 각각 갖는 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 서열 번호 2 및/또는 서열 번호 3의 하나 이상의 프레임워크 영역(들)을 추가로 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 항체는 인간화 항체이다. 본 명세서에 기재된 프레임워크 영역은 CDR 넘버링 체계의 경계에 기초하여 결정된다. 다시 말해서, 예를 들어, 카바트, IMGT, 또는 초티아에 의해 CDR이 결정된다면, 프레임워크 영역은, N-말단으로부터 C-말단으로, FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4의 형식으로 가변 영역 내의 CDR을 둘러싸는 아미노산 잔기이다. 예를 들어, FR1은, 예를 들어, 카바트 넘버링 체계, IMGT 넘버링 체계, 또는 초티아 넘버링 체계에 의해 정의되는 바와 같이 CDR1 아미노산 잔기에 대해 N-말단인 아미노산 잔기로서 정의되고, FR2는, 예를 들어, 카바트 넘버링 체계, IMGT 넘버링 체계, 또는 초티아 넘버링 체계에 의해 정의되는 바와 같이 CDR1 및 CDR2 아미노산 잔기 사이의 아미노산 잔기로서 정의되고, FR3은, 예를 들어, 카바트 넘버링 체계, IMGT 넘버링 체계, 또는 초티아 넘버링 체계에 의해 정의되는 바와 같이 CDR2 및 CDR3 아미노산 잔기 사이의 아미노산 잔기로서 정의되고, FR4는, 예를 들어, 카바트 넘버링 체계, IMGT 넘버링 체계, 또는 초티아 넘버링 체계에 의해 정의되는 바와 같이 CDR3 아미노산 잔기에 대해 C-말단인 아미노산 잔기로서 정의된다.
일부 실시 형태에서, NKG2d에 결합하는 항체는, 서열 번호 34의, VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3의 아미노산 서열을 각각 갖는 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 VH를 포함한다. 일부 실시 형태에서, NKG2d에 결합하는 항체는, 서열 번호 35의, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3의 아미노산 서열을 각각 갖는 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함한다. 일부 실시 형태에서, NKG2d에 결합하는 항체는 (i) 서열 번호 34의, VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3의 아미노산 서열을 각각 갖는 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 VH; 및 (ii) 서열 번호 35의, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3의 아미노산 서열을 각각 갖는 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함한다. 일부 실시 형태에서, CDR1, CDR2 또는 CDR3은 카바트 넘버링 체계, IMGT 넘버링 체계, AbM 넘버링 체계, 초티아 넘버링 체계, Contact 넘버링 체계, 또는 이들의 조합에 따라 결정된다. 일부 실시 형태에서, NKG2d에 결합하는 항체는 서열 번호 34의 아미노산 서열을 갖는 VH를 포함한다. 일부 실시 형태에서, NKG2d에 결합하는 항체는 서열 번호 35의 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함한다. 일부 실시 형태에서, NKG2d에 결합하는 항체는 서열 번호 34의 아미노산 서열을 갖는 VH, 및 서열 번호 35의 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, NKG2d에 결합하는 항체는 (i) 서열 번호 36, 37, 및 38의 아미노산 서열을 각각 갖는 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 VH, 및 (ii) 서열 번호 39, 40, 및 41의 아미노산 서열을 각각 갖는 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함한다. 일부 실시 형태에서, NKG2d에 결합하는 항체는 (i) 서열 번호 42, 43, 및 44의 아미노산 서열을 각각 갖는 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 VH, 및 (ii) 서열 번호 45, 46, 및 47의 아미노산 서열을 각각 갖는 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함한다. 일부 실시 형태에서, NKG2d에 결합하는 항체는 (i) 서열 번호 48, 49, 및 50의 아미노산 서열을 각각 갖는 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 VH, 및 (ii) 서열 번호 51, 52, 및 53의 아미노산 서열을 각각 갖는 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함한다. 일부 실시 형태에서, NKG2d에 결합하는 항체는 (i) 서열 번호 54, 55, 및 56의 아미노산 서열을 각각 갖는 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 VH, 및 (ii) 서열 번호 57, 58, 및 59의 아미노산 서열을 각각 갖는 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함한다. 일부 실시 형태에서, NKG2d에 결합하는 항체는 (i) 서열 번호 60, 61, 및 62의 아미노산 서열을 각각 갖는 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 VH, 및 (ii) 서열 번호 63, 64, 및 65의 아미노산 서열을 각각 갖는 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 서열 번호 34 및/또는 서열 번호 35의 하나 이상의 프레임워크 영역(들)을 추가로 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 항체는 인간화 항체이다. 본 명세서에 기재된 프레임워크 영역은 CDR 넘버링 체계의 경계에 기초하여 결정된다. 다시 말해서, 예를 들어, 카바트, IMGT, 또는 초티아에 의해 CDR이 결정된다면, 프레임워크 영역은, N-말단으로부터 C-말단으로, FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4의 형식으로 가변 영역 내의 CDR을 둘러싸는 아미노산 잔기이다. 예를 들어, FR1은, 예를 들어, 카바트 넘버링 체계, IMGT 넘버링 체계, 또는 초티아 넘버링 체계에 의해 정의되는 바와 같이 CDR1 아미노산 잔기에 대해 N-말단인 아미노산 잔기로서 정의되고, FR2는, 예를 들어, 카바트 넘버링 체계, IMGT 넘버링 체계, 또는 초티아 넘버링 체계에 의해 정의되는 바와 같이 CDR1 및 CDR2 아미노산 잔기 사이의 아미노산 잔기로서 정의되고, FR3은, 예를 들어, 카바트 넘버링 체계, IMGT 넘버링 체계, 또는 초티아 넘버링 체계에 의해 정의되는 바와 같이 CDR2 및 CDR3 아미노산 잔기 사이의 아미노산 잔기로서 정의되고, FR4는, 예를 들어, 카바트 넘버링 체계, IMGT 넘버링 체계, 또는 초티아 넘버링 체계에 의해 정의되는 바와 같이 CDR3 아미노산 잔기에 대해 C-말단인 아미노산 잔기로서 정의된다.
소정 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 전술된 항체들 중 어느 하나에 대해 소정의 퍼센트 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
2개의 서열(예를 들어, 아미노산 서열 또는 핵산 서열) 사이의 퍼센트 동일성의 결정은 수학적 알고리즘을 사용하여 달성할 수 있다. 2개의 서열의 비교에 이용되는 수학적 알고리즘의 비제한적인 예는 문헌[Karlin and Altschul, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 87:2264 2268 (1990)]의 알고리즘이며, 이는 문헌[Karlin and Altschul, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 90:5873 5877 (1993)]에서와 같이 변형된 것이다. 그러한 알고리즘은 문헌[Altschul et al., J. Mol. Biol. 215:403 (1990)]의 NBLAST 및 XBLAST 프로그램에 통합되어 있다. 예를 들어, 점수=100, 단어 길이=12에 대해 설정된 NBLAST 뉴클레오티드 프로그램 파라미터로 BLAST 뉴클레오티드 검색을 수행하여 본 명세서에 기재된 핵산 분자와 상동성인 뉴클레오티드 서열을 얻을 수 있다. 예를 들어, 점수 50, 단어 길이=3으로 설정된 XBLAST 프로그램 파라미터로 BLAST 단백질 검색을 수행하여 본 명세서에 기재된 단백질 분자와 상동성인 아미노산 서열을 얻을 수 있다. 비교 목적을 위한 갭 정렬을 얻기 위해, 문헌[Altschul et al., Nucleic Acids Res. 25:3389 3402 (1997)]에 기재된 바와 같이 갭 BLAST를 이용할 수 있다. 대안적으로, PSI BLAST를 사용하여 분자 사이의 원거리 관계(Id.)를 검출하는 반복된 검색을 수행할 수 있다. BLAST, 갭 BLAST, 및 PSI Blast 프로그램을 이용할 경우, 각각의 프로그램(예를 들어, XBLAST 및 NBLAST)의 디폴트 파라미터가 사용될 수 있다(예를 들어, 월드와이드 웹, ncbi.nlm.nih.gov 상의 미국 국립 생물 정보 센터(NCBI) 참조). 서열의 비교에 이용되는 수학적 알고리즘의 다른 바람직한 비제한적인 예는 문헌[Myers and Miller, CABIOS 4:11-17 (1998)]의 알고리즘이다. 그러한 알고리즘은 ALIGN 프로그램(버전 2.0)에 포함되며, 이는 GCG 서열 정렬 소프트웨어 패키지의 일부이다. 아미노산 서열을 비교하기 위한 ALIGN 프로그램을 이용할 경우, PAM120 가중치 잔기 표, 12의 갭 길이 페널티, 및 4의 갭 페널티가 사용될 수 있다. 갭을 허용하거나 허용하지 않으면서 상기 기재된 것들과 유사한 기법을 사용하여 2개의 서열 사이의 % 동일성을 결정할 수 있다. % 동일성의 계산에서는, 전형적으로 정확한 일치만이 계수된다.
일부 실시 형태에서, 서열 번호 2의 아미노산 서열과 적어도 약 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성 중 어느 하나를 갖는 VH를 포함하는 항-NKG2d 항체가 제공된다. 일부 실시 형태에서, 서열 번호 3의 아미노산 서열과 적어도 약 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성 중 어느 하나를 갖는 VL을 포함하는 항-NKG2d 항체가 제공된다. 일부 실시 형태에서, 서열 번호 2의 아미노산 서열과 적어도 약 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성 중 어느 하나를 갖는 VH, 및 서열 번호 3의 아미노산 서열과 적어도 약 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성 중 어느 하나를 갖는 VL을 포함하는 항-NKG2d 항체가 제공된다.
일부 실시 형태에서, 서열 번호 34의 아미노산 서열과 적어도 약 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성 중 어느 하나를 갖는 VH를 포함하는 항-NKG2d 항체가 제공된다. 일부 실시 형태에서, 서열 번호 35의 아미노산 서열과 적어도 약 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성 중 어느 하나를 갖는 VL을 포함하는 항-NKG2d 항체가 제공된다. 일부 실시 형태에서, 서열 번호 34의 아미노산 서열과 적어도 약 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성 중 어느 하나를 갖는 VH, 및 서열 번호 35의 아미노산 서열과 적어도 약 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성 중 어느 하나를 갖는 VL을 포함하는 항-NKG2d 항체가 제공된다.
일부 실시 형태에서, 적어도 약 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 동일성 중 어느 하나를 갖는 VH 또는 VL 서열은 참조 서열과 대비하여 치환(예를 들어, 보존적 치환), 삽입, 또는 결실을 함유하지만, 그 서열을 포함하는 항체는 NKG2d에 결합하는 능력을 유지한다. 일부 실시 형태에서, 총 1 내지 10개의 아미노산이 치환, 삽입 및/또는 결실되었다. 일부 실시 형태에서, 치환, 삽입, 또는 결실은 CDR 외부의 영역에서(즉, FR에서) 발생한다.
다른 태양에서, NKG2d에 결합하기 위하여 본 명세서에 기재된 NKG2d 항체들 중 임의의 것과 경쟁하는 항체가 본 명세서에 제공된다. 다른 태양에서, 본 명세서에 기재된 NKG2d 항체들 중 임의의 것과 동일한 에피토프에 결합하는 항체가 본 명세서에 제공된다. 다른 태양에서, 본 명세서에 기재된 NKG2d 항체에 의해 결합되는 NKG2d 상의 에피토프와 중첩되는 NKG2d 상의 에피토프에 결합하는 NKG2d 항체가 제공된다.
일 태양에서, NKG2d에 결합하기 위하여 NKG2d 참조 항체와 경쟁하는 항체가 제공된다. 다른 태양에서, NKG2d 참조 항체와 동일한 NKG2d 에피토프에 결합하는 NKG2d 항체가 제공된다. 다른 태양에서, NKG2d 참조 항체에 의해 결합되는 NKG2d 상의 에피토프와 중첩되는 NKG2d 상의 에피토프에 결합하는 NKG2d 항체가 제공된다.
일 실시 형태에서, NKG2d 참조 항체는 (i) 서열 번호 2의 아미노산 서열을 갖는 VH의, VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3의 아미노산 서열을 각각 갖는 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 VH; 및 (ii) 서열 번호 3의 아미노산 서열을 갖는 VL의, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3의 아미노산 서열을 각각 갖는 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함한다. 일 실시 형태에서, NKG2d 참조 항체는 (i) 서열 번호 34의 아미노산 서열을 갖는 VH의, VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3의 아미노산 서열을 각각 갖는 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 VH; 및 (ii) 서열 번호 35의 아미노산 서열을 갖는 VL의, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3의 아미노산 서열을 각각 갖는 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함한다.
일 태양에서, NKp46에 결합하는 항체가 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, 항체는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시 형태에서, NKp46 항체는 단일 도메인 항체 또는 나노바디가 아니다. 일부 실시 형태에서, NKp46 항체는 인간화 항체이다.
일부 실시 형태에서, NKp46에 특이적으로 결합하고, NK 세포 활성을 조절할 수 있는 항체가 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 NKp46 항체는 NK 세포의 인게이지먼트를 조절할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 NKp46 항체는 NK 세포를 활성화할 수 있다. 구체적인 실시 형태에서, NK 세포는 인간 NK 세포이다.
소정 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 항체들 중 어느 하나의 VH 영역, VL 영역, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및/또는 VL CDR3을 포함하는 항-NKp46 항체가 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 항체들 중 어느 하나의 VH 영역을 포함하는 항-NKp46 항체가 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 항체들 중 어느 하나의 VL 영역을 포함하는 항-NKp46 항체가 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 항체들 중 어느 하나의 VH 영역, 및 본 명세서에 기재된 항체들 중 어느 하나의 VL 영역을 포함하는 항-NKp46 항체가 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 항체들 중 어느 하나의 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 항-NKp46 항체가 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 항체들 중 어느 하나의 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 항-NKp46 항체가 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 항체들 중 어느 하나의 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3; 및 본 명세서에 기재된 항체들 중 어느 하나의 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 항-NKp46 항체가 본 명세서에 제공된다. 본 명세서에 제공된 NKp46 항체의 대표적인 VH 및 VL 아미노산 서열 - VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2 및 VL CDR3 아미노산 서열을 포함함 - 이 서열 목록뿐만 아니라 표 14 및 표 15에 제공되어 있다.
일부 실시 형태에서, 항체는 인간화 항체이다. 소정 실시 형태에서, 항체는 IgG 항체이다. 다른 실시 형태에서, IgG 항체는 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4 항체이다. 일부 실시 형태에서, 항체는 이중특이성 항체이다. 소정 실시 형태에서, 항체는 다가 형태이다. 다른 실시 형태에서, 항체는 적어도 3개의 항원에 결합할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 항체는 적어도 5개의 항원에 결합할 수 있다.
소정 실시 형태에서, 온전한 항체인 NKp46 항체가 제공된다. 다른 실시 형태에서, NKp46 항체로서 NKp46 항체의 항원-결합 단편이 제공된다. 일부 실시 형태에서, NKp46 항체의 항원-결합 단편은 기능성 단편이다. 일부 실시 형태에서, 항원-결합 단편은 다이아바디이다. 일부 실시 형태에서, 항원-결합 단편은 Fab이다. 일부 실시 형태에서, 항원-결합 단편은 Fab'이다. 일부 실시 형태에서, 항원-결합 단편은 F(ab')2이다. 일부 실시 형태에서, 항원-결합 단편은 Fv 단편이다. 일부 실시 형태에서, 항원-결합 단편은 이황화물 안정화된 Fv 단편(dsFv)이다. 일부 실시 형태에서, 항원-결합 단편은 (dsFv)2이다. 일부 실시 형태에서, 항원-결합 단편은 이중특이성 dsFv(dsFv-dsFv')이다. 일부 실시 형태에서, 항원-결합 단편은 이황화물 안정화된 다이아바디(ds 다이아바디)이다. 일부 실시 형태에서, 항원-결합 단편은 단일쇄 항체 분자(scFv)이다. 일부 실시 형태에서, 항원-결합 단편은 단일 도메인 항체(sdAb)이다. 일부 실시 형태에서, 항원-결합 단편은 scFv 이량체(2가 다이아바디)이다. 일부 실시 형태에서, 항원-결합 단편은 하나 이상의 CDR을 포함하는 항체의 일부분으로부터 형성된 다중특이성 항체이다. 일부 실시 형태에서, 항원-결합 단편은 도메인 항체이다. 일부 실시 형태에서, 항원-결합 단편은 2가 도메인 항체이다. 일부 실시 형태에서, 항원-결합 단편은, 항원에 결합하지만 완전 항체 구조를 포함하지 않는 항체 단편이다.
구체적인 실시 형태에서, NKp46 항체는 VH 영역 및 VL 영역을 포함한다. 일부 실시 형태에서, NKp46 항체는 단일쇄 항체이다. 일부 실시 형태에서, NKp46 항체는 단일 도메인 항체이다. 일부 실시 형태에서, 항원-결합 단편은 낙타화 단일 도메인 항체이다. 일부 실시 형태에서, NKp46 항체는 나노바디이다. 소정 실시 형태에서, NKp46 항체는 VHH 항체이다. 소정 실시 형태에서, NKp46 항체는 라마 항체이다. 일부 실시 형태에서, NKp46 항체는 단일쇄 항체가 아니다. 일부 실시 형태에서, NKp46 항체는 단일 도메인 항체가 아니다. 일부 실시 형태에서, NKp46 항체는 나노바디가 아니다. 소정 실시 형태에서, NKp46 항체는 VHH 항체가 아니다. 소정 실시 형태에서, NKp46 항체는 라마 항체가 아니다. 일부 실시 형태에서, NKp46 항체는 다중특이성 항체이다. 다른 실시 형태에서, NKp46은 이중특이성 항체이다. 소정 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 본 명세서에 제공된 NKp46 항체의 항원-결합 단편을 포함한다. 다른 실시 형태에서, 이중특이성 항체는 본 명세서에 제공된 NKp46 항체의 항원-결합 단편을 포함한다. 일부 실시 형태에서, NKp46 항체는 효능적 항체이다. 소정 실시 형태에서, NKp46 항체는 NK 세포를 활성화시킨다. 일부 실시 형태에서, NKp46 항체는 NK 세포의 활성을 조절한다. 일부 실시 형태에서, NKp46 항체는 NK 세포의 활성을 활성화시키지도 비활성화시키지도 않는다. 구체적인 실시 형태에서, NK 세포는 인간 NK 세포이다.
일부 실시 형태에서, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3 서열은 카바트 넘버링 체계에 따른다. 일부 실시 형태에서, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3 서열은 초티아 넘버링 체계에 따른다. 일부 실시 형태에서, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3 서열은 예시적인 넘버링 체계에 따른다. 일부 실시 형태에서, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3 서열은 Contact 넘버링 체계에 따른다. 일부 실시 형태에서, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3 서열은 IMGT 넘버링 체계에 따른다. 일부 실시 형태에서, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3 서열은 AbM 넘버링 체계에 따른다. 소정 항체 실시 형태의 6개의 CDR(VH CDR1 내지 CDR3 및 VL CDR1 내지 CDR3)의 예시적인 세트가 본 명세서에 제공된다. CDR의 다른 세트가 고려되며 본 명세서에 제공된 항체 실시 형태의 범주 내에 있다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 항체는 NKp46에 결합한다. 일부 실시 형태에서, NKp46에 결합하는 항체는, 서열 번호 67의, VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3의 아미노산 서열을 각각 갖는 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 VH를 포함한다. 일부 실시 형태에서, NKp46에 결합하는 항체는, 서열 번호 68의, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3의 아미노산 서열을 각각 갖는 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함한다. 일부 실시 형태에서, NKp46에 결합하는 항체는 (i) 서열 번호 67의, VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3의 아미노산 서열을 각각 갖는 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 VH; 및 (ii) 서열 번호 68의, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3의 아미노산 서열을 각각 갖는 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함한다. 일부 실시 형태에서, CDR1, CDR2 또는 CDR3은 카바트 넘버링 체계, IMGT 넘버링 체계, AbM 넘버링 체계, 초티아 넘버링 체계, Contact 넘버링 체계, 또는 이들의 조합에 따라 결정된다. 일부 실시 형태에서, NKp46에 결합하는 항체는 서열 번호 67의 아미노산 서열을 갖는 VH를 포함한다. 일부 실시 형태에서, NKp46에 결합하는 항체는 서열 번호 68의 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함한다. 일부 실시 형태에서, NKp46에 결합하는 항체는 서열 번호 67의 아미노산 서열을 갖는 VH, 및 서열 번호 68의 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, NKp46에 결합하는 항체는 (i) 서열 번호 69, 70, 및 71의 아미노산 서열을 각각 갖는 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 VH, 및 (ii) 서열 번호 72, 73, 및 74의 아미노산 서열을 각각 갖는 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함한다. 일부 실시 형태에서, NKp46에 결합하는 항체는 (i) 서열 번호 75, 76, 및 77의 아미노산 서열을 각각 갖는 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 VH, 및 (ii) 서열 번호 78, 79, 및 80의 아미노산 서열을 각각 갖는 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함한다. 일부 실시 형태에서, NKp46에 결합하는 항체는 (i) 서열 번호 81, 82, 및 83의 아미노산 서열을 각각 갖는 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 VH, 및 (ii) 서열 번호 84, 85, 및 86의 아미노산 서열을 각각 갖는 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함한다. 일부 실시 형태에서, NKp46에 결합하는 항체는 (i) 서열 번호 87, 88, 및 89의 아미노산 서열을 각각 갖는 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 VH, 및 (ii) 서열 번호 90, 91, 및 92의 아미노산 서열을 각각 갖는 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함한다. 일부 실시 형태에서, NKp46에 결합하는 항체는 (i) 서열 번호 93, 94, 및 95의 아미노산 서열을 각각 갖는 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 VH, 및 (ii) 서열 번호 96, 97, 및 98의 아미노산 서열을 각각 갖는 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 서열 번호 67 및/또는 서열 번호 68의 하나 이상의 프레임워크 영역(들)을 추가로 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 항체는 인간화 항체이다. 본 명세서에 기재된 프레임워크 영역은 CDR 넘버링 체계의 경계에 기초하여 결정된다. 다시 말해서, 예를 들어, 카바트, IMGT, 또는 초티아에 의해 CDR이 결정된다면, 프레임워크 영역은, N-말단으로부터 C-말단으로, FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4의 형식으로 가변 영역 내의 CDR을 둘러싸는 아미노산 잔기이다. 예를 들어, FR1은, 예를 들어, 카바트 넘버링 체계, IMGT 넘버링 체계, 또는 초티아 넘버링 체계에 의해 정의되는 바와 같이 CDR1 아미노산 잔기에 대해 N-말단인 아미노산 잔기로서 정의되고, FR2는, 예를 들어, 카바트 넘버링 체계, IMGT 넘버링 체계, 또는 초티아 넘버링 체계에 의해 정의되는 바와 같이 CDR1 및 CDR2 아미노산 잔기 사이의 아미노산 잔기로서 정의되고, FR3은, 예를 들어, 카바트 넘버링 체계, IMGT 넘버링 체계, 또는 초티아 넘버링 체계에 의해 정의되는 바와 같이 CDR2 및 CDR3 아미노산 잔기 사이의 아미노산 잔기로서 정의되고, FR4는, 예를 들어, 카바트 넘버링 체계, IMGT 넘버링 체계, 또는 초티아 넘버링 체계에 의해 정의되는 바와 같이 CDR3 아미노산 잔기에 대해 C-말단인 아미노산 잔기로서 정의된다.
소정 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 전술된 항체들 중 어느 하나에 대해 소정의 퍼센트 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 서열 번호 67의 아미노산 서열과 적어도 약 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성 중 어느 하나를 갖는 VH를 포함하는 항-NKp46 항체가 제공된다. 일부 실시 형태에서, 서열 번호 68의 아미노산 서열과 적어도 약 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성 중 어느 하나를 갖는 VL을 포함하는 항-NKp46 항체가 제공된다. 일부 실시 형태에서, 서열 번호 67의 아미노산 서열과 적어도 약 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성 중 어느 하나를 갖는 VH, 및 서열 번호 68의 아미노산 서열과 적어도 약 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성 중 어느 하나를 갖는 VL을 포함하는 항-NKp46 항체가 제공된다.
일부 실시 형태에서, 적어도 약 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 동일성 중 어느 하나를 갖는 VH 또는 VL 서열은 참조 서열과 대비하여 치환(예를 들어, 보존적 치환), 삽입, 또는 결실을 함유하지만, 그 서열을 포함하는 항체는 NKp46에 결합하는 능력을 유지한다. 일부 실시 형태에서, 총 1 내지 10개의 아미노산이 치환, 삽입 및/또는 결실되었다. 일부 실시 형태에서, 치환, 삽입, 또는 결실은 CDR 외부의 영역에서(즉, FR에서) 발생한다.
다른 태양에서, NKp46에 결합하기 위하여 본 명세서에 기재된 NKp46 항체들 중 임의의 것과 경쟁하는 항체가 본 명세서에 제공된다. 다른 태양에서, 본 명세서에 기재된 NKp46 항체들 중 임의의 것과 동일한 에피토프에 결합하는 항체가 본 명세서에 제공된다. 다른 태양에서, 본 명세서에 기재된 NKp46 항체에 의해 결합되는 NKp46 상의 에피토프와 중첩되는 NKp46 상의 에피토프에 결합하는 NKp46 항체가 제공된다.
일 태양에서, NKp46에 결합하기 위하여 NKp46 참조 항체와 경쟁하는 항체가 제공된다. 다른 태양에서, NKp46 참조 항체와 동일한 NKp46 에피토프에 결합하는 NKp46 항체가 제공된다. 다른 태양에서, NKp46 참조 항체에 의해 결합되는 NKp46 상의 에피토프와 중첩되는 NKp46 상의 에피토프에 결합하는 NKp46 항체가 제공된다.
일 실시 형태에서, NKp46 참조 항체는 (i) 서열 번호 67의 아미노산 서열을 갖는 VH의, VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3의 아미노산 서열을 각각 갖는 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 VH; 및 (ii) 서열 번호 68의 아미노산 서열을 갖는 VL의, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3의 아미노산 서열을 각각 갖는 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함한다.
본 명세서에 제공된 항체는 조류 및 포유동물을 포함한 임의의 동물 기원(예를 들어, 인간, 원숭이, 뮤린, 당나귀, 양, 토끼, 염소, 기니피그, 낙타, 말, 또는 닭)의 것으로부터 유래될 수 있다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 항체는 인간 또는 인간화 단일클론 항체이다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, "인간" 항체는 인간 면역글로불린의 아미노산 서열을 갖는 항체를 포함하고, 인간 면역글로불린 라이브러리로부터 단리되거나 인간 유전자로부터 항체를 발현하는 마우스로부터 단리된 항체를 포함한다.
소정 실시 형태에서, 항체는 완전 마우스 항체이다. 소정 실시 형태에서, 항체는 마우스-인간 키메라 항체이다. 소정 실시 형태에서, 항체는 인간화 항체이다. 소정 실시 형태에서, 항체는 완전 인간 항체이다. 다른 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 항체는 인간화 항체(예를 들어, 인간 불변 영역 및 인간 프레임워크 영역을 포함함)이다. 본 명세서에 제공된 항체는 이중특이성이거나, 삼중특이성이거나, 또는 더 고차의 다중특이성의 것일 수 있다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 1000 nM 미만의 KD로 NKG2d에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 100 nM 미만의 KD로 NKG2d에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 50 nM 미만의 KD로 NKG2d에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 40 nM 미만의 KD로 NKG2d에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 30 nM 미만의 KD로 NKG2d에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 20 nM 미만의 KD로 NKG2d에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 10 nM 미만의 KD로 NKG2d에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 9 nM 미만의 KD로 NKG2d에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 8 nM 미만의 KD로 NKG2d에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 7 nM 미만의 KD로 NKG2d에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 6 nM 미만의 KD로 NKG2d에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 5 nM 미만의 KD로 NKG2d에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 4 nM 미만의 KD로 NKG2d에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 3 nM 미만의 KD로 NKG2d에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 2 nM 미만의 KD로 NKG2d에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 1 nM 미만의 KD로 NKG2d에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 0.1 nM 미만의 KD로 NKG2d에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 0.01 nM 미만의 KD로 NKG2d에 결합한다. KD 또는 KD 값은 또한 당업계에 알려진 임의의 방법에 의해, 예를 들어 생물층 간섭측정법(BLI) 또는 표면 플라즈몬 공명(SPR) 검정을 사용함으로써 측정될 수 있으며, 이들은, 예를 들어 Octet®Red96 시스템을 사용하여 Octet®에 의해, 또는, 예를 들어 Biacore®TM-2000 또는 Biacore®TM-3000을 사용하여 Biacore®에 의해 측정될 수 있다. "온-속도" 또는 "결합의 속도" 또는 "결합 속도" 또는 "kon"이 또한, 예를 들어 Octet®Red96, Biacore®TM-2000, 또는 Biacore®TM-3000 시스템을 사용하는 전술된 것과 동일한 생물층 간섭측정법(BLI) 또는 표면 플라즈몬 공명(SPR) 기법으로 결정될 수 있다. 구체적인 실시 형태에서, KD는 Biacore® 검정에 의해 결정된다. 일부 실시 형태에서, NKG2d는 인간 NKG2d이다. 일부 실시 형태에서, NKG2d는 사이노몰거스 마카크(cynomolgus macaque) NKG2d이다. 일부 실시 형태에서, NKG2d는 래트 NKG2d이다. 다른 실시 형태에서, NKG2d는 마우스 NKG2d이다.
다른 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 1000 nM 미만의 KD로 NKp46에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 100 nM 미만의 KD로 NKp46에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 50 nM 미만의 KD로 NKp46에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 40 nM 미만의 KD로 NKp46에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 30 nM 미만의 KD로 NKp46에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 20 nM 미만의 KD로 NKp46에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 10 nM 미만의 KD로 NKp46에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 9 nM 미만의 KD로 NKp46에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 8 nM 미만의 KD로 NKp46에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 7 nM 미만의 KD로 NKp46에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 6 nM 미만의 KD로 NKp46에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 5 nM 미만의 KD로 NKp46에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 4 nM 미만의 KD로 NKp46에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 3 nM 미만의 KD로 NKp46에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 2 nM 미만의 KD로 NKp46에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 1 nM 미만의 KD로 NKp46에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 0.1 nM 미만의 KD로 NKp46에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 0.01 nM 미만의 KD로 NKp46에 결합한다. KD 또는 KD 값은 또한 당업계에 알려진 임의의 방법에 의해, 예를 들어 생물층 간섭측정법(BLI) 또는 표면 플라즈몬 공명(SPR) 검정을 사용함으로써 측정될 수 있으며, 이들은, 예를 들어 Octet®Red96 시스템을 사용하여 Octet®에 의해, 또는, 예를 들어 Biacore®TM-2000 또는 Biacore®TM-3000을 사용하여 Biacore®에 의해 측정될 수 있다. "온-속도" 또는 "결합의 속도" 또는 "결합 속도" 또는 "kon"이 또한, 예를 들어 Octet®Red96, Biacore®TM-2000, 또는 Biacore®TM-3000 시스템을 사용하는 전술된 것과 동일한 생물층 간섭측정법(BLI) 또는 표면 플라즈몬 공명(SPR) 기법으로 결정될 수 있다. 구체적인 실시 형태에서, KD는 Biacore® 검정에 의해 결정된다. 일부 실시 형태에서, NKp46은 인간 NKp46이다. 일부 실시 형태에서, NKp46은 사이노몰거스 마카크 NKp46이다. 일부 실시 형태에서, NKp46은 래트 NKp46이다. 다른 실시 형태에서, NKp46은 마우스 NKp46이다.
일부 실시 형태에서, NKG2d에 특이적으로 결합하고, NK 세포 활성을 조절할 수 있는 항체가 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, NKG2d에 특이적으로 결합하고, NKG2d-발현 면역 이펙터 세포 활성을 조절할 수 있는 항체가 본 명세서에 제공된다.
일부 실시 형태에서, NKp46에 특이적으로 결합하고, NK 세포 활성을 조절할 수 있는 항체가 본 명세서에 제공된다.
일부 실시 형태에서, NKp46에 특이적으로 결합하고, NKp46-발현 면역 이펙터 세포 활성을 조절할 수 있는 항체가 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, NKp46-발현 면역 이펙터 세포는 T 세포이다. 일부 실시 형태에서, T 세포는 감마 델타 T 세포이다. 일부 실시 형태에서, T 세포는 선천성 림프계 세포의 점막 집단이다.
일부 실시 형태에서, NKp46에 특이적으로 결합하고, T 세포 활성을 조절할 수 있는 항체가 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, T 세포는 감마 델타 T 세포이다. 일부 실시 형태에서, T 세포는 선천성 림프계 세포의 점막 집단이다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 항체는 NK 세포를 활성화할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 항체는 적어도 약 10%만큼 NK 세포 활성을 활성화한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 항체는 적어도 약 20%만큼 NK 세포 활성을 활성화한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 항체는 적어도 약 30%만큼 NK 세포 활성을 활성화한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 항체는 적어도 약 40%만큼 NK 세포 활성을 활성화한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 항체는 적어도 약 50%만큼 NK 세포 활성을 활성화한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 항체는 적어도 약 60%만큼 NK 세포 활성을 활성화한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 항체는 적어도 약 70%만큼 NK 세포 활성을 활성화한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 항체는 적어도 약 80%만큼 NK 세포 활성을 활성화한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 항체는 적어도 약 90%만큼 NK 세포 활성을 활성화한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 항체는 적어도 약 95%만큼 NK 세포 활성을 활성화한다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 항체는 적어도 약 15% 내지 약 65%만큼 NK 세포 활성을 활성화한다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 항체는 적어도 약 20% 내지 약 65%만큼 NK 세포 활성을 활성화한다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 항체는 적어도 약 30% 내지 약 65%만큼 NK 세포 활성을 활성화한다. 구체적인 실시 형태에서, NK 세포는 인간 NK 세포이다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 항체는 NK 세포에 의한 IFNg 생성을 촉진시킬 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 항체는 적어도 10%만큼 NK 세포에 의한 IFNg 생성을 촉진시킨다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 항체는 적어도 20%만큼 NK 세포에 의한 IFNg 생성을 촉진시킨다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 항체는 적어도 30%만큼 NK 세포에 의한 IFNg 생성을 촉진시킨다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 항체는 적어도 40%만큼 NK 세포에 의한 IFNg 생성을 촉진시킨다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 항체는 적어도 50%만큼 NK 세포에 의한 IFNg 생성을 촉진시킨다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 항체는 적어도 60%만큼 NK 세포에 의한 IFNg 생성을 촉진시킨다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 항체는 적어도 70%만큼 NK 세포에 의한 IFNg 생성을 촉진시킨다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 항체는 적어도 80%만큼 NK 세포에 의한 IFNg 생성을 촉진시킨다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 항체는 적어도 90%만큼 NK 세포에 의한 IFNg 생성을 촉진시킨다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 항체는 적어도 95%만큼 NK 세포에 의한 IFNg 생성을 촉진시킨다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 항체는 적어도 약 15% 내지 약 65%만큼 NK 세포에 의한 IFNg 생성을 촉진시킨다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 항체는 적어도 약 20% 내지 약 65%만큼 NK 세포에 의한 IFNg 생성을 촉진시킨다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 항체는 적어도 약 30% 내지 약 65%만큼 NK 세포에 의한 IFNg 생성을 촉진시킨다. 구체적인 실시 형태에서, NK 세포는 인간 NK 세포이다.
다중특이성 분자
본 명세서에 제공된 다중특이성 분자는 NK 세포 상에 존재하는 항원에 결합할 수 있는 결합 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항원은 NKG2d이다. 일부 실시 형태에서, 항원은 NKp46이다. 일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인은 전술된 바와 같거나 또는 전술된 항체로부터 유래된다.
전술된 도메인에 추가하여, 본 명세서에 제공된 다중특이성 분자는 제2 항원에 결합할 수 있는 추가의 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제2 결합 도메인은 종양 세포 상에 발현되는 항원에 결합할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 제2 결합 도메인은 종양-특이적 항원(TSA) 또는 종양-관련 항원(TAA)에 결합할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 제2 결합 도메인은 BCMA에 결합할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 제2 결합 도메인은 GPRC5d에 결합할 수 있다.
종양 항원은 면역 반응, 특히 T-세포 매개 면역 반응을 유도할 수 있는 종양 세포에 의해 생성되는 단백질이다. 예시적인 종양 항원은 신경교종-관련 항원, 암배아 항원(CEA), β-인간 융모성 고나도트로핀, 알파페토프로테인(AFP), 렉틴-반응성 AFP, 티로글로불린, RAGE-1, MN-CAIX, 인간 텔로머라제 역전사효소, RU1, RU2 (AS), 위장 카르복실에스테라제, mut hsp70-2, M-CSF, 프로테아제, 전립선-특이적 항원(PSA), PAP, NY-ESO-1, LAGE-la, p53, 프로스테인, PSMA, HER2/neu, 서비빈 및 텔로머라제, 전립선-암종 종양 항원-1(PCTA-1), MAGE, ELF2M, 호중구 엘라스타제, 에프린B2, 인슐린 성장 인자(IGF)-I, IGF-II, IGF-I 수용체, 및 메소텔린을 포함하지만 이로 한정되지 않는다.
일부 실시 형태에서, 종양 항원은 악성 종양과 관련된 하나 이상의 항원성 암 에피토프를 포함한다. 악성 종양은 면역 공격을 위한 표적 항원으로서 작용할 수 있는 다수의 단백질을 발현한다. 이들 분자는 흑색종의 MART-1, 티로시나제 및 gp100과 같은 조직-특이적 항원 및 전립선 암의 전립선 산 포스파타제(PAP) 및 전립선-특이적 항원(PSA)을 포함하지만 이로 한정되지 않는다. 다른 표적 분자는 발암유전자 HER2/Neu/ErbB-2와 같은 형질전환-관련 분자의 군에 속한다. 표적 항원의 또 다른 군은 종양-태아 항원, 예컨대 암배아 항원(CEA)이다.
일부 실시 형태에서, 종양 항원은 종양-특이적 항원(TSA) 또는 종양-관련 항원(TAA)이다. TSA는 종양 세포에 고유하고, 신체의 다른 세포 상에서 발생하지 않는다. TAA 관련 항원은 종양 세포에 고유하지 않으며, 대신 항원에 대한 면역학적 관용의 상태를 유도하지 못하는 조건 하에서 정상 세포 상에서 발현된다. 종양 상에의 항원의 발현은 면역 시스템이 항원에 반응할 수 있게 하는 조건 하에서 발생할 수 있다. TAA는 면역 시스템이 미성숙하고 반응할 수 없을 때에는 태아 발생 동안 정상 세포에서 발현되는 항원일 수 있거나, 이들은 정상 세포에서 훨씬 더 낮은 수준으로 존재하지만, 종양 세포에서는 훨씬 더 높은 수준으로 발현되는 항원일 수 있다.
TSA 또는 TAA 항원의 비제한적인 예에는 하기가 포함된다: 분화 항원, 예컨대 MART-1/MelanA(MART-I), gp 100(Pmel 17), 티로시나제, TRP-1, TRP-2 및 종양-특이적 다계열 항원 예컨대 MAGE-1, MAGE-3, BAGE, GAGE-1, GAGE-2, pl5; 과발현된 배아 항원, 예컨대 CEA; 과발현된 발암유전자 및 돌연변이된 종양-억제 유전자, 예컨대 p53, Ras, HER2/neu; 염색체 전위로부터 생성된 고유한 종양 항원; 예컨대, BCR-ABL, E2A-PRL, H4-RET, IGH-IGK, MYL-RAR; 및 바이러스 항원, 예컨대 엡스타인-바르(Epstein Barr) 바이러스 항원 EBVA 및 인간 유두종 바이러스(HPV) 항원 E6 및 E7.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 다중특이성 분자는 다중특이성 항체이다. 본 명세서에 제공된 항체는 합성 항체, 단일클론 항체, 재조합적으로 생성된 항체, 인간 항체, 인간화 항체, 키메라 항체 등을 포함하지만 이로 한정되지 않는다.
특히, 본 명세서에 제공된 항체는 면역글로불린 분자, 및 면역글로불린 분자의 면역학적으로 활성인 부분, 즉, 항원에 면역특이적으로 결합하는 항원-결합 부위를 함유하는 분자를 포함한다. 본 명세서에 제공된 면역글로불린 분자는 임의의 유형(예를 들어, IgG, IgE, IgM, IgD, IgA 및 IgY), 부류(예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2) 또는 하위부류의 면역글로불린 분자일 수 있다. 일부 실시 형태에서, 항체는 IgG 항체이다. 일부 실시 형태에서, IgG 항체는 IgG1 항체이다. 일부 실시 형태에서, IgG 항체는 IgG2, IgG3, 또는 IgG4 항체이다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 다양한 다중특이성 분자는 항체의 변이체 및/또는 유도체를 포함하며, 이에는 에피토프에 특이적으로 결합하는 능력을 유지하는 항체 단편이 포함된다. 본 명세서에 제공된 다양한 다중특이성 분자의 다른 실시 형태에서, 제1 결합 도메인 및/또는 제2 결합 도메인은 항체의 변이체 및/또는 유도체이며, 이에는 에피토프에 특이적으로 결합하는 능력을 유지하는 항체 단편이 포함된다. 예시적인 단편은 하기를 포함한다: Fab 단편(항원-결합 도메인을 함유하고, 이황화물 결합에 의해 가교된 중쇄의 일부와 경쇄를 포함하는 항체 단편); Fab'(Fab를 포함하는 단일 항-결합 도메인 및 힌지 영역을 통한 중쇄의 추가 부분을 함유하는 항체 단편); F(ab')2(중쇄의 힌지 영역 내의 사슬간 이황화물 결합에 의해 연결된 2개의 Fab' 분자; Fab' 분자들은 동일하거나 상이한 에피토프를 향해 유도될 수 있음); 이중특이성 Fab(2개의 항원-결합 도메인을 갖는 Fab 분자; 이들 각각은 상이한 에피토프를 향해 유도될 수 있음); scFv로도 알려진, 가변 영역을 포함하는 단일쇄 Fab 사슬(10 내지 25개의 아미노산의 사슬에 의해 함께 연결된 항체의 단일 경쇄와 중쇄의 가변, 항원-결합 결정 영역); 이황화물-연결된 Fv, 또는 dsFv(이황화물 결합에 의해 함께 연결된 항체의 단일 경쇄와 중쇄의 가변, 항원-결합 결정 영역); 낙타화 VH(VH 계면에서의 일부 아미노산이 자연 발생 낙타 항체의 중쇄에서 발견되는 것들인 항체의 단일 중쇄의 가변, 항원-결합 결정 영역); 이중특이성 scFv(2개의 항원-결합 도메인을 갖는 scFv 또는 dsFv 분자; 이들 각각은 상이한 에피토프를 향해 유도될 수 있음); 다이아바디(제1 scFv의 VH 도메인이 제2 scFv의 VL 도메인과 조립될 때 형성되고, 제1 scFv의 VL 도메인이 제2 scFv의 VH 도메인과 조립될 때 형성되는 이량체화된 scFv; 다이아바디의 2개의 항원-결합 영역은 동일하거나 상이한 에피토프를 향해 유도될 수 있음); 트라이아바디(삼량체화된 scFv로서, 이는 다이아바디와 유사한 방식으로 형성되지만, 여기서는 3개의 항원-결합 도메인이 단일 복합체로 생성됨; 3개의 항원-결합 도메인은 동일하거나 상이한 에피토프를 향해 유도될 수 있음); 및 테트라바디(사량체화된 scFv로서, 이는 다이아바디와 유사한 방식으로 형성되지만, 여기서는 4개의 항원-결합 도메인이 단일 복합체로 생성됨; 4개의 항원-결합 도메인은 동일하거나 상이한 에피토프를 향해 유도될 수 있음). 항체의 유도체는 또한 항체 조합 부위의 하나 이상의 CDR 서열을 포함한다. CDR 서열들은 2개 이상의 CDR 서열이 존재할 때 스캐폴드 상에서 함께 연결될 수 있다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 항체는 단일쇄 Fv("scFv")를 포함한다. scFv는 항체의 VH 및 VL 도메인을 포함하는 항체 단편이며, 여기서 이들 도메인은 단일 폴리펩티드 사슬 내에 존재한다. 일반적으로, scFv 폴리펩티드는 VH 도메인과 VL 도메인 사이의 폴리펩티드 링커를 추가로 포함하며, 이러한 폴리펩티드 링커는 scFv가 항원 결합을 위한 원하는 구조를 형성할 수 있게 한다. scFv의 검토에 관해서는 문헌[Pluckthun in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds. Springer-Verlag, New York, pp. 269-315 (1994)]을 참조한다.
구체적인 실시 형태에서, NKG2d에 결합하는 항체는 VH 영역 및 VL 영역을 포함한다. 일부 실시 형태에서, NKG2d 항체는 단일쇄 항체이다. 일부 실시 형태에서, NKG2d 항체는 단일 도메인 항체이다. 일부 실시 형태에서, NKG2d 항체는 나노바디이다. 소정 실시 형태에서, NKG2d 항체는 VHH 항체이다. 소정 실시 형태에서, NKG2d 항체는 라마 항체이다. 일부 실시 형태에서, NKG2d 항체는 단일쇄 항체가 아니다. 일부 실시 형태에서, NKG2d 항체는 단일 도메인 항체가 아니다. 일부 실시 형태에서, NKG2d 항체는 나노바디가 아니다. 소정 실시 형태에서, NKG2d 항체는 VHH 항체가 아니다. 소정 실시 형태에서, NKG2d 항체는 라마 항체가 아니다. 일부 실시 형태에서, NKG2d 항체는 다중특이성 항체이다. 다른 실시 형태에서, NKG2d 항체는 이중특이성 항체이다. 소정 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 본 명세서에 제공된 NKG2d 항체의 항원-결합 단편을 포함한다. 다른 실시 형태에서, 이중특이성 항체는 본 명세서에 제공된 NKG2d 항체의 항원-결합 단편을 포함한다.
구체적인 실시 형태에서, NKG2d에 결합하는 다중특이성 항체가 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 이중특이성 항체이다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 삼중특이성 항체이다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 사중특이성 항체이다. 일 실시 형태에서, 다중특이성 NKG2d 항체는 (a) NKG2d에 결합하는 제1 결합 도메인, 및 (b) 제2 표적에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함한다. 일 실시 형태에서, 다중특이성 NKG2d 항체는 (a) NKG2d에 결합하는 제1 결합 도메인, 및 (b) 제2 표적에 결합하는 제2 결합 도메인, 및 (c) 제3 표적에 결합하는 제3 결합 도메인을 포함한다. 일 실시 형태에서, 다중특이성 NKG2d 항체는 (a) NKG2d에 결합하는 제1 결합 도메인, 및 (b) 제2 표적에 결합하는 제2 결합 도메인, (c) 제3 표적에 결합하는 제3 결합 도메인, 및 (d) 제4 표적에 결합하는 제4 결합 도메인을 포함한다.
소정 태양에서, 이중특이성 항체가 본 명세서에 제공되며, 상기 이중특이성 항체는 (a) NKG2d에 결합하는 제1 결합 도메인, 및 (b) NKG2d가 아닌 제2 표적에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함한다. 다른 태양에서, 이중특이성 항체가 본 명세서에 제공되며, 상기 이중특이성 항체는 (a) NKG2d에 결합하는 제1 결합 도메인, 및 (b) 종양 세포 상에 발현되는 항원에 결합하는 제2 표적에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제2 결합 도메인은 BCMA에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 제2 결합 도메인은 GPRC5d에 결합한다.
소정 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 항체들 중 어느 하나의 VH 영역, VL 영역, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및/또는 VL CDR3을 갖는 NKG2d에 결합하는 결합 도메인을 포함하는 항-NKG2d 이중특이성 항체가 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 항체들 중 어느 하나의 VH 영역을 갖는 NKG2d에 결합하는 결합 도메인을 포함하는 항-NKG2d 이중특이성 항체가 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 항체들 중 어느 하나의 VL 영역을 갖는 NKG2d에 결합하는 결합 도메인을 포함하는 항-NKG2d 이중특이성 항체가 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 항체들 중 어느 하나의 VH 영역, 및 본 명세서에 기재된 항체들 중 어느 하나의 VL 영역을 갖는 NKG2d에 결합하는 결합 도메인을 포함하는 항-NKG2d 이중특이성 항체가 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, 기재된 항체들 중 어느 하나의 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 갖는 NKG2d에 결합하는 결합 도메인을 포함하는 항-NKG2d 이중특이성 항체가 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 항체들 중 어느 하나의 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 갖는 NKG2d에 결합하는 결합 도메인을 포함하는 항-NKG2d 이중특이성 항체가 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 항체들 중 어느 하나의 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3; 및 본 명세서에 기재된 항체들 중 어느 하나의 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 갖는 NKG2d에 결합하는 결합 도메인을 포함하는 항-NKG2d 이중특이성 항체가 본 명세서에 제공된다.
소정 실시 형태에서, 항-NKG2d 항체는 이중특이성 항체이다. 일부 실시 형태에서, 항-NKG2d 이중특이성 항체는 본 명세서에 제공된 항-BCMA 항체의 VH 영역, VL 영역, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및/또는 VL CDR3을 갖는 BCMA에 결합하는 제2 결합 도메인을 추가로 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항-NKG2d 이중특이성 항체는 본 명세서에 제공된 항-BCMA 항체의 VH 영역을 갖는 BCMA에 결합하는 제2 결합 도메인을 추가로 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항-NKG2d 이중특이성 항체는 본 명세서에 제공된 항-BCMA 항체의 VL 영역을 갖는 BCMA에 결합하는 제2 결합 도메인을 추가로 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항-NKG2d 이중특이성 항체는 본 명세서에 제공된 항-BCMA 항체의 VH 영역, 및 본 명세서에 제공된 항-BCMA 항체의 VL 영역을 갖는 BCMA에 결합하는 제2 결합 도메인을 추가로 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항-NKG2d 이중특이성 항체는 본 명세서에 제공된 항-BCMA 항체의 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 갖는 BCMA에 결합하는 제2 결합 도메인을 추가로 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항-NKG2d 이중특이성 항체는 본 명세서에 제공된 항-BCMA 항체의 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 갖는 BCMA에 결합하는 제2 결합 도메인을 추가로 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항-NKG2d 이중특이성 항체는 본 명세서에 제공된 항-BCMA 항체의 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3, 및 본 명세서에 제공된 항-BCMA 항체의 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 갖는 BCMA에 결합하는 제2 결합 도메인을 추가로 포함한다.
소정 실시 형태에서, 항-NKG2d 항체는 이중특이성 항체이다. 일부 실시 형태에서, 항-NKG2d 이중특이성 항체는 본 명세서에 제공된 항-GPRC5d 항체의 VH 영역, VL 영역, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및/또는 VL CDR3을 갖는 GPRC5d에 결합하는 제2 결합 도메인을 추가로 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항-NKG2d 이중특이성 항체는 본 명세서에 제공된 항-GPRC5d 항체의 VH 영역을 갖는 GPRC5d에 결합하는 제2 결합 도메인을 추가로 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항-NKG2d 이중특이성 항체는 본 명세서에 제공된 항-GPRC5d 항체의 VL 영역을 갖는 GPRC5d에 결합하는 제2 결합 도메인을 추가로 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항-NKG2d 이중특이성 항체는 본 명세서에 제공된 항-GPRC5d 항체의 VH 영역, 및 본 명세서에 제공된 항-GPRC5d 항체의 VL 영역을 갖는 GPRC5d에 결합하는 제2 결합 도메인을 추가로 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항-NKG2d 이중특이성 항체는 본 명세서에 제공된 항-GPRC5d 항체의 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 갖는 GPRC5d에 결합하는 제2 결합 도메인을 추가로 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항-NKG2d 이중특이성 항체는 본 명세서에 제공된 항-GPRC5d 항체의 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 갖는 GPRC5d에 결합하는 제2 결합 도메인을 추가로 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항-NKG2d 이중특이성 항체는 본 명세서에 제공된 항-GPRC5d 항체의 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3, 및 본 명세서에 제공된 항-GPRC5d 항체의 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 갖는 GPRC5d에 결합하는 제2 결합 도메인을 추가로 포함한다.
일부 실시 형태에서, NKG2d에 결합하는 제1 결합 도메인은 전술된 바와 같거나 또는 전술된 항체로부터 유래된다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 구체적인 실시 형태에서, NKG2d에 결합하는 제1 결합 도메인은 (i) 서열 번호 4, 5, 및 6의 아미노산 서열을 각각 갖는 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 VH, 및 (ii) 서열 번호 7, 8, 및 9의 아미노산 서열을 각각 갖는 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, NKG2d에 결합하는 제1 결합 도메인은 (i) 서열 번호 10, 11, 및 12의 아미노산 서열을 각각 갖는 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 VH, 및 (ii) 서열 번호 13, 14, 및 15의 아미노산 서열을 각각 갖는 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, NKG2d에 결합하는 제1 결합 도메인은 (i) 서열 번호 16, 17, 및 18의 아미노산 서열을 각각 갖는 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 VH, 및 (ii) 서열 번호 19, 20, 및 21의 아미노산 서열을 각각 갖는 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, NKG2d에 결합하는 제1 결합 도메인은 (i) 서열 번호 22, 23, 및 24의 아미노산 서열을 각각 갖는 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 VH, 및 (ii) 서열 번호 25, 26, 및 27의 아미노산 서열을 각각 갖는 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, NKG2d에 결합하는 제1 결합 도메인은 (i) 서열 번호 28, 29, 및 30의 아미노산 서열을 각각 갖는 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 VH, 및 (ii) 서열 번호 31, 32, 및 33의 아미노산 서열을 각각 갖는 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, NKG2d에 결합하는 제1 결합 도메인은, 서열 번호 2의, VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3의 아미노산 서열을 각각 갖는 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 VH를 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, NKG2d에 결합하는 제1 결합 도메인은, 서열 번호 3의, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3의 아미노산 서열을 각각 갖는 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, NKG2d에 결합하는 제1 결합 도메인은 (i) 서열 번호 2의, VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3의 아미노산 서열을 각각 갖는 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 VH, 및 (ii) 서열 번호 3의, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3의 아미노산 서열을 각각 갖는 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, NKG2d에 결합하는 제1 결합 도메인은 서열 번호 2의 아미노산 서열을 갖는 VH를 포함한다. 일부 실시 형태에서, NKG2d에 결합하는 제1 결합 도메인은 서열 번호 3의 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, NKG2d에 결합하는 제1 결합 도메인은 서열 번호 2의 아미노산 서열을 갖는 VH, 및 서열 번호 3의 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, NKG2d에 결합하는 제1 결합 도메인은 서열 번호 2의 아미노산 서열과 적어도 95%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, NKG2d에 결합하는 제1 결합 도메인은 서열 번호 3의 아미노산 서열과 적어도 95%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, NKG2d에 결합하는 제1 결합 도메인은 서열 번호 2의 아미노산 서열과 적어도 95%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH, 및 서열 번호 3의 아미노산 서열과 적어도 95%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다.
본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, NKG2d에 결합하는 제1 결합 도메인은 (i) 서열 번호 36, 37, 및 38의 아미노산 서열을 각각 갖는 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 VH, 및 (ii) 서열 번호 39, 40, 및 41의 아미노산 서열을 각각 갖는 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, NKG2d에 결합하는 제1 결합 도메인은 (i) 서열 번호 42, 43, 및 44의 아미노산 서열을 각각 갖는 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 VH, 및 (ii) 서열 번호 45, 46, 및 47의 아미노산 서열을 각각 갖는 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, NKG2d에 결합하는 제1 결합 도메인은 (i) 서열 번호 48, 49, 및 50의 아미노산 서열을 각각 갖는 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 VH, 및 (ii) 서열 번호 51, 52, 및 53의 아미노산 서열을 각각 갖는 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, NKG2d에 결합하는 제1 결합 도메인은 (i) 서열 번호 54, 55, 및 56의 아미노산 서열을 각각 갖는 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 VH, 및 (ii) 서열 번호 57, 58, 및 59의 아미노산 서열을 각각 갖는 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, NKG2d에 결합하는 제1 결합 도메인은 (i) 서열 번호 60, 61, 및 62의 아미노산 서열을 각각 갖는 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 VH, 및 (ii) 서열 번호 63, 64, 및 65의 아미노산 서열을 각각 갖는 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, NKG2d에 결합하는 제1 결합 도메인은, 서열 번호 34의, VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3의 아미노산 서열을 각각 갖는 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 VH를 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, NKG2d에 결합하는 제1 결합 도메인은, 서열 번호 35의, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3의 아미노산 서열을 각각 갖는 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, NKG2d에 결합하는 제1 결합 도메인은 (i) 서열 번호 34의, VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3의 아미노산 서열을 각각 갖는 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 VH, 및 (ii) 서열 번호 35의, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3의 아미노산 서열을 각각 갖는 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, NKG2d에 결합하는 제1 결합 도메인은 서열 번호 34의 아미노산 서열을 갖는 VH를 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, NKG2d에 결합하는 제1 결합 도메인은 서열 번호 35의 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, NKG2d에 결합하는 제1 결합 도메인은 서열 번호 34의 아미노산 서열을 갖는 VH, 및 서열 번호 35의 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, NKG2d에 결합하는 제1 결합 도메인은 서열 번호 34의 아미노산 서열과 적어도 95%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, NKG2d에 결합하는 제1 결합 도메인은 서열 번호 35의 아미노산 서열과 적어도 95%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, NKG2d에 결합하는 제1 결합 도메인은 서열 번호 34의 아미노산 서열과 적어도 95%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH, 및 서열 번호 35의 아미노산 서열과 적어도 95%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, NKG2d에 결합하는 제1 결합 도메인의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3 아미노산 서열은 카바트 넘버링 체계에 따른다. 일부 실시 형태에서, NKG2d에 결합하는 제1 결합 도메인의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3 아미노산 서열은 초티아 넘버링 체계에 따른다. 일부 실시 형태에서, NKG2d에 결합하는 제1 결합 도메인의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3 아미노산 서열은 AbM 넘버링 체계에 따른다. 일부 실시 형태에서, NKG2d에 결합하는 제1 결합 도메인의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3 아미노산 서열은 Contact 넘버링 체계에 따른다. 일부 실시 형태에서, NKG2d에 결합하는 제1 결합 도메인의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3 아미노산 서열은 IMGT 넘버링 체계에 따른다.
본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d 항체의 일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인은 NKG2d 항원에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인은 NKG2d 에피토프에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인은 NKG2d에 특이적으로 결합한다. 일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3은 NKG2d의 항원에 대한 결합 부위를 형성한다. 일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3은 NKG2d의 에피토프에 대한 결합 부위를 형성한다. 일부 실시 형태에서, NKG2d는 NK 세포의 표면 상에 존재한다.
다른 태양에서, NKG2d에 결합하기 위하여 본 명세서에 기재된 NKG2d 항체들 중 임의의 것과 경쟁하는 다중특이성 항체가 본 명세서에 제공된다. 다른 태양에서, 본 명세서에 기재된 NKG2d 항체들 중 임의의 것과 동일한 에피토프에 결합하는 다중특이성 항체가 본 명세서에 제공된다. 다른 태양에서, 본 명세서에 기재된 NKG2d 항체에 의해 결합되는 NKG2d 상의 에피토프와 중첩되는 NKG2d 상의 에피토프에 결합하는 다중특이성 NKG2d 항체가 제공된다.
일 태양에서, NKG2d에 결합하기 위하여 NKG2d 참조 항체와 경쟁하는 다중특이성 항체가 제공된다. 다른 태양에서, NKG2d 참조 항체와 동일한 NKG2d 에피토프에 결합하는 다중특이성 NKG2d 항체가 제공된다. 다른 태양에서, NKG2d 참조 항체에 의해 결합되는 NKG2d 상의 에피토프와 중첩되는 NKG2d 상의 에피토프에 결합하는 다중특이성 NKG2d 항체가 제공된다.
일 실시 형태에서, NKG2d 참조 항체는 (i) 서열 번호 2의 아미노산 서열을 갖는 VH의, VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3의 아미노산 서열을 각각 갖는 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 VH; 및 (ii) 서열 번호 3의 아미노산 서열을 갖는 VL의, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3의 아미노산 서열을 각각 갖는 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함한다. 일 실시 형태에서, NKG2d 참조 항체는 (i) 서열 번호 34의 아미노산 서열을 갖는 VH의, VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3의 아미노산 서열을 각각 갖는 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 VH; 및 (ii) 서열 번호 35의 아미노산 서열을 갖는 VL의, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3의 아미노산 서열을 각각 갖는 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함한다.
본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d 항체의 일부 실시 형태에서, 제2 표적은 NKG2d 항원이 아니다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d 항체의 일부 실시 형태에서, 제3 표적은 NKG2d 항원이 아니다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d 항체의 일부 실시 형태에서, 제4 표적은 NKG2d 항원이 아니다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d 항체의 일부 실시 형태에서, 제2 표적은 NKG2d 항원이 아니고, 제3 표적은 NKG2d 항원이 아니다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d 항체의 일부 실시 형태에서, 제2 표적은 NKG2d 항원이 아니고, 제4 표적은 NKG2d 항원이 아니다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d 항체의 일부 실시 형태에서, 제3 표적은 NKG2d 항원이 아니고, 제4 표적은 NKG2d 항원이 아니다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d 항체의 일부 실시 형태에서, 제2 표적은 NKG2d 항원이 아니고, 제3 표적은 NKG2d 항원이 아니고, 제4 표적은 NKG2d 항원이 아니다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d 항체의 일부 실시 형태에서, 제2 표적은 NKG2d 에피토프가 아니다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d 항체의 일부 실시 형태에서, 제3 표적은 NKG2d 에피토프가 아니다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d 항체의 일부 실시 형태에서, 제4 표적은 NKG2d 에피토프가 아니다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d 항체의 일부 실시 형태에서, 제2 표적은 NKG2d 에피토프가 아니고, 제3 표적은 NKG2d 에피토프가 아니다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d 항체의 일부 실시 형태에서, 제2 표적은 NKG2d 에피토프가 아니고, 제4 표적은 NKG2d 에피토프가 아니다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d 항체의 일부 실시 형태에서, 제3 표적은 NKG2d 에피토프가 아니고, 제4 표적은 NKG2d 에피토프가 아니다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d 항체의 일부 실시 형태에서, 제2 표적은 NKG2d 에피토프가 아니고, 제3 표적은 NKG2d 에피토프가 아니고, 제4 표적은 NKG2d 에피토프가 아니다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d 항체의 일부 실시 형태에서, 제2 표적은 BCMA이다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d 항체의 일부 실시 형태에서, 제2 표적은 GPRC5d이다.
NK 세포의 표면 상에 존재하는 NKG2d 및 제2 표적 세포의 표면 상에 존재하는 제2 표적 항원에 대한 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 결합은, 예를 들어 제2 표적 세포의 살해를 가져올 수 있다. 다른 실시 형태에서, NK 세포의 표면 상에 존재하는 NKG2d 및 제2 표적 항원에 대한 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 결합은, 예를 들어 NK 세포의 활성화를 가져올 수 있다. 일부 실시 형태에서, 이중특이성 항체가 본 명세서에 제공되며, 상기 이중특이성 항체는 (a) NKG2d에 결합하는 제1 결합 도메인, 및 (b) 암 세포의 표면 상에 존재하는 암 항원에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 암 세포의 표면 상의 항원은 종양-특이적 항원이다. 일부 실시 형태에서, 암 세포의 표면 상의 항원은 종양-관련 항원이다. 일부 실시 형태에서, 암 세포의 표면 상의 항원은 신생항원이다. 소정 실시 형태에서, 이중특이성 항체의 제1 결합 도메인은 NKG2d에 특이적으로 결합한다. 일부 실시 형태에서, NKG2d는 NK 세포의 표면 상에 존재한다. 일부 실시 형태에서, 암 세포는 이중특이성 항체가 NK 세포의 표면 상의 NKG2d 및 암 세포의 표면 상의 항원에 결합할 때 살해된다.
다른 태양에서, 이중특이성 항체가 본 명세서에 제공되며, 상기 이중특이성 항체는 (a) NKG2d에 결합하는 제1 결합 도메인, 및 (b) BCMA에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함한다. 소정 실시 형태에서, 이중특이성 항체의 제1 결합 도메인은 NKG2d에 특이적으로 결합한다. 일부 실시 형태에서, NKG2d는 NK 세포의 표면 상에 존재한다. 일부 실시 형태에서, BCMA는 세포의 표면 상에 존재한다. 소정 실시 형태에서, NKG2d는 NK 세포의 표면 상에 존재하고, BCMA는 세포의 표면 상에 존재한다. 일부 실시 형태에서, 표면 상에 BCMA를 갖는 세포는 이중특이성 항체가 NK 세포의 표면 상의 NKG2d 및 세포의 표면 상의 BCMA에 결합할 때 살해된다. 일부 실시 형태에서, BCMA는 암 세포의 표면 상에 존재한다. 소정 실시 형태에서, NKG2d는 NK 세포의 표면 상에 존재하고, BCMA는 암 세포의 표면 상에 존재한다. 일부 실시 형태에서, 암 세포는 이중특이성 항체가 NK 세포의 표면 상의 NKG2d 및 암 세포의 표면 상의 BCMA에 결합할 때 살해된다. 소정 실시 형태에서, 제1 결합 도메인으로서 본 명세서에 제공된 임의의 NKG2d 항체를 포함하는 이중특이성 항체가 고려된다. 게다가, 소정 실시 형태에서, 제1 결합 도메인으로서 본 명세서에 제공된 임의의 NKG2d 항체 및 BCMA에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함하는 이중특이성 항체가 또한 고려된다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체는 이중특이성 항체이며, 상기 이중특이성 항체는 (a) NKG2d에 결합하는 제1 결합 도메인, 및 (b) BCMA에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함하며, 여기서 상기 BCMA에 결합하는 제2 결합 도메인은 (i) 서열 번호 101, 102, 및 103의 아미노산 서열을 각각 갖는 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 VH, 및 (ii) 서열 번호 104, 105, 및 106의 아미노산 서열을 각각 갖는 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, BCMA에 결합하는 제2 결합 도메인은 (i) 서열 번호 107, 108, 및 109의 아미노산 서열을 각각 갖는 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 VH, 및 (ii) 서열 번호 110, 111, 및 112의 아미노산 서열을 각각 갖는 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, BCMA에 결합하는 제2 결합 도메인은 (i) 서열 번호 113, 114, 및 115의 아미노산 서열을 각각 갖는 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 VH, 및 (ii) 서열 번호 116, 117, 및 118의 아미노산 서열을 각각 갖는 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, BCMA에 결합하는 제2 결합 도메인은 (i) 서열 번호 119, 120, 및 121의 아미노산 서열을 각각 갖는 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 VH, 및 (ii) 서열 번호 122, 123, 및 124의 아미노산 서열을 각각 갖는 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, BCMA에 결합하는 제2 결합 도메인은 (i) 서열 번호 125, 126, 및 127의 아미노산 서열을 각각 갖는 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 VH, 및 (ii) 서열 번호 128, 129, 및 130의 아미노산 서열을 각각 갖는 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, BCMA에 결합하는 제2 결합 도메인은, 서열 번호 99의, VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3의 아미노산 서열을 각각 갖는 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 VH를 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, BCMA에 결합하는 제2 결합 도메인은, 서열 번호 100의, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3의 아미노산 서열을 각각 갖는 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, BCMA에 결합하는 제2 결합 도메인은 (i) 서열 번호 99의, VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3의 아미노산 서열을 각각 갖는 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 VH, 및 (ii) 서열 번호 100의, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3의 아미노산 서열을 각각 갖는 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, BCMA에 결합하는 제2 결합 도메인은 서열 번호 99의 아미노산 서열을 갖는 VH를 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, BCMA에 결합하는 제2 결합 도메인은 서열 번호 100의 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, BCMA에 결합하는 제2 결합 도메인은 서열 번호 99의 아미노산 서열을 갖는 VH, 및 서열 번호 100의 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, BCMA에 결합하는 제2 결합 도메인은 서열 번호 99의 아미노산 서열과 적어도 95%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, BCMA에 결합하는 제2 결합 도메인은 서열 번호 100의 아미노산 서열과 적어도 95%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, BCMA에 결합하는 제2 결합 도메인은 서열 번호 99의 아미노산 서열과 적어도 95%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH, 및 서열 번호 100의 아미노산 서열과 적어도 95%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다.
