KR20220167273A - 항-코로나바이러스 항체 및 사용 방법 - Google Patents

항-코로나바이러스 항체 및 사용 방법 Download PDF

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KR20220167273A
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카트린 웨스텐도르프
스테파니 젠텔리스
크리티카 무수라만
케빈 젭슨
에스터 팔코너
존 마스콜라
바니 그레이엄
키즈메키아 코베트
줄리 레저우드
링슈 왕
올루부콜라 아비오나
웨이 샤이
윙-푸이 콩
이 장
브라이언 에드워드 존스
데니사 포스터
줄리안 데이비스
칭 샤이
크리스토퍼 카를 프라이
가나파시 고팔라트남
죄르그 헨들
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Abstract

SARS-CoV 스파이크 단백질, SARS-CoV-2 스파이크 단백질에 결합하는 항체, 및 SARS 또는 COVID-19와 연관된 상태를 치료 또는 예방하기 위해 및 SARS-CoV 또는 SARS-CoV-2를 검출하기 위해 그를 사용하는 방법.

Description

항-코로나바이러스 항체 및 사용 방법
관련 출원에 대한 상호-참조
미국 가출원 번호 62/987,313 (2020년 3월 9일 출원); 63/010,999 (2020년 4월 16일 출원); 63/030,530 (2020년 5월 27일 출원); 63/036,089 (2020년 6월 8일 출원); 63/080,351 (2020년 9월 18일 출원); 63/085,042 (2020년 9월 29일 출원); 및 63/116,483 (2020년 11월 20일 출원)을 우선권 주장하며, 이들 각각은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
서열 목록
본 출원은 EFS-웹을 통해 ASCII 포맷으로 제출된 서열 목록을 함유하며, 이는 그 전문이 본원에 참조로 포함된다. 2021년 3월 2일에 생성된 상기 ASCII 카피는 파일명이 27050016WO01030221SEQLST25.txt이고, 크기가 4,791,037 바이트이다.
연방 후원 연구 또는 개발에 관한 진술
본 발명은 방위 고등 연구 계획국(Defense Advanced Research Projects Agency)에 의해 수여된 D18AC00002 하의 정부 지원으로 이루어졌다. 정부는 본 발명에 특정 권리를 갖는다.
본 발명의 기술 분야
본 개시내용은 일반적으로 의약, 면역학 및 감염성 질환의 분야에 관한 것이다. 보다 구체적으로, 본 개시내용은 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체) 및 항체-유사 분자, 특히 인간 항체, 그의 항체 단편 및 핵산-벡터화 버전, 및 코로나바이러스 감염의 치료 방법, 코로나바이러스 감염에 대한 예방 방법 및 코로나바이러스의 검출을 위한 면역검정에 관한 것이다.
지난 수십년간 중증 급성 호흡기 증후군 코로나바이러스 (SARS-CoV), 웨스트 나일, 에볼라, 중동 호흡기 증후군 코로나바이러스 (MERS-CoV), 지카 및 범유행성 인플루엔자를 비롯한, 매년 새로운 또는 재출현 바이러스 발병이 나타났다. 범유행의 위험은 인구 증가 및 도시화, 기후 변화, 전세계 여행 및 내전에 의해 배가된다. 최근, 2019년 신규 코로나바이러스 (SARS-CoV-2) 발병으로 인해 세계 보건 기구 (WHO)는 전세계 보건 비상상태를 선언하였다. 이들 바이러스 발병은 인간 사회에 중요한 결과를 가져, 건강관리 시스템에 큰 부담을 주고 경제에 중요한 영향을 미친다.
범유행성 발병은 전세계 안보 및 무역에 심각한 위험을 제시한다. 예를 들어, 1918년 H1N1 범유행성 인플루엔자 바이러스 (스패니쉬 플루(Spanish flu))는 수개월 내에 추정컨대 5천만명의 목숨을 앗아갔다. 세계 은행은 그러한 규모로의 범유행에 전세계 국내총생산 (GDP)의 약 5% 또는 약 3조 USD 달러가 소요될 것으로 추정한다. 보다 최근 2009년 H1N1 범유행은 세계 인구의 11-21% (65세 미만의 80%)를 감염시키고, 151,700 내지 575,400명의 목숨을 앗아간 것으로 추정된다. 비-범유행 해에, WHO는 3백만 내지 5백만건의 중증 인플루엔자 사례로, 250,000 내지 500,000명의 전세계 사망이 초래된 것으로 추정한다. 급속한 유전자 변화, 항원 다양성 및 폭넓은 잠재적 숙주의 경향은 인플루엔자 A형에 유의한 범유행성 잠재력을 제공한다. 표면 항원의 급속한 돌연변이는 바이러스가 면역 반응을 회피하도록 하므로, 계절성 백신에 포함시킬 순환 균주의 연간 예측이 요구된다.
장기간 및 교차-균주 보호를 제공할 수 있는 보편적인 독감 백신은 지금까지 찾기 어려웠고, 전임상 및 임상 시험에 후보가 존재하긴 하지만, 이용가능해지기 전까지는 수년이 걸릴 가능성이 있다. 계절성 소변이보다 덜 예측가능한, 인수공통 숙주에서의 헤마글루티닌 또는 뉴라미니다제의 유전자 재편성 (항원 대변이)은, 인간에게 전달되어 면역학적 나이브 집단에 걸쳐 빠르게-확산되는 범유행을 유발할 수 있는 신규 인플루엔자 바이러스 균주를 생성할 수 있다. 캘리포니아 2009년 H1N1 균주는 돼지에서 기원한 것으로 발견되었고, 스패니시 플루 및 홍콩 1957년 범유행성 균주 둘 다는 조류 공급원으로부터 기원한 것으로 생각된다. 가축 및 야생 인수공통 숙주에서 급속하게-변이하는 병독성 인자의 감시는 현재 가능하지 않으므로, 신생 인플루엔자 범유행에 대한 신속한 대응 전략이 긴급히 필요하다. 현재 또는 미래의 위협을 구성하는 바이러스 패밀리에 대한 인간 항체의 대량 수집이 이용가능하게 되면, 진단, 예방 또는 치료에 적합한 특성을 갖는 항체를 신속하게 확인할 수 있어 발병에 대한 대응이 가속화될 것이다.
코로나바이러스의 범유행성 잠재력
코로나바이러스는 인간 코로나바이러스 229E, OC43, NL63 및 HKU1을 비롯한 인간에서 통상적으로 순환하는 4종의 풍토병성 균주에 의해 포유동물 및 조류를 감염시키는 바이러스의 거대 패밀리이다. 이들 풍토병성 균주는 일반적으로 경도의 독감-유사 증상을 유발하지만, 취약한 집단에서는 보다 심각한 폐렴을 유발할 수도 있다. 그러나, 새로운 코로나바이러스가 인수공통 숙주 (박쥐, 조류, 낙타 등)로부터 인간으로 점프할 때, 이들은 집단을 통해 신속하게 확산될 수 있는 훨씬 더 중증의 호흡기 질환을 유발할 수 있다. 이러한 발병의 예는 2003년에 SARS (중증 급성 호흡기 증후군) (SARS-연관 코로나바이러스 (SARS-CoV)에 의해 유발되며, 세계적으로 8,000명이 넘는 사람들을 감염시켰고 ~10% 치사율인 발병을 초래하였음) 및 2012년에 MERS (중동 호흡기 증후군) (MERS-CoV에 의해 유발되며, 지금까지 2,500명이 넘는 사람들을 감염시켰고 대략 35% 치사율임)를 포함한다.
본 출원 당시에, SARS-CoV-2로 명명된 새로운 코로나바이러스는 COVID-19로 지칭되는 중증 호흡기 질환을 유발하는 심각한 전세계 발병이 되었으며, 전세계 범유행이 되는 것이 확실해 보인다. 2019년말 중국 우한에서 최초 보고된 사례 이후, 현재 전세계적으로 100,000건이 넘는 사례가 확인되며, 3,500명이 넘게 사망하였다. SARS-CoV-2는 이제 역사상 가장 심각한 코로나바이러스 발병이다. MERS-CoV 및 SARS-CoV와 달리, SARS-CoV-2는 지금까지 90개 초과의 국가에서 사례가 확인되면서, 전세계 규모로 급속히 확산되었다.
다수의 신생 SARS-CoV-2 변이체가 있었다. 일부 SARS-CoV-2 변이체는 인간 ACE2 수용체에 대해 증진된 결합 친화도를 갖는 N439K 돌연변이를 함유한다 (Thomson, E.C., et al., "The circulating SARS-CoV-2 Spike variant N439K maintains fitness while evading antibody-mediated immunity." bioRxiv, 2020). 일부 SARS-CoV-2 변이체는 각각 영국 및 남아프리카에서 발견된 계통 B.1.1.7 (20I/501Y.V1 및 VOC 202012/01로도 공지됨) 및 B.1.351 (20H/501Y.V2로도 공지됨)을 비롯한, 증가된 전염성과 연관된 N501Y 돌연변이를 함유한다 (Tegally, H., et al., "Emergence and rapid spread of a new severe acute respiratory syndrome-related coronavirus 2 (SARS-CoV-2) lineage with multiple Spike mutations in South Africa." medRxiv, 2020: p. 2020.12.21.20248640; Leung, K., et al., "Early empirical assessment of the N501Y mutant strains of SARS-CoV-2 in the United Kingdom, October to November 2020." medRxiv, 2020: p. 2020.12.20.20248581). B.1.351은 또한 SARS-CoV-2 스파이크 단백질의 RBD 도메인에 2개의 다른 돌연변이 K417N 및 E484K를 포함한다 (Tegally, H., et al., "Emergence and rapid spread of a new severe acute respiratory syndrome-related coronavirus 2 (SARS-CoV-2) lineage with multiple Spike mutations in South Africa." medRxiv, 2020: p. 2020.12.21.20248640). 다른 SARS-CoV-2 변이체는 브라질에서 최초 보고된 계통 B.1.1.28; 일본에서 최초 보고된 변이체 P.1, 계통 B.1.1.28 (20J/501Y.V3으로도 공지됨); 미국 캘리포니아에서 최초 보고된 변이체 L452R (Pan American Health Organization, Epidemiological update: Occurrence of variants of SARS-CoV-2 in the Americas, January 20, 2021, reliefweb.int/sites/reliefweb.int/files/resources/2021-jan-20-phe-epi-update-SARS-CoV-2.pdf에서 이용가능함)을 포함한다. 다른 SARS-CoV-2 변이체는 계통군 19A의 SARS CoV-2; 계통군 19B의 SARS CoV-2; 계통군 20A의 SARS CoV-2; 계통군 20B의 SARS CoV-2; 계통군 20C의 SARS CoV-2; 계통군 20D의 SARS CoV-2; 계통군 20E (EU1)의 SARS CoV-2; 계통군 20F의 SARS CoV-2; 계통군 20G의 SARS CoV-2; SARS CoV-2 B1.1.207; 및 문헌 [Rambaut, A., et al., "A dynamic nomenclature proposal for SARS-CoV-2 lineages to assist genomic epidemiology." Nat Microbiol 5, 1403-1407 (2020)]에 기재된 다른 SARS CoV-2 계통을 포함한다.
이러한 발병에 대응하여, 질환을 치료, 예방 및 검출하기 위한 항체-기반 치료제, 예방제 및 진단제가 긴급히 필요하다. 각각의 이들 적용은 에피토프 인식, 친화도, 제조 용이성, 용해도 및 특이성을 비롯한 특이적 특성을 갖는 항체를 요구한다. 추가로, 치료 용도에 사용하기 위해, 인간 항체가 요구된다. 코로나바이러스에 대한 특이성을 갖는 인간 항체의 크고 다양한 라이브러리의 이용가능성은 신생 코로나바이러스 발병에 대한 신속한 대응을 위한 가치있는 자원일 것이며, 이는 치료, 예방 및 진단 용도에 적합한 항체의 신속한 스크리닝 및 선택을 가능하게 한다.
바이러스 위협에 대한 대책으로서의 항체
백신이 가장 저렴하고 가장 효과적인 보호 대책이지만, 그의 사용은 높은 항원 소변이, 항원 대변이를 갖는 바이러스에 대해서 제한적이고, 인수공통 숙주로부터 새로 발생하여 인간이 집단 면역을 거의 또는 전혀 갖고 있지 않는 바이러스 균주에 대해서도 제한적이다. 백신접종 후, 면역계가 보호 면역을 생성시키는 데 면역화-후 수일이 걸린다 - 이는 발병 지역에 인간의 노력이 신속히 배치되어야 하고 감염을 예방 또는 치료하기 위해 즉각적인 행위가 필요한 범유행성 상황에서는 종종 비실용적이다. 항바이러스 모노클로날 항체 (mAb)를 사용한 수동 면역화는 계절성 유행 및 빠르게-이동하는 범유행으로부터 위험에 처한 집단을 보호하기 위한 실행가능한 전략으로서 부상하였다.
상기 규모의 접근법을 배치하는 것과 연관된 도전은 예방제 또는 치료제로서 사용될 수 있는 중화 항체를 회복기 환자로부터 단리하기 위한 노력을 촉발하였다. 여러 그룹은 매우 짧은 기간 내에 고도로 강력한 mAb를 발견하고 전달하는 것이 실현가능하다는 것을 보여주었다. 2014-2015년 MERS-CoV 발병 동안, 두 그룹이 고도로 강력한 MERS-특이적 mAb를 단리하고, 이들을 그램 양으로 재조합적으로 생산하여, 이들을 비교적 짧은 기간 내에 동물 모델에서 시험하였다: 코르티(Corti) 및 동료들은 단일 인간 회복기 공여자로부터의 불멸화 B-세포 스크리닝으로부터 4개월 내에 예방적 보호 mAb를 생산하기에 이르렀다. 파스칼(Pascal) 및 동료들은 하이브리도마 및 B-세포 분류 방법 둘 다를 사용하여, 면역화된 트랜스제닉 마우스로부터 수주 내에 강력한 완전 인간 mAb를 확인하였다. 마찬가지로, 2015-2016년 에볼라 유행 동안, 여러 그룹은 회복기 인간 공여자의 기억 B-세포로부터 강력한 에볼라 바이러스 GP-특이적 중화 mAb를 신속하게 생성하였다. 이들 경우 모두에서, 대규모 배치에 충분한 양으로 항체 단백질을 제조하는 것은 적시에 효과적인 대책을 생성하는 데 제한 인자였다.
다수의 항바이러스 mAb가 전임상 및 임상 개발 중에 있지만, 단지 하나의 승인된 항바이러스 mAb만이 시장에 존재한다 (호흡기 세포융합 바이러스 (RSV)에 대한 메드이뮨(MedImmune)으로부터의 팔리비주맙). mAb가 다른 적응증, 예컨대 종양학 및 면역 장애에서 큰 성공을 경험하였지만, 항바이러스 mAb 발견에 있어서의 장애물은 주로 2가지 인자로부터 유래한다: 첫째, 비교적 높은 비용의 mAb 생산 및 요구되는 투여 프로토콜은 이러한 접근법을 전세계 규모로 적용하기 어렵게 만들 수 있다. 둘째, 감염된 개체 중 단지 적은 비율만이 높은 항원 가변성을 갖는 바이러스 (즉, HIV, 에볼라, 라사 및 인플루엔자)에 대한 광범위하고 강력한 중화 반응을 생성한다. 이들 희귀 mAb는 일반적으로 감염된 개체에서 B 세포의 적은 부분을 나타내므로, 이들을 찾기가 매우 어렵다.
하이브리도마 방법은 역사상 항체 발견의 주요 동인이었지만, 희귀 mAb를 찾아내는 데 매우 비효율적이다. 인 실리코 디스플레이 기술은 하이브리도마의 일부 비효율성을 극복하지만, mAb 패널은 이러한 방식으로 자연의 엄격한 선택 과정을 우회하여 결과적으로 종종 낮은 다양성과 불량한 개발가능성을 겪는 것으로 발견되었다. 사실상, 최근 희귀 mAb (즉, HIV, RSV, HMPV, 라사 및 HCMV에 대한 것) 발견의 급증은 환자 샘플을 직접 스크리닝할 수 있는 고처리량 단일 B 세포 접근법으로부터 비롯된다. 이러한 천연 면역-저장소의 고처리량 조사는 희귀 교차-반응성인 강력한 mAb를 확인할 수 있으며, 이는 투여 빈도 및 그와 함께 단위 치료 비용을 감소시킬 수 있다. 분자 조작은 추가적으로 효력 및 교차-반응성 둘 다를 개선시키고, mAb 반감기를 연장시킬 수 있다. 핵산-기반 mAb 전달에서의 최근의 진보는 비용 및 투여 빈도 둘 다를 감소시킬 가능성을 보여주었다. 임상 연구는 치쿤군야 바이러스에 대한 mRNA-코딩 항체의 투여가 인간 환자에서 독성 없이 중화 역가를 생성할 수 있다는 것을 입증하였다. 이들은 추가로 상업적 규모에서 고순도로 생산될 수 있고, 저장 및 운송을 용이하게 하도록 제제화될 수 있으며, 이는 모두 mAb를 신속하게 및 전세계적으로 배치하는 데 중요한 인자이다.
범유행 대응
미국 방위 고등 연구 계획국 (DARPA)의 범유행 예방 플랫폼 (P3) 프로그램에 본 발명자들이 참여한 것의 일부로서, 본 발명자들은 임의의 바이러스 발병에 대응하여 현장-준비된 치료 대책의 발견 및 전달을 위한 초고속 대응 파이프라인을 구축하는 것을 목표로 한다. P3 하에, 모의 범유행 시나리오에서, 본 발명자들은 마이크로유체 고처리량 단일 B 세포 스크리닝을 사용하여 인간 공여자로부터 직접 범유행성 2009년 H1N1 인플루엔자에 대한 mAb를 발견하였다. 본 발명자들은 스크리닝 동안 mAb의 고-신뢰도 선택을 자동화하기 위한 기계 학습 도구를 설계하였고, 수백개의 H1-반응성 mAb를 신속하게 서열분석하였으며, 생물정보학 파이프라인 및 데이터 가시화 소프트웨어를 사용하여 전임상 시험을 위한 후보를 범위 좁혀 선택하였다. 본 발명자들은 고처리량 및 자동화 클로닝 및 발현 전략을 개발하여 중화 검정을 위한 재조합 mAb를 생성한 다음, 치사 챌린지 마우스 모델에 플라스미드 DNA로서 코딩된 상위 중화제 (DMAb)를 투여하였으며, 이는 20x LD50 용량의 범유행성 H1N1 인플루엔자 바이러스에 대해 100% 보호를 나타냈다. 이러한 성공적인 전임상 시험에 대한 발견의 입증은 단지 55일에 걸쳐 이루어졌으며, 이는 DMAb가 전임상 질환 모델에서 범유행성 바이러스 균주를 중화시키는 데 효과적일 수 있다는 것 및 범유행성 바이러스에 대한 대책으로서 치료 mAb의 신생 발견 및 개발이 신속한 대응 타임라인 내에서 가능하다는 것을 보여준다.
본 개시내용은 SARS-CoV 및 SARS-CoV-2-연관 질환, 예컨대 COVID-19의 진단, 모니터링 및 치료 또는 예방에 사용될 수 있는 방법, 물질의 조성물 및 제조 물품에 관한 것이다. 이를 위해, 코로나바이러스, 예를 들어 SARS-CoV-2의 스파이크 (S) 단백질에 대한 완전 인간 항체의 대형 라이브러리가 본원에 제공된다. 이들 항체의 중쇄 및 경쇄 가변 영역 (VH 및 VL)의 서열을 코로나바이러스로의 감염 후 회복기 환자로부터 처음 확인하고, 전장 인간 IgG1 이소형 (예를 들어, IgG1m3 동종이형)으로 전환시키고, 이들 항체의 재조합 버전을 후속적으로 생산하고, 본원에 기재된 바와 같이 특징화하였다. 따라서, 이들 항체는 사실상 재조합 항체이다. 본원에 제공된 항체는 각각 SARS-CoV-2 바이러스의 스파이크 단백질에 결합하고, 항체 중 일부는 1종 이상의 다른 코로나바이러스의 스파이크 단백질과 교차-반응한다.
한 실시양태에서, 라이브러리는 라이브러리의 각각의 구성원의 중쇄 및 경쇄 가변 영역의 전자 DNA 서열의 수집물로서 저장된다. 또 다른 실시양태에서, 라이브러리는 라이브러리 내의 각각의 구성원의 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 코딩하는 DNA 분자로서 저장된다. 또 다른 실시양태에서, 라이브러리는 신속한 시험을 위한 항체 단백질 분자로서 저장된다. 또 다른 실시양태에서, 라이브러리는 단백질 대신 핵산으로서 인간에게 직접 투여하기에 적합한 mRNA 또는 DNA 포맷 및 발현 벡터로, 항체 단백질의 핵산-코딩 버전으로서 저장된다.
내부 명칭 항체 258 내지 577 및 589 내지 1587로 주석달린 1329종의 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체)의 라이브러리가 본원에 개시되고, 서열식별번호: 1-5316에 제시된다. 이들 항체의 중쇄 가변 영역 (VH)을 코딩하는 핵산은 본원에 상술된 서열식별번호: 1-660, 1321-2750 및 4181-4748 중 홀수 번호 서열에 제시된다. 이들 항체의 경쇄 가변 영역 (VL)을 코딩하는 핵산은 본원에 상술된 서열식별번호: 1-660, 1321-2750 및 4181-4748 중 짝수 번호 서열에 제시된다. 이들 항체의 중쇄 가변 영역 (VH)의 아미노산 서열은 본원에 상술된 서열식별번호: 661-1320, 2751-4180 및 4749-5316 중 홀수 번호 서열에 제시된다. 이들 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 본원에 상술된 서열식별번호: 661-1320, 2751-4180 및 4749-5316 중 짝수 번호 서열에 제시된다. 관련 기술분야의 통상의 기술자가 인지할 바와 같이, 임의의 특정한 항체에 관한 4개의 서열은 다른 항체에 관한 서열과 별개일 것이다. 예를 들어, 제1 항체 (258로 지정됨)에 배정된 서열식별번호는 서열식별번호: 1, 2, 661 및 662인 반면, 제2 항체 (259로 지정됨)에 배정된 서열식별번호는 서열식별번호: 3, 4, 663 및 664인 것 등이고, 서열식별번호: 4747, 4748, 5315 및 5316이 배정된 제1329 항체 (1587로 지정됨)까지 계속해서 그러하다.
일부 실시양태에서, 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체) 또는 그의 항원-결합 단편은 (a) CDR-H1의 경우 잔기 31-35, CDR-H2의 경우 잔기 50-65 및 CDR-H3의 경우 잔기 95-102를 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 (b) CDR-L1의 경우 잔기 24-34, CDR-L2의 경우 잔기 50-56 및 CDR-L3의 경우 잔기 89-97을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하며; 여기서 CDR 넘버링은 카바트(Kabat)에 따른다.
일부 실시양태에서, 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체) 또는 그의 항원-결합 단편은 (a) CDR-H1의 경우 잔기 26-32, CDR-H2의 경우 잔기 50-58 및 CDR-H3의 경우 잔기 95-102를 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 (b) CDR-L1의 경우 잔기 24-34, CDR-L2의 경우 서열식별번호: 62의 잔기 50-56 및 CDR-L3의 경우 서열식별번호: 62의 잔기 89-97을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하며; 여기서 CDR 넘버링은 코티아(Chothia)에 따른다.
일부 실시양태에서, 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체) 또는 그의 항원-결합 단편은 (a) CDR-H1의 경우 잔기 30-35, CDR-H2의 경우 잔기 47-58 및 CDR-H3의 경우 잔기 93-101을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 (b) CDR-L1의 경우 잔기 30-36, CDR-L2 및 CDR-L3의 경우 잔기 46-55를 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하며; 여기서 CDR 넘버링은 맥칼룸(MacCallum)에 따른다.
일부 실시양태에서, 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체)는 완전한 중쇄 및 경쇄에 의해 정의된다. 이들 항체의 중쇄의 아미노산 서열은 서열식별번호: 5319-5366, 5575-5592 및 5707-5744 중 홀수 번호에 제시되고, 이들 항체의 경쇄의 아미노산 서열은 서열식별번호: 5319-5366, 5575-5592 및 5707-5744 중 짝수 번호에 제시된다.
일부 실시양태에서, 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체) 또는 그의 항원-결합 단편은 서열식별번호: 661-1320, 2751-4180 및 4749-5316에 명백하게 개시된 중쇄 가변 영역 서열 중 1개에 대해 적어도 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 661-1320, 2751-4180 및 4749-5316에 명백하게 개시된 경쇄 가변 영역 서열 중 1개에 대해 적어도 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항체 라이브러리의 구성원은 SARS-CoV-2에 특이적이다. 일부 실시양태에서, 항체는 SARS-CoV 및 SARS-CoV-2 스파이크 단백질에 대해 교차-반응하는 것으로 공지되어 있다. 일부 실시양태에서, 항체는 SARS-CoV 스파이크 단백질에 특이적이다.
일부 실시양태에서, 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체) 또는 그의 항원-결합 단편은 중화 항체이다. 다른 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 고갈성 항체이다.
일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 적어도 1개의 아미노산 치환을 포함한다. 특정한 실시양태에서, 적어도 1개의 아미노산 치환은 보존적 치환이다. 일부 실시양태에서, 적어도 1개의 아미노산 치환은 비-유전자 코딩된 아미노산 또는 합성 아미노산으로의 아미노산 치환이다.
일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 면역조정제, 시토카인, 세포독성제, 화학요법제, 진단제, 항바이러스제, 항미생물제 또는 약물에 접합된다.
일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 제약 조성물로서 제제화된다. 일부 실시양태에서, 제약 조성물은 1종 이상의 제약상 허용되는 담체, 희석제 또는 부형제를 포함할 수 있다. 특정한 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 제제화 전에 면역조정제, 시토카인, 세포독성제, 화학요법제, 진단제, 항바이러스제, 항미생물제 또는 약물에 접합될 수 있다.
본원에 개시된 발명은 또한 본원에 개시된 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체) 및 그의 항원-결합 단편의 일부 또는 모두를 코딩하는 단리된 핵산을 포괄한다. 일부 실시양태에서, 상기 핵산은 벡터 내로 혼입될 수 있다. 일부 실시양태에서, 상기 핵산은 숙주 세포 내로 혼입될 수 있거나 또는 벡터 내로 혼입된 다음 숙주 세포 내로 혼입될 수 있다.
본원에 개시된 발명은 또한 세포를 검출가능한 작용제에 접합된 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체) 또는 그의 항원-결합 단편과 접촉시키는 단계 및 세포에 대한 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 특이적 결합을 검출하는 단계를 포함하는, SARS-CoV-2-감염된 세포를 확인하는 방법을 포괄한다.
본원에 개시된 발명은 또한 SARS-CoV-2 질환 (예컨대 COVID-19)에 대한 백신 (예를 들어, 불활성화 바이러스)의 개발 및 생산을 위한 시험 시약으로서 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체) 또는 그의 항원-결합 단편을 사용하는 방법을 포괄한다.
본원에 개시된 발명은 또한 환자로부터 수득된 샘플을 검출가능한 작용제에 접합된 SARS-CoV-2 항체 또는 그의 항원-결합 단편과 접촉시키는 단계 및 샘플에 존재하는 SARS-CoV-2 항원에 대한 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 특이적 결합을 검출하는 단계를 포함하는, 환자에서 SARS-CoV-2 감염을 진단하는 방법을 포괄한다.
본원에 개시된 발명은 또한 환자에게 치료 유효량의 SARS-CoV-2 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 투여하는 것을 포함하는, SARS-CoV-연관 질환 (SARS) 또는 SARS-CoV-2-연관 질환 (예컨대 COVID-19)을 치료하는 방법을 포괄한다. 투여 전에, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 (예를 들어, 항바이러스제에) 접합되거나 또는 제약 조성물로서 제제화될 수 있다.
본원에 개시된 발명은 또한 SARS-CoV-2 항체 또는 그의 항원-결합 단편 또는 항체 접합체 또는 제약 조성물을 포함하는 리셉터클, 뿐만 아니라 SARS-CoV-2-연관 질환을 치료 또는 진단하는 데 그를 사용하는 것에 대한 지침서를 포함하는, SARS-CoV-2-연관 질환을 진단 또는 치료하는 데 유용한 제조 물품를 포괄한다.
본원에 개시된 발명은 또한 숙주 세포를 항체가 발현되도록 하는 조건 하에 배양하는 단계 및 발현된 항체를 회수하는 단계를 포함하는, SARS-CoV-2 항체를 생산하는 방법을 포괄한다.
상기는 개요이고, 따라서 필요에 따라 세부사항의 단순화, 일반화 및 생략을 함유하며; 그에 따라, 관련 기술분야의 통상의 기술자는 개요가 단지 예시적이고, 어떠한 방식으로도 제한적인 것으로 의도되지 않는다는 것을 인지할 것이다. 본원에 기재된 방법, 조성물 및/또는 장치 및/또는 다른 대상의 다른 측면, 특색 및 이점은 본원에 제시된 교시에서 분명해질 것이다. 개요는 하기 상세한 설명에 추가로 기재되는 선택 개념을 단순화된 형태로 소개하기 위해 제공된다. 본 개요는 청구된 대상의 주요 특색 또는 본질적 특색을 확인하고자 하는 것이 아니며, 청구된 대상의 범주를 결정하는 데 도움을 주기 위해 사용하고자 하는 것도 아니다.
도 1은 카테라(CARTERRA)® 에피토프 분석 소프트웨어를 사용한 에피토프 비닝 실험으로부터 생성된 히트 맵이다. 결합 신호를 1 RU (상대 단위)와 등가인 Ag-단독 신호 평균에 대해 정규화하였다. 한계값 윈도우 (0.9 RU 내지 1.1 RU)를 사용하여 분석물을 3개의 카테고리, 즉 차단제 (하한치 한계값 미만의 결합 신호를 갖는 분석물), 샌드위처 (상한치 한계값 초과의 결합 신호를 갖는 분석물) 및 모호함 (하한치와 상한치 한계값 사이에 속하는 신호를 갖는 분석물)으로 분류하였다. 소프트웨어는 유사-거동 mAb를 히트 맵 내로 자동으로 클러스터링한다. B=차단제 (서로 차단하고 동일한 에피토프에 대해 경쟁할 가능성이 있는 2종의 mAb; 중간 회색). NB=비-차단제 (서로 차단하지 않고 2종의 상이한 에피토프에 결합할 가능성이 있는 2종의 mAb 또는 "샌드위치"; 백색). A=모호함 (담회색). 자기-대-자기 상호작용은 암회색으로 강조된다.
도 2a는 SARS-CoV-2 스파이크 단백질에 대한 Fab 555의 결합 동역학 곡선을 보여준다. 도 2b는 삼량체 SARS-CoV-2 스파이크 단백질과 복합체화된 Fab 555의 대표적인 음성 염색 전자 현미경검사 영상을 보여준다. 도 2c는 클래스-평균 영상 밀도 내에서의 Fab 555와 SARS-CoV-2 스파이크 단백질의 복합체의 3차원 재구축을 보여주며; 여기서 펩티드 영역은 암회색으로 라벨링된 HDXMS 실험으로부터 유래된 에피토프 정보에 상응한다.
도 3a는 SARS-CoV-2 스파이크 단백질에 대한 Fab 447의 결합 동역학 곡선을 보여준다. 도 3b는 삼량체 SARS-CoV-2 스파이크 단백질과 복합체화된 Fab 447의 대표적인 음성 염색 전자 현미경검사 영상을 보여준다. 도 3c는 클래스-평균 영상 밀도 내에서의 Fab 447과 SARS-CoV-2 스파이크 단백질의 복합체의 3차원 재구축을 보여준다.
도 4a는 SARS-CoV-2 스파이크 단백질에 대한 Fab 483의 결합 동역학 곡선을 보여준다. 도 4b는 삼량체 SARS-CoV-2 스파이크 단백질과 복합체화된 Fab 483의 대표적인 음성 염색 전자 현미경검사 영상을 보여준다. 도 4c는 클래스-평균 영상 밀도 내에서의 Fab 483과 SARS-CoV-2 스파이크 단백질의 복합체의 3차원 재구축을 보여준다.
도 5a는 SARS-CoV-2 스파이크 단백질에 대한 Fab 419의 결합 동역학 곡선을 보여준다. 도 5b는 삼량체 SARS-CoV-2 스파이크 단백질과 복합체화된 Fab 419의 대표적인 음성 염색 전자 현미경검사 영상을 보여준다. 도 5c는 클래스-평균 영상 밀도 내에서의 Fab 419와 SARS-CoV-2 스파이크 단백질의 복합체의 3차원 재구축을 보여준다.
도 6a는 SARS-CoV-2 스파이크 단백질에 대한 Fab 388의 결합 동역학 곡선을 보여준다. 도 6b는 삼량체 SARS-CoV-2 스파이크 단백질과 복합체화된 Fab 388의 대표적인 음성 염색 전자 현미경검사 영상을 보여준다. 도 6c는 클래스-평균 영상 밀도 내에서의 Fab 388과 SARS-CoV-2 스파이크 단백질의 복합체의 3차원 재구축을 보여준다.
도 7은 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 상의 Fab 555, 447, 483, 419, 388의 상대 결합 부위를 보여준다.
도 8a는 SARS-CoV-2 스파이크 단백질에 대한 Fab 494의 결합 동역학 곡선을 보여준다. 도 8b는 삼량체 SARS-CoV-2 스파이크 단백질과 복합체화된 Fab 494의 대표적인 음성 염색 전자 현미경검사 영상을 보여준다. 도 8c는 클래스-평균 영상 밀도 내에서의 Fab 494와 SARS-CoV-2 스파이크 단백질의 복합체의 3차원 재구축을 보여준다.
도 9a는 X선 결정학에 의해 결정 시 구조화된 LY-CoV555/481/488: RBD 도메인 복합체의 Fab의 리본 다이어그램이다. 도 9b는 RBD-ACE2 복합체의 구조 (PDB ID: 6M0J)로부터의 ACE2 수용체와 중첩된 LY-CoV555 복합체의 RBD-Fab의 결정 구조를 보여준다. 도 9c는 LY-CoV555 경쇄의 Fab와 SARS-CoV-2 스파이크 단백질의 RBD의 계면에서의 주요 원자 상호작용의 확대도이다. 도 9d는 LY-CoV555 중쇄의 Fab와 SARS-CoV-2 스파이크 단백질의 RBD의 계면에서의 주요 원자 상호작용의 확대도이다. 도 9e는 모든 3개의 Fab를 가시화하기 위해 8Å 해상도로 저역-통과 필터링되고 낮은 한계값으로 제시된 LY-CoV 555-스파이크 단백질 복합체의 Fab의 극저온-EM 구조를 보여준다. 도 9f는 LY-CoV555-스파이크 단백질 복합체의 Fab의 고해상도 극저온-EM 맵이다.
도 10a-10h는 SARS-CoV-2로 챌린지된 레서스 마카크에서의 바이러스 로드에 대한 mAb 555 (일명 LY-CoV555)의 효과를 보여준다. 바이러스 챌린지 24시간 전에, 레서스 마카크에게 다양한 양의 LY-CoV555를 단일 IV 용량으로서 투여하였다. BAL (도 10a 및 10b), 인후 스왑 (도 10c 및 10d), 비강 스왑 (도 10e 및 10f) 또는 폐 조직 (도 10g 및 10h)에서의 바이러스 로드를 접종-후 6일의 과정에 걸쳐 qRT-PCR에 의해 게놈 RNA (도 10a, 10c, 10e, 10g) 또는 서브게놈 mRNA (도 10b, 10d, 10f, 10h)를 측정함으로써 평가하였다. 도 10a-10f: 값은 3 또는 4마리의 동물에 대한 평균 및 평균의 표준 오차를 나타낸다. 도 10g 및 10h: 막대는 3 또는 4마리의 동물의 평균을 나타낸다. 정량 하한치 (LLOQ) 미만의 샘플을 1/2 LLOQ의 값으로 지정하였다. LLOQ = 게놈 또는 sg mRNA에 대한 50 카피.
도 11은 Vero 76/E6 세포에서 SARS-CoV-2 (hCoV-19/캐나다/ON_ON-VIDO-01-2/202)를 중화시키는 mAb 555 및 1404의 능력을 입증하는 일련의 플라크 감소 중화 시험의 결과를 보여주는 선 그래프이다. 각각의 항체의 IC50은 X-축 위의 하부 우측 코너에 제공된다.
도 12는 Vero 76/E6 세포에서 SARS-CoV-2 (MT020880.1)를 중화시키는 mAb 555 및 1404의 능력을 입증하는 일련의 면역형광 검정의 결과를 보여주는 선 그래프이다. 각각의 항체의 IC50은 X-축 위의 하부 우측 코너에 제공된다.
본 발명은 많은 상이한 형태로 구현될 수 있지만, 본 발명의 원리를 예시하는 그의 구체적인 예시적 실시양태가 본원에 개시된다. 본 발명이 예시된 구체적 실시양태에 제한되지 않는다는 것이 강조되어야 한다. 더욱이, 본원에 사용된 임의의 섹션 표제는 단지 조직화 목적을 위한 것이며, 기재된 대상을 제한하는 것으로 해석되어서는 안된다.
본원에 달리 정의되지 않는 한, 본 발명과 관련하여 사용된 과학 기술 용어는 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 통상적으로 이해되는 의미를 가질 것이다. 추가로, 문맥상 달리 요구되지 않는 한, 단수 용어는 복수를 포함할 것이고, 복수 용어는 단수를 포함할 것이다. 보다 구체적으로, 본 명세서 및 첨부된 청구범위에 사용된 단수 형태는 문맥이 달리 명확하게 지시하지 않는 한 복수 지시대상을 포함한다. 따라서, 예를 들어 "단백질"에 대한 언급은 복수의 단백질을 포함하고; "세포"에 대한 언급은 세포의 혼합물 등을 포함한다. 추가로, 명세서 및 첨부된 청구범위에 제공된 범위는 종점 둘 다 및 종점 사이의 모든 포인트를 포함한다. 따라서, 2.0 내지 3.0의 범위는 2.0, 3.0 및 2.0과 3.0 사이의 모든 포인트를 포함한다.
일반적으로, 본원에 기재된 세포 및 조직 배양, 분자 생물학, 면역학, 미생물학, 유전학 및 단백질 및 핵산 화학 및 혼성화와 관련하여 사용된 명명법 및 그의 기술은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있고 통상적으로 사용되는 것이다. 본 발명의 방법 및 기술은 일반적으로 관련 기술분야에 널리 공지된 통상적인 방법에 따라 및 달리 나타내지 않는 한 본 명세서 전반에 걸쳐 인용되고 논의된 다양한 일반적 참고문헌 및 보다 구체적인 참고문헌에 기재된 바와 같이 수행된다. 효소적 반응 및 정제 기술은 제조업체의 설명서에 따라, 관련 기술분야에서 통상적으로 달성되는 바와 같이 또는 본원에 기재된 바와 같이 수행된다. 본원에 기재된 분석 화학, 합성 유기 화학 및 의약 및 제약 화학과 관련하여 사용된 명명법 및 그의 실험실 절차 및 기술은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있고 통상적으로 사용되는 것이다.
본 발명의 예시적인 실시양태
특정한 실시양태에서, 본원에 개시된 발명은 SARS-CoV-2 항원, SARS-CoV-2 바이러스 입자 또는 SARS-CoV-2-감염된 세포에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포괄하며, 여기서 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 하기를 포함한다:
(a) 서열식별번호: 661로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 662로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
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(c) 서열식별번호: 665로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 666으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(d) 서열식별번호: 667로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 668로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(e) 서열식별번호: 669로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 670으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(f) 서열식별번호: 671로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 672로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(g) 서열식별번호: 673으로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 674로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
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(i) 서열식별번호: 677로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 678로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
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(k) 서열식별번호: 681로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 682로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(l) 서열식별번호: 683으로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 684로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(m) 서열식별번호: 685로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 686으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
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(s) 서열식별번호: 677로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 678로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
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(u) 서열식별번호: 681로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 682로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
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(y) 서열식별번호: 689로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 690으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
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(k - i) 서열식별번호: 713으로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 714로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
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(o - i) 서열식별번호: 721로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 722로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
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(q - i) 서열식별번호: 725로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 726으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(r - i) 서열식별번호: 727로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 728로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
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(u - i) 서열식별번호: 733으로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 734로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(v - i) 서열식별번호: 735로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 736으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
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(y - i) 서열식별번호: 741로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 742로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(z - i) 서열식별번호: 743으로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 744로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
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(b - ii) 서열식별번호: 747로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 748로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(c - ii) 서열식별번호: 749로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 750으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(d - ii) 서열식별번호: 751로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 752로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(e - ii) 서열식별번호: 753으로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 754로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(f - ii) 서열식별번호: 755로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 756으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(g - ii) 서열식별번호: 757로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 758로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(h - ii) 서열식별번호: 759로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 760으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(i - ii) 서열식별번호: 761로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 762로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
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(l - ii) 서열식별번호: 767로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 768로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
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(n - ii) 서열식별번호: 771로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 772로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(o - ii) 서열식별번호: 773으로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 774로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(p - ii) 서열식별번호: 775로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 776으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(q - ii) 서열식별번호: 777로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 778로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(r - ii) 서열식별번호: 779로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 780으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(s - ii) 서열식별번호: 781로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 782로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(t - ii) 서열식별번호: 783으로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 784로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(u - ii) 서열식별번호: 785로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 786으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(v - ii) 서열식별번호: 787로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 788로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(w - ii) 서열식별번호: 789로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 790으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(x - ii) 서열식별번호: 791로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 792로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(y - ii) 서열식별번호: 793으로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 794로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(z - ii) 서열식별번호: 795로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 796으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
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(q - iv) 서열식별번호: 881로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 882로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
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(q - vi) 서열식별번호: 985로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 986으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(r - vi) 서열식별번호: 987로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 988로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(s - vi) 서열식별번호: 989로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 990으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(t - vi) 서열식별번호: 991로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 992로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(u - vi) 서열식별번호: 993으로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 994로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(v - vi) 서열식별번호: 995로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 996으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(w - vi) 서열식별번호: 997로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 998로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(x - vi) 서열식별번호: 999로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1000으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(y - vi) 서열식별번호: 1001로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1002로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(z - vi) 서열식별번호: 1003으로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1004로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(a - vii) 서열식별번호: 1005로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1006으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(b - vii) 서열식별번호: 1007로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1008로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
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(f - vii) 서열식별번호: 1015로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1016으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(g - vii) 서열식별번호: 1017로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1018로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
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(i - vii) 서열식별번호: 1021로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1022로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(j - vii) 서열식별번호: 1023으로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1024로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(k - vii) 서열식별번호: 1025로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1026으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(l - vii) 서열식별번호: 1027로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1028로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(m - vii) 서열식별번호: 1029로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1030으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(n - vii) 서열식별번호: 1031로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1032로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(o - vii) 서열식별번호: 1033으로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1034로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(p - vii) 서열식별번호: 1035로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1036으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(q - vii) 서열식별번호: 1037로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1038로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(r - vii) 서열식별번호: 1039로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1040으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(s - vii) 서열식별번호: 1041로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1042로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(t - vii) 서열식별번호: 1043으로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1044로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(u - vii) 서열식별번호: 1045로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1046으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(v - vii) 서열식별번호: 1047로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1048로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(w - vii) 서열식별번호: 1049로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1050으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(x - vii) 서열식별번호: 1051로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1052로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(y - vii) 서열식별번호: 1053으로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1054로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(z - vii) 서열식별번호: 1055로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1056으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(a - viii) 서열식별번호: 1057로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1058로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(b - viii) 서열식별번호: 1059로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1060으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(c - viii) 서열식별번호: 1061로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1062로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(d - viii) 서열식별번호: 1063으로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1064로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(e - viii) 서열식별번호: 1065로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1066으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(f - viii) 서열식별번호: 1067로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1068로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(g - viii) 서열식별번호: 1069로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1070으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(h - viii) 서열식별번호: 1071로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1072로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(i - viii) 서열식별번호: 1073으로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1074로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(j - viii) 서열식별번호: 1075로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1076으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
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(n - viii) 서열식별번호: 1083으로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1084로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(o - viii) 서열식별번호: 1085로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1086으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(p - viii) 서열식별번호: 1087로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1088로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(q - viii) 서열식별번호: 1089로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1090으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
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(y - vii) 서열식별번호: 1105로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1106으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(z - viii) 서열식별번호: 1107로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1108로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(a - vix) 서열식별번호: 1109로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1110으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(b - vix) 서열식별번호: 1111로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1112로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(c - vix) 서열식별번호: 1113으로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1114로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(d - vix) 서열식별번호: 1115로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1116으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(e - vix) 서열식별번호: 1117로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1118로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(f - vix) 서열식별번호: 1119로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1120으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(g - vix) 서열식별번호: 1121로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1122로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(h - vix) 서열식별번호: 1123으로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1124로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(i - vix) 서열식별번호: 1125로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1126으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(j - vix) 서열식별번호: 1127로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1128로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(k - vix) 서열식별번호: 1129로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1130으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(l - vix) 서열식별번호: 1131로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1132로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(m - vix) 서열식별번호: 1133으로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1134로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(n - vix) 서열식별번호: 1135로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1136으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
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(y - ix) 서열식별번호: 1157로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1158로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(z - ix) 서열식별번호: 1159로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1160으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(a - x) 서열식별번호: 1161로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1162로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(b - x) 서열식별번호: 1163으로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1164로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(c - x) 서열식별번호: 1165로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1166으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(d - x) 서열식별번호: 1167로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1168로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(e - x) 서열식별번호: 1169로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1170으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(f - x) 서열식별번호: 1171로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1172로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(g - x) 서열식별번호: 1173으로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1174로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
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(k - x) 서열식별번호: 1181로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1182로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
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(n - x) 서열식별번호: 1187로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1188로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
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(p - x) 서열식별번호: 1191로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1192로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(q - x) 서열식별번호: 1193으로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1194로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(r - x) 서열식별번호: 1195로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1196으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(s - x) 서열식별번호: 1197로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1198로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(t - x) 서열식별번호: 1199로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1200으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(u - x) 서열식별번호: 1201로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1202로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(v - x) 서열식별번호: 1203으로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1204로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(w - x) 서열식별번호: 1205로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1206으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(x - x) 서열식별번호: 1207로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1208로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(y - x) 서열식별번호: 1209로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1210으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(z - x) 서열식별번호: 1211로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1212로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
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(i - xi) 서열식별번호: 1229로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1230으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
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(r - xi) 서열식별번호: 1247로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1248로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
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(v - xi) 서열식별번호: 1255로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1256으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
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(a - xii) 서열식별번호: 1265로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1266으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(b - xii) 서열식별번호: 1267로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1268로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(c - xii) 서열식별번호: 1269로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1270으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(d - xii) 서열식별번호: 1271로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1272로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(e - xii) 서열식별번호: 1273으로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1274로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(f - xii) 서열식별번호: 1275로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1276으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(g - xii) 서열식별번호: 1277로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1278로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(h - xii) 서열식별번호: 1279로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1280으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(i - xii) 서열식별번호: 1281로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1282로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(j - xii) 서열식별번호: 1283으로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1284로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(k - xii) 서열식별번호: 1285로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1286으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(l - xii) 서열식별번호: 1287로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1288로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(m - xii) 서열식별번호: 1289로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1290으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(n - xii) 서열식별번호: 1291로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1292로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(o - xii) 서열식별번호: 1293으로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1294로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(p - xii) 서열식별번호: 1295로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1296으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(q - xii) 서열식별번호: 1297로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1298로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(r - xii) 서열식별번호: 1299로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1300으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(s - xii) 서열식별번호: 1301로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1302로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(t - xii) 서열식별번호: 1303으로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1304로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(u - xii) 서열식별번호: 1305로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1306으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(v - xii) 서열식별번호: 1307로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1308로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(w - xii) 서열식별번호: 1309로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1310으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(x - xii) 서열식별번호: 1311로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1312로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(y - xii) 서열식별번호: 1313으로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1314로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(z - xii) 서열식별번호: 1315로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1316으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(a - xiii) 서열식별번호: 1317로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1318로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(b - xiii) 서열식별번호: 1319로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1320으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(c - xiii) 서열식별번호: 2751로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 2752로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(d - xiii) 서열식별번호: 2753으로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 2754로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(e - xiii) 서열식별번호: 2755로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 2756으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(f - xiii) 서열식별번호: 2757로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 2758로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(g - xiii) 서열식별번호: 2759로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 2760으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(h - xiii) 서열식별번호: 2761로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 2762로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(i - xiii) 서열식별번호: 2763으로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 2764로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(j - xiii) 서열식별번호: 2765로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 2766으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(k - xiii) 서열식별번호: 2767로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 2768로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(l - xiii) 서열식별번호: 2769로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 2770으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(m - xiii) 서열식별번호: 2771로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 2772로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(n - xiii) 서열식별번호: 2773으로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 2774로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
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(t - xiii) 서열식별번호: 2785로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 2786으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(u - xiii) 서열식별번호: 2787로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 2788로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(v - xiii) 서열식별번호: 2789로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 2790으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(w - xiii) 서열식별번호: 2791로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 2792로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(x - xiii) 서열식별번호: 2793으로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 2794로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(y - xiii) 서열식별번호: 2795로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 2796으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(z - xiii) 서열식별번호: 2797로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 2798로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(a - xiv) 서열식별번호: 2799로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 2800으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(b - xiv) 서열식별번호: 2801로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 2802로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(c - xiv) 서열식별번호: 2803으로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 2804로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(d - xiv) 서열식별번호: 2805로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 2806으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(e - xiv) 서열식별번호: 2807로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 2808로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(f - xiv) 서열식별번호: 2809로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 2810으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
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(i - xv) 서열식별번호: 2867로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 2868로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(j - xv) 서열식별번호: 2869로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 2870으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(k - xv) 서열식별번호: 2871로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 2872로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(l - xv) 서열식별번호: 2873으로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 2874로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
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(w - xv) 서열식별번호: 2895로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 2896으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(x - xv) 서열식별번호: 2897로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 2898로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
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(a - xvi) 서열식별번호: 2903으로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 2904로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(b - xvi) 서열식별번호: 2905로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 2906으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(c - xvi) 서열식별번호: 2907로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 2908로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(d - xvi) 서열식별번호: 2909로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 2910으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(e - xvi) 서열식별번호: 2911로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 2912로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(f - xvi) 서열식별번호: 2913으로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 2914로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
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(v - xvi) 서열식별번호: 2945로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 2946으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(w - xvi) 서열식별번호: 2947로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 2948로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(x - xvi) 서열식별번호: 2949로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 2950으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(y - xvi) 서열식별번호: 2951로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 2952로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(z - xvi) 서열식별번호: 2953으로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 2954로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(a - xvii) 서열식별번호: 2955로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 2956으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(b - xvii) 서열식별번호: 2957로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 2958로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(c - xvii) 서열식별번호: 2959로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 2960으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(d - xvii) 서열식별번호: 2961로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 2962로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(e - xvii) 서열식별번호: 2963으로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 2964로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
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(s - xviii) 서열식별번호: 3045로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3046으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(t - xviii) 서열식별번호: 3047로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3048로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(u - xviii) 서열식별번호: 3049로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3050으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
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(l - xix) 서열식별번호: 3083으로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3084로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
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(r - xx) 서열식별번호: 3147로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3148로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(s - xx) 서열식별번호: 3149로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3150으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
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(i - xxi) 서열식별번호: 3181로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3182로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(j - xxi) 서열식별번호: 3183으로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3184로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(k - xxi) 서열식별번호: 3185로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3186으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(l - xxi) 서열식별번호: 3187로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3188로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(m - xxi) 서열식별번호: 3189로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3190으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(n - xxi) 서열식별번호: 3191로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3192로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(o - xxi) 서열식별번호: 3193으로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3194로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(p - xxi) 서열식별번호: 3195로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3196으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(q - xxi) 서열식별번호: 3197로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3198로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(r - xxi) 서열식별번호: 3199로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3200으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(s - xxi) 서열식별번호: 3201로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3202로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(t - xxi) 서열식별번호: 3203으로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3204로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
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(v - xxi) 서열식별번호: 3207로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3208로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
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(z - xxi) 서열식별번호: 3215로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3216으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
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(b - xxii) 서열식별번호: 3219로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3220으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
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(o - xxii) 서열식별번호: 3245로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3246으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
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(h - xxiii) 서열식별번호: 3283으로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3284로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(i - xxiii) 서열식별번호: 3285로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3286으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(j - xxiii) 서열식별번호: 3287로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3288로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(k - xxiii) 서열식별번호: 3289로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3290으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(l - xxiii) 서열식별번호: 3291로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3292로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(m - xxiii) 서열식별번호: 3293으로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3294로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(n - xxiii) 서열식별번호: 3295로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3296으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(o - xxiii) 서열식별번호: 3297로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3298로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
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(c - xxiv) 서열식별번호: 3325로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3326으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
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(i - xxiv) 서열식별번호: 3337로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3338로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(j - xxiv) 서열식별번호: 3339로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3340으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
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(l - xxiv) 서열식별번호: 3343으로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3344로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
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(x - xxiv) 서열식별번호: 3367로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3368로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(y - xxiv) 서열식별번호: 3369로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3370으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(z - xxiv) 서열식별번호: 3371로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3372로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
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(i - xxv) 서열식별번호: 3389로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3390으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(j - xxv) 서열식별번호: 3391로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3392로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(k - xxv) 서열식별번호: 3393으로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3394로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(l - xxv) 서열식별번호: 3395로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3396으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(m - xxv) 서열식별번호: 3397로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3398로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(n - xxv) 서열식별번호: 3399로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3400으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(o - xxv) 서열식별번호: 3401로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3402로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(p - xxv) 서열식별번호: 3403으로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3404로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(q - xxv) 서열식별번호: 3405로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3406으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(r - xxv) 서열식별번호: 3407로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3408로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(s - xxv) 서열식별번호: 3409로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3410으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(t - xxv) 서열식별번호: 3411로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3412로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(u - xxv) 서열식별번호: 3413으로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3414로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(v - xxv) 서열식별번호: 3415로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3416으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(w - xxv) 서열식별번호: 3417로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3418로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(x - xxv) 서열식별번호: 3419로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3420으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(y - xxv) 서열식별번호: 3421로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3422로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(z - xxv) 서열식별번호: 3423으로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3424로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(a - xxvi) 서열식별번호: 3425로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3426으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(b - xxvi) 서열식별번호: 3427로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3428로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(c - xxvi) 서열식별번호: 3429로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3430으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(d - xxvi) 서열식별번호: 3431로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3432로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(e - xxvi) 서열식별번호: 3433으로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3434로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(f - xxvi) 서열식별번호: 3435로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3436으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(g - xxvi) 서열식별번호: 3437로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3438로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(h - xxvi) 서열식별번호: 3439로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3440으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(i - xxvi) 서열식별번호: 3441로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3442로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(j - xxvi) 서열식별번호: 3443으로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3444로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(k - xxvi) 서열식별번호: 3445로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3446으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
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(o - xxvi) 서열식별번호: 3453으로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3454로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
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(g - xxvii) 서열식별번호: 3489로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3490으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(h - xxvii) 서열식별번호: 3491로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3492로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
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(j - xxvii) 서열식별번호: 3495로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3496으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
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(z - xxvii) 서열식별번호: 3527로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3528로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(a - xxviii) 서열식별번호: 3529로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3530으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(b - xxviii) 서열식별번호: 3531로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3532로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(c - xxviii) 서열식별번호: 3533으로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3534로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(d - xxviii) 서열식별번호: 3535로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3536으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(e - xxviii) 서열식별번호: 3537로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3538로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(f - xxviii) 서열식별번호: 3539로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3540으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(g - xxviii) 서열식별번호: 3541로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3542로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
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(i - xxviii) 서열식별번호: 3545로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3546으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(j - xxviii) 서열식별번호: 3547로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3548로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
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(r - xxviii) 서열식별번호: 3563으로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3564로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(s - xxviii) 서열식별번호: 3565로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3566으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(t - xxviii) 서열식별번호: 3567로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3568로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(u - xxviii) 서열식별번호: 3569로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3570으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(v - xxviii)) 서열식별번호: 3571로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3572로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(w - xxviii) 서열식별번호: 3573으로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3574로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(x - xxviii) 서열식별번호: 3575로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3576으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(y - xxviii) 서열식별번호: 3577로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3578로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(z - xxviii) 서열식별번호: 3579로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3580으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(a - xxix) 서열식별번호: 3581로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3582로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(b - xxix) 서열식별번호: 3583으로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3584로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(c - xxix) 서열식별번호: 3585로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3586으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(d - xxix) 서열식별번호: 3587로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3588로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(e - xxix) 서열식별번호: 3589로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3590으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
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(p - xxix) 서열식별번호: 3611로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3612로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
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(v - xxix) 서열식별번호: 3623으로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3624로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(w - xxix) 서열식별번호: 3625로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3626으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(x - xxix) 서열식별번호: 3627로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3628로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(y - xxix) 서열식별번호: 3629로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3630으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(z - xxix) 서열식별번호: 3631로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3632로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(a - xxx) 서열식별번호: 3633으로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3634로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(b - xxx) 서열식별번호: 3635로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3636으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(c - xxx) 서열식별번호: 3637로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3638로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(d - xxx) 서열식별번호: 3639로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3640으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(e - xxx) 서열식별번호: 3641로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3642로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(f - xxx) 서열식별번호: 3643으로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3644로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(g - xxx) 서열식별번호: 3645로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3646으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(h - xxx) 서열식별번호: 3647로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3648로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(i - xxx) 서열식별번호: 3649로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3650으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(j - xxx) 서열식별번호: 3651로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3652로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(k - xxx) 서열식별번호: 3653으로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3654로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(l - xxx) 서열식별번호: 3655로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3656으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(m - xxx) 서열식별번호: 3657로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3658로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(n - xxx) 서열식별번호: 3659로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3660으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
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(t - xxx) 서열식별번호: 3671로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3672로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(u - xxx) 서열식별번호: 3673으로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3674로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(v - xxx) 서열식별번호: 3675로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3676으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(w - xxx) 서열식별번호: 3677로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3678로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(x - xxx) 서열식별번호: 3679로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3680으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(y - xxx) 서열식별번호: 3681로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3682로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(z - xxx) 서열식별번호: 3683으로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3684로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(a - xxxi) 서열식별번호: 3685로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3686으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(b - xxxi) 서열식별번호: 3687로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3688로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(c - xxxi) 서열식별번호: 3689로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3690으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(d - xxxi) 서열식별번호: 3691로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3692로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
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(n - xxxii) 서열식별번호: 3763으로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3764로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
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(r - xxxii) 서열식별번호: 3771로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3772로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(s - xxxii) 서열식별번호: 3773으로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3774로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(t - xxxii) 서열식별번호: 3775로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3776으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(u - xxxii) 서열식별번호: 3777로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3778로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
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(h - xxxiii) 서열식별번호: 3803으로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3804로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(i - xxxiii) 서열식별번호: 3805로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3806으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(j - xxxiii) 서열식별번호: 3807로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3808로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(k - xxxiii) 서열식별번호: 3809로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3810으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
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(q - xxxiv) 서열식별번호: 3873으로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3874로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(r - xxxiv) 서열식별번호: 3875로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3876으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(s - xxxiv) 서열식별번호: 3877로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3878로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(t - xxxiv) 서열식별번호: 3879로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3880으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(u - xxxiv) 서열식별번호: 3881로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3882로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(v - xxxiv) 서열식별번호: 3883으로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3884로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
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(x - xxxiv) 서열식별번호: 3887로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3888로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(y - xxxiv) 서열식별번호: 3889로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3890으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(z - xxxiv) 서열식별번호: 3891로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3892로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(a - xxxv) 서열식별번호: 3893으로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3894로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(b - xxxv) 서열식별번호: 3895로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3896으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(c - xxxv) 서열식별번호: 3897로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3898로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(d - xxxv) 서열식별번호: 3899로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3900으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(e - xxxv) 서열식별번호: 3901로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3902로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(f - xxxv) 서열식별번호: 3903으로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3904로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(g - xxxv) 서열식별번호: 3905로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3906으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(h - xxxv) 서열식별번호: 3907로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3908로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(i - xxxv) 서열식별번호: 3909로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3910으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(j - xxxv) 서열식별번호: 3911로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3912로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(k - xxxv) 서열식별번호: 3913으로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3914로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(l - xxxv) 서열식별번호: 3915로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3916으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(m - xxxv) 서열식별번호: 3917로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3918로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(n - xxxv) 서열식별번호: 3919로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3920으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
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(a - xxxviii) 서열식별번호: 4049로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 4050으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
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(w - xxxix) 서열식별번호: 4145로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 4146으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(x - xxxix) 서열식별번호: 4147로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 4148로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(y - xxxix) 서열식별번호: 4149로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 4150으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(z - xxxix) 서열식별번호: 4151로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 4152로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(a - xl) 서열식별번호: 4153으로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 4154로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(b - xl) 서열식별번호: 4155로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 4156으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(c - xl) 서열식별번호: 4157로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 4158로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(d - xl) 서열식별번호: 4159로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 4160으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(e - xl) 서열식별번호: 4161로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 4162로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
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(h - xliii) 서열식별번호: 4891로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 4892로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(i - xliii) 서열식별번호: 4893으로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 4894로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
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(n - xliv) 서열식별번호: 4955로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 4956으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
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(e - xlix) 서열식별번호: 5197로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 5198로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(f - xlix) 서열식별번호: 5199로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 5200으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(g - xlix) 서열식별번호: 5201로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 5202로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(h - xlix) 서열식별번호: 5203으로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 5204로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(i - xlix) 서열식별번호: 5205로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 5206으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(j - xlix) 서열식별번호: 5207로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 5208로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(k - xlix) 서열식별번호: 5209로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 5210으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(l - xlix) 서열식별번호: 5211로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 5212로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(m - xlix) 서열식별번호: 5213으로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 5214로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(n - xlix) 서열식별번호: 5215로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 5216으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(o - xlix) 서열식별번호: 5217로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 5218로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(p - xlix) 서열식별번호: 5219로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 5220으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(q - xlix) 서열식별번호: 5221로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 5222로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(r - xlix) 서열식별번호: 5223으로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 5224로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(s - xlix) 서열식별번호: 5225로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 5226으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(t - xlix) 서열식별번호: 5227로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 5228로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(u - xlix) 서열식별번호: 5229로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 5230으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(v - xlix) 서열식별번호: 5231로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 5232로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(w - xlix) 서열식별번호: 5233으로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 5234로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(x - xlix) 서열식별번호: 5235로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 5236으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(y - xlix) 서열식별번호: 5237로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 5238로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(z - xlix) 서열식별번호: 5239로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 5240으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(a - l) 서열식별번호: 5241로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 5242로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(b - l) 서열식별번호: 5243으로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 5244로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(c - l) 서열식별번호: 5245로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 5246으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(d - l) 서열식별번호: 5247로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 5248로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(e - l) 서열식별번호: 5249로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 5250으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(f - l) 서열식별번호: 5251로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 5252로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(g - l) 서열식별번호: 5253으로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 5254로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(h - l) 서열식별번호: 5255로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 5256으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(i - l) 서열식별번호: 5257로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 5258로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(j - l) 서열식별번호: 5259로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 5260으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(k - l) 서열식별번호: 5261로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 5262로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(l - l) 서열식별번호: 5263으로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 5264로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(m - l) 서열식별번호: 5265로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 5266으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(n - l) 서열식별번호: 5267로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 5268로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(o - l) 서열식별번호: 5269로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 5270으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(p - l) 서열식별번호: 5271로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 5272로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(q - l) 서열식별번호: 5273으로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 5274로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(r - l) 서열식별번호: 5275로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 5276으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(s - l) 서열식별번호: 5277로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 5278로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(t - l) 서열식별번호: 5279로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 5280으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(u - l) 서열식별번호: 5281로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 5282로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(v - l) 서열식별번호: 5283으로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 5284로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(w - l) 서열식별번호: 5285로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 5286으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(x - l) 서열식별번호: 5287로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 5288로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(y - l) 서열식별번호: 5289로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 5290으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(z - l) 서열식별번호: 5291로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 5292로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(a - li) 서열식별번호: 5293으로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 5294로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(b - li) 서열식별번호: 5295로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 5296으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(c - li) 서열식별번호: 5297로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 5298로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(d - li) 서열식별번호: 5299로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 5300으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(e - li) 서열식별번호: 5301로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 5302로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(f - li) 서열식별번호: 5303으로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 5304로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(g - li) 서열식별번호: 5305로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 5306으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(h - li) 서열식별번호: 5307로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 5308로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(i - li) 서열식별번호: 5309로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 5310으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(j - li) 서열식별번호: 5311로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 5312로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(k - li) 서열식별번호: 5313으로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 5314로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
(l - li) 서열식별번호: 5315로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 5316으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR.
