JP2024515303A - 操作された抗体定常領域変異体を有する分子 - Google Patents

操作された抗体定常領域変異体を有する分子 Download PDF

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Abstract

（ｉ）重鎖可変領域（ＶＨ）と抗体重鎖の第１の定常領域（ＣＨ１）に由来する領域を含む第１ポリペプチド、及び、（ｉｉ）軽鎖可変領域（ＶＬ）と抗体軽鎖の定常領域（ＣＬ）に由来する領域とを含む第２ポリペプチド、を含む結合分子であって、ＣＨ１領域に由来する領域及び／又はＣＬ領域に由来する領域が１つ以上の抗原結合ループを含む、結合分子。

Description

（関連出願の相互参照）
本出願は、２０２１年４月１９日に出願された米国特許仮出願第６３／１７６，７１８号、２０２１年４月１９日に出願された同第６３／１７６，７２０号、２０２１年４月１９日に出願された同第６３／１７６，７２５号、２０２１年４月１９日に出願された同第６３／１７６，７３１号、２０２１年４月１９日に出願された同第６３／１７６，７３６号の利益を主張し、それぞれが参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
（電子的に提出された配列表の参照）
本出願は、ＡＳＣＩＩ形式の配列表としてＥＦＳ－Ｗｅｂを介して電子的に提出され、ファイル名「１４６２０－６８３－２２８＿ＳＥＱ＿ＬＩＳＴＩＮＧ．ｔｘｔ」で２０２２年４月１４日に作成され、１８，１２４バイトのサイズを有する配列表を含む。ＥＦＳ－Ｗｅｂを介して提出された配列表は、本明細書の一部であり、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
１．分野
抗原に結合することができる抗体定常領域の変異体を含む結合分子が本明細書において提供される。結合分子を含む医薬組成物又はキット、それを作製するプロセス、及びそれを使用する方法も本明細書において提供される。
２．背景
本開示は、ＶＨ及びＶＬ領域の外側に追加の抗原結合部位を有する改善された抗体構造及びその使用を初めて開発したものである。抗体は、種々の疾患及び障害を治療するために首尾よく使用されてきた。従来の抗体は、ＶＨ領域及びＶＬ領域を介してその抗原を認識する。通常は結合しない標的に結合するようにタンパク質を操作するために、様々な技術が開発されている。
複数の抗原に対する従来の抗体の結合能力を拡張し、したがって抗体の治療効果を増大させるために、ＶＨ及びＶＬ領域の外側に追加の抗原結合部位を有する改善された抗体構造が当技術分野において必要とされている。
３．概要
一態様では、抗体重鎖のＣＨ１領域に由来する領域及び／又は抗体軽鎖のＣＬ領域に由来する領域を含む結合分子であって、ＣＨ１領域に由来する領域及び／又はＣＬ領域に由来する領域が１つ以上の抗原結合ループを含む、結合分子が本明細書で提供される。
一態様では、結合分子であって、（ｉ）重鎖可変領域（ＶＨ）と抗体重鎖のＣＨ１領域に由来する領域とを含む第１ポリペプチド、及び、（ｉｉ）軽鎖可変領域（ＶＬ）と抗体軽鎖のＣＬ領域に由来する領域とを含む第２ポリペプチド、を含み、ＣＨ１領域に由来する領域及び／又はＣＬ領域に由来する領域が、１つ以上の抗原結合ループを含む、結合分子が本明細書で提供される。
いくつかの実施形態では、ＣＨ１領域に由来する領域内の１つ以上の抗原結合ループは、ＣＨ１領域のＡＢ、ＢＣ、ＣＤ、ＤＥ、ＥＦ、及び／又は、ＦＧループ領域にある。いくつかの実施形態では、ＣＬ領域に由来する領域内の１つ以上の抗原結合ループは、ＣＬ領域のＡＢ、ＢＣ、ＣＤ、ＤＥ、ＥＦ、及び／又は、ＦＧループ領域にある。いくつかの実施形態では、ＣＨ１領域に由来する領域内の１つ以上の抗原結合ループは、ＣＨ１領域のＡＢ、ＢＣ、ＣＤ、ＤＥ、ＥＦ、及び／又は、ＦＧループ領域の外側に位置する。いくつかの実施形態では、ＣＬ領域に由来する領域内の１つ以上の抗原結合ループは、ＣＬ領域のＡＢ、ＢＣ、ＣＤ、ＤＥ、ＥＦ、及び／又は、ＦＧループ領域の外側に位置する。いくつかの実施形態では、ＣＨ１領域に由来する領域内の１つ以上の抗原結合ループは、ＣＨ１領域のＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、及び／又は、Ｆβ鎖に位置する。いくつかの実施形態では、ＣＬ領域に由来する領域内の１つ以上の抗原結合ループは、ＣＬ領域のＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、及び／又は、Ｆβ鎖に位置する。
いくつかの実施形態では、ＣＨ１領域に由来する領域は、１つ又は２つの抗原結合ループを含む。いくつかの実施形態では、ＣＬ領域に由来する領域は、１つ又は２つの抗原結合ループを含む。
いくつかの実施形態では、ＣＨ１領域に由来する領域は、ＣＨ１領域のＣＤループ領域に１つの抗原結合ループを含む。いくつかの実施形態では、ＣＨ１領域に由来する領域は、ＣＨ１領域のＤＥループ領域に１つの抗原結合ループを含む。いくつかの実施形態では、ＣＨ１領域に由来する領域は、ＣＨ１領域のＣＤループ領域に１つの抗原結合ループを含み、ＣＨ１領域のＤＥループ領域に１つの抗原結合ループを含む。
いくつかの実施形態では、ＣＬ領域に由来する領域は、ＣＬ領域のＣＤループ領域に１つの抗原結合ループを含む。いくつかの実施形態では、ＣＬ領域に由来する領域は、ＣＬ領域のＤＥループ領域に１つの抗原結合ループを含む。いくつかの実施形態では、ＣＬ領域に由来する領域は、ＣＬ領域のＣＤループ領域における１つの抗原結合ループ及びＣＬ領域のＤＥループ領域における１つの抗原結合ループを含む。
いくつかの実施形態では、ＣＨ１領域に由来する領域は、ＣＨ１領域のＣＤループ領域に１つの抗原結合ループを含み、ＣＬ領域に由来する領域は、ＣＬ領域のＣＤループ領域に１つの抗原結合ループを含む。いくつかの実施形態では、ＣＨ１領域に由来する領域は、ＣＨ１領域のＣＤループ領域に１つの抗原結合ループを含み、ＣＬ領域に由来する領域は、ＣＬ領域のＤＥループ領域に１つの抗原結合ループを含む。いくつかの実施形態では、ＣＨ１領域に由来する領域は、ＣＨ１領域のＣＤループ領域に１つの抗原結合ループを含み、ＣＬ領域に由来する領域は、ＣＬ領域のＣＤループ領域における１つの抗原結合ループ及びＣＬ領域のＤＥループ領域における１つの抗原結合ループを含む。
いくつかの実施形態では、ＣＨ１領域に由来する領域は、ＣＨ１領域のＤＥループ領域に１つの抗原結合ループを含み、ＣＬ領域に由来する領域は、ＣＬ領域のＣＤループ領域に１つの抗原結合ループを含む。いくつかの実施形態では、ＣＨ１領域に由来する領域は、ＣＨ１領域のＤＥループ領域に１つの抗原結合ループを含み、ＣＬ領域に由来する領域は、ＣＬ領域のＤＥループ領域に１つの抗原結合ループを含む。いくつかの実施形態では、ＣＨ１領域に由来する領域は、ＣＨ１領域のＤＥループ領域に１つの抗原結合ループを含み、ＣＬ領域に由来する領域は、ＣＬ領域のＣＤループ領域における１つの抗原結合ループ及びＣＬ領域のＤＥループ領域における１つの抗原結合ループを含む。
いくつかの実施形態では、ＣＨ１領域に由来する領域は、ＣＨ１領域のＣＤループ領域における１つの抗原結合ループ及びＣＨ１領域のＤＥループ領域における１つの抗原結合ループを含み、ＣＬ領域に由来する領域は、ＣＬ領域のＣＤループ領域に１つの抗原結合ループを含む。いくつかの実施形態では、ＣＨ１領域に由来する領域は、ＣＨ１領域のＣＤループ領域における１つの抗原結合ループ及びＣＨ１領域のＤＥループ領域における１つの抗原結合ループを含み、ＣＬ領域に由来する領域は、ＣＬ領域のＤＥループ領域に１つの抗原結合ループを含む。いくつかの実施形態では、ＣＨ１領域に由来する領域は、ＣＨ１領域のＣＤループ領域における１つの抗原結合ループ及びＣＨ１領域のＤＥループ領域における１つの抗原結合ループを含み、ＣＬ領域に由来する領域は、ＣＬ領域のＣＤループ領域における１つの抗原結合ループ及びＣＬ領域のＤＥループ領域における１つの抗原結合ループを含む。
いくつかの実施形態では、ＣＨ１領域由来する領域は、配列番号１のアミノ酸配列を含むヒトＩｇＧ１ ＣＨ１領域に由来する領域であり、ＣＨ１領域に由来する領域は、配列番号１に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％又は９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＬ領域に由来する領域は、配列番号２のアミノ酸配列を含むヒトＣＬカッパ領域に由来する領域であり、ＣＬ領域に由来する領域は、配列番号２に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％又は９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＬ領域に由来する領域は、配列番号３のアミノ酸配列を含むヒトＣＬラムダ領域に由来する領域であり、ＣＬ領域に由来する領域は、配列番号３と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％又は９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＨ１領域のＣＤループ領域における抗原結合ループは、ヒトＩｇＧ１ ＣＨ１領域のＣＤループのアミノ酸残基ＴＳＧを置換する。いくつかの実施形態では、ＣＨ１領域のＤＥループ領域における抗原結合ループは、ヒトＩｇＧ１ ＣＨ１領域のＤＥループのアミノ酸残基ＱＳＳを置換する。いくつかの実施形態では、ＣＬ領域のＣＤループ領域における抗原結合ループは、ヒトＣＬカッパ領域のＣＤループのアミノ酸残基ＳＧＮＳを置換する。いくつかの実施形態では、ＣＬ領域のＤＥループ領域における抗原結合ループは、ヒトＣＬカッパ領域のＤＥループのアミノ酸残基ＳＫＤを置換する。
いくつかの実施形態では、１つ以上の抗原結合ループのそれぞれは、７～１５個のアミノ酸残基を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨ領域及びＶＬ領域は第１の抗原に結合し、ＣＨ１領域に由来する領域及び／又はＣＬ領域に由来する領域は第２の抗原に結合する。いくつかの実施形態では、第１の抗原及び第２の抗原は、同じ抗原である。いくつかの実施形態では、第１の抗原及び第２の抗原は、２つの異なる抗原である。
別の態様では、結合分子をコードする核酸が本明細書で提供される。
別の態様では、結合分子をコードする核酸を含むベクターが本明細書で提供される。
更に一態様では、宿主細胞において結合分子をコードするポリヌクレオチドを発現させることを含む、結合分子を作製する方法が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、結合分子は、抗体重鎖のＣＨ１領域に由来する領域及び／又は抗体軽鎖のＣＬ領域に由来する領域を含み、ＣＨ１領域に由来する領域及び／又はＣＬ領域に由来する領域は、１つ以上の抗原結合ループを含む。いくつかの実施形態では、結合分子は、（ｉ）重鎖可変領域（ＶＨ）と抗体重鎖のＣＨ１領域に由来する領域とを含む第１ポリペプチド、及び、（ｉｉ）軽鎖可変領域（ＶＬ）と抗体軽鎖のＣＬ領域に由来する領域とを含む第２ポリペプチド、を含み、ＣＨ１領域に由来する領域及び／又はＣＬ領域に由来する領域が、１つ以上の抗原結合ループを含む。
更に一態様では、医薬組成物が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、薬学的組成物は、（ａ）抗体重鎖のＣＨ１領域に由来する領域及び／又は抗体軽鎖のＣＬ領域に由来する領域を含む結合分子であって、ＣＨ１領域に由来する領域及び／又はＣＬ領域に由来する領域が１つ以上の抗原結合ループを含む、結合分子と、（ｂ）医薬的に許容される賦形剤と、を含む。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、（ｉ）重鎖可変領域（ＶＨ）と抗体重鎖のＣＨ１領域に由来する領域とを含む第１ポリペプチド、及び、（ｉｉ）軽鎖可変領域（ＶＬ）と抗体軽鎖のＣＬ領域に由来する領域とを含む第２ポリペプチド、を含む、結合分子であって、ＣＨ１領域に由来する領域及び／又はＣＬ領域に由来する領域は１つ以上の抗原結合ループを含む、結合分子と、（ｂ）医薬的に許容される賦形剤と、を含む。
更に別の態様では、結合分子又は結合分子をコードする核酸を対象に投与することを含む、対象における疾患又は障害を治療する方法が、本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、結合分子は、抗体重鎖のＣＨ１領域に由来する領域及び／又は抗体軽鎖のＣＬ領域に由来する領域を含み、ＣＨ１領域に由来する領域及び／又はＣＬ領域に由来する領域は、１つ以上の抗原結合ループを含む。いくつかの実施形態では、結合分子は、（ｉ）重鎖可変領域（ＶＨ）と抗体重鎖のＣＨ１領域に由来する領域とを含む第１ポリペプチド、及び、（ｉｉ）軽鎖可変領域（ＶＬ）と抗体軽鎖のＣＬ領域に由来する領域とを含む第２ポリペプチド、を含み、ＣＨ１領域に由来する領域及び／又はＣＬ領域に由来する領域が、１つ以上の抗原結合ループを含む。いくつかの実施形態では、疾患又は障害は、結合分子の抗原に関連する。
一態様では、結合分子の集団を含む定常領域ライブラリー（ＣＲＬ）が本明細書で提供され、結合分子のそれぞれは、（ｉ）重鎖可変領域（ＶＨ）と抗体重鎖のＣＨ１領域に由来する領域とを含む第１ポリペプチド、及び、（ｉｉ）軽鎖可変領域（ＶＬ）と抗体軽鎖のＣＬ領域に由来する領域とを含む第２ポリペプチド、を含み、結合分子の集団は、ＣＨ１領域に由来する領域及び／又はＣＬ領域に由来する領域に多様なアミノ酸配列を含む。別の態様では、抗体のＣＨ１領域に由来する領域及び／又はＣＬ領域に由来する領域をそれぞれが含む分子の集団を含む定常領域ライブラリー（ＣＲＬ）が本明細書で提供され、ここで、分子の集団は、ＣＨ１領域に由来する領域及び／又はＣＬ領域に由来する領域において多様なアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＨ１領域に由来する領域内の多様なアミノ酸配列は、ＣＨ１領域のＡＢ、ＢＣ、ＣＤ、ＤＥ、ＥＦ、及び／又はＦＧループ領域にある。いくつかの実施形態では、ＣＬ領域に由来する領域内の多様なアミノ酸配列は、ＣＬ領域のＡＢ、ＢＣ、ＣＤ、ＤＥ、ＥＦ、及び／又はＦＧループ領域にある。いくつかの実施形態では、ＣＨ１領域に由来する領域内の多様なアミノ酸配列は、ＣＨ１領域のＡＢ、ＢＣ、ＣＤ、ＤＥ、ＥＦ、及び／又はＦＧループ領域の外側に位置する。いくつかの実施形態では、ＣＬ領域に由来する領域内の多様なアミノ酸配列は、ＣＬ領域のＡＢ、ＢＣ、ＣＤ、ＤＥ、ＥＦ、及び／又はＦＧループ領域の外側に位置する。いくつかの実施形態では、ＣＨ１領域に由来する領域における多様なアミノ酸配列は、ＣＨ１領域のＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、及び／又はＦβ鎖に位置する。いくつかの実施形態では、ＣＬ領域に由来する領域における多様なアミノ酸配列は、ＣＬ領域のＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、及び／又はＦβ鎖に位置する。
いくつかの実施形態では、分子の集団は、ＣＨ１領域に由来する領域中の１つ又は２つのループ領域中に多様なアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、分子の集団は、ＣＬ領域に由来する領域中の１つ又は２つのループ領域中に多様なアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、分子の集団は、ＣＨ１領域のＣＤループ領域に多様なアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、分子の集団は、ＣＨ１領域のＤＥループ領域に多様なアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、分子の集団は、ＣＨ１領域のＣＤループ領域及びＤＥループ領域に多様なアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、分子の集団は、ＣＬ領域のＣＤループ領域に多様なアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、分子の集団は、ＣＬ領域のＤＥループ領域に多様なアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、分子の集団は、ＣＬ領域のＣＤループ領域及びＤＥループ領域に多様なアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、分子の集団は、ＣＨ１領域のＣＤループ領域に多様なアミノ酸配列を含み、かつ分子の集団は、ＣＬ領域のＣＤループ領域に多様なアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、分子の集団は、ＣＨ１領域のＣＤループ領域に多様なアミノ酸配列を含み、分子の集団は、ＣＬ領域のＤＥループ領域に多様なアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、分子の集団は、ＣＨ１領域のＣＤループ領域に多様なアミノ酸配列を含み、かつ分子の集団は、ＣＬ領域のＣＤループ領域及びＤＥループ領域に多様なアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、分子の集団は、ＣＨ１領域のＤＥループ領域に多様なアミノ酸配列を含み、分子の集団は、ＣＬ領域のＣＤループ領域に多様なアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、分子の集団は、ＣＨ１領域のＤＥループ領域に多様なアミノ酸配列を含み、分子の集団は、ＣＬ領域のＤＥループ領域に多様なアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、分子の集団は、ＣＨ１領域のＤＥループ領域に多様なアミノ酸配列を含み、分子の集団は、ＣＬ領域のＣＤループ領域及びＤＥループ領域に多様なアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、分子の集団は、ＣＨ１領域のＣＤループ領域及びＣＨ１領域のＤＥループ領域に多様なアミノ酸配列を含み、かつ分子の集団は、ＣＬ領域のＣＤループ領域に多様なアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、分子の集団は、ＣＨ１領域のＣＤループ領域及びＤＥループ領域に多様なアミノ酸配列を含み、分子の集団は、ＣＬ領域のＤＥループ領域に多様なアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、分子の集団は、ＣＨ１領域のＣＤループ領域及びＤＥループ領域に多様なアミノ酸配列を含み、分子の集団は、ＣＬ領域のＣＤループ領域及びＤＥループ領域に多様なアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＨ１領域由来する領域は、配列番号１のアミノ酸配列を含むヒトＩｇＧ１ ＣＨ１領域に由来する領域であり、ＣＨ１領域に由来する領域は、配列番号１に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％又は９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＬ領域に由来する領域は、配列番号２のアミノ酸配列を含むヒトＣＬカッパ領域に由来する領域であり、ＣＬ領域に由来する領域は、配列番号２に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％又は９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＬ領域に由来する領域は、配列番号３のアミノ酸配列を含むヒトＣＬラムダ領域に由来する領域であり、ＣＬ領域に由来する領域は、配列番号３に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％又は９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＩｇＧ１ ＣＨ１領域のＣＤループのアミノ酸残基ＴＳＧは、ＣＲＬ中の分子中の多様なアミノ酸配列で置換される。いくつかの実施形態では、ヒトＩｇＧ１ ＣＨ１領域のＤＥループのアミノ酸残基ＱＳＳは、ＣＲＬ中の分子中の多様なアミノ酸配列で置換される。いくつかの実施形態では、ヒトＣＬカッパ領域のＣＤループのアミノ酸残基ＳＧＮＳは、ＣＲＬ中の分子中の多様なアミノ酸配列で置換されている。いくつかの実施形態では、ヒトＣＬカッパ領域のＤＥループのアミノ酸残基ＳＫＤは、ＣＲＬ中の分子中の多様なアミノ酸配列で置換されている。
いくつかの実施形態では、多様なアミノ酸配列は、７～１５個のアミノ酸残基を含む。いくつかの実施形態では、各分子は、ＶＨ領域とＶＬ領域とを更に含む。
いくつかの実施形態では、結合分子又は分子はＦａｂ断片である。
いくつかの実施形態では、１つのループ領域を有するＣＲＬの多様性は、１０７～１０１６の範囲である。いくつかの実施形態では、２つのループ領域を有するＣＲＬの多様性は、１０１８～１０３３の範囲である。
別の態様では、第１の抗原に結合する第１の結合ドメイン及び第２の抗原に結合する第２の結合ドメインを含む結合分子を同定するための方法であって、参照レベルよりも高い親和性で第２の抗原に結合する結合分子を同定するためにＣＲＬをスクリーニングすることを含み、第１の結合ドメインが抗体のＶＨ領域及びＶＬ領域を含み、第２の結合ドメインが抗体定常領域変異体を含む、方法が、本明細書で提供される。別の態様では、抗原に結合することができる抗体定常領域変異体を同定する機能を実行するための第１のステップと、抗体定常領域変異体を含む結合分子を構築する第２のステップとを含む、結合分子を生成する方法が、本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、第１のステップは、ＣＲＬをスクリーニングすることを含む。更に別の態様では、本明細書で提供される方法に従って作製された分化細胞が本明細書で提供される。
４．図面の簡単な説明
本明細書で提供される定常領域変異体を含む例示的な結合分子を示す。 例示的なＦａｂ定常領域ライブラリー（ＣＲＬ）の構築を示す。ヒトＣＬカッパ及びヒトＩｇＧ１ ＣＨ１内に位置するＣＤ及びＤＥループの位置及び元の配列を示す。図１Ｂにおいて強調された位置の１つ以上は、目的の標的に対する新規結合分子を選択するために使用される多様化されたライブラリーで置換される。 例示的なＦａｂ定常領域ライブラリー（ＣＲＬ）の構築を示す。Ｆａｂ ＣＲＬの結合ループの多様化した組成及び理論的多様性を示す。 抗ポリヒスチジンモノクローナル抗体に対するＦａｂ定常領域バインダーの選択を示す。具体的には、１～６ラウンドのパニング後の３つの濃縮プールの抗ポリヒスチジンモノクローナル抗体結合についてのポリクローナルファージＥＬＩＳＡの結果を示す。 抗ポリヒスチジンモノクローナル抗体に対するＦａｂ定常領域バインダーの選択を示す。具体的には、１～６ラウンドのパニング後の３つの濃縮プールのＸＯ１Ｂ１結合についてのポリクローナルファージＥＬＩＳＡの結果を示す。 抗ポリヒスチジンモノクローナル抗体に対するＦａｂ定常領域バインダーの選択を示す。具体的には、４ラウンドのパニング後の９つのクローンの結合ループのアミノ酸配列を示す。 Ｆａｂ ＣＲＬからｍＥｐｈＡ２－Ｆｃに対するＦａｂ定常領域バインダーを選択する全体的なプロセスを示す。 ４～８ラウンドのパニング後の５つの濃縮プールのｍＥｐｈＡ２－Ｆｃ結合についてのポリクローナルファージＥＬＩＳＡの結果を示す。ｍＥｐｈＡ２－Ｆｃ結合の陽性対照は抗ｍＥｐｈＡ２－Ｆｃ ＣＨ２ドメイン－ファージ融合物であり、陰性対照は抗ＸＯ１Ｂ１親Ｆａｂ－ファージ融合物である。親Ｆａｂに対するシグナルを以下のように計算する。（パニングプールのｍＥｐｈＡ２－Ｆｃ ＲＬＵ）／（親ＦａｂのｍＥｐｈＡ２－Ｆｃ ＲＬＵ）。 ６～８ラウンドのパニング後の５つの濃縮プールからの３７８クローンのｍＥｐｈＡ２－Ｆｃ結合（図４Ｂ）及びＸＯ１Ｂ１結合（図４Ｃ）についてのモノクローナルファージＥＬＩＳＡの結果を示す。 ６～８ラウンドのパニング後の５つの濃縮プールからの３７８クローンのｍＥｐｈＡ２－Ｆｃ結合（図４Ｂ）及びＸＯ１Ｂ１結合（図４Ｃ）についてのモノクローナルファージＥＬＩＳＡの結果を示す。 サンガー配列決定による更なる分析のために選択された１６個のクローンのｍＥｐｈＡ２－Ｆｃ結合及びＸＯ１Ｂ１結合の両方についてのモノクローナルファージＥＬＩＳＡの結果を示し、これらのクローンは全て、６ラウンドのパニング後のＰ８由来である。 Ｐ８から選択された１６個のクローン全てから同定されたＣＨ１ ＣＤループライブラリーに由来する単一アミノ酸配列を示す。 一段階Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ Ｍｅｔａｌ Ａｆｆｉｎｉｔｙ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ（ＩＭＡＣ）精製を使用した、ＨＥＫ Ｅｘｐｉ２９３細胞における哺乳動物発現から単離されたｍＥｐｈＡ２－Ｆｃ（ＥＰＡＸＢ１として同定される）に対する単一Ｆａｂ定常領域バインダーのサイズ排除－高速液体クロマトグラフィ（ＳＥ－ＨＰＬＣ）並びに還元（Ｒ）及び非還元（ＮＲ）ドデシル硫酸ナトリウム－ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）特徴付けを示す。図４Ｆは更に、質量分析を用いたＥＰＡＸＢ１の分子量の決定を示す。 表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）分析を使用した、ｍＥｐｈＡ２－Ｆｃ及びＸＯ１Ｂ１の両方に対するＥＰＡＸＢ１の結合動態及び親和性を示す。図４Ｇは更に、ｍＥｐｈＡ２－Ｆｃ及びＸＯ１Ｂ１の両方に対する操作されたＣＲＬを欠く抗ＸＯ１Ｂ１親Ｆａｂの結合動態及び親和性を示す。 ＮＧＳ及びＳＰＲによってパニングプールのサブセットから同定された新しいｆａｂ定常領域バインダー（ＥＰＡＸＢ１７、ＥＰＡＸＢ２７、及びＥＰＡＸＢ２８）を示す。 ＥＰＡＸＢ１の定常領域と新たな可変領域との対合及びＥＰＡＸＢ１のモノクローナルとしての再フォーマット化を示す。 再フォーマットされた精製Ｆａｂ及びモノクローナル抗体のサイズ排除－高速液体クロマトグラフィ（ＳＥ－ＨＰＬＣ）特徴付けを示す。 再フォーマットされた二重特異性Ｆａｂ及びモノクローナル抗体が、それらの対応する標的への結合を保持することを示す。 標準モノクローナル抗体フォーマットに再フォーマットされた抗ＩＬ２３Ｒ×抗ＥｐｈＡ２及び抗ＨＥＲ２×抗ＥｐｈＡ２ ＦａｂについてＳＥ－ＨＰＬＣによって観察された精製収率を示す。 ＨＥＲ２×ＥｐｈＡ２及びＩＬ２３×ＥｐｈＡ２二重特異性抗体並びに対応する単一特異性対照抗体の、遺伝子導入されていないＨＥＫ細胞（図８Ａ）、ヒトＨＥＲ２を安定的に発現するＨＥＫ細胞（図８Ｂ）、ヒトＥｐｈＡ２を安定的に発現するＨＥＫ細胞（図８Ｃ）、及びヒトＩＬ２３Ｒを安定的に発現するＨＥＫ細胞（図８Ｄ）に対する結合データを示す。 ＨＥＲ２×ＥｐｈＡ２及びＩＬ２３×ＥｐｈＡ２二重特異性抗体並びに対応する単一特異性対照抗体の、遺伝子導入されていないＨＥＫ細胞（図８Ａ）、ヒトＨＥＲ２を安定的に発現するＨＥＫ細胞（図８Ｂ）、ヒトＥｐｈＡ２を安定的に発現するＨＥＫ細胞（図８Ｃ）、及びヒトＩＬ２３Ｒを安定的に発現するＨＥＫ細胞（図８Ｄ）に対する結合データを示す。 ＨＥＲ２×ＥｐｈＡ２及びＩＬ２３×ＥｐｈＡ２二重特異性抗体並びに対応する単一特異性対照抗体の、遺伝子導入されていないＨＥＫ細胞（図８Ａ）、ヒトＨＥＲ２を安定的に発現するＨＥＫ細胞（図８Ｂ）、ヒトＥｐｈＡ２を安定的に発現するＨＥＫ細胞（図８Ｃ）、及びヒトＩＬ２３Ｒを安定的に発現するＨＥＫ細胞（図８Ｄ）に対する結合データを示す。 ＨＥＲ２×ＥｐｈＡ２及びＩＬ２３×ＥｐｈＡ２二重特異性抗体並びに対応する単一特異性対照抗体の、遺伝子導入されていないＨＥＫ細胞（図８Ａ）、ヒトＨＥＲ２を安定的に発現するＨＥＫ細胞（図８Ｂ）、ヒトＥｐｈＡ２を安定的に発現するＨＥＫ細胞（図８Ｃ）、及びヒトＩＬ２３Ｒを安定的に発現するＨＥＫ細胞（図８Ｄ）に対する結合データを示す。 バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）による、抗ＨＥＲ２×抗ＥｐｈＡ ２二重特異性Ｆａｂ及び抗ＩＬ２３Ｒ×抗ＥｐｈＡ２二重特異性Ｆａｂ（それぞれ図９Ａ及び９Ｂ）並びにｍＡｂ形式の抗ＨＥＲ２×抗ＥｐｈＡ２二重特異性Ｆａｂ（図９Ｃ）のそれぞれの標的への同時結合を示す。 バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）による、抗ＨＥＲ２×抗ＥｐｈＡ２二重特異性Ｆａｂ及び抗ＩＬ２３Ｒ×抗ＥｐｈＡ２二重特異性Ｆａｂ（それぞれ図９Ａ及び９Ｂ）並びにｍＡｂ形式の抗ＨＥＲ２×抗ＥｐｈＡ２二重特異性Ｆａｂ（図９Ｃ）のそれぞれの標的への同時結合を示す。 バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）による、抗ＨＥＲ２×抗ＥｐｈＡ２二重特異性Ｆａｂ及び抗ＩＬ２３Ｒ×抗ＥｐｈＡ２二重特異性Ｆａｂ（それぞれ図９Ａ及び９Ｂ）並びにｍＡｂ形式の抗ＨＥＲ２×抗ＥｐｈＡ２二重特異性Ｆａｂ（図９Ｃ）のそれぞれの標的への同時結合を示す。
５．詳細な記述
本開示は、Ｆａｂが所望の第２の抗原に結合することができるように、ＦａｂのＣＨ１及び／又はＣＬ領域を改変することができるという驚くべき発見に部分的に基づく。このような改変は、ＣＨ１領域及び／又はＣＬ領域の表面に元々存在する特定のアミノ酸を、目的の標的に結合するように選択され得る多様なアミノ酸で置換することによって達成される。このような改変はまた、ＣＨ１領域及び／又はＣＬ領域の表面で目的の標的に結合するように選択され得る更なる多様化したアミノ酸を導入することによって達成される。
５．１ 定義
本明細書に記載又は参照されている技術及び手順には、当業者が概ねよく理解しているもの、及び／又は当業者が従来の手法を使用して通常採用しているもの、例えば、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ｅｔ ａｌ．，３ｄ ｅｄ．２００１）、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ａｕｓｕｂｅｌ，ｅｔ ａｌ．ｅｄｓ．，２００３）、Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｆｒｏｍ Ｂｅｎｃｈ ｔｏ Ｃｌｉｎｉｃ（Ａｎ，ｅｄ．２００９）、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ（Ａｌｂｉｔａｒ，ｅｄ．２０１０）、及びＡｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｖｏｌｓ １ ａｎｄ ２（Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ ａｎｄ Ｄｕｂｅｌ，ｅｄｓ．，２ｄ ｅｄ．２０１０）に記載されている広く利用されている手法などが含まれる。
本明細書中で特に定義されていない限り、本明細書で使用されている技術用語及び科学用語は、当業者によって通常理解される意味を有する。この明細書を解釈するために、以下の用語の説明が適用され、必要に応じて、単数形で使用される用語は複数形も含まれ、その逆もまた同様である。記載された用語の任意の説明が、参照により本明細書に組み込まれる任意の文書と矛盾する場合、以下に記載された用語の説明が優先するものとする。
「抗体」、「免疫グロブリン」又は「Ｉｇ」という用語は、本明細書で互換的に使用され、最も広い意味で使用され、具体的には、例えば、以下に記載されるように、モノクローナル抗体（アゴニスト、アンタゴニスト、中和抗体、全長又はインタクトモノクローナル抗体を含む）、ポリエピトープ又はモノエピトープ特異性を有する抗体組成物、ポリクローナル又は一価抗体、多価抗体、及び少なくとも２つのインタクト抗体から形成された多重特異性抗体（例えば、所望の生物学的活性を示す限りにおいて、二重特異性抗体）を包含する。抗体は、ヒト、ヒト化、キメラ、及び／又は親和性成熟されたものであり、並びに他の種、例えば、マウス及びウサギなどからの抗体であり得る。「抗体」という用語は、特定の分子抗原に結合することができ、２つの同一の対のポリペプチド鎖で構成される、ポリペプチドの免疫グロブリンクラス内のＢ細胞のポリペプチド産物を含むことを意図しており、各対は、１つの重鎖（約５０～７０ｋＤａ）及び１つの軽鎖（約２５ｋＤａ）を有し、各鎖の各アミノ末端部分は、約１００～約１３０以上のアミノ酸の可変領域を含み、各鎖の各カルボキシ末端部分は、定常領域を含む。例えば、Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ（Ｂｏｒｒｅｂａｅｃｋ，ｅｄ．，２ｄ ｅｄ．１９９５）、及びＫｕｂｙ，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（３ｄ ｅｄ．１９９７）を参照。具体的な実施形態では、特定の分子抗原は、ポリペプチド又はエピトープを含む、本明細書において提供される抗体によって結合され得る。また、抗体には、合成抗体、組み換え生成抗体、ラクダ化抗体又はそれらのヒト化変異体、細胞内抗体、及び抗イディオタイプの（抗Ｉｄ）抗体が含まれるが、これらに限定されない。本明細書で使用される「抗体」という用語はまた、Ｆｃ領域及び上記のうちのいずれかの機能的断片（例えば、抗原結合断片）を有する任意の結合分子を含み、機能的断片は、断片が由来する抗体の結合活性の一部又は全部を保持する抗体重鎖又は軽鎖ポリペプチドの一部を指す。機能的断片（例えば、抗原結合断片）の非限定的な例としては、単鎖Ｆｖｓ（ｓｃＦｖ）（例えば、単一特異性、二重特異性などを含む）、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）断片、Ｆ（ａｂ）２断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、ジスルフィド結合Ｆｖｓ（ｄｓＦｖ）、Ｆｄ断片、Ｆｖ断片、ダイアボディ、トライアボディ、テトラボディ、及びミニボディが挙げられる。特に、本明細書において提供される抗体は、免疫グロブリン分子及び免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な部分、例えば、抗原に結合する抗原結合部位（例えば、抗体の１つ以上のＣＤＲ）を含む抗原結合ドメイン又は分子を含む。そのような抗体断片は、例えば、Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（１９８９）、Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ａ Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ｄｅｓｋ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ（Ｍｙｅｒｓ，ｅｄ．，１９９５）、Ｈｕｓｔｏｎ，ｅｔ ａｌ．，１９９３，Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃｓ ２２：１８９－２２４、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ ａｎｄ Ｓｋｅｒｒａ，１９８９，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．１７８：４９７－５１５、及びＤａｙ，Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（２ｄ ｅｄ．１９９０）に見出すことができる。本明細書において提供される抗体は、免疫グロブリン分子の任意のクラス（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、及びＩｇＡ）又は任意のサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２）であり得る。抗体は、アゴニスト抗体又はアンタゴニスト抗体であり得る。
「抗原」とは、抗体が選択的に結合することができる構造である。標的抗原は、ポリペプチド、炭水化物、核酸、脂質、ハプテン、又は他の天然に存在する化合物若しくは合成化合物であり得る。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、標的抗原はポリペプチドである。特定の実施形態では、抗原は、細胞と関連し、例えば、細胞上又は細胞内に存在する。
「インタクト」抗体とは、抗原結合部位、並びに定常ドメイン（constant domain、ＣＬ）並びに少なくとも重鎖定常領域ＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３を含むものである。定常領域には、ヒト定常領域又はそのアミノ酸配列の変異体が含まれ得る。特定の実施形態では、インタクト抗体は、１つ以上のエフェクター機能を有する。
「結合（binds）」又は「結合すること（binding）」という用語は、例えば、複合体を形成することを含む分子間の相互作用を指す。相互作用は、例えば、水素結合、イオン結合、疎水性相互作用、及び／又はファンデルワールス相互作用を含む非共有相互作用であり得る。複合体には、共有結合若しくは非共有結合、相互作用、又は力によって一緒に保持された２つ以上の分子の結合も含まれ得る。抗体の単一の抗原結合部位と、抗原などの標的分子の単一のエピトープとの間の非共有相互作用全体の強さが、そのエピトープに対する抗体又は機能的断片の親和性である。一価の抗原に対する結合分子（例えば、抗体）の解離速度（ｋｏｆｆ）と会合速度（ｋｏｎ）との比（ｋｏｆｆ／ｋｏｎ）は、解離定数ＫＤであり、親和性とは逆の関係にある。ＫＤ値が低いほど、抗体の親和性は高くなる。ＫＤの値は、抗体及び抗原の異なる複合体によって様々であり、ｋｏｎ及びｋｏｆｆの両方に依存する。本明細書において提供される抗体の解離定数ＫＤは、本明細書で提供されている任意の方法、又は当業者に周知である任意の他の方法を使用して決定することができる。１つの結合部位での親和性は、必ずしも抗体と抗原との間の相互作用の真の強さを反映するものではない。多価抗原などの複数の繰り返し抗原決定基を含む複雑な抗原が、複数の結合部位を含む抗体と接触した場合、ある部位での抗体の抗原との相互作用は、第２部位での反応の確率を増加させるであろう。そのような多価抗体と抗原との間の複数の相互作用の強さは、親和力と呼ばれる。
本明細書に記載されている抗体に関連して、「に結合する」、「に特異的に結合する」などの用語、及び類似の用語も本明細書では互換的に使用され、ポリペプチドなどの抗原に特異的に結合する抗原結合ドメインの抗体を指す。抗原に結合するか、又は抗原に特異的に結合する抗体又は抗原結合ドメインは、関連する抗原と交差反応し得る。特定の実施形態では、抗原に結合するか、又は抗原に特異的に結合する抗体又は抗原結合ドメインは、他の抗原と交差反応しない。抗原に結合するか、又は抗原に特異的に結合する抗体又は抗原結合ドメインは、例えば、イムノアッセイ、Ｏｃｔｅｔ（登録商標）、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）、又は当業者に知られている他の技術によって同定することができる。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかのいくつかの実施形態では、抗体又は抗原結合ドメインは、ラジオイムノアッセイ（radioimmunoassay、ＲＩＡ）及び酵素結合免疫吸着アッセイ（enzyme linked immunosorbent assay、ＥＬＩＳＡ）などの実験技術を使用して決定される任意の交差反応性抗原よりも高い親和性で抗原に結合する場合、抗原に結合するか、又は抗原に特異的に結合する。典型的には、特異的又は選択的な反応は、バックグラウンドのシグナル又はノイズの少なくとも２倍であり、バックグラウンドの１０倍を超える場合がある。結合特異性に関する考察については、例えば、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ３３２－３６（Ｐａｕｌ，ｅｄ．，２ｄ ｅｄ．１９８９）を参照。特定の実施形態では、「非標的」タンパク質に対する抗体又は抗原結合ドメインの結合の程度は、例えば、蛍光活性化細胞選別（fluorescence activated cell sorting、ＦＡＣＳ）分析又はＲＩＡによって決定される、その特定の標的抗原に対する抗体又は抗原結合ドメインの結合の約１０％未満である。「特異的結合」、「に特異的に結合する」、又は「に特異的な」などの用語に関しては、結合は、非特異的な相互作用とは測定可能に異なる結合を意味する。特異的結合は、例えば、概ね結合活性を有していない類似構造の分子である対照分子の結合と比較して、分子の結合を決定することによって測定することができる。例えば、特異的結合は、標的に類似した対照分子、例えば、過剰な非標識標的との競合によって決定することができる。この場合、標識標的のプローブへの結合が、過剰な非標識標的によって競合的に阻害される場合、特異的結合が示される。抗原に結合する抗体又は抗原結合ドメインには、その抗体が、例えば、抗原を標的とした診断薬又は治療薬として有用であるように、十分な親和性で抗原に結合することが可能なものが含まれる。特定の実施形態では、抗原に結合する抗体又は抗原結合ドメインは、１０００ｎＭ、８００ｎＭ、５００ｎＭ、２５０ｎＭ、１００ｎＭ、５０ｎＭ、１０ｎＭ、５ｎＭ、４ｎＭ、３ｎＭ、２ｎＭ、１ｎＭ、０．９ｎＭ、０．８ｎＭ、０．７ｎＭ、０．６ｎＭ、０．５ｎＭ、０．４ｎＭ、０．３ｎＭ、０．２ｎＭ、又は０．１ｎＭ以下の解離定数（ＫＤ）を有する。上上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、抗原に結合する抗体又は抗原結合ドメインは、１０００ｎＭ、８００ｎＭ、５００ｎＭ、２５０ｎＭ、１００ｎＭ、５０ｎＭ、１０ｎＭ、５ｎＭ、４ｎＭ、３ｎＭ、２ｎＭ、１ｎＭ、０．９ｎＭ、０．８ｎＭ、０．７ｎＭ、０．６ｎＭ、０．５ｎＭ、０．４ｎＭ、０．３ｎＭ、０．２ｎＭ、若しくは０．１ｎＭの解離定数（ＫＤ）、又は任意の２つの前述のＫＤ値によって定義される範囲の間の任意のＫＤを有する。特定の実施形態では、抗体又は抗原結合ドメインは、異なる種に由来する抗原間（例えば、ヒトとカニクイザル種との間）で保存されている抗原のエピトープに結合する。
「結合親和性」とは、概して、分子の単一の結合部位（例えば、抗体などの結合タンパク質）と、その結合パートナー（例えば、抗原）との間の非共有相互作用の総和の強さを指す。別段の記載がない限り、本明細書で使用されるとき、「結合親和性」とは、結合対（例えば、抗体及び抗原）のメンバー間の１：１の相互作用を反映する固有の結合親和性を指す。結合分子Ｘのその結合パートナーＹに対する親和性は、概ね解離定数（ＫＤ）で表すことができる。親和性は、本明細書に記載されているものを含む、当該技術分野において既知である一般的な方法で測定することができる。低親和性抗体は、概ね抗原とゆっくり結合し、容易に解離する傾向があるが、高親和性抗体は、概ね抗原とより速く結合し、より長く結合を維持する傾向がある。結合親和性を測定する様々な方法が当該技術分野において既知であり、そのいずれもが本開示の目的のために使用することができる。具体的な例示的実施形態としては、以下のものが挙げられる。一実施形態では、「ＫＤ」又は「ＫＤ値」は、当該技術分野において既知であるアッセイによって、例えば、結合アッセイによって測定することができる。ＫＤは、例えば、目的の抗体のＦａｂバージョン及びその抗原を用いて行われるＲＩＡで測定され得る（Ｃｈｅｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ，１９９９，２９３：８６５－８１）。ＫＤ又はＫＤ値は、Ｏｃｔｅｔ（登録商標）による生体層干渉法（ＢＬＩ）又は表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）アッセイを使用して測定することもでき、例えば、Ｏｃｔｅｔ（登録商標）Ｒｅｄ９６システム又はＯｃｔｅｔ（登録商標）Ｒｅｄ３８４システムを使用するか、又は例えばＢｉａｃｏｒｅ（登録商標）２０００又はＢｉａｃｏｒｅ（登録商標）３０００を使用するＢｉａｃｏｒｅ（登録商標）を使用する。「オンレート」又は「関連率」又は「関連率」又は「ｋｏｎ」は、また、例えば、Ｏｃｔｅｔ（登録商標）Ｒｅｄ９６、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）２０００、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）３０００システム、又はＢｉａｃｏｒｅ（登録商標）８０００システムを使用して、上記と同じ生体層干渉法（ＢＬＩ）又は表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）技術を用いて決定することもできる。
特定の実施形態では、抗体は、重鎖及び／又は軽鎖の一部が、特定の種に由来するか、又は特定の抗体クラス若しくはサブクラスに属する抗体の対応する配列と同一又は相同である一方、鎖の残りの部分が、別の種に由来するか、又は別の抗体クラス若しくはサブクラスに属する抗体の対応する配列と同一又は相同である、「キメラ」配列を含むことができるが、それらが所望の生物活性を示す場合に限る（米国特許第４，８１６，５６７号、及びＭｏｒｒｉｓｏｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１９８４，８１：６８５１－５５を参照）。
特定の実施形態では、抗体は、ネイティブＣＤＲ残基が、所望の特異性、親和性、及び能力を有するマウス、ラット、ウサギ、又は非ヒト霊長類などの非ヒト種（例えば、ドナー抗体）の対応するＣＤＲからの残基に置換されている、ヒト免疫グロブリン（例えば、レシピエント抗体）を含むキメラ抗体である、非ヒト（例えば、マウス）抗体の形態の「ヒト化」形態の部分を含み得る。場合によっては、ヒト免疫グロブリンの１つ以上のＦＲ領域残基が、対応する非ヒト残基に置換される。更に、ヒト化抗体は、レシピエント抗体又はドナー抗体で見出されない残基を含むことができる。これらの改変は、抗体の性能を更に改良するために行われる。ヒト化抗体の重鎖又は軽鎖は、ＣＤＲの全て又は実質的に全てが非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、ＦＲの全て又は実質的に全てがヒト免疫グロブリン配列のものである、１つ以上の可変領域を含むことができる。特定の実施形態では、ヒト化抗体は、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、典型的には、ヒト免疫グロブリンの少なくとも一部分を含む。更なる詳細については、Ｊｏｎｅｓ，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，１９８６，３２１：５２２－２５、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，１９８８，３３２：３２３－２９、Ｐｒｅｓｔａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．，１９９２，２：５９３－９６、Ｃａｒｔｅｒ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１９９２，８９：４２８５－８９、米国特許第６，８００，７３８号、同第６，７１９，９７１号、同第６，６３９，０５５号、同第６，４０７，２１３号、及び同第６，０５４，２９７号に記載されている。
特定の実施形態では、抗体は、「完全ヒト抗体」又は「ヒト抗体」の一部を含むことができ、これらの用語は、本明細書で互換的に使用され、ヒト可変領域、及び、例えば、ヒト定常領域を含む、抗体を指す。具体的な実施形態では、これらの用語は、ヒト起源の可変領域及び定常領域を含む抗体を指す。「完全ヒト」抗体は、特定の実施形態では、ポリペプチドに結合し、ヒト生殖細胞系列免疫グロブリン核酸配列の天然に存在する体細胞変異体である核酸配列によってコードされる、抗体も包含することができる。「完全ヒト抗体」という用語には、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．により記載されたようにヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列に対応する可変領域及び定常領域を有する抗体が含まれる（Ｋａｂａｔ，ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．９１－３２４２を参照）。「ヒト抗体」とは、ヒトによって生成される抗体のアミノ酸配列に対応するアミノ酸配列を有するもの、及び／又はヒト抗体を作製するための技術のうちのいずれかを使用して作製されたものである。このヒト抗体の定義では、具体的には、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を除外している。ヒト抗体は、当該技術分野で知られている様々な技術を使用して生成することができ、その中には、ファージ表示ライブラリー（Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ａｎｄ Ｗｉｎｔｅｒ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９９１，２２７：３８１、Ｍａｒｋｓ，ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９９１，２２２：５８１）及び酵母表示ライブラリー（Ｃｈａｏ，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，２００６，１：７５５－６８）が含まれる。また、ヒトモノクローナル抗体の調製には、Ｃｏｌｅ，ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ ７７（１９８５）、Ｂｏｅｒｎｅｒ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９９１，１４７（１）：８６－９５、及びｖａｎ Ｄｉｊｋ ａｎｄ ｖａｎ ｄｅ Ｗｉｎｋｅｌ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，２００１，５：３６８－７４に記載されている方法も利用可能である。ヒト抗体は、抗原チャレンジに応答してそのような抗体を生成するように改変されているが、その内因性遺伝子座が無効化されているトランスジェニック動物、例えば、マウスに抗原を投与することによって調製することができる（例えば、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，１９９５，６（５）：５６１－６６、Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ ａｎｄ Ｔａｕｓｓｉｎｇ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，１９９７，８（４）：４５５－５８、並びに、ＸＥＮＯマウス（商標）技術に関する米国特許第６，０７５，１８１号及び同第６，１５０，５８４号を参照）。また、例えば Ｌｉ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，２００６，１０３：３５５７－６２（ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術を介して生成されたヒト抗体に関する）も参照。
特定の実施形態では、抗体は、「組み換えヒト抗体」の部分を含むことができ、この語句には、組み換え手段によって調製、発現、作成、若しくは単離されたヒト抗体、例えば、宿主細胞に遺伝子導入された組み換え発現ベクターを使用して発現された抗体、組み換えコンビナトリアルヒト抗体ライブラリーから単離された抗体、ヒト免疫グロブリン遺伝子のトランスジェニック及び／又はトランス染色体である動物（例えば、マウス又はウシ）から単離された抗体（例えば、Ｔａｙｌｏｒ，Ｌ．Ｄ．，ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，１９９２ ２０：６２８７－６２９５）、又は、ヒト免疫グロブリン遺伝子配列を他のＤＮＡ配列にスプライシングすることを伴う任意の他の手段によって調製、発現、作成、若しくは単離された抗体が含まれる。そのような組み換えヒト抗体は、ヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域及び定常領域を有することができる（Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．，ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．９１－３２４２を参照）。しかしながら、特定の実施形態では、そのような組み換えヒト抗体は、インビトロ変異誘発（又は、ヒトＩｇ配列のトランスジェニックである動物を使用する場合は、インビボ体細胞変異誘発）を受けており、したがって、組み換え抗体のＶＨ及びＶＬ領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖細胞系列のＶＨ配列及ＶＬ配列に由来し、関連しているが、インビボでのヒト抗体生殖細胞系列レパートリ内に天然には存在しない場合がある配列である。
特定の実施形態では、抗体は、「モノクローナル抗体」の一部を含むことができ、本明細書で使用されるこの用語は、実質的に均質な抗体の集団から得られた抗体を指し、例えば、集団を含む個々の抗体は、微量で存在し得る天然に存在する起こり得る変異を除いて同一であり、各モノクローナル抗体は、典型的には、抗原上の単一のエピトープを認識する。具体的な実施形態では、本明細書で使用される「モノクローナル抗体」とは、単一のハイブリドーマ又は他の細胞によって生成される抗体である。「モノクローナル」という用語は、抗体を作製するための特定の方法に限定されるものではない。例えば、本開示で有用なモノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９７５，Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５によって最初に記載されたハイブリドーマ法によって調製され得るか、又は細菌若しくは真核動物若しくは植物細胞で組み換えＤＮＡ法を使用して作製され得る（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号を参照）。また、「モノクローナル抗体」は、例えば、Ｃｌａｃｋｓｏｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，１９９１，３５２：６２４－２８及びＭａｒｋｓ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９９１，２２２：５８１－９７に記載されている技術を使用して、ファージ抗体ライブラリーから単離され得る。クローン細胞株及びそれによって発現するモノクローナル抗体を調製するための他の方法は、当該技術分野で周知である。例えば、Ｓｈｏｒｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．ｅｄｓ．，５ｔｈ ｅｄ．２００２）を参照。
典型的な４鎖抗体ユニットは、２本の同一の軽鎖（Ｌ）及び２本の同一の重鎖（Ｈ）で構成されるヘテロ４量体糖タンパク質である。ＩｇＧの場合、４鎖ユニットは、概ね約１５０，０００ダルトンである。各Ｌ鎖は、１つの共有ジスルフィド結合でＨ鎖によって連結され、一方、２つのＨ鎖は、Ｈ鎖のアイソタイプに応じて１つ以上のジスルフィド結合によって互いに連結される。また、各Ｈ鎖及びＬ鎖は、規則的間隔の鎖内ジスルフィド架橋を有する。各Ｈ鎖は、Ｎ末端に可変ドメイン（variable domain、ＶＨ）に続いて、α鎖及びγ鎖の各々に３つの定常ドメイン（constant domain、ＣＨ）並びに、μ及びεのアイソタイプには４つのＣＨドメインを有する。各Ｌ鎖は、Ｎ末端に可変ドメイン（variable domain、ＶＬ）に続いて、もう一方の末端に定常ドメイン（ＣＬ）を有する。ＶＬは、ＶＨとアラインメントし、ＣＬは、重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）とアラインメントしている。特定のアミノ酸残基が、軽鎖及び重鎖の可変ドメイン間の界面を形成すると考えられる。ＶＨ及びＶＬの対合は、単一の抗原結合部位を共に形成する。異なるクラスの抗体の構造及び特性については、例えば、Ｂａｓｉｃ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ７１（Ｓｔｉｔｅｓ，ｅｔ ａｌ．ｅｄｓ．，８ｔｈ ｅｄ．１９９４）、及びＩｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ（Ｊａｎｅｗａｙ，ｅｔ ａｌ．ｅｄｓ．，５ｔｈ ｅｄ．２００１）を参照。
「Ｆａｂ」又は「Ｆａｂ領域」という用語は、抗原に結合する抗体領域を指す。従来のＩｇＧは通常、２つのＦａｂ領域を含み、各々がＹ字型ＩｇＧ構造の２つのアームのうちの１つに存在する。各Ｆａｂ領域は、典型的には、重鎖及び軽鎖の各々の１つの可変領域及び１つの定常領域で構成されている。より具体的には、Ｆａｂ領域における重鎖の可変領域及び定常領域は、ＶＨ及びＣＨ１領域であり、Ｆａｂ領域における軽鎖の可変領域及び定常領域は、ＶＬ及びＣＬ領域である。Ｆａｂ領域におけるＶＨ、ＣＨ１、ＶＬ、及びＣＬは、本開示に従って抗原結合能力を付与するために様々な方式で配置することができる。例えば、ＶＨ領域及びＣＨ１領域は、１つのポリペプチド上にあり、ＶＬ領域及びＣＬ領域は、従来のＩｇＧのＦａｂ領域と同様に、別個のポリペプチド上にあり得る。代替的に、ＶＨ領域、ＣＨ１領域、ＶＬ領域、ＣＬ領域は全て、同じポリペプチド上に存在し、以下のセクションでより詳細に記載されるように、異なる順序で配向することができる。
「可変領域」、「可変ドメイン」、「Ｖ領域」、又は「Ｖドメイン」という用語は、軽鎖又は重鎖のアミノ末端に概ね位置し、重鎖では約１２０～１３０アミノ酸、軽鎖では約１００～１１０アミノ酸の長さを有する抗体の軽鎖又は重鎖の一部を指し、各特定の抗体のその特定の抗原に対する結合及び特異性に使用される。重鎖の可変領域は、「ＶＨ」と称され得る。軽鎖の可変領域は、「ＶＬ」と称され得る。「可変」という用語は、可変領域の特定のセグメントが、抗体間で配列が大きく異なることを指す。Ｖ領域は、抗原の結合を媒介し、特定の抗原に対する特定の抗体の特異性を決定する。しかしながら、可変領域の１１０アミノ酸のスパン全体では、その可変性は均一ではない。代わりに、Ｖ領域は、各々が約９～１２アミノ酸の長さである「超可変領域」と呼ばれるより大きな可変性（例えば、極端な可変性）のより短い領域によって分離された、約１５～３０アミノ酸のフレームワーク領域（framework region、ＦＲ）と呼ばれるより可変性の低い（例えば、比較的不変の）ストレッチからなる。重鎖及び軽鎖の可変領域は各々４つのＦＲを含み、大部分はβシート構造をとり、３つの超可変領域によって接続され、βシート構造を接続するループを形成し、場合によってはβシート構造の一部を形成する。各鎖内の超可変領域は、ＦＲによって共に近接して保持され、他の鎖の超可変領域と共に、抗体の抗原結合部位の形成に寄与している（例えば、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（５ｔｈ ｅｄ．１９９１）を参照）。定常領域は、抗体を抗原に結合することには直接関与しないが、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）及び補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）への抗体の関与など、様々なエフェクター機能を示す。可変領域は、異なる抗体間で配列が大きく異なる。具体的な実施形態では、可変領域は、ヒト可変領域である。
「Ｋａｂａｔによる可変領域残基番号付け」又は「Ｋａｂａｔにあるようなアミノ酸位置番号付け」という用語、及びその変形は、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．（上記）の抗体の編集物の重鎖可変領域又は軽鎖可変領域に使用される番号付けシステムを指す。この番号付けシステムを使用して、実際の直鎖状アミノ酸配列は、可変ドメインのＦＲ若しくはＣＤＲの短縮又はこれらへの挿入に対応する、より少ない又は追加のアミノ酸を含み得る。例えば、重鎖可変ドメインは、残基５２の後に単一のアミノ酸挿入（Ｋａｂａｔによる残基５２ａ）と、残基８２の後に３つの挿入された残基（例えば、Ｋａｂａｔによる残基８２ａ、８２ｂ、及び８２ｃなど）とを含み得る。残基のＫａｂａｔ番号付けは、所与の抗体に対して、その抗体の配列と「標準」Ｋａｂａｔ番号付け配列とを相同領域でアライメントすることにより、決定することができる。Ｋａｂａｔ番号付けシステムは、可変ドメインの残基（軽鎖の約１～１０７残基、重鎖の約１～１１３残基）を参照する際に概ね使用される（例えば、上記のＫａｂａｔ ｅｔ ａｌ．）。「ＥＵ番号付けシステム」又は「ＥＵインデックス」は、免疫グロブリン重鎖定常領域内の残基に言及する際に概ね使用される（例えば、上記のＫａｂａｔ ｅｔ ａｌ．で報告されているＥＵインデックス）。「ＫａｂａｔにあるようなＥＵインデックス」は、ヒトＩｇＧ１ ＥＵ抗体の残基番号付けを指す。他の番号付けシステムは、例えば、ＡｂＭ、Ｃｈｏｔｈｉａ、Ｃｏｎｔａｃｔ、ＩＭＧＴ、及びＡＨｏｎによって記載されている。
抗体に関して使用される場合の「重鎖」という用語は、約５０～７０ｋＤａのポリペプチド鎖であって、アミノ末端部分が約１２０～１３０個以上のアミノ酸の可変領域を含み、カルボキシ末端部分が定常領域を含むものを指す。定常領域は、重鎖定常領域のアミノ酸配列に基づいて、アルファ（α）、デルタ（δ）、イプシロン（ε）、ガンマ（γ）、及びミュー（μ）と称される５つの明確に異なるタイプ（例えば、アイソタイプ）のうちの１つであり得る。明確に異なる重鎖の大きさは異なり、α、δ、及びγは約４５０個のアミノ酸を含み、一方、μ及びεは約５５０個のアミノ酸を含む。軽鎖と組み合わせられると、これらの明確に異なるタイプの重鎖は、それぞれ５つの周知のクラス（アイソタイプなど）の抗体、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭ（ＩｇＧの４つのサブクラス、すなわち、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４も含まれる）を生じさせる。
抗体に関して使用される場合の「軽鎖」という用語は、約２５ｋＤａのポリペプチド鎖であって、アミノ末端部分が約１００～約１１０個以上のアミノ酸の可変領域を含み、カルボキシ末端部分が定常領域を含むものを指す。軽鎖のおおよその長さは、２１１～２１７アミノ酸である。定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ（κ）又はラムダ（λ）と称される２つの異なるタイプがある。
本明細書で使用される場合、「超可変領域」、「hypervariable region、ＨＶＲ」、「相補性決定領域」、及び「Complementarity Determining Region、ＣＤＲ」という用語は、互換的に使用される。「ＣＤＲ」は、免疫グロブリン（Ｉｇ又は抗体）ＶＨ β－シートフレームワークの非フレームワーク領域内の３つの超可変領域のうちの１つ（Ｈ１、Ｈ２、若しくはＨ３）、又は抗体ＶＬ β－シートフレームワークの非フレームワーク領域内の３つの超可変領域のうちの１つ（Ｌ１、Ｌ２、若しくはＬ３）を指す。したがって、ＣＤＲは、フレームワーク領域配列内に散在する可変領域配列である。
ＣＤＲ領域は、当業者に周知であり、周知の番号付けシステムによって定義されている。例えば、Ｋａｂａｔ相補性決定領域（ＣＤＲ）は、配列の可変性に基づいており、最も一般的に使用されている（例えば、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．（上記）を参照）。Ｃｈｏｔｈｉａは、それに代えて、構造ループの位置を指す（例えば、Ｃｈｏｔｈｉａ及びＬｅｓｋ、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、１９８７、１９６：９０１－１７を参照）。Ｋａｂａｔ付番規則を使用して付番されたときのＣｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ－Ｈ１ループの末端は、ループの長さに応じてＨ３２からＨ３４まで変化する（これは、Ｋａｂａｔ付番スキームが、Ｈ３５Ａ及びＨ３５Ｂに挿入を配置するためであり、３５Ａも３５Ｂも存在しない場合、ループは３２で終わり、３５Ａのみが存在する場合、ループは３３で終わり、３５Ａ及び３５Ｂの両方が存在する場合、ループは３４で終わる）。ＡｂＭ超可変領域は、Ｋａｂａｔ ＣＤＲとＣｈｏｔｈｉａ構造ループとの間の妥協案を表し、Ｏｘｆｏｒｄ ＭｏｌｅｃｕｌａｒのＡｂＭ抗体モデリングソフトウェアによって使用されている（例えばＡｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｖｏｌ．２（Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ ａｎｄ Ｄｕｂｅｌ，ｅｄｓ．，２ｄ ｅｄ．２０１０）を参照）。「ｃｏｎｔａｃｔ」超可変領域は、利用可能な複合結晶構造の分析に基づく。開発され、広く採用されている別の世界共通の番号付けシステムは、ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ（ＩＭＧＴ）Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ（登録商標）である（Ｌａｆｒａｎｃ，ｅｔ ａｌ．，Ｄｅｖ．Ｃｏｍｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２００３，２７（１）：５５－７７）。ＩＭＧＴは、免疫グロブリン（immunoglobulin、ＩＧ）、Ｔ細胞受容体（T cell receptor、ＴＣＲ）、並びにヒト及び他の脊椎動物の主要組織適合性複合体（major histocompatibility complex、ＭＨＣ）専門の統合情報システムである。本明細書において、ＣＤＲは、アミノ酸配列と、軽鎖又は重鎖内の位置との両方の観点において言及される。免疫グロブリン可変ドメインの構造内のＣＤＲの「位置」は、種の間で保存され、ループと称される構造に存在するため、可変ドメイン配列を構造的特徴に従ってアラインメントする番号付けシステムを使用することにより、ＣＤＲ及びフレームワーク残基は容易に同定される。この情報は、１つの種の免疫グロブリンからのＣＤＲ残基を、典型的にはヒト抗体からのアクセプタフレームワーク内に移植及び置換することに使用され得る。Ｈｏｎｅｇｇｅｒ ａｎｄ Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２００１，３０９：６５７－７０によって、追加の番号付けシステム（ＡＨｏｎ）が開発されている。例えば、Ｋａｂａ番号付け及びＩＭＧＴ固有の番号付けシステムを含む番号付けシステム間の対応関係は、当業者に周知である（例えば、Ｋａｂａｔ（上記）、Ｃｈｏｔｈｉａ及びＬｅｓｋ（上記）、Ｍａｒｔｉｎ（上記）、Ｌｅｆｒａｎｃ ｅｔ ａｌ．（上記）を参照）。これらの超可変領域又はＣＤＲの各々の残基を以下に示す。

Figure 2024515303000002
所与のＣＤＲの境界は、同定に使用されるスキームに応じて異なり得る。したがって、特に明記しない限り、可変領域などの所与の抗体又はその領域の「ＣＤＲ」及び「相補性決定領域」という用語、並びに抗体又はその領域の個々のＣＤＲ（例えば、「ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２」）は、本明細書で上述した既知のスキームのうちのいずれかによって定義される相補性決定領域を包含すると理解されるべきである。場合によっては、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、又はＣｏｎｔａｃｔ法で定義されたＣＤＲなど、特定のＣＤＲ又は複数のＣＤＲの同定のためのスキームが指定されている。他の場合には、ＣＤＲの特定のアミノ酸配列が挙げられる。
超可変領域は、次のような「拡張超可変領域」を含み得る：ＶＬ内の２４～３６又は２４～３４（Ｌ１）、４６～５６又は５０～５６（Ｌ２）、及び８９～９７又は８９～９６（Ｌ３）、並びにＶＨ内の２６～３５又は２６～３５Ａ（Ｈ１）、５０～６５又は４９～６５（Ｈ２）、及び９３～１０２、９４～１０２、又は９５～１０２（Ｈ３）。
用語「定常領域」又は「定常ドメイン」は、抗原に対する抗体の結合に直接関与しないが、Ｆｃ受容体との相互作用などの様々なエフェクター機能を示す軽鎖及び重鎖のカルボキシ末端部分を指す。この用語は、抗原結合部位を含む可変領域である免疫グロブリンの他の部分と比較してより保存されたアミノ酸配列を有する免疫グロブリン分子の部分を指す。定常領域は、重鎖のＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３領域、並びに軽鎖のＣＬ領域を含み得る。
「フレームワーク」又は「ＦＲ」という用語は、ＣＤＲに隣接する可変領域の残基を指す。ＦＲ残基は、例えば、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、ドメイン抗体、ダイアボディ、直鎖抗体、及び二重特異性抗体中に存在する。ＦＲ残基は、超可変領域残基又はＣＤＲ残基以外の可変ドメイン残基である。典型的には、ＶＨ領域及びＶＬ領域の各々に４つのＦＲ領域がある。ＶＨにおけるＦＲ領域は、ＶＨ ＦＲ１、ＶＨ ＦＲ２、ＶＨ ＦＲ３、及びＶＨ ＦＲ４（又はＦＲ Ｈ１、ＦＲ Ｈ２、ＦＲ Ｈ３及びＦＲ Ｈ４）である。ＶＬにおけるＦＲ領域は、ＶＬ ＦＲ１、ＶＬ ＦＲ２、ＶＬ ＦＲ３及びＶＬ ＦＲ４（又はＦＲ Ｌ１、ＦＲ Ｌ２、ＦＲ Ｌ３及びＦＲ Ｌ４）である。
本明細書において、「Ｆｃ領域」という用語は、例えば、天然配列Ｆｃ領域、組み換えＦｃ領域、及び変異体Ｆｃ領域を含む、免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するために使用される。免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域の境界は様々であり得るが、ヒトＩｇＧ重鎖のＦｃ領域は、Ｃｙｓ２２６位のアミノ酸残基、又はＰｒｏ２３０位のアミノ酸残基からカルボキシル末端まで伸びると定義されることが多い。Ｆｃ領域のＣ末端リジン（ＥＵの番号付けシステムによる残基４４７）は、例えば、抗体の生成若しくは精製中に、又は抗体の重鎖をコードする核酸を組み換え操作することによって除去され得る。したがって、インタクト抗体の組成物は、全てのＫ４４７残基が除去された抗体集団、Ｋ４４７残基が除去されていない抗体集団、及びＫ４４７残基のある抗体とない抗体との混合物を有する抗体集団を含み得る。「機能的Ｆｃ領域」は、天然配列Ｆｃ領域の「エフェクター機能」を有する。例示的な「エフェクター機能」には、Ｃ１ｑ結合、ＣＤＣ、Ｆｃ受容体結合、ＡＤＣＣ、貪食作用、細胞表面の受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）のダウンレギュレーションなどが含まれる。そのようなエフェクター機能は、概ね、Ｆｃ領域が結合領域又は結合ドメイン（例えば、抗体可変領域又はドメイン）と組み合わせられることを必要とし、当業者に知られている様々なアッセイを使用して評価することができる。「変異体Ｆｃ領域」は、少なくとも１つのアミノ酸改変（例えば、置換、付加、又は欠失）により、天然配列Ｆｃ領域のアミノ酸配列とは異なるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、変異体Ｆｃ領域は、天然配列Ｆｃ領域又は親ポリペプチドのＦｃ領域と比較して、少なくとも１つのアミノ酸置換を有しており、例えば、天然配列Ｆｃ領域又は親ポリペプチドのＦｃ領域において、約１～約１０個のアミノ酸置換、又は約１～約５個のアミノ酸置換を有する。本明細書の変異体Ｆｃ領域は、天然配列Ｆｃ領域及び／又は親ポリペプチドのＦｃ領域と少なくとも約８０％の相同性、又はそれと少なくとも約９０％の相同性、例えば、それと少なくとも約９５％の相同性を有し得る。