다른 태양에서, 이중특이성 항체가 본 명세서에 제공되며, 상기 이중특이성 항체는 (a) NKG2d에 결합하는 제1 결합 도메인, 및 (b) GPRC5d에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함한다. 소정 실시 형태에서, 이중특이성 항체의 제1 결합 도메인은 NKG2d에 특이적으로 결합한다. 일부 실시 형태에서, NKG2d는 NK 세포의 표면 상에 존재한다. 일부 실시 형태에서, GPRC5d는 세포의 표면 상에 존재한다. 소정 실시 형태에서, NKG2d는 NK 세포의 표면 상에 존재하고, GPRC5d는 세포의 표면 상에 존재한다. 일부 실시 형태에서, 표면 상에 GPRC5d를 갖는 세포는 이중특이성 항체가 NK 세포의 표면 상의 NKG2d 및 세포의 표면 상의 GPRC5d에 결합할 때 살해된다. 일부 실시 형태에서, GPRC5d는 암 세포의 표면 상에 존재한다. 소정 실시 형태에서, NKG2d는 NK 세포의 표면 상에 존재하고, GPRC5d는 암 세포의 표면 상에 존재한다. 일부 실시 형태에서, 암 세포는 이중특이성 항체가 NK 세포의 표면 상의 NKG2d 및 암 세포의 표면 상의 GPRC5d에 결합할 때 살해된다. 소정 실시 형태에서, 제1 결합 도메인으로서 본 명세서에 제공된 임의의 NKG2d 항체를 포함하는 이중특이성 항체가 고려된다. 게다가, 소정 실시 형태에서, 제1 결합 도메인으로서 본 명세서에 제공된 임의의 NKG2d 항체 및 GPRC5d에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함하는 이중특이성 항체가 또한 고려된다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체는 이중특이성 항체이며, 상기 이중특이성 항체는 (a) NKG2d에 결합하는 제1 결합 도메인, 및 (b) GPRC5d에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함하며, 여기서 상기 GPRC5d에 결합하는 제2 결합 도메인은 (i) 서열 번호 133, 134, 및 135의 아미노산 서열을 각각 갖는 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 VH, 및 (ii) 서열 번호 136, 137, 및 138의 아미노산 서열을 각각 갖는 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, GPRC5d에 결합하는 제2 결합 도메인은 (i) 서열 번호 139, 140, 및 141의 아미노산 서열을 각각 갖는 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 VH, 및 (ii) 서열 번호 142, 143, 및 144의 아미노산 서열을 각각 갖는 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, GPRC5d에 결합하는 제2 결합 도메인은 (i) 서열 번호 145, 146, 및 147의 아미노산 서열을 각각 갖는 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 VH, 및 (ii) 서열 번호 148, 149, 및 150의 아미노산 서열을 각각 갖는 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, GPRC5d에 결합하는 제2 결합 도메인은 (i) 서열 번호 151, 152, 및 153의 아미노산 서열을 각각 갖는 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 VH, 및 (ii) 서열 번호 154, 155, 및 156의 아미노산 서열을 각각 갖는 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, GPRC5d에 결합하는 제2 결합 도메인은 (i) 서열 번호 157, 158, 및 159의 아미노산 서열을 각각 갖는 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 VH, 및 (ii) 서열 번호 160, 161, 및 162의 아미노산 서열을 각각 갖는 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, GPRC5d에 결합하는 제2 결합 도메인은, 서열 번호 131의, VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3의 아미노산 서열을 각각 갖는 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 VH를 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, GPRC5d에 결합하는 제2 결합 도메인은, 서열 번호 132의, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3의 아미노산 서열을 각각 갖는 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, GPRC5d에 결합하는 제2 결합 도메인은 (i) 서열 번호 131의, VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3의 아미노산 서열을 각각 갖는 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 VH, 및 (ii) 서열 번호 132의, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3의 아미노산 서열을 각각 갖는 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, GPRC5d에 결합하는 제2 결합 도메인은 서열 번호 131의 아미노산 서열을 갖는 VH를 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, GPRC5d에 결합하는 제2 결합 도메인은 서열 번호 132의 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, GPRC5d에 결합하는 제2 결합 도메인은 서열 번호 131의 아미노산 서열을 갖는 VH, 및 서열 번호 132의 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, GPRC5d에 결합하는 제2 결합 도메인은 서열 번호 131의 아미노산 서열과 적어도 95%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, GPRC5d에 결합하는 제2 결합 도메인은 서열 번호 132의 아미노산 서열과 적어도 95%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, GPRC5d에 결합하는 제2 결합 도메인은 서열 번호 131의 아미노산 서열과 적어도 95%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH, 및 서열 번호 132의 아미노산 서열과 적어도 95%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다.
구체적인 실시 형태에서, 노브-인-홀(knob-in-hole) 포맷으로 본 명세서에 제공된 NKG2d 항체를 포함하는 다중특이성 항체가 제공된다. 구체적인 실시 형태에서, 노브-인-홀 포맷으로 본 명세서에 제공된 NKG2d 항체를 포함하는 이중특이성 항체가 제공된다. 구체적인 실시 형태에서, 노브-인-홀 포맷으로 본 명세서에 제공된 NKG2d 항체를 포함하는 삼중특이성 항체가 제공된다. 구체적인 실시 형태에서, 노브-인-홀 포맷으로 본 명세서에 제공된 NKG2d 항체를 포함하는 사중특이성 항체가 제공된다. 당업계에 잘 알려진 방법을 사용하여(예를 들어, scFv를 N-말단 또는 C-말단에 부가하여) 다른 특이성이 노브-인-홀 포맷의 항체에 추가될 수 있다. 또한, 다중특이성 항체를 제조하는 다른 포맷 및 방법이 또한 당업계에 알려져 있으며 고려된다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 NKG2d 항체는 이중특이성 항체 내에 포함된다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 NKG2d 항체는 삼중특이성 항체 내에 포함된다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 NKG2d 항체는 사중특이성 항체 내에 포함된다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 NKG2d 이중특이성 항체는 다중특이성 항체 내에 포함된다.
소정 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체는 제1 NKG2d 에피토프에 결합하는 본 명세서에 제공된 NKG2d 항체를 포함하는 제1 결합 도메인, 및 제2 에피토프에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함하며, 제1 NKG2d 에피토프와 제2 에피토프는 동일하지 않다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 이중특이성 항체는 제1 NKG2d 에피토프에 결합하는 본 명세서에 제공된 NKG2d 항체를 포함하는 제1 결합 도메인, 및 제2 에피토프에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함하며, 제1 NKG2d 에피토프와 제2 에피토프는 동일하지 않다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 삼중특이성 항체는 제1 NKG2d 에피토프에 결합하는 본 명세서에 제공된 NKG2d 항체를 포함하는 제1 결합 도메인, 제2 에피토프에 결합하는 제2 결합 도메인, 및 제3 에피토프에 결합하는 제3 결합 도메인을 포함하며, 제1 NKG2d 에피토프, 제2 에피토프, 및 제3 에피토프는 동일하지 않다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 사중특이성 항체는 제1 NKG2d 에피토프에 결합하는 본 명세서에 제공된 NKG2d 항체를 포함하는 제1 결합 도메인, 제2 에피토프에 결합하는 제2 결합 도메인, 제3 에피토프에 결합하는 제3 결합 도메인, 및 제4 에피토프에 결합하는 제4 결합 도메인을 포함하며, 제1 NKG2d 에피토프, 제2 에피토프, 제3 에피토프, 및 제4 에피토프는 동일하지 않다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체는 제1 NKG2d 항원에 결합하는 본 명세서에 제공된 NKG2d 항체를 포함하는 제1 결합 도메인, 및 제2 항원에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함하며, 제1 NKG2d 항원과 제2 항원은 동일하지 않다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 이중특이성 항체는 제1 NKG2d 항원에 결합하는 본 명세서에 제공된 NKG2d 항체를 포함하는 제1 결합 도메인, 및 제2 항원에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함하며, 제1 NKG2d 항원과 제2 항원은 동일하지 않다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 삼중특이성 항체는 제1 NKG2d 항원에 결합하는 본 명세서에 제공된 NKG2d 항체를 포함하는 제1 결합 도메인, 제2 항원에 결합하는 제2 결합 도메인, 및 제3 항원에 결합하는 제3 결합 도메인을 포함하며, 제1 NKG2d 항원, 제2 항원, 및 제3 항원은 동일하지 않다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 사중특이성 항체는 제1 NKG2d 항원에 결합하는 본 명세서에 제공된 NKG2d 항체를 포함하는 제1 결합 도메인, 제2 항원에 결합하는 제2 결합 도메인, 제3 항원에 결합하는 제3 결합 도메인, 및 제4 항원에 결합하는 제4 결합 도메인을 포함하며, 제1 NKG2d 항원, 제2 항원, 제3 항원, 및 제4 항원은 동일하지 않다. 구체적인 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 NKG2d 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 NKG2d에 특이적으로 결합한다.
일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제2 결합 도메인은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하고, 제2 결합 도메인은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시 형태에서, NKG2d 항체는 단일 도메인 항체 또는 나노바디가 아니다. 일부 실시 형태에서, 제3 결합 도메인은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제4 결합 도메인은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다.
소정 실시 형태에서, NKG2d 다중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 NKG2d 상에 위치된 제1 에피토프 및 제2 표적 항원의 제2 에피토프에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체가 본 명세서에 제공되며, 상기 다중특이성 항체는 (a) NKG2d 항원에 결합하는 제1 결합 도메인, 및 (b) 제2 표적 항원에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체가 본 명세서에 제공되며, 상기 다중특이성 항체는 (a) NKG2d 항원에 특이적으로 결합하는 제1 결합 도메인, 및 (b) 제2 표적 항원에 특이적으로 결합하는 제2 결합 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체가 본 명세서에 제공되며, 상기 다중특이성 항체는 (a) NKG2d 항원 상의 제1 에피토프에 결합하는 제1 결합 도메인, 및 (b) 제2 표적 항원 상의 제2 에피토프에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체가 본 명세서에 제공되며, 상기 다중특이성 항체는 (a) NKG2d 항원 상의 제1 에피토프에 특이적으로 결합하는 제1 결합 도메인, 및 (b) 제2 표적 항원 상의 제2 에피토프에 특이적으로 결합하는 제2 결합 도메인을 포함한다.
구체적인 실시 형태에서, NKG2d 항원은 NK 세포의 표면 상에 존재한다. 소정 실시 형태에서, 제2 표적 항원은 NKG2d가 아니다. NK 세포의 표면 상에 존재하는 NKG2d 및 제2 표적 세포의 표면 상에 존재하는 제2 표적 항원에 대한 NKG2d 다중특이성 항체의 결합은, 예를 들어 제2 표적 세포의 살해를 가져올 수 있다. 다른 실시 형태에서, NK 세포의 표면 상에 존재하는 NKG2d 및 제2 표적 항원에 대한 NKG2d 다중특이성 항체의 결합은, 예를 들어 NK 세포의 활성화를 가져올 수 있다.
다른 태양에서, NKG2d에 결합하는 제1 결합 도메인 및 BCMA에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함하는 다중특이성 항체("다중특이성 NKG2d/BCMA 항체")가 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 NKG2d/BCMA 항체는 이중특이성 항체이다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 NKG2d/BCMA 항체는 삼중특이성 항체이다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 NKG2d/BCMA 항체는 사중특이성 항체이다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d/BCMA 항체는 (a) NKG2d에 결합하는 제1 결합 도메인, 및 (b) BCMA에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함한다. 일 실시 형태에서, 다중특이성 NKG2d/BCMA 항체는 (a) NKG2d에 결합하는 제1 결합 도메인, 및 (b) BCMA에 결합하는 제2 결합 도메인, 및 (c) 제3 표적에 결합하는 제3 결합 도메인을 포함한다. 일 실시 형태에서, 다중특이성 NKG2d/BCMA 항체는 (a) NKG2d에 결합하는 제1 결합 도메인, 및 (b) BCMA에 결합하는 제2 결합 도메인, (c) 제3 표적에 결합하는 제3 결합 도메인, 및 (d) 제4 표적에 결합하는 제4 결합 도메인을 포함한다.
본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d/BCMA 항체의 일부 실시 형태에서, NKG2d에 결합하는 제1 결합 도메인은, 서열 번호 2의 아미노산 서열을 갖는 VH의, VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3의 아미노산 서열을 각각 갖는 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 VH를 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d/BCMA 항체의 일부 실시 형태에서, NKG2d에 결합하는 제1 결합 도메인은, 서열 번호 3의 아미노산 서열을 갖는 VL의, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3의 아미노산 서열을 각각 갖는 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d/BCMA 항체의 일부 실시 형태에서, NKG2d에 결합하는 제1 결합 도메인은 (i) 서열 번호 2의 아미노산 서열을 갖는 VH의, VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3의 아미노산 서열을 각각 갖는 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 VH, 및 (ii) 서열 번호 3의 아미노산 서열을 갖는 VL의, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3의 아미노산 서열을 각각 갖는 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d/BCMA 항체의 일부 실시 형태에서, NKG2d에 결합하는 제1 결합 도메인은 서열 번호 2의 아미노산 서열을 갖는 VH를 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d/BCMA 항체의 일부 실시 형태에서, NKG2d에 결합하는 제1 결합 도메인은 서열 번호 3의 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d/BCMA 항체의 일부 실시 형태에서, NKG2d에 결합하는 제1 결합 도메인은 서열 번호 2의 아미노산 서열을 갖는 VH, 및 서열 번호 3의 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함한다.
본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d/BCMA 항체의 일부 실시 형태에서, NKG2d에 결합하는 제1 결합 도메인은, 서열 번호 34의 아미노산 서열을 갖는 VH의, VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3의 아미노산 서열을 각각 갖는 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 VH를 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d/BCMA 항체의 일부 실시 형태에서, NKG2d에 결합하는 제1 결합 도메인은, 서열 번호 35의 아미노산 서열을 갖는 VL의, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3의 아미노산 서열을 각각 갖는 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d/BCMA 항체의 일부 실시 형태에서, NKG2d에 결합하는 제1 결합 도메인은 (i) 서열 번호 34의 아미노산 서열을 갖는 VH의, VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3의 아미노산 서열을 각각 갖는 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 VH, 및 (ii) 서열 번호 35의 아미노산 서열을 갖는 VL의, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3의 아미노산 서열을 각각 갖는 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d/BCMA 항체의 일부 실시 형태에서, NKG2d에 결합하는 제1 결합 도메인은 서열 번호 34의 아미노산 서열을 갖는 VH를 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d/BCMA 항체의 일부 실시 형태에서, NKG2d에 결합하는 제1 결합 도메인은 서열 번호 35의 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d/BCMA 항체의 일부 실시 형태에서, NKG2d에 결합하는 제1 결합 도메인은 서열 번호 34의 아미노산 서열을 갖는 VH, 및 서열 번호 35의 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함한다.
본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d/BCMA 항체의 일부 실시 형태에서, NKG2d에 결합하는 제1 결합 도메인의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3 아미노산 서열은 카바트 넘버링 체계에 따른다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d/BCMA 항체의 일부 실시 형태에서, NKG2d에 결합하는 제1 결합 도메인의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3 아미노산 서열은 초티아 넘버링 체계에 따른다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d/BCMA 항체의 일부 실시 형태에서, NKG2d에 결합하는 제1 결합 도메인의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3 아미노산 서열은 AbM 넘버링 체계에 따른다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d/BCMA 항체의 일부 실시 형태에서, NKG2d에 결합하는 제1 결합 도메인의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3 아미노산 서열은 Contact 넘버링 체계에 따른다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d/BCMA 항체의 일부 실시 형태에서, NKG2d에 결합하는 제1 결합 도메인의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3 아미노산 서열은 IMGT 넘버링 체계에 따른다.
본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d/BCMA 항체의 일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인은 NKG2d 항원에 결합한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d/BCMA 항체의 일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인은 NKG2d 에피토프에 결합한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d/BCMA 항체의 일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인은 NKG2d에 특이적으로 결합한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d/BCMA 항체의 일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3은 NKG2d의 항원에 대한 결합 부위를 형성한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d/BCMA 항체의 일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3은 NKG2d의 에피토프에 대한 결합 부위를 형성한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d/BCMA 항체의 일부 실시 형태에서, NKG2d는 NK 세포의 표면 상에 존재한다.
본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d/BCMA 항체의 일부 실시 형태에서, BCMA에 결합하는 제2 결합 도메인은, 서열 번호 99의, VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3의 아미노산 서열을 각각 갖는 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 VH를 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d/BCMA 항체의 일부 실시 형태에서, BCMA에 결합하는 제2 결합 도메인은, 서열 번호 100의, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3의 아미노산 서열을 각각 갖는 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d/BCMA 항체의 일부 실시 형태에서, BCMA에 결합하는 제2 결합 도메인은 (i) 서열 번호 99의, VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3의 아미노산 서열을 각각 갖는 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 VH, 및 (ii) 서열 번호 100의, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3의 아미노산 서열을 각각 갖는 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d/BCMA 항체의 일부 실시 형태에서, BCMA에 결합하는 제2 결합 도메인은 서열 번호 99의 아미노산 서열을 갖는 VH를 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d/BCMA 항체의 일부 실시 형태에서, BCMA에 결합하는 제2 결합 도메인은 서열 번호 100의 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d/BCMA 항체의 일부 실시 형태에서, BCMA에 결합하는 제2 결합 도메인은 서열 번호 99의 아미노산 서열을 갖는 VH, 및 서열 번호 100의 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함한다.
본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d/BCMA 항체의 일부 실시 형태에서, BCMA에 결합하는 제2 결합 도메인의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3 아미노산 서열은 카바트 넘버링 체계에 따른다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d/BCMA 항체의 일부 실시 형태에서, BCMA에 결합하는 제2 결합 도메인의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3 아미노산 서열은 초티아 넘버링 체계에 따른다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d/BCMA 항체의 일부 실시 형태에서, BCMA에 결합하는 제2 결합 도메인의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3 아미노산 서열은 AbM 넘버링 체계에 따른다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d/BCMA 항체의 일부 실시 형태에서, BCMA에 결합하는 제2 결합 도메인의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3 아미노산 서열은 Contact 넘버링 체계에 따른다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d/BCMA 항체의 일부 실시 형태에서, BCMA에 결합하는 제2 결합 도메인의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3 아미노산 서열은 IMGT 넘버링 체계에 따른다.
본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d/BCMA 항체의 일부 실시 형태에서, 제2 결합 도메인은 BCMA 항원에 결합한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d/BCMA 항체의 일부 실시 형태에서, 제2 결합 도메인은 BCMA 에피토프에 결합한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d/BCMA 항체의 일부 실시 형태에서, 제2 결합 도메인은 BCMA에 특이적으로 결합한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d/BCMA 항체의 일부 실시 형태에서, 제2 결합 도메인의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3은 BCMA의 항원에 대한 결합 부위를 형성한다. 일부 실시 형태에서, 제2 결합 도메인의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3은 BCMA의 에피토프에 대한 결합 부위를 형성한다. 일부 실시 형태에서, BCMA는 종양 세포의 표면 상에 존재한다.
본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d/BCMA 항체의 일부 실시 형태에서, 제3 표적은 NKG2d 항원이 아니다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d/BCMA 항체의 일부 실시 형태에서, 제4 표적은 NKG2d 항원이 아니다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d/BCMA 항체의 일부 실시 형태에서, 제3 표적은 NKG2d 항원이 아니고, 제4 표적은 NKG2d 항원이 아니다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d/BCMA 항체의 일부 실시 형태에서, 제3 표적은 BCMA 항원이 아니다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d/BCMA 항체의 일부 실시 형태에서, 제4 표적은 BCMA 항원이 아니다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d/BCMA 항체의 일부 실시 형태에서, 제3 표적은 BCMA 항원이 아니고, 제4 표적은 BCMA 항원이 아니다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d/BCMA 항체의 일부 실시 형태에서, 제3 표적은 NKG2d 에피토프가 아니다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d/BCMA 항체의 일부 실시 형태에서, 제4 표적은 NKG2d 에피토프가 아니다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d/BCMA 항체의 일부 실시 형태에서, 제3 표적은 NKG2d 에피토프가 아니고, 제4 표적은 NKG2d 에피토프가 아니다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d/BCMA 항체의 일부 실시 형태에서, 제3 표적은 BCMA 에피토프가 아니다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d/BCMA 항체의 일부 실시 형태에서, 제4 표적은 BCMA 에피토프가 아니다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d/BCMA 항체의 일부 실시 형태에서, 제3 표적은 BCMA 에피토프가 아니고, 제4 표적은 BCMA 에피토프가 아니다.
구체적인 실시 형태에서, 표적은 포유동물 유래이다. 구체적인 실시 형태에서, 표적은 래트 유래이다. 구체적인 실시 형태에서, 표적은 마우스 유래이다. 구체적인 실시 형태에서, 표적은 영장류 유래이다. 구체적인 실시 형태에서, 표적은 인간 유래이다.
구체적인 실시 형태에서, 노브-인-홀 포맷의 다중특이성 NKG2d/BCMA 항체가 제공된다. 구체적인 실시 형태에서, 노브-인-홀 포맷의 이중특이성 NKG2d/BCMA 항체가 제공된다. 구체적인 실시 형태에서, 노브-인-홀 포맷의 삼중특이성 항체가 제공된다. 구체적인 실시 형태에서, 노브-인-홀 포맷의 사중특이성 항체가 제공된다. 당업계에 잘 알려진 방법을 사용하여(예를 들어, scFv를 N-말단 또는 C-말단에 부가하여) 다른 특이성이 노브-인-홀 포맷의 항체에 추가될 수 있다. 또한, 다중특이성 항체를 제조하는 다른 포맷 및 방법이 또한 당업계에 알려져 있으며 고려된다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 NKG2d/BCMA 항체는 이중특이성 항체 내에 포함된다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 NKG2d/BCMA 항체는 삼중특이성 항체 내에 포함된다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 NKG2d/BCMA 항체는 사중특이성 항체 내에 포함된다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 NKG2d/BCMA 이중특이성 항체는 다중특이성 항체 내에 포함된다.
소정 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 삼중특이성 NKG2d/BCMA 항체는 NKG2d 에피토프에 결합하는 본 명세서에 제공된 NKG2d 항체를 포함하는 제1 결합 도메인, BCMA 에피토프에 결합하는 본 명세서에 제공된 BCMA 항체를 포함하는 제2 결합 도메인, 및 제3 에피토프에 결합하는 제3 결합 도메인을 포함하며, NKG2d 에피토프, BCMA 에피토프, 및 제3 에피토프는 동일하지 않다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 사중특이성 항체는 NKG2d 에피토프에 결합하는 본 명세서에 제공된 NKG2d 항체를 포함하는 제1 결합 도메인, BCMA 에피토프에 결합하는 본 명세서에 제공된 BCMA 항체를 포함하는 제2 결합 도메인, 제3 에피토프에 결합하는 제3 결합 도메인, 및 제4 에피토프에 결합하는 제4 결합 도메인을 포함하며, NKG2d 에피토프, BCMA 에피토프, 제3 에피토프, 및 제4 에피토프는 동일하지 않다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 삼중특이성 항체는 NKG2d 항원에 결합하는 본 명세서에 제공된 NKG2d 항체를 포함하는 제1 결합 도메인, BCMA 항원에 결합하는 본 명세서에 제공된 BCMA 항체를 포함하는 제2 결합 도메인, 및 제3 항원에 결합하는 제3 결합 도메인을 포함하며, NKG2d 항원, BCMA 항원, 및 제3 항원은 동일하지 않다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 사중특이성 항체는 NKG2d 항원에 결합하는 본 명세서에 제공된 NKG2d 항체를 포함하는 제1 결합 도메인, BCMA 항원에 결합하는 본 명세서에 제공된 BCMA 항체를 포함하는 제2 결합 도메인, 제3 항원에 결합하는 제3 결합 도메인, 및 제4 항원에 결합하는 제4 결합 도메인을 포함하며, NKG2d 항원, BCMA 항원, 제3 항원, 및 제4 항원은 동일하지 않다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d/BCMA 항체의 소정 실시 형태에서, NKG2d에 결합하는 제1 결합 도메인은 NKG2d에 특이적으로 결합한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d/BCMA 항체의 다른 실시 형태에서, BCMA에 결합하는 제2 결합 도메인은 BCMA에 특이적으로 결합한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d/BCMA 항체의 또 다른 실시 형태에서, NKG2d에 결합하는 제1 결합 도메인은 NKG2d에 특이적으로 결합하고, BCMA에 결합하는 제2 결합 도메인은 BCMA에 특이적으로 결합한다.
일부 실시 형태에서, 다중특이성 NKG2d/BCMA 항체는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제2 결합 도메인은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하고, 제2 결합 도메인은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시 형태에서, NKG2d 항체는 단일 도메인 항체 또는 나노바디가 아니다. 일부 실시 형태에서, 제3 결합 도메인은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제4 결합 도메인은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다.
소정 실시 형태에서, NKG2d/BCMA 다중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 NKG2d 상에 위치된 제1 에피토프 및 BCMA 상에 위치된 제2 에피토프에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 NKG2d/BCMA 항체가 본 명세서에 제공되며, 상기 다중특이성 NKG2d/BCMA 항체는 (a) NKG2d 항원에 결합하는 제1 결합 도메인, 및 (b) BCMA 항원에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 NKG2d/BCMA 항체가 본 명세서에 제공되며, 상기 다중특이성 NKG2d/BCMA 항체는 (a) NKG2d 항원에 특이적으로 결합하는 제1 결합 도메인, 및 (b) BCMA 항원에 특이적으로 결합하는 제2 결합 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 NKG2d/BCMA 항체가 본 명세서에 제공되며, 상기 다중특이성 NKG2d/BCMA 항체는 (a) NKG2d 항원 상의 제1 에피토프에 결합하는 제1 결합 도메인, 및 (b) BCMA 항원 상의 제2 에피토프에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체가 본 명세서에 제공되며, 상기 다중특이성 항체는 (a) NKG2d 항원 상의 제1 에피토프에 특이적으로 결합하는 제1 결합 도메인, 및 (b) BCMA 항원 상의 제2 에피토프에 특이적으로 결합하는 제2 결합 도메인을 포함한다.
구체적인 실시 형태에서, NKG2d 항원은 NK 세포의 표면 상에 존재한다. 구체적인 실시 형태에서, BCMA 항원은 종양 세포의 표면 상에 존재한다. NK 세포의 표면 상에 존재하는 NKG2d 및 종양 세포의 표면 상에 존재하는 BCMA에 대한 NKG2d/BCMA 다중특이성 항체의 결합은, 예를 들어 종양 세포의 살해를 가져올 수 있다. 다른 실시 형태에서, NK 세포의 표면 상에 존재하는 NKG2d 및 종양 세포의 표면 상에 존재하는 BCMA에 대한 NKG2d/BCMA 다중특이성 항체의 결합은, 예를 들어 NK 세포의 활성화를 가져올 수 있다.
다른 태양에서, NKG2d에 결합하는 제1 결합 도메인 및 GPRC5d에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함하는 다중특이성 항체("다중특이성 NKG2d/GPRC5d 항체")가 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 NKG2d/GPRC5d 항체는 이중특이성 항체이다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 NKG2d/GPRC5d 항체는 삼중특이성 항체이다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 NKG2d/GPRC5d 항체는 사중특이성 항체이다.
일 실시 형태에서, 다중특이성 NKG2d/GPRC5d 항체는 (a) NKG2d에 결합하는 제1 결합 도메인, 및 (b) GPRC5d에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함한다. 일 실시 형태에서, 다중특이성 NKG2d/GPRC5d 항체는 (a) NKG2d에 결합하는 제1 결합 도메인, 및 (b) GPRC5d에 결합하는 제2 결합 도메인, 및 (c) 제3 표적에 결합하는 제3 결합 도메인을 포함한다. 일 실시 형태에서, 다중특이성 NKG2d/GPRC5d 항체는 (a) NKG2d에 결합하는 제1 결합 도메인, 및 (b) GPRC5d에 결합하는 제2 결합 도메인, (c) 제3 표적에 결합하는 제3 결합 도메인, 및 (d) 제4 표적에 결합하는 제4 결합 도메인을 포함한다.
본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d/GPRC5d 항체의 일부 실시 형태에서, NKG2d에 결합하는 제1 결합 도메인은, 서열 번호 2의 아미노산 서열을 갖는 VH의, VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3의 아미노산 서열을 각각 갖는 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 VH를 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d/GPRC5d 항체의 일부 실시 형태에서, NKG2d에 결합하는 제1 결합 도메인은, 서열 번호 3의 아미노산 서열을 갖는 VL의, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3의 아미노산 서열을 각각 갖는 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d/GPRC5d 항체의 일부 실시 형태에서, NKG2d에 결합하는 제1 결합 도메인은 (i) 서열 번호 2의 아미노산 서열을 갖는 VH의, VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3의 아미노산 서열을 각각 갖는 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 VH, 및 (ii) 서열 번호 3의 아미노산 서열을 갖는 VL의, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3의 아미노산 서열을 각각 갖는 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d/GPRC5d 항체의 일부 실시 형태에서, NKG2d에 결합하는 제1 결합 도메인은 서열 번호 2의 아미노산 서열을 갖는 VH를 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d/GPRC5d 항체의 일부 실시 형태에서, NKG2d에 결합하는 제1 결합 도메인은 서열 번호 3의 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d/GPRC5d 항체의 일부 실시 형태에서, NKG2d에 결합하는 제1 결합 도메인은 서열 번호 2의 아미노산 서열을 갖는 VH, 및 서열 번호 3의 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함한다.
본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d/GPRC5d 항체의 일부 실시 형태에서, NKG2d에 결합하는 제1 결합 도메인은, 서열 번호 34의 아미노산 서열을 갖는 VH의, VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3의 아미노산 서열을 각각 갖는 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 VH를 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d/GPRC5d 항체의 일부 실시 형태에서, NKG2d에 결합하는 제1 결합 도메인은, 서열 번호 35의 아미노산 서열을 갖는 VL의, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3의 아미노산 서열을 각각 갖는 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d/GPRC5d 항체의 일부 실시 형태에서, NKG2d에 결합하는 제1 결합 도메인은 (i) 서열 번호 34의 아미노산 서열을 갖는 VH의, VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3의 아미노산 서열을 각각 갖는 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 VH, 및 (ii) 서열 번호 35의 아미노산 서열을 갖는 VL의, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3의 아미노산 서열을 각각 갖는 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d/GPRC5d 항체의 일부 실시 형태에서, NKG2d에 결합하는 제1 결합 도메인은 서열 번호 34의 아미노산 서열을 갖는 VH를 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d/GPRC5d 항체의 일부 실시 형태에서, NKG2d에 결합하는 제1 결합 도메인은 서열 번호 35의 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d/GPRC5d 항체의 일부 실시 형태에서, NKG2d에 결합하는 제1 결합 도메인은 서열 번호 34의 아미노산 서열을 갖는 VH, 및 서열 번호 35의 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함한다.
본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d/GPRC5d 항체의 일부 실시 형태에서, NKG2d에 결합하는 제1 결합 도메인의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3 아미노산 서열은 카바트 넘버링 체계에 따른다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d/GPRC5d 항체의 일부 실시 형태에서, NKG2d에 결합하는 제1 결합 도메인의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3 아미노산 서열은 초티아 넘버링 체계에 따른다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d/GPRC5d 항체의 일부 실시 형태에서, NKG2d에 결합하는 제1 결합 도메인의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3 아미노산 서열은 AbM 넘버링 체계에 따른다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d/GPRC5d 항체의 일부 실시 형태에서, NKG2d에 결합하는 제1 결합 도메인의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3 아미노산 서열은 Contact 넘버링 체계에 따른다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d/GPRC5d 항체의 일부 실시 형태에서, NKG2d에 결합하는 제1 결합 도메인의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3 아미노산 서열은 IMGT 넘버링 체계에 따른다.
본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d/GPRC5d 항체의 일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인은 NKG2d 항원에 결합한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d/GPRC5d 항체의 일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인은 NKG2d 에피토프에 결합한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d/GPRC5d 항체의 일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인은 NKG2d에 특이적으로 결합한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d/GPRC5d 항체의 일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3은 NKG2d의 항원에 대한 결합 부위를 형성한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d/GPRC5d 항체의 일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3은 NKG2d의 에피토프에 대한 결합 부위를 형성한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d/GPRC5d 항체의 일부 실시 형태에서, NKG2d는 NK 세포의 표면 상에 존재한다.
본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d/GPRC5d 항체의 일부 실시 형태에서, GPRC5d에 결합하는 제2 결합 도메인은, 서열 번호 131의, VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3의 아미노산 서열을 각각 갖는 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 VH를 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d/GPRC5d 항체의 일부 실시 형태에서, GPRC5d에 결합하는 제2 결합 도메인은, 서열 번호 132의, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3의 아미노산 서열을 각각 갖는 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d/GPRC5d 항체의 일부 실시 형태에서, GPRC5d에 결합하는 제2 결합 도메인은 (i) 서열 번호 131의, VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3의 아미노산 서열을 각각 갖는 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 VH; 및 (ii) 서열 번호 132의, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3의 아미노산 서열을 각각 갖는 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d/GPRC5d 항체의 일부 실시 형태에서, GPRC5d에 결합하는 제2 결합 도메인은 서열 번호 131의 아미노산 서열을 갖는 VH를 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d/GPRC5d 항체의 일부 실시 형태에서, GPRC5d에 결합하는 제2 결합 도메인은 서열 번호 132의 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d/GPRC5d 항체의 일부 실시 형태에서, GPRC5d에 결합하는 제2 결합 도메인은 서열 번호 131의 아미노산 서열을 갖는 VH, 및 서열 번호 132의 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함한다.
본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d/GPRC5d 항체의 일부 실시 형태에서, GPRC5d에 결합하는 제2 결합 도메인의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3 아미노산 서열은 카바트 넘버링 체계에 따른다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d/GPRC5d 항체의 일부 실시 형태에서, GPRC5d에 결합하는 제2 결합 도메인의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3 아미노산 서열은 초티아 넘버링 체계에 따른다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d/GPRC5d 항체의 일부 실시 형태에서, GPRC5d에 결합하는 제2 결합 도메인의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3 아미노산 서열은 AbM 넘버링 체계에 따른다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d/GPRC5d 항체의 일부 실시 형태에서, GPRC5d에 결합하는 제2 결합 도메인의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3 아미노산 서열은 Contact 넘버링 체계에 따른다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d/GPRC5d 항체의 일부 실시 형태에서, GPRC5d에 결합하는 제2 결합 도메인의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3 아미노산 서열은 IMGT 넘버링 체계에 따른다.
본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d/GPRC5d 항체의 일부 실시 형태에서, 제2 결합 도메인은 GPRC5d 항원에 결합한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d/GPRC5d 항체의 일부 실시 형태에서, 제2 결합 도메인은 GPRC5d 에피토프에 결합한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d/GPRC5d 항체의 일부 실시 형태에서, 제2 결합 도메인은 GPRC5d에 특이적으로 결합한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d/GPRC5d 항체의 일부 실시 형태에서, 제2 결합 도메인의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3은 GPRC5d의 항원에 대한 결합 부위를 형성한다. 일부 실시 형태에서, 제2 결합 도메인의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3은 GPRC5d의 에피토프에 대한 결합 부위를 형성한다. 일부 실시 형태에서, GPRC5d는 종양 세포의 표면 상에 존재한다.
본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d/GPRC5d 항체의 일부 실시 형태에서, 제3 표적은 NKG2d 항원이 아니다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d/GPRC5d 항체의 일부 실시 형태에서, 제4 표적은 NKG2d 항원이 아니다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d/GPRC5d 항체의 일부 실시 형태에서, 제3 표적은 NKG2d 항원이 아니고, 제4 표적은 NKG2d 항원이 아니다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d/GPRC5d 항체의 일부 실시 형태에서, 제3 표적은 GPRC5d 항원이 아니다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d/GPRC5d 항체의 일부 실시 형태에서, 제4 표적은 GPRC5d 항원이 아니다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d/GPRC5d 항체의 일부 실시 형태에서, 제3 표적은 GPRC5d 항원이 아니고, 제4 표적은 GPRC5d 항원이 아니다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d/GPRC5d 항체의 일부 실시 형태에서, 제3 표적은 NKG2d 에피토프가 아니다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d/GPRC5d 항체의 일부 실시 형태에서, 제4 표적은 NKG2d 에피토프가 아니다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d/GPRC5d 항체의 일부 실시 형태에서, 제3 표적은 NKG2d 에피토프가 아니고, 제4 표적은 NKG2d 에피토프가 아니다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d/GPRC5d 항체의 일부 실시 형태에서, 제3 표적은 GPRC5d 에피토프가 아니다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d/GPRC5d 항체의 일부 실시 형태에서, 제4 표적은 GPRC5d 에피토프가 아니다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d/GPRC5d 항체의 일부 실시 형태에서, 제3 표적은 GPRC5d 에피토프가 아니고, 제4 표적은 GPRC5d 에피토프가 아니다.
구체적인 실시 형태에서, 표적은 포유동물 유래이다. 구체적인 실시 형태에서, 표적은 래트 유래이다. 구체적인 실시 형태에서, 표적은 마우스 유래이다. 구체적인 실시 형태에서, 표적은 영장류 유래이다. 구체적인 실시 형태에서, 표적은 인간 유래이다.
구체적인 실시 형태에서, 노브-인-홀 포맷의 다중특이성 NKG2d/GPRC5d 항체가 제공된다. 구체적인 실시 형태에서, 노브-인-홀 포맷의 이중특이성 NKG2d/GPRC5d 항체가 제공된다. 구체적인 실시 형태에서, 노브-인-홀 포맷의 삼중특이성 항체가 제공된다. 구체적인 실시 형태에서, 노브-인-홀 포맷의 사중특이성 항체가 제공된다. 당업계에 잘 알려진 방법을 사용하여(예를 들어, scFv를 N-말단 또는 C-말단에 부가하여) 다른 특이성이 노브-인-홀 포맷의 항체에 추가될 수 있다. 또한, 다중특이성 항체를 제조하는 다른 포맷 및 방법이 또한 당업계에 알려져 있으며 고려된다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 NKG2d/GPRC5d 항체는 이중특이성 항체 내에 포함된다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 NKG2d/GPRC5d 항체는 삼중특이성 항체 내에 포함된다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 NKG2d/GPRC5d 항체는 사중특이성 항체 내에 포함된다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 NKG2d/GPRC5d 이중특이성 항체는 다중특이성 항체 내에 포함된다.
소정 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 삼중특이성 NKG2d/GPRC5d 항체는 NKG2d 에피토프에 결합하는 본 명세서에 제공된 NKG2d 항체를 포함하는 제1 결합 도메인, GPRC5d 에피토프에 결합하는 본 명세서에 제공된 GPRC5d 항체를 포함하는 제2 결합 도메인, 및 제3 에피토프에 결합하는 제3 결합 도메인을 포함하며, NKG2d 에피토프, GPRC5d 에피토프, 및 제3 에피토프는 동일하지 않다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 사중특이성 항체는 NKG2d 에피토프에 결합하는 본 명세서에 제공된 NKG2d 항체를 포함하는 제1 결합 도메인, GPRC5d 에피토프에 결합하는 본 명세서에 제공된 GPRC5d 항체를 포함하는 제2 결합 도메인, 제3 에피토프에 결합하는 제3 결합 도메인, 및 제4 에피토프에 결합하는 제4 결합 도메인을 포함하며, NKG2d 에피토프, GPRC5d 에피토프, 제3 에피토프, 및 제4 에피토프는 동일하지 않다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 삼중특이성 항체는 NKG2d 항원에 결합하는 본 명세서에 제공된 NKG2d 항체를 포함하는 제1 결합 도메인, GPRC5d 항원에 결합하는 본 명세서에 제공된 GPRC5d 항체를 포함하는 제2 결합 도메인, 및 제3 항원에 결합하는 제3 결합 도메인을 포함하며, NKG2d 항원, GPRC5d 항원, 및 제3 항원은 동일하지 않다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 사중특이성 항체는 NKG2d 항원에 결합하는 본 명세서에 제공된 NKG2d 항체를 포함하는 제1 결합 도메인, GPRC5d 항원에 결합하는 본 명세서에 제공된 GPRC5d 항체를 포함하는 제2 결합 도메인, 제3 항원에 결합하는 제3 결합 도메인, 및 제4 항원에 결합하는 제4 결합 도메인을 포함하며, NKG2d 항원, GPRC5d 항원, 제3 항원, 및 제4 항원은 동일하지 않다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d/GPRC5d 항체의 소정 실시 형태에서, NKG2d에 결합하는 제1 결합 도메인은 NKG2d에 특이적으로 결합한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d/GPRC5d 항체의 다른 실시 형태에서, GPRC5d에 결합하는 제2 결합 도메인은 GPRC5d에 특이적으로 결합한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKG2d/GPRC5d 항체의 또 다른 실시 형태에서, NKG2d에 결합하는 제1 결합 도메인은 NKG2d에 특이적으로 결합하고, GPRC5d에 결합하는 제2 결합 도메인은 GPRC5d에 특이적으로 결합한다.
일부 실시 형태에서, 다중특이성 NKG2d/GPRC5d 항체는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제2 결합 도메인은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하고, 제2 결합 도메인은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시 형태에서, NKG2d 항체는 단일 도메인 항체 또는 나노바디가 아니다. 일부 실시 형태에서, 제3 결합 도메인은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제4 결합 도메인은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다.
소정 실시 형태에서, NKG2d/GPRC5d 다중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 NKG2d 상에 위치된 제1 에피토프 및 GPRC5d 상에 위치된 제2 에피토프에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 NKG2d/GPRC5d 항체가 본 명세서에 제공되며, 상기 다중특이성 NKG2d/GPRC5d 항체는 (a) NKG2d 항원에 결합하는 제1 결합 도메인, 및 (b) GPRC5d 항원에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 NKG2d/GPRC5d 항체가 본 명세서에 제공되며, 상기 다중특이성 NKG2d/GPRC5d 항체는 (a) NKG2d 항원에 특이적으로 결합하는 제1 결합 도메인, 및 (b) GPRC5d 항원에 특이적으로 결합하는 제2 결합 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 NKG2d/GPRC5d 항체가 본 명세서에 제공되며, 상기 다중특이성 NKG2d/GPRC5d 항체는 (a) NKG2d 항원 상의 제1 에피토프에 결합하는 제1 결합 도메인, 및 (b) GPRC5d 항원 상의 제2 에피토프에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체가 본 명세서에 제공되며, 상기 다중특이성 항체는 (a) NKG2d 항원 상의 제1 에피토프에 특이적으로 결합하는 제1 결합 도메인, 및 (b) GPRC5d 항원 상의 제2 에피토프에 특이적으로 결합하는 제2 결합 도메인을 포함한다.
구체적인 실시 형태에서, NKG2d 항원은 NK 세포의 표면 상에 존재한다. 구체적인 실시 형태에서, GPRC5d 항원은 종양 세포의 표면 상에 존재한다. NK 세포의 표면 상에 존재하는 NKG2d 및 종양 세포의 표면 상에 존재하는 GPRC5d에 대한 NKG2d/GPRC5d 다중특이성 항체의 결합은, 예를 들어 종양 세포의 살해를 가져올 수 있다. 다른 실시 형태에서, NK 세포의 표면 상에 존재하는 NKG2d 및 종양 세포의 표면 상에 존재하는 GPRC5d에 대한 NKG2d/GPRC5d 다중특이성 항체의 결합은, 예를 들어 NK 세포의 활성화를 가져올 수 있다.
구체적인 실시 형태에서, NKp46 항체는 VH 영역 및 VL 영역을 포함한다. 일부 실시 형태에서, NKp46 항체는 단일쇄 항체이다. 일부 실시 형태에서, NKp46 항체는 단일 도메인 항체이다. 일부 실시 형태에서, NKp46 항체는 나노바디이다. 소정 실시 형태에서, NKp46 항체는 VHH 항체이다. 소정 실시 형태에서, NKp46 항체는 라마 항체이다. 일부 실시 형태에서, NKp46 항체는 단일쇄 항체가 아니다. 일부 실시 형태에서, NKp46 항체는 단일 도메인 항체가 아니다. 일부 실시 형태에서, NKp46 항체는 나노바디가 아니다. 소정 실시 형태에서, NKp46 항체는 VHH 항체가 아니다. 소정 실시 형태에서, NKp46 항체는 라마 항체가 아니다. 일부 실시 형태에서, NKp46 항체는 다중특이성 항체이다. 다른 실시 형태에서, NKp46은 이중특이성 항체이다. 소정 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 본 명세서에 제공된 NKp46 항체의 항원-결합 단편을 포함한다. 다른 실시 형태에서, 이중특이성 항체는 본 명세서에 제공된 NKp46 항체의 항원-결합 단편을 포함한다.
구체적인 실시 형태에서, NKp46에 결합하는 다중특이성 항체가 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 이중특이성 항체이다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 삼중특이성 항체이다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 사중특이성 항체이다. 일 실시 형태에서, 다중특이성 NKp46 항체는 (a) NKp46에 결합하는 제1 결합 도메인, 및 (b) 제2 표적에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함한다. 일 실시 형태에서, 다중특이성 NKp46 항체는 (a) NKp46에 결합하는 제1 결합 도메인, 및 (b) 제2 표적에 결합하는 제2 결합 도메인, 및 (c) 제3 표적에 결합하는 제3 결합 도메인을 포함한다. 일 실시 형태에서, 다중특이성 NKp46 항체는 (a) NKp46에 결합하는 제1 결합 도메인, 및 (b) 제2 표적에 결합하는 제2 결합 도메인, (c) 제3 표적에 결합하는 제3 결합 도메인, 및 (d) 제4 표적에 결합하는 제4 결합 도메인을 포함한다.
다른 태양에서, 이중특이성 항체가 본 명세서에 제공되며, 상기 이중특이성 항체는 (a) NKp46에 결합하는 제1 결합 도메인, 및 (b) NKp46이 아닌 제2 표적에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함한다. 다른 태양에서, 이중특이성 항체가 본 명세서에 제공되며, 상기 이중특이성 항체는 (a) NKp46에 결합하는 제1 결합 도메인, 및 (b) 종양 세포 상에 발현되는 항원에 결합하는 제2 표적에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제2 결합 도메인은 BCMA에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 제2 결합 도메인은 GPRC5d에 결합한다.
소정 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 항체들 중 어느 하나의 VH 영역, VL 영역, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및/또는 VL CDR3을 갖는 NKp46에 결합하는 결합 도메인을 포함하는 항-NKp46 이중특이성 항체가 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 항체들 중 어느 하나의 VH 영역을 갖는 NKp46에 결합하는 결합 도메인을 포함하는 항-NKp46 이중특이성 항체가 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 항체들 중 어느 하나의 VL 영역을 갖는 NKp46에 결합하는 결합 도메인을 포함하는 항-NKp46 이중특이성 항체가 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 항체들 중 어느 하나의 VH 영역, 및 본 명세서에 기재된 항체들 중 어느 하나의 VL 영역을 갖는 NKp46에 결합하는 결합 도메인을 포함하는 항-NKp46 이중특이성 항체가 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, 기재된 항체들 중 어느 하나의 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 갖는 NKp46에 결합하는 결합 도메인을 포함하는 항-NKp46 이중특이성 항체가 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 항체들 중 어느 하나의 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 갖는 NKp46에 결합하는 결합 도메인을 포함하는 항-NKp46 이중특이성 항체가 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 항체들 중 어느 하나의 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3; 및 본 명세서에 기재된 항체들 중 어느 하나의 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 갖는 NKp46에 결합하는 결합 도메인을 포함하는 항-NKp46 이중특이성 항체가 본 명세서에 제공된다.
소정 실시 형태에서, 항-NKp46 항체는 이중특이성 항체이다. 일부 실시 형태에서, 항-NKp46 이중특이성 항체는 본 명세서에 제공된 항-BCMA 항체의 VH 영역, VL 영역, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및/또는 VL CDR3을 갖는 BCMA에 결합하는 제2 결합 도메인을 추가로 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항-NKp46 이중특이성 항체는 본 명세서에 제공된 항-BCMA 항체의 VH 영역을 갖는 BCMA에 결합하는 제2 결합 도메인을 추가로 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항-NKp46 이중특이성 항체는 본 명세서에 제공된 항-BCMA 항체의 VL 영역을 갖는 BCMA에 결합하는 제2 결합 도메인을 추가로 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항-NKp46 이중특이성 항체는 본 명세서에 제공된 항-BCMA 항체의 VH 영역, 및 본 명세서에 제공된 항-BCMA 항체의 VL 영역을 갖는 BCMA에 결합하는 제2 결합 도메인을 추가로 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항-NKp46 이중특이성 항체는 본 명세서에 제공된 항-BCMA 항체의 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 갖는 BCMA에 결합하는 제2 결합 도메인을 추가로 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항-NKp46 이중특이성 항체는 본 명세서에 제공된 항-BCMA 항체의 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 갖는 BCMA에 결합하는 제2 결합 도메인을 추가로 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항-NKp46 이중특이성 항체는 본 명세서에 제공된 항-BCMA 항체의 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3, 및 본 명세서에 제공된 항-BCMA 항체의 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 갖는 BCMA에 결합하는 제2 결합 도메인을 추가로 포함한다.
소정 실시 형태에서, 항-NKp46 항체는 이중특이성 항체이다. 일부 실시 형태에서, 항-NKp46 이중특이성 항체는 본 명세서에 제공된 항-GPRC5d 항체의 VH 영역, VL 영역, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및/또는 VL CDR3을 갖는 GPRC5d에 결합하는 제2 결합 도메인을 추가로 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항-NKp46 이중특이성 항체는 본 명세서에 제공된 항-GPRC5d 항체의 VH 영역을 갖는 GPRC5d에 결합하는 제2 결합 도메인을 추가로 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항-NKp46 이중특이성 항체는 본 명세서에 제공된 항-GPRC5d 항체의 VL 영역을 갖는 GPRC5d에 결합하는 제2 결합 도메인을 추가로 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항-NKp46 이중특이성 항체는 본 명세서에 제공된 항-GPRC5d 항체의 VH 영역, 및 본 명세서에 제공된 항-GPRC5d 항체의 VL 영역을 갖는 GPRC5d에 결합하는 제2 결합 도메인을 추가로 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항-NKp46 이중특이성 항체는 본 명세서에 제공된 항-GPRC5d 항체의 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 갖는 GPRC5d에 결합하는 제2 결합 도메인을 추가로 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항-NKp46 이중특이성 항체는 본 명세서에 제공된 항-GPRC5d 항체의 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 갖는 GPRC5d에 결합하는 제2 결합 도메인을 추가로 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항-NKp46 이중특이성 항체는 본 명세서에 제공된 항-GPRC5d 항체의 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3, 및 본 명세서에 제공된 항-GPRC5d 항체의 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 갖는 GPRC5d에 결합하는 제2 결합 도메인을 추가로 포함한다.
본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, NKp46에 결합하는 제1 결합 도메인은 전술된 바와 같거나 또는 전술된 항체로부터 유래된다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 구체적인 실시 형태에서, NKp46에 결합하는 제1 결합 도메인은 (i) 서열 번호 69, 70, 및 71의 아미노산 서열을 각각 갖는 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 VH, 및 (ii) 서열 번호 72, 73, 및 74의 아미노산 서열을 각각 갖는 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, NKp46에 결합하는 제1 결합 도메인은 (i) 서열 번호 75, 76, 및 77의 아미노산 서열을 각각 갖는 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 VH, 및 (ii) 서열 번호 78, 79, 및 80의 아미노산 서열을 각각 갖는 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, NKp46에 결합하는 제1 결합 도메인은 (i) 서열 번호 81, 82, 및 83의 아미노산 서열을 각각 갖는 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 VH, 및 (ii) 서열 번호 84, 85, 및 86의 아미노산 서열을 각각 갖는 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, NKp46에 결합하는 제1 결합 도메인은 (i) 서열 번호 87, 88, 및 89의 아미노산 서열을 각각 갖는 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 VH, 및 (ii) 서열 번호 90, 91, 및 92의 아미노산 서열을 각각 갖는 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, NKp46에 결합하는 제1 결합 도메인은 (i) 서열 번호 93, 94, 및 95의 아미노산 서열을 각각 갖는 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 VH, 및 (ii) 서열 번호 96, 97, 및 98의 아미노산 서열을 각각 갖는 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, NKp46에 결합하는 제1 결합 도메인은, 서열 번호 67의, VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3의 아미노산 서열을 각각 갖는 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 VH를 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, NKp46에 결합하는 제1 결합 도메인은, 서열 번호 68의, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3의 아미노산 서열을 각각 갖는 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, NKp46에 결합하는 제1 결합 도메인은 (i) 서열 번호 67의, VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3의 아미노산 서열을 각각 갖는 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 VH, 및 (ii) 서열 번호 68의, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3의 아미노산 서열을 각각 갖는 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, NKp46에 결합하는 제1 결합 도메인은 서열 번호 67의 아미노산 서열을 갖는 VH를 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, NKp46에 결합하는 제1 결합 도메인은 서열 번호 68의 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, NKp46에 결합하는 제1 결합 도메인은 서열 번호 67의 아미노산 서열을 갖는 VH, 및 서열 번호 68의 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, NKp46에 결합하는 제1 결합 도메인은 서열 번호 67의 아미노산 서열과 적어도 95%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, NKp46에 결합하는 제1 결합 도메인은 서열 번호 68의 아미노산 서열과 적어도 95%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, NKp46에 결합하는 제1 결합 도메인은 서열 번호 67의 아미노산 서열과 적어도 95%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH, 및 서열 번호 68의 아미노산 서열과 적어도 95%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, NKp46에 결합하는 제1 결합 도메인의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3 아미노산 서열은 카바트 넘버링 체계에 따른다. 일부 실시 형태에서, NKp46에 결합하는 제1 결합 도메인의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3 아미노산 서열은 초티아 넘버링 체계에 따른다. 일부 실시 형태에서, NKp46에 결합하는 제1 결합 도메인의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3 아미노산 서열은 AbM 넘버링 체계에 따른다. 일부 실시 형태에서, NKp46에 결합하는 제1 결합 도메인의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3 아미노산 서열은 Contact 넘버링 체계에 따른다. 일부 실시 형태에서, NKp46에 결합하는 제1 결합 도메인의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3 아미노산 서열은 IMGT 넘버링 체계에 따른다.
본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46 항체의 일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인은 NKp46 항원에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인은 NKp46 에피토프에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인은 NKp46에 특이적으로 결합한다. 일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3은 NKp46의 항원에 대한 결합 부위를 형성한다. 일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3은 NKp46의 에피토프에 대한 결합 부위를 형성한다. 일부 실시 형태에서, NKp46은 NK 세포의 표면 상에 존재한다.
다른 태양에서, NKp46에 결합하기 위하여 본 명세서에 기재된 NKp46 항체들 중 임의의 것과 경쟁하는 다중특이성 항체가 본 명세서에 제공된다. 다른 태양에서, 본 명세서에 기재된 NKp46 항체들 중 임의의 것과 동일한 에피토프에 결합하는 다중특이성 항체가 본 명세서에 제공된다. 다른 태양에서, 본 명세서에 기재된 NKp46 항체에 의해 결합되는 NKp46 상의 에피토프와 중첩되는 NKp46 상의 에피토프에 결합하는 다중특이성 NKp46 항체가 제공된다.
일 태양에서, NKp46에 결합하기 위하여 NKp46 참조 항체와 경쟁하는 다중특이성 항체가 제공된다. 다른 태양에서, NKp46 참조 항체와 동일한 NKp46 에피토프에 결합하는 다중특이성 NKp46 항체가 제공된다. 다른 태양에서, NKp46 참조 항체에 의해 결합되는 NKp46 상의 에피토프와 중첩되는 NKp46 상의 에피토프에 결합하는 다중특이성 NKp46 항체가 제공된다.
일 실시 형태에서, NKp46 참조 항체는 (i) 서열 번호 67의 아미노산 서열을 갖는 VH의, VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3의 아미노산 서열을 각각 갖는 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 VH; 및 (ii) 서열 번호 68의 아미노산 서열을 갖는 VL의, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3의 아미노산 서열을 각각 갖는 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함한다.
본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46 항체의 일부 실시 형태에서, 제2 표적은 NKp46 항원이 아니다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46 항체의 일부 실시 형태에서, 제3 표적은 NKp46 항원이 아니다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46 항체의 일부 실시 형태에서, 제4 표적은 NKp46 항원이 아니다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46 항체의 일부 실시 형태에서, 제2 표적은 NKp46 항원이 아니고, 제3 표적은 NKp46 항원이 아니다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46 항체의 일부 실시 형태에서, 제2 표적은 NKp46 항원이 아니고, 제4 표적은 NKp46 항원이 아니다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46 항체의 일부 실시 형태에서, 제3 표적은 NKp46 항원이 아니고, 제4 표적은 NKp46 항원이 아니다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46 항체의 일부 실시 형태에서, 제2 표적은 NKp46 항원이 아니고, 제3 표적은 NKp46 항원이 아니고, 제4 표적은 NKp46 항원이 아니다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46 항체의 일부 실시 형태에서, 제2 표적은 NKp46 에피토프가 아니다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46 항체의 일부 실시 형태에서, 제3 표적은 NKp46 에피토프가 아니다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46 항체의 일부 실시 형태에서, 제4 표적은 NKp46 에피토프가 아니다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46 항체의 일부 실시 형태에서, 제2 표적은 NKp46 에피토프가 아니고, 제3 표적은 NKp46 에피토프가 아니다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46 항체의 일부 실시 형태에서, 제2 표적은 NKp46 에피토프가 아니고, 제4 표적은 NKp46 에피토프가 아니다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46 항체의 일부 실시 형태에서, 제3 표적은 NKp46 에피토프가 아니고, 제4 표적은 NKp46 에피토프가 아니다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46 항체의 일부 실시 형태에서, 제2 표적은 NKp46 에피토프가 아니고, 제3 표적은 NKp46 에피토프가 아니고, 제4 표적은 NKp46 에피토프가 아니다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46 항체의 일부 실시 형태에서, 제2 표적은 BCMA이다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46 항체의 일부 실시 형태에서, 제2 표적은 GPRC5d이다.
NK 세포의 표면 상에 존재하는 NKp46 및 제2 표적 세포의 표면 상에 존재하는 제2 표적 항원에 대한 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 결합은, 예를 들어 제2 표적 세포의 살해를 가져올 수 있다. 다른 실시 형태에서, NK 세포의 표면 상에 존재하는 NKp46 및 제2 표적 항원에 대한 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 결합은, 예를 들어 NK 세포의 활성화를 가져올 수 있다. 일부 실시 형태에서, 이중특이성 항체가 본 명세서에 제공되며, 상기 이중특이성 항체는 (a) NKp46에 결합하는 제1 결합 도메인, 및 (b) 암 세포의 표면 상에 존재하는 암 항원에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 암 세포의 표면 상의 항원은 종양-특이적 항원이다. 일부 실시 형태에서, 암 세포의 표면 상의 항원은 종양-관련 항원이다. 일부 실시 형태에서, 암 세포의 표면 상의 항원은 신생항원이다. 소정 실시 형태에서, 이중특이성 항체의 제1 결합 도메인은 NKp46에 특이적으로 결합한다. 일부 실시 형태에서, NKp46은 NK 세포의 표면 상에 존재한다. 일부 실시 형태에서, 암 세포는 이중특이성 항체가 NK 세포의 표면 상의 NKp46 및 암 세포의 표면 상의 항원에 결합할 때 살해된다.
T 세포의 표면 상에 존재하는 NKp46 및 제2 표적 세포의 표면 상에 존재하는 제2 표적 항원에 대한 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 결합은, 예를 들어 제2 표적 세포의 살해를 가져올 수 있다. 다른 실시 형태에서, T 세포의 표면 상에 존재하는 NKp46 및 제2 표적 항원에 대한 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 결합은, 예를 들어 T 세포의 활성화를 가져올 수 있다. 일부 실시 형태에서, 이중특이성 항체가 본 명세서에 제공되며, 상기 이중특이성 항체는 (a) NKp46에 결합하는 제1 결합 도메인, 및 (b) 암 세포의 표면 상에 존재하는 암 항원에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 암 세포의 표면 상의 항원은 종양-특이적 항원이다. 일부 실시 형태에서, 암 세포의 표면 상의 항원은 종양-관련 항원이다. 일부 실시 형태에서, 암 세포의 표면 상의 항원은 신생항원이다. 소정 실시 형태에서, 이중특이성 항체의 제1 결합 도메인은 NKp46에 특이적으로 결합한다. 일부 실시 형태에서, NKp46은 T 세포의 표면 상에 존재한다. 일부 실시 형태에서, 암 세포는 이중특이성 항체가 T 세포의 표면 상의 NKp46 및 암 세포의 표면 상의 항원에 결합할 때 살해된다. 일부 실시 형태에서, T 세포는 감마 델타 T 세포이다. 일부 실시 형태에서, T 세포는 선천성 림프계 세포의 점막 집단이다.
다른 태양에서, 이중특이성 항체가 본 명세서에 제공되며, 상기 이중특이성 항체는 (a) NKp46에 결합하는 제1 결합 도메인, 및 (b) BCMA에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함한다. 소정 실시 형태에서, 이중특이성 항체의 제1 결합 도메인은 NKp46에 특이적으로 결합한다. 일부 실시 형태에서, NKp46은 NK 세포의 표면 상에 존재한다. 일부 실시 형태에서, BCMA는 세포의 표면 상에 존재한다. 소정 실시 형태에서, NKp46은 NK 세포의 표면 상에 존재하고, BCMA는 세포의 표면 상에 존재한다. 일부 실시 형태에서, 표면 상에 BCMA를 갖는 세포는 이중특이성 항체가 NK 세포의 표면 상의 NKp46 및 세포의 표면 상의 BCMA에 결합할 때 살해된다. 일부 실시 형태에서, BCMA는 암 세포의 표면 상에 존재한다. 소정 실시 형태에서, NKp46은 NK 세포의 표면 상에 존재하고, BCMA는 암 세포의 표면 상에 존재한다. 일부 실시 형태에서, 암 세포는 이중특이성 항체가 NK 세포의 표면 상의 NKp46 및 세포의 표면 상의 BCMA에 결합할 때 살해된다. 소정 실시 형태에서, 제1 결합 도메인으로서 본 명세서에 제공된 임의의 NKp46 항체를 포함하는 이중특이성 항체가 고려된다. 게다가, 소정 실시 형태에서, 제1 결합 도메인으로서 본 명세서에 제공된 임의의 NKp46 항체 및 BCMA에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함하는 이중특이성 항체가 또한 고려된다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체는 이중특이성 항체이며, 상기 이중특이성 항체는 (a) NKp46에 결합하는 제1 결합 도메인, 및 (b) BCMA에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함하며, 여기서 상기 BCMA에 결합하는 제2 결합 도메인은 (i) 서열 번호 101, 102, 및 103의 아미노산 서열을 각각 갖는 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 VH, 및 (ii) 서열 번호 104, 105, 및 106의 아미노산 서열을 각각 갖는 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, BCMA에 결합하는 제2 결합 도메인은 (i) 서열 번호 107, 108, 및 109의 아미노산 서열을 각각 갖는 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 VH, 및 (ii) 서열 번호 110, 111, 및 112의 아미노산 서열을 각각 갖는 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, BCMA에 결합하는 제2 결합 도메인은 (i) 서열 번호 113, 114, 및 115의 아미노산 서열을 각각 갖는 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 VH, 및 (ii) 서열 번호 116, 117, 및 118의 아미노산 서열을 각각 갖는 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, BCMA에 결합하는 제2 결합 도메인은 (i) 서열 번호 119, 120, 및 121의 아미노산 서열을 각각 갖는 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 VH, 및 (ii) 서열 번호 122, 123, 및 124의 아미노산 서열을 각각 갖는 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, BCMA에 결합하는 제2 결합 도메인은 (i) 서열 번호 125, 126, 및 127의 아미노산 서열을 각각 갖는 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 VH, 및 (ii) 서열 번호 128, 129, 및 130의 아미노산 서열을 각각 갖는 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, BCMA에 결합하는 제2 결합 도메인은, 서열 번호 99의, VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3의 아미노산 서열을 각각 갖는 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 VH를 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, BCMA에 결합하는 제2 결합 도메인은, 서열 번호 100의, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3의 아미노산 서열을 각각 갖는 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, BCMA에 결합하는 제2 결합 도메인은 (i) 서열 번호 99의, VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3의 아미노산 서열을 각각 갖는 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 VH, 및 (ii) 서열 번호 100의, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3의 아미노산 서열을 각각 갖는 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, BCMA에 결합하는 제2 결합 도메인은 서열 번호 99의 아미노산 서열을 갖는 VH를 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, BCMA에 결합하는 제2 결합 도메인은 서열 번호 100의 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, BCMA에 결합하는 제2 결합 도메인은 서열 번호 99의 아미노산 서열을 갖는 VH, 및 서열 번호 100의 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, BCMA에 결합하는 제2 결합 도메인은 서열 번호 99의 아미노산 서열과 적어도 95%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, BCMA에 결합하는 제2 결합 도메인은 서열 번호 100의 아미노산 서열과 적어도 95%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, BCMA에 결합하는 제2 결합 도메인은 서열 번호 99의 아미노산 서열과 적어도 95%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH, 및 서열 번호 100의 아미노산 서열과 적어도 95%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다.