특정한 실시양태에서, 본원에 개시된 발명은 (a) 중쇄 가변 영역 (VH)의 잔기 31-35를 포함하는 CDR-H1, VH의 잔기 50-65를 포함하는 CDR-H2 및 VH의 잔기 95-102를 포함하는 CDR-H3; 및 (b) 경쇄 가변 영역 (VL)의 잔기 24-34를 포함하는 CDR-L1, VL의 잔기 50-56을 포함하는 CDR-L2 및 VL의 잔기 89-97을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; 여기서 CDR 넘버링은 카바트에 따른 것인 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포괄한다.
특정한 실시양태에서, 본원에 개시된 발명은 (a) VH의 잔기 26-32를 포함하는 CDR-H1, VH의 잔기 50-58을 포함하는 CDR-H2 및 VH의 잔기 95-102를 포함하는 CDR-H3; 및 (b) VL의 잔기 24-34를 포함하는 CDR-L1, VL의 잔기 50-56을 포함하는 CDR-L2 및 VL의 잔기 89-97을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; 여기서 CDR 넘버링은 코티아에 따른 것인 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포괄한다.
특정한 실시양태에서, 본원에 개시된 발명은 (a) VH의 잔기 30-35를 포함하는 CDR-H1, VH의 잔기 47-58을 포함하는 CDR-H2 및 VH의 잔기 93-101을 포함하는 CDR-H3; 및 (b) VL의 잔기 30-36을 포함하는 CDR-L1, VL의 잔기 46-55를 포함하는 CDR-L2 및 VL의 잔기 89-96을 포함하는 CDR-L3을 포함하며; 여기서 CDR 넘버링은 맥칼룸에 따른 것인 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포괄한다.
특정한 실시양태에서, 본원에 개시된 발명은 서열식별번호: 661-1320, 2751-4180 및 4749-5316 중 홀수 번호에 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR을 포함하는 중쇄 가변 영역 서열에 대해 적어도 60% 동일한 (예를 들어, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한) 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 661-1320, 2751-4180 및 4749-5316 중 짝수 번호에 제시된 상응하는 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR을 포함하는 경쇄 가변 영역 서열 중 1개에 대해 적어도 60% 동일한 (예를 들어, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한) 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포괄한다.
특정한 실시양태에서, 본원에 개시된 발명은 (a) 서열식별번호: 4949로서 제시된 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 4950으로서 제시된 경쇄 가변 영역; 또는 (b) 서열식별번호: 3275로서 제시된 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 3276으로서 제시된 경쇄 가변 영역; 또는 (c) 서열식별번호: 3361로서 제시된 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 3362로서 제시된 경쇄 가변 영역; 또는 (d) 서열식별번호: 3365로서 제시된 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 3366으로서 제시된 경쇄 가변 영역; 또는 (e) 서열식별번호: 3421로서 제시된 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 3422로서 제시된 경쇄 가변 영역; 또는 (f) 서열식별번호: 3447로서 제시된 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 3448로서 제시된 경쇄 가변 영역; 또는 (g) 서열식별번호: 3515로서 제시된 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 3516으로서 제시된 경쇄 가변 영역; 또는 (h) 서열식별번호: 3605로서 제시된 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 3606으로서 제시된 경쇄 가변 영역; 또는 (i) 서열식별번호: 3647로서 제시된 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 3648로서 제시된 경쇄 가변 영역; 또는 (j) 서열식별번호: 3649로서 제시된 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 3650으로서 제시된 경쇄 가변 영역; 또는 (k) 서열식별번호: 3725로서 제시된 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 3726으로서 제시된 경쇄 가변 영역; 또는 (l) 서열식별번호: 3835로서 제시된 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 3836으로서 제시된 경쇄 가변 영역; 또는 (m) 서열식별번호: 3845로서 제시된 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 3846으로서 제시된 경쇄 가변 영역; 또는 (n) 서열식별번호: 3853으로서 제시된 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 3854로서 제시된 경쇄 가변 영역; 또는 (o) 서열식별번호: 3873으로서 제시된 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 3874로서 제시된 경쇄 가변 영역; 또는 (p) 서열식별번호: 5029로서 제시된 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 5030으로서 제시된 경쇄 가변 영역; 또는 (q) 서열식별번호: 5131로서 제시된 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 5132로서 제시된 경쇄 가변 영역; 또는 (r) 서열식별번호: 5217로서 제시된 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 5218로서 제시된 경쇄 가변 영역; 또는 (s) 서열식별번호: 5311로서 제시된 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 5312로서 제시된 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포괄한다.
특정한 실시양태에서, 본원에 개시된 발명은 (a) 서열식별번호: 5735를 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5736을 포함하는 경쇄; 또는 (b) 서열식별번호: 5707을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5708을 포함하는 경쇄; 또는 (c) 서열식별번호: 5709를 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5710을 포함하는 경쇄; 또는 (d) 서열식별번호: 5711을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5712를 포함하는 경쇄; 또는 (e) 서열식별번호: 5713을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5714를 포함하는 경쇄; 또는 (f) 서열식별번호: 5715를 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5716을 포함하는 경쇄; 또는 (g) 서열식별번호: 5717을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5718을 포함하는 경쇄; 또는 (h) 서열식별번호: 5719를 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5720을 포함하는 경쇄; 또는 (i) 서열식별번호: 5721을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5722를 포함하는 경쇄; 또는 (j) 서열식별번호: 5723을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5724를 포함하는 경쇄; 또는 (k) 서열식별번호: 5725를 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5726을 포함하는 경쇄; 또는 (l) 서열식별번호: 5727을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5728을 포함하는 경쇄; 또는 (m) 서열식별번호: 5729를 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5730을 포함하는 경쇄; 또는 (n) 서열식별번호: 5731을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5732를 포함하는 경쇄; 또는 (o) 서열식별번호: 5733을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5734를 포함하는 경쇄; 또는 (p) 서열식별번호: 5737을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5738을 포함하는 경쇄; 또는 (q) 서열식별번호: 5739를 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5740을 포함하는 경쇄; 또는 (r) 서열식별번호: 5741을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5742를 포함하는 경쇄; 또는 (s) 서열식별번호: 5743을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5744를 포함하는 경쇄를 포함하는 항체를 포괄한다.
특정한 실시양태에서, 본원에 개시된 발명은 서열식별번호: 661-1320, 2751-4180 및 4749-5316 중 홀수 번호에 제시된 중쇄 가변 영역과 동일한 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 661-1320, 2751-4180 및 4749-5316 중 짝수 번호에 제시된 경쇄 가변 영역과 동일한 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포괄한다.
특정한 실시양태에서, 본원에 개시된 발명은 SARS-CoV 스파이크 단백질에 특이적으로 결합하는, 본 섹션의 선행 단락에 기재된 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포괄한다.
특정한 실시양태에서, 본원에 개시된 발명은 SARS-CoV-2 스파이크 단백질에 특이적으로 결합하는, 본 섹션의 선행 단락에 기재된 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포괄한다.
특정한 실시양태에서, 본원에 개시된 발명은 SARS-CoV 스파이크 단백질 및 SARS-CoV-2 스파이크 단백질과 교차-반응성인, 본 섹션의 선행 단락에 기재된 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포괄한다.
특정한 실시양태에서, 본원에 개시된 발명은 중화 항체인, 본 섹션의 선행 단락에 기재된 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포괄한다.
특정한 실시양태에서, 본원에 개시된 발명은 고갈성 항체인, 본 섹션의 선행 단락에 기재된 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포괄한다.
특정한 실시양태에서, 본원에 개시된 발명은 SARS-CoV-2 스파이크 단백질의 하기 잔기: Y351, Y449, N450, L452, L455, F456, T470, I472, N481, G482, V483, E484, G485, F486, Y489, F490, L492, Q493, S494 중 1개 이상을 포함하는 에피토프에 결합하며, 여기서 아미노산 잔기 위치는 서열식별번호: 5317에 상응하는 것인, 본 섹션의 선행 단락에 기재된 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포괄한다. 특정한 실시양태에서, 에피토프는 열거된 잔기 중 2개 이상, 열거된 잔기 중 3개 이상 또는 열거된 잔기 중 5개 이상을 포함한다.
특정한 실시양태에서, 본원에 개시된 발명은 SARS-CoV-2 스파이크 단백질의 하기 잔기: R403, D405, R408, Q409, T415, G416, K417, D420, Y421, Y453, L455, F456, R457, K458, S459, N460, Y473, Q474, A475, G476, F486, N487, Y489, Q493, S494, Y495, G496, Q498, T500, N501, G502, Y505 중 1개 이상을 포함하는 에피토프에 결합하며, 여기서 아미노산 잔기 위치는 서열식별번호: 5317에 상응하는 것인, 본 섹션의 선행 단락에 기재된 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포괄한다. 특정한 실시양태에서, 에피토프는 열거된 잔기 중 2개 이상, 열거된 잔기 중 3개 이상 또는 열거된 잔기 중 5개 이상을 포함한다.
특정한 실시양태에서, 본원에 개시된 발명은 SARS-CoV-2 스파이크 단백질의 하기 잔기: R403, T415, G416, K417, D420, Y421, L455, F456, R457, K458, S459, N460, Y473, Q474, A475, G476, S477, F486, N487, Y489, N501, G502, Y505 중 1개 이상을 포함하는 에피토프에 결합하며, 여기서 아미노산 잔기 위치는 서열식별번호: 5317에 상응하는 것인, SARS-CoV-2 스파이크 단백질에 결합하는, 본 섹션의 선행 단락에 기재된 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포괄한다. 특정한 실시양태에서, 에피토프는 열거된 잔기 중 2개 이상, 열거된 잔기 중 3개 이상 또는 열거된 잔기 중 5개 이상을 포함한다.
특정한 실시양태에서, 본원에 개시된 발명은 IgG1 이소형을 갖는, 본 섹션의 선행 단락에 기재된 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포괄한다.
특정한 실시양태에서, 본원에 개시된 발명은 Fc 영역에 결합된 N-글리코시드-연결된 당 쇄를 포함하는 Fc 영역을 포함하며, 여기서 당 쇄는 푸코스를 함유하지 않는 것인, 본 섹션의 선행 단락에 기재된 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포괄한다.
특정한 실시양태에서, 본원에 개시된 발명은 적어도 1개의 아미노산 치환을 포함하는, 본 섹션의 선행 단락에 기재된 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포괄한다. 특정한 실시양태에서, 적어도 1개의 아미노산 치환은 보존적 치환이다. 특정한 실시양태에서, 적어도 1개의 아미노산 치환은 비-유전자 코딩된 아미노산 또는 합성 아미노산으로의 아미노산 치환이다.
특정한 실시양태에서, 본원에 개시된 발명은 면역조정제, 시토카인, 세포독성제, 화학요법제, 진단제, 항바이러스제, 항미생물제 또는 약물에 접합된, 본 섹션의 선행 단락에 기재된 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포괄한다.
특정한 실시양태에서, 본원에 개시된 발명은 면역조정제, 시토카인, 세포독성제, 화학요법제, 진단제, 항바이러스제, 항미생물제 또는 약물에 접합된, 본 섹션의 선행 단락에 기재된 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포함하는 항체 접합체를 포괄한다.
특정한 실시양태에서, 본원에 개시된 발명은 본 섹션의 선행 단락에 기재된 항체 또는 그의 항원-결합 단편 또는 그를 포함하는 항체 접합체 및 1종 이상의 제약상 허용되는 담체, 희석제 또는 부형제를 포함하는 제약 조성물을 포괄한다. 특정한 실시양태에서, 제약 조성물은 SARS-CoV-2 스파이크 단백질에 결합하는 적어도 1종의 추가의 항체를 포함한다. 특정한 실시양태에서, 제약 조성물은 히스티딘, 염화나트륨, 수크로스 및 폴리소르베이트 80을 포함한다. 특정한 실시양태에서, 제약 조성물은 약 6.0의 pH를 갖는다. 특정한 실시양태에서, 제약 조성물은 5 mM 히스티딘, 50 mM NaCl, 6% 수크로스 및 0.05% 폴리소르베이트 80을 포함하고, 약 6.0의 pH를 갖는다.
특정한 실시양태에서, 제약 조성물 중 본 섹션의 선행 단락에 기재된 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 농도는 약 35 mg/mL 내지 약 125 mg/mL이다. 특정한 실시양태에서, 제약 조성물 중 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 농도는 약 35 mg/mL 또는 약 125 mg/mL이다.
특정한 실시양태에서, 본원에 개시된 발명은 서열식별번호: 661-1320, 2751-4180 및 4749-5316 중 홀수 번호에 제시된 중쇄 가변 영역과 동일한 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역을 코딩하는 단리된 핵산을 포괄한다. 특정한 실시양태에서, 본원에 개시된 발명은 서열식별번호: 661-1320, 2751-4180 및 4749-5316 중 짝수 번호에 제시된 경쇄 가변 영역과 동일한 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 코딩하는 단리된 핵산을 포괄한다. 특정한 실시양태에서, 본원에 개시된 발명은 서열식별번호: 5319-5366, 5575-5592 및 5707-5744 중 홀수 번호에 제시된 중쇄와 동일한 아미노산 서열을 갖는 중쇄를 코딩하는 단리된 핵산을 포괄한다. 특정한 실시양태에서, 본원에 개시된 발명은 서열식별번호: 5319-5366, 5575-5592 및 5707-5744 중 짝수 번호에 제시된 경쇄와 동일한 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 코딩하는 단리된 핵산을 포괄한다.
특정한 실시양태에서, 본원에 개시된 발명은 (a) 서열식별번호: 661-1320, 2751-4180 및 4749-5316 중 홀수 번호에 제시된 중쇄 가변 영역과 동일한 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역을 코딩하는 단리된 핵산; 및 (b) 서열식별번호: 661-1320, 2751-4180 및 4749-5316 중 짝수 번호에 제시된 경쇄 가변 영역과 동일한 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 코딩하는 단리된 핵산 중 적어도 1개를 포함하는 벡터를 포괄한다. 특정한 실시양태에서, 본원에 개시된 발명은 (a) 서열식별번호: 5319-5366, 5575-5592 및 5707-5744 중 홀수 번호에 제시된 중쇄와 동일한 아미노산 서열을 갖는 중쇄를 코딩하는 단리된 핵산; 및 (b) 서열식별번호: 5319-5366, 5575-5592 및 5707-5744 중 짝수 번호에 제시된 경쇄와 동일한 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 코딩하는 단리된 핵산 중 적어도 1개를 포함하는 벡터를 포괄한다.
특정한 실시양태에서, 본원에 개시된 발명은 (a) 서열식별번호: 661-1320, 2751-4180 및 4749-5316 중 홀수 번호에 제시된 중쇄 가변 영역과 동일한 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역을 코딩하는 단리된 핵산; 및 (b) 서열식별번호: 661-1320, 2751-4180 및 4749-5316 중 짝수 번호에 제시된 경쇄 가변 영역과 동일한 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 코딩하는 단리된 핵산 중 적어도 1개를 포함하는 숙주 세포를 포괄한다. 특정한 실시양태에서, 본원에 개시된 발명은 (a) 서열식별번호: 5319-5366, 5575-5592 및 5707-5744 중 홀수 번호에 제시된 중쇄와 동일한 아미노산 서열을 갖는 중쇄를 코딩하는 단리된 핵산; 및 (b) 서열식별번호: 5319-5366, 5575-5592 및 5707-5744 중 짝수 번호에 제시된 경쇄와 동일한 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 코딩하는 단리된 핵산 중 적어도 1개를 포함하는 숙주 세포를 포괄한다.
특정한 실시양태에서, 본원에 개시된 발명은 (a) 서열식별번호: 661-1320, 2751-4180 및 4749-5316 중 홀수 번호에 제시된 중쇄 가변 영역과 동일한 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역을 코딩하는 단리된 핵산; 및 (b) 서열식별번호: 661-1320, 2751-4180 및 4749-5316 중 짝수 번호에 제시된 경쇄 가변 영역과 동일한 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 코딩하는 단리된 핵산 중 적어도 1개를 포함하는 벡터를 포함하는 숙주 세포를 포괄한다. 특정한 실시양태에서, 본원에 개시된 발명은 (a) 서열식별번호: 5319-5366, 5575-5592 및 5707-5744 중 홀수 번호에 제시된 중쇄와 동일한 아미노산 서열을 갖는 중쇄를 코딩하는 단리된 핵산; 및 (b) 서열식별번호: 5319-5366, 5575-5592 및 5707-5744 중 짝수 번호에 제시된 경쇄와 동일한 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 코딩하는 단리된 핵산 중 적어도 1개를 포함하는 벡터를 포함하는 숙주 세포를 포괄한다.
특정한 실시양태에서, 본원에 개시된 발명은 (a) 본 섹션의 선행 단락에 기재된 숙주 세포를 본 섹션의 선행 단락에 기재된 항체 또는 그의 항원-결합 단편이 발현되도록 하는 조건 하에 배양하는 단계; 및 (b) 발현된 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 회수하는 단계를 포함하는, 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 생산하는 방법을 포괄한다.
특정한 실시양태에서, 본원에 개시된 발명은 본 섹션의 선행 단락에 기재된 항체 또는 그의 항원-결합 단편 또는 그를 포함하는 항체 접합체 또는 그를 포함하는 제약 조성물을 포함하는 리셉터클 및 SARS-CoV 또는 SARS-CoV-2-연관 질환을 치료 또는 진단하기 위해 그를 사용하는 것에 대한 지침서를 포함하는, SARS-CoV 또는 SARS-CoV-2-연관 질환을 진단 또는 치료하는 데 유용한 제조 물품을 포괄한다.
특정한 실시양태에서, 본원에 개시된 발명은 (a) 세포를 검출가능한 작용제에 접합된 본 섹션의 선행 단락에 기재된 항체 또는 그의 항원-결합 단편과 접촉시키는 단계; 및 (b) 세포에 대한 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 특이적 결합을 검출하는 단계를 포함하는, SARS-CoV 또는 SARS-CoV-2-감염된 세포를 확인하는 방법을 포괄한다.
특정한 실시양태에서, 본원에 개시된 발명은 (a) 환자로부터 수득된 샘플을 검출가능한 작용제에 접합된 본 섹션의 선행 단락에 기재된 항체 또는 그의 항원-결합 단편과 접촉시키는 단계; 및 (b) 샘플에 존재하는 SARS-CoV 또는 SARS-CoV-2 항원에 대한 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 특이적 결합을 검출하는 단계를 포함하는, 환자에서 SARS-CoV 또는 SARS-CoV-2 감염을 진단하는 방법을 포괄한다.
특정한 실시양태에서, 본원에 개시된 발명은 환자에게 치료 유효량의 본 섹션의 선행 단락에 기재된 항체 또는 그의 항원-결합 단편 또는 그를 포함하는 항체 접합체 또는 그를 포함하는 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하는, SARS-CoV 또는 SARS-CoV-2-연관 질환을 치료 또는 예방하는 방법을 포괄한다.
특정한 실시양태에서, 본원에 개시된 발명은 (a) 환자로부터 수득된 샘플을 검출가능한 작용제에 접합된 본 섹션의 선행 단락에 기재된 항체 또는 그의 항원-결합 단편과 접촉시키는 단계; (b) 샘플에 존재하는 SARS-CoV-2 항원에 대한 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 특이적 결합을 검출하는 단계; 및 (c) 환자에게 치료 유효량의 본 섹션의 선행 단락에 기재된 항체 또는 그의 항원-결합 단편 또는 그를 포함하는 제약 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, COVID-19를 예방 또는 치료하는 방법을 포괄한다.
특정한 실시양태에서, 본원에 개시된 발명은 항체 또는 그의 항원-결합 단편이 약 700 mg 내지 약 7000 mg으로 환자에게 정맥내로 또는 피하로 투여되거나 투여가능한 것인, 본 섹션에 기재된 예방 및 치료 방법을 포괄한다. 특정한 실시양태에서, 항체는 약 700 mg으로 환자에게 정맥내로 또는 피하로 투여된다. 일부 실시양태에서, 본 섹션에 기재된 예방 및 치료 방법에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 약 35 mg 내지 약 700 mg으로 환자에게 정맥내로 또는 피하로 투여되거나 투여가능하다.
특정한 실시양태에서, 본원에 개시된 발명은 환자에게 SARS-CoV-2 S 단백질에 결합하는 또 다른 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 투여하는 것을 추가로 포함하는, 본 섹션에 기재된 예방 및 치료 방법을 포괄한다.
특정한 실시양태에서, 본원에 개시된 발명은 환자가 경도 내지 중등도 COVID-19를 갖는 것인, 본 섹션에 기재된 예방 및 치료 방법을 포괄한다. 특정한 실시양태에서, 본원에 개시된 발명은 환자가 COVID-19에 걸릴 위험이 있는 것인, 본 섹션에 기재된 예방 및 치료 방법을 포괄한다. 특정한 실시양태에서, 본원에 개시된 발명은 환자가 중증 COVID-19로 진행하거나 입원할 위험이 높은 것인, 본 섹션에 기재된 예방 및 치료 방법을 포괄한다.
특정한 실시양태에서, 본원에 개시된 발명은 SARS-CoV 또는 SARS-CoV-2-관련 질환 또는 증상의 진단, 테라그노시스(theragnosis), 치료 및/또는 예방에 사용하기 위한 본 섹션의 선행 단락에 기재된 항체 또는 그의 항원-결합 단편 또는 그를 포함하는 제약 조성물을 포괄한다.
특정한 실시양태에서, 본원에 개시된 발명은 SARS-CoV 또는 SARS-CoV-2-관련 질환 또는 증상의 진단, 테라그노시스, 치료 및/또는 예방을 위한 의약의 제조에 사용하기 위한 본 섹션의 선행 단락에 기재된 항체 또는 그의 항원-결합 단편 또는 그를 포함하는 제약 조성물을 포괄한다.
특정한 실시양태에서, 본원에 개시된 발명은 (a) 항-코로나바이러스 백신의 샘플을 검출가능한 작용제에 접합된 본 섹션의 선행 단락에 기재된 항체 또는 그의 항원-결합 단편과 접촉시키는 단계; 및 (b) 샘플에 존재하는 항-코로나바이러스 백신에 대한 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 특이적 결합을 검출하는 단계를 포함하며; 여기서 항-코로나바이러스 백신은 코로나바이러스 서브유닛 또는 그의 단편을 포함하는 것인, 항-코로나바이러스 백신을 시험하는 방법을 포괄한다.
항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체)
본 개시내용은 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체) 및 SARS-CoV 및 SARS-CoV-2 감염 및 관련 증상 (즉, SARS 및 COVID-19 코로나바이러스 질환)의 진단, 테라그노시스, 치료 및/또는 예방에서의 그의 용도에 관한 것이다. 본원에 사용된 용어 "항-코로나바이러스 항체(들)"는 SARS-CoV 및/또는 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 상에 존재하는 1종 이상의 항원을 특이적으로 인식하거나, 그에 결합하거나 또는 달리 그와 회합하는 항체를 기재한다 (즉, 1종 또는 다른 단백질에 특이적이거나 또는 교차-반응성인 항체가 포괄됨). 본원에 개시된 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체)는 단독으로 또는 매우 다양한 다른 화합물 또는 생물학적 반응 조절제와 함께 사용될 수 있다. 다른 선택된 실시양태에서, 2종 이상의 별개의 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체)는 증진된 치료 효과를 제공하기 위해 조합되어 사용될 수 있거나 또는 다중특이적 구축물을 제작하는 데 사용될 수 있다. 따라서, 2, 3종 또는 그 초과의 별개의 항-코로나바이러스 항체를 포함하는 조성물이 또한 제공된다. 본원의 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체)는 사실상 재조합 항체이다.
SARS-CoV-2 항원, SARS-CoV-2 바이러스 입자 또는 SARS-CoV-2-감염된 세포에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편 ("항-SARS-CoV-2 항체 또는 항원 결합 단편")이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 항-SARS-CoV-2 항체 또는 항원 결합 단편은 SARS-CoV-2의 스파이크 (S) 단백질에 특이적으로 결합한다. 본원에 사용된 용어 "결합하다" 및 "결합한다"는 달리 나타내지 않는 한, 한 단백질 또는 분자가 또 다른 단백질 또는 분자와 화학적 결합 또는 인력 상호작용을 형성할 수 있어, 관련 기술분야에 공지된 통상의 방법에 의해 결정 시 두 단백질 또는 분자가 근접하도록 하는 것을 의미하는 것으로 의도된다.
SARS-CoV-2 S 단백질의 극저온-전자 현미경검사 구조가 최근에 기재되었으며, 이는 SARS-CoV-2 S 단백질이 준안정 융합전 입체형태로 존재하고 바이러스 막을 숙주 세포 막과 융합시키기 위해 실질적인 구조적 재배열을 겪는 삼량체 부류 I 융합 단백질이라는 것을 보여준다 (Wrapp et al., Science 367, 1260-1263, 2020). 이 과정은 SARS-CoV-2 S 단백질의 S1 서브유닛의 수용체-결합 도메인 (RBD)이 숙주 세포 수용체 안지오텐신-전환 효소 2 (ACE2)에 결합하는 경우에 촉발되며; 수용체 결합은 융합전 삼량체를 탈안정화시켜, S1 서브유닛의 유출 및 S2 서브유닛의 안정한 융합후 입체형태로의 전이를 유발한다 (Wrapp et al., Science 367, 1260-1263, 2020).
SARS-CoV-2 스파이크 (S) 단백질의 아미노산 서열은 이전에 기재되었으며, 예를 들어 진뱅크(GenBank) 수탁 번호 YP_009724390.1이 하기 제시된 바와 같은 이러한 예시적인 서열을 제공한다:
Figure pct00001
수용체-결합 도메인 (RBD)은 SARS-CoV-2 S 단백질의 아미노산 329 내지 520, 예를 들어 서열식별번호: 5317의 아미노산 329 내지 520 또는 1개 이상의 돌연변이를 포함하는 변이체를 포함하고; N-말단 도메인 (NTD)은 SARS-CoV-2 S 단백질의 아미노산 16-328, 예를 들어 서열식별번호: 5317의 아미노산 16-328 또는 1개 이상의 돌연변이를 포함하는 변이체를 포함하고; S2 도메인은 SARS-CoV-2 S 단백질의 아미노산 686-1213, 예를 들어 서열식별번호: 5317의 아미노산 686-1213 또는 1개 이상의 돌연변이를 포함하는 변이체를 포함한다 (문헌 [Wrapp et al., Science 367, 1260-1263, 2020] 참조).
SARS-CoV 스파이크 단백질의 아미노산 서열은 또한 이전에, 예를 들어 하기 제시된 바와 같은 유니프롯(UniProt) ID: P59594로 기재되었다:
Figure pct00002
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 내부 명칭 258 내지 577 및 589 내지 1587을 갖는 항-SARS-CoV-2 항체가 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 항체 258 내지 577 및 589 내지 1587 중 어느 하나의 VH 및/또는 VL을 포함하는 항-SARS-CoV-2 항체 또는 항원 결합 단편이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 항체 258 내지 577 및 589 내지 1587 중 어느 하나의 VH 도메인에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일성을 갖는 VH 도메인 또는 항체 258 내지 577 및 589 내지 1587 중 어느 하나의 VH 도메인에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일성을 갖는 VL 도메인을 포함하는 항-SARS-CoV-2 항체 또는 항원 결합 단편이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 항체 258 내지 577 및 589 내지 1587 중 어느 하나의 VH 도메인에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일성을 갖는 VH 도메인 및 항체 258 내지 577 및 589 내지 1587 중 어느 하나의 VH 도메인에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일성을 갖는 VL 도메인을 포함하며, 바람직하게는 여기서 이들 상동 VH 및 VL 도메인은 동일한 항체의 것에 상응하는 것인 항-SARS-CoV-2 항체 또는 항원 결합 단편이 본원에 제공된다.
일부 실시양태에서, 항체 258 내지 577 및 589 내지 1587 중 어느 하나의 VH 도메인에 포함된 것과 동일한 3개의 CDR을 포함하는 VH 도메인을 포함하고/거나 항체 258 내지 577 및 589 내지 1587 중 어느 하나의 VL 도메인과 동일한 3개의 CDR을 포함하는 VL 도메인을 포함하며, 여기서 CDR은 카바트, 코티아, 맥칼룸 또는 노스(North) 넘버링에 의해 정의되는 것인 항-SARS-CoV-2 항체 또는 항원 결합 단편이 본원에 제공된다.
일부 실시양태에서, 본원에 제공된 항-SARS-CoV-2 항체 또는 항원 결합 단편은 중화 항체이다. 특정한 실시양태에서, 중화 항-SARS-CoV-2 항체 또는 항원 결합 단편은 (a) 서열식별번호: 729로서 제시된 중쇄 가변 영역 (VH) 내의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 730으로서 제시된 경쇄 가변 영역 (VL) 내의 3개의 CDR; (b) 서열식별번호: 763로서 제시된 VH 내의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 764로서 제시된 VL 내의 3개의 CDR; (c) 서열식별번호: 873로서 제시된 VH 내의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 874로서 제시된 VL 내의 3개의 CDR; (d) 서열식별번호: 891로서 제시된 VH 내의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 892로서 제시된 VL 내의 3개의 CDR; (e) 서열식별번호: 921로서 제시된 VH 내의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 922로서 제시된 VL 내의 3개의 CDR; (f) 서열식별번호: 961로서 제시된 VH 내의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 962로서 제시된 VL 내의 3개의 CDR; (g) 서열식별번호: 973로서 제시된 VH 내의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 974로서 제시된 VL 내의 3개의 CDR; (h) 서열식별번호: 979로서 제시된 VH 내의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 980로서 제시된 VL 내의 3개의 CDR; (i) 서열식별번호: 983로서 제시된 VH 내의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 984로서 제시된 VL 내의 3개의 CDR; (j) 서열식별번호: 1029로서 제시된 VH 내의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1030로서 제시된 VL 내의 3개의 CDR; (k) 서열식별번호: 1035로서 제시된 VH 내의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1036로서 제시된 VL 내의 3개의 CDR; (l) 서열식별번호: 1039로서 제시된 VH 내의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1040로서 제시된 VL 내의 3개의 CDR; (m) 서열식별번호: 1069로서 제시된 VH 내의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1070로서 제시된 VL 내의 3개의 CDR; (n) 서열식별번호: 1103로서 제시된 VH 내의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1104로서 제시된 VL 내의 3개의 CDR; (o) 서열식별번호: 1107로서 제시된 VH 내의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1108로서 제시된 VL 내의 3개의 CDR; (p) 서열식별번호: 1111로서 제시된 VH 내의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1112로서 제시된 VL 내의 3개의 CDR; (q) 서열식별번호: 1121로서 제시된 VH 내의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1122로서 제시된 VL 내의 3개의 CDR; (r) 서열식별번호: 1133로서 제시된 VH 내의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1134로서 제시된 VL 내의 3개의 CDR; (s) 서열식별번호: 1157로서 제시된 VH 내의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1158로서 제시된 VL 내의 3개의 CDR; (t) 서열식별번호: 1225로서 제시된 VH 내의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1226로서 제시된 VL 내의 3개의 CDR; (u) 서열식별번호: 1243로서 제시된 VH 내의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1244로서 제시된 VL 내의 3개의 CDR; (v) 서열식별번호: 1251로서 제시된 VH 내의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1252로서 제시된 VL 내의 3개의 CDR; (w) 서열식별번호: 1255로서 제시된 VH 내의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1256로서 제시된 VL 내의 3개의 CDR; (x) 서열식별번호: 1269로서 제시된 VH 내의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1270로서 제시된 VL 내의 3개의 CDR; (y) 서열식별번호: 3275로서 제시된 VH 내의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3276로서 제시된 VL 내의 3개의 CDR; (z) 서열식별번호: 3361로서 제시된 VH 내의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3362로서 제시된 VL 내의 3개의 CDR; (aa) 서열식별번호: 3365로서 제시된 VH 내의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3366로서 제시된 VL 내의 3개의 CDR; (bb) 서열식별번호: 3421로서 제시된 VH 내의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3422로서 제시된 VL 내의 3개의 CDR; (cc) 서열식별번호: 3447로서 제시된 VH 내의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3448로서 제시된 VL 내의 3개의 CDR; (dd) 서열식별번호: 3515로서 제시된 VH 내의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3516로서 제시된 VL 내의 3개의 CDR; (ee) 서열식별번호: 3605로서 제시된 VH 내의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3606로서 제시된 VL 내의 3개의 CDR; (ff) 서열식별번호: 3647로서 제시된 VH 내의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3648로서 제시된 VL 내의 3개의 CDR; (gg) 서열식별번호: 3649로서 제시된 VH 내의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3650로서 제시된 VL 내의 3개의 CDR; (hh) 서열식별번호: 3725로서 제시된 VH 내의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3726로서 제시된 VL 내의 3개의 CDR; (ii) 서열식별번호: 3835로서 제시된 VH 내의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3836로서 제시된 VL 내의 3개의 CDR; (jj) 서열식별번호: 3845로서 제시된 VH 내의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3846로서 제시된 VL 내의 3개의 CDR; (kk) 서열식별번호: 3853로서 제시된 VH 내의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3854로서 제시된 VL 내의 3개의 CDR; (ll) 서열식별번호: 3873로서 제시된 VH 내의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3874로서 제시된 VL 내의 3개의 CDR; (mm) 서열식별번호: 4949로서 제시된 VH 내의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 4950로서 제시된 VL 내의 3개의 CDR; (nn) 서열식별번호: 5029로서 제시된 VH 내의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 5030로서 제시된 VL 내의 3개의 CDR; (oo) 서열식별번호: 5131로서 제시된 VH 내의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 5132로서 제시된 VL 내의 3개의 CDR; (pp) 서열식별번호: 5217로서 제시된 VH 내의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 5218로서 제시된 VL 내의 3개의 CDR; 또는 (qq) 서열식별번호: 5311로서 제시된 VH 내의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 5312로서 제시된 VL 내의 3개의 CDR을 포함하며, 여기서 CDR은 카바트, 코티아, 맥칼룸 또는 노스 넘버링에 의해 정의된다.
다른 실시양태에서, 중화 항-SARS-CoV-2 항체 또는 항원 결합 단편은 (a) 서열식별번호: 729로서 제시된 VH 및 서열식별번호: 730으로서 제시된 경쇄 가변 영역 VL; (b) 서열식별번호: 763으로서 제시된 VH 및 서열식별번호: 764로서 제시된 VL; (c) 서열식별번호: 873으로서 제시된 VH 및 서열식별번호: 874로서 제시된 VL; (d) 서열식별번호: 891로서 제시된 VH 및 서열식별번호: 892로서 제시된 VL; (e) 서열식별번호: 921로서 제시된 VH 및 서열식별번호: 922로서 제시된 VL; (f) 서열식별번호: 961로서 제시된 VH 및 서열식별번호: 962로서 제시된 VL; (g) 서열식별번호: 973으로서 제시된 VH 및 서열식별번호: 974로서 제시된 VL; (h) 서열식별번호: 979로서 제시된 VH 및 서열식별번호: 980으로서 제시된 VL; (i) 서열식별번호: 983으로서 제시된 VH 및 서열식별번호: 984로서 제시된 VL; (j) 서열식별번호: 1029로서 제시된 VH 및 서열식별번호: 1030으로서 제시된 VL; (k) 서열식별번호: 1035로서 제시된 VH 및 서열식별번호: 1036으로서 제시된 VL; (l) 서열식별번호: 1039로서 제시된 VH 및 서열식별번호: 1040으로서 제시된 VL; (m) 서열식별번호: 1069로서 제시된 VH 및 서열식별번호: 1070으로서 제시된 VL; (n) 서열식별번호: 1103으로서 제시된 VH 및 서열식별번호: 1104로서 제시된 VL; (o) 서열식별번호: 1107로서 제시된 VH 및 서열식별번호: 1108로서 제시된 VL; (p) 서열식별번호: 1111로서 제시된 VH 및 서열식별번호: 1112로서 제시된 VL; (q) 서열식별번호: 1121로서 제시된 VH 및 서열식별번호: 1122로서 제시된 VL; (r) 서열식별번호: 1133으로서 제시된 VH 및 서열식별번호: 1134로서 제시된 VL; (s) 서열식별번호: 1157로서 제시된 VH 및 서열식별번호: 1158로서 제시된 VL; (t) 서열식별번호: 1225로서 제시된 VH 및 서열식별번호: 1226으로서 제시된 VL; (u) 서열식별번호: 1243으로서 제시된 VH 및 서열식별번호: 1244로서 제시된 VL; (v) 서열식별번호: 1251로서 제시된 VH 및 서열식별번호: 1252로서 제시된 VL; (w) 서열식별번호: 1255로서 제시된 VH 및 서열식별번호: 1256으로서 제시된 VL; (x) 서열식별번호: 1269로서 제시된 VH 및 서열식별번호: 1270으로서 제시된 VL; (y) 서열식별번호: 3275로서 제시된 VH 및 서열식별번호: 3276으로서 제시된 VL; (z) 서열식별번호: 3361로서 제시된 VH 및 서열식별번호: 3362로서 제시된 VL; (aa) 서열식별번호: 3365로서 제시된 VH 및 서열식별번호: 3366으로서 제시된 VL; (bb) 서열식별번호: 3421로서 제시된 VH 및 서열식별번호: 3422로서 제시된 VL; (cc) 서열식별번호: 3447로서 제시된 VH 및 서열식별번호: 3448로서 제시된 VL; (dd) 서열식별번호: 3515로서 제시된 VH 및 서열식별번호: 3516으로서 제시된 VL; (ee) 서열식별번호: 3605로서 제시된 VH 및 서열식별번호: 3606으로서 제시된 VL; (ff) 서열식별번호: 3647로서 제시된 VH 및 서열식별번호: 3648로서 제시된 VL; (gg) 서열식별번호: 3649로서 제시된 VH 및 서열식별번호: 3650으로서 제시된 VL; (hh) 서열식별번호: 3725로서 제시된 VH 및 서열식별번호: 3726으로서 제시된 VL; (ii) 서열식별번호: 3835로서 제시된 VH 및 서열식별번호: 3836으로서 제시된 VL; (jj) 서열식별번호: 3845로서 제시된 VH 및 서열식별번호: 3846으로서 제시된 VL; (kk 서열식별번호: 3853으로서 제시된 VH 및 서열식별번호: 3854로서 제시된 VL; (ll) 서열식별번호: 3873으로서 제시된 VH 및 서열식별번호: 3874로서 제시된 VL; (mm) 서열식별번호: 4949로서 제시된 VH 및 서열식별번호: 4950으로서 제시된 VL; (nn) 서열식별번호: 5029로서 제시된 VH 및 서열식별번호: 5030으로서 제시된 VL; (oo) 서열식별번호: 5131로서 제시된 VH 및 서열식별번호: 5132로서 제시된 VL; (pp) 서열식별번호: 5217로서 제시된 VH 및 서열식별번호: 5218로서 제시된 VL; 또는 (qq) 서열식별번호: 5311로서 제시된 VH 및 서열식별번호: 5312로서 제시된 VL을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에 제공된 항-SARS-CoV-2 항체 또는 항원 결합 단편은 ACE2에 대한 SARS-CoV-2 결합을 차단하는 항체, 즉 ACE2 차단제이다. 특정한 실시양태에서, ACE2-차단 항-SARS-CoV-2 항체 또는 항원 결합 단편은 (i) 서열식별번호: 729로서 제시된 중쇄 가변 영역 (VH) 내의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 730으로서 제시된 경쇄 가변 영역 (VL) 내의 3개의 CDR; (ii) 서열식별번호: 891로서 제시된 VH 내의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 892로서 제시된 VL 내의 3개의 CDR; (iii) 서열식별번호: 961로서 제시된 VH 내의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 962로서 제시된 VL 내의 3개의 CDR; (iv) 서열식별번호: 979로서 제시된 VH 내의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 980으로서 제시된 VL 내의 3개의 CDR; (v) 서열식별번호: 1039로서 제시된 VH 내의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1040으로서 제시된 VL 내의 3개의 CDR; (vi) 서열식별번호: 1103으로서 제시된 VH 내의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1104로서 제시된 VL 내의 3개의 CDR; (vii) 서열식별번호: 1107로서 제시된 VH 내의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1108로서 제시된 VL 내의 3개의 CDR; (viii) 서열식별번호: 1111로서 제시된 VH 내의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1112로서 제시된 VL 내의 3개의 CDR; (ix) 서열식별번호: 1121로서 제시된 VH 내의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1122로서 제시된 VL 내의 3개의 CDR; (x) 서열식별번호: 1133으로서 제시된 VH 내의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1134로서 제시된 VL 내의 3개의 CDR; (xi) 서열식별번호: 1157로서 제시된 VH 내의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1158로서 제시된 VL 내의 3개의 CDR; (xii) 서열식별번호: 1143으로서 제시된 VH 내의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1144로서 제시된 VL 내의 3개의 CDR; (xiii) 서열식별번호: 1251로서 제시된 VH 내의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1252로서 제시된 VL 내의 3개의 CDR; (xiv) 서열식별번호: 1255로서 제시된 VH 내의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1256으로서 제시된 VL 내의 3개의 CDR; (xv) 서열식별번호: 3421로서 제시된 VH 내의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3422로서 제시된 VL 내의 3개의 CDR; (xvi) 서열식별번호: 3447로서 제시된 VH 내의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3448로서 제시된 VL 내의 3개의 CDR; (xvii) 서열식별번호: 3515로서 제시된 VH 내의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3516으로서 제시된 VL 내의 3개의 CDR; (xviii) 서열식별번호: 3605로서 제시된 VH 내의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3606으로서 제시된 VL 내의 3개의 CDR; (xvix) 서열식별번호: 3649로서 제시된 VH 내의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3650으로서 제시된 VL 내의 3개의 CDR; (xx) 서열식별번호: 3853으로서 제시된 VH 내의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3854로서 제시된 VL 내의 3개의 CDR; (xxi) 서열식별번호: 4949로서 제시된 VH 내의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 4950으로서 제시된 VL 내의 3개의 CDR; (xxii) 서열식별번호: 5029로서 제시된 VH 내의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 5030으로서 제시된 VL 내의 3개의 CDR; (xxiii) 서열식별번호: 5131로서 제시된 VH 내의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 5132로서 제시된 VL 내의 3개의 CDR; (xxiv) 서열식별번호: 5217로서 제시된 VH 내의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 5218로서 제시된 VL 내의 3개의 CDR; 또는 (xxv) 서열식별번호: 5311로서 제시된 VH 내의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 5312로서 제시된 VL 내의 3개의 CDR을 포함하며, 여기서 CDR은 카바트, 코티아, 맥칼룸 또는 노스 넘버링에 의해 정의된다.
다른 실시양태에서, ACE2-차단 항-SARS-CoV-2 항체 또는 항원 결합 단편은 (i) 서열식별번호: 729로서 제시된 VH 및 서열식별번호: 730으로서 제시된 VL; (ii) 서열식별번호: 891로서 제시된 VH 및 서열식별번호: 892로서 제시된 VL; (iii) 서열식별번호: 961로서 제시된 VH 및 서열식별번호: 962로서 제시된 VL; (iv) 서열식별번호: 979로서 제시된 VH 및 서열식별번호: 980으로서 제시된 VL; (v) 서열식별번호: 1039로서 제시된 VH 및 서열식별번호: 1040으로서 제시된 VL; (vi) 서열식별번호: 1103으로서 제시된 VH 및 서열식별번호: 1104로서 제시된 VL; (vii) 서열식별번호: 1107로서 제시된 VH 및 서열식별번호: 1108로서 제시된 VL; (viii) 서열식별번호: 1111로서 제시된 VH 및 서열식별번호: 1112로서 제시된 VL; (ix) 서열식별번호: 1121로서 제시된 VH 및 서열식별번호: 1122로서 제시된 VL; (x) 서열식별번호: 1133으로서 제시된 VH 및 서열식별번호: 1134로서 제시된 VL; (xi) 서열식별번호: 1157로서 제시된 VH 및 서열식별번호: 1158로서 제시된 VL; (xii) 서열식별번호: 1143으로서 제시된 VH 및 서열식별번호: 1144로서 제시된 VL; (xiii) 서열식별번호: 1251로서 제시된 VH 및 서열식별번호: 1252로서 제시된 VL; (xiv) 서열식별번호: 1255로서 제시된 VH 및 서열식별번호: 1256으로서 제시된 VL; (xv) 서열식별번호: 3421로서 제시된 VH 및 서열식별번호: 3422로서 제시된 VL; (xvi) 서열식별번호: 3447로서 제시된 VH 및 서열식별번호: 3448로서 제시된 VL; (xvii) 서열식별번호: 3515로서 제시된 VH 및 서열식별번호: 3516으로서 제시된 VL; (xviii) 서열식별번호: 3605로서 제시된 VH 및 서열식별번호: 3606으로서 제시된 VL; (xvix) 서열식별번호: 3649로서 제시된 VH 및 서열식별번호: 3650으로서 제시된 VL; (xx) 서열식별번호: 3853으로서 제시된 VH 및 서열식별번호: 3854로서 제시된 VL; (xxi) 서열식별번호: 4949로서 제시된 VH 및 서열식별번호: 4950으로서 제시된 VL; (xxii) 서열식별번호: 5029로서 제시된 VH 및 서열식별번호: 5030으로서 제시된 VL; (xxiii) 서열식별번호: 5131로서 제시된 VH 및 서열식별번호: 5132로서 제시된 VL; (xxiv) 서열식별번호: 5217로서 제시된 VH 및 서열식별번호: 5218로서 제시된 VL; 또는 (xxv) 서열식별번호: 5311로서 제시된 VH 및 서열식별번호: 5312로서 제시된 VL을 포함한다.
상기 단락에 기재된 항체의 아미노산 서열은 하기에 제공된다:
Figure pct00003
Figure pct00004
Figure pct00005
Figure pct00006
Figure pct00007
Figure pct00008
Figure pct00009
Figure pct00010
Figure pct00011
일부 실시양태에서, 본원에 제공된 항-SARS-CoV-2 항체는 IgG1 이소형을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 항-SARS-CoV-2 항체는 IgG1m3 동종이형을 갖는다.
일부 실시양태에서, 서열식별번호: 5319를 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5320을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체가 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 서열식별번호: 5321을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5322를 포함하는 경쇄를 포함하는 항체가 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 서열식별번호: 5322를 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5323을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체가 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 서열식별번호: 5327을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5328을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체가 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 서열식별번호: 5329를 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5330을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체가 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 서열식별번호: 5331을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5332를 포함하는 경쇄를 포함하는 항체가 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 서열식별번호: 5333을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5334를 포함하는 경쇄를 포함하는 항체가 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 서열식별번호: 5337을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5338을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체가 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 서열식별번호: 5339를 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5340을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체가 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 서열식별번호: 5341을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5342를 포함하는 경쇄를 포함하는 항체가 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 서열식별번호: 5343을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5344를 포함하는 경쇄를 포함하는 항체가 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 서열식별번호: 5345를 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5346을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체가 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 서열식별번호: 5349를 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5350을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체가 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 서열식별번호: 5353을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5354를 포함하는 경쇄를 포함하는 항체가 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 서열식별번호: 5355를 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5356을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체가 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 서열식별번호: 5357을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5358을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체가 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 서열식별번호: 5359를 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5360을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체가 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 서열식별번호: 5361을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5362를 포함하는 경쇄를 포함하는 항체가 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 서열식별번호: 5365를 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5366을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체가 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 서열식별번호: 5707을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5708을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체가 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 서열식별번호: 5709를 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5710을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체가 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 서열식별번호: 5711을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5712를 포함하는 경쇄를 포함하는 항체가 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 서열식별번호: 5713을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5714를 포함하는 경쇄를 포함하는 항체가 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 서열식별번호: 5715를 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5716을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체가 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 서열식별번호: 5717을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5718을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체가 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 서열식별번호: 5719를 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5720을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체가 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 서열식별번호: 5721을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5722를 포함하는 경쇄를 포함하는 항체가 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 서열식별번호: 5723을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5724를 포함하는 경쇄를 포함하는 항체가 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 서열식별번호: 5725를 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5726을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체가 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 서열식별번호: 5727을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5728을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체가 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 서열식별번호: 5729를 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5730을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체가 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 서열식별번호: 5731을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5732를 포함하는 경쇄를 포함하는 항체가 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 서열식별번호: 5733을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5734를 포함하는 경쇄를 포함하는 항체가 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 서열식별번호: 5735를 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5736을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체가 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 서열식별번호: 5737을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5738을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체가 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 서열식별번호: 5739를 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5740을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체가 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 서열식별번호: 5741을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5742를 포함하는 경쇄를 포함하는 항체가 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 서열식별번호: 5743을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5744를 포함하는 경쇄를 포함하는 항체가 본원에 제공된다.
선행 단락에 기재된 항체의 아미노산 서열은 하기에 제공된다:
Figure pct00012
Figure pct00013
Figure pct00014
Figure pct00015
Figure pct00016
Figure pct00017
Figure pct00018
Figure pct00019
Figure pct00020
Figure pct00021
Figure pct00022
Figure pct00023
Figure pct00024
특정한 실시양태에서, 상기 항체는 서열식별번호: 5363을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5364를 포함하는 경쇄를 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 항체는 서열식별번호: 5335를 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5336을 포함하는 경쇄를 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 항체는 서열식별번호: 5347을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5348을 포함하는 경쇄를 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 항체는 서열식별번호: 5351을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5352를 포함하는 경쇄를 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 항체는 서열식별번호: 5325를 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5326을 포함하는 경쇄를 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 항체는 서열식별번호: 5735를 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5736을 포함하는 경쇄를 포함한다.