「ループ領域」という用語は、β鎖を接続する構造的ループを指し、これは次に、βシート（通常のタンパク質二次構造の共通モチーフ）を構成する。β鎖は、タンパク質ドメインの一次アミノ酸配列におけるそれらの出現の順序に関して、連続的に文字化される（Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆなど）ことが当業者に周知である。構造ループは、それらが接続しているβ鎖に基づいて標識される。例えば、ＡＢループは、β鎖Ａ及びＢを接続する構造ループを指す、ＢＣループは、β鎖Ｂ及びＣを接続する構造ループを指す、ＣＤループは、β鎖Ｃ及びＤを接続する構造ループを指す、ＤＥループは、β鎖Ｄ及びＥを接続する構造ループを指す、など。
「抗原結合ループ」という用語は、抗原に特異的に結合することができるポリペプチド領域を指す。いくつかの例において、抗原結合ループは、ＶＨ及び／又はＶＬ領域内に位置するＣＤＲである。他の場合において、抗原結合ループは、ＶＨ及び／又はＶＬ領域の外側に位置するポリペプチドである。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗原結合ループは、ＣＨ１領域に位置する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗原結合ループは、ＣＬ領域に位置する。いくつかの実施形態では、抗原結合ループは、ＣＨ１領域及びＣＬ領域の両方に位置する。いくつかの実施形態では、抗原結合ループは、ＣＨ１領域のＡＢ、ＢＣ、ＣＤ、ＤＥ、ＥＦ、及び／又はＦＧループ領域に位置する。いくつかの実施形態では、抗原結合ループは、ＣＬ領域のＡＢ、ＢＣ、ＣＤ、ＤＥ、ＥＦ、及び／又はＦＧループ領域に位置する。いくつかの実施形態では、抗原結合ループは、ＣＨ１領域のＡＢ、ＢＣ、ＣＤ、ＤＥ、ＥＦ、及び／又はＦＧループ領域の外側に位置する。いくつかの実施形態では、抗原結合ループは、ＣＬ領域のＡＢ、ＢＣ、ＣＤ、ＤＥ、ＥＦ、及び／又はＦＧループ領域の外側に位置する。いくつかの実施形態では、抗原結合ループは、ＣＬ領域のＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、及び／又はＦβ鎖に位置する。いくつかの実施形態では、抗原結合ループは、ＣＨ１領域のＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、及び／又はＦβ鎖に位置する。
抗原又は抗体に関して使用される場合、「変異体」という用語は、天然又は未改変の配列と比較して、１つ以上（例えば、約１～約２５、約１～約２０、約１～約１５、約１～約１０、又は約１～約５）のアミノ酸配列置換、欠失、及び／又は付加を含むペプチド又はポリペプチドを指し得る。
「同一性」という用語は、配列をアラインメント及び比較することによって決定される、２つ以上のポリペプチド分子又は２つ以上の核酸分子の配列間の関係を指す。参照ポリペプチド配列に対する「アミノ酸配列同一性パーセント（％）」は、最大配列同一性パーセントを達成するように、配列同一性の一部としていずれの保存的置換も考慮することなく、配列をアラインメントし、必要に応じてギャップを導入した後の、参照ポリペプチド配列中のアミノ酸残基と同一である候補配列中のアミノ酸残基の百分率として定義される。アミノ酸配列同一性パーセントを決定する目的のためのアライメントは、当該技術分野における技能の範囲内である様々な方法、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、ＡＬＩＧＮ、又はＭＥＧＡＬＩＧＮ（ＤＮＡＳｔａｒ，Ｉｎｃ．）ソフトウェアなどの公的に入手可能なコンピュータソフトウェアを使用して達成することができる。当業者は、比較される配列の全長にわたって最大のアラインメントを達成するために必要な任意のアルゴリズムを含む、配列をアラインメントするための適切なパラメータを決定することができる。
アミノ酸残基／位置の「改変」とは、出発アミノ酸配列と比較した一次アミノ酸配列の変化を指し、変化は、当該アミノ酸残基／位置を伴う配列変化から生じる。例えば、典型的な改変には、残基の別のアミノ酸による置換（例えば、保存的置換又は非保存的置換）、当該残基／位置に隣接する１つ以上（例えば、一般的には５個、４個、又は３個未満）のアミノ酸の挿入、及び／又は当該残基／位置欠失が含まれる。
本明細書中で使用される場合、「エピトープ」とは、当該技術分野の用語であり、抗体が特異的に結合することができる抗原の局在領域を指す。エピトープは、線状エピトープ又は立体構造エピトープ、非線状エピトープ、又は不連続エピトープであり得る。ポリペプチド抗原の場合、例えば、エピトープは、ポリペプチドの連続したアミノ酸（「線状」エピトープ）であり得るか、又はエピトープは、ポリペプチドの２つ以上の非連続領域からのアミノ酸（「立体構造」、「非線状」、又は「不連続」エピトープ）を含み得る。概ね、線状エピトープは、二次、三次、又は四次構造に依存する場合もあれば、依存しない場合もあることが当業者によって理解されるであろう。例えば、いくつかの実施形態では、抗体は、アミノ酸が天然の三次元タンパク質構造に折り畳まれているかどうかにかかわらず、アミノ酸の群に結合する。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかのいくつかの実施形態では、抗体は、エピトープを認識して結合するために、エピトープを構成するアミノ酸残基が特定の立体構造（例えば、屈曲、ねじれ、回転、又は折り畳み）を示すことを必要とする。
「ポリペプチド」、「ペプチド」及び「タンパク質」という用語は、本明細書では互換的に使用され、任意の長さのアミノ酸のポリマーを指す。ポリマーは、直鎖又は分岐鎖であってもよく、改変されたアミノ酸を含んでもよく、非アミノ酸により中断されてもよい。この用語はまた、天然に改変されているか、又は介入によって改変されているアミノ酸ポリマー、介入の例としては、例えば、ジスルフィド結合形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化、又は任意の他の操作若しくは改変がある。また、定義には、例えば、非天然アミノ酸を含むがこれらに限定されない、アミノ酸の１つ以上の類似体を含むポリペプチド、並びに当該技術分野で知られている他の改変も含まれる。本開示のポリペプチドは、抗体又は免疫グロブリンスーパーファミリーの他のメンバーに基づき得るため、特定の実施形態では、「ポリペプチド」は、一本鎖として、又は２つ以上の関連鎖として生じ得ることが理解される。
「ベクター」という用語は、核酸配列を宿主細胞に導入するために、例えば、本明細書に記載されている抗体をコードする核酸配列などの核酸配列を運ぶ又は含むために使用される物質を指す。使用に適用可能なベクターには、例えば、発現ベクター、プラスミド、ファージベクター、ウイルスベクター、エピソーム、及び人工染色体が含まれ、これらは、宿主細胞の染色体に安定的に組み込むことができる動作可能な選択配列又はマーカーを含み得る。加えて、ベクターは、１つ以上の選択可能マーカー遺伝子及び適切な発現制御配列を含み得る。含めることができる選択マーカー遺伝子は、例えば、抗生物質又は毒素への耐性を提供し、補助栄養要求性の欠乏を補完し、又は培養液にない重要な栄養素を供給するものである。発現制御配列は、当該技術分野で周知である構成的及び誘導性プロモーター、転写エンハンサー、転写ターミネーターなどを含み得る。２つ以上の核酸分子を共発現させる場合（例えば、抗体の重鎖及び軽鎖の両方、又は抗体ＶＨ及びＶＬ）、両方の核酸分子は、例えば、単一の発現ベクター又は別個の発現ベクターに挿入され得る。単一ベクターでの発現の場合、コード核酸は、１つの共通の発現制御配列に動作可能に連結されるか、又は１つの誘導性プロモーター及び１つの構成的プロモーターなどの異なる発現制御配列に連結され得る。宿主細胞への核酸分子の導入は、当該技術分野で周知である方法を使用して確認することができる。そのような方法としては、例えば、ノーザンブロット又はポリメラーゼ連鎖反応（polymerase chain reaction、ＰＣＲ）によるｍＲＮＡの増幅などの核酸分析、遺伝子産物の発現のための免疫ブロッティング、又は導入した核酸配列若しくはその対応する遺伝子産物の発現を試験するための他の好適な分析方法が挙げられる。当業者は、核酸分子が所望の産物を生成するのに十分な量で発現されることを理解しており、更に、当業者に周知である方法を使用して十分な発現を得るために発現レベルを最適化することができることを理解している。
本明細書で使用する「宿主」という用語は、哺乳動物（例えば、ヒト）などの動物を指す。
本明細書で使用される「宿主細胞」という用語は、核酸分子を遺伝子導入され得る特定の対象細胞、及びそのような細胞の子孫又は潜在的な子孫を指す。そのような細胞の子孫は、核酸分子で遺伝子導入された親細胞とは、宿主細胞ゲノムへの核酸分子の後続の生成又は集積において生じ得る、変異又は環境からの影響により、同一ではないことがある。
「単離核酸」とは、核酸、例えば、ＲＮＡ、ＤＮＡ、又は混合核酸であり、他のゲノムＤＮＡ配列、並びに天然配列に天然に会合するリボソーム及びポリメラーゼなどのタンパク質又は複合体から実質的に分離されたものである。「単離」核酸分子とは、核酸分子の天然の供給源に存在する他の核酸分子から分離されたものである。更に、ｃＤＮＡ分子などの「単離」核酸分子は、組み換え技術によって製造された場合には、他の細胞材料又は培養液を実質的に含まなくてもよく、化学合成された場合には、化学前駆体又は他の化学物質を実質的に含まなくてもよい。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体をコードする１つ以上の核酸分子が単離又は精製される。この用語は、天然に存在する環境から取り出された核酸配列を包含し、組み換え又はクローン化されたＤＮＡ単離物、及び化学的に合成された類似体、又は異種系によって生物学的に合成された類似体を含む。実質的に純粋な分子には、その分子の単離形態が含まれることがある。
「ポリヌクレオチド」、「ヌクレオチド」又は「核酸」は、本明細書で互換的に使用される場合、任意の長さのヌクレオチドのポリマーを指し、ＤＮＡ及びＲＮＡを含む。ヌクレオチドは、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、改変ヌクレオチド又は塩基、及び／又はそれらの類似体、又はＤＮＡ又はＲＮＡポリメラーゼによって、又は合成反応によってポリマーに組み込むことができる任意の基質であり得る。ポリヌクレオチドは、メチル化ヌクレオチド及びその類似体などの改変ヌクレオチドを含み得る。本明細書で使用される「オリゴヌクレオチド」は、長さが約２００ヌクレオチド未満であるが、概して必ずしも必須ではなく、短く、概ね一本鎖の合成ポリヌクレオチドを指す。「オリゴヌクレオチド」及び「ポリヌクレオチド」という用語は、相互に排他的なものではない。ポリヌクレオチドに関する上記の説明は、オリゴヌクレオチドにも同様に完全に適用できる。本開示の抗体を生成する細胞には、親ハイブリドーマ細胞、並びに抗体をコードする核酸が導入された細菌及び真核宿主細胞が挙げられ得る。特に指定のない限り、本明細書で開示されている任意の一本鎖ポリヌクレオチド配列の左端は、５’末端である。二本鎖ポリヌクレオチド配列の左方向は、５’方向と称される。新生ＲＮＡ転写物の５’から３’への付加の方向は、転写方向と称される。ＲＮＡ転写物の５’から５’末端にあるＲＮＡ転写物と同じ配列を有するＤＮＡ鎖上の配列領域は、「上流配列」と称され、ＲＮＡ転写物の３’から３’末端にあるＲＮＡ転写物と同じ配列を有するＤＮＡ鎖上の配列領域は、「下流配列」と称される。
本明細書で使用するとき、用語「多重特異性抗体」は、複数の抗原結合部位を含む抗体を指し、複数のうちの第１の抗原結合部位は、第１のエピトープに対する結合特異性を有し、複数のうちの第２の抗原結合部位は、第２のエピトープに対する結合特異性を有する。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、第１のエピトープ及び第２のエピトープは重複しないか、又は実質的に重複しない。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかのいくつかの実施形態では、第１及び第２のエピトープは、異なる抗原上、例えば、異なるタンパク質（又は多量体タンパク質の異なるサブユニット）上にある。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、第３、第４、又は第５の抗原結合部位を含む。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、二重特異性抗体分子、三重特異性抗体分子、又は四重特異性抗体分子である。
本明細書で使用するとき、用語「二重特異性抗体」は、２つ以下のエピトープ又は２つの抗原に結合する多重特異性抗体を指す。二重特異性抗体は、第１のエピトープに対する結合特異性を有する第１の抗原結合部位、及び第２のエピトープに対する結合特異性を有する第２の抗原結合部位よって特徴付けられる。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかのいくつかの実施形態では、第１及び第２のエピトープは、異なる抗原上、例えば、異なるタンパク質（又は多量体タンパク質の異なるサブユニット）上にある。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかのいくつかの実施形態では、二重特異性抗体は、第１のエピトープに対する結合特異性を有する重鎖可変ドメイン配列及び軽鎖可変ドメイン配列と、第２のエピトープに対する結合特異性を有する重鎖可変ドメイン配列及び軽鎖可変ドメイン配列とを含む。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかのいくつかの実施形態では、二重特異性抗体は、第１のエピトープに対する結合特異性を有する半抗体又はその断片と、第２のエピトープに対する結合特異性を有する半抗体又はその断片とを含む。実施形態では、二重特異性抗体は、第１のエピトープに対する結合特異性を有する重鎖可変ドメイン配列及び軽鎖可変ドメイン配列と、第２のエピトープに対する結合特異性を有する、抗体重鎖のＣＨ１領域に由来する領域及び／又は抗体軽鎖のＣＬ領域に由来する領域とを含む。
本明細書で使用される「医薬的に許容される」という用語は、動物における使用について、より具体的にはヒトにおける使用について、連邦政府又は州政府の規制機関によって承認されているか、又は米国薬局方、欧州薬局方、若しくは他の一般的に認められている薬局方に列挙されていることを意味する。
「賦形剤」とは、液体又は固体の充填剤、希釈剤、溶媒、カプセル化材料などの、医薬的に許容される材料、組成物、又はビヒクルを指す。賦形剤としては、例えば、吸収促進剤、抗酸化剤、バインダー、緩衝剤、担体、コーティング剤、着色剤、希釈剤、崩壊剤、乳化剤、拡張剤、充填剤、香味剤、湿潤剤、潤滑剤、香料、防腐剤、推進剤、放出剤、殺菌剤、甘味料、可溶化剤、湿潤剤及びこれらの混合物などのカプセル化材料又は添加剤が挙げられる。また、「賦形剤」という用語は、希釈剤、アジュバント（例えば、フロイントアジュバント（完全又は不完全））又はビヒクルを指すことができる。
上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、賦形剤は薬学的に許容される賦形剤である。医薬的に許容される賦形剤の例としては、リン酸塩、クエン酸塩、及びその他の有機酸などの緩衝剤、アスコルビン酸を含む抗酸化剤、低分子量（例えば、約１０アミノ酸残基未満）のポリペプチド、血清アルブミン、ゼラチン、又は免疫グロブリンなどのタンパク質、ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー、グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニン、又はリジンなどのアミノ酸、単糖類、二糖類、及びグルコース、マンノース、又はデキストリンを含むその他の炭水化物、ＥＤＴＡなどのキレート剤、マンニトール又はソルビトールなどの糖アルコール、ナトリウムなどの塩形成対イオン、並びに／又はＴＷＥＥＮ（登録商標）、ポリエチレングリコール（polyethylene glycol、ＰＥＧ）、及びＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（登録商標）などの非イオン性界面活性剤が挙げられる。医薬的に許容される賦形剤の他の例は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ ａｎｄ Ｇｅｎｎａｒｏ，Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（１８ｔｈ ｅｄ．１９９０）に記載されている。
上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかのいくつかの実施形態では、各成分は、医薬製剤の他の成分と適合性があるという意味で「医薬的に許容される」ものであり、過度の毒性、刺激性、アレルギー反応、免疫原性、又はその他の問題又は合併症がなく、妥当な利点／リスク比に見合って、ヒト及び動物の組織又は器官と接触して使用するために好適である。例えば、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ：Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡ，２００５、Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ，６ｔｈ ｅｄ．、Ｒｏｗｅ ｅｔ ａｌ．，Ｅｄｓ．、Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ ａｎｄ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ：２００９、Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ａｄｄｉｔｉｖｅｓ，３ｒｄ ｅｄ．、Ａｓｈ ａｎｄ Ａｓｈ Ｅｄｓ．、Ｇｏｗｅｒ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ：２００７、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ，２ｎｄ ｅｄ．、Ｇｉｂｓｏｎ Ｅｄ．、ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ ＬＬＣ：Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，ＦＬ，２００９を参照。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかのいくつかの実施形態では、医薬的に許容される賦形剤は、採用される用量及び濃度で、それにさらされる細胞又は哺乳動物に対して非毒性である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、薬学的に許容される賦形剤は水性ｐＨ緩衝溶液である。
上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかのいくつかの実施形態では、賦形剤は、水、及び石油、動物、植物、又は合成物由来のものを含む油、例えば、落花生油、大豆油、鉱油、ゴマ油などの無菌液体であってもよい。水は、組成物（例えば、医薬組成物）が静脈内投与される場合の例示的な賦形剤である。生理食塩水並びに水性デキストロース及びグリセロール溶液も、特に注射溶液用の液体賦形剤として採用され得る。賦形剤としては、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、コメ、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセリン、タルク、塩化ナトリウム、乾燥スキムミルク、グリセリン、プロピレン、グリコール、水、エタノールなども挙げることができる。必要に応じて、組成物は、少量の湿潤剤若しくは乳化剤、又はｐＨ緩衝剤を更に含み得る。組成物は、液剤、懸濁剤、乳剤、錠剤、丸剤、カプセル剤、散剤、徐放製剤などの形態を取り得る。製剤を含む経口組成物は、医薬品グレードのマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウムなどの標準的な賦形剤を含み得る。
医薬化合物を含む組成物は、例えば、単離又は精製された形の抗体を、好適な量の賦形剤と共に含み得る。
本明細書で使用される「有効量」又は「治療有効量」という用語は、所望の結果をもたらすのに十分である、本明細書において提供される抗体又は医薬組成物の量を指す。
「対象」及び「患者」という用語は、本明細書では互換的に使用することができる。本明細書で使用される場合、特定の実施形態では、対象は、非霊長類（例えば、ウシ、ブタ、ウマ、ネコ、イヌ、ラットなど）又は霊長類（例えば、サル及びヒト）などの哺乳動物である。具体的な実施形態では、対象は、ヒトである。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、対象は、病態又は障害と診断された哺乳動物、例えば、ヒトである。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、対象は、病態又は障害を発症するリスクのある哺乳動物、例えば、ヒトである。
「投与する」又は「投与」とは、本明細書に記載されているか、又は当該技術分野で知られている、粘膜、皮内、静脈内、筋肉内、皮下送達、及び／又は他の任意の物理的送達方法などによって、体外に存在する物質を患者に注射又は他の方法で物理的に送達する行為を指す。
本明細書で使用される場合、「処置」、及び「治療／処置する」という用語は、１つ以上の治療法を投与することによって生じる、疾患又は病態の進行、重症度、及び／又は持続期間の減少又は寛解を指す。治療は、患者がまだ基礎疾患に罹患している場合があるにもかかわらず、患者に改善が観察されるように、基礎疾患と関連する１つ以上の症状の減少、軽減及び／又は緩和があったかどうかを評価することによって決定され得る。「治療すること」という用語は、疾患の管理及び寛解の両方を含む。「管理する」、「管理すること」、及び「管理」という用語は、対象が治療から得られる有益な効果を指し、必ずしも疾患の治癒をもたらすとは限らない。
「予防する」、「予防すること」、及び「予防」という用語は、疾患、障害、病態、又は関連する症状の発症（又は再発）の可能性を低減することを指す。
「約」及び「おおよそ」という用語は、所与の値又は範囲の２０％以内、１５％以内、１０％以内、９％以内、８％以内、７％以内、６％以内、５％以内、４％以内、３％以内、２％以内、１％以内、又はそれ未満を指す。
本開示及び特許請求の範囲で使用されるように、単数形「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は、文脈が明らかに他のことを示さない限り、複数形を含む。
実施形態が「含む」という用語で本明細書に記載される場合は常に、そうでなければ「からなる」及び／又は「から本質的になる」に関して記載される他の類似の実施形態もまた提供されることが理解される。実施形態が「から本質的になる」という語句で本明細書に記載される場合は常に、そうでなければ「からなる」に関して記載される類似の実施形態もまた提供されることも理解される。
「ＡとＢの間」又は「Ａ～Ｂの間」などの語句で使用される「間」という用語は、Ａ及びＢの両方を含む範囲を指す。
本明細書の「Ａ及び／又はＢ」などの語句で使用される「及び／又は」という用語は、Ａ及びＢの両方、Ａ又はＢ、Ａ（単独）、及びＢ（単独）を含むことを意図している。同様に、「Ａ、Ｂ、及び／又はＣ」などの語句で使用される「及び／又は」という用語は、以下の各実施形態：Ａ、Ｂ、及びＣ、Ａ、Ｂ、又はＣ、Ａ又はＣ、Ａ又はＢ、Ｂ又はＣ、Ａ及びＣ、Ａ及びＢ、Ｂ及びＣ、Ａ（単独）、Ｂ（単独）、及びＣ（単独）を含むことを意図している。
５．２ 結合分子
本明細書で提供される結合分子は、少なくとも１つの操作された抗体定常領域変異体（例えば、ＣＨ１領域変異体及び／又はＣＬ領域変異体）を含み、定常領域変異体は、１つ以上の抗原結合ループを含み、したがって、本分子中の定常領域変異体は、抗原結合能力を付与する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される定常領域変異体中の抗原結合ループは、抗体定常領域（例えば、ＣＨ１領域又はＣＬ領域）中のループ領域のうちの１つに位置する。抗体定常領域の「ループ領域」は、β鎖を接続する構造的ループを指す（これは次に、βシート、通常のタンパク質二次構造の共通モチーフを構成する）。β鎖は、タンパク質ドメインの一次アミノ酸配列におけるそれらの出現の順序に関して、連続的に文字化される（Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆなど）ことが当業者に周知である。構造ループは、それらが接続しているβ鎖に基づいて標識される。例えば、ＡＢループは、β鎖Ａ及びＢを接続する構造ループを指す。ＢＣループは、β鎖Ｂ及びＣを接続する構造ループを指す。ＣＤループは、β鎖Ｃ及びＤを接続する構造ループを指す。ＤＥループは、β鎖Ｄ及びＥを接続する構造ループを指す。ＥＦループは、β鎖Ｅ及びＦを接続する構造ループを指す。ＦＧループは、β鎖Ｆ及びＧを接続する構造ループを指す。典型的なＣＨ１領域及びＣＬ領域は、７つのβストランド－Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、及びＧ、並びに６つのループ領域ＡＢループ、ＢＣループ、ＣＤループ、ＤＥループ、ＥＦループ、及びＦＧループを含む（例えば、図１Ｂに示されるような）。
いくつかの実施形態では、１つ以上の抗原結合ループが、ＣＨ１領域のＡＢ、ＢＣ、ＣＤ、ＤＥ、ＥＦ、及び／又はＦＧループ領域内のアミノ酸残基に導入され、かつ／又はそれを置換する。いくつかの実施形態では、１つ以上の抗原結合ループが、ＣＬ領域のＡＢ、ＢＣ、ＣＤ、ＤＥ、ＥＦ、及び／又はＦＧループ領域内のアミノ酸残基に導入され、かつ／又はそれを置換する。いくつかの実施形態では、１つ以上の抗原結合ループは、ＣＨ１領域のＡＢ、ＢＣ、ＣＤ、ＤＥ、ＥＦ、及び／又はＦＧループ領域の外側のアミノ酸残基に導入され、かつ／又はそれを置換する。いくつかの実施形態では、１つ以上の抗原結合ループは、ＣＬ領域のＡＢ、ＢＣ、ＣＤ、ＤＥ、ＥＦ、及び／又はＦＧループ領域の外側のアミノ酸残基に導入され、かつ／又はそれを置換する。いくつかの実施形態では、１つ以上の抗原結合ループが、ＣＨ１領域のＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、及び／又はＦβ鎖領域内のアミノ酸残基に導入され、かつ／又はそれを置換する。いくつかの実施形態では、１つ以上の抗原結合ループが、ＣＬ領域のＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、及び／又はＦβ鎖領域内のアミノ酸残基に導入され、かつ／又はそれを置換する。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗原結合ループは、ループ領域に挿入され得る。抗原結合ループは、ＣＨ１又はＣＬ領域のＡＢループ領域に挿入することができる。抗原結合ループは、ＣＨ１又はＣＬ領域のＢＣループ領域に挿入することができる。抗原結合ループは、ＣＨ１又はＣＬ領域のＣＤループ領域に挿入することができる。抗原結合ループは、ＣＨ１又はＣＬ領域のＤＥループ領域に挿入することができる。抗原結合ループは、ＣＨ１又はＣＬ領域のＥＦループ領域に挿入することができる。抗原結合ループは、ＣＨ１又はＣＬ領域のＦＧループ領域に挿入することができる。
他の実施形態では、本明細書で提供される抗原結合ループは、ループ領域内の領域を置換することができる。抗原結合ループは、ＣＨ１又はＣＬ領域のＡＢループ領域内の領域を置換することができる。抗原結合ループは、ＣＨ１又はＣＬ領域のＢＣループ領域内の領域を置換することができる。抗原結合ループは、ＣＨ１又はＣＬ領域のＣＤループ領域内の領域を置換することができる。抗原結合ループは、ＣＨ１又はＣＬ領域のＤＥループ領域内の領域を置換することができる。抗原結合ループは、ＣＨ１又はＣＬ領域のＥＦループ領域内の領域を置換することができる。抗原結合ループは、ＣＨ１又はＣＬ領域のＦＧループ領域内の領域を置換することができる。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される結合分子は、１つの抗原結合ループを含む。他の実施形態では、本明細書で提供される結合分子は、２つ以上の抗原結合ループを含む。例えば、結合分子は、ＣＨ１領域のＡＢ、ＢＣ、ＣＤ、ＤＥ、ＥＦ、及び／又はＦＧループ領域内のアミノ酸断片に導入され、かつ／又はそれを置換する２つ以上の抗原結合ループを含むＣＨ１領域変異体を含むことができる。他の実施形態では、結合分子は、ＣＬ領域のＡＢ、ＢＣ、ＣＤ、ＤＥ、ＥＦ、及び／又はＦＧループ領域内のアミノ酸断片に導入され、かつ／又はそれを置換する２つ以上の抗原結合ループを含むＣＬ領域変異体を含む。更に他の実施形態では、本明細書で提供される結合分子は、ＣＨ１領域のＡＢ、ＢＣ、ＣＤ、ＤＥ、ＥＦ、及び／又はＦＧループ領域内のアミノ酸断片に導入され、かつ／又はそれを置換する１つ以上の抗原結合ループを含むＣＨ１領域変異体と、ＣＬ領域のＡＢ、ＢＣ、ＣＤ、ＤＥ、ＥＦ、及び／又はＦＧループ領域内のアミノ酸断片に導入され、かつ／又はそれを置換する１つ以上の抗原結合ループを含むＣＬ領域変異体とを含む。いくつかの実施形態では、抗原結合ループは、ＣＨ１領域のＡＢ、ＢＣ、ＣＤ、ＤＥ、ＥＦ、及び／又はＦＧループ領域の外側に位置する。いくつかの実施形態では、抗原結合ループは、ＣＬ領域のＡＢ、ＢＣ、ＣＤ、ＤＥ、ＥＦ、及び／又はＦＧループ領域の外側に位置する。いくつかの実施形態では、抗原結合ループは、ＣＬ領域のＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、及び／又はＦβ鎖に位置する。いくつかの実施形態では、抗原結合ループは、ＣＨ１領域のＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、及び／又はＦβ鎖に位置する。
いくつかの実施形態では、ＣＨ１領域は、ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣ（配列番号１）のアミノ酸配列を含むヒトＩｇＧ１ＣＨ１領域である。いくつかの実施形態では、ＣＨ１領域は、配列番号１に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％又は９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＬ ＣＤＲ３は、ＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号２）のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＬ領域は、配列番号２に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％又は９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＬ領域は、ＣＤＲ３は、ＧＱＰＫＡＮＰＴＶＴＬＦＰＰＳＳＥＥＬＱＡＮＫＡＴＬＶＣＬＩＳＤＦＹＰＧＡＶＴＶＡＷＫＡＤＧＳＰＶＫＡＧＶＥＴＴＫＰＳＫＱＳＮＮＫＹＡＡＳＳＹＬＳＬＴＰＥＱＷＫＳＨＲＳＹＳＣＱＶＴＨＥＧＳＴＶＥＫＴＶＡＰＴＥＣＳ（配列番号３）のアミノ酸配列を含むヒトＣＬラムダ領域である。いくつかの実施形態では、ＣＬ領域は、配列番号３に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％又は９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される結合分子は、ＣＨ１領域に１つ又は２つの抗原結合ループを含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される結合分子は、ＣＬ領域に１つ又は２つの抗原結合ループを含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される結合分子は、ＣＨ１領域のＣＤループ領域に１つの抗原結合ループを含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される結合分子は、ＣＨ１領域のＤＥループ領域に１つの抗原結合ループを含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される結合分子は、ＣＨ１領域のＣＤループ領域に１つの抗原結合ループを含み、ＣＨ１領域のＤＥループ領域に１つの抗原結合ループを含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される結合分子は、ＣＬ領域のＣＤループ領域に１つの抗原結合ループを含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される結合分子は、ＣＬ領域のＤＥループ領域に１つの抗原結合ループを含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される結合分子は、ＣＬ領域のＣＤループ領域における１つの抗原結合ループ及びＣＬ領域のＤＥループ領域における１つの抗原結合ループを含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される結合分子は、ＣＨ１領域のＣＤループ領域に１つの抗原結合ループを含み、ＣＬ領域のＣＤループ領域に１つの抗原結合ループを含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される結合分子は、ＣＨ１領域のＣＤループ領域における１つの抗原結合ループ及びＣＬ領域のＤＥループ領域における１つの抗原結合ループを含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される結合分子は、ＣＨ１領域のＣＤループ領域における１つの抗原結合ループ、ＣＬ領域のＣＤループ領域における１つの抗原結合ループ及びＣＬ領域のＤＥループ領域における１つの抗原結合ループを含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される結合分子は、ＣＨ１領域のＤＥループ領域に１つの抗原結合ループを含み、ＣＬ領域のＣＤループ領域に１つの抗原結合ループを含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される結合分子は、ＣＨ１領域のＤＥループ領域における１つの抗原結合ループ及びＣＬ領域のＤＥループ領域における１つの抗原結合ループを含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される結合分子は、ＣＨ１領域のＤＥループ領域における１つの抗原結合ループ、ＣＬ領域のＣＤループ領域における１つの抗原結合ループ、及びＣＬ領域のＤＥループ領域における１つの抗原結合ループを含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される結合分子は、ＣＨ１領域のＣＤループ領域における１つの抗原結合ループ、ＣＨ１領域のＤＥループ領域における１つの抗原結合ループ、及びＣＬ領域のＣＤループ領域における１つの抗原結合ループを含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される結合分子は、ＣＨ１領域のＣＤループ領域における１つの抗原結合ループ、ＣＨ１領域のＤＥループ領域における１つの抗原結合ループ、及びＣＬ領域のＤＥループ領域における１つの抗原結合ループを含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される結合分子は、ＣＨ１領域のＣＤループ領域における１つの抗原結合ループ、ＣＨ１領域のＤＥループ領域における１つの抗原結合ループ、ＣＬ領域のＣＤループ領域における１つの抗原結合ループ、及びＣＬ領域のＤＥループ領域における１つの抗原結合ループを含む。
いくつかの特定の実施形態では、ＣＨ１領域のＣＤループ領域における抗原結合ループは、ヒトＩｇＧ１ ＣＨ１領域のＣＤループのアミノ酸残基ＴＳＧを置換する。いくつかの特定の実施形態では、ＣＨ１領域のＤＥループ領域における抗原結合ループは、ヒトＩｇＧ１ ＣＨ１領域のＤＥループのアミノ酸残基ＱＳＳを置換する。いくつかの特定の実施形態では、ＣＬ領域のＣＤループ領域における抗原結合ループは、ヒトＣＬカッパ領域のＣＤループのアミノ酸残基ＳＧＮＳを置換する。いくつかの実施形態では、ＣＬ領域のＤＥループ領域における抗原結合ループは、ヒトＣＬカッパ領域のＤＥループのアミノ酸残基ＳＫＤを置換する。
いくつかの実施形態では、結合分子は、抗体重鎖のＣＨ１領域に由来する領域及び／又は抗体軽鎖のＣＬ領域に由来する領域を含み、ＣＨ１領域に由来する領域及び／又はＣＬ領域に由来する領域は、１つ以上の抗原結合ループを含む。
本明細書で提供される結合分子は、抗体（その任意の抗原結合断片を含む）であり得る。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される結合分子は、本明細書で提供される１つ以上の定常領域変異体によって形成される抗原結合ドメインを含む多重特異性又は多価結合分子である。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される結合分子は、１つ以上の抗原結合ループを有する１つ以上の定常領域変異体を含み、それによって追加の抗原結合ドメインを抗体に導入して多重特異性／多価抗体を生成することを除いて、従来の抗体フォーマットである。そのような例示的な結合分子を図１Ａに示す。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される多重特異性／多価結合分子は、第１の抗原に結合することができるＶＨ領域及びＶＬ領域を含む結合ドメインを含む。更に、本明細書において提供される多重特異性結合分子は、第２の抗原に結合することができるＣＨ１領域に由来する領域及び／又はＣＬ領域に由来する領域を含む追加の結合ドメインを含む。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される結合分子は、多重特異的抗体である。他の実施形態では、本明細書で提供される結合分子は多価抗体である。本明細書で提供される抗体としては、合成抗体、モノクローナル抗体、組み換え生成抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体などが挙げられるが、これらに限定されない。
特に、本明細書で提供される抗体は、免疫グロブリン分子及び免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な部分、すなわち、抗原に免疫特異的に結合する抗原結合部位を含む分子を含む。本明細書において提供される免疫グロブリン分子は、免疫グロブリン分子の任意のクラス（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、及びＩｇＡ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２）又は免疫グロブリン分子のサブクラスであり得る。特定の実施態態では、本明細書で提供される抗体は、ＩｇＧ１抗体、ＩｇＧ２抗体、又はＩｇＧ４抗体（例えば、ＩｇＧ４ ｎｕｌｌｂｏｄｙ及びＩｇＧ４抗体の変異体）などのＩｇＧ抗体である。特定の実施形態では、ＩｇＧ抗体は、ＩｇＧ１抗体である。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される様々な結合分子は、エピトープに特異的に結合する能力を保持する抗体断片を含む抗体の変異体及び／又は誘導体を含む。本明細書で提供される様々な結合分子の他の実施形態では、第１の結合ドメイン及び／又は第２の結合ドメインは、エピトープに特異的に結合する能力を保持する抗体断片を含む抗体の変異体及び／又は誘導体である。例示的な断片としては、Ｆａｂ断片（抗原結合ドメインを含有し、軽鎖と、ジスルフィド結合によって架橋された重鎖の一部とを含む抗体断片）、Ｆａｂ’（Ｆａｂ及びヒンジ領域を介した重鎖の追加部分を含む単一の抗結合ドメインを含有する抗体断片）、Ｆ（ａｂ’）２（重鎖のヒンジ領域において鎖間ジスルフィド結合によって連結された２つのＦａｂ’分子、Ｆａｂ’分子は、同じ又は異なるエピトープに向けられ得る）、二重特異性Ｆａｂ（２つの抗原結合ドメインを有するＦａｂ分子であり、その各々は異なるエピトープに向けられ得る）が挙げられる。抗体の誘導体はまた、抗体の抗原結合部位の１つ以上のＣＤＲ配列を含む。ＣＤＲ配列は、２つ以上のＣＤＲ配列が存在する場合、足場上で一緒に連結され得る。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は二重特異性抗体である。いくつかの実施形態では、抗体は、三重特異性抗体である。いくつかの実施形態では、抗体は、四重特異性抗体である。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は二価抗体である。いくつかの実施形態では、抗体は、三価抗体である。いくつかの実施形態では、抗体は、四価抗体である。
一実施形態では、抗体は、（ａ）第１の抗原に結合する第１の結合ドメイン、及び（ｂ）第２の抗原に結合する第２の結合ドメインを含む。一実施形態では、多重特異性抗体は、（ａ）第１の抗原に結合する第１の結合ドメイン、及び（ｂ）第２の抗原に結合する第２の結合ドメイン、及び（ｃ）第３の抗原に結合する第３の結合ドメインを含む。一実施形態では、多重特異性抗体は（ａ）第１の抗原に結合する第１の結合ドメイン、及び（ｂ）第２の抗原に結合する第２の結合ドメイン、（ｃ）第３の抗原に結合する第３の結合ドメイン、及び（ｄ）ａ第４の抗原に結合する第４の結合ドメイン、を含む。いくつかの実施形態では、第１の抗原、第２の抗原、第３の抗原及び／又は第４の抗原のうちの２つ以上は同じである。いくつかの実施形態では、第１の抗原、第２の抗原、第３の抗原及び／又は第４の抗原のうちの２つ以上は異なる。
別の態様では、（ａ）第１の抗原に結合することができるＶＨ領域及びＶＬ領域を含む第１の結合ドメイン、及び、（ｂ）第２の抗原に結合することができるＣＨ１領域に由来する領域及び／又はＣＬ領域に由来する領域を含む第２の結合ドメインを含む抗体が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、第１の抗原及び第２の抗原は、同じ抗原である。いくつかの実施形態では、第１の抗原及び第２の抗原は、２つの異なる抗原である。
いくつかの実施形態では、ＣＨ１領域由来する領域は、配列番号１のアミノ酸配列を含むヒトＩｇＧ１ ＣＨ１領域に由来する領域であり、ＣＨ１領域に由来する領域は、配列番号１に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％又は９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＬ領域に由来する領域は、配列番号２のアミノ酸配列を含むヒトＣＬカッパ領域に由来する領域であり、ＣＬ領域に由来する領域は、配列番号２に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％又は９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＬ領域に由来する領域は、配列番号３のアミノ酸配列を含むヒトＣＬラムダ領域に由来する領域であり、ＣＬ領域に由来する領域は、配列番号３と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％又は９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの具体的な実施態態では、以下の第７節で作製される二重特異性抗体が本明細書で提供される。
本明細書で提供される抗体は、鳥類及び哺乳動物（例えば、ヒト、サル、マウス、ロバ、ヒツジ、ウサギ、ヤギ、モルモット、ラクダ、ウマ、又はニワトリ）を含む任意の動物起源に由来し得る。特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、ヒト又はヒト化モノクローナル抗体である。本明細書中で使用される場合、「ヒト」抗体は、ヒト免疫グロブリンのアミノ酸配列を有する抗体を含み、ヒト免疫グロブリンライブラリーから、又はヒト遺伝子由来の抗体を発現するマウスから単離された抗体を含む。
特定の実施形態では、抗体は、完全マウス抗体である。特定の実施形態では、抗体は、マウス－ヒトキメラ抗体である。特定の実施形態では、抗体は、ヒト化抗体である。特定の実施形態では、抗体は、完全ヒト抗体である。他の実施態態では、本明細書で提供される抗体は、ヒト化抗体（例えば、ヒト定常領域及びフレームワーク領域を含む）である。本明細書で提供される抗体は、二重特異性、三重特異性、又はそれ以上の多重特異性であり得る。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体又は抗原結合性断片は、１０００ｎＭ未満のＫｄＤで抗原に結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体又は抗原結合性断片は、１００ｎＭ未満のＫｄＤで抗原に結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体又は抗原結合性断片は、５０ｎＭ未満のＫｄＤで抗原に結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体又は抗原結合性断片は、４０ｎＭ未満のＫｄＤで抗原に結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体又は抗原結合性断片は、３０ｎＭ未満のＫｄＤで抗原に結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体又は抗原結合性断片は、２０ｎＭ未満のＫｄＤで抗原に結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体又は抗原結合性断片は、１０ｎＭ未満のＫｄＤで抗原に結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体又は抗原結合性断片は、９ｎＭ未満のＫｄＤで抗原に結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体又は抗原結合性断片は、８ｎＭ未満のＫｄＤで抗原に結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体又は抗原結合性断片は、７ｎＭ未満のＫｄＤで抗原に結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体又は抗原結合性断片は、６ｎＭ未満のＫｄＤで抗原に結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体又は抗原結合性断片は、５ｎＭ未満のＫｄＤで抗原に結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体又は抗原結合性断片は、４ｎＭ未満のＫｄＤで抗原に結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体又は抗原結合性断片は、３ｎＭ未満のＫｄＤで抗原に結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体又は抗原結合性断片は、２ｎＭ未満のＫｄＤで抗原に結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体又は抗原結合性断片は、１ｎＭ未満のＫｄＤで抗原に結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体又は抗原結合性断片は、０．１ｎＭ未満のＫｄＤで抗原に結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体又は抗原結合性断片は、０．０１ｎＭ未満のＫｄＤで抗原に結合する。また、例えば、Ｏｃｔｅｔ（登録商標）（Ｏｃｔｅｔ（登録商標）Ｒｅｄ９６系など）又はＢｉａｃｏｒｅ（登録商標）（Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）ＴＭ－２０００やＢｉａｃｏｒｅ（登録商標）ＴＭ－３０００など）で、例えば、バイオレイヤー干渉法（biolayer interferometry、ＢＬＩ）又は表面プラズモン共鳴法（surface plasmon resonance、ＳＰＲ）アッセイを用いて、など、当該技術分野において周知の任意の方法で、ＫＤ又はＫＤ値を測定することができる。また、「オンレート」又は「会合の速度」又は「会合速度」又は「ｋｏｎ」は、例えば、Ｏｃｔｅｔ（登録商標）Ｒｅｄ９６、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）ＴＭ－２０００、又はＢｉａｃｏｒｅ（登録商標）ＴＭ－３０００のシステムを用いて、上述したバイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）又は表面プラズモン共鳴法（ＳＰＲ）という同じ手法で測定することができる。特定の実施形態では、ＫＤは、Ｂｉａｃｏｒｅアッセイによって決定される。いくつかの実施形態では、抗原は、ヒト抗原である。いくつかの実施形態では、抗原は、カニクイザル抗原である。いくつかの実施形態では、抗原は、ラット抗原である。他の実施形態では、腫瘍抗原は、マウス抗原である。
いくつかの実施形態では、本明細書では、抗原に特異的に結合し、抗原の活性及び／又は発現を調節できる（例えば、抗原媒介シグナル伝達を阻害する）抗体が提供される。特定の実施形態では、抗原に特異的に結合し、抗原活性を阻害する（部分的に阻害することを含む）、本明細書に記載される抗体である抗原アンタゴニストが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、抗原のそのリガンドへの結合を阻害する（部分的に阻害又は低減することを含む）。抗原活性は、当技術分野において周知であるか又は記載されているものなどの抗原の任意の活性に関連し得る。特定の実施形態では、抗原活性及び抗原シグナル伝達（又は抗原媒介シグナル伝達）は、本明細書において互換的に使用される。
特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、抗原活性を減弱させる（例えば、部分的に減弱させる）。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、抗原活性を少なくとも約１０％減弱させる。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、抗原活性を少なくとも約２０％減弱させる。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、抗原活性を少なくとも約３０％減弱させる。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、抗原活性を少なくとも約４０％減弱させる。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、抗原活性を少なくとも約５０％減弱させる。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、抗原活性を少なくとも約６０％減弱させる。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、抗原活性を少なくとも約７０％減弱させる。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、抗原活性を少なくとも約８０％減弱させる。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、抗原活性を少なくとも約９０％減弱させる。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、抗原活性を少なくとも約９５％減弱させる。特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、抗原活性を少なくとも約１５％～約６５％減衰させ得る（例えば、部分的に減衰させ得る）。特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、抗原活性を少なくとも約２０％～約６５％減衰させ得る（例えば、部分的に減衰させ得る）。特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、抗原活性を少なくとも約３０％～約６５％減衰させ得る（例えば、部分的に減衰させ得る）。
具体的な実施態態では、抗原活性の減弱は、本明細書に記載される方法によって評価される。特定の実施形態では、抗原活性の減弱は、当業者に周知の方法によって評価される。特定の実施形態では、抗原活性の減弱は、抗原に対する任意の抗体を伴わない刺激の存在下での抗原活性に対するものである。特定の実施形態では、抗原活性の減弱は、無関係の抗体（例えば、抗原に特異的に結合しない抗体）による刺激の存在下での抗原活性と比較したものである。
抗原活性の非限定的な例は、抗原媒介シグナル伝達である。したがって、特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、抗原媒介シグナル伝達を減弱させる（例えば、部分的に減弱させる）。いくつかの実施形態では、本明細書で提供する抗体は、抗原媒介性シグナル伝達を少なくとも約１０％減衰させる。いくつかの実施形態では、本明細書で提供する抗体は、抗原媒介性シグナル伝達を少なくとも約２０％減衰させる。いくつかの実施形態では、本明細書で提供する抗体は、抗原媒介シグナル伝達を少なくとも約３０％減衰させる。いくつかの実施形態では、本明細書で提供する抗体は、抗原媒介性シグナル伝達を少なくとも約４０％減衰させる。いくつかの実施形態では、本明細書で提供する抗体は、抗原媒介性シグナル伝達を少なくとも約５０％減衰させる。いくつかの実施形態では、本明細書で提供する抗体は、抗原媒介性シグナル伝達を少なくとも約６０％減衰させる。いくつかの実施形態では、本明細書で提供する抗体は、抗原媒介シグナル伝達を少なくとも約７０％減衰させる。いくつかの実施形態では、本明細書で提供する抗体は、抗原媒介シグナル伝達を少なくとも約８０％減衰させる。いくつかの実施形態では、本明細書で提供する抗体は、抗原媒介性シグナル伝達を少なくとも約９０％減衰させる。いくつかの実施形態では、本明細書で提供する抗体は、抗原媒介シグナル伝達を少なくとも約９５％減衰させる。特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、抗原媒介性シグナル伝達を少なくとも約１５％～約６５％減衰させる（例えば、部分的に減衰させる）ことができる。特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、抗原媒介性シグナル伝達を少なくとも約２０％～約６５％減衰させる（例えば、部分的に減衰させる）ことができる。特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、抗原媒介性シグナル伝達を少なくとも約３０％～約６５％減衰させる（例えば、部分的に減衰させる）ことができる。
いくつかの実施形態では、本結合分子によって結合される１つの癌細胞などの標的細胞の表面上の抗原である。いくつかの実施形態では、抗原は、腫瘍特異的抗原、腫瘍関連抗原、又は新抗原である。
いくつかの実施形態では、癌細胞は、副腎癌、肛門癌、虫垂癌、胆管癌、膀胱癌、骨癌、脳癌、乳癌、子宮頸癌、結腸直腸癌、食道癌、胆嚢癌、妊娠性絨毛性、頭頸部癌、ホジキンリンパ腫、腸癌、腎臓癌、白血病、肝臓癌、肺癌、黒色腫、中皮腫、多発性骨髄腫、神経内分泌腫瘍、非ホジキンリンパ腫、口腔癌、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、洞癌、皮膚癌、軟部組織肉腫脊髄癌、胃癌、精巣癌、咽頭癌、甲状腺癌、子宮癌、子宮内膜癌、膣癌、又は外陰部癌の細胞である。いくつかの実施形態では、癌は、副腎癌、肛門癌、虫垂癌、胆管癌、膀胱癌、骨癌、脳癌、乳癌、子宮頸癌、結腸直腸癌、食道癌、胆嚢癌、妊娠性絨毛性、頭頸部癌、ホジキンリンパ腫、腸癌、腎臓癌、白血病、肝臓癌、肺癌、黒色腫、中皮腫、多発性骨髄腫、神経内分泌腫瘍、非ホジキンリンパ腫、口腔癌、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、洞癌、皮膚癌、軟部組織肉腫脊髄癌、胃癌、精巣癌、咽頭癌、甲状腺癌、子宮癌、子宮内膜癌、膣癌、又は外陰部癌である。いくつかの実施形態では、癌は、副腎癌である。いくつかの実施形態では、癌は、肛門癌である。いくつかの実施形態では、癌は、虫垂癌である。いくつかの実施形態では、癌は、胆管癌である。いくつかの実施形態では、癌は、膀胱癌である。いくつかの実施形態では、癌は、骨癌である。いくつかの実施形態では、癌は、脳癌である。いくつかの実施形態では、癌は、乳癌である。いくつかの実施形態では、癌は、子宮頸癌である。いくつかの実施形態では、癌は、結腸直腸癌である。いくつかの実施形態では、癌は、食道癌である。いくつかの実施形態では、癌は、胆嚢癌である。いくつかの実施形態では、癌は、妊娠性絨毛性である。いくつかの実施形態では、癌は、頭頸部癌である。いくつかの実施形態では、癌は、ホジキンリンパ腫である。いくつかの実施形態では、癌は、腸癌である。いくつかの実施形態では、癌は、腎臓癌である。いくつかの実施形態では、癌は、白血病である。いくつかの実施形態では、癌は、肝臓癌である。いくつかの実施形態では、癌は、肺癌である。いくつかの実施形態では、癌は、黒色腫である。いくつかの実施形態では、癌は、中皮腫である。いくつかの実施形態では、癌は、多発性骨髄腫である。いくつかの実施形態では、癌は、神経内分泌腫瘍である。いくつかの実施形態では、癌は、非ホジキンリンパ腫である。いくつかの実施形態では、癌は、口腔癌である。いくつかの実施形態では、癌は、卵巣癌である。いくつかの実施形態では、癌は、膵臓癌である。いくつかの実施形態では、癌は、前立腺癌である。いくつかの実施形態では、癌は、洞癌である。いくつかの実施形態では、癌は、皮膚癌である。いくつかの実施形態では、癌は、軟部組織肉腫脊髄癌である。いくつかの実施形態では、癌は、胃癌である。いくつかの実施形態では、癌は、精巣癌である。いくつかの実施形態では、癌は、咽頭癌である。いくつかの実施形態では、癌は、甲状腺癌である。いくつかの実施形態では、癌は、子宮癌子宮内膜癌である。いくつかの実施形態では、癌は、膣癌である。いくつかの実施形態では、癌は、外陰部癌である。
いくつかの実施形態では、副腎癌は、副腎皮質性癌腫（ＡＣＣ）、副腎皮質癌、褐色細胞腫、又は神経芽細胞腫である。いくつかの実施形態では、肛門癌は、扁平上皮細胞癌腫、総排泄腔癌腫、腺癌腫、基底細胞癌腫、又は黒色腫である。いくつかの実施形態では、虫垂癌は、神経内分泌腫瘍（ＮＥＴ）、粘液性腺癌腫、杯細胞カルチノイド、腸型腺癌腫、又は印環細胞腺癌腫である。いくつかの実施形態では、胆管癌は、肝外胆管癌、腺癌腫、肝門部胆管癌、肝門部領域胆管癌、遠位胆管癌、又は肝内胆管癌である。いくつかの実施形態では、膀胱癌は、移行細胞癌腫（ＴＣＣ）、乳頭状癌腫、扁平癌腫、扁平上皮細胞癌腫、腺癌腫、小細胞癌腫、又は肉腫である。いくつかの実施形態では、骨癌は、原発性骨癌、肉腫、骨肉腫、軟骨肉腫、肉腫、線維肉腫、悪性線維性組織球腫、骨の巨細胞腫瘍、脊索腫、又は転移性骨癌である。いくつかの実施形態では、脳癌は、星状細胞腫、脳幹神経膠腫、神経膠芽腫、髄膜腫、上衣腫、乏突起膠腫、混合神経膠腫、下垂体癌、下垂体腺腫、頭蓋咽頭腫、胚細胞腫瘍、松果体部腫瘍、髄芽腫、又は原発性ＣＮＳリンパ腫である。いくつかの実施形態では、乳癌は、乳腺癌腫、侵襲性乳癌、非侵襲性乳癌、乳肉腫、化生性癌腫、腺嚢癌腫、葉状腫瘍、血管肉腫、ＨＥＲ２陽性乳癌、トリプルネガティブ乳癌、又は炎症性乳癌である。いくつかの実施形態では、子宮頸癌は、扁平上皮細胞癌腫又は腺癌腫である。いくつかの実施形態では、結腸直腸癌は、結腸直腸腺癌腫、原発性結腸直腸リンパ腫、消化管間質腫瘍、平滑筋肉腫、カルチノイド腫瘍、粘液性腺癌腫、印環細胞腺癌腫、消化管カルチノイド腫瘍、又は黒色腫である。いくつかの実施形態では、食道癌は、腺癌腫又は扁平上皮細胞癌腫である。いくつかの実施形態では、胆嚢癌は、腺癌腫、乳頭状腺癌腫、腺扁平上皮癌腫、扁平上皮細胞癌腫、小細胞癌腫、又は肉腫である。いくつかの実施形態では、妊娠性絨毛性疾患（ＧＴＤ）は、胞状奇胎、妊娠性絨毛性新生物（ＧＴＮ）、絨毛癌腫、胎盤部トロホブラスト腫瘍（ＰＳＴＴ）、又は類上皮性トロホブラスト腫瘍（ＥＴＴ）である。いくつかの実施形態では、頭頸部癌は、喉頭癌、鼻咽頭癌、下咽頭癌、鼻腔癌、副鼻腔癌、唾液腺癌、口腔癌、中咽頭癌、又は扁桃癌である。いくつかの実施形態では、ホジキンリンパ腫は、古典的ホジキンリンパ腫、結節硬化型、混合細胞型、リンパ球豊富型、リンパ球減少型、又は結節性リンパ球優位型ホジキンリンパ腫（ＮＬＰＨＬ）である。いくつかの実施形態では、腸癌は、小腸癌（small intestine cancer）、小腸癌（small bowel cancer）、腺癌腫、肉腫、消化管間質腫瘍、カルチノイド腫瘍、又はリンパ腫である。いくつかの実施形態では、腎臓癌は、腎細胞癌（ＲＣＣ）、明細胞ＲＣＣ、乳頭状ＲＣＣ、嫌色素性ＲＣＣ、集合管ＲＣＣ、未分類ＲＣＣ、移行細胞癌、尿路上皮癌、腎盂癌腫、又は腎肉腫である。いくつかの実施形態では、白血病は、急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、ヘアリーセル白血病（ＨＣＬ）、又は骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）である。特定の実施形態では、白血病は、ＡＭＬである。いくつかの実施形態では、肝臓癌は、肝細胞癌腫（ＨＣＣ）、線維層板型ＨＣＣ、胆管細胞癌腫、血管肉腫、又は肝転移である。いくつかの実施形態では、肺癌は、小細胞肺癌、小細胞癌腫、複合型小細胞癌腫、非小細胞肺癌、肺腺癌腫、扁平上皮細胞肺癌、大細胞未分化型癌腫、肺結節、転移性肺癌、腺扁平上皮癌腫、大細胞神経内分泌癌腫、唾液腺型肺癌腫、肺カルチノイド、中皮腫、肺の肉腫様癌腫、又は悪性顆粒細胞肺腫瘍である。いくつかの実施形態では、黒色腫は、表在拡大型黒色腫、結節性黒色腫、末端黒子型黒色腫、悪性黒子由来黒色腫、無色素性黒色腫、線維形成性黒色腫、眼黒色腫、又は転移性黒色腫である。いくつかの実施形態では、中皮腫は、胸膜中皮腫、腹膜中皮腫、心膜中皮腫、又は精巣中皮腫である。いくつかの実施形態では、多発性骨髄腫は、活動型又はくすぶり型の多発性骨髄腫である。いくつかの実施形態では、神経内分泌腫瘍は、消化管神経内分泌腫瘍、膵神経内分泌腫瘍、又は肺神経内分泌腫瘍である。いくつかの実施形態では、非ホジキンリンパ腫は、未分化大細胞リンパ腫、リンパ芽球性リンパ腫、末梢性Ｔ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫、辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、ＭＡＬＴリンパ腫、小細胞リンパ球性リンパ腫、バーキットリンパ腫、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、前駆Ｔリンパ芽球性白血病／リンパ腫、急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）、成人Ｔ細胞リンパ腫／白血病（ＡＴＬＬ）、ヘアリーセル白血病、Ｂ細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、原発性縦隔Ｂ細胞リンパ腫、原発性中枢神経系（ＣＮＳ）リンパ腫、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、辺縁帯リンパ腫、粘膜関連リンパ組織（ＭＡＬＴ）リンパ腫、結節辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、脾臓辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫、Ｔ細胞非ホジキンリンパ腫、ナチュラルキラー細胞リンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、アリベール－バザン症候群、セザリー症候群、原発性皮膚未分化大細胞リンパ腫、末梢性Ｔ細胞リンパ腫、血管免疫芽球性Ｔ細胞リンパ腫（ＡＩＴＬ）、未分化大細胞リンパ腫（ＡＬＣＬ）、全身性ＡＬＣＬ、腸症型Ｔ細胞リンパ腫（ＥＡＴＬ）、又は肝脾ガンマ／デルタＴ細胞リンパ腫である。いくつかの実施形態では、口腔癌は、扁平上皮細胞癌腫、疣状癌腫、小唾液腺癌腫、リンパ腫、良性口腔腫瘍、好酸球性肉芽腫、線維腫、顆粒細胞腫瘍、角化棘細胞腫、平滑筋腫、骨軟骨腫、脂肪腫、シュワン細胞腫、神経線維腫、乳頭腫、尖圭コンジローマ、疣贅型黄色腫、化膿性肉芽腫、横紋筋腫、歯原性腫瘍、白板症、紅板症、扁平上皮細胞口唇癌、基底細胞口唇癌、口癌、歯肉癌、又は舌癌である。いくつかの実施形態では、卵巣癌は、卵巣上皮癌、粘液性上皮卵巣癌、子宮内膜上皮卵巣癌、明細胞上皮卵巣癌、未分化型上皮卵巣癌、卵巣低悪性度腫瘍、原発性腹膜癌、卵管癌、胚細胞腫瘍、奇形腫、未分化卵巣胚細胞癌、内胚葉洞腫瘍、性索間質性腫瘍、性索性腺間質腫瘍、卵巣間質腫瘍、顆粒膜細胞腫瘍、顆粒膜卵胞膜腫瘍、セルトリ－ライディッヒ腫瘍、卵巣肉腫、卵巣癌肉腫、卵巣腺肉腫、卵巣平滑筋肉腫、卵巣線維肉腫、クルケンベルグ腫瘍、又は卵巣嚢胞である。いくつかの実施形態では、膵臓癌は、膵外分泌腺癌、膵内分泌腺癌、又は膵腺癌腫、膵島細胞腫瘍、又は神経内分泌腫瘍である。いくつかの実施形態では、前立腺癌は、前立腺腺癌腫、前立腺肉腫、移行細胞癌腫、小細胞癌腫、又は神経内分泌腫瘍である。いくつかの実施形態では、洞癌は、扁平上皮細胞癌腫、粘膜細胞癌腫、腺様嚢胞細胞癌腫、腺房細胞癌腫、副鼻腔未分化癌腫、鼻腔癌、副鼻腔癌、上顎洞癌、篩骨洞癌、又は鼻咽頭癌である。いくつかの実施形態では、皮膚癌は、基底細胞癌、扁平上皮癌腫、黒色腫、メルケル細胞癌腫、カポジ肉腫（ＫＳ）、日光角化症、皮膚リンパ腫、又は角化棘細胞腫である。いくつかの実施形態では、軟部組織癌は、血管肉腫、皮膚線維肉腫、上皮性肉腫、ユーイング肉腫、線維肉腫、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、カポジ肉腫、平滑筋肉腫、脂肪肉腫、脱分化型脂肪肉腫（ＤＬ）、粘液性／円形細胞脂肪肉腫（ＭＲＣＬ）、高分化型脂肪肉腫（ＷＤＬ）、悪性線維性組織球腫、神経線維肉腫、横紋筋肉腫（ＲＭＳ）、又は滑膜肉腫である。いくつかの実施形態では、脊髄癌は、脊髄転移性腫瘍である。いくつかの実施形態では、胃癌は、胃腺癌腫、胃リンパ腫、消化管間質腫瘍、カルチノイド腫瘍、胃カルチノイド腫瘍、Ｉ型ＥＣＬ細胞カルチノイド、ＩＩ型ＥＣＬ細胞カルチノイド、又はＩＩＩ型ＥＣＬ細胞カルチノイドである。いくつかの実施形態では、精巣癌は、セミノーマ、非セミノーマ、胚性癌腫、卵黄嚢癌腫、絨毛癌腫、奇形腫、性腺間質腫瘍、ライディッヒ細胞腫瘍、又はセルトリ細胞腫瘍である。いくつかの実施形態では、咽頭癌は、扁平上皮細胞癌腫、腺癌腫、肉腫、喉頭癌、咽頭癌、鼻咽頭癌、中咽頭癌、下咽頭癌、喉頭癌、喉頭扁平上皮細胞癌、喉頭腺癌腫、リンパ上皮腫、紡錘細胞癌腫、疣状癌、未分化癌腫、又はリンパ節癌である。いくつかの実施形態では、甲状腺癌は、乳頭状癌腫、濾胞状癌腫、ハースル細胞癌腫、甲状腺髄様癌腫、又は未分化癌腫である。いくつかの実施形態では、子宮癌は、子宮内膜癌、子宮内膜腺癌腫、類子宮内膜癌腫、漿液性腺癌腫、腺扁平上皮癌腫、子宮癌肉腫、子宮肉腫、子宮平滑筋肉腫、子宮内膜間質肉腫、又は未分化肉腫である。いくつかの実施形態では、膣癌は、扁平上皮細胞癌腫、腺癌腫、黒色腫、又は肉腫である。いくつかの実施形態では、外陰部癌は、扁平上皮細胞癌腫又は腺癌腫である。
いくつかの実施形態では、本結合分子によって結合される１つの抗原は、癌抗原である。いくつかの実施形態では、癌抗原は、アンジオポエチン、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２５（ＩＬ２－Ｒ）、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ１２３（ＩＬ－３Ｒ）、ｃＭＥＴ、ＤＬＬ／Ｎｏｔｃｈ、ＥＧＦＲ、ＥｐＣＡＭ、ＦＧＦ、ＦＧＦ－Ｒ、ＧＤ２、ＨＥＲ２、メソテリン、ネクチン－４、ＰＤＧＦＲα、ＲＡＮＫＬ、ＳＬＡＭＦ７、ＴＲＯＰ２、ＶＥＧＦ、又はＶＥＧＦ－Ｒである。いくつかの実施形態では、癌抗原は、アンジオポエチンである。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＢＣＭＡである。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＣＤ１９である。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＣＤ２０である。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＣＤ２２である。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＣＤ２５（ＩＬ２－Ｒ）である。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＣＤ３０である。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＣＤ３３である。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＣＤ３７である。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＣＤ３８である。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＣＤ５２である。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＣＤ５６である。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＣＤ１２３（ＩＬ－３Ｒ）である。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ｃＭＥＴである。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＤＬＬ／Ｎｏｔｃｈである。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＥＧＦＲである。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＥｐＣＡＭである。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＦＧＦである。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＦＧＦ－Ｒである。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＧＤ２である。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＨＥＲ２である。いくつかの実施形態では、癌抗原は、メソテリンである。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ネクチン－４である。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＰＤＧＦＲαである。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＲＡＮＫＬである。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＳＬＡＭＦ７である。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＴＲＯＰ２である。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＶＥＧＦである。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＶＥＧＦ－Ｒである。
いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＣＥＡ、未成熟ラミニン受容体、ＴＡＧ－７２、ＨＰＶ Ｅ６、ＨＰＶ Ｅ７、ＢＩＮＧ－４、カルシウム活性化クロリドチャネル２、サイクリン－Ｂ１、９Ｄ７、ＥｐＣＡＭ、ＥｐｈＡ３、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、テロメラーゼ、メソテリン、ＳＡＰ－１、サバイビン、ＢＡＧＥファミリー抗原、ＣＡＧＥファミリー抗原、ＧＡＧＥファミリー抗原、ＭＡＧＥファミリー抗原、ＳＡＧＥファミリー抗原、ＸＡＧＥファミリー抗原、ＮＹ－ＥＳＯ－１／ＬＡＧＥ－１、ＰＲＡＭＥ、ＳＳＸ－２、Ｍｅｌａｎ－Ａ、ＭＡＲＴ－１、Ｇｐ１００、ｐｍｅｌ１７、チロシナーゼ、ＴＲＰ－１、ＴＲＰ－２、Ｐ．ポリペプチド、ＭＣ１Ｒ、前立腺特異的抗原、β－カテニン、ＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２、ＣＤＫ４、ＣＭＬ６６、フィブロネクチン、ＭＡＲＴ－２、ｐ５３、Ｒａｓ、ＴＧＦ－βＲＩＩ、又はＭＵＣ１である。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＣＥＡである。いくつかの実施形態では、癌抗原は、未成熟ラミニン受容体である。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＴＡＧ－７２である。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＨＰＶ Ｅ６である。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＨＰＶ Ｅ７である。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＢＩＮＧ－４である。いくつかの実施形態では、癌抗原は、カルシウム活性化クロリドチャネル２である。いくつかの実施形態では、癌抗原は、サイクリン－Ｂ１である。いくつかの実施形態では、癌抗原は、９Ｄ７である。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＥｐＣＡＭである。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＥｐｈＡ３である。いくつかの実施形態では、癌抗原は、Ｈｅｒ２／ｎｅｕである。いくつかの実施形態では、癌抗原は、テロメラーゼである。いくつかの実施形態では、癌抗原は、メソテリンである。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＳＡＰ－１である。いくつかの実施形態では、癌抗原は、サバイビンである。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＢＡＧＥファミリー抗原である。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＣＡＧＥファミリー抗原である。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＧＡＧＥファミリー抗原である。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＭＡＧＥファミリー抗原である。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＳＡＧＥファミリー抗原である。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＸＡＧＥファミリー抗原である。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＮＹ－ＥＳＯ－１／ＬＡＧＥ－１である。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＰＲＡＭＥである。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＳＳＸ－２である。いくつかの実施形態では、癌抗原は、Ｍｅｌａｎ－Ａである。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＭＡＲＴ－１である。いくつかの実施形態では、癌抗原は、Ｇｐ１００である。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ｐｍｅｌ１７である。いくつかの実施形態では、癌抗原は、チロシナーゼである。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＴＲＰ－１である。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＴＲＰ－２である。いくつかの実施形態では、癌抗原は、Ｐ．ポリペプチドである。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＭＣ１Ｒである。いくつかの実施形態では、癌抗原は、前立腺特異的抗原である。いくつかの実施形態では、癌抗原は、β－カテニンである。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＢＲＣＡ１である。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＢＲＣＡ２である。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＣＤＫ４である。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＣＭＬ６６である。いくつかの実施形態では、癌抗原は、フィブロネクチンである。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＭＡＲＴ－２である。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ｐ５３である。いくつかの実施形態では、癌抗原は、Ｒａｓである。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＴＧＦ－βＲＩＩである。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ＭＵＣ１である。
いくつかの実施形態では、本結合分子は、Ｂ細胞抗原に結合する。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ１ａ、ＣＤ１ｂ、ＣＤ１ｃ、ＣＤ１ｄ、ＣＤ２、ＣＤ５、ＣＤ６、ＣＤ９、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１７、ＣＤ１８、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ２５、ＣＤ２６、ＣＤ２７、ＣＤ２９、ＣＤ３０、ＣＤ３１、ＣＤ３２ａ、ＣＤ３２ｂ、ＣＤ３５、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ３９、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＤ４５ＲＢ、ＣＤ４５ＲＣ、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ４６、ＣＤ４７、ＣＤ４８、ＣＤ４９ｂ、ＣＤ４９ｃ、ＣＤ４９ｄ、ＣＤ５０、ＣＤ５２、ＣＤ５３、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５８、ＣＤ６０ａ、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ６３、ＣＤ６８、ＣＤ６９、ＣＤ７０、ＣＤ７２、ＣＤ７３、ＣＤ７４、ＣＤ７５、ＣＤ７５Ｓ、ＣＤ７７、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ８０、ＣＤ８１、ＣＤ８２、ＣＤ８３、ＣＤ８４、ＣＤ８５Ｅ、ＣＤ８５Ｉ、ＣＤ８５Ｊ、ＣＤ８６、ＣＤ９２、ＣＤ９５、ＣＤ９７、ＣＤ９８、ＣＤ９９、ＣＤ１００、ＣＤ１０２、ＣＤ１０８、ＣＤ１１９、ＣＤ１２０ａ、ＣＤ１２０ｂ、ＣＤ１２１ｂ、ＣＤ１２２、ＣＤ１２４、ＣＤ１２５、ＣＤ１２６、ＣＤ１３０、ＣＤ１３２、ＣＤ１３７、ＣＤ１３８、ＣＤ１３９、ＣＤ１４７、ＣＤ１４８、ＣＤ１５０、ＣＤ１５２、ＣＤ１６２、ＣＤ１６４、ＣＤ１６６、ＣＤ１６７ａ、ＣＤ１７０、ＣＤ１７１、ＣＤ１７５、ＣＤ１７５ｓ、ＣＤ１８０、ＣＤ１８４、ＣＤ１８５、ＣＤ１９２、ＣＤ１９６、ＣＤ１９７、ＣＤ２００、ＣＤ２０５、ＣＤ２０１ａ、ＣＤｗ２１０ｂ、ＣＤ２１２、ＣＤ２１３ａ１、ＣＤ２１３ａ２、ＣＤ２１５、ＣＤ２１７、ＣＤ２１８ａ、ＣＤ２１８ｂ、ＣＤ２２０、ＣＤ２２１、ＣＤ２２２、ＣＤ２２４、ＣＤ２２５、ＣＤ２２６、ＣＤ２２７、ＣＤ２２９、ＣＤ２３０、ＣＤ２３２、ＣＤ２５２、ＣＤ２５２、ＣＤ２５４、ＣＤ２５５、ＣＤ２５６、ＣＤ２５７ ＣＤ２５８、ＣＤ２５９、ＣＤ２６０、ＣＤ２６１、ＣＤ２６２、ＣＤ２６３、ＣＤ２６４、ＣＤ２６７、ＣＤ２６８、ＣＤ２６９、ＣＤ２７０、ＣＤ２７２、ＣＤ２７４、ＣＤ２７５、ＣＤ２７７、ＣＤ２７９、ＣＤ２８３、ＣＤ２８９、ＣＤ２９０、ＣＤ２９５、ＣＤ２９８、ＣＤ３００、ＣＤ３００ｃ、ＣＤ３０５、ＣＤ３０６、ＣＤ３０７ａ、ＣＤ３０７ｂ、ＣＤ３０７ｃ、ＣＤ３０７ｄ、ＣＤ３０７ｅ、ＣＤ３１４、ＣＤ２１５、ＣＤ３１６、ＣＤ３１７、ＣＤ３１９、ＣＤ３２１、ＣＤ３２７、ＣＤ３２８、ＣＤ３２９、ＣＤ３３８、ＣＤ３５１、ＣＤ３５２、ＣＤ３５３、ＣＤ３５４、ＣＤ３５５、ＣＤ３５６、ＣＤ３５７、ＣＤ３５８、ＣＤ３６０、ＣＤ３６１、ＣＤ３６２、又はＣＤ３６３抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ１ａ抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ１ｂ抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ１ｃ抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ１ｄ抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ５抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ６抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ９抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ１１ａ抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ１１ｂ抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ１１ｃ抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ１７抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ１８抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ１９抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２０抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２１抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２２抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２３抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２４抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２５抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２６抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２７抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２９抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ３０抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ３１抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ３２ａ抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ３２ｂ抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ３５抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ３７抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ３８抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ３９抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ４０抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ４５抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ４５ＲＡ抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ４５ＲＢ抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ４５ＲＣ抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ４５ＲＯ抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ４６抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ４７抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ４８抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ４９ｂ抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ４９ｃ抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ４９ｄ抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ５０抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ５２抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ５３抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ５４抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ５５抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ５８抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ６０ａ抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ６２Ｌ抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ６３抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ６８抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ６９抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ７０抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ７２抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ７３抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ７４抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ７５抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ７５Ｓ抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ７７抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ７９ａ抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ７９ｂ抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ８０抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ８１抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ８２抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ８３抗原である。
いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ８４抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ８５Ｅ抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ８５Ｉ抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ８５Ｊ抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ８６抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ９２抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ９５抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ９７抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ９８抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ９９抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ１００抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ１０２抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ１０８抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ１１９抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ１２０ａ抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ１２０ｂ抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ１２１ｂ抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ１２２抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ１２４抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ１２５抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ１２６抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ１３０抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ１３２抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ１３７抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ１３８抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ１３９抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ１４７抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ１４８抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ１５０抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ１５２抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ１６２抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ１６４抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ１６６抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ１６７ａ抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ１７０抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ１７１抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ１７５抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ１７５ｓ抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ１８０抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ１８４抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ１８５抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ１９２抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ１９６抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ１９７抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２００抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２０５抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２０１ａ抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤｗ２１０ｂ抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２１２抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２１３ａ１抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２１３ａ２抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２１５抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２１７抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２１８ａ抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２１８ｂ抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２２０抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２２１抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２２２抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２２４抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２２５抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２２６抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２２７抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２２９抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２３０抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２３２抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２５２抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２５２抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２５４抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２５５抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２５６抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２５７ ＣＤ２５８抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２５９抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２６０抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２６１抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２６２抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２６３抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２６４抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２６７抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２６８抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２６９抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２７０抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２７２抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２７４抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２７５抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２７７抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２７９抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２８３抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２８９抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２９０抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２９５抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２９８抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ３００抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ３００ｃ抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ３０５抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ３０６抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ３０７ａ抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ３０７ｂ抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ３０７ｃ抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ３０７ｄ抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ３０７ｅ抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ３１４抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２１５抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ３１６抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ３１７抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ３１９抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ３２１抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ３２７抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ３２８抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ３２９抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ３３８抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ３５１抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ３５２抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ３５３抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ３５４抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ３５５抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ３５６抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ３５７抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ３５８抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ３６０抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ３６１抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ３６２抗原である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ３６３抗原である。
一実施形態では、本結合分子は病原体に結合する。いくつかの実施形態では、病原体は、急性弛緩性脊髄炎（ＡＦＭ）、アナプラズマ病、炭疽病、バベシア症、ボツリヌス中毒症、ブルセラ症、カンピロバクター症、カルバペネム耐性感染、軟性下疳、チクングニアウイルス感染症、クラミジア、シガテラ中毒、ディフィシル感染症、パーフリンジェンス、コクシジオイデス症真菌感染症、コロナウイルス感染症、Ｃｏｖｉｄ－１９（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）、クロイツフェルト・ヤコブ病／伝達性海綿状脳症、クリプトスポリジウム症（Ｃｒｙｐｔｏ）、シクロスポラ症、デング熱１、２、３、又は４、ジフテリア、大腸菌感染症／志賀毒素生成性（ＳＴＥＣ）、東部馬脳炎、出血熱（エボラ）、エーリキア症、脳炎、アルボウイルス又は傍感染性脳炎、非ポリオエンテロウイルス、Ｄ６８エンテロウイル（ＥＶ－Ｄ６８）、ジアルジア症、鼻疽、淋菌感染症、鼠径部肉芽腫、ヘモフィルスインフルエンザ感染症Ｂ型（Ｈｉｂ又はＨ－ｆｌｕ）、ハンタウイルス肺症候群（ＨＰＳ）、溶血性尿毒症症候群（ＨＵＳ）、Ａ型肝炎（Ｈｅｐ Ａ）、Ｂ型肝炎（Ｈｅｐ Ｂ）、Ｃ型肝炎（Ｈｅｐ Ｃ）、Ｄ型肝炎（Ｈｅｐ Ｄ）、Ｅ型肝炎（Ｈｅｐ Ｅ）、ヘルペス、帯状ヘルペス（帯状疱疹）、ヒストプラスマ症、ヒト免疫不全ウイルス／ＡＩＤＳ（ＨＩＶ／ＡＩＤＳ）、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、インフルエンザ（Ｆｌｕ）、レジオネラ症（レジオネラ病）、癩（ハンセン病）、レプトスピラ症、リステリア症（リステリア）、ライム病、鼠径リンパ肉芽腫感染症（ＬＧＶ）、マラリア、麻疹、メリオイドーシス、髄膜炎（ウイルス性）、髄膜炎菌性疾患（髄膜炎（細菌性））、中東呼吸器症候群コロナウイルス（ＭＥＲＳ－ＣｏＶ）、ムンプス、ノロウイルス、シラミ寄生症（Ｐｅｄｉｃｕｌｏｓｉｓ）、骨盤内感染症（ＰＩＤ）、パーツシス（百日咳）、ペスト（腺、敗血性、肺炎性）、肺炎球菌疾患（肺炎）、ポリオウイルス感染症（ポリオ）、ポワッサン、オウム病、シラミ寄生症（ケジラミ症）、膿疱疹疾患（天然痘、サル痘、牛痘）、Ｑ熱、狂犬病、リケッチア症（ロッキー山紅斑熱）、風疹（ドイツ麻疹）、サルモネラ症胃腸炎（サルモネラ）、疥癬、スコンブロイド、敗血症、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）、赤痢菌感染症胃腸炎（シゲラ）、天然痘、メチシリン耐性スタフィロカル感染症（ＭＲＳＡ）、ブドウ球菌食中毒エンテロトキシンＢ中毒（ブドウ球菌食中毒）、バンコマイシン中間体サフィロコカル感染症（ＶＩＳＡ）、バンコマイシン耐性ブドウ球菌感染症（ＶＲＳＡ）、Ａ群連鎖球菌感染症（侵襲性）（Ｓｔｒｅｐ Ａ（侵襲性）、Ｂ群連鎖球菌感染症（Ｓｔｒｅｐ－Ｂ）、連鎖球菌毒素性ショック症候群ＳＴＳＳ毒素ショック、梅毒（第１期、第２期、早期潜伏、晩期潜伏、先天性）、破傷風感染、トリコモナス症、トリコノシス感染症、結核（ＴＢ）、潜伏性結核（ＬＴＢＩ）、ツラレミア、腸チフスＤ群、膣症、水痘（水疱瘡）、コレラ菌（コレラ）、ビブリオ症（ビブリオ）、エボラウイルス出血熱、ラサウイルス出血熱、マールブルグウイルス出血熱、ウエストナイルウイルス、黄熱、エルセニア、及びジカウイルス感染症からなる群から選択される感染症を引き起こす。いくつかの実施形態では、感染症は、急性弛緩性脊髄炎（ＡＦＭ）である。いくつかの実施形態では、感染症は、アナプラズマ病である。いくつかの実施形態では、感染症は、炭疽病である。いくつかの実施形態では、感染症は、バベシア症である。いくつかの実施形態では、感染症は、ボツリヌス中毒症である。いくつかの実施形態では、感染症は、ブルセラ症である。いくつかの実施形態では、感染症は、カンピロバクター症である。いくつかの実施形態では、感染症は、カルバペネム耐性感染である。いくつかの実施形態では、感染症は、軟性下疳である。いくつかの実施形態では、感染症は、チクングニアウイルス感染症である。いくつかの実施形態では、感染症は、クラミジアである。いくつかの実施形態では、感染症は、シガテラ中毒である。いくつかの実施形態では、感染症は、ディフィシル感染症である。いくつかの実施形態では、感染症は、パーフリンジェンスである。いくつかの実施形態では、感染症は、コクシジオイデス症真菌感染症である。いくつかの実施形態では、感染症は、コロナウイルスである。いくつかの実施形態では、感染症は、Ｃｏｖｉｄ－１９（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）である。いくつかの実施形態では、感染症は、クロイツフェルト・ヤコブ病／伝達性海綿状脳症である。いくつかの実施形態では、感染症は、クリプトスポリジウム症（Ｃｒｙｐｔｏ）である。いくつかの実施形態では、感染症は、シクロスポラ症である。いくつかの実施形態では、感染症は、デング熱１、２、３、又は４である。いくつかの実施形態では、感染症は、ジフテリアである。いくつかの実施形態では、感染症は、大腸菌感染症／志賀毒素生成性（ＳＴＥＣ）である。いくつかの実施形態では、感染症は、東部馬脳炎である。いくつかの実施形態では、感染症は、出血熱（エボラ）である。いくつかの実施形態では、感染症は、エーリキア症である。いくつかの実施形態では、感染症は、脳炎である。いくつかの実施形態では、感染症は、アルボウイルス又は傍感染性である。いくつかの実施形態では、感染症は、非ポリオエンテロウイルスである。いくつかの実施形態では、感染症は、Ｄ６８エンテロウイル（ＥＶ－Ｄ６８）である。いくつかの実施形態では、感染症は、ジアルジア症である。いくつかの実施形態では、感染症は、鼻疽である。いくつかの実施形態では、感染症は、淋菌感染症である。いくつかの実施形態では、感染症は、鼠径部肉芽腫である。いくつかの実施形態では、感染症は、ヘモフィルスインフルエンザ感染症Ｂ型（Ｈｉｂ又はＨ－ｆｌｕ）である。いくつかの実施形態では、感染症は、ハンタウイルス肺症候群（ＨＰＳ）である。いくつかの実施形態では、感染症は、溶血性尿毒症症候群（ＨＵＳ）である。いくつかの実施形態では、感染症は、Ａ型肝炎（Ｈｅｐ Ａ）である。いくつかの実施形態では、感染症は、Ｂ型肝炎（Ｈｅｐ Ｂ）である。いくつかの実施形態では、感染症は、Ｃ型肝炎（Ｈｅｐ Ｃ）である。いくつかの実施形態では、感染症は、Ｄ型肝炎（Ｈｅｐ Ｄ）である。いくつかの実施形態では、感染症は、Ｅ型肝炎（Ｈｅｐ Ｅ）である。いくつかの実施形態では、感染症は、ヘルペスである。いくつかの実施形態では、感染症は、帯状ヘルペス（帯状疱疹）である。いくつかの実施形態では、感染症は、ヒストプラスマ症である。いくつかの実施形態では、感染症は、ヒト免疫不全ウイルス／ＡＩＤＳ（ＨＩＶ／ＡＩＤＳ）である。いくつかの実施形態では、感染症は、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）である。いくつかの実施形態では、感染症は、インフルエンザ（Ｆｌｕ）である。いくつかの実施形態では、感染症は、レジオネラ症（レジオネラ病）である。いくつかの実施形態では、感染症は、癩（ハンセン病）である。いくつかの実施形態では、感染症は、レプトスピラ症である。いくつかの実施形態では、感染症は、リステリア症（リステリア）である。いくつかの実施形態では、感染症は、ライム病である。いくつかの実施形態では、感染症は、鼠径リンパ肉芽腫感染症（ＬＧＶ）である。いくつかの実施形態では、感染症は、マラリアである。いくつかの実施形態では、感染症は、麻疹である。いくつかの実施形態では、感染症は、メリオイドーシスである。いくつかの実施形態では、感染症は、髄膜炎（ウイルス性）である。いくつかの実施形態では、感染症は、髄膜炎菌性疾患（髄膜炎（細菌性））である。いくつかの実施形態では、感染症は、中東呼吸器症候群コロナウイルス（ＭＥＲＳ－ＣｏＶ）である。いくつかの実施形態では、感染症は、ムンプスである。いくつかの実施形態では、感染症は、ノロウイルスである。いくつかの実施形態では、感染症は、シラミ寄生症（Ｐｅｄｉｃｕｌｏｓｉｓ）である。いくつかの実施形態では、感染症は、骨盤内感染症（ＰＩＤ）である。いくつかの実施形態では、感染症は、パーツシス（百日咳）である。いくつかの実施形態では、感染症は、ペスト（腺である。いくつかの実施形態では、感染症は、敗血性である。いくつかの実施形態では、感染症は、肺炎性）である。いくつかの実施形態では、感染症は、肺炎球菌疾患（肺炎）である。いくつかの実施形態では、感染症は、ポリオウイルス感染症（ポリオ）である。いくつかの実施形態では、感染症は、ポワッサンである。いくつかの実施形態では、感染症は、オウム病である。いくつかの実施形態では、感染症は、シラミ寄生症（ケジラミ症）である。いくつかの実施形態では、感染症は、膿疱疹疾患（天然痘である。いくつかの実施形態では、感染症は、サル痘である。いくつかの実施形態では、感染症は、牛痘）である。いくつかの実施形態では、感染症は、Ｑ熱である。いくつかの実施形態では、感染症は、狂犬病である。いくつかの実施形態では、感染症は、リケッチア症（ロッキー山紅斑熱）である。いくつかの実施形態では、感染症は、風疹（ドイツ麻疹）である。いくつかの実施形態では、感染症は、サルモネラ症胃腸炎（サルモネラ）である。いくつかの実施形態では、感染症は、疥癬である。いくつかの実施形態では、感染症は、スコンブロイドである。いくつかの実施形態では、感染症は、敗血症である。いくつかの実施形態では、感染症は、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）である。いくつかの実施形態では、感染症は、赤痢菌感染症胃腸炎（シゲラ）である。いくつかの実施形態では、感染症は、天然痘である。いくつかの実施形態では、感染症は、メチシリン耐性スタフィロカル感染症（ＭＲＳＡ）である。いくつかの実施形態では、感染症は、ブドウ球菌食中毒エンテロトキシンＢ中毒（ブドウ球菌食中毒）である。いくつかの実施形態では、感染症は、バンコマイシン中間体サフィロコカル感染症（ＶＩＳＡ）である。いくつかの実施形態では、感染症は、バンコマイシン耐性ブドウ球菌感染症（ＶＲＳＡ）である。いくつかの実施形態では、感染症は、Ａ群連鎖球菌感染症（侵襲性）（Ｓｔｒｅｐ Ａ（侵襲性）である。いくつかの実施形態では、感染症は、連鎖球菌感染症である。いくつかの実施形態では、感染症は、Ｂ群（Ｓｔｒｅｐ－Ｂ）である。いくつかの実施形態では、感染症は、連鎖球菌毒素性ショック症候群ＳＴＳＳ毒素ショックである。いくつかの実施形態では、感染症は、梅毒（第１期である。いくつかの実施形態では、感染症は、第２期である。いくつかの実施形態では、感染症は、早期潜伏である。いくつかの実施形態では、感染症は、晩期潜伏である。いくつかの実施形態では、感染症は、先天性）である。いくつかの実施形態では、感染症は、破傷風感染である。いくつかの実施形態では、感染症は、トリコモナス症である。いくつかの実施形態では、感染症は、トリコノシス感染症である。いくつかの実施形態では、感染症は、結核（ＴＢ）である。いくつかの実施形態では、感染症は、潜伏性結核（ＬＴＢＩ）である。いくつかの実施形態では、感染症は、ツラレミアである。いくつかの実施形態では、感染症は、腸チフスＤ群である。いくつかの実施形態では、感染症は、水痘（水疱瘡）、コレラ菌（コレラ）である。いくつかの実施形態では、感染症は、ビブリオ症（ビブリオ）である。いくつかの実施形態では、感染症は、エボラウイルス出血熱である。いくつかの実施形態では、感染症は、ラサウイルス出血熱である。いくつかの実施形態では、感染症は、マールブルグウイルス出血熱である。いくつかの実施形態では、感染症は、ウエストナイルウイルスである。いくつかの実施形態では、感染症は、黄熱である。いくつかの実施形態では、感染症は、エルセニアである。いくつかの実施形態では、感染症は、及びジカウイルス感染症である。
いくつかの実施形態では、病原体は、ウイルスである。いくつかの実施形態では、ウイルスは、アデノウイルス科、アレナウイルス科、アストロウイルス科、ブニヤウイルス科、カリシウイルス科、コロナウイルス科、フィロウイルス科、フラビウイルス科、ヘパドナウイルス科、ヘペウイルス科、オルトミクソウイルス科、パピローマウイルス科、パラミクソウイルス科、パルボウイルス科、ピコルナウイルス科、ポリオーマウイルス科、ポックスウイルス科、レオウイルス科、レトロウイルス科、ラブドウイルス科、又はトガウイルス科のウイルスである。いくつかの実施形態では、ウイルスは、アデノウイルス科のウイルスである。いくつかの実施形態では、ウイルスは、アレナウイルス科のウイルスである。いくつかの実施形態では、ウイルスは、アストロウイルス科のウイルスである。いくつかの実施形態では、ウイルスは、ブニヤウイルス科のウイルスである。いくつかの実施形態では、ウイルスは、カリシウイルス科のウイルスである。いくつかの実施形態では、ウイルスは、コロナウイルス科のウイルスである。いくつかの実施形態では、ウイルスは、フィロウイルス科のウイルスである。いくつかの実施形態では、ウイルスは、フラビウイルス科のウイルスである。いくつかの実施形態では、ウイルスは、ヘパドナウイルス科のウイルスである。いくつかの実施形態では、ウイルスは、ヘペウイルス科のウイルスである。いくつかの実施形態では、ウイルスは、オルトミクソウイルス科のウイルスである。いくつかの実施形態では、ウイルスは、パピローマウイルス科のウイルスである。いくつかの実施形態では、ウイルスは、パラミクソウイルス科のウイルスである。いくつかの実施形態では、ウイルスは、パルボウイルス科のウイルスである。いくつかの実施形態では、ウイルスは、ピコルナウイルス科のウイルスである。いくつかの実施形態では、ウイルスは、ポリオーマウイルス科のウイルスである。いくつかの実施形態では、ウイルスは、ポックスウイルス科のウイルスである。いくつかの実施形態では、ウイルスは、レオウイルス科のウイルスである。いくつかの実施形態では、ウイルスは、レトロウイルス科のウイルスである。いくつかの実施形態では、ウイルスは、ラブドウイルス科のウイルスである。いくつかの実施形態では、ウイルスは、トガウイルス科のウイルスである。
いくつかの実施形態では、ウイルスは、アデノウイルス、コロナウイルス、コクサッキーウイルス、エプスタインバーウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、単純ヘルペスウイルス２型、サイトメガロウイルス、ヒトヘルペスウイルス８型、ヒト免疫不全ウイルス、インフルエンザウイルス、麻疹ウイルス、ムンプスウイルス、ヒトパピローマウイルス、パラインフルエンザウイルス、ポリオウイルス、狂犬病ウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、風疹ウイルス、又は水痘帯状疱疹ウイルスである。いくつかの実施形態では、ウイルスは、アデノウイルスである。いくつかの実施形態では、ウイルスは、コロナウイルスである。いくつかの実施形態では、コロナウイルスウイルスは、Ｃｏｖｉｄ－１９（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）である。いくつかの実施形態では、ウイルスは、コクサッキーウイルスである。いくつかの実施形態では、ウイルスは、エプスタインバーウイルスである。いくつかの実施形態では、ウイルスは、Ａ型肝炎ウイルスである。いくつかの実施形態では、ウイルスは、Ｂ型肝炎ウイルスである。いくつかの実施形態では、ウイルスは、Ｃ型肝炎ウイルスである。いくつかの実施形態では、ウイルスは、単純ヘルペスウイルス２型である。いくつかの実施形態では、ウイルスは、サイトメガロウイルスである。いくつかの実施形態では、ウイルスは、ヒトヘルペスウイルス８型である。いくつかの実施形態では、ウイルスは、ヒト免疫不全ウイルスである。いくつかの実施形態では、ウイルスは、インフルエンザウイルスである。いくつかの実施形態では、ウイルスは、麻疹ウイルスである。いくつかの実施形態では、ウイルスは、ムンプスウイルスである。いくつかの実施形態では、ウイルスは、ヒトパピローマウイルスである。いくつかの実施形態では、ウイルスは、パラインフルエンザウイルスである。いくつかの実施形態では、ウイルスは、ポリオウイルスである。いくつかの実施形態では、ウイルスは、狂犬病ウイルスである。いくつかの実施形態では、ウイルスは、呼吸器合胞体ウイルスである。いくつかの実施形態では、ウイルスは、風疹ウイルスである。いくつかの実施形態では、ウイルスは、水痘帯状疱疹ウイルスである。
いくつかの実施形態では、病原体は、細菌である。いくつかの実施形態では、細菌は、バチルス、バルトネラ、ボルデテラ、ボレリア、ブルセラ、カンピロバクター、クラミジア、クラミドフィラ、クロストリジウム、コリネバクテリウム、エンテロコッカス、エシェリキア、フランシセラ、ヘモフィルス、ヘリコバクター、レジオネラ、レプトスピラ、リステリア、マイコバクテリア、マイコプラズマ、ナイセリア、シュードモナス、リケッチア、サルモネラ、シゲラ、ブドウ球菌、連鎖球菌、トレポネーマ、ウレアプラズマ、ビブリオ、又はエルシニア属の細菌である。いくつかの実施形態では、細菌は、バチルス属の細菌である。いくつかの実施形態では、細菌は、バルトネラ属の細菌である。いくつかの実施形態では、細菌は、ボルデテラ属の細菌である。いくつかの実施形態では、細菌は、ボレリア属の細菌である。いくつかの実施形態では、細菌は、ブルセラ属の細菌である。いくつかの実施形態では、細菌は、カンピロバクター属の細菌である。いくつかの実施形態では、細菌は、クラミジア属の細菌である。いくつかの実施形態では、細菌は、クラミドフィラ属の細菌である。いくつかの実施形態では、細菌は、クロストリジウム属の細菌である。いくつかの実施形態では、細菌は、コリネバクテリウム属の細菌である。いくつかの実施形態では、細菌は、エンテロコッカス属の細菌である。いくつかの実施形態では、細菌は、エシェリキア属の細菌である。いくつかの実施形態では、細菌は、フランシセラ属の細菌である。いくつかの実施形態では、細菌は、ヘモフィルス属の細菌である。いくつかの実施形態では、細菌は、ヘリコバクター属の細菌である。いくつかの実施形態では、細菌は、レジオネラ属の細菌である。いくつかの実施形態では、細菌は、レプトスピラ属の細菌である。いくつかの実施形態では、細菌は、リステリア属の細菌である。いくつかの実施形態では、細菌は、マイコバクテリア属の細菌である。いくつかの実施形態では、細菌は、マイコプラズマ属の細菌である。いくつかの実施形態では、細菌は、ナイセリア属の細菌である。いくつかの実施形態では、細菌は、シュードモナス属の細菌である。いくつかの実施形態では、細菌は、リケッチア属の細菌である。いくつかの実施形態では、細菌は、サルモネラ属の細菌である。いくつかの実施形態では、細菌は、シゲラ属の細菌である。いくつかの実施形態では、細菌は、ブドウ球菌属の細菌である。いくつかの実施形態では、細菌は、連鎖球菌属の細菌である。いくつかの実施形態では、細菌は、トレポネーマ属の細菌である。いくつかの実施形態では、細菌は、ウレアプラズマ属の細菌である。いくつかの実施形態では、細菌は、ビブリオ属の細菌である。いくつかの実施形態では、細菌は、エルシニア属の細菌である。
いくつかの実施形態では、病原体は、寄生虫である。いくつかの実施形態では、寄生虫は、原虫、蠕虫、又は外部寄生虫である。いくつかの実施形態では、原虫は、エントアメーバ属、ジアルジア属、リーシュマニア属、バランチジウム属、プラスモジウム属、又はクリプトスポリジウム属である。いくつかの実施形態では、蠕虫は、吸虫、条虫、鈎頭虫、又は回虫である。いくつかの実施形態では、外部寄生虫は、節足動物である。
本定常領域変異体は、当該技術分野における任意の既知の二重特異性抗体フォーマットを含む当該技術分野において既存の多重特異性抗体プラットフォーム又はフォーマットに導入されて、１つ以上の追加の抗原結合ドメインを提供し得る。
そのような既知の多重特異性抗体フォーマットは、制御されたＦａｂアーム交換を介して得られる多重特異性抗体を含む。多重特異性抗体としては、ヘテロ二量体形成を促進する相補性ＣＨ３ドメインを有するＩｇＧ様分子、組み換えＩｇＧ様二重標的化分子（この分子の２つの側面は各々、少なくとも２つの異なる抗体のＦａｂ断片又はＦａｂ断片の一部を含む）、ＩｇＧ融合分子（完全長ＩｇＧ抗体が、余分のＦａｂ断片又はＦａｂ断片の一部に融合されている）、Ｆｃ融合分子（一本鎖Ｆｖ分子又は安定化されたダイアボディが、重鎖定常ドメイン、Ｆｃ領域、又はその一部に融合されている）、Ｆａｂ融合分子（異なるＦａｂ断片が一緒に融合されている）、ＳｃＦｖ及びダイアボディベース及び重鎖抗体（例えば、ドメイン抗体、ナノボディ）（異なる一本鎖Ｆｖ分子又は異なるダイアボディ又は異なる重鎖抗体（例えば、ドメイン抗体、ナノボディ）が互いに融合されているか、又は別のタンパク質若しくは担体分子に融合されている）が挙げられる。
いくつかの実施形態では、相補性ＣＨ３ドメイン分子を有するＩｇＧ様分子としては、Ｔｒｉｏｍａｂ／Ｑｕａｄｒｏｍａ（Ｔｒｉｏｎ Ｐｈａｒｍａ／Ｆｒｅｓｅｎｉｕｓ Ｂｉｏｔｅｃｈ）、Ｋｎｏｂｓ－ｉｎｔｏ－Ｈｏｌｅｓ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ＣｒｏｓｓＭＡｂｓ（Ｒｏｃｈｅ）及び静電的に調整されたもの（Ａｍｇｅｎ）、ＬＵＺ－Ｙ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ストランドを交換し操作したドメインボディ（Ｓｔｒａｎｄ Ｅｘｃｈａｎｇｅ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ Ｄｏｍａｉｎ ｂｏｄｙ、ＳＥＥＤｂｏｄｙ）（ＥＭＤ Ｓｅｒｏｎｏ）、Ｂｉｃｌｏｎｉｃ（Ｍｅｒｕｓ）、並びにＤｕｏＢｏｄｙ（Ｇｅｎｍａｂ Ａ／Ｓ）が挙げられる。
いくつかの実施形態では、組み換えＩｇＧ様二重標的化分子としては、Ｄｕａｌ Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ（ＤＴ）－Ｉｇ（ＧＳＫ／Ｄｏｍａｎｔｉｓ）、Ｔｗｏ－ｉｎ－ｏｎｅ Ａｎｔｉｂｏｄｙ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、Ｃｒｏｓｓ－ｌｉｎｋｅｄ Ｍａｂｓ（Ｋａｒｍａｎｏｓ Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｎｔｅｒ）、ｍＡｂ２（Ｆ－Ｓｔａｒ）、及びＣｏｖＸ－ｂｏｄｙ（ＣｏｖＸ／Ｐｆｉｚｅｒ）が挙げられる。
いくつかの実施形態では、ＩｇＧ融合分子としては、Ｄｕａｌ Ｖａｒｉａｂｌｅ Ｄｏｍａｉｎ（ＤＶＤ）－Ｉｇ（Ａｂｂｏｔｔ）、ＩｇＧ－ｌｉｋｅ Ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ（ＩｍＣｌｏｎｅ／Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ）、Ｔｓ２Ａｂ（ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ／ＡＺ）、及びＢｓＡｂ（Ｚｙｍｏｇｅｎｅｔｉｃｓ）、ＨＥＲＣＵＬＥＳ（Ｂｉｏｇｅｎ Ｉｄｅｃ）、並びにＴｖＡｂ（Ｒｏｃｈｅ）が挙げられる。
いくつかの実施形態では、Ｆｃ融合分子としては、ＳｃＦｖ／Ｆｃ融合体（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎ）、ＳＣＯＲＰＩＯＮ（Ｅｍｅｒｇｅｎｔ ＢｉｏＳｏｌｕｔｉｏｎｓ／Ｔｒｕｂｉｏｎ，Ｚｙｍｏｇｅｎｅｔｉｃｓ／ＢＭＳ）、二重親和性再標的化技術（Ｆｃ－ＤＡＲＴ）（ＭａｃｒｏＧｅｎｉｃｓ）、及び二重（ＳｃＦｖ）２－Ｆａｂ（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ－－Ｃｈｉｎａ）を挙げることができる。
いくつかの実施形態では、Ｆａｂ融合二重特異性抗体としては、Ｆ（ａｂ）２（Ｍｅｄａｒｅｘ／ＡＭＧＥＮ）、Ｄｕａｌ－Ａｃｔｉｏｎ ｏｒ Ｂｉｓ－Ｆａｂ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、Ｄｏｃｋ－ａｎｄ－Ｌｏｃｋ（ＤＮＬ）（ＩｍｍｕｎｏＭｅｄｉｃｓ）、Ｂｉｖａｌｅｎｔ Ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ（Ｂｉｏｔｅｃｎｏｌ）、及びＦａｂ－Ｆｖ（ＵＣＢ－Ｃｅｌｌｔｅｃｈ）が挙げられる。ＳｃＦｖ抗体、ダイアボディに基づく抗体、及びドメイン抗体は、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャ（Bispecific T Cell Engager、ＢｉＴＥ）（Ｍｉｃｒｏｍｅｔ）、タンデムダイアボディ（Tandem Diabody、Ｔａｎｄａｂ）（Ａｆｆｉｍｅｄ）、二重親和性再標的技術（Dual Affinity Retargeting Technology、ＤＡＲＴ）（ＭａｃｒｏＧｅｎｉｃｓ）、一本鎖ダイアボディ（Ａｃａｄｅｍｉｃ）、ＴＣＲ様抗体（ＡＩＴ、ＲｅｃｅｐｔｏｒＬｏｇｉｃｓ）、ヒト血清アルブミンＳｃＦｖ融合体（Ｍｅｒｒｉｍａｃｋ）、及びＣＯＭＢＯＤＹ（Ｅｐｉｇｅｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ）、二重標的ナノボディ（Ａｂｌｙｎｘ）、二重標的重鎖のみドメイン抗体を含むが、これらに限定されない。
他の例は、例えば、２つの単一特異性二価抗体間でのＦａｂアーム交換（又は半分子交換）を用い、インビトロにおいて、無細胞環境下又は共発現使用下のいずれかで、別個の特異性を有する２つの抗体半分子のヘテロ二量体形成に有利になるように各半分子において重鎖ＣＨ３界面に置換を導入することにより生成することができる。Ｆａｂアーム交換反応は、ジスルフィド結合異性化反応及びＣＨ３ドメインの解離－会合の結果である。単一特異性親抗体のヒンジ領域における重鎖ジスルフィド結合は、低減される。単一特異性親抗体のうちの１つについて生じる遊離システインは、第２の単一特異性親抗体分子のシステイン残基と重鎖内ジスルフィド結合を形成し、同時に、親抗体のＣＨ３ドメインは、解離－会合により開放及び再形成する。ＦａｂアームのＣＨ３ドメインは、ホモ二量体形成よりヘテロ二量体形成を有利にするように操作され得る。得られた生成物は、それぞれ異なるエピトープに結合する、２つのＦａｂアーム又は半分子を有する二重特異性抗体である。多重特異性抗体を作製する他の方法は、既知であり、企図される。
本明細書で使用するとき、「ホモ二量体形成」は、同一のＣＨ３アミノ酸配列を有する２本の重鎖の相互作用を意味する。本明細書で使用するとき、「ホモ二量体」は、同一のＣＨ３アミノ酸配列を有する２本の重鎖を有する抗体を意味する。
本明細書で使用するとき、「ヘテロ二量体形成」は、同一でないＣＨ３アミノ酸配列を有する２本の重鎖の相互作用を意味する。本明細書で使用するとき、「ヘテロ二量体」は、同一でないＣＨ３アミノ酸配列を有する２本の重鎖を有する抗体を意味する。
「ノブインホール（knob-in-hole）」戦略（例えば、国際公開第２００６／０２８９３６号を参照）を使用して、完全長二重特異性抗体を生成することができる。簡潔に述べると、ヒトＩｇＧにおけるＣＨ３ドメインの界面を形成する選択されたアミノ酸は、ヘテロ二量体形成を促進するように、ＣＨ３ドメイン相互作用に影響を及ぼす位置において変異され得る。小さな側鎖を有するアミノ酸（ホール）が、第１の抗原に特異的に結合する抗体の重鎖内に導入され、大きな側鎖を有するアミノ酸（ノブ）が、第２の抗原に特異的に結合する抗体の重鎖内に導入される。２つの抗体の共発現後に、ヘテロ二量体が、「ホール」を有する重鎖と「ノブ」を有する重鎖との優先的な相互作用の結果として形成される。ノブ及びホールを形成する例示的なＣＨ３置換の対は、Ｔ３６６Ｙ／Ｆ４０５Ａ、Ｔ３６６Ｗ／Ｆ４０５Ｗ、Ｆ４０５Ｗ／Ｙ４０７Ａ、Ｔ３９４Ｗ／Ｙ４０７Ｔ、Ｔ３９４Ｓ／Ｙ４０７Ａ、Ｔ３６６Ｗ／Ｔ３９４Ｓ、Ｆ４０５Ｗ／Ｔ３９４Ｓ、及びＴ３６６Ｗ／Ｔ３６６Ｓ＿Ｌ３６８Ａ＿Ｙ４０７Ｖである（第１の重鎖の第１のＣＨ３ドメインにおける改変された位置／第２の重鎖の第２のＣＨ３ドメインにおける改変された位置として表現）。
他のストラテジ、例えば、１つのＣＨ３表面における正に荷電した残基及び第２のＣＨ３表面における負に荷電した残基を置換することによる静電的相互作用を使用する重鎖ヘテロ二量体形成の促進が、米国特許出願公開第２０１０／００１５１３３号、米国特許出願公開第２００９／０１８２１２７号、米国特許出願公開第２０１０／０２８６３７号、又は米国特許出願公開第２０１１／０１２３５３２号に記載されるように使用され得る。他のストラテジでは、ヘテロ二量体形成は、米国特許出願公開第２０１２／０１４９８７６号又は米国特許出願公開第２０１３／０１９５８４９号に記載されるように、下記置換：Ｌ３５１Ｙ＿Ｆ４０５ＡＹ４０７Ｖ／Ｔ３９４Ｗ、Ｔ３６６Ｉ＿Ｋ３９２Ｍ＿Ｔ３９４Ｗ／Ｆ４０５Ａ＿Ｙ４０７Ｖ、Ｔ３６６Ｌ＿Ｋ３９２Ｍ＿Ｔ３９４Ｗ／Ｆ４０５Ａ＿Ｙ４０７Ｖ、Ｌ３５１Ｙ＿Ｙ４０７Ａ／Ｔ３６６Ａ＿Ｋ４０９Ｆ、Ｌ３５１Ｙ＿Ｙ４０７Ａ／Ｔ３６６Ｖ Ｋ４０９Ｆ Ｙ４０７Ａ／Ｔ３６６Ａ＿Ｋ４０９Ｆ、又はＴ３５０Ｖ＿Ｌ３５１Ｙ＿Ｆ４０５Ａ Ｙ４０７Ｖ／Ｔ３５０Ｖ＿Ｔ３６６Ｌ＿Ｋ３９２Ｌ＿Ｔ３９４Ｗ（第１の重鎖の第１のＣＨ３ドメインにおける改変位置／第２の重鎖の第２のＣＨ３ドメインにおける改変位置として表現）により促進され得る。
上記の方法に加えて、別の既知の二重特異性抗体フォーマットは、国際公開第２０１１／１３１７４６号に記載の方法に従って、２つの単一特異性ホモ二量体抗体のＣＨ３領域に非対称な変異を導入し、ジスルフィド結合の異性化を可能にするための還元条件下において２つの親単一特異性ホモ二量体抗体から二重特異性ヘテロ二量体抗体を形成することによって、無細胞環境でインビトロにおいて生成され得る。この方法において、第１の単一特異性二価抗体及び第２の単一特異性二価抗体は、ヘテロ二量体の安定性を促進するＣＨ３ドメインにおいてある特定の置換を有するように操作され、これらの抗体は、ヒンジ領域におけるシステインがジスルフィド結合を異性化させるために十分な還元条件下において一緒にインキュベートされ、それにより、Ｆａｂアーム交換により二重特異性抗体が生成される。インキュベート条件は、任意には、非還元条件に戻され得る。使用され得る例示的な還元剤は、２－メルカプトエチルアミン（2-mercaptoethylamine、２－ＭＥＡ）、ジチオスレイトール（dithiothreitol、ＤＴＴ）、ジチオエリスリトール（dithioerythritol、ＤＴＥ）、グルタチオン、トリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン（tris（2-carboxyethyl）phosphine、ＴＣＥＰ）、Ｌ－システイン、及びベータ－メルカプトエタノールであり、好ましくは、２－メルカプトエチルアミン、ジチオスレイトール、及びトリス（２－カルボキシエチル）ホスフィンからなる群から選択される還元剤である。例えば、少なくとも２０℃の温度で、少なくとも２５ｍＭの２－ＭＥＡの存在下又は少なくとも０．５ｍＭのジチオスレイトールの存在下で、ｐＨ５～８、例えばｐＨ７．０又はｐＨ７．４で、少なくとも９０分間のインキュベートが使用され得る。
５．２．１ モノクローナル抗体
本開示の抗体（多重特異性又は多価抗体を含む）は、モノクローナル抗体であり得るか、又はモノクローナル抗体に由来し得る。モノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒ，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，１９７５，２５６：４９５－９７により最初に記載されたハイブリドーマ法を使用して作製され得るか、又は組み換えＤＮＡ方法（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号を参照）によって作製され得る。
ハイブリドーマ方法では、マウス、又はハムスターなどの他の適切な宿主動物を、上記で記載した通りに免疫化して、免疫化のために使用されるタンパク質に特異的に結合する抗体を生成するか、又はこれらを生成することが可能なリンパ球を誘発する。代替的に、リンパ球は、インビトロで免疫化され得る。免疫化の後、リンパ球を単離し、次いで、ポリエチレングリコールなどの好適な融合剤を使用して骨髄腫細胞系と融合させて、ハイブリドーマ細胞を形成する（Ｇｏｄｉｎｇ，モノクローナル抗体：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ５９－１０３（１９８６））。
このようにして調製されたハイブリドーマ細胞を、特定の実施形態では、融合されていない親骨髄腫細胞（融合パートナーとも称される）の増殖又は生存を阻害する１つ以上の物質を含有する、好適な培養培地中に播種し、増殖させる。例えば、親骨髄腫細胞が、酵素であるヒポキサンチン－グアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＧＰＲＴ又はＨＰＲＴ）を欠く場合、ハイブリドーマのための選択的培養培地は、典型的に、ヒポキサンチン、アミノプテリン、及びチミジンを含み（ＨＡＴ培地）、これらは、ＨＧＰＲＴ欠損細胞の増殖を防止する。
例示的な融合パートナーである骨髄腫細胞は、効率的に融合し、選択された抗体生成細胞による安定的な高レベルの抗体の生成を支援し、融合させていない親細胞に対して選択する選択的培地に感受性である骨髄腫細胞である。例示的な骨髄腫細胞系は、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）から入手可能な、ＳＰ－２細胞及び派生細胞、例えば、Ｘ６３－Ａｇ８－６５３細胞などのマウス骨髄腫系、並びにＳａｌｋ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ Ｃｅｌｌ Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ Ｃｅｎｔｅｒ（Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）から入手可能な、ＭＯＰＣ－２１マウス腫瘍及びＭＰＣ－１１マウス腫瘍に由来する、マウス骨髄腫系である。ヒト骨髄腫及びマウス－ヒトヘテロ骨髄腫細胞株もまた、ヒトモノクローナル抗体の生成のために記載されている（Ｋｏｚｂｏｒ，１９８４，Ｉｍｍｕｎｏｌ．．１３３：３００１－０５、及びＢｒｏｄｅｕｒ ｅｔ ａｌ．，１９８７，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ５１－６３）。
ハイブリドーマ細胞が増殖する培養培地を、抗原に対するモノクローナル抗体の生成についてアッセイする。ハイブリドーマ細胞により生成されるモノクローナル抗体の結合特異性を、免疫沈降、又はＲＩＡ若しくはＥＬＩＳＡなどのインビトロにおけるにおける結合アッセイにより決定する。モノクローナル抗体の結合親和性は、例えば、Ｍｕｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１９８０，１０７：２２０－３９において記載されている、スカッチャード分析により決定することができる。
所望の特異性、親和性、及び／又は活性を有する抗体を生成するハイブリドーマ細胞を同定したら、クローンを、限界希釈手順によりサブクローニングし、標準的な方法により増殖させることができる（Ｇｏｄｉｎｇ（上記））。この目的に好適な培養培地は、例えば、ＤＭＥＭ培地又はＲＰＭＩ－１６４０培地を含む。加えて、例えば、細胞のマウスへのｉ．ｐ．注射により、ハイブリドーマ細胞を、インビボにおいて、動物における腹水腫瘍として増殖させ得る。
サブクローンにより分泌されたモノクローナル抗体を、例えば、親和性クロマトグラフィ（例えば、プロテインＡ－セファロース又はプロテインＧ－セファロースを使用して）又はイオン交換クロマトグラフィ、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィ、ゲル電気泳動、透析などの従来の抗体精製手順により、培養培地、腹水、又は血清から、好適に分離する。