다른 태양에서, 이중특이성 항체가 본 명세서에 제공되며, 상기 이중특이성 항체는 (a) NKp46에 결합하는 제1 결합 도메인, 및 (b) GPRC5d에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함한다. 소정 실시 형태에서, 이중특이성 항체의 제1 결합 도메인은 NKp46에 특이적으로 결합한다. 일부 실시 형태에서, NKp46은 NK 세포의 표면 상에 존재한다. 일부 실시 형태에서, GPRC5d는 세포의 표면 상에 존재한다. 소정 실시 형태에서, NKp46은 NK 세포의 표면 상에 존재하고, GPRC5d는 세포의 표면 상에 존재한다. 일부 실시 형태에서, 표면 상에 GPRC5d를 갖는 세포는 이중특이성 항체가 NK 세포의 표면 상의 NKp46 및 세포의 표면 상의 GPRC5d에 결합할 때 살해된다. 일부 실시 형태에서, GPRC5d는 암 세포의 표면 상에 존재한다. 소정 실시 형태에서, NKp46은 NK 세포의 표면 상에 존재하고, GPRC5d는 암 세포의 표면 상에 존재한다. 일부 실시 형태에서, 암 세포는 이중특이성 항체가 NK 세포의 표면 상의 NKp46 및 암 세포의 표면 상의 GPRC5d에 결합할 때 살해된다. 소정 실시 형태에서, 제1 결합 도메인으로서 본 명세서에 제공된 임의의 NKp46 항체를 포함하는 이중특이성 항체가 고려된다. 게다가, 소정 실시 형태에서, 제1 결합 도메인으로서 본 명세서에 제공된 임의의 NKp46 항체 및 GPRC5d에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함하는 이중특이성 항체가 또한 고려된다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체는 이중특이성 항체이며, 상기 이중특이성 항체는 (a) NKp46에 결합하는 제1 결합 도메인, 및 (b) GPRC5d에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함하며, 여기서 상기 GPRC5d에 결합하는 제2 결합 도메인은 (i) 서열 번호 133, 134, 및 135의 아미노산 서열을 각각 갖는 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 VH, 및 (ii) 서열 번호 136, 137, 및 138의 아미노산 서열을 각각 갖는 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, GPRC5d에 결합하는 제2 결합 도메인은 (i) 서열 번호 139, 140, 및 141의 아미노산 서열을 각각 갖는 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 VH, 및 (ii) 서열 번호 142, 143, 및 144의 아미노산 서열을 각각 갖는 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, GPRC5d에 결합하는 제2 결합 도메인은 (i) 서열 번호 145, 146, 및 147의 아미노산 서열을 각각 갖는 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 VH, 및 (ii) 서열 번호 148, 149, 및 150의 아미노산 서열을 각각 갖는 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, GPRC5d에 결합하는 제2 결합 도메인은 (i) 서열 번호 151, 152, 및 153의 아미노산 서열을 각각 갖는 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 VH, 및 (ii) 서열 번호 154, 155, 및 156의 아미노산 서열을 각각 갖는 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, GPRC5d에 결합하는 제2 결합 도메인은 (i) 서열 번호 157, 158, 및 159의 아미노산 서열을 각각 갖는 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 VH, 및 (ii) 서열 번호 160, 161, 및 162의 아미노산 서열을 각각 갖는 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, GPRC5d에 결합하는 제2 결합 도메인은, 서열 번호 131의, VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3의 아미노산 서열을 각각 갖는 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 VH를 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, GPRC5d에 결합하는 제2 결합 도메인은, 서열 번호 132의, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3의 아미노산 서열을 각각 갖는 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, GPRC5d에 결합하는 제2 결합 도메인은 (i) 서열 번호 131의, VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3의 아미노산 서열을 각각 갖는 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 VH, 및 (ii) 서열 번호 132의, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3의 아미노산 서열을 각각 갖는 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, GPRC5d에 결합하는 제2 결합 도메인은 서열 번호 131의 아미노산 서열을 갖는 VH를 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, GPRC5d에 결합하는 제2 결합 도메인은 서열 번호 132의 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, GPRC5d에 결합하는 제2 결합 도메인은 서열 번호 131의 아미노산 서열을 갖는 VH, 및 서열 번호 132의 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, GPRC5d에 결합하는 제2 결합 도메인은 서열 번호 131의 아미노산 서열과 적어도 95%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, GPRC5d에 결합하는 제2 결합 도메인은 서열 번호 132의 아미노산 서열과 적어도 95%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, GPRC5d에 결합하는 제2 결합 도메인은 서열 번호 131의 아미노산 서열과 적어도 95%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH, 및 서열 번호 132의 아미노산 서열과 적어도 95%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다.
구체적인 실시 형태에서, 노브-인-홀 포맷으로 본 명세서에 제공된 NKp46 항체를 포함하는 다중특이성 항체가 제공된다. 구체적인 실시 형태에서, 노브-인-홀 포맷으로 본 명세서에 제공된 NKp46 항체를 포함하는 이중특이성 항체가 제공된다. 구체적인 실시 형태에서, 노브-인-홀 포맷으로 본 명세서에 제공된 NKp46 항체를 포함하는 삼중특이성 항체가 제공된다. 구체적인 실시 형태에서, 노브-인-홀 포맷으로 본 명세서에 제공된 NKp46 항체를 포함하는 사중특이성 항체가 제공된다. 당업계에 잘 알려진 방법을 사용하여(예를 들어, scFv를 N-말단 또는 C-말단에 부가하여) 다른 특이성이 노브-인-홀 포맷의 항체에 추가될 수 있다. 또한, 다중특이성 항체를 제조하는 다른 포맷 및 방법이 또한 당업계에 알려져 있으며 고려된다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 NKp46 항체는 이중특이성 항체 내에 포함된다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 NKp46 항체는 삼중특이성 항체 내에 포함된다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 NKp46 항체는 사중특이성 항체 내에 포함된다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 NKp46 이중특이성 항체는 다중특이성 항체 내에 포함된다.
소정 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체는 제1 NKp46 에피토프에 결합하는 본 명세서에 제공된 NKp46 항체를 포함하는 제1 결합 도메인, 및 제2 에피토프에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함하며, 제1 NKp46 에피토프와 제2 에피토프는 동일하지 않다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 이중특이성 항체는 제1 NKp46 에피토프에 결합하는 본 명세서에 제공된 NKp46 항체를 포함하는 제1 결합 도메인, 및 제2 에피토프에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함하며, 제1 NKp46 에피토프와 제2 에피토프는 동일하지 않다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 삼중특이성 항체는 제1 NKp46 에피토프에 결합하는 본 명세서에 제공된 NKp46 항체를 포함하는 제1 결합 도메인, 제2 에피토프에 결합하는 제2 결합 도메인, 및 제3 에피토프에 결합하는 제3 결합 도메인을 포함하며, 제1 NKp46 에피토프, 제2 에피토프, 및 제3 에피토프는 동일하지 않다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 사중특이성 항체는 제1 NKp46 에피토프에 결합하는 본 명세서에 제공된 NKp46 항체를 포함하는 제1 결합 도메인, 제2 에피토프에 결합하는 제2 결합 도메인, 제3 에피토프에 결합하는 제3 결합 도메인, 및 제4 에피토프에 결합하는 제4 결합 도메인을 포함하며, 제1 NKp46 에피토프, 제2 에피토프, 제3 에피토프, 및 제4 에피토프는 동일하지 않다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체는 제1 NKp46 항원에 결합하는 본 명세서에 제공된 NKp46 항체를 포함하는 제1 결합 도메인, 및 제2 항원에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함하며, 제1 NKp46 항원과 제2 항원은 동일하지 않다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 이중특이성 항체는 제1 NKp46 항원에 결합하는 본 명세서에 제공된 NKp46 항체를 포함하는 제1 결합 도메인, 및 제2 항원에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함하며, 제1 NKp46 항원과 제2 항원은 동일하지 않다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 삼중특이성 항체는 제1 NKp46 항원에 결합하는 본 명세서에 제공된 NKp46 항체를 포함하는 제1 결합 도메인, 제2 항원에 결합하는 제2 결합 도메인, 및 제3 항원에 결합하는 제3 결합 도메인을 포함하며, 제1 NKp46 항원, 제2 항원, 및 제3 항원은 동일하지 않다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 사중특이성 항체는 제1 NKp46 항원에 결합하는 본 명세서에 제공된 NKp46 항체를 포함하는 제1 결합 도메인, 제2 항원에 결합하는 제2 결합 도메인, 제3 항원에 결합하는 제3 결합 도메인, 및 제4 항원에 결합하는 제4 결합 도메인을 포함하며, 제1 NKp46 항원, 제2 항원, 제3 항원, 및 제4 항원은 동일하지 않다. 구체적인 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 NKp46 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 NKp46에 특이적으로 결합한다.
일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제2 결합 도메인은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하고, 제2 결합 도메인은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시 형태에서, NKp46 항체는 단일 도메인 항체 또는 나노바디가 아니다. 일부 실시 형태에서, 제3 결합 도메인은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제4 결합 도메인은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다.
소정 실시 형태에서, NKp46 다중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 NKp46 상에 위치된 제1 에피토프 및 제2 표적 항원의 제2 에피토프에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체가 본 명세서에 제공되며, 상기 다중특이성 항체는 (a) NKp46 항원에 결합하는 제1 결합 도메인, 및 (b) 제2 표적 항원에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체가 본 명세서에 제공되며, 상기 다중특이성 항체는 (a) NKp46 항원에 특이적으로 결합하는 제1 결합 도메인, 및 (b) 제2 표적 항원에 특이적으로 결합하는 제2 결합 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체가 본 명세서에 제공되며, 상기 다중특이성 항체는 (a) NKp46 항원 상의 제1 에피토프에 결합하는 제1 결합 도메인, 및 (b) 제2 표적 항원 상의 제2 에피토프에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체가 본 명세서에 제공되며, 상기 다중특이성 항체는 (a) NKp46 항원 상의 제1 에피토프에 특이적으로 결합하는 제1 결합 도메인, 및 (b) 제2 표적 항원 상의 제2 에피토프에 특이적으로 결합하는 제2 결합 도메인을 포함한다.
구체적인 실시 형태에서, NKp46 항원은 NK 세포의 표면 상에 존재한다. 소정 실시 형태에서, 제2 표적 항원은 NKp46이 아니다. NK 세포의 표면 상에 존재하는 NKp46 및 제2 표적 세포의 표면 상에 존재하는 제2 표적 항원에 대한 NKp46 다중특이성 항체의 결합은, 예를 들어 제2 표적 세포의 살해를 가져올 수 있다. 다른 실시 형태에서, NK 세포의 표면 상에 존재하는 NKp46 및 제2 표적 항원에 대한 NKp46 다중특이성 항체의 결합은, 예를 들어 NK 세포의 활성화를 가져올 수 있다.
구체적인 실시 형태에서, NKp46 항원은 T 세포의 표면 상에 존재한다. 소정 실시 형태에서, 제2 표적 항원은 NKp46이 아니다. T 세포의 표면 상에 존재하는 NKp46 및 제2 표적 세포의 표면 상에 존재하는 제2 표적 항원에 대한 NKp46 다중특이성 항체의 결합은, 예를 들어 제2 표적 세포의 살해를 가져올 수 있다. 다른 실시 형태에서, T 세포의 표면 상에 존재하는 NKp46 및 제2 표적 항원에 대한 NKp46 다중특이성 항체의 결합은, 예를 들어 T 세포의 활성화를 가져올 수 있다. 일부 실시 형태에서, T 세포는 감마 델타 T 세포이다. 일부 실시 형태에서, T 세포는 선천성 림프계 세포이다.
다른 태양에서, NKp46에 결합하는 제1 결합 도메인 및 BCMA에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함하는 다중특이성 항체("다중특이성 NKp46/BCMA 항체")가 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 NKp46/BCMA 항체는 이중특이성 항체이다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 NKp46/BCMA 항체는 삼중특이성 항체이다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 NKp46/BCMA 항체는 사중특이성 항체이다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46/BCMA 항체는 (a) NKp46에 결합하는 제1 결합 도메인, 및 (b) BCMA에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함한다. 일 실시 형태에서, 다중특이성 NKp46/BCMA 항체는 (a) NKp46에 결합하는 제1 결합 도메인, 및 (b) BCMA에 결합하는 제2 결합 도메인, 및 (c) 제3 표적에 결합하는 제3 결합 도메인을 포함한다. 일 실시 형태에서, 다중특이성 NKp46/BCMA 항체는 (a) NKp46에 결합하는 제1 결합 도메인, 및 (b) BCMA에 결합하는 제2 결합 도메인, (c) 제3 표적에 결합하는 제3 결합 도메인, 및 (d) 제4 표적에 결합하는 제4 결합 도메인을 포함한다.
본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46/BCMA 항체의 일부 실시 형태에서, NKp46에 결합하는 제1 결합 도메인은, 서열 번호 67의 아미노산 서열을 갖는 VH의, VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3의 아미노산 서열을 각각 갖는 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 VH를 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46/BCMA 항체의 일부 실시 형태에서, NKp46에 결합하는 제1 결합 도메인은, 서열 번호 68의 아미노산 서열을 갖는 VL의, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3의 아미노산 서열을 각각 갖는 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46/BCMA 항체의 일부 실시 형태에서, NKp46에 결합하는 제1 결합 도메인은 (i) 서열 번호 67의 아미노산 서열을 갖는 VH의, VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3의 아미노산 서열을 각각 갖는 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 VH, 및 (ii) 서열 번호 68의 아미노산 서열을 갖는 VL의, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3의 아미노산 서열을 각각 갖는 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46/BCMA 항체의 일부 실시 형태에서, NKp46에 결합하는 제1 결합 도메인은 서열 번호 67의 아미노산 서열을 갖는 VH를 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46/BCMA 항체의 일부 실시 형태에서, NKp46에 결합하는 제1 결합 도메인은 서열 번호 68의 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46/BCMA 항체의 일부 실시 형태에서, NKp46에 결합하는 제1 결합 도메인은 서열 번호 67의 아미노산 서열을 갖는 VH, 및 서열 번호 68의 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함한다.
본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46/BCMA 항체의 일부 실시 형태에서, NKp46에 결합하는 제1 결합 도메인의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3 아미노산 서열은 카바트 넘버링 체계에 따른다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46/BCMA 항체의 일부 실시 형태에서, NKp46에 결합하는 제1 결합 도메인의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3 아미노산 서열은 초티아 넘버링 체계에 따른다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46/BCMA 항체의 일부 실시 형태에서, NKp46에 결합하는 제1 결합 도메인의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3 아미노산 서열은 AbM 넘버링 체계에 따른다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46/BCMA 항체의 일부 실시 형태에서, NKp46에 결합하는 제1 결합 도메인의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3 아미노산 서열은 Contact 넘버링 체계에 따른다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46/BCMA 항체의 일부 실시 형태에서, NKp46에 결합하는 제1 결합 도메인의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3 아미노산 서열은 IMGT 넘버링 체계에 따른다.
본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46/BCMA 항체의 일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인은 NKp46 항원에 결합한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46/BCMA 항체의 일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인은 NKp46 에피토프에 결합한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46/BCMA 항체의 일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인은 NKp46에 특이적으로 결합한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46/BCMA 항체의 일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3은 NKp46의 항원에 대한 결합 부위를 형성한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46/BCMA 항체의 일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3은 NKp46의 에피토프에 대한 결합 부위를 형성한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46/BCMA 항체의 일부 실시 형태에서, NKp46은 NK 세포의 표면 상에 존재한다.
본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46/BCMA 항체의 일부 실시 형태에서, BCMA에 결합하는 제2 결합 도메인은, 서열 번호 99의, VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3의 아미노산 서열을 각각 갖는 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 VH를 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46/BCMA 항체의 일부 실시 형태에서, BCMA에 결합하는 제2 결합 도메인은, 서열 번호 100의, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3의 아미노산 서열을 각각 갖는 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46/BCMA 항체의 일부 실시 형태에서, BCMA에 결합하는 제2 결합 도메인은 (i) 서열 번호 99의, VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3의 아미노산 서열을 각각 갖는 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 VH, 및 (ii) 서열 번호 100의, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3의 아미노산 서열을 각각 갖는 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46/BCMA 항체의 일부 실시 형태에서, BCMA에 결합하는 제2 결합 도메인은 서열 번호 99의 아미노산 서열을 갖는 VH를 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46/BCMA 항체의 일부 실시 형태에서, BCMA에 결합하는 제2 결합 도메인은 서열 번호 100의 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46/BCMA 항체의 일부 실시 형태에서, BCMA에 결합하는 제2 결합 도메인은 서열 번호 99의 아미노산 서열을 갖는 VH, 및 서열 번호 100의 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함한다.
본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46/BCMA 항체의 일부 실시 형태에서, BCMA에 결합하는 제2 결합 도메인의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3 아미노산 서열은 카바트 넘버링 체계에 따른다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46/BCMA 항체의 일부 실시 형태에서, BCMA에 결합하는 제2 결합 도메인의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3 아미노산 서열은 초티아 넘버링 체계에 따른다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46/BCMA 항체의 일부 실시 형태에서, BCMA에 결합하는 제2 결합 도메인의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3 아미노산 서열은 AbM 넘버링 체계에 따른다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46/BCMA 항체의 일부 실시 형태에서, BCMA에 결합하는 제2 결합 도메인의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3 아미노산 서열은 Contact 넘버링 체계에 따른다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46/BCMA 항체의 일부 실시 형태에서, BCMA에 결합하는 제2 결합 도메인의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3 아미노산 서열은 IMGT 넘버링 체계에 따른다.
본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46/BCMA 항체의 일부 실시 형태에서, 제2 결합 도메인은 BCMA 항원에 결합한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46/BCMA 항체의 일부 실시 형태에서, 제2 결합 도메인은 BCMA 에피토프에 결합한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46/BCMA 항체의 일부 실시 형태에서, 제2 결합 도메인은 BCMA에 특이적으로 결합한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46/BCMA 항체의 일부 실시 형태에서, 제2 결합 도메인의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3은 BCMA의 항원에 대한 결합 부위를 형성한다. 일부 실시 형태에서, 제2 결합 도메인의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3은 BCMA의 에피토프에 대한 결합 부위를 형성한다. 일부 실시 형태에서, BCMA는 종양 세포의 표면 상에 존재한다.
본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46/BCMA 항체의 일부 실시 형태에서, 제3 표적은 NKp46 항원이 아니다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46/BCMA 항체의 일부 실시 형태에서, 제4 표적은 NKp46 항원이 아니다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46/BCMA 항체의 일부 실시 형태에서, 제3 표적은 NKp46 항원이 아니고, 제4 표적은 NKp46 항원이 아니다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46/BCMA 항체의 일부 실시 형태에서, 제3 표적은 BCMA 항원이 아니다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46/BCMA 항체의 일부 실시 형태에서, 제4 표적은 BCMA 항원이 아니다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46/BCMA 항체의 일부 실시 형태에서, 제3 표적은 BCMA 항원이 아니고, 제4 표적은 BCMA 항원이 아니다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46/BCMA 항체의 일부 실시 형태에서, 제3 표적은 NKp46 에피토프가 아니다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46/BCMA 항체의 일부 실시 형태에서, 제4 표적은 NKp46 에피토프가 아니다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46/BCMA 항체의 일부 실시 형태에서, 제3 표적은 NKp46 에피토프가 아니고, 제4 표적은 NKp46 에피토프가 아니다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46/BCMA 항체의 일부 실시 형태에서, 제3 표적은 BCMA 에피토프가 아니다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46/BCMA 항체의 일부 실시 형태에서, 제4 표적은 BCMA 에피토프가 아니다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46/BCMA 항체의 일부 실시 형태에서, 제3 표적은 BCMA 에피토프가 아니고, 제4 표적은 BCMA 에피토프가 아니다.
구체적인 실시 형태에서, 표적은 포유동물 유래이다. 구체적인 실시 형태에서, 표적은 래트 유래이다. 구체적인 실시 형태에서, 표적은 마우스 유래이다. 구체적인 실시 형태에서, 표적은 영장류 유래이다. 구체적인 실시 형태에서, 표적은 인간 유래이다.
구체적인 실시 형태에서, 노브-인-홀 포맷의 다중특이성 NKp46/BCMA 항체가 제공된다. 구체적인 실시 형태에서, 노브-인-홀 포맷의 이중특이성 NKp46/BCMA 항체가 제공된다. 구체적인 실시 형태에서, 노브-인-홀 포맷의 삼중특이성 항체가 제공된다. 구체적인 실시 형태에서, 노브-인-홀 포맷의 사중특이성 항체가 제공된다. 당업계에 잘 알려진 방법을 사용하여(예를 들어, scFv를 N-말단 또는 C-말단에 부가하여) 다른 특이성이 노브-인-홀 포맷의 항체에 추가될 수 있다. 또한, 다중특이성 항체를 제조하는 다른 포맷 및 방법이 또한 당업계에 알려져 있으며 고려된다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 NKp46/BCMA 항체는 이중특이성 항체 내에 포함된다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 NKp46/BCMA 항체는 삼중특이성 항체 내에 포함된다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 NKp46/BCMA 항체는 사중특이성 항체 내에 포함된다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 NKp46/BCMA 이중특이성 항체는 다중특이성 항체 내에 포함된다.
소정 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 삼중특이성 NKp46/BCMA 항체는 NKp46 에피토프에 결합하는 본 명세서에 제공된 NKp46 항체를 포함하는 제1 결합 도메인, BCMA 에피토프에 결합하는 본 명세서에 제공된 BCMA 항체를 포함하는 제2 결합 도메인, 및 제3 에피토프에 결합하는 제3 결합 도메인을 포함하며, NKp46 에피토프, BCMA 에피토프, 및 제3 에피토프는 동일하지 않다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 사중특이성 항체는 NKp46 에피토프에 결합하는 본 명세서에 제공된 NKp46 항체를 포함하는 제1 결합 도메인, BCMA 에피토프에 결합하는 본 명세서에 제공된 BCMA 항체를 포함하는 제2 결합 도메인, 제3 에피토프에 결합하는 제3 결합 도메인, 및 제4 에피토프에 결합하는 제4 결합 도메인을 포함하며, NKp46 에피토프, BCMA 에피토프, 제3 에피토프, 및 제4 에피토프는 동일하지 않다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 삼중특이성 항체는 NKp46 항원에 결합하는 본 명세서에 제공된 NKp46 항체를 포함하는 제1 결합 도메인, BCMA 항원에 결합하는 본 명세서에 제공된 BCMA 항체를 포함하는 제2 결합 도메인, 및 제3 항원에 결합하는 제3 결합 도메인을 포함하며, NKp46 항원, BCMA 항원, 및 제3 항원은 동일하지 않다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 사중특이성 항체는 NKp46 항원에 결합하는 본 명세서에 제공된 NKp46 항체를 포함하는 제1 결합 도메인, BCMA 항원에 결합하는 본 명세서에 제공된 BCMA 항체를 포함하는 제2 결합 도메인, 제3 항원에 결합하는 제3 결합 도메인, 및 제4 항원에 결합하는 제4 결합 도메인을 포함하며, NKG2d 항원, BCMA 항원, 제3 항원, 및 제4 항원은 동일하지 않다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46/BCMA 항체의 소정 실시 형태에서, NKp46에 결합하는 제1 결합 도메인은 NKp46에 특이적으로 결합한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46/BCMA 항체의 다른 실시 형태에서, BCMA에 결합하는 제2 결합 도메인은 BCMA에 특이적으로 결합한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46/BCMA 항체의 또 다른 실시 형태에서, NKp46에 결합하는 제1 결합 도메인은 NKp46에 특이적으로 결합하고, BCMA에 결합하는 제2 결합 도메인은 BCMA에 특이적으로 결합한다.
일부 실시 형태에서, 다중특이성 NKp46/BCMA 항체는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제2 결합 도메인은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하고, 제2 결합 도메인은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시 형태에서, NKp46 항체는 단일 도메인 항체 또는 나노바디가 아니다. 일부 실시 형태에서, 제3 결합 도메인은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제4 결합 도메인은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다.
소정 실시 형태에서, NKp46/BCMA 다중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 NKp46 상에 위치된 제1 에피토프 및 BCMA 상에 위치된 제2 에피토프에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 NKp46/BCMA 항체가 본 명세서에 제공되며, 상기 다중특이성 NKp46/BCMA 항체는 (a) NKG2d 항원에 결합하는 제1 결합 도메인, 및 (b) BCMA 항원에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 NKp46/BCMA 항체가 본 명세서에 제공되며, 상기 다중특이성 NKp46/BCMA 항체는 (a) NKG2d 항원에 특이적으로 결합하는 제1 결합 도메인, 및 (b) BCMA 항원에 특이적으로 결합하는 제2 결합 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 NKp46/BCMA 항체가 본 명세서에 제공되며, 상기 다중특이성 NKp46/BCMA 항체는 (a) NKp46 항원 상의 제1 에피토프에 결합하는 제1 결합 도메인, 및 (b) BCMA 항원 상의 제2 에피토프에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체가 본 명세서에 제공되며, 상기 다중특이성 항체는 (a) NKp46 항원 상의 제1 에피토프에 특이적으로 결합하는 제1 결합 도메인, 및 (b) BCMA 항원 상의 제2 에피토프에 특이적으로 결합하는 제2 결합 도메인을 포함한다.
구체적인 실시 형태에서, NKp46 항원은 NK 세포의 표면 상에 존재한다. 구체적인 실시 형태에서, BCMA 항원은 종양 세포의 표면 상에 존재한다. NK 세포의 표면 상에 존재하는 NKp46 및 종양 세포의 표면 상에 존재하는 BCMA에 대한 NKp46/BCMA 다중특이성 항체의 결합은, 예를 들어 종양 세포의 살해를 가져올 수 있다. 다른 실시 형태에서, NK 세포의 표면 상에 존재하는 NKp46 및 종양 세포의 표면 상에 존재하는 BCMA에 대한 NKp46/BCMA 다중특이성 항체의 결합은, 예를 들어 NK 세포의 활성화를 가져올 수 있다.
구체적인 실시 형태에서, NKp46 항원은 T 세포의 표면 상에 존재한다. 소정 실시 형태에서, BCMA 항원은 종양 세포의 표면 상에 존재한다. T 세포의 표면 상에 존재하는 NKp46 및 종양 세포의 표면 상에 존재하는 BCMA에 대한 NKp46/BCMA 다중특이성 항체의 결합은, 예를 들어 종양 세포의 살해를 가져올 수 있다. 다른 실시 형태에서, T 세포의 표면 상에 존재하는 NKp46 및 종양 세포의 표면 상에 존재하는 BCMA에 대한 NKp46/BCMA 다중특이성 항체의 결합은, 예를 들어 T 세포의 활성화를 가져올 수 있다. 일부 실시 형태에서, T 세포는 감마 델타 T 세포이다. 일부 실시 형태에서, T 세포는 선천성 림프계 세포이다.
다른 태양에서, NKp46에 결합하는 제1 결합 도메인 및 GPRC5d에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함하는 다중특이성 항체("다중특이성 NKp46/GPRC5d 항체")가 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 NKp46/GPRC5d 항체는 이중특이성 항체이다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 NKp46/GPRC5d 항체는 삼중특이성 항체이다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 NKp46/GPRC5d 항체는 사중특이성 항체이다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46/GPRC5d 항체는 (a) NKp46에 결합하는 제1 결합 도메인, 및 (b) GPRC5d에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함한다. 일 실시 형태에서, 다중특이성 NKp46/GPRC5d 항체는 (a) NKp46에 결합하는 제1 결합 도메인, 및 (b) GPRC5d에 결합하는 제2 결합 도메인, 및 (c) 제3 표적에 결합하는 제3 결합 도메인을 포함한다. 일 실시 형태에서, 다중특이성 NKp46/GPRC5d 항체는 (a) NKp46에 결합하는 제1 결합 도메인, 및 (b) GPRC5d에 결합하는 제2 결합 도메인, (c) 제3 표적에 결합하는 제3 결합 도메인, 및 (d) 제4 표적에 결합하는 제4 결합 도메인을 포함한다.
본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46/GPRC5d 항체의 일부 실시 형태에서, NKp46에 결합하는 제1 결합 도메인은, 서열 번호 67의 아미노산 서열을 갖는 VH의, VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3의 아미노산 서열을 각각 갖는 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 VH를 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46/GPRC5d 항체의 일부 실시 형태에서, NKp46에 결합하는 제1 결합 도메인은, 서열 번호 68의 아미노산 서열을 갖는 VL의, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3의 아미노산 서열을 각각 갖는 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46/GPRC5d 항체의 일부 실시 형태에서, NKp46에 결합하는 제1 결합 도메인은 (i) 서열 번호 67의 아미노산 서열을 갖는 VH의, VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3의 아미노산 서열을 각각 갖는 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 VH, 및 (ii) 서열 번호 68의 아미노산 서열을 갖는 VL의, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3의 아미노산 서열을 각각 갖는 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46/GPRC5d 항체의 일부 실시 형태에서, NKp46에 결합하는 제1 결합 도메인은 서열 번호 67의 아미노산 서열을 갖는 VH를 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46/GPRC5d 항체의 일부 실시 형태에서, NKp46에 결합하는 제1 결합 도메인은 서열 번호 68의 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46/GPRC5d 항체의 일부 실시 형태에서, NKp46에 결합하는 제1 결합 도메인은 서열 번호 67의 아미노산 서열을 갖는 VH, 및 서열 번호 68의 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함한다.
본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46/GPRC5d 항체의 일부 실시 형태에서, NKp46에 결합하는 제1 결합 도메인의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3 아미노산 서열은 카바트 넘버링 체계에 따른다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46/GPRC5d 항체의 일부 실시 형태에서, NKp46에 결합하는 제1 결합 도메인의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3 아미노산 서열은 초티아 넘버링 체계에 따른다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46/GPRC5d 항체의 일부 실시 형태에서, NKp46에 결합하는 제1 결합 도메인의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3 아미노산 서열은 AbM 넘버링 체계에 따른다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46/GPRC5d 항체의 일부 실시 형태에서, NKp46에 결합하는 제1 결합 도메인의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3 아미노산 서열은 Contact 넘버링 체계에 따른다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46/GPRC5d 항체의 일부 실시 형태에서, NKp46에 결합하는 제1 결합 도메인의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3 아미노산 서열은 IMGT 넘버링 체계에 따른다.
본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46/GPRC5d 항체의 일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인은 NKp46 항원에 결합한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46/GPRC5d 항체의 일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인은 NKp46 에피토프에 결합한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46/GPRC5d 항체의 일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인은 NKp46에 특이적으로 결합한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46/GPRC5d 항체의 일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3은 NKp46의 항원에 대한 결합 부위를 형성한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46/GPRC5d 항체의 일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3은 NKp46의 에피토프에 대한 결합 부위를 형성한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46/GPRC5d 항체의 일부 실시 형태에서, NKp46은 NK 세포의 표면 상에 존재한다.
본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46/GPRC5d 항체의 일부 실시 형태에서, GPRC5d에 결합하는 제2 결합 도메인은, 서열 번호 131의, VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3의 아미노산 서열을 각각 갖는 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 VH를 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46/GPRC5d 항체의 일부 실시 형태에서, GPRC5d에 결합하는 제2 결합 도메인은, 서열 번호 132의, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3의 아미노산 서열을 각각 갖는 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46/GPRC5d 항체의 일부 실시 형태에서, GPRC5d에 결합하는 제2 결합 도메인은 (i) 서열 번호 131의, VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3의 아미노산 서열을 각각 갖는 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 VH; 및 (ii) 서열 번호 132의, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3의 아미노산 서열을 각각 갖는 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46/GPRC5d 항체의 일부 실시 형태에서, GPRC5d에 결합하는 제2 결합 도메인은 서열 번호 131의 아미노산 서열을 갖는 VH를 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46/GPRC5d 항체의 일부 실시 형태에서, GPRC5d에 결합하는 제2 결합 도메인은 서열 번호 132의 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46/GPRC5d 항체의 일부 실시 형태에서, GPRC5d에 결합하는 제2 결합 도메인은 서열 번호 131의 아미노산 서열을 갖는 VH, 및 서열 번호 132의 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함한다.
본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46/GPRC5d 항체의 일부 실시 형태에서, GPRC5d에 결합하는 제2 결합 도메인의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3 아미노산 서열은 카바트 넘버링 체계에 따른다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46/GPRC5d 항체의 일부 실시 형태에서, GPRC5d에 결합하는 제2 결합 도메인의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3 아미노산 서열은 초티아 넘버링 체계에 따른다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46/GPRC5d 항체의 일부 실시 형태에서, GPRC5d에 결합하는 제2 결합 도메인의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3 아미노산 서열은 AbM 넘버링 체계에 따른다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46/GPRC5d 항체의 일부 실시 형태에서, GPRC5d에 결합하는 제2 결합 도메인의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3 아미노산 서열은 Contact 넘버링 체계에 따른다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46/GPRC5d 항체의 일부 실시 형태에서, GPRC5d에 결합하는 제2 결합 도메인의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3 아미노산 서열은 IMGT 넘버링 체계에 따른다.
본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46/GPRC5d 항체의 일부 실시 형태에서, 제2 결합 도메인은 GPRC5d 항원에 결합한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46/GPRC5d 항체의 일부 실시 형태에서, 제2 결합 도메인은 GPRC5d 에피토프에 결합한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46/GPRC5d 항체의 일부 실시 형태에서, 제2 결합 도메인은 GPRC5d에 특이적으로 결합한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46/GPRC5d 항체의 일부 실시 형태에서, 제2 결합 도메인의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3은 GPRC5d의 항원에 대한 결합 부위를 형성한다. 일부 실시 형태에서, 제2 결합 도메인의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3은 GPRC5d의 에피토프에 대한 결합 부위를 형성한다. 일부 실시 형태에서, GPRC5d는 종양 세포의 표면 상에 존재한다.
본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46/GPRC5d 항체의 일부 실시 형태에서, 제3 표적은 NKp46 항원이 아니다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46/GPRC5d 항체의 일부 실시 형태에서, 제4 표적은 NKp46 항원이 아니다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46/GPRC5d 항체의 일부 실시 형태에서, 제3 표적은 NKp46 항원이 아니고, 제4 표적은 NKp46 항원이 아니다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46/GPRC5d 항체의 일부 실시 형태에서, 제3 표적은 GPRC5d 항원이 아니다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46/GPRC5d 항체의 일부 실시 형태에서, 제4 표적은 GPRC5d 항원이 아니다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46/GPRC5d 항체의 일부 실시 형태에서, 제3 표적은 GPRC5d 항원이 아니고, 제4 표적은 GPRC5d 항원이 아니다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46/GPRC5d 항체의 일부 실시 형태에서, 제3 표적은 NKp46 에피토프가 아니다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46/GPRC5d 항체의 일부 실시 형태에서, 제4 표적은 NKp46 에피토프가 아니다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46/GPRC5d 항체의 일부 실시 형태에서, 제3 표적은 NKp46 에피토프가 아니고, 제4 표적은 NKp46 에피토프가 아니다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46/GPRC5d 항체의 일부 실시 형태에서, 제3 표적은 GPRC5d 에피토프가 아니다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46/GPRC5d 항체의 일부 실시 형태에서, 제4 표적은 GPRC5d 에피토프가 아니다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46/GPRC5d 항체의 일부 실시 형태에서, 제3 표적은 GPRC5d 에피토프가 아니고, 제4 표적은 GPRC5d 에피토프가 아니다.
구체적인 실시 형태에서, 표적은 포유동물 유래이다. 구체적인 실시 형태에서, 표적은 래트 유래이다. 구체적인 실시 형태에서, 표적은 마우스 유래이다. 구체적인 실시 형태에서, 표적은 영장류 유래이다. 구체적인 실시 형태에서, 표적은 인간 유래이다.
구체적인 실시 형태에서, 노브-인-홀 포맷의 다중특이성 NKp46/GPRC5d 항체가 제공된다. 구체적인 실시 형태에서, 노브-인-홀 포맷의 이중특이성 NKp46/GPRC5d 항체가 제공된다. 구체적인 실시 형태에서, 노브-인-홀 포맷의 삼중특이성 항체가 제공된다. 구체적인 실시 형태에서, 노브-인-홀 포맷의 사중특이성 항체가 제공된다. 당업계에 잘 알려진 방법을 사용하여(예를 들어, scFv를 N-말단 또는 C-말단에 부가하여) 다른 특이성이 노브-인-홀 포맷의 항체에 추가될 수 있다. 또한, 다중특이성 항체를 제조하는 다른 포맷 및 방법이 또한 당업계에 알려져 있으며 고려된다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 NKp46/GPRC5d 항체는 이중특이성 항체 내에 포함된다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 NKp46/GPRC5d 항체는 삼중특이성 항체 내에 포함된다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 NKp46/GPRC5d 항체는 사중특이성 항체 내에 포함된다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 NKp46/GPRC5d 이중특이성 항체는 다중특이성 항체 내에 포함된다.
소정 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 삼중특이성 NKp46/GPRC5d 항체는 NKp46 에피토프에 결합하는 본 명세서에 제공된 NKp46 항체를 포함하는 제1 결합 도메인, GPRC5d 에피토프에 결합하는 본 명세서에 제공된 GPRC5d 항체를 포함하는 제2 결합 도메인, 및 제3 에피토프에 결합하는 제3 결합 도메인을 포함하며, NKp46 에피토프, GPRC5d 에피토프, 및 제3 에피토프는 동일하지 않다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 사중특이성 항체는 NKp46 에피토프에 결합하는 본 명세서에 제공된 NKp46 항체를 포함하는 제1 결합 도메인, GPRC5d 에피토프에 결합하는 본 명세서에 제공된 GPRC5d 항체를 포함하는 제2 결합 도메인, 제3 에피토프에 결합하는 제3 결합 도메인, 및 제4 에피토프에 결합하는 제4 결합 도메인을 포함하며, NKp46 에피토프, GPRC5d 에피토프, 제3 에피토프, 및 제4 에피토프는 동일하지 않다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 삼중특이성 항체는 NKp46 항원에 결합하는 본 명세서에 제공된 NKp46 항체를 포함하는 제1 결합 도메인, GPRC5d 항원에 결합하는 본 명세서에 제공된 GPRC5d 항체를 포함하는 제2 결합 도메인, 및 제3 항원에 결합하는 제3 결합 도메인을 포함하며, NKp46 항원, GPRC5d 항원, 및 제3 항원은 동일하지 않다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 사중특이성 항체는 NKp46 항원에 결합하는 본 명세서에 제공된 NKp46 항체를 포함하는 제1 결합 도메인, GPRC5d 항원에 결합하는 본 명세서에 제공된 GPRC5d 항체를 포함하는 제2 결합 도메인, 제3 항원에 결합하는 제3 결합 도메인, 및 제4 항원에 결합하는 제4 결합 도메인을 포함하며, NKG2d 항원, GPRC5d 항원, 제3 항원, 및 제4 항원은 동일하지 않다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46/GPRC5d 항체의 소정 실시 형태에서, NKp46에 결합하는 제1 결합 도메인은 NKp46에 특이적으로 결합한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46/GPRC5d 항체의 다른 실시 형태에서, GPRC5d에 결합하는 제2 결합 도메인은 GPRC5d에 특이적으로 결합한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 NKp46/GPRC5d 항체의 또 다른 실시 형태에서, NKp46에 결합하는 제1 결합 도메인은 NKp46에 특이적으로 결합하고, GPRC5d에 결합하는 제2 결합 도메인은 GPRC5d에 특이적으로 결합한다.
일부 실시 형태에서, 다중특이성 NKp46/GPRC5d 항체는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제2 결합 도메인은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하고, 제2 결합 도메인은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시 형태에서, NKp46 항체는 단일 도메인 항체 또는 나노바디가 아니다. 일부 실시 형태에서, 제3 결합 도메인은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제4 결합 도메인은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다.
소정 실시 형태에서, NKp46/GPRC5d 다중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 NKp46 상에 위치된 제1 에피토프 및 GPRC5d 상에 위치된 제2 에피토프에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 NKp46/GPRC5d 항체가 본 명세서에 제공되며, 상기 다중특이성 NKp46/GPRC5d 항체는 (a) NKp46 항원에 결합하는 제1 결합 도메인, 및 (b) GPRC5d 항원에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 NKp46/GPRC5d 항체가 본 명세서에 제공되며, 상기 다중특이성 NKp46/GPRC5d 항체는 (a) NKG2d 항원에 특이적으로 결합하는 제1 결합 도메인, 및 (b) GPRC5d 항원에 특이적으로 결합하는 제2 결합 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 NKp46/GPRC5d 항체가 본 명세서에 제공되며, 상기 다중특이성 NKp46/GPRC5d 항체는 (a) NKG2d 항원 상의 제1 에피토프에 결합하는 제1 결합 도메인, 및 (b) GPRC5d 항원 상의 제2 에피토프에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체가 본 명세서에 제공되며, 상기 다중특이성 항체는 (a) NKp46 항원 상의 제1 에피토프에 특이적으로 결합하는 제1 결합 도메인, 및 (b) GPRC5d 항원 상의 제2 에피토프에 특이적으로 결합하는 제2 결합 도메인을 포함한다.
구체적인 실시 형태에서, NKp46 항원은 NK 세포의 표면 상에 존재한다. 구체적인 실시 형태에서, GPRC5d 항원은 종양 세포의 표면 상에 존재한다. NK 세포의 표면 상에 존재하는 NKp46 및 종양 세포의 표면 상에 존재하는 GPRC5d에 대한 NKp46/GPRC5d 다중특이성 항체의 결합은, 예를 들어 종양 세포의 살해를 가져올 수 있다. 다른 실시 형태에서, NK 세포의 표면 상에 존재하는 NKp46 및 종양 세포의 표면 상에 존재하는 GPRC5d에 대한 NKp46/GPRC5d 다중특이성 항체의 결합은, 예를 들어 NK 세포의 활성화를 가져올 수 있다.
구체적인 실시 형태에서, NKp46 항원은 T 세포의 표면 상에 존재한다. 소정 실시 형태에서, GPRC5d 항원은 종양 세포의 표면 상에 존재한다. T 세포의 표면 상에 존재하는 NKp46 및 종양 세포의 표면 상에 존재하는 GPRC5d에 대한 NKp46/GPRC5d 다중특이성 항체의 결합은, 예를 들어 종양 세포의 살해를 가져올 수 있다. 다른 실시 형태에서, T 세포의 표면 상에 존재하는 NKp46 및 종양 세포의 표면 상에 존재하는 GPRC5d에 대한 NKp46/GPRC5d 다중특이성 항체의 결합은, 예를 들어 T 세포의 활성화를 가져올 수 있다. 일부 실시 형태에서, T 세포는 감마 델타 T 세포이다. 일부 실시 형태에서, T 세포는 선천성 림프계 세포이다.
일부 구체적인 실시 형태에서, 하기 섹션 7에서, 예를 들어 하기 표 21 및 표 22에 제시된 바와 같이 생성된 이중특이성 항체가 본 명세서에 제공된다.
일부 실시 형태에서, 이중특이성 항체가 본 명세서에 제공되며, 상기 이중특이성 항체는 서열 번호 2의 제1 VH 및 서열 번호 3의 제1 VL을 포함하는 NK 세포 상의 항원에 결합하는 제1 결합 도메인; 및 서열 번호 99의 제2 VH 및 서열 번호 100의 제2 VL을 포함하는 종양 항원에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 이중특이성 항체가 본 명세서에 제공되며, 상기 이중특이성 항체는 서열 번호 2의 제1 VH 및 서열 번호 3의 제1 VL을 포함하는 NK 세포 상의 항원에 결합하는 제1 결합 도메인; 및 서열 번호 131의 제2 VH 및 서열 번호 132의 제2 VL을 포함하는 종양 항원에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 이중특이성 항체가 본 명세서에 제공되며, 상기 이중특이성 항체는 서열 번호 34의 제1 VH 및 서열 번호 35의 제1 VL을 포함하는 NK 세포 상의 항원에 결합하는 제1 결합 도메인; 및 서열 번호 99의 제2 VH 및 서열 번호 100의 제2 VL을 포함하는 종양 항원에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 이중특이성 항체가 본 명세서에 제공되며, 상기 이중특이성 항체는 서열 번호 34의 제1 VH 및 서열 번호 35의 제1 VL을 포함하는 NK 세포 상의 항원에 결합하는 제1 결합 도메인; 및 서열 번호 131의 제2 VH 및 서열 번호 132의 제2 VL을 포함하는 종양 항원에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 이중특이성 항체가 본 명세서에 제공되며, 상기 이중특이성 항체는 서열 번호 67의 제1 VH 및 서열 번호 68의 제1 VL을 포함하는 NK 세포 상의 항원에 결합하는 제1 결합 도메인; 및 서열 번호 99의 제2 VH 및 서열 번호 100의 제2 VL을 포함하는 종양 항원에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 이중특이성 항체가 본 명세서에 제공되며, 상기 이중특이성 항체는 서열 번호 67의 제1 VH 및 서열 번호 68의 제1 VL을 포함하는 NK 세포 상의 항원에 결합하는 제1 결합 도메인; 및 서열 번호 131의 제2 VH 및 서열 번호 132의 제2 VL을 포함하는 종양 항원에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 이중특이성 항체가 본 명세서에 제공되며, 상기 이중특이성 항체는 서열 번호 164의 제1 폴리펩티드, 서열 번호 163의 제2 폴리펩티드, 및 서열 번호 165의 제3 폴리펩티드를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 이중특이성 항체가 본 명세서에 제공되며, 상기 이중특이성 항체는 서열 번호 164의 제1 폴리펩티드, 서열 번호 163의 제2 폴리펩티드, 및 서열 번호 174의 제3 폴리펩티드를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 이중특이성 항체가 본 명세서에 제공되며, 상기 이중특이성 항체는 서열 번호 168의 제1 폴리펩티드, 서열 번호 169의 제2 폴리펩티드, 및 서열 번호 165의 제3 폴리펩티드를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 이중특이성 항체가 본 명세서에 제공되며, 상기 이중특이성 항체는 서열 번호 173의 제1 폴리펩티드, 서열 번호 170의 제2 폴리펩티드, 및 서열 번호 165의 제3 폴리펩티드를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 이중특이성 항체가 본 명세서에 제공되며, 상기 이중특이성 항체는 서열 번호 168의 제1 폴리펩티드, 서열 번호 169의 제2 폴리펩티드, 및 서열 번호 174의 제3 폴리펩티드를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 이중특이성 항체가 본 명세서에 제공되며, 상기 이중특이성 항체는 서열 번호 173의 제1 폴리펩티드, 서열 번호 170의 제2 폴리펩티드, 및 서열 번호 174의 제3 폴리펩티드를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 이중특이성 항체가 본 명세서에 제공되며, 상기 이중특이성 항체는 서열 번호 177의 제1 폴리펩티드, 서열 번호 163의 제2 폴리펩티드, 및 서열 번호 180의 제3 폴리펩티드를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 이중특이성 항체가 본 명세서에 제공되며, 상기 이중특이성 항체는 서열 번호 194의 제1 폴리펩티드, 서열 번호 163의 제2 폴리펩티드, 및 서열 번호 196의 제3 폴리펩티드를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 이중특이성 항체가 본 명세서에 제공되며, 상기 이중특이성 항체는 서열 번호 166의 제1 폴리펩티드, 및 서열 번호 163의 제2 폴리펩티드를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 이중특이성 항체는 서열 번호 166을 각각 포함하는 2개의 폴리펩티드, 및 서열 번호 163을 각각 포함하는 2개의 폴리펩티드를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 이중특이성 항체가 본 명세서에 제공되며, 상기 이중특이성 항체는 서열 번호 167의 제1 폴리펩티드, 및 서열 번호 163의 제2 폴리펩티드를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 이중특이성 항체는 서열 번호 167을 각각 포함하는 2개의 폴리펩티드, 및 서열 번호 163을 각각 포함하는 2개의 폴리펩티드를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 이중특이성 항체가 본 명세서에 제공되며, 상기 이중특이성 항체는 서열 번호 171의 제1 폴리펩티드, 및 서열 번호 170의 제2 폴리펩티드를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 이중특이성 항체는 서열 번호 171을 각각 포함하는 2개의 폴리펩티드, 및 서열 번호 170을 각각 포함하는 2개의 폴리펩티드를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 이중특이성 항체가 본 명세서에 제공되며, 상기 이중특이성 항체는 서열 번호 172의 제1 폴리펩티드, 및 서열 번호 169의 제2 폴리펩티드를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 이중특이성 항체는 서열 번호 172를 각각 포함하는 2개의 폴리펩티드, 및 서열 번호 169를 각각 포함하는 2개의 폴리펩티드를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 이중특이성 항체가 본 명세서에 제공되며, 상기 이중특이성 항체는 서열 번호 175의 제1 폴리펩티드, 및 서열 번호 170의 제2 폴리펩티드를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 이중특이성 항체는 서열 번호 175를 각각 포함하는 2개의 폴리펩티드, 및 서열 번호 170을 각각 포함하는 2개의 폴리펩티드를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 이중특이성 항체가 본 명세서에 제공되며, 상기 이중특이성 항체는 서열 번호 176의 제1 폴리펩티드, 및 서열 번호 169의 제2 폴리펩티드를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 이중특이성 항체는 서열 번호 176을 각각 포함하는 2개의 폴리펩티드, 및 서열 번호 169를 각각 포함하는 2개의 폴리펩티드를 포함한다.
본 명세서에 제공된 항체는 조류 및 포유동물을 포함한 임의의 동물 기원(예를 들어, 인간, 원숭이, 뮤린, 당나귀, 양, 토끼, 염소, 기니피그, 낙타, 말, 또는 닭)의 것으로부터 유래될 수 있다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 항체는 인간 또는 인간화 단일클론 항체이다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, "인간" 항체는 인간 면역글로불린의 아미노산 서열을 갖는 항체를 포함하고, 인간 면역글로불린 라이브러리로부터 단리되거나 인간 유전자로부터 항체를 발현하는 마우스로부터 단리된 항체를 포함한다.
소정 실시 형태에서, 항체는 완전 마우스 항체이다. 소정 실시 형태에서, 항체는 마우스-인간 키메라 항체이다. 소정 실시 형태에서, 항체는 인간화 항체이다. 소정 실시 형태에서, 항체는 완전 인간 항체이다. 다른 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 항체는 인간화 항체(예를 들어, 인간 불변 영역 및 인간 프레임워크 영역을 포함함)이다. 본 명세서에 제공된 항체는 이중특이성이거나, 삼중특이성이거나, 또는 더 고차의 다중특이성의 것일 수 있다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 1000 nM 미만의 KD로 NKG2d에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 100 nM 미만의 KD로 NKG2d에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 50 nM 미만의 KD로 NKG2d에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 40 nM 미만의 KD로 NKG2d에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 30 nM 미만의 KD로 NKG2d에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 20 nM 미만의 KD로 NKG2d에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 10 nM 미만의 KD로 NKG2d에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 9 nM 미만의 KD로 NKG2d에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 8 nM 미만의 KD로 NKG2d에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 7 nM 미만의 KD로 NKG2d에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 6 nM 미만의 KD로 NKG2d에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 5 nM 미만의 KD로 NKG2d에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 4 nM 미만의 KD로 NKG2d에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 3 nM 미만의 KD로 NKG2d에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 2 nM 미만의 KD로 NKG2d에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 1 nM 미만의 KD로 NKG2d에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 0.1 nM 미만의 KD로 NKG2d에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 0.01 nM 미만의 KD로 NKG2d에 결합한다. KD 또는 KD 값은 또한 당업계에 알려진 임의의 방법에 의해, 예를 들어 생물층 간섭측정법(BLI) 또는 표면 플라즈몬 공명(SPR) 검정을 사용함으로써 측정될 수 있으며, 이들은, 예를 들어 Octet®Red96 시스템을 사용하여 Octet®에 의해, 또는, 예를 들어 Biacore®TM-2000 또는 Biacore®TM-3000을 사용하여 Biacore®에 의해 측정될 수 있다. "온-속도" 또는 "결합의 속도" 또는 "결합 속도" 또는 "kon"이 또한, 예를 들어 Octet®Red96, Biacore®TM-2000, 또는 Biacore®TM-3000 시스템을 사용하는 전술된 것과 동일한 생물층 간섭측정법(BLI) 또는 표면 플라즈몬 공명(SPR) 기법으로 결정될 수 있다. 구체적인 실시 형태에서, KD는 Biacore® 검정에 의해 결정된다. 일부 실시 형태에서, NKG2d는 인간 NKG2d이다. 일부 실시 형태에서, NKG2d는 사이노몰거스 마카크 NKG2d이다. 일부 실시 형태에서, NKG2d는 래트 NKG2d이다. 다른 실시 형태에서, NKG2d는 마우스 NKG2d이다.
다른 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 1000 nM 미만의 KD로 NKp46에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 100 nM 미만의 KD로 NKp46에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 50 nM 미만의 KD로 NKp46에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 40 nM 미만의 KD로 NKp46에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 30 nM 미만의 KD로 NKp46에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 20 nM 미만의 KD로 NKp46에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 10 nM 미만의 KD로 NKp46에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 9 nM 미만의 KD로 NKp46에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 8 nM 미만의 KD로 NKp46에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 7 nM 미만의 KD로 NKp46에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 6 nM 미만의 KD로 NKp46에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 5 nM 미만의 KD로 NKp46에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 4 nM 미만의 KD로 NKp46에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 3 nM 미만의 KD로 NKp46에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 2 nM 미만의 KD로 NKp46에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 1 nM 미만의 KD로 NKp46에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 0.1 nM 미만의 KD로 NKp46에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 0.01 nM 미만의 KD로 NKp46에 결합한다. KD 또는 KD 값은 또한 당업계에 알려진 임의의 방법에 의해, 예를 들어 생물층 간섭측정법(BLI) 또는 표면 플라즈몬 공명(SPR) 검정을 사용함으로써 측정될 수 있으며, 이들은, 예를 들어 Octet®Red96 시스템을 사용하여 Octet®에 의해, 또는, 예를 들어 Biacore®TM-2000 또는 Biacore®TM-3000을 사용하여 Biacore®에 의해 측정될 수 있다. "온-속도" 또는 "결합의 속도" 또는 "결합 속도" 또는 "kon"이 또한, 예를 들어 Octet®Red96, Biacore®TM-2000, 또는 Biacore®TM-3000 시스템을 사용하는 전술된 것과 동일한 생물층 간섭측정법(BLI) 또는 표면 플라즈몬 공명(SPR) 기법으로 결정될 수 있다. 구체적인 실시 형태에서, KD는 Biacore® 검정에 의해 결정된다. 일부 실시 형태에서, NKp46은 인간 NKp46이다. 일부 실시 형태에서, NKp46은 사이노몰거스 마카크 NKp46이다. 일부 실시 형태에서, NKp46은 래트 NKp46이다. 다른 실시 형태에서, NKp46은 마우스 NKp46이다.
당업계에 알려진 임의의 다중특이성 항체 플랫폼 또는 포맷이 본 발명에 사용될 수 있으며, 이에는 당업계에 알려진 임의의 이중특이성 항체 포맷이 포함된다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체는 다이아바디, 크로스-바디, 또는 본 명세서에 기재된 것들로서의 제어된 Fab 아암 교환을 통해 획득된 다중특이성 항체이다.
일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 하기를 포함한다: 이종이량체화를 촉진하는 상보적 CH3 도메인을 갖는 IgG-유사 분자; 재조합 IgG-유사 이중 표적화 분자 - 여기서는, 분자의 2개의 측 각각이 적어도 2개의 상이한 항체의 Fab 단편 또는 Fab 단편의 일부를 함유함 -; IgG 융합 분자 - 여기서는, 전장 IgG 항체가 추가 Fab 단편 또는 Fab 단편의 일부에 융합됨 -; Fc 융합 분자 - 여기서는, 단일쇄 Fv 분자 또는 안정화된 다이아바디가 중쇄 불변 도메인, Fc 영역 또는 이의 일부에 융합됨 -; Fab 융합 분자 - 여기서는, 상이한 Fab 단편들이 함께 융합됨 -; scFv- 및 다이아바디-기반 및 중쇄 항체(예를 들어, 도메인 항체, 나노바디) - 여기서는, 상이한 단일쇄 Fv 분자들 또는 상이한 다이아바디들 또는 상이한 중쇄 항체들(예를 들어, 도메인 항체, 나노바디)이 서로 또는 다른 단백질 또는 운반체 분자에 융합됨.
일부 실시 형태에서, 상보적 CH3 도메인 분자를 갖는 IgG-유사 분자는 Triomab/Quadroma (Trion Pharma/Fresenius Biotech), 노브-인투-홀(Knob-into-Hole) (Genentech), CrossMAb (Roche) 및 정전기적-매칭(electrostatically-matched) (Amgen), LUZ-Y (Genentech), 가닥 교환 조작된 도메인 바디(Strand Exchange Engineered Domain body)(SEEDbody) (EMD Serono), Biclonic (Merus) 및 DuoBody (Genmab A/S)를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 재조합 IgG-유사 이중 표적화 분자는 이중 표적화(Dual Targeting)(DT)-Ig (GSK/Domantis), 투-인-원 항체(Two-in-one Antibody) (Genentech), 가교결합된(Cross-linked) Mab (Karmanos Cancer Center), mAb2 (F-Star) 및 CovX-바디 (CovX/Pfizer)를 포함한다.
일부 실시 형태에서, IgG 융합 분자는 이중 가변 도메인(Dual Variable Domain, DVD)-Ig (Abbott), IgG-유사 이중특이체 (ImClone/Eli Lilly), Ts2Ab (MedImmune/AZ) 및 BsAb (Zymogenetics), HERCULES (Biogen Idec) 및 TvAb (Roche)를 포함한다.
일부 실시 형태에서, Fc 융합 분자는 ScFv/Fc 융합체 (Academic Institution), SCORPION (Emergent BioSolutions/Trubion, Zymogenetics/BMS), 이중 친화성 재표적화 기술(Dual Affinity Retargeting Technology)(Fc-DART) (MacroGenics) 및 이중(Dual)(ScFv)2-Fab (National Research Center for Antibody Medicine-China)를 포함할 수 있다.
일부 실시 형태에서, Fab 융합 이중특이성 항체는 F(ab)2 (Medarex/AMGEN), 이중-작용체(Dual-Action) 또는 Bis-Fab (Genentech), 독-앤드-록(Dock-and-Lock, DNL) (ImmunoMedics), 2가 이중특이체(Bivalent Bispecific) (Biotecnol) 및 Fab-Fv (UCB-Celltech)를 포함한다. ScFv-, 다이아바디-기반 및 도메인 항체는 이중특이성 T 세포 인게이저(BiTE) (Micromet), 탠덤 다이아바디(Tandab) (Affimed), 이중 친화성 재표적화 기술(DART) (MacroGenics), 단일쇄 다이아바디(Academic), TCR-유사 항체(AIT, ReceptorLogics), 인간 혈청 알부민 ScFv 융합체(Merrimack) 및 COMBODY(Epigen Biotech), 이중 표적화 나노바디(Ablynx), 이중 표적화 중쇄 단독 도메인 항체를 포함하지만 이로 한정되지 않는다.
본 명세서에 제공된 전장 이중특이성 항체는, 예를 들어 2개의 단일특이성 2가 항체들 사이에서의 Fab 아암 교환(또는 하프 분자 교환)을 사용하여 생성될 수 있는데, 이는 공발현을 사용하거나 또는 무세포 환경에서의 시험관내에서, 각각의 하프 분자 내의 중쇄 CH3 계면에 치환을 도입하여 별개의 특이성을 갖는 2개의 항체 하프 분자의 이종이량체 형성을 유리하게 함으로써 행해진다. Fab 아암 교환 반응은 이황화물-결합 이성질화 반응 및 CH3 도메인의 해리-회합의 결과이다. 모 단일특이성 항체의 힌지 영역 내의 중쇄 이황화물 결합은 환원된다. 모 단일특이성 항체들 중 하나의, 생성된 유리 시스테인은, 제2 모 단일특이성 항체 분자의 시스테인 잔기와 중쇄간 이황화물 결합을 형성하고, 동시에 모 항체의 CH3 도메인이 해리-회합에 의해 방출 및 재형성된다. Fab 아암의 CH3 도메인은 동종이량체화에 비하여 이종이량체화에 유리하도록 조작될 수 있다. 생성된 산물은, 각각이 별개의 에피토프와 결합하는 2개의 Fab 아암 또는 하프 분자를 갖는 이중특이성 항체이다. 다중특이성 항체를 제조하는 다른 방법이 알려져 있으며 고려된다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, "동종이량체화"는 동일한 CH3 아미노산 서열을 갖는 2개의 중쇄의 상호작용을 지칭한다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, "동종이량체"는 동일한 CH3 아미노산 서열을 갖는 2개의 중쇄를 갖는 항체를 지칭한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, "이종이량체화"는 동일하지 않은 CH3 아미노산 서열을 갖는 2개의 중쇄의 상호작용을 지칭한다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, "이종이량체"는 동일하지 않은 CH3 아미노산 서열을 갖는 2개의 중쇄를 갖는 항체를 지칭한다.
"노브-인-홀" 전략(예를 들어, PCT 특허 출원 공개 WO2006/028936호 참조)이 전장 이중특이성 항체를 생성하는 데 사용될 수 있다. 간략하게 말해서, 인간 IgG 내에 CH3 도메인의 계면을 형성하는 선택된 아미노산이 CH3 도메인 상호작용에 영향을 주는 위치에서 돌연변이화되어 이종이량체 형성을 촉진할 수 있다. 작은 측쇄(홀)를 갖는 아미노산이 제1 항원에 특이적으로 결합하는 항체의 중쇄 내로 도입되고, 큰 측쇄(노브)를 갖는 아미노산이 제2 항원에 특이적으로 결합하는 항체의 중쇄 내로 도입된다. 2개의 항체의 공발현 후에, "홀"을 갖는 중쇄와 "노브"를 갖는 중쇄의 우선적인 상호작용의 결과로서 이종이량체가 형성된다. 노브와 홀을 형성하는 예시적인 CH3 치환 쌍은 다음과 같다(제1 중쇄의 제1 CH3 도메인 내의 변형된 위치/제2 중쇄의 제2 CH3 도메인 내의 변형된 위치로서 표현됨): T366Y/F405A, T366W/F405W, F405W/Y407A, T394W/Y407T, T394S/Y407A, T366W/T394S, F405W/T394S 및 T366W/T366S_L368A_Y407V.
하나의 CH3 표면에서 양으로 하전된 잔기를, 그리고 제2 CH3 표면에서 음으로 하전된 잔기를 치환함으로써 정전기 상호작용을 사용하여 중쇄 이종이량체화를 촉진하는 것과 같은 다른 전략이 사용될 수 있으며, 이는 미국 특허 출원 공개 제2010/0015133호; 미국 특허 출원 공개 제2009/0182127호; 미국 특허 출원 공개 제2010/028637호 또는 미국 특허 출원 공개 제2011/0123532호에 기재된 바와 같다. 다른 전략에서는, 미국 특허 출원 공개 제2012/0149876호 또는 미국 특허 출원 공개 제2013/0195849호에 기재된 바와 같이 하기의 치환(제1 중쇄의 제1 CH3 도메인 내의 변형된 위치/제2 중쇄의 제2 CH3 도메인 내의 변형된 위치로서 표현됨)에 의해 이종이량체화가 촉진될 수 있다: L351Y_F405AY407V/T394W, T366I_K392M_T394W/F405A_Y407V, T366L_K392M_T394W/F405A_Y407V, L351Y_Y407A/T366A_K409F, L351Y_Y407A/T366V K409F Y407A/T366A_K409F, 또는 T350V_L351Y_F405A Y407V/T350V_T366L_K392L_T394W.
전술된 방법에 더하여, 본 명세서에 제공된 이중특이성 항체는, 2개의 단일특이성 동종이량체성 항체의 CH3 영역 내에 비대칭 돌연변이를 도입시키고, 이황화물 결합 이성질화를 가능하게 하는 환원성 조건에서 2개의 모 단일특이성 동종이량체성 항체로부터 이중특이성 이종이량체성 항체를 형성함으로써 무세포 환경에서 시험관내에서 생성될 수 있는데, 이는 PCT 특허 출원 공개 WO2011/131746호에 기재된 방법에 따른 것이다. 이들 방법에서, 제1 단일특이성 2가 항체 및 제2 단일특이성 2가 항체는 CH3 도메인에서 이종이량체 안정성을 촉진하는 소정의 치환을 갖도록 조작되며; 이들 항체는 힌지 영역 내의 시스테인이 이황화물 결합 이성질화를 거칠 수 있게 하기에 충분한 환원성 조건 하에서 함께 인큐베이션되고; 그럼으로써 Fab 아암 교환에 의해 이중특이성 항체를 생성한다. 인큐베이션 조건은 선택적으로 비환원성 조건으로 회복될 수 있다. 사용될 수 있는 예시적인 환원제는 2-메르캅토에틸아민(2-MEA), 다이티오트레이톨(DTT), 다이티오에리트리톨(DTE), 글루타티온, 트리스(2-카르복시에틸)포스핀(TCEP), L-시스테인 및 베타-메르캅토에탄올이며, 바람직하게는 2-메르캅토에틸아민, 다이티오트레이톨 및 트리스(2-카르복시에틸)포스핀으로 이루어진 군으로부터 선택되는 환원제이다. 예를 들어, pH 5 내지 8에서, 예를 들어 pH 7.0에서 또는 pH 7.4에서 적어도 25 mM 2-MEA의 존재 하에서 또는 적어도 0.5 mM 다이티오트레이톨의 존재 하에서 20℃ 이상의 온도에서 90분 이상 동안의 인큐베이션이 사용될 수 있다.
일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 이중특이성 항체이며, 여기서 이중특이성 항체는 바이포드-스캐폴드 입체구조이다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 바이포드-스캐폴드 입체구조의 이중특이성 항체이며, 여기서 제1 결합 도메인은 Fab 영역이고, 제2 결합 도메인은 scFv 영역이다. 일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인은 NK 세포 상에 존재하는 항원에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인은 NKG2d에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인은 NKp46에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 제2 결합 도메인은 종양 세포 상에 존재하는 항원에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 제2 결합 도메인은 BCMA에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 제2 결합 도메인은 GPRC5d에 결합한다.
일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 이중특이성 항체이며, 여기서 이중특이성 항체는 모리슨-스캐폴드 입체구조이다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 모리슨-스캐폴드 입체구조의 이중특이성 항체이며, 여기서 제1 결합 도메인은 2개의 Fab 영역을 포함하고, 제2 결합 도메인은 2개의 scFv 영역을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인은 NK 세포 상에 존재하는 항원에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인은 NKG2d에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 제1 결합 도메인은 NKp46에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 제2 결합 도메인은 종양 세포 상에 존재하는 항원에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 제2 결합 도메인은 BCMA에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 제2 결합 도메인은 GPRC5d에 결합한다.
본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, Fc 영역은 IgG1 침묵 돌연변이를 포함한다. 일부 실시 형태에서, Fc 영역은 AAS 돌연변이를 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, Fc 영역은 항체의 이펙터 기능의 향상을 위한 돌연변이를 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, Fc 영역은 CDC 향상 돌연변이를 포함한다. 일부 실시 형태에서, Fc 영역은 K248E 및 T437R 돌연변이를 포함한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, Fc 영역은 비푸코실화된다.