또한, SARS-CoV-2 스파이크 단백질의 아미노산 434-444 및 459-495 내의 1개 이상의 잔기를 포함하는 에피토프에 결합하며, 여기서 아미노산 잔기 위치는 서열식별번호: 5317에 상응하는 것인, SARS-CoV-2 스파이크 단백질에 결합하는 항체가 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, SARS-CoV-2 스파이크 단백질의 아미노산 434-444 및 459-495 내의 2, 3, 4, 5개 또는 그 초과의 잔기를 포함하는 에피토프에 결합하며, 여기서 아미노산 잔기 위치는 서열식별번호: 5317에 상응하는 것인, SARS-CoV-2 스파이크 단백질에 결합하는 항체가 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 에피토프는 HDX-MS (수소-중수소 교환 질량 분광측정법)에 의해 결정된다.
또한, SARS-CoV-2 스파이크 단백질의 하기 잔기: Y351, Y449, N450, L452, L455, F456, T470, I472, N481, G482, V483, E484, G485, F486, Y489, F490, L492, Q493, S494 중 1개 이상을 포함하는 에피토프에 결합하며, 여기서 아미노산 잔기 위치는 서열식별번호: 5317에 상응하는 것인, SARS-CoV-2 스파이크 단백질에 결합하는 항체가 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 에피토프는 열거된 잔기 중 2개 이상 (예를 들어, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19개)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 에피토프는 열거된 잔기 중 3개 이상을 포함한다. 일부 실시양태에서, 에피토프는 열거된 잔기 중 4개 이상을 포함한다. 일부 실시양태에서, 에피토프는 열거된 잔기 중 5개 이상을 포함한다. 일부 실시양태에서, 에피토프는 X선 결정학에 의해 결정된다.
또한, SARS-CoV-2 스파이크 단백질의 하기 잔기: R403, D405, R408, Q409, T415, G416, K417, D420, Y421, Y453, L455, F456, R457, K458, S459, N460, Y473, Q474, A475, G476, F486, N487, Y489, Q493, S494, Y495, G496, Q498, T500, N501, G502, Y505 중 1개 이상을 포함하는 에피토프에 결합하며, 여기서 아미노산 잔기 위치는 서열식별번호: 5317에 상응하는 것인, SARS-CoV-2 스파이크 단백질에 결합하는 항체가 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 에피토프는 열거된 잔기 중 2개 이상 (예를 들어, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32개)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 에피토프는 열거된 잔기 중 3개 이상을 포함한다. 일부 실시양태에서, 에피토프는 열거된 잔기 중 4개 이상을 포함한다. 일부 실시양태에서, 에피토프는 열거된 잔기 중 5개 이상을 포함한다. 일부 실시양태에서, 에피토프는 X선 결정학에 의해 결정된다.
또한, SARS-CoV-2 스파이크 단백질의 하기 잔기: R403, T415, G416, K417, D420, Y421, L455, F456, R457, K458, S459, N460, Y473, Q474, A475, G476, S477, F486, N487, Y489, N501, G502, Y505 중 1개 이상을 포함하는 에피토프에 결합하며, 여기서 아미노산 잔기 위치는 서열식별번호: 5317에 상응하는 것인, SARS-CoV-2 스파이크 단백질에 결합하는 항체가 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 에피토프는 열거된 잔기 중 2개 이상 (예를 들어, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23개)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 에피토프는 열거된 잔기 중 3개 이상을 포함한다. 일부 실시양태에서, 에피토프는 열거된 잔기 중 4개 이상을 포함한다. 일부 실시양태에서, 에피토프는 열거된 잔기 중 5개 이상을 포함한다. 일부 실시양태에서, 에피토프는 X선 결정학에 의해 결정된다.
용어 "에피토프"는 항체에 의해 결합되는 항원의 아미노산 잔기를 지칭한다. 에피토프는 선형 에피토프, 입체형태적 에피토프 또는 하이브리드 에피토프일 수 있다. 에피토프는 "에피토프 맵핑 기술"로도 불리는 상이한 실험 기술에 따라 결정될 수 있다. 에피토프의 결정은 사용된 상이한 에피토프 맵핑 기술에 기초하여 달라질 수 있고, 또한 사용된 상이한 실험 조건에 따라, 예를 들어 특정 실험 조건에 의해 유도된 항원의 입체형태적 변화 또는 절단으로 인해 달라질 수 있는 것으로 이해된다. X선 결정학, 핵 자기 공명 (NMR) 분광분석법, 전자 현미경검사, 부위-지정 돌연변이유발, 종 스와프 돌연변이유발, 알라닌-스캐닝 돌연변이유발, 수소-중수소 교환 (HDX) 및 교차-차단 검정을 포함하나 이에 제한되지는 않는 에피토프 맵핑 기술이 관련 기술분야에 공지되어 있다 (예를 들어, 문헌 [Rockberg and Nilvebrant, Epitope Mapping Protocols: Methods in Molecular Biology, Humana Press, 3rd ed. 2018]).
일부 실시양태에서, 2 또는 3종의 항-SARS-CoV-2 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포함하며, 여기서 적어도 1종의 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 본원에 기재된 항체 또는 항원-결합 단편으로부터 선택된 것인 조성물 (예를 들어, 제약 조성물)이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 2 또는 3종의 항-SARS-CoV-2 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포함하는 조성물 (예를 들어, 제약 조성물)이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 항체 258 내지 577 및 589 내지 1587로부터 선택된 2 또는 3종의 항-SARS-CoV-2 항체를 포함하는 조성물 (예를 들어, 제약 조성물)이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 2 또는 3종의 항-SARS-CoV-2 항체를 포함하며, 여기서 항체 중 적어도 1종은 SARS-CoV-2를 중화시키는 것인 조성물 (예를 들어, 제약 조성물)이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 항체 292, 309, 364, 373, 388, 408, 414, 417, 419, 442, 445, 447, 462, 479, 481, 483, 488, 494, 506, 540, 549, 553, 555, 562, 851, 894, 896, 923, 936, 970, 1015, 1036, 1037, 1075, 1130, 1135, 1139, 1149, 1404, 1444, 1495, 1538 및 1585로부터 선택된 2 또는 3종의 항-SARS-CoV-2 항체를 포함하는 조성물 (예를 들어, 제약 조성물)이 본원에 제공된다.
일부 실시양태에서, 2 또는 3종의 항-SARS-CoV-2 항체를 포함하며, 여기서 적어도 1종의 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 ACE2에 대한 SARS-CoV-2 결합을 차단하는 것인 조성물 (예를 들어, 제약 조성물)이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 2 또는 3종의 항-SARS-CoV-2 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포함하며, 여기서 적어도 1종의 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 항체 292, 373, 408, 417, 447, 479, 481, 483, 488, 494, 506, 549, 553, 555 및 1404로부터 선택되는 것인 조성물 (예를 들어, 제약 조성물)이 본원에 제공된다.
일부 실시양태에서, 2 또는 3종의 항-SARS-CoV-2 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포함하며, 여기서 적어도 1종의 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 SARS-CoV-2 S 단백질의 RBD에 결합하는 것인 조성물 (예를 들어, 제약 조성물)이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 2 또는 3종의 항-SARS-CoV-2 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포함하며, 여기서 적어도 1종의 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 292, 447, 481, 488, 494, 506, 549, 553, 555 및 1404로부터 선택된 항체인 조성물 (예를 들어, 제약 조성물)이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 2 또는 3종의 항-SARS-CoV-2 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포함하며, 여기서 항-SARS-CoV-2 항체 중 적어도 1종은 555인 조성물 (예를 들어, 제약 조성물)이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 2 또는 3종의 항-SARS-CoV-2 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포함하며, 여기서 항-SARS-CoV-2 항체 중 적어도 1종은 서열식별번호: 5363을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5364를 포함하는 경쇄를 포함하는 것인 조성물 (예를 들어, 제약 조성물)이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 2 또는 3종의 항-SARS-CoV-2 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포함하며, 여기서 항-SARS-CoV-2 항체 중 적어도 1종은 1404인 조성물 (예를 들어, 제약 조성물)이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 2 또는 3종의 항-SARS-CoV-2 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포함하며, 여기서 항-SARS-CoV-2 항체 중 적어도 1종은 서열식별번호: 5727을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5728을 포함하는 경쇄를 포함하는 것인 조성물 (예를 들어, 제약 조성물)이 본원에 제공된다.
일부 실시양태에서, 2 또는 3종의 항-SARS-CoV-2 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포함하며, 여기서 적어도 1종의 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 SARS-CoV-2 S 단백질의 N-말단 도메인 (NTD)에 결합하는 것인 조성물 (예를 들어, 제약 조성물)이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 2 또는 3종의 항-SARS-CoV-2 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포함하며, 여기서 적어도 1종의 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 항체 417, 419 및 479로부터 선택된 항체인 조성물 (예를 들어, 제약 조성물)이 본원에 제공된다.
일부 실시양태에서, 2 또는 3종의 항-SARS-CoV-2 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포함하며, 여기서 적어도 1종의 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 SARS-CoV-2 S 단백질의 S2 도메인/서브유닛에 결합하는 것인 조성물 (예를 들어, 제약 조성물)이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 2 또는 3종의 항-SARS-CoV-2 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포함하며, 여기서 적어도 1종의 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 항체 309, 364, 373, 388, 442, 462, 540 및 562로부터 선택된 항체인 조성물 (예를 들어, 제약 조성물)이 본원에 제공된다.
일부 실시양태에서, SARS-CoV-2 S 단백질의 상이한 에피토프에 결합하는 2 또는 3종의 항-SARS-CoV-2 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포함하는 조성물 (예를 들어, 제약 조성물)이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, SARS-CoV-2 S 단백질의 수용체-결합 도메인 (RBD) 중 제1 에피토프에 결합하는 제1 항-SARS-CoV-2 항체 또는 그의 항원-결합 단편 및 SARS-CoV-2 S 단백질의 제2 에피토프에 결합하는 제2 항-SARS-CoV-2 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포함하며, 여기서 제2 에피토프는 제1 에피토프와 상이한 것인 조성물 (예를 들어, 제약 조성물)이 본원에 제공된다.
조성물에 사용될 수 있는 다른 적합한 항-SARS-CoV-2 항체는 문헌 [Shi et al., "A human neutralizing antibody targets the receptor binding site of SARS-CoV-2." Nature 584, 120-124 (2020)]에 기재된 항체, 예를 들어 CB6 또는 CA1을 포함한다. 저자에 따르면, CA1 및 CB6 항체의 서열은 진뱅크에 수탁 코드 MT470194-MT470197로 기탁되었으며, 여기서 MT470194 및 MT470195는 CA1의 경쇄 및 중쇄를 코딩하고; MT470196 및 MT470197은 CB6의 경쇄 및 중쇄를 코딩한다.
일부 실시양태에서, 2 또는 3종의 항-SARS-CoV-2 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포함하며, 여기서 항-SARS-CoV-2 항체 중 적어도 1종은 본원에 기재된 항-SARS-CoV-2 항체이고, 다른 항체는 CA1 또는 CB6인 조성물 (예를 들어, 제약 조성물)이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 2 또는 3종의 항-SARS-CoV-2 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포함하며, 여기서 항-SARS-CoV-2 항체 중 적어도 1종은 555이고, 다른 항체는 CB6인 조성물 (예를 들어, 제약 조성물)이 본원에 제공된다. 555는 또한 밤라니비맙으로도 공지되어 있고, CB6은 또한 에테세비맙으로도 공지되어 있다.
일부 실시양태에서, 2 또는 3종의 항-SARS-CoV-2 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포함하며, 여기서 적어도 1종의 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 SARS-CoV-2 S 단백질의 RBD에 결합하고, 적어도 1종의 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 SARS-CoV-2 S 단백질의 NTD 또는 S2 도메인에 결합하는 것인 조성물 (예를 들어, 제약 조성물)이 본원에 제공된다.
일부 실시양태에서, ACE2-차단성인 것 및 SARS-CoV-2 S 단백질의 수용체-결합 도메인 (RBD) 또는 N-말단 도메인 (NTD) 내의 에피토프에 결합하는 것 둘 다인 2 또는 3종의 항-SARS-CoV-2 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포함하는 조성물 (예를 들어, 제약 조성물)이 본원에 제공된다. 특정한 실시양태에서, 적어도 1종의 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 (i) 서열식별번호: 729로서 제시된 VH 내의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 730으로서 제시된 VL 내의 3개의 CDR; (ii) 서열식별번호: 779로서 제시된 VH 내의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 780으로서 제시된 VL 내의 3개의 CDR; (iii) 서열식별번호: 1039로서 제시된 VH 내의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1040으로서 제시된 VL 내의 3개의 CDR; (iv) 서열식별번호: 1107로서 제시된 VH 내의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1108로서 제시된 VL 내의 3개의 CDR; (v) 서열식별번호: 1121로서 제시된 VH 내의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1122로서 제시된 VL 내의 3개의 CDR; (vi) 서열식별번호: 1133으로서 제시된 VH 내의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1134로서 제시된 VL 내의 3개의 CDR; (vii) 서열식별번호: 1157로서 제시된 VH 내의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1158로서 제시된 VL 내의 3개의 CDR; (viii) 서열식별번호: 1243으로서 제시된 VH 내의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1244로서 제시된 VL 내의 3개의 CDR; (ix) 서열식별번호: 1251로서 제시된 VH 내의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1252로서 제시된 VL 내의 3개의 CDR; (x) 서열식별번호: 1255로서 제시된 VH 내의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1256으로서 제시된 VL 내의 3개의 CDR; (xi) 서열식별번호: 3421로서 제시된 VH 내의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3422로서 제시된 VL 내의 3개의 CDR; (xii) 서열식별번호: 3605로서 제시된 VH 내의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3606으로서 제시된 VL 내의 3개의 CDR; (xiii) 서열식별번호: 3649로서 제시된 VH 내의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3650으로서 제시된 VL 내의 3개의 CDR; 또는 (xiv) 서열식별번호: 4949로서 제시된 VH 내의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 4950으로서 제시된 VL 내의 3개의 CDR을 포함하며, 여기서 CDR은 카바트, 코티아, 맥칼룸 또는 노스 넘버링에 의해 정의된다.
다른 실시양태에서, ACE2-차단성인 것 및 SARS-CoV-2 S 단백질의 수용체-결합 도메인 (RBD) 또는 N-말단 도메인 (NTD) 내의 에피토프에 결합하는 것 둘 다인 적어도 1종의 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 (i) 서열식별번호: 729로서 제시된 VH 및 서열식별번호: 730으로서 제시된 VL; (ii) 서열식별번호: 779로서 제시된 VH 및 서열식별번호: 780으로서 제시된 VL; (iii) 서열식별번호: 1039로서 제시된 VH 및 서열식별번호: 1040으로서 제시된 VL; (iv) 서열식별번호: 1107로서 제시된 VH 및 서열식별번호: 1108로서 제시된 VL; (v) 서열식별번호: 1121로서 제시된 VH 및 서열식별번호: 1122로서 제시된 VL; (vi) 서열식별번호: 1133으로서 제시된 VH 및 서열식별번호: 1134로서 제시된 VL; (vii) 서열식별번호: 1157로서 제시된 VH 및 서열식별번호: 1158로서 제시된 VL; (viii) 서열식별번호: 1243으로서 제시된 VH 및 서열식별번호: 1244로서 제시된 VL; (ix) 서열식별번호: 1251로서 제시된 VH 및 서열식별번호: 1252로서 제시된 VL; (x) 서열식별번호: 1255로서 제시된 VH 및 서열식별번호: 1256으로서 제시된 VL; (xi) 서열식별번호: 3421로서 제시된 VH 및 서열식별번호: 3422로서 제시된 VL; (xii) 서열식별번호: 3605로서 제시된 VH 및 서열식별번호: 3606으로서 제시된 VL; (xiii) 서열식별번호: 3649로서 제시된 VH 및 서열식별번호: 3650으로서 제시된 VL; 또는 (xiv) 서열식별번호: 4949로서 제시된 VH 및 서열식별번호: 4950으로서 제시된 VL을 포함한다.
특정한 실시양태에서, 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체)는 중화 항체이다. 또 다른 실시양태에서, 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체)는 고갈성 항체이다. 더욱이, 상기 언급된 융합 구축물과 같이, 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체)는 선택된 세포독성제, 중합체, 생물학적 반응 조절제 등과 접합, 연결 또는 달리 회합되어 다양한 (및 임의로 다중) 작용 메카니즘을 갖는 수동 면역요법을 제공할 수 있다.
SARS-CoV-2로 감염된 (그리고 그로부터 회복된) 공여자는 신생 및 재발성 바이러스 위협을 신속하게 다루기 위한 치유적 치료, 예방적 대책 및 진단 시약으로서의 항체를 발견하고, 시험하고, 개발하고, 제조하기 위한 면역 세포의 이상적인 공급원이다. 이러한 항체는 채혈 최소 2주 전, 예를 들어 최소 7-8주 전에 SARS-CoV-2로 감염된 공여자로부터 채혈한 혈액 샘플에서 발견될 수 있다. 따라서, 가장 초기에 확인된 환자 및 심지어 인덱스 환자가 최소-침습적 채혈을 사용하는 치료, 예방 및 진단 항체의 공급원일 수 있다. 항원 소변이로부터의 바이러스 탈출의 위험은 감염된 집단의 감시 및 여러 바이러스 균주를 인식하는 교차-반응성 항체의 확인에 의해 완화될 수 있다. 그러나, 인덱스 또는 초기 환자로부터의 치료, 예방 및 진단 항체의 발견, 시험 및 제조를 포괄하는 약물 발견 과정을 유의하게 단축시키는 신속한 대응은 신생 바이러스 위협이 전세계 건강에 위협이 되는 것을 신속하게 막기 위한 및 재정적 및 정치적 안정성을 위한 핵심이다.
관련 기술분야의 통상의 기술자는 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체)가 접합 또는 비접합 형태로 사용될 수 있다는 것을 인지할 것이다. 즉, 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체)는 (예를 들어, 공유 또는 비-공유) 제약 활성 화합물, 생물학적 반응 조절제, 진단 모이어티 또는 생체적합성 조절제와 회합되거나 또는 그에 접합될 수 있다. 이와 관련하여, 이러한 접합체는 펩티드, 폴리펩티드, 단백질, 융합 단백질, 핵산 분자, 소분자, 모방제, 합성 약물, 무기 분자, 유기 분자 및 방사성동위원소를 포함할 수 있는 것으로 이해될 것이다. 더욱이, 접합체는 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체)에, 적어도 부분적으로는 접합을 수행하는 데 사용되는 방법에 따라 다양한 몰비로 공유 또는 비-공유 연결될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "항체" 또는 "이뮤노글로불린"은 상호교환가능하게 및 가장 넓은 의미로 사용되고, 무손상 분자 및 그의 면역학적-반응성 단편 둘 다를 포괄한다. 이들 용어는, 예를 들어 합성 항체, 모노클로날 항체, 올리고클로날 또는 폴리클로날 항체, 멀티클로날 항체, 재조합적으로 생산된 항체, 인트라바디, 다중특이적 항체, 이중특이적 항체, 1가 항체, 다가 항체, 인간 항체, 인간화 항체, 키메라 항체, CDR-그라프트된 항체, 영장류화 항체, Fab 단편, F(ab') 단편, F(ab')2 단편, F(ab)c 단편, 단일-쇄 FvFc (scFvFc), 단일-쇄 Fv (scFv), Dab, 나노바디, 항-이디오타입 (항-Id) 항체 및 그의 임의의 다른 면역학적-반응성/항원-결합 단편을 포괄한다.
항체는 생화학적으로 구별될 수 있는 5종의 별개의 부류로 군분류되고, 그의 중쇄의 불변 도메인의 아미노산 서열에 따라 적절한 부류에 용이하게 배정될 수 있다. 역사적 이유로, 무손상 항체의 주요 부류는 IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM으로 명명된다. 인간에서, IgG 및 IgA 부류는 구조 및 특정 생화학적 특성에 따라 인식된 하위부류 (이소형), 즉 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2로 추가로 나뉠 수 있다. 인간에서의 IgG 이소형은 혈청에서의 그의 풍부도의 순서로 명명되며, IgG1이 가장 풍부하다는 것이 인지될 것이다.
모든 5종의 부류의 항체 (즉, IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM) 및 모든 이소형 (즉, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2), 뿐만 아니라 그의 변이는 본 개시내용의 범주 내에 있지만, IgG 부류에 속하는 바람직한 실시양태가 단지 예시 목적을 위해 일부 상세하게 논의된다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체)는 IgG1 이소형을 갖는다. 그러나, 이러한 개시내용은 단지 예시적인 조성물 및 방법을 나타내는 것이며, 어떠한 방식으로도 제한적이지는 않은 것으로 이해될 것이다.
이와 관련하여, 인간 IgG 이뮤노글로불린은 분자량 대략 23,000 달톤의 2개의 동일한 경쇄 폴리펩티드 및 이소형에 따라 분자량 53,000-70,000의 2개의 동일한 중쇄를 포함한다. 상이한 부류의 항체에 상응하는 중쇄 불변 도메인은 각각 상응하는 소문자 그리스 문자 α, δ, ε, γ 및 μ로 표시된다. 임의의 척추동물 종으로부터의 항체의 경쇄는 그의 불변 도메인의 아미노산 서열에 기초하여 카파 (κ) 및 람다 (λ)로 불리는 2종의 명확하게 구분되는 유형 중 1종에 배정될 수 있다. 관련 기술분야의 통상의 기술자는 상이한 부류의 이뮤노글로불린의 서브유닛 구조 및 3차원 형상이 널리 공지되어 있다는 것을 인지할 것이다.
4개의 쇄는 "Y" 형상으로 디술피드 결합에 의해 연결되며, 여기서 경쇄는 "Y"의 입구에서 시작하여 가변 영역을 거쳐 "Y"의 이중 말단까지 계속되는 중쇄와 묶여진다. 각각의 경쇄는 1개의 공유 디술피드 결합에 의해 중쇄에 연결되는 한편 힌지 영역 내의 2개의 디술피드 연결이 중쇄를 연결한다. 각각의 중쇄 및 경쇄는 또한 규칙적으로 이격된 쇄내 디술피드 가교를 가지며, 이의 수는 IgG의 이소형에 기초하여 달라질 수 있다.
각각의 중쇄는 한 말단에 가변 영역 (VH), 이어서 다수의 불변 영역을 갖는다. 각각의 경쇄는 한 말단에 가변 영역 (VL) 및 그의 다른 말단에 불변 영역을 가지며; 경쇄의 불변 영역은 중쇄의 제1 불변 영역과 정렬되고, 경쇄 가변 영역은 중쇄의 가변 영역과 정렬된다. 경쇄 가변 영역 (VL) 및 중쇄 가변 영역 (VH) 부분 둘 다가 항원 인식 및 특이성을 결정한다. 반대로, 경쇄의 불변 영역 (CL) 및 중쇄의 불변 영역 (CH1, CH2 또는 CH3)은 분비, 경태반 이동성, 순환 반감기, 보체 결합 등과 같은 중요한 생물학적 특성을 부여하고 조절한다. 관례상, 불변 영역 영역의 넘버링은 항체의 항원 결합 부위 또는 아미노-말단으로부터 더 멀어질수록 증가한다. 따라서, 항체의 아미노 또는 N-말단은 가변 영역을 포함하고, 카르복시 또는 C-말단은 불변 영역을 포함한다. 따라서, CH3 및 CL 영역은 실제로 각각 중쇄 및 경쇄의 카르복시-말단을 포함한다.
중쇄 및 경쇄 둘 다의 가변 영역의 부분은 이뮤노글로불린 사이에서 서열이 광범위하게 상이하고, 이들 초가변 부위가 대부분 특정한 항체의 결합 및 특이성을 정의한다. 이들 초가변 부위는 상보성 결정 영역 (CDR)으로 공지된 3개의 절편에서 그 자체로 나타난다. CDR에 플랭킹된 가변 영역의 보다 고도로 보존된 부분은 프레임워크 영역 (FR)으로 명명된다. 보다 구체적으로, 자연 발생 단량체 IgG 항체에서, 항체의 각각의 아암 상에 존재하는 6개의 CDR은 항체가 생체내 또는 시험관내에서 그의 3차원 형상을 취함에 따라 항원-결합 부위를 형성하도록 특이적으로 위치하는 아미노산의 짧은 비-인접 서열이다. CDR은 관련 기술분야에 공지되고 하기에 기재된 바와 같은 임의의 서열 또는 구조-기반 방법 또는 명명 시스템을 사용하여 확인된 아미노산 잔기를 포괄한다.
예로서, CDR은 문헌 [Kabat et al. (1991, NIH Publication 91-3242, National Technical Information Service, Springfield, Va.)]에 기재된 명명법, 구체적으로 중쇄 가변 영역 내의 잔기 31-35 (CDR-H1), 50-65 (CDR-H2) 및 95-102 (CDR-H3) 및 경쇄 가변 영역 내의 잔기 24-34 (CDR-L1), 50-56 (CDR-L2) 및 89-97 (CDR-L3)을 사용하여 정의될 수 있다.
예로서, CDR은 또한 문헌 [Chothia et al. (J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987); Nature 342, pp. 877-883 (1989))]에 기재된 명명법, 구체적으로 중쇄 가변 영역 내의 잔기 26-32 (CDR-H1), 50-58 (CDR-H2) 및 95-102 (CDR-H3) 및 경쇄 가변 영역 내의 잔기 23-34 (CDR-L1), 50-56 (CDR-L2) 및 89-97 (CDR-L3)을 사용하여 정의될 수 있다.
예로서, CDR은 또한 문헌 [MacCallum et al. (J. Mol. Biol. 262:732-745 (1996)]에 기재된 명명법, 구체적으로 중쇄 가변 영역 내의 잔기 30-35 (CDR-H1), 47-58 (CDR-H2) 및 93-101 (CDR-H3) 및 경쇄 가변 영역 내의 잔기 30-36 (CDR-L1), 46-55 (CDR-L2) 및 89-96 (CDR-L3)을 사용하여 정의될 수 있다.
예로서, CDR은 또한 노스에 의해 기재된 명명법을 사용하여 정의될 수 있다 (North et al., "A New Clustering of Antibody CDR Loop Conformations", J. Mol. Biol., 406, 228-256 (2011)). 일부 실시양태에서, CDR은 또한 상이한 명명법의 조합, 예를 들어 카바트와 노스의 하이브리드를 사용하여 정의될 수 있다.
CDR은 항체마다 상당히 다르다 (그리고 정의상 카바트 컨센서스 서열과 상동성을 나타내지 않을 것임). 프레임워크 잔기의 최대 정렬은 Fv 영역에 사용되기 위해 넘버링 시스템에서의 스페이서 잔기의 삽입을 빈번하게 요구한다. 추가로, 임의의 주어진 카바트 부위 번호에서의 특정 개별 잔기의 정체는 종간 또는 대립유전자 분기로 인해 항체 쇄마다 달라질 수 있다.
관련 기술분야의 통상의 기술자는 본원에 제시된 각각의 항체 중쇄 및 경쇄 서열에 대해 카바트 등, 코티아 등 또는 맥칼룸 등에 의해 정의된 바와 같은 CDR을 용이하게 정의, 확인, 유도 및/또는 열거할 수 있다. 따라서, 모든 이러한 명명법에 의해 정의된 각각의 대상 CDR 및 CDR을 포함하는 항체는 명백하게 본 개시내용의 범주 내에 포함된다.
프레임워크 영역은 중쇄 및 경쇄 가변 영역의 나머지를 포함하고, 따라서 약 100-120개 아미노산 길이의 비-인접 서열로 구성된다. 예를 들어, 카바트 등의 명명법을 사용하여, 프레임워크 영역 1은 아미노산 1-30을 포괄하는 가변 영역의 영역에 상응하고; 프레임워크 영역 2는 아미노산 36-49를 포괄하는 가변 영역의 영역에 상응하고; 프레임워크 영역 3은 아미노산 66-94를 포괄하는 가변 영역의 영역에 상응하고; 프레임워크 영역 4는 아미노산 103으로부터 가변 영역의 말단까지의 가변 영역의 영역에 상응한다. 유사하게, 코티아 등에 의한 CDR (예를 들어, CDR-L1 23-34, CDR-L2 50-56, CDR-L3 89-97; CDR-H1 26-32, CDR-H2 50-58, CDR-H3 95-102) 또는 맥칼룸 등에 의한 CDR의 정의를 사용하여, 프레임워크 영역 경계는 상기 기재된 바와 같이 각각의 CDR 말단에 의해 분리된다.
프레임워크 영역은 아미노산 서열에 있어서 보다 적은 분자간 가변성을 나타내고, 주로 β-시트 입체형태를 채택하며, CDR은 β-시트 구조를 연결하고 일부 경우에는 그의 일부를 형성하는 루프를 형성한다. 따라서, 이들 프레임워크 영역은 쇄간 비-공유 상호작용에 의해 6개의 CDR을 정확한 배향으로 위치시키는 것을 제공하는 스캐폴드를 형성하는 작용을 한다. 위치된 CDR에 의해 형성된 항원-결합 부위는 면역반응성 항원 상의 에피토프에 상보적인 표면을 정의한다. 이러한 상보적인 표면은 면역반응성 항원 에피토프에 대한 항체의 비-공유 결합을 촉진한다.
중쇄 및 경쇄 가변 영역의 모두 또는 일부는 생성된 항체의 1종 이상의 특성 개선을 제공하기 위해 표준 재조합 및 발현 기술을 사용하여 재조합 또는 조작될 수 있다. 즉, 제1 항체로부터의 중쇄 또는 경쇄 가변 영역 (또는 그의 임의의 부분)은 제2 항체로부터의 중쇄 또는 경쇄 가변 영역의 임의의 선택된 부분과 혼합 및 매칭될 수 있다. 예를 들어, 한 실시양태에서, 제1 항체의 3개의 경쇄 CDR을 포함하는 전체 경쇄 가변 영역은 제2 항체의 3개의 중쇄 CDR을 포함하는 전체 중쇄 가변 영역과 쌍형성될 수 있다. 더욱이, 다른 실시양태에서, 다양한 항체로부터 유래된 개별 중쇄 및 경쇄 CDR을 혼합하고 매칭시켜 최적화된 특징을 갖는 목적하는 항체를 제공할 수 있다. 따라서, 예시적인 항체는 제1 항체로부터의 3개의 경쇄 CDR, 제2 항체로부터 유래된 2개의 중쇄 CDR 및 제3 항체로부터의 제3 중쇄 CDR을 포함할 수 있다.
상기 언급된 구조적 고려사항을 염두하여, 관련 기술분야의 통상의 기술자는 본 발명의 항체가 다수의 기능적 실시양태 중 어느 하나를 포함할 수 있다는 것을 인지할 것이다. 이와 관련하여, 상용성 항체는 대상체에서 목적하는 생리학적 반응을 제공하는 임의의 면역반응성 항체 (본원에 정의된 바와 같은 용어)를 포함할 수 있다. 임의의 개시된 항체가 본 발명의 교시와 함께 사용될 수 있지만, 본 발명의 특정 실시양태는 키메라, 인간화 또는 인간 모노클로날 항체 또는 그의 면역반응성 단편을 포함할 것이다. 또 다른 실시양태는, 예를 들어 균질 또는 불균질 다량체 구축물, Fc 변이체 및 접합된 또는 글리코실화-변경된 항체를 포함할 수 있다. 더욱이, 이러한 형상은 상호 배타적이지 않고, 상용성 개별 항체는 본원에 개시된 기능적 측면 중 1개 이상을 포함할 수 있는 것으로 이해될 것이다. 예를 들어, 상용성 항체는 인간화 가변 영역을 갖는 단일 쇄 디아바디 또는 혈청 반감기를 조정하기 위해 글리코실화 패턴을 변경시키는 Fc 변형을 갖는 완전 인간 전장 IgG3 항체를 포함할 수 있다. 다른 예시적인 실시양태는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 자명하며, 본 발명의 범주 내에 있는 것으로 용이하게 인식될 수 있다.
나이브 라이브러리 (천연 또는 합성)에 의해 생산된 항체는 중간 정도의 친화도 (Ka 약 106 내지 107 M-1)를 가질 수 있지만, 친화도 성숙은 또한 관련 기술분야에 기재된 바와 같이 2차 라이브러리로부터 구축 및 재선택함으로써 시험관내에서 모방될 수 있다. 예를 들어, 돌연변이는 오류-유발 폴리머라제를 사용함으로써 시험관내에서 무작위로 도입될 수 있다.
추가적으로, 친화도 성숙은, 예를 들어 선택된 개별 Fv 클론에서 관심 CDR에 걸쳐있는 무작위 서열을 보유하는 프라이머를 사용한 PCR을 사용하여 1개 이상의 CDR을 무작위로 돌연변이시키고, 보다 높은 친화도 클론에 대해 스크리닝함으로써 수행될 수 있다. 또 다른 접근법은 파지 디스플레이에 의해 선택된 VH 또는 VL 영역을 비면역화 공여자로부터 수득된 자연 발생 가변 영역 변이체의 레퍼토리와 재조합하고, 여러 라운드의 쇄 재셔플링에서 보다 높은 친화도에 대해 스크리닝하는 것이다. 이 기술은 약 10-9 M 이하의 해리 상수 Kd (koff/kon)를 갖는 항체 및 항체 단편의 생산을 가능하게 한다.
항체의 유형 (예를 들어, 키메라, 인간화 등)에 상관없이, 관련 기술분야의 통상의 기술자는 그의 면역반응성 또는 항원-결합 단편이 또한 사용될 수 있다는 것을 인지할 것이다. 가장 넓은 의미에서, 항체 단편은 무손상 항체 (예를 들어, 자연 발생 이뮤노글로불린)의 적어도 한 부분을 포함한다. 보다 특히, 용어 "단편"은 무손상 또는 완전 항체 또는 항체 쇄보다 더 적은 아미노산 잔기를 포함하는 항체 또는 항체 쇄의 일부 또는 부분을 지칭한다. 본원에 사용된 용어 "항원-결합 단편"은 항원에 결합하거나 또는 항원 결합 (즉, 특이적 결합)에 대해 무손상 항체와 (즉, 이들이 유래된 무손상 항체와) 경쟁하는 이뮤노글로불린 또는 항체의 폴리펩티드 단편을 지칭한다. 본원에 사용된 항원-결합 단편은 항체 경쇄 (VL), 항체 중쇄 (VH), 단일 쇄 항체 (scFv), F(ab')2 단편, Fab 단편, Fd 단편, Fv 단편, 단일 영역 항체 단편, 디아바디, 선형 항체, 단일-쇄 항체 분자 및 항체 단편으로부터 형성된 다중특이적 항체를 포함하였다.
관련 기술분야의 통상의 기술자는 또한 항체 단편이 무손상 또는 완전 조정제 (예를 들어, 항체 또는 항체 쇄)의 화학적 또는 효소적 처리를 통해 또는 재조합 수단에 의해 수득될 수 있다는 것을 인지할 것이다. 이와 관련하여, 다양한 항체 단편이 무손상 항체의 소화의 관점에서 정의되지만, 통상의 기술자는 이러한 단편이 화학적으로 또는 재조합 DNA 방법론을 사용함으로써 신생 합성될 수 있다는 것을 인지할 것이다.
예로서, 항체의 파파인 소화는 Fab 단편으로 불리는, 각각 단일 항원-결합 부위를 갖는 2개의 동일한 항원-결합 단편, 및 용이하게 결정화되는 능력을 반영하는 명칭인, 나머지 Fc 단편을 생산한다. 펩신 처리는 2개의 항원-결합 부위를 갖고 여전히 항원에 가교할 수 있는 F(ab')2 단편을 생성한다. Fab 단편은 또한 경쇄의 불변 영역 및 중쇄의 제1 불변 영역 (CH1)을 함유한다. Fab' 단편은 항체 힌지 영역으로부터의 1개 이상의 시스테인을 포함한 중쇄 CH1 영역의 카르복시 말단에 소수의 잔기가 부가된다는 점에서 Fab 단편과 상이하다. Fab'-SH는 불변 영역의 시스테인 잔기(들)가 적어도 1개의 유리 티올 기를 보유하는 Fab'에 대한 본원의 명칭이다. F(ab')2 항체 단편은 원래 그들 사이에 힌지 시스테인을 갖는 Fab' 단편의 쌍으로서 생산되었다. 항체 단편의 다른 화학적 커플링이 또한 공지되어 있다.
추가의 예로서, Fv 단편은 완전한 항원 인식 및 결합 부위를 함유하는 항체 단편이다. 이 영역은 자연에서, 예를 들어 scFv에서 공유결합될 수 있는, 단단히 회합된 1개의 중쇄 및 1개의 경쇄 가변 영역의 이량체로 구성된다. 이러한 형상에서 각각의 가변 영역의 3개의 CDR이 상호작용하여 VH-VL 이량체의 표면 상에 항원 결합 부위를 정의한다. 집합적으로, 6개의 CDR 또는 그의 하위세트는 항체에 항원 결합 특이성을 부여한다. 그러나, 심지어 단일 가변 영역 (또는 항원에 특이적인 단지 3개의 CDR을 포함하는 Fv의 절반)도, 통상적으로 전체 결합 부위보다 더 낮은 친화도로이긴 하지만, 항원을 인식하고 결합하는 능력을 갖는다.
일부 실시양태에서, 항-코로나바이러스 항체 단편 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체 단편)은, 예를 들어 Fc 영역을 포함하고, 무손상 항체에 존재하는 경우에 Fc 영역과 정상적으로 연관된 생물학적 기능, 예컨대 FcRn 결합, 항체 반감기 조정, ADCC 기능 및 보체 결합 중 적어도 1개를 유지하는 것이다. 한 실시양태에서, 항체 단편은 생체내 반감기가 무손상 항체와 실질적으로 유사한 1가 항체이다. 예를 들어, 이러한 항체 단편은 단편에 생체내 안정성을 부여할 수 있는 Fc 서열에 연결된 항원 결합 아암을 포함할 수 있다.
관련 기술분야의 통상의 기술자는 또한 본원에 개시된 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체)가 1가 또는 다가 (예를 들어, 2가, 3가 등)일 수 있다는 것을 인지할 것이다. 본원에 사용된 용어 "결합가"는 항체와 회합된 잠재적 결합 부위의 수를 지칭한다. 각각의 표적 결합 부위는 1개의 표적 분자 또는 표적 분자 상의 특이적 위치 또는 유전자좌에 특이적으로 결합한다. 본 발명의 항체가 1개 초과의 표적 결합 부위 (다가)를 포함하는 경우에, 각각의 표적 결합 부위는 동일하거나 상이한 분자에 특이적으로 결합할 수 있다 (예를 들어, 상이한 리간드 또는 상이한 항원, 또는 동일한 항원 상의 상이한 에피토프 또는 위치에 결합할 수 있음). 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체)는 분자의 각각의 결합 부위가 단일 위치 또는 에피토프에 특이적으로 결합할 것이라는 점에서 1가일 것이다. 다른 실시양태에서, 본원에 개시된 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체)는 1개 초과의 결합 부위를 포함하고 상이한 결합 부위가 단일 초과의 위치 또는 에피토프와 특이적으로 회합한다는 점에서 다가일 것이다. 이러한 경우에, 바이러스 항원을 디스플레이하는 비리온 또는 감염된 세포 상에 다중 에피토프가 존재할 수 있거나, 또는 하나의 분자 상에 단일 에피토프가 존재할 수 있는 한편 또 다른 분자 또는 표면 상에 제2의 상이한 에피토프가 존재할 수 있다.
상기 암시된 바와 같이, 다가 항체는 목적하는 표적 분자의 상이한 에피토프에 면역특이적으로 결합할 수 있거나, 또는 표적 분자뿐만 아니라 이종 에피토프, 예컨대 이종 폴리펩티드 또는 고체 지지체 물질 둘 다에 면역특이적으로 결합할 수 있다. 본원에 개시된 일부 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체)는 단지 2종의 항원에만 결합하지만 (즉, 이중특이적 항체임), 추가의 특이성을 갖는 항체, 예컨대 삼중특이적 항체가 또한 포괄된다. 이중특이적 항체의 예는, 비제한적으로, SARS-CoV 또는 SARS-CoV-2 스파이크 단백질에 대해 지시된 하나의 아암 및 임의의 다른 항원에 대해 지시된 다른 아암을 갖는 것을 포함한다. 이중특이적 항체를 제조하는 방법은 관련 기술분야에 공지되어 있다. 전장 이중특이적 항체의 전통적인 생산은 2개의 이뮤노글로불린 중쇄-경쇄 쌍의 공동-발현에 기초하며, 여기서 2개의 쇄는 상이한 특이성을 갖는다. 다른 보다 정교한 상용성 다중특이적 구축물 및 그의 제작 방법이 또한 공지되어 있다.
또 다른 실시양태에서, 목적하는 결합 특이성 (항체-항원 결합 부위)을 갖는 항체 가변 영역이 이뮤노글로불린 불변 영역 서열에 융합된다. 융합은 바람직하게는 힌지의 적어도 일부, CH2 및/또는 CH3 영역을 포함하는 이뮤노글로불린 중쇄 불변 영역을 갖는다. 한 예에서, 경쇄 결합에 필요한 부위를 함유하는 제1 중쇄 불변 영역 (CH1)이 융합체 중 적어도 1개에 존재한다. 이뮤노글로불린 중쇄 융합체 및 목적하는 경우에 이뮤노글로불린 경쇄를 코딩하는 DNA를 개별 발현 벡터 내로 삽입하고, 적합한 숙주 유기체 내로 공동-형질감염시킨다. 이는 구축에 사용된 3개의 폴리펩티드 쇄의 동일하지 않은 비가 최적의 수율을 제공하는 실시양태에서 3개의 폴리펩티드 단편의 상호 비율을 조정하는 데 있어서 큰 유연성을 제공한다. 그러나, 적어도 2개의 폴리펩티드 쇄의 동일한 비로의 발현이 높은 수율을 생성하는 경우 또는 비가 특정한 유의성을 갖지 않는 경우에, 2개 또는 모든 3개의 폴리펩티드 쇄에 대한 코딩 서열을 1개의 발현 벡터에 삽입하는 것이 가능하다.
이러한 접근법의 한 실시양태에서, 이중특이적 항체는 한 아암에 제1 결합 특이성을 갖는 하이브리드 이뮤노글로불린 중쇄 및 다른 아암에 하이브리드 이뮤노글로불린 중쇄-경쇄 쌍 (제2 결합 특이성을 제공함)으로 구성된다. 이중특이적 분자의 한쪽 절반에만 이뮤노글로불린 경쇄가 존재하는 것이 용이한 분리 방식을 제공하기 때문에, 이러한 비대칭 구조는 원치않는 이뮤노글로불린 쇄 조합물로부터 목적하는 이중특이적 화합물의 분리를 용이하게 하는 것으로 밝혀졌다.
관련 기술분야에 공지된 또 다른 접근법에 따르면, 한 쌍의 항체 분자는 재조합 세포 배양물로부터 회수되는 이종이량체의 백분율을 최대화하도록 조작될 수 있다. 바람직한 계면은 항체 불변 영역의 CH3 영역의 적어도 일부를 포함한다. 이 방법에서, 제1 항체 분자의 계면으로부터의 1개 이상의 작은 아미노산 측쇄는 보다 큰 측쇄 (예를 들어, 티로신 또는 트립토판)로 대체된다. 큰 아미노산 측쇄를 보다 작은 것 (예를 들어, 알라닌 또는 트레오닌)으로 대체함으로써 큰 측쇄(들)에 대한 동일하거나 유사한 크기의 보상적 공동이 제2 항체 분자의 계면 상에 생성된다. 이는 동종이량체와 같은 다른 원치않는 최종-생성물에 비해 이종이량체의 수율을 증가시키는 메카니즘을 제공한다.
이중특이적 항체는 또한 가교 또는 이종접합체 항체를 포함한다. 이종접합체 항체는 임의의 편리한 가교 방법을 사용하여 제조될 수 있다. 적합한 가교제 및 기술은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있다.
본원에 개시된 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체)의 가변 또는 결합 영역에 대한 다양한 변형, 치환, 부가 또는 결실에 추가로, 관련 기술분야의 통상의 기술자는 선택된 실시양태가 또한 불변 영역 (즉, Fc 영역)의 치환 또는 변형을 포함할 수 있다는 것을 인지할 것이다. 보다 특히, 본원에 개시된 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체)는 변경된 약동학, 증가된 혈청 반감기, 증가된 결합 친화도, 감소된 면역원성, 증가된 생산, 변경된 Fc 리간드 결합, 증진 또는 감소된 ADCC 또는 CDC 활성, 변경된 글리코실화 및/또는 디술피드 결합 및 변형된 결합 특이성을 포함하나 이에 제한되지는 않는 바람직한 특징을 갖는 화합물을 생성하는 1개 이상의 추가의 아미노산 잔기 치환, 돌연변이 및/또는 변형을 함유할 수 있는 것으로 고려된다.
본원에 사용된 용어 "Fc 영역"은 천연 서열 Fc 영역 및 변이체 Fc 영역을 포함한, 이뮤노글로불린 중쇄의 C-말단 영역을 정의한다. 이뮤노글로불린 중쇄의 Fc 영역의 경계는 달라질 수 있지만, 인간 IgG 중쇄 Fc 영역은 통상적으로 위치 Cys226에서의 아미노산 잔기로부터 또는 Pro230으로부터 그의 카르복실-말단까지의 스트레치로 정의된다. Fc 영역의 C-말단 리신 (EU 넘버링 시스템에 따른 잔기 447)은, 예를 들어 항체의 생산 또는 정제 동안 제거될 수 있거나, 또는 항체의 중쇄를 코딩하는 핵산을 재조합적으로 조작함으로써 제거될 수 있다. 따라서, 무손상 항체의 조성물은 모든 K447 잔기가 제거된 항체 집단, K447 잔기가 제거되지 않은 항체 집단 및 K447 잔기를 갖는 항체와 갖지 않는 항체의 혼합물을 갖는 항체 집단을 포함할 수 있다. 기능적 Fc 영역은 천연 서열 Fc 영역의 이펙터 기능을 보유한다. 예시적인 이펙터 기능은 C1 q 결합; CDC; Fc 수용체 결합; ADCC; 식세포작용; 세포 표면 수용체 (예를 들어, B 세포 수용체; BCR)의 하향 조절 등을 포함한다. 이러한 이펙터 기능은 일반적으로 Fc 영역이 결합 영역 (예를 들어, 항체 가변 영역)과 조합될 것을 요구하고, 예를 들어 본원의 정의에 개시된 바와 같은 다양한 검정을 사용하여 평가될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "Fc 수용체" 또는 FcR은 항체의 Fc 영역에 결합하는 수용체를 기재한다. 일부 실시양태에서, FcR은 천연 인간 FcR이다. 일부 실시양태에서, FcR은 IgG 항체에 결합하는 것 (감마 수용체)이고, FcγRI, FcγRII 및 FcγRIII 하위부류의 수용체 (이들 수용체의 대립유전자 변이체 및 대안적으로 스플라이싱된 형태 포함)를 포함한다. FcγII 수용체는 FcγRIIA (활성화 수용체) 및 FcγRIIB (억제 수용체)를 포함하며, 이들은 주로 그의 세포질 영역에서 상이한, 유사한 아미노산 서열을 갖는다.
활성화 수용체 FcγRIIA는 그의 세포질 영역에 면역수용체 티로신-기반 활성화 모티프 (ITAM)를 함유한다. 억제 수용체 FcγRIIB는 그의 세포질 영역에 면역수용체 티로신-기반 억제 모티프 (ITIM)를 함유한다. FcRn에 대한 결합을 측정하는 방법은 관련 기술분야에 공지되어 있다.
본원에 사용된 "보체 의존성 세포독성" 또는 CDC는 보체의 존재 하의 표적 세포의 용해를 지칭한다. 보체 활성화 경로는 보체계의 제1 성분 (C1q)이 분자, 예를 들어 동족 항원과 복합체화된 항체에 결합함으로써 개시된다. 보체 활성화를 평가하기 위해, CDC 검정이 수행될 수 있다. 추가로, 항체-의존성 세포-매개 세포독성 또는 ADCC는 특정 세포독성 세포 (예를 들어, 자연 킬러 (NK) 세포, 호중구 및 대식세포) 상에 존재하는 Fc 수용체 (FcR)에 결합된 분비된 Ig가, 이들 세포독성 이펙터 세포가 항원-보유 표적 세포에 특이적으로 결합한 다음 후속적으로 표적 세포를 세포독소로 사멸시킬 수 있게 하는 세포독성의 형태를 지칭한다. 표적 아암 세포독성 세포에 대해 지시된 특이적 고친화도 IgG 항체가 이러한 사멸에 절대적으로 요구된다. 표적 세포의 용해는 세포외이고, 직접적인 세포-대-세포 접촉을 요구하며, 보체를 수반하지 않는다.
변경된 FcR 결합 친화도 또는 ADCC 활성을 갖는 본원에 개시된 변이체 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체)는 모 또는 비변형 항체 또는 천연 서열 Fc 영역을 포함하는 조정제와 비교하여 증진 또는 감소된 FcR 결합 활성 및/또는 ADCC 활성을 갖는 것이다. FcR에 대한 증가된 결합을 나타내는 변이체 항체는 모 또는 비변형 항체 또는 천연 서열 Fc 영역을 포함하는 조정제보다 더 우수한 친화도로 적어도 1개의 FcR에 결합한다. FcR에 대한 감소된 결합을 나타내는 변이체 항체는 모 또는 비변형 항체 또는 천연 서열 Fc 영역을 포함하는 조정제보다 더 불량한 친화도로 적어도 1개의 FcR에 결합한다. FcR에 대한 감소된 결합을 나타내는 이러한 변이체는 FcR에 대한 인지가능한 결합을 거의 또는 전혀 보유하지 않을 수 있으며, 예를 들어 관련 기술분야에 널리 공지된 기술에 의해 결정 시, 예를 들어 천연 서열 IgG Fc 영역과 비교하여 FcR에 대한 0-20% 결합을 보유할 수 있다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체)는 증진된 ADCC 활성을 갖는다.
FcRn과 관련하여, 본원에 개시된 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체)는 또한 포유동물, 바람직하게는 인간에서 5일 초과, 10일 초과, 15일 초과, 바람직하게는 20일 초과, 25일 초과, 30일 초과, 35일 초과, 40일 초과, 45일 초과, 2개월 초과, 3개월 초과, 4개월 초과 또는 5개월 초과의 반감기 (예를 들어, 혈청 반감기)를 제공하는 불변 영역에 대한 변형을 갖는 Fc 변이체를 포괄할 수 있다. 포유동물, 바람직하게는 인간에서 본 발명의 항체 (또는 Fc 함유 분자)의 증가된 반감기는 포유동물에서 항체 또는 항체 단편의 보다 높은 혈청 역가를 유발하고, 따라서 항체 또는 항체 단편의 투여 빈도를 감소시키고/거나 투여될 항체 또는 항체 단편의 농도를 감소시킨다. 증가된 생체내 반감기를 갖는 항체는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 기술에 의해 생성될 수 있다. 예를 들어, 증가된 생체내 반감기를 갖는 항체는 Fc 영역과 FcRn 수용체 사이의 상호작용에 수반되는 것으로 확인된 아미노산 잔기를 변형 (예를 들어, 치환, 결실 또는 부가)시킴으로써 생성될 수 있다. 생체내 인간 FcRn에 대한 결합 및 인간 FcRn 고친화도 결합 폴리펩티드의 혈청 반감기는, 예를 들어 인간 FcRn을 발현하는 트랜스제닉 마우스 또는 형질감염된 인간 세포주에서 또는 변이체 Fc 영역을 갖는 폴리펩티드가 투여된 영장류에서 검정될 수 있다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 항-SARS-CoV-2 항체는 인간에서 그의 반감기 (예를 들어, 혈청 반감기)를 개선시키는 변형을 갖는 Fc 영역을 포괄할 수 있다. 연구는 FcRn 결합을 증진시키는 일부 Fc 돌연변이, 예를 들어 N434A/Y436T/Q438R/S440E (ACT1), N434A/Y436V/Q438R/S440E (ACT2), M428L/N434A/Y436T/Q438R/S440E (ACT3), M428L/N434A/Y436V/Q438R/S440E (ACT4), M428L/N434A/Q438R/S440E (ACT5) (문헌 [Maeda, et al., MABS 2017, 9(5): 844-853], EU 인덱스 넘버링에 따라 넘버링된 위치)가 류마티스 인자 (RF)에 대한 증가된 결합을 유발하는 반면, 일부 Fc 돌연변이 조합은 RF에 대한 증가된 결합 없이 FcRn 결합을 증진시키고 항체 반감기를 연장시킨다는 것을 제시하였다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 항-SARS-CoV-2 항체는 ACT1, ACT2, ACT3, ACT4 또는 ACT5로부터 선택된 돌연변이의 임의의 세트를 포함하는 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 항-SARS-CoV-2 항체는 ACT5 돌연변이: M428L/N434A/Q438R/S440E (EU 인덱스 넘버링에 따라 넘버링된 위치)를 포함하는 Fc 영역을 포함한다. 예를 들어, 본원에 개시된 항-SARS-CoV-2 항체는 서열식별번호: 5367을 포함하는 Fc 영역을 포함할 수 있다.
또 다른 실시양태에서, 본원에 개시된 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체)의 글리코실화 패턴 또는 조성이 변형된다. 보다 특히, 바람직한 실시양태는 Fc 영역을 포함하는 분자에 공유 부착된 1개 이상의 조작된 당형태, 즉 변경된 글리코실화 패턴 또는 변경된 탄수화물 조성을 포함할 수 있다. 조작된 당형태는 이펙터 기능의 증진 또는 감소, 표적 항원에 대한 항체의 친화도의 증가 또는 항체의 생산의 용이화를 포함하나 이에 제한되지는 않는 다양한 목적에 유용할 수 있다. 감소된 이펙터 기능이 요망되는 경우에, 항체는 비-글리코실화 형태로 발현되도록 조작될 수 있는 것으로 인지될 것이다. 이러한 탄수화물 변형은, 예를 들어 항체 서열 내의 1개 이상의 글리코실화 부위를 변경시킴으로써 달성될 수 있다. 즉, 1개 이상의 가변 영역 프레임워크 글리코실화 부위의 제거를 유발하여 그 부위에서 글리코실화를 제거하는 1개 이상의 아미노산 치환이 이루어질 수 있다. 반대로, 1개 이상의 추가의 글리코실화 부위에서의 조작에 의해 Fc 함유 분자에 증진된 이펙터 기능 또는 개선된 결합이 부여될 수 있다.
추가적으로 또는 대안적으로, 변경된 글리코실화 조성을 갖는 Fc 변이체, 예컨대 감소된 양의 푸코실 잔기를 갖는 저푸코실화 항체 또는 증가된 양분성 GlcNAc 구조를 갖는 항체가 제조될 수 있다. 이들 및 유사한 변경된 글리코실화 패턴은 항체의 ADCC 능력을 증가시키는 것으로 입증되었다. 조작된 당형태는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 임의의 방법에 의해, 예를 들어 조작된 또는 변이체 발현 균주를 사용함으로써, 1종 이상의 효소 (예를 들어 N-아세틸글루코사미닐트랜스퍼라제 III (GnT III))와의 공동-발현에 의해, 다양한 유기체 또는 다양한 유기체로부터의 세포주에서 Fc 영역을 포함하는 분자를 발현시킴으로써, 또는 Fc 영역을 포함하는 분자가 발현된 후에 탄수화물(들)을 변형시킴으로써 생성될 수 있다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체)는 감소된 푸코실화를 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체)는 Fc 영역에 결합된 N-글리코시드-연결된 당 쇄를 포함하는 Fc 영역을 포함하며, 여기서 당 쇄는 푸코스를 함유하지 않는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체)는 푸코스를 포함하는 N-글리코시드-연결된 당 쇄를 포함하는 동일한 항체와 비교하여 증가된 ADCC 활성을 갖는다.
항-코로나바이러스 항체의 특징화
항체 조정제가 어떻게 수득되든지 또는 상기 언급된 형태 중 어느 것을 취하든지 (예를 들어, 인간화, 인간 등), 본원에 개시된 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체)는 1개 이상의 바람직한 특징을 나타낸다. 따라서, 항-코로나바이러스 항체-생산 세포 (예를 들어, 인간 B 세포, 하이브리도마 또는 효모 콜로니)를 선택하고, 클로닝하고, 예를 들어 강건한 성장, 높은 항체 생산 및 하기에 보다 상세하게 논의된 바와 같은 바람직한 항체 특징을 포함한 이들 바람직한 특징에 대해 추가로 스크리닝할 수 있다. 하이브리도마는 생체내 동계 동물, 면역계가 결여된 동물, 예를 들어 누드 마우스에서 또는 시험관내 세포 배양물에서 확장될 수 있다. 각각 별개의 항체 종을 생산하는 하이브리도마 및/또는 콜로니를 선택하고, 클로닝하고, 확장시키는 방법은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 널리 공지되어 있다.
