TW201211252A - Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof - Google Patents

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TW201211252A
TW201211252A TW100130545A TW100130545A TW201211252A TW 201211252 A TW201211252 A TW 201211252A TW 100130545 A TW100130545 A TW 100130545A TW 100130545 A TW100130545 A TW 100130545A TW 201211252 A TW201211252 A TW 201211252A
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TW
Taiwan
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seq
disease
binding
binding protein
variable region
Prior art date
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TW100130545A
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Tariq Ghayur
Jochen G Salfeld
Michael J Mcpherson
Original Assignee
Abbott Lab
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Publication date
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Description

201211252 六、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明提供多價及多特異性結合蛋白，其製備方法 特別提供其用於診斷、預防及/或治療急性及慢性發炎= 病、癌症及其他疾病之用途。 、 本申請案為主張2010年8月26曰申請之美國臨時申請案 第61/377,1 17號之優先權的非臨時申請案，其全部内容以 引用的方式併入本文中。 〇 【先前技術】 此項技術中已知經工程改造之蛋白質，諸如能結合兩個 或兩個以上抗原之多特異性抗體。該等多特異性結合蛋白 可使用細胞融合、化學結合或重組DNA技術產生。 已使用四源雜交瘤技術（參看Milstein，C.及A.C. Cxieli。 (1983) Nature 305(5934): 537-40)，基於表現具有雙特異性 抗體之所要特異性之鼠類單株抗體（mAb)的兩種不同融合 瘤細胞株之體細胞融合來產生雙特異性抗體。因為所得雜 〇 交融合瘤（或四源雜交瘤）細胞株内兩種不同免疫球蛋白 (Ig)重鏈及輕鏈的隨機配對’所以產生多達1〇種不同1§種 類’其中僅一者為功能性雙特異性抗體。存在錯配副產物 及產率很低表示需要完善的純化程序。 亦可藉由使兩種不同mAb化學結合來產生雙特異性抗體 (參看 Staerz，U.D.等人，（1985) Nature 314(6012): 628- 31)。此方法不產生均質製劑。其他方法已使用兩種不同 mAb或較小抗體片段之化學結合（參看Brennan, M.等人 158366.doc 201211252 (1985) Science 229(4708): 81-3)。 用於產生雙特異性抗體之另一方法為將兩個親本抗體用 異雙功能交聯劑偶合’但所得雙特異性抗體的缺點在於具 有顯著分子異質性’因為交聯劑與親本抗體的反應並非定 點反應。為獲得更均質之雙特異性抗體製劑，已將兩個不 同F ab片段在其鉸鏈半胱胺酸殘基處以定點方式化學交聯 (參看 Glennie，M.J.等人，（1987) J. Immunol. 139(7): 2367- 75)。但此方法產生Fabi2片段，而非完全IgG分子。 已開發出多種其他重組雙特異性抗體形式（參看
Kriangkum，J.等人，（2001) Biomol. Eng· 18(2): 31-40)。其 中，串聯單鏈Fv分子及雙功能抗體（diabody)及其多種衍生 物最為廣泛使用。慣常自兩個識別不同抗原的單鏈 Fv(scFv)片^又開始建構此等分子（參看Ec〇n〇mides，α·ν·等 人，（2003) Nat. Med. 9(1): 47-52)。串聯scFv 分子（taFv)表 示以另一肽連接子簡單連接兩個scFv分子的簡單形式。此 等串聯ScFv分子中存在的兩個scFv片段形成單獨摺疊實 體。可使用多種連接子連接兩片段且連接子長度為 最多63個殘基（參看Nakanishi，κ等人，（2〇〇1) Ann
Immunol· 19· 423-74)。儘管親本scFv片段在細菌中通常可 以可溶形式表現，然而，通常觀測到串聯scFv分子在細菌 中形成不溶聚集體。因此，慣常應用再摺疊方案或使用哺 礼動物表現系統來產生可溶串聯scFv分子。在一項最近研 九中’報導由轉殖基因兔及牛活體内表現針對cD28及黑 素瘤相關蛋白聚糖之串聯scFv(參看Gracie，； A等人 158366.doc 201211252 (1999) J. Clin. Invest. 104(10): 1393-401)。在此構築體 中，兩個scFv分子由CHI連接子連接，且可見雙特異性抗 體的血清濃度高達100 mg/L。使用多種策略，包括改變結 構域順序或使用具有不同長度或可撓性之中間連接子，以 允許細菌表現可溶性串聯scFv分子。少數研究現已報導， 使用極短Ala3連接子或富含甘胺酸/絲胺酸之長連接子在 細菌中表現可溶串聯scFv分子（參看Leung, B.P.等人， (2000) J. Immunol. 164(12): 6495-502 ; Ito, A.等人，（2003) 〇 J. Immunol. 170(9): 4802-9 ; Karni, Α·等人，（2002) J.
Neuroimmunol. 125(1-2): 134-40) ° 在另一最近研究中，使 用含有長度為3或6個殘基的隨機化中間連接子的串聯scFv 譜系的噬菌體呈現法，以增濃在細菌中以可溶性及活性形 式產生之彼等分子。此方法導致串聯scFv分子與6個胺基 酸殘基之連接子分離（參看Arndt, M.及J. Krauss (2003) Methods Mol. Biol. 207: 305-21)。不清楚此連接子序列是 否代表串聯scFv分子的可溶性表現的通用解決方案。然 〇 而，此研究證明串聯scFv分子之噬菌體呈現法與定向突變 誘發之組合為增濃可以活性形式在細菌中表現之此等分子 的有效工具。 雙特異性雙功能抗體（Db)利用雙功能抗體形式進行表 現。藉由使連接VH區域與VL區域之連接子長度減小至約5 個殘基，由scFv片段產生雙功能抗體（參看Peipp, M.及T. Valerius (2002) Biochem· Soc. Trans. 30(4): 507-1 1)。連接 子尺寸如此減小便利於兩個多肽鏈藉由VH區域與VL區域 158366.doc 201211252 交叉配對而進行二聚。藉由在同一細胞内表現兩個具有結 構 VHA-VLB 及 VHB-VLA(VH-VL 組態）或 VLA-VHB 及 VLB-VHA(VL-VH組態）之多肽鏈來產生雙特異性雙功能抗體。 過去已產生多種不同的雙特異性雙功能抗體，且其中大多 數在細菌中以可溶性形式表現。然而，最近的比較研究證 明，可變區域之定向可能影響活性結合位點之表現及形成 (參看 Mack，M.等人，（1995) Proc. Natl. Acad. Sci. U S A 92(15): 7021-5)。儘管如此，細菌中之可溶性表現代表優 於串聯scFv分子的重要優勢。然而，因為單個細胞内表現 兩種不同多肽鏈，所以無活性均二聚體可與活性雜二聚體 一起產生。此需要執行其他純化步驟，以獲得雙特異性雙 功能抗體的均質製劑。一種推動產生雙特異性雙功能抗體 之方法為產生杵臼結構（knob-into-hole)的雙功能抗體（參看 Holliger, Ρ·, T. Prospero&G.Winter(1993)Proc.Natl. Acad. Sci. U S A 90(14): 6444-8.18)。此方法已關於針對 HER2及CD3之雙特異性雙功能抗體得以證實。在抗HER2 或抗CD3可變區域中，藉由將Val37換為Phe且Leu45換為 Trp而在VH區域中引入大型杵狀結構，且藉由使Phe98突 變為Met且Tyr87突變為Ala而在VL區域中產生互補臼狀結 構。藉由使用此方法，雙特異性雙功能抗體之產量可自親 本雙功能抗體的72%增至杵臼結構雙功能抗體的超過 90%。重要的是，產品收得率僅因此等突變略微降低。然 而，觀測到若干構築體的抗原結合活性降低。因此，此相 當精細的方法需要分析多種構築體，以鑑別產生結合活性 158366.doc 201211252 無改變之雜二聚分子的彼等突變《此外，該方法需要突變 修飾免疫球蛋白序列之恆定區，而形成抗體序列的非原生 及非天然形式，此可導致免疫原性提高、活體内穩定性差 以及不良藥物動力學。 單鏈雙功能抗體（scDb)代表改良雙特異性雙功能抗體樣 分子之形成的替代策略（參看Holliger，P.及G. Winter (1997) Cancer Immunol. Immunother. 45(3-4): 128-30 ； Wu, A.M.等人，（1996) Immunotechnology 2(1):第 21-36頁）。 O 藉由以長度為約15個胺基酸殘基之另一中間連接子連接兩 個形成雙功能抗體之多肽鏈來產生雙特異性單鏈雙功能抗 體。因此，分子量對應於單體單鏈雙功能抗體（50-60 kDa) 之所有分子均為雙特異性的。若干研究已證明，雙特異性 單鏈雙功能抗體以可溶性及活性形式表現於細菌中，其中 大多數經純化分子以單體形式存在（參看Holliger，P.及G. Winter (1997) Cancer Immunol. Immunother. 45(3-4): 128-30 ; Wu，A.M.等人，（1996) Immunotechnol. 2(1): 21-36 ; ❹ Pluckthun，A.&P.Pack(1997)Immunotechnol.3(2):83- 105 ; Ridgway，J.B.等人，（1996) Protein Engin. 9(7): 617-2 1)。因此，單鏈雙功能抗體組合串聯scFv(所有單體均為 雙特異性）及雙功能抗體（在細菌中可溶性表現）之優勢。 新近已將雙功能抗體融合於Fc以產生更多Ig樣分子，即 聯雙功能抗體（di-diabody)(參看 Lu, D.等人，（2004) J. Biol. Chem. 279(4): 2856-65)。此外，已描述在IgG重鏈中包含 兩個Fab重複單元且能夠結合四個抗原分子的多價抗體構 158366.doc 201211252 築體（參看 WO 0177342A1，及 Miller，K.等人，（2003) J. Immunol. 170(9): 4854-61) 〇 此項技術中需要能夠結合兩個或兩個以上抗原的經改良 多價結合蛋白。美國專利申請案第11/507,050號提供能夠 以高親和力結合兩個或兩個以上抗原的新穎結合蛋白家 族，其稱為雙可變區域免疫球蛋白（DVD-IgTM)。亦提供能 夠結合兩個或兩個以上抗原之新穎結合蛋白。 【發明内容】 提供能夠結合兩個或兩個以上抗原之多價結合蛋白。亦 提供能夠以高親和力結合兩個或兩個以上抗原之新穎結合 蛋白家族。
在一個實施例中，提供包含多肽鏈之結合蛋白，其中該 多肽鏈包含VDl-(Xl)n-VD2-C-(X2)n，其中VD1為第一可 變區域，VD2為第二可變區域，C為恆定區域，XI表示胺 基酸或多肽，X2表示Fc區，且η為0或1。在一實施例中， 結合蛋白中之VD1及VD2為重鏈可變區域。在另一實施例 中，重鏈可變區域為鼠類重鏈可變區域、人類重鏈可變區 域、CDR移植重鏈可變區域或人類化重鏈可變區域。在另 一實施例中，VD1與VD2能夠結合相同抗原。在另一實施 例中，VD1與VD2能夠結合不同抗原。在另一實施例中， C為重鏈恆定區域。舉例而言，XI為連接子，限制條件為 XI 不為 CH1。舉例而言，XI 為 AKTTPKLEEGEFSEAR (SEQ ID NO: 1) ； AKTTPKLEEGEFSEARV (SEQ ID NO: 2) ； AKTTPKLGG (SEQ ID NO: 3) ； SAKTTPKLGG (SEQ 158366.doc 201211252 ID NO: 4) ； SAKTTP (SEQ ID NO: 5) ； RADAAP (SEQ ID NO: 6) ； RADAAPTVS (SEQ ID NO: 7) ； RADAAAAGGPGS (SEQ ID NO: 8) ； RADAAAA(G4S)4 (SEQ ID NO: 9)； SAKTTPKLEEGEFSEARV (SEQ ID NO: 10) ； ADAAP (SEQ ID NO: 11) ； ADAAPTVSIFPP (SEQ ID NO: 12) ； TVAAP (SEQ ID NO: 13) ； TVAAPSVFIFPP (SEQ ID NO: 14)； QPKAAP (SEQ ID NO: 15) ； QPKAAPSVTLFPP (SEQ ID NO: 16) ； AKTTPP (SEQ ID NO: 17) ； AKTTPPSVTPLAP (SEQ O ID NO: 18) ； AKTTAP (SEQ ID NO: 19) ； AKTTAPSVYPLAP (SEQ ID NO: 20) ； ASTKGP (SEQ ID NO: 21) ； ASTKGPSVFPLAP (SEQ ID NO: 22) ； GGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 23)； GENKVEYAPALMALS (SEQ ID NO: 24) ； GPAKELTPLKEAKVS (SEQ ID NO: 25);或 GHEAAAVMQVQYPAS (SEQ ID NO: 26)。在一實施例中，X2為Fc區。在另一實施例中，X2為 變異Fc區。 在一實施例中，本文揭示之結合蛋白包含多肽鏈，其中 〇 該多肽鏈包含VDl-(Xl)n-VD2-C-(X2)n，其中VD1為第一 重鏈可變區域’ VD2為第二重鏈可變區域，C為重鏈恆定 區域，XI為連接子，限制條件為XI不為CH1，且X2為Fc 區0 在一實施例中，結合蛋白中之VD1及VD2為輕鏈可變區 域。在一實施例中，輕鏈可變區域為鼠類輕鏈可變區域、 人類輕鏈可變區域、CDR移植輕鏈可變區域或人類化輕鏈 可變區域。在一個實施例中，VD 1與VD2能夠結合相同抗 158366.doc 201211252 原。在另一實施例中，VD1與VD2能夠結合不同抗原。在 一實施例中，C為輕鏈恆定區域。在另一實施例中，XI為 連接子，限制條件為XI不為CL。在一實施例中，XI為 AKTTPKLEEGEFSEAR (SEQ ID NO: 1) ； AKTTPKLEEGEFSEARV (SEQ ID NO: 2) ； AKTTPKLGG (SEQ ID NO: 3) ； SAKTTPKLGG (SEQ ID NO: 4) ； SAKTTP (SEQ ID NO: 5) ； RADAAP (SEQ ID NO: 6) ； RADAAPTVS (SEQ ID NO: 7)； RADAAAAGGPGS (SEQ ID NO: 8) ; RADAAAA(G4S)4 (SEQ ID NO: 9) ； SAKTTPKLEEGEFSEARV (SEQ ID NO: 10)； ADAAP (SEQ ID NO: 11) ； ADAAPTVSIFPP (SEQ ID NO: 12) ； TVAAP (SEQ ID NO: 13) ； TVAAPSVFIFPP (SEQ ID NO: 14) ； QPKAAP (SEQ ID NO: 15) ； QPKAAPSVTLFPP (SEQ ID NO: 16) ； AKTTPP (SEQ ID NO: 17) ； AKTTPPSVTPLAP (SEQ ID NO: 18) ； AKTTAP (SEQ ID NO: 19) ； AKTTAPSVYPLAP (SEQ ID NO: 20) ； ASTKGP (SEQ ID NO: 21) ； ASTKGPSVFPLAP (SEQ ID NO: 22) ； GGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 23)； GENKVEYAPALMALS (SEQ ID NO: 24) ； GPAKELTPLKEAKVS (SEQ ID NO: 25);或 GHEAAAVMQVQYPAS (SEQ ID NO: 26)。在一實施例中，結合蛋白不包含X2。 在一實施例中，可變重鏈及可變輕鏈包含相同連接子。 在另一實施例中，可變重鏈與可變輕鏈包含不同連接子。 在另一實施例中，可變重鏈與可變輕鏈皆包含短（約6個胺 基酸）連接子。在另一實施例中，可變重鍵與可變輕鍵皆 包含長（大於6個胺基酸）連接子。在另一實施例中，可變重 158366.doc •10· 201211252 鏈包含短連接子且可變輕鏈包含長連接子。在另—實施例 中可變重鏈包含長連接子且可變輕鏈包含短連接子。 在-實施例中，本文揭示之結合蛋白包含多肽鏈，其中 該多肽鏈包含VD1_(xl)n_VD2_c_(X2)n，其中彻為第一 輕鏈可變區域’ VD2為第：輕鏈可變區域，c為輕鍵怪定 區域，X1為連接子，限制條件為XI不為CL·，且X2不包含 Fc區。 在另實施例中，提供包含兩個多肽鏈之結合蛋白，其 〇 中該第一多肽鏈包含VDl-(Xl)n_VD2_C_(X2)n，其中vm 為第一重鏈可變區域’ VD2為第二重鏈可變區域，c為重 鏈〖互疋區域，XI為連接子，限制條件為XI不為,且 X2為Fc區’且該第二多肽鏈包含vD1_(xl)n_VD2_c_ (X2)n，其中VD1為第一輕鏈可變區域，VD2為第二輕鏈可 變區域，C為輕鏈恆定區域，X1為連接子（其視情況不為 CL)，且X2不包含Fc區。在一特定實施例中，結合蛋白（亦 即雙可變區域免疫球蛋白（DVD_Ig))包含四個多肽鏈，其 〇 中刖兩個多肽鏈分別包含VDl-(Xl)n_VD2-C-(X2)n，其中 VD1為第一重鏈可變區域，VD2為第二重鏈可變區域，匸 為重鏈恆定區域，XI為連接子，限制條件為χι不為CH1， 且X2為Fc區，且後兩個多肽鏈分別包含VD1_(xl)n_VD2· C-(X2)n，其中VD1為第一輕鏈可變區域，VD2為第二輕鏈 可變區域，C為輕鏈恆定區域，幻為連接子（其視情況不為 CL)，且X2不包含Fc區。該結合蛋白具有四個抗原結合位 158366.doc 201211252 在另一實施例中，本文揭示之結合蛋白能夠結合一或多 個目標。因此，在一些實施例中，結合蛋白包含至少兩個 能夠結合至少兩個不同目標之可變區域序列（例如VD1及 VD2)。在一些實施例中，獨立選擇vd 1及VD2。因此，在 一些實施例中，VD1及VD2包含相同SEQ ID NO，且在其 他實施例中，VD1及VD2包含不同SEQIDNO。 在另一實施例中，本文揭示之結合蛋白結合一或多個目 標。在一實施例中，目標為細胞激素、細胞表面蛋白、酶 或受體。在另一實施例中，結合蛋白能夠調節一或多種目 標之生物功能。在另一實施例中，結合蛋白能夠中和一或 多個目標。在一個實施例中，結合蛋白能夠結合細胞激 素。在一些實施例中，細胞激素為淋巴介質、單核球激 素、多肽激素、受體或腫瘤標記。在一些實施例中， DVD-Ig能夠結合以下中之兩者或兩者以上：腫瘤壞死因 子（TNF)、神經生長因子（NGF)、硬骨素（SOST)、前列腺 素E2(PGE2)、溶血磷脂酸（LPA)(亦參看表2)。在一特定實 施例中，結合蛋白能夠結合TNF(序列2)與NGF ; TNF(序列 3)與 NGF ； TNF(序列 4)與 NGF ; TNF(序列 5)與 NGF ； TNF(序列6)與NGF ; TNF(序列2)與SOST ; TNF(序列3)與 SOST ； TNF(序歹4)與 SOST ； TISTF(序歹5)與 SOST ； TNF(序歹U 6)與 SOST ; TNF(序歹ij 2)與 PGE2 ; TMF(序歹3)與 PGE2 ; TNF(序列 4)與 PGE2 ; TNF(序列 5)與 PGE2 ’· TNF(序 歹|J6)與 PGE2; TNF(序列 1)與 LPA ; TNF(序歹'J 2)與 LPA ; TNF(序列 3)與 LPA ; TNF(序列 4)與 LPA ; TNF(序歹'J 5)與 158366.doc 12 201211252 LPA ;或TNF(序列6)與LPA。在一實施例中，DVD-Ig含有 一或多個包含短連接子之VH鏈及一或多個含有長連接子 之VL鏈。在一實施例中，DVD-Ig含有一或多個包含長連 接子之VH鏈及一或多個含有短連接子之VL鏈。在一實施 例中，-Ig含有一或多個包含長連接子之VH鏈及一或多個 含有長連接子之VL鏈。 在一實施例中，能夠結合TNF(序列2)及NGF之結合蛋白 包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 52或SEQ ID NO. 54 ;及 〇 輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 53或SEQ ID NO· 55。在一實 施例中，能夠結合TNF(序列2)及NGF之結合蛋白包含重鏈 胺基酸序列SEQ ID NO. 52及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO: 53。在另一實施例中，能夠結合TNF(序列2)及NGF之結合 蛋白具有反定向且包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 54及 輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO: 55。 在一實施例中，能夠結合TNF(序列3)及NGF之結合蛋白 包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 56或SEQ ID NO. 58 ;及 〇 輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 57或SEQ ID NO. 59。在一實 施例中，能夠結合TNF(序列3)及NGF之結合蛋白包含重鏈 胺基酸序列SEQ ID NO. 56及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO: 57。在另一實施例中，能夠結合TNF(序列3)及NGF之結合 蛋白具有反定向且包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 58及 輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO: 59。 在一實施例中，能夠結合TNF(序列4)及NGF之結合蛋白 包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO· 60或SEQ ID NO. 62 ;及 158366.doc -13- 201211252 輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 61或SEQ ID NO. 63。在一實 施例中，能夠結合TNF(序列4)及NGF之結合蛋白包含重鏈 胺基酸序列SEQ ID NO. 60及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO: 61。在另一實施例中，能夠結合TNF(序列4)及NGF之結合 蛋白具有反定向且包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 62及 輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO: 63。 在一實施例中，能夠結合TNF(序列5)及NGF之結合蛋白 包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO· 64或SEQ ID NO. 66 ;及 輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 65或SEQ ID NO. 67。在一實 施例中，能夠結合TNF(序列5)及NGF之結合蛋白包含重鏈 胺基酸序列SEQ ID NO. 64及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO: 65。在另一實施例中，能夠結合TNF(序列5)及NGF之結合 蛋白具有反定向且包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 66及 輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO: 67。 在一實施例中，能夠結合TNF(序列6)及NGF之結合蛋白 包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 68或SEQ ID NO· 70 ;及 輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 69或SEQ ID NO. 71。在一實 施例中，能夠結合TNF(序列6)及NGF之結合蛋白包含重鏈 胺基酸序列SEQ ID NO. 68及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO: 69。在另一實施例中，能夠結合TNF(序列6)及NGF之結合 蛋白具有反定向且包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 70及 輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO: 71。 在一實施例中，能夠結合TNF(序列2)及SOST之結合蛋 白包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO_ 72或SEQ ID NO. 74 ; 158366.doc .14· 201211252 及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 73或SEQ ID NO. 75。在一 實施例中，能夠結合TNF(序列2)及SOST之結合蛋白包含 重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 72及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO: 73。在另一實施例中，能夠結合TNF(序列2)及SOST 之結合蛋白具有反定向且包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 74及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO: 75。 在一實施例中，能夠結合TNF(序列3)及SOST之結合蛋 白包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 76或SEQ ID NO. 78 ; 〇 及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 77或SEQ ID NO. 79。在一 實施例中，能夠結合TNF(序列3)及SOST之結合蛋白包含 重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 76及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO: 77。在另一實施例中，能夠結合TNF(序列3)及SOST 之結合蛋白具有反定向且包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 78及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO: 79。 在一實施例中，能夠結合TNF(序列4)及SOST之結合蛋 白包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 80或SEQ ID NO. 82 ; 〇 及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 81或SEQ ID NO. 83。在一 實施例中，能夠結合TNF(序列4)及SOST之結合蛋白包含 重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 80及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO: 81。在另一實施例中，能夠結合TNF(序列4)及SOST 之結合蛋白具有反定向且包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 82及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO: 83。 在一實施例中，能夠結合TNF(序列5)及SOST之結合蛋 白包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 84或SEQ ID NO. 86 ; 158366.doc -15- 201211252 及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 85或SEQ ID NO. 87。在一 實施例中，能夠結合TNF(序列5)及SOST之結合蛋白包含 重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 84及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO: 85。在另一實施例中，能夠結合TNF(序列5)及SOST 之結合蛋白具有反定向且包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO-86及輕鏈胺基 酸序列 SEQ ID NO: 87 。 在一實施例中，能夠結合TNF(序列6)及SOST之結合蛋 白包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 88或SEQ ID NO. 90 ; 及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 89或SEQ ID NO. 91。在一 實施例中，能夠結合TNF(序列6)及SOST之結合蛋白包含 重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 88及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO: 89。在另一實施例中，能夠結合TNF(序列6)及SOST 之結合蛋白具有反定向且包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 90及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO: 91。 在一實施例中，能夠結合TNF(序列2)及PGE2之結合蛋 白包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 92或SEQ ID NO. 94 ; 及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 93或SEQ ID NO. 95。在一 實施例中，能夠結合TNF(序列2)及PGE2之結合蛋白包含 重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 92及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO: 93。在另一實施例中，能夠結合TNF(序列2)及PGE2 之結合蛋白具有反定向且包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 94及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO: 95。 在一實施例中，能夠結合TNF(序列3)及PGE2之結合蛋 白包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 96或SEQ ID NO. 98 ; 158366.doc -16- 201211252 及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 97或SEQ ID NO. 99。在一 實施例中，能夠結合TNF(序列3)及PGE2之結合蛋白包含 重鏈胺基酸序列SEQ ID NO_ 96及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO: 97。在另一實施例中，能夠結合丁1^(序列3)及PGE2 之結合蛋白具有反定向且包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 98及輕鏈胺基酸序列SEQ ID N0: 99。 在一實施例中，能夠結合71"^(序列4)及PGE2之結合蛋 白包含重鏈胺基酸序列SEQ ID N〇. 100或SEQ ID NO_ 0 l〇2 ;及輕鍵胺基酸序列SEQ ID NO. 101或SEQ ID NO. 103。在一實施例中’能夠結合TNF(序列4)及PGE2之結合 蛋白包含重鍵胺基酸序列SEQ ID NO. 100及輕鏈胺基酸序 列SEQ ID NO: 1 〇 1。在另一實施例中’能夠結合TNF(序列 4) 及PGE2之結合蛋白具有反定向且包含重鏈胺基酸序列 SEQ ID NO. 102及輕鍵胺基酸序列SEQ ID NO: 103。 在一實施例中，能夠結合TNF(序列5)及PGE2之結合蛋 白包含重鏈胺基酸序列SEQ ID N〇. 104或SEQ ID no. ❹ 1 〇6 ;及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 105或SEQ ID NO. 107。在一實施例中，能夠結合TNF(序列5)及PGE2之結合 蛋白包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO‘ 104及輕鍵胺基酸序 列SEQ ID NO: 1〇5。在另一實施例中，能夠結合TNF(序列 5) 及PGE2之結合蛋白具有反定向且包含重鍵胺基酸序列 SEQ ID NO. 106及輕鏈胺基酸序列SEQ⑴NO· 107。 在一實施例中’能夠結合TNF(序列6)及PGE2之結合蛋 白包含重鏈胺基酸序列犯卩ID N0. 108或SEQ ID N〇. 158366.doc -17- 201211252 110;及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 109或SEQ ID NO. 111。在一實施例中，能夠結合TNF(序列6)及PGE2之結合 蛋白包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 108及輕鏈胺基酸序 列SEQ ID NO: 109。在另一實施例中，能夠結合TNF(序列 6)及PGE2之結合蛋白具有反定向且包含重鏈胺基酸序列 SEQ ID NO. 110及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO: 111。 在一實施例中，能夠結合TNF(序列1)及LPA之結合蛋白 包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 112或SEQ ID NO. 114 ; 及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 113或SEQ ID NO· 115。在 一實施例中，能夠結合TNF(序列1)及LPA之結合蛋白包含 重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 112及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO: 113。在另一實施例中，能夠結合TNF(序列1)及LPA 之結合蛋白具有反定向且包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 114及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO: 115。 在一實施例中，能夠結合TNF(序列2)及LPA之結合蛋白 包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 116或SEQ ID NO. 1 18 ; 及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 11 7或SEQ ID NO. 119。在 一實施例中，能夠結合TNF(序列2)及LPA之結合蛋白包含 重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 116及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO: 117。在另一實施例中，能夠結合TNF(序列2)及LPA 之結合蛋白具有反定向且包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 11 8及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO: 119。 在一實施例中，能夠結合TNF(序列3)及LPA之結合蛋白 包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 120或SEQ ID NO. 122 ; 158366.doc -18- 201211252 及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 121或SEQ ID NO. 123。在 一實施例中，能夠結合TNF(序列3)及LPA之結合蛋白包含 重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 120及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO: 121。在另一實施例中，能夠結合TNF(序列3)及LPA 之結合蛋白具有反定向且包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 122及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO: 123。 在一實施例中，能夠結合TNF(序列4)及LPA之結合蛋白 包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 124或SEQ ID NO. 126 ; Ο 及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 125或SEQ ID NO. 127。在 一實施例中，能夠結合TNF(序列4)及LPA之結合蛋白包含 重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 124及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO: 125。在另一實施例中，能夠結合TNF(序列4)及LPA 之結合蛋白具有反定向且包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 126及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO: 127。 在一實施例中，能夠結合TNF(序列5)及LPA之結合蛋白 包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 128或SEQ ID NO· 130 ; 〇 及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 129或SEQ ID NO. 131。在 一實施例中，能夠結合TNF(序列5)及LPA之結合蛋白包含 重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 128及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO: 129。在另一實施例中，能夠結合TNF(序列5)及LPA 之結合蛋白具有反定向且包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 13 0及輕鏈胺基酸序列seQ ID NO: 131。 在一實施例中，能夠結合TNF(序列6)及LPA之結合蛋白 包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 132或SEQ ID NO. 134 ; 158366.doc -19- 201211252 及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 133或SEQ ID NO· 135 °在 一實施例中，能夠結合TNF(序列6)及LPA之結合蛋白包含 重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 132及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO: 133。在另一實施例中，能夠結合TNF(序列6)及LPA 之結合蛋白具有反定向且包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO-134及輕鍵胺基 酸序列 SEQ ID NO: 135 。 在一實施例中，能夠結合TNF(序列2)及NGF之結合蛋白 包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 136或SEQ ID NO. 138 ; 及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 137或SEQ ID NO. 139。在 一實施例中，能夠結合TNF(序列2)及NGF之結合蛋白包含 重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 136及輕鍵胺基酸序列SEQ ID NO: 137。在另一實施例中，能夠結合TNF(序列2)及NGF 之結合蛋白具有反定向且包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 138及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO: 139。 在一實施例中，能夠結合TNF(序列3)及NGF之結合蛋白 包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 140或SEQ ID NO. 142 ; 及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 141或SEQ ID NO. 143。在 一實施例中，能夠結合TNF(序列3)及NGF之結合蛋白包含 重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 140及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO: 141。在另一實施例中，能夠結合TNF(序列3)及NGF 之結合蛋白具有反定向且包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 142及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO: 143。 在一實施例中，能夠結合TNF(序列4)及NGF之結合蛋白 包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO· 144或SEQ ID NO_ 146 ;
158366.doc ·20· 201211252 及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 145或SEQ ID NO. 147。在 一實施例中，能夠結合TNF(序列4)及NGF之結合蛋白包含 重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 144及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO: 145。在另一實施例中，能夠結合TNF(序列4)及NGF 之結合蛋白具有反定向且包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO-146及輕鏈胺基 酸序列 SEQ ID NO: 147 。 在一實施例中，能夠結合TNF(序列5)及NGF之結合蛋白 包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 148或SEQ ID NO. 150 ; Ο 及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 149或SEQ ID NO. 151。在 一實施例中，能夠結合TNF(序列5)及NGF之結合蛋白包含 重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 148及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO: 149。在另一實施例中，能夠結合TNF(序列5)及NGF 之結合蛋白具有反定向且包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO· 150及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO: 151。 在一實施例中，能夠結合TNF(序列6)及NGF之結合蛋白 包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 152或SEQ ID NO. 154 ; 〇 及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO· 153或SEQ ID NO. 155。在 一實施例中，能夠結合TNF(序列6)及NGF之結合蛋白包含 重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 152及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO: 153。在另一實施例中，能夠結合TNF(序列6)及NGF 之結合蛋白具有反定向且包含重鏈胺基酸序列SEQ ID N0. 154及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO: 155。 在一實施例中，能夠結合TNF(序列2)及SOST之結合蛋 白包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 156或SEQ ID NO. 158366.doc -21 · 201211252 158 ;及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 157或SEQ ID NO. 159。在一實施例中，能夠結合TNF(序列2)及SOST之結合 蛋白包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 15 6及輕鏈胺基酸序 列SEQ ID NO: 157。在另一實施例中，能夠結合TNF(序列 2) 及SOST之結合蛋白具有反定向且包含重鏈胺基酸序列 SEQ ID NO. 158及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO: 159。 在一實施例中，能夠結合TNF(序列3)及SOST之結合蛋 白包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 160或SEQ ID NO. 162 ;及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 161或SEQ ID NO. 163。在一實施例中，能夠結合TNF(序列3)及SOST之結合 蛋白包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 160及輕鏈胺基酸序 列SEQ ID NO: 161。在另一實施例中，能夠結合TNF(序列 3) 及SOST之結合蛋白具有反定向且包含重鏈胺基酸序列 SEQ ID NO. 162及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO: 163。 在一實施例中，能夠結合TNF(序列4)及SOST之結合蛋 白包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 164或SEQ ID NO. 166 ;及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 165或SEQ ID NO. 167。在一實施例中，能夠結合TNF(序列4)及SOST之結合 蛋白包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 164及輕鏈胺基酸序 列SEQ ID NO: 165。在另一實施例中，能夠結合TNF(序列 4) 及SOST之結合蛋白具有反定向且包含重鏈胺基酸序列 SEQ ID NO. 166及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO: 167。 在一實施例中，能夠結合TNF(序列5)及SOST之結合蛋 白包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 168或SEQ ID NO. 158366.doc -22- 201211252 170 ;及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 169或SEQ ID NO. 171。在一實施例中，能夠結合TNF(序列5)及SOST之結合 蛋白包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 168及輕鏈胺基酸序 列SEQ ID NO: 1 69。在另一實施例中，能夠結合TNF(序列 5) 及SOST之結合蛋白具有反定向且包含重鏈胺基酸序列 SEQ ID NO. 170及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO: 171。 在一實施例中，能夠結合TNF(序列6)及SOST之結合蛋 白包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 172或SEQ ID NO. 〇 174 ;及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 173或SEQ ID NO. 175。在一實施例中，能夠結合TNF(序列6)及SOST之結合 蛋白包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 172及輕鏈胺基酸序 列SEQ ID NO: 173。在另一實施例中，能夠結合TNF(序列 6) 及SOST之結合蛋白具有反定向且包含重鏈胺基酸序列 SEQ ID NO. 174及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO: 175。 在一實施例中，能夠結合TNF(序列2)及PGE2之結合蛋 白包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 176或SEQ ID NO. Ο 178 ;及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 177或SEQ ID NO. 179。在一實施例中，能夠結合TNF(序列2)及PGE2之結合 蛋白包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 176及輕鏈胺基酸序 列SEQ ID NO: 177。在另一實施例中，能夠結合TNF(序列 2)及PGE2之結合蛋白具有反定向且包含重鏈胺基酸序列 SEQ ID NO. 178及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO: 179。 在一實施例中，能夠結合TNF(序列3)及PGE2之結合蛋 白包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 180或SEQ ID NO. 158366.doc -23- 201211252 182 ;及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 181或SEQ ID NO. 183。在一實施例中，能夠結合TNF(序列3)及PGE2之結合 蛋白包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 180及輕鍵胺基酸序 列SEQ ID NO: 181。在另一實施例中，能夠結合TNF(序列 3) 及PGE2之結合蛋白具有反定向且包含重鏈胺基酸序列 SEQ ID NO. 182及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO: 1 83 ° 在一實施例中’能夠結合TNF(序列4)及PGE2之結合蛋 白包含重鏈胺基酸序列SEQ ID no. 184或SEQ ID NO· 186 ;及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 185或SEQ ID NO. 187。在一實施例中，能夠結合TNF(序列4)及PGE2之結合 蛋白包含重鏈胺基酸序列SEQ ID N0. 184及輕鏈胺基酸序 列SEQ ID NO: 1 85。在另一實施例中’能夠結合TNF(序列 4) 及PGE2之結合蛋白具有反定向且包含重鏈胺基酸序列 SEQ ID NO. 1 86及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO: 1 87。 在一實施例中’能夠結合TNF(序列5)及PGE2之結合蛋 白包含重鏈胺基酸序列SEQ ID N0· 188或SEQ ID N〇. 190 ;及輕鏈胺基酸序列SEQ ID N0. 189或SEQ ID NO· 191。在一實施例中，能夠結合TNF(序列5)及PGE2之結合 蛋白包含重鏈胺基酸序列SEQ ID N〇. 188及輕鍵胺基酸序 列SEQ ID NO: 189。在另一實施例中’能夠結合TNF(序列 -24- 158366.doc 201211252 194 ;及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 193或SEQ ID NO. 195。在一實施例中，能夠結合TNF(序列6)及PGE2之結合 蛋白包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 192及輕鏈胺基酸序 列SEQ ID NO: 193。在另一實施例中，能夠結合TNF(序列 6)及PGE2之結合蛋白具有反定向且包含重鏈胺基酸序列 SEQ ID NO. 194及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO: 195 ° 在一實施例中，能夠結合TNF(序列1)及LPA之結合蛋白 包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 196或SEQ ID NO· 198 ; 〇 及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO· 197或SEQ ID ΝΟ_ 199。在 一實施例中，能夠結合TNF(序列1)及LPA之結合蛋白包含 重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 196及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO: 197。在另一實施例中，能夠結合TNF(序列1)及LPA 之結合蛋白具有反定向且包含重鏈胺基酸序列SEQ ID N0. 198及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO: 199。 在一實施例中，能夠結合TNF(序列2)及LPA之結合蛋白 包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 200或SEQ ID NO. 202 ; 〇 及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 201或SEQ ID NO. 203。在 一實施例中，能夠結合TNF(序列2)及LPA之結合蛋白包含 重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 200及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO: 201。在另一實施例中，能夠結合TNF(序列2)及LPA 之結合蛋白具有反定向且包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 202及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO: 203。 在一實施例中，能夠結合TNF(序列3)及LPA之結合蛋白 包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 204或SEQ ID NO. 206 ; 158366.doc •25- 201211252 及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 205或SEQ ID NO. 207。在 一實施例中，能夠結合TNF(序列3)及LPA之結合蛋白包含 重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 204及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO: 205。在另一實施例中，能夠結合TNF(序列3)及LPA 之結合蛋白具有反定向且包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 206及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO: 207。 在一實施例中，能夠結合TNF(序列4)及LPA之結合蛋白 包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 208或SEQ ID NO· 210 ; 及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 209或SEQ ID NO. 211。在 一實施例中，能夠結合TNF(序列4)及LPA之結合蛋白包含 重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 208及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO: 209。在另一實施例中，能夠結合TNF(序列4)及LPA 之結合蛋白具有反定向且包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO· 210及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO: 211。 在一實施例中，能夠結合TNF(序列5)及LPA之結合蛋白 包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO_ 212或SEQ ID NO_ 2M ; 及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 213或SEQ ID NO. 215 °在 一實施例中，能夠結合TNF(序列5)及LPA之結合蛋白包含 重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 212及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO: 213。在另一實施例中，能夠結合TNF(序列5)及LPA 之結合蛋白具有反定向且包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO· 214及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO: 215。 在一實施例中，能夠結合TNF(序列6)及LPA之結合蛋白 包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 216或SEQ ID NO· 218 ; 158366.doc -26- 201211252 及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 217或SEQ ID NO. 219。在 一實施例中，能夠結合TNF(序列6)及LPA之結合蛋白包含 重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 216及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO: 217。在另一實施例中，能夠結合TNF(序列6)及LPA 之結合蛋白具有反定向且包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 218及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO: 219。 在一實施例中，能夠結合TNF(序列2)及NGF之結合蛋白 包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 220或SEQ ID NO. 222 ; 〇 及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 221或SEQ ID NO. 223。在 一實施例中，能夠結合TNF(序列2)及NGF之結合蛋白包含 重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 220及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO: 221。在另一實施例中，能夠結合TNF(序列2)及NGF 之結合蛋白具有反定向且包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 222及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO: 223。 在一實施例中，能夠結合TNF(序列3)及NGF之結合蛋白 包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 224或SEQ ID NO. 226 ; 〇 及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 225或SEQ ID NO. 227。在 一實施例中，能夠結合TNF(序列3)及NGF之結合蛋白包含 重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 224及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO: 225。在另一實施例中，能夠結合TNF(序列3)及NGF 之結合蛋白具有反定向且包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 226及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO: 227。 在一實施例中，能夠結合TNF(序列4)及NGF之結合蛋白 包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 228或SEQ ID NO. 23 0 ; 158366.doc 27- 201211252 及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 229或SEQ ID NO. 231。在 一實施例中，能夠結合TNF(序列4)及NGF之結合蛋白包含 重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 228及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO: 229。在另一實施例中，能夠結合TNF(序列4)及NGF 之結合蛋白具有反定向且包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 23 0及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO: 231。 在一實施例中，能夠結合TNF(序列5)及NGF之結合蛋白 包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 232或SEQ ID NO. 234 ; 及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 233或SEQ ID NO. 235。在 一實施例中，能夠結合TNF(序列5)及NGF之結合蛋白包含 重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 23 2及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO: 233。在另一實施例中，能夠結合TNF(序列5)及NGF 之結合蛋白具有反定向且包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 234及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO: 23 5。 在一實施例中，能夠結合TNF(序列6)及NGF之結合蛋白 包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 236或SEQ ID NO. 238 ; 及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 237或SEQ ID NO. 239。在 一實施例中，能夠結合TNF(序列6)及NGF之結合蛋白包含 重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 23 6及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO: 237。在另一實施例中，能夠結合TNF(序列6)及NGF 之結合蛋白具有反定向且包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 238及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO: 23 9。 在一實施例中，能夠結合TNF(序列2)及SOST之結合蛋 白包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 240或SEQ ID NO. 158366.doc -28- 201211252 242 ;及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 241或SEQ ID NO. 243。在一實施例中，能夠結合TNF(序列2)及SOST之結合 蛋白包含重鏈胺基酸序列SEQ IE) NO. 240及輕鏈胺基酸序 列SEQ ID NO: 241。在另一實施例中，能夠結合TNF(序列 2) 及SOST之結合蛋白具有反定向且包含重鏈胺基酸序列 SEQ ID NO. 242及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO: 243。 在一實施例中，能夠結合TNF(序列3)及SOST之結合蛋 白包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 244或SEQ ID NO· Ο 246 ;及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 245或SEQ ID NO· 247。在一實施例中，能夠結合TNF(序列3)及SOST之結合 蛋白包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 244及輕鏈胺基酸序 列SEQ ID NO: 245。在另一實施例中，能夠結合TNF(序列 3) 及SOST之結合蛋白具有反定向且包含重鏈胺基酸序列 SEQ ID NO. 246及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO: 247。 在一實施例中，能夠結合TNF(序列4)及SOST之結合蛋 白包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 248或SEQ ID NO. Ο 250 ;及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 249或SEQ ID NO. 251。在一實施例中，能夠結合TNF(序列4)及SOST之結合 蛋白包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 248及輕鏈胺基酸序 列SEQ ID NO: 249。在另一實施例中，能夠結合TNF(序列 4) 及SOST之結合蛋白具有反定向且包含重鏈胺基酸序列 SEQ ID NO. 250及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO: 251。 在一實施例中，能夠結合TNF(序列5)及SOST之結合蛋 白包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 252或SEQ ID NO. 158366.doc •29- 201211252 254 ;及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 253或SEQ ID NO- 255 。 在一實 施例中 ，能 夠結合TNF(序列 5) 及 SOST之結合 蛋白包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 252及輕鏈胺基酸序 列SEQ ID NO: 253。在另一實施例中，能夠結合TNF(序列 5) 及SOST之結合蛋白具有反定向且包含重鏈胺基酸序列 SEQ ID NO. 254及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO: 25 5。 在一實施例中，能夠結合TNF(序列6)及SOST之結合蛋 白包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO· 256或SEQ ID NO. 258 ;及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 25 7或SEQ ID NO- 259 。 在一實 施例中 ，能 夠結合TNF(序列 6)及 SOST之結合 蛋白包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 256及輕鏈胺基酸序 列SEQ ID NO: 257。在另一實施例中，能夠結合TNF(序列 6) 及SOST之結合蛋白具有反定向且包含重鏈胺基酸序列 SEQ ID NO. 258及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO: 259。 在一實施例中，能夠結合TNF(序列2)及PGE2之結合蛋 白包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 260或SEQ ID NO- 262 ; 及輕鏈胺基 酸序列 SEQ ID NO. 261 或 SEQ ID NO- 263 。 在一實施例中 ，能夠結合TNF(序列2) 及 PGE2之結合 蛋白包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 260及輕鏈胺基酸序 列SEQ ID NO: 261。在另一實施例中，能夠結合TNF(序列 2)及PGE2之結合蛋白具有反定向且包含重鏈胺基酸序列 SEQ ID NO. 262及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO: 263。 在一實施例中，能夠結合TNF(序列3)及PGE2之結合蛋 白包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO· 264或SEQ ID NO. 158366.doc •30- 201211252 266 ;及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 265或SEQ ID NO. 267。在一實施例中，能夠結合TNF(序列3)及PGE2之結合 蛋白包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 264及輕鏈胺基酸序 列SEQ ID NO: 265。在另一實施例中，能夠結合TNF(序列 3) 及PGE2之結合蛋白具有反定向且包含重鏈胺基酸序列 SEQ ID NO. 266及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO: 267。 在一實施例中，能夠結合TNF(序列4)及PGE2之結合蛋 白包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 268或SEQ ID NO. 〇 270 ;及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 269或SEQ ID NO. 271。在一實施例中，能夠結合TNF(序列4)及PGE2之結合 蛋白包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 268及輕鏈胺基酸序 列SEQ ID NO: 269。在另一實施例中，能夠結合TNF(序列 4) 及PGE2之結合蛋白具有反定向且包含重鏈胺基酸序列 SEQ ID NO. 270及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO: 271。 在一實施例中，能夠結合TNF(序列5)及PGE2之結合蛋 白包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 272或SEQ ID NO. Ο 274 ;及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 273或SEQ ID NO. 275。在一實施例中，能夠結合TNF(序列5)及PGE2之結合 蛋白包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 272及輕鏈胺基酸序 列SEQ ID NO: 273。在另一實施例中，能夠結合TNF(序列 5) 及PGE2之結合蛋白具有反定向且包含重鏈胺基酸序列 SEQ ID NO. 274及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO: 275。 在一實施例中，能夠結合TNF(序列6)及PGE2之結合蛋 白包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 276或SEQ ID NO. 158366.doc -31 201211252 278 ;及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 277或SEQ ID NO. 279。在一實施例中，能夠結合TNF(序列6)及PGE2之結合 蛋白包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO, 276及輕鏈胺基酸序 列SEQ ID NO: 277。在另一實施例中，能夠結合TNF(序列 6)及PGE2之結合蛋白具有反定向且包含重鏈胺基酸序列 SEQ ID NO. 278及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO: 279。 在一實施例中，能夠結合TNF(序列1)及LPA之結合蛋白 包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 280或SEQ ID NO. 282 ; 及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 281或SEQ ID NO. 283。在 一實施例中，能夠結合TNF(序列1)及LPA之結合蛋白包含 重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 280及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO: 281。在另一實施例中，能夠結合TNF(序列1)及LPA 之結合蛋白具有反定向且包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 282及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO: 283。 在一實施例中，能夠結合TNF(序列2)及LPA之結合蛋白 包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO· 284或SEQ ID NO. 2 86 ; 及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 285或SEQ ID NO. 287。在 一實施例中，能夠結合TNF(序列2)及LPA之結合蛋白包含 重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 284及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO: 285。在另一實施例中，能夠結合TNF(序列2)及LPA 之結合蛋白具有反定向且包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 286及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO: 287。 在一實施例中，能夠結合TNF(序列3)及LPA之結合蛋白 包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 288或SEQ ID NO. 290 ; 158366.doc 32- 201211252 及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 289或SEQ ID NO. 291。在 一實施例中，能夠結合TNF(序列3)及LPA之結合蛋白包含 重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 288及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO: 289。在另一實施例中，能夠結合TNF(序列3)及LPA 之結合蛋白具有反定向且包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 290及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO: 291。 在一實施例中，能夠結合TNF(序列4)及LPA之結合蛋白 包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 292或SEQ ID NO. 294 ; 〇 及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 293或SEQ ID NO. 295。在 一實施例中，能夠結合TNF(序列4)及LPA之結合蛋白包含 重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 292及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO: 293。在另一實施例中，能夠結合TNF(序列4)及LPA 之結合蛋白具有反定向且包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 294及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO: 295。 在一實施例中，能夠結合TNF(序列5)及LPA之結合蛋白 包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 296或SEQ ID NO. 298 ; 〇 及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 297或SEQ ID NO. 299。在 一實施例中，能夠結合TNF(序列5)及LPA之結合蛋白包含 重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 296及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO: 297。在另一實施例中，能夠結合TNF(序列5)及LPA 之結合蛋白具有反定向且包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO-298及輕鏈胺基 酸序列 SEQ ID NO: 299 。 在一實施例中，能夠結合TNF(序列6)及LPA之結合蛋白 包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 3 00或SEQ ID NO. 3 02 ; 158366.doc -33- 201211252 及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 301或SEQ ID NO. 303。在 一實施例中’能夠結合TNF(序列6)及LPA之結合蛋白包含 重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 300及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO: 301。在另一實施例中，能夠結合TNF(序列6)及LPA 之結合蛋白具有反定向且包含重鏈胺基酸序列SEQ ID NO. 3 02及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO: 303。 在另一實施例中，結合蛋白包含多肽鏈，其中該多肽鏈 包含VDl-(Xl)n-VD2-C-(X2)n，其中；VD1為自第一親本 抗體或其抗原結合部分獲得之第一重鏈可變區域；VD2為 自第一親本抗體或其抗原結合部分獲得之第二重鏈可變區 域’ C為重鏈值定區域；（XI )n為連接子，限制條件為 (Xl)n不為CH1 ’其中該（Xl)n存在或不存在；且（χ2)η為Fc 區，其中該（X2)n存在或不存在。在一實施例中，結合蛋 白中不存在Fc區。 在另一實施例中’結合蛋白包含多肽鏈，其中該多肽鏈 包含VDl-(Xl)n-VD2-C-(X2)n，其中，VD1為自第一親本 抗體或其抗原結合部分獲得之第一輕鍵可變區域；vd2為 自第二親本抗體或其抗原結合部分獲得之第二輕鏈可變區 域；C為輕鏈恆定區域；（X1)n為連接子，限制條件為 (Xl)n不為CL，其中該（Xl)n存在或不存在；且（χ2)η不包 含Fc區，其中該（χ2)η存在或不存在。在—實施例中結 合蛋白中不存在（Χ2)η。 在另一實施例中，結合蛋白包含第一及第二多肽鏈，其 中該第一多肽鏈包含第一 VDl-(Xl)n_VD2_c(X2)n，其中 158366.doc -34· 201211252 VD1為自第一親本抗體或其抗原結合部分獲得之第—重鍵 可變區域；VD2為自第二親本抗體或其抗原結合部分獲得 之第二重鏈可變區域；c為重鏈恆定區域；（χι)η為連接 子，限制條件為（Χ1)η不為CH1，其中該（Χ1)η存在或不存 在，且（Χ2)η為Fc區，其中該（Χ2)η存在或不存在；且其中 該第二多肽鏈包含第二VDl-(Xl)n-VD2-C-(X2)n，其中 VD1為自第一親本抗體或其抗原結合部分獲得之第一輕鏈 可變區域；VD2為自第二親本抗體或其抗原結合部分獲得 之第二輕鏈可變區域；C為輕鏈恆定區域；（χι)η為連接子 (其視情況不為CL)，其中該（χι)η存在或不存在；且（χ2)η 不包含Fc區，其中該（Χ2)η存在或不存在。在另一實施例 中’結合蛋白包含兩個第一多肽鏈及兩個第二多肽鏈。在 另一實施例中，第二多肽中不存在（Χ2)η。在另一實施例 中，若第一多肽中存在Fc區，則Fc區為原生序列Fc區或變 異序列Fc區。在另一實施例中，Fc區來自Ig(H、IgG2、
IgG3、IgG4、IgA、IgM、IgE 或 IgD。 在另一實施例中，結合蛋白為能夠結合兩個抗原且包含 四個多肽鏈之DVD-Ig，其中第一及第三多肽鏈包含¥1)1_ (Xl)n-VD2-C_(X2)n ’其中VD1為自第一親本抗體或其抗 原結合部分獲得之第一重鏈可變區域；VD2為自第二親本 抗體或其抗原結合部分獲得之第二重鏈可變區域；c為重 鏈恆疋區域，（XI)n為連接子，限制條件為（χι沁不為 CH1，其中該（Xl)n存在或不存在；且（幻仏為以區，其中 s亥（X2)n存在或不存在；且其中第二及第四多肽鏈包含 158366.doc -35· 201211252 VDl-(Xl)n-VD2-C-(X2)n，其中VD1為自第一親本抗體或 其抗原結合部分獲得之第一輕鍵可變區域；VD2為自第二 親本抗體或其抗原結合部分獲得之第二輕鏈可變區域；c 為輕鏈恆定區域；（χΐ)η為連接子（其視情況不為(：1^，其 中§亥（Χ1)η存在或不存在；且（χ2)η不包含以區，其中該 (Χ2)η存在或不存在。 亦提供一種藉由預選親本抗體來製備DVD_Ig結合蛋白 之方法。在一實施例中，製備能夠結合兩個抗原之雙可變 區域免疫球蛋白之方法包含以下步驟：勾獲得能夠結合第 一抗原之第一親本抗體或其抗原結合部分；b)獲得能夠結 合第一抗原之第二親本抗體或其抗原結合部分；e)建構包 含VDl-(Xl)n-VD2-C-(X2)n之第一及第三多肽鏈，其中 VD1為自該第一親本抗體或其抗原結合部分獲得之第一重 鏈可變區域；VD2為自該第二親本抗體或其抗原結合部分 獲得之第二重鏈可變區域；C為重鏈恆定區域；（X1)n為連 接子’限制條件為（Xl)n不為CH1，其中該（χΐ)η存在或不 存在；且（Χ2)η為Fc區，其中該（Χ2)η存在或不存在；d)建 構包含VDl-(Xl)n_VD2-C-(X2)n之第二及第四多肽鏈，其 中VD1為自該第一親本抗體或其抗原結合部分獲得之第— 輕鏈可變區域；VD2為自該第二親本抗體或其抗原結合部 分獲得之第二輕鏈可變區域；C為輕鏈恆定區域；（Χ1)η為 連接子（其視情況不為CL)，其中該（Χ1)η存在或不存在； 且（Χ2)η不包含卜區，其中該（Χ2)η存在或不存在；e)表現 該第一多肽鏈、該第二多肽鏈、該第三多肽鏈及該第四多 158366.doc -36- 201211252 肽鏈；從而產生能夠結合該第一抗原及該第二抗原之雙可 變區域免疫球蛋白。 在另一實施例中，提供產生能夠結合兩個抗原且具有所 要特性之雙可變區域免疫球蛋白之方法，其包含以下步 驟：a)獲得能夠結合第一抗原且具有至少一種由雙可變區 域免疫球蛋白展現之所要特性的第一親本抗體或其抗原結 合部分；b)獲得能夠結合第二抗原且具有至少一種由雙可 變區域免疫球蛋白展現之所要特性的第二親本抗體或其抗 〇 原結合部分；c)建構包含VDl-(Xl)n-VD2-C-(X2)n之第— 及第三多肽鏈，其中：¥£>1為自該第一親本抗體或其抗原 結合部分獲得之第一重鏈可變區域；VD2為自該第二親本 抗體或其抗原結合部分獲得之第二重鏈可變區域；c為重 鏈恆定區域；（Xl)n為連接子，限制條件為（χι)η不為 CH1，其中該（χ1)η存在或不存在；且（χ2)η為卜區，其中 該（Χ2)η存在或不存在；d)建構包含VDl-(Xl)n-VD2-C-(X2)n之第二及第四多肽鏈，其中，vm為自該第一親本 〇 抗體或其抗原結合部分獲得之第一輕鏈可變區域；VD2為 自該第二親本抗體或其抗原結合部分獲得之第二輕鏈可變 區域；c為輕鏈恆定區域；（χι)η為連接子（其視情況不為 CL) ’其中該（Xl)n存在或不存在；且（χ2)η不包含Fc區， 其中該（X2)n存在或不存在；e)表現該第一多肽鏈、該第二 多肽鏈、該第三多肽鏈及該第四多肽鏈；從而產生能夠結 合該第一抗原及該第二抗原且具有所要特性之雙可變區域 免疫球蛋白。 158366.doc •37- 201211252 在個實施例令，本文揭示之第一及第二多肽鏈的VDI 係自相同親本抗體或其抗原結合部分獲得。在另一實施例 中’本文揭不之第一及第二多肽鏈的VDI係自不同親本抗 體或其抗原結合部分獲得。在另一實施例中，本文揭示之 第一及第二多肽鏈的VD2係自相同親本抗體或其抗原結合 部分獲得：在另一實施例中，本文揭示之第一及第二多肽 鏈的VD2係自不同親本抗體或其抗原結合部分獲得。 在一個實施例中，第一親本抗體或其抗原結合部分與第 二親本抗體或其抗原結合部分為相同抗體。在另一實施例 中第㉟本抗體或其抗原結合部分與第二親本抗體或其 抗原結合部分為不同抗體。 ，在-個實施例中，第一親本抗體或其抗原結合部分結合 第一抗原’且第二親本抗體或其抗原結合部分結合第二抗 原。在—特定實施例中，第—抗原與第二抗原為相同抗 原。在另一實施例中，親本抗體結合同一抗原上之不同抗 原決定基。在另-實施例中，第一抗原與第二抗原為不同 抗原。在另-實施例中，第一親本抗體或其抗原結合部分 結合几原之效能不同於第二親本抗體或其抗原結合部 分結合第二抗原之效能。在另一 斗、甘4- ® β人 例中’第一親本抗體 或”原…Ρ分結合第-抗原之親和力不同於第二親本 抗體或其抗原結合部分結合第二抗原之親和力。， 在另實把例中’第一親本抗體或其抗原結合部分及第 二親本抗體或其抗原結合部分 或人類化抗體。在一實施:中，體、CDR移植抗體 在實化例中，&原結合部分為㈣片 158366.doc -38- 201211252 k ’ F(ab.)2片段’即包含兩個在鉸鏈區由二硫橋鍵連接的 Fab片段之二價片段；包含VHachi區域之Fd片段；包含 抗體單臂之VL及VH區域之Fv片段；⑽片段；分離之互 補決定區（CDR);單鏈抗體；或雙功能抗體。 Ο Ο 在另-實施例中’結合蛋白具有至少一種由第一親本抗 體或其抗原結合部分或第二親本抗體或其抗原結合部分展 現之所要特性。或者，第—親本抗體或其抗原結合部分及 第二親本抗體或其抗原結合部分具有至少_種由雙可變區 域免疫球蛋白展現之所要特性。在—實施例中，所要特性 係選自-或多種抗體參數。在另—實施财，抗體參數為 抗原特異性、對抗原之親和力、效能、生物功能、抗原決 定基識別性、穩定性、溶解度、生產效率、免疫原性、藥 物動力學、生物可用性、組織交叉反應性或直系同源抗原 結合性。在一實施例中，結合蛋白為多價結合蛋白◎在另 一實施例中，結合蛋白為多特異性結合蛋白。本文所述之 多價及或多特異性結合蛋自具有尤其由治療觀點來看所要 之特性。舉例而言，多價及或多特異性結合蛋白可（1)相較 於二價抗體由表現抗體所結合之抗原的細胞較快内化（及/ 或分解代謝）；（2)為促效劑抗體；及/或（3)誘導表現多價抗 體能夠結合之抗原之細胞的細胞死亡及/或細胞凋亡。提 供多價及/或多特異性結合蛋白之至少一種抗原結合特異 性的「親本抗體」可為由表現抗體所結合之抗原的細胞内 化（及/或分解代謝）之抗體；及/或可為促效劑、誘導細胞 死亡及/或誘導細胞凋亡之抗體，且如本文所述之多價及 158366.doc -39- 201211252 或多特異性結合蛋白可展現一或多種此等特性之改良。此 卜親本抗體可能缺乏任何一或多種此等特性，但在建構 為如本文所述之多價結合蛋白時可具有此等特性。 在另f把例中’結合蛋白對一或多個目標之締合速率 常數(K〇n)為·至少約1〇2μ、·1;至少約Μ、、'•至小
約ΙΟ4 Μ、.1 ;至少約丨-丨 V 玍^均10 M s丨；及至少約1〇6μ、_,，如 面電漿子共振所量測。在一 隹實施例中，結合蛋白對一或多 個目標之締合速率常數（KQn)為： 1〇3ΜΛ-丨至 104Μ-γ1; WM-丨 】 ’ 至 10 M s ，或 1〇5 Μ-ι, 至10 M.S.，如表面電漿子共振所量測。 在另一實施例中，結合蛋白斟...α ^ 略枝 贫白對—或多個目標之解離速率 常數（Koff)為：最多約1〇-3 . ^ β , ,取多約10 S'最多約1〇-5 s ;及最多約1〇·6 s—1，如矣品兩收 表面電漿子共振所量剛。在一實 施例中，結合蛋白對一或客柄η加 為：心1至心；心至解 王丄υ S ，或 10 5 3-1至 1〇·6 y， 如表面電漿子共振所量測。 在另-實施例巾，結合蛋自對—或多個目 (KD)為：最多約最多約10 ㈣常數 υ Μ，敢多約1〇-9 Μ ·县 多約ΙΟ·10 Μ ;最多約10-" M . w， ” ’取 M，取多約1〇·12 M;及最多1〇-13 Μ。在-實施例中，結合蛋白對其目 ΙΟ-7 Μ^10-8Μ； 1〇'8 μ^ι〇-9 Λ/Γ 9 I 數（KD)為 主 10 10-9 河至1〇, 〇 Μ 至 Η)·"Μ;Η)·”Μ 至 1()、；__12μ至 1〇1〜10 在另—實施例中，本文所述之結合蛋白為進—步包含試 叙結合物，纟中該試劑為免疫黏附分子、顯影劑、治療 158366.doc -40, 201211252 劑或細胞毒性劑。在一實施例中，顯影劑為放射性標記、 酶、螢光標記、發光標記、生物發光標記、磁性標記或生 物素。在另一實施例中，放射性標記為：3H、、力、 -γ、"Tc、、mLu、1、。或 15、。在另 一實施例中，治療劑或細胞毒性劑為抗代謝物、烷基化 劑、抗生素、生長因子、細胞激素、抗血管生成劑、抗有 絲分裂劑、蒽環黴素（anthracycline)、毒素或細胞凋亡 劑0
在另一實施例中，本文所述之結合蛋白為結晶結合蛋白 且以晶體形式存在。在一實施例中，晶體為無載劑醫藥控 制釋放晶體。在另一實施例中，、结晶結合蛋白具有比該結 合蛋白之可溶對應物長的活體内半衰期。在另一實施例 中’結晶結合蛋白保留生物活性。 在另一實施例中，本文所述之結合蛋白經糖基化。舉例 而言’糖基化為人類糖基化模式。 亦提供編碼任一種本文揭示之結合蛋白的經分離核酸。 另一實施例提供包含本文揭示之經分離核酸的載體，其中 該载體為 pcDNA ; PTT(DUr〇cher 等人，
Acids ΛαΜΓΜ 2002，第30卷，第2期）；pTT3(具有其他多選殖 位點之pTT); pEFBOS(Mizushima, S.及Nagata，S.，（1990)
Nucleic acids Research 第 18 卷，第 17 期）；pBV ; pjV ; PCDNA3.1 TOPO ; PEF6 TOPO ;或 pBJ。在一實施例中， 載體為美國專利申請案第61/021，282號中揭示之載體。 在另一態樣中，宿主細胞經本文揭示之載體轉型。在一 158366.doc -41 - 201211252 實施例中，宿主細胞為原核細胞。在另一實施例中，宿主 細胞為大腸桿菌。在相關實施例中’宿主細胞為真核細 胞。在另一實施例中’真核細胞為原生生物細胞、動物細 胞、植物細胞或真菌細胞。在另一實施例中，宿主細胞為 哺乳動物細胞，包括（但不限於）CH〇、c〇s ; NS0、δΡ2、 PER.C6 ;或真菌細胞，諸如釀酒酵母（Sacchar〇myces cerevisiae);或昆蟲細胞，諸如sf9。 在一實施例中，例如具有不同特異性之兩個或兩個以上 DVD-Ig係在單個重組宿主細胞中產生。舉例而言，抗體 混合物之表現已稱為 〇lig0cl〇nicsTM (Merus B.V·, The Netherlands);美國專利第 7,262,028號；第 7,429,486號。 亦提供製造本文所揭示之結合蛋白的方法，包含在足以 產生結合蛋白的條件下在培養基中培養任一種亦為本文揭 不之宿主細胞。在一實施例中，此方法所產生之結合蛋白 中50%_75%為雙特異性四價結合蛋白。在一特定實施例 中，此方法產生之結合蛋白中75%_9〇〇/0為雙特異性四價結 合蛋白。在一特定實施例中，所產生之結合蛋白中9〇〇/〇_ 9 5 %為雙特異性四價結合蛋白。 一個實施例提供用於釋放結合蛋白之組合物，其中該組 合物包含調配物，該調配物又包含本文揭示之結晶結合蛋 白，及一種成分，及至少一種聚合載劑。舉例而言，聚合 載劑為：聚（丙烯酸）、聚（氰基丙烯酸酯）、聚（胺基酸）、聚 (酐）、聚（縮肽）、聚（S旨）、聚（乳酸）、聚（乳酸_共_乙醇酸） 或PLGA、聚（b-羥基丁酸酯）、聚（己内酯）、聚（二氧環己 158366.doc -42- 201211252 酮）、聚（乙二酵）、聚（（羥丙基）曱基丙烯醯胺）、聚[(有機） 填氮烯]、聚（原酸酯）、聚（乙烯醇）、聚（乙烯吼咯啶酮）、 順丁烯二酸酐·烷基乙烯基醚共聚物、普洛尼克多元醇 (pluronic polyols)、白蛋白、海藻酸鹽、纖維素及纖維素 衍生物、膠原蛋白、血纖維蛋白、明膠、玻尿酸、募醣、 甘胺基聚糖、硫酸多酶、其換合物及共聚物。舉例而言， 在一些實施例中’該成分為白蛋白、蔗糖、海藻糖、乳橋 醇、明膠、羥丙基-β-環糊精、曱氧基聚乙二醇或聚乙二 〇 醇。另一實施例提供用於治療哺乳動物之方法，其包含向 該哺乳動物投與有效量之本文揭示之組合物的步驟。 亦提供包含本文揭示之結合蛋白及醫藥學上可接受之载 劑的醫藥組合物。在另一實施例中，醫藥組合物包含至少 一種用於治療病症之其他治療劑。舉例而言，其他試劑為 治療劑、顯影劑、細胞毒性劑、血管生成抑制劑（包括（但 不限於）抗VEGF抗體或VEGF-trap)、激酶抑制劑（包括（但 不限於）KDR及TIE-2抑制劑）、協同刺激分子阻斷劑（包括 ❹（但不限於）抗B7·1、抗B7.2、CTLA4-Ig、抗CD20)、黏附 分子阻斷劑（包括（但不限於）抗LFA—i抗體、抗e/l選擇素 抗體、小分子抑制劑）、抗細胞激素抗體或其功能片段（包 括（但不限於）抗IL-18、抗TNF、及抗IL-6/細胞激素受體抗 體）、曱胺喋呤（methotrexate)、環孢靈（cycl〇sp〇rin)、雷帕 黴素（rapamycin)、FK506、可偵測標記或報導體、丁抑拮 抗劑、抗風屬藥、肌肉鬆他劑、麻醉藥、非類固醇消炎藥 物（NSAID)、止痛劑、麻醉劑、鎮靜劑、局部麻醉劑、神 158366.doc •43· 201211252 經肌肉阻斷劑、抗微生物劑、抗牛皮癬藥、皮質類固醇、 同化類固醇、紅血球生成素、免疫接種、免疫球蛋白、免 疫抑制劑、生長激素、激素替代藥物、放射性藥物、抗抑 鬱劑、抗精神病藥、刺激劑（stinuUant)、哮喘藥物、p促效 劑、吸入性類固醇、腎上腺素或類似物、細胞激素或細胞 激素抬抗劑。 亦提供治療罹患本文揭示之結合蛋白能夠結合之該（等） 目標為有害的病症之人類個體之方法，包含向人類個體投 與本文揭不之結合蛋白，從而抑制人類個體中該（等）目標 之活性，且緩解多種症狀中之一種或實現治療。舉例而 言，該病症係選自包含以下之群：關節炎、骨關節炎、青 少年慢性關節《、敗血性關節炎、萊姆關節炎 arthr山s)、牛皮癖性關節炎、反應性關節炎、脊椎關節 病、全身性紅斑狼瘡症、克羅恩氏病（Cr〇hn，sdisease)、潰 瘍性結腸炎、發炎性腸病、胰島素依賴性糖尿病、甲狀腺 炎、哮喘、過敏性疾病、牛皮癣、皮膚炎性硬皮病、移植 物抗宿主疾病、器官移植排斥反應、與器官移植有關之急 性或性免疫疾病、肉狀瘤病、動脈粥樣硬化、散播性血 g内凝血、川崎氏病（Kawasaki，s disease)、格雷氏病 (Grave s disease)、腎病症候群、慢性疲勞症候群、韋格納 氏肉芽腫病（Wegener’s granul〇mat〇sis)、亨僅-絲奇恩賴紫 癜（Henoch-SCh〇enlein purpurea)、㈣微性血管炎、慢性 活動里肝人帛萄膜炎、敗血性休克、中毒性休克症候 群敗血症症候群、惡病質、感染性疾病、寄生蟲病、後 I58366.doc •44- 201211252 天免疫缺乏症候群、急性橫貫性脊鑛炎、亨廷頓氏舞蹈病 (Huntingtonis chorea)、帕金森氏病（Parkins〇n.s disease)、 阿d海默氏病（Alzheimer's disease)、中風、原發性膽汁性 肝硬化、溶血性貧血、惡性病、心臟衰竭、心肌梗塞、艾 迪森氏病（Addison's disease)、偶發性I型多腺體分泌不足 症及π型多腺體分泌不足症 '施密特氏症候群（Schmidt,s syndrome)、成人（急性）呼吸窘迫症候群、脫髮、斑形脫 髮、血清陰性關節病、關節病、萊特爾氏病（Reiter，s 〇 dlsease)、牛皮癖性關節病、潰瘍性結腸炎關節病、腸病 性滑膜炎、與披衣菌（Chlamydia)、耶氏桿菌（yersinia)及沙 門氏菌（salmonella)相關之關節病、脊椎關節病、動脈粥樣 瘤病/動脈硬化、異位性過敏、自體免疫大皰病、尋常天 疱瘡、葉狀天疱瘡、類天疱瘡、線狀IgA病、自體免疫溶 血性貧血、庫姆氏陽性溶血性貧血（c〇〇mbs p〇sitive haemolytic anaemia)、後天惡性貧血、青少年惡性貧血、 肌痛腦炎/皇家自由病（R0yal Free Disease)、慢性皮膚黏膜 〇 念珠菌病、巨細胞動脈炎、原發性硬化性肝炎、原因不明 性自體免疫肝炎、後天免疫缺乏疾病症候群、後天免疫缺 乏相關疾病、B型肝炎、C型肝炎、普通變異性免疫缺乏 症（普通變異性低γ球蛋白血症）、擴張性心肌病、雌性不孕 症、卵巢衰竭、卵巢早衰、纖維變性肺病、原因不明性纖 維化肺泡炎、發炎後間質性肺病、間質性肺炎、結缔組織 病相關之間質性肺病、混合結締組織病相關之肺病、全身 性硬化症相關之間質性肺病、類風濕性關節炎相關之間質 158366.doc •45- 201211252 性肺病、全身性紅斑狼瘡症相關之肺病、皮肌炎/多肌炎 相關之肺病、休格連氏病相關之肺病剛gren，s disease associated Iung disease)、僵直性脊椎炎相關之肺病 '血管 炎擴散性肺病、含鐵血黃素沈積症（haemosiderosis)相關之 肺病、藥㈣發之間質性肺病、纖維化、放射性纖維化、 阻塞性細支氣管炎、慢性嗜伊紅血球性肺炎、淋巴細胞浸 潤性肺病、感染後間質性肺病、痛風性㈣炎、自體免疫 性肝炎、i型自體免疫性肝炎(典型自體免疫或類狼瘡性肝 火）、2型自體免疫性肝炎（抗^反河抗體肝炎）、自體免疫介 導之低血糖症、B型胰島素抗性伴黑色棘皮病、副甲狀腺 低犯症、與器官移植有關之急性免疫疾病、與器官移植有 關之慢性免疫疾病、骨性關節病、原發性硬化性膽管炎、 1型牛皮癣、2型牛皮癬、特發性白血球減少病、自體免疫 性嗜中性球減少症、NOS型腎病、血管球性腎炎、腎顯微 性血官炎、萊姆病（lyme disease)、盤狀紅斑狼瘡、特發性 或NOS型雄性不育症、精子自體免疫、多發性硬化症（所 有亞型）、交感性眼炎、結締組織病繼發之肺高血壓、古 巴士德氏症候群（Goodpasture's syndrome)、結節性多動脈 炎之肺表現、急性風濕熱、類風濕性脊椎炎、史提爾氏病 (Still's disease)、全身性硬化症、休格連氏症候群、高安 氏病（Takayasu’s disease)/動脈炎、自體免疫性血小板減少 症、特發性血小板減少症、自體免疫性甲狀腺病、曱狀腺 機能宄進症、曱狀腺腫性自體免疫性曱狀腺低能症（橋本 氏病（Hashimoto's disease))、萎縮性自體免疫性甲狀腺低 158366.doc •46- 201211252 能症'原發性黏液水腫、晶狀體源性葡萄膜炎、原發性血 管炎、白斑病急性肝病、慢性肝病、酒精性肝硬化、酒精 誘發之肝損傷、膽汁縈滯、特質性肝病、藥物誘發之肝 炎、非酒精性脂肪性肝炎、過敏症及哮喘、Μ鍵球菌 (GBS)感染、精神障礙（例如抑鬱症及精神分裂症）、型 及Thl型介導之疾病、急性及慢性疼痛（不同形式之疼 痛）、及諸如肺癌、乳癌、胃癌 '膀胱癌、結腸癌、胰腺 癌、印巢癌、前列腺癌及直腸癌之癌症及造血系統惡性疾 〇 病（白血病及淋巴瘤）、無β脂蛋白血症、手足發绀、急性及 慢性寄生或感染過程、急性白企病、急性淋巴母細胞白血 病（ALL)、急性骨趙白也病（AML)、急性或慢性細菌感 染、急性胰腺炎 '急性腎衰竭、腺癌、心房異位搏動、 AIDS癡呆複合症、酒精誘發之肝炎、過敏性結膜炎、過 敏性接觸性皮膚炎、過敏性鼻炎、同種異體移植排斥反 應、α-1-抗胰蛋白酶缺乏症、肌肉萎縮性側索硬化、貧 血、心絞痛、前角細胞退化、抗cd3療法、抗磷脂症候 〇 群、抗受體過敏反應、主動脈及周邊動脈瘤、主動脈剝 離、動脈性高血壓、動脈硬化症、動靜脈瘺、共濟失調、 心房纖維性顫動（持續性或陣發性）、心房撲動、房室傳導 阻滯、B細胞淋巴瘤、骨移植物排斥反應、骨髓移植 (BMT)排斥反應、束枝傳導阻滯、伯基特氏淋巴瘤 (Burkitt’s lymphoma)、燒傷、心律不整、心臟頓抑症候 群、心臟腫瘤、心肌病、心肺繞道發炎反應、軟骨移植排 .斥反應、小腦皮質退化、小腦病症、蒼亂性或多灶性心房 158366.doc -47· 201211252 心動過速、與化學療法有關之病症、慢性髓細胞白血病 (CML)、慢性酒精中毒、慢性發炎性病變、慢性淋巴細胞 性白血病（CLL)、慢性阻塞性肺病（C〇PD)、慢性水揚酸中 毒、結腸直腸癌、充血性心臟衰竭、結膜炎、接觸性皮膚 炎、肺原性心臟病、冠狀動脈疾病、庫賈氏病 (Creutzfeldt-Jakob disease)、培養物陰性敗血症、囊腫性 纖維化、細胞激素療法相關之病症、拳擊員癡呆、脫髓賴 疾病、出企性登革熱（dengue hemorrhagic fever)、皮膚 炎、皮膚病病狀、糖尿病（diabete、diabetes mellitus)、糖 尿病性動脈硬化病、彌漫性路易體疾病（Diffuse Lewy body disease)、擴張型充血性心肌病、基底神經節病症、 中年唐氏症候群（Down's Syndrome in middle age)、由阻斷 CNS多巴胺受體之藥物誘發的藥物誘發之運動障礙、藥物 敏感、濕療、腦脊髓炎、心内膜炎、内分泌病、會厭炎、 EB病毒感染（epStein-barr virus infection)、肢端紅痛症、 錐體外及小腦病症、家族性噬血淋巴組織細胞瘤病、胎兒 胸腺移植排斥反應、弗里德賴希氏共濟失調（Friedreich,s ataxia)、功能性周邊動脈病症、真菌性敗也症、氣性壞 疽、胃潰瘍、腎小球腎炎、任何器官或組織的移植物排斥 反應、革蘭氏陰性敗血症（gram negative sepsis)、革蘭氏 陽性敗血症、胞内生物體引起之肉芽腫、毛細胞白血病、 哈洛弗登-史巴茲氏症（Hallerrorden-Spatz disease)、喬本 氏甲狀腺炎（hashimoto’s thyroiditis)、枯草熱、心臟移植 排斥反應、血色素沈著症、血液透析、溶血性尿毒癥候群 158366.doc •48- 201211252 /血栓溶解性血小板減少性紫癜、出血、肝炎（A型）、希氏 束心律不整（His bundle arrythmias)、HIV 感染 /HIV神經 病、霍奇金氏病（Hodgkin’s disease)、過動性運動病症、過 敏反應、過敏性肺炎 '高血壓、運動不足運動病症、下丘 腦-垂體-腎上腺轴評估、特發性艾迪森氏病、特發性肺纖 維化、抗體介導之細胞毒性、衰弱（Asthenia)、嬰兒脊髓 性肌萎縮症、主動脈發炎、a型流感、電離輻射曝露、虹 膜睫狀體炎/葡萄膜炎/視神經炎、缺血再灌注損傷、缺血 〇 性中風、青少年類風濕性關節炎、青少年脊髓性肌萎縮 症、卡波西氏肉瘤（Kaposi’s sarcoma)、腎臟移植排斥反 應、退伍軍人病（legionella)、利什曼體病（leishmaniasis)、 麻風病、皮質脊髓系統病變、脂性水腫、肝移植排斥反 應、淋巴水腫、瘧疾、惡性淋巴瘤、惡性組織細胞增多 病、惡性黑素瘤、腦膜炎、腦膜炎球菌血症、代謝性/特 發性疾病、偏頭痛、粒線體多系統病症、混合結締組織 病、單株γ球蛋白症、多發性骨髓瘤、多系統退化（曼切、 ❹ 代哲因·托馬斯、史德爾格及馬查多-約瑟夫（Mencel
Dejerine-Thomas Shi-Drager and Machado-Joseph))、重症 肌無力、禽細胞内分枝桿菌（myC〇bacteriurn avium intracellulare)、結核分枝桿菌（myC〇bacteriuin tuberculosis)、 骨髓發育不良症候群、心肌梗塞、心肌缺血病症、鼻咽 癌、新生兒慢性肺病、腎炎、腎病、神經退化性疾病、I 型神經性肌肉萎縮、嗜中性球減少性發熱、非霍奇金氏淋 巴瘤（non-Hodgkins lymphoma)、腹主動脈及其分支閉塞、 158366.doc •49· 201211252 阻塞性動脈病症、〇kt3療法、睾丸炎/副睾丸炎、睾丸炎/ 輸精管復通術、器官腫大、骨質疏鬆症、胰腺移植排斥反 應、胰腺癌、副腫瘤症候群/惡性高血鈣症、副曱狀腺移 植排斥反應、骨盆發炎疾病、常年性鼻炎、心包疾病、周 邊動脈粥樣硬化疾病、周邊血管疾病、腹膜炎、惡性貧 血、卡氏肺囊蟲肺炎（pneumoCyStis carinii pneumonia)、肺 炎、POEMS症候群（多發性神經病、器官腫大、内分泌 病、單株γ球蛋白症及皮膚變化症候群）、灌注後症候群、 泵後症候群、ΜΙ心切開術後症候群、子癇前症、進行性核 上性麻痛·、原發性肺南企壓、放射性療法、雷諾氏現象 (Raynaud's phenomenon)及疾病、雷諾氏病（Rayn〇ud，s disease)、雷弗素姆氏病（Refsum’s disease)、規則性狹窄 QRS心動過速、腎血管性高血壓、再灌注損傷、限制型心 肌病、肉瘤、硬皮病、老年性舞蹈病、路易體型老年癡呆 (Senile Dementia of Lewy body type)、血清陰性關節病、 休克、鐮形細胞性貧血、皮膚同種異體移植排斥反應、皮 膚變化症候群、小腸移植排斥反應、實體腫瘤、特異性心 律不整、脊椎共濟失調、脊髓小腦退化、鏈球菌肌炎、小 腦結構病變、亞急性硬化性全腦炎、昏厥、心血管系統梅 毒、全身性過敏、全身性發炎反應症候群、全身發作型青 少年類風濕性關節炎、T細胞或FAB ALL、毛細管擴張、 血栓閉塞性血管炎、血小板減少症、中毒、移植、創傷/ 出血、III型過敏反應、IV型過敏、不穩定型心絞痛、尿毒 癥、尿敗血病、蓴麻疹、心臟瓣膜病、靜脈曲張、血管 158366.doc •50- 201211252 炎、靜脈疾病、靜脈血栓形成、心室纖維性顫動、病毒及 真菌感染、病毒性腦炎/無菌性腦膜炎、病毒相關之噬血 細胞症候群、韋尼克-科爾薩科夫症候群（Wernicke-Kt>rSakoff syndrome)、威爾遜氏病（Wilson’s disease)、任 何器官或組織的異種移植物排斥反應、急性冠狀動脈症候 群、急性特發性多發性神經炎、急性發炎性脫髓鞘性多神 經根神經病、急性局部缺血、成人史提爾氏病（adult StiUis disease)、斑形脫髮、全身性過敏反應、抗磷脂抗體症候 Ο 群、再生不全性貧血 '動脈硬化、異位性濕疹、異位性皮 膚炎、自體免疫性皮膚炎、與鏈球菌感染有關之自體免疫 病症自體免疫性腸病、自體免疫性聽力損失、自體免疫 淋巴組織增生症候群（ALPS)、自體免疫性心肌炎、自體免 疫性卵巢早衰、瞼炎、支氣管擴張、大皰性類天疱瘡、心 血官疾病、災難性抗磷脂症候群、乳糜瀉、頸椎關節病、 慢性局部缺血、瘢痕性類天疱瘡、具有多發性硬化症風險 之臨床單—症候群（CIS)、結膜炎、兒童期初發型精神病 ^ 症·、慢性阻塞性肺病（c〇PD)、淚囊炎、皮肌炎、糖尿病 性視網膜病變、糖尿病、椎間盤突出症、椎間盤脫垂、藥 物誘發之免疫性溶血性貧血、心内膜炎、子宮内膜異位、 眼内火、上鞏膜炎、多形性紅斑、重症多形性紅斑、妊娠 員天疱瘡格_巴氏症候群（Guillain-Barr6 syndrome) (GBS)、栝草熱、休斯症候群（Hughes syndrome)、特發性 帕金森氏病、特發性間質性肺炎、邮介導之過敏症、免 疫性溶血性貧血、包涵體肌炎、感染性眼發炎疾病、發炎 158366.doc •51· 201211252 性脫髓鞘疾病、發炎性心臟病、發炎性腎病、IPF/mp、 虹膜炎、角膜炎、乾燥性角膜結膜炎、庫斯毛爾氏病 (Kussmaul disease)或庫斯毛爾-米爾氏病（Kussmaul Meier disease)、蘭德里氏麻痒（Landry’s paraiysis)、朗格罕氏細 胞組織細胞增多病（Langerhanis cell histi〇cyt〇sis)、網狀青 斑、黃斑變性、顯微性多血管炎、白赫鐵列夫症（m〇rbus bechterev)、運動神經元病症、黏膜類天疱瘡、多器官衰 竭、重症肌無力、骨趙發育不良症候群、心肌炎、神經根 病症、神經病、非A非B型肝炎、視神經炎、骨質溶解、 印巢癌、少關即型JRA(pauciarticular JRA)、周邊動脈閉 塞性疾病（PAOD)、周邊血管疾病（pVD)、周邊動脈疾病 (PAD)、靜脈炎、結節性多動脈炎（或結節性動脈周圍 炎）、多軟骨炎、風濕性多肌痛、白髮症、多關節型JRA、 多發性内分泌缺乏症候群、多肌炎、風濕性多肌痛 (PMR)、泵後症候群、原發性帕金森氏症、前列腺及直腸 癌及造血惡性病（白血病及淋巴瘤）、前列腺炎、純紅血球 1¾月不全、原發性腎上腺機能不全、復發性視神經脊髓 炎、再狹窄、風濕性心臟病、saph〇(滑膜炎、痤瘡、膿皰 病、骨肥厚及骨炎）、硬皮病、繼發性澱粉樣變性病、休 克肺、鞏膜炎、坐骨神經痛、繼發性腎上腺機能不全、聚 矽氧相關之結締組織疾病、史奈登-威爾金森皮膚病 (sneddon-wilkinson dermatosis)、強直性脊椎炎、史蒂芬_ 瓊森症候群（Stevens-Johnson syndrome，SJS)、全身性發 炎反應症候群、顳動脈炎、弓形蟲性視網膜炎、中毒性表 158366.doc -52· 201211252 皮壞死溶解、橫貫性脊髓炎、TRAPS(腫瘤壞死因子受 體）、1型過敏反應、II型糖尿病、蓴麻疹、尋常性間質性 肺炎（UIP)、血管炎、春季結膜炎、病毒性視網膜炎、沃 格特-小柳-原田症候群（Vogt-Koyanagi-Harada syndrome) (VKH症候群）、濕式黃斑變性、創傷癒合、與耶氏桿菌及 沙門氏菌相關之關節病。 在一實施例中’可以本文揭示之組合物及方法治療或診 斷之疾病包括（但不限於）原發性及轉移性癌症，包括乳 癌、結腸癌、直腸癌、肺癌、口咽癌、下„燕癌、食道癌、 胃癌、胰腺癌、肝癌、膽囊癌及膽管癌、小腸癌、尿道癌 (包括腎癌、膀胱癌及尿道上皮癌）、雌性生殖道癌（包括子 宮頸癌、子宮癌及卵巢癌，以及絨膜癌及妊娠滋養細胞疾 病）、雄性生殖道癌（包括前列腺癌、精囊癌、睾丸癌及生 殖細胞腫瘤）、内分泌腺癌（包括甲狀腺癌、腎上腺癌及垂 、黑素瘤、肉瘤（包括骨骼 及軟組織產生之肉瘤以及卡波西氏肉瘤）、腦腫瘤、神經
實體腫瘤。 體腺癌）及皮膚癌’以及血管瘤、
脫髓鞘性多神經根神經病、急性局部缺血' 、急性發炎性 成人史提爾氏 158366.doc •53· 201211252 病、斑形脫髮、全身性過敏反應、抗填脂抗體症候群、再 生不全性貧血、動脈硬化、異位性濕疹、異位性皮膚炎、 自體免疫性皮膚炎、與鏈球菌感染有關之自體免疫病症、 自體免疫性聽力損失、自體免疫淋巴組織增生症候群 (alps)、自體免疫性心肌炎、自體免疫性血小板減少症 (AITP)、臉炎、支氣管擴張、大皰性類天疱瘡、心血管疾 病、災難性抗磷脂症候群、乳糜瀉、頸椎關節病、慢性局 部缺血、瘢痕性類天疱瘡、具有多發性硬化症風險之臨床 單一症候群（CIS)、結膜炎、兒童期初發型精神病症、慢 性阻塞性肺病（COPD)、淚囊炎、皮肌炎、糖尿病性視網 膜病變、糖尿病、椎間盤突出症、椎間盤脫垂、藥物誘發 之免疫性溶血性貧血、心内膜炎、子宮内膜異位、眼内 炎、上鞏膜炎、多形性紅斑、重症多形性紅斑、紅娘類天 疱療、格-巴氏症候群（GBS)、枯草熱、休斯症候群、特發 性帕金森氏病、特發性間質性肺炎、igE介導之過敏症、 免疫性溶血性貧血、句、，系an 貝 包涵體肌炎、感染性眼發炎疾病、發 炎性脫髓鞠疾症、说* 届發炎性心臟病、發炎性腎病、 IPF/UIP、虹膜炎、角膜 月膜炎、乾燥性角膜結膜炎、庫斯毛 爾氏病或庫斯毛爾_ _水爾氏病、闌德里氏麻瘁、朗格 細胞組織細胞增多病、 微性多血管炎、白赫鐵列本二"斑變性、惡性病、顯 天疱瘡、多器官声覘壬— 貝 群、、、肌火、由 重症肌無力、骨髓發育不良症候 1〜肌火、神經根病症、神經病、非八非 神經炎、骨質溶解1巢癌、鳩㈣A、周邊 158366.doc -54- 201211252 塞性疾病（PAOD)、周邊血管疾病（PVD)、周邊動脈疾病 (PAD)、靜脈炎、結節性多動脈炎（或結節性動脈周圍 炎）、多軟骨炎、風濕性多肌痛、白髮症、多關節型JRa、 多發性内分泌缺乏症候群、多肌炎、風濕性多肌痛 (PMR)、泵後症候群、原發性帕金森氏症、前列腺及直腸 癌及造血惡性病（白血病及淋巴瘤）、前列腺炎、純紅血球 發育不全、原發性腎上腺機能不全、復發性視神經脊髓 炎、再狹窄、風濕性心臟病、sapho(滑膜炎、痤瘡、膿 〇 皰病、骨肥厚及骨炎）、硬皮病、繼發性澱粉樣變性病、 休克肺、鞏膜炎、坐骨神經痛、繼發性腎上腺機能不全、 聚矽氧相關之結締組織疾病、史奈登_威爾金森皮膚病、 強直性脊椎炎、史蒂芬-瓊森症候群（SJS)、全身性發炎反 應症候群、顳動脈炎、弓形蟲性視網膜炎、中毒性表皮壞 死溶解、橫貫性脊髓炎、TRAPS(腫瘤壞死因子受體）、1型 過敏反應、II型糖尿病、蓴麻療、尋常性間質性肺炎 (UIP)、血管炎、春季結膜炎、病毒性視網膜炎、沃格特^ j柳原田症候群（VKH症候群）、濕式黃斑變性及創傷療 合。 在一實施例中，本文揭示之結合蛋白或其抗原結合部分 在單獨使用或與放射療法及/或其他化學治療劑組合使用 時可用於冶療癌症或用於預防自本文所述之腫瘤轉移。 在另態樣中’提供治療罹患病症之患者的方法，其包 3在杈與如上文所述之第二藥劑之前、同時或之後投與本 曷尸、之任種結合蛋白的步驟。在一特定實施例中，第 158366.doc -55- 201211252 二藥劑為：布地奈德（budeno side)、表皮生長因子、皮質 類固醇、環孢靈、柳氮磺胺吡啶（sulfasalazine)、胺基水揚 酸鹽、6-魏基嗓呤、硫D坐嗓呤（azathioprine)、甲石肖達α坐 (metronidazole)、脂質加氧酶抑制劑、美沙拉°秦 (mesalamine)、奥沙拉唤（olsalazine)、巴柳氮（balsalazide)、 抗氧化劑、血栓素抑制劑、IL-1受體拮抗劑、抗IL-Ιβ mAb、抗IL-6或IL-6受體mAb、生長因子、彈性蛋白酶抑 制劑、π比咬基米峻化合物、TNF、LT、IL-1、IL-2、IL- 6、IL-7、IL-8、IL-12、IL-13、IL-15、IL-16、IL-18、IL- 23、EMAP-II、GM-CSF、FGF及 PDGF之抗體或促效劑、 CD2、CD3、CD4、CD8、CD19、CD25、CD28、CD30、 CD40、CD45、CD69、CD90或其配位體之抗體、甲胺嗓 吟、環抱靈、FK506、雷帕黴素、黴紛酸嗎琳乙酉t
(mycophenolate mofetil)、來氟米特（leflunomide)、NSAID 布洛芬（ibuprofen)、皮質類固醇、潑尼龍（pred nis〇lorie) 磷酸二酯酶抑制劑、腺苷促效劑、抗血栓劑、 ⑴補體抑制 劑、腎上腺素激導劑、IRAK、NIK、IKK、p38、 map激 酶抑制劑、IL-1 β轉化酶抑制劑、TNFa轉化崎抑制巧 細胞信號傳導抑制劑、金屬蛋白酶抑制劑、知D ^ T 聊虱磺胺η比 0定、硫唾σ票呤、6 -疏基嗓吟、血管收縮素轉彳卜 得化酶抑制劑、 可溶性細胞激素受體、可溶性P55 TNF受體、 可溶性p75 TNF 受體、SIL-1RI、SIL_1RII、SIL-6R、消炎性 素、IL-4、IL-10、IL-11、IL-13 或 TGFP。 在一特定實施例中，本文揭示之醫藥組合物 細胞激 係藉由 至少 158366.doc •56· 201211252 一種選自以下之模式投與患者：非經腸、皮下、肌肉内、 靜脈内、關節内、支氣管内、腹内、囊内、軟骨内、腔 内、體腔内、小腦内、腦室内、結腸内、子宮頸内、胃 内、肝内、心肌内、骨内、骨盆内、心包内、腹膜内、胸 膜内、前列腺内、肺内、直腸内、腎内、視網膜内、脊椎 内、滑膜内、胸内、子宮内、膀胱内、快速注射、經陰 道、經直腸、經頰、舌下、鼻内及經皮。 在一個實施例中，提供至少一種針對至少一種本文揭示 〇 之結合蛋白的抗個體基因型抗體。抗個體基因型抗體包括 含有以下分子之任何蛋白質或肽，該分子包含免疫球蛋白 分子之至少一部分，諸如（但不限於）重鏈或輕鏈之至少— 個互補決定區（CDR)或其配位體結合部分，重鏈或輕鏈可 變區、重鏈或輕鏈恆定區、構架區或其可併入本文揭示之 結合蛋白中的任何部分。 【實施方式】 提供能夠結合兩個或兩個以上抗原之多價及/或多特異 〇,〖生結合蛋白。特定言之，提供雙可變區域免疫球蛋白 (DVD-Ig)及其醫藥組合物，以及用於製備該等DvD_ig之 核酸、重組表現載體及宿主細胞。亦提供使用本文所提供 之DVD-Ig活體外或活體内偵測特異性抗原之方法。 除非本文另外定義’否則本文所用之科技術語將具有一 般技術者通常所瞭解之含義。術語之含義及範嘴應為清晰 的，然而，若存在任何隱含歧義，則本文中所提供之定義 優先於任何字典或外來定義。此外，除非上下文另外要 158366.doc -57- 201211252 求’否則單數術語應包括複數且複數術語應包括單數。在 本申请案中’除非另外說明’否則使用「或」意謂「及/ 或」 此外’使用術語「包括（including)」以及其他形 式，諸如「includes」及「inciuded」不具有限制性。同 樣，除非另外特別說明，否則諸如「元件」或「組件」之 術語涵蓋包含一個單元之元件及組件及包含一個以上次單 元之元件及組件。 般而s ’本文所述之關於細胞及組織培養、分子生物 學、免疫學、微生物學、遺傳學以及蛋白質及核酸化學及 p 雜父所使用的np名法及其技術為此項技術中所熟知及常用 之命名法及技術。除非另外說明，否則一般根據此項技術 中热知之習知方法及如本說明書全文所引用及論述之多種 般性及更為具體之參考文獻所描述執行本文提供之方法 及技術。酶反應及純化技術係根據製造商說明書，如此項 技術中通常所只現或如本文所述來執行。本文所述之關於 分析化學、合成有機化學及醫學及藥物化學所使用之命名 法及其實驗至程序與技術為此項技術中所熟知及常用之命《 名法及程序與技術。使用標準技術來進行化學合成、化學u 分析、醫藥製傷、調配及傳遞，以及患者之治療。 所選術語定義如下： =文所用之術語「多肽」係指胺基酸之任何聚合鍵。 」及蛋白質」可與術語多肽互換使用且亦係才t 胺基酸之聚合鏈。術語「多肽」涵蓋原生或人工曰 蛋白質片丰又及蛋白質序列之多肽類似物。多肽可為單體或 158366.doc -58- 201211252 聚合體。除非上下文另外反駁，否則本文中使用「多狀 意欲涵蓋多肽及其片段及變異體（包括變異體之片段就 抗原多肽而言’多肽片段視情況含有多肽之至少一個相鄰 或非線性抗原決定基。該至少一個抗原決定基片段之確切 邊界可使用此項技術中之一般技術確定。該片段包含至小 約5個鄰接胺基酸，諸如至少約1〇個鄰接胺基酸、至少約 15個鄰接胺基酸，或至少約2〇個鄰接胺基酸。多肽之變異 體係如本文所述。
術浯「經分離蛋白質」或r經分離多肽」係指該蛋白質 或多肽基於其起源或衍生來源而不與其原生狀態中所伴隨 之天然締合組分締合；實質上不含來自同—物種之其他蛋 白質；由不同物種之細胞表現；或在自然界中不存在。因 此’以化學方式合成或在不同於其天然起源之細胞的細胞 糸統中合成之多肽將與其天然締合組分「分離」。使用此 項技術中熟知之蛋白質純化技術進行分離，亦可使蛋 實質上不含天然締合組分。 如本文所用之術語「回收」係指例如使用此項技術熟知
之蛋白質純化技術藉由分離使化學物質(諸如多肽)實質上 不含天然締合組分之過I 如本文所用之「生物活性」係指分子之任何 有生物特性（如活體内可見 -夕種口 m征… 存在之特性，或由重組 :式、供或賦予之特性)。生物特性包括(但不 體；誘導細胞增殖、抑制 ）、、口 σ又 誘導細㈣亡… 誘導其他細胞激素、 ° 酶活性。生物活性亦包括Ig分子之活 l5S366.doc •59· 201211252 性。 如本文所用之關於抗體、蛋白質或肽與第二化學物質之 相互作用的術語「特異性結合」意謂該相互作用隨化學物 質上特定結構（例如抗原決定子或抗原決定基）之存在而 定；例如，抗體可以識別且結合於特定蛋白質結構，而不 與蛋白質廣泛結合。若抗體對抗原決定基「A」具有特異 性，則在含經標記「A」及抗體之反應中，含抗原決定基 A(或游離、未經標記之A)之分子之存在將減少與該抗體結 合之經標記A的量。 如本文所用之術語「抗體」泛指包含四個多肽鏈（兩個 重（H)鏈及兩個輕（L)鏈）之任何免疫球蛋白（Ig)分子或其保 留Ig分子之必需抗原決定基結合特徵的任何功能片段、突 變體、變異體或衍生物。該等突變體、變異體或衍生物抗 體形式為此項技術中所已知。下文論述其非限制性實施 例。 在全長抗體中，各重鏈包含重鏈可變區（本文中縮寫為 HCVR或VH)及重鏈恆定區。重鏈恆定區包含3個結構域， CHI、CH2及CH3。各輕鏈包含輕鏈可變區（本文中縮寫為 LCVR或VL)及輕鏈恆定區。輕鏈恆定區包含一個區域 CL。可將VH及VL區進一步再分為高變區（稱為互補決定區 (CDR))，其間散佈有較為保守之區（稱為構架區（FR))。各 VH及VL由三個CDR及四個FR構成，該等區域自胺基端至 羧基端按以下順序排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、 FR3、CDR3、FR4。免疫球蛋白分子可為任何類型（例如 158366.doc •60- 201211252
IgG、IgE、IgM、IgD、IgA及 IgY)、類別（例如 IgGl、 IgG2、IgG3、IgG4、IgAl及IgA2)或子類。 術語「Fc區」用於定義免疫球蛋白重鏈之C端區，其可 由完整抗體經木瓜蛋白酶消化產生。Fc區可為原生序列Fc 區或變異Fc區。免疫球蛋白之Fc區一般包含兩個惺定區域 CH2區域及CH3區域，且視情況包含CH4區域。置換Fc部 分中之胺基酸殘基以改變抗體效應功能在此項技術中已知 (Winter等人，美國專利第5,648,260號及第5,624,821號）。 Ο 抗體之Fc部分介導若干重要效應功能，例如細胞激素誘 導、ADCC、吞噬作用、補體依賴性細胞毒性（CDC)以及 抗體及抗原-抗體複合物之半衰期/清除率。視治療目標而 定，在一些情況下，此等效應功能為治療性抗體所需，但 在其他情況下可能並非必要或甚至有害。某些人類IgG同 型（尤其IgGl及IgG3)分別經由結合於FcYR及補體Clq來介 導ADCC及CDC。新生兒Fc受體（FcRn)為確定抗體循環半 衰期的關鍵組分。在另一實施例中，置換抗體恆定區（例 〇 如抗體之Fc區）中的至少一個胺基酸殘基，使得抗體之效 應功能改變。免疫球蛋白之兩個相同重鏈的二聚化係由 CH3區域之二聚化介導，且由鉸鏈區内之二硫鍵穩定化 (Huber等人，Nature; 264: 415-20 ; Thies等人，1999 J Mol Biol; 293: 67-79·)。使鉸鏈區内之半胱胺酸殘基突變以防 止形成重鏈-重鏈二硫鍵，將使CH3區域之二聚化不穩定。 已鑑別出負責CH3二聚化之殘基（Dall'Acqua 1998 Biochemistry 37: 9266-73.)。因此，有可能產生單價半 158366.doc •61 - 201211252
Ig。有趣的是，已在自然界中發現IgG及IgA子類之此等單 價半 Ig 分子（Seligman 1978 Ann Immunol 129: 855-70 ; Biewenga等人，1983 Clin Exp Immunol 5 1: 395-400)。已測 得FcRn:Ig Fc區之化學計量為2:l(West等人，2000 Biochemistry 39: 9698-708)，且半 Fc足以介導 FcRn結合 (Kim等人，1994 Eur J Immunol; 24: 542-548.)。干擾 CH3 區 域二聚化之突變可能不會對其FcRn結合產生較大不利影 響，因為對於CH3二聚化重要之殘基位於CH3 b指疊結構 之内界面上，而負責FcRn結合之區位於CH2-CH3區域之外 界面上。然而，半1g分子可能由於尺寸小於常規抗體而在 組織穿透方面具有一定優勢。在一個實施例中，置換結合 蛋白之恆定區（例如Fc區）中的至少一個胺基酸殘基，以致 干擾重鏈之二聚化，從而產生半DVD Ig分子。IgG之消炎 活性完全視IgG Fc片段N連接之聚糖的唾液酸化而定。已 確定消炎活性之確切聚糖要求’使得可產生適當IgG 1 Fc 片段，藉此產生效能極大增強之完全重組唾液酸化IgG 1 Fc(Anthony，R.M·等人，（2008) Science 320:373-376)。 如本文所用之術語抗體之「抗原結合部分」（或簡稱為 「抗體部分」）係指保留與抗原特異性結合之能力的抗體 之一或多個片段。已顯示抗體之抗原結合功能可由全長抗 體之片段執行。該等抗體實施例亦可為雙特異性、雙特異 性或多特異性形式；其特異性結合於兩個或兩個以上不同 抗原。術語抗體之「抗原結合部分」内所涵蓋之結合片段 的實例包括：⑴Fab片段，即包含VL、VH、CL及CH1區 158366.doc •62· 201211252 域之單價片段；（ii) F(ab')2片段，即包含兩個在鉸鏈區由 二硫橋連接之Fab片段的二價片段；（iii) Fd片段，其包含 VH及CH1區域；（iv) Fv片段，其包含抗體之單臂之VL及 VH區域；（v) dAb 片段（Ward 等人，（1989) iVWMre 341:544-546 ; Winter等人，PCT公開案 WO 90/05144 A1)，其包含 單一可變結構域；及（vi)分離之互補決定區（CDR)。此外， 儘管Fv片段之兩個區域（VL及VH)係由獨立基因編碼，但 可使用重組方法藉由合成連接子將其連接，使得能夠製備 Ο 為VL區與VH區配對形成單價分子之單一蛋白質鏈（稱為單 鏈 Fv(scFv);參看例如 Bird 等人，（1988) Sc/ewe 242:423-426 ;及 Huston 等人，（1988) ZVoc.