モノクローナル抗体をコードするＤＮＡは、従来の手順を使用して（例えば、マウス抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することが可能なオリゴヌクレオチドプローブを使用することにより）、容易に単離され、配列決定される。ハイブリドーマ細胞を、そのようなＤＮＡの供給源として用いることができる。単離したら、ＤＮＡを発現ベクターに入れることができ、次いで、普通であれば抗体タンパク質を生成しない大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）細胞、サルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、又は骨髄腫細胞などの宿主細胞にこれらを遺伝子導入して、組み換え宿主細胞内のモノクローナル抗体の合成を得ることができる。抗体をコードするＤＮＡの、細菌内の組み換え発現についての総説論文は、Ｓｋｅｒｒａ，ｅｔ ａｌ．，１９９３，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ．５：２５６－６２及びＰｌｕｃｋｔｈｕｎ，１９９２，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖｓ．１３０：１５１－８８を含む。
更なる実施形態では、モノクローナル抗体は、例えば、Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｈａｇｅ Ｄｉｓｐｌａｙ：Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ（Ｏ’Ｂｒｉｅｎ ａｎｄ Ａｉｔｋｅｎ，ｅｄｓ．，２００２）において記載されている技法を使用して作出された抗体ファージライブラリーから単離することができる。ファージ表示方法では、機能的な抗体ドメインを、それらをコードするポリヌクレオチド配列を保有するファージ粒子の表面上に提示する。本明細書で記載される抗体を作製するのに使用され得るファージ表示方法の例は、Ｂｒｉｎｋｍａｎ，ｅｔ ａｌ．１９９５，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ １８２：４１－５０．Ｚｈｅｎｇ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ １８４：１７７－１８６．Ｇｉｌｌｉｅｓ ｅｔ ａｌ．，１９９４，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：９５２－９５８、Ｐｅｒｓｉｃ，ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ，１９９７，１８７：９－１８、Ｂｕｒｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１９９４，５７：１９１－２８０、ＰＣＴ出願第ＧＢ９１／０１１３４号、国際公開第９０／０２８０９号、同第９１／１０７３７号、同第９２／０１０４７号、同第９２／１８６１９号、同第９３／１１２３６号、同第９５／１５９８２号、同第９５／２０４０１号、及び同第９７／１３８４４号、並びに米国特許第５，６９８，４２６号、同第５，２２３，４０９号、同第５，４０３，４８４号、同第５，５８０，７１７号、同第５，４２７，９０８号、同第５，７５０，７５３号、同第５，８２１，０４７号、同第５，５７１，６９８号、同第５，４２７，９０８号、同第５，５１６，６３７号、同第５，７８０，２２５号、同第５，６５８，７２７号、同第５，７３３，７４３号及び同第５，９６９，１０８号において開示されているファージ表示方法を含む。
原則として、合成抗体クローンは、ファージコートタンパク質に融合した抗体の抗原結合部位を表示するファージを含むファージライブラリーをスクリーニングすることによって選択される。そのようなファージライブラリーを、所望の抗原に対してスクリーニングする。所望の抗原への結合が可能な抗原結合部位を発現するクローンは、抗原へと吸着されるので、ライブラリー内の非結合クローンから分離される。次いで、結合クローンを、抗原から溶離させ、抗原への吸着／溶離の更なるサイクルにより、更に濃縮され得る。
抗原結合部位は、抗体の可変ドメイン内にあり得る。可変ドメインは、Ｆａｂ断片としてファージ上に機能的に提示され得、ここで、可変ドメインは、例えば、Ｗｉｎｔｅｒｅｔ ａｌ．，１９９４，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２：４３３－５５に記載されている通り、それらはそれぞれ定常ドメインに融合し、非共有結合的に相互作用する。
ＶＨ遺伝子及びＶＬ遺伝子のレパートリは、Ｗｉｎｔｅｒ ｅｔ ａｌ．（上記）において記載されている通り、ＰＣＲにより個別にクローニングされ、ファージライブラリー内でランダムに組み換えられることができ、次いで、これらを、抗原結合クローンについて検索することができる。免疫された起源からのライブラリーは、ハイブリドーマを構築する必要性を伴うことなく免疫原に高親和性抗体を提供する。代替的に、Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ，１９９３，１２：７２５－３４により記載されているように、ナイーブレパートリをクローニングして、広範にわたる非自己に対するヒト抗体の単一の供給源をもたらし、また、免疫化を伴わない自己抗原に対するヒト抗体の単一の供給源ももたらすことができる。最後に、ナイーブライブラリーはまた、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ａｎｄ Ｗｉｎｔｅｒ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９９２，２２７：３８１－８８により記載されている通り、幹細胞に由来する、再配列されていないＶ遺伝子セグメントをクローニングし、ランダム配列を含むＰＣＲプライマーを使用して、高度に可変性のＣＤＲ３領域をコードし、インビトロにおける再配列を達成することにより、合成により作ることもできる。
抗原結合部位は、抗体の可変ドメインの外側にあり得る。例えば、抗原結合部位は、抗体の定常領域中にあり得る。定常領域ライブラリーは、定常領域の構造ループを１つ以上の高度に可変性の抗原結合ループで置換することによって構築することができる。このような定常領域ライブラリーは、以下の第５．４節においてより詳細に記載される。
ライブラリーのスクリーニングは、当該技術分野で知られている様々な技術によって達成することができる。例えば、特定の抗原（例えば、抗原のポリペプチド、断片、又はエピトープ）は、吸着プレートのウェルをコーティングするのに使用することができ、吸着プレートへと固定した宿主細胞上で発現させることもでき、細胞選別において使用することができ、ストレプトアビジンでコーティングされたビーズによる捕捉のためにビオチンへとコンジュゲートさせることができ、パニング表示ライブラリーのための他の任意の方法において使用することができる。解離反応速度の遅い（例えば、結合親和性が良好な）抗体の選択は、Ｂａｓｓ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，１９９０，８：３０９－１４及び国際公開第９２／０９６９０号において記載されているように、長時間の洗浄及び一価ファージ表示の使用、並びにＭａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，１９９２，１０：７７９－８３において記載されているように、抗原の低コーティング密度の使用により促進することができる。
抗体は、目的のファージクローンを選択するための好適な抗原スクリーニング手順に続き、Ｋａｂａｔ，ｅｔ ａｌ．（上記）に記載されている、ＶＨ及び／又はＶＬ配列（例えば、Ｆｖ配列）、ＶＨ及びＶＬ配列からの様々なＣＤＲ配列、又は目的のファージクローンからの他の抗原結合配列及び適切な定常領域（例えば、Ｆｃ）配列を使用する、全長抗体クローンの構築を設計することにより得ることができる。
本明細書で記載される抗体はまた、例えば、キメラ抗体を含み得る。キメラ抗体とは、抗体の異なる部分が異なる免疫グロブリン分子に由来する分子である。例えば、キメラ抗体は、ヒト抗体の定常領域へと融合させたマウスモノクローナル抗体又はラットモノクローナル抗体の可変領域を含み得る。キメラ抗体を生成するための方法は当該技術分野において既知である。例えば、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９８５，２２９：１２０２、Ｏｉ ｅｔ ａｌ．，１９８６，ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ４：２１４、Ｇｉｌｌｉｅｓ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ １２５：１９１－２０２、及び米国特許第５，８０７，７１５号、同第４，８１６，５６７号、同第４，８１６，３９７号、及び同第６，３３１，４１５号を参照。
本明細書で記載される技法などの技法を使用して生成される抗体は、周知の標準的な技法を使用して単離することができる。例えば、抗体又は抗原結合断片は、例えば、プロテインＡ－セファロース、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィ、ゲル電気泳動、透析、又は親和性クロマトグラフィなど、従来の免疫グロブリン精製手順により、例えば、培養培地、腹水、血清、細胞溶解物、合成反応材料などから好適に分離することができる。本明細書中で使用される場合、「単離」又は「精製」抗体は、抗体が由来する細胞供給源若しくは組織供給源に由来する細胞物質若しくは他のタンパク質を実質的に含まないか、又は化学合成される場合、化学的前駆物質若しくは他の化学物質を実質的に含まない。
５．２．２ 抗体断片
本開示は、１つ以上の抗原に結合する抗体断片を含む多重特異性抗体を提供する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される１つ以上の抗体断片及び１つ以上の定常領域変異体を含む結合分子が本明細書で提供される。
抗体断片の作製のために様々な手法が開発されている。伝統的に、これらの断片は、インタクトな抗体のタンパク質分解消化を介して誘導された（例えば、Ｍｏｒｉｍｏｔｏ ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２４：１０７－１７、及びＢｒｅｎｎａｎ ｅｔ ａｌ．，１９８５，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２９：８１－８３を参照）。しかしながら、これらの断片は現在、組み換え宿主細胞によって直接に作製され得る。Ｆａｂ、Ｆｖ、及びＳｃＦｖ抗体断片は全て大腸菌又は酵母細胞内で発現及び分泌し得、これらの断片の大量生産を可能にする。抗体断片は、上記の抗体ファージライブラリーから単離することができる。代替的に、Ｆａｂ’－ＳＨ断片は、大腸菌から直接回収でき、化学的に結合してＦ（ａｂ′）２断片を形成することができる（Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１０：１６３－６７（１９９２））。別のアプローチにより、Ｆ（ａｂ′）２断片は、組み換え宿主細胞培養から直接単離することができる。サルベージ受容体結合エピトープ残基を含む増加したインビボ半減期を有するＦａｂ及びＦ（ａｂ’）２断片は、例えば、米国特許第５，８６９，０４６号に記載されている。抗体断片の生成のための他の技術は、当業者に明らかである。ｓｃＦｖ融合タンパク質は、ｓｃＦｖのアミノ末端又はカルボキシ末端のいずれかにおいて、本明細書で提供される結合分子の融合を生じるように構築され得る（例えば、Ｂｏｒｒｅｂａｅｃｋ編（上記）を参照）。抗体断片はまた、例えば、上で引用した参考文献に記載されるような「直鎖状抗体」であり得る。このような直鎖状抗体は、単一特異性であっても、二重特異性などの多重特異性であってもよい。
より小さな抗体由来結合構造は、単一可変ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）とも呼ばれる別個の可変ドメイン（Ｖドメイン）である。ある種の生物、ラクダ科動物及び軟骨魚類は、それらの免疫系の一部としてＦｃ等価ドメイン構造上にマウントされた高親和性単一Ｖ様ドメインを有する。（Ｗｏｏｌｖｅｎ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ ５０：９８－１０１、及びＳｔｒｅｌｔｓｏｖ ｅｔ ａｌ．，２００４，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ．１０１：１２４４４－４９）。Ｖ様ドメイン（ラクダ科ではＶｈＨと呼ばれ、サメではＶ－ＮＡＲと呼ばれる）は、典型的には、標的抗原の空洞の貫通を可能にする長い表面ループを示す。それらはまた、疎水性表面パッチをマスキングすることによって、単離されたＶＨドメインを安定化する。
これらのＶｈＨ及びＶ－ＮＡＲドメインは、ｓｄＡｂを操作するために使用されてきた。ヒトＶドメイン変異体は、ファージライブラリーからの選択及び安定な高結合ＶＬ及びＶＨ由来ドメインをもたらした他のアプローチを使用して設計されている。ｓｄＡｂ融合タンパク質は、ｓｄＡｂのアミノ末端又はカルボキシ末端のいずれかにおいて本明細書で提供される結合分子の融合をもたらすように構築され得る。
本明細書で提供される抗体としては、免疫グロブリン分子及び免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な部分が挙げられるが、これらに限定されない。本明細書において提供される抗体は、免疫グロブリン分子の任意のクラス（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、及びＩｇＡ）又は任意のサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２）であり得る。特定の実施態態では、本明細書で提供される抗体は、ＩｇＧ１抗体、ＩｇＧ２抗体、又はＩｇＧ４抗体（例えば、ＩｇＧ４ ｎｕｌｌｂｏｄｙ及びＩｇＧ４抗体の変異体）などのＩｇＧ抗体である。特定の実施形態では、ＩｇＧ抗体は、ＩｇＧ１抗体である。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ抗体は、Ｆｃエフェクター機能を増強するための突然変異を有するＦｃ領域を含む。
抗体の変異体及び誘導体は、特異的抗原に結合する能力を保持する抗体機能的断片を含む。例示的な機能的断片としては、Ｆａｂ断片（例えば、抗原結合ドメインを含有し、軽鎖と、ジスルフィド結合によって架橋された重鎖の一部とを含む抗体断片）、Ｆａｂ’（例えば、Ｆａｂ及びヒンジ領域までの重鎖の更なる部分を含む単一の抗原結合ドメインを含有する抗体断片）、Ｆ（ａｂ’）２（例えば、重鎖のヒンジ領域において鎖間ジスルフィド結合によって連結された２つのＦａｂ’分子、Ｆａｂ’分子は、同じ又は異なるエピトープに向けられ得る）、二重特異性Ｆａｂ（例えば、それぞれが異なるエピトープに向けられ得る２つの抗原結合ドメインを有するＦａｂ分子）が挙げられる。
５．２．３ ヒト化抗体
本明細書に記載される抗体は、例えば、ヒト化抗体、例えば脱免疫化又は複合ヒト抗体を含み得る。
ヒト化抗体は、ヒトフレームワーク領域及びヒト定常領域の配列を含み得る。例えば、ヒト化抗体は、ヒト定常領域配列を含み得る。特定の実施形態では、ヒト化抗体は、ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＡ及びＩｇＥを含む免疫グロブリンの任意のクラス、及びＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４を含む任意のアイソタイプ（例えば、ＩｇＧ４の変異体及びＩｇＧ４ヌルボディ）から選択され得る。特定の実施形態では、ヒト化抗体は、カッパ又はラムダの軽鎖定常配列を含み得る。
ヒト化抗体は、ＣＤＲグラフティング（欧州特許第２３９，４００号、国際公開第９１／０９９６７号、米国特許第５，２２５，５３９号、同第５，５３０，１０１号、及び同第５，５８５，０８９号）、ベニヤリング又はリサーフェシング（欧州特許第５９２，１０６号、同第５１９，５９６号、Ｐａｄｌａｎ，１９９１，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ２８（４／５）：４８９－４９８、Ｓｔｕｄｎｉｃｋａ ｅｔ ａｌ．，１９９４，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ７（６）：８０５－８１４、及びＲｏｇｕｓｋａ ｅｔ ａｌ．，１９９４，ＰＮＡＳ ９１：９６９－９７３）、チェーンシャッフリング（米国特許第５，５６５，３３２号）、及び例えば、米国特許第６，４０７，２１３号、同第５，７６６，８８６号、国際公開第９３／１７１０５号、Ｔａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６９：１１１９ ２５（２００２）、Ｃａｌｄａｓ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．１３（５）：３５３－６０（２０００）、Ｍｏｒｅａ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ２０（３）：２６７ ７９（２０００）、Ｂａｃａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２（１６）：１０６７８－８４（１９９７）、Ｒｏｇｕｓｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．９（１０）：８９５ ９０４（１９９６）、Ｃｏｕｔｏ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５５（２３ Ｓｕｐｐ）：５９７３ｓ－ ５９７７ｓ（１９９５）、Ｃｏｕｔｏ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５５（８）：１７１７－２２（１９９５）、Ｓａｎｄｈｕ ＪＳ，Ｇｅｎｅ １５０（２）：４０９－１０（１９９４）、及びＰｅｄｅｒｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２３５（３）：９５９－７３（１９９４）に開示される技術を含むがこれらに限定されない当技術分野で知られている様々な技術を使用して製造することができる。米国特許出願公開第２００５／００４２６６４（Ａ１）号（２００５年２月２４日）も参照されたく、これらの各々は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
非ヒト抗体をヒト化するための様々な方法が、当該技術分野では知られている。例えば、ヒト化抗体は、非ヒトである供給源からそれに導入された１つ以上のアミノ酸残基を有し得る。これらの非ヒトアミノ酸残基は、多くの場合「インポート」残基と称され、典型的には、「インポート」可変ドメインから取得される。ヒト化は、例えば、Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，１９８６，Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２－２５、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，１９８８，３３２：３２３－２７、及びＶｅｒｈｏｅｙｅｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９８８，２３９：１５３４－３６）の方法に従い、超可変領域の配列で、ヒト抗体の対応する配列を置換することにより実施することができる。
場合によっては、ヒト化抗体は、親非ヒト抗体（例えば、齧歯動物）の６つのＣＤＲのアミノ酸配列をヒト抗体フレームワークへとグラフトする、ＣＤＲグラフティングにより構築される。例えば、Ｐａｄｌａｎ ｅｔ ａｌ．は、ＣＤＲの残基の約３分の１だけが実際に抗原と接触することを決定し、これらを「特異性決定残基」又はＳＤＲと呼んだ（Ｐａｄｌａｎ ｅｔ ａｌ．，１９９５，ＦＡＳＥＢ Ｊ．９：１３３３９）。ＳＤＲグラフト化の技術では、ＳＤＲ残基のみが、ヒト抗体フレームワークにグラフト化される（例えば、Ｋａｓｈｍｉｒｉ ｅｔ ａｌ．，２００５，Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：２５３４を参照）。
ヒト化抗体を作るのに使用される、ヒト可変ドメインの、軽鎖及び重鎖の両方の選択は、抗原性を低減するのに重要であり得る。例えば、いわゆる「ベストフィット」方法に従い、非ヒト（例えば、齧歯動物）抗体の可変ドメインの配列を、既知のヒト可変ドメイン配列のライブラリーの全体に対してスクリーニングする。齧歯動物のヒト配列に最も近いヒト配列は、ヒト化抗体のヒト骨格として選択され得る（Ｓｉｍｓ ｅｔ ａｌ．，１９９３，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２２９６３０８、及びＣｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，１９８７，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１１７）。別の方法は、軽鎖又は重鎖の特定のサブグループの全てのヒト抗体のコンセンサス配列に由来する特定のフレームワークを使用する。同じフレームワークをいくつかの異なるヒト化抗体に使用することができる（Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：４２８５８９、及びＰｒｅｓｔａ ｅｔ ａｌ．，１９９３，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２６２３－３２）。場合によっては、フレームワークは、最も存在量が多いヒトサブクラスであるＶＬ６亜群Ｉ（ＶＬ６Ｉ）及びＶＨ亜群ＩＩＩ（ＶＨＩＩＩ）のコンセンサス配列に由来する。別の方法では、ヒト生殖細胞系列遺伝子をフレームワーク領域の供給源として使用する。
スーパーヒト化と呼ばれるＣＤＲの比較に基づいた代替パラダイムでは、ＦＲの相同性は関係ない。この方法は、非ヒト配列及び機能的ヒト生殖細胞系列遺伝子レパートリを比較することからなる。次いで、マウス配列と同じ又は密接に関連した標準構造をコードする遺伝子が選択される。次に、非ヒト抗体と標準構造を共有する遺伝子のうち、ＣＤＲ内の相同性が最も高い遺伝子をＦＲドナーとして選択する。最後に、非ヒトＣＤＲをこれらのＦＲにグラフト化する（例えば、Ｔａｎ ｅｔ ａｌ．，２００２，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６９：１１１９－２５）。
更に、抗体は、抗原に対する親和性及びその他の好ましい生物学的特性を保持したままヒト化されることが概ね望ましい。この目標を達成するために、ある方法によれば、親配列及びヒト化配列の三次元モデルを使用して、親配列及び様々な概念のヒト化産物を分析するプロセスによって、ヒト化抗体を調製する。三次元の免疫グロブリンモデルが一般的に利用可能であり、当業者に周知である。選択された免疫グロブリン配列候補について確率の高い三次元立体構造を図示及び表示するコンピュータプログラムが利用可能である。これらには、例えば、ＷＡＭ（Ｗｈｉｔｅｌｅｇｇ ａｎｄ Ｒｅｅｓ，２０００，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．１３：８１９－２４）、Ｍｏｄｅｌｌｅｒ（Ｓａｌｉ ａｎｄ Ｂｌｕｎｄｅｌｌ，１９９３，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２３４：７７９－８１５）、Ｓｗｉｓｓ ＰＤＢ Ｖｉｅｗｅｒ（Ｇｕｅｘ ａｎｄ Ｐｅｉｔｓｃｈ，１９９７，Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ １８：２７１４－２３）が挙げられる。これらの表示について精査することにより、免疫グロブリン配列候補の機能において残基が示す可能性の高い働きの分析、例えば、免疫グロブリン候補が、その抗原結合能に影響を及ぼす残基についての分析が可能となる。このようにして、標的抗原に対する親和性の増大など、所望の抗体特性が達成されるように、レシピエント配列及びインポート配列から、ＦＲ残基を選択し組み合わせることができる。概して、超可変領域残基は、抗原結合に直接的に、ほとんど実質的に関与する。
抗体のヒト化の別の方法は、Ｈｕｍａｎ Ｓｔｒｉｎｇ Ｃｏｎｔｅｎｔ（ＨＳＣ）と呼ばれる抗体のヒト性の測定基準に基づいている。この方法では、マウスの配列とヒト生殖細胞系列遺伝子のレパートリを比較し、その違いをＨＳＣとしてスコアリングする。次いで、標的配列は、全体的な同一性測定を使用して多様なヒト化バリアントを生成するのではなく、そのＨＳＣを最大化することによってヒト化される（Ｌａｚａｒ ｅｔ ａｌ．，２００７，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４４：１９８６－９８）。
上記の方法に加えて、経験的な方法を用いてヒト化抗体を生成及び選択することができる。これらの方法には、ヒト化変異体の大規模なライブラリーを生成し、濃縮技術又はハイスループットスクリーニング技術を使用する最適なクローンの選択に基づく方法がある。抗体変異体は、ファージ、リボソーム、及び酵母表示ライブラリーから、並びに細菌コロニースクリーニングによって、単離することができる（例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ，２００５，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２３：１１０５－１６、Ｄｕｆｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，２００６，Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２４：５２３－２９、Ｆｅｌｄｈａｕｓ ｅｔ ａｌ．，２００３，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２１：１６３７０、及びＳｃｈｌａｐｓｃｈｙ ｅｔ ａｌ．，２００４，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．Ｄｅｓ．Ｓｅｌ．１７：８４７－６０）。
ＦＲライブラリーアプローチでは、ＦＲの特定の位置に複数の残基変異体を導入した後、ライブラリーをスクリーニングして、グラフトされたＣＤＲを最もよくサポートするＦＲを選択する。置換される残基は、ＣＤＲ構造に潜在的に寄与すると同定された「バーニア」残基の一部又は全て（例えば、Ｆｏｏｔｅ ａｎｄ Ｗｉｎｔｅｒ，１９９２，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２４：４８７９９を参照）、又はＢａｃａ ｅｔ ａｌによって同定されたより限定された標的残基のセットからのものを含み得る（１９９７，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１０６７８－８４）。
ＦＲシャフリングでは、全ＦＲを、選択された残基変異体のコンビナトリアルライブラリーを創出するのではなく、非ヒトＣＤＲと組み合わせる（例えば、Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ，２００５，３６：４３－６０を参照）。ライブラリーは、結合について、まず、ＶＬをヒト化するのに続き、ＶＨをヒト化する、２ステッププロセスでスクリーニングすることができる。代替的に、１ステップのＦＲシャフリングプロセスを使用することができる。かかるプロセスは、得られた抗体が、発現の増強、親和性の増大、及び熱的安定性を含む、生化学的特性及び物理化学的特性の改善を呈したので、２ステップスクリーニングより効率的であることが示されている（例えば、Ｄａｍｓｃｈｒｏｄｅｒ ｅｔ ａｌ．，２００７，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４４：３０４９－６０）。
「ヒューマニアリング」方法は、必須の最小特異性決定基（minimum specificity determinant、ＭＳＤ）の実験的同定に基づくものであり、非ヒト断片をヒトＦＲライブラリーに順次置換し、結合を評価することに基づいている。ヒューマニアリング方法は、非ヒトＶＨ鎖及び非ヒトＶＬ鎖のＣＤＲ３の領域で始まり、ＶＨ及びＶＬの両方の、ＣＤＲ１及びＣＤＲ２を含む、非ヒト抗体の他の領域を、ヒトＦＲへと徐々に置換する。この手法により、典型的には、エピトープを保持し、ヒトＶセグメントのＣＤＲが明確に異なる複数のサブクラスの抗体を同定する。ヒューマニアリングは、ヒト生殖細胞系列遺伝子抗体に９１～９６％相同な抗体の単離を可能とする（例えば、Ａｌｆｅｎｉｔｏ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｈｅａｌｔｈｔｅｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ’ｓ Ｔｈｉｒｄ Ａｎｎｕａｌ ＰＥＧＳ，Ｔｈｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｓｕｍｍｉｔ，２００７を参照）。
「ヒト操作」方法は、ヒトにおける免疫原性を低減する一方で、元の非ヒト抗体の所望の結合特性を保持する改変抗体を生成するように、抗体のアミノ酸配列へと特異的変化を施すことにより、マウス抗体又はキメラ抗体若しくは抗体断片などの非ヒト抗体又は抗体断片を変更することを伴う。一般に、技法は、非ヒト（例えば、マウス）抗体のアミノ酸残基を、「低リスク」残基、「中程度のリスク」残基、又は「高リスク」残基として分類することを伴う。分類は、特定の置換を施すことの予測される利益（例えば、ヒトにおける免疫原性のための）を、結果として得られる抗体の折り畳みに置換が影響を及ぼすリスクに対して査定する、グローバルなリスク／有益性の計算を使用して実施する。非ヒト（例えば、マウス）抗体配列の、所与の位置（例えば、低リスク又は中程度のリスク）において置換される、特定のヒトアミノ酸残基は、非ヒト抗体の可変領域に由来するアミノ酸配列を、特異的又はコンセンサスヒト抗体配列の対応する領域とアライメントすることにより選択することができる。非ヒト配列の低リスク又は中リスクの位置にあるアミノ酸残基は、アライメントに応じてヒト抗体配列の対応する残基に置換することができる。ヒト操作タンパク質を作製するための技術は、Ｓｔｕｄｎｉｃｋａ ｅｔ ａｌ．，１９９４，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ７：８０５１４、米国特許第５，７６６，８８６号、同第５，７７０，１９６号、同第５，８２１，１２３号、及び同第５，８６９，６１９号、並びに国際公開第９３／１１７９４号に詳しく記載されている。
複合ヒト抗体は、例えば、Ｃｏｍｐｏｓｉｔｅ Ｈｕｍａｎ Ａｎｔｉｂｏｄｙ（商標）テクノロジ（Ａｎｔｉｔｏｐｅ Ｌｔｄ．，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，Ｕｎｉｔｅｄ Ｋｉｎｇｄｏｍ）を使用して生成することができる。複合ヒト抗体を生成するためには、複数のヒト抗体可変領域配列の断片から、Ｔ細胞エピトープを回避する方法で可変領域配列を設計することで、得られる抗体の免疫原性を最小限に抑える。そのような抗体は、ヒト定常領域配列、例えば、ヒト軽鎖定常領域及び／又はヒト重鎖定常領域を含み得る。
脱免疫抗体は、Ｔ細胞エピトープが除去された抗体である。脱免疫抗体を作製する方法が記載されている。例えば、Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．２００９、５２５：４０５２３、ｘｉｖ，ａｎｄ Ｄｅ Ｇｒｏｏｔ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４４：１４８－１５３（２００６）を参照）。脱免疫抗体は、Ｔ細胞エピトープ枯渇可変領域及びヒト定常領域を含む。略述すると、抗体のＶＨ及びＶＬをクローニングし、その後、Ｔ細胞増殖アッセイにおいて、抗体のＶＨ及びＶＬに由来する重複ペプチドを調べることにより、Ｔ細胞エピトープを同定する。Ｔ細胞エピトープは、ヒトＭＨＣクラスＩＩに結合するペプチドを同定するためのインシリコの方法によって同定される。変異は、ヒトＭＨＣクラスＩＩへの結合を無効にするためにＶＨ及びＶＬに導入される。次いで、ＶＨ及びＶＬを利用して、脱免疫化抗体を生成する。
５．２．４ ヒト抗体
特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、完全ヒト抗体又はその断片を含む。完全ヒト抗体は、当技術分野で周知の任意の方法によって決定することができる。本明細書で提供されるヒト抗体は、ヒト由来ファージ表示ライブラリーから選択されたＦｖクローン可変ドメイン配列を既知のヒト定常ドメイン配列と組み合わせることによって構築することができる。あるいは、本開示のヒトモノクローナル抗体は、ハイブリドーマ法によって作製することができる。ヒトモノクローナル抗体の生成のためのヒト骨髄腫及びマウス－ヒトヘテロ骨髄腫細胞系は記載されており、例えば、Ｋｏｚｂｏｒ、１９８４、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３３：３００１－０５、Ｂｒｏｄｅｕｒｅｔ ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ５１－６３（１９８７）、Ｇｉｌｌｉｅｓ ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：８６－９５による。
免疫化の際に、内因性免疫グロブリン生成の非存在下でヒト抗体の完全レパートリを生成することができるトランスジェニック動物（例えば、マウス）を作製することも可能である。ヒト抗体レパートリを発現するトランスジェニックマウスは、多種多様な潜在的薬物標的に対する高親和性ヒト配列モノクローナル抗体を生成するために使用されている（例えば、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ，Ａ．，１９９５，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．６（５）：５６１－６６、Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ ａｎｄ Ｔａｕｓｓｉｎｇ，１９９７，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．８（４）：４５５－５８、米国特許第６，０７５，１８１号及び第６，１５０，５８４号、並びにＬｏｎｂｅｒｇｅｔ ａｌ．，２００５，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２３：１１１７－２５を参照）。
あるいは、ヒト抗体は、標的抗原に対する抗体を生成するヒトＢリンパ球の不死化を介して調製されてもよい（例えばそのようなＢリンパ球は、個体から回収されてもよく、又はインビトロで免疫化されていてもよい）（例えば、Ｃｏｌｅ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ（１９８５）、Ｂｏｅｒｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７（１）：同第８６－９５号、及び同第５，７５０，３７３号を参照）。
遺伝子シャッフリングはまた、非ヒト（例えば、げっ歯類）抗体からヒト抗体を誘導するために使用され得、ここで、このヒト抗体は、出発非ヒト抗体と類似の親和性及び特異性を有する。「エピトープインプリンティング」又は「誘導選択」とも呼ばれるこの方法によれば、本明細書に記載されるファージ表示技術によって得られる非ヒト抗体断片の重鎖可変領域又は軽鎖可変領域のいずれかが、ヒトＶドメイン遺伝子のレパートリで置換され、非ヒト鎖／ヒト鎖Ｆａｂキメラの集団が作製される。抗原を用いた選択は、非ヒト鎖／ヒト鎖キメラＦａｂの単離をもたらし、ここで、ヒト鎖は、一次ファージ表示クローン中の対応する非ヒト鎖の除去の際に破壊された抗原結合部位を回復する（例えば、エピトープは、ヒト鎖パートナーの選択を誘導する（刷り込む））。残りの非ヒト鎖を置換するためにプロセスを繰り返すと、ヒト抗体が得られる（例えば、国際公開第９３／０６２１３号、及びＯｓｂｏｕｒｎ ｅｔ ａｌ．，２００５，Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：６１－６８を参照）。ＣＤＲグラフティングによる非ヒト抗体の従来のヒト化とは異なり、この技術は、非ヒト起源のＦＲ又はＣＤＲ残基を有さない完全ヒト抗体を提供する。細胞表面抗原に対してマウス抗体をヒト化するための誘導選択の例としては、卵巣癌細胞上に存在する葉酸結合タンパク質（例えば、Ｆｉｇｉｎｉ ｅｔ ａｌ．，１９９８，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５８：９９１－９６を参照）、並びに肝細胞癌上で高度に発現されるＣＤ１４７（例えば、Ｂａｏ ｅｔ ａｌ．，２００５，Ｃａｎｃｅｒ Ｂｉｏｌ．Ｔｈｅｒ．４：１３７４－８０を参照）が挙げられる。
誘導された選択アプローチの潜在的な欠点は、一方の抗体鎖のシャッフリングが、他方を一定に保ちながらエピトープドリフトをもたらし得ることである。非ヒト抗体によって認識されるエピトープを維持するために、ＣＤＲ保持を適用することができる（例えば、Ｋｌｉｍｋａ ｅｔ ａｌ．，２０００，Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ．８３：２５２－６０、及びＣｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，２０００，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９６：８３３－４９を参照）。この方法において、非ヒトＶＨ ＣＤＲ３は、このＣＤＲが抗原結合部位の中心にあり得、抗原認識のための抗体の最も重要な領域であり得るので、一般的に保持される。しかしながら、場合によっては、非ヒト抗体のＶＨ ＣＤＲ３及びＶＬ ＣＤＲ３、並びにＶＨ ＣＤＲ２、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ１が保持されてもよい。
５．２．５ Ｆｃ操作
Ｆｃ操作によって本明細書で提供される抗体を改変することが望ましい場合がある。特定の実施形態では、抗体のＦｃ領域に対する改変は、抗体のエフェクター機能の減少又は排除をもたらす。特定の実施形態では、エフェクター機能は、ＡＤＣＣ、ＡＤＣＰ、及び／又はＣＤＣである。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、エフェクター機能はＡＤＣＣである。他の実施形態では、エフェクター機能は、ＡＤＣＰである。他の実施形態では、エフェクター機能は、ＣＤＣである。一実施形態では、エフェクター機能はＡＤＣＣ及びＡＤＣＰである。一実施形態では、エフェクター機能はＡＤＣＣ及びＣＤＣである。一実施形態では、エフェクター機能はＡＤＣＰ及びＣＤＣである。一実施形態では、エフェクター機能は、ＡＤＣＣ、ＡＤＣＰ及びＣＤＣである。これは、抗体のＦｃ領域に１つ以上のアミノ酸置換を導入することによって達成することができる。
特定の実施形態では、抗体のＦｃ領域に対する改変は、抗体のエフェクター機能の増強をもたらす。特定の実施形態では、エフェクター機能は、ＡＤＣＣ、ＡＤＣＰ、及び／又はＣＤＣである。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、エフェクター機能はＡＤＣＣである。他の実施形態では、エフェクター機能は、ＡＤＣＰである。他の実施形態では、エフェクター機能は、ＣＤＣである。一実施形態では、エフェクター機能はＡＤＣＣ及びＡＤＣＰである。一実施形態では、エフェクター機能はＡＤＣＣ及びＣＤＣである。一実施形態では、エフェクター機能はＡＤＣＰ及びＣＤＣである。一実施形態では、エフェクター機能は、ＡＤＣＣ、ＡＤＣＰ及びＣＤＣである。これは、抗体のＦｃ領域に１つ以上のアミノ酸置換を導入することによって達成することができる。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、Ｋｎｏｂｓ－ｉｎ－ｈｏｌｅｓ（ＫＩＨ）技術を用いて抗体を操作した。
抗体の血清半減期を増加させるために、例えば、米国特許第５，７３９，２７７号に記載されているように、サルベージ受容体結合エピトープを抗体（特に抗体断片）に組み込むことができる。「サルベージ受容体結合エピトープ」という用語は、ＩｇＧ分子のインビボ血清半減期の増加に関与するＩｇＧ分子（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４）のＦｃ領域のエピトープを指す。
５．２．６ 別のバインダー
本開示は、本明細書に開示される抗体と同じエピトープに特異的に結合する非免疫グロブリンバインダーを包含する。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかのいくつかの実施形態では、非免疫グロブリンバインダーは、競合結合アッセイでは本開示の抗体を置換する又は本開示の抗体によって置換される剤として同定される。これらの代替バインダーは、例えば、当該技術分野において既知の操作されたタンパク質スカフォールドのいずれかを含み得る。そのようなスカフォールドとしては、例えば、リガンド結合部位を形成する４つの超可変ループを支持する剛性ベータバレルを特徴とするタンパク質構造である、リポカリンスカフォールドに基づく抗カリンが挙げられる。新規の結合特異性は、機能的表示及び誘導選択（guided selection）と組み合わせて、ループ領域における標的ランダム突然変異誘発によって操作され得る（例えば、Ｓｋｅｒｒａ，２００８，ＦＥＢＳ Ｊ．２７５：２６７７－８３を参照）。他の好適なスカフォールドとしては、例えば、ヒトフィブロネクチンＩＩＩの１０番目の細胞外ドメインに基づくアドネクチン又はモノボディ（例えば、Ｋｏｉｄｅ ａｎｄ Ｋｏｉｄｅ，２００７，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３５２：９５－１０９を参照）、ブドウ球菌タンパク質ＡのＺドメインに基づくアフィボディ（例えば、Ｎｙｇｒｅｎ ｅｔ ａｌ．，２００８，ＦＥＢＳ Ｊ．２７５：２６６８－７６を参照）、アンキリン反復タンパク質に基づくＤＡＲＰｉｎ（例えば、Ｓｔｕｍｐｐ ｅｔ ａｌ．，２００８，Ｄｒｕｇ．Ｄｉｓｃｏｖ．Ｔｏｄａｙ １３：６９５－７０１を参照）、ヒトＦｙｎタンパク質キナーゼのＳＨ３ドメインに基づくフィノマー（例えば、Ｇｒａｂｕｌｏｖｓｋｉ ｅｔ ａｌ．，２００７，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８２：３１９６－２０４を参照）、スルフォロブス・アシドラリウス（Sulfolobus acidolarius）のＳａｃ７ｄに基づくアフィチン（例えば、Ｋｒｅｈｅｎｂｒｉｎｋ ｅｔ ａｌ．，２００８，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３８３：１０５８－６８を参照）、ヒトｙ－Ｂ－クリスタリンに基づくアフィリン（例えば、Ｅｂｅｒｓｂａｃｈ ｅｔ ａｌ．，２００７，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３７２：１７２－８５を参照）、膜受容体タンパク質のＡドメインに基づくアビマー（例えば、Ｓｉｌｖｅｒｍａｎ ｅｔ ａｌ．，２００５，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２３：１５５６－６１を参照）、システインリッチノッチンペプチド（例えば、Ｋｏｌｍａｒ，２００８，ＦＥＢＳ Ｊ．２７５：２６８４－９０を参照）、及び操作されたクニッツ型阻害剤（例えば、Ｎｉｘｏｎ ａｎｄ Ｗｏｏｄ，２００６，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｄｒｕｇ．Ｄｉｓｃｏｖ．Ｄｅｖ．９：２６１－６８を参照）を挙げることができる。概説については、例えば、Ｇｅｂａｕｅｒ ａｎｄ Ｓｋｅｒｒａ，２００９，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．１３：２４５－５５を参照。
５．２．７ 抗体変異体
上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、抗体又は抗原結合断片のアミノ酸配列改変が企図される。例えば、抗体の結合親和性及び／又は他の生物学的特性（特異性、熱安定性、発現レベル、エフェクター機能、グリコシル化、免疫原性の低下、又は溶解性を含むがこれらに限定されない）を改善することが望ましい場合がある。したがって、本明細書において記載される抗体に加えて、抗体変異体も調製され得ることが企図される。例えば、抗体変異体は、適切なヌクレオチド変化を、コードするＤＮＡに導入することによって、及び／又は所望の抗体又はポリペプチドを合成することによって調製することができる。当業者は、アミノ酸変化が、グリコシル化部位の数若しくは位置の変化、又は膜アンカー特性の変更など、抗体の翻訳後プロセス変更し得ることを理解する。
上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、本明細書において提供される抗体は、例えば、任意のタイプの分子を抗体に共有結合させることによって、化学的に改変される。抗体誘導体は、例えば、グリコシル化、アセチル化、ペグ化、リン酸化、アミド化、既知の保護（protecting/blocking）基による誘導体化、タンパク質分解切断、細胞のリガンド又は他のタンパク質への連結などにより化学改変された抗体を含み得る。多数の化学的改変のうちのいずれかは、特異的化学開裂、アセチル化、製剤化、ツニカマイシンの代謝的合成などを含むがこれらに限定されない、既知の技法により実行することができる。加えて、抗体は、１つ以上の非古典的アミノ酸を含み得る。
変異は、抗体又はポリペプチドをコードする１つ以上のコドンの置換、欠失、又は挿入であって、天然配列の抗体又はポリペプチドと比較してアミノ酸配列の変化を結果としてもたらす、置換、欠失、又は挿入であり得る。アミノ酸置換は、ロイシンのセリンによる置換し、例えば、保存的アミノ酸の置換など、あるアミノ酸を類似の構造的及び／又は化学的特性を有する別のアミノ酸に置換した結果であり得る。当業者に知られている標準的な技術を使用して、例えば、部位特異的変異誘発及びアミノ酸置換をもたらすＰＣＲ媒介変異誘発を含む、本明細書において提供される分子をコードするヌクレオチド配列に変異を導入することができる。挿入又は欠失は、任意選択的に、約１～５のアミノ酸の範囲であり得る。特定の実施形態では、置換、欠失、又は挿入は、元の分子と比較して、２５未満のアミノ酸置換、２０未満のアミノ酸置換、１５未満のアミノ酸置換、１０未満のアミノ酸置換、５未満のアミノ酸置換、４未満のアミノ酸置換、３未満のアミノ酸置換、又は２未満のアミノ酸置換を含む。特定の実施形態では、置換は、１つ以上の予測される非必須アミノ酸残基で行われる保存的アミノ酸置換である。許容される変異は、配列内に、アミノ酸の挿入、欠失、又は置換を体系的に施し、結果として得られる変異体を、全長天然配列又は成熟天然配列が呈する活性について調べることにより決定することができる。
アミノ酸配列の挿入には、１つの残基から１００以上の残基を含むポリペプチドまでの長さのアミノ末端及び／又はカルボキシル末端の融合、並びに単一又は複数のアミノ酸残基の配列内挿入が含まれる。末端挿入の例としては、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体が挙げられる。抗体分子の他の挿入変異体は、抗体のＮ末端又はＣ末端の、酵素（例えば、抗体指向酵素によるプロドラッグ療法）又は抗体の血清半減期を延長するポリペプチドへの融合体を含む。
「保存的アミノ酸置換」は、アミノ酸残基が、同様の電荷を持つ側鎖を有するアミノ酸残基で置換されるアミノ酸置換である。類似した電荷を持つ側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーが定義されている。これらのファミリーには、塩基性側鎖（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非電荷極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、ベータ分岐側鎖（例えば、スレオニン、バリン、イソロイシン）、及び芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を有するアミノ酸が含まれる。代替的に、飽和変異誘発などにより、コード配列の全部又は一部に沿ってランダムに変異を導入することができ、得られた突然変異体の生物活性をスクリーニングして、活性を保持する突然変異体を同定することもできる。変異誘発の後、コードされたタンパク質を発現させ、タンパク質の活性を決定することができる。
抗体の生物学的特性における実質的な改変は、（ａ）置換領域内のポリペプチドの構造骨格、例えば、シート又はヘリックス立体構造、（ｂ）標的部位における分子の電荷若しくは疎水性、又は（ｃ）側鎖のバルク、の維持に対するそれらの効果が著明に異なる置換を選択することにより達成することができる。代替的に、保存的（例えば、同様な特性及び／又は側鎖による、アミノ酸群内の）置換は、特性を維持するか、又は特性を著明に変化させないように施すことができる。アミノ酸は、以下に挙げるその側鎖の特性の類似性に応じてグループ化することができる（例えば、Ｌｅｈｎｉｎｇｅｒ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ７３－－７５（２ｄ ｅｄ．１９７５）参照）：（１）非極性：Ａｌａ（Ａ）、Ｖａｌ（Ｖ）、Ｌｅｕ（Ｌ）、Ｉｌｅ（Ｉ）、Ｐｒｏ（Ｐ）、Ｐｈｅ（Ｆ）、Ｔｒｐ（Ｗ）、Ｍｅｔ（Ｍ）、（２）非荷電極性：Ｇｌｙ（Ｇ）、Ｓｅｒ（Ｓ）、Ｔｈｒ（Ｔ）、Ｃｙｓ（Ｃ）、Ｔｙｒ（Ｙ）、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｇｌｎ（Ｑ）、（３）酸性：Ａｓｐ（Ｄ）、Ｇｌｕ（Ｅ）、及び（４）塩基性：Ｌｙｓ（Ｋ）、Ａｒｇ（Ｒ）、Ｈｉｓ（Ｈ）を参照）。
代替的に、天然に存在する残基は、共通の側鎖特性に基づいてグループに分けられることもある：（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ、（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、（５）鎖の向きに影響を与える残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。
非保存的置換は、これらのクラスのうちの１つのメンバーを、別のクラスのメンバーと交換することを伴う。そのような置換残基はまた、保存的置換部位に、又は残りの（非保存的）部位に導入され得る。
変形は、オリゴヌクレオチド媒介（部位特異的）変異誘発、アラニンスキャニング、ＰＣＲ変異誘発など、当該技術分野で知られている方法を用いて行うことができる。部位特異的突然変異誘発（例えば、Ｃａｒｔｅｒ，１９８６，Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ．２３７：１－７、及びＺｏｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９８２，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１０：６４８７－５００を参照）、カセット変異誘発（例えば、Ｗｅｌｌｓ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ ３４：３１５－２３（１９８５）を参照）、又は他の公知の技術を、クローニングされたＤＮＡに実施して、抗体変異体ＤＮＡを生成することができる。
本明細書で提供される抗体の適切な立体構造の維持に関与していない任意のシステイン残基は、分子の酸化安定性を改善し、異常な架橋を防ぐために、例えば、アラニンやセリンなど別のアミノ酸で置換することもできる。逆に、システイン結合を抗体に付加して、その安定性を改善することができる（例えば、抗体がＦｖ断片などの抗体断片である場合）。
上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、本開示の抗体分子は「脱免疫化」抗体である。「脱免疫化」抗体は、ヒト化抗体又はキメラ抗体に由来する抗体であり、それぞれの元の脱免疫化されていない抗体と比較して、抗体の免疫原性の低減をもたらす、そのアミノ酸配列における１つ以上の改変を有する。このような抗体変異体を生成するための手順の１つは、抗体分子のＴ細胞エピトープの同定及び除去を含む。第１のステップにおいて、抗体分子の免疫原性は、いくつかの方法によって、例えば、当技術分野で公知のように、Ｔ細胞エピトープのインビトロ決定又はそのようなエピトープのインシリコ予測によって決定することができる。Ｔ細胞エピトープ機能に重要な残基が同定されたら、免疫原性を除去し、抗体活性を保持するために突然変異を行うことができる。総説については、例えば、Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，２００９，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ５２５：４０５－２３を参照。
５．２．８ インビトロ親和性成熟
いくつかの実施形態では、親抗体と比較して、親和性、安定性、又は発現レベルなどの特性が改善された抗体変異体を、ｉｎ ｖｉｔｒｏ親和性成熟によって調製することができる。天然のプロトタイプと同様に、ｉｎ ｖｉｔｒｏでの親和性成熟は、変異と選択の原理に基づいている。抗体のライブラリーは、生物（ファージ、細菌、酵母、又は哺乳動物細胞など）の表面に表示されるか、コードするｍＲＮＡ又はＤＮＡと関連して（共有結合又は非共有結合など）表示される。表示された抗体を親和性選択することで、その抗体をコードする遺伝情報を持つ生物又は複合体の単離が可能になる。ファージ表示などの表示法を用いて、２～３回の変異と選択を繰り返すことで、通常、ナノモル台前半の親和性を持つ抗体断片が得られる。親和性成熟された抗体は、標的抗原に対してナノモル又はピコモルの親和性を有し得る。
ファージ表示は、抗体の表示と選択のための広く普及した方法である。抗体は、Ｆｄ又はＭ１３バクテリオファージの表面に、バクテリオファージコートタンパク質への融合物として表示される。選択は、抗原にさらされて、ファージ表示された抗体を、標的に結合させること、すなわち「パニング」と呼ばれるプロセスを伴う。抗原に結合したファージを回収し、細菌に感染させてファージを生成し、更に選択を繰り返すために使用する。総説については、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ，２００２，Ｍｅｔｈｏｄｓ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１７８：１－３７、及びＢｒａｄｂｕｒｙ ａｎｄ Ｍａｒｋｓ，２００４，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２９０：２９－４９を参照。
酵母表示システムでは（例えば、Ｂｏｄｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．１５：５５３－５７、及びＣｈａｏ ｅｔ ａｌ．，２００６，Ｎａｔ．Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ １：７５５－６８を参照）、抗体は、Ａｇａ１ｐとのジスルフィド結合を介して酵母細胞壁に付着する、酵母凝集素タンパク質Ａｇａ２ｐの接着サブユニットに融合され得る。Ａｇａ２ｐを介したタンパク質の表示は、タンパク質を細胞表面から遠ざけ、酵母細胞壁上の他の分子との相互作用の可能性を最小限にする。磁気分離及びフローサイトメトリーを用いてライブラリーをスクリーニングし、親和性又は安定性が改善された抗体を選択する。目的の可溶性抗原への結合は、ビオチン化抗原及びフルオロフォアにコンジュゲートしたストレプトアビジンなどの二次試薬で酵母を標識することによって決定される。抗体の表面発現の変形は、Ｆａｂに隣接するヘマグルチニン又はｃ－Ｍｙｃエピトープタグの免疫蛍光標識を通じて測定できる。発現は、表示されたタンパク質の安定性と相関することが示されているため、抗体を選択して、安定性と親和性を改善させることができる（例えば、Ｓｈｕｓｔａ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９２：９４９－５６を参照）。酵母表示の追加の利点は、表示されたタンパク質が真核生物の酵母細胞の小胞体で折り畳まれ、小胞体シャペロンと品質管理機構が利用されることである。成熟が完了すると、酵母の表面に表示されている間、抗体の親和性を便利に「滴定」することができ、各クローンの発現と精製の必要性がなくなる。酵母表面表示の理論的な限界は、他の表示方法に比べて機能的なライブラリーのサイズが小さくなる可能性があることである。しかし、最近のアプローチでは、酵母細胞の交配系を利用して、１０１４サイズと推定されるコンビナトリアル多様性を創出している（例えば、米国特許出願公開第２００３／０１８６３７４号、及びＢｌａｉｓｅ ｅｔ ａｌ．，２００４，Ｇｅｎｅ ３４２：２１１－１８参照）。
リボソーム表示では、抗体－リボソーム－ｍＲＮＡ（ＡＲＭ）の複合体を生成し、無細胞系で選択する。特定の抗体ライブラリーをコードするＤＮＡライブラリーは、終止コドンを欠くスペーサー配列と遺伝的に融合している。このスペーサー配列は、翻訳されてもペプチジルｔＲＮＡに付着したままリボソームトンネルを占めるため、目的のタンパク質がリボソームから突出して折り畳まれることになる。得られたｍＲＮＡ、リボソーム、及びタンパク質の複合体は、表面に結合したリガンドと結合し、リガンドとの親和性捕捉により、抗体とそれをコードするｍＲＮＡを同時に単離することができる。その後、リボソームに結合したｍＲＮＡを逆転写してｃＤＮＡに戻し、次いで変異誘発を受け、次回の選択に使用することができる（例えば、Ｆｕｋｕｄａ ｅｔ ａｌ．，２００６，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．３４：ｅ１２７を参照）。ｍＲＮＡ表示では、ピューロマイシンをアダプター分子として用いて、抗体とｍＲＮＡとの間に共有結合を形成する（Ｗｉｌｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，２００１，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９８：３７５０－５５を参照）。
これらの方法は完全にｉｎ ｖｉｔｒｏで行われるため、他の選択技術に比べて主に２つの利点がある。最初に、ライブラリーの多様性は、細菌細胞の形質転換効率によって制限されるのではなく、試験管内に存在するリボソーム及び異なるｍＲＮＡ分子の数によってのみ制限される。２番目に、各回の選択の後に、例えば、非プルーフリーディングポリメラーゼによって、ランダムな変異を容易に導入することができ、これは、多様性ステップの後にライブラリーを変換する必要がないためである。
上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、哺乳動物表示系を使用してもよい。
多様性はまた、標的化された方法で、又はランダムな導入を介して、抗体ライブラリーのＣＤＲに導入され得る。前者のアプローチには、高レベル又は低レベルの変異誘発を介して抗体の全てのＣＤＲを順次標的にすること、又は体細胞超変異の単離したホットスポット（例えば、Ｈｏ ｅｔ ａｌ．，２００５，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８０：６０７－１７を参照）、又は実験的根拠若しくは構造的理由から親和性に影響を与えると疑われる残基を標的にすることが含まれる。また、ＤＮＡシャッフリング又は同様の技術を介して、天然に多様性のある領域を置換することで、多様性を導入することもできる（例えば、Ｌｕ ｅｔ ａｌ．，２００３，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７８：４３４９６－５０７、米国特許第５，５６５，３３２号及び同第６，９８９，２５０号を参照）。代替的な技術は、フレームワーク領域残基に伸長する超可変ループを標的とするか（例えば、Ｂｏｎｄ ｅｔ ａｌ．，２００５，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３４８：６９９－７０９を参照）、ＣＤＲにおけるループ欠失及び挿入を利用するか、又はハイブリダイゼーションに基づく多様化を使用する（例えば、米国特許公開第２００４／０００５７０９号を参照）。ＣＤＲに多様性を生成する追加的な方法は、例えば、米国特許第７９８５，８４０号に開示されている。抗体ライブラリー及び／又は抗体親和性成熟の生成に使用できる更なる方法は、例えば、米国特許第８，６８５，８９７号及び同第８，６０３，９３０号、並びに米国特許出願公開第２０１４／０１７０７０５号、同第２０１４／００９４３９２号、同第２０１２／００２８３０１号、同第２０１１／０１８３８５５号、及び同第２００９／００７５３７８号に開示されており、これらはそれぞれ参照により本明細書に組み込まれる。
ライブラリーのスクリーニングは、当該技術分野で知られている様々な技術によって達成することができる。例えば、抗体を、固体支持体、カラム、ピン、若しくはセルロース／ポリ（フッ化ビニリデン）膜／他のフィルターに固定化し、吸着プレートに固定される若しくは細胞選別で使用される宿主細胞に発現させる、又はストレプトアビジンでコーティングされたビーズで捕捉のためにビオチンにコンジュゲートさせる、又は表示ライブラリーをパニングするための任意の他の方法で使用することができる。
インビトロ親和性成熟法の概説については、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ，２００５，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２３：１１０５－１６、Ｑｕｉｒｏｚ ａｎｄ Ｓｉｎｃｌａｉｒ，２０１０，Ｒｅｖｉｓｔａ Ｉｎｇｅｎｅｒｉａ Ｂｉｏｍｅｄｉａ ４：３９－５１、及びその中の参考文献を参照。
５．２．９ 抗体改変
特定の抗原に結合する抗体の共有結合改変は、本開示の範囲内に含まれる。共有結合改変には、抗体の標的アミノ酸残基を、抗体の選択された側鎖又はＮ末端若しくはＣ末端残基と反応可能な有機誘導体化剤と反応させることが含まれる。他の改変としては、グルタミニル及びアスパラギニル残基のそれぞれ対応するグルタミル及びアスパルチル残基への脱アミド化、プロリン及びリジンのヒドロキシル化、セリル又はスレオニル残基のヒドロキシル基のリン酸化、リジン、アルギニン及びヒスチジン側鎖のα－アミノ基のメチル化（例えば、Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ７９－８６（１９８３）参照）、Ｎ末端アミンのアセチル化、並びにＣ末端カルボキシル基のアミド化が挙げられる。
本開示の範囲に含まれる本明細書で提供される抗体の他の種類の共有結合改変には、抗体又はポリペプチドのネイティブなグリコシル化パターンを変更すること（例えば、ｅ．ｇ．，Ｂｅｃｋ ｅｔ ａｌ．，２００８，Ｃｕｒｒ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．９：４８２－５０１、及びＷａｌｓｈ，２０１０，Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ．Ｔｏｄａｙ １５：７７３－８０を参照）、及び、抗体を様々な非タンパク質ポリマー、例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリプロピレングリコール、又はポリオキシアルキレンのうちの１つに、例えば、米国特許第４，６４０，８３５号、同第４，４９６，６８９号、同第４，３０１，１４４号、同第４，６７０，４１７号、同第４，７９１，１９２号、又は同第４，１７９，３３７号に記載されている方法で連結することが含まれる。
本開示の抗体はまた、別の異種ポリペプチド又はアミノ酸配列、例えば、エピトープタグ（例えば、Ｔｅｒｐｅ，２００３，Ａｐｐｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．６０：５２３－３３を参照）、又はＩｇＧ分子のＦｃ領域（例えば、Ａｒｕｆｆｏ，Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｆｕｓｉｏｎ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ２２１－４２（Ｃｈａｍｏｗ ａｎｄ Ａｓｈｋｅｎａｚｉ ｅｄｓ．，１９９９）を参照）に融合された抗体を含むキメラ分子を形成するように改変され得る。
また、特定の抗原に結合する抗体のパネルが本明細書で提供される。特定の実施形態では、抗体のパネルは、特定の抗原に対する異なる会合速度、異なる解離速度、異なる親和性、及び／又は、特定の抗原に対する異なる特異性を有する。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかのいくつかの実施形態では、約１０個、約２５個、約５０個、約７５個、約１００個、約１２５個、約１５０個、約１７５個、約２００個、約２５０個、約３００個、約３５０個、約４００個、約４５０個、約５００個、約５５０個、約６００個、約６５０個、約７００個、約７５０個、約８００個、約８５０個、約９００個、約９５０個、又は約１０００個以上の抗体を含むか、又はそれからなる。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、パネルは、約１０、約２５、約５０、約７５、約１００、約１２５、約１５０、約１７５、約２００、約２５０、約３００、約３５０、約４００、約４５０、約５００、約５５０、約６００、約６５０、約７００、約７５０、約８００、約８５０、約９００、約９５０、約１０００、約２０００若しくは約３０００個の抗体、又は任意の２つの前述の値によって定義される範囲内の任意の数の抗体を含む。抗体のパネルは、ＥＬＩＳＡなどのアッセイに例えば、９６ウェル又は３８４ウェルプレートで使用することができる。
５．２．１０ 免疫複合体
本開示はまた、合成リンカーによって１つ以上の非抗体剤に共有結合された本開示の抗体のいずれか１つを含むコンジュゲートを提供する。
上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、本明細書において提供される抗体は、コンジュゲートされているか又は組換えにより融合され、例えば、治療剤（例えば、細胞毒性剤）又は診断若しくは検出可能な分子に対して。コンジュゲートされた抗体又は組み換え融合抗体は、例えば、疾患又は障害を治療又は予防するために有用であり得る。コンジュゲートされた又は組換えにより融合された抗体は、例えば、疾患又は障害の発症、発達、進行、及び／又は重症度をモニタリング又は予知するために有用であり得る。
このような診断及び検出は、例えば、抗体を検出可能な物質に結合させることにより達成することができ、検出可能な物質には、様々な酵素、例えば、限定されないが、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β－ガラクトシダーゼ、又はアセチルコリンエステラーゼ、補欠分子族、例えば、限定されないが、ストレプトアビジン／ビオチン及びアビジン／ビオチン、蛍光物質、例えば、限定されないが、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシネート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、ダンシルクロリド、又はフィコエリスリン、発光物質、例えば、限定されないが、ルミノール、生体発光物質、例えば、限定されないが、ルシフェラーゼ、ルシフェリン、又はエクオリン、化学発光物質、例えば、限定されないが、アクリジニウムベースの化合物又はＨＡＬＯＴＡＧ、限定されないが、ヨウ素（１３１Ｉ、１２５Ｉ、１２３Ｉ、及び１２１Ｉ）、炭素（１４Ｃ）、硫黄（３５Ｓ）、トリチウム（３Ｈ）、インジウム（１１５ Ｉｎ、１１３ Ｉｎ、１１２ Ｉｎ、及び１１１ Ｉｎ）、テクネチウム（９９ Ｔｃ）、タリウム（２０１ Ｔｉ）、ガリウム（６８ Ｇａ及び６７ Ｇａ）、パラジウム（１０３ Ｐｄ）、モリブデン（９９ Ｍｏ）、キセノン（１３３ Ｘｅ）、フッ素（１８Ｆ）、１５３ Ｓｍ、１７７ Ｌｕ、１５９ Ｇｄ、１４９ Ｐｍ、１４０ Ｌａ、１７５ Ｙｂ、１６６ Ｈｏ、９０Ｙ、４７ Ｓｃ、１８６ Ｒｅ、１８８ Ｒｅ、１４２ Ｐｒ、１０５ Ｒｈ、９７ Ｒｕ、６８ Ｇｅ、５７ Ｃｏ、６５ Ｚｎ、８５ Ｓｒ、３２Ｐ、１５３ Ｇｄ、１６９ Ｙｂ、５１ Ｃｒ、５４ Ｍｎ、７５ Ｓｅ、１１３ Ｓｎ、又は１１７ Ｓｎなどの放射性物質、種々の陽電子放出断層撮影を使用する陽電子放出金属；及び非放射性常磁性金属イオンが含まれる。
また、本明細書では、異種タンパク質又はポリペプチド（又はその断片、例えば、約１０、約２０、約３０、約４０、約５０、約６０、約７０、約８０、約９０、又は約１００アミノ酸のポリペプチド）に組換えにより融合又は化学的に結合（共有結合又は非共有結合）して融合タンパク質を生成する抗体、及びその使用も提供される。特に、本明細書では、本明細書で提供される抗体の抗原結合断片（例えば、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及び／又はＣＤＲ３）と、異種タンパク質、ポリペプチド、又はペプチドとを含む融合タンパク質が提供される。一実施形態では、抗体が融合される異種タンパク質、ポリペプチド、又はペプチドは、抗体を特定の細胞型に標的化するのに有用である。
更に、本明細書で提供される抗体は、精製を容易にするために、ペプチドなどのマーカー又は「タグ」配列と融合させることができる。具体的な実施形態では、マーカー又はタグのアミノ酸配列は、とりわけｐＱＥベクター（例えば、ＱＩＡＧＥＮ，Ｉｎｃ．を参照）に提供されているタグなどのヘキサヒスチジンペプチドであり、その多くが市販されている。例えば、Ｇｅｎｔｚ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：８２１－２４に記載されているように、ヘキサヒスチジンは、融合タンパク質の都合のよい精製を提供する。精製に有用な他のペプチドタグとしては、インフルエンザ血球凝集素タンパク質に由来するエピトープに対応する血球凝集素（「ＨＡ」）タグ（Ｗｉｌｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９８４，Ｃｅｌｌ ３７：７６７－７８）、及び「ＦＬＡＧ」タグが挙げられるが、これらに限定されるものではない。