예를 들어, 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체)는 수용체 결합 및/또는 숙주 세포 내로의 진입에 필수적인 바이러스 표면 항원의 인식을 통해 비리온을 중화시키는 그의 능력에 의해 특징화될 수 있다. 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체)는 또한 보체-의존성 세포독성 (CDC), 항체-의존성 세포성 식세포작용 (ADCP) 또는 항체-의존성 세포-매개 세포독성 (ADCC)을 통해 표면에 바이러스 항원을 디스플레이하는 감염된 세포를 제거하는 그의 능력에 의해 특징화될 수 있다. 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체)는 또한 항체-의존성, 세포-매개 바이러스 억제 (ADCVI)를 통해 바이러스 전파에 직접적으로 영향을 미치는 그의 능력에 의해 특징화될 수 있다. 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체)는 또한 그의 에피토프 특이성 또는 예를 들어 결합 친화도, 용융 온도 (Tm) 및 등전점을 비롯한 다수의 상이한 물리적 특징에 의해 특징화될 수 있다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체)는 중화 항체이다. 본원에 사용된 용어 "중화 항체"는 비리온에 결합하거나 그와 상호작용하여, 비리온과 숙주 세포의 결합 또는 회합 및/또는 숙주 세포 내로의 진입을 방지하거나, 또는 항체가 통상적인 시험관내 중화 검정에서 중화 항체인 것으로 보이지 않을 수도 있지만 항체가 바이러스 감염의 전파를 여전히 억제하는 한, 방출 억제제로서 작용하는 항체를 지칭한다.
중화 검정의 예는 배양물 내의 세포에 대한 바이러스 세포병변 효과 (CPE)의 억제에 기초한 통상적인 중화 검정을 포함한다. 예를 들어, 중화는 SARS-CoV 또는 SARS-CoV-2로 감염된 세포에서 CPE의 형성을 감소시키거나 차단함으로써 시험될 수 있다. 바이러스 및 항체를 예비혼합한 후 세포에 첨가하고, 이어서 바이러스 진입의 차단을 측정할 수 있다. 헤마글루티닌 억제 (HI)는 시험관내에서 시험될 수 있고, 적혈구에 결합하는 바이러스의 능력의 차단을 검출할 수 있다. 시알산 수용체 결합 부위를 차단하는 항체는 세포에 대한 바이러스 결합을 중화시켜 감염을 차단할 것이다. 중화 검정은 또한 타미플루(TAMIFLU)®와 같은 뉴라미니다제 억제제의 경우에서와 같이 바이러스 방출의 차단을 검출할 수 있다. 일부 실시양태에서, 중화 검정은, 예를 들어 하기 실시예에 기재된 바와 같은 유사중화(pseudoneutralization) 검정일 수 있다. 일부 실시양태에서, 중화 검정은, 예를 들어 하기 실시예에 기재된 바와 같은 생 바이러스 중화 검정일 수 있다.
다른 실시양태에서, 본원에 개시된 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체)는 고갈성 항체이다. 본원에 사용된 용어 "고갈성 항체"는 감염된 세포의 표면 상에서 또는 그 근처에서 SARS-CoV-2 항원에 결합하거나 회합하고, (예를 들어, 보체-의존성 세포독성 (CDC), 항체-의존성 세포성 세포독성 (ADCC) 또는 항체-의존성 세포성 식세포작용 (ADCP)에 의해) 세포의 사멸, 불능화 또는 제거를 유도, 촉진 또는 유발하는 항체를 지칭한다. 바람직하게는, 고갈성 항체는 정의된 세포 집단 내의 감염된 세포의 적어도 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99%를 제거, 불능화, 퇴치 또는 사멸시킬 수 있을 것이다.
본원에 개시된 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체)는 또한 그의 에피토프 특이성에 의해 특징화될 수 있다. 본원에 개시된 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체)는 선택된 표적(들)에 의해 제시된 별개의 에피토프 또는 결정기와 회합하거나 또는 그에 결합할 것이다. 본원에 사용된 용어 "에피토프"는 특정한 항체에 의해 인식되고 특이적으로 결합될 수 있는 표적 항원의 부분을 지칭한다. 에피토프는 단백질의 3차 폴딩에 의해 병치된 인접 아미노산 및 비인접 아미노산 둘 다로부터 형성될 수 있다. 인접 아미노산으로부터 형성된 에피토프는 전형적으로 단백질 변성 시 유지되는 반면, 3차 폴딩에 의해 형성된 에피토프는 전형적으로 단백질 변성 시 상실된다. 에피토프는 전형적으로 독특한 공간 입체형태로 적어도 3개, 보다 통상적으로는 적어도 5 내지 10개의 아미노산을 포함한다. 보다 구체적으로, 통상의 기술자는 용어 에피토프가 이뮤노글로불린 또는 T-세포 수용체에 특이적으로 결합할 수 있거나 또는 달리 분자와 상호작용할 수 있는 임의의 단백질 결정기를 포함한다는 것을 인지할 것이다. 에피토프 결정기는 일반적으로 분자, 예컨대 아미노산 또는 탄수화물 또는 당 측쇄의 화학적 활성 표면 기로 이루어지고, 일반적으로 특이적 3차원 구조적 특징, 뿐만 아니라 특이적 전하 특징을 갖는다. 추가적으로, 에피토프는 선형 또는 입체형태적일 수 있다. 선형 에피토프에서, 단백질과 상호작용 분자 (예컨대 항체) 사이의 상호작용의 모든 지점은 단백질의 1차 아미노산 서열을 따라 선형으로 발생한다. 입체형태적 에피토프에서, 상호작용 지점은 서로 선형으로 분리된 단백질 상의 아미노산 잔기에 걸쳐 발생한다.
항원 상의 목적하는 에피토프가 결정되면, 예를 들어 관련 기술분야에 공지된 기술을 사용하여 에피토프를 포함하는 펩티드로 면역화시킴으로써 그 에피토프에 대한 항체를 생성시키는 것이 가능하다. 대안적으로, 발견 과정 동안, 항체의 생성 및 특징화는 바람직한 에피토프에 관한 정보를 규명할 수 있다. 이어서, 이러한 정보로부터, 동일한 에피토프에의 결합에 대해 항체를 경쟁적으로 스크리닝하는 것이 가능하다. 이를 달성하기 위한 접근법은 서로 경쟁적으로 결합하는 항체, 즉 항원에의 결합에 대해 경쟁하는 항체를 찾아내기 위한 경쟁 연구를 수행하는 것이다. 항체를 그의 교차-경쟁에 기초하여 비닝하는 고처리량 방법은 관련 기술분야에 공지되어 있다.
본원에 사용된 용어 "비닝"은 항체를 그의 항원 결합 특징에 기초하여 군분류하는 방법을 지칭한다. 군분류는 시험된 항체의 관찰된 결합 패턴이 얼마나 상이한지에 따라 다소 임의적이다. 따라서, 상기 기술이 항체를 카테고리화하는 데 유용한 도구이지만, 빈이 항상 에피토프와 직접적으로 상관관계가 있는 것은 아니며, 이러한 에피토프 결합의 초기 결정은 다른 관련 기술분야에 인지된 방법론에 의해 추가로 확인되어야 한다.
이러한 주의를 기울여, 선택된 1차 항체 (또는 그의 단편)가 관련 기술분야에 공지된 방법을 사용하여 제2 항체와 결합에 대해 교차 경쟁하는지 또는 동일한 에피토프에 결합하는지 여부를 결정할 수 있다. 한 실시양태에서, 비리온 또는 1개 이상의 감염된 세포(들)를 포화 조건 하에 제1 항체에 노출시킨 다음, 제2 항체가 동일한 비리온 또는 세포(들) 집단에 결합하는 능력을 측정한다. 제2 항체가 결합할 수 있다면, 제2 항체는 제1 항체와 상이한 에피토프에 결합한다. 그러나, 제2 항체가 결합할 수 없다면, 제2 항체는 동일한 에피토프, 중첩 에피토프 또는 제1 항체에 의해 결합된 에피토프에 매우 근접한 에피토프에 결합한다. 관련 기술분야에 공지된 바와 같이, 목적하는 데이터는 고체 상 직접 또는 간접 방사선면역검정 (RIA), 고체 상 직접 또는 간접 효소 면역검정 (EIA), 샌드위치 경쟁 검정, 표면 플라즈몬 공명, 생물층 간섭측정법 또는 유동 세포측정 방법론을 사용하여 수득될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "경쟁하다"는 시험 하의 항체 또는 면역학적-반응성 단편이 공통 항원에 대한 참조 항체의 특이적 결합을 방지하거나 억제하는, 검정에 의해 결정된 바와 같은 항체들 사이의 경쟁을 의미한다. 전형적으로, 이러한 검정은 고체 표면에 결합된 정제된 항원, 또는 비표지된 시험 이뮤노글로불린 및 표지된 참조 이뮤노글로불린, 이들 중 어느 하나를 보유하는 세포의 사용을 수반한다. 경쟁적 억제는 시험 이뮤노글로불린의 존재 하에 고체 표면 또는 세포에 결합된 표지의 양을 결정함으로써 측정된다. 통상적으로, 시험 이뮤노글로불린은 과량으로 존재한다. 경쟁 검정에 의해 확인된 항체 (경쟁 항체)는 참조 항체와 동일한 에피토프에 결합하는 항체 및 입체 장애가 발생하도록 참조 항체에 의해 결합된 에피토프에 충분히 근접하는 인접한 에피토프에 결합하는 항체를 포함한다. 경쟁적 결합을 결정하는 방법에 관한 추가의 세부사항은 본원의 실시예에 제공된다. 통상적으로, 경쟁 항체가 과량으로 존재하는 경우에, 이는 공통 항원에 대한 참조 항체의 특이적 결합을 적어도 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70% 또는 75%만큼 억제할 것이다. 일부 경우에, 결합은 적어도 80%, 85%, 90%, 95% 또는 97% 또는 그 초과만큼 억제된다.
본원에 개시된 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체)는 또한 그의 결합 친화도에 의해 특징화될 수 있다. 일부 실시양태에서, 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체)는 비리온 또는 감염된 세포 상에 발현된 표적 항원에 특이적으로 결합하며, 즉 해리 상수 Kd (koff/kon)는 ≤ 10-8M이다. 항체는 Kd가 ≤ 5x10-9M인 경우에 높은 친화도로 및 Kd가 ≤ 5x10-10M인 경우에 매우 높은 친화도로 그의 항원에 특이적으로 결합한다. 특정한 실시양태에서, 항체는 ≤ 10-9M의 Kd 및 약 1x10-4/sec의 오프-레이트를 갖는다. 다른 실시양태에서, 오프-레이트는 ≤ 1x10-5/sec이다. 다른 실시양태에서, 항체는 약 10-8M 내지 10-10M의 Kd로 결합할 것이고, 또 다른 실시양태에서, 항체는 Kd ≤ 2x10-10M로 결합한다. 또 다른 선택된 실시양태는 10-2M 미만, 5x10-2M 미만, 10-3M 미만, 5x10-3M 미만, 10-4M 미만, 5x10-4M 미만, 10-5M 미만, 5x10-5M 미만, 10-6M 미만, 5x10-6M 미만, 10-7M 미만, 5x10-7M 미만, 10-8M 미만, 5x10-8M 미만, 10-9M 미만, 5x10-9M 미만, 10-10M 미만, 5x10-10M 미만, 10-11M 미만, 5x10-11M 미만, 10-12M 미만, 5x10-12M 미만, 10-13M 미만, 5x10-13M 미만, 10-14M 미만, 5x10-14M 미만, 10-15M 미만 또는 5x10-15M 미만의 해리 상수 또는 Kd (koff/kon)를 갖는 항체를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, (예를 들어, 바이러스 항원을 디스플레이하는 비리온 또는 감염된 세포 상의) 그의 항원에 특이적으로 결합하는 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체)는 적어도 105M-1s-1, 적어도 2x105M-1s-1, 적어도 5x105M-1s-1, 적어도 106M-1s-1, 적어도 5x106M-1s-1, 적어도 107M-1s-1, 적어도 5x107M-1s-1 또는 적어도 108M-1s-1의 회합률 상수 또는 kon 비율 ((Ab) + 항원 (Ag)k on←Ab-Ag)을 갖는다.
또 다른 실시양태에서, (예를 들어, 바이러스 항원을 디스플레이하는 비리온 또는 감염된 세포 상의) 그의 항원에 특이적으로 결합하는 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체)는 10-1s-1 미만, 5x10-1s-1 미만, 10-2s-1 미만, 5x10-2s-1 미만, 10-3s-1 미만, 5x10-3s-1 미만, 10-4s-1 미만, 5x10-4s-1 미만, 10-5s-1 미만, 5x10-5s-1 미만, 10-6s-1 미만, 5x10-6s-1 미만, 10-7s-1 미만, 5x10-7s-1 미만, 10-8s-1 미만, 5x10-8s-1 미만, 10-9s-1 미만, 5x10-9s-1 또는 10-10s-1 미만의 해리율 상수 또는 koff 비율 ((Ab) + 항원 (Ag)k off←Ab-Ag)을 갖는다.
또 다른 실시양태에서, (예를 들어, 바이러스 항원을 디스플레이하는 비리온 또는 감염된 세포 상의) 그의 항원에 특이적으로 결합하는 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체)는 적어도 102M-1, 적어도 5x102M-1, 적어도 103M-1, 적어도 5x103M-1, 적어도 104M-1, 적어도 5x104M-1, 적어도 105M-1, 적어도 5x105M-1, 적어도 106M-1, 적어도 5x106M-1, 적어도 107M-1, 적어도 5xl 07M-1, 적어도 108M-1, 적어도 5x108M-1, 적어도 109M-1, 적어도 5x109M-1, 적어도 1010M-1, 적어도 5x1010M-1, 적어도 10 nM-1, 적어도 5x10 nM-1, 적어도 1012M-1, 적어도 5x1012M-1, 적어도 1013M-1, 적어도 5x1013M-1, 적어도 1014M-1, 적어도 5x1014M-1, 적어도 1015M-1 또는 적어도 5x1015M-1의 친화도 상수 또는 Ka (kon/koff)를 갖는다.
본원에 개시된 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체)는 또한 그의 각각의 융점 (Tm)에 의해 반영되는 바와 같은 그의 열 안정성에 의해 특징화될 수 있다. 항체의 Fab 영역의 Tm은 항체의 열 안정성의 우수한 지표일 수 있고, 보관 수명의 지표를 추가로 제공할 수 있다. Tm은 단지 주어진 영역 또는 서열에 대한 50% 언폴딩의 온도이다. 보다 낮은 Tm은 보다 많은 응집/보다 적은 안정성을 나타내는 반면, 보다 높은 Tm은 보다 적은 응집/보다 많은 안정성을 나타낸다. 따라서, 보다 높은 Tm을 갖는 항체 또는 단편 또는 유도체가 바람직하다. 더욱이, 관련 기술분야에 인지된 기술을 사용하여, 분자 안정성을 증가시키거나 최적화하기 위해 항체 또는 그의 영역의 조성을 변경하는 것이 가능하다. 단백질 영역 (예를 들어, Fab 영역)의 열 용융 온도 (Tm)는 관련 기술분야에 공지된 임의의 표준 방법을 사용하여, 예를 들어 시차 주사 열량측정법에 의해 측정될 수 있다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체)의 Fab 영역은 적어도 50℃, 55℃, 60℃, 65℃, 70℃, 75℃, 80℃, 85℃, 90℃, 95℃, 100℃, 105℃, 110℃, 115℃ 또는 120℃ 초과의 Tm 값을 갖는다. 또 다른 실시양태에서, 본원에 개시된 항-코로나바이러스 항체의 Fab 영역은 적어도 약 50℃, 약 55℃, 약 60℃, 약 65℃, 약 70℃, 약 75℃, 약 80℃, 약 85℃, 약 90℃, 약 95℃, 약 100℃, 약 105℃, 약 110℃, 약 115℃ 또는 약 120℃ 초과의 Tm 값을 갖는다.
본원에 개시된 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체)는 또한 그의 등전점 (pI)에 의해 특징화될 수 있으며, 등전점은 일반적으로 폴리펩티드가 순 전하 0을 보유하는 pH로 정의된다. 용액의 pH가 단백질의 등전점 (pI)과 동일할 때 단백질 용해도가 전형적으로 최저라는 것은 관련 기술분야에 공지되어 있다. 따라서, 항체 내의 이온화성 잔기의 수 및 위치를 변경하여 pI를 조정함으로써 용해도를 최적화하는 것이 가능하다. 예를 들어, 폴리펩티드의 pI는 적절한 아미노산 치환을 만듦으로써 (예를 들어, 비하전된 잔기, 예컨대 알라닌을 하전된 아미노산, 예컨대 리신으로 치환함으로써) 조작될 수 있다. 어떠한 특정한 이론에 얽매이는 것을 원하지는 않지만, 항체의 아미노산 치환으로 상기 항체의 pI의 변화를 유발하는 것은 항체의 용해도 및/또는 안정성을 개선시킬 수 있다. 관련 기술분야의 통상의 기술자는 목적하는 pI를 달성하기 위해 특정한 항체에 대해 어느 아미노산 치환이 가장 적절할 것인지를 이해할 것이다. 단백질의 pI는 등전 포커싱 및 다양한 컴퓨터 알고리즘을 포함하나 이에 제한되지는 않는 다양한 방법에 의해 결정될 수 있다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체)의 pI는 약 6.5, 약 7.0, 약 7.5, 약 8.0, 약 8.5 또는 약 9.0 초과이다. 또 다른 실시양태에서, 본원에 개시된 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체)의 pI는 6.5, 7.0, 7.5, 8.0, 8.5 또는 9.0 초과이다. 또 다른 실시양태에서, 본원에 개시된 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체)의 pI의 변경을 유발하는 치환은 그의 결합 친화도를 유의하게 감소시키지 않을 것이다. 하기에 보다 상세하게 논의된 바와 같이, FcγR에 대한 변경된 결합을 유발하는 Fc 영역의 치환(들)은 또한 pI의 변화를 유발할 수 있는 것으로 구체적으로 고려된다. 바람직한 실시양태에서, Fc 영역의 치환(들)은 FcγR 결합의 목적하는 변경 및 pI의 임의의 목적하는 변화 둘 다를 달성하도록 구체적으로 선택된다. 본원에 사용된 pI 값은 우세한 전하 형태의 pI로 정의된다.
핵산 및 항-코로나바이러스 항체 발현
본원에 개시된 신규 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체)의 중쇄 또는 경쇄 또는 VH 또는 VL을 코딩하는 핵산 및 1개 이상의 이러한 핵산을 포함하는 벡터가 또한 본원에 제공된다. 본원에서 상호교환가능하게 사용된 용어 "핵산" 또는 "폴리뉴클레오티드"는 천연, 변형된 뉴클레오티드 및/또는 그의 유사체가 혼입된 단일 가닥 및/또는 이중 가닥의 뉴클레오티드-함유 분자, 예컨대 DNA, cDNA 및 RNA 분자를 포함한 뉴클레오티드의 중합체를 지칭한다. 본 개시내용의 폴리뉴클레오티드는 또한, 예를 들어 DNA 또는 RNA 폴리머라제 또는 합성 반응에 의해 그 안에 혼입된 기질을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 항-SARS-CoV-2 항체, 예를 들어 Ab 258 내지 577 및 589 내지 1587 중 어느 하나의 중쇄 또는 경쇄를 코딩하는 핵산이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 항-SARS-CoV-2 항체, 예를 들어 Ab 258 내지 577 및 589 내지 1587 중 어느 하나의 VH 또는 VL을 코딩하는 핵산이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 서열식별번호: 661-1320, 2751-4180 및 4749-5316 중 어느 하나를 포함하는 VH 또는 VL을 코딩하는 핵산이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 서열식별번호: 1-660, 1321-2750 및 4181-4748 중 어느 하나로부터의 서열을 포함하는 핵산이 본원에 제공된다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 항-SARS-CoV-2 항체의 중쇄 또는 경쇄를 코딩하는 핵산이 본원에 제공된다. 예를 들어, 이러한 항체의 중쇄의 아미노산 서열은 서열식별번호: 5319-5366, 5575-5592 및 5707-5744 중 홀수 번호에 제시되고, 이들 항체의 경쇄의 아미노산 서열은 서열식별번호: 5319-5366, 5575-5592 및 5707-5744 중 짝수 번호에 제시된다. 일부 실시양태에서, 서열식별번호: 5363을 포함하는 중쇄, 서열식별번호: 5364를 포함하는 경쇄, 또는 서열식별번호: 5363을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5364를 포함하는 경쇄 둘 다를 코딩하는 핵산이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 서열식별번호: 5335를 포함하는 중쇄, 서열식별번호: 5336을 포함하는 경쇄, 또는 서열식별번호: 5335를 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5336을 포함하는 경쇄 둘 다를 코딩하는 핵산이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 서열식별번호: 5347을 포함하는 중쇄, 서열식별번호: 5348을 포함하는 경쇄, 또는 서열식별번호: 5347을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5348을 포함하는 경쇄 둘 다를 코딩하는 핵산이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 서열식별번호: 5351을 포함하는 중쇄, 서열식별번호: 5352를 포함하는 경쇄, 또는 서열식별번호: 5351을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5352를 포함하는 경쇄 둘 다를 코딩하는 핵산이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 서열식별번호: 5325를 포함하는 중쇄, 서열식별번호: 5326을 포함하는 경쇄, 또는 서열식별번호: 5325를 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5326을 포함하는 경쇄 둘 다를 코딩하는 핵산이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 서열식별번호: 5735를 포함하는 중쇄, 서열식별번호: 5736을 포함하는 경쇄, 또는 서열식별번호: 5735를 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5736을 포함하는 경쇄 둘 다를 코딩하는 핵산이 본원에 제공된다.
선행 단락에 기재된 항-SARS-CoV-2 항체의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 예시적인 핵산, 뿐만 아니라 본원에 개시된 다른 예시적인 항-SARS-CoV-2 항체를 코딩하는 예시적인 핵산이 하기에 제공된다:
Figure pct00025
Figure pct00026
Figure pct00027
Figure pct00028
Figure pct00029
Figure pct00030
Figure pct00031
Figure pct00032
Figure pct00033
Figure pct00034
Figure pct00035
Figure pct00036
Figure pct00037
본원에 개시된 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체)를 코딩하는 DNA는 통상적인 절차를 사용하여 (예를 들어, 항체 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 유전자에 특이적으로 결합할 수 있는 올리고뉴클레오티드 프로브를 사용함으로써) 용이하게 단리 및 서열분석될 수 있다. 단리 및 서브클로닝된 하이브리도마 세포 (또는 파지 또는 효모 유래된 콜로니)는 이러한 DNA의 바람직한 공급원으로서의 역할을 할 수 있다. 보다 특히, 단리된 DNA (변형될 수 있음)는 항체의 제조를 위해 불변 및 가변 영역 서열을 클로닝하는 데 사용될 수 있다.
한 예시적인 방법은 선택된 세포로부터의 RNA의 추출, cDNA로의 전환 및 항체 특이적 프라이머를 사용한 PCR에 의한 증폭을 수반한다. 적합한 프라이머는 관련 기술분야에 널리 공지되어 있고, 본원에 예시된 바와 같이 수많은 상업적 공급원으로부터 용이하게 입수가능하다. 조합 라이브러리의 스크리닝에 의해 단리된 재조합 인간 또는 비-인간 항체를 발현시키기 위해, 항체를 코딩하는 DNA를 재조합 발현 벡터 내로 클로닝하고, 포유동물 세포, 곤충 세포, 식물 세포, 효모 및 박테리아를 포함한 숙주 세포 내로 도입한다는 것이 인지될 것이다. 또 다른 실시양태에서, 조정제를 원숭이 COS 세포, NS0 세포, 차이니즈 햄스터 난소 (CHO) 세포 또는 골수종 세포 내로 도입하여 그에 의해 발현시킨다 (이들 세포는 그렇지 않으면 목적하는 구축물을 생산하지 않음). 하기에 보다 상세하게 논의될 바와 같이, 목적하는 조정제를 발현하는 형질전환된 세포를 비교적 다량으로 성장시켜 융합 구축물 또는 이뮤노글로불린의 임상적 및 상업적 공급을 제공할 수 있다.
본원에 개시된 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체)를 코딩하는 핵산이 파지 디스플레이 기술, 효모 라이브러리, 하이브리도마 기반 기술로부터 합성적으로 수득 또는 유래되든지 또는 상업적 공급원으로부터 수득 또는 유래되든지 간에, 본원에 개시된 발명은 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체), 융합 단백질 또는 그의 항원-결합 단편 또는 유도체를 코딩하는 핵산 분자 및 서열을 포괄하는 것으로 이해되어야 한다. 본원에 개시된 발명은 본 발명의 조정제 또는 그의 단편 또는 변이체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열을 갖는 핵산에 대해 상보적인 폴리뉴클레오티드에, 고 엄격도 하에 또는 대안적으로 중간 또는 저 엄격도 혼성화 조건 (예를 들어, 하기에 정의된 바와 같음) 하에 혼성화하는 핵산 또는 핵산 분자 (예를 들어, 폴리뉴클레오티드)를 추가로 포괄한다. 본원에 사용된 용어 핵산 분자 또는 단리된 핵산 분자는 적어도 DNA 분자 및 RNA 분자를 포함하는 것으로 의도된다. 핵산 분자는 단일 가닥 또는 이중 가닥일 수 있지만, 바람직하게는 이중 가닥 DNA이다. 더욱이, 본 발명은 벡터, 플라스미드, 숙주 세포, 코스미드 또는 바이러스 구축물을 비제한적으로 포함하는, 폴리뉴클레오티드를 코딩하는 이러한 조정제가 혼입된 임의의 비히클 또는 구축물을 포함한다.
본원에 사용된 용어 "단리된 핵산"은 (i) 예를 들어 폴리머라제 연쇄 반응 (PCR)에 의해 시험관내 증폭되거나, (ii) 클로닝에 의해 재조합적으로 생산되거나, (iii) 예를 들어 절단 및 겔-전기영동 분획화에 의해 정제되거나 또는 (iv) 예를 들어 화학적 합성에 의해 합성된 핵산을 지칭한다. 단리된 핵산은 재조합 DNA 기술에 의한 조작에 이용가능한 핵산이다.
보다 구체적으로, 본원에 기재된 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체)를 코딩하는 핵산, 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 확인, 분석, 돌연변이 또는 증폭시키기 위한 혼성화 프로브, PCR 프라이머 또는 서열분석 프라이머로서 사용하기에 충분한 폴리뉴클레오티드, 폴리뉴클레오티드의 발현을 억제하기 위한 안티센스 핵산 및 상기의 상보적 서열이 또한 본원에 포괄된다. 이러한 핵산은 임의의 길이일 수 있다. 이들은, 예를 들어 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 75, 100, 125, 150, 175, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 750, 1,000, 1,500, 3,000, 5,000개 또는 그 초과의 뉴클레오티드 길이일 수 있고/거나, 1개 이상의 추가의 서열, 예를 들어 조절 서열을 포함할 수 있고/거나, 보다 큰 핵산, 예를 들어 벡터의 일부일 수 있다. 이들 핵산은 단일 가닥 또는 이중 가닥일 수 있고, RNA 및/또는 DNA 뉴클레오티드 및 그의 인공 변이체 (예를 들어, 펩티드 핵산)를 포함할 수 있다.
나타낸 바와 같이, 본 발명은 특정한 혼성화 조건 하에 다른 핵산에 혼성화하는 핵산을 추가로 제공한다. 핵산을 혼성화시키는 방법은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있다. 예를 들어, 중간 정도로 엄격한 혼성화 조건은 5x 염화나트륨/시트르산나트륨 (SSC), 0.5% SDS, 1.0 mM EDTA (pH 8.0)를 함유하는 예비세척 용액, 약 50% 포름아미드의 혼성화 완충제, 6xSSC 및 55℃의 혼성화 온도 (또는 다른 유사한 혼성화 용액, 예컨대 약 50% 포름아미드를 함유하는 용액과 42℃의 혼성화 온도) 및 0.5xSSC, 0.1% SDS 중 60℃의 세척 조건을 사용한다. 엄격한 혼성화 조건은 45℃에서 6xSSC 중에서 혼성화하고, 이어서 68℃에서 0.1xSSC, 0.2% SDS 중에서 1회 이상 세척한다. 관련 기술분야의 통상의 기술자는 서로 적어도 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 98 또는 99% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산이 전형적으로 서로 혼성화된 채로 남아있도록 혼성화의 엄격도를 증가 또는 감소시키기 위해 혼성화 및/또는 세척 조건을 조작할 수 있다. 보다 일반적으로, 본 개시내용의 목적상, 핵산 서열과 관련하여 용어 "실질적으로 동일한"은 참조 핵산 서열에 대해 적어도 약 85% 또는 90% 또는 95% 또는 97% 서열 동일성을 나타내는 뉴클레오티드의 서열을 지칭한다. 혼성화 조건의 선택에 영향을 미치는 기초 파라미터 및 적합한 조건을 고안하기 위한 지침은 널리 공지되어 있고, 예를 들어 핵산의 길이 및/또는 염기 조성에 기초하여 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.
핵산은 단독으로 또는 상동 또는 이종일 수 있는 다른 핵산과 조합되어 존재할 수 있다는 것이 추가로 인지될 것이다. 바람직한 실시양태에서, 핵산은 그 핵산에 대해 상동 또는 이종일 수 있는 발현 제어 서열에 기능적으로 연결된다. 이러한 문맥에서, 용어 "상동"은 핵산이 또한 자연적으로 발현 제어 서열에 기능적으로 연결됨을 의미하고, 용어 "이종"은 핵산이 자연적으로 발현 제어 서열에 기능적으로 연결되지 않음을 의미한다.
핵산, 예컨대 RNA 및/또는 단백질 또는 펩티드를 발현하는 핵산 및 발현 제어 서열은 이들이 핵산의 발현 또는 전사가 발현 제어 서열의 제어 하에 또는 영향 하에 있도록 하는 방식으로 서로 공유 연결되는 경우에 서로 기능적으로 연결된다. 핵산이 기능적 단백질로 번역되어야 하는 경우에는, 코딩 서열에 기능적으로 연결된 발현 제어 서열에 의해, 발현 제어 서열의 유도가 코딩 서열에서 프레임 시프트를 유발하지 않으면서 또는 코딩 서열이 목적하는 단백질 또는 펩티드로 번역될 수 없는 경우가 없이, 핵산의 전사를 유발한다. 본원에 사용된 용어 "발현 제어 서열"은 프로모터, 리보솜 결합 부위, 인핸서, 및 유전자의 전사 또는 mRNA의 번역을 조절하는 다른 제어 요소를 포함한다. 특정한 실시양태에서, 발현 제어 서열은 조절될 수 있다. 발현 제어 서열의 정확한 구조는 종의 기능 또는 세포 유형에 따라 달라질 수 있지만, 일반적으로 각각 전사 및 번역의 개시에 수반되는 5'-비전사 및 5'- 및 3'-비번역 서열, 예컨대 TATA 박스, 캡핑 서열, CAAT 서열 등을 포함한다. 보다 구체적으로, 5'-비전사 발현 제어 서열은 기능적으로 연결된 핵산의 전사 제어를 위한 프로모터 서열을 포함하는 프로모터 영역을 포함한다. 발현 제어 서열은 또한 인핸서 서열 또는 상류 활성화제 서열을 포함할 수 있다.
본원에 사용된 용어 "프로모터" 또는 "프로모터 영역"은 발현될 핵산 서열의 상류 (5')에 위치하고 RNA-폴리머라제에 대한 인식 및 결합 부위를 제공함으로써 서열의 발현을 제어하는 핵산 서열에 관한 것이다. 프로모터 영역은 유전자의 전사의 조절에 수반되는 추가의 인자에 대한 추가의 인식 및 결합 부위를 포함할 수 있다. 프로모터는 원핵 또는 진핵 유전자의 전사를 제어할 수 있다. 추가로, 프로모터는 유도성일 수 있고, 유도제에 반응하여 전사를 개시할 수 있거나 또는 전사가 유도제에 의해 제어되지 않는 경우에 구성적일 수 있다. 유도성 프로모터의 제어 하에 있는 유전자는 발현되지 않거나 또는 단지 유도제가 부재하는 경우에 적은 정도로 발현된다. 유도제의 존재 하에, 유전자가 켜지거나 또는 전사 수준이 증가된다. 이는 일반적으로 특이적 전사 인자의 결합에 의해 매개된다.
본원에 개시된 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체)의 생산에 사용하기 위한 프로모터는 SP6, T3 및 T7 폴리머라제에 대한 프로모터, 인간 U6 RNA 프로모터, CMV 프로모터 및 그의 인공 하이브리드 프로모터 (예를 들어, CMV)를 포함하며, 여기서 부분 또는 부분들은 다른 세포성 단백질, 예컨대, 예를 들어 인간 GAPDH (글리세르알데히드-3-포스페이트 데히드로게나제)의 유전자의 프로모터의 부분 또는 부분들에 융합되고, (한) 추가의 인트론(들)을 포함할 수 있다.
본원에 사용된 용어 "발현"은 그의 가장 일반적 의미로 사용되고, RNA 또는 RNA 및 단백질/펩티드의 생산을 포함한다. 이는 또한 핵산의 부분적 발현을 포함한다. 추가로, 발현은 일시적으로 또는 안정적으로 수행될 수 있다.
바람직한 실시양태에서, 핵산 분자는 적절한 경우에 핵산의 발현을 제어하는 프로모터와 함께 벡터에 존재한다. 본원에 사용된 용어 "벡터"는 그의 가장 일반적 의미로 본원에 사용되고, 핵산이, 예를 들어 원핵 및/또는 진핵 세포 내로 도입될 수 있게 하고, 적절한 경우, 게놈 내로 통합될 수 있게 하는 핵산에 대한 임의의 중간 비히클을 포함한다. 이러한 종류의 벡터는 바람직하게는 세포에서 복제 및/또는 발현된다. 벡터는 플라스미드, 파지미드, 박테리오파지 또는 바이러스 게놈을 포함할 수 있다. 본원에 사용된 용어 "플라스미드"는 일반적으로 염색체외 유전 물질의 구축물, 통상적으로 염색체 DNA와 독립적으로 복제될 수 있는 원형 DNA 듀플렉스에 관한 것이다. 바람직한 실시양태에서, 발현 벡터는 글루타민 신테타제 (GS) 발현 벡터이다.
분자 생물학, 미생물학 및 재조합 DNA 기술에서의 많은 통상적인 기술이 임의로 사용된다는 것이 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 인지될 것이다. 이러한 통상적인 기술은 본원에 정의된 바와 같은 벡터, 숙주 세포 및 재조합 방법에 관한 것이다. 추가로, 본질적으로 임의의 폴리뉴클레오티드 (예를 들어, 표지된 또는 비오티닐화된 폴리뉴클레오티드 포함)는 임의의 다양한 상업적 공급원으로부터 수득될 수 있다.
본원에 개시된 발명은 또한 본 발명의 항체 또는 그의 부분의 재조합 발현을 허용하는 재조합 숙주 세포를 포괄한다. 이러한 재조합 숙주 세포에서의 발현에 의해 생산된 본원에 개시된 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체)는 본원에서 재조합 항체로 지칭된다. 본원에 개시된 발명은 또한 이러한 숙주 세포의 자손 세포 및 그에 의해 생산된 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체)를 포괄한다. 바람직한 실시양태에서, 숙주 세포는 차이니즈 햄스터 난소 (CHO) 세포이다.
본원에 사용된 용어 "재조합 숙주 세포" 또는 "숙주 세포"는 재조합 발현 벡터가 도입된 세포를 의미한다. 재조합 숙주 세포 및 숙주 세포는 특정한 대상 세포뿐만 아니라 이러한 세포의 자손을 의미하는 것으로 이해되어야 한다. 특정 변형이 돌연변이 또는 환경적 영향으로 인해 후속 세대에서 발생할 수 있기 때문에, 이러한 자손은 사실상 모 세포와 동일하지 않을 수 있지만, 여전히 본원에 사용된 용어 숙주 세포의 범주 내에 포함된다. 이러한 세포는 상기 기재된 바와 같은 벡터를 포함할 수 있다.
본원에 개시된 발명은 또한 본원에 개시된 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체)를 제조하는 방법을 포괄한다. 한 실시양태에 따르면, 이러한 방법은 상기 기재된 바와 같은 벡터로 형질감염 또는 형질전환된 세포를 배양하는 단계 및 항체를 단리하는 단계를 포함한다.
상기 나타낸 바와 같이, 항체의 발현은 바람직하게는 항-코로나바이러스 항체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 함유하는 발현 벡터(들)를 포함한다. 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 널리 공지된 방법을 사용하여, 항체 코딩 서열 및 적절한 전사 및 번역 제어 신호를 포함하는 발현 벡터를 구축할 수 있다. 이들 방법은, 예를 들어 시험관내 재조합 DNA 기술, 합성 기술 및 생체내 유전자 재조합을 포함한다. 특정한 실시양태는 프로모터에 작동가능하게 연결된 본원에 개시된 항-코로나바이러스 항체를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 복제가능한 벡터를 제공한다. 바람직한 실시양태에서, 이러한 벡터는 항체 분자 (또는 그의 단편)의 중쇄를 코딩하는 뉴클레오티드 서열, 항체 (또는 그의 단편)의 경쇄를 코딩하는 뉴클레오티드 서열, 또는 중쇄 및 경쇄 둘 다를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있다.
관련 기술분야에 인지된 분자 생물학 기술 및 현행 단백질 발현 방법론을 사용하여, 본원에 개시된 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체)의 상당량이 생산될 수 있다. 보다 구체적으로, 이러한 항체를 코딩하는 핵산 분자는 전임상, 임상 또는 상업적 양의 목적하는 제약 제품을 제공하기 위해 다양한 유형의 숙주 세포를 포함하는 널리 공지되고 상업적으로 입수가능한 단백질 생산 시스템 내로 통합될 수 있다. 바람직한 실시양태에서, 항체를 코딩하는 핵산 분자는 선택된 숙주 세포 내로의 효율적인 통합 및 후속적인 높은 항체 발현 수준을 제공하는 벡터 또는 발현 벡터 내로 조작된다.
바람직하게는 본원에 개시된 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체)를 코딩하는 핵산 분자 및 이들 핵산 분자를 포함하는 벡터는 적합한 포유동물, 식물, 박테리아 또는 효모 숙주 세포의 형질감염에 사용될 수 있지만, 원핵 시스템이 또한 사용될 수 있는 것으로 인지될 것이다. 형질감염은 폴리뉴클레오티드를 숙주 세포 내로 도입하기 위한 임의의 공지된 방법에 의한 것일 수 있다. 이종 폴리뉴클레오티드를 포유동물 세포 내로 도입하는 방법은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있고, 덱스트란-매개 형질감염, 인산칼슘 침전, 폴리브렌-매개 형질감염, 원형질체 융합, 전기천공, 리포솜 내의 폴리뉴클레오티드(들)의 캡슐화 및 핵 내로의 DNA의 직접 미세주사를 포함한다. 추가로, 핵산 분자는 바이러스 벡터에 의해 포유동물 세포 내로 도입될 수 있다. 포유동물 세포를 형질전환시키는 방법은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있다. 예를 들어, 아그로박테리움-매개 형질전환, 바이오리스틱 형질전환, 직접 주사, 전기천공 및 바이러스 형질전환을 포함한, 식물 세포를 형질전환시키는 방법이 또한 관련 기술분야에 널리 공지되어 있다. 박테리아 및 효모 세포를 형질전환시키는 방법이 또한 관련 기술분야에 널리 공지되어 있다.
더욱이, 숙주 세포는 본 발명의 2개의 발현 벡터, 예를 들어 중쇄 폴리펩티드를 코딩하는 제1 벡터 및 경쇄 폴리펩티드를 코딩하는 제2 벡터로 공동-형질감염될 수 있다. 2개의 벡터는 중쇄 및 경쇄 폴리펩티드의 실질적으로 동일한 발현을 가능하게 하는 동일한 선택 마커를 함유할 수 있다. 대안적으로, 중쇄 및 경쇄 폴리펩티드 둘 다를 코딩하고 발현할 수 있는 단일 벡터가 사용될 수 있다. 이러한 상황에서, 경쇄는 바람직하게는 과량의 독성 유리 중쇄를 피하기 위해 중쇄 앞에 위치한다. 중쇄 및 경쇄에 대한 코딩 서열은 cDNA 또는 게놈 DNA를 포함할 수 있다.
많은 상업적으로 입수가능한 다양한 숙주-발현 벡터 시스템을 사용하여 본원에 개시된 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체)를 발현시킬 수 있다. 이러한 숙주-발현 시스템은 관심 코딩 서열이 발현되고 후속적으로 정제될 수 있는 비히클을 나타내지만, 또한 적절한 뉴클레오티드 코딩 서열로 형질전환 또는 형질감염될 때 계내에서 본 발명의 분자를 발현할 수 있는 세포를 나타내기도 한다. 이러한 시스템은 조정제 코딩 서열을 함유하는 재조합 박테리오파지 DNA, 플라스미드 DNA 또는 코스미드 DNA 발현 벡터로 형질전환된 미생물, 예컨대 박테리아 (예를 들어, 이. 콜라이(E. coli), 비. 서브틸리스(B. subtilis), 스트렙토미세스(streptomyces)); 조정제 코딩 서열을 함유하는 재조합 효모 발현 벡터로 형질감염된 효모 (예를 들어, 사카로미세스(Saccharomyces), 피키아(Pichia)); 조정제 코딩 서열을 함유하는 재조합 바이러스 발현 벡터 (예를 들어, 바큘로바이러스)로 감염된 곤충 세포 시스템; 재조합 바이러스 발현 벡터 (예를 들어, 콜리플라워 모자이크 바이러스, CaMV; 담배 모자이크 바이러스, TMV)로 감염되거나 조정제 코딩 서열을 함유하는 재조합 플라스미드 발현 벡터 (예를 들어, Ti 플라스미드)로 형질감염된 식물 세포 시스템 (예를 들어, 니코티아나(Nicotiana), 아라비돕시스(Arabidopsis), 좀개구리밥, 옥수수, 밀, 감자 등); 또는 포유동물 세포의 게놈으로부터 유래된 프로모터 (예를 들어, 메탈로티오네인 프로모터) 또는 포유동물 바이러스로부터 유래된 프로모터 (예를 들어, 아데노바이러스 후기 프로모터; 백시니아 바이러스 7.5K 프로모터)를 함유하는 재조합 발현 구축물을 보유하는 포유동물 세포 시스템 (예를 들어, COS, CHO, BHK, 293, 3T3 세포)을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
박테리아 시스템에서, 다수의 발현 벡터는 발현될 분자에 대해 의도된 용도에 따라 유리하게 선택될 수 있다. 예를 들어, 제약 조성물의 생성을 위해 다량의 상기 단백질이 생산되어야 할 때, 용이하게 정제되는 융합 단백질 생성물의 높은 수준의 발현을 지시하는 벡터가 바람직할 수 있다.
곤충 시스템에서, 아우토그라파 칼리포르니카(Autographa californica) 핵 다각체병 바이러스 (AcNPV)가 외래 유전자를 발현하기 위한 벡터로서 사용될 수 있다. 바이러스는 스포도프테라 프루기페르다(Spodoptera frugiperda) 세포에서 성장한다. 코딩 서열은 바이러스의 비-필수 영역 (예를 들어, 폴리헤드린 유전자) 내로 개별적으로 클로닝되고, AcNPV 프로모터 (예를 들어, 폴리헤드린 프로모터)의 제어 하에 놓일 수 있다.
포유동물 숙주 세포에서, 다수의 바이러스-기반 발현 시스템이 목적하는 뉴클레오티드 서열을 도입하는 데 사용될 수 있다. 아데노바이러스가 발현 벡터로서 사용되는 경우에, 관심 코딩 서열은 아데노바이러스 전사/번역 제어 복합체, 예를 들어 후기 프로모터 및 3부 리더 서열에 라이게이션될 수 있다. 이어서, 이 키메라 유전자는 시험관내 또는 생체내 재조합에 의해 아데노바이러스 게놈에 삽입될 수 있다. 바이러스 게놈의 비-필수 영역 (예를 들어, 영역 E1 또는 E3)에의 삽입은 감염된 숙주에서 생존가능하고 분자를 발현할 수 있는 재조합 바이러스를 생성할 것이다. 삽입된 코딩 서열의 효율적인 번역을 위해 특이적 개시 신호가 또한 요구될 수 있다. 이들 신호는 ATG 개시 코돈 및 인접한 서열을 포함한다. 추가로, 개시 코돈은 전체 삽입물의 번역을 보장하기 위해 목적하는 코딩 서열의 리딩 프레임과 동일 상이어야 한다. 이들 외인성 번역 제어 신호 및 개시 코돈은 천연 및 합성 둘 다의 다양한 기원의 것일 수 있다. 발현 효율은 적절한 전사 인핸서 요소, 전사 종결인자 등을 포함시킴으로써 증진될 수 있다. 따라서, 발현을 위한 숙주로서 입수가능한 상용성 포유동물 세포주는 관련 기술분야에 널리 공지되어 있고, 아메리칸 타입 컬쳐 콜렉션 (ATCC)으로부터 입수가능한 많은 불멸화 세포주를 포함한다. 이들은 특히 차이니즈 햄스터 난소 (CHO) 세포, NS0 세포, SP2 세포, HEK-293T 세포, 293 프리스타일 세포 (라이프 테크놀로지스(Life Technologies)), NIH-3T3 세포, HeLa 세포, 새끼 햄스터 신장 (BHK) 세포, 아프리카 녹색 원숭이 신장 세포 (COS), 인간 간세포성 암종 세포 (예를 들어, Hep G2), A549 세포 및 다수의 다른 세포주를 포함한다.
재조합 단백질의 장기간 고수율 생산을 위해, 안정한 발현이 바람직하다. 따라서, 선택된 조정제를 안정하게 발현하는 세포주는 관련 기술분야에 인지된 표준 기술을 사용하여 조작될 수 있다. 바이러스 복제 기점을 함유하는 발현 벡터를 사용하기 보다는, 숙주 세포는 적절한 발현 제어 요소 (예를 들어, 프로모터, 인핸서, 서열, 전사 종결인자, 폴리아데닐화 부위 등) 및 선택 마커에 의해 제어되는 DNA로 형질전환될 수 있다. 외래 DNA의 도입 후에, 조작된 세포를 풍부화 배지에서 1 내지 2일 동안 성장하도록 한 다음, 선택 배지로 교체할 수 있다. 재조합 플라스미드 내의 선택 마커는 선택에 대한 저항성을 부여하며, 세포가 플라스미드를 그의 염색체 내로 안정하게 통합시키고, 성장하여 증식소를 형성하고, 이어서 클로닝되고 세포주 내로 확장될 수 있도록 한다. 이 방법은 유리하게는 분자를 발현하는 세포주를 조작하는 데 사용될 수 있다. 이러한 조작된 세포주는 분자와 직접적으로 또는 간접적으로 상호작용하는 조성물의 스크리닝 및 평가에 특히 유용할 수 있다.
각각 tk-, hgprt- 또는 aprt- 세포에서 사용될 수 있는 단순 포진 바이러스 티미딘 키나제, 하이포크산틴구아닌 포스포리보실트랜스퍼라제 및 아데닌 포스포리보실트랜스퍼라제 유전자를 포함하나 이에 제한되지는 않는 다수의 선택 시스템이 관련 기술분야에 널리 공지되어 있고 사용될 수 있다. 또한, 항대사물 저항성은 하기 유전자에 대한 선택의 기초로서 사용될 수 있다: 메토트렉세이트에 대한 저항성을 부여하는 dhfr; 미코페놀산에 대한 저항성을 부여하는 gpt; 아미노글리코시드 G-418에 대한 저항성을 부여하는 neo; 및 히그로마이신에 대한 저항성을 부여하는 hygro.
재조합 DNA 기술 분야에 통상적으로 공지된 방법이 목적하는 재조합 클론을 선택하는 데 상용적으로 적용될 수 있다. 안정한 고수율 세포주를 확립하는 하나의 특히 바람직한 방법은 특정 조건 하에 발현을 증진시키기 위한 효율적인 접근법을 제공하는 글루타민 신테타제 유전자 발현 시스템 (GS 시스템)을 포함한다는 것이 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 인지될 것이다.
추가로, 삽입된 서열의 발현을 조정하거나 또는 유전자 생성물을 목적하는 특이적 방식으로 변형시키고 프로세싱하는 숙주 세포주가 선택될 수 있다. 단백질 생성물의 이러한 변형 (예를 들어, 글리코실화) 및 프로세싱 (예를 들어, 절단)은 단백질의 기능 및/또는 정제에 중요할 수 있다. 상이한 숙주 세포는 단백질 및 유전자 생성물의 번역후 프로세싱 및 변형을 위한 특징적이고 특이적인 메카니즘을 갖는다. 관련 기술분야에 공지된 바와 같이, 적절한 세포주 또는 숙주 시스템이 발현된 폴리펩티드의 목적하는 변형 및 프로세싱을 보장하도록 선택될 수 있다. 이를 위해, 1차 전사체의 적절한 프로세싱, 글리코실화 및 유전자 생성물의 인산화를 위한 세포 기구를 보유하는 진핵 숙주 세포가 특히 효과적이다. 따라서, 일부 바람직한 포유동물 숙주 세포주는 CHO, VERY, BHK, HeLa, COS, NS0, MDCK, 293, 3T3 및 W138을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체) 및 선택된 생산 시스템에 따라, 관련 기술분야의 통상의 기술자는 항체의 효율적인 발현을 위해 적절한 숙주 세포를 용이하게 선택하고 최적화할 수 있다.
관련 기술분야의 통상의 기술자는 본원에 개시된 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체)가 관련 기술분야에 공지된 기술을 사용하여 화학적으로 합성될 수 있다는 것을 인지할 것이다. 예를 들어, 본 발명의 폴리펩티드 단편에 상응하는 펩티드는 펩티드 합성기를 사용하여 합성될 수 있다. 원하는 경우에, 비-유전자 코딩된 아미노산 또는 합성 아미노산이 폴리펩티드 서열에 부가되거나 치환될 수 있다.
대표적인 비-유전자 코딩된 아미노산은 2-아미노아디프산; 3-아미노아디프산; β-아미노프로피온산; 2-아미노부티르산; 4-아미노부티르산 (피페리딘산); 6-아미노카프로산; 2-아미노헵탄산; 2-아미노이소부티르산; 3-아미노이소부티르산; 2-아미노피멜산; 2,4-디아미노부티르산; 데스모신; 2,2'-디아미노피멜산; 2,3-디아미노프로피온산; N-에틸글리신; N-에틸아스파라긴; 히드록시리신; 알로-히드록시리신; 3-히드록시프롤린; 4-히드록시프롤린; 이소데스모신; 알로-이소류신; N-메틸글리신 (사르코신); N-메틸이소류신; N-메틸발린; 노르발린; 노르류신; 및 오르니틴을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
대표적인 합성 아미노산은, 예를 들어 유리 아미노 기가 유도체화되어 아민 히드로클로라이드, p-톨루엔 술포닐 기, 카르보벤족시 기, t-부틸옥시카르보닐 기, 클로로아세틸 기 또는 포르밀 기를 형성한 분자를 포함한다. 유리 카르복실 기는 유도체화되어 염, 메틸 및 에틸 에스테르 또는 다른 유형의 에스테르 또는 히드라지드를 형성할 수 있다. 유리 히드록실 기는 유도체화되어 O-아실 또는 O-알킬 유도체를 형성할 수 있다. 히스티딘의 이미다졸 질소는 유도체화되어 N-im-벤질히스티딘을 형성할 수 있다.
본원에 개시된 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체)는 또한 관심 이뮤노글로불린 중쇄 및 경쇄 서열 (또는 그의 단편 또는 유도체 또는 변이체)에 대해 트랜스제닉인 포유동물 또는 식물의 생성 및 회수가능한 형태의 목적 화합물의 생산을 통해 트랜스제닉으로 생산될 수 있다. 예를 들어, 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체)는, 예를 들어 염소, 소 또는 다른 포유동물의 유액에서 생산되고 그로부터 회수될 수 있다. 일부 실시양태에서, 인간 이뮤노글로불린 유전자좌를 포함하는 비-인간 트랜스제닉 동물은 상기 기재된 바와 같은 SARS-CoV-2 비리온 또는 그의 면역원성 부분으로 면역화된다.
비-인간 트랜스제닉 동물 또는 식물은 표준 트랜스제닉 기술에 의해 항-코로나바이러스 항체를 코딩하는 1개 이상의 핵산 분자를 동물 또는 식물 내로 도입함으로써 생산될 수 있다. 트랜스제닉 동물을 제조하는 데 사용되는 트랜스제닉 세포는 배아 줄기 세포 또는 체세포 또는 수정란일 수 있다. 트랜스제닉 비-인간 유기체는 키메라, 비키메라 이형접합체 및 비키메라 동형접합체일 수 있다. 일부 실시양태에서, 트랜스제닉 비-인간 동물은, 예를 들어 관심 중쇄 및/또는 경쇄를 코딩하는 표적화 구축물에 의한 표적화된 파괴 및 대체를 갖는다. 본원에 개시된 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체)는 임의의 트랜스제닉 동물에서 생산될 수 있지만, 특히 바람직한 실시양태는 마우스, 래트, 양, 돼지, 염소, 소 및 말을 포함한다. 특정한 실시양태에서, 비-인간 트랜스제닉 동물은 혈액, 유액, 소변, 타액, 눈물, 점액 및 관련 기술분야에 인지된 정제 기술을 사용하여 그로부터 용이하게 수득가능한 다른 체액에서 목적하는 제약 생성물을 발현한다.
상이한 세포주에 의해 또는 트랜스제닉 동물에서 발현되는 항체를 포함한 조정제는 서로 상이한 글리코실화 패턴을 가질 가능성이 있다. 그러나, 본 발명은 본원에 제공된 핵산 분자에 의해 코딩되거나 또는 본원에 제공된 아미노산 서열을 포함하는 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체)를 분자의 글리코실화 상태와 상관없이, 보다 일반적으로는 번역후 변형(들)의 존재 또는 부재와 상관없이 포괄한다. 본 발명은 또한 번역 동안 또는 후에, 예를 들어 글리코실화, 아세틸화, 인산화, 아미드화, 공지된 보호기/차단기에 의한 유도체화, 단백질분해적 절단, 항체 분자 또는 다른 세포 리간드에 대한 연결 등에 의해 차등 변형된 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체)를 포괄한다. 브로민화시아노겐, 트립신, 키모트립신, 파파인, V8 프로테아제, 아세틸화, 포르밀화, 산화, 환원, 튜니카마이신의 존재 하에서의 대사 합성 등에 의한 특이적 화학적 절단을 포함하나 이에 제한되지는 않는 공지된 기술에 의해 임의의 수많은 화학적 변형이 수행될 수 있다. 예를 들어 N-연결된 또는 O-연결된 탄수화물 쇄, N-말단 또는 C-말단 단부의 프로세싱, 아미노산 백본에 대한 화학적 모이어티의 부착, N-연결된 또는 O-연결된 탄수화물 쇄의 화학적 변형 및 원핵 숙주 세포 발현의 결과로서의 N-말단 메티오닌 잔기의 부가 또는 결실을 포함한 다양한 번역후 변형이 또한 본 발명에 의해 포괄된다. 더욱이, 본문 및 하기에 제시된 바와 같이, 본원에 개시된 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체)는 또한 그의 검출 및 단리를 가능하게 하기 위해 검출가능한 표지, 예컨대 효소적, 형광, 방사성동위원소 또는 친화성 표지로 변형될 수 있다.
본원에 개시된 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체)가 재조합 발현 또는 본원에 개시된 다른 기술 중 어느 하나에 의해 생산되면, 이들은 이뮤노글로불린의 정제를 위한 관련 기술분야에 공지된 임의의 방법에 의해 또는 보다 일반적으로는 단백질의 정제를 위한 임의의 다른 표준 기술에 의해 정제될 수 있다. 이와 관련하여, 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체)가 단리될 수 있다. 본원에 사용된 "단리된 항-코로나바이러스 항체"는 그의 자연 환경의 성분으로부터 확인 및 분리 및/또는 회수된 것이다. 그의 자연 환경의 오염 성분은 항체의 진단 또는 치료 용도를 방해할 물질이고, 효소, 호르몬 및 다른 단백질성 또는 비-단백질성 용질을 포함할 수 있다. 단리된 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체)는 항체의 자연 환경의 적어도 1종의 성분도 존재하지 않을 것이기 때문에 재조합 세포 내의 계내 항체를 포함한다.
재조합 기술을 사용하는 경우에, 본원에 개시된 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체)는 세포내에서, 주변세포질 공간에서 생산되거나 또는 배지 내로 직접 분비될 수 있다. 목적하는 분자가 세포내에서 생산되는 경우에, 제1 단계로서, 숙주 세포 또는 용해된 단편인 미립자 파편이, 예를 들어 원심분리 또는 한외여과에 의해 제거될 수 있다. 항체가 배지 내로 분비되는 경우에, 이러한 발현 시스템으로부터의 상청액이 일반적으로 먼저 상업적으로 입수가능한 단백질 농축 필터를 사용하여 농축된다. 프로테아제 억제제, 예컨대 PMSF가 단백질분해를 억제하기 위해 임의의 상기 단계에 포함될 수 있고, 항생제가 우발적 오염물의 성장을 방지하기 위해 포함될 수 있다.