85:5 879-5 883)。該等單鏈抗體亦欲涵蓋於術語抗體之「抗 原結合部分」内。亦涵蓋單鏈抗體之其他形式，諸如雙功 能抗體。雙功能抗體為二價雙特異性抗體，其中VH區域 及VL區域表現於單個多肽鏈上，但使用過短以致相同鏈 上之兩個區域之間不能配對的連接子，藉此迫使該等區域 〇 與另一鏈之互補區域配對且形成兩個抗原結合位點（參看 例如 Holliger，P.等人，（1993) Proc. iVa，/· Jcai/· C/M 90:6444-6448 ； Poljak, R.J.^A, (1994) Structure 2:1121-1123)。該等抗體結合部分為此項技術中所已知（Kontermann 及 Dubel編，Antibody Engineering (2001) Springer-Verlag. New York.第 790 頁（ISBN 3-540-41354-5))。此外，單鏈 抗體亦包括「線抗體」，其包含與互補輕鏈多肽一起形成 一對抗原結合區的一對串聯Fv區段（VH-CH1-VH- 158366.doc -63- 201211252 CHl)(Zapata等人，protein Eng· 8(ΐ〇):ι〇57-1062 (1995); 及美國專利第5,641，870號）。 術語「多價結合蛋白」在本說明書全文中用於表示包含 兩個或兩個以上抗原結合位點之結合蛋白。在一實施例 中，多價結合蛋白經工程改造成具有三個或三個以上抗原 結合位點且一般不為天然存在之抗體。術語「多特異性結 合蛋白」係指能夠結合兩個或兩個以上相關或不相關目標 之結合蛋白。本文提供之雙可變區域（DVD)結合蛋白包含 兩個或兩個以上抗原結合位點且為四價或多價結合蛋白。 在特定實施例中，結合蛋白為單特異性的，亦即能夠結合 —個抗原；或多特異性的，亦即能夠結合兩個或兩個以上 抗原。包含兩個重鏈多肽及兩個輕鏈多肽之DVD結合蛋白 稱為DVD-Ig。DVD-Ig之每一半包含重鏈多肽及輕鏈多 肽，及兩個抗原結合位點。各結合位點包含重鏈可變區域 及輕鏈可變區域，其中每一抗原結合位點總計有6個cdr 參與抗原結合。 如本文所用之術語「雙特異性抗體」係指藉由以下技術 產生之全長抗體：四源雜交瘤技術（參看Milstein，c.及 A.C_ Cuello, Nature, 1983. 305(5934):第 537_40頁）；使兩 種不同單株抗體化學結合（參看Staerz，U D.等人，Nature， 1985. 314(6012):第628-31頁）；或將突變引入以區中之杵
臼技術或類似方法（參看Holliger, p，T Pr〇sper〇^G
Winter，Pr〇c Natl Acad Sci U S A, 1993. 90(14):第 6444- 8.1 8頁），該等技術產生多種不同免疫球蛋白物質其中僅 158366.doc -64 - 201211252 一者為功能性雙特異性抗體。根據分子功能，雙特異性抗 體在其兩個結合臂（一對HC/LC)之一個臂上結合一個抗原 (或抗原決定基），且在其第二臂（一對不同的HC/LC)上結 合不同抗原（或抗原決定基）。根據此定義，雙特異性抗體 具有兩個不同抗原結合臂（在特異性及CDR序列方面），且 對於其結合之各抗原而言為單價的。 如本文所用之術語「雙特異性抗體」係指可在兩個結合 臂（一對HC/LC)中之每一臂中結合兩個不同抗原（或抗原決 Ο 定基）的全長抗體（參看PCT公開案WO 02/02773)。因此， 雙特異性結合蛋白具有兩個具有相同特異性及相同（：1)尺序 列之相同抗原結合臂，且對於其結合之各抗原而言為二價 的0 結合蛋白之「功能性抗原結合位點」為能夠結合目標抗 原之結合位點。抗原結合位點之抗原結合親和力不一定與 產生抗原結合位點之親本抗體一樣強，但結合抗原之能力 必須可使用多種已知用於評估抗體與抗原結合之方法中之 ❹ e-者來量測。此外，本文之多價抗體之各抗原結合位點 的抗原結合親和力在數量上不必相同。 術語「細胞激素」為由一個細胞群體釋放且以細胞間介 體形式作用於另一細胞群體的蛋白質之通用術語。該等細 胞激素之實例為淋巴介質、單核球激素及傳統多肽激素。 細胞激素包括生長激素，諸如人類生長激素、N_甲硫胺醯 基人類生長激素及牛生長激素；副甲狀腺激素；甲狀腺 素；姨島素；前胰島素；鬆他素；前鬆他素；聽蛋白激 I58366.doc •65· 201211252 素，諸如促卵泡激素（FSH)、促曱狀腺激素（TSH)及促黃體 激素（LH);肝生長因子；纖維母細胞生長因子；促乳素； 胎盤生乳素；腫瘤壞死因子-α及腫瘤壞死因子-β ;苗勒氏 抑制物質（mullerian-inhibiting substance);小鼠促性腺激 素相關肽；抑制素；活化素；血管内皮生長因子；整合 素；血小板生成素（TPO);神經生長因子，諸如NGF-α ; 血小板生長因子；胎盤生長因子；轉化生長因子（TGF)， 諸如TGF-a及TGF-β ;胰島素樣生長因子-1及胰島素樣生 長因子-11 ;紅血球生成素（EPO);骨生成誘導因子；干擾 素，諸如干擾素- a、干擾素-β及干擾素-γ;群落刺激因子 (CSF)，諸如巨噬細胞-CSF(M-CSF);粒細胞巨噬細胞-CSF(GM-CSF);及粒細胞-CSF(G-CSF);介白素（IL)，諸 WIL-1、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9 、 IL-10 、 IL-11 、 IL-12 、 IL-13 、 IL-15 、 IL-18 、 IL-21 、 IL-22、IL-23、IL-33 ;腫瘤壞死因子，諸如 TNF-a 或 TNF-β;及其他多肽因子，包括LIF及kit配位體（KL)。如本文所 用之術語細胞激素包括來自天然來源或重組細胞培養物之 蛋白質，及原生序列細胞激素之生物活性相等物。 術語「連接子」用於表示包含兩個或兩個以上經肽鍵連 接之胺基酸殘基且用於連接一或多個抗原結合部分之多 肽。該等連接子多肽為此項技術中所熟知（參看例如 Holliger, P.^A, (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444-6448 ; Poljak，R.J.等人，（1994) 2:1 121-1 123)。例
示性連接子包括（但不限於）AKTTPKLEEGEFSEAR (SEQ 158366.doc -66- 201211252 ID NO: 1) ； AKTTPKLEEGEFSEARV (SEQ ID NO: 2)； AKTTPKLGG (SEQ ID NO: 3) ； SAKTTPKLGG (SEQ ID NO: 4) ； SAKTTP (SEQ ID NO: 5) ； RADAAP (SEQ ID NO: 6) ； RADAAPTVS (SEQ ID NO: 7) ； RADAAAAGGPGS (SEQ ID NO: 8) ； RADAAAA(G4S)4 (SEQ ID NO: 9)； SAKTTPKLEEGEFSEARV (SEQ ID NO: 10) ； ADAAP (SEQ ID NO: 11) ； ADAAPTVSIFPP (SEQ ID NO: 12) ； TVAAP (SEQ ID NO: 13) ； TVAAPSVFIFPP (SEQ ID NO: 14)； 〇 QPKAAP (SEQ ID NO: 15) ； QPKAAPSVTLFPP (SEQ ID NO: 16) ； AKTTPP (SEQ ID NO: 17) ； AKTTPPSVTPLAP (SEQ ID NO: 18) ； AKTTAP (SEQ ID NO: 19) ； AKTTAPSVYPLAP (SEQ ID NO: 20) ； ASTKGP (SEQ ID NO: 21) ； ASTKGPSVFPLAP (SEQ ID NO: 22) ； GGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 23)； GENKVEYAPALMALS (SEQ ID NO: 24) ； GPAKELTPLKEAKVS (SEQ ID NO: 25);及 GHEAAAVMQVQYPAS (SEQ ID NO: 26)。 〇 免疫球蛋白恆定區域係指重鏈或輕鏈恆定區域。人類
IgG重鏈及輕鏈恆定區域胺基酸序列為此項技術中所已 知。 如本文所用之術語「單株抗體」或「mAb」係指自一群 實質上同質之抗體獲得的抗體，亦即構成該群體之個別抗 體除可以較少量存在之可能天然存在之突變外皆相同。單 株抗體針對單一抗原具有高度特異性。此外，與通常包括 針對不同決定子（抗原決定基）之不同抗體的多株抗體製劑 158366.doc •67- 201211252 對比，各mAb針對抗原上之單一決定子。修倚語「單株」 不應理解為需要藉由任何特定方法製備抗體。 如本文所用之術語「人類抗體」意欲包括具有來源於人 類生殖系免疫球蛋白序列之可變區及恒定區的抗體。本文 提供之人類抗體可例如在CDR且尤其CDR3中包括不由人 類生殖系免疫球蛋白序列編碼之胺基酸殘基（例如，藉由 活體外隨機或位點特異性突變誘發或藉由活體内體細胞突 變引入之突變）。然而，如本文所用之術語「人類抗體」 並不欲包括來源於另一哺乳動物物種（諸如小鼠）之生殖系 的CDR序列已移植至人類構架序列上之抗體。 如本文所用之術語「重組人類抗體」意欲包括藉由重組 方式製備、表現、產生或分離之所有人類抗體，諸如使用 轉染至宿主細胞中之重組表現載體表現之抗體（在下文第π C部分中進一步描述）、自重組組合人類抗體文庫分離之抗 體（Hoogenboom H.R. (1997) TIB Tech. 15:62-70; Azzazy H.及 Highsmith W.E. (2002) Clin. Biochem. 35:425-445 ; Gavilondo J.V.&LarrickJ.W.(2002)BioTechniques 29:128- 145 ; Hoogenboom H.及 Chames P· (2000) Immunology Today 21:371-3 78)、自人類免疫球蛋白基因之轉殖基因動 物（例如小鼠）分離之抗體（參看Taylor, L. D.等人，（1992) Nucl. Acids Res· 20:6287-6295 ; Kellermann S-A.及 Green L.L. (2002) Current Opinion in Biotechnology 13: 593-597 ； Little M.等人（2000) Immunology Today 21:364-3 70)、或藉由涉及將人類免疫球蛋白基因序列剪接至其他 I58366.doc -68- 201211252 DNA序列的任何其他方式製備、表現、產生或分離之抗 體。該等重組人類抗體具有來源於人類生殖系免疫球蛋白 序列之可變區及恆定區。然而，在某些實施例中，使該等 重組人類抗體進行活體外突變誘發（或當使用人類Ig序列之 轉殖基因動物時’使其進行活體内體細胞突變誘發）且因 此’重組抗體之VH區及VL區胺基酸序列為雖然來源於人 類生殖系VH及VL序列且與人類生殖系VH及VL序列相 關’但可能並非活體内天然存在於人類抗體生殖系譜系内 Ο 的序列。 「親和力成熟」抗體為在一或多個CDR中具有一或多處 變化之抗體，該（等）變化使得抗體對抗原之親和力相較於 不具有彼（等）變化之親本抗體得以改良。例示性親和力成 熟抗體對目標抗原將具有奈莫耳或甚至皮莫耳（picomolar) 級親和力。親和力成熟抗體係藉由此項技術中已知的程序 製備。Marks等人，BidlTechnology 10:779-783 (1992)描述 藉由VH及VL區域改組進行親和力成熟。以下文獻描述了 〇 CDR及/或構架殘基之隨機突變誘發：Barbas等 人，Proc
Nat. Acad. Sci，USA 91:3809-3813 (1994); Schier 等人， Gene 169:147- 155 (1995) ; Yelton等人，J. Immunol. 155:1994-2004 (1995) ; Jackson等人，J. Immunol. 154(7):3310-9 (1995); Hawkins等人，J. Mol. BioL 226:889-896 (1992);且在選擇 性突變誘發位置、接觸或超突變位置處以活性增強型胺基 酸殘基進行選擇性突變如美國專利US 6914128B1中描述。 術語「嵌合抗體」係指包含來自一物種之重鏈及輕鏈可 158366.doc -69- 201211252 變區序列及來自另一物種之恆定區序列的抗體，諸如具有 鼠類重鏈及輕鏈可變區連接至人類恆定區之抗體。 術*吾「CDR移植抗體」係指包含來自一物種之重鏈及輕 鏈可變區序列但其中VH及/或VL之一或多個CDR區之序列 經另一物種之CDR序列置換的抗體，諸如具有一或多個鼠 類CDR(例如CDR3)已經人類CDR序列置換之鼠類重鏈及輕 鏈可變區之抗體。 術語「人類化抗體」係指包含來自非人類物種（例如小 鼠）之重鏈及輕鏈可變區序列，但其中VH及/或VL序列的 至少一部分已經改變而更「類人類」，亦即更類似於人類 生殖系可變序列的抗體。一種類型之人類化抗體為Cdr移 植抗體’其中將人類CDR序列引入非人類VH及VL序列中 以置換相應非人類CDR序列。「人類化抗體」亦為免疫特 異性結合於相關抗原且包含實質上具有人類抗體胺基酸序 列之構架（FR)區及實質上具有非人類抗體胺基酸序列之互 補決定區（CDR)的抗體或其變異體、衍生物、類似物或片 段。如本文所用之術語「實質上」在CDR上下文中係指具 有與非人類抗體CDR之胺基酸序列至少8〇%、至少85%、 至少90°/。、至少95%、至少98%或至少99% —致之胺基酸序 列的CDR。人類化抗體包含至少一個且通常兩個可變區域 (Fab、Fab’、F(ab’）2、FabC、Fv)之實質上全部，其中全部 或貫貝上全部CDR區對應於非人類免疫球蛋白（亦即供體 抗體）之CDR區且全部或實質上全部構架區為人類免疫球 蛋白共同序列之構架區。在一實施例中，人類化抗體亦包 158366.doc • 70- 201211252 含免疫球蛋白恆定區（Fc)(通常為人類免疫球蛋白恆定區） 之至少一部分。在一些實施例中，人類化抗體含有輕鏈以 及至少重鏈之可變區域。抗體亦可包括重鏈之CH1、鉸鏈 區、CH2、CH3及CH4區。在一些實施例中，人類化抗體 僅含有人類化輕鏈。在一些實施例中，人類化抗體僅含有 人類化重鏈。在特定實施例中，人類化抗體僅含有輕鏈及/ 或人類化重鏈之人類化可變區域。 術語「Kabat編號」、「Kabat定義」及「Kabat標記」 〇 在本文中可互換使用。此項技術中公認之此等術語係指相 較於抗體或其抗原結合部分之重鏈及輕鏈可變區中之其他 胺基酸殘基可變（亦即高變）之胺基酸殘基的編號系統 (Kabat等人，（1971)TVrJca式 5W. 190:382-391 及Kabat， Έ.Α·專尺，{\99Y) Sequences of Proteins of Immunological #5廣，美國衛生及公共服務部（U.S. Department of Health and Human Services), NIH公開案第 91-3242號）。 對於重鏈可變區而言，高變區範圍為CDR1之胺基酸位置 ❹ 31至35，CDR2之胺基酸位置50至65，及CDR3之胺基酸位 置95至102。對於輕鏈可變區而言，高變區範圍為CDR1之 胺基酸位置24至34，CDR2之胺基酸位置50至56，及CDR3 之胺基酸位置89至97。 如本文所用之術語「CDR」係指抗體可變序列内之互補 決定區。重鏈及輕鏈之可變區中各存在三個CDR，各可變 區之該三個CDR指定為CDR1、CDR2及CDR3。如本文所 用之術語「CDR組」係指存在於單一可變區中能夠結合抗 158366.doc -71 - 201211252 原之三個CDR之群。此等CDR之確切邊界已根據不同系統 不同地加以界定。Kabat所述之系統（Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest (美國國家衛生研究 院（National Institutes of Health)，Bethesda，Md. (1987)及 (1991))不僅提供適用於抗體之任何可變區的明確殘基編號 系統，且亦提供界定三個CDR之確切殘基邊界。此等CDR 可稱為 Kabat CDR。Chothia及其同事（Chothia及 Lesk, J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)以及 Chothia 等人，Nature 342:877-883 (1989))發現Kabat CDR内之某些子部分即使在 胺基酸序列層面具有極大多樣性，亦使用幾乎相同的肽主 鏈構形。此等子部分指定為LI、L2及L3或HI、H2及H3， 其中「L」及「H」分別表示輕鏈區及重鏈區。此等區可 稱為Chothia CDR，其具有與Kabat CDR重疊之邊界。界定 與Kabat CDR重疊之CDR之其他邊界已由Padlan (FASEB J. 9: 133-139 (1995))以及 MacCallum (J Mol Biol 262(5):732- 45 (1996))描述。其他CDR邊界界定可能不嚴格遵循本文 中之一系統，但仍會與Kabat CDR重疊，不過根據特定殘 基或殘基群或甚至整個CDR不顯著影響抗原結合之預測或 實驗研究結果，其可能會縮短或延長。本文中所用之方法 可利用根據此等系統中之任一者所界定之CDR，但特定實 施例使用Kabat或Chothia界定之CDR。 如本文所用之術語「構架」或「構架序列」係指可變區 減去CDR之剩餘序列。因為CDR序列之確切界定可由不同 系統確定，所以構架序列之含義遵循相應的不同解釋。六 158366.doc -72- 201211252 個CDR(輕鏈之CDR-Ll、CDR-L2及CDR-L3，以及重鏈之 CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3)亦將輕鏈及重鏈上之構架區 在各鏈上分成四個子區（FR1、FR2、FR3及FR4)，其中 CDR1位於FR1與FR2之間，CDR2位於FR2與FR3之間，且 CDR3位於FR3與FR4之間。在不將特定子區指定為FR1、 FR2、FR3或FR4之情形下，構架區當以其他名稱提及時代 表天然存在之單一免疫球蛋白鏈之可變區中之組合FR。如 本文所用之一 FR代表四個子區中之一者，且FR代表構成 構架區之四個子區中之兩個或兩個以上子區。 如本文所用之術語「生殖系抗體基因」或「基因片段」 係指由未經歷產生遺傳重排及突變以表現特定免疫球蛋白 之成熟過程之非淋巴細胞編碼的免疫球蛋白序列。（參看 例如 Shapiro 等人，Crit. Rev. Immunol. 22(3): 183-200 (2002) ; Marchalonis 等人，Adv Exp Med Biol. 484:13-30 (2〇01))。本文提供之多個實施例所提供之一個優點基於如 下認知：生殖系抗體基因比成熟抗體基因更可能保留物種 〇 中個體之必需胺基酸序列結構特徵，因此當用於治療彼物 種時，不太可能認為其來自外來來源。 如本文所用，術語「中和」係指當結合蛋白特異性結合 抗原時抵消抗原之生物活性。在一實施例中，中和結合蛋 白結合細胞激素且使其生物活性降低至少約20%、40%、 60%、80%、85%或 85%以上。 術語「活性」包括諸如結合蛋白對兩個或兩個以上抗原 之結合特異性及親和力的活性。 158366.doc -73- 201211252 術語「抗原決定基」包括能夠特異性結合於免疫球蛋白 或τ細胞受體之任何多狀決定子。在某些實施例中，抗原 決定基決定子包括分子之化學活性表面基團(諸如胺基 酸、糖側鏈、磷醯基或磺醯基），且在某些實施例中，其 可具有特定三維結構特徵及/或特定電荷特徵。抗原決定 基為抗體所結合之抗原區。在某些實施例中，當抗體在蛋 白質及/或大分子之複雜混合物中識別其目標抗原時，則 稱抗體特異性結合抗原。若抗體交叉競爭（一抗體阻止另 一抗體結合或調節另一抗體之效應），則稱抗體「結合於 同一抗原決定基」。此外，抗原決定基之結構定義（重 疊、類似、相同）提供很多資訊，但因為功能定義涵蓋結 構（結合）及功能（調節、競爭）參數，所以其通常更有相關 性。 本文所用之術語「表面電裝子共振」係指允許藉由（例 如）使用 BIAcore® 系統（BIAcore International AB，a GE Healthcare company, Uppsala, Sweden and Piscataway, NJ) 偵測生物感測器基質内蛋白質濃度之改變來分析即時生物 特異性相互作用之光學現象。更多描述參看JSnsson，U.等 人，（1993) ·βζ·ο/. C7z’《· 5 1:19-26 ; JSnsson, U.等人， (1991) 1 1:620-627 ; Johnsson, B_ 等人， (1995) «/. Mo/· iiecogm'i. 8:125-131 ;及 Johnnson, Β·等人， (1991) Jna/. 198:268-277。 如本文所用之術語「K〇n」意欲指如此項技術已知，結合 蛋白（例如抗體）與抗原締合形成例如抗體/抗原複合物之締 158366.doc -74- 201211252 σ速率㊉數。κοη」亦稱為術語「締合速率常數」或 ka」，其在本文中可互換使用。此值指示抗體與其目標 抗原之結合速率或抗體與抗原之間的複合物形成速率，亦 藉由以下方程式展示： 抗體（「Ab」）+抗原（「Ag」hAb-Ag。
如本文中所用’術語「Koff」意欲指如此項技術中已知 之結合蛋白（例如抗體）自例如抗體/抗原複合物解離之「解 離速率常數」。此值指示抗體自其目標抗原解離或Ab_Ag 複合物隨時間推移分離成游離抗體及抗原之解離速率，如 由以下方程式展示： A b+A g * A b - A g 〇 如本文所用之術語「KD」欲指「平衡解離常數」，且係 指在滴定量測中在平衡時獲得之值或藉由用解離速率常數 (koff)除以締合速率常數（k〇n)獲得之值。締合速率常數、 解離速率常數及平衡解離常數係用於表示抗體與抗原之結 合親和力。測定締合及解離速率常數之方法為此項技術中 所熟知。使用基於螢光之技術可提供檢查平衡狀態生理緩 衝液中之樣品之高靈敏度及能力。可使用其他實驗方法及 儀器’諸如BIAcore®(生物分子相互作用分析）分析法（例 如可自 BIAcore International AB，GE Healthcare company, Uppsala, Sweden購得之儀器）。另外，亦可使用可自 Sapidyne Instruments(Boise，Idaho)購得之 KinExA®(動力 學排除分析法）分析。 「標記」及「可偵測標記」意謂連接於特定結合搭配物 158366.doc -75- 201211252 (諸如抗體或分析物）以便例如使特異性結合對之成員（諸如 抗體及分析物）之間的反應變得可偵測的邱八， 丨刀 且如此經 標記之特定結合搭配物（例如抗體及分析物）稱為「經可摘 測標記」。因此’如本文所用之術語「經標記結合蛋白」
係指已併有標記以提供對結合蛋白之鑑別的蛋白質。在L 實施例中，標記為能產生可用目測或儀器方式偵測出之信 號之可彳貞測標記’例如併入經放射性標記之胺基酸或連接 於可由經標記抗生物素蛋白（例如含有可以光學或比色法 偵測之螢光標記或酶活性之抗生物蛋白鏈菌素)價測之具 有生物素基部分之多。用於多肽之標記的實例包括⑷ 不限於）以下：放射性同位素或放射性核種（例如A、"c、 35S、90Υ、99Tc、"ιΙη、125i、131 1、177Lu、166h〇 或 ⑴化）；色素原；螢光標記（例如nTc、若丹明 (rhodamine)、鑭系金屬磷光體）；酶標記（例如辣根過氧化 酶、勞光素酶、鹼性磷酸酶）；化學發光標記；生物素 基；由第二報導體識別之預定多肽抗原決定基(例如白胺 酸拉鏈對序列、二次抗體之結合位點、金屬結合區域、抗 原決定基標籤及諸如釓螯合物之磁化劑。通常用於免 疫分析法之標記的代表性實例包括發光部分（例如十定鑽 (拟―）化合物）及發勞光之部分（例如螢光素）。於本 文中描述其他標記。就此而言， ” μ y ^ 〇丨刀本身可能未經可偵測 才示纪但在與另一部分反應後可變 、 茭仔了偵測。使用「經可偵 測標記」意欲涵蓋後一類型之可偵測標記。 術語「結合物」係指化學連接 、淆如治療劑或細胞毒性 158366.doc •76- 201211252 劑之第二化學部分的結合蛋白（諸如抗體）。本文所用之術 語「藥劑」表示化合物、化合物之混合物、生物大分子或 由生物材料製備之提取物。在一實施例中，治療劑或細胞 毒性劑包括（但不限於）百曰咳毒素（pertussis toxin)、紫杉 醇（taxol)、細胞鬆弛素B(cytochalasin B)、短桿菌肽 D(gramicidin D)、溴化乙疑、吐根素（emetine)、絲裂黴素 (mitomycin)、依託泊 ^(etoposide)、特諾波賽（tenoposide)、 長春新鹼（vincristine)、長春驗（vinblastine)、秋水仙驗 O (colchicin)、小紅每（doxorubicin)、道諾黴素（daunorubicin)、 二經基炭疽菌素二酮（dihydroxy anthracin dione)、米托蒽 酿（mitoxantrone)、光神黴素（mithramycin)、放線菌素 D(actinomycin D)、1-去氫睪固酮、糖皮質激素、普魯卡 因（procaine)、四卡因（tetracaine)、利多卡因（lidocaine)、 普萘洛爾（propranolol)及嘌吟黴素（puromycin)以及其類似 物或同系物。當在免疫分析法之情形中使用時，結合物抗 體可為用作偵測抗體之經可偵測標記抗體。 〇 如本文所用之術語「晶體」及「結晶」係指以晶體形式 存在之結合蛋白（例如抗體）或其抗原結合部分。晶體為物 質的一種固態形式，其不同於諸如非晶形固態或液晶態之 其他形式。晶體係由原子、離子、分子（例如蛋白質，諸 如抗體）或分子組裝體（例如抗原/抗體複合物）之規則的重 複三維陣列構成。此等三維陣列係根據此領域中充分瞭解 之特定數學關係排列。晶體中重複之基本單元或建構塊稱 為不對稱單元。以符合既定之定義明確的晶體學對稱性之 158366.doc -77- 201211252 排列重複不對稱單元提供晶體之「單位晶胞」。在所有三 個維度中藉由規則平移重複單位晶胞提供晶體。參看 Giege，R.及Ducruix，a. Barrett，Crystallization of Nucleic
Acids and Proteins，a practical Approach，第 2版，第 20 1-16 頁，Oxford University Press，New York，New York， (1999)。 術語「聚核苷酸」意謂兩個或兩個以上核苷酸（核糖核 苷酸或去氧核苷酸或任一類核苷酸的經修飾形式）之聚合 形式。該術語包括DNA之單股及雙股形式。 術語「經分離聚核苷酸」將意謂一種聚核苷酸（例如基 因組、cDNA或合成來源者，或其某種組合），鑒於其來 源，該「經分離聚核苷酸」不與在自然界中可發現「經分 離聚核苷酸」之整個聚核苷酸或其一部分缔合；操作性連 接至在自然界中不與其連接之聚核苷酸；或在自然界中不 作為較大序列之一部分存在。 術語「載體」意欲指一種能夠轉運已連接之另一核酸的 核酸分子。一種類型之載體為「質體」，其係指内部可接 合其他腿區段之環狀雙股DNA環。另—_之載體為病 毒載體，其中可將其他DNA區段接合至病毒基因組中。某 些載體能夠在引入該等載體之宿主細胞中自主複製㈠列如 具有細菌複製起點之細菌載體及游離型哺乳動物載體）。 其他載體（例如非游離型哺乳動物載體）可在引入宿主細胞 中之後整合至宿主細胞之基因組中，且藉此與宿主基因'且 一起複製。此夕卜，某些載體能夠㈣與其可操作性連接之 158366.doc -78- 201211252 基因的表現。該等載體在本文中稱為「重組表現載體」 (或簡稱為「表現載體」）。一般而言，適用於重组DNA技 術中之表現載體通常呈質體形式。因為質體為载體之最常 用形式’所以在本說明書中，「質體」與「载體」可互換 使用。然而，實施例包括表現載體之該等其他形式，諸如 起等效作用之病毒載體（例如複製缺陷型反轉錄病毒腺 病毒及腺相關病毒）。 Ο 〇 術語「操作性連接」係指所述組分之併接關係使立得以 按其預定方式發揮功能。使控制序列「操作性連接」至編 碼序列係以可在與控制序列相容之條件下達成表現編碼序 列的方式接合。「操作性連接」之序列包括與相關基因相 鄰之表現控制序列，及反式作用或遠距控制相關基因的表 現控制序列。如本文所用之術語「表現控制序列」係指使 所接合之編碼序列進行表現及加I時所必需之聚核普酸序 列。表現控制序列包括適當轉錄起始、終止、啟動子及強 化子序列；有效舰加工錢，諸如剪接及聚腺苷酸化信 號；使細胞質mRNA穩定之序列；提高轉譯效率之序列(亦 即K〇zak共同序列）；增強蛋白質敎性之序列；及必要時 增加蛋白質分泌之序列。該等控制序列之性f視宿主生物 體而不同；在原核生物中，該等控制序列一般包括啟動 子、核糖體結合位點及轉錄終止序列；纟真核生物中，該 等控制序列-般包括啟動子及轉錄終止序列。術語「控制 序列」意欲包括表現及力κ時有必要存在的組分，且亦可 包括適宜存在之其他組分，例如前導序列及融合搭配物序 158366.doc -79- 201211252 列。 「轉型」係指使外源DNA進入宿主細胞中之任何過程。 可使用此項技術中熟知的多#方法在天然或人工條件下進 打轉型。轉型可憑藉任何已知方法，將外來核酸序列插入 至原核生物或真核生物宿主細胞中進行。該方法係基於所 轉型之宿主細胞選擇，且可包括（但不限於）病毒感染、電 穿孔、脂質體轉染及粒子轟擊。該等「轉型」細胞包括其 中所插入之DNA能夠呈自主複製質體或宿主染色體之一部 分的形式複製的穩定轉型細胞。其亦包括在有限時段内短 暫表現所插入之DNA或RNA的細胞。 術語「重組宿主細胞」（或簡稱為「宿主細胞」）意欲指 已引入外源DNA之細胞。在一實施例中，宿主細胞包含兩 個或兩個以上（例如多個）編碼抗體之核酸，諸如在例如美 國專利第7,262,028號中所述之宿主細胞。該等術語不僅欲 指特定個體細胞，而且亦指該細胞之子代。因為某些修飾 可能因突變或環境影響而在繼代中發生，所以該子代實際 上可能不與親本細胞相同，但其仍包括在如本文所用之術 語「宿主細胞」之範疇内。在一實施例中，宿主細胞包括 選自生物界中之任一者的原核細胞及真核細胞。在另一實 施例中，真核細胞包括原生生物、真菌、植物及動物細 胞。在另一實施例中，宿主細胞包括（但不限於）原核細胞 株大腸桿菌；哺乳動物細胞株CHO、HEK 293、COS、 NS0、SP2及PER.C6 ;昆蟲細胞株Sf9 ;及真菌細胞釀酒酵 母0 158366.doc •80- 201211252 重組DNA、寡核苷酸合成及組織培養及轉型可使用標準 技術進行（例如電穿孔、脂質體轉染）。酶反應及純化技術 可根據製造商說明書或如此項技術中通常所實現或如本文 所述執行。上述技術及程序一般可根據此項技術中熟知之 習知方法及如本說明書全文所引用及論述之各種綜合性參 考文獻及更具體之參考文獻中所述執行。參看例如 Sambrook專人，Molecular Cloning: A Laboratory Manual (第 2版，Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring o Harbor，N.Y. (1989))。 如此項技術中已知之「轉殖基因生物體」係指具有含有 轉殖基因之細胞的生物體，其中引入生物體（或生物體之 祖先）中之轉殖基因表現並不在該生物體中天然表現之多 肽。「轉殖基因」為穩定且操作性整合至發育成轉殖基因 生物體之細胞之基因組中，從而引導所編碼基因產物於轉 殖基因生物體之一或多種細胞類型或組織中表現的DNA構 築體。 ❹ 術語「調控」與「調節」可互換使用，且如本文中所使 用’其係指改變或變化相關分子之活性（例如細胞激素之 生物活性）。調節可為增加或降低相關分子之某一活性或 功能之量值。分子之例示性活性及功能包括（但不限於）結 合特徵、酶活性、細胞受體活化及信號轉導。 相應地’術語「調節劑」為能夠使相關分子之活性或功 能（例如細胞激素之生物活性）改變或變化的化合物。舉例 而言，調節劑可引起分子的某一活性或功能之量值相較於 15S366.doc • 81 · 201211252 在無該調節劑存在下所觀察到之活性或功能之量值增加或 減小。在某些實施例中，調節劑為降低分子之至少一種活 性或功能之量值的抑制劑。例示性抑制劑包括(但不限於) 蛋白質、肽、抗體、肽體(peptibody)、碳水化合物或小有 機分子。肽體描述於例如W〇 〇1/83525中。 術語「促效劑」係指當與相關分子接觸時引起分子的某 一活性或功能之量值相較於在缺效劑存在下所觀察到之 /舌丨生或功能之量值增加的調節劑。相關特定促效劑可包括 (但不限於）多肽、核酸、碳水化合物或結合於抗原之任何 其他分子。 術語「拮抗劑」3戈「抑制劑」係指當與相關分子接觸時 引起分子的某一活性或功能之量值相較於在無拮抗劑存在 下所觀察到之活性或功能之量值降低的調節劑。相關特定 拮抗劑包括阻斷或調節抗原之生物或免疫活性之拮抗劑。 抗原之拮抗劑及抑制劑可包括（但不限於）蛋白質、核酸、 碳水化合物或結合於抗原之任何其他分子。 如本文所用之術語「有效量」係指足以降低或改善病症 或其-或多種症狀之嚴重程度及/或持續時間；預防病症 進展；引起病症料；預防與病症相關之—或多種症狀復 發、發展、發作或進展；偵測病症，或增強或改良另一療 法（例如預防劑或治療劑）之預防或治療作用的療法之量。 「患者」與「個體」在本文中可互換使用，指動物，諸 如哺乳動物，包括靈長類動物（例如人類、猴及黑猩猩）、 非靈長類動物（例如母牛、豬、駱駝、美洲駝、馬、山 158366.doc -82 - 201211252 羊、兔、錦羊、倉鼠、天竺鼠、貓、犬、大鼠、小鼠、 錄）、禽類（例如鴨或鶴）及襄魚。較佳地，患者或個體為人 ，諸如正在針對疾病、病症或病狀進行治療或評估之人 犬貝，、有羅患疾病、病症或病狀風險之人類、羅患疾病、 病症或病狀之人類，及/或正在針對疾病 行治療之人類。 病症或病狀進
如本文所用之術語「樣品」係以其最廣泛意義使用。如 本文所用之「生物樣品」包括（但不限於）來自活物 thing)或先前為活物之任何量的物f。該等活物包括（但不 限於）人類、小鼠、大鼠、猴、&、兔及其他動物。該等 物質包括（但不限於）血液（例如全血）、血漿、血清、尿、 羊水、滑液、时細胞、自血球、單核細胞、其他細胞、 器官、組織、骨髓、淋巴結及脾臟。 「組分」及「至少-種組分」—般係指可包括於套組中 以根據本文所述之方法及此項技術中已知之其他方法分析 測試樣品（諸如患者尿、血清或血漿樣品）之捕捉抗體、偵 測或結合抗體、對照組、校準物、_系列校準物、靈敏度 組（sensitivity panel)、容器、緩衝液、稀釋劑、鹽、酶、 酶之輔因子、偵測試劑、預處理試劑/溶液、受質（例如呈 溶液形式）、停止溶液及其類似物。因此，在本發明之上 下文中，「至少一種組分」及「組分」可包括如上之多肽 或其他分析物，諸如包含分析物（諸如多肽）之組合物，其 視情況諸如藉由結合於抗分析物（例如抗多肽）抗體而固定 於固體支撐物上。一些組分可呈溶液形式或經凍乾以在復 158366.doc -83 - 201211252 原後用於分析中。 「對照組」係指已知非分析物（「陰性對照組」）或含有 刀析物（陽j·生對照組」）之組合物。陽性對照組可包含已 知濃度之分析物。「對照組」、「陽性對照組」及「校準 物」在本文中可互換使用1包含已知濃度之分析物的組 合物。「陽性對照組」可用於確定分析法效能特徵且為試 劑（例如分析物）之完整性的適用指示劑。 預疋截止」及「預定程度」一般係指用以藉由將分析 結果相對於預定截止/程度進行比較來評估診斷/預後/治療 功效結果的分析截止值，其中預定截h程度已與各種臨 床參數（例如疾病之嚴重程度、進展/無進展/改良等）相聯 繫或相關聯。儘管本發明可提供例示性預定程度但眾所 周知截止值可視免疫分析法之性質(例如所使用之抗體等) 而變化。此外，針對其他免疫分析法來調適本發明以基於 本發明獲得詩彼等其他免疫分析法之免疫分析法特定截 止值完全在熟習此項技術者之f通技能内。儘管預定截止/ 程度之確切值可隨分析法而變化，但如本文所述之相關性 (若存在）應普遍適用。 如本文所述之診斷分析法中利之「預處理料」（例 如溶解、沈澱及/或增溶試劑）為使存在於測試樣品中之任 何細胞溶解及/或使存在於測㈣品巾之任何分析物增溶 的試劑。如本文中進-步描述’並非所有樣品均必需予;： f尤其’使分析物（例如相關多狀）增溶可能使分析物^ 存在於樣品中之任何内源結合蛋白釋放。職理試劑可為 158366.doc • 84 - 201211252 均質的（無需分離步驟）或非均質的（需要分離步驟）。藉由 使用非均質預處理試劑，自測試樣品移除任何沈殺之 物、’Ό Q蛋白，隨後進行分析法之下一步驟。 <「品質控制試劑」在本文所述之免疫分析法及套組的情 形丁包括（但不限於）校準物、對照組及靈敏度組。通常使 Z「校準物」或「標準物」(例如一或多個，諸如複數個) /建立内插分析物(諸如抗體或分析物)濃度之校正(標準) 曲線。或者，可使用接近預定陽性/陰性截止之單一校準 物。可聯合使用多個校準物（亦即一種以上校準物或不同 量之校準物），以便構成「靈敏度組」。 風險」係指目前或在將來某個時點發生特定事件之可 月匕ί生或機率。「風險分層」係指使得醫師可將患者分成具 2發展特定疾病、病症或病狀之低、中、高或最高風險的 一系列已知臨床風險因子。 特生」在特異性結合對之成員（例如抗原（或其片段） 與抗體（或其抗原反應性片段）)之間的相互作用之情形下係 扣相互作用之選擇反應性。片語「特異性結合於」及其類 似片語係指抗體（或其抗原反應性片段）特異性結合於分析 物（或其片段）且不特異性結合於其他實體之能力。 「特異性結合搭配物」為特異性結合對之成員。特異性 結合對包含兩個不同分子，其經由化學或物理方式彼此特 異〖生結合。因此，除常見免疫分析法之抗原與抗體特異性 結合對以外，其他特異性結合對可包括生物素與抗生物素 蛋白（或抗生物蛋白鏈菌素）；碳水化合物與凝集素；互補 158366.doc -85- 201211252 核普酸序列；效應分子與受體分子；辅因子與酶；酶抑制 劑與酶，及其類似物。此外，特異性結合對可包括為初始 特異性結合成員之類似物的成員’例如分析物類似物。免 疫反應性特異性結合成員包括經分離或以重組方式產生之 抗原、抗原片段及抗體（包括單株及多株抗體），以及其複 合物、片段及變異體（包括變異體片段）。 如本文所用之「變異體」意謂因胺基酸之添加（例如插 入）、缺失或保守性取代而在胺基酸序列方面不同於既定 多肽⑼如^抓卜職^刪多^或抗多狀抗 體），但保留既定多肽之生物活性（例如變異體il_i8可與抗 IL-18抗體競爭結合IL-18)的多肽。此項技術中認為胺基酸 之保守性取代（亦即胺基酸經具有類似特性（例如親水性及 帶電區程度及分佈）之不同胺基酸置換）通常涉及微小變 化。如此項技術中所瞭解，可部分地藉由考慮胺基酸之親 水扣數來鑑別此等微小變化（參看例如Kyte等人，j Biol. 157: 105-132 (1982))。胺基酸之親水指數係基於對 其疏水性及電荷之考慮。在此項技術中已知具有類似親水 指數之胺基酸可經取代且仍保留蛋白質功能。在一個態樣 中，親水指數為±2之胺基酸經取代。胺基酸之親水性亦可 用於揭示將會產生保留生物功能之蛋白質的取代。對胺基 酸親水性之考慮在肽之情形下允許計算彼肽之最大局部平 均親水性，其為一種已經報導與抗原性及免疫原性密切相 關之適用量度（參看例如美國專利第4,554，1〇1號）。如此項 技術中所瞭解，具有類似親水性值之胺基酸之取代作用可 158366.doc -86· 201211252
產生保留生物活性（例如免疫原性）之肽。在一個態樣中， 用彼此親水性值在±2範圍内之胺基酸進行取代。胺基酸之 疏水性指數及親水性值皆受彼胺基酸之特定側鏈的影響。 與彼觀測結果一致，與生物功能相容之胺基酸取代作用據 瞭解係視版基酸，且尤其彼等胺基酸之側鏈之相對類似性 (如由疏水性、親水性、電荷、尺寸及其他特性所揭示）而 定。「變異體」亦可用於描述已經差異性處理（諸如藉由 蛋白質水解、磷酸化或其他轉譯後修飾），但仍保留生物 活性或抗原反應性（例如結合IL_ i 8之能力）的多肽或其片 段。除非上下文另有相反說明，否則本文中使用「變異 體」意欲涵蓋變異體之片段。 I·產生結合蛋白 提供能夠結合一或多個目標之雙可變區域結合蛋白及其 製備方法。在一實施例中，結合蛋白包含多肽鏈，其中該 多肽鏈包含VDl-(X1)n_VD2_c_(X2)n ’其中VD1為第一可 變區域，VD2為第二可變區域，c為恆定區域，幻表示胺 基酸或多肽’ X2表示Fc區’且。結合蛋白可使用 多種技術產生。提供產生結合蛋白之表現载體、宿主細胞 及方法。 A.產生親本單株抗趙 本文提供之結合蛋白之可變區域可自親本抗體（包括能 夠結合相關抗原之多株及mAb)獲得。此等抗體可天然存 在或可藉由重組技術產生。 MAb可使用此項技術中已知之多種技術製備，包括使用 158366.doc -87- 201211252 融合瘤、重組及噬菌體呈現技術或其組合。舉例而言，可 使用融合瘤技術產生mAb，包括此項技術中已知且例如在 以下文獻中教示之彼等融合瘤技術：Harlow等人， Antibodies: A Laboratory Manual, (Cold Spring Harbor Laboratory Press，第 2版.1988); Hammerling等人，Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas 563-681 (Elsevier, N.Y., 1 98 1)。如本文所用，術語「單株抗體」不限於經由融合 瘤技術產生之抗體。術語「單株抗體」係指來源於單一純 系，包括任何真核、原核或噬菌體純系之抗體，而非產生 其之方法。如下文實例1論述，選擇融合瘤，選殖且針對 所需特徵（包括旺盛融合瘤生長、高抗體產量及所需抗體 特徵）進一步篩選。融合瘤可在同基因型動物、缺乏免疫 系統之動物（例如裸小鼠）中活體内培養及擴增或在細胞培 養物中活體外培養及擴增。選擇、選殖及擴增融合瘤之方 法為一般技術者所熟知。在一特定實施例中，融合瘤為小 鼠融合瘤。在另一實施例中，融合瘤產生於非人類、非小 鼠物種中，諸如大鼠、綿羊、緒、山羊、牛或馬。在另一 實施例中，融合瘤為人類融合瘤，其中將人類非分泌性骨 髓瘤與表現能夠結合特異性抗原之抗體的人類細胞融合。 如美國專利第5,627,052號、PCT公開案WO 92/02551及 Babcock, J.S.等人，（1996) /Voc. iVai/· dcail iScz·· 93:7843-7848中所述，亦使用此項技術中稱為選擇淋巴細胞抗體法 (SLAM)之程序由單一經分離淋巴細胞產生重組mAb。在 此方法中，鑑別分泌相關抗體之單個細胞（例如來源於經 158366.doc -88- 201211252 免疫接種動物之淋巴細胞）’且藉由反轉錄酶pcR自細胞救 援重鏈及輕鏈可變區CDNA，且隨後可在適當免疫球蛋白 恆定區(例如人類恆定區)之情形下，於諸如⑽或ch〇細 胞之哺乳動物伯主細胞中表現此等可變區。隨後可例如藉 由淘選經源自活體内選擇之淋巴細胞之經擴增免疫球蛋白 序列轉染的宿主細胞以分離出表現針對相關抗原之抗體的 細胞，對經轉染細胞於活體外進行進一步分析及選擇。經 擴增免疫球蛋白序列可在活體外諸如藉由活體外親和力成
Ο 熟法（諸如PCT公開案WO 97/29131號及PCT公開案WO 00/56772中所述之方法）進一步操作。 单株抗體亦藉由以相關抗原對包含一些或全部人類免疫 球蛋白基因座的非人類動物免疫接種而產生。在一實施例 中，非人類動物為XENOMOUSE轉殖基因小鼠，其為包含 人類免疫球蛋白基因座之大片段且缺乏小鼠抗體產生之經 工程改造之小鼠品系。參看例如Green等人，
Geneiics 7:13-21 (1994)及美國專利第 5,916,771號、第 〇 5,939,598號、第 5,985,615號、第 5,998,209號、第 6,075,181 號、第6,091，001號、第6，1 14,598號及第6，13 0,3 64號。亦 參看1991年7月25日公開之WO 91/10741、1994年2月3日公 開之 WO 94/02602、1996 年 10 月 31 日公開之 WO 96/34096 及 WO 96/33 735、1998 年 4 月 23 日公開之 WO 98/16654、 1998年6月11日公開之WO 98/24893、1998年11月12日公開 之 WO 98/50433、1999 年 9 月 10 日公開之 WO 99/45031、 1999年10月21日公開之WO 99/53049、2000年2月24日公開 158366.doc •89- 201211252 之WO 00 09560 及 2000年 6 月 29日公開之WO 00/037504。 XENOMOUSE轉殖基因小鼠產生完全人類抗體之成年樣人 類譜系且產生抗原特異性人類單株抗體。XENOMOUSE轉 殖基因小鼠經由引入人類重鏈基因座及X輕鏈基因座之百 萬驗基（megabase)規模的生殖系構型YAC片段而含有約 80%人類抗體譜系。參看Mendez等人，iVaiMre Gewei/cs 15:146-156 (1997)，Green及Jakobovits ·/· Mei/· 188:483-495 (1998)。 亦可使用活體外方法來製備親本抗體，其中篩選抗體文 庫以鑑別具有所需結合特異性之抗體。該篩選重組抗體文 庫之方法為此項技術中所熟知且包括例如以下文獻中所述 之方法：Ladner等人，美國專利第5,223,409號；Kang等 人，PCT公開案第WO 92/18619號；Dower等人，PCT公開 案第WO 91/17271號；Winter等人，PCT公開案第WO 92/20791 號；Markland等人，PCT公開案第 WO 92/15679 號；Breitling 等人，PCT 公開案第 WO 93/01288 號； McCafferty 等人，PCT公開案第 WO 92/01047號；Garrard 等人，PCT公開案第WO 92/09690號；Fuchs等人，（1991) Bio/Technology 9Λ370-1372 ·，Hay等人，（1992) Hum Antibod Hybridomas 3:81-85 ； Huse^A, (1989) Science 246:1275-1281 ; McCafferty等人，iVaiwre (1990) 348:552-554 ; Griffiths # A, (1993) EMBO J 12:725-734 ； Hawkins# A, (1992) J Mo/ 5ζ·ο/ 226:889-896 ; Clackson等人，（1991) TVaiwre 352:624-628 ; Gram等人，（1992) PAMS 89:3576-3580 ; Garrad等人， 158366.doc -90- 201211252 (1991) Bio/Tec/mo/ogy 9:1373-1377 ; Hoogenboom 等人， (1991) 19:4133-4137 ;及 Barbas等人，（1991)
PiNMS 88:7978-7982 ;美國專利申請公開案20030186374及 PCT公開案第WO 97/29131號。 亦可使用此項技術中已知的多種噬菌體呈現法產生親本 抗體。在噬菌體呈現法中，功能性抗體結構域呈現於載有 編碼其之聚核苷酸序列之噬菌體粒子表面上。詳言之，可 利用該噬菌體呈現由譜系或組合抗體文庫（例如人類或鼠 〇 類）表現之抗原結合區域。可用抗原，例如使用經標記抗 原或結合或捕獲於固體表面或珠粒上之抗原來選擇或鑑別 表現結合相關抗原之抗原結合區域的噬菌體。此等方法中 所用之噬菌體通常為絲狀噬菌體，該噬菌體包括自Fab、 Fv或二硫化物穩定之Fv抗體結構域與噬菌體基因III或基因 VIII蛋白質重組融合之噬菌體表現的fd及M13結合區域。 噬菌體呈現法之實例包括以下文獻中揭示之方法·· Brinkman 等人，J. Immunol. Methods 182:41-50 (1995); ❹ Ames 等人，J. Immunol. Methods 184:177-186 (1995) ί Kettleborough等人，Eur. J. Immunol. 24:952-958 (1994); Persic等人，Gene 187 9-18 (1997) ; Burton等人，Advances in Immunology 57:191-280 (1994) ; PCT 申請案第 PCT/GB91/01134號；PCT公開案第 WO 90/02809號；第 WO 91/10737號；第 WO 92/01047號；第 WO 92/18619號；第 WO 93/11236號；第 WO 95/15982號；第 WO 95/20401 號； 及美國專利第5,698,426號；第5,223,409號；第5,403,484 158366.doc -91 - 201211252 號；第 5,580,717號；第 5,427,908號；第 5,750,753 號；第 5,821，047號；第 5,571，698號；第 5,427,908號；第 5,516,637 號；第 5,780,225號；第 5,658,727 號；第 5,733,743號及第 5,969，108 號。 如本文參考文獻中所述，在噬菌體選擇後，可自噬菌體 分離抗體編碼區且將其用於產生包括人類抗體之完整抗體 或任何其他所要抗原結合片段，且例如下文詳細描述，使 其於包括哺乳動物細胞、昆蟲細胞、植物細胞、酵母及細 菌之任何所要宿主中表現。舉例而言，亦可使用此項技術 中已知之方法使用重組產生Fab、Fab'及F(ab')2片段之技 術，諸如PCT公開案WO 92/22324 ; Mullinax等人， BioTechniques 12(6):864-869 (1992);及 Sawai 等人，AJRI 34:26-34 (1995);及 Better 等人，Science 240:1041-1043 (1988)。可用於產生單鏈Fv及抗體之技術的實例包括美國 專利 4,946,778 及 5,258,498 ； Huston 等人，Methods in Enzymology 203:46-88 (1991) ; Shu 等人，PNAS 90:7995-7999 (1993);及 Skerra等人，Science 240:1038-1040 (1988) 中所述之技術。 可應用此項技術中已知之篩選大型組合文庫之其他方法 替代用噬菌體呈現篩選重組抗體文庫來鑑別親本抗體。一 種類型之替代表現系統為如以下文獻中所述將重組抗體文 庫表現為RNA-蛋白質融合體之表現系統：Szostak及 Roberts之 PCT公開案第 WO 98/31700號，&Roberts，R.W. 及 Szostak, J.W. (1997) /Voc. TVa". Jcac/· iScz·· t/iSJ 94:12297- 158366.doc -92- 201211252 12302。在此系統令，在抓财與其藉由活體外轉譯在、 具有噪呤黴素（-種肽基受體抗生素）之合成mRNA而編碼 之肽或蛋白質之間形成共價融合體。因此，可基於所編碼 之狀或蛋白質（例如抗體或其部分）之特性（諸如抗體或其部 分與雙特異性抗原之結合），|mRNA之複雜混合物（例如 組合文庫）中富集特異性mRNA。可藉由如本文所述之重組 方式（例如在哺乳動物宿主細胞中）表現自該等文庫篩選回 &之編碼抗體或其部分之核酸序列，且此外，可藉由再進 〇 行幾輪已在最初選擇之序列中引入突變之mRNA_狀融合體 的篩選或藉由如本文所述使重組抗體活體外親和力成熟之 其他方法使該等核酸序列進一步親和力成熟。 在另方去中，亦可使用此項技術令已知的酵母呈現法 產生親本抗體。在酵母呈現法中，使用遺傳學方法將抗體 結構域繫栓於酵母細胞壁且使其在酵母表面上呈現。詳言 之，可利用該酵母來呈現由譜系或組合抗體文庫（例如人 類或鼠類）表現之抗原結合區域。可用於製備親本抗體之 酵母呈現法的貫例包括以引入之方式併入本文中的 等人’美國專利第6,699,658號。 本文所述之抗體可經進一步修飾產生CDR移植抗體及人 類化親本抗體。CDR移植親本抗體包含來自人類抗體之重 鏈及輕鏈可變區序列’其中VH及/或&的一或多個CDR區 經能夠結合相關抗原之鼠類抗體之CDR序列置換。來自任 何人類抗體之構架序列可用作CDR移植之模板。然而，該 構架上之直鏈置換通常導致對抗原之結合親和力在一定程 158366.doc •93- 201211252 度上損失。人類抗體與初始鼠類抗體之同源性愈高，組合 鼠類CDR與人類構架在CDR中引入可能降低親和力的失真 之可能性愈小。因此，在一實施例中，經選擇以置換除 CDR之外的鼠類可變構架之人類可變構架與鼠類抗體可變 區構架具有至少65%序列一致性。在一實施例中’人類與 鼠類可變區除CDR之外具有至少70%序列一致性。在一特 定實施例中，人類與鼠類可變區除CDR之外具有至少75% 序列一致性。在另一實施例中，人類與鼠類可變區除CDR 之外具有至少80%序列一致性。此項技術中已知產生該等 抗體之方法（參看EP 239,400 ; PCT公開案WO 91/09967 ; 美國專利第5,225,539號；第5,530，101號及第5,585,089 號）；面飾或表面重塑（EP 592,106 ; EP 519,596 ; Padlan， Molecular Immunology 28(4/5):489-498 (1991) ; Studnicka 等人，Protein Engineering 7(6):805-814 (1994) ; Roguska等 人，PNAS 91:969-973 (1994));及鏈改組（美國專利第 5,565，352號）；及抗個體基因型抗體。 人類化抗體為來自結合所要抗原之非人類物種抗體的抗 體分子，其具有一或多個來自非人類物種之互補決定區 (CDR)及來自人類免疫球蛋白分子之構架區。已知人類Ig 序歹|J 揭示於列士口 www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez-/query.fcgi ; www.atcc.org/phage/hdb.html ； www.sciquest.com/ ; www. abcam.com/ ; www.antibodyresource.com/onlinecomp.html ; www.pub 1 ic.iastate.edu/.about.pedro/research_tools.html ; www.mgen.uni-heidelberg.de/SD/IT/IT.html ； www.whfreeman.com/ 158366.doc • 94· 201211252 immunology/CH-05/kuby05.htm ； www.library.thinkquest.org/ 12429/Immune/Antibody.html ； www.hhmi.org/grants/lectures/ 1996/vlab/ i www.path.cam.ac.uk/.about.mrc7/m-ikeimages.html ;www.antibodyresource.com/ ； mcb.harvard.edu/BioLinks/ Immuno-logy.html.www.immunologylink.com/ ； pathbox.wustl. edu/.about.hcenter/index.-html ； www.biotech.ufl.edu/.about.hcl/
;www.pebio.com/pa/340913/340913.html- ; www.nal.usda.gov/ awic/pubs/antibody/ ; www.m.ehime-u.acjp/.about.yasuhito-/Elisa.html ； www.biodesign.com/table.asp ； www.icnet.uk/ axp/facs/davies/lin-ks.html ； www.biotech.ufl.edu/.about.feel/ protocol.html ； www.isac-net.org/sites_geo.html ； aximtl.imt.uni-marburg.de/.about.rek/AEP- Start.html ； baserv.uci.kun.nl/ .about.jraats/linksl.html ； www.recab.uni-hd.de/immuno.bme.nwu.edu/ ; www.mrc-cpe.cam.ac.uk/imt-doc/pu-blic/INTRO.html ; www.ibt.unam.mx/vir/V_mice.html ; imgt.cnusc.fr:8104/ ; www.biochem.ucl.ac.uk/.about.martin/abs/index.html i antibody. bath.ac.uk/ ； abgen.cvm.tamu.edu/lab/wwwabgen.html ； www.unizh.ch/ .about.honegger/AHOsem-inar/SlideO 1 .html ; www.cryst.bbk. ac.uk/.about.ubcg07s/ ； www.nimr.mrc.ac.uk/CC/ccaewg/ccaewg.htm ;www.path.cam.ac.uk7.about.mrc7/h-umanisation/TAHHP.html ; www.ibt.unam.mx/vir/structure/stat_aim.html ； www.biosci. missouri.edu/smithgp/index.html ； www.cryst.bioc.cam.ac.uk/ .abo-ut.fmolina/Web-pages/Pept/spottech.html ； www.jerini.de/ frroducts.htm ; www.patents_ibm.eom/ibm.html ; Kabat 等 158366.doc •95· 201211252 人，Sequences of pr〇teins 〇f immun〇i〇gical Interest, u.s
Dept· Health (1983)中。該等輸入序列可用於降低免疫原 性或降低、增強或改變結合、親和力、締合速率、解離速 率、親合力、特異性、半衰期或如此項技術中已知之任何 其他適合特徵。 可用來自CDR供體抗體之相應殘基取代人類構架區中之 構架殘基以改變、例如改良抗原結合。此等構架取代係由 此項技術中熟知之方法鑑別，例如藉由建立CDR與構架殘 基相互作用模型以鑑別對抗原結合重要之構架殘基以及進 行序列比較以鑑別特定位置之異常構架殘基。（參看例如 Queen等人’美國專利第5,585,089號；Riechmann等人， Nature 332:323 (1988))。三維免疫球蛋白模型為常用的且 為熟習此項技術者所熟悉。可利用說明及顯示所選候選免 疫球蛋白序列之可能三維構形結構的電腦程式。對此等顯 示之檢驗准許分析殘基在候選免疫球蛋白序列發揮功能過 程中的可能作用’亦即，分析影響候選免疫球蛋白結合其 抗原之能力的殘基。以此方式，可自共同及輸入序列選擇 FR殘基且將其組合以便達成所要之抗體特徵，諸如對目標 抗原之親和力增加。一般而言，CDR殘基直接且最大程度 上參與影響抗原結合。可使用此項技術中已知之多種技術 使抗體人類化，諸如（但不限於）Jones等人，Nature 321:522 (1986) ; Verhoeyen 等人，Science 239:1534 (1988)) ; Sims 等人，J. Immunol. 151: 2296 (1993) ； Chothia 及 Lesk，J.
Mol. Biol. 196:901 (1987); Carter等人，Proc. Natl. Acad. 158366.doc -96· 201211252
Sci. U.S.A. 89:4285 (1992) ; Presta 等人，J. Immunol. 151:2623 (1993), Padlan, Molecular Immunology 28(4/5):489-498 (1991) ; Studnicka等人，Protein Engineering 7(6):805-814 (1994) ; Roguska.等人，PNAS 91:969-973 (1994) ; PCT 公開案 WO 91/09967 ; PCT/: US 98/16280 ; US 96/18978 ; US 91/09630 ； US 91/05939 ； US 94/01234 ； GB 89/01334 ； GB 91/01134 ； GB 92/01755 ； WO 90/14443 ； WO 90/14424 ； WO 90/14430 ； EP 229246 ； EP 592,106 ； EP 519,596 ； EP 〇 239,400 ;美國專利第 5,565,332 號、第 5,723,323 號、第 5,976,862號、第 5,824,514號、第 5,817,483號、第5,814,476 號、第5,763,192號、第 5,723,323號、第 5,766,886號、第 5,714,352號、第 6,204,023號、第 6，180,370號、第 5,693,762 號、第 5,530，101號、第 5,585,089號、第 5,225,539號、第 4,816,567號中所述之技術。 B.選擇親本單株抗體之準則 在一實施例中，選擇具有DVD-Ig分子所要之至少一或 ◎ 多種特性的親本抗體。在一實施例中，所要特性係選自一 或多種抗體參數。在另一實施例中，抗體參數為抗原特異 性、對抗原之親和力、效能、生物功能、抗原決定基識別 性、穩定性、溶解度、生產效率、免疫原性、藥物動力 學、生物可用性、組織交叉反應性或直系同源抗原結合 性。 B1.對抗原之親和力 治療性mAb之所要親和力可視抗原性質及所要治療終點 158366.doc -97· 201211252 而定。在一實施例中，當單株抗體阻斷細胞激素_細胞激 素受體相互作用時，其具有較高親和力（Kd=〇 PM) ’因為該等相互作用通常為高親和力相互作用（例如 <pM-<nM範圍）。在該等情形下，福對其目標之親和力 應等於或高於細胞激素（配位體）對其受體之親和力。另一 方面，親和力較小（>nM範圍）imAb可在治療上有效用於 例如清除循環之潛在病原性蛋白質，該mAb例如結合、螯 合及清除Α-β類澱粉蛋白之循環物質的單株抗體。在其他 情形下’藉由定點突變誘發降低現有高親和力mAb之親和 力或使用對目標具有較低親和力之mAb可用於避免潛在副 作用，例如高親和力mAb可螯合/中和其所有預期目標，從 而完全消耗/消除所靶向之蛋白質的功能。在此情形下， 低親和力mAb可螯合/中和目標中可能造成疾病症狀（病理 性或過度產生之含量）之部分，從而使目標之一部分可繼 續執行其正常生理功能。因此，有可能降低Kd以調整劑量 及/或降低副作用。親本mAb之親和力可能在適當靶向細胞 表面分子方面起作用以實現所要治療結果。舉例而言，若 目標以高密度表現於癌細胞上且以低密度表現於正常細胞 上’則較低親和力mAb將在腫瘤細胞上結合比在正常細胞 上數目多之目標’使得經由ADCC或CDC引起腫瘤細胞消 除，且因此可能產生所要治療效應。因此，選擇具有所要 親和力之mAb可能與可溶性目標與表面目標兩者均相關。 受體在與其配位體相互作用後引起之信號傳導可視受 體-配位體相互作用之親和力而定。類似地，可設想mAb 158366.doc 98- 201211252 對表面受體之親和力可決定細胞内信號傳導之性質及mAb 可傳遞促效劑信號還是傳遞拮抗劑信號。mAb介導之信號 傳導的基於親和力之性質可影響其副作用概況。因此，需 要藉由活體外及活體内實驗仔細確定治療性單株抗體之所 要親和力及所要功能。 結合蛋白（例如抗體）之所要Kd可視所要治療結果以實驗 方式確定。在一實施例中，選擇對特定抗原之親和力（Kd) 等於或大於DVD-Ig對同一抗原之所要親和力的親本抗
體。藉由Biacore或另一類似技術評估抗原結合親和力及動 力學。在一個實施例中，各親本抗體對其抗原之解離常數 (Kd)為：最多約1〇·7 μ ;最多約1〇·8 M ;最多約1〇.9 M ;最 多約ΙΟ·10 Μ ;最多約ίο-丨丨M ;最多約1〇-丨2 M ;或最多ι〇·π Μ。獲得VD1之第一親本抗體及獲得VD2之第二親本抗體 可對各別抗原具有類似或不同親和力（Kd)。纟親本抗體對 抗原之締合速率常數（K〇n)為：至少約1〇2 μ、];至少約 1〇3 M-V1 ;至少約104 Μ-、-丨；至少約1〇5 或至少 ’、’勺10 M S ，如表面電漿子共振所量測。獲得VD丨之第一 親本抗體及獲得VD2之第二親本抗體可對各別抗原具有類 :或不同之締合速率常數(κ〇η)。在一個實施例中各親本 抗體對抗原之解離速率常數（K〇ff)為：最多約ι〇_3 ^ ;最 多約HTV1 ;最多約10-5〆；或最多約1〇·6，，如表面電 衆子共振所量測，。獲得彻之第—親本抗體及獲得VD2 之第二親本抗體可對各別抗原具有類似或不同解 數（Koff)。 千¥ 158366.doc -99- 201211252 Β2·效能 親本單株抗體之所要親和力/效能將視所要治療結果而 定。舉例而言，對於受體-配位體（R-L)相互作用，親和力 (kd)等於或大於r_l kd(PM範圍）。為簡單清除病理性循環 蛋白質，例如清除各種循環Α-β肽物質，kd可能處於低nM 範圍内。此外’ Kd亦將視目標是否表現相同抗原決定基之 多個複本而定’例如mAb把向Αβ寡聚物中之構形抗原決定 基。 若VDI與VD2結合相同抗原但結合不同抗原決定基，則 DVD-Ig將含有4個結合相同抗原之位點，因此增大親合力 且從而增大DVD-Ig之表觀kd。在一實施例中，選擇kd等 於或小於DVD-Ig之所要kd的親本抗體。對親本111八1)之親和 力考慮因素亦可視DVD-Ig是否含有4個或4個以上相同抗 原結合位點（亦即來自單個mAb之DVD-Ig)而定。在此情形 下，表觀kd由於親合力而大於mAb。該等DVD_Ig可用於使 表面受體交聯、增大中和效能、增強對病理性蛋白質的清 除等。 在一實施例中，選擇對特異性抗原之中和效能等於或大 於DVD-Ig對相同抗原之所要中和潛力的親本抗體。可藉 由目標依賴性生物分析法評估中和效能，其中適當類型之 細胞回應於目標刺激而產生可量測信號（亦即增殖或細胞 激素產生），且由mAb對目標之中和可以劑量依賴性方式 減弱該信號。 B3.生物功能 158366.doc -100· 201211252 單株抗體可潛在地執行若干功能。一些此等功能列於表 1中。此等功能可由活體外分析法（例如基於細胞之分析法 及生物化學分析法）及活體内動物模型來評估。 表1 :治療性抗體的一些潛在應用 目標(類別） 作用機制（目標） __- 可溶性(細胞激素，其 他） 中和活性(例如細胞激素） 增強清除(例如Αβ募聚物） 增加半衰期(例如GLP 1) ___ 細胞表面 (受體，其他） 促效劑(例如GLP1 R ; EPOR等） 拮抗劑(例如整合素等） 細胞毒素(CD 20等） __一 蛋白質沈積物 _ —增強清除/降解(例如Αβ斑塊，澱粉樣蛋白晳沈精物） 可選擇具有本文實例中於表1中所述之不同功能的MAb 以實現所要治療結果。接著可以DVD-Ig形式使用兩種或 兩種以上所選親本單株抗體以在單一 DVD-Ig分子中實現 兩種不同功能。舉例而言，可藉由選擇中和特定細胞激素 功能之親本mAb及選擇增強對病理性蛋白質之清除的親本 mAb來產生DVD-Ig。類似地，吾人可選擇識別兩種不同細 胞表面受體之兩種親本單株抗體，一種mAb對一種受體具 有促效劑功能，且另一種mAb對另一受體具有拮抗劑功 能。此等兩種各具有不同功能之所選單株抗體可用於建構 單一 DVD-Ig分子，在單一分子中具有所選單株抗體之兩 種不同功能（促效劑及拮抗劑）。類似地，兩種各阻斷各別 受體配位體（例如EGF及IGF)結合之針對細胞表面受體具有 拮抗性之單株抗體可以DVD-Ig形式使用。相反，可選擇 拮抗性抗受體mAb(例如抗EGFR)及中和抗可溶介體（例如 158366.doc -101- 201211252 抗 IGFl/2)mAb來製備 DVD_Ig。 B4·抗原決定基識別性 蛋白質之不同區可執行不同功能。舉例而言，細胞激素 之特疋區與細胞激素受體相互作用以引起受體活化，而蛋 白質之其他區可能為使細胞激素穩定所需。在此情形下， 可選擇特異性結合至細胞激素上之受體相互作用區之mAb 且因此阻斷細胞激素_受體相互作用。在一些情形下，例 如某些結合多個配位體之趨化因子受體情形下，可選擇結 &於僅與一種配位體相互作用之抗原決定基（趨化因子受 體上之區）的mAb。在其他情形下，雖然單株抗體可結合 於目標上不直接負責蛋白質生理功能之抗原決定基，但使 mAb結合於此等區會干擾蛋白質的生理功能（位阻）或改變 蛋白質構形’使得蛋白質不能起作用（mAb與具有多個配 位體之受體結合會改變受體構形，使得任何一個配位體皆 無法結合）。亦已鑑別出不阻斷細胞激素與其受體結合但 阻斷信號轉導之抗細胞激素單株抗體（例如125_2H，一種 抗 IL- 1 8 mAb)。 抗原決定基及mAb功能之實例包括（但不限於）阻斷受體_ 配位體（R-L)相互作用（中和結合R_相互作用位點之mAb); 引起R-結合減少或無R-結合之位阻。雖然Ab可在除受體|士 合位點以外之位點處結合目標，但仍因誘導構形變化而干 擾目標之受體結合及功能’且消除功能（例如χ〇1 air)、龄 合於R但阻斷信號傳導（125-2H)。 在一實施例中，親本mAb需要靶向適當抗原決定基以實 158366.doc -102- 201211252 現最大功效。該抗原決定基在DVD-Ig中應為保守的。mAb 之結合抗原決定基可由若干方法來確定，包括共結晶術、 mAb-抗原複合物之限制性蛋白質水解加上質譜肽圖譜分 析（mass spectrometric peptide mapping)(Legros V.等人， 2000 Protein Sci· 9:1002-10)、噬菌體呈現肽文庫（O’Connor KH等人，2005 J Immunol Methods. 299:21-35)以及突變誘 發（Wu C.等人，2003 J Immunol 170:5571-7)。 B5.物理化學及醫藥特性 〇 以抗體進行治療性治療通常需要投與高劑量，通常為每 公斤數毫克（歸因於因分子量通常較大而以質量計之效能 較低）。為了調節患者順應性且為了適當處理慢性疾病療 法及門診患者治療，需要皮下（S.C.)或肌肉内（i.m.)投與治 療性mAb。舉例而言，皮下投與之所要最大體積為約1 ·0 mL，且因此，需要>1 00 mg/mL之濃度以限制每劑量之注 射次數。在一實施例中，以單劑量投與治療性抗體。然 而，該等調配物之開發受限於蛋白質-蛋白質相互作用（例 〇 如潛在地增大免疫原性風險之聚集）及在加工及傳遞期間 之限制因素（例如黏度）。因此，臨床功效所需之大量及相 關開發限制因素會限制抗體調配物之潛能之充分利用及以 高劑量方案皮下投藥。顯然蛋白質分子及蛋白質溶液之物 理化學及醫藥特性（例如穩定性、溶解度及黏度特徵）極為 重要。 B5.1.穩定性 「穩定」抗體調配物為抗體在儲存後基本上保留其物理 158366.doc -103- 201211252 穩定性及/或化學穩定性及/或生物活性的調配物。可量測 在所選溫度下，所選時段内之穩定性。在一實施例中，調 配物中之抗體在室溫（約30°C )下或在40°C下穩定至少！個月 及/或在約2至8°C下穩定至少1年、至少2年。此外，在— 實施例中，調配物在將調配物冷凍（至例如_7〇°c )及解來 (下文稱作「凍/融循環」）後為穩定的。在另一實例中， 「穩定」調配物可為調配物中少於約1 〇%及少於約5%之蛋 白質以聚集體形式存在之調配物。 在各種溫度下在活體外長時段穩定之DVD-Ig為合乎需 要的。可藉由快速篩選在高溫下（例如在4〇。〇下）在活體外 穩定2-4週之親本mAb來達成此目的，接著評估穩定性。 在2-8°C下儲存期間，蛋白質在至少12個月，例如至少24 個月内展現穩定性。穩定性（完整單體分子之百分比）可使 用各種技術（諸如陽離子交換層析、尺寸排阻層析、S d s _ PAGE以及生物活性測試）來評估。關於可用於分析共價及 構形修飾之分析技術的更全面列舉，參看jones, A. j. s (1993) Analytical methods for the assessment of protein formulations and delivery systems ； Cleland, J. L.; Langer R.編，Formulation and delivery of peptides and proteins 第 1 版，Washington, ACS,第 22-45 頁；及 peariman R · Nguyen, T. H.(1990) Analysis of protein drugs ； Lee, V H 編，Peptide and protein drug delivery，第 1版，New York Marcel Dekker，Inc.,第 247-301 頁。 異質性及聚集體形成：抗體之穩定性可使調配物可顯示 158366.doc •104· 201211252 低於約ίο%，且在一實施例中低於約5%，在另一實施例中 低於約2。/。，或在-實施例中在〇5%h篇之範圍内或更 少之GMP抗體物質以聚集體形式存在。尺寸排阻層析為一 種靈敏、可再現且極穩固之摘測蛋白質聚集體的方法。 除低聚集體含量之外，在—實施财，抗體必需化學穩 定。化學穩定性可由離子交換層析（例如陽離子或陰離子 交換層析）、疏水性相互作用層析或諸如等電聚焦或毛細 f電泳之其他方法來測定。舉例而言，抗體之化學穩定性 G可使得在2-8。(：下儲存至少12個月後，相較於儲存測試前 之抗體溶液，陽離子交換層析中表示未經修飾之抗體的峰 值可能增加最多2〇%，在一實施例中增加最多1〇%，或在 另一實施例中增加最多5 %。 在一實施例中，親本抗體呈現結構完整性、正確二硫鍵 形成及正確摺疊：歸因於抗體二級或三級結構變化之化學 不穩定性可影響抗體活性。舉例而言，如由抗體活性所: 示之穩定性可使得在2-8。(：下儲存至少12個月後，相較於 〇 儲存測試前之抗體溶液，抗體活性可降低最多5〇%，在— 實施例中降低最多30%、或甚至降低最多1〇%，或在一實 施例中降低最多5%或1%。可使用適合抗原結合分析法來 測定抗體活性。 B5.2.溶解度 mAb之「溶解度」與正確摺疊之單體IgG的產生相關。 因此，可藉由HPLC評估IgG之溶解度。舉例而言，可溶性 (單體）IgG將在HPLC層析譜上產生單峰，而不溶（例如多聚 158366.doc •105· 201211252 體及聚集體）IgG將產生複數個峰。因此熟習此項技術者將 能夠使用常規HPLC技術偵測IgG溶解度的增加或降低。關 於可用於分析溶解度之分析技術的更全面列舉（參看J0nes， A. G. Dep. Chem. Biochem. Eng., Univ. Coll. London, London, UK.編者：Shamlou，P. Ayazi. Process. Solid-Liq.
Suspensions (1993)，93-117·出版商：Butterworth-Heinemann，
Oxford, UK and Pearlman, Rodney; Nguyen, Tue H, Advances in Parenteral Sciences (1990), 4 (Pept. Protein
Drug Delivery)，247-301)。治療性mAb之溶解度對於調配 成足量給藥通常所需之高濃度而言至關重要。如本文所概 述，可能需要大於1〇〇 mg/mL之溶解度以適應有效抗體給 藥。舉例而言，抗體溶解度在研究初期可能不低於約$ mg/mL，在一實施例中’在過程科學後期不低於約Μ mg/mL，或在一實施例中，不低於約i〇〇 ，或在一 實施例中，不低於約15〇 mg/mL。熟習此項技術者顯而易 見，蛋白質分子之固有特性對於蛋白質溶液之物理化學特 性（例如穩定性、溶解度、 黏度）而$為重要的。然而，熟 習此項技術者應瞭解存 在夕種可用作添加劑以有利影塑最 終蛋白質調配物之特微的轴r *丨 幵做的Η形劑。此等賦形劑可包 液體溶劑、共溶劑（例如 丨』匕括.⑴
如磷酸鹽、乙酸鹽、 衝J ί J 铋酸鹽、胺基酸緩衝 糖醇（例如蔗糖、海瘅榼 ，（U1)糖或 母屬糖、果糖、棉子 梨糖醇、聚葡萄糖）.Γ、田 糖甘路搪醇、山 9η取， ，（V)界面活性劑（例如聚山犁醇酯 20、聚山梨醇酯4〇 山木醉a曰 山4醇酯60、聚山梨醇酯8〇、泊洛 158366.doc •106· 201211252 沙姆⑽⑽咖0) ; (V)等張性調節劑（例如，諸如NaCk 鹽、糖、糖醇）；及(vi)其他賦形劑(例如防腐劑、螯合 劑、抗氧化劑、螯合物質（例如EDTA)、生物可降解聚合 物、載劑分子（例如HAS、PEG))。 黏度為與抗體製造及抗體加工（例如透滤/超遽）、填充_ 精整製程（果送態樣、過濾態樣）及傳遞態樣（可注射性、完 善裝置傳遞）有關之極重要參數。低黏度使抗體之液體溶 &能夠具有較高濃度。此使得可能以較小體積投與相同劑 量小/主射體積固有注射疼痛感覺較小之優勢，且溶液不 -定必需為等張的以減輕患者注射時之疼痛。抗體溶液之 黏度可使得在100 (1/s)之剪切速率下，抗體溶液黏度低於 200 mPa s，在一實施例中，低於125 mpa s，在另一實施 例中，低於70 mpa s，且在另一實施例中，低於25 mpa s 或甚至低於10 mPa s。 B 5.3.生產效率 、 在一實施例中，有效表現於哺乳動物細胞（諸如中國倉
◎ 鼠卵巢細胞（CHO))中之DVD-Ig的產生將需要兩種自身有 效表現於哺乳動物細胞中之親本單株抗體。來自穩定哺乳 動物細胞株（亦即CHO)之產率應高於約〇.5 g/L，在一實施 例中’咼於約1 g/L，且在另一實施例中，在約2至約5 g/L 或 5 g/L 以上之範圍内（Kipriyanov SM，Little Μ. 1999 Mol
Biotechnol. 12:173-201 ； Carroll S, Al-Rubeai M. 2004 Expert Opin Biol Ther. 4:1821-9) o 在哺乳動物細胞中抗體及Ig融合蛋白之產生受若干因素 158366.doc -107- 201211252 影響。經由併入強啟動子、強化子及選擇標記對表現載體 進行工程改造，可使相關基因自整合載體複本之轉錄最大 化。對允許高度基因轉錄之載體整合位點的鑑別可增加蛋 白質自載體表現（Wurm 等人，2004, Nature Biotechnology， 2004，第22卷/第11期/第（1393-1398)頁）。此外，生產含量 受抗體重鏈與輕鏈之比率及蛋白質組裝與分泌過程中之各 種步驟影響（Jiang等人，2006, Biotechnology Progress，2006 年1月-2月，第22卷，第1期，第313_8頁）。 B 6·免疫原性 投與治療性mAb可能引起特定免疫反應發生（亦即形成 針對治療性mAb之内源抗體）^在選擇親本單株抗體期間 應分析可能誘導免疫原性之潛在要素，且可採取降低該風 險之步驟以在DVD-Ig建構前最佳化親本單株抗體。已發 現來源於小鼠之抗體在患者中具有高度免疫原性。包含小 鼠可變區及人類恆定區之嵌合抗體的產生為降低治療性抗 體免疫原性之下一合乎邏輯之步驟（M〇rris〇n及Schi〇m， 1990)。或者，如由Riechmann等人，1988關於治療性抗體 所述’可藉由將鼠類CDR序列轉移至人類抗體構架中（重 塑/CDR移植/人類化）來降低免疫原性。另一方法稱為「表 面重塑」或「面飾」，其以齧齒動物可變輕鏈結構域及重 鏈結構域起始，僅將表面可接觸之構架胺基酸變為人類之 構架胺基酸，同時CDR及内埋之胺基酸仍來自親本齧齒動 物抗體（Roguska等人，1996)。在另一類型人類化中，一種 技術僅移植「特異性決定區」（SDR)而非移植整個CDR， 158366.doc 201211252 該等SDR定義為抗體與其目標結合中所涉及之CDR殘基子 集（Kashmiri等人，2005)。此使得有必要經由分析抗體-目 標複合物之可利用三維結構或對抗體CDR殘基進行突變分 析以確定與目標相互作用之殘基來鏗別SDR。或者，相較 於鼠類、嵌合或人類化抗體，完全人類抗體可具有降低之 免疫原性。 另一降低治療性抗體之免疫原性的方法為消除某些經預 測具有免疫原性之特異性序列。在一種方法中，在人類中 〇 測試第一代生物製劑且發現其具有不可接受之免疫原性 後，可對B細胞抗原決定基進行定位，接著改變以避免免 疫偵測。另一方法使用預測及移除潛在T細胞抗原決定基 之方法。已開發出計算方法來掃描且鑑別有可能結合於 MHC蛋白質之生物治療劑之肽序列（Desmet等人，2005)。 或者，可使用基於人類樹突狀細胞之方法鑑別潛在蛋白質 過敏原中之CD4+ T細胞抗原決定基（Stickler等人，2005; S.L. Morrison and J. Schlom, Important Adv. Oncol. (1990), 〇 第 3-18 頁；Riechmann，L.，Clark, M·，Waldmann, H.及 Winter, G. 「Reshaping human antibodies for therapy.」 Nature (1988) 332: 323-327 ； Roguska-M-A, Pedersen-J-T, Henry-A-H, Searle-S-M, Roja-C-M, Avery-B, Hoffee-M, Cook-S, Lambert-J-M, Blattler-W-A, Rees-A-R, Guild-B-C. A comparison of two murine mAbs humanized by CDR-grafting and variable domain re surfacing. Protein engineering，{Protein-Eng}，1996，第 9 卷，第 895-904 頁； 158366.doc -109- 201211252
Kashmiri-Syed-V-S, De-Pascalis-Roberto, Gonzales-Noreen-R, Schlom-Jeffrey. SDR grafting--a new approach to antibody humanization. Methods (San Diego Calif.), {Methods}, 2005 年 5 月，第 36卷，第 1 期，第 25-34 頁；Desmet-Johan, Meersseman-Geert, Boutonnet-Nathalie, Pletinckx-Jurgen, De-Clercq-Krista, Debulpaep-Maja, Braeckman-Tessa, Lasters-Ignace. Anchor profiles of HLA-specific peptides: analysis by a novel affinity scoring method and experimental validation. Proteins, 2005,第 58卷，第 53-69 頁；Stickler-M-M, Estell-D-A，Harding-F-A. CD4+ T-cell epitope determination using unexposed human donor peripheral blood mononuclear cells. Journal of immunotherapy 2000，第 23卷，第 654-60 頁）。 B 7.活體内功效 為產生具有所要活體内功效之DVD-Ig分子，重要的是 產生且選擇在以組合形式給予時具有類似所要活體内功效 的mAb。然而，在一些情形下，DVD-Ig可能展現2種獨立 mAb之組合無法實現的活體内功效。舉例而言，DVD-Ig可 使2個目標緊密鄰近，從而產生由2個獨立mAb之組合無法 實現的活性。其他所要生物功能於本文B 3章節中描述。 具有DVD-Ig分子中所要之特徵的親本抗體可基於諸如藥 物動力學伙；組織分佈；可溶性目標相對於細胞表面目 標；及目標濃度（可溶性）/密度（表面）之因素來選擇。 B 8.活體内組織分佈 158366.doc •110- 201211252 為產生具有所要活體内組織分佈之DVD-Ig分子，在— 貫施例中，必需選擇具有類似所要之活體内組織分佈概況 之親本mAb。或者，基於雙特異性靶向策略之機制，在其 他情形下可能不需要選擇在以組合形式給予時具有同樣所 要之活體内組織分佈的親本舉例而言，在一結合組 分使DVD-Ig靶向一特異性位點，從而將第二結合組分引 至同一目標位點之DVD-Ig的情況下即如此。舉例而言， DVD-Ig之一結合特異性可輕向騰臟（騰島細胞），且另—特 〇 異性可將GLP1引至胰臟以誘導胰島素。 B 9.同型 在一實施例中’為了產生具有所要特性（包括（但不限於） 同型、效應功能及循環半衰期）之DVD-Ig分子，視治療效 用及所要治療終點而定選擇具有適當Fc效應功能之親本 mAb。存在5個主要重鏈類別或同型，其中一些具有若干 亞型且此等類別或同型決定抗體分子之效應功能。此等效 應功能存在於抗體分子之鉸鏈區、CH2及CH3區域中。然 C) 而’抗體分子之其他部分中之殘基亦可能對效應功能有影 響。鉸鏈區Fc效應功能包括：⑴抗體依賴性細胞毒性； (ii) 補體（Clq)結合、活化及補體依賴性細胞毒性（CDC); (iii) 對抗原-抗體複合物之吞噬/清除；及（iv)在一些情形 下，細胞激素釋放。抗體分子之此等Fc效應功能係經由Fc 區與一組類別特異性細胞表面受體之相互作用來介導。 IgGl同型抗體最具活性，而lgG2及IgG4具有最小效應功能 或不具有效應功能。IgG抗體之效應功能係經由與3種結構 158366.doc • 111 - 201211252 上同源之細胞Fc受體類型（及亞型）（FcgRl、FcgRII及 FcgRIII)相互作用來介導。可藉由使下游鉸鏈區中為FcgR 及ciq結合所要之特定胺基酸殘基（例如L234A、l235A)突 變來消除IgGl之此等效應功能。以區（尤其CH2_CH3區域） 中之胺基酸殘基亦決定抗體分子之循環半衰期。此Fc功能 係經由Fc區與新生兒Fc受體（FcRn)之結合來介導，該結合 負責使抗體分子自酸性溶酶體再循環回全身循環中。 mAb是否應具有活性或非活性同型將視抗體之所要治療 終點而疋。同型之使用及所要治療結果之一些實例列於下 文： a) 若所要終點為功能性中和可溶性細胞激素，則可使 用非活性同型； b) 若所要結果為清除病理性蛋白，則可使用活性同 型； c) 右所要結果為清除蛋白質聚集體，則可使用活性同 型； d) 若所要結果為拮抗表面受體，則使用非活性同型（泰 沙比（Tysabri) ’ IgG4 ; OKT3，突變型IgG1); e) 若所要結果為消除目標細胞，則使用活性同型（赫赛 汀（Herceptin)，IgG1(且具有增強之效應功能））；及 f) 若所要結果為自循環清除蛋白質而不進入cns中，則 可使用IgM同型（例如清除循環Ab肽物質）。 親本mAb之Fc效應功能可由此項技術中熟知之各種活體 外方法來測定。 158366.doc -112- 201211252 如所論述，對同型之選擇，及從而對效應功能之選擇將 視所要治療終點而定。在需要簡單中和循環目標（例如阻 斷受體-配位體相互作用）之情形下，可能不需要效應功 能。在該等情形下，抗體之消除效應功能之同型或Fc區中 之突變為合乎需要的。在消除目標細胞為治療終點（例如 消除腫瘤細胞）之其他情形下，增強效應功能之同型或Fc 區中之突變或去海藻糖基化（(^-[11<：03713^011)為合乎需要的 (Presta GL, Adv. Drug Delivery Rev. 58:640-656, 2006 ； O Satoh M., Iida S., Shitara K. Expert Opinion Biol. Ther. 6:1161-1173, 2006)。類似地，視治療效用而定，抗體分子 之循環半衰期可藉由在Fc區中引入特定突變來調節抗體-FcRn相互作用而縮短 /延長（Dall'Acqua WF，Kiener PA, Wu H. J. Biol. Chem. 281:23514-23524, 2006 ； Petkova SB., Akilesh S.，Sproule TJ.等人，11^61*11&1:.11111111111〇1.18:1759-1769，2006 ; Vaccaro C.，Bawdon R., Wanjie S 等人，PNAS 103:18709-18714, 2007)。 C) 關於DVD-Ig，可能需要確認關於影響正常治療性mAb之 不同效應功能之多種殘基的公開資訊。在DVD-Ig形式 中，除經鑑別用於調節單株抗體效應功能之Fc區殘基以外 之其他（不同）Fc區殘基有可能會很重要。 總之，關於最終DVD-Ig形式中關鍵之Fc效應功能（同型） 之決定將視疾病適應症、治療目標、所要治療終點及安全 考慮因素而定。下文列出例示性適當重鏈及輕鏈恆定區， 包括（但不限於）： 158366.doc -113- 201211252 〇 IgGl -異型：Glmz o IgGl 突變體-Α234 ' Α235 o IgG2 -異型：G2m(n-) ο κ-Km3 ο λ
Fc受體及Clq研究：可藉由（例如L234A、L235A)鉸鏈區 突變來消除以下可能性：由抗體與細胞膜上任何過度表現 之目標複合引起的不合需要之抗體依賴性細胞介導之細胞 毒性（ADCC)及補體依賴性細胞毒性（CDC)。預期存在於 mAb之IgGl鉸鏈區中的此等經取代胺基酸會使mAb與人類 Fc受體（而非FcRn)之結合減少，因為認為FcgR結合發生於 IgG 1鉸鏈區上之重疊位點内。mAb之此特徵可使其安全概 況比含有野生型IgG之抗體有所改良。mAb與人類Fc受體 之結合可藉由流動式細胞量測實驗使用細胞株（例如THP-1、K562)及表現FcgRIIb(或其他FcgR)之經工程改造之 CHO細胞株來測定。相較於IgGl對照單株抗體，mAb展示 與FcgRI及FcgRIIa之結合降低，而與FcgRIIb之結合不受影 響。由抗原/IgG免疫複合物結合及活化Clq引發典型補體 級聯，及後續發炎性及/或免疫調節反應。IgG上之Clq結 合位點已定位至IgG鉸鏈區内之殘基。藉由Clq ELIS A評估 C 1 q與遞增濃度之mAb的結合。結果表明如所預期，當與 野生型對照IgGl之結合相比時，mAb不能結合C lq。總 之，L234A、L235A鉸鏈區突變消除mAb與FcgRI、 FcgRIIa及Clq之結合，但不影響mAb與FcgRIIb之相互作 158366.doc -114- 201211252 用。此數據表明雖然具有突變型Fc之mAb通常將在活體内 與抑制性FcgRIIb相互作用，但可能無法與活化FcgRI及 FcgRIIa受體或Clq相互作用。 人類FcRn結合：新生兒受體（FcRn)負責轉運IgG穿過胎 盤且控制IgG分子之分解代謝半衰期。可能需要增加抗體 之終末半衰期以改良功效，降低投藥之劑量或頻率，或改 良對目標之定位。或者，可能適宜進行相反操作，亦即縮 短抗體之終末半衰期以降低全身暴露或改良目標與非目標 〇 結合比。調整IgG與其救助受體FcRn之間的相互作用可提 供增加或縮短IgG之終末半衰期的方式。循環中蛋白質（包 括IgG)在流體相中經由某些細胞（諸如血管内皮之細胞）之 微胞飲作用被吸收。IgG在内體中在略微酸性之條件（pH 6.0-6.5)下可結合FcRn且可再循環至細胞表面，在細胞表 面上其在幾乎中性條件（pH 7.0-7.4)下釋放。對FcRn80、 16、1 7上Fc區結合位點之圖譜分析展示在物種之間呈保守 性之2個組胺酸殘基（His310及His435)造成此相互作用之pH 〇 值依賴性。使用噬菌體呈現技術，鑑別增加與FcRn之結合 且延長小鼠IgG之半衰期的小鼠Fc區突變（參看Victor, G.等 人；Nature Biotechnology (1997)，15(7)，637-640)。亦已鑑 別出可增加人類IgG在pH 6.0下而非在pH 7.4下對FcRn之結 合親和力的Fc區突變（參看DairAcqua William F等人， Journal of Immunology (2002), 169(9), 5171-80)° 此夕卜， 在一種情形下，對於恆河猴FcRn亦觀測到類似之pH值依 賴性結合增加（高達27倍），且此使得恆河猴之血清半衰期 158366.doc -115- 201211252 相較於親本IgG增加兩倍（參看Hinton, Paul R.等人，Journal of Biological Chemistry (2004), 279(8)，6213-6216)。此等 研究結果指示藉由調整Fc區與FcRn之相互作用來延長抗體 治療劑之血漿半衰期為可行的。相反，減弱與FcRn之相互 作用的Fc區突變可縮短抗體半衰期。 B.10 藥物動力學（PK) 在一實施例中，為產生具有所要藥物動力學概況之 DVD-Ig分子，選擇具有類似所要之藥物動力學概況之親 本mAb。一個考慮因素為對單株抗體之免疫原性反應（亦 即HAHA，人類抗人類抗體反應；HACA，人類抗嵌合抗 體反應）進一步使此等治療劑之藥物動力學複雜化。在一 實施例中，使用具有最低免疫原性或不具有免疫原性之單 株抗體建構DVD-Ig分子使得所得DVD-Ig亦將具有最低免 疫原性或不具有免疫原性。決定mAb之PK的一些因素包括 (但不限於）mAb之固有特性（VH胺基酸序列）、免疫原性、 FcRn結合及Fc功能。 所選親本單株抗體之PK概況可輕易地在齧齒動物體内 測定，因為齧齒動物之PK概況與在石蟹摘猴（cynomolgus monkey)及人類中單株抗體之PK概況密切相關（或前者可精 密預測後者）。PK概況係如實例1.2.2.3.A章節中所述測 定。 選擇具有所要PK特徵（及如本文所述之其他所要功能特 性）之親本單株抗體之後，建構DVD-Ig。因為DVD-Ig分子 含有兩個來自兩種親本單株抗體之抗原結合區域，所以亦 158366.doc -116- 201211252 評估DVD-Ig之PK特性。因此，在測定DVD-Ig之PK特性 時，可使用基於來源於2種親本單株抗體之2個抗原結合區 域之功能性來測定ΡΚ概況的ΡΚ分析法。可如實例 1.2.2.3.Α中所述測定DVD-Ig之ΡΚ概況。可影響DVD-Ig之 PK概況的其他因素包括抗原結合區域（CDR)定向、連接子 尺寸及Fc/FcRn相互作用。親本抗體之PK特徵可藉由評估 以下參數來評估：吸收、分佈、代謝及排泄。 吸收：迄今為止，治療性單株抗體係經由非經腸途徑 〇 (例如靜脈内[IV]、皮下[SC]或肌肉内[IM])投與。在SC或 IM投與後，mAb主要經由淋巴路徑自胞間隙吸收至體循環 中。可飽和之體循環前蛋白水解降解可在血管外投與後產 生可變之絕對生物可用性。通常，由於在較高劑量下蛋白 水解容量飽和，所以可觀測到絕對生物可用性隨單株抗體 劑量增加而增加。因為淋巴流體緩慢排入jk管系統中，所 以mAb之吸收過程通常相當緩慢，且吸收持續時間可歷經 數小時至數天。單株抗體在SC投與後之絕對生物可用性一 〇 般處於50%至100%之範圍内。在DVD-Ig構築體所靶向之 血腦屏障處介導轉運之結構的情形中，血漿中之循環時間 可能由於血腦屏障（BBB)處至CNS代謝區中之跨細胞轉運 的提高而降低，其中釋放DVD-Ig以使能夠經其第二抗原 鑑別位點相互作用。 分佈：在IV投與之後，單株抗體通常遵循以快速分佈相 開始，繼之以緩慢消除相之兩相血清（或血漿）濃度-時間概 況。一般而言，雙指數藥物動力學模型最佳描述此種藥物 158366.doc -117- 201211252 動力學概況。mAb於中央室（Ve)中之分佈體積通常等於或 略兩於A漿體積（2公升_3公升）。其他非經腸投與途徑（諸 如IM或SC)的血清（血聚）濃度相對於時間之概況的獨特兩 相模式可能不明顯，因為血清（血激）濃度_時間曲線之分佈 相由長吸收部分掩蓋。包括物理化學特性、位點特異性及 目標定向受體介導之吸收、組織結合能力及_劑量之多 種因素可影響mAb之生物分佈。—些此等因素可造成_ 生物分佈之非線性。 代謝及排泄：完整單株抗體由於分子尺寸而無法經由腎 臟排泄至尿中。其主要藉由代謝(例如分解代謝)而失活。 對於基於IgG之治療性單株抗體，半衰期通常在數小時或 1-2天至20天以上之範圍内。mAb之消除可受多種因素影 響，包括（但不限於）受體之親和力、mAb之免疫原 性、mAb之糖基化程度、mAb對蛋白f水解之敏感性及受 體介導之消除。 B.11人類及毒理學物種之組織交又反應性模式 相同染色模式表明可以毒理學物種評估潛在人類毒性。 毒理學物種為用於研究無關毒性之彼等動物。 選擇滿足2個準則之個別抗體。（1)組織染色適合於已知 抗體目標表現。（2)來自相同器官之人類組織與毒理學物種 組織之間的染色模式類似。 準則1:免疫接種及/或抗體選擇通常使用重組或合成抗 原（蛋白質、碳水化合物或其他分子）。結合於天然對應物 及針對無關抗原之反筛選通常為用於治療性抗體之筛選漏 158366.doc • 118- 201211252 斗的一部分。然而，針對大量抗原進行篩選通常不切實 際。因此，使用來自所有主要器官之人類組織進行組織交 叉反應性研究可用於避免抗體與任何無關抗原之不合需要 之結合》 準則2 :對人類及毒理學物種組織（石蟹獼猴、犬、可能 為齧齒動物及其他動物，如人類研究中般測試相同36或37 個組織）之比較組織交叉反應性研究有助於驗證毒理學物 種之選擇。在對冷凍組織切片之典型組織交叉反應性研究 Ο 中，治療性抗體可展現與已知抗原之預期結合及/或基於 低相互作用程度（非特異性結合、與類似抗原之低結合程 度、基於低電平電荷之相互作用等）與組織以較低程度結 合。在任何情形下，最具相關性之毒理學動物物種為與人 類及動物組織之結合重合度最高的動物物種。 組織交又反應性研究遵循適當法規指南，包括EC CPMP 指南 ΙΙΙ/5271/94「Production and quality control of mAbs」及 1997 US FDA/CBER「Points to Consider in the o Manufacture and Testing of Monoclonal Antibody Products for Human Use」。在物鏡上固定在屍體解剖或活組織檢查 時獲得之人類組織冷床切片（5 μ1»)，且乾燥。使用抗生物 素蛋白-生物素系統對組織切片進行過氧化酶染色。FD A 指南「Points to Consider in the Manufacture and Testing of Monoclonal Antibody Products for Human Use」° 相關參 考案包括 Clarke J 2004, Boon L· 2002a，Boon L 2002b， Ryan A 1999。 158366.doc -119- 201211252 組織父叉反應性研究通常以兩個階段進行，其中第一階 段匕括製成來自一個人類供者之32個組織（通常：腎上 腺月腸道、剞列腺、膀胱、心臟、骨骼肌、血球、腎 臟、皮膚、骨髓、肝、脊髓、乳房、肺、脾臟、小腦、淋 巴，睾丸、大腦皮質、卵巢、胸腺、結腸、胰臟、曱狀 腺内皮、田1】曱狀腺、輸尿管、眼、垂體、子宮、輸印管 及胎盤）的冷康切片。在第二階段中，用來自3個無關成人 之多達38個組織（包括腎上腺、血液、血管、骨髄、小 腦、大腦、子宮頸、食道、眼、心臟、腎臟、大腸、肝、 肺淋巴、，、σ乳腺、卵巢、輸卵管、胰臟、副甲狀腺、周 邊神經、垂體、胎盤、前列腺、唾液腺、皮膚、小腸、脊 知脾臟、月、橫紋肌、睾丸、胸腺、甲狀腺、扁桃體、 輸尿官、膀胱及子宮）進行完全交叉反應性研究。通常以 最少2個劑量進行研究。 ~療性抗體（亦即測試物品）及同型匹配對照抗體可經生 物素標圯以用於抗生物素蛋白生物素複合物（ABc)偵測； 其他偵測方法可包括對經FITC(或以其他方式）標記之測試 物ασ進行二次抗體偵測，或使未標記之測試物品與經標記 之抗人類IgG預複合。 簡言之，在物鏡上固定在屍體解剖或活組織檢查時獲得 之人類組織冷凍切片（約5 μιη)，且乾燥。使用抗生物素蛋 白-生物素系統對組織切片進行過氧化酶染色。首先（在預 複合偵測系統之情形下）’將測試物品與經生物素標記之 二次抗人類IgG—起培育且形成免疫複合物。將測試物品 158366.doc -120- 201211252 之最終濃度為2 pg/mL及10 pg/rnL之免疫複合物添加至物 鏡上的組織切片上’接著使組織切片與抗生物素蛋白生 物素-過氧化酶套組反應30分鐘。隨後，塗覆Dab(3 一 胺基聯苯胺）（過氧化酶反應之受質），歷時4分鐘以進行組 織染色。抗原-瓊脂糖珠粒用作陽性對照組織切片。 基於所討論之目標抗原的已知表現來判斷任何特異性染 色為預期反應性（例如符合抗原表現）或非預期之反應性。 針對強度及頻率，對任何經判斷具特異性之染色進行評 〇 分。抗原或血清競爭或阻斷研究可進一步輔助確定所觀測 到的染色為特異性的或非特異性的。 若發現2種所選抗體滿足選擇準則（即適當組織染色、人 類與毒理學動物特定組織之間的染色匹配），則可選擇其 用於DVD-Ig產生。 必需用最終DVD-Ig構築體重複組織交叉反應性研究， 但當此等研究遵循如本文所概述之相同方案時，對其之評 估更複雜，因為任何結合均可由2種親本抗體中之任一者 所致’ I冑要用複雜抗原I爭研究確$任何無法解釋之結 合〇 夕顯而易見，若選擇如下2種親本抗體，則可極大簡化對 夕特異吐刀子（如DVD_Ig)之组織交又反應性研究的複雜操 作.（1)缺乏非預期之組織交又反應性研究結果及⑺相應 人類與毋理學動物物種組織之間的組織交叉反應性研究結 果存在適當類似性。 B.12特異性及選擇性 158366.doc -121- 201211252 為了產生具有所要特異性及選擇性之DVD-Ig分子，需 要產生且選擇具有類似所要特異性及選擇性概況之親本 mAb。 對於DVD-Ig之特異性及選擇性的結合研究可因四個或 四個以上結合位點（每兩個針對一種抗原）而變得複雜。簡 言之，對DVD-Ig之使用ELISA、BIAcore、KinExA之結合 研究或其他相互作用研究需要監測1種、2種或2種以上抗 原與DVD-Ig分子之結合。雖然BIAcore技術可判定多種抗 體之連續獨立結合，但較傳統之方法（包括ELISA)或較現 代之技術（如KinExA)卻不能。因此，對各親本抗體進行仔 細表徵至關重要。在已針對特異性對各個抗體進行表徵 後，對DVD-Ig分子中個別結合位點之特異性保留的確認 將極大簡化。 顯而易見，若針對特異性來選擇該2種親本抗體，之後 將其組合成DVD-Ig，則測定DVD-Ig特異性之複雜操作將 極大簡化。 抗原-抗體相互作用研究可採取多種形式，包括多種典 型蛋白質-蛋白質相互作用研究，包括ELISA(酶聯免疫吸 附分析法）、質譜、化學交聯、使用光散射之SEC、平衡透 析、凝膠滲透、超濾、凝膠層析、大區域分析型SEC、微 量製備級超速離心（沈降平衡）、光譜法、滴定微量熱法、 沈降平衡（在分析型超速離心機中）、沈降速度（在分析型離 心機中）、表面電漿子共振（包括BIAcore)。相關參考文獻 包括 John Wiley & Sons Inc出版之「Current Protocols in 158366.doc -122- 201211252
Protein Science」，John E. Coligan，Ben M. Dunn, David W. Speicher，Paul T, Wingfield (編.）第 3卷，第 19章及第 20 章，及其中包括之參考文獻以及John Wiley & Sons Inc出 版之「Current Protocols in Immunology」，John E. Coligan, Barbara E. Bierer, David H. Margulies, Ethan M. Shevach，Warren Strober (編·）及其中包括之相關參考文 獻。 全血中之細胞激素釋放：可藉由細胞激素釋放分析法研 Ο 究mAb與人類血球的相互作用（John Wiley & Sons Inc出版 之 Wing, M. G. Therapeutic Immunology (1995)，2(4)，183-190; 「Current Protocols in Pharmacology」，S.J. Enna， Michael Williams, John W. Ferkany, Terry Kenakin, Paul Moser,(編.）；Madhusudan，S. Clinical Cancer Research (2004), 10(19), 6528-6534; Cox, J. Methods (2006), 38(4), 274-282; Choi, I. European Journal of Immunology (2001), 31(1)，94-106)。簡言之’各種濃度之mAb與人類全血一起 ◎ 培育24小時。所測試之濃度應涵蓋包括模擬患者體内典型 血液含量之最終濃度的寬範圍（包括（但不限於）1 〇〇 ng/ml-100 pg/ml)。培育後，分析上清液及細胞溶解產物中化― lRcx、TNF-α、IL-lb、IL-6及IL-8之存在。比較mAb產生之 細胞激素濃度概況與陰性人類IgG對照組及陽性LPS或PHA 對照組產生之概況。來自細胞上清液及細胞溶解產物之 mAb呈現之細胞激素概況與對照人類igG之概況相當。在 一實施例中’單株抗體不與人類血球相互作用以自發釋放 158366.doc •123- 201211252 發炎性細胞激素。 DVD-Ig之細胞激素釋放研究由於四個或四個以上結合 位點（每2個針對一種抗原）而變得複雜。簡言之，如本文所 述之細胞激素釋放研究量測整個DVD_Ig分子對全血或其 他細胞系統之效應，但可判定引起細胞激素釋放之分子部 分。一旦偵測到細胞激素釋放，則必需確定DVD-Zg製劑 的純度，因為一些共純化細胞組分可獨自引起細胞激素釋 放。若純度並非問題，則可能需要使用DVD_Ig之斷裂（包 括（但不限於）移除Fc部分、分離結合位點等）、結合位點突 變誘發或其他方法來重疊合任何觀測結果。顯而易見，若 選擇缺乏細胞激素釋放之2種親本抗體’之後將其組合成 DVD-Ig，則可極大簡化此複雜操作。 B.13與用於毒物學研究之其他物種的交又反應性 在一實施例中，選擇與適當毒理學物種（例如石蟹獼猴） 具有充分交叉反應性的個別抗體。親本抗體需要結合於直 系同源物種目標（亦即石蟹獼猴）且引發適當反應（調節、中 和、活化）。在一實施例中，對直系同源物種目標之交叉 反應性（親和力/效能）應在人類目標之1〇倍以内。實務上， 針對包括小鼠、大鼠、犬、猴（及其他非人類靈長類動物） 之多種物種以及疾病模型物種（亦即用於哮喘模型之綿羊） 評估親本抗體。親本單株抗體對毒理學物種之可接受交又 反應性允許將來以同一物種進行DVD-Ig-Ig的毒理學研 究。出於彼原因，2種親本單株抗體應對常見毒理學物種 >·、有了接受之父叉反應性，因此允許以同一物種對dvd_ 158366.doc -124- 201211252 ig進行毒理學研究。 親本mAb可選自能夠結合特異性目標且在此項技術中熟 知之各種mAb。此等mAb包括（但不限於）抗TNF抗體（美國 專利第6,258,562號）、抗11^-12及/或抗11^12?40抗體（美國 專利第 6,914，128 號）；抗 IL-18 抗體（US 2005/0147610 A1)、抗 C5、抗 CBL、抗 CD147、抗 gpl20、抗 VLA-4、抗 CDlla、抗 CD18、抗 VEGF、抗 CD40L、抗 CD-40(例如參 看 WO 2007124299)、抗 Id、抗 ICAM-1、抗 CXCL13、抗 O CD2、抗 EGFR、抗 TGF-P2、抗 HGF、抗 cMet、抗 DLL-4、 抗NPR1、抗 PLGF、抗 ErbB3、抗 E選擇素、抗Fact VII、 抗 Her2/neu、抗 F gp、抗 CD1 1/18、抗 CD14、抗 ICAM-3、 抗 RON、抗 CD-19、抗CD80(例如參看 WO 2003039486)、 抗CD4、抗CD3、抗CD23、抗β2-整合素、抗α4β7、抗 CD52、抗HLA DR、抗CD22(例如參看美國專利第 5,789,554 號）、抗 CD20、抗 MIF、抗 CD64(FcR)、抗 TCR αβ、抗 CD2、抗Hep B、抗 CA 125、抗 EpCAM、抗 gpl20、 〇 抗 CMV、抗 gpllbllla、抗 IgE、抗 CD25、抗 CD33、抗 HLA、抗 IGF1，2、抗 IGFR、抗 VNR整合素、抗 IL-la、抗 IL-Ιβ、抗IL-1受體、抗IL_2受體、抗IL-4、抗IL-4受體、 抗 IL5、抗 IL-5 受體、抗 IL-6、抗 IL-6R、RANKL、NGF、 DKK、ανβ3、IL-17A、抗 IL-8、抗 IL-9、抗 IL-13、抗 IL-13受體、抗IL-17 及抗IL-23 ; IL-23pl9(參看 Presta LG. 2005 Selection, design, and engineering of therapeutic antibodies J Allergy Clin Immunol. 116:731-6及http://www. 158366.doc -125· 201211252 path.cam.ac.uk/〜mrc7/humanisation/antibodies.html)。 親本mAb亦可選自各種批准使用、處於臨床試驗或處於 開發供臨床使用之治療性抗體。該等治療性抗體包括（但 不限於）利妥昔單抗（rituximab)(Rituxan®，IDEC/Genentech/ 11〇^^)(參看例如美國專利第5,73 6,137號），一種批准用於 治療非霍奇金氏淋巴瘤之嵌合抗CD20抗體；HuMax-CD20，一種當前正由Genmab開發之抗CD20 ;美國專利第 5,500,362號所述之抗CD20抗體，AME-133(Applied Molecular Evolution) ； hA20(Immunomedics, Inc.) ； HumaLYM(Intracel) 及 PR070769(PCT/US2003/040426，標題「Immunoglobulin Variants and Uses Thereof」）；曲妥珠單抗（trastuzumab) (Herceptin®，Genentech)(參看例如美國專利第 5,677,1 71 號），一種批准用於治療乳癌之人類化抗Her2/neu抗體；當 前正由Genentech開發之帕妥珠單抗（pertuzumab)(rhu]VIab-2C4，Omnitarg®);抗Her2抗體（描述於美國專利第 4,753,894 號中）；西妥昔單抗（cetuximab)(Erbitux®， Imclone)(美國專利第 4,943,533號；PCT WO 96/40210)，一 種處於臨床試驗之用於多種癌症之嵌合抗EGFR抗體；當 前正由 Abgenix-Immunex-Amgen 開發之 ABX-EGF(美國專 利第6,235,883號）；當前正由Genmab開發之HuMax-EGFr(^ Μ % 7,247,301 ^,) ； 425 ' EMD55900 ' EMD62000 及 EMD72000(Merck KGaA)(美國專利第 5,558,864 號； Murthy等人，1987，Arch Biochem Biophys. 252(2):549-60; Rodeck 等人，1987，J Cell Biochem. 35(4):315-20 ; 158366.doc -126- 201211252
Kettleborough 等人，1991，Protein Eng. 4(7):773-83); ICR62(Institute of Cancer Research)(PCT WO 95/20045 ; Modjtahedi等人，1993, J. Cell Biophys. 1993, 22(1-3):129-46 ; Modjtahedi等人，1993, Br J Cancer. 1993, 67(2):247-53 ; Modjtahedi 等人，1996，Br J Cancer, 73(2):228-35 ; Modjtahedi 等人，2003，Int J Cancer，105(2):273-80); TheraCIM hR3(YM Biosciences, Canada and Centro de Immunologia Molecular，Cuba)(美國專利第 5,891,996號； 〇 美國專利第 6,506, 883號；Mateo等人，1997, Immunotechnology， 3(1):71-81) ； mAb-806(Ludwig Institue for Cancer Research, Memorial Sloan-Kettering)(Jungbluth 等人，（2003) Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 100(2): 639-44) ； KSB-102(KS Biomedix) ； MR1-1(IVAX > National Cancer Institute)(PCT WO 0162931A2);及 SC100(Scancell)(PCT WO 01/88138); 阿來組單抗（alemtuzumab)(Campath®，Millenium)，一種 當前批准用於治療B細胞慢性淋巴細胞性白金病之人類化 〇 mAb ;莫羅莫那-CD3(muromonab-CD3)(Orthoclone OKT3®)， 一種由 Ortho Biotech/Johnson & Johnson開發之抗CD3抗 體；替伊莫單抗（ibritumomab tiuxetan)(Zevalin®)，一種由 IDEC/Schering AG開發之抗CD20抗體；吉妥單抗 (gemtuzumab ozogamicin)(Mylotarg®)，一種由 Celltech/Wyeth 開發之抗CD33 (p67蛋白）抗體；阿法賽特（alefacept) (Amevive®)，一種由Biogen開發之抗LFA-3 Fc融合體；由 Centocor/Lilly 開發之阿昔單抗（abciximab)(ReoPro®);由 158366.doc -127- 201211252
Novartis 開發之巴利昔單抗（basiliximab)(Simulect®);由 Medimmune 開發之帕利珠單抗（palivizumab)(Synagis®); 英利昔單抗（infliximab)(Remicade®)，一種由 Centocor 開發 之抗 TNFa抗體；阿達木單抗（adalimumab)(Humira®)，一 種由Abbott開發之抗TNFcx抗體；Humicade®，一種由 Celltech開發之抗TNFa抗體；戈利木單抗（golimumab) (CNTO-148)，一種由Centocor開發之完全人類TNF抗體； 依那西普（etanercept)(Enbrel®)，一種由 Immunex/Amgen 開 發之p75 TNF受體Fc融合體；來那西普（lenercept)，一種先 前由Roche開發之p5 5TNF受體Fc融合體；ABX-CBL，一種 正由Abgenix開發之抗CD147抗體；ABX-IL8，一種正由 Abgenix開發之抗IL8抗體；ABX-MA1，一種正由Abgenix 開發之抗MUC18抗體；帕姆替珠單抗（Pemtumomab) (R1549，90Y-muHMFGl)，一種由 Antisoma 開發之抗 MUC1 ;塞來克斯（Therex)(R1550)，一 種正由 Antisoma 開 發之抗MUC1抗體；正由Antisoma開發之安吉奥單抗 (AngioMab)(AS1405);正由 Antisoma 開發之 HuBC-1 ;正由 Antisoma開發之硫銘（Thioplatin)(AS1407) ; Antegren®(那 他珠單抗（natalizumab))，一種正由Biogen開發之抗α-4-β-l(VLA-4)及 α-4-β-7 抗體；VLA-1 mAb，一種正由 Biogen 開 發之抗VLA-1整合素抗體；LTBR mAb，一種正由Biogen 開發之抗淋巴毒素β受體（LTBR)抗體；CAT-152 ’ 一種正 由 Cambridge Antibody Technology 開發之抗 TGF-P2抗體； ABT 874 (J695)，一 種正由 Abbott 開發之抗 IL-12 p40 抗 158366.doc -128· 201211252 體；CAT-192，一 種正由 Cambridge Antibody Technology 及Genzyme開發之抗TGFpi抗體；CAT-213，一種正由 Cambridge Antibody Technology 開發之抗 Eotaxinl 抗體； LymphoStat-B® * 一種正由 Cambridge Antibody Technology 及 Human Genome Sciences Inc.開發之抗 Blys 抗體； TRAIL-RlmAb，一 種正由 Cambridge Antibody Technology 及 Human Genome Sciences，Inc.開發之抗TRAIL-R1抗體； Avastin® 貝伐單抗（Avastin® bevacizumab，rhuMAb-O VEGF)，一種正由Genentech開發之抗VEGF抗體；正由 Genentech開發之抗HER受體家族抗體；抗組織因子 (ATF)，一種正由Genentech開發之抗組織因子抗體； Xolair®(奥馬珠單抗（Omalizumab))，一 種正由 Genentech開 發之抗IgE抗體，Raptiva®(依法利珠單抗（Efalizumab))， 一種正由Genentech及Xoma開發之抗CD 11 a抗體；正由 Genentech及 Millenium Pharmaceuticals 開發之 MLN-02抗體 (先前為LDP-02) ; HuMax CD4 ’ 一種正由Genmab開發之 抗 CD4 抗體，HuMax-IL 15 ’ 一 種正由 Genmab 及 Amgen 開 發之抗IL15抗體；正由Genmab及Medarex開發之HuMax-Inflam ; HuMax-Cancer，一 種正由 Genmab 及 Medarex 及 Oxford GcoSciences開發之抗I型肝素酶抗體；正由Genmab 及Amgen開發之HuMax-Lymphoma ;正由Genmab開發之 HuMax-TAC ;正由 IDEC Pharmaceuticals 開發之 IDEC-13.1 及抗 CD40L 抗體；IDEC-151(克立昔單抗（clenoliximab))， 一種正由 IDEC Pharmaceuticals開發之抗CD4抗體；IDEC- 158366.doc -129- 201211252 114，一 種正由 IDEC Pharmaceuticals開發之抗 CD80抗體； IDEC-152，一 種正由 IDEC Pharmaceuticals 開發之抗 CD23 ;正由IDEC Pharmaceuticals開發之抗巨噬細胞遷移 因子（MIF)抗體；BEC2，一種正由Imclone開發之抗個體基 因型抗體；IMC-1C11，一種正由Imclone開發之抗KDR抗 體；DC101，一種正由Imclone開發之抗flk-Ι抗體；一種正 由Imclone開發之抗VE鈣黏素抗體；CEA-Cide®(拉貝珠單 抗（labetuzumab))，一種正由Immunomedics開發之抗癌胚 抗原 （CEA)抗體 ；LymphoCide®(依帕珠單抗 (Epratuzumab))，一 種正由 Immunomedics開發之抗CD22抗 體；正由Immunomedics開發之AFP-Cide ； 正由 Immunomedics 開發之 MyelomaCide ;正由 Immunomedics 開 發之 LkoCide ;正由 Immunomedics 開發之 ProstaCide ; MDX-010，一種正由Medarex開發之抗CTLA4抗體；MDX-060，一種正由Medarex開發之抗CD30抗體；正由Medarex 開發之MDX-070 ;正由Medarex開發之MDX-018 ;正由 Medarex 及 Immuno-Designed Molecules 開發之 Osidem® ι.:# (IDM-1)及抗 Her2抗體；HuMax®-CD4，一 種正由 Medarex 及Genmab開發之抗CD4抗體；HuMax-IL15，一種正由 Medarex及Genmab開發之抗IL15抗體；CNTO 148，一種正 由 Medarex 及 Centocor/J&J 開發之抗 TNFa 抗體；CNTO 1275，一種正由Centocor/J&J開發之抗細胞激素抗體； MOR101及MOR102，正由MorphoSys開發之抗細胞間黏附 分子-1(ICAM-1)(CD54)抗體；MOR201，一 種正由 MorphoSys 158366.doc -130- 201211252 開發之抗纖維母細胞生長因子受體3(FGFR-3)抗體； Nuvion®(維西珠單抗（visilizumab))，一 種正由 Protein Design Labs開發之抗CD3抗體；HuZAF®，一種正由 Protein Design Labs開發之抗γ干擾素抗體；正由Protein Design Labs 開發之抗 α5β1 整合素；正由 Protein Design Labs開發之抗IL-12 ; ING-1，一種正由Xoma開發之抗Ep-CAM抗體；Xolair®(奥馬珠單抗），一種由Genentech及 Novartis開發之人類化抗IgE抗體；及MLN01，一種正由 O Xoma開發之抗β2整合素抗體。在另一實施例中，治療劑 包括 KRN330(Kirin) ; huA33 抗體（Α33，Ludwig Institute for Cancer Research) ; CNTO 95(aV整合素，Centocor); ΜΕϋΙ-522(ανβ3 整合素，Medimmune);伏洛昔單抗 (volociximab)(aVpi整合素，Biogen/PDL);人類mAb 216 (B細胞糖基化抗原決定基，NCI) ; BiTE MT103(雙特異性 CD19xCD3，Medimmune) ; 4G7xH22(雙特異性B細胞 xFcyRl ，Medarex/Merck KGa) ; rM28(雙特異性 CD28xMAPG，美 〇 國專利第 EP1444268號）；MDX447(EMD 82633)(雙特異性 CD64xEGFR > Medarex);卡妥索單抗（Catumaxomab， removab)(雙特異性 EpCAMx抗 CD3，Trion/Fres);厄妥索 單抗（Ertumaxomab)(雙特異性HER2/CD3，Fresenius Biotech); 奥戈伏單抗（oregovomab，OvaRex)(CA-125，ViRexx); Rencarex®(WX G250)(碳酸酐酶 IX，Wilex) ; CNTO 888 (CCL2，Centocor) ; TRC105(CD105(endoglin)，Tracon); BMS-663513(CD137 促效劑，Brystol Myers Squibb); 15S366.doc -131- 201211252 MDX-1342(CD19 ’ Medarex);西利珠單抗（Siplizumab， MEDI-507)(CD2 ’ Medimmune);奥法木單抗（Ofatumumab， Humax-CD20)(CD20，Genmab);利妥昔單抗（Rituxan)(CD20， Genentech);維塔珠單抗（veltuzumab，hA20)(CD20， Immunomedics);依帕珠單抗（CD22，Amgen);魯昔單抗 (lumiliximab，IDEC 152)(CD23，Biogen);莫羅莫那-CD3(CD3 ’ Ortho) ; HuM291(CD3 fc受體，PDL Biopharma); HeFi-l(CD30 * NCI) i MDX-060(CD30 » Medarex) i MDX-1401(CD30，Medarex) ; SGN-30(CD30，Seattle Genentics); SGN-33(林妥珠單抗（Lintuzumab))(CD33，Seattle Genentics); 紮木單抗（Zanolimumab，HuMax-CD4)(CD4，Genmab); HCD122(CD40，Novartis) ; SGN-40(CD40，Seattle Genentics); Campathlh(阿來組單抗）（CD52，Genzyme) ; MDX-1411 (CD70，Medarex) ; hLLl(EPB-l)(CD74.38，Immunomedics); 加利昔單抗（Galiximab，IDEC-144)(CD80，Biogen); MT293(TRC093/D93)(裂解之膠原蛋白，Tracon) ; HuLuc63 (CS1，PDL Pharma);伊普利單抗（ipilimumab，MDX-010)(CTLA4，Brystol Myers Squibb);川利木單抗 (Tremelimumab，替西單抗（Ticilimumab)，CP-675,2) (CTLA4，Pfizer) ; HGS-ETR1(馬帕木單抗（Mapatumumab)) (DR4 TRAIL-R1 促效劑，Human Genome Science/Glaxo Smith Kline) ; AMG-655(DR5，Amgen);阿普單抗（Apomab) (DR5 > Genentech) ； CS-1008(DR5 > Daiichi Sankyo)； HGS-ETR2(來沙木單抗（lexatumumab))(DR5 TRAIL-R2 促 158366.doc -132- 201211252 效劑，HGS);西妥昔單抗（Erbitux)(EGFR，Imclone); IMC-11F8(EGFR，Imclone);尼妥珠單抗（Nimotuzumab) (EGFR，YM Bio);帕尼單抗（Panitumumab，Vectabix) (EGFR，Amgen);紮魯木單抗（Zalutumumab，HuMaxEGFr) (EGFR > Genmab) ； CDX-110(EGFRvIII > AVANT Immunotherapeutics) :阿德木單抗（adecatumumab，MT201)(Epcam，Merck); 依決洛單抗（edrecolomab，Panorex，17-lA)(Epcam， Glaxo/Centocor) ; MORAb_003(葉酸鹽受體a，Morphotech) O ; KW-2871(神經結醣脂 GD3，Kyowa) ; MORAb-009(GP-9 » Morphotech) ； CDX-1307(MDX-13.07)(hCGb，Celldex)； 曲妥珠單抗（赫賽汀（Herceptin))(HER2，Celldex);帕妥珠 單抗（rhuMAb 2C4)(HER2(DI)，Genentech);阿泊珠單抗 (apolizumab)(HLA-DRp鏈，PDL Pharma) ; AMG-479(IGF-1R，Amgen);抗 IGF-1R R1507(IGF1-R，Roche) ; CP 751871(IGF1-R，Pfizer) ; IMC-A12(IGF1-R，Imclone); BIIB022(IGF-1R，Biogen) ; Mik_P-l(IL-2Rb(CD122)， ◎ Hoffman LaRoche) ; CNTO 328(IL6，Centocor);抗KIR(1-7F9)(殺手細胞 Ig樣受體（KIR)，Novo) ; Hu3S193(Lewis (y) 5 Wyeth, Ludwig Institute of Cancer Research) ； hCBE-11(LTPR > Biogen) ; HuHMFGl(MUCl，Antisoma/NCI); RAV12(N連接碳水化合物抗原決定基，Raven) ; CAL(副曱 狀腺激素相關蛋白（PTH-rP)，University of California); CT-011(PD1 ，CureTech) ； MDX-1106(ono-4538)(PDl > Medarex/Ono) ； MAb CT-011(PD1 > Curetech) ； IMC-3G3 158366.doc -133- 201211252 (PDGFRa，Imclone);巴維昔單抗（bavituximab)(磷脂醢絲 胺酸，Peregrine) ; huJ591(PSMA，Cornell Research Foundation) ； muJ591(PSMA > Cornell Research Foundation)； GC1008(TGFb (pan)抑制劑（IgG4)，Genzyme);英利昔單 抗（Remicade)(TNFa，Centocor) ; A27_15(轉鐵蛋白受體， Salk Institute，INSERN WO 2005/1 1 1082) ; Ε2·3(轉鐵蛋白 受體，Salk Institute);貝伐單抗（阿瓦斯汀（Avastin)) (VEGF，Genentech) ; HuMV833(VEGF，Tsukuba Research Lab-W0/2000/034337, University of Texas) ； IMC-18F1 (VEGFR1，Imclone) ; IMC-1121(VEGFR2, Imclone)。 C.建構結合蛋白分子 雙可變區域免疫球蛋白（DVD-Ig)分子經設計以藉由重組 DNA技術使來自兩種不同親本單株抗體之兩個不同輕鏈可 變區域（VL)以串聯方式直接連接或經由短連接子連接，接 著為輕鍵怪定區域。類似地，重鍵包含兩個以串聯方式連 接之不同重鏈可變區域（VH)，接著為恆定區域CH1及Fc區 (圖 1A) 〇 可使用重組DNA技術自由本文所述之任一種方法產生之 親本抗體獲得可變區域。在一實施例中，可變區域為鼠類 重鏈可變區域或輕鏈可變區域。在另一實施例中，可變區 域為CDR移植或人類化重鏈可變區域或輕鏈可變區域。在 一實施例中，可變區域為人類重鏈可變區域或輕鏈可變區 域。 在一個實施例中，使用重組DNA技術使第一及第二可變 158366.doc -134- 201211252 區域彼此直接連接。在另一實施例中，可變區域係經由連 接子序列連接。在一實施例中，兩個可變區域連接。三個 或三個以上可變區域亦可直接連接或經由連接子序列連 接。可變區域可結合相同抗原或可結合不同抗原。本文提 供之DVD-Ig分子可包括1個免疫球蛋白可變區域及1個非 免疫球蛋白可變區域（諸如受體之配位體結合區域、酶之 活性區域）。DVD-Ig分子亦可包含2個或2個以上非Ig區 域。 連接子序列可為單個胺基酸或多肽序列。在一實施例 中，連接子序列為 AKTTPKLEEGEFSEAR (SEQ ID NO: 1) ； AKTTPKLEEGEFSEARV (SEQ ID NO: 2) ； AKTTPKLGG (SEQ ID NO: 3) ; SAKTTPKLGG (SEQ ID NO: 4); SAKTTP (SEQ ID NO: 5) ； RADAAP (SEQ ID NO: 6)； RADAAPTVS (SEQ ID NO: 7) ； RADAAAAGGPGS (SEQ ID NO: 8) ； RADAAAA(G4S)4 (SEQ ID NO: 9)； SAKTTPKLEEGEFSEARV (SEQ ID NO: 10) ； ADAAP (SEQ 〇 ID NO: 11) ； ADAAPTVSIFPP (SEQ ID NO: 12) ； TVAAP (SEQ ID NO: 13) ； TVAAPSVFIFPP (SEQ ID NO: 14)； QPKAAP (SEQ ID NO: 15) ； QPKAAPSVTLFPP (SEQ ID NO: 16) ； AKTTPP (SEQ ID NO: 17) ； AKTTPPSVTPLAP (SEQ ID NO: 18) ； AKTTAP (SEQ ID NO: 19) ； AKTTAPSVYPLAP (SEQ ID NO: 20) ； ASTKGP (SEQ ID NO: 21)； ASTKGPSVFPLAP (SEQ ID NO: 22) ； GGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 23) ； GENKVEYAPALMALS (SEQ ID NO: 158366.doc -135- 201211252 24) ； GPAKELTPLKEAKVS (SEQ ID NO: 25)；或 GHEAAAVMQVQYPAS (SEQ ID NO: 26)。基於對若干 Fab 分子之晶體結構分析選擇連接子序列。在Fab或抗體分子 結構中，可變區域與CH1/CL恆定區域之間存在天然可撓 性鍵聯。此天然鍵聯包含約10-12個胺基酸殘基，由來自V 區域之C端的4-6個殘基及來自CL/CH1區域之N端的4-6個 殘基提供。本文提供之DVD Ig係分別使用CL或CH1之N端 5-6個胺基酸殘基或11-12個胺基酸殘基作為DVD-Ig之輕鏈 及重鏈中之連接子產生。CL或CH1區域之N端殘基（尤其前 5-6個胺基酸殘基）採用環構形而無穩固二級結構，因此可 用作2個可變區域之間的可撓性連接子。CL或CH1區域之N 端殘基由於其為Ig序列之一部分而為可變區域之天然延 長，因此在很大程度上使任何可能由連接子及接點引起之 免疫原性降至最低。 其他連接子序列可包括CL/CH1區域之任何長度之任何 序列，但非CL/CH1區域之所有殘基；例如CL/CH1區域的 前5-12個胺基酸殘基；輕鏈連接子可來自Ck或（：λ;且重鍵 連接子可來源於任何同型之CH1，包括Cyl、（：γ2、〇γ3、 Cy4、Cal、Ctx2、、Οε及Ομ。連接子序列亦可來源於其 他蛋白質，諸如Ig樣蛋白（例如TCR、FCR、KIR);基於 G/S之序列（例如G4S (SEQ ID NO: 27)或G4S重複序列）；來 源於较鏈區之序列；及來自其他蛋白質之其他天然序列。 在一實施例中，使用重組DNA技術使恆定區域連接至2 個連接之可變區域上。在一實施例中，包含連接之重鏈可 158366.doc 136· 201211252 變區域的序列係連接至重鏈恆定區域而包含連接之輕鏈可 變區域的序列係連接至輕鏈恆定區域。在一實施例中，恆 定區域分別為人類重鏈恆定區域及人類輕鏈恆定區域。在 一實施例中’重鏈進一步連接至Fc區。Fc區可為原生序列 Fc區或變異Fc區。在另一實施例中，以區為人類以區。在 另一實施例中，Fc區包括來自IgGi、igG2、IgG3、IgG4 ' IgA、IgM、IgE或 IgD之 Fc區。 在另一實施例中，兩個重鏈多肽及兩個輕鏈多肽經組合 Ο 形成DVD-k分子。表2列出適用於治療疾病（例如治療癌 症）之目標的例示性抗體之VH及VL區的胺基酸序列。在一
實施例中’ DVD Ig包含任何取向之表2中所列vh及/或VL 區中至少兩者。在一些實施例中，獨立選擇VD1及VD2。 因此’在一些實施例中，VD1及VD2包含相同SEq m NO，且在其他實施例中，vm及VD2包含不同seq NO。 下文&供之VH及VL區域序列包含此項技術中已知或容 〇 易使用此項技術中已知之方法辨別的互補決定區（cdr)及 構架序列。在一些實施例中，此等CDR及/或構架序列中 之或夕者置換為來自結合蛋白的此項技術中已知結合於 相同抗原之其他CDR&/或構架序列而不失去功能。 158366.doc •137· 201211252 表2:用於產生DVD-Ig之抗體的VH區及VL區之胺基酸序 列清單
SEQID No. ABT 唯一 Π) 蛋白質區 序列 123456789012345678901234567890123456 28 AB017VH VHTNF (序列1) EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQA PGKGLEWVSAITWNSGHIDYADSVEGRFTISRDNAKNSLY LQMNSLRAEDTAVYYCAKVSYLSTASSLDYWGQGTLVTVS S 29 AB017VL VLTNF (序列1) DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNYLAWYQQKP GKAPKLLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQP EDVATYYCQRYNRAPYTFGQGTKVEIKR 30 AB020VH VHNGF QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGFSLIGYDLNWIRQP PGKGLEWIGIIWGDGTTDYNSAVKSRVTISKDTSKNQFSL KLSSVTAADTAVYYCARGGYWYATSYYFDYWGQGTLVTVS S 31 AB020VL VLNGF DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISNNLNWYQQKP GKAPKLLIYYTSRFHSGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQP EDIATYYCQQEHTLPYTFGQGTKLEIKR 32 AB022VH VH SOST EVQLQQSGPELVTPGASVKISCiCASGYTFTDHYMSWVKQS HGKSLEWIGDINPYSGETTYNQKFKGTATLTVDKSSSIAY MEIRGLTSEDSAVYYCARDDYDASPFAYWGQGTLVTVSA 33 AB022VH VL SOST DVQMIQSPSSLSASLGDIVTMTCQASQGTSINLNWFQQKP GKAPKLLIYGSSNLEDGVPSRFSGSRYGTDFTLTISSLED EDLATYFCLQHSYLPYTFGGGTKLEIKR 34 AB048VH VHPGE2 EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTKYWLGWVRQA PGQGLEWMGDIYPGYDYTHYNEKFKDRVTLTTDTSTSTAY MELRSLRSDDTAVYYCARSDGSSTYWGQGTLVTVSS 35 AB048VL VL PGE2 DVLMTQTPLSLPVTPGEPASISCTSSQNIVHSNGNTYLEW YLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKI SRVEAEDVGVYYCFQVSHVPYTFGGGTKVEIKR 36 AB213VH VHTNF (序列2) QVQLKESGPGLVAPSQSLSITCTVSGFSLTDYGVNWVRQP PGKGLEWLGMIWGDGSTDYDSTLKSRLSISKDNSKSQIFL KMNSLQTDDTARYYCAREWHHGPVAYWGQGTLVTVSA 37 AB213VL VLTNF (序列2) DIVMTQSHKFMSTTVGDRVSITCKASQAVSSAVAWYQQKP GQSPKLLIYWASTRHTGVPDRFTGSGSVTDFTLTIHNLQA EDLALYYCQQHYSTPFTFGSGTKLEIKR 38 AB214VH VHTNF (序列3) EVKLEESGGGLVQPGGSMKLSCVASGFIFSNHWMNWVRQS PEKGLEWVAEIRSKSINSATHYAESVKGRFTISRDDSKSA VYLQMTDLRTEDTGVYYCSRNYYGSTYDYWGQGTTLTVSS 39 AB214VL VLTNF (序列3) DILLTQSPAILSVSPGERVSFSCRASQFVGSSIHWYQQRT NGSPRLLIKYASESMSGIPSRFSGSGSGTDFTLSINTVES EDIADYYCQESHSWPFTFGSGTNLEVKR 40 AB215VH VHTNF (序列4) QVQLVESGGGWQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQA PGNGLEWVAFMSYDGSNKYAKDSVKGRFTISRDNSKNTLY LQMNSLRAEDTAVYYCARDRGIAAGGNYYYYGMDVWGQGT TVTVSS 41 AB215VL VLTNF (序列4) EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVYSYLAWYQQKP GQAPRLLIYDASNRATG工PARFSGSGSGTDFTLTISSLEP EDFAVYYCQQRSNWPPFTFGPGTKVDIKR 42 AB216VH VHLPA QVQLQQSGAELVRPGTSVKVSCKASGYGFINYLIEWIKQR PGQGLEWIGLINPGSDYTNYNENFKGKATLTADKSSSTAY MHLSSLTSEDSAVYFCARRFGYYGSGNYFDYWGQGTTLTV SS 43 AB216VL VLLPA DVVMTQTPLSLPVSLGDQASISCTSGQSLVHINGNTYLHW YLQKPGQSPKLLIYKVSNLFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKI SRVEAEDLGVYFCSQSTHFPFTFGTGTKLEIKR •138· 158366.doc 201211252
SEQID No. ABT 唯一 ID 蛋白質區 序列 123456789012345678901234567890123456 44 AB217VH VHTNF (序列5) QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYDMHWVRQA PGKGLEWVAVIWSDGSIKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLY LQMNSLRAEDTAVYYCAKEVESAMGGFYYNGMDVWGQGTT VTVSS 45 AB217VL VLTNF (序列5) DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRIDLGWYQQKP GKAPKRLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTEFIFTISSLQP EDFASYYCLQHKSYPLTFGGGTKVEIKR 46 AB218VH VHTNF (序列6) EVQLVESGGGLIQPGGSLRLSCAASGFTVSRNYMSWVRQA PGKGLEWVSVIYSGDRTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYL QMNSLRAEDTAVYYCARGEGGFDYWGQGTLVTVSS 47 AB218VL VLTNF (序列6) EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKP GQAPRLLIHGASIRATGLPARFSGSGSGTEFTLTISSLQS EDFAVYYCQQYNYWWT FGQGTKVEIKR 下文實例章節令提供能夠結合特異性目標之特異性 DVD-Ig分子及其製備方法的詳細描述。 O D. 產生結合蛋白 可藉由此項技術中已知之多種技術中之任一者製造本文 提供之結合蛋白。舉例而言，自宿主細胞表現，其中藉由 標準技術將編碼重鏈及輕鏈之表現載體轉染至宿主細胞 中°術語「轉染」之各種形式意欲涵蓋通常用於將外源 DNA引入原核生物或真核生物宿主細胞中之多種技術，例 如電穿孔、磷酸鈣沈澱、DEAE-聚葡萄糖轉染及其類似技 術。儘管可能於原核生物或真核生物宿主細胞中表現本文 提供之結合蛋白’但結合蛋白應表現於真核細胞（例如哺 乳動物宿主細胞）中，因為該等真核細胞（且尤其哺乳動物 、細胞）比原核細胞更有可能組裝及分泌適當摺疊且具免疫 活性之結合蛋白。 表現重組結合蛋白之例示性哺乳動物宿主細胞包括中國 倉鼠印巢（CHO)細胞（包括dhfr-CHO細胞，其係描述於 Urlaub 及 chasin，(1980) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216-4220 中，例如如 R.j. Kaufman 及 P.A. Sharp (1982) 158366.doc •139· 201211252 Μο/· 5ίο/· 159: 601-621中所述，其係與DHFR可選標記一 起使用）、NS0骨髓瘤細胞、COS細胞、SP2及PER.C6細 胞。當將編碼結合蛋白之重組表現載體引入哺乳動物宿主 細胞中時，藉由培養宿主細胞歷時足以使結合蛋白在宿主 細胞中表現或足以將結合蛋白分泌至使宿主細胞生長之培 養基中的時段來產生結合蛋白。可使用標準蛋白質純化方 法自培養基回收結合蛋白。 在用於重組表現之例示性系統中，藉由磷酸鈣介導之轉 染將編碼重鏈及輕鏈兩者之重組表現載體引入dhfr-CHO細 胞中。在重組表現載體中，重鏈與輕鏈基因各自操作性連 接於CMV強化子/AdMLP啟動子調控元件以驅動基因之高 水準轉錄。重組表現載體亦運載DHFR基因，其允許使用 曱胺喋呤選擇/擴增來選擇已經該載體轉染之CHO細胞。 培養所選擇之轉型體宿主細胞以允許表現重鏈及輕鏈且自 培養基回收完整結合蛋白。使用標準分子生物學技術來製 備重組表現載體、轉染宿主細胞、選擇轉型體、培養宿主 細胞及自培養基回收結合蛋白。提供合成結合蛋白之另一 方法’該方法藉由在適合培養基中培養宿主細胞直至合成 結合蛋白來進行。該方法可進一步包含自培養基分離結合 蛋白。 DVD-Ig之重要特徵在於其可以與習知抗體類似之方式 產生及純化。DVD-Ig之產生形成具有所要雙特異性活性 之均質單一主要產物’而無對恆定區之任何序列修飾或任 何種類之化學修飾。其他先前所述之產生「雙特異性 158366.doc -140· 201211252 「多，異性」及「多特異性多價」全長結合蛋白之方法不 產生單i產物，而是引起細胞内產生或分泌產生經組裝 之非活性、單特異性、多特異性、多價全長結合蛋白及具 有:同結合位點組合之多價全長結合蛋白的混合物。舉例 而言，基於Miller &Presta(PCT公開案 w〇 2〇〇1/〇77342 (AD)所述之設計，存在重鏈與輕鏈之16種可能組合。因 此，僅6.25%蛋白質可能呈所要之活性形式，而與其他15 «可能組合相比’並非為單_主要產物或單—主產物。使 〇帛通常用於大規模製造之標準層析技術分離蛋白質之所要 完全活性形式與蛋白質之非活性及部分活性形式仍有待證 實。 令人驚訝的是，「雙特異性多價全長結合蛋白」之設計 產生主要組裝成所要「雙特異性多價全長結合蛋白」的雙 可變區域輕鏈及雙可變區域重鏈。 至v 50/〇、至少75%及至少9〇%之經組裝及經表現之雙 彳變區域免疫球蛋白分子為所要雙特異性四價蛋白質。此 ◎ f施例尤其增進商業效用。因此，提供使雙可變區域輕鍵 及雙可變區域重鏈在單細胞中表現以產生「雙特異性四價 全長結合蛋白」作為單一主產物的方法。 亦提供使雙可變區域輕鏈及雙可變區域重鏈在單細胞中 表現以產生「雙特異性四價全長結合蛋白」作為「主產 物」的方法’其中該「主產物」佔所有包含雙可變區域輕 鏈及雙可變區域重鏈之經組裝蛋白質之5〇%以上。 亦提供使雙可變區域輕鏈及雙可變區域重鏈在單細胞中 l5S366.doc • 141 - 201211252 表現以產生「雙特異性四價全長結合蛋白」作為單一「主 產物」的方法，其中該「主產物佔 』」佔所有包含雙可變區域 輕鏈及雙可變區域重鏈之經組裝蛋白質之75%以上。
亦提供使雙可變區域輕鏈及雙可變F 叉」雙b域重鏈在單細胞中 表現以產生「雙特異性四價全長結合蛋白」作為單一「主 產物」的方法，其中該「主產物」佔所有包含雙可變區域 輕鏈及雙可變區域重鏈之經組裝蛋白質之90%以上。 π·衍生之結合蛋白 -個實施例提供結合蛋白經衍生化或連接於另_功能分 子（例如另一肽或蛋白質）的經標記結合蛋白。舉例而言， y藉由將本文提供之結合蛋白與—或多個其他分子實體功 能性連接（例如藉由化學偶合、I因融合、非共價締合或 其他方式)來衍生經標記結合蛋白，該一或多個其他分子 實體為諸如另—抗體(例如雙特異性抗體或雙功能抗 可偵測試劑、細胞毒性劑、醫藥劑及/或可介導結合蛋白 =另—分子（諸如抗生物蛋白鏈菌素核心區或聚組胺酸標 籤）締合之蛋白質或肽。 ，|、π 土个又挽併 螢光化合物。例示性螢光可偵測試劑包括螢光素、異硫 齩螢光素、若丹明、5-二甲胺-1-萘磺醯氯、藻紅素及其 似物。亦可用諸如鹼性磷酸酶、辣根過氧化酶、葡萄糖 化酶及其類似酶之可偵測酶衍生結合蛋白。當用可偵測丨 卜、° 5蛋白時’藉由添加其他試劑（酶使用該等試劑； 產生可偵測反應產物）對其加以偵測。舉例而言，當存3 158366.doc -142- 201211252 可偵成I試劑辣根過氧化酶時，添加過氧化氫及二胺基聯苯 胺會產生可偵測之有色反應產物。亦可以生物素衍生結合 蛋白，且經由間接量測抗生物素蛋白或抗生物蛋白鏈菌素 結合來偵測。 另—實施例提供一種結晶結合蛋白及包含該等晶體之調 配物及組合物。在一個實施例中，結晶結合蛋白具有比結 合蛋白之可溶性對應物高之活體内半衰期。在另一實施例 中’結合蛋白在結晶後保留生物活性。 〇 結晶結合蛋白可按照此項技術中已知及如WO 02/072636 中所揭示之方法產生。 另一實施例提供一種糖基化結合蛋白，其中結合蛋白或 其抗原結合部分包含一或多個碳水化合物殘基。初期活體 内蛋白質生產可經歷稱為轉譯後修飾之進一步加工。詳言 之可以酶處理方式添加糖（糖基）殘基，此過程稱為糖基 化所得具有共價連接之募醣側鏈之蛋白質稱為糖基化蛋 白處或醣蛋白。抗體為在Fc區域以及可變區域中具有一或 多個碳水化合物殘基之醣蛋白。F c區域中之碳水化合物殘 基對Fc區域之效應功能具有重要影響，而對抗體之抗原結 合或半衰期影響極小（R. Jefferis，的〜叹21 (2005)，第ιι_16頁）。相對而言，可變區域之糖基化可對 抗體之抗原結合活性產生影響。可變區域中之糖基化可能 對抗體結合親和力具有負面影響，這很可能係由於位阻作 用（Co，M.S.等人，Mol. Immun〇i (1993) 30:1361- 1367)或 導致對抗原之親和力増加（Wallick，sc.等人，Εχρ. Med. 158366.doc •143- 201211252 (1988) 168:1099-1 109，· Wright, A.等人，EMB〇 j. (1991) 10:2717 2723)。 一個態樣係針對產生結合蛋白之〇連接或N連接糖基化 位點已突變之糖基化位點突變體。熟習此項技術者可使用 標準熟知技術產生該等突變體。其他實施例為保留生物活 性但具有增加或減小之結合活性的糖基化位點突變體。 在另實施例中，結合蛋白或其抗原結合部分之糖基化 經修飾。舉例而言，可製備去糖基化之結合蛋白（亦即缺 乏糖基化之結合蛋白）。糖基化可經改變以例如增加結合 蛋白對抗原之親和力。該等碳水化合物修飾可藉由例如改 變結合蛋白序列中之一或多個糖基化位點實現。舉例而 言，可進行-或多個胺基酸取代，#導致消除一或多個可 變區糖基化位點從而消除彼位點處之糖基化。該去糖基化 可增加結合蛋白對抗原之親和力。該方法在pc丁公開案 戰0〇3〇16偏A2及美國專利第5,714 35()號及第6,350,^ 號中進一步詳細描述。 或者或另外，可製備具有改變之糖基化類型的經修飾結 合蛋白’諸如海藻糖基殘基之量減少的低海藻糖基化結合 蛋白(參看 Kanda，Yutaka等人，J〇_“f Bi〇techn〇i〇gy (20〇7)，130(3)，3〇〇_31〇)或平分型gicNAc結構增加之結合 蛋白。已證明該等經改變之糖基化模式增強抗體之ADCC 能力。該等碳水化合物修都可藉由例如使結合蛋白在糖基 化機構改變之宿主細胞中表現來實現。此項技術中已描述 糖基化機構改變之細胞且其可用作表現重組結合蛋白由 158366.doc 201211252 此產生糖基化改變之結合蛋白之宿主細胞。參看例如
Shields, R. L.等人，（2002) J. Biol. Chem. 277:26733-26740 ; Umana等人，（1999) Nat. Biotech. 17:176·1 以及歐洲專利第 ΕΡ 1，176，195號；PCT公開案 w〇 03/035835 ; WO 99/54342 80。 〇 〇 蛋白質糖基化視相關蛋白質之胺基酸序列以及表現該蛋 白質之宿主細胞而定。不同生物體可產生不同糖基化酶 (例如糖基轉移酶及醣苷酶）且具有不同的可利用受質（核苷 酸糖）。由於該等因素，蛋白質糖基化模式及糖基殘基之 組成可視表現特定蛋白質之宿主系統而不同。糖基殘基可 包括（但不限於）葡萄糖、半乳糖、甘露糖、海藻糖、乙 醯基葡糖胺及唾液酸。在一實施例中，糖基化結合蛋白包 含糖基殘基以使得糖基化模式為人類糖基化模式。 熟習此項技術者已知不同蛋白質糖基化可產生不同蛋白 質特徵。舉例而言，在諸如酵母之微生物宿主中產生，且 利用酵母内源途徑糖基化之治療性蛋白f的功效可能比諸 如CHO細胞株之哺乳動物細胞中表現之相同蛋白質的功效 低。該等聽蛋白亦可能在人類中具有免疫原性且在投盘後 展不降低之活體内半衰期。人類及其他動物中之特定受體 可識別特定糖基殘基且促進自血流中快速清除蛋白質。其 他不利作用可包括蛋白質摺疊、溶解 、'、 声m 今解度對蛋白酶之敏感 二輪、轉運、區室化、分泌、由其他蛋白質或因子識 原性或過敏原性的改變1此，醫師可能選擇且有 特疋糖基化組成及模式（例如與人類細胞或預定個體動 158366.doc -145· 201211252 之物種特異性細胞中所產生者相同或至少類似的糖基化組 成及模式）之治療性蛋白質。 表現不同於宿主細胞之糖基化蛋白質的糖基化蛋白質可 藉由基因修飾宿主細胞以表現異源糖基化酶來實現。使用 此項技術中已知之技術，醫師可產生展現人類蛋白質糖基 化之結合蛋白或其抗原結合部分。舉例而言，已對酵母^ 株進行基因修飾以表現非天然存在之糖基化酶，以使得此 等酵母㈣中所纟生之糖基化蛋白質（醋蛋白）展現與動物 細胞（尤其人類細胞）之蛋白質糖基化相同的蛋白質糖基化 (美國專利申請案20040018590及20020137134以及PCT公開 案 W02005100584 A2)。 除結合蛋白外，某些實施例亦針對對該等結合蛋白具有 特異性之抗個體基因型（抗Id)抗體。抗1(1抗體為識別一般 與另一抗體之抗原結合區締合之獨特決定子的抗體。可藉 由以結合蛋白或其含CDR之區域使動物免疫接種來製備抗 Id。經免疫接種動物將識別且回應免疫接種結合蛋白之遺 傳型決定子且產生抗Id抗體。顯而易見，可能較易於產生 併入DVD-Ig分子中之兩種或兩種以上親本抗體的抗個體 基因型抗體；且藉由此項技術中充分瞭解之方法（例如 BIAcore、ELISA)確認結合研究，以驗證針對各親本抗體 之個體基因型具有特異性之抗個體基因型抗體在DVD-Ig 之情形下亦識別個體基因型（例如抗原結合位點）。針對 DVD-Ig之兩個或兩個以上抗原結合位點中每一者具有特 異性之抗個體基因型抗體提供量測患者血清中人類dVD_ 158366.doc -146- 201211252
Ig之DVD-Ig濃度的理想試劑；DVD_ig濃度分析法可使用 失心分析法ELISA形式」建立，其中將針對第一抗原結 合區之抗體塗覆於固相（例如BIAcore晶片、EUSA盤等） 上’用沖洗緩衝液沖洗，與血清樣品一起培育，進行另一 沖洗步驟，且最終與針對另一抗原結合位點之另一抗個體 基因型抗體一起培育，該另一抗個體基因型抗體本身經酶 才示5己以疋量結合反應。在一實施例中，對於具有2個以上 不同結合位點之DVD-Ig，針對2個最外側（位於怪定區之最 遠端及最近端）結合位點的抗個體基因型抗體將不僅有助 於測定人類血清中之DVD-Ig濃度，且亦有助於證明分子 在活體内之完整性。各抗Id抗體亦可用作在另一動物中誘 發免疫反應之「免疫原」，從而產生所謂抗抗Id抗體。 此外，熟習此項技術者應瞭解，可使用經基因工程改造 以表現各種糖基化酶之宿主細胞文庫來表現相關蛋白質， 以使得該文庫中之宿主細胞成員產生具有變異糖基化模式 之相關蛋白質。醫師隨後可選拔及分離具有特定新穎糖基 化模式之相關蛋白質。在一實施例中，具有經特定選擇之 新穎糖基化模式之蛋白質展現改良或改變之生物特性。 III· DVD-Ig之用途 蓉於本文提供之結合蛋白結合於兩個或兩個以上抗原之 月b力’可使用該等結合蛋白以使用諸如酶聯免疫吸附分析 法（ELIS A)、放射免疫分析法（RIA)或組織免疫組織化學之 習知免疫分析法偵測抗原（例如生物樣品中，諸如金清或 血漿）° DVD-Ig經可偵測物質直接或間接標記以便於偵測 158366.doc -147- 201211252 結合或未結合DVD-Ig。適合可偵測物質包括各種酶、輔 基、螢光物質、發光物質及放射性物質。適合酶之實例包 括辣根過氧化酶、鹼性磷酸酶、卜半乳糖苷酶或乙醯膽鹼 酯酶；適合輔基複合物之實例包括抗生物蛋白鏈菌素/生 物素及抗生物素蛋白/生物素；適合螢光物質之實例包括 繳酮（umbelliferone)、螢光素、異硫氰酸螢光素、若丹 明、二氯三嗪基胺螢光素、丹醯氣（dansyl chl〇ride)或藻紅 素’發光物質之實例包括魯米諾（lurnjn〇i);且適合放射性 物質之實例包括 3H、14C、35s、90γ、99TC、luin、124、 131I、177Lu、66Ho或…Sm。 在一實施例中，結合蛋白能夠活體外及活體内中和抗原 活性。因此，該等DVD-Ig可用於在例如含有抗原之細胞 養物中，在具有與結合蛋白交叉反應之抗原的人類個體 或其他哺乳動物個體中抑制抗原活性。在另一實施例中， 提供一種降低罹患因抗原活性而受害之疾病或病症的個體 之抗原活性之方法。在一些實施例中，可出於治療目的向 人類個體投與結合蛋白。 如本文所用之術語「因抗原活性而受害之病症」意欲包 括以下疾病及其他病症，其中已罹患或疑似罹患該病症之 個體中所存在抗原為造成該病症之病理生理的原因，或為 促使該病症惡化之因素之疾病及其他病症。因此，因抗原 活性而受害之病症為可能因降低抗原活性會緩解病症之症 狀及/或進展的病症。該等病症可藉由例如罹患該病症之 個體之生物流體中抗原濃度之增加（例如個體之血清、血 158366.doc -148· 201211252 漿、滑液等中抗原濃度增加）來證實。可以本文提供之結 合蛋白治療的病症的非限制性實例包括下文及關於醫藥組 合物之章節中所論述的彼等病症。 本文提供之DVD-Ig可結合一個抗原或多個抗原。該等 抗原包括（但不限於）以下數據庫中所列之目標，該等數據 庫以引用的方式併入本文中。此等目標數據庫包括下文所 列之彼等： Ο
治療性目標（http://xin.cz3.nus.edu.sg/group/cjttd/ttd.asp); 細胞激素及細胞激素受體（http://www.cytokinewebfacts.com/， http://www.copewithcytokines.de/cope.cgi 及 http://cmbi.bjmu.edu.cn/cmbidata/cgf/CGF_Database/ cytokine.medic.kumamoto-u.ac.jp/CFC/indexR.html)； 趨化因子（http://cytokine.medic.kumamoto-u.ac.jp/CFC/ CK/Chemokine.html)； 趨化因子受體及 GPCR(http://csp.medic.kumamoto-u.ac.jp/ CSP/Receptor.html, http://www.gpcr.org/7tm/)； 嗅覺受體（Olfactory Receptor)(http://senselab.med.yale.edu/ senselab/ORDB/default.asp); 受體（http://www.iuphar-db.org/iuphar-rd/list/index.htm); 癌症目標（http://cged.hgc.jp/cgi-bin/input.cgi); 作為潛在抗體目標之分泌蛋白（http://spd.cbi.pku.edu.cn/); 蛋白激酶（http://spd.cbi.pku.edu.cn/)及 人類 CD標記（http://content.labvelocity.eom/tools/6/l 226/ CD_table_final_locked.pdf)及（Zola H, 2005 CD molecules 158366.doc -149- 201211252 2005: human cell differentiation molecules Blood, 106:3123- 6)。 DVD-Ig適用作治療劑以同時阻斷兩種不同目標，從而 增強功效/安全性及/或增加患者覆蓋範圍。該等目標可包 括可溶性目標（TNF)及細胞表面受體目標（VEGFR及 EGFR)。其亦可用於誘導腫瘤細胞與T細胞（Her2及CD3)之 間（對於癌症療法而言）、或自身反應性細胞與效應細胞之 間（對於自體免疫疾病或移植而言）、或任何目標細胞與效 應細胞之間的重導向細胞毒性以消除任何既定疾病中引起 疾病之細胞。 此外，當DVD-Ig經設計以靶向同一受體上的兩個不同 抗原決定基時，其可用於引發受體叢集及活化。此有益於 製備促效性及拮抗性抗GPCR治療劑。在此情形下，DVD-Ig可用於靶向一個細胞上的兩個不同抗原決定基（包括環區 及胞外區域兩者上之抗原決定基）以實現叢集/信號傳導（兩 個細胞表面分子）或信號傳導（一個分子上）。類似地， DVD-Ig分子可經設計以藉由靶向CTLA-4胞外區域之兩個 不同抗原決定基（或同一抗原決定基之2個複本）來引發 CTLA-4接合及負信號，導致免疫反應下調。CTLA-4為用 於治療性治療多種免疫學病症的經臨床驗證之目標。 CTLA-4/B7相互作用藉由肖ij弱細胞週期進展、IL-2產生及T 細胞在活化後的增殖來負調控T細胞活化，且CTLA-4(CD 152)嚙合可下調T細胞活化及促進免疫耐受之誘導。 然而，藉由CTLA-4之促效性抗體嚙合來削弱T細胞活化之 158366.doc -150- 201211252 策略已失敗，因為CTLA-4活化需要接合。如晶體結構分 析所證實，CTLA-4/B7之分子相互作用為「斜拉鏈」陣列 形式（Stamper 2001 Nature 410:608)。然而，當前可獲得之 CTLA-4結合試劑（包括抗CTLA-4 mAb)均不具有接合特 性。已進行多種嘗試來解決此問題。在一種情形下，產生 細胞成員結合之單鏈抗體，其顯著抑制小鼠之同種異體排 斥（Hwang 2002 JI 169:633)。在另一種情形下，產生針對 CTLA-4之人工APC表面連接型單鏈抗體，且證明其削弱T 〇 細胞反應（Griffin 2000 JI 164:4433)。在兩種情形下，藉由 在人工系統中緊密定位之成員結合抗體實現CTLA-4接 合。儘管此等實驗提供藉由引發CTLA-4負信號傳導使免 疫下調之概念驗證，但此等報導中所使用之試劑不適於治 療性用途。為此，可藉由使用靶向CTLA-4胞外區域之兩 個不同抗原決定基（或同一抗原決定基之2個複本）的DVD-Ig分子實現CTLA-4接合。基本原理為跨越IgG之兩個結合 位點的距離（約150-170A)過大，以致無法實現CTLA-4之活 Ο 性接合（2個CTLA-4均二聚體之間為30-50 A)。然而， DVD-Ig(—個臂）上兩個結合位點之間的距離短得多（亦在 3 0-50 A範圍内），從而允許CTLA-4的適當接合。 類似地，DVD-Ig可靶向細胞表面受體複合物之兩個不 同成員（例如IL-12R α及β)。此外，DVD-Ig可靶向CR1及可 溶性蛋白質/病原體，從而驅使快速清除目標可溶性蛋白 質/病原體。 此外，本文提供之DVD-Ig可用於組織特異性傳遞（靶向 158366.doc -151 - 201211252 組織標記及疾病介體以提高局部pk，從而具有較高功效及 /或較低毒性），包括胞内傳遞（靶向内化受體及胞内分 子）、傳遞至腦内（靶向運鐵蛋白受體及CNS疾病介體以跨 越血腦屏障）。DVD-Ig亦可用作載體蛋白以經由結合於抗 原之非中和抗原決定基而將彼抗原傳遞至特定位置，及亦 提高抗原半衰期。此外，DVD-Ig可經設計以物理連接於 植入患者體内之醫學裝置或靶向此等醫學裝置（參看Burke, Sandra E.; Kuntz, Richard E.; Schwartz, Lewis B., Zotarolimus eluting stents. Advanced Drug Delivery Reviews (2006), 58(3)，437-446 ; Surface coatings for biological activation and functionalization of medical devices, Hildebrand, H. F.; Blanchemain, N.; Mayer, G.; Chai, F.; Lefebvre, M.; Boschin, F.， Surface and Coatings Technology (2006)， 200(22-23), 6318-6324 ； Drug/device combinations for local drug therapies and infection prophylaxis, Wu, Peng; Grainger, David W., Biomaterials (2006), 27(1 1), 2450-2467 ； Mediation of the cytokine network in the implantation of orthopedic devices., Marques, A. P.; Hunt, J. A.; Reis, Rui L., Biodegradable Systems in Tissue Engineering and Regenerative Medicine (2005)，377-397) ° 簡言之，將適當類型之細胞引導至醫藥植入部位可促進癒 合且修復正常組織功能。或者，亦提供對在裝置植入後藉 由偶合於裝置上或靶向裝置之DVD-Ig釋放之介體（包括（但 不限於）細胞激素）的抑制作用。舉例而言，介入心臟病學 158366.doc •152- 201211252 多年來使用支架疏通阻塞之動脈及改善血液至心肌之流 動。然而，已知傳統裸金屬支架在一些患者體内會引起再 狹窄（所治療區域t之動脈再變狹窄）且可產生血液凝塊。 最近，已描述塗有抗CD34抗體之支架，其藉由捕捉在整 個血液中循環之内皮祖細胞（EPC)來減輕再狹窄且防止出 現灰液凝塊。内皮細胞為内襯於血管内使企液順暢流動之 細胞。EPC黏附於支架之硬質表面上，形成光滑層，該光 Ο
滑層不僅促進癒合而且亦防止再狹窄及企液凝塊，與使用 支架先前相Μ之併發症（八叫等人，2〇〇5 ; Am c〇u 45(10):1574_9p除改善需要支架之患者的結果以外，對 需要心血管繞道手術之患者亦存在意義。舉例而言，塗有 抗EPC抗體之修復血管管道（人工動脈）將消除使用來自患 者腿部或手臂之動脈用於繞道手術移植的需要。此將減少 手術及麻醉次數，繼而將減少冠狀動脈手術死亡。以一定 方式設計DVD-Ig，該方式使得其結合於細胞表面標記（諸 如CD34)以及已塗於植入之裝置上以促進細胞募集之蛋白 貝(或任何種類之抗原決定基，包括(但不限於)蛋白質、脂 貝及夕醣）° s玄等方法_般亦可用於其他醫學植入物。或 者，可將则七塗於醫學裝置上且在裝置植入且自該裝 置釋放所有DVD-Ig後（或可能需|其他新鮮之任何 八他而求&括已裝栽之DVD_Ig老化及變性），可藉由向 患者全身性投舆新鮮DVD姻裝載該裝置，其中则七 經設計以一組結合位點結合於相關目標（細胞激素、細胞 表面標記（諸如CD34)箄、η ,、，σ 寸J i以另一組結合位點結合於裝置 158366.doc •153· 201211252 上塗有之目標（包括蛋白質，任何種類之抗原決定基，包 括（但不限於）脂質、多醣及聚合物）。此技術具有擴展經塗 覆植入物之適用性的優勢。 A· DVD-Ig在各種疾病中之用途 本文提供之DVD-Ig分子亦適用作治療各種疾病之治療 性分子。該等分子可結合特定疾病中所涉及之一或多種目 標。各種疾病中之該等目標之實例描述如下。 A1.人類自體免疫及發炎反應 一般自體免疫及發炎反應中涉及許多蛋白質，包括C5、 CCLl(I-309)、CCL11(嗜酸性粒細胞趨化因子（eotaxin)) ' CCL13(mcp-4)、CCL15(MIP-ld)、CCL16(HCC-4)、CCL17 (TARC)、CCL18(PARC)、CCL19、CCL2(mcp-l)、CCL20 (MIP-3a)、CCL21(MIP-2)、CCL23(MPIF-1)、CCL24(MPIF-2/ 嗜酸性粒細胞趨化因子-2)、CCL25(TECK)、CCL26、 CCL3(MIP-la) 、 CCL4(MIP-lb) 、 CCL5(RANTES)、 CCL7(mcp-3)、CCL8(mcp-2)、CXCL1、CXCLIO(IP-IO)、 CXCLll(I-TAC/IP-9)、CXCL12(SDF1)、CXCL13、CXCL14、 CXCL2、CXCL3、CXCL5(ENA-78/LIX)、CXCL6(GCP-2)、CXCL9、IL13 ' IL8、CCL13(mcp-4)、CCR1、 CCR2、CCR3、CCR4、CCR5、CCR6、CCR7、CCR8、 CCR9、CX3CR1、IL8RA、XCRl(CCXCRl)、IFNA2、 IL10、IL13、IL17C、ILIA、IL1B、IL1F10、IL1F5、 IL1F6、IL1F7、IL1F8、IL1F9、IL22、IL5、IL8、IL9、 LTA、LTB、MIF、SCYE1(内皮單核細胞活化細胞激素）、 158366.doc •154- 201211252 SPPl 、TNF 、TNFSF5 、IFNA2 、IL10RA、IL10RB 、 IL13、IL13RA1、IL5RA、IL9、IL9R、ABCF1、BCL6、 C3、C4A、CEBPB、CRP、ICEBERG、IL1R1、IL1RN、 IL8RB、LTB4R、TOLLIP、FADD、IRAKI 、IRAK2、 MYD88、NCK2、TNFAIP3、TRADD、TRAF1、TRAF2、 TRAF3、TRAF4、TRAF5、TRAF6、ACVR1、ACVR1B、 ACVR2、ACVR2B、ACVRL1、CD28、CD3E、CD3G、 CD3Z、CD69、CD80、CD86、CNR1、CTLA4、CYSLTR1、 O FCER1A、FCER2、FCGR3A、GPR44、HAVCR2、 OPRD1、P2RX7、TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR6、 TLR7、TLR8、TLR9、TLR10、BLR1、CCL1、CCL2、 CCL3、CCL4、CCL5、CCL7、CCL8、CCL11、CCL13、 CCL15 、 CCL16 、 CCL17 、 CCL18 、 CCL19 、 CCL20 、 CCL21 、 CCL22 、 CCL23 、 CCL24 、 CCL25 、 CCR1 、 CCR2、CCR3、CCR4、CCR5、CCR6、CCR7、CCR8、 CCR9、CX3CL1、CX3CR1、CXCL1、CXCL2、CXCL3、 〇 CXCL5、CXCL6、CXCL10、CXCL11、CXCL12、 CXCL13 、 CXCR4 、 GPR2 、 SCYE1 、 SDF2 、 XCL1 、 XCL2、XCR1、AMH、AMHR2、BMPR1A、BMPR1B、 BMPR2 > C19 或 flO(IL27w)、CER1、CSF1、CSF2、 CSF3、DKFZp451J0118、FGF2、GFI1、IFNA1、IFNB1、 IFNG、IGF1、ILIA、IL1B、IL1R1、IL1R2、IL2、 IL2RA、IL2RB、IL2RG、IL3、IL4、IL4R、IL5、 IL5RA 、 IL6 、IL6R 、IL6ST 、 IL7 、 IL8 、 IL8RA 、 158366.doc -155- 201211252 IL8RB、IL9、IL9R、IL10、IL10RA、IL10RB、ILll、 IL11RA、IL12A、IL12B、IL12RB1、IL12RB2、IL13、 IL13RA1、IL13RA2、IL15、IL15RA、IL16、IL17、 IL17R、IL18、IL18R1、IL19、IL20、KITLG、LEP、 LTA、LTB、LTB4R、LTB4R2、LTBR、MIF、NPPB、 PDGFB、TBX21、TDGF1、TGFA、TGFB1、TGFB1I1、 TGFB2 、 TGFB3 、 TGFBI 、 TGFBR1 、 TGFBR2 、 TGFBR3、TH1L、TNF、TNFRSF1A、TNFRSF1B、 TNFRSF7 、 TNFRSF8 、 TNFRSF9 、 TNFRSF11A 、 TNFRSF21、TNFSF4、TNFSF5、TNFSF6、TNFSF11、 VEGF、ZFPM2及 RNF110(ZNF144)。在一個態樣中，提供 能夠結合一或多個本文所列目標之DVD-Ig。 涵蓋能夠結合以下成對目標以治療發炎疾病之DVD Ig : TNF 與 IL-17A ; TNF 與 RANKL ; TNF 與 VEGF ; TNF 與 SOST(序列 1) ; TNF 與 DKK ; TNF 與 ανβ3 ; TNF 與 NGF ; TNF 與 IL-23pl9; TNF 與 IL-6; TNF 與 SOST(序歹丨J2); TNF 與 IL-6R ; TNF與 CD-20 ; TNF與 LPA ; TNF與 PGE2 ; IgE與 IL-13(序列 1) ; IL-13(序列 1)與 IL23pl9 ; IgE與 IL-4 ; IgE 與 IL-9(序列 1) ; IgE與 IL-9(序列 2) ; IgE與 IL-13(序列 2); 1[-13(序列1)與11^-9(序列1);11^13(序列1)與11^4;1[-13(序列 1)與 IL-9(序列 2) ; IL-13(序列 2)與 IL-9(序列 1) ; IL-13(序列2)與11^-4;1[-13(序列2)與比-23?19;1[-13(序列2) 與 IL-9(序列 2) ; IL-6R與 VEGF ; IL-6R與 IL-17A ; IL-6R與 RANKL ； IL-17A 與 IL-Ιβ(序列 1) ; IL-Ιβ(序列 1)與 158366.doc -156- 201211252 RANKL ; IL-Ιβ(序列 1)與 VEGF ; RANKL與 CD-20 ; IL-Ια 與1L-Ιβ(序列1) ; IL_la與IL-Ιβ(序列2)(參看實例至 2.40) 〇 Α2·哮喘 過敏性哮喘之特徵在於存在嗜伊紅血球增多、杯狀細胞 化生、上皮細胞改變、氣管過度反應（AHR)以及Th2及Thl 細胞激素表現以及血清IgE含量升高。目前廣泛認可氣管
發炎為°孝喘發病機制之潛在關鍵因素，涉及諸如T細胞、B Ο 細胞、嗜伊紅血球、肥大細胞及巨噬細胞之發炎性細胞及 其分泌之介體（包括細胞激素及趨化因子）的複雜相互作 用。皮質類固醇為當今用於哮喘之最重要的消炎治療劑， 但其作用機制不具特異性，且存在安全性問題，尤其在青 少年患者群體中更是如此。因此有必要開發更具特異性及 靶向性之療法。愈來愈多證據表明小鼠中之IL-13模擬許 多哮喘特徵，包括AHR、黏液分泌過多及氣管纖維化，而 與嗜伊紅血球發炎無關（Finotto等人，International 〇 ImmUn〇1〇gy (2〇05), P(8)，993-1007 ; Padilla等人，Journal of Immunology (2005)，174(12)，8〇97 8i〇5)。 已暗示IL-13在引起與哮喘相關之病理學反應中起關鍵 作用降低IL-13在肺中之效應的抗^ mAb療法之發展 為激勵人。的新方法，其作為哮喘之新顆治療具有相當大 的剛景。然而，哮喘發病機制中亦涉及差異免疫路徑之其 他；I體且除IL-13之外亦阻斷此等介體可提供其他治療 血處。該等成對目標包括（但不限於）m及促炎性細胞激 158366.doc •157· 201211252 素，諸如腫瘤壞死因子-a(TNF-a)。TNF-α可增強哮喘之發 炎反應，且可能與疾病嚴重程度相關聯（McDonnell等人， Progress in Respiratory Research (2001), 31(New Drugs for Asthma, Allergy and COPD), 247-250.)。此表明阻斷IL-13 及TNF-α兩者可能具有有益作用，尤其在嚴重氣管疾病中 更是如此。在另一實施例中，DVD-Ig結合目標IL-13及 TNFa，且用於治療哮喘。 可評估發炎及AHR之動物模型（諸如OVA誘導哮喘之小 鼠模型）在此項技術中已知，且可用於測定各種DVD-Ig分 子治療哮喘之能力。用於研究哮喘之動物模型揭示於 Coffman 等人，Journal of Experimental Medicine (2005), 201(12)，1875-1879 ; Lloyd等人，Advances in Immunology (2001), 77，263-295 ; Boyce 等人，Journal of Experimental Medicine (2005)，201(12), 1869-1873 ;及 Snibson 等人， Journal of the British Society for Allergy and Clinical Immunology (2005)，35(2)，146-52 中。除此等成對目標之 常規安全性評估以外，可能有必要針對免疫抑制程度進行 特定測試且該等測試有助於選擇最佳成對目標（參看Luster 等人，Toxicology (1994)，92(1-3)，229-43; Descotes等人， Developments in biological standardization (1992), 77 99-102 ; Hart等人，Journal of Allergy and Clinical Immunology (2001), 108(2)，250-257)。 基於本文所揭示之基本原理且使用功效及安全性之相同 評估模型，可測定DVD-Ig分子可結合且適用於治療哮喘 158366.doc •158· 201211252 之其他成對目標。在一實施例中，該等目標包括（但不限 於）IL-13與IL-Ιβ，因為IL-Ιβ亦涉及於哮喘之發炎反應 中；IL-13與發炎中涉及之細胞激素及趨化因子，諸如IL-13 與 IL-9 ; IL-13 與 IL-4 ; IL-13 與 IL-5 ; IL-13 與 IL-25 ; IL-13 與 TARC ; IL-13 與 MDC ; IL-13 與 MIF ; IL-13 與 TGF-β ; IL-13 與 LHR 促效劑；IL-13 與 CL25 ; IL-13 與 SPRR2a ; IL-13與SPRR2b ;及IL-13與ADAM8。亦提供能夠結合哮喘中 涉及之一或多個目標的DVD-Ig。在一些實施例中，目標 Ο 為 CSFl(MCSF)、CSF2(GM-CSF)、CSF3(GCSF)、FGF2、 IFNA1、IFNB1、IFNG、組織胺及組織胺受體、ILIA、 IL1B、IL2、IL3、IL4、IL5、IL6、IL7、IL8、IL9、 IL10、IL11、IL12A、IL12B、IL13、IL14、IL15、IL16、 IL17、IL18、IL19、KITLG、PDGFB、IL2RA、IL4R、 IL5RA 、 IL8RA 、IL8RB 、 IL12RB1 、IL12RB2 、 IL13RA1、IL13RA2、IL18R1、TSLP、CCL1、CCL2、 CCL3、CCL4、CCL5、CCL7、CCL8、CCL13、CCL17、 〇 CCL18、CCL19、CCL20、CCL22、CCL24、CX3CL1、 CXCL1 、 CXCL2 、 CXCL3 、 XCL1 、 CCR2 、 CCR3 、 CCR4、CCR5、CCR6、CCR7、CCR8、CX3CR1、GPR2、 XCR1、FOS、GATA3、JAK1、JAK3、STAT6、TBX21、 TGFB1 、 TNF 、 TNFSF6 、 YY1 、 CYSLTR1 、 FCER1A 、 FCER2、LTB4R、TB4R2、LTBR或殼質酶。 A3.類風濕性關節炎 類風濕性關節炎（RA)為一種全身性疾病，其特徵在於關 -159- 158366.doc 201211252 節滑膜中之慢性發炎反應，且與軟骨退化及近關節骨磨損 有關。患病關節中表現包括TNF、趨化因子及生長因子之 許多促炎性細胞激素。向RA小鼠模型全身性投與抗TNF抗 體或sTNFR融合蛋白顯示消炎及關節保護。藉由靜脈内投 與英利昔單抗（Harriman G, Harper LK，Schaible TF. 1999 Summary of clinical trials in rheumatoid arthritis using infliximab, an anti-TNFalpha treatment. Ann Rheum Dis 58 增刊1:161-4)(—種嵌合抗TNF mAb)阻斷RA患者之TNF活 性的臨床研究已提供證據表明TNF調控IL-6、IL-8、MCP-1及VEGF產生、免疫及發炎性細胞至關節中之募集、血管 生成及降低基質金屬蛋白酶1及3血液含量。類風濕性關節 炎之發炎路徑的較佳理解導致鑑別類風濕性關節炎中涉及 的其他治療目標。過去幾年中，已在隨機對照試驗中測試 有前景之治療劑，諸如介白素-6拮抗劑（由Chugai, Roche 開發之IL-6受體抗體MRA)(參看Nishimoto, Norihiro等人， Arthritis & Rheumatism (2004)，50(6)，1761-1769)、CTLA4Ig (阿巴西普（abatacept)，Genovese Me等人，2005 Abatacept for rheumatoid arthritis refractory to tumor necrosis factor alpha inhibition· N Engl J Med. 353:1 1 14-23.)及抗 B 細胞療 法（利妥昔單抗；Okamoto H, Kamatani Ν· 2004 Rituximab for rheumatoid arthritis. N Engl J Med· 351:1909)。已鑑別 出其他細胞激素，且已顯示其在動物模型中具有益處，包 括介白素-15(治療性抗體HuMax-IL_15，AMG 714，參看 Baslund, Bo 等人，Arthritis & Rheumatism (2005)，52(9)， 158366.doc -160- 201211252 2686-2692)、介白素-17及介白素-18，且目前正在進行此 等試劑之臨床試驗。雙特異性抗體療法組合抗TNF及另一 介體在提高臨床功效及/或患者覆蓋範圍方面具有極大潛 力。舉例而言’阻斷TNF及VEGF可能根除發炎及血管生 成，其皆涉及於RA病理生理學中。亦涵蓋以特異性DVD Ig阻斷RA中涉及之其他成對目標，包括（但不限於）TNF與 IL-18 ; TNF與 IL-12 ; TNF與 IL-23 ; TNF與 IL-Ιβ ; TNF與 MIF ; TNF與IL-17 ;及TNF與IL-1 5。除對此等成對目標之 Ο 常規安全性評估以外，可能有必要針對免疫抑制程度進行 特定測試且該等測試有助於選擇最佳成對目標（參看Luster 等人，Toxicology (1994)，92(1-3)，229-43 ; Descotes 等人， Developments in biological standardization (1992)，77 99-102 ; Hart等人，Journal of Allergy and Clinical Immunology (2001)，108(2), 250-257)。可使用臨床前動物RA模型（諸如 膠原蛋白誘導關節炎之小鼠模型）評估DVD Ig分子是否將 適用於治療類風濕性關節炎。其他適用模型亦為此項技術 ◎中所熟知（參看Brand DD·，Comp Med. (2005) 55(2):1 14-22)。基於親本抗體對人類及小鼠直系同源物之交叉反應 性（例如對人類與小鼠TNF、人類與小鼠IL-15等之反應 性），可以「匹配之替代抗體」產生之DVD-Ig分子進行小 鼠CIA模型中之驗證研究；簡言之，基於兩個（或兩個以 上）小鼠目標特異性抗體之DVD-Ig可在可能的程度上匹配 用於人類DVD-Ig建構之親本人類抗體或人類化抗體之特 徵（類似親和力、類似中和效能、類似半衰期等）。 158366.doc -161· 201211252
A4. SLE SLE之免疫病原性特點為多株B細胞活化，此導致高球 蛋白血症、產生自體抗體及形成免疫複合物。基本異常似 乎為T細胞由於全身性T細胞功能障礙而無法抑制禁忌B細 胞純系。此外’若干細胞激素（諸如IL-10)以及起始第二信 號之協同刺激分子（諸如CD40及CD40L、B7及CD28及 CTLA-4)促進B細胞與T細胞相互作用。此等相互作用，連 同免疫複合物及細胞凋亡物質的吞噬細胞清除受損’使免 疫反應及由此導致之組織損傷持續。以下目標可涉及於 SLE中且可潛在地用於供治療性干預的DVD-Ig方法中：B 細胞靶向療法：CD-20、CD-22、CD-19、CD28、CD4、 CD80、HLA-DRA、IL10、IL2、IL4、TNFRSF5、 TNFRSF6 、TNFSF5 、TNFSF6 、BLR1 、HDAC4 、 HDAC5、HDAC7A、HDAC9、ICOSL、IGBP1、MS4A1、 RGS1 、 SLA2 、 CD81 、 IFNB1 、 IL10 、 TNFRSF5 、 TNFRSF7、TNFSF5、AICDA、BLNK、GALNAC4S-6ST、 HDAC4、HDAC5 、HDAC7A、HDAC9、IL10、IL11 、 IL4、INHA、INHBA、KLF6、TNFRSF7、CD28、CD38、 CD69、CD80、CD83、CD86、DPP4、FCER2、IL2RA、 TNFRSF8、TNFSF7、CD24、CD37、CD40、CD72、 CD74、CD79A、CD79B、CR2、IL1R2、ITGA2、ITGA3、 MS4A1、ST6GAL1、CD1C、CHST10、HLA-A、HLA-DRA及NT5E.;協同刺激信號：CTLA4或B7.1/B7.2 ;抑制 B細胞存活：BlyS、BAFF ;補體失活：C5 ;細胞激素調 158366.doc -162· 201211252 節：關鍵原理在於任何組織中之淨生物反應均為促炎性細 胞激素或消炎細胞激素局部含量之間的平衡結果（參看
Sfikakis PP4 人，2005 Curr Opin Rheumatol 17:550-7)。 SLE視作Th-2驅動之疾㉟，已證實其中金清il_4、江^、 IL-10升高。在一些實施例中，DVD匕能夠結合、a· 6、IL·1 〇、IFN_a或™F-a。本文所述之目標組合將增強針 對SLE之治療功效，其可在多種狼瘡臨床前模型中進行測 試（參看 Peng SL (2004) Meth〇ds Mol Med.; 1〇2:227 72)。 〇 基於親本抗體對人類及小鼠直系同源物之交又反應性（例 如對人類及小鼠CD20、人類及小鼠干擾素a等之反應性）， 可以「匹配之替代抗體」產生之DVD-Ig分子進行小鼠狼 瘡模型中之驗證研究；簡言之，基於兩個（或兩個以上）小 鼠目標特異性抗體之DVD_Ig可在可能之程度上匹配用於 人類DVD-Ig建構之親本人類抗體或人類化抗體之特徵（類 似親和力、類似中和效能、類似半衰期等）。 A5·多發性硬化症 0 .多發性硬化症（MS)為病因基本上未知之一種複雜的人類 自體免疫型疾病。在整個神經系統中髓鞘鹼性蛋白（MBp) 的免疫破壞為多發性硬化症之主要病理。MS為具有涉及 CD4+及CD8+ T細胞浸潤之複雜病理及中樞神經系統内之 反應之疾病。細胞激素、反應性氮物質及協同刺激分子在 CNS中之表現皆已關於MS有所描述。主要考慮因素為促進 產生自體免疫的免疫機制。詳言之，抗原表現、細胞激素 與白血球相互作用及有助於平衡/調節其他τ細胞（諸如Th 1 158366.doc •163· 201211252 及Th2細胞）之調控性T細胞為治療目標鑑別之重要方面。 IL-12為由APC產生且促進Th 1效應細胞分化之促炎性細 胞激素。IL-12在罹患MS之患者正形成之病變中以及在罹 患EAE之動物體内產生。先前已展示干擾il-12路徑可有效 防止齧齒動物之EAE，且使用抗IL-12 mAb活體内中和IL-12p40在普通狨猿之髓鞘誘發性EAE模型中具有有益作 用。 TWEAK為TNF家族之成員，其組成性表現於中樞神經系 統（CNS)中，視細胞類型而定具有促炎性、增殖性或細胞 凋亡效應。其受體Fn 14係由内皮細胞、反應性星形膠質細 胞及神經元表現於CNS中。在實驗性自體免疫腦脊髓炎 (EAE)期間，脊髓中之TWEAK及Fnl4 mRNA表現增加。對 C57BL/6小鼠之髓鞘募樹突神經膠質細胞醣蛋白（MOG)誘 發之EAE進行抗TWEAK抗體治療在預致敏階段後治療小 鼠時會引起疾病嚴重程度及白血球浸潤降低。 一個實施例係關於能夠結合一或多種（例如兩種）目標的 DVD Ig分子。在一些實施例中，目標為IL-12、TWEAK、 IL-23、CXCL13、CD40、CD40L、IL-18、VEGF、VLA-4、TNF、CD45RB、CD200、IFNy、GM-CSF、FGF、C5、 CD52或CCR2。一實施例包括雙特異性抗IL-12/TWEAK DVD Ig作為有益於治療MS之治療劑。 若干用於評估DVD-Ig分子治療MS之適用性的動物模型 為此項技術所已知（參看Steinman L等人，（2005) Trends Immunol. 26(1 1):565-71 ; Lublin FD.等人，（1985) Springer 158366.doc -164- 201211252
Semin Immunopathol. 8(3):197-208 ; Genain CP 等人， (1997) J Mol Med. 75(3):187-97 ; Tuohy VK等人，（1999) J Exp Med· 189(7):1033-42 ; Owens T 等人，（1995) Neurol Clin· 13(1):51-73 ;及't Hart BA 等人，（2005) J Immunol 175(7):4761-8)。基於人類及動物物種直系同源物之親本 抗體交叉反應性（例如人類及小鼠IL-12、人類及小鼠 TWEAK等之反應性），可以「匹配之替代抗體」產生之 DVD-Ig分子進行小鼠EAE模型中之驗證研究；簡言之，基 〇 於兩個（或兩個以上）小鼠目標特異性抗體之DVD-Ig可在可 能的程度上匹配用於人類DVD-Ig建構之親本人類抗體或 人類化抗體之特徵（類似親和力、類似中和效能、類似半 衰期等）。相同概念適用於其他非齧齒動物物種之動物模 型，其中將選擇「匹配之替代抗體」產生之DVD-Ig用於 預期藥理學及可能的安全性研究。除對此等成對目標之常 規安全性評估以外，有必要針對免疫抑制程度進行特定測 試且該等測試有助於選擇最佳成對目標（參看Luster等人， 〇 Toxicology (1994)，92(1_3)，229-43 ; Descotes等人，Developments in biological standardization (1992)，77 99-102 ; Jones R. 2000 Rovelizumab (ICOS Corp). IDrugs. 3(4):442-6)。 Α6·敗血症 敗血症之病理生理係由革蘭氏陰性生物體（脂多醣 [LPS]、脂質A、内毒素）及革蘭氏陽性生物體（脂磷壁酸 (lipoteichoic acid)、肽聚糖）之外膜組分起始。此等外膜組 分能夠結合於單核細胞表面上之CD14受體。根據最近描 158366.doc -165- 201211252 述之toll樣受體，接著將信號傳遞至細胞，導致最終產生 促炎性細胞激素腫瘤壞死因子_a(TNF-a)及介白素 1)。嚴重發炎及免疫反應為敗血性休克之基本特徵，且在 由敗血症誘導之組織損傷、多器官衰竭及死亡之發病機制 中起重要作用。細胞激素（尤其腫瘤壞死因子及介白 素（IL-1))已經展示為敗血性休克之關鍵介體。此等細胞激 素對組織具有直接毒性作用；其亦活化填脂酶A2。此等及 其他效應導致血小板活化因子濃度增加、促進氧化氮合成 酶活性、促進嗜中性白血球之組織浸潤及促進嗜中性白血 球活性。 對敗血症及敗血性休克之治療仍為臨床難題，且以針對 發炎反應之生物反應調節劑（亦即抗TNF '抗MIF)進行之 新近前瞻性試驗僅展示中等臨床益處。最近，關注轉向目 的在於逆轉免疫抑制伴發期之治療。對實驗動物及危重患 者之研究已表明淋巴器官及一些實質組織之細胞凋亡增強 促成此免疫抑制、無反應性及器官系統功能障礙。在敗血 症症候群期間，淋巴細胞細胞凋亡可由缺乏IL_2或由釋放 糖皮質激素、顆粒酶或所謂之「死亡」細胞激素（即腫瘤 壞死因子ex或Fas配位體）引發。細胞凋亡經由胞内及/或粒 線體卡斯蛋白酶之自體活化繼續進行，該自體活化可受 Bcl-2家族之促細胞凋亡及抗細胞凋亡成員影響。在實驗 動物中，用細胞凋亡抑制劑治療不僅可防止淋巴細胞之細 胞凋亡；其亦可改善結果。儘管對抗細胞凋亡劑之臨床試 驗在很大程度上歸因於與其投與及組織靶向相關之技術困 158366.doc -166- 201211252 難而難以進行，但抑制淋巴細胞細胞凋亡代表用於敗血症 患者之有吸引力的治療目標。同樣，靶向發炎性介體及細 胞凋亡介體之雙特異性藥劑可具有其他益處。一個實施例 係關於能夠結合一或多種涉及於敗血症中之目標（在一實 施例，兩種目標）的DVD Ig。在一些實施例中，目標為 TNF、IL-1、MIF、IL-6、IL-8、IL-18、IL-12、IL-23、 FasL、LPS、Toll樣受體、TLR-4、組織因子、MIP-2、 ADORA2A、CASP1、CASP4、IL-10、IL-1B、NFKB1、 O PROC、TNFRSF1A、CSF3、CCR3、IL1RN、MIF、 NFKB1、PTAFR、TLR2、TLR4、GPR44、HMOX1、中期 因子（midkine)、IRAKI、NFKB2、SERPINA1、SERPINE1 或TREM1。該等DVD Ig對於敗血症之功效可在此項技術 中已知之臨床前動物模型中評估（參看Buras JA等人， (2005) Nat Rev Drug Discov. 4(10):854-65 以及 Calandra T 等人，（2000) Nat Med. 6(2):164-70)。 Α7·神經病症 〇 Α7.1.神經退化性疾病 神經退化性疾病為慢性的（在該情形中，其通常為年齡 相關性的）或急性的（例如中風、創傷性腦損傷、脊髓損傷 等）。其特徵在於神經元功能進行性喪失（神經元細胞死 亡、脫髓鞘）、運動性喪失及記憶喪失。關於慢性神經退 化性疾病（例如阿茲海默氏病）之基礎之機制的新興知識展 示複雜病源學且已認可多種因素造成其產生及進展，例如 年齡、血糖狀況、類澱粉蛋白產生及多聚化、晚期糖基化 158366.doc -167- 201211252 終點產物（AGE)(其結合其受體RAGE(AGE之受體））積聚、 腦氧化應激增加、腦血流量減少、包括發炎性細胞激素及 趨化因子之釋放的神經發炎、神經元功能障礙及微神經膠 質細胞活化。因此，此等慢性神經退化性疾病代表多種細 胞類型與介體之間的複雜相互作用。針對該等疾病之治療 策略有限且主要為用非特異性消炎劑（例如皮質類固醇、 COX抑制劑）阻斷發炎過程或使用防止神經元喪失及/或突 觸功能之藥劑。此等治療不能終止疾病進展。新近研究表 明更具靶向性之療法（諸如針對可溶性A-b肽（包括A-b寡聚 形式）之抗體）不僅可有助於終止疾病進展且亦可有助於維 持記憶力。此等初步觀測結果表明靶向一種以上疾病介體 (例如A-b及促炎性細胞激素（諸如TNF))之特異性療法對慢 性神經退化性疾病所提供的治療功效甚至比靶向單一疾病 機制（例如單獨可溶性A-b)所觀測到之治療功效更好。（參 看 C.E. Shepherd 等人，Neurobiol Aging. 2005 年 10 月 24 曰；