일부 실시 형태에서, NKG2d에 특이적으로 결합하고, NK 세포 활성을 조절할 수 있는 항체가 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, NKp46에 특이적으로 결합하고, NK 세포 활성을 조절할 수 있는 항체가 본 명세서에 제공된다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 다중특이성 항체는 NK 세포를 활성화한다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 다중특이성 항체는 NK 세포와 접촉하거나 이를 표적 세포로 유도한다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 다중특이성 항체는 NK 세포와 접촉하거나 이를 표적 세포로 유도하며, 여기서 다중특이성 항체는 NK 세포 상의 제1 항원에 결합하는 제1 결합 도메인 및 표적 세포 상의 제2 항원에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함한다. 구체적인 실시 형태에서, 표적 세포는 종양 세포이다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 다중특이성 항체는 종양 세포의 NK 세포 의존성 세포독성을 유도하며, 여기서 다중특이성 항체는 NK 세포 상의 제1 항원에 결합하는 제1 결합 도메인 및 표적 세포 상의 제2 항원에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함한다. 구체적인 실시 형태에서, NK 세포는 인간 NK 세포이다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 NKG2d에 결합하는 다중특이성 항체는 NK 세포를 활성화한다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 NKG2d에 결합하는 다중특이성 항체는 NK 세포와 접촉하거나 이를 표적 세포로 유도한다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 NKG2d에 결합하는 다중특이성 항체는 NK 세포와 접촉하거나 이를 표적 세포로 유도하며, 여기서 다중특이성 항체는 NK 세포 상의 NKG2d에 결합하는 제1 결합 도메인 및 표적 세포 상의 제2 항원에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함한다. 구체적인 실시 형태에서, 표적 세포는 종양 세포이다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 다중특이성 항체는 종양 세포의 NK 세포 의존성 세포독성을 유도하며, 여기서 다중특이성 항체는 NK 세포 상의 NKG2d에 결합하는 제1 결합 도메인 및 종양 세포 상의 제2 항원에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함한다. 구체적인 실시 형태에서, NK 세포는 인간 NK 세포이다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 NKp46에 결합하는 다중특이성 항체는 NK 세포를 활성화한다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 NKp46에 결합하는 다중특이성 항체는 NK 세포와 접촉하거나 이를 표적 세포로 유도한다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 NKp46에 결합하는 다중특이성 항체는 NK 세포와 접촉하거나 이를 표적 세포로 유도하며, 여기서 다중특이성 항체는 NK 세포 상의 NKp46에 결합하는 제1 결합 도메인 및 표적 세포 상의 제2 항원에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함한다. 구체적인 실시 형태에서, 표적 세포는 종양 세포이다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 다중특이성 항체는 종양 세포의 NK 세포 의존성 세포독성을 유도하며, 여기서 다중특이성 항체는 NK 세포 상의 NKp46에 결합하는 제1 결합 도메인 및 종양 세포 상의 제2 항원에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함한다. 구체적인 실시 형태에서, NK 세포는 인간 NK 세포이다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 다중특이성 항체는 NKp46-발현 면역 세포 상에 발현되는 NKp46에 결합한다. 일부 실시 형태에서, NKp46-발현 면역 세포는 T 세포이다. 일부 실시 형태에서, T 세포는 감마 델타 T 세포이다. 일부 실시 형태에서, T 세포는 선천성 림프계 세포의 점막 집단이다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 NKp46에 결합하는 다중특이성 항체는 NKp46-발현 면역 세포를 활성화할 수 있다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 NKp46에 결합하는 다중특이성 항체는 NKp46-발현 면역 세포와 접촉하거나 이를 표적 세포로 유도할 수 있다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 NKp46에 결합하는 다중특이성 항체는 NKp46-발현 면역 세포와 접촉하거나 이를 표적 세포로 유도하며, 여기서 다중특이성 항체는 NKp46-발현 면역 세포 상의 NKp46에 결합하는 제1 결합 도메인 및 표적 세포 상의 제2 항원에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함한다. 구체적인 실시 형태에서, 표적 세포는 종양 세포이다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 다중특이성 항체는 종양 세포의 NKp46-발현 면역 세포 의존성 세포독성을 유도하며, 여기서 다중특이성 항체는 NKp46-발현 면역 세포 상의 NKp46에 결합하는 제1 결합 도메인 및 종양 세포 상의 제2 항원에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함한다. 구체적인 실시 형태에서, NK 세포는 인간 NK 세포이다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 다중특이성 항체는 NK 세포 수용체 및 Fc 수용체 둘 모두를 활성화하는 것을 통해 기능함으로써 NK 세포를 활성화할 수 있다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 다중특이성 항체는 NK 세포와 접촉하거나 이를 종양 세포로 유도한다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 다중특이성 항체는 NK 세포 수용체 및 Fc 수용체 둘 모두를 활성화하는 것을 통해 기능함으로써 종양 세포의 NK 세포 의존성 세포독성을 유도한다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 다중특이성 항체는, 다중특이성 항체의 Fc 영역이 IgG1 침묵 돌연변이를 포함하더라도, 종양 세포의 NK 세포 의존성 세포독성을 유도한다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 다중특이성 항체는 면역 억제 종양 환경에서 NK 세포를 활성화할 수 있다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 다중특이성 항체는 면역 억제 종양 환경에서 NK 세포와 접촉하거나 이를 종양 세포로 유도한다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 다중특이성 항체는 면역 억제 종양 환경에서 종양 세포의 NK 세포 의존성 세포독성을 유도한다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 다중특이성 항체는, 다중특이성 항체의 Fc 영역이 IgG1 침묵 돌연변이를 포함하더라도, 면역 억제 종양 환경에서 종양 세포의 NK 세포 의존성 세포독성을 유도한다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 다중특이성 항체는 NK 세포에 대해 해로운 효과를 발휘하지 않는다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 다중특이성 항체는 항-NK 세포 세포독성이 부재되어 있다. 일부 실시 형태에서, WT IgG1 골격을 갖는 본 명세서에 기재된 다중특이성 항체는 NK 세포의 CDC 살해를 야기하지 않는다. 일부 실시 형태에서, CDC-향상 돌연변이(예를 들어, K248E/T437R) 세트를 갖는 본 명세서에 기재된 다중특이성 항체는 NK 세포의 CDC 살해를 야기하지 않는다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 NKp46 x BCMA 이중특이성 항체이다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 NKG2d x BCMA 이중특이성 항체이다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 NKp46 x GPRC5d 이중특이성 항체이다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 NKG2d x GPRC5d 이중특이성 항체이다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 다중특이성 항체는 25% 미만의 NK 세포 용해를 유도한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 다중특이성 항체는 20% 미만의 NK 세포 용해를 유도한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 다중특이성 항체는 15% 미만의 NK 세포 용해를 유도한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 다중특이성 항체는 10% 미만의 NK 세포 용해를 유도한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 다중특이성 항체는 5% 미만의 NK 세포 용해를 유도한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 다중특이성 항체는 3% 미만의 NK 세포 용해를 유도한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 다중특이성 항체는 2% 미만의 NK 세포 용해를 유도한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 다중특이성 항체는 1% 미만의 NK 세포 용해를 유도한다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 다중특이성 항체는 NK 세포를 활성화한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 다중특이성 항체는 적어도 약 10%만큼 NK 세포 활성을 활성화한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 다중특이성 항체는 적어도 약 20%만큼 NK 세포 활성을 활성화한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 다중특이성 항체는 적어도 약 30%만큼 NK 세포 활성을 활성화한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 다중특이성 항체는 적어도 약 40%만큼 NK 세포 활성을 활성화한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 다중특이성 항체는 적어도 약 50%만큼 NK 세포 활성을 활성화한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 다중특이성 항체는 적어도 약 60%만큼 NK 세포 활성을 활성화한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 다중특이성 항체는 적어도 약 70%만큼 NK 세포 활성을 활성화한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 다중특이성 항체는 적어도 약 80%만큼 NK 세포 활성을 활성화한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 다중특이성 항체는 적어도 약 90%만큼 NK 세포 활성을 활성화한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 다중특이성 항체는 적어도 약 95%만큼 NK 세포 활성을 활성화한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 다중특이성 항체는 적어도 약 95%만큼 NK 세포 활성을 활성화한다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 다중특이성 항체는 적어도 약 15% 내지 약 65%만큼 NK 세포 활성을 활성화한다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 다중특이성 항체는 적어도 약 20% 내지 약 65%만큼 NK 세포 활성을 활성화한다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 다중특이성 항체는 적어도 약 30% 내지 약 65%만큼 NK 세포 활성을 활성화한다. 구체적인 실시 형태에서, NK 세포는 인간 NK 세포이다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 다중특이성 항체는 NK 세포에 의한 IFNg 생성을 촉진시킨다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 다중특이성 항체는 적어도 10%만큼 NK 세포에 의한 IFNg 생성을 촉진시킨다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 다중특이성 항체는 적어도 20%만큼 NK 세포에 의한 IFNg 생성을 촉진시킨다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 다중특이성 항체는 적어도 30%만큼 NK 세포에 의한 IFNg 생성을 촉진시킨다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 다중특이성 항체는 적어도 40%만큼 NK 세포에 의한 IFNg 생성을 촉진시킨다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 다중특이성 항체는 적어도 50%만큼 NK 세포에 의한 IFNg 생성을 촉진시킨다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 다중특이성 항체는 적어도 60%만큼 NK 세포에 의한 IFNg 생성을 촉진시킨다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 다중특이성 항체는 적어도 70%만큼 NK 세포에 의한 IFNg 생성을 촉진시킨다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 다중특이성 항체는 적어도 80%만큼 NK 세포에 의한 IFNg 생성을 촉진시킨다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 다중특이성 항체는 적어도 90%만큼 NK 세포에 의한 IFNg 생성을 촉진시킨다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 다중특이성 항체는 적어도 95%만큼 NK 세포에 의한 IFNg 생성을 촉진시킨다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 다중특이성 항체는 적어도 약 15% 내지 약 65%만큼 NK 세포에 의한 IFNg 생성을 촉진시킨다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 다중특이성 항체는 적어도 약 20% 내지 약 65%만큼 NK 세포에 의한 IFNg 생성을 촉진시킨다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 다중특이성 항체는 적어도 약 30% 내지 약 65%만큼 NK 세포에 의한 IFNg 생성을 촉진시킨다. 구체적인 실시 형태에서, NK 세포는 인간 NK 세포이다.
본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 적어도 10%만큼 종양 세포의 NK 세포 의존성 세포독성을 유도한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 적어도 20%만큼 종양 세포의 NK 세포 의존성 세포독성을 유도한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 적어도 30%만큼 종양 세포의 NK 세포 의존성 세포독성을 유도한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 적어도 40%만큼 종양 세포의 NK 세포 의존성 세포독성을 유도한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 적어도 50%만큼 종양 세포의 NK 세포 의존성 세포독성을 유도한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 적어도 60%만큼 종양 세포의 NK 세포 의존성 세포독성을 유도한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 적어도 70%만큼 종양 세포의 NK 세포 의존성 세포독성을 유도한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 적어도 80%만큼 종양 세포의 NK 세포 의존성 세포독성을 유도한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 적어도 90%만큼 종양 세포의 NK 세포 의존성 세포독성을 유도한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 적어도 95%만큼 종양 세포의 NK 세포 의존성 세포독성을 유도한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 소정 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 적어도 약 15% 내지 약 65%만큼 종양 세포의 NK 세포 의존성 세포독성을 유도한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 소정 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 적어도 약 20% 내지 약 65%만큼 종양 세포의 NK 세포 의존성 세포독성을 유도한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 소정 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 적어도 약 30% 내지 약 65%만큼 종양 세포의 NK 세포 의존성 세포독성을 유도한다.
본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 약 500 pM 미만의 IC50으로 시험관내에서 종양 세포의 NK 세포 의존성 세포독성을 유도한다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 약 300 pM 미만의 IC50으로 시험관내에서 종양 세포의 NK 세포 의존성 세포독성을 유도한다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 약 100 pM 미만의 IC50으로 시험관내에서 종양 세포의 NK 세포 의존성 세포독성을 유도한다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 약 50 pM 미만의 IC50으로 시험관내에서 종양 세포의 NK 세포 의존성 세포독성을 유도한다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 약 20 pM 미만의 IC50으로 시험관내에서 종양 세포의 NK 세포 의존성 세포독성을 유도한다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 약 15 pM 미만의 IC50으로 시험관내에서 종양 세포의 NK 세포 의존성 세포독성을 유도한다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 약 10 pM 미만의 IC50으로 시험관내에서 종양 세포의 NK 세포 의존성 세포독성을 유도한다.
본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, IC50은 NK 이펙터 세포와 제2 항원을 발현하는 표적 세포의 혼합물을 사용하여 평가된다.
본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 약 2000 pM 미만의 EC50으로 시험관내에서 종양 세포의 NK 세포 의존성 세포독성을 유도한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 약 1000 pM 미만의 EC50으로 시험관내에서 종양 세포의 NK 세포 의존성 세포독성을 유도한다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 약 500 pM 미만의 EC50으로 시험관내에서 종양 세포의 NK 세포 의존성 세포독성을 유도한다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 약 300 pM 미만의 EC50으로 시험관내에서 종양 세포의 NK 세포 의존성 세포독성을 유도한다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 약 100 pM 미만의 EC50으로 시험관내에서 종양 세포의 NK 세포 의존성 세포독성을 유도한다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 약 50 pM 미만의 EC50으로 시험관내에서 종양 세포의 NK 세포 의존성 세포독성을 유도한다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 약 20 pM 미만의 EC50으로 시험관내에서 종양 세포의 NK 세포 의존성 세포독성을 유도한다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 약 15 pM 미만의 EC50으로 시험관내에서 종양 세포의 NK 세포 의존성 세포독성을 유도한다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 약 10 pM 미만의 EC50으로 시험관내에서 종양 세포의 NK 세포 의존성 세포독성을 유도한다.
본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, EC50은 NK 이펙터 세포와 제2 항원을 발현하는 표적 세포의 혼합물을 사용하여 평가된다.
본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, 이펙터 세포 대 표적 세포 비는 약 0.01:1 내지 약 10:1이다. 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, 이펙터 세포 대 표적 세포 비는 약 0.01:1 내지 약 5:1이다. 일부 실시 형태에서, 이펙터 세포 대 표적 세포 비는 약 0.1:1 내지 약 2:1이다. 일부 실시 형태에서, 이펙터 세포 대 표적 세포 비는 약 1:1이다. 소정 실시 형태에서, 이펙터 대 표적 세포 비는, 예를 들어 0.01:1, 0.02:1, 0.03:1, 0.04:1, 0.05:1, 0.06:1, 0.07:1, 0.08:1, 0.09:1, 1:1, 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 6:1, 7:1, 8:1, 9:1, 또는 10:1일 수 있다. 소정 실시 형태에서, 다중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 농도는 약 0.000005 ng/mL, 약 0.00005 ng/mL, 약 0.0005, 약 0.005 ng/mL, 약 0.01 ng/mL, 약 0.02 ng/mL, 약 0.03 ng/mL, 약 0.04 ng/mL, 약 0.05 ng/mL, 약 0.06 ng/mL, 약 0.07 ng/mL, 약 0.08 ng/mL, 약 0.09 ng/mL, 약 0.1 ng/mL, 약 0.5 ng/mL, 약 1.0 ng/mL, 약 10 ng/mL, 약 20 ng/mL, 약 30 ng/mL, 약 40 ng/mL, 약 50 ng/mL, 약 60 ng/mL, 약 70 ng/mL, 약 80 ng/mL, 약 90 ng/mL, 약 100 ng/mL, 또는 약 1000 ng/mL이다.
단일클론 항체
본 발명의 항체는 단일클론 항체일 수 있거나 이로부터 유래될 수 있다. 단일클론 항체는 문헌[Kohler et al., 1975, Nature 256:495-97]에 의해 최초로 기재된 하이브리도마 방법을 사용하여 제조할 수 있거나, 재조합 DNA 방법에 의해 제조될 수 있다(예를 들어, 미국 특허 제4,816,567호 참조).
하이브리도마 방법에서는, 마우스 또는 다른 적절한 숙주 동물, 예컨대 햄스터를 상기 기재된 바와 같이 면역화하여 면역화에 사용되는 단백질에 특이적으로 결합할 항체를 생성하거나 생성할 수 있는 림프구를 유도한다. 대안적으로, 림프구는 시험관내에서 면역화될 수 있다. 면역화 후에, 림프구를 단리하고, 이어서 폴리에틸렌 글리콜과 같은 적합한 융합제를 사용하여 골수종 세포주와 융합시켜 하이브리도마 세포를 형성한다(문헌[Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice 59-103 (1986)]).
그렇게 제조된 하이브리도마 세포를 적합한 배양 배지 중에 시딩하고 성장시키며, 이는 소정 실시 형태에서 융합되지 않은 모 골수종 세포(융합 파트너로도 지칭됨)의 성장 또는 생존을 억제하는 하나 이상의 물질을 함유한다. 예를 들어, 모 골수종 세포에 효소 하이포잔틴 구아닌 포스포리보실 트랜스퍼라제(HGPRT 또는 HPRT)가 결여되어 있는 경우, 하이브리도마를 위한 선택적 배양 배지는 전형적으로 하이포잔틴, 아미노프테린, 및 티미딘을 포함할 것인데(HAT 배지), 이들은 HGPRT-결손 세포의 성장을 방지한다.
예시적인 융합 파트너 골수종 세포는, 효율적으로 융합하고, 선택된 항체-생성 세포에 의한 항체의 안정적인 고수준 생성을 지원하고, 융합되지 않은 모 세포에 대해 선택하는 선택적 배지에 민감한 것들이다. 예시적인 골수종 세포주는 뮤린 골수종 세포주, 예컨대 SP-2 및 유도체, 예를 들어, 미국 세포주 은행(American Type Culture Collection)(미국 버지니아주 머내서스 소재)으로부터 이용가능한 X63-Ag8-653 세포, 및 소크 연구소 세포 분양 센터(Salk Institute Cell Distribution Center)(미국 캘리포니아주 샌디에고 소재)로부터 이용가능한 MOPC-21 및 MPC-11 마우스 종양으로부터 유래된 것들이다. 인간 골수종 세포주 및 마우스-인간 이종골수종 세포주가 또한 인간 단일클론 항체의 생성을 위한 것으로 기재되어 있다(문헌[Kozbor, 1984, Immunol . 133:3001-05]; 및 문헌[Brodeur et al., 1987, Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications 51-63]).
하이브리도마 세포가 성장하는 배양 배지를 항원에 대해 유도된 단일클론 항체의 생성에 대해 검정한다. 하이브리도마 세포에 의해 생성된 단일클론 항체의 결합 특이성은 면역침전에 의해, 또는 RIA 또는 ELISA와 같은 시험관내 결합 검정에 의해 결정된다. 단일클론 항체의 결합 친화도는, 예를 들어 문헌[Munson et al., 1980, Anal. Biochem. 107:220-39]에 기재된 Scatchard 분석에 의해 결정될 수 있다.
원하는 특이성, 친화도, 및/또는 활성의 항체를 생성하는 하이브리도마 세포가 일단 확인되면, 제한 희석 절차에 의해 클론을 하위클로닝하고 표준 방법(문헌[Goding, 상기 문헌])에 의해 성장시킬 수 있다. 이러한 목적을 위해 적합한 배양 배지는, 예를 들어, DMEM 또는 RPMI-1640 배지를 포함한다. 또한, 예를 들어, 마우스에 하이브리도마 세포를 i.p. 주사함으로써 하이브리도마 세포를 동물에서 복수 종양으로서 생체내에서 성장시킬 수 있다.
하위클론에 의해 분비된 단일클론 항체는, 예를 들어, 친화성 크로마토그래피(예를 들어, 단백질 A 또는 단백질 G-세파로스를 사용함) 또는 이온-교환 크로마토그래피, 하이드록실아파타이트 크로마토그래피, 겔 전기영동, 투석 등과 같은 통상적인 항체 정제 절차에 의해 배양 배지, 복수 유체, 또는 혈청으로부터 적합하게 분리된다.
단일클론 항체를 인코딩하는 DNA는 통상적인 절차를 사용하여(예를 들어, 뮤린 항체의 중쇄 및 경쇄를 인코딩하는 유전자에 특이적으로 결합할 수 있는 올리고뉴클레오티드 프로브를 사용함으로써) 용이하게 단리되고 서열분석된다. 하이브리도마 세포는 그러한 DNA의 공급원으로서의 역할을 할 수 있다. 일단 단리되면, DNA는 발현 벡터 내로 넣어질 수 있으며, 이어서 이는, 달리 항체 단백질을 생성하지 않는 숙주 세포, 예컨대 E. 콜라이(E. coli) 세포, 유인원 COS 세포, 중국 햄스터 난소(CHO) 세포, 또는 골수종 세포 내로 형질감염되어 재조합 숙주 세포 내에서의 단일클론 항체의 합성을 획득한다. 항체를 인코딩하는 DNA의 세균 내에서의 재조합 발현에 대한 검토 논문은 문헌[Skerra et al., 1993, Curr. Opinion in Immunol. 5:256-62] 및 문헌[Plckthun, 1992, Immunol. Revs. 130:151-88]을 포함한다.
추가의 실시 형태에서 단일클론 항체 또는 항체 단편은, 예를 들어, 문헌[Antibody Phage Display: Methods and Protocols (O'Brien and Aitken, eds., 2002)]에 기재된 기법을 사용하여 생성된 항체 파지 라이브러리로부터 단리될 수 있다. 파지 디스플레이 방법에서, 기능성 항체 도메인은 이들을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열을 운반하는 파지 입자의 표면 상에 디스플레이된다. 본 명세서에 기재된 항체를 제조하기 위해 사용될 수 있는 파지 디스플레이 방법의 예에는 문헌[Brinkman et al., 1995, J. Immunol. Methods 182:41-50]; 문헌[Ames et al., 1995, J. Immunol. Methods 184:177-186]; 문헌[Kettleborough et al., 1994, Eur. J. Immunol. 24:952-958]; 문헌[Persic et al., 1997, Gene 187:9-18]; 문헌[Burton et al., 1994, Advances in Immunology 57:191-280]; PCT 특허 출원 공개 PCT/GB91/01134호; 국제 특허 출원 공개 WO 90/02809호, WO 91/10737호, WO 92/01047호, WO 92/18619호, WO 93/11236호, WO 95/15982호, WO 95/20401호, 및 WO 97/13844호; 및 미국 특허 제5,698,426호, 제5,223,409호, 제5,403,484호, 제5,580,717호, 제5,427,908호, 제5,750,753호, 제5,821,047호, 제5,571,698호, 제5,427,908호, 제5,516,637호, 제5,780,225호, 제5,658,727호, 제5,733,743호, 및 제5,969,108호에 개시된 것들이 포함된다.
원칙적으로 합성 항체 클론은 파지 코트 단백질에 융합된 항체 가변 영역(Fv)의 다양한 단편을 디스플레이하는 파지를 함유하는 파지 라이브러리를 스크리닝함으로써 선택된다. 그러한 파지 라이브러리는 원하는 항원에 대해 스크리닝된다. 원하는 항원에 결합할 수 있는 Fv 단편을 발현하는 클론은 항원에 흡착되고, 따라서 라이브러리 내의 비결합 클론으로부터 분리된다. 이어서, 결합 클론은 항원으로부터 용리되고, 항원 흡착/용리의 추가 사이클에 의해 추가로 풍부화될 수 있다.
예를 들어, 문헌[Winter et al., 1994, Ann. Rev. Immunol. 12:433-55]에 기재된 바와 같이, 가변 도메인은 VH 및 VL이 짧은 가요성 펩티드를 통해 공유적으로 연결된 단일-사슬 Fv(scFv) 단편으로서, 또는 각각 불변 도메인에 융합되고 비공유적으로 상호작용하는 Fab 단편으로서 파지 상에 기능적으로 디스플레이될 수 있다.
VH 및 VL 유전자의 레퍼토리는 PCR에 의해 별도로 클로닝되고 파지 라이브러리에서 무작위로 재조합될 수 있으며, 이는 문헌[Winter et al., 상기 문헌]에 기재된 바와 같이 항원-결합 클론에 대해 검색될 수 있다. 면역화된 공급원으로부터의 라이브러리는 하이브리도마를 작제할 필요 없이 면역원에 대해 고친화성 항체를 제공한다. 대안적으로, 나이브(naive) 레퍼토리는 어떠한 면역화 없이도 광범위한 비-자가 및 또한 자가 항원에 대한 단일 인간 항체 공급원을 제공하도록 클로닝될 수 있으며, 이는 문헌[Griffiths et al., 1993, EMBO J 12:725-34]에 의해 기재된 바와 같다. 마지막으로, 나이브 라이브러리는 또한, 줄기 세포로부터 재배열되지 않은 V-유전자 세그먼트를 클로닝하고, 무작위 서열을 함유하는 PCR 프라이머를 사용하여 고도로 가변적인 CDR3 영역을 인코딩하고 시험관내에서 재배열을 달성함으로써 합성에 의해 제조될 수 있으며, 이는, 예를 들어 문헌[Hoogenboom and Winter, 1992, J. Mol. Biol. 227:381-88]에 의해 기재된 바와 같다.
라이브러리의 스크리닝은 당업계에 알려진 다양한 기법에 의해 달성될 수 있다. 예를 들어, NKG2d 또는 NKp46(예를 들어, NKG2d 또는 NKp46 폴리펩티드, 단편, 또는 에피토프)는 흡착 플레이트의 웰을 코팅하기 위해 사용되거나, 흡착 플레이트에 부착된 숙주 세포 상에서 발현되거나, 세포 분류에 사용되거나, 스트렙타비딘-코팅된 비드를 이용하는 포획을 위해 비오틴에 접합되거나, 디스플레이 라이브러리를 패닝(panning)하기 위한 임의의 다른 방법에 사용될 수 있다. 느린 해리 반응속도론적 속도(예를 들어, 우수한 결합 친화성)를 갖는 항체의 선택은 문헌[Bass et al., 1990, Proteins 8:309-14] 및 국제 특허 출원 공개 WO 92/09690호에 기재된 바와 같은 긴 세척 및 1가 파지 디스플레이의 사용에 의해, 그리고 문헌[Marks et al., 1992, Biotechnol. 10:779-83]에 기재된 바와 같은 항원의 낮은 코팅 밀도의 사용에 의해 촉진될 수 있다.
문헌[Kabat, et al., 상기 문헌]에 기재된 관심 파지 클론 및 적합한 불변 영역(예를 들어, Fc) 서열로부터, 관심 파지 클론을 선택하기에 적합한 항원 스크리닝 절차를 설계한 후에 VH 및/또는 VL 서열(예를 들어, Fv 서열), 또는 VH 및 VL 서열로부터의 다양한 CDR 서열을 사용하여 전장 항체 클론을 작제함으로써 항체를 얻을 수 있다.
본 명세서에 기재된 항체는 또한, 예를 들어, 키메라 항체를 포함할 수 있다. 키메라 항체는 항체의 상이한 부분이 상이한 면역글로불린 분자로부터 유래되는 분자이다. 예를 들어, 키메라 항체는 인간 항체의 불변 영역에 융합된 마우스 또는 래트 단일클론 항체의 가변 영역을 함유할 수 있다. 키메라 항체를 생성하기 위한 방법은 당업계에 알려져 있다. 예를 들어, 문헌[Morrison, 1985, Science 229:1202;]; 문헌[Oi et al., 1986, BioTechniques 4:214]; 문헌[Gillies et al., 1989, J. Immunol. Methods 125:191-202]; 및 미국 특허 제5,807,715호, 제4,816,567호, 제4,816,397호, 및 제6,331,415호를 참조한다.
본 명세서에 기재된 것들과 같은 기법을 사용하여 생성된 항체 또는 항원-결합 단편은 잘 알려진 표준 기법을 사용하여 단리할 수 있다. 예를 들어, 항체 또는 항원-결합 단편은, 예를 들어, 배양 배지, 복수 유체, 혈청, 세포 용해물, 합성 반응 물질 등으로부터, 예를 들어, 단백질 A-세파로스, 하이드록실아파타이트 크로마토그래피, 겔 전기영동, 투석, 또는 친화성 크로마토그래피와 같은 통상적인 면역글로불린 정제 절차에 의해 적합하게 분리될 수 있다. 본 명세서에 사용된 바와 같이, "단리된" 또는 "정제된" 항체에는 항체가 유래되는 세포 또는 조직 공급원으로부터의 세포 물질 또는 다른 단백질이 실질적으로 없거나, 화학적으로 합성될 경우에 화학 전구체 또는 다른 화학물질이 실질적으로 없다.
항체 단편
본 발명은, 예를 들어 NKG2d 및 NKp46에 결합하는 항체 단편을 포함하는 항체(예를 들어, 다중특이성 항체)를 제공한다.
항체 단편의 생성을 위한 다양한 기법이 개발되어 있다. 전통적으로, 이들 단편은 온전한 항체의 단백질 분해적 분해를 통해 유도되었다(예를 들어, 문헌[Morimoto et al., 1992, J. Biochem. Biophys. Methods 24:107-17]; 및 문헌[Brennan et al., 1985, Science 229:81-83] 참조). 그러나, 이들 단편은 이제 재조합 숙주 세포에 의해 직접 생성될 수 있다. Fab, Fv, 및 scFv 항체 단편은 모두 E. 콜라이 또는 효모 세포에서 발현되고 그로부터 분비될 수 있으며, 이로써 다량의 이들 단편의 용이한 생성을 가능하게 할 수 있다. 항체 단편은 상기 논의된 항체 파지 라이브러리로부터 단리될 수 있다. 대안적으로, Fab'-SH 단편이 E. 콜라이로부터 직접 회수되고 화학적으로 커플링되어 F(ab')2 단편을 형성할 수 있다(문헌[Carter et al., 1992, Bio/Technology 10:163-67]). 다른 접근법에 따르면, F(ab')2 단편은 재조합 숙주 세포 배양물로부터 직접 단리될 수 있다. 구제 수용체(salvage receptor) 결합 에피토프 잔기를 포함하는 증가된 생체내 반감기를 갖는 Fab 및 F(ab')2 단편이, 예를 들어 미국 특허 제5,869,046호에 기재되어 있다. 항체 단편의 생성을 위한 다른 기법이 숙련된 실무자에게 명백할 것이다. 소정 실시 형태에서, 항체는 단일쇄 Fv 단편(scFv)이다(예를 들어, 국제 특허 출원 공개 WO 93/16185호; 미국 특허 제5,571,894호 및 제5,587,458호 참조). Fv 및 scFv는 불변 영역이 없는 온전한 조합 부위를 가지며; 이로써, 이들은 생체내 사용 동안 감소된 비특이적 결합에 적합할 수 있다. scFv 융합 단백질은 scFv의 아미노 말단 또는 카르복시 말단 중 어느 하나에서 이펙터 단백질의 융합을 생성하도록 작제될 수 있다(예를 들어, 문헌[Borrebaeck ed., 상기 문헌] 참조). 항체 단편은 또한, 예를 들어 상기 인용된 참고문헌에 기재된 바와 같은 "선형 항체"일 수 있다. 그러한 선형 항체는 단일특이성 또는 다중특이성, 예컨대 이중특이성일 수 있다.
더 작은 항체-유래 결합 구조는 단일 가변 도메인 항체(sdAb)로도 불리는 별개의 가변 도메인(V 도메인)이다. 소정 유형의 유기체, 즉, 낙타과 및 연골 어류는 이들의 면역 시스템의 일부로서 Fc 등가 도메인 구조 상에 마운팅된 고친화성 단일 V-유사 도메인을 갖는다. (문헌[Woolven et al., 1999, Immunogenetics 50: 98-101]; 및 문헌[Streltsov et al., 2004, Proc Natl Acad Sci USA. 101:12444-49]). V-유사 도메인(낙타과에서는 VhH로 불리고, 상어에서는 V-NAR로 지칭됨)은 전형적으로 긴 표면 루프들을 디스플레이하며, 이들 루프는 표적 항원의 공동(cavity)의 침투를 가능하게 한다. 이들은 또한 소수성 표면 패치를 마스킹함으로써 단리된 VH 도메인을 안정화한다.
이들 VhH 및 V-NAR 도메인은 sdAb를 조작하는 데 사용되어 왔다. 파지 라이브러리로부터의 선택, 및 안정한 고결합 VL- 및 VH-유래 도메인을 가져온 다른 접근법을 사용하여 인간 V 도메인 변이체가 설계되어 왔다.
본 명세서에 제공된 항체는 면역글로불린 분자, 및 면역글로불린 분자의 면역학적으로 활성인 부분, 예를 들어 항원-결합 부위를 함유하는 분자, 예를 들어 NKG2d 또는 NKp46 에피토프에 결합하는 항원-결합 부위를 함유하는 분자를 포함하지만 이로 한정되지 않는다. 본 명세서에 제공된 면역글로불린 분자는 임의의 부류(예를 들어, IgG, IgE, IgM, IgD, 및 IgA), 또는 임의의 하위부류(예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1, 및 IgA2)의 면역글로불린 분자일 수 있다. 일부 실시 형태에서, 항체는 IgG 항체이다. 일부 실시 형태에서, IgG 항체는 IgG1 항체이다. 일부 실시 형태에서, IgG 항체는 IgG2, IgG3, 또는 IgG4 항체이다.
항체의 변이체 및 유도체는, 예를 들어 NKG2d 또는 NKp46 에피토프에 결합하는 능력을 보유하는 항체 기능성 단편을 포함한다. 예시적인 기능성 단편은 하기를 포함한다: Fab 단편(예를 들어, 항원-결합 도메인을 함유하고, 이황화물 결합에 의해 가교된 중쇄의 일부와 경쇄를 포함하는 항체 단편); Fab'(예를 들어, Fab를 포함하는 단일 항원-결합 도메인 및 힌지 영역을 통한 중쇄의 추가 부분을 함유하는 항체 단편); F(ab')2(예를 들어, 중쇄의 힌지 영역 내의 사슬간 이황화물 결합에 의해 연결된 2개의 Fab' 분자; Fab' 분자들은 동일하거나 상이한 에피토프를 향해 유도될 수 있음); 이중특이성 Fab(예를 들어, 2개의 항원-결합 도메인을 갖는 Fab 분자; 이들 각각은 상이한 에피토프를 향해 유도될 수 있음); scFv로도 알려진, 가변 영역을 포함하는 단일쇄(예를 들어, 10 내지 25개의 아미노산의 사슬에 의해 함께 연결된 항체의 단일 경쇄와 중쇄의 가변, 항원-결합 결정 영역); 이황화물-연결된 Fv, 또는 dsFv(예를 들어, 이황화물 결합에 의해 함께 연결된 항체의 단일 경쇄와 중쇄의 가변, 항원-결합 결정 영역); 낙타화 VH(예를 들어, VH 계면에서의 일부 아미노산이 자연 발생 낙타 항체의 중쇄에서 발견되는 것들인 항체의 단일 중쇄의 가변, 항원-결합 결정 영역); 이중특이성 scFv(예를 들어, 2개의 항원-결합 도메인을 갖는 scFv 또는 dsFv 분자; 이들 각각은 상이한 에피토프를 향해 유도될 수 있음); 다이아바디(예를 들어, 제1 scFv의 VH 도메인이 제2 scFv의 VL 도메인과 조립될 때 형성되고, 제1 scFv의 VL 도메인이 제2 scFv의 VH 도메인과 조립될 때 형성되는 이량체화된 scFv; 다이아바디의 2개의 항원-결합 영역은 동일하거나 상이한 에피토프를 향해 유도될 수 있음); 트라이아바디(예를 들어, 삼량체화된 scFv로서, 이는 다이아바디와 유사한 방식으로 형성되지만, 여기서는 3개의 항원-결합 도메인이 단일 복합체로 생성됨; 3개의 항원-결합 도메인은 동일하거나 상이한 에피토프를 향해 유도될 수 있음); 및 테트라바디(예를 들어, 사량체화된 scFv로서, 이는 다이아바디와 유사한 방식으로 형성되지만, 여기서는 4개의 항원-결합 도메인이 단일 복합체로 생성됨; 4개의 항원-결합 도메인은 동일하거나 상이한 에피토프를 향해 유도될 수 있음).
일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 이중특이성 항체이다.
일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 이중특이성 항체이며, 여기서 이중특이성 항체는 바이포드-스캐폴드 입체구조이다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 바이포드-스캐폴드 입체구조의 이중특이성 항체이며, 여기서 제1 결합 도메인은 Fab 영역이고, 제2 결합 도메인은 scFv 영역이다.
일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 이중특이성 항체이며, 여기서 이중특이성 항체는 모리슨-스캐폴드 입체구조이다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 모리슨-스캐폴드 입체구조의 이중특이성 항체이며, 여기서 제1 결합 도메인은 2개의 Fab 영역을 포함하고, 제2 결합 도메인은 2개의 scFv 영역을 포함한다.
인간화 항체
본 명세서에 기재된 항체(예를 들어, 다중특이성 항체)는, 예를 들어 인간화 항체, 예를 들면 탈면역화된(deimmunized) 또는 복합 인간 항체를 포함할 수 있다.
인간화 항체는 인간 프레임워크 영역 및 인간 불변 영역 서열을 포함할 수 있다. 예를 들어, 인간화 항체는 인간 불변 영역 서열을 포함할 수 있다. 소정 실시 형태에서, 인간화 항체는 면역글로불린의 임의의 부류, 예를 들어 IgM, IgG, IgD, IgA, 및 IgE, 및 임의의 동형, 예를 들어 IgG1, IgG2, IgG3, 및 IgG4(예를 들어, IgG4의 변이체 및 IgG4 널바디(nullbody))로부터 선택될 수 있다. 소정 실시 형태에서, 인간화 항체는 카파 또는 람다 경쇄 불변 서열을 포함할 수 있다.
인간화 항체는 당업계에 알려진 다양한 기법을 사용하여 생성될 수 있으며, 이에는 CDR-이식(유럽 특허 EP 239,400호; 국제 특허 출원 공개 WO 91/09967호; 및 미국 특허 제5,225,539호, 제5,530,101호, 및 제5,585,089호), 베니어링(veneering) 또는 재표면화(resurfacing)(유럽 특허 EP 592,106호 및 EP 519,596호; 문헌[Padlan, 1991, Molecular Immunology 28(4/5):489-498]; 문헌[Studnicka et al., 1994, Protein Engineering 7(6):805-814]; 문헌[Roguska et al., 1994, PNAS 91:969-973]), 사슬 셔플링(chain shuffling)(미국 특허 제5,565,332호), 및, 예를 들어 미국 특허 제6,407,213호, 미국 특허 제5,766,886호, 국제 특허 출원 공개 WO 93/17105호, 문헌[Tan et al., J. Immunol. 169:1119 25 (2002)], 문헌[Caldas et al., Protein Eng. 13(5):353-60 (2000)], 문헌[Morea et al., Methods 20(3):267 79 (2000)], 문헌[Baca et al., J. Biol. Chem. 272(16):10678-84 (1997)], 문헌[Roguska et al., Protein Eng. 9(10):895 904 (1996)], 문헌[Couto et al., Cancer Res. 55 (23 Supp):5973s- 5977s (1995)], 문헌[Couto et al., Cancer Res. 55(8):1717-22 (1995)], 문헌[Sandhu JS, Gene 150(2):409-10 (1994)], 및 문헌[Pedersen et al., J. Mol. Biol. 235(3):959-73 (1994)]에 개시된 기법이 포함되지만 이로 한정되지 않는다. 미국 특허 출원 공개 제2005/0042664 A1호(2005년 2월 24일)를 또한 참조하며, 이들 각각은 전체적으로 본 명세서에 참고로 포함된다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 항체는 NKG2d 또는 NKp46 - 이에는 인간, 사이노몰거스 마카크, 래트 및 마우스 NKG2d, 또는 NKp46이 포함됨 - 에 결합하는 인간화 항체일 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 인간화 항체는 본 명세서에 제공된 서열 목록에 제시된 바와 같은 하나 이상의 CDR을 포함할 수 있다. 비인간 항체를 인간화하기 위한 다양한 방법이 당업계에 알려져 있다. 예를 들어, 인간화 항체는 비인간 공급원으로부터의 하나 이상의 아미노산 잔기가 그 안으로 도입될 수 있다. 이들 비인간 아미노산 잔기는 종종 "유입" 잔기로 지칭되는데, 이는 전형적으로 "유입" 가변 도메인으로부터 받아들여진다. 인간화는, 예를 들어 문헌[Jones et al., 1986, Nature 321:522-25]; 문헌[Riechmann et al., 1988, Nature 332:323-27]; 및 문헌[Verhoeyen et al., 1988, Science 239:1534-36)]의 방법에 따라, 초가변 영역 서열을 인간 항체의 상응하는 서열을 대신하는 것으로 치환함으로써 수행될 수 있다.
일부 경우에, 인간화 항체는 CDR 이식에 의해 작제되는데, 여기서는 모 비인간 항체(예를 들어, 설치류)의 6개의 CDR의 아미노산 서열이 인간 항체 프레임워크 상에 이식된다. 예를 들어, Padlan et al.은 CDR 내의 잔기의 약 1/3만이 항원과 실제로 접촉하는 것으로 판단하였으며, 이들을 "특이성 결정 잔기" 또는 SDR이라고 칭하였다(문헌[Padlan et al., 1995, FASEB J. 9:133-39]). SDR 이식의 기법에서는, 단지 SDR 잔기만이 인간 항체 프레임워크 상에 이식된다(예를 들어, 문헌[Kashmiri et al., 2005, Methods 36:25-34] 참조).
인간화 항체를 제조하는 데 사용되는, 중쇄 및 경쇄 둘 모두의 인간 가변 도메인의 선택은 항원성(antigenicity)을 감소시키는 데 중요할 수 있다. 예를 들어, 이른바 "최적-적합(best-fit)" 방법에 따라, 비인간(예를 들어, 설치류) 항체의 가변 도메인의 서열이, 알려진 인간 가변 도메인 서열의 전체 라이브러리에 대해 스크리닝된다. 설치류의 것과 가장 유사한 인간 서열이 인간화 항체를 위한 인간 프레임워크로서 선택될 수 있다(문헌[Sims et al., 1993, J. Immunol. 151:2296-308]; 및 문헌[Chothia et al., 1987, J. Mol. Biol. 196:901-17]). 다른 방법은 모든 인간 항체의 경쇄 또는 중쇄의 특정 하위그룹의 컨센서스 서열로부터 유래되는 특정 프레임워크를 사용한다. 몇몇의 상이한 인간화 항체들에 대해 동일한 프레임워크가 사용될 수 있다(문헌[Carter et al., 1992, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:4285-89]; 및 문헌[Presta et al., 1993, J. Immunol. 151:2623-32]). 일부 경우에, 프레임워크는 가장 풍부한 인간 하위부류인 VL6 하위군 I(VL6I) 및 VH 하위군 III(VHIII)의 컨센서스 서열로부터 유래된다. 다른 방법에서는, 인간 생식세포계열 유전자가 프레임워크 영역의 공급원으로서 사용된다.
초인간화로 불리는, CDR들의 비교에 기초한 대안적인 패러다임에서는, FR 상동성이 비관련되어 있다. 상기 방법은 비인간 서열과 기능성 인간 생식세포계열 유전자 레퍼토리의 비교로 이루어진다. 이어서, 뮤린 서열과 동일하거나 밀접하게 관련된 표준 구조를 인코딩하는 유전자를 선택한다. 다음으로, 비인간 항체와 표준 구조를 공유하는 유전자 내에서, CDR 내에서 가장 높은 상동성을 갖는 것들이 FR 공여체로서 선택된다. 마지막으로, 비인간 CDR을 이들 FR 상에 이식한다(예를 들어, 문헌[Tan et al., 2002, J. Immunol. 169:1119-25] 참조).
항체는 항원에 대한 그들의 친화도를 보유하고 다른 유리한 생물학적 특성을 갖도록 인간화되는 것이 추가로 일반적으로 바람직하다. 이러한 목적을 달성하기 위하여, 한 가지 방법에 따르면, 인간화 항체는 모 서열 및 인간화 서열의 3차원 모델을 사용하여 모 서열 및 다양한 개념적(conceptual) 인간화 생성물을 분석하는 과정에 의해 제조된다. 3차원 면역글로불린 모델은 일반적으로 이용가능하며 당업자에게 익숙하다. 선택된 후보 면역글로불린 서열의 가능한 3차원 입체형태 구조를 예시하고 디스플레이하는 컴퓨터 프로그램이 이용가능하다. 이들은, 예를 들어 WAM(문헌[Whitelegg and Rees, 2000, Protein Eng. 13:819-24]), Modeller(문헌[Sali and Blundell, 1993, J. Mol. Biol. 234:779-815]), 및 Swiss PDB Viewer(문헌[Guex and Peitsch, 1997, Electrophoresis 18:2714-23])를 포함한다. 이들 디스플레이에 대한 조사는 후보 면역글로불린 서열의 기능에 있어서의 잔기의 가능성이 있는 역할의 분석, 예를 들어 후보 면역글로불린이 그의 항원과 결합하는 능력에 영향을 주는 잔기의 분석을 가능하게 한다. 이러한 방식으로, FR 잔기가 수용자 서열 및 유입 서열로부터 선택 및 조합되어, 원하는 항체 특성, 예컨대 표적 항원(들)에 대한 증가된 친화도가 달성되도록 할 수 있다. 일반적으로, 초가변 영역 잔기는 직접적이고 가장 실질적으로 항원 결합에 영향을 준다.
항체 인간화를 위한 다른 방법은 인간 스트링 함량(Human String Content, HSC)으로 불리는 항체 인간도(antibody humanness)의 메트릭에 기초한다. 이 방법은 마우스 서열을 인간 생식세포계열 유전자의 레퍼토리와 비교하고, 그 차이를 HSC로 점수 매긴다. 이어서, 전반적인 동일성 척도를 사용하기보다는 표적 서열의 HSC를 최대화하여 다수의 다양한 인간화 변이체를 생성함으로써 표적 서열을 인간화한다(문헌[Lazar et al., 2007, Mol. Immunol. 44:1986-98]).
전술된 방법에 더하여, 인간화 항체를 생성하고 선택하는 데 경험적 방법이 사용될 수 있다. 이들 방법은 인간화 변이체들의 큰 라이브러리의 생성 및 풍부화 기술 또는 고처리량 스크리닝 기법을 사용한 최상의 클론의 선택에 기초한 것들을 포함한다. 항체 변이체는 파지, 리보솜, 및 효모 디스플레이 라이브러리로부터 단리될 수 있을 뿐만 아니라 세균 콜로니 스크리닝에 의해 단리될 수 있다(예를 들어, 문헌[Hoogenboom, 2005, Nat. Biotechnol. 23:1105-16]; 문헌[Dufner et al., 2006, Trends Biotechnol. 24:523-29]; 문헌[Feldhaus et al., 2003, Nat. Biotechnol. 21:163-70]; 및 문헌[Schlapschy et al., 2004, Protein Eng. Des. Sel. 17:847-60] 참조).
FR 라이브러리 접근법에서는, 잔기 변이체들의 집합체(collection)를 FR 내의 특정 위치들에 도입시킨 후, 라이브러리를 스크리닝하여, 이식된 CDR을 최상으로 지지하는 FR을 선택한다. 치환될 잔기는 CDR 구조에 잠재적으로 기여하는 것으로 확인되거나(예를 들어, 문헌[Foote and Winter, 1992, J. Mol. Biol. 224:487-99] 참조), 또는 문헌[Baca et al.(1997, J. Biol. Chem. 272:10678-84)]에 의해 확인된 표적 잔기들의 더 제한된 세트로부터 확인된 "베르니어(Vernier)" 잔기들 중 일부 또는 전부를 포함할 수 있다.
FR 셔플링에서는, 선택된 잔기 변이체들의 조합 라이브러리를 생성하는 것 대신에 전체 FR을 비인간 CDR과 조합한다(예를 들어, 문헌[Dall'Acqua et al., 2005, Methods 36:43-60] 참조). 먼저 VL을 이어서 VH를 인간화하는 2-단계 공정으로 결합에 대해 라이브러리를 스크리닝할 수 있다. 대안적으로, 1-단계 FR 셔플링 공정이 사용될 수 있다. 그러한 공정은, 생성된 항체가 향상된 발현, 증가된 친화도, 및 열 안정성을 포함한 개선된 생화학적 및 물리화학적 특성을 나타내었기 때문에, 2-단계 스크리닝보다 더 효율적인 것으로 밝혀져 있다(예를 들어, 문헌[Damschroder et al., 2007, Mol. Immunol. 44:3049-60] 참조).
이러한 "인간조작(humaneering)" 방법은 필수적인 최소 특이성 결정인자(minimum specificity determinant, MSD)의 실험적 확인에 기초하고, 인간 FR의 라이브러리 내로의 비인간 단편의 순차적인 대체 및 결합의 평가에 기초한다. 그것은 비인간 VH 및 VL 사슬의 CDR3의 영역으로 시작하고, VH 및 VL 둘 모두의 CDR1 및 CDR2를 포함하는, 비인간 항체의 다른 영역을 인간 FR로 점진적으로 대체한다. 이 방법은 전형적으로 별개의 인간 V-세그먼트 CDR을 갖는 다수의 하위부류로부터 유래되는 항체들의 에피토프 보유 및 확인을 가져온다. 인간화는 인간 생식세포계열 유전자 항체에 대해 91 내지 96% 상동성인 항체의 단리를 가능하게 한다(예를 들어, 문헌[Alfenito, Cambridge Healthtech Institute's Third Annual PEGS, The Protein Engineering Summit, 2007] 참조).
이러한 "인간 조작" 방법은 항체의 아미노산 서열에 특정 변화를 주어서, 인간에서 감소된 면역원성을 가짐에도 불구하고 원래의 비인간 항체의 바람직한 결합 특성을 보유하는 변형된 항체를 생성하도록 함으로써, 비인간 항체 또는 항체 단편, 예컨대 마우스 또는 키메라 항체 또는 항체 단편을 변경시키는 것을 수반한다. 일반적으로, 이러한 기법은 비인간(예를 들어, 마우스) 항체의 아미노산 잔기를 "저위험", "중간 위험", 또는 "고위험" 잔기로서 분류하는 것을 수반한다. 이러한 분류는 특정 치환이 가져올 예측된 이익(예를 들어, 인간에서의 면역원성을 위함)을, 그러한 치환이, 생성되는 항체의 접힘에 영향을 미치게 될 위험과 대비하여 평가하는 전반적인 위험/보상 계산을 사용하여 수행된다. 비인간 항체 서열의 주어진 위치(예를 들어, 저위험 또는 중간 위험)에서 치환될 특정 인간 아미노산 잔기는 비인간(예를 들어, 마우스) 항체의 가변 영역으로부터 유래되는 아미노산 서열을 특정 또는 컨센서스 인간 항체 서열의 상응하는 영역과 정렬시킴으로써 선택될 수 있다. 비인간 서열에서 저위험 또는 중간 위험 위치에 있는 아미노산 잔기는 정렬에 따라 인간 항체 서열 내의 상응하는 잔기로 치환될 수 있다. 인간 조작된 단백질을 제조하기 위한 기법이 문헌[Studnicka et al., 1994, Protein Engineering 7:805-14]; 미국 특허 제5,766,886호; 제5,770,196호; 제5,821,123호; 및 제5,869,619호; 및 PCT 특허 출원 공개 WO 93/11794호에 더 상세히 기재되어 있다.
복합 인간 항체가, 예를 들어 Composite Human Antibody™ 기술(영국 케임브리지 소재의 Antitope Ltd.)을 사용하여 생성될 수 있다. 복합 인간 항체를 생성하기 위하여, T 세포 에피토프를 피함으로써, 생성되는 항체의 면역원성을 최소화하는 방식으로 다수의 인간 항체 가변 영역 서열의 단편으로부터 가변 영역 서열을 설계한다. 그러한 항체는 인간 불변 영역 서열, 예를 들어, 인간 경쇄 및/또는 중쇄 불변 영역을 포함할 수 있다.
탈면역화된 항체는 T-세포 에피토프가 제거된 항체이다. 탈면역화된 항체의 제조 방법이 기재되어 있다. 예를 들어, 문헌[Jones et al., Methods Mol Biol. 2009;525:405-23, xiv], 및 문헌[De Groot et al., Cell. Immunol. 244:148-153(2006)]을 참조한다. 탈면역화된 항체는 T-세포 에피토프-고갈된 가변 영역 및 인간 불변 영역을 포함한다. 간략하게 말하면, 항체의 VH 및 VL을 클로닝하고, 후속으로 T 세포 증식 검정에서 항체의 VH 및 VL로부터 유래되는 중첩 펩티드를 시험함으로써 T-세포 에피토프를 확인한다. 컴퓨터 모의실험(in silico) 방법을 통해 T 세포 에피토프를 확인하여 인간 MHC 클래스 II에 대한 펩티드 결합을 확인한다. VH 및 VL 내에 돌연변이를 도입하여 인간 MHC 클래스 II에 대한 결합을 소실시킨다. 이어서, 돌연변이화된 VH 및 VL을 이용하여 탈면역화된 항체를 생성한다.
인간 항체
구체적인 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체는 완전 인간 항-인간 항체 또는 이의 단편을 포함한다. 완전 인간 항체는 당업계에 알려진 임의의 방법에 의해 생성될 수 있다. 본 명세서에 제공된 인간 항체는 인간-유래 파지 디스플레이 라이브러리로부터 선택되는 Fv 클론 가변 도메인 서열(들)을, 알려진 인간 불변 도메인 서열(들)과 조합함으로써 작제될 수 있다. 대안적으로, 본 발명의 인간 단일클론 항체는 하이브리도마 방법에 의해 제조될 수 있다. 인간 단일클론 항체의 생성을 위한 인간 골수종 및 마우스-인간 이종골수종 세포주가, 예를 들어 문헌[Kozbor, 1984, J. Immunol. 133:3001-05]; 문헌[Brodeur et al., Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications 51-63 (1987)]; 및 문헌[Boerner et al., 1991, J. Immunol. 147:86-95]에 기재되어 있다.
면역화 시에 내인성 면역글로불린 생성의 부재 하에서 인간 항체의 전체 레퍼토리를 생성할 수 있는 유전자도입 동물(예를 들어, 마우스)을 생성하는 것이 또한 가능하다. 인간 항체 레퍼토리를 발현하는 유전자도입 마우스가 매우 다양한 잠재적인 약물 표적에 대해 고친화성 인간 서열 단일클론 항체를 생성하는 데 사용되어 왔다(예를 들어, 문헌[Jakobovits, A., 1995, Curr. Opin. Biotechnol. 6(5):561-66]; 문헌[Brggemann and Taussing, 1997, Curr. Opin. Biotechnol. 8(4):455-58]; 미국 특허 제6,075,181호 및 제6,150,584호; 및 문헌[Lonberg et al., 2005, Nature Biotechnol. 23:1117-25] 참조).
대안적으로, 인간 항체는 표적 항원에 대해 유도된 항체를 생성하는 인간 B 림프구의 불멸화를 통해 제조될 수 있다(예를 들어, 그러한 B 림프구는 개체로부터 회수될 수 있거나, 또는 시험관내에서 면역화되었을 수 있다)(예를 들어, 문헌[Cole et al., Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy (1985)]; 문헌[Boerner et al., 1991, J. Immunol. 147(1):86-95]; 및 미국 특허 제5,750,373호 참조).
유전자 셔플링이 또한 비인간(예를 들어, 설치류) 항체로부터 인간 항체를 유도하는 데 사용될 수 있으며, 여기서 인간 항체는 출발 비인간 항체와 유사한 친화성 및 특이성을 갖는다. "에피토프 임프린팅" 또는 "유도된 선택(guided selection)"으로도 불리는 이 방법에 따르면, 본 명세서에 기재된 바와 같은 파지 디스플레이 기법에 의해 얻어진 비인간 항체 단편의 중쇄 가변 영역 또는 경쇄 가변 영역 중 어느 하나는 인간 V 도메인 유전자의 레퍼토리로 대체되어, 비인간 사슬/인간 사슬 scFv 또는 Fab 키메라들의 집단을 생성한다. 항원에 의한 선택은 비인간 사슬/인간 사슬 키메라 scFv 또는 Fab의 단리를 가져오며, 여기서 인간 사슬은 1차 파지 디스플레이 클론에서 상응하는 비인간 사슬의 제거 시에 파괴된 항원-결합 부위를 회복한다(예를 들어, 에피토프는 인간 사슬 파트너의 선택을 유도(임프린팅)한다). 나머지 비인간 사슬을 대체하기 위해 이 공정이 반복될 때, 인간 항체가 얻어진다(예를 들어, PCT 특허 출원 공개 WO 93/06213호; 및 문헌[Osbourn et al., 2005, Methods 36:61-68] 참조). CDR 이식에 의한 비인간 항체의 전통적인 인간화와는 달리, 이 기법은 비인간 기원의 FR 또는 CDR 잔기를 갖지 않는 완전한 인간 항체를 제공한다. 세포 표면 항원을 향해 마우스 항체를 인간화하기 위한 유도된 선택의 예에는 난소암 세포 상에 존재하는 폴레이트-결합 단백질(예를 들어, 문헌[Figini et al., 1998, Cancer Res. 58:991-96] 참조), 및 CD147 - 이는 간세포 암종 상에서 고도로 발현됨 - (예를 들어, 문헌[Bao et al., 2005, Cancer Biol. Ther. 4:1374-80] 참조)이 포함된다.
유도된 선택 접근법의 잠재적인 단점은, 하나의 항체 사슬을, 나머지 다른 하나의 항체 사슬을 일정하게 유지하면서 셔플링하는 것은 에피토프 드리프트를 초래할 수 있다는 것이다. 비인간 항체에 의해 인식된 에피토프를 유지하기 위하여, CDR 보유가 적용될 수 있다(예를 들어, 문헌[Klimka et al., 2000, Br. J. Cancer. 83:252-60]; 및 문헌[Beiboer et al., 2000, J. Mol. Biol. 296:833-49] 참조). 이 방법에서, 비인간 VH CDR3은 일반적으로 보유되는데, 그 이유는, 이 CDR은 항원-결합 부위의 중심에 있을 수 있고, 항원 인식에 대한 항체의 가장 중요한 영역일 수 있기 때문이다. 그러나, 일부 경우에, 비인간 항체의 VH CDR3 및 VL CDR3뿐만 아니라, VH CDR2, VL CDR2, 및 VL CDR1이 보유될 수 있다.
Fc
조작
Fc 조작에 의해 본 명세서에 제공된 항체를 변형시키는 것이 바람직할 수 있다. 소정 실시 형태에서, 항체의 Fc 영역의 변형은 항체의 이펙터 기능의 감소 또는 제거를 가져온다. 소정 실시 형태에서, 이펙터 기능은 ADCC, ADCP, 및/또는 CDC이다. 일부 실시 형태에서, 이펙터 기능은 ADCC이다. 다른 실시 형태에서, 이펙터 기능은 ADCP이다. 다른 실시 형태에서, 이펙터 기능은 CDC이다. 일 실시 형태에서, 이펙터 기능은 ADCC 및 ADCP이다. 일 실시 형태에서, 이펙터 기능은 ADCC 및 CDC이다. 일 실시 형태에서, 이펙터 기능은 ADCP 및 CDC이다. 일 실시 형태에서, 이펙터 기능은 ADCC, ADCP 및 CDC이다. 이는 항체의 Fc 영역 내에 하나 이상의 아미노산 치환을 도입함으로써 달성될 수 있다. 일부 실시 형태에서, Fc 영역은 IgG1 침묵 돌연변이를 포함한다. 일부 실시 형태에서, Fc 영역은 AAS 돌연변이를 포함한다.
소정 실시 형태에서, 항체의 Fc 영역의 변형은 항체의 이펙터 기능의 향상을 가져온다. 소정 실시 형태에서, 이펙터 기능은 ADCC, ADCP, 및/또는 CDC이다. 일부 실시 형태에서, 이펙터 기능은 ADCC이다. 다른 실시 형태에서, 이펙터 기능은 ADCP이다. 다른 실시 형태에서, 이펙터 기능은 CDC이다. 일 실시 형태에서, 이펙터 기능은 ADCC 및 ADCP이다. 일 실시 형태에서, 이펙터 기능은 ADCC 및 CDC이다. 일 실시 형태에서, 이펙터 기능은 ADCP 및 CDC이다. 일 실시 형태에서, 이펙터 기능은 ADCC, ADCP 및 CDC이다. 이는 항체의 Fc 영역 내에 하나 이상의 아미노산 치환을 도입함으로써 달성될 수 있다. 소정 실시 형태에서, Fc 영역은 CDC 향상 돌연변이를 포함한다. 일부 실시 형태에서, Fc 영역은 K248E 및 T437R 돌연변이를 포함한다.
본 명세서에 제공된 항체의 소정 실시 형태에서, Fc 영역은 비푸코실화된다.
항체의 혈청 반감기를 증가시키기 위해, 예를 들어 미국 특허 제5,739,277호에 기재된 바와 같이, 항체(특히, 항체 단편) 내로 구제 수용체 결합 에피토프를 도입할 수 있다. 용어 "구제 수용체 결합 에피토프"는 IgG 분자의 생체내 혈청 반감기의 증가를 담당하는 IgG 분자(예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4)의 Fc 영역의 에피토프를 지칭한다.
대안적인 결합제
본 발명은 본 명세서에 개시된 항체와 동일한 에피토프에 특이적으로 결합하는 비-면역글로불린 결합제를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 비-면역글로불린 결합제는 경쟁적 결합 검정에서 본 발명의 항체를 대체하거나 그에 의해 대체되는 작용제(agent)로서 확인된다. 이들 대안적인 결합제는, 예를 들어 당업계에 알려진 임의의 조작된 단백질 스캐폴드를 포함할 수 있다. 그러한 스캐폴드는, 예를 들어, 리간드 결합 부위를 형성하는 4개의 초가변 루프를 지지하는 강성 베타-배럴을 특징으로 하는 단백질 구조인, 리포칼린 스캐폴드를 기반으로 하는 안티칼린을 포함한다. 신규한 결합 특이성은, 기능적 디스플레이 및 유도된 선택과 조합하여, 루프 영역에서의 표적화된 무작위 돌연변이생성에 의해 조작될 수 있다(예를 들어, 문헌[Skerra, 2008, FEBS J. 275:2677-83] 참조). 다른 적합한 스캐폴드는, 예를 들어 하기를 포함할 수 있다: 애드넥틴, 또는 모노바디: 인간 피브로넥틴 III의 10번째 세포외 도메인을 기반으로 함(예를 들어, 문헌[Koide and Koide, 2007, Methods Mol. Biol. 352: 95-109] 참조); 아피바디: 스타필로콕쿠스 단백질 A의 Z 도메인을 기반으로 함(예를 들어, 문헌[Nygren et al., 2008, FEBS J. 275:2668-76] 참조); DARPin: 안키린 반복 단백질을 기반으로 함(예를 들어, 문헌[Stumpp et al., 2008, Drug. Discov. Today 13:695-701] 참조); 피노머: 인간 Fyn 단백질 키나제의 SH3 도메인을 기반으로 함(예를 들어, 문헌[Grabulovski et al., 2007, J. Biol. Chem. 282:3196-204] 참조); 아피틴: 술폴로부스 아시돌라리우스(Sulfolobus acidolarius)로부터 유래되는 Sac7d를 기반으로 함(예를 들어, 문헌[Krehenbrink et al., 2008, J. Mol. Biol. 383:1058-68] 참조); 아필린: 인간 y-B-크리스탈린을 기반으로 함(예를 들어, 문헌[Ebersbach et al., 2007, J. Mol. Biol. 372:172-85] 참조); 아비머: 막 수용체 단백질의 A 도메인을 기반으로 함(예를 들어, 문헌[Silverman et al., 2005, Biotechnol. 23:1556-61] 참조); 시스테인-풍부 노틴 펩티드(예를 들어, 문헌[Kolmar, 2008, FEBS J. 275:2684-90] 참조); 및 조작된 쿠니츠-유형 억제제(예를 들어, 문헌[Nixon and Wood, 2006, Curr. Opin. Drug. Discov. Dev. 9:261-68] 참조). 검토를 위해, 예를 들어 문헌[Gebauer and Skerra, 2009, Curr. Opin. Chem. Biol. 13:245-55]을 참조한다.
항체
변이체
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된, 예를 들어 NKG2d, NKp46에 결합하는 항체 또는 항원-결합 단편의 아미노산 서열 변형(들)이 고려된다. 예를 들어, 특이성, 열안정성, 발현 수준, 이펙터 기능, 글리코실화, 감소된 면역원성, 또는 용해도를 포함하지만 이로 한정되지 않는 항체의 결합 친화성 및/또는 다른 생물학적 특성을 개선하는 것이 바람직할 수 있다. 따라서, 본 명세서에 기재된 항체에 추가하여, 항체 변이체가 제조될 수 있음이 고려된다. 예를 들어, 적절한 뉴클레오티드 변화를 인코딩 DNA 내로 도입함으로써 그리고/또는 원하는 항체 또는 폴리펩티드의 합성에 의해 항체 변이체가 제조될 수 있다. 글리코실화 부위의 수 또는 위치를 변화시키거나 막 고착 특성을 변화시키는 것과 같이, 아미노산 변화가 항체의 번역 후 과정을 변경시킬 수 있음을 당업자는 인정할 것이다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 항체는, 예를 들어, 항체에 대한 임의의 유형의 분자의 공유적 부착에 의해 화학적으로 변형된다. 항체 유도체는, 예를 들어, 글리코실화, 아세틸화, 페길화, 인산화, 아미드화, 알려진 보호기/차단기에 의한 유도체화, 단백질 분해적 절단, 세포 리간드 또는 다른 단백질에 대한 연결 등에 의해 화학적으로 변형된 항체를 포함할 수 있다. 임의의 다수의 화학적 변형이, 특이적 화학적 절단, 아세틸화, 제형화, 튜니카마이신의 대사 합성 등을 포함하지만 이로 한정되지 않는 알려진 기법에 의해 실행될 수 있다. 또한, 항체는 하나 이상의 비고전적 아미노산을 함유할 수 있다.
변이는 천연 서열 항체 또는 폴리펩티드와 대비하여 아미노산 서열의 변화를 가져오는 항체 또는 폴리펩티드를 인코딩하는 하나 이상의 코돈의 치환, 결실, 또는 삽입일 수 있다. 아미노산 치환은, 세린에 의한 류신의 대체, 예를 들어, 보존적 아미노산 대체와 같이, 하나의 아미노산을 유사한 구조적 및/또는 화학적 특성을 갖는 다른 아미노산으로 대체한 결과일 수 있다. 예를 들어, 아미노산 치환을 가져오는 부위-지정 돌연변이생성 및 PCR-매개 돌연변이생성을 포함하는, 당업자에게 알려진 표준 기법을 사용하여, 본 명세서에 제공된 분자를 인코딩하는 뉴클레오티드 서열에 돌연변이를 도입할 수 있다. 삽입 또는 결실은 선택적으로 약 1 내지 5개의 아미노산의 범위일 수 있다. 소정 실시 형태에서, 치환, 결실, 또는 삽입은 원래의 분자에 비해 25개 미만의 아미노산 치환, 20개 미만의 아미노산 치환, 15개 미만의 아미노산 치환, 10개 미만의 아미노산 치환, 5개 미만의 아미노산 치환, 4개 미만의 아미노산 치환, 3개 미만의 아미노산 치환, 또는 2개 미만의 아미노산 치환을 포함한다. 구체적인 실시 형태에서, 치환은 하나 이상의 예측된 비필수 아미노산 잔기에서 실행된 보존적 아미노산 치환이다. 허용되는 변이는, 서열 내에 아미노산의 삽입, 결실, 또는 치환을 체계적으로 실행하고, 생성되는 변이체를 전장 또는 성숙 천연 서열에 의해 나타나는 활성에 대해 시험함으로써 결정될 수 있다.