세포로부터 제조된 본원에 개시된 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체)를 포함하는 조성물은, 예를 들어 히드록시아파타이트 크로마토그래피, 겔 전기영동, 투석 및 친화성 크로마토그래피를 사용하여 정제될 수 있다. 친화성 리간드로서의 단백질 A의 적합성은 선택된 구축물에 존재하는 임의의 이뮤노글로불린 Fc 영역의 종 및 이소형에 좌우된다. 단백질 A는 인간 IgG1, IgG2 또는 IgG4 중쇄에 기초한 항체를 정제하는 데 사용될 수 있다. 단백질 G는 모든 마우스 이소형 및 인간 IgG3에 대해 권장된다. 친화성 리간드가 부착되는 매트릭스는 가장 종종 아가로스이지만, 다른 매트릭스가 이용가능하다. 기계적으로 안정한 매트릭스, 예컨대 제어된 세공 유리 또는 폴리(스티렌디비닐)벤젠은 아가로스로 달성될 수 있는 것보다 더 빠른 유량 및 더 짧은 가공 시간을 허용한다. 항체가 CH3 영역을 포함하는 경우에, 베이커본드 ABX(BAKERBOND ABX)™ 수지가 정제에 유용하다. 단백질 정제를 위한 다른 기술, 예컨대 이온-교환 칼럼 상의 분획화, 에탄올 침전, 역상 HPLC, 실리카 상의 크로마토그래피, 헤파린 상의 크로마토그래피, 음이온 또는 양이온 교환 수지 (예컨대 폴리아스파르트산 칼럼) 상의 세파로스(SEPHAROSE)® 크로마토그래피, 크로마토포커싱, SDS-PAGE 및 황산암모늄 침전이 또한 회수될 항체에 따라 이용가능하다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체)는, 적어도 부분적으로, 단백질 A 또는 단백질 G 친화성 크로마토그래피를 사용하여 정제된다.
상기의 예시로서, 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체) 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 cDNA 서열을 글루타민 신테타제 (GS) 발현 벡터 내로 클로닝 및 조작할 수 있다. 이어서, 조작된 이뮤노글로불린 발현 벡터를 CHO 세포 내로 안정하게 형질감염시킬 수 있다. 관련 기술분야의 통상의 기술자가 인지할 바와 같이, 항체의 포유동물 발현은 전형적으로 Fc 영역 내의 고도로 보존된 N-글리코실화 부위에서 글리코실화를 유발할 것이다. SARS-CoV 스파이크 단백질 또는 SARS-CoV-2 스파이크 단백질에 특이적으로 결합하는 항체의 발현에 대해 안정한 클론을 확인할 수 있다. 양성 클론을 생물반응기에서의 항체 생산을 위해 무혈청 배양 배지 내로 확장시킬 수 있다. 항체가 분비된 배지를 통상적인 기술에 의해 정제할 수 있다. 예를 들어, 배지를 상용성 완충제, 예컨대 포스페이트 완충 염수로 평형화된 단백질 A 또는 G 세파로스® FF 칼럼에 편리하게 적용할 수 있다. 칼럼을 세척하여 비특이적 결합 성분을 제거한다. 결합된 항체를, 예를 들어 pH 구배에 의해 용리시키고, 항체 분획을, 예컨대 SDS-PAGE에 의해 검출한 후, 풀링한다. 통상의 기술을 사용하여 항체를 농축 및/또는 멸균 여과할 수 있다. 가용성 응집체 및 다량체를 크기 배제, 소수성 상호작용, 이온 교환 또는 히드록시아파타이트 크로마토그래피를 포함한 통상의 기술에 의해 효과적으로 제거할 수 있다. 생성물을, 예를 들어 -70℃에서 즉시 동결시킬 수 있거나 또는 동결건조시킬 수 있다.
항-코로나바이러스 항체 접합체
본원에 개시된 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체)가 정제되었으면, 이들은 진단 모이어티 또는 생체적합성 조절제와 연결되거나, 그에 융합되거나, 그에 접합되거나 (예를 들어, 공유 또는 비-공유) 또는 달리 회합될 수 있다. 본원에 사용된 용어 "접합체"는 회합 방법에 상관없이 본원에 개시된 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체)와 회합된 임의의 분자를 의미한다. 이와 관련하여, 이러한 접합체는 펩티드, 폴리펩티드, 단백질, 중합체, 핵산 분자, 소분자, 모방제, 합성 약물, 무기 분자, 유기 분자 및 방사성동위원소를 포함할 수 있는 것으로 이해될 것이다. 더욱이, 상기 나타낸 바와 같이, 선택된 접합체는 항체에 공유 또는 비-공유 연결될 수 있고, 적어도 부분적으로, 접합을 실시하는 데 사용된 방법에 따라 다양한 몰비를 나타낼 수 있다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체)는 선택된 특징을 부여하는 단백질, 폴리펩티드 또는 펩티드 (예를 들어, 생물독소, 바이오마커, 정제 태그 등)와 접합 또는 회합될 수 있다. 특정한 실시양태에서, 본원에 개시된 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체)는 이종 단백질 또는 폴리펩티드에 재조합적으로 융합되거나 또는 화학적으로 접합되며 (공유 및 비-공유 접합 둘 다 포함), 여기서 폴리펩티드는 적어도 10개, 적어도 20개, 적어도 30개, 적어도 40개, 적어도 50개, 적어도 60개, 적어도 70개, 적어도 80개, 적어도 90개 또는 적어도 100개의 아미노산을 포함한다. 구축물은 반드시 직접 연결될 필요는 없지만, 링커 서열을 통해 발생할 수 있다. 예를 들어, 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체)는 항체를 다른 항원에 특이적인 다른 항체에 융합 또는 접합시킴으로써 시험관내 또는 생체내에서 이종 폴리펩티드를 비리온 또는 감염된 세포에 표적화하는 데 사용될 수 있다. 더욱이, 이종 폴리펩티드에 융합 또는 접합된 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체)는 또한 시험관내 면역검정에 사용될 수 있고, 관련 기술분야에 공지된 정제 방법론과 상용성일 수 있다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체)는 항체 특성을 조정, 변경, 개선 또는 조정하는 데 사용될 수 있는 생체적합성 조절제와 접합되거나 또는 달리 회합될 수 있다. 예를 들어, 증가된 생체내 반감기를 갖는 항체 또는 융합 구축물은 비교적 고분자량 중합체 분자, 예컨대 상업적으로 입수가능한 폴리에틸렌 글리콜 (PEG) 또는 유사한 생체적합성 중합체를 부착시킴으로써 생성될 수 있다. 관련 기술분야의 통상의 기술자는 PEG가 많은 상이한 분자량 및 분자 구성으로 수득될 수 있으며, 이는 항체에 특이적 특성을 부여하도록 (예를 들어, 반감기가 조정될 수 있음) 선택될 수 있다는 것을 인지할 것이다. PEG는 항체의 N- 또는 C-말단에 대한 PEG의 부위-특이적 접합을 통해 또는 리신 잔기 상에 존재하는 엡실론-아미노 기를 통해 다관능성 링커의 존재 또는 부재 하에 조정제 또는 항체 단편 또는 유도체에 부착될 수 있다. 생물학적 활성의 손실이 최소이도록 하는 선형 또는 분지형 중합체 유도체화가 사용될 수 있다. 접합 정도는 항체 분자에 대한 PEG 분자의 최적 접합을 보장하기 위해 SDS-PAGE 및 질량 분광측정법에 의해 면밀하게 모니터링될 수 있다. 미반응 PEG는, 예를 들어 크기 배제 또는 이온-교환 크로마토그래피에 의해 항체-PEG 접합체로부터 분리될 수 있다. 유사한 방식으로, 개시된 조정제는 항체 또는 항체 단편을 생체내에서 보다 안정하게 만들거나 또는 보다 긴 생체내 반감기를 갖도록 하기 위해 알부민에 접합될 수 있다. 기술은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있다. 다른 생체적합성 접합체는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 분명하고, 본원의 교시에 따라 용이하게 확인되고 이용될 수 있다.
다른 실시양태에서, 본원에 개시된 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체)는 생물학적 분자 (예를 들어, 펩티드 또는 뉴클레오티드), 소분자, 형광단 또는 방사성동위원소일 수 있는 진단제 또는 검출가능한 작용제, 마커 또는 리포터에 접합된다. 표지된 조정제는 SARS-CoV-2 감염의 발생 또는 진행을 모니터링하는 데 유용할 수 있거나 또는 본원에 개시된 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체)를 포함한 특정한 요법의 효능을 결정하기 위한 (즉, 테라그노스틱스) 또는 향후 치료 과정을 결정하기 위한 임상 시험 절차의 일부로서 유용할 수 있다. 이러한 마커 또는 리포터는 또한 본원에 개시된 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체)를 정제하는 데 유용할 수 있다.
진단 및 검출은 조정제를 검출가능한 물질, 예컨대 비제한적으로, 예를 들어 양고추냉이 퍼옥시다제, 알칼리성 포스파타제, 베타-갈락토시다제 또는 아세틸콜린에스테라제를 포함하는 다양한 효소; 보결분자단, 예컨대 비제한적으로 스트렙타비딘/비오틴 및 아비딘/비오틴; 형광 물질, 예컨대 비제한적으로 움벨리페론, 플루오레세인, 플루오레세인 이소티오시아네이트, 로다민, 디클로로트리아지닐아민 플루오레세인, 단실 클로라이드 또는 피코에리트린; 발광 물질, 예컨대 비제한적으로 루미놀; 생물발광 물질, 예컨대 비제한적으로 루시페라제, 루시페린 및 에쿼린; 방사성 물질, 예컨대 비제한적으로 아이오딘 (131I, 125I, 123I, 121I), 탄소 (14C), 황 (35S), 삼중수소 (3H), 인듐 (115In, 113In, 112In, 111In) 및 테크네튬 (99Tc), 탈륨 (201Ti), 갈륨 (68Ga, 67Ga), 팔라듐 (103Pd), 몰리브데넘 (99Mo), 크세논 (133Xe), 플루오린 (18F), 153Sm, 177Lu, 59Gd, 49Pm, 140La, 175Yb, 166Ho, 90Y, 47Sc, 186Re, 188Re, 142Pr, 105Rh, 97Ru, 68Ge, 57Co, 65Zn, 85Sr, 32P, 153Gd, 169Yb, 51Cr, 54Mn, 75Se, 113Sn 및 117Tin; 다양한 양전자 방출 단층촬영을 사용한 양전자 방출 금속, 비-방사성 상자성 금속 이온, 및 방사성표지되거나 또는 특이적 방사성동위원소에 접합된 분자에 커플링시킴으로써 달성될 수 있다. 이러한 실시양태에서, 적절한 검출 방법론은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있고, 수많은 상업적 공급원으로부터 용이하게 입수가능하다.
다른 실시양태에서, 본원에 개시된 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체)는 마커 서열, 예컨대 펩티드 또는 형광단에 융합되어 정제 또는 진단 절차, 예컨대 면역조직화학 또는 FAC를 용이하게 할 수 있다. 일부 실시양태에서, 마커 아미노산 서열은 헥사-히스티딘 펩티드, 예컨대 특히 pQE 벡터에 제공된 태그이며, 이들 중 다수는 상업적으로 입수가능하다. 정제에 유용한 다른 펩티드 태그는 인플루엔자 헤마글루티닌 단백질로부터 유래된 에피토프에 상응하는 헤마글루티닌 "HA" 태그 및 "플래그" 태그를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
또 다른 실시양태에서, 본원에 개시된 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체)는 면역조정제, 시토카인, 세포독성제, 화학요법제, 항바이러스제, 항미생물제 또는 다른 약물에 접합될 수 있다. 일부 실시양태에서, 항체는 항바이러스제에 접합된다.
항-코로나바이러스 항체를 사용하는 진단 방법
본원에 개시된 발명은 또한 코로나바이러스 감염을 검출, 진단 또는 모니터링하는 시험관내 또는 생체내 방법, 및 현재 SARS-CoV-2로 감염된 환자로부터의 세포 또는 과거 SARS-CoV-2 감염으로부터 회복된 환자로부터의 세포를 비롯하여, 코로나바이러스 감염된 세포를 확인하기 위해 환자로부터의 세포를 스크리닝하는 방법을 포괄한다. 이러한 방법은 치료를 위해 코로나바이러스로 감염된 개체를 확인하는 단계, 환자 또는 환자로부터 수득된 샘플을 본원에 개시된 1종 이상의 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체)와 접촉시키는 단계를 포함하는, 코로나바이러스 감염의 진행을 모니터링하는 단계, 및 샘플에서 코로나바이러스 항원에 대한 항체의 존재 또는 부재 또는 회합 수준을 검출하는 단계를 포함한다. 특히 바람직한 실시양태에서, 본원에 개시된 1종 이상의 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체)는 환자 샘플 (예를 들어, 혈장 또는 혈액)에서 코로나바이러스 수준을 검출 및 정량화하는 데 사용될 수 있다. 샘플에서 코로나바이러스 항원과의 회합은 개체가 본원에 개시된 1종 이상의 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체)로 효과적으로 치료될 수 있다는 것을 나타낼 가능성이 있다. 방법은 결합 수준을 대조군과 비교하는 단계를 추가로 포함할 수 있다. 본원의 교시와 상용성인 다른 진단 또는 테라그노스틱 방법은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있고, 상업적 물질, 예컨대 전용 보고 시스템을 사용하여 실시될 수 있다.
예시적인 상용성 검정 방법은 방사선면역검정, 효소 면역검정, 경쟁적-결합 검정, 형광 면역검정, 이뮤노블롯 검정, 웨스턴 블롯 분석, 유동 세포측정법 검정 및 ELISA 검정을 포함한다. 보다 일반적으로, 생물학적 샘플에서의 코로나바이러스의 검출은 임의의 관련 기술분야에 공지된 검정을 사용하여 달성될 수 있다. 상용성 생체내 테라그노스틱스 또는 진단은 관련 기술분야에 인지된 영상화 또는 모니터링 기술, 예컨대 자기 공명 영상화 (MRI), 컴퓨터 단층촬영 (예를 들어, CAT 스캔), 양전자 단층촬영 (예를 들어, PET 스캔), 방사선촬영, 초음파 등을 포함할 수 있다. 관련 기술분야의 통상의 기술자는 장애의 병인, 병리학적 징후 또는 임상 진행에 기초하여 적절한 검출, 모니터링 또는 영상화 기술 (종종 상업적으로 입수가능한 공급원을 포함함)을 용이하게 인식하고 구현할 수 있을 것이다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 생체내에서 코로나바이러스 감염 진행 및/또는 발병기전을 분석하는 방법을 제공한다.
또 다른 측면에서 및 하기에 보다 상세하게 논의된 바와 같이, 본원에 개시된 발명은 또한 코로나바이러스 감염을 검출, 모니터링 또는 진단하고, 환자에서 감염의 가능한 치료 또는 진행 (또는 퇴행) 모니터링을 위해 코로나바이러스 감염을 갖는 개체를 확인하기 위한 키트를 포괄하며, 여기서 키트는 본원에 기재된 바와 같은 항-코로나바이러스 항체 및 환자로부터의 샘플에 대한 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체)의 효과를 검출하기 위한 시약을 포함한다.
본원에 개시된 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체) 및 그를 포함하는 세포, 배양물, 집단 및 조성물 (그의 자손 포함)은 또한 코로나바이러스 비리온 또는 코로나바이러스 감염된 세포의 표면 상에 존재하는 항원에 결합함으로써 비리온 또는 감염된 세포 또는 그의 자손의 기능 또는 활성에 영향을 미치는 화합물 또는 작용제 (예를 들어, 약물)를 스크리닝하거나 확인하는 데 사용될 수 있다. 따라서 본원에 개시된 발명은 코로나바이러스 바이러스의 기능 또는 활성에 영향을 미칠 수 있는 화합물 또는 작용제의 평가 또는 확인을 위한 시스템 및 방법을 포괄한다. 이러한 화합물 및 작용제는, 예를 들어 코로나바이러스 감염의 치료를 위해 스크리닝되는 약물 후보일 수 있다. 한 실시양태에서, 시스템 또는 방법은 코로나바이러스 비리온 및/또는 코로나바이러스 감염된 세포 및 화합물 또는 작용제 (예를 들어, 약물)를 포함하며, 여기서 비리온/세포 및 화합물 또는 작용제 (예를 들어, 약물)는 서로 접촉된다.
본원에 개시된 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체)는 또한 백신, 예컨대 불활성화 바이러스, 생-약독화 백신 또는 재조합 서브유닛 백신을 시험하기 위한 시약으로서 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 이러한 항-SARS-CoV-2 항체 또는 항원 결합 단편은 (i) 서열식별번호: 661로서 제시된 중쇄 가변 영역 (VH) 내의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 662로서 제시된 경쇄 가변 영역 (VL) 내의 3개의 CDR; (ii) 서열식별번호: 727로서 제시된 VH 내의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 728로서 제시된 VL 내의 3개의 CDR; (iii) 서열식별번호: 761로서 제시된 VH 내의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 762로서 제시된 VL 내의 3개의 CDR; (iv) 서열식별번호: 867로서 제시된 VH 내의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 868로서 제시된 VL 내의 3개의 CDR; (v) 서열식별번호: 1123으로서 제시된 VH 내의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1124로서 제시된 VL 내의 3개의 CDR; (vi) 서열식별번호: 1167로서 제시된 VH 내의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1168로서 제시된 VL 내의 3개의 CDR; (vii) 서열식별번호: 1267로서 제시된 VH 내의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1268로서 제시된 VL 내의 3개의 CDR; 또는 (viii) 서열식별번호: 1313으로서 제시된 VH 내의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 1314로서 제시된 VL 내의 3개의 CDR을 포함하며; 여기서 CDR은 카바트, 코티아, 맥칼룸 또는 노스 넘버링에 의해 정의된다. 다른 실시양태에서, 이러한 항-SARS-CoV-2 항체 또는 항원 결합 단편은 (i) 서열식별번호: 661로서 제시된 중쇄 가변 영역 (VH) 및 서열식별번호: 662로서 제시된 경쇄 가변 영역 (VL); (ii) 서열식별번호: 727로서 제시된 VH 및 서열식별번호: 728로서 제시된 VL; (iii) 서열식별번호: 761로서 제시된 VH 및 서열식별번호: 762로서 제시된 VL; (iv) 서열식별번호: 867로서 제시된 VH 및 서열식별번호: 868로서 제시된 VL; (v) 서열식별번호: 1123으로서 제시된 VH 및 서열식별번호: 1124로서 제시된 VL; (vi) 서열식별번호: 1167로서 제시된 VH 및 서열식별번호: 1168로서 제시된 VL; (vii) 서열식별번호: 1267로서 제시된 VH 및 서열식별번호: 1268로서 제시된 VL; 또는 (viii) 서열식별번호: 1313으로서 제시된 VH 및 서열식별번호: 1314로서 제시된 VL을 포함한다. mAb 851, 894, 896, 923, 936, 970, 1015, 1036, 1037, 1075, 1130, 1135, 1139, 1149, 1404, 1444, 1495, 1538 및 1585의 6개의 CDR 또는 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-SARS-CoV-2 항체가 또한 특히 고려된다.
선행 단락에 기재된 항체 중 일부의 아미노산 서열은 이전에 기재되었다. 다른 것은 하기에 제공된다.
Figure pct00038
Figure pct00039
Figure pct00040
다른 실시양태에서, 이러한 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체)는 서열식별번호: 5575를 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5576을 포함하는 경쇄를 포함한다. 다른 실시양태에서, 이러한 항체는 서열식별번호: 5577을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5578을 포함하는 경쇄를 포함한다. 다른 실시양태에서, 이러한 항체는 서열식별번호: 5579를 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5580을 포함하는 경쇄를 포함한다. 다른 실시양태에서, 이러한 항체는 서열식별번호: 5581을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5582를 포함하는 경쇄를 포함한다. 다른 실시양태에서, 이러한 항체는 서열식별번호: 5583을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5584를 포함하는 경쇄를 포함한다. 다른 실시양태에서, 이러한 항체는 서열식별번호: 5585를 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5586을 포함하는 경쇄를 포함한다. 다른 실시양태에서, 이러한 항체는 서열식별번호: 5587을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5588을 포함하는 경쇄를 포함한다. 다른 실시양태에서, 이러한 항체는 서열식별번호: 5589를 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5590을 포함하는 경쇄를 포함한다. 다른 실시양태에서, 이러한 항체는 서열식별번호: 5591을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5592를 포함하는 경쇄를 포함한다. mAb 851, 894, 896, 923, 936, 970, 1015, 1036, 1037, 1075, 1130, 1135, 1139, 1149, 1404, 1444, 1495, 1538 및 1585의 완전한 중쇄 및 경쇄를 포함하는 항-SARS-CoV-2 항체가 또한 특히 고려된다.
선행 단락에 기재된 항체 중 일부의 아미노산 서열은 이전에 기재되었다. 다른 것은 하기에 제공된다.
Figure pct00041
Figure pct00042
Figure pct00043
조정될 수 있는 예시적인 활성 또는 기능은 세포 형태, 마커의 발현, 분화 또는 탈분화, 성숙, 증식, 생존율, 아폽토시스 또는 세포 사멸, 뉴런 전구세포 또는 그의 자손에서의 변화를 포함한다.
작용제 및 화합물을 스크리닝 및 확인하는 방법은, 임의로 미리 결정된 위치 또는 주소에 위치 또는 배치된 세포의 어레이 (예를 들어, 마이크로어레이)를 포함하는 고처리량 스크리닝에 적합한 것을 포함한다. 고처리량 로봇 또는 수동 취급 방법은 화학적 상호작용을 프로빙하고, 단기간 내에 많은 유전자의 발현 수준을 결정할 수 있다. 분자 신호 (예를 들어, 형광단)를 이용하는 기술 및 매우 신속한 속도로 정보를 처리하는 자동화 분석이 개발되었다.
이러한 스크리닝 방법 (예를 들어, 고처리량)은 활성제 및 화합물을 신속하게 및 효율적으로 확인할 수 있다. 예를 들어, 세포는 잠재적 치료 분자의 확인을 위해 배양 접시, 튜브, 플라스크, 롤러 병 또는 플레이트 (예를 들어, 단일의 멀티-웰 플레이트 또는 접시, 예컨대 8, 16, 32, 64, 96, 384 및 1536 멀티-웰 플레이트 또는 접시) 상에, 임의로 정의된 위치에 위치 또는 배치 (사전-시딩)될 수 있다. 스크리닝될 수 있는 라이브러리는, 예를 들어 소분자 라이브러리, 파지 디스플레이 라이브러리, 완전 인간 항체 효모 디스플레이 라이브러리, siRNA 라이브러리 및 아데노바이러스 형질감염 벡터를 포함한다.
제약 조성물 및 치료 용도
환자에게 치료 유효량의 본원에 기재된 1종 이상의 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체) 또는 본원에 기재된 1종 이상 (예를 들어, 2 또는 3종)의 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체)를 포함하는 제약 조성물을 투여함으로써 SARS-CoV 또는 SARS-CoV-2-연관 질환 (예를 들어, COVID-19)을 치료 또는 예방하는 방법이 본원에 제공된다.
본원에서 상호교환가능하게 사용된 바와 같이, "치료" 또는 "치료하는" 또는 "치료하다"는 증상 또는 합병증의 둔화, 중단, 중지, 제어, 정지, 완화 또는 호전이 있을 수 있거나 또는 본원에 개시된 장애 또는 질환, 예를 들어 SARS-CoV-2 바이러스 감염 또는 COVID-19 질환의 진행의 역전이 있을 수 있는 모든 과정을 지칭하지만, 반드시 모든 질환 또는 장애 증상의 총체적 제거를 나타내지는 않는다.
본원에 사용된 바와 같이, 본원에서 상호교환가능하게 사용되는 "예방", "예방하다" 및/또는 "예방하는"은 질환 또는 장애의 예방적 치료 또는 질환 또는 장애, 예를 들어 SARS-CoV-2 바이러스 감염 또는 COVID-19 질환의 발병 또는 진행의 지연을 지칭한다.
일부 실시양태에서, SARS-CoV 또는 SARS-CoV-2-연관 질환 (예를 들어, COVID-19)을 치료 또는 예방하는 방법은 환자에게 본원에 기재된 1종 이상 (예를 들어, 2 또는 3종)의 항-SARS-CoV-2 항체를 포함하는 제약 조성물을 투여하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 이러한 방법은 환자에게 SARS-CoV-2 S 단백질의 상이한 에피토프에 결합하는 2 또는 3종의 항-SARS-CoV-2 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포함하는 제약 조성물을 투여하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 이러한 방법은 환자에게 2 또는 3종의 항-SARS-CoV-2 항체를 포함하는 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하며, 여기서 항체 중 적어도 1종은 항체 258 내지 577 및 589 내지 1587로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 이러한 방법은 환자에게 2 또는 3종의 항-SARS-CoV-2 항체를 포함하는 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하며, 여기서 항체 중 적어도 1종은 항체 292, 309, 364, 373, 388, 408, 414, 417, 419, 442, 445, 447, 462, 479, 481, 483, 488, 494, 506, 540, 549, 553, 555, 562, 851, 894, 896, 923, 936, 970, 1015, 1036, 1037, 1075, 1130, 1135, 1139, 1149, 1404, 1444, 1495, 1538 또는 1585로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 이러한 방법은 환자에게 2 또는 3종의 항-SARS-CoV-2 항체를 포함하는 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하며, 여기서 항체 중 적어도 1종은 555이다. 일부 실시양태에서, 이러한 방법은 환자에게 2 또는 3종의 항-SARS-CoV-2 항체를 포함하는 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하며, 여기서 항체 중 적어도 1종은 1404이다. 일부 실시양태에서, 이러한 방법은 환자에게 2 또는 3종의 항-SARS-CoV-2 항체를 포함하는 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하며, 여기서 항체 중 적어도 1종은 SARS-CoV-2를 중화시킨다. 일부 실시양태에서, 이러한 방법은 환자에게 2 또는 3종의 항-SARS-CoV-2 항체를 포함하는 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하며, 여기서 적어도 1종의 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 ACE2에 대한 SARS-CoV-2 결합을 차단한다. 일부 실시양태에서, 이러한 방법은 환자에게 2 또는 3종의 항-SARS-CoV-2 항체를 포함하는 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하며, 여기서 적어도 1종의 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 SARS-CoV-2 S 단백질의 RBD에 결합한다. 일부 실시양태에서, 이러한 방법은 환자에게 2 또는 3종의 항-SARS-CoV-2 항체를 포함하는 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하며, 여기서 적어도 1종의 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 SARS-CoV-2 S 단백질의 NTD 도메인에 결합한다. 일부 실시양태에서, 이러한 방법은 환자에게 2 또는 3종의 항-SARS-CoV-2 항체를 포함하는 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하며, 여기서 적어도 1종의 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 SARS-CoV-2 S 단백질의 S2 도메인에 결합한다. 일부 실시양태에서, 이러한 방법은 환자에게 2 또는 3종의 항-SARS-CoV-2 항체를 포함하는 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하며, 여기서 적어도 1종의 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 SARS-CoV-2 S 단백질의 RBD에 결합하고, 적어도 1종의 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 SARS-CoV-2 S 단백질의 NTD 또는 S2 도메인에 결합한다.
일부 실시양태에서, 환자에게 서열식별번호: 5363을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5364를 포함하는 경쇄를 포함하는 항체 또는 이러한 항체를 포함하는 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하는, SARS-CoV-2-연관 질환 (예를 들어, COVID-19)을 치료 또는 예방하는 방법이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 이러한 방법은 환자에게 SARS-CoV-2 S 단백질에 결합하는 또 다른 항체 (예를 들어, CB-6 또는 1404)를 투여하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 환자에게 서열식별번호: 5363을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5364를 포함하는 경쇄를 포함하는 항체 및 SARS-CoV-2에 결합하는 적어도 1종의 추가의 항체 (예를 들어, CB6 또는 1404)를 포함하는 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하는, SARS-CoV-2-연관 질환 (예를 들어, COVID-19)을 치료 또는 예방하는 방법이 본원에 제공된다.
일부 실시양태에서, 환자에게 서열식별번호: 5735를 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5736을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체 또는 이러한 항체를 포함하는 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하는, SARS-CoV-2-연관 질환 (예를 들어, COVID-19)을 치료 또는 예방하는 방법이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 이러한 방법은 환자에게 SARS-CoV-2 S 단백질에 결합하는 또 다른 항체 (예를 들어, 555 또는 CB-6)를 투여하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 환자에게 서열식별번호: 5735를 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5736을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체 및 SARS-CoV-2에 결합하는 적어도 1종의 추가의 항체 (예를 들어, 555 또는 CB6)를 포함하는 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하는, SARS-CoV-2-연관 질환 (예를 들어, COVID-19)을 치료 또는 예방하는 방법이 본원에 제공된다.
일부 실시양태에서, COVID-19에 걸릴 위험이 있는 환자에게 서열식별번호: 5363을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5364를 포함하는 경쇄를 포함하는 항체 또는 이러한 항체를 포함하는 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하는, COVID-19를 예방하는 방법이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 이러한 방법은 환자에게 SARS-CoV-2 S 단백질에 결합하는 또 다른 항체 (예를 들어, CB-6 또는 1404)를 투여하는 것을 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 환자에게 서열식별번호: 5735를 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5736을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체 또는 이러한 항체를 포함하는 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하는, SARS-CoV-2-연관 질환 (예를 들어, COVID-19)을 치료 또는 예방하는 방법이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 이러한 방법은 환자에게 SARS-CoV-2 S 단백질에 결합하는 또 다른 항체 (예를 들어, 555 또는 CB-6)를 투여하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 환자에게 서열식별번호: 5735를 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5736을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체 및 SARS-CoV-2에 결합하는 적어도 1종의 추가의 항체 (예를 들어, 555 또는 CB6)를 포함하는 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하는, SARS-CoV-2-연관 질환 (예를 들어, COVID-19)을 치료 또는 예방하는 방법이 본원에 제공된다.
일부 실시양태에서, COVID-19에 걸릴 위험이 있는 환자에게 서열식별번호: 5735를 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5736을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체 또는 이러한 항체를 포함하는 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하는, COVID-19를 예방하는 방법이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 이러한 방법은 환자에게 SARS-CoV-2 S 단백질에 결합하는 또 다른 항체 (예를 들어, 555 또는 CB-6)를 투여하는 것을 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, COVID-19를 갖는 환자에게 치료 유효량의 본원에 기재된 항-SARS-CoV-2 항체 또는 이러한 항체를 포함하는 제약 조성물을 투여함으로써 상기 환자의 COVID-19 관련 입원 또는 응급실 (ER) 방문을 감소시키는 방법이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, COVID-19를 갖는 환자에게 치료 유효량의 서열식별번호: 5363을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5364를 포함하는 경쇄를 포함하는 항체 또는 이러한 항체를 포함하는 제약 조성물을 투여함으로써 상기 환자의 COVID-19 관련 입원 또는 ER 방문을 감소시키는 방법이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, COVID-19를 갖는 환자에게 치료 유효량의 서열식별번호: 5363을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5364를 포함하는 경쇄를 포함하는 항체 및 또 다른 항-SARS-CoV-2 항체 (예를 들어, SARS-CoV-2 S 단백질에 결합하는 항체, 예컨대 CB6 또는 1404)를 투여함으로써 상기 환자의 COVID-19 관련 입원 또는 ER 방문을 감소시키는 방법이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, COVID-19를 갖는 환자에게 치료 유효량의 서열식별번호: 5735를 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5736을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체 및 또 다른 항-SARS-CoV-2 항체 (예를 들어, SARS-CoV-2 S 단백질에 결합하는 항체, 예컨대 555 또는 CB6)를 투여함으로써 상기 환자의 COVID-19 관련 입원 또는 ER 방문을 감소시키는 방법이 본원에 제공된다.
일부 실시양태에서, 환자로부터 수득된 샘플을 검출가능한 작용제에 접합된 본원에 기재된 항체 또는 그의 항원-결합 단편과 접촉시키는 단계; 샘플에 존재하는 SARS-CoV-2 항원에 대한 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 특이적 결합을 검출하는 단계; 및 환자에게 치료 유효량의 본원에 기재된 항체 또는 그의 항원-결합 단편 또는 이러한 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포함하는 제약 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, COVID-19를 치료 또는 예방하는 방법이 본원에 제공된다.
일부 실시양태에서, 환자는 중등도 내지 중증 COVID-19를 갖지만, 입원하지는 않는다. 일부 실시양태에서, 환자는 경도 내지 중등도 COVID-19를 갖는다. 예를 들어, 경도 COVID-19 환자는 임의의 다양한 징후 및 증상, 예를 들어 열, 기침, 인후통, 권태감, 두통, 근육 통증을 갖지만, 숨가쁨, 호흡곤란 또는 비정상적 영상화는 없는 개체를 포함할 수 있다. 중등도 COVID-19 환자는 임상 평가 또는 영상화에 의한 하기도 질환의 증거 및 해수면에서 실내 공기의 (>)93 퍼센트 (%) 초과의 산소 포화도 (SaO2)를 갖는 개체를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 환자는 COVID-19에 걸릴 위험이 있다. 일부 실시양태에서, 환자는 SARS-CoV-2 바이러스 시험 결과 양성이다. 일부 실시양태에서, 환자는 12세 이상이고 체중이 적어도 40 킬로그램 (kg)인 성인 또는 소아 환자이다. 일부 실시양태에서, 환자는 중증 COVID-19로 진행하고/거나 입원할 위험이 높으며, 예를 들어 환자는 (i) 65세 이상 (≥ 65)이거나; (ii) 체질량 지수 (BMI)가 35 이상 (≥ 35)이거나; (iii) 만성 신장 질환을 갖거나; (iv) 당뇨병을 갖거나; (v) 면역억제 질환을 갖거나; (vi) 면역억제 치료를 받고 있거나; (vii) 55세 이상 (≥ 55)이고 심혈관 질환, 고혈압, 만성 폐쇄성 폐 질환 또는 다른 만성 호흡기 질환을 갖거나; 또는 (viii) 12 - 17세이고 그의 연령 및 성별에 대한 BMI ≥85% 또는 겸상 적혈구 질환, 선천성 또는 후천성 심장 질환, 신경발달 장애 (예를 들어, 뇌성 마비), 의학-관련 기술 의존 (예를 들어, 기관절개술, 위루설치술 또는 COVID-19와 관련되지 않은 양압 환기), 또는 제어를 위해 매일 의약이 요구되는 천식, 반응성 기도 또는 다른 만성 호흡기 질환을 갖는다. 일부 실시양태에서, 환자는 경도 내지 중등도 COVID-19를 갖고, 환자는 중증 COVID-19로 진행하고/거나 입원할 위험이 높으며, 예를 들어 환자는 (i) 65세 이상 (≥ 65)이거나; (ii) 체질량 지수 (BMI)가 35 이상 (≥ 35)이거나; (iii) 만성 신장 질환을 갖거나; (iv) 당뇨병을 갖거나; (v) 면역억제 질환을 갖거나; (vi) 면역억제 치료를 받고 있거나; (vii) 55세 이상 (≥ 55)이고 심혈관 질환, 고혈압, 만성 폐쇄성 폐 질환 또는 다른 만성 호흡기 질환을 갖거나; 또는 (viii) 12 - 17세이고 그의 연령 및 성별에 대한 BMI ≥85% 또는 겸상 적혈구 질환, 선천성 또는 후천성 심장 질환, 신경발달 장애 (예를 들어, 뇌성 마비), 의학-관련 기술 의존 (예를 들어, 기관절개술, 위루설치술 또는 COVID-19와 관련되지 않은 양압 환기), 또는 제어를 위해 매일 의약이 요구되는 천식, 반응성 기도 또는 다른 만성 호흡기 질환을 갖는다.
요법에 사용하기 위한 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체) 또는 항원-결합 단편 또는 1종 이상 (예를 들어, 2 또는 3종)의 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체) 또는 항원-결합 단편을 포함하는 제약 조성물이 또한 제공된다. 일부 실시양태에서, 항-SARS-CoV-2 항체 또는 항원-결합 단편 또는 제약 조성물은 COVID-19의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 1종 이상 (예를 들어, 2 또는 3종)의 항-SARS-CoV-2 항체 또는 항원-결합 단편을 포함한다. COVID-19의 치료 또는 예방을 위한 의약의 제조에서의 본원에 기재된 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체) 또는 항원-결합 단편의 용도가 본원에 추가로 제공된다.
항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체)의 형태, 의도된 전달 방식 및 수많은 다른 변수에 따라, 본원에 개시된 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체)는 관련 기술분야에 인지된 기술을 사용하여 목적하는 바와 같이 제제화될 수 있다. 비히클, 아주반트 및 희석제를 포함하는 다양한 제약상 허용되는 담체는 수많은 상업적 공급원으로부터 용이하게 입수가능하다. 더욱이, 여러가지의 제약상 허용되는 보조 물질, 예컨대 pH 조정제 및 완충제, 장성 조정제, 안정화제, 습윤제 등이 또한 입수가능하다. 특정의 비제한적 예시적인 담체는 염수, 완충 염수, 덱스트로스, 물, 글리세롤, 에탄올 및 그의 조합을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체)는 환자에게 순수하게 또는 최소의 추가의 성분과 함께 투여될 수 있다. 다른 실시양태에서, 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체)는 관련 기술분야에 널리 공지되어 있고 투여를 용이하게 하거나 또는 전달을 위해 제약상 최적화된 제제로의 활성 화합물의 가공을 보조하는 비교적 불활성 물질인 부형제 및 보조제를 포함하는 적합한 제약상 허용되는 담체를 함유하도록 제제화될 수 있다. 예를 들어, 부형제는 형태 또는 점조도를 제공하거나 또는 희석제로서 작용하여 항체의 약동학을 개선시킬 수 있다. 적합한 부형제는 안정화제, 습윤제 및 유화제, 다양한 오스몰랄농도를 위한 염, 캡슐화제, 완충제 및 피부 침투 증진제를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
본원에 개시된 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체)는 경장, 비경구 또는 국소 투여를 위해 제제화될 수 있다. 실제로, 모든 3종의 유형의 제제는 활성 성분의 전신 투여를 달성하기 위해 동시에 사용될 수 있다. 부형제뿐만 아니라 비경구 및 비-비경구 약물 전달을 위한 제제는 관련 기술분야에 공지되어 있다. 비경구 투여에 적합한 제제는 수용성 형태의 활성 화합물, 예를 들어 수용성 염의 수용액을 포함한다. 추가로, 유성 주사 현탁액에 적절한 활성 화합물의 현탁액이 투여될 수 있다. 적합한 친지성 용매 또는 비히클은 지방 오일, 예를 들어 참깨 오일 또는 합성 지방산 에스테르, 예를 들어 에틸 올레에이트 또는 트리글리세리드를 포함한다. 수성 주사 현탁액은 현탁액의 점도를 증가시키는 물질을 함유할 수 있고, 예를 들어 소듐 카르복시메틸 셀룰로스, 소르비톨 및/또는 덱스트란을 포함한다. 임의로, 현탁액은 또한 안정화제를 함유할 수 있다. 리포솜은 또한 세포 내로의 전달을 위해 작용제를 캡슐화하는 데 사용될 수 있다.
경장 투여에 적합한 제제는 경질 또는 연질 젤라틴 캡슐, 환제, 정제, 예컨대 코팅된 정제, 엘릭시르, 현탁액, 시럽 또는 흡입제 및 그의 제어 방출 형태를 포함한다.
일부 실시양태에서, 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체)는 적혈구 상에 흡착되어 폐로의 우선적 전달을 용이하게 함으로써 간 및 비장에서의 프로세싱을 통한 반감기 단축을 방지하고 폐에 보다 높은 농도를 제공할 수 있다.
일반적으로, 본원에 개시된 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체)는 경구, 정맥내, 동맥내, 피하, 비경구, 비강내, 근육내, 심장내, 뇌실내, 기관내, 협측, 직장, 복강내, 피내, 국소, 경피 및 척수강내를 포함하나 이에 제한되지는 않는 다양한 경로에 의해 또는 달리 이식 또는 흡입에 의해, 그를 필요로 하는 대상체에게 생체내 투여될 수 있다. 조성물은 정제, 캡슐, 분말, 과립, 연고, 용액, 좌제, 관장제, 주사, 흡입제 및 에어로졸을 포함하나 이에 제한되지는 않는 고체, 반고체, 액체 또는 기체상 형태의 제제로 제제화될 수 있다. 적절한 제제 및 투여 경로는 의도된 적용 및 치료 요법에 따라 선택될 수 있다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 제약 조성물은 1종 이상의 항-SARS-CoV-2 항체를 포함한다. 일부 실시양태에서, 제약 조성물은 하기 부형제: 히스티딘, 염화나트륨, 수크로스, 폴리소르베이트 80 중 1종 이상을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 제약 조성물은 적어도 1종의 항-SARS-CoV-2 항체 (예를 들어, 555 또는 1404), 히스티딘, 염화나트륨, 수크로스, 폴리소르베이트 80을 포함한다. 일부 실시양태에서, 제약 조성물은 약 6.0의 pH를 갖는다. 일부 실시양태에서, 제약 조성물은 적어도 1종의 항-SARS-CoV-2 항체 (예를 들어, 555 또는 1404), 5 mM 히스티딘, 50 mM NaCl, 6% 수크로스 및 0.05% 폴리소르베이트 80을 포함하고, 약 6.0의 pH를 갖는다. 일부 실시양태에서, 제약 조성물 중 항-SARS-CoV-2 항체 농도는 약 10 mg/mL 내지 약 150 mg/mL이다. 일부 실시양태에서, 제약 조성물 중 항-SARS-CoV-2 항체 농도는 약 35 mg/mL 내지 약 125 mg/mL이다. 일부 실시양태에서, 제약 조성물 중 항-SARS-CoV-2 항체 농도는 약 35 mg/mL이다. 일부 실시양태에서, 제약 조성물 중 항-SARS-CoV-2 항체 농도는 약 125 mg/mL이다.
유사하게, 특정한 투여 요법, 즉 용량, 시기 및 반복은 특정한 개체 및 그 개체의 의료 병력에 좌우될 것이다. 경험적 고려사항, 예컨대 약동학 (예를 들어, 반감기, 클리어런스율 등)이 투여량의 결정에 기여할 것이다. 투여 빈도는 요법 과정에 걸쳐 결정 및 조정될 수 있고, 종양 개시 세포를 포함한 과다증식성 또는 신생물성 세포의 수의 감소, 이러한 신생물성 세포의 감소의 유지, 신생물성 세포의 증식의 감소 또는 전이의 발생의 지연에 기초한다. 대안적으로, 대상 치료 조성물의 지속 연속 방출 제제가 적절할 수 있다. 지속 방출을 달성하기 위한 다양한 제제 및 장치가 관련 기술분야에 공지되어 있다.
제약 조성물은 코로나바이러스 감염의 치료 또는 예방을 위한 치료 유효량으로 투여된다. 본원에 사용된 용어 "치료 유효량"은 의사 또는 다른 임상의에 의해 추구되는 대상체에서의 생물학적 또는 의학적 반응을 도출할 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체) 또는 그를 포함하는 제약 조성물의 양을 의미한다. 특히, 바이러스 감염 및 바이러스 증식과 관련하여, "치료 유효량"은 하기 효과 중 1개 이상을 달성하기에 충분한 양을 포함하는 것으로 의도된다: (i) 바이러스 감염, 바이러스성 질환 또는 그와 연관된 증상의 중증도의 감소 또는 호전; (ii) 바이러스 감염, 바이러스성 질환 또는 그와 연관된 증상의 지속기간의 감소; (iii) 바이러스 감염, 바이러스성 질환 또는 그와 연관된 증상의 진행의 예방; (iv) 바이러스 감염, 바이러스성 질환 또는 그와 연관된 증상의 퇴행; (v) 바이러스 감염, 바이러스성 질환 또는 그와 연관된 증상의 발생 또는 발병의 예방; (vi) 바이러스 감염, 바이러스성 질환 또는 그와 연관된 증상의 재발의 예방; (vii) 한 세포로부터 또 다른 세포로, 한 조직으로부터 또 다른 조직으로 또는 한 기관으로부터 또 다른 기관으로의 코로나바이러스의 확산의 감소 또는 예방; (viii) 한 대상체로부터 또 다른 대상체로의 코로나바이러스의 확산/전염의 예방 또는 감소; (ix) 바이러스 감염 또는 바이러스성 질환과 연관된 기관 부전의 감소; (x) 대상체의 입원의 감소; (xi) 입원 기간의 감소; (xii) 코로나바이러스 감염 또는 그와 연관된 질환을 갖는 대상체의 생존의 증가; (xiii) 코로나바이러스 감염 또는 그와 연관된 질환의 제거; (xiv) 바이러스 복제의 억제 또는 감소; (xv) 숙주 세포(들)에 대한 비리온의 결합 또는 융합의 억제 또는 감소; (xvi) 숙주 세포(들) 내로의 비리온의 진입의 억제 또는 감소; (xvii) 바이러스 게놈의 복제의 억제 또는 감소; (xviii) 바이러스 단백질의 합성의 억제 또는 감소; (xix) 바이러스 입자의 조립의 억제 또는 감소; (xx) 숙주 세포(들)로부터의 바이러스 입자의 방출의 억제 또는 감소; (xxi) 바이러스 역가의 감소; (xxii) 코로나바이러스 감염 또는 바이러스성 질환과 연관된 증상의 수의 감소; (xxiii) 또 다른 요법의 예방적 또는 치료적 효과(들)의 증진, 개선, 보충, 보완 또는 증대; (xxiv) 바이러스 감염과 연관된 속발성 감염의 발병 또는 진행의 방지; (xxv) 코로나바이러스 감염에 속발성으로 발생하는 또 다른 질환의 발병의 방지 또는 중증도의 감소; 및/또는 (xxvi) 시토카인, 케모카인, 보체, 세포성 반응 등을 포함한 면역 반응 코로나바이러스 감염의 변화.
일부 실시양태에서, 치료 유효량의 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체) 또는 그를 포함하는 제약 조성물은 유익한 효과를 갖지만, 바이러스 감염 또는 그와 연관된 질환을 치유하지 않는다. 특정 실시양태에서, 요법은 예방 및/또는 치료 효과를 갖는 요법의 양을 달성하기 위해 특정 빈도로 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체) 또는 그를 포함하는 제약 조성물의 다중 용량의 투여를 포괄할 수 있다.
코로나바이러스 및 다른 바이러스 감염과 연관된 용이하게 관찰가능한 증상은 열, 기침 및/또는 인후통, 콧물 또는 코막힘, 두통 및/또는 신체 통증, 오한, 피로, 전신 약화, 오심 및 구토 및/또는 설사를 포함한다.
치료 유효량은 전형적으로 치료될 대상체의 체중, 그 또는 그녀의 신체 상태, 치료될 상태의 광범위성 및 치료될 대상체의 연령에 좌우된다. 일반적으로, 본원에 개시된 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체)는 용량당 약 10 ng/kg 체중 내지 약 100 mg/kg 체중 범위의 양으로 투여될 수 있다. 특정 실시양태에서, 항체는 용량당 약 50 μg/kg 체중 내지 약 5 mg/kg 체중 범위의 양으로 투여될 수 있다. 다른 실시양태에서, 항체는 용량당 약 100 μg/kg 체중 내지 약 10 mg/kg 체중 범위의 양으로 투여될 수 있다. 다른 실시양태에서, 항체는 용량당 약 100 μg/kg 체중 내지 약 20 mg/kg 체중 범위의 양으로 투여될 수 있다. 다른 실시양태에서, 항체는 용량당 약 0.5 mg/kg 체중 내지 약 20 mg/kg 체중 범위의 양으로 투여될 수 있다. 다른 실시양태에서, 항체는 적어도 약 100 μg/kg 체중, 적어도 약 250 μg/kg 체중, 적어도 약 750 μg/kg 체중, 적어도 약 3 mg/kg 체중, 적어도 약 5 mg/kg 체중 또는 적어도 약 10 mg/kg 체중의 용량으로 투여될 수 있다.
일부 실시양태에서, 항-SARS-CoV-2 항체 또는 이러한 항체를 포함하는 제약 조성물은 약 100 mg 내지 약 10,000 mg의 용량으로 환자에게 정맥내로 또는 피하로 투여된다. 일부 실시양태에서, 항-SARS-CoV-2 항체 (예를 들어, 555 또는 1404) 또는 이러한 항체를 포함하는 제약 조성물은 약 35 mg 내지 약 7000 mg의 용량으로 환자에게 정맥내로 또는 피하로 투여된다. 일부 실시양태에서, 항-SARS-CoV-2 항체 (예를 들어, 555 또는 1404) 또는 이러한 항체를 포함하는 제약 조성물은 약 700 mg 내지 약 7000 mg (예를 들어, 약 700 mg, 약 750 mg, 약 800 mg, 약 850 mg, 약 900 mg, 약 950 mg, 약 1000 mg, 약 1100 mg, 약 1200 mg, 약 1300 mg, 약 1400 mg, 약 1500 mg, 약 1600 mg, 약 1700 mg, 약 1800 mg, 약 1900 mg, 약 2000 mg, 약 2100 mg, 약 2200 mg, 약 2300 mg, 약 2400 mg, 약 2500 mg, 약 2600 mg, 약 2700 mg, 약 2800 mg, 약 2900 mg, 약 3000 mg, 약 3100 mg, 약 3200 mg, 약 3300 mg, 약 3400 mg, 약 3500 mg, 약 3600 mg, 약 3700 mg, 약 3800 mg, 약 3900 mg, 약 4000 mg, 약 4100 mg, 약 4200 mg, 약 4300 mg, 약 4400 mg, 약 4500 mg, 약 4600 mg, 약 4700 mg, 약 4800 mg, 약 4900 mg, 약 5000 mg, 약 5100 mg, 약 5200 mg, 약 5300 mg, 약 5400 mg, 약 5500 mg, 약 5600 mg, 약 5700 mg, 약 5800 mg, 약 5900 mg, 약 6000 mg, 약 6100 mg, 약 6200 mg, 약 6300 mg, 약 6400 mg, 약 6500 mg, 약 6600 mg, 약 6700 mg, 약 6800 mg, 약 6900 mg, 약 7000 mg)의 용량으로 환자에게 정맥내로 또는 피하로 투여된다. 일부 실시양태에서, 항-SARS-CoV-2 항체 (예를 들어, 555 또는 1404) 또는 이러한 항체를 포함하는 제약 조성물은 약 700 mg, 1400 mg, 2800 mg, 4200 mg, 5600 mg 또는 7000 mg의 용량으로 환자에게 정맥내로 또는 피하로 투여된다. 일부 실시양태에서, 항-SARS-CoV-2 (예를 들어, 555 또는 1404) 또는 이러한 항체를 포함하는 제약 조성물은 약 35 mg 내지 약 700 mg (예를 들어, 약 35 mg, 약 70 mg, 약 105 mg, 약 140 mg, 약 150 mg, 약 175 mg, 약 210 mg, 약 245 mg, 약 280 mg, 약 315 mg, 약 350 mg, 385 mg, 420 mg, 455 mg, 490 mg, 525 mg, 560 mg, 595 mg, 630 mg, 665 mg 또는 700 mg)의 용량으로 환자에게 정맥내로 또는 피하로 투여된다. 일부 실시양태에서, 항-SARS-CoV-2 항체 (예를 들어, 555 또는 1404) 또는 이러한 항체를 포함하는 제약 조성물은 약 70 mg, 140 mg, 150 mg, 175mg, 210 mg, 280 mg, 350 mg, 420 mg, 490 mg, 560 mg 또는 630 mg의 용량으로 환자에게 정맥내로 또는 피하로 투여된다. 일부 실시양태에서, 항-SARS-CoV-2 항체 (예를 들어, 555 또는 1404) 또는 이러한 항체를 포함하는 제약 조성물은 약 700 mg의 용량으로 환자에게 정맥내로 또는 피하로 투여된다. 일부 실시양태에서, 항-SARS-CoV-2 항체 (예를 들어, 555 또는 1404) 또는 이러한 항체를 포함하는 제약 조성물은 약 350 mg의 용량으로 환자에게 정맥내로 또는 피하로 투여된다. 일부 실시양태에서, 항-SARS-CoV-2 항체 (예를 들어, 555 또는 1404) 또는 이러한 항체를 포함하는 제약 조성물은 약 175 mg의 용량으로 환자에게 정맥내로 또는 피하로 투여된다. 일부 실시양태에서, 항-SARS-CoV-2 항체 (예를 들어, 555 또는 1404) 또는 이러한 항체를 포함하는 제약 조성물은 약 150 mg의 용량으로 환자에게 정맥내로 또는 피하로 투여된다.
다른 투여 요법은 체표면적 (BSA) 계산에 근거할 수 있다. 관련 기술분야에 널리 공지된 바와 같이, 환자의 BSA는 환자의 키 및 체중을 사용하여 계산되고, 그 또는 그녀의 신체의 표면적에 의해 나타내어진 바와 같은 대상체의 크기의 척도를 제공한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체)는 10 mg/m2 내지 800 mg/m2의 투여량으로 투여된다. 다른 실시양태에서, 항체는 50 mg/m2 내지 500 mg/m2의 투여량, 보다 더 바람직하게는 100 mg/m2, 150 mg/m2, 200 mg/m2, 250 mg/m2, 300 mg/m2, 350 mg/m2, 400 mg/m2 또는 450 mg/m2의 투여량으로 투여된다.
개별 환자에 대한 증량은, 임상의가 환자에 대해 과도한 안전성 위험, 예컨대, 예를 들어 등급 ≥ 3 비-혈액학적 독성, 등급 ≥ 3 오심, 최대 항구토/항설사 요법에 의해 제어되지 않는 구토 또는 설사, 성장 인자 지지체의 부재 하에 > 7일 지속되는 등급 4 호중구감소증, ≥ 38.5℃의 열 및/또는 전신 감염을 동반하는 임의의 지속기간의 등급 3 또는 4 호중구감소증, 또는 다른 등급 ≥ 4 혈액학적 독성을 나타낼 것이라고 합리적으로 여길 수 있는 임의의 임상적으로 유의한 발생의 부재 하에, 임상의의 재량으로 이루어질 수 있다.
본원에 개시된 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체)는 통상적으로 환자에게 다수회 투여된다. 예시적인 치료 요법은 2주마다 1회, 1개월 1회 또는 3 내지 6개월마다 1회의 투여를 수반한다. 예를 들어, 환자는 항체를 주기로서 4주마다, 예를 들어 28일마다 1회 (예를 들어, 정맥내 제제로서) 받을 수 있다. 투여 빈도는 환자에서 항체의 약동학적 프로파일에 따라 조정될 수 있다. 예를 들어, 항체의 반감기는 2주 투여 빈도를 필요로 할 수 있다. 일부 방법에서, 상이한 결합 특이성을 갖는 2종 이상의 항체가 동시에 투여될 수 있으며, 이 경우에 투여되는 각각의 항체의 투여량은 나타낸 범위 내에 속한다. 단일 투여량 사이의 간격은 매주, 매월 또는 매년일 수 있다. 간격은 또한 혈액 중 항체의 수준 및 다른 임상 징후에 따라 불규칙적일 수 있다. 일부 방법에서, 투여량은 약 1-1000 μg/mL 또는 약 25-300 μg/mL의 혈장 항체 농도를 달성하도록 조정된다. 대안적으로, 항체는 지속 방출 제제로서 투여될 수 있으며, 이 경우에 덜 빈번한 투여가 요구된다. 항체는 목적하는 결과를 달성하기 위해 적어도 9개월, 적어도 12개월 또는 보다 긴 기간 동안 환자에게 투여될 수 있다.
투여량 및 빈도는 환자에서의 항체의 반감기에 따라 달라진다. 일반적으로, 인간 항체가 가장 긴 반감기를 나타내고, 이어서 인간화 항체, 키메라 항체 및 비인간 항체이다. 투여량 및 투여 빈도는 치료가 예방적인지 또는 치료적인지에 따라 달라질 수 있다. 예방 용도에서, 비교적 낮은 투여량이 긴 기간에 걸쳐 비교적 드문 간격으로 투여된다. 일부 환자는 그의 여생 동안 계속 치료를 받는다. 치료 용도에서, 질환의 진행이 감소 또는 종결될 때까지, 부분 또는 완전 반응이 달성될 때까지 및/또는 환자가 질환 증상의 경감 또는 호전을 나타낼 때까지, 비교적 짧은 간격의 비교적 높은 투여량이 때때로 요구된다. 그 후, 환자에게 예방 요법을 투여할 수 있다.
치료 요법의 지속기간은 치료될 질환, 환자의 연령 및 상태, 환자의 질환의 단계 및 유형, 환자가 치료에 어떻게 반응하는지 등에 좌우된다. 임상의는 요법의 효과를 면밀하게 관찰할 수 있고, 필요에 따라 임의의 조정을 행할 수 있다. 작용제가 조합되어 사용되는 경우에, 2종 이상의 치료제는 동시에 또는 임의의 순서로 순차적으로 투여되며, 즉 본원에 개시된 항체는 제2 치료제를 투여하기 전에, 제2 치료제와 공동으로 또는 제2 치료제의 투여 후에 투여된다. 예를 들어, 조합 요법은 제2 치료제를 투여하기 전에 (예를 들어, 1분, 5분, 15분, 30분, 45분, 1시간, 2시간, 4시간, 6시간, 12시간, 24시간, 48시간, 72시간, 96시간, 1주, 2주, 3주, 4주, 5주, 6주, 8주 또는 12주 전에), 그와 공동으로 또는 그 후에 (예를 들어, 1분, 5분, 15분, 30분, 45분, 1시간, 2시간, 4시간, 6시간, 12시간, 24시간, 48시간, 72시간, 96시간, 1주, 2주, 3주, 4주, 5주, 6주, 8주 또는 12주 후에) 제1 치료제를 투여함으로써 수행될 수 있다.