Nelson RB., Curr Pharm Des. 2005; 1 1:3335; William L. Klein.; Neurochem Int. 2002; 41:345 ； Michelle C Janelsins 等人，J Neuroinflammation. 2005; 2:23 ； Soloman B.，Curr Alzheimer Res. 2004; 1:149 ; Igor Klyubin等人，Nat Med. 2005; 1 1:556-61 ； Arancio O ^ A, EMBO Journal (2004) 1-10 ; Bornemann KD 等人，Am J Pathol. 2001; 158:63 ; Deane R 等人，Nat Med· 2003; 9:907-13 ;以及 Eliezer Masliah等人，Neuron. 2005; 46:857) ° 本文提供之DVD-Ig分子可結合一或多種涉及於諸如阿 158366.doc -168 - 201211252 兹海默氏病之慢性神經退化性疾病中的目標。該等目標包 括（但不限於）涉及於ad發病機制中之任何可溶性或細胞表 面"體，例如AGE(S100 A、兩性黴素）、促炎性細胞激素 (例如IL-1)、趨化因子（例如Mcp 1}、抑制神經再生之分子 (例如Nogo、RGM A)、增強神經突生長之分子（神經營養 素（neurotrophin))及可介導血腦屏障處之轉運的分子（例如 運鐵蛋白受體、胰島素受體或RAGE)。D VDIg分子之功效 可在諸如過度表現類澱粉前驅蛋白或R A G E且形成阿茲海 〇 默氏病樣症狀之轉殖基因小鼠的臨床前動物模型中得以驗 證。此外’可建構DVD_Ig*子且測試其在動物模型中之 功效，且可選擇最佳治療性DVD_Ig在人類患者中進行測 試。DVD-Ig分子亦可用於治療其他神經退化性疾病，諸 如帕金森氏病。α-突觸核蛋白（Alpha-Synuclein)涉及於帕 金森氏病的病理中。能夠靶向α_突觸核蛋白及發炎性介體 (諸如TNF、IL-1、MCP-1)之DVD-Ig可證明為帕金森氏病 之有效療法且亦涵蓋在内。 〇 A7.2神經元再生及脊髓損傷 儘管對病理機制的認識增加，但脊髓損傷（SCi)仍為一 種破壞性病狀且代表特徵在於高醫藥需求之醫學適應症。 大多數脊髓損傷為挫傷或壓傷且原發性損傷後通常為使初 始損傷惡化且引起病變區域顯著擴大（有時10倍以上）之繼 發性損傷機制（發炎性介體.，例如細胞激素及趨化因子）。 SCI中之此等原發性及繼發性機制與由其他方式（例如中 風）引起之腦損傷中之機制極相似。沒有令人滿意之治療 158366.doc •169· 201211252 法且尚劑量快速注射甲潑尼龍（methylprednisoloneXMP) 為唯一在損傷後8小時之短時間期内使用之療法。然而， 此治療僅意欲預防繼發性損傷而不引起任何顯著功能恢 復。其由於缺乏明確功效且不利作用嚴重（如免疫抑制伴 有後續感染及嚴重組織病理學肌肉改變）而受到嚴厲批 評。無其他刺激内源再生潛能之藥物、生物劑或小分子獲 批准，但近年來有前景之治療原理及藥物候選物已在Sd 動物模型中展示功效。在很大程度上，人類奶功能恢復 之缺乏係由抑制病變部位處、疤痕組織中、髓鞘中以及損《 傷相關細胞上之神經突生長之因子所引起。該等因子為髓 鞠相關蛋白N〇g〇A、OMgRMAG、RGM a、苑痕相關 CSPG(硫酸軟骨素蛋白聚糖）及反應性星形膠質細胞上之抑 制因子（一些臂板蛋白（semaph〇dn)及蝶素㈣_)。然 而，在病變部位處不僅發現生長抑制性分子且亦發現神經 突生長刺激因子（如神經營養素、層黏連蛋白、u及其他 因子）。神經突生長抑制性分子及生長促進分子之此组合 Μ㈣A之單一因子會在餐齒動物‘ SCI模型中引起顯著功能恢復’因為減小抑制性影響可使 平衡自生長抑制作用轉向生長促進作用。然而，在阻斷單 -神經突外生長抑制分子下觀測到之恢復不完全。為實現 更快且更顯著之恢復，可能需要阻斷兩種神經突外生長抑 制分子（例如N0g0MGM A)，或阻斷神經突外生長抑制分 子且增強神經突外生長增強分子（例如Nog。與神經營養素） 之功能，或阻斷神經突外生長抑制分子（例如N〇g〇)及促炎 158366.doc -170- 201211252 性分子（例如TNF)(參看McGee AW等人，（2003) Trends Neurosci. 26:193 ; Marco Domeniconi 等人，（2005)1· Neurol. Sci. 233:43 ; Milan Makwanal 等人，（2005) FEBS J. 272:2628 ； Barry J. Dickson (2002) Science 298:1959 ； Felicia Yu Hsuan Teng 等人，（2005) J. Neurosci. Res. 79:273 ; Tara Karnezis 等人，（2004) Nature Neuroscience 7:736 ; Gang Xu等人，（2004) J· Neurochem. 91:1018) ° 在一個態樣中，提供能夠結合以下成對目標之DVD-O Ig :諸如 NgR與 RGM A ; NogoA與 RGM A ; MAG與 RGM A ; OMGp與 RGM A ; RGM A與 RGM B ; CSPG與 RGM A ; 聚集蛋白聚糖（aggrecan)、中期因子（midkine)、神經蛋白 聚糖（neurocan)、多功能蛋白聚糖（versican)、磷酸蛋白聚 糖（phosphacan)、Te3 8與TNF-α ;與促進樹突及軸突萌芽 之抗體組合之Αβ球聚體特異性抗體。樹突病變為ad的極 早期症象，且已知NOGO A限制樹突生長。可將該類型之 ab與任一種SCI-候選物（趙鞘-蛋白質）Ab組合。其他DVD-〇 Ig 目標可包括 NgR-p75、NgR-Troy、NgR-Nogo66(Nogo)、 NgR-Lingo、Lingo-Tr〇y、Ling〇-p75、MAG或 Omgp之任何 組合。此外’目標亦可包括涉及抑制神經突之任何可溶性 或細胞表面之介體’例如Nogo、Ompg、MAG、RGM A、 臂板蛋白、蝶素、可溶性A-b、促炎性細胞激素（例如IL-1)、趨化因子（例如]V[IP la)、抑制神經再生之分子。抗 nogo/抗RGM A或類似DVD-Ig分子之功效可在脊髓損傷之 臨床前動物模型中得以驗證。此外，可建構此等DVD-Ig 158366.doc -171- 201211252 分子且測試其在動物模型中之功效，且可選擇最佳治療性 DVD-Ig在人類患者中進行測試。此外，可建構靶向單一 受體（例如結合三種配位體Nogo、Ompg及MAG之Nogo受 體以及結合A-b及S100 A之RAGE)上之兩個不同配位體結 合位點的DVD-Ig分子。此外，在如多發性硬化症之免疫 疾病中，例如nogo及nogo受體之神經突外生長抑制劑亦在 防止神經再生中起作用。已在多發性硬化症之動物模型中 顯示，抑制nogo-nogo受體相互作用可以增強恢復。因 此，可阻斷一種免疫介體（例如細胞激素，如IL-1 2)及神經 突外生長抑制分子（例如nogo或RGM)功能的DVD-Ig分子之 功效可提供比單獨阻斷免疫或神經突外生長抑制分子之功 效更快且更大之功效。 一般而言，抗體不以有效及相關方式跨越血腦屏障 (BBB)。然而，在某些神經性疾病（例如中風、創傷性腦損 傷、多發性硬化症等）中，BBB可能受損且使DVD-Ig及抗 體進入腦中之穿透作用增強。在未出現BBB滲漏之其他神 經病狀中，可使用對内源轉運系統之靶向，該等轉運系統 包括載體介導之轉運體（諸如葡萄糖及胺基酸載體）及BBB 血管内皮上的受體介導之轉胞吞作用（transcytosis)介導之 細胞結構/受體，從而使DVD-Ig可能經由跨BBB轉運。位 於BBB而使該轉運成為可能之結構包括（但不限於）胰島素 受體、運鐵蛋白受體、LRP及RAGE。另外，策略使DVD-Ig亦能夠作為穿梭載體（shuttle)將潛在藥物（包括低分子量 藥物、奈米粒子及核酸）轉運至CNS _ (Coloma MJ等人， 158366.doc -172- 201211252 (2000) Pharm Res. 17(3):266-74: Boado RJ等人，（2007) Bioconjug· Chem· 18(2):447-55) o A8.腫瘤病症 單株抗體療法已顯現為癌症之重要治療模式（von Mehren Μ等人，（2003) Annu. Rev. Med. 54: 343-69)。抗體 可藉由誘導細胞凋亡、重導向細胞毒性、干擾配位體·受 體相互作用或阻止對贅生性表型關鍵之蛋白質表現來發揮 抗腫瘤作用。此外，抗體可靶向踵瘤微環境之組分，擾亂 〇 重要結構，諸如腫瘤相關血管結構形成。抗體亦可靶向配 位體為生長因子之受體，諸如表皮生長因子受體。抗體因 此抑制刺激細胞生長之天然配位體結合於靶向之腫瘤細 胞。或者，抗體可誘導抗個體基因型網狀物、補體介導之 細胞毒性或抗體依賴性細胞毒性（ADCC)。使用靶向兩種 各別腫瘤介體之雙特異性結合蛋白相較於單特異性療法將 可能提供其他益處。 在另一實施例中，DVD Ig能夠結合VEGF與磷脂醯絲胺 ❹酸；VEGF 與 ErbB3 ; VEGF 與 PLGF ; VEGF 與 R0B04 ;
VEGF 與 BSG2 ; VEGF 與 CDCP1 ; VEGF 與 ANPEP ; VEGF 與 c-MET ; HER-2 與 ERB3 ; HER-2 與 BSG2 ; HER-2 與 CDCP1 ; HER-2 與 ANPEP ; EGFR 與 CD64 ; EGFR 與 BSG2 ； EGFR 與 CDCP1 ; EGFR 與 ANPEP ; IGF1R 與 PDGFR ; IGF1R與 VEGF ; IGF1R與 CD20 ; CD20 與 CD74 ; CD20 與 CD30 ; CD20 與 DR4 ; CD20 與 VEGFR2 ; CD20 與 CD52 ; CD20 與 CD4 ; HGF 與 c-MET ; HGF 與 NRP1 ; HGF 158366.doc •173· 201211252 與磷脂醯絲胺酸；ErbB3 與IGF1R ; ErbB3 與 IGF1，2 ; c-Met 與 Her-2 ; c-Met 與 NRP1 ; c，Met 與 IGF1R ; IGF1，2 與 PDGFR ； IGF1,2 與 CD20 ; IGF 1，2 與 IGF 1R ; IGF2 與 EGFR ; IGF2與 HER2 ; IGF2與 CD20 ; IGF2與 VEGF ; IGF2 與 IGF1R ; IGF1 與 IGF2 ; PDGFRa 與 VEGFR2 ; PDGFRa與 PLGF ; PDGFRa 與 VEGF ; PDGFRa 與 c-Met ; PDGFRa 與 EGFR ; PDGFRb與 VEGFR2 ; PDGFRb與 c-Met ; PDGFRb與 EGFR ; RON與 c-Met ; RON與 MTSP1 ; RON與 MSP ; RON 與 CDCP1 ; VGFR1 與 PLGF ; VGFR1 與 RON ; VGFR1 與 EGFR ; VEGFR2 與 PLGF ; VEGFR2 與 NRP1 ; VEGFR2 與 RON ; VEGFR2 與 DLL4 ; VEGFR2 與 EGFR ; VEGFR2 與 R0B04 ; VEGFR2 與 CD55 ; LPA 與 SIP ; EPHB2 與 RON ; CTLA4 與 VEGF ; CD3 與 EPCAM ; CD40 與 IL6 ; CD40 與 IGF ; CD40 與 CD56 ; CD40 與 CD70 ; CD40 與 VEGFR1 ; CD40 與 DR5 ; CD40 與 DR4 ; CD40 與 APRIL ; CD40 與 BCMA ; CD40與 RANKL ; CD28與 MAPG ; CD80與 CD40 ; CD80 與 CD30 ; CD80 與 CD33 ; CD80 與 CD74 ; CD80 與 CD2 ; CD80與 CD3 ; CD80與 CD19 ; CD80與 CD4 ; CD80與 CD52 ; CD80 與 VEGF ; CD80 與 DR5 ; CD80 與 VEGFR2 ; CD22 與 CD20 ; CD22 與 CD80 ; CD22 與 CD40 ; CD22 與 CD23 ; CD22 與 CD33 ; CD22 與 CD74 ; CD22 與 CD19 ; CD22 與 DR5 ; CD22 與 DR4 ; CD22 與 VEGF ; CD22 與 CD52 ; CD30 與 CD20 ; CD30 與 CD22 ; CD30 與 CD23 ; CD30 與 CD40 ; CD30 與 VEGF ; CD30 與 CD74 ; CD30 與 158366.doc •174· 201211252
CD19 ; CD30 與 DR5 ; CD30 與 DR4 ; CD30 與 VEGFR2 ; CD30 與 CD52 ; CD30 與 CD4 ; CD138 與 RANKL ; CD33 與 FTL3 ; CD33 與 VEGF ; CD33 與 VEGFR2 ; CD33 與 CD44 ; CD33 與 DR4 ; CD33 與 DR5 ; DR4 與 CD137 ; DR4 與 IGF1，2 ; DR4與 IGF1R ; DR4與 DR5 ; DR5 與 CD40 ; DR5 與 CD137 ; DR5 與 CD20 ; DR5 與 EGFR ; DR5 與 IGF1，2 ; DR5 與IGFR ; DR5與HER-2 ;以及EGFR與DLL4。其他目標組 合包括EGF/erb-2/erb-3家族中之一或多個成員。腫瘤疾病 中所涉及的可結合DVD Ig之其他目標（一或多種）包括（但 不限於）：CD52、CD20、CD19、CD3、CD4、CD8、 BMP6、IL12A、ILIA、IL1B、IL2、IL24、INHA、TNF、 TNFSF10、BMP6、EGF、FGF1、FGF10、FGF11、 FGF12 、 FGF13 、 FGF14 、 FGF16 、 FGF17 、 FGF18 、 FGF19、FGF2、FGF20、FGF21、FGF22、FGF23、 FGF3 、 FGF4 、 FGF5 、 FGF6 、 FGF7 、 FGF8 、 FGF9 、 GRP、IGF1、IGF2、IL12A、ILIA、IL1B、IL2、INHA、 TGFA、TGFB1、TGFB2、TGFB3、VEGF、CDK2、 FGF10、FGF18、FGF2、FGF4、FGF7、IGF1R、IL2、 BCL2、CD164、CDKN1A、CDKN1B、CDKN1C、 CDKN2A 、 CDKN2B 、 CDKN2C 、 CDKN3 、 GNRH1 、 IGFBP6 、 ILIA 、 IL1B 、 ODZ1 、 PAWR 、 PLG 、 TGFB1I1、AR、BRCA1、CDK3、CDK4、CDK5、CDK6、 CDK7、CDK9、E2F1、EGFR、ENOl、ERBB2、ESR1、 ESR2、IGFBP3、IGFBP6、IL2、INSL4、MYC、NOX5、 158366.doc -175- 201211252 NR6A1、PAP、PCNA、PRKCQ、PRKDl、PRL、TP53、 FGF22、FGF23、FGF9、IGFBP3、IL2、INHA、KLK6、 TP53、CHGB、GNRH1、IGF1、IGF2、INHA、INSL3、 INSL4、PRL、KLK6、SHBG、NR1D1、NR1H3、NR1I3、 NR2F6 、 NR4A3 、 ESR1 、 ESR2 、NR0B1 、NR0B2 、 NR1D2、NR1H2、NR1H4、NR1I2、NR2C1 、NR2C2、 NR2E1 、NR2E3、NR2F1 、NR2F2、NR3C1 、NR3C2、 NR4A1 、 NR4A2 、 NR5A1 、 NR5A2 、 NR6A1 、 PGR 、 RARB、FGF1、FGF2、FGF6、KLK3、KRT1、APOC1、 BRCA1 、CHGA、CHGB、CLU、COL1A1 、COL6A1 、 EGF、ERBB2、ERK8、FGF1、FGF10、FGF11、FGF13、 FGF14 、 FGF16 、 FGF17 、 FGF18 、 FGF2 、 FGF20 、 FGF21、FGF22、FGF23、FGF3、FGF4、FGF5、FGF6、 FGF7、FGF8、FGF9、GNRH1、IGF1、IGF2、IGFBP3、 IGFBP6、IL12A、ILIA、IL1B、IL2、IL24、INHA、 INSL3 、 INSL4 、 KLK10 、 KLK12 、 KLK13 、 KLK14 、 KLK15、KLK3、KLK4、KLK5、KLK6、KLK9、MMP2、 MMP9、MSMB、NTN4、ODZ1、PAP、PLAU、PRL、 PSAP 、SERPINA3 、SHBG、TGFA、TIMP3 、CD44、 CDH1 、 CDH10 、 CDH19 、 CDH20 、 CDH7 、 CDH9 、 CDH1、CDH10、CDH13、CDH18、CDH19、CDH20、 CDH7、CDH8、CDH9、ROB02、CD44、ILK、ITGA1、 APC 、CD164 、COL6A1 、MTSS1 、PAP 、TGFB1I1 、 AGR2 、AIG1 、AKAP1 、AKAP2 、 CANT1 、 CAV1 、 158366.doc •176- 201211252 CDH12 、 CLDN3 、CLN3 、CYB5 、CYC1 、DAB2IP ' DES 、 DNCL1 、 ELAC2 、 EN02 、 EN03 、 FASN 、 FLJ12584 、FLJ25530 、GAGEB1 、GAGEC1 、GGT1 、 GSTP1 、：HIP1 、HUMCYT2A、IL29 、K6HF 、KAI1 、 KRT2A 、 MIB1 、 PARTI 、 PATE 、 PCA3 、 PIAS2 、 PIK3CG、PPID、PR1 、PSCA、SLC2A2、SLC33A1 、 SLC43A1、STEAP、STEAP2、TPM1、TPM2、TRPC6、 ANGPT1、ANGPT2、ANPEP、ECGF1、EREG、FGF1、 〇 FGF2、FIGF、FLT1、JAG1、KDR、LAMA5、NRP1、 NRP2 、PGF 、PLXDC1 、 STAB1 、 VEGF 、 VEGFC 、 ANGPTL3 、BAI1 、COL4A3 、IL8、LAMA5 、NRP1 、 NRP2、STAB1、ANGPTL4、PECAM1、PF4、PROK2、 SERPINF1 、TNFAIP2 、CCL11 、CCL2、CXCL1 、 CXCL10、CXCL3、CXCL5、CXCL6、CXCL9、IFNA1、 IFNB1、IFNG、IL1B、IL6、MDK、EDG1、EFNA1、 EFNA3、EFNB2、EGF、EPHB4、FGFR3、HGF、IGF1、 〇 ITGB3、PDGFA、TEK、TGFA、TGFB1、TGFB2、 TGFBR1、CCL2、CDH5、COL18A1、EDG1、ENG、 ITGAV、ITGB3、THBS1、THBS2、BAD、BAG1、 BCL2、CCNA1、CCNA2、CCND1、CCNE1、CCNE2、 CDH1(E-鈣黏素）、CDKNlB(p27Kipl)、CDKN2A(pl6INK4a)、 COL6A1、CTNNBl(b-索烴素）、CTSB(組織蛋白酶 B)、 ERBB2(Her-2)、ESR1、ESR2、F3(TF)、FOSLl(FRA-l)、 GATA3、GSN(膠溶素）、IGFBP2、IL2RA、IL6、IL6R、 158366.doc -177- 201211252 IL6ST(醣蛋白 130)、ITGA6(a6 整合素）、JUN、KLK5、 KRT19、MAP2K7(c-Jun)、MKI67(Ki-67)、NGFB(NGF)、 NGFR、NME1(NM23A)、PGR、PLAU(uPA)、PTEN、 SERPINB5(乳腺絲抑蛋白）、SERPINEl(PAI-l)、TGFA、 THBS1(血小板反應蛋白-1)、TIE(Tie-l)、TNFRSF6(Fas)、 TNFSF6(FasL)、TOP2A(拓撲異構酶Iia)、TP53、AZGP1 (鋅-a-醣蛋白）、BPAG1(網蛋白（plectin))、CDKN1A (p21Wapl/Cipl)、CLDN7(緊密連接蛋白-7(claudin-7))、 CLU(凝聚素（clusterin))、ERBB2(Her-2)、FGF1、FLRT1 (纖維結合蛋白）、GABRP(GABAa)、GNAS 1、ID2、ITGA6 (a6 整合素）、ITGB4(b 4 整合素）、KLF5(GC Box BP)、 KRT19(角蛋白19)、KRTHB6(毛髮特異性II型角蛋白）、 MACMARCKS、MT3(金屬硫蛋白-III(metallothionectin-III))、MUC1(黏蛋白）、PTGS2(COX-2)、RAC2(p21Rac2)、 S100A2、SCGB1D2(親脂素 B(lipophilin B))、SCGB2A1(乳 腺珠蛋白 2(mammaglobin 2))、SCGB2A2(乳腺珠蛋白 1)、 SPRRlB(Sprl)、THBS1、THBS2、THBS4、及 TNFAIP2 (B94)、RON、c-Met、CD64、DLL4、PLGF、CTLA4、磷 脂醯絲胺酸、R0B04、CD80、CD22、CD40、CD23、 CD28 、 CD80 、 CD55 、 CD38 、 CD70 、 CD74 、 CD30 、 CD138、CD56、CD33、CD2、CD137、DR4、DR5、 RANKL、VEGFR2、PDGFR、VEGFR1、MTSP1、MSP、 EPHB2、EPHA1、EPHA2、EpCAM、PGE2、NKG2D、 LPA、SIP、APRIL、BCMA、MAPG、FLT3、PDGFRa、 158366.doc -178- 201211252 PDGFRP、RORl、PSMA、PSCA、SCD1 或 CD59。 IV.醫藥組合物 亦提供包含本文揭示之結合蛋白及醫藥學上可接受之載 劑的醫藥組合物。包含本文揭示之結合蛋白的醫藥組合物 係用於（但不限於）診斷、偵測或監測病症；預防、治療、 處理或改善病症或其一或多種症狀；及/或研究。在—特 疋實施例中，組合物包含一或多種本文揭示之結合蛋白。 在另一實施例中，醫藥組合物包含一或多種結合蛋白及除 〇 本文提供之結合蛋白以外的一或多種用於治療病症的預防 劑或治療劑。在一實施例中，已知預防劑或治療劑適用於 或已用於或目前正用於預防、治療、處理或改善病症戋其 一或多種症狀。根據此等實施例，組合物可進一步包含載 劑、稀釋劑或賦形劑。 本文提供之結合蛋白可併入適於向個體投與之醫藥組合 物中。通常，醫藥組合物包含結合蛋白及醫藥學上可接受 《載劑。如本文所用之「醫藥學上可接受之載劑」包括： 生理學上相容之任何及所有溶劑、分散介質、包衣、抗細 菌劑及抗真菌劑、等張及吸收延遲劑及其類似物。醫藥學 上可接受之載劑的實例包括水、鹽水、磷酸鹽緩衝鹽 2旋糖、甘油、乙醇及其類似物中之—或多者以及其組 α。在一些實施例中，組合物中包括等張劑，例如糖；諸 如甘露糖醇、山梨糖醇之多元醇；或氣化鈉。醫藥學上可 接受之載劑可進-步包含微量輔助物質，諸如濕潤：或;L 化劑、防腐劑或緩衝劑，其増強結合蛋白或抗原結合部分 158366.doc •179- 201211252 之存放期或有效性。 各種傳遞系統為已知的且可詩投舆—或多種本文提供 、·口 S蛋白或或多種結合蛋白與適用於預防、處理、治 療或改善病症或其-或多種症狀之預防劑或治療劑的組 合’例如囊封於脂質體、微粒、微膠囊中；能夠表現結合 蛋白或抗原結合片段之重組細胞；受體介導之内飲作用 (參看例如 Wu 及 Wu，J. Bi〇1 Chem 262:4429 4432 (1987));建構作為反轉錄病毒或其他載體之一部分之核酸 等。投與預防劑或治療劑的方法包括（但不限於）非經腸投 與（例如皮内、肌肉内、腹膜内、靜脈内及皮下）、硬膜外 投與、腫瘤内投與及黏膜投與（例如鼻内及經口途徑）^此 外，可例如藉由使用吸入器或喷霧器及具有氣霧劑之調配 物使用肺部投與。參看例如美國專利第6,〇19,968號；第 5,985,320 號；第 5,985,309 號；第 5,934,272 號；第 5,874,064 號；第 5,855,913 號；第 5,290,540 號及第 4,880,078 號；及 PCT 公開案第 WO 92/19244 號；第 WO 97/32572號；第 WO 97/44013號；第 WO 98/31346號；及第 WO 99/66903號。在一個實施例中，使用Aikermes AIR® 肺部藥物傳遞技術（Alkermes，Inc.，Cambridge，Mass.)投與 結合蛋白、組合療法或本文揭示之組合物。在一特定實施 例中，肌肉内、靜脈内、腫瘤内、經口、鼻内、肺部或皮 下投與本文揭示之預防劑或治療劑。預防劑或治療劑可藉 由任何適宜途徑，例如藉由輸注或快速注射、藉由經上皮 或皮膚黏膜内層（例如口腔黏膜、直腸及腸黏膜等）吸收投 158366.doc -180- 201211252 與且其可與其他生物活性劑一起投與。投與可為全身性或 局部投與。 在一實施例中，可使用如下方法靶向腫瘤細胞：使偶合 抗體之碳奈米管（CNT)與腫瘤細胞在活體外特異性結合， 隨後用近紅外（NIR)光對其進行高特異性切除術。舉例而 5，可使用經生物素標記之極性脂質來製備穩定、生物相 容性、無細胞毒性之CNT分散液，接著使其連接於一或兩 種針對一或多種腫瘤抗原（例如CD22)之不同中性抗生物素 Ο 蛋白（11叫11^出6&“土11)衍生之1)¥1)-1§上（(：1^]^心訂巧，1>等 人，（2008) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 105:8697-8702)。 在-特定實施例中，彳能需要向需要治療之區域局部投 與本文提供之預防劑或治療劑；此可藉由例如（但不限於） 局部輸注、注射或藉助於植入物（該植入物為多孔或非多 孔材料，包括膜及基質，諸如矽橡膠膜（仏丨如4 membrane)、聚合物、纖維基質（例如Tissuei⑧）或膠原蛋白 基質）實現。在一個實施例中，向個體之受影響區域局部 〇 投與有效量之一或多種本文提供之結合蛋白以預防、治 療、處理及/或改善病症或其症狀。在另一實施例中，向 患病區域局部投與有效量之一或多種本文提供之結合蛋白 與有效量之一或多種除本文提供之結合蛋白以外的療法 (例如一或多種預防劑或治療劑）的組合以預防、治療、處 理及/或改善病症或其一或多種症狀。 在另一實施例中，預防劑或治療劑可以控制釋放或持續 釋放系統傳遞。在一個實施例中，可使用泵來實現控制釋 158366.doc -181- 201211252 放或持續釋放（參看Langer，上文：以行011，1987，。1^01^1· Ref. Biomed. Eng. 14:20; Buchwald 等人，1980, Surgery 88:507 ; Saudek等人，1989, N. Engl. J. Med· 321:574)。在 另一實施例中，可使用聚合材料來實現本文提供之療法的 控制釋放或持續釋放（參看例如Medical Applications of
Controlled Release, Langer及 Wise (編），CRC Pres” Boca Raton，Fla. (1974) ; Controlled Drug Bioavailability, Drug Product Design and Performance, Smolen 及 Ball (編）， Wiley, New York (1984) ; Ranger 及 Peppas，1983 J·,
Macromol. Sci. Rev. Macromol. Chem. 23:61 ;亦參看 Levy 等人，1985，Science 228:190 ; During等人，1989，Ann. Neurol. 25:351 ; Howard 等人，1989，J. Neurosurg. 7 1:105);美國專利第5,679,377號；美國專利第5, 916,597 號；美國專利第5,912,015號；美國專利第5,989,463號及美 國專利第5,128,326號；PCT公開案第WO 99/1 5 154號；及 PCT公開案第WO 99/20253號）。持續釋放調配物中使用之 聚合物的實例包括（但不限於）聚（甲基丙烯酸2-羥乙酯）、 聚（曱基丙烯酸甲酯）、聚（丙烯酸）、聚（乙烯-共-乙酸乙烯 酯）、聚（甲基丙烯酸）、聚乙交酯（PLG)、聚酸酐、聚（N-乙 烯基吼咯啶酮）、聚（乙烯醇）、聚丙烯醯胺、聚（乙二醇）、 聚丙交酯（PLA)、聚（丙交酯-共-乙交酯）（PLGA)及聚原酸 酯。在一實施例中，持續釋放調配物中使用之聚合物為惰 性的、不含可浸出雜質、儲存穩定、無菌且生物可降解。 在另一實施例中，控制釋放或持續釋放系統可鄰近預防或 158366.doc •182- 201211252 治療目標放置，因此僅需要全身劑量之一部分（參看例如 Goodson, Medical Applications of Controlled Release,同 上文，第2卷，第115-138頁（1984))。 控制釋放系統由 Langer(1990，Science 249:1527-1533)論 述。可使用熟習此項技術者已知之任何技術製備包含一或 多種本文提供之治療劑之持續釋放調配物。參看例如美國 專利第4,526,938號；PCT公開案W0 91/05548 ; PCT公開案 WO 96/20698 ; Ning 等人，1996，r Intratumoral Radioimmunotheraphy of a Human Colon Cancer Xenograft Using a Sustained-Release Gel,」Radiotherapy & Oncology 39:179-1 89 ; Song 等人，1995， 「Antibody Mediated Lung Targeting of Long-
Circulating Emulsions，」 PDA Journal of Pharmaceutical Science & Technology 50:372-397; Cleek等人，1997, 「Biodegradable Polymeric Carriers for a bFGF Antibody for Cardiovascular Application,」Pro. Int'l. Symp. Control. Rel. Bioact. Mater. 24:853-854 ;及 Lam 等人，1997, 「Microencapsulation of Recombinant Humanized Monoclonal Antibody for Local Delivery,」Proc. Int'l. Symp. Control Rel. Bioact. Mater. 24:759- 760。 在組合物為編碼預防劑或治療劑之核酸的特定實施例 中，可藉由將核酸建構為適當核酸表現載體之一部分，且 例如藉由使用反轉錄病毒載體（參看美國專利第4,980,286 號）或藉由直接注射或藉由使用微粒轟擊（例如基因搶； Biolistic, Dupont)或以脂質或細胞表面受體或轉染劑包 158366.doc -183- 201211252 覆’或藉由將其與已知進入核之同源盒樣肽鍵聯投與（參
看例如 Joliot等人，1991，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88:1864-1868)將其投與以使其變為在細胞内，來活體内投 與核酸以促進其所編碼之預防劑或治療劑表現。或者，可 將核酸引入胞内且藉由同源重組使其併入宿主細胞DNa中 以供表現。 調配本文提供之醫藥組合物使其與其預定投與途徑相 谷。投與途极之實例包括（但不限於）非經腸，例如靜脈 内、皮内、皮下、經口、鼻内（例如吸入）、經皮（例如局 部）、經黏膜；及直腸投與。在一特定實施例中，組合物 係根據常規程序調配為適於靜脈内、皮下、肌肉内、經 口、鼻内或局部投與人類之醫藥組合物。通常，用於靜脈 内投與之組合物為於無菌等張水性緩衝液中之溶液。需要 時，組合物亦可包括增溶劑及局部麻醉劑（諸如利多卡因 (lignocaine))以減輕注射部位之疼痛。 若欲局部投與本文提供之組合物，則組合物可調配為軟 膏乳膏、，、ι皮貼片、洗劑、凝膠、洗髮精、噴霧劑、氣 霧劑、溶液、乳液之形式或熟習此項技術者熟知之其他形 式 參看例如 Remington's Pharmaceutical Sciences and
Intr〇duCti〇n to Pharmaceutical Dosage F〇rms，第 19版 Mack Pub· Co.，East〇n，pa (1995)。在一實施例中，對於 不可噴霧之局部劑型而言，使用包含與局部施用相容之載 劑或一或多種賦形劑且動力黏度大於水之黏稠形式至半固 體或固體形式°適合調配物包括（但不限於）溶液、懸浮 158366.doc 201211252 :、乳液、礼膏、軟膏、散劑、擦劑、油膏及其類似物， 二要時將其滅菌或與影響諸如滲透壓之各種特性之助劑 ^防腐齊j、穩定劑、濕满劑、緩衝劑或鹽）混合。其他 ，口局部劑型包括可噴霧之氣霧劑製劑，其中在一實施例 物質:與固體或液體惰性载劍組合以與加㈣ 封#劣'Α體推進劑’諸如氟利昂（fr_))之混合物形式 :5封裝於擠壓瓶（squeeze bottle)中。必要時，亦 0 Ο IS::物及劑型中添加增濕劑或保濕劑。該等其他成分 實Η為此項技術中所熟知。 配=提供之方法包含鼻内投與組合物，則組合物可， =霧劑形式、喷霧劑、薄霧或滴劑形 = =療劑可使用適合推進劑(例如二氯…：、： 氣霧劑^二氯四款乙炫、二氧化碳或其他適合氣體）以 加麼氣霧劑之情形下…if霧'適宜地傳遞。在 傳遞計量ρ 藉由提供閥門來確定劑量單位以 合粉末A句里配含有化合物與諸如乳糖或殺粉之適 土 Μ之粉末混合物的膠囊 用於吸入器或吹入器。 霞樂同(由例如明膠構成） 劑、膠：去2^投與，則組合物可調配為經口之錠 勝囊、扁囊劑、膠囊錠(gelcap) 之鲛 類似物之形式。錠劑或膠囊可藉由習知方液及其 接：之賦形劑製備’該等賦形劑 ：學上可 玉米殿粉、聚乙稀㈣相或經丙基甲二= 列如預膠化 劑（例如乳糖、微晶纖維素或鱗酸氯轉）.：；=旬；填充 巧潤滑劑（例如硬脂 158366.doc •185- 201211252 酸鎂、滑石或矽石）；崩鉉劍 輪鈿、%解劑(例如馬鈴薯澱粉或乙醇酸澱 技或濕潤劑(例如十二烧基硫酸鈉）。錠劑可藉由此項 ^不/知之方法包覆。用於經口投與之液體製劑可採取 - <於）溶液、糖I㈣浮液形式，或其可以乾燥產品 J 在使用則以水或其他適合媒劑復原。該等液體 製劑可藉由習知方式用醫藥學上可接受之添加劑來製備， 该等添加劑諸如懸浮劑（例如山梨糖醇糖漿、纖維素衍生 物或氫化可食用脂肪)；乳化劑(例如印磷脂或阿拉伯膠” 非水性媒劑（例如杏仁油、油性醋、乙醇或經分館之植物 油），及防腐劑(例如對羥基苯甲酸甲酯或對羥基苯甲酸丙 2或山梨酸）。適當時，製劑亦可含有緩衝鹽、調味劑、 著色W及甜味劑。經口投與之製劑可經適當調配以供緩慢 釋放、控制釋放或持續釋放預防劑或治療劑。 本文提供之方法可包含例如藉由使用吸入器或噴霧器肺 部投與與氣霧劑一起調配之組合物。參看例如美國專利第 M19,968號；第 5,985,320號；第 5,985,309號；第 5,934,272 號，第 5,874,064 號；第 5,855,913 號；第 5,290,540號及第 4,880,078 號；及 PCT 公開案第 WO 92/19244 號；第 WO 97/32572號；第 WO 97/44013號；第 WO 98/31346號；及第 WO 99/66903號。在一特定實施例中，使用Alkermes AIR® 肺部藥物傳遞技術（Aikermes, Inc.，Cambridge， Mass.)投與結合蛋白、組合療法及/或本文提供之組合物。 本文提供之方法可包含藉由注射（例如藉由快速注射或 連續輸注）投與經調配用於非經腸投與之組合物。用於注 158366.doc -186- 201211252 射之調配物可以添加有防腐劑之單位劑型（例如於安瓿中 或於多劑量容器中）提供。組合物可採取諸如於油性或火 性媒劑中之懸浮液、溶液或乳液之形式且可含有諸如縣^ 劑、穩定劑及/或分散劑之調配劑。或者，活性成分;為 在使用前以適合媒劑（例如無菌無熱原質水）復原之粉末形 式。 y 該等方法可進一步包含投與調配為儲槽式製劑之组人
G Ο 物。該等長效調配物可藉由植人（例如皮下或肌肉内 由肌肉内注射來投與。因此，例如組合物可與適合聚合^ 疏水性物質（例如調配為可接受之油中之乳液）或與離子交 換樹脂-起調配；或調配成微溶衍生物（例如調配為微溶 鹽）。 在二實施例中，該等方法涵蓋投與調配為中性或鹽形 式之組合物。醫筚睪 酋樂予上了接党之鹽包括與陰離子形成之 鹽，諸如衍生自鹽酸、磷酸、乙酸、草酸、酒石酸等之 鹽’及與陽離子形成之鹽，諸如街生自氫氧化納、氫氧化 卸、氫氧化錢、氫氧化妈、氯氧化鐵、異丙胺、三乙胺、 2-乙基胺基乙醇、組胺酸、普魯卡因等之鹽。 -般而言，組合物之成分單獨或以混合在一起之單位劑 型(曰例如以乾燥;東乾粉末或無水濃縮物形式）於指示活性劑 =密封容器(諸如安瓿或藥囊)中提供。當投與模式為 心二’組合物可以含有無菌醫藥級水或鹽水之輸液瓶分 配。當投與模式為注射時’可提供注射用無菌水或鹽水之 安瓿以便可在投與之前混合成分。 l5S366.doc -187. 201211252 在-些實施例中，本文提供之預防劑或治療劑或 合物中之一或多者封裝於指示藥劑之量之密、 . ^ m 4 益（諸士口 女瓿或樂囊）中。在一個實施例中，一或多種本文提、 預防劑或治療劑或醫藥組合物係以乾燥無菌；東乾==二= 水濃縮物形式於密封容器中提供且其可復原(例：： 鹽水）成適當濃度以向個體投與。在一實施例中，—。s 種本文提供之預防劑或治療劑或醫藥組合物係 2 凍乾粉末形式，以至少5 mg、至少1〇 〜、、、固 少25邮、至少35mg、至少45mg、至少//叫、至 mg或至少1〇〇叫之單位劑量於密封容器中提供。本文 之束干預防劑或治療劑或醫藥組合物應在其初始容“ p至St：下儲存，且本文提供之預防劑或治療劑或醫藥兔 °物應在復原後1週内’例如5天内、72小時内、48小時 内、24小時内、12小時内、6小時内、5小時内、3小時内 或1小時内投鱼。* _接a & 、内 -、在—替代性實施例中，一或多種本 供之預防劑或治療劍式駿兹 ，、U醫隸合物係以液體形式於指 劑之篁及濃度的密封六„„丄， ^ 在封…提供。在-實施例中，所投盥 組合物之液體形放仫，、，s , λ 仪，、 $ ,， ^係以至少0·25 mg/m卜至少〇.5 、 至少1 mg/mi、至少 王夕 2.5 mg/ml、至少 5 mg/ml、至 mg/m卜至少10 m / , *卜至少15mg/kg、至少25mg/m卜至 少 50 mg/ml、至少 / ,、 至 mg/ml或至少1〇〇 m /mi於密封 提供。液體形式靡在盆^仏〜 谷益中 %在八初始各器中在2°c至8它下儲存。 本文提供之結合蛋白 耸白了併入適於非經腸投與之醫藥組合 施例中，結合蛋白或抗原結合部分將製備為 158366.doc 201211252 含有0.1-250 mg/ml結合蛋白之可注射溶液。可注射溶液可 由燧石或琥珀色小瓶、安瓿或預填充注射器中之液體或凍 乾劑型構成。緩衝劑可為L-組胺酸（uo mM)，最佳5_1〇 mM，pH值為5_〇至7.0(最佳為pH 6.0)。其他適合緩衝劑包 括（但不限於）丁二酸鈉、檸檬酸鈉、磷酸鈉或磷酸鉀。可 使用濃度為0-300 mM(對於液體劑型而言最佳為15〇 mM) 之氯化鈉來調節溶液毒性。對於凍乾劑型而言可包括低溫 保護劑，主要為（M〇%蔗糖（最佳為〇 5%_丨〇%)。其他適合 〇 低溫保護劑包括海藻糖及乳糖。對於凍乾劑型而言，可包 括增積劑，主要1-10%甘露糖醇（最佳2_4%)。穩定劑可用 於液體劑型及凍乾劑型中，主要卜50 mM L-甲硫胺酸（最 佳5-10 mM)。其他適合增積劑包括甘胺酸、精胺酸（其可 “（^.(^。/。濃度包括在内^聚山梨醇酯彳…最佳^⑽外^ 0.01%)。其他界面活性劑包括（但不限於）聚山梨醇酯2〇及 BRIJ界面活性劑。在一些實施例中，製備成用於非經腸投 與之可注射溶液的包含本文提供之結合蛋白的醫藥組合物 〇 可進一步包含適用作佐劑之藥劑，諸如用於增加治療性蛋 白質（例如抗體）之吸收或分散的藥劑。尤其適用之佐劑為 玻尿酸酶，諸如Hylenex®(重組人類玻尿酸酶）。在可注射 /谷液中添加玻尿酸酶在非經腸投與後，尤其皮下投與後改 良人類生物可用性。其亦允許較高注射部位體積（亦即大 於1 ml)以及較少疼痛及不適，及最低注射部位反應發生 率。（參看 W02004078140 及 US2006104968)。 本文提供之組合物可呈多種形式。此等形式包括例如液 158366.doc -189- 201211252 體、半固體及固體劑划， 及可m、 諸如液體溶液（例如可注射溶液 匕〇 ή、分散液或懸浮液、鍵劑、丸劑、散劑、 脂質體及检劑。所選开彡、日机 ^ ^ 投與及治療應用之衫模式而 二丄组。物為可注射或可輸注溶液形式，諸如類似於 彼等以其他抗體使人類被動免& # # 、 铷““机， ㈣免疫接種所用之組合物的組合 k又/、模式為非經腸（例如靜脈内、皮下、腹膜 内、肌肉内）模式。在一 、 實施例中，藉由靜脈内輸注或注 射來技與結合蛋白。在另— 肉内或皮下注射投與。㈣例中’結合蛋白係藉由肌 入^療組合物在製造_存條件下通常須㈣且穩定。組 物濃度之其他有序液、脂質體或適於高藥 有序…構。可藉由將所要量之活性化合物 Γ之?1 體或抗體部分）連同本文列舉之一種成分或該等成 :^併人適當溶劑中，接著根據需要過遽滅菌來製備 其、Τ/主射’谷液。一般而言，藉由將活性化合物併入含有 散介質及來自本文所列舉之成分之所要其他成分的 j媒劑中來製備分散液。在用於製備無菌可注射溶液之 择，Γ乾教末之情形τ ’製備方法為真空乾燥及喷霧乾 立/產生活性成分加來自其先前無菌過滤之溶液的任何 ς〆所要成分之粉末。可例如藉由使用諸如㈣脂之衣 1夺糟由准持所要粒度（在分散液情形下），及藉由使用界 /性劑來維持溶液之適當流動性。可注射組合物之延長 L豳°藉由在組合物中包括延緩吸收之藥齊“例如單硬脂 酉文鹽及明膠）來達成。 158366.doc 201211252 可藉由此項技術中已知之多種方法投與本文提供之結合 蛋白，但在一實施例中，對於許多治療應用而言，投與途 徑/模式為皮下注射、靜脈内注射或輸注。如熟習此項技 術者所應瞭解’投與途徑及/或模式將視所要結果而變 化。在某些實施例中，可用防止化合物快速釋放之載劑來 製備活性化合物，諸如控制釋放調配物，包括植入物、經 皮貼片及微囊封傳遞系統。可使用生物可降解、生物相容 性聚合物，諸如乙烯乙酸乙烯酯、聚酐、聚乙醇酸、膠原 Ο 蛋白、聚原酸酯及聚乳酸。製備該等調配物之許多方法均 已取得專利權或通常為熟習技術者所已知。參看例如 Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems, J.R· Robinson編，Marcel Dekker，Inc.，New York，1978。 在某些實施例中，本文提供之結合蛋白可例如與惰性稀 釋劑或可吸收之可食用載劑一同經口投與。化合物（必要 時連同其他成分）亦可封閉於硬殼或軟殼明膠膠囊中，壓 〜 製為錠劑或直接併入至個體飲食中。對於經口治療性投與 ◎ ❿言’化合物可併有賦形劑且以如下形式使用：可攝入鍵 劑、經頻旋劑、糖衣錠、膠囊、醜劑、懸浮液、糖裝、粉 片（職㈣及其類似形式。為了藉由非經腸投與之外的方式 投與本文提供之化合物，可能需要將化合物以防止其失活 之材料塗覆或將化合物與防止其失活之材料共同投與。 補充活性化合物亦可併入組合物中。在某些實施例中， 將本文提供之結合蛋白與一或多種適用於與本文提供之社 合蛋白-起治療病症的其他治療劑共調配及/或共投與。 158366.doc -191- 201211252 舉例而5，可將本文提供之結合蛋白與一或多種結合其他 目標之其他抗體（例如結合其他細胞激素或結合細胞表面 分子之抗體）共調配及/或共投與。此外，一或多種本文提 供之結合蛋白可與兩種或兩種以上上述治療劑組合使用。 該4組σ療法可適宜地利用較低劑量之所投與治療劑從 而避免與各種單一療法相關之可能毒性或併發症。 在某些實施例中，將結合蛋白連接於此項技術中已知的 延長半衰期之媒劑。該等媒劑包括（但不限於）Fc區域、聚 乙二醇及聚葡萄糖。該等媒劑描述於例如美國申請案第 09/428,082號及公開之PCT申請案第w〇 99/25〇44號中。 在特疋實施例中’投與編碼本文提供之結合蛋白或另 一預防劑或治療劑的核酸序列以藉助於基因療法治療、預 防、處理或改善病症或其一或多種症狀。基因療法係指藉 由向個體投與已表現或可表現之核酸執行之療法。在此實 施例中’核酸產生介導預防或治療作用之其所編碼之結合 蛋白或預防劑或治療劑。 可使用此項技術中可利用之用於基因療法的任何方法。 關於基因療法之方法的綜述參看Goldspiel等人，1993,
Clinical Pharmacy 12:488-505 ; Wu及 Wu，1991, Biotherapy 3.87-95 , Tolstoshev, 1993, Ann. Rev. Pharmacol. Toxicol. 32:573-596 ; Mulligan, Science 260:926- 932 (1993);以及 Morgan及Anderson, 1993，Ann. Rev. Biochem. 62:191-217; 1993 年5月，TIBTECH 11(5):155-215。可使用之重組DNA 技術之領域中通常已知的方法於Ausubel等人（編），Current 158366.doc •192· 201211252
Protocols in Molecuiar Bi〇I〇gy，J〇hn wiley & s〇ns, Νγ (1993)，及 KHegler, Gene Transfer and ΕχρΓ^ί〇η，a Laboratory Manual，Stockton Press，NY (1990)中描述。基 因療法之各種方法的詳細描述揭示於us 20050042664 A1 中ο 本文提供之結合蛋白適用於治療該等結合蛋白所識別之 目標有害的各種疾病。該等疾病包括（但不限於）類風濕性 Μ節炎、骨關節炎、青少年慢性關節炎、敗血性關節炎、 〇 ㈣關節炎、牛皮癬性關節炎、反應性關節炎、脊椎關節 病、全身性紅斑狼瘡症、克羅恩氏病、潰瘍性結腸炎、發 炎性腸病、胰島素依賴性糖尿病、甲狀腺炎、哮喘、過敏 性疾病、牛皮癣、皮膚炎性硬皮病、移植物抗宿主疾病、 器官移植排斥反應、與器官移植有關之急性或慢性免疫疾 病、肉狀瘤病、動脈粥樣硬化、散播性血管内凝血、川崎 氏病、格雷氏病、腎病症候群、慢性疲勞症候群、韋格納 氏肉芽腫病、亨偌_絲奇恩賴紫癜、腎顯微性血管炎、慢 〇 性活動型肝炎、葡萄膜炎、敗血性休克、中毒性休克㈣ 群敗血症症候群、惡病質、感染性疾病、寄生蟲病、後 天免疫缺乏症候群、急性橫貫性脊髓炎、亨廷頓氏舞蹈 病帕金森氏病、阿鉍海默氏病、中風、原發性膽汁性肝 硬化、溶血性貧血、惡性病、心臟衰竭、心肌梗塞、艾迪 森氏病、偶發性〗型多腺體分泌不足症及11型多腺體分泌不 足症、施密特氏症候群、成人（急性）呼吸窘迫症候群、脫 髮、斑形脫髮、血清陰性關節病、關節病、萊特爾氏病、 158366.doc 193- 201211252 牛皮癬性關節病、潰瘍性結腸炎關節病、腸病性滑膜炎、 與被衣菌、與耶氏桿菌及沙門氏菌相關之關節病、脊椎關 節病、動脈粥樣瘤病/動脈硬化、異位性過敏、自體免疫 大皰病、尋常天疱瘡、葉狀天疱瘡 '類天疱瘡、線狀igA 病、自體免疫溶血性貧血、庫姆氏陽性溶血性貧血、後天 惡性貧血、青少年惡性貧血、肌痛腦炎/皇家自由病、慢 性皮膚黏膜念珠菌病、巨細胞動脈炎、原發性硬化性肝 炎、原因不明性自體免疫肝炎、後天免疫缺乏疾病症候 群、後天免疫缺乏相關疾病、3型肝炎、c型肝炎、普通 變異性免疫缺乏症（普通變異性低丫球蛋白血症）、擴張性心 肌病、雌性不孕症 '印巢衰竭、印巢早衰、纖維變性肺 病、原因不明性纖維化肺泡炎、發炎後間質性肺病、間質 性肺炎、結締組織病相關之間f性肺病、混合結締組織病 相關之肺病、全身性硬化症相關之間質性肺病、類風濕性 •征孑目關 關節炎相關之間質性肺病、全身性 病、皮肌炎/多肌炎㈣之肺病、休格連氏病相 病、僵直性脊椎炎相關之肺病、▲管炎擴散性肺病、含鐵 血黃素沈積症相關之肺病、藥物誘發之間質性肺病、纖維 化、放射性纖雜、阻塞性細支氣管炎、慢性嗜伊紅众球 性肺炎1巴細胞浸潤性肺病、感染後間質性肺病、痛風 性關節炎、自體免疫性肝炎、1型自體免疫性肝炎（业型自 體免疫或類狼瘡性肝炎）、2型自體免疫性肝炎（抗LKM抗 體肝炎）、自體免疫介導之低血糖症、B型胰島素抗性伴愛 色棘皮病、副甲狀腺低能症、與器官移植有關之急性免: 158366.doc •194· 201211252 疾病、與器官移植有關之慢性免疫 ^ .. Λ 汉戾局骨性關節病、原 發性硬化性膽管炎、1型牛皮癖、 土十反屏2型牛皮癬、特發性白血 ”>、病、自體免疫性嘻中性球減少症、NOS型腎病、企 =腎炎、腎顯微性血管炎、萊姆病、盤狀紅斑狼瘡、 广’或刪型雄性不育症、精子自體免疫、多發性硬化 症（斤有亞型）、交感性眼炎、結缔組織病繼發之肺高也 麼、古巴士德氏症候群、結節性多動脈炎之肺表現、急性 ❹ Ο 風濕熱、類風濕性㈣炎、史提爾氏病、全身性硬化症、 休格連氏症候群、高安氏病/動脈炎、自體免疫性血小板 減少症、特發性血小板減少症'自體免疫性曱狀腺病、甲 狀腺機能完進症、甲妝腺睹祕&胁 庇T狀腺遽性自體免疫性甲狀腺低能症 (橋本氏病）、萎縮性自體免疫性甲狀腺低能症、原發性黏 液水腫、晶狀體源性葡萄琪炎、原發性灰管炎、白斑病急 性肝病、慢性肝病、酒精性肝硬化、酒精誘發之肝損傷、 膽汁鬱滯、特質性肝病、藥物誘發之肝炎、非酒精性脂肪 性肝炎、過敏症及哮喘、B群鏈球菌（咖）感_、精神障礙 (例如抑鬱症及精神分裂症）、Th2型及TM型介導之疾病、 急性及慢性疼痛（不同形式之疼痛）、及諸如肺癌、乳:、 胃癌m結腸癌、騰腺癌、#巢癌、前列腺錢直 腸癌之癌症及造血性惡性病（白血病及淋巴瘤）、無^脂蛋白 血症、手足發紺、急性及慢性寄生或感染過程、急性白血 病、急性淋巴母細胞白企病（ALL)、急性骨题白企病 (AML)、急性或慢性細菌感染、急性胰腺炎、急性腎衰 竭、腺癌、心房異位搏動、AIDS癡呆複合症、酒精誘發 158366.doc -195- 201211252 之肝炎、過敏性結膜炎、過敏性接觸性皮膚炎、過敏性鼻 k、同種異體移植排斥反應、α-1-抗騰蛋白酶缺乏症、肌 肉萎縮性侧索硬化、貧血、心絞痛、前角細胞退化、抗 cd3療法、抗磷脂症候群、抗受體過敏反應、主動脈及周 邊動脈瘤、主動脈剝離、動脈性高血壓、動脈硬化、動靜 脈瘺、共濟失調、心房纖維性顫動（持續性或陣發性）、心 房撲動、房室傳導阻滯、B細胞淋巴瘤、骨移植物排斥反 應、骨髓:移植（BMT)排斥反應、束枝傳導阻滞、伯基特氏 淋巴瘤、燒傷、心律不整、心臟頓抑症候群、心臟腫瘤、 心肌病、心肺繞道發炎反應、軟骨移植排斥反應、小腦皮 質退化、小腦病症、奮亂性或多灶性心房心動過速、與化 學療法有關之病症、慢性髓細胞白血病（CML)、慢性酒精 中毒、慢性發炎性病變、慢性淋巴細胞性白血病（CLL)、 慢性阻塞性肺病（COPD)、慢性水揚酸中毒、結腸直腸 癌、充血性心臟衰竭、結膜炎、接觸性皮膚炎、肺原性心 臟病、冠狀動脈疾病、庫賈氏病、培養物陰性敗血症、囊 腫性纖维化、細胞激素療法相關之病症、拳擊員癡呆 '脫 髓鞘疾病、出血性登革熱、皮膚炎、皮膚病病狀、糖尿病 (diabetes，diabetes mellitus) '糖尿病性動脈硬化病、彌漫 性路易體疾病、擴張型充血性心肌病、基底神經節病症、 中年唐氏症候群、由阻斷CNS多巴胺受體之藥物誘發的藥 物誘發之運動障礙、藥物敏感、濕疹、腦脊髓炎、心内膜 火、内分泌病、會厭炎、£6病毒感染、肢端紅痛症、錐體 及丨知病症、豕族性π藍血淋巴組織細胞瘤病、胎兒胸腺 158366.doc -196- 201211252 Ο
G 移植排斥反應、弗里德賴希氏共濟失調、功能性周邊動脈 病症、真菌性敗血症、氣性壞疽、胃潰瘍、腎小球腎炎、 任何器官或組織的移植物排斥反應、革蘭氏陰性敗血症、 革蘭氏陽性敗血症、胞内生物體引起之肉芽腫、毛細胞白 血病、哈洛弗登-史巴茲氏症、橋本氏曱狀腺炎、枯草 熱'心臟移植排斥反應、血色素沈著症'血液透析、溶血 性尿毒癥候群/血栓溶解性血小板減少性紫癜、出血、A型 肝炎、希氏束心律不整、HIV感染/HIV神經病、霍奇金氏 病、過動性運動病症、過敏反應、過敏性肺炎、高血壓、 運動不足運動病症、下丘腦_垂體_腎上腺轴評估、特發性 艾迪森氏病、特發性肺纖維化、抗體介導之細胞毒性、衰 弱、嬰兒脊髓性肌萎縮症、主動脈發炎、a型流感、電離 輻射曝露、虹膜睫狀體炎/葡萄膜炎/視神經炎、缺血再灌 注損傷、缺血性中風、#少年類風濕性關節炎、青少年脊 髓性肌萎縮症、卡波西^肉瘤、腎臟移植排斥反應、退伍 軍人病、利什曼體病、麻風病、纟f脊髓㈣病變、脂性 水腫、肝移植排斥反應、淋巴水腫、瘧疾、惡性淋巴瘤、 心陡組織細胞增多冑、惡性黑素瘤、腦膜炎、腦膜炎球菌 血症、代謝性/特發性疾病、偏頭痛、粒線體多系統病 症、混合結締組織病、單株7球蛋白症、多發性骨趙瘤、 夕系統退化(义切、代哲因-托馬斯、史德爾格及馬查多-約 必夫）、重症肌無力、禽細胞内分枝桿菌、結核分枝桿 菌、骨髓發育不良症候群、心肌梗塞、心肌缺血病症、鼻 咽癌、新生兒慢性肺病、腎炎、腎病、神經退化性疾病、 158366.doc •197· 201211252 i型神經原性肌肉萎縮、嗜中性白血球減少性發熱、非霍 奇金氏淋巴瘤、腹主動脈及其分支閉塞、閉塞性動脈病 症、〇kt3療法、睾丸炎/副睾丸炎、睾丸炎/輸精管復通 術、器官腫大、骨質疏鬆症、胰腺移植排斥反應、胰腺 癌、副腫瘤症候群/惡性高血鈣症、副甲狀腺移植排斥反 應、骨盆發炎疾病、常年性鼻炎、心包疾病、周邊動脈粥 樣硬化疾病、周邊血管疾病、腹膜炎、惡性貧血、卡氏肺 囊蟲肺炎、肺炎、POEMS症候群（多發性神經病、器官腫 大、内分泌病、單株γ球蛋白症及皮膚變化症候群）、灌注 後症候群、泵後症候群、ΜΙ心切開術後症候群、子癇前 症、進行性核上性麻痹、原發性肺高血壓、放射療法、雷 諾氏現象及疾病、雷諾氏病、雷弗素姆氏病、規則性狹窄 QRS心動過速、腎血管性高血壓、再灌注損傷、限制型心 肌病、肉瘤、硬皮病、老年性舞蹈病、路易體型老年癡 呆、血清陰性關節病、休克、鐮形細胞性貧血、皮膚同種 異體移植排斥反應、皮膚變化症候群、小腸移植排斥反 應、實體腫瘤、特異性^律不整、脊椎共濟失調、脊髓小 腦退化、鏈球菌肌炎、小腦結構病變、亞急性硬化全腦 炎、昏厥、心血管系統梅毒、全身性過敏、全身性發炎反 應症候群、全身發作型青少年類風濕性關節炎、τ細胞或 FAB ALL、毛細管擴張、血栓閉塞性血管炎、血小板減少 症、中毒、移植、創傷/出血、ΠΙ型過敏反應、Iv型過 敏、不穩定型心絞痛、尿毒癥、尿敗企病、尊麻療、心臟 瓣膜病、靜脈曲張、血管炎、靜脈疾㉟、靜脈血检形成、 i58366.doc 201211252 心室纖維性顫動、病毒及真菌感染、病毒性腦炎/無菌性 腦媒炎、病毒相關之噬血細胞症候群、韋尼克-科爾薩科 夫症候群、威爾遜氏病、任何器官或組織的異種移植物排 斥反應。（參看Peritt等人，PCT公開案第WO 2002097048 A2號；Leonard等人，PCT公開案第WO 9524918 A1號；及 8&仏1(1等人，？(^1'公開案第'\^〇 00/56772八1號）。 本文提供之DVD-Ig亦可治療一或多種以下疾病：急性 冠狀動脈症候群、急性特發性多發性神經炎、急性發炎性 〇 脫髓鞘性多神經根神經病、急性局部缺血、成人史提爾氏 病、斑形脫髮、全身性過敏反應、抗磷脂抗體症候群、再 生不全性貧jk、動脈硬化、異位性濕療、異位性皮膚炎、 自體免疫性皮膚炎、與鏈球菌感染有關之自體免疫病症、 自體免疫性聽力損失、自體免疫淋巴組織增生症候群 (alps)、自體免疫性心肌炎、自體免疫性血小板減少症 (AITP)、瞼炎、支氣管擴張、大皰性類天疱瘡、心血管疾 ^ 病、災難性抗磷脂症候群、乳糜瀉、頸椎關節病、慢性局 〇 部缺血、瘢痕性類天疱瘡、具有多發性硬化症風險之臨床 單一症候群（CIS)、結膜炎、兒童期初發型精神病症、慢 性阻塞性肺病（COPD)、淚囊炎、皮肌炎、糖尿病性視網 膜病變、糖尿病、椎間盤突出症、椎間盤脫垂、藥物誘發 之免疫性溶血性貧血、心内膜炎、子宮内膜異位、眼内 炎、上鞏膜炎、多形性紅斑、重症多形性紅斑、妊娠類天 疱瘡、格-巴氏症候群（GBS)、括草熱、休斯症候群、特發 性帕金森氏病、特發性間質性肺炎、IgE介導之過敏症、 158366.doc • 199· 201211252 免疫性溶血性貧血、 炎性脫髓賴疾病 感染性眼發炎疾病、發 趱勒疾病、發炎性心 IPF/UIP、虹膜炎 毛人陡腎病、 再膜炎、乾燥性角膜4士膣本 * . 爾氏病或庫斯毛爾月I。膜炎、庫斯毛 ^ . 卡爾氏病、蘭德里氏麻痺、朗格罕庆 細胞組織細胞增多病t厚朗格干氏 微性多血管炎、白赫雜月斑、育斑變性、惡性病、顯 天癌瘡、多器官衰竭歹^症、運動神經元病症、黏膜類 群、心肌炎、神：根":無力、骨髓發育不良症候 根病症、神經病、非入非B型肝炎、視 神經炎、骨質溶解、卵巢 Λ/. 卵H少_型似、周邊動脈閉 塞性疾病WOD)、周邊血管疾病（PVD)、周邊動脈疾病 PAD)、靜脈炎、結節性多動脈炎(或結節性動脈周圍 炎)、多軟骨炎、風濕性多肌痛、白髮症、多關節型jra、 多發性内分泌缺乏症料、多肌炎、風濕性多肌痛 ⑽R)、栗後症候群、原發性帕金森氏症、前列腺及直腸 癌及造血惡性病（白血病及淋巴瘤）、前列腺炎、純紅血球 發育不全、原發性腎上腺機能不全、復發性視神經脊髓 炎、再狹窄、風濕性心臟病、SAPHO(滑膜炎、痤瘡、膿 皰病、骨肥厚及骨炎）、硬皮病、繼發性澱粉樣變性病、 休克肺、鞏膜炎、坐骨神經痛、繼發性腎上腺機能不全、 聚矽氧相關之結締組織疾病、史奈登-威爾金森皮膚病、 強直性脊椎炎、史蒂芬-瓊森症候群（SJS)、全身性發炎反 應症候群、顳動脈炎、弓形蟲性視網膜炎、中毒性表皮壞 死溶解、橫貫性脊髓炎、TRAPS(腫瘤壞死因子受體）、is 過敏反應、II型糖尿病、蓴麻疹、尋常性間質性肺炎 158366.doc •200· 201211252 (UIP)、血管炎、春季結膜炎、病毒性視網膜炎、沃格特- 小柳-原田症候群（VKH症候群）、濕式黃斑變性及創傷療 合0 本文提供之結合蛋白可用於治療罹患自體免疫疾病之人 類’該等自體免疫疾病尤其與發炎有關，包括類風濕性關 節炎、脊椎炎、過敏症、自體免疫性糖尿病、自體免疫性 葡萄膜炎。在一實施例中，結合蛋白或其抗原結合部分係 用於治療類風濕性關節炎、克羅恩氏病、多發性硬化症、 〇 騰島素依賴性糖尿病及牛皮癬。 在一實施例中，可以本文提供之組合物及方法治療或診 斷之疾病包括（但不限於）原發性及轉移性癌症，包括乳 癌、結腸癌、直腸癌、肺癌、口咽癌、下嚥癌、食道癌、 月癌、姨腺癌、肝癌、膽囊癌及膽管癌、小腸癌、尿道癌 (包括腎癌、膀胱癌及尿道上皮癌）、雌性生痩道癌（包括子 宮頸癌、子宮癌及卵巢癌，以及絨膜癌及妊娠滋養細胞疾 病）、雄性生殖道癌（包括前列腺癌、精囊癌、睾丸癌及生 G 殖細胞腫瘤）、内分泌腺癌（包括甲狀腺癌、腎上腺癌及垂 體腺癌）及皮膚癌，以及血管瘤、黑素瘤、肉瘤（包括骨骼 及軟組織產生之肉瘤以及卡波西氏肉瘤）、腦腫瘤、神經 腫瘤、眼腫瘤及腦膜腫瘤（包括星形細胞瘤、神經膠質 瘤膠羞母細胞瘤、視網膜胚細胞瘤、神經瘤、神經母細 胞瘤、神經鞘瘤及腦膜瘤）、由諸如白血病及淋巴瘤（霍奇 金氏淋巴瘤及非霍奇金氏淋巴瘤）之造血性惡性病引起的 實體腫瘤。 158366.doc •201- 201211252 在一實施例中，本文提供之結合蛋白或其抗原結合部分 在單獨使用或與放射療法及/或其他化學治療劑組合使用 時可用於治療癌症或預防自本文所述之腫瘤轉移。 本文提供之結合蛋白或其抗原結合部分可與包括（但不 限於）以下之藥劑組合：抗贅生劑；放射療法；化學療 法，諸如DNA烷基化劑、順鉑（cisplatin)、卡鉑 (carboplatin)、抗微管蛋白劑、太平洋紫杉醇（pae丨如奸丨）、 多烯紫杉醇（docetaxel)、紫杉醇（tax〇i)、小紅莓、吉西他 濱（gemcitabine)、健擇（gemzar)、蒽環黴素（anthracyclines)、 阿德力黴素（adriamycin)、拓撲異構酶丨抑制劑、拓撲異構 酶II抑制劑、5_氟尿嘧啶（5_FU)、曱醯四氫葉酸 (leuCovorin)、伊立替康（irin〇tecan)、受體酪胺酸激酶抑制 劑（例如埃羅替尼（erlotinib)、吉非替尼（gefhinib))、c〇x_ 2抑制劑（例如塞内昔布（celec〇xib))、激酶抑制劑及 siRNA。 本文提供之結合蛋白亦可與一或多種適用於治療各種疾 病之其他治療劑一起投與。 本文提供之結合蛋白可單獨或組合使用以治療該等疾 病。應瞭解，結合蛋白可單獨使用或與其他藥劑(例如治 療劑）組合使用，該其他藥劑係由熟習此項技術者出於其 預期目的來選擇。舉例而言，該另一藥劑可為此項技術認 ^適用於治療由本文揭示之結合蛋白治療之疾病或病狀之 療J該另一藥劑亦可為賦予治療組合物有益屬性的藥 劑’例如影響組合物黏度之藥劑。 〃 158366.doc •202 · 201211252 應進一步瞭解，本文提供之組合為適用於其預定目的之 彼等組合。下文陳述之藥劑為說明性目的且不欲具有限制 性。本文提供之組合可為結合蛋白及至少一種選自以下清 單之其他藥劑。若組合使得所形成之組合物可執行其預定 功能，則組合亦可包括一種以上其他藥劑，例如兩種或三 種其他藥劑。 治療自體免疫及發炎疾病之組合為非類固醇消炎藥（亦 稱作NSAID)，其包括如布洛芬之藥物。其他組合為皮質 Ο 類固醇，包括潑尼龍；可藉由在與本文提供之DVD Ig組合 治療患者時逐漸減少所要之類固醇劑量來降低或甚至消除 類固醇使用之熟知副作用。可與本文提供之結合蛋白組合 之用於類風濕性關節炎之治療劑的非限制性實例包括以 下：細胞激素抑制性消炎藥（CSAID);針對其他人類細胞 激素或生長因子之抗體或拮抗劑，該等其他人類細胞激素 或生長因子為例如 TNF、LT、IL-1、IL-2、IL-3、IL-4、 IL-5 、 IL-6 、 IL-7 、 IL-8 、 IL-15 、 IL-16 、 IL-18 、 IL-21 、 〇 IL-23、干擾素、EMAP-II、GM-CSF、FGF及 PDGF。本文 提供之結合蛋白或其抗原結合部分可與針對細胞表面分子 之抗體組合，該等分子諸如CD2、CD3、CD4、CD8、 CD25、CD28、CD30、CD40、CD45、CD69、CD80 (B7.1)、CD86(B7.2)、CD90、CTLA 或其配位體，包括 CD154(gp39或 CD40L)。 治療劑之組合可在不同點干擾自體免疫及後續發炎性級 聯；實例包括TNF拮抗劑（如嵌合、人類化或人類TNF抗 158366.doc -203 - 201211252 體）、阿達木單抗（PCT公開案第WO 97/29131號；）、 CA2(RemicadeTM)、CDP 571及可溶性 p55 或 p75 TNF 受 體、其衍生物（p75TNFRlgG(EnbrelTM)或 p55TNFRlgG(來 那西普）；以及TNFa轉化酶（TACE)抑制劑；類似地，IL-1 抑制劑（介白素-1轉化酶抑制劑、IL-1RA等）可能由於相同 原因而為有效的。其他組合包括介白素11。另一組合包括 可與IL-12功能平行起作用、依賴於IL-12功能起作用或與 IL-12功能協同起作用的自體免疫反應關鍵作用者；尤其 IL-18拮抗劑，包括IL-18抗體或可溶性IL-18受體、或iL_ 18結合蛋白。已顯示IL-12及IL-18具有重疊但不同之功 能’且兩者之拮抗劑的組合可能最有效。另一組合為非消 耗性抗CD4抑制劑。其他組合包括協同刺激路徑CD80 (B7.1)或CD86 (B7.2)之拮抗劑，包括抗體、可溶性受體或 拮抗性配位體。 本文提供之結合蛋白亦可與以下藥劑組合：諸如曱胺嗓 呤、6-MP、硫唑嘌呤、柳氮磺胺吡啶、美沙拉嗪 (mesalazine)、奥沙拉嗪、氯喹/羥基氯喹、青黴胺 (pencillamine)、硫代齒果酸鹽（aur〇thi〇nialate)(肌肉内及 經口）、硫唑嘌呤、秋水仙驗、皮質類固醇（經口、吸入及 局部注射）、β-2腎上腺素受體促效劑（沙丁胺醇 (salbutamol) > 特布他林（terbutaline)、沙美特羅 (salmeteral))、黃嘌呤（茶鹼（the〇phylHne)、胺茶鹼 (aminophymne))、色甘酸鹽（cr〇m〇giycate)、奈多羅米 (nedocromil)、酮替酚（ket〇Ufen)、異丙托銨（ipratr〇pium) 158366.doc -204- 201211252 及氧托錢（oxitropium)、環孢靈、FK506、雷帕黴素、黴紛 酸嗎琳乙酯、來氟米特、NS AID(例如布洛芬）、皮質類固 酵（諸如潑尼龍）、填酸二醋S#抑制劑、腺普促效劑、抗血 栓劑、補體抑制劑、腎上腺素激導劑、干擾促炎性細胞激 素（諸如TNF-α或IL-1)信號傳導之藥劑（例如IRAK、NIK、 IKK、p3 8或MAP激酶抑制劑）、IL-Ιβ轉化酶抑制劑、 TNFa轉化酶（TACE)抑制劑、T細胞信號傳導抑制劑（諸如 激酶抑制劑）、金屬蛋白酶抑制劑、柳氮確胺吡啶、硫唑 〇 嘌呤、6-疏基嘌呤、血管收縮素轉化酶抑制劑、可溶性細 胞激素受體及其衍生物（例如可溶性p5 5或p75 TNF受體及 衍生物 p75TNFRIgG(EnbrelTM&p55TNFRIgG(來那西普））、 sIL-lRI、sIL-lRII、SIL-6R)、消炎性細胞激素（例如IL-4、 IL-10、IL-11、IL-13及TGFP)、塞内昔布、葉酸、硫酸羥 基氣啥、羅非考昔（rofecoxib)、依那西普、英利昔單抗、 萘普生（naproxen)、伐地考昔（valdecoxib)、柳氮續胺η比 唆、甲潑尼龍（methylprednisolone)、美洛西康（meloxicam)、 〇 乙酸甲潑尼龍、硫代蘋果酸金鈉、阿司匹靈（aspirin)、曲 安奈德（triamcinolone acetonide)、萘確酸丙氧芬 (propoxyphene napsylate)/apap、葉酸鹽、萘 丁美酮 (nabumetone)、雙氣芬酸（diclofenac)、π比羅昔康（piroxicam)、 依託度酸（etodolac)、雙氯芬酸鈉（diclofenac sodium)、奥 沙普嗪（oxaprozin)、鹽酸經考酮（oxycodone hcl)、氫可鯛 酒石酸氫鹽（hydrocodone bitartrate)/apap、雙氯芬酸鈉/米 索前列醇（misoprostol)、芬太尼（fentanyl)、人類重組阿那 158366.doc -205 - 201211252 白滯素（anakinra, human recombinant)、鹽酸曲馬多 (tramadol hcl)、雙水楊自旨（salsalate)、舒林酸（sulindac)、 氰始胺素（cyanocobalamin)/fa/0比咳醇（pyridoxine) ' 乙酿胺 苯盼（acetaminophen)、阿余膦酸鈉（alendronate sodium)、 潑尼龍、硫酸嗎啡（morphine sulfate)、鹽酸利多卡因、D引 D朵美辛（indomethacin)、硫酸葡糖胺（glucosamine sulf)/軟 骨素、鹽酸阿米替林（amitriptyline hcl)、續胺嚷咬 (sulfadiazine)、鹽酸經考酮/乙醯胺苯盼、鹽酸奥洛他定 (olopatadine hcl)、米索前列醇、萘普生鈉、奥美拉β坐 (omeprazole)、環礙酿胺（cyclophosphamide)、利妥昔單 抗、IL-1 TRAP、MRA、CTLA4-IG、IL-18 BP、抗 IL-18、 抗 IL15、BIRB-796、SCIO-469、VX-702、AMG-548、VX-740、羅氟司特（Roflumilast)、IC-485、CDC-801 及美索潘 (Mesopram)。組合包括曱胺嗅吟或來氟米特，且在中度或 重度類風濕性關節炎情形下，包括環孢靈。 亦可與結合蛋白組合用於治療類風濕性關節炎之非限制 性其他藥劑包括（但不限於）以下：非類固醇消炎藥 (NSAID);細胞激素抑制性消炎藥（CSAID) ; CDP-571/BAY-10-3356(人類化抗 TNFa抗體；Celltech/Bayer); cA2/英利昔單抗（嵌合抗TNFa抗體；Centocor) ; 75 kdTNFR-IgG/依那西普（75 kD TNF受體-IgG融合蛋白； Immunex ;參看例如 及/zewwai^m (1994)第 37 卷， S295; hva，· Med. (1996)第 44 卷，235A); 55 kdTNF-IgG(55 kD TNF 受體-IgG 融合蛋白；Hoffmann-LaRoche); 158366.doc -206- 201211252 10£0。£9.1/88 210396(非消耗性靈長類動物化抗〇04抗 體；IDEC/SmithKline ;參看例如 yiri/zr"，·*? ά (1995)第 38 卷，S185); DAB 486-IL-2及 / 或 DAB 389-IL_ 2(IL-2 融合蛋白；Seragen ;參看例如 Jri/zr/iz··? ά： Rheumatism (1 "3)第 36 卷，I223);抗 Tac(人類化抗11>-2Ra ; Protein Design Labs/Roche) ; IL-4(消炎性細胞激 素）；DNAX/Schering) ; IL-10(SCH 52000 ;重組IL-10消炎 性細胞激素；DNAX/Schering) ; IL-4 ; IL-10及 /或 IL-4 促 Ο 效劑（例如促效劑抗體）；IL-1RA(IL-1受體拮抗劑； Synergen/Amgen);阿那白滯素（Kineret®/Amgen) ; TNF-bp/s-TNF(可溶性TNF結合蛋白：參看例如& (1996)第 39卷，第 9期（增刊），S284; Jmer. ·/. Physiol. - Heart and Circulatory Physiology (1995)第 268 卷，第37-42頁）；R973401(IV型磷酸二酯酶抑制劑；參看 例如 jri/zriib & /i/zewwaibm (1996)第 39卷，第 9期（增刊）， S282) ; MK-966(COX-2 抑制劑；參看例如 Jri/zrzD ίδ C) 謂（1996)第39卷，第9期（增刊），S8 1);伊洛前列 素（Iloprost)(參看例如 JrArzD (fe (1996)第 39 卷，第9期（增刊），S82);甲胺喋呤；沙立度胺（thalidomide) (參看例如 (1996)第 39卷，第 9期（增 刊），S282)及沙立度胺相關藥物（例如西爾金（Celgen));來 氣米特（消炎藥及細胞激素抑制劑；參看例如£& (1996)第 39卷，第 9期（增刊），S131 ; βαβαλΆ (1996)第45卷，第 103-107頁）；胺曱環酸(tranexamic 158366.doc -207- 201211252 aCid)m維蛋白溶酶原活化抑制劑；參看例如a.肋没 綠麵如（1996)第39卷，第9期（增刊），s284); τ·6ΐ4(細 胞激素抑㈣；參看例如」"⑽以—_/ζ·_ (1996)第 卷，第9期（增刊），S282);前列腺素£1(參看例如々咖⑽ 沒及心請⑽iw(1996)第39卷第9期（增刊）s282) ;替尼達 曰（Tenidap)(非類固醇消炎藥；參看例如a咖仙没 以e謂扣·州（1996)第39卷第9期（增刊），s28〇);萘普生 (非類固醇4 κ藥，參看例如"（Μ%)第7卷， 第1209-1213頁）；美;各西康（非類固醇消炎藥）；布洛芬（非 類固醇消炎藥）；吡羅昔康(非類固醇消炎藥）；雙氯芬酸 (非類固醇消炎藥）；吲哚美辛(非類固醇消炎藥）；柳氮磺 胺比疋（參看例如（1996)第π卷第 9期（增刊），S281);硫唑嘌呤（參看例如1如仙凌 (1996)第39卷第9期（增刊），s28i); ice抑制 劑（介白素-ΐβ轉化酶之抑制劑）；zap_7〇及/或lck抑制劑（酪 胺酸激酶zap-70或1心之抑制劑）；¥£(}17抑制劑及/或vegf_ R抑制名（jk苔内皮細胞生長因子或血管内皮細胞生長因子 父體之抑制劑；灰管生成抑制劑）；皮質類固醇消炎藥（例 如SB203580) ; TNF轉化酶抑制劑；抗江_12抗體；抗比一^ 抗體介白素11 (參看例如ά及所如1996) 第39卷，第9期（增刊），S296);介白素_13(參看例如 如心心ά仙⑽讲“价历（1996)第39卷第9期（增刊）， S3〇8) ’介白素-17抑制劑（參看例如篇 (1996)第3 9卷，第9期（增刊），S120);金；青黴胺；氯喹； 158366.doc -208- 201211252 苯丁酸氮芬（chlorambucil);經基氯喧；環孢素；環填酿 胺；全身淋巴組織照射（total lymphoid irradiation);抗胸 腺細胞球蛋白；抗CD4抗體；CD5毒素；經口投與之肽及 膠原蛋白；氯苯紮利二納（lobenzarit disodium);細胞激素 調控劑（CRA)HP228 及 HP466(Houghten Pharmaceuticals, Inc.) ; ICAM-1反義硫代磷酸酯寡去氧核苷酸（ISIS 2302 ; Isis Pharmaceuticals，Inc.);可溶性補體受體 1(TP10 ; T Cell Sciences，Inc.);強的松（prednisone);奥古蛋白 O (orgotein);葡糖胺聚糖多琉酸鹽（glycosaminoglycan polysulphate);二曱胺四環素（minocycline);抗 IL 2R抗 體；海洋生物及植物脂質（魚及植物種子脂肪酸；參看例 如 DeLuca等人，（1995) iVori/z j/w. 21: 759-777);金諾芬（auranofin);苯基 丁氮酮（phenylbutazone); 曱氯芬那酸（meclofenamic acid);氟芬那酸（flufenamic acid);靜脈内免疫球蛋白；齊留通（zileuton);阿紮立平 (azaribine);黴紛酸（mycophenolic acid)(RS-61443);他克 〇 莫司（tacrolimus)(FK-506);西羅莫司（sirolimus)(雷帕黴 素）；胺普立糖（amiprilose)(鹽酸胺普立糖（therafectin)); 克拉曲濱（cladribine)(2-氯去氧腺苷）；曱胺嗓吟；bcl-2抑 制劑（參看 Bruncko，Milan 等人，Journal of Medicinal Chemistry (2007)，50(4), 641-662);抗病毒劑；及免疫調 節劑。 在一個實施例中，結合蛋白或其抗原結合部分與一種以 下藥劑組合投與以治療類風濕性關節炎：KDR之小分子抑 158366.doc -209- 201211252 制劑；Tie-2之小分子抑制劑；甲胺喋呤；強的松；塞内昔 布；葉酸；硫酸羥基氣啥；羅非考昔；依那西普；英利昔 單抗；來氟米特；萘普生；伐地考昔；柳氮磺胺吡啶；甲 潑尼龍；布洛芬；美洛西康；乙酸甲潑尼龍 (methylprednisolone acetate);硫代蘋果酸金鈉；阿司匹 靈；硫唑嘌呤；曲安奈德；萘磺酸丙氧芬/apap ;葉酸鹽； 萘丁美酮；雙氣芬酸；》比羅昔康；依託度酸；雙氣芬酸 納；奥沙普嗪；鹽酸羥考酮；氫可酮酒石酸氫鹽/apap ;雙 氯芬酸納/米索前列醇；芬太尼；人類重組阿那白滯素； 鹽酸曲馬多，·雙水揚酯，·舒林酸；氰鈷胺素/fa/吡哆醇； 乙醯胺苯紛；阿俞膦酸鈉；潑尼龍；硫酸嗎啡；鹽酸利多 卡因’。引β木美辛’硫酸葡糖胺/軟骨素；環孢靈；鹽酸阿 米替林；磺胺嘧啶；鹽酸羥考酮/乙醯胺苯酚；鹽酸奥洛 他定，米索刖列醇；萘普生鈉；奥美拉唑；黴酚酸嗎啉乙 酯；環磷醯胺；利妥昔單抗；比」TRAp ; MRA ; CTLA4_ IG ’ IL-18 BP ; IL-12/23 ;抗 IL 18 ;抗 IL 15 ; BIRB-796 ; SCIO-469，VX-702 ; AMG-548 ; VX-740 ;羅氟司特；ic- 485 ; CDC-801 ;及美索潘。 可與本文提供之結合蛋白組合用於發炎性腸病之治療劑 的非限制性實例包括以下：布地奈德；表皮生長因子；皮 質颏固醇’環孢靈；柳氮磺胺吡啶；胺基水楊酸鹽；卜巯 基不呤，硫嗤嗓呤；曱確噠唆；脂質加氧酶抑制劑；美沙 拉奥沙拉嗪；巴柳氮；抗氧化劑；血栓素抑制劑； IL 1又體拮抗劑；抗IL_lp mAb;抗IL 6 mAb;生長因 158366.doc -210· 201211252 子；彈性蛋白酶抑制劑；。比π定基-°米嗤化合物；針對其他 人類細胞激素或生長因子（例如TNF、LT、IL-l、IL-2、 IL-6、IL-7、IL-8、IL-15、IL-16、IL-17、IL-18、EMAP_ II、GM-CSF、FGF及PDGF)之抗體或拮抗劑。本文提供之 結合蛋白或其抗原結合部分可與針對細胞表面分子（諸如 CD2、CD3、CD4、CD8、CD25、CD28、CD30、CD40、 CD45、CD69、CD90)或其配位體之抗體組合。本文提供 之結合蛋白或其抗原結合部分亦可與以下藥劑組合：諸如 ❹ 甲胺喋呤；環孢靈；FK506 ;雷帕黴素；黴酚酸嗎啉乙 酯；來氟米特；NSAID，例如布洛芬；皮質類固醇，諸如 潑尼龍；磷酸二酯酶抑制劑；腺苷促效劑；抗血栓劑；補 體抑制劑；腎上腺素激導劑；干擾促炎性細胞激素（諸如 TNFot或IL-1)信號傳導之藥劑（例如IRAK、NIK、IKK、p38 或MAP激酶抑制劑）；IL-Ιβ轉化酶抑制劑；TNFa轉化酶抑 制劑；T細胞信號傳導抑制劑，諸如激酶抑制劑；金屬蛋 白酶抑制劑；柳氮磺胺吡啶；硫唑嘌呤；6-毓基嘌呤；血 〇 管收縮素轉化酶抑制劑；可溶性細胞激素受體及其衍生物 (例如可溶性p5 5 或p75 TNF受體、sIL-lRI、sIL-lRII、sIL-6R);及消炎性細胞激素（例如IL-4、IL-10、IL-11、IL-13 及TGFp);及bcl-2抑制劑。 可與結合蛋白組合之用於克羅恩氏病之治療劑的實例包 括以下：TNF拮抗劑（例如抗TNF抗體）、阿達木單抗（PCT 公開案第 WO 97/29131 號；HUMIRA)、CA2(REMICADE)、 CDP 571、TNFR-Ig 構築體（p75TNFRIgG(ENBREL)及 15B366.doc 211 · 201211252 p55TNFRIgG(來那昔普）)抑制劑及PDE4抑制劑。本文提供 之結合蛋白或其抗原結合部分可與皮質類固醇（例如布地 奈德及地塞米松）組合。本文提供之結合蛋白或其抗原結 合部分亦可與以下藥劑組合：諸如柳氮磺胺吡啶、5-胺基 水楊酸及奥沙拉嗪，以及干擾諸如IL-1之促炎性細胞激素 合成或作用的藥劑（例如IL-Ιβ轉化酶抑制劑及IL-lra)。本 文提供之結合蛋白或其抗原結合部分亦可與T細胞信號傳 導抑制劑（例如酪胺酸激酶抑制劑6-酼基嘌呤）一起使用。 本文提供之結合蛋白或其抗原結合部分可與IL- 11組合。 本文提供之結合蛋白或其抗原結合部分可與以下組合：美 沙拉嗓、強的松、硫。坐嘌吟、疏基嘌吟、英利昔單抗、甲 潑尼龍丁二酸·納、地芬諾醋（diphenoxylate)/硫酸阿托品 (atrop sulfate)、鹽酸洛e辰丁胺（loperamide hydrochloride)、 甲胺嗓吟、奥美拉e坐、葉酸鹽、環丙沙星（ciprofloxacin)/ 右旋糖-水、氫可酮酒石酸氫鹽/apap、鹽酸四環素 (tetracycline hydrochloride)、醋酸氣輕鬆（fluocinonide)、 曱琐噠嗤、硫柳汞（thimerosal)/删酸、消膽胺 (cholestyramine)/蔗糖、鹽酸環丙沙星、硫酸莨菪驗 (hyoscyamine sulfate)、鹽酸口底替咬(meperidine hydrochloride) 、鹽酸w米達e坐佘（midazolam hydrochloride)、鹽酸經考酉同/ 乙酿胺苯酌·、鹽酸普敏太定（promethazine hydrochloride)、 填酸納、石黃胺曱°惡°坐（sulfamethoxazole)/曱氧节胺喷。定 (trimethoprim)、塞内昔布、聚卡波非（polycarbophil)、蔡 石黃酸丙氧芬、氫化可的松（hydrocortisone)、多維生素劑 158366.doc -212- 201211252 (multivitamin)、巴柳氮二納、填酸可待因（codeine phosphate)/apap、鹽酸考來維舍（colesevelam hcl)、氰銘胺 素、葉酸、左氧氟沙星（levofloxacin)、甲潑尼龍、那他珠 單抗及干擾素-γ。 可與本文提供之結合蛋白組合用於多發性硬化症之治療 劑的非限制性實例包括以下：皮質類固醇；潑尼龍；甲潑 尼龍；硫唑嘌呤；環磷醯胺；環孢靈；曱胺喋呤；4-胺基 吡啶；替紮尼定（tizanidine);干擾素-pia(AVONEX ; O Biogen);干擾素-pib(BETASERON ; Chiron/Berlex);干 擾素 a-n3(Interferon Sciences/Fujimoto)；干擾素-a(Alfa Wassermann/J&J);干擾素plA-IF(Serono/Inhale Therapeutics); 聚乙二醇化干擾 Ί：α 2b(Enzon/Schering-Plough);共聚物 l(Cop-l ;克帕松（COPAXONE) ; Teva Pharmaceutical Industries, Inc.);高壓氧；靜脈内免疫球蛋白；克拉曲濱 (clabribine);針對其他人類細胞激素或生長因子及其受體 (例如 TNF、LT、IL-1、IL-2、IL-6、IL-7、IL-8、IL-23、 〇 IL-15、IL-16、IL-18、EMAP-II、GM-CSF、FGF及 PDGF) 之抗體或拮抗劑。本文提供之結合蛋白可與針對細胞表面 分子（諸如 CD2、CD3、CD4、CD8、CD19、CD20、 CD25、CD28、CD30、CD40、CD45、CD69、CD80、 CD86、CD90)或其配位體之抗體組合。本文提供之結合蛋 白亦可與以下藥劑組合：諸如曱胺喋呤、環孢靈、 FK506、雷帕黴素、黴酚酸嗎啉乙酯、來氟米特、 NS AID(例如布洛芬）、皮質類固醇（諸如潑尼龍）、磷酸二 158366.doc -213- 201211252 酯酶抑制劑、腺苷促效劑、抗血栓劑、補體抑制劑、腎上 腺素激導劑、干擾促炎性細胞激素（諸如TNFa或IL-1)信號 傳導之藥劑（例如IRAK、NIK、IKK、p3 8或MAP激酶抑制 劑）、IL-1 β轉化酶抑制劑、TACE抑制劑、T細胞信號傳導 抑制劑（諸如激酶抑制劑）、金屬蛋白酶抑制劑、柳氮確胺 °比σ定、硫°坐σ票吟、6 -疏基嗓吟、血管收縮素轉化酶抑制 劑、可溶性細胞激素受體及其衍生物（例如可溶性Ρ 5 5或 p75 TNF受體、sIL-lRI、sIL-lRII、SIL-6R)、消炎性細胞 激素（例如 IL-4、IL-10、IL-13 及 TGFP)及 bcl-2抑制劑。 可與本文提供之結合蛋白組合用於多發性硬化症之治療 劑的實例包括干擾素-β(例如IFNpia及IFNplb);克帕松、 皮質類固醇、卡斯蛋白酶抑制劑（例如卡斯蛋白酶-1抑制 劑）、IL-1抑制劑、TNF抑制劑及針對CD40配位體及CD80 之抗體。 本文提供之結合蛋白亦可與以下藥劑組合：諸如阿來組 單抗、屈大麻紛（dronabinol)、尤利美（Unimed)、達利珠單 抗（daclizumab)、米托蒽酉昆、鹽酸紮利羅登（xaliproden hydrochloride)、胺 °比咬（fampridine)、乙酸格拉替美 (glatiramer acetate)、那他珠單抗、西納 °比 °多（sinnabidol)、 a-伊木諾金NNS03(a-immunokine NNS03)、ABR-215062、 AnergiX.MS、趨化因子受體拮抗劑、BBR-2778、卡拉胍 素（calagualine)、CPI-1189、LEM(脂質體囊封之米托蒽 酿）、THC.CBD(類大麻酌·（cannabinoid)促效劑）、MBP-8298、美索潘（PDE4抑制劑）、MNA-715、抗IL-6受體抗 158366.doc -214- 201211252 體、萘羅瓦西（neurovax)、°比非尼酮（pirfenidone)、阿羅曲 普 1258(allotrap 1258)(RDP-1258)、sTNF-Rl、他侖帕奈 (talampanel)、特立氟胺（teriflunomide)、TGF-p2、替利莫 肽（tiplimotide)、VLA-4拮抗劑（例如 TR-14035、VLA4 Ultrahaler、Antegran-ELAN/Biogen)、干擾素 γ# 抗劑、 IL-4促效劑。 可與本文提供之結合蛋白組合用於心絞痛之治療劑的非 限制性實例包括以下：阿司匹靈、硝化甘油 Ο (nitroglycerin)、單确酸異山梨醇酯、丁二酸美托洛爾 (metoprolol succinate)、阿替洛爾（atenolol)、酒石酸美托 洛爾、苯績酸胺氯地平（amlodipine besylate)、鹽酸地爾硫 卓（diltiazem hydrochloride)、二石肖酸異山梨酵酯、氣°比格 雷硫酸氫鹽（clopidogrel bisulfate)、硝苯地平（nifedipine)、 阿托伐他、;丁約（atorvastatin calcium)、氣化鉀、吱喃苯胺酸 (furosemide)、辛伐他汀（simvastatin)、鹽酸維拉帕米 (verapamil hcl)、地高辛（digoxin)、鹽酸普萘洛爾、卡維 〇 地洛（carvedilol)、賴諾普利（lisinopril)、螺内酯 (spironolactone)、氫氣苯嘆達嗪（hydrochlorothiazide)、順 丁浠二酸依拉普利（enalapril maleate)、納多洛爾 (nadolol)、雷米普利（ramipril)、依諾肝素鈉（enoxaparin sodium)、肝素鈉、纈沙坦（valsartan)、鹽酸索他洛爾 (sotalol hydrochloride)、非諾貝特（fenofibrate)、依澤替米 貝（ezetimibe)、布美他尼（bumetanide)、氯沙坦卸（losartan potassium)、賴諾普利/氫氯苯噻噠嗓、非洛地平 158366.doc -215- 201211252 (fel〇dipine)、卡托普利（capt〇pril)、反丁稀二酸比索洛爾 (bisoprolol fumarate)。 可與本文提供之結合蛋白組合用於僵直性脊椎炎之治療 劑的非限制性實例包括以下：布洛芬、雙氯芬酸及米素前 列醇、萘普生、美洛西康、吲哚美辛、雙氣芬酸、塞内昔 布、羅非考昔、柳氮磺胺吡啶、曱胺喋呤、硫唑嘌呤、二 甲胺四環素、強的松、依那西普、英利昔單抗。 可與本文提供之結合蛋白組合用於哮喘之治療劑的非限 制性實例包括以下：沙丁胺醇（albuter〇1)、沙美特羅 (salmeterol)/氟替卡松（fluticas〇ne)、孟魯司特鈉 (montelukast sodium)、丙酸 I 替卡松（fluticasone propi〇nate)、 布地奈德（budesonide)、強的松、羥萘曱酸沙美特羅、醆 酸左旋沙丁胺醇（levalbuterol hcl)、硫酸沙丁胺醇/異丙托 錄、潑尼龍構酸鈉、曲安奈德、二丙酸倍氯米於 (beclomethasone dipropionate)、溴化異丙托銨、阿奇黴素 (azithromycin)、乙酸吡布特羅（pirbuterol acetate)、潑尼 龍、無水茶驗、甲潑尼龍丁二酸納、克拉徵素 (clarithromycin)、紮魯司特（zafirlukast)、反 丁烯二酸福莫 特羅（formoterol fumarate)、流感病毒疫苗、甲潑尼龍、二 水合阿莫西林（amoxicillin trihydrate)、氟尼、端中、 (flunisolide)、過敏注射液、色甘酸鈉、鹽酸非索非那定 (fexofenadine hydrochloride)、氟尼縮松/薄荷腦、阿莫西 林/棒酸鹽（clavulanate)、左氧氟沙星、吸入器輔助裂置、 愈創甘油&I (guaifenesin)、地塞米松填酸鈉、鹽酸莫西Λ|、 158366.doc -216- 201211252 星（moxifloxacin hcl)、鹽酸多西環素（d〇XyCyCiine hyclate)、 愈創甘油醚/d-美沙芬（d-methorphan)、對麻黃素/cod/氯芬 那敏（chlorphenir)、加替沙星（gatifi〇xacin)、鹽酸西替利 嗓（cetirizine hydrochloride)、糠酸莫美他松（mometas〇ne furoate)、叛萘甲酸沙美特羅、苯佐那酯（benz〇natate)、頭 孢胺苄（cephalexin)、pe/氫可酮/氣芬那敏、鹽酸西替利嗪/ 假麻黃素（pseudoephed)、苯腎上腺素/cod/普敏太定、可待 因/普敏太定、頭孢丙烯（cefprozil)、地塞米松、愈創甘油 Ο 醚/假麻黃素、氣芬尼拉明（chlorpheniramine)/氫可酮、奈 多羅米鈉、硫酸特布他林、腎上腺素、甲潑尼龍、硫酸間 羥異丙腎上腺素（metapr〇teren〇l sulfate) 〇 可與本文提供之結合蛋白組合用於COPD之治療劑的非 限制性實例包括以下：硫酸沙丁胺醇/異丙托銨、溴化異 丙托銨、沙美特羅/氟替卡松、沙丁胺醇、羥萘甲酸沙美 特羅、丙酸氟替卡松、強的松、無水茶鹼、曱潑尼龍丁二 酸鈉、孟魯司特鈉、布地奈德、反丁烯二酸福莫特羅、曲 ϋ *奈德、左氧氟沙星、愈創甘油醚、阿奇黴素、二丙酸倍 氯米松、鹽酸左旋沙丁胺醇、氟尼縮松、頭孢曲松鈉 (Ceftdaxone sodium)、三水合阿莫西林、加替沙星紮魯 司特、阿莫西林/棒酸鹽、氟尼縮松/薄荷腦、氯芬尼拉明/ 氫可酮、硫酸間經異丙腎上腺素、甲潑尼龍、糠酸莫美他 松、對麻黃素/eod/氯芬那敏、乙酸。比布特羅、對麻黃素/ 洛拉他定（l〇ratadine)、硫酸特布他林、噻托溴銨 (ti〇tr〇PiUm br〇mide)、（R R)_福莫特羅、τ§αατ、西洛司 158366.doc -217- 201211252 特（Cilomilast)、羅氟司特。 可與本文提供之結合蛋白組合用KHCVi治療劑的非限 制性實例包括以下：干擾素a_2a、干擾素心孔、干擾素α coni、干擾素a-nl、聚乙二醇化干擾素心仏、聚乙二醇化 干擾素a-2b、病毒唑（ribavirin)、聚乙二醇化干擾素心孔+ 病毒嗤、熊去氧膽酸（Ursodeoxycholic Acid)、甘草酸 (Glycyirhizic Acid)、胸腺法新（Thymalfasin)、二鹽酸組胺 (Maxamine)、VX-497及藉由干預以下目標以治療HCV之任 何化合物.HCV聚合酶、HCV蛋白酶、HCV解螺旋酶、 HCV IRES(内部核糖體入口位點）。 可與本發明之結合蛋白組合用於特發性肺纖維化之治療 劑的非限制性實例包括以下：強的松、硫唑嘌呤、沙丁胺 醇、秋水仙鹼、硫酸沙丁胺醇、地高辛、γ干擾素、甲潑 尼龍丁二酸鈉、勞拉西泮（l〇razepam)、呋喃苯胺酸、賴諾 普利、硝化甘油、螺内酯、環磷醯胺、溴化異丙托銨、放 線菌素d、阿替普酶（alteplase)、丙酸氟替卡松、左氧氟沙 星、硫酸間羥異丙腎上腺素、硫酸嗎啡、鹽酸羥考酮、氯 化卸曲文奈德、無水他克莫司、妈、干擾素〇1、甲胺噪 呤、黴酚酸嗎啉乙酯、干擾素γ·丨β。 可與本文提供之結合蛋白組合用於心肌梗塞之治療劑的 非限制性實例包括以下：阿司匹靈、硝化甘油、酒石酸美 托洛爾、依諾肝素鈉、肝素鈉、氣吡格雷硫酸氫鹽、卡維 地洛、阿替洛爾、硫酸嗎啡、丁二酸美托洛爾、華法林鈉 (warfarin sodium)、賴諾普利、單硝酸異山梨醇酯、地高 158366.doc •218· 201211252 辛、°夫喃苯胺酸、辛伐他丨丁、雷米普利、替奈普酶 (tenecteplase)、順丁稀二酸依拉普利、托西邁 (torsemide)、瑞替普酶（retavase)、氯沙坦鉀、鹽酸啥那普 利（quinapril hcl)/mag carb、布美他尼、阿替普酶、依那普 利拉（enalaprilat)、 鹽酸乙胺埃吱酿I (amiodarone hydrochloride)、m-水合鹽酸替羅.非班（tirofiban hcl m-hydrate)、鹽酸地爾硫卓、卡托普利、厄貝沙坦 (irbesartan)、顯沙坦、鹽酸普萘洛爾、福辛普利納 O (fosinopril sodium)、鹽酸利多卡因、埃替菲巴肽 (eptifibatide)、頭抱唾林鈉（cefazolin sodium)、硫酸阿托 品（atropine sulfate)、胺基己酸、螺内酯、干擾素、鹽酸 索他洛爾、氣化卸、多庫醋納（docusate sodium)、鹽酸多 巴盼丁胺（dobutamine hcl)、阿普0坐余（alprazolam)、普伐 他灯納（pravastatin sodium)、阿托伐他汀妈、鹽酸"米達嗤 侖、鹽酸哌替啶、二硝酸異山梨醇酯、腎上腺素、鹽酸多 巴胺、比伐盧定（bivalirudin)、羅素他汀（rosuvastatin)、依 ◎ 澤替米貝/辛伐他、;T、阿伐麥布（avasimibe)、卡立泊來德 (cariporide) ° 可與本文提供之結合蛋白組合用於牛皮癬之治療劑的非 限制性實例包括以下：KDR之小分子抑制劑、Tie-2之小分 子抑制劑、：i弓泊三醇（calcipotriene)、丙酸氣倍他索 (clobetasol propionate)、曲安奈德、丙酸函貝他索 (halobetasol propionate)、他紮羅汀（tazarotene)、甲胺嗓 呤、醋酸IL輕鬆、強化二丙酸倍他米松（betamethasone 158366.doc -219- 201211252 diprop augmented)、醋酸氟輕鬆（fluocinolone acetonide)、 阿曲汀（acitretin)、植物性洗髮精（tar shampoo)、戊酸倍他 米松（betamethasone valerate)、糠酸莫美他松、酮康嗤 (ketoconazole)、普莫卡因（pramoxine)/氣輕鬆（fluocinolone)、 戊酸氫化可的松（hydrocortisone valerate)、氟氫縮松 (flurandrenolide)、尿素、倍他米松（betamethasone)、丙酸 氯倍他索/潤膚劑、丙酸氟替卡松、阿奇黴素、氫化可的 松、增濕配方（moisturizing formula)、葉酸、地奈德 (desonide)、〇比美莫司（pimecrolimus)、煤焦油（coal tar)、 二乙酸二氟拉松（diflorasone diacetate)、葉酸依那西普 (etanercept folate)、乳酸、甲氧沙林（methoxsalen)、he/驗 式沒食子酸叙（bismuth subgal)/znox/resor、乙酸甲潑尼 龍、強的松、防B麗劑、哈西奈德（halcinonide)、水楊酸、 蒽二盼（anthralin)、特戊酸氯可托龍（clocortolone pivalate)、煤提取物、煤焦油/水楊酸、煤焦油/水揚酸/ 硫、去經米松（desoximetasone)、安定（diazepam)、满膚 劑、醋酸氟輕鬆/潤膚劑、礦物油/蓖麻油/na lact、礦物油/ 化生油、石油/十四烧酸異丙g旨、補骨脂素（pS〇ralen)、水 揚酸、妻類/三漠沙侖（tribromsalan)、硫柳汞/棚酸、塞内 昔布、英利昔單抗、環孢靈、阿法賽特、依法利珠單抗、 他克莫司、吡美莫司、PUVA、UVB、柳氮磺胺吡啶。 可與本文提供之結合蛋白組合用於牛皮癖性關節炎之治 療劑的非限制性實例包括以下：曱胺喋呤、依那西普、羅 非考昔、塞内昔布、葉酸、柳氮磺胺吼啶、萘普生、來氟 158366.doc -220- 201211252 米特、乙酸甲潑尼龍、吲哚美辛、硫酸羥基氣喹、強的 松、舒林酸、強化二丙酸倍他米松、英利昔單抗、甲胺喋 呤、葉酸鹽、曲安奈德、雙氣芬酸、二甲亞砜、吡羅昔 康、雙氯芬酸納、酮洛芬（ketQpr()fen)、美洛西康、曱潑尼 龍、萘丁美酮、托美丁鈉（tolmetin s〇dium)、鈣泊三醇、 袞抱靈雙氣芬酸納/米索前列醇、醋酸氟輕鬆 '硫酸葡 糖胺、硫代蘋果酸金鈉、氫可酮酒石酸氫鹽/apap、布洛 分、利塞膦酸鈉、磺胺嘧啶、硫鳥嘌呤、伐地考昔、阿法 賽特、依法利珠單抗及bcl-2抑制劑。 "T與本文k供之結合蛋白組合用於再狹窄之治療劑的非 限制性實例包括以下：西羅莫司、太平洋紫杉醇、依維莫 司（everolimus)、他克莫司、唑他莫司（z〇tar〇Hmus)、乙醯 胺苯酚。 可與本文提供之結合蛋白組合用於坐骨神經痛之治療劑 的非限制性實例包括以下：氫可酮酒石酸氫鹽/apap、羅非 考曰、鹽酸壤本紮林（cyclobenzaprine hcl)、曱潑尼龍、萘 普生、布洛芬、鹽酸羥考酮/乙醯胺苯酚、塞内昔布、伐 地考昔、乙酸曱潑尼龍、強的松、磷酸可待因/apap、鹽酸 曲馬多/乙酿胺本盼、美他沙酮（metaxai〇ne)、美洛西康、 美索巴莫（methocarbamol)、鹽酸利多卡因、雙氣芬酸鈉、 加巴喷丁（gabapentin)、地塞米松、肌安寧（cariSOpr〇(j〇i)、 酮 11各酸胺 丁二醇（ketorolac tromethamine)、0引0朵美辛、乙 醯胺苯酚、安定、萘丁美酮、鹽酸羥考酮、鹽酸替紮尼 定、雙氣芬酸鈉/米索前列醇、萘磺酸丙氧芬/apap、 158366.doc -221- 201211252 asa/oxycod/經考酮ter、布洛芬/氫可酮酒石酸氫鹽、鹽酸 曲馬多、依託度酸、鹽酸丙氧芬、鹽酸阿米替林、肌安寧/ 磷酸可待因/asa、硫酸嗎啡、多維生素、萘普生鈉、檸檬 酸奥芬那君（orphenadrine citrate)、替馬西泮（temazepam)。 可與本文提供之結合蛋白組合用於SLE(狼瘡）之治療劑 的實例包括以下：NSAID，例如雙氯芬酸、萘普生、布洛 芬、。比羅昔康、吲哚美辛；COX2抑制劑，例如塞内昔 布、羅非考昔、伐地考昔；抗癔劑，例如羥基氯喹；類固 醇，例如強的松、潑尼龍、布地奈德、地塞米松；細胞毒 性劑，例如硫°坐°票呤、環構醯胺、黴盼酸嗎琳乙S旨、曱胺 喋呤；PDE4抑制劑或嘌呤合成抑制劑，例如驍悉 (Cellcept)。本文提供之結合蛋白亦可與以下藥劑組合：諸 如柳氮磺胺吡啶、5-胺基水楊酸、奥沙拉嗪、依木蘭 (Imuran)及干擾促炎性細胞激素（諸如IL-1)合成、產生或作 用之藥劑，例如卡斯蛋白酶抑制劑，如IL-1 β轉化酶抑制 劑及IL-Ira。本文提供之結合蛋白亦可與Τ細胞信號傳導抑 制劑（例如酪胺酸激酶抑制劑）；或靶向T細胞活化分子之 分子（例如CTLA-4-IgG或抗B7家族抗體、抗PD-1家族抗體） 一起使用。本文提供之結合蛋白可與IL- Π或抗細胞激素 抗體（例如芳妥珠單抗（fonotolizumab)(抗IFNg抗體））或抗受 體之受體抗體（例如抗IL-6受體抗體）及針對B細胞表面分子 之抗體組合。本文提供之結合蛋白或其抗原結合部分亦可 與以下一起使用：LJP 394(阿貝莫司（abetimus));消耗B細 胞或使B細胞失活之藥劑，例如利妥昔單抗（抗CD20抗 158366.doc -222- 201211252 體）' 貝利單抗（lymphostat-B)(抗BlyS抗體）；TNF拮抗劑， 例如抗TNF抗體、阿達木單抗（PCT公開案第WO 97/29131 號；HUMIRA)、CA2(REMICADE)、CDP 571、TNFR-Ig構 築體（p75TNFRIgG(ENBREL)及 p55TNFRIgG(來那西普））； 及bcl-2抑制劑，由於已證實bcl-2在轉殖基因小鼠體内之 過度表現產生狼瘡像表型（參看Marquina, Regina等人， Journal of Immunology (2004), 172(11)，7177-7185)，因此 預期抑制產生治療作用。 〇 本文提供之醫藥組合物可包括「治療有效量」或「預防 有效量」之本文提供之結合蛋白。「治療有效量」係指在 必需劑量下且歷時必需時段有效達成所要治療效果之量。 結合蛋白之治療有效量可由熟習此項技術者確定且可根據 諸如疾病病況、個體之年齡、性別及體重以及結合蛋白在 個體中引起所要反應之能力的因素而變化。治療有效量亦 為結合蛋白或抗原結合部分之治療有益作用超過任何毒性 或有害作用的量。「預防有效量」係指在必需劑量下且歷 〇 時必需時段有效達成所要預防結果之量。通常，因為在疾 病早期階段之前或在疾病早期階段時對個體使用預防劑 量，所以預防有效量將小於治療有效量。 可調整給藥方案以提供最佳所要反應（例如治療或預防 反應）。舉例而言，可投與單次劑量，可隨時間投與若干 分開劑量，或依治療情況之緊急性指示，可按比例減少或 增加劑量。出於易於投與且劑量均一之目的，將非經腸組 合物調配為單位劑型尤其適宜。如本文所用之單位劑型係 158366.doc -223- 201211252 指適合作為整體劑量用於欲治療哺乳動物個體的 續單元；各單元含有料算μ生所要治療作用之預定旦 的活性化合物與所要醫藥載劑之聯合。本文提供之μ ' 型的規格由以下因素規定且直接視以下因素而定、： 化合物之獨特特徵及欲達成之特定治療或預防作用；及 混配該活性化合物以達成個體之治療靈敏度之技術 有之限制。 本文提供之結合蛋白之治療或預防有效量之例示性非限 制範圍為0.1-20 mg/kg，例如mo mg/kg。應注意劑量值^ 能隨欲緩解之病狀的類型及嚴重程度而變化。應進—步瞭 解，對於任何特定個體而t，特定劑量方案應㈣個體需 要及投與或監督組合物投與之個人的專業判斷隨時間而加 以調整，且本文所述之劑量範圍僅供例示，而並非意欲限 制所主張之組合物的範疇或實施。 V.診斷 本文之揭示内容亦提供診斷應用。下文將對此進行進一 步闡述。 A.分析方法 本發明亦提供使用至少一種如本文所述之DVD-lg測定 測試樣品中分析物（或其片段）之存在、量或濃度的方法。 該方法中可使用此項技術中已知之任何適合分析法。實例 包括（但不限於）免疫分析法，諸如夾心免疫分析法（例如單 株、多株及/或DVD-Ig夾心免疫分析法或其任何變化形式 (例如單株/DVD-Ig、DVD-Ig/多株等），包括放射性同位素 158366.doc -224- 201211252 偵測（放射免疫分析法（RIA))及酶偵測（酶免疫分析法（ΕΙΑ) 或酶聯免疫吸附分析法（ELISA)(例如Quantikine ELISA分 析法，R & D Systems, Minneapolis, MN))、競爭抑制免疫 分析法（例如正向及反向）、螢光偏振免疫分析法（FPIA)、 酶倍增免疫分析法技術（EMIT)、生物發光共振能量傳遞 (BRET)及均質化學發光分析法等。在基於SELDI之免疫分 析法中，將特異性結合相關分析物（或其片段）之捕捉試劑 連接於質譜探針（諸如預活化之蛋白質晶片陣列）表面。接 〇 著將分析物（或其片段）特異性捕捉於生物晶片上.，且藉由 質譜法偵測所捕捉之分析物（或其片段）。或者，可自捕捉 試劑溶離分析物（或其片段）且藉由傳統MALDI(基質輔助雷 射脫附/離子化）或藉由SELDI加以偵測。化學發光微粒免 疫分析法（尤其採用ARCHITECT®自動分析儀（Abbott Laboratories, Abbott Park, IL)之化學發光微粒免疫分析法） 為較佳免疫分析法之實例。 舉例而言，在如本文所述之DVD-Ig用作免疫診斷試劑 〇 及/或用於分析物免疫分析法套組中時，使用此項技術中 熟知之收集、處理及加工尿液、血液、血清及血漿_及其他 體液之方法來實踐本發明。測試樣品除相關分析物以外亦 可包含其他部分，諸如抗體、抗原、半抗原、激素、藥 物、酶、受體、蛋白質、肽、多肽、寡核苷酸及/或聚核 苦酸。舉例而言，樣品可為自個體獲得之全jk樣品。在如 本文所述之免疫分析法前可能必需或需要例如用預處理試 劑處理測試樣品（尤其全血）。即使在預處理並非必需之情 158366.doc -225- 201211252 形（例如大多數尿液樣品）下，仍可視情況進行預處理（例 如，作為基於商業平台之方案的一部分）。 預處理試劑可為任何適於與本文提供之免疫分析法及套 組一起使用之試劑。預處理視情況包含：（a)—或多種溶刻 (例如甲醇及乙二醇）及視情況選用之鹽，（b)—或多種溶制 及鹽及視情況選用之清潔劑，（c)清潔劑，或（d)清潔劑及 鹽。預處理試劑為此項技術中所已知，且可例如以如文獻 (參看例如 Yatscoff等人，Abbott TDx Monoclonal Antibody Assay Evaluated for Measuring Cyclosporine in Wh〇le Blood，Clin. Chem. 36: 1969-1973 (1990);及 Wallemacq等 人，Evaluation of the New AxSYM Cyclosporine Assay； Comparison with TDx Monoclonal Whole Blood and EMIT Cyclosporine Assays, Clin. Chem. 45: 432-435 (1999))所述 在 Abbott TDx、AxSYM® 及 ARCHITECT® 分析儀（Abbott Laboratories，Abbott Park, IL)上進行分析法所使用之形 式，及/或市售形式使用該預處理。此外，預處理可如 Abbott的美國專利第5,135,875號、歐洲專利公開案第0 471 293號、2006年12月29曰申請之美國臨時專利申請案 60/878,017及美國專利申請公開案第2008/0020401號（其關 於預處理之教示以全文引用的方式併入本文中）中所述進 行。預處理試劑可為非均質試劑或均質試劑。 在使用非均質預處理試劑下，預處理試劑使樣品中存在 之分析物結合蛋白（例如可結合至分析物或其片段之蛋白 質）沈澱。該預處理步驟包含藉由分離沈澱之分析物結合 158366.doc •226· 201211252 蛋白與藉由將預處理劑添加至樣 清液來移除任何分析物結合蛋白。在該合物的上 在任何結合蛋白之混合物上清液用於 將不存 捉步驟。 直接進行至捕 2用均質預處理試劑下，不存在 Ο Ο 整個混合物與分析物(或其： 特異性結合搭配物（諸如經標記之抗分析 抗原反應性>1段）)接觸。通常在由第 （或- 捕捉之前或期間，將用於該分析法虚Ί“搭配物 之預處理試劑於經預虚 理之測試樣品混合物中稀釋。儘管存在該稀釋，但在= 期間測试樣品混合物中仍存在（或殘留）_定量預處理試 劑。根據特定實施例，經標記特異性結合搭配物可為 DVD-Ig(或其片段、變異體或變異體之片段）。 在非均質形式中，在自個體獲得測試樣品後，製備第— 混合物。混合物含有待評估分析物（或其片段）之測試樣品 及第-特異性結合搭配物，#中該第一特異性結合搭配物 與測試樣品中所含之任何分析物形成第一特異性結合搭配 物-分析物複合物。第一特異性結合搭配物較佳為抗分析 物抗體或其片段。第一特異性結合搭配物可為如本文所述 之DVD-Ig(或其片段、變異體或變異體之片段）。添加測試 樣品及第一特異性結合搭配物以形成混合物之順序並非關 鍵所在。較佳將第一特異性結合搭配物固定於固相上。用 於免疫分析法（用於第一特異性結合搭配物及視情況用於 第二特異性結合搭配物）之固相可為此項技術中已知之任 158366.doc -227- 201211252 何固相，諸如（但不限於）磁性粒子、珠粒、試管、微量滴 疋盤、光析官、膜、骨架分子、薄膜、濾紙、圓盤及晶 片。 办成3有弟特異性結合搭配物-分析物複合物之混合 物後，使用此項技術中已知之任何技術自複合物移除任何 未結合之分析物。舉例而言，可藉由洗滌移除未結合之分 析物。然而’理想的是存在之第一特異性結合搭配物之量 超過測試樣品中存在之任何分析物，以使測試樣品中存在 之所有分析物皆與第一特異性結合搭配物結合。 移除任何未結合之分析物後，將第二特異性結合搭配物 添加至混合物中以形成第一特異性結合搭配物_分析物、第 一特異性結合搭配物複合物。第二特異性結合搭配物較佳 為結合至分析物上不同於第一特異性結合搭配物在分析物 上所結合之抗原決定基之抗原決定基的抗分析物抗體。此 外’第二特異性結合搭配物亦較佳經如上文所述之可彳貞測 標記來標記或含有如上文所述之可偵測標記。第二特異性 結合搭配物可為如本文所述之DVD_Ig(或其片段、變異體 或變異體之片段）。 可使用此項技術中已知之任何適合之可偵測標記。舉例 而言，可偵測標記可為放射性標記（諸如3H、l2h、35s、 14C、32p及33P)、酶標記（諸如辣根過氧化酶、鹼性過氧化 酶、葡萄糖6-碟酸脫氫酶及其類似物）、化學發光標記（諸 如吖°定鑌酯、硫酯、或續醢胺；魯米諾、異魯米飞 (isoluminol)、非。疋錄 |旨（phenanthridinium ester)及其類似 158366.doc •228- 201211252 物）、螢光標記（諸如螢光素（例如5-螢光素、6-羧基螢光 素、3'6-羧基螢光素、5(6)-羧基螢光素、6-六氯-螢光素、 6-四氯螢光素、異硫氰酸螢光素及其類似物））、若丹明、 藻膽蛋白（phycobiliprotein)、R-藻紅素、量子點（例如硫化 鋅封端之硒化鎘）、測溫標記或免疫聚合酶鏈反應標記。 標記之引入、標記程序及對標記之偵測可見於Polak及Van Noorden, Introduction to Immunocy to chemistry,第 2 版， Springer Verlag, N.Y. (1997)及 Haugland，Handbook of o Fluorescent Probes and Research Chemicals (1996)(其為由 Molecular Probes, Inc.，Eugene, Oregon出版之組合手冊及 目錄）中。螢光標記可用於FPIA中（參看例如美國專利第 5,593,896 號、第 5,573,904 號、第 5,496,925 號、第 5,359,093號及第5,352,803號）。吖啶鏘化合物可在均質或 非均質化學發光分析法中用作可偵測標記（參看例如 Adamczyk等人，Bioorg. Med. Chem. Lett. 16: 1324-1328 (2006) ; Adamczyk等人，Bioorg· Med. Chem. Lett. 4: 2313-◎ 23 17 (2004) ; Adamczyk等人，Biorg. Med. Chem. Lett. 14: 3917-3921 (2004);及 Adamczyk 等人，Org. Lett. 5: 3779-3782 (2003))。 較佳吖啶鏽化合物為吖啶鑌-9-曱醯胺。製備吖啶鏽9-曱 醯胺之方法係描述於Mattingly，J. Biolumin. Chemilumin. 6: 107-1 14 (1991) ; Adamczyk 等人，J. Org. Chem. 63: 5636-5639 (1998) ; Adamczyk等人，Tetrahedron 55: 10899-10914 (1999) ; Adamczyk等人，Org. Lett. 1: 779-781 (1999); 158366.doc -229- 201211252
Adamczyk等人，Bioconjugate Chem. 11: 714-724 (2000); Mattingly等人，In Luminescence Biotechnology: Instruments and Applications; Dyke, K. V.編；CRC Press: Boca Raton， 第 77-105 頁（2002); Adamczyk 等人，Org. Lett. 5: 3779-3 782 (2003);及美國專利第5,468,646號、第5,543，524號及 第5,783,699號中。另一較佳吖啶鑌化合物為吖啶鏽-9-曱 酸芳酯。吖啶鏽-9-曱酸芳酯之實例為10-甲基-9-(苯氧羰 基）β丫咬鑌氟績酸鹽（可自 Cayman Chemical, Ann Arbor, MI 獲得）。製備吖啶鏽9-甲酸芳酯之方法係描述於McCapra等 人，Photochem. Photobiol. 4: 1 1 1 1-21 (1965) ； Razavi# Λ, Luminescence 15: 245-249 (2000) ; Razavi等人，Luminescence 15: 239-244 (2000);及美國專利第5,241，070號中。關於吖 啶鏽-9-甲酸芳酯及其用途之其他細節闡述於US 2008-0248493中。 可根據 Adamczyk 等人，Anal. Chim. Acta 579(1): 61-67 (2006)中所述之方法進行化學發光分析（例如，使用如上文 所述之吖啶鏽或其他化學發光劑）。儘管可使用任何適合 之分析法形式，但微盤化學發光計（Mithras LB-940,
Berthold Technologies U_S.A” LLC，Oak Ridge，TN)使得能 夠快速分析多個小體積樣品。 添加測試樣品及特異性結合搭配物以形成用於化學發光 分析法之混合物之順序並非關鍵。若第一特異性結合搭配 物經諸如吖啶鏽化合物之化學發光劑可偵測標記，則形成 經可偵測標記之第一特異性結合搭配物-分析物複合物。 158366.doc -230- 201211252 或者:若使用第二特異性結合搭配物且第二特異性結合搭 配物巫諸如。丫咬鏽化合物之化學發光劑可偵測標記，則形 成經可伯測標記之第一特異性結合搭配物-分析物_第二特 異性結合搭配物複合物。可使用此項技術令已知之任何技 術（諸如洗務）自混合物移除任何經標記或未經標記的未結 合之特異性結合搭配物。 在添加上述°丫啶鑌化合物之前、同時或之後’可現場在 ⑽口物中產生過氧化氫或可向混合物中提供或供應過氧化 〇氫(例如，過氧化氫之來源為一或多種已知含有過氧化氫 之緩衝液或其他溶液）。過氧化氫可以多種方式（諸如為熟 習此項技術者所顯而易見之方式）現場產生。 在同時或隨後向樣品中添加至少一種鹼性溶液後，產生 指示分析物存在之可偵測信號，即化學發光信號。鹼性溶 液含有至少一種驗且具有大於或等於1〇，較佳大於或等於 12之pH值。鹼性溶液之實例包括（但不限於）氫氧化納、氫 .I化卸、氫氧化約、氫氧化鍵、氫氧化鎂、碳酸納、碳酸 氫鈉、氳氧化鈣、碳酸鈣及碳酸氫鈣，添加至樣品中之鹼 性溶液之量視鹼性溶液之濃度而定。基於所用鹼性溶液之 濃度，熟習此項技術者可輕易地確定添加至樣品中之鹼性 溶液之量。 可使用熟習此項技術者所已知之常規技術偵測所產生之 化學發光信號。基於所產生之信號強度，可定量樣品中分 析物之量。特定言之，樣品中分析物之量舆所產生之信號 強度成比例《可藉由將所產生光之量與分析物之標準曲線 158366.doc -231 - 201211252 相比較或藉由與參考標準物相比較來定量存在之分析物之 ΐ。可藉由質譜分析、重量分析法及此項技術中已知之其 他技術使用已知濃度之分析物的連續稀釋液或溶液產生標 準曲線。儘管上文著重描述使用吖啶鑷化合物作為化學發 光劑，但一般技術者可輕易地改變此描述以使用其他化學 發光劑。 分析物免疫分析法一般可使用此項技術中已知之任何形 式（諸如（但不限於）夾心形式）來進行。特定言之，在一種 免疫分析法形式中，採用至少2種結合蛋白來分離及定量 樣品中之分析物，諸如人類分析物或其片段。更特定古 之，至少2種結合蛋白結合於分析物（或其片段）上之不同抗 原決定基以形成免疫複合物，其稱作「夾心」。一般而 =，在免疫分析法中，可使用一或多種結合蛋白來捕捉測 試樣品中之分析物（或其片段）（此等結合蛋白通常稱作「捕 捉」抗體），且可使用一或多種結合蛋白以使可偵測（即可 疋量）標記結合於夾心（此等結合蛋白常稱作「偵測抗 體」、「結合物」）。因此，在夾心免疫分析法形式之上 下文中，如本文所述之DVD-Ig(或其片段、變異體或變異 體之片段）可用作捕捉抗體、偵測抗體或兩者。舉例而 吕，一種具有可結合分析物（或其片段）上之第—抗原決定 基之區域的DVD-Ig可用作捕捉抗體及/或另一具有可結人 分析物（或其片段）上之第二抗原決定基之區域的 用作偵測抗體。就此而言，具有可結合分析物（或其片段） 上之第一抗原決定基之第一結構域及可結合分析物（或其 158366.doc -232- 201211252 片段）上之第二抗原決定基之第二結構域的DVD-Ig可用作 捕捉抗體及/或偵測抗體。或者，一種具有可結合第一分 析物（或其片段）上之抗原決定基之第一結構域及可結合第 二分析物（或其片段）上之抗原決定基之第二結構域的Dvd-Ig可用作捕捉抗體及/或偵測抗體來偵測且視情況定量兩種 或兩種以上分析物。若分析物可能以一種以上形式（諸如 單體形式及二聚/多聚形式，其可為均聚（h〇m〇meric)或雜 聚（heteromenc))存在於樣品中，則一種具有可結合僅暴露 C) 於單體形式上之抗原決定基之結構域的DVD-Ig及另一種 具有可結合一聚/多聚形式之不同部分上之抗原決定基之 區域的DVD-Ig可用作捕捉抗體及/或偵測抗體，從而使得 能夠偵測及視情況定量不同形式之既定分析物。此外，使 用單個DVD-Ig中及/或DVD-Ig之間親和力有所不同之 DVD-Ig可提供親合力優勢。在如本文所述之免疫分析法 之上下文中，將一或多個連接子併入DVD-Ig之結構中一 般可能為有幫助的或合乎需要的。若存在連接子，則最佳 〇 連接子應具有足夠長度及結構可撓性以使内部區域能夠結 合抗原決定基以及外部區域能夠結合另一抗原決定基。就 此而言，若DVD-Ig可結合兩種不同分析物且一種分析物 大於另一種，則合乎需要的是，由外部結構域結合較大分 析物。 一般而言，可使測試（例如懷疑含有）分析物（或其片段） 之樣品同時或依序及按任何順序與至少一種捕捉抗體及至 少一種偵測抗體（例如在捕捉及/或偵測抗體包含多種抗體 158366.doc •233 - 201211252 時’其可為第二偵測抗體或第三偵測抗體或甚至連續編號 之抗體）接觸。舉例而言，可使測試樣品首先與至少一種 捕捉抗體接觸，接著（依序）與至少一種偵測抗體接觸。或 者，可使測試樣品首先與至少一種偵測抗體接觸，接著 (依序）與至少一種捕捉抗體接觸。在另一替代方案中，可 使測試樣品同時與捕捉抗體及偵測抗體接觸。 在夾心分析法形式中，使懷疑含有分析物（或其片段）之 樣品首先與至少一種第一捕捉抗體在使得形成第—抗體/ 分析物複合物之條件下接觸。若使用一種以上捕捉抗體， 則形成包含兩種或兩種以上捕捉抗體之第一捕捉抗體/分 析物複合物。在夾心分析法中，以比測試樣品中預期之分 析物（或其片段）之最大量莫耳過量之量使用抗體（亦即較佳 至少一種捕捉抗體）。舉例而言，可使用每毫升緩衝液（例 如微粒塗覆緩衝液）約5微克至約1毫克抗體。 由於舄要僅由一種結合蛋白結合而常用於量測小分析物 之競爭抑制免疫分析法包含依序及典型形式。在依序競爭 抑制免疫分析法中，將相關分析物之捕捉抗體塗覆於微量 =盤之孔或其他固體支撐物上。當將含有相關分析物之 ^ 添加至孔中時，相關分析物結合於捕捉抗體。洗滌 後，將已知量之經標記（例如生物素或辣根過氧化酶 (HRP))分析物添加至孔中。酶標記之受質為產生信號所必 需。HRP之適合受質之實例為my—四甲基聯苯胺 (丁應)。洗滌後’量測由經標記之分析物產生之信號且該 信號與樣品中分析物之量成反比。在典型競爭抑制免疫分 158366.doc •234· 201211252 析法中’將相關分析物之抗體塗覆於固體支撐物（例如微 量滴定盤之孔）上。然而，不同於依序競爭抑制免疫分析 法，同時將樣品及經標記之分析物添加至孔中。樣品中之 任何分析物與經標記之分析物競爭結合於捕捉抗體。洗滌 後’量測由經標記之分析物產生之信號且該信號與樣品中 分析物之量成反比。 視情況在使測試樣品與至少一種捕捉抗體（例如第一捕 捉抗體）接觸之前，可使至少一種捕捉抗體結合於固體支 Ο 撐物上，此有助於使第一抗體/分析物（或其片段）複合物與 測試樣品分離。捕捉抗體所結合之受質可為有助於捕捉抗 體·分析物複合物自樣品分離之任何適合固體支樓物或固 相0 實例包括培養盤（諸如微量滴定盤）之孔、試管、多孔凝 膠（例如矽膠、瓊脂糖、聚葡萄糖或明膠）、聚合薄膜（例如 聚丙烯醯胺）、珠粒（例如聚苯乙烯珠粒或磁性珠粒）、濾紙 /膜（例如硝化纖維素或耐綸）之條帶、微粒（例如乳膠粒 〇 子、可磁化微粒（例如具有氧化鐵或氧化鉻核心及均聚或 雜聚塗層且半徑為約1 -1 0微米之微粒）。受質可包含適合多 孔材料，其具有適於結合抗原之表面親和力及足以允許偵 測抗體出人之孔隙率。儘管可使用呈水合狀態之凝膠狀材 料，但微孔材料一般較佳。該等多孔受質較佳為厚度為約 〇.〇1 mm至約0.5 mm，較佳約(M mm之薄片形式。雖然微 孔尺寸可大不相同，但較佳微孔尺寸為約〇 〇25至約15 μπι，更佳為約〇.15至約15 μιη。該等受質之表面可藉由使 158366.doc •235 · 201211252 抗體與受質共價鍵聯之化學製程活化。引起抗原或抗體不 可逆結合於受質，一般藉由經疏水力吸附；或者，可使用 化學偶合劑或其他方式使抗體與受質共價結合，只要該結 合不干擾抗體結合分析物之能力。或者，抗體可與微粒結 合’該等微粒先前塗有抗生物蛋白鏈菌素（例如DYNAL® 磁性珠粒，Invitrogen, Carlsbad，CA)或生物素（例如使用 Power-BindTM-SA-MP抗生物蛋白鏈菌素塗覆之微粒 (Seradyn，Indianapolis, IN))或抗物種特異性單株抗體。必 要時’受質可經衍生化以對抗體上之各種官能基具有反應 性。該衍生化需要使用某些偶合劑，其實例包括（但不限 於）順丁烯二酸酐、N-羥基丁二醯亞胺及1-乙基-3-(3-二甲 基胺基丙基）碳化二亞胺。需要時，可使各自對分析物具 有特異性的一或多種捕捉試劑（諸如抗體（或其片段））連接 於固相之不同物理或可定址位置上（例如呈生物晶片組 態）（參看例如美國專利第6,225,047號；國際專利申請公開 案第WO 99/51773號；美國專利第6,329,209號；國際專利 申請公開案第WO 00/56934號及美國專利第5,242,828號）。 若使捕捉試劑連接於作為固體支撐物之質譜探針上，則可 藉由雷射脫附離子化質譜法偵測結合於探針之分析物之 量。或者’可用經一或多種捕捉試劑衍生化之不同珠粒填 充單個管柱，從而在單一位置捕捉分析物（參看基於經抗 體衍生化之珠粒的技術’例如Luminex(Austin, TX)之 xMAP技術）。 在用於分析分析物（或其片段）之測試樣品與至少一種捕 158366.doc -236- 201211252 捉抗體（例如第-捕捉抗體）接觸後，培育混合物以形成第 一抗體（或多個抗體分析物（或其片段）複合物。培育可在 約4.5至約10.0之pH值下，在約沈至約45。〇之溫度下歷 經至少約1分鐘至約18小時’較佳約丨分鐘至約24分鐘，最 佳約4分鐘至約18分鐘之時段進行。本文所述之免疫分析 法可以一個步驟進行（意謂依序或同時將測試樣品、至少 一種捕捉抗體及至少一種偵測抗體全部添加至反應容器 中）或以個以上步驟，諸如兩個步驟、三個步驟等進 〇 行。 在（第一或多個）捕捉抗體/分析物（或其片段）複合物形成 後，接著使複合物與至少一種偵測抗體在允許形成（第一 或多個）捕捉抗體/分析物（或其片段）/第二債測抗體複合物 之條件下接觸。儘管為清楚起見而冠以「第二」抗體（例 如第—偵測抗體）之名稱，但實際上若使用多種抗體進行 捕捉及/或偵測，至少一種偵測抗體可為用於免疫分析法 之第二抗體、第三抗體、第四抗體等。若使捕捉抗體/分 析物（或其片段）複合物與一種以上该測抗體接觸，則形成 (第或多個）捕捉杬體/分析物（或其片段）/(多個）偵測抗體 複合物。如同捕捉抗體（例如第一捕捉抗體），當使至少一 種（例如第二及任何後續編號）偵測抗體與捕捉抗體/分析物 (或其片段）複合物接觸時，需要在與上文所述之條件類似 的條件下培月一段時間以形成（第一或多個）捕捉抗體/分析 物（或其片段）/(第二或多個）偵測抗體複合物。較佳至少一 種偵測抗體含有可偵測標記。可偵測標記可在（第一或多 158366.doc *237- 201211252 個）捕捉抗體/分析物（或其片段）/(第二或多個）债測抗體複 合物形成之前、同時或之後結合於至少一種偵測抗體（例 如第二偵測抗體）。可使用此項技術中已知之任何可伯測 4示s己（參看上文命述’包括Polak及Van Noorden (1997)及 Haugland (1996)參考文獻）。 可4貞測標§己可直接或經由偶合劑結合至抗體。可使用之 偶合劑之實例為EDAC(1-乙基-3-(3-二曱基胺基丙基）碳化 二亞胺鹽酸鹽）’其可自 Sigma-Aldrich，St. Louis, MO購 得。可使用之其他偶合劑為此項技術已知。可谓測標記結 合至抗體之方法為此項技術所已知。此外，多種已含有末 端基可促成可偵測標記偶合於抗體的可彳貞測標記可購得或 合成，諸如CPSP-吖啶鑌酯（亦即9-[N-甲苯磺醯基_N-(3-敌 基丙基）]-10-(3-磺丙基）吖啶鑌甲醯胺）或81>81>_吖啶鏽醋 (亦即N10-(3-績丙基）-N-(3-續丙基）_。丫咬鏽_9_甲醯胺）。 在定量標記之前，可（但並非必須）將（第一或多個）捕捉 抗體/分析物/(第二或多個）偵測抗體複合物與測試樣品之 其餘部分分離。舉例而言，若至少一種捕捉抗體（例如第 一捕捉抗體）結合於固體支撐物（諸如孔或珠粒），則可藉由 移除（測試樣品）流體以不與固體支撐物接觸來達成分離。 或者，若至少第一捕捉抗體結合於固體支撐物，則其可同 時與含有分析物之樣品及至少一種第二偵測抗體接觸，以 形成第一（多個）抗體/分析物/第二（多個）抗體複合物，繼而 移除流體（測試樣品）以不與固體支撐物接觸。若至少—種 第一捕捉抗體未結合於固體支撐物，則無需自測試樣品移 158366.doc -238· 201211252 二或多個）偵測抗體才复 除（第一或多個）捕捉抗體/分析物/(第 合物以定量標記之量。 Ο
在域記之捕捉抗體/分析_測抗體複合物（例如第— 捕捉抗體/分析物H測抗體複合物）形成後，使用此項 技術中已知之技術定量複合物中標記之量。舉例而言，若 使用酶標記，則使經標記之複合物與標記之受質反應，產 生可定量反應’諸如顯色。若標記為放射性標記，則使用 適合方式(諸如閃爍計數器)定量標記。若標記為螢光標 記’則用單色光（其稱作「激發波長」）刺激標記且伯測標 應刺激所發射之另一顏色（其稱作「發射波長」）來定 置標記。若標記為化學發光標記，則藉由目測或使用光度 叶、X射線膠片、高速攝影膠片、CCD攝像機等偵測所發 射之光來定量標記。在定量出複合物中標記之量後，則藉 由適合方式，諸如藉由使用已知濃度之分析物或其片段之 連續稀釋液所產生之標準曲線，來測定測試樣品中分析物 或其片段之濃度。除使用分析物或其片段之連續稀釋液以 外’標準曲線可以重量分析’藉由質譜分析及藉由此項技 術中已知之其他技術產生。 在採用ARCHITECT®分析儀之化學發光微粒分析法中， 結合物稀釋劑pH值應為約6.0+/-0.2，微粒塗覆緩衝液應維 持於約室溫（亦即在約17乞至約27°C下），微粒塗覆緩衝液 pH值應為約6.5+/_〇.2，且微粒稀釋劑pH值應為約7.8+/-〇.2 °固體較佳少於約0.2%，諸如少於約〇·15%、少於約 0.14°/。、少於約〇 13%、少於約〇 12%或少於約〇 u%，諸 158366.doc -239- 201211252 如約0.10%。 FPIA係基於競爭性結合免疫分析法原理。經螢光標記之 化合物在由線性偏振光激發時將發射偏振度與其旋轉速率 成反比之螢光。當藉由線性偏振光激發經螢光標記之示蹤 劑-抗體複合物時，所發射之光仍保持高度偏振，因為螢 光團在吸收光之時間與發射光之時間之間旋轉受限。當藉 由線性偏振光激發「游離」示蹤劑化合物（亦即未結合至 抗體之化合物）時’其旋轉比競爭性結合免疫分析法中所 產生之相應示蹤劑-抗體結合物快得多。由於不存在需要 特殊處理及處置之放射性物質，FPIa優於RIA。此外， FPIA為可輕易且快速進行之均質分析法。 鑒於上文’提供測定分析物（或其片段）於測試樣品中之 存在、量或濃度的方法。該方法包含藉由如下分析法來分 析測試樣品之分析物（或其片段），該分析法⑴採用（i，）可結 合於分析物之抗體、抗體片段、可結合於分析物之抗體之 變異體、可結合於分析物之抗體變異體之片段及可結合於 分析物之DVD-Ig(或其片段、變異體或變異體之片段）中之 至少一者，及（11’）至少一種可偵測標記；且包含將由可 偵測払s己產生作為分析物（或其片段）於測試樣品中之存 在、量或濃度的直接或間接指示的信號與產生作為分析物 (或其片段）於對照組或校準物中之存在、量或濃度之直接 或間接指示的信號相比較。校準物視情 之一部分，其中各校準物與其他校準物之分析物濃= 同0 158366.doc •240- 201211252 該方法可包含⑴使測試樣品與至少一種包含以下的分析 物（或其片段）之第一特異性結合搭配物接觸：可結合至分 析物之抗體、抗體片段，可結合至分析物之抗體之變異 體，可結合至分析物之抗體變異體之片段，或可結合至分 析物之(或其片段、變異體或變異體之片段），以形 成第一特異性結合搭配物/分析物（或其片段）複合物；（H) 使第一特異性結合搭配物/分析物（或其片段）複合物與至少 一種包含以下的分析物（或其片段）之第二特異性結合搭配 〇 物接觸：可結合至分析物的經可偵測標記之抗分析物抗 體、經可偵測標記之抗分析物抗體片段，可結合至分析物 的經可偵測標記之抗分析物抗體變異體，可結合至分析物 的經可偵測標記之抗分析物抗體變異體之片段或經可偵 測輮S己之DVD-Ig(或其片段、變異體或變異體之片段），以 形成第一特異性結合搭配物/分析物（或其片段）/第二特異 性結合搭配物複合物；及（Hi)藉由偵測或量測由（Π)中所形 成之第一特異性結合搭配物/分析物（或其片段）/第二特異 性結合搭配物複合物中之可偵測標記產生之信號來測定分 析物於測試樣品中之存在、量或濃度。至少一種針對分析 物（或其片段）之第一特異性結合搭配物及/或至少一種針對 分析物（或其片段）之第二特異性結合搭配物為 如本文所述 之DVD-Ig(或其片段、變異體或變異體之片段）的方法可為 較佳。 或者’該方法可包含使測試樣品與至少一種包含以下的 針對分析物（或其片段）之第一特異性結合搭配物接觸：可 158366.doc -241- 201211252 結合至分析物之抗體、抗體之片段，可結合至分析物之抗 體變異體、可結合至分析物之抗體變異體之片段，或 DVD-Ig(或其片段、變異體或變異體之片段）；且同時或依 序以任一順序使測試樣品與至少一種第二特異性結合搭配 物接觸，該至少一種第二特異性結合搭配物可與分析物 (或其片段）競爭結合至該至少一種第一特異性結合搭配 物，且其為可結合至第一特異性結合搭配物的經可偵測標 記之分析物、經可偵測標記之分析物片段，可結合至第一 特異性結合搭配物的經可偵測標記之分析物變異體，或可 、、、》δ至第特異性結合搭配物的經可偵測標記之分析物變 異體之片段。測試樣品中存在之任何分析物（或其片段）與 至 > 一種第二特異性結合搭配物彼此競爭以分別形成第一 特異性結合搭配物/分析物(或其片段)複合物及第一特異性 結合搭配物/第二特異性結合搭配物複合物。該方法進一 步包含藉由偵測或量測由（Η)中所形成之第一特異性結合 搭配物/第二特異性結合搭配物複合物中可㈣標記所產 土之6號來測定分析物於測試樣品中之存在、量或濃度， 其中由第—特異性結合搭配物/第二特異性結合搭配物複 口物中可偵測標記產生之信號與測試樣品中分析物之量或 ?辰度成反比。 上述方法可進一步包含對獲得測試樣品之患者之治療性 療的功效進行診斷、預後或評估。若該方法進 乂匕3 估對獲得測試樣品之患者之治療性/預防性治 療的功效，則贫古、、上、n α /硯情況進一步包含根據需要改變患者 158366.doc -242- 201211252 的治療性/預防性治療以改良功效。該方法可經改進用於 自動化系統或半自動化系統中。 關於分析方法（及其套組），可能使用市售抗分析物抗體 或如文獻中所述製造抗分析物之方法。各種抗體之供應商 包括（但不限於）Santa Cruz Biotechnology Inc.(Santa Cruz, CA)、GenWay Biotech, Inc.(San Diego，CA)及 R&D Systems(RDS; Minneapolis，MN)。
一般而言，可使用預定含量作為分析測試樣品之分析物 或其片段（例如用於偵測疾病或疾病風險）所獲得結果之基 準。一般而言，在進行該比較中，藉由在適合條件下進行 特定分析法足夠多次數來獲得預定含量，使得可建立分析 物存在、3：或濃度與疾病、病症或病狀之特定階段或終點 或與特定臨床指標之關聯或聯繫。通常，藉由分析朱考個 體（或個體之群體）獲得預定含量，所量測之分析物可包括 其片段、其降解產物及/或其酶裂解產物。
特定言之’關於用於監測疾病進展及/或治療之預定含 量，分析物或其片段之量或濃度可「不變」、「有利 (或「有利地改變」）或「不利」（「不利地改變」）。「I 高」或「增加」係指測試樣品中之量或濃度高於典型或正 常含量或範圍(例如預定含量），或高於另一參考含 圍（例如初期或基線樣品）。術言吾「降低」或「減少」係於 測試樣品中之量或濃度低於业2丨# 9 〃、型或正常含量或範圍（例如 預定含量），或低於另一參考含景 >哼3量或範圍（例如初期或基線 樣品）。術§吾改變」係相样〇 * >互 糸才曰樣。0中之量或濃度改變（增加或 158366.doc •243- 201211252 降低)超出典型或正常含量或範圍(例如預定含量)或超出另 一參考含量或範圍（例如初期或基線樣品）。 分析物之典型或正常含量或範圍係根據標準操作來定 義。由於分析物含量在一些情形下極低，所以當與典型或 正常含量或範圍或參考含量或範圍相比存在不能由實驗爷 差或樣品差異解釋之任何淨變化時，可認為已發生所謂的 改變之含量或改變。因此，將在特定樣品令所量測之含量 與在來自所謂正常個體之類似樣品中所測定之含量或含量 範圍相比較。在此上下文中’ 「正常個體」為例如益可伯 測疾病之個體’且例如「正常」（有時稱作「對昭」”者 或群體分別為不展現可偵測疾病之患者或群體。此外二假 定在大部分人類群體中通常未發現高含量之分析物，則 正=個體」可視作分析物之量或濃度無實質可積測增加 或升间之個體’且「正常」（有時稱作「對照」）患者或群 體為展現分析物之量或濃度無實質可偵測增加或升高的自 者或群體。「表觀正常個體」為尚未評估分析物或當前正 δ平估分析物之個體。查公好私$劣 一 ^田刀析物通常為不可偵測（例如正常 含量為零’或處於正常群體之約挪至約乃％之範圍内）， 但在測試樣品中傾測到分析物時，以及當分析物以高於正 常含量之量存在於測試樣品中時，認為分析物之含量「升 高」。、因此，本發明尤其提供筛選罹患特定疾病、病症或 病狀或有罹患特定疾病、病症或病狀之風險之個體的方 法:分析方法亦可涉及分析其他標記及其類似物。 因此’本文所$之方法亦可用於確定個體是否罹患既定 158366.doc -244· 201211252 疾病、病症或病狀或有產生既定疾病、病症或病狀之風 險。特定言之，該方法可包含以下步驟： (a) 測定來自個體之測試樣品中分析物（或其片段）之濃度 或量（例如使用本文所述之方法或此項技術中已知之方 法）；及 (b) 將步驟（a)中測定之分析物（或其片段）之濃度或量與預 定含量相比較，其中若步驟（a)中所測定之分析物之濃度或 里相對於預疋含量而s為有利的’則確定個體未罹患既定 〇 疾病、病症或病狀或無罹患既定疾病、病症或病狀之風 險。然而，若步驟（a)中測定之分析物之濃度或量相對於預 定含量而言為不利的’則確定個體罹患既定疾病、病症或 病狀或有罹患既定疾病、病症或病狀之風險。 此外’本文提供監測個體疾病進展的方法。該方法最佳 包含以下步驟： (a) 測疋來自個體之測试樣品中分析物之濃度或量； (b) 測定來自個體之隨後測試樣品中分析物之濃度或 〇 量；及 (c) 將如步驟（b)中所測定之分析物之濃度或量與步驟（a) 中所測疋之分析物之濃度或量相比較，其中若步驟（b)中所 測定之濃度或量在與步驟（a)中測定之分析物之濃度或量相 比較時無變化或為不利的，則確定該個體之疾病持續、進 展或惡化。相比而言’若步驟（b)中所測定之分析物之濃度 或ΐ在與步驟（a)中所測定之分析物之濃度或量相比較時為 有利的’則確定該個體之疾病已中止、消退或改善。 158366.doc -245- 201211252 該方法視情況進—步包含將步驟中所測定之分析物 之濃度或i與例如預定含量相比較。此外，該方法視情況 包含右·比权展不步驟（b)中所測定之分析物之濃度或量例如 相對於預疋含置存在不利改變，則用一或多種醫藥組合物 治療個體一段時間。 此外，可使用該等方法來監測接受以一或多種醫藥組合 物m療之個體之/Q療^特定言之’該等方法涉及提供來自 個體之第測试樣品’隨後向個體投與一或多種醫藥組合 物。隨後，測定來自個體之第-測試樣品中分析物之濃度 或量（例如使用本文所述或如此項技術中已知之方法卜在 測定分析物之濃度或量後，接著視情況將分析物之濃度或 里與預定3里相比較。若在第—測試樣品中所測定之分析 物之濃度或量低於預定合吾日丨 疋3置，則不用一或多種醫藥組合物 治療個體：然而，若在第-測試樣品中所測定之分析物之 濃度或量南於預定含量，貝1丨爾 ^ 里則用一或多種醫藥組合物治療個 體-段時間。以一或多種醫藥組合物治療個體之時段可由 熟習此項技術者來決定(例如該時段可為約7天至 ， 較佳為約14天至約1年）。 在以-或多種醫藥組合物治療過程期間，接著自個鮮 得第二及^試樣品。測試樣品之數目及自個體獲^ 該等測試樣品之時間並非關鍵所在， 次向個體投與-或多種醫藥M合物後7 品’可在第-次向個體投與—或多種醫藥 = 得第三測試樣品’可在第-次向個體投與-或多種： 158366.doc •246· 201211252 合物後3週獲得第四測試樣品，可太楚 u J隹弟一次向個體投與 或多種醫藥組合物後4週獲得第五測試樣品等。
在自個體獲得各第二或後續之測試樣品後，測定第二威 後續之測試樣品中分析物之濃度或量（例如使用本文所述 或如此項技術中已知之方法接著將在各第二及後續測 試樣品中所測定之分析物之濃度或量與在第—測試樣品 (例如最初視情況與敎含量相比較之測試樣品）中所測定 之分析物之濃度或量相比較。若步驟⑷中所測定之分析物 之濃度或量在與步驟⑷中所測定之分析物之濃度或量相比 較時為有利的，則確定個體之疾病已中止、消退或改善， 且應繼續向該個體投與步驟（b)之一或多種醫藥組合物:然 而’若步驟⑷中所測定之濃度或量在與步驟⑷中所測： 之分析物之濃度或量相比較時無變化或為不利的，則確定 個體之疾病持續 '進展或惡化，且應以較高濃度之一或多 種在步驟⑻中向個體投與之醫藥組合物治療該個體或應以 一或多種不同於步驟（b)中向個體投與之一或多種醫藥組合 物的醫藥組合物治療該個體。特定言之，可用一或多種不 同於該個體先前所接受之一或多種醫藥組合物的醫藥組合 物來治療個體以減少或降低該個體之分析物含量。 一般而言，對於可能進行重複測試之分析法（例如監測 疾病進展及/或對治療之反應），在已自個體獲得第一測試 樣品後一段時間内獲得第二或後續測試樣品。特定言之， 可在已自個體獲得第一測試樣品後數分鐘、數小時、數 天、數週或數年後自個體獲得第二測試樣品。舉例而言， 158366.doc •247· 201211252 可在自個體獲得第一測試樣品後約1分鐘、約5分鐘、約i 〇 分鐘、約15分鐘、約30分鐘、約45分鐘、約60分鐘、約2 小時、約3小時、約4小時、約5小時、約6小時、約7小 時、約8小時、約9小時、約1 〇小時、約11小時、約12小 時、約13小時、約14小時、約15小時、約16小時、約1 7小 時、約18小時、約19小時、約2〇小時、約21小時、約22小 時、約23小時、約24小時、約2天、約3天、約4天、約5 天、約6天、約7天、約2週、約3週、約4週、約5週、約6 週、約7週、約8週、約9週、約1 〇週、約11週、約！ 2週、 約13週、約14週、約15週、約16週、約17週、約18週、約 19週、約20週、約21週、約22週、約23週、約24週、約25 週、約26週、約27週、約28週、約29週、約30週、約31 週、約32週、約33週、約34週、約35週、約36週、約37 週、約38週、約39週、約40週、約41週、約42週、約43 週、約44週、約45週、約46週、約47週、約48週、約49 週、約50週、約51週 '約52週、約l5年、約2年、約2.5 年、約3.0年、約3.5年、約4.0年、約4.5年、約5.0年、約 5.5·年、約6.0年、約6.5年、約7.0年、約7.5年、約8.〇年、 約8.5年、約9.0年、約9.5年或約10·0年之時段自個體獲得 第二測試樣品。 當上述分析法用於監測疾病進展時，可使用上述分析法 來監測罹患急性病狀之個體之疾病進展。急性病狀亦稱作 危急護理病狀，其係指危及生命之急性疾病或其他嚴重醫 學病狀，涉及例如心血管系統或排泄系統。嚴重護理病狀 158366.doc -248· 201211252 通常係指需要在醫院機構（包括（但不限於）急救室、加護病 房、創傷中心或其他急救護理機構）中進行急性醫藥介入 或由護理人員或其他領域之醫務人員進行投藥的病狀。對 於嚴重護理病狀，一般在較短時間範圍内重複監測，即數 刀知、數小時或數天（例如約1分鐘、約5分鐘、約1 〇分 鐘、力15分鐘、約30分鐘、約45分鐘、約60分鐘、約2小 Ο
時約3小時、約4小時、約5小時、約6小時、約7小時、 約8小時、約9小時、約1〇小時、約11小時、約12小時、約 13小時、約14小時、約15小時、約16小時、約17小時、約 18小時、約19小時、約20小時、約21小時、約22小時、約 Μ時、約24小時、約2天、約3天、約4天、約5天、約6 妒二1 i初始分析法同樣—般在疾病或病狀發作之 ^間辄圍内’例如約數分鐘、數小時或數天内進行。 析法亦可用於監測罹患慢性或非急性病狀之個體 =進展。非嚴重護理或非急性病狀係指除危及生命之 =疾病及其他危急醫學病狀（涉及 _統)以外的病狀。非急性病狀通常包二 或慢性持續時間之、卜， 艰㊉包括具有較長期 間範圍内進行重複=對於非急性病狀，—般在較長時 或數年_叫、時、約2小時、約3二天：、數月 小時、約6小時、約… "時、約4小時、約5 時、約u小時、二小：、約8小時、約一 ^ 時、約16小時、約17、Γ約13小時、約14小時、約15小 時、約21小日夺、、約2 ^车約18小時、約19小時、⑽小 2小時、約23小時、約24小時、約2 158366.doc •249- 201211252 天、約3天、約4天、約5天、約ό天、約7天、約2週、約3 週、約4週、約5週、約ό週、約7週、約8週、約9週、約1〇 週、約11週、約12週、約13週、約14週、約15週、約16 週、約17週、約18週、約19週、約2〇週、約21週、約22 週、約23週、約24週、约25週、約26週、約27週、約28 週、約29週、約30週、約31週、約32週、約33週、約34 週、約35週、約36週、約37週、約38週、約39週、約40 週、約41週、約42週、約43週、約44週、約45週、約46 週、約47週、約48週、約49週、約50週、約51週、約52 週、約h5年、'約2年、約2.5年、約3.0年、約3.5年、約4.0 年、約4.5年、約5·〇年、約5 5年、約6 〇年、約6乃年、約 7.〇年、約7.5年、約8 〇年、約g 5年、約9 〇年約9 $年或 約10.0年），且初始分析法同樣一般在疾病或病狀發作之較 長時間範圍内，例如約數小時、數天、數月或數年内進 行。 此外，可使用自個體獲得之第一測試樣品進行上述分析 t，其中該第一測試樣品係獲自一種來源，諸如尿液、血 清或血漿。接著可視情況使用自個體獲得之第二測試樣品 重複上述分析法’纟中該第二測試樣品係獲自另一來源。 :例而言’若第一測試樣品係自屎液獲得，則第二測試樣 可自血m或血漿獲得。可比較使用第一測試樣品與第二 測忒枚之分析法獲得之結果。該比較可用於評估個體之 疾病或病狀之狀態。 外本發明亦關於確定易患或罹患既定疾病、病症或 158366.doc -250- 201211252 病狀之個體是否將得益於治療之方法。衫言之，本發明 係關於分析物相伴診斷方法及產物。因此，如本文㈣之 皿測對個體之疾病治療」之方法最佳另外亦可涵蓋選擇 或鑑別用於治療之候選者。 因此’在特定實施例中，本發明亦提供較罹患既定疾 病病症或病狀或具有羅患既定疾病、病症或病狀之風險 的個體是以治療之候選者的方法…般而言，個體為經
无疋疾病㉟症或病狀之__些症狀或實際上已經診斷羅 患既定疾病、病症或病狀或有羅患既^病、病症或病狀 之風險的個體；；5 及或如本文所述表現不利濃度或量之分 析物或其片段的個體。 /方^視情況包含如本文所述之分析法，其中在用-或 夕:醫樂組合物(例如尤其用與涉及分析物之作用機制相 ::樂，、用免疫抑制治療或藉由免疫吸附治療 及之後評估分析物，或其中在該治療後評估分析 7將分析物之濃度或量與預定含量相比較。在 Π不利濃度或量之分析物確定該個體不會得益於接受 析物2繼續治療’而在治療後觀测到有利濃度或量之分 斤^:該個體會得益於接受進—步或繼續治^ 有助於官理臨床研究且提供改良之患者護理。 不言而喻’雖然本文之苹此奋 述—、病症或病文所 …估其他疾病、病症及病狀中 去亦可涉及分析其他標記及其類似物。 刀析方 158366.doc -251 - 201211252 分析方法亦可用於鑑別改善既定疾病、病症或病狀之化 合物。舉例而言，可使表現分析物之細胞與候選化合物接 觸。可使用本文所述之分析方法將與化合物接觸之細胞中 分析物之表現含量與對照細胞中之分析物表現含量相比 較。 B.套組 亦提供針對測試樣品分析測試樣品中分析物（或其片段） 之存在、量或濃度之套組。該套組包含至少一種分析測試 樣品之分析物（或其片段）之組分及分析測試樣品之分析物 (或其片段）的說明書。至少—種分析測試樣品之分析物（或 其片段）的組分可包括包含視情況固定於固相±之抗分析 物卿七（或其片段、變異體或變異體之片段）的組合物。 套’且可包3至）-種藉由免疫分析法（例如化學發光微 粒免疫分析法）分析測試樣品之分析物的組分及藉由免疫 分析法（例如化學發光微粒免疫分析法）分析測試樣品之分 析物的說明書。舉例而言，套組可包含分析物之至少一種 特異性結合搭配物’諸如抗分析物單株/多株抗體（或其可 錄合至分析物之片肖，其可結合至分析物之變異體，或可 結合至分析物之變異體片段）或抗分析物DVD-Ig(或其片 段、變異體或變異體片段），其任一者均可經可伯測標 記。或者或另夕卜’套組可包含經可请測標記之分析物（或 其可結合至抗分析物單株/多株抗體或抗分析物DVD-Ig(或 其片段、變異體或變異體片段）之片段），其可與測試樣品 卞之任何分析物競爭結合於抗分析物單株/多株抗體（或里 \58366.doc •252· 201211252 可結合至分析物之片段，其可結合 可結合至分析物之變異體片 刀“之變異體，或 段、變異想或變異趙一仙 物上。套組可包含校準物或 於固體支撐 分析物。套組可包含至少一種用於進例如， 結合搭配物）；及/或緩㈣ 特異性 Ο
液’其任-者可以濃縮溶液之形；^7貞或綠緩衝 .^ ,a _ _ r 飞和1供’可摘測標記（例 ^《質溶液；或停止溶液。套組較佳包含進行 “斤法所必需之所有組分，亦即試劍、標準物、緩衝液、 稀釋劑等。㈣㈣為紙張形式或電腦可讀之形式，諸如 磁碟、CD、DVD或其類似物。 任何抗體(諸如抗分析物抗體或抗分析物DVD-Ig)或示蹤 立劑可併有如本文所述之可制標記，諸如螢錢、放射性 部分、酶、生物素/抗生物素蛋白標記、發色團、化學發 光標記或其類似物’或套組可包括用於進行可偵測標記之 試齊卜抗體、校準物及/或對照組可提供於各別容器中或 預先刀配於適5之分析法形式中，例如預先分配於微量滴 定盤中。 套組視情況包括品質控制組分（例如靈敏度組、校準物 及陽I·生對照）。品質控制試劑之製備為此項技術中所熟知 且於多種免疫診斷產品之插頁上描述。視情況使用靈敏度 組成員建立分析法效能特徵，且進一步視情況為免疫分析 法套組試劑之完整性及分析法標準化的適用指標。 158366.doc -253- 201211252 套組亦可視情況包括進行診斷分析法或有助於品質控制 評估所需之其他試劑，諸如緩衝液、鹽、酶、酶輔因子、 酶受質、偵測試劑及其類似物。套組中亦可包括其他組 分’諸如緩衝液及用於分離及/或處理測試樣品之溶液（例 如預處理試劑）。套組可另外包括一或多種其他對照組。 套組之一或多個組分可經凍乾，在該情形下，套組可進一 步包含適於復原凍乾組分之試劑。 套組之各種組分根據需要視情況提供於適合容器，例如 微量滴定盤中。套組可進一步包括容納或儲存樣品之容器 (例如尿液樣品之容器或筒）。適當時，套組視情況亦可含 有反應令裔、混合容器及有助於製備試劑或測試樣品之其 ，組，。套組亦可包括—或多種協助獲得測試樣品之儀 諸戈注射器、吸液管、射子、量匙⑽丑隨以sp〇〇n) 或其類似物。 若可债測標記為至少-種。丫啶鏘化合物，則套組可包含 至少一種〇丫 〇定鑌_9_甲酼妝 T醞私、至少一種吖啶鑌-9-甲酸芳酯 或其任何組合。若可_標記為至少-㈣㈣化合物， 諸如磁 骨架分 則套組亦可包含過氧化氫之來源，諸如緩衝液、溶液及/ 或至少一種鹼性溶液。 乂要時，套組可含有固相 性粒子、珠粒、試管、料 ^ 微篁滴疋盤、光析管、膜 子、薄膜、濾紙、圓盤或晶片。 C.套組及方法之改進 藉由如本文所述之分析法 &、， 忐（啫如免疫分析法）測定分析物 於測試樣品中之存在、量或嘈由 … 的套組（或其組分）以及方 158366.doc _254· 201211252 法可經改進以用於例如美國專利第5,089,424號及第 5,006,309 號中戶斤述且例如由 Abbott Laboratories(Abbott Park, IL)以ARCHITECT®出售之多種自動及半自動系統 (包括固相包含微粒之系統）中。 自動或半自動系統相較於非自動系統（例如ELISA)的一 些差異包括連接有第一特異性結合搭配物（例如抗分析 物、單株/多株抗體（或其片段、其變異體或其變異體片段） 或抗分析物DVD-Ig(或其片段、其變異體或其變異體片 〇 段），任一方式皆可影響夾心形成及分析物反應性）之受 質；以及捕捉、偵測及/或任何視情況存在之洗滌步驟的 時間長短及時序。儘管非自動形式（諸如ELISA)可能需要 與樣品與捕捉試劑一起培育相對較長時間（例如約2小時）， 但自動或半自動形式（例如ARCHITECT®，Abbott Laboratories)可能具有相對較短之培育時間（例如對於 ARCHITECT®，為約18分鐘）。類似地，非自動形式（諸如 ELIS A)可培育偵測抗體（諸如結合物試劑）歷時相對較長之 〇 培育時間（例如約2小時），但自動或半自動形式（例如 ARCHITECT®)可能具有相對較短之培育時間（例如對於 ARCHITECT®，為約 4分鐘）。 可自Abbott Laboratories獲得之其他平台包括（但不限 於）AxSYM®、IMx®(參看例如美國專利第5,294,4〇4號）、 PRISM®、EIA(珠粒）及Quantum™ II以及其他平台。另 外，分析法、套組及套組組分可以其他形式使用，例如在 電化學或其他掌上型或即時分析系統上。本發明例如適用 158366.doc -255 - 201211252 於執行夾心免疫分析法之商業Abbott Point of Care(i-STAT®，Abbott Laboratories)電化學免疫分析法系統。免 疫感測器及其製造方法及在單次用測試裝置中操作之方法 描述於例如美國專利第5,063,081號、美國專利申請公開案 第2003/0170881號、美國專利申請公開案第2004/0018577 號、美國專利申請公開案第2005/0054078號及美國專利申 請公開案第2006/0160164號中。 詳言之，就改進分析物分析法以適合I-STAT®系統而 言，以下組態較佳。製造具有一對金電流分析工作電極及 銀-氯化銀參考電極的微加工之矽晶片。在一個工作電極 上，將具有固定之抗分析物單株/多株抗體（或其片段、其 變異體或其變異體片段）或抗分析物DVD-Ig(或其片段、其 變異體或其變異體片段）之聚苯乙烯珠粒（0.2 mm直徑）黏附 於電極上經圖案化之聚乙烯醇之聚合物塗層上。將此晶片 組裝至具有適用於免疫分析法之流體形式之I-STAT®筒 中。在該筒容納樣品之腔室壁的一部分上，存在包含對分 析物具特異性之結合搭配物（諸如抗分析物單株/多株抗體 (或其可結合分析物之片段、其變異體或其變異體片段）或 抗分析物DVD-Ig(或其可結合分析物之片段、其變異體或 其變異體片段），其任一者皆可經可偵測標記）之層。在該 筒之流體囊内為包括對胺基苯酚磷酸酯之水性試劑。 在操作中，將懷疑含有分析物之樣品添加至測試筒之容 納腔室中，且將筒插入I-STAT®讀取器中。在對分析物具 特異性之結合搭配物溶解於樣品中之後，該筒内之泵元件 158366.doc -256 · 201211252 迫使樣品進入含有晶片之管道中。此時，將其振盪以促進 形成夾心。在分析法之倒數第二個步驟中，迫使流體自囊 中流出且進入管道中以將樣品自晶片洗去且進入廢料腔室 中。在分析法之最後步驟中，鹼性磷酸酶標記與對胺基苯 酚磷酸酯反應以裂解磷酸酯基且使所釋放之對胺基苯酚在 工作電極處被電化學氧化。基於所量測之電流，讀取器能 夠藉助於嵌入算法及工廠確定之校正曲線來計算樣品中分 析物之量。 Ο 更不言而喻的是，如本文所述之方法及套組必然涵蓋進 行免疫分析法之其他試劑及方法。舉例而言，涵蓋各種緩 衝液，諸如此項技術中已知及/或可輕易地製備或最佳化 以例如用於洗務、用作結合物稀釋劑、微粒稀釋劑及/或 用作校準物稀釋劑的緩衝液。例示性結合物稀釋劑為某些 套組（Abbott Laboratories，Abbott Park，IL)中所用且含有 2- (N-嗎啉基）乙烷磺酸（MES)、鹽、蛋白質阻斷劑、抗微生 物劑及清潔劑之ARCHITECT®結合物稀釋劑。例示性校準 〇 物稀釋劑為某些套組（Abbott Laboratories, Abbott Park, IL) 中所用之ARCHITECT®人類校準物稀釋劑，其包含含有 MES、其他鹽、蛋白質阻斷劑及抗微生物劑之緩衝液。另 外，如2〇08年12月31日申請之美國專利申請案第61/142,048 號中所述，可例如在I-Stat筒形式中，使用連接於信號抗 體之核酸序列作為信號放大器獲得改良之信號產生。 範例 實例1 : DVD-Ig之設計、建構及分析 158366.doc •257- 201211252 實例1.1:用於鑑別及表徵親本抗體及DVD-Ig之分析法 除非另外說明，否則實例全文中使用以下分析法鑑別及 表徵親本抗體及DVD-Ig。
實例1.1.1 :用於測定親本抗體及DVD-Ig針對其目標抗原 之結合及親和力之分析法 實例1.1.1A:直接結合ELISA 篩選結合所要目標抗原之抗體的酶聯免疫吸附分析法係 如下進行。在4°C下，以每孔1〇〇 pL含10 pg/ml所要目標抗 原（R&D Systems, Minneapolis, MN)或所要目標抗原胞外區 域/Fc融合蛋白（R&D Systems, Minneapolis, MN)或單株小 鼠抗聚組胺酸抗體（R&D Systems # MAB050, Minneapolis, MN)之構酸鹽緩衝鹽水（1 OX PBS, Abbott Bioresearch Center, Media Prep# MPS-073, Worcester, MA)塗覆高度結 合 ELISA 盤（Corning Costar # 3369, Acton, MA)隔夜。以含 有0.02% Tween 20之PBS洗滌盤四次。在室溫下，藉由每 孔添加300 pL阻斷溶液（在PBS中稀釋至2%的脫脂奶粉 (non-fat dry milk powder)，多個零售供應商）阻斷盤1/2小 時。在阻斷後，以含有0.02% Tween20之PBS洗滌盤四 次。 或者，向如上文所述塗覆有單株小鼠抗聚組胺酸抗體之 ELISA盤中每孔添加100 pL 10 pg/ml組胺酸（His)標記之所 要目標抗原（R&D Systems, Minneapolis, MN)，且在室溫下 培育1小時。以含有0.02% Tween 20之PBS洗務各孔四次。 向如上文所述製備之所要目標抗原盤或所要目標抗原 158366.doc -258 - 201211252 /FC融合盤或抗聚組胺酸抗體/His標記之所要目標抗原盤中 添加100 pL在如上文所述之阻斷溶液中稀釋之抗體或DVD-Ig製劑，且在室温下培育1小時。以含有〇·〇2% Tween 20之 PBS洗滌各孔四次。 向所要目標抗原盤或抗聚組胺酸抗體/組胺酸標記之所 要目標抗原盤的各孔中添加100 gL 10 ng/mL山羊抗人類 IgG_FC特異性 HRP結合抗體（Southern Biotech # 2040-05, Birmingham, AL)。或者，向所要目標抗原/FC融合盤之各 〇 孔中添加1〇〇 gL 10 ng/mL山羊抗人類IgG-K輕鏈特異性 HRP結合抗體（Southern Biotech # 2060-05 Birmingham， AL)，且在室溫下培育1小時。以含有0.02% Tween 20之 PBS洗滌盤4次。 向各孔中添加100 gL增強之TMB溶液（Neogen Corp. #308177，K Blue, Lexington，KY)，且在室溫下培育 10分 鐘。藉由添加50 pL 1 Ν硫酸停止反應。在450 nm之波長下 以分光光度法對盤讀數。 〇 表3含有直接結合分析法中所用抗原的清單。 表4含有直接結合ELISA分析法中所測試之彼等抗體及 DVD-Ig構築體的結合數據，以EC50表示，單位為nM。 有時在直接結合ELISA中觀測不到結合，此可能因為在 塗覆於塑膠表面時，目標抗原上之抗體結合位點「被遮 蔽」或抗原「變形」。DVD-Ig不能結合其目標亦可能由 於直接結合ELIS A形式對DVD-Ig施加之空間限制。在直接 結合ELIS A形式中不結合之親本抗體及DVD-Ig在其他 158366.doc -259- 201211252 ELISA形式（諸如FACS、Biacore或生物分析法）中結合至目 標抗原。如先前所示’亦可藉由調整DVD-Ig之兩個可變 區域之間的連接子長度來修復DVD-Ig之不結合。
實例 1.1.1.B :捕捉ELISA ELISA盤（Nunc, MaxiSorp，Rochester，NY)與抗人類FC抗 體（PBS 中 5 pg/ml，Jackson Immunoresearch，West Grove, PA)—起在4°C下培育隔夜。在洗滌緩衝液（含有0.05% Tween 20之PBS)中洗滌盤3次，且在25°C下在阻斷緩衝液 (含有1% BSA之PBS)中阻斷1小時。洗滌各孔3次，且向各 孔中添加各抗體或DVD-Ig於含有0.1% BSA之PBS中的連續 稀釋液，且在25°C下培育1小時。洗滌各孔3次，且向盤中 添加經生物素標記之抗原（2 nM)，且在25°C下培育1小 時。洗滌各孔3次，接著在25°C下與抗生蛋白鏈菌素-HRP(KPL #474-3000, Gaithersburg, MD)— 起培育 1小時。 洗滌各孔3次，且每孔添加100 μΐ ULTRA-TMB ELISA (Pierce，Rockford, IL)。顯色後，以1 N HCL停止反應且量 測450 nM下之吸光度。 實例1.1.1.C :使用BIACORE技術之親和力測定 表3 : Biacore分析中所用之試劑
分析法 抗原 供應商命名 供應商 目錄號 NGF 重組人類β-NGF R&D systems 256-GF TNFa 重組人類 TNF-a/TNFSF 1A R&D systems 210-TA SOST 重組人類SOST R&D systems 1406-ST ECD=胞夕卜區域 /FC=抗原/IgG FC區域融合蛋白 BIACORE方法： 158366.doc -260- 201211252
BIACORE分析法（Biacore，Inc，Piscataway，NJ)以締合速 率及解離速率常數之動力學量測測定抗體或DVD-Ig之親 和力。在25°C下，藉由基於表面電漿子共振之量測以 Biacore® 1000或 3000儀器（Biacore® AB，Uppsala, Sweden) 使用流動 HBS-EP(10 mM HEPES [pH 7.4]、150 mM NaCl、3 mM EDTA及0.005%界面活性劑P20)測定抗體或 DVD-Ig與目標抗原（例如純化重組目標抗原）之結合。所有 化學品係獲自Biacore® AB(Uppsala，Sweden)或獲自本文 〇 所述之不同來源。舉例而言，根據製造商說明書及程序使 用標準胺偶合套組將25 pg/ml於10 mM乙酸鈉（pH 4.5)中稀 釋之約5000 RU山羊抗小鼠IgG(FcY)片段特異性多株抗體 (Pierce Biotechnology Inc, Rockford，IL)直接固定於 CM5 研 究級生物感測器晶片上。生物感測器表面上之未反應部分 以乙醇胺阻斷。流槽2及4中之經修飾羧甲基聚葡萄糖表面 用作反應表面。流槽1及3中不具有山羊抗小鼠IgG之未經 修飾之羧曱基聚葡萄糖用作參考表面。為進行動力學分 〇 析，使用Biaevaluation 4.0.1軟體將自1:1朗谬爾結合模型 (1:1 Langmuir binding model)導出之速率方程式同時與所 有8次注射之締合相及解離相擬合（使用整體擬合分析）。經 純化抗體或DVD-Ig稀釋於HEPES缓衝鹽水中以於整個山羊 抗小鼠IgG特異性反應表面上捕捉。將待捕捉作為配位體 之抗體或DVD-Ig(25 pg/ml)以5 μΐ/min之流動速率注射於反 應基質上。在25 μΐ/min之連續流動速率下測定締合及解離 速率常數k^M·、·1)及kdKs·1)。速率常數係在10 - 200 nM 158366.doc -261- 201211252 範圍内之不同抗原濃度下進行動力學結合量測而產生。接 著藉由下式自動力學速率常數計算抗體或DVD-Ig與目標 抗原之間的反應平衡解離常數（M) . KD^koff/kon。記錄隨時 間變化之結合，且計算動力學速率常數。在此分析法中， 可量測到快達1〇6 Μ·、·1之締合速率及慢至10_6 s·1之解離速 率。 表4:親本抗體及DVD構築體之BIACORE分析 親本抗體或 DVD-Ig ID N端 可變區域 (VD) C端 可變區域 (VD) k〇n k〇ff KD (M-ls-l) (s-l) (M) AB213 TNF(序列2) 3.23E+06 1.08E-04 3.35E-11 AB022 SOST 9.68E+06 3.96E-04 4.08E-11 DVD 1454 SOST 1.00E+07 8.60E-04 8.40E-11 DVD 1454 TNF(序列2) 2.30E+05 4.90E-05 2.10E-10 AB213 TNF(序列2) 3.23E+06 1.08E-04 3.35E-11 AB020 NGF 6.06E+05 4.08E-06 6.73E-12 DVD 1460 NGF 2.30E+06 2.00E-06 8.50E-13 DVD 1460 TNF(序列2) 1.40E+05 3.60E-05 2.60E-10 AB213 TNF(序列2) 3.23E+06 1.08E-04 3.35E-11 DVD1466 LPA TNF(序列2) 1.60E+05 6.30E-05 3.90E-10 ABO 17 TNF(序列1) 1.61E+06 1.29E-04 7.99E-11 DVD 1471 TNF(序列1) LPA 2.20E+06 3.80E-05 1.80E-11 DVD 1472 LPA TNF(序列1) 2.90E+05 1.60E-04 5.50E-10 AB217 TNF(序列5) 1.85E+06 5.04E-05 2.72E-11 DVD 1473 TNF(序列5) PGE2 2.60E+06 4.40E-05 1.70E-11 AB217 TNF(序列5) 1.85E+06 5.04E-05 2.72E-11 AB022 SOST 9.68E+06 3.96E-04 4.08E-11 DVD 1475 TNF(序列5) 2.70E+06 3.60E-05 1.30E-11 DVD 1475 SOST 8.10E+05 7.30E-04 9.00E-10 AB217 TNF(序列5) 1.85E+06 5.04E-05 2.72E-11 AB020 NGF 6.06E+05 4.08E-06 6.73E-12 DVD 1477 TNF(序列5) 2.50E+06 3.80E-05 1.50E-11 DVD 1477 NGF 1.60E+05 〈1.0E-06 <6_3E-12 DVD 1478 NGF 2.40E+06 6.00E-06 2.50E-12 DVD 1478 TNF(序列5) 1.50E+05 1.50E-05 1.00E-10 AB217 TNF(序列5) 1.85E+06 5.04E-05 2.72E-11 158366.doc -262 - 201211252
親本抗體或 DVD-IgID N端 可變區域 (VD) C端 可變區域 (VD) k〇n k〇ff KD (M-ls-l) (s-l) (M) DVD1479 TNF(序列5) LPA 2.40E+06 4.10E-05 1.70E-11 DVD1480 LPA TNF(序列5) 1.30E+05 3.40E-05 2.60E-10 AB218 TNF(序列6) 1.79E+06 5.15E-05 2.88E-11 DVD 1481 TNF(序列6) PGE2 2.60E+06 2.40E-05 8.90E-12 DVD1482 PGE2 TNF(序列6) 1.60E+05 1.50E-05 9.20E-11 AB218 TNF(序列6) 1.79E+06 5.15E-05 2.88E-11 AB022 SOST 9.68E+06 3.96E-04 4.08E-11 DVD 1483 TNF(序列6) 2.80E+06 3.30E-05 1.20E-11 DVD1483 SOST 1.10E+06 8.30E-04 7.80E-10 AB218 TNF(序列6) 1.79E+06 5.15E-05 2.88E-11 AB020 NGF 6.06E+05 4.08E-06 6.73E-12 DVD 1485 TNF(序列6) 2.10E+06 3.60E-05 1.70E-11 DVD 1485 NGF 1.00E+05 <1.0E-06 〈1.0E-11 AB218 TNF(序列6) 1.79E+06 5.15E-05 2.88E-11 DVD 1487 TNF(序列6) LPA 1.80E+06 2.60E-05 1.40E-11 DVD1488 LPA TNF(序列6) 2.30E+05 1.90E-05 8.40E-11 AB213 TNF(序列2) 3.23E+06 1.08E-04 3.35E-11 DVD1490 PGE2 TNF(序列2) 5.00E+05 6.10E-05 1.2E-10 AB213 TNF(序列2) 3.23E+06 1.08E-04 3.35E-11 AB022 SOST 9.68E+06 3.96E-04 4.08E-11 DVD 1495 TNF(序列2) 2.50E+06 5.40E-05 2.10E-11 DVD 1495 SOST 4.40E+04 9.50E-04 2.20E-08 AB213 TNF(序列2) 3.23E+06 1.08E-04 3.35E-11 AB020 NGF 6.06E+05 4.08E-06 6.73E-12 DVD 1502 NGF 2.50E+06 〈1.0E-06 <4_0E-13 DVD 1502 TNF(序列2) 1.80E+05 5.50E-05 3.00E-10 AB213 TNF(序列2) 3.23E+06 1.08E-04 3.35E-11 DVD 1508 LPA TNF(序列 2) 2.50E+05 5.00E-05 2.00E-10 AB017 TNF(序列1) 1.61E+06 1.29E-04 7.99E-11 DVD1514 LPA TNF(序列 1) 3.30E+05 6.70E-05 2.00E-10 AB217 TNF(序列5) 1.85E+06 5.04E-05 2.72E-11 DYD1515 TNF(序列 5) PGE2 3.10E+06 3.70E-05 1.20E-11 AB217 TNF(序列5) 1.85E+06 5.04E-05 2.72E-11 AB022 SOST 9.68E+06 3.96E-04 4.08E-11 DVD1517 TNF(序列5) 2.60E+06 4.70E-05 1.80E-11 DVD1517 SOST 8.90E+04 5.00E-04 5.50E-09 AB217 TNF(序列5) 1.85E+06 5.04E-05 2.72E-11 AB020 NGF 6.06E+05 4.08E-06 6.73E-12 DVD1519 TNF(序列5) 2.10E+06 4.20E-05 2.00E-11 158366.doc -263 - 201211252 親本抗體或 DVD-Ig ID N端 可變區域 (VD) C端 可變區域 (VD) k〇n k〇ff KD (M-ls-l) (s-l) (M) DVD1519 NGF 1.10E+05 〈1.0E-06 〈L0E-11 DVD 1520 NGF 2.70E+06 9.30E-06 3.40E-12 DVD 1520 TNF(序列5) 1.10E+06 4.40E-06 3.80E-12 AB218 TNF(序列6) 1.79E+06 5.15E-05 2.88E-11 DVD 1523 TNF(序列6) PGE2 2.20E+06 2.00E-05 9.10E-12 DVD 1524 PGE2 TNF(序列6) 1.00E+05 1.70E-06 1.70E-11 AB218 TNF(序列6) 1.79E+06 5.15E-05 2.88E-11 AB022 SOST 9.68E+06 3.96E-04 4.08E-11 DVD 1525 TNF(序列6) 2.00E+06 3.00E-05 1.50E-11 DVD1525 SOST 9.10E+04 8.90E-04 9.80E-09 AB218 TNF(序列6) 1.79E+06 5.15E-05 2.88E-11 AB020 NGF 6.06E+05 4.08E-06 6.73E-12 DVD 1527 TNF(序列6) 2.30E+06 4.00E-05 1.70E-11 DVD 1527 NGF 1.00E+05 〈1.0E-06 〈1.0E-11 DVD 1528 NGF 2.40E+06 7.30E-06 3.00E-12 DVD1528 TNF(序列6) 1.70E+05 9.40E-06 5.60E-11 AB218 TNF(序列6) 1.79E+06 5.15E-05 2.88E-11 DVD 1529 TNF(序列6) LPA 2.50E+06 2.60E-05 1.00E-11 DVD1530 LPA TNF(序列6) 8.70E+04 1.60E-06 1.90E-11 實例1·1.2 :用於測定親本抗體及DVD-Ig之功能活性的分 析法 實例1.1.2.A:細胞激素生物分析法 藉由測定抗體或DVD-Ig之抑制潛力來分析抗細胞激素 或抗生長因子親本抗體或含有抗細胞激素或抗生長因子序 列之DVD-Ig抑制或中和目標細胞激素或生長因子生物活 性的能力。舉例而言，可使用抗IL-4抗體抑制IL-4所介導 產生IgE的能力。舉例而言，藉由Ficoll-paque密度離心 法，隨後使用對標記人類slgD FITC之山羊F(ab)2抗體具特 異性的 MACS珠粒（Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach,德 國）繼之以抗FITC MACS珠粒，利用磁力分離法，自周邊 358366.doc -264- 201211252 血液（各別而言，白血球層）分離未經處理之人類B細胞。 取經過磁力分選之未經處理之B細胞在χνΐ5中調整至每毫 升3 X 105個細胞’且在96孔盤中心的6 X 6陣列中，每孔塗 覆100 μΐ，周圍為以PBS填充的孔’在37°C下在5% C〇2存 在下培養10天。每種欲測試抗體各製備一個盤，各盤包含 未經誘導對照組及經誘導對照組，以及抗體滴定液之一式 五份重複’各3個孔，該等抗體滴定液自7 pg/ml起始，且 添加於50 μΐ四倍濃縮之預稀釋液中，以3倍稀釋降至29 〇 ng/ml最終濃度。為了誘導IgE產生，向各孔中添加2〇 ng/ml之rhIL-4加0.5 pg/ml最終濃度之抗CD40單株抗體 (Novartis，Basel，瑞士）（各50 μΐ)，且在培養期結束時藉由 才示準夹心式ELISΑ法測定IgE濃度。 實例1.1.2.B:細胞激素釋放分析法 分析親本抗體或DVD-Ig引起細胞激素釋放之能力。藉 由靜脈穿刺自三名健康供者抽取周邊血液，並置於肝素化 真空採血管中。以RPMI-1640培養基1:5倍稀釋全血，且依 Ο 一 每孔〇_5 mL置於24孔組織培養盤中。將抗細胞激素抗體 (例如抗IL-4)稀釋於RPMI-1640中，且依每孔0.5 mL置於盤 中’獲得200、100、50、10及1 pg/mL之最終濃度。培養 盤中全血之最終稀釋度為1:10。LPS及PHA依2 pg/mL及5 Mg/niL最終濃度添加至各別孔中，作為細胞激素釋放之陽 性對照。以多株人類IgG用作陰性對照抗體。實驗一式兩 份進行。將盤在37°C下在5% C02下培育。24小時後，各孔 之内谷物轉移至試管中，且在1200 rpm下旋轉5分鐘。收 158366.doc -265- 201211252 集不含細胞之上清液，且冷柬用於細胞激素分析法。留在 盤上及試管中之細胞以0.5 mL溶胞溶液溶解，且置於-20°C 下且解凍。添加0.5 mL培養基（使體積達到與無細胞之上 清液樣品相同之量），且收集細胞製劑，且冷凍用於細胞 激素分析法。藉由ELISA分析無細胞之上清液及細胞溶解 產物的細胞激素含量，例如IL-8、IL-6、IL-Ιβ、IL-1RA或 TNF-α之含量。 實例1.1.2.C :細胞激素交叉反應性研究 分析針對相關細胞激素之抗細胞激素親本抗體或DVD-Ig與其他細胞激素交叉反應的能力。親本抗體或DVD-Ig固 定於Biacore生物感測器基質上。藉由首先以1 00 mM N-經 基丁二醯亞胺（NHS)及400 mM N-乙基-N'-(3-二曱基胺基丙 基）-碳化二亞胺鹽酸鹽（EDC)活化基質上之羧基，使抗人 類Fc mAb經由游離胺基共價連接至聚葡萄糖基質。取約50 μι各抗體或DVD-Ig製劑（濃度為25 pg/mL，稀釋於乙酸鈉 中，pH 4.5)注射至經活化生物感測器上，且蛋白質上之游 離胺直接結合於經活化羧基。通常，固定5000共振單位 (RU)。未反應之基質EDC酯藉由注射1 Μ乙醇胺而失活。 藉由使用標準胺偶合套組固定人類IgGl/K，製成第二流槽 作為參考標準。使用CM生物感測器晶片進行SPR量測。將 所有欲在生物感測器表面上分析之抗原於含有0.01% P20 之HBS-EP操作缓衝液中稀釋。 為了檢驗細胞激素結合特異性，將過量相關細胞激素 (1 0 0 nM，例如可溶性重組人類細胞激素）注射至固定抗細 158366.doc -266- 201211252 胞激素親本抗體或DVD-Ig之整個生物感測器表面上（5分鐘 接觸時間）。在注射相關細胞激素之前及之後立即使HBs_ EP緩衝液單獨流過各流槽。獲取基線值與對應於細胞激素 注射完成後約30秒之點之間的信號淨差，代表最終結合 值。仍然以共振單位作為反應量度。若觀測到結合作用 時，在注射下一樣品之前，使用10 HC1使生物感測器 基質再生，否則在基質上注射操作緩衝液即可。亦同時在 經固定小鼠IgGl/K參考表面上注射人類細胞激素（例如IL_ 〇 1α、IL，、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL_7、IL_8、 IL-9、IL-10、IL-11、IL-12、IL-13、IL-15、IL_16、IL_ 17 IL 18、IL-19、IL-20、IL-22、IL-23、IL-27、TNF_ α、TNF-β及lFN-γ)，以記錄任何非特異性結合背景。藉由 製備參考及反應表面，Biacore可自動從反應表面數據減去 參考表面數據，以消除大部分折射率變化及注射雜訊。因 此，有可能確定歸因於抗細胞激素抗體或DVD_Ig結合反 應的真結合反應。 口 〇 當相關細胞激素注射至整個經固定抗細胞激素抗體上 時，觀測到顯著結合。10 mM HC1再生法完全移除所有非 八價缔σ之蛋白質。感測器圖譜檢驗顯示經固定抗細胞激 素抗體或DVD-Ig與可溶性細胞激素之結合有力且穩固。 在用相關細胞激素確認預期結果後，分別針對各抗體或 =V^-Ig測試剩餘重組人類細胞激素組。記錄各注射週期 Θ或未結合細胞激素的抗細胞激素抗體或DVD-Ig之 ^使用二個獨立實驗之結果測定各抗體或DVD-Ig之特 158366.doc •267- 201211252 異性概況。選擇與相關細胞激素預期結合且未結合任何其 他細胞激素之抗體或DVD-Ig。 實例1.1.2.D:組織交又反應性 組織父又反應性研究分三個階段進行，第一階段包括 種組織的冷凍切片，第二階段包括多達3 8種組織，且第三 階段包括如下文所述之來自三個不相關成人之其他組織。 研究通常以2個劑量進行。 階段1 :在物鏡上固定人類組織（在屍體解剖或活組織檢 查時獲得之來自一個人類供者之32種組織（通常：腎上 腺、胃腸道、前列腺、膀胱、心臟、骨骼肌、血細胞、腎 臟、皮膚、骨髓、肝、脊髓 '乳房 '肺、脾臟 '小腦、淋 巴結、睾丸、大腦皮質、卵巢、胸腺、結腸、胰腺、曱狀 腺、内皮、副甲狀腺、輸尿管、眼、垂體、子宮、輸卵管 及胎盤））的冷凍切片（約5 μιη)且乾燥。使用抗生物素蛋白_ 生物素系統對組織切片進行過氧化酶染色。 階段2 .在物鏡上固疋人類組織（在屍體解剖或活組織檢 查時獲得之來自3個不相關成人之38種組織（包括腎上腺、 血液、血管、骨髓、小腦、大腦、子宮頸 '食道、眼、心 :、腎臟、大腸、肝、肺、淋巴結、乳腺、_巢、輸印 管、騰腺、副曱狀腺、周邊神經、垂體、胎盤、前列腺、 唾液腺、皮膚、小腸、脊髓、脾臟、胃、橫紋肌、睾丸、 胸腺、甲狀腺、爲桃體、輸尿管、膀胱及子宮))的冷凍切 片(約5叫)且乾燥。繼生物素蛋白_生物素系統對組織 切片進行過氧化酶染色。 158366.doc •268- 201211252 階段3:在物鐘上 織檢杳8«彳H ^ _㈣織（在屍體㈣或活組 上肢一 ：Γ 不相關成年狼之38種組織(包括腎 上腺、血液、血管、骨黯、 m 大腦、子宮頸、食道、 眼、心臟、腎臟、大腸、肝、肺 Ψ 林巴結、乳腺、卵巢、 輸印管、胰腺、副甲狀腺、周邊神經、垂體、胎盤、前列 腺、唾液腺、皮膚、小腸、脊髓、脾臟、胃、撗紋肌、睾 丸胸腺甲狀腺、扁桃體、輸尿管、膀耽及子宮））的冷 Ο
康切片（約5 μηι)且乾燥。使用抗生物素蛋白_生物素系統對 組織切片進行過氧化酶染色。 將抗體或卿-㈣經生物素標記之二次抗人類邮一起 培育且形成免疫複合物。將抗體或__Ig之最終濃度為2 Pg/mL&10 叫/mL之免疫複合物添加至物鏡上的組織切片 上，接著使組織切片與抗生物素蛋白_生物素_過氧化酶套 組反應30分鐘。隨後，塗覆DAB(3,3,_二胺基聯苯胺X 一種 過氧化酶反應之受質）’歷時4分鐘以用於組織染色。使用 抗原-瓊脂糖珠粒作為陽性對照組織切片。目標抗原及人 類血清阻斷研究用作其他對照。將抗體或DVD_Ig之最終 濃度為2 pg/mL及10 pg/mL之免疫複合物與目標抗原（最終 濃度為100 pg/ml)或人類血清（最終濃度1〇%)一起預培育3〇 分鐘，接著添加至物鏡上之組織切片上，接著使組織切片 與抗生物素蛋白-生物素-過氧化酶套組反應3〇分鐘。隨 後’塗覆DAB(3,3’-二胺基聯苯胺一種過氧化酶反應之受 質），歷時4分鐘以用於組織染色。 基於所討論之目標抗原的已知表現來判斷任何特異性染 158366.doc -269- 201211252 色具有預期反應性（例如與抗原表現相符）或非預期反應 性。針對強度及頻率，對任何經判斷具特異性之染色進行 評分。階段2(人類組織）及階段3(石蟹獼猴組織）之間的組 織染色經判斷為類似或不同。 實例1.1.2.D : huTNFa之中和作用 使L929細胞生長至半匯合密度且使用0.05%胰蛋白酶 (Gibco#25300)採集。細胞以PBS洗滌，計數且以每毫升 1 X 106個細胞再懸浮於含有4 pg/mL放線菌素D(actinomycin D)之分析培養基中。細胞以50 pL之體積及每孔5 X 104個 細胞之密度接種於96孔盤（Costar#3599)中。在分析培養基 中將DVD-IgTM及對照IgG稀釋至4倍濃度，且製備1:3倍連 續稀釋液。在分析培養基中將huTNFa稀釋至400 pg/mL。 以1:2倍稀釋方案將抗體樣品（200 μΙ〇添加至huTNFa(200 μί)中，且將其在室溫下培育0.5小時。 將DVD-IgTM/huTNFa溶液添加至100 μί經接種細胞中直 至最終濃度為 100 pg/mL huTNFa 及 25 nM - 0.00014 ηΜ DVD-IgTM。各盤在37°C、5% C02下培育20小時。為了定 量活力，自各孔移除100 pL，且添加10 pL WST-1試劑 (Roche目錄號1 1644807001)。各盤在分析條件下培育3.5小 時，在500 xg下離心且將75 μΕ上清液轉移至ELISA盤 (Costar 目錄號 3369)中。在 OD 420-600 nm下在 Spectromax 190 ELISA盤讀取器上對盤讀數。表5中包括若干分析法之 平均EC50。 158366.doc •270· 201211252 表5 :使用huTNFa親本抗體及DVD-Ig構築趙之HuTNFa中 和分析法 親本抗體或 DVD-IgID N端可變區域 rvD) C端可變區域 (VD) N 端 VD TNFa 中和分析法 EC50 nM C 端 VD TNFa 中和分析法 EC50 nM AB017 TNF(序列1) 0.0461 AB213 TNF(序列2) 0.124 AB217 TNF(序列5) 0.0762 AB218 TNF(序列6) 0045 DVD 1448 PGE2 TNF(序列2) - 1.388 DVD 1454 SOST _ TNF(序列2) - 0.951 DVD1466 LPA _ TNF(序列2) - 29.92 DVD 1471 TNFf序列1) LPA 0.0153 DVD 1472 LPA TNF(序列1) - 0.732 DVD1473 TNF(序列5) PGE2 0.011 DVD 1474 PGE2 TNF(序列5) - 0.273 DVD 1475 TNFY序列5) SOST 0.002 DVD 1476 SOST TNF(序列5) - 0.139 DVD 1477 TNF(序列5) NGF 0.009 • DVD 1478 NGF TNF(序列5) - 0.329 DVD 1479 TNF(序列5) LPA 0.012 DVD 1480 LPA TNF(序列5) - 0.183 DVD 1481 TNF(序列6) PGE2 0.011 DVD 1482 PGE2 TNF(序列6) - 1.453 DVD 1483 TNF(序列6) SOST 0.012 DVD 1484 SOST TNF(序列6) - 0.219 DVD 1485 TNF(序列6) NGF 0.011 DVD 1486 NGF TNF(序列6) - 0.363 DVD1487 TNF(序列6) LPA 0.007 _ DVD1488 LPA TNF(序列6) - 0.894 DVD 1490 PGE2 TNF(序列2) 0.283 DVD1495 TNF(序列2) SOST 0.0038 _ DVD1496 SOST TNF(序列2) - 0.085 DVD1501 TNF(序列2) NGF 0.1952 DVD 1502 NGF TNF(序列2) - 0.4596 DVD1507 TNF(序列2) LPA 0.1327 DVD 1508 LPA TNF(序列2) - 0.234 DVD1514 LPA TNF(序列1) - 0.407 DVD1516 PGE2 TNF(序列5) - 8.709 158366.doc • 271- 201211252 — N端 VD TNFa C 端 VD TNFa 親本抗體或 N端可變區域 C端可變區域 中和分析法 中和分析法 DVD-Ig ID iVD) (VD) EC50 nM EC50 nM DVD1517 TNF(序列5) SOST 0.0012 - DVD1518 SOST TNFi序列5) - 0.89 DVD1519 TNF(序列5) NGF 0.0079 - DVD 1520 NGF TNFC序列5) 7.21 DVD 1522 LPA TNF(序列5) - 4.179 DVD 1524 PGE2 TNFC序列6) - 0.963 DVD 1525 TNF(序列6) SOST 0.0029 - DVD 1526 SOST TNF(序列6) - 0.059 DVD 1527 TNF(序列6) NGF 0.0029 - DVD 1528 NGF TNF(序列6) - 0.197 DVD 1530 LPA TNF(序列6) - 0.571 在N端或C端位置含有來自AB017、AB213、AB217及 AB218之VD的所有DVD-Ig蛋白在TNFa抑制分析法中顯示 中和作用。 實例1.1.2.E ·· TF-1細胞增殖生物分析法中NGF之抑制 在 RPMI 1640(Invitrogen)+10%胎牛血清（Hyclone)+L-楚 醯胺酸（Invitrogen)+rhu GM-CSF(R&D Systems)中培養TF-1細胞。TF-1細胞在RPMI 1640+L-麩醯胺酸中以每毫升 ΙχΙΟ5個細胞之密度血清饑餓24小時，且在37°C、5% C02 下培育隔夜。實驗當天，將TF-1細胞以每孔2·5χ104個細胞 於100 μί體積+分析培養基（RPMI-1640+L-麩醯胺酸+4% FBS)中接種於不透明壁96孔盤中。藉由向細胞中添加 NGF/DVD-Ig或抗體來刺激細胞。在分析培養基中將DVD-IgTM及對照IgG稀釋至4倍濃度且進行1:5倍連續稀釋。在分 析培養基中將huNGF稀釋至8 ng/mL。將DVD-IgTM(50 pL) 及huNGF(50 μ!〇溶液添加至盤中，直至最終濃度為2 ng/mL huNGF 及 25 ηΜ - 〇·〇〇〇〇〇3 nM DVD-IgTM。各盤在 158366.doc 272· 201211252 37°C、5% C02下培育72小時。為了定量活力，使用cell Titer Glo套組（promega目錄號TB288)(遵照製造商說明書向 各孔中添加100 μΐ溶液）。藉由在Spectromax 190 ELISA盤 讀取器上量測發光而對盤讀數。表6中包括若干分析法之 平均EC50。 表6 :使用NGF親本抗體及DVD-Ig構築體之NGF抑制分析法 親本抗體或 DVD-Ig ID N端可變區域 (VD) C端可變區域 iVD) N 端 VD NGF 抑制分析法 EC50 nM c 端 VD NGF 抑制分析法 EC50 nM AB020 NGF 0.003 DVD1460 NGF TNF(序列2) 1.695 DVD 1477 TNF(序列5) NGF - 0.038 DVD1478 NGF TNF(序列5) 0.019 DVD1485 TNF(序列6) NGF - 0.053 DVD1486 NGF TNF(序列6) 0.076 - DVD1501 TNF(序列2) NGF - ND DVD1502 NGF TNF(序列2) 0.028 - DVD1519 TNF(序列5) NGF - 1.946 DVD1520 NGF TNF(序列5) 0.025 - DVD 1527 TNF(序列6) NGF - 0.350 DVD1528 NGF . TNF(序列6) 0.018 在N端或C端位置含有來自AB02〇2VD的所有DVD-Ig蛋 白在NGF抑制分析法中顯示中和作用。 實例1.2.2.F : Wnt-1/螢光素酶雙重穩定HEK純系#14中硬 骨素之抑制 以TopFlash質體（TCF報導體質體，Cell Signaling目錄號 21-170，批號26217)穩定轉染邱& 293八細胞’且以贾1^-1 慢病毒（Origene目錄號SC303644)感染該等細胞’從而產生 共表現螢光素酶與Wnt-1之純系°分析當天’已將一個雙 重穩定純系（#14)保持於T75燒瓶中的DMEM(Invitrogen目 15S366.doc -273- 201211252 錄號1 1965-092)培養基中直至80-90%匯合，該培養基含有 10% 合格 FBS(Invitrogen 目錄號 26140-079)、pen-Strep (Invitrogen目錄號 15140-122)、L-麩醯胺酸（Invitrogeng 錄 號25030-081，2 mM最終濃度）、丙酮酸鈉（Invitr〇gen目錄 號1 1360-070 ’最終濃度1 mM)及5 pg/ml °票吟黴素 (Invivogen目錄號ant-pr-Ι) 〇在分析培養基中進行分析：培 養基不含嗓呤黴素。將人類硬骨素（Abbott PR-1261069， 批號1769536，1.06 mg/mL)等分成1〇 μΐ且在_8〇°c下冷凍 儲存。第1天’以每孔10,000個細胞將純系#丨4細胞接種於 經組織培養物處理之黑色侧壁、透明底的96孔盤（c〇star #3603)中的50 μΐ分析培養基中，且在37°C下培育隔夜（2〇_ 24小時）。第二天，硬骨素儲備液在分析培養基中稀釋至 200 ηΜ(4χ)。將抗硬骨素抗體在分析培養基中稀釋至 4x(通常600 ηΜ)。移除培養基且換為每孔5〇 μ1新鮮分析培 養基。接著將細胞與25 μΐ 200 ηΜ(4χ)硬骨素一起培育i小 時。接著向細胞中添加抗硬骨素抗體（4 X濃縮，2 5 μΐ)，且 將盤在37 C下培育隔夜（20-24小時）。最終體積為1〇〇 第3天，細胞以2〇〇 μι pBS洗滌一次（室溫）。使用pr〇mega 螢光素酶套組#E1501進行細胞溶解及螢光素酶讀取。簡言 之，將5χ細胞溶解試劑（promega，目錄號E153A)以miUiQ 水稀釋1倍’且向各孔中添加20 μΐ。為了確保完全溶解， 使盤k轉500 rpm持續20分鐘。向各孔中添加丨〇〇 μι螢光素 酶分析試劑（1小瓶目錄號Ε151Α受質+ 10以目錄號Ε152Α 分析緩衝液）。在TopCount機（程式：螢光素酶96，分析17: 158366.doc -274· 201211252 1秒/孔讀數）上對盤讀數。表7呈現在15 0 nM下能夠抑制 SOST之抗體或DVD-Ig。 表7 :使用SOST親本抗體及DVD-Ig構築體之SOST抑制分 析法 親本抗體或 DVD-Ig ID N端可變區域 iVD) c端可變區域 (VD) N-端 VD S〇sf 抑制分析法 C端 VD SOST 抑制分析法 AB022 SOST + DVD1454 TNF(序列4) SOST • DVD 1475 TNF(序列5) SOST + DVD1476 SOST TNF(序列5) + DVD1483 TNF(序列6) SOST DVD1484 SOST TNFi序列6) + DVD1495 TNF(序列2) SOST DVD 1496 SOST TNI7(序列 2) + DVD1517 TNF(序列5) SOST DVD1518 SOST TNF(序列5) + DVD1526 SOST TNF(序列6) + 在N端或C端位置含有來自AB022之VD的所有DVD-Ig在 SOST抑制分析法中顯示中和作用。 實例1.1.2.G :腫瘤受體單株抗體或DVD-Ig在活體外之生 長抑制作用 將20 μ!^於D-PBS-BSA(含有0.1% BSA之杜爾貝科氏磷酸 鹽緩衝鹽水（Dulbecco's phosphate buffered saline))中稀釋 之腫瘤受體單株抗體或DVD-Ig添加至人類腫瘤細胞中， 最終濃度為 0.01 pg/mL - 100 pg/mL(180 μί)。盤在 37°C 下 在含濕氣5% C02氛圍中培育3天。根據製造商說明書 (Promega，Madison, WI)使用MTS試劑定量各孔中之活細胞 數目，以測定腫瘤生長抑制百分比。無抗體處理之孔用作 0%抑制之對照組，而無細胞之孔則視為顯示100%抑制。 158366.doc -275- 201211252 實例1.1.2.H :親本抗艏或DVD-Ig的活體外殺腫瘤作用