아미노산 서열 삽입은 길이가 1개인 잔기부터 100개 이상인 잔기를 함유하는 폴리펩티드에까지 이르는 범위의 아미노- 및/또는 카르복실-말단 융합체뿐만 아니라, 단일 또는 다수의 아미노산 잔기의 서열내 삽입을 포함한다. 말단 삽입의 예는 N-말단 메티오닐 잔기를 갖는 항체를 포함한다. 항체 분자의 다른 삽입 변이체에는 항체의 혈청 반감기를 증가시키는 폴리펩티드 또는 효소(예를 들어, 항체-유도 효소 전구약물 요법의 경우)에 대한 항체의 N- 또는 C-말단 융합체가 포함된다.
"보존적 아미노산 치환"은 아미노산 잔기가 유사한 전하를 가진 측쇄를 갖는 아미노산 잔기로 대체되는 것이다. 유사한 전하를 갖는 측쇄를 갖는 아미노산 잔기의 패밀리는 당업계에 정의되어 있다. 이들 패밀리는 염기성 측쇄를 갖는 아미노산(예를 들어, 라이신, 아르기닌, 히스티딘), 산성 측쇄를 갖는 아미노산(예를 들어, 아스파르트산, 글루탐산), 비하전된 극성 측쇄를 갖는 아미노산(예를 들어, 글리신, 아스파라긴, 글루타민, 세린, 트레오닌, 티로신, 시스테인), 비극성 측쇄를 갖는 아미노산(예를 들어, 알라닌, 발린, 류신, 아이소류신, 프롤린, 페닐알라닌, 메티오닌, 트립토판), 베타-분지형 측쇄를 갖는 아미노산(예를 들어, 트레오닌, 발린, 아이소류신) 및 방향족 측쇄를 갖는 아미노산(예를 들어, 티로신, 페닐알라닌, 트립토판, 히스티딘)을 포함한다. 대안적으로, 예컨대 포화 돌연변이생성에 의해 코딩 서열의 전부 또는 일부를 따라 돌연변이가 무작위로 도입될 수 있고, 생성된 돌연변이체를 생물학적 활성에 대해 스크리닝하여 활성을 유지하는 돌연변이체를 확인할 수 있다. 돌연변이생성 후에, 인코딩된 단백질이 발현될 수 있고, 단백질의 활성이 결정될 수 있다.
항체의 생물학적 특성의 실질적인 변형은, (a) 치환의 영역에서의 폴리펩티드 골격의 구조, 예를 들어, 시트 또는 나선형 입체형태, (b) 표적 부위에서의 분자의 전하 또는 소수성, 또는 (c) 측쇄의 벌크를 유지함에 대한 이들의 효과가 유의하게 상이한 치환을 선택함으로써 달성된다. 대안적으로, 특성을 유의하게 변화시키지 않거나 유지하도록 보존적(예를 들어, 유사한 특성 및/또는 측쇄를 갖는 아미노산 군 내의) 치환이 실행될 수 있다. 아미노산은 이들의 측쇄의 특성의 유사성에 따라 그룹화될 수 있다(예를 들어, 문헌[Lehninger, Biochemistry 73-75 (2d ed. 1975)] 참조): (1) 비극성: Ala(A), Val(V), Leu(L), Ile(I), Pro(P), Phe(F), Trp(W), Met(M); (2) 비하전된 극성: Gly(G), Ser(S), Thr(T), Cys(C), Tyr(Y), Asn(N), Gln(Q); (3) 산성: Asp(D), Glu(E); 및 (4) 염기성: Lys(K), Arg(R), His(H).
대안적으로, 자연 발생 잔기를 일반적인 측쇄 특성에 기초하여 군으로 나눌 수 있다: (1) 소수성: 노르류신, Met, Ala, Val, Leu, Ile; (2) 중성 친수성: Cys, Ser, Thr, Asn, Gln; (3) 산성: Asp, Glu; (4) 염기성: His, Lys, Arg; (5) 사슬 배향에 영향을 주는 잔기: Gly, Pro; 및 (6) 방향족: Trp, Tyr, Phe.
비보존적 치환은 이들 부류 중 하나의 구성원을 다른 부류로 교환하는 것을 수반한다. 그러한 치환된 잔기는 또한 보존적 치환 부위 또는 나머지(비보존된) 부위 내로 도입될 수 있다. 따라서, 일 실시 형태에서, NKG2d 에피토프에 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 본 명세서에 기재된 항체의 아미노산 서열과 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 따라서, 일 실시 형태에서, NKp46 에피토프에 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 본 명세서에 기재된 항체의 아미노산 서열과 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
올리고뉴클레오티드-매개(부위-지정) 돌연변이생성, 알라닌 스캐닝, 및 PCR 돌연변이생성과 같은 당업계에 알려진 방법을 사용하여 변이를 실행할 수 있다. 부위-지정 돌연변이생성(예를 들어, 문헌[Carter, 1986, Biochem J. 237:1-7]; 및 문헌[Zoller et al., 1982, Nucl. Acids Res. 10:6487-500] 참조), 카세트 돌연변이생성(예를 들어, 문헌[Wells et al., 1985, Gene 34:315-23] 참조), 또는 다른 알려진 기법을 클로닝된 DNA 상에서 수행하여 항-NKG2d 또는 항-NKp46 항체 변이체 DNA를 생성할 수 있다.
본 명세서에 제공된 항체의 적절한 입체형태를 유지하는 것에 관여하지 않는 임의의 시스테인 잔기는 또한, 분자의 산화 안정성을 개선하고 비정상적인 가교결합을 방지하기 위해, 예를 들어, 알라닌 또는 세린과 같은 다른 아미노산으로 치환될 수 있다. 역으로, 시스테인 결합(들)을 항체에 추가하여 그의 안정성을 개선할 수 있다(예를 들어, 항체가 항체 단편, 예컨대 Fv 단편인 경우).
일부 실시 형태에서, 본 발명의 항체 분자는 "탈면역화된" 항체이다. "탈면역화된" 항체는 인간화 항체 또는 키메라 항체로부터 유래된 항체이며, 이는 각각의 원래의 비-탈면역화된 항체와 대비하여, 그의 아미노산 서열 내에 항체의 면역원성의 감소를 가져오는 하나 이상의 변경을 갖는다. 그러한 항체 돌연변이체를 생성하기 위한 절차들 중 하나는 항체 분자의 T-세포 에피토프의 확인 및 제거를 포함한다. 첫 번째 단계에서는, 항체 분자의 면역원성을 몇몇 방법에 의해, 예를 들어 T-세포 에피토프의 시험관내 결정 또는 그러한 에피토프의 컴퓨터 모의실험 예측에 의해 결정할 수 있으며, 이는 당업계에 알려진 바와 같다. T-세포 에피토프 기능에 중요한 잔기가 확인되었으면, 면역원성을 제거하고 항체 활성을 보유하도록 돌연변이가 이루어질 수 있다. 검토를 위해, 예를 들어 문헌[Jones et al., 2009, Methods in Molecular Biology 525:405-23]을 참조한다.
시험관내
친화성 성숙
일부 실시 형태에서, 모 항체와 대비하여 친화성, 안정성, 또는 발현 수준과 같은 개선된 특성을 갖는 항체 변이체는 시험관내 친화성 성숙에 의해 제조될 수 있다. 천연 프로토타입과 마찬가지로, 시험관내 친화성 성숙은 돌연변이 및 선택의 원리에 기초한다. 항체의 라이브러리는 유기체(예를 들어, 파지, 세균, 효모, 또는 포유류 세포)의 표면 상에 또는 이들의 인코딩 mRNA 또는 DNA와 회합되어(예를 들어, 공유적으로 또는 비공유적으로) 디스플레이된다. 디스플레이된 항체의 친화성 선택은 항체를 인코딩하는 유전자 정보를 운반하는 유기체 또는 복합체의 단리를 가능하게 한다. 파지 디스플레이와 같은 디스플레이 방법을 사용하는 2회 라운드 또는 3회 라운드의 돌연변이 및 선택은 통상 낮은 나노몰 범위의 친화도를 갖는 항체 단편을 가져온다. 친화성 성숙된 항체는 표적 항원에 대해 나노몰 또는 심지어 피코몰의 친화도를 가질 수 있다.
파지 디스플레이는 항체의 디스플레이 및 선택을 위한 광범위한 방법이다. 항체는 박테리오파지 코트 단백질에 대한 융합으로서 Fd 또는 M13 박테리오파지의 표면 상에 디스플레이된다. 선택은, "패닝"으로 지칭되는 공정인, 파지-디스플레이된 항체가 이들의 표적에 결합하는 것이 가능하도록 항원에 노출시키는 것을 포함한다. 항원에 결합된 파지를 회수하고, 세균을 감염시켜 추가의 선택 라운드를 위해 파지를 생성하기 위해 사용한다. 검토를 위해, 예를 들어, 문헌[Hoogenboom, 2002, Methods. Mol. Biol. 178:1-37]; 및 문헌[Bradbury and Marks, 2004, J. Immunol. Methods 290:29-49]을 참조한다.
효모 디스플레이 시스템(예를 들어, 문헌[Boder et al., 1997, Nat. Biotech. 15:553-57]; 및 문헌[Chao et al., 2006, Nat. Protocols 1:755-68] 참조)에서, 항체는 효모 응집소 단백질 Aga2p의 접착 하위단위에 융합될 수 있으며, 이는 Aga1p에 대한 이황화물 결합을 통해 효모 세포벽에 부착된다. Aga2p를 통한 단백질의 디스플레이는 단백질을 세포 표면으로부터 멀리 돌출시켜, 효모 세포벽 상의 다른 분자와의 잠재적인 상호작용을 최소화한다. 개선된 친화성 또는 안정성을 갖는 항체에 대해 선택하기 위해, 자성 분리 및 유세포측정을 사용하여 라이브러리를 스크리닝한다. 비오티닐화된 항원 및 2차 시약, 예컨대 형광단에 접합된 스트렙타비딘을 이용한 효모의 표지화에 의해 관심 가용성 항원에 대한 결합이 결정된다. 항체의 표면 발현에서의 변이는 scFv를 플랭킹하는 헤마글루티닌 또는 c-Myc 에피토프 태그의 면역형광 표지를 통해 측정될 수 있다. 발현은 디스플레이된 단백질의 안정성과 상관관계가 있는 것으로 나타났으며, 따라서 항체는 개선된 안정성뿐만 아니라 친화성에 대해 선택될 수 있다(예를 들어, 문헌[Shusta et al., 1999, J. Mol. Biol. 292:949-56] 참조). 효모 디스플레이의 추가의 이점은 디스플레이된 단백질이 진핵 효모 세포의 소포체 내에서 접혀서, 소포체 샤페론 및 품질-제어 기구를 이용한다는 점이다. 일단 성숙이 완료되면, 항체 친화성은 효모의 표면 상에 디스플레이되는 동안 편리하게 "적정"될 수 있어서, 각각의 클론의 발현 및 정제에 대한 필요성을 제거한다. 효모 표면 디스플레이의 이론적 제한은 다른 디스플레이 방법의 것보다 잠재적으로 더 작은 기능성 라이브러리 크기이지만; 최근의 접근법은 효모 세포의 교배 양식(mating system)을 사용하여 크기가 1014으로 추정되는 조합 다양성을 생성한다(예를 들어, 미국 특허 출원 공개 제2003/0186374호; 및 문헌[Blaise et al., 2004, Gene 342:211-18] 참조).
리보솜 디스플레이에서는, 무세포 시스템에서의 선택을 위해 항체-리보솜-mRNA(ARM) 복합체가 생성된다. 항체의 특정 라이브러리를 코딩하는 DNA 라이브러리는 정지 코돈이 결여된 스페이서 서열에 유전자 융합된다. 이러한 스페이서 서열은, 번역될 경우에, 펩티딜 tRNA에 여전히 부착되고 리보솜 터널을 점유하며, 따라서 관심 단백질이 리보솜으로부터 돌출되고 접히는 것을 가능하게 한다. mRNA, 리보솜, 및 단백질의 생성되는 복합체는 표면-결합 리간드에 결합하여, 리간드를 이용한 친화성 포획을 통한 항체 및 그의 인코딩 mRNA의 동시 단리를 가능하게 할 수 있다. 이어서, 리보솜-결합된 mRNA는 다시 cDNA로 역전사되며, 이는 이어서 돌연변이생성을 거치고 다음 선택 라운드에 사용될 수 있다(예를 들어, 문헌[Fukuda et al., 2006, Nucleic Acids Res. 34:e127] 참조). mRNA 디스플레이에서는, 어댑터 분자로서 퓨로마이신을 사용하여 항체와 mRNA 사이의 공유 결합을 확립한다(문헌[Wilson et al., 2001, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 98:3750-55]).
이들 방법들은 완전히 시험관내에서 수행되므로, 이들은 다른 선택 기술에 비해 2가지 주요 이점을 제공한다. 첫째로, 라이브러리의 다양성은 세균 세포의 형질전환 효율에 의해 제한되는 것이 아니라, 시험관 내에 존재하는 상이한 mRNA 분자 및 리보솜의 개수에 의해서만 제한된다. 둘째로, 임의의 다양화 단계 후에 라이브러리가 형질전환되어야 하는 것이 아니므로, 각각의 선택 라운드 후에, 예를 들어, 비교정(non-proofreading) 폴리머라제에 의해 무작위 돌연변이가 용이하게 도입될 수 있다.
일부 실시 형태에서, 포유류 디스플레이 시스템이 사용될 수 있다.
다양성은 또한, 표적화된 방식으로 또는 무작위 도입을 통해 항체 라이브러리의 CDR 내로 도입될 수 있다. 전자의 접근법은 고수준 또는 저수준의 돌연변이생성을 통해 항체의 모든 CDR을 순차적으로 표적화하는 것 또는 체세포 과돌연변이의 단리된 핫 스폿(예를 들어, 문헌[Ho et al., 2005, J. Biol. Chem. 280:607-17] 참조) 또는 실험적 기반 또는 구조적 이유로 친화성에 영향을 주는 것으로 의심되는 잔기를 표적화하는 것을 포함한다. 다양성은 또한, DNA 셔플링 또는 유사한 기법을 통한 천연적으로 다양한 영역의 대체에 의해 도입될 수 있다(예를 들어, 문헌[Lu et al., 2003, J. Biol. Chem. 278:43496-507]; 미국 특허 제5,565,332호 및 제6,989,250호 참조). 프레임워크-영역 잔기 내로 연장되는 초가변 루프를 표적으로 하는 대안적인 기법(예를 들어, 문헌[Bond et al., 2005, J. Mol. Biol. 348:699-709] 참조)은 CDR 내의 루프 결실 및 삽입을 사용하거나 혼성화-기반 다양화를 사용한다(예를 들어, 미국 특허 출원 공개 제2004/0005709호 참조). CDR에서 다양성을 생성하는 추가의 방법은, 예를 들어, 미국 특허 제7,985,840호에 개시되어 있다. 항체 라이브러리 및/또는 항체 친화성 성숙을 생성하기 위해 사용될 수 있는 추가의 방법은, 예를 들어, 미국 특허 제8,685,897호 및 제8,603,930호, 및 미국 출원 공개 제2014/0170705호, 제2014/0094392호, 제2012/0028301호, 제2011/0183855호, 및 제2009/0075378호에 개시되어 있으며, 이들 각각은 본 명세서에 참고로 포함된다.
라이브러리의 스크리닝은 당업계에 알려진 다양한 기법에 의해 달성될 수 있다. 예를 들어, 항체는 고체 지지체, 컬럼, 핀, 또는 셀룰로스/폴리(비닐리덴 플루오라이드) 막/다른 필터 상에 고정되거나, 흡착 플레이트에 부착된 숙주 세포 상에서 발현되거나, 세포 분류에 사용되거나, 스트렙타비딘-코팅된 비드를 이용한 포획을 위해 비오틴에 접합되거나, 디스플레이 라이브러리를 패닝하기 위한 임의의 다른 방법에 사용될 수 있다.
시험관내 친화성 성숙 방법의 검토를 위해, 예를 들어, 문헌[Hoogenboom, 2005, Nature Biotechnology 23:1105-16]; 문헌[Quiroz and Sinclair, 2010, Revista Ingeneria Biomedia 4:39-51]; 및 그 안의 참고문헌을 참조한다.
항체 변형
본 명세서에 제공된, 예를 들어 NKG2d 및 NKp46에 결합하는 항체의 공유적 변형은 본 발명의 범주 내에 포함된다. 공유적 변형은 항체의 표적화된 아미노산 잔기를 항체의 선택된 측쇄 또는 N- 또는 C- 말단 잔기와 반응할 수 있는 유기 유도체화제와 반응시키는 것을 포함한다. 다른 변형은, 글루타미닐 및 아스파라기닐 잔기의 각각 상응하는 글루타밀 및 아스파르틸 잔기로의 탈아미드화, 프롤린 및 라이신의 하이드록실화, 세릴 또는 트레오닐 잔기의 하이드록실 기의 인산화, 라이신, 아르기닌, 및 히스티딘 측쇄의 α-아미노 기의 메틸화(예를 들어, 문헌[Creighton, Proteins: Structure and Molecular Properties 79-86 (1983)] 참조), N-말단 아민의 아세틸화, 및 임의의 C-말단 카르복실 기의 아미드화를 포함한다.
본 발명의 범주 내에 포함되는 본 명세서에 제공된 항체의 공유적 변형의 다른 유형은 항체 또는 폴리펩티드의 천연 글리코실화 패턴을 변경시키는 것(예를 들어, 문헌[Beck et al., 2008, Curr. Pharm. Biotechnol. 9:482-501]; 및 문헌[Walsh, 2010, Drug Discov. Today 15:773-80] 참조), 및 예를 들어, 미국 특허 제4,640,835호; 제4,496,689호; 제4,301,144호; 제4,670,417호; 제4,791,192호; 또는 제4,179,337호에 제시된 방식으로 다양한 비단백질성 중합체, 예를 들어, 폴리에틸렌 글리콜(PEG), 폴리프로필렌 글리콜, 또는 폴리옥시알킬렌 중 하나에 항체를 연결하는 것을 포함한다.
본 발명의 항체는 또한, 다른 이종성 폴리펩티드 또는 아미노산 서열, 예를 들어, 에피토프 태그(예를 들어, 문헌[Terpe, 2003, Appl. Microbiol. Biotechnol. 60:523-33] 참조) 또는 IgG 분자의 Fc 영역(예를 들어, 문헌[Aruffo, Antibody Fusion Proteins 221-42 (Chamow and Ashkenazi eds., 1999)] 참조)에 융합된 항체를 포함하는 키메라 분자를 형성하도록 변형될 수 있다.
예를 들어, NKG2d, NKp46, 및 이종성 폴리펩티드에 결합하는 본 명세서에 제공된 항체를 포함하는 융합 단백질이 본 명세서에 또한 제공된다.
NKG2d, NKp46 항원에 결합하는 항체의 패널이 본 명세서에 또한 제공된다. 구체적인 실시 형태에서, 항체들의 패널은 NKG2d, NKp46 항원에 대한 상이한 회합 속도, 상이한 해리 속도, 상이한 친화도, 및/또는 NKG2d, NKp46 항원에 대한 상이한 특이성을 갖는다. 일부 실시 형태에서, 패널은 약 10, 약 25, 약 50, 약 75, 약 100, 약 125, 약 150, 약 175, 약 200, 약 250, 약 300, 약 350, 약 400, 약 450, 약 500, 약 550, 약 600, 약 650, 약 700, 약 750, 약 800, 약 850, 약 900, 약 950, 또는 약 1000개 또는 그 이상의 항체를 포함하거나 이로 이루어진다. 예를 들어, ELISA와 같은 검정을 위해, 96웰 또는 384웰 플레이트에서 항체의 패널이 사용될 수 있다.
면역접합체
본 발명은 또한, 합성 링커에 의해 하나 이상의 비-항체 작용제에 공유 결합된 본 발명의 항체들 중 어느 하나를 포함하는 접합체를 제공한다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 항체는, 예를 들어 치료제(예를 들어, 세포독성제) 또는 진단용 또는 검출가능한 분자에 접합되거나 재조합적으로 융합된다. 접합된 또는 재조합적으로 융합된 항체는, 예를 들어 질병 또는 장애를 치료 또는 예방하는 데 유용할 수 있다. 접합된 또는 재조합적으로 융합된 항체는, 예를 들어 질병 또는 장애의 발병, 발달, 진행, 및/또는 중증도를 모니터링 또는 예후하는 데 유용할 수 있다.
그러한 진단 및 검출은, 예를 들어, 항체를 검출가능한 물질에 커플링함으로써 달성될 수 있으며, 이러한 검출가능한 물질에는 하기가 포함도지만 이로 한정되지 않는다: 다양한 효소, 예컨대 제한 없이, 서양고추냉이 퍼옥시다제, 알칼리성 포스파타제, 베타-갈락토시다제, 또는 아세틸콜린에스테라제; 보결기(prosthetic group), 예컨대 제한 없이, 스트렙타비딘/비오틴 또는 아비딘/비오틴; 형광 물질, 예컨대 제한 없이, 움벨리페론, 플루오레세인, 플루오레세인 아이소티오시네이트, 로다민, 다이클로로트라이아지닐아민 플루오레세인, 단실 클로라이드, 또는 피코에리트린; 발광 물질, 예컨대 제한 없이, 루미놀; 생물발광 물질, 예컨대 제한 없이, 루시페라제, 루시페린, 또는 에쿼린; 화학발광 물질, 예컨대 제한 없이, 아크리디늄계 화합물 또는 HALOTAG; 방사성 물질, 예컨대 제한 없이, 요오드(131I, 125I, 123I, 및 121I), 탄소(14C), 황(35S), 삼중수소(3H), 인듐(115In, 113In, 112In, 및 111In), 테크네튬(99Tc), 탈륨(201Ti), 갈륨(68Ga 및 67Ga), 팔라듐(103Pd), 몰리브덴(99Mo), 제논(133Xe), 불소(18F), 153Sm, 177Lu, 159Gd, 149Pm, 140La, 175Yb, 166Ho, 90Y, 47Sc, 186Re, 188Re, 142Pr, 105Rh, 97Ru, 68Ge, 57Co, 65Zn, 85Sr, 32P, 153Gd, 169Yb, 51Cr, 54Mn, 75Se, 113Sn, 또는 117Sn; 다양한 양전자 방출 토포그래피를 사용하는 양전자 방출 금속; 및 비방사성 상자성 금속 이온.
이종성 단백질 또는 폴리펩티드(또는 이의 단편)에, 예를 들어 약 10, 약 20, 약 30, 약 40, 약 50, 약 60, 약 70, 약 80, 약 90, 또는 약 100개의 아미노산의 폴리펩티드에 재조합적으로 융합되거나 화학적으로 접합되어(공유적 또는 비공유적 접합) 융합 단백질을 생성하는 항체뿐만 아니라, 이의 용도가 본 명세서에 또한 제공된다. 특히, 본 명세서에 제공된 항체의 항원-결합 단편(예를 들어, CDR1, CDR2, 및/또는 CDR3)을 포함하는 융합 단백질 및 이종성 단백질, 폴리펩티드, 또는 펩티드가 본 명세서에 제공된다. 일 실시 형태에서, 항체가 융합되는 이종성 단백질, 폴리펩티드, 또는 펩티드는 항체를 특정 세포 유형에 표적화하기에 유용하다.
더욱이, 본 명세서에 제공된 항체는 정제를 용이하게 하기 위해 마커 또는 "태그" 서열, 예컨대 펩티드에 융합될 수 있다. 구체적인 실시 형태에서, 마커 또는 태그 아미노산 서열은, 특히 헥사-히스티딘 펩티드, 예컨대 pQE 벡터(예를 들어, QIAGEN, Inc. 참조) 내에 제공된 상기 태그이며, 이들 중 다수는 구매가능하다. 예를 들어, 문헌[Gentz et al., 1989, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86:821-24]에 기재된 바와 같이, 헥사-히스티딘은 융합 단백질의 편리한 정제를 제공한다. 정제에 유용한 다른 펩티드 태그는 헤마글루티닌("HA") 태그 - 이는 인플루엔자 헤마글루티닌 단백질로부터 유래된 에피토프에 상응함 - (문헌[Wilson et al., 1984, Cell 37:767-78]) 및 "FLAG" 태그를 포함하지만 이로 한정되지 않는다.
모이어티(폴리펩티드를 포함함)를 항체에 융합시키거나 접합시키는 방법이 알려져 있다(예를 들어, 문헌[Arnon et al., Monoclonal Antibodies for Immunotargeting of Drugs in Cancer Therapy, in Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy 243-56 (Reisfeld et al. eds., 1985)]; 문헌[Hellstrom et al., Antibodies for Drug Delivery, in Controlled Drug Delivery623-53 (Robinson et al. eds., 2d ed. 1987)]; 문헌[Thorpe, Antibody Carriers of Cytotoxic Agents in Cancer Therapy: A Review, in Monoclonal Antibodies: Biological and Clinical Applications 475-506 (Pinchera et al. eds., 1985)]; 문헌[Analysis, Results, and Future Prospective of the Therapeutic Use of Radiolabeled Antibody in Cancer Therapy, in Monoclonal Antibodies for Cancer Detection and Therapy 303-16 (Baldwin et al. eds., 1985)]; 문헌[Thorpe et al., 1982, Immunol. Rev. 62:119-58]; 미국 특허 제5,336,603호; 제5,622,929호; 제5,359,046호; 제5,349,053호; 제5,447,851호; 제5,723,125호; 제5,783,181호; 제5,908,626호; 제5,844,095호; 및 제5,112,946호; EP 307,434호; EP 367,166호; EP 394,827호; PCT 특허 출원 공개 WO 91/06570호, WO 96/04388호, WO 96/22024호, WO 97/34631호, 및 WO 99/04813호; 문헌[Ashkenazi et al., 1991, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 88: 10535-39]; 문헌[Traunecker et al., 1988, Nature, 331:84-86]; 문헌[Zheng et al., 1995, J. Immunol. 154:5590-600]; 및 문헌[Vil et al., 1992, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:11337-41] 참조).
융합 단백질은, 예를 들어 유전자-셔플링, 모티프-셔플링, 엑손-셔플링, 및/또는 코돈-셔플링(총칭하여 "DNA 셔플링"으로 지칭됨)의 기법을 통해 생성될 수 있다. 예를 들어, 더 높은 친화성과 더 낮은 해리 속도를 갖는 항체를 포함한 본 명세서에 제공된 항체의 활성을 변경시키기 위해, DNA 셔플링이 사용될 수 있다(예를 들어, 미국 특허 제5,605,793호; 제5,811,238호; 제5,830,721호; 제5,834,252호; 및 제5,837,458호; 문헌[Patten et al., 1997, Curr. Opinion Biotechnol. 8:724-33]; 문헌[Harayama, 1998, Trends Biotechnol. 16(2):76-82]; 문헌[Hansson et al., 1999, J. Mol. Biol. 287:265-76]; 및 문헌[Lorenzo and Blasco, 1998, Biotechniques 24(2):308-13] 참조). 항체, 또는 인코딩된 항체는 재조합 전에 오류-유발(error-prone) PCR, 무작위 뉴클레오티드 삽입, 또는 다른 방법에 의한 무작위 돌연변이생성을 적용함으로써 변경될 수 있다. 본 명세서에 제공된 항체를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드는 하나 이상의 이종성 분자의 하나 이상의 성분, 모티프, 섹션, 부분, 도메인, 단편 등과 재조합될 수 있다.
본 명세서에 제공된 항체는 제2 항체에 접합되어, 예를 들어, 미국 특허 제4,676,980호에 기재된 바와 같은 항체 이종접합체를 형성할 수 있다.
본 명세서에 제공된 바와 같은 항체는 또한 고체 지지체에 부착될 수 있으며, 이때 고체 지지체는 표적 항원의 면역검정 또는 정제에 특히 유용하다. 그러한 고체 지지체는 유리, 셀룰로스, 폴리아크릴아미드, 나일론, 폴리스티렌, 폴리비닐 클로라이드, 또는 폴리프로필렌을 포함하지만 이로 한정되지 않는다.
링커는 세포에서 접합된 작용제의 방출을 용이하게 하는 "절단가능한 링커"일 수 있지만, 절단 불가능한 링커도 본 명세서에서 고려된다. 본 발명의 접합체에 사용하기 위한 링커는, 제한 없이, 산 불안정성 링커(예를 들어, 하이드라존 링커), 이황화물-함유 링커, 펩티다제-민감성 링커(예를 들어, 아미노산, 예를 들어, 발린 및/또는 시트룰린을 포함하는 펩티드 링커, 예컨대 시트룰린-발린 또는 페닐알라닌-라이신), 광불안정성 링커, 다이메틸 링커(예를 들어, 문헌[Chari et al., 1992, Cancer Res. 52:127-31]; 및 미국 특허 제5,208,020호 참조), 티오에테르 링커, 또는 다중약물 수송체-매개 저항성을 회피하도록 설계된 친수성 링커(예를 들어, 문헌[Kovtun et al., 2010, Cancer Res. 70:2528-37] 참조)를 포함한다.
항체와 작용제의 접합체는 다양한 이중기능성 단백질 커플링제, 예컨대 BMPS, EMCS, GMBS, HBVS, LC-SMCC, MBS, MPBH, SBAP, SIA, SIAB, SMCC, SMPB, SMPH, 설포-EMCS, 설포-GMBS, 설포-KMUS, 설포-MBS, 설포-SIAB, 설포-SMCC, 설포-SMPB, 및 SVSB(석신이미딜-(4-비닐설폰)벤조에이트)를 사용하여 제조할 수 있다. 본 발명은 항체와 작용제의 접합체가 당업계에 개시된 바와 같은 임의의 적합한 방법(예를 들어, 문헌[Bioconjugate Techniques (Hermanson ed., 2d ed. 2008)] 참조)을 사용하여 제조될 수 있음을 추가로 고려한다.
항체와 작용제에 대한 통상적인 접합 전략은 Lys 잔기의 ε-아미노 기 또는 Cys 잔기의 티올 기를 포함하는 무작위 접합 화학에 기초하였으며, 이는 이종성 접합체를 가져온다. 최근에 개발된 기법은 항체에 대한 부위-특이적 접합을 가능하게 하여, 균질한 로딩을 가져오고, 변경된 항원-결합 또는 약동학적 특성을 갖는 접합체 하위집단을 회피한다. 이들은 반응성 티올 기를 제공하고 면역글로불린 접힘 및 조립을 방해하거나 항원 결합을 변경시키지 않는 중쇄 및 경쇄 상의 위치에 시스테인 치환을 포함하는 "티오맵(thiomab)"의 조작을 포함한다(예를 들어, 문헌[Junutula et al., 2008, J. Immunol. Meth. 332: 41-52]; 및 문헌[Junutula et al., 2008, Nature Biotechnol. 26:925-32] 참조). 다른 방법에서는, 정지 코돈 UGA를 종결로부터 셀레노시스테인 삽입으로 리코딩(recoding)함으로써 셀레노시스테인을 항체 서열에 동시번역 삽입하여, 다른 천연 아미노산의 존재 하에 셀레노시스테인의 친핵성 셀레놀 기에서의 부위-특이적 공유적 접합을 가능하게 한다(예를 들어, 문헌[Hofer et al., 2008, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 105:12451-56]; 및 문헌[Hofer et al., 2009, Biochemistry 48(50):12047-57] 참조).
폴리뉴클레오티드
소정 실시 형태에서, 본 발명은 본 명세서에 기재된 항체를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다. 용어 "폴리펩티드를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드"는 폴리펩티드에 대한 코딩 서열만을 포함하는 폴리뉴클레오티드뿐만 아니라 추가의 코딩 및/또는 비-코딩 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다. 본 발명의 폴리뉴클레오티드는 RNA의 형태 또는 DNA의 형태일 수 있다. DNA는 cDNA, 게놈 DNA, 및 합성 DNA를 포함하고; 이중-가닥 또는 단일-가닥일 수 있으며, 단일 가닥인 경우에는 코딩 가닥 또는 비-코딩(안티-센스) 가닥일 수 있다.
소정 실시 형태에서, 폴리뉴클레오티드는 동일한 리딩 프레임(reading frame)에서 폴리뉴클레오티드에 융합된 폴리펩티드에 대한 코딩 서열을 포함하며, 이는, 예를 들어, 숙주 세포로부터의 폴리펩티드의 발현 및 분비를 보조한다(예를 들어, 폴리펩티드의 수송을 제어하기 위한 분비 서열로서 기능하는 리더 서열). 폴리펩티드는 폴리펩티드의 "성숙" 형태를 형성하기 위해 숙주 세포에 의해 절단되는 리더 서열을 가질 수 있다.
소정 실시 형태에서, 폴리뉴클레오티드는 동일한 리딩 프레임에서 마커 또는 태그 서열에 융합된 폴리펩티드에 대한 코딩 서열을 포함한다. 예를 들어, 일부 실시 형태에서, 마커 서열은 세균 숙주의 경우에 마커에 융합된 폴리펩티드의 효율적인 정제를 가능하게 하는 벡터에 의해 공급되는 헥사-히스티딘 태그이다. 일부 실시 형태에서, 마커는 다른 친화성 태그와 함께 사용된다.
본 발명은 추가로 본 명세서에 기재된 폴리뉴클레오티드의 변이체에 관한 것이며, 여기서 변이체는, 예를 들어, 폴리펩티드의 단편, 유사체, 및/또는 유도체를 인코딩한다. 소정 실시 형태에서, 본 발명은 본 명세서에 기재된 항체를 포함하는 폴리펩티드를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드와 적어도 약 80% 동일한 뉴클레오티드 서열, 적어도 약 85% 동일한 뉴클레오티드 서열, 적어도 약 90% 동일한 뉴클레오티드 서열, 적어도 약 95% 동일한 뉴클레오티드 서열, 그리고 일부 실시 형태에서는, 적어도 약 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 뉴클레오티드 서열을 갖는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 어구 "예를 들어, 참조 뉴클레오티드 서열과 적어도 95% "동일한" 뉴클레오티드 서열을 갖는 폴리뉴클레오티드"는 폴리뉴클레오티드 서열이 참조 뉴클레오티드 서열의 각각의 100개 뉴클레오티드당 최대 5개의 점 돌연변이를 포함할 수 있다는 점을 제외하고는, 폴리뉴클레오티드의 뉴클레오티드 서열이 참조 서열과 동일함을 의미하도록 의도된다. 다시 말해서, 참조 뉴클레오티드 서열과 적어도 95% 동일한 뉴클레오티드 서열을 갖는 폴리뉴클레오티드를 얻기 위해, 참조 서열 내의 뉴클레오티드의 최대 5%가 결실되거나 다른 뉴클레오티드로 치환될 수 있거나, 참조 서열 내의 총 뉴클레오티드의 최대 5%의 뉴클레오티드 개수가 참조 서열 내로 삽입될 수 있다. 참조 서열의 이들 돌연변이는 참조 뉴클레오티드 서열의 5' 또는 3' 말단 위치 또는 그러한 말단 위치들 사이의 임의의 곳에서 발생할 수 있으며, 참조 서열 내의 뉴클레오티드 사이에 개별적으로, 또는 참조 서열 내의 하나 이상의 인접한 군 내에서 산재된다.
폴리뉴클레오티드 변이체는 코딩 영역, 비-코딩 영역, 또는 둘 모두의 변경을 함유할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 폴리뉴클레오티드 변이체는 침묵 치환, 부가, 또는 결실을 생성하지만, 인코딩된 폴리펩티드의 특성 또는 활성을 변경시키지 않는 변경을 함유한다. 일부 실시 형태에서, 폴리뉴클레오티드 변이체는 (유전자 코드의 축퇴로 인해) 폴리펩티드의 아미노산 서열에 변화를 가져오지 않는 침묵 치환을 포함한다. 폴리뉴클레오티드 변이체는 다양한 이유로, 예를 들어, 특정 숙주에 대한 코돈 발현을 최적화하기 위해 생성될 수 있다(즉, 인간 mRNA에서의 코돈을 E. 콜라이와 같은 세균 숙주에 의해 선호되는 것들로 변화시킴). 일부 실시 형태에서, 폴리뉴클레오티드 변이체는 서열의 비-코딩 또는 코딩 영역 내에 하나 이상의 침묵 돌연변이를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 폴리뉴클레오티드 변이체는 인코딩된 폴리펩티드의 발현(또는 발현 수준)을 조절하거나 변경시키기 위해 생성된다. 일부 실시 형태에서, 폴리뉴클레오티드 변이체는 인코딩된 폴리펩티드의 발현을 증가시키기 위해 생성된다. 일부 실시 형태에서, 폴리뉴클레오티드 변이체는 인코딩된 폴리펩티드의 발현을 감소시키기 위해 생성된다. 일부 실시 형태에서, 폴리뉴클레오티드 변이체는 모 폴리뉴클레오티드 서열과 대비하여 인코딩된 폴리펩티드의 발현을 증가시켰다. 일부 실시 형태에서, 폴리뉴클레오티드 변이체는 모 폴리뉴클레오티드 서열과 대비하여 인코딩된 폴리펩티드의 발현을 감소시켰다.
소정 실시 형태에서, 본 발명은 본 명세서에 제공된 서열 목록에 열거된 폴리뉴클레오티드와 적어도 약 80% 동일한 뉴클레오티드 서열, 적어도 약 85% 동일한 뉴클레오티드 서열, 적어도 약 90% 동일한 뉴클레오티드 서열, 적어도 약 95% 동일한 뉴클레오티드 서열, 그리고 일부 실시 형태에서는, 적어도 약 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
소정 실시 형태에서, 본 발명은 본 명세서에 제공된 폴리뉴클레오티드로부터 선택되는 폴리뉴클레오티드와 적어도 약 80% 동일한 뉴클레오티드 서열, 적어도 약 85% 동일한 뉴클레오티드 서열, 적어도 약 90% 동일한 뉴클레오티드 서열, 적어도 약 95% 동일한 뉴클레오티드 서열, 그리고 일부 실시 형태에서는, 적어도 약 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
소정 실시 형태에서, 폴리뉴클레오티드는 단리된 형태이다. 소정 실시 형태에서, 폴리뉴클레오티드는 실질적으로 순수하다.
본 명세서에 기재된 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터 및 세포가 또한 제공된다. 일부 실시 형태에서, 발현 벡터는 폴리뉴클레오티드 분자를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 숙주 세포는 폴리뉴클레오티드 분자를 포함하는 발현 벡터를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 숙주 세포는 폴리뉴클레오티드 분자를 포함하는 하나 이상의 발현 벡터를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 숙주 세포는 폴리뉴클레오티드 분자를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 숙주 세포는 하나 이상의 폴리뉴클레오티드 분자를 포함한다.
항체의 제조 방법 또는 제조 공정
또 다른 태양에서, 본 명세서에 제공된 다양한 분자를 제조하기 위한 방법 또는 공정이 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, 하나 초과의 표적 분자에 결합하는 분자를 제조하기 위한 공정이 본 명세서에 제공되며, 상기 공정은 NK 세포의 표면 상의 제1 항원에 결합할 수 있는 결합 도메인을 얻는 기능을 수행하기 위한 단계; 제2 항원에 결합할 수 있는 결합 도메인을 얻는 기능을 수행하기 위한 단계; 및 상기 제1 항원 및 상기 제2 항원에 결합할 수 있는 분자를 제공하는 기능을 수행하기 위한 단계를 포함한다.
본 명세서에 제공된 항체의 재조합 발현은 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 함유하는 발현 벡터의 작제를 필요로 한다. 본 명세서에 제공된 항체 분자, 항체의 중쇄 또는 경쇄, 또는 이의 단편(예컨대, 중쇄 및/또는 경쇄 가변 도메인을 함유하지만 반드시 그런 것은 아님)을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드가 얻어졌으면, 당업계에 잘 알려진 기법을 사용하여 재조합 DNA 기술에 의해 항체 분자의 생성을 위한 벡터가 생성될 수 있다. 따라서, 항체를 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 함유하는 폴리뉴클레오티드를 발현시킴으로써 단백질을 제조하기 위한 방법이 본 명세서에 기재된다. 당업자에게 잘 알려진 방법을 사용하여 항체를 코딩하는 서열 및 적절한 전사 및 번역 제어 신호를 함유하는 발현 벡터를 작제할 수 있다. 이들 방법은, 예를 들어 시험관내 재조합 DNA 기법, 합성 기법, 및 생체내 유전자 재조합을 포함한다. 프로모터에 작동가능하게 연결된, 본 명세서에 제공된 항체 분자, 항체의 중쇄 또는 경쇄, 항체의 중쇄 또는 경쇄 가변 도메인, 또는 이의 단편, 또는 중쇄 또는 경쇄 CDR을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 복제가능한 벡터가 또한 제공된다. 그러한 벡터는 항체 분자의 불변 영역을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있으며(예를 들어, 국제 특허 출원 공개 WO 86/05807호 및 WO 89/01036호; 및 미국 특허 제5,122,464호 참조), 항체의 가변 도메인은 전체 중쇄, 전체 경쇄, 또는 전체 중쇄 및 전체 경쇄 둘 모두의 발현을 위해 그러한 벡터 내로 클로닝될 수 있다.
발현 벡터는 통상적인 기법에 의해 숙주 세포에 전달되며, 이어서 형질감염된 세포는 통상적인 기법에 의해 배양되어 본 명세서에 제공된 항체를 생성한다. 따라서, 이종성 프로모터에 작동가능하게 연결된, 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 단편, 또는 이의 중쇄 또는 경쇄, 또는 이의 단편, 또는 본 명세서에 제공된 단일쇄 항체를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 함유하는 숙주 세포가 본 명세서에 또한 제공된다. 이중-사슬 항체의 발현을 위한 소정 실시 형태에서, 하기에 상세히 설명된 바와 같이, 중쇄 및 경쇄 둘 모두를 인코딩하는 벡터는 전체 면역글로불린 분자의 발현을 위해 숙주 세포에서 공발현될 수 있다.
본 명세서에 제공된 항체 분자를 발현시키기 위해 다양한 숙주-발현 벡터 시스템이 이용될 수 있다(예를 들어, 미국 특허 제5,807,715호 참조). 그러한 숙주-발현 시스템은, 관심 코딩 서열을 생성하고 후속으로 정제할 수 있는 비히클을 나타내지만, 또한 적절한 뉴클레오티드 코딩 서열로 형질전환되거나 형질감염될 경우에 본 명세서에 제공된 항체 분자를 원위치(in situ)에서 발현할 수 있는 세포를 나타낸다. 이들은 항체 코딩 서열을 함유하는 재조합 박테리오파지 DNA, 플라스미드 DNA, 또는 코스미드 DNA 발현 벡터로 형질전환된 세균(예를 들어, E. 콜라이 및 B. 서브틸리스(B. subtilis))과 같은 미생물; 항체 코딩 서열을 함유하는 재조합 효모 발현 벡터로 형질전환된 효모(예를 들어, 사카로미세스 피키아(Saccharomyces pichia)); 항체 코딩 서열을 함유하는 재조합 바이러스 발현 벡터(예를 들어, 바큘로바이러스)로 감염된 곤충 세포 시스템; 재조합 바이러스 발현 벡터(예를 들어, 콜리플라워 모자이크 바이러스, CaMV, 담배 모자이크 바이러스, TMV)로 감염되거나 항체를 코딩하는 서열을 함유하는 재조합 플라스미드 발현 벡터(예를 들어, Ti 플라스미드)로 형질전환된 식물 세포 시스템; 포유류 세포의 게놈으로부터 유래된 프로모터(예를 들어, 메탈로티오네인 프로모터) 또는 포유류 바이러스로부터 유래된 프로모터(예를 들어, 아데노바이러스 후기 프로모터; 백시니아 바이러스 7.5K 프로모터)를 함유하는 재조합 발현 작제물을 보유하는 포유류 세포 시스템(예를 들어, COS, CHO, BHK, 293, NS0, 및 3T3 세포)을 포함하지만 이로 한정되지 않는다. 특히 전체 재조합 항체 분자의 발현을 위한, 진핵 세포, 또는, 에스케리키아 콜라이(Escherichia coli)와 같은 세균 세포가 재조합 항체 분자의 발현에 사용될 수 있다. 예를 들어, 인간 거대세포로바이러스로부터의 주요 중간 초기 유전자 프로모터 요소와 같은 벡터와 함께, 중국 햄스터 난소 세포(CHO)와 같은 포유류 세포는 항체를 위한 효과적인 발현 시스템이다(문헌[Foecking et al., 1986, Gene 45:101]; 및 문헌[Cockett et al., 1990, Bio/Technology 8:2]). 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 항체는 CHO 세포에서 생성된다. 구체적인 실시 형태에서, NKG2d 항원에 면역특이적으로 결합하는 본 명세서에 제공된 항체를 인코딩하는 뉴클레오티드 서열의 발현은 구성적 프로모터, 유도성 프로모터, 또는 조직 특이적 프로모터에 의해 조절된다. 구체적인 실시 형태에서, NKp46 항원에 면역특이적으로 결합하는 본 명세서에 제공된 항체를 인코딩하는 뉴클레오티드 서열의 발현은 구성적 프로모터, 유도성 프로모터, 또는 조직 특이적 프로모터에 의해 조절된다.
세균 시스템에서, 발현되는 항체 분자에 대해 의도된 용도에 따라 다수의 발현 벡터가 유리하게 선택될 수 있다. 예를 들어, 항체 분자의 약제학적 조성물의 생성을 위해, 다량의 그러한 항체가 생성되어야 하는 경우, 용이하게 정제되는 융합 단백질 생성물의 고수준의 발현을 유도하는 벡터가 바람직할 수 있다. 그러한 벡터는, 융합 단백질이 생성되도록 항체 코딩 서열이 lac Z 코딩 영역과 인 프레임(in frame)으로 벡터 내에 개별적으로 라이게이션될 수 있는 E. 콜라이 발현 벡터 pUR278(문헌[Ruther et al., 1983, EMBO 12:1791]); pIN 벡터(문헌[Inouye & Inouye, 1985, Nucleic Acids Res. 13:3101-3109]; 문헌[Van Heeke & Schuster, 1989, J. Biol. Chem. 24:5503-5509]) 등을 포함하지만 이로 한정되지 않는다. 글루타티온 5-트랜스페라제(GST)와의 융합 단백질로서 외래 폴리펩티드를 발현시키기 위해 pGEX 벡터가 또한 사용될 수 있다. 일반적으로, 그러한 융합 단백질은 가용성이고, 용해된 세포로부터 매트릭스 글루타티온 아가로스 비드에 대한 흡착 및 결합에 이어서 유리 글루타티온의 존재 하의 용리에 의해 용이하게 정제될 수 있다. pGEX 벡터는 클로닝된 표적 유전자 생성물이 GST 모이어티로부터 방출될 수 있도록 트롬빈 또는 인자 Xa 프로테아제 절단 부위를 포함하도록 설계된다.
곤충 시스템에서는, 아우토그라파 칼리포르니카(Autographa californica) 핵 다각체병 바이러스(AcNPV)가 외래 유전자를 발현시키기 위한 벡터로서 사용된다. 바이러스는 스포도프테라 프루기페르다(Spodoptera frugiperda)에서 성장한다. 항체 코딩 서열은 바이러스의 비필수 영역(예를 들어, 다각체 유전자) 내로 개별적으로 클로닝되고, AcNPV 프로모터(예를 들어, 다각체 프로모터)의 제어 하에 배치될 수 있다.
포유류 숙주 세포에서는, 다수의 바이러스-기반 발현 시스템이 이용될 수 있다. 아데노바이러스가 발현 벡터로서 사용되는 경우, 관심 항체 코딩 서열은 아데노바이러스 전사/번역 제어 복합체, 예를 들어, 후기 프로모터 및 3-부분 리더 서열에 라이게이션될 수 있다. 이어서, 이러한 키메라 유전자는 시험관내 또는 생체내 재조합에 의해 아데노바이러스 게놈에 삽입될 수 있다. 바이러스 게놈의 비필수 영역(예를 들어, 영역 El 또는 E3)에서의 삽입은 생존가능하고 감염된 숙주에서 항체 분자를 발현할 수 있는 재조합 바이러스를 가져올 것이다(예를 들어, 문헌[Logan & Shenk, 1984, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 8 1:355-359] 참조). 삽입된 항체 코딩 서열의 효율적인 번역을 위해 특이적 개시 신호가 또한 필요할 수 있다. 이들 신호는 ATG 개시 코돈 및 인접한 서열을 포함한다. 더욱이, 개시 코돈은 전체 삽입물의 번역을 보장하기 위해 원하는 코딩 서열의 리딩 프레임과 일치해야 한다. 이들 외인성 번역 제어 신호 및 개시 코돈은 천연 및 합성 둘 모두의 다양한 기원의 것일 수 있다. 적절한 전사 인핸서 요소, 전사 종결자 등의 포함에 의해 발현 효율이 향상될 수 있다(예를 들어, 문헌[Bittner et al., 1987, Methods in Enzymol. 153:51-544] 참조).
또한, 삽입된 서열의 발현을 조절하거나, 원하는 특이적 방식으로 유전자 생성물을 변형시키고 가공하는 숙주 세포 균주가 선택될 수 있다. 단백질 생성물의 그러한 변형(예를 들어, 글리코실화) 및 가공(예를 들어, 절단)은 단백질의 기능에 중요할 수 있다. 상이한 숙주 세포들은 단백질 및 유전자 산물의 번역후 가공 및 변형을 위한 특징적이고 특이적인 기전을 갖는다. 발현되는 외래 단백질의 올바른 변형 및 가공을 보장하도록 적절한 세포주 또는 숙주 시스템이 선택될 수 있다. 이 목적을 위해, 유전자 생성물의 1차 전사체, 글리코실화, 및 인산화의 적절한 가공을 위한 세포 기구를 보유하는 진핵 숙주 세포가 사용될 수 있다. 그러한 포유류 숙주 세포는 CHO, VERY, BHK, Hela, COS, MDCK, 293, 3T3, W138, BT483, Hs578T, HTB2, BT2O 및 T47D, NS0(내인성으로 임의의 면역글로불린 사슬을 생성하지 않는 뮤린 골수종 세포주), CRL7O3O 및 HsS78Bst 세포를 포함하지만 이로 한정되지 않는다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 완전 인간 단일클론 항체는 CHO 세포와 같은 포유류 세포에서 생성된다.
재조합 단백질의 장기 고수율 생성을 위해, 안정한 발현이 이용될 수 있다. 예를 들어, 항체 분자를 안정적으로 발현하는 세포주가 조작될 수 있다. 바이러스 복제 기점을 함유하는 발현 벡터를 사용하기보다는, 적절한 발현 조절 요소(예를 들어, 프로모터, 인핸서, 서열, 전사 종결자, 폴리아데닐화 부위 등)에 의해 제어되는 DNA 및 선택가능한 마커로 숙주 세포를 형질전환할 수 있다. 외래 DNA의 도입 이후, 조작된 세포를 풍부화된 배지(enriched media) 중에서 1 내지 2일 동안 성장되게 할 수 있으며, 이어서 선택 배지로 교체한다. 재조합 플라스미드 내의 선택가능 마커는 선택에 대한 저항성을 부여하여, 세포가 플라스미드를 그의 염색체 내로 안정하게 통합시키고 성장시켜 증식소(foci)를 형성하게 하며, 이는 결국 클로닝되고 세포주로 증폭될 수 있다. 이러한 방법은 항체 분자를 발현하는 세포주를 조작하기 위해 유리하게 사용될 수 있다. 그러한 조작된 세포주는 항체 분자와 직접적으로 또는 간접적으로 상호작용하는 조성물의 스크리닝 및 평가에 특히 유용할 수 있다.
단순 헤르페스 바이러스 티미딘 키나제(문헌[Wigler et al., 1977, Cell 11:223]), 하이포잔틴구아닌 포스포리보실트랜스퍼라제(문헌[Szybalska & Szybalski, 1992, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 48:202]), 및 아데닌 포스포리보실트랜스퍼라제(문헌[Lowy et al., 1980, Cell 22:8-17]) 유전자를 포함하지만 이로 한정되지 않는 다수의 선택 시스템이 각각 tk-, hgprt-, 또는 aprt-세포에 사용될 수 있다. 또한, 하기 유전자에 대한 선택의 기반으로서 항대사물 저항성이 사용될 수 있다: 메토트렉세이트에 대한 저항성을 부여하는 dhfr(문헌[Wigler et al., 1980, Natl. Acad. Sci. USA 77:357]; 문헌[O'Hare et al., 1981, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 78:1527]); 마이코페놀산에 대한 저항성을 부여하는 gpt(문헌[Mulligan & Berg, 1981, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 78:2072]); 아미노글리코시드 G-418에 대한 저항성을 부여하는 neo(문헌[Wu and Wu, 1991, Biotherapy 3:87-95]; 문헌[Tolstoshev, 1993, Ann. Rev. Pharmacol. Toxicol. 32:573-596]; 문헌[Mulligan, 1993, Science 260:926-932]; 및 문헌[Morgan and Anderson, 1993, Ann. Rev. Biochem. 62:191-217]; 문헌[1993, TIB TECH 11(5):l55-215]); 및 하이그로마이신에 대한 저항성을 부여하는 hygro(문헌[Santerre et al., 1984, Gene 30:147]). 원하는 재조합 클론을 선택하기 위해, 당업계에 일반적으로 알려진 재조합 DNA 기술의 방법이 일상적으로 적용될 수 있으며, 그러한 방법은, 예를 들어, 문헌[Ausubel et al. (eds.), Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, NY (1993)]; 문헌[Kriegler, Gene Transfer and Expression, A Laboratory Manual, Stockton Press, NY (1990)]; 및 문헌[Chapters 12 and 13, Dracopoli et al. (eds.), Current Protocols in Human Genetics, John Wiley & Sons, NY (1994)]; 문헌[Colberre-Garapin et al., 1981, J. Mol. Biol. 150:1]에 기재되어 있고, 이들은 전체적으로 본 명세서에 참고로 포함된다.
항체 분자의 발현 수준은 벡터 증폭에 의해 증가될 수 있다(검토를 위해, 문헌[Bebbington and Hentschel, The use of vectors based on gene amplification for the expression of cloned genes in mammalian cells in DNA cloning, Vol. 3 (Academic Press, New York, 1987)] 참조). 항체를 발현하는 벡터 시스템에서 마커가 증폭가능한 경우, 숙주 세포의 배양물 내에 존재하는 억제제의 수준의 증가는 마커 유전자의 카피 수를 증가시킬 것이다. 증폭되는 영역은 항체 유전자와 관련되므로, 항체의 생성이 또한 증가할 것이다(문헌[Crouse et al., 1983, Mol. Cell. Biol. 3:257]).
숙주 세포는 본 명세서에 제공된 2개 이상의 발현 벡터와 공동-형질감염될 수 있다. 2개 이상의 벡터는, 예를 들어 중쇄 및 경쇄 폴리펩티드의 동일한 발현을 가능하게 하는 동일한 선택가능한 마커를 함유할 수 있다. 대안적으로, 본 항체의 상이한 성분 폴리펩티드, 예를 들어 중쇄 및 경쇄 폴리펩티드 둘 모두를 인코딩하고 발현시킬 수 있는 단일 벡터가 사용될 수 있다. 코딩 서열은 cDNA 또는 게놈 DNA를 포함할 수 있다.
일단 본 명세서에 제공된 항체 분자가 재조합 발현에 의해 생성되었으면, 이는 면역글로불린 분자의 정제에 대해 당업계에 알려진 임의의 방법에 의해, 예를 들어 크로마토그래피(예를 들어, 이온 교환 크로마토그래피, 친화성 크로마토그래피(특히, 단백질 A 크로마토그래피 후 특이적 항원에 대한 친화성에 의함), 및 크기결정 컬럼 크로마토그래피), 원심분리, 차등 용해도에 의해, 또는 단백질의 정제에 대한 임의의 다른 표준 기법에 의해 정제될 수 있다. 추가로, 정제를 용이하게 하기 위해 본 명세서에 제공된 항체는 본 명세서에 기재되거나 달리 당업계에 알려진 이종성 폴리펩티드 서열에 융합될 수 있다.
약제학적 조성물
일 태양에서, 본 발명은 본 발명의 적어도 하나의 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 약제학적 조성물을 추가로 제공한다. 일부 실시 형태에서, 약제학적 조성물은 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 치료적 유효량 및 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함한다. 약제학적 조성물을 생성하는 방법이 또한 제공되며, 상기 방법은 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 약제학적으로 허용되는 담체와 배합하여 상기 약제학적 조성물을 얻는 단계를 포함한다.
다른 일반적인 태양에서, 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물이 제공된다. 소정 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 단리된 형태이다. 약제학적 조성물을 생성하는 방법이 또한 제공되며, 상기 방법은 상기 다중특이성 항체를 약제학적으로 허용되는 담체와 배합하여 상기 약제학적 조성물을 얻는 단계를 포함한다. 다른 태양에서, 약제학적 조성물이 본 명세서에 제공되며, 상기 약제학적 조성물은 (a) NKG2d에 결합하는 제1 결합 도메인, 및 (b) 제2 표적에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함하는 것, 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함한다. 다른 태양에서, 약제학적 조성물이 본 명세서에 제공되며, 상기 약제학적 조성물은 (a) NKp46에 결합하는 제1 결합 도메인, 및 (b) 제2 표적에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함하는 것, 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함한다. 본 명세서에 제공된 임의의 다중특이성 항체가 약제학적 조성물에서 고려된다. 소정 실시 형태에서, 제2 결합 도메인은 BCMA에 결합한다. 소정 실시 형태에서, 제2 결합 도메인은 GPRC5d에 결합한다. 본 명세서에 제공된 임의의 항체가 약제학적 조성물에서 고려된다.
항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 약제학적 조성물이, 원하는 정도의 순도를 갖는 단백질을 선택적인 생리학적으로 허용되는 부형제와 혼합함으로써(예를 들어, 문헌[Remington, Remington's Pharmaceutical Sciences (18th ed. 1980)] 참조) 수용액 또는 동결건조된 형태 또는 다른 건조된 형태로 저장을 위해 제조된다.
본 발명의 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 표적 세포/조직으로의 전달을 위한 임의의 적합한 형태로, 예를 들어, 마이크로캡슐 또는 마크로에멀젼으로서(문헌[Remington, 상기 문헌]; 문헌[Park et al., 2005, Molecules 10:146-61]; 문헌[Malik et al., 2007, Curr. Drug. Deliv. 4:141-51]), 지속-방출 제형으로서(문헌[Putney and Burke, 1998, Nature Biotechnol. 16:153-57]), 또는 리포좀으로(문헌[Maclean et al., 1997, Int. J. Oncol. 11:325-32]; 문헌[Kontermann, 2006, Curr. Opin. Mol. Ther. 8:39-45]) 제형화될 수 있다.
본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 또한, 예를 들어 코아세르베이션 기법에 의해 또는 계면 중합에 의해 제조된 마이크로캡슐, 예를 들어 각각, 하이드록시메틸셀룰로스 또는 젤라틴-마이크로캡슐 및 폴리-(메틸메타크릴레이트) 마이크로캡슐에, 콜로이드상 약물 전달 시스템(예를 들어, 리포좀, 알부민 미소구체, 마이크로에멀젼, 나노입자 및 나노캡슐)에, 또는 매크로에멀젼 내에 봉입될 수 있다. 그러한 기법은, 예를 들어, 문헌[Remington, 상기 문헌]에 개시되어 있다.
다양한 조성물 및 전달 시스템이 알려져 있으며, 본 명세서에 기재된 바와 같은 항체 또는 이의 항원-결합 단편과 함께 사용될 수 있으며, 이에는 리포솜, 미세입자, 마이크로캡슐 내에의 캡슐화, 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 발현할 수 있는 재조합 세포, 수용체-매개 엔도사이토시스(예를 들어, 문헌[Wu and Wu, 1987, J. Biol. Chem. 262:4429-32] 참조), 레트로바이러스 벡터 또는 다른 벡터 등의 일부로서의 핵산의 작제가 포함되지만 이로 한정되지 않는다. 다른 실시 형태에서, 제어-방출 또는 지속-방출 시스템으로서 조성물이 제공될 수 있다. 일 실시 형태에서는, 제어 방출 또는 지속 방출을 달성하기 위해 펌프가 사용될 수 있다(예를 들어, 문헌[Langer, 상기 문헌]; 문헌[Sefton, 1987, Crit. Ref. Biomed. Eng. 14:201-40]; 문헌[Buchwald et al., 1980, Surgery 88:507-16]; 및 문헌[Saudek et al., 1989, N. Engl. J. Med. 321:569-74] 참조). 다른 실시 형태에서는, 본 명세서에 제공된 예방제 또는 치료제(예를 들어, 본 명세서에 기재된 바와 같은 항체 또는 이의 항원-결합 단편) 또는 조성물의 제어 방출 또는 지속 방출을 달성하기 위해 중합체 재료를 사용할 수 있다(예를 들어, 문헌[Medical Applications of Controlled Release (Langer and Wise, eds., 1974)]; 문헌[Controlled Drug Bioavailability, Drug Product Design and Performance (Smolen and Ball eds., 1984)]; 문헌[Ranger and Peppas, 1983, J. Macromol. Sci. Rev. Macromol. Chem. 23:61-126]; 문헌[Levy et al., 1985, Science 228:190-92]; 문헌[During et al., 1989, Ann. Neurol. 25:351-56]; 문헌[Howard et al., 1989, J. Neurosurg. 71:105-12]; 미국 특허 제5,679,377호; 제5,916,597호; 제5,912,015호; 제5,989,463호; 및 제5,128,326호; PCT 특허 출원 공개 WO 99/15154호 및 WO 99/20253호 참조). 지속-방출 제형에 사용되는 중합체의 예에는 폴리(2-하이드록시 에틸 메타크릴레이트), 폴리(메틸 메타크릴레이트), 폴리(아크릴산), 폴리(에틸렌-코-비닐 아세테이트), 폴리(메타크릴산), 폴리글리콜리드(PLG), 폴리언하이드라이드, 폴리(N-비닐 피롤리돈), 폴리(비닐 알코올), 폴리아크릴아미드, 폴리(에틸렌 글리콜), 폴리락티드(PLA), 폴리(락티드-코-글리콜리드)(PLGA), 및 폴리오르토에스테르가 포함되지만 이로 한정되지 않는다. 일 실시 형태에서, 지속-방출 제형에 사용되는 중합체는 불활성이고, 침출가능한 불순물이 없고, 저장 시에 안정하고, 멸균 상태이고, 생분해성이다.
또 다른 실시 형태에서, 제어-방출 또는 지속-방출 시스템은 특정 표적 조직, 예를 들어, 비도(nasal passage) 또는 폐에 근접하여 배치될 수 있으며, 따라서 전신 용량의 소정 분율만을 필요로 한다(예를 들어, 문헌[Goodson, Medical Applications of Controlled Release Vol. 2, 115-38 (1984)] 참조). 제어-방출 시스템은, 예를 들어, 문헌[Langer, 1990, Science 249:1527-33]에 의해 논의되어 있다. 당업자에게 알려진 임의의 기법을 사용하여 본 명세서에 기재된 바와 같은 하나 이상의 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 지속-방출 제형을 생성할 수 있다(예를 들어, 미국 특허 제4,526,938호, PCT 특허 출원 공개 WO 91/05548호 및 WO 96/20698호, 문헌[Ning et al., 1996, Radiotherapy & Oncology 39:179-89]; 문헌[Song et al., 1995, PDA J. of Pharma. Sci. & Tech. 50:372-97]; 문헌[Cleek et al., 1997, Pro. Int'l. Symp. Control. Rel. Bioact. Mater. 24:853-54]; 및 문헌[Lam et al., 1997, Proc. Int'l. Symp. Control Rel. Bioact. Mater. 24:759-60] 참조).
사용 방법
또 다른 태양에서, NKG2d를 발현하는 세포를 풍부화하거나, 단리하거나, 분리하거나, 정제하거나, 분류하거나, 선택하거나, 포획하거나, 검출하거나 또는 고갈시키는 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 상기 NKG2d를 발현하는 세포를 포함하는 샘플을 제공하는 단계; 상기 샘플을 본 명세서에 제공된 NKG2d 항체와 접촉시키는 단계; 및 NKG2d를 발현하고 상기 NKG2d 항체에 결합된 상기 세포를 풍부화하거나, 단리하거나, 분리하거나, 정제하거나, 분류하거나, 선택하거나, 포획하거나, 검출하거나, 또는 고갈시키는 단계를 포함한다.
또 다른 태양에서, NKG2d를 발현하는 세포를 풍부화하거나, 단리하거나, 분리하거나, 정제하거나, 분류하거나, 선택하거나, 포획하거나, 검출하거나 또는 고갈시키기 위한 본 명세서에 제공된 NKG2d 항체의 용도가 본 명세서에 제공되며, 상기 용도는 상기 NKG2d를 발현하는 세포를 포함하는 샘플을 제공하는 단계; 상기 샘플을 본 명세서에 제공된 NKG2d 항체와 접촉시키는 단계; 및 NKG2d를 발현하고 상기 NKG2d 항체에 결합된 상기 세포를 풍부화하거나, 단리하거나, 분리하거나, 정제하거나, 분류하거나, 선택하거나, 포획하거나, 검출하거나, 또는 고갈시키는 단계를 포함한다.
다른 태양에서, NKp46을 발현하는 세포를 풍부화하거나, 단리하거나, 분리하거나, 정제하거나, 분류하거나, 선택하거나, 포획하거나, 검출하거나 또는 고갈시키는 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 상기 NKp46을 발현하는 세포를 포함하는 샘플을 제공하는 단계; 상기 샘플을 본 명세서에 제공된 NKp46 항체와 접촉시키는 단계; 및 NKp46을 발현하고 상기 NKp46 항체에 결합된 상기 세포를 풍부화하거나, 단리하거나, 분리하거나, 정제하거나, 분류하거나, 선택하거나, 포획하거나, 검출하거나, 또는 고갈시키는 단계를 포함한다.
다른 태양에서, NKp46을 발현하는 세포를 풍부화하거나, 단리하거나, 분리하거나, 정제하거나, 분류하거나, 선택하거나, 포획하거나, 검출하거나 또는 고갈시키기 위한 본 명세서에 제공된 NKp46 항체의 용도가 본 명세서에 제공되며, 상기 용도는 상기 NKp46을 발현하는 세포를 포함하는 샘플을 제공하는 단계; 상기 샘플을 본 명세서에 제공된 NKp46 항체와 접촉시키는 단계; 및 NKp46을 발현하고 상기 NKp46 항체에 결합된 상기 세포를 풍부화하거나, 단리하거나, 분리하거나, 정제하거나, 분류하거나, 선택하거나, 포획하거나, 검출하거나, 또는 고갈시키는 단계를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 세포는 NK 세포이다. 일부 실시 형태에서, 샘플은 혈액 샘플이다. 다른 실시 형태에서, 샘플은 조직 샘플이다.
또 다른 태양에서, NK 세포를 표적 세포로 유도하는 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 상기 NK 세포를 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체와 접촉시켜 상기 NK 세포를 상기 표적 세포로 유도하는 단계를 포함하며, 상기 다중특이성 항체는 NK 세포 상의 제1 항원에 결합하는 제1 결합 도메인 및 표적 세포 상의 제2 항원에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 표적 세포는 종양 세포이다. 소정 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 다중특이성 NKG2d/BCMA 항체이며, 여기서 제1 표적은 NKG2d이고, 제2 표적은 BCMA이다. 소정 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 다중특이성 NKG2d/GPRC5d 항체이며, 여기서 제1 표적은 NKG2d이고, 제2 표적은 GPRC5d이다. 소정 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 다중특이성 NKp46/BCMA 항체이며, 여기서 제1 표적은 NKp46이고, 제2 표적은 BCMA이다. 소정 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 다중특이성 NKp46/GPRC5d 항체이며, 여기서 제1 표적은 NKp46이고, 제2 표적은 GPRC5d이다.