조합 요법의 각각의 성분의 투여량, 빈도 및 투여 방식은 독립적으로 제어될 수 있다. 예를 들어, 하나의 치료제는 1일에 3회 경구로 투여될 수 있는 반면, 제2 치료제는 1일에 1회 근육내로 투여될 수 있다. 조합 요법은 휴지 기간을 포함하는 투약-및-휴약 주기로 제공될 수 있다. 화합물은 또한 1회 투여가 둘 다의 치료제를 전달하도록 함께 혼합되거나 또는 달리 제제화될 수 있다. 이 경우에, 각각의 치료제는 일반적으로 조성물의 총 중량의 1-95 중량%의 양으로 존재한다. 대안적으로, 치료제는 개별적으로 및 개별 투여량으로 제제화될 수 있다. 치료를 위한 치료제의 조합은 제약 팩의 성분으로서 제공될 수 있다.
바람직하게는, 조합 요법은 상승작용적 치료 효과, 즉 상기 기재된 것과 같은 그의 개별 효과 또는 치료 결과의 합계보다 더 큰 효과를 도출한다. 예를 들어, 상승작용적 치료 효과는 주어진 조합물의 단일 작용제들에 의해 도출된 치료 효과의 합계보다 적어도 약 2배 더 큰 또는 적어도 약 5배 더 큰 또는 적어도 약 10배 더 큰 또는 적어도 약 20배 더 큰 또는 적어도 약 50배 더 큰 또는 적어도 약 100배 더 큰 효과일 수 있다. 상승작용적 치료 효과는 또한 주어진 조합물의 단일 작용제들에 의해 도출된 치료 효과의 합계와 비교하여 적어도 10% 또는 적어도 20% 또는 적어도 30% 또는 적어도 40% 또는 적어도 50% 또는 적어도 60% 또는 적어도 70% 또는 적어도 80% 또는 적어도 90% 또는 적어도 100% 또는 그 초과의 치료 효과의 증가로서 관찰될 수 있다. 상승작용적 효과는 또한 치료제가 조합되어 사용되는 경우에 이들의 감소된 투여를 허용하는 효과이다.
제조 물품
본원에 개시된 발명은 또한 1개 이상의 용기를 포함하고 1회 이상의 용량의 본원에 개시된 항-코로나바이러스 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체)를 포함하는 제약 팩 및 키트를 포괄한다. 특정 실시양태에서, 예를 들어 본원에 개시된 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체)를 1종 이상의 추가의 작용제와 함께 또는 그 없이 포함하는 조성물의 미리 결정된 양을 함유하는 단위 투여량이 제공된다. 다른 실시양태의 경우, 이러한 단위 투여량은 주사용 단일-사용 사전충전 시린지에 공급된다. 또 다른 실시양태에서, 단위 투여량에 함유된 조성물은 염수, 수크로스 등; 완충제, 예컨대 포스페이트 등을 포함할 수 있고/거나; 안정하고 효과적인 pH 범위 내에서 제제화될 수 있다. 대안적으로, 특정 실시양태에서, 조성물은 적절한 액체, 예를 들어 멸균수의 첨가 시 재구성될 수 있는 동결건조 분말로서 제공될 수 있다. 특정의 바람직한 실시양태에서, 조성물은 수크로스 및 아르기닌을 포함하나 이에 제한되지는 않는, 단백질 응집을 억제하는 1종 이상의 물질을 포함한다. 용기(들) 상에 있거나 용기(들)와 회합된 임의의 라벨은 동봉된 조성물이 진단 또는 치료에 사용된다는 것을 나타낸다.
본 발명은 또한 본원에 개시된 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체) 및 임의로 1종 이상의 다른 진단제 또는 치료제의 단일-용량 또는 다중-용량 투여 단위를 생산하기 위한 키트를 제공한다. 키트는 용기 및 용기 상에 있거나 용기와 회합된 라벨 또는 포장 삽입물을 포함한다. 적합한 용기는, 예를 들어 병, 바이알, 시린지 등을 포함한다. 용기는 다양한 물질, 예컨대 유리 또는 플라스틱으로부터 형성될 수 있다. 용기는 상태를 치료하는 데 효과적인 조성물을 보유하고, 멸균 접근 포트를 가질 수 있다 (예를 들어, 용기는 피하 주사 바늘로 뚫을 수 있는 마개를 갖는 정맥내 용액 백 또는 바이알일 수 있음). 이러한 키트는 일반적으로 동일한 또는 상이한 용기 내에 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체) 및 임의로 1종 이상의 다른 진단제 또는 치료제의 제약상 허용되는 제제를 적합한 용기 내에 함유할 것이다. 키트는 또한 진단 또는 조합 요법을 위한 다른 제약상 허용되는 제제를 함유할 수 있다. 이러한 키트는 또한 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체)를 다른 진단제 또는 치료제(들)와 접합시키기에 적절한 시약을 제공할 수 있다.
보다 구체적으로, 키트는 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체)를 추가의 성분과 함께 또는 그 없이 함유하는 단일 용기를 가질 수 있거나 또는 키트는 각각의 목적하는 작용제에 대한 별개의 용기를 가질 수 있다. 조합 치료제가 접합을 위해 제공되는 경우에, 단일 용액은 몰 등가 조합으로 또는 하나의 성분이 다른 성분을 초과하여 예비-혼합될 수 있다. 대안적으로, 키트의 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체) 및 임의의 임의적인 진단제 또는 치료제는 환자에 대한 투여 전에 별개의 용기 내에서 개별적으로 유지될 수 있다. 키트는 또한 멸균된 제약상 허용되는 완충제 또는 다른 희석제, 예컨대 정박테리아 주사용수 (BWFI), 포스페이트-완충 염수 (PBS), 링거액 및 덱스트로스 용액을 함유하기 위한 제2/제3 용기 수단을 포함할 수 있다.
키트의 성분이 1종 이상의 액체 용액으로 제공되는 경우에, 액체 용액은 바람직하게는 수용액이며, 멸균 수용액이 특히 바람직하다. 그러나, 키트의 성분은 건조 분말(들)로서 제공될 수 있다. 시약 또는 성분이 건조 분말로서 제공되는 경우에, 분말은 적합한 용매의 첨가에 의해 재구성될 수 있다. 용매는 또한 또 다른 용기에 제공될 수 있는 것으로 고려된다.
상기 간략하게 나타낸 바와 같이, 키트는 또한 항체 및 임의의 임의적인 성분을 환자에게 투여하는 수단, 예를 들어 1개 이상의 바늘 또는 시린지, 또는 심지어 점안기, 피펫 또는 다른 이러한 유사 장치를 함유할 수 있으며, 이로부터 제제가 환자에게 주사 또는 도입될 수 있다. 이러한 키트는 또한 전형적으로 바이알 등을 함유하기 위한 수단 및 상업적 판매를 위한 밀폐된 다른 성분, 예컨대, 예를 들어 목적하는 바이알 및 다른 장치가 배치되고 유지되는 주입 또는 취입-성형된 플라스틱 용기를 포함할 것이다. 임의의 라벨 또는 포장 삽입물은 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체) 조성물이 암, 예를 들어 결장직장암을 치료하는 데 사용된다는 것을 나타낸다.
다른 바람직한 실시양태에서, 본원에 개시된 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체)는 증식성 장애의 진단 또는 치료에 유용한 진단 또는 치료 장치와 함께 사용될 수 있거나 또는 그를 포함할 수 있다. 예를 들어, 한 실시양태에서, 항-코로나바이러스 항체 (예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체)는 코로나바이러스 감염의 병인 또는 징후에 수반되는 세포 또는 마커 화합물을 검출, 모니터링, 정량화 또는 프로파일링하는 데 사용될 수 있는 특정 진단 장치 또는 기기와 조합될 수 있다.
실시예
하기 실시예는 본원에 개시된 발명의 측면을 예시하기 위해 포함되었다. 본 개시내용 및 관련 기술분야의 통상의 기술자의 일반적 수준에 비추어, 통상의 기술자는 하기 실시예가 단지 예시적인 것으로 의도되고, 수많은 변화, 변형 및 변경이 개시내용의 범주로부터 벗어나지 않으면서 사용될 수 있다는 것을 인지한다.
실시예 1
모노클로날 항체의 단리 및 생성
확인된 SARS-CoV-2 감염을 갖는 회복기 인간 공여자로부터 혈액 샘플을 수득하였다. 샘플은 항체-분비 B-세포가 풍부화되었고, 이를 단일 세포 분비 검정을 사용하여 스크리닝하여, 3종의 상이한 소형화 단일 세포 분비 검정: 멀티플렉스화 비드-기반 검정, 가용성 항원 검정 및 생존 세포 검정을 사용하여 재조합 SARS-CoV-2 스파이크 단백질에 결합하는 항체를 풍부화하였다. 생존 세포 검정은 재조합 단백질 발현 및 표적에 대한 심도있는 지식의 필요 없이 범유행 동안 미지의 항원을 신속하게 발현시키고 스크리닝하는 이상적인 전략이다.
비드 검정의 경우, 고처리량 유동 세포측정법 상에서 멀티플렉스화 비드 검정을 사용하여 스크리닝 표적 (SARS-CoV-2 전장 스파이크)에 결합하는 독특한 항체 서열을 확인하였다. 상이한 광학적 암호화 비드 유형을 다양한 SARS-CoV-2 항원: SARS-CoV-2의 야생형 또는 보고된 바이러스 돌연변이체 (S50L, A222V, N439K, F490S, S494P, D614G, B.1.1.7, B.1.351)의 전장 스파이크 및 SARS-CoV-2 스파이크의 S1 또는 NTD 서브유닛에 접합시켰다. 발견된 항체의 잠재적 교차-반응성을 평가하기 위해, 광학적 암호화 비드 유형에 커플링된 하기 항원: MERS, SARS-CoV, HKU1 및 WIV1의 전장 스파이크에 대한 결합을 또한 평가하였다. 정제된 항체를 멀티플렉스화 비드 및 BSA-His 또는 폴드온(FoldOn)-His에 접합된 음성 대조군 비드와 함께 50 nM 항체 농도로 실온에서 30분 동안 인큐베이션하였다. 비드를 세척하고, 형광 표지된 항-인간 2차 항체를 사용하여 결합을 검출하였다. 고처리량 플레이트-기반 유동 세포측정법을 사용하여 형광을 측정하였다. SARS-CoV와 SARS-CoV-2 사이의 스파이크 서열의 유사성으로 인해 SARS-CoV에 대해 확인된 기준 항체를 양성 대조군으로서 사용하였으며; 인간 IgG 이소형 및 비관련 항체를 음성 대조군으로서 사용하였다.
생존 세포 검정의 경우, 고처리량 유동 세포측정법을 사용하여 스크리닝 표적 (SARS-CoV-2 전장 스파이크)에 결합하는 독특한 항체 서열을 확인하였다. CHO 세포를 일시적으로 형질감염시켜 야생형 SARS-CoV 또는 SARS-CoV-2 또는 돌연변이체 SARS-CoV-2 (R21I, T22I, T29I, H49Y, D138H, Q490E, N439K, G476S, S477N, T478I, V483A, F490S, S494P, N501Y, G504D, A520S, D614G, B.1.1.7, B.1.351)의 전장 스파이크 단백질을 세포 표면 상에 발현시켰다. 현탁 CHO 세포를 전기천공을 사용하여 플라스미드로 일시적으로 형질감염시켰다. 유동 세포측정법을 사용하여 상이한 줄기 및 머리 도메인을 표적화하는, SARS-CoV에 대해 발견된 기준 항체로 시험함으로써, 전장 천연 입체형태 스파이크 단백질 발현을 확인하였다. 전세포 분리주로 웨스턴 블롯을 수행하여 세포 표면 상의 전장 단백질 발현을 확인하였다. 가용성 검정의 경우, B-세포에 의해 분비된 IgG를 불변 영역을 사용하여 비드 상에 포획하였다. 후속적으로, 가용성 형광 표지된 SARS-CoV-2 스파이크 또는 SARS-CoV-2 RBD 항원을 사용하여 비드 상에 고정화된 분비된 IgG에 대한 결합을 평가하였다.
정제된 항체를 판독 세포 및 비형질감염 대조군 CHO 세포주와 함께 50 nM 항체 농도로 4℃에서 30분 동안 인큐베이션하였다. CHO 세포를 세척하고, 형광 표지된 항-인간 2차 항체를 사용하여 결합을 검출하였다. 고처리량 플레이트-기반 유동 세포측정법을 사용하여 형광을 측정하였다. SARS-CoV와 SARS-CoV-2 사이의 스파이크 서열의 유사성으로 인해 SARS-CoV에 대해 확인된 기준 항체를 양성 대조군으로서 사용하였으며; 인간 IgG 이소형 및 비관련 항체를 음성 대조군으로서 사용하였다. 각각의 항체의 중앙 형광 강도를 각각의 항원에 대한 인간 이소형 대조군의 중앙 형광 강도에 대해 정규화하였다. 상이한 검증 실험으로부터의 이소형 값 대비 중앙 배수를 플롯팅하였다. 적용가능한 경우 평균 및 표준 편차를 계산하고, 값을 Y-축 상에 이소형 대비 중앙 배수로 칼럼 막대 그래프로서 플롯팅하고, 상이한 항체를 X-축을 따라 나타냈다. 이소형 대비 5배 초과의 항체 값을 결합제로서 간주하였다. 음성 대조군에 대한 결합에 기초하여 컷-오프 값을 결정하였다.
양성 결합 사건 (히트)을 갖는 것으로 확인된 챔버로부터의 개별 B-세포를 마이크로유체 장치로부터 회수하고, 회수된 단일 세포로부터 항체 유전자의 차세대 서열분석 (NGS) 라이브러리를 생성하고, 이들을 MiSeq 플랫폼 (일루미나(Illumina), 미국)을 사용하여 서열분석하였다.
항원-반응성 B 세포의 VH 및 VL 서열을 결정한 후에, 이들을 전장 IgG1 항체 서열로 전환시켰다. IgG1m3 동종이형의 전장 중쇄 서열을 VH 서열에 기초하여 구축하고, 전장 경쇄 카파 또는 람다 서열을 VL 서열에 기초하여 구축하였다. 전장 중쇄 및 경쇄 서열을 발현 벡터 내로 클로닝하고, 재조합적으로 발현시켰다.
표 1-1은 어느 예시적인 항-코로나바이러스 항체가 야생형 SARS-CoV-2에 결합하는지를 입증하는 상기 기재된 비드 검정의 결과를 보여준다. 칼럼 A-F: 50 nM SARS-CoV-2. 칼럼 G 및 H: 10 nM SARS-CoV-2. 칼럼 I: 2 nM SARS-CoV-2. 블랭크 셀: 이용가능한 데이터 없음.
표 1-2는 어느 예시적인 항-코로나바이러스 항체가 야생형 SARS-CoV-2에 결합하는지를 입증하는 상기 기재된 생존 세포 검정의 결과를 보여준다. 칼럼 A-E: 50 nM SARS-CoV-2. 칼럼 F 및 G: 10 nM SARS-CoV-2. 칼럼 H: 2 nM SARS-CoV-2. 블랭크 셀: 이용가능한 데이터 없음.
표 1-3은 어느 예시적인 항-코로나바이러스 항체가 야생형 SARS-CoV-2에 결합하는지를 입증하는 상기 기재된 생존 세포 검정의 결과를 보여준다. 칼럼 A-E: 50 nM SARS-CoV-2 V483A 돌연변이체. 칼럼 F: 50 nM SARS-CoV-2 V367F 돌연변이체. 칼럼 G: 50 nM SARS-CoV-2 D641G 돌연변이체. 블랭크 셀: 이용가능한 데이터 없음.
표 1-4는 어느 예시적인 항-코로나바이러스 항체가 SARS와 교차-반응하는지를 입증하는 상기 기재된 비드 검정의 결과를 보여준다. 칼럼 A-E: 50 nM SARS. 칼럼 F 및 G: 10 nM SARS. 칼럼 H: 2 nM SARS. 블랭크 셀: 이용가능한 데이터 없음.
표 1-5는 어느 예시적인 항-코로나바이러스 항체가 WIV1과 교차-반응하는지를 입증하는 상기 기재된 비드 검정의 결과를 보여준다. 칼럼 A-E: 50 nM WIV1. 칼럼 F 및 G: 10 nM WIV1. 칼럼 H: 2 nM WIV1. 블랭크 셀: 이용가능한 데이터 없음.
표 1-6은 어느 예시적인 항-코로나바이러스 항체가 특정한 SARS-CoV-2 단백질 및 스파이크 변이체에 결합하는지를 입증하는 상기 기재된 비드 검정의 결과를 보여준다. 칼럼 A: 50 nM SARS-CoV-2. 칼럼 B: 50 nM SARS-CoV-2 NTD. 칼럼 C: 50 nM SARS-CoV-2 RBD. 칼럼 D: 50 nM SARS-CoV-2 S1 D614G. 칼럼 E: 50 nM SARS-CoV-2 S1. 칼럼 F: 50 nM SARS-CoV-2 D614G. 칼럼 G: 50 nM SARS-CoV-2 N439K. 칼럼 H: 50 nM SARS-CoV-2 S494P. 칼럼 I: 50 nM SARS-CoV-2 F490S. 칼럼 J: 50 nM SARS-CoV-2 A222V. 칼럼 K: 50 nM SARS-CoV-2 S50L. 칼럼 L: 50 nM SARS-CoV-2 B.1.351. 칼럼 M: 50 nM SARS-CoV-2 B.1.1.7.
표 1-7은 어느 예시적인 항-코로나바이러스 항체가 다른 코로나바이러스 단백질에 결합하는지를 입증하는 상기 기재된 비드 검정의 결과를 보여준다. 칼럼 A: 50 nM HKU. 칼럼 B: 50 nM MERS. 칼럼 C: 50 nM SARS-1. 칼럼 D: 50 nM WIV-1. 칼럼 E: 50 nM 음성 대조군.
표 1-8은 어느 예시적인 항-코로나바이러스 항체가 특정한 SARS-CoV-2 NTD 변이체를 발현하는 특정한 세포에 결합하는지를 입증하는 상기 기재된 생존 세포 검정의 결과를 제시한다. 칼럼 A: 50 nM R21I 세포. 칼럼 B: 50 nM T21I 세포. 칼럼 C: 50 nM T29I 세포. 칼럼 D: 50 nM H49Y 세포. 칼럼 E: 50 nM S50L 세포. 칼럼 F: 50 nM D138H 세포. 칼럼 G: 50 nM S254F 세포.
표 1-9는 어느 예시적인 항-코로나바이러스 항체가 특정한 SARS-CoV-2 RBD 변이체를 발현하는 특정한 세포에 결합하는지를 입증하는 상기 기재된 생존 세포 검정의 결과를 제시한다. 칼럼 A: 50 nM V367F 세포. 칼럼 B: 50 nM Q409E 세포. 칼럼 C: 50 nM N439K 세포. 칼럼 D: 50 nM G476S 세포. 칼럼 E: 50 nM S477N 세포. 칼럼 F: 50 nM T478I 세포. 칼럼 G: 50 nM V483A 세포. 칼럼 H: 50 nM F490S 세포. 칼럼 I: 50 nM S494P 세포. 칼럼 J: 50 nM N501Y 세포. 칼럼 K: 50 nM G504D 세포. 칼럼 L: 50 nM A520S 세포.
표 1-10은 어느 예시적인 항-코로나바이러스 항체가 코로나바이러스 단백질을 발현하는 특정한 세포에 결합하는지를 입증하는 상기 기재된 생존 세포 검정의 결과를 보여준다. 칼럼 A: 50 nM SARS-CoV-2 세포. 칼럼 B: 50 nM SARS-CoV-2 D614G 세포. 칼럼 C: 50 nM SARS-CoV-2 B.1.1.7 세포. 칼럼 D: 50 nM SARS-CoV-2 B.1.351 세포. 칼럼 E: 50 nM SARS-CoV 세포. 칼럼 F: 음성 대조군 세포.
표 1-1: 야생형 SARS-CoV-2에 대한 결합 (비드 검정)
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표 1-2: 야생형 SARS-CoV-2에 대한 결합 (생존 세포 검정)
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표 1-3: SARS-CoV-2 돌연변이체와의 반응성
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표 1-4: SARS와의 교차-반응성
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표 1-5: WIV1과의 교차-반응성
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표 1-6: SARS-CoV-2 단백질 및 스파이크 변이체에 대한 결합
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표 1-7: 다른 코로나바이러스 단백질에 대한 결합
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표 1-8: SARS-CoV-2 NTD 변이체 세포에 대한 결합
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표 1-9: SARS-CoV-2 RBD 변이체 세포에 대한 결합
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표 1-10: 다른 코로나바이러스 단백질에 대한 결합
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실시예 2
항체의 발현 및 정제
항체를 본질적으로 하기와 같이 발현시키고 정제하였다. 적절한 숙주 세포, 예컨대 HEK 293 또는 CHO를 최적의 미리 결정된 HC:LC 벡터 비 (예컨대 1:3 또는 1:2)를 사용하여 항체를 분비하기 위한 발현 시스템 또는 HC 및 LC 둘 다를 코딩하는 단일 벡터 시스템으로 일시적으로 또는 안정하게 형질감염시켰다. 항체가 분비된 정화된 배지를 임의의 많은 통상적으로 사용되는 기술을 사용하여 정제하였다. 예를 들어, 상용성 완충제, 예컨대 포스페이트 완충 염수 (pH 7.4)로 평형화시킨 맙셀렉트(MABSELECT)® 칼럼 (지이 헬스케어(GE Healthcare)) 또는 Fab 단편에 대한 카파셀렉트(KappaSelect) 칼럼 (지이 헬스케어)에 배지를 편리하게 적용할 수 있다.
칼럼을 세척하여 비특이적 결합 성분을 제거하였다. 결합된 항체를, 예를 들어 pH 구배 (예컨대 20 mM 트리스 완충제 pH 7.0에서 10 mM 시트르산나트륨 완충제 pH 3.0, 또는 포스페이트 완충 염수 pH 7.4에서 100 mM 글리신 완충제 pH 3.0)에 의해 용리시켰다. 항체 분획을, 예컨대 SDS-PAGE에 의해 검출한 다음, 풀링하였다. 추가 정제는 의도된 용도에 따라 임의적인 것으로 간주하였다.
각각의 항체의 집단을 통상의 기술을 사용하여 농축시키고/거나 멸균 여과하였다. 가용성 응집체 및 다량체는 크기 배제, 소수성 상호작용, 이온 교환, 다중모드 또는 히드록시아파타이트 크로마토그래피를 비롯한 통상의 기술에 의해 효과적으로 제거된다. 이들 크로마토그래피 단계 후 항체의 순도는 약 95% 내지 약 99%였다. 생성물을 냉장시키거나, -70℃에서 즉시 동결시키거나 또는 동결건조시켰다.
특정한 예시적인 항체의 다양한 물리적 특징 및 발현-관련 특징을 관련 기술분야에 공지된 방법론을 사용하여 결정하였다 (하기 표 2-1 내지 2-5 참조).
제조업체의 권장 프로토콜을 일부 변형 하에 사용하여 Expi293-F™ 세포 (깁코(GIBCO)) 내로 항체 코딩 플라스미드 DNA를 형질감염시켜 항체를 생산하였다. Expi293-F™ 세포를 24 웰 플레이트 내로 분취하고, 37℃에서 8% CO2 및 85% 습도 하에 진탕시키면서 인큐베이션하였다. 중쇄 및 경쇄 플라스미드를 1:1 중쇄 대 경쇄 질량으로 풀링하고, Expi293펙타민과 혼합하고, 각각의 웰 내의 세포에 적가하였다. Expi293F 인핸서 I 및 II를 형질감염 20시간 후에 첨가하고, 세포 상청액을 형질감염 4일 후에 수거하였다. 항체 역가를 옥테트 HTX 기기 (포르테바이오(ForteBio)) 상에서 생물층 간섭측정법에 의해 측정하였다. 표 2-1을 참조한다. 발현 부피는 4 mL였다.
표 2-1: expiHEK293 세포에서의 모노클로날 항체의 발현 수준 (N=2).
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항체 코딩 플라스미드 DNA를 Expi293-F™ 세포 (깁코) 내로 형질감염시켰다. 단백질 정제를 위해, 자성 단백질 A 비드 (젠스크립트(GenScript))의 25% 슬러리 용액 8 μL를 30 μg의 발현된 mAb에 첨가하고, 37℃에서 진탕시키면서 밤새 인큐베이션하였다. 다음 날, 비드를 세척하고, 단백질을 480 μL의 100 mM 글리신 pH 2.0으로 용리시켰다. 용리 분획을 pH 7.0으로 중화시키고, 필터 플레이트 상에서 건조시켰다. 건조된 mAb를 완충제 중에 대략 1 mg/mL의 최종 농도로 재현탁시키고, 멸균 여과하였다. 정제된 mAb를 옥테트 HTX 기기 (포르테바이오)를 사용하여 생물층 간섭측정법에 의해 정량화하였다. 랩칩 기기 (퍼킨 엘머(Perkin Elmer))를 제조업체의 프로토콜에 따라 사용하여 변성 모세관 전기영동 (CE) SDS 페이지에 의해 mAb의 순도를 분석하였다. 랩칩 GX 리뷰어 소프트웨어 (퍼킨 엘머)를 사용하여 데이터를 분석하였다. 표 2-2 및 2-3을 참조한다. 비어있는 경우 이용가능한 값이 없다.
표 2-2: 포스페이트 완충 염수로 완충제 교환한 후의 정제 수율 (N=2).
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표 2-3: 모세관 전기영동 (CE) SDS PAGE를 사용한 모노클로날 항체의 순도 (%) 및 겉보기 분자량 (MW) (N=1).
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써멀 사이클러 기기 (바이오-라드(Bio-Rad))를 사용하여 시차 주사 형광측정법 (DSF)에 의해 mAb의 용융 온도 (Tm)를 평가하였다. 350 μg/mL의 mAb 용액 6 μL를 19X 농축된 시프로(SYPRO)™ 오렌지 용액 (써모 피셔(Thermo Fisher)) 6 μL와 혼합하였다. 형광 변화에 의해 평가된 열 언폴딩을 25℃의 출발 온도에서 측정하고, 0.5℃/분 증분으로 95℃까지 증가시켰다. 데이터를 분석하고, 바이오-라드 CFX 마에스트로 소프트웨어를 사용하여 용융 곡선을 적분하였다. Tm은 용융 곡선의 도함수로부터 취한 국부 최소값으로 정의하였다. 표 2-4를 참조한다. 비어있는 경우 이용가능한 값이 없다.
표 2-4: 시차 주사 형광측정법 (DSF) 검정에서의 모노클로날 항체의 융점 (Tm) (N=1).
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다이나프로(DYNAPRO)® 플레이트 판독기 III 기기 (와이어트(Wyatt)) 상에서 동적 광 산란 (DLS)에 의해 mAb의 퍼센트 응집 및 다분산도를 평가하였다. 개별 샘플 (다양한 농도 (0.5 - 2 mg/mL)의 mAb 7 μL)의 DLS를 샘플당 5 x 5 s 획득으로 20℃에서 획득하였다. 다이나믹스 소프트웨어 (와이어트)에서 규칙화 알고리즘을 사용하여 데이터를 분석하였다. 가용성 mAb의 퍼센트 다분산도 및 퍼센트 질량을 2 내지 10 nm의 크기 범위에 대해 계산하였다. 표 2-5를 참조한다. 비어있는 경우 이용가능한 값이 없다.
표 2-5: 동적 광 산란 (DLS)에 의해 결정된 가용성 항체의 양 (%) 및 가용성 항체의 다분산도 (%)
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실시예 3
고처리량 표면 플라즈몬 공명을 사용한 항체 특징화
HC-30M 칩 유형이 장착된 카테라® LSA™ 기기 (카테라, 미국) 상에서 고처리량 표면 플라즈몬 공명 포획 동역학 실험을 수행하였다. 기기는 2개의 마이크로유체 모듈인 단일-유동 채널 (SFC) 및 96 다중-유동 채널 (MFC) 프린트헤드를 사용하여, 고정된 샘플 부피의 전후 순환을 통해 칩 표면에 샘플을 전달한다. 많게는 384개의 리간드로 구성된 어레이는 연속 방식으로 4개의 내포된 프린트 블록 위치 각각에 MFC를 도킹함으로써 생성될 수 있다.
HEK 세포로부터 수득된 정제된 모노클로날 항체를 직접 커플링에 의해 칩 상에 고정화시켰다. 칩 표면을 활성화시키고 (예를 들어, 100 mM MES pH 5.5, 100 mM S-NHS, 400 mM EDC의 새로 제조된 1:1:1 활성화 믹스를 7분 동안 유동시킴), 10 μg/mL 또는 1 μg/mL (예를 들어, 10 mM NaOAc pH 4.25 + 0.01% 트윈 20 중)로 희석된 mAb를 주입하고, MFC 프린트헤드를 사용하여 칩 표면 상에 10분 동안 프린팅하였다. 칩 표면을 켄칭하고 (예를 들어, 1 M 에탄올아민 (pH 8.5)을 7분 동안 유동시켜 과량의 반응성 에스테르를 차단함), 이어서 세척하였다 (예를 들어, HBSTE (10 mM HEPES pH 7.4, 150 mM NaCl, 3 mM EDTA, 0.01% (v/v) 트윈-20) + 0.05% BSA로 매회 15초 동안 2회). 관련 기준 및 음성 대조군 mAb를 또한 칩 표면 상에 프린팅하였다.
다양한 농도 (예를 들어, HBSTE + 0.05% BSA 중 300 nM, 100 nM, 33.3 nM, 11.1 nM, 3.7 nM, 1.2 nM, 0.4 nM 및 0.1 nM)의 관심 항원 (예를 들어, SARS-CoV-2 스파이크 단백질)의 용액을 칩 표면 상에 순차적으로 주입하였다. 각각의 농도에 대해, 관심 항원을 5분 동안 주입하고 (회합 단계), 이어서 구동 완충제를 15분 동안 주입하였다 (해리 단계). 각각의 일련의 희석물 사이에 2회의 재생 사이클을 수행하였다. 일부 경우에, 재생 사이클을 피어스(PIERCE)™ IgG 용리 완충제 (써모 피셔 사이언티픽(Thermo Fisher Scientific)) + 1M NaCl 중에서 1분 동안 수행하였다. 다른 경우에, 재생 사이클을 10 mM 글리신 (pH 2.0) 중에서 15초 동안 수행하였다.
카테라® 동역학 분석 소프트웨어를 사용하여 데이터를 분석하고, 1:1 랭뮤어 결합 모델에 전반적으로 피팅하여 겉보기 회합률 (ka) 및 해리율 (kd) 동역학 상수 및 결합 친화도 상수 (KD)를 결정하였다. 표 3-1을 참조한다.
표 3-1: 결합 동역학 (SARS-CoV-2 WT)
Figure pct00114
Figure pct00115
Figure pct00116
Figure pct00117
카테라® LSA 기기를 사용하여 칩에 커플링된 mAb에 대한 에피토프 비닝 실험을 수행하였다. 각각의 mAb를 관심 항원과 함께 그의 10 내지 20배 몰 과량으로 혼합함으로써 샘플을 제조하였다 (예를 들어, 400 nM mAb 및 40 nM Ag의 1:1 새로 제조된 믹스, 둘 다 HBSTE + 0.05% BSA 구동 완충제 중에 희석됨). SFC를 사용하여, 각각의 Ag-mAb 프리믹스를 칩 표면 상에 4 내지 5분 동안 순차적으로 주입하고 (칩 상에 이전에 프린팅된 리간드에 대한 회합 단계), 이어서 2 내지 15분 동안 구동 완충제를 주입하였다 (해리 단계). 10 mM 글리신 (pH 2.0)을 칩 표면 상에 주입함으로써 각각의 프리믹스 샘플 사이에 15-30초의 2회의 재생 사이클을 수행하였다. 참조로서 Ag-단독 주입 (구동 완충제 중 20 nM 농도)을 주기적으로 (예를 들어, 8회 사이클마다) 수행하였다.
히트 맵 생성을 위해 카테라® 에피토프 분석 소프트웨어를 사용하여 데이터를 분석하였다. 간략하게, 각각의 리간드에 대해, 분석물 결합 신호를 SARS-CoV-2 스파이크 단백질-단독 신호 평균이 1 RU (상대 단위)와 등가이도록 하는 SARS-CoV-2-스파이크 단백질-단독 결합 신호에 대해 정규화하였다. 0.5-0.7 또는 0.9-1.1 RU 범위의 한계값 윈도우를 사용하여 분석물을 3개의 카테고리, 즉 차단제 (하한치 한계값 미만의 결합 신호를 갖는 분석물), 샌드위처 (상한치 한계값 초과의 결합 신호를 갖는 분석물) 및 모호함 (하한치와 상한치 한계값 사이에 속하는 신호를 갖는 분석물)으로 분류하였다. 이어서, 소프트웨어는 유사-거동 mAb를 히트 맵 내로 자동으로 클러스터링하였다. 도 1을 참조한다.
항체 차단 경쟁 실험을 수행하여 SARS-CoV-2 스파이크 단백질의 특이적 도메인에 대한 항체의 결합을 시험하였다. 공지된 결합 도메인을 갖는 기준 항체를 상기 기재된 동일한 설정으로 경쟁 실험에 사용하였다. 확립된 기준과 경쟁한 항체에 대한 데이터를 분석함으로써 특이적 스파이크 단백질 도메인에 대한 결합을 결정하였다. 공지된 기준 항체와의 경쟁은 동일한 도메인에 대한 결합을 나타냈다 (표 3-2 내지 3-4 참조). C는 경쟁을 나타내고, C*는 대칭 경쟁 (2개의 항체 중 어느 것이 칩에 결합되었고 어느 것이 가용성인지에 상관없이 관찰된 경쟁)을 나타내고, NC는 경쟁이 없음을 나타내고, 블랭크는 이용가능한 데이터가 없음을 나타낸다. mAb S652-19, S652-22, S652-102, S652-118, S652-109, S652-115, S562-103, S562-112 및 S562-116은 미국 국립 보건원 (NIH)의 데일 앤드 베티 범퍼스 백신 연구 센터 (VRC)로부터 입수한 SARS-CoV-2에 교차-반응성인 항-SARS1 항체이다. 항-SARS-CoV-2 항체 294, 419, 422, 488, 555, 923, 1037, 1075, 1081, 1130 및 1193이 본원에 기재되어 있다. 488콤보(488Combo)는 일라이 릴리(Eli Lilly)로부터의 친화도 성숙 항-SARS-CoV-2 mAb이다. 4A8은, 예를 들어 문헌 [Chi et al., "A neutralizing human antibody binds to the N-terminal domain of the Spike protein of SARS-CoV-2." Science. 07 Aug 2020: 650-655]에 기재된 항-SARS-CoV-2 항체이다. CR3022는, 예를 들어 문헌 [Yuan et al., "A highly conserved cryptic epitope in the receptor binding domains of SARS-CoV-2 and SARS-CoV." Science. 08 May 2020 : 630-633]에 기재된 항-SARS-CoV-2 항체이다. CA1 및 CB6은 준시 바이오사이언시스(Junshi Biosciences)에 의해 발견된 항-SARS-CoV-2 mAb이고, 이전에 기재되었다. REGN10933 및 REGN10987은 레게네론(Regeneron)에 의해 발견되고, 예를 들어 문헌 [Hansen et al., "Studies in humanized mice and convalescent humans yield a SARS-CoV-2 antibody cocktail." Science. 21 Aug 2020: 1010-1014]에 기재된 항-SARS-CoV-2 mAb이다. VIRS309는 비어 바이오테크놀로지(Vir Biotechnology)에 의해 발견되고, 예를 들어 문헌 [Pint et al., "Cross-neutralization of SARS-CoV-2 by a human monoclonal SARS-CoV antibody." Nature. 583:290-295 (2020)]에 기재된 항-SARS-CoV-2 항체이다. S652-123은 VRC로부터 입수한 SARS1-특이적 항체이고, 8203-C1은 항-폴드온 항체이고, PA1-983c는 항-His 태그 항체이다.
표 3-2
에피토프 비닝
Figure pct00118
Figure pct00119
Figure pct00120
표 3-3
에피토프 비닝
Figure pct00121
Figure pct00122
Figure pct00123
Figure pct00124
실시예 4
선택된 mAb의 에피토프 비닝, ACE2 차단 및 결합 동역학
완전 통합된 HT-SPR™ (고처리량 표면 플라즈몬 공명) 시스템인 카테라® LSA™ 기기를 CHO 세포로부터 콜로니-클로닝된 선택 항-SARS-CoV-2 mAb의 프리믹스 에피토프 비닝, ACE2 차단 검정 및 결합 동역학 측정에 사용하였다. 검정을 제조업체의 브로셔에 따라 수행하였다. 실험에 사용된 시약이 표 4-1에 제시된다.
표 4-1: 시약
Figure pct00125
기기는 pH 5.5의 25 mM MES의 다중-채널 완충제 및 1x HBSEP+의 단일-채널 완충제를 사용한다. HC30M 칩을 사용하고, 7분 동안 활성화 완충제 (100μL ECD + 100μL sNHS + 100μL 25mM MES pH 5.5) 중에서 칩 활성화, 10분 동안 10 mM 아세테이트 (pH 4.0) 중에서 샘플에 커플링 및 7분 동안 1M 에탄올아민 (pH 8.5) 중에서 탈활성화를 포함하는 카테라® 프로토콜에 따라 어레이 제조를 수행하였다.
프리믹스 에피토프 비닝의 경우, 20 nM의 SARS-CoV-2 스파이크 단백질을 0.1mg/mL BSA를 함유하는 1x HBSEP 중에 희석된 200 nM의 mAb와 예비혼합하고, 최소 3시간 동안 인큐베이션하였다. 이어서, 스파이크 단백질/mAb의 복합체를 제조된 HC30M 칩 상의 고정화된 mAb에의 결합에 대해, 5분 동안 회합 및 1분 동안 해리로 시험하였다. 1M NaCl을 함유하는 20 mM 글리신 (pH 2.0) 중에서 45초 동안 2회 재생을 수행하였다.
ACE2를 차단하는 mAb의 능력을 시험하기 위해, 상기 기재된 바와 같은 HC-30M 칩에 커플링된 항체를 SARS-CoV-2 스파이크 단백질:ACE2 복합체에 노출시켰다. 20 nM의 SARS-CoV-2 스파이크 단백질을 0.5M NaCl, 1% BSA, 1x 덱스트란 및 2mg/mL 헤파린을 함유하는 1x HBSEP 또는 0.05% BSA를 함유하는 HBSTE 중에 희석된 200 nM의 His-태그부착된 ACE2 (ACE2-His) 또는 태그부착되지 않은 ACE2와 예비혼합하였다. 이어서, 스파이크 단백질/ACE2-His의 복합체를 제조된 HC-30M 칩 상의 고정화된 mAb에의 결합에 대해, 5분 동안 회합 및 1 내지 5분 동안 해리로 시험하였다. 최대 결합을 평가하기 위해 20 nM의 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 주입, 뿐만 아니라 비-특이적 결합을 평가하기 위해 200 nM의 ACE2 주입을 포함시켰다. 1M NaCl을 함유하는 20 mM 글리신 pH 2.0 중에서 30초 동안 2회 재생을 수행하였다.
카테라® 에피토프 분석 소프트웨어 (버전 1.2.0.1960)를 사용하여 데이터를 분석하였다. 각각의 리간드에 대해, 분석물 결합 신호를 스파이크-단독 신호 평균이 1 RU (상대 단위)와 등가이도록 하는 SARS-CoV-2 스파이크-단독 결합 신호에 대해 정규화하였다. 0.7 RU 내지 0.71 RU 범위의 한계값 윈도우를 사용하여 분석물을 2개의 카테고리: ACE2 차단제 (하한치 한계값 미만의 결합 신호를 갖는 분석물) 및 비-차단제 (상한치 한계값 초과의 결합 신호를 갖는 분석물)로 분류하였다. 칩에 대한 낮은 커플링, 불량한 재생 또는 ACE2에 대한 비-특이적 결합을 갖는 항체는 분석에서 배제하였다.
결합 동역학을 시험하기 위해, 제조된 HC30M 칩을 SARS-CoV-2 스파이크 단백질에 대해 200 nM에서 시작하여 3배 연속 희석으로 적정하면서, 5분 동안의 회합 및 20분 동안의 해리로 시험하였다. 1M NaCl을 함유하는 20 mM 글리신 (pH 2.0) 중에서 45초 동안 2회 재생을 수행하였다. 도메인-특이적 단백질 (RBD, S2 또는 S1 서브유닛)의 경우, 시험된 농도는 500 nM, 250 nM 및 125 nM이었다. 시험을 25℃ 또는 37℃에서 수행하였다. 표 4-2 및 4-3은 선택된 mAb의 에피토프 빈, 결합 동역학, 중화 및 ACE2-차단 활성을 요약한다.
표 4-2: 선택된 mAb의 에피토프 빈, 결합 동역학 및 ACE2-차단 활성
Figure pct00126
표 4-3: 에피토프 빈
Figure pct00127
실시예 5
선택된 mAb의 생물물리학적 특징화
물질 및 방법
mAb를 분석적 크기 배제 크로마토그래피 (SEC-HPLC), 소수성 상호작용 크로마토그래피 - 고성능 액체 크로마토그래피 (HIC-HPLC), 헤파린 크로마토그래피 (헤파린-HPLC), 교차-상호작용 크로마토그래피 (CIC) 및 친화도-포획 자기-상호작용 나노입자 분광분석법 (AC-SINS)을 포함한 여러 생물물리학적 특징화에 적용하였다. 표 5-1을 참조한다.
SEC-HPLC
4 μg의 샘플을 워터스(Waters) BEH200 SEC, 4.6 x 150mm, 1.7 μm 칼럼 (워터스 Cat#186005225) 상에 주입하였다. 50 mM 인산나트륨, pH 6.8, 0.3M NaCl, 0.005% 아지드화나트륨을 함유하는 구동 완충제를 0.3 mL/분의 유량으로 사용하였다. 애질런트(Agilent) 1260 HPLC를 사용하여 280nm에서 UV 흡광도를 모니터링하였다. 주요 피크의 체류 시간 (RT) 및 단량체의 백분율이 보고된다.
HIC-HPLC
20 μg IgG 샘플 (1 mg/mL)을 2x 완충제 A 농축물 (2 M 황산암모늄, 0.1 M 인산나트륨, pH 6.8)로 1:1 희석하여 분석 전 1 M의 최종 황산암모늄 농도를 달성하였다. TSKGEL® 부틸-NPR (4.6 mm ID x 10 cm, 2.5 μm, 토소(Tosoh) # 42168) 칼럼을 23분에 걸쳐 이동상 A (1M 황산암모늄, 50 mM 인산나트륨, pH 6.8) 및 이동상 B 용액 (50 mM 인산나트륨, pH 6.8)의 선형 구배 (0-100% 완충제 B)로 1 mL/분의 유량으로 사용하고, 280 nm에서 UV 흡광도를 모니터링하였다. 주요 피크의 체류 시간이 보고된다.
헤파린-HPLC
PBS 중 20 μg의 IgG 샘플 (1mg/mL)을 포로스(POROS)™ 헤파린 50um (4.6x50mm, 0.8mL, 써모 사이언티픽 #4333412) 칼럼 상에 주입하였다. 유량을 1.5mL/분으로 유지하고, 초기 선형 구배는 0% 완충제 B에서 6분 내 40% 완충제 B에 이어서 2분 내 60% B까지였고, 이어서 1분 내 100% B까지 구배 증가시켰다. 구배를 추가로 1분 동안 100%로 유지하여 임의의 남아있는 단백질을 제거하였다. 주요 피크의 체류 시간이 보고된다.
CIC
CIC를 이전에 기재된 바와 같이 수행하였다 (Jacobs, S.A., et al., Pharm. Res. 27, 65-71, 2010). 간략하게, ~30 mg의 인간 혈청 폴리클로날 항체 (I4506; 시그마(Sigma))를 1-mL 히트랩(HITRAP)® 칼럼 (17-0716-01; 지이 헬스케어)에 커플링시키고, 이어서 에탄올아민으로 켄칭함으로써 CIC 칼럼을 제조하였다. 인간 혈청 IgG가 없는 것을 제외하고는 동일하게 블랭크 칼럼을 제조하였다. 대략 20 μg의 각각의 항체를 애질런트 1260 시리즈 HPLC 시스템 상에서 이동상으로서 10 mM 시트르산나트륨, 10 mM NaCl, pH 6.5를 사용하여 0.2 mL/분의 유량으로 시험하였다. IgG 및 블랭크 칼럼 둘 다에 의해 수득된 체류 시간을 사용하여 k'를 계산하였다. 추가로, 일부 샘플에서의 피크 테일링으로 인해, 50% 높이에서의 피크 폭을 또한 수득하여 시험 항체의 비-특이적 상호작용을 모니터링하였다.
AC-SINS
AC-SINS 검정을 이전에 기재된 바와 같되 변형하여 수행하였다 (Wu, J. et al., Protein Eng. Des. Sel. 28, 403-14, 2015). 간략하게, 금 나노입자 (15705; 테드 펠라 인크.(Ted Pella Inc.))를 100% 포획 항-인간 염소 IgG Fc (109-005-008; 잭슨 이뮤노리서치(Jackson ImmunoResearch))로 코팅하였다. 접합 반응물을 1 μg/mL 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)로 켄칭하고, 0.25x PBS 중으로 용리시켰다. 접합된 금 혼합물에 PEG를 0.2 μg/mL의 농도로 첨가한 후에 사용하였다. 이어서, 관심 항체를 코팅된 금 입자와 함께 실온에서 1시간 동안 인큐베이션하고, 테칸(Tecan) M1000 프로 플레이트 판독기를 사용하여 475-625 nm의 범위 내에서 1 nm의 증분으로 파장 이동을 측정하였다. 시험 항체를 PBS 또는 10mM 히스티딘, pH 6.0 중에 희석한 후에 인큐베이션하였다. 완충제 대조군과 비교한 델타 혈장 파장 이동이 보고된다. 자기-상호작용 항체는 완충제 대조군으로부터 더 높은 파장 이동을 나타낸다.
표 5-1: 선택된 mAb의 생물물리학적 특성
Figure pct00128
실시예 6
유사중화 검정
다양한 항-코로나바이러스 항체에 대해 다양한 유사중화 검정을 수행하였다. 일부 실험에서, 4가지 농도의 항체를 사용하여 유사중화 검정을 수행하였다. 항체 희석물을 SARS-CoV-2 전장 스파이크 단백질을 발현하는 유사형화 렌티바이러스와 예비혼합하고, 인간 ACE2 수용체를 일시적으로 발현하는 293T 세포와 72시간 동안 인큐베이션하였다. 세포를 용해시키고, 플레이트 판독기를 사용하여 프로메가(Promega) 루시페라제 검정 키트에 의해 세포 내로의 바이러스 진입을 정량화하였다. 각각의 농도에서의 % 중화를 바이러스 단독 (0% 중화) 및 세포 단독 (100% 중화) 대조군 웰과 비교하여 계산하였다 (표 6-1 참조). 모든 검정을 이중으로 실행하였다. 기준 mAb S652-118 및 면역화된 마우스 혈청을 양성 대조군으로서 사용하여, 7개의 적정 포인트를 사용하여 IC50, IC80 및 IC90 값을 계산하였다 (표 6-2 및 6-3 참조). S자형 곡선을 생성하고, 각각 바이러스의 50% 및 80%를 중화시키는 데 요구되는 항체의 농도로서 IC50 및 IC80 값을 계산하였다 (표 6-4 참조). 곡선에 피팅될 수 없는 항체는 >50 μg/mL의 IC50 값을 갖는 것으로 표시된다.
표 6-1: 모노클로날 항체의 4-포인트 유사중화 스크린
% 중화
Figure pct00129
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Figure pct00137
표 6-2
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표 6-3
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표 6-4: 선택 항-코로나바이러스 항체에 대한 IC50 및 IC80 값
Figure pct00140
선택 항-코로나바이러스 항체에 대해 추가의 슈도바이러스 중화 검정을 수행하였다. 렌티바이러스 패키징 및 루시페라제 리포터, 인간 막횡단 프로테아제 세린 2 (TMPRSS2) 및 SARS-CoV-2 S (우한-1, 진뱅크 #: MN908947.3) 유전자를 코딩하는 플라스미드로 293T 세포를 공동-형질감염시켜 루시페라제 리포터 유전자를 보유하는 SARS-CoV-2 스파이크 유사형화 렌티바이러스를 생산하였다. 형질감염 48시간 후에, 상청액을 수거하고, 여과하고, 동결시켰다. 중화 검정을 위해 모노클로날 항체의 연속 희석물 (초기 스크린 검정에 대해 10 및 1 μg/ml로 2가지 희석물 또는 전체 곡선에 대해 10-0.0006 μg/ml로 8가지 희석물)을 적정된 슈도바이러스와 혼합하고, 37℃에서 45분 동안 인큐베이션하고, 96-웰 백색/흑색 이소플레이트 (퍼킨 엘머) 내 사전-시딩된 293T-ACE2 세포에 삼중으로 첨가하였다. 2시간의 인큐베이션 후에, 웰을 150 μL의 새로운 배지로 보충하였다. 72시간 후에 세포를 용해시키고, 루시페라제 활성 (상대 광 단위, RLU)을 측정하였다. 그래프패드 프리즘 8.0.2를 사용하여 퍼센트 중화 및 중화 IC50 값을 계산하였다. 결과가 표 6-5에 제시된다.
표 6-5: 선택 항-코로나바이러스 항체에 대한 IC50 값
Figure pct00141
선택 항-코로나바이러스 항체에 대해 더 많은 슈도바이러스 중화 검정을 수행하였다. 정제된 항체의 연속 희석물 (3배 단계적 방식으로 10가지 희석물)을 혼합하고, 37℃에서 1시간 동안 완전 배지 (DMEM/F12, 10% FBS, 10mM HEPES) 중에서 SARS-CoV-2 WT 및/또는 SARS-CoV-2 D614G 레닐라 루시페라제 리포터 바이러스 입자 (RVP, 인테그랄 몰레큘라(Integral Molecular))와 함께 인큐베이션한 후에, 배양물에 새로 트립신 처리한 293T-hsACE 세포 (인테그랄 몰레큘라)를 첨가하였다. 72시간의 인큐베이션 후에, 상청액을 각각의 웰로부터 조심스럽게 흡인하고, 고처리량 플레이트 판독기 기반 검정을 통해 루시페라제 검정 시스템 (프로메가)을 사용하여 생물발광을 측정하였다. 대조군은 하기와 같았다: 세포 단독, 세포 및 바이러스 단독, 및 내부 기준 항체 (양성 대조군) 및/또는 비관련 항체 (음성 대조군)를 갖는 세포 및 바이러스. 상대 발광 단위를 먼저 세포 단독 및 항체 부재 대조군에 기초하여 정규화하고, 후속적으로 데이터를 약물 농도에 대해 플롯팅하였다. 시험된 각각의 항체에 대해, 그래프패드 프리즘 8 (그래프패드 소프트웨어, 인크.(GraphPad Software, Inc.))을 사용하여 데이터 포인트를 피팅하기 위해 비선형 회귀를 사용함으로써 감염의 50%를 억제할 수 있는 농도 (IC50)를 계산하였다. 모든 샘플을 삼중으로 실행하였고, 그에 따라 평균 및 표준 편차를 계산하였다. 결과가 표 6-6에 제시된다.
표 6-6: 선택 항-코로나바이러스 항체에 대한 IC50 값
Figure pct00142
실시예 7
수소 중수소 교환 질량 분광측정법 (HDX-MS)에 의한 항-SARS-CoV-2 항체 555 및 다른 항-SARS-CoV-2 항체의 에피토프 맵핑
예시된 항체 (mAb 555)가 SARS-CoV-2 스파이크 단백질에 결합하는 위치를 결정하기 위해 수소 중수소 교환-질량 분광측정법 (HDX-MS)을 수행하였다. 워터스 시냅트(SYNAPT)™ G2Si (워터스 코포레이션) 기기 상에서 소화를 위한 네펜테신 II (Nep II)를 사용하여 제로 교환 (H2O 중 0.1 X PBS)으로 5 μg의 SARS-CoV-2 스파이크를 사용하여 SARS-CoV-2 스파이크에 대한 펩티드 확인을 수행하였다. 질량 분광계를 HDMSe (이동성 ESI+ 모드)로; m/z 255.00-1950.00의 질량 획득 범위로; 0.4초의 스캔 시간으로 설정하였다. PLGS 2.3.2 (워터스 코포레이션)를 사용하여 데이터를 처리하였다. 교환 실험을 위해, 150 mM NaCl을 함유하는 10 mM 인산나트륨 완충제, pH 7.4 (1xPBS 완충제) 중에서 인간 SARS COV-2 스파이크와 mAb 555의 복합체를 1:1.2의 몰비로 제조하였다. 맞춤형 테칸 샘플 제조 시스템 (Espada et al., J. Am. Soc. Mass Spectrom., 2019, 30:2580-2583)을 사용하여 0.1x PBS를 함유하는 25uL의 D2O 완충제를 2.5 ul의 스파이크 (1 mg/mL) 또는 스파이크-mAb 555 복합체에 15℃에서 다양한 양의 시간 (0초, 10초, 30초, 2분, 10분 및 120분) 동안 첨가함으로써 실험을 개시하였다. 동일 부피의 0.32M TCEP, 3 M 구아니딘 HCl, 0.1M 포스페이트 pH 2.5를 사용하여 4℃에서 2분 동안 반응물을 켄칭하고, -70℃에서 즉시 동결시켰다. 샘플 주입 시스템은 UR3 로봇, LEAP PAL3 HDX 오토샘플러 및 워터스 시냅트® G2-Si (워터스 코포레이션) (문헌 [Espada et al.]으로부터 변형됨)와 접속된 HPLC 시스템으로 구성된다. LC 이동상은 각각 0.2% 포름산을 함유하는 물 (A) 및 아세토니트릴 (B)로 이루어졌다. 각각의 샘플을 50 μL의 0.32M TCEP, 1.5 M 구아니딘 HCl, 0.1M 포스페이트 pH 2.5를 사용하여 1분 동안 해동시키고, 2.5분 동안 250 μL/분의 유량으로 이동상 A를 사용하여 4℃에서 소화를 위한 Nep II 칼럼 상에 주입하였다. 생성된 펩티드를 4℃에서 워터스 BEH 반가드(VANGUARD)™ 프리-칼럼 상에 트랩핑하고, 4℃에서 워터스 액퀴티 UPLC™ BEH C18 분석 칼럼을 사용하여 200 μL/분의 유량 및 7분에 걸쳐 3%-85% 이동상 B의 구배로 크로마토그래피 분리하고, 질량 분석을 위해 질량 분광계로 보냈다. 시냅트® G2-Si를 Glu-피브리노펩티드로 보정한 후에 사용하였다. 질량 스펙트럼을 HDMS 모드에서 m/z 범위 255 내지 1950에 걸쳐 잠금 질량 m/z 556.2771 (류신 엔케팔린)로 획득하였다. 다이남엑스(DYNAMX)™ 3.0 (워터스 코포레이션)에서 확인된 펩티드 목록을 사용하여 비중수소화 대조군과 함께 중수소화 샘플에 대한 MS 데이터를 처리함으로써 각각의 펩티드에 대한 상대 중수소 혼입을 결정하였다. 중수소 혼입 차이로 SARS-CoV-2 스파이크의 유리 및 결합 상태를 비교하였다.
결과가 표 7.1에 제시된다. SARS-CoV-2 스파이크에 대한 서열 커버리지는 63.5%였다. SARS-CoV-2 스파이크 단독 대비 SARS-CoV-2 스파이크 플러스 mAb 555 복합체의 중수소 흡수의 감소가 잔기 459-495 (SNLKPERISTEIYQAGSTPCNGVEGFNCYFPLQSY; 서열식별번호: 5380) 및 잔기 434-444 (IAWNSNNLDSK; 서열식별번호: 5379)에서 관찰되었으며, 이는 가능성 있는 에피토프 영역을 가리킨다. 이들 데이터는 mAb 555가 SARS-CoV-2 스파이크 단백질의 아미노산 434-444 및 459-495 내의 1개 이상의 잔기를 포함하는 에피토프를 갖는다는 것을 시사한다. mAb 555의 에피토프 영역은 SARS-CoV-2 스파이크 RBD 영역 내의 ACE2 결합 부위와 상관관계가 있다 (Yan et al., 2020, Science. 367(6485):1444-1448.)
표 7.1: SARS-CoV-2 스파이크 단독과 비교하여 SARS-CoV-2 스파이크 플러스 mAb 555 복합체에서 감소된 교환이 관찰된 펩티드 (중첩 펩티드가 관찰됨).
Figure pct00143
HDX-MS를 또한 추가의 항-SARS-CoV-2 항체에 대해 수행하였다. 결과가 표 7.2에 요약된다.
표 7.2: 추가의 항-SARS-CoV-2 항체에 대한 HDX-MS 데이터의 요약. 보호를 나타내는 SARS-CoV-2 스파이크 단백질의 서열 범위가 제시되며; 각각의 서열 범위에 대한 펩티드의 개수가 괄호 안에 표시된다.