可分析結合於腫瘤細胞上之目標抗原的親本抗體或 DVD-Ig之殺腫瘤活性。簡言之’將親本抗體或DVD_I_ 釋於D-PBS-BSA(含有〇· 1% BSA之杜爾貝科氏構酸鹽缓衝 鹽水）中且添加至人類腫瘤細胞中’最終濃度為〇·01 Kg/mL 至100 pg/mL(200 μί)。盤在37°C下在含濕氣5% C〇2氛圍 中培育3天。根據製造商說明書（Promega，Madison，WI)使 用MTS試劑定量各孔中之活細胞數目，以測定腫瘤生長抑 制百分比。無抗體處理之孔用作0%抑制之對照組，而無 細胞之孔則視為顯示1 〇〇%抑制。 為了評估細胞凋亡，藉由以下方案測定卡斯蛋白酶-3活 化：在室溫下伴隨振盪’將96孔盤中經抗體處理之細胞溶 解於 120 μΐ 1 X溶解缓衝液（1·67 mM Hepes(pH 7.4)、7 mM KCM、0.83 mM MgCl2、o.ll mM EDTA、0.11 mM EGTA、 0.5 7% CHAPS、1 mM DTT、lx蛋白酶抑制劑混合錠劑； 無 EDTA; Roche Pharmaceuticals，Nutley，NJ)中持續 20分 鐘。在細胞溶解後，添加80 μΐ卡斯蛋白酶_3反應缓衝液 (48 mM Hepes(pH 7.5)、252 mM蔗糖、0.1% CHAPS、4 mM DTT及 20 μΜ Ac-DEVD-AMC 受質；Biomol Research Labs, Inc.，Plymouth Meeting，PA)，且將盤在 37〇c 下培育 2 小時。在1420 VICTOR多標籤計數器（Perkin Eimer Life
Sciences，Downers Grove, IL)上使用以下設定對盤讀數： 激發=360/40，發射=460M0。經抗體處理之細胞之榮光單 位相對於經同型抗體對照組處理之細胞的增加指示細胞凋 158366.doc •276· 201211252 亡。 實例1.1.2.I :藉由親本抗體及DVD-Ig構築體抑制細胞增殖 將100 μΐ之U87-MG人類神經膠質瘤細胞於補充有5%胎 牛血清之RPMI培養基中以每孔2,000個細胞接種於96孔培 養皿中’且在37°C、5% C02下培育隔夜。第二天，以抗體 或DVD-Ig之連續稀釋液（0_013 nM至133 nM劑量範圍）處理 細胞，且在37°C下在含濕氣5% C02氛圍中培育5天。藉由 根據製造商說明書使用ATPlite套組（Perkin Elmer，Waltham, Ο ΜΑ)評估ATP含量來間接量測細胞存活/增殖。 實例1.1.2.J : VEGF親本抗體及DVD-Ig構築體阻止 VEGF16S與VEGFR1之相互作用 ELISA盤（Nunc, MaxiSorp，Rochester, NY)與 100 μΐ含有 重組VEGFR1胞外區域-Fc融合蛋白之PBS(5 pg/ml，R&D systems, Minneapolis, MN)—起在4°C下培育隔夜。在洗務 緩衝液（含有0.05% Tween 20之PBS)中洗滌盤3次，且在 25°C下在阻斷緩衝液（含有1% BSA之PBS)中阻斷1小時。 〇 將各抗體/DVD-Ig於含有0.1% BSA之PBS中之連續稀釋液 與50 μΐ之2 nM生物素標記VEGF—起在25°C下培育1小 時。接著將抗體/DVD-Ig-生物素標記VEGF混合物（1〇〇 μΐ) 添加至VEGFRl-Fc塗覆之孔中，且在25°C下培育10分鐘。 洗滌各孔3次，接著在25°C下與1〇〇 μΐ抗生蛋白鏈菌素-HRP(KPL #474-3000, Gaithersburg, MD)— 起培育 1小時。 各孔洗滌3次，且每孔添加100 μΐ ULTRA-TMB ELISA (Pierce，Rockford, IL)。顯色後，以1 N HCL停止反應且量 158366.doc -277- 201211252 測45 0 nM下之吸光度。 實例1.1.2.K :藉由親本抗體或DVD-Ig構築體活體外抑制 受體磷酸化 將人類癌細胞於180 μΐ無血清培養基（DMEM+ 0.1% 88八）中以每孔40,000個細胞接種於96孔盤中，且在37°(：、 5% C02下培育隔夜。以每孔100 μΐ受體捕捉Ab(最終濃度4 pg/ml)塗覆Costar EIA盤（Lowell，MA)，且在室溫下在振盪 下培育隔夜。第二天，洗滌經受體抗體塗覆之ELISA盤（以 PBST=^0.05% Tween 20^PBS > pH 7.2 - > 且在室溫下在搖移器（rocker)上添加200 μΐ阻斷溶液（含1 % BSA、0.05%NaN3之PBS，pH7.27·4)以阻斷2小時。將人 類腫瘤細胞與抗體或DVD-Ig及配位體一起共培育。將於 D-PBS-BSA(含有0.1% BSA之杜爾貝科氏磷酸鹽緩衝鹽水） 中稀釋之單株抗體或DVD-Ig添加至人類癌細胞中，最終 濃度為 〇.〇1 pg/mL-100 pg/mL。同時以 1 -1 00 ng/mL(200 μΙ〇之濃度向細胞中添加生長因子，且細胞在37°C下在含 濕氣5% C02氛圍中培育1小時。將細胞溶解於每孔120 μΐ 冷細胞提取缓衝液（10 mM Tris(pH 7.4)、100 mM NaCl、1 mM EDTA、1 mM EGTA、1 mM NaF、1 mM原飢酸鈉、 1 % Triton X-100、10%甘油、0.1% SDS及蛋白酶抑制劑混 合液）中，且在4°C下伴隨振盪培育20分鐘。將細胞溶胞物 (100 μΐ)添加至ELISA盤中，且在4°C下在溫和振盪下培育 隔夜。第二天，洗滌ELISA盤，且每孔添加100 μΐ pTyr-HRP偵測 Ab(p-IGF1R ELISA套組，R&D System # DYC1770, 158366.doc • 278 - 201211252
Minneapolis，MN)，且盤在25°C下在暗處培育2小時。根據 製造商說明書使盤顯色以測定磷酸化。 實例1.1.2.L ··藉由VEGF親本抗體及DVD-Ig構築體抑制 VEGFR2(KDR)磷酸化 將表現人類VEGFR2(KDR)之NIH3T3細胞於補充有10% FBS之DMEM中以每孔20,000個細胞（100 μΐ)接種於96孔盤 中。第二天，細胞以DMEM洗滌2次，且在無FBS之DMEM 中血清饑餓3小時。於含有0.1% BSA之DMEM中稀釋的抗 〇 VEGF親本抗體或DVD-Ig(最終濃度為67 ηΜ、6·7 ηΜ及 0·67 ηΜ)與重組人類VEGF165(50 ng/ml)—起在25°C下預培 育1小時。接著向細胞中添加此等抗體/DVD-Ig及VEGF混 合物，且盤在37°C下在含濕氣5% C02氛圍中培育10分鐘。 以冰冷之PB S洗滌細胞2次，且藉由每孔添加1 00 μΐ補充有 0.1% ΝΡ40之細胞溶解缓衝液（Cell Signaling，Boston, ΜΑ) 使細胞溶解。彙聚副份樣品（duplicate sample)，且向先前 以抗 VEGFR2抗體（R&D systems, AF357，Minneapolis，MN) 〇 塗覆之ELISA盤的各孔中添加170 μΐ，且在25°C下在溫和 振盪下培育2小時。以洗滌緩衝液（含有0.05% Tween 20之 PBS)洗滌各孔5次，且與50 μΐ生物素標記抗磷酸酪胺酸抗 體（4G10; Millipore，Billerica，ΜΑ)之 1:2000 倍稀釋液一起 在25°C下培育1小時。以含有〇.〇5°/。Tween 20之PBS洗滌各 孔5次，接著與抗生蛋白鏈菌素-HRP(KPL #474-3000, Gaithersburg，MD)—起在25°C下培育1小時。以抗生蛋白 鏈菌素_HRP(KPL #474-3000, Gaithersburg，MD)洗滌各孔 3 158366.doc •279- 201211252 次。以含有0.05% Tween 20之PBS洗滌各孔3次，且每孔添 加 100 μΐ ULTRA-TMB ELISA(Pierce，Rockford，IL)。顯色 後，以1 N HCL停止反應且量測450 nM下之吸光度。 實例1.1.2.M : DVD-Ig對人類癌皮下侧腹異種移植物之生 長的功效 使A-43 1人類表皮樣癌細胞在組織培養燒瓶中活體外生 長至99%活力、85%匯合。在研究第0天，向19-25公克之 SCID雌性小鼠（Charles Rivers Labs, Wilmington，MA)右側 腹皮下注射1 x 106個人類腫瘤細胞（與基質膠（matrigel)成 1:1)。在將平均腫瘤體積為約200至320 mm3之小鼠按尺寸 匹配分組之後，開始投與（IP，QD，每週3次）人類IgG對照 組或DVD-Ig。在腫瘤細胞注射後約第10天開始每週兩次 量測腫瘤。 實例1.1.2.N:如流動式細胞測量術所評估之單株抗體與人 類腫瘤細胞株表面的結合 自組織培養燒瓶收集過度表現相關細胞表面抗原之穩定 細胞株或人類腫瘤細胞株，且將其再懸浮於含有5%胎牛 血清之磷酸鹽緩衝鹽水（PBS)(PBS/FBS)中。在染色之前’ 將人類腫瘤細胞在冰上與（100 μΐ)含5 pg/ml人類IgG之 PBS/FCS—起培育。在冰上，將1-5χ105個細胞與含抗體或 DVD-Ig(2 pg/mL)之 PBS/FBS— 起培育 30-60 分鐘。洗滌細 胞2次，且添加100 μΐ之F(ab，）2山羊抗人類IgG，Fey-藻紅素 (1:200 倍稀釋於 PBS 中）（Jackson ImmunoResearch，West
Grove，PA，目錄號109-1 16-170)。在冰上培育30分鐘後’ 158366.doc -280 201211252 將細胞洗滌2次且再懸浮於PBS/FBS中。使用Becton Dickinson FACSCalibur(Becton Dickinson, San Jose，CA)量 測螢光。 實例1.1.2.0 :如流動式細胞測量術所評估之親本受體抗體 及DVD-Ig構築艘與人類腫瘤細胞株表面的結合 自組織培養燒瓶收集過度表現細胞表面受體之穩定細胞 株或人類腫瘤細胞株’且將其再懸浮於含有1%胎牛血清 之杜爾貝科氏磷酸鹽緩衝鹽水（DPBS)(DPBS/FCS)中。在 〇 冰上，將1-5 X 105個細胞與100 μί含抗體或DVD-Ig(10 之DPBS/FBS —起培育30-60分鐘。將細胞洗滌2 次，且添加50 W山羊抗人類1gG_藻紅素（於DPBS/BSA中之 1:50倍稀釋液）（S〇uthern Biotech Associates, Birmingham, AL目錄號204〇-〇9)。在冰上培育30·45分鐘後’將細胞洗 條兩次且以每孔125 pL再懸浮於含1%曱醛之DPBS/FCS 中。使用 Becton Dickinson LSRII(Becton Dickinson, San
Jose，CA)量測螢光。 O 實例1.2:產生針對相關人類抗原之親本單株抗體 如下獲得能夠結合及中和相關人類抗原及其變異體之親 本小鼠mAb : 實例1.2.A:以相關人類抗原對小鼠免疫接種 在第1天，在5隻6-8週大Balb/C小鼠、5隻C57B/6小鼠及 5隻AJ小鼠中皮下注射20叫與完全弗氏佐劑或Immunoeasy 佐劑（Qiagen，Valencia, CA)混合之重組經純化人類抗原（例 如IGF1，2)。在第24天、第38天及第49天，向相同小鼠皮 158366.doc -281- 201211252 下〉主射2〇 pg與不完全弗氏佐劑或Immunoeasy佐劑混合之 重組經純化人類抗原變異體。在第84天或第112天或第144 天’向小鼠靜脈内注射1 pg相關之重組經純化人類抗原。 實例1.2.B :產生融合瘤 根據 Kohler，G_ 及 Milstein (1975) Nature，256: 495 所述之 確定方法使自實例1 ·2·A中所述之經免疫接種小鼠獲得之 脾細胞與SP2/〇-Ag- 14細胞以5 :1比率融合以產生融合瘤。 以每孔2·5 X 1〇6個脾細胞的密度將融合產物於含有偶氮絲胺 酸及次黃嘌呤之選擇培養基中接種於96孔盤中。融合後7 至1 〇天’觀測到肉眼可見之融合瘤群落。藉由ELISΑ測試 含有融合瘤群落之各孔的上清液中針對相關抗原之抗體的 存在（如實例1.1 · 1 ·Α所述）。接著測試呈現抗原特異性活性 之上清液的活性（如實例L1.2之分析法所述），例如在生物 分析法中中和相關抗原之能力（諸如實例21所述卜 實例1.2.C :針對相關人類目標抗原之親本單株抗體之鑑 別及表徵 實例1.2.C.1 :分析親本單株抗體中和活性 刀析融δ瘤上清液中結合根據實例丨2·α及1 ·2 b產生之 相關W I亦能夠結纟相關抗原t變異冑（「抗原變異 體」）之親本抗體的存在。接著’在例如實例ι ΐ 2 ι之細胞 激素生物分析法中’測試含有在兩個分析法中呈陽性之抗 體的上清液的抗原中和效能。藉由有限稀釋按比例擴增且 選殖在生物分析法中IC5〇值小於1〇〇〇 ，在—實施例中 小於_ PM的融合瘤產生抗體。融合瘤細胞擴增至含有 158366.doc •282- 201211252 10%低IgG胎牛血清（Hyclone #SH30151，Logan，UT)之培養 基中。收集平均250 mL各融合瘤上清液（來源於純系種 群），濃縮且藉由蛋白質A親和力層析來純化，如Harlow, Ε·及 Lane，D. 1988 「Antibodies: A Laboratory Manual」 中所述。例如使用如實例1.1.2.1所述之細胞激素生物分析 法，測定經純化mAb抑制其目標抗原活性之能力。 實例I.2.C.2:分析親本單株抗體對相關石蟹黐猴目標抗原 之交叉反應性 Ο 為了測定本文所述之所選mAb是否識別相關石蟹獼猴抗 原，使用重組石蟹獼猴目標抗原如本文所述（實例1 · 1 · 1 .G) 進行BIACORE分析。此外，亦可在細胞激素生物分析法 (實例1.1.2.1)中量測mAb針對相關重組石蟹獼猴抗原之中 和效能。選擇具有良好石蟹獼猴交叉反應性之MAb(在一 實施例中，在人類抗原之反應性的5倍以内）用於進一步表 徵。 實例1.2.D:測定各鼠類抗人類單株抗體之可變區胺基酸 〇 序列 如下進行重組抗人類小鼠mAb之cDNA分離、表現及表 徵。對於各胺基酸序列之測定，藉由離心法分離約1 x 1〇6 個融合瘤細胞，且根據製造商說明書使用Trizol(Gibco BRL/Invitrogen, Carlsbad，CA.)處理以分離總RNA。根據 製造商說明書使用Superscript第一股合成系統（Invitrogen， Carlsbad, CA)對總RNA進行第一股DNA合成。使用募（dT) 引發第一股合成以選擇聚（A)+ RNA。接著藉由PCR ’使用 158366.doc -283 - 201211252 經設計用於擴增鼠類免疫球蛋白可變區之引子（Ig-Primer Sets, Novagen，Madison, WI)來擴增第一股cDNA產物。於 瓊脂糖凝膠上分解PCR產物，切下，純化且接著以TOPO 選殖套組次選殖至 pCR2.1-TOPO載體（Invitrogen, Carlsbad， CA)中，且轉型至TOP10化學感受態大腸桿菌（Invitrogen， Carlsbad, CA)中。對轉型體進行群落PCR以鑑別含有插入 物之純系。使用 QIAprep Miniprep 套組（Qiagen，Valencia, CA)自含有插入物之純系分離質體DNA。使用Ml 3正向引 子及 M13 反向引子（Fermentas Life Sciences, Hanover MD) 對質體中之插入物之兩股進行定序以確定可變重鏈DNA序 列或可變輕鏈DNA序列。鑑別mAb之可變重鏈序列及可變 輕鏈序列。在一實施例中，用於下一步開發（人類化）之前 導mAb組的選擇準則包括以下： 抗體不含任何N連接之糖基化位點（NXS)，CH2中之 標準NXS除外 除每一抗體中之正常半胱胺酸外，抗體不含任何其 他半胱胺酸 比對抗體序列與最接近之人類生殖系序列之VH及 VL，且應檢驗其他天然人類抗體中任何異常胺基酸 之存在 若不影響抗體活性’則N端麩醯胺酸（Q)換為麩胺酸 (E)。此將減少由Q環化引起之異質性 藉由質譜分析確認有效信號序列裂解。此可使用COS 細胞或293細胞物質進行 158366.doc •284· 201211252 檢驗蛋白質序列之可能導致活性喪失之Asn脫醯胺之 風險 抗體具有低聚集程度 抗體溶解度大於5_10 mg/mi(在研究階段）；大於25 mg/ml 根據動態光散射（DLS)測得抗體具有正常尺寸（5_6 nm) 抗體具有低電荷異質性 抗體缺乏細胞激素釋放（參看實例hl 2 B) 抗體對預定細胞激素具有特異性（參看實例me) 抗體缺乏非預期組織交叉反應性（參看實例丨丨2 D) •抗體對人類與石蟹獼猴組織交又反應性之間具有類 似性（參看實例1.1.2.D) 實例1.2.2:重組人類化親本抗體 實例1.2.2.1:重组喪合抗人類親本抗體之建構及表現 藉由在細菌中同源重組將編碼鼠類抗人類親本mAb之重 鍵怪疋區的DN A置換為編碼含有2個欽鍵區胺基酸突變之 人類IgGl恆定區的cDNA片段。此等突變為位置234(EU編 號）處之白胺酸改變為丙胺酸及位置235處之白胺酸改變為 丙胺酸（Lund等人，1991，J. Immunol” 147: 2657)。此等抗 體中之每一者的輕鏈恆定區置換為人類κ恆定區。藉由共 轉染接合至pBOS表現質體中之嵌合重鍵及輕鍵cdna在 COS細胞中短暫表現全長嵌_合抗體（Mizushima及Nagata，
Nucleic Acids Research 1990，第 18卷，第 5322頁）。藉由 158366.doc -285- 201211252 蛋白質A瓊脂糖凝膠層析法純化含有重組嵌合抗體之細胞 上清液，且藉由添加酸緩衝液溶離已結合抗體。中和抗體 且透析至PBS中。 編碼嵌合mAb之重鏈cDNA與其嵌合輕鏈cdNA(皆接合 至pBOS載體中）共轉染至COS細胞中。藉由蛋白質A缓脂 糖凝膠層析法純化含有重組嵌合抗體之細胞上清液且藉由 添加酸緩衝液溶離已結合抗體。中和抗體且透析至PBS 中〇 接著如實例1.1.1 .G及1 _ 1 ·2.Β所述測試純化嵌合抗人類親 本mAb的結合能力（藉由Biacore)及例如抑制細胞激素誘導 之IgE產生的功能活性。選擇維持親本融合瘤mAb活性之 彼合mAb用於進一步開發。 實例1.2.2.2:人類化抗人類親本抗體之建構及表現 實例1·2.2.2·Α:選擇人類抗體構架 使用Vector ΝΤΙ軟體分別比對各鼠類可變重鏈及可變輕 鏈基因序列與44個人類免疫球蛋白生殖系可變重鏈或46個 生殖系可變輕鏈序列（來源於NCBI Ig Blast網站 http://www.ncbi.nlm.nih.gov/igblast/retrieveig.html.)。 基於胺基酸序列同源性、CDR叢集分析、所表現人類抗 體之使用頻率及可獲得之關於人類抗體之晶體結構之資訊 進行人類化。考慮到對抗體結合、VH-VL配對及其他因素 的可能影響’在鼠類與人類構架殘基不同之情況下，使鼠 類殘基突變成人類殘基，但有少數例外。基於對與鼠類抗 體可變區的實際胺基酸序列具有高度同源性（亦即序列類 158366.doc -286- 201211252 似性）的人類生殖系抗體序列或其子群之分析來設計其他 人類化策略。 使用同源性模型化來鐘別預計對抗體組合位點cdr結構 至關重要的鼠類抗體序列特有之殘基。同源模型化為產生 蛋白質之近似三維座標的計算方法。初始座標來源及其進 一步改進之指南為第二蛋白質（即參考蛋白質），其三維座 標已知且序列與第一蛋白質之序列相關。使用兩種蛋白質 之序列之間的關係產生參考蛋白質與需要座標之蛋白質 〇(目標蛋白質)之間的對應性。比對參考蛋白質及目標蛋白 質之一級序列，其中兩種蛋白質之一致部分的座標自參考 蛋白質直接轉移至目標蛋白質。自通用結構模板建構例如 由殘基突變、插入或缺失產生之兩種蛋白質之錯配部分的 座標且改進能量以確保與已轉移模型座標的一致性。此計 算蛋白質結構可經進一步改進或直接用於模型化研究。模 型結構之品質由參考蛋白質與目標蛋白質相關之論點的準 確性及建構序列比對之精確性決定。 〇 對於乳類mAb，使用BLAST搜尋與目測之組合鑑別適合 參考結構。參考胺基酸序列與目標胺基酸序列之間25%的 序列一致性被視作嘗試執行同源性模型化之最低必要條 件。人工建構序列比對且以程式Jackal產生模型座標（參看
Petrey，D.專人，（2〇〇3) pr〇teins 53 (增刊 6): 430-435)。 所選抗體之鼠類及人類構架區之一級序列共有顯著—致 性。不同之殘基位置為在人類化序列中包括鼠類殘基以保 留％類抗體的所觀測到的結合效能之候選位置。人工建構 158366.doc -287- 201211252 人類序列與鼠類序列之間不同之構架殘基的清單。表8顯 示針對此研究選擇之構架序列。 表8:人類IgG重鏈恆定區域及輕鏈恆定區域之序列
蛋白質 SEQID NO 序列 12345678901234567890123456789012345678901 野生型hlgGl恆定區 48 ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSW NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYI CNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSV FLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDG VEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCK VSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQV SLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF1 FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP GK 突變hlgGl恆定區 49 ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSW NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYI CNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSV FLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDG VEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCK VSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKISIQV SLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP GK IgK怪定區 50 TVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWK VDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHK VYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC Ig λ恒·定區 51 QPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAW KADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHR SYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS 既定構架殘基影響抗體之結合特性的可能性視其與CDR 殘基之鄰近性而定。因此，使用模型結構，根據距CDR中 之任何原子的距離排列鼠類序列與人類序列之間的不同殘 基。在任何CDR原子4.5 A範圍内的彼等殘基經鑑別為最重 要殘基且推薦其作為人類化抗體中保留鼠類殘基（亦即回 復突變）之候選殘基。 使用寡核苷酸建構經電腦（/« 建構之人類化抗 體。對於各可變區cDNA而言，設計6個各自具有60-80個 核苷酸之寡核苷酸以在各寡核苷酸之5'及/或3'端彼此重疊 20個核苷酸。在黏接反應中，組合所有6種募核苷酸，煮 -288- 158366.doc 201211252 沸且在dNTP存在下使其黏接。添加DNA聚合酶I(大 (Klenow)片段（New England Biolabs #M0210，Beverley, MA.))以填充重疊寡核苷酸之間的約40 bp間隙。使用兩個 含有與經修飾pBOS載體中之多選殖位點互補之懸垂序列 的最外側引子進行PCR以擴增整個可變區基因（Mizushima， S.及Nagata，S· (1990) Nucleic Acids Res. 18: 17)。在瓊脂 糖凝膠上分離自各cDNA組裝體獲得之PCR產物且切出對 應於經預測可變區cDNA尺寸之條帶且將其純化。在細菌 中藉由同源重組將可變重鏈區同框插入至編碼含有2個鉸 鏈區胺基酸突變之人類IgGl恆定區的cDNA片段上。此等 突變為位置234(EU編號）處之白胺酸改變為丙胺酸且位置 235處之白胺酸改變為丙胺酸（Lund等人，（1991) j Immunol· 147: 265 7)。藉由同源重組將可變輕鏈區與人類κ 值定區同框插入。分離細菌群落，且提取質體dNA。對整 個cDNA插入物定序。將對應於各抗體之正確人類化重鏈 及輕鏈共轉染至(：08細胞中以短暫產生全長人類化抗人類 抗體。藉由蛋白質A瓊脂糖凝膠層析法純化含有重組嵌合 抗體之細胞上清液，且藉由添加酸緩衝液溶離已結合抗 體。中和抗體且將其透析至PBs中。 實例1·2·2·3:人類化抗體之表徵 J如使用如κ例1 · 1.2 · Α所述之細胞激素生物分析法來測 定丄純化人類化抗體抑制功能活性之能力。使用如實例 1_1·1·Β中所述之表面電漿子共振⑧）量測來測定人 類化抗體對重組人類抗原之結合親和力。排列生物分析法 158366.doc 201211252 之ic5〇值及人類化抗體之親和力。選擇完全保留親本融合 瘤mAb活性之人類化mAb作為用於進一步開發之候選物。 對最適宜的2-3個人類化mAb進行進一步表徵。 實例1.2.2.3.A:人類化抗體之藥物動力學分析 在史泊格多利（Sprague-Dawley)大鼠及石蟹獼猴中進行 藥物動力學研究。對雄性及雌性大鼠及石蟹獼猴靜脈内或 皮下給予4 mg/kg mAb之單一劑量，且使用抗原捕捉 ELISA分析樣品，且藉由非房室模型分析測定藥物動力學 參數。簡言之，用山羊抗生物素抗體（5 mg/ml，4°C，隔 夜）塗覆ELISA盤，用Superblock(Pierce)阻斷，且在室溫下 與含50 ng/ml經生物素標記之人類抗原之10% Superblock TTBS—起培育2小時。血清樣品經連續稀釋（0.5%血清， TTBS中之10% Superblock)，且在室溫下在盤上培育30分 鐘。以HRP標記之山羊抗人類抗體進行偵測，且藉助於標 準曲線使用四參數邏輯擬合測定濃度。藉由非房室模型使 用 WinNonlin軟體（Pharsight Corporation, Mountain View, CA)測定藥物動力學參數值。選擇具有良好藥物動力學概 況（T1/2為8-13天或更佳，具有低清除率及50-100%的極佳 生物可用性）之人類化mAb。 實例1.2.2.3.B :人類化單株抗體之物理化學及活體外穩定 性分析 尺寸排阻層析 用水稀釋抗體至2.5 mg/mL，且取20 mL在Shimadzu HPLC系統上使用TSK凝膠G3000 SWXL管柱（Tosoh 158366.doc -290- 201211252
Bio science,目錄號k5539-05k)分析。使用211 mM硫酸 鈉、92 mM破酸納（pH 7.0)以0.3 mL/min之流動速率自管柱 溶離樣品。HPLC系統操作條件如下： 移動相：211 mM Na2S04、92 mM Na2HP04*7H20，pH 7.0 梯度：等度 流動速率：0.3 mL/min 偵測器波長：280 nm 自動取樣器冷卻器溫度：4°C 〇 管柱烘箱溫度：環境溫度 運作時間：50分鐘 表9含有如上述方案所測定，親本抗體及DVD-Ig構築體 的純度數據，以單體百分比（具有預期分子量之未聚集蛋 白質）表示。 表9:藉由尺寸排阻層析測定之親本抗體及DVD-Ig構築體 之純度 親本抗體或DVD-Ig N端可變區域 C端可變區域 單體％(純度） ID (VD) (VD) ABO 17 TNF(序列1) 97.5 AB020 NGF 88.2 AB022 SOST 93.2 AB048 PGE2 100 AB213 TNF(序列2) 100 AB214 TNF(序列3) 100 AB215 TNF(序列4) 99.9 AB216 LPA 100 AB217 TNF(序列5) 100 AB218 TNF(序列6) 100 DVD1448 PGE2 TNF(序列2) 76.4 DVD1454 SOST TNF(序列2) 88.8 DVD1460 NGF TNF(序列2) 87.6 158366.doc •291- 201211252
親本抗體或DVD-Ig N端可變區域 C端可變區域 單體％(純度） ID (VD) (VD) DVD 1466 LPA TNF(序列2) 100 DVD 1471 TNF(序列1) LPA 90.5 DVD 1472 LPA TNF(序列1) 96.8 DVD 1473 TNF(序列5) PGE2 94.4 DVD 1474 PGE2 TNF(序列5) 67.9 DVD 1475 TNF(序列5) SOST 91.6 DVD1476 SOST TNF(序列5) 76.7 DVD 1477 TNF(序列5) NGF 96.7 DVD 1478 NGF TNF(序列5) 89.2 DVD 1479 TNF(序列5) LPA 95.3 DVD 1480 LPA TNF(序列5) 100 DVD 1481 TNF(序列6) PGE2 97.5 DVD 1482 PGE2 TNF(序列6) 80.7 DVD 1483 TNF(序列6) SOST 90.8 DVD1484 SOST TNF(序列6) 76 DVD 1485 TNF(序列6) NGF 89.9 DVD 1486 NGF TNF(序列6) 92.2 DVD 1487 TNF(序列6) LPA 90.9 DVD 1488 LPA TNF(序列6) 100 DVD 1490 PGE2 TNF(序列2) 97.2 DVD 1495 TNF(序列2) SOST 98.8 DVD 1496 SOST TNF(序列2) 72.8 DVD1502 NGF TNF(序列2) 96.2 DVD 1508 LPA TNF(序列2) 100 DVD1513 TNF(序列1) LPA 73.9 DVD1514 LPA TNF(序列1) 96.3 DVD1515 TNF(序列5) PGE2 97.2 DVD1517 TNF(序列5) SOST 95.4 DVD1518 SOST TNF(序列5) 78.4 DVD1519 TNF(序列5) NGF 100 DVD 1520 NGF TNF(序列5) 95.2 DVD 1523 TNF(序列6) PGE2 97.5 DVD1524 PGE2 TNF(序列6) 98.1 DVD 1525 TNF(序列6) SOST 96.5 DVD 1526 SOST TNF(序列6) 70.5 DVD 1527 TNF(序列6) NGF 98.2 DVD1528 NGF TNF(序列6) 93.3 DVD 1529 TNF(序列6) LPA 81.3 DVD 1530 LPA TNF(序列6) 100 SDS-PAGE 158366.doc -292- 201211252 在還原性條件及非還原性條件下藉由十二烧基硫酸鈉_ 聚丙烯醯胺凝膠電泳（SDS-PAGE)分析抗體。使用阿達木 單抗（批號AFP04C)作為對照組。對於還原性條件，1:1混 合樣品與具有100 mM DTT之2X tris甘胺酸SDS-PAGE樣品 缓衝液（Invitrogen，目錄號LC2676，批號1323208)，且在 60°C下加熱30分鐘。對於非還原性條件，1:1混合樣品與 樣品缓衝液且在100°C下加熱5分鐘。將經還原樣品（每泳 道10 mg)裝載於12%預製tris甘胺酸凝膠（invitrogen,目錄 〇 號£060051)〇\，批號6111021)上，且將未經還原之樣品（每 泳道10 mg)裝載至8%-16%預製tris甘胺酸凝膠（Invitrogen, 目錄號EC6045box，批號 6111021)上。使用 SeeBlue Plus 2(Invitrogen，目錄號LC5925，批號1351542)作為分子量標 記。在XCell SureLock小單元凝膠盒（Invitr〇gen，目錄號 ΕΙ0001)中運作凝膠，且藉由首先施加電壓75使樣品堆疊 於凝膠中’隨後施加恒定電壓125直至染料前沿到達凝膠 底部來分離蛋白質。所用之電泳緩衝液為自1〇χ tris甘胺 〇 酸SDS緩衝液（ABC，MPS-79-080106)製備的1X tris甘胺酸 SDS缓衝液。用膠體藍染色劑（c〇u〇idal blue办⑷ (Invitrogen目錄號46-7015, 46-7016)對凝膠染色隔夜，且 用MiUi-Q水脫色直至背景透明。接著使用Eps〇n Expressi〇n 掃描儀（型號1680, S/NDASX003641)掃描經染色凝膠。 沈降速度分析 將抗體裝載至三個標準雙區碳環氧樹脂（ep〇n)中心件中 之每一者的樣品室中。此等中心件具有丨.2 cm之光徑長度 •293· 158366.doc 201211252 且經建造有藍寶石窗。使用PBS作為參考緩衝液且各腔室 含有 140 pL PBS。在 Beckman ProteomeLab XL-Ι分析型超 離心機（序號PL106C01)中使用4孔（ΑΝ-60ΊΠ)轉子同時檢查 所有樣品。 運作條件經程式化，且使用ProteomeLab(v5.6)執行離心 對照。在分析之前，使樣品及轉子熱平衡1小時（20.〇± 0· 1°C )。在3000 rpm下執行適當室負荷之確認，且記錄各 室之單一掃描。沈降速度條件如下：
樣品室體積：420 mL 參考室體積：420 mL 溫度：20°C 轉子速度：35,000 rpm 時間：8:00小時 UV波長：280 nm 徑向步長：0.003 cm 數據收集：每步一個數據點，無信號平均。 總掃描數：100 完整抗體之LC-MS分子量量測 藉由LC-MS分析完整抗體之分子量。以水稀釋各抗體至 約1 mg/mL。使用具有蛋白質微捕集器（Michrom
Bioresources，Inc,目錄號 004/25109/03)之 1100 HPLC (Agilent)系統脫鹽，且將5 mg樣品引入至API Qstar pulsar i質譜儀（Applied Biosystems)中。使用短梯度溶離樣品。 用移動相A(HPLC水中0.08% FA、0.02% TFA)及移動相 158366.doc -294- 201211252 B(乙腈中0.08% FA及0_02。/〇 TFA)以50 mL/min之流動速率 運作梯度。質譜儀在4.5千伏喷霧電壓下操作’掃描範圍 為2000至3500質荷比。 抗體輕鏈及重鏈之LC-MS分子量量測 藉由LC-MS分析抗體輕鏈（LC)、重鏈（HC)及去糖基化 HC之分子量量測。以水稀釋抗體至1 mg/mL ’且在37°C下 以最終濃度為10 mM之DTT使樣品還原為LC及HC歷時30分 鐘。為了使抗體去糖基化，將1〇〇 m§抗體與2 mL PNGase ο F、5 mL 10% Ν-辛基糖苷以100 mL之總體積在37°C下一起 培育隔夜。在去糖基化之後，在37°C下以最終濃度為10 mM之DTT使樣品還原30分鐘。使用具有C4管柱之Agilent 1100 HPLC系統(Vydac，目錄號214TP5115, S/N 060206537204069) 脫鹽，且將樣品（5 mg)引入至API Qstar pulsar i質譜儀 (Applied Biosystems)中。使用短梯度溶離樣品。用移.動相 A(HPLC水中0.08% FA、0.02% TFA)及移動相B(乙腈中 0.08% FA及0.02% TFA)以50 mL/min之流動速率運作梯 〇 度。質譜儀在4.5千伏喷霧電壓下操作，掃描範圍為800至 3500質荷比。 肽圖譜分析 在室溫下在75 mM碳酸氫銨中用最終濃度為6 Μ之鹽酸 胍使抗體變性15分鐘。在37°C下以最終濃度為10 mM之 DTT使變性樣品還原60分鐘，隨後在37°C下在黑暗中以50 mM碘乙酸（IAA)使其烷基化30分鐘。在烷基化之後，在 4°C下針對4 L 10 mM碳酸氫銨透析樣品隔夜。以10 mM碳 158366.doc -295 - 201211252 酸氫錢（pH 7.8)稀釋經透析樣品至1 mg/mL ’且在37 C下用 胰蛋白酶（Proniega，目錄號V5 111)或Lys-C(Roche，目錄5虎 1 1 047 825 001)以1:20(w/w)胰蛋白酶/Lys-C:抗體比率消化 100 mg抗體達4小時。以1 mL 1 N HC1淬滅消化物。對於 使用質譜儀偵測法之肽圖譜分析’使用Agilent 1100 HPLC 系統在 C18 管柱（Vydac，目錄號 218TP51，S/N NE9606 10.3.5)上藉由逆相高效液相層析（1^«^1^)分離4〇1111^消化 物。以使用移動相A(HPLC級水中0.02% TFA及0.08% FA) 及移動相B(乙腈中0.02% TFA及0.08% FA)之梯度以50 mL/min之流動速率進行肽分離。API QSTAR Pulsar i質譜 儀在4.5千伏喷霧電壓下及800至2500質荷比之掃描範圍内 以正離子模式操作。 二硫鍵圖譜分析 為了使抗體變性，將100 mL抗體與300 mL含8 Μ鹽酸胍 之100 mM碳酸氫銨混合。檢驗pH值以確保其在7與8之 間，且使樣品在室溫下在最終濃度為6 Μ之鹽酸胍中變性 15分鐘。用Milli-Q水稀釋一部分變性樣品（1〇〇 mL)至600 mL，獲得1 Μ之最終鹽酸胍濃度。在37°C下用胰蛋白酶 (Promega,目錄號 V5111，批號 22265901)或 Lys-C(Roche, 目錄號11047825001,批號12808000)以1:50胰蛋白酶或 1:50 Lys-C:抗體（w/w)比率（4.4 mg酶：220 mg樣品）消化樣 品（220 mg)約16小時。向樣品中再添加5 mg胰蛋白酶或 Lys-C，且於37°C下再進行消化2小時。藉由向各樣品中添 加1 mL TFA來停止消化。在Agilent HPLC系統上使用C18 158366.doc -296- 201211252 管柱（Vydac,目錄號 218TP51 S/NNE020630-4-1A)藉由 RPHPLC分離經消化之樣品。以與用於肽圖譜分析之梯度 相同之梯度使用移動相A(HPLC級水中0.02% TFA及0.08% FA)及移動相 B(乙腈中 0.02% TFA及 0.08% FA)以 50 mL/min 之流動速率進行分離。HPLC操作條件與肽圖譜分析所用 之操作條件相同。API QSTAR Pulsar i質譜儀在4_5千伏噴 霧電壓及800至2500質荷比之掃描範圍内以正離子模式操 作。藉由匹配所觀測之肽MW與經二硫鍵連接之胰蛋白酶 Ο 肽或Lys-C肽的預測MW來指定二硫鍵。 游離硫氫基之測定 用於定量抗體中之游離半胱胺酸的方法係基於愛耳門試 劑（Ellman’s reagent)(5,50-二硫基-雙（2-硝基苯曱酸） (DTNB))與硫氫基（SH)之反應，該反應產生特徵性發色產 物5-硫基-(2-硝基苯甲酸）(Tnb)。反應以下式說明： DTNB+RSH ® RS-TNB+TNB-+H+ 使用Cary 50分光光度計量測TNB-在412 nm下之吸光 〇 度。使用2-疏基乙醇（b-ME)稀釋液作為游離SH標準物繪製 吸光度曲線，且自樣品於412 nm下之吸光度測定蛋白質中 之游離硫氫基的濃度。 藉由以HPLC級水連續稀釋14·2 M b-ME直至0.142 mM的 最終濃度來製備b-ME標準儲備液。接著，一式三份製備 各濃度之標準物。使用amicon ultra 10,000 MWCO離心過 濾器（Millipore，目錄號 UFC801096，批號 L3KN5251)將抗 體濃縮至10 mg/mL ’且將緩衝液換為用於阿達木單抗之調 158366.doc •297· 201211252 配緩衝液（5.57 mM構酸二氫鈉、8.69 mM構酸氫二納、 106.69 mM NaCl、1.07 mM擰檬酸鈉、6.45 mM檸檬酸' 66.68 mM甘露糖醇，pH 5.2、0.1%(w/v)Tween)。在室溫 下在振盪器上混合樣品20分鐘。接著，向各樣品及標準物 中添加180 mL 100 mM Tris緩衝液（pH 8.1)，隨後添加300 mL含2 mM DTNB之10 mM鱗酸鹽緩衝液（pH 8.1)。在充分 混合之後，在Cary 50分光光度計上在4 12 nm下量測樣品 及標準物之吸光度。藉由繪製游離SH之量與b-ME標準物 之OD412 nm之曲線獲得標準曲線。在減去空白後，基於此 曲線計算樣品之游離SH含量。 弱陽離子交換層析 以10 mM填酸納（pH 6.0)稀釋抗體至1 mg/mL。使用 Shimadzu HPLC 系統用 WCX-1 〇 ProPac 分析型管柱（Dionex， 目錄號054993, S/N 02722)分析電荷異質性。將樣品裝載 於管柱上（80%移動相A(10 mM磷酸鈉，pH 6.0)及20%移動 相 B(10 mM磷酸鈉、500 mM NaCl，pH 6.0))，且以 1.0 mL/min之流動速率溶離。 寡醣分佈 以2-胺基苯甲醯胺（2-AB)標記試劑衍生經PNGase F處理 抗體後釋放之寡醣。藉由正相高效液相層析（NPHPLC)分 離螢光標記之募醣，且基於與已知標準物的滯留時間比較 表徵寡醣之不同形式。 首先以PNGaseF消化抗體，以自重鏈之以部分裂解n連 接之募醣。將抗體（200 mg)與2 mL PNGase F及3 mL 10% 158366.doc -298- 201211252 N-辛基糖普一起置於500 mL Eppendorf管中。添加構酸鹽 緩衝鹽水使最終體積達到60 mL。將樣品在371下在設定 為700 RPM之Eppendorf恆溫混勻器中培育隔夜。作為對 照，亦使用PNGase F消化批號為AFP04C之阿達木單抗。 在PNGase F處理之後，將樣品在95°C下在設定為750 RPM之Eppendorf恆溫混勻器中培育5分鐘以沈殿出蛋白 質，接著將樣品置於1〇,〇〇〇 RPM下之Eppendorf離心機中 歷時2分鐘，以短暫離心（spin down)沈澱之蛋白質。將含 Ο 有寡醣之上清液轉移至500 mL Eppendorf管中且在65°c下 在speed-vac中乾燥。 使用購自Prozyme之2AB標記套組（目錄號GKK-404，批 號132026)以2AB標記寡醣。根據製造商說明書製備標記試 劑。將乙酸（150 mL，於套組中提供）添加至DMSO小瓶（於 套組中提供）中，且藉由將溶液上下抽吸若干次來混合。 將乙酸/DMSO混合物（1〇〇 mL)轉移至2-AB染料小瓶中（即 將使用之前）且混合直至染料完全溶解。接著將染料溶液 ◎ 添加至還原劑小瓶（於套組中提供）中充分混合（標記試 劑）。向各乾燥寡醣樣品小瓶中添加標記試劑（5 mL)，且充 分混合。將反應小瓶置於設定為65°C及700-800 RPM之 Eppendorf恒溫混勻器中以反應2小時。 在標記反應之後，使用來自Prozyme之GlycoClean S筒 (目錄號GKI-4726)移除過量螢光染料。在添加樣品之前， 將該等筒以1 mL milli-Q水洗滌，隨後以1 mL 30%乙酸溶 液洗滌5次。在即將添加樣品之前，向筒中添加1 mL乙腈 158366.doc -299- 201211252 (Burdick and Jackson，目錄號AH015-4)。 在所有乙腈均已通過筒之後，將樣品點樣至剛洗滌之圓 盤中央，且使其吸附於圓盤上歷時1 〇分鐘。用1 mL乙腈洗 滌圓盤，隨後以1 mL 96%乙腈洗滌5次。將筒置於1.5 mL Eppendorf管上，且以milli Q水洗蘇3次（每次洗務400 mL) 來溶離2-AB標記之寡醣。 使用連接於Shimadzu HPLC系統之Glycosep N HPLC(目 錄號GKI-4728)管柱分離募醣。Shimadzu HPLC系統由系統 控制器、脫氣器、二元泵、具有樣品冷卻器之自動取樣器 及螢光偵測器組成。 高溫下之穩定性 抗體緩衝液為5.57 mM磷酸二氫鈉、8.69 mM磷酸氫二 鈉、106.69 mM NaCl、1.07 mM檸檬酸鈉、6.45 mM檸檬 酸、66.68 mM甘露糖醇、0.1%(w/v)Tween(pH 5·2);或 10 mM組胺酸、10 mM甲硫胺酸、4%甘露糖醇（pH 5.9)，使用 Amicon超離心過濾器。以適當緩衝液將抗體最終濃度調整 至2 mg/mL。接著將抗體溶液過濾滅菌，且在無菌條件下 製備0.25 mL等分試樣。將等分試樣留置於-80°C、5°C、 25°C或40°C下歷時1、2或3週。在培育期結束時，藉由尺 寸排阻層析及SDS-PAGE分析樣品。 藉由SDS-PAGE在還原性及非還原性條件下分析穩定性 樣品。所用程序與本文所述相同。用膠體藍染色劑 (colloidal blue stain)(Invitrogen 目錄號46-7015, 46-7016)對 凝膠染色隔夜，且用Milli-Q水脫色直至背景透明。接著使 158366.doc -300- 201211252 用 Epson Expression 掃描儀（型號 1680, S/N DASX003641)掃 描經染色凝膠。為了獲得更高靈敏度，使用銀染色套組 (Owl Scientific)對相同凝膠進行銀染色，且使用製造商給 出之推薦程序。 動態掃描螢光測定法 DVD-Ig在10 mM檸檬酸鹽、10 mM磷酸鹽缓衝液，pH 6.0中透析，獲得1 mg/ml之最終濃度。各DVD-Ig重複三 次。對於各樣品，在96孔盤之孔中添加27 μΐ DVD，且與3 Ο μΐ 4倍稀釋之SYPRO橙色染料（Invitrogen)混合。染料以 5000χ之濃度在DMSO中供應，且在水中稀釋至4χ工作濃 度。使盤離心30秒以確保染料及蛋白質皆沈降至孔底部， 且藉由移液管尖端溫和抽吸以確保完全混合。盤接著以黏 著膜密封。 使用即時PCR(Applied Biosciences, 7500 Series)量測螢 光強度隨溫度之改變。盤在約〇.5°C /min之溫度斜率下自 25t加熱至95°C，且使用TAMRA濾光片收集發射螢光。 ^ 數據輸出至Microsoft Excel且針對各DVD-Ig繪製為溫度對 於螢光曲線。溫度記錄圖升至超過基線螢光之溫度註釋為 熔融開始。SYPRO Orange為疏水性染料且較佳結合於未 摺疊蛋白質分子中暴露之疏水性殘基。因此，如螢光增加 所量測之未摺疊溫度之開始為DVD-Ig之熱穩定性的指 示。DVD-Ig之未摺疊溫度可見於表10中。 158366.doc •301· 201211252 表10:如動態掃描螢光測定法所測定之親本抗艘及CDR移 植D VD-Ig構築體之熱穩疋性 親本抗體或DVD-Ig ID N端可變區域(VD) C端可變區域(VD) 熔融開始 mcc) DVD 1244 TNF(序列1) LPA 51.3 DVD1248 TNF(库列5) SOST 54.0 DVD1249 SOST ____ TNF(序列5) 54.3 DVD 1256 TNF(序列6) SOST 56 DVD1257 SOST TNF(序列6) 57 DVD1258 TNF(序列6) NGF 59.5 DVD1259 NGF TNF(序列 6)_ 51.7 DVD 1261 LPA TNF(序列6) 54.7 DVD 1475 TNFC序列5) SOST 49.0 DVD 1476 SOST TNF(序列5) 53.0 DVD1483 TNF(序列6) SOST 52.7 DVD1484 SOST TNF(序列6) 49.3 DVD 1485 ΤΝΠ序列6) NGF 54.7 DVD1488 LPA TNF(序列6) 52.3 DVD1513 TNF(序列1) LPA 50.7 DVD1518 SOST TNF(序列5) 52.7 DVD1525 TNF(厗列6) SOST 55.3 DVD 1526 SOST TNF(序列6) 52.7 DVD 1527 TNFr序列6) NGF 55.7 DVD 1528 NGF TNF(序列6) 47.3 多數DVD-Ig顯示未摺疊溫度>50。此DVD-Ig概況與關於 親本抗體所觀測者類似。 溶解度測定 在15 mM His(pH 6.0)中透析DVD-Ig候選物’隨後在30 K截止值之濃縮離心管（centricon)中濃縮至5〇 μΐ。藉由在 4°C下儲存後無沈澱存在目測確認溶解度，且藉由280 nm 下之UV吸光度量測定量測定。 158366.doc 302 - 201211252 表11 : DVD-Ig構築體之溶解度 親本抗體或 DVD-Ig ID N端可變區域 (VD) C端可變區域 (VD) 溶解度(秩)15mMHis ’ pH 6 外觀 mg/ml DVD 1244 TNF(序列1) LPA 澄清 >62 DVD 1248 TNF(序列5) SOST 澄清 >103 DVD 1249 SOST TNF(序列5) 澄清 >115 DVD 1256 TNF(序列6) SOST 澄清 >95 DVD 1257 SOST TNF(序列6) 澄清 >80 DVD1258 TNF(序列6) NGF 澄清 >125 DVD 1259 NGF TNF(序列6) 澄清 >92 DVD 1261 LPA TNF(序列6) 澄清 >52 DVD 1475 TNF(序列5) SOST ppt 84 DVD 1476 SOST TNF(序列5) 澄清 >78 DVD1483 TNF(序列6) SOST 澄清 >97 DVD 1484 SOST TNF(序列6) 澄清 >78 DVD 1485 TNF(序列6) NGF ppt 26 DVD1488 LPA TNF(序列6) 澄清 >27 DVD1513 TNF(序列1) LPA 澄清 >81 DVD1518 SOST TNF(序列5) 澄清 >21 DVD 1525 TNF(序列6) SOST 澄清 >107 DVD 1526 SOST TNF(序列6) ppt 32 DVD 1527 TNF(序列6) NGF ppt 51 DVD 1528 NGF TNF(序列6) ppt 59
多數DVD-Ig顯示澄清外觀且可濃縮至大於25 mg/ml。此 ❹ DVD-Ig概況與關於親本抗體所觀測者類似。 實例1.2.2.3.C :人類化單株抗體單獨或與化學療法之組合 對人類癌瘤異種移植物生長之功效 人類癌細胞在組織培養燒瓶中活體外生長至99%活力、 85%匯合。對19-25公克之SCID雌性或雄性小鼠（Charles Rivers Labs)在耳朵上做標記且刺毛。接著，在研究第0 天，以0.2 ml 2xl06個人類腫瘤細胞（與基質膠成1:1)皮下 接種至小鼠右側腹。在將平均腫瘤體積為約150至200 mm3 158366.doc -303 - 201211252 之小鼠按尺寸匹配分入至各別小鼠籠中之後開始投與 (IP，每週Q3D)媒劑（PBS)、人類化抗體、及/或化學療 法。在接種後約第10天開始，藉由一對測徑規每週量測腫 瘤兩次，且根據下式計算腫瘤體積：V=LxW2/2(V :體 積，mm3 ; L :長度，mm ; W :寬度，mm)。可見以mAb 單獨或與化學療法組合處理之動物的腫瘤體積相對於僅接 收媒劑或同型對照mAb之動物的腫瘤有所減小。 實例1.2.2.3.D :基於FACS之重定向細胞毒性（rCTL)分析法 藉由陰性選擇增濃管柱（R&D Systems，Minneapolis, MN ;目錄號HTCC-525)自先前經冷凍之分離周邊血單核 細胞（PBMC)分離人類CD3+ T細胞。在塗覆有含10 gg/mL 抗 CD3(OKT-3, eBioscience, Inc.，San Diego, CA)及 2 pg/mL抗 CD28(CD28.2，eBioscience, Inc·, San Diego, CA) 之 D-PBS(Invitrogen, Carlsbad, CA)之燒瓶（vent cap, Corning, Acton, MA)中刺激 T細胞 4天，且在含 30 U/mL IL_ 2(Roche)之完全 RPMI 1 640 培養基（Invitrogen，Carlsbad, CA)(含有 L-麩醯胺酸、55 mM β-ΜΕ、Pen/Strep、10% FBS)中培養。T細胞接著在用於分析前在30 U/mL IL-2中 靜置隔夜。根據製造商說明書以PKH26(Sigma-Aldrich，St. Louis，MO)標記DoHH2或Raji目標細胞。整個rCTL分析法 中使用含有L-麵醯胺酸及10% FBS(Hyclone, Logan, UT)之 RPMI 1640 培養基（無苯酌·，Invitrogen，Carlsbad, CA)。（參 看 Dreier等人，（2002) Int J Cancer 100:690)。 效應T細胞（E)及目標（T)分別以每孔105個細胞及每孔104 158366.doc -304· 201211252 個細胞之最終細胞濃度接種於96孔盤（Costar #3799, Acton, ΜΑ)中，產生10:1之E:T比。DVD-Ig分子經稀釋以獲得濃 度依賴性滴定曲線。培育隔夜之後，使細胞粒化且以D-PBS洗滌一次，隨後再懸浮於含有D-PBS中之0.1% BSA (Invitrogen, Carlsbad, CA)、0.1%疊氮化納及0.5 pg/mL峨 化丙錠（BD)的FACS緩衝液中。在第II型FACS Canto機 (Becton Dickinson, San Jose，CA)上收集 FACS數據且在 Flowjo(Treestar)中分析。計算DVD-Ig處理之樣品中的活 〇 目標百分比除以總目標百分比（對照組，未處理）的值，以 確定比溶胞率百分比。在Prism(Graphpad)中計算IC50。 測試CD3/CD20 DVD-Ig之重導向毒性且以IC50 = 325 pM 顯示活體外腫瘤殺傷。此CD3/CD20 DVD-Ig之序列揭示於 美國專利申請案第20070071675號中。 實例1.4 :產生DVD-Ig 使用如本文所述選擇之兩個親本單株抗體建構能夠結合 兩個抗原之DVD-Ig分子，一個親本抗體針對人類抗原A， 〇 且另一親本抗體針對人類抗原B。 實例1.4.1 :產生具有兩個連接子長度之DVD-Ig 使用含有在234及235處具有突變以消除ADCC/CDC效應 功能之μΐ Fc的恆定區。產生四種不同抗A/B DVD-Ig構築 體：2種具有短連接子且2種具有長連接子，各為兩種不同 區域取向：Va_Vb_C及Vb-Va_C(參看表11)。來源於人類 Cl/Ck或CH1區域之N端序列的連接子序列如下： 對於DVDAB構築體： 158366.doc •305 - 201211252 輕鏈（若抗A具有λ):短連接子：QPKAAP (SEQ ID NO: 15);長連接子：QPKAAPSVTLFPP (SEQ ID NO: 16) 輕鏈（若抗A具有k):短連接子：TVAAP (SEQ ID NO: 13);長連接子：TVAAPSVFIFPP (SEQ ID NO: 14) 重鏈（γΐ):短連接子：ASTKGP (SEQ ID NO: 21);長連 接子：ASTKGPSVFPLAP (SEQ ID NO: 22) 對於DVDBA構築體： 輕鏈（若抗B具有λ):短連接子：QPKAAP (SEQ ID NO: 15);長連接子：QPKAAPSVTLFPP (SEQ ID NO: 16) 輕鏈（若抗B具有k):短連接子：TVAAP (SEQ ID NO: 13);長連接子：TVAAPSVFIFPP (SEQ ID NO: 14) 重鏈（γΐ):短連接子：ASTKGP (SEQ ID NO: 21);長連 接子：ASTKGPSVFPLAP (SEQ ID NO: 22) 重鏈及輕鏈構築體經次選殖至pBOS表現載體中，且表 現於COS細胞中，隨後藉由蛋白質A層析純化。對經純化 物質進行SDS-PAGE及SEC分析。 表12描述用於表現各抗A/B DVD-Ig蛋白的重鏈及輕鏈構 築體。 表12 :抗A/B DVD-Ig構築體
DVD-Ig蛋白質 重鏈構築體 輕鏈構築體 DVDABSL DVDABHC-SL DVDABLC-SL DVDABLL DVDABHC-LL DVDABLC-LL DVDBASL DVDBAHC-SL DVDBALC-SL DVDBALL DVDBAHC-LL DVDBALC-LL 實例1.4.2 : DVDABSL及DVDABLL之DNA構築體分子選殖 158366.doc • 306- 201211252 為了產生重鏈構築體DVDABHC-LL及DVDABHC-SL， 使用特定引子（對於SL/LL構築體而言，3'引子分別含有短/ 長連接子序列）來PCR擴增A抗體之VH區域；同時使用特定 引子（對於SL/LL構築體而言，51引子分別含有短/長連接子 序列）來擴增B抗體之VH區域。兩個PCR反應皆根據標準 PCR技術及程序進行。兩個PCR產物經凝膠純化，且一起 用作用於後續重疊PCR反應之重疊模板。藉由使用標準同 源重組法將重疊PCR產物次選殖至Srf I及Sal I雙重消化 O pBOS-hCyl,z非a哺乳動物表現載體（Abbott)中。 為了產生輕鏈構築體DVDABLC-LL及DVDABLC-SL，使 用特定引子（對於SL/LL構築體而言，3’引子分別含有短/長 連接子序列）來PCR擴增A抗體之VL區域；同時使用特定引 子（對於SL/LL構築體而言，5'引子分別含有短/長連接子序 列）來擴增B抗體之VL區域。兩個PCR反應皆根據標準PCR 技術及程序進行。兩個PCR產物經凝膠純化，且一起用作 用於使用標準PCR條件進行之後續重疊PCR反應之重疊模 〇 板。藉由使用標準同源重組法將重疊PCR產物次選殖至Srf I及Not I雙重消化pBOS-hCk哺乳動物表現載體（Abbott) 中。已使用類似方法產生如下所述之DVDBASL及 DVDBALL： 實例1.4.3 : DVDBASL及DVDBALL之DNA構築體分子選殖 為了產生重鏈構築體DVDB AHC-LL及DVDB AHC-SL， 使用特定引子（對於SL/LL構築體而言，3'引子分別含有短/ 長連接子序列）來PCR擴增抗體B之VH區域；同時使用特定 158366.doc •307- 201211252 引子（對於SL/LL構築體而言，5’引子分別含有短/長連接子 序列）來擴增抗體A之VH區域。兩個PCR反應皆根據標準 PCR技術及程序進行。兩個PCR產物經凝膠純化，且一起 用作用於使用標準PCR條件進行之後續重疊PCR反應之重 疊模板。藉由使用標準同源重組法將重疊PCR產物次選殖 至Srf I及Sal I雙重消化pBOS-hCyl，z非a哺乳動物表現載體 (Abbott)中。 為了產生輕鏈構築體DVDB ALC-LL及DVDB ALC-SL，使 用特定引子（對於SL/LL構築體而言，3·引子分別含有短/長 連接子序列）來PCR擴增抗體B之VL區域；同時使用特定引 子（對於SL/LL構築體而言，5’引子分別含有短/長連接子序 列）來擴增抗體A之VL區域。兩個PCR反應皆根據標準PCR 技術及程序進行。兩個PCR產物經凝膠純化，且一起用作 用於使用標準PCR條件進行之後續重疊pCR反應之重疊模 板。藉由使用標準同源重組法將重疊PCR產物次選殖至Srf I及Not I雙重消化pBOS-hCk哺乳動物表現載體（Abbott) 中〇 實例1.4.4:其他DVD-Ig之建構及表現 實例1.4.4.1:製備0¥0-18載體構築體 可藉由如上文所述製備融合瘤或可藉由定序已知抗體蛋 白質或核酸獲得併入DVD-Ig中之識別特定抗原或其抗原 決定基之特定抗體的親本抗體胺基酸序列。此外，已知序 列可自文獻獲得。可用該等序列藉由使用標準DNA合成或 擴增技術且使用標準重組DNA技術將所要抗體片段組裝至 158366.doc -308- 201211252 表現載體中來合成核酸以供在細胞中表現。 舉例而言，自胺基酸序列測定核酸密碼子且由Blue Heron Biotechnology, Inc.(www.blueheronbio.com)Bothell, WA US A合成寡核苷酸DNA。將寡核苷酸組裝至300-2,000 個鹼基對雙股DNA片段中，選殖至質體載體中且驗證序 列。使用酶處理方法組裝經選殖片段產生全基因且次選殖 至表現載體中。（參看 7,306,914 ; 7,297,541 ; 7,279，159 ; 7,150,969 ； 20080115243 ； 20080102475 ； 20080081379 ； Ο 20080075690 ； 20080063780 ； 20080050506 ； 20080038777 ； 20080022422 ； 20070289033 ； 20070287170 ； 20070254338 20070243194 ； 20070225227 ； 20070207171 ； 20070150976 20070135620 ； 20070128190 ； 20070104722 ； 20070092484 20070037196 ； 20070028321 ； 20060172404 ； 20060162026 20060153791 ; 20030215458 ; 20030157643)。 將pHybE載體之組（美國專利申請案第61/021,282號）用於 親本抗體及DVD-Ig選痩。使用源自pJP183; pHybE-hCgl，z， 〇 非-a V2之VI選殖具有野生型恆定區之抗體及DVD重鏈。 使用源自PJP191; pHybE_hCk V2之V2選殖具有以亙定區之 抗體及DVD輕鏈。使用源自pJP192; pHybE-hCl V2之V3選 殖具有λ忸定區之抗體及DVD輕鏈。使用以λ信號肽及κ恆 定區構造之V4選殖具有λ-κ雜交V區域之DVD輕鏈。使用 以κ信號肽及1恆定區構造之V5選殖具有κ-λ雜交V區域之 DVD 輕健。使用源自 Ρ】Ρ183; PHybE-hCgl，z，非-a V2 之 V7 選殖具有（234,235 AA)突變恆定區之抗體及DVD重鏈。 158366.doc • 309- 201211252 參看表13，許多載體用於選殖親本抗體以及DVD-Ig VH 及VL鏈。 表13:用於選殖親本抗體及DVD-Ig之載體 ID 重鏈載體 輕鏈載體 DVD 1447 VI V2 DVD 1448 VI V2 DVD 1449 VI V2 DVD 1450 VI V2 DVD 1451 VI V2 DVD 1452 VI V2 DVD 1453 VI V2 DVD 1454 VI Y2 DVD 1455 VI V2 DVD 1456 VI V2 DVD1457 VI V2 DVD 1468 VI V2 DVD 1459 VI V2 DVD 1460 VI V2 DVD 1461 VI V2 DVD 1462 VI V2 DVD 1463 VI V2 DVD 1464 VI V2 DVD 1465 VI V2 DVD 1466 VI V2 DVD 1467 VI V2 DVD 1468 VI V2 DVD 1469 VI V2 DVD 1470 Y1 V2 DVD 1471 VI V2 DVD1472 VI V2 DVD 1473 VI V2 DVD 1474 VI V2 DVD 1475 VI V2 DVD 1476 VI V2 DVD 1477 VI V2 DVD 1478 VI V2 DVD 1479 VI V2 DVD 1480 VI V2 158366.doc 310· 201211252
ID 重鏈載體 輕鏈載體 DVD 1481 VI V2 DVD1482 VI V2 DVD 1483 VI V2 DVD 1484 VI V2 DVD 1485 VI V2 DVD 1486 VI V2 DVD 1487 VI V2 DVD1488 VI V2 DVD 1489 VI V2 DVD 1490 VI V2 DVD 1491 VI V2 DVD 1492 VI V2 DVD 1493 VI V2 DVD 1494 VI V2 DVD 1495 VI V2 DVD1496 VI V2 DVD 1497 VI V2 DVD 1498 VI V2 DVD1499 VI V2 DVD 1500 VI V2 DVD1501 VI V2 DVD 1502 VI V2 DVD 1503 VI V2 DVD 1504 VI V2 DVD 1505 VI V2 DVD 1506 VI V2 DVD 1507 VI V2 DVD 1508 VI V2 DVD 1509 VI V2 DVD1510 VI V2 DVD1511 VI V2 DVD1512 VI V2 DVD1513 VI V2 DVD1514 VI V2 DVD1515 VI V2 DVD1516 VI V2 DVD1517 VI V2 DVD1518 VI V2 DVD1519 VI V2 DVD1520 VI V2 DVD 1521 VI V2 158366.doc -311- 201211252 ID 重鏈載體 輕鏈載體 DVD 1522 VI V2 DVD 1523 VI V2 DVD 1524 VI V2 DVD 1525 VI V2 DVD 1526 VI V2 DVD 1527 VI V2 DVD 1528 VI V2 DVD 1529 VI V2 DVD 1530 VI V2 DVD 1531 VI V2 DVD1532 VI V2 DVD 1533 VI V2 DVD 1534 VI V2 DVD 1535 VI V2 DVD1536 VI V2 DVD 1537 VI V2 DVD1538 VI V2 DVD1539 VI V2 DVD 1540 VI V2 DVD 1541 VI V2 DVD 1542 VI V2 DVD 1543 VI V2 DVD 1544 VI V2 DVD 1545 VI V2 DVD 1546 VI V2 DVD 1547 VI V2 DVD 1548 VI Y2 DVD 1549 VI V2 DVD1550 VI V2 DVD1551 VI V2 DVD 1552 VI V2 DVD1553 VI V2 DVD 15 54 VI V2 DVD 1555 VI V2 DVD1556 VI V2 DVD1557 VI V2 DVD1558 VI V2 DVD 15 59 VI V2 DVD 1560 VI V2 DVD1561 VI V2 DVD 1562 VI V2 158366.doc •312· 201211252 ID 重鏈載體 輕鏈載體 DVD 1563 VI V2 DVD1564 VI V2 DVD 1565 VI V2 DVD 1566 VI V2 DVD1567 VI V2 DVD1568 VI V2 DVD 1569 VI V2 DVD 1570 VI V2 DVD1571 VI V2 DVD1572 VI V2 實例1.4.4.2 :在293細胞中轉染及表現 藉由以含有相應輕鏈（LC)及重鏈（HC)核酸之質體短暫共 〇
轉染HEK293(EBNA)細胞來完成參考抗體及DVD-Ig之表 現。在C02培育箱（8% C02、125 RPM、37°C)中振盪之燒 瓶（2 L，Corning目錄號431198)中，以0.5 L規模在 Freestyle 293 培養基（Invitrogen，Carlsbad CA)中繁殖 HEK293(EBNA)細胞。當培養物達到每毫升1 X 1〇6個細胞 之密度時，以轉染複合物轉染細胞。藉由首先在25 ml Freestyle培養基中混合150 gg LC-質體與100 pg HC-質 體，隨後添加500 μΐ PEI儲備溶液[儲備溶液：1 mg/ml(pH 〇 7.0)Linear 25 kDa PEI，Polysciences 目錄號23966]，製備轉 染複合物。藉由反轉混合轉染複合物，且在添加至細胞培 養物中之前在室溫下培育10分鐘。在轉染後，培養物在 C02培育箱（8% C02、125 RPM、37°C )中繼續生長。轉染 24小時後，向培養物補充25 ml 10%胰化蛋白（Tryptone)Nl 溶液（Organo Technie, La Courneuve France 目錄號 19553)。 轉染9天後，藉由離心（16,000 g，10分鐘）自培養物移除細 胞，且將剩餘之上清液無菌過濾（Millipore HV Durapore 158366.doc -313- 201211252
Stericup, 0.45 μιη) ’且置於4°C下直至開始純化步驛。 各抗體或DVD-Ig分別使用含有MabSelect SuRe樹脂（GE Healthcare)之拋棄式 1 ml填料塔（由 〇rochem Technologies 封裝）純化。管柱在PBS中預平衡，接著以1 ml/min裝載所 收獲之〇. 5 5 L樣品隔伏（15小時），同時流過物再循環回到 饋料容器中。在裝載步驟之後，管柱以20 ml PBS洗條， 且藉由以4 ml/min饋入溶離緩衝液[50 mM檸檬酸pH 3.5]並 將溶離份（1 ml)收集於已含有0.2 ml 1.5M Tris pH 8.2之試 管中（使最終pH值達到約6.0)來溶離蛋白質。基於層析彙聚 含有抗體之溶離份’且透析至最終儲備緩衝液[10 mM檸檬 酸、10 mM Na2HP04，pH 6.0]中。透析後，使樣品經〇 22 μηι Steriflip(Millipore)過濾’且根據吸光度測定蛋白質濃 度[Hewlett Packard 8453二極體陣列分光光度計]。對分析 型樣品（還原樣品及未還原樣品）進行SDS-PAGE分析以評 估最終純度’檢驗適當尺寸之重鏈及輕鍵條帶之存在，且 確認無大量游離（例如未複合）輕鏈（在未還原樣品中）存 在。 表14含有親本抗體或DVD-Ig構築體之產量數據，表示 為每公升293細胞中的毫克數。 表14 :親本抗體及DVD-Ig構築體於293細胞中之短暫表現 產量 親本抗體或DVD- N端可變區域 c端可變區域 表現產量(mg/L> IgID (VD) 「 （vm DVD 1447 TNF(序列2) PGE2 0.014 DVD 1448 PGE2 TNF(序列2) 1.06 —~ 158366.doc -314- 201211252 親本抗體或DVD- N端可變區域 C端可變區域 表現產量(mg/L) IgID fVD) (VD) DVD 1453 TNF(序列2) SOST 0.05 DVD1454 SOST TNF(序列2) 0.184 DVD 1459 TNF(序列2) NGF 0 DVD1460 NGF TNF(序列2) 0.24 DVD1465 TNF(序列2) LPA 0 DYD1466 LPA TNF(序列2) 0 DVD1471 TNF(序列1) LPA 0.34 DVD1472 LPA TNF(序列1) 0.66 DVD 1473 TNF(序列5) PGE2 0.14 DVD1474 PGE2 TNF(序列5) 2 DVD 1475 TNF(序列5) SOST 21.4 DVD1476 SOST TNF(序列5) 18.2 DVD1477 TNF(序列5) NGF 3.6 DVD1478 NGF TNF(序列5) 1.32 DVD 1479 TNF(序列5) LPA 1.6 DVD 1480 LPA TNF(序列5) 6 DVD 1481 TNF(序列6) PGE2 3 DVD1482 PGE2 TNF(序列6) 5.6 DVD1483 TOF(序列6) SOST 21.8 DVD1484 SOST TNF(序列6) 19.8 DVD 1485 TNF(序列6) NGF 8.4 DVD 1486 NGF TNF(序列6) 2.1 DVD1487 TNF(序列6) LPA 2.6 DVD1488 LPA TNF(序列6) 8.6 DVD1489 TNF(序列2) PGE2 0 DVD1490 PGE2 TNF(序列2) 0.6 DVD 1495 TNF(序列2) SOST 2.2 DVD 1496 SOST TNF(序列2) 5 DVD1501 TNF(序列2) NGF 0.056 DVD1502 NGF TNF(序列2) 2.4 DVD 1507 TNF(序列2) LPA 0.05 DVD 1508 LPA TNF(序列2) 3.28 DVD1513 TOF(序列1) LPA 17.72 DVD1514 LPA TNF(序列1) 0.8 DVD1515 TNF(序列5) PGE2 1 DYD1516 PGE2 TNF(序列5) 4.98 DVD1517 TNF(序列5) SOST 3.54 DVD1518 SOST TNF(序列5) 8.78 DVD1519 TNF(序列5) NGF 0.4 DVD 1520 NGF TNF(序列5) 0.86 DVD 1521 TNF(序列5) LPA 0 158366.doc -315- 201211252 親本抗體或DVD- N端可變區 表現產量(mg/L) IgID (VD) (VD1___ DVD 1522 LPA ---M— TNF(^^J5)____一~ 1.34 2 DVD1523 TNF(序列6) PGE2 __—— DVD1524 PGE2 2.56 DVD1525 TNF(序列6) SOST -- 23.8 DVD 1526 SOST TNF(^?iJ6)_____ 14.6 DVD1527 TNF(序列6) NGF __—- 11 DVD1528 NGF TNF(序列 一- 11.6 DVD1529 TNF(序列6) LPA ——i 5.2 DVD1530 LPA TNF(序歹_ 5.2 實例1.4.5 : A/B DVD-Ig之表徵及前導選擇 在Biacore上針對蛋白質A及蛋白質B分析抗A/B DVD-Ig 之結合親和力。藉由Biacore上之多次結合研九檢驗DVD-Ig之四價特性。同時’分別藉由如本文所述之生物分析法 評估DVD-Ig針對蛋白質A及蛋白質B之中和效能。選擇最 佳保留初始親本mAb之親和力及效能之DVD-Ig分子用於如 本文所述對各mAb的深入物理化學及生物分析（大鼠ρκ)表 徵。基於分析之集合，使最終前導DVI>Ig進入CH0穩定 細胞株形成中，且來源於CHO之物質用於石蟹獼猴中之穩 定性、藥物動力學及功效研究，及預調配活性。 實例2 :雙可變區域免疫球蛋白（DVD-Ig)之產生及表徵 根據實例1·4.4.1藉由合成編碼DVD-Ig可變重鏈及DVD-Ig可變輕鏈序列之聚核苷酸片段且將片段選殖至pHybC-D2 載體中，產生使用具有已知胺基酸序列之親本抗體的雙可 變區域免疫球蛋白（DVD-Ig)。如實例1,4.4.2中所述將 DVD-Ig構築體選殖至且表現於293細胞中。如所指示，根 據實例1 · 1.1及1.1.2所述之方法確定功能特徵。下文提供本 文揭示之DVD-Ig之DVD-Ig VH及VL鍵。 158366.doc -316- 201211252 實例2.1 :產生具有連接子組2之TNF(序列2)及NGF DVD-Ig 表15
SEQ Π) NO DVD可變區 域名稱 外可變區域 名稱 内可變區域 名稱 序列 12345678901234567890123456789012345 52 DVD1459H AB213VH AB020VH QVQLKESGPGLVAPSQSLSITCTVSGFSLTDYGVN WVRQPPGKGLEWLGMIWGDGSTDYDSTLKSRLSIS KDNSKSQIFLKMNSLQTDDTARYYCAREWHHGPVA YWGQGTLVTVSAASTKGPQVQLQESGPGLVKPSET LSLTCTVSGFSLIGYDLNWIRQPPGKGLEWIGIIW GDGTTDYNSAVKSRVTISKDTSKNQFSLKLSSVTA ADTAVYYCARGGYWYATSYYFDYWGQGTLVTVSS 53 DVD1459L AB213VL AB020VL DIVMTQSHKFMSTTVGDRVSITCKASQAVSSAVAW YQQKPGQSPKLLIYWASTRHTGVPDRFTGSGSVTD FTLTIHNLQAEDLALYYCQQHYSTPFTFGSGTKLE IKRTVAAPSVFIFPPDIQMTQSPSSLSASVGDRVT ITCRASQSISNNLNWYQQKPGKAPKLLIYYTSRFH SGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQ EHTLPYTFGQGTKLEIKR 54 DVD1460H AB020VH AB213VH QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGFSLIGYDLN WIRQPPGKGLEWIGIIWGDGTTDYNSAVKSRVTIS KDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGGYWYATS YYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPQVQLKESGPGLVA PSQSLSITCTVSGFSLTDYGVNWVRQPPGKGLEWL GMIWGDGSTDYDSTLKSRLSISKDNSKSQIFLKMN SLQTDDTARYYCAREWHHGPVAYWGQGTLVTVSA 55 DVD1460L AB020VL AB213VL DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISNNLNW YQQKPGKAPKLLIYYTSRFHSGVPSRFSGSGSGTD FTFTISSLQPEDIATYYCQQEHTLPYTFGQGTKLE IKRTVAAPSVFIFPPDIVMTQSHKFMSTTVGDRVS ITCKASQAVSSAVAWYQQKPGQSPKLLIYWASTRH TGVPDRFTGSGSVTDFTLTIHNLQAEDLALYYCQQ HYSTPFTFGSGTKLEIKR
〇 317· 15S366.doc 201211252 實例2·2 :產生具有連接子組2之TNF(序列3)及NGF DVD-Ig 表16
SEQ m NO DVD可變區 域名稱 外可變區域 名稱 内可變區域 名稱 序列 12345678901234567890123456789012345 56 DVD1461H AB214VH AB020VH EVKLEESGGGLVQPGGSMKLSCVASGFIFSNHWMN WVRQSPEKGLEWVAEIRSKSINSATHYAESVKGRF TISRDDSKSAVYLQMTDLRTEDTGVYYCSRNYYGS TYDYWGQGTTLTVSSASTKGPQVQLQESGPGLVKP SETLSLTCTVSGFSLIGYDLNWIRQPPGKGLEWIG IIWGDGTTDYNSAVKSRVTISKDTSKNQFSLKLSS VTAADTAVYYCARGGYWYATSYYFDYWGQGTLVTV SS 57 DVD1461L AB214YL AB020VL DILLTQSPAILSVSPGERVSFSCRASQFVGSSIHW YQQRTNGSPRLLIKYASESMSG工PSRFSGSGSGTD FTLSINTVESEDIADYYCQESHSWPFTFGSGTNLE VKRTVAAPSVFIFPPDIQMTQSPSSLSASVGDRVT ITCRASQSISNNLNWYQQKPGKAPKLLIYYTSRFH SGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQ EHTLPYTFGQGTKLEIKR 58 DVD1462H AB020VH AB214VH QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGFSLIGYDLN WIRQPPGKGLEWIGIIWGDGTTDYNSAVKSRVTIS KDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGGYWYATS YYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPEVKLEESGGGLVQ PGGSMKLSCVASGFIFSNHWMNWVRQSPEKGLEWV AEIRSKSINSATHYAESVKGRFTISRDDSKSAVYL QMTDLRTEDTGVYYCSRNYYGSTYDYWGQGTTLTV SS 59 DVD1462L AB020VL AB214VL DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISNNLNW YQQKPGKAPKLLIYYTSRFHSGVPSRFSGSGSGTD FTFTISSLQPEDIATYYCQQEHTLPYTFGQGTKLE 工 KRTVAAPSVFIFPPDILLTQS PAILSVS PGERVS FSCRASQFVGSSIHWYQQRTNGSPRLLIKYASESM SGIPSRFSGSGSGTDFTLSINTVESEDIADYYCQE SHSWPFTFGSGTNLEVKR 318- 158366.doc 201211252 實例2.23 :產生具有連接子組2之TNF(序列4)及NGF DVD-Ig 表17
❹
SEQ Π) NO DVD可變區 域名稱 ^卜可變區域 名稱 内可變區域 名稱 序列 12345678901234567890123456789012345 60 DVD1463H AB215VH AB020VH QVQLVESGGGWQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMH WVRQAPGNGLEWVAFMSYDGSNKYAKDSVKGRFTI SRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRGIAAG GNYYYYGMDWGQGTTVTVSSASTKGPQVQLQESG PGLVKPSETLSLTCTVSGFSLIGYDLNWIRQPPGK GLEWIGIIWGDGTTDYNSAVKSRVTISKDTSKNQF SLKLSSVTAADTAVYYCARGGYWYATSYYFDYWGQ GTLVTVSS 61 DVD1463L AB215VL AB020VL EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVYSYLAW YQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTD FTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWPPFTFGPGTKV DIKRTVAAPSVFXFPPDIQMTQSPSSLSASVGDRV TITCRASQSISNNLNWYQQKPGKAPKLLIYYTSRF HSGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQ QEHTLPYTFGQGTKLEIKR 62 DVD1464H AB020VH AB215VH QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGFSLIGYDLN WIRQPPGKGLEWIGIIWGDGTTDYNSAVKSRVTIS KDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGGYWYATS YYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPQVQLVESGGGVVQ PGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGNGLEWV AFMSYDGSNKYAKDSVKGRFTISRD1SISKNTLYLQM NSLRAEDTAVYYCARDRGIAAGGNYYYYGMDVWGQ GTTVTVSS 63 DVD1464L AB020VL AB215VL DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISNNLNW YQQKPGKAPKLLIYYTSRFHSGVPSRFSGSGSGTD FTFTISSLQPEDIATYYCQQEHTLPYTFGQGTKLE 工KRTVAAPSVFIFPPEIVLTQSPATLSLSPGERAT LSCRASQSVYSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRA TGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQ RSNWPPFTFGPGTKVDIKR 319- 158366.doc 201211252 實例2.4 :產生具有連接子組2之TNF(序列5)及NGF DVD-Ig 表18
SEQ ID NO DVD可變區 域名稱 外可變區域 名稱 内可變區域 名稱 序列 12345678901234567890123456789012345 64 DVD1477H AB217VH AB020VH QVQLVESGGGWQPGRSLRLSCAASGFTFSSYDMH WVRQAPGKGLEWVAVIWS DGSIKY YADS VKGRFTI SRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREVESAMG GFYYNGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPQVQLQESGP GLVKPSETLSLTCTVSGFSLIGYDLNWIRQPPGKG LEWIGIIWGDGTTDYNSAVKSRVTISKDTSKNQFS LKLSSVTAADTAVYYCARGGYWYATSYYFDYWGQG TLVTVSS 65 DVD1477L AB217VL AB020VL DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRIDLGW YQQKPGKAPKRLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTE FIFTISSLQPEDFASYYCLQHKSYPLTFGGGTKVE IKRTVAAPSVFIFPPDIQMTQSPSSLSASVGDRVT ITCRASQSISNNLNWYQQKPGKAPKLLIYYTSRFH SGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQ EHTLPYTFGQGTKLEIKR 66 DVD1478H AB020VH AB217VH QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGFSLIGYDLN WIRQPPGKGLEWIGIIWGDGTTDYNSAVKSRVTIS KDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGGYWYATS YYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPQVQLVESGGGVVQ PGRSLRLSCAASGFTFSSYDMHWVRQAPGKGLEWV AVIWSDGSIKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQM NSLRAEDTAVYYCAREVESAMGGFYYNGMDVWGQG TTVTVSS 67 DVD1478L AB020VL AB217VL DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISNNLNW YQQKPGKAPKLLIYYTSRFHSGVPSRFSGSGSGTD FTFTISSLQPEDIATYYCQQEHTLPYTFGQGTKLE IKRTVAAPSVFIFPPDIQMTQSPSSLSASVGDRVT ITCRASQGIRIDLGWYQQKPGKAPKRLIYAASTLQ SGVPSRFSGSGSGTEFIFTISSLQPEDFASYYCLQ HKSYPLTFGGGTKVEIKR -320 - 158366.doc 201211252 實例2.5 :產生具有連接子組2之TNF(序列6)及NGF-Ig 表19
SEQ Π) NO DVD可變區 域名稱 外可變區 域名稱 内可變區域 名稱 序列 12345678901234567890123456789012345 68 DVD1485H AB218VH AB020VH EVQLVESGGGLIQPGGSLRLSCAASGFTVSRNYMS WVRQAPGKGLEWVSVIYS G DRTYYADSVKGRFTIS RDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGEGGFDYW GQGTLVTVSSASTKGPQVQLQESGPGLVKPSETLS LTCTVSGFSLIGYDLNWIRQPPGKGLEWIGIIWGD GTTDYNSAVKSRVTISKDTSKNQFSLKLSSVTAAD TAVYYCARGGYWYATSYYFDYWGQGTLVTVSS 69 DVD1485L AB218VL AB020VL EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAW YQQKPGQAPRLLIHGASIRATGLPARFSGSGSGTE FTLTISSLQSEDFAVYYCQQYNYWWTF'GQGTKVEI KRTVAAPSVFIFPPDIQMTQSPSSLSASVGDRVTI TCRASQSISNNLNWYQQKPGKAPKLLIYYTSRFHS GVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQE HTLPYTFGQGTKLEIKR 70 DVD1486H AB020VH AB218VH QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGFSLIGYDLN WIRQPPGKGLEWIGIIWGDGTTDYNSAVKSRVTIS KDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGGYWYATS YYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPEVQLVESGGGLIQ PGGSLRLSCAASGFTVSRNYMSWVRQAPGKGLEWV SVIYSGDRTYYADSVKGRPTISRDNSKNTLYLQMN SLRAEDTAVYYCARGEGGFDYWGQGTLVTVSS 71 DVD1486L AB020VL AB218VL DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISNNLNW YQQKPGKAPKLLIYYTSRFHSGVPSRFSGSGSGTD FTFTISSLQPEDIATYYCQQEHTLPYTFGQGTKLE IKRTVAAPSVFIFPPEIVMTQSPATLSVSPGERAT LSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIHGASIRA TGLPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQ YNYWWT FGQGTKVEIKR
〇 321 - 158366.doc 201211252 實例2.6 :產生具有連接子組2之TNF(序列2)及SOST DVD-Ig 表20
SEQ Π) NO DVD可變區 域名稱 外可變區域 名稱 内可變區域 名稱 序列 12345678901234567890123456789012345 72 DVD1453H AB213VH AB022VH QVQLKESGPGLVAPSQSLSITCTVSGFSLTDYGVN WVRQPPGKGLEWLGMIWGDGSTDYDSTLKSRLSIS KDNSKSQIFLKMNSLQTDDTARYYCAREWHHGPVA YWGQGTLVTVSAASTKGPEVQLQQSGPELVTPGAS VKISCKASGYTFTDHYMSWVKQSHGKSLEWIGDIN PYSGETTYNQKFKGTATLTVDKSSSIAYMEIRGLT SEDSAVYYCARDDYDASPFAYWGQGTLVTVSA 73 DYD1453L AB213VL AB022VL DIVMTQSHKFMSTTVGDRVSITCKASQAVSSAVAW YQQKPGQSPKLLIYWASTRHTGVPDRFTGSGSVTD FTLTIHNLQAEDLALYYCQQHYSTPFTFGSGTKLE IKRTVAAPSVFIFPPDVQMIQSPSSLSASLGDIVT MTCQASQGTSINLNWFQQKPGKAPKLLIYGSSNLE DGVPSRFSGSRYGTDFTLTISSLEDEDLATYFCLQ HSYLPYTFGGGTKLEIKR 74 DVD1454H AB022VH AB213VH EVQLQQSGPELVTPGASVKISCKASGYTFTDHYMS WVKQSHGKSLEWIGDINPYSGETTYNQKFKGTATL TVDKSSSIAYMEIRGLTSEDSAVYYCARDDYDASP FAYWGQGTLVTVSAASTKGPQVQLKESGPGLVAPS QSLSITCTVSGFSLTDYGVNWVRQPPGKGLEWLGM IWGDGSTDYDSTLKSRLSISKDNSKSQIFLKMNSL QTDDTARYYCAREWHHGPVAYWGQGTLVTVSA 75 DVD1454L AB022VL AB213VL DVQMIQSPSSLSASLGDIVTMTCQASQGTSINLNW FQQKPGKAPKLLIYGSSNLEDGVPSRFSGSRYGTD FTLTISSLEDEDLATYFCLQHSYLPYTFGGGTKLE IKRTVAAPSVFIFPPDIVMTQSHKFMSTTVGDRVS 工TCKASQAVSSAVAWYQQKPGQSPKLLIYWASTRH TGVPDRFTGSGSVTDFTLTIHNLQAEDLALYYCQQ HYSTPFTFGSGTKLEIKR -322· 158366.doc 201211252 實例2.7 :產生具有連接子組2之TNF(序列3)及SOST DVD-Ig 表21
SEQ Π) NO DVD可變 區域名稱 外可變區域 名稱 内可變區 域名稱 序列 12345678901234567890123456789012345 76 DVD1455H AB214VH AB022VH EVKLEESGGGLVQPGGSMKLSCVASGFIFSNHWMN WVRQSPEKGLEWVAEIRSKSINSATHYAESVKGRF TISRDDSKSAVYLQMTDLRTEDTGVYYCSRNYYGS TYDYWGQGTTLTVSSASTKGPEVQLQQSGPELVTP GASVKISCKASGYTFTDHYMSWVKQSHGKSLEWIG DINPYSGETTYNQKFKGTATLTVDKSSSIAYMEIR GLTSEDSAVYYCARDDYDASPFAYWGQGTLVTVSA 77 DVD1455L AB214VL AB022VL DILLTQSPAILSVSPGERVSFSCRASQFVGSSIHW YQQRTNGSPRLLIKYASESMSGIPSRFSGSGSGTD FTLSINTVESEDIADYYCQESHSWPFTFGSGTNLE VKRTVAAPSVFIFPPDVQMIQSPSSLSASLGDIVT MTCQASQGTSINLNWFQQKPGKAPKLLIYGSSNLE DGVPSRFSGSRYGTDFTLTISSLEDEDLATYFCLQ HSYLPYTFGGGTKLEIKR 78 DVD1456H AB022VH AB214VH EVQLQQSGPELVTPGASVKISCKASGYTFTDHYMS WVKQSHGKSLEWIGDINPYSGETTYNQKFKGTATL TVDKSSSIAYMEIRGLTSEDSAVYYCARDDYDASP FAYWGQGTLVTVSAASTKGPEVKLEESGGGLVQPG GSMKLSCVASGFIFSNHWMNWVRQSPEKGLEWVAE IRSKSINSATHYAESVKGRFTISRDDSKSAVYLQM TDLRTEDTGVYYCSRNYYGSTYDYWGQGTTLTVSS 79 DVD1456L AB022VL AB214VL DVQMIQSPSSLSASLGDIVTMTCQASQGTSINLNW FQQKPGKAPKLLIYGSSNLEDGVPSRFSGSRYGTD FTLTISSLEDEDLATYFCLQHSYLPYTFGGGTKLE IKRTVAAPSVFIFPPDILLTQSPAILSVSPGERVS FSCRASQFVGSSIHWYQQRTNGSPRLLIKYASESM SGIPSRFSGSGSGTDFTLSINTVESEDIADYYCQE SHSWPFTFGSGTNLEVKR
❹ 323- 158366.doc 201211252 實例2.8 :產生具有連接子組2之TNF(序列4)及SOST DVD-Ig 表22
SEQ Π> NO DVD可變區 域名稱 外可變區 域名稱 内可變區 域名稱 序列 12345678901234567890123456789012345 80 DVD1457H AB215VH AB022VH QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMH WVRQAPGNGLEWVAFMSYDGSNKYAKDSVKGRFTI SRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRG 工 AAG GNYYYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPEVQLQQSG PELVTPGASVKISCKASGYTFTDHYMSWVKQSHGK SLEWIGDINPYSGETTYNQKFKGTATLTVDKSSSI AYMEIRGLTSEDSAVYYCARDDYDASPFAYWGQGT LVTVSA 81 DVD1457L AB215VL AB022VL EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVYSYLAW YQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTD FTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWPPFTFGPGTKV DIKRTVAAPSVFIFPPDVQMIQSPSSLSASLGDIV TMTCQASQGTSINLNWFQQKPGKAPKLLIYGSSNL EDGVPSRFSGSRYGTDFTLTISSLEDEDLATYFCL QHSYLPYTFGGGTKLEIKR 82 DVD1458H AB022VH AB215VH EVQLQQSGPELVTPGASVKISCKASGYTFTDHYMS WVKQSHGKSLEWIGDINPYSGETTYNQKFKGTATL TVDKSSSIAYMEIRGLTSEDSAVYYCARDDYDASP FAYWGQGTLVTVSAASTKGPQVQLVESGGGWQPG RSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGNGLEWVAF MSYDGSNKYAKDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNS LRAEDTAVYYCARDRGIAAGGNYYYYGMDVWGQGT TVTVSS 83 DVD1458L AB022VL AB215YL DVQMIQSPSSLSASLGDIVTMTCQASQGTSINLNW FQQKPGKAPKLLIYGSSNLEDGVPSRFSGSRYGTD FTLTISSLEDEDLATYFCLQHSYLPYTFGGGTKLE IKRTVAAPSVFIFPPEIVLTQSPATLSLSPGERAT LSCRASQSVYSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRA TGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQ RSNWPPFTFGPGTKVDIKR •324, 158366.doc 201211252 實例2·9 :產生具有連接子組2之TNF(序列5)及SOST DVD-Ig 表23
〇
SEQ Π) NO DVD可變區 域名稱 外可變區 域名稱 内可變區 域名稱 序列 12345678901234567890123456789012345 84 DVD1475H AB217VH AB022VH QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYDMH WVRQAPGKGLEWVAVIWS DGSIKYYADSVKGRFTI SRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREVEST^MG GFYYNGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPEVQLQQSGP ELVTPGASVKISCKASGYTFTDHYMSWVKQSHGKS LEWIGDINPYSGETTYNQKFKGTATLTVDKSSSIA YMEIRGLTSEDSAVYYCARDDYDASPFAYWGQGTL VTVSA 85 DVD1475L AB217VL AB022VL DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRIDLGW YQQKPGKAPKRLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTE FIFTISSLQPEDFASYYCLQHKSYPLTFGGGTKVE IKRTVAAPSVFIFPPDVQMIQSPSSLSASLGDIVT MTCQASQGTSINLNWFQQKPGKAPKLLIYGSSNLE DGVPSRFSGSRYGTDFTLTISSLEDEDLATYFCLQ HSYLPYTFGGGTKLEIKR 86 DVD1476H AB022VH AB217VH EVQLQQSGPELVTPGASVKISCKASGYTFTDHYMS WVKQSHGKSLEWIGDINPYSGETTYNQKFKGTATL TVDKSSSIAYMEIRGLTSEDSAVYYCARDDYDASP FAYWGQGTLVTVSAASTKGPQVQLVESGGGWQPG RSLRLSCAASGFTFSSYDMHWVRQAPGKGLEWVAV IWSDGSIKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNS LRAEDTAVYYCAREVESAMGGFYYNGMDVWGQGTT VTVSS 87 DVD1476L AB022VL AB217VL DVQMIQSPSSLSASLGDIVTMTCQASQGTSINLNW FQQKPGKAPKLLIYGSSNLEDGVPSRFSGSRYGTD FTLTISSLEDEDLATYFCLQHSYLPYTFGGGTKLE IKRTVAAPSVFIFPPDIQMTQSPSSLSASVGDRVT ITCRASQGIRIDLGWYQQKPGKAPKRL工YAASTLQ SGVPSRFSGSGSGTEFIFTISSLQPEDFASYYCLQ HKSYPLTFGGGTKVEIKR 325- 158366.doc 201211252 實例2.10 :產生具有連接子組2之TNF(序列6)及SOST DVD-Ig 表24
SEQ m NO DVD可變區 域名稱 外可變區 域名稱 内可變區 域名稱 序列 12345678901234567890123456789012345 88 DVD1483H AB218VH AB022VH EVQLVESGGGLIQPGGSLRLSCAASGFTVSRNYMS WVRQAPGKGLEWVSVIYSGDRTYYADSVKGRFTIS RDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGEGGFDYW GQGTLVTVSSASTKGPEVQLQQSGPELVTPGASVK ISCKASGYTFTDHYMSWVKQSHGKSLEWIGDINPY SGETTYNQKFKGTATLTVDKSSSIAYMEIRGLTSE DSAVYYCARDDYDASPFAYWGQGTLVTVSA 89 DVD1483L AB218VL AB022VL EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAW YQQKPGQAPRLLIHGASIRATGLPARFSGSGSGTE FTLTISSLQSEDFAVYYCQQYNYWWTFGQGTKVEI KRTVAAPSVFIFPPDVQMIQSPSSLSASLGDIVTM TCQASQGTSINLNWFQQKPGKAPKLLIYGSSNLED GVPSRFSGSRYGTDFTLTISSLEDEDLATYFCLQH SYLPYTFGGGTKLEIKR 90 DVD1484H AB022VH AB218VH EVQLQQSGPELVTPGASVKISCKASGYTFTDHYMS WVKQSHGKSLEWIGDINPYSGETTYNQKFKGTATL TVDKSSSIAYMEIRGLTSEDSAVYYCARDDYDASP FAYWGQGTLVTVSAASTKGPEVQLVESGGGLIQPG GSLRLSCAASGFTVSRNYMSWVRQAPGKGLEWVSV IYSGDRTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSL RAEDTAVYYCARGEGGFDYWGQGTLVTVSS 91 DVD1484L AB022VL AB218VL DVQMIQSPSSLSASLGDIVTMTCQASQGTSINLNW FQQKPGKAPKLLIYGSSNLEDGVPSRFSGSRYGTD FTLTISSLEDEDLATYFCLQHSYLPYTFGGGTKLE IKRTVAAPSVFIFPPEIVMTQSPATLSVSPGERAT LSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIHGASIRA TGLPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQ YNYWWT FGQGTKVEIKR 326- 158366.doc 201211252 實例2.11 :產生具有連接子組2之TNF(序列2)及PGE2 表25
SEQ Π) NO DVD可變區 域名稱 外可變區 域名稱 内可變區域 名稱 序列 1234567890123456789012345678901234 92 DVD1447H AB213VH AB048VH QVQLKESGPGLVAPSQSLSITCTVSGFSLTDYGV NWVRQPPGKGLEWLGMIWGDGSTDYDSTLKSRLS ISKDNSKSQIFLKMNSLQTDDTARYYCAREWHHG PVAYWGQGTLVTVSAASTKGPEVQLVQSGAEVKK PGASVKVSCKASGYTFTKYWLGWVRQAPGQGLEW MGDIYPGYDYTHYNEKFKDRVTLTTDTSTSTAYM ELRSLRSDDTAVYYCARSDGSSTYWGQGTLVTVS S 93 DVD1447L AB213VL AB048VL DIVMTQSHKFMSTTVGDRVSITCKASQAVSSAVA WYQQKPGQSPKLLIYWASTRHTGVPDRFTGSGSV TDFTLTIHNLQAEDLALYYCQQHYSTPFTFGSGT KLEIKRTVAAPSVFIFPPDVLMTQTPLSLPVTPG EPASISCTSSQNIVHSNGNTYLEWYLQKPGQSPQ LLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVE AEDVGVYYCFQVSHVPYTFGGGTKVEIKR 94 DVD1448H AB048VH AB213VH EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTKYWL GWVRQAPGQGLEWMGDIYPGYDYTHYNEKFKDRV TLTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARSDGS STYWGQGTLVTVSSASTKGPQVQLKESGPGLVAP SQSLSITCTVSGFSLTDYGVNWVRQPPGKGLEWL GMIWGDGSTDYDSTLKSRLSISKDNSKSQIFLKM NSLQTDDTARYYCAREWHHGPVAYWGQGTLVTVS A 95 DVD1448L AB048VL AB213VL DVLMTQTPLSLPVTPGEPASISCTSSQNIVHSNG NTYLEWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFS GSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQVSHVPYT FGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPDIVMTQSHKFM STTVGDRVSITCKASQAVSSAVAWYQQKPGQSPK LLIYWASTRHTGVPDRFTGSGSVTDFTLTIHNLQ AEDLALYYCQQHYSTPFTFGSGTKLEIKR
327- 158366.doc 201211252 實例2.12 :產生具有連接子組2之TNF(序列3)及PGE2 DVD-Ig 表26
SEQ Π) NO DVD可變區 域名稱 外可變區域 名稱 内可變區 域名稱 序列 12345678901234567890123456789012345 96 DVD1449H AB214VH AB048VH EVKLEESGGGLVQPGGSMKLSCVASGFIFSNHWMN WVRQSPEKGLEWVAEIRSKSINSATHYAESVKGRF TISRDDSKSAVYLQMTDLRTEDTGVYYCSRNYYGS TYDYWGQGTTLTVSSASTKGPEVQLVQSGAEVKKP GASVKVSCKASGYTFTKYWLGWVRQAPGQGLEWMG DIYPGYDYTHYNEKFKDRVTLTTDTSTSTAYMELR SLRSDDTAVYYCARSDGSSTYWGQGTLVTVSS 97 DVD1449L AB214VL AB048VL DILLTQSPAILSVSPGERVSFSCRASQFVGSSIHW YQQRTNGSPRLLIKYASESMSGIPSRFSGSGSGTD FTLSINTVESEDIADYYCQESHSWPPTFGSGTNLE VKRTVAAPSVFIFPPDVLMTQTPLSLPVTPGEPAS ISCTSSQNIVHSNGNTYLEWYLQKPGQSPQLLIYK VSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGV YYCFQVSHVPYTFGGGTKVEIKR 98 DVD1450H AB048VH AB214VH EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTKYWLG WVRQAPGQGLEWMGDIYPGYDYTHYNEKFKDRVTL TTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARSDGSSTY WGQGTLVTVSSASTKGPEVKLEESGGGLVQPGGSM KLSCVASGFIFSNHWMNWVRQSPEKGLEWVAEIRS KSINSATHYAESVKGRFTISRDDSKSAVYLQMTDL RTEDTGVYYCSRNYYGSTYDYWGQGTTLTVSS 99 DVD1450L AB048VL AB214VL DVLMTQTPLSLPVTPGEPASISCTSSQNIVHSNGN TYLEWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGS GSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQVSHVPYTFGG GTKVE 工 KRTVAAPSVFIFPPDILLTQSPAILSVSP GERVSFSCRASQFVGSSIHWYQQRTNGSPRLLIKY ASESMSGIPSRFSGSGSGTDFTLSINTVESEDIAD YYCQESHSWPFTFGSGTNLEVKR -328 - 158366.doc 201211252 實例2.13 :產生具有連接子組2之TNF(序列4)及PGE2 DVD-Ig 表27
SEQ Π) NO DVD可變區 域名稱 外可變區域 名稱 内可變區 域名稱 序列 12345678901234567890123456789012345 100 DVD1451H AB215VH AB048VH QVQLVESGGGWQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMH WVRQAPGNGLEWVAFMSYDGSNKYAKDSVKGRFTI SRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRGIAAG GNYYYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPEVQLVQSG AEVKKPGASVKVSCKASGYTFTKYWLGWVRQAPGQ GLEWMGDIYPGYDYTHYNEKFKDRVTLTTDTSTST AYMELRSLRSDDTAVYYCARSDGSSTYWGQGTLVT VSS 101 DVD1451L AB215VL AB048VL EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVYSYLAW YQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTD FTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWPPFTFGPGTKV DIKRTVAAPSVFIFPPDVLMTQTPLSLPVTPGEPA SISCTSSQN工VHSNGNTYLEWYLQKPGQSPQLLIY KVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVG VYYCFQVSHVPYTFGGGTKVEIKR 102 DVD1452H AB048VH AB215VH EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTKYWLG WVRQAPGQGLEWMGDIYPGYDYTHYNEKFKDRVTL TTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARSDGSSTY WGQGTLVTVSSASTKGPQVQLVESGGGVVQPGRSL RLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGNGLEWVAFMSY DGSNKYAKDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRA EDTAVYYCARDRGIAAGGNYYYYGMDVWGQGTTVT VSS 103 DVD1452L AB048VL AB215VL DVLMTQTPLSLPVTPGEPASISCTSSQNIVHSNGN TYLEWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGS GSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQVSHVPYTFGG GTKVEIKRTVAAPSVFIFPPEIVLTQSPATLSLSP GERATLSCRASQSVYSYLAWYQQKPGQAPRLLIYD ASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAV YYCQQRSNWPPFTFGPGTKVDIKR 〇 〇 329- 158366.doc 201211252 實例2.14 :產生具有連接子組2之TNF(序列5)及PGE2 DVD-Ig 表28
SEQ Π) NO DVD可變區 域名稱 外可變區 域名稱 内可變區 域名稱 序列 12345678901234567890123456789012345 104 DVD1473H AB217VH AB048VH QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYDMH WVRQAPGKGLEWVAVIWS DGSIKY YADS VKGRFTI SRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREVESAMG GFYYNGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPEVQLVQSGA EVKKPGASVKVSCKASGYTFTKYWLGWVRQAPGQG LEWMGDIYPGYDYTHYNEKFKDRVTLTTDTSTSTA YMELRSLRSDDTAVYYCARSDGSSTYWGQGTLVTV SS 105 DVD1473L AB217VL AB048VL DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRIDLGW YQQKPGKAPKRLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTE FIFTISSLQPEDFASYYCLQHKSYPLTFGGGTKVE IKRTVAAPSVFIFPPDVLMTQTPLSLPVTPGEPAS ISCTSSQNIVHSNGNTYLEWYLQKPGQSPQLLIYK VSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGV YYCFQVSHVPYTFGGGTKVEIKR 106 DVD1474H AB048VH AB217VH EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTKYWLG WVRQAPGQGLEWMGDIYPGYDYTHYNEKFKDRVTL TTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARSDGSSTY WGQGTLVTVSSASTKGPQVQLVESGGGWQPGRSL RLSCAASGFTFSSYDMHWVRQAPGKGLEWVAVIWS DGSIKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRA EDTAVYYCAREVESAMGGFYYNGMDVWGQGTTVTV SS 107 DVD1474L AB048VL AB217YL DVLMTQTPLSLPVTPGEPASISCTSSQNIVHSNGN TYLEWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGS GSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQVSHVPYTFGG GTKVEIKRTVAAPSVFIFPPDIQMTQSPSSLSASV GDRVTITCRASQGIRIDLGWYQQKPGKAPKRLIYA ASTLQSGVPSRFSGSGSGTEFIFTISSLQPEDFAS YYCLQHKSYPLTFGGGTKVEIKR •330· 158366.doc 201211252 實例2·15 :產生具有連接子組2之TNF(序列6)及PGE2 DVD-Ig 表29
SEQ m NO DVD可變區 域名稱 外可變區 域名稱 内可變區 域名稱 序列 12345678901234567890123456789012345 108 DVD1481H AB218VH AB048VH EVQLVESGGGLIQPGGSLRLSCAASGFTVSRNYMS WVRQAPGKGLEWVSVIYSGDRTYYADSVKGRFTIS RDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGEGGFDYW GQGTLVTVSSASTKGPEVQLVQSGAEVKKPGASVK VSCKASGYTFTKYWLGWVRQAPGQGLEWMGDIYPG YDYTHYNEKFKDRVTLTTDTSTSTAYMELRSLRSD DTAVYYCARSDGSSTYWGQGTLVTVSS 109 DVD1481L AB218VL AB048VL EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAW YQQKPGQAPRLLIHGASIRATGLPARFSGSGSGTE FTLTISSLQSEDFAVYYCQQYNYWWTFGQGTKVEI KRTVAAPSVFIFPPDVLMTQTPLSLPVTPGEPASI SCTSSQNIVHSNGNTYLEWYLQKPGQSPQLLIYKV SNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVY YCFQVSHVPYTFGGGTKVEIKR 110 DVD1482H AB048VH AB218VH EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTKYWLG WVRQAPGQGLEWMGDIYPGYDYTHYNEKFKDRVTL TTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARSDGSSTY WGQGTLVTVSSASTKGPEVQLVESGGGLIQPGGSL RLSCAASGFTVSRNYMSWVRQAPGKGLEWVSVIYS GDRTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAE DTAVYYCARGEGGFDYWGQGTLVTVSS 111 DVD1482L AB048VL AB218VL DVLMTQTPLSLPVTPGEPASISCTSSQNIVHSNGN TYLEWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGS GSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQVSHVPYTFGG GTKVEIKRTVAAPSVFIFPPEIVMTQSPATLSVSP GERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIHG ASIRATGLPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAV YYCQQYNYWWTFGQGTKVEIKR
331· 15S366.doc 201211252 實例2.16 :產生具有連接子組2之TNF(序列2)及LPADVD-Ig 表30
SEQ ID NO DVD可變 區域名稱 外可變區 域名稱 内可變區 域名稱 序列 12345678901234567890123456789012345 112 DVD1465H AB213VH AB216VH QVQLKESGPGLVAPSQSLSITCTVSGFSLTDYGVN WVRQPPGKGLEWLGMIWGDGSTDYDSTLKSRLSIS KDNSKSQIFLKMNSLQTDDTARYYCAREWHHGPVA YWGQGTLVTVSAASTKGPQVQLQQSGAELVRPGTS VKVSCKASGYGFINYLIEWIKQRPGQGLEWIGLIN PGSDYTNYNENFKGKATLTADKSSSTAYMHLSSLT SEDSAVYFCARRFGYYGSGNYFDYWGQGTTLTVSS 113 DVD1465L AB213VL AB216VL DIVMTQSHKFMSTTVGDRVSITCKASQAVSSAV 厕 YQQKPGQSPKLLIYWASTRHTGVPDRFTGSGSVTD FTLTIHNLQAEDLALYYCQQHYSTPFTFGSGTKLE 工 KRTVAAPSVFIFPPDWMTQTPLSLPVSLGDQAS ISCTSGQSLVH工NGNTYLHWYLQKPGQSPKLLIYK VSNLFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGV YFCSQSTHFPFTFGTGTKLEIKR 114 DVD1466H AB216VH AB213VH QVQLQQSGAELVRPGTSVKVSCKASGYGFIMYLIE WIKQRPGQGLEWIGLINPGSDYTNYNENFKGKATL TADKSSSTAYMHLSSLTSEDSAVYFCARRFGYYGS GNYFDYWGQGTTLTVSSASTKGPQVQLKESGPGLV APSQSLSITCTVSGFSLTDYGVNWVRQPPGKGLEW LGMIWGDGSTDYDSTLKSRLSISKDNSKSQIFLKM NSLQTDDTARYYCAREWHHGPVAYWGQGTLVTVSA 115 DVD1466L AB216VL AB213VL DVVMTQTPLSLPVSLGDQASISCTSGQSLVHINGN TYLHWYLQKPGQSPKLLIYKVSNLFSGVPDRFSGS GSGTDFTLKISRVEAEDLGVYFCSQSTHFPFTFGT GTKLEIKRTVAAPSVFIFPPDIVMTQSHKFMSTTV GDRVSITCKASQAVSSAVAWYQQKPGQSPKLLIYW ASTRHTGVPDRFTGSGSVTDFTLTIHNLQAEDLAL YYCQQHYSTPFTFGSGTKLEIKR 332- 158366.doc 201211252 實例2.17 :產生具有連接子組2之tnF(序列3)及LPA DVD-Ig 表31
SEQ ID NO DVD可變區 域名稱 外可變區 域名稱 内可變區 域名稱 序列 12345678901234567890123456789012345 116 DVD1467H AB214VH AB216VH EVKLEESGGGLVQPGGSMKLSCVASGFIFSNHWMN WRQSPEKGLEWVAEIRSKSINSATHYAESVKGRF TISRDDSKSAVYLQMTDLRTEDTGVYYCSRNYYGS TYDYWGQGTTLTVSSASTKGPQVQLQQSGAELVRP GTSVKVSCKASGYGFINYLIEWIKQRPGQGLEWIG LINPGSDYTNYNENFKGKATLTADKSSSTAYMHLS SLTSEDSAVYFCARRFGYYGSGNYFDYWGQGTTLT VSS 117 DVD1467L AB214VL AB216VL DILLTQSPAILSVSPGERVSFSCRASQFVGSSIHW YQQRTNGSPRLLIKYASESMSGIPSRFSGSGSGTD FTLSINTVESEDIADYYCQESHSWPFTFGSGTNLE VKRTVAAPSVFIFPPDVVMTQTPLSLPVSLGDQAS ISCTSGQSLVHINGNTYLHWYLQKPGQSPKLLIYK VSNLFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGV YFCSQSTHFPFTFGTGTKLEIKR 118 DVD1468H AB216VH AB214VH QVQLQQSGAELVRPGTSVKVSCKASGYGFINYLIE WIKQRPGQGLEWIGLINPGSDYTNYNENFKGKATL TADKSSSTAYMHLSSLTSEDSAVYFCARRFGYYGS GNYFDYWGQGTTLTVSSASTKGPEVKLEESGGGLV QPGGSMKLSCVASGFIFSNHWMNWVRQSPEKGLEW VAEIRSKSINSATHYAESVKGRFTISRDDSKSAVY LQMTDLRTEDTGVYYCSRNYYGSTYDYWGQGTTLT VSS 119 DVD1468L AB216VL AB214VL DVVMTQTPLSLPVSLGDQASISCTSGQSLVHINGN TYLHWYLQKPGQSPKLLIYKVSNLFSGVPDRFSGS GSGTDFTLKISRVEAEDLGVYFCSQSTHFPFTFGT GTKLEIKRTVAAPSVFIFPPDILLTQSPAILSVSP GERVSFSCRASQFVGSSIHWYQQRTNGSPRLLIKY ASESMSGIPSRFSGSGSGTDFTLSINTVESEDIAD YYCQESHSWPFTFGSGTNLEVKR
333 _ 158366.doc 201211252 實例2·18 :產生具有連接子組2之TNF(序列4)及LPA DVD-Ig 表32
SEQ Π) NO DVD可變 區域名稱 外可變區域 名稱 内可變區 域名稱 序列 12345678901234567890123456789012345 120 DVD1469H AB215VH AB216VH QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMH WVRQAPGNGLEWVAFMSYDGSNKYAKDSVKGRFTI SRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRGIAAG GNYYYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPQVQLQQSG AELVRPGTSVKVSCKASGYGFINYLIEWIKQRPGQ GLEWIGLINPGSDYTNYNENFKGKATLTADKSSST AYMHLSSLTSEDSAVYFCARRFGYYGSGNYFDYWG QGTTLTVSS 121 DVD1469L AB215VL AB216VL EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVYSYLAW YQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTD FTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWPPFTFGPGTKV DIKRTVAAPSVFIFPPDWMTQTPLSLPVSLGDQA SISCTSGQSLVHINGNTYLHWYLQKPGQSPKLLIY KVSNLFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLG VYFCSQSTHFPFTFGTGTKLEIKR 122 DVD1470H AB216VH AB215VH QVQLQQSGAELVRPGTSVKVSCKASGYGFINYLIE WIKQRPGQGLEWIGLINPGSDYTNYNENFKGKATL TADKSSSTAYMHLSSLTSEDSAVYFCARRFGYYGS GNYFDYWGQGTTLTVSSASTKGPQVQLVESGGGVV QPGRSLRLSC7VASGFTFSSYAMHWVRQAPGNGLEW VAFMSYDGSNKYAKDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQ MNSLRAEDTAVYYCARDRGIAAGGNYYYYGMDVWG QGTTVTVSS 123 DVD1470L AB216VL AB215VL DVVMTQTPLSLPVSLGDQASISCTSGQSLVHINGN TYLHWYLQKPGQSPKLLIYKVSNLFSGVPDRFSGS GSGTDFTLKISRVEAEDLGVYFCSQSTHFPFTFGT GTKLEIKRTVAAPSVFIFPPEIVLTQSPATLSLSP GERATLSCRASQSVYSYLAWYQQKPGQAPRLLIYD ASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAV YYCQQRSNWPPFTFGPGTKVDIKR 334- 158366.doc 201211252 實例2·19 :產生具有連接子組2之TNF(序列1)及LPADVD-Ig 表33
〇
SEQ Π) NO DVD可變區 域名稱 外可變區 域名稱 内可變區 域名稱 序列 12345678901234567890123456789012345 124 DVD1471H AB017VH AB216VH EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMH WVRQAPGKGLEWVSAITWNSGHIDYADSVEGRFTI SRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVSYLSTA SSLDYWGQGTLVTVSSASTKGPQVQLQQSGAELVR PGTSVKVSCKASGYGFINYLIEWIKQRPGQGLEWI GLINPGSDYTNYNENFKGKATLTADKSSSTAYMHL SSLTSEDSAVYFCARRFGYYGSGNYFDYWGQGTTL TVSS 125 DVD1471L AB017VL AB216VL DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNYLAW YQQKPGKAPKLLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTD FTLTISSLQPEDVATYYCQRYNRAPYTFGQGTKVE IKRTVAAPSVFXFPPDVVMTQTPLSLPVSLGDQAS ISCTSGQSLVHINGNTYLHWYLQKPGQSPKLLIYK VSNLFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGV YFCSQSTHFPFTFGTGTKLEIKR 126 DVD1472H AB216VH AB017VH QVQLQQSGAELVRPGTSVKVSCKASGYGFINYLIE WIKQRPGQGLEWIGLINPGSDYTNYNENFKGKATL TADKSSSTAYMHLSSLTSEDSAVYFCARRFGYYGS GNYFDYWGQGTTLTVSSASTKGPEVQLVESGGGLV QPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEW VSAITWNSGHIDYADSVEGRFTISRDNAKNSLYLQ MNSLRAEDTAVYYCAKVSYLSTASSLDYWGQGTLV TVSS 127 DVD1472L AB216VL AB017VL DWMTQTPLSLPVSLGDQASISCTSGQSLVHINGN TYLHWYLQKPGQSPKLLIYKVSNLFSGVPDRFSGS GSGTDFTLKISRVEAEDLGVYFCSQSTHFPFTFGT GTKLEIKRTVAAPSVFIFPPDIQMTQSPSSLSASV GDRVTITCRASQGIRNYLAWYQQKPGKAPKLLIYA ASTLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVAT YYCQRYNRAPYTFGQGTKVEIKR -335- 158366.doc 201211252 實例2.20 :產生具有連接子組2之TNF(序列5)及LPA DVD-Ig 表34
SEQ ID NO DVD可變區 域名稱 外可變區 域名稱 内可變區 域名稱 序列 12345678901234567890123456789012345 128 DVD1479H AB217VH AB216VH QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYDMH WVRQAPGKGLEWVAVIWSDGSIKYYADSVKGRFTI SRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREVESAMG GFYYNGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPQVQLQQSGA ELVRPGTSVKVSCKASGYGFINYLIEWIKQRPGQG LEWIGLINPGSDYTNYNENFKGKATLTADKSSSTA YMHLSSLTSEDSAVYFCARRFGYYGSGNYFDYWGQ GTTLTVSS 129 DVD1479L AB217VL AB216VL DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRIDLGW YQQKPGKAPKRLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTE FIFTISSLQPEDFASYYCLQHKSYPLTFGGGTKVE IKRTVAAPSVFIFPPDVVMTQTPLSLPVSLGDQAS ISCTSGQSLVHINGNTYLHWYLQKPGQSPKLLIYK VSNLFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGV YFCSQSTHFPFTFGTGTKLEIKR 130 DVD1480H AB2I6VH AB217VH QVQLQQSGAELVRPGTSVKVSCKASGYGFINYLIE WIKQRPGQGLEWIGLINPGSDYTNYNENFKGKATL TADKSSSTAYMHLSSLTSEDSAVYFCARRFGYYGS GNYFDYWGQGTTLTVSSASTKGPQVQLVESGGGVV QPGRSLRLSCAASGFTFSSYDMHWVRQAPGKGLEW VAVIWSDGSIKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQ MNSLRAEDTAVYYCAREVESAMGGFYYNGMDVWGQ GTTVTVSS 131 DVD1480L AB216VL AB217VL DWMTQTPLSLPVSLGDQASISCTSGQSLVHINGN TYLHWYLQKPGQSPKLLIYKVSNLFSGVPDRFSGS GSGTDFTLKISRVEAEDLGVYFCSQSTHFPFTFGT GTKLEIKRTVAAPSVFIPPPDIQMTQSPSSLSASV GDRVTITCRASQGIRIDLGWYQQKPGKAPKRLIYA ASTLQSGVPSRFSGSGSGTEFIFTISSLQPEDFAS YYCLQHKSYPLTFGGGTKVEIKR 336 - 158366.doc 201211252 實例2.21 :產生具有連接子組2之TNF(序列6)及LPA DVD-Ig 表35
SEQ Π) NO DVD可變區 域名稱 外可變區 域名稱 内可變區 域名稱 序列 12345678901234567890123456789012345 132 DVD1487H AB218VH AB216VH EVQLVESGGGLIQPGGSLRLSCAASGFTVSRNYMS WVRQAPGKGLEWVSVIYSGDRTYYADSVKGRFTIS RDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGEGGFDYW GQGTLVTVSSASTKGPQVQLQQSGAELVRPGTSVK VSCKASGYGFINYLIEWIKQRPGQGLEWIGLINPG SDYTNYNENFKGKATLTADKSSSTAYMHLSSLTSE DSAVYFCARRFGYYGSGNYFDYWGQGTTLTVSS 133 DVD1487L AB218VL AB216VL EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAW YQQKPGQAPRLLIHGASIRATGLPARFSGSGSGTE FTLTISSLQSEDFAVYYCQQYNYWWTFGQGTKVEI KRTVAAPSVFIFPPDWMTQTPLSLPVSLGDQASI SCTSGQSLVHINGNTYLHWYLQKPGQSPKLLIYKV SNLFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVY FCSQSTHFPFTFGTGTKLEIKR 134 DVD1488H AB216VH AB218VH QVQLQQSGAELVRPGTSVKVSCKASGYGFINYLIE WIKQRPGQGLEWIGLINPGSDYTNYNENFKGKATL TADKSSSTAYMHLSSLTSEDSAVYFCARRFGYYGS GNYFDYWGQGTTLTVSSASTKGPEVQLVESGGGLI QPGGSLRLSCAASGFTVSRNYMSWVRQAPGKGLEW VSVIYSGDRTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQM NSLRAEDTAVYYCARGEGGFDYWGQGTLVTVSS 135 DVD1488L AB216VL AB218VL DWMTQTPLSLPVSLGDQASISCTSGQSLVHINGN TYLHWYLQKPGQSPKLLIYKVSNLFSGVPDRFSGS GSGTDFTLKISRVEAEDLGVYFCSQSTHFPFTFGT GTKLE工KRTVAAPSVFIFPPEIVMTQSPATLSVSP GERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIHG ASIRATGLPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAV YYCQQYNYWWTFGQGTKVEIKR
〇 337- I58366.doc 201211252 實例2.22 :產生具有連接子组3之TNF(序列2)及NGFDVD-Ig 表36
SEQ Π) NO DVD可變區 域名稱 外可變區 域名稱 内可變區 域名稱 序列 12345678901234567890123456789012345 136 DVD1501H AB213VH AB020VH QVQLKESGPGLVAPSQSLSITCTVSGFSLTDYGVN WVRQPPGKGLEWLGMIWGDGSTDYDSTLKSRLSIS KDNSKSQIFLKMNSLQTDDTARYYCAREWHHGPVA YWGQGTLVTVSAASTKGPSVFPLAPQVQLQESGPG LVKPSETLSLTCTVSGFSLIGYDLNWIRQPPGKGL EWIGIIWGDGTTDYNSAVKSRVTISKDTSKNQFSL KLSSVTAADTAVYYCARGGYWYATSYYFDYWGQGT LVTVSS 137 DVD1501L AB213VL AB020VL DIVMTQSHKFMSTTVGDRVSITCKASQAVSSAVAW YQQKPGQSPKLLIYWASTRHTGVPDRFTGSGSVTD FTLTIHNLQAEDLALYYCQQHYSTPFTFGSGTKLE IKRTVAAPDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQ SISNNLNWYQQKPGKAPKLLIYYTSRFHSGVPSRF SGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQEHTLPYT FGQGTKLEIKR 138 DVD1502H AB020VH AB213VH QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGFSLIGYDLN WIRQPPGKGLEWIGIIWGDGTTDYNSAVKSRVTIS KDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGGYWYATS YYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPQVQLKE SGPGLVAPSQSLSITCTVSGFSLTDYGVNWVRQPP GKGLEWLGMIWGDGSTDYDSTLKSRLSISKDNSKS QIFLKMNSLQTDDTARYYCAREWHHGPVAYWGQGT LVTVSA 139 DVD1502L AB020VL AB213VL DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISNNLNW YQQKPGKAPKLLIYYTSRFHSGVPSRFSGSGSGTD FTFTISSLQPEDIATYYCQQEHTLPYTFGQGTKLE IKRTVAAPDIVMTQSHKFMSTTVGDRVSITCKASQ AVSSAVAWYQQKPGQSPKLLIYWASTRHTGVPDRF TGSGSVTDFTLTIHNLQAEDLALYYCQQHYSTPFT FGSGTKLEIKR 338 · 158366.doc 201211252 實例2.23 :產生具有連接子組3之tnf(序列3)及NGF DVD-Ig 表37 ❹
SEQ W NO DVD可變區 域名稱 外可變區 域名稱 内可變區 域名稱 序列 12345678901234567890123456789012345 140 DVD1503H AB214VH AB020VH EVKLEESGGGLVQPGGSMKLSCVASGFIFSNHWMN WVRQSPEKGLEWVAEIRSKSINSATHYAESVKGRF TISRDDSKSAVYLQMTDLRTEDTGVYYCSRNYYGS TYDYWGQGTTLTVSSASTKGPSVFPLAPQVQLQES GPGLVKPSETLSLTCTVSGFSLIGYDLNWIRQPPG KGLEWIGIIWGDGTTDYNSAVKSRVTISKDTSKNQ FSLKLSSVTAADTAVYYCARGGYWYATSYYFDYWG QGTLVTVSS 141 DVD1503L AB214VL AB020VL DILLTQSPAILSVSPGERVSFSCRASQFVGSSIHW YQQRTNGSPRLLIKYASESMSGIPSRFSGSGSGTD FTLSINTVESEDIADYYCQESHSWPFTFGSGTNLE VKRTVAAPDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQ SISNNLNWYQQKPGKAPKLLIYYTSRFHSGVPSRF SGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQEHTLPYT FGQGTKLEIKR 142 DVD1504H AB020VH AB214VH QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGFSLIGYDLN WIRQPPGKGLEWIGIIWGDGTTDYNSAVKSRVTIS KDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGGYWYATS YYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPEVKLEE SGGGLVQPGGSMKLSCVASGFIFSNHWMNWVRQSP EKGLEWVAEIRSKSINSATHYAESVKGRFTISRDD SKSAVYLQMTDLRTEDTGVYYCSRNYYGSTYDYWG QGTTLTVSS 143 DVD1504L AB020VL AB214VL DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISNNLNW YQQKPGKAPKLLIYYTSRFHSGVPSRFSGSGSGTD FTFTISSLQPEDIATYYCQQEHTLPYTFGQGTKLE IKRTVAAPDILLTQSPAILSVSPGERVSFSCRASQ FVGSSIHWYQQRTNGSPRLLIKYASESMSGIPSRF SGSGSGTDFTLSINTVESEDIADYYCQESHSWPFT FGSGTNLEVKR 339· 158366.doc 201211252 實例2·24 :產生具有連接子組3之TNF(序列4)及NGF DVD-Ig 表38
SEQ Π) NO DVD可變區 域名稱 外可變區 域名稱 内可變區 域名稱 序列 12345678901234567890123456789012345 144 DVD1505H AB215VH AB020VH QVQLVESGGGWQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMH WVRQAPGNGLEWVAFMSYDGSNKYAKDSVKGRFTI SRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRGIAAG GNYYYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPQ VQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGFSLIGYDLNW IRQPPGKGLEWIGIIWGDGTTDYNSAVKSRVTISK DTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGGYWYATSY YFDYWGQGTLVTVSS 145 DVD1505L AB215VL AB020VL EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVYSYLAW YQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTD FTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWPPFTFGPGTKV DIKRTVAAPDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRAS QSISNNLNWYQQKPGKAPKLL工YYTSRFHSGVPSR FSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQEHTLPY TFGQGTKLEIKR 146 DVD1506H AB020VH AB215VH QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGFSLIGYDLN WIRQPPGKGLEWIGIIWGDGTTDYNSAVKSRVTIS KDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGGYWYATS YYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPQVQLVE SGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAP GNGLEWVAFMSYDGSNKYAKDSVKGRFTISRDNSK NTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRGIAAGGNYYYY GMDVWGQGTTVTVSS 147 DVD1506L AB020VL AB215VL DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISNNLNW YQQKPGKAPKLLIYYTSRFHSGVPSRFSGSGSGTD FTFTISSLQPEDIATYYCQQEHTLPYTFGQGTKLE IKRTVAAPEIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQ SVYSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARF SGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWPPF TFGPGTKVDIKR •340-
158366.doc 201211252 實例2·25 :產生具有連接子組3之TNF(序列5)及NGF DVD_Ig 表39
SEQ Π) NO DVD可變區 域名稱 外可變區 域名稱 内可變區 域名稱 序列 12345678901234567890123456789012345 148 DVD1519H AB217VH AB020VH QVQLVESGGGWQPGRSLRLSCAASGFTFSSYDMH WVRQAPGKGLEWVAVIWS DGSIKYYADSVKGRFTI SRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREVESAMG GFYYNGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPQV QLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGFSLIGYDLNWI RQPPGKGLEWIGIIWGDGTTDYNSAVKSRVTISKD TSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGGYWYATSYY FDYWGQGTLVTVSS 149 DVD1519L AB217VL AB020VL DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRIDLGW YQQKPGKAPKRLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTE FIFTISSLQPEDFASYYCLQHKSYPLTFGGGTKVE IKRTVAAPDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQ SISNNLNWYQQKPGKAPKLLIYYTSRFHSGVPSRF SGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQEHTLPYT FGQGTKLEIKR 150 DVD1520H AB020VH AB217VH QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGFSLIGYDLN WIRQPPGKGLEWIGIIWGDGTTDYNSAVKSRVTIS KDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGGYWYATS YYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPQVQLVE SGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYDMHWVRQAP GKGLEWVAVIWSDGSIKYYADSVKGRFTISRDNSK NTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREVESAMGGFYYNG MDVWGQGTTVTVSS 151 DVD1520L AB020VL AB217VL DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISNNLNW YQQKPGKAPKLLIYYTSRFHSGVPSRFSGSGSGTD FTFTISSLQPEDIATYYCQQEHTLPYTFGQGTKLE IKRTVAAPDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQ GIRIDLGWYQQKPGKAPKRLIYAASTLQSGVPSRF SGSGSGTEFIFTISSLQPEDFASYYCLQHKSYPLT FGGGTKVEIKR 341- 158366.doc 201211252 實例2·26 :產生具有連接子組3之tnF(序列6)及NGF-Ig 表40
SEQ ID NO DVD可變區 域名稱 外可變區 域名稱 内可變區 域名稱 序列 12345678901234567890123456789012345 152 DVD1527H AB218VH AB020VH EVQLVESGGGLIQPGGSLRLSCAASGFTVSRNYMS WVRQAPGKGLEWVSVIYSGDRTYYADSVKGRFTIS RDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGEGGFDYW GQGTLVTVSSASTKGPSVFPIAPQVQLQESGPGLV KPSETLSLTCTVSGFSLIGYDLNWIRQPPGKGLEW IGIIWGDGTTDYNSAVKSRVTISKDTSKNQFSLKL SSVTAADTAVYYCARGGYWYATSYYFDYWGQGTLV TVSS 153 DVD1527L AB218VL AB020VL EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAW YQQKPGQAPRLLIHGASIRATGLPARFSGSGSGTE FTLTISSLQSEDFAVYYCQQYNYWWTFGQGTKVEI KRTVAAPDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQS ISNNLNWYQQKPGKAPKLLIYYTSRFHSGVPSRFS GSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQEHTLPYTF GQGTKLEIKR 154 DVD1528H AB020VH AB218VH QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGFSLIGYDLN WIRQPPGKGLEWIGIIWGDGTTDYNSAVKSRVTIS KDT S KNQ FS LKLS S VTAADTAVY YCARGG YWYAT S YYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPEVQLVE SGGGLIQPGGSLRLSCAASGFTVSRNYMSWVRQAP GKGLEWVSVIYSGDRTYYADSVKGRFTISRDNSKN TLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGEGGFDYWGQGTLV TVSS 155 DVD1528L AB020VL AB218VL DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISNNLNW YQQKPGKAPKLLIYYTSRFHSGVPSRFSGSGSGTD FTFTISSLQPEDIATYYCQQEHTLPYTFGQGTKLE IKRTVAAPEIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQ SVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIHGASIRATGLPARF SGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYNYWWTF GQGTKVEIKR •342- 158366.doc 201211252 實例2·27 :產生具有連接子組3之TNF(序列2)及SOST DVD-Ig 表41
SEQ Π) NO DVD可變區 域名稱 外可變區域 名稱 内可變區 域名稱 序列 12345678901234567890123456789012345 156 DVD1495H AB213VH AB022VH QVQLKESGPGLVAPSQSLSITCTVSGFSLTDYGVN WVRQPPGKGLEWLGMIWGDGSTDYDSTLKSRLSIS KDNSKSQIFLKMNSLQTDDTARYYCAREWHHGPVA YWGQGTLVTVSAASTKGPSVFPLAPEVQLQQSGPE LVTPGASVKISCKASGYTFTDHYMSWVKQSHGKSL EWIGDINPYSGETTYNQKFKGTATLTVDKSSSIAY MEIRGLTSEDSAVYYCARDDYDASPFAYWGQGTLV TVSA 157 DVD1495L AB213VL AB022VL DIVMTQSHKFMSTTVGDRVSITCKASQAVSSAVAW YQQKPGQSPKLLIYWASTRHTGVPDRFTGSGSVTD FTLTIHNLQAEDLALYYCQQHYSTPFTFGSGTKLE 工KRTVAAPDVQMIQSPSSLSASLGDIVTMTCQASQ GTSINLNWFQQKPGKAPKLLIYGSSNLEDGVPSRF SGSRYGTDFTLTISSLEDEDLATYFCLQHSYLPYT FGGGTKLEIKR 158 DVD1496H AB022VH AB213VH EVQLQQSGPELVTPGASVKISCKASGYTFTDHYMS WVKQSHGKSLEWIGDINPYSGETTYNQKFKGTATL TVDKSSSIAYMEIRGLTSEDSAVYYCARDDYDASP FAYWGQGTLVTVSAASTKGPSVFPLAPQVQLKESG PGLVAPSQSLSITCTVSGFSLTDYGVNWVRQPPGK GLEWLGMIWGDGSTDYDSTLKSRLSISKDNSKSQI FLKMNSLQTDDTARYYCAREWHHGPVAYWGQGTLV TVSA 159 DVD1496L AB022VL AB213VL DVQMIQSPSSLSASLGD工VTMTCQASQGTSIMLNW FQQKPGKAPKLLIYGSSNLEDGVPSRFSGSRYGTD FTLTISSLEDEDLATYFCLQHSYLPYTFGGGTKLE 工KRTVAAPDIVMTQSHKFMSTTVGDRVSITCKASQ AVSSAVAWYQQKPGQSPKLLIYWASTRHTGVPDRF TGSGSVTDFTLTIHNLQAEDLALYYCQQHYSTPFT FGSGTKLEIKR 343 - 158366.doc 201211252 實例2.28 :產生具有連接子組3之TNF(序列3)及SOST DVD-Ig 表42
SEQ Π) NO DVD可變區 域名稱 外可變區域 名稱 内可變區 域名稱 序列 12345678901234567890123456789012345 160 DVD1497H AB214VH AB022VH EVKLEESGGGLVQPGGSMKLSCVASGFIFSNHWMN WVRQSPEKGLEWVAEIRSKSINSATHYAESVKGRF TISRDDSKSAVYLQMTDLRTEDTGVYYCSRNYYGS TYDYWGQGTTLTVSSASTKGPSVFPLAPEVQLQQS GPELVTPGASVKISCKASGYTFTDHYMSWVKQSHG KSLEWIGDINPYSGETTYNQKFKGTATLTVDKSSS IAYMEIRGLTSEDSAVYYCARDDYDASPFAYWGQG TLVTVSA 161 DVD1497L AB214VL AB022VL DILLTQSPAILSVSPGERVSFSCRASQFVGSSIHW YQQRTNGSPRLLIKYASESMSGIPSRFSGSGSGTD FTLSINTVESEDIADYYCQESHSWPFTFGSGTNLE VKRTVAAPDVQMIQSPSSLSASLGDIVTMTCQASQ GTSINLNWFQQKPGKAPKLLIYGSSNLEDGVPSRF SGSRYGTDFTLTISSLEDEDLATYFCLQHSYLPYT FGGGTKLEIKR 162 DVD1498H AB022VH AB214VH EVQLQQSGPELVTPGASVKISCKASGYTFTDHYMS WVKQSHGKSLEWIGDINPYSGETTYNQKFKGTATL TVDKSSSIAYMEIRGLTSEDSAVYYCARDDYDASP FAYWGQGTLVTVSAASTKGPSVFPLAPEVKLEESG GGLVQPGGSMKLSCVASGFIFSNHWMNWVRQSPEK GLEWVAEIRSKSINSATHYAESVKGRFTISRDDSK SAVYLQMTDLRTEDTGVYYCSRNYYGSTYDYWGQG TTLTVSS 163 DVD1498L AB022VL AB214VL DVQMIQSPSSLSASLGDIVTMTCQASQGTSINLNW FQQKPGKAPKLLIYGSSNLEDGVPSRFSGSRYGTD FTLTISSLEDEDLATYFCLQHSYLPYTFGGGTKLE IKRTVAAPDILLTQSPAILSVSPGERVSFSCRASQ FVGSSIHWYQQRTNGSPRLLIKYASESMSGIPSRF SGSGSGTDFTLSINTVESEDIADYYCQESHSWPFT FGSGTNLEVKR • 344- 158366.doc 201211252 實例2.29 :產生具有連接子組3之TNF(序列4)及SOST DVD-Ig 表43
SEQ Π) NO DVD可變區 域名稱 外可變區 域名稱 内可變區 域名稱 序列 12345678901234567890123456789012345 164 DVD1499H AB215VH AB022VH QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMH WVRQAPGNGLEWVAFMSYDGSNKYAKDSVKGRFTI SRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRGIAAG GNYYYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPE VQLQQSGPELVTPGASVKISCKASGYTFTDHYMSW VKQSHGKSLEWIGDINPYSGETTYNQKFKGTATLT VDKSSSIAYMEIRGLTSEDSAVYYCARDDYDASPF AYWGQGTLVTVSA 165 DVD1499L AB215VL AB022VL EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVYSYLAW YQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTD FTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWPPFTFGPGTKV DIKRTVAAPDVQMIQSPSSLSASLGDIVTMTCQAS QGTSINLNWFQQKPGKAPKLLIYGSSNLEDGVPSR FSGSRYGTDFTLTISSLEDEDLATYFCLQHSYLPY TFGGGTKLEIKR 166 DVD1500H AB022VH AB215VH EVQLQQSGPELVTPGASVKISCKASGYTFTDHYMS WVKQSHGKSLEWIGDINPYSGETTYNQKFKGTATL TVDKSSSIAYMEIRGLTSEDSAVYYCARDDYDASP FAYWGQGTLVTVSAASTKGPSVFPLAPQVQLVESG GGWQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGN GLEWVAFMSYDGSNKYAKDSVKGRFTISRDNSKNT LYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRGIAAGGNYYYYGM DVWGQGTTVTVSS 167 DVD1500L AB022VL AB215VL DVQMIQSPSSLSASLGDIVTMTCQASQGTSINLNW FQQKPGKAPKLLIYGSSNLEDGVPSRFSGSRYGTD FTLTISSLEDEDLATYFCLQHSYLPYTFGGGTKLE IKRTVAAPEIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQ SVYSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARF SGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWPPF TFGPGTKVDIKR 345- 158366.doc 201211252 實例2.30:產生具有連接子組3之tnF(序列5)及SOST DVD-Ig 表44
SEQ ID NO DVD可變區 域名稱 外可變區 域名稱 内可變區 域名稱 序列 12345678901234567890123456789012345 168 DVD1517H AB217VH AB022VH QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYDMH WVRQAPGKGLEWVAVIWS DGSIKY YADS VKGRFTI SRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREVESAMG GFYYNGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPEV QLQQSGPELVTPGASVKISCKASGYTFTDHYMSWV KQSHGKSLEWIGDINPYSGETTYNQKFKGTATLTV DKSSSIAYMEIRGLTSEDSAVYYCARDDYDASPFA YWGQGTLVTVSA 169 DVD1517L AB217VL AB022VL DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRIDLGW YQQKPGKAPKRLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTE FIFTISSLQPEDFASYYCLQHKSYPLTFGGGTKVE IKRTVAAPDVQM工QSPSSLSASLGDIVTMTCQASQ GTSINLNWFQQKPGKAPKLLIYGSSNLEDGVPSRF SGSRYGTDFTLTISSLEDEDLATYFCLQHSYLPYT FGGGTKLEIKR 170 DVD1518H AB022VH AB217VH EVQLQQSGPELVTPGASVKISCKASGYTFTDHYMS WVKQSHGKSLEWIGDINPYSGETTYNQKFKGTATL TVDKSSSIAYMEIRGLTSEDSAVYYCARDDYDASP FAYWGQGTLVTVSAASTKGPSVFPLAPQVQLVESG GGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYDMHWVRQAPGK GLEWVAVIWSDGSIKYYADSVKGRFTISRDNSKNT LYLQMNSLRAEDTAVYYCAREVESAMGGFYYNGMD VWGQGTTVTVSS 171 DVD1518L AB022VL AB217VL DVQMIQSPSSLSASLGDIVTMTCQASQGTSINLNW FQQKPGKAPKLLIYGSSNLEDGVPSRFSGSRYGTD FTLTISSLEDEDLATYFCLQHSYLPYTFGGGTKLE IKRTVAAPDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQ GIRIDLGWYQQKPGKAPKRLIYAASTLQSGVPSRF SGSGSGTEFIFTISSLQPEDFASYYCLQHKSYPLT FGGGTKVEIKR 346- 158366.doc 201211252 實例2·31 :產生具有連接子組3之TNF(序列6)及SOST DVD-Ig 表45
SEQ m NO DVD可變區 域名稱 外可變區 域名稱 内可變區 域名稱 序列 12345678901234567890123456789012345 172 DVD1525H AB218VH AB022VH EVQLVESGGGLIQPGGSLRLSCAASGFTVSRNYMS WVRQAPGKGLEWVSVIYSGDRTYYADSVKGRFTIS RDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGEGGFDYW GQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPEVQLQQSGPELV TPGASVKISCKASGYTFTDHYMSWVKQSHGKSLEW IGDINPYSGETTYNQKFKGTATLTVDKSSSIAYME IRGLTSEDSAVYYCARDDYDASPFAYWGQGTLVTV SA 173 DVD1525L AB218VL AB022VL EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAW YQQKPGQAPRLLIHGASIRATGLPARFSGSGSGTE FTLTISSLQSEDFAVYYCQQYNYWWTFGQGTKVEI KRTVAAPDVQMIQSPSSLSASLGDIVTMTCQASQG TSINLNWFQQKPGKAPKLLIYGSSNLEDGVPSRFS GSRYGTDFTLTISSLEDEDLATYFCLQHSYLPYTF GGGTKLEIKR 174 DVD1526H AB022VH AB218VH EVQLQQSGPELVTPGASVKISCKASGYTFTDHYMS WVKQSHGKSLEWIGDINPYSGETTYNQKFKGTATL TVDKSSSIAYMEIRGLTSEDSAVYYCARDDYDASP FAYWGQGTLVTVSTVASTKGPSVFPLAPEVQLVESG GGLIQPGGSLRLSCAASGFTVSRNYMSWVRQAPGK GLEWVSVIYSGDRTYYADSVKGRFTISRDNSKNTL YLQMNSLRAEDTAVYYCARGEGGFDYWGQGTLVTV SS 175 DVD1526L AB022VL AB218VL DVQMIQSPSSLSASLGDIVTMTCQASQGTSINLNW FQQKPGKAPKLLIYGSSNLEDGVPSRFSGSRYGTD FTLTISSLEDEDLATYFCLQHSYLPYTFGGGTKLE IKRTVAAPEIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQ SVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIHGASIRATGLPARF SGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYNYWWTF GQGTKVEIKR 347- 158366.doc 201211252 實例2.32 :產生具有連接子組3之TNF(序列2)及PGE2 表46
SEQ Π) NO DVD可變區 域名稱 外可變區 域名稱 内可變區域 名稱 序列 1234567890123456789012345678901234 176 DVD1489H AB213VH AB048VH QVQLKESGPGLVAPSQSLSITCTVSGFSLTDYGV NWVRQPPGKGLEWLGMIWGDGSTDYDSTLKSRLS ISKDNSKSQIFLKMNSLQTDDTARYYCAREWHHG PVAYWGQGTLVTVSAASTKGPSVFPLAPEVQLVQ SGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTKYWLGWVRQA PGQGLEWMGDIYPGYDYTHYNEKFKDRVTLTTDT STSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARSDGSSTYWGQ GTLVTVSS 177 DVD1489L AB213VL AB048VL DIVMTQSHKFMSTTVGDRVSITCKASQAVSSAVA WYQQKPGQSPKLLIYWASTRHTGVPDRFTGSGSV TDFTLTIHNLQAEDLALYYCQQHYSTPFTFGSGT KLEIKRTVAAPDVLMTQTPLSLPVTPGEPASISC TSSQNIVHSNGNTYLEWYLQKPGQSPQLLIYKVS NRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVY YCFQVSHVPYTFGGGTKVEIKR 178 DVD1490H AB048VH AB213VH EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTKYWL GWVRQAPGQGLEWMGDIYPGYDYTHYNEKFKDRV TLTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARSDGS STYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPQVQLKES GPGLVAPSQSLSITCTVSGFSLTDYGVNWVRQPP GKGLEWLGMIWGDGSTDYDSTLKSRLSISKDNSK SQIFLKMNSLQTDDTARYYCAREWHHGPVAYWGQ GTLVTVSA 179 DVD1490L AB048VL AB213VL DVLMTQTPLSLPVTPGEPASISCTSSQISIIVHSNG NTYLEWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFS GSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQVSHVPYT FGGGTKVEIKRTVAAPDIVMTQSHKFMSTTVGDR VSITCKASQAVS SAVAWYQQKPGQS PKLLIYWAS TRHTGVPDRFTGSGSVTDFTLTIHMLQAEDLALY YCQQHYSTPFTFGSGTKLEIKR -348- 158366.doc 201211252 實例2.33 :產生具有連接子組3之TNF(序列3)及PGE2 DVD-Ig 表47
SEQ Π) NO DVD可變區 域名稱 外可變區 域名稱 内可變區 域名稱 序列 12345678901234567890123456789012345 180 DVD1491H AB214VH AB048VH EVKLEESGGGLVQPGGSMKLSCVASGFIFSNHWMN WVRQSPEKGLEWVAEIRSKSINSATHYAESVKGRF TISRDDSKSAVYLQMTDLRTEDTGVYYCSRNYYGS TYDYWGQGTTLTVSSASTKGPSVFPLAPEVQLVQS GAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTKYWLGWVRQAPG QGLEWMGDIYPGYDYTHYNEKFKDRVTLTTDTSTS TAYMELRSLRSDDTAVYYCARSDGSSTYWGQGTLV TVSS 181 DVD1491L AB214VL AB048VL DILLTQSPAILSVSPGERVSFSCRASQFVGSSIHW YQQRTNGSPRLLIKYASESMSGIPSRFSGSGSGTD FTLSINTVESEDIADYYCQESHSWPFTFGSGTNLE VKRTVAAPDVLMTQTPLSLPVTPGEPASISCTSSQ NIVHSNGNTYLEWYLQKPGQSPQLL工YKVSNRFSG VPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQVS HVPYTFGGGTKVEIKR 182 DVD1492H AB048VH AB214VH EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTKYWLG WVRQAPGQGLEWMGDIYPGYDYTHYNEKFKDRVTL TTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARSDGSSTY WGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPEVKLEESGGGL VQPGGSMKLSCVASGFIFSNHWMNWVRQSPEKGLE WVAEIRSKSINSATHYAESVKGRFTISRDDSKSAV YLQMTDLRTEDTGVYYCSRNYYGSTYDYWGQGTTL TVSS 183 DVD1492L AB048VL AB214VL DVLMTQTPLSLPVTPGEPASISCTSSQNIVHSNGN TYLEWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGS GSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQVSHVPYTFGG GTKVEIKRTVAAPDILLTQSPAILSVSPGERVSFS CRASQFVGSSIHWYQQRTNGSPRLLIKYASESMSG IPSRFSGSGSGTDFTLSINTVESEDIADYYCQESH SWPFTFGSGTNLEVKR 349- 158366.doc 201211252 實例2.34 :產生具有連接子組3之TNF(序列4)及PGE2 DVD-Ig 表48
SEQ Π) NO DVD可變區 域名稱 外可變區 域名稱 内可變區 域名稱 序列 12345678901234567890123456789012345 184 DVD1493H AB215VH AB048VH QVQLVESGGGWQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMH WVRQAPGNGLEWVAFMSYDGSNKYAKDSVKGRFTI SRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRGIAAG GNYYYYGMDVWGQGTTVTVS SASTKGPSVFPLAPE VQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTKYWLGW VRQAPGQGLEWMGDIYPGYDYTHYNEKFKDRVTLT TDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARSDGSSTYW GQGTLVTVSS 185 DVD1493L AB215VL AB048VL EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVYSYLAW YQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTD FTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWPPFTFGPGTKV DIKRTVAAPDVLMTQTPLSLPVTPGEPASISCTSS QNIVHSNGNTYLEWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFS GVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQV SHVPYTFGGGTKVEIKR 186 DVD1494H AB048VH AB215VH EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTKYWLG WVRQAPGQGLEWMGDIYPGYDYTHYNEKFKDRVTL TTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARSDGSSTY WGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPQVQLVESGGGV VQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGNGLE WVAFMSYDGSNKYAKDSVKGRFTISRDNSKNTLYL QMNSLRAEDTAVYYCARDRGIAAGGNYYYYGMDVW GQGTTVTVSS 187 DVD1494L AB048VL AB215VL DVLMTQTPLSLPVTPGEPASISCTSSQNIVHSNGN TYLEWYLQKPGQSPQLLIYKVS1SIRFSGVPDRFSGS GSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQVSHVPYTFGG GTKVEIKRTVAAPEIVLTQSPATLSLSPGERATLS CRASQSVYSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATG IPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRS NWPPFTFGPGTKVD工KR • 350· 158366.doc 201211252 實例2.35 :產生具有連接子組3之tnf(序列5)及PGE2 DVD-Ig 表49
SEQ Π) NO DVD可變區 域名稱 外可變區 域名稱 内可變區 域名稱 序列 12345678901234567890123456789012345 188 DVD1515H AB217VH AB048VH QVQLVESGGGWQPGRSLRLSCAASGFTFSSYDMH WVRQAPGKGLEWVAVIWSDGSIKYYADSVKGRFTI SRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREVESAMG GFYYNGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPEV QLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTKYWLGWV RQAPGQGLEWMGDIYPGYDYTHYNEKFKDRVTLTT DTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARSDGSSTYWG QGTLVTVSS 189 DVD1515L AB217VL AB048VL DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRIDLGW YQQKPGPCAPKRLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTE FIFTISSLQPEDFASYYCLQHKSYPLTFGGGTKVE IKRTVAAPDVLMTQTPLSLPVTPGEPASISCTSSQ NIVHSNGNTYLEWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSG VPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQVS HVPYTFGGGTKVEIKR 190 DVD1516H AB048VH AB217VH EVQLVQSGAEVKKPGASVECVSCKASGYTFTKYWLG WVRQAPGQGLEWMGDIYPGYDYTHYNEKFKDRVTL TTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARSDGSSTY WGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPQVQLVESGGGV VQPGRSLRLSCAASGFTFSSYDMHWVRQAPGKGLE WVAVIWSDGSIKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYL QMNSLRAEDTAVYYCAREVESAMGGFYYNGMDVWG QGTTVTVSS 191 DVD1516L AB048VL AB217VL DVLMTQTPLSLPVTPGEPASISCTSSQNIVHSNGN TYLEWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGS GSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQVSHVPYTFGG GTKVEIKRTVAAPDIQMTQSPSSLSASVGDRVTIT CRASQGIRIDLGWYQQKPGKAPKRLIYAASTLQSG VPSRFSGSGSGTEFIFTISSLQPEDFASYYCLQHK SYPLTFGGGTKVEIKR
351- 158366.doc 201211252 實例2.36 :產生具有連接子組3之TNF(序列6)及PGE2 DVD-Ig 表50