또 다른 태양에서, NK 세포를 표적 세포로 유도하기 위한 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 용도가 본 명세서에 제공되며, 상기 용도는 상기 NK 세포를 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체와 접촉시켜 상기 NK 세포를 상기 표적 세포로 유도하는 단계를 포함하며, 상기 다중특이성 항체는 NK 세포 상의 제1 항원에 결합하는 제1 결합 도메인 및 표적 세포 상의 제2 항원에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 표적 세포는 종양 세포이다. 소정 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 다중특이성 NKG2d/BCMA 항체이며, 여기서 제1 표적은 NKG2d이고, 제2 표적은 BCMA이다. 소정 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 다중특이성 NKG2d/GPRC5d 항체이며, 여기서 제1 표적은 NKG2d이고, 제2 표적은 GPRC5d이다. 소정 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 다중특이성 NKp46/BCMA 항체이며, 여기서 제1 표적은 NKp46이고, 제2 표적은 BCMA이다. 소정 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 다중특이성 NKp46/GPRC5d 항체이며, 여기서 제1 표적은 NKp46이고, 제2 표적은 GPRC5d이다.
또 다른 태양에서, NK 세포를 활성화하는 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 상기 NK 세포를 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체와 접촉시키는 단계를 포함하며, 상기 다중특이성 항체는 상기 NK 세포 상의 제1 항원에 결합하는 제1 결합 도메인 및 표적 세포 상의 제2 항원에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 표적 세포는 종양 세포이다. 소정 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 다중특이성 NKG2d/BCMA 항체이며, 여기서 제1 표적은 NKG2d이고, 제2 표적은 BCMA이다. 소정 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 다중특이성 NKG2d/GPRC5d 항체이며, 여기서 제1 표적은 NKG2d이고, 제2 표적은 GPRC5d이다. 소정 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 다중특이성 NKp46/BCMA 항체이며, 여기서 제1 표적은 NKp46이고, 제2 표적은 BCMA이다. 소정 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 다중특이성 NKp46/GPRC5d 항체이며, 여기서 제1 표적은 NKp46이고, 제2 표적은 GPRC5d이다.
또 다른 태양에서, NK 세포를 활성화하기 위한 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 용도가 본 명세서에 제공되며, 상기 용도는 상기 NK 세포를 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체와 접촉시키는 단계를 포함하며, 상기 다중특이성 항체는 상기 NK 세포 상의 제1 항원에 결합하는 제1 결합 도메인 및 표적 세포 상의 제2 항원에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함한다. 소정 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 다중특이성 NKG2d/BCMA 항체이며, 여기서 제1 표적은 NKG2d이고, 제2 표적은 BCMA이다. 소정 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 다중특이성 NKG2d/GPRC5d 항체이며, 여기서 제1 표적은 NKG2d이고, 제2 표적은 GPRC5d이다. 소정 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 다중특이성 NKp46/BCMA 항체이며, 여기서 제1 표적은 NKp46이고, 제2 표적은 BCMA이다. 소정 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 다중특이성 NKp46/GPRC5d 항체이며, 여기서 제1 표적은 NKp46이고, 제2 표적은 GPRC5d이다.
또 다른 태양에서, 세포 표면 상에 제2 항원을 발현하는 상기 표적 세포의 성장 또는 증식을 억제하는 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 상기 표적 세포를 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체와 접촉시키는 단계를 포함하며, 상기 다중특이성 항체는 NK 세포 상의 제1 항원에 결합하는 제1 결합 도메인 및 상기 제2 항원에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제2 항원은 종양 세포 상에 발현된다. 소정 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 다중특이성 NKG2d/BCMA 항체이며, 여기서 제1 표적은 NKG2d이고, 제2 표적은 BCMA이다. 소정 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 다중특이성 NKG2d/GPRC5d 항체이며, 여기서 제1 표적은 NKG2d이고, 제2 표적은 GPRC5d이다. 소정 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 다중특이성 NKp46/BCMA 항체이며, 여기서 제1 표적은 NKp46이고, 제2 표적은 BCMA이다. 소정 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 다중특이성 NKp46/GPRC5d 항체이며, 여기서 제1 표적은 NKp46이고, 제2 표적은 GPRC5d이다.
또 다른 태양에서, 세포 표면 상에 제2 항원을 발현하는 상기 표적 세포의 성장 또는 증식을 억제하기 위한 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 용도가 본 명세서에 제공되며, 상기 용도는 상기 표적 세포를 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체와 접촉시키는 단계를 포함하며, 상기 다중특이성 항체는 NK 세포 상의 제1 항원에 결합하는 제1 결합 도메인 및 상기 제2 항원에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함한다. 소정 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 다중특이성 NKG2d/BCMA 항체이며, 여기서 제1 표적은 NKG2d이고, 제2 표적은 BCMA이다. 소정 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 다중특이성 NKG2d/GPRC5d 항체이며, 여기서 제1 표적은 NKG2d이고, 제2 표적은 GPRC5d이다. 소정 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 다중특이성 NKp46/BCMA 항체이며, 여기서 제1 표적은 NKp46이고, 제2 표적은 BCMA이다. 소정 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 다중특이성 NKp46/GPRC5d 항체이며, 여기서 제1 표적은 NKp46이고, 제2 표적은 GPRC5d이다.
다른 태양에서, 대상체에서 제2 항원을 발현하는 표적 세포를 제거하거나, 또는 상기 제2 항원을 발현하는 표적 세포에 의해 전부 또는 부분적으로 야기되는 질병 또는 장애를 치료하기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 유효량을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하며, 상기 다중특이성 항체는 NK 세포 상의 제1 항원에 결합하는 제1 결합 도메인 및 상기 제2 항원에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제2 항원은 종양 세포 상에 발현된다. 소정 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 다중특이성 NKG2d/BCMA 항체이며, 여기서 제1 표적은 NKG2d이고, 제2 표적은 BCMA이다. 소정 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 다중특이성 NKG2d/GPRC5d 항체이며, 여기서 제1 표적은 NKG2d이고, 제2 표적은 GPRC5d이다. 소정 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 다중특이성 NKp46/BCMA 항체이며, 여기서 제1 표적은 NKp46이고, 제2 표적은 BCMA이다. 소정 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 다중특이성 NKp46/GPRC5d 항체이며, 여기서 제1 표적은 NKp46이고, 제2 표적은 GPRC5d이다.
다른 태양에서, 대상체에서 제2 항원을 발현하는 표적 세포를 제거하거나, 또는 상기 제2 항원을 발현하는 표적 세포에 의해 전부 또는 부분적으로 야기되는 질병 또는 장애를 치료하기 위한 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 용도가 본 명세서에 제공되며, 상기 용도는 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 유효량을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하며, 상기 다중특이성 항체는 NK 세포 상의 제1 항원에 결합하는 제1 결합 도메인 및 상기 제2 항원에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함한다. 소정 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 다중특이성 NKG2d/BCMA 항체이며, 여기서 제1 표적은 NKG2d이고, 제2 표적은 BCMA이다. 소정 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 다중특이성 NKG2d/GPRC5d 항체이며, 여기서 제1 표적은 NKG2d이고, 제2 표적은 GPRC5d이다. 소정 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 다중특이성 NKp46/BCMA 항체이며, 여기서 제1 표적은 NKp46이고, 제2 표적은 BCMA이다. 소정 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 다중특이성 NKp46/GPRC5d 항체이며, 여기서 제1 표적은 NKp46이고, 제2 표적은 GPRC5d이다.
또 다른 태양에서, 암을 갖는 대상체에서 암 세포를 억제하거나 고갈시키는 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체를 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다.
또 다른 태양에서, 암을 갖는 대상체에서 암 세포를 억제하거나 고갈시키기 위한 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 용도가 본 명세서에 제공되며, 상기 용도는 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체를 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다.
또 다른 태양에서, 대상체에서 암을 치료하는 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체를 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 일 태양에서, 대상체에서 암의 치료에 사용하기 위한 본 명세서에 기재된 바와 같은 다중특이성 항체가 본 명세서에 또한 제공된다. 일부 실시 형태에서, 암은 고형 종양 암이다. 다른 실시 형태에서, 암은 혈액암이다. 또 다른 태양에서, 약제로서 사용하기 위한 본 명세서에 기재된 바와 같은 다중특이성 항체가 본 명세서에 제공된다.
다른 태양에서, 대상체에서 질병 또는 장애를 치료하는 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 유효량을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 질병 또는 장애의 치료에 사용하기 위한 본 명세서에 기재된 바와 같은 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 본 명세서에 또한 제공된다.
다른 태양에서, 대상체에서 질병 또는 장애를 치료하는 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 유효량을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 일 태양에서, 질병 또는 장애의 치료에 사용하기 위한 본 명세서에 기재된 바와 같은 다중특이성 항체가 본 명세서에 또한 제공된다.
질병 또는 장애의 치료 방법이 본 명세서에 또한 제공되며, 상기 방법에서는 상기 대상체에게 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편과 병용하여 하나 이상의 치료제가 투여된다.
다른 태양에서, 대상체에서 질병 또는 장애를 치료하기 위한 약제의 제조에 있어서의 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 용도가 본 명세서에 제공된다. 다른 태양에서, 대상체에서 질병 또는 장애를 치료하기 위한 약제의 제조에 있어서의 본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 용도가 본 명세서에 제공된다.
다른 태양에서, 대상체에서 질병 또는 장애를 치료하기 위한 약제의 제조에 있어서의 본 명세서에 제공된 약제학적 조성물의 용도가 본 명세서에 제공된다.
구체적인 실시 형태에서, 약제로서 사용하기 위한 조성물이 본 명세서에 제공되며, 상기 조성물은 항체 또는 이의 항원-결합 단편 및 약제학적으로 허용되는 부형제/담체를 포함한다. 구체적인 실시 형태에서, 질병 또는 장애의 예방 및/또는 치료에 사용하기 위한 조성물이 본 명세서에 제공되며, 상기 조성물은 항체 또는 이의 항원-결합 단편 및 약제학적으로 허용되는 부형제/담체를 포함한다. 일 실시 형태에서, 질병 또는 장애의 예방에 사용하기 위한 조성물이 본 명세서에 제공되며, 상기 조성물은 항체 또는 이의 항원-결합 단편 및 약제학적으로 허용되는 부형제/담체를 포함한다. 일 실시 형태에서, 질병 또는 장애의 치료에 사용하기 위한 조성물이 본 명세서에 제공되며, 상기 조성물은 항체 또는 이의 항원-결합 단편 및 약제학적으로 허용되는 부형제/담체를 포함한다. 일 실시 형태에서, 암의 치료에 사용하기 위한 조성물이 본 명세서에 제공되며, 상기 조성물은 항체 또는 이의 항원-결합 단편 및 약제학적으로 허용되는 부형제/담체를 포함한다. 소정 실시 형태에서, 대상체는 이를 필요로 하는 대상체이다. 일부 실시 형태에서, 대상체는 질병 또는 질환을 갖는다. 다른 실시 형태에서, 대상체는 질병 또는 질환을 가질 위험이 있다. 일부 실시 형태에서, 투여는 질병 또는 질환의 예방, 관리, 치료, 또는 호전을 가져온다.
일 실시 형태에서, 질병 또는 장애의 증상의 예방 및/또는 치료에 사용하기 위한 조성물이 본 명세서에 제공되며, 상기 조성물은 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편 및 약제학적으로 허용되는 부형제/담체를 포함한다. 일 실시 형태에서, 질병 또는 장애의 증상의 예방에 사용하기 위한 조성물이 본 명세서에 제공되며, 상기 조성물은 항체 또는 이의 항원-결합 단편 및 약제학적으로 허용되는 부형제/담체를 포함한다. 일 실시 형태에서, 질병 또는 장애의 증상의 치료에 사용하기 위한 조성물이 본 명세서에 제공되며, 상기 조성물은 항체 또는 이의 항원-결합 단편 및 약제학적으로 허용되는 부형제/담체를 포함한다. 소정 실시 형태에서, 대상체는 이를 필요로 하는 대상체이다. 일부 실시 형태에서, 대상체는 질병 또는 질환을 갖는다. 다른 실시 형태에서, 대상체는 질병 또는 질환을 가질 위험이 있다. 일부 실시 형태에서, 투여는 질병 또는 질환의 증상의 예방 또는 치료를 가져온다.
다른 실시 형태에서, 대상체에서 질병 또는 질환을 예방 및/또는 치료하는 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 유효량을 투여하는 단계를 포함한다. 일 실시 형태에서, 대상체에서 질병 또는 질환을 예방하는 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 유효량을 투여하는 단계를 포함한다. 일 실시 형태에서, 대상체에서 질병 또는 질환을 치료하는 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 유효량을 투여하는 단계를 포함한다. 소정 실시 형태에서, 대상체는 이를 필요로 하는 대상체이다. 일부 실시 형태에서, 대상체는 질병 또는 질환을 갖는다. 다른 실시 형태에서, 대상체는 질병 또는 질환을 가질 위험이 있다. 일부 실시 형태에서, 투여는 질병 또는 질환의 예방 또는 치료를 가져온다.
다른 실시 형태에서, 대상체에서 질병 또는 질환의 증상을 예방 및/또는 치료하는 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 유효량을 투여하는 단계를 포함한다. 일 실시 형태에서, 대상체에서 질병 또는 질환의 증상을 예방하는 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 유효량을 투여하는 단계를 포함한다. 일 실시 형태에서, 대상체에서 질병 또는 질환의 증상을 치료하는 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 유효량을 투여하는 단계를 포함한다. 소정 실시 형태에서, 대상체는 이를 필요로 하는 대상체이다. 일부 실시 형태에서, 대상체는 질병 또는 질환을 갖는다. 다른 실시 형태에서, 대상체는 질병 또는 질환을 가질 위험이 있다. 일부 실시 형태에서, 투여는 질병 또는 질환의 증상의 예방 또는 치료를 가져온다.
본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 또는 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 약제학적 조성물의 유효량을 대상체에게 투여함으로써 질병 또는 질환을 예방 및/또는 치료하는 방법이 본 명세서에 또한 제공된다. 일 태양에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 정제된다(즉, 이의 효과를 제한하거나 원치 않는 부작용을 야기하는 물질이 실질적으로 없음). 요법을 투여받은 대상체는 포유동물, 예컨대 비영장류 또는 영장류(예를 들어, 인간)일 수 있다. 일 실시 형태에서, 대상체는 인간이다. 다른 실시 형태에서, 대상체는 질병 또는 질환을 갖는 인간이다.
다양한 전달 시스템이 알려져 있으며, 예방제 또는 치료제(예를 들어, 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편)를 투여하는 데 사용될 수 있으며, 이에는 리포솜, 미세입자, 마이크로캡슐 내에의 캡슐화, 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 발현할 수 있는 재조합 세포, 수용체-매개 엔도사이토시스(예를 들어, 문헌[Wu and Wu, J. Biol. Chem. 262:4429-4432 (1987)] 참조), 레트로바이러스 벡터 또는 다른 벡터 등의 일부로서의 핵산의 작제가 포함되지만 이로 한정되지 않는다. 예방제 또는 치료제(예를 들어, 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편), 또는 약제학적 조성물을 투여하는 방법은 비경구 투여(예를 들어, 피내, 근육내, 복막내, 정맥내 및 피하), 경막외, 및 점막(예를 들어, 비강내 및 경구 경로)을 포함하지만 이로 한정되지 않는다. 구체적인 실시 형태에서, 예방제 또는 치료제(예를 들어, 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편), 또는 약제학적 조성물은 비강내, 근육내, 정맥내, 또는 피하 투여된다. 예방제 또는 치료제, 또는 조성물은 임의의 편리한 경로에 의해, 예를 들어 주입 또는 볼루스 주사에 의해, 상피 또는 점막 피부 라이닝(예를 들어, 구강 점막, 비강내 점막, 직장 및 장 점막 등)을 통한 흡수에 의해 투여될 수 있으며, 다른 생물학적 활성제와 함께 투여될 수 있다. 투여는 전신적 또는 국부적일 수 있다. 추가적으로, 예를 들어, 흡입기 또는 분무기의 사용에 의해, 그리고 에어로졸화제를 이용한 제형의 사용에 의해, 폐 투여가 또한 사용될 수 있다. 예를 들어, 미국 특허 제6,019,968호, 제5,985,320호, 제5,985,309호, 제5,934,272호, 제5,874,064호, 제5,855,913호, 제5,290,540호, 및 제4,880,078호; 및 PCT 특허 출원 공개 WO 92/19244호, WO 97/32572호, WO 97/44013호, WO 98/31346호, 및 WO 99/66903호를 참조하며, 이들 각각은 전체적으로 본 명세서에 참고로 포함된다.
구체적인 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 예방제 또는 치료제, 또는 약제학적 조성물을 치료를 필요로 하는 영역에 국부적으로 투여하는 것이 바람직할 수 있다. 이는, 예를 들어 제한 없이, 국부 주입에 의해, 국소 투여에 의해(예를 들어, 비강내 분무에 의해), 주사에 의해, 또는 이식물에 의해 달성될 수 있으며, 상기 이식물은 Silastic 막과 같은 막, 또는 섬유를 포함하는 다공성, 비다공성, 또는 젤라틴 재료이다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 투여하는 경우, 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 흡수하지 않는 재료를 사용하도록 주의해야 한다.
다른 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 예방제 또는 치료제, 또는 조성물은 소포, 특히 리포좀 내에 전달될 수 있다(문헌[Langer, 1990, Science 249:1527-1533]; 문헌[Treat, et al., in Liposomes in the Therapy of Infectious Disease and Cancer, Lopez-Berestein and Fidler (eds.), Liss, New York, pp. 353- 365 (1989)]; 문헌[Lopez-Berestein, 동일 문헌, pp. 317-327] 참조; 일반적으로 동일 문헌 참조).
다른 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 예방제 또는 치료제, 또는 조성물은 제어-방출 또는 지속-방출 시스템 내에 전달될 수 있다. 일 실시 형태에서는, 제어 방출 또는 지속 방출을 달성하기 위해 펌프가 사용될 수 있다(문헌[Langer, 상기 문헌]; 문헌[Sefton, 1987, CRC Crit. Ref. Biomed. Eng. 14:20]; 문헌[Buchwald et al., 1980, Surgery 88:507]; 문헌[Saudek et al., 1989, N. Engl. J. Med. 321:574] 참조). 다른 실시 형태에서는, 본 명세서에 제공된 예방제 또는 치료제(예를 들어, 본 명세서에 제공된 항체) 또는 조성물의 제어 방출 또는 지속 방출을 달성하기 위해 중합체 재료를 사용할 수 있다(예를 들어, 문헌[Medical Applications of Controlled Release, Langer and Wise (eds.), CRC Pres., Boca Raton, Florida (1974)]; 문헌[Controlled Drug Bioavailability, Drug Product Design and Performance, Smolen and Ball (eds.), Wiley, New York (1984)]; 문헌[Ranger and Peppas, 1983, J., Macromol. Sci. Rev. Macromol. Chem. 23:61]; 또한 문헌[Levy et al., 1985, Science 228:190]; 문헌[During et al., 1989, Ann. Neurol. 25:351]; 문헌[Howard et al., 1989, J. Neurosurg. 7 1:105]; 미국 특허 제5,679,377호; 미국 특허 제5,916,597호; 미국 특허 제5,912,015호; 미국 특허 제5,989,463호; 미국 특허 제5,128,326호; PCT 특허 출원 공개 WO 99/15154호; 및 PCT 특허 출원 공개 WO 99/20253호 참조). 지속-방출 제형에 사용되는 중합체의 예에는 폴리(2-하이드록시 에틸 메타크릴레이트), 폴리(메틸 메타크릴레이트), 폴리(아크릴산), 폴리(에틸렌-코-비닐 아세테이트), 폴리(메타크릴산), 폴리글리콜리드(PLG), 폴리언하이드라이드, 폴리(N-비닐 피롤리돈), 폴리(비닐 알코올), 폴리아크릴아미드, 폴리(에틸렌 글리콜), 폴리락티드(PLA), 폴리(락티드-코-글리콜리드)(PLGA), 및 폴리오르토에스테르가 포함되지만 이로 한정되지 않는다. 일 실시 형태에서, 지속-방출 제형에 사용되는 중합체는 불활성이고, 침출가능한 불순물이 없고, 저장 시에 안정하고, 멸균 상태이고, 생분해성이다. 또 다른 실시 형태에서, 제어-방출 또는 지속-방출 시스템은 치료 표적, 즉, 비도 또는 폐에 근접하여 배치될 수 있으며, 따라서 전신 용량의 소정 분율만을 필요로 한다(예를 들어, 문헌[Goodson, in Medical Applications of Controlled Release, supra, vol. 2, pp. 115-138 (1984)] 참조). 제어-방출 시스템은 문헌[Langer (1990, Science 249:1527-1533)]에 의한 검토에 논의되어 있다. 당업자에게 알려진 임의의 기법을 사용하여 본 명세서에 제공된 하나 이상의 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 지속-방출 제형을 생성할 수 있다. 예를 들어, 미국 특허 제4,526,938호, PCT 특허 출원 공개 WO 91/05548호, PCT 특허 출원 공개 WO 96/20698호, 문헌[Ning et al., 1996, "Intratumoral Radioimmunotherapy of a Human Colon Cancer Xenograft Using a Sustained-Release Gel," Radiotherapy & Oncology 39:179- 189], 문헌[Song et al., 1995, "Antibody Mediated Lung Targeting of Long-Circulating Emulsions," PDA Journal of Pharmaceutical Science & Technology 50:372-397], 문헌[Cleek et al., 1997, "Biodegradable Polymeric Carriers for a bFGF Antibody for Cardiovascular Application," Pro. Int'l. Symp. Control. Rel. Bioact. Mater. 24:853-854], 및 문헌[Lam et al., 1997, "Microencapsulation of Recombinant Humanized Monoclonal Antibody for Local Delivery," Proc. Int'l. Symp. Control Rel. Bioact. Mater. 24:759-760]을 참조하며, 이들 각각은 전체적으로 본 명세서에 참고로 포함된다.
본 명세서에 제공된 조성물이 예방제 또는 치료제(예를 들어, 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편)를 인코딩하는 핵산인 구체적인 실시 형태에서는, 예를 들어, 레트로바이러스 벡터의 사용에 의해(미국 특허 제4,980,286호 참조), 또는 직접 주사에 의해, 또는 미세입자 충돌(예를 들어, 유전자 총; Biolistic, Dupont)의 사용에 의해, 또는 지질 또는 세포 표면 수용체 또는 형질감염제를 이용한 코팅에 의해, 또는 핵에 진입하는 것으로 알려진 호메오박스-유사 펩티드에 연결하여 핵산을 투여하는 것(예를 들어, 문헌[Joliot et al., 1991, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88:1864-1868] 참조) 등에 의해, 적절한 핵산 발현 벡터의 일부로서 핵산을 작제하고 핵산을 투여하여 그것이 핵산이 세포내에 있도록 함으로써, 핵산을 생체내 투여하여 그의 인코딩된 예방제 또는 치료제의 발현을 촉진할 수 있다. 대안적으로, 상동성 재조합에 의한 발현을 위해 핵산이 세포내로 도입되고 숙주 세포 DNA 내에 도입될 수 있다.
구체적인 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조성물은 1개, 2개, 또는 그 이상의 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함한다. 다른 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조성물은 1개, 2개, 또는 그 이상의 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편 및 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편 이외의 예방제 또는 치료제를 포함한다. 일 실시 형태에서, 작용제는 질병 또는 질환의 예방, 관리, 치료, 및/또는 호전에 유용한 것으로 알려져 있거나, 이를 위해 사용되었거나, 현재 사용된다. 예방제 또는 치료제에 추가하여, 본 명세서에 제공된 조성물은 또한 부형제를 포함할 수 있다.
본 명세서에 제공된 조성물은 단위 투여 형태의 제조에 사용될 수 있는 약제학적 조성물(예를 들어, 대상체 또는 환자에게 투여하기에 적합한 조성물)의 제조에 유용한 벌크 약물 조성물을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조성물은 약제학적 조성물이다. 그러한 조성물은 하나 이상의 예방제 또는 치료제(예를 들어, 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 또는 다른 예방제 또는 치료제)의 예방적 또는 치료적 유효량, 및 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함한다. 약제학적 조성물은 대상체에 대한 투여 경로에 적합하도록 제형화될 수 있다.
구체적인 실시 형태에서, 용어 "부형제"는 또한 희석제, 애쥬번트(예를 들어, 프로인트 애쥬번트(완전 또는 불완전)), 또는 비히클을 지칭할 수 있다. 약제학적 부형제는 석유, 동물, 식물 또는 합성 기원의 것들, 예컨대 낙화생유, 대두유, 광유, 참기름 등을 포함하는, 물 및 오일과 같은 멸균 액체일 수 있다. 약제학적 조성물이 정맥내 투여되는 경우에 물이 예시적인 부형제이다. 식염수 용액, 및 덱스트로스 및 글리세롤 수용액이 또한, 특히 주사 용액을 위한 액체 부형제로서 사용될 수 있다. 적합한 약제학적 부형제는 전분, 글루코스, 락토스, 수크로스, 젤라틴, 맥아, 쌀, 곡분, 백악, 실리카 겔, 소듐 스테아레이트, 글리세롤 모노스테아레이트, 활석, 염화나트륨, 탈지분유, 글리세롤, 프로필렌, 글리콜, 물, 에탄올 등을 포함한다. 조성물은, 필요하다면, 미량의 습윤제 또는 유화제, 또는 pH 완충제를 또한 함유할 수 있다. 이들 조성물은 용액, 현탁액, 에멀젼, 정제, 알약, 캡슐, 분말, 지속-방출 제형 등의 형태를 취할 수 있다. 경구 제형은 제약 등급의 만니톨, 락토스, 전분, 마그네슘 스테아레이트, 소듐 사카린, 셀룰로스, 탄산마그네슘 등과 같은 표준 부형제를 포함할 수 있다. 적합한 약제학적 부형제의 예는 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences (1990) Mack Publishing Co., Easton, PA]에 기재되어 있다. 그러한 조성물은 환자에 대한 적절한 투여를 위한 형태를 제공하도록 부형제의 적합한 양과 함께, 예를 들어 정제된 형태의 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 예방적 또는 치료적 유효량을 함유할 것이다. 제형은 투여 방식에 적합해야 한다.
일 실시 형태에서, 조성물은 인간에 대한 정맥내 투여용으로 구성된 약제학적 조성물로서 일상적인 절차에 따라 제형화된다. 전형적으로, 정맥내 투여를 위한 조성물은 멸균 등장성 완충 수용액 형태의 용액이다. 필요한 경우, 조성물은 또한 주사 부위에서 통증을 완화시키기 위해 리그노카인과 같은 국부 마취제 및 가용화제를 포함할 수 있다. 그러나, 그러한 조성물은 정맥내 경로 이외의 경로에 의해 투여될 수 있다.
일반적으로, 본 명세서에 제공된 조성물의 성분들은, 예를 들어, 활성제의 양을 표시하는 앰풀 또는 사셰와 같은 밀폐 용기 내에 건조 동결건조된 분말 또는 무수 농축물로서, 단위 투여 형태로 함께 혼합되거나 개별적으로 공급된다. 조성물이 주입에 의해 투여될 경우, 그것은 멸균 제약 등급의 물 또는 식염수가 담긴 주입 병으로 분배될 수 있다. 조성물이 주사에 의해 투여되는 경우, 투여 전에 성분들이 혼합될 수 있도록 주사용 멸균수 또는 식염수의 앰풀이 제공될 수 있다.
본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 항체의 양을 표시하는 앰풀 또는 사셰와 같은 밀폐 용기 내에 포장될 수 있다. 일 실시 형태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 밀폐 용기 내에 건조 멸균 동결건조된 분말 또는 무수 농축물로서 공급되며, 예를 들어, 물 또는 식염수를 이용하여 대상체에게 투여하기에 적절한 농도로 재구성될 수 있다. 동결건조된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 그의 원래의 용기 내에 2 내지 8℃에서 저장될 수 있고 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 재구성된 후 12시간 이내, 예컨대 6시간 이내, 5시간 이내, 3시간 이내, 또는 1시간 이내에 투여될 수 있다. 대안적인 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 항체의 양 및 농도를 표시하는 밀폐 용기 내에 액체 형태로 공급된다.
본 명세서에 제공된 조성물은 중성 또는 염 형태로서 제형화될 수 있다. 약제학적으로 허용되는 염은 염산, 인산, 아세트산, 옥살산, 타르타르산으로부터 유래된 것들과 같은 음이온으로 형성된 것들, 및 나트륨, 칼륨, 암모늄, 칼슘, 수산화제2철, 아이소프로필아민, 트라이에틸아민, 2-에틸아미노 에탄올, 히스티딘, 프로카인 등으로부터 유래된 것들과 같은 양이온으로 형성된 것들을 포함한다.
질병 또는 질환의 예방 및/또는 치료에 효과적일 본 명세서에 제공된 예방제 또는 치료제(예를 들어, 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편), 또는 조성물의 양은 표준 임상 기법에 의해 결정될 수 있다. 게다가, 최적의 투여량 범위를 확인하는 것을 돕기 위해 시험관내 검정이 선택적으로 사용될 수 있다. 제형에 사용되는 정확한 용량은 또한 투여 경로, 및 질병 또는 질환의 심각도에 좌우될 것이며, 전문의의 판단 및 각각의 환자의 상황에 따라 결정되어야 한다.
유효 용량은 시험관내 또는 동물 모델 시험 시스템으로부터 도출되는 용량-반응 곡선으로부터 외삽될 수 있다.
소정 실시 형태에서, 환자에 대한 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 용량에 대한 투여 경로는 비강내, 근육내, 정맥내, 피하, 또는 이들의 조합이지만, 본 명세서에 기재된 다른 경로가 또한 허용가능하다. 각각의 용량은 동일한 투여 경로에 의해 투여될 수 있거나 그렇지 않을 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 본 명세서에 제공된 동일한 또는 상이한 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 다른 용량에 대해 후속으로 또는 동시에 다수의 투여 경로를 통해 투여될 수 있다.
소정 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 항체는 대상체에게 예방적으로 또는 치료적으로 투여된다. 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 질병 또는 이의 증상을 예방, 감소, 또는 호전시키도록 대상체에게 예방적으로 또는 치료적으로 투여될 수 있다.
유전자 요법
구체적인 실시 형태에서, 항체 또는 이의 기능성 유도체를 인코딩하는 서열을 포함하는 핵산은 본 명세서에 제공된 방법에 사용하기 위해, 예를 들어 유전자 요법에 의해 질병, 장애 또는 질환을 예방, 관리, 치료 및/또는 호전시키기 위해 대상체에게 투여된다. 그러한 요법은 발현된 또는 발현가능한 핵산을 대상체에게 투여함으로써 수행되는 것을 포함한다. 일 실시 형태에서, 핵산은 그의 인코딩된 항체를 생성하고, 항체는 예방적 또는 치료적 효과를 매개한다. 당업계에서 이용가능한 재조합 유전자 발현(또는 유전자 요법)을 위한 임의의 방법이 사용될 수 있다.
유전자 요법의 방법에 대한 일반적인 검토를 위해서는, 문헌[Goldspiel et al., 1993, Clinical Pharmacy 12:488-505]; 문헌[Wu and Wu, 1991, Biotherapy 3:87-95]; 문헌[Tolstoshev, 1993, Ann. Rev. Pharmacol. Toxicol. 32:573-596]; 문헌[Mulligan, 1993, Science 260:926-932]; 및 문헌[Morgan and Anderson, 1993, Ann. Rev. Biochem. 62:191-217]; May, 1993, TIBTECH 11(5):155-215]을 참조한다. 사용될 수 있는, 당업계에 일반적으로 알려진 재조합 DNA 기술의 방법은 문헌[Ausubel et al. (eds.), Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, NY (1993)]; 및 문헌[Kriegler, Gene Transfer and Expression, A Laboratory Manual, Stockton Press, NY (1990)]에 기재되어 있다.
구체적인 실시 형태에서, 조성물은 본 명세서에 제공된 항체를 인코딩하는 핵산을 포함하며, 상기 핵산은 적합한 숙주 내에서 상기 항체 또는 이의 키메라 단백질 또는 중쇄 또는 경쇄를 발현하는 발현 벡터의 일부이다. 특히, 그러한 핵산은 항체 코딩 영역에 작동가능하게 연결된 프로모터, 예컨대 이종성 프로모터를 가지며, 상기 프로모터는 유도성 또는 구성적, 및 선택적으로, 조직-특이적이다. 다른 특정 실시 형태에서, 항체 코딩 서열 및 임의의 다른 원하는 서열이 게놈 내의 원하는 부위에서 상동성 재조합을 촉진시키는 영역에 의해 플랭킹되어, 항체 인코딩 핵산의 염색체내 발현을 제공하는 핵산 분자가 사용된다(문헌[Koller and Smithies, 1989, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86:8932-8935]; 문헌[Zijlstra et al., 1989, Nature 342:435-438]). 일부 실시 형태에서, 발현된 항체 분자는 단일쇄 항체이며; 대안적으로, 핵산 서열은 항체의 중쇄 및 경쇄 둘 모두를 인코딩하는 서열, 또는 이의 단편을 포함한다.
대상체 내로의 핵산의 전달은 직접적 - 이 경우에는 대상체를 핵산 또는 핵산-운반 벡터에 직접 노출시킴 - 일 수 있거나, 또는 간접적 - 이 경우에는 세포를 먼저 시험관내에서 핵산을 사용하여 형질전환시키고, 이어서 대상체 내로 이식함 - 일 수 있다. 이들 두 가지 접근법은 생체내 또는 생체외(ex vivo) 유전자 요법으로서 각각 알려져 있다.
구체적인 실시 형태에서, 핵산 서열은 생체내에 직접 투여되며, 여기서 서열이 발현되어 인코딩된 생성물을 생성한다. 이는 당업계에 알려진 임의의 다수의 방법에 의해 달성될 수 있으며, 예를 들어 이들을 적절한 핵산 발현 벡터의 일부로서 작제하고 벡터를 투여하여 서열이 세포내에 있게 되도록 함으로써, 예를 들어 결손성 또는 약독화 레트로바이러스 또는 다른 바이러스 벡터를 사용하여 감염시킴으로써(미국 특허 제4,980,286호 참조), 또는 외피 비보유(naked) DNA의 직접 주사에 의해, 또는 미세입자 충격(예를 들어, 유전자 총; Biolistic, Dupont)의 사용에 의해, 또는 지질 또는 세포 표면 수용체 또는 형질감염제에 의한 코팅, 리포좀, 미세입자, 또는 마이크로캡슐 내에의 캡슐화에 의해, 또는 핵에 들어가는 것으로 알려진 펩티드에 연결하여 이들을 투여함으로써, 수용체-매개 엔도사이토시스를 받게 되는 리간드에 연결하여 그것을 투여함으로써(예를 들어, 문헌[Wu and Wu, 1987, J. Biol. Chem. 262:4429-4432] 참조)(이는 수용체를 특이적으로 발현하는 세포 유형을 표적화하는 데 사용될 수 있음) 행해지는 방법 등이 있다. 다른 실시 형태에서, 핵산-리간드 복합체가 형성될 수 있으며, 여기서 리간드는, 엔도솜을 파괴하여 핵산이 리소좀 분해를 피할 수 있게 하는 융합유도성(fusogenic) 바이러스 펩티드를 포함한다. 또 다른 실시 형태에서, 핵산은, 특이적 수용체를 표적화함으로써, 세포 특이적 흡수 및 발현을 위해 생체내에서 표적화될 수 있다(예를 들어, PCT 특허 출원 공개 WO 92/06180호; WO 92/22635호; WO 92/20316호; WO93/14188호, WO 93/20221호 참조). 대안적으로, 상동성 재조합에 의한 발현을 위해 핵산이 세포내로 도입되고 숙주 세포 DNA 내에 도입될 수 있다(문헌[Koller and Smithies, 1989, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86:8932-8935]; 및 문헌[Zijlstra et al., 1989, Nature 342:435-438]).
구체적인 실시 형태에서, 항체를 인코딩하는 핵산 서열을 함유하는 바이러스 벡터가 사용된다. 예를 들어, 레트로바이러스 벡터가 사용될 수 있다(문헌[Miller et al., 1993, Meth. Enzymol. 217:581-599] 참조). 이들 레트로바이러스 벡터는 바이러스 게놈의 올바른 패키징 및 숙주 세포 DNA 내로의 통합에 필요한 성분을 함유한다. 유전자 요법에 사용될 항체를 인코딩하는 핵산 서열은 대상체 내로의 유전자의 전달을 용이하게 하는 하나 이상의 벡터 내로 클로닝될 수 있다. 레트로바이러스 벡터에 대한 더 상세한 내용은 문헌[Boesen et al., 1994, Biotherapy 6:291-302]에서 찾아볼 수 있으며, 이 문헌은 조혈 줄기 세포를 화학요법에 대해 더 저항성이 되게 하기 위해 MDR1 유전자를 조혈 줄기 세포에 전달하기 위한 레트로바이러스 벡터의 용도를 기재한다. 유전자 요법에서 레트로바이러스 벡터의 사용을 예시하는 다른 참고문헌은 문헌[Clowes et al., 1994, J. Clin. Invest. 93:644-651]; 문헌[Klein et al., 1994, Blood 83:1467-1473]; 문헌[Salmons and Gunzberg, 1993, Human Gene Therapy 4:129-141]; 및 문헌[Grossman and Wilson, 1993, Curr. Opin. in Genetics and Devel. 3:110-114]이다.
아데노바이러스는 항체의 재조합 생성에 사용될 수 있는 다른 바이러스 벡터이다. 아데노바이러스는 호흡기 상피에 유전자를 전달하기 위한 특히 매력적인 비히클이다. 아데노바이러스는 자연적으로 호흡기 상피를 감염시키며, 여기서 이들은 경도의 질병을 야기한다. 아데노바이러스-기반 전달 시스템에 대한 다른 표적은 간, 중추 신경계, 내피 세포, 및 근육이다. 아데노바이러스는 비분열성 세포를 감염시킬 수 있다는 이점을 갖는다. 문헌[Kozarsky and Wilson, 1993, Current Opinion in Genetics and Development 3:499-503]은 아데노바이러스-기반 유전자 요법에 대한 검토를 제시한다. 문헌[Bout et al., 1994, Human Gene Therapy 5:3-10]은 레서스 원숭이의 호흡기 상피에 유전자를 전달하기 위한 아데노바이러스 벡터의 사용을 입증하였다. 유전자 요법에서의 아데노바이러스의 사용의 다른 경우는 문헌[Rosenfeld et al., 1991, Science 252:431-434]; 문헌[Rosenfeld et al., 1992, Cell 68:143-155]; 문헌[Mastrangeli et al., 1993, J. Clin. Invest. 91:225-234]; PCT 특허 출원 공개 WO94/12649호; 및 문헌[Wang et al., 1995, Gene Therapy 2:775-783]에서 찾아볼 수 있다. 구체적인 실시 형태에서, 아데노바이러스 벡터가 사용된다.
아데노-관련 바이러스(AAV)가 또한 이용될 수 있다(문헌[Walsh et al., 1993, Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 204:289-300]; 및 미국 특허 제5,436,146호). 구체적인 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 바와 같은 항체를 발현시키기 위해 AAV 벡터가 사용된다. 소정 실시 형태에서, AAV는 VH 도메인을 인코딩하는 핵산을 포함한다. 다른 실시 형태에서, AAV는 VL 도메인을 인코딩하는 핵산을 포함한다. 소정 실시 형태에서, AAV는 VH 도메인 및 VL 도메인을 인코딩하는 핵산을 포함한다. 본 명세서에 제공된 방법의 일부 실시 형태에서, VH 도메인을 인코딩하는 핵산을 포함하는 AAV 및 VL 도메인을 인코딩하는 핵산을 포함하는 AAV가 대상체에게 투여된다. 다른 실시 형태에서, VH 도메인 및 VL 도메인을 인코딩하는 핵산을 포함하는 AAV가 대상체에게 투여된다. 소정 실시 형태에서, VH 및 VL 도메인은 과발현된다.
유전자 요법에 대한 다른 접근법은 전기천공, 리포펙션, 인산칼슘 매개 형질감염, 또는 바이러스성 감염과 같은 방법에 의해 유전자를 조직 배양 중인 세포에 전달하는 것을 포함한다. 통상적으로, 전달 방법은 세포에 대한 선택가능한 마커의 전달을 포함한다. 이어서, 세포를 선택 하에 두어서, 전달된 유전자를 흡수하여 이를 발현하고 있는 세포를 단리한다. 이어서, 이들 세포를 대상체에게 전달한다.
이 실시 형태에서, 핵산은 생성되는 재조합 세포를 생체내에 투여하기 전에 세포 내로 도입된다. 그러한 도입은 형질감염, 전기천공, 현미주사(microinjection), 핵산 서열을 함유하는 바이러스 벡터 또는 박테리오파지 벡터에 의한 감염, 세포 융합, 염색체-매개 유전자 전달, 마이크로세포-매개 유전자 전달, 스페로플라스트(spheroplast) 융합 등을 포함하지만 이로 한정되지 않는 당업계에 알려진 임의의 방법에 의해 수행될 수 있다. 세포 내로의 외래 유전자의 도입을 위한 다수의 기법이 당업계에 알려져 있으며(예를 들어, 문헌[Loeffler and Behr, 1993, Meth. Enzymol. 217:599-618]; 문헌[Cohen et al., 1993, Meth. Enzymol. 217:618-644]; 문헌[Clin. Pharma. Ther. 29:69-92 (1985)] 참조), 본 명세서에 제공된 방법에 따라 사용될 수 있되, 단 이는, 수용 세포의 필요한 발달적 및 생리학적 기능은 파괴되지 않는다는 조건에서이다. 이러한 기법은, 핵산이 세포에 의해 발현가능하도록, 이를 테면 유전성을 나타내고 그의 세포 자손에 의해 발현가능하도록, 세포에 대한 핵산의 안정한 전달을 제공해야 한다.
생성되는 재조합 세포는 당업계에 알려진 다양한 방법에 의해 대상체로 전달될 수 있다. 재조합 혈액 세포(예를 들어, 조혈 줄기 세포 또는 선조 세포)가 정맥내 투여될 수 있다. 사용을 위해 고려되는 세포의 양은 원하는 효과, 환자 상태 등에 좌우되며, 당업자에 의해 결정될 수 있다.
유전자 요법의 목적을 위해 핵산을 도입할 수 있는 세포는 임의의 원하는 이용가능한 세포 유형을 포함하며, 상피 세포, 내피 세포, 각질세포, 섬유아세포, 근육 세포, 간세포; 혈액 세포, 예컨대 T 림프구, B 림프구, 단핵구, 대식세포, 호중구, 호산구, 거핵구, 과립구; 다양한 줄기 세포 또는 선조 세포, 특히 조혈 줄기 세포 또는 선조 세포, 예를 들어 골수, 제대혈, 말초 혈액, 태아 간 등으로부터 얻어지는 바와 같은 것을 포함하지만 이로 한정되지 않는다.
구체적인 실시 형태에서, 유전자 요법을 위해 사용되는 세포는 대상체에 대해 자가(autologous)이다.
재조합 세포가 유전자 요법에 사용되는 일 실시 형태에서는, 항체를 인코딩하는 핵산 서열을 세포 내로 도입하여, 이들을 세포 또는 이의 자손에 의해 발현가능하게 되도록 하고, 이어서 재조합 세포를 치료적 효과를 위해 생체내 투여한다. 구체적인 실시 형태에서, 줄기 세포 또는 선조 세포가 사용된다. 시험관내에서 단리되고 유지될 수 있는 임의의 줄기 세포 및/또는 선조 세포는 잠재적으로 본 명세서에 제공된 방법의 이 실시 형태에 따라 사용될 수 있다(예를 들어, PCT 특허 출원 공개 WO 94/08598호; 문헌[Stemple and Anderson, 1992, Cell 7 1:973-985]; 문헌[Rheinwald, 1980, Meth. Cell Bio. 21A:229]; 및 문헌[Pittelkow and Scott, 1986, Mayo Clinic Proc. 61:771] 참조).
구체적인 실시 형태에서, 유전자 요법을 목적으로 도입되는 핵산은 코딩 영역에 작동가능하게 연결된 유도성 프로모터를 포함하며, 이로써 전사의 적절한 유도인자의 존재 또는 부재를 제어함으로써 핵산의 발현이 제어가능하게 한다.
진단 검정 및 방법
본 명세서에 제공된, 항원에 면역특이적으로 결합하는 표지된 항체 및 이의 유도체 및 유사체는 질병 또는 장애를 검출, 진단, 또는 모니터링하기 위한 진단 목적으로 사용될 수 있다.
본 명세서에 제공된 항체가 본 명세서에 기재된 바와 같은 또는 당업자에게 알려진 바와 같은 고전적 면역조직학적 방법을 사용하여 생물학적 샘플에서 항원 수준을 검정하는 데 사용될 수 있다(예를 들어, 문헌[Jalkanen et al., 1985, J. Cell. Biol. 101:976-985]; 및 문헌[Jalkanen et al., 1987, J. Cell. Biol. 105:3087-3096] 참조). 단백질 유전자 발현을 검출하는 데 유용한 다른 항체-기반 방법은 면역검정, 예컨대 효소-결합 면역흡착 검정(ELISA) 및 방사면역검정(RIA)을 포함한다. 적합한 항체 검정 표지는 당업계에 알려져 있으며, 효소 표지, 예컨대 글루코스 옥시다제; 방사성 동위원소, 예컨대 요오드(125I, 121I), 탄소(14C), 황(35S), 삼중수소(3H), 인듐(121In), 및 테크네튬(99Tc); 발광 표지, 예컨대 루미놀; 및 형광 표지, 예컨대 플루오레세인 및 로다민, 및 비오틴을 포함한다. 본 명세서에 제공된 일 태양은 인간에서의 질병 또는 장애의 검출 및 진단이다.
사용되는 이미징 시스템 및 대상체의 크기는 진단적 이미지를 생성하는 데 필요한 이미징 모이어티의 양을 결정할 것임이 당업계에 이해되어 있을 것이다. 인간 대상체에 대한 방사성 동위원소 모이어티의 경우, 주사되는 방사능의 양은 통상적으로 약 5 내지 20 밀리퀴리 범위의 99Tc일 것이다. 이어서, 표지된 항체는 특정 단백질을 함유하는 세포의 위치에 축적될 것이다. 생체내 종양 이미징은 문헌[S.W. Burchiel et al., "Immunopharmacokinetics of Radiolabeled Antibodies and Their Fragments." (Chapter 13 in Tumor Imaging: The Radiochemical Detection of Cancer, S.W. Burchiel and B.A. Rhodes, eds., Masson Publishing Inc. (1982)]에 기재되어 있다.
사용된 표지의 유형 및 투여 방식을 포함한 몇몇 변수에 따라, 표지된 항체가 대상체에서 부위에 농축될 수 있게 하고 결합되지 않은 표지된 항체가 백그라운드 수준으로 제거될 수 있게 하기 위한 투여 후의 시간 간격은 6 내지 48시간 또는 6 내지 24시간 또는 6 내지 12시간이다. 다른 실시 형태에서, 투여 후의 시간 간격은 5 내지 20일 또는 5 내지 10일이다.
일 실시 형태에서, 질병 또는 장애를 진단하기 위한 방법을, 예를 들어 초기 진단 후 1개월 시점, 초기 진단 후 6개월 시점, 초기 진단 후 1년 시점 등에서 반복함으로써 질병 또는 장애의 모니터링이 수행된다.
표지된 분자의 존재는 생체내 스캐닝을 위한 것으로 당업계에 알려진 방법을 사용하여 대상체에서 검출될 수 있다. 이들 방법은 사용되는 표지의 유형에 따라 좌우된다. 숙련된 기술자는 특정 표지를 검출하기에 적절한 방법을 결정할 수 있을 것이다. 본 명세서에 제공된 진단 방법에 사용될 수 있는 방법 및 장치는 컴퓨터 단층촬영(CT), 전신 스캔, 예컨대 양전자 방출 단층촬영(PET), 자기 공명 영상(MRI), 및 초음파 검사(sonography)를 포함하지만 이로 한정되지 않는다.
구체적인 실시 형태에서, 분자는 방사성 동위원소로 표지되고, 방사선 반응성 수술 기구를 사용하여 환자에서 검출된다(Thurston et al., 미국 특허 제5,441,050호). 다른 실시 형태에서, 분자는 형광 화합물로 표지되고, 형광 반응성 스캐닝 기기를 사용하여 환자에서 검출된다. 다른 실시 형태에서, 분자는 양전자 방출 금속으로 표지되고, 양전자 방출 단층촬영을 사용하여 환자에서 검출된다. 또 다른 실시 형태에서, 분자는 상자성 표지로 표지되고, 자기 공명 영상(MRI)을 사용하여 환자에서 검출된다.
키트
적합한 패키징 재료 내에 패키징된 본 명세서에 제공된 항체(예를 들어, 항-NKG2d 다중특이성 항체 또는 항-NKp46 다중특이성 항체), 또는 이의 조성물(예를 들어, 약제학적 조성물)을 포함하는 키트가 본 명세서에 또한 제공된다. 키트는 선택적으로 라벨 또는 패키징 삽입물(packaging insert)을 포함하며, 이에는 성분들에 대한 설명 또는 그 안의 성분들의 시험관내, 생체내, 또는 생체외에서의 사용을 위한 설명서가 포함된다.
용어 "패키징 재료"는 키트의 성분들을 하우징하는 물리적 구조물을 지칭한다. 패키징 재료는 성분들을 멸균 상태로 유지할 수 있으며, 그러한 목적을 위해 일반적으로 사용되는 재료(예를 들어, 종이, 파형(corrugated) 섬유, 유리, 플라스틱, 포일, 앰풀, 바이알, 튜브 등)로 제조될 수 있다.
본 명세서에 제공된 키트는 라벨 또는 삽입물을 포함할 수 있다. 라벨 또는 삽입물은 성분, 키트 또는 팩킹 재료(예를 들어, 상자)와는 별개의 또는 이에 부착된, 또는, 예를 들어 키트 성분이 담긴 앰풀, 튜브, 또는 바이알에 부착된 "인쇄물", 예를 들어 종이 또는 판지를 포함한다. 라벨 또는 삽입물은 컴퓨터 판독가능 매체, 예컨대 디스크(예를 들어, 하드 디스크, 카드, 메모리 디스크), 광학 디스크, 예컨대 CD- 또는 DVD-ROM/RAM, DVD, MP3, 자기 테이프, 또는 전기적 저장 매체, 예컨대 RAM 및 ROM 또는 이들의 하이브리드, 예컨대 자기/광학 저장 매체, FLASH 매체, 또는 메모리 유형 카드를 추가로 포함할 수 있다. 라벨 또는 삽입물은 제조자 정보, 로트 번호, 제조자 소재지, 및 날짜를 확인시켜 주는 정보를 포함할 수 있다.
본 명세서에 제공된 키트는 다른 성분들을 추가로 포함할 수 있다. 키트의 각각의 성분은 개별 용기 내에 봉입될 수 있고, 다양한 용기 모두가 단일 패키지 내에 있을 수 있다. 키트는 또한 저온 저장을 위해 설계될 수 있다. 키트는 추가로 본 명세서에 제공된 항체, 또는 본 명세서에 제공된 항체를 인코딩하는 핵산을 함유하는 세포를 수용하도록 설계될 수 있다. 키트 내의 세포는 즉시 사용가능할 때까지 적절한 저장 조건 하에서 유지될 수 있다.
항원, 예를 들어 NKG2d 또는 NKp46에 면역특이적으로 결합하는 항체들의 패널이 본 명세서에 또한 제공된다. 구체적인 실시 형태에서, 항원에 대한 상이한 회합 속도 상수, 상이한 해리 속도 상수, 상이한 친화도, 및/또는 항원에 대한 상이한 특이성을 갖는 항체들의 패널이 본 명세서에 제공된다. 소정 실시 형태에서, 약 10, 바람직하게는 약 25, 약 50, 약 75, 약 100, 약 125, 약 150, 약 175, 약 200, 약 250, 약 300, 약 350, 약 400, 약 450, 약 500, 약 550, 약 600, 약 650, 약 700, 약 750, 약 800, 약 850, 약 900, 약 950, 또는 약 1000개 또는 그 이상의 항체의 패널이 본 명세서에 제공된다. 예를 들어, 96웰 또는 384웰 플레이트, 예컨대 ELISA와 같은 검정을 위한 것에 항체의 패널이 사용될 수 있다.
달리 정의되지 않는 한, 본 명세서에 사용되는 모든 기술 과학 용어는 당업자가 통상적으로 이해하는 것과 동일한 의미를 갖는다. 본 명세서에 기재된 것들과 유사하거나 동등한 방법 및 재료가 본 발명의 실시 또는 시험에 사용될 수 있지만, 적합한 방법 및 재료가 본 명세서에 기재되어 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 수치 값이 종종 본 명세서 전체에 걸쳐 범위 형식으로 제시된다. 범위 형식의 사용은 단지 편의상 및 간결성을 위한 것이며, 문맥상 명백히 달리 나타내지 않는 한 본 발명의 범주에 대한 완강한 제한으로서 해석되어서는 안 된다. 따라서, 범위의 사용은, 문맥상 명백히 달리 나타내지 않는 한, 모든 가능한 하위범위, 그 범위 내의 모든 개별 수치 값, 및 모든 수치 값 또는 수치 범위 - 이에는 그러한 범위 내의 정수, 및 범위 내의 값 또는 정수의 분수가 포함됨 - 를 명시적으로 포함한다. 이러한 구성은 본 특허 문헌 전체에 걸쳐 범위의 폭에 관계없이 그리고 모든 문맥상 적용된다. 따라서, 예를 들어, 90 내지 100%의 범위에 대한 언급은 91 내지 99%, 92 내지 98%, 93 내지 95%, 91 내지 98%, 91 내지 97%, 91 내지 96%, 91 내지 95%, 91 내지 94%, 91 내지 93% 등을 포함한다. 90 내지 100%의 범위에 대한 언급은 또한 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 95%, 97% 등뿐만 아니라, 91.1%, 91.2%, 91.3%, 91.4%, 91.5% 등, 92.1%, 92.2%, 92.3%, 92.4%, 92.5% 등, 및 기타 등등을 포함한다.
또한, 1 내지 3, 3 내지 5, 5 내지 10, 10 내지 20, 20 내지 30, 30 내지 40, 40 내지 50, 50 내지 60, 60 내지 70, 70 내지 80, 80 내지 90, 90 내지 100, 100 내지 110, 110 내지 120, 120 내지 130, 130 내지 140, 140 내지 150, 150 내지 160, 160 내지 170, 170 내지 180, 180 내지 190, 190 내지 200, 200 내지 225, 225 내지 250의 범위에 대한 언급은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 등을 포함한다. 추가의 예에서, 25 내지 250, 250 내지 500, 500 내지 1,000, 1,000 내지 2,500, 2,500 내지 5,000, 5,000 내지 25,000, 25,000 내지 50,000의 범위에 대한 언급은 그러한 값들 내의 또는 이들을 포함하는 임의의 수치 값 또는 범위, 예를 들어 25, 26, 27, 28, 29…250, 251, 252, 253, 254…500, 501, 502, 503, 504… 등을 포함한다.
본 명세서에 또한 사용되는 바와 같이, 일련의 범위가 본 명세서 전체에 걸쳐 개시된다. 일련의 범위의 사용은 더 높은 범위와 더 낮은 범위의 조합을 포함하여 다른 범위를 제공한다. 이러한 구성은 본 특허 문헌 전체에 걸쳐 범위의 폭에 관계없이 그리고 모든 문맥상 적용된다. 따라서, 예를 들어, 5 내지 10, 10 내지 20, 20 내지 30, 30 내지 40, 40 내지 50, 50 내지 75, 75 내지 100, 100 내지 150과 같은 일련의 범위에 대한 언급은 5 내지 20, 5 내지 30, 5 내지 40, 5 내지 50, 5 내지 75, 5 내지 100, 5 내지 150, 및 10 내지 30, 10 내지 40, 10 내지 50, 10 내지 75, 10 내지 100, 10 내지 150, 및 20 내지 40, 20 내지 50, 20 내지 75, 20 내지 100, 20 내지 150 등과 같은 범위를 포함한다.
간결성을 위해, 소정 약어가 본 명세서에 사용된다. 한 예는 아미노산 잔기를 나타내는 1-문자 약어이다. 아미노산 및 이의 상응하는 3-문자 및 1-문자 약어는 하기와 같다:
본 발명은 다수의 실시 형태를 기재하기 위해 긍정 언어를 사용하여 일반적으로 본 명세서에 개시된다. 본 발명은 또한 물질 또는 재료, 방법 단계 및 조건, 프로토콜, 절차, 검정, 또는 분석과 같은 특정 주제가 전체적으로 또는 부분적으로 배제되는 실시 형태를 구체적으로 포함한다. 따라서, 본 발명이 포함하지 않는 것의 관점에서 본 발명이 본 명세서에 일반적으로 표현되지 않더라도, 그럼에도 불구하고 본 발명에 명시적으로 포함되지 않은 태양들이 본 명세서에 개시된다.
본 발명의 다수의 실시 형태가 기재되어 있다. 그럼에도 불구하고, 본 발명의 사상 및 범주로부터 벗어남이 없이 다양한 변형들이 이루어질 수 있다는 것은 이해될 것이다. 따라서, 하기 실시예는 청구범위에 기재된 본 발명의 범주를 예시하지만 이를 제한하고자 하지 않는다.
실시 형태
본 발명은 하기의 비제한적인 실시 형태를 제공한다.
일 세트의 실시 형태(실시 형태 세트 A)에서, 다음이 제공된다:
A1.
다중특이성 항체로서,
(a)
자연 살해(NK) 세포 상에 발현되는 제1 항원에 결합하는 제1 결합 도메인, 및
(b)
제2 항원에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함하는, 다중특이성 항체.
A2.
실시 형태 A1에 있어서, 상기 제1 항원은 NK 세포 활성화 수용체인, 다중특이성 항체.
A3.
실시 형태 A2에 있어서, 상기 제1 항원은 NKG2d인, 다중특이성 항체. A4.
실시 형태 A3에 있어서, 상기 제1 결합 도메인은
(i)
(a)
서열 번호 4의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 5의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 6의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3;
(b)
서열 번호 10의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 11의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 12의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3;
(c)
서열 번호 16의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 17의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 18의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3;
(d)
서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 23의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 24의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3; 또는
(e)
서열 번호 28의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 29의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 30의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH);
및
(a)
서열 번호 7의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 8의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 9의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3;
(b)
서열 번호 13의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 14의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 15의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3;
(c)
서열 번호 19의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 20의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 21의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3;
(d)
서열 번호 25의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 26의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 27의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3; 또는
(e) 서열 번호 31의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 32의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 33의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
또는
(ii)
(a)
서열 번호 36의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 37의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 38의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3;
(b)
서열 번호 42의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 43의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 44의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3;
(c)
서열 번호 48의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 49의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 50의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3;
(d)
서열 번호 54의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 55의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 56의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3; 또는
(e)
서열 번호 60의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 61의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 62의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH);
및
(a)
서열 번호 39의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 40의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 41의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3;
(b)
서열 번호 45의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 46의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 47의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3;
(c)
서열 번호 51의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 52의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 53의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3;
(d)
서열 번호 57의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 58의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 59의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3; 또는
(e)
서열 번호 63의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 64의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 65의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하는, 다중특이성 항체.
A5.
실시 형태 A4에 있어서, 상기 제1 결합 도메인은 서열 번호 2의 아미노산 서열을 갖는 VH, 및 서열 번호 3의 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함하거나, 또는 상기 제1 결합 도메인은 서열 번호 34의 아미노산 서열을 갖는 VH, 및 서열 번호 35의 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함하는, 다중특이성 항체.
A6.
실시 형태 A2에 있어서, 상기 제1 항원은 NKp46인, 다중특이성 항체.
A7.
실시 형태 A6에 있어서, 상기 제1 결합 도메인은
(i)
(a)
서열 번호 69의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 70의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 71의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3;
(b)
서열 번호 75의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 76의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 77의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3;
(c)
서열 번호 81의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 82의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 83의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3;
(d)
서열 번호 87의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 88의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 89의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3; 또는
(e)
서열 번호 93의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 94의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 95의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH);
및
(ii)
(a)
서열 번호 72의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 73의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 74의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3;
(b)
서열 번호 78의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 79의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 80의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3;
(c)
서열 번호 84의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 85의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 86의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3;
(d)
서열 번호 90의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 91의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 92의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3; 또는
(e)
서열 번호 96의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 97의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 98의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하는, 다중특이성 항체.
A8.
실시 형태 A7에 있어서, 상기 제1 결합 도메인은 서열 번호 67의 아미노산 서열을 갖는 VH, 및 서열 번호 68의 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함하는, 다중특이성 항체.
A9.
실시 형태 A1 내지 실시 형태 A8 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 항원은 세포 표면 상에 존재하는, 다중특이성 항체.
A10.
실시 형태 A1 내지 실시 형태 A8 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 항원은 종양 세포 상에서 발현되는, 다중특이성 항체.
A11.
실시 형태 A10에 있어서, 상기 제2 항원은 종양-특이적 항원(TSA) 또는 종양-관련 항원(TAA)인, 다중특이성 항체.
A12.
실시 형태 A10에 있어서, 상기 제2 항원은 BCMA인, 다중특이성 항체.
A13.
실시 형태 A10에 있어서, 상기 제2 항원은 GPRC5d인, 다중특이성 항체.
A14.
실시 형태 A1 내지 실시 형태 A13 중 어느 하나에 있어서, 상기 제1 결합 도메인은 인간화되거나, 상기 제2 결합 도메인은 인간화되거나, 또는 상기 제1 결합 도메인 및 상기 제2 결합 도메인 둘 모두가 인간화되는, 다중특이성 항체.
A15.
실시 형태 A1 내지 실시 형태 A14 중 어느 하나에 있어서, 상기 다중특이성 항체는 IgG 항체인, 다중특이성 항체.
A16.
실시 형태 A15에 있어서, 상기 IgG 항체는 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4 항체인, 다중특이성 항체.
A17.
실시 형태 A16에 있어서, 상기 IgG 항체는 IgG1 항체인, 다중특이성 항체.
A18.
실시 형태 A1 내지 실시 형태 A17 중 어느 하나에 있어서, 상기 다중특이성 항체는 이중특이성 항체인, 다중특이성 항체.
A19.
실시 형태 A18에 있어서, 상기 이중특이성 항체는 바이포드-스캐폴드 입체구조인, 다중특이성 항체.
A20.
실시 형태 A19에 있어서, 상기 제1 결합 도메인은 Fab 영역이고, 상기 제2 결합 도메인은 scFv 영역인, 다중특이성 항체.
A21.
실시 형태 A18에 있어서, 상기 이중특이성 항체는 모리슨-스캐폴드 입체구조인, 다중특이성 항체.
A22.
실시 형태 A21에 있어서, 상기 제1 결합 도메인은 2개의 Fab 영역을 포함하고, 상기 제2 결합 도메인은 2개의 scFv 영역을 포함하는, 다중특이성 항체.
A23.
실시 형태 A10 내지 실시 형태 A22 중 어느 하나에 있어서, 상기 다중특이성 항체는 약 500 pM 미만의 IC50으로 시험관내에서 상기 종양 세포의 NK 세포 의존성 세포독성을 유도하는, 다중특이성 항체.
A24.
실시 형태 A10 내지 실시 형태 A22 중 어느 하나에 있어서, 상기 다중특이성 항체는 약 300 pM 미만의 IC50으로 시험관내에서 상기 종양 세포의 NK 세포 의존성 세포독성을 유도하는, 다중특이성 항체.
A25.
실시 형태 A10 내지 실시 형태 A22 중 어느 하나에 있어서, 상기 다중특이성 항체는 약 100 pM 미만의 IC50으로 시험관내에서 상기 종양 세포의 NK 세포 의존성 세포독성을 유도하는, 다중특이성 항체.
A26.
실시 형태 A10 내지 실시 형태 A22 중 어느 하나에 있어서, 상기 다중특이성 항체는 약 50 pM 미만의 IC50으로 시험관내에서 상기 종양 세포의 NK 세포 의존성 세포독성을 유도하는, 다중특이성 항체.
A27.
실시 형태 A10 내지 실시 형태 A22 중 어느 하나에 있어서, 상기 다중특이성 항체는 약 20 pM 미만의 IC50으로 시험관내에서 상기 종양 세포의 NK 세포 의존성 세포독성을 유도하는, 다중특이성 항체.
A28.
실시 형태 A10 내지 실시 형태 A22 중 어느 하나에 있어서, 상기 다중특이성 항체는 약 15 pM 미만의 IC50으로 시험관내에서 상기 종양 세포의 NK 세포 의존성 세포독성을 유도하는, 다중특이성 항체.
A29.
실시 형태 A10 내지 실시 형태 A22 중 어느 하나에 있어서, 상기 다중특이성 항체는 약 10 pM 미만의 IC50으로 시험관내에서 상기 종양 세포의 NK 세포 의존성 세포독성을 유도하는, 다중특이성 항체.
A30.
실시 형태 A23 내지 실시 형태 A29 중 어느 하나에 있어서, 상기 IC50은 NK 이펙터 세포와 상기 제2 항원을 발현하는 표적 세포의 혼합물을 사용하여 평가되는, 다중특이성 항체.
A31.
실시 형태 A30에 있어서, 상기 이펙터 세포 대 표적 세포 비는 약 0.01:1 내지 약 5:1인, 다중특이성 항체.
A32.
실시 형태 A30에 있어서, 상기 이펙터 세포 대 표적 세포 비는 약 0.1:1 내지 약 2:1인, 다중특이성 항체.
A33.
실시 형태 A30에 있어서, 상기 이펙터 세포 대 표적 세포 비는 약 1:1인, 다중특이성 항체.
A34.
실시 형태 A1 내지 실시 형태 A33 중 어느 하나의 다중특이성 항체를 인코딩하는 핵산.
A35.
실시 형태 A34의 핵산을 포함하는 벡터.
A36.
실시 형태 A35의 벡터를 포함하는 숙주 세포.
A37.
실시 형태 A35의 벡터 및 이를 위한 패키징을 포함하는 키트.
A38.
NKG2d에 결합하는 항체로서,
(i)
(a)
서열 번호 4의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 5의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 6의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3;
(b)
서열 번호 10의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 11의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 12의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3;
(c)
서열 번호 16의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 17의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 18의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3;
(d)
서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 23의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 24의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3; 또는
(e)
서열 번호 28의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 29의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 30의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH);
및
(a)
서열 번호 7의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 8의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 9의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3;
(b)
서열 번호 13의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 14의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 15의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3;
(c)
서열 번호 19의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 20의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 21의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3;
(d)
서열 번호 25의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 26의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 27의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3; 또는
(e) 서열 번호 31의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 32의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 33의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
또는
(ii)
(a)
서열 번호 36의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 37의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 38의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3;
(b)
서열 번호 42의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 43의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 44의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3;
(c)
서열 번호 48의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 49의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 50의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3;
(d)
서열 번호 54의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 55의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 56의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3; 또는
(e)
서열 번호 60의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 61의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 62의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH);
및
(a)
서열 번호 39의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 40의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 41의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3;
(b)
서열 번호 45의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 46의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 47의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3;
(c)
서열 번호 51의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 52의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 53의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3;
(d)
서열 번호 57의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 58의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 59의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3; 또는
(e)
서열 번호 63의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 64의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 65의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하는, 항체.