Figure pct00144
실시예 8
음성-염색 전자 현미경검사 (nsEM)에 의한 항-SARS-CoV-2 Fab의 에피토프 맵핑
항-SARS-CoV-2 항체를 차이니즈 햄스터 난소 (CHO) 세포에서의 발현에 의해 생산하고, 표준 항체 정제 기술을 사용하여 정제하였다. 항체의 Fab 부분을 파파인을 사용한 단백질분해적 소화, 이어서 표준 크로마토그래피 기술을 사용한 비-절단 단백질의 제거에 의해 생성하였다.
SARS-CoV-2 스파이크 엑토도메인을 10배 과량의 Fab의 존재 하에 2 mM 트리스 pH 8.0, 200 mM NaCl, 0.02% NaN3 (희석 완충제) 중에 0.04 mg/mL로 희석하고, 얼음 상에서 10초 (Fab 555), 2분 (Fab 447), 5분 (Fab 309, 488, 562, 506, 442, 417, 462, 292, 540, 479, 553, 388) 또는 20분 (Fab 447, 483, 419, 494) 동안 인큐베이션하였다. CF400-Cu 그리드 (일렉트론 마이크로스코피 사이언시스(Electron Microscopy Sciences))를 4:1 비의 O2/H2를 갖는 솔라루스(SOLARUS)® 950 플라즈마 세정제 (가탄(Gatan))에서 30초 동안 플라즈마 세정하였다. 4.8 μl의 단백질 샘플을 그리드에 적용하고, 30초 동안 인큐베이션되도록 하였다. 이어서, 그리드를 메틸아민 텅스테이트 (NANO-W, 나노프로브스(Nanoprobes))로 염색된 희석 완충제로 2회 세척하였다. 이어서, FEI 탈로스(TALOS)™ TEM (써모 사이언티픽) 및 세타 16M 검출기를 사용하여 그리드를 영상화하였다. TIA v4.14 소프트웨어를 사용하여 1.63 Å/픽셀의 픽셀 크기에 상응하는 x92,000의 배율로 현미경사진을 수동 수집하였다. cisTEM에서 CTF 추정 및 입자 선별을 수행하였다. cisTEM (Grant, et al., 2018. "CisTEM, User-Friendly Software for Single-Particle Image Processing." Edited by Edward H Egelman. ELife 7 (March): e35383) 또는 CRYOSPARC™ (Punjani, Nature Methods 14 (3): 290-96, 2017)에서 2D 분류를 수행하고, CRYOSPARC™에서 3D 맵에 대한 순이론적 재구축 및 정밀화를 수행하였다.
결합 동역학을 생물층 간섭측정법에 기초하여 결정하였다. BLI 완충제 (10 mM HEPES pH 7.5, 150 mM NaCl, 3 mM EDTA, 0.05% 트윈 20 및 1 mg/mL BSA) 중 50 nM 2X-스트렙-태그부착된 SARS-CoV-2 엑토도메인을 옥테트 RED96e (포르테바이오)를 사용하여 600초 동안 스트렙타비딘 바이오센서 (포르테바이오) 상에 고정화시켰다. 이어서, 바이오센서를 100 nM Fab (BLI 완충제 중에 희석됨) 중에 침지시키고, 회합 신호를 600초 동안 측정하였다. 이 후, 바이오센서를 BLI 완충제 중에 침지시켜 해리 신호를 600초 동안 측정하였다. 데이터를 참조-차감하고, 옥테트 데이터 분석 소프트웨어 v11.1 (포르테바이오)을 사용하여 1:1 결합 모델에 피팅하였다.
Fab 555, 447, 494, 483, 419 및 388에 대한 nsEM 결과 및 결합 동역학이 도 2-8에 제시된다. 다른 Fab는 nsEM에 의해 관찰되지 않았다. 복합체의 nsEM 영상화 및 3차원 재구축은 Fab 555가 공지된 ACE2-스파이크 단백질 상호작용을 직접적으로 방해할 배향으로 SARS-CoV-2 스파이크 단백질의 RBD 도메인에 결합한다는 것을 확인시켜 준다 (Yan et al., "Structural basis for the recognition of SARS-CoV-2 by full-length human ACE2." Science. 367(6485): 1444-1448 (2020)).
실시예 9
항-SARS-CoV-2 항체의 생 바이러스 중화 검정
일부 항-SARS-CoV-2 항체 (mAb 555, 419, 481, 488, 373)의 효능을 배양된 Vero 76/E6 세포를 사용하여 용량-반응 방식으로 감염성 SARS-CoV-2 바이러스의 중화를 검출함으로써 측정하였다. 이들 세포는 SARS-CoV-2에 의해 감염되기 매우 쉬운 것으로 공지되어 있다. 3곳의 독립적 실험실에서 SAR-CoV-2와 함께 사용하기 위해 이전에 공개된 방법을 변형시킴으로써 검정을 개발하고 수행하였다.
배양된 Vero E6 세포를 SARS-CoV-2 임상 분리주 USA/WA/1/2020 (BEI 자원 번호 NR52281)으로 감염시키고 세포병리학이 분명해질 때까지 (전형적으로 48-72시간) 37℃에서 인큐베이션함으로써 생산된 천연 바이러스를 사용하여 실험실 1 및 실험실 2에서 검정을 수행하였다. 확장은 원래 바이러스 서열의 완전성을 보유하기 위해 세포 배양물에서 단지 1-2 계대배양으로 제한하였다. 바이러스 스톡을 표준 플라크 검정에 의해 정량화하고, 분취물을 -80℃에서 저장하였다. 새로 해동된 분취물을 각각의 중화 실험에 사용하였다.
또한, Vero E6 세포에서 유사하게 성장하고 플라크 검정에 의해 적정되고 동결 저장된 SARS-CoV-2의 이탈리아-INMI1 분리주 (유럽 바이러스 아카이브 - 글로벌, ref #008V-03893)를 사용하여 실험실 2에서 검정을 수행하였다.
비-필수 유전자 (ORF7)가 나노루크(NANOLUC)® 루시페라제 리포터 유전자 (프로메가)로 대체된 변형된 버전의 USA/WA/1/2020 분리주를 사용하여 실험실 3에서 검정을 수행하였다. 이러한 기술은 이전에 SARS-CoV 및 MERS-CoV에 대해 기재되었다 (Sheahan, et al., Sci. Transl. Med. 2017;9 eaal3653)
간략하게, 바이러스의 20-140 플라크-형성 단위를 37℃에서 1시간 동안 항-SARS-CoV-2 항체의 연속 희석물 (곡선당 8-10 포인트)과 함께 사전-인큐베이션하고, Vero E6 세포의 단층 상에 접종하고, 37℃에서 인큐베이션하여 비-중화 바이러스가 복제되도록 하였다.
mAb555에 의한 바이러스 중화로부터 비롯된 복제의 억제를 하기 방법에 의해 검출하였다: (1) 표준 면역염색 기술에 의해 SARS-CoV-2 뉴클레오캡시드 단백질 (NP)에 대한 뮤린 모노클로날 항체를 사용하여 검출되는 바와 같은 바이러스 NP의 생산 감소 (실험실 1 방법); (2) 표준 플라크 검정에 의해 검출되는 바와 같은 바이러스-유도된 세포 사멸에 대한 보호 (실험실 2 방법); 또는 (3) 삽입된 루시페라제 리포터 유전자로부터의 신호 감소 (실험실 3 방법).
각각의 샘플을 항체 희석물당 2-3개의 복제물을 사용하여 시험하였다. 마우스 또는 인간 회복기 혈청을 양성 대조군으로서 사용하였다. IgG 이소형 항체 대조군 및 비-바이러스 대조군에 의해 생성된 신호와 비교하여 퍼센트 중화를 계산하고, 4-파라미터 피트에 의한 비선형 회귀 분석 (그래프패드 프리즘 v8.0.0)을 사용하여 데이터를 플롯팅하였다. 무작위 효과 모델 (Berkey, et al., Stat Med. 1995; 14(4):395-411) 및 R 패키지 메타포어 (Viechtbauer, J. Stat. Software 2010;36(3):1-48)를 사용하여 4곳의 실험실로부터의 모든 데이터의 메타-분석을 사용하여 IC50 및 IC99에 대한 전체 추정치를 생성하였다.
mAb 555, 419, 481, 488 및 373에 대한 중화 검정의 결과가 표 9.1 및 표 9.2에 제시된다. 종합하면, mAb 555는 바이러스 감염성의 강력한 억제제인 것으로 나타났으며, USA/WA/1/2020 임상 분리주의 경우 추정치 IC50 = 0.03 μg/mL (95% CI: 0.01 μg/mL, 0.12 μg/mL) 및 IC99 = 0.43 μg/mL (95% CI: 0.13 μg/mL, 1.43 μg/mL)이고, 이탈리아-INMI1 임상 분리주의 경우 추정치 IC50 = 0.05 μg/mL (95% CI: 0.04 μg/mL, 0.05 μg/mL) 및 IC99 = 1.42 μg/mL (95% CI: 0.94 μg/mL, 2.13 μg/mL)이다. IC99는 mAb 555에 대해서만 계산하였다.
표 9.1: mAb 555, 419, 481, 488, 373에 의한 USA/WA/1/2020 분리주의 중화 검정의 결과
Figure pct00145
표 9.2: mAb 555에 의한 이탈리아-INMI1 분리주의 중화 검정의 결과
Figure pct00146
표 9.3: 다른 항-SARS-CoV-2 mAb의 중화 검정의 결과
Figure pct00147
실시예 10
공지된 돌연변이를 갖는 SARS-CoV-2 스파이크 단백질에 대한 항-SARS-CoV-2 항체 555의 결합
mAb 555에 의한 결합 및 중화를 손상시킬 수 있는 바이러스 집단에서 발생하는 돌연변이를 확인하기 위해, 사내 바이러스 감시 생물정보학 작업흐름을 확립하였다. SARS-CoV-2의 서열을 GISAID 데이터베이스 (Elbe, S., and Buckland-Merrett, G., 2017, Global Challenges, 1: 33-46)로부터 4일마다 전장 DNA 서열로서 다운로드한 다음, 맞춤형 매트랩(MATLAB)® (매스웍스(MathWorks)) 스크립트를 통해 프로세싱하여 스파이크 서열을 정렬하고, 균주 hCoV-19/우한/IVDC-HB-01/2019 (EPI_ISL_402119)로부터의 참조 스파이크 단백질 서열에 비해 돌연변이 정보를 추출하였다. 생물정보학 도구 넥스트스트레인(Nextstrain) (Hadfield et al., 2018, Bioinformatics; 34(23), 4121-4123)에 의해 생성된 임의적인 환자 메타데이터를 사용하여 서열 데이터를 보충하였다. 서열이 스파이크 단백질의 >5% 모호한 염기를 함유하거나, 참조 스파이크에 대해 <80% DNA 동일성을 갖거나, 또는 다수의 결실 또는 삽입된 염기를 함유하며, 이들 모두가 항원 소변이보다는 서열분석 오류를 나타내는 경우에, 이들 서열을 폐기하였다. 매트랩® 스크립트는 돌연변이의 빈도, 돌연변이된 잔기의 코돈, 잠재적 돌연변이, 순환에서의 지속기간 및 균주 분리의 위치를 요약하기 위해 필터링된 데이터를 분석하였다. mAb 555에 의한 심층 결합 특징화를 위해 고려되는 스파이크 돌연변이에 대해, 하기 한계값을 사용하였다: 돌연변이는 >5회 나타나야 하고, >1개 위치로부터 단리되어야 하고, >13일 동안 순환되어야 하고, 수용체 결합 도메인 (RBD, 잔기 329-520) 내에 존재해야 한다.
SARS-CoV-2 변이체의 수용체 결합 도메인에서 발생한 돌연변이가 발생 횟수와 함께 표 10.1에 열거된다. RBD 돌연변이는 드물고, 기탁된 서열의 0.5%에서 집합적으로 나타난다.
전장 SARS-CoV-2 스파이크 단백질로 결합 실험을 수행하였다. 현탁 CHO 세포를 전기천공을 사용하여 플라스미드로 일시적으로 형질감염시켰다. 유동 세포측정법을 사용하여 상이한 줄기 및 머리 도메인을 표적화하는, SARS-CoV에 대해 발견된 기준 항체로 시험함으로써, 전장 스파이크 단백질 발현 (원래의 우한 참조 서열을 사용함)을 확인하였다. 추가로, 전세포 및 형질 막 분리주로 웨스턴 블롯을 수행하여 세포 표면 상의 전장 단백질 발현을 확인하였다. 고처리량 유동 세포측정법을 사용하여 스크리닝 표적 (SARS-CoV-2 전장 스파이크)에 결합하는 mAb 555를 확인하였다. CHO 세포를 일시적으로 형질감염시켜 참조 서열 또는 SARS-CoV-2 스파이크 단백질의 돌연변이체의 전장 스파이크 단백질을 세포 표면 상에 발현시켰다. mAb 555를 판독 세포 및 비형질감염 대조군 CHO 세포주와 함께 50 nM 항체 농도로 4℃에서 30분 동안 인큐베이션하였다. CHO 세포를 세척하고, 형광 표지된 항-인간 2차 항체를 사용하여 결합을 검출하였다. 고처리량 플레이트-기반 유동 세포측정법을 사용하여 형광을 측정하였다. SARS와 SARS-CoV-2 사이의 스파이크 서열의 유사성으로 인해 SARS에 대해 확인된 기준 항체를 양성 대조군으로서 사용하였으며; 인간 IgG 이소형 및 비관련 항체를 음성 대조군으로서 사용하였다. 각각의 항체의 중앙 형광 강도를 각각의 항원에 대한 인간 이소형 대조군의 중앙 형광 강도에 대해 정규화하였다. 이소형 대비 5배 초과의 항체 값을 결합제로서 간주하였다. 음성 대조군에 대한 결합에 기초하여 컷-오프 값을 결정하였다.
mAb 555는 시험된 돌연변이 중 3개에 결합할 수 있었다 (표 10.2). 관찰된 돌연변이 중에서, 2개의 돌연변이된 잔기 (G476S 및 V483A)만이 mAb 555에 대한 에피토프 내에 존재한다. 이들 중 발생한 제1 돌연변이인 V483A를 단리된 수용체 결합 도메인 내로 혼입시키고, mAb 555에 대한 이 시약의 결합 친화도를 상기 기재된 바와 같이 시험하였다. 이 실험에서, mAb555는 참조 수용체 결합 도메인 및 V483A 돌연변이를 함유하는 돌연변이된 도메인 둘 다에 유사한 친화도로 결합하였다 (표 10.3).
표 10.1: 2020년 4월 28일 당시 GISAID 데이터베이스에 기초한 검출 한계값 내에서 관찰된 SARS-CoV-2 스파이크 단백질의 수용체 결합 도메인 (잔기 329 - 520) 내의 돌연변이 빈도.
Figure pct00148
표 10.2: 고처리량 유동 세포측정법에 의한 전장 SARS-CoV-2 스파이크 단백질의 돌연변이체 형태에 대한 mAb 555의 결합
Figure pct00149
표 10.3: 표면 플라즈몬 공명 (카르테라® LSA)에 의해 측정된, mAb 555의 결합 친화도에 대한 V483A 돌연변이의 효과
Figure pct00150
실시예 11
mAb 555의 코딩 유전자의 핵산 서열 및 번역된 아미노산 서열
비-코딩 서열은 이탤릭체이다. ms카파 ss에 대한 DNA 코딩 서열은 실선으로 밑줄표시된다. 가변 도메인에 대한 DNA 코딩 서열은 볼드체이다. 인간 카파 불변 도메인에 대한 DNA 코딩 서열은 보통체이다. 번역 정지 코돈에 대한 DNA 코딩 서열은 이탤릭체로 표시되고, 실선으로 밑줄표시된다.
mAb 555 HC를 코딩하는 DNA 서열
Figure pct00151
비-코딩 서열은 이탤릭체이다. ms카파 ss를 코딩하는 DNA는 실선으로 밑줄표시된다. 항-SARS-CoV-2 HC의 가변 도메인을 코딩하는 DNA는 볼드체이다. 인간 IgG1 불변 도메인에 대한 DNA 코딩 서열은 보통체이다. 번역 정지 코돈에 대한 DNA 코딩 서열은 이탤릭체로 표시되고, 실선으로 밑줄표시된다.
mAb 555 LC를 코딩하는 DNA 서열
Figure pct00152
비-코딩 서열은 이탤릭체이다. ms카파 ss에 대한 DNA 코딩 서열은 실선으로 밑줄표시된다. 가변 도메인에 대한 DNA 코딩 서열은 볼드체이다. 인간 카파 불변 도메인에 대한 DNA 코딩 서열은 보통체이다. 번역 정지 코돈에 대한 DNA 코딩 서열은 이탤릭체로 표시되고, 실선으로 밑줄표시된다.
mAb 555 HC에 대한 추정 성숙 아미노산 서열 (서열식별번호: 5363)
Figure pct00153
가변 도메인은 볼드체이고, 인간 IgG1 G1m3 불변 쇄는 보통체이다. IgG1 힌지 영역은 밑줄표시된다. CDR 서열은 경계를 사용하여 제시된다.
mAb 555 LC에 대한 추정 성숙 아미노산 서열 (서열식별번호: 5364)
Figure pct00154
가변 도메인은 볼드체이고, 인간 카파 불변 도메인은 보통체이다. CDR 서열은 경계를 사용하여 제시된다.
표 11-1: mAb 555-HC 및 LC CDR 서열
Figure pct00155
다른 예시적인 항체의 CDR 서열이 하기 표 11-2에 제시된다.
표 11-2
Figure pct00156
Figure pct00157
Figure pct00158
Figure pct00159
Figure pct00160
Figure pct00161
Figure pct00162
Figure pct00163
Figure pct00164
Figure pct00165
Figure pct00166
Figure pct00167
Figure pct00168
실시예 12
선택 항-SARS-CoV-2 항체의 X선 결정학 분석
항-SARS-CoV-2 Fab 555, 481 및 488 (모두 RBD 결합제)의 X선 결정학 분석을 하기와 같이 수행하였다. 555 Fab-RBD 복합체의 12 mg/mL 용액을 100 mM 아세트산나트륨 pH 4.6 및 20% PEG 10K의 웰 용액과 1:1의 비로 증기 확산 시팅 드롭으로 설정하였다. 결정은 2일 내에 나타났고, 설정 후 제3일에 수거하였다. 481 Fab-RBD 복합체의 11.5 mg/mL 용액을 100 mM 시트르산삼나트륨 pH=5.8 및 14% PEG 4K 및 10% 2-프로판올의 웰 용액과 1:1의 비로 증기 확산 시팅 드롭으로 설정하였다. 결정은 2일 내에 나타났고, 설정 후 제4일에 수거하였다. 488 Fab-RBD 복합체의 11.7 mg/mL 용액을 100 mM HEPES pH=7.7 및 8% PEG 3350 및 200 mM L-프롤린의 웰 용액과 1:1의 비로 증기 확산 시팅 드롭으로 설정하였다. 결정은 1일 내에 나타났고, 2일 내에 그의 전체 크기로 성장하였다. 이들을 설정 후 제3일에 수거하였다. 결정을, 모액 중 25% 글리세롤을 함유하는 동결보호제 용액 중에서 1분 인큐베이션한 후, 액체 질소 중에서 급속-동결시켰다.
릴리 리서치 래보러토리즈 콜라보러티브 액세스 팀 (Lilly Research Laboratories Collaborative Access Team; LRL-CAT) 및 일리노이주 시카고 소재의 아르곤 국립 연구소의 어드밴스드 포톤 소스의 섹터 31의 빔라인에서 회절 데이터를 수집하였다. 액체 질소 중에 저장된 결정을 100°K의 온도에서 유지된 옥스포드 크리오시스템즈(Oxford Cryosystems) 저온유지장치가 장착된 측각기 상에 탑재하였다. 사용된 파장은 0.9793Å이었으며, 이는 필라투스(Pilatus)3 S 6M 검출기 상에서 392 mm의 거리에서 0.2도 진동각 및 0.12초의 노출 시간에 900개의 회절 영상을 수집한다. 회절 데이터를 오토 PROC/XDS를 사용하여 인덱싱 및 통합하고, CCP4 스위트로부터의 AIMLESS (Vonrhein, Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 67, 293-302, 2011; Kabsch, Acta crystallographica. Section D, Biological crystallography 66, 133-144, 2010; Evans, Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 69, 1204-1214, 2013; Winn, Acta crystallographica. Section D, Biological crystallography 67, 235-242, 2011)에서 병합 및 스케일링하였다.
비-동형 데이터는 독점적 일라이 릴리 구조 데이터베이스로부터의 Fab 부분 결정 구조 및 SARS2 스파이크 RBD에 대해 액세스 코드 6yla를 갖는 공공 도메인 구조를 사용하여 분자 대체에 의해 초기 구조를 용이하게 산출하였다 (Huo et al., "Neutralization of SARS-CoV-2 by Destruction of the Prefusion Spike." Cell Host and Microbe 28(3): 445-454 (2020)). 등방성 온도 인자를 적용하는 Refmac5 (CCP4)를 사용하여 각각의 데이터세트에 대한 초기 구조 좌표를 추가로 정밀화하였다. Coot (CCP4)로 모델 구축을 수행하고, MolProbity (Chen et al., Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 66: 12-21, 2010) 및 CCP4 검증 도구로 최종 구조 검증을 수행하였다.
SARS-CoV-2 스파이크 단백질 RBD와 복합체화된 Fab 481, 488 및 555의 결정 구조가 도 9a에 제시된다. Fab 481 및 488은 ACE2 결합 부위를 거의 완전히 가리는 거의 동일한 방식으로 결합한다. 이 결합 부위는 RBD의 "상향" 입체형태에서 접근가능할 것으로 예상된다. Fab 555는 ACE2 결합 부위와 약간 중첩되는 RBD 상의 상이한 에피토프에 결합한다 (도 9b). Fab 555의 에피토프 (도 9c 및 9d)는 RBD의 "상향" 및 "하향" 입체형태 둘 다에서 완전히 접근가능한 것으로 예측된다. 이러한 예측은 단일 SARS-CoV-2 스파이크 단백질에 결합된 3개의 555 Fab의 복합체가 상향 및 하향 입체형태 둘 다에서 관찰된 고해상도 극저온-EM 영상화에 의해 확인된다 (도 9e 및 9f).
Fab 555, 481 및 488에 대한 상세한 에피토프 분석을 하기와 같이 수행하였다. 케미칼 컴퓨팅 그룹 (CCG)으로부터의 몰레큘라 오퍼레이팅 인바이런먼트 (MOE) 소프트웨어를 사용하여 접촉 표면적을 측정하고 (분자 접촉 표면 분석 SVL 스크립트를 사용함) 도면을 생성하였다. CCP4 접촉 소프트웨어를 사용하여 반 데르 발스 및 수소 결합 상호작용의 수 (표 12.1, 12.2 및 12.3에서 각각 괄호 안의 수)를 확인하였다. 3.5 Å (옹스트롬)의 거리 컷오프를 수소 결합 상호작용에 대해 사용하고, 4.5 Å의 거리 컷오프를 반 데르 발스 접촉에 대해 사용하였다. 항체/Fab의 임의의 잔기에 대해 4.5 Å 내에 있는 적어도 1개의 원자를 갖는 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 잔기를 항체/Fab에 대한 에피토프의 일부로 간주하였다.
표 12.1에 제시된 바와 같이, Fab/mAb 555의 에피토프는 SARS-CoV-2 스파이크 단백질의 하기 아미노산 잔기 중 1개 이상을 포함한다: Y351, Y449, N450, L452, L455, F456, T470, I472, N481, G482, V483, E484, G485, F486, Y489, F490, L492, Q493, S494 (잔기 위치는 서열식별번호: 5317에 상응함).
표 12.2에 제시된 바와 같이, Fab/mAb 481의 에피토프는 SARS-CoV-2 스파이크 단백질의 하기 아미노산 잔기 중 1개 이상을 포함한다: R403, D405, R408, Q409, T415, G416, K417, D420, Y421, Y453, L455, F456, R457, K458, S459, N460, Y473, Q474, A475, G476, F486, N487, Y489, Q493, S494, Y495, G496, Q498, T500, N501, G502, Y505 (잔기 위치는 서열식별번호: 5317에 상응함).
표 12.3에 제시된 바와 같이, Fab/mAb 481의 에피토프는 SARS-CoV-2 스파이크 단백질의 하기 아미노산 잔기 중 1개 이상을 포함한다: R403, T415, G416, K417, D420, Y421, L455, F456, R457, K458, S459, N460, Y473, Q474, A475, G476, S477, F486, N487, Y489, N501, G502, Y505 (잔기 위치는 서열식별번호: 5317에 상응함).
표 12.1: SARS-CoV-2 스파이크 단백질 잔기와 Fab 555 잔기 사이의 상호작용
Figure pct00169
표 12.2: SARS-CoV-2 스파이크 단백질 잔기와 Fab 481 잔기 사이의 상호작용
Figure pct00170
표 12.3: SARS-CoV-2 스파이크 단백질 잔기와 Fab 488 잔기 사이의 상호작용
Figure pct00171
실시예 13
SARS-CoV-2 감염의 레서스 마카크 모델
바이러스 챌린지로부터 보호하는 mAb 555 (LY-CoV555로도 공지됨)의 능력을 평가하기 위해, 레서스 마카크에게 바이러스 챌린지 24시간 전 1 mg/kg, 2.5 mg/kg, 15 mg/kg 또는 50 mg/kg의 mAb 555 또는 50 mg/kg의 IgG1 대조군 항체를 정맥내로 (IV) 투여하였다. 레서스 마카크에 총 1.1x105 TCID50의 SARS-CoV-2 (USA-WA1/2020)를 비강내로 및 기관내로 접종하고, 연구 전반에 걸쳐 1일 2회 케이지-측 관찰 및 호흡기 검사에 의해 모니터링하였다. 마카크에서 질환의 호흡기 및 임상 징후는 제한적이었고, 제6일에 수집된 육안 부검 관찰은 경도였다. 기관지폐포 세척액 (BAL), 비강 및 인후 스왑을 바이러스 챌린지 (연구 제0일) 후 제1일, 제3일 및 제6일에 수집하였다. 활성 바이러스 복제를 나타내는 바이러스 게놈 (gRNA) 및 서브게놈 RNA (sg mRNA)가 SARS-CoV-2의 비강내 및 기관내 접종 후 모든 동물에 대해 BAL, 인후 스왑 및 비강 스왑에서 검출가능하였다 (도 10a-10h).
모든 LY-CoV555-처리군의 상기도 및 하기도에서 바이러스 로드의 상당한 감소가 입증되었다 (도 10a, 10c, 10e, 10g 및 표 13.1). BAL 및 인후 스왑에서, LY-CoV555 처리는 접종 1일 후에 gRNA의 1.5 내지 5-log 감소를 유발하였으며, 15 mg/kg (BAL) 및 2.5, 15 및 50 mg/kg (인후)에서 유의성 (q-값 <0.05)을 가졌다. 2.5, 15 및 50 mg/kg 용량의 LY-CoV555는 제3일 및 제6일에 BAL 및 비강 gRNA의 유의한 감소 (q-값 <0.05)를 나타냈다. BAL gRNA와 일치하게, 제6일 폐 조직 또한 2.5 mg/kg 이상의 LY-CoV555의 용량에서 gRNA의 유의한 감소 (q-값 <0.05)를 나타냈다. gRNA의 전체 감소는 용량-관련되었으며, 최대 보호는 2.5 mg/kg 이상의 용량에서 관찰되었다. 바이러스 로드 결정에 추가로, 제3일 및 제6일로부터의 BAL 샘플을 차세대 서열분석에 의한 전체 게놈 서열분석에 적용하였다. 게놈 변이체를 확인하는 데 충분한 커버리지를 갖는 샘플 (N=12) 중에서, 참조와 비교하여 LY-CoV555 또는 RBD 도메인에서 서열 변경이 검출되지 않았다 (표 13.1).
서브게놈 RNA 분석은 바이러스 복제에 대한 LY-CoV555 처리의 현저한 영향을 입증하였다 (도 10b, 10d, 10f, 10h 및 표 13.1). 제1일 BAL, 인후 및 비강 샘플에서, 모든 LY-CoV555 처리군에 대해 sgRNA의 1-4 log 감소가 관찰되었으며, 인후의 모든 군에서 및 BAL 및 비강 샘플의 1, 2.5 및 15 또는 50 mg/kg 군에서 유의성 (q-값 <0.05)이 관찰되었다. 주목할 만하게, 제3일에 BAL 및 비강 샘플에서의 sgRNA는 2.5-50 mg/kg LY-CoV555를 투여한 동물에서 검출불가능하였으며, 대조군에 비해 유의한 3-4 log 감소가 관찰되었다 (q-값 <0.05). 제6일에, 폐 조직에서 2.5 내지 50 mg/kg 용량 수준에서 sgRNA의 유의한 감소가 나타났다 (q-값<0.05). 종합하면, 이들 데이터는 비-인간 영장류 모델에서 mAb 555에 의한 SARS-CoV-2의 강력한 중화를 보여준다.
모델의 용량-반응 평가를 뒷받침하기 위해, LY-CoV555의 혈청 농도를 ELISA에 의해 평가하였다. LY-CoV555는 IV 투여 후 지속적인 혈청 농도를 나타냈으며, 이는 비-인간 영장류 모델에서 인간 IgG에 대한 예상 약동학과 일치한다 (표 13.2). 혈청 LY-CoV555의 용량 반응성 농도는 폐, 인후 및 비도에서의 바이러스 로드의 용량-관련 감소와 일치하였다. 중요하게는, 2.5 mg/kg 이상의 용량에서의 LY-CoV555의 혈청 농도가 이 레서스 마카크 감염 모델에서의 최대 보호와 연관되었고, 낮은 mg/kg 용량 수준에서 강력한 생체내 활성을 명확하게 입증하였다. 비강 스왑에서의 바이러스 로드에 대한 영향 지연은 폐 또는 인후 대비 비강 상피 내층액 내로의 항체의 보다 느린 분포를 반영할 수 있다.
표 13.1: SARS-CoV-2 챌린지된 레서스 마카크에서의 바이러스 로드에 대한 mAb 555 (LY-CoV555)의 영향에 대한 통계적 분석.
Figure pct00172
표 13.2: SARS-CoV-2 챌린지 모델에서 레서스 마카크에게 mAb 555 또는 대조군 IgG를 정맥내 투여한 후 혈청 총 인간 IgG 농도 및 AUC0-6일.
Figure pct00173
레서스 마카크 연구를 위한 방법
SARS-CoV-2 감염의 레서스 마카크 모델을 문헌 [Chandrashekar et al., Science 2020]의 방법에 따라 수행하였다. 이 연구는 동물 복지 요건 및 인증에 따라 바이오퀄 인크.(BioQual Inc.)의 동물 실험 윤리 위원회에 의해 승인되었다. 동물의 수용 및 취급은 하기 AAALAC 국제 참고문헌 자료의 표준에 따라 수행하였다: 개정된 동물 복지법, 실험 동물의 관리 및 사용에 대한 지침 제8판, 및 실험 동물의 인간 관리 및 사용에 대한 공중 보건 서비스 (PHS) 2015년 재판. 샘플 및 동물의 취급은 문헌 미생물 및 생물의학 실험실에서의 생물안전성 (BMBL), 제5판 (질병 통제 센터)에 따랐다. 인도 기원의 나이브 암컷 레서스 마카크 (목적 사육, 프라임젠(PrimGen)으로부터의 마카카 물라타(Macaca mulatta), 8-12세)에게 1, 2.5, 15 또는 50 mg/kg의 LY-CoV555 또는 50 mg/kg의 IgG1 대조군 항체를 느린 정맥내 볼루스에 의해 투여하였다 (군당 N= 3 또는 4마리의 동물). 연구 제0일 (항체 투여 1일 후)에, 원숭이는 0.5 mL/비공 (IN)으로서 및 1.0 mL 기관내로 (IT) 나누어 투여된 2 mL 부피 중 1.1 x10^5 PFU SARS-CoV-2 USA-WA1/2020의 바이러스 챌린지를 받았다. 생존 단계 파라미터를 부검에 의해 연구전 모니터링하였다 (제6일). COVID 특이적 관찰을 의식있는 동물에서 매일 수집하여 전체 건강 및 안녕을 모니터링하고, 수의학적 개입 및/또는 안락사에 대한 필요를 결정하였다. COVID 관찰을 0 내지 10의 척도로 점수화하였으며, 이는 호흡률 및 호흡곤란, 전체 외관, 활성 및 반응성의 척도를 포함하였다. 임상 관찰을 케이지-측에서 1일 2회 평가하였으며, 이는 전체 동물 외관, 분변 점조도 및 욕구의 평가를 포함하였다. 체중 및 직장 체온을 마취된 동물에서 매일 측정하였다. 연구 제6일의 종결 시, 폐에서의 육안 관찰을 공인된 수의학 병리학자에 의해 평가하였다.
기관지폐포 세척액 (BAL), 비강 및 구강 스왑을 제1일, 제3일 및 제6일에 수집하고, 폐 조직 샘플 (부검 시, 제6일)을 수집하여, 보고된 바와 같이 수행되는 qRT PCR을 통해 게놈 및 서브게놈 바이러스 RNA를 평가하였다 (Chandrashekar et al., Science 2020). 게놈 및 서브-게놈 RNA 카피에 대한 검출 하한치는 50이었다. 값이 검정에서 검출 하한치 미만인 경우에, 25 (정량화 한계의 1/2)의 값을 계산에 사용하였다. 총 인간 IgG ELISA 검정에 의한 LYCoV-555 농도의 결정을 위해 혈청 샘플을 또한 수집하였다.
실시예 14
추가의 항-SARS-CoV-2 항체의 특징화
추가의 항-SARS-CoV-2 항체를 실시예 3-6, 9 및 10에 기재된 방법을 사용하여 특징화하였다. 스파이크 단백질 결합, ACE2 차단 및 결합 친화도 결정을 실시예 4에 기재된 방법을 사용하여 수행하였다. 유사중화 검정을 실시예 6에 기재된 방법을 사용하여 수행하였다. 경쟁적 결합 검정을 실시예 4에 기재된 에피토프 비닝 검정과 유사한 방법을 사용하여 수행하였다. 결과가 표 14-1에 제시된다.
SARS-CoV-2 바이러스 임상 분리주 USA/WA/1/2020으로 감염된 배양된 Vero E6 세포를 사용하여 실험실 4에서 생 바이러스 중화 검정을 수행하였다. SARS-CoV-2 바이러스와 시험 항-SARS-CoV-2 항체의 예비-혼합된 용액을 Vero E6 세포에 첨가하고, 37℃에서 24시간 동안 인큐베이션함으로써, 비-중화 SARS-CoV-2 바이러스가 복제되도록 하였다. 표준 면역염색 기술을 사용하여 검출된 바와 같이 바이러스 뉴클레오캡시드 단백질의 생산은 감소되었다. IC50을 계산하였으며, 결과가 표 14-1에 제시된다.
표 14-1: 선택 항-SARS-CoV-2 mAb의 활성
Figure pct00174
실시예 15
플라크 감소 중화 시험
Vero 76/E6 세포를 검정 48시간 전에 24-웰 플레이트에 시딩하였다. 75 플라크 형성 단위 (pfu)의 감염성 클론 hCoV-19/캐나다/ON_ON-VIDO-01-2/202를 선택 항-코로나 항체의 연속 희석물과 혼합하고, 37℃에서 60분 동안 인큐베이션하였다. 바이러스와 항체의 혼합물을 각각의 웰에 첨가하고, 37℃ + 5% CO2 인큐베이터에서 10-15분마다 요동시키면서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 플라크 검정 배지 (1% BGS + 1% 저융점 아가로스를 함유하는 완전 MEM 배지)를 접종물 상단에 오버레이하고, 37℃ + 5% CO2 인큐베이터에서 48시간 동안 인큐베이션하였다. 플라크 가시화를 위해, MEM-뉴트럴 레드 오버레이를 제2일에 첨가하고, 플라크를 제3일 또는 제4일에 수동으로 계수하였다. 결과가 표 15-1에 제시된다.
표 15-1: 선택 항-코로나바이러스 항체에 대한 IC50 값
Figure pct00175
mAb 555 및 1404에 대한 곡선이 도 11에 제시된다. 각각의 항체의 IC50은 X-축 위의 하부 우측 코너에 제공된다.
실시예 16
면역형광 검정
연방 및 기관 생물안전성 표준 및 규정에 따라 USAMRIID의 BSL-3 실험실에서 진정한 SARS-CoV-2를 사용한 모든 연구를 완료하였다. Vero 76/E6 세포를 SARS-CoV-2 (진뱅크 MT020880.1)로 MOI = 0.01로 접종하고, 5% CO2 및 80% 습도 하에 37℃에서 인큐베이션하였다. 감염 50시간 후에, 세포를 -80℃에서 1시간 동안 동결시키고, 실온에서 해동되도록 하고, 상청액을 수집하고, ~2,500 x g로 10분 동안 원심분리하여 정화하였다.
최종 감염 다중도 0.2로 사전-적정된 양의 진정한 SARS-CoV-2/MT020880.1을 모노클로날 항체의 연속 희석물과 함께 37℃에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 항체-바이러스 혼합물을 96-웰 플레이트 내 Vero-E6 세포의 단층에 적용하고, 가습 인큐베이터에서 37℃에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 이어서, 감염 배지를 제거하고, 세포를 1X PBS로 1회 세척하고, 이어서 새로운 세포 배양 배지를 첨가하였다. 배양 배지를 감염 24시간 후에 제거하고, 세포를 1X PBS로 1회 세척하였다. PBS를 제거하고, 플레이트를 포르말린 고정 용액에 침지시킨 다음, 0.2% 트리톤-X를 실온에서 10분 동안 투과시키고, 차단 용액으로 처리하였다. SARS-CoV-2 뉴클레오캡시드 단백질을 인식하는 1차 검출 항체 (시노 바이올로지칼(Sino Biological))를 사용하여, 알렉사플루오르 488에 접합된 2차 검출 항체 (염소 α 토끼)로의 염색 후에, 감염된 세포를 검출하였다. 오페레타(Operetta) 고성능 영상화 기기를 사용하여 감염된 세포를 계수하고, 하모니 소프트웨어 (퍼킨 엘머)를 사용하여 데이터 분석을 수행하였다. 결과가 표 16-1에 제시된다.
표 16-1: 선택 항-코로나바이러스 항체에 대한 IC50 값
Figure pct00176
mAb 555 및 1404에 대한 곡선이 도 12에 제시된다. 각각의 항체의 IC50은 X-축 위의 하부 우측 코너에 제공된다.
실시예 17
표면 플라즈몬 공명 (SPR) 실험
표면 플라즈몬 공명 (SPR) 포획 실험을 CM5 칩 유형 (시티바(Cytiva), 미국)이 장착된 비아코어(BIACORE)® 8K 기기 상에서 수행하였다. 기기는 1개의 마이크로유체 모듈, 8개의 다중-유동 채널을 사용하여, 설정 유량 및 농도에서 샘플의 단방향 유동을 통해 칩 표면에 샘플을 전달한다. 칩은 8개의 유동 셀을 함유하며, 즉 8개 이하의 리간드가 동시에 포획 및 분석될 수 있다.
포획 분자인 스트렙-탁틴(STREP-TACTIN)®XT를 직접 커플링에 의해 비아코어® CM5 칩 상에 고정화시켰다. 먼저 100 mM S-NHS, 400 mM EDC의 새로 제조된 1:1 활성화 믹스를 10분 동안 10 μL/분의 유량으로 유동시킴으로써 칩 표면을 활성화시켰다. 스트렙-탁틴®XT를 10 mM 아세트산나트륨 완충제 중에 50 μg/mL로 희석한 다음, 모든 8개의 채널을 사용하여 10분 동안 10 μL/분의 유량으로 주입하였다. 칩을 HBS-EP+ (10 mM HEPES, 150 mM NaCl, 3 mM EDTA 및 0.05% v/v 계면활성제 P20)로 1분 동안 30 μL/분의 유량으로 세척하였다. 최종적으로, 1 M 에탄올아민을 10분 동안 10 μL/분의 유량으로 유동시키고, 이어서 10 mM NaOH 완충제 중에서 10 μL/분의 유량으로 각각 30초의 3회 컨디셔닝 단계를 수행하여 과량의 반응성 에스테르를 켄칭하였다.
항체의 콤보 결합 검정을 본원에 기재된 바와 같이 비아코어® 기기 상에서 상기와 같이 제조된 CM5 칩을 사용하여 수행하였다.
스트렙 태그를 디스플레이하는 관심 항원을 HBS-EP+ 완충제 (상기와 같음) 중에 5 nM로 희석한 다음, 스트렙-탁틴®XT가 코팅된 CM5 칩 상에 30초 동안 10 μL/분의 유량으로 유동시켰다. 칩을 HBS-EP+로 30초 동안 10 μL/분의 유량으로 세척하였다. 관심 mAb를 HBS-EP+ 완충제 중에 200 nM로 희석하였다. 각각의 콤보에 대해, 2종의 mAb (mAb A 및 B)를 각각 2분 동안 10 μL/분의 유량으로 순차적으로 주입함으로써 콤보 결합을 평가하였다. 각각의 콤보에 대해, 대조군을 존재하는 단지 1종의 항체 (항체 A-단독 및 항체 B-단독)와 함께 실행하였다. 8개의 콤보를 8개의 채널을 사용하여 동시에 시험하여, 1 사이클을 형성하였다. 3M GuHCl을 30 μL/분의 유량으로 칩 표면 상에 주입함으로써 각각의 사이클 사이에 60초의 1회의 재생 단계를 수행하였다.
비아코어® 인사이트 평가 소프트웨어를 사용하여 데이터를 분석하였다. 각각의 조합에 대해, 항체 B에 대한 결합 신호를 항체 B-단독 신호 평균이 1과 등가이도록 하는 항체 B-단독 대조군에 대한 결합 신호에 대해 정규화하였다. 0.8의 한계값을 사용하여 항체를 2개의 카테고리, 즉 차단제 (한계값 미만의 신호를 갖는 항체의 경우) 및 비-차단제 (한계값 초과의 신호를 갖는 항체의 경우)로 분류하였다. 결과가 표 17-1에 제시된다. 항-SARS-CoV-2 항체 555, 894, 1037, 1075, 1404 및 1495가 본원에 기재된다. CB6 (에테세비맙)은 이전에 기재된 항-SARS-CoV-2 항체이다. VIR S309는 비어 바이오테크놀로지로부터의 항-SARS-CoV-2 항체이다. 4A8은, 예를 들어 문헌 [Chi et al., "A neutralizing human antibody binds to the N-terminal domain of the Spike protein of SARS-CoV-2." Science. 07 Aug 2020: 650-655]에 기재된 항-SARS-CoV-2 항체이다. Opti373 (373(H24/L2))은 일라이 릴리로부터 입수한 친화도 성숙 항체이다.
표 17-1: 비아코어® 결과
Figure pct00177
본 발명이 특정한 실시양태를 참조하여 개시되었지만, 본원에 개시된 본 발명의 다른 실시양태 및 변형이 그의 진정한 취지 및 범주로부터 벗어나지 않으면서 관련 기술분야의 다른 통상의 기술자에 의해 고안될 수 있다는 것이 분명하다. 첨부된 청구범위는 모든 이러한 실시양태 및 등가의 변형을 포함한다.