SEQ Π) NO DVD可變區 域名稱 外可變區 域名稱 内可變區 域名稱 序列 12345678901234567890123456789012345 192 DVD1523H AB218VH AB048VH EVQLVESGGGLIQPGGSLRLSCAASGFTVSRNYMS WVRQAPGKGLEWVSVIYSGDRTYYADSVKGRFTIS RDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGEGGFDYW GQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPEVQLVQSGAEVK KPGASVKVSCKASGYTFTKYWLGWVRQAPGQGLEW MGDIYPGYDYTHYNEKFKDRVTLTTDTSTSTAYME LRSLRSDDTAVYYCARSDGSSTYWGQGTLVTVSS 193 DVD1523L AB218VL AB048VL EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAW YQQKPGQAPRLLIHGASIRATGLPARFSGSGSGTE FTLTIS SLQSEDFAVYYCQQYNYWWTFGQGTKVEI KRTVAAPDVLMTQTPLSLPVTPGEPASISCTSSQN IVHSNGNTYLEWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGV PDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQVSH VPYTFGGGTKVEIKR 194 DVD1524H AB048VH AB218VH EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTKYWLG WVRQAPGQGLEWMGDIYPGYDYTHYNEKFKDRVTL TTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARSDGSSTY WGQGTLVTVSSASTKGPSVFPIiAPEVQLVESGGGL IQPGGSLRLSCAASGFTVSRMYMSWVRQAPGKGLE WVSVIYSGDRTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQ MNSLRAEDTAVYYCARGEGGFDYWGQGTLVTVSS 195 DVD1524L AB048VL AB218VL DVLMTQTPLSLPVTPGEPASISCTSSQNIVHSNGN TYLEWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGS GSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQVSHVPYTFGG GTKVEIKRTVAAPEIVMTQSPATLSVSPGERATLS CRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIHGASIRATG LPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYN YWMTGQGTKVEIKR -352 - 158366.doc 201211252 實例2.37 :產生具有連接子組3之TNF(序列2)及LPA DVD-Ig 表51
SEQ m NO DVD可變區 域名稱 外可變區 域名稱 内可變區 域名稱 序列 12345678901234567890123456789012345 196 DVD1507H AB213VH AB216VH QVQLKESGPGLVAPSQSLSITCTVSGFSLTDYGVN WVRQPPGKGLEWLGMIWGDGSTDYDSTLKSRLSIS KDNSKSQIFLKMNSLQTDDTARYYCAREWHHGPVA YWGQGTLVTVSAASTKGPSVFPLAPQVQLQQSGAE LVRPGTSVKVSCKASGYGFINYLIEWIKQRPGQGL EWIGLINPGSDYTNYNENFKGKATLTADKSSSTAY MHLSSLTSEDSAVYFCARRFGYYGSGNYFDYWGQG TTLTVSS 197 DVD1507L AB213VL AB216VL DIVMTQSHKFMSTTVGDRVSITCKASQAVSSAVAW YQQKPGQSPKLLIYWASTRHTGVPDRFTGSGSVTD FTLTIHNLQAEDLALYYCQQHYSTPFTFGSGTKLE IKRTVAAPDWMTQTPLSLPVSLGDQASISCTSGQ SLVHINGNTYLHWYLQKPGQSPKLLIYKVSNLFSG VPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYFCSQST HFPFTFGTGTKLEIKR 198 DVD1508H AB216VH AB213VH QVQLQQSGAELVRPGTSVKVSCKASGYGFINYLIE WIKQRPGQGLEWIGLINPGSDYTNYNENFKGKATL TADKSSSTAYMHLSSLTSEDSAVYFCARRFGYYGS GNYFDYWGQGTTLTVSSASTKGPSVFPLAPQVQLK ESGPGLVAPSQSLSITCTVSGFSLTDYGVNWVRQP PGKGLEWLGMIWGDGSTDYDSTLKSRLSISKDNSK SQIFLKMNSLQTDDTARYYCAREWHHGPVAYWGQG TLVTVSA 199 DVD1508L AB216VL AB213VL DVVMTQTPLSLPVSLGDQASISCTSGQSLVHINGN TYLHWYLQKPGQSPKLLIYKVSNLFSGVPDRFSGS GSGTDFTLKISRVEAEDLGVYFCSQSTHFPFTFGT GTKLEIKRTVAAPDIVMTQSHKFMSTTVGDRVSIT CKASQAVSSAVAWYQQKPGQSPKLLIYWASTRHTG VPDRFTGSGSVTDFTLTIHNLQAEDLALYYCQQHY STPFTFGSGTKLEIKR
353 - 158366.doc 201211252 實例2.38 :產生具有連接子組3之TNF(序列3)及LPA DVD-Ig 表52
SEQ JD NO DVD可變區 域名稱 外可變區 域名稱 内可變區 域名稱 序列 12345678901234567890123456789012345 200 DVD1509H AB214VH AB216VH EVKLEESGGGLVQPGGSMKLSCVASGFIFSNHWMN WVRQSPEKGLEWAEIRSKSINSATHYAESVKGRF TISRDDSKSAVYLQMTDLRTEDTGVYYCSRNYYGS TYDYWGQGTTLTVSSASTKGPSVFPLAPQVQLQQS GAELVRPGTSVKVSCKASGYGFINYLIEWIKQRPG QGLEWIGLINPGSDYTNYNENFKGKATLTADKSSS TAYMHLSSLTSEDSAVYFCARRFGYYGSGNYFDYW GQGTTLTVSS 201 DVD1509L AB214VL AB216VL DILLTQSPAILSVSPGERVSFSCRASQFVGSSIHW YQQRTNGSPRLLIKYASESIMSGIPSRFSGSGSGTD FTLSINTVESEDIADYYCQESHSWPFTFGSGTNLE VKRTVAAPDVVMTQTPLSLPVSLGDQASISCTSGQ SLVHINGNTYLHWYLQKPGQSPKLLIYKVSNLFSG VPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYFCSQST HFPPTFGTGTKLEIKR 202 DVD1510H AB216VH AB214VH QVQLQQSGAELVRPGTSVKVSCKASGYGFINYLIE WIKQRPGQGLEWIGLINPGSDYTNYNENFKGKATL TADKSSSTAYMHLSSLTSEDSAVYFCARRFGYYGS GNYFDYWGQGTTLTVSSASTKGPSVFPLAPEVKLE ESGGGLVQPGGSMKLSCVASGFIFSNHWMNWVRQS PEKGLEWVAEIRSKSINSATHYAESVKGRFTISRD DSKSAVYLQMTDLRTEDTGVYYCSRNYYGSTYDYW GQGTTLTVSS 203 DVD1510L AB216VL AB214VL DVVMTQTPLSLPVSLGDQASISCTSGQSLVHINGN TYLHWYLQKPGQSPKLLIYKVSNLFSGVPDRFSGS GSGTDFTLKISRVEAEDLGVYFCSQSTHFPFTFGT GTKLEIKRTVAAPDILLTQSPAILSVSPGERVSFS CRASQFVGSSIHWYQQRTNGSPRLLIKYASESMSG IPSRFSGSGSGTDFTLSINTVESEDIADYYCQESH SWPFTFGSGTNLEVKR •354· 158366.doc 201211252 實例2.39 :產生具有連接子組3之TNF(序列4)及LPA DVD-Ig 表53
SEQ ID NO DVD可變區 域名稱 外可變區 域名稱 内可變區 域名稱 序列 12345678901234567890123456789012345 204 DVD1511H AB215VH AB216VH QVQLVESGGGWQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMH WVRQAPGNGLEWVAFMSYDGSNKYAKDSVKGRFTI SRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRGIAAG GNYYYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPQ VQLQQSGAELVRPGTSVKVSCKASGYGFINYLIEW IKQRPGQGLEWIGLINPGSDYTNYNENFKGKATLT ADKSSSTAYMHLSSLTSEDSAVYFCARRFGYYGSG NYFDYWGQGTTLTVSS 205 DVD1511L AB215YL AB216VL EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVYSYLAW YQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTD FTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWPPFTFGPGTKV DIKRTVAAPDWMTQTPLSLPVSLGDQASISCTSG QSLVHINGNTYLHWYLQKPGQSPKLLIYKVSNLFS GVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYFCSQS THFPFTFGTGTKLEIKR 206 DVD1512H AB216VH AB215VH QVQLQQSGAELVRPGTSVKVSCKASGYGFINYLIE WIKQRPGQGLEWIGLINPGSDYTNYNENFKGKATL TADKSSSTAYMHLSSLTSEDSAVYFCARRFGYYGS GNYFDYWGQGTTLTVSSASTKGPSVFPLAPQVQLV ESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQA PGNGLEWVAFMSYDGSNKYAKDSVKGRFTISRDNS KNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRGIAAGGNYYY YGMDVWGQGT TVTVS S 207 DVD1512L AB216VL AB215VL DWMTQTPLSLPVSLGDQASISCTSGQSLVHINGN TYLHWYLQKPGQSPKLLIYKVSNLFSGVPDRFSGS GSGTDFTLKISRVEAEDLGVYFCSQSTHFPFTFGT GTKLEIKRTVAAPEIVLTQSPATLSLSPGERATLS CRASQSVYSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATG IPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRS NWPPFTFGPGTKVDIKR 0 355- 158366.doc 201211252 實例2.40 :產生具有連接子組3之tnF(序列1)及LPA DVD-Ig 表54
SEQ ID NO DVD可變區 域名稱 外可變區 域名稱 内可變區 域名稱 序列 12345678901234567890123456789012345 208 DVD1513H AB017VH AB216VH EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMH WVRQAPGKGLEWVSA工TWNSGHIDYADSVEGRFTI SRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVSYLSTA SSLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPIAPQVQLQQ SGAELVRPGTSVKVSCKASGYGFINYLIEWIKQRP GQGLEWIGLINPGSDYTNYNENFKGKATLTADKSS STAYMHLSSLTSEDSAVYFCARRFGYYGSGNYFDY WGQGTTLTVSS 209 DVD1513L AB017VL AB216VL DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNYLAW YQQKPGKAPKLLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTD FTLTIS S LQPEDVATYYCQRYNRAPYT FGQGTKVE IKRTVAAPDWMTQTPLSLPVSLGDQASISCTSGQ SLVHINGNTYLHWYLQKPGQSPKLLIYKVSNLFSG VPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYFCSQST HFPFTFGTGTKLEIKR 210 DVD1514H AB216VH AB017VH QVQLQQSGAELVRPGTSVKVSCKASGYGFINYLIE WIKQRPGQGLEWIGLINPGSDYTNYNEMFKGKATL TADKSSSTAYMHLSSLTSEDSAVYFCARRFGYYGS GNYFDYWGQGTTLTVSSASTKGPSVFPLAPEVQLV ESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQA PGKGLEWVSAITWNSGHIDYADSVEGRFTISRDNA KNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVSYLSTASSLDY WGQGTLVTVSS 211 DVD1514L AB216VL AB017VL DVVMTQTPLSLPVSLGDQASISCTSGQSLVHINGN TYLHWYLQKPGQSPKLLIYKVSNLFSGVPDRFSGS GSGTDFTLKISRVEAEDLGVYFCSQSTHFPFTFGT GTKLEIKRTVAAPDIQMTQSPSSLSASVGDRVTIT CRASQGIRNYLAWYQQKPGKAPKLLIYAASTLQSG VPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQRYN RAPYTFGQGTKVEIKR -356 · 158366.doc 201211252 實例2.41 :產生具有連接子組3之TNF(序列5)及LPADVD-Ig 表55
SEQ Π) NO DVD可變區 域名稱 外可變區 域名稱 内可變區 域名稱 序列 12345678901234567890123456789012345 212 DVD1521H AB217VH AB216VH QVQLVESGGGWQPGRSLRLSCAASGFTFSSYDMH WVRQAPGKGLEWVAVIWSDGSIKYYADSVKGRFTI SRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREVESAMG GFYYNGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPQV QLQQSGAELVRPGTSVKVSCKASGYGFINYLIEWI KQRPGQGLCTIGL 工 NPGSDYTNYNENFKGKATLTA DKSSSTAYMHLSSLTSEDSAVYFCARRFGYYGSGN YFDYWGQGTTLTVSS 213 DVD1521L AB217VL AB216VL DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRIDLGW YQQKPGKAPKRLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTE FIFTISSLQPEDFASYYCLQHKSYPLTFGGGTKVE IKRTVAAPDVVMTQTPLSLPVSLGDQASISCTSGQ SLVHINGNTYLHWYLQKPGQSPKLLIYKVSNLFSG VPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYFCSQST HFPFTFGTGTKLEIKR 214 DVD1522H AB216VH AB217VH QVQLQQSGAELVRPGTSVKVSCKASGYGFINYLIE WIKQRPGQGLEWIGL工NPGSDYTNYNENFKGKATL TADKSSSTAYMHLSSLTSEDSAVYFCARRFGYYGS GNYFDYWGQGTTLTVSSASTKGPSVFPLAPQVQLV ESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYDMHWVRQA PGKGLEWVAVIWSDGSIKYYADSVKGRFT 工 SRDNS KNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREVESAMGGFYYN GMDVWGQGTTVTVSS 215 DVD1522L AB216VL AB217VL DWMTQTPLSLPVSLGDQASISCTSGQSLVHINGN TYLHWYLQKPGQSPKLLIYKVSNLFSGVPDRFSGS GSGTDFTLKISRVEAEDLGVYFCSQSTHFPFTFGT GTKLEIKRTVAAPDIQMTQSPSSLSASVGDRVTIT CRASQGIRIDLGWYQQKPGKAPKRLIYAASTLQSG VPSRFSGSGSGTEFIFTISSLQPEDFASYYCLQHK SYPLTFGGGTKVEIKR 0 357- 158366.doc 201211252 序列2·42 :產生具有連接子組3之TNF(序列6)及LPA DVD-Ig 表56
SEQ Π) NO DVD可變區 域名稱 外可變區 域名稱 内可變區 域名稱 序列 12345678901234567890123456789012345 216 DVD1529H AB218VH AB216VH EVQLVESGGGLIQPGGSLRLSCAASGFTVSRNYMS WVRQAPGKGLEWVSVIYSGDRTYYADSVKGRFTIS RDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGEGGFDYW GQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPQVQLQQSGAELV RPGTSVKVSCKASGYGFINYLIEWIKQRPGQGLEW IGLINPGSDYTNYNENFKGKATLTADKSSSTAYMH LSSLTSEDSAVYFCARRFGYYGSGNYFDYWGQGTT LTVSS 217 DVD1529L AB218VL AB216VL EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAW YQQKPGQAPRLLIHGASIRATGLPARFSGSGSGTE FTLTISSLQSEDFAVYYCQQYNYWWTFGQGTKVEI KRTVAAPDWMTQTPLSLPVSLGDQASISCTSGQS LVHINGMTYLHWYLQKPGQSPKLLIYKVSNLFSGV PDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYFCSQSTH FPFTFGTGTKLEIKR 218 DVD1530H AB216VH AB218VH QVQLQQSGAELVRPGTSVKVSCKASGYGFINYLIE WIKQRPGQGLEWIGLIMPGSDYTNYNEMFKGKATL TADKSSSTAYMHLSSLTSEDSAVYFCARRFGYYGS GNYFDYWGQGTTLTVSSASTKGPSVFPLAPEVQLV ESGGGLIQPGGSLRLSCAASGFTVSRNYMSWVRQA PGKGLEWVSVIYSGDRTYYADSVKGRFTISRDNSK NTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGEGGFDYWGQGTL VTVSS 219 ' DVD1530L AB216VL AB218VL DVVMTQTPLSLPVSLGDQASISCTSGQSLVHIISIGN TYLHWYLQKPGQSPKLLIYKVSNLFSGVPDRFSGS GSGTDFTLKISRVEAEDLGVYFCSQSTHFPFTFGT GTKLEIKRTVAAPEIVMTQSPATLSVSPGERATLS CRASQSVSSMLAWYQQKPGQAPRLLIHGASIRATG LPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYN YWWT FGQGT KVEIKR - 358 - 158366.doc 201211252 實例2.43 :產生具有連接子組4之TNF(序列2)及NGF DVD-Ig 表57
SEQ Π) NO DVD可變區 域名稱 外可變區 域名稱 内可變區 域名稱 序列 12345678901234567890123456789012345 220 DVD1543H AB213VH AB020VH QVQLKESGPGLVAPSQSLSITCTVSGFSLTDYGVN WVRQPPGKGLEWLGMIWGDGSTDYDSTLKSRLSIS KDNSKSQIFLKMNSLQTDDTARYYCAREWHHGPVA YWGQGTLVTVSAASTKGPSVFPLAPQVQLQESGPG LVKPSETLSLTCTVSGFSLIGYDLNWIRQPPGKGL EWIGIIWGDGTTDYNSAVKSRVTISKDTSKNQFSL KLSSVTAADTAVYYCARGGYWYATSYYFDYWGQGT LVTVSS 221 DVD1543L AB213VL AB020VL DIVMTQSHKFMSTTVGDRVSITCKASQAVSSAVAW YQQKPGQSPKLLIYWASTRHTGVPDRFTGSGSVTD FTLTIHNLQAEDLALYYCQQHYSTPFTFGSGTKLE IKRTVAAPSVFIFPPDIQMTQSPSSLSASVGDRVT ITCRASQSISNNLNWYQQKPGKAPKLLIYYTSRFH SGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQ EHTLPYTFGQGTKLEIKR 222 DVD1544H AB020VH AB213VH QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGFSLIGYDLN WIRQPPGKGLEWIGIIWGDGTTDYNSAVKSRVTIS KDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGGYWYATS YYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPQVQLKE SGPGLVAPSQSLSITCTVSGFSLTDYGVNWVRQPP GKGLEWLGMIWGDGSTDYDSTLKSRLSISKDNSKS QIFLKMNSLQTDDTARYYCAREWHHGPVAYWGQGT LVTVSA 223 DVD1544L AB020VL AB213VL DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISNNLNW YQQKPGKAPKLLIYYTSRFHSGVPSRFSGSGSGTD FTFTISSLQPEDIATYYCQQEHTLPYTFGQGTKLE IKRTVAAPSVFIFPPDIVMTQSHKFMSTTVGDRVS ITCKASQAVSSAVAWYQQKPGQSPKLLIYWASTRH TGVPDRFTGSGSVTDFTLTIHNLQAEDLALYYCQQ HYSTPFTFGSGTKLEIKR -359- 158366.doc 201211252 實例2.44 :產生具有連接子組4之TNF(序列3)及NGF DVD-Ig 表58
SEQ Π) NO DVD可變區 域名稱 外可變區 域名稱 内可變區 域名稱 序列 12345678901234567890123456789012345 224 DVD1545H AB214VH AB020VH EVKLEESGGGLVQPGGSMKLSCVASGFIFSNHWMN WVRQSPEKGLEWVAEIRSKSINSATHYAESVKGRF TISRDDSKSAVYLQMTDLRTEDTGVYYCSRNYYGS TYDYWGQGTTLTVSSASTKGPSVFPIiAPQVQLQES GPGLVKPSETLSLTCTVSGFSLIGYDLNWIRQPPG KGLEWIGIIWGDGTTDYNSAVKSRVTISKDTSKNQ FSLKLSSVTAADTAVYYCARGGYWYATSYYFDYWG QGTLVTVSS 225 DVD1545L AB214VL AB020VL DILLTQSPAILSVSPGERVSFSCRASQFVGSSIHW YQQRTNGSPRLLIKYASESMSGIPSRFSGSGSGTD FTLSINTVESEDIADYYCQESHSWPFTFGSGTNLE VKRTVAAPSVFIFPPDIQMTQSPSSLSASVGDRVT ITCRASQSISNNLNWYQQKPGKAPKLLIYYTSRFH SGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQ EHTLPYTFGQGTKLEIKR 226 DVD1546H AB020VH AB214VH QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGFSLIGYDLN WIRQPPGKGLEWIGIIWGDGTTDYNSAVKSRVTIS KDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGGYWYATS YYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPEVKLEE SGGGLVQPGGSMKLSCVASGFIFSNHWMNWVRQSP EKGLEWVAEIRSKSINSATHYAESVKGRFTISRDD SKSAVYLQMTDLRTEDTGVYYCSRNYYGSTYDYWG QGTTLTVSS 227 DVD1546L AB020VL AB214VL DIQMTQSPSSLS7VSVGDRVT 工 TCRASQSISNNLNW YQQKPGKAPKLLIYYTSRFHSGVPSRFSGSGSGTD FTFTISSLQPEDIATYYCQQEHTLPYTFGQGTKLE 工KRTVAAPSVFIFPPDILLTQSPAILSVSPGERVS FSCRASQFVGSSIHWYQQRTNGSPRLLIKYASESM SGIPSRFSGSGSGTDFTLSINTVESEDIADYYCQE SHSWPFTFGSGTNLEVKR -360- 158366.doc 201211252 實例2.45 :產生具有連接子組4之TNF(序列4)及NGF DVD-Ig 表59
SEQ Π) NO DVD可變區 域名稱 外可變區 域名稱 内可變區 域名稱 序列 12345678901234567890123456789012345 228 DVD1547H AB215VH AB020VH QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMH WVRQAPGNGLEWVAFMSYDGSNKYAKDSVKGRFTI SRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRGIAAG GNYYYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPQ VQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGFSLIGYDLNW IRQPPGKGLEWIGIIWGDGTTDYNSAVKSRVTISK DTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGGYWYATSY YFDYWGQGTLVTVSS 229 DVD1547L AB215VL AB020VL EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVYSYLAW YQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTD FTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWPPFTFGPGTKV DIKRTVAAPSVFIFPPDIQMTQSPSSLSASVGDRV TITCRASQSISNNLNWYQQKPGKAPKLLIYYTSRF HSGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQ QEHTLPYTFGQGTKLEIKR 230 DVD1548H AB020VH AB215VH QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGFSLIGYDLN WIRQPPGKGLEWIGIIWGDGTTDYNSAVKSRVTIS KDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGGYWYATS YYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPQVQLVE SGGGWQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAP GNGLEWVAFMSYDGSNKYAKDSVKGRFTISRDNSK NTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRGIAAGGNYYYY GMDVWGQGT TVTVS S 231 DVD1548L AB020VL AB215VL DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISNNLNW YQQKPGKAPKLLIYYTSRFHSGVPSRFSGSGSGTD FTFTISSLQPEDIATYYCQQEHTLPYTFGQGTKLE IKRTVAAPSVFIFPPEIVLTQSPATLSLSPGERAT LSCRASQSVYSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRA TGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQ RSNWPPFTFGPGTKVDIKR
361 _ 158366.doc 201211252 實例2·46 :產生具有連接子組4之TNF(序列5)及NGF DVD-Ig 表60
SEQ Π) NO DVD可變區 域名稱 外可變區 域名稱 内可變區 域名稱 序列 12345678901234567890123456789012345 232 DVD1561H AB217VH AB020VH QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYDMH WVRQAPGKGLEWVAVIWSDGSIKYYADSVKGRFTI SRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREVESAMG GFYYNGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPQV QLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGFSLIGYDLNWI RQPPGKGLEWIGIIWGDGTTDYNSAVKSRVTISKD TSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGGYWYATSYY FDYWGQGTLVTVSS 233 DVD1561L AB217VL AB020VL DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRIDLGW YQQKPGKAPKRLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTE FIFTISSLQPEDFASYYCLQHKSYPLTFGGGTKVE IKRTVAAPSVFIFPPDIQMTQSPSSLSASVGDRVT ITCRASQSISNNLNWYQQKPGKAPKLLIYYTSRFH SGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQ EHTLPYTFGQGTKLEIKR 234 DVD1562H AB020VH AB217VH QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGFSLIGYDLN WIRQPPGKGLEWIGIIWGDGTTDYNSAVKSRVTIS KDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGGYWYATS YYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPQVQLVE SGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYDMHWVRQAP GKGLEWVAVIWSDGSIKYYADSVKGRFTISRDNSK NTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREVESAMGGFYYNG MDVWGQGTTVTVSS 235 DVD1562L AB020VL AB217VL DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISNNLNW YQQKPGKAPKLL工YYTSRFHSGVPSRFSGSGSGTD FTFTISSLQPEDIATYYCQQEHTLPYTFGQGTKLE IKRTVAAPSVFIFPPDIQMTQSPSSLSASVGDRVT 工TCRASQGIRIDLGWYQQKPGKAPKRLIYAASTLQ SGVPSRFSGSGSGTEFIFTISSLQPEDFASYYCLQ HKSYPLTFGGGTKVEIKR -362 · 158366.doc 201211252 實例2.47 :產生具有連接子組4之TNF(序列6)及NGF-Ig 表61
SEQ ID NO DVD可變區 域名稱 外可變區 域名稱 内可變區 域名稱 序列 12345678901234567890123456789012345 236 DVD1569H AB218VH AB020VH EVQLVESGGGL工QPGGSLRLSCAASGFTVSRNYMS WVRQAPGKGLEWVSVIYSGDRTYYADSVKGRFTIS RDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGEGGFDYW GQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPQVQLQESGPGLV KPSETLSLTCTVSGFSLIGYDLNWIRQPPGKGLEW IGIIWGDGTTDYNSAVKSRVTISKDTSKNQFSLKL SSVTAADTAVYYCARGGYWYATSYYFDYWGQGTLV TVSS 237 DVD1569L AB218VL AB020VL EIVMTQSPATLSVSPGEPATLSCRASQSVSSNLAW YQQKPGQAPRLLIHGASIRATGLPARFSGSGSGTE FTLTISSLQSEDFAVYYCQQYNYWWTFGQGTKVEI KRTVAAPSVFIFPPDIQMTQSPSSLSASVGDRVTI TCRASQSISNNLNWYQQKPGKAPKLLIYYTSRFHS GVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQE HTLPYTFGQGTKLEIKR 238 DVD1570H AB020VH AB218VH QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGFSLIGYDLN WIRQPPGKGLEWIGIIWGDGTTDYNSAVKSRVTIS KDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGGYWYATS YYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPEVQLVE SGGGLIQPGGSLRLSCAASGFTVSRNYMSWVRQAP GKGLEWVSVIYSGDRTYYADSVKGRFTISRDNSKN TLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGEGGFDYWGQGTLV TVSS 239 DVD1570L AB020VL AB218VL DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISNNLNW YQQKPGKAPKLLIYYTSRFHSGVPSRFSGSGSGTD FTFTISSLQPEDIATYYCQQEHTLPYTFGQGTKLE IKRTVAAPSVFIFPPEIVMTQSPATLSVSPGERAT LSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIHGASIRA TGLPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQ YNYWWT FGQGTKVEIKR
〇 -363 - 158366.doc 201211252 實例2·48 :產生具有連接子組4之TNF(序列2)及SOST DVD-Ig 表62
SEQ ID NO DVD可變區 域名稱 外可變區 域名稱 内可變區 域名稱 序列 12345678901234567890123456789012345 240 DVD1537H AB213VH AB022VH QVQLKESGPGLVAPSQSLSITCTVSGFSLTDYGVN WVRQPPGKGLEWLGMIWGDGSTDYDSTLKSRLSIS KDNSKSQ工FLKMNSLQTDDTARYYCAREWHHGPVA YWGQGTLVTVSAASTKGPSVFPLAPEVQLQQSGPE LVTPGASVKISCKASGYTFTDHYMSWVKQSHGKSL EWIGDINPYSGETTYNQKFKGTATLTVDKSSSIAY MEIRGLTSEDSAVYYCARDDYDASPFAYWGQGTLV TVSA 241 DVD1537L AB213VL AB022VL DIVMTQSHKFMSTTVGDRVSITCKASQAVSSAVAW YQQKPGQSPKLLIYWASTRHTGVPDRFTGSGSVTD FTLTIHNLQAEDLALYYCQQHYSTPFTFGSGTKLE IKRTVAAPSVFIFPPDVQMIQSPSSLSASLGDIVT MTCQASQGTSINLNWFQQKPGKAPKLLIYGSSNLE DGVPSRFSGSRYGTDFTLTISSLEDEDLATYFCLQ HSYLPYTFGGGTKLEIKR 242 DVD1538H AB022VH AB213VH EVQLQQSGPELVTPGASVKISCKASGYTFTDHYMS WVKQSHGKSLEWIGDINPYSGETTYNQKFKGTATL TVDKSSSIAYMEIRGLTSEDSAVYYCARDDYDASP FAYWGQGTLVTVSAASTKGPSVFPIAPQVQLKESG PGLVAPSQSLSITCTVSGFSLTDYGVNWVRQPPGK GLEWLGMIWGDGSTDYDSTLKSRLSISKDISISKSQI FLKMNSLQTDDTARYYCAREWHHGPVAYWGQGTLV TVSA 243 DVD1538L AB022VL AB213VL DVQMIQSPSSLSASLGDIVTMTCQASQGTSINLNW FQQKPGKAPKLLIYGSSNLEDGVPSRFSGSRYGTD FTLTISSLEDEDLATYFCLQHSYLPYTFGGGTKLE IKRTVAAPSVFIFPPDIVMTQSHKFMSTTVGDRVS ITCKASQAVSSAVAWYQQKPGQSPKLLIYWASTRH TGVPDRFTGSGSVTDFTLTIHNLQAEDLALYYCQQ HYSTPFTFGSGTKLEIKR - 364-
158366.doc 201211252 實例2·49 :產生具有連接子組4之TNF(序列3)及SOST DVD-Ig 表63
SEQ Π) NO DVD可變區 域名稱 外可變區 域名稱 内可變區 域名稱 序列 12345678901234567890123456789012345 244 DVD1539H AB214VH AB022VH EVKLEESGGGLVQPGGSMKLSCVASGFIFSNHWMN WVRQSPEKGLEWVAEIRSKSINSATHYAESVKGRF TISRDDSKSAVYLQMTDLRTEDTGVYYCSRNYYGS TYDYWGQGTTLTVSSASTKGPSVFPLAPEVQLQQS GPELVTPGASVKISCKASGYTFTDHYMSWVKQSHG KSLEWIGDINPYSGETTYNQKFKGTATLTVDKSSS IAYMEIRGLTSEDSAVYYCARDDYDASPFAYWGQG TLVTVSA 245 DVD1539L AB214VL AB022VL DILLTQSPAILSVSPGERVSFSCRASQFVGSSIHW YQQRTNGSPRLLIKYASESMSGIPSRFSGSGSGTD FTLSINTVESEDIADYYCQESHSWPFTFGSGTNLE VKRTVAAPSVFIFPPDVQMIQSPSSLSASLGDIVT MTCQASQGTSINLNWFQQKPGKAPKLLIYGSSNLE DGVPSRFSGSRYGTDFTLTISSLEDEDLATYFCLQ HSYLPYTFGGGTKLEIKR 246 DVD1540H AB022VH AB214VH EVQLQQSGPELVTPGASVKISCKASGYTFTDHYMS WVKQSHGKSLEWIGDINPYSGETTYNQKFKGTATL TVDKSSSIAYMEIRGLTSEDSAVYYCARDDYDASP FAYWGQGTLVTVSAASTKGPSVFPLAPEVKLEESG GGLVQPGGSMKLSCVASGFIFSNHWMNWVRQSPEK GLEWVAEIRSKSINSATHYAESVKGRFTISRDDSK SAVYLQMTDLRTEDTGVYYCSRNYYGSTYDYWGQG TTLTVSS 247 DVD1540L AB022VL AB214VL DVQMIQSPSSLSASLGDIVTMTCQASQGTSINLNW FQQKPGKAPKLLIYGSSNLEDGVPSRFSGSRYGTD FTLTISSLEDEDLATYFCLQHSYLPYTFGGGTKLE IKRTVAAPSVFIFPPDILLTQS PAILSVS PGERVS FSCRASQFVGSSIHWYQQRTNGSPRLLIKYASESM SGIPSRFSGSGSGTDFTLSINTVESEDIADYYCQE SHSWPFTFGSGTNLEVKR 365· 158366.doc 201211252 實例2·50 :產生具有連接子組4之TNF(序列4)及SOST DVD-Ig 表64
SEQ ID NO DVD可變區 域名稱 外可變區 域名稱 内可變區 域名稱 序列 12345678901234567890123456789012345 248 DVD1541H AB215VH AB022VH QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMH WVRQAPGNGLEWVAFMSYDGSNKYAKDSVKGRFTI SRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRGIAAG GNYYYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPIAPE VQLQQSGPELVTPGASVKISCKASGYTFTDHYMSW VKQSHGKSLEWIGDINPYSGETTYNQKFKGTATLT VDKSSSIAYMEIRGLTSEDSAVYYCARDDYDASPF AYWGQGTLVTVSA 249 DVD1541L AB215VL AB022VL EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVYSYLAW YQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTD FTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWPPFTFGPGTKV DIKRTVAAPSVFIFPPDVQMIQSPSSLSASLGDIV TMTCQASQGTSINLNWFQQKPGKAPKLLIYGSSNL EDGVPSRFSGSRYGTDFTLTISSLEDEDLATYFCL QHSYLPYTFGGGTKLEIKR 250 DVD1542H AB022VH AB215VH EVQLQQSGPELVTPGASVKISCKASGYTFTDHYMS WVKQSHGKSLEWIGDINPYSGETTYNQKFKGTATL TVDKSSSIAYMEIRGLTSEDSAVYYCARDDYDASP FAYWGQGTLVTVSAASTKGPSVFPLAPQVQLVESG GGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGN GLEWVAFMSYDGSNKYAKDSVKGRFTISRDNSKNT LYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRGIAAGGNYYYYGM DVWGQGTTVTVSS 251 DVD1542L AB022VL AB215VL DVQMIQSPSSLSASLGDIVTMTCQASQGTSINLNW FQQKPGKAPKLLIYGSSNLEDGVPSRFSGSRYGTD FTLTISSLEDEDLATYFCLQHSYLPYTFGGGTKLE IKRTVAAPSVFIFPPEIVLTQSPATLSLSPGERAT LSCRASQSVYSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRA TGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQ RSNWPPFTFGPGTKVDIKR •366-
158366.doc 201211252 實例2.51 :產生具有連接子組4之TNF(序列5)及SOST DVD-Ig 表65
SEQ ID NO DVD可變區 域名稱 外可變區 域名稱 内可變區 域名稱 序列 12345678901234567890123456789012345 252 DVD1559H AB217VH AB022VH QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYDMH WVRQAPGKGLEWVAVIWSDGSIKYYADSVKGRFTI SRDNSKNTLYLQMNSLEIAEDTAVYYCAREVESAMG GFYYNGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPEV QLQQSGPELVTPGASVKISCKASGYTFTDHYMSWV KQSHGKSLEWIGDINPYSGETTYNQKFKGTATLTV DKSSSIAYMEIRGLTSEDSAVYYCARDDYDASPFA YWGQGTLVTVSA 253 DVD1559L AB217VL AB022VL DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRIDLGW YQQKPGKAPKRLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTE FIFTISSLQPEDFASYYCLQHKSYPLTFGGGTKVE IKRTVAAPSVFIFPPDVQMIQSPSSLSASLGDIVT MTCQASQGTSINLNWFQQKPGKAPKLL工YGSSNLE DGVPSRFSGSRYGTDFTLTISSLEDEDLATYFCLQ HSYLPYTFGGGTKLEIKR 254 DVD1560H AB022VH AB217VH EVQLQQSGPELVTPGASVKISCKASGYTFTDHYMS WVKQSHGKSLEWIGDINPYSGETTYNQKFKGTATL TVDKSSSIAYMEIRGLTSEDSAVYYCARDDYDASP FAYWGQGTLVTVSAASTKGPSVFPLAPQVQLVESG GGWQPGRSLRLSCAASGFTFSSYDMHWVRQAPGK GLEWVAVIWSDGSIKYYADSVKGRFTISRDNSKNT LYLQMNSLRAEDTAVYYCAREVEST^MGGFYYNGMD VWGQGTTVTVSS 255 DVD1560L AB022VL AB217VL DVQMIQSPSSLSASLGDIVTMTCQASQGTSINLNW FQQKPGKAPKLLIYGSSNLEDGVPSRFSGSRYGTD FTLTISSLEDEDLATYFCLQHSYLPYTFGGGTKLE 工 KRTVAAPSVFIFPPDIQMTQSPSSLSASVGDRVT ITCRASQGIRIDLGWYQQKPGKAPKRLIYAASTLQ SGVPSRFSGSGSGTEFIFTISSLQPEDFASYYCLQ HKSYPLTFGGGTKVEIKR
•367· 158366.doc 201211252 實例2.52 :產生具有連接子組4之TNF(序列6)及SOST DVD-Ig 表66
SEQ Π) NO DVD可變區 域名稱 外可變區 域名稱 内可變區 域名稱 序列 12345678901234567890123456789012345 256 DVD1567H AB218VH AB022VH EVQLVESGGGLIQPGGSLRLSCAASGFTVSRNYMS WVRQAPGKGLEWVSVIYSGDRTYYADSVKGRFTIS RDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGEGGFDYW GQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPEVQLQQSGPELV TPGASVKISCKASGYTFTDHYMSWVKQSHGKSLEW IGDINPYSGETTYNQKFKGTATLTVDKSSSIAYME IRGLTSEDSAVYYCARDDYDASPFAYWGQGTLVTV SA 257 DVD1567L AB218VL AB022VL EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAW YQQKPGQAPRLLIHGASIRATGLPARFSGSGSGTE FTLTISSLQSEDFAVYYCQQYNYWWTFGQGTKVEI KRTVAAPSVFIFPPDVQMIQSPSSLSASLGDIVTM TCQASQGTSINLNWFQQKPGKAPKLLIYGSSNLED GVPSRFSGSRYGTDFTLTISSLEDEDLATYFCLQH SYLPYTFGGGTKLEIKR 258 DVD1568H AB022VH AB218VH EVQLQQSGPELVTPGASVKISCKASGYTFTDHYMS WVKQSHGKSLEWIGDINPYSGETTYNQKFKGTATL TVDKSSSIAYMEIRGLTSEDSAVYYCARDDYDASP FAYWGQGTLVTVSAASTKGPSVFPLAPEVQLVESG GGLIQPGGSLRLSCAASGFTVSRNYMSWVRQAPGK GLEWVSVIYSGDRTYYADSVKGRFTISRDNSKNTL YLQMNSLRAEDTAVYYCARGEGGFDYWGQGTLVTV SS 259 DVD1568L AB022VL AB218VL DVQMIQSPSSLSASLGDIVTMTCQASQGTSINLMW FQQKPGKAPKLLIYGSSNLEDGVPSRFSGSRYGTD FTLTISSLEDEDLATYFCLQHSYLPYTFGGGTKLE IKRTVAAPSVFIFPPEIVMTQSPATLSVSPGERAT LSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIHGASIRA TGLPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQ YNYWWT FGQGTKVEIKR -368· 158366.doc 201211252 實例2·53 :產生具有連接子組4之TNF(序列2)及PGE2 表67
SEQ Π) NO DVD可變區 域名稱 外可變區 域名稱 内可變區域 名稱 序列 1234567890123456789012345678901234 260 DVD1531H AB213VH AB048VH QVQLKESGPGLVAPSQSLSITCTVSGFSLTDYGV NWVRQPPGKGLEWLGMIWGDGSTDYDSTLKSRLS ISKDNSKSQIFLKMNSLQTDDTARYYCAREWHHG PVAYWGQGTLVTVSAASTKGPSVFPLAPEVQLVQ SGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTKYWLGWVRQA PGQGLEWMGDIYPGYDYTHYNEKFKDRVTLTTDT STSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARSDGSSTYWGQ GTLVTVSS 261 DVD1531L AB213VL AB048VL DIVMTQSHKFMSTTVGDRVSITCICASQAVSSAVA WYQQKPGQSPKLLIYWASTRHTGVPDRFTGSGSV TDFTLTIHNLQAEDLALYYCQQHYSTPFTFGSGT KLEIKRTVAAPSVFIFPPDVLMTQTPLSLPVTPG EPASISCTSSQNIVHSNGNTYLEWYLQKPGQSPQ LLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVE AEDVGVYYCFQVSHVPYTFGGGTKVEIKR 262 DVD1532H AB048VH AB213VH EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTKYWL GWVRQAPGQGLEWMGDIYPGYDYTHYNEKFKDRV TLTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARSDGS STYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPQVQLKES GPGLVAPSQSLSITCTVSGFSLTDYGVNWVRQPP GKGLEWLGMIWGDGSTDYDSTLKSRLSISKDNSK SQIFLKMNSLQTDDTARYYCAREWHHGPVAYWGQ GTLVTVSA 263 DVD1532L AB048VL AB213VL DVLMTQTPLSLPVTPGEPASISCTSSQNIVHSNG NTYLEWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFS GSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQVSHVPYT FGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPDIVMTQSHKFM STTVGDRVSITCKASQAVSSAVAWYQQKPGQSPK LLIYWASTRHTGVPDRFTGSGSVTDFTLTIHNLQ AEDLALYYCQQHYSTPFTFGSGTKLEIKR
〇 369· 158366.doc 201211252 實例2.54 :產生具有連接子組4之TNF(序列3)及PGE2 DVD-Ig 表68
SEQ Π) NO DVD可變區 域名稱 外可變區 域名稱 内可變區 域名稱 序列 12345678901234567890123456789012345 264 DVD1533H AB214VH AB048VH EVKLEESGGGLVQPGGSMKLSCVASGFIFSNHWMN WVRQSPEKGLEWVAEIRSKSINSATHYAESVKGRF TISRDDSKSAVYLQMTDLRTEDTGVYYCSRNYYGS TYDYWGQGTTLTVSSASTKGPSVFPLAPEVQLVQS GAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTKYWLGWVRQAPG QGLEWMGDIYPGYDYTHYNEKFKDRVTLTTDTSTS TAYMELRSLRSDDTAVYYCARSDGSSTYWGQGTLV TVSS 265 DVD1533L AB214VL AB048VL DILLTQSPAILSVSPGERVSFSCRASQFVGSSIHW YQQRTNGSPRLLIKYASESMSGIPSRFSGSGSGTD FTLSINTVESEDIADYYCQESHSWPFTFGSGTNLE VKRTVAAPSVFIFPPDVLMTQTPLSLPVTPGEPAS ISCTSSQNIVHSNGNTYLEWYLQKPGQSPQLLIYK VSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGV YYCFQVSHVPYTFGGGTKVEIKR 266 DVD1534H AB048VH AB214VH EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTKYWLG WVRQAPGQGLEWMGDIYPGYDYTHYMEKFKDRVTL TTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARSDGSSTY WGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPEVKLEESGGGL VQPGGSMKLSCVASGFIFSNHWMNWVRQSPEKGLE WVAEIRSKSINSATHYAESVKGRFTISRDDSKSAV YLQMTDLRTEDTGVYYCSRNYYGSTYDYWGQGTTL TVSS 267 DVD1534L AB048VL AB214VL DVLMTQTPLSLPVTPGEPASISCTSSQNIVHSNGN TYLEWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGS GSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQVSHVPYTFGG GTKVEIKRTVAAPSVFIFPPDILLTQSPAILSVSP GERVSFSCRASQFVGSSIHWYQQRTNGSPRLLIKY ASESMSGIPSRFSGSGSGTDFTLSINTVESEDIAD YYCQESHSWPFTFGSGTNLEVKR 370-
158366.doc 201211252 實例2·55 :產生具有連接子組4之tnF(序列4)及PGE2 DVD-Ig 表69
SEQ Π) NO DVD可變區 域名稱 外可變區 域名稱 内可變區 域名稱 序列 12345678901234567890123456789012345 268 DVD1535H AB215VH AB048VH QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMH WVRQAPGNGLEWVAFMSYDGSNKYAKDSVKGRFT工 SRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRGIAAG GNYYYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPE VQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTKYWLGW VRQAPGQGLEWMGDIYPGYDYTHYNEKFKDRVTLT TDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARSDGSSTYW GQGTLVTVSS 269 DVD1535L AB215VL AB048VL EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVYSYLAW YQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTD FTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWPPFTFGPGTKV DIKRTVAAPSVFIFPPDVLMTQTPLSLPVTPGEPA SISCTSSQNIVHSNGNTYLEWYLQKPGQSPQLLIY KVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVG VYYCFQVSHVPYTFGGGTECVEIKR 270 DVD1536H AB048VH AB215VH EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTKYWLG WVRQAPGQGLEWMGDIYPGYDYTHYNEKFKDRVTL TTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARSDGSSTY WGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPQVQLVESGGGV VQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGNGLE WVAFMSYDGSNKYAKDSVKGRFTISRDNSKNTLYL QMNSLRAEDTAVYYCARDRGIAAGGNYYYYGMDVW GQGTTVTVSS 271 DVD1536L AB048VL AB215VL DVLMTQTPLSLPVTPGEPASISCTSSQNIVHSMGN TYLEWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGS GSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQVSHVPYTFGG GTKVEIKRTVAAPSVFIFPPEIVLTQSPATLSLSP GERATLSCRASQSVYSYLAWYQQKPGQAPRLLIYD ASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAV YYCQQRSNWPPFTFGPGTKVDIKR 371- 158366.doc 201211252 實例2.56:產生具有連接子組4之TNF(序列5)及PGE2 DVD-Ig 表70
SEQ Π) NO DVD可變區 域名稱 外可變區 域名稱 内可變區 域名稱 序列 12345678901234567890123456789012345 272 DVD1557H AB217VH AB048VH QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYDMH WVRQAPGKGLEWVAV 工 WS DGS 工 KYYADS VKGRFTI SRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREVESAMG GFYYNGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPEV QLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTKYWLGWV RQAPGQGLEWMGDIYPGYDYTHYNEKFKDRVTLTT DTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARSDGSSTYWG QGTLVTVSS 273 DVD1557L AB217VL AB048VL DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRIDLGW YQQKPGKAPKRLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTE FIFTISSLQPEDFASYYCLQHKSYPLTFGGGTKVE IKRTVAAPSVFIFPPDVLMTQTPLSLPVTPGEPAS ISCTSSQNIVHSNGNTYLEWYLQKPGQSPQLLIYK VSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGV YYCFQVSHVPYTFGGGTKVEIKR 274 DVD1558H AB048VH AB217VH EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTKYWLG WVRQAPGQGLEWMGDIYPGYDYTHYNEKFKDRVTL TTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARSDGSSTY WGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPQVQLVESGGGV VQPGRSLRLSCAASGFTFSSYDMHWVRQAPGKGLE WVAVIWSDGSIKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYL QMNSLRAEDTAVYYCAREVESAMGGFYYNGMDVWG QGTTVTVSS 275 DVD1558L AB048VL AB217VL DVLMTQTPLSLPVTPGEPASISCTSSQNIVHSNGN TYLEWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGS GSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQVSHVPYTFGG GTKVEIKRTVAAPSVPIFPPDIQMTQSPSSLSASV GDRVTITCRASQGIRIDLGWYQQKPGKAPKRLIYA ASTLQSGVPSRFSGSGSGTEFIFTISSLQPEDFAS YYCLQHKSYPLTFGGGTKVEIKR -372- 158366.doc 201211252 實例2.57 :產生具有連接子組4之TNF(序列6)及PGE2 DVD-Ig 表71
〇
SEQ Π) NO DVD可變區 域名稱 外可變區 域名稱 内可變區 域名稱 序列 12345678901234567890123456789012345 276 DVD1565H AB218VH AB048VH EVQLVESGGGLIQPGGSLRLSCAASGFTVSRNYMS WVRQAPGKGLEWVSVIYSGDRTYYADSVKGRFTIS RDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGEGGFDYW GQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPEVQLVQSGAEVK KPGASVKVSCKASGYTFTKYWLGWVRQAPGQGLEW MGDIYPGYDYTHYNEKFKDRVTLTTDTSTSTAYME LRSLRSDDTAVYYCARSDGSSTYWGQGTLVTVSS 277 DVD1565L AB218VL AB048VL EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAW YQQKPGQAPRLLIHGASIRATGLPARFSGSGSGTE FTLTISSLQSEDFAVYYCQQYNYWWTFGQGTKVEI KRTVAAPSVFIFPPDVLMTQTPLSLPVTPGEPASI SCTSSQNIVHSNGNTYLEWYLQKPGQSPQLLIYKV SNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVY YCFQVSHVPYTFGGGTKVEIKR 278 DVD1566H AB048VH AB218VH EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTKYWLG WVRQAPGQGLEWMGDIYPGYDYTHYNEKFKDRVTL TTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARSDGSSTY WGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPEVQLVESGGGL IQPGGSLRLSCAASGFTVSRNYMSWVRQAPGKGLE WVSVIYSGDRTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQ MNSLRAEDTAVYYCARGEGGFDYWGQGTLVTVSS 279 DVD1566L AB048VL AB218VL DVLMTQTPLSLPVTPGEPASISCTSSQNIVHSNGN TYLEWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGS GSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQVSHVPYTFGG GTKVEIKRTVAAPSVFIFPPEIVMTQSPATLSVSP GERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIHG ASIRATGLPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAV YYCQQYNYWWT FGQGTKVEIKR -373- 158366.doc 201211252 實例2.58 :產生具有連接子組4之TNF(序列2)及LPA DVD-Ig 表72
SEQ ID NO DVD可變區 域名稱 外可變區 域名稱 内可變區 域名稱 序列 12345678901234567890123456789012345 280 DVD1549H AB213VH AB216VH QVQLKESGPGLVAPSQSLSITCTVSGFSLTDYGVN WVRQPPGKGLEWLGMIWGDGSTDYDSTLKSRLSIS KDNSKSQIFLKMISISLQTDDTARYYCAREWHHGPVA YWGQGTLVTVSAASTKGPSVFPLAPQVQLQQSGAE LVRPGTSVKVSCKASGYGFINYLIEWIKQRPGQGL EWIGLINPGSDYTNYNENFKGKATLTADKSSSTAY MHLSSLTSEDSAVYFCARRFGYYGSGNYFDYWGQG TTLTVSS 281 DVD1549L AB213VL AB216VL DIVMTQSHKFMSTTVGDRVSITCKASQAVSSAVAW YQQKPGQSPKLLIYWASTRHTGVPDRFTGSGSVTD FTLTIHNLQAEDLALYYCQQHYSTPFTFGSGTKLE 工KRTVAAPSVFIFPPDVVMTQTPLSLPVSLGDQAS 工SCTSGQSLVHINGNTYLHWYLQKPGQSPKLLIYK VSNLFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGV YFCSQSTHFPFTFGTGTKLEIKR 282 DVD1550H AB216VH AB213VH QVQLQQSGAELVRPGTSVKVSCKASGYGFINYLIE WIKQRPGQGLEWIGLINPGSDYTNYNENFKGKATL TADKSSSTAYMHLSSLTSEDSAVYFCARRFGYYGS GNYFDYWGQGTTLTVSSASTKGPSVFPLAPQVQLK ESGPGLVAPSQSLSITCTVSGFSLTDYGVNWVRQP PGKGLEWLGMIWGDGSTDYDSTLKSRLSISKDNSK SQIFLKMNSLQTDDTARYYCAREWHHGPVAYWGQG TLVTVSA 283 DVD1550L AB216VL AB213VL DVVMTQTPLSLPVSLGDQASISCTSGQSLVHINGN TYLHWYLQKPGQSPKLLIYKVSNLFSGVPDRFSGS GSGTDFTLKISRVEAEDLGVYFCSQSTHFPFTFGT GTKLEIKRTVAAPSVFIFPPDIVMTQSHKFMSTTV GDRVSITCKASQAVSSAVAWYQQKPGQSPKLLIYW ASTRHTGVPDRFTGSGSVTDFTLTIHNLQAEDLAL YYCQQHYSTPFTFGSGTKLEIKR -374 - 158366.doc 201211252 實例2.59 :產生具有連接子組4之tnf(序列3)及LPA DVD-Ig 表73
SEQ Π) NO DVD可變區 域名稱 外可變區 域名稱 内可變區 域名稱 序列 12345678901234567890123456789012345 284 DVD1551H AB214VH AB216VH EVKLEESGGGLVQPGGSMKLSCVASGFIFSNHWMN WVRQSPEKGLEWVAE工RSKSINSATHYAESVKGRF TISRDDSKSAVYLQMTDLRTEDTGVYYCSRNYYGS TYDYWGQGTTLTVSSASTKGPSVFPLAPQVQLQQS GAELVRPGTSVKVSCKASGYGFIMYLIEWIKQRPG QGLEWIGLINPGSDYTNYNENFKGKATLTADKSSS TAYMHLSSLTSEDSAVYFCARRFGYYGSGNYFDYW GQGTTLTVSS 285 DVD1551L AB214VL AB216VL DILLTQSPAILSVSPGERVSFSCRASQFVGSSIHW YQQRTNGSPRLLIKYASESMSGIPSRFSGSGSGTD FTLSINTVESEDIADYYCQESHSWPFTFGSGTNLE VKRTVAAPSVFIFPPDWMTQTPLSLPVSLGDQAS 工SCTSGQSLVHINGNTYLHWYLQKPGQSPKLLIYK VSNLFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGV YFCSQSTHFPFTFGTGTKLEIKR 286 DVD1552H AB216VH AB214VH QVQLQQSGAELVRPGTSVKVSCKASGYGFINYLIE WIKQRPGQGLEWIGLINPGSDYTNYNENFKGKATL TADKSSSTAYMHLSSLTSEDSAVYFCARRFGYYGS GNYFDYWGQGTTLTVSSASTKGPSVFPLAPEVKLE ESGGGLVQPGGSMKLSCVASGFIFSNHWMNWVRQS PEKGLEWVAEIRSKSINSATHYAESVKGRFTISRD DSKSAVYLQMTDLRTEDTGVYYCSRNYYGSTYDYW GQGTTLTVSS 287 DVD1552L AB216VL AB214VL DWMTQTPLSLPVSLGDQASISCTSGQSLVHINGN TYLHWYLQKPGQSPKLLIYKVSNLFSGVPDRFSGS GSGTDFTLKISRVEAEDLGVYFCSQSTHFPFTFGT GTKLEIKRTVAAPSVFIFPPDILLTQSPAILSVSP GERVSFSCRASQFVGSSIHWYQQRTNGSPRLLIKY ASESMSGIPSRFSGSGSGTDFTLSINTVESEDIAD YYCQESHSWPFTFGSGTNLEVKR
〇 •375· 158366.doc 201211252 實例2·60 :產生具有連接子組4之TNF(序列4)及LPA DVD-Ig 表74
SEQ JD NO DVD可變區 域名稱 外可變區 域名稱 内可變區 域名稱 序列 12345678901234567890123456789012345 288 DVD1553H AB215VH AB216VH QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMH WVRQAPGNGLEWVAFMSYDGSNKYAKDSVKGRFTI SRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRGIAAG GNYYYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPQ VQLQQSGAELVRPGTSVKVSCKASGYGFINYLIEW IKQRPGQGLEWIGLINPGSDYTNYNENFKGKATLT ADKSSSTAYMHLSSLTSEDSAVYFCARRFGYYGSG NYFDYWGQGTTLTVSS 289 DVD1553L AB215VL AB216VL EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVYSYLAW YQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTD FTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWPPFTFGPGTKV DIKRTVAAPSVFIFPPDVVMTQTPLSLPVSLGDQA SISCTSGQSLVHINGISITYLHWYLQKPGQSPKLLIY KVSNLFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLG VYFCSQSTHFPFTFGTGTKLEIKR 290 DVD1554H AB216VH AB215VH QVQLQQSGAELVRPGTSVKVSCKASGYGFINYLIE WIKQRPGQGLEWIGLINPGSDYTNYNENFKGKATL TADKSSSTAYMHLSSLTSEDSAVYFCARRFGYYGS GNYFDYWGQGTTLTVSSASTKGPSVFPLAPQVQLV ESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQA PGNGLEWVAFMSYDGSNKYAKDSVKGRFTISRDNS KNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRGIAAGGNYYY YGMDVWGQGTTVTVSS 291 DVD1554L AB216VL AB215VL DVVMTQTPLSLPVSLGDQASISCTSGQSLVHINGN TYLHWYLQKPGQSPKLLIYKVSNLFSGVPDRFSGS GSGTDFTLKISRVEAEDLGVYFCSQSTHFPFTFGT GTKLEIKRTVAAPSVFIFPPEIVLTQSPATLSLSP GERATLSCRASQSVYSYLAWYQQKPGQAPRLLIYD ASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAV YYCQQRSNWPPFTFGPGTKVDIKR •376· 158366.doc 201211252 實例2.61 :產生具有連接子組4之TNF(序列1)及LPA DVD-Ig 表75
SEQ ID NO DVD可變區 域名稱 外可變區 域名稱 内可變區 域名稱 序列 12345678901234567890123456789012345 292 DVD1555H AB017VH AB216VH EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMH WVRQAPGKGLEWVSAITWNS GH 工 DYADSVEGRFTI SRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVSYLSTA SSLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPQVQLQQ SGAELVRPGTSVKVSCKASGYGFINYLIEWIKQRP GQGLEWIGLINPGSDYTNYNENFKGKATLTADKSS STAYMHLSSLTSEDSAVYFCARRFGYYGSGNYFDY WGQGTTLTVSS 293 DVD1555L AB017VL AB216VL DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNYLAW YQQKPGKAPKLLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTD FTLTISSLQPEDVATYYCQRYNRAPYTFGQGTKVE IKRTVAAPSVFIFPPDWMTQTPLSLPVSLGDQAS ISCTSGQSLVHINGNTYLHWYLQKPGQSPKLLIYK VSNLFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGV YFCSQSTHFPFTFGTGTKLEIKR 294 DVD1556H AB216VH AB017VH QVQLQQSGAELVRPGTSVKVSCKASGYGFINYLIE WIKQRPGQGLEWIGLINPGSDYTNYNENFKGKATL TADKSSSTAYMHLSSLTSEDSAVYFCARRFGYYGS GNYFDYWGQGTTLTVSSASTKGPSVFPLAPEVQLV ESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQA PGKGLEWVSAITWNSGHIDYADSVEGRFTISRDNA KNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVSYLSTASSLDY WGQGTLVTVSS 295 DVD1556L AB216VL AB017VL DWMTQTPLSLPVSLGDQASISCTSGQSLVHINGN TYLHWYLQKPGQSPKLLIYKVSNLFSGVPDRFSGS GSGTDFTLKISRVEAEDLGVYFCSQSTHFPFTFGT GTKLEIKRTVAAPSVFIFPPDIQMTQSPSSLSASV GDRVTITCRASQGIRNYLAWYQQKPGKAPKLLIYA ASTLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVAT YYCQRYNRAPYTFGQGTKVEIKR
〇 377- 158366.doc 201211252 實例2·62 :產生具有連接子組4之TNF(序列5)及LPA DVD-Ig 表76
SEQ Π) NO DVD可變區 域名稱 外可變區 域名稱 内可變區 域名稱 序列 12345678901234567890123456789012345 296 DVD1563H AB217VH AB216VH QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYDMH WVRQAPGKGLEWVAVIWSDGSIKYYADSVKGRFTI SRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREVESAMG GFYYNGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPQV QLQQSGAELVRPGTSVKVSCKASGYGFINYLIEWI KQRPGQGLEWIGLINPGSDYTNYNENFKGKATLTA DKSSSTAYMHLSSLTSEDSAVYFCARRFGYYGSGN YFDYWGQGTTLTVSS 297 DVD1563L AB217VL AB216VL DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRIDLGW YQQKPGKAPKRLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTE FIFTISSLQPEDFASYYCLQHKSYPLTFGGGTKVE IKRTVAAPSVFIFPPDVVMTQTPLSLPVSLGDQAS ISCTSGQSLVHINGNTYLHWYLQKPGQSPKLLIYK VSNLFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGV YFCSQSTHFPFTFGTGTKLEIKR 298 DVD1564H AB216VH AB217VH QVQLQQSGAELVRPGTSVKVSCKASGYGFINYLIE WIKQRPGQGLEWIGLINPGSDYTNYNENFKGKATL TADKSSSTAYMHLSSLTSEDSAVYFCARRFGYYGS GNYFDYWGQGTTLTVSSASTKGPSVFPLAPQVQLV ESGGGVVQPGRSLRLSC7VASGFTFSSYDMHWVRQA PGKGLEWVAVIWS DGSIKYYADSVKGRFTISRDNS KNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREVESAMGGFYYN GMDVWGQGTTVTVSS 299 DVD1564L AB216VL AB217VL DWMTQTPLSLPVSLGDQASISCTSGQSLVHINGN TYLHWYLQKPGQSPKLLIYKVSNLFSGVPDRFSGS GSGTDFTLKISRVEAEDLGVYFCSQSTHFPFTFGT GTKLEIKRTVAAPSVFIFPPDIQMTQSPSSLSASV GDRVTITCRASQGIRIDLGWYQQKPGKAPKRLIYA ASTLQSGVPSRFSGSGSGTEFIFTISSLQPEDFAS YYCLQHKSYPLTFGGGTKVEIKR 378· 158366.doc 201211252 實例2.63 :產生具有連接子組4之TNF(序列6)及LPA DVD-Ig 表77
SEQ Π) NO DVD可變區 域名稱 外可變區 域名稱 内可變區 域名稱 序列 12345678901234567890123456789012345 300 DVD1571H AB218VH AB216VH EVQLVESGGGLIQPGGSLRLSCAASGFTVSRNYMS WVRQAPGKGLEWVSVIYSGDRTYYADSVKGRFTIS RDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGEGGFDYW GQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPQVQLQQSGAELV RPGTSVKVSCKASGYGFINYLIEWIKQRPGQGLEW IGLINPGSDYTNYNENFKGKATLTADKSSSTAYMH LSSLTSEDSAVYFCARRFGYYGSGNYFDYWGQGTT LTVSS 301 DVD1571L AB218VL AB216VL EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAW YQQKPGQAPRLLIHGASIRATGLPARFSGSGSGTE FTLTISSLQSEDFAVYYCQQYNYWWTFGQGTKVEI KRTVAAPSVFIFPPDVVMTQTPLSLPVSLGDQASI SCTSGQSLVHINGNTYLHWYLQKPGQSPKLLIYKV SNLFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVY rcSQSTHFPFTFGTGTKLEIKR 302 DVD1572H AB216VH AB218VH QVQLQQSGAELVRPGTSVKVSCKASGYGFINYLIE WIKQRPGQGLEWIGLINPGSDYTNYNENFKGKATL TADKSSSTAYMHLSSLTSEDSAVYFCARRFGYYGS GNYFDYWGQGTTLTVSSASTKGPSVFPLAPEVQLV ESGGGLIQPGGSLRLSCAASGFTVSRNYMSWVRQA PGKGLEWVSVIYSGDRTYYADSVKGRFTISRDNSK NTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGEGGFDYWGQGTL VTVSS 303 DVD1572L AB216VL AB218VL DWMTQTPLSLPVSLGDQASISCTSGQSLVHINGN TYLHWYLQKPGQSPKLLIYKVSNLFSGVPDRFSGS GSGTDFTLKISRVEAEDLGVYFCSQSTHFPFTFGT GTKLEIKRTVAAPSVFIFPPEIVMTQSPATLSVSP GERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIHG ASIRATGLPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAV YYCQQYNY窗TFGQGTKVEIKR
379- 158366.doc 201211252 實例2.64 :用於選殖親本抗體及DVD-Ig序列之選殖載體序列 表78
SEQ Π) NO 載體名稱 核苷酸序列 123456789012345678901234567890123456789012345678901 304 VI GCGTCGACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGC ACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCC GAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCAC ACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTG GTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTG AATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCT TGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTG7VACTCCTGGGG GGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATC TCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGAC CCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCC AAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGC GTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGC AAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAA GCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGC GAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTC TATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAAC AACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTC TACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTC TCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGC CTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGAGCGGCCGCTCGAGGCCGGCAAGGCCGG ATCCCCCGACCTCGACCTCTGGCTAATAAAGGAAATTTATTTTCATTGCAA TAGTGTGTTGGT^ATTTTTTGTGTCTCTCACTCGGAAGGACATATGGGAGGG CAAATCATTTGGTCGAGATCCCTCGGAGATCTCTAGCTAGAGGATCGATCC CCGCCCCGGACGAACTAAACCTGACTACGACATCTCTGCCCCTTCTTCGCG GGGCAGTGCATGTAATCCCTTCAGTTGGTTGGTACAACTTGCCAACTGGGC CCTGTTCCACATGTGACACGGGGGGGGACCAAACACAAAGGGGTTCTCTGA CTGTAGTTGACATCCTTATAAATGGATGTGCACATTTGCCAACACTGAGTG GCTTTCATCCTGGAGCAGACTTTGCAGTCTGTGGACTGCAACACAACATTG CCTTTATGTGTAACTCTTGGCTGAAGCTCTTACACCAATGCTGGGGGACAT GTACCTCCCAGGGGCCCAGGAAGACTACGGGAGGCTACACCAACGTCAATC AGAGGGGCCTGTGTAGCTACCGATAAGCGGACCCTCAAGAGGGCATTAGCA ATAGTGTTTATAAGGCCCCCTTGTTAACCCTAAACGGGTAGCATATGCTTC CCGGGTAGTAGTATATACTATCCAGACTAACCCTAATTCAATAGCATATGT TACCCAACGGGAAGCATATGCTATCGAATTAGGGTTAGTAAAAGGGTCCTA AGGAACAGCGATATCTCCCACCCCATGAGCTGTCACGGTTTTATTTACATG GGGTCAGGATTCCACGAGGGTAGTGAACCATTTTAGTCACAAGGGCAGTGG CTGAAGATCAAGGAGCGGGCAGTGAACTCTCCTGAATCTTCGCCTGCTTCT TCATTCTCCTTCGTTTAGCTAATAGAATAACTGCTGAGTTGTGAACAGTAA GGTGTATGTGAGGTGCTCGAAAACAAGGTTTCAGGTGACGCCCCCAGAATA AAATTTGGACGGGGGGTTCAGTGGTGGCATTGTGCTATGACACCAATATAA CCCTCACAAACCCCTTGGGCAATT^AATACTAGTGTAGGAATGAAACATTCT GAATATCTTTAACAATAGAAATCCATGGGGTGGGGACAAGCCGTAAAGACT GGATGTCCATCTCACACGAATTTATGGCTATGGGCAACACAT7^ATCCTAGT GC7VATATGATACTGGGGTTATTAAGATGTGTCCCAGGCAGGGACCAAGACA GGTGAACCATGTTGTTACACTCTATTTGTAACAAGGGGAAAGAGAGTGGAC GCCGACAGCAGCGGACTCCACTGGTTGTCTCTAACACCCCCGAAAATTAAA CGGGGCTCCACGCCAATGGGGCCCATAAACA7VAGACAAGTGGCCACTCTTT TTTTTGAAATTGTGGAGTGGGGGCACGCGTCAGCCCCCACACGCCGCCCTG CGGTTTTGGACTGTAAAATAAGGGTGTAATAACTTGGCTGATTGTAACCCC GCTAACCACTGCGGTCAAACCACTTGCCCACAAAACCACTAATGGCACCCC GGGGAATACCTGCATAAGTAGGTGGGCGGGCCTVAGATAGGGGCGCGATTGC TGCGATCTGGAGGACAAATTACACACACTTGCGCCTGAGCGCCAAGCACAG GGTTGTTGGTCCTCATATTCACGAGGTCGCTGAGAGCACGGTGGGCTAATG -380· 158366.doc 201211252
SEQ Π) NO 載體名稱 核苷酸序列 123456789012345678901234567890123456789012345678901 TTGCCATGGGTAGCATATACTACCCAAATATCTGGATAGCATATGCTATCC TAATCTATATCTGGGTAGCATAGGCTATCCTAATCTATATCTGGGTAGCAT ATGCTATCCTAATCTATATCTGGGTAGTATATGCTATCCTAATTTATATCT GGGTAGCATAGGCTATCCTAATCTATATCTGGGTAGCATATGCTATCCTAA TCTATATCTGGGTAGTATATGCTATCCTAATCTGTATCCGGGTAGCATATG CTATCCTAATAGAGATTAGGGTAGTATATGCTATCCTAATTTATATCTGGG TAGCATATACTACCCAAATATCTGGATAGCATATGCTATCCTAATCTATAT CTGGGTAGCATATGCTATCCTAATCTATATCTGGGTAGCATAGGCTATCCT AATCTATATCTGGGTAGCATATGCTATCCTAATCTATATCTGGGTAGTATA TGCTATCCTAATTTATATCTGGGTAGCATAGGCTATCCTAATCTATATCTG GGTAGCATATGCTATCCTAATCTATATCTGGGTAGTATATGCTATCCTAAT CTGTATCCGGGTAGCATATGCTATCCTCATGATAAGCTGTCAAACATGAGA ATTTTCTTGAAGACGAAAGGGCCTCGTGATACGCCTATTTTTATAGGTTAA TGTCATGATAATAATGGTTTCTTAGACGTCAGGTGGCACTTTTCGGGGAAA TGTGCGCGGAACCCCTATTTGTTTATTTTTCT7\AATACATTCA7\ATATGTA TCCGCTCATGAGACAATAACCCTGATAAATGCTTCAATAATATTGAAAAAG GAAGAGTATGAGTATTCAACATTTCCGTGTCGCCCTTATTCCCTTTTTTGC GGCATTTTGCCTTCCTGTTTTTGCTCACCCAGAAACGCTGGTGAAAGTAAA AGATGCTGAAGATCAGTTGGGTGCACGAGTGGGTTACATCGAACTGGATCT CAACAGCGGTAAGATCCTTGAGAGTTTTCGCCCCGAAGAACGTTTTCCAAT GATGAGCACTTTTAAAGTTCTGCTATGTGGCGCGGTATTATCCCGTGTTGA CGCCGGGCAAGAGCAACTCGGTCGCCGCATACACTATTCTCAGAATGACTT GGTTGAGTACTCACCAGTCACAGAAAAGCATCTTACGGATGGCATGACAGT AAGAGAATTATGCAGTGCTGCCATAACCATGAGTGATAACACTGCGGCCAA CTTACTTCTGACAACGATCGGAGGACCGAAGGAGCTAACCGCTTTTTTGCA CAACATGGGGGATCATGTAACTCGCCTTGATCGTTGGGAACCGGAGCTGAA TGAAGCCATACCAAACGACGAGCGTGACACCACGATGCCTGCAGCAATGGC AACAACGTTGCGCAAACTATTAACTGGCGAACTACTTACTCTAGCTTCCCG GCAACAATTAATAGACTGGATGGAGGCGGATAAAGTTGCAGGACCACTTCT GCGCTCGGCCCTTCCGGCTGGCTGGTTTATTGCTGATAAATCTGGAGCCGG TGAGCGTGGGTCTCGCGGTATCATTGCAGCACTGGGGCCAGATGGTAAGCC CTCCCGTATCGTAGTTATCTACACGACGGGGAGTCAGGCAACTATGGATGA ACGAAATAGACAGATCGCTGAGATAGGTGCCTCACTGATTAAGCATTGGTA ACTGTCAGACCAAGTTTACTCATATATACTTTAGATTGATTTAAAACTTCA TTTTTAATTTAAAAGGATCTAGGTGAAGATCCTTTTTGATAATCTCATGAC CAAAATCCCTTAACGTGAGTTTTCGTTCCACTGAGCGTCAGACCCCGTAGA AAA.GATCAAAGGATCTTCTTGAGATCCTTTTTTTCTGCGCGTAATCTGCTG CTTGCAAACAAAAAAACCACCGCTACCAGCGGTGGTTTGTTTGCCGGATCA AGAGCTACCAACTCTTTTTCCGAAGGTAACTGGCTTCAGCAGAGCGCAGAT ACCAAATACTGTTCTTCTAGTGTAGCCGTAGTTAGGCCACCACTTCAAGAA CTCTGTAGCACCGCCTACATACCTCGCTCTGCTAATCCTGTTACCAGTGGC TGCTGCCAGTGGCGATAAGTCGTGTCTTACCGGGTTGGACTCAAGACGATA GTTACCGGATAAGGCGCAGCGGTCGGGCTGAACGGGGGGTTCGTGCACACA GCCCAGCTTGGAGCGAACGACCTACACCGAACTGAGATACCTACAGCGTGA GCTATGAGAAAGCGCCACGCTTCCCGT^AGGGAGAAAGGCGGACAGGTATCC GGTAAGCGGCAGGGTCGGAACAGGAGAGCGCACGAGGGAGCTTCCAGGGGG A7V7VCGCCTGGTATCTTTATAGTCCTGTCGGGTTTCGCCACCTCTGACTTGA GCGTCGATTTTTGTGATGCTCGTCAGGGGGGCGGAGCCTATGGAAAAACGC CAGCAACGCGGCCTTTTTACGGTTCCTGGCCTTTTGCTGGCCTTTTGCTCA CATGTTCTTTCCTGCGTTATCCCCTGATTCTGTGGATAACCGTATTACCGC CTTTGAGTGAGCTGATACCGCTCGCCGCAGCCGAACGACCGAGCGCAGCGA GTCAGTGAGCGAGGAAGCGGAAGAGCGCCCAATACGCAAACCGCCTCTCCC CGCGCGTTGGCCGATTCATTAATGCAGCTGGCACGACAGGTTTCCCGACTG G7VAAGCGGGCAGTGAGCGCAACGCAATTAATGTGAGTTAGCTCACTCATTA GGCACCCCAGGCTTTACACTTTATGCTTCCGGCTCGTATGTTGTGTGGAAT TGTGAGCGGATAACAATTTCACACAGGAAACAGCTATGACCATGATTACGC CAAGCTCTAGCTAGAGGTCGAGTCCCTCCCCAGCAGGCAGAAGTATGCAAA GCATGCATCTCAATTAGTCAGCAACCATAGTCCCGCCCCTAACTCCGCCCA TCCCGCCCCTAACTCCGCCCAGTTCCGCCCATTCTCCGCCCCATGGCTGAC TAATTTTTTTTATTTATGCAGAGGCCGAGGCCGCCTCGGCCTCTGAGCTAT 158366.doc -381 - 201211252
SEQ ID NO 載體名稱 核苷酸序列 123456789012345678901234567890123456789012345678901 TCCAGAAGTAGTGAGGAGGCTTTTTTGGAGGCCTAGGCTTTTGCAAAAAGC TTTGC7VAAGATGGATAAAGTTTTAAACAGAGAGGAATCTTTGCAGCTAATG GACCTTCTAGGTCTTGAAAGGAGTGGGAATTGGCTCCGGTGCCCGTCAGTG GGCAGAGCGCACATCGCCCACAGTCCCCGAGAAGTTGGGGGGAGGGGTCGG CAATTGAACCGGTGCCTAGAGAAGGTGGCGCGGGGTAAACTGGGAAAGTGA TGTCGTGTACTGGCTCCGCCTTTTTCCCGAGGGTGGGGGAGAACCGTATAT AAGTGCAGTAGTCGCCGTGAACGTTCTTTTTCGCAACGGGTTTGCCGCCAG AACACAGGTAAGTGCCGTGTGTGGTTCCCGCGGGCCTGGCCTCTTTACGGG TTATGGCCCTTGCGTGCCTTG7VATTACTTCCACCTGGCTGCAGTACGTGAT TCTTGATCCCGAGCTTCGGGTTGGAAGTGGGTGGGAGAGTTCGAGGCCTTG CGCTTAAGGAGCCCCTTCGCCTCGTGCTTGAGTTGAGGCCTGGCCTGGGCG CTGGGGCCGCCGCGTGCGAATCTGGTGGCACCTTCGCGCCTGTCTCGCTGC TTTCGATAAGTCTCTAGCCATTTAAAATTTTTGATGACCTGCTGCGACGCT TTTTTTCTGGCAAGATAGTCTTGT7WVTGCGGGCCAAGATCTGCACACTGG TATTTCGGTTTTTGGGGCCGCGGGCGGCGACGGGGCCCGTGCGTCCCAGCG CACATGTTCGGCGAGGCGGGGCCTGCGAGCGCGGCCACCGAGAATCGGACG GGGGTAGTCTCAAGCTGGCCGGCCTGCTCTGGTGCCTGGCCTCGCGCCGCC GTGTATCGCCCCGCCCTGGGCGGCAAGGCTGGCCCGGTCGGCACCAGTTGC GTGAGCGGAAAGATGGCCGCTTCCCGGCCCTGCTGCAGGGAGCTCAAAATG GAGGACGCGGCGCTCGGGAGAGCGGGCGGGTGAGTCACCCACACAAAGGAA AAGGGCCTTTCCGTCCTCAGCCGTCGCTTCATGTGACTCCACGGAGTACCG GGCGCCGTCCAGGCACCTCGATTAGTTCTCGAGCTTTTGGAGTACGTCGTC TTTAGGTTGGGGGGAGGGGTTTTATGCGATGGAGTTTCCCCACACTGAGTG GGTGGAGACTGAAGTTAGGCCAGCTTGGCACTTGATGTAATTCTCCTTGGA ATTTGCCCTTTTTGAGTTTGGATCTTGGTTCATTCTCAAGCCTCAGACAGT GGTTCAAAGTTTTTTTCTTCCATTTCAGGTGTCGTGAGGAATTCTCTAGAG ATCCCTCGACCTCGAGATCCATTGTGCCCGGGCGCCACCATGGAGTTTGGG CTGAGCTGGCTTTTTCTTGTCGCGATTTTAAAAGGTGTCCAGTGC 305 V2 ACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTG AAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGA GAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCC CAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGC AGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCC TGCGT^AGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAAC AGGGGAGAGTGTTGAGCGGCCGCTCGAGGCCGGCAAGGCCGGATCCCCCGA CCTCGACCTCTGGCTAATAAAGGAAATTTATTTTCATTGCAATAGTGTGTT GGAATTTTTTGTGTCTCTCACTCGGAAGGACATATGGGAGGGCAAATCATT TGGTCGAGATCCCTCGGAGATCTCTAGCTAGAGGATCGATCCCCGCCCCGG ACGAACTAAACCTGACTACGACATCTCTGCCCCTTCTTCGCGGGGCAGTGC ATGTAATCCCTTCAGTTGGTTGGTACAACTTGCCAACTGGGCCCTGTTCCA CATGTGACACGGGGGGGGACCAAACACAAAGGGGTTCTCTGACTGTAGTTG ACATCCTTATAAATGGATGTGCACATTTGCCAACACTGAGTGGCTTTCATC CTGGAGCAGACTTTGCAGTCTGTGGACTGCAACACAACATTGCCTTTATGT GTAACTCTTGGCTGAAGCTCTTACACCAATGCTGGGGGACATGTACCTCCC AGGGGCCCAGGAAGACTACGGGAGGCTACACCAACGTCAATCAGAGGGGCC TGTGTAGCTACCGATAAGCGGACCCTCAAGAGGGCATTAGCAATAGTGTTT ATAAGGCCCCCTTGTTAACCCTAAACGGGTAGCATATGCTTCCCGGGTAGT AGTATATACTATCCAGACTAACCCTAATTCAATAGCATATGTTACCCAACG GGAAGCATATGCTATCGAATTAGGGTTAGTAAAAGGGTCCTAAGGAACAGC GATATCTCCCACCCCATGAGCTGTCACGGTTTTATTTACATGGGGTCAGGA TTCCACGAGGGTAGTGAACCATTTTAGTCACAAGGGCAGTGGCTGAAGATC AAGGAGCGGGCAGTGAACTCTCCTGAATCTTCGCCTGCTTCTTCATTCTCC TTCGTTTAGCTT^ATAGAATAACTGCTGAGTTGTGAACAGTAAGGTGTATGT GAGGTGCTCGAAAACAAGGTTTCAGGTGACGCCCCCAGAATAAAATTTGGA CGGGGGGTTCAGTGGTGGCATTGTGCTATGACACCAATATAACCCTCACAA ACCCCTTGGGCAATAAATACTAGTGTAGGAATGAAACATTCTGAATATCTT TAACAATAGAAATCCATGGGGTGGGGACAAGCCGTAAAGACTGGATGTCCA TCTCACACGAATTTATGGCTATGGGCAACACATAATCCTAGTGCAATATGA TACTGGGGTTATT7VAGATGTGTCCCAGGCAGGGACCAAGACAGGTGAACCA TGTTGTTACACTCTATTTGTAACAAGGGGAAAGAGAGTGGACGCCGACAGC
158366.doc -382· 201211252
SEQ ID NO 載體名稱 核苷酸序列 123456789012345678901234567890123456789012345678901 AGCGGACTCCACTGGTTGTCTCTAACACCCCCGAAAATTAAACGGGGCTCC ACGCCAATGGGGCCCATAAACAAAGACAAGTGGCCACTCTTTTTTTTGAAA TTGTGGAGTGGGGGCACGCGTCAGCCCCCACACGCCGCCCTGCGGTTTTGG ACTGTAAAATAAGGGTGTAATAACTTGGCTGATTGTAACCCCGCTAACCAC TGCGGTCAAACCACTTGCCCACAAAACCACTAATGGCACCCCGGGGAATAC CTGCATAAGTAGGTGGGCGGGCCAAGATAGGGGCGCGATTGCTGCGATCTG GAGGACAAATTACACACACTTGCGCCTGAGCGCCAAGCACAGGGTTGTTGG TCCTCATATTCACGAGGTCGCTGAGAGCACGGTGGGCTAATGTTGCCATGG GTAGCATATACTACCCAAATATCTGGATAGCATATGCTATCCTAATCTATA TCTGGGTAGCATAGGCTATCCTAATCTATATCTGGGTAGCATATGCTATCC TAATCTATATCTGGGTAGTATATGCTATCCTAATTTATATCTGGGTAGCAT AGGCTATCCTAATCTATATCTGGGTAGCATATGCTATCCTAATCTATATCT GGGTAGTATATGCTATCCTAATCTGTATCCGGGTAGCATATGCTATCCTAA TAGAGATTAGGGTAGTATATGCTATCCTAATTTATATCTGGGTAGCATATA CTACCCAAATATCTGGATAGCATATGCTATCCTAATCTATATCTGGGTAGC ATATGCTATCCTAATCTATATCTGGGTAGCATAGGCTATCCTAATCTATAT CTGGGTAGCATATGCTATCCTAATCTATATCTGGGTAGTATATGCTATCCT AATTTATATCTGGGTAGCATAGGCTATCCTAATCTATATCTGGGTAGCATA TGCTATCCTAATCTATATCTGGGTAGTATATGCTATCCTAATCTGTATCCG GGTAGCATATGCTATCCTCATGATAAGCTGTCAAACATGAGAATTTTCTTG AAGACGAAAGGGCCTCGTGATACGCCTATTTTTATAGGTTAATGTCATGAT AATAATGGTTTCTTAGACGTCAGGTGGCACTTTTCGGGGAAATGTGCGCGG AACCCCTATTTGTTTATTTTTCTAAATACATTCAAATATGTATCCGCTCAT GAGACAATAACCCTGATAAATGCTTCAATAATATTGAAAAAGGAAGAGTAT GAGTATTCAACATTTCCGTGTCGCCCTTATTCCCTTTTTTGCGGCATTTTG CCTTCCTGTTTTTGCTCACCCAGAAACGCTGGTGAAAGTAAAAGATGCTGA AGATCAGTTGGGTGCACGAGTGGGTTACATCGAACTGGATCTCAACAGCGG TAAGATCCTTGAGAGTTTTCGCCCCGAAGAACGTTTTCCAATGATGAGCAC TTTTAAAGTTCTGCTATGTGGCGCGGTATTATCCCGTGTTGACGCCGGGCA AGAGCAACTCGGTCGCCGCATACACTATTCTCAGAATGACTTGGTTGAGTA CTCACCAGTCACAGAAAAGCATCTTACGGATGGCATGACAGTAAGAGAATT ATGCAGTGCTGCCATAACCATGAGTGATAACACTGCGGCCAACTTACTTCT GACAACGATCGGAGGACCGAAGGAGCTAACCGCTTTTTTGCACAA.CATGGG GGATCATGTAACTCGCCTTGATCGTTGGGAACCGGAGCTGAATGAAGCCAT ACCAAACGACGAGCGTGACACCACGATGCCTGCAGCAATGGCAACAACGTT GCGCAAACTATTAACTGGCGAACTACTTACTCTAGCTTCCCGGCAACAATT AATAGACTGGATGGAGGCGGATAAAGTTGCAGGACCACTTCTGCGCTCGGC CCTTCCGGCTGGCTGGTTTATTGCTGATAAATCTGGAGCCGGTGAGCGTGG GTCTCGCGGTATCATTGCAGCACTGGGGCCAGATGGTAAGCCCTCCCGTAT CGTAGTTATCTACACGACGGGGAGTCAGGCAACTATGGATGAACGAAATAG ACAGATCGCTGAGATAGGTGCCTCACTGATTAAGCATTGGTAACTGTCAGA CCAAGTTTACTCATATATACTTTAGATTGATTTAAAACTTCATTTTTAATT TAAAAGGATCTAGGTGAAGATCCTTTTTGATAATCTCATGACCAAAATCCC TTAACGTGAGTTTTCGTTCCACTGAGCGTCAGACCCCGTAGAAAAGATCAA AGGATCTTCTTGAGATCCTTTTTTTCTGCGCGTAATCTGCTGCTTGCAAAC AAAAAAACCACCGCTACCAGCGGTGGTTTGTTTGCCGGATCAAGAGCTACC AACTCTTTTTCCGAAGGTAACTGGCTTCAGCAGAGCGCAGATACCAAATAC TGTTCTTCTAGTGTAGCCGTAGTTAGGCCACCACTTCAAGAACTCTGTAGC ACCGCCTACATACCTCGCTCTGCTAATCCTGTTACCAGTGGCTGCTGCCAG TGGCGATT^AGTCGTGTCTTACCGGGTTGGACTCAAGACGATAGTTACCGGA TAAGGCGCAGCGGTCGGGCTGAACGGGGGGTTCGTGCACACAGCCCAGCTT GGAGCGAACGACCTACACCGAACTGAGATACCTACAGCGTGAGCTATGAGA AAGCGCCACGCTTCCCGAAGGGAGAAAGGCGGACAGGTATCCGGTAAGCGG CAGGGTCGGAACAGGAGAGCGCACGAGGGAGCTTCCAGGGGGAAACGCCTG GTATCTTTATAGTCCTGTCGGGTTTCGCCACCTCTGACTTGAGCGTCGATT TTTGTGATGCTCGTCAGGGGGGCGGAGCCTATGGAAAAACGCCAGCAACGC GGCCTTTTTACGGTTCCTGGCCTTTTGCTGGCCTTTTGCTCACATGTTCTT TCCTGCGTTATCCCCTGATTCTGTGGATAACCGTATTACCGCCTTTGAGTG AGCTGATACCGCTCGCCGCAGCCGAACGACCGAGCGCAGCGAGTCAGTGAG CGAGGAAGCGGAAGAGCGCCCAATACGCAAACCGCCTCTCCCCGCGCGTTG 158366.doc -383- 201211252
SEQ Π) NO 載體名稱 核苷酸序列 123456789012345678901234567890123456789012345678901 GCCGATTCATTAATGCAGCTGGCACGACAGGTTTCCCGACTGGAAAGCGGG CAGTGAGCGCAACGCAATTAATGTGAGTTAGCTCACTCATTAGGCACCCCA GGCTTTACACTTTATGCTTCCGGCTCGTATGTTGTGTGGAATTGTGAGCGG ATAACAATTTCACACAGGAAACAGCTATGACCATGATTACGCCAAGCTCTA GCTAGAGGTCGAGTCCCTCCCCAGCAGGCAGAAGTATGCAAAGCATGCATC TCAATTAGTCAGCAACCATAGTCCCGCCCCTAACTCCGCCCATCCCGCCCC TAACTCCGCCCAGTTCCGCCCATTCTCCGCCCCATGGCTGACTAATTTTTT TTATTTATGCAGAGGCCGAGGCCGCCTCGGCCTCTGAGCTATTCCAGAAGT AGTGAGGAGGCTTTTTTGGAGGCCTAGGCTTTTGCAAAAAGCTTTGCAAAG ATGGATAAAGTTTTAAACAGAGAGGAATCTTTGCAGCTAATGGACCTTCTA GGTCTTGAAAGGAGTGGGAATTGGCTCCGGTGCCCGTCAGTGGGCAGAGCG CACATCGCCCACAGTCCCCGAGAAGTTGGGGGGAGGGGTCGGCAATTGAAC CGGTGCCTAGAGAAGGTGGCGCGGGGTAAACTGGGAAAGTGATGTCGTGTA CTGGCTCCGCCTTTTTCCCGAGGGTGGGGGAGAACCGTATATAAGTGCAGT AGTCGCCGTGAACGTTCTTTTTCGCAACGGGTTTGCCGCCAGAACACAGGT AAGTGCCGTGTGTGGTTCCCGCGGGCCTGGCCTCTTTACGGGTTATGGCCC TTGCGTGCCTTGAATTACTTCCACCTGGCTGCAGTACGTGATTCTTGATCC CGAGCTTCGGGTTGGAAGTGGGTGGGAGAGTTCGAGGCCTTGCGCTTAAGG AGCCCCTTCGCCTCGTGCTTGAGTTGAGGCCTGGCCTGGGCGCTGGGGCCG CCGCGTGCGAATCTGGTGGCACCTTCGCGCCTGTCTCGCTGCTTTCGATAA GTCTCTAGCCATTTAAAATTTTTGATGACCTGCTGCGACGCTTTTTTTCTG GCAAGATAGTCTTGTAAATGCGGGCCAAGATCTGCACACTGGTATTTCGGT TTTTGGGGCCGCGGGCGGCGACGGGGCCCGTGCGTCCCAGCGCACATGTTC GGCGAGGCGGGGCCTGCGAGCGCGGCCACCGAGAATCGGACGGGGGTAGTC TCAAGCTGGCCGGCCTGCTCTGGTGCCTGGCCTCGCGCCGCCGTGTATCGC CCCGCCCTGGGCGGCAAGGCTGGCCCGGTCGGCACCAGTTGCGTGAGCGGA AAGATGGCCGCTTCCCGGCCCTGCTGCAGGGAGCTCAAAATGGAGGACGCG GCGCTCGGGAGAGCGGGCGGGTGAGTCACCCACACAAAGGAAAAGGGCCTT TCCGTCCTCAGCCGTCGCTTCATGTGACTCCACGGAGTACCGGGCGCCGTC CAGGCACCTCGATTAGTTCTCGAGCTTTTGGAGTACGTCGTCTTTAGGTTG GGGGGAGGGGTTTTATGCGATGGAGTTTCCCCACACTGAGTGGGTGGAGAC TGAAGTTAGGCCAGCTTGGCACTTGATGTAATTCTCCTTGGAATTTGCCCT TTTTGAGTTTGGATCTTGGTTCATTCTCAAGCCTCAGACAGTGGTTCAAAG TTTTTTTCTTCCATTTCAGGTGTCGTGAGGAATTCTCTAGAGATCCCTCGA CCTCGAGATCCATTGTGCCCGGGCGCACCATGGACATGCGCGTGCCCGCCC AGCTGCTGGGCCTGCTGCTGCTGTGGTTCCCCGGCTCGCGATGC 306 V3 CAACCCAAGGCTGCCCCCTCGGTCACTCTGTTCCCGCCCTCCTCTGAGGAG CTTCAAGCCAACAAGGCCACACTGGTGTGTCTCATAAGTGACTTCTACCCG GGAGCCGTGACAGTGGCCTGGAAGGCAGATAGCAGCCCCGTCAAGGCGGGA GTGGAGACCACCACACCCTCCAAACAAAGCAACAACAAGTACGCGGCCAGC AGCTACCTGAGCCTGACGCCTGAGCAGTGGAAGTCCCACAGAAGCTACAGC TGCCAGGTCACGCATGAAGGGAGCACCGTGGAGAAGACAGTGGCCCCTACA GAATGTTCATGAGCGGCCGCTCGAGGCCGGCAAGGCCGGATCCCCCGACCT CGACCTCTGGCTAATAAAGGAAATTTATTTTCATTGC7VATAGTGTGTTGGA ATTTTTTGTGTCTCTCACTCGGAAGGACATATGGGAGGGCAAATCATTTGG TCGAGATCCCTCGGAGATCTCTAGCTAGAGGATCGATCCCCGCCCCGGACG AACTAAACCTGACTACGACATCTCTGCCCCTTCTTCGCGGGGCAGTGCATG T7\ATCCCTTCAGTTGGTTGGTACAACTTGCCAACTGGGCCCTGTTCCACAT GTGACACGGGGGGGGACCAAACACAAAGGGGTTCTCTGACTGTAGTTGACA TCCTTATAT^ATGGATGTGCACATTTGCCAACACTGAGTGGCTTTCATCCTG GAGCAGACTTTGCAGTCTGTGGACTGCAACACAACATTGCCTTTATGTGTA ACTCTTGGCTGAAGCTCTTACACCAATGCTGGGGGACATGTACCTCCCAGG GGCCCAGGAAGACTACGGGAGGCTACACCAACGTCAATCAGAGGGGCCTGT GTAGCTACCGATAAGCGGACCCTCAAGAGGGCATTAGCAATAGTGTTTATA AGGCCCCCTTGTTAACCCTAAACGGGTAGCATATGCTTCCCGGGTAGTAGT ATATACTATCCAGACTAACCCTAATTCAATAGCATATGTTACCCAACGGGA AGCATATGCTATCGAATTAGGGTTAGTAAAAGGGTCCTAAGGA?VCAGCGAT ATCTCCCACCCCATGAGCTGTCACGGTTTTATTTACATGGGGTCAGGATTC CACGAGGGTAGTGAACCATTTTAGTCACAAGGGCAGTGGCTGAAGATCAAG GAGCGGGCAGTGAACTCTCCTGAATCTTCGCCTGCTTCTTCATTCTCCTTC
158366.doc -384· 201211252
SEQ Π) NO 載體名稱 核苷酸序列 123456789012345678901234567890123456789012345678901 GTTTAGCTAATAGAATAACTGCTGAGTTGTGAACAGTAAGGTGTATGTGAG GTGCTCGAAAACAAGGTTTCAGGTGACGCCCCCAGAATAAAATTTGGACGG GGGGTTCAGTGGTGGCATTGTGCTATGACACCAATATAACCCTCACAAACC CCTTGGGCAATAAATACTAGTGTAGGAATGAAACATTCTGAATATCTTTAA CAATAGAAATCCATGGGGTGGGGACAAGCCGTAAAGACTGGATGTCCATCT CACACGAATTTATGGCTATGGGCAACACATAATCCTAGTGCAATATGATAC TGGGGTTATTAAGATGTGTCCCAGGCAGGGACCAAGACAGGTGAACCATGT TGTTACACTCTATTTGTAACAAGGGGAAAGAGAGTGGACGCCGACAGCAGC GGACTCCACTGGTTGTCTCTAACACCCCCGAAAATTAAACGGGGCTCCACG CCAATGGGGCCCATAAACAAAGACAAGTGGCCACTCTTTTTTTTGAAATTG TGGAGTGGGGGCACGCGTCAGCCCCCACACGCCGCCCTGCGGTTTTGGACT GTAAAATAAGGGTGTAATAACTTGGCTGATTGTAACCCCGCTAACCACTGC GGTCAAACCACTTGCCCACAAAACCACTAATGGCACCCCGGGGAATACCTG CATAAGTAGGTGGGCGGGCCAAGATAGGGGCGCGATTGCTGCGATCTGGAG GACAAATTACACACACTTGCGCCTGAGCGCCAAGCACAGGGTTGTTGGTCC TCATATTCACGAGGTCGCTGAGAGCACGGTGGGCTAATGTTGCCATGGGTA GCATATACTACCCAAATATCTGGATAGCATATGCTATCCTAATCTATATCT GGGTAGCATAGGCTATCCTAATCTATATCTGGGTAGCATATGCTATCCTAA TCTATATCTGGGTAGTATATGCTATCCTAATTTATATCTGGGTAGCATAGG CTATCCTAATCTATATCTGGGTAGCATATGCTATCCTAATCTATATCTGGG TAGTATATGCTATCCTAATCTGTATCCGGGTAGCATATGCTATCCTAATAG AGATTAGGGTAGTATATGCTATCCTAATTTATATCTGGGTAGCATATACTA CCCAAATATCTGGATAGCATATGCTATCCTAATCTATATCTGGGTAGCATA TGCTATCCTAATCTATATCTGGGTAGCATAGGCTATCCTAATCTATATCTG GGTAGCATATGCTATCCTAATCTATATCTGGGTAGTATATGCTATCCTAAT TTATATCTGGGTAGCATAGGCTATCCTAATCTATATCTGGGTAGCATATGC TATCCTAATCTATATCTGGGTAGTATATGCTATCCTAATCTGTATCCGGGT AGCATATGCTATCCTCATGATAAGCTGTCAAACATGAGAATTTTCTTGAAG ACGAAAGGGCCTCGTGATACGCCTATTTTTATAGGTTAATGTCATGATAAT AATGGTTTCTTAGACGTCAGGTGGCACTTTTCGGGGAAATGTGCGCGGAAC CCCTATTTGTTTATTTTTCTAAATACATTCAAATATGTATCCGCTCATGAG ACAATAACCCTGATAAATGCTTCAATAATATTGAAAAAGGAAGAGTATGAG TATTCAACATTTCCGTGTCGCCCTTATTCCCTTTTTTGCGGCATTTTGCCT TCCTGTTTTTGCTCACCCAGAAACGCTGGTGAAAGTAAAAGATGCTGAAGA TCAGTTGGGTGCACGAGTGGGTTACATCGAACTGGATCTCAACAGCGGTAA GATCCTTGAGAGTTTTCGCCCCGAAGAACGTTTTCCAATGATGAGCACTTT TAAAGTTCTGCTATGTGGCGCGGTATTATCCCGTGTTGACGCCGGGCAAGA GCAACTCGGTCGCCGCATACACTATTCTCAGAATGACTTGGTTGAGTACTC ACCAGTCACAGAAAAGCATCTTACGGATGGCATGACAGTAAGAGAATTATG CAGTGCTGCCATAACCATGAGTGATT^ACACTGCGGCCAACTTACTTCTGAC AACGATCGGAGGACCGAAGGAGCTAACCGCTTTTTTGCACAACATGGGGGA TCATGTAACTCGCCTTGATCGTTGGGAACCGGAGCTGAATGAAGCCATACC AAACGACGAGCGTGACACCACGATGCCTGCAGCAATGGCAACAACGTTGCG CAAACTATTAACTGGCGAACTACTTACTCTAGCTTCCCGGCAACAATTAAT AGACTGGATGGAGGCGGATAAAGTTGCAGGACCACTTCTGCGCTCGGCCCT TCCGGCTGGCTGGTTTATTGCTGATAAATCTGGAGCCGGTGAGCGTGGGTC TCGCGGTATCATTGCAGCACTGGGGCCAGATGGTAAGCCCTCCCGTATCGT AGTTATCTACACGACGGGGAGTCAGGCAACTATGGATGAACGAT^TAGACA GATCGCTGAGATAGGTGCCTCACTGATTAAGCATTGGTAACTGTCAGACCA AGTTTACTCATATATACTTTAGATTGATTTAAAACTTCATTTTTAATTTAA AAGGATCTAGGTGAAGATCCTTTTTGATAATCTCATGACCAAAATCCCTTA ACGTGAGTTTTCGTTCCACTGAGCGTCAGACCCCGTAGAAAAGATCAAAGG ATCTTCTTGAGATCCTTTTTTTCTGCGCGTAATCTGCTGCTTGCAAACAAA AAAACCACCGCTACCAGCGGTGGTTTGTTTGCCGGATCAAGAGCTACCAAC TCTTTTTCCGAAGGTAACTGGCTTCAGCAGAGCGCAGATACCAAATACTGT TCTTCTAGTGTAGCCGTAGTTAGGCCACCACTTCAAGAACTCTGTAGCACC GCCTACATACCTCGCTCTGCTAATCCTGTTACCAGTGGCTGCTGCCAGTGG CGATAAGTCGTGTCTTACCGGGTTGGACTCAAGACGATAGTTACCGGATAA GGCGCAGCGGTCGGGCTGAACGGGGGGTTCGTGCACACAGCCCAGCTTGGA GCGAACGACCTACACCGAACTGAGATACCTACAGCGTGAGCTATGAGAAAG 158366.doc -385- 201211252
SEQ ID NO 載體名稱 核苷酸序列 123456789012345678901234567890123456789012345678901 CGCCACGCTTCCCGAAGGGAGAAAGGCGGACAGGTATCCGGTAAGCGGCAG GGTCGGAACAGGAGAGCGCACGAGGGAGCTTCCAGGGGGAAACGCCTGGTA TCTTTATAGTCCTGTCGGGTTTCGCCACCTCTGACTTGAGCGTCGATTTTT GTGATGCTCGTCAGGGGGGCGGAGCCTATGGAAAAACGCCAGCAACGCGGC CTTTTTACGGTTCCTGGCCTTTTGCTGGCCTTTTGCTCACATGTTCTTTCC TGCGTTATCCCCTGATTCTGTGGATAACCGTATTACCGCCTTTGAGTGAGC TGATACCGCTCGCCGCAGCCGAACGACCGAGCGCAGCGAGTCAGTGAGCGA GGAAGCGGAAGAGCGCCCAATACGCAAACCGCCTCTCCCCGCGCGTTGGCC GATTCATTAATGCAGCTGGCACGACAGGTTTCCCGACTGGAAAGCGGGCAG TGAGCGCAACGCAATTAATGTGAGTTAGCTCACTCATTAGGCACCCCAGGC TTTACACTTTATGCTTCCGGCTCGTATGTTGTGTGGAATTGTGAGCGGATA ACAATTTCACACAGGAAACAGCTATGACCATGATTACGCCAAGCTCTAGCT AGAGGTCGAGTCCCTCCCCAGCAGGCAGAAGTATGCAAAGCATGCATCTCA ATTAGTCAGCAACCATAGTCCCGCCCCTT^ACTCCGCCCATCCCGCCCCTAA CTCCGCCCAGTTCCGCCCATTCTCCGCCCCATGGCTGACTAATTTTTTTTA TTTATGCAGAGGCCGAGGCCGCCTCGGCCTCTGAGCTATTCCAGAAGTAGT GAGGAGGCTTTTTTGGAGGCCTAGGCTTTTGCAAAAAGCTTTGCAAAGATG GATAAAGTTTTAAACAGAGAGGAATCTTTGCAGCTAATGGACCTTCTAGGT CTTGT^AAGGAGTGGGAATTGGCTCCGGTGCCCGTCAGTGGGCAGAGCGCAC ATCGCCCACAGTCCCCGAGT^GTTGGGGGGAGGGGTCGGCAATTGAACCGG TGCCTAGAGAAGGTGGCGCGGGGTAAACTGGGAAAGTGATGTCGTGTACTG GCTCCGCCTTTTTCCCGAGGGTGGGGGAGAACCGTATATAAGTGCAGTAGT CGCCGTGAACGTTCTTTTTCGCAACGGGTTTGCCGCCAGAACACAGGTAAG TGCCGTGTGTGGTTCCCGCGGGCCTGGCCTCTTTACGGGTTATGGCCCTTG CGTGCCTTGAATTACTTCCACCTGGCTGCAGTACGTGATTCTTGATCCCGA GCTTCGGGTTGGAAGTGGGTGGGAGAGTTCGAGGCCTTGCGCTTAAGGAGC CCCTTCGCCTCGTGCTTGAGTTGAGGCCTGGCCTGGGCGCTGGGGCCGCCG CGTGCGAATCTGGTGGCACCTTCGCGCCTGTCTCGCTGCTTTCGATAAGTC TCTAGCCATTTAAAATTTTTGATGACCTGCTGCGACGCTTTTTTTCTGGCA AGATAGTCTTGTAAATGCGGGCCAAGATCTGCACACTGGTATTTCGGTTTT TGGGGCCGCGGGCGGCGACGGGGCCCGTGCGTCCCAGCGCACATGTTCGGC GAGGCGGGGCCTGCGAGCGCGGCCACCGAGAATCGGACGGGGGTAGTCTCA AGCTGGCCGGCCTGCTCTGGTGCCTGGCCTCGCGCCGCCGTGTATCGCCCC GCCCTGGGCGGCAAGGCTGGCCCGGTCGGCACCAGTTGCGTGAGCGGAAAG ATGGCCGCTTCCCGGCCCTGCTGCAGGGAGCTCAAAATGGAGGACGCGGCG CTCGGGAGAGCGGGCGGGTGAGTCACCCACACAAAGGAAAAGGGCCTTTCC GTCCTCAGCCGTCGCTTCATGTGACTCCACGGAGTACCGGGCGCCGTCCAG GCACCTCGATTAGTTCTCGAGCTTTTGGAGTACGTCGTCTTTAGGTTGGGG GGAGGGGTTTTATGCGATGGAGTTTCCCCACACTGAGTGGGTGGAGACTGA AGTTAGGCCAGCTTGGCACTTGATGTAATTCTCCTTGGAATTTGCCCTTTT TGAGTTTGGATCTTGGTTCATTCTCAAGCCTCAGACAGTGGTTCAAAGTTT TTTTCTTCCATTTCAGGTGTCGTGAGGAATTCTCTAGAGATCCCTCGACCT CGAGATCCATTGTGCCCGGGCGCCACCATGACTTGGACCCCACTCCTCTTC CTCACCCTCCTCCTCCACTGCACAGGAAGCTTATCG 307 V4 ACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTG AAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGA GAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCC CAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGC AGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCC TGCG7VAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAAC AGGGGAGAGTGTTGAGCGGCCGCTCGAGGCCGGCAAGGCCGGATCCCCCGA CCTCGACCTCTGGCTAATAAAGGT^AATTTATTTTCATTGCAATAGTGTGTT GGAATTTTTTGTGTCTCTCACTCGGAAGGACATATGGGAGGGCAAATCATT TGGTCGAGATCCCTCGGAGATCTCTAGCTAGAGGATCGATCCCCGCCCCGG ACGAACTT^ACCTGACTACGACATCTCTGCCCCTTCTTCGCGGGGCAGTGC ATGTAATCCCTTCAGTTGGTTGGTACAACTTGCCAACTGGGCCCTGTTCCA CATGTGACACGGGGGGGGACCAAACACAAAGGGGTTCTCTGACTGTAGTTG ACATCCTTAT7VAATGGATGTGCACATTTGCCAACACTGAGTGGCTTTCATC CTGGAGCAGACTTTGCAGTCTGTGGACTGCAACACAACATTGCCTTTATGT GTAACTCTTGGCTGAAGCTCTTACACCAATGCTGGGGGACATGTACCTCCC
158366.doc -386· 201211252
SEQ Π) NO 載體名稱 核苷酸序列 123456789012345678901234567890123456789012345678901 AGGGGCCCAGGAAGACTACGGGAGGCTACACCAACGTCAATCAGAGGGGCC TGTGTAGCTACCGATAAGCGGACCCTCAAGAGGGCATTAGCAATAGTGTTT ATAAGGCCCCCTTGTTAACCCTAAACGGGTAGCATATGCTTCCCGGGTAGT AGTATATACTATCCAGACTAACCCTAATTCAATAGCATATGTTACCCAACG GGAAGCATATGCTATCGAATTAGGGTTAGTAAAAGGGTCCTAAGGAACAGC GATATCTCCCACCCCATGAGCTGTCACGGTTTTATTTACATGGGGTCAGGA TTCCACGAGGGTAGTGAACCATTTTAGTCACAAGGGCAGTGGCTGAAGATC AAGGAGCGGGCAGTGAACTCTCCTGAATCTTCGCCTGCTTCTTCATTCTCC TTCGTTTAGCTAATAGAATAACTGCTGAGTTGTGAACAGTAAGGTGTATGT GAGGTGCTCGAAAACAAGGTTTCAGGTGACGCCCCCAGAATAAAATTTGGA CGGGGGGTTCAGTGGTGGCATTGTGCTATGACACCAATATAACCCTCACAA ACCCCTTGGGCAATAAATACTAGTGTAGGAATGAAACATTCTGAATATCTT TAACAATAGAAATCCATGGGGTGGGGACAAGCCGTAAAGACTGGATGTCCA TCTCACACGAATTTATGGCTATGGGCAACACATAATCCTAGTGCAATATGA TACTGGGGTTATTAAGATGTGTCCCAGGCAGGGACCAAGACAGGTGAACCA TGTTGTTACACTCTATTTGTAACAAGGGGAAAGAGAGTGGACGCCGACAGC AGCGGACTCCACTGGTTGTCTCTAACACCCCCGAAAATTAAACGGGGCTCC ACGCCAATGGGGCCCATAAACAAAGACAAGTGGCCACTCTTTTTTTTGAAA TTGTGGAGTGGGGGCACGCGTCAGCCCCCACACGCCGCCCTGCGGTTTTGG ACTGTAAAATAAGGGTGTAATAACTTGGCTGATTGTAACCCCGCTAACCAC TGCGGTCAAACCACTTGCCCACAAAACCACTAATGGCACCCCGGGGAATAC CTGCATAAGTAGGTGGGCGGGCCAAGATAGGGGCGCGATTGCTGCGATCTG GAGGACAAATTACACACACTTGCGCCTGAGCGCCAAGCACAGGGTTGTTGG TCCTCATATTCACGAGGTCGCTGAGAGCACGGTGGGCTAATGTTGCCATGG GTAGCATATACTACCCAAATATCTGGATAGCATATGCTATCCTAATCTATA TCTGGGTAGCATAGGCTATCCTAATCTATATCTGGGTAGCATATGCTATCC TAATCTATATCTGGGTAGTATATGCTATCCTAATTTATATCTGGGTAGCAT AGGCTATCCTAATCTATATCTGGGTAGCATATGCTATCCTAATCTATATCT GGGTAGTATATGCTATCCTAATCTGTATCCGGGTAGCATATGCTATCCTAA TAGAGATTAGGGTAGTATATGCTATCCTAATTTATATCTGGGTAGCATATA CTACCCAAATATCTGGATAGCATATGCTATCCTAATCTATATCTGGGTAGC ATATGCTATCCTAATCTATATCTGGGTAGCATAGGCTATCCTAATCTATAT CTGGGTAGCATATGCTATCCTAATCTATATCTGGGTAGTATATGCTATCCT AATTTATATCTGGGTAGCATAGGCTATCCTAATCTATATCTGGGTAGCATA TGCTATCCTAATCTATATCTGGGTAGTATATGCTATCCTAATCTGTATCCG GGTAGCATATGCTATCCTCATGATAAGCTGTCAAACATGAGAATTTTCTTG AAGACGAAAGGGCCTCGTGATACGCCTATTTTTATAGGTTAATGTCATGAT AATAATGGTTTCTTAGACGTCAGGTGGCACTTTTCGGGGAAATGTGCGCGG AACCCCTATTTGTTTATTTTTCTAAATACATTCAAATATGTATCCGCTCAT GAGACAATAACCCTGATAAATGCTTCAATAATATTGAAAAAGGAAGAGTAT GAGTATTCAACATTTCCGTGTCGCCCTTATTCCCTTTTTTGCGGCATTTTG CCTTCCTGTTTTTGCTCACCCAGAAACGCTGGTGAAAGTAAAAGATGCTGA AGATCAGTTGGGTGCACGAGTGGGTTACATCGAACTGGATCTCAACAGCGG TAAGATCCTTGAGAGTTTTCGCCCCGAAGAACGTTTTCCAATGATGAGCAC TTTTAAAGTTCTGCTATGTGGCGCGGTATTATCCCGTGTTGACGCCGGGCA AGAGCAACTCGGTCGCCGCATACACTATTCTCAGAATGACTTGGTTGAGTA CTCACCAGTCACAGAAAAGCATCTTACGGATGGCATGACAGTAAGAGAATT ATGCAGTGCTGCCATAACCATGAGTGATAACACTGCGGCCAACTTACTTCT GACAACGATCGGAGGACCGAAGGAGCTAACCGCTTTTTTGCACAACATGGG GGATCATGTAACTCGCCTTGATCGTTGGGAACCGGAGCTGAATGAAGCCAT ACCAAACGACGAGCGTGACACCACGATGCCTGCAGCAATGGCAACAACGTT GCGCAAACTATTAACTGGCGAACTACTTACTCTAGCTTCCCGGCAACAATT AATAGACTGGATGGAGGCGGATAAAGTTGCAGGACCACTTCTGCGCTCGGC CCTTCCGGCTGGCTGGTTTATTGCTGATAAATCTGGAGCCGGTGAGCGTGG GTCTCGCGGTATCATTGCAGCACTGGGGCCAGATGGTAAGCCCTCCCGTAT CGTAGTTATCTACACGACGGGGAGTCAGGCAACTATGGATGAACGAAATAG ACAGATCGCTGAGATAGGTGCCTCACTGATTAAGCATTGGTAACTGTCAGA CCAAGTTTACTCATATATACTTTAGATTGATTTAAAACTTCATTTTTAATT TAAAAGGATCTAGGTGAAGATCCTTTTTGATAATCTCATGACCAAAATCCC TTAACGTGAGTTTTCGTTCCACTGAGCGTCAGACCCCGTAGAAAAGATCAA 15S366.doc •387· 201211252
SEQ Π) NO 載體名稱 核苷酸序列 123456789012345678901234567890123456789012345678901 AGGATCTTCTTGAGATCCTTTTTTTCTGCGCGTAATCTGCTGCTTGCAAAC AAAAAAACCACCGCTACCAGCGGTGGTTTGTTTGCCGGATCAAGAGCTACC AACTCTTTTTCCGAAGGTAACTGGCTTCAGCAGAGCGCAGATACCAAATAC TGTTCTTCTAGTGTAGCCGTAGTTAGGCCACCACTTCAAGAACTCTGTAGC ACCGCCTACATACCTCGCTCTGCTAATCCTGTTACCAGTGGCTGCTGCCAG TGGCGATAAGTCGTGTCTTACCGGGTTGGACTCT^AGACGATAGTTACCGGA TAAGGCGCAGCGGTCGGGCTGAACGGGGGGTTCGTGCACACAGCCCAGCTT GGAGCGAACGACCTACACCGAACTGAGATACCTACAGCGTGAGCTATGAGA AAGCGCCACGCTTCCCGAAGGGAGAAAGGCGGACAGGTATCCGGTAAGCGG CAGGGTCGGT^ACAGGAGAGCGCACGAGGGAGCTTCCAGGGGGAAACGCCTG GTATCTTTATAGTCCTGTCGGGTTTCGCCACCTCTGACTTGAGCGTCGATT TTTGTGATGCTCGTCAGGGGGGCGGAGCCTATGGAAAAACGCCAGCAACGC GGCCTTTTTACGGTTCCTGGCCTTTTGCTGGCCTTTTGCTCACATGTTCTT TCCTGCGTTATCCCCTGATTCTGTGGATAACCGTATTACCGCCTTTGAGTG AGCTGATACCGCTCGCCGCAGCCGAACGACCGAGCGCAGCGAGTCAGTGAG CGAGGAAGCGGAAGAGCGCCCAATACGCAAACCGCCTCTCCCCGCGCGTTG GCCGATTCATTAATGCAGCTGGCACGACAGGTTTCCCGACTGGAAAGCGGG CAGTGAGCGCAACGCAATTAATGTGAGTTAGCTCACTCATTAGGCACCCCA GGCTTTACACTTTATGCTTCCGGCTCGTATGTTGTGTGGAATTGTGAGCGG ATAACAATTTCACACAGGAAACAGCTATGACCATGATTACGCCAAGCTCTA GCTAGAGGTCGAGTCCCTCCCCAGCAGGCAGAAGTATGCAAAGCATGCATC TCAATTAGTCAGCAACCATAGTCCCGCCCCTAACTCCGCCCATCCCGCCCC TAACTCCGCCCAGTTCCGCCCATTCTCCGCCCCATGGCTGACTAATTTTTT TTATTTATGCAGAGGCCGAGGCCGCCTCGGCCTCTGAGCTATTCCAGAAGT AGTGAGGAGGCTTTTTTGGAGGCCTAGGCTTTTGCAAAAAGCTTTGCAAAG ATGGATAAAGTTTTAAACAGAGAGGAATCTTTGCAGCTAATGGACCTTCTA GGTCTTGAAAGGAGTGGGAATTGGCTCCGGTGCCCGTCAGTGGGCAGAGCG CACATCGCCCACAGTCCCCGAGAAGTTGGGGGGAGGGGTCGGCAATTGAAC CGGTGCCTAGAGAAGGTGGCGCGGGGTAAACTGGGAAAGTGATGTCGTGTA CTGGCTCCGCCTTTTTCCCGAGGGTGGGGGAGAACCGTATATAAGTGCAGT AGTCGCCGTGAACGTTCTTTTTCGCAACGGGTTTGCCGCCAGAACACAGGT AAGTGCCGTGTGTGGTTCCCGCGGGCCTGGCCTCTTTACGGGTTATGGCCC TTGCGTGCCTTGAATTACTTCCACCTGGCTGCAGTACGTGATTCTTGATCC CGAGCTTCGGGTTGGAAGTGGGTGGGAGAGTTCGAGGCCTTGCGCTTAAGG AGCCCCTTCGCCTCGTGCTTGAGTTGAGGCCTGGCCTGGGCGCTGGGGCCG CCGCGTGCGAATCTGGTGGCACCTTCGCGCCTGTCTCGCTGCTTTCGATAA GTCTCTAGCCATTTAAAATTTTTGATGACCTGCTGCGACGCTTTTTTTCTG GCAAGATAGTCTTGTAAATGCGGGCCAAGATCTGCACACTGGTATTTCGGT TTTTGGGGCCGCGGGCGGCGACGGGGCCCGTGCGTCCCAGCGCACATGTTC GGCGAGGCGGGGCCTGCGAGCGCGGCCACCGAGAATCGGACGGGGGTAGTC TCAAGCTGGCCGGCCTGCTCTGGTGCCTGGCCTCGCGCCGCCGTGTATCGC CCCGCCCTGGGCGGCAAGGCTGGCCCGGTCGGCACCAGTTGCGTGAGCGGA AAGATGGCCGCTTCCCGGCCCTGCTGCAGGGAGCTCAAAATGGAGGACGCG GCGCTCGGGAGAGCGGGCGGGTGAGTCACCCACACAAAGGAAAAGGGCCTT TCCGTCCTCAGCCGTCGCTTCATGTGACTCCACGGAGTACCGGGCGCCGTC CAGGCACCTCGATTAGTTCTCGAGCTTTTGGAGTACGTCGTCTTTAGGTTG GGGGGAGGGGTTTTATGCGATGGAGTTTCCCCACACTGAGTGGGTGGAGAC TGAAGTTAGGCCAGCTTGGCACTTGATGTAATTCTCCTTGGAATTTGCCCT TTTTGAGTTTGGATCTTGGTTCATTCTCAAGCCTCAGACAGTGGTTCAAAG TTTTTTTCTTCCATTTCAGGTGTCGTGAGGAATTCTCTAGAGATCCCTCGA CCTCGAGATCCATTGTGCCCGGGCGCACCATGACTTGGACCCCACTCCTCT TCCTCACCCTCCTCCTCCACTGCACAGGAAGCTTATCG 308 V5 CAACCCAAGGCTGCCCCCTCGGTCACTCTGTTCCCGCCCTCCTCTGAGGAG CTTCAAGCC7\ACAAGGCCACACTGGTGTGTCTCATAAGTGACTTCTACCCG GGAGCCGTGACAGTGGCCTGGAAGGCAGATAGCAGCCCCGTCAAGGCGGGA GTGGAGACCACCACACCCTCCAAACAAAGCAACAACAAGTACGCGGCCAGC AGCTACCTGAGCCTGACGCCTGAGCAGTGGAAGTCCCACAGAAGCTACAGC TGCCAGGTCACGCATG7^AGGGAGCACCGTGGAGAAGACAGTGGCCCCTACA GAATGTTCATGAGCGGCCGCTCGAGGCCGGCAAGGCCGGATCCCCCGACCT CGACCTCTGGCTAATAAAGGAAATTTATTTTCATTGCAATAGTGTGTTGGA
158366.doc -388· 201211252
SEQ ID NO 載體名稱 核苷酸序列 123456789012345678901234567890123456789012345678901 ATTTTTTGTGTCTCTCACTCGGAAGGACATATGGGAGGGCAAATCATTTGG TCGAGATCCCTCGGAGATCTCTAGCTAGAGGATCGATCCCCGCCCCGGACG AACTAAACCTGACTACGACATCTCTGCCCCTTCTTCGCGGGGCAGTGCATG TAATCCCTTCAGTTGGTTGGTACAACTTGCCAACTGGGCCCTGTTCCACAT GTGACACGGGGGGGGACCAAACACAAAGGGGTTCTCTGACTGTAGTTGACA TCCTTATAAATGGATGTGCACATTTGCCAACACTGAGTGGCTTTCATCCTG GAGCAGACTTTGCAGTCTGTGGACTGCAACACAACATTGCCTTTATGTGTA ACTCTTGGCTGAAGCTCTTACACCAATGCTGGGGGACATGTACCTCCCAGG GGCCCAGGAAGACTACGGGAGGCTACACCAACGTCAATCAGAGGGGCCTGT GTAGCTACCGATAAGCGGACCCTCAAGAGGGCATTAGCAATAGTGTTTATA AGGCCCCCTTGTTTVACCCTAAACGGGTAGCATATGCTTCCCGGGTAGTAGT ATATACTATCCAGACTAACCCTAATTCAATAGCATATGTTACCCAACGGGA AGCATATGCTATCGAATTAGGGTTAGTAAAAGGGTCCTAAGGAACAGCGAT ATCTCCCACCCCATGAGCTGTCACGGTTTTATTTACATGGGGTCAGGATTC CACGAGGGTAGTGAACCATTTTAGTCACAAGGGCAGTGGCTGAAGATCAAG GAGCGGGCAGTGAACTCTCCTGAATCTTCGCCTGCTTCTTCATTCTCCTTC GTTTAGCTAATAGAATAACTGCTGAGTTGTGAACAGTAAGGTGTATGTGAG GTGCTCGAAAACAAGGTTTCAGGTGACGCCCCCAGTVATAAAATTTGGACGG GGGGTTCAGTGGTGGCATTGTGCTATGACACCAATATAACCCTCACAAACC CCTTGGGCAATAAATACTAGTGTAGGAATGAAACATTCTGAATATCTTTAA CAATAGAAATCCATGGGGTGGGGACAAGCCGTAAAGACTGGATGTCCATCT CACA'CGAATTTATGGCTATGGGCAACACATAATCCTAGTGCAATATGATAC TGGGGTTATTAAGATGTGTCCCAGGCAGGGACCAAGACAGGTGAACCATGT TGTTACACTCTATTTGTAACAAGGGGAAAGAGAGTGGACGCCGACAGCAGC GGACTCCACTGGTTGTCTCTAACACCCCCGA7U\ATTAAACGGGGCTCCACG CCAATGGGGCCCATAAACAAAGACAAGTGGCCACTCTTTTTTTTGAAATTG TGGAGTGGGGGCACGCGTCAGCCCCCACACGCCGCCCTGCGGTTTTGGACT GTAAAATAAGGGTGTAATAACTTGGCTGATTGTAACCCCGCTAACCACTGC GGTCAAACCACTTGCCCACAAAACCACTAATGGCACCCCGGGGAATACCTG CATAAGTAGGTGGGCGGGCCAAGATAGGGGCGCGATTGCTGCGATCTGGAG GACAAATTACACACACTTGCGCCTGAGCGCCAAGCACAGGGTTGTTGGTCC TCATATTCACGAGGTCGCTGAGAGCACGGTGGGCTAATGTTGCCATGGGTA GCATATACTACCCAAATATCTGGATAGCATATGCTATCCTAATCTATATCT GGGTAGCATAGGCTATCCTAATCTATATCTGGGTAGCATATGCTATCCTAA TCTATATCTGGGTAGTATATGCTATCCTAATTTATATCTGGGTAGCATAGG CTATCCTAATCTATATCTGGGTAGCATATGCTATCCTAATCTATATCTGGG TAGTATATGCTATCCTAATCTGTATCCGGGTAGCATATGCTATCCTAATAG AGATTAGGGTAGTATATGCTATCCTAATTTATATCTGGGTAGCATATACTA CCCAAATATCTGGATAGCATATGCTATCCTAATCTATATCTGGGTAGCATA TGCTATCCTAATCTATATCTGGGTAGCATAGGCTATCCT7VATCTATATCTG GGTAGCATATGCTATCCTAATCTATATCTGGGTAGTATATGCTATCCTAAT TTATATCTGGGTAGCATAGGCTATCCTAATCTATATCTGGGTAGCATATGC TATCCTAATCTATATCTGGGTAGTATATGCTATCCTAATCTGTATCCGGGT AGCATATGCTATCCTCATGATAAGCTGTCAAACATGAGAATTTTCTTGAAG ACGAAAGGGCCTCGTGATACGCCTATTTTTATAGGTTAATGTCATGATAAT AATGGTTTCTTAGACGTCAGGTGGCACTTTTCGGGGAAATGTGCGCGGAAC CCCTATTTGTTTATTTTTCTAAATACATTCAAATATGTATCCGCTCATGAG ACAATAACCCTGATAAATGCTTCAATAATATTGAAA7\AGGAAGAGTATGAG TATTCAACATTTCCGTGTCGCCCTTATTCCCTTTTTTGCGGCATTTTGCCT TCCTGTTTTTGCTCACCCAGAAACGCTGGTGAAAGTAAAAGATGCTGAAGA TCAGTTGGGTGCACGAGTGGGTTACATCGAACTGGATCTCAACAGCGGTAA GATCCTTGAGAGTTTTCGCCCCGAAGAACGTTTTCCAATGATGAGCACTTT TAAAGTTCTGCTATGTGGCGCGGTATTATCCCGTGTTGACGCCGGGCAAGA GCAACTCGGTCGCCGCATACACTATTCTCAGAATGACTTGGTTGAGTACTC ACCAGTCACAGAAAAGCATCTTACGGATGGCATGACAGTAAGAGAATTATG CAGTGCTGCCAT7\ACCATGAGTGATAACACTGCGGCCAACTTACTTCTGAC AACGATCGGAGGACCGAAGGAGCTAACCGCTTTTTTGCACAACATGGGGGA TCATGTAACTCGCCTTGATCGTTGGGAACCGGAGCTGAATGAAGCCATACC AAACGACGAGCGTGACACCACGATGCCTGCAGCAATGGCAACAACGTTGCG CAAACTATTAACTGGCGi\ACTACTTACTCTAGCTTCCCGGCAACAATTAAT 158366.doc -389· 201211252
SEQ ID NO 載體名稱 核苷睃序列 123456789012345678901234567890123456789012345678901 AGACTGGATGGAGGCGGATAAAGTTGCAGGACCACTTCTGCGCTCGGCCCT TCCGGCTGGCTGGTTTATTGCTGATAAATCTGGAGCCGGTGAGCGTGGGTC TCGCGGTATCATTGCAGCACTGGGGCCAGATGGTAAGCCCTCCCGTATCGT AGTTATCTACACGACGGGGAGTCAGGCAACTATGGATGAACGAAATAGACA GATCGCTGAGATAGGTGCCTCACTGATTAAGCATTGGTAACTGTCAGACCA AGTTTACTCATATATACTTTAGATTGATTTAAAACTTCATTTTTAATTTAA AAGGATCTAGGTGAAGATCCTTTTTGATAATCTCATGACCAAAATCCCTTA ACGTGAGTTTTCGTTCCACTGAGCGTCAGACCCCGTAGAAAAGATCAAAGG ATCTTCTTGAGATCCTTTTTTTCTGCGCGTAATCTGCTGCTTGCAAACAAA AAAACCACCGCTACCAGCGGTGGTTTGTTTGCCGGATCAAGAGCTACCAAC TCTTTTTCCGAAGGTAACTGGCTTCAGCAGAGCGCAGATACCAAATACTGT TCTTCTAGTGTAGCCGTAGTTAGGCCACCACTTCAAGAACTCTGTAGCACC GCCTACATACCTCGCTCTGCTAATCCTGTTACCAGTGGCTGCTGCCAGTGG CGATAAGTCGTGTCTTACCGGGTTGGACTCAAGACGATAGTTACCGGATAA GGCGCAGCGGTCGGGCTGAACGGGGGGTTCGTGCACACAGCCCAGCTTGGA GCGAACGACCTACACCGAACTGAGATACCTACAGCGTGAGCTATGAGAAAG CGCCACGCTTCCCGAAGGGAGAAAGGCGGACAGGTATCCGGTAAGCGGCAG GGTCGGAACAGGAGAGCGCACGAGGGAGCTTCCAGGGGGAAACGCCTGGTA TCTTTATAGTCCTGTCGGGTTTCGCCACCTCTGACTTGAGCGTCGATTTTT GTGATGCTCGTCAGGGGGGCGGAGCCTATGGAAAAACGCCAGCAACGCGGC CTTTTTACGGTTCCTGGCCTTTTGCTGGCCTTTTGCTCACATGTTCTTTCC TGCGTTATCCCCTGATTCTGTGGATAACCGTATTACCGCCTTTGAGTGAGC TGATACCGCTCGCCGCAGCCGAACGACCGAGCGCAGCGAGTCAGTGAGCGA GGAAGCGGAAGAGCGCCCAATACGCAAACCGCCTCTCCCCGCGCGTTGGCC GATTCATTAATGCAGCTGGCACGACAGGTTTCCCGACTGGAAAGCGGGCAG TGAGCGCAACGCAATTAATGTGAGTTAGCTCACTCATTAGGCACCCCAGGC TTTACACTTTATGCTTCCGGCTCGTATGTTGTGTGGAATTGTGAGCGGATA ACAATTTCACACAGGAAACAGCTATGACCATGATTACGCCAAGCTCTAGCT AGAGGTCGAGTCCCTCCCCAGCAGGCAGAAGTATGCAAAGCATGCATCTCA ATTAGTCAGCAACCATAGTCCCGCCCCTAACTCCGCCCATCCCGCCCCTAA CTCCGCCCAGTTCCGCCCATTCTCCGCCCCATGGCTGACTAATTTTTTTTA TTTATGCAGAGGCCGAGGCCGCCTCGGCCTCTGAGCTATTCCAGAAGTAGT GAGGAGGCTTTTTTGGAGGCCTAGGCTTTTGCAAAAAGCTTTGCAAAGATG GATAAAGTTTTAAACAGAGAGGAATCTTTGCAGCTAATGGACCTTCTAGGT CTTGAAAGGAGTGGGAATTGGCTCCGGTGCCCGTCAGTGGGCAGAGCGCAC ATCGCCCACAGTCCCCGAGAAGTTGGGGGGAGGGGTCGGCAATTGAACCGG TGCCTAGAGAAGGTGGCGCGGGGTAAACTGGGAAAGTGATGTCGTGTACTG GCTCCGCCTTTTTCCCGAGGGTGGGGGAGAACCGTATATAAGTGCAGTAGT CGCCGTGAACGTTCTTTTTCGCAACGGGTTTGCCGCCAGAACACAGGTAAG TGCCGTGTGTGGTTCCCGCGGGCCTGGCCTCTTTACGGGTTATGGCCCTTG CGTGCCTTGAATTACTTCCACCTGGCTGCAGTACGTGATTCTTGATCCCGA GCTTCGGGTTGGAAGTGGGTGGGAGAGTTCGAGGCCTTGCGCTTAAGGAGC CCCTTCGCCTCGTGCTTGAGTTGAGGCCTGGCCTGGGCGCTGGGGCCGCCG CGTGCGAATCTGGTGGCACCTTCGCGCCTGTCTCGCTGCTTTCGATAAGTC TCTAGCCATTTAAAATTTTTGATGACCTGCTGCGACGCTTTTTTTCTGGCA AGATAGTCTTGTAAATGCGGGCCAAGATCTGCACACTGGTATTTCGGTTTT TGGGGCCGCGGGCGGCGACGGGGCCCGTGCGTCCCAGCGCACATGTTCGGC GAGGCGGGGCCTGCGAGCGCGGCCACCGAGAATCGGACGGGGGTAGTCTCA AGCTGGCCGGCCTGCTCTGGTGCCTGGCCTCGCGCCGCCGTGTATCGCCCC GCCCTGGGCGGCAAGGCTGGCCCGGTCGGCACCAGTTGCGTGAGCGGAAAG ATGGCCGCTTCCCGGCCCTGCTGCAGGGAGCTCAAAATGGAGGACGCGGCG CTCGGGAGAGCGGGCGGGTGAGTCACCCACACAAAGGAA7^AGGGCCTTTCC GTCCTCAGCCGTCGCTTCATGTGACTCCACGGAGTACCGGGCGCCGTCCAG GCACCTCGATTAGTTCTCGAGCTTTTGGAGTACGTCGTCTTTAGGTTGGGG GGAGGGGTTTTATGCGATGGAGTTTCCCCACACTGAGTGGGTGGAGACTGA AGTTAGGCCAGCTTGGCACTTGATGT^ATTCTCCTTGGAATTTGCCCTTTT TGAGTTTGGATCTTGGTTCATTCTCT^AGCCTCAGACAGTGGTTCAAAGTTT TTTTCTTCCATTTCAGGTGTCGTGAGGAATTCTCTAGAGATCCCTCGACCT CGAGATCCATTGTGCCCGGGCGCCACCATGGACATGCGCGTGCCCGCCCAG CTGCTGGGCCTGCTGCTGCTGTGGTTCCCCGGCTCGCGATGC
158366.doc -390- 201211252
SEQ ID NO 載體名稱 核苷酸序列 123456789012345678901234567890123456789012345678901 309 V7 GCGTCGACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGC ACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCC GAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCAC ACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTG GTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTG AATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCATVATCT TGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGCCGCGGGG GGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATC TCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGAC CCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCC AAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGC GTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGC AAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAA GCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGC GAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTC TATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAAC AACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTC TACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTC TCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGC CTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGAGCGGCCGCTCGAGGCCGGCAAGGCCGG ATCCCCCGACCTCGACCTCTGGCTAATAAAGGAAATTTATTTTCATTGCAA TAGTGTGTTGGAATTTTTTGTGTCTCTCACTCGG7VAGGACATATGGGAGGG CAAATCATTTGGTCGAGATCCCTCGGAGATCTCTAGCTAGAGGATCGATCC CCGCCCCGGACGAACTAAACCTGACTACGACATCTCTGCCCCTTCTTCGCG GGGCAGTGCATGTAATCCCTTCAGTTGGTTGGTACAACTTGCC7VACTGGGC CCTGTTCCACATGTGACACGGGGGGGGACCAAACACAAAGGGGTTCTCTGA CTGTAGTTGACATCCTTATAAATGGATGTGCACATTTGCCAACACTGAGTG GCTTTCATCCTGGAGCAGACTTTGCAGTCTGTGGACTGCAACACAACATTG CCTTTATGTGTAACTCTTGGCTGAAGCTCTTACACCAATGCTGGGGGACAT GTACCTCCCAGGGGCCCAGGAAGACTACGGGAGGCTACACCAACGTCAATC AGAGGGGCCTGTGTAGCTACCGATAAGCGGACCCTCAAGAGGGCATTAGCA ATAGTGTTTATAAGGCCCCCTTGTTAACCCTAAACGGGTAGCATATGCTTC CCGGGTAGTAGTATATACTATCCAGACTAACCCTAATTCAATAGCATATGT TACCCAACGGGAAGCATATGCTATCGAATTAGGGTTAGTAAAAGGGTCCTA AGGAACAGCGATATCTCCCACCCCATGAGCTGTCACGGTTTTATTTACATG GGGTCAGGATTCCACGAGGGTAGTGAACCATTTTAGTCACAAGGGCAGTGG CTGAAGATCAAGGAGCGGGCAGTGAACTCTCCTGAATCTTCGCCTGCTTCT TCATTCTCCTTCGTTTAGCTAATAGAATAACTGCTGAGTTGTGAACAGTAA GGTGTATGTGAGGTGCTCGAAAACAAGGTTTCAGGTGACGCCCCCAGAATA AAATTTGGACGGGGGGTTCAGTGGTGGCATTGTGCTATGACACCAATATAA CCCTCACAAACCCCTTGGGCAATAAATACTAGTGTAGGAATGAAACATTCT GAATATCTTTAACAATAGAAATCCATGGGGTGGGGACAAGCCGTAAAGACT GGATGTCCATCTCACACGAATTTATGGCTATGGGCAACACATAATCCTAGT GCAATATGATACTGGGGTTATTAAGATGTGTCCCAGGCAGGGACCAAGACA GGTGAACCATGTTGTTACACTCTATTTGTAACAAGGGGAAAGAGAGTGGAC GCCGACAGCAGCGGACTCCACTGGTTGTCTCTAACACCCCCGAAAATTAAA CGGGGCTCCACGCCAATGGGGCCCATAAACAAAGACAAGTGGCCACTCTTT TTTTTGAAATTGTGGAGTGGGGGCACGCGTCAGCCCCCACACGCCGCCCTG CGGTTTTGGACTGTAAAATAAGGGTGTAATAACTTGGCTGATTGTAACCCC GCTAACCACTGCGGTCAAACCACTTGCCCACT^AAACCACTAATGGCACCCC GGGGAATACCTGCATAAGTAGGTGGGCGGGCCAAGATAGGGGCGCGATTGC TGCGATCTGGAGGACAAATTACACACACTTGCGCCTGAGCGCCAAGCACAG GGTTGTTGGTCCTCATATTCACGAGGTCGCTGAGAGCACGGTGGGCTAATG TTGCCATGGGTAGCATATACTACCCAAATATCTGGATAGCATATGCTATCC TAATCTATATCTGGGTAGCATAGGCTATCCTTyVTCTATATCTGGGTAGCAT ATGCTATCCTAATCTATATCTGGGTAGTATATGCTATCCTAATTTATATCT GGGTAGCATAGGCTATCCTAATCTATATCTGGGTAGCATATGCTATCCTAA TCTATATCTGGGTAGTATATGCTATCCTAATCTGTATCCGGGTAGCATATG CTATCCTAATAGAGATTAGGGTAGTATATGCTATCCTAATTTATATCTGGG TAGCATATACTACCCAT^ATATCTGGATAGCATATGCTATCCTAATCTATAT 158366.doc -391- 201211252
SEQ ED NO 載體名稱 核苷酸序列 123456789012345678901234567890123456789012345678901 CTGGGTAGCATATGCTATCCTAATCTATATCTGGGTAGCATAGGCTATCCT AATCTATATCTGGGTAGCATATGCTATCCTAATCTATATCTGGGTAGTATA TGCTATCCTAATTTATATCTGGGTAGCATAGGCTATCCTAATCTATATCTG GGTAGCATATGCTATCCTAATCTATATCTGGGTAGTATATGCTATCCTAAT CTGTATCCGGGTAGCATATGCTATCCTCATGATAAGCTGTCAAACATGAGA ATTTTCTTGAAGACGAAAGGGCCTCGTGATACGCCTATTTTTATAGGTTAA TGTCATGATAATAATGGTTTCTTAGACGTCAGGTGGCACTTTTCGGGGAAA TGTGCGCGGAACCCCTATTTGTTTATTTTTCTAAATACATTCAAATATGTA TCCGCTCATGAGACAATAACCCTGATAAATGCTTCAATAATATTGA?^AAAG GAAGAGTATGAGTATTCAACATTTCCGTGTCGCCCTTATTCCCTTTTTTGC GGCATTTTGCCTTCCTGTTTTTGCTCACCCAGA7VACGCTGGTGAAAGTAAA AGATGCTGTVAGATCAGTTGGGTGCACGAGTGGGTTACATCGAACTGGATCT CAACAGCGGTAAGATCCTTGAGAGTTTTCGCCCCGAAGAACGTTTTCCAAT GATGAGCACTTTTAAAGTTCTGCTATGTGGCGCGGTATTATCCCGTGTTGA CGCCGGGCAAGAGCAACTCGGTCGCCGCATACACTATTCTCAGAATGACTT GGTTGAGTACTCACCAGTCACAGAAAAGCATCTTACGGATGGCATGACAGT AAGAGAATTATGCAGTGCTGCCATAACCATGAGTGATAACACTGCGGCCAA CTTACTTCTGACAACGATCGGAGGACCGAAGGAGCTAACCGCTTTTTTGCA CAACATGGGGGATCATGTAACTCGCCTTGATCGTTGGGAACCGGAGCTGAA TGAAGCCATACCAAACGACGAGCGTGACACCACGATGCCTGCAGCAATGGC AACAACGTTGCGCAAACTATTAACTGGCGAACTACTTACTCTAGCTTCCCG GCAACAATTAATAGACTGGATGGAGGCGGATAAAGTTGCAGGACCACTTCT GCGCTCGGCCCTTCCGGCTGGCTGGTTTATTGCTGATAAATCTGGAGCCGG TGAGCGTGGGTCTCGCGGTATCATTGCAGCACTGGGGCCAGATGGTAAGCC CTCCCGTATCGTAGTTATCTACACGACGGGGAGTCAGGCAACTATGGATGA ACGAAATAGACAGATCGCTGAGATAGGTGCCTCACTGATTT^AGCATTGGTA ACTGTCAGACCAAGTTTACTCATATATACTTTAGATTGATTTAAAACTTCA TTTTTAATTTAAAAGGATCTAGGTGAAGATCCTTTTTGATAATCTCATGAC CAAAATCCCTTAACGTGAGTTTTCGTTCCACTGAGCGTCAGACCCCGTAGA AAAGATCAAAGGATCTTCTTGAGATCCTTTTTTTCTGCGCGTAATCTGCTG CTTGCAAACAAAAAAACCACCGCTACCAGCGGTGGTTTGTTTGCCGGATCA AGAGCTACCAACTCTTTTTCCGAAGGTAACTGGCTTCAGCAGAGCGCAGAT ACCAAATACTGTTCTTCTAGTGTAGCCGTAGTTAGGCCACCACTTCAAGAA CTCTGTAGCACCGCCTACATACCTCGCTCTGCTAATCCTGTTACCAGTGGC TGCTGCCAGTGGCGATAAGTCGTGTCTTACCGGGTTGGACTCAAGACGATA GTTACCGGATAAGGCGCAGCGGTCGGGCTGAACGGGGGGTTCGTGCACACA GCCCAGCTTGGAGCGAACGACCTACACCGAACTGAGATACCTACAGCGTGA GCTATGAGAAAGCGCCACGCTTCCCGAAGGGAGT^AGGCGGACAGGTATCC GGTAAGCGGCAGGGTCGGAACAGGAGAGCGCACGAGGGAGCTTCCAGGGGG AAACGCCTGGTATCTTTATAGTCCTGTCGGGTTTCGCCACCTCTGACTTGA GCGTCGATTTTTGTGATGCTCGTCAGGGGGGCGGAGCCTATGGAAAAACGC CAGCAACGCGGCCTTTTTACGGTTCCTGGCCTTTTGCTGGCCTTTTGCTCA CATGTTCTTTCCTGCGTTATCCCCTGATTCTGTGGATAACCGTATTACCGC CTTTGAGTGAGCTGATACCGCTCGCCGCAGCCGAACGACCGAGCGCAGCGA GTCAGTGAGCGAGGAAGCGGAAGAGCGCCCAATACGCAAACCGCCTCTCCC CGCGCGTTGGCCGATTCATTAATGCAGCTGGCACGACAGGTTTCCCGACTG GAAAGCGGGCAGTGAGCGCAACGCAATTAATGTGAGTTAGCTCACTCATTA GGCACCCCAGGCTTTACACTTTATGCTTCCGGCTCGTATGTTGTGTGGAAT TGTGAGCGGATAACAATTTCACACAGG7WVCAGCTATGACCATGATTACGC CAAGCTCTAGCTAGAGGTCGAGTCCCTCCCCAGCAGGCAGAAGTATGCAAA GCATGCATCTCAATTAGTCAGCAACCATAGTCCCGCCCCT7^ACTCCGCCCA TCCCGCCCCTAACTCCGCCCAGTTCCGCCCATTCTCCGCCCCATGGCTGAC TAATTTTTTTTATTTATGCAGAGGCCGAGGCCGCCTCGGCCTCTGAGCTAT TCCAGAAGTAGTGAGGAGGCTTTTTTGGAGGCCTAGGCTTTTGCAAAAAGC TTTGCAAAGATGGATAAAGTTTTAAACAGAGAGGT^ATCTTTGCAGCTAATG GACCTTCTAGGTCTTGAAAGGAGTGGGAATTGGCTCCGGTGCCCGTCAGTG GGCAGAGCGCACATCGCCCACAGTCCCCGAGAAGTTGGGGGGAGGGGTCGG CAATTGAACCGGTGCCTAGAGAAGGTGGCGCGGGGTAAACTGGGAAAGTGA TGTCGTGTACTGGCTCCGCCTTTTTCCCGAGGGTGGGGGAGAACCGTATAT AAGTGCAGTAGTCGCCGTGAACGTTCTTTTTCGCAACGGGTTTGCCGCCAG
158366.doc -392- 201211252
SEQ ID NO 載體名稱 核苷酸序列 123456789012345678901234567890123456789012345678901 AACACAGGTAAGTGCCGTGTGTGGTTCCCGCGGGCCTGGCCTCTTTACGGG TTATGGCCCTTGCGTGCCTTGAATTACTTCCACCTGGCTGCAGTACGTGAT TCTTGATCCCGAGCTTCGGGTTGGAAGTGGGTGGGAGAGTTCGAGGCCTTG CGCTTAAGGAGCCCCTTCGCCTCGTGCTTGAGTTGAGGCCTGGCCTGGGCG CTGGGGCCGCCGCGTGCGAATCTGGTGGCACCTTCGCGCCTGTCTCGCTGC TTTCGATAAGTCTCTAGCCATTTAAAATTTTTGATGACCTGCTGCGACGCT TTTTTTCTGGCAAGATAGTCTTGTAAATGCGGGCCAAGATCTGCACACTGG TATTTCGGTTTTTGGGGCCGCGGGCGGCGACGGGGCCCGTGCGTCCCAGCG CACATGTTCGGCGAGGCGGGGCCTGCGAGCGCGGCCACCGAGAATCGGACG GGGGTAGTCTCAAGCTGGCCGGCCTGCTCTGGTGCCTGGCCTCGCGCCGCC GTGTATCGCCCCGCCCTGGGCGGCAAGGCTGGCCCGGTCGGCACCAGTTGC GTGAGCGGAAAGATGGCCGCTTCCCGGCCCTGCTGCAGGGAGCTCAAAATG GAGGACGCGGCGCTCGGGAGAGCGGGCGGGTGAGTCACCCACACAAAGGAA AAGGGCCTTTCCGTCCTCAGCCGTCGCTTCATGTGACTCCACGGAGTACCG GGCGCCGTCCAGGCACCTCGATTAGTTCTCGAGCTTTTGGAGTACGTCGTC TTTAGGTTGGGGGGAGGGGTTTTATGCGATGGAGTTTCCCCACACTGAGTG GGTGGAGACTGAAGTTAGGCCAGCTTGGCACTTGATGTAATTCTCCTTGGA ATTTGCCCTTTTTGAGTTTGGATCTTGGTTCATTCTCAAGCCTCAGACAGT GGTTCAAAGTTTTTTTCTTCCATTTCAGGTGTCGTGAGGAATTCTCTAGAG ATCCCTCGACCTCGAGATCCATTGTGCCCGGGCGCCACCATGGAGTTTGGG CTGAGCTGGCTTTTTCTTGTCGCGATTTTAAAAGGTGTCCAGTGC Ο 本發明以全文引用的方式併入分子生物學及藥物傳遞領 域中熟知之技術。此等技術包括（但不限於）以下公開案中 所述之技術：
Ausubel 等人（編），Current Protocols in Molecular Biology， John Wiley & Sons, NY (1993)；
Ausubel，F.M.等人編，Short Protocols In Molecular Biology (第 4版· 1999) John Wiley & Sons，NY. (ISBN 0-471-32938-〇 X)；