A39.
실시 형태 A38에 있어서, 상기 제1 결합 도메인은 서열 번호 2의 아미노산 서열을 갖는 VH, 및 서열 번호 3의 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함하거나, 또는 상기 제1 결합 도메인은 서열 번호 34의 아미노산 서열을 갖는 VH, 및 서열 번호 35의 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함하는, 항체.
A40.
NKp46에 결합하는 항체로서,
(i)
(a)
서열 번호 69의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 70의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 71의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3;
(b)
서열 번호 75의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 76의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 77의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3;
(c)
서열 번호 81의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 82의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 83의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3;
(d)
서열 번호 87의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 88의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 89의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3; 또는
(e)
서열 번호 93의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 94의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 95의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH);
및
(ii)
(a)
서열 번호 72의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 73의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 74의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3;
(b)
서열 번호 78의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 79의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 80의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3;
(c)
서열 번호 84의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 85의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 86의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3;
(d)
서열 번호 90의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 91의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 92의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3; 또는
(e)
서열 번호 96의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 97의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 98의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하는, 항체.
A41.
실시 형태 A40에 있어서, 상기 제1 결합 도메인은 서열 번호 67의 아미노산 서열을 갖는 VH, 및 서열 번호 68의 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함하는, 항체.
A42.
실시 형태 A38 내지 실시 형태 A41 중 어느 하나의 항체를 인코딩하는 핵산.
A43.
실시 형태 A42의 핵산을 포함하는 벡터.
A44.
실시 형태 A43의 벡터를 포함하는 숙주 세포.
A45.
실시 형태 A43의 벡터 및 이를 위한 패키징을 포함하는 키트.
한 세트의 실시 형태(실시 형태 세트 B)에서는, 하기가 제공된다:
B1.
다중특이성 항체 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물로서,
상기 다중특이성 항체는
(a)
자연 살해(NK) 세포 상에 발현되는 제1 항원에 결합하는 제1 결합 도메인, 및
(b)
제2 항원에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함하는, 약제학적 조성물.
B2.
실시 형태 B1에 있어서, 상기 제1 항원은 NK 세포 활성화 수용체인, 약제학적 조성물.
B3.
실시 형태 B2에 있어서, 상기 제1 항원은 NKG2d인, 약제학적 조성물.
B4.
실시 형태 B3에 있어서, 상기 제1 결합 도메인은
(i)
(a)
서열 번호 4의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 5의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 6의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3;
(b)
서열 번호 10의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 11의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 12의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3;
(c)
서열 번호 16의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 17의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 18의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3;
(d)
서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 23의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 24의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3; 또는
(e)
서열 번호 28의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 29의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 30의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH);
및
(a)
서열 번호 7의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 8의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 9의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3;
(b)
서열 번호 13의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 14의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 15의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3;
(c)
서열 번호 19의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 20의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 21의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3;
(d)
서열 번호 25의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 26의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 27의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3; 또는
(e) 서열 번호 31의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 32의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 33의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
또는
(ii)
(a)
서열 번호 36의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 37의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 38의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3;
(b)
서열 번호 42의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 43의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 44의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3;
(c)
서열 번호 48의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 49의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 50의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3;
(d)
서열 번호 54의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 55의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 56의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3;또는
(e)
서열 번호 60의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 61의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 62의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH);
및
(a)
서열 번호 39의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 40의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 41의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3;
(b)
서열 번호 45의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 46의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 47의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3;
(c)
서열 번호 51의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 52의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 53의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3;
(d)
서열 번호 57의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 58의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 59의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3;또는
(e)
서열 번호 63의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 64의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 65의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하는, 약제학적 조성물.
B5.
실시 형태 B4에 있어서, 상기 제1 결합 도메인은 서열 번호 2의 아미노산 서열을 갖는 VH, 및 서열 번호 3의 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함하거나, 또는 상기 제1 결합 도메인은 서열 번호 34의 아미노산 서열을 갖는 VH, 및 서열 번호 35의 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함하는, 약제학적 조성물.
B6.
실시 형태 B2에 있어서, 상기 제1 항원은 NKp46인, 약제학적 조성물.
B7.
실시 형태 B6에 있어서, 상기 제1 결합 도메인은
(i)
(a)
서열 번호 69의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 70의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 71의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3;
(b)
서열 번호 75의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 76의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 77의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3;
(c)
서열 번호 81의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 82의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 83의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3;
(d)
서열 번호 87의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 88의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 89의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3;또는
(e)
서열 번호 93의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 94의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 95의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH);
및
(ii)
(a)
서열 번호 72의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 73의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 74의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3;
(b)
서열 번호 78의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 79의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 80의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3;
(c)
서열 번호 84의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 85의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 86의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3;
(d)
서열 번호 90의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 91의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 92의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3; 또는
(e)
서열 번호 96의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 97의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 98의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하는, 약제학적 조성물.
B8.
실시 형태 B7에 있어서, 상기 제1 결합 도메인은 서열 번호 67의 아미노산 서열을 갖는 VH, 및 서열 번호 68의 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함하는, 약제학적 조성물.
B9.
실시 형태 B1 내지 실시 형태 B8 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 항원은 세포 표면 상에 존재하는, 약제학적 조성물.
B10.
실시 형태 B1 내지 실시 형태 B8 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 항원은 종양 세포 상에서 발현되는, 약제학적 조성물.
B11.
실시 형태 B10에 있어서, 상기 제2 항원은 종양-특이적 항원(TSA) 또는 종양-관련 항원(TAA)인, 약제학적 조성물.
B12.
실시 형태 B10에 있어서, 상기 제2 항원은 BCMA인, 약제학적 조성물.
B13.
실시 형태 B10에 있어서, 상기 제2 항원은 GPRC5d인, 약제학적 조성물.
B14.
실시 형태 B1 내지 실시 형태 B13 중 어느 하나에 있어서, 상기 제1 결합 도메인은 인간화되거나, 상기 제2 결합 도메인은 인간화되거나, 또는 상기 제1 결합 도메인 및 상기 제2 결합 도메인 둘 모두가 인간화되는, 약제학적 조성물.
B15.
실시 형태 B1 내지 실시 형태 B14 중 어느 하나에 있어서, 상기 다중특이성 항체는 IgG 항체인, 약제학적 조성물.
B16.
실시 형태 B15에 있어서, 상기 IgG 항체는 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4 항체인, 약제학적 조성물.
B17.
실시 형태 B16에 있어서, 상기 IgG 항체는 IgG1 항체인, 약제학적 조성물.
B18.
실시 형태 B1 내지 실시 형태 B17 중 어느 하나에 있어서, 상기 다중특이성 항체는 이중특이성 항체인, 약제학적 조성물.
B19.
실시 형태 B18에 있어서, 상기 이중특이성 항체는 바이포드-스캐폴드 입체구조인, 약제학적 조성물.
B20.
실시 형태 B19에 있어서, 상기 제1 결합 도메인은 Fab 영역이고, 상기 제2 결합 도메인은 scFv 영역인, 약제학적 조성물.
B21.
실시 형태 B18에 있어서, 상기 이중특이성 항체는 모리슨-스캐폴드 입체구조인, 약제학적 조성물.
B22.
실시 형태 B21에 있어서, 상기 제1 결합 도메인은 2개의 Fab 영역을 포함하고, 상기 제2 결합 도메인은 2개의 scFv 영역을 포함하는, 약제학적 조성물.
B23.
실시 형태 B10 내지 실시 형태 B22 중 어느 하나에 있어서, 상기 다중특이성 항체는 약 500 pM 미만의 IC50으로 시험관내에서 상기 종양 세포의 NK 세포 의존성 세포독성을 유도하는, 약제학적 조성물.
B24.
실시 형태 B10 내지 실시 형태 B22 중 어느 하나에 있어서, 상기 다중특이성 항체는 약 300 pM 미만의 IC50으로 시험관내에서 상기 종양 세포의 NK 세포 의존성 세포독성을 유도하는, 약제학적 조성물.
B25.
실시 형태 B10 내지 실시 형태 B22 중 어느 하나에 있어서, 상기 다중특이성 항체는 약 100 pM 미만의 IC50으로 시험관내에서 상기 종양 세포의 NK 세포 의존성 세포독성을 유도하는, 약제학적 조성물.
B26.
실시 형태 B10 내지 실시 형태 B22 중 어느 하나에 있어서, 상기 다중특이성 항체는 약 50 pM 미만의 IC50으로 시험관내에서 상기 종양 세포의 NK 세포 의존성 세포독성을 유도하는, 약제학적 조성물.
B27.
실시 형태 B10 내지 실시 형태 B22 중 어느 하나에 있어서, 상기 다중특이성 항체는 약 20 pM 미만의 IC50으로 시험관내에서 상기 종양 세포의 NK 세포 의존성 세포독성을 유도하는, 약제학적 조성물.
B28.
실시 형태 B10 내지 실시 형태 B22 중 어느 하나에 있어서, 상기 다중특이성 항체는 약 15 pM 미만의 IC50으로 시험관내에서 상기 종양 세포의 NK 세포 의존성 세포독성을 유도하는, 약제학적 조성물.
B29.
실시 형태 B10 내지 실시 형태 B22 중 어느 하나에 있어서, 상기 다중특이성 항체는 약 10 pM 미만의 IC50으로 시험관내에서 상기 종양 세포의 NK 세포 의존성 세포독성을 유도하는, 약제학적 조성물.
B30.
실시 형태 B23 내지 실시 형태 B29 중 어느 하나에 있어서, 상기 IC50은 NK 이펙터 세포와 상기 제2 항원을 발현하는 표적 세포의 혼합물을 사용하여 평가되는, 약제학적 조성물.
B31.
실시 형태 B30에 있어서, 상기 이펙터 세포 대 표적 세포 비는 약 0.01:1 내지 약 5:1인, 약제학적 조성물.
B32.
실시 형태 B30에 있어서, 상기 이펙터 세포 대 표적 세포 비는 약 0.1:1 내지 약 2:1인, 약제학적 조성물.
B33.
실시 형태 B30에 있어서, 상기 이펙터 세포 대 표적 세포 비는 약 1:1인, 약제학적 조성물.
한 세트의 실시 형태(실시 형태 세트 C)에서는, 하기가 제공된다:
C1.
다중특이성 항체의 제조 공정으로서,
자연 살해(NK) 세포 상에 발현되는 제1 항원에 결합하는 제1 결합 도메인 및 제2 항원에 결합하는 제2 결합 도메인을 인코딩하는 하나 이상의 핵산을 숙주 세포 내로 도입하는 단계를 포함하는, 공정.
C2.
실시 형태 C1에 있어서, 상기 제1 항원은 NK 세포 활성화 수용체인, 공정.
C3.
실시 형태 C2에 있어서, 상기 제1 항원은 NKG2d인, 공정.
C4.
실시 형태 C3에 있어서, 상기 제1 결합 도메인은
(i)
(a)
서열 번호 4의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 5의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 6의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3;
(b)
서열 번호 10의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 11의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 12의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3;
(c)
서열 번호 16의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 17의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 18의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3;
(d)
서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 23의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 24의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3; 또는
(e)
서열 번호 28의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 29의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 30의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH);
및
(a)
서열 번호 7의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 8의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 9의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3;
(b)
서열 번호 13의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 14의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 15의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3;
(c)
서열 번호 19의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 20의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 21의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3;
(d)
서열 번호 25의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 26의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 27의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3;또는
(e) 서열 번호 31의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 32의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 33의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
또는
(ii)
(a)
서열 번호 36의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 37의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 38의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3;
(b)
서열 번호 42의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 43의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 44의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3;
(c)
서열 번호 48의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 49의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 50의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3;
(d)
서열 번호 54의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 55의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 56의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3;또는
(e)
서열 번호 60의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 61의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 62의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH);
및
(a)
서열 번호 39의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 40의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 41의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3;
(b)
서열 번호 45의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 46의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 47의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3;
(c)
서열 번호 51의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 52의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 53의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3;
(d)
서열 번호 57의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 58의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 59의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3;또는
(e)
서열 번호 63의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 64의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 65의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하는, 공정.
C5.
실시 형태 C4에 있어서, 상기 제1 결합 도메인은 서열 번호 2의 아미노산 서열을 갖는 VH, 및 서열 번호 3의 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함하거나, 또는 상기 제1 결합 도메인은 서열 번호 34의 아미노산 서열을 갖는 VH, 및 서열 번호 35의 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함하는, 공정.
C6.
실시 형태 C2에 있어서, 상기 제1 항원은 NKp46인, 공정.
C7.
실시 형태 C6에 있어서, 상기 제1 결합 도메인은
(i)
(a)
서열 번호 69의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 70의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 71의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3;
(b)
서열 번호 75의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 76의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 77의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3;
(c)
서열 번호 81의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 82의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 83의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3;
(d)
서열 번호 87의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 88의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 89의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3;또는
(e)
서열 번호 93의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 94의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 95의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH);
및
(ii)
(a)
서열 번호 72의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 73의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 74의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3;
(b)
서열 번호 78의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 79의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 80의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3;
(c)
서열 번호 84의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 85의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 86의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3;
(d)
서열 번호 90의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 91의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 92의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3; 또는
(e)
서열 번호 96의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 97의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 98의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하는, 공정.
C8.
실시 형태 C7에 있어서, 상기 제1 결합 도메인은 서열 번호 67의 아미노산 서열을 갖는 VH, 및 서열 번호 68의 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함하는, 공정.
C9.
실시 형태 C1 내지 실시 형태 C8 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 항원은 세포 표면 상에 존재하는, 공정.
C10.
실시 형태 C1 내지 실시 형태 C8 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 항원은 종양 세포 상에서 발현되는, 공정.
C11.
실시 형태 C10에 있어서, 상기 제2 항원은 종양-특이적 항원(TSA) 또는 종양-관련 항원(TAA)인, 공정.
C12.
실시 형태 C10에 있어서, 상기 제2 항원은 BCMA인, 공정.
C13.
실시 형태 C10에 있어서, 상기 제2 항원은 GPRC5d인, 공정.
C14.
실시 형태 C1 내지 실시 형태 C13 중 어느 하나에 있어서, 상기 제1 결합 도메인은 인간화되거나, 상기 제2 결합 도메인은 인간화되거나, 또는 상기 제1 결합 도메인 및 상기 제2 결합 도메인 둘 모두가 인간화되는, 공정.
C15.
실시 형태 C1 내지 실시 형태 C14 중 어느 하나에 있어서, 상기 다중특이성 항체는 IgG 항체인, 공정.
C16.
실시 형태 C15에 있어서, 상기 IgG 항체는 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4 항체인, 공정.
C17.
실시 형태 C16에 있어서, 상기 IgG 항체는 IgG1 항체인, 공정.
C18.
실시 형태 C1 내지 실시 형태 C17 중 어느 하나에 있어서, 상기 다중특이성 항체는 이중특이성 항체인, 공정.
C19.
실시 형태 C18에 있어서, 상기 이중특이성 항체는 바이포드-스캐폴드 입체구조인, 공정.
C20.
실시 형태 C19에 있어서, 상기 제1 결합 도메인은 Fab 영역이고, 상기 제2 결합 도메인은 scFv 영역인, 공정.
C21.
실시 형태 C18에 있어서, 상기 이중특이성 항체는 모리슨-스캐폴드 입체구조인, 공정.
C22.
실시 형태 C21에 있어서, 상기 제1 결합 도메인은 2개의 Fab 영역을 포함하고, 상기 제2 결합 도메인은 2개의 scFv 영역을 포함하는, 공정.
C23.
실시 형태 C10 내지 실시 형태 C22 중 어느 하나에 있어서, 상기 다중특이성 항체는 약 500 pM 미만의 IC50으로 시험관내에서 상기 종양 세포의 NK 세포 의존성 세포독성을 유도하는, 공정.
C24.
실시 형태 C10 내지 실시 형태 C22 중 어느 하나에 있어서, 상기 다중특이성 항체는 약 300 pM 미만의 IC50으로 시험관내에서 상기 종양 세포의 NK 세포 의존성 세포독성을 유도하는, 공정.
C25.
실시 형태 C10 내지 실시 형태 C22 중 어느 하나에 있어서, 상기 다중특이성 항체는 약 100 pM 미만의 IC50으로 시험관내에서 상기 종양 세포의 NK 세포 의존성 세포독성을 유도하는, 공정.
C26.
실시 형태 C10 내지 실시 형태 C22 중 어느 하나에 있어서, 상기 다중특이성 항체는 약 50 pM 미만의 IC50으로 시험관내에서 상기 종양 세포의 NK 세포 의존성 세포독성을 유도하는, 공정.
C27.
실시 형태 C10 내지 실시 형태 C22 중 어느 하나에 있어서, 상기 다중특이성 항체는 약 20 pM 미만의 IC50으로 시험관내에서 상기 종양 세포의 NK 세포 의존성 세포독성을 유도하는, 공정.
C28.
실시 형태 C10 내지 실시 형태 C22 중 어느 하나에 있어서, 상기 다중특이성 항체는 약 15 pM 미만의 IC50으로 시험관내에서 상기 종양 세포의 NK 세포 의존성 세포독성을 유도하는, 공정.
C29.
실시 형태 C10 내지 실시 형태 C22 중 어느 하나에 있어서, 상기 다중특이성 항체는 약 10 pM 미만의 IC50으로 시험관내에서 상기 종양 세포의 NK 세포 의존성 세포독성을 유도하는, 공정.
C30.
실시 형태 C23 내지 실시 형태 C29 중 어느 하나에 있어서, 상기 IC50은 NK 이펙터 세포와 상기 제2 항원을 발현하는 표적 세포의 혼합물을 사용하여 평가되는, 공정.
C31.
실시 형태 C30에 있어서, 상기 이펙터 세포 대 표적 세포 비는 약 0.01:1 내지 약 5:1인, 공정.
C32.
실시 형태 C30에 있어서, 상기 이펙터 세포 대 표적 세포 비는 약 0.1:1 내지 약 2:1인, 공정.
C33.
실시 형태 C30에 있어서, 상기 이펙터 세포 대 표적 세포 비는 약 1:1인, 공정.
한 세트의 실시 형태(실시 형태 세트 D)에서는, 하기가 제공된다:
D1.
NK 세포를 표적 세포로 유도하는 방법으로서,
상기 NK 세포를 다중특이성 항체와 접촉시켜 상기 NK 세포를 상기 표적 세포로 유도하는 단계를 포함하며, 상기 다중특이성 항체는 NK 세포 상의 제1 항원에 결합하는 제1 결합 도메인 및 표적 세포 상의 제2 항원에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함하는, 방법.
D2.
NK 세포를 활성화하는 방법으로서,
상기 NK를 다중특이성 항체와 접촉시키는 단계를 포함하며, 상기 다중특이성 항체는 상기 NK 세포 상의 제1 항원에 결합하는 제1 결합 도메인 및 표적 세포 상의 제2 항원에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함하는, 방법.
D3.
세포 표면 상에 제2 항원을 발현하는 상기 표적 세포의 성장 또는 증식을 억제하는 방법으로서,
상기 표적 세포를 다중특이성 항체와 접촉시키는 단계를 포함하며, 상기 다중특이성 항체는 NK 세포 상의 제1 항원에 결합하는 제1 결합 도메인 및 상기 제2 항원에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함하는, 방법.
D4.
대상체에서 제2 항원을 발현하는 표적 세포를 제거하거나, 또는 상기 제2 항원을 발현하는 표적 세포에 의해 전부 또는 부분적으로 야기되는 질병 또는 장애를 치료하기 위한 방법으로서,
다중특이성 항체의 유효량을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하며, 상기 다중특이성 항체는 NK 세포 상의 제1 항원에 결합하는 제1 결합 도메인 및 상기 제2 항원에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함하는, 방법.
D5.
실시 형태 D4에 있어서, 상기 대상체는 이를 필요로 하는 대상체인, 방법.
D6.
실시 형태 D4 또는 실시 형태 D5에 있어서, 상기 대상체는 인간인, 방법.
D7.
실시 형태 D4 내지 실시 형태 D6 중 어느 하나에 있어서, 상기 질병 또는 장애는 암인, 방법.
D8.
실시 형태 D7에 있어서, 상기 암은 혈액암인, 방법.
D9.
실시 형태 D7에 있어서, 상기 암은 고형 종양암인, 방법.
D10.
실시 형태 D1 내지 실시 형태 D9 중 어느 하나에 있어서, 상기 제1 항원은 NK 세포 활성화 수용체인, 방법.
D11.
실시 형태 D10에 있어서, 상기 제1 항원은 NKG2d인, 방법.
D12.
실시 형태 D11에 있어서, 상기 제1 결합 도메인은
(i)
(a)
서열 번호 4의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 5의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 6의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3;
(b)
서열 번호 10의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 11의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 12의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3;
(c)
서열 번호 16의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 17의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 18의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3;
(d)
서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 23의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 24의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3; 또는
(e)
서열 번호 28의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 29의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 30의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH);
및
(a)
서열 번호 7의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 8의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 9의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3;
(b)
서열 번호 13의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 14의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 15의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3;
(c)
서열 번호 19의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 20의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 21의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3;
(d)
서열 번호 25의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 26의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 27의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3;또는
(e) 서열 번호 31의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 32의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 33의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
또는
(ii)
(a)
서열 번호 36의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 37의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 38의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3;
(b)
서열 번호 42의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 43의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 44의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3;
(c)
서열 번호 48의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 49의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 50의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3;
(d)
서열 번호 54의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 55의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 56의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3;또는
(e)
서열 번호 60의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 61의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 62의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH);
및
(a)
서열 번호 39의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 40의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 41의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3;
(b)
서열 번호 45의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 46의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 47의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3;
(c)
서열 번호 51의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 52의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 53의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3;
(d)
서열 번호 57의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 58의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 59의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3;또는
(e)
서열 번호 63의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 64의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 65의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하는, 방법.
D13.
실시 형태 D12에 있어서, 상기 제1 결합 도메인은 서열 번호 2의 아미노산 서열을 갖는 VH, 및 서열 번호 3의 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함하거나, 또는 상기 제1 결합 도메인은 서열 번호 34의 아미노산 서열을 갖는 VH, 및 서열 번호 35의 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함하는, 방법.
D14.
실시 형태 D10에 있어서, 상기 제1 항원은 NKp46인, 방법.
D15.
실시 형태 D14에 있어서, 상기 제1 결합 도메인은
(i)
(a)
서열 번호 69의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 70의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 71의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3;
(b)
서열 번호 75의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 76의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 77의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3;
(c)
서열 번호 81의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 82의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 83의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3;
(d)
서열 번호 87의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 88의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 89의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3;또는
(e)
서열 번호 93의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 94의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 95의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH);
및
(ii)
(a)
서열 번호 72의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 73의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 74의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3;
(b)
서열 번호 78의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 79의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 80의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3;
(c)
서열 번호 84의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 85의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 86의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3;
(d)
서열 번호 90의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 91의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 92의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3; 또는
(e)
서열 번호 96의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 97의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 98의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하는, 방법.
D16.
실시 형태 D15에 있어서, 상기 제1 결합 도메인은 서열 번호 67의 아미노산 서열을 갖는 VH, 및 서열 번호 68의 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함하는, 방법.
D17.
실시 형태 D1 내지 실시 형태 D16 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 항원은 세포 표면 상에 존재하는, 방법.
D18.
실시 형태 D1 내지 실시 형태 D17 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 항원은 종양 세포 상에서 발현되는, 방법.
D19.
실시 형태 D18에 있어서, 상기 제2 항원은 종양-특이적 항원(TSA) 또는 종양-관련 항원(TAA)인, 방법.
D20.
실시 형태 D19에 있어서, 상기 제2 항원은 BCMA인, 방법.
D21.
실시 형태 D19에 있어서, 상기 제2 항원은 GPRC5d인, 방법.
D22.
실시 형태 D1 내지 실시 형태 D21 중 어느 하나에 있어서, 상기 제1 결합 도메인은 인간화되거나, 상기 제2 결합 도메인은 인간화되거나, 또는 상기 제1 결합 도메인 및 상기 제2 결합 도메인 둘 모두가 인간화되는, 방법.
D23.
실시 형태 D1 내지 실시 형태 D21 중 어느 하나에 있어서, 상기 다중특이성 항체는 IgG 항체인, 방법.
D24.
실시 형태 D23에 있어서, 상기 IgG 항체는 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4 항체인, 방법.
D25.
실시 형태 D24에 있어서, 상기 IgG 항체는 IgG1 항체인, 방법.
D26.
실시 형태 D1 내지 실시 형태 D25 중 어느 하나에 있어서, 상기 다중특이성 항체는 이중특이성 항체인, 방법.
D27.
실시 형태 D26에 있어서, 상기 이중특이성 항체는 바이포드-스캐폴드 입체구조인, 방법.
D28.
실시 형태 D27에 있어서, 상기 제1 결합 도메인은 Fab 영역이고, 상기 제2 결합 도메인은 scFv 영역인, 방법.
D29.
실시 형태 D26에 있어서, 상기 이중특이성 항체는 모리슨-스캐폴드 입체구조인, 방법.
D30.
실시 형태 D29에 있어서, 상기 제1 결합 도메인은 2개의 Fab 영역을 포함하고, 상기 제2 결합 도메인은 2개의 scFv 영역을 포함하는, 방법.
D31.
실시 형태 D18 내지 실시 형태 D30 중 어느 하나에 있어서, 상기 다중특이성 항체는 약 500 pM 미만의 IC50으로 시험관내에서 상기 종양 세포의 NK 세포 의존성 세포독성을 유도하는, 방법.
D32.
실시 형태 D18 내지 실시 형태 D30 중 어느 하나에 있어서, 상기 다중특이성 항체는 약 300 pM 미만의 IC50으로 시험관내에서 상기 종양 세포의 NK 세포 의존성 세포독성을 유도하는, 방법.
D33.
실시 형태 D18 내지 실시 형태 D30 중 어느 하나에 있어서, 상기 다중특이성 항체는 약 100 pM 미만의 IC50으로 시험관내에서 상기 종양 세포의 NK 세포 의존성 세포독성을 유도하는, 방법.
D34.
실시 형태 D18 내지 실시 형태 D30 중 어느 하나에 있어서, 상기 다중특이성 항체는 약 50 pM 미만의 IC50으로 시험관내에서 상기 종양 세포의 NK 세포 의존성 세포독성을 유도하는, 방법.
D35.
실시 형태 D18 내지 실시 형태 D30 중 어느 하나에 있어서, 상기 다중특이성 항체는 약 20 pM 미만의 IC50으로 시험관내에서 상기 종양 세포의 NK 세포 의존성 세포독성을 유도하는, 방법.
D36.
실시 형태 D18 내지 실시 형태 D30 중 어느 하나에 있어서, 상기 다중특이성 항체는 약 15 pM 미만의 IC50으로 시험관내에서 상기 종양 세포의 NK 세포 의존성 세포독성을 유도하는, 방법.
D37.
실시 형태 D18 내지 실시 형태 D30 중 어느 하나에 있어서, 상기 다중특이성 항체는 약 10 pM 미만의 IC50으로 시험관내에서 상기 종양 세포의 NK 세포 의존성 세포독성을 유도하는, 방법.
D38.
실시 형태 D31 내지 실시 형태 D37 중 어느 하나에 있어서, 상기 IC50은 NK 이펙터 세포와 상기 제2 항원을 발현하는 표적 세포의 혼합물을 사용하여 평가되는, 방법.
D39.
실시 형태 D38에 있어서, 상기 이펙터 세포 대 표적 세포 비는 약 0.01:1 내지 약 5:1인, 방법.
D40.
실시 형태 D38에 있어서, 상기 이펙터 세포 대 표적 세포 비는 약 0.1:1 내지 약 2:1인, 방법.
D41.
실시 형태 D38에 있어서, 상기 이펙터 세포 대 표적 세포 비는 약 1:1인, 방법.
한 세트의 실시 형태(실시 형태 세트 E)에서는, 하기가 제공된다:
E1.
자연 살해(NK) 세포를 인게이징 또는 활성화하기 위한 제1 수단 및 종양 세포를 결합하기 위한 제2 수단을 포함하는 분자로서, 상기 종양 세포에 대한 NK 세포 의존성 세포독성을 유도할 수 있는, 분자.
E2.
실시 형태 E1에 있어서, 상기 제1 수단은 상기 NK 세포 상에 발현되는 제1 항원에 결합하는 제1 결합 도메인을 포함하고, 상기 제2 수단은 상기 종양 세포 상에 발현되는 제2 항원에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함하는, 분자.
E3.
실시 형태 E2에 있어서, 상기 제1 항원은 NK 세포 활성화 수용체인, 분자.
E4.
실시 형태 E2에 있어서, 상기 제1 항원은 NKG2d인, 분자.
E5.
실시 형태 E2에 있어서, 상기 제1 항원은 NKp46인, 분자.
E6.
실시 형태 E2에 있어서, 상기 제2 항원은 종양-특이적 항원(TSA) 또는 종양-관련 항원(TAA)인, 분자.
E7.
실시 형태 E6에 있어서, 상기 제2 항원은 BCMA인, 분자.
E8.
실시 형태 E6에 있어서, 상기 제2 항원은 GPRC5d인, 분자.
E9.
하나 초과의 표적 분자에 결합하는 분자를 제조하기 위한 공정으로서,
NK 세포 상의 제1 항원에 결합할 수 있는 결합 도메인을 얻는 기능을 수행하기 위한 단계; 종양 세포 상의 제2 항원에 결합할 수 있는 결합 도메인을 얻는 기능을 수행하기 위한 단계; 및 상기 제1 항원 및 상기 제2 항원에 결합할 수 있는 분자를 제공하는 기능을 수행하기 위한 단계를 포함하는, 공정.
E10.
NK 세포를 표적 세포로 유도하는 방법으로서,
상기 NK 세포를 실시 형태 E1 내지 실시 형태 E8 중 어느 하나의 분자와 접촉시키는 단계를 포함하는, 방법.
E11.
NK 세포를 활성화하는 방법으로서,
상기 NK 세포를 실시 형태 E1 내지 실시 형태 E8 중 어느 하나의 분자와 접촉시키는 단계를 포함하는, 방법.
E12.
표적 세포의 성장 또는 증식을 억제하는 방법으로서,
상기 표적 세포를 실시 형태 E1 내지 실시 형태 E8 중 어느 하나의 분자와 접촉시키는 단계를 포함하는, 방법.
E13.
대상체에서 제2 항원을 발현하는 표적 세포를 제거하거나, 또는 상기 제2 항원을 발현하는 표적 세포에 의해 전부 또는 부분적으로 야기되는 질병 또는 장애를 치료하기 위한 방법으로서,
실시 형태 E1 내지 실시 형태 E8 중 어느 하나의 분자의 유효량을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
본 발명의 특정 실시 형태가 본 명세서에 기재되어 있다. 전술한 설명을 읽을 때, 개시된 실시 형태들의 변형이 당업자에게 명백해질 수 있으며, 숙련자는 적절한 경우에 그러한 변형을 사용할 수 있을 것으로 예상된다. 따라서, 본 발명은 본 명세서에 구체적으로 기재된 것과 다른 방식으로 실시될 수 있으며, 본 발명은 적용가능한 법에 의해 허용되는 한 본 명세서에 첨부된 청구범위에 언급된 발명 요지의 모든 변형 및 등가물을 포함하는 것으로 의도된다. 더욱이, 본 명세서에서 달리 지시되거나 문맥에 의해 달리 명확하게 모순되지 않는 한, 이의 모든 가능한 변형 내의 전술된 요소들의 임의의 조합이 본 발명에 의해 포함된다. 본 발명의 다수의 실시 형태가 기재되어 있다. 그럼에도 불구하고, 본 발명의 사상 및 범주로부터 벗어남이 없이 다양한 변형들이 이루어질 수 있다는 것은 이해될 것이다. 따라서, 실시예 섹션에서의 설명은 청구범위에 기재된 본 발명의 범주를 예시하지만 이를 제한하고자 하지 않는다.
실시예
실시예
1:
NK
세포에 결합하는 항-
NKG2d
항체의 생성
면역화에 의한 항-
NKG2D
항체(
NKGB125
)의 생성
인간 NKG2d에 대한 결합제를 얻기 위해, NKGW1(NKG2d80-216 세포외 도메인)을 사용한 면역화에 의해 항체 발굴을 수행하였다. OmniRat를 인간 NKGW1을 사용하여 면역화하고(표 1), 7주에 걸쳐 매주 면역화에 의해 부스팅하였으며, 이후에 안락사된 동물로부터 혈청을 수집하였다.
[표 1]
서혜부 및 슬와 림프절을 무균적으로 수집하고 풀링하였다. 모든 8 마리의 동물로부터의 하악 림프절을 또한 수집하였다. 2 마리의 동물로부터 RNA 튜브 내로 전혈을 수집하였다. 이들 2 마리의 동물의 대퇴골로부터의 골수를 또한 저온 멸균 1 x PBS 중으로 수집하였다(HYB:212, Jen Pitcher ELN: NKG2d-00011). 면역화에 대한 면역 반응을 결정하기 위해 혈청 역가를 측정하였다(도 1).
면역화된 래트로부터의 총 림프구를 2개의 군으로 조합하였으며, 생존가능 세포 카운트가 약 60%인 것으로 측정되었다(Hai Sheng, ELN: NKG2d-00023). 세포를 원심분리에 의해 수집하였다. 1:1 융합비를 위하여 FO 세포를 수집하였다. 간략하게 말하면, 비분비성(non-secreting) Balb/c 마우스 골수종 융합 파트너, FO 세포의 세포 뱅크를 Janssen's Cell Biology Services(CBS)를 통해 뱅킹된 ATCC(cat.# CRL-1646)로부터 입수하였다. 하나의 냉동 바이알을 제공받아서 DMEM + Glutamax(Invitrogen cat.# 10569 lot# 1676884)/10% FBS(Invitrogen 16140 lot 1671884)를 사용하여 배양물 내로 넣었다. 세포를 1:2 내지 1:10으로 수일마다 대수기 분할(log phase splitting) 상태로 유지하였다. 세포를 원심분리에 의해 수집하고, 1 x PBS 중에서 1회 세척하고, 계수하고, 생존가능한 세포가 96.4%인 5 x 107개의 FO 세포를 각각의 군 융합에 사용하였다. 림프구와 FO 세포를 함께 첨가하고, 1 x PBS 중에서 세척하고, 상층액을 폐기하고, 세포 펠릿을 플릭킹(flicking)에 의해 재현탁시켰다. 각각의 혼합된 세포 집단에, 108개의 세포당(1 mL 최대) 1 mL의 37℃ PEG 4000(2 g의 PEG(EMD cat.# 9727.2), 2 mL의 DMEM(Invitrogen cat.# 11995 lot# 1676884), 400 μL의 DMSO(Sigma D2650)를 첨가하였다. 세포 혼합물을 37℃ 수조(water bath) 중에서 1분 동안 와동시켰다. 37℃ DMEM + Glutamax(Invitrogen cat.# 11995 lot# 1676884)(40 mL)를 1분에 걸쳐 첨가하여 반응을 정지시켰다. 세포를 실온에서 5분 동안 휴지한 후 원심분리하여 세포 펠릿을 수집하였다. 세포를 MediumE(StemCell Technologies cat.# 15A60952 lot# 15F64268) + HAT(Gibco cat.# 21060-017) 중에 재현탁시키고, 이어서 200 μL/웰로 플레이팅하여, 그 결과 1.13 x 104개의 림프구/웰이 생성되었다. 세포를 37℃, 5% CO2에서 7일 동안 인큐베이션하였다. 이어서, 세포에 200 μL의 신선한 배지(StemCell Technologies cat.# 03805 lot# 15A60952)를 재공급하였다.
ELISA-기반 스크리닝 검정을 고정화된 인간 및 사이노몰거스 원숭이 NKG2d를 사용하여 상층액에 대해 실행하였다(Mike Miller, ELN: NKG2d Oncology-00001). 고정화된 항원 포맷을 위하여, 간략하게 말하면, 플레이트를 1 μg/mL에서 50 μg/웰의 NKG2d로 코팅하였다. 200 μL/웰의 0.4% BSA-PBS를 첨가하여 플레이트를 차단하고, 4℃에서 하룻밤 인큐베이션하고, 이어서 300 μL/웰의 1 x PBS + 0.02% Tween 20을 사용하여 3회 세척하였다. 이어서, 50 μL의 시험 상층액 및 배지 대조군을 웰에 첨가하고, 실온에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. AFP2016.017.JP로부터의 50 μL/웰의 혼합 혈청(차단 완충액 중에 1:2000 희석)을 양성 대조군으로서 첨가하였다. 백그라운드 대조군 웰에 FO 배양된 배지를 첨가하였다(50 μL/웰). 웰을 1 x PBS + 0.02% Tween 20 중에 3회 세척하고, 이어서 50 μL/웰의 염소 항-래트 IgG Fc-HRP(Jackson cat.# 112-036-071, 차단 완충액 중에 1:10K로 희석됨)를 첨가하고, 실온에서 30분 동안 인큐베이션하고, 1 x PBS + 0.02% Tween 20 중에 3회 세척하고, 50 μL/웰의 TMB 기질 완충액(Thermo cat.# 34022)을 첨가하고, 암실에서 약 10분 동안 인큐베이션하고, 이어서 25 μL/웰의 4N H2SO4를 모든 웰에 첨가하여 반응을 정지시켰다. Biotek(Gen5 소프트웨어)을 사용하여 450 nm에서 플레이트를 판독하였다. OD 값이 배지 백그라운드 대조군의 2x 평균보다 더 큰 히트(hit)를 인간 NKG2d에 대한 결합 확인(binding confirmation)인 것으로 선택하였다.
요약하면, 95개의 융합 플레이트로부터의 배양 상층액을 인간 NKG2d에 대한 항체 결합에 대해 스크리닝하였다. 상층액을 다음과 같은 2개의 ELISA 포맷으로 스크리닝하였다: 직접 코팅된 NKG2d 및 비오티닐화된 NKG2d. R 분석을 사용하여 1차 스크리닝 둘 모두에 대한 ELISA 데이터를 분석하고, 각각의 포맷에 대한 별개의 플레이트맵(platemap)을 생성하였다. 2개의 히트 플레이트맵 사이의 이중 히트(duplicate hit)를 제거하여, 결합 확인을 위한 259개의 히트로 이루어진 최종 컴파일링된 플레이트맵을 생성하였다. 2개의 목록 사이의 이중 히트를 제거하여 168개의 확인된 인간 NKG2d-특이적 히트의 최종 목록을 생성하였다(표 2). 히트를 사이노 NKG2d에 대한 교차-반응성 결합에 대해 특성화하였다(MPB 핸드-오프(hand-off) 후). 항원을 다음과 같은 2개의 포맷으로 스크리닝하였다: 직접 코팅된 항원 및 비오티닐화된 항원. 양성 결합을 2x 평균 백그라운드 대조군보다 큰 OD 값으로서 결정하였다. 168개의 히트 중 163개가 2개의 검정 포맷(직접 코팅된 항원 및/또는 비오티닐화된 항원) 중 적어도 하나에서 사이노 NKG2d 단백질에 대해 교차-반응성이었다.
[표 2]
인간 NKG2d로 면역화된 OmniRat로부터 유래된 NKGY1 융합 하이브리도마로부터 RNA를 단리하였다(Maria MacWilliams, ELN: Biologics Research Requests - 2016-00387). RNA를 역전사효소 반응으로 cDNA를 제조하기 위한 주형으로서 사용하고, 이어서 cDNA를 Ig 가변 영역의 PCR 증폭을 위한 주형으로서 사용하였다. 간략하게 말하면, 플레이트를 먼저 500 x g로 5분 동안 원심분리하였다. 배지를 털어내고(flicked off), 플레이트를 온화하게 청정 구역(clean area)과 접촉되게 배치하여 추가의 배지를 제거하였다. 이들 단계를 반복하여 웰로부터 잔류 배지를 제거하였다. 140 μL의 RLT + 143 mM 2-메르캅토에탄올을 각각의 웰에 첨가하였다. 플레이트를 벤치 표면 상에서 10초 동안 신속히 앞뒤로 이동시키고, 이어서 90도로 회전시키고, 다시 10초 동안 진탕하였다. RNeasy 96 프로토콜을 사용하여 Qiagen Biorobot 8000 상에서 RNA를 단리하였다(절차 정보에 대해서는, Metadata 탭에서 RNeasy 96 Biorobot 8000 Kit 참조). 자동화 절차는 RLT + BME 세포 용해 단계 직후에 시작되었다. 최종 용리 부피는 100 μL였다. BioMek 로봇은 8 μL의 각각의 RNA 샘플을 cDNA 합성을 위한 미세적정 플레이트에, 그리고 80 μL를 미세적정 플레이트에 전달하였다. 8 μL의 분취물을 cDNA 합성을 위한 주형으로서 즉시 사용하였다. 80 μL 플레이트들을 각각 밀봉 필름으로 덮고, 이어서 포일에 랩핑하였다. 이들 플레이트를 -80℃에서 저장한다. cDNA를 제조하기 위해, Invitrogen Superscript III First Strand Synthesis System(카탈로그 #18080-051)을 제조자의 설명서에 따라 사용하였다. 간략하게 말하면, 8 μL의 RNA를 20 μL 반응에 사용하였다. 유전자-특이적 프라이머들(vH, vK, 및 vL mRNA에 대해 각각 하나씩)은 항체 가변 영역을 표적화하였다. 항체 유전자 mRNA를 검출하고, 발현되는 항체 사슬 상에 존재하는 가변 영역의 서열을 결정하기 위해, PCR을 수행하였다. 각각의 하이브리도마에 대해, 2개의 별개의 반응을 실행하였는데, 즉, 하나는 IgG 중쇄에 대한 반응이고, 하나는 람다 경쇄에 대한 반응이었다. 반응에 대한 프라이머 서열은 RT-PCR 탭의 서브-탭에 열거되어 있다. 백금 Pfx 폴리머라제(Invitrogen 카탈로그 #11708-021)를 제조자로부터 개조된 절차에 사용하였다. 면역화된 동물은 람다 경쇄만을 생성하였으며, 이에 따라 카파 반응은 실행하지 않았다. 아가로스 겔 분석을 수행하여 PCR 산물의 존재를 확인하였다. 클론 NKGY1_045_F04를 인간 NKG2d 및 사이노 NKG2d 둘 모두에 대한 이의 특이적 결합에 기초하여 선택하였다.
요약하면, 128개의 하이브리도마 중 약 125개가 가시적인 vH 및 vL PCR 산물을 가졌다. 샘플을 생거 서열분석(Sanger sequencing)에 의해 서열분석하여 v-영역 서열을 얻었으며, 이어서 v-영역을 인간 IgG1 시그마 및 람다 불변 영역 내로 클로닝하였다. 따라서, 클론 NKGY1_045_F04는 mAb 식별자 NKGB125를 얻었다. NKGB125의 가변 영역 서열이 하기 표 3에 제공되어 있다. NKGB125의 CDR 서열은 표 4에 제공되어 있다. 항체 패널을 2 mL 규모로 발현시켰으며, NKGB125는 0.37 mg의 최종 항체를 제공하였고, 이는 항체 수율의 상위 약 6%에 속하였으며(Mike Diem, ELN: Biologics Research Requests - 2016-00739), 약 97% 단량체였다(Ed Swift, ELN: Biologics Research Requests - 2016-00796).
[표 3]
[표 4]
NKL
세포주에 대한 면역화에 의해 얻어진 항-
NKG2d
항체의 결합 활성에 대한 검정
항체들의 패널을 NKG2d를 발현하는 NKL 세포에 결합할 수 있는 이들의 능력에 대해 스크리닝하였다(Lamar Blackwell, ELN: NKG2d-00048). 간략하게 말하면, 세포를 세척하고, PBS 중에 약 1 x 106개의 세포/ml로 재현탁시키고, 여기에 1 μL의 녹색 생-사 염색제(L-23101 Thermo)를 첨가하고, 세포를 4℃에서 30분 동안 100 μL/웰로 플레이팅하였다. 세포를 200 μL의 염색 완충액 중에 재현탁시키고, 5분 동안 400 g로 회전시키고, 50 μL의 NKG2d 항체 또는 동종형 대조군 - 둘 모두 60, 6, 및 0.6 nM로 PBS 중에 희석시킴 - 중 어느 하나로 처리하였다. 플레이트를 4℃에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 이어서, 세포를 150 μL의 염색 완충액 중에 재현탁시키고, 5분 동안 400 g로 회전시키고, 플릭킹하고, 200 μL의 염색 완충액 중에 재현탁시키고, 5분 동안 400 g로 회전시키고, 염소 항 hu-Fc AF647(Jackson 109-606-098 lot 122473)을 2 μg/ml로 첨가하고, 4℃에서 30분 동안 50 μL/웰로 첨가하였다. 샘플을 HyperCyt® 오토샘플러(Autosampler)(Intellicyte에 의함) 상에서 획득하였다. ForeCyt™ 스크리닝 소프트웨어를 사용하여 데이터를 분석하였다. ForCyte로부터의 기하 평균 형광 강도(기하 평균) 값을 분석에 사용하였다(표 5). 항체는 NKG2d를 발현하지 않는 HEK293 세포에 대해서는 유의한 결합을 나타내지 않았다.
[표 5]
요약하면, 다음 10개의 항체는 NKL 세포에 대한 용량-의존적, NKG2d-특이적 결합을 나타내었다: NKGB129, NKGB130, NKGB138, NKGB125, NKGB221, NKGB206, NKGB200, NKGB202, NKGB203, 및 NKGB219(표 5).
파지 디스플레이 라이브러리를 스크리닝함으로써 항-
NKG2d
항체(NKGB83)의 생성
인간 NKG2d에 대한 결합제를 얻기 위하여, 파지 디스플레이 라이브러리를 스크리닝함으로써 항체 발굴을 수행하였다(Rama Reddy, ELN: Biologics Research Requests - 2016-00137). 사용된 라이브러리는 드 노보(De novo) Fab-pIX 파지 라이브러리(국제 특허 출원 공개 WO 2009/085462 A1호)였다.
드 노보 Fab-pIX 파지 라이브러리(국제 특허 출원 공개 WO 2009/085462 A1호):
V2.1 - 중쇄(1-69, 3-23, 5-51); 생식세포계열 경쇄(A27, B3, L6, 012)
V3.0 - 중쇄(1-69, 3-23, 5-51); 다양화된 경쇄(A27, B3, L6, 012)
중쇄에 의한 100 uL의 각각의 라이브러리, 예를 들어 {1-69 + (A27, B3, L6, 012)}를 풀링하여 6개의 라이브러리 풀을 생성한다.
V5.0 - 클로닝 중쇄(1-69, 3-23, 5-51); 생식세포계열 경쇄(A27, B3, L6, 012)
(ELN: 드 노보 2010 파지 라이브러리 SRI-005, 드 노보 2010 파지 라이브러리 SRI-006 및 드 노보 2010 파지 라이브러리 SRI-007)
각각의 Hc/Lc 쌍에 대해 각각의 H3-길이로부터 라이브러리를 10 uL 풀링하여, 패닝을 위한 110 μL의 라이브러리 파지를 생성하였다. 이어서, 각각의 HC 쌍을 풀링하여, 패닝을 위한 3개의 라이브러리를 생성하였다.
간략하게 말하면, 항체 라이브러리를 PIX 파지 표면 상에 디스플레이하고, 고정화된 인간 비오티닐화된-NKGW1에 대한 ELISA-기반 결합에 의해 콜로니를 선택하였다.
파지를 E. 콜라이에서 증폭시키고, 생거 방법을 사용하여 v-영역에 의해 서열분석하였다. 전체적으로, 45개의 특유의 항체 v-영역이 NKG2d에 결합할 수 있는 것으로 확인되었다. 이어서, v-영역을 침묵 인간 IgG1/카파 불변 영역 내로 클로닝하고, 2 mL 규모로 발현시켰다.
NKL
세포주에 대해 파지 디스플레이 라이브러리를 스크리닝함으로써 얻어진 항-
NKG2d
항체의 결합
활성에 대한 검정
항체를 실시예 1.2에서의 항체에 대한 것과 동일한 방식으로 NKL 세포에 결합할 수 있는 그들의 능력에 대해 시험하였다(Lamar Blackwell, ELN: NKG2d-00035)(표 6).
[표 6]
요약하면, 다음 11개의 항체는 NKL 세포에 대한 유의한 특이적 결합을 나타내었다: NKGB108, NKGB116, NKGB83, NKGB95, NKGB99, NKGB100, NKGB88, NKGB93, NKGB75, NKGB98, 및 NKGB102.
NKGB83의 가변 영역 서열이 하기 표 7에 제공되어 있다. NKGB83의 CDR 서열은 표 8에 제공되어 있다.
[표 7]
[표 8]
NKG2d에
대한 면역화 및 파지 디스플레이 라이브러리의 스크리닝에 의해 얻어진 항-
NKG2d
항체의 결합
활성에 대한 검정
이어서, 면역화(HYB:212) 및 파지 디스플레이(APD182)에 의해 얻어진 NKG2d 표적화 항체들을 단일 패널로 조합하고, 이어서 인간 NKG2d 및 사이노 NKG2d에 대한 결합 친화도에 대해 시험하였는데, 이는 표면 플라즈몬 공명에 의해 측정하였다(Joseph Bourghol, ELN: NKG2d-00074)(표 9).
[표 9]
요약하면, 다음 7개의 항체가 1 nM보다 더 엄격한 인간 NKG2d 및 사이노 NKG2d에 대한 친화도를 나타내었다: NKGB125, NKGB130, NKGB203, NKGB204, NKGB206, NKGB219, 및 NKGB221. NKGB83은 더 약한 친화도(KD = 약 8 nM)를 나타내었다.
실시예
2: 항-
NKG2d
항체의 기능 검정
면역화(HYB:212) 및 파지 디스플레이(APD182)에 의해 얻어진 NKG2d 표적화 항체들을 단일 패널로 조합하고, 이어서 IFNg 생성을 측정함으로써 NK 세포를 활성화할 수 있는 그들의 능력에 대해 시험하였다. 도 2는 활성화 수용체의 가교결합을 통한 NK 세포 효능작용에 대한 비드-기반 검정을 예시한다.
2000 μL의 비드를 자석을 사용하여 2 내지 5 mL의 PBS/2% FBS 중에 2회 세척하고, 이어서 2000 μL의 PBS 중에 재현탁시켰다. 이어서, 1000 μL의 세척된 비드를 Falcon 튜브 내에 분취하고, 1:10으로 희석시켰다. 총 부피는 10 mL였다. 이어서, 10 μL의 희석된 비드를 검정 플레이트 내로 분취하였다. 10 μL의 비드가 담긴 검정 플레이트 내로 100 μL의 항체를 첨가하였다. 생성된 복합체를 흔들어 주면서(rocking) 4℃에서 120분 동안 인큐베이션하였다. 비드를 자석을 사용하여 200 μL의 PBS 중에 3회 세척하고, 이어서 검정 배지 중에 재현탁시켰다. 검정 배지 중 10 μL의 비드를 96웰 내의 할당된 웰에 분취하고, 웰당 1 x 10e5개의 NK 세포를 첨가하였다. 웰당 총 부피는 200 μL였다. 플레이트를 37℃/5% CO2에서 16 내지 24시간 동안 인큐베이션하고, 이어서 3분 동안 1300 RPMI로 회전시켰다. IFNg 생성 측정을 위해 상층액을 수집하였다.
요약하면, IFNg 생성(표 10)의 유도에 기초하여, 다음 총 11개의 항체(OMT 래트로부터 4개, 파지 디스플레이로부터 7개)가 NK 세포를 활성화할 수 있는 능력을 나타내었다: NKGB125, NKGB130, NKGB208, NKGB202는 OMT 래트를 사용하여 발견되었고, NKGB116, NKGB83, NKGB89, NKGB90, NKGB99, NKGB63, NKGB65는 파지 디스플레이를 사용하여 발견되었다.
[표 10]
이들 중, NKGB125 및 NKGB83은 높은 수준의 활성화를 나타내었다. 일부 항체가 더 높은 유도를 나타내었지만, 이들 2개의 항체는 또한 더 높은 수준의 세포 결합도 나타내었는데, 이는, 이들이 생체내에서의 세포 결합에 더 적합할 수 있을 것임을 시사한다.
실시예
3:
NK
세포에 결합하는 항-
NKp46
항체의 생성
면역화에 의한 항-
NKp46
항체(
N46B105
)의 생성
인간 NKp46에 대한 결합제를 얻기 위해, 면역화에 의해 항체 발굴을 수행하였다. 면역화를 위한 인간 NKp46은 5T4였으며, R&D Systems(cat.# 1850-N)로부터 구입하였다.
OmniRat를 인간 NKp46(표 11, R&D Systems cat.# 1850-NK)을 사용하여 면역화하고, 8주에 걸쳐 매주 2회 면역화에 의해 부스팅하였으며, 이후에 안락사된 동물로부터 혈청을 수집하였다(Jen Pitcher, ELN: Oncology Target Discovery-00192).
[표 11]
림프절을 전술된 바와 같이 얻었다. 면역화에 대한 면역 반응을 결정하기 위해 혈청 역가를 측정하였다(도 3).
림프절 및 전혈을 수집하고, 전술된 바와 같이 하이브리도마를 생성하였다(Mike Miller, ELN: Oncology Target Discovery-00217). 간략하게 말하면, 림프구를 림프절로부터 추출하고, 하이브리도마 생성을 위해 FO 세포에 융합하였다. 100개의 융합 플레이트를 생성하였다. 평균 융합 효율은 150%였다. 림프구를 또한 전혈로부터 얻고, 하이브리도마 생성을 위해 FO 세포에 융합하였다. 10개의 융합 플레이트를 생성하였다. 평균 융합 효율은 78%였다. 110개의 융합 플레이트로부터의 배양 상층액을 NKp46에 대한 항체 결합에 대해 스크리닝하였다. R 분석을 사용하여 ELISA 데이터를 분석하고, 조합된 히트 목록에 기초하여 797개의 히트를 산출하였다(R 중위 폴리시 히트(median polish hit) 및 2x 백그라운드 둘 모두를 사용함). R 분석은 결합 확인을 위한 264개의 히트의 플레이트 맵을 생성하였다. 전체적으로, NKp46에 대한 결합 확인을 위해 1차 스크리닝으로부터의 264개의 히트를 재스크리닝하고, B7-H6/Fc에 대해 교차-스크리닝하였다. 258개의 히트(97%)가 면역원, NKp46에 대한 양성 결합제로서 확인되었다. 117개(258개 중에서; 45%)가, B7-H6/Fc의 Fc 부분에 대한 교차-반응성 없이, NKp46에 특이적으로 결합된 결합제인 것으로 확인되었다. 높은 수의 히트군 등급순위(HitGroup Ranking) "1로 인해, NKp46에 대한 결합 확인을 위해 1차 스크리닝으로부터의 추가 158개의 히트를 재스크리닝하고, B7-H6/Fc에 대해 교차-스크리닝하였다. 153개의 히트(97%)가 면역원, NKp46에 대한 양성 결합제로서 확인되었다. 91개(153개 중에서; 59%)가, GITR/Fc의 Fc 부분에 대한 교차-반응성 없이, NKp46에 특이적으로 결합된 결합제인 것으로 확인되었다. 총 208개가, B7-H6/Fc 또는 GITR/Fc 어느 것의 Fc 부분에도 교차-반응성 없이, NKp46에 대한 특이적 결합제인 것으로 확인되었다. 48웰 플레이트에 대한 히트의 증폭 후에, 169개의 컨플루언트 하이브리도마가 시각적 검사에 의해 확인되었으며, v-영역 클로닝 및 서열분석을 위해 핸드 오프하였다. 보안 동결물(security freeze)을 제조하였다. 저성장 하이브리도마를 초기 패널로부터 제거하고, 핸드-오프 전에 더 높은 컨플루언시를 달성하게 하였다. 추가 라운드의 결합 확인 후에, v-영역 클로닝의 두 번째 라운드에서 35개의 추가 히트를 제공하였다. 보안 동결물을 제조하였다. 요약하면, NKp46에 대한 총 204개의 특이적 결합제를 v-영역 서열분석을 위해 핸드 오프하였다(Req8788 및 Req8799). 총 168개의 항체 서열을 회수하고(Lauren Peters, ELN: Biologics Research Requests - 2015-00839), 2 mL 규모로 발현시켰다.
항체를 ELISA에 의해 재조합 NKp46에 결합할 수 있는 그들의 능력에 대해 시험하였다(Lamar Blackwell, ELN: ADIPOR-00126). 간략하게 말하면, 재조합 NKp46을 PBS 중에 2 μg/ml로 희석시키고, 4℃에서 하룻밤 50 μL/웰로 첨가하였다. 플레이트를 PBS로 세척하고, 50 μL의 차단 완충액(PBS 0.4% BSA)을 첨가하였다. 플레이트를 실온에서 30분 동안 진탕하였다. 플레이트를 PBS로 다시 세척하고, 50 μL의 15 ug/ml NKp46 항체를 웰에 첨가하였다. 플레이트를 실온에서 30분 동안 진탕하였다. 플레이트를 PBS로 세척하고, 50 μL의 염소 항 인간 카파 및 람다 제2 항체를 첨가하였다. 플레이트를 실온에서 30분 동안 진탕하였다. 플레이트를 PBS로 세척하고, 50 μL의 Sigma 기질을 첨가하고, 실온에서 2 내지 4분 동안 인큐베이션하였다. 이어서, 50 μL의 정지 용액을 첨가하였다. ELISA를 위해 450 nm에서 Envision 상에서 플레이트를 판독하였다. 총 28개의 항체가 유의한 결합을 나타내었다.
NKL
세포주에 대한 면역화에 의해 얻어진 항-
NKp46
항체의 결합 활성에 대한 검정
이어서, 전술된 바와 같이 NKL 세포에 결합할 수 있는 능력에 대해 항체를 평가하였다(Lamar Blackwell, ELN: NKG2d-00022). 전체적으로, 104개의 항체가 NKL 세포에 대한 유의한 결합을 나타내었다(표 12).
[표 12]
N46W3(NKp46 D1)에
대한 항-
NKp46
항체의 결합
활성에 대한 검정
항체를 재조합 전장 NKp46: N46W1 및 NKp46 D1: N46W3에 결합할 수 있는 그들의 능력에 대해 추가로 시험하였다(표 13)(Sanjib Dutta, ELN: NKG2d-00026). N46B105 및 N46B76은 각각 3.5 및 70 nM의 KD 값으로, NKp46의 도메인 1만을 함유하는 N46W3에 대한 특이적 결합을 나타내었다(표 13).
[표 13]
N46B105의 가변 영역 서열이 하기 표 14에 제공되어 있다. N46B105의 CDR 서열은 표 15에 제공되어 있다.
[표 14]
[표 15]
실시예
4:
이중특이성
항체의 생성
항-BCMA scFv 또는 항-GPRC5d scFv 중 어느 하나를 사용하여 bsAb를 생성하였다(표 16). 분자를 2 세트의 동일한 NK 세포-결합 Fab 영역 및 C-말단 종양-표적화 scFv 모이어티를 갖는 모리슨-스캐폴드 항체로서 포맷화하였다. 분자를 또한 종양-표적화 scFv 및 NK 세포-결합 Fab 영역을 포함하는 바이포드 스캐폴드 항체로서 형성하였다. 모든 분자는 정상 IgG1을 사용하여 생성하였다. 항체의 입체구조는 도 4에 나타나 있다.
[표 16]
항-BCMA 항체의 가변 영역 서열이 하기 표 17에 제공되어 있다. 항-BCMA 항체의 CDR 서열은 표 18에 제공되어 있다.
[표 17]
[표 18]
항-GPRC5d 항체의 가변 영역 서열이 하기 표 19에 제공되어 있다. 항-GPRC5d 항체의 CDR 서열은 표 20에 제공되어 있다.
[표 19]
[표 20]
예시적인 이중특이성 항체(도 4에서의 것들을 포함함)의 서열은 하기 표 21 및 표 22에 제공되어 있다.
[표 21]
[표 22]
실시예
5:
이중특이성
항체의 세포독성 특성의 평가
bsAb를 이들의 세포독성 특성에 대해 추가로 평가하였다. 간략하게 말하면, BCMA 및 GPRC5d를 내인적으로 발현하는 H929/GFP 세포를 표적 세포로서 사용하고, 인간 PBMC(Hemcare, PB009C-50, lot# 19054456)를 이펙터 세포로서 사용하였다. 표적 세포, 이펙터 세포 및 항체 치료제를 준비하고, 6.6 대 1의 이펙터 대 표적 비로 투명 바닥 플레이트(PerkinElmer #6057300) 내의 웰에 첨가하였다. 실시간 살아있는 세포 이미징 시스템 Incucyte(Sartarious)를 사용하여 매시간마다 세포를 이미징하고, 웰당 총 GFP 적분 신호를 정량화하였다. 평균 및 표준 편차를 반복 시험물에 대해 계산하였다. 시점 데이터를 치료제를 첨가하였을 때의 시간 0에 대해 정규화하였다. 종점(47시간) 용량 반응 곡선을 이들 분자에 대해 플롯팅하고, 4-파라미터 비선형 회귀를 수행하여 Graphpad Prism에 의해 IC50을 얻었다.
전체적으로, 모리슨-스캐폴드 bsAb는 약한 활성을 나타내었는데, 이는, 표적 세포에 대한 더 약한 결합에 기인하였을 가능성이 높다. 이 포맷에서는, NG2BB21 및 NG2GB26만이 NK 세포-기반 세포독성을 매개하였으며, 나노몰 범위의 IC50 값을 가졌다(도 5a 내지 도 5d, 표 23).
[표 23]
바이포드-스캐폴드 분자는, 1가에 의해 특성화되긴 하였지만, 더 강력한 활성을 나타내었다. 이 포맷에서, 모든 BCMA-기반 bsAb는 활성을 가졌으며, NG2BB10(NKGB125-기반), NG2BB9(NKGB83-기반), 및 N46BB4(N46B105-기반)는 모두 정상 IgG1 불변 영역을 특징으로 하였지만 상이한 NK 세포 인게이저를 특징으로 하였다. 이들 분자는 모두 거의 동일한 활성을 가졌으며, 이때 IC50 값은 약 10 pM이었다. 이러한 경향은 마찬가지로 GPRC5d-표적화 바이포드 bsAb에 대해서도 그러하였으며, 여기서 불변 영역의 동일성은 NK 세포 인게이저의 동일성보다 IC50에 더 현저한 영향을 미쳤다.
이러한 결과는 다음을 예시한다: 첫째, 3개의 NK 세포 인게이저: NKGB125, NKGB83, 및 N46B105가 모두 유사한 활성으로 NK 세포 재유도를 매개하기에 적격하였다. 둘째, 바이포드-기반 입체구조는 모리슨-스캐폴드 bsAb 입체구조와 대비하여 NK 세포 재유도에 더 적합하였다.
실시예
6:
이중특이성
NK
인게이저는
NK
수용체 및
Fc
수용체 둘 모두를 활성화함을 통해
기능함으로써
월등한 세포독성
특성을 갖는다
이중특이성 NK 인게이저의 세포독성 특성을 추가로 조사하기 위해, 하나의 NKp46 결합제, N46B105를 규칙(regular) 세포 및 비푸코실화된 세포에서 제조된 침묵 Fc 또는 야생형 Fc 중 어느 하나를 갖는 BCMA 결합제와 쌍을 이루었다(도 6). NK 세포 또는 PMBC를 직접 사용하거나 또는 면역 억제 종양 환경을 모방할 것으로 예상된 조건에서, 예컨대 TGFβ의 존재 하에서 또는 저산소(hypoxia) 하에서 이들 분자에 대해 ADCC를 실행하였다.
TGFβ 연구에서는, PBMC를 회생시키고 하룻밤 정치시켰다. PBMC로부터 NK 세포 단리(CD16+/CD56+) 후에, 이들을 상이한 농도의 TGFβ로 처리하거나, 또는 TGFβ 없이 배지 중에서 72시간 동안 인큐베이션하고, TGFβ-처리된 NK 세포 또는 아무 것도 처리되지 않은 NK 세포를 첨가한 지 4시간 후에, DELFIA-EuTDA 시간-분해 형광 세포독성 키트(PerkinElmer)를 사용하여 ADCC 검정을 수행하였다.
도 7은 BCMA-내인성 발현 H929 세포 상에서의 NK 세포에 의한 ADCC 활성을 나타낸다. TGFβ에 의한 이펙터 세포의 사전-컨디셔닝 없이, 이중특이성 NK 인게이저 N46BB10.AFU는 상응하는 항체 BCMB1106을 능가하였다. NKp46 아암을 나타내는 AFU는 Fc 수용체, 특히 CD16에 의해 유도된 효과에 추가하여, NK 세포에 의한 추가의 세포독성 효과를 가져온다. 이펙터 세포가 TGFβ에서 사전-컨디셔닝된 후에, 세포독성 효과는 TGFβ의 면역-억제 특성으로 인해 감소하였다. 그러나, 이중특이성 NK 인게이저는 NKp46 결합제가 결여된 상응하는 항체보다 여전히 더 강력하였는데, 이는, NKp46을 갖는 것의 이러한 이익이 면역-억제 환경으로 변환된다는 것을 시사한다.
저산소 연구에서는, PBMC(Hemacare PB009C-3 lot 19055785)를 해동시키고, 반응시키고, 37℃, 5% CO2, 2% O2, 3.0 PSI의 조건 하에서 4일 동안 Avatar Hipoxia 챔버(Xcellbio) 내에서 인큐베이션하였다. 이어서, MM1R/GFP 세포, 이펙터 세포 및 항체 치료제를 준비하고, 10 대 1의 PBMC 대 표적 비로 투명 바닥 플레이트(PerkinElmer #6057300) 내의 웰에 첨가하였다. 실시간 살아있는 세포 이미징 시스템 Incucyte(Sartarious)를 사용하여 매시간마다 세포를 이미징하고, 웰당 총 GFP 적분 신호를 정량화하였다. 평균 및 표준 편차를 반복 시험물에 대해 계산하였다. 시점 데이터를 치료제를 첨가하였을 때의 시간 0에 대해 정규화하였다. 종점(48시간) 용량 반응 곡선을 이들 분자에 대해 플롯팅하고, 4-파라미터 비선형 회귀를 수행하여 Graphpad Prism에 의해 IC50을 얻었다.