SEQUENCE LISTING <110> AbCellera Biologics Inc. <120> Anti-Coronavirus Antibodies and Methods of Use <130> 2705-0016WO01 <150> 62/987,313 <151> 2020-03-09 <150> 63/010,999 <151> 2020-04-16 <150> 63/030,530 <151> 2020-05-27 <150> 63/036,089 <151> 2020-06-08 <150> 63/080,351 <151> 2020-09-18 <150> 63/085,042 <151> 2020-09-29 <150> 63/116,483 <151> 2020-11-20 <160> 5782 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 345 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 1 caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcggagac cctgtccctc 60 acctgcactg tctctggtgg ctccatcagt agttactact ggagctggat ccggcagccc 120 gccgggaagg gactggagtg gattgggcgt atctatacca gtgggagcac caactacaac 180 ccctccctca agagtcgagt caccatgtca gtagacacgt ccaagaacca gttctccctg 240 aagctgagct ctgtgaccgc cgcggacacg gccgtgtatt actgtgcggc aggctatggt 300 tcgattgact actggggcca gggaaccctg gtcaccgtct cctca 345 <210> 2 <211> 336 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 2 gatattgtga tgactcagtc tccactctcc ctgcccgtca cccctggaga gccggcctcc 60 atctcctgca ggtctagtca 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gggaaagccc ctaagcgcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagcg gcagtggatc tgggacagaa ttcactctca caatcagcag cctgcagcct 240 gaagattttg caacttatta ctgtctacag cataatagtt accctcagac ttttggccag 300 gggaccaagc tggagatcaa a 321 <210> 5 <211> 369 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 5 gaagtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggcaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttgat tattatgcca tgcactgggt ccggcaagct 120 ccagggaagg gcctggagtg ggtctcaggt attagttgga atagtggtac cataggctat 180 gcggactctg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa ctccctgtat 240 ctgcaaatga acagtctgag agctgaggac acggccttgt attactgtgc aaaagatagt 300 cgaccatcgg ggcggtacta ctacggtatg gacgtctggg gccaagggac cacggtcacc 360 gtctcctca 369 <210> 6 <211> 321 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 6 gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgcc aggcgagtca ggacattagc aactatttaa attggtatca gcagaaacca 120 gggaaagccc ctaagctcct gatctacgat gcatccaatt tggaaacagg ggtcccatca 180 aggttcagtg 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cctgcagcct 240 gaagattttg caacttatta ctgtctacag cataatagtt accctttcac tttcggccct 300 gggaccaaag tggatatcaa a 321 <210> 9 <211> 381 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 9 caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agctatgcta tgcactgggt ccgccaggct 120 ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatcatatg atggaagtaa taaatactac 180 gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agctgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagacggg 300 ggggaattac tatggttcgg ggagttagac tactacggta tggacgtctg gggccaaggg 360 accacggtca ccgtctcctc a 381 <210> 10 <211> 321 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 10 tcctatgagc tgacacagcc atcctcagtg tcagtgtctc cgggacagac agccaggatc 60 acctgctcag gagatgtact ggcaaaaaaa tatgctcggt ggttccagca gaagccaggc 120 caggcccctg tgctggtgat ttataaagac agtgagcggc cctcagggat ccctgagcga 180 ttctccggct ccagctcagg gaccacagtc accttgacca tcagcggggc ccaggttgag 240 gatgaggctg actattactg ttactctgcg gctgacaaca 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taacctcagc aactatgcta tgcactgggt ccgccagcca 120 tcaggcaagg ggctggagtg ggtgtcactt atatcatatg atggaagtat taaatattac 180 acagactccg tgaagggccg attcaccgtc tccggggaca attccaagaa cacactgttt 240 ctgcaaatga acagcctgcg acctgacgac tcggctcttt attactgtgt gaggggcggt 300 gtcagtggcc caaattcttt tgatatgtgg ggccaaggga caacggtcac cgtctcttcg 360 <210> 18 <211> 336 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 18 gatgttgtga tgactcagtc tccactctcc ctgcccgtca cccttggaca gccggcctcc 60 atctcttgca ggtctagtca aagcctcgta tacagtgatg gaaacaccta cgtgaattgg 120 tttcagcaga ggccaggcca atctccaagg cgcctaatct atcaggtttc tatccgggcc 180 tctggggtcc cagacagatt cagcggcagt gggtcaggca ctgatttcgc actgaaaatc 240 agcagggtgg aggctgagga tgttggggtt tattactgca tgcaaggtac acactggccg 300 gtgacgttcg gccaagggac caaggtggaa atcaaa 336 <210> 19 <211> 348 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 19 gaggtccacc tggtacagtc tggggctgag atgaagaagc ctggggctac agtgaaaatc 60 tcctgcaagg tttctggaaa caccttcatc gatcactaca ttcaatgggt gcaacaggcc 120 cccggaaaag ggtttgagtg gatgggactt gttgatcctg aagatggtga aacaatttac 180 gcagagaagt tccagggcag agtcaccata accgcggaca cgtctagaga cacagcctac 240 atggagctga gcagcctgaa atctgaagac acggccgtat attactgtgg aacgcacggt 300 gactaccttg actactgggg ccagggaacc ctggtcaccg tctcctca 348 <210> 20 <211> 318 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 20 ttctatgagc tgacacagcc atcctcagtg tcagtgtctc cgggacagac agccttgatt 60 acctgctcag gagatgtagt ggcaaaaaaa tatgctcggt ggtttcagca gaaggcaggc 120 caggcccctg tattggtgat ttataaagac actgagcggc cctcagggat ccctgagcga 180 atctccggct ccagctcagg gaccacagtc accttgacca tcagcggggc ccaggttgag 240 gatgaggctg actattattg ttactctgcg actgacaaca atctggtgtt cggcggaggg 300 accaaggtga ccgtctta 318 <210> 21 <211> 366 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 21 caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcacagac cctgtccctc 60 acctgcactg tctctggtgg ctccatcagc agtggtagtt actactggag ctggatccgg 120 cagcccgccg ggaagggact ggagtggatt gggcgtatct ataccagtgg gagcaccaac 180 tacaacccct ccctcaagag tcgagtcacc atatcagtag acacgtccaa gaaccagttc 240 tccctgaagc tgagctctgt gaccgccgca gacacggccg tgtattactg tgcgagggag 300 ctcgtaggag gtttattggg aactattgac tactggggcc agggaaccct ggtcaccgtc 360 tcctca 366 <210> 22 <211> 321 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 22 gacatccagt tgacccagtc tccatccttc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgcc gggccagtca gggcattagc agttatttag cctggtatca gcaaaaacca 120 gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccactt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagcg gcagtggatc tgggacagaa ttcactctca caatcagcag cctgcagcct 240 gaagattttg caacttatta ctgtcaacag cttaatagtt acccgtacac ttttggccag 300 gggaccaagc tggagatcaa a 321 <210> 23 <211> 393 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 23 cagctgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcggagac cctgtccctc 60 acctgcactg tctctggtgg ctccatcagc agtagtagtt actactgggg ctggatccgc 120 cagcccccag ggaaggggct ggagtggatt gggaatatct attatagtgg gagcacctac 180 tacaacccgt ccctcaagag tcgagtcacc atatccgtag acacgtccaa gaaccagttc 240 tccctgaagc tgagctctgt gaccgccgca gacacggctg tgtattactg 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gacatccagt tgacccagtc tccatccttc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgcc gggccagtca gggcattagc agttatttag cctggtatca gcaaaaacca 120 gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccactt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagcg gcagtggatc tgggacagaa ttcactctca caatcagcag cctgcagcct 240 gaagattttg caacttatta ctgtcaacag cttaatagtt accccccatt cactttcggc 300 cctgggacca aagtggatat caaa 324 <210> 475 <211> 372 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 475 cagatcacct tgaaggagtc tggtcctacg ctggtgaaac ccacacagac cctcacgctg 60 acctgcacct tctctgggtt ctcactcagc actagtggag tgggtgtggg ctggatccgt 120 cagcccccag gaaaggccct ggagtggctt gcactcattt attgggatga tgataagcgc 180 tacagcccat ctctgaagag caggctcacc atcaccaagg acacctccaa gaaccaggtg 240 gtccttataa tgaccaacat ggaccctgtg gacacagcca catattactg tgcacacagg 300 gatagcagca gctggttcga cttagatgct tttgatatct ggggccaagg gacaatggtc 360 atcgtctctt ca 372 <210> 476 <211> 330 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 476 cagtctgtgc tgactcagcc accctcggtg tctgaagccc ccaggcagag ggtcaccatc 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atttctgtgc gagagcgtct 300 gcgcgtccgg gtgttgcaac aaacttagac ttctggggcc agggaaccct ggtcgtcgtc 360 tcctca 366 <210> 656 <211> 321 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 656 gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgcc gggcaagtca gaatattgac aactatttaa attggtatca gcagaaacca 120 ggggaagccc ctaatctcct gatctatgct gcgtccagat tgcatagtgg ggtcccatca 180 aggttcagtg gcagtggatc tgggacagag tttactctca tcatcagcag tctacaacct 240 gaagatcttg caacttatta ctgtcaacag agttacagta atcctctcac tttcgcccct 300 gggaccaaag tggatatcag a 321 <210> 657 <211> 378 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 657 cagctgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctagtgaagc cttcggagac cctgtccctc 60 acctgcactg tctctggtgg ctccatcagc agtagtagtt actactgggg ctggatccgc 120 cagcccccag ggaaggggct ggagtggatt gggagtatct attatagtgg gagcacctac 180 tacaacccgt ccctcaagag tcgagtcacc atatcagtag acacgtccaa gaaccagttc 240 tccctgaagc tgagctctgt gaccgccgcg gacacggccg tgtattactg tgcgagcgaa 300 aaagtggatt tttggagtgg gggaccctac tacggtatgg 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agtcaccata accgcggaca cgtctacaga cacagcctac 240 atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc aatacccaga 300 tattttgact ggttattgtc tcggcactac ggtatggacg tctggggcca agggaccacg 360 gtcaccgtct cctca 375 <210> 1328 <211> 339 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 1328 gacatcgtga tgacccagtc tccagactcc ctggctgtgt ctctgggcga gagggccacc 60 atcaactgca agtccagcca gagtgtttta tacagctcca acaataagaa ctacttagct 120 tggtaccagc agaaaccagg acagcctcct aagctgctca tttactgggc atctacccgg 180 gaatccgggg tccctgaccg attcagtggc agcgggtctg ggacagattt cactctcacc 240 atcagcagcc tgcaggctga agatgtggca gtttattact gtcagcaata ttatagtact 300 cccgtcactt tcggccctgg gaccaaagtg gatatcaaa 339 <210> 1329 <211> 384 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 1329 caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaggc ctggggcctc agtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggata caccttcacc agttatgata tcaactgggt gcgacaggcc 120 actggacaag ggcttgagtg gatgggatgg atgaaccctt acagtggtaa cacaggctat 180 gcacagaagt ttcagggcag agtcaccatg accaggaaca cctccataag cacagcctac 240 atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attcctgtgc gacggctttt 300 accgaacagg atattgtagt ggtggtagga cataacgggg cttttgatat ctggggccaa 360 gggacaatgg tcaccgtctc ttca 384 <210> 1330 <211> 342 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 1330 gatattgtga tgactcagtc tccactctcc ctgcccgtca cccctggaga gccggcctcc 60 atctcctgca ggtctagtca gagcctcctg catagtaatg gatacaacta tttggattgg 120 tacctgcaga agccagggca gtctccacag ctcctgatct atttgggttc taatcgggcc 180 tccggggtcc ctgacaggtt cagtggcagt ggatcaggca cagattttac attgaaaatc 240 agcagagtgg aggctgagga tgttggggct tattactgca tgcaagctct acaaactcct 300 ccgatgctca ctttcggcgg agggaccaag gtggagatca aa 342 <210> 1331 <211> 366 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 1331 caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggata caccttcacc ggctactata tgcactgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggatgg atcaacccta acagtggtgg cacaaactat 180 gcacagaagt ttcagggcag ggtcaccatg accagggaca cgtccatcag cacagcctac 240 atggagctga 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gccatccagt tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgcc gggcaagtca gggcattagc agtgctttag cctggtatca gcagaaacca 120 gggaaagctc ctaagctcct gatctatgat gcctccagtt tggaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240 gaagattttg caacttatta ctgtcaacag tttaatactt acctgtacac ttttggccag 300 gggaccaagc tggagatcaa a 321 <210> 1339 <211> 354 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 1339 caggtgcatc tacagcagtg gggcgcagga ctgttgaagc cttcggagac cctgtcccgc 60 acctgcgctg tgtatggtgg atccttcagt ggttaccatt ggagctggat ccgccagccc 120 ccagggaagg ggctggagtg gattggggag atcaatcata gtggaagccc caactacaac 180 ccgtccctca agagtcgagt caccctatca gtggacacgt ccaagaacca gttctccctg 240 aaactgaact ctgtgaccgc cgcggacacg gctgtatatt actgtacgag actttatgca 300 ggtatggact acttcgacta ctggagccag ggaaccctgg tcaccgtctc ctca 354 <210> 1340 <211> 321 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 1340 gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgttggaga cagagtcacc 60 gtcacttgcc 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cctggtatca gcagaaacca 120 gggaaagccc ctaagctcct gatctataag gcgtctagtt tagaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagcg gcagtggatc tgggacagaa ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240 gatgattttg caacttatta ctgccaacag tataatagtt attctccgga cacttttggc 300 caggggacca agctggagat caaa 324 <210> 1343 <211> 366 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 1343 gaagtgcagc tggtggagtc tgggggagtc gtggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttgat gattatgcca tgcactgggt ccgtcaagct 120 ccggggaagg gtctggagtg ggtctctctt attagttggg atggtggtag cacctactat 180 gcagactctg tgaagggtcg attcaccatc tccagagaca acagcaaaaa ctccctgtat 240 ctgcaaatga acagtctgag agctgaggac accgccttgt attactgtgc aaaagattca 300 gagcagtggt cctactacta cggtatggac gtctggggcc aagggaccac ggtcaccgtc 360 tcctca 366 <210> 1344 <211> 321 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 1344 gaaattgtgt tgacacagtc tccagccacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60 ctctcctgca gggcccgtca gagtgttagc aactacttag cctggtacca acagaaacct 120 ggccaggctc ccaggctcct catctatgat 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ctggtgatag atattattca 180 gactccgtga agggccgatg caccatctcc agagacaatg gcaagaactc cttgtatctt 240 caattgaaga gcctgagagc cgcggacagg gctgtgtatt attgtgcaag gggggtgggt 300 ggaattatcg actactgggg ccagggaacc ccggtcaccg tctcctca 348 <210> 1678 <211> 330 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 1678 aattttgtgc tgactcagcc ccactctgtg tcggagtctc cggggaagac ggtaaccatc 60 tcctgcaccg gcaacagtgg cagcattgcc accaagtatg tacagtggtt ccagcagcgc 120 ccgggcagtg cccccaccac tgtgatctat gaggataacc aaagaccctc tggggtccct 180 gatcggttct ctggctccag cgacagctcc tccaactctg cctctctcac gatctctgga 240 ctgaagactg aagacgaggc tgattactac tgtcagtctt atcataacag gcgctgggtg 300 tttggcggag ggaccaggtt gaccgtccta 330 <210> 1679 <211> 378 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 1679 cagctgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcggagac cctgtccctc 60 acctgcactg tctctggtgg ctccatcagc agtagtagtt actactgggg ctggatccgc 120 cagcccccag ggaaggggct ggagtggatt gggagtatct attatagtgg gagcacctac 180 tacaacccgt ccctcaagag tcgagtcacc atatcagtag acacgtccaa gaaccagttc 240 tccctgaagc tgagctctgt gaccgccgcg gacacggccg tgtattactg tgcgagaacc 300 cgacgcgggg gattggcagt ggctgccccg aactggttcg acccctgggg ccagggaacc 360 ctggtcaccg tctcctca 378 <210> 1680 <211> 324 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 1680 gacatccaga tgacccagtc tccttccacc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgcc gggccagtca gagtattagt agctggttgg cctggtatca gcagaaacca 120 gggaaagccc ctaagctcct gatctataag gcgtctagtt tagaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagcg gcagtggatc tgggacagaa ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240 gatgattttg caacttatta ctgccaacag tataatagtt attctccgct cactttcggc 300 ggagggacca aggtggagat caaa 324 <210> 1681 <211> 366 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 1681 cagatcacct tgaaggagtc tggtcctacg ctggtgaaac ccacacagac cctcacgctg 60 acctgcacct tctctgggtt ctcactcagc actagtggag tgggtgtggg ctggatccgt 120 cagcccccag gaaaggccct ggagtggctt gcactcattt attgggatga tgataagcgc 180 tacagcccat ctctgaagag caggctcacc atcaccaagg acacctccaa aaaccaggtg 240 gtccttacaa tgaccaacat ggaccctgtg gacacagcca catattactg tgcacacaga 300 cggggtggct ggtactcgga atacttccag cactggggcc agggcaccct ggtcaccgtc 360 tcctca 366 <210> 1682 <211> 336 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 1682 gatattgtga tgactcagtc tccactctcc ctgcccgtca cccctggaga gccggcctcc 60 atctcctgca ggtctagtca gagcctcctg catagtaatg gatacaacta tttggattgg 120 tacctgcaga agccagggca gtctccacag ctcctgatct atttgggttc taatcgggcc 180 tccggggtcc ctgacaggtt cagtggcagt ggatcaggca cagattttac actgaaaatc 240 agcagagtgg aggctgagga tgttggggtt tattactgca tgcaagctct acaaactcct 300 atcaccttcg gccaagggac acgactggag attaaa 336 <210> 1683 <211> 354 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 1683 gaagtgcagt tggtggaatc tggaggaggc ttgatccagc cgggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcaa cctctgggtt caccgtcagt agcaacttca tgagttgggt ccgccaggct 120 ccagggatgg gcctggagtg ggtctcaatt atctatagcg gtggtaaaac attctacgcg 180 gagtccgtga ggggccgatt caccatctct agagacaatt ccaagagcac gatatatctt 240 caaatgaaca acctgagagt cgaggacacg gccgtctatt tctgtgctcg aacaacagca 300 gcagctgggg 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ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60 ttttcttgta gggccagtca gagtgttagc agctacttag cctggtacca acagaaacct 120 ggccaggctc ccaggctcct catctatgat gcatccaaca gggccactgg catcccagcc 180 aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagac ttcactctca ccatcagcag cctagagcct 240 gaagattttg cagtttatta ctgtcagcag cgtagcaact gggctccgag caccttcggc 300 caagggacac gactggagat taaa 324 <210> 1689 <211> 372 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 1689 gaagtgcaac tagtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggcaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttaat gaatatgcca tgtactgggt ccgacaagct 120 ccagggaggg gcctggagtg ggtctcaggc attgattgga atagcggtca cataggctat 180 gcggattctg ttaagggccg attcaccatc tccagagaca acaccaacaa ctccgtgtat 240 ctgcaaatgg acagtctgag acctgaggac accgccttgt attactgtgc aaaagataag 300 gtcccctatt acgacatttt gactggtttt ttggactcat ggggccaggg aaccctgctc 360 atcgtctcct ca 372 <210> 1690 <211> 321 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 1690 gccatccaga tgacccagtc tccttccacc ttgtctgcat ctgtcggaga cagagtcacc 60 atcacttgcc gggccagtca 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ccaggctgct catctacggt gcatccacca gggccactgg tatcccagcc 180 aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagag ttcactctca ccatcgacag cctgcagtct 240 gaagattttg cagtttatta ctgtcagcag tataataact ggcctccgct cactttcggc 300 ggagggacca tgctggagat caaa 324 <210> 1693 <211> 369 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 1693 caggttcagc tggtgcagtc tggagctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggtta cacctttacc agctatggta tcagctgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggatgg atcagcgctt acaatggtaa cacaaactat 180 gcacagaagc tccagggcag agtcaccatg accacagaca catccacgag cacagcctac 240 atggagctga ggagcctgag atctgacgac acggccgtgt attactgtgc gagttgtgct 300 ttctgtttga taagtggctg gtaccacttt gactactggg gccagggaac cctggtcacc 360 gtctcctca 369 <210> 1694 <211> 324 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 1694 gaaattgtgt tgacgcagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60 ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agcagctact tagcctggta ccagcagaaa 120 cctggccagg ctcccaggct cctcatctat ggtgcatcca gcagggccac tggcatccca 180 gacaggttca gtggcagtgg gtctgggaca gacttcactc tcaccatcag cagactggag 240 cctgaagatt ttgcagtgta ttactgtcag cagtatggta gctcacctat caccttcggc 300 caagggacac gactggagat taaa 324 <210> 1695 <211> 360 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 1695 caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcacagac cctgtccctc 60 acctgcactg tctctggtgg ctccatcagc agtggtggtt actactggag ctggatccgc 120 cagcacccag ggaagggcct ggagtggatt gggtacatct tttacagtgg gagcacctac 180 tacaacccgt ccctcaagag tcgagttacc atatcagtag acacgtctaa gaaccacttc 240 tccctgaagg tgagctctgt gactgccgcg gacacggccg tgtattactg tgcgagagat 300 cccgcccccc gtaaggggcc agttatctgg ggccaaggga caatggtcac cgtctctgca 360 <210> 1696 <211> 330 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 1696 cagtctgccc tgactcagcc tgcctccgtg tctgggtctc ctggacagtc gatcaccatc 60 tcctgcactg gaaccaacag tgacattggt tcttataact ttgtctcctg gtaccagcaa 120 cacccaggca aagcccccaa acttatgatt tatgaggtca gtaatcggcc ctcaggggtt 180 tctaatcgct tctctggctc caagtctggc agcacggcct ccctgaccat ctctgggctc 240 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Homo sapiens <400> 1924 cagtctgtgc tgacgcagcc gccctcagtg tctggggccc cagggcagag ggtcaccatc 60 tcctgcactg ggagcagctc caacatcggg gcaggttatg atgtacactg gtaccagcag 120 cttccaggaa cagcccccaa actcctcatc tatgataaca acattcggcc ctcaggggtc 180 cctgaccgat tctctggctc ccagtctggc acctcagcct ccctggccat cactgggctc 240 caggctgagg atgaggctga ttattactgc caatcctatg acagcagcgt aatattcggc 300 ggagggacca agctgaccgt ccta 324 <210> 1925 <211> 369 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 1925 cagctgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcggagac cctgtccctc 60 acctgcactg tctctggtgg ctccatcagc agtagtaatt actactgggg ctggatccgc 120 cagcccccag ggaaggggct ggaatggatt gggaatatct attatagtgg tatctcctac 180 tacaacccgt ccctcaagag tcgagtcacc atgtccgtag acacgtccaa gaaccagttc 240 tccctgaagc tgaactctgt gaccgccgca gacacggctg tgtattactg tgcgagaaca 300 attgattcgg tgaattatta taatgtgctt gactactggg gccagggaac cctggtcacc 360 gtctcctca 369 <210> 1926 <211> 321 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 1926 gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgcc gggcaagtca gggcattaga aatgatttag gctggtttca gcagaaacca 120 gggaacgccc ctaagcgcct gatctatact gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 agattcagcg gcagtggatc tgggacagaa ttcactctca caatcagcag cctgcagcct 240 gaagattttg caacttatta ctgtctacag cataatagtt accctctcac tttcggcgga 300 gggaccaagg tggagatcaa a 321 <210> 1927 <211> 360 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 1927 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agctacgaca tgcactgggt ccgccaagtt 120 ccaggaaaag gtctggattg ggtctcaact attggtactg ctggtgacac atactatcca 180 ggctccgtga agggccgatt caccatctcc agagaaaatg ccaagaactc cttgtatctt 240 caaatgaaca gcctgagcgc cggggacacg gctgtgtatt actgtgcgcg gggcggaatg 300 attacggtga ctaccacctt tgactactgg ggccagggaa ccctggtcac cgtctcctca 360 <210> 1928 <211> 324 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 1928 gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 ctaacttgcc gggcaagtca gaccattagc agttatttaa attggtatca gctgaaacca 120 gggacagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg agtcccatca 180 aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240 gaagattttg caacttacta ctgtcaacag agttacagta acccctcgat caccttcggc 300 caagggacac gactggagat taaa 324 <210> 1929 <211> 387 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 1929 gaggtgcaac tggtggagtc tgggggaggc ttggtaaagc ctggggggtc ccttagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cactttcact aacgcctgga tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggttggccgt attaaaagca aaactgatgg tgggacaact 180 gactacgctg cacccgtgaa aggcagattc accatctcaa gagatgattc aaaaaaaacg 240 ctgtatctgc aaatgaacag tctgaaaacc gaggacacag ccctgtatta ctgtaccaca 300 gatcggcggg gggttcgggg atttatggaa atagtcgtct acaatatgga cgtctggggc 360 caagggacca cggtcaccgt ctcctca 387 <210> 1930 <211> 333 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 1930 cagtctgtgt tgacgcagcc gccctcagtg tctgcggccc caggacagaa ggtcaccatc 60 tcctgctctg gaagcagctc caacattggg aataattatg tatcctggta ccagcagctc 120 ccaggaacag cccccaaact cctcatttat gacaataata agcgaccctc agggattcct 180 gaccgattct ctggctccaa gtctggcacg tcagccaccc tgggcatcac cggactccag 240 actggggacg aggccgatta ttactgcgga acatgggata gcagcctgag tgctccttgg 300 gtgttcggcg gagggaccaa gctgaccgtc cta 333 <210> 1931 <211> 387 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 1931 caggtccagc tggtacagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60 tcctgcaagg tttccggata caccctccct gaattatcca tacactgggt gcgacaggct 120 cctggaaaag ggcttgagtg gatgggaggt tttgatcctg aaaatgctga aacaatctac 180 acacagaagt tccagggcag actcaccatg accgaggaca catctacaga cacagcctac 240 atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccatgt attactgtgc aacaagtttt 300 gtactaatgc cggctgctct gggggattac tcctactact acggtatgga cgtctggggc 360 caagggacca cggtcaccgt ctcctca 387 <210> 1932 <211> 336 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 1932 gatattgtga tgacccagac tccactctcc tcacctgtca cccttggaca gccggcctcc 60 atctcctgca ggtctagtca aagcctcgta cacagtgatg gaaacaccta cttgagttgg 120 cttcagcaga ggccaggcca gcctccaaga ctcctaattt 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180 gcagactctg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acagcaaaaa ttccctttat 240 ctgcaaatga acagtctgag aactgaggac accgccttct attactgtgc aaaagattct 300 agtatggttc agggatgggt atcctggttc gacccctggg gccagggaac cctggtcacc 360 gtctcctca 369 <210> 1952 <211> 324 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 1952 gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctacat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgcc gggcaagtca gagcattagc agctatttaa attggtatca gcagaaacca 120 gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240 gaagattttg caacttacta ctgtcaacag agttacaata cccctccgtg gacttttggc 300 caggggacca agctgcagat caaa 324 <210> 1953 <211> 372 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 1953 caggtccagg tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggagg cacctccagc agctatgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120 ccaggacaag ggcttgagtg gatgggaagg atcatcccta tcctaggtac aacaaactac 180 gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggaca aatccacgag 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gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagt agttattgga tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtggccaac ataaacaaag atggaagtga gaaatactat 180 gtggactctg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa ctcactgtat 240 ctgcaaatga acagcctgcg agccgaggac acggctgtgt atttctgtgc gagagattat 300 cgatattttg actggttatt atcgcaaata gacttggaga ttgactactt tgactactgg 360 ggccagggaa ccctggtcac cgtctcctca 390 <210> 2084 <211> 321 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 2084 gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgcc gggcaagtca gagcattagc agttatttaa attggtatca gcagaaacca 120 gggaaagccc ctaaggtcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240 gaagattttg caacttacta ctgtcaacag agttacagta cccctctcac tttcggcgga 300 gggaccaagg tggagatcaa a 321 <210> 2085 <211> 363 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 2085 caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt acctatgcca tgcactgggt ccgccaggct 120 ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatcatatg atggaagtaa taaatactat 180 gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agctgaggac acggctgtgt attactgtgc gaaaagtggt 300 tcggggagtt atttatccca ctttgactac tggggccagg gaaccctggt caccgtctcc 360 tca 363 <210> 2086 <211> 315 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 2086 gacatccaga tgacccagtc tccttccacc ctgtctgcat ctgtcggaga cagagtcacc 60 atcacttgcc gggccagtca gactattagt aggtggttgg cctggtatca gcagaaacca 120 gggaaagccc ccaagctcct gatctataag gcgtctaatt tagaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagcg gcagtggatc tgggacagaa ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240 gatgattttg caacttatta ctgccaacag tataatagtt actcgttcgg ccaagggacc 300 aaggtggaaa tcaaa 315 <210> 2087 <211> 372 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 2087 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagt agttatgtca tgagctgggt 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<400> 2098 gaaattgtgt tgacgcagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60 ctctcctgca gggccagtca gagtgtaagc agcagctact tggcctggta ccagcagaaa 120 cctggccagg ctcccaggct cctcatctat ggtgcatcaa ccagggccac cggcatccca 180 gacaggttca gtggcagtgg gtctgggaca gacttcactc tcaccatcag cagactggag 240 cctgaagatt ttgcagtgta tttctgtcag cagtttcatg agtcacgggg cactttcggc 300 cctgggacca aagtccaaat caaa 324 <210> 2099 <211> 372 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 2099 cagctgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcggcgac cctgtccctc 60 acctgcactg tctctggtgg ccccatcaac agtagaggtt attcctgggg ctggatccgc 120 cagcccccag ggaaggggct ggagtgggtt ggggctgtct attacagtgg gagtaccaac 180 tacaagccgt ccctcaagag tcgagtcacc atatccgtgg acacgtccaa gagccagttc 240 tccctgaagg tgaactctgt gaccgccgca gatacggctg tatattactg tgtgggagaa 300 tcgggaagat tacgattttt gggtaattac atggacgtct ggggcaaagg ggccacggtc 360 accgtctcat ca 372 <210> 2100 <211> 330 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 2100 cagtctgtgc tgactcagcc accctcagcg tctgggaccc 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ggccaggctc ccaggctcct catctatggt acatccacca gggccactgg tatcccagcc 180 aggttcagtg gccgtgggtc tgggacagag ttcactctca ccatcagcag cctgcagtct 240 gaagatattg cagtttatta ctgtcagcag tataataact ggccgtggac gttcggccaa 300 gggaccaagg tggaaatcag a 321 <210> 2105 <211> 396 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 2105 caggtgcagc tgcaggggtc gggcccagga ctggtgaagc cttcacagac cctgtccctc 60 acctgcactg tctctggtgg ctccatcagc agtggtaatt actactggag ctggatccgg 120 cagcccgccg ggaagggact ggagtggatt gggcgtatct attccagtgg gagtgggaat 180 accaagtaca acccctccct caagagtcga gtcaccatat cagtagacac gtccaagaac 240 cagttctccc tgaagctgag ctctgtgacc gccgcagaca cggccgtgta ttactgtgcg 300 agcggcgaga tactattaac agcagctggt acggaggact actcctacta cggtatggac 360 gtctggggcc aagggaccac ggtcaccgtc tcctca 396 <210> 2106 <211> 318 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 2106 tcctatgagc tgactcagcc accctcagtg tccgtgtccc caggacagac agccagcatc 60 acctgctctg gagataaatt gggggataaa tatgcttgct ggtatcagca gaagccaggc 120 cagtcccctg tgctggtcat ctatcaagat 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DNA <213> Homo sapiens <400> 2243 caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt acatatgcta tccactgggt ccgccaggct 120 ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatcatatg atggaagtaa taaatactac 180 gcaaagtccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaaaaa cacgctatat 240 ctgcaaatga acagcctggg agctgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagcacaa 300 tttgggaact actactacgg tatggacgtc tggggccaag ggaccacggt caccgtctcc 360 tca 363 <210> 2244 <211> 327 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 2244 cagtctgccc tgactcagcc tgcctccgtg tctgggtctc ctggacagtc gatcaccatc 60 tcctgcactg gaaccagcag tgacgttggt ggttataact atgtctcctg gtaccaacaa 120 cacccaggca aagcccccaa actcatgatt tatgatgtca gtaagcggcc ctcaggggtt 180 tctaatcgct tctctggctc caagtctggc aacacggcct ccctgaccat ctctgggctc 240 caggctgagg acgaggctga ttattactgc agctcatata caagcacctt ttatgtcttc 300 ggaactggga ccaaggtcac cgtccta 327 <210> 2245 <211> 375 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 2245 caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc 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ggtatcagca gaagccaggc 120 caggcccctg tgctggtcgt caatgatgat agcgaccggc cctcagggat ccctgagcga 180 ttctctggct ccaactctgg gaacacggcc accctgacca tcagcagggt cgaagccggg 240 gatgaggccg actattactg tcaggtgtgg gatagtagta gtgatcatcc gggggtgttc 300 ggcggaggga ccaagctgac cgtcctt 327 <210> 2337 <211> 360 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 2337 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt acctacgaca tgcactgggt acgccaaact 120 acaggaaaag gtctggagtg ggtctcagct attggtactg ctggtgacac atactatcca 180 gactccgtga agggccgatt caccatctcc agagaaaatg ccaagaactc cttgtatctt 240 caaatgaaca gcctgagagc cggggacacg gctgtgtatt actgtgcaag agggggccaa 300 tggctacgag tctggtactt cgatctctgg ggccgtggca ccctggtcac tgtctcctca 360 <210> 2338 <211> 324 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 2338 gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgcc gggcaagtca gagcattagc aggtatttaa attggtatca gcagaaacca 120 gggaaagccc ctaagctcct gatctatggt gcatccagtt 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tccagggcag agtcaccatg accgaggaca catctacaga cacagcctat 240 atggacctga gcggcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc aacttcccct 300 gctatttatc gacagacctg gttcgacccc tggggccagg gaaccctggt caccgtctcc 360 tca 363 <210> 2356 <211> 333 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 2356 cagtctgtgt tgacgcagcc gccctcagtg tctgcggccc caggacagaa cgtcaccatc 60 tcctgctctg gaagcagctc caacattggc aataattatg tatcctggta ccagcagctc 120 ccaggaacag cccccaaact cctcatttat gacaataata agcgaccctc agggattcct 180 gaccgattct ctggctccaa gtctggcacg tcagccaccc tgggcatctc cggactccag 240 actggggacg aggccgatta ttactgcgga acatgggata ctagcctgag tgttggaggg 300 gtattcggcg gagggaccaa gctgaccgtc cta 333 <210> 2357 <211> 372 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 2357 caggtccagc tggtgcaatc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggagg caccttcagc agctatacta tcagctgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggaagc atcatcccta tccttggtat agcaaactac 180 gcacagaagt ttccgggccg agtcacgatt accgcggaca aatccacgag cacagcctac 240 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ccagcagaaa 120 cctggccagg ctcccaggct cctcatctat ggtgcatcca gcagggccac tggcatccca 180 gacaggttca gtggcagtgg gtctgggaca gacttcactc tcaccatcag cagactggag 240 cctgaagatt ttgcagtgta ttactgtcag cagtatggaa cctcacctag gacgttcggc 300 caagggacca aggtggaaat caaa 324 <210> 2747 <211> 375 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 2747 caggtccagc ttgtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaagtt 60 tcctgcaagg cctctggata tagtttcaat atgtatgcta tgcattgggt gcgccaggcc 120 cccggacaaa ggcttgagtg gatggggtgg atcaaccccg gcaagaaaaa cacagaattt 180 tcagagaagt tccagggcag agtcaccatt tccagggaca caaccgcgag cacagtttat 240 atggagctga ggagcctgac atctgaagac acggctctat atttttgtgc aagatcgttc 300 agtaacagtg gctcttacga ggggggatac cagtttgact tctggggcca gggaaccctg 360 gtcaccgtct cctct 375 <210> 2748 <211> 321 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 2748 gaagtagtga tgacgcagtc tccagccacc ctgtctgtgt ctccagggga aggagccacc 60 ctctcctgca gggccagtca gagtattggc agcaagttag cctggtatca gcagaaacct 120 ggccaggctc ccaggctcct catctatggt gcatccacca gggccactgg tatcccagcc 180 aggttcagag gcagtgagtc tgggacagag ttcactctca ccatcagtcg cctgcagtct 240 gaagattttg cagtttattt ctgtcaccag tataataact ggccactcac tttcggcgga 300 gggaccaagg tggagatcaa a 321 <210> 2749 <211> 342 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 2749 cagctgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcggagac cctgtccctc 60 acctgcacta tctccagcag tagtaattac tactggggct ggatccgcca gtccccaggg 120 aaggggctgg agtggattgg gagtatgttt tatagtggga gcacccacta caacccgtcc 180 ctcaagagtc gagtcaccat atccgtagac acgtccaaga accagttctc cctggaactg 240 acctctgtga ccgccgcaga cacggctgtc tattactgtg cgagacagga aggtggctgg 300 ttcccctact ggggccaggg aaccctggtc accgtctcct ca 342 <210> 2750 <211> 327 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 2750 gaaattgtgt tgacacagtc tccagccacc ctgtctctgt ctccagggga aagagccacc 60 ttctcctgca gggccagtca gagagttagg agctacttag cctggtacca acagaaacct 120 ggccaggctc ccaggctcct catctatgat gcatccaaca gggccactgg catcccagcc 180 aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagac ttcactctca ccatcagcag cctagagcct 240 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gcagtggatc tgggacaggt ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240 gaagattgtg caatttacta ttgtcaacag agttacagtt cccctcagac gttcggccaa 300 gggaccaagg tggaaatcaa a 321 <210> 4193 <211> 354 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 4193 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtaaagc ctggggggtc ccttagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cactttcagt aacgcctgga tgagttgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggttggccat attgaaagca aaactgatgg tgggacaaca 180 gactacgctg cacccgtgaa aggcagattc accatctcca gagacgattc aaaaaacacg 240 ctgtatctcc aaatgaacag cctgaaaacc gaggacacag ccctttatta ctgtacccgc 300 ggacccttct actttgactt ctggggccag ggaaccctgg tcaccgtctc ctct 354 <210> 4194 <211> 321 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 4194 gacatccaga tgacccagtc tccttccacc ctgtctgcat ctgcaggaga cagagtcacc 60 atcgcctgcc gggccagtca gagtattagt tcctggttgg cctggtatca gcagaaacca 120 gggcaagccc ctaaactcct gatctataag gcgtctagtt taaaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagcg gcagtggatc tgggacagaa ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240 ggtgattttg caacttatta 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<400> 4199 caactgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaggc cttcggagac cctgtccctc 60 acctgcactg tctctggtgg ctccatcagc agtagtagtt actactcggg ctggatccgc 120 cagcccccag ggaaggggct ggagtggatt ggtaatatct attatggtgg gagcacctac 180 tacaacccgt ccctcaagag tcgagtcacc atatccgtag acacgtccaa gaaccagttc 240 tccctgaaac tgagctctgt gaccgccgca gacacggctg tgtattactg tgcgacggag 300 gccattacta tgatggtact ggctcatcat gcttttgata tctggggcca agggacaacg 360 gtcaccgtct cttca 375 <210> 4200 <211> 330 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 4200 cagtctgccc tgactcagcc tgcctccgtg tctgggtctc ctggacagtc gatcaccatc 60 tcctgcactg gaaccagcag tgacgttggt ggttataact atgtctcctg gtaccaacag 120 cacccaggca aagtccccaa actcatgatt tatgaggtca gtaatcggcc ctcaggggtt 180 tctaatcgct tctctggctc caagtctggc aacacggcct ccctgaccat ctctgggctc 240 cagactgagg acgaggctga ttattactgc agctcatata caagcatcag cacttatgtc 300 ttcggaactg ggaccaaggt caccgtccta 330 <210> 4201 <211> 363 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 4201 caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc 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ttggtccagc cgggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggtct caccgtcagt agcaactaca tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcaatt atttatagcg gtggtagcac attctatgta 180 gactccgtga agggccgatt caccatctcc agagacaatt ccaagaacac gctggatctt 240 caaatgaaca gcctgagagc tgaggacacg gctgtgtatt actgtgcgag agatttgtcg 300 gagtacggga tggacgtctg gggccaaggg accacggtca ccgtctcctc a 351 <210> 4236 <211> 330 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 4236 cagtctgccc tgactcagcc tccctccgtg tccgggtctc ctggacagtc agtcaccatc 60 tcctgcactg gaaccagcag tgacgttggt agttataatc gtgtctcctg gtaccagcag 120 cccccaggca cagcccccaa actcatgatt tatgaggtca gtaatcggcc ctcaggggtc 180 cctgatcgct tctctgggtc caagtctggc aacacggcct ccctgaccat ctctgggctc 240 caggctgagg acgaggctga ttattactgc agctcatata caagcagcag tactttggta 300 ttcggcggag ggaccaagct gaccgtccta 330 <210> 4237 <211> 375 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 4237 cagctgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcggagac cctgtccctc 60 acctgcactg tctctggtgg ctccatcagc agtagtagtt 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ggacagattt cactctcacc 240 atcagcagcc tgcaggctga agatgtggca gtttattact gtcagcaata ttatagtcct 300 ccgctcactt tcggcggcgg gaccaaggtg gagatcaaa 339 <210> 4259 <211> 390 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 4259 caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcacagac cctgtccctc 60 acctgcactg tctctggtgg ctccatcagc agtggtggtt actactggag ctgggtccgc 120 cagcacccag ggaagggcct cgagtggatt gggaacatct atcacagtgg ggggagcacc 180 tactacaacc cgtccctcaa gagtcgagtt accatatcta tagacacgtc taagaaccag 240 ttctccctga agctgaactc tgtgactgcc gcggacacgg ccatttatta ctgtgcgagc 300 gagtcgataa atgtggttcg gggagtgcct ctctactact actacgctat ggacgtctgg 360 ggcctaggga ccacggtcac cgtctcctca 390 <210> 4260 <211> 330 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 4260 cagtctgccc tgactcagcc tgcctccgtg tctgcgtctc ctggacagtc gatgaccatc 60 tcctgcactg gaaccagcag tgacgttggt cgttataact atgtctcctg gtaccaacag 120 cacccaggca aagcccccaa actcttgatt tatgatgtca gtaatcggcc ctcaggggtt 180 tctaatcgct tctctggctc caagtctggc aacacggcct ccctgaccat ctctgggctc 240 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agccccgaga accacaggtg 1080 tacaccctgc ccccatcccg ggaggagatg accaagaacc aagtcagcct gacctgcctg 1140 gtcaaaggct tctatcccag cgacatcgcc gtggagtggg agagcaatgg gcagccggag 1200 aacaactaca agaccacgcc tcccgtgctg gactccgacg gctccttctt cctctattcc 1260 aagctcaccg tggacaagag caggtggcag caggggaacg tcttctcatg ctccgtgatg 1320 catgaggctc tgcacaacca ctacacgcag aagagcctct ccctgtctcc gggcaaa 1377 <210> 5748 <211> 657 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 5748 gatattgtga tgacccagac tccactctcc tcacctgtca cccttggaca gccggcctcc 60 atctcctgca ggtctagtca aagcctcgta cacagtgatg gaaacaccta cttgagttgg 120 cttcagcaga ggccaggcca gcctccaaga ctcctaattt ataagatttc taaccggttc 180 tctggggtcc cagacagatt cagtggcagt ggggcaggga cagatttcac actgaaaatc 240 agcagggtgg aagctgagga tgtcggggtt tattactgca tgcaagctac acaatttcct 300 ctcactttcg gcggagggac caaggtggag atcaaaagaa ctgtggcggc gccatctgtc 360 ttcatcttcc cgccatctga tgagcagttg aaatccggaa ctgcctctgt tgtgtgcctg 420 ctgaataact tctatcccag agaggccaaa gtacagtgga aggtggataa cgccctccaa 480 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catgaaggga gcaccgtgga gaagacagtg gcccctacag aatgttca 648 <210> 5773 <211> 1347 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 5773 cagatcacct tgaaggagtc tggtcctacg ctggtgaaac ccacacagac cctcacgctg 60 acctgcacct tctctgggtt ctcactcagc attagtggag tgggtgtggg ctggctccgt 120 cagcccccag gaaaggccct ggagtggctt gcactcattt attgggatga tgataagcgc 180 tacagcccat ctctgaagag caggctcacc atcagcaagg acacctccaa aaaccaggtg 240 gtccttaaaa tgaccaacat tgaccctgtg gacacagcca catattactg tgcacaccat 300 tcgattagca ccatctttga ccactggggc cagggaaccc tggtcaccgt ctcctcagcc 360 tccaccaagg gcccatcggt cttccccctg gcaccctcct ccaagagcac ctctgggggc 420 acagcggccc tgggctgcct ggtcaaggac tacttccccg aaccggtgac ggtgtcgtgg 480 aactcaggcg cactgaccag cggcgtgcac accttcccgg ctgtcctaca gtcctcagga 540 ctctactccc tcagcagcgt ggtgaccgtg ccctccagca gcttgggcac ccagacctac 600 atctgcaacg tgaatcacaa gcccagcaac accaaggtgg acaagagagt tgagcccaaa 660 tcttgtgaca aaactcacac atgcccaccg tgcccagcac ctgaactcct ggggggaccg 720 tcagtcttcc tcttcccccc aaaacccaag gacaccctca tgatctcccg gacccctgag 780 gtcacatgcg tggtggtgga cgtgagccac gaagaccctg aggtcaagtt caactggtat 840 gtggacggcg tggaggtgca taatgccaag acaaagccgc gggaggagca gtacaacagc 900 acgtaccgtg tggtcagcgt cctcaccgtc ctgcaccaag actggctgaa tggcaaggag 960 tacaagtgca aggtctccaa caaagccctc ccagccccca tcgagaaaac catctccaaa 1020 gccaaagggc agccccgaga accacaggtg tacaccctgc ccccatcccg ggaggagatg 1080 accaagaacc aagtcagcct gacctgcctg gtcaaaggct tctatcccag cgacatcgcc 1140 gtggagtggg agagcaatgg gcagccggag aacaactaca agaccacgcc tcccgtgctg 1200 gactccgacg gctccttctt cctctattcc aagctcaccg tggacaagag caggtggcag 1260 caggggaacg tcttctcatg ctccgtgatg catgaggctc tgcacaacca ctacacgcag 1320 aagagcctct ccctgtctcc gggcaaa 1347 <210> 5774 <211> 645 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 5774 cagtctgccc tgactcagcc tgcctccgtg tctgggtctc ctggacagtc gatcaccatc 60 tcctgcactg caaccagcag tgacgttggt gattataact atgtctcctg gtaccaacaa 120 cacccaggca aagcccccaa actcatgatt tttgaggtca gtgatcggcc ctcggggatt 180 tctaatcgct tctctggctc caagtctggc aacacggcct ccctgaccat ctctgggctc 240 caggctgagg acgaggctga ttattactgc agctcatata caaccagcag cgctgtattc 300 ggcggaggga ccaagctgac cgtcctaggc cagcccaagg ctgccccctc ggtcactctg 360 ttcccgccct cctctgagga gcttcaagcc aacaaggcca cactggtgtg tctcataagt 420 gacttctacc cgggagccgt gacagtggcc tggaaggcag atagcagccc cgtcaaggcg 480 ggagtggaga caaccacacc ctccaaacaa agcaacaaca agtacgcggc cagcagctat 540 ctgagcctga cgcctgagca gtggaagtcc cacagaagct acagctgcca ggtcacgcat 600 gaagggagca ccgtggagaa gacagtggcc cctacagaat gttca 645 <210> 5775 <211> 1359 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 5775 caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggata caccttcacc gcctactata tgcactgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggctgg atcaacccta acagtgatga cacaaactat 180 gcacagaagt ttcagggcag ggtcaccatg accagggaca cgtccatcag tacagcctac 240 atggagctga gcaggctgag atctgacgac acggccgtct attactgtgc gagggaagag 300 ggagtcttca caatcgggga ccgatacttc gatctatggg gccgtggcac cctggtcagt 360 gtctcctcag cctccaccaa gggcccatcg gtcttccccc tggcaccctc ctccaagagc 420 acctctgggg gcacagcggc cctgggctgc ctggtcaagg actacttccc cgaaccggtg 480 acggtgtcgt ggaactcagg cgcactgacc agcggcgtgc acaccttccc ggctgtccta 540 cagtcctcag gactctactc cctcagcagc gtggtgaccg tgccctccag cagcttgggc 600 acccagacct acatctgcaa cgtgaatcac aagcccagca acaccaaggt ggacaagaga 660 gttgagccca aatcttgtga caaaactcac acatgcccac cgtgcccagc acctgaactc 720 ctggggggac cgtcagtctt cctcttcccc ccaaaaccca aggacaccct catgatctcc 780 cggacccctg aggtcacatg cgtggtggtg gacgtgagcc acgaagaccc tgaggtcaag 840 ttcaactggt atgtggacgg cgtggaggtg cataatgcca agacaaagcc gcgggaggag 900 cagtacaaca gcacgtaccg tgtggtcagc gtcctcaccg tcctgcacca agactggctg 960 aatggcaagg agtacaagtg caaggtctcc aacaaagccc tcccagcccc catcgagaaa 1020 accatctcca aagccaaagg gcagccccga gaaccacagg tgtacaccct gcccccatcc 1080 cgggaggaga tgaccaagaa ccaagtcagc ctgacctgcc tggtcaaagg cttctatccc 1140 agcgacatcg ccgtggagtg ggagagcaat gggcagccgg agaacaacta caagaccacg 1200 cctcccgtgc tggactccga cggctccttc ttcctctatt ccaagctcac cgtggacaag 1260 agcaggtggc agcaggggaa cgtcttctca tgctccgtga tgcatgaggc tctgcacaac 1320 cactacacgc agaagagcct ctccctgtct ccgggcaaa 1359 <210> 5776 <211> 648 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 5776 cagactgtgg tgacccagga gccatcgttc tcagtgtccc ctggagggac agtcactctc 60 acttgtggct tgagctctgg ctcagtctct actagttact accccagctg gtaccagcag 120 accccaggcc aggctccacg cacgctcatc tacaacacaa acactcgctc ttctggggtc 180 cctgatcgct tctctggctc catccttggg aacaaagctg ccctcaccat cacgggggcc 240 caggcagatg atgaatctga ttattactgt gtgctttata tgggtagtgg catttgggtg 300 ttcggcggag ggaccaagct gaccgtccta ggccagccca aggctgcccc ctcggtcact 360 ctgttcccgc cctcctctga ggagcttcaa gccaacaagg ccacactggt gtgtctcata 420 agtgacttct acccgggagc cgtgacagtg gcctggaagg cagatagcag ccccgtcaag 480 gcgggagtgg agacaaccac accctccaaa caaagcaaca acaagtacgc ggccagcagc 540 tatctgagcc tgacgcctga gcagtggaag tcccacagaa gctacagctg ccaggtcacg 600 catgaaggga gcaccgtgga gaagacagtg gcccctacag aatgttca 648 <210> 5777 <211> 1389 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 5777 caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60 tcctgtacag cctctggatt caccttcagt agctatgcta tgcactgggt ccgccaggct 120 ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcggtt atatcgtatg atggaaataa taaatattat 180 ggagactctg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa caccctgtat 240 ctgcagatga acagcctgag agctgaggac acggctgtgt attactgcgc gaaaggtgcc 300 gacacccccc attatagtgg ctatcatttt ttgtctgtcg gctactactt ctacggtatg 360 gacgtctggg gccaagggac cacggtcacc gtctcctcag cctccaccaa gggcccatcg 420 gtcttccccc tggcaccctc ctccaagagc acctctgggg gcacagcggc cctgggctgc 480 ctggtcaagg actacttccc cgaaccggtg acggtgtcgt ggaactcagg cgcactgacc 540 agcggcgtgc acaccttccc ggctgtccta cagtcctcag gactctactc cctcagcagc 600 gtggtgaccg tgccctccag cagcttgggc acccagacct acatctgcaa cgtgaatcac 660 aagcccagca acaccaaggt ggacaagaga gttgagccca aatcttgtga caaaactcac 720 acatgcccac cgtgcccagc acctgaactc ctggggggac cgtcagtctt cctcttcccc 780 ccaaaaccca aggacaccct catgatctcc cggacccctg aggtcacatg cgtggtggtg 840 gacgtgagcc acgaagaccc tgaggtcaag ttcaactggt atgtggacgg cgtggaggtg 900 cataatgcca agacaaagcc gcgggaggag cagtacaaca gcacgtaccg tgtggtcagc 960 gtcctcaccg tcctgcacca agactggctg aatggcaagg agtacaagtg caaggtctcc 1020 aacaaagccc tcccagcccc catcgagaaa accatctcca aagccaaagg gcagccccga 1080 gaaccacagg tgtacaccct gcccccatcc cgggaggaga tgaccaagaa ccaagtcagc 1140 ctgacctgcc tggtcaaagg cttctatccc agcgacatcg ccgtggagtg ggagagcaat 1200 gggcagccgg agaacaacta caagaccacg cctcccgtgc tggactccga cggctccttc 1260 ttcctctatt ccaagctcac cgtggacaag agcaggtggc agcaggggaa cgtcttctca 1320 tgctccgtga tgcatgaggc tctgcacaac cactacacgc agaagagcct ctccctgtct 1380 ccgggcaaa 1389 <210> 5778 <211> 642 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 5778 gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgcc gggcaagtca gagcattagc tactatttaa attggtatca gcagaaacca 120 gggaaagccc ctcagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagtg gcagtagatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240 gaagactttg caacttatta ctgtcaacag agttacagta ctccattcac tttcggccct 300 gggaccaaag tcgatatcaa aagaactgtg gcggcgccat ctgtcttcat cttcccgcca 360 tctgatgagc agttgaaatc cggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420 cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480 gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540 ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600 ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gc 642 <210> 5779 <211> 1371 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 5779 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agctatgcca tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcaggt attagtgata gtggtggtag cacatactac 180 gcagactacg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagga cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gaaagatcgg 300 gggaacgagt acgccctgac ccactactac tactacgcta tggacgtctg gggccaaggg 360 accacggtca ccgtctcctc agcctccacc aagggcccat cggtcttccc cctggcaccc 420 tcctccaaga gcacctctgg gggcacagcg gccctgggct gcctggtcaa ggactacttc 480 cccgaaccgg tgacggtgtc gtggaactca ggcgcactga ccagcggcgt gcacaccttc 540 ccggctgtcc tacagtcctc aggactctac tccctcagca gcgtggtgac cgtgccctcc 600 agcagcttgg gcacccagac ctacatctgc aacgtgaatc acaagcccag caacaccaag 660 gtggacaaga gagttgagcc caaatcttgt gacaaaactc acacatgccc accgtgccca 720 gcacctgaac tcctgggggg accgtcagtc ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc 780 ctcatgatct cccggacccc tgaggtcaca tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac 840 cctgaggtca agttcaactg gtatgtggac ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag 900 ccgcgggagg agcagtacaa cagcacgtac cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac 960 caagactggc tgaatggcaa ggagtacaag tgcaaggtct ccaacaaagc cctcccagcc 1020 cccatcgaga aaaccatctc caaagccaaa gggcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc 1080 ctgcccccat cccgggagga gatgaccaag aaccaagtca gcctgacctg cctggtcaaa 1140 ggcttctatc ccagcgacat cgccgtggag tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac 1200 tacaagacca cgcctcccgt gctggactcc gacggctcct tcttcctcta ttccaagctc 1260 accgtggaca agagcaggtg gcagcagggg aacgtcttct catgctccgt gatgcatgag 1320 gctctgcaca accactacac gcagaagagc ctctccctgt ctccgggcaa a 1371 <210> 5780 <211> 642 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 5780 gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgcc gggcaagtca gagcattagc agctatttaa attggtatca gcagaaacca 120 gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatacagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagtg gcggtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240 gaagattttg caacttactt ctgtcaacag agttacagta ccccgatcac tttcggccaa 300 gggacacgac tggagattaa aagaactgtg gcggcgccat ctgtcttcat cttcccgcca 360 tctgatgagc agttgaaatc cggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420 cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480 gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540 ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600 ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gc 642 <210> 5781 <211> 1350 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 5781 caggtacagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agatttactc tacactgggt ccgccaggct 120 ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatcatatg atggaagcaa taaatattac 180 gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagag cactctctat 240 ctgcaaatga acagcctgag agctgaggac acgggtgtgt attactgtgc gagagatccc 300 tctacggtga ccggctactt tgactactgg ggccagggaa ccctggtcac cgtctcctca 360 gcctccacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcaccct cctccaagag cacctctggg 420 ggcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg 480 tggaactcag gcgcactgac cagcggcgtg cacaccttcc cggctgtcct acagtcctca 540 ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcagcttggg cacccagacc 600 tacatctgca acgtgaatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagag agttgagccc 660 aaatcttgtg acaaaactca cacatgccca ccgtgcccag cacctgaact cctgggggga 720 ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct 780 gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg 840 tatgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagtacaac 900 agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc aagactggct gaatggcaag 960 gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc 1020 aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccgggaggag 1080 atgaccaaga accaagtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc 1140 gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg 1200 ctggactccg acggctcctt cttcctctat tccaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg 1260 cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg 1320 cagaagagcc tctccctgtc tccgggcaaa 1350 <210> 5782 <211> 633 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 5782 tcctatgtgc tgactcagcc accctcagtg tcagtggccc caggaaagac ggccaagatt 60 tcctgtgggg gagacagcat tggaagtaaa agtgtccact ggtaccagca gaagccaggc 120 caggcccctg tgctggtcat ctattatgat aacgaccggc cctcagggat ccctgagcga 180 ttctctggct ccaactctgg gaacacggcc accctgacca tcagcagggt cgaagccggg 240 gatgaggccg actattactg tcaggtgtgg gatattggtg tggtattcgg cggagggacc 300 aagctgaccg tcctaggcca gcccaaggct gccccctcgg tcactctgtt cccgccctcc 360 tctgaggagc ttcaagccaa caaggccaca ctggtgtgtc tcataagtga cttctacccg 420 ggagccgtga cagtggcctg gaaggcagat agcagccccg tcaaggcggg agtggagaca 480 accacaccct ccaaacaaag caacaacaag tacgcggcca gcagctatct gagcctgacg 540 cctgagcagt ggaagtccca cagaagctac agctgccagg tcacgcatga agggagcacc 600 gtggagaaga cagtggcccc tacagaatgt tca 633

Claims (39)

  1. (a) 서열식별번호: 4949로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 4950으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
    (b) 서열식별번호: 3275로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3276으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
    (c) 서열식별번호: 3361로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3362로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
    (d) 서열식별번호: 3365로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3366으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
    (e) 서열식별번호: 3421로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3422로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
    (f) 서열식별번호: 3447로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3448로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
    (g) 서열식별번호: 3515로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3516으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
    (h) 서열식별번호: 3605로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3606으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
    (i) 서열식별번호: 3647로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3648로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
    (j) 서열식별번호: 3649로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3650으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
    (k) 서열식별번호: 3725로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3726으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
    (l) 서열식별번호: 3835로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3836으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
    (m) 서열식별번호: 3845로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3846으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
    (n) 서열식별번호: 3853으로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3854로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
    (o) 서열식별번호: 3873으로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 3874로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
    (p) 서열식별번호: 5029로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 5030으로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
    (q) 서열식별번호: 5131로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 5132로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
    (r) 서열식별번호: 5217로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 5218로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR; 또는
    (s) 서열식별번호: 5311로서 제시된 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열식별번호: 5312로서 제시된 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR
    을 포함하는, SARS-CoV-2 스파이크 단백질에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
  2. 제1항에 있어서,
    (a) 중쇄 가변 영역 (VH)의 잔기 31-35를 포함하는 CDR-H1, VH의 잔기 50-65를 포함하는 CDR-H2 및 VH의 잔기 95-102를 포함하는 CDR-H3; 및
    (b) 경쇄 가변 영역 (VL)의 잔기 24-34를 포함하는 CDR-L1, VL의 잔기 50-56을 포함하는 CDR-L2 및 VL의 잔기 89-97을 포함하는 CDR-L3
    을 포함하며, 여기서 CDR 넘버링은 카바트에 따른 것인 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
  3. 제1항에 있어서,
    (a) VH의 잔기 26-32를 포함하는 CDR-H1, VH의 잔기 50-58을 포함하는 CDR-H2 및 VH의 잔기 95-102를 포함하는 CDR-H3; 및
    (b) VL의 잔기 24-34를 포함하는 CDR-L1, VL의 잔기 50-56을 포함하는 CDR-L2 및 VL의 잔기 89-97을 포함하는 CDR-L3
    을 포함하며, 여기서 CDR 넘버링은 코티아에 따른 것인 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
  4. 제1항에 있어서,
    (a) VH의 잔기 30-35를 포함하는 CDR-H1, VH의 잔기 47-58을 포함하는 CDR-H2 및 VH의 잔기 93-101을 포함하는 CDR-H3; 및
    (b) VL의 잔기 30-36을 포함하는 CDR-L1, VL의 잔기 46-55를 포함하는 CDR-L2 및 VL의 잔기 89-96을 포함하는 CDR-L3
    을 포함하며, 여기서 CDR 넘버링은 맥칼룸에 따른 것인 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
  5. 제1항에 있어서, (a)-(s)에 제시된 중쇄 가변 영역 서열에 대해 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역 및 동일한 (a)-(s)에 제시된 상응하는 경쇄 가변 영역 서열 중 1개에 대해 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
  6. 제1항에 있어서,
    (a) 서열식별번호: 4949로서 제시된 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 4950으로서 제시된 경쇄 가변 영역; 또는
    (b) 서열식별번호: 3275로서 제시된 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 3276으로서 제시된 경쇄 가변 영역; 또는
    (c) 서열식별번호: 3361로서 제시된 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 3362로서 제시된 경쇄 가변 영역; 또는
    (d) 서열식별번호: 3365로서 제시된 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 3366으로서 제시된 경쇄 가변 영역; 또는
    (e) 서열식별번호: 3421로서 제시된 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 3422로서 제시된 경쇄 가변 영역; 또는
    (f) 서열식별번호: 3447로서 제시된 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 3448로서 제시된 경쇄 가변 영역; 또는
    (g) 서열식별번호: 3515로서 제시된 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 3516으로서 제시된 경쇄 가변 영역; 또는
    (h) 서열식별번호: 3605로서 제시된 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 3606으로서 제시된 경쇄 가변 영역; 또는
    (i) 서열식별번호: 3647로서 제시된 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 3648로서 제시된 경쇄 가변 영역; 또는
    (j) 서열식별번호: 3649로서 제시된 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 3650으로서 제시된 경쇄 가변 영역; 또는
    (k) 서열식별번호: 3725로서 제시된 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 3726으로서 제시된 경쇄 가변 영역; 또는
    (l) 서열식별번호: 3835로서 제시된 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 3836으로서 제시된 경쇄 가변 영역; 또는
    (m) 서열식별번호: 3845로서 제시된 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 3846으로서 제시된 경쇄 가변 영역; 또는
    (n) 서열식별번호: 3853으로서 제시된 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 3854로서 제시된 경쇄 가변 영역; 또는
    (o) 서열식별번호: 3873으로서 제시된 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 3874로서 제시된 경쇄 가변 영역; 또는
    (p) 서열식별번호: 5029로서 제시된 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 5030으로서 제시된 경쇄 가변 영역; 또는
    (q) 서열식별번호: 5131로서 제시된 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 5132로서 제시된 경쇄 가변 영역; 또는
    (r) 서열식별번호: 5217로서 제시된 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 5218로서 제시된 경쇄 가변 영역; 또는
    (s) 서열식별번호: 5311로서 제시된 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 5312로서 제시된 경쇄 가변 영역
    을 포함하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
  7. 제1항에 있어서,
    (a) 서열식별번호: 5735를 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5736을 포함하는 경쇄; 또는
    (b) 서열식별번호: 5707을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5708을 포함하는 경쇄; 또는
    (c) 서열식별번호: 5709를 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5710을 포함하는 경쇄; 또는
    (d) 서열식별번호: 5711을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5712를 포함하는 경쇄; 또는
    (e) 서열식별번호: 5713을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5714를 포함하는 경쇄; 또는
    (f) 서열식별번호: 5715를 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5716을 포함하는 경쇄; 또는
    (g) 서열식별번호: 5717을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5718을 포함하는 경쇄; 또는
    (h) 서열식별번호: 5719를 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5720을 포함하는 경쇄; 또는
    (i) 서열식별번호: 5721을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5722를 포함하는 경쇄; 또는
    (j) 서열식별번호: 5723을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5724를 포함하는 경쇄; 또는
    (k) 서열식별번호: 5725를 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5726을 포함하는 경쇄; 또는
    (l) 서열식별번호: 5727을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5728을 포함하는 경쇄; 또는
    (m) 서열식별번호: 5729를 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5730을 포함하는 경쇄; 또는
    (n) 서열식별번호: 5731을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5732를 포함하는 경쇄; 또는
    (o) 서열식별번호: 5733을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5734를 포함하는 경쇄; 또는
    (p) 서열식별번호: 5737을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5738을 포함하는 경쇄; 또는
    (q) 서열식별번호: 5739를 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5740을 포함하는 경쇄; 또는
    (r) 서열식별번호: 5741을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5742를 포함하는 경쇄; 또는
    (s) 서열식별번호: 5743을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5744를 포함하는 경쇄
    를 포함하는 항체.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, IgG1 이소형을 갖는 항체.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, IgG1m3 동종이형을 갖는 항체.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, Fc 영역에 결합된 N-글리코시드-연결된 당 쇄를 포함하는 Fc 영역을 포함하며, 여기서 상기 당 쇄는 푸코스를 함유하지 않는 것인 항체.
  11. 제10항에 있어서, SARS-CoV-2를 중화시키는 항체.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 면역조정제, 시토카인, 세포독성제, 화학요법제, 진단제, 항바이러스제, 항미생물제 또는 약물에 접합된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
  13. 면역조정제, 시토카인, 세포독성제, 화학요법제, 진단제, 항바이러스제, 항미생물제 또는 약물에 접합된 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항의 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포함하는 항체 접합체.
  14. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항의 항체 또는 그의 항원-결합 단편 또는 제13항의 항체 접합체 및 1종 이상의 제약상 허용되는 담체, 희석제 또는 부형제를 포함하는 제약 조성물.
  15. 제14항에 있어서, SARS-CoV-2 스파이크 단백질에 결합하는 적어도 1종의 추가의 항체를 포함하는 제약 조성물.
  16. 제14항 또는 제15항에 있어서, 히스티딘, 염화나트륨, 수크로스 및 폴리소르베이트 80을 추가로 포함하는 제약 조성물.
  17. 제14항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 약 6.0의 pH를 갖는 제약 조성물.
  18. 제14항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 5 mM 히스티딘, 50 mM NaCl, 6% 수크로스 및 0.05% 폴리소르베이트 80을 포함하고, 약 6.0의 pH를 갖는 제약 조성물.
  19. 제15항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 제약 조성물 중 항체 농도가 약 35 mg/mL 내지 약 125 mg/mL인 제약 조성물.
  20. (a) 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 제시된 중쇄 가변 영역 서열 중 1개와 동일한 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역; 또는
    (b) 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 제시된 경쇄 가변 영역 서열 중 1개와 동일한 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역; 또는
    (c) 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 제시된 중쇄 가변 영역 서열 중 1개와 동일한 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역 및 중쇄 가변 영역 서열에 상응하는 경쇄 가변 영역 서열과 동일한 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역
    을 코딩하는 핵산.
  21. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항의 항체의 중쇄, 경쇄 또는 중쇄 및 경쇄 둘 다를 코딩하는 핵산.
  22. 제20항 또는 제21항의 핵산을 포함하는 벡터.
  23. 제20항 또는 제21항의 핵산 또는 제22항의 벡터를 포함하는 숙주 세포.
  24. (a) 제23항의 숙주 세포를 항체가 발현되도록 하는 조건 하에 배양하는 단계; 및
    (b) 발현된 항체를 회수하는 단계
    를 포함하는, 항체를 생산하는 방법.
  25. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항의 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 제13항의 항체 접합체 또는 제14항 내지 제19항 중 어느 한 항의 제약 조성물을 포함하는 리셉터클 및 SARS-CoV-2-연관 질환을 치료 또는 진단하는 데 그를 사용하는 것에 대한 지침서를 포함하는, SARS-CoV-2-연관 질환을 진단 또는 치료하는 데 유용한 제조 물품.
  26. (a) 세포를 검출가능한 작용제에 접합된 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항의 항체 또는 그의 항원-결합 단편과 접촉시키는 단계; 및
    (b) 세포에 대한 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 특이적 결합을 검출하는 단계
    를 포함하는, SARS-CoV-2-감염된 세포를 확인하는 방법.
  27. (a) 환자로부터 수득된 샘플을 검출가능한 작용제에 접합된 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항의 항체 또는 그의 항원-결합 단편과 접촉시키는 단계; 및
    (b) 샘플에 존재하는 SARS-CoV-2 항원에 대한 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 특이적 결합을 검출하는 단계
    를 포함하는, 환자에서 SARS-CoV-2 감염을 진단하는 방법.
  28. 환자에게 치료 유효량의 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항의 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 제13항의 항체 접합체 또는 제14항 내지 제19항 중 어느 한 항의 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하는, SARS-CoV-2-연관 질환을 치료 또는 예방하는 방법.
  29. 환자에게 치료 유효량의 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항의 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 제13항의 항체 접합체 또는 제14항 내지 제19항 중 어느 한 항의 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하는, COVID-19를 치료 또는 예방하는 방법.
  30. (a) 환자로부터 수득된 샘플을 검출가능한 작용제에 접합된 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항의 항체 또는 그의 항원-결합 단편과 접촉시키는 단계;
    (b) 샘플에 존재하는 SARS-CoV-2 항원에 대한 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 특이적 결합을 검출하는 단계; 및
    (c) 환자에게 치료 유효량의 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항의 항체 또는 그의 항원-결합 단편 또는 제14항 내지 제19항 중 어느 한 항의 제약 조성물을 투여하는 단계
    를 포함하는, COVID-19를 치료 또는 예방하는 방법.
  31. 제29항 또는 제30항에 있어서, 항체가 약 35 mg 내지 약 7000 mg으로 환자에게 정맥내로 또는 피하로 투여되는 것인 방법.
  32. 제29항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서, 환자에게 SARS-CoV-2 S 단백질에 결합하는 또 다른 항체를 투여하는 것을 추가로 포함하는 방법.
  33. 제29항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서, 환자가 경도 내지 중등도 COVID-19를 갖는 것인 방법.
  34. 제29항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서, 환자가 COVID-19에 걸릴 위험이 있는 것인 방법.
  35. 제29항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서, 환자가 중증 COVID-19로 진행하거나 입원할 위험이 높은 것인 방법.
  36. 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 요법에 사용하기 위한 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 항체 접합체 또는 제약 조성물.
  37. 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, COVID-19의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 항체 접합체 또는 제약 조성물.
  38. 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, COVID-19의 치료 또는 예방을 위한 의약의 제조에 사용하기 위한 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 항체 접합체 또는 제약 조성물.
  39. (a) 항-코로나바이러스 백신의 샘플을 검출가능한 작용제에 접합된 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항의 항체 또는 그의 항원-결합 단편과 접촉시키는 단계; 및
    (b) 샘플에 존재하는 항-코로나바이러스 백신에 대한 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 특이적 결합을 검출하는 단계
    를 포함하며, 여기서 항-코로나바이러스 백신은 코로나바이러스 서브유닛 또는 그의 단편을 포함하는 것인, 항-코로나바이러스 백신을 시험하는 방법.
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