Controlled Drug Bioavailability, Drug Product Design and Performance, Smolen及 Ball (編），Wiley，New York (1984); Giege，R.及 Ducruix, A· Barrett, Crystallization of Nucleic Acids and Proteins, a Practical Approach，第 2版，第 20 1-16頁，Oxford University Press，New York, New York, (1999); Goodson，Medical Applications of Controlled Release，第 2卷， 第 115-138 頁（1984); •393- 158366.doc 201211252
Hammerling等人，Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas 563-681 (Elsevier, N.Y., 1981)；
Harlow等人，Antibodies: A Laboratory Manual, (Cold Spring Harbor Laboratory Press,第 2版.1988);
Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest (National Institutes of Health, Bethesda，Md. (1987)及（1991); Kabat，E.Α·等人，（1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest,第 5版，U.S. Department of Health and Human Services, NIH公開案第91-3242號；
Kontermann 及 Dubel 編，Antibody Engineering (2001) Springer-Verlag. New York.第 790 頁（ISBN 3-540-41354-5);
Kriegler, Gene Transfer and Expression, A Laboratory Manual, Stockton Press, NY (1990) i
Lu及 Weiner編，Cloning and Expression Vectors for Gene Function Analysis (2001) BioTechniques Press. Westborough, MA.第 298 頁（ISBN 1-881299-21-X);
Medical Applications of Controlled Release, Langer and Wise (編），CRC Pres·，Boca Raton, Fla. (1974);
Old, R.W. & S.B. Primrose, Principles of Gene Manipulation: An Introduction To Genetic Engineering (第 3 版.1985)
Blackwell Scientific Publications, Boston. Studies in Microbiology; 第 2卷：第 409 頁（ISBN 0-632-01318-4);
Sambrook, J.等人編，Molecular Cloning: A Laboratory 158366.doc - 394- 201211252
Manual (第 2版.1989) Cold Spring Harbor Laboratory Press， NY.第卜3卷 (ISBN 0-87969-309-6);
Sustained A Controlled Release Drug Delivery Systems, J.R. Robinson編，Marcel Dekker，Inc.，New York，1978 ; Winnacker, E.L. From Genes To Clones: Introduction To Gene Technology (1987) VCH Publishers，NY (由 Horst Ibelgaufts 翻譯）·第 634 頁（ISBN 0-89573-614-4)。 參考文獻併入 0 本申請案通篇可能引用之所有引用參考文獻（包括參考 文獻、專利、專利申請案及網站）之内容基於任何目的以 全文引用的方式明確併入本文中，該等參考文獻中所引用 之參考文獻同樣基於任何目的以全文引用的方式明確併入 本文中。除非另外說明，否則本發明之實施將使用此項技 術中熟知的免疫學、分子生物學及細胞生物學之習知技 術。 相等物 Q 本發明可在不悖離其精神或基本特徵之情況下以其他特 定形式實施。前述實施例因此在所有態樣中均視為說明性 的，而非限制性的。因此本發明之範疇由隨附申請專利範 圍而非前述說明書指定，且因此本文意欲涵蓋申請專利範 圍之相等含義及範圍内的所有變化。 【圖式簡單說明】 圖1A為雙可變區域免疫球蛋白（DVD-Ig)構築體之示意 圖，且展示自兩個親本抗體產生DVD-Ig之策略；及 158366.doc -395- 201211252 圖1B為構築體DVD1-Ig、DVD2-Ig、及兩個來自融合瘤 純系2D13.E3(抗-IL-la)及13F5.G5(抗-IL-Ιβ)之嵌合單特異 性抗體的示意圖。 158366.doc - 396 - 201211252 序列表 <11〇>美商亞培公司 <120>雙可變區域免疫球蛋白及其用途 <130> 01016.0057-00304 <140> 1¥ 100130545 <141> 2011-08-25 <150> 61/377,117 <151> 2010-08-26 <160> 309 <170> Patentln version 3.5 <210> 1 <211> 16 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成肽 Ο <400> 1
Ala Lys Thr Thr Pro Lys Leu Giu Glu Gly Glu Hie Ser Glu Ala Arg 15 10 15 <210> 2 <2Π> 17 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成肽 <400> 2
Ala Lys Thr Ήιγ Pro Lys Leu Giu G!u Gly Glu Phe Ser Glu Ala Arg 1 5 10 15
Val <2I0> 3
<211> 9 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成肽 <400> 3
Ala Lys Thr Thr Pro Lys Leu Gly Gly 1 5 <210> 4 <211> 10 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成肽 <400> 4
Ser Ala Lys Thr Thr Pro Lys Leu Gly Gly 1 5 10 158366-序列表.doc 201211252 <210> 5 <211> 6 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成肽 <40〇> 5
Ser Ala Lys l*hr Thr Pro 1 5 <210> 6 <211> 6 <212> m <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成肽 <400> 6
Arg Ala Asp Ala Ala Pro 1 5 <2I0> 7 <231> 9 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成肽 <400> 7
Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Scr 1 5 <210> 8 <211> 12 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成肽 <400> 8
Arg Ala Asp Ala Ala Ala Ala Gly Gly Pro Gly Ser <210> 9 <213> 27 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成肽 <400> 9 Arg Ala Asp Ala Ala
Ala Ala Gly Gly Glv Gly Ser Gly Gly Gly Gly
Sei Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 20 25 -2- 158366-序列表.doc 201211252 列 序T工 08R /V -—- b> Λ > 1 ΛΜΛ 3 1* ix υ 1 <2<2<2<2 <220> <223>人工序列之描述：合成肽 <400> 10
Ser Ala Lys Thr Thr Pro Lys Leu Glu Glu Gly Glu Phe Ser Glu Ala 15 10 15
Arg Val <210> 11 <211> 5 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成肽 Ο
O <400> 11
Ala Asp Ala Ala Pro 1 5 <210> 12 <211> 12 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成肽 <400> 12
Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser He Phc Pro Pro 1 5 10 <210> 13 <21I> 5 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成肽 <400> 13
Thr Val Ala Ala Pro <210> 14 <211> 12 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成肽 <400> 14
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro 1 S 10 15 83 66-序列表.doc 201211252 <210> 15 <211> 6 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成肽 <400> 15
Gin Pro Lys Ala Ala Pro <210> 16 <211> 13 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成肽 <400> 16
Gin Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro 1 5 10 <210> 17 <211> 6 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成肽 <4〇0> 17
Ala Lys Thr Thr Fro Pro 1 5 <210> 18 <211> 13 <212> PRT <2】3>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成肽 <400> 18 Ala Lys Thr
Thr Pro Pro Ser Val Thr Pro Leu Ala Pro 5 l〇 <210> 19 <211> 6 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成肽 <400> 19
Ala Lys Thr Thr Ala Pro <210> 20 <211> 13 <2\2> PRT <213>人工序列 4- 158366-序列表.doc 201211252 <220> <223>人工序列之描述：合成肽 <>20
Ala Lys Thr Thr Ala Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro 1 5 10 <210> 21 <211> 6 <2I2> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成肽 <400> 21
Ala Ser Thr Lys Gly Pro
<210> 22 <21i> 13 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成肽 <400> 22
Ala Ser Thr Lys Giy Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro 1 5 10 <210> 23 <211> 15 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成肽 <400> 23
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Giy Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 15 10 15 <210〉 24 <21]> 15 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成肽 <400> 24
Gly Glu Asn Lys Val Glu Tyr Ala Pro Ala Leu Met Ala Leu Ser 1 5 10 15 <210> 25 <211> 15 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成肽 158366-序列表.doc 201211252 <400> 25
Gly Pro Ala Lys Glu Leu Thr Pro leu Lys Glu Ala Lys Val Ser 15 10 15 <210> 26 <211> 15 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成肽 <400> 26
Gly His Glu Ala Ala Ala Val Met Gin Val Gin Tyr Pro Ala Ser 15 10 15 <210> 27 <211> 5 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成肽 <>27
Gly Gly Gly Gly Ser 1 5 <210> 28 <211> 121 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 28
Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Arg 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyi* 20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Giu Trp Val 35 40 45
Ser Ala lie Tlir Trp Asn Ser Gly His lie Asp Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60
Glu Gly Arg Phe fFhr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Lys Val Ser Tyr Leu Ser Thr Ala Ser Ser Leu Asp Tyr Trp Gly 100 105 110
Gin Gly Thr Leu Val 丁hr Vai Ser Ser 115 120 158366-序列表.doc 201211252 <210> 29 <211> 108 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 29
Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Gly lie Arg Asn Tyr 20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Scr Giy Scr Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Arg Tyr Asn Arg Ala Pro TyT 85 90 95
Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg 100 105 <210> 30 <211> 121 <212> m <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 30 ΟΙτϊ Val Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 15 10 15 ΊΙίγ Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu lie Gly Tyr
Asp Leu Asn Trp lie Arg Gin Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp lie 35 40 45
Gly lie lie Trp Gly Asp Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Ser Ala Val Lys 50 55 60
Ser Arg Va] Tlir lie Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gin Phe Ser Leu 65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95
Arg Gly Gly Tyr Trp Tyr Ala Thr Ser Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 158366-序列表.doc 201211252
Gin Gly TTir Leu Val Thr Va] Ser Ser 115 120 <210〉 31 <211> 108 <2I2> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 31
Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser vSer Leu Ser Ala Ser Val Giy 1 5 10 25
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Ser lie Ser Asn Asn 20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45
Tyr Tyr Thr Ser Arg Phe His Ser Gly Vai Pro Scr Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe llir He Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80
Glu Asp Tie Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin G]u His Thr Leu Pro Tyr 85 90 95
Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys Arg 100 105 <2i〇> 32 <211> 119 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <>32
Glu Val Gin Leu Gin Gin Ser Gly Pro Glu leu Val Thr Pro Gly Ala ] 5 10 15
Ser Val Lys lie Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thx Phe Thr Asp His 20 25 30
Tyr Met Ser Trp Val Lys Gin Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp fie 35 40 45
Gly Asp lie Asn Pro Tyr Ser Gly G]u TTir Thr Tyr Asn Gin Lys Phe 50 55 60
Lys Gly Thr Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser lie Ala Tyr 65 70 75 80
Met Glu lie Arg Gly Leii Ήιγ Ser Giu Asp Ser Ala Val Tyr 丁yr Cys 85 90 95 158366-序列表.doc 201211252
Ala Arg Asp Asp Tyr Asp Ala Ser Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gin Gly 100 105 110 TTir Leu Val Thr Val Ser Ala .115 <210> 33 <211> 108 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 33
Asp Val GJn Met lie Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Lea Gly 15 10 15
Asp lie Val Tlir Met Thr Cys Gin Ala Ser Gin Gly Thr Ser He Asn 20 25 30
L^u Asn Trp Phe Glo Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45
Tyr Gly Ser Ser Asn Leu Glu Asp Gly Val Fro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Arg Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Scr Leu Glu Asp 65 70 75 80
Glu Asp Leu Ala Thr Tyr Phe Cys Leu Gin His Ser Tyr Leu Pro Tyr 85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys Arg 100 105 <210> 34 <211> 116 <212> PKT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 34
Glu Val Gin Leu Va! Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala i 5 10 15
Scr Val Lys Val Scr Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Lys Tyr 20 25 30
Trp Leu Gly Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45
Gly Asp lie Tyr Pro Gly Tyr Asp Tyr Thr His Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60
Lys Asp Arg Val Thr Leu Thr Thr Asp Thr Set Thr Ser Thr Ala Tyr -9- 158366-序列表.doc 201211252
65 70 75 SO
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Ser Asp Gly Ser Ser Thr Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val !00 105 110
Thr Val Ser Ser 115 <210> 35 <211> 113 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 35
Asp Val Leu Met Thr Gin Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 15 10 15
Glu Pro Ala Ser lie Ser Cys Thr Ser Ser Gin Asn lie Val His Ser 20 25 30
Asn Giy Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gin Lys Pro Gly Gin Ser 35 40 45
Pro Gin Leu Leu lie Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys He 65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gin Vai 85 90 95
Ser His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Va! Glu lie Lys 100 105 110
Arg <210> 36 <211> 117 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 36
Gin Val Gin Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gin 15 10 15
Ser Leu Ser lie Tlir Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Asp Tyr 20 25 30 -10- 158366-序列表.doc 201211252
Gly Val Asn Trp Val Arg Gin Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 4Q 45
Gly Met lie Trp Gly Asp Giy Ser Thr Asp Tyr Asp Ser Ihr Leu Lys 50 55 60
Ser Arg Leu Ser lie Ser Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gin lie Phe Leu
65 70 75 SO
Lys Met Asn Ser Leu Gin ΊΤη Asp Asp Thr Ala Arg Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95
Arg Glu Trp His His Giy Pro Val Ala Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu 100 105 110
Vai Thr Val Ser Ala 115
<210> 37 <211> 108 <212> <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 37
Asp I3e Val Met Thr Gin Ser His Lys Phe Met Ser Thr Thr Val Gly 1 5 10 ί5
Asp Arg Val Ser lie Thr Cys Lys Ala Scr Gin Ala Val Ser Ser Ala 20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ser Pro Lys Leu Leu lie .35 40 45 IVr Trp Ala Ser Thr Arg His Tlir Gly Val Pro Asp Arg Phe H’hr Gly 50 55 60
Ser Oly Ser Vai Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie His Asn Leu Gin Ala 65 70 75 80 ❹
Glu Asp Leu Ala Leu Tyr Tyr Cys Gin Gin His Tyr Ser Thr Pro Phe 85 90 95
Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys Arg 100 105 <210> 38 <211> 120 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <>38
Glu Val Lys Leu Glu Glu Sex Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15 •11 · 158366-序列表.doc 201211252
Ser Met Lys Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe lie Phe Ser Asn His 20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gin Ser Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ala Glu lie Arg Ser Lys Ser lie Asn Ser Ala Thr His Tyr Ala Glu 50 55 60
Ser Vai Lys Gly Arg Phe Τατ lie Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Aia 65 70 75 80
Val Tyr Leu Gin Met Thr Asp Leu Arg Thr Glu Asp Thr Gly Val Tyr 85 90 95
Tyr Cys Ser Arg Asn Tyr Tyr Gly Ser Thr Tyr Asp Tyr Trp Gly Gin 100 105 Π0
Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Scr 115 120 <210〉 39 <211> 108 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 39
Asp lie Leu Leu Thr Gin Ser Pro Ala lie Leu Ser Val Ser Pro Gly 15 30 15
Glu Arg Val Ser Phe Ser Cys Arg Ala Ser Gin Phe Val Gly Ser Ser 20 25 30 lie His 丁rp Tyr Gin Gin Arg Thr Asn Gly Ser Pro Arg Leu Leu lie 35 40 45
Lys Tyr Ala Ser Glu Ser Met Ser Gly He Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Ser lie Asn Thr Val Glu Ser 65 70 75 80
Glu Asp He Ala Asp Tyr Tyr Cys Gin Glu Ser His Scr Trp Pro Phe 85 90 95
Thr Fhe Gly Ser Gly Thr Asn Leu Glu Val Lys Arg 100 105 <210> 40 <211> 126 <2i2> PR1T <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 -12- 158366-序列表.doc 201211252 <400> 40
Gin Val Gin Leu Vai Glu Ser Gly Gly G!y Val Val Gin Pro Gly Arg 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Asn Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ala Phe Met Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Ala Lys Asp Ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Asp Arg Gly lie Ala Ala Gly Gly Asn Tyr Tyr Tyr Tyr Gly 300 105 110
Met Asp Val Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Vai Ser Sex 115 120 125 <210> 41 <211> 109 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 41
Glu lie Val Leu Thr Gin Ser Pro Ala Tin Leu Ser Leu Ser Pro Gly 15 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gin Ser Val Tyr Ser Tyr 20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Arg Leu Leu He
Tyr Asp Ala Ser Asa Arg Ala Thr Gly lie Pro Ala Arg Fhe Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Scr Gly Thr Asp Phe Iht Leu Thr He Ser Ser Leu Glu Pro 65 70 75 80
Ql\x Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gin Gin Arg Ser Asn Trp Pro Pro S5 90 95
Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp He Lys Arg 100 105
<210> 42 <211> 122 <212> PRT -13· 158366-序列表.doc 201211252 <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 42
Gin Val Gin Leu Gin Gin Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Thr 15 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser G]y Tyr Gly Phe lie Asn 丁yr 20 25 30
Leu lie Glu Trp lie Lys Gin Arg Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp lie 35 40 45
Gly Leu lie Asn Pro Gly Ser Asp Tyr Thr Asn Tyr Asn Glu Asn Fhe 50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 liiet His Leu Ser Ser Leu llir Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95
Ala Arg Arg Fhe Gly Tyr Tyr Gly Ser Gly Asn Tyr Phe Asp Tyr Trp 100 105 110
Gl.GlnOiyThrTh.Leu^ValSer Ser <230> 43 <211> 113 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 43
Asp Val Val Met Thr Gin Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly 15 10 15
Asp Gin Ala Ser He Ser Cys Thr Ser Gly Gin Ser Leu Val His He 20 25 30
Asn Gly Asti Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gin Lys Pro Gly Gin Ser 35 40 45
Pro Lys Leu Leu lie Tyr Lys Val Ser Asn Leu Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie 65 70 75 80
Ser Arg Vai Glu Ala Glu Asp Leu Giy Val Tyr Phe Cys Ser Gin Ser 85 90 95
Thr His Phe Pro Phe Thr Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys I00 105 110 -14- 158366-序列表.doc 201211252
Arg <210> 44 <211> 125 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 44
Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gin Pro Gly Arg 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser G】y Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30
Asp Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ala Val lie Trp Ser Asp Gly Ser lie Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Scr Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Glu Val Glu Ser Ala Met Gly Gly Phe Tyr Tyr Asn Gly Met 100 105 110 A.sp Val Trp Giy Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 45 <21I> 108 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 45
Asp He Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15
Asp Arg Val Thr He Thr Cys Arg Ala Ser Gin Gly Ue Arg lie Asp 20 25 30
Leu Gly Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu lie 35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Tlir L&u Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Scr Gly Ser Gly Thr Glu Phe lie Phe Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro •15· 158366-序列表.doc 201211252 65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Ser Tyr Tyr Cys Leu Gin His Lys Ser Tyr Pro Leu 85 90 95
Thr Fhe Giy Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg 100 105 <210> 46 <211> 115 <212> PRT <213>人工序列 <220> <2M>人工序列之描述：合成多肽 <4(X)> 46 01υ Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Giy Leu lie Gin Pro Gly Gly 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Val Ser Arg Asn 20 25 30
Tyr Met Ser Trp Vai kx° Gin Ala Pro Gty Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ser Val He Tyr Ser Gly Asp Arg Tl^r Tyr Tvr Ala Asp Ser Val Lys 50 55 60
Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 65 70 75 80
Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95
Arg Gly Glu Gly Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110
Val Sex Ser 115 <210> 47 <211> 207 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400〉 47
Glu lie Val Met Thr Gin Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly 15 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gin Ser Val Ser Ser Asn 20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Arg Leu Leu lie 35 40 45 -16· 158366-序列表.doc 201211252
His Gly Ala Ser He Arg Ala Thr Gly Leu Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr GIu Phe Thr Leu Thr He Ser Ser Leu Gin Ser 65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Vai Tyr Tyr Cys Gin Gin Tyr Asn Tyr Trp Trp Thr 85 90 95
Phe Cly Gin Gly Hir Lys Val Glu lie Lys Arg 100 105 <210> 48 <211> 330 <212> PRT <213>智人 <400> 48
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys i 5 10 15 Ο
Scr Thr Sei Gly Gly Ihr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30
Phe Pro Giu Pro Val Thr Val Ser Ττρ Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Scr 50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Va里 Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gin Thr 65 70 75 80
Tyr lie Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro C^s 100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met He Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 130 135 140
Val Val Val ^sp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 145 1.50 Ϊ55 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175
Glu Gin Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 180 185 190
His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro lie Glu Lys Thr lie Ser Lys Ala Lys Gly -17- 158366-序列表.doc 201211252 210 235 220
Gin Pro Arg Glu Fro Gin Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu 225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 245 250 255
Pro Ser Asp He Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn 260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn 290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Lea His Asn His Tyr Thr 305 310 315 320
Gin Lys Scr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 330 <210> 49 <211> 330 <212> PRT <213；>智人 <400> 49
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 15 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gin Ser vSer Gly Leu Tyr Ser 50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gin Thr 65 70 75 80
Tyr lie Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Set Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110
Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Fro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 315 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Set Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 130 135 140
Va】Va】Va! Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 145 150 155 160 -18- 158366·序列表.doc 201211252
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175
Glu Gin Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 180 185 190
His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro lie Glu Lys Thr lie Ser Lys Ala Lys Gly 210 215 220
Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg GIu Glu 225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Giy Phe Tyr 245 250 255
Pro Ser Asp He Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn 260 265 270 Ο
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Scr Phe Phe 275 2δ0 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn 290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 305 310 315 320
Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 330 <210> 50 <2I1> 106 <212> mi <213>智人 <400> 50
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe He Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin 15 10 IS
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr 20 25 30
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gin Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gin Ser 35 40 45
Gly Asn Ser Gin Glu Ser Val Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Scr Thr 50 5S 60
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys 65 70 75 80
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gin Gly Leu Ser Scr Pro S5 90 95 -19- 158366-序列表 _doc 201211252
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys m 1.05 <210> 51 <211> 105 <212> PRT <213>智人 <400> 51
Gin Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu 15 10 15
Glu Leu Gin Ala As« Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu lie Ser Asp Phe 20 25 30
Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val 35 40 45
Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gin Ser Asn Asn Lys 50 55 60
Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gin Trp Lys Ser 65 70 75 80
His Arg Ser Tyr Ser Cys Gin Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu 85 90 95
Lys Thr Val Ala Pro Tnr Glu Cys Ser 100 105 <2i0> 52 <211> 244 <212> PRT <2!3>人工序列 <220〉 <223>人工序列之描述：合成多肽 <_> 52
Gin Val Gin Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val AJa Pro Ser Gin 1 5 10 15
Ser Leu Ser He Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Asp Tyr 20 25 30
Gly Val Asn Trp Val Arg Gin Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45
Gly Met lie Trp Gly Asp Gly Ser Thr Asp Tyr Asp Ser Thr Leu Lys 50 55 60
Ser Are Leu Ser lie Scr Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gin lie Phe Leu 65 70 75 80
Lys Met Asn Ser Leu Gin Thr Asp Asp Thr Ala Arg Tyi Tyr Cys Ala 85 90 95
Arg Giu Trp His His Giy Pro Va! Ala 丁yr Trp Gly Gin Gly Thr Leu 100 105 110 -20- 158366-序列表.doc 201211252
Val Thr Val Ser Ala Ala Ser Thr Lys Gly Pro Gin Val Gin Leu Gin 115 120 125
Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr 130 135 140
Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu lie Gly Tyr Asp Leu Asn Trp 13e 145 150 155 160
Arg Gin Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp He Gly He lie Trp Gly 165 170 175
Asp Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Ser A】a Va丨 Lysj Ser Arg Val Thr lie 180 〖85 190
Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gin Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val 195 200 205
Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Gly Tyr Trp 210 215 220
Tyr Ala Thr Ser Tyt Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val 225 230 235 240
Thr Val Ser Ser <210> 53 <211> 228 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 53
Asp He Val Met Thr Gin Ser His Lys Phe Met Ser Thr Thr Val Gly 15 10 15
Asp Arg Val Ser lie Thr Cys Lys Ala Ser Gin Ala Val Scr Ser Ala 20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Oly Gin Ser Pro Lys Leu Leu He 35 40 45
Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Val Thr Asp Phe Thr Leu Hir lie His Asn Leu Gin Ala 65 70 75 80
Glu Asp Leu Ala Leu Tyr Tyr Cys Gin Gin His Tyr Ser Thr Pro Phe 85 90 95
Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 •21- 158366-序列表.doc 201211252
Pro Ser Val Phc lie Phe Pro Pro Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro 115 120 225
Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val l^hr lie Thr Cys Arg 130 135 140
Ala Ser Gin Ser lie Ser Asn Asn Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro 145 150 155 160
Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu He Tyr Tyr Thr Ser Arg Phe His Ser 165 170 175
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr 180 185 190
Phe Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro Glu Asp lie Ala Thr Tyr Tyr Cys 195 200 205
Gin Gin Glu His Hir Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Leu 210 215 220
Glu He Lys Arg 225 <210> 54 <211> 244 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 54
Gin Val Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu lie Gly Tyr 20 25 30
Asp Leu Asn Trp lie Aig Gin Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp lie 35 40 45
Gly lie lie Trp Gly Asp Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Ser Ala Val Lys 50 55 60
Ser Arg Val Thr lie Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gin Phe Ser Leu 65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Th.r Ala Va] Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95
Arg Gly Qiy Tyr Trp Tyr Ala TbT Ser Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly 100 105 110
Gin Giy Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Giy Pro Gin 115 220 125 -22> 158366-序列表.doc 201211252
Val Gin Leu Lys Giu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Scr Gin Ser 130 135 140
Leu Ser lie Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Asp Tyr Gly 145 150 155 160
Val Asn Trp Val Arg Gin Pro Pro Gly Lys Gly Leu Giu Tfp Leu Gly 165 170 175
Met lie Trp Gly Asp Gly Ser Thr Asp Tyr Asp Ser Thr Leu Lys Ser 180 185 190
Atg Leu Ser He Ser Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gin lie Phe Leu Lys 195 200 205
Asn Ser Leu Gin Thr Asp Asp Thr Ala Arg Tyr Tyr Cys Ala Arg 210 215 220
Giu Trp His His Gly Pro Val Ala Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val 225 230 235 240
Thr Val Ser Ala Ο <210〉 55 <211> 228 <212> FKT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 55
Asp He Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Ser lie Ser Asn Asn 20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45
Tyr Tyr ITir Ser Arg Phe His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr lie Scr Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80
Giu Asp He Ala Thr Tyr lyr Qys Gin Gin Giu His Thr Leu Pra Tyr 85 90 95 Πιτ Phe Gly Gin Gly Thr Lys Leu Giu lie Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110
Pro Ser Val Phe He Phe Pro Pro Asp He Val Met Thr Gin Ser His 115 120 125
Lys Phe Met Ser Thr Thr Val Gly Asp Arg Val Ser He Thr Cys Lys -23- 158366·序列表.doc 201211252 130 135 140
Ala Ser Gin Ala Val Ser Ser Ala Val Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro 145 150 155 160
Gly Gin Ser Pro Lys Leu Leu He Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr 165 170 175
Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Val Thr Asp Phe Thr 180 185 190
Leu Thr lie His Asn Leu Gin Ala Glu Asp Leu Ala Leu Tyr Tyr Cys 195 200 205
Gin Gin His Tyr Ser Thr Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu 210 2] 5 220
Glu lie Lys Arg 225 <210> 56 <211> 247 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 56
Glu Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 1 5 10 15
Ser Met Lys Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe lie Phe Ser Asn His 20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gin Ser Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ala Glu lie Arg Ser Lys Ser lie Asn Ser Ala Thr His Tyr Ala Glu 50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Ala 65 70 75 80
Val Tyr Leu Gin Met Thr Asp Leu Arg Tlir Glu Asp Thr Gly Val Tyr 85 90 95
Tyr Cys Ser Arg Asn Tyr Tyr Gly Ser Thr Tyr Asp Tyr Trp Gly Gin 100 105 110
Gly Thr Thr Leu Tlir Va] Ser Sar Ala Ser Thr Lys Gly Pro Gin Val 115 120 125
Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu Thr Leu 130 235 140
Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu lie Gly Tyr Asp Leu 145 1.50 155 160 -24- 158366-序列表.doc 201211252
Asn Trp lie Arg Gin Pro Pro Gly Lys Gly Leu GIu Trp lie Gly lie 165 170 175 lie Trp Gly Asp Gly Thr Thr Asp Tyr Asu Ser Ala Val Lys Ser Arg 180 185 190
Val Thr lie Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gin Phe Ser Leu Lys Leu 195 200 205
Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly 210 215 220
Gly Tyr 丁rp Tyr Ala Thr Ser Tyr Tyr Phe Asp Tyi Trp Gly Gin Gly 225 230 235 240
Thr Leu Val Thr Vai Scr Ser 245
<210> 57 <211> 228 <212> FRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 57
Asp lie Leu Leu Thr G3n Scr Pro Ala lie Leu Ser Val Scr Pro Gly 15 10 15
Gin Arg Val Ser Phe Ser Cys Arg Ala Set Gin Phe Val Giy Ser Ser 20 25 30 lie His Trp Tyr Gin Gin Arg Thr Asn Gly Ser Pro Arg Leu Leu He 35 40 45
Lys Tyr Ala Ser Glu Ser Met Ser Gly lie Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Scr lie Asn Thr Val Glu Ser 65 70 75 80
Glu Asp lie Ala Asp Tyr Tyr Cys Gin Glu Ser His Ser Trp Pro Phe 85 90 95
Thr Phe Gly Ser Gly Thr Asn Leu Glu Val Lys Arg Tlir Val Ala Ala 100 105 110
Pro Scr Va! Phe lie Phe Fro Pro Asp lie Gin Met Thr Gin Scr Pro 115 120 125
Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr lie TTir Cys Arg 130 135 140
Ala Ser Gin Ser lie Ser Asn Asn Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro 145 150 155 160 •25- 158366-序列表.doc 201211252
Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie Tyr Tyr Thr Ser Arg Phe His Ser 165 170 175
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Giy Ser Gly Thr Asp Plie Thr 180 1S5 190
Phe Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro Giu Asp lie Ala Thr Tyr Tyr Cys 195 200 205
Gin Gin Glu His Thr Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Leu 210 215 220
Glu lie Lys Arg 225 <210> 58 <211> 247 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽
<400> 5S
Gin Val Gin Leu Gin Glu Sef Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu lie Gly Tyr 20 25 30
Asp Leu Asn Trp lie Arg Gin Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp He 35 40 45
Gl, lie lie Trp Gly Asp Gly l,r Thr Asp Tyr Α,η Ser Ala Val LyS
Ser Arg Val Thr lie Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gin Phe Ser Leu 65 70 75 80
Lys Leu Ser Scr Val Tht Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95
Arg Gly Gly Tyr Trp Tyr Ala Thr Ser Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly 100 105 110
Gin Gly Thr Leu Vai Thr Vai Ser Ser Ala Scr Thr Lys Gly Pro Glu 115 120 125
Val Lys Lea Glu Glu Ser Gly Giy Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly Ser 130 135 140
Met Lys Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe lie Phe Ser Asn His Trp 145 150 155 160
Met Asn Trp Val Arg Gin Ser Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala 165 170 175 -26- 158366-序列表.doc 201211252
Glu He Arg Ser Ly$ Scr lie Asn Ser Ala Thr His Tyr Ala Glu Ser 180 185 190
Val Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Ala Val 195 200 205
Tyr Leu Gin Met Thr Asp Leu Arg Ihr Glu Asp Thr Gly Val Tyr Tyr 210 215 220
Cys Ser kxg Asn Tyr Tyr Gly Ser Thr Tyr Asp Tyr Trp Gly Gin Gly 225 230 235 240
Thr Tin Leu Thr Val Ser Ser 245 <210> 59 <211> 22& <212> PRT <213>人工序列 <220>
<223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 59
Asp lie Gin Met Tlir Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly L 5 10 15
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Ser lie Ser Asn Asn 20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45
Tyr Tyr Thr Ser Arg Phe His Set Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Scr Gly Scr Gly Thr Asp Phe llir Phe Thr He Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 B0
Giu Asp He Ala Thx Tyr Tyr Cys Gin Gin Glu His Thr Leu Pro Tyr 85 90 95
Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110
Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Asp lie Leu Leu Thr Gin Ser Pro 115 120 125
Ala lie Leu Ser Val S^r Pro Gly Glu Arg Val Ser Phe Ser Cys Arg 130 135 140
Ala Ser Gin Phe Val Gly Scr Ser lie His Trp Tyr Gin Gin Arg Thr 145 150 155 160
Asn Gly Ser Pro Arg Leu Leu lie Lys Tyr Ala Ser Glu Ser Met Ser 165 170 175
Gly lie Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr -27- 158366-序列表.doc 201211252 180 185 190
Leu Ser lie Asn Thr Val G!u Scr Glu Asp lie Ala Asp Tyr Tyr Cys 195 200 205
Gin Glu Ser His Ser Trp Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Asn Leu 210 215 220
Glu Val Lys Arg 225 <210> 60 <21]> 253 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 60
Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gin Pro Gly Arg 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Asn Gly Leu G]u Trp Val 35 40 45
Ala Phe Met Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Ala Lys Asp Ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Sex Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Asp Arg Gly lie Ala Ala Gly Gly Asn Tyr Tyr Tyr Tyr Gly 100 105 HO
Met Asp Val Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Ήκ Val Ser Ser Ala Ser 115 120 125
Thr Lys Gly Pro Gin Val Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val 130 135 140
Lys Pro Ser Glu Thr Leu Ser Leu Hir Cys Thr Val Sex Gly Phe Ser 145 150 155 160
Leu lie Gly Tyr Asp Leu Asn Trp lie Arg Gin Pro Pro Gly Lys Gly 165 170 175
Leu Glu Trp lie Gly lie He Trp Gly Asp Gly Thr Thr Asp Tyr Asn 180 1S5 190
Ser Ala Val Lys Ser Arg Val Thr lie Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn 195 200 205 -28- 158366-序列表.doc 201211252
Gin Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val 210 215 220
Tyr Tyi Cys Ala Arg Gly Giy Tyr Trp Tyr Ala Thr Ser Tyr Tyr Phe 225 230 235 240
Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 245 250 <210> 61 <211> 229 <2I2> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 61
Glu lie Val Leu Thr Gin Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 15 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gin Ser Val Tyr Scr Tyr 20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Glu Ala Pro Arg Leu Leu lie 35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly lie Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Glu Pro 65 70 75 E0
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gin Gin Arg Ser Asn Trp Pro Pro 85 90 95
Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp lie Lys Arg Thr Val Ala 100 105 110
Ala Pro Set Val Phe He Phe Pro Pro Asp lie Gin Met Tht Gin Ser 115 120 125
Pro Ser Scr Leu Scr Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr lie Thr Cys 130 135 140
Arg Ala Ser Gin Ser He Ser Asn Asn Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys 145 150 155 160
Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu f^eu lie Tyr Tyr Thr Ser Arg Phe His 165 170 175
Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe 180 185 190
Thr Phe Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro Glu Asp lie Ala Thr Tyr Tyr 195 200 205 -29- 158366-序列表.doc 201211252
Cys Gin Gin Glu His Thr Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys 210 215 220
Leu Glu He Lys Arg 225 <210> 62 <211> 253 <212> PRT <213>人工序列 <220> <U3>人工序列之描述：合成多肽 <400> 62
Gin Val Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Oly Leu Val Lys Pro Ser Gla 1 5 30 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu lie Gly Tyr 20 25 30
Asp Leu Asn Trp lie Arg Gin Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp lie 35 40 45
Gly lie lie Trp Gly Asp Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Ser Ala Val Lys 50 55 60
Ser Arg Va] Thr lie Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gin Phe Ser Leu 65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala S5 90 95
Arg Gly Gly Tyr Trp Tyr Ala Thr Ser Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly 300 105 110
Gin Gly ΤΗτ Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Gin 115 120 125
Val Gin Leu Val Glu Ser Gly G,y Gly Val Val Gin Pro Gly Arg Ser
Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala 145 150 155 160
Met His 丁np Val Arg Gin Ala Pro Gly Asn Gly Leu Glu Trp Val Ala 165 170 175
Phe Met Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Ala Lys Asp Ser Val Lys 180 185 190
Qly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 195 200 205
Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Gla Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 210 215 220 -30- 158366-序列表.doc 201211252
Arg Asp Arg Gly lie Ala Ala Gly Gly Asn Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met 225 230 235 240
Asp Val Trp Gly Gin Gly Thr Thr Vat Thr Val Ser Ser 245 250 <210> 63 <211> 229 <212> PRT <213r>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 63 Asp He Gin
Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Scr Ala Ser Val Gly S 10 15
Asp Arg Val Tht lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Ser lie Ser Asn Asn 20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu He 35 40 45
Tyr Tyr Thr Ser Arg Phe His Ser Gly Val Pxo Sei Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thf lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80
Glu Asp He Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Glu His Thr Leu Pro Tyr 85 90 95
Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110
Pro Ser Val Phe lie Phe Pto Pro Glu lie Val Leu Thr Gin Ser Pro 115 120 125
Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg 130 135 140
Ala Ser Gin Ser Val Tyr Ser Tyr Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro 145 150 155 160
Gly Gin Ala Pro Arg Leu Leu lie Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr 165 170 175
Gly lie Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr ISO 185 190
Leu Thr He Ser Ser Leu Glu Pro Giu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys 195 200 205
Gin Gin Atg Ser Asn Trp Pro Pro Phe Thr Phe Gly Pto Gly Thr Lys 210 215 220
Val Asp lie Lys Arg 31- 158366-序列表.doc 201211252 225 <210> 64 <21ί> 252 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 64
Gin Val Gla Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gin Pro Gly Arg 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phc Ser Scr Tyr 20 25 30
Asp Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ala Val lie Trp Ser Asp Gly Ser lie Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Atg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Glu Val Glu Ser Ala Met Gly Gly Phe Tyr Tyr Asn Gly Met 100 305 110
Asp Val Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Tlir 115 120 125
Lys Gly Pro Gin Val Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Gly Leu Yai Lys 130 135 140
Pro Ser Glu ri7ir Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu 145 150 155 160
He Gly Tyr Asp Leu Asn Trp lie Arg Gin Pro Pro Gly Lys Gly Leu 165 170 175
Glu Trp lie Gly lie He Trp Gly Asp Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Ser ISO 185 190
Ala Val Lys Ser Arg Val Thr lie Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gin 195 200 205
Phe Ser Leu Lys Leu Scr Ser Val Thr A]a Ala Asp Uir Ala Val Tyr 210 215 220
Tyr Cvs Ala Arg Gly Gly Tyr Trp Tyr Ala Thr Ser Tyr Tyr Phe Asp 225 230 235 240
Tyr Trp Gly Gin Gly Tlir Leu Val Thr Val Ser Ser 245 250 -32- 158366-序列表.doc 201211252 <210> 65 <211> 228 <212> ?KT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 65
Asp lie G3n Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1.5 10 15
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Gly lie Arg lie Asp 20 25 30
Leu Gly Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu lie 35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60
O
Ser Gly Ser Gly Tlir Glu Phe lie Phe Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Scr Tyr Tyr Cys Leu Gin His Lys Scr Tyr Pro Leu 85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg Thx Val Ala Ala 100 105 110
Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro 115 120 125
Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg 130 135 140
Ala Ser Gin Ser lie Ser Asn Asn Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro 145 150 155 160
Gly Lys Ala Pro Lys Leu Lea lie Tyr Tyr Thr Ser Arg Phe His Ser 165 170 175
Gly Val Pro Ser Arg Pile Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr 180 185 190
Phe Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro Glu Asp lie Ala Thr Tyr Tyr Cys 195 200 205
Gin Gin Glu His Thr Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Ixu 210 235 220
Glu lie Lys Arg 225
<210> 66 <211> 252 <212> PRT -33- 158366-序列表.doc 201211252 <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 66
Gin Val Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 15 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu lie Gly Tyr 20 25 30
Asp Leu Asn Trp lie Arg Gin Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp lie 35 40 45
Gly lie lie Trp Gly Asp Gly Thr Tlir Asp Tyr Asn Ser Ala Val Lys 50 55 60
Ser Arg Val Thr lie Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gin Pbe Ser Lea 65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95
Arg Gly Gly Tyr Trp Tyr Ala Thr Ser Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly 100 105 110
Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser llir Lys Gly Pro Gin 115 120 125
Val Gin Leu Vai Giu Scr Gly Gly G)y Val Val Gin Pro Gly Arg Ser 130 135 140
Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Asp 145 150 155 160
Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala 165 170 175
Val lie Trp Ser Asp Gly Ser He Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 180 185 190
Gb Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 195 200 205
Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Gl« Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 210 215 220
Arg Gin Val Glu Ser Ala Met Gly Gly Phe Tyr Tyr Asn Gly Met Asp 225 230 235 240
Val Trp Gly Gin Gly Tlir Thr Val Thr Val Ser Ser 245 250 <210> 67 <211> 22S <212> PRT <213>人工序列 -34- 158366-序列表.doc 201211252 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 67
Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Ser lie Ser Asn Asn 20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45
Tyr Tyr 丁hr Ser Arg Phe His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 6Q
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Tlir Pile Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80
Glu Asp lie Ala Ήιγ Tyr Tyr Cys Gin Gin Glu His Thr Leu Pro Tyr 85 90 95
Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110
Pro Ser Va】Phc lie Phe Pro Pro Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro 115 120 125
Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg 130 135 140
Ala Ser Gin Gly lie Arg lie Asp Leu Gly Trp Tyr Gin Gin Lys Pro 145 150 155 160
Gly Lys Ala Pro Lys Arg Lou lie Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gin Ser 165 170 175
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe lie 180 185 190
Phe Thr lie Ser Scr Leu Gin Pro Glu Asp Phe Ala Scr Tyr Tyr Cys 195 200 205
Leu Gin His Lys Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val 210 215 220
Glu He Lys Arg 225 <210> 68 <211> 242 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 -35- 158366-序列表.doc 201211252
<400> 6S
Glu Val Gin Leu Val Olu Ser Gly Gly Gly Leu He Gin Pro Gly Gly 1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Scr Cys Ala Ala Ser Gly Phc Thr Val Ser Arg Asn 20 25 30
Tyr Met Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ser Val lie Tyr Ser Gly Asp Arg Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 50 55 60
Gly Ar8 Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95
Arg Giy Glu Gly Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr 100 105 120
Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro GIji Va) Gin Leu Gin Glu Ser 115 120 125
Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr 130 135 140
Val Ser Gly Phe Scr Leu lie Gly Tyr Asp Leu Asn Trp lie Arg Gin H5 150 155 160
Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp lie Gly lie lie Trp Gly Asp Gly !65 170 175
Thr Thi Asp Tyr Asn Ser Ala Val Lys Ser Arg Val Thr lie Ser Lys 180 185 190
Asp Thr Ser Lys Asn Gin Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala 195 200 205
Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Gly Tyr Trp Tyr Ala 210 215 220
Thr Set Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp G.ly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val 225 230 235 240
Ser Ser <210> 69 <211> 227 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 69 •36· 158366-序列表.doc 201211252 GIu I1e Val Met Thr Gin Ser Pro Ala Ήιγ Leu Ser Va! Ser Pro Gly 1 5 10 ]5
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gin Ser Val Ser Ser Asn 20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Arg Leu Leu Ue 35 40 45
His Gly Ala Ser lie Arg Ala Thr Gly Leu Pro Ala Arg Phc Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Hir Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Ser 65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gin Gin Tyr Asn Tyr Trp Trp Tlir 85 90 95
Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro 100 105 110
Ser Val Phc lie Phe Pro Pro Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser 125 120 125
Ser Leu Ser Ala Ser Val Giy Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Axg Ala 130 135 140
Ser Gin Ser lie Ser Asn Asn Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly 145 150 155 160
Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie Tyr Tyr Thr Ser Arg Phe His Ser Gly 165 170 175
Vai Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Giy Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe 180 185 190
Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro Glu Asp lie Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin 195 2W 205
Gin Glu His Thr Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Leu Glu 210 215 220 lie Lys Arg 225 <210> 70 <211> 242 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 70
Gin Vai Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 15 10 35
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Fhe Ser Leu He Gly Tyr -37- 158366-序列表.doc 201211252 20 25 30
Asp Leu Asn Trp He Arg Gin Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp lie 35 40 45
Gly lie lie Trp Gly Asp Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Ser Ala Val Lys 50 55 60
Ser Arg Val Thr lie Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gin Phe Ser Leu 65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Yal Thr Ala Ala Asp ^fhr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95
Arg Gly Gly Tyr Trp Tyr Ala Thr Ser Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly 100 105 110
Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Giu 115 120 125
Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu lie Gin Pro Gly Gly Ser 130 135 140
Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Val Scr Arg Asn Tyr 145 150 '155 260
Met Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser 165 170 175
Va】lie 丁yr Ser Asp Arg Tlir 丁yr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly 180 185 190
Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gin 195 200 205
Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Aig 210 215 220
Gly Glu Gly Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Va] 225 230 235 240
Set Ser <210> 71 <211> 227 <212> FRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 71
Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Ser lie Ser Asn Asn 2D 25 30 •38· 158366-序列表.doc 201211252
Leu Asn Trp Tyr Gin Cln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu He 35 40 45
Tyr Tyx Thr Ser Arg Phe His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phc Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80
Glu Asp lie Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Glu His Thr Leu Pro Tyr 85 90 95
Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110
Pro Ser Va, Phc lie Phe Pro Pro Glu He Val Met Thr Gin Ser Pro
Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg 130 135 140
Ala Ser Gin Scr Val Ser Scr Asn Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro 145 150 155 160
Gly Gin Ala Pro Arg Leu Leu He His Gly Ala Ser He Arg Ala Thr 165 170 175
Gly Leu Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe l^r 180 185 190
Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin vSer Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys 195 200 m
Gin Gin Tyr Asn Tyr Trp Trp Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu 210 215 220 lie Lys Arg 225 <210> 72 <211> 242 <212> PRT <213>人工序列 <22〇> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 72
Gin Val Gin Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Leu Vai Ala Pro Ser Gin 15 10 15
Ser Leu Scr lie Thr Cys Thr Val Scr Gly Phe Ser Leu Thr Asp Tyr 20 25 30
Gly Vai Asn Trp Val Arg Gin Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 -39- 158366-序列表.doc 201211252
Gly Met lie Trp Gly Asp Gly Ser Thr Asp Tyr Asp Ser Thr Leu Lys 50 55 60
Ser Arg Leu Ser lie Ser Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gin lie Phe Leu 65 70 75 80
Lys Met Asn Ser Leu Gin Thr Asp Asp Thr Ala Arg Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95
Arg Glu Trp His His Gly Pro Val Ala Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu 100 105 110
Val Tlir Val Ser Ala Ala Ser Thr Lys Gly Pro Glu Val Gin Lea Gin 115 120 125
Gin Ser Gly Pro Glu Leu Val Thr Pro Gly Ala Ser Val Lys lie Ser 130 135 140
Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Tlir Phe Thr Asp His Tyr Met Ser Trp Va] 145 150 155 160
Lys Gin Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp 11c Gly Asp lie Asn Pro 165 170 175
Tyr Set Gly Glu Thr Thr Tyr Asn Gin Lys Phe Lys Gly Thr Ala Thr 180 185 190
Leu rrhr Val Asp Lys Ser Ser Ser lie Ala Tyr Met Glu lie Arg Gly 195 200 205
Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Asp 丁yr 210 215 220
Asp Ala Ser Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val 225 230 235 240
Sei Ala <210〉 73 <211> 228 <212> PRT <233>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 73
Asp lie Val Met Thr Gin Ser His Lys Phe Met Ser Thr Thr Val Gly 15 10 15
Asp Arg Val Ser lie Thr Cys Lys Ala Ser Gin Ala Val Ser Ser Ala 20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ser Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45 -40- 158366·序列表.doc 201211252
Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Val Thr Asp Phe Thr Leu Thr He His Asn Leu Gin Ala 65 70 75 SO
Glu Asp Leu Ala Leu Tyr Tyr Cys Gin Gin His Tyr Scr Thr Pro Phe 85 90 95
Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys Arg Tlir Val Ala Ala 100 105 110
Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Asp Va] Gin Met Uc Gin Ser Pro 115 120 125
Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly Asp lie Val Thr Met Thr Cys Gin 130 235 340
Ala Ser Gin Gly Thr Ser He Asn Leu Asn Trp Phe Gin Gin Lys Pro 145 150 155 160 ❹
Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie Tyr Gly Ser Ser Asn Leu Glu Asp 165 170 175
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser ATg Tyr Gly Thr A_sp Phe Thr ISO 185 190
Leu Thr lie Ser Ser Leu Glu Asp Glu Asp Leu Ala Thr Tyr Phe Cys 195 200 205
Leu Gin His Ser Tyr Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu 210 215 220
Glu lie Lys Arg 225 <210> 74 <211> 242 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 74
Glu Val Gin Leu Gin Gin Ser Gly Pro Glu Leu Val Thr Pro Gly Ala 1 5 1.0 15
Ser Val Lys lie Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe ΊΤιγ Asp His 20 25 30
Tyr Met Ser Trp Val Lys Gin Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp lie 35 40 45
Gly Asp lie Asn Pro Tyr Ser Gly Glu Tlir Thr Tyr Asn Gin Lys Phe 50 55 60
Lys Gly Thr Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser lie A]a Tyr -41- 158366-序列表.doc 201211252 65 70 75 80
Met Glu lie Atg Gly Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Asp Asp Tyr Asp Ala Ser Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gin Gly 100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ala Ala Ser Thr Lys Gly Pro Gin Val Gin 115 120 125
Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Uu Val Ala Pro Ser Gin vSer Leu Ser 130 135 140
He Thr Cys Thr Val Ser G】y Phe Ser Leu Thr Asp Tyr Gly Val Asn 145 150 155 160
Trp Val Arg Gin Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Lea Gly Met He 165 170 175
Trp Gly Asp Gly Ser Thr Asp Tyr Asp Ser Thr Leu Lys Ser Arg Leu 180 185 190
Ser He Ser Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gin lie Phe Leu Lys Met Asn 295 200 205
Ser Leu Gin Thr Asp Asp Thr Ala Arg Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Trp 210 2] 5 220
His His Gly Pro Val Ala Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val 225 230 235 240
Scr Ala <210> 75 <211> 228 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 75
Asp Val Gin Met He Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly 15 10 15
Asp He Val Thr Met Thr Cys Gin Ala Ser Gin Gly Thr Ser lie Asn 20 25 30
Leu Asn Trp Phe Gin Gin Lys Fro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45
Tyr Gly Ser Ser Asn Leu Glu Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 ω
Set Arg Tyr Gly llir Asp Phe Thr Leu Thr He Ser Ser Leu Glu Asp 65 70 75 80 -42- 158366-序列表.doc 201211252
Glu Asp Leu Ala Thr Tyr Phe Cys Leu Gin His Ser Tyr Leu Pro Tyr 85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110
Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Asp lie Val Met Thr Gin Ser His 135 120 125
Lys Pbe Met Ser Thr Thr Val Gly Asp Arg Val Sex lie Thr Cys Lys 130 〗35 140
Ala Ser Gin Ala Val Scr Ser Ala Val Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro 145 150 155 160
Gly Gin Scr Pro Lys Leu Leu lie Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr 165 170 175
Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Val Thr Asp Phe Thr 180 185 190
Leu Thr lie His Asn Leu Gin Ala Glu Asp Leu Ala Leu Tyr Tyr Cys 195 200 205
Gin Gin His Tyr Ser Ήιγ Pro Phe Thr Phe Gly Scr Gly Thr Lys Leu 210 215 220
Glu He Lys Arg 225 <210> 76 <211> 245 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 76
Giu Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 1 5 10 15
Ser Met Lys Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe lie Phe Ser Asn His 20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gin Ser Pro Glu Lys Gly Uu Glu Trp Val 35 40 45
Ala Glu lie Arg Ser Lys Ser He Asn Ser Ala Thr His Tyr Ala Glu 50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asp Scr Lys Ser Ala 65 70 75 80
Val Tyr Leu Gin Met Thr Asp Leu Arg Thr Glu Asp Thr Gly Val Tyr 85 90 95 -43· 158366-序列表.doc 201211252
Tyr Cys Ser Arg Asn Tyr Tyr Gly Ser Thr Tyr Asp Tyr Trp Gly Gin 100 105 110
Gly Thr ITir Leu Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Glu Val 115 120 125
Gin Leu Gin Gin Ser Gly Pro Glu Leu Val Thr Pro Gly Ala Ser Val 130 135 140
Lys lie Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp His Tyr Met 145 150 155 160
Ser Trp Val Lys Gin Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp He Gly Asp 165 170 175
He Asn Pro Tyr Ser Gly Glu Thr Thr Tyr Asn Gin Lys Pbe Lys Gly 180 185 190
Thr Ala Thr Leu ITir Val Asp Lys Ser Ser Sex lie Ala Tyr Met Glu 195 200 205 lie Arg Gly Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg 210 215 220
Asp Asp Tyr Asp Ala Ser Pro Phe Ala 丁yr Trp Gly Gin Gly Thr Leu 225 230 235 240 %1 561 ^45 <210> 77 <211> 228 <212> PKT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 77
Asp lie Leu Leu Thr Gin Ser Pro Ala He Leu Ser Val Ser Pro Gly 15 10 15
Glu Arg Val Ser Phe Ser Cys Arg Ala Ser Gin Phe Val Gly Ser Ser 20 25 30 lie His Trp Tyr Gin Gin Arg Thr Asn Gly Ser Pro Arg Leu Leu He 35 40 45
Lys Tyr Ala Ser Glu Ser Met Ser Gly lie Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Tbr Asp Pbe Thr Leu Ser He Asn Thr Val Glu Ser 65 70 75 80
Glu Asp He Ala Asp Tyr Tyr Cys Gin Glu Ser His Ser Trp Pro Phe 85 90 95 •44- 158366-序列表.doc 201211252
Thr Phe Gly Ser Gly Thr Asn Leu Glu Val Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110
Pro Ser Val Phc lie Phc Pro Pro Asp Val Gin Met lie Gin Ser Pro 115 120 125
Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly Asp lie Val Thr Met Thr Cys Gin 130 135 140
Ala Ser Gin Gly Thr Ser lie Asn Leu Asn Trp Phe Gin Gin Lys Pro 145 150 155 160
Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie Tyr Gly Ser Ser Asn Leu Glu Asp 165 170 175
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Arg Tyr Gly Thr Asp Phe Thr 180 185 190
Leu Thr lie Ser Ser Leu Glu Asp Glu Asp Leu Ala Thr Tyr Phe Cys 195 200 205
Leu Gin His Ser Tyr Leu Pro Tyr Thr Phc Gly Gly Gly Thr Lys Leu 210 2] 5 220
Glu lie Lys Arg 225 <210> 78 <211> 245 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 78
Glu Val Gin Leu Gin Gin Ser Gly Pro Glu Leu Val Thr Pro Gly Ala 15 10 15
Ser Val Lys lie Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Tlir Phe Thr Asp His 20 25 30
Tyr Met Ser Trp Val Lys Gin Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp He 35 40 45
Gly Asp lie Asn Pro Tyr Ser Giy Glu Thr Thr Tyr Asn Gin Lys Phe 50 55 60
Lys Gly Thr Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser lie Ala Tyr 65 70 75 80
Met Glu lie Arg Gly Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Asp Asp Tyr Asp Ala Ser Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gin Gly 100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ala Ala Ser Thr Lys Gly Pro Glu Val Lys • 45· 158366·序列表.doc 201211252 215 120 125
Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly Ser Met Lys 130 135 140
Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe lie Phe Ser Asn His Trp Met Asn 145 150 155 160
Trp Val Arg Gin Ser Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Gla lie 165 170 175
Arg Ser Lys Scr lie Asn Ser Ala Thr His Tyr Ala Glu Ser Val Lys ISO 185 190
Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Ala Val Tyr Leu 195 200 205
Gin Uti Thr Asp Leu Arg Thr Gin Asp Thr Gly Val Tyr Tyr Cys Ser 210 215 220
Arg Asa Tyr Tyr Gly Ser Thr Tyr Asp Tyr Trp Giy Gin Gly Thr Thr 225 230 235 240
Leu Thr Val Ser Ser 245 <210> 79 <211> 228 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 79
Asp Val Gin Met lie Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly 15 10 15
Asp He Val Thr Met llir Cys Gin Aia Ser Gin Giy Thr Ser He Asn 20 25 30
Leu Asn Trp Phe Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45
Tyr Gly Ser Ser Asn Leu Glu Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Arg Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Glu Asp 65 70 75 80
Giu Asp Leu A!a Thr Tyr Phe Cys Leu Gin His Ser Tyr Uu Pro Tyr 85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110
Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Asp lie Leu Leu Thr Gin Ser Pro 115 120 125 -46- 158366-序列表.doc 201211252
Ala ilc Leu Scr Val Ser Pro Gly Glu Arg Val Ser Phe Ser Cys Arg 130 135 140
Ala Ser Gin Fhe Val Gly Ser Ser lie His Trp Tyr Gin Gin Arg Thr 145 150 155 160
Asn Gly Ser Pro Arg Leu Leu lie Lys Tyr Ala Scr Glu Ser Met Scr 165 170 175
Gly lie Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Tlir 180 185 190
Leu Ser lie Asn TKr Val Glu Ser Glu Asp He Ala A.sp Tyr Tyr Cys 195 200 205
Gin Glu Ser His Ser Trp Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Asn Leu 210 215 220
Glu Val Lys Arg 225
<210> 80 <21i> 251 <212> PRT <213>人工序列 <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 80
Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gin Pro Gly Arg 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Scr Tyr 20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Asn Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ala Phe Met Ser Tyr Asp Gly Scr Asn Lys Tyr Ala Lys Asp Ser Va! 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys S5 90 95
Ala Arg Asp Arg Gly lie Ala Ala Gly Gly Asn Tyr Tyr Tyr Tyr Gly 100 105 110
Met Asp Val Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser 115 120 125 t
Thr Lys Gly Pro Glu Val Gin Leu Gin Gin Ser Gly Pro Glu Leu Val 130 135 140 -47· 158366-序列表.doc 201211252
Thr Pro Gly Ala Ser Val Lys He Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr 145 150 155 160
Phe Thr Asp His Tyr Met Ser Trp Val Lys Gin Ser His Gly Lys Ser 1.65 170 175
Leu Glu Trp lie Gly Asp lie Asn Pro Tyr Ser Gly Glu Thr Thr Tyr ISO 185 190
Asn Gin Lys Phe Lys Gly Thr Ala Thr Lea Thr Val Asp Lys Ser Ser 195 200 205
Ser lie Ala Tyr Met Glu lie Arg Gly Leu l*hr Ser Glu Asp Ser Ala 210 215 220
Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Asp Tyr Asp Ala Ser Pro Phe Ala Tyr 225 230 235 240
Trp Gly Gin Gly Ilu Leu Val Thr Val Ser Ala 245 250 <210> 81 <211> 229 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 81
Glu lie Val Leu Thr Gin Sex Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Cly 1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gin Ser Val Tyr Ser Tyr 20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lya Pro Gly Gin Ala Pro Arg Leu Leu lie 35 40 45
Tyr Asp Ala Set Asn Arg Ala Thr Gly lie Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Scr Leu Glu Pro 65 70 75 80
Glu Asp Ph« Ala Val Tyr Tyr Cys Gin Gin Arg Ser Asn Trp Pro Pro 85 90 95
Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp lie Lys Arg Thr Val Ala 100 105 110
Ala Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Asp Val Gin Met lie Gin Ser 115 120 125
Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly Asp lie Val Thr Met Thr Cys 130 135 140 -48- 158366-序列表.doc 201211252
Gin Ala Ser Gin Gly Thr Ser lie Asn Leu Asn Trp Fhe Gin Gin Lys 145 150 155 160
Pro Gly Lys Ala Pro Lys Lea Leu lie Tyr Gly Ser Ser Asn Leu Glu 165 170 375
Asp Gly Vral Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Arg Tyr Gly Thr Asp Phe 180 185 190
Tlir Leu Thr lie Ser Ser Leu Glu Asp Glu Asp Leu Ala Thr Tyr Phe 195 200 205
Cys Leu Gin His Ser Tyr Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys 210 215 220
Leu Glu lie Lys Arg 225 Ο <210> 82 <211> 251 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <4Q0> 82
Glu Val Gin Leu Gin Gin Ser Gly Pro Glu Leu Val Thr Pro Gly Ala 1 5 10 15
Ser Val Lys lie Scr Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp His 20 25 30
Tyr Met Ser Trp Val Lys Gin Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp lie 35 40 45
Giy Asp lie Asn Pro Tyr Ser Gly Giu Thr Thr Tyr Asn Gin Lys Phe 50 55 60
Lys Gly Thr Ala Thr Leu Tbr Val Asp Lys Ser Ser Ser lie Ala Tyr 65 70 75 80
Met Glu He Arg Gly Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Asp Asp Tyr Asp Ala Ser Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gin Gly 100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ala Ala Ser Thr Lys Gly Pro Gin Val Gin 115 120 125
Leu Val Glu Sex Gly Gly Gly Val Val Gin Pro Gly Arg Ser Leu Atg 130 135 140
Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met His 145 150 155 160
Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Asn Gly Leu Glu Trp Val Ala Met -49- 158366-序列表.doc 201211252 165 170 175
Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Ala Lys Asp Ser Val Lys Gly Arg 180 185 190
Phe Thr He Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gin Met 195 200 205
Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp 210 215 220
Arg Gly lie Ala Ala Gly Gly Asn Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val 225 230 235 240
Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 245 250 <210> 83 <211> 229 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 83
Asp Val Gin Met lie Gin Scr Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly 15 10 15
Asp lie Val Thr Met Thr Cys Gin Ala Ser Gin Giy Thr Ser lie Asn 20 25 30
Leu Asn Trp Phe Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45
Tyr Gly Sei Ser Asn Leu Glu Asp Gly Val Pro Scr Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Scr Arg Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr He Ser Ser Leu Glu Asp 65 70 75 80
Glu Asp Leu Ala Thr Tyr Phe Cys Leu Gin His Ser Tyr Leu Pro Tyr 85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu He Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110
Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Glu He Val Leu Thx Gin Ser Pro 115 120 125
Ala Tht Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg 130 135 140
Ala Ser Gin Ser Val Tyr Ser Tyr Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro 245 150 155 160
Gly Gin Ala Pro Arg Leu Leu lie Tyr Asp Aia Ser Asn Arg Ala Thr 165 170 175 -50· 158366-序列表.doc 201211252
Gly lie Pro Ala Arg Phc Ser G3y Ser Gly Ser Gly Thr Asp Fhe Thr 180 185 190
Leu Thr lie Ser Set Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys 195 200 205
Gin Gin Arg Ser Asn Trp Pro Pro Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys 210 215 220
Val Asp lie Lys Arg 225 <210> 84 <211> 250 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <m> 84 ❹
Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Vai Va] Gin Pro Gly Arg 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Scr Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30
Asp Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ala Val lie Trp Ser Asp Gly Ser lie Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr He Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Glu Val Glu Ser Ala Met Gly Gly Phe Tyr Tyr Asn Gly Met 100 105 110
Asp Vai Trp Gly Gin Gly Thr Thr Va! Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr 115 120 125
Lys Gly Pro Glu Val Gin Leu Gin Gin Scr Gly Pro Glu Leu Val Thr 130 135 HO
Pro Gly Ala Ser Val Lys He Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe 145 150 155 160
Thr Asp His Tyr Met Ser Trp Val Lys Gin Scr His Gly Lys Scr Leu 365 170 175
Glu Trp lie Gly Asp lie Asn Pro Tyr Ser Gly Glu Thr Thr Tyr Asn 180 185 190 •51 158366-序列表.doc 201211252
Gin Lys Phe Lys Gly Thr Ala rIlir Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser 195 200 205 lie Ala Tyr Met Glu lie Arg Gly Leu Thr Set Glu Asp Ser Ala Val 210 215 220
Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Asp Tyr Asp Ala Ser Pro Phe A]a Tyr Trp 225 230 235 240
Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala 245 250 <210> 85 <211> 228 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述··合成多肽 <400> 85
Asp He Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly I 5 10 15
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Gly lie Arg lie Asp 20 25 30
Leu Gly Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu lie 35 40 45
Tyr Aia Ala Ser Thr Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Sex Gly Thr Glu Phe lie Phe Thr He Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Ser Tyr Tyr Cys Leu Gin His Lys Ser Tyr Pro Leu 85 90 95 TKr Phe Gly Gly Gly Ήίγ Lys Val Glu lie Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110
Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Asp Val Gin Met lie Gin Ser Pro 115 120 125
Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly Asp lie Val Thr Mel Thr Cys Gin 130 135 140
Ala Ser Gin Gly Th.r Ser He Asn Leu Asn Trp Phe Gin Gin Lys Pro 145 150 155 160
Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie Tyr Gly Ser Ser Asn Leu Glu Asp 165 170 175
Gly Val Pro Ser Arg Phe Set Gly Ser Arg Tyr Gly Thr Asp Phe Thr ISO 385 190 -52- 158366-序列表.doc 201211252
Leu Thr lie Ser Scr Leu Glu Asp Glu Asp Leu Ala Thr Tyr Phe Cys 195 200 205
Leu Gin His Ser Tyt Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu 210 215 220
Glu lie Lys Arg 225 <210> 86 <211> 250 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 86
Glu Val Gin Leu Gin G3n Ser Gly Pro Glu Leu Val Thr Pro Gly Ala 1 5 10 15
Ser Val Lys lie Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Tbr Asp His 20 25 30
Tyr Met Ser Trp Val Lys Gin Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp lie 35 40 45
Gly Asp lie Asn Pro Tyr Ser Gly Glu Thr Thr Tyr Asn Gin Lys Phe 50 55 60
Lys Gly Thr Ala Thr Leu Tbr Val Asp Lys Ser Ser Scr lie Ala Tyr 65 70 75 80
Met Glu lie Arg Gly Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Asp Asp Tyr Asp Ala Scr Pro Phe Ala Tyr Tip Gly Gin Gly 100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ala Ala Ser Thr Lys Gly Pro Gin Val Gin 115 120 125
Leu Val Glu Ser Gly Giy Gly Val VaJ Gin Pro Gly Arg Ser Leu Arg 130 135 140
Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Asp Met His 145 150 155 160
Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Val lie 165 170 175
Trp Ser Asp Gly Ser lie Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg 180 185 190
Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn llir Leu Tyr Leu Gin Met 195 200 205
Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu -53· 158366-序列表.doc 201211252 210 215 220
Val Glu Ser Ala Met Gly Gly Phe Tyr Tyr Asn Gly Met Asp Val Trp 225 230 235 240
Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 245 250 <210> 87 <211> 228 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 87
Asp Val Gin Met lie Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly 15 10 15
Asp He Val Thr Met Thr Cys Gin Ala Ser On Gly Tlir Ser lie Asn 20 25 30
Leu Asn Trp Phe Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45
Tyr Gly SeT Ser Asn Leu Glu Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Arg Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr He Ser Scr Leu Glu Asp 65 70 75 80
Glu Asp Leu Ala Thr Tyr Phe Cys Leu Gin His Ser Tyr Lea Pro Tyr 85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu He Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 120
Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro 11.5 120 125
Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg 130 135 140
Ala Ser Gin Gly lie Arg He Asp Leu Gly Trp Tyr Gin Gin Lys Pro 145 150 155 160
Glv Lys Ala Pro Lys Arg Leu lie Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gin Ser 165 170 175
Gly Val Pro Ser Atg Phe Ser Gly Ser Gly vSer Gly Thr Glu Phe He ISO 185 190
Phe Tiir lie Ser Ser Leu Gin Pro Glu Asp Phe Ala Ser Tyr Tyr Cys 195 200 205
Leu Gin His Lys Scr Tyr Pro Leu Thr Phe Giy Gly Gly Thr Lys Val 210 21.5 220 -54- 158366-序列表.doc 201211252
Glu lie Lys Arg 225 <210> 88 <211> 240 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <4〇0> 88
Glu Val G3n Leu Val Glu Ser G3y Gly Gly Leu He Gin Pro Gly Gly 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Val Ser Arg Asn 20 25 30
Tyr Mel Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ser Val lie Tyr Ser Gly Asp Arg Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 50 55 60
Gly Arg Phe Thr lie Scr Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 65 70 75 80
Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95
Arg Gly Glu Gly Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110
Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Glu Val Gin Leu Gin Gin Ser 115 120 125
Gly Pro Glu Leu Val Thr Pro Gly Ala Ser Val Lys lie Ser Cys Lys 130 135 140
Ala Ser Gly Tyr Tlir Phe Thr Asp His Tyr Met Ser Trp Val Lys Gin 145 150 155 160
Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp lie Gly Asp lie Asn Pro Tyr Scr 165 170 175
Giy Glu Thr Thr Tyt* Asn Gin Lys Phe Lys Gly Thr A!a Thr Leu ll^r J80 185 190
Val Asp Lys Ser Ser Ser lie Ala Tyr Met Glu lie Arg Gly Leu Thr 195 200 205
Set Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Asp Tyr Asp Ala 210 215 220
Scr Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala 225 230 235 240 -55- 158366-序列表.doc 201211252 <210> 89 <211> 227 <212> PRT <2Π>人工序列 <220〉 <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 89
Glu lie Va] Met Thr Gin Ser Pro Ala Thr Leu Ser Vai Ser Pro Gly 1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gin Ser Vai Ser Ser Asn 20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Arg Leu Leu lie 35 40 45
His Gly Ala Ser lie Arg Ala Thr Gly Leu Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Set Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Ser 65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Vai Tyr Tyr Cys Gin Gin Tyr Asn Tyr Trp Trp Tlir 85 90 95
Phe Gly Girt Gly Thr Lys Vai Glu lie Lys Arg Thf Vai Ala Ala Pro loo 105 no
Ser Vai Phe lie Phe Pro Pro Asp Va) Gin Met lie Gin Ser Pro Ser 115 120 125
Scr Leu Ser Ala Ser Leu Gly Asp lie Val Thr Met Thr Cys Gin Ala 130 135 140 wSer Gin Gly Thr Ser lie Asn Leu Asn Trp Phe Gin Gin Lys Pro Gly 145 150 155 160
Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie Tyr Gly Ser Ser Asn Leu Glu Asp Gly 165 170 175
Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Arg Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Leu 180 185 190
Thr lie Ser Ser Leu Glu Asp Glu Asp Leu Ala Thr Tyr Phe Cys Leu 195 200 205
Gin His Ser Tyr Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu 210 215 220
He Lys Arg 225 <210> 90 <211> 240 <222> PRT <213>人工序列 -56- 1583 66-序列表.doc 201211252 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 90
Glu Val Gin Leu Gin Gin Ser Gly Pro Glu Leu Val Thr Pro Gly Ala 15 10 15
Scr Val Lys lie Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp His 20 25 30
Tyr Met Ser Trp Val Lys Gin Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp lie 35 40 45
Gly Asp lie Asn Pro Tyr Ser Gly Glu Thr Thr Tyr Asn Gin Lys Phe 50 55 60
Lys Gly Thr Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser lie Ala Tyr 65 70 75 80
Met Glu lie Arg Gly Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys S5 90 95 〇
Ala Arg Asp Asp Tyr Asp Ala Ser Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gin Gly 100 1Q5 110
On: Leu Va] Thr Val Ser Ala Ala Ser Thr Lys Gly Pro Glu Vul Gin 115 120 125
Leu Va! Glu Ser Gly Gly Gly Leu lie Gin Pro Gly Gly Ser Ixu Arg 130 135 140
Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Val Ser Arg Asn Tyr Met Ser 145 150 155 160
Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Val lie' 165 170 175
Tyr Ser Gly Asp Arg Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe 180 185 190
Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Lea Gin Met Asn 195 200 205
Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Glu 210 215 220
Gly Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 225 230 235 240 <210> 91 <211> 227 <212> mi <2i3>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 -57- 158366-序列表.doc 201211252 <400> 91
Asp Val Gin Met lie Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly 15 10 15
Asp lie Val Thr Met Ilir Cys Gin Ala Ser Gin Giy Thr Ser lie Asn 20 25 30
Leu Asn Trp Phe Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45
Tyr Gly Ser Ser Asn Leu Glu Asp Gly Val Pro Ser Atg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Arg Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Glu Asp 65 70 75 80
Glu Asp Leu Ala Thr Tyr Phe Cys Leu Gin His Ser Tyr Leu Pro Tyr 85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys Arg Thr Vai Ala Ala 100 105 110
Pro Ser Val Phe lie f^e Pro Pro Glu lie Val Met Thr Gin Ser Pro 115 1.20 125
Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Lea Ser Cys Arg 130 135 140
Ala Ser G]n Ser Val Ser Ser Asn Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro 145 150 155 160
Gly Gin Ala Pro Arg Leu Leu lie His Gly Ala Ser lie Arg Ala Thr 165 170 175
Gly Leu Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr 180 185 190
Leu Thr lie Set Ser Leu Gin Ser Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys 195 200 205
Gin Gin Tyr Asn Tyr Trp Trp Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu 210 225 220
He Lys Arg 225 <210> 92 <211> 239 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 92
Gin Val Gin Leu Lys Giu Ser Giy Pro Gly Leu Vai Aia Pro Ser Gin 15 10 15 -58- 158366-序列表.doc 201211252
Ser Leu Scr lie Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Asp Tyr 20 25 30
Gly Val Asn Trp Val Arg Gin Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45
Gly Met lie Trp Gly Asp Gly Ser Thr Asp Tyr Asp Ser Thr Leu Lys 50 55 60
Ser Arg Leu Ser lie Ser Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gin lie Phe Leu 65 70 75 80
Lys Met Asn Ser Leu Gin Thr Asp Asp Thr Ala Arg Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95
Aig Glu Trp His His Gly Pro Val Ala Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu 100 105 110
Val Thr Val Ser Ala Ala Scr Thr Lys Gly Pro Glu Val Gin Leu Val 115 120 125
Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser 130 135 140
Cys Lys Aia Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Lys Tyr Trp Leu Gly Trp Val 145 150 155 160
Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met Gly Asp lie Tyr Pro 165 170 175
Gly Tyr Asp Tyr Thr His Tyr Asn Glu Lys Pbc Lys Asp Arg Val Thr 180 185 190
Leu Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Arg Ser 195 200 205
Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Asp Gly 210 215 220
SeT Ser Thr Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 225 230 235 <210> 93 <211> 233 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 93
Asp lie Val Met Thr Gin Ser His Lys Phe Met Ser Thr Thr Val Gly 15 10 15
Asp Arg Val Ser lie Thr Cys Lys Ala Scr Gin Ala Val Ser Ser Ala 20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ser Pro Lys Leu Leu lie •59- 158366-序列表.doc 201211252 35 40 45
Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Val Thr Asp Phe Thr Leu Thr He His Asn Leu Gin Ala 65 70 75 SO
Glu Asp Leu Ala Leu Tyr Tyr Cys Gin Gin His Tyr Ser Thr Pro Phe 85 90 95
Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys Arg Thr Val Ala Ala loo 105 no
Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Asp Val Leu Met Thr Gin Thr Pro 115 120 125
Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly Glu Pro Ala Ser He Ser Cys Thr 130 135 140
Ser Ser Gin Asn lie Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp 145 150 155 160
Tyr Leu Gin Lys Pro Gly Gin Ser Pro Gin Leu Leu lie Tyr Lys Val 165 170 175
Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser 180 185 190
Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys He Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val 195 200 205
Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gin Va] Ser His Va] Pro Tyr Hir Phe Gly 210 215 220
Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg 225 230 <210> 94 <2Il> 239 <2I2> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 94
Glu Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 15 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Lys Tyr 20 25 30
Trp Leu Gly Trp Val. Arg Gin Ala Pro Gly Gin Giy Leu Glu Trp Met 35 40 45
Gly Asp lie Tyr Pro Giy Tyr Asp Tyr Thr His Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 •60- 】58366-序列表.doc 201211252
Lys Asp Arg Val Ήιγ Leu Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Ser Asp Gly Ser Ser Thr Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val 100 105 110
Thr Val Ser Scr Ala Ser Thr Lys Gly Pro Gin Val Gin Leu Lys Glu 115 120 125
Scr Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gin Ser Leu Ser lie Thr Cys 130 135 140
Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg 145 150 155 160 G)n Pro Pro Gly Lys Gly Leu Gla Trp Leu Giy Met lie Trp Gly Asp 165 170 175
Gly Ser Thr Asp Tyr Asp Ser Thr Leu Lys Ser Arg Leu Ser lie Ser 180 185 190
Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gin lie Phe Leu Lys Met Asn Ser Leu Gin 195 200 205
Thr Asp Asp Thr Ala Atg Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Trp His His Giy 210 215 220
Pro Vai Ala Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala 225 230 235 <210> 95 <2il> 233 <212> m <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 95
Asp Val Leu Met Thr Gin Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly ] 5 10 15
Glu Pro Ala Scr lie Scr Cys Thr Ser Ser Gin Asn He Val His Ser 20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gin Lys Pro Gly Gin Ser 35 40 45
Pro Gin Leu Leu lie Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie 65 70 75 80 -61 · 158366-序列表.doc 201211252
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gin Val 85 90 95
Ser His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys loo 105 no
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe He Phe Pro Pro Asp lie Val 115 120 125
Met Thr Gin Ser His Lys Phe Met Scr llir Thr Val Gly Asp Arg Val 130 135 140
Ser lie Thr Cys Lys Ala Ser Gin Ala Val Ser Ser Ala Val Ala Trp 145 150 155 160
Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ser Pro Lys Leu Leu lie Tyr Trp Ala 165 170 175
Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser 180 185 190
Val Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie His Asn Leu Gin Ala Glu Asp Leu 195 200 205
Ala Leu Tyr Tyr Cys Gin Gin His Tyr Ser Thr Pro Phe Thr Phe Gly 210 215 220
Set Gly Thr Lys Leu Glu He Lys Arg 225 230 <210> 96 <211> 242 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <4(X)> 96
Clu Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15
Ser Met Lys Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe lie Phe Ser Asn His 20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gin Sef Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Vai 35 40 45
Ala Glu l\c Arg Ser Lys Ser lie Asn Ser Ala Thr His Tyr Ala Glu 50 55 60
Ser Va] Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Ala 65 70 75 30
Vai Tyr Leu Gin Met Thr Asp Leu Arg Thr Glu Asp Thr Gly Val Tyr 85 90 95 -62· 158366-序列表.doc 201211252
Tyr Cys Scr Arg Asn Tyr Tyr Gly Ser Thr Tyr Asp Tyr Trp Qly 〇]n 100 105 110
Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro GIu Val 115 120 125
Gin Leu Val G]n Ser Gly Ala GIu Val Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val 130 135 140
Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Fhe Thr Lys Tyr Trp Leu 145 150 155 160
Gly Trp Val Arg GJn Ala Pro Gly Gin Gly Leu GIu Trp Met Gly Asp 165 170 175 i]e Tyr Pro Gly Tyr Asp Tyr Thr His Tyr Asn GIu Lys Phe Lys Asp 180 185 190
Arg Val Thr Leu Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met GIu 195 200 205 Ο
Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg 210 215 220
Ser Asp Giy Ser Ser Thr Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val 225 230 235 240
Ser Ser <210> 97 <211> 233 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 97
Asp lie Leu Leu Thr Gin Ser Pro Ala lie Leu Ser Val Ser Pro Gly 15 10 15 GIu Arg Val Ser Phe Ser Cys Arg Ala Ser Gin Phe Val Gly Ser Scr 20 25 30 lie His Trp Tyr Gin Gin Arg llir Asn G!y Ser Pro Arg Leu Leu IU 35 40 45
Lys Tyr Ala Ser Glu Ser Met Ser Gly lie Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly rrhr Asp Phe Thr Leu Ser lie Asn Thr Val Glu Ser 65 70 75 80
Glu Asp lie Ala Asp Tyr Tyr Cys Gin Glu Ser His Ser Trp Pro Phe 85 90 95 T!ir Phe Gly Ser Gly Thr Asn Leu Glu Val Lys Arg Thr Val Ala Ala -63- 158366-序列表.doc 201211252 100 105 110
Pro Ser Val Fhe lie Phe Pro Pro Asp Val Leu Met Thr Gin Thr Pro 115 120 125
Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly Glu Pro Ala Ser lie Ser Cys Thr 130 135 140
Ser Ser Gin Asn lie Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp 145 150 155 260
Tyr Leu Gin Lys Pro Gly Gin Ser Pro G!n 乙eu Leu lie Tyr Lys Val 165 170 175
Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser 180 185 190
Gly Thr Asp Phe Thr I^cu Lys lie Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val 195 200 205