部位（ポリペプチドを含む）を抗体に融合又はコンジュゲートさせる方法が知られている（例えば、Ａｒｎｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｆｏｒ Ｉｍｍｕｎｏｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｏｆ Ｄｒｕｇｓ ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，ｉｎ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ ２４３－５６（Ｒｅｉｓｆｅｌｄ ｅｔ ａｌ．ｅｄｓ．，１９８５）、Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｆｏｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，ｉｎ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ ６２３－－５３（Ｒｏｂｉｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ．ｅｄｓ．，２ｄ ｅｄ．１９８７）、Ｔｈｏｒｐｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｃａｒｒｉｅｒｓ ｏｆ Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ａｇｅｎｔｓ ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ：Ａ Ｒｅｖｉｅｗ，ｉｎ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ４７５－５０６（Ｐｉｎｃｈｅｒａ ｅｔ ａｌ．ｅｄｓ．，１９８５）、Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｒｅｓｕｌｔｓ，ａｎｄ Ｆｕｔｕｒｅ Ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ ｏｆ ｔｈｅ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｕｓｅ ｏｆ Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ Ａｎｔｉｂｏｄｙ ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，ｉｎ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｙ ３０３－１６（Ｂａｌｄｗｉｎ ｅｔ ａｌ．ｅｄｓ．，１９８５）、Ｔｈｏｒｐｅ ｅｔ ａｌ．，１９８２，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．６２：１１９－５８、米国特許第５，３３６，６０３号、同第５，６２２，９２９号、同第５，３５９，０４６号、同第５，３４９，０５３号、同第５，４４７，８５１号、同第５，７２３，１２５号、同第５，７８３，１８１号、同第５，９０８，６２６号、米国特許第５，８４４，０９５号、及び米国特許第５，１１２，９４６号、欧州特許第３０７，４３４号、欧州特許第３６７，１６６号、欧州特許第３９４，８２７号、国際公開第９１／０６５７０号、同第９６／０４３８８号、同第９６／２２０２４号、同第９７／３４６３１号、及び同第９９／０４８１３号、Ａｓｈｋｅｎａｚｉ ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８８：１０５３５－３９、Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ｎａｔｕｒｅ，３３１：８４－８６、Ｚｈｅｎｇ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５４：５５９０－６００、並びにＶｉｌ ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：１１３３７－４１を参照）。
融合タンパク質は、例えば、遺伝子シャッフリング、モチーフシャッフリング、エクソンシャッフリング、及び／又はコドンシャッフリング（総称して「ＤＮＡシャッフリング」と呼ばれる）の手法で生成され得る。ＤＮＡシャッフリングを使用して、例えば、より高い親和性及びより低い解離速度を有する抗体を含む、本明細書で提供される抗体の活性を変更することができる（例えば、米国特許第５，６０５，７９３号、同第５，８１１，２３８号、同第５，８３０，７２１号、米国特許第５，８３４，２５２号、及び米国特許第５，８３７，４５８号、Ｐａｔｔｅｎ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．８：７２４－３３、Ｈａｒａｙａｍａ，１９９８，Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１６（２）：７６－８２、Ｈａｎｓｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２８７：２６５－７６、及びＬｏｒｅｎｚｏ ａｎｄ Ｂｌａｓｃｏ，１９９８，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ２４（２）：３０８－１３を参照）。抗体、又はコードされた抗体は、組み換えの前に、エラープローンＰＣＲ、ランダムヌクレオチド挿入又は他の方法によるランダム変異誘発を受けることによって変更され得る。本明細書で提供される抗体をコードするポリヌクレオチドは、１つ以上の異種分子の１つ以上の成分、モチーフ、セクション、パート、ドメイン、断片などと組み換えられ得る。
本明細書で提供される抗体（例えば、ＶＨＨドメイン）は、例えば、米国特許第４，６７６，９８０号に記載されているように、二次抗体にコンジュゲートされて抗体ヘテロコンジュゲートを形成できる。
また、本明細書で提供されるような抗体は、固体支持体に結合することもでき、これはイムノアッセイ又は標的抗原の精製に特に有用である。このような固体支持体としては、ガラス、セルロース、ポリアクリルアミド、ナイロン、ポリスチレン、ポリ塩化ビニル、又はポリプロピレンが挙げられるが、これらに限定されない。
リンカーは、細胞内でのコンジュゲート薬剤の放出を促進する「切断性リンカー」であり得るが、非切断性リンカーも本明細書において企図される。本開示のコンジュゲートに使用するリンカーとしては、限定されないが、酸不安定性リンカー（例えば、ヒドラゾンリンカー）、ジスルフィド含有リンカー、ペプチダーゼ感受性リンカー（例えば、アミノ酸、例えば、バリン及び／又はシトルリン、例えば、シトルリン－バリン又はフェニルアラニン－リジンを含むペプチドリンカー）、光不安定性リンカー、ジメチルリンカー（例えば、Ｃｈａｒｉ ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５２：１２７－３１、及び米国特許第５，２０８，０２０号を参照）、チオエーテルリンカー、又は多剤輸送体を介した耐性を回避するように設計された親水性リンカー（例えば、Ｋｏｖｔｕｎ ｅｔ ａｌ．，２０１０，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．７０：２５２８－３７を参照）が挙げられる。
抗体及び薬剤のコンジュゲートは、ＢＭＰＳ、ＥＭＣＳ、ＧＭＢＳ、ＨＢＶＳ、ＬＣ－ＳＭＣＣ、ＭＢＳ、ＭＰＢＨ、ＳＢＡＰ、ＳＩＡＢ、ＳＭＣＣ、ＳＭＰＢ、ＳＭＰＨ、スルホ－ＥＭＣＳ、スルホ－ＧＭＢＳ、スルホ－ＫＭＵＳ、スルホ－ＭＢＳ、スルホ－ＳＩＡＢ、スルホ－ＳＭＣＣ、スルホ－ＳＭＰＢ、及びＳＶＳＢ（スクシンイミジル－（４－ビニルスルホン）ベンゾエート）などの様々な二官能性タンパク質結合剤を用いて作製することができる。本開示は更に、抗体及び薬剤のコンジュゲートが、当該技術分野で開示されている任意の適切な方法を用いて調製され得ることを企図している（例えば、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ（Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ ｅｄ．，２ｄ ｅｄ．２００８）を参照）。
抗体及び薬剤の従来のコンジュゲーションストラテジーは、Ｌｙｓ残基のε－アミノ基又はＣｙｓ残基のチオール基を伴うランダムなコンジュゲーション化学に基づいており、その結果、不均一なコンジュゲートが生じていた。最近開発された技術により、抗体への部位特異的コンジュゲーションが可能になり、結果として、均一な充填量を実現し、抗原結合又は薬物動態が変化したコンジュゲート亜集団を回避することができる。これらには、反応性チオール基を提供し、また免疫グロブリンの折り畳み及び組み立てを阻害せず、又は抗原結合を変化させない、重鎖及び軽鎖上の位置でのシステイン置換を含む「チオマブ」の操作が挙げられる（例えば、Ｊｕｎｕｔｕｌａ ｅｔ ａｌ．，２００８，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．３３２：４１－５２、及びＪｕｎｕｔｕｌａ ｅｔ ａｌ．，２００８，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２６：９２５－３２を参照）。別の方法では、終止コドンＵＧＡを終結からセレノシステイン挿入に再コードすることにより、セレノシステインを抗体配列に共翻訳的に挿入し、他の天然アミノ酸の存在下でセレノシステインの求核性セレノール基での部位特異的な共有結合的コンジュゲーションを可能にする（例えば、Ｈｏｆｅｒ ｅｔ ａｌ．，２００８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １０５：１２４５１－５６、及びＨｏｆｅｒ ｅｔ ａｌ．，２００９，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ４８（５０）：１２０４７－５７を参照）。
５．３ ポリヌクレオチド
特定の実施形態では、本開示は、本明細書に記載の抗体をコードするポリヌクレオチドを包含する。「ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド」という用語は、ポリペプチドのコード配列のみを含むポリヌクレオチド、並びに追加のコード配列及び／又は非コード配列を含むポリヌクレオチドを包含する。本開示のポリヌクレオチドは、ＲＮＡの形態又はＤＮＡの形態であり得る。ＤＮＡには、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、及び合成ＤＮＡが挙げられ、これは、二本鎖又は一本鎖であり得、一本鎖の場合は、コード鎖又非コード（アンチセンス）鎖であり得る。
特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは、例えば、宿主細胞からのポリペプチドの発現及び分泌を補助するポリヌクレオチド（例えば、ポリペプチドの輸送を制御するための分泌配列として機能するリーダー配列）と同じ読み枠で融合した、ポリペプチドのコード配列を含む。ポリペプチドは、「成熟」型のポリペプチドを形成させるために宿主細胞によって切断されるリーダー配列を有することができる。
特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは、マーカー又はタグ配列と同じ読み枠で融合した、ポリペプチドのコード配列を含む。例えば、いくつかの実施形態では、細菌宿主の場合、マーカー配列は、マーカーと融合したポリペプチドの効率的精製を可能にするベクターによって供給されるヘキサヒスチジンタグである。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、マーカーは他の親和性タグと組み合わせて使用される。
本開示は更に、本明細書に記載されたポリヌクレオチドの変異体に関し、変異体は、例えば、ポリヌクレオチドの断片、類似体、及び／又は誘導体をコードする。特定の実施形態では、本開示は、本明細書に記載の抗体又はその抗原結合断片を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドと、少なくとも約８０％同一、少なくとも約８５％同一、少なくとも約９０％同一、少なくとも約９５％同一、及びいくつかの実施形態では、少なくとも約９６％、９７％、９８％又は９９％同一のヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドを含む、ポリヌクレオチドを提供する。
本明細書で使用される場合、「参照ヌクレオチド配列と少なくとも、例えば、９５％「同一」のヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチド」という語句は、ポリヌクレオチド配列が参照ヌクレオチド配列の１００ヌクレオチドごとに最大５個の点変異を含み得ることを除いて、ポリヌクレオチドのヌクレオチド配列が参照配列と同一であることを意味することを意図している。言い換えれば、参照ヌクレオチド配列と少なくとも９５％同一のヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドを得るためには、参照配列のヌクレオチドのうち最大５％が、欠失若しくは別のヌクレオチドで置換され得るか、又は参照配列の全ヌクレオチドのうち最大５％の数のヌクレオチドが、参照配列に挿入され得る。参照配列のこれらの変異は、参照ヌクレオチド配列の５’又は３’の末端位置、又はそれらの末端位置の間の任意の場所で起こり得、参照配列のヌクレオチド間で個別に、又は参照配列内の１つ以上の隣接グループで散在する。
ポリヌクレオチド変異体は、コード領域、非コード領域、又はその両方に変化を含み得る。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかのいくつかの実施形態では、ポリヌクレオチド変異体は、サイレント置換、付加、又は欠失をもたらす変化を含むが、コードされたポリペプチドの特性又は活性を変化させない。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかのいくつかの実施形態では、ポリヌクレオチド変異体は、（遺伝子コードの縮重により）ポリペプチドのアミノ酸配列に変化をもたらさないサイレント置換を含む。ポリヌクレオチド変異体は、様々な理由のため、例えば、特定の宿主に対するコドン発現を最適化するため（すなわち、ヒトのｍＲＮＡのコドンを大腸菌などの細菌宿主が好むものに変更する）、生成することができる。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかのいくつかの実施形態では、ポリヌクレオチド変異体は、配列の非コード領域又はコード領域における少なくとも１つのサイレント変異を含む。
上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかのいくつかの実施形態では、ポリヌクレオチド変異体は、コードされたポリペプチドの発現（又は発現レベル）を調節又は変更するために生成される。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、ポリヌクレオチド変種は、コードされるポリペプチドの発現を増加させるために生成される。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、ポリヌクレオチド変種は、コードされるポリペプチドの発現を減少させるように生成される。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかのいくつかの実施形態では、ポリヌクレオチド変異体は、親ポリヌクレオチド配列と比較して、コードされたポリペプチドの発現が増加している。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかのいくつかの実施形態では、ポリヌクレオチド変異体は、親ポリヌクレオチド配列と比較して、コードされたポリペプチドの発現が減少している。
特定の実施形態では、本開示は、本明細書で提供される配列表に列挙されるポリヌクレオチドと、少なくとも約８０％同一、少なくとも約８５％同一、少なくとも約９０％同一、少なくとも約９５％同一、及びいくつかの実施形態では、少なくとも約９６％、９７％、９８％又は９９％同一のヌクレオチド配列を含む、ポリヌクレオチドを提供する。
特定の実施形態では、本開示は、本明細書で提供されるポリヌクレオチドから選択されるポリヌクレオチドと少なくとも約８０％同一、少なくとも約８５％同一、少なくとも約９０％同一、少なくとも約９５％同一、そしていくつかの実施形態では少なくとも約９６％、９７％、９８％、又は９９％同一のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドを提供する。
特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは、単離される。特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは、実質的に純粋である。
本明細書に記載のポリヌクレオチドを含むベクター及び細胞も提供される。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、発現ベクターはポリヌクレオチド分子を含む。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、宿主細胞は、ポリヌクレオチド分子を含む発現ベクターを含む。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、宿主細胞は、ポリヌクレオチド分子を含む１つ以上の発現ベクターを含む。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、宿主細胞はポリヌクレオチド分子を含む。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、宿主細胞は１つ以上のポリヌクレオチド分子を含む。
５．４ 定常領域ライブラリー
別の態様では、少なくとも１つの操作された抗体定常領域変異体（例えば、ＣＨ１領域変異体変異体及び／又はＣＬ領域変異体）をそれぞれが含む複数の分子を含む抗体定常領域ライブラリーが本明細書で提供され、ライブラリー中の複数の分子中の定常領域変異体は、様々なループ領域を含む。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、ライブラリー多様性は、約１０７－１０１６（単一ループの場合）から約１０１８－１０３３（二重ループの場合）の範囲であり得る。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、ライブラリー多様性は、単一ループについて約１０６～１０７の範囲であり得る。いくつかの実施形態では、ライブラリー多様性は、単一ループについて約１０７～１０８の範囲であり得る。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、ライブラリー多様性は、単一ループについて約１０８～１０９の範囲であり得る。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、ライブラリーの多様性は、単一ループについて約１０９～１０１０の範囲であり得る。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、ライブラリー多様性は、単一ループについて約１０１０～１０１１の範囲であり得る。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、ライブラリー多様性は、単一ループについて約１０１１～１０１２の範囲であり得る。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、ライブラリー多様性は、単一ループについて約１０１２～１０１３の範囲であり得る。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、ライブラリー多様性は、単一ループについて約１０１３～１０１４の範囲であり得る。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、ライブラリー多様性は、単一ループについて約１０１４～１０１５の範囲であり得る。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、ライブラリー多様性は、単一ループについて約１０１５～１０１６の範囲であり得る。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、ライブラリー多様性は、単一ループについて約１０１６～１０１７の範囲であり得る。
本発明のライブラリーは、抗体定常領域（例えば、ＣＨ１領域又はＣＬ領域）中のループ領域の少なくとも１つに様々なアミノ酸配列を導入し、任意選択で抗体定常領域中のループ領域内の１つ以上のアミノ酸残基を置換することによって構築することができる。例えば、上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、本明細書において提供されるライブラリーは、抗体定常領域（例えば、ＣＨ１領域又はＣＬ領域）のＡＢループ内の領域に導入された、及び／又は置換した異なるアミノ酸配列を有する複数の分子を含む。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、本明細書において提供されるライブラリーは、抗体定常領域（例えば、ＣＨ１領域又はＣＬ領域）のＢＣループ内の領域に導入されている及び／又は置換している異なるアミノ酸配列を有する複数の分子を含む。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、本明細書において提供されるライブラリーは、抗体定常領域（例えば、ＣＨ１領域又はＣＬ領域）のＣＤループ内の領域に導入されている及び／又は置換している異なるアミノ酸配列を有する複数の分子を含む。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、本明細書において提供されるライブラリーは、抗体定常領域（例えば、ＣＨ１領域又はＣＬ領域）のＤＥループ内の領域に導入されている及び／又は置換している異なるアミノ酸配列を有する複数の分子を含む。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、本明細書において提供されるライブラリーは、抗体定常領域（例えば、ＣＨ１領域又はＣＬ領域）のＥＦループ内の領域に導入されている及び／又は置換している異なるアミノ酸配列を有する複数の分子を含む。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、本明細書において提供されるライブラリーは、抗体定常領域（例えば、ＣＨ１領域又はＣＬ領域）のＦＧループ内の領域に導入されている及び／又は置換している異なるアミノ酸配列を有する複数の分子を含む。
上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、様々なアミノ酸配列が、ＣＨ１領域のＡＢ、ＢＣ、ＣＤ、ＤＥ、ＥＦ、及び／又はＦＧループ領域内のアミノ酸断片に導入され、かつ／又はそれを置換する。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、様々なアミノ酸配列が、ＣＬ領域のＡＢ、ＢＣ、ＣＤ、ＤＥ、ＥＦ、及び／又はＦＧループ領域内のアミノ酸断片に導入され、かつ／又はそれを置換する。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、様々なアミノ酸配列が、ＣＨ１領域のＡＢ、ＢＣ、ＣＤ、ＤＥ、ＥＦ、及び／又はＦＧループ領域の外側のアミノ酸断片に導入され、かつ／又は置換する。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、様々なアミノ酸配列が、ＣＬ領域のＡＢ、ＢＣ、ＣＤ、ＤＥ、ＥＦ、及び／又はＦＧループ領域の外側のアミノ酸断片に導入され、かつ／又は置換する。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、様々なアミノ酸配列が、ＣＨ１領域のＡβ鎖領域、Ｂβ鎖領域、Ｃβ鎖領域、Ｄβ鎖領域、Ｅβ鎖領域、及び／又はＦβ鎖領域内のアミノ酸断片に導入され、かつ／又は置換する。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、様々なアミノ酸配列が、ＣＬ領域のＡβ鎖領域、Ｂβ鎖領域、Ｃβ鎖領域、Ｄβ鎖領域、Ｅβ鎖領域、及び／又はＦβ鎖領域内のアミノ酸断片に導入され、かつ／又は置換する。
上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、様々なアミノ酸配列をループ領域に挿入することができる。ＣＨ１又はＣＬ領域のＡＢループ領域には、種々のアミノ酸配列を挿入することができる。ＣＨ１又はＣＬ領域のＢＣループ領域には、種々のアミノ酸配列を挿入することができる。ＣＨ１又はＣＬ領域のＣＤループ領域には、種々のアミノ酸配列を挿入することができる。ＣＨ１又はＣＬ領域のＤＥループ領域には、種々のアミノ酸配列を挿入することができる。ＣＨ１又はＣＬ領域のＥＦループ領域には、種々のアミノ酸配列を挿入することができる。ＣＨ１又はＣＬ領域のＦＧループ領域には、種々のアミノ酸配列を挿入することができる。
他の実施形態では、種々のアミノ酸配列は、ループ領域内の領域を置換し得る。種々のアミノ酸配列が、ＣＨ１又はＣＬ領域のＡＢループ領域内の領域を置換し得る。種々のアミノ酸配列が、ＣＨ１又はＣＬ領域のＢＣループ領域内の領域を置換し得る。種々のアミノ酸配列が、ＣＨ１又はＣＬ領域のＣＤループ領域内の領域を置換し得る。種々のアミノ酸配列が、ＣＨ１又はＣＬ領域のＤＥループ領域内の領域を置換し得る。種々のアミノ酸配列が、ＣＨ１又はＣＬ領域のＥＦループ領域内の領域を置換し得る。種々のアミノ酸配列が、ＣＨ１又はＣＬ領域のＦＧループ領域内の領域を置換し得る。
上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、本明細書において提供されるライブラリー中の分子は、１つのループ領域に多様な配列を含む。他の実施形態では、本明細書で提供されるライブラリー中の分子は、１つ以上の定常領域内の２つ以上のループ領域に多様な配列を含む。
したがって、上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、抗体のＣＨ１領域に由来する領域及び／又はＣＬ領域に由来する領域をそれぞれが含む分子の集団を含むＦａｂ定常領域ライブラリー（ＣＲＬ）が本明細書で提供され、ここで、分子の集団は、ＣＨ１領域に由来する領域及び／又はＣＬ領域に由来する領域において多様なアミノ酸配列を含む。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、ＣＨ１領域に由来する領域における多様なアミノ酸配列は、ＣＨ１領域のＡＢ、ＢＣ、ＣＤ、ＤＥ、ＥＦ、及び／又はＦＧループ領域にある。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、ＣＬ領域に由来する領域における多様なアミノ酸配列は、ＣＬ領域のＡＢ、ＢＣ、ＣＤ、ＤＥ、ＥＦ、及び／又はＦＧループ領域にある。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、ＣＨ１領域に由来する領域における多様なアミノ酸配列は、ＣＨ１領域のＡＢ、ＢＣ、ＣＤ、ＤＥ、ＥＦ、及び／又はＦＧループ領域の外側にある。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、ＣＬ領域に由来する領域における多様なアミノ酸配列は、ＣＬ領域のＡＢ、ＢＣ、ＣＤ、ＤＥ、ＥＦ、及び／又はＦＧループ領域の外側にある。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、ＣＨ１領域に由来する領域における多様なアミノ酸配列は、ＣＨ１領域のＡβ鎖領域、Ｂβ鎖領域、Ｃβ鎖領域、Ｄβ鎖領域、Ｅβ鎖領域、及び／又はＦβ鎖領域にある。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、ＣＬ領域に由来する領域中の多様なアミノ酸配列は、ＣＬ領域のＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、及び／又はＦβ鎖領域にある。
上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、分子の集団は、ＣＨ１領域に由来する領域中の１つ又は２つのループ領域に多様なアミノ酸配列を含む。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、分子の集団は、ＣＬ領域に由来する領域中の１つ又は２つのループ領域に多様なアミノ酸配列を含む。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、分子の集団は、ＣＨ１領域のＣＤループ領域に多様なアミノ酸配列を含む。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、分子の集団は、ＣＨ１領域のＤＥループ領域に多様なアミノ酸配列を含む。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、分子の集団は、ＣＨ１領域のＣＤループ領域及びＤＥループ領域に多様なアミノ酸配列を含む。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、分子の集団は、ＣＬ領域のＣＤループ領域に多様なアミノ酸配列を含む。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、分子の集団は、ＣＬ領域のＤＥループ領域に多様なアミノ酸配列を含む。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、分子の集団は、ＣＬ領域のＣＤループ領域及びＤＥループ領域に多様なアミノ酸配列を含む。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、分子の集団は、ＣＨ１領域のＣＤループ領域に多様なアミノ酸配列を含み、かつ分子の集団は、ＣＬ領域のＣＤループ領域に多様なアミノ酸配列を含む。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、分子の集団は、ＣＨ１領域のＣＤループ領域に多様なアミノ酸配列を含み、かつ分子の集団は、ＣＬ領域のＤＥループ領域に多様なアミノ酸配列を含む。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、分子の集団は、ＣＨ１領域のＣＤループ領域に多様なアミノ酸配列を含み、かつ分子の集団は、ＣＬ領域のＣＤループ領域及びＤＥループ領域に多様なアミノ酸配列を含む。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、分子の集団は、ＣＨ１領域のＤＥループ領域に多様なアミノ酸配列を含み、かつ分子の集団は、ＣＬ領域のＣＤループ領域に多様なアミノ酸配列を含む。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、分子の集団は、ＣＨ１領域のＤＥループ領域に多様なアミノ酸配列を含み、かつ分子の集団は、ＣＬ領域のＤＥループ領域に多様なアミノ酸配列を含む。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、分子の集団は、ＣＨ１領域のＤＥループ領域に多様なアミノ酸配列を含み、かつ分子の集団は、ＣＬ領域のＣＤループ領域及びＤＥループ領域に多様なアミノ酸配列を含む。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、分子の集団は、ＣＨ１領域のＣＤループ領域及びＣＨ１領域のＤＥループ領域に多様なアミノ酸配列を含み、かつ分子の集団は、ＣＬ領域のＣＤループ領域に多様なアミノ酸配列を含む。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、分子の集団は、ＣＨ１領域のＣＤループ領域及びＤＥループ領域に多様なアミノ酸配列を含み、かつ分子の集団は、ＣＬ領域のＤＥループ領域に多様なアミノ酸配列を含む。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、分子の集団は、ＣＨ１領域のＣＤループ領域及びＤＥループ領域に多様なアミノ酸配列を含み、かつ分子の集団は、ＣＬ領域のＣＤループ領域及びＤＥループ領域に多様なアミノ酸配列を含む。
いくつかの特定の実施形態では、ＣＨ１領域に由来する領域は、配列番号１のアミノ酸配列を含むヒトＩｇＧ１ ＣＨ１領域に由来する領域であり、ＣＨ１領域に由来する領域は、配列番号１に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％又は９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの特定の実施形態では、ＣＬ領域に由来する領域は、配列番号２のアミノ酸配列を含むヒトＣＬカッパ領域に由来する領域であり、ＣＬ領域に由来する領域は、配列番号２に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％又は９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの特定の実施形態では、ＣＬ領域に由来する領域は、配列番号３のアミノ酸配列を含むヒトＣＬラムダ領域に由来する領域であり、ＣＬ領域に由来する領域は、配列番号３と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％又は９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかのより具体的な実施形態では、ヒトＩｇＧ１ ＣＨ１領域のＣＤループのアミノ酸残基ＴＳＧ（ＥＵ番号１６４～１６６）は、Ｆａｂ ＣＲＬ中の分子において多様なアミノ酸配列で置換される。いくつかのより具体的な実施形態では、ヒトＩｇＧ１ ＣＨ１領域のＣＤループのアミノ酸残基Ｓ（ＥＵ番号１６５）は、Ｆａｂ ＣＲＬ中の分子において多様なアミノ酸配列で置換される。いくつかのより具体的な実施形態では、ヒトＩｇＧ１ ＣＨ１領域のＤＥループのアミノ酸残基ＱＳＳ（ＥＵ番号１７５～１７７）は、Ｆａｂ ＣＲＬ中の分子において多様なアミノ酸配列で置換される。いくつかのより具体的な実施形態では、ヒトＣＬカッパ領域のＣＤループのアミノ酸残基ＳＧＮＳ（ＥＵ番号１５６～１５９）は、Ｆａｂ ＣＲＬ中の分子において多様なアミノ酸配列で置換されている。いくつかのより具体的な実施形態では、ヒトＣＬカッパ領域のＤＥループのアミノ酸残基ＳＫＤ（ＥＵ番号１６８～１７０）は、Ｆａｂ ＣＲＬ中の分子において多様なアミノ酸配列で置換されている。いくつかのより具体的な実施形態では、ヒトＣＬカッパ領域のＤＥループのアミノ酸残基Ｋ（ＥＵ番号１６９）が、Ｆａｂ ＣＲＬ中の分子中の多様なアミノ酸配列で置換されている。
本発明のライブラリーにおける分子の集団中の１つのループ領域に導入される多様なアミノ酸配列は、種々の長さであり得るか、又は同じ長さであるが異なる配列を有し得る。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、１つのループ中の多様なアミノ酸配列は、７～１５個のアミノ酸残基を含む。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、１つのループ中の多様なアミノ酸配列は、７個のアミノ酸残基を含む。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、１つのループ中の多様なアミノ酸配列は、８アミノ酸残基を含む。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、１つのループ中の多様なアミノ酸配列は、９アミノ酸残基を含む。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、１つのループ中の多様なアミノ酸配列は１０個のアミノ酸残基を含む。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、１つのループ中の多様なアミノ酸配列は１１個のアミノ酸残基を含む。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、１つのループ中の多様なアミノ酸配列は１２個のアミノ酸残基を含む。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、１つのループ中の多様なアミノ酸配列は１３個のアミノ酸残基を含む。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、１つのループ中の多様なアミノ酸配列は、１４アミノ酸残基を含む。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、１つのループ中の多様なアミノ酸配列は、１５アミノ酸残基を含む。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、１つのループ中の多様なアミノ酸配列は、１５個を超えるアミノ酸残基、例えば１６個、１７個、１８個、１９個、２０個又はそれ以上のアミノ酸残基を含む。
種々の定常領域改変体に加えて、本ライブラリー中の分子は、更なるドメイン（例えば、ＶＨ領域及び／又はＶＬ領域）を更に含み得る。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、ライブラリー中の分子の各々は、ＶＨ領域及びＶＬ領域を更に含む。したがって、上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、結合分子の集団を含むＦａｂ定常領域ライブラリー（ＣＲＬ）が本明細書で提供され、ここで、結合分子の各々は、（ｉ）重鎖可変領域（ＶＨ）と抗体重鎖のＣＨ１領域に由来する領域とを含む第１ポリペプチド、及び、（ｉｉ）軽鎖可変領域（ＶＬ）と抗体軽鎖のＣＬ領域に由来する領域とを含む第２ポリペプチド、を含み、結合分子の集団は、ＣＨ１領域に由来する領域及び／又はＣＬ領域に由来する領域に多様なアミノ酸配列を含む。いくつかの特定の実施形態では、本ライブラリー中の分子は、Ｆａｂ断片である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、本明細書において提供されるライブラリーは、以下の第７節に記載されるように構築され得る。
更に、任意の抗体フォーマットの分子を用いて、本発明のＦａｂ ＣＲＬを構築することができる。上記又は下記の実施形態のいずれかであるいくつかの実施形態では、多様な定常領域（例えば、多様なＣＨ１領域及び／又はＣＬ領域）をインタクトな抗体に導入して、本ライブラリーを作製する。抗体は、免疫グロブリン分子の任意のタイプ（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ及びＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２）又はサブクラスであり得る。特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、ＩｇＧ１抗体、ＩｇＧ２抗体、又はＩｇＧ４抗体（例えば、ＩｇＧ４ ｎｕｌｌｂｏｄｙ及びＩｇＧ４抗体の変異体）などのＩｇＧ抗体である。特定の実施形態では、ＩｇＧ抗体は、ＩｇＧ１抗体である。他の実施形態では、多様な定常領域（例えば、多様なＣＨ１領域及び／又はＣＬ領域）をインタクトな抗体断片に導入して、本発明のライブラリーを作製する。例示的な断片としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、二重特異性Ｆａｂ、単鎖Ｆａｂが挙げられるが、これらに限定されない。抗体は、鳥類及び哺乳動物（例えば、ヒト、サル、マウス、ロバ、ヒツジ、ウサギ、ヤギ、モルモット、ラクダ、ウマ、又はニワトリ）を含む任意の動物起源からのものであってもよく、又はそれに由来してもよい。特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、ヒト又はヒト化モノクローナル抗体である。本明細書中で使用される場合、「ヒト」抗体は、ヒト免疫グロブリンのアミノ酸配列を有する抗体を含み、ヒト免疫グロブリンライブラリーから、又はヒト遺伝子由来の抗体を発現するマウスから単離された抗体を含む。特定の実施形態では、抗体は、完全マウス抗体である。特定の実施形態では、抗体は、マウス－ヒトキメラ抗体である。特定の実施形態では、抗体は、ヒト化抗体である。特定の実施形態では、抗体は、完全ヒト抗体である。他の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、ヒト化抗体（例えば、ヒト定常領域及びフレームワーク領域を含む）である。上記又は下記の実施形態のいずれかであるいくつかの実施形態では、抗体は二重特異性抗体である。上記又は下記の実施形態のいずれかであるいくつかの実施形態では、抗体は三重特異性抗体である。上記又は下記の実施形態のいずれかであるいくつかの実施形態では、本発明は四重特異性抗体である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、抗体は二価抗体である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、抗体は三価抗体である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、抗体は四価抗体である。
更に別の態様では、抗原に結合することができる抗体定常領域変異体を同定する機能を実行するための第１のステップと、抗体定常領域変異体を含む結合分子を構築する第２のステップとを含む、結合分子を生成する方法が本明細書で提供される。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、第１のステップは、本明細書において提供されるＦａｂ ＣＲＬをスクリーニングするステップを含む。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、第１の抗原に結合する第１の結合ドメイン及び第２の抗原に結合する第２の結合ドメインを含む結合分子を同定するための方法であって、参照レベルよりも高い親和性で第２の抗原に結合する結合分子を同定するために本明細書で提供されるＦａｂ ＣＲＬをスクリーニングするステップを含み、第１の結合ドメインが抗体のＶＨ領域及びＶＬ領域を含み、第２の結合ドメインが抗体定常領域変異体を含む、方法が本明細書で提供される。ライブラリーのスクリーニングは、当該技術分野で知られている様々な技術によって達成することができる。例えば、特定の抗原（例えば、抗原のポリペプチド、フラグメント、又はエピトープ）は、吸着プレートのウェルをコーティングするのに使用することができ、吸着プレートへと固定した宿主細胞上で発現させることもでき、細胞選別において使用することができ、ストレプトアビジンでコーティングされたビーズによる捕捉のためにビオチンへとコンジュゲートさせることができ、パニング表示ライブラリーのための他の任意の方法において使用することができる。解離反応速度の遅い（例えば、結合親和性が良好な）抗体の選択は、Ｂａｓｓ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，１９９０，８：３０９－１４及び国際公開第９２／０９６９０号において記載されているように、長時間の洗浄及び一価ファージ表示の使用、並びにＭａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，１９９２，１０：７７９－８３において記載されているように、抗原の低コーティング密度の使用により促進することができる。
更に別の態様では、Ｆａｂ ＣＲＬを使用して本明細書で提供される方法に従って生成される結合分子が本明細書で提供される。
５．５ 抗体の作製方法又はプロセス
更に別の態様では、本明細書において提供される様々な抗体を作製するための方法が本明細書において提供される。いくつかの実施形態では、１つ以上の標的分子に特異的に結合する分子を作製するためのプロセスであって、当該プロセスが、第１の抗原に結合することができる結合ドメインを得る機能を実行するためのステップと、第２の抗原に結合可能な結合ドメインを取得する機能を実行するステップと、第１の抗原及び第２の抗原に結合可能な分子を提供する機能を実行するステップと、を含む、プロセスが本明細書で提供される。
本明細書で提供される抗体の組み換え発現には、抗体又はその抗原結合断片をコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターの構築が必要となる。本明細書で提供される抗体分子、抗体の重鎖若しくは軽鎖、又はその断片（例えば、必ずしもそうではないが、重鎖及び／又は軽鎖可変ドメインを含有する）をコードするポリヌクレオチドが得られたら、抗体分子の生成のためのベクターは、当技術分野で周知の技法を使用する組み換えＤＮＡ技術によって生成することができる。したがって、抗体をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドを発現することによりタンパク質を調製するための方法が、本明細書において記載される。当業者に周知である方法を使用して、抗体コード配列並びに適切な転写及び翻訳制御シグナルを含む発現ベクターを構築することができる。これらの方法としては、例えば、インビトロ組み換えＤＮＡ技術、合成技術、及びインビボ遺伝的組み換えが挙げられる。プロモーターに作動可能に連結された、本明細書で提供される抗体分子若しくはその断片、抗体の重鎖若しくは軽鎖、抗体若しくはその断片の重鎖若しくは軽鎖可変ドメイン、又は重鎖若しくは軽鎖ＣＤＲをコードするヌクレオチド配列を含む複製可能なベクターも提供される。このようなベクターは、抗体分子の定常領域をコードするヌクレオチド配列を含み得（例えば、国際公開第８６／０５８０７号及び国際公開第８９／０１０３６号、並びに米国特許第５，１２２，４６４号を参照）、抗体の可変ドメインは、重鎖全体、軽鎖全体、又は重鎖及び軽鎖両方の全体の発現のために、そのようなベクターにクローニングされ得る。
発現ベクターは、従来の技術により宿主細胞に移入され、次いで、遺伝子導入された細胞は、従来の技術により培養されて、本明細書において提供される抗体を生成する。したがって、異種プロモーターに作動可能に連結された、本明細書で提供される抗体若しくはその断片、又はその重鎖若しくは軽鎖、又はその断片、又は本明細書で提供される単鎖抗体をコードするポリヌクレオチドを含有する宿主細胞も本明細書で提供される。二本鎖抗体を発現させるための特定の実施形態では、下記で詳述される通り、免疫グロブリン分子全体の発現のために、重鎖及び軽鎖の両方をコードするベクターが、宿主細胞内で共発現され得る。
本明細書において提供される抗体分子を発現させるために、様々な宿主発現ベクター系が利用され得る（例えば、米国特許第５，８０７，７１５号を参照）。そのような宿主発現系は、目的のコード配列が生成され、続いて精製され得るビヒクルを表すが、適切なヌクレオチドコード配列で形質転換又は遺伝子導入された場合に、本明細書において提供される抗体分子をインサイチュで発現し得る細胞も表す。これらの宿主発現系は、抗体コード配列を含む組み換えバクテリオファージＤＮＡ発現ベクター、プラスミドＤＮＡ発現ベクター、又はコスミドＤＮＡ発現ベクターにより形質転換した細菌（例えば、大腸菌及び枯草菌（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ））などの微生物、抗体コード配列を含有する組み換え酵母発現ベクターで形質転換された酵母（例えば、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ Ｐｉｃｈｉａ）、コード配列を含む組み換えウイルス発現ベクター（例えば、バキュロウイルス）を感染させた昆虫細胞系、抗体コード配列を含む組み換えウイルス発現ベクター（例えば、カリフラワーモザイクウイルス、ＣａＭＶ、タバコモザイクウイルス、ＴＭＶ）を感染させるか、又は抗体コード配列を含む組み換えプラスミド発現ベクター（例えば、Ｔｉプラスミド）により形質転換した植物細胞系、又は哺乳類細胞のゲノム（例えば、メタロチオネインプロモーター）又は哺乳類ウイルス（例えば、アデノウイルス後期）由来のプロモーターを含む組み換え発現構築物を保有する哺乳類細胞系（例えば、ＣＯＳ、ＣＨＯ、ＢＨＫ、２９３、ＮＳ０、及び３Ｔ３細胞）プロモーター、ワクシニアウイルス７．５Ｋプロモーター）が含まれるが、これらに限定されるものではない。特に組み換え抗体分子全体の発現には、大腸菌などの細菌細胞、又は真核細胞を、組み換え抗体分子の発現に用いることができる。例えば、チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）などの哺乳動物細胞は、ヒトサイトメガロウイルス由来の主要中間初期遺伝子プロモーターエレメントなどのベクターと併用することで、抗体の効果的な発現系となる（Ｆｏｅｃｋｉｎｇ ｅｔ ａｌ．，１９８６，Ｇｅｎｅ ４５：１０１、及びＣｏｃｋｅｔｔ ｅｔ ａｌ．，１９９０，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ８：２）。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、本明細書において提供される抗体はＣＨＯ細胞において生成される。特定の実施形態では、特定の抗原に免疫特異的に結合する本明細書において提供される抗体をコードするヌクレオチド配列の発現は、構成的プロモーター、誘導性プロモーター、又は組織特異的プロモーターによって調節される。
細菌系では、発現させる抗体分子の意図する用途に応じて、多くの発現ベクターが有利に選択され得る。例えば、そのような抗体を大量に生成する場合、抗体分子の医薬組成物を生成するために、容易に精製される高レベルの融合タンパク質産物の発現を指示するベクターが望ましい場合がある。そのようなベクターとしては、融合タンパク質が生成されるように、抗体コード配列がｌａｃ Ｚコード領域と、インフレームで、個別に、ベクターへとライゲーションされ得る大腸菌発現ベクターｐＵＲ２７８（Ｒｕｔｈｅｒ，ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ，１９８３，１２：１７９１）、ｐＩＮベクター（Ｉｎｏｕｙｅ ＆ Ｉｎｏｕｙｅ，１９８５，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１３：３１０１－３１０９、Ｖａｎ Ｈｅｅｋｅ ＆ Ｓｃｈｕｓｔｅｒ，１９８９，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２４：５５０３－５５０９を参照）などを含むが、これに限定されるものではない。ｐＧＥＸベクターは、グルタチオン５－トランスフェラーゼ（glutathione 5-transferase、ＧＳＴ）との融合タンパク質として外来ポリペプチドを発現させるためにも使用され得る。概ね、このような融合タンパク質は可溶性であり、マトリックスグルタチオンアガロースビーズに吸着及び結合した後、遊離グルタチオンの存在下で溶出することにより、溶解した細胞から容易に精製することができる。ｐＧＥＸベクターは、クローン化された標的遺伝子産物がＧＳＴ部分から放出され得るように、トロンビン又は第Ｘａ因子プロテアーゼ切断部位を含むように設計されている。
昆虫系では、外来遺伝子を発現させるためのベクターとして、Ａｕｔｏｇｒａｐｈａ ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ核多角体病ウイルス（ＡｃＮＰＶ）が用いられる。ウイルスは、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ細胞内で増殖する。抗体コード配列は、ウイルスの非必須領域（例えば、ポリヘドリン遺伝子）に個別にクローニングし、ＡｃＮＰＶプロモーター（例えば、ポリヘドリンプロモーター）の制御下に置かれ得る。
哺乳動物の宿主細胞では、多くのウイルスベースの発現系が利用され得る。アデノウイルスを発現ベクターとして使用する場合、目的の抗体コード配列が、アデノウイルス転写／翻訳制御複合体、例えば、後期プロモーター及び三連リーダー配列とライゲーションされ得る。次いで、インビトロ又はインビボにおける組み換えにより、このキメラ遺伝子は、アデノウイルスゲノム内に挿入され得る。ウイルスゲノムの非必須領域（例えば、領域Ｅｌ又はＥ３）に挿入することで、生存能力があり、感染した宿主において抗体分子を発現可能な組み換えウイルスが得られる（例えば、Ｌｏｇａｎ ＆ Ｓｈｅｎｋ，１９８４，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８ １：３５５－３５９を参照）。また、挿入された抗体コード配列を効率的に翻訳するためには、特定の開始シグナルが必要となる場合がある。これらのシグナルには、ＡＴＧ開始コドンと隣接する配列が含まれる。更に、挿入全体の翻訳を確実にするためには、開始コドンが所望のコード配列のリーディングフレームと一致している必要がある。これらの外因性の翻訳制御シグナル及び開始コドンは、天然及び合成の両方の様々な起源のものであり得る。発現の効率は、適切な転写エンハンサーエレメント、転写ターミネーターなどを組み入れることにより、増強され得る（例えば、Ｂｉｔｔｎｅｒ，ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌ．，１９８７，１５３：５１－５４４を参照）。
更に、挿入された配列の発現を調節するか、又は所望の特定の方法で遺伝子産物を改変及び処理する宿主細胞株を選択することもできる。タンパク質産物のそのような改変（例えば、グリコシル化）及び処理（例えば、切断）は、タンパク質の機能にとって重要であり得る。異なる宿主細胞は、タンパク質及び遺伝子産物の翻訳後の処理及び改変のための特徴的かつ特異的なメカニズムを有する。適切な細胞株又は宿主系を選択することで、発現した外来タンパク質を正しく改変及び処理することができる。この目的で、一次転写物の適切な処理、グリコシル化、及び遺伝子産物のリン酸化のための細胞機構を有する真核性宿主細胞が、使用され得る。そのような哺乳動物宿主細胞としては、ＣＨＯ、ＶＥＲＹ、ＢＨＫ、Ｈｅｌａ、ＣＯＳ、ＭＤＣＫ、２９３、３Ｔ３、Ｗ１３８、ＢＴ４８３、Ｈｓ５７８Ｔ、ＨＴＢ２、ＢＴ２Ｏ及びＴ４７Ｄ、ＮＳ０（内因性では免疫グロブリン鎖を全く生成しないマウス骨髄腫細胞株）、ＣＲＬ７Ｏ３Ｏ及びＨｓＳ７８Ｂｓｔ細胞が挙げられるが、これらに限定されるものではない。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、本明細書において提供される完全ヒトモノクローナル抗体は、ＣＨＯ細胞などの哺乳動物細胞において生成される。
組み換えタンパク質を長期間、高収率で生成するためには、安定した発現を利用することができる。例えば、抗体分子を安定的に発現する細胞株が操作され得る。ウイルスの複製起点を含む発現ベクターを使用するのではなく、適切な発現制御エレメント（例えば、プロモーター、エンハンサー、配列、転写ターミネーター、ポリアデニル化部位など）及び選択可能マーカーによって制御されるＤＮＡで、宿主細胞を形質転換することができる。外来ＤＮＡの導入後に、操作された細胞は、濃縮培地中で１～２日間増殖させられ得、次いで、選択培地に切り替えられる。組み換えプラスミドの選択マーカーは、選択に耐性を付与し、細胞が、染色体中にプラスミドを安定に組み込み、増殖して増殖巣を形成することを可能にし、次にこの増殖巣は、クローン化して細胞株に増殖することができる。この方法は、抗体分子を発現する細胞株を操作するために有利に使用され得る。そのような操作された細胞株は、抗体分子と直接的又は間接的に相互作用する組成物のスクリーニング及び評価に特に有用であり得る。
多数の選択システムを使用することができ、これには、限定されないが、単純ヘルペスウイルスのチミジンキナーゼ（Ｗｉｇｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９７７，Ｃｅｌｌ １１：２２３）、ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（Ｓｚｙｂａｌｓｋａ ＆ Ｓｚｙｂａｌｓｋｉ，１９９２，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ４８：２０２）、及びアデニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（Ｌｏｗｙ ｅｔ ａｌ．，１９８０，Ｃｅｌｌ ２２：８－１７）が含まれ、遺伝子は、それぞれｔｋ－、ｈｇｐｒｔ－、又はａｐｒｔ－細胞で使用することができる。また、代謝拮抗剤耐性も、以下の遺伝子の選択基準として使用され得る：メトトレキサートに対する耐性を付与するｄｈｆｒ（Ｗｉｇｌｅｒ，ｅｔ ａｌ．１９８０，Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：３５７、Ｏ’Ｈａｒｅ ｅｔ ａｌ．１９８１，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７８：１５２７）、ミコフェノール酸に対する耐性を付与するｇｐｔ（Ｍｕｌｌｉｇａｎ ＆ Ｂｅｒｇ，１９８１，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７８：２０７２）、アミノグリコシドＧ－４１８に対する耐性を付与するｎｅｏ（Ｗｕ ａｎｄ Ｗｕ，１９９１，Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ ３：８７－９５、Ｔｏｌｓｔｏｓｈｅｖ，１９９３，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．３２：５７３－５９６、Ｍｕｌｌｉｇａｎ，１９９３，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６０：９２６－９３２、及びＭｏｒｇａｎ ａｎｄ Ａｎｄｅｒｓｏｎ，１９９３，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．６２：１９１－２１７、１９９３，ＴＩＢ ＴＥＣＨ １１（５）：ｌ５５－２ １５）、及びハイグロマイシンに対する耐性を付与するｈｙｇｒｏ（Ｓａｎｔｅｒｒｅ，ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ，１９８４，３０：１４７）。組み換えＤＮＡ技術の分野で当該技術分野で一般に知られている方法を、規定通りに適用して、所望の組み換えクローンを選択することができ、そのような方法については、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる、例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ，ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．），Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，ＮＹ（１９９３）、Ｋｒｉｅｇｌｅｒ，Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ ａｎｄ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ（１９９０）、及びＣｈａｐｔｅｒｓ １２ ａｎｄ １３，Ｄｒａｃｏｐｏｌｉ，ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．），Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，ＮＹ（１９９４）、Ｃｏｌｂｅｒｒｅ－Ｇａｒａｐｉｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９８１，１５０：１に記載されている。
抗体分子の発現レベルは、ベクターの増幅により増大させることができる（総説については、Ｂｅｂｂｉｎｇｔｏｎ ａｎｄ Ｈｅｎｔｓｃｈｅｌ，ＤＮＡクローニングにおける哺乳類細胞におけるクローン化遺伝子の発現のための遺伝子増幅に基づくベクターの使用，Ｖｏｌ．３（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８７）を参照）。抗体を発現するベクター系のマーカーが増幅可能な場合、宿主細胞の培養中に存在する阻害剤のレベルが上がると、マーカー遺伝子のコピー数が増加する。増幅された領域は抗体遺伝子と関連しているため、抗体の生成も増加する（Ｃｒｏｕｓｅ ｅｔ ａｌ．，１９８３，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．３：２５７）。
宿主細胞は、本明細書で提供される２つ以上の発現ベクターで共遺伝子導入され得る。２つのベクターは、例えば、重鎖ポリペプチド及び軽鎖ポリペプチドの同等な発現を可能とする、同一な選択可能マーカーを含み得る。代替的に、本抗体の異なる成分ポリペプチド、例えば、重鎖及び軽鎖ポリペプチドの両方をコードし、発現することができる単一のベクターを使用してもよい。コード配列は、ｃＤＮＡ又はゲノムＤＮＡを含み得る。
本明細書において提供される抗体分子が、組み換え発現により生成されると、これは、免疫グロブリン分子を精製するための当該技術分野で既知である任意の方法、例えば、クロマトグラフィ（例えば、イオン交換クロマトグラフィ、親和性クロマトグラフィ、特に、プロテインＡクロマトグラフィの後における特異的抗原についての親和性クロマトグラフィ、及びサイズ除外カラムクロマトグラフィ）、遠心分離、示差的可溶性によって、又はタンパク質を精製するための他の任意の標準的な技法によって、精製され得る。更に、本明細書において提供される抗体は、精製を促進するために、本明細書に記載されているか、又は他の技術分野で知られている異種ポリペプチド配列に融合させることができる。
５．６ 医薬組成物
一態様では、本開示は、本開示の少なくとも１つの抗体又はその抗原結合断片を含む医薬組成物を更に提供する。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかのいくつかの実施形態では、医薬組成物は、治療有効量の本明細書において提供される抗体又はその抗原結合断片と、医薬的に許容される賦形剤とを含む。
抗体又はその抗原結合断片を含む医薬組成物は、保存のために、所望の純度を有するタンパク質を、任意の生理学的に許容される賦形剤（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ，Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（１８ｔｈ ｅｄ．１９８０）参照）と、水溶液の形態又は凍結乾燥又は他の乾燥形態で混合することにより、調製される。
本開示の抗体又はその抗原結合断片は、標的細胞／組織への送達に任意の好適な形態で、例えば、マイクロカプセル又はマクロエマルジョンとして（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ（上記）、Ｐａｒｋ，ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ，２００５，１０：１４６－６１、Ｐａｔｔｅｎ ｅｔ ａｌ．，２００７，Ｃｕｒｒ．Ｄｒｕｇ．Ｄｅｌｉｖ．４：１４１－５１）、徐放性製剤として（（Ｐｕｔｎｅｙ ａｎｄ Ｂｕｒｋｅ，１９９８，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１６：１５３－５７）、又はリポソームで（Ｍａｃｌｅａｎ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｏｎｃｏｌ．１１：３２５－３２、Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ，２００６，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．８：３９－４５）製剤化することができる。
また、本明細書において提供される抗体又はその抗原結合断片は、それぞれ、例えばコアセルベーション法によって、又は界面重合によって調製されたマイクロカプセル、例えばヒドロキシメチルセルロース又はゼラチンマイクロカプセル及びポリ－（メチルメタクリレート）マイクロカプセル内に、コロイド状薬剤送達系（例えば、リポソーム、アルブミンマイクロスフェア、マイクロエマルジョン、ナノ粒子、及びナノカプセルなど）中、又はマクロエマルジョン中に封入することができる。そのような技術は、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ（上記）に開示されている。
様々な組成物及び送達システムが知られており、本明細書に記載の抗体又はその抗原結合断片と共に使用することができ、リポソームへのカプセル化、微粒子、マイクロカプセル、抗体又はその抗原結合断片を発現できる組み換え細胞、受容体媒介エンドサイトーシス（例えば、Ｗｕａｎｄ Ｗｕ、１９８７、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２：４４２９－３２を参照）、核酸の構築レトロウイルス又は他のベクターの一部としてなどが含まれるが、これに限定されない。別の実施形態では、組成物は、制御放出システム又は徐放システムとして提供され得る。一実施形態では、制御放出又は徐放を達成するために、ポンプが使用され得る（例えば、Ｌａｎｇｅｒ（上記）、Ｓｅｆｔｏｎ，１９８７，Ｃｒｉｔ．Ｒｅｆ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｅｎｇ．１４：２０１－４０、Ｂｕｃｈｗａｌｄ ｅｔ ａｌ．，１９８０，Ｓｕｒｇｅｒｙ ８８：５０７－１６、及びＳａｕｄｅｋ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３２１：５６９－７４）。別の実施形態では、ポリマー材料を使用して、予防薬若しくは治療薬（例えば、本明細書において記載される抗体又はその抗原結合断片）、又は本明細書において提供される組成物の制御放出若しくは徐放を達成することができる（例えば、Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ（Ｌａｎｇｅｒ ａｎｄ Ｗｉｓｅ，ｅｄｓ．，１９７４）、Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｄｒｕｇ Ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ，Ｄｒｕｇ Ｐｒｏｄｕｃｔ Ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ（Ｓｍｏｌｅｎ ａｎｄ Ｂａｌｌ，ｅｄｓ．，１９８４）、Ｒａｎｇｅｒ ａｎｄ Ｐｅｐｐａｓ，１９８３，Ｊ．Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｓｃｉ．Ｒｅｖ．Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．２３：６１－１２６、Ｌｅｖｙ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２８：１９０－９２（１９８５）、Ｄｕｒｉｎｇ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．２５：３５１－５６、Ｈｏｗａｒｄ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．７１：１０５－１２、米国特許第５，６７９，３７７号、同第５，９１６，５９７号、同第５，９１２，０１５号、米国特許第５，９８９，４６３号、及び米国特許第５，１２８，３２６号、国際公開第９９／１５１５４号及び同第９９／２０２５３号を参照）。徐放性製剤に用いられるポリマーの例としては、ポリ（２－ヒドロキシエチルメタクリレート）、ポリ（メチルメタクリレート）、ポリ（アクリル酸）、ポリ（エチレン－ｃｏ－ビニルアセテート）、ポリ（メタクリル酸）、ポリグリコリド（ＰＬＧ）、ポリ無水物、ポリ（Ｎ－ビニルピロリドン）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリアクリルアミド、ポリ（エチレングリコール）、ポリラクチド（ＰＬＡ）、ポリ（ラクチド－ｃｏ－グリコリド）（ＰＬＧＡ）、及びポリオルトエステルが挙げられるが、これらに限定されない。一実施形態では、徐放性製剤中で使用されるポリマーは、不活性で、浸出性不純物を含まず、保存時に安定で、無菌で、生分解性である。
更に別の実施形態では、制御放出システム又は徐放システムを特定の標的組織、例えば、鼻腔又は肺に近接して配置することができ、その結果、全身用量のほんの一部しか必要としない（例えば、Ｇｏｏｄｓｏｎ，Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ Ｖｏｌ．２，１１５－３８（１９８４）を参照）。制御放出系については、例えば、Ｌａｎｇｅｒ，１９９０，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７－３３により議論されている。当業者に公知の任意の技術を使用して、本明細書に記載の１つ以上の抗体又はその抗原結合断片を含む徐放製剤を製造することができる（例えば、米国特許第４，５２６，９３８号、国際公開第９１／０５５４８号及び同第９６／２０６９８号、Ｎｉｎｇ，ｅｔ ａｌ．，Ｒａｄｉｏｔｈｅｒａｐｙ＆Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，３９：１７９－８９（１９９６）、Ｓｏｎｇ ｅｔ ａｌ．，１９９５，ＰＤＡ Ｊ．ｏｆ Ｐｈａｒｍａ．Ｓｃｉ．＆ Ｔｅｃｈ．５０：３７２－９７、Ｃｌｅｅｋ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｐｒｏ．Ｉｎｔ’ｌ．Ｓｙｍｐ．Ｃｏｎｔｒｏｌ．Ｒｅｌ．Ｂｉｏａｃｔ．Ｍａｔｅｒ．２４：８５３－５４、並びにＶｉｌ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｐｒｏｃ．Ｉｎｔ’ｌ．Ｓｙｍｐ．Ｃｏｎｔｒｏｌ Ｒｅｌ．Ｂｉｏａｃｔ．Ｍａｔｅｒ．２４：７５９－６０を参照）。
５．７ 使用方法
更に別の態様では、特異的抗原を発現する細胞を濃縮、単離、分離、精製、選別、選択、捕捉、検出又は枯渇させる方法であって、特異的抗原を発現する細胞を含む試料を提供すること、試料を多重特異性抗体と接触させること、並びに多重特異性抗体に結合する特異的抗原を発現する細胞を濃縮、単離、分離、精製、選別、選択、捕捉、検出又は枯渇させることであって、多重特異性抗体が、第１の抗原に結合することができる第１の結合ドメイン、及び第２の抗原に結合することができる第２の結合ドメインを含む、こと、を含む、方法が本明細書で提供される。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、試料は血液試料である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、試料は組織試料である。
更に別のでは、本明細書で提供される上記又は下記の実施形態のいずれか１つに記載の抗体実施形態を対象に投与することを含む、対象における癌を治療する方法が本明細書で提供される。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、癌は固形腫瘍癌である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、癌は血液癌である。