저산소 세포독성 동태 및 종점 용량-반응이 도 8a, 도 8b, 및 도 8c에 나타나 있다. ADCC 활성이 항체 및 이펙터 세포가 첨가된 후 수시간 이내에 관찰되었으며, 이중특이성 NK 인게이저 N46BB10.AFU 및 상응하는 항체 BCMB1106.AFU 둘 모두에 대해 수일 후에 플레이팅하였다(도 8a 및 도 8b). IgG1 침묵 돌연변이를 갖는 NK 인게이저 변이체(N46BB14)은 단독으로, 약 1.191 nM의 EC50으로 약 47% 세포독성을 유도할 수 있었는데(도 8c), 이는 NKp46 재유도 단독의 세포독성 효과의 기여를 나타낸다. 활성 야생형 Fc(N46BB10)를 통해 또는 비푸코실화된 Fc(N46BB10.AFU)를 통해 Fc 수용체-유도 세포독성을 추가함으로써 최대 % 용해를 각각 대략 68% 및 72%로 증가시킨 반면, EC50 값은 각각 약 0.07 및 0.006 nM로 감소시켰다. NKp46뿐만 아니라 Fc 수용체 둘 모두를 통해 기능하는 비푸코실화된 이중특이성 NK 인게이저(N46BB10.AFU)를 Fc 수용체만을 통해 기능하는 상응하는 항체(BCMB1106.AFU)와 비교한 결과, % 최대 용해뿐만 아니라 효력 둘 모두가 증가되었는데, 이는 치료제로서의 이중특이성 및 이중기능성 NK 인게이저의 효능에 있어서의 잠재적인 우월성을 입증한다.
N46BB10의 아미노산 서열 정보는 하기에서와 같이 표 24에 열거되어 있다.
[표 24]
N46BB10의 핵산 서열 정보는 하기에서와 같이 표 25에 열거되어 있다.
[표 25]
N46BB14의 아미노산 서열 정보는 하기에서와 같이 표 26에 열거되어 있다.
[표 26]
N46BB14의 핵산 서열 정보는 하기에서와 같이 표 27에 열거되어 있다.
[표 27]
BCMB1106의 아미노산 서열 정보는 하기에서와 같이 표 28에 열거되어 있다.
[표 28]
BCMB1106의 핵산 서열 정보는 하기에서와 같이 표 29에 열거되어 있다.
[표 29]
실시예
7: 항-
NK
세포독성의 부재
이중특이성 NK 인게이저(N46BB10.AFU)가 ADCC 기전에 의해 활성이고 상응하는 항체(BCMB1106.AFU)보다 월등하다(도 7 및 도 8a 내지 도 8c)는 조사결과는 또한 이중특이성 NK 인게이저가 동족살해 방식으로 NK 세포에 대해 해로운 효과를 발휘하지 않는다는 것을 입증하였다.
NKp46 결합제를 함유하는 이중특이성 항체가 CDC 기전에 의해 항-NK 세포독성을 초래할 것인지의 여부를 평가하기 위해, 정제된 NK 세포를 12시간 동안 40% 인간 혈청의 존재 하에서 이중특이성 항체와 함께 인큐베이션하였다. 이어서, 제조자에 의해 지시된 바와 같이 Cell-Titerglo(Promega, 미국 위스콘신주 매디슨 소재)를 사용하여 NK 세포의 생존력을 측정하였다. 항-CD38 항체(이는 CDC에 의한 항-NK 세포독성을 야기하는 것으로 알려져 있음) 및 비특이적 동종형 대조군을 양성 대조군 및 음성 대조군으로서 사용하였다. 도 9에 나타낸 바와 같이, 항-CD38 항체는 NK 세포의 CDC 매개 살해를 보여준다. 대조적으로, WT IgG1 골격(N46BB10.AFU) 또는 심지어 CDC-향상 돌연변이 세트(K248E/T437R, N46BB12) 중 어느 하나를 갖는 NKp46 x BCMA 이중특이성 항체는 NK 세포의 CDC 살해를 야기하지 않는다. 이들 데이터는 시험된 이중특이성 포맷에서의 NKp46 결합제의 도입이 항-NK 세포독성을 초래하지 않음을 나타낸다.
실시예
8: 치료적 잠재력
본 발명에서는, 종양 표적화 bsAb 내에의 항-NKp46 결합제의 도입이 NKp46-발현 면역 이펙터 세포에 의해 종양 표적에 대한 세포독성 활성을 증강시킬 수 있는 것으로 밝혀졌다. 최근 연구는 NKp46이 오로지 NK 세포 상에만 존재하지 않고, 감마 델타 T 세포를 포함한 T 세포 하위세트(문헌[Mikulak et al, JCI Insight. 2019])뿐만 아니라, 선천성 림프계 세포의 점막 집단(문헌[Narni-Maninelli, et al, PNAS 2011]) 상에서도 또한 발현된다는 것을 알아내기 시작하였기 때문에, 이들 NKp46-함유 분자는 NK 세포 이외의 다른 NKp46-발현 면역 세포 유형에 의한 종양 표적 살해를 유도할 잠재력을 갖는다. 다수의 면역 이펙터 세포에 의한 그러한 작용 기전은 본 발명을 단일클론 및 이중특이성 치료용 항체에 의한 다른 이펙터 기능과 구별할 수 있다.
SEQUENCE LISTING
<110> JANSSEN BIOTECH, INC.
<120> MATERIALS AND METHODS FOR IMMUNE EFFECTOR CELLS REDIRECTION
<130> 14620-648-228
<140>
<141>
<150> US 63/168,628
<151> 2021-03-31
<150> US 63/168,621
<151> 2021-03-31
<150> US 63/168,618
<151> 2021-03-31
<150> US 63/168,611
<151> 2021-03-31
<150> US 63/168,605
<151> 2021-03-31
<160> 212
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 143
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide
<400> 1
His His His His His His Asn Ser Leu Phe Asn Gln Glu Val Gln Ile
1 5 10 15
Pro Leu Thr Glu Ser Tyr Cys Gly Pro Cys Pro Lys Asn Trp Ile Cys
20 25 30
Tyr Lys Asn Asn Cys Tyr Gln Phe Phe Asp Glu Ser Lys Asn Trp Tyr
35 40 45
Glu Ser Gln Ala Ser Cys Met Ser Gln Asn Ala Ser Leu Leu Lys Val
50 55 60
Tyr Ser Lys Glu Asp Gln Asp Leu Leu Lys Leu Val Lys Ser Tyr His
65 70 75 80
Trp Met Gly Leu Val His Ile Pro Thr Asn Gly Ser Trp Gln Trp Glu
85 90 95
Asp Gly Ser Ile Leu Ser Pro Asn Leu Leu Thr Ile Ile Glu Met Gln
100 105 110
Lys Gly Asp Cys Ala Leu Tyr Ala Ser Ser Phe Lys Gly Tyr Ile Glu
115 120 125
Asn Cys Ser Thr Pro Asn Thr Tyr Ile Cys Met Gln Arg Thr Val
130 135 140
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<211> 121
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ile Tyr
20 25 30
Ala Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ile Ile Ser Gly Ser Gly Asp His Thr Phe Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Arg Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Glu Gly Lys Trp Val Gln Leu Ser His Phe Ala Asn Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 3
<211> 108
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide
<400> 3
Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln
1 5 10 15
Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Gly Asn Asn Ile Gly Ser Lys Ser Val
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Ala Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Val Tyr
35 40 45
Asp Asp Ser Asp Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Ala Gly
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp Gly Arg Ser Asp His
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Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
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Gly Phe Thr Phe Ser Ile Tyr Ala Met Thr
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<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 5
Ile Ile Ser Gly Ser Gly Asp His Thr Phe
1 5 10
<210> 6
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 6
Glu Gly Lys Trp Val Gln Leu Ser His Phe Ala Asn
1 5 10
<210> 7
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 7
Gly Gly Asn Asn Ile Gly Ser Lys Ser Val His
1 5 10
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<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 8
Asp Asp Ser Asp Arg Pro Ser
1 5
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 9
Gln Val Trp Asp Gly Arg Ser Asp His Val Val
1 5 10
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
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Ile Tyr Ala Met Thr
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 11
Ile Ile Ser Gly Ser Gly Asp His Thr Phe Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 12
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 12
Glu Gly Lys Trp Val Gln Leu Ser His Phe Ala Asn
1 5 10
<210> 13
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 13
Gly Gly Asn Asn Ile Gly Ser Lys Ser Val His
1 5 10
<210> 14
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 14
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<210> 15
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 15
Gln Val Trp Asp Gly Arg Ser Asp His Val Val
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 16
Gly Phe Thr Phe Ser Ile Tyr
1 5
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<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 17
Ser Gly Ser Gly Asp His
1 5
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<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 18
Glu Gly Lys Trp Val Gln Leu Ser His Phe Ala
1 5 10
<210> 19
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 19
Asn Asn Ile Gly Ser Lys Ser
1 5
<210> 20
<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 20
Asp Asp Ser
1
<210> 21
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 21
Trp Asp Gly Arg Ser Asp His Val
1 5
<210> 22
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 22
Ser Ile Tyr Ala Met Thr
1 5
<210> 23
<211> 13
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 23
Trp Val Ser Ile Ile Ser Gly Ser Gly Asp His Thr Phe
1 5 10
<210> 24
<211> 13
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 24
Ala Lys Glu Gly Lys Trp Val Gln Leu Ser His Phe Ala
1 5 10
<210> 25
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 25
Ser Lys Ser Val His Trp Tyr
1 5
<210> 26
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 26
Leu Val Val Tyr Asp Asp Ser Asp Arg Pro
1 5 10
<210> 27
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 27
Gln Val Trp Asp Gly Arg Ser Asp His Val
1 5 10
<210> 28
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 28
Gly Phe Thr Phe Ser Ile Tyr Ala
1 5
<210> 29
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 29
Ile Ser Gly Ser Gly Asp His Thr
1 5
<210> 30
<211> 14
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 30
Ala Lys Glu Gly Lys Trp Val Gln Leu Ser His Phe Ala Asn
1 5 10
<210> 31
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 31
Asn Ile Gly Ser Lys Ser
1 5
<210> 32
<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 32
Asp Asp Ser
1
<210> 33
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 33
Gln Val Trp Asp Gly Arg Ser Asp His Val Val
1 5 10
<210> 34
<211> 123
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide
<400> 34
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Tyr Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe
50 55 60
Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Val Ser Ala Ser Gly Asn Tyr Arg Ala Leu Asp Tyr
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 35
<211> 113
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide
<400> 35
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser
20 25 30
Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Tyr Ser Thr Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 36
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 36
Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr Trp Ile Gly
1 5 10
<210> 37
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 37
Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Tyr Thr Arg
1 5 10
<210> 38
<211> 14
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 38
Gly Gly Val Ser Ala Ser Gly Asn Tyr Arg Ala Leu Asp Tyr
1 5 10
<210> 39
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 39
Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu
1 5 10 15
Ala
<210> 40
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 40
Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser
1 5
<210> 41
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 41
Gln Gln Tyr Tyr Ser Thr Pro Leu Thr
1 5
<210> 42
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 42
Ser Tyr Trp Ile Gly
1 5
<210> 43
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 43
Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Tyr Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 44
<211> 14
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 44
Gly Gly Val Ser Ala Ser Gly Asn Tyr Arg Ala Leu Asp Tyr
1 5 10
<210> 45
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 45
Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu
1 5 10 15
Ala
<210> 46
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 46
Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser
1 5
<210> 47
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 47
Gln Gln Tyr Tyr Ser Thr Pro Leu Thr
1 5
<210> 48
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 48
Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr
1 5
<210> 49
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 49
Tyr Pro Gly Asp Ser Tyr
1 5
<210> 50
<211> 13
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 50
Gly Gly Val Ser Ala Ser Gly Asn Tyr Arg Ala Leu Asp
1 5 10
<210> 51
<211> 13
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 51
Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser Ser Asn Asn Lys Asn Tyr
1 5 10
<210> 52
<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 52
Trp Ala Ser
1
<210> 53
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 53
Tyr Tyr Ser Thr Pro Leu
1 5
<210> 54
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 54
Thr Ser Tyr Trp Ile Gly
1 5
<210> 55
<211> 13
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 55
Trp Met Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Tyr Thr Arg
1 5 10
<210> 56
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 56
Ala Arg Gly Gly Val Ser Ala Ser Gly Asn Tyr Arg Ala Leu Asp
1 5 10 15
<210> 57
<211> 13
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 57
Leu Tyr Ser Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr
1 5 10
<210> 58
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 58
Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu
1 5 10
<210> 59
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 59
Gln Gln Tyr Tyr Ser Thr Pro Leu
1 5
<210> 60
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 60
Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr Trp
1 5
<210> 61
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 61
Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Tyr Thr
1 5
<210> 62
<211> 16
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 62
Ala Arg Gly Gly Val Ser Ala Ser Gly Asn Tyr Arg Ala Leu Asp Tyr
1 5 10 15
<210> 63
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 63
Gln Ser Val Leu Tyr Ser Ser Asn Asn Lys Asn Tyr
1 5 10
<210> 64
<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 64
Trp Ala Ser
1
<210> 65
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 65
Gln Gln Tyr Tyr Ser Thr Pro Leu Thr
1 5
<210> 66
<211> 467
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide
<400> 66
Gln Gln Gln Thr Leu Pro Lys Pro Phe Ile Trp Ala Glu Pro His Phe
1 5 10 15
Met Val Pro Lys Glu Lys Gln Val Thr Ile Cys Cys Gln Gly Asn Tyr
20 25 30
Gly Ala Val Glu Tyr Gln Leu His Phe Glu Gly Ser Leu Phe Ala Val
35 40 45
Asp Arg Pro Lys Pro Pro Glu Arg Ile Asn Lys Val Lys Phe Tyr Ile
50 55 60
Pro Asp Met Asn Ser Arg Met Ala Gly Gln Tyr Ser Cys Ile Tyr Arg
65 70 75 80
Val Gly Glu Leu Trp Ser Glu Pro Ser Asn Leu Leu Asp Leu Val Val
85 90 95
Thr Glu Met Tyr Asp Thr Pro Thr Leu Ser Val His Pro Gly Pro Glu
100 105 110
Val Ile Ser Gly Glu Lys Val Thr Phe Tyr Cys Arg Leu Asp Thr Ala
115 120 125
Thr Ser Met Phe Leu Leu Leu Lys Glu Gly Arg Ser Ser His Val Gln
130 135 140
Arg Gly Tyr Gly Lys Val Gln Ala Glu Phe Pro Leu Gly Pro Val Thr
145 150 155 160
Thr Ala His Arg Gly Thr Tyr Arg Cys Phe Gly Ser Tyr Asn Asn His
165 170 175
Ala Trp Ser Phe Pro Ser Glu Pro Val Lys Leu Leu Val Thr Gly Asp
180 185 190
Ile Glu Asn Thr Ser Leu Ala Pro Glu Asp Pro Thr Phe Pro Asp Thr
195 200 205
Trp Gly Thr Tyr Leu Leu Thr Thr Glu Thr Gly Leu Gln Lys Asp His
210 215 220
Ala Leu Trp Asp His Thr Ala Gln Asn Ile Glu Gly Arg Met Asp Pro
225 230 235 240
Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu
245 250 255
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
260 265 270
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
275 280 285
Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
290 295 300
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser
305 310 315 320
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
325 330 335
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
340 345 350
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
355 360 365
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
370 375 380
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
385 390 395 400
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
405 410 415
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr
420 425 430
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
435 440 445
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Leu Ser Leu Ser
450 455 460
Pro Gly Lys
465
<210> 67
<211> 121
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide
<400> 67
Gln Leu Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Pro Val Arg Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Asp Ser Ile Arg Ser Ser
20 25 30
Ser Tyr Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Asp
35 40 45
Trp Ile Gly Ser Ile Tyr Tyr Thr Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Met Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
65 70 75 80
Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Ser Pro Gly Tyr Ser Ser Gly Trp Ser Ile Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 68
<211> 108
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide
<400> 68
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Val Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Leu Asn Ser Tyr Pro Arg
85 90 95
Met Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 69
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 69
Gly Asp Ser Ile Arg Ser Ser Ser Tyr Tyr Trp Gly
1 5 10
<210> 70
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 70
Ser Ile Tyr Tyr Thr Gly Ser Thr Tyr
1 5
<210> 71
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 71
Pro Gly Tyr Ser Ser Gly Trp Ser Ile Asp Tyr
1 5 10
<210> 72
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 72
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 73
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 73
Val Ala Ser Thr Leu Gln Ser
1 5
<210> 74
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 74
Gln Gln Leu Asn Ser Tyr Pro Arg Met Thr
1 5 10
<210> 75
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 75
Ser Ser Ser Tyr Tyr Trp Gly
1 5
<210> 76
<211> 16
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 76
Ser Ile Tyr Tyr Thr Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Met Ser
1 5 10 15
<210> 77
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 77
Pro Gly Tyr Ser Ser Gly Trp Ser Ile Asp Tyr
1 5 10
<210> 78
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 78
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 79
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 79
Val Ala Ser Thr Leu Gln Ser
1 5
<210> 80
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 80
Gln Gln Leu Asn Ser Tyr Pro Arg Met Thr
1 5 10
<210> 81
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 81
Gly Asp Ser Ile Arg Ser Ser Ser Tyr
1 5
<210> 82
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 82
Tyr Tyr Thr Gly Ser
1 5
<210> 83
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 83
Pro Gly Tyr Ser Ser Gly Trp Ser Ile Asp
1 5 10
<210> 84
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 84
Ser Gln Gly Ile Ser Ser Tyr
1 5
<210> 85
<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 85
Val Ala Ser
1
<210> 86
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 86
Leu Asn Ser Tyr Pro Arg Met
1 5
<210> 87
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 87
Arg Ser Ser Ser Tyr Tyr Trp Gly
1 5
<210> 88
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 88
Trp Ile Gly Ser Ile Tyr Tyr Thr Gly Ser Thr Tyr
1 5 10
<210> 89
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 89
Ala Ser Pro Gly Tyr Ser Ser Gly Trp Ser Ile Asp
1 5 10
<210> 90
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 90
Ser Ser Tyr Leu Ala Trp Tyr
1 5
<210> 91
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 91
Leu Leu Ile Tyr Val Ala Ser Thr Leu Gln
1 5 10
<210> 92
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 92
Gln Gln Leu Asn Ser Tyr Pro Arg Met
1 5
<210> 93
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 93
Gly Asp Ser Ile Arg Ser Ser Ser Tyr Tyr
1 5 10
<210> 94
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 94
Ile Tyr Tyr Thr Gly Ser Thr
1 5
<210> 95
<211> 13
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 95
Ala Ser Pro Gly Tyr Ser Ser Gly Trp Ser Ile Asp Tyr
1 5 10
<210> 96
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 96
Gln Gly Ile Ser Ser Tyr
1 5
<210> 97
<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 97
Val Ala Ser
1
<210> 98
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 98
Gln Gln Leu Asn Ser Tyr Pro Arg Met Thr
1 5 10
<210> 99
<211> 123
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide
<400> 99
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asp Glu Gly Tyr Ser Ser Gly His Tyr Tyr Gly Met Asp Val
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 100
<211> 109
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide
<400> 100
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Ser
20 25 30
Phe Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Gly Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Tyr Gly Ser Ser Pro
85 90 95
Met Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 101
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 101
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Ser
1 5 10
<210> 102
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 102
Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr
1 5 10
<210> 103
<211> 14
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 103
Asp Glu Gly Tyr Ser Ser Gly His Tyr Tyr Gly Met Asp Val
1 5 10
<210> 104
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 104
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Ser Phe Leu Thr
1 5 10
<210> 105
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 105
Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr
1 5
<210> 106
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 106
Gln His Tyr Gly Ser Ser Pro Met Tyr Thr
1 5 10
<210> 107
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 107
Ser Tyr Ala Met Ser
1 5
<210> 108
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 108
Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 109
<211> 14
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 109
Asp Glu Gly Tyr Ser Ser Gly His Tyr Tyr Gly Met Asp Val
1 5 10
<210> 110
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 110
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Ser Phe Leu Thr
1 5 10
<210> 111
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 111
Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr
1 5
<210> 112
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 112
Gln His Tyr Gly Ser Ser Pro Met Tyr Thr
1 5 10
<210> 113
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 113
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
1 5
<210> 114
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 114
Ser Gly Ser Gly Gly Ser
1 5
<210> 115
<211> 13
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 115
Asp Glu Gly Tyr Ser Ser Gly His Tyr Tyr Gly Met Asp
1 5 10
<210> 116
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 116
Ser Gln Ser Ile Ser Ser Ser Phe
1 5
<210> 117
<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 117
Gly Ala Ser
1
<210> 118
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 118
Tyr Gly Ser Ser Pro Met Tyr
1 5
<210> 119
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 119
Ser Ser Tyr Ala Met Ser
1 5
<210> 120
<211> 13
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 120
Trp Val Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr
1 5 10
<210> 121
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 121
Ala Lys Asp Glu Gly Tyr Ser Ser Gly His Tyr Tyr Gly Met Asp
1 5 10 15
<210> 122
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 122
Ser Ser Ser Phe Leu Thr Trp Tyr
1 5
<210> 123
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 123
Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala
1 5 10
<210> 124
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 124
Gln His Tyr Gly Ser Ser Pro Met Tyr
1 5
<210> 125
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 125
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala
1 5
<210> 126
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 126
Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr
1 5
<210> 127
<211> 16
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 127
Ala Lys Asp Glu Gly Tyr Ser Ser Gly His Tyr Tyr Gly Met Asp Val
1 5 10 15
<210> 128
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 128
Gln Ser Ile Ser Ser Ser Phe
1 5
<210> 129
<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 129
Gly Ala Ser
1
<210> 130
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 130
Gln His Tyr Gly Ser Ser Pro Met Tyr Thr
1 5 10
<210> 131
<211> 119
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide
<400> 131
Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Val Leu Val Lys Pro Thr Glu
1 5 10 15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Asn Ile
20 25 30
Arg Met Ser Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu
35 40 45
Trp Leu Ala His Ile Phe Ser Asn Asp Glu Lys Ser Tyr Ser Thr Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Ser Gln Val
65 70 75 80
Val Leu Thr Leu Thr Asn Val Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg Met Arg Leu Pro Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 132
<211> 112
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide
<400> 132
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Ser Pro Val Thr Leu Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30
Asp Gly Asn Thr Tyr Leu Ser Trp Leu Gln Gln Arg Pro Gly Gln Pro
35 40 45
Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Ile Ser Asn Arg Phe Phe Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ala Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala
85 90 95
Thr Gln Phe Pro His Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 133
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 133
Gly Phe Ser Leu Thr Asn Ile Arg Met Ser Val Ser
1 5 10
<210> 134
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 134
His Ile Phe Ser Asn Asp Glu Lys Ser
1 5
<210> 135
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 135
Met Arg Leu Pro Tyr Gly Met Asp Val
1 5
<210> 136
<211> 16
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 136
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser Asp Gly Asn Thr Tyr Leu Ser
1 5 10 15
<210> 137
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 137
Lys Ile Ser Asn Arg Phe Phe
1 5
<210> 138
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 138
Met Gln Ala Thr Gln Phe Pro His Thr
1 5
<210> 139
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 139
Asn Ile Arg Met Ser Val Ser
1 5
<210> 140
<211> 16
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 140
His Ile Phe Ser Asn Asp Glu Lys Ser Tyr Ser Thr Ser Leu Lys Ser
1 5 10 15
<210> 141
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 141
Met Arg Leu Pro Tyr Gly Met Asp Val
1 5
<210> 142
<211> 16
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 142
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser Asp Gly Asn Thr Tyr Leu Ser
1 5 10 15
<210> 143
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 143
Lys Ile Ser Asn Arg Phe Phe
1 5
<210> 144
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 144
Met Gln Ala Thr Gln Phe Pro His Thr
1 5
<210> 145
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 145
Gly Phe Ser Leu Thr Asn Ile Arg Met
1 5
<210> 146
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 146
Phe Ser Asn Asp Glu
1 5
<210> 147
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 147
Met Arg Leu Pro Tyr Gly Met Asp
1 5
<210> 148
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 148
Ser Gln Ser Leu Val His Ser Asp Gly Asn Thr Tyr
1 5 10
<210> 149
<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 149
Lys Ile Ser
1
<210> 150
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 150
Ala Thr Gln Phe Pro His
1 5
<210> 151
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 151
Thr Asn Ile Arg Met Ser Val Ser
1 5
<210> 152
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 152
Trp Leu Ala His Ile Phe Ser Asn Asp Glu Lys Ser
1 5 10
<210> 153
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 153
Ala Arg Met Arg Leu Pro Tyr Gly Met Asp
1 5 10
<210> 154
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 154
Val His Ser Asp Gly Asn Thr Tyr Leu Ser Trp Leu
1 5 10
<210> 155
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 155
Leu Leu Ile Tyr Lys Ile Ser Asn Arg Phe
1 5 10
<210> 156
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 156
Met Gln Ala Thr Gln Phe Pro His
1 5
<210> 157
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 157
Gly Phe Ser Leu Thr Asn Ile Arg Met Ser
1 5 10
<210> 158
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 158
Ile Phe Ser Asn Asp Glu Lys
1 5
<210> 159
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 159
Ala Arg Met Arg Leu Pro Tyr Gly Met Asp Val
1 5 10
<210> 160
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 160
Gln Ser Leu Val His Ser Asp Gly Asn Thr Tyr
1 5 10
<210> 161
<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 161
Lys Ile Ser
1
<210> 162
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 162
Met Gln Ala Thr Gln Phe Pro His Thr
1 5
<210> 163
<211> 215
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide
<400> 163
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Val Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Leu Asn Ser Tyr Pro Arg
85 90 95
Met Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala
100 105 110
Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser
115 120 125
Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu
130 135 140
Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser
145 150 155 160
Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu
165 170 175
Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val
180 185 190
Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys
195 200 205
Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 164
<211> 451
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide
<400> 164
Gln Leu Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Pro Val Arg Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Asp Ser Ile Arg Ser Ser
20 25 30
Ser Tyr Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Asp
35 40 45
Trp Ile Gly Ser Ile Tyr Tyr Thr Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Met Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
65 70 75 80
Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Ser Pro Gly Tyr Ser Ser Gly Trp Ser Ile Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
225 230 235 240
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250 255
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305 310 315 320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
325 330 335
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340 345 350
Tyr Val Tyr Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser
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Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
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His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
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Pro Gly Lys
450
<210> 165
<211> 484
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide
<400> 165
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide
<400> 166
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide
<400> 167
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide
<400> 168
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide
<400> 169
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Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Gly Asn Asn Ile Gly Ser Lys Ser Val
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210
<210> 170
<211> 220
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide
<400> 170
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide
<400> 171
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide
<400> 172
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Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
225 230 235 240
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
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Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
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465 470 475 480
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide
<400> 173
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide
<400> 174
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<211> 723
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide
<400> 175
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
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<210> 176
<211> 721
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide
<400> 176
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
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<210> 177
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide
<400> 177
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<210> 178
<211> 330
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide
<400> 178
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<211> 107
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide
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Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
35 40 45
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
50 55 60
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
65 70 75 80
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
85 90 95
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
100 105
<210> 180
<211> 484
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide
<400> 180
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Ser
20 25 30
Phe Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Gly Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Tyr Gly Ser Ser Pro
85 90 95
Met Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Gly Ser
100 105 110
Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr Gly Gly
115 120 125
Ser Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly
130 135 140
Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser
145 150 155 160
Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
165 170 175
Val Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser
180 185 190
Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu
195 200 205
Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
210 215 220
Cys Ala Lys Asp Glu Gly Tyr Ser Ser Gly His Tyr Tyr Gly Met Asp
225 230 235 240
Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Glu Pro Lys Ser
245 250 255
Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu
260 265 270
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
275 280 285
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
290 295 300
His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
305 310 315 320
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr
325 330 335
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
340 345 350
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro
355 360 365
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
370 375 380
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val
385 390 395 400
Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
405 410 415
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
420 425 430
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr
435 440 445
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
450 455 460
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
465 470 475 480
Ser Pro Gly Lys
<210> 181
<211> 20
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 181
Gly Gly Ser Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser
1 5 10 15
Thr Gly Gly Ser
20
<210> 182
<211> 232
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide
<400> 182
Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
1 5 10 15
Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
20 25 30
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
35 40 45
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
50 55 60
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
65 70 75 80
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
85 90 95
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
100 105 110
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
115 120 125
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr
130 135 140
Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
145 150 155 160
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
165 170 175
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val
180 185 190
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
195 200 205
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
210 215 220
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
225 230
<210> 183
<211> 1353
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide
<400> 183
cagctccagt tgcaggaatc aggtcccggt cccgtccgcc cctctgagac cctttctttg 60
acctgcacag tatccggcga ctctatccgc agctcatcat actactgggg ttggattcgg 120
cagcctccag gaaaaggtct cgactggatc ggatctattt actatactgg ctctacctac 180
tacaatccta gcttgatgag cagggttacc atttctgtcg acacctcaaa aaatcagttc 240
agtcttaaac tgtccagcgt cactgctgca gacactgcag tgtattattg tgcctcaccc 300
ggatattcat ccgggtggag cattgattat tggggccaag gtacactcgt aacagtctct 360
tcagcctcca ccaagggccc atcggtcttc cccctggcac cctcctccaa gagcacctct 420
gggggcacag cggccctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg 480
tcgtggaact caggcgccct gaccagcggc gtgcacacct tcccggctgt cctacagtcc 540
tcaggactct actccctcag cagcgtggtg accgtgccct ccagcagctt gggcacccag 600
acctacatct gcaacgtgaa tcacaagccc agcaacacca aggtggacaa gaaagttgag 660
cccaaatctt gtgacaaaac tcacacatgc ccaccgtgcc cagcacctga actcctgggg 720
ggaccgtcag tcttcctctt ccccccaaaa cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc 780
cctgaggtca catgcgtggt ggtggacgtg agccacgaag accctgaggt caagttcaac 840
tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcataat gccaagacaa agccgcggga ggagcagtac 900
aacagcacgt accgtgtggt cagcgtcctc accgtcctgc accaggactg gctgaatggc 960
aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaaa gccctcccag cccccatcga gaaaaccatc 1020
tccaaagcca aagggcagcc ccgagaacca caggtgtaca ccctgccccc atcccgggag 1080
gagatgacca agaaccaggt cagcctgtgg tgcctggtca aaggcttcta tcccagcgac 1140
atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag ccggagaaca actacaagac cacgcctccc 1200
gtgctggact ccgacggctc cttcttcctc tacagcaagc tcaccgtgga caagagcagg 1260
tggcagcagg ggaacgtctt ctcatgctcc gtgatgcatg aggctctgca caaccggttc 1320
acgcagaaga gcctctccct gtctccgggt aaa 1353
<210> 184
<211> 363
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide
<400> 184
cagctccagt tgcaggaatc aggtcccggt cccgtccgcc cctctgagac cctttctttg 60
acctgcacag tatccggcga ctctatccgc agctcatcat actactgggg ttggattcgg 120
cagcctccag gaaaaggtct cgactggatc ggatctattt actatactgg ctctacctac 180
tacaatccta gcttgatgag cagggttacc atttctgtcg acacctcaaa aaatcagttc 240
agtcttaaac tgtccagcgt cactgctgca gacactgcag tgtattattg tgcctcaccc 300
ggatattcat ccgggtggag cattgattat tggggccaag gtacactcgt aacagtctct 360
tca 363
<210> 185
<211> 990
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide
<400> 185
gcctccacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcaccct cctccaagag cacctctggg 60
ggcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg 120
tggaactcag gcgccctgac cagcggcgtg cacaccttcc cggctgtcct acagtcctca 180
ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcagcttggg cacccagacc 240
tacatctgca acgtgaatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagaa agttgagccc 300
aaatcttgtg acaaaactca cacatgccca ccgtgcccag cacctgaact cctgggggga 360
ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct 420
gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg 480
tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagtacaac 540
agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc aggactggct gaatggcaag 600
gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc 660
aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccgggaggag 720
atgaccaaga accaggtcag cctgtggtgc ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc 780
gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg 840
ctggactccg acggctcctt cttcctctac agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg 900
cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccggttcacg 960
cagaagagcc tctccctgtc tccgggtaaa 990
<210> 186
<211> 645
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide
<400> 186
gacatccagc tgacccagag ccccagcttt ctgagcgcca gcgtgggcga cagggtgacc 60
atcacctgca gggccagcca gggcatcagc agctacctgg cctggtacca gcagaagccc 120
ggcaaagccc ccaagctgct gatctacgtg gccagcacac tgcagagcgg cgtgcctagc 180
agatttagcg gcagcggcag cggcacagag ttcaccctga ccatctccag cctgcagccc 240
gaggacttcg ccacctacta ctgccagcag ctgaacagct accccaggat gaccttcggc 300
ggcggcacca aggtggagat caagcgtacg gtggctgcac catctgtctt catcttcccg 360
ccatctgatg agcagttgaa atctggaact gcctctgttg tgtgcctgct gaataacttc 420
tatcccagag aggccaaagt acagtggaag gtggataacg ccctccaatc gggtaactcc 480
caggagagtg tcacagagca ggacagcaag gacagcacct acagcctcag cagcaccctg 540
acgctgagca aagcagacta cgagaaacac aaagtctacg cctgcgaagt cacccatcag 600
ggcctgagct cgcccgtcac aaagagcttc aacaggggag agtgt 645
<210> 187
<211> 324
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide
<400> 187
gacatccagc tgacccagag ccccagcttt ctgagcgcca gcgtgggcga cagggtgacc 60
atcacctgca gggccagcca gggcatcagc agctacctgg cctggtacca gcagaagccc 120
ggcaaagccc ccaagctgct gatctacgtg gccagcacac tgcagagcgg cgtgcctagc 180
agatttagcg gcagcggcag cggcacagag ttcaccctga ccatctccag cctgcagccc 240
gaggacttcg ccacctacta ctgccagcag ctgaacagct accccaggat gaccttcggc 300
ggcggcacca aggtggagat caag 324
<210> 188
<211> 321
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide
<400> 188
cgtacggtgg ctgcaccatc tgtcttcatc ttcccgccat ctgatgagca gttgaaatct 60
ggaactgcct ctgttgtgtg cctgctgaat aacttctatc ccagagaggc caaagtacag 120
tggaaggtgg ataacgccct ccaatcgggt aactcccagg agagtgtcac agagcaggac 180
agcaaggaca gcacctacag cctcagcagc accctgacgc tgagcaaagc agactacgag 240
aaacacaaag tctacgcctg cgaagtcacc catcagggcc tgagctcgcc cgtcacaaag 300
agcttcaaca ggggagagtg t 321
<210> 189
<211> 1452
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide
<400> 189
gagatcgtgc tgactcagag ccctggcact ctgagcctga gccctggcga gagggccact 60
ctgagctgta gggccagcca gagcatcagc agcagcttcc tgacttggta ccagcagaag 120
cctggccagg cccctaggct gctgatctac ggcgccagca gcagggccac tggcatccct 180
gataggttca gcggcggcgg cagcggcact gatttcactc tgactatcag caggctggag 240
cctgaggatt tcgccgtgta ctactgtcag cactacggca gcagccctat gtacactttc 300
ggccagggca ctaagctgga gatcaagggc ggctccgagg gcaagagcag cggcagcggc 360
agcgagagca agagcaccgg cggcagcgaa gtgcagctgc tggagtcagg gggcggtctg 420
gtacaaccgg gcggcagcct gaggctgagc tgtgccgcca gcggcttcac tttcagcagc 480
tacgccatga gctgggtgag gcaggcccct ggcaagggcc tggagtgggt gagcgccatc 540
agcggcagcg gcggcagcac ttactacgcc gatagcgtga agggcaggtt cactatcagc 600
agggataata gcaagaatac tctgtacctg cagatgaata gcctgagggc cgaggatact 660
gccgtgtact actgtgccaa ggatgagggc tacagcagcg gccactacta cggcatggat 720
gtgtggggcc agggcactac tgtgactgtg agcagcgagc ccaaatctag cgacaaaact 780
cacacatgtc caccgtgccc agcacctgaa ctcctggggg gaccgtcagt cttcctcttc 840
cccccaaaac ccaaggacac cctcatgatc tcccggaccc ctgaggtcac atgcgtggtg 900
gtggacgtga gccacgaaga ccctgaggtc aagttcaact ggtacgtgga cggcgtggag 960
gtgcataatg ccaagacaaa gccgcgggag gagcagtaca acagcacgta ccgtgtggtc 1020
agcgtcctca ccgtcctgca ccaggactgg ctgaatggca aggagtacaa gtgcaaggtc 1080
tccaacaaag ccctcccagc ccccatcgag aaaaccatct ccaaagccaa agggcagccc 1140
cgagaaccac aggtgtacac cctgccccca tcccgggagg agatgaccaa gaaccaggtc 1200
agcctgtcct gcgccgtcaa aggcttctat cccagcgaca tcgccgtgga gtgggagagc 1260
aatgggcagc cggagaacaa ctacaagacc acgcctcccg tgctggactc cgacggctcc 1320
ttcttcctcg tgagcaagct caccgtggac aagtctagat ggcagcaggg gaacgtcttc 1380
tcatgctccg tgatgcatga ggctctgcac aaccactaca cgcagaagag cctctccctg 1440
tctccgggta aa 1452
<210> 190
<211> 369
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide
<400> 190
gaagtgcagc tgctggagtc agggggcggt ctggtacaac cgggcggcag cctgaggctg 60
agctgtgccg ccagcggctt cactttcagc agctacgcca tgagctgggt gaggcaggcc 120
cctggcaagg gcctggagtg ggtgagcgcc atcagcggca gcggcggcag cacttactac 180
gccgatagcg tgaagggcag gttcactatc agcagggata atagcaagaa tactctgtac 240
ctgcagatga atagcctgag ggccgaggat actgccgtgt actactgtgc caaggatgag 300
ggctacagca gcggccacta ctacggcatg gatgtgtggg gccagggcac tactgtgact 360
gtgagcagc 369
<210> 191
<211> 60
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic nucleotide
<400> 191
ggcggctccg agggcaagag cagcggcagc ggcagcgaga gcaagagcac cggcggcagc 60
<210> 192
<211> 327
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide
<400> 192
gagatcgtgc tgactcagag ccctggcact ctgagcctga gccctggcga gagggccact 60
ctgagctgta gggccagcca gagcatcagc agcagcttcc tgacttggta ccagcagaag 120
cctggccagg cccctaggct gctgatctac ggcgccagca gcagggccac tggcatccct 180
gataggttca gcggcggcgg cagcggcact gatttcactc tgactatcag caggctggag 240
cctgaggatt tcgccgtgta ctactgtcag cactacggca gcagccctat gtacactttc 300
ggccagggca ctaagctgga gatcaag 327
<210> 193
<211> 696
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide
<400> 193
gagcccaaat ctagcgacaa aactcacaca tgtccaccgt gcccagcacc tgaactcctg 60
gggggaccgt cagtcttcct cttcccccca aaacccaagg acaccctcat gatctcccgg 120
acccctgagg tcacatgcgt ggtggtggac gtgagccacg aagaccctga ggtcaagttc 180
aactggtacg tggacggcgt ggaggtgcat aatgccaaga caaagccgcg ggaggagcag 240
tacaacagca cgtaccgtgt ggtcagcgtc ctcaccgtcc tgcaccagga ctggctgaat 300
ggcaaggagt acaagtgcaa ggtctccaac aaagccctcc cagcccccat cgagaaaacc 360
atctccaaag ccaaagggca gccccgagaa ccacaggtgt acaccctgcc cccatcccgg 420
gaggagatga ccaagaacca ggtcagcctg tcctgcgccg tcaaaggctt ctatcccagc 480
gacatcgccg tggagtggga gagcaatggg cagccggaga acaactacaa gaccacgcct 540
cccgtgctgg actccgacgg ctccttcttc ctcgtgagca agctcaccgt ggacaagtct 600
agatggcagc aggggaacgt cttctcatgc tccgtgatgc atgaggctct gcacaaccac 660
tacacgcaga agagcctctc cctgtctccg ggtaaa 696
<210> 194
<211> 451
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide
<400> 194
Gln Leu Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Pro Val Arg Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Asp Ser Ile Arg Ser Ser
20 25 30
Ser Tyr Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Asp
35 40 45
Trp Ile Gly Ser Ile Tyr Tyr Thr Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Met Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
65 70 75 80
Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Ser Pro Gly Tyr Ser Ser Gly Trp Ser Ile Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly
225 230 235 240
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250 255
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Ser Val Ser His
260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305 310 315 320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
325 330 335
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340 345 350
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser
355 360 365
Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
370 375 380
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
385 390 395 400
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
405 410 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420 425 430
His Glu Ala Leu His Asn Arg Phe Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445
Pro Gly Lys
450
<210> 195
<211> 330
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide
<400> 195
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Ser Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn Arg Phe Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 196
<211> 484
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide
<400> 196
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Ser
20 25 30
Phe Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Gly Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Tyr Gly Ser Ser Pro
85 90 95
Met Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Gly Ser
100 105 110
Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr Gly Gly
115 120 125
Ser Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly
130 135 140
Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser
145 150 155 160
Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
165 170 175
Val Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser
180 185 190
Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu
195 200 205
Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
210 215 220
Cys Ala Lys Asp Glu Gly Tyr Ser Ser Gly His Tyr Tyr Gly Met Asp
225 230 235 240
Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Glu Pro Lys Ser
245 250 255
Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala
260 265 270
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
275 280 285
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Ser Val Ser
290 295 300
His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
305 310 315 320
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr
325 330 335
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
340 345 350
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro
355 360 365
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
370 375 380
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val
385 390 395 400
Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
405 410 415
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
420 425 430
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr
435 440 445
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
450 455 460
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
465 470 475 480
Ser Pro Gly Lys
<210> 197
<211> 232
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide
<400> 197
Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
1 5 10 15
Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
20 25 30
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
35 40 45
Val Ser Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
50 55 60
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
65 70 75 80
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
85 90 95
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
100 105 110
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
115 120 125
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr
130 135 140
Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
145 150 155 160
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
165 170 175
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val
180 185 190
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
195 200 205
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
210 215 220
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
225 230
<210> 198
<211> 1353
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide
<400> 198
cagctccagt tgcaggaatc aggtcccggt cccgtccgcc cctctgagac cctttctttg 60
acctgcacag tatccggcga ctctatccgc agctcatcat actactgggg ttggattcgg 120
cagcctccag gaaaaggtct cgactggatc ggatctattt actatactgg ctctacctac 180
tacaatccta gcttgatgag cagggttacc atttctgtcg acacctcaaa aaatcagttc 240
agtcttaaac tgtccagcgt cactgctgca gacactgcag tgtattattg tgcctcaccc 300
ggatattcat ccgggtggag cattgattat tggggccaag gtacactcgt aacagtctct 360
tcagcctcca ccaagggccc atcggtcttc cccctggcac cctcctccaa gagcacctct 420
gggggcacag cggccctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg 480
tcgtggaact caggcgccct gaccagcggc gtgcacacct tcccggctgt cctacagtcc 540
tcaggactct actccctcag cagcgtggtg accgtgccct ccagcagctt gggcacccag 600
acctacatct gcaacgtgaa tcacaagccc agcaacacca aggtggacaa gaaagttgag 660
cccaaatctt gtgacaaaac tcacacatgc ccaccgtgcc cagcacctga agccgccggg 720
ggaccgtcag tcttcctctt ccccccaaaa cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc 780
cctgaggtca catgcgtggt ggtgagcgtg agccacgaag accctgaggt caagttcaac 840
tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcataat gccaagacaa agccgcggga ggagcagtac 900
aacagcacgt accgtgtggt cagcgtcctc accgtcctgc accaggactg gctgaatggc 960
aaggagtaca agtgcaaggt gtcgaacaaa gccctcccag cccccatcga gaaaaccatc 1020
tccaaagcca aagggcagcc ccgagaacca caggtgtaca ccctgccccc atcccgggag 1080
gagatgacca agaaccaggt cagcctgtgg tgcctggtca aaggcttcta tcccagcgac 1140
atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag ccggagaaca actacaagac cacgcctccc 1200
gtgctggact ccgacggctc cttcttcctc tacagcaagc tcaccgtgga caagagcaga 1260
tggcagcagg ggaacgtctt ctcatgctcc gtgatgcatg aggctctgca caaccggttc 1320
acgcagaagt ctctctccct gtctccggga aaa 1353
<210> 199
<211> 990
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide
<400> 199
gcctccacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcaccct cctccaagag cacctctggg 60
ggcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg 120
tggaactcag gcgccctgac cagcggcgtg cacaccttcc cggctgtcct acagtcctca 180
ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcagcttggg cacccagacc 240
tacatctgca acgtgaatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagaa agttgagccc 300
aaatcttgtg acaaaactca cacatgccca ccgtgcccag cacctgaagc cgccggggga 360
ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct 420
gaggtcacat gcgtggtggt gagcgtgagc cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg 480
tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagtacaac 540
agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc aggactggct gaatggcaag 600
gagtacaagt gcaaggtgtc gaacaaagcc ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc 660
aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccgggaggag 720
atgaccaaga accaggtcag cctgtggtgc ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc 780
gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg 840
ctggactccg acggctcctt cttcctctac agcaagctca ccgtggacaa gagcagatgg 900
cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccggttcacg 960
cagaagtctc tctccctgtc tccgggaaaa 990
<210> 200
<211> 1452
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide
<400> 200
gagatcgtgc tgactcagag ccctggcact ctgagcctga gccctggcga gagggccact 60
ctgagctgta gggccagcca gagcatcagc agcagcttcc tgacttggta ccagcagaag 120
cctggccagg cccctaggct gctgatctac ggcgccagca gcagggccac tggcatccct 180
gataggttca gcggcggcgg cagcggcact gatttcactc tgactatcag caggctggag 240
cctgaggatt tcgccgtgta ctactgtcag cactacggca gcagccctat gtacactttc 300
ggccagggca ctaagctgga gatcaagggc ggctccgagg gcaagagcag cggcagcggc 360
agcgagagca agagcaccgg cggcagcgaa gtgcagctgc tggagtcagg gggcggtctg 420
gtacaaccgg gcggcagcct gaggctgagc tgtgccgcca gcggcttcac tttcagcagc 480
tacgccatga gctgggtgag gcaggcccct ggcaagggcc tggagtgggt gagcgccatc 540
agcggcagcg gcggcagcac ttactacgcc gatagcgtga agggcaggtt cactatcagc 600
agggataata gcaagaatac tctgtacctg cagatgaata gcctgagggc cgaggatact 660
gccgtgtact actgtgccaa ggatgagggc tacagcagcg gccactacta cggcatggat 720
gtgtggggcc agggcactac tgtgactgtg agcagcgagc ccaaatctag cgacaaaact 780
cacacatgtc caccgtgccc agcacctgaa gcagcagggg gaccgtcagt cttcctcttc 840
cccccaaaac ccaaggacac cctcatgatc tcccggaccc ctgaggtcac atgcgtggtg 900
gtgagcgtga gccacgaaga ccctgaggtc aagttcaact ggtacgtgga cggcgtggag 960
gtgcataatg ccaagacaaa gccgcgggag gagcagtaca acagcacgta ccgtgtggtc 1020
agcgtcctca ccgtcctgca ccaggactgg ctgaatggca aggagtacaa gtgcaaggtc 1080
tccaacaaag ccctcccagc ccccatcgag aaaaccatct ccaaagccaa agggcagccc 1140
cgagaaccac aggtgtacac cctgccccca tcccgggagg agatgaccaa gaaccaggtc 1200
agcctgtcct gcgccgtcaa aggcttctat cccagcgaca tcgccgtgga gtgggagagc 1260
aatgggcagc cggagaacaa ctacaagacc acgcctcccg tgctggactc cgacggctcc 1320
ttcttcctcg tgagcaagct caccgtggac aagtctagat ggcagcaggg gaacgtcttc 1380
tcatgctccg tgatgcatga ggctctgcac aaccactaca cgcagaagag cctctccctg 1440
tctccgggta aa 1452
<210> 201
<211> 696
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide
<400> 201
gagcccaaat ctagcgacaa aactcacaca tgtccaccgt gcccagcacc tgaagcagca 60
gggggaccgt cagtcttcct cttcccccca aaacccaagg acaccctcat gatctcccgg 120
acccctgagg tcacatgcgt ggtggtgagc gtgagccacg aagaccctga ggtcaagttc 180
aactggtacg tggacggcgt ggaggtgcat aatgccaaga caaagccgcg ggaggagcag 240
tacaacagca cgtaccgtgt ggtcagcgtc ctcaccgtcc tgcaccagga ctggctgaat 300
ggcaaggagt acaagtgcaa ggtctccaac aaagccctcc cagcccccat cgagaaaacc 360
atctccaaag ccaaagggca gccccgagaa ccacaggtgt acaccctgcc cccatcccgg 420
gaggagatga ccaagaacca ggtcagcctg tcctgcgccg tcaaaggctt ctatcccagc 480
gacatcgccg tggagtggga gagcaatggg cagccggaga acaactacaa gaccacgcct 540
cccgtgctgg actccgacgg ctccttcttc ctcgtgagca agctcaccgt ggacaagtct 600
agatggcagc aggggaacgt cttctcatgc tccgtgatgc atgaggctct gcacaaccac 660
tacacgcaga agagcctctc cctgtctccg ggtaaa 696
<210> 202
<211> 227
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide
<400> 202
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
1 5 10 15
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Glu Asp Thr Leu Met
20 25 30
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
35 40 45
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
50 55 60
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
65 70 75 80
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
85 90 95
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
100 105 110
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
115 120 125
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser
130 135 140
Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
145 150 155 160
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
165 170 175
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
180 185 190
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
195 200 205
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Arg Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
210 215 220
Pro Gly Lys
225
<210> 203
<211> 453
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide
<400> 203
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asp Glu Gly Tyr Ser Ser Gly His Tyr Tyr Gly Met Asp Val
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly
115 120 125
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly
130 135 140
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val
145 150 155 160
Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe
165 170 175
Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val
180 185 190
Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val
195 200 205
Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys
210 215 220
Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu
225 230 235 240
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Glu Asp Thr
245 250 255
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
260 265 270
Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
275 280 285
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser
290 295 300
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
305 310 315 320
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
325 330 335
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
340 345 350
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
355 360 365
Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
370 375 380
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
385 390 395 400
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu
405 410 415
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
420 425 430
Val Met His Glu Ala Leu His Asn Arg Phe Arg Gln Lys Ser Leu Ser
435 440 445
Leu Ser Pro Gly Lys
450
<210> 204
<211> 330
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide
<400> 204
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Glu Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn Arg Phe Arg
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 205
<211> 216
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide
<400> 205
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Ser
20 25 30
Phe Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Gly Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Tyr Gly Ser Ser Pro
85 90 95
Met Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val
100 105 110
Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys
115 120 125
Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg
130 135 140
Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn
145 150 155 160
Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser
165 170 175
Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys
180 185 190
Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr
195 200 205
Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 206
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide
<400> 206
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
1 5 10 15
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
20 25 30
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
35 40 45
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
50 55 60
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
65 70 75 80
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
85 90 95
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
100 105
<210> 207
<211> 681
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide
<400> 207
gacaaaactc acacatgtcc accgtgccca gcacctgaac tgctgggggg accgtcagtc 60
ttcctcttcc ccccaaaacc cgaggacacc ctcatgatct cccggacccc tgaggtcaca 120
tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac cctgaggtca agttcaactg gtacgtggac 180
ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccgcgggagg agcagtacaa cagcacgtac 240
cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac caggactggc tgaatggcaa ggagtacaag 300
tgcaaggtct ccaacaaagc cctcccagcc cccatcgaga aaaccatctc caaagccaaa 360
gggcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc ctgcccccat cccgggagga gatgaccaag 420
aaccaggtca gcctgtggtg cctggtcaaa ggcttctatc ccagcgacat cgccgtggag 480
tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cgcctcccgt gctggactcc 540
gacggctcct tcttcctcta cagcaagctc accgtggaca agtctagatg gcagcagggg 600
aacgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactaccg gcagaagagc 660
ctctccctgt ctccgggtaa a 681
<210> 208
<211> 1359
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide
<400> 208
gaagtgcagc tgctggagtc agggggcggt ctggtacaac cgggcggcag cctgaggctg 60
agctgtgccg ccagcggctt cactttcagc agctacgcca tgagctgggt gaggcaggcc 120
cctggcaagg gcctggagtg ggtgagcgcc atcagcggca gcggcggcag cacttactac 180
gccgatagcg tgaagggcag gttcactatc agcagggata atagcaagaa tactctgtac 240
ctgcagatga atagcctgag ggccgaggat actgccgtgt actactgtgc caaggatgag 300
ggctacagca gcggccacta ctacggcatg gatgtgtggg gccagggcac tactgtgact 360
gtgagcagcg cctccaccaa gggcccatcg gtcttccccc tggcaccctc ctccaagagc 420
acctctgggg gcacagcggc cctgggctgc ctggtcaagg actacttccc cgaaccggtg 480
acggtgtcgt ggaactcagg cgccctgacc agcggcgtgc acaccttccc ggctgtccta 540
cagtcctcag gactctactc cctcagcagc gtggtgaccg tgccctccag cagcttgggc 600
acccagacct acatctgcaa cgtgaatcac aagcccagca acaccaaggt ggacaagaaa 660
gttgagccca aatcttgtga caaaactcac acatgtccac cgtgcccagc acctgaactg 720
ctggggggac cgtcagtctt cctcttcccc ccaaaacccg aggacaccct catgatctcc 780
cggacccctg aggtcacatg cgtggtggtg gacgtgagcc acgaagaccc tgaggtcaag 840
ttcaactggt acgtggacgg cgtggaggtg cataatgcca agacaaagcc gcgggaggag 900
cagtacaaca gcacgtaccg tgtggtcagc gtcctcaccg tcctgcacca ggactggctg 960
aatggcaagg agtacaagtg caaggtctcc aacaaagccc tcccagcccc catcgagaaa 1020
accatctcca aagccaaagg gcagccccga gaaccacagg tgtacaccct gcccccatcc 1080
cgggaggaga tgaccaagaa ccaggtcagc ctgtcctgcg ccgtcaaagg cttctatccc 1140
agcgacatcg ccgtggagtg ggagagcaat gggcagccgg agaacaacta caagaccacg 1200
cctcccgtgc tggactccga cggctccttc ttcctcgtga gcaagctcac cgtggacaag 1260
tctagatggc agcaggggaa cgtcttctca tgctccgtga tgcatgaggc tctgcacaac 1320
cggttccgcc agaagagcct ctccctgtct ccgggtaaa 1359
<210> 209
<211> 990
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide
<400> 209
gcctccacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcaccct cctccaagag cacctctggg 60
ggcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg 120
tggaactcag gcgccctgac cagcggcgtg cacaccttcc cggctgtcct acagtcctca 180
ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcagcttggg cacccagacc 240
tacatctgca acgtgaatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagaa agttgagccc 300
aaatcttgtg acaaaactca cacatgtcca ccgtgcccag cacctgaact gctgggggga 360
ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc gaggacaccc tcatgatctc ccggacccct 420
gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg 480
tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagtacaac 540
agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc aggactggct gaatggcaag 600
gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc 660
aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccgggaggag 720
atgaccaaga accaggtcag cctgtcctgc gccgtcaaag gcttctatcc cagcgacatc 780
gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg 840
ctggactccg acggctcctt cttcctcgtg agcaagctca ccgtggacaa gtctagatgg 900
cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccggttccgc 960
cagaagagcc tctccctgtc tccgggtaaa 990
<210> 210
<211> 648
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide
<400> 210
gagatagttc ttacccaatc tcctggaacc ctcagtctca gtccaggtga gagagctact 60
ctctcatgta gagcaagcca atctattagt tctagctttc tcacctggta tcagcaaaag 120
ccaggacaag ctcctcgttt gcttatttat ggagcatcat ctagggccac tggaatacct 180
gatcgtttca gtggtggcgg ttcagggacc gactttacac tgactataag cagattggaa 240
ccagaagact ttgctgtcta ctattgtcaa cattacggat cctccccaat gtacacattt 300
ggtcaaggca caaaattgga gataaagcgg acagtggccg ctccttccgt gttcatcttc 360
ccaccttccg acgagcagct gaagtccggc acagcttctg tcgtgtgcct gctgaacaac 420
ttctaccctc gggaagccaa ggtgcagtgg aaggtggaca atgccctgca gtccggcaac 480
tcccaagagt ctgtgaccga gcaggactcc aaggacagca cctacagcct gtcctccaca 540
ctgaccctgt ccaaggccga ctacgagaag cacaaggtgt acgcctgcga agtgacccat 600
cagggcctgt ctagccctgt gaccaagtct ttcaaccggg gcgagtgt 648
<210> 211
<211> 327
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide
<400> 211
gagatagttc ttacccaatc tcctggaacc ctcagtctca gtccaggtga gagagctact 60
ctctcatgta gagcaagcca atctattagt tctagctttc tcacctggta tcagcaaaag 120
ccaggacaag ctcctcgttt gcttatttat ggagcatcat ctagggccac tggaatacct 180
gatcgtttca gtggtggcgg ttcagggacc gactttacac tgactataag cagattggaa 240
ccagaagact ttgctgtcta ctattgtcaa cattacggat cctccccaat gtacacattt 300
ggtcaaggca caaaattgga gataaag 327
<210> 212
<211> 321
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide
<400> 212
cggacagtgg ccgctccttc cgtgttcatc ttcccacctt ccgacgagca gctgaagtcc 60
ggcacagctt ctgtcgtgtg cctgctgaac aacttctacc ctcgggaagc caaggtgcag 120
tggaaggtgg acaatgccct gcagtccggc aactcccaag agtctgtgac cgagcaggac 180
tccaaggaca gcacctacag cctgtcctcc acactgaccc tgtccaaggc cgactacgag 240
aagcacaagg tgtacgcctg cgaagtgacc catcagggcc tgtctagccc tgtgaccaag 300
tctttcaacc ggggcgagtg t 321
Claims (45)
- 다중특이성 항체로서,
(a) 자연 살해(NK) 세포 상에 발현되는 제1 항원에 결합하는 제1 결합 도메인, 및
(b) 제2 항원에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함하는, 다중특이성 항체. - 제1항에 있어서, 상기 제1 항원은 NK 세포 활성화 수용체인, 다중특이성 항체.
- 제2항에 있어서, 상기 제1 항원은 NKG2d인, 다중특이성 항체.
- 제3항에 있어서, 상기 제1 결합 도메인은
(i)
(a) 서열 번호 4의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 5의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 6의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3;
(b) 서열 번호 10의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 11의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 12의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3;
(c) 서열 번호 16의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 17의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 18의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3;
(d) 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 23의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 24의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3; 또는
(e) 서열 번호 28의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 29의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 30의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH);
및
(a) 서열 번호 7의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 8의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 9의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3;
(b) 서열 번호 13의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 14의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 15의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3;
(c) 서열 번호 19의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 20의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 21의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3;
(d) 서열 번호 25의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 26의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 27의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3; 또는
(e) 서열 번호 31의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 32의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 33의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
또는
(ii)
(a) 서열 번호 36의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 37의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 38의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3;
(b) 서열 번호 42의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 43의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 44의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3;
(c) 서열 번호 48의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 49의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 50의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3;
(d) 서열 번호 54의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 55의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 56의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3; 또는
(e) 서열 번호 60의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 61의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 62의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH);
및
(a) 서열 번호 39의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 40의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 41의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3;
(b) 서열 번호 45의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 46의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 47의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3;
(c) 서열 번호 51의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 52의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 53의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3;
(d) 서열 번호 57의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 58의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 59의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3; 또는
(e) 서열 번호 63의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 64의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 65의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하는, 다중특이성 항체. - 제4항에 있어서, 상기 제1 결합 도메인은 서열 번호 2의 아미노산 서열을 갖는 VH, 및 서열 번호 3의 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함하거나, 또는 상기 제1 결합 도메인은 서열 번호 34의 아미노산 서열을 갖는 VH, 및 서열 번호 35의 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함하는, 다중특이성 항체.
- 제2항에 있어서, 상기 제1 항원은 NKp46인, 다중특이성 항체.
- 제6항에 있어서, 상기 제1 결합 도메인은
(i)
(a) 서열 번호 69의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 70의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 71의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3;
(b) 서열 번호 75의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 76의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 77의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3;
(c) 서열 번호 81의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 82의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 83의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3;
(d) 서열 번호 87의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 88의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 89의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3; 또는
(e) 서열 번호 93의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 94의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 95의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH);
및
(ii)
(a) 서열 번호 72의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 73의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 74의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3;
(b) 서열 번호 78의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 79의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 80의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3;
(c) 서열 번호 84의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 85의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 86의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3;
(d) 서열 번호 90의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 91의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 92의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3; 또는
(e) 서열 번호 96의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 97의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 98의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하는, 다중특이성 항체. - 제7항에 있어서, 상기 제1 결합 도메인은 서열 번호 67의 아미노산 서열을 갖는 VH, 및 서열 번호 68의 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함하는, 다중특이성 항체.
- 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제2 항원은 세포 표면 상에 존재하는, 다중특이성 항체.
- 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제2 항원은 종양 세포 상에서 발현되는, 다중특이성 항체.
- 제10항에 있어서, 상기 제2 항원은 종양-특이적 항원(TSA) 또는 종양-관련 항원(TAA)인, 다중특이성 항체.
- 제10항에 있어서, 상기 제2 항원은 BCMA인, 다중특이성 항체.
- 제10항에 있어서, 상기 제2 항원은 GPRC5d인, 다중특이성 항체.
- 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 결합 도메인은 인간화되거나, 상기 제2 결합 도메인은 인간화되거나, 또는 상기 제1 결합 도메인 및 상기 제2 결합 도메인 둘 모두가 인간화되는, 다중특이성 항체.
- 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 다중특이성 항체는 IgG 항체인, 다중특이성 항체.
- 제15항에 있어서, 상기 IgG 항체는 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4 항체인, 다중특이성 항체.
- 제16항에 있어서, 상기 IgG 항체는 IgG1 항체인, 다중특이성 항체.
- 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 다중특이성 항체는 이중특이성 항체인, 다중특이성 항체.
- 제18항에 있어서, 상기 이중특이성 항체는 바이포드-스캐폴드 입체구조(bipod-scaffold configuration)인, 다중특이성 항체.
- 제19항에 있어서, 상기 제1 결합 도메인은 Fab 영역이고, 상기 제2 결합 도메인은 scFv 영역인, 다중특이성 항체.
- 제18항에 있어서, 상기 이중특이성 항체는 모리슨(Morrison)-스캐폴드 입체구조인, 다중특이성 항체.
- 제21항에 있어서, 상기 제1 결합 도메인은 2개의 Fab 영역을 포함하고, 상기 제2 결합 도메인은 2개의 scFv 영역을 포함하는, 다중특이성 항체.
- 제10항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 다중특이성 항체는 약 500 pM 미만의 IC50으로 시험관내(in vitro)에서 상기 종양 세포의 NK 세포 의존성 세포독성을 유도하는, 다중특이성 항체.
- 제10항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 다중특이성 항체는 약 300 pM 미만의 IC50으로 시험관내에서 상기 종양 세포의 NK 세포 의존성 세포독성을 유도하는, 다중특이성 항체.
- 제10항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 다중특이성 항체는 약 100 pM 미만의 IC50으로 시험관내에서 상기 종양 세포의 NK 세포 의존성 세포독성을 유도하는, 다중특이성 항체.
- 제10항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 다중특이성 항체는 약 50 pM 미만의 IC50으로 시험관내에서 상기 종양 세포의 NK 세포 의존성 세포독성을 유도하는, 다중특이성 항체.
- 제10항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 다중특이성 항체는 약 20 pM 미만의 IC50으로 시험관내에서 상기 종양 세포의 NK 세포 의존성 세포독성을 유도하는, 다중특이성 항체.
- 제10항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 다중특이성 항체는 약 15 pM 미만의 IC50으로 시험관내에서 상기 종양 세포의 NK 세포 의존성 세포독성을 유도하는, 다중특이성 항체.
- 제10항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 다중특이성 항체는 약 10 pM 미만의 IC50으로 시험관내에서 상기 종양 세포의 NK 세포 의존성 세포독성을 유도하는, 다중특이성 항체.
- 제23항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 IC50은 NK 이펙터 세포와 상기 제2 항원을 발현하는 표적 세포의 혼합물을 사용하여 평가되는, 다중특이성 항체.
- 제30항에 있어서, 상기 이펙터 세포 대 표적 세포 비는 약 0.01:1 내지 약 5:1인, 다중특이성 항체.
- 제30항에 있어서, 상기 이펙터 세포 대 표적 세포 비는 약 0.1:1 내지 약 2:1인, 다중특이성 항체.
- 제30항에 있어서, 상기 이펙터 세포 대 표적 세포 비는 약 1:1인, 다중특이성 항체.
- 제1항 내지 제33항 중 어느 한 항의 다중특이성 항체를 인코딩하는 핵산.
- 제34항의 핵산을 포함하는 벡터.
- 제35항의 벡터를 포함하는 숙주 세포.
- 제36항의 벡터 및 이를 위한 패키징을 포함하는 키트.
- NKG2d에 결합하는 항체로서,
(i)
(a) 서열 번호 4의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 5의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 6의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3;
(b) 서열 번호 10의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 11의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 12의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3;
(c) 서열 번호 16의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 17의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 18의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3;
(d) 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 23의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 24의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3; 또는
(e) 서열 번호 28의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 29의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 30의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH);
및
(a) 서열 번호 7의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 8의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 9의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3;
(b) 서열 번호 13의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 14의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 15의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3;
(c) 서열 번호 19의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 20의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 21의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3;
(d) 서열 번호 25의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 26의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 27의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3; 또는
(e) 서열 번호 31의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 32의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 33의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
또는
(ii)
(a) 서열 번호 36의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 37의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 38의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3;
(b) 서열 번호 42의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 43의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 44의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3;
(c) 서열 번호 48의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 49의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 50의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3;
(d) 서열 번호 54의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 55의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 56의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3; 또는
(e) 서열 번호 60의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 61의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 62의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH);
및
(a) 서열 번호 39의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 40의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 41의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3;
(b) 서열 번호 45의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 46의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 47의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3;
(c) 서열 번호 51의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 52의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 53의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3;
(d) 서열 번호 57의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 58의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 59의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3; 또는
(e) 서열 번호 63의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 64의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 65의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하는, 항체. - 제38항에 있어서, 상기 제1 결합 도메인은 서열 번호 2의 아미노산 서열을 갖는 VH, 및 서열 번호 3의 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함하거나, 또는 상기 제1 결합 도메인은 서열 번호 34의 아미노산 서열을 갖는 VH, 및 서열 번호 35의 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함하는, 항체.
- NKp46에 결합하는 항체로서,
(i)
(a) 서열 번호 69의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 70의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 71의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3;
(b) 서열 번호 75의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 76의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 77의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3;
(c) 서열 번호 81의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 82의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 83의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3;
(d) 서열 번호 87의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 88의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 89의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3; 또는
(e) 서열 번호 93의 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열 번호 94의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 번호 95의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH);
및
(ii)
(a) 서열 번호 72의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 73의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 74의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3;
(b) 서열 번호 78의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 79의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 80의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3;
(c) 서열 번호 84의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 85의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 86의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3;
(d) 서열 번호 90의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 91의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 92의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3; 또는
(e) 서열 번호 96의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 번호 97의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 번호 98의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하는, 항체. - 제40항에 있어서, 상기 제1 결합 도메인은 서열 번호 67의 아미노산 서열을 갖는 VH, 및 서열 번호 68의 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함하는, 항체.
- 제38항 내지 제41항 중 어느 한 항의 항체를 인코딩하는 핵산.
- 제42항의 핵산을 포함하는 벡터.
- 제43항의 벡터를 포함하는 숙주 세포.
- 제43항의 벡터 및 이를 위한 패키징을 포함하는 키트.
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