Gly Vai Tyr Tyr Cys Phe Gin Val Ser His Vai Pro Tyr Thr Phe Cly 210 215 220
Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg 225 230 <210> 98 <211> 242 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 98
Glu Vai Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala GJu Va】Lys Lys Pro G】y Ala 15 10 IS
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Lys Tyr 20 25 30
Trp Leu Gly Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45
Gly Asp lie Tyr Pro Gly Tyr Asp Tyr Thr His Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60
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Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Glu Vai Lys Leu Glu Glu 115 120 125 -64- 158366-序列表.doc 201211252
Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly Ser Met Lys Leu Ser Cys 130 135 140
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Gin Ser Pro Giu Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Glu lie Arg Ser Lys 165 170 175
Ser He Asn Scr Ala Thr His Tyr Ala Gla Ser Val Lys Gly Arg Phe 180 1S5 190
Thr lie Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Ala Val Tyr Leu Gin Met Thr 195 200 205
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Asp Val Leu Met Thr Gin Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15
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Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gin Lys Pro Gly Gin Ser 35 40 45
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Leu Thr Gin Scr Fro Ala lie Leu Ser Val Set Pro Gly Giu Arg Val 130 135 140
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Tyr Gin Gin Arg Thr Asn Gly Ser Pro Arg Leu Leu lie Lys Tyr Ala 165 170 175
Ser G)u Ser Met Ser Gly lie Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser 180 185 190
Gly Thr Asp Phe Thr Leu Ser He Asn Thr Val Glu Ser Glu Asp lie 195 200 205
Ala Asp Tyr Tyr Cys Gin Glu Ser His Ser Trp Pro Phe Thr Phe Gly 210 215 220
Ser Gly ITir Asn Leu Glu Val Lys Arg 225 230 <210> 100 <211> 248 <212> PRT <2】3>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 100
Gin Vai Gin Leu Va[ Glu Ser Giy Gly Gly Val Val Gin Pro Gly Arg 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Asn Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
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Ala Arg Asp Arg Gly lie Ala Ala Gly Gly Asn Tyr Tyr Tyr Tyr Gly 300 205 310
Met Asp Val Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser 115 120 125
Thr Lys Gly Pro Glu Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys 130 135 140 -66- 158366-序列表.doc 201211252
Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr 145 150 155 】60
Phe Thr Lys Tyr Trp Leu Gly Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly 165 170 175
Leu Gla Ttp Met Gly Asp lie Tyr Fro Gly Tyr Asp Tyr ITir His Tyt 180 185 190
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Gly Tin Leu Vai Thr Val Ser Ser 245
<210> 101 <211> 234 <212> PRT c213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 101
Glu lie Val Leu Thr Gin Ser Pro Ala Tbr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Glti Ser Val Tyr Ser Tyr 20 25 30
Leu Ala Trp Tyt Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pto Arg Leu Leu He 35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly lie Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Glu Pro 65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gin Gin Arg Ser Asn Trp Pro Pro 85 90 95
Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp lie Lys Arg Thr Val Ala 】00 105 110
Ala Pro Ser Val Phe He Pbe Pro Pro Asp Val Leu Met Hir Gin Thr 115 120 125
Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pto Gly Glu Pro Ala Ser lie Sex Cys 130 135 140
Thx Ser Ser Gin Asn He Va! His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Giu -67- 158366-序列表.doc 201211252 145 150 155 160
Trp Tyr Leu Gin Lys Pro Gly Gin Ser Pro Gin Leu Leu lie Tyr Lys 165 170 175
Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly 180 185 190
Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie Ser Arg Val Gla Ala Glu Asp 195 200 205
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Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg 225 230 <210> 102 <213> 248 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 102
Glu Val Gin Leu Vai Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Lys Tyr 20 25 30
Trp Leu Gly Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45
Gly Asp lie Tyr Pro Gly Tyr Asp Tyr Thr His Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60
Lys Asp Arg Val Thr Leu Thr Thv Asp Thr Ser Thr Ser Tlir Ala Tyr 65 70 75 80
Met G1u Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Ser Asp Gly Ser Ser Thr Tyr Trp GJy Gin Gly Thr Leu Val 100 105 110
Tlir Val Ser Set Ala Ser Thr Lys Gly Pro Gin Val Gin Leu Val Glu 115 120 125
Ser Gly Gly Gly Val Val Gin Pro Giy Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys 130 135 140
Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met His Trp Yal Arg 145 150 155 160
Gin Aia Pro Gly Asn Gly Leu Glu Trp Val Ala Phe Met Ser Tyr Asp 165 170 175 -68- 158366-序列表.doc 201211252
Gly Ser Asn Lys Tyr Ala Lys Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr lie 180 185 190
Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gin Met Asn Ser Leu 195 200 205
Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Arg Gly IJe 210 215 220
Ala Ala Gly Gly Asn Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gin 225 230 235 240
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 245 <210> 103 <211> 234 <212> PRT <213>人工序列 <220>
<223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 103 A$p Val Leu Met Thr Gin Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 15 10 15
Glu Pro Ala Ser lie Ser Cys Thr Ser Ser Gin Asn lie Val His Ser 20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gin Lys Pro Gly Gin Ser 35 40 45
Pro Gin Leu Leu lie Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie 65 70 75 80
Ser Arg Val Giu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gin Val 85 90 95
Ser His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 110
Arg TTir Val Ala Ala Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Glu lie Val 115 120 125
Leu Thr Gin Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala 130 135 140
Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gin Ser Val Tyr Ser Tyr Leu Ala Trp 145 150 155 160
Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Arg Leu Leu lie Tyr Asp Ala 165 170 175 -69- 158366-序列表.doc 201211252
Ser Asn Arg Ala TTir Giy He Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Scr 180 185 190
Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe 195 200 205
Ala Val Tyr Tyr Cys Gin Gin Arg Ser Asn Trp Pro Pro Phe Thr Phe 210 215 220
Gly Pro Gly Tbr Lys Val Asp lie Lys Arg 225 230 <210> 104 <211> 247 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 104
Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gin Pro Gly Arg 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30
Asp Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Giy Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ala Val lie Trp Ser Asp Gly Ser He Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60
Lys G]y Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80
Lea Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp ITir Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Glu Val Glu Ser Ala Met Gly Gly Phe Tyr Tyr Asn Gly Met 100 105 110
Asp Val Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Hir Val Scr Ser Ala Ser Thr 115 120 125
Lys Gly Pro Glu Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys 130 135 140
Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe 145 150 155 160
Thr Lys Tyr Trp Leu Gly Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu 165 170 175
Glu Trp Met Gly Asp I]e Tyr Pro Gly Tyr Asp Tyr Thr His Tyr Asn 180 185 190 -70- 158366-序列表.doc 201211252
Giu Lys Phe Lys Asp Arg Va] Thr Leu Thr Hir Asp Thr Ser Thr Ser 195 200 205
Thr Ala Tyr Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Ihr Ala Val 210 215 220
Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Asp Gly Ser Ser Thr Tyr Trp Gly Gin Gly
225 230 235 24Q
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 245 <210> 105 <21i> 233 <212> m <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 105
Asp lie (Hn Met TTir Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser AU Ser Val Gly i 5 10 15
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Gly lie Arg lie Asp 20 25 30
Leu Gly Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu He 35 40 45 丁yr Ala Ala Ser Thr Leu Gin Ser Gly Va〗Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr GIu Phe lie Phe Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro
65 70 75 SO
Glu Asp Phe Ala Ser Tyr Tyr Cys Leu Gin His Lys Ser Tyr Pro Leu 85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Tlir Lys Val Gla lie Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110
Pro Ser Vai Phe lie Phe Pro Pro Asp Val Leu Met Thx Gin Thi Pro 115 120 125
Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly Glu Pro Ala Ser lie Ser Cys Thr 130 135 140
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Tyr Leu Gin Lys Pro Gly Gin Ser Pro Gin Leu Leu He Tyr Lys Val 165 170 175
Ser Asn Arg Plie Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser 180 185 190
Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys He Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val -71 · 158366-序列表.doc 201211252 195 200 205
Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gin Val Ser His Val Pro Tyr Thr Phe Gly 210 215 220
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Glu Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 15 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Lys Tyr 20 25 30
Trp Leu Gly Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45
Gly Asp lie Tyr Pro Gly Tyr Asp Tyr Thr His Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60
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Met Gin Leu Arg Ser Lea Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Ser Asp Gly Ser Ser Thr Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val 100 105 110
Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Gin Val Gin Leu Val Giu 115 120 125
Ser Gly Gly Gl：y Val Val Gin Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys 130 135 140
Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Sei. Tyr Asp Met His Trp Vai Arg 145 150 155 160
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Gly Ser lie Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Va! Lys Gly Arg Phe ΊΙιγ 180 185 190
Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gin Met Asn Set Leu 195 200 205
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Asn Gly Asn Tlir Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gin Lys Pro Gly Gin Ser 35 40 45
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Set His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Vai Glu lie Lys 100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Asp lie Gin 115 120 125
Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val 130 135 140
Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Gly lie Arg lie Asp Leu Gly Trp 145 150 155 160
Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu He Tyr Ala Ala 165 170 175
Ser Thr Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser 180 185 190
Gly Thr Glu Phe lie Phe Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro Glu Asp Phe 195 200 205
Ala Sei: Tyr TVi: Cys Leu His Lys Ser Tyr Pto Leu Thr Phe Gly 210 215 220 -73- 158366-序列表.doc 201211252
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Ser Lea Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Pbe Thr Val Ser Arg Asn 20 25 30
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Ser Val lie Tyr Ser Gly Asp Arg Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 50 55 60
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Arg Gly Glu Gly Gly Phe A.sp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110
Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Glu Val Gin Leu Val Gin Ser 115 120 125
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Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Ser 65 70 75 80
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Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Asp Val Leu Met Thr Gin Thr Pro Leu 115 120 125
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Ser Gin Asn lie Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr 145 150 155 160
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Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg 225 230 <210> 110 <211> 237 <212> PRT <2B>人工序列 ·75· 158366-序列表.doc 201211252 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 110
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Ser Gly Gly Gly Leu lie Gin Pro Gly Gly Se? Leu Arg Leu Ser Cys 130 135 140
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Ser lie Arg Ala Thr Gly Leu Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser 180 185 190
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Ser Leu Ser lie Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Lea Tbr Asp Tyr -77- 158366-序列表.doc 201211252 20 25 30
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Gly Val Tyr Phe Cys Scr Gin Sex Tbr His Phe Pro Phe Thr Phe Gly 210 215 220 llir Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys Arg 225 230 <210> 114 <211> 245 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 114
Gin Val Gin Leu Gin Gin Ser Gly Ala Glu Le-u Val Arg Pro Gly Ihv 15 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Gly Phe lie Asn Tyr 20 25 30
Leu lie Glu Trp He Lys Gin Arg Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp lie 35 40 45 -79- 158366·序列表.doc 201211252
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Lys Met Asn Ser Leu Gin Thr Asp Asp Thr Ala Arg Tyr Tyr Cys Ala 210 215 220
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Val ^ Val Ser # <210> 115 <211> 233 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 115
Asp Val Vai Met Thr Gin Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly 15 10 15
Asp Gin Ala Ser lie Ser Cys Thr Ser Gly Gin Ser Leu Val His He 20 25 30
Asn Giy Asn Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gin Lys Pro Gly Gin Ser 35 40 45 -80- 158366-序列表.doc 201211252
Pro Lys Leu Leu lie Tyr Lys Val Ser Asn Leu Phc Ser Gly Val Pro 50 55 60
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Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gin Ser 85 90 95
Thr His Phc Pro Phe Thr Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys 100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phc lie Phe Pro Pro Asp lie Val 115 120 125
Met Thr Gin Ser His Lys Phe Met Scr Thr Thr Val Gly Asp Arg Val 130 135 140
Ser lie Thr Cys Lys Ala Scr Gin Ala Val Ser Ser Ala Val Ala Trp 145 150 155 160
G
Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ser Pro Lys Leu Leu lie Tyr Trp Ala 165 170 175
Ser Thr Arg His Thr G3y Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser 180 185 190
Val Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie His Asn Leu Gin Ala Glu Asp Leu 195 200 205 Ala Leu Tyr Tyr Cys Gin Gin His Tyr Ser Thr Pro Phe Thr Phe Gly 210 215 220
Ser Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys Arg 225 230 <210> 116 <211> 248 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 116 Glu Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 10 15
Ser Met Lys Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe lie Phe Ser Asn His 20 25 30
Trp Mel Asn Trp Val Arg Gin Ser Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ala Glu lie Arg Ser Lys Ser He Asn Sex Ala Thr His Tyr Ala Glu 50 55 60 Set Val Lys 01 y Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Ala 158366-序列表.doc •81 - 201211252
65 70 75 SO
Val Tyr Leu Gin Met Thr Asp Leu Arg Thr Glu Asp Thr Gly Val Tyr 85 90 95
Tyr Cys Ser Arg Asn Tyr Tyr Gly Ser Thr Tyr Asp Tyr Trp Gly Gin 100 105 110
Gly TTir Thr Leu Thr Val Scr Ser Ala Ser Ήίγ Lys Gly Pro Gin Val 115 120 125
Gin Leu Gin Gin Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Thr Ser Val 130 135 140
Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Gly Phe lie Asn Tyr Leu lie 145 150 155 160
Glu Trp lie Lys Gin Arg Pro Gly Gin Gly Leu Glu 丁rp ile Gly Leu 165 170 175 lie Asn Pro Gly Ser Asp Tyr Thr Asn Tyr Asn Glu Asb. Phe Lys Gly 180 185 190
Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met His 195 200 205
Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys Ala Arg 210 215 220
Asp Tyr Trp Gly Gin 240
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Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser 245 <210> 117 <211> 233 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 117
Asp lie Leu Leu Ήίγ Gin Scr Pro Ala lie Leu Ser Val Ser Pro Gly 15 10 15
Glu Arg Val Ser Phe Ser Cys Arg Ala Ser Gin Phe Val Gly Ser Ser 20 25 30 lie His Trp Tyr Gin Gin Arg Thr Asn Gly Scr Pro Arg Leu Leu lie 35 40 45
Lys Tyr Ala Ser Glu Ser Met Ser Gly He Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Pbe Thr Leu Ser ile Asn Thr Val Glu Ser 65 70 75 80 -82- 158366-序列表,doc 201211252
Glu Asp He Ala Asp Tyr Tyr Cys Gin Glu Ser His Ser Trp Pro Phe 85 90 95
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Ser Gly Gin Ser Leu Val His lie Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp 145 150 155 160
Tyr Leu Gin Lys Pro Gly Gin Ser Pro Lys Leu Leu lie Tyr Lys Val 165 170 175
Ser Asn Leu Phe Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Oly Ser 180 185 190 Ο
Gly Tht Asp Phe Thr Leu Lys lie Scr Axg Val Glu Ala Glu Asp Leu 195 200 205
Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gin Ser Thr His Phe Pro Phe Thr Phe Gly 210 215 220
Thr Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys Arg 225 230 <210> 118 <211> 248 <232> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 118
Gin Val Gin Leu Gin Gin Ser Gly Ala Glu Lea Val Arg Pro Gly Thr 1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Gly Phe He Asn Tyr 20 25 30
Leu lie Glu Trp lie Lys Gin Axg Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp lie 35 40 45
Gly Leu lie Asn Pro Gly Ser Asp Tyr Thr Asn Tyr Asn Glu Asn Phe 50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80
Met His Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Yal Tyr Phe Cys 85 90 95 -83- 158366-序列表.doc 201211252
Ala Arg Arg Phe Gly Tyr Tyr Gly Ser Gly Asn Tyr Phc Asp Tyr Trp 100 105 110
Gly Gin Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pto 115 120 125
Glu Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro GJy Gly 130 135 140
Ser Met Lys Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe lie Phe Ser Asn His 145 150 155 160
Trp Met Asn Trp Val Arg Gin Ser Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val 165 170 175
Ala Glu lie Arg Scr Lys Ser lie Asn Ser Ala Thr His Tyr Ala Glu 180 185 190
Ser Val Lys G】y Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Ala 195 200 205
Val Tyr Leu Gin Met Thr Asp Leu Arg Thr Glu Asp Thr Gly Va】Tyr 210 215 220
Tyr Cys Ser Arg Asn Tyr Tyr Gly Ser llir Tyr Asp Tyr Trp Gly Gin 225 230 235 240
Gly Thf Thr Leu Thr Val Ser Ser 245 <210> 119 <211> 233 <212> PRT <Ή3>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 119
Asp Val Val Met Thr Gin Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Giy 15 10 15
Asp Gin Ala Ser lie Ser Cys Thr Ser Gly Gin Ser Leu VaJ His lie 20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gin Lys Pro Gly Gin Ser 35 40 45
Pro Lys Leu Leu lie Tyr Lys Val Ser Asn Leu Phe Ser Gly Vai Pro 50 55 ω
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie 65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Qly Val Tyr Phe Cys Ser Gin Ser 85 90 95 •84- 158366·序列表.doc 201211252
Thr His Phe Pro Phe Thr Phe Giy Thr Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys 100 105 110
Arg Thv Val Ala Ala Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Asp lie Leu 115 120 125
Leu Thr Gin Ser Pro Ala lie t^u Ser Val Ser Pro Gly Glu Arg Val 130 135 140
Ser Phe Ser Cys Arg Ala Ser Gin Phe Val Gly Ser Ser lie His Tip 145 150 155 160
Tyr Gin Gin Arg Thr Asn Gly Ser Pro Arg Leu Leu lie Lys Tyx Ala 165 170 175
Ser Glu Ser Met Ser Gly lie Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser 180 185 190
Gly Thr Asp Phe Thr Leu Scr lie Asn Thr Val Glu Ser Glu Asp lie 195 200 205 Ο
Ala Asp Tyr Tyr Cys Gin Glu Ser His Ser Trp Pro Phe pfhr Phe Gly 210 215 220
SeT Gly Thr Asn Leu Glu Val Lys Aig 225 230 <210> 120 <211> 254 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 120
Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gin Pro Gly Arg 1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Scr Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Asn Gly Leu Glu Trp Vai 35 40 45
Ala Phe Met Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Ala Ly.s Asp Ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie S&r Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala GLu Asp Thr Ala Val Tyr Tyt Cvs 85 90 95
Ala Arg Asp Arg Gly He Ala Ala Gly Gly Asn Tyr Tyr Tyr Tyr Gly 1D0 105 no
Met Asp Val Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser -85 - 158366·序列表.doc 201211252 115 120 125
Thr Lys Gly Pro Gin Val Gin Leu Gin Gin Ser Gly Ala Glu Leu Val 130 135 140
Arg Pro Gly Thr Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Gly 145 150 155 160
Phe lie Asa Tyr Leu lie Glu Trp lie Lys Gin Arg Pro Gly Gin Gly 165 170 175
Leu Glu Trp lie Gly Leu lie Asn Pro Gly Ser Asp Tyr Thr Asn Tyr 180 185 190
Asn Glu Asn Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser 195 200 205
Ser Thr Ala Tyr Met His Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala 210 215 220
Val Tyr Phe Cys Ala Arg Arg Phe Gly Tyr Tyr Gly Ser Gly Asn Tyr 225 230 235 240
Fhe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly ΊΙιγ Thr Leu Thr Val Ser Ser 245 250 <210〉 121 <211> 234 <212> PRT <213>人工序列 <220> <323>人工序列之描述：合成多肽 <400> 121
Glu lie Val Leu Thr Gin Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 15 10 15
Glu Ar8 Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gin Ser Val Tyr Ser Tyr
Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Arg Leu Leu lie 35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly lie Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thi· lie Ser Ser Leu Glu Pro 65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gin Gin Arg Ser Asn Trp Pro Pro 85 90 95
Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp lie Lys Arg Thr Val Ala 100 105 110
Ala Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Asp Vai Val Met Thr Gin Thr 115 120 125 -86- 158366-序列表.doc 201211252
Pro Leu Set Leu Pro Val Ser Leu Gly Asp Gin Ala vSer He Scr Cys 130 135 140
Thr Ser Gly Gin Ser Leu Val His lie Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His 145 150 155 160
Trp Tyr Leu Gin Lys Pro Gly Gin Ser Pro Lys Leu Leu lie Tyr Lys 165 170 175
Val Ser Asn Leu Phe Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly 180 185 190
Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp 195 200 205
Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gin Ser Thr His Phe Pro Phe Thr Phe 210 215 220
Gly Thr Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys Arg 225 230 <210> 122 <211> 254 <212> PRT <213>人工序列
O <220> <2Z3>人工序列之描述：合成多肽 <400> 122
Gin Val Gin Leu Gin Gin Scr Gly Ala Glu L«u Val Arg Pro Gly Thr 15 10 15
Ser Val Lys Ya! Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Gly Phe lie Asn Tyr 20 25 30
Leu lie Glu Trp lie Lys Gin Arg Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp lie 35 40 45
Gly Leu He Asn Pro Gly Ser Asp Tyr Thr Asn Tyr Asn Glu Asn Phe 50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser llir Ala Tyr 65 70 75 80
Met His Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95
Ala Arg Arg Phe Gly Tyr Tyr Gly Ser Gly Asn Tyr Phe Asp Tyr Trp 100 105 110
Gly Gin Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro 115 120 125
Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gin Pro Gly Arg 130 135 140 -87- 158366-序列表.doc 201211252
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 245 150 155 160
Ala Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Asn Gly Leu Glu Trp Val 265 170 175
Ala Phe Met Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Ala Lys Asp Ser Val 180 185 190
Lys Gly Arg Phe Thr He Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 195 200 205
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyt Cys 210 215 220
Ala Arg Asp Arg Gly J]e AJa Ala Gly Gly Asn Tyr Tyr Tyr Tyr Gly 22$ 230 235 240
Met Asp Val Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 245 250 <210> 123 <211> 234 <212> PRT <2i3>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 123
Asp Val Val Met Thr Gin Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Sex Leu Gly 15 10 15
Asp Gin Ala Ser lie Ser Cys Thr Ser Gly Gin Ser Leu Val His lie 20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gin Lys Pro Giy Gin Ser 35 40 45
Pro Lys Leu Leu lie Tyr Lys Val Ser Asn Leu Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie 65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gin Ser 85 90 95
Thr His Phe Pro Phe Thr Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys 100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Glu lie Val 115 120 125
Leu Thr Gin Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala 130 135 140 -88- 158366-序列表.doc 201211252
Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gin Ser Val Tyr Ser Tyr Leu Ala Trp 145 150 155 160
Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gla Ala Pro Arg Leu Leu He Tyr Asp Ala 165 170 175
Ser Asn Arg Ala Thr Gly lie Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser 180 185 190 GJy Thr Asp Phe Ήιγ Leu Thr lie Scr Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe 195 200 205
Ala Val Tyr Tyr Cys Gin Gin Arg Ser Asn Trp Pro Pro Phe Thr Phe 210 215 220
Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp lie Lys Arg 225 230
<21〇> 124 <211> 249 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 124
Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Arg 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr 20 25 30
Ala Met His Trp Vai Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Scr Ala ilc Thr Trp Asn Ser Gly His lie Asp Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60
Glu Gly Arg Phe Thr He Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu ATg Aia Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Lys Val Ser Tyr Leu Ser Thr Ala Scr Ser Leu Asp Tyr Trp Gly 100 105 110
Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Gin 135 120 125
Val Gin Leu Gin Gla Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pto Gly Thr Ser 130 135 140
Vai Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Gly Phe lie Asn Tyr Leu 145 150 155 160
Ilc Glu Tip lie Lys Gin Arg Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp lie Gly -89- 158366·序列表.doc 201211252 165 170 175
Leu lie Asn Pro Gly Ser Asp Tyr Thr Asn Tyr Asn Glu Asn Phe Lys ISO 185 190
Gly Lys Ala ΏΐιΓ Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met 195 200 205
His Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys Ala 210 215 220
Arg Arg Phe Gly Tyr Tyr Gly Ser Gly Asn Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly 225 230 235 240
Gin Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser 245 <210> 125 <211> 233 <222> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 125
Asp He Gin Met Tlir Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Glv 15 10 15
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Gly lie Arg Asn Tyr 20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gin Ser GJy Val Pro Ser Arg Fhe Scr Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ήιγ Leu ΊΙίγ lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80
Glu Asp Va! Aia Thr Tyr Tyr Cys Gin Arg Tyr Asn Arg Ala Pro Tyr S5 90 95
Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110
Pro Ser Val Phe lie Fhe Pro Pro Asp Val Val Met Thr Gin Thr Pro 115 120 125
Leu Ser Leu Pro Yal Ser Leu Gly Asp Gin Ala Ser lie Ser Cys Thr 130 135 140
Ser Gly Gin Ser Leu Val His lie Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp 145 150 155 360
Tyr Leu Gin Lys Pro Gly Gin Ser Pro Lys Leu Leu lie Tyr Lys Val 165 170 175 •90· 158366-序列表.doc 201211252
Ser Asn Leu Phe Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Scr Gly Ser Gly Ser 180 185 190
Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie Ser Arg Vai Glu Ala Glu Asp Leu 195 200 205
Val Tyr Phe Cys Ser Gin Ser Thr His Phe Pro Phe Thr Phe Gly 210 215 220
Thr Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys Arg 225 230 <210> 126 <211> 249 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 126
Gin Val Gin Leu Gin Gin Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Thr i 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser G3y Tyr Giy Phe lie Asn Tyr 20 25 30
Leu lie Glu Trp He Lys Gin Arg Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp lie 35 40 45
Gly Leu lie Asn Pro Gly Ser Asp Tyr Thr Asn Tyr Asn Glu Asn Phe 50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Tbr Ala Tyr 65 70 75 80
Met His Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95
Ala Arg Arg Phe Gly Tyr Tyr Gly Ser Gly Asn Tyr Phe Asp Tyr 丁rr> 100 105 110
Gly Gin Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro 115 120 125
Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Arg 130 135 140
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr 145 150 155 160
Ala Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Vai 165 270 175
Set Ala lie Thr Trp Asn Ser Gly His lie Asp Tyr Ala Asp Ser Val ISO 185 190 •91 · 158366-序列表.doc 201211252
Glu Gly Arg Pbe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 195 200 205
Leu Gin Wet Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 210 215 220
Ala Lys Val Ser Tyr Leu Ser Thr Ala Ser Ser Leu Asp Tyr Trp Gly 225 230 235 240 G^ly^LeuVa.ThrVal Ser Ser <210> 127 <211> 233 <212> FRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 127
Asp Val Val Met Thr Gin Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val wSer Leu Gly 1 5 10 15
Asp Gin Ala Ser lie Ser Cys Thr Ser Gly Gin Ser Leu Val His lie 20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gin Lys Pro Gly Gin Ser 35 40 45
Pro Lys Leu Leu He Tyr Lys Val Ser Asn Leu Hie Ser Gly Val Pro 50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie 65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gin Ser 85 90 95
Thr His Phe Pro Phe Thr Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys 100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Fro Ser Val Phe lie Fhe Pro Pro Asp lie Gin 115 120 125
Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val 130 135 140
Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Gly He Arg Asn Tyr Leu Ala 145 150 155
Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie Tyr Ala Ala 165 170 175
Ser Tlir Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser kxg Phe Ser Giy Ser Gly Ser ISO 185 190 •92- 158366-序列表.doc 201211252
Gly Thr Asp Phe Thr Leu rfhr lie Ser Ser Leu Gin Pro Glu Asp Val 195 200 205
Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Arg Tyr Asia Arg Ala Pro Tyr Thr Phe Gly 210 215 220
Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg 225 230 <210> 128 <211> 2S3 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 128
Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gin Pro Gly Arg 15 10 15 Ο
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Scr Gly Phe Ήϊγ Phe Ser Ser Tyr 20 25 30
Asp Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ala Va! lie Trp Ser Asp Gly Ser lie Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr He Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Glu Val Glia Ser Ala Met Gly Gly Phe Tyr Tyr Asn Gly Met 100 105 110
Asp Val Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr 115 120 125
Lys Gly Pro Gin Val Gin Leu Gin Gin Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg 130 135 140
Pro Gly Thr Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Scr Gly Tyr Gly Phe 145 150 155 160 lie Asn Tyr Leu lie Glu Trp lie Lys Gin Arg Pro Gly Gin Gly Leu 165 170 175
Glu Trp lie Gly Leu lie Asn Pro Gly Ser Asp Tyr Thr Asn Tyr Asn 180 185 190
Glu Asn Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser 195 200 205
Thr Ala Tyr Met His Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val •93- 158366-序列表.doc 201211252 210 215 220
Tyr Phe Cys Ala Arg Arg Phe Gly Tyr Tyr Gly Scr Gly Asn Tyr Phe 225 230 235 240
Asp Tyr Τφ Gly Gin Gly Thr Thr Leu Thr Va丨 Ser Ser 245 250 <210> 129 <211> 233 <212> PRT <213>人工序列 <220> <2：23>人工序列之描述：合成多肽 <400> 129
Asp He Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15
Asp Arg Val Thr He Thr Cys Aig Ala Ser Gin Gly I3e Arg lie Asp 20 25 30
Leu Gly Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu lie 35 40 45
Tyr Ala Ala Scr Thr Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe He Phe Thr ile Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 SO
Glu Asp Phe Ala Ser Tyr Tyr Cys Leu Gin His Lys Ser Tyr Pro Leu 85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 HO
Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Asp Val Val Met Thr Gin Thr Pro 115 120 125
Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly Asp Gin Ala Ser He Ser Cys Thr 130 135 140
Ser Gly Gin Ser Leu Val His lie Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp 145 150 155 160
Tyr Leu Gin Lys Pro Gly Gin Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val 165 170 175
Ser Asn Leu Phe Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser 180 185 190
Gly Thr Asp Pbe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu 195 200 205
Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gin Ser Thx His Phe Pro Phe Thr Phe Giy 210 215 220 -94- 158366-序列表,doc 201211252 ΊΤιγ Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys Arg 225 230 <210> 130 <211> 253 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 130
Gin Val Gin Leu Gin Gin Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Thr 15 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Gly Phe IU A«sn Tyr 20 25 30
Leu lie Glu Trp lie Lys Gin Arg Pro Gly Gin Gly Leu Glu Tip lie 35 40 45 ❹
Gly Leu lie Asn Pto Gly Ser Asp Tyr Thr Asn Tyr Asn Glu Asn Phe 50 55 60
Lys Gly Lys Ma Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser SeT Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 SO
Met His Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phc Cys 85 90 95
Ala Arg Arg Phe Gly Tyr Tyr Gly Ser Gly Asn Tyr Phe Asp Tyr Trp 100 105 110
Gly Gin Gly Thr Thr Leu Thr Val Scr Scr Ala Scr Thr Lys Gly Pro 115 120 125
Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gin Pro Gly Arg 130 135 140
Ser Leu Arg Leu Scr Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 145 150 155 160
Asp Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 165 170 175
Ala Val lie Trp Ser Asp Gly Ser He Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 180 185 190
Lys Gly Arg Phc Thr He Ser Aig Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 195 200 205
Leu Gin Met Asn Ser Lea Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 210 2J5 220
Ala Arg Glu Val Glu Ser Ala Met Gly Gly Phe Tyr 丁yr Asn Gly Met 225 230 235 240 -95- 158366-序列表.doc 201211252
Asp Val Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 245 250 <210> 131 <221> 233 <212> PRT <213>人工序列 <22〇> <223>人工序列之描述··合成多肽 <400> 131
Asp Val Val Met Thr Gin Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly 1 5 10 15
Asp Gin Ala Ser lie Ser Cys Thr Ser Gly Girt Ser Leu Val His lie 20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gin Lys Pro Giy Gin vSer 35 40 45
Pro Lys Leu Leu lie Tyr Lys Val Ser Asn Leu Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe rYhr Leu Lys He 65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Sar Gin Ser 85 90 95
Thr His Phe Fro Phe Thr Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys 100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Va] Phe lie Phe Pro Pro Asp He Gin 115 120 125
Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val 130 135 140
Tht lie Thr Cys Arg Ala Ser Glti Gly He Arg ile Asp Leu Gly Trp 145 150 155 160
Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Ala Ala 165 170 175
Ser fYhr Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser 380 185 190
Gly Thr Glu Phe Ile Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gin Pro Glu Asp Phe 195 200 205
Ala Ser Tyr Tyr Cys Leu Gin His Lys Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly 210 215 220
Gly Gly Hir Lys Val Glu lie Lys Arg 225 230 -96· 158366-序列表.doc 201211252 <210> 132 <211> 243 <2]2> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 132
Glu Val Gla Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu lie Gin Pro Giy Gly 1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Val Ser Arg Asn 20 25 30
Tyr Met Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ser Val lie Tyr Ser Gly Asp Arg Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 50 55 60
Oly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 65 70 75 80
Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Tiir Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95
Arg Gly Glu Gly Gly Phe A^p Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu Va】Thr 100 105 110
Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Gin Val Gin Leu Gin Gin Ser 115 120 125
Gly Ala Giu Leu Val Arg Pro Gly Thr Ser Val Lys Val Ser Cys Lys 130 135 140
Ala Ser Gly 丁yr Gly Phe lie Asn Tyr Leu lie Glu Trp lie Lys Gin 145 150 155 160
Arg Pro Gly Gin Gly Leu G!u Trp lie G5y Leu lie Asn Pro Gly Ser 165 170 175
Asp Tyr Thr Asn Tyr Asn Glu Asn Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr 180 185 190
Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met His Leu Ser Scr Leu Thr 195 200 205
Ser Glu Asp Ser Ala Vai Tyr Phe Cys Ala Arg Arg Phe Gly Tyr Tyr 210 215 220
Gly Scr Gly Asn Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Tlir Thr Leu Tlir 225 230 235 240
Val Ser Scr <210> 133 -97- 158366-序列表.doc 201211252 <211> 232 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 133
Giu ilc Val Met Thr Gin Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Giy 1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gin Ser Val Ser Ser Asn 20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Arg Leu Leu lie 35 40 45
His Gly Ala Ser lie Arg Ala Tlir Gly Leu Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Scr Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Ser 65 70 75 80
Giu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gin Gin Tyr Asn Tyr Trp Ίϊρ Thr 85 90 95
Phe Gly Gin Gly Thr Lvs Val Glu lie Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro 100 105 110
Ser Val Phe He Phe Pro Pro Asp Val Val Met Thr Gin Thr Pro Leu 115 120 125
Ser Leu Pro Va丨 Ser Leu Gly Asp Gin Ala Ser lie Ser Cys Thr Ser 130 335 140
Gly Gin Ser Leu Val His lie Asn Gly Asn rfhr Tyr Leu His Trp Tyr 145 150 155 160
Leu Gin Lys Pro Gly Gin Ser Pro Lys Leu Leu Ilc Tyr Lys Val Ser 165 170 175
Asn Leu Phe Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly 180 185 190
Thr Asp Phe Thr Leu Lys He Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly 195 200 205
Val Tyr Phe Cys Ser Gin Ser Thr His Phe Pro Phe Thr Phe Gly Thr 210 215 220
Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys Arg 225 230 <210> 134 <211> 243 <212> PRT <213>人工序列 <220> 158366-序列表.doc *98- 201211252 <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 134
Gin Val Gin Leu Gin Gin Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Thr 1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Gly Phe lie Asn Tyr 20 25 30
Lt\x lie Glu Trp lie Lys Gin Arg Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp lie 35 40 45 G]y Leu lie Asn Pro Gly Ser Asp Tyr Thr Asn Tyr Asn Glu Asn Phe 50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 SO
Met His Leu Ser Scr Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95
Ala Arg Arg Phe Gly Tyr Tyr Gly Ser Gly Asn Tyr Phe Asp Tyr Trp 100 105 110
Gly Gin Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro 115 120 125
Glu Val Gin Leu Val Glu Scr Gly Gly Gly Leu lie Gin Pro Gly Gly 130 135 140
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Val Ser Arg Asn 145 150 155 160
Tyr Met Scr Trp Vai Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 165 170 175
Ser Val lie Tyx Ser Gly Asp Arg Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 180 185 190
Gly Arg Fhe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 195 200 205
Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 210 215 220
Arg Gly Glu Gly Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr 225 230 235 240
Val Ser Ser <210> 135 <211> 232 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 -99- 158366-序列表.doc 201211252 <400> 135
Asp Va3 Val Met Thr G]n Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu G3y 15 10 15
Asp Gin Ala Ser lie Ser Cys Thr Ser Gly Gin Ser Leu Val His lie 20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gin Lys Pro Gly Gin Ser 35 40 45
Pro Lys Leu Leu He Tyr Lys Val Ser Asn Leu Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly rfhr Asp Phe Thr Leu Lys lie 65 70 75 80
Ser Arg Val GIu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyi Phe Cys Ser Gin Ser 85 90 95
Thr His Phe Pro Phe Thr Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Glu He lys 100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Glu He Val 115 120 125
Met Thr Gin Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly Glu Arg Ala 130 135 140
Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gin Ser Vai Ser Ser Asn Leu Ala Trp 145 150 155 160
Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Arg Leu Leu lie His GJy Ala 165 170 175
Ser lie Arg Ala Thr Gly Leu Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser ia〇 185 190 G]y Thr Glu Phe Thr Leu Thr He Ser Ser Leu Gin Ser Glu Asp Phe 195 200 205
Ala Val Tyr Tyr Cys Gin Gin Tyr Asn Tyr Trp Trp Thr Phe Gly Gin 210 215 220
Gly Thr Lys Val Gla lie Lys Arg 225 230 <210> 136 <221> 251 <212> PRT c2】3>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 136
Gin Val Gin leu Lys Glu Ser Gly Pro Giy Leu Val Ala Pro Ser Gin 15 10 15 •100- 158366-序列表.doc 201211252
Ser Leu Ser lie Thr Cys Thr Val Ser Gly Phc Ser Leu Thr Asp Tyr 20 25 30
Gly Val Asn Trp Val Arg Gtn Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45
Gly Met lie Trp Gly Asp Gly Ser Thr Asp Tyr Asp Ser Tbr Leu Lys 50 55 60
Ser Arg Leu Ser He Ser Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gin He Phe Leu 65 70 75 80
Lys Met Asn Ser Leu Gin ITir Asp Asp Thr Ala Arg Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95
Arg Glu Trp His His Gly Pro Val Ala Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu 100 IQ5 110
Va! Thr Val Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu 115 120 125
Ala Pro Gin Val Gin Leu Glxi Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro 130 135 140
Ser Glu Thr Leu SeT Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Pbe Ser Leu lie 145 150 155 160
Gly Tyr Asp Leu Asn Trp lie Arg Gin Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175
Trp He Gly lie lie Trp Gly Asp Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Ser Ala 380 185 190
Val Lys Ser Arg Val Thr lie Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gin Phe 195 200 205
Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Yal Tyr Tyr 210 215 220
Cys Ala Arg Gly Gly Tyr Trp Tyr Ala Thr Ser Tyr Tyr Phe Asp Tyr 225 230 235 240
Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 245 250 <210> 137 <211> 221 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 137
Asp lie Val Met Thr Gin Ser His Lys Phe Met Ser Thr Thr Val Gly
10 IS -101 · 158366-序列表.doc 201211252
Asp Arg Val Ser lie Thr Cys Lys Ala Ser Gin Ala Val Ser Ser Ala 20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ser Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45
Tyr Trp Ala Ser T.r Arg H.s Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
Ser Gly Ser Val 'llir Asp Phe Thr Leu Thr lie His Asn Leu Gin Ala 65 70 75 80
Glu Asp Leu Ala Leu Tyr Tyr Cys Gin Gin His Tyr Ser Thr Pro Phe 85 90 95
Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110
Pro Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Va3 115 120 125
Gly Asp Arg Val Thr lie pfhr Cys Arg Ala Ser Gin Ser lie Set Asn 130 135 140
Asn Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Q\y Lys Ala Pro Lys Leu Leu 145 150 155 160 lie Tyr Tyr Thr Ser Arg Phe His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser 165 170 175
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr lie Scr Ser Leu Gin 180 185 ]90
Pro Glu Asp lie Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Glu His Thr Leu Pro 195 200 205
Tyr Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys Arg 210 215 220 <210> 138 <211> 251 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <4〇〇> 138
Gin Val Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 15 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu lie (Hy Tyr 20 25 30
Asp Leu Asn Trp ile Arg Gin Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp lie 35 40 45 -102- 158366-序列表.doc 201211252
Gly lie lie Trp GJy Asp Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Ser Ala Val Lys 50 55 60
Ser Arg Val Thr lie Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gin Phe Ser Leu 65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95
Arg Gly Gly Tyr Trp Tyr Ala Thr Ser Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly 100 105 110
Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Scr Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125
Val Pbc Pro Leu Ala Pro Gin Val Gin Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly 130 135 140
Leu Val Ala Pro Ser Gin Ser Leu Ser He Thr Cys Thr Val Ser Gly 145 150 155 160
Phe Ser Leu Thr Asp Tyr Giy Val Asn Trp Val Arg Gin Pro Pro Gly 165 170 175
Lys Gly Leu Glu Trp Leu Gly Met lie Trp Gly Asp Gly Ser Thr Asp 180 185 190
Tyr Asp Ser Thr Leu Lys Ser Arg Leu Ser lie Ser Lys Asp Asn Ser 195 200 205
Lys Ser Gin lie Phe Leu Lys Met Asn Ser Leu Gin Thr Asp Asp Thr 210 215 220
Ala Arg Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Trp His His Gly Pro Val Ala Tyr 225 230 235 240
Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Scr Ala 245 250 <210> 139 <2ll> 221 <2i2> m <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 139
Asp He Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15
Asp Arg Val Thr He Thr Cys Arg Ala Ser Gin Ser lie Ser Asn Asn 20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45
Tyr Tyr Thr Ser Arg Phe His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly -103- 158366-序列表.doc 201211252 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80
Glu Asp He Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Glu His Thr Leu Pro Tyr 85 90 95
Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Ixu Glu lie Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110
Pro Asp lie Val Met Thr Gin Ser His Lys Fhe Met Ser Thr Thr Val 115 120 125
Gly Asp Arg Val Ser lie Thr Cys Lys Ala Ser Gin Ala Val Ser Ser 130 135 140
Ala Val Ala Trp Tyt Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ser Pro Lys Leu Leu 145 150 155 160
He Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp Afg Phe Thr 165 170 175
Gly Ser Gly Ser Val Thr Asp Phe Thr Leu Tbr lie His Asn Leu Gin ISO 185 190
Ala Glu Asp Leu Ala Leu Tyr Tyr Cys Gin Gin His Tyr Ser Thr Pro 195 200 205
Phe ll:r Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys Arg 210 215 220 <210> 140 <211> 254 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 140
Glu Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly I 5 10 15
Ser Met Lys Leu Ser Cys Val Ala Ser Giy Phe lie Phe Ser Asn His 20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gin Ser Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ala Glu lie Arg Ser Lys Ser lie Asn Ser Ala Thr His 丁yr Ala Glu 50 55 60
Scr Val Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Ala 65 70 75 80
Va】Tyr Leu Gin Met Thr Asp Leu Arg Thr Glu Asp Tin Gly Val Tyr 85 90 95 •104- 15 83 66-序列表.doc 201211252
Tyr Cys Ser Arg Asn Tyr Tyr Gly Scr Thr Tyr Asp Tyr Trp Gly Gin 100 105 110
Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Scr Val 115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Gin Val Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Gly Leu 130 135 140
Val Lys Pro Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phc 145 150 155 160
Ser Leu lie Gly Tyr Asp Leu Asn Trp lie Arg Gin Pro Pro Gly Lys 165 170 175
Gly Leu Glu Trp lie Gly lie lie Trp Gly Asp Gly Thr Thr Asp Tyr 180 185 190
Asn Ser Ala Val Lys Ser Arg Val Thr lie Ser Lys Asp Thr Ser Lys 195 200 205 Ο
Asn Gin Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala 210 215 220
Va】Tyr Tyr Cys Ala Arg Giy Gly Tyr Trp Tyr Ala Thr Ser Tyr Tyr 225 230 235 240
Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Sex Ser 245 250 <210> 141 <212> 221 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 141
Asp He Leu Leu Tl^r Gin Ser Pro Ala He Leu Scr Val Ser Pro Gly 15 10 15
Glu Arg Val Ser Bie Ser Cys Arg Ala Ser Gin Phe Val Gly Ser Scr 20 25 30 lie His Trp Tyr Gin Gin Arg Thr Asn Gly Ser Fro Arg Leu Leu lie 35 40 45
Lys Tyr Ala Ser Glu Scr Met Ser Gly lie Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Scr Gly Thr Asp Phc Thr Leu Ser lie Asn fFhr Val Glu Ser 65 70 75 80 GU Asp !le Ala Asp Tyr Tyr Cys Gin Glu Ser His Ser Trp Pro Phe 85 90 95 -105- 158366-序列表.doc 201211252
Thr Phe Gly Ser Gly Thr Asn Leu Glu Val Lys Arg Tlir Val Ala Ala 100 105 110
Pro Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val 115 120 325
Gly Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Ser He Ser Asn 130 135 140
Asn Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu 145 150 155 160 lie Tyr Tyr Thr Ser Arg Phe His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser 165 170 175
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ήιγ Phe Thi lie Ser Ser Leu Gla 180 1S5 190
Pro Glu Asp He Ala Tlir Tyr Tyr Cys Gin Gin Glu His Thr Leu Pro 195 200 205
Tyr Thr Fhe Gly Gin Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys Arg 210 215 220 <210> U2 <211> 254 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 142
Gin Val Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Scr Glu 1 5 20 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Fhc Ser Leu lie Gly Tyr 20 25 30
Asp Leu Asn Trp lie Arg Gin Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 丁rp fie 35 40 45
Gly lie lie Trp Gly Asp Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Ser Ala Val Lys 50 55 60
Ser Arg Val Thr lie Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gin Phe Ser Leu 65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95
Arg Gly Gly Tyr Trp Tyr Ala Thr Ser Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly 100 105 110
Gin Gly Thr Leu Val ITu Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125 -106- 158366-序列表.doc 201211252
Val Phe Pro Leu Ala Pro Glu Vai Lys Leu Glu Glu Scr Giy Gly Giy 130 135 140
Leu Val Gin Pro Giy Gly Ser Met Lys Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly 145 150 155 160
Phe lie Phe Ser Asn His Trp M&t Asn Trp Val Atg Gin Ser Ρτο Glu 165 170 175
Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Glu He Arg Ser Lys Ser lie Asn Scr 180 185 190
Ala Thr His Tyr Ala Glu Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg 195 200 205
Asp Asp Ser Lys Ser Ala Val Tyr Leu Gin Met Thr Asp Leu Arg Thr 210 215 220
Glu Asp Hir Giy Val Tyr Tyr Cys Ser Arg Asn Tyr Tyr Gly Ser Thr 225 230 235 240
Tyr Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Ήιγ Thr Leu Thr Val Ser Ser 245 250 <210> 143 <21I> 221 <212> ΡΖΓ <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 143
Asp lie Gin Met Tlir Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Ser lie Ser Asn Asn 20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45
Tyr Tyr Thr Ser Arg Phe His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60
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Glu Asp lie Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Glu His Thr Leu Pro Tyr 85 90 95
Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys Arg Thr Val Ala Ala 300 105 110
Pro Asp He Leu Leu Thr Gin Ser Pro Ala lie Leu Ser Val Ser Pro 115 120 125
Gly Glu Arg Val Scr Phe Ser Cys Arg Ala Ser Gin Phe Val Gly Ser -107- 158366-序列表.doc 201211252 130 135 140
Ser lie His Trp Tyr Gin Gin Arg Thr Asn Gly Ser Pro Arg Leu Leu 145 150 155 160 lie Lys Tyr Ala Ser Glu Ser Met Ser Gly lie Pro Ser Arg Phe Ser 165 170 175
Gly Ser Gly Ser Gly Tht Asp Phe Thr Leu Ser lie Asn Thr Val Glu 180 185 190
Ser Glu Asp lie Ala Asp Tyr Tyr Cys Gin Glu Ser His Ser Tip Pro 195 200 205
Phe Thr Phe Gly Ser Gly Tlir Asn Leu Glu Val Lys Arg 210 215 220 <210> 144 <211> 260 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 144
Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gin Fro Gly Arg l 5 10 15
Scr Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Fhe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30
Ala Met His Trp Val At.g Gin Ala Pro Gly Asn Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
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Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp ΊΙιγ Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Asp Ar, Gly He Ala Ala Gly Gly Asn Tyr Ty, Tyr Tyr Gly
Met Asp Val Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser 115 120 125
Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu A]a Fro Gin Val Gin Leu Gin 130 135 140
Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr 145 150 155 160
Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu lie Gly Tyr Asp Leu Asn 丁rp 丁le 165 170 175 •108· 158366-序列表,doc 201211252
Arg Gin Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Ττρ Ile Gly lie lie Trp Gly 280 185 190
Asp Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Ser. Ala Val Lys Ser Arg Va] Thr lie !95 200 205
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Givi Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gin Ser Val Tyr Ser Tyr 20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Arg Leu Leu He 35 40 45
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Val Gly Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Ser lie Ser 130 135 140
Asn Asn Leu Asn Ττρ Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu 145 150 155 160 -109- 158366-序列表.doc 201211252
Leu He Tyr Tyr Thr Ser Arg Fhe His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe 165 170 175
Ser Gly Ser Gly Ser Giy Thr Asp Phe Thr Phe Thr ile Ser Ser Leu 180 185 190
Gin Pro Glu Asp lie Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Glu His Thr Leu 195 200 205
Fro Tyr Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys Arg 210 215 220 <210> 146 <211> 260 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 146
Gin Val Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Set Gly Phe Ser Leu He Gly Tyr 20 25 30
Asp Uu Asn 丁rp 1U Arg G];n Pro Pro Gly Lys Gly Leu GIu 了rp lie 35 40 45
Gly lie lie Trp Giy Asp Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Set Ala Val Lys 50 55 60
Ser Arg Val Hu lie Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gin Phe Ser Leu 65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser "Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95
Arg Gly Gly Tyr Trp Tyr Ala Thr Ser Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly 100 105 110
Gin Gly Thr Leu Val Ήίγ Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly 130 135 140
Val Val Gin Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly 145 150 155 160
Phe ^rhr Phe Ser Ser Tyr Ala Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly 165 170 175
Asn Gly Leu Glu Trp Val Ala Phe Met Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys 180 185 190 -110- 158366-序列表.doc 201211252
Tyr Ala Lys Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr He Ser Arg Asp Asn 195 200 205
Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp 210 215 220
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Asn Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val 245 250 255
Thr Val Ser Ser 260 <2I0> 147 <211> 222 <212> PRT <213>人工序列 <220> Ο <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 147
Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Ser lie Ser Asn Asn 20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu He 35 40 45
Tyr Tyr Thr Ser Arg Phe His Scr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80
Glu Asp lie Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Glu His Thr Leu Pro Tyr 85 90 95
Thr Phe Giy Gin Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110
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Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gin Ser Val Tyr Ser 130 135 140
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Arg Leu Leu 145 150 155 160 lie Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly lie Pro Ala Arg Phe Ser 165 170 175
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu rilir lie Ser Ser Leu Glu -Ill - 158366-序列表.doc 201211252 180 185 190
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gin Gin Arg Ser Asn Trp Pro 195 200 205
Pro Phe Thr Phe G】y Pro Gly Thr Lys Va! Asp lie Lys Arg 210 215 220 <210> 148 <211> 259 <2\2> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 148
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Asp Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ala Val lie Trp Ser Asp Gly Ser lie Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60
Lys G!y Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Glu Val Glu Ser Ala Mel Gly Gly Phe Tyr Tyr Asn Gly Met 100 105 110
Asp Val Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Vai Ser Ser Ala Ser Oir 115 120 125
Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Gin Val Gin Leu Gin Glu 130 135 140
Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu Thr Leu Ser Leu Ήίγ Cys 145 15Q 155 160
Thr Val Set Gly Phe Ser Leu lie Gly Tyr Asp Leu Asn Trp lie Arg 165 170 175
Gin Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp lie Gly ile He Trp Gly Asp ISO 185 190
Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Ser Ala Val Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser 195 200 205
Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gin Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr 210 2!5 220 -112- 158366-序列表.doc 201211252
Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly GJy Tyr Trp Tyr 225 230 235 240
Ala Thr Ser Tyr Tyr Phe Asp Tyr Tip Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr 245 250 255
Vai Ser Ser <210> 149 <21i> 221 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 149
Asp Jle Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Aia Ser Val Gly 1 5 10 15
O
Asp Arg Val Thr I】e Ήιϊ1 Cys Arg Ala Ser Gin Gly IU Arg lie Asp 20 25 30
Leu Gly Trp Tyt Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu lie 35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr GIu Phe lie Phe Thr lie Scr Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Ser Tyr Tyr Cys Leu Gin His Lys Ser Tyr Pro Leu 85 90 95
Hir Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg Thr Val Ala Ala l&) 105 110
Pro Asp lie Gin Met Tbr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val 115 120 125
Gly Asp Arg Val Tht lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Ser lie Ser Asn 130 135 HO
Asn Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Aia Pro Lys Leu Leu 145 150 155 160 31e Tyr Tyr Tht Ser Arg Flic His Ser Gly Vai Pro Ser Arg Phe Ser 165 170 175
Gly Ser Gly vSer Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr lie Ser Ser Leu Gin 180 185 190
Pro Glu Asp He Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Glu His Thr Leu Pro 195 200 205 •113· 158366-序列表.doc 201211252
Tyr Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys Arg 210 215 220 <210> 150 <211> 259 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 150
Gin Vai Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 2 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu He Gly Tyr 20 25 30
Asp Leu Asn Trp lie Arg Gin Fro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp He 35 40 45
Gly lie He Trp Gly Asp Gly ITir Thr Asp Tyr Asn Ser Ala Val Lys 50 55 60
Scr Arg Val Tlir He Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gin Phe Ser Leu 65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp TTir Ala Val Tyr Tyr Cys Ala S5 90 95
Arg Giy Gly Tyr Trp Tyr Ala Thr Ser Tyr Tyr Phe Asp Tyr 丁rp Gly 300 105 no
Gin Gly Ήιγ Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly 130 135 140
Val Val Gin Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly 145 150 155 160
Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Asp Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly 165 170 175
Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Val lie Trp Ser Asp Gly Set lie Lys 180 185 190
Tyr 丁yr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr He Ser Arg Asp Asn 195 200 205
Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp 210 215 220
Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Val Glu Ser Ala Met Gly Gly 225 230 235 240 -114- 158366-序列表.doc 201211252
Phe Tyr Tyr Asn Gly IKet Asp Val Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr 245 250 255
Val Ser Ser <210> 151 <211> 221 <222> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 151
Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Me Thr Cys Aig Ala Set Gin Ser lie Set Asn Asn 20 25 30
O
Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Giy Lys Ala Pro Lys Leu Leu He 35 40 45
Tyr Tyr Thr Ser Arg Phe His Ser Gly Val Pro Set Arg Phe Scr Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80
Glu Asp He Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Glu His Thr Leu Pro Tyr 85 90 95
Thr Phe Giy Gin Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110
Pro Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val 115 120 125
Gly Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Gly lie Arg lie 130 135 140
Asp Leu Gly Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu 145 150 155 160
He Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser 165 170 175
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gtu Phe lie Phe Thr lie Ser Ser Leu Gin 180 185 190
Pro Glu Asp Phe Ala Ser Tyr Tyr Cys Leu Gin His Lys Ser Tyr Pro 195 200 205
Leu Thr Phe Gly Gly G]y Hir Lys Val Glu lie Lys Arg 210 215 220 <230> 152 -115- 158366-序列表.doc 201211252 <211> 249 <212> m <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 152
Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu lie Gin Pro G3y Gly 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys A]a Ala Ser Gly Phe Thr Val Ser Arg Asn 20 25 30
Tyr Met Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Lea Glu Trp Val 35 40 45
Ser Val ile Tyr Ser Gly Asp Arg Thr Tyr Tyr Ala Asp vSer Val Lys 50 55 60
Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 65 70 75 80 G3n Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95
Arg Gly Glu Gly Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly ΊΉγ Leu Vai Thr 100 105 110
Val Ser Sei Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Fro Leu Ala Pro 115 120 125
Gin Val Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 130 135 140
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu He Gly Tyr 145 150 155 \ω
Asp Leu Asit 丁rp Ile Arg Gin Pro Pro Gly Lys Gly Leu G】u 丁rp 】le 165 170 175
Gly Ile lie Trp Gly Asp Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Ser Ala Val Lys 180 185 190
Ser Arg Val Thr ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gin Phe Ser Leu 195 200 205
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 210 215 220
Arg Gly Gly Tyr Trp Tyr Ala Thr Ser Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly 225 230 235 240
Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 245 <230> 153 <211> 220 -1】6- 158366·序列表.doc 201211252 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 153
Glu lie Val Met Thr Gin Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly 1 5 10 15 CHu Arg Ala Hir Lea Ser Cys Arg Ala Ser G】n SeT Val Ser Ser Asn 20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gla Ala Pro kvg Leu Leu lie 35 40 45
His Gly Ala Ser lie Arg Ala Thr Gly Leu Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr He Ser Ser Leu Gin Ser 65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gin Gin Tyr Asn Tyr Trp Trp Thr δ5 90 95
Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro 100 105 110
Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 115 120 125
Asp Arg Val Thr He Thr Cys Arg Ala Ser Gin Ser lie Ser Asn Asn 130 135 140
Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu fie 145 150 155 160
Tyr Tyr Hir Ser Arg Phe His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 165 170 175
Scr Gly Scr Gly Tlir Asp Phe Thr Phe Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 180 185 190
Glu Asp lie Ala Thr Tyr Tyr Cys G!n Gin Glu His Thr Leu Pro Tyr 195 200 205
Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys Arg 210 215 220 <210> 154 <211> 249 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 154
Gin Val Gin Leu Gin Glu Ser Gly,Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu • 117- 158366-序列表.doc 201211252 15 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu lie Gly Tyr 20 25 30
Asp Leu Asn Trp lie Arg Gin Pro Pro Gly Lys Gly Leu Giu Trp lie 35 40 45
Gly lie lie Trp Gly Asp Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Ser Ala Val Lys 50 55 60
Ser Arg Val Thr lie Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gin. Phe Ser Leu 65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ma Asp Thr AU Val 丁yr Tyr Cys Ala 85 90 95
Arg Gly Gly Tyr Trp Tyr Ala Thr Scr Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly 100 105 110
Gin Gly Thr Leu Val Tlir Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Glu Vai Gin Leu Val Glu Set G!y Gly Gly 130 135 140
Leu He Gin Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly 145 150 155 160
Phe Thr Va】Ser Arg Asn Tyr Met Ser 丁rp Va! Arg Gin Ala Pro Gly 165 170 175
Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Val lie Tyr Ser Gly Asp Arg Thr Tyt 180 285 190
Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser 195 200 205
Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr 210 215 220
Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Glu Gly Gly Phe Asp Tyr Trp Gly 225 230 235 240
Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 245 <210> 155 <21ϊ> 220 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 155
Asp lie G\n Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15 -118 - 158366·序列表.doc 201211252
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Scr Gin Ser lie Ser Asn Asn 20 2S 30
Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45
Tyr Tyr Thr Scr Arg Phc His Ser Gly Val Pro Ser Arg Fhe Ser Gly 50 55 60
Sct Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr lie Set Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80
Qlu Asp lie Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Glu His Thr Leu Pro Tyr 85 90 95
Thr Phe Gly Gin Gly Thf Lys Leu Glu lie Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110
Pro Glu lie Val Met Ήιγ Gin Scr Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro 115 120 125
Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gin Ser Val Ser Ser 130 135 140
Asn Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Arg Leu Leu 145 150 155 160 lie His Giy Ala Ser lie Arg Ala Thr Gly Leu Pro Ala Arg Phe Ser 165 170 175
Gly Ser Gly Ser Gty Thr Glu Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin 180 185 190
Ser Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gin Gin Tyr Asn Tyr Trp Trp 195 200 205
Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg 210 215 220 <210> 156 <211> 249 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <40〇> ]56
Gin Val Gin Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gin 15 10 15
Ser Leu Ser lie ThT Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Asp Tyt 20 25 30
Gly Val Asn Trp Val Arg Gin Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 -119· 158366-序列表.doc 201211252
Gly Met lie Trp Gly Asp Gly Ser Thr Asp Tyr Asp Ser Thr Leu Lys 50 55 60
Ser Arg Leu Ser lie Ser Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gin lie Phe Leu 65 70 75 80
Lys Met Asn Ser Leu Gin Thr Asp Asp Thr Ala Arg Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95
Ar£ Glu Trp His His Gly Pro Vai Ala Tyr 丁rp Gly Gin Gly Thr Leu 100 105 110
Val Thr Val Ser Ala Ala Ser Thr Lys Gly Pro Set Val Phe Pro Leu 115 120 125
Ala Pro Giu Val Gin Leu Gin Gin Ser Gly Pro Glu Leu Val rrhr Pro 130 135 140
Gly Ala Ser Val Lys lie Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr 145 150 155 160
Asp His Tyr Met Ser Trp Val Lys Gin Ser His Gly Lys Sex Leu Glu 165 170 175
Trp lie Giy Asp He Asn Pro Tyr Ser Gly Glu Thr Thr Ty：r Asn Gin 180 185 190
Lys Phe Lys Gly Thr Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser lie 195 200 205
Ala Tyr Met Glu He Arg Gly Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr 210 215 220
Tyr Cys Ala Arg Asp Asp Tyr Asp Ala Ser Pro Phe Ala Tyr Trp Gly 225 230 235 240
Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala 245 <210> 157 <211> 221 <212> PRT <213>人工序列 <220〉 <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 157
Asp lie Val Met rfhr Gin Ser His Lys Phe Met Ser Thr Thr Val Gly 1 5 10 15
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Va] Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly G]n Ser Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45 -120- 158366-序列表.doc 201211252
Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 50 55 60
Scr G!y Ser Val Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie His Asn Leu Gin Ala 65 Ί0 75 80 GIu Asp Leu Ala Leu Tyi Tyr Cys Gin Gin His Tyr Ser Thr Pro Phe 85 90 95
Thr Phe Gly Ser Gly Tlir Lys Leu Glu lie Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110
Pro Asp Val Gin Met lie Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Scr Leu 115 120 125
Gly Asp lie Val Thr Met Thr Cys Gin Ala Ser Gin Gly Thr Ser He 130 135 140
Asn Leu Asn Trp Phe Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu 145 150 155 16〇 Ο lie Tyr Gly Ser Ser Asn Leu Glu Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser 165 170 175
Gly Ser Arg Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Glu ISO 185 190
Asp Glu Asp Leu Ala Thr Tyr Phe Cys Leu Gin His Ser Tyr Leu Pro 195 200 205
Tyr Thr Fhe Gly Giy Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys Arg 210 215 220 <210> 158 <211> 249 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 158
Glu Val Gin Leu Gin Gin Ser Gly Pro Glu Leu Val Thr Pro Gly Ala 15 10 15
Ser Val Lys He Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp His 20 25 30
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Gly Asp lie Asn Pro Tyr Ser Gly Glu Thr Thr Tyr Asn Gin Lys Phe 50 55 60
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Met Glu He Arg Gly Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys • 121 - 158366-序列表.doc 201211252 85 90 95
Ala Arg Asp Asp Tyr Asp Ala Ser Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gin Gly 100 105 110
Thr Leu Val Thr Vai Ser Ala Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 115 120 125
Pro Leu Ala Pro Gin Val Gin Leu Lys GIu Ser Gly Pro Gly Lea Val 130 135 140
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Leu llir Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gin Pro Pro Gly Lys Gly 165 170 175
Leu GIu Trp Leu Gly Met lie Trp Gly Asp Gly Ser thr Asp Tyr Asp 】80 】85 190
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Tyr Tyr Cys Ala Arg GIu Trp His His Gly Pro Val Ala Tyr Trp Gly 225 230 235 240
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Asp Val Gin Met lie Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly 1 5 10 15
Asp lie Val Thr Met ΊΤίγ Cys Gin Aia vSer Gin Gly Tht Ser lie Asn 20 25 30
Leu Asn 丁：rp Phe G】n Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45
Tyr Gly Ser Ser Asn Leu GIu Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Arg Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr He Ser Ser Leu GIu Asp 65 70 75 80 GIu Asp Leu Ala Thr Tyr Phe Cys Leu Gin His Ser Tyr Leu Pro Tyr S5 90 95 -122- 158366-序列表.doc 201211252
Thr Phe Gly Gly Gly Tbr Lys Leu Glu lie Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110
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Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys Arg 210 215 220 <210> 160 <211> 252 <212> PRT <2丨3>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 160
Glu Val Lys Leu Glu Glu Ser Q\y Gly Giy Leu Val Gin Pro Gly Giy 1 5 10 15
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Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Tin Val Ser Ala 245 250 <210> 161 <211> 221 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <_> 161
Asp lie Leu Leu Thr Gin Ser Pro Ala lie Leu Ser Val Ser Pro Gly 15 10 15
Glu Arg Val Ser Phe Ser Cys Arg Ala Ser Gin Phe Val Gly Ser Ser 20 25 30 lie His Trp Tyr Gin Gin Arg Thr Asn Gly Ser Pro Arg Leu Leu He 35 40 45
Lys Tyr Ala Ser Glu Ser Met Ser Gly He Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60
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Pro Asp Val Gin Met lie Gin Ser Fro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu 115 120 125 -124- 158366-序列表.doc 201211252
Gly Asp lie Vai Thr Met Thr Cys Gin Aia Ser Gin Gly Thr Ser lie 130 135 140 A$n Leu Asn Trp Phe Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu 145 150 155 160
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<211> 252 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 162
Glu Vai Gin Leu Gin Gin Ser Gly Pro Glu Leu Val Thr Pro Gly Ala 15 10 15
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Leu Glu Trp Val Ala Glu lie Arg Ser Lys Ser lie Asn Ser Ala Thr 180 185 190
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Ser Lys Scr Ala Val Tyr Leu Gin Met Thr Asp Leu Arg Thr Glu Asp 210 215 220
Thr Gly Va[ Tyr Tyr Cys Ser Arg Asn Tyr Tyr Gly Ser Thr Tyr Asp 225 230 235 240
Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser 245 250 <210> 163 <211> 221 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 163
Asp Val Gin Met He Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser A】a Ser Leu Gly 15 10 15
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Pro Asp Ile Leu Leu Tlir Gin Ser Pro Ala Ile Leu Ser Val Scr Pro 115 120 125
Gly Glu Arg Val Ser Phe Set Cys Arg Ala Ser Gin Phe Val Gly Ser 130 135 140
Ser lie His Trp Tyr Gin Gin Arg Thr Asn Gly Ser Pro Arg Leu Leu 145 150 155 160
Ile Lys Tyr Ala Ser Glu Ser Met Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe vSer 165 170 175 • 126- 158366-序列表.doc 201211252
Gly Ser Gly Ser Q\y Thr Asp Phe Thr Leu Ser lie Asn Thr Val Glu 180 185 190
Set Glu Asp lie Ala Asp Tyr Tyr Cys Gin Glu Ser His Ser Trp Pro 195 200 205
Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Asn Leu Glu Val Lys Arg 210 215 220 <210> 164 <211> 258 <212> PRT <2B>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 164
Gin Val Gin Leu Val Glu Scr Gly Gly Gly Val Val Gin Pro Gly Arg 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30
Ala Met His Trp Val Axg Gin Ala Pro Gly Asn Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ma Phe Met Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Ala Lys Asp Scr Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr He Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 SO
Leii Gin Met Asn Ser Lea Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Asp Arg Gly lie Ala Ala Gly Gly Asn Tyr Tyr Tyr Tyr Gly 100 105 110
Met Asp Val Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Scr Ala Ser 135 120 125
Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Glu Val Gin Leu Gin 130 135 140
Gin Ser Gly Pro Glu Leu Val Thr Pro Gly Ala Ser Val Lys He Ser 145 150 155 160
Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp His Tyr Met Ser Trp Val 165 170 175
Lys Gin Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp lie Gly Asp lie Asn Pro 180 IS5 190
Tyr Ser Gly Glu Thr Thr Tyr Asn Gin Lys Phe Lys Gly Thr Ala Thr 195 200 205 -127- 158366-序列表.doc 201211252
Leu Thr Vai Asp Lys Scr Ser Ser He Ala Tyr Met Glu lie Aig Gly 210 215 220
Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Asp Tyr 225 230 235 240
Asp Ala Ser Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val 245 250 255
Ser Ala <210> 165 <2]1> 222 <212> PRT <213>人工序列 <220> <‘223>人工序列之描述：合成多肽 <40D> 165
Glu lie Val Leu Ήη Gin Ser Ρτο Ala Tin Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gin Ser Vai Tyr Ser Tyr 20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Giy Gin Ala Pro Arg Leu Leu He 35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly He Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Tlir Asp Phe Thr Leu Thr He Ser Ser Leu Glu Pro 65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gin Gin Arg Ser Asn Trp Pro Pro 85 90 95
Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp lie Lys Arg Thx Val Ala 100 105 110
Ala Pro Asp Val Gin Met lie Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser 115 120 125
Leu Gly Asp lie Val Thr Met Thr Cys Gin Ala Ser Gin Gly 丁hr Ser 130 135 140
He Asn Leu Asn Trp Phe Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu 245 150 155 160
Leu lie Tyr Gly Ser Ser Asn Leu Glu Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe 165 170 175
Ser Gly Ser Arg Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr He Ser Ser Leu 180 185 190 -128- 158366-序列表.doc 201211252
Glu Asp GIu Asp Leu AU 丁hr Tyr Phe Cys Leu Gin His Ser Tyr Leu 195 200 205
Pro Tyr Thr Fhc Gly 'Gly Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys Arg 210 215 220 <210> 166 <211> 258 <212> PRT <2]3>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 166 Glu Val Gin Lea Gin Gin Ser Gly Pro Glu Leu Val Thr Pro Gly Ala 1 5 10 15
Scr Val Lys lie Ser Cys Lys Ala Scr Gly Tyr Thr Phe Thr Asp His 20 25 30
O
Tyr Met Ser Trp Val Lys Gin Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp lie 35 40 45
Gly Asp lie Asn Pro Tyr Ser Gly Glu Thr Thr Tyr Asn Gin Lys Phe 50 55 60
Lys Gly Thr Ala Thr I^eu Thr Val Asp Lys Ser Ser Set lie Ala Tyr 65 70 75 80
Met Glu He Arg Gly Leu Thr Scr Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys S5 90 95
Ala Arg Asp Asp Tyr Asp Ala Ser Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gin Gly 100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ala Ala Scr Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 115 120 125
Fro Leu Ala Pro Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val 130 135 140
O
Gin Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr 145 150 155 160
Phe Ser Ser Tyr Ala Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Asn Gly 165 170 175
Leu Glu Trp Val Ala Phe Met Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Aia 180 185 190
Lys Asp Ser Vai Lys Gly Arg Plic Thr He Ser Arg Asp Asn tSer Lys 195 200 205
Asn Thr Leu Tyr Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala 210 215 220 Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Arg Gly lie Ala Ala Gly Gly Asn Tyr 158366·序列表.doc -129- 201211252 225 230 235 240
Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val 245 250 255
Ser Ser <2I0> 167 <211> 222 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 167
Asp Val Gin Met He Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly 1 5 10 15
Asp He Val Thr Met Thr Cys Gin Ala Ser Gin Gly Tbr Ser lie Asn 20 25 30
Leu Asn Trp Phe Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45
Tyr Gly Ser Ser Asn Leu Glu Asp Gly Val Pro Ser Arg Pbe Ser Gly 50 55 60
Ser Arg Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Glu Asp 65 70 75 80
Glu Asp Leu Ala Tlir Tyr Fhe Cys Leu Gin His Ser Tyr Leu Pro Tyr 85 90 95
Tlir Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110
Pro Glu lie Val Leu Thr Gin Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro 115 120 125
Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gin Ser Val Tyr Ser 330 135 J40
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Arg Leu Leu 145 150 155 160 lie Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly lie Pro Ala Arg Phe Ser 165 170 175
Cly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu ITir He Ser Ser Leu Glu 180 185 190
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gin Gin Arg Ser Asn Trp Pro 195 200 205
Pro Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp He Lys Atg 210 235 220 -130- 158366-序列表.doc 201211252 <210> 168 <211> 257 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 168
Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gin Pro Gly Arg 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30
Asp Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ala Val lie 丁rp Ser Asp Gly Ser Ik Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80
Leu Gin M&t Asn Scr Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Glu Val Glu Ser Ala Met Gly Gly Phe Tyr Tyr Asn Gly Met 100 105 110
Asp Val Trp Gly Gtn Gly Thr Tbr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr 115 120 125
Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Glu Val Gin Leu Gin Gin 130 135 140
Ser Gly Pro Giu Leu Val Thr Pro Gly Ala Ser Val Lys lie Ser Cys 145 150 155 160
Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp His Tyr Met Ser Trp Val Lys 165 170 175
Gin Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp He Gly Asp He Asn Pro Tyr 180 185 190
SeT Gly Glu Thr Thr Tyr Asn Gin Lys Phe Lys Gly Thr Ala Thr Leu 195 200 205
Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser lie Ala Tyr Met Glu He Arg Gly Leu 210 215 220
Thr Ser Glu Asp Ser Ala Va] Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Asp Tyr Asp 225 230 235 240
Ala Ser Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser 245 250 255 -131 - 158366-序列表.doc 201211252
Ala <210> 169 <211> 221 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 169
Asp He Gin Met Tiir Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15
Asp Arg Val Thr He Thr Cys Arg Ala Ser Gin Gly lie Arg lie Asp 20 25 30
Leu Gly Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu lie 35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Fhe Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe He Fhe Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Ser Tyr Tyr Cys Leu Gin His Lys Ser Tyr Pro Leu 85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg Thr Val Aia Ala 100 105 110
Pro Asp Val Gin Met lie Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu 115 120 125
Gly Asp lie Val Thr Met Thr Cys Gin Ala Ser Gin Gly Thr Ser He 130 135 140
Asn Leu Asn Trp Phe Gin Gin Lys Pro Gly Lys Aia Pro Lys Leu Leu 145 150 155 160 lie Tyr Gly Ser Ser Asn Leu Glu Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser 165 170 175
Gly Ser Arg Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr ile Ser Ser Leu Glu ISO 185 190
Asp Giu Asp Leu Ala Thr Tyr Phe Cys Leu Gin His Ser Tyr Leu Pro 195 200 205
Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu GJu Ile Lys Arg 210 215 220 <210> 170 <231> 257 <212> FRT <213>人工序列 -132- 158366-序列表.doc 201211252 <220> <223>人工序列之据述：合成多肽 <400> 170
Glu Val Gin Leu Gin Gin Ser Gly Pro Glu Leu Val Thr Pro Gly Ala 15 10 15
Ser Val Lys lie Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phc Thr Asp His 20 25 30
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Gly Asp lie Asn Pro Tyr Ser Gly Glu Thr Thr Tyr Asn Gin Lys Phe 50 55 60
Lys Gly Thr Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser lie Ala Tyr 65 70 75 80 Ο
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Ala Arg Asp Asp Tyr Asp Ala Ser Pro Phc Ala Tyr Trp Gly Gin Gly 100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ala Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 115 120 125
Pro Leu Ala Pro Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val 130 135 140
Gin Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Sex Gly Phc Tlir 145 150 155 160
Phe Ser Ser Tyr Asp Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly 165 170 175
Leu Glu Trp Val Ala Val He Trp Ser Asp Gly Ser lie Lys Tyr Tyr ISO 185 190
Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys 195 200 205
Asn Thr Leu Tyr Leu Gin Met Asn Ser Leu Atg Ala Glu Asp Thr Ala 210 215 220