別の態様では、有効量の本明細書で提供される抗体又はその抗原結合断片を対象に投与することを含む、対象における疾患又は障害を治療する方法が、本明細書で提供される。
また、疾患又は障害を治療する方法であって、対象が、１つ以上の治療薬を、本明細書で提供される抗体と併用して投与される、方法が、本明細書で提供される。
別の態様では、対象における疾患又は障害を治療するための薬剤の製造における、本明細書で提供される抗体又はその抗原結合断片の使用が、本明細書で提供される。
別の態様では、対象における疾患又は障害を治療するための薬剤の製造における、本明細書で提供される医薬組成物の使用が、本明細書で提供される。
特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体又はその抗原結合断片を含む、疾患又は病態の予防及び／又は治療において使用するための組成物が、本明細書で提供される。一実施形態では、疾患又は病態の予防において使用するための組成物であって、当該組成物が本明細書で提供される抗体又はその抗原結合断片を含む、組成物が、本明細書で提供される。一実施形態では、疾患又は病態の治療において使用するための組成物であって、当該組成物が本明細書で提供される抗体又はその抗原結合断片を含む、組成物が、本明細書で提供される。特定の実施形態では、対象は、その治療を必要としている対象である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、対象は疾患又は病態を有する。他の実施形態では、対象は、疾患又は病態を有するリスクにある。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、投与は、疾患又は病態の予防、管理、治療又は改善をもたらす。
一実施形態では、疾患又は病態の症状の予防及び／又は治療において使用するための組成物であって、当該組成物が本明細書において提供される抗体又はその抗原結合断片を含む、組成物が、本明細書で提供される。一実施形態では、疾患又は病態の症状の予防において使用するための組成物であって、当該組成物が本明細書で提供される抗体又はその抗原結合断片を含む、組成物が、本明細書で提供される。一実施形態では、疾患又は病態の症状の治療において使用するための組成物であって、当該組成物が本明細書で提供される抗体又はその抗原結合断片を含む、組成物が、本明細書で提供される。特定の実施形態では、対象は、その治療を必要としている対象である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、対象は疾患又は病態を有する。他の実施形態では、対象は、疾患又は病態を有するリスクにある。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、投与は、疾患又は病態の症状の予防又は処置をもたらす。
別の実施形態では、有効量の本明細書で提供される抗体又はその抗原結合断片を投与することを含む、対象における疾患又は病態を予防及び／又は治療する方法が、本明細書で提供される。一実施形態では、有効量の本明細書で提供される抗体又はその抗原結合断片を投与することを含む、対象における疾患又は病態を予防する方法が、本明細書で提供される。一実施形態では、有効量の本明細書で提供される抗体又はその抗原結合断片を投与することを含む、対象における疾患又は病態を治療する方法が、本明細書で提供される。特定の実施形態では、対象は、その治療を必要としている対象である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、対象は疾患又は病態を有する。他の実施形態では、対象は、疾患又は病態を有するリスクにある。いくつかの実施形態では、投与は、疾患又は病態の予防又は治療をもたらす。
別の実施形態では、有効量の本明細書で提供される抗体又はその抗原結合断片を投与することを含む、対象における疾患又は病態の症状を予防及び／又は治療する方法が、本明細書で提供される。一実施形態では、有効量の本明細書で提供される抗体又はその抗原結合断片を投与することを含む、対象における疾患又は病態の症状を予防する方法が、本明細書で提供される。一実施形態では、有効量の本明細書で提供される抗体又はその抗原結合断片を投与することを含む、対象における疾患又は病態の症状を治療する方法が、本明細書で提供される。特定の実施形態では、対象は、その治療を必要としている対象である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、対象は疾患又は病態を有する。他の実施形態では、対象は、疾患又は病態を有するリスクにある。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、投与は、疾患又は病態の症状の予防又は処置をもたらす。
また、有効量の本明細書において提供される抗体又はその抗原結合断片又は本明細書において提供される抗体又はその抗原結合断片を含む医薬組成物を対象に投与することによって、疾患又は病態を予防及び／又は治療する方法も、本明細書において提供される。いくつかの実施形態では、疾患又は病態を予防及び／又は治療するための、本明細書で提供される抗体又は抗原結合性断片の使用も本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、疾患又は病態の予防及び／又は治療に使用するための本明細書で提供される抗体又は抗原結合断片も本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、疾患又は病態を予防及び／又は治療するための薬剤の製造のための、本明細書で提供される抗体又は抗原結合性断片の使用も本明細書で提供される。一態様では、抗体又はその抗原結合断片は、実質的に精製される（すなわち、その効果を制限するか、又は望ましくない副作用を生じさせる物質を実質的に含まない）。治療を施される対象は、非霊長類又は霊長類（例えば、ヒト）などの哺乳動物であり得る。一実施形態では、対象は、ヒトである。別の実施形態では、対象は、疾患又は病態を有するヒトである。
上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、本結合分子は、固形腫瘍癌を治療するために使用される。他の実施形態では、本結合分子は、血液癌の治療に使用される。他の実施形態では、疾患又は障害は、自己免疫疾患又は炎症性疾患である。他の実施形態では、疾患又は障害は、免疫疾患又は障害である。
上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、疾患又は障害は、異常な細胞増殖及び／又は調節不全のアポトーシスの疾患である。このような疾患の例としては、癌、中皮腫、膀胱癌、膵臓癌、皮膚癌、頭部又は頚部の癌、皮膚又は眼球内メラノーマ、卵巣癌、乳癌、子宮癌、ファロピウス管の癌、子宮内膜の癌、頸部の癌、膣の癌、外陰の癌、骨癌、結腸癌、直腸癌、肛門部癌、胃癌、消化管（胃、結腸直腸、及び／又は十二指腸）癌、慢性リンパ性白血病、急性リンパ性白血病、食道癌、小腸癌、内分泌系癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、副腎癌、軟部組織の癌、尿道の癌、陰茎の癌、睾丸癌、肝細胞（肝臓及び／又は胆管）癌、一次又は二次中枢神経系腫瘍、一次又は二次脳腫瘍、ホジキン病、慢性又は急性の白血病、慢性骨髄性白血病、リンパ性リンパ腫、リンパ芽球性白血病、濾胞性リンパ腫、Ｔ細胞又はＢ細胞起源のリンパ性悪性腫瘍、メラノーマ、多発性ミエローマ、口腔癌、非小細胞肺癌、前立腺癌、小細胞肺癌、腎及び／又は輸尿管の癌、腎細胞癌、腎盂の癌、中枢神経系の新生物、一次中枢神経系リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、脊髄軸腫瘍、脳幹グリオーマ、下垂体腺腫、副腎皮質癌、胆嚢癌、脾臓の癌、胆管癌、線維肉腫、神経芽細胞種、網膜芽腫又はこれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。
上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、疾患又は障害は、膀胱癌、脳癌、乳癌、骨髄癌、子宮頸癌、慢性リンパ性白血病、急性リンパ性白血病、結腸直腸癌、食道癌、肝細胞癌、リンパ芽球性白血病、濾胞性リンパ腫、Ｔ細胞起源又はＢ細胞起源のリンパ性悪性腫瘍、黒色腫、骨髄性白血病、骨髄腫、口腔癌、卵巣癌、非小細胞肺癌、前立腺癌、小細胞肺癌、及び脾臓癌からなる群より選択される。
上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、疾患又は障害は、白血病、リンパ腫、又は骨髄腫などの血液癌である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、癌は、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、皮膚Ｂ細胞リンパ腫、活性化Ｂ細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、濾胞中心リンパ腫、形質転換リンパ腫、中間分化のリンパ球性リンパ腫、中間リンパ球性リンパ腫（ＩＬＬ）、びまん性低分化リンパ球性リンパ腫（ＰＤＬ）、中心細胞リンパ腫、びまん性小切断細胞リンパ腫（ＤＳＣＣＬ）、末梢Ｔ細胞性リンパ腫（ＰＴＣＬ）、皮膚Ｔ細胞性リンパ腫、マントルゾーンリンパ腫、低悪性度濾胞性リンパ腫、多発性骨髄腫（ＭＭ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、急性Ｔ細胞性白血病、急性骨髄球性白血病（ＡＭＬ）、急性前骨髄球性白血病、急性骨髄芽球性白血病、急性巨核芽球性白血病、前駆Ｂ急性リンパ芽球性白血病、前駆Ｔ急性リンパ芽球性白血病、バーキット白血病（バーキットリンパ腫）、急性二表現型白血病、慢性骨髄性リンパ腫、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、及び慢性単球性白血病からなる群より選択される。特定の実施形態では、疾患又は障害は骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）である。別の特定の実施形態では、疾患又は障害は急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）である。別の特定の実施形態では、疾患又は障害は慢性リンパ球性白血病である。更に別の特定の実施形態では、疾患又は障害は多発性骨髄腫（ＭＭ）である。
他の実施形態では、疾患又は障害は固形腫瘍癌である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、充実性腫瘍癌は、癌、腺癌、副腎皮質腫瘍、大腸腺癌、結腸直腸腺癌、結腸直腸癌、腺管細胞癌、肺癌、甲状腺癌、鼻咽頭癌、メラノーマ、非メラノーマ皮膚癌、肝臓癌及び肺癌からなる群より選択される。
上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、癌は副腎癌である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、癌は肛門癌である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、癌は虫垂癌である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、癌は胆管癌である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、癌は膀胱癌である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、癌は骨癌である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、癌は脳癌である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、癌は乳癌である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、癌は子宮頸癌である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、癌は結腸直腸癌である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、癌は食道癌である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、癌は胆のう癌である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、癌は妊娠性絨毛膜癌である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、癌は頭頸部癌である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、癌はホジキンリンパ腫である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、癌は腸癌である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、癌は腎臓癌である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、癌は白血病である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、癌は肝臓癌である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、癌は肺癌である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、癌は黒色腫である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、癌は中皮腫である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、癌は多発性骨髄腫（ＭＭ）である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、癌は神経内分泌腫瘍である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、癌は非ホジキンリンパ腫である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、癌は口腔癌である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、癌は卵巣癌である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、癌は膵臓癌である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、癌は前立腺癌である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、癌は洞癌である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、癌は皮膚癌である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、癌は軟部組織肉腫脊髄癌である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、癌は胃癌である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、癌は精巣癌である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、癌は咽喉癌である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、癌は甲状腺癌である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、癌は子宮癌、子宮内膜癌である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、癌は腟癌である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、癌は外陰癌である。
上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、副腎癌は、副腎皮質腫瘍（ＡＣＣ）、副腎皮質癌、褐色細胞腫、又は神経芽細胞種である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、肛門癌は、扁平上皮癌、総排出性癌、腺癌、基底細胞癌、又はメラノーマである。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかのいくつかの実施形態では、虫垂癌は、神経内分泌腫瘍（ＮＥＴ）、粘液性腺癌腫、杯細胞カルチノイド、腸型腺癌腫、又は印環細胞腺癌腫である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかのいくつかの実施形態では、胆管癌は、肝外胆管癌、腺癌腫、肝門部胆管癌、肝門部領域胆管癌、遠位胆管癌、又は肝内胆管癌である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかのいくつかの実施形態では、膀胱癌は、移行細胞癌腫（ＴＣＣ）、乳頭状癌腫、扁平癌腫、扁平上皮細胞癌腫、腺癌腫、小細胞癌腫、又は肉腫である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかのいくつかの実施形態では、原発性骨癌、肉腫、骨肉腫、軟骨肉腫、肉腫、線維肉腫、悪性線維性組織球腫、骨の巨細胞腫瘍、脊索腫、又は転移性骨癌である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかのいくつかの実施形態では、脳癌は、星状細胞腫、脳幹神経膠腫、神経膠芽腫、髄膜腫、上衣腫、乏突起膠腫、混合神経膠腫、下垂体癌、下垂体腺腫、頭蓋咽頭腫、胚細胞腫瘍、松果体部腫瘍、髄芽腫、又は原発性ＣＮＳリンパ腫である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかのいくつかの実施形態では、乳癌は、乳腺癌腫、侵襲性乳癌、非侵襲性乳癌、乳肉腫、化生性癌腫、腺嚢癌腫、葉状腫瘍、血管肉腫、ＨＥＲ２陽性乳癌、トリプルネガティブ乳癌、又は炎症性乳癌である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、子宮頸癌は扁平上皮癌又は腺癌である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかのいくつかの実施形態では、結腸直腸癌は、結腸直腸腺癌腫、原発性結腸直腸リンパ腫、消化管間質腫瘍、平滑筋肉腫、カルチノイド腫瘍、粘液性腺癌腫、印環細胞腺癌腫、消化管カルチノイド腫瘍、又は黒色腫である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、食道癌は腺癌又は扁平上皮癌である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかのいくつかの実施形態では、胆嚢癌は、腺癌腫、乳頭状腺癌腫、腺扁平上皮癌腫、扁平上皮細胞癌腫、小細胞癌腫、又は肉腫である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかのいくつかの実施形態では、妊娠性絨毛性疾患（ＧＴＤ）は、胞状奇胎、妊娠性絨毛性新生物（ＧＴＮ）、絨毛癌腫、胎盤部トロホブラスト腫瘍（ＰＳＴＴ）、又は類上皮性トロホブラスト腫瘍（ＥＴＴ）である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかのいくつかの実施形態では、頭頸部癌は、喉頭癌、鼻咽頭癌、下咽頭癌、鼻腔癌、副鼻腔癌、唾液腺癌、口腔癌、中咽頭癌、又は扁桃癌である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかのいくつかの実施形態では、ホジキンリンパ腫は、古典的ホジキンリンパ腫、結節硬化型、混合細胞型、リンパ球豊富型、リンパ球減少型、又は結節性リンパ球優位型ホジキンリンパ腫（ＮＬＰＨＬ）である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかのいくつかの実施形態では、腸癌は、小腸癌（small intestine cancer）、小腸癌（small bowel cancer）、腺癌腫、肉腫、消化管間質腫瘍、カルチノイド腫瘍、又はリンパ腫である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかのいくつかの実施形態では、腎臓癌は、腎細胞癌（ＲＣＣ）、明細胞ＲＣＣ、乳頭状ＲＣＣ、嫌色素性ＲＣＣ、集合管ＲＣＣ、未分類ＲＣＣ、移行細胞癌、尿路上皮癌、腎盂癌腫、又は腎肉腫である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかのいくつかの実施形態では、白血病は、急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、ヘアリーセル白血病（ＨＣＬ）、又は骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）である。特定の実施形態では、白血病は、ＡＭＬである。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、肝臓癌は、肝細胞癌（ＨＣＣ）、線維層板型ＨＣＣ、胆管癌、血管肉腫、又は肝転移である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかのいくつかの実施形態では、肺癌は、小細胞肺癌、小細胞癌腫、複合型小細胞癌腫、非小細胞肺癌、肺腺癌腫、扁平上皮細胞肺癌、大細胞未分化型癌腫、肺結節、転移性肺癌、腺扁平上皮癌腫、大細胞神経内分泌癌腫、唾液腺型肺癌腫、肺カルチノイド、中皮腫、肺の肉腫様癌腫、又は悪性顆粒細胞肺腫瘍である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかのいくつかの実施形態では、黒色腫は、表在拡大型黒色腫、結節性黒色腫、末端黒子型黒色腫、悪性黒子由来黒色腫、無色素性黒色腫、線維形成性黒色腫、眼黒色腫、又は転移性黒色腫である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、中皮腫は、胸膜中皮腫、腹膜中皮腫、心膜中皮腫、又は精巣中皮腫である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、多発性骨髄腫は、活動性骨髄腫又はくすぶり型骨髄腫である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、神経内分泌腫瘍は、胃腸神経内分泌腫瘍、膵臓神経内分泌腫瘍、又は肺神経内分泌腫瘍である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかのいくつかの実施形態では、非ホジキンリンパ腫は、未分化大細胞リンパ腫、リンパ芽球性リンパ腫、末梢性Ｔ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫、辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、ＭＡＬＴリンパ腫、小細胞リンパ球性リンパ腫、バーキットリンパ腫、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、前駆Ｔリンパ芽球性白血病／リンパ腫、急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）、成人Ｔ細胞リンパ腫／白血病（ＡＴＬＬ）、ヘアリーセル白血病、Ｂ細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、原発性縦隔Ｂ細胞リンパ腫、原発性中枢神経系（ＣＮＳ）リンパ腫、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、辺縁帯リンパ腫、粘膜関連リンパ組織（ＭＡＬＴ）リンパ腫、結節辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、脾臓辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫、Ｔ細胞非ホジキンリンパ腫、ナチュラルキラー細胞リンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、アリベール－バザン症候群、セザリー症候群、原発性皮膚未分化大細胞リンパ腫、末梢性Ｔ細胞リンパ腫、血管免疫芽球性Ｔ細胞リンパ腫（ＡＩＴＬ）、未分化大細胞リンパ腫（ＡＬＣＬ）、全身性ＡＬＣＬ、腸症型Ｔ細胞リンパ腫（ＥＡＴＬ）、又は肝脾ガンマ／デルタＴ細胞リンパ腫である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかのいくつかの実施形態では、口腔癌は、扁平上皮細胞癌腫、疣状癌腫、小唾液腺癌腫、リンパ腫、良性口腔腫瘍、好酸球性肉芽腫、線維腫、顆粒細胞腫瘍、角化棘細胞腫、平滑筋腫、骨軟骨腫、脂肪腫、シュワン細胞腫、神経線維腫、乳頭腫、尖圭コンジローマ、疣贅型黄色腫、化膿性肉芽腫、横紋筋腫、歯原性腫瘍、白板症、紅板症、扁平上皮細胞口唇癌、基底細胞口唇癌、口癌、歯肉癌、又は舌癌である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかのいくつかの実施形態では、卵巣癌は、卵巣上皮癌、粘液性上皮卵巣癌、子宮内膜上皮卵巣癌、明細胞上皮卵巣癌、未分化型上皮卵巣癌、卵巣低悪性度腫瘍、原発性腹膜癌、卵管癌、胚細胞腫瘍、奇形腫、未分化卵巣胚細胞癌、内胚葉洞腫瘍、性索間質性腫瘍、性索性腺間質腫瘍、卵巣間質腫瘍、顆粒膜細胞腫瘍、顆粒膜卵胞膜腫瘍、セルトリ－ライディッヒ腫瘍、卵巣肉腫、卵巣癌肉腫、卵巣腺肉腫、卵巣平滑筋肉腫、卵巣線維肉腫、クルケンベルグ腫瘍、又は卵巣嚢胞である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかのいくつかの実施形態では、膵臓癌は、膵外分泌腺癌、膵内分泌腺癌、又は膵腺癌腫、膵島細胞腫瘍、又は神経内分泌腫瘍である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかのいくつかの実施形態では、前立腺癌は、前立腺腺癌腫、前立腺肉腫、移行細胞癌腫、小細胞癌腫、又は神経内分泌腫瘍である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかのいくつかの実施形態では、洞癌は、扁平上皮細胞癌腫、粘膜細胞癌腫、腺様嚢胞細胞癌腫、腺房細胞癌腫、副鼻腔未分化癌腫、鼻腔癌、副鼻腔癌、上顎洞癌、篩骨洞癌、又は鼻咽頭癌である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかのいくつかの実施形態では、皮膚癌は、基底細胞癌、扁平上皮癌腫、黒色腫、メルケル細胞癌腫、カポジ肉腫（ＫＳ）、日光角化症、皮膚リンパ腫、又は角化棘細胞腫である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかのいくつかの実施形態では、軟部組織癌は、血管肉腫、皮膚線維肉腫、上皮性肉腫、ユーイング肉腫、線維肉腫、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、カポジ肉腫、平滑筋肉腫、脂肪肉腫、脱分化型脂肪肉腫（ＤＬ）、粘液性／円形細胞脂肪肉腫（ＭＲＣＬ）、高分化型脂肪肉腫（ＷＤＬ）、悪性線維性組織球腫、神経線維肉腫、横紋筋肉腫（ＲＭＳ）、又は滑膜肉腫である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、脊髄癌は脊髄転移性腫瘍である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかのいくつかの実施形態では、胃癌は、胃腺癌腫、胃リンパ腫、消化管間質腫瘍、カルチノイド腫瘍、胃カルチノイド腫瘍、Ｉ型ＥＣＬ細胞カルチノイド、ＩＩ型ＥＣＬ細胞カルチノイド、又はＩＩＩ型ＥＣＬ細胞カルチノイドである。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかのいくつかの実施形態では、精巣癌は、セミノーマ、非セミノーマ、胚性癌腫、卵黄嚢癌腫、絨毛癌腫、奇形腫、性腺間質腫瘍、ライディッヒ細胞腫瘍、又はセルトリ細胞腫瘍である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかのいくつかの実施形態では、咽頭癌は、扁平上皮細胞癌腫、腺癌腫、肉腫、喉頭癌、咽頭癌、鼻咽頭癌、中咽頭癌、下咽頭癌、喉頭癌、喉頭扁平上皮細胞癌、喉頭腺癌腫、リンパ上皮腫、紡錘細胞癌腫、疣状癌、未分化癌腫、又はリンパ節癌である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかのいくつかの実施形態では、甲状腺癌は、乳頭状癌腫、濾胞状癌腫、ハースル細胞癌腫、甲状腺髄様癌腫、又は未分化癌腫である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかのいくつかの実施形態では、子宮癌は、子宮内膜癌、子宮内膜腺癌腫、類子宮内膜癌腫、漿液性腺癌腫、腺扁平上皮癌腫、子宮癌肉腫、子宮肉腫、子宮平滑筋肉腫、子宮内膜間質肉腫、又は未分化肉腫である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、腟癌は扁平上皮癌、腺癌、メラノーマ、又は肉腫である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、外陰癌は扁平上皮癌又は腺癌である。
上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、疾患又は障害は病原体によって引き起こされる。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかのいくつかの実施形態では、病原体は、急性弛緩性脊髄炎（ＡＦＭ）、アナプラズマ病、炭疽病、バベシア症、ボツリヌス中毒症、ブルセラ症、カンピロバクター症、カルバペネム耐性感染、軟性下疳、チクングニアウイルス感染症、クラミジア、シガテラ中毒、ディフィシル感染症、パーフリンジェンス、コクシジオイデス症真菌感染症、コロナウイルス感染症、Ｃｏｖｉｄ－１９（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）、クロイツフェルト・ヤコブ病／伝達性海綿状脳症、クリプトスポリジウム症（Ｃｒｙｐｔｏ）、シクロスポラ症、デング熱１、２、３、又は４、ジフテリア、大腸菌感染症／志賀毒素生成性（ＳＴＥＣ）、東部馬脳炎、出血熱（エボラ）、エーリキア症、アルボウイルス又は傍感染性脳炎、非ポリオエンテロウイルス、Ｄ６８エンテロウイル（ＥＶ－Ｄ６８）、ジアルジア症、鼻疽、淋菌感染症、鼠径部肉芽腫、ヘモフィルスインフルエンザ感染症Ｂ型（Ｈｉｂ又はＨ－ｆｌｕ）、ハンタウイルス肺症候群（ＨＰＳ）、溶血性尿毒症症候群（ＨＵＳ）、Ａ型肝炎（Ｈｅｐ Ａ）、Ｂ型肝炎（Ｈｅｐ Ｂ）、Ｃ型肝炎（Ｈｅｐ Ｃ）、Ｄ型肝炎（Ｈｅｐ Ｄ）、Ｅ型肝炎（Ｈｅｐ Ｅ）、ヘルペス、帯状ヘルペス（帯状疱疹）、ヒストプラスマ症、ヒト免疫不全ウイルス／ＡＩＤＳ（ＨＩＶ／ＡＩＤＳ）、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、インフルエンザ（Ｆｌｕ）、レジオネラ症（レジオネラ病）、癩（ハンセン病）、レプトスピラ症、リステリア症（リステリア）、ライム病、鼠径リンパ肉芽腫感染症（ＬＧＶ）、マラリア、麻疹、メリオイドーシス、髄膜炎（ウイルス性）、髄膜炎菌性疾患（髄膜炎（細菌性））、中東呼吸器症候群コロナウイルス（ＭＥＲＳ－ＣｏＶ）、ムンプス、ノロウイルス、シラミ寄生症（Ｐｅｄｉｃｕｌｏｓｉｓ）、骨盤内感染症（ＰＩＤ）、パーツシス（百日咳）、ペスト（腺、敗血性、肺炎性）、肺炎球菌疾患（肺炎）、ポリオウイルス感染症（ポリオ）、ポワッサン、オウム病、シラミ寄生症（ケジラミ症）、膿疱疹疾患（天然痘、サル痘、牛痘）、Ｑ熱、狂犬病、リケッチア症（ロッキー山紅斑熱）、風疹（ドイツ麻疹）、サルモネラ症胃腸炎（サルモネラ）、疥癬、スコンブロイド、敗血症、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）、赤痢菌感染症胃腸炎（シゲラ）、天然痘、メチシリン耐性スタフィロカル感染症（ＭＲＳＡ）、ブドウ球菌食中毒エンテロトキシンＢ中毒（ブドウ球菌食中毒）、バンコマイシン中間体サフィロコカル感染症（ＶＩＳＡ）、バンコマイシン耐性ブドウ球菌感染症（ＶＲＳＡ）、Ａ群連鎖球菌感染症（侵襲性）（Ｓｔｒｅｐ Ａ（侵襲性）、Ｂ群連鎖球菌感染症（Ｓｔｒｅｐ－Ｂ）、連鎖球菌毒素性ショック症候群ＳＴＳＳ毒素ショック、梅毒（第１期、第２期、早期潜伏、晩期潜伏、先天性）、破傷風感染、トリコモナス症、トリコノシス感染症、結核（ＴＢ）、潜伏性結核（ＬＴＢＩ）、ツラレミア、腸チフスＤ群、膣症、水痘（水疱瘡）、コレラ菌（コレラ）、ビブリオ症（ビブリオ）、エボラウイルス出血熱、ラサウイルス出血熱、マールブルグウイルス出血熱、ウエストナイルウイルス、黄熱、エルセニア、及びジカウイルス感染症からなる群から選択される感染症を引き起こす。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症は急性弛緩性脊髄炎（ＡＦＭ）である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症はアナプラズマ病である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症は炭疽である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症はバベシア症である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症はボツリヌス中毒症である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症はブルセラ症である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症はカンピロバクター症である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症はカルバペネム耐性感染である。
上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症は軟下疳である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症はチクングニアウイルス感染である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症はクラミジアである。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症はシガテラ属である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症はディフィシル感染である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症はパーフリンジェンスである。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症はコクシジオイデス症真菌感染である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症はコロナウイルスである。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症はＣｏｖｉｄ－１９（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症はクロイツフェルト－ヤコブ病／伝染性海綿状脳症である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症はクリプトスポリジウム症（Ｃｒｙｐｔｏ）である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症はシクロスポリン症である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症はデング１，２，３又は４である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症はジフテリアである。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症は、大腸菌感染／志賀毒素生成性（ＳＴＥＣ）である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症は東部馬脳炎である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症は出血熱（エボラ）である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症はエールリヒア症である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症は脳炎である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症はアルボウイルス（Arboviral）又はパラ感染性である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症は非ポリオエンテロウイルスである。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症はＤ６８ Ｅｎｔｅｒｏｖｉｒｕ（ＥＶ－Ｄ６８）である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症はジアルジア症である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症は鼻疽である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症は淋菌感染症である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症は鼠径部肉芽腫である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症はＢ型インフルエンザ菌（Ｈｉｂ又はＨ－ｆｌｕ）である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症はハンタウイルス肺症候群（ＨＰＳ）である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症は溶血性尿毒症症候群（ＨＵＳ）である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症はＡ型肝炎（Ｈｅｐ Ａ）である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症はＢ型肝炎（Ｈｅｐ Ｂ）である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症はＣ型肝炎（Ｈｅｐ Ｃ）である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症はＤ型肝炎（Ｈｅｐ Ｄ）である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症はＥ型肝炎（Ｈｅｐ Ｅ）である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症はヘルペスである。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症は帯状疱疹（Ｈｅｒｐｅｓ Ｚｏｓｔｅｒ）（帯状疱疹）である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症はヒストプラスマ症感染である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症はヒト免疫不全ウイルス／ＡＩＤＳ（ＨＩＶ／ＡＩＤＳ）である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症はヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症はインフルエンザ（Ｆｌｕ）である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症はレジオネラ症（レジオネラ症）である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症はライ病（ハンセズ病）である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症はレプトスピラ症である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症はリステリア症（Ｌｉｓｔｅｒｉａ）である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症はライム病である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症は鼡径リンパ肉芽腫症感染（ＬＧＶ）である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症はマラリアである。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症は麻疹である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症は類鼻疽である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症は髄膜炎（ウイルス性）である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症は髄膜炎菌性心疾患（髄膜炎（細菌性））である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症は中東呼吸器症候群コロナウイルス（ＭＥＲＳ－ＣｏＶ）である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症はムンプスである。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症はノロウイルスである。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症はしらみ寄生症である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症は骨盤腹膜炎（ＰＩＤ）である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症は百日咳（パーツシス）である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症はペスト（腺疫菌）である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症は敗血症である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症は肺炎性である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症は肺炎球菌疾患（肺炎）である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症は灰白髄炎（ポリオ）である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症はポワッサンである。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症はオウム病である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症はケジラミ症である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症は膿疱性発疹疾患（天然痘）である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症はサル痘である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症は牛痘である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症はＱ熱である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症は狂犬病である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症は、リケッチア症（ロッキー山紅斑熱）である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症は三日ばしか（風疹）である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症はサルモネラ症胃腸炎（サルモネラ菌）である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症は疥癬である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症はサバ中毒である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症は敗血症である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症はサーズ（ＳＡＲＳ）である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症は細菌性赤痢胃腸炎（シゲラ）である。
上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症は天然痘である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症はブドウ球菌感染メチシリン耐性（ＭＲＳＡ）である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症はぶどう球菌食中毒エンテロトキシンＢ中毒（ブドウ球菌食中毒）である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症はブドウ球菌感染バンコマイシン中間体（ＶＩＳＡ）である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症はぶどう球菌感染症バンコマイシン耐性（ＶＲＳＡ）である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症は連鎖球菌Ａ群（侵襲性）（連鎖球菌Ａ（侵襲性））である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症は連鎖球菌疾患である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症はＢ群（Ｓｔｒｅｐ－Ｂ）である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症は連鎖球菌毒性ショック症候群ＳＴＳＳ毒性ショックである。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症は原発性である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症は二次性である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症は早期潜在性である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症は後期潜伏性である。いくつかの実施形態では、感染症は、先天性）である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症は破傷風感染である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症はトリコモナス症である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症はトリコノシス感染である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症は結核（ＴＢ）である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症は潜在性結核（ＬＴＢＩ）である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症は野兎病である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症は腸チフスＤ群である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症は膣症である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症は、水痘（水痘）、コレラ菌（コレラ）である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症はビブリオ症（Ｖｉｂｒｉｏ）である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症はエボラウイルス出血熱である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症はラサウイルス出血熱である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症はマールブルグウイルス出血熱である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症は西ナイルウイルスである。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症は黄熱病である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症はエルシニアである。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、感染症はジカウイルス感染である。
上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、病原体は細菌である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、細菌は、バチルス、バルトネラ、ボルデテラ、ボレリア、ブルセラ、カンピロバクター、クラミジア、クラミドフィラ、クロストリジウム、コリネバクテリウム、エンテロコッカス、エシェリキア、フランシセラ、ヘモフィルス、ヘリコバクター、レジオネラ、レプトスピラ、リステリア、マイコバクテリア、マイコプラズマ、ナイセリア、シュードモナス、リケッチア、サルモネラ、シゲラ、ブドウ球菌、連鎖球菌、トレポネーマ、ウレアプラズマ、ビブリオ、又はエルシニア属の細菌である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、細菌はバチルス属の細菌である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、細菌はバルトネラ科属の細菌である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、細菌はボルデテラ属の細菌である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、細菌はボレリア属の細菌である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、細菌はブルセラ属の細菌である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、細菌は、カンピロバクター属の細菌である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、細菌はクラミジア属の細菌である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、細菌はクラミドフィラ属属の細菌である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、細菌はクロストリジウム（Clostridium）属の細菌である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、細菌はコリネバクテリウム属の細菌である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、細菌はエンテロコッカス属の細菌である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、細菌はエシェリヒア属の細菌である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、細菌は、フランシセラ属の細菌である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、細菌はヘモフィルス属の細菌である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、細菌はヘリコバクター属の細菌である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、細菌はレジオネラ属の細菌である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、細菌はレプトスピラ属の細菌である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、細菌はリステリア属の細菌である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、細菌はマイコバクテリウム属の細菌である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、細菌はマイコプラズマ属の細菌である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、細菌はナイセリア属の細菌である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、細菌はシュードモナス属の細菌である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、細菌はリケッチア属の細菌である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、細菌はサルモネラ属の細菌である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、細菌は赤痢菌属の細菌である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、細菌はブドウ球菌属の細菌である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、細菌は連鎖球菌属の細菌である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、細菌はトレポネーマ属の細菌である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、細菌はウレアプラズマ属（大腸菌）属の細菌である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、細菌はビブリオ属の細菌である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、細菌はエルシニア属の細菌である。
上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、病原体は寄生生物である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、寄生生物は、原生動物、蠕虫、又は外部寄生生物である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、原虫は、エントアメーバ属、ジアルジア、リーシュマニア、バランチジウム、プラスモジウム、又はクリプトスポリジウムである。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、蠕虫は、吸虫、条虫、鈎頭虫、又は回虫である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、外部寄生生物は節足動物である。
上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、病原体はウイルスである。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、ウイルスは、アデノウイルス科、アレナウイルス科、アストロウイルス科、ブニヤウイルス科、カリシウイルス科、コロナウイルス科、フィロウイルス科、フラビウイルス科、ヘパドナウイルス科、ヘペウイルス科、オルトミクソウイルス科、パピローマウイルス科、パラミクソウイルス科、パルボウイルス科、ピコルナウイルス科、ポリオーマウイルス科、ポックスウイルス科、レオウイルス科、レトロウイルス科、ラブドウイルス科、又はトガウイルス科のウイルスである。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、ウイルスはアデノウイルス科のウイルスである。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、ウイルスは、アレナウイルス科のウイルスである。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、ウイルスは、アストロウイルス科のウイルスである。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、ウイルスはブニヤウイルス科のウイルスである。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、ウイルスはカリチウイルス科のウイルスである。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、ウイルスはコロナウイルス科のウイルスである。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、ウイルスはフィロウイルス科のウイルスである。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、ウイルスはフラビウイルス科のウイルスである。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、ウイルスはヘパドナウイルス科（hepadnaviridae）のウイルスである。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、ウイルスはヘペウイルス科のウイルスである。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、ウイルスはオルトミウイルス科のウイルスである。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、ウイルスは、パピローマウイルス科のウイルスである。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、ウイルスはパラミクソウイルス科のウイルスである。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、ウイルスはパルボウイルス科のウイルスである。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、ウイルスはピコルナウイルス科のウイルスである。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、ウイルスは、ポリオーマウイルス科のウイルスである。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、ウイルスはポックスウイルス科のウイルスである。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、ウイルスはレオウイルス科のウイルスである。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、ウイルスはレトロウイルス科のウイルスである。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、ウイルスはラブドウイルス科のウイルスである。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、ウイルスはトガウイルス科のウイルスである。
上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、ウイルスは、アデノウイルス、コロナウイルス、コクサッキーウイルス、エプスタインバーウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、単純ヘルペスウイルス２型、サイトメガロウイルス、ヒトヘルペスウイルス８型、ヒト免疫不全ウイルス、インフルエンザウイルス、麻疹ウイルス、ムンプスウイルス、ヒトパピローマウイルス、パラインフルエンザウイルス、ポリオウイルス、狂犬病ウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、風疹ウイルス、又は水痘帯状疱疹ウイルスである。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、ウイルスはアデノウイルスである。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、ウイルスはコロナウイルスである。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、コロナウイルスウイルスはＣｏｖｉｄ－１９（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、ウイルスはコクサッキーウイルスである。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、ウイルスはエプスタインバーウイルスである。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、ウイルスはＡ型肝炎ウイルスである。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、ウイルスはＢ型肝炎ウイルスである。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、ウイルスはＣ型肝炎ウイルスである。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、ウイルスは単純ヘルペスウイルス２型である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、ウイルスはサイトメガロウイルスである。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、ウイルスはヒトヘルペスウイルス８型である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、ウイルスはヒト免疫不全ウイルスである。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、ウイルスはインフルエンザウイルスである。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、ウイルスは麻疹ウイルスである。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、ウイルスはムンプスウイルスである。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、ウイルスはヒトパピローマウイルスである。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、ウイルスはパラインフルエンザウイルスである。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、ウイルスはポリオウイルスである。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、ウイルスは狂犬病ウイルスである。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、ウイルスは呼吸器合胞体ウイルスである。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、ウイルスは風疹ウイルスである。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、ウイルスは水痘帯状疱疹ウイルスである。
上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、疾患又は障害は免疫障害又は自己免疫障害である。このような障害としては、自己免疫水疱症、無βリポプロテイン血症、後天性免疫不全関連疾患、臓器移植に関連する急性免疫疾患、後天性先端チアノーゼ、急性及び慢性の寄生虫又は感染過程、急性膵炎、急性腎不全、急性リウマチ熱、急性横断性脊髄炎、腺癌、気中異所性ビート、成人（急性）呼吸窮迫症候群、エイズ認知症複合体、アルコール性肝硬変、アルコール性肝障害、アルコール性肝炎、アレルギー性結膜炎、アレルギー性接触皮膚炎、アレルギー性鼻炎、アレルギーと喘息、同種移植片拒絶反応、α－Ｌ－アンチトリプシン欠乏症、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症、貧血、狭心症、強直性脊椎炎関連肺疾患、前角細胞変性、抗体媒介細胞毒性、抗リン脂質症候群、抗受容体過敏反応、大動脈瘤及び末梢動脈瘤、大動脈解離、動脈性高血圧、動脈硬化症、動静脈瘻、関節症、無力症、喘息、運動失調、アトピー性アレルギー、心房細動（持続性又は発作性）、心房粗動、房室ブロック、萎縮性自己免疫性甲状腺機能低下症、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性肝炎、１型自己免疫性肝炎（古典的自己免疫性又はルポイド肝炎）、自己免疫介在性低血糖、自己免疫性好中球減少症、自己免疫性血小板減少症、自己免疫性甲状腺疾患、Ｂ細胞リンパ腫、骨移植片拒絶反応、骨髄移植（ＢＭＴ）拒絶反応、閉塞性細気管支炎、脚ブロック、火傷、悪液質、不整脈、心臓気絶症候群、心臓腫瘍、心筋症、心肺バイパス炎症反応、軟骨移植拒絶、小脳皮質変性、小脳障害、無秩序又は多巣性心房頻脈、化学療法関連障害、クラミジア、胆汁酸炎、慢性アルコール依存症、慢性活動性肝炎、慢性疲労症候群、臓器移植に関連した慢性免疫疾患、慢性好酸球性肺炎、慢性炎症性病態、慢性皮膚粘膜カンジダ症、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、慢性サリチル酸中毒、結腸直腸の共通多様免疫不全症（一般可変性低ガンマグロブリン血症）、結膜炎、結合組織病関連間質性疾患肺疾患、接触皮膚炎、クームス陽性溶血性貧血、肺性心、クロイツフェルト・ヤコブ病、原因不明自己免疫肝炎、原因不明線維化性肺胞炎、培養陰性敗血症、嚢胞性線維症、サイトカイン療法関連疾患、クローン病、拳銃認知症、脱髄疾患、デング出血熱、皮膚炎、強皮症皮膚炎、皮膚疾患、皮膚筋炎／多発性筋炎に伴う肺疾患、糖尿病、糖尿病性動脈硬化性疾患、糖尿病、びまん性レビー小体病、拡張型心筋症、拡張型うっ血性心筋症、円板状エリテマトーデス、大脳基底核の障害、播種性血管内凝固症候群、中年ダウン症候群、薬剤性間質性肺疾患、薬剤性肝炎、ＣＮＳを遮断する薬剤により誘発される薬剤性運動障害ドーパミン受容体、薬物過敏症、湿疹、脳脊髄炎、心内膜炎、内分泌障害、腸疾患性滑膜炎、喉頭蓋炎、エプスタインバーウイルス感染症、赤髄痛、錐体外路及び小脳障害、家族性血球貪食性リンパ組織球症、胎児胸腺インプラント拒絶反応、フリードライヒ失調症、機能性末梢動脈障害、女性不妊症、線維症、線維性肺疾患、真菌性敗血症、ガス壊疽、胃潰瘍、巨細胞性動脈炎、糸球体腎炎、糸球体腎炎、グッドパスチャー症候群、甲状腺腫性自己免疫性甲状腺機能低下症（橋本病）、痛風性関節炎、臓器又は組織の移植片拒絶反応、移植片対移植片宿主病、グラム陰性敗血症、グラム陽性敗血症、細胞内微生物による肉芽腫、Ｂ群連鎖球菌（ＧＢＳ）感染症、バセドウ病、ヘモジデローシス関連肺疾患、ヘアリー細胞白血病、ハエラーデン・スパッツ病、橋本甲状腺炎、干し草発熱、心臓移植拒絶反応、ヘマクロマトーシス、造血器悪性腫瘍（白血病及びリンパ腫）、溶血性貧血、溶血性尿毒症症候群／血栓溶解性血小板減少性紫斑病、出血、ヘノッホ・シェーンライン紫斑病、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、ＨＩＶ感染／ＨＩＶ神経障害、ホジキン病病気、低糖症、ハンティントン舞踏病、超キネティック運動障害、過敏症反応、過敏症性肺炎、甲状腺機能亢進症、過敏症運動障害、視床下部－下垂体－副腎軸評価、特発性アジソン病、特発性白血球減少症、特発性肺線維症、特発性血小板減少症、特異性肝疾患、小児脊髄性筋萎縮症、感染症、大動脈の炎症、炎症性腸疾患、インスリン依存性糖尿病、間質性肺炎、虹彩毛様体炎／ぶどう膜炎／視神経炎、虚血再灌流障害、虚血性脳卒中、若年性悪性貧血、若年性関節リウマチ、若年性脊髄筋萎縮症萎縮、カポジ肉腫、川崎病、腎移植拒絶反応、レジオネラ菌、リーシュマニア症、ハンセン病、皮質脊髄系の病変、線状ＩｇＡ疾患、脂肪腫、肝移植拒絶反応、ライム病、リンパ上皮症、リンパ球性浸潤性肺疾患、マラリア、特発性男性不妊、又はＮＯＳ、悪性組織球症、悪性黒色腫、髄膜炎、髄膜球菌血症、腎臓の顕微鏡的血管炎、片頭痛、ミトコンドリア多系統障害、混合性結合組織病、混合性結合組織病に関連する肺疾患、モノクローナルガンモグラフィ、多発性骨髄腫、多系統変性症（メンセル）、デジェリーヌ・トーマス、シャイ・ドレーガー、マチャド・ジョセフ）、筋痛性脳炎／ロイヤル・フリー病、重症筋無力症、腎臓の顕微鏡的血管炎、鳥型バクテリウム・イントラセルラーレ、結核菌、骨髄異形成症候群、心筋梗塞、心筋虚血性障害、上咽頭癌、新生児慢性肺疾患、腎炎、ネフローゼ、ネフローゼ症候群、神経変性疾患、神経原性Ｉ型筋萎縮症、好中球減少熱、非アルコール性脂肪性肝炎、腹部大動脈及びその分枝の閉塞、閉塞性動脈疾患、臓器移植拒絶反応、睾丸炎／精巣上体炎、睾丸炎／精管切除術の回復処置、器官肥大、変形性関節症、骨粗鬆症、卵巣不全、膵臓移植拒絶反応、寄生虫疾患、副甲状腺移植拒絶反応、パーキンソン病、骨盤炎症性疾患、尋常性天疱瘡、葉状天疱瘡、天疱瘡、通年性鼻炎、心膜疾患、末梢アテローム性動脈硬化症、末梢血管障害、腹膜炎、悪性貧血、水晶体ブドウ膜炎、ニューモシスチス・カリニ肺炎、肺炎、ＰＯＥＭＳ症候群（多発性神経障害、器官肥大、内分泌障害、モノクローナルガンマ線維症、皮膚変化症候群）、潅流後症候群、ポンプ後症候群、心筋梗塞後心臓切開症候群、感染後間質性肺疾患、早発卵巣不全、原発性胆汁性肝硬変、原発性硬化性肝炎、原発性粘液水腫、原発性肺高血圧症、原発性硬化性胆管炎、原発性血管炎、進行性核上性麻痺、乾癬、１型乾癬、２型乾癬、乾癬性関節症、結合組織疾患に続発する肺高血圧症、結節性多発動脈炎の肺症状、炎症後間質性肺疾患、放射線線維症、放射線療法、レイノー現象と病気、レイノー病、レフサム病、定常狭ＱＲＳ頻脈、ライター病、腎疾患ＮＯＳ、腎血管性高血圧症、再灌流傷害、拘束型心筋症、関節リウマチ関連間質性肺疾患、リウマチ性脊椎炎、サルコイドーシス、シュミット症候群、強皮症、老人性舞踏病、レビー小体型老人性認知症、敗血症症候群、敗血症性ショック、血清陰性関節症、ショック、鎌状赤血球貧血、Ｔ細胞又はＦＡＢＡＬＬ、高安病／動脈炎、毛細血管拡張症、Ｔｈ２型及びＴｈ１タイプ媒介性疾患、閉塞性血栓血管炎、血小板減少症、甲状腺炎、毒性、トキシックショック症候群、移植、外傷／出血、２型自己免疫性肝炎（抗ＬＫＭ抗体肝炎）、黒色表皮症を伴うＢ型インスリン抵抗性、ＩＩＩ型過敏反応、ＩＶ型過敏症、潰瘍性大腸炎性関節症、潰瘍性大腸炎、不安定狭心症、尿毒症、尿路敗血症、蕁麻疹、ぶどう膜炎、心臓弁膜症、静脈瘤、血管炎、血管炎性びまん性肺疾患、静脈疾患、静脈血栓症、心室細動、白斑急性肝疾患、ウイルス及び真菌感染症、重症脳炎／無菌性髄膜炎、生体関連血球貪食症候群、ウェゲナー肉芽腫症、ウェルニッケ・コルサコフ症候群、ウィルソン病、あらゆる臓器又は組織の異種移植片拒絶反応、エルシニア及びサルモネラ関連関節症、後天性免疫不全症候群（エイズ）、自己免疫性リンパ増殖症候群、溶血性貧血、炎症性疾患、血小板減少症、臓器移植に伴う急性及び慢性免疫疾患、アジソン病、アレルギー性疾患、脱毛症、円形脱毛症、アテローム性疾患／動脈硬化、アテローム性動脈硬化、関節炎（変形性関節症、若年性慢性関節炎、敗血症性関節炎、ライム関節炎、乾癬性関節炎及び反応性関節炎）、シェーグレン病関連肺疾患、シェーグレン症候群、皮膚同種移植片拒絶反応、皮膚変化症候群、小腸移植拒絶反応、精子自己免疫、多発性硬化症（全てのサブタイプ）、脊髄失調症、脊髄小脳変性症、脊椎関節症、散発性多腺欠損症Ｉ型、散発性多腺欠損症ＩＩ型、スチル病、連鎖球菌性筋炎、脳卒中、小脳の構造的病変、亜急性硬化性全脳炎、交感神経性眼炎、失神、心血管系梅毒、全身性アナフィラキシー、全身性炎症性の反応症候群、全身性発症型若年性関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、全身性エリテマトーデス関連肺疾患、ループス腎炎、全身性硬化症、全身性硬化症関連間質性肺疾患が含まれる。
上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、疾患又は障害は炎症性疾患である。炎症は、宿主防御及び免疫介在性疾患の進行において基本的な役割を果たす。炎症反応は、損傷（例えば、外傷、虚血及び異物）及び感染（例えば、細菌又はウイルス感染）に応答して、化学的メディエーター（例えば、サイトカイン及びプロスタグランジン）及び炎症細胞（例えば、白血球）を含む事象の複雑なカスケードによって開始される。炎症反応は、血流の増加、毛細血管透過性の増加、及び食細胞の流入を特徴とする。これらの事象は、損傷又は感染部位における腫脹、発赤、温感（熱パターンの変化）、及び膿形成をもたらす。
サイトカイン及びプロスタグランジンは、炎症反応を制御し、順序付けられた自己制限的カスケードで血液又は患部組織に放出される。このサイトカイン及びプロスタグランジンの放出は、損傷又は感染の領域への血流を増加させ、発赤及び温感をもたらし得る。これらの化学物質のいくつかは、組織への流体の漏出を引き起こし、腫脹をもたらす。この保護プロセスは、神経を刺激し、疼痛を引き起こし得る。これらの変化は、関連する領域において限られた期間にわたって生じる場合、身体の利益に対して働く。
炎症反応における体液性免疫要素と細胞性免疫要素との間の繊細でバランスのとれた相互作用は、有害な薬剤の排除及び損傷組織の修復の開始を可能にする。この微妙にバランスのとれた相互作用が破壊されると、炎症反応は正常組織にかなりの損傷をもたらす可能性があり、反応を開始した元の傷害よりも有害である可能性がある。これらの制御されない炎症反応の場合、組織損傷及び臓器機能不全を予防するために臨床的介入が必要とされる。乾癬、関節リウマチ、変形性関節症、乾癬性関節炎、クローン病、喘息、アレルギー又は炎症性腸疾患などの疾患は、慢性炎症を特徴とする。関節炎、関連する関節炎病態（例えば、変形性関節症、関節リウマチ、及び乾癬性関節炎）、炎症性腸疾患（例えば、クローン病及び潰瘍性大腸炎）、敗血症、乾癬、アトピー性皮膚炎、接触皮膚炎、及び慢性閉塞性肺疾患などの炎症性疾患、慢性炎症性肺疾患もまた、蔓延しており、問題となる病気である。
様々な送達系が知られており、予防薬又は治療薬（例えば、本明細書で提供される抗体又はその抗原結合断片）を投与するために使用することができ、リポソーム、微粒子、マイクロカプセル、抗体又はその抗原結合断片を発現することができる組み換え細胞への封入、受容体媒介エンドサイトーシス（例えば、Ｗｕ ａｎｄ Ｗｕ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２：４４２９－４４３２（１９８７））、レトロウイルス又は他のベクターの一部としての核酸の構築などが挙げられる。予防剤若しくは治療剤（例えば、本明細書で提供される抗体又はその抗原結合断片）、又は医薬組成物を投与する方法としては、非経口投与（例えば、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内及び皮下）、硬膜外及び粘膜（例えば、鼻腔内及び経口経路）が挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施形態では、予防薬若しくは治療薬（例えば、本明細書において提供される抗体又はその抗原結合断片）、又は医薬組成物は、鼻腔内投与、筋肉内投与、静脈内投与、又は皮下投与される。予防薬若しくは治療薬、又は組成物は、任意の好都合な経路、例えば、注入又はボーラス注射により、上皮又は皮膚粘膜内壁（例えば、口腔粘膜、鼻腔粘膜、直腸粘膜、及び腸粘膜など）を介する吸収により、投与され得、他の生物学的活性剤と共に投与され得る。投与は、全身性又は局所的であり得る。加えて、例えば、吸入器又は噴霧器、及びエアゾール化剤を伴う製剤の使用による肺内投与を採用することもできる。例えば、各々が参照によりそれらの全体で本明細書に組み込まれる、米国特許第６，０１９，９６８号、同第５，９８５，３２０号、同第５，９８５，３０９号、同第５，９３４，２７２号、同第５，８７４，０６４号、同第５，８５５，９１３号、同第５，２９０，５４０号、及び同第４，８８０，０７８号、及び国際公開第９２／１９２４４号、同第９７／３２５７２号、同第９７／４４０１３号、同第９８／３１３４６号、及び同第９９／６６９０３号を参照。
特定の実施形態では、本明細書において提供される予防薬若しくは治療薬、又は医薬組成物を、治療を必要とする領域に局所投与することが望ましい場合がある。これは、例えば、限定を目的とするものではないが、局所注入により、局所投与により（例えば、鼻内噴霧により）、注射により、又はインプラントを用いて達成され得、当該インプラントは、シラスティック膜などの膜又は繊維を含む、多孔性材料、非多孔性材料、又はゼラチン性材料である。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、本明細書において提供される抗体又はその抗原結合断片を投与する場合、抗体又はその抗原結合断片が吸収しない材料を使用するように注意しなければならない。
別の実施形態では、本明細書において提供される予防薬若しくは治療薬、又は組成物は、ベシクル、特に、リポソームで送達され得る（Ｌａｎｇｅｒ，Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９０，２４９：１５２７－１５３３、Ｔｒｅａｔ，ｅｔ ａｌ．，ｉｎ Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ ｉｎ ｔｈｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ，Ｌｏｐｅｚ－Ｂｅｒｅｓｔｅｉｎ ａｎｄ Ｆｉｄｌｅｒ（ｅｄｓ．），Ｌｉｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ｐｐ．３５３－３６５（１９８９）、Ｌｏｐｅｚ－Ｂｅｒｅｓｔｅｉｎ，ｉｂｉｄ．，ｐｐ．３１７－３２７を参照。同書を全般的に参照）。
別の実施形態では、本明細書において提供される予防薬若しくは治療薬、又は組成物は、制御放出システム又は徐放システムで送達されることができる。一実施形態では、ポンプが、制御放出又は徐放を達成するために使用され得る（Ｌａｎｇｅｒ（上記）、Ｓｅｆｔｏｎ，１９８７，Ｃｒｉｔ．Ｒｅｆ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｅｎｇ．１４：２０、Ｂｕｃｈｗａｌｄ ｅｔ ａｌ．，Ｓｕｒｇｅｒｙ，１９８０，８８：５０７、Ｓａｕｄｅｋ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３２１：５７４を参照）。別の実施形態では、ポリマー材料を使用して、予防薬若しくは治療薬（例えば、本明細書において提供される抗体）、又は本明細書において提供される組成物の制御放出又は徐放を達成することができる（例えば、Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ，Ｌａｎｇｅｒ ａｎｄ Ｗｉｓｅ（ｅｄｓ．），ＣＲＣ Ｐｒｅｓ．，Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，Ｆｌｏｒｉｄａ（１９７４）、Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｄｒｕｇ Ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ，Ｄｒｕｇ Ｐｒｏｄｕｃｔ Ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ，Ｓｍｏｌｅｎ ａｎｄ Ｂａｌｌ（ｅｄｓ．），Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８４）、Ｒａｎｇｅｒ ａｎｄ Ｐｅｐｐａｓ，１９８３，Ｊ．Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｓｃｉ．Ｒｅｖ．Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．２３：６１を参照。また、Ｌｅｖｙ，ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９８５，２２８：１９０、Ｄｕｒｉｎｇ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．２５：３５１、Ｈｏｗａｒｄ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．７：１－１０５）、米国特許第５，６７９，３７７号、米国特許第５，９１６，５９７号、米国特許第５，９１２，０１５号、米国特許第５，９８９，４６３号、米国特許第５，１２８，３２６号、国際公開第９９／１５１５４号、及び国際公開第９９／２０２５３号も参照）。徐放性製剤に用いられるポリマーの例としては、ポリ（２－ヒドロキシエチルメタクリレート）、ポリ（メチルメタクリレート）、ポリ（アクリル酸）、ポリ（エチレン－ｃｏ－ビニルアセテート）、ポリ（メタクリル酸）、ポリグリコリド（ＰＬＧ）、ポリ無水物、ポリ（Ｎ－ビニルピロリドン）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリアクリルアミド、ポリ（エチレングリコール）、ポリラクチド（ＰＬＡ）、ポリ（ラクチド－ｃｏ－グリコリド）（ＰＬＧＡ）、及びポリオルトエステルが挙げられるが、これらに限定されない。ある実施形態では、徐放製剤中で使用されるポリマーは、不活性であり、浸出性不純物を含まず、保存時に安定であり、無菌であり、かつ生分解性である。更に別の実施形態では、制御放出システム又は徐放システムを治療標的、すなわち、鼻腔又は肺に近接して配置することができ、その結果、全身用量のほんの一部しか必要としない（例えば、Ｇｏｏｄｓｏｎ，ｉｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｒｅｌｅａｓｅ（上記）、ｖｏｌ．２，ｐｐ．１１５－１３８（１９８４）を参照）。放出制御システムがＬａｎｇｅｒ（１９９０，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７－１５３３）による概説において考察されている。当業者に既知の任意の技術を使用して、本明細書で提供される１つ以上の抗体又はその抗原結合断片を含む徐放製剤を生産することができる。例えば、米国特許第４，５２６，９３８号、国際公開第９１／０５５４８号、国際公開第９６／２０６９８号、Ｎｉｎｇ ｅｔ ａｌ．，１９９６，”Ｉｎｔｒａｔｕｍｏｒａｌ Ｒａｄｉｏｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ ａ Ｈｕｍａｎ Ｃｏｌｏｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｘｅｎｏｇｒａｆｔ Ｕｓｉｎｇ ａ Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ－Ｒｅｌｅａｓｅ Ｇｅｌ，”Ｒａｄｉｏｔｈｅｒａｐｙ＆Ｏｎｃｏｌｏｇｙ ３９：１７９－１８９、Ｓｏｎｇ ｅｔ ａｌ．，１９９５，”Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｍｅｄｉａｔｅｄ Ｌｕｎｇ Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｏｆ Ｌｏｎｇ－Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ Ｅｍｕｌｓｉｏｎｓ，”ＰＤＡ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ＆Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ５０：３７２－３９７、Ｃｌｅｅｋ ｅｔ ａｌ．，１９９７，”Ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｂｌｅ Ｐｏｌｙｍｅｒｉｃ Ｃａｒｒｉｅｒｓ ｆｏｒ ａ ｂＦＧＦ Ａｎｔｉｂｏｄｙ ｆｏｒ Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ，”Ｐｒｏ．Ｉｎｔ’ｌ．Ｓｙｍｐ．Ｃｏｎｔｒｏｌ．Ｒｅｌ．Ｂｉｏａｃｔ．Ｍａｔｅｒ．２４巻：８５３～８５４頁、及びＬａｍ ｅｔ ａｌ．，１９９７，”Ｍｉｃｒｏｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ Ｈｕｍａｎｉｚｅｄ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ ｆｏｒ Ｌｏｃａｌ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ”，Ｐｒｏｃ．Ｉｎｔ’ｌ．Ｓｙｍｐ．Ｃｏｎｔｒｏｌ Ｒｅｌ．Ｂｉｏａｃｔ．Ｍａｔｅｒ．２４：７５９－７６０を参照。これらのそれぞれは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
本明細書で提供される組成物が、予防薬又は治療薬（例えば、本明細書で提供される抗体又はその抗原結合断片）をコードする核酸である、特定の実施形態では、核酸を、適切な核酸発現ベクターの一部として構築し、例えば、レトロウイルスベクターの使用により、核酸が、細胞内核酸となるように、ベクターを投与すること（米国特許第４，９８０，２８６号を参照、）により、又は直接注射により、又はマイクロ粒子衝突（例えば、遺伝子銃；Ｂｉｏｌｉｓｔｉｃ、Ｄｕｐｏｎｔ）により、又は脂質若しくは細胞表面受容体若しくは遺伝子導入剤によるコーティングの使用により、又は核に侵入することが既知であるホメオボックス様ペプチドと連結して核酸を投与すること（例えば、Ｊｏｌｉｏｔ，ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８８：１８６４－１８６８を参照）などにより、そのコードされる予防剤又は治療剤の発現を促進するように、核酸を、インビボにおいて投与することができる。代替的に、核酸は、細胞内に導入し、相同組み換えによる発現のために、宿主細胞ＤＮＡ内に組み込むことができる。
特定の実施形態では、本明細書において提供される組成物は、１つ、２つ以上の、本明細書において提供される抗体又はその抗原結合断片を含む。別の実施形態では、本明細書において提供される組成物は、１つ、２つ以上の、本明細書において提供される抗体又はその抗原結合断片と、本明細書において提供される抗体又はその抗原結合断片以外の予防薬又は治療薬とを含む。一実施形態では、薬剤は、疾患若しくは病態の予防、管理、治療及び／又は寛解に有用であることが既知であるか、又はこれらのために使用されているか、若しくは現在使用されている。予防薬又は治療薬に加えて、本明細書において提供される組成物はまた、賦形剤を含み得る。
本明細書において提供される組成物は、単位剤形の調製に使用され得る医薬組成物（例えば、対象又は患者への投与に好適な組成物）の製造において有用なバルク薬剤組成物を含む。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、本明細書で提供される組成物は医薬組成物である。そのような組成物は、予防有効量又は治療有効量の１つ以上の予防薬又は治療薬（例えば、本明細書において提供される抗体又はその抗原結合断片、又は他の予防薬若しくは治療薬）と、医薬的に許容される賦形剤とを含む。医薬組成物は、対象への投与経路に好適であるように製剤化されることができる。
特定の実施形態では、「賦形剤」という用語は、希釈剤、アジュバント（例えば、フロイントアジュバント（完全又は不完全））又はビヒクルを指すこともできる。医薬用賦形剤は、無菌液体、例えば水、及び落花生油、大豆油、鉱油、ゴマ油等の、石油、動物、植物、又は合成起源のものを含む油であり得る。水は、医薬組成物が静脈内投与される場合の代表的な賦形剤である。生理食塩水並びに水性デキストロース及びグリセロール溶液も、特に注射溶液用の液体賦形剤として採用され得る。好適な医薬用賦形剤としては、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、コメ、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセリン、タルク、塩化ナトリウム、乾燥スキムミルク、グリセリン、プロピレン、グリコール、水、エタノールなどが挙げられる。必要に応じて、組成物は、少量の湿潤剤若しくは乳化剤、又はｐＨ緩衝剤を更に含み得る。これらの組成物は、液剤、懸濁剤、乳剤、錠剤、丸剤、カプセル剤、散剤、徐放製剤などの形態を取り得る。経口製剤は、医薬品グレードのマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウムなどの標準的な賦形剤を含み得る。好適な医薬用賦形剤の例は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（１９９０）Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡにおいて記載されている。このような組成物は、予防的又は治療的に有効な量の本明細書で提供される抗体又はその抗原結合断片を含み、精製された形態などで、適切な量の賦形剤と共に、患者に適切に投与するための形態を提供する。その製剤は、投与様式に適するべきである。
実施形態では、組成物は、日常的な手順に従って、ヒトへの静脈内投与に適合させた医薬組成物として製剤化される。典型的には、静脈内投与用の組成物は、滅菌水性等張緩衝液中の溶液である。必要な場合、組成物はまた、可溶化剤及び、注射部位の疼痛を和らげるための、リグノカインなどの局所麻酔剤も含み得る。しかしながら、そのような組成物は、静脈内経路以外の経路を介して投与され得る。
本明細書において提供される組成物の成分は、例えば、活性薬剤の量を示すアンプル又は小袋などの密封容器内に、乾燥した凍結乾燥粉末又は水分を含まない濃縮物として、個別に、又は単位剤形中に一体に混合して供給される。組成物が注入により投与される場合、組成物は、医薬品グレードの滅菌水又は生理食塩水の入った注入ボトルによって分注され得る。組成物が注射により投与される場合、投与前に成分が混合され得るように、注射用滅菌水又は生理食塩水のアンプルを提供することができる。
本明細書において提供される抗体又はその抗原結合断片は、抗体の量を示すアンプル又は小袋などの密封容器内に包装され得る。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかのいくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片を、密封容器に入った乾燥滅菌した凍結乾燥粉末又は水分を含まない濃縮物として供給して、例えば、水又は生理食塩液で、対象への投与に適切な濃度まで復元させることができる。凍結乾燥された抗体又はその抗原結合断片は、その元の容器内で２～８℃で保存され得、抗体又はその抗原結合断片は、復元後１２時間以内（例えば、６時間以内、５時間以内、３時間以内、又は１時間以内）に投与され得る。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体又はその抗原結合断片は、抗体の量及び濃度を示す密封容器中の液体形態で供給される。
本明細書において提供される組成物は、中性形態又は塩形態として製剤化され得る。医薬的に許容される塩としては、塩酸、リン酸、酢酸、シュウ酸、酒石酸などに由来するアニオンなどのアニオンと共に形成される塩、及びナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、水酸化第二鉄、イソプロピルアミン、トリエチルアミン、２－エチルアミノエタノール、ヒスチジン、プロカインなどに由来するカチオンなどのカチオンと共に形成される塩が挙げられる。
疾患又は病態の予防及び／又は治療に有効である、予防薬又は治療薬（例えば、本明細書において提供される抗体又はその抗原結合断片）又は本明細書において提供される組成物の量は、標準的な臨床技術によって決定され得る。加えて、最適な用量範囲を識別するのに役立てるために、任意選択的にインビトロアッセイが採用され得る。製剤に用いる正確な用量は、投与経路及び疾患又は病態の重症度にも依存し、医師の判断及び各患者の状況に応じて決定する必要がある。
有効用量は、インビトロ又は動物モデル試験系から導出される用量反応曲線から外挿することができる。
上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかのいくつかの実施形態では、本明細書において提供される抗体又はその抗原結合断片の用量の患者への投与経路は、経鼻内、筋内、静脈内、皮下、又はこれらの組み合わせであるが、本明細書に記載される他の経路も許容可能である。各用量は、同一の投与経路で投与されても、投与されなくてもよい。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、本明細書において提供される抗体又はその抗原結合断片は、複数の投与経路を介して、他の用量の本明細書において提供される同じ抗体又は異なる抗体又はその抗原結合断片と同時に又はその後に投与されてもよい。
特定の実施形態では、本明細書において提供される抗体又はその抗原結合断片は、対象に対して予防的に又は治療的に投与される。本明細書において提供される抗体又はその抗原結合断片は、疾患又は症状を防止する、減少させる、又は寛解させるように、対象に対して予防的に又は治療的に投与され得る。
５．８ 遺伝子治療
特定の実施形態では、抗体又はその機能的誘導体をコードする配列を含む核酸は、例えば、遺伝子治療によって、疾患、障害又は病態を予防、管理、治療及び／又は改善するために、本明細書において提供される方法において使用するために対象に投与される。このような治療は、発現された核酸又は発現可能な核酸の対象への投与によって行われる治療を包含する。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、核酸はそのコードされた抗体を生成し、抗体は予防効果又は治療効果を媒介する。当技術分野で利用可能な組み換え遺伝子発現（又は遺伝子治療）のための任意の方法を使用することができる。
いくつかの実施形態では、遺伝子治療のための核酸は、本明細書に開示される結合分子又はその断片をコードする。いくつかの実施形態では、遺伝子治療のための核酸は、抗体重鎖のＣＨ１領域に由来する領域及び／又は抗体軽鎖のＣＬ領域に由来する領域を含む結合分子をコードし、ここで、ＣＨ１領域に由来する領域及び／又はＣＬ領域に由来する領域は、１つ以上の抗原結合ループを含む。いくつかの実施形態では、遺伝子治療のための核酸は、重鎖可変領域（ＶＨ）と抗体重鎖のＣＨ１領域に由来する領域とを含む第１ポリペプチドをコードし、ＣＨ１領域に由来する領域は、１つ以上の抗原結合ループを含む。いくつかの実施形態では、遺伝子治療のための核酸は、抗体軽鎖の軽鎖可変領域（ＶＬ）及びＣＬ領域に由来する領域を含む第２ポリペプチドをコードし、ＣＬ領域に由来する領域は、１つ以上の抗原結合ループを含む。いくつかの実施形態では、遺伝子治療のための１つ以上の核酸分子は、（ｉ）重鎖可変領域（ＶＨ）と抗体重鎖のＣＨ１領域に由来する領域とを含む第１ポリペプチド、及び、（ｉｉ）軽鎖可変領域（ＶＬ）と抗体軽鎖のＣＬ領域に由来する領域とを含む第２ポリペプチド、をコードし、ＣＨ１領域に由来する領域及び／又はＣＬ領域に由来する領域は、１つ以上の抗原結合ループを含む。
遺伝子治療の方法の一般的な総説については、Ｇｏｌｄｓｐｉｅｌ ｅｔ ａｌ．，１９９３，Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｙ １２：４８８－５０５、Ｗｕ ａｎｄ Ｗｕ，１９９１，Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ ３：８７－９５、Ｔｏｌｓｔｏｓｈｅｖ，１９９３，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．３２：５７３－５９６、Ｍｕｌｌｉｇａｎ，１９９３，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６０：９２６－９３２、及びＭｏｒｇａｎ ａｎｄ Ａｎｄｅｒｓｏｎ，１９９３，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．６２：１９１－２１７、１９９３年５月、ＴＩＢＴＥＣＨ １１（５）：１５５－２１５を参照。使用され得る組み換えＤＮＡ技術の分野において一般的に公知の方法は、Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．），Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，ＮＹ（１９９３）Ｋｒｉｅｇｌｅｒ，Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ ａｎｄ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ（１９９０）に記載される。
特定の実施形態では、組成物は、本明細書で提供される抗体をコードする核酸を含み、核酸は、適切な宿主において抗体又はキメラタンパク質又はその重鎖若しくは軽鎖を発現する発現ベクターの一部である。特に、このような核酸は、抗体コード領域に作動可能に連結されたプロモーター（例えば、異種プロモーター）を有し、このプロモーターは、誘導性又は構成性であり、そして必要に応じて、組織特異的である。別の特定の実施形態では、抗体コード配列及び任意の他の所望の配列が、ゲノム中の所望の部位での相同組み換えを促進する領域に隣接し、したがって、抗体コード核酸の染色体内発現を提供する核酸分子が使用される（Ｋｏｌｌｅｒ ａｎｄ Ｓｍｉｔｈｉｅｓ，１９８９，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：８９３２－８９３５、Ｚｉｊｌｓｔｒａ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｎａｔｕｒｅ ３４２：４３５－４３８）。上記又は下記の実施形態のそれぞれ又はいずれかであるいくつかの実施形態では、発現される抗体分子は一本鎖抗体である、あるいは、核酸配列は、抗体の重鎖及び軽鎖の両方、又はその断片をコードする配列を含む。
対象への核酸の送達は、直接的（この場合、対象は、核酸又は核酸保有ベクターに直接曝露される）又は間接的（この場合、細胞は、最初にインビトロで核酸で形質転換され、次いで、対象に移植される）のいずれかであり得る。これらの２つのアプローチは、それぞれインビボ又はエクスビボ遺伝子治療として知られている。
特定の実施形態では、核酸配列は、インビボで直接投与され、ここで、配列は、コードされる産物を生成するために発現される。これは、当該分野で公知の多数の方法のいずれかによって、例えば、適切な核酸発現ベクターの一部としてそれらを構築し、そして配列が細胞内になるようにベクターを投与することによって、例えば、欠損又は弱毒化レトロウイルスベクター又は他のウイルスベクター（米国特許第４，９８０，２８６号を参照）を使用する感染によって、あるいは裸のＤＮＡの直接注入によって、あるいは微粒子ボンバードメント（例えば、遺伝子銃）Ｂｉｏｌｉｓｔｉｃ，Ｄｕｐｏｎｔ）の使用、又は脂質若しくは細胞表面受容体若しくは遺伝子導入剤でのコーティング、リポソーム、微粒子、若しくはマイクロカプセルへのカプセル化、又は核に侵入することが知られているペプチドに連結してそれらを投与することによって、受容体媒介エンドサイトーシスを受けるリガンドに連結してそれを投与することによって（例えば、Ｗｕ ａｎｄ Ｗｕ，１９８７，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２：４４２９－４４３２）（これは、受容体を特異的に発現する細胞型を標的化するために使用することができる）達成され得る。別の実施形態では、リガンドがエンドソームを破壊するための融合性ウイルスペプチドを含み、核酸がリソソーム分解を回避することを可能にする核酸－リガンド複合体を形成することができる。更に別の実施形態では、核酸は、特異的受容体を標的化することによって、細胞特異的取り込み及び発現のためにインビボで標的化され得る（例えば、国際公開第９２／０６１８０号、国際公開第９２／２２６３５号、国際公開第９２／２０３１６号、国際公開第９３／１４１８８号、（国際公開第９３／２０２２１号を参照）、あるいは、相同組み換えによって、核酸を細胞内に導入し、発現のために宿主細胞ＤＮＡ内に組み込むことができる（Ｋｏｌｌｅｒ ａｎｄ Ｓｍｉｔｈｉｅｓ，１９８９，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：８９３２－８９３５、ａｎｄ Ｚｉｊｌｓｔｒａ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｎａｔｕｒｅ ３４２：４３５－４３８）。
特定の実施形態では、抗体をコードする核酸配列を含むウイルスベクターが使用される。例えば、レトロウイルスベクターを使用することができる（Ｍｉｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９９３，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．２１７：５８１－５９９を参照）。これらのレトロウイルスベクターは、ウイルスゲノムの正確なパッケージング及び宿主細胞ＤＮＡへの組込みに必要な成分を含む。遺伝子治療に使用される抗体をコードする核酸配列は、対象への遺伝子の送達を容易にする１つ以上のベクターにクローニングすることができる。レトロウイルスベクターについての更なる詳細は、Ｂｏｅｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，１９９４，Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ ６：２９１－３０２に見出され得、これは、幹細胞を化学療法に対してより耐性にするために、造血幹細胞にＭＤＲ１遺伝子を送達するためのレトロウイルスベクターの使用を記載する。遺伝子治療におけるレトロウイルスベクターの使用を説明する他の参考文献は以下の通りである。Ｃｌｏｗｅｓ ｅｔ ａｌ．，１９９４、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９３：６４４－６５１、Ｋｌｅｉｎ ｅｔ ａｌ．，（１９９４）Ｂｌｏｏｄ ８３：１４６７－１４７３）、Ｓａｌｍｏｎｓ ａｎｄ Ｇｕｎｚｂｅｒｇ，１９９３，Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ４：１２９－１４１、及びＧｒｏｓｓｍａｎ ａｎｄ Ｗｉｌｓｏｎ，１９９３，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．ｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌ．３：１１０－１１４。
アデノウイルスは、抗体の組み換え生成において使用され得る他のウイルスベクターである。アデノウイルスは、遺伝子を呼吸器上皮に送達するための特に魅力的なビヒクルである。アデノウイルスは自然に呼吸器上皮に感染し、そこで軽度の疾患を引き起こす。アデノウイルスに基づく送達系の他の標的は、肝臓、中枢神経系、内皮細胞、及び筋肉である。アデノウイルスは、非分裂細胞に感染することができるという利点を有する。Ｋｏｚａｒｓｋｙ ａｎｄ Ｗｉｌｓｏｎ，１９９３，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ３：４９９－５０３は、アデノウイルスに基づく遺伝子治療の総説を提示している。Ｂｏｕｔ ｅｔ ａｌ．，１９９４，Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ５：３－１０は、アカゲザルの呼吸器上皮に遺伝子を移入するためのアデノウイルスベクターの使用を実証した。遺伝子治療におけるアデノウイルスの使用の他の例は、Ｒｏｓｅｎｆｅｌｄ ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５２：４３１－４３４、Ｒｏｓｅｎｆｅｌｄ，ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ｃｅｌｌ ６８：１４３－１５５、Ｚｈｅｎｇ ｅｔ ａｌ．，１９９３，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｎｖｅｓｔ．９１：２２５－２３４、国際公開第９４／１２６４９号、及びＷａｎｇ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ２：７７５－７８３に見出され得る。いくつかの実施形態では、アデノウイルスベクターが使用される。
アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）も利用することができる（Ｗａｌｓｈ ｅｔ ａｌ．，１９９３，Ｐｒｏｃ．Ｓｏｃ．Ｅｘｐ．Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ．２０４：２８９－３００、及び米国特許第５，４３６，１４６号）。特定の実施態態では、ＡＡＶベクターは、本明細書で提供される抗体を発現するために使用される。特定の実施形態では、ＡＡＶは、ＶＨドメインをコードする核酸を含む。他の実施形態では、ＡＡＶは、ＶＬドメインをコードする核酸を含む。特定の実施形態では、ＡＡＶは、ＶＨドメイン及びＶＬドメインをコードする核酸を含む。本明細書において提供される方法のいくつかの実施形態では、対象には、ＶＨドメインをコードする核酸を含むＡＡＶ及びＶＬドメインをコードする核酸を含むＡＡＶが投与される。他の実施形態では、対象は、ＶＨドメイン及びＶＬドメインをコードする核酸を含むＡＡＶを投与される。特定の実施形態では、ＶＨ及びＶＬドメインは過剰発現される。
遺伝子治療に対する別のアプローチは、エレクトロポレーション、リポフェクション、リン酸カルシウム媒介遺伝子導入、又はウイルス感染のような方法によって、組織培養中の細胞に遺伝子を移入するステップを包含する。通常、移入方法は、細胞への選択マーカーの移入を含む。次いで、細胞を選択下に置いて、移入された遺伝子を取り込み、発現している細胞を単離する。次いで、これらの細胞を対象に送達する。
この実施形態では、核酸は、得られた組み換え細胞のインビボ投与の前に細胞に導入される。そのような導入は、遺伝子導入、エレクトロポレーション、マイクロインジェクション、核酸配列を含有するウイルス又はバクテリオファージベクターによる感染、細胞融合、染色体媒介遺伝子導入、マイクロセル媒介遺伝子導入、スフェロプラスト融合などを含むがこれらに限定されない、当技術分野で公知の任意の方法によって行うことができる。細胞への外来遺伝子の導入のための多数の技術が当技術分野で公知である（例えば、Ｌｏｅｆｆｌｅｒ ａｎｄ Ｂｅｈｒ，１９９３，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．２１７：５９９－６１８、Ｃｏｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，１９９３，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．２１７：６１８－６４４、Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａ．Ｔｈｅｒ．２９：６９－９２（１９８５））、レシピエント細胞の必要な発生及び生理学的機能が破壊されないという条件で、本明細書で提供される方法に従って使用することができる。この技術は、核酸の細胞への安定な移入を提供するべきであり、その結果、核酸は、細胞によって発現可能である（例えば、遺伝性であり、その細胞子孫によって発現可能である）。
得られた組み換え細胞は、当該分野で公知の種々の方法によって対象に送達され得る。組み換え血液細胞（例えば、造血幹細胞又は造血前駆細胞）は、静脈内投与され得る。使用が想定される細胞の量は、所望の効果、患者の病態などに依存し、当業者によって決定することができる。
遺伝子治療の目的のために核酸が導入され得る細胞は、任意の所望の利用可能な細胞型を包含し、そして上皮細胞、内皮細胞、ケラチノサイト、線維芽細胞、筋細胞、肝細胞、Ｔリンパ球、Ｂリンパ球、単球、マクロファージ、好中球、好酸球、巨核球、顆粒球などの血液細胞、様々な幹細胞又は前駆細胞、特に、例えば、骨髄、臍帯血、末梢血、胎児肝臓などから得られるような造血幹細胞又は前駆細胞を含むが、これらに限定されない。
特定の実施形態では、遺伝子治療に使用される細胞は、対象に対して自己由来である。
組み換え細胞が遺伝子治療において使用される実施形態では、抗体をコードする核酸配列は、それらが細胞又はそれらの子孫によって発現可能であるように細胞に導入され、次いで、組み換え細胞は、治療効果のためにインビボで投与される。特定の実施形態では、幹細胞又は前駆細胞が使用される。インビトロで単離及び維持され得る任意の幹細胞及び／又は前駆細胞は、本明細書中に提供される方法のこの実施形態に従って潜在的に使用され得る（例えば、国際公開第９４／０８５９８号、Ｓｔｅｍｐｌｅ ａｎｄ Ａｎｄｅｒｓｏｎ，１９９２，Ｃｅｌｌ ７ １：９７３－９８５、Ｒｈｅｉｎｗａｌｄ，１９８０，Ｍｅｔｈ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏ．２１Ａ：２２９、及びＰｉｔｔｅｌｋｏｗ ａｎｄ Ｓｃｏｔｔ，１９８６，Ｍａｙｏ Ｃｌｉｎｉｃ Ｐｒｏｃ．６１：７７１を参照）。
特定の実施形態では、遺伝子治療の目的のために導入される核酸は、コード領域に作動可能に連結された誘導性プロモーターを含み、その結果、核酸の発現は、適切な転写誘導因子の存在又は非存在を制御することによって制御可能である。
５．９ 診断アッセイ及び方法
本明細書において提供される抗原に免疫特異的に結合する標識された抗体並びにその誘導体及び類似体は、疾患又は障害を検出、診断、又はモニターするための診断目的に使用することができる。
本明細書で提供される抗体は、本明細書で記載されるような、又は当業者に公知のような古典的な免疫組織学的方法を使用して生体試料中の抗原レベルをアッセイするために使用することができる（例えば、Ｊａｌｋａｎｅｎ ｅｔ ａｌ．，１９８５，Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１０１巻：９７６～９８５頁、及びＪａｌｋａｎｅｎ ｅｔ ａｌ．，１９８７，Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１０５：３０８７－３０９６を参照）。タンパク質遺伝子発現を検出するために有用な他の抗体ベースの方法としては、酵素結合免疫吸着アッセイイ（（ＥＬＩＳＡ）及びラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ））が挙げられる。適切な抗体アッセイ標識は当技術分野で公知であり、グルコースオキシダーゼ、ヨウ素（１２５Ｉ、１２１Ｉ）、炭素（１４Ｃ）、硫黄（３５Ｓ）、トリチウム（３Ｈ）、インジウム（１２１ Ｉｎ）、テクネチウム（９９ Ｔｃ）等の放射性同位元素、ルミノールなどの発光標識、並びにフルオレセイン及びローダミンなどの蛍光標識、並びにビオチンなどの酵素標識が含まれる。本明細書で提供される１つの態様は、ヒトにおける疾患又は障害の検出及び診断である。
対象のサイズ及び使用される画像化システムが、診断画像を生成するために必要とされる画像化部分の量を決定することは、当該分野で理解される。放射性同位体部分の場合、ヒト対象について、注入される放射能の量は、通常、９９ Ｔｃの約５～２０ミリキュリーの範囲である。次いで、標識された抗体は、特定のタンパク質を含む細胞の位置に蓄積する。インビボ腫瘍画像化は、Ｓ．Ｗ．Ｂｕｒｃｈｉｅｌ ｅｔ ａｌ．，”Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ ｏｆ Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｔｈｅｉｒ Ｆｒａｇｍｅｎｔｓ”に記載される。（Ｔｕｍｏｒ Ｉｍａｇｉｎｇ：Ｔｈｅ Ｒａｄｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ，Ｓ．Ｗ．の第１３章。Ｂｕｒｃｈｉｅｌ ａｎｄ Ｂ．Ａ．Ｒｈｏｄｅｓ，ｅｄｓ．，Ｍａｓｓｏｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｉｎｃ．（１９８２）。
使用される標識のタイプ及び投与の様式を含むいくつかの変数に依存して、標識された抗体が対象の部位に濃縮することを可能にするため、及び結合していない標識された抗体がバックグラウンドレベルまで除去されるための投与後の時間間隔は、６～４８時間又は６～２４時間又は６～１２時間である。別の実施形態では、投与後の時間間隔は５～２０日又は５～１０日である。
一実施形態では、疾患又は障害のモニタリングは、疾患又は障害を診断するための方法を繰り返すことによって、例えば、最初の診断の１ヶ月後、最初の診断の６ヶ月後、最初の診断の１年後などに行われる。
標識された分子の存在は、インビボスキャニングのための当該分野で公知の方法を使用して、対象において検出され得る。これらの方法は、使用される標識のタイプに依存する。当業者は、特定の標識を検出するための適切な方法を決定することができる。本明細書において提供される診断方法において使用され得る方法及びデバイスとしては、コンピュータ断層撮影法（ＣＴ）、陽電子放射断層撮影法（ＰＥＴ）などの全身走査、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）、及び超音波検査が挙げられるが、これらに限定されない。
特定の実施形態では、この分子は、放射性同位体で標識され、そして放射線応答性手術器具を使用して患者において検出される（Ｔｈｕｒｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，米国特許第５，４４１，０５０号）。別の実施形態では、この分子は、蛍光化合物で標識され、そして蛍光応答性走査機器を使用して患者において検出される。別の実施形態では、分子は陽電子放出金属で標識され、陽電子放出断層撮影法を用いて患者において検出される。更に別の実施形態では、分子は常磁性標識で標識され、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）を使用して患者において検出される。
５．１０ キット
適切な包装材料に包装された、本明細書で提供される抗体又は本明細書で提供される組成物（例えば、医薬組成物）を含むキットも本明細書で提供される。キットは、必要に応じて、成分の説明又はその中の成分のインビトロ、インビボ、若しくはエキソビボでの使用のための指示書を含むラベル又は包装挿入物を含む。
用語「包装材料」は、キットの構成要素を収容する物理的構造を指す。包装材料は、成分を無菌的に維持することができ、そのような目的のために一般的に使用される材料（例えば、紙、段ボール、ガラス、プラスチック、箔、アンプル、バイアル、チューブなど）から作製することができる。
本明細書で提供されるキットは、ラベル又は挿入物を含むことができる。ラベル又は挿入物は、「印刷物」、例えば、構成要素、キット又は包装材料（例えば、箱）とは別個の又はそれに添付された、あるいは例えば、キット構成要素を含有するアンプル、チューブ、又はバイアルに取り付けられた紙又は厚紙を含む。ラベル又は挿入物は、ディスク（例えば、ハードディスク、カード、メモリディスク）、ＣＤ若しくはＤＶＤ－ＲＯＭ／ＲＡＭ、ＤＶＤ、ＭＰ３、磁気テープなどの光ディスク、又はＲＡＭ及びＲＯＭなどの電気記憶媒体、又は磁気／光学記憶媒体、ＦＬＡＳＨ媒体、若しくはメモリタイプカードなどのこれらのハイブリッドなどのコンピュータ可読媒体を更に含むことができる。ラベル又は挿入物は、製造業者情報、ロット番号、製造業者所在地、及び日付を識別する情報を含むことができる。
本明細書で提供されるキットは、他の構成要素を更に含むことができる。キットの各構成要素は、個々の容器内に封入することができ、様々な容器の全てを単一のパッケージ内に入れることができる。キットは、冷蔵用に設計することもできる。キットは更に、本明細書で提供される抗体、又は本明細書で提供される抗体をコードする核酸を含む細胞を含むように設計することができる。キット中の細胞は、使用の準備ができるまで適切な保存条件下で維持することができる。
また、特定の抗原に免疫特異的に結合する抗体のパネルが本明細書で提供される。具体的な実施形態では、本明細書で提供される抗体のパネルは、抗原に対する異なる会合速度定数、異なる解離速度定数、異なる親和性、及び／又は、抗原に対する異なる特異性を有する。特定の実施形態では、約１０個、好ましくは約２５個、約５０個、約７５個、約１００個、約１２５個、約１５０個、約１７５個、約２００個、約２５０個、約３００個、約３５０個、約４００個、約４５０個、約５００個、約５５０個、約６００個、約６５０個、約７００個、約７５０個、約８００個、約８５０個、約９００個、約９５０個、又は約１０００個以上のパネルが本明細書で提供される。抗体のパネルは、ＥＬＩＳＡなどのアッセイに例えば、９６ウェル又は３８４ウェルプレートで使用することができる。
特に定義されない限り、本明細書で使用されている全ての技術的用語及び科学的用語は、本発明が属する分野の当業者に共通に理解されるものと同じ意味を有している。本明細書に記載のものと同様又は同等の方法及び材料を本発明の実施又は試験に使用することができるが、好適な方法及び材料を本明細書に記載する。
本明細書で使用される場合、数値は、本文書全体を通して範囲形式で提示されることが多い。範囲形式の使用は、単に便宜上及び簡潔さのためであり、文脈が別途明確に示さない限り、本発明の範囲に対する柔軟性のない限定として解釈されるべきではない。したがって、範囲の使用には、文脈で明確に別段の指示がない限り、全ての可能な部分範囲、その範囲内の全ての個々の数値、及びそのような範囲内の整数及び範囲内の値又は整数の分数を含む全ての数値又は数値範囲が明示的に含まれる。この構成は、範囲の広さにかかわらず、本特許文書全体を通して全ての文脈において適用される。したがって、例えば、９０～１００％の範囲への言及は、９１～９９％、９２～９８％、９３～９５％、９１～９８％、９１～９７％、９１～９６％、９１～９５％、９１～９４％、９１～９３％などを含む。９０～１００％の範囲への言及は、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９５％、９７％など、並びに９１．１％、９１．２％、９１．３％、９１．４％、９１．５％など、９２．１％、９２．２％、９２．３％、９２．４％、９２．５％なども含む。
更に、１～３、３～５、５～１０、１０～２０、２０～３０、３０～４０、４０～５０、５０～６０、６０～７０、７０～８０、８０～９０、９０～１００、１００～１１０、１１０～１２０、１２０～１３０、１３０～１４０、１４０～１５０、１５０～１６０、１６０～１７０、１７０～１８０、１８０～１９０、１９０～２００、２００～２２５、２２５～２５０の範囲への言及は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０などを含む。更なる例では、２５～２５０、２５０～５００、５００～１，０００、１，０００～２５００、２５００～５０００、５０００～２５０００、２５０００～５００００の範囲への言及は、任意の数値又はそのような値内の若しくはそのような値を包含する範囲、例えば、２５、２６、２７、２８、２９．２５０、２５１、２５２、２５３、２５４．５００、５０１、５０２、５０３、５０４等を含む。
同様に本明細書で使用される場合、一連の範囲が本文書全体にわたって開示される。一連の範囲の使用は、別の範囲を提供するための上限及び下限の範囲の組み合わせを含む。この構成は、範囲の広さにかかわらず、本特許文書全体を通して全ての文脈において適用される。したがって、例えば、５～１０、１０～２０、２０～３０、３０～４０、４０～５０、５０～７５、７５～１００、１００～１５０などの一連の範囲への言及は、５～２０、５～３０、５～４０、５～５０、５～７５、５～１００、５～１５０、及び１０～３０、１０～４０、１０～５０、１０～７５、１０～１００、１０～１５０、及び２０～４０、２０～５０、２０～７５、２０～１００、２０～１５０などの範囲を含む。
簡潔にするために、特定の略語が本明細書で使用される。一例として、アミノ酸残基を表す単一文字の略語がある。アミノ酸及びそれらに対応する３文字及び１文字の略語は以下のとおりである：
Figure 2024515303000003
本発明は、概して、多数の実施形態を説明するために肯定的な言葉を使用して本明細書に開示される。また、本発明には、物質又は材料、方法のステップ及び条件、プロトコル、手順、アッセイ又は分析など、特定の主題が完全に又は部分的に除外されている実施形態も具体的に含まれる。したがって、本明細書は、概ね、本発明が含まないものに関して本明細書で表現されていない場合であっても、それでもなお、本発明に明示的に含まれていない態様が本明細書で開示される。
本発明の多くの実施形態が説明されてきた。しかしながら、様々な修正が、本発明の趣旨及び範囲から逸脱することなく実行され得ることが、理解されるであろう。したがって、以下の実施例は、特許請求の範囲に記載された発明の範囲を説明することを意図しているが、限定するものではない。
６．実施形態
本発明は、以下の非限定的な実施形態を提供する。
１つのセットの実施形態（実施形態セットＡ）では、以下が提供される。
Ａ１．（実施形態１）結合分子であって、
（ｉ）重鎖可変領域（ＶＨ）と抗体重鎖のＣＨ１領域とに由来する領域を含む第１ポリペプチド、及び、
（ｉｉ）抗体軽鎖の軽鎖可変領域（ＶＬ）及びのＣＬ領域に由来する領域を含む第２ポリペプチドを含み、
ＣＨ１領域に由来する領域及び／又はＣＬ領域に由来する領域が、１つ以上の抗原結合ループを含む、結合分子。
Ａ２．（実施例２）ＣＨ１領域に由来する領域内の１つ以上の抗原結合ループが、ＣＨ１領域のＡＢ、ＢＣ、ＣＤ、ＤＥ、ＥＦ、及び／又はＦＧループ領域にある、実施形態Ａ１に記載の結合分子。
Ａ３．（実施形態３）ＣＬ領域に由来する領域内の１つ以上の抗原結合ループが、ＣＬ領域のＡＢ、ＢＣ、ＣＤ、ＤＥ、ＥＦ、及び／又はＦＧループ領域にある、実施形態Ａ１又はＡ２に記載の結合分子。
Ａ４．（実施形態４）ＣＨ１領域に由来する領域は、１つ又は２つの抗原結合ループを含む、実施形態Ａ １～Ａ ３のいずれか１つに記載の結合分子。
Ａ５．（実施例５）ＣＨ領域に由来する領域は、１つ又は２つの抗原結合ループを含む、実施形態Ａ １～Ａ ４のいずれか１つに記載の結合分子。
Ａ６．（実施例６）ＣＨ１領域に由来する領域が、ＣＨ１領域のＣＤループ領域に１つの抗原結合ループを含む、実施形態Ａ １～Ａ ５のいずれか１つに記載の結合分子。
Ａ７．（実施例７）ＣＨ１領域に由来する領域が、ＣＨ１領域のＤＥループ領域に１つの抗原結合ループを含む、実施形態Ａ １～Ａ ６のいずれか１つに記載の結合分子。
Ａ８．（実施例８）ＣＨ１領域に由来する領域が、ＣＨ１領域のＣＤループ領域に１つの抗原結合ループを含み、ＣＨ１領域のＤＥループ領域に１つの抗原結合ループを含む、実施形態Ａ １～Ａ ７のいずれか１つに記載の結合分子。
Ａ９．（実施例９）ＣＬ領域に由来する領域は、ＣＬ領域のＣＤループ領域に１つの抗原結合ループを含む、実施形態Ａ １～Ａ ８のいずれか１つに記載の結合分子。
Ａ１０．（実施例１０）ＣＬ領域に由来する領域は、ＣＬ領域のＤＥループ領域に１つの抗原結合ループを含む、実施形態Ａ １～Ａ ９のいずれか１つに記載の結合分子。
Ａ１１．（実施例１１）ＣＬ領域に由来する領域は、ＣＬ領域のＣＤループ領域における１つの抗原結合ループ及びＣＬ領域のＤＥループ領域における１つの抗原結合ループを含む、実施形態Ａ １～Ａ １０のいずれか１つに記載の結合分子。
Ａ１２．（実施例１２）ＣＨ１領域に由来する領域が、ＣＨ１領域のＣＤループ領域に１つの抗原結合ループを含み、ＣＬ領域に由来する領域が、ＣＬ領域のＣＤループ領域に１つの抗原結合ループを含む、実施形態Ａ １～Ａ ６又はＡ９のいずれか１つに記載の結合分子。
Ａ１３．（実施例１３）ＣＨ１領域に由来する領域が、ＣＨ１領域のＣＤループ領域に１つの抗原結合ループを含み、ＣＬ領域に由来する領域が、ＣＬ領域のＤＥループ領域に１つの抗原結合ループを含む、実施形態Ａ １～Ａ ６又はＡ１０のいずれか１つに記載の結合分子。
Ａ１４．（実施例１４）ＣＨ１領域に由来する領域は、ＣＨ１領域のＣＤループ領域に１つの抗原結合ループを含み、ＣＬ領域に由来する領域は、ＣＬ領域のＣＤループ領域における１つの抗原結合ループ及びＣＬ領域のＤＥループ領域における１つの抗原結合ループを含む、実施形態Ａ １～Ａ ６又はＡ ９～Ａ １３のいずれか１つに記載の結合分子。
Ａ１５．（実施例１５）ＣＨ１領域に由来する領域が、ＣＨ１領域のＤＥループ領域に１つの抗原結合ループを含み、ＣＬ領域に由来する領域が、ＣＬ領域のＣＤループ領域に１つの抗原結合ループを含む、実施形態Ａ １～Ａ ５、Ａ７又はＡ９のいずれか１つに記載の結合分子。
Ａ１６．（実施例１６）ＣＨ１領域に由来する領域が、ＣＨ１領域のＤＥループ領域に１つの抗原結合ループを含み、ＣＬ領域に由来する領域が、ＣＬ領域のＤＥループ領域に１つの抗原結合ループを含む、実施形態Ａ １～Ａ ５、Ａ７又はＡ１０のいずれか１つに記載の結合分子。
Ａ１７．（実施例１７）ＣＨ１領域に由来する領域が、ＣＨ１領域のＤＥループ領域に１つの抗原結合ループを含み、ＣＬ領域に由来する領域が、ＣＬ領域のＣＤループ領域における１つの抗原結合ループ及びＣＬ領域のＤＥループ領域における１つの抗原結合ループを含む、実施形態Ａ １～Ａ ５、Ａ７、Ａ ９～Ａ １１、Ａ１５又はＡ１６のいずれか１つに記載の結合分子。
Ａ１８．（実施例１８）ＣＨ１領域に由来する領域が、ＣＨ１領域のＣＤループ領域における１つの抗原結合ループ、及びＣＨ１領域のＤＥループ領域における１つの抗原結合ループを含み、ＣＬ領域に由来する領域が、ＣＬ領域のＣＤループ領域に１つの抗原結合ループを含む、実施形態Ａ １～Ａ ９、Ａ１２又はＡ１５のいずれか１つに記載の結合分子。
Ａ１９．（実施例１９）ＣＨ１領域に由来する領域は、ＣＨ１領域のＣＤループ領域における１つの抗原結合ループ、及びＣＨ１領域のＤＥループ領域における１つの抗原結合ループを含み、ＣＬ領域に由来する領域が、ＣＬ領域のＤＥループ領域に１つの抗原結合ループを含む、実施形態Ａ １～Ａ ８、Ａ１０、Ａ１３、又はＡ１６のいずれか１つに記載の結合分子。
Ａ２０．（実施例２０）ＣＨ１領域に由来する領域が、ＣＨ１領域のＣＤループ領域における１つの抗原結合ループ及びＣＨ１領域のＤＥループ領域における１つの抗原結合ループを含み、ＣＬ領域に由来する領域が、ＣＬ領域のＣＤループ領域における１つの抗原結合ループ及びＣＬ領域のＤＥループ領域における１つの抗原結合ループを含む、実施形態Ａ １～Ａ １９のいずれか１つに記載の結合分子。
Ａ２１．（実施例２１Ａ）ＣＨ１領域に由来する領域が、配列番号１のアミノ酸配列を含むヒトＩｇＧ１ ＣＨ１領域に由来する領域であり、ＣＨ１領域に由来する領域が、配列番号１と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％又は９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態Ａ １～Ａ ２０のいずれか１つに記載の結合分子。
Ａ２２．（実施例２２）ＣＬ領域に由来する領域は、配列番号２のアミノ酸配列を含むヒトＣＬカッパ領域に由来する領域であり、ＣＬ領域に由来する領域は、配列番号２に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％又は９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態Ａ １～Ａ ２１のいずれか１つに記載の結合分子。
Ａ２３．（実施例２３）ＣＨ１領域のＣＤループ領域における抗原結合ループが、ヒトＩｇＧ１ ＣＨ１領域のＣＤループのアミノ酸残基ＴＳＧを置換する、実施形態Ａ２１又はＡ２２に記載の結合分子。
Ａ２４．（実施例２４）ＣＨ１領域のＤＥループ領域における抗原結合ループが、ヒトＩｇＧ１ ＣＨ１領域のＤＥループのアミノ酸残基ＱＳＳを置換する、実施形態Ａ２１又はＡ２２に記載の結合分子。
Ａ２５．（実施例２５Ａ）ＣＬ領域のＣＤループ領域における抗原結合ループが、ヒトＣＬカッパ領域のＣＤループのアミノ酸残基ＳＧＮＳを置換している、実施形態Ａ２１又はＡ２２に記載の結合分子。
Ａ２６．（実施例２６Ａ）ＣＬ領域のＤＥループ領域における抗原結合ループが、ヒトＣＬカッパ領域のＤＥループのアミノ酸残基ＳＫＤを置換する、実施形態Ａ２１又はＡ２２に記載の結合分子。
Ａ２７．（実施例２７Ａ）１つ以上の抗原結合ループのそれぞれは、７～１５個のアミノ酸残基を含む、実施形態Ａ １～Ａ ２６のいずれか１つに記載の結合分子。
Ａ２８．（実施例２８）ＶＨ領域及びＶＬ領域は、第１の抗原に結合し、ＣＨ１領域に由来する領域及び／又はＣＬ領域に由来する領域は、第２の抗原に結合する、実施形態Ａ １～Ａ ２７のいずれか１つに記載の結合分子。
Ａ２９．（実施例２９Ａ）第１の抗原及び第２の抗原が同じ抗原である、実施形態Ａ２８に記載の結合分子。
Ａ３０．（実施例３０Ａ）第１の抗原及び第２の抗原が２つの異なる抗原である、実施形態Ａ２８に記載の結合分子。
Ａ３１．（実施例３１）実施形態Ｂ１～Ａ１－Ａ３０のいずれか１つに記載の二重特異性抗体をコードする、核酸。
Ａ３２．（実施例３２）実施形態Ａ３１に記載の核酸を含む、ベクター。
別のセットの実施形態（実施形態セットＢ）では、以下が提供される。
Ｂ１．（実施形態１）結合分子の集団を含む定常領域ライブラリー（ＣＲＬ）であって、結合分子のそれぞれが
（ｉ）重鎖可変領域（ＶＨ）と抗体重鎖のＣＨ１領域に由来する領域とを含む第１ポリペプチド、及び、
（ｉｉ）抗体軽鎖の軽鎖可変領域（ＶＬ）及びＣＬ領域に由来する領域を含む第２ポリペプチドを含み、
結合分子の集団は、ＣＨ１領域に由来する領域及び／又はＣＬ領域に由来する領域に多様なアミノ酸配列を含む。
Ｂ２．（実施形態２）ＣＨ１領域に由来する領域内の多様なアミノ酸配列が、ＣＨ１領域のＡＢ、ＢＣ、ＣＤ、ＤＥ、ＥＦ、及び／又はＦＧループ領域にある、実施形態Ｂ１に記載のＣＲＬ。
Ｂ３．（実施形態３）ＣＬ領域に由来する領域における多様なアミノ酸配列が、ＣＬ領域のＡＢ、ＢＣ、ＣＤ、ＤＥ、ＥＦ、及び／又はＦＧループ領域にある、実施形態Ｂ１又はＢ２のＣＲＬ。
Ｂ４．（実施形態４）結合分子の集団が、ＣＨ１領域に由来する領域における１つ又は２つのループ領域に多様なアミノ酸配列を含む、実施形態Ｂ １～Ｂ ３のいずれか１つに記載のＣＲＬ。
Ｂ５．（実施形態５）結合分子の集団が、ＣＬ領域に由来する領域中の１つ又は２つのループ領域中に多様なアミノ酸配列を含む、実施形態Ｂ １～Ｂ ４のいずれか１つに記載のＣＲＬ。
Ｂ６．（実施形態６）結合分子の集団が、ＣＨ１領域のＣＤループ領域に多様なアミノ酸配列を含む、実施形態Ｂ １～Ｂ ５のいずれか１つに記載のＣＲＬ。
Ｂ７．（実施形態７）結合分子の集団が、ＣＨ１領域のＤＥループ領域に多様なアミノ酸配列を含む、実施形態Ｂ １～Ｂ ６のいずれか１つに記載のＣＲＬ。
Ｂ８．（実施形態８）結合分子の集団が、ＣＨ１領域のＣＤループ領域及びＤＥループ領域に多様なアミノ酸配列を含む、実施形態Ｂ １～Ｂ ７のいずれか１つに記載のＣＲＬ。
Ｂ９．（実施形態９）結合分子の集団が、ＣＬ領域のＣＤループ領域に多様なアミノ酸配列を含む、実施形態Ｂ １～Ｂ ８のいずれか１つに記載のＣＲＬ。
Ｂ１０．（実施形態１０）結合分子の集団が、ＣＬ領域のＤＥループ領域に多様なアミノ酸配列を含む、実施形態Ｂ １～Ｂ ９のいずれか１つに記載のＣＲＬ。
Ｂ１１．（実施形態１１）結合分子の集団が、ＣＬ領域のＣＤループ領域及びＤＥループ領域に多様なアミノ酸配列を含む、実施形態Ｂ １～Ｂ １０のいずれか１つに記載のＣＲＬ。
Ｂ１２．（実施形態１２）結合分子の集団が、ＣＨ１領域のＣＤループ領域に多様なアミノ酸配列を含み、結合分子の集団が、ＣＬ領域のＣＤループ領域に多様なアミノ酸配列を含む、実施形態Ｂ １～Ｂ ６又はＢ９のいずれか１つに記載のＣＲＬ。
Ｂ１３．（実施形態１３）結合分子の集団が、ＣＨ１領域のＣＤループ領域に多様なアミノ酸配列を含み、結合分子の集団が、ＣＬ領域のＤＥループ領域に多様なアミノ酸配列を含む、実施形態Ｂ １～Ｂ ６又はＢ１０のいずれか１つに記載のＣＲＬ。
Ｂ１４．（実施形態１４）結合分子の集団が、ＣＨ１領域のＣＤループ領域に多様なアミノ酸配列を含み、結合分子の集団が、ＣＬ領域のＣＤループ領域及びＤＥループ領域に多様なアミノ酸配列を含む、実施形態Ｂ １～Ｂ ６又はＢ ９～Ｂ １３のいずれか１つに記載のＣＲＬ。
Ｂ１５．（実施形態１５）結合分子の集団が、ＣＨ１領域のＤＥループ領域に多様なアミノ酸配列を含み、結合分子の集団が、ＣＬ領域のＣＤループ領域に多様なアミノ酸配列を含む、実施形態Ｂ １～Ｂ ５、Ｂ７、又はＢ９のいずれか１つに記載のＣＲＬ。
Ｂ１６．（実施形態１６）結合分子の集団が、ＣＨ１領域のＤＥループ領域に多様なアミノ酸配列を含み、結合分子の集団が、ＣＬ領域のＤＥループ領域に多様なアミノ酸配列を含む、実施形態Ｂ １～Ｂ ５、Ｂ７、又はＢ１０のいずれか１つに記載のＣＲＬ。
Ｂ１７．（実施形態１７）結合分子の集団が、ＣＨ１領域のＤＥループ領域に多様なアミノ酸配列を含み、結合分子の集団が、ＣＬ領域のＣＤループ領域及びＤＥループ領域に多様なアミノ酸配列を含む、実施形態Ｂ １～Ｂ ５、Ｂ７、Ｂ ９～Ｂ １１、Ｂ１５又はＢ１６のいずれか１つに記載のＣＲＬ。
Ｂ１８．（実施形態１８）結合分子の集団が、ＣＨ１領域のＣＤループ領域及びＣＨ１領域のＤＥループ領域に多様なアミノ酸配列を含み、結合分子の集団が、ＣＬ領域のＣＤループ領域に多様なアミノ酸配列を含む、実施形態Ｂ １～Ｂ ９、Ｂ１２又はＢ１５のいずれか１つに記載のＣＲＬ。
Ｂ１９．（実施形態１９）結合分子の集団が、ＣＨ１領域のＣＤループ領域及びＤＥループ領域に多様なアミノ酸配列を含み、結合分子の集団が、ＣＬ領域のＤＥループ領域に多様なアミノ酸配列を含む、実施形態Ｂ １～Ｂ ８、Ｂ１０、Ｂ１３、又はＢ１６のいずれか１つに記載のＣＲＬ。
Ｂ２０．（実施形態２０）結合分子の集団が、ＣＨ１領域のＣＤループ領域及びＤＥループ領域に多様なアミノ酸配列を含み、結合分子の集団が、ＣＬ領域のＣＤループ領域及びＤＥループ領域に多様なアミノ酸配列を含む、実施形態Ｂ １～Ｂ １９のいずれか１つに記載のＣＲＬ。
Ｂ２１．（実施形態２１）ＣＨ１領域に由来する領域が、配列番号１のアミノ酸配列を含むヒトＩｇＧ１ ＣＨ１領域に由来する領域であり、ＣＨ１領域に由来する領域が、配列番号１に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％又は９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態Ｂ １～Ｂ ２０のいずれか１つに記載のＣＲＬ。
Ｂ２２．（実施形態２２）ＣＬ領域に由来する領域が、配列番号２のアミノ酸配列を含むヒトＣＬカッパ領域に由来する領域であり、ＣＬ領域に由来する領域が、配列番号２に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％又は９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態Ｂ １～Ｂ ２１のいずれか１つに記載のＣＲＬ。
Ｂ２３．（実施形態２３）ヒトＩｇＧ１ ＣＨ１領域のＣＤループのアミノ酸残基ＴＳＧが、ＣＲＬ中の結合分子中の多様なアミノ酸配列で置換されている、実施形態Ｂ２１又はＢ２２に記載のＣＲＬ。
Ｂ２４．（実施形態２４）ヒトＩｇＧ１ ＣＨ１領域のＤＥループのアミノ酸残基ＱＳＳが、ＣＲＬ中の結合分子中の多様なアミノ酸配列で置換されている、実施形態Ｂ２１又はＢ２２に記載のＣＲＬ。
Ｂ２５．（実施形態２５）ヒトＣＬカッパ領域のＣＤループのアミノ酸残基ＳＧＮＳが、ＣＲＬ中の結合分子中の多様なアミノ酸配列で置換されている、実施形態Ｂ２１又はＢ２２に記載のＣＲＬ。
Ｂ２６．（実施形態２６）ヒトＣＬカッパ領域のＤＥループのアミノ酸残基ＳＫＤが、ＣＲＬ中の結合分子中の多様なアミノ酸配列で置換されている、実施形態Ｂ２１又はＢ２２に記載のＣＲＬ。
Ｂ２７．（実施形態２７）多様なアミノ酸配列が、７～１５個のアミノ酸残基を含む、実施形態Ｂ１～Ｂ２６のいずれか１つに記載のＣＲＬ。
Ｂ２８．（実施形態２８）抗体のＣＨ１領域由来の領域及び／又はＣＬ領域由来の領域をそれぞれが含む分子の集団を含む定常領域ライブラリー（ＣＲＬ）であって、分子の集団は、ＣＨ１領域由来の領域及び／又はＣＬ領域由来の領域に多様なアミノ酸配列を含む、定常領域ライブラリー（ＣＲＬ）。
Ｂ２９．（実施形態２９）ＣＨ１領域に由来する領域内の多様なアミノ酸配列が、ＣＨ１領域のＡＢ、ＢＣ、ＣＤ、ＤＥ、ＥＦ、及び／又はＦＧループ領域にある、実施形態Ｂ２８に記載のＣＲＬ。
Ｂ３０．（実施形態３０）ＣＬ領域に由来する領域内の多様なアミノ酸配列が、ＣＬ領域のＡＢ、ＢＣ、ＣＤ、ＤＥ、ＥＦ、及び／又はＦＧループ領域にある、実施形態Ｂ２８に記載のＣＲＬ。
Ｂ３１．（実施形態３１）分子の集団が、ＣＨ１領域に由来する領域中の１つ又は２つのループ領域中に多様なアミノ酸配列を含む、実施形態Ｂ２８に記載のＣＲＬ。
Ｂ３２．（実施形態３２）分子の集団が、ＣＬ領域に由来する領域中の１つ又は２つのループ領域中に多様なアミノ酸配列を含む、実施形態Ｂ２８に記載のＣＲＬ。
Ｂ３３．（実施形態３３）分子の集団が、ＣＨ１領域のＣＤループ領域に多様なアミノ酸配列を含む、実施形態Ｂ２８に記載のＣＲＬ。
Ｂ３４．（実施形態３４）分子の集団が、ＣＨ１領域のＤＥループ領域に多様なアミノ酸配列を含む、実施形態Ｂ２８に記載のＣＲＬ。
Ｂ３５．（実施形態３５）分子の集団が、ＣＨ１領域のＣＤループ領域及びＤＥループ領域に多様なアミノ酸配列を含む、実施形態Ｂ２８に記載のＣＲＬ。
Ｂ３６．（実施形態３６）分子の集団が、ＣＬ領域のＣＤループ領域に多様なアミノ酸配列を含む、実施形態Ｂ２８に記載のＣＲＬ。
Ｂ３７．（実施形態３７）分子の集団が、ＣＬ領域のＤＥループ領域に多様なアミノ酸配列を含む、実施形態Ｂ２８に記載のＣＲＬ。
Ｂ３８．（実施形態３８）分子の集団が、ＣＬ領域のＣＤループ領域及びＤＥループ領域に多様なアミノ酸配列を含む、実施形態Ｂ２８に記載のＣＲＬ。
Ｂ３９．（実施形態３９）分子の集団が、ＣＨ１領域のＣＤループ領域に多様なアミノ酸配列を含み、分子の集団が、ＣＬ領域のＣＤループ領域に多様なアミノ酸配列を含む、実施形態Ｂ２８に記載のＣＲＬ。
Ｂ４０．（実施形態４０）分子の集団が、ＣＨ１領域のＣＤループ領域に多様なアミノ酸配列を含み、分子の集団が、ＣＬ領域のＤＥループ領域に多様なアミノ酸配列を含む、実施形態Ｂ２８に記載のＣＲＬ。
Ｂ４１．（実施形態４１）分子の集団が、ＣＨ１領域のＣＤループ領域に多様なアミノ酸配列を含み、分子の集団が、ＣＬ領域のＣＤループ領域及びＤＥループ領域に多様なアミノ酸配列を含む、実施形態Ｂ２８に記載のＣＲＬ。
Ｂ４２．（実施形態４２）分子の集団が、ＣＨ１領域のＤＥループ領域に多様なアミノ酸配列を含み、分子の集団が、ＣＬ領域のＣＤループ領域に多様なアミノ酸配列を含む、実施形態Ｂ２８に記載のＣＲＬ。
Ｂ４３．（実施形態４３）分子の集団が、ＣＨ１領域のＤＥループ領域に多様なアミノ酸配列を含み、分子の集団が、ＣＬ領域のＤＥループ領域に多様なアミノ酸配列を含む、実施形態Ｂ２８に記載のＣＲＬ。
Ｂ４４．（実施形態４４）分子の集団が、ＣＨ１領域のＤＥループ領域に多様なアミノ酸配列を含み、分子の集団が、ＣＬ領域のＣＤループ領域及びＤＥループ領域に多様なアミノ酸配列を含む、実施形態Ｂ２８に記載のＣＲＬ。
Ｂ４５．（実施形態４５）分子の集団が、ＣＨ１領域のＣＤループ領域及びＣＨ１領域のＤＥループ領域に多様なアミノ酸配列を含み、かつ分子の集団が、ＣＬ領域のＣＤループ領域に多様なアミノ酸配列を含む、実施形態Ｂ２８に記載のＣＲＬ。
Ｂ４６．（実施形態４６）分子の集団が、ＣＨ１領域のＣＤループ領域及びＤＥループ領域に多様なアミノ酸配列を含み、分子の集団が、ＣＬ領域のＤＥループ領域に多様なアミノ酸配列を含む、実施形態Ｂ２８に記載のＣＲＬ。
Ｂ４７．（実施形態４７）分子の集団が、ＣＨ１領域のＣＤループ領域及びＤＥループ領域に多様なアミノ酸配列を含み、分子の集団が、ＣＬ領域のＣＤループ領域及びＤＥループ領域に多様なアミノ酸配列を含む、実施形態Ｂ２８に記載のＣＲＬ。
Ｂ４８．（実施形態４８）ＣＨ１領域に由来する領域は、配列番号１のアミノ酸配列を含むヒトＩｇＧ１ ＣＨ１領域由来の領域であり、ＣＨ１領域由来の領域は、配列番号１に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％又は９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態Ｂ ２８～Ｂ ４７のいずれか１つに記載のＣＲＬ。
Ｂ４９．（実施形態４９）ＣＬ領域に由来する領域が、配列番号２のアミノ酸配列を含むヒトＣＬカッパ領域に由来する領域であり、ＣＬ領域に由来する領域が、配列番号２に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％又は９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態Ｂ ２８～Ｂ ４７のいずれか１つに記載のＣＲＬ。
Ｂ５０．（実施形態５０）ヒトＩｇＧ１ ＣＨ１領域のＣＤループのアミノ酸残基ＴＳＧが、ＣＲＬ中の分子において多様なアミノ酸配列で置換されている、実施形態Ｂ４８又はＢ４９に記載のＣＲＬ。
Ｂ５１．（実施形態５１）ヒトＩｇＧ１ ＣＨ１領域のＤＥループのアミノ酸残基ＱＳＳが、ＣＲＬ中の分子において多様なアミノ酸配列で置換されている、実施形態Ｂ４８又はＢ４９に記載のＣＲＬ。
Ｂ５２．（実施形態５２）ヒトＣＬカッパ領域のＣＤループのアミノ酸残基ＳＧＮＳが、ＣＲＬ中の分子において多様なアミノ酸配列で置換されている、実施形態Ｂ４８又はＢ４９に記載のＣＲＬ。
Ｂ５３．（実施形態５３）ヒトＣＬカッパ領域のＤＥループのアミノ酸残基ＳＫＤが、ＣＲＬ中の分子において多様なアミノ酸配列で置換されている、実施形態Ｂ４８又はＢ４９に記載のＣＲＬ。
Ｂ５４．（実施形態５４）多様なアミノ酸配列が、７～１５個のアミノ酸残基を含む、実施形態Ｂ ２８～Ｂ ５３のいずれか１つに記載のＣＲＬ。
Ｂ５５．（実施形態５５）分子の各々が、ＶＨ領域及びＶＬ領域を更に含む、実施形態Ｂ ２８～Ｂ ５４のいずれか１つに記載のＣＲＬ。
Ｂ５６．（実施形態５６）結合分子又は分子は、Ｆａｂ断片である、実施形態Ｂ １～Ｂ ５５のいずれか１つに記載のＣＲＬ。
Ｂ５７．（実施形態５７）１つのループ領域を有するＣＲＬの多様性が、１０７～１０１６の範囲である、実施形態Ｂ １～Ｂ ５６のいずれか１つに記載のＣＲＬ。
Ｂ５８．（実施形態５８）２つのループ領域を有するＣＲＬの多様性が、１０１８～１０３３の範囲である、実施形態Ｂ １～Ｂ ５６のいずれか１つに記載のＣＲＬ。
Ｂ５９．（実施形態５９）参照レベルよりも高い親和性で第２の抗原に結合する結合分子を同定するために、実施形態Ｂ １～Ｂ ５８のいずれか１つに記載のＣＲＬをスクリーニングすることを含み、第１の結合ドメインが抗体のＶＨ領域及びＶＬ領域を含み、第２の結合ドメインが抗体定常領域変異体を含む、第１の抗原に結合する第１の結合ドメイン及び第２の抗原に結合する第２の結合ドメインを含む結合分子を同定する方法。
Ｂ６０．（実施形態６０）抗原に結合することができる抗体定常領域変異体を同定する機能を実行するための第１のステップと、抗体定常領域変異体を含む結合分子を構築する第２のステップとを含む、結合分子を生成する方法。
Ｂ６１．（実施形態６１）第１のステップが、実施形態Ｂ １～Ｂ ５８のいずれか１つに記載のＣＲＬをスクリーニングすることを含む、実施形態Ｂ６０に記載の方法。
Ｂ６２．（実施形態６２）実施形態Ｂ ５９～Ｂ ６１のいずれか１つに記載の方法に従って生成される結合分子。
別のセットの実施形態（実施形態セットＣ）では、以下が提供される。
Ｃ１．（実施形態１）結合分子をコードするポリヌクレオチドを宿主細胞において発現させることを含む、結合分子を作製する方法であって、結合分子が
（ｉ）重鎖可変領域（ＶＨ）と抗体重鎖のＣＨ１領域に由来する領域とを含む第１ポリペプチド、及び、
（ｉｉ）抗体軽鎖の軽鎖可変領域（ＶＬ）及びＣＬ領域に由来する領域を含む第２ポリペプチドを含み、
ＣＨ１領域に由来する領域及び／又はＣＬ領域に由来する領域が、１つ以上の抗原結合ループを含む、結合分子。
Ｃ２．（実施形態２）ＣＨ１領域に由来する領域内の１つ以上の抗原結合ループが、ＣＨ１領域のＡＢ、ＢＣ、ＣＤ、ＤＥ、ＥＦ、及び／又はＦＧループ領域にある、実施形態Ｃ１に記載の方法。
Ｃ３．（実施形態３）ＣＬ領域に由来する領域内の１つ以上の抗原結合ループが、ＣＬ領域のＡＢ、ＢＣ、ＣＤ、ＤＥ、ＥＦ、及び／又はＦＧループ領域にある、実施形態Ｃ１又はＣ２に記載の方法。
Ｃ４．（実施形態４）ＣＨ１領域に由来する領域が、１つ又は２つの抗原結合ループを含む、実施形態Ｃ １～Ｃ ３のいずれか１つに記載の方法。
Ｃ５．（実施形態５）ＣＬ領域に由来する領域が、１つ又は２つの抗原結合ループを含む、実施形態Ｃ １～Ｃ ４のいずれか１つに記載の方法。
Ｃ６．（実施形態６）ＣＨ１領域に由来する領域が、ＣＨ１領域のＣＤループ領域に１つの抗原結合ループを含む、実施形態Ｃ １～Ｃ ５のいずれか１つに記載の方法。
Ｃ７．（実施形態７）ＣＨ１領域に由来する領域が、ＣＨ１領域のＤＥループ領域に１つの抗原結合ループを含む、実施形態Ｃ １～Ｃ ６のいずれか１つに記載の方法。
Ｃ８．（実施形態８）ＣＨ１領域に由来する領域が、ＣＨ１領域のＣＤループ領域における１つの抗原結合ループ、及びＣＨ１領域のＤＥループ領域における１つの抗原結合ループを含む、実施形態Ｃ １～Ｃ ７のいずれか１つに記載の方法。
Ｃ９．（実施形態９）ＣＬ領域に由来する領域が、ＣＬ領域のＣＤループ領域に１つの抗原結合ループを含む、実施形態Ｃ １～Ｃ ８のいずれか１つに記載の方法。
Ｃ１０．（実施形態１０）ＣＬ領域に由来する領域が、ＣＬ領域のＤＥループ領域に１つの抗原結合ループを含む、実施形態Ｃ １～Ｃ ９のいずれか１つに記載の方法。
Ｃ１１．（実施形態１１）ＣＬ領域に由来する領域が、ＣＬ領域のＣＤループ領域における１つの抗原結合ループ及びＣＬ領域のＤＥループ領域における１つの抗原結合ループを含む、実施形態Ｃ １～Ｃ １０のいずれか１つに記載の方法。
Ｃ１２．（実施形態１２）ＣＨ１領域に由来する領域が、ＣＨ１領域のＣＤループ領域に１つの抗原結合ループを含み、ＣＬ領域に由来する領域が、ＣＬ領域のＣＤループ領域に１つの抗原結合ループを含む、実施形態Ｃ １～Ｃ ６又はＣ９のいずれか１つに記載の方法。
Ｃ１３．（実施形態１３）ＣＨ１領域に由来する領域が、ＣＨ１領域のＣＤループ領域に１つの抗原結合ループを含み、ＣＬ領域に由来する領域が、ＣＬ領域のＤＥループ領域に１つの抗原結合ループを含む、実施形態Ｃ １～Ｃ ６又はＣ１０のいずれか１つに記載の方法。
Ｃ１４．（実施形態１４）ＣＨ１領域に由来する領域が、ＣＨ１領域のＣＤループ領域に１つの抗原結合ループを含み、ＣＬ領域に由来する領域が、ＣＬ領域のＣＤループ領域における１つの抗原結合ループ及びＣＬ領域のＤＥループ領域における１つの抗原結合ループを含む、実施形態Ｃ １～Ｃ ６又はＣ ９～Ｃ １３のいずれか１つに記載の方法。
Ｃ１５．（実施形態１５）ＣＨ１領域に由来する領域が、ＣＨ１領域のＤＥループ領域に１つの抗原結合ループを含み、ＣＬ領域に由来する領域が、ＣＬ領域のＣＤループ領域に１つの抗原結合ループを含む、実施形態Ｃ １～Ｃ ５、Ｃ７又はＣ９のいずれか１つに記載の方法。
Ｃ１６．（実施形態１６）ＣＨ１領域に由来する領域が、ＣＨ１領域のＤＥループ領域に１つの抗原結合ループを含み、ＣＬ領域に由来する領域が、ＣＬ領域のＤＥループ領域に１つの抗原結合ループを含む、実施形態Ｃ １～Ｃ ５、Ｃ７又はＣ１０のいずれか１つに記載の方法。
Ｃ１７．（実施形態１７）ＣＨ１領域に由来する領域が、ＣＨ１領域のＤＥループ領域に１つの抗原結合ループを含み、ＣＬ領域に由来する領域が、ＣＬ領域のＣＤループ領域における１つの抗原結合ループ及びＣＬ領域のＤＥループ領域における１つの抗原結合ループを含む、実施形態Ｃ １～Ｃ ５、Ｃ７、Ｃ ９～Ｃ １１、Ｃ１５又はＣ１６のいずれか１つに記載の方法。
Ｃ１８．（実施形態１８）ＣＨ１領域に由来する領域が、ＣＨ１領域のＣＤループ領域に１つの抗原結合ループ、及びＣＨ１領域のＤＥループ領域に１つの抗原結合ループを含み、ＣＬ領域に由来する領域が、ＣＬ領域のＣＤループ領域に１つの抗原結合ループを含む、実施形態Ｃ １～Ｃ ９、Ｃ１２又はＣ１５のいずれか１つに記載の方法。
Ｃ１９．（実施形態１９）ＣＨ１領域に由来する領域が、ＣＨ１領域のＣＤループ領域に１つの抗原結合ループ、及びＣＨ１領域のＤＥループ領域に１つの抗原結合ループを含み、ＣＬ領域に由来する領域が、ＣＬ領域のＤＥループ領域に１つの抗原結合ループを含む、実施形態Ｃ １～Ｃ ８、Ｃ１０、Ｃ１３、又はＣ１６のいずれか１つに記載の方法。
Ｃ２０．（実施形態２０）ＣＨ１領域に由来する領域が、ＣＨ１領域のＣＤループ領域における１つの抗原結合ループ及びＣＨ１領域のＤＥループ領域における１つの抗原結合ループを含み、ＣＬ領域に由来する領域が、ＣＬ領域のＣＤループ領域における１つの抗原結合ループ及びＣＬ領域のＤＥループ領域における１つの抗原結合ループを含む、実施形態Ｃ １～Ｃ １９のいずれか１つに記載の方法。
Ｃ２１．（実施形態２１）ＣＨ１領域に由来する領域が、配列番号１のアミノ酸配列を含むヒトＩｇＧ１ ＣＨ１領域に由来する領域であり、ＣＨ１領域に由来する領域が、配列番号１に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％又は９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態Ｃ １～Ｃ ２０のいずれか１つに記載の方法。
Ｃ２２．（実施形態２２）ＣＬ領域に由来する領域が、配列番号２のアミノ酸配列を含むヒトＣＬカッパ領域に由来する領域であり、ＣＬ領域に由来する領域が、配列番号２と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％又は９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態Ｃ １～Ｃ ２１のいずれか１つに記載の方法。
Ｃ２３．（実施形態２３）ＣＨ１領域のＣＤループ領域における抗原結合ループが、ヒトＩｇＧ１ ＣＨ１領域のＣＤループのアミノ酸残基ＴＳＧを置換する、実施形態Ｃ２１又はＣ２２に記載の方法。
Ｃ２４．（実施形態２４）ＣＨ１領域のＤＥループ領域における抗原結合ループが、ヒトＩｇＧ１ ＣＨ１領域のＤＥループのアミノ酸残基ＱＳＳを置換する、実施形態Ｃ２１又はＣ２２に記載の方法。
Ｃ２５．（実施形態２５）ＣＬ領域のＣＤループ領域における抗原結合ループが、ヒトＣＬカッパ領域のＣＤループのアミノ酸残基ＳＧＮＳを置換する、実施形態Ｃ２１又はＣ２２に記載の方法。
Ｃ２６．（実施形態２６）ＣＬ領域のＤＥループ領域における抗原結合ループが、ヒトＣＬカッパ領域のＤＥループのアミノ酸残基ＳＫＤを置換する、実施形態Ｃ２１又はＣ２２に記載の方法。
Ｃ２７．（実施形態２７）１つ以上の抗原結合ループのそれぞれが、７～１５個のアミノ酸残基を含む、実施形態Ｃ １～Ｃ ２６のいずれか１つに記載の方法。
Ｃ２８．（実施形態２８）ＶＨ領域及びＶＬ領域が第１の抗原に結合し、ＣＨ１領域に由来する領域及び／又はＣＬ領域に由来する領域が第２の抗原に結合する、実施形態Ｃ １～Ｃ ２７のいずれか１つに記載の方法。
Ｃ２９．（実施形態２９）第１の抗原及び第２の抗原が同じ抗原である、実施形態Ｃ２８に記載の方法。
Ｃ３０．（実施形態３０）第１の抗原及び第２の抗原が２つの異なる抗原である、実施形態Ｃ２８に記載の方法。
更に別のセットの実施形態（実施形態セットＤ）では、以下が提供される。
Ｄ１．（実施形態１）医薬組成物であって、
（ａ）多重特異性結合分子であって、
（ｉ）重鎖可変領域（ＶＨ）と抗体重鎖のＣＨ１領域に由来する領域とを含む第１ポリペプチド、及び、
（ｉｉ）抗体軽鎖の軽鎖可変領域（ＶＬ）及びＣＬ領域に由来する領域を含む第２ポリペプチドを含み、
ＣＨ１領域に由来する領域及び／又はＣＬ領域に由来する領域が、１つ以上の抗原結合ループを含む、多重特異性結合分子と、
（ｂ）医薬的に許容される賦形剤と、を含む、医薬組成物。
Ｄ２．（実施形態２）ＣＨ１領域に由来する領域内の１つ以上の抗原結合ループが、ＣＨ１領域のＡＢ、ＢＣ、ＣＤ、ＤＥ、ＥＦ、及び／又はＦＧループ領域にある、実施形態Ｄ１に記載の医薬組成物。
Ｄ３．（実施形態３）ＣＬ領域に由来する領域内の１つ以上の抗原結合ループが、ＣＬ領域のＡＢ、ＢＣ、ＣＤ、ＤＥ、ＥＦ、及び／又はＦＧループ領域にある、実施形態Ｄ１又はＤ２に記載の医薬組成物。
Ｄ４．（実施形態４）ＣＨ１領域に由来する領域が、１つ又は２つの抗原結合ループを含む、実施形態Ｄ １～Ｄ ３のいずれか１つに記載の医薬組成物。
Ｄ５．（実施形態５）ＣＬ領域に由来する領域が、１つ又は２つの抗原結合ループを含む、実施形態Ｄ １～Ｄ ４のいずれか１つに記載の医薬組成物。
Ｄ６．（実施形態６）ＣＨ１領域に由来する領域が、ＣＨ１領域のＣＤループ領域に１つの抗原結合ループを含む、実施形態Ｄ １～Ｄ ５のいずれか１つに記載の医薬組成物。
Ｄ７．（実施形態７）ＣＨ１領域に由来する領域が、ＣＨ１領域のＤＥループ領域に１つの抗原結合ループを含む、実施形態Ｄ １～Ｄ ６のいずれか１つに記載の医薬組成物。
Ｄ８．（実施形態８）ＣＨ１領域に由来する領域が、ＣＨ１領域のＣＤループ領域に１つの抗原結合ループを含み、ＣＨ１領域のＤＥループ領域に１つの抗原結合ループを含む、実施形態Ｄ １～Ｄ ７のいずれか１つに記載の医薬組成物。
Ｄ９．（実施形態９）ＣＬ領域に由来する領域は、ＣＬ領域のＣＤループ領域に１つの抗原結合ループを含む、実施形態Ｄ １～Ｄ ８のいずれか１つに記載の医薬組成物。
Ｄ１０．（実施形態１０）ＣＬ領域に由来する領域が、ＣＬ領域のＤＥループ領域に１つの抗原結合ループを含む、実施形態Ｄ １～Ｄ ９のいずれか１つに記載の医薬組成物。
Ｄ１１．（実施形態１１）ＣＬ領域に由来する領域が、ＣＬ領域のＣＤループ領域における１つの抗原結合ループ及びＣＬ領域のＤＥループ領域における１つの抗原結合ループを含む、実施形態Ｄ １～Ｄ １０のいずれか１つに記載の医薬組成物。
Ｄ１２．（実施形態１２）ＣＨ１領域に由来する領域が、ＣＨ１領域のＣＤループ領域に１つの抗原結合ループを含み、ＣＬ領域に由来する領域が、ＣＬ領域のＣＤループ領域に１つの抗原結合ループを含む、実施形態Ｄ １～Ｄ ６又はＤ９のいずれか１つに記載の医薬組成物。
Ｄ１３．（実施形態１３）ＣＨ１領域に由来する領域が、ＣＨ１領域のＣＤループ領域に１つの抗原結合ループを含み、ＣＬ領域に由来する領域が、ＣＬ領域のＤＥループ領域に１つの抗原結合ループを含む、実施形態Ｄ １～Ｄ ６又はＤ１０のいずれか１つに記載の医薬組成物。
Ｄ１４．（実施形態１４）ＣＨ１領域に由来する領域が、ＣＨ１領域のＣＤループ領域に１つの抗原結合ループを含み、ＣＬ領域に由来する領域が、ＣＬ領域のＣＤループ領域における１つの抗原結合ループ及びＣＬ領域のＤＥループ領域における１つの抗原結合ループを含む、実施形態Ｄ １～Ｄ ６又はＤ ９～Ｄ １３のいずれか１つに記載の医薬組成物。
Ｄ１５．（実施形態１５）ＣＨ１領域に由来する領域が、ＣＨ１領域のＤＥループ領域に１つの抗原結合ループを含み、ＣＬ領域に由来する領域が、ＣＬ領域のＣＤループ領域に１つの抗原結合ループを含む、実施形態Ｄ １～Ｄ ５、Ｄ７又はＤ９のいずれか１つに記載の医薬組成物。
Ｄ１６．（実施形態１６）ＣＨ１領域に由来する領域が、ＣＨ１領域のＤＥループ領域に１つの抗原結合ループを含み、ＣＬ領域に由来する領域が、ＣＬ領域のＤＥループ領域に１つの抗原結合ループを含む、実施形態Ｄ １～Ｄ ５、Ｄ７又はＤ１０のいずれか１つに記載の医薬組成物。
Ｄ１７．（実施形態１７）ＣＨ１領域に由来する領域が、ＣＨ１領域のＤＥループ領域に１つの抗原結合ループを含み、ＣＬ領域に由来する領域が、ＣＬ領域のＣＤループ領域における１つの抗原結合ループ及びＣＬ領域のＤＥループ領域における１つの抗原結合ループを含む、実施形態Ｄ １～Ｄ ５、Ｄ７、Ｄ ９～Ｄ １１、Ｄ１５又はＤ１６のいずれか１つに記載の医薬組成物。
Ｄ１８．（実施形態１８）ＣＨ１領域に由来する領域が、ＣＨ１領域のＣＤループ領域に１つの抗原結合ループ、及びＣＨ１領域のＤＥループ領域に１つの抗原結合ループを含み、ＣＬ領域に由来する領域が、ＣＬ領域のＣＤループ領域に１つの抗原結合ループを含む、実施形態Ｄ １～Ｄ ９、Ｄ１２又はＤ１５のいずれか１つに記載の医薬組成物。
Ｄ１９．（実施形態１９）ＣＨ１領域に由来する領域が、ＣＨ１領域のＣＤループ領域に１つの抗原結合ループ、及びＣＨ１領域のＤＥループ領域に１つの抗原結合ループを含み、ＣＬ領域に由来する領域が、ＣＬ領域のＤＥループ領域に１つの抗原結合ループを含む、実施形態Ｄ １～Ｄ ８、Ｄ１０、Ｄ１３、又はＤ１６のいずれか１つに記載の医薬組成物。
Ｄ２０．（実施形態２０）ＣＨ１領域に由来する領域が、ＣＨ１領域のＣＤループ領域における１つの抗原結合ループ及びＣＨ１領域のＤＥループ領域における１つの抗原結合ループを含み、ＣＬ領域に由来する領域が、ＣＬ領域のＣＤループ領域における１つの抗原結合ループ及びＣＬ領域のＤＥループ領域における１つの抗原結合ループを含む、実施形態Ｄ １～Ｄ １９のいずれか１つに記載の医薬組成物。
Ｄ２１．（実施形態２１）ＣＨ１領域に由来する領域が、配列番号１のアミノ酸配列を含むヒトＩｇＧ１ ＣＨ１領域に由来する領域であり、ＣＨ１領域に由来する領域が、配列番号１と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％又は９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態Ｄ １～Ｄ ２０のいずれか１つに記載の医薬組成物。
Ｄ２２．（実施形態２２）ＣＬ領域に由来する領域が、配列番号２のアミノ酸配列を含むヒトＣＬカッパ領域に由来する領域であり、ＣＬ領域に由来する領域が、配列番号２に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％又は９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態Ｄ １～Ｄ ２１のいずれか１つに記載の医薬組成物。
Ｄ２３．（実施形態２３）ＣＨ１領域のＣＤループ領域における抗原結合ループが、ヒトＩｇＧ１ ＣＨ１領域のＣＤループのアミノ酸残基ＴＳＧを置換する、実施形態Ｄ２１又はＤ２２に記載の医薬組成物。
Ｄ２４．（実施形態２４）ＣＨ１領域のＤＥループ領域における抗原結合ループが、ヒトＩｇＧ１ ＣＨ１領域のＤＥループのアミノ酸残基ＱＳＳを置換する、実施形態Ｄ２１又はＤ２２に記載の医薬組成物。
Ｄ２５．（実施形態２５）ＣＬ領域のＣＤループ領域における抗原結合ループが、ヒトＣＬカッパ領域のＣＤループのアミノ酸残基ＳＧＮＳを置換している、実施形態Ｄ２１又はＤ２２に記載の医薬組成物。
Ｄ２６．（実施形態２６）ＣＬ領域のＤＥループ領域における抗原結合ループが、ヒトＣＬカッパ領域のＤＥループのアミノ酸残基ＳＫＤを置換している、実施形態Ｄ２１又はＤ２２に記載の医薬組成物。
Ｄ２７．（実施形態２７）１つ以上の抗原結合ループのそれぞれは、７～１５個のアミノ酸残基を含む、実施形態Ｄ １～Ｄ ２６のいずれか１つに記載の医薬組成物。
Ｄ２８．（実施形態２８）ＶＨ領域及びＶＬ領域は、第１の抗原に結合し、ＣＨ１領域に由来する領域及び／又はＣＬ領域に由来する領域は、第２の抗原に結合する、実施形態Ｄ １～Ｄ ２７のいずれか１つに記載の医薬組成物。
Ｄ２９．（実施形態２９）第１の抗原及び第２の抗原が、同じ抗原である、実施形態Ｄ２８に記載の医薬組成物。
Ｄ３０．（実施形態３０）第１の抗原及び第２の抗原が２つの異なる抗原である、実施形態Ｄ２８に記載の医薬組成物。
更に別のセットの実施形態（実施形態セットＥ）では、以下が提供される。
Ｅ１．（実施形態１）対象における疾患又は障害を治療する方法であって、対象に結合分子を投与することを含み、結合分子が
（ｉ）重鎖可変領域（ＶＨ）と抗体重鎖のＣＨ１領域に由来する領域を含む第１ポリペプチド、及び、
（ｉｉ）抗体軽鎖の軽鎖可変領域（ＶＬ）及びＣＬ領域に由来する領域を含む第２ポリペプチドを含み、
ＣＨ１領域に由来する領域及び／又はＣＬ領域に由来する領域が、１つ以上の抗原結合ループを含む、結合分子。
Ｅ２．（実施形態２）ＣＨ１領域に由来する領域内の１つ以上の抗原結合ループが、ＣＨ１領域のＡＢ、ＢＣ、ＣＤ、ＤＥ、ＥＦ、及び／又はＦＧループ領域にある、実施形態Ｅ１に記載の方法。
Ｅ３．（実施形態３）ＣＬ領域に由来する領域内の１つ以上の抗原結合ループが、ＣＬ領域のＡＢ、ＢＣ、ＣＤ、ＤＥ、ＥＦ、及び／又はＦＧループ領域にある、実施形態Ｅ１又はＥ２に記載の方法。
Ｅ４．（実施形態４）ＣＨ１領域に由来する領域が、１つ又は２つの抗原結合ループを含む、実施形態Ｅ １～Ｅ ３のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ５．（実施形態５）ＣＬ領域に由来する領域が、１つ又は２つの抗原結合ループを含む、実施形態Ｅ １～Ｅ ４のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ６．（実施形態６）ＣＨ１領域に由来する領域が、ＣＨ１領域のＣＤループ領域に１つの抗原結合ループを含む、実施形態Ｅ １～Ｅ ５のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ７．（実施形態７）ＣＨ１領域由来の領域が、ＣＨ１領域のＤＥループ領域に１つの抗原結合ループを含む、実施形態Ｅ １～Ｅ ６のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ８．（実施形態８）ＣＨ１領域に由来する領域が、ＣＨ１領域のＣＤループ領域における１つの抗原結合ループ、及びＣＨ１領域のＤＥループ領域における１つの抗原結合ループを含む、実施形態Ｅ １～Ｅ ７のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ９．（実施形態９）ＣＬ領域に由来する領域が、ＣＬ領域のＣＤループ領域に１つの抗原結合ループを含む、実施形態Ｅ １～Ｅ ８のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１０．（実施形態１０）ＣＬ領域に由来する領域が、ＣＬ領域のＤＥループ領域に１つの抗原結合ループを含む、実施形態Ｅ １～Ｅ ９のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１１．（実施形態１１）ＣＬ領域に由来する領域が、ＣＬ領域のＣＤループ領域における１つの抗原結合ループ及びＣＬ領域のＤＥループ領域に１つの抗原結合ループを含む、実施形態Ｅ １～Ｅ １０のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１２．（実施形態１２）ＣＨ１領域に由来する領域が、ＣＨ１領域のＣＤループ領域に１つの抗原結合ループを含み、ＣＬ領域に由来する領域が、ＣＬ領域のＣＤループ領域に１つの抗原結合ループを含む、実施形態Ｅ １～Ｅ ６又はＥ９のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１３．（実施形態１３）ＣＨ１領域に由来する領域が、ＣＨ１領域のＣＤループ領域に１つの抗原結合ループを含み、ＣＬ領域に由来する領域が、ＣＬ領域のＤＥループ領域に１つの抗原結合ループを含む、実施形態Ｅ １～Ｅ ６又はＥ１０のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１４．（実施形態１４）ＣＨ１領域に由来する領域が、ＣＨ１領域のＣＤループ領域に１つの抗原結合ループを含み、ＣＬ領域に由来する領域が、ＣＬ領域のＣＤループ領域における１つの抗原結合ループ及びＣＬ領域のＤＥループ領域における１つの抗原結合ループを含む、実施形態Ｅ １～Ｅ ６又はＥ ９～Ｅ １３のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１５．（実施形態１５）ＣＨ１領域に由来する領域が、ＣＨ１領域のＤＥループ領域に１つの抗原結合ループを含み、ＣＬ領域に由来する領域が、ＣＬ領域のＣＤループ領域に１つの抗原結合ループを含む、実施形態Ｅ １～Ｅ ５、Ｅ７又はＥ９のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１６．（実施形態１６）ＣＨ１領域に由来する領域が、ＣＨ１領域のＤＥループ領域に１つの抗原結合ループを含み、ＣＬ領域に由来する領域が、ＣＬ領域のＤＥループ領域に１つの抗原結合ループを含む、実施形態Ｅ １～Ｅ ５、Ｅ７又はＥ１０のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１７．（実施形態１７）ＣＨ１領域に由来する領域が、ＣＨ１領域のＤＥループ領域に１つの抗原結合ループを含み、ＣＬ領域に由来する領域が、ＣＬ領域のＣＤループ領域における１つの抗原結合ループ及びＣＬ領域のＤＥループ領域における１つの抗原結合ループを含む、実施形態Ｅ １～Ｅ ５、Ｅ７、Ｅ ９～Ｅ １１、Ｅ１５又はＥ１６のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１８．（実施形態１８）ＣＨ１領域に由来する領域が、ＣＨ１領域のＣＤループ領域における１つの抗原結合ループ、及びＣＨ１領域のＤＥループ領域における１つの抗原結合ループを含み、ＣＬ領域に由来する領域が、ＣＬ領域のＣＤループ領域に１つの抗原結合ループを含む、実施形態Ｅ １～Ｅ ９、Ｅ１２又はＥ１５のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１９．（実施形態１９）ＣＨ１領域に由来する領域が、ＣＨ１領域のＣＤループ領域における１つの抗原結合ループ、及びＣＨ１領域のＤＥループ領域における１つの抗原結合ループを含み、ＣＬ領域に由来する領域が、ＣＬ領域のＤＥループ領域に１つの抗原結合ループを含む、実施形態Ｅ １～Ｅ ８、Ｅ１０、Ｅ１３、又はＥ１６のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２０．（実施形態２０）ＣＨ１領域に由来する領域が、ＣＨ１領域のＣＤループ領域における１つの抗原結合ループ、及びＣＨ１領域のＤＥループ領域における１つの抗原結合ループを含み、ＣＬ領域に由来する領域が、ＣＬ領域のＣＤループ領域における１つの抗原結合ループ及びＣＬ領域のＤＥループ領域における１つの抗原結合ループを含む、実施形態Ｅ １～Ｅ １９のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２１．（実施形態２１）ＣＨ１領域に由来する領域が、配列番号１のアミノ酸配列を含むヒトＩｇＧ１ ＣＨ１領域に由来する領域であり、ＣＨ１領域に由来する領域が、配列番号１に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％又は９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態Ｅ １～Ｅ ２０のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２２．（実施形態２２）ＣＬ領域に由来する領域が、配列番号２のアミノ酸配列を含むヒトＣＬカッパ領域に由来する領域であり、ＣＬ領域に由来する領域が、配列番号２に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％又は９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態Ｅ １～Ｅ ２１のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２３．（実施形態２３）ＣＨ１領域のＣＤループ領域における抗原結合ループが、ヒトＩｇＧ１ ＣＨ１領域のＣＤループのアミノ酸残基ＴＳＧを置換する、実施形態Ｅ２１又はＥ２２に記載の方法。
Ｅ２４．（実施形態２４）ＣＨ１領域のＤＥループ領域における抗原結合ループが、ヒトＩｇＧ１ ＣＨ１領域のＤＥループのアミノ酸残基ＱＳＳを置換する、実施形態Ｅ２１又はＥ２２に記載の方法。
Ｅ２５．（実施形態２５）ＣＬ領域のＣＤループ領域における抗原結合ループが、ヒトＣＬカッパ領域のＣＤループのアミノ酸残基ＳＧＮＳを置換する、実施形態Ｅ２１又はＥ２２に記載の方法。
Ｅ２６．（実施形態２６）ＣＬ領域のＤＥループ領域における抗原結合ループが、ヒトＣＬカッパ領域のＤＥループのアミノ酸残基ＳＫＤを置換する、実施形態Ｅ２１又はＥ２２に記載の方法。
Ｅ２７．（実施形態２７）１つ以上の抗原結合ループのそれぞれが、７～１５個のアミノ酸残基を含む、実施形態Ｅ １～Ｅ ２６のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２８．（実施形態２８）ＶＨ領域及びＶＬ領域が第１の抗原に結合し、ＣＨ１領域に由来する領域及び／又はＣＬ領域に由来する領域が第２の抗原に結合する、実施形態Ｅ １～Ｅ ２７のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２９．（実施形態２９）第１の抗原及び第２の抗原が同じ抗原である、実施形態Ｅ２８に記載の方法。
Ｅ３０．（実施形態３０）第１の抗原及び第２の抗原が２つの異なる抗原である、実施形態Ｅ２８に記載の方法。
Ｅ３１．（実施形態３１）疾患又は障害が、第１の抗原及び／又は第２の抗原に関連する、実施形態Ｅ １～Ｅ ３０のいずれか１つに記載の方法。
７．実施例
以下は、研究において使用される様々な方法及び材料の記載である。これらは、当業者に本発明の作製及び使用方法の完全な開示及び説明を提供するように記載されており、本発明者らがその発明とみなす範囲を限定することを意図しておらず、また、以下の実験が実施され、実施可能な実験の全てであることを表すことを意図していない。現在形で書かれた例示的な記述は、必ずしも実行されたものではなく、むしろ記述は、本発明の教示と関連するデータなどを生成するために実行され得るものであることを理解されたい。使用される数値（例えば、量、割合など）についての正確度を保証するための努力はなされているが、多少の実験誤差及び偏差が考慮に入れられるべきである。
実施例１－Ｆａｂ定常領域ライブラリーの構築
Ｆａｂ定常領域ライブラリー（ＣＲＬ）の構築は、Ｍ１３繊維状バクテリオファージコートタンパク質、ｐＩＸに融合した抗ＸＯ１Ｂ１ Ｆａｂに基づいた。抗ＸＯ１Ｂ１親Ｆａｂの可変領域は、ヒトトロンビンに対するモノクローナル抗体であるＸＯ１Ｂ１に結合する。設計されたライブラリーは、抗ＸＯ １Ｂ １親ＦａｂのＣＨ１及び／又はＣＬ定常領域のＣＤ及びＤＥループの溶媒アクセス可能領域において構築され（図１Ｂに示す）、第２抗原への結合を可能にする。ＣＲＬは、記載されたライブラリー変異体を包含する合成ＤＮＡ断片（ＤＮＡ合成業者から入手）を用いて作製した。標準的な分子生物学技術を使用して、これらのＤＮＡライブラリー断片を、Ｆａｂ重鎖がｐＩＸファージコートタンパク質のアミノ末端とインフレームであり、軽鎖が第２のプロモーターの制御下で発現される二重遺伝子大腸菌ファージ表示ベクターにサブクローニングした。
親ＦａｂのＣＨ１及び／又はＣＬ定常領域のＣＤ及びＤＥループの部分を置換するために、異なるループの組み合わせ及び長さを使用して、Ｆａｂ ＣＲＬを構築した。例えば、第１世代（Ｇ１）Ｆａｂ ＣＲＬは、（Ａ）ＣＨ１ ＣＤループ内の３つのアミノ酸（ＴＳＧ１６４～１６６、ＥＵナンバリング）、（Ｂ）ＣＬカッパＤＥループ内の３つのアミノ酸（ＳＫＤ１６８～１７０、ＥＵナンバリング）、又は（Ｃ）両方のループのいずれかを置換するために、多様化された７又は９アミノ酸結合ループを使用して構築された。第２世代（Ｇ２）Ｆａｂ ＣＲＬは、同じ７及び９アミノ酸結合ループを用いて、（Ａ）ＣＨ１ ＤＥループ内の３アミノ酸（ＱＳＳ１７５～１７７、ＥＵナンバリング）、（Ｂ）ＣＬカッパＣＤループ内の４アミノ酸（ＳＧＮＳ１５６～１５９、ＥＵナンバリング）、又は（Ｃ）両方のループのいずれかを置換することによって構築した。第５世代（Ｇ５）Ｆａｂ ＣＲＬは、多様化された１５アミノ酸結合ループを使用して、（Ａ）ＣＨ１ ＣＤループ内のＳ１６５、（Ｂ）ＣＬカッパＤＥループ内のＫ１６９、又は（Ｃ）両方のループのいずれかを置換することによって構築した。
Ｆａｂ ＣＲＬの結合ループの多様化した組成を図１Ｃに示す。アミノ酸システインは、望ましくないジスルフィド結合を形成する傾向があるため、ＣＲＬから除外した。メチオニンは、酸化を受ける傾向があるため除外した。フェニルアラニンの立体特性及び疎水性親水性特性は、チロシン及びトリプトファンの側鎖によって大きく再現されるので、フェニルアラニンはＣＲＬから除外された。同様に、イソロイシンの立体的及び疎水性親水性特性は、バリン及びロイシンの側鎖によって大きく再現されるので、イソロイシンはＣＲＬから除外された。多様化した配列の最初及び最後の残基をアンカーと称した。１５アミノ酸のＣＲＬについては、アラニン及びグリシンを位置－１、－２、１６及び１７のアンカーとして選択した。グリシンは、多様化しループのその標的への提示が、他の１９個の標準アミノ酸によって望ましくない骨格ねじれを必要とした場合に、最大の骨格柔軟性を提供する。アラニンは、多様化された領域の適切な提示が減少したねじれの柔軟性を許容する場合に、そのような提示を安定化し得る最小程度の骨格拘束を提供する。７及び９アミノ酸ＣＲＬについて、アンカー残基を、それらの小さな親水性側鎖に従って選択した。重複した側鎖官能基を有するアミノ酸（アスパラギン酸及びグルタミン酸、アスパラギン及びグルタミン）については、より大きなアミノ酸をアンカー位置から除外した。アルギニンは、そのグアニジニウム側鎖官能基が、隣接する残基の骨格原子及び側鎖原子と安定化相互作用を形成する能力ゆえにアンカー位置に含まれた。したがって、アンカー残基のセットは、アラニン、アスパラギン酸、グリシン、アスパラギン、アルギニン、セリン及びトレオニンを含んでいた。９アミノ酸ＣＲＬの多様化したループ内で、嵩高い疎水性残基トリプトファン、バリン、及びロイシンは、標的に非特異的に結合し得る広範な疎水性表面の提示を防止するために、交互の位置でのみ許容された。同様に、これらの残基は、７アミノ酸ＣＲＬにおける３位、４位及び５位のクラスターとしてのみ許容された。１５アミノ酸ＣＲＬは、システイン、メチオニン、フェニルアラニン、及びイソロイシンの排除によってのみ拘束された。Ｆａｂ ＣＲＬの結合ループの多様化した組成の結果として、単一ループを有するＦａｂ ＣＲＬの多様性は１０７～１０１６の範囲である。二重ループを有するＦａｂ ＣＲＬの多様性は、１０１８～１０３３の範囲である。
実施例２－抗ポリヒスチジンモノクローナル抗体に対するＦａｂ定常領域バインダーの選択
目的の標的に対する完全に新しい分子認識を進化させるためのファージ表示ＣＲＬを検証するために、結合モチーフ（ポリヒスチジン）が知られており、設計されたライブラリー内に含まれているので、まず市販の抗ポリヒスチジンモノクローナル抗体に対して選択を行った。合計３つのパニングプールをこの選択に使用した。３つのプールの全ては、実施例１に記載されるように、ＣＲＬ第１世代（Ｇ１）に基づいた。具体的には、プール３（Ｐ３）をパニングする際に使用されるＦａｂ ＣＲＬは、多様化された７及び９アミノ酸結合ループを使用して、ＣＬκＤＥループ内の３つのアミノ酸（ＳＫＤ１６８～１７０、ＥＵナンバリング）を置換することによって構築された。プール４（Ｐ４）をパニングするのに使用されるＦａｂ ＣＲＬは、多様化された７及び９アミノ酸結合ループを使用して、ＣＨ１ ＣＤループ内の３つのアミノ酸（ＴＳＧ１６４～１６６、ＥＵナンバリング）を置換することによって構築された。プール５（Ｐ５）をパニングするのに使用されるＦａｂ ＣＲＬは、ＣＬカッパＤＥループ内の３つのアミノ酸（ＳＫＤ１６８～１７０、ＥＵナンバリング）及びＣＨ１ ＣＤループ内の３つのアミノ酸（ＴＳＧ１６４～１６６、ＥＵナンバリング）を置換するために９つのアミノ酸結合ループを使用することによって構築された。パニングのラウンド１、３、４、５、及び６で使用した抗ポリヒスチジンモノクローナル抗体の濃度は、それぞれ１００ｎＭ、５０ｎＭ、１０ｎＭ、１０ｎＭ、及び１０ｎＭであった。ラウンド２のパニングは、ＸＯ１Ｂ１に対して行い、ＣＤＲ媒介性標的結合を維持しない任意のＣＲＬ Ｆａｂを除去した。
パニングの各ラウンド（ラウンド２を除く）の後、３つのプールの各ラウンドからのアウトプットファージのアリコートを、抗ポリヒスチジンモノクローナル抗体結合及びＸＯ１Ｂ１結合についてポリクローナルファージＥＬＩＳＡによって分析した。図２Ａに示されるように、プールは、抗ポリヒスチジンモノクローナル抗体に結合するＦａｂ定常領域バインダーで徐々に濃縮された。図２Ｂに示されるように、ＸＯ１Ｂ１に対する濃縮プールの結合は、親Ｆａｂの結合に匹敵する。更に、図２Ｃに示される配列決定結果によって実証されるように、Ｆａｂ ＣＲＬの元々多様化された結合ループはヒスチジンについて濃縮され、関心対象の標的に対するＦａｂ定常領域バインダーがＦａｂ ＣＲＬから選択され得ることが確認された。
実施例３－ｍＥｐｈＡ２－Ｆｃに対するＦａｂ定常領域バインダーの選択
ｍＥｐｈＡ２－Ｆｃに対するデノボＦａｂ ＣＲＬパニング
Ｆａｂ ＣＲＬから組み換えマウスＥｐｈＡ２－ヒトＩｇＧ１ Ｆｃキメラ（本明細書ではｍＥｐｈＡ２－Ｆｃと呼ぶ）に結合するＦａｂ定常領域を選択する全体的なプロセスを図３に示す。Ｇ１、Ｇ２、及びＧ５単一及び二重ループＦａｂ ＣＲＬは、特定のパニング条件下でｍＥｐｈＡ２－Ｆｃに対する複数ラウンドのパニングを受けた。パニングの各ラウンド後、プールを、ｍＥｐｈＡ２－Ｆｃ、ＸＯ１Ｂ１、及び陰性対照Ｆｃ融合タンパク質への結合についてポリクローナルファージＥＬＩＳＡによって分析した。ＥｐｈＡ２結合の濃縮を示す任意のプールを、モノクローナルファージＥＬＩＳＡによって更に分析して、クローンｍＥｐｈＡ２－Ｆｃバインダーを同定し、続いてこれを配列決定した。次世代配列決定（ＮＧＳ）も選択されたパニングプールに適用して、ｍＥｐｈＡ２－Ｆｃに対する更なる潜在的なＦａｂ定常領域バインダーを同定した。最後に、両方の方法（ファージＥＬＩＳＡ及びＮＧＳ）によって同定されたヒットを、哺乳動物発現からの精製後に更に特徴付けた。
パニングプールＰ １～Ｐ １７と呼ばれる合計１７のパニング条件を調査して、ｍＥｐｈＡ２－Ｆｃ抗原に対するヒットを生じる際に最も生産的であった条件を同定した。一般的なパニング法については、Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｈａｇｅ Ｄｉｓｐｌａｙ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｂｙ Ｒｏｂｅｒｔ Ａｉｔｋｅｎ（ＩＳＢＮ ９７８－１－６０３２７－３０２－２）を参照。全ての場合において、ブロック混合物の存在下で、ニュートラアビジンビーズ上に捕捉された非特異的ビオチン化ｍＥｐｈＡ２－Ｆｃ抗原にＣＲＬを結合させることによって選択を行った。ｍＥｐｈＡ２－Ｆｃ抗原のＦｃ領域へのバインダーの濃縮を防ぐために、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ競合剤を全てのプールについてのパニングの全てのラウンドにおいて使用した。十分に洗浄した後、結合したファージを用いてＭＣ１０６１Ｆ’大腸菌細菌細胞を感染させ、その後のパニングラウンド又はファージＥＬＩＳＡによる特徴付けのために増幅した。多様化したパニング条件は、（１）どのライブラリーがパニングにおいて使用されたか、（２）各パニングラウンドにおいて使用された抗原の量、（３）抗原結合時間の長さ、及び（４）ＸＯ１Ｂ１へのＣＤＲ媒介結合を維持するための方法を含んだ。パニングラウンド１～６の間の各プールの特定のパニング条件を、以下の表２に列挙する。
Figure 2024515303000004
 ＊一晩の抗原結合を用いて２回の更なるパニングラウンドを行った
１７個のプールのそれぞれに、ｍＥｐｈＡ２－Ｆｃに対する６～８ラウンドのパニングを行った。６～８ラウンドのパニング後、１７個のプールの各ラウンドからのアウトプットファージのアリコートを、抗ＸＯ１Ｂ１親Ｆａｂに対するｍＥｐｈＡ２－Ｆｃ結合についてポリクローナルファージＥＬＩＳＡにより分析した。
ｍＥｐｈＡ２－Ｆｃ結合についてのポリクローナルファージＥＬＩＳＡの結果によれば、１７個のプールのうち１２個がｍＥｐｈＡ２－Ｆｃ結合についての濃縮を示さなかった。４つのプール（Ｐ５－Ｒ８、Ｐ９－Ｒ８、Ｐ１５－Ｒ８、Ｐ１７－Ｒ８）は、ｍＥｐｈＡ２－Ｆｃ結合について弱い濃縮（抗ＸＯ１Ｂ１親Ｆａｂと比較してファージライブラリープールの３．４～３４倍の結合シグナル）を示した。１つのプール（Ｐ８－Ｒ６）は、ｍＥｐｈＡ２－Ｆｃ結合について強い濃縮（抗ＸＯ１Ｂ１親Ｆａｂと比較してファージライブラリープールの８３３５倍の結合シグナル）を示した。４～８ラウンドのパニング後の５つの濃縮プール（Ｐ５、Ｐ８、Ｐ９、Ｐ１５、Ｐ１７）のｍＥｐｈＡ２－Ｆｃ結合についてのポリクローナルファージＥＬＩＳＡの結果の概要を図４Ａに示す。これは、より長い１５アミノ酸ループを有するＧ５ライブラリーがｍＥｐｈＡ２－Ｆｃパニングにおいて最も生産的に濃縮されたことを強調している。
濃縮ファージプール内の個々のクローンの結合特性を評価するために、５つの濃縮プール（Ｐ５、Ｐ８、Ｐ９、Ｐ１５、Ｐ１７）からの合計３７８個のクローンを、ｍＥｐｈＡ２－Ｆｃ（図４Ｂ）及びＸＯ１Ｂ１（図４Ｃ）に対するモノクローナルファージＥＬＩＳＡ結合によって更に分析した。ｍＥｐｈＡ２－Ｆｃ結合シグナルが陰性対照のものを６０以上多く、ＸＯ１Ｂ１結合シグナルが親Ｆａｂのものに対して５０％以上である場合、単一クローンをサンガー配列決定分析のために選択した。この選択基準により、Ｇ５ ＣＨ１－ＣＤループライブラリーに由来するＰ８から１６個のクローンが選択された。Ｐ５（Ｇ２ ＣＨ１－ＤＥループライブラリー）クローンは、ＸＯ１Ｂ１への全てのＣＤＲ媒介性結合を失い、このパニングプールにおけるクローンの潜在的なミス折り畳み又は切断を示した。Ｐ９（Ｇ５二重ループライブラリー）クローンはまた、ＸＯ１Ｂ１結合の大きな減少及びＥｐｈＡ２結合のわずかな増加を有したので、このプールからの更なる配列分析のためにクローンを選択しなかった。Ｐ１５及びＰ１７（Ｇ５ ＣＬカッパ－ＤＥループライブラリー）由来のクローンは、親抗ＸＯ１Ｂ１ Ｆａｂと同様のＸＯ１Ｂ１結合を維持したが、ｍＥｐｈＡ２－Ｆｃ結合シグナルは選択基準を満たさず、更なる配列分析のためにクローンを選択しなかった。６ラウンドのパニング後のＰ８からの１６個の選択されたクローンを図４Ｄに示し、クローンの大部分は同様のｍＥｐｈＡ２－Ｆｃ及びＸＯ１Ｂ１結合プロファイルを有する。１６個の選択されたクローンを配列決定し、１６個の選択されたクローンの全てが、ＣＨ１ ＣＤループ中に同じ抗ｍＥｐｈＡ２－Ｆｃ結合配列を有し、これを図４Ｅに示す。興味深いことに、選択されたループは１３アミノ酸長であり、設計された１５アミノ酸ループライブラリーに由来するトランケーション変異体を表していた。
同定されたクローンの結合特性を確認するために、ｍＥｐｈＡ２－Ｆｃに対するこの単一Ｆａｂ定常領域バインダー（ＥＰＡＸＢ１として同定される）を、ＨＥＫ Ｅｘｐｉ２９３細胞における哺乳動物発現からのＨｉｓ６タグ化融合物として精製した。固定化金属親和性クロマトグラフィ（ＩＭＡＣ）による一段階精製後、発現体積１リットル当たり２６９ ｍｇのタンパク質の収量が達成された。タンパク質を、分析的サイズ排除－高速液体クロマトグラフィ（ＳＥ－ＨＰＬＣ）、還元（Ｒ）及び非還元（ＮＲ）ドデシル硫酸ナトリウム－ポリアクリルアミドゲル電気泳動ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、並びにインタクトな質量分析（ＭＳ）によって特徴付けた。ＳＥ－ＨＰＬＣにより単一のピーク（ヒスチジン緩衝液のピークは別として）が観察され、ＳＤＳ－ＰＡＧＥにより高純度が観察された。インタクトな精製タンパク質の観察された分子量（４９，１１９ Ｄａ）は、４９，１１０ Ｄａの予測分子量に近かった。精製タンパク質分析を図４Ｆに示す。
精製したＦａｂの二重特異性を確認するために、ｍＥｐｈＡ２－Ｆｃ及びＸＯ１Ｂ１の両方に対するＥＰＡＸＢ１の結合動態及び親和性を、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を用いて分析した。ｍＥｐｈＡ２－Ｆｃ及びＸＯ１Ｂ１の両方に対する抗ＸＯ１Ｂ１親Ｆａｂの結合動態及び親和性も参照として分析した。図４Ｇに示されるように、親ＦａｂはｍＥｐｈＡ２－Ｆｃに結合しないが、ＥＰＡＸＢ１は２．１８ｎＭの親和性で結合し、パニング中に同定されたＣＲＬループがＦａｂ定常領域において新規結合を付与することが確認された。一方、ＥＰＡＸＢ１は、親Ｆａｂ（ＫＤ＝０．３５ｎＭ）と同等の親和性（ＫＤ＝０．３６ｎＭ）でＸＯ１Ｂ１に結合することができ、ＣＤＲ媒介性結合がＣＲＬループの付加によって乱されないことを示している。
ファージＥＬＩＳＡによって同定されるヒットの数はアッセイ感度によって制限され得るので、パニングプールのサブセットも次世代配列決定（ＮＧＳ）に供して、配列濃縮によって更なるＦａｂ定常領域バインダーを同定した。ポリクローナルファージＥＬＩＳＡからの結果に基づいて、１７個のパニングプールのうち１３個からの後のパニングラウンド（ラウンド４、５、６、又は８）を、ライブラリー領域におけるＡｍｐｌｉｃｏｎＥＺ ＮＧＳ分析のために選択した。濃縮は、観察された全長配列の総数に対する特定の配列の例の数の比に１００パーセントを掛けたものとして計算した。ファージＥＬＩＳＡによって同定された抗ｍＥｐｈＡ２ヒットはＮＧＳによっても観察され、この配列は９４．２％の濃縮を有していた。アルギニンリッチモチーフなどの明らかな非特異的結合モチーフを含まない０．５％を超える濃縮を、更なる結合分析のための配列を選択するための誘導として使用した。したがって、２つの二重ループ変異体を含む合計４３個のＮＧＳに基づくヒットを、Ｈｉｓ６タグ付きＦａｂとして哺乳動物発現ベクターにクローニングした。これらの４３個のＦａｂ＋ファージＥＬＩＳＡによって同定された単一のＦａｂ定常領域バインダー（ＥＰＡＸＢ１）及び親抗ＸＯ１Ｂ１ ＦａｂをＨＥＫ Ｅｘｐｉ２９３細胞から発現させ、上清をＳＰＲによって分析した。４３個のＦａｂのうち４個がｎＭ範囲でｍＥｐｈＡ２－Ｆｃへの結合を示した。しかしながら、同定された可能性のあるヒットの１つは、無視できる発現レベルを有することが後に示され、したがって、ＥｐｈＡ２バインダーとして確認されなかった。結果として、３つの新しいＦａｂ定常領域バインダー（ＥＰＡＸＢ１７、ＥＰＡＸＢ２７、及びＥＰＡＸＢ２８として同定された）が、ＳＰＲスクリーニングと組み合わせたＮＧＳを通して同定され、これを図５に示す。
要約すると、Ｆａｂ ＣＨ１及び／又はＣＬ領域のいずれかにおいて７、９、又は１５個の多様化したアミノ酸を含むループに基づく１７個の異なるパニング条件から開始して、合計４つのＦａｂ定常領域バインダーをｍＥｐｈＡ２－Ｆｃに対して同定した。それらの全ては、単一ループ第５世代（Ｇ５）Ｆａｂ ＣＲＬ由来であった。４つのＦａｂ定常領域バインダーの特徴を以下の表３に示す。Ａｌａ－Ｔｙｒ－Ｐｒｏモチーフは、４つの同定された配列のうち３つに存在した。
Figure 2024515303000005
操作された抗ＥｐｈＡ２結合ループを有するＦａｂの熱安定性
操作された抗ＥｐｈＡ２結合ループを有する４つのＦａｂのそれぞれを、示差走査蛍光定量法（ＤＳＦ）によって分析して、熱安定性を測定した。熱安定性は、Ｐｒｏｍｅｔｈｅｕｓ ＮａｎｏＤＳＦ機器（Ｎａｎｏｔｅｍｐｅｒ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用して示差走査蛍光定量法（ＤＳＦ）によって決定した。試料をＰＢＳ（ｐＨ ７．４）で０．５ ｍｇ／ｍＬに希釈し、３８４ウェル試料プレートから２４ウェルキャピラリーにロードした。各サンプルについて、２回測定を行った。試料を２０℃から９５℃まで１．０℃／分の速度で加熱し、固有トリプトファン及びチロシン蛍光を、３３０ｎＭの励起波長及び３５０ｎＭの発光を使用して測定した。後方反射技術を用いた凝集の開始温度もモニターした。融解温度と凝集の開始は、Ｐｒ．Ｓｔａｂｉｌｉｔｙ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｖ１．０．２ ソフトウェアを使用して決定した。
以下の表４に示されるように、操作された抗ＥｐｈＡ２結合ループを有する４つのＦａｂのそれぞれは、親Ｆａｂと比較していくらかの不安定化を有する。ＣＨ１ドメイン内の操作されたＣＤループを介してＥｐｈＡ２に結合する２つのＦａｂ（すなわち、ＥＰＡＸＢ１及びＥＰＡＸＢ１７）は、親Ｆａｂと比較してＴｍが２℃しか失われていない。しかしながら、非常に広い転移が観察され、おそらくＣＨ１の初期アン折り畳みを示している。この幅広い遷移のために、Ｔ開始は比較のための最良の測定基準であり、二重特異性Ｆａｂは親Ｆａｂよりも１０～１２℃早い開始を有する。ＣＬＫドメイン内の操作されたＤＥループを介してＥｐｈＡ２に結合する２つのＦａｂ（すなわち、ＥＰＡＸＢ２７及びＥＰＡＸＢ２８）は、親Ｆａｂと比較して９℃のＴｍ喪失、及び９℃早期のＴ開始を有する。特に、操作されたループを有する二重特異性抗体は、安定であり、良好な生物物理学的特性を有することが知られている無関係の対照抗体（ＣＮＴＯ５８２５）の範囲内のＴｍ及びＴ開始を有する。
Figure 2024515303000006
Ｆａｂ定常領域バインダーのｍＥｐｈＡ２－Ｆｃへの再フォーマット
ＥＰＡＸＢ１のＣＨ１ドメイン内のｍＥｐｈＡ２－Ｆｃ結合ループは、抗ＸＯ１Ｂ １ Ｆａｂとの関連で発見されたが、ｍＥｐｈＡ２－Ｆｃ結合が保持されるかどうかを決定するために、別個のヒト生殖系列配列に由来する新しい可変領域（抗ヒトＩＬ２３Ｒ及びＨＥＲ２）と対にした。更に、ＥＰＡＸＢ１をモノクローナルとして再フォーマットした（図６Ａ）。各形態をＨＥＫ ２９３ Ｅｘｐｉ細胞において発現させ、ＩＭＡＣ（Ｆａｂの場合）又はプロテインＡ精製（モノクローナル抗体の場合）によって精製した。発現収量は、二重特異性Ｆａｂ及びモノクローナル抗体について発現１リットル当たり２３１～４８１ ｍｇのタンパク質の範囲であり、新しいフォーマットのそれぞれについてＳＥ－ＨＰＬＣによって単一のピーク（緩衝液ピークは別として）が観察された。Ｆａｂについて、二重特異性抗体の精製収率及びＳＥ－ＨＰＬＣ保持時間は、それらの対応する単一特異性Ｆａｂ親と同等であった（図６Ｂ）。
各標的（ｍＥｐｈＡ２－Ｆｃ、ＸＯ１Ｂ１、ヒトＩＬ２３Ｒ、及びＨＥＲ２－Ｆｃ）に対する精製単一特異性及び二重特異性Ｆａｂ並びに精製二重特異性モノクローナル抗体の結合親和性を、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定した。ＥｐｈＡ２結合ループは、全ての新しいフォーマットにおいて結合を保持し、抗ＸＯ１Ｂ１二重特異性Ｆａｂにおいて２．１８ｎＭ、抗ＩＬ２３Ｒ二重特異性Ｆａｂにおいて８．８４ｎＭ、及び抗ＨＥＲ２二重特異性Ｆａｂにおいて１６．５７ｎＭの親和性を有する。各Ｆａｂにおいて、その同族標的に対する可変領域親和性は、抗ＥｐｈＡ２二重特異性フォーマットにおいて維持される。抗ＸＯ１Ｂ１×抗ＥｐｈＡ２モノクローナル抗体フォーマットにおいて、ＸＯ１Ｂ１に対する可変領域の見かけの親和性は０．０８ｎＭであり、ｍＥｐｈＡ２－Ｆｃに対する抗ＥｐｈＡ２ループの見かけの親和性は０．０９ｎＭである。見かけの結合は、親和力に起因して、Ｆａｂと比較してモノクローナル抗体フォーマットにおいてより強固である（図６Ｃ）。
更なる二重特異性ｍＡｂの標的結合
抗ＩＬ２３Ｒ ｘ抗ＥｐｈＡ２及び抗ＨＥＲ２ｘ抗ＥｐｈＡ２ Ｆａｂを、標準的なモノクローナル抗体フォーマットに再フォーマットし、細胞上のそれぞれの標的に結合する能力について評価した。
ＨＥＲ２×ＥｐｈＡ２及びＩＬ２３×ＥｐｈＡ２二重特異性抗体を、対応するＨＥＲ２及びＩＬ２３Ｒ単一特異性ｍＡｂと共に、ＨＥＫ ２９３Ｅｘｐｉ細胞において発現させ、プロテインＡ樹脂によって精製した。タンパク質純度をＳＥ－ＨＰＬＣ（サイズ排除－高速液体クロマトグラフィ）によって評価した。
精製収率は、発現１ Ｌ当たり９１～１５７ｍｇのタンパク質の範囲であり、単一ピークがＳＥ－ＨＰＬＣによって観察された（図７）。二重特異性抗体の精製収率及びＳＥ－ＨＰＬＣ保持時間は、それらの対応する単一特異性ｍＡｂ親と同等であった。
全長ヒトＥｐｈＡ２及びＨＥＲ２受容体をコードするプラスミドを２９３Ｆ細胞に遺伝子導入して、ハイグロマイシン選択下で安定な細胞プールを作製した。選択したプールを、フィコエリトリンフルオロフォアとコンジュゲートした抗ＥｐｈＡ２抗体（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ Ｃａｔ＃ＦＡＢ３０３５Ｐ）又は抗ＨＥＲ２抗体（ＡｂＣａｍ Ｃａｔ＃１１７１０）のいずれかを使用したＦＡＣＳによってスクリーニングし、フィコエリトリンフルオロフォアとコンジュゲートした抗ラット二次抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｃａｔ＃１１２－１１６－１４３）を使用して検出した。選択されたプールの全てを、それらの一次抗体及びアイソタイプ特異的Ｄｙｎａｂｅａｄｓを用いて単離した。ＥｐｈＡ２については、Ｄｙｎａｂｅａｄヤギ抗マウス（Ｔｈｅｒｍｏ Ｃａｔ＃１１０３３）、及びＨＥＲ２については、Ｄｙｎａｂｅａｄヒツジ抗ラット（Ｔｈｅｒｍｏ Ｃａｔ＃１１０３５）を使用した。
結合研究のために、細胞を、Ａｃｃｕｔａｓｅを用いて培養フラスコから剥がし、洗浄し、ＢＤ染色緩衝液に再懸濁した。細胞を９６ウェルｖ底プレートに１５０，０００細胞／ウェルで播種し、４００ｎＭから１：２に連続希釈した一次染色抗体と共に氷上で１時間インキュベートした。次いで、細胞を洗浄し、ヤギＡＦ４８８抗ｈＩｇＧ Ｆｃｇ特異的Ｆ（ａｂ’）２二次検出試薬と共に氷上で１時間インキュベートした。細胞を洗浄し、ＢＤ Ｃｙｔｏｆｉｘで固定し、再度洗浄し、５０μｌの染色緩衝液に再懸濁した。次いで、細胞をｉＱｕｅ ＶＢＲ Ｐｌｕｓフローサイトメーターで分析した。
遺伝子導入されていないＨＥＫ細胞に対して、ＨＥＲ２×ＥｐｈＡ２及びＩＬ２３×ＥｐｈＡ２二重特異性抗体又はそれらの対応する単一特異性対照抗体の最小限の結合が観察された（図８Ａ）。抗体定常領域にＥｐｈＡ２結合ループを含有する抗体の各々は、ヒトＥｐｈＡ２を安定に発現するＨＥＫ細胞に結合したが、アイソタイプ対照は感知できるほどには結合しなかった（図８Ｃ）。抗ＨＥＲ２×抗ＥｐｈＡ２二重特異性は、親抗ＨＥＲ２ ｍＡｂと同様にＨＥＫ－ＨＥＲ２細胞に結合し（図８Ｂ）、抗ＩＬ２３Ｒ×抗ＥｐｈＡ２二重特異性は、親抗ＩＬ２３Ｒ ｍＡｂと同様にＨＥＫ－ＩＬ２３Ｒ細胞に結合し（図８Ｄ）、このことは、ＥｐｈＡ２結合ループの存在が、可変領域によって媒介される細胞結合に影響を及ぼさなかったことを示している。
定常領域結合相互作用の特異性を更に確認するために、二重特異性Ｆａｂ及びｍＡｂ並びにそれらの対応する単一特異性親抗体もＳＰＲ法によって評価して、それらが、ある範囲の生物物理学的特性を有する無関係の組み換え試験タンパク質のサブセットとの非特異的相互作用を有するかどうかを決定した。操作されたＥｐｈＡ２結合ループを含有するほとんどの二重特異性Ｆａｂ及びｍＡｂについて、組み換え試験タンパク質への結合は観察されなかった。１つの場合において、非特異的相互作用が観察されたが、これは、親抗体に起因し、操作された定常領域ループに起因しなかった（データ示さず）。
二重特異性Ｆａｂ及びｍＡｂの同時標的結合
二重特異性Ｆａｂ及びｍＡｂを、可変領域媒介結合及び定常領域ループ結合を介してそれらの標的に同時に結合するそれらの能力について評価した。
Ｏｃｔｅｔ ＲＥＤ（登録商標）３８４ Ｓｙｓｔｅｍ（ＦｏｒｔｅＢｉｏ，Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ）を使用して、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）によって二重標的結合を評価した。ビオチン化抗原をストレプトアビジンでコーティングされたバイオセンサーにロードし、１ｎＭ の応答単位（ＲＵ）シフトを達成た。単一特異性又は二重特異性ｍＡｂ（１μＭ）又はＦａｂ（４００ｎＭ）を３分間会合させた。次いで、二次抗原を３分間会合させた。全ての試料を、ＤＰＢＳ、０．１％ＢＳＡ、及び０．０２％界面活性剤Ｐ２０のランニング緩衝液中に希釈した。
抗ＨＥＲ２×抗ＥｐｈＡ２及び抗ＩＬ２３Ｒ×抗ＥｐｈＡ２二重特異性Ｆａｂは、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）によって、それらのそれぞれの標的に同時に結合することが示された（それぞれ図９Ａ及び９Ｂ）。二重標的結合は、どの抗原が最初にバイオセンサー上に捕捉されたかに関係なく成功した。ｍＡｂ形式の抗ＨＥＲ２×抗ＥｐｈＡ２二重特異性も、両方の標的に同時に結合することができた（図９Ｃ）。

Claims (33)

  1. 抗体重鎖のＣＨ１領域に由来する領域及び／又は抗体軽鎖のＣＬ領域に由来する領域を含む結合分子であって、前記ＣＨ１領域に由来する前記領域及び／又は前記ＣＬ領域に由来する前記領域が、１つ以上の抗原結合ループを含む、結合分子。
  2. 結合分子であって、
    （ｉ）重鎖可変領域（ＶＨ）と抗体重鎖のＣＨ１領域に由来する領域とを含む第１ポリペプチド、及び、
    （ｉｉ）軽鎖可変領域（ＶＬ）と抗体軽鎖のＣＬ領域に由来する領域とを含む第２のポリペプチド、を含み、
    前記ＣＨ１領域に由来する前記領域及び／又は前記ＣＬ領域に由来する前記領域が、１つ以上の抗原結合ループを含む、結合分子。
  3. （ｉ）前記ＣＨ１領域に由来する前記領域内の前記１つ以上の抗原結合ループが、前記ＣＨ１領域の前記ＡＢ、ＢＣ、ＣＤ、ＤＥ、ＥＦ、及び／又はＦＧループ領域にあり、及び／又は、
    （ｉｉ）前記ＣＬ領域に由来する前記領域中の前記１つ以上の抗原結合ループが、前記ＣＬ領域の前記ＡＢ、ＢＣ、ＣＤ、ＤＥ、ＥＦ、及び／又はＦＧループ領域にある、請求項１又は２に記載の結合分子。
  4. （ｉ）前記ＣＨ１領域に由来する前記領域が、１つ又は２つの抗原結合ループを含み、及び／又は、
    （ｉｉ）前記ＣＬ領域に由来する前記領域が、１つ又は２つの抗原結合ループを含む、請求項１～３のいずれか一項に記載の結合分子。
  5. （ｉ）前記ＣＨ１領域に由来する前記領域が、前記ＣＨ１領域の前記ＣＤループ領域に１つの抗原結合ループを含み、及び／又は、
    （ｉｉ）前記ＣＨ１領域に由来する前記領域が、前記ＣＨ１領域の前記ＤＥループ領域に１つの抗原結合ループを含む、請求項１～４のいずれか一項に記載の結合分子。
  6. 前記ＣＨ１領域に由来する前記領域が、前記ＣＨ１領域の前記ＣＤループ領域に１つの抗原結合ループを含み、前記ＣＨ１領域の前記ＤＥループ領域に１つの抗原結合ループを含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の結合分子。
  7. 前記ＣＬ領域に由来する前記領域が、
    （ｉ）前記ＣＬ領域の前記ＣＤループ領域における１つの抗原結合ループ、
    （ｉｉ）前記ＣＬ領域の前記ＤＥループ領域における１つの抗原結合ループ、又は
    （ｉｉｉ）前記ＣＬ領域の前記ＣＤループ領域における１つの抗原結合ループ及び前記ＣＬ領域の前記ＤＥループ領域における１つの抗原結合ループ、を含む、請求項１～６のいずれか一項に記載の結合分子。
  8. （ｉ）前記ＣＨ１領域に由来する前記領域が、前記ＣＨ１領域の前記ＣＤループ領域に１つの抗原結合ループを含み、前記ＣＬ領域に由来する前記領域が、前記ＣＬ領域の前記ＣＤループ領域に１つの抗原結合ループを含み、
    （ｉｉ）前記ＣＨ１領域に由来する前記領域が、前記ＣＨ１領域の前記ＣＤループ領域に１つの抗原結合ループを含み、前記ＣＬ領域に由来する前記領域が、前記ＣＬ領域の前記ＤＥループ領域に１つの抗原結合ループを含み、
    （ｉｉｉ）前記ＣＨ１領域に由来する前記領域が、前記ＣＨ１領域の前記ＣＤループ領域に１つの抗原結合ループを含み、前記ＣＬ領域に由来する前記領域が、前記ＣＬ領域の前記ＣＤループ領域における１つの抗原結合ループ及び前記ＣＬ領域の前記ＤＥループ領域における１つの抗原結合ループを含み；
    （ｉｖ）前記ＣＨ１領域に由来する前記領域が、前記ＣＨ１領域の前記ＤＥループ領域に１つの抗原結合ループを含み、前記ＣＬ領域に由来する前記領域が、前記ＣＬ領域の前記ＣＤループ領域に１つの抗原結合ループを含み、
    （ｖ）前記ＣＨ１領域に由来する前記領域が、前記ＣＨ１領域の前記ＤＥループ領域に１つの抗原結合ループを含み、前記ＣＬ領域に由来する前記領域が、前記ＣＬ領域の前記ＤＥループ領域に１つの抗原結合ループを含み、
    （ｖｉ）前記ＣＨ１領域に由来する前記領域が、前記ＣＨ１領域の前記ＤＥループ領域に１つの抗原結合ループを含み、前記ＣＬ領域に由来する前記領域が、前記ＣＬ領域の前記ＣＤループ領域における１つの抗原結合ループ及び前記ＣＬ領域の前記ＤＥループ領域における１つの抗原結合ループを含み；
    （ｖｉｉ）前記ＣＨ１領域に由来する前記領域が、前記ＣＨ１領域の前記ＣＤループ領域における１つの抗原結合ループ及び前記ＣＨ１領域の前記ＤＥループ領域における１つの抗原結合ループを含み、前記ＣＬ領域に由来する前記領域が、前記ＣＬ領域の前記ＣＤループ領域に１つの抗原結合ループを含み、
    （ｖｉｉｉ）前記ＣＨ１領域に由来する前記領域が、前記ＣＨ１領域の前記ＣＤループ領域における１つの抗原結合ループ及び前記ＣＨ１領域の前記ＤＥループ領域における１つの抗原結合ループを含み、前記ＣＬ領域に由来する前記領域が、前記ＣＬ領域の前記ＤＥループ領域に１つの抗原結合ループを含み、又は
    （ｉｘ）前記ＣＨ１領域に由来する前記領域が、前記ＣＨ１領域の前記ＣＤループ領域における１つの抗原結合ループ及び前記ＣＨ１領域の前記ＤＥループ領域における１つの抗原結合ループを含み、前記ＣＬ領域に由来する前記領域が、前記ＣＬ領域の前記ＣＤループ領域における１つの抗原結合ループ及び前記ＣＬ領域の前記ＤＥループ領域における１つの抗原結合ループを含む、請求項２～７のいずれか一項に記載の結合分子。
  9. （ｉ）前記ＣＨ１領域に由来する前記領域が、配列番号１のアミノ酸配列を含むヒトＩｇＧ１ ＣＨ１領域に由来する領域であり、前記ＣＨ１領域に由来する前記領域が、配列番号１に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％又は９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、及び／又は、
    （ｉｉ）前記ＣＬ領域に由来する前記領域が、配列番号２のアミノ酸配列を含むヒトＣＬカッパ領域に由来する領域であり、前記ＣＬ領域に由来する前記領域が、配列番号２に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％又は９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１～８のいずれか一項に記載の結合分子。
  10. （ｉ）前記ＣＨ１領域の前記ＣＤループ領域における前記抗原結合ループが、前記ヒトＩｇＧ１ ＣＨ１領域の前記ＣＤループの前記アミノ酸残基ＴＳＧを置換し、及び／又は、
    （ｉｉ）前記ＣＨ１領域の前記ＤＥループ領域における前記抗原結合ループが、前記ヒトＩｇＧ１ ＣＨ１領域の前記ＤＥループの前記アミノ酸残基ＱＳＳを置換する、請求項９に記載の結合分子。
  11. （ｉ）前記ＣＬ領域の前記ＣＤループ領域における前記抗原結合ループが、前記ヒトＣＬカッパ領域の前記ＣＤループの前記アミノ酸残基ＳＧＮＳを置換し、及び／又は、
    （ｉｉ）前記ＣＬ領域の前記ＤＥループ領域における前記抗原結合ループが、前記ヒトＣＬカッパ領域の前記ＤＥループの前記アミノ酸残基ＳＫＤを置換する、請求項９に記載の結合分子。
  12. 前記１つ以上の抗原結合ループのそれぞれが、７～１５個のアミノ酸残基を含む、請求項１～１１のいずれか一項に記載の結合分子。
  13. 前記ＶＨ領域及び前記ＶＬ領域が第１の抗原に結合し、前記ＣＨ１領域に由来する前記領域及び／又は前記ＣＬ領域に由来する前記領域が第２の抗原に結合する、請求項２～１２のいずれか一項に記載の結合分子。
  14. （ｉ）前記第１の抗原及び前記第２の抗原が同じ抗原であり、又は
    （ｉｉ）前記第１の抗原及び前記第２の抗原が２つの異なる抗原である、請求項１３に記載の結合分子。
  15. 請求項１～１４のいずれか一項に記載の結合分子をコードする、核酸。
  16. 請求項１５に記載の核酸を含む、ベクター。
  17. 請求項１～１４のいずれか一項に記載の結合分子をコードするポリヌクレオチドを宿主細胞中で発現させることを含む、結合分子を作製する方法。
  18. （ａ）請求項１～１４のいずれか一項に記載の結合分子または請求項１５に記載の核酸と、（ｂ）薬学的に許容される賦形剤とを含む、医薬組成物。
  19. 対象における疾患又は障害を治療する方法であって、請求項１～１４のいずれか一項に記載の結合分子及び／又は請求項１５に記載の核酸を前記対象に投与することを含み、任意選択で、前記疾患又は障害が前記第１の抗原及び／又は前記第２の抗原に関連する、方法。
  20. 疾患又は障害の前記治療のための医薬の製造のための、請求項１～１４のいずれか一項に記載の結合分子及び／又は請求項１５に記載の核酸の使用。
  21. 結合分子の集団を含む定常領域ライブラリー（ＣＲＬ）であって、前記結合分子のそれぞれが請求項１～１４のいずれか一項に記載の結合分子であり、前記結合分子の前記集団が、前記ＣＨ１領域に由来する前記領域及び／又は前記ＣＬ領域に由来する前記領域に多様なアミノ酸配列を含む、定常領域ライブラリー（ＣＲＬ）。
  22. 抗体のＣＨ１領域由来の領域及び／又はＣＬ領域由来の領域をそれぞれが含む分子の集団を含む定常領域ライブラリー（ＣＲＬ）であって、前記分子の前記集団は、前記ＣＨ１領域由来の前記領域及び／又は前記ＣＬ領域由来の前記領域に多様なアミノ酸配列を含む、定常領域ライブラリー（ＣＲＬ）。
  23. （ｉ）前記ＣＨ１領域に由来する前記領域内の前記多様なアミノ酸配列が、前記ＣＨ１領域の前記ＡＢ、ＢＣ、ＣＤ、ＤＥ、ＥＦ、及び／又はＦＧループ領域にあり、及び／又は、
    （ｉｉ）前記ＣＬ領域に由来する前記領域内の前記多様なアミノ酸配列が、前記ＣＬ領域の前記ＡＢ、ＢＣ、ＣＤ、ＤＥ、ＥＦ、及び／又はＦＧループ領域にある、請求項２１に記載のＣＲＬ。
  24. 前記分子の前記集団が、以下の領域に、多様なアミノ酸配列を含み、
    （ｉ）前記ＣＨ１領域に由来する前記領域中の１つ又は２つのループ領域、
    （ｉｉ）前記ＣＬ領域に由来する前記領域中の１つ又は２つのループ領域、
    （ｉｉｉ）前記ＣＨ１領域の前記ＣＤループ領域、
    （ｉｖ）前記ＣＨ１領域の前記ＤＥループ領域、
    （ｖ）前記ＣＨ１領域の前記ＣＤループ領域及び前記ＤＥループ領域、
    （ｖｉ）前記ＣＬ領域の前記ＣＤループ領域、
    （ｖｉｉ）前記ＣＬ領域の前記ＤＥループ領域、
    （ｖｉｉｉ）前記ＣＬ領域の前記ＣＤループ領域及び前記ＤＥループ領域、
    （ｉｘ）前記ＣＨ１領域の前記ＣＤループ領域、さらに前記分子の前記集団が、前記ＣＬ領域の前記ＣＤループ領域に多様なアミノ酸配列を含み、
    （ｘ）前記ＣＨ１領域の前記ＣＤループ領域、さらに、前記分子の前記集団が、前記ＣＬ領域の前記ＤＥループ領域に多様なアミノ酸配列を含み、
    （ｘｉ）前記ＣＨ１領域の前記ＣＤループ領域、さらに、前記分子の前記集団が、前記ＣＬ領域の前記ＣＤループ領域及び前記ＤＥループ領域に多様なアミノ酸配列を含み、
    （ｘｉｉ）前記ＣＨ１領域の前記ＤＥループ領域、さらに、前記分子の前記集団が、前記ＣＬ領域の前記ＣＤループ領域に多様なアミノ酸配列を含み、
    （ｘｉｉｉ）前記ＣＨ１領域の前記ＤＥループ領域、さらに、前記分子の前記集団が、前記ＣＬ領域の前記ＤＥループ領域に多様なアミノ酸配列を含み、
    （ｘｉｖ）前記ＣＨ１領域の前記ＤＥループ領域、さらに、前記分子の前記集団は、前記ＣＬ領域の前記ＣＤループ領域及び前記ＤＥループ領域に多様なアミノ酸配列を含み、
    （ｘｖ）前記ＣＨ１領域の前記ＣＤループ領域及び前記ＣＨ１領域の前記ＤＥループ領域、さらに、前記分子の前記集団が、前記ＣＬ領域の前記ＣＤループ領域に多様なアミノ酸配列を含み、
    （ｘｖｉ）前記ＣＨ１領域の前記ＣＤループ領域及び前記ＤＥループ領域、さらに、前記分子の前記集団が、前記ＣＬ領域の前記ＤＥループ領域に多様なアミノ酸配列を含み、又は
    （ｘｖｉｉ）前記ＣＨ１領域の前記ＣＤループ領域及び前記ＤＥループ領域、さらに、前記分子の前記集団は、前記ＣＬ領域の前記ＣＤループ領域及び前記ＤＥループ領域に多様なアミノ酸配列を含む、請求項２１に記載のＣＲＬ。
  25. （ｉ）前記ＣＨ１領域に由来する前記領域が、配列番号１のアミノ酸配列を含むヒトＩｇＧ１ ＣＨ１領域に由来する領域であり、前記ＣＨ１領域に由来する前記領域が、配列番号１に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％又は９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、及び／又は、
    （ｉｉ）前記ＣＬ領域に由来する前記領域が、配列番号２のアミノ酸配列を含むヒトＣＬカッパ領域に由来する領域であり、前記ＣＬ領域に由来する前記領域が、配列番号２に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％又は９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項２１～２４のいずれか一項に記載の抗体。
  26. （ｉ）前記ヒトＩｇＧ１ ＣＨ１領域の前記ＣＤループの前記アミノ酸残基ＴＳＧが、前記ＣＲＬ中の前記分子中の多様なアミノ酸配列で置換されている；又は
    （ｉｉ）前記ヒトＩｇＧ１ ＣＨ１領域の前記ＤＥループの前記アミノ酸残基ＱＳＳが、前記ＣＲＬ中の前記分子中の多様なアミノ酸配列で置換されている、請求項２５に記載のＣＲＬ。
  27. （ｉ）前記ヒトＣＬカッパ領域の前記ＣＤループの前記アミノ酸残基ＳＧＮＳが、前記ＣＲＬ中の前記分子中の多様なアミノ酸配列で置換されている、又は
    （ｉｉ）前記ヒトＣＬカッパ領域の前記ＤＥループの前記アミノ酸残基ＳＫＤが、前記ＣＲＬ中の前記分子中の多様なアミノ酸配列で置換されている、請求項２５に記載のＣＲＬ。
  28. （ｉ）前記多様なアミノ酸配列が、７～１５個のアミノ酸残基を含み、
    （ｉｉ）前記分子のそれぞれが、ＶＨ領域及びＶＬ領域を更に含み、
    （ｉｉｉ）前記結合分子又は前記分子がＦａｂ断片であり、
    （ｉｖ）１つのループ領域を有する前記ＣＲＬの前記多様性が１０７～１０１６の範囲であり、又は
    （ｖ）２つのループ領域を有する前記ＣＲＬの前記多様性が１０１８～１０３３の範囲である、請求項２１～２７のいずれか一項に記載の抗体。
  29. 第１の抗原に結合する第１の結合ドメイン及び第２の抗原に結合する第２の結合ドメインを含む結合分子を同定するための方法であって、参照レベルよりも高い親和性で前記第２の抗原に結合する前記結合分子を同定するために請求項２１～２８のいずれか一項に記載のＣＲＬをスクリーニングすることを含み、前記第１の結合ドメインが抗体の前記ＶＨ領域及び前記ＶＬ領域を含み、前記第２の結合ドメインが抗体定常領域変異体を含む、方法。
  30. 結合分子を生成する方法であって、抗原に結合することができる抗体定常領域変異体を同定する機能を実行するための第１のステップと、前記抗体定常領域変異体を含む前記結合分子を構築する第２のステップとを含み、任意選択で、前記第１のステップが、請求項２１～２８のいずれか一項に記載のＣＲＬをスクリーニングすることを含む、方法。
  31. 請求項２９に記載の方法に従って同定される、結合分子。
  32. 請求項３０に記載の方法に従って作製される、結合分子。
  33. 対象における疾患又は障害を治療するための方法であって、請求項１～１４、３１、及び３２のいずれか一項に記載の結合分子及び／又は請求項１５に記載の核酸を前記対象に投与することを含む、方法。
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