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Tyr Asn Gly Met Asp Val Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser 245 250 255
Ser <210> 171 -133- 158366-序列表 _doc 201211252 <211> 221 <212> PRT <2】3>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400〉 171
Asp Val Gin Met lie Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly 15 10 15
Asp I3e Val Thr Met Thr Cys Gin Ala Ser Gin. Gly Thr Ser lie Asn 20 25 30
Leu Asn Trp Phe Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45
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Glu Asp Leu Ala Thr 丁yr Phe Cys Leu Gh His Ser Tyr Leu Pro Tyr 85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110
Pro Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val 115 120 125
Gly Asp Arg Val Tlir lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Gly He Arg lie 130 135 140
Asp Uu Gly Trp Ty2* Gin Lys Pro Giy Lys Ala Pro Lys Arg Leu 145 150 155 160 lie Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser 165 170 175
Gly Ser Gly Ser Gly Thr GIu Phe lie Phe Thr lie Ser Ser Leu Gin ISO 185 190
Pro Glu As? Phe Ala Ser Tyr Tyr Cys Leu Gin His Lys Ser Tyr Pro
Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg 210 215 220 <210> 172 <211> 247 <212> PRT <213>人工序列 <220> <M3>人工序列之描述：合成多肽 <400> 172 -134- 158366-序列表.doc 201211252 GIu Val Gin Leu Val GIu Ser Gly Gly Gly Leu He Gin Pro Gly Gly 15 10 15
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Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala GIu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95
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Ser Val Lys ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp His 145 150 155 160
Tyr Met Ser Trp Val Lys Gin Ser His Gly Lys Ser Leu GIu Trp He 165 170 175
Gly Asp lie Asn Pro Tyr Scr Gly GIu Thr Thr tyr Asn Gin Lys Phe 180 185 190
Lys Gly ΊΊιγ Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser lie Ala Tyr 195 200 205
Met GIu He Arg Gly Leu Thr Scr GIu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 210 215 220
Ala Arg Asp Asp Tyr Asp Ala Ser Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gin Gly 225 230 235 240
Thr Leu Vai Thr Val Ser Ala 245 <210> 173 <211> 220 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 173 GIu lie Val Met Thr Gin Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly -135- 158366-序列表.doc 201211252 1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gin Ser Val Ser Ser Asn 20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Arg Leu Leu lie 35 40 45
His Gly Ala Ser He Arg Ala Thr Gly Leu Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Fhe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Set
65 70 75 SO
GluAspPhe Ala Val Tyr Tyr Cys Gin Gin Tyr Asn Tyr Trp Trp
Phe Gly Gin Gty Thr Lys Val Glu lie Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro 100 105 110
Asp VaJ Gin Met lie Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Lea Gly 115 120 125
Asp He Val Thr Met Thr Cys Gin Ala Ser Gin Gly Thr Ser lie Asn 130 135 140
Leu Asn Trp Phe Gin Gin Lys Pio Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 145 150 155 160
Tyr Gly Ser Ser Asn Leu Glu Asp Gly Val Fro Ser Arg Phe Ser Gly 165 170 175
Ser Arg Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Leu rfhi: lie Ser vSer Leu Glu Asp 180 185 190
Glu Asp Leu Ala Thr Tyr Phe Cys Leu Gin His Ser Tyr Leu Pro Tyr 195 200 205
Thr Phe Gly Giy Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys Arg 210 215 220 <210> 174 <211> 247 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 174
Glu Val Gin Leu Gin Gin Ser Gly Pro Glu Leu Val Thr Pro Gly Ala 1 5 10 15
Ser Val Lys He Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp His 20 25 30
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Gly Asp He Asn Pro Tyr Ser Gly Glu Thr Tlir Tyr Asn Gin Lys Phe 50 55 60
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Met Glu He Arg Gly Leu Ihr Ser Glu Asp Scr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Asp Asp Tyr Asp Ala Ser Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gin Gly 100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ala Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 115 120 125
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Thr Leu Tyr Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val 210 215 220
Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Glu Gly Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly 225 230 235 240 T.r Leu Val Thr Val Ser Ser <210> 175 <211> 220 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 175
Asp Val Gin Met He Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly 15 10 15
Asp lie Val Thr Met Thr Cys Gin Ala Ser Gin Gly Thr Ser lie Asn 20 25 30
Leu Asn Tip Phe Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45 -137- 158366-序列表.doc 201211252
Tyr Gly Ser Ser Asn Leu Giu Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Are Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Glu Asp
65 70 75 SO
Glu Asp Leu Ala Thr Tyr Phe Cys Leu Gin His Ser Tyr Leu Pro Tyr 85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Hvr Lys Leu Glu lie Lys Arg Thr Val Ala Ala m i〇5 no
Pro Glu lie Val Met Thr Gin Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro 115 120 125
Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gin Ser Val Ser Ser 130 135 140
Asn Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Arg Leu Leu 145 150 155 160
He His Gly Ala Set lie Arg Ala Thr Gly Leu Pro Ala Arg Phe Ser 165 170 175
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe T3ir Leu Ί\χ lie Ser Ser Leu Gin 180 185 190
Ser Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gin Gin Tyr Asn Tyr Trp Trp 195 200 205
Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg 210 215 220 <210> 176 <211> 246 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 176
Gin Val Gin Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gin 15 10 15
Ser Leu Ser lie Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Asp Tyr 20 25 30
Gly Val Asn Trp Val Arg Gin Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 AO 45
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Lys Met Asn Ser Leu Gin Thr Asp Asp Thr Ala Arg Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95
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Val rfhr Val Ser Ala Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu 115 120 125
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Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Scr Gly Tyr Thr Phe Thr 145 150 155 160
Lys Tyr Trp Leu Gly Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu 165 170 175
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Ala Tyr Met Glu Leu Arg Scr Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr 2]0 215 220
Tyr Cys Ala Arg Ser Asp Gly Ser Scr Thr Tyr Trp Gly Gin Gly Thr 225 230 235 240
Leu Val Thr Val Ser Ser 245 <210> 177 <2U> 226 <2I2> F*T <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 177
Asp lie Val Met Thr Gin Ser His Lys Phe Met Ser Thr Thr Val Gly 15 10 15
Asp Arg Val Ser ile Thr Cys Lys Ala Ser Gin Ala Val Ser Ser Ala 20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Scr Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45
Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Val Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile His Asn Leu Gin Ala 65 70 75 80
Glu Asp Ixu Ala Leu Tyr Tyr Cys Gin Gin His Tyr Ser Thr Pro Phe -139- 158366-序列表.doc 201211252 85 90 95
Thr Phc Gly Ser Gly l*hr Lys Leu Glu lie Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110
Fro Asp Val Leu Met Thr Gin Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro 115 120 125
Gly Glu Pro Ala Ser lie Ser Cys Ήιγ Ser Ser Gin Asn lie Val His 130 135 140
Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gin Lys Pro Gly Gin 145 150 155 160
Ser Pro Gin Leu Leu He Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val 165 170 175
Pro Asp Arg Pbe Ser Gly Scr Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys 180 185 190 lie Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gin 195 200 205
Va】Ser His Va! Pro Tyr Thr Fte Gly Gly Gly Thr Lys Val G】u lie 210 215 220
Lys Arg 225 <210> 178 <211> 246 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 178
Glu Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 15 10 15
Ser Val Lys Yal Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Lys Tyr 20 25 30
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Pro Gin Val Gtn Leu Lys Giu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser 130 135 140
Gin Ser Leu Ser lie Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Asp 145 150 155· 160
Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gin Pro Pro Gly Lys Gly Leu GIu Trp 165 170 175
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Leu Lys Met Asn Scr Leu Gin Thr Asp Asp Thr Ala Arg Tyr Tyr Cys 210 215 220
Ala Arg Giu Trp His His G!y Pro Val Ala Tyr Trp Gly Gin Gly Thr 225 230 235 240
Leu Val Thr Val Ser Ala 245 <210> 179 <211> 226 <212> PRT <2]3>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 179
Asp Val Leu Met Thr Gin Ήιγ Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 15 10 15
Giu Pro Ala Ser lie Ser Cys Thr Scr Ser Gin Asn lie Val His Ser 20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Giu Trp Tyt Leu Gin Lys Pro Gly Gin Ser 35 40 45
Pro Gin Leu Leu Me Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie 65 70 75 80
Sex Arg Val Giu Ala Giu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gin Val 85 90 95
Ser His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Giu lie Lys 100 105 110 -141 - 158366-序列表.doc 201211252
Arg Thr Val Ala Ala Pro Asp lie Val Met Tlir Gin Ser His Lys Phe 115 120 125
Mei vSer Thr Thr Val Gly Asp Arg Val Ser He Thr Cys Lys Ala Ser 130 135 140
Gin Ala Vai Ser Ser Ala Val Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin 145 150 155 160
Ser Pro Lys Leu Leu lie Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val 165 170 175
Pro Asp Arg Phc Thr Gly Ser Gly Ser Val Thr Asp Phe Thr Leu Thr 180 185 190 IJe His Asn Leu Gin Ala Glu Asp Leu Ala Leu Tyr Tyr Cys Gin Gin 195 200 205
His Tyr Ser Thr Pro Phe Thr Phe Gly Set Gly Thr Lys Leu Glu lie 210 215 220
Lys Arg 225 <210> ίδΟ <2U> 249 <212> PRT <2I3>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 180
Glu Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 1 5 10 15
Ser Met Lys Leu Ser Cys Va! Ala Ser Gly Phe lie Phe Ser Asn His 20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Aig Gin Ser Pro Glu Lys Giy Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ala Glu lie Arg Ser Lys Ser He Asn Ser Ala Thr His Tyr Ala GLu 50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr He Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Ala 65 70 75 80
Val Tyr Leu Gin Met Thr Asp Leu Arg Thr Glu Asp Thr Gly Va1 Tyr 85 90 95
Tyr Cys Ser Arg Asn Tyr Tyr Gly Ser Thr Tyr Asp Tyr Trp Gly Gin 100 105 110
Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125 -142- 158366-序列表.doc 201211252
Phe Pro Leu Ala Pro Glu Val G]n Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val 130 135 140
Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr 145 150 155 160
Thr Phe Thr Lys Tyr Trp Leu Gly Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin 165 170 175
Gly Leu Glu Trp Met Gly Asp i!e Tyr Pro Gly Tyr Asp Tyr Thr His 180 185 190
Tyr Asn Glu Lys Phe Lys Asp Arg Val Thr Leu Thr Thr Asp Thr Ser 195 200 205
Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr 210 215 220
Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Asp Gly Ser Ser Thr Tyr Trp Gly 225 230 235 240
Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 245 <210> 181 <211> 226 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 1S1
Asp lie Leu Leu Thr Gin Ser Pro Ala He Leu Ser Val Ser Pro Gly 1 5 10 15
Glu Arg Val Ser Phe Ser Cys Arg Ala Ser Gin Phe Val Gly Ser Ser 20 25 30 lie His Trp Tyr Gin Gin Arg Thr Asn Gly Ser Pro Arg Leu Leu He 35 40 45.
Lys Tyr Ala Scr Glu Ser Met Ser Gly lie Pro Scr Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Fhe Thr Leu Ser lie Asn Thr Val Glu Ser 65 70 75 80
Glu Asp He Ala Asp Tyr Tyr Cys Gin Glu Ser His Ser Trp Pro Phe 85 90 95
Thr Phe Gly Ser Gly Thr Asn Leu Glu Val Lys Arg ΊΤιι* Val Ala Ala 100 105 110
Pro Asp Val Leu Met Itir Gin Thr Pro Leu Set Leu Pro Val Thr Pro 115 120 125
Gly Glu Pro Ala Ser He Ser Cys Thr Ser Ser Gin Asn lie Vai His -143- 158366-序列表.doc 201211252 130 135 140
Ser Asn Gly Asn Hir Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gin Lys Pro Gly Gin 145 150 155 160
Ser Pro Gin Leu Leu lie Tyr Lys Val Scr Asn Arg Phe Ser Gly Val 165 170 175
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys 180 185 190 lie Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gin 195 200 205
Val Ser His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie 210 215 220
Lys Arg 225 <210> 182 <211> 249 <212> PKT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 182 G3u Val Gin Leu Va] Gin Ser Gly A3a Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 15 10 15
Ser Vai Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Lys Tyr 20 25 30
Trp Leu Giy Trp Va) Arg G】n Ala Pro Gly Gin G).y Leu Glu Trp Met 35 40 45
Gly Asp lie 丁yr Pro G]y Tyr Asp Tyr Thr His Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60
Lys Asp Arg Vai Thr Leu Thr Thr Asp Tbr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Ser Asp Gly Ser Ser Thr Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu Vai too 105 no
Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Giy Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125
Fro Glu Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly GJy Gly Leu Val Gin Pro Gly 130 135 140
Giy Ser Met Lys Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe lie Phe Ser Asn 145 150 155 160 -144- 158366-序列表.doc 201211252
His Trp Met ksx\ Trp Val Arg Gin Ser Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp 165 170 175
Val Ala Glu lie Arg Ser Lys Ser lie Asn Ser Ala Thr His Tyr Ala 180 185 190
Glu Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser 195 200 205
Ala Val Tyr Leu Gin Met Thr Asp Leu Arg Thr Glu Asp Thr Gly Val 210 215 220
Tyr Tyr Cys Ser Arg Asn Tyr Tyr Gly Ser Thr Tyr Asp Tyr Trp Gly 225 230 235 240
Gin Gly Thr Thr Leu ΊΙιγ Val Ser Ser 245
<2i0> 183 <211> 226 <212> PST <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 183
Asp Val Leu Met Thr Gin Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 15 10 15
Glu Pro Ala Ser lie Ser Cys Thr Ser Ser Gin Asn lie Val His Ser 20 25 30
Asti Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gin Lys Pro Gly Gin Ser 35 40 45
Pro Gin Leu Leu lie Tyr Lys Val Ser Asn Axg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60
Asp Arg Phe Scr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys He 65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gin Val 85 90 95
Ser His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Asp He Leu Leu Thr Gin Ser Pro Ala He 115 120 125
Leu Ser Val Ser Pro Gly Glu Arg Val Ser Phe Ser Cys Arg Ala Ser 130 135 140
Gin Phe Val Gly Ser Ser lie His Trp Tyr Gin Gin ATg Thr Asn Gly 145 150 155 160 •145· 158366-序列表.doc 201211252
Set Pro Arg Leu Leu He Lys Tyr Ala Ser Glu Ser Met Ser Gly lie 165 170 175
Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Tlir Leu Ser ISO 185 190 lie Asn Thr Val Glu Ser Glu Asp lie Ala Asp Tyr Tyr Cys Gin Glu 195 200 205
Ser His Ser Trp Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Asn Leu Glu Val 210 215 220
Lys Arg 225 <210> 184 <211> 255 <212> PRT <2丨3>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 184
Gin Val Gin Leu Val Olu Ser Gly Giy Gly Val Val Gin Pro Gly Arg 1 5 ]0 ]5
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Asn Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ala Phe Met Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Ala Lys Asp Ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr He vSer Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Vai Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Asp Arg Giy lie Ala Ala Gly Gly Asn Tyr Tyr Tyr Tyr Gly 100 105 110 l^let Asp Val Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser 115 120 125
Tlir Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Lea Ala Pro Glu Val Gin Leu Val 130 135 140
Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser 145 150 155 160
Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Tin* Phe Thr Lys Tyr Trp Leu Gly Trp Val 165 170 175 -146· 158366-序列表.doc 201211252
Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu GJu Trp Met Gly Asp lie Tyr Pro 180 185 190
Giy Tyr Asp Tyr Thr His Tyr Asn Glu Lys Phe Lys Asp Arg Val Thr 195 200 205
Leu Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Arg Ser 210 215 220
Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Scr Asp Gly 225 230 235 240
Ser Ser Thr Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Scr Scr 245 250 255 <210> 185 <21]> 227 <212> PRT <213>人工序列 <220>
<223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 185 GJu lie Vai Leu Thr Gin Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 15 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gin Ser Val Tyr Ser Tyr 20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Fro Gly Gin Ala Pro Arg Leu Leu lie 35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly He Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Glu Pro 65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gin G】n Arg Ser Asn Trp Pro Pro 85 90 95
Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp lie Lys Arg Thr Val Ala loo 105 no
Ala Pro Asp Va! Leu Met Thr Glti Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr 115 120 125
Pro Gly Glu Pro Ala Ser lie Ser Cys Thr Ser Ser Gin Asn He Val 130 135 140
His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gin Lys Pro Gly 145 150 155 160
Gin Ser Pro Gin Leu Leu lie Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly 165 . 170 175
Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu -147- 158366-序列表.doc 201211252 180 185 190
Lys ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe 195 200 205
Gin Val Ser His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu 210 215 220 lie Lys Arg 225 <210> 186 <211> 255 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 186
Glu Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 15 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr llir Phe Thr Lys Tyr 20 25 30
Trp Leu Gly Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 如 45
Gly Asp He Tyr Pro Gly Tyr Asp Tyr Thr His Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60
Lys Asp Arg Val Thr Leu Tbr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala 丁yr 65 70 75 80
Met G!u Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Ser Asp Gly Ser Ser Thr Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val 100 105 110
Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125
Pro Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Vai Val Gin Pro Gly 130 135 140
Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Tht Phe Ser Ser 145 150 155 160
Tyr Ala Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Asn Gly Leu Glu Trp 165 170 175
Val Ala Phe Met Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Ala Lys Asp Ser 180 185 190
Val Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asti Thr Leu 195 200 205 -148- 158366-序列表.doc 201211252
Tyr Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Giu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 210 215 220
Cys Ala Arg Asp Arg Gly lie Ala Ala Gly Gly Asn Tyr Tyr Tyr Tyr 225 230 235 240
Gly Met Asp Val Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 245 250 255 <210> 187 <211> 227 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 187 Asp Val Leu Met Thr Gin Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly L 5 10 15 ❹
Glu Pro Ala Ser He Ser Cys Ήιγ Ser Ser Gin Asn lie Val His Ser 20 25 30
Asft Gly Asn Thr Tyr Leu Gtu Trp Tyr Leu Gin Lys Pro Gly Gin Ser 35 40 45
Pro Gin Leu Leu lie Tyr Lys Val Scr Asn Arg Phe Ser GLy Val Pro 50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie 65 70 75 SO
Ser Atg Val Glu /Ua Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gin Yal 85 90 95
Ser His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 110
Arg Thr Va! Ala Ala Pro Glu He Val Leu Thr Gin Ser Pro Ala Thr 115 120 125 ❹
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Xrg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser 130 135 140
Gin Ser Val Tyr Scr Tyr Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin 145 150 155 160
Ala Pro Arg Leu Leu He Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly lie 165 170 175 Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 180 185 190 lie Ser Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gin Gin 195 200 205 158366-序列表.doc -149- 201211252
Arg Ser Asn Trp Pro Pro Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp 210 215 220 lie Lys Arg 225 <220> 188 <221> 254 <212> ?KT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 188
Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gin Pro G1y Arg 1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30
Asp Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Lea Glu Trp Val 35 40 45
Ala Val lie Trp Set Asp Gly Ser lie Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe llir He Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 B0
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Va! Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Glu Val Glu Ser Ala Met Gly Gly Phe Tyr Tyr Asn Gly Met 100 105 110
Asp Val Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val ITir Val Ser Ser Ala Ser Thr 115 120 125
Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Glu Val Gin Leu Val Gin 130 135 140
Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys 145 150 155 160
Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Fhe Thr Lys Tyr Trp Leu Gly Trp Val Arg 165 170 175
Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met Gly Asp lie Tyr Pro Gly 180 185 190
Tyr Asp Tyr Thr His Tyr Asn Glu Lys Phe Lys Asp Arg Val Thr Leu 195 200 205
Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Arg Ser Leu 210 215 220 -150- 158366-序列表.doc 201211252
Arg Scr Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Scr Asp Gly Ser 225 230 235 240
Ser Thr Tyr Trp Gly Gin Gly Tlir Leu Val Thr Val Ser Ser 245 250 <210> 189 <211> 226 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 189
Asp lie GJn Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Gly lie Arg He Asp 20 25 30
Leu Gly Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu lie 35 40 45
Tyr Ala Aia Ser Thr Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe lie Phe Thr lie Ser Scr Leu Gin Pro 65 70 75 80 G!u Asp Phe Ala Ser Tyr Tyr Cys Leu Gin His Lys Ser Tyi* Pro Leu S5 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg 11ϊγ Val Ala Ala 100 105 110
Pro Asp Val Leu Met Thr Gin Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro 1)5 120 125
Gly Glu Pro Ala Scr lie Ser Cys Thr Ser Ser Gin Asn lie Val His 130 135 140
Scr Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gin Lys Pro Gly Gin 145 150 155 160
Ser Pro Gin Leu Leu lie Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val 165 170 175
Pro Asp Arg Phe Ser Gl)? Ser Gly Ser Gly Ίΐτ Asp Phe Th;r Leu Lys 180 185 190 lie Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cvs Phe Gin 195 200 205
Val Ser His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Vai Glu lie 210 215 220
Lys Arg -151 - 158366-序列表.doc 201211252 225 <2]〇> 190 <211> 254 <212> PRT <2B>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 190
Glu Val Gin Leu Va3 Gin SeT Gly Ala Glu Vai Lys Lys Pro G3y Ala 1 5 10 15 vSer Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Lys Tyr 20 25 30
Trp Leu Gly Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45
Gly Asp lie Tyr Pro Gly Tyr Asp Tyr TYhx His Tyr Asn Glu Lys Fhe 50 55 60
Lys Asp Arg Val Thr Leu Thr Ίΐτ Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Sex Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys S5 90 95
Ala Arg Ser Asp Gly Ser Ser Tin Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val 100 105 110
Thr Val Ser Ser Aia Ser Thr Lys Gly Pro Ser Va3 Phe Pro Leu Ala 115 120 125
Pro Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gin Pro Gly 130 135 140
Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser 145 150 155 160
Tyr Asp Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 165 170 175
Val A1a Val lie Trp Ser Asp Gly Ser lie Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser 180 185 190
Val Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu 195 200 205
Tyr Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 210 215 220
Cys Ala Arg Glu Val Glu Ser Ala Met Gly Gly Phe Tyr Tyr Asn Giy 225 230 235 240
Met Asp Vai Trp Gly Gin Gly Thr Thr Vai Thr Val Ser Ser 245 250 -152- 158366-序列表,doc 201211252 <210> 191 <211> 226 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 191
Asp Val Leu Met Thr Gin Tlir Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 15 10 15
Glu Pro Ala Ser lie Ser Cys Thr Ser Set Gin Asn He Val His Ser 20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gin Lys Pro Gly Gin Ser 35 40 45
Pro Gin Leu Leu lie Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Ο
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie 65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gin Val 85 90 95
Ser His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Asp lie Gin Met ll^r Gin Ser Pro Ser Ser 115 120 125
Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser 130 135 140
Gin Gly lie Arg He Asp Leu Gly Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys 145 150 155 360
Ala Pro Lys Arg Lea He Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gin Ser Gly Yal 165 170 175
Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe lie Phe Thr ISO 185 190 lie Ser Ser Leu Gin Pro Glu Asp Phe Ala Ser Tyr Tyr Cys Leu Gin 195 200 205 liis Lys Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Vai Giu lie 210 215 220
Lys Arg 225
<210> 192 <21i> 244 <212> PRT -153· 158366-序列表.doc 201211252 <213>人工序列 <220> <2幻> 人工序列之描述：合成多肽 <400> 192 GUx Val Gin Leu Val Glu Set Gly Gly Giy Leu He Gin Pro G)y Giy 15 30 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Val Ser Arg Asn 20 25 30
Tyr Met Ser Trp Va! Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ser Val lie Tyr Ser Gly Asp Arg Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 50 55 60 G】y Arg Phe 丁hr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu 丁yr Leu 65 70 75 80
Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala S5 90 95
Arg Giy Glu Gly Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Tlu 100 105 110
Val Ser Ser Ala Ser Tlir Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro 115 120 125 〇]u Va3 Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Giy Ala 130 135 140
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Lys Tyr 145 150 155 160
Trp Leu Gly Trp Val Krg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 165 170 175
Gly Asp lie Tyr Pro Gly Tyr Asp Tyr Thr His Tyr Asn Glu Lys Phe 180 185 190
Lys Asp Arg Val Thr Leu Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 195 200 205
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 210 215 220
Ala Arg Ser Asp Gly Ser Scr Thr Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val 225 230 235 240
Thr Val Ser Ser <210> 193 <211> 225 <212> PRT <213>人工序列 154- 158366-序列表.doc 201211252 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 193 GIu lie Val Met Thr Gin Ser Pro Ala Thr Leu Scr Val Ser Pro Gly 15 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gin Ser Val Scr Scr Asn 20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Arg Leu Leu lie 35 40 45
His Gly Ala Ser lie Arg Ala Thr Gly Leu Pro Ala Arg Phe Scr Gly 50 55 60
Set Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Ser 65 70 75 80 Ο
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gin Gin Tyr Asn Tyr Trp Trp Thr 85 90 95
Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro 100 1Q5 110
Asp Val Leu Met Thr Gin Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 115 120 125
Glu Pro Ala Ser lie Ser Cys Thr Ser Ser Gin Asn He Val His Ser 130 135 140
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gin Lys Pro Gly.Gin Ser 145 150 155 160
Pro Gin Leu Leu He Tyr Lys Val Ser Asn Arg ?ht Ser Gly Val Pro 165 170 175
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie 180 185 190
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gin Val 195 200 205
Ser His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 210 215 220
Arg 225 <2!0> 194 <211> 244 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 -155- 158366-序列表.doc 201211252 <400> 194
Glu Va] Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gty Ala ! 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Lys Tyr 20 25 30
Trp Leu Gly Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45
Gly Asp He Tyr Pro Gly Tyr Asp Tyr Thr His Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60
Lys Asp Arg Val Thr Leu Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Ser Asp Gly Ser Ser Thr Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val 100 105 110
Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125
Pro Glu Val Gin Leu Vai Glu Ser Gly Gly Gly Leu He Gin Pro Gly 130 135 140
Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Tlir Val Ser Arg 145 150 155 160
Asn Tyr Met Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 165 170 175
Val Ser Val He Tyr Ser Gly Asp Arg Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 180 185 190
Lys Gly Arg Phe Thr He Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 395 200 205
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr A!a Val Tyi* Tyr Cys 210 215 220
Ala Arg Gly Glu Gly Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu Vai 225 230 235 240
Thr Val Ser Ser <210> 195 <211> 225 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 195 -156- 158366-序列表.doc 201211252
Asp Val Leu Met Thr Gin Thr Pro Leu Ser I^eu Pro Vai Thr Pro Gly 1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser lie Ser Cys Thr Ser Ser Gin Asn 11c Val His Ser 20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gin Lys Pro Gly Gin Ser 35 40 45
Pro Gin Leu Leu lie Tyr Lys Vai Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Tlir Asp Phe Thr Leu Lys lie 65 70 75 80
Scr Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gin Val 85 90 95
Ser His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 110 Ο
Arg Thr Val Ala Ala Pto Glu He Val Met Thr Gin Scr Pro Ala Thr 315 120 125
Leu Ser Val Ser Pro Gly GLu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Aia Ser 130 135 140
Gin Ser Val Ser Ser Asn Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin 145 150 155 160
Ala Pro Arg Leu Leu He His Gly Ala Ser lie Arg Ala Thr Gly Leu 165 170 175
Pro Ala Arg Phe Ser Gly Scr Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr 180 185 190. lie Ser Ser Leu Gin Ser Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gin Gin 195 200 205 Tyr Asn Tyr Trp Trp Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu He Lys 210 215 220
Arg 225 <210> 196 <211> 252 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 196 Gin Val Gin Leu Lys Giu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gin 15 10 15
Ser Leu Ser lie Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Asp Tyr 158366-序列表.doc -157- 201211252 20 25 30
Gly Val ksn Trp Val Arg Gin Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45
Gly Met lie Trp G!y Asp Gly Ser ITu Asp Tyr Asp Ser Thr Leu Lys 50 55 60
Ser Arg Leu Ser lie Ser Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gin lie Phe Leu 65 70 75 80
Lys Met Asn Ser Leu Gin Thr Asp Asp Thr Ala Arg Tyr Tyr Cys Aia 85 90 95
Arg Glu Trp His His Gly Pro Val Ala Tyr Trp Gly Gin (}ly Thr Leu 100 105 Π0
Val Thr Va里 Ser Aia Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu 115 120 125
Ala Pro Gin Val Gin Leu Gin Gin Scr Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro 230 135 140
Gly Thr Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Gly Phe lie 145 150 155 160
Asn Tyr Leu lie Glu Trp lie Lys Gin Arg Pro Gly G3n Gly Leu Glu 165 170 175
Trp He Gly Leu He Asn Pro Gly Ser Asp Tyr Tlir Asn Tyr Asn Glu 180 185 190
Asn Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Scr Ser Ser Thr 195 200 205
Ala Tyr Met His Leu Ser Ser Leu rilir Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr 210 215 220
Phe Cys Ala Arg Arg Phe Gly Tyr Tyr Gly Ser Gly Asn Tyr Phe Asp 225 230 235 240
Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser 245 250 <210> 197 <211> 226 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223;>人工序列之描述：合成多肽 <400> 197
Asp lie Val Met Thr Gin Ser His Lys Phe Met Ser Thi Thr Val Gly 15 10 15
Asp Arg Val Ser He Thr Cys Lys Ala Ser Gin Aia Vai Ser Ser Ala 20 25 30 -158- 158366-序列表.doc 201211252
Val Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ser Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45
Tyr Trp Ala Scr Thr Arg His Thx Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 50 55 60
Ser Gly Scr Val Thr Asp Phc Thr Leu Thr lie His Asa Leu Gin Ala 65 70 75 80 GIu Asp Leu Ala Leu Tyr Tyr Cys Gin Gin His Tyr Ser Thr Pro Phe 85 90 95
Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys Arg Thr Vai Ala Ala 100 105 110
Pro Asp Val Val Met Thr Gin Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu 】15 120 125
Gly Asp Gin Ala Ser lie Ser Cys Thr Ser Gly Gin Ser Leu Val His 130 135 140 ❹
He Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gin Lys Pro Gly Gin 145 150 155 160
Ser Pro Lys Leu Leu IJe Tyr Lys Val Ser Asn Leu Phe Ser Gly Val 165 170 175
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser GJy Thr Asp Phc Thr Leu Lys 180 185 190 lie Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phc Cys Ser Gin 195 200 205
Ser Thr His Phe Pro Phe Thr Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Glu He 210 215 m
Lys Arg 225 <210> 198 <211> 252 <212> PRT <213>人工序列 <220> <523>人工序列之描述：合成多肽 <400> 198
Gin Val Gin Leu Gin Gin Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Thr 3 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Gly Phe lie Asn Tyr 20 25 30
Leu He Glu Trp lie Lys Gin Arg Pro Gly G1n Gly Leu Glu Trp lie 35 40 45 -159- 158366-序列表.doc 201211252
Gly Leu lie Asn Pro Gly Set Asp Tyr Thr Asn Tyr Asn Gla Asn Phe 50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Scr Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80
Met His Leu Ser Ser Leu Tbr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95
Ala Arg Arg Phe Gly Tyr Tyr Gly Ser Gly Asn Tyr Phe Asp Tyr Trp m i〇5 no
Gly Gin Gly Tlir Thr Leu Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro 115 120 125
Ser Val Fhe Pro Leu Ala Pro Gin Val Gin Leu Lys Glu Ser Gly Pro 130 135 240
Gly Leu Val Ala Pro Ser Gin Ser Leu Ser lie Thr Cys Thr VaL Ser 145 150 155 160
Gly Phe Ser Leu Thr Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gin Pro Pro 165 170 175
Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu Gly Met lie Trp Gly Asp Gly Ser Thr 180 185 190
Asp Tyr Asp Ser Thr Leu Lys Ser Arg Leu Ser lie Ser Lys Asp Asn 195 200 205
Ser Lys Ser Gin lie Phe Leu Lys Met Asn Ser Leu Gin Thr Asp Asp 210 215 220
Thr Ala Arg Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Trp His His Gly Pro Val Ala 225 230 235 240
Tyr Trp Gly Gin Gly I.r Leu Va! Thr Val Ser A,a <210> 199 <21]> 226 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 199
Asp Val Val Met Thr Gin Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly 1 5 10 15
Asp Gin Ala Ser lie Ser Cys Thr Ser Gly Gin Ser Leu Val His lie 20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gin Lys Pro Gly Gin Set 35 40 45 -160- 158366-序列表.doc 201211252
Pro Lys Leu Leu lie Tyr Lys Vai Ser Asn Leu Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Scr Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie 65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Vai Tyr Phe Cys Ser Gin Ser 85 90 95
Thr His Phe Pro Phe Thr Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys 100 1.05 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Asp lie Va! Met Thr Gin Ser His Lys Phe 115 120 125
Met Ser Thr Thr Val Gly Asp Arg Val Ser lie Thr Cys Lys Ala Ser 130 135 140
Gin Ala Val Scr Ser Ala Val Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin 145 150 155 160
Ser Pro Lys Leu Leu lie Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val 165 170 175
Pro Asp Arg Phe Tlir Gly Ser Gly Ser Val Thr Asp Phe Thr Leu Thr 180 185 190 lie His Asn Leu Gin Ala Glu Asp Leu Ala Leu Tyr Tyr Cys Gin Gin 195 200 2D5
His Tyr Scr Thr Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu lie 210 215 220
Lys Arg 225 <210> 200 <211> 255 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 200
Glu Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15
Ser Met Lys Leu Ser Cys Val Ala Ser Glv Phe lie Phe Ser Asn His 20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gin Ser Pro Glu Lys Giy Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ala Glu lie Arg Ser Lys Scr He Asn Scr Ala "Fhr His Tyr Ala Glu 50 55 60 .Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Ala -161 - 158366-序列表.doc 201211252 65 70 75 80
Val Tyr Leu Gin Met Thr Asp Leu Arg Thr Glu Asp Thr Gly Val Tyr 85 90 95
Tyr Cys Ser Arg Asn Tyr Tyr Gly Ser Thr Tyr Asp Tyr Trp Gly Gin 100 105 110
Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Gin Val Gin Leu Gin Gin Ser Gly Ala Glu Leu 130 135 140
Val Arg Pro Gly Thr Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr 145 150 155 160
Gly Phe lie Asn Tyr Leu lie Glu Trp lie Lys Gin Arg Pro Gly Gin 165 170 175
Gly Leu Glu Trp He Gly Leu lie Asa Pro Gly Scr Asp Tyr Thr Asn 180 185 190
Tyr Asn Glu Asn Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ma Asp Lys Ser 195 200 205
Scr Ser Oir Ala Tyr Met His Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser 210 215 220
Ala Va! Tyr Phe Cys Ala Arg Arg Phe Gly Tyr Tyr Gly Ser Gly Asn 225 230 235 240
Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser 245 250 255 <210> 201 <211> 226 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 201
Asp lie Leu Leu Thr Gin Ser Pro Ala lie Leu Ser Val Ser Pro Gly 1 5 10 15
Glu Arg Val Ser Phe Ser Cys Arg Ala Ser Gin Phe Vai Gly Ser Ser 20 25 30 lie His Trp Tyr Gin Gin Arg Thr Asn Gly Ser Pro Arg Leu Leu lie 35 40 45
Lys Tyr Ala Ser Glu Ser Met Scr Gly lie Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Tlir Asp Phe Thr Leu Ser lie Asn Thr Val Glu Ser 65 70 75 80 -162- 158366-序列表.doc 201211252
Glu Asp lie Ala Asp Tyr Tyr Cys Gin Glu Scr His Sor Trp Pro Phc 85 90 95
Thr Phe Gly Ser Gly Thr Asn Leu Glu VaJ Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110
Pro Asp Val Val Met Thr Gin Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu 115 120 125
Gly Asp Gin Ala Ser lie Ser Cys Thr Ser Gly Gin Ser Leu Val His 130 135 140 lie Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gin Lys Pro Gly Gin 145 150 155 160
Ser Pro Lys Leu Leu lie Tyr Lys Val Ser Asn Leu Phe Ser Gly Val 165 170 175
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys 180 185 190
lie Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gin 195 200 205
Ser Thr His Phe Pro Phe ITir Phe Gly Thr Gly. Thr Lys Leu Glu lie 210 215 220
Lys Arg 225 <210> 202 <211> 255 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 202
Gin Val Gin Leu Gin Gin Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Oly Thr 15 10 15
Scr Vai Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Gly Phe lie Asn Tyr 20 25 30
Leu lie Glu Trp lie Lys Gin Arg Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp lie 35 40 45
Gly Ixu lie Asn Pro Gly Ser Asp Tyr Thr Asn Tyr Asn Glu Asn Phe 50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Scr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80
Met His Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Scr Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 -163 - 158366-序列表.doc 201211252
Ala Arg Arg Phe Gly Tyr Tyr Gly Ser Gly Asn Tyr Phe Asp Tyr Trp 100 105 110
Gly G]n Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro 115 120 125
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Glu Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly 130 135 140
Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly Ser Met Lys Leu Ser Cys Val Ala Ser 145 150 155 160
Giy Phe He Phe Ser Asn His Trp Met Asn Trp Val Arg Gin Ser Pro 165 170 175
Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Glu lie Arg Ser Lys Ser lie Asn 180 1S5 190
Ser Ala Thr His Tyr Ala Glu Ser Val Lys Gly Arg Phe Tlir He Ser 195 200 205
Arg Asp Asp Ser Lys Ser Ala Val Tyr Leu Gin Met Thr Asp Leu Arg 210 215 220
Thr Glu Asp Thr Giy Val Tyr Tyr Cys Ser Arg Asn Tyr Tyr Gly Ser 225 230 235 240
Thr Tyr Asp Tyr Trp Gly G3n Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser 245 250 255 <210> 203 <211> 226 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 203
Asp Val Val Met Thr Gin Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly 15 10 15
Asp Gin Ala Ser lie Ser Cys Thr Ser Giy Gin Scr Leu Val His lie 20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gin Lys Pro Gly Gin Ser 35 40 45
Pro Lys Leu Leu He Tyr Lys Val Ser Asn Leu Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie 65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Giy Val Tyr Phe Cys Ser Gin Ser 85 90 95 •164· 158366-序列表.doc 201211252
Thr His Phe Pro Phe Thr Plie Gly Thr Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys 100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Asp He Leu Leu Thr Gin Ser Pro Ala lie 115 120 125
Leu Ser Val Ser Pro Gly Glu Arg Val Ser Phe Ser Cys Arg Ala Ser 130 135 140
Gin Phe Val Gly Ser Scr lie His Trp Tyr Gin Gin Arg Thr Asn Gly 145 150 155 160
Scr Pro Arg Leu Leu lie Lys Tyr Ala Ser Glu Sex Met Ser Gly lie 165 170 175
Pro Scr Arg Phe Ser Gly Ser Oly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Ser 180 185 190 lie Asn Thr Val Glu Ser Glu Asp lie Ala Asp Tyr Tyr Cys Gin Glu 195 200 205
Ser His Ser Trp Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Asn Leu Glu Val 210 215 220
Lys Arg 225 <210> 204 <21i> 261 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 204
Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gin Pro Gly Arg 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Scr Tyr 20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Asn Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ma Phe Met Ser Tyi Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Ala Lys Asp Ser Va! 50 55 60
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Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Asp Arg Gly lie Ala Ala Gly Gly Asn Tyr Tyr Tyr Tyr Gly 100 105 110
Met Asp Val Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser -165- 158366-序列表.doc 201211252 115 120 125
Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Gin Val Gin Leu Gin 130 135 140
Gin Scr Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Thr Ser Val Lys Val Ser 145 150 155 160
Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Gly Phe lie Asn Tyr Leu lie Glu Trp lie 165 170 175
Lys Gin Arg Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp lie Gly Leu He Asn Pro 180 185 190
Gly Ser Asp Tyr Thr Asn Tyr Asn Glu Asn Phe Lys Gly Lys Ala Thr 195 200 205
Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met His Leu Ser Ser 210 215 220
Leu Thr Ser GU Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys Ala Arg Arg Phe Gly 225 230 235 240
Tyr Tyr Gly Ser Gly Asn Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Thr 245 250 255
Leu Thr Val Ser Ser 260 <210> 205 <211> 227 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 205
Glu lie Val Leu Thr Gin Ser Pro Ala Tlir Leu Ser Leu Ser Pro Gly 15 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gin Ser Val Tyr Ser Tyr 20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Arg Leu Leu lie 35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly He Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60
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Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gin Gin Arg Ser Asn Trp Pro Pro 85 90 95
Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp lie Lys Arg ΊΙιγ Val Ala 100 105 110 -166 - 158366-序列表.doc 201211252
Ala Pro Asp Val Val Met Thr Gin Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Set 115 120 125
Leu Gly Asp Qln Ala Ser He Ser Cys Tlir Scr Gly Gin Ser Leu Val 130 135 140
His lie Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gin Lys Pro Gly 145 150 155 160 GJn Ser Pro Lys Leu Leu He Tyr Lys Val Ser Asn Leu Phe Ser Gly 165 170 175
Val Pro Asp Arg Fhe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu ISO 185 190
Lys lie Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser 195 200 205
Gin Ser Thr His Phe Pro Phe Thr Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Glu 210 215 220 ❹
He Lys Arg 225 <210> 206 <211> 263 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 206
Glu Val Gin Leu Gin G3n Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Thr 15 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Gly Phe He Asn Tyr 20 25 30
Leu lie Glu Trp lie Lys Gin Arg Pro Giy Gin G!y Leu Glu Trp lie 35 40 45
Gly Leu lie Asn Pro Gly Ser Asp Tyr Thr Asn Tyr Asn Glu Asn Phe 50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Set Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80
Met His Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95
Ala Arg Arg Phe Gly Tyr Tyr Gly Ser Gly Asn Tyr Phe Asp Tyr Trp 100 105 110
Gly Gin Gly Thr Thr Leu Tlir Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro 115 120 125 -167· 158366-序列表.doc 201211252
Ser Val Phe Pro Lea Ala Pro Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly 130 135 140
Gly Val Val Gin Fro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Sex Cys Ala Ala Ser 145 150 355 160
Gly Phe Thr Phe Ser Set Tyr Ala Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro 165 170 175
Gly Asn Giy Leu Giu Trp Va】Ala Phe Met Ser Tyr Asp Gly Ser Asn ISO 185 190
Lys Tyr Ala Lys Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp 195 200 205
Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu 210 215 220
Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Arg Gly lie Ala Ala Gly 225 230 235 240 G!y Asn Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Aiet Asp Val Trp Gly G}n Gly Thr Thr 245 250 255
Val Thr Val Ser Ser 260 <210> 207 <21I> 227 <2I2> PRT <213>人工序列 <220〉 <223>人工序列之描述：合成多肽 <400〉 207
Asp Val Val Met Thr Gin Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly 1 5 10 15
Asp Gin A5a Ser lie Ser Cys Thr Ser Gly Gin Ser Leu Val His He 20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gin Lys Pro Gly Gin Ser 35 40 45
Pro Lys Leu Leu lie Tyr Lys Val Ser Asn Leu Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie 65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Giu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gin Ser 85 90 95
Thr His Phe Pro Phe Thr Phe Gly Thr Gly rYhr Lys Leu Glu He Lys 100 105 110 -168- 158366-序列表.doc 201211252
Arg Thr Val Ala Ala Pro Olu He Val Leu Thr Gin Set Pro Ala Thr 115 120 125
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser 130 135 140
Gin Ser Val Tyr Ser Tyr Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin 145 150 155 160
Ala Pro Arg Leu Leu lie Tyr Asp Aia Ser Asn Arg Ala Thr Gly He 165 170 175
Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Giy Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 180 185 190 lie Ser Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gin Gin 195 200 205
Arg Ser Asn Trp Pro Pro Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp 210 2]5 220
lie Lys Arg 225 <210> 208 <21I> 256 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 208
Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Cly Leu Val Gin Pro Gly Arg 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr 20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Va! 35 40 45
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Giu Gly Arg Phe Thr He Scr Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thi Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
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Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ma Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Gin Vai G3n Leu Gin Gin Ser Gly Ala Glu •169- 158366-序列表.doc 201211252 130 135 140
Leu Val Arg Pro Gly Thr Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly 145 150 155 160
Tyr Gly F%e lie Asn Tyr Leu lie Glu Trp lie Lys Gin Arg Pro Gly 165 170 175
Gin Gly Leu Glu Trp He Gly Leu He Asn Pro Gly Ser Asp Tyr Thr 180 185 190
Asn Tyr Asn Giu Asn Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys 195 200 205
Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met His Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp 2]0 215 220
Ser Ala Val Tyr Phe Cys Ala Arg Arg Phe Gly Tyr Tyr Gly Ser Gly 225 230 235 240
Asn Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser 245 250 255 <210> 209 <211> 226 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 209
Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15
Asp Arg Val Thr 11c llir Cys Arg Ala Ser Gin Gly He Arg Asn Tyr 20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Scr Gly Ser Gly Thr Asp Ph.e Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80
Giu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Arg Tyr Asn Arg Ala Pro Tyr 85 90 95 rrhr Pbe Gly Gin Gly Thr Lys Val Giu lie Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 205 110
Pro Asp Val Val Met Thr Gin Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu 115 120 125 GLy Asp Gin Ala Ser lie Ser Cys Thr Ser Gly Gin Ser Leu Val His 130 135 140 -170- 158366-序列表.doc 201211252 lie Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gin Lys Pro Gly Gin 145 150 〗55 160
Ser Pro Lys Leu Leu lie Tyr Lys Val Ser Asn Leu Phe Scr Gly Val 165 170 175
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys 180 185 190 lie Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gin 195 200 205
Scr Thr His Phe Pro Phe Thr Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Glu lie 210 215 220
Lys Arg 225
<210> 210 <211> 256 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 210
Gin Val Gin Leu Gin Gin Ser Gly Ala Glu Leu Vai Arg Pro Gly Hu 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Scr Gly Tyr Gly Phe lie Asn Tyr 20 25 30
Levi lie Glu Trp He Lys Gin Arg Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp lie 35 40 45
Gly Leu lie Asn Pro Gly Ser Asp Tyr Thr Asn Tyr Asn Glu Asn Phe 50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80
Met His Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95
Ala Arg Arg Phe Gly Tyr Tyr Gly Ser Gly Asn Tyr Phe Asp Tyr Trp 100 105 110
Gly Gin Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro 115 120 125
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Glu Val Gin Leu Va! Glu Ser Gly Gly 130 135 140
Gly Leu Val Gin Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser 145 150 155 160 -171- 158366-序列表.doc 201211252
Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr Ala Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro 165 170 175
Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Ala IJe Thr Trp Asn Ser G3y His 180 185 190 lie Asp Tyr Ala Asp Ser Val Glu Giy Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp 195 200 205
Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gin Met Asn Ser Leu Atg Ala Glu 210 215 220
Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys Val Ser Tyr Leu Ser Thr Ala 225 230 235 240
Ser Ser Leu Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu Vai Thr Val Ser Ser 245 250 255 <210> 211 <211> 226 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 211
Asp Val Val Met Ώιγ Gin Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Giy 15 10 15
Asp Gin Ala Ser lie Ser Cys Thr Ser Gly Gin Ser Leu Val His lie 20 25 30
Asn Gly Asn Thr 丁yr Leu His Trp Tyr Leu Gin Lys Pro Gly Gin Ser 35 40 45
Pro Lys Leu Leu lie Tyr Lys Val Ser Asn Leu Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Giy Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie 65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Pile Cys Ser Gin Ser 85 90 95
Thf His Phe Pro Phe Thr Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Glu He Lys 100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Asp lie Gin Met llir Gin Ser Pro Ser Ser 115 120 125
Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Va】Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser 130 135 140
Gin Gly lie Arg Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys ]45 150 155 160 -172- 】58366-序列表.doc 201211252
Ala Pro Lys Leu Leu He Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gin Ser Gly Val 165 170 175
Pro Ser Arg Phc Scr Gly Ser Gly Ser Gly Thx Asp Phe Thr Leu Thr 180 185 190 lie Ser Ser Leu Gin Pro Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Arg 195 200 205
Tyr Asn Arg Ala Pro Tyr Thr Phe Gly Gin Gly Tht Lys Val Glu lie 210 215 220
Lys Arg 225 <210> 212 <211> 260 <212> PRT <213>人工序列 <220>
<223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 212
Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gin Pro Gly Arg 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30
Asp Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ala Vai !]e Trp Ser Asp Gly Ser lie Lys 丁yr Tyr Ala Asp Ser Vai 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 SO
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Vai Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Glxi Val Glu Ser Ala Met Gly Gly Phe Tyr Tyr Asn Gly Met 100 105 110
Asp Val Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr 115 120 125
Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Gin Val Gin Leu Gin Gin 130 135 140
Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Thr Ser Val Lys Val Ser Cys 145 150 155 160
Lys Ala Ser Gly Tyr Gly Phe lie Asn Tyr Leu lie Glu Trp lie Lys 165 170 175
Gin Arg Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp lie Gly Leu lie Asn Pro Gly -173- 158366-序列表.doc 201211252 180 185 190
Ser Asp Tyr Thr Asn 丁yr Asn Glu Asn Phe Lys Gly Lys A】a Thr Leu 195 200 205
Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met His Leu Ser Ser Leu 210 215 220 llir Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys Ala Arg Ars Phe Gly Tyr 225 230 235 240
Tyr Gly Ser Gly Asn Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Thr Leu 245 250 255
Thr Val Ser Ser 260 <210> 213 <2il> 226 <2i2> PRT <2】3>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 213
Asp lie Gin Met 丁hr G】n Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Va3 Gly 1 5 10 15
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Gly lie Arg lie Asp 20 25 30
Leu Gly Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu lie 35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe lie Phe Thr He Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Ser Tyr Tyr Cys Leu Gin His Lys Scr Tyr Pro Leu 85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu He Lys Arg Thr Val Ala Ala ]〇〇 105 no
Pro Asp Val Val Met Hir Gin Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu 115 120 125
Gly Asp Gin Ala Ser lie Ser Cys Tht Ser Gly Gin Ser Leu Va] His 130 135 140
He Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gin Lys Pro Gly Gin 145 150 155 _
Ser Pro Lys Leu Leu Tyr Lys Va】 Ser Asn Leu Phe Ser Gly Vai 165 170 175 -174- 158366-序列表.doc 201211252
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thx Asp Phe Thr Leu Lys 180 185 190 lie Ser Arg Val Glu Ala GIu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gin 195 200 205
Ser Thr His Phe Pro Phe Thr Phe Cf3y Thr Gly Thr Lys Leu Glu lie 210 215 220
Lys Arg 225 <210> 214 <211> 260 <212> PRT <2i3>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 214 ❹
Gin Val Gin Leu Gin Gin Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Thr 1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Gly Phe lie Asn Tyt 20 25 30
Leu lie Glu Trp lie Lys Gin Arg Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp He 35 40 45
Gly Leu lie Asn Pro Gly Ser Asp Tyr Thr Asn Tyr Asn Glu Asti Phe 50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 hiet His Lea Ser Scr Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95
Ala Arg Arg Phe Gly Tyr Tyr Gly Ser Gly Asn Tyr Phe Asp Tyr Trp 100 105 110
Gly Gin Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Π5 120 125
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly 130 135 140
Gly Val Val Gin Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser 145 150 155 160
Gly Phe Thr Phe Ser Scr Tyr Asp Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro 165 170 175
Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Val He Trp Ser Asp Gly Ser lie ISO 185 190 •175· 158366·序列表.doc 201211252
Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp 195 200 205
Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gin Met Asn Ser Leu Afg Ala Glu 210 215 220
Asp Thr Ala Vai Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Val Glu Ser Ala Met Gly 225 230 235 240
Gly Phe Tyr Tyr Asn Gly Met Asp Val Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val 245 250 255
Thr Val Ser Ser 260 <210> 215 <211> 226 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 215
Asp Val Val Met Tlir Gin Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Scr Leu Gly 15 10 15
Asp Gin Ala Ser He Ser Cys Thr Ser Gly Gin Ser Leu Vai His lie 20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gin Lys Pro Gly Gin Ser 35 40 45
Pro Lys Leu Leu lie Tyr Lys Val Ser Asn Leu Phe Ser Gly Val Fro 50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie 65 70 75 SO S^r Arg Val Glu Ala Giu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gin Ser 85 90 95
Tiir His Phe Pro Phe Thr Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys 100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Asp He Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser 115 120 125
Leu Ser Ala Scr Val Gly Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser 130 135 140
Gin Gly Ue Arg lie Asp Leu Gly Trp Tyr GJn Gin Lys Pro Gly Lys 145 150 155 160
Ala Pro Lys Arg Leu lie Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gin Ser Gly Val 165 170 175 -176- 158366·序列表.doc 201211252
Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr GIu Phe lie Phe Thr 180 185 190 lie Ser Ser Leu Gin Pro Glu Asp Phe Ala Ser Tyr Tyr Cys Leu Gin 195 200 205
His Lys Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie 210 215 220
Lys Arg 225 <210> 216 <211> 250 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 216
Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gfy Gly Gly Leu lie Gin Pro Gly Gly 15 10 15
Scr Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Val Ser Arg Asn 20 25 30
Tyr Met Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ser Val lie Tyr Ser Gly Asp Arg Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 50 55 60
Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Uu Tyr Leu 65 70 75 80
Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95
Arg Gly Glu Gly Giy Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu Vai Thr 100 105 110
Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro 115 120 125
Gin Val Gin Leu Gin Gin Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Thr 130 135 140
Ser Val Lys Val Scr Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Gly Phe lie Asn Tyr 145 150 155 160
Leu lie Glu Trp He Lys Gin Arg Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp IU 165 170 175
Gly Leu lie Asn Pro Gly Ser Asp Tyr Thr Asn Tyr Asn Glu Asn Phe 180 185 190
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr -177- 158366-序列表.doc 201211252 195 200 205
Met His Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala 210 215 220
Val Tyr Phe Cys
Ala Arg Axg Phe Gly Tyr Tyr Gly Ser Gly Asn Tyr 225 230 235
Phe Asp Tyr Trp 240
Gly Gin Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser 245 250 <210> 217 <211> 225 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <4<K)> 217 Glu 〖lc Val Met Thr Gin Ser Pro Ala Thr Leu Ser 1 5 10
Val Ser Pro Gly 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gin Ser 20 25
Val Ser Ser Asn 30
Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro 35 40
Arg Leu Leu lie 45
His Gly Ala Ser He Arg Ala Tl^r Gly Leu Pro Ala 50 55 60
Arg Phe Ser Gly
Ser G]y Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr He Ser 65 70 75
Ser Leu Gin Ser 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gin Gin Tyr Asn 85 90
Tyr Trp Trp Thr 95
Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg Thr 100 105
Val Ala Ala Pro 110
Asp Val Val Met Thr G3n Thr Pro Leu Ser Leu Pro 115 120
Val Ser Leu Gly 225
Asp Gin Ala Ser He Ser Cys Thr Ser Gly Gin Ser 130 135 140
Leu Val His lie
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gin Lys 145 150 155
Pro Gly Gin Ser 160
Pro Lys Leu Leu lie Tyr Lys Val Ser Asn Leu Phe 165 170
Ser Gly Val Pro 175
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe 180 185
Thr Leu Lys lie 190
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe 195 200
Cys Ser Gin Ser 205 158366-序列表,doc -178- 201211252
Thr His Phe Pro Phe Thr Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys 210 215 220 <2I0> 218 <211> 250 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 218
Gin Val Gin Leu GJn Gin Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Thr 1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Scr Gly Tyr Gly Phe He Asn Tyr 20 25 30 Ο
Leu lie Glu Trp lie Lys Gin Arg Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp He 35 40 45
Gly Leu lie Asn Pro Gly Ser Asp Tyr Thr Asn Tyr Asn Glu Asn Phe 50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thx Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Scr Thr Ala Tyr 65 70 75 80
Met His Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95
Ala Arg Arg Phe Gly Tyr Tyr Gly Scr Gly Asn Tyr Phe Asp Tyr Trp 200 105 110
Gly Gin Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro 115 120 ' 125
Set Val Phe Pro Leu Ala Pro Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly 130 135 140
Gly Leu He Gin Pro Gly Giy Scr Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser 145 J50 155 160
Gly Phe Thr Val Ser Arg Asn Tyr Met Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro 165 170 175
Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Val lie Tyr Ser Gly Asp Arg Thr ISO 185 190
Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn 19S 200 205
Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gin. Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp 210 215 220 -179· 158366-序列表.doc 201211252
Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Glu Gly Gly Phe Asp Tyr Trp 225 230 235 240
Gly Gin Gly Hir Leu Vai Tlu Val Ser Ser 245 250 <210> 219 <211> 225 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 219
Asp Val Val Met Thr Gin Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly 15 10 15
Asp Gin Ala Ser He Ser Cys Thr Ser Gly Gin Ser Leu Val His lie 20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu ilis Trp Tyr Leu Gin Lys Pro Gly Gin Ser 35 40 45
Pro Lys Leu Leu lie Tyr Lys VaS Ser Asn Leu Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Giy Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie 65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gin Ser 85 90 95
Thr His Phe Pro Phe Thr Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys 100 105 110
Arg frhr Val Ala Ala Pro GJu lie Val Met Thr Gin Ser Pro Ala Tlir 115 120 125
Leu Ser Va] Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser 130 135 140
Gin Ser Val Sct Ser Asn Leu Ala 丁rp Tyr (Jin Gin Lys Pro Gly Gin 145 150 155 160
Ala Pro Arg Leu Leu lie His Gly Ala Ser lie Arg Ala Thr Gly Leu 165 170 175
Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr 180 185 190
He Ser Ser Leu Gin Ser Glu Asp Phe Ala Vai Tyr Tyr Cys Gin Gin 195 200 205
Tyr Asn Tyr Trp Trp Thr Pbe Gly Gin Glv Thr Lys Val Glu He Lys 210 215 220 -180- 158366-序列表.doc 201211252
Arg 225 <210> 220 <211> 251 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 220
Gin Va] Gin Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Scr Gin 1 5 10 15
Ser Leu Ser lie Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Asp Tyr 20 25 30
Gly Val Asn Trp Val Arg Gin Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45
G]y Met lie Ίϊρ Gly Asp Gly Ser Thr Asp Tyr Asp Ser Thr Leu Lys 50 55 60
Ser Arg Leu Ser lie Ser Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gin lie Phe Leu 65 70 75 80
Lys Met Asn Ser Leu Gin Ήπ1 Asp Asp Thr Ala Arg Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95
Afg Glu Trp His His Gly Pro Va] Ala Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu 100 105 110
Val Thr Val Ser Ala Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu 115 120 125
Ala Pro Gin Va] Gin Leu Gin Glu Scr Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro 130 135 140
Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Fhe Ser Leu He 145 150 155 160
Gly Tyr Asp Leu Asn 丁rp lie Arg Gin Pro Pro Gly Lys Giy Leu Glu 165 370 175
Trp lie Gly lie lie 丁rp G】y Asp Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Ser Ala 180 185 190
Val Lys Ser Arg Val Thr lie Ser Lys Asp Thr vSer Lys Asn Gin Phe 195 200 205
Ser Lea Lys Leu SeT Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ma Val Tyr Tyr 210 215 220
Cys Ala Arg Glv Gly Tyr Trp Tyr Ala Thr Ser Tyr Tyc Phe Asp Tyr 225 230 235 240
Trp Giy Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser -181 - 158366·序列表.doc 201211252 245 250 <2!0> 221 <211> 228 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 221
Asp lie Val Met Thr Gin Ser His Lys Phe Met Ser Thr Thr Val Gly 15 10 15
Asp Arg Val Ser lie Thr Cys Lys Ala Ser Gin Ala Val Ser Ser Ala 20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ser Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45
Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Val Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie His Asn Leu Gin Ala 65 70 75 80
Glu Asp Leu Ala Leu Tyr Tyr Cys Gin Gin His Tyr Ser Thr Pro Phe 85 90 95
Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110
Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Π5 120 125
Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Vai Thr lie Thr Cys Arg 130 135 140
Ala Ser Gin Ser lie Ser Asn Asn Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro 145 150 155 160
Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie Tyr Tyr Thr Ser Arg Phe His Ser 165 170 175
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr 180 185 190
Phe Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro Glu Asp lie Ala Tht Tyr Tyr Cys 195 200 205
Gin Gin Glu His Thr Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Leu 210 215 220
Glu lie Lys Arg 225 <210> 222 <211> 251 -182- 158366-序列表.doc 201211252 <212> WT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之指述：合成多肽 <400> 222
Gin Val Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu lie Gly Tyr 20 25 30
Asp Leu Asn Trp lie Arg Gin Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp lie 35 40 45
Gly lie lie Trp Gly Asp Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Scr Ala Val Lys 50 55 60
Ser Arg Val Thr lie Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gin Phe Ser Leu 65 70 75 80 Ο
Lys Leu Ser Ser Val Thr A!a Ala Asp Tlir Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95
Aig G】y G】y Tyr Trp Tyr Ala Thr Ser Tyr Tyr Phe Asp Tyr Ίι*ρ Gly 100 105 110
Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro G\n Va3 Gin Leu Lys Glu Scr Gly Pro Gly 130 135 140
Leu Val Ala Pro Ser Gin Ser Leu Ser He Thr Cys Thr Val Ser Gly 145 150 155 160
Phe Ser Leu Thr Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gin Pro Pro Gly 165 170 175
Lys Gly Leu Glu 丁rp Leu Gly Met lie Trp Gly Asp Gly Ser Thr Asp 180 1S5 190
Tyr Asp Ser Thr Leu Lys Ser Arg Leu Ser lie Ser Lys Asp Asn Ser 195 200 205
Lys Ser Gin lie Phe Leu Lys Met Asn Ser Leu Gin Thr Asp Asp Thr 210 215 220
Ala Arg Tyr Cys Ala Arg Glu Trp His His Gly Pro Val Ala Tyr 225 230 235 240
Trp Gly Gin Gly 3r Leu Val Thr Val Ser Ala
<210> 223 <211> 228 <212> PRT •183· 158366-序列表.doc 201211252 <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 223
Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15
Asp Arg Val Thr He Thr Cys Arg Ala Ser Gin Ser lie Ser Asn Asn 20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45
Tyr Tyr Thr Ser Arg Phe His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80
Glu Asp lie Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Glu His Thr Leu Pro Tyr 85 90 95
Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110
Fro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Asp He Val Met Thr Gin Ser His 115 120 125
Lys Phe Mel Ser Thr Tlu Val Gly Asp Arg Val Ser lie Thr Cys Lys 130 135 140
Ala Ser Gin Ala Val Ser Ser Ala Val Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro 145 150 155 160
Gly Gin Ser Pro Lys Leu Leu lie Tyi Trp Ala Ser Thr Arg His Thr 165 170 175
Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Val Thr Asp Phe Thr 180 185 190
Leu Thr lie His Asn Leu Gin Ala Glu Asp Leu Ala Leu Tyr Tyr Cys 195 200 205 GIti Gin His 丁yr Ser Tbr Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu 210 215 220
Glu lie Lys Arg 225 <210> 224 <211> 254 <222> FRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 •184- 158366·序列表.doc 201211252 <400> 224
Glu Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15
Ser Met Lys Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Fhe lie Phe Ser Asn His 20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gin Ser Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ala Glu lie Arg Ser Lys Ser lie Asn Ser Ala Thr His Tyr Ala Glu 50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Ala 65 70 75 80
Val Tyr Leu Gin Met Thr Asp Leu Arg Thr Glu Asp Thr Gly Val Tyr 85 90 95 Ο
Tyr Cys Ser Arg Asn Tyr Tyr Gly Ser Thx Tyr Asp Tyr Trp Gly Gin 100 105 il〇
Gly Thr Thr Leu Thr Va] Ser Ser AU Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Gin Val Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Gly Leu 130 135 140
Val Lys Pro Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Scr Gly Phe 145 150 155 160
Ser Leu Ile Gly Tyr Asp Leu Asn Trp Ile Arg Gin Pro Pro Gly Lys 165 170 175
Oly Leu Glu Trp lie Gly lie lie Trp Gly Asp Gly Thr Thr Asp Tyr 180 185 190
Asn Ser Ala Val Lys Ser Arg Val Thr lie Ser Lys Asp Thr Ser Lys 195 2(K) 205
Asn Gin Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala 210 215 220
Vai Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Gly Tyr Trp Tyr Ala Thr Ser Tyr Tyr 225 230 235 240
Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 245 250 <210> 225 <211> 228 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 -185- 158366-序列表.doc 201211252 <400> 225
Asp lie Leu Leu Thr Gin Ser Pro Ala lie Leu Ser Val Ser Pro Gly 15 10 15
Glu Arg Val Ser Phe Ser Cys Arg Ala Ser Gin Phe Val Gly Scr Ser 20 25 30 lie His 丁rp Tyr Gin Gin Arg Thr Asn Gly Ser Pro Arg Leu Leu lie 35 40 45
Lys Tyr Ala Ser Glu Ser Met Ser Gly He Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Ser lie Asn Thr Val Glu Ser 65 70 75 80
Glu Asp lie Ala Asp Tyr Tyr Cys Gin Glu Ser His Ser Trp Pro Phe 85 90 95
Thr Phe Gly Ser Gly Thr Asn Leu Glu Val Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110
Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro 115 120 125
Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg 130 135 140
Ala Ser Gin Ser lie Ser Asn Asn Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro 145 150 155 160
Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu He Tyr Tyr Thr Ser Arg Phe His Ser 165 170 175
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Tlir 180 185 190
Phe Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro Glu Asp lie Ala Thr Tyr Tyr Cys 195 200 205
Gin Gin Glu His Thr Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Leu 210 215 220
Glu lie Lys Arg 225 <210> 226 <211> 254 <212〉 PKT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 226
Gin Val Gin Lea Gin Glu Ser Gly Pro Giy Leu Val Lys Pro Ser Glu 15 10 15 -186- 158366·序列表.doc 201211252
Thr Leu Ser Leu Thr Cys ITir Val Ser Gly Phe Ser Leu lie Gly Tyr 20 25 30
Asp Leu Asn Trp lie Arg Gin Pro Pro Giy Lys Gly Leu Glu Trp lie 35 40 45
Giy lie lie Trp Gly Asp Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Ser Ala Val Lys 50 55 60
Scr Arg Val Thr lie Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn G]n Phe Ser Leu 65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95
Arg Gly Gly Tyr Trp Tyr Ala Thr Scr Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly 100 105 110
Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125 Ο
Val Phe Pro Leu Ala Pro Glu Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly 130 135 140
Leu Val Gin Pro Gly Gly Ser Met Lys Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly 145 150 155 160
Phe lie Phe Ser Asn His Trp Met Asn Trp Val Arg Gin Ser Pro Glu 165 170 175
Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Glu lie Arg Ser Lys Ser lie Asn Ser 180 185 190
Ala Thr His Tyr Ala Glu Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Atg 195 200 205
Asp Asp Ser Lys Ser Ala Val Tyr Leu Gin Met Thr Asp Leu Arg Thr 210 215 220
Glu Asp Thr Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Arg Asn Tyr Tyr Gly Ser Thr 225 230 235 240
Tyr Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser 245 250 <210> 227 <211> 228 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <柳> 227
Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15
Asp Arg Val Thr He Thr Cys Arg Aia Set Gin Ser lie Ser Asn Asn -187· 158366-序列表.doc 201211252 20 25 30
Leu Asji 丁rp Tyr G]n Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ue 35 40 45
Tyr Tyr Thr Ser Arg Phe His Ser G1y Val Pro Ser Afg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Tlu Phe Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80
Glu Asp lie Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Glu His Thr Leu Pro Tyr 85 90 95
Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Leu Giu lie Lys Arg Ήιγ Val Ala Ala 100 105 110
Pro Ser Val Phe He Phe Pro Pro Asp lie Leu Leu Thr Gin Ser Pro 115 120 125
Ala lie Leu Ser Val Ser Pro Gly Glu Arg Val Ser Phe Ser Cys Arg 130 135 140
Ala Ser Gin Phe Val Gly Ser Ser lie His Trp Tyr Gin Gin Arg Thr 145 150 155 160
Asn Gly Ser Pro Arg Leu Leu He Lys Tyr Ala Ser Glu Ser Met Ser 165 170 175
Gly lie Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Tht Asp Phe Thr 180 185 190
Leu Ser lie Asn Thr Val Glu Ser Glu Asp lie Ala Asp Tyr Tyr Cys 195 200 205
Gin Glu Ser His Ser Trp Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Asn Leu 210 215 220
Glu Val Lys Arg 225 <210 228 <211> 260 <in> prt <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 228
Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gin Pro Gly Arg 1 5 10 15 ,
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Fhe Ser Ser Tyr 20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Asn Giy Leu Glu Trp Val 35 40 45 -188- 158366-序列表.doc 201211252
Ala Phe Met Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Ala Lys Asp Ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Asp Arg Gly He Ala Ala Gly Gly Asn Tyr Tyr Tyr Tyr Gly 100 105 110
Met Asp Val Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser 115 120 125
Thr Lys Gly Pro Ser Val Phc Pro Leu Ala Pro Gin Val Gin Leu G3n 130 135 140
Giu Ser GLy Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr 145 150 155 160 Ο
Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu lie Gly Tyr Asp Leu Asn Trp He 165 170 175 krg Gin Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp lie Gly lie He Trp Gly 180 185 190
Asp Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Ser Ala Val Lys Ser Arg Val Thr lie 195 200 205
Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gin Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val 210 215 220
Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Gly Tyr Trp 225 230 235 240
Tyr Ala Thr Ser Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val 245 250 255
Thr Val Ser Ser 260 <210> 229 <211> 229 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 229
Glu lie Vai Leu Thr Gin Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10. 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ar^ Ala Ser Gin Ser Val Tyr Ser Tyr 20 25 30 -189- 158366-序列表.doc 201211252
Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Arg Leu Leu lie 35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly lie Pro Ala Arg Phe Set Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Tlu Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Glu Pro 65 70 75 80
Glu Asp Pfie Ala Val 丁yr Tyr Cys Gin Gin Arg Ser Asn 丁rp Pro Pro 85 90 95
Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp lie Lys Arg Thr Val Ala 100 105 110
Ala Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Asp lie Gin Met Thr Gin Scr 115 120 125
Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Ήιγ lie Thr Cys 130 135 140
Arg Ala Ser Gin Ser lie Ser Asn Asn Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys 145 150 155 160
Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu He Tyr Tyr Tlir Ser Arg Phe His 165 170 175
Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly SeT Gly Ser Gly Thr Asp Phe 180 185 190 Ήιγ Phe Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro Glu Asp lie Ala Thr Tyr Tyr 195 200 205
Cys Gin Gin GIu His Thr Leu Pro Tyr Hu Phe Gly Gin Gly Thr Lys 210 215 220
Leu Glu lie Lys Ar£ 225 <210> 230 <211> 260 <212> PRT <Ή3>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 230
Gin Val Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 15 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Giy Phe Ser Leu lie Gly Tyr 20 25 30
Asp Leu Asn Trp lie Arg Gin Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp lie 35 40 45 •190· 158366-序列表.doc 201211252
Gly lie lie Trp Gly Asp Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Ser Ala Val Lys 50 55 60
Ser Arg Val Thr lie Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gin Phe Ser Leu 65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95
Arg Gly Gly Tyr Trp Tyr Ala Thr Ser Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly 100 105 )10
Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly 130 135 140
Val Val Gin Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly 145 150 155 160
Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly 165 170 175
Asn Gly Leu Gla Trp Val Ala Phe Met Ser Tyr Asp Gly Scr Asn Lys 180 185 190
Tyr Ala Lys Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn 195 2(X) 205
Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp 210 215 220
Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Arg GLy He Ala Ala Gly Gly 225 230 235 240
Asn Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val 245 250 255
Thr Val Ser Ser 260 <210> 231 <211> 229 <212> PRT <2】3>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <40〇> 231
Asp lie Gin Met Hir Gin Scr Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly ] 5 10 15
Asp Arg Val Thr ile Thr Cys Arg Ala Ser Gin Ser lie Ser Asn Asn 20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie -191- 158366-序列表.doc 201211252 35 40 45
Tyr Tyr Thr Ser Arg Phe His Ser Gly Va] Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80
Glu Asp He Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Gla His Thr Leu Pro Tyr 85 90 95
Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Leu Glu He Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110
Pro Ser Val Phe He Phe Pro Pro Glu He Val Leu Thr Gin Ser Pro 115 120 325
Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg 130 135 140
Ala Ser Gin Ser Val Tyr Ser Tyr Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro 145 250 155 160
Gly Gin Ala Pro Arg Leu Leu lie Tyr Asp Ala Ser A$n Arg Ala Thr 165 170 175
Gly lie Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr 180 185 190
Leu Thr He Ser Ser Leu Glu Pro Giu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys 195 200 205
Gin Gin Arg Ser Asn Trp Pro Pro Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys 210 215 220
Vai Asp lie Lys Arg 225 <210> 232 <211> 259 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 232
Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gin Pro Gly Arg 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30
Asp Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ala Val He Trp Ser Asp Gly Ser He Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 •192- 158366-序列表.doc 201211252
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 SO
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cvs 85 90 95
Ala Arg Glu Val Glu Ser Ala Met Gly Gly Phe Tyr Tyr Asn Gly Met 100 105 110
Asp Val Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Sei Ser Ala Ser Thr 115 120 125
Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Gin Val Gin Leu Gin Glu 130 135 140
Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu Thr Leu Scr Leu Thr Cys 145 150 155 160
Thr Va! Ser Gly Phe Ser Lea lie Gly Tyr Asp Leu Asn Trp He Arg 165 170 175 ❹
Gin Pro Pro Oly Lys Gly Leu Glu Trp lie Gly lie lie Trp Gly Asp 180 185 190
Gly Thr Thr Asp Tyr Mn Ser Ala Val Lys Ser Arg Val Thr lie Ser 195 200 205
Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gin Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr 210 215 220
Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Gly Tyr Trp Tyr 225 230 235 240
Ala Thr Ser Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Tl^r 245 250 255
Val Scr Ser <2!0> 233 <2U> 22B <212> PRT <213>人工序列 <22〇> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 233
Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15
Asp Arg Val Th.r lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Gly He Aig lie Asp 20 25 30
Leu Gly Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu lie 35 40 45 -193- 158366-序列表.doc 201211252
Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Tlir Glu Phe lie Phe Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 SO
Glu Asp Phe Ala Ser Tyr Tyr Cys Leu Gin His Lys vSer Tyr Pro Leu 85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu He Lys Arg Tlir Val Ala Ala 100 105 110
Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Asp He Gin Met Thr Gin Ser Pro 115 120 125
Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr He Tht Cys Arg 130 135 140
Ala Ser Gin Ser lie Ser Asn Asn Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro 145 150 155 160
Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu He Tyr Tyr Thr Ser Arg Phe His Ser 165 170 175
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr 180 185 190
Phe Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro Glu Asp He Ala Thr Tyr Tyr Cys 195 200 205
Gin Gin Glu His Thr Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Leu 210 215 220
Glu lie Lys Arg 225 <210> 234 <211> 259 <232> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 234
Gin Val Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 TTir Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu lie Gly Tyr 20 25 30
Asp Leu Asn Trp He Arg Gin Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp lie 35 40 45
Gly lie lie Trp Gly Asp Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Ser Ala Val Lys 50 55 60 -194- 158366·序列表.doc 201211252
Ser Atg Val Thr He Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gin Phe Ser Leu 65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95
Arg Gly Gly Tyr Trp Tyr Ala Thr Ser Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly 100 105 110
Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Scr Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly 130 135 140
VaJ Val Gin Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly 145 150 155 160
Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Asp Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly 165 170 175
Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Val lie Trp Ser Asp Gly Ser He Lys 380 185 190
Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn 195 200 205
Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp 210 215 220
Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Val Glu Ser Ala Met Gly Gly 225 230 235 240
Phe Tyr Tyr Asn Gly Met Asp Val Trp Cly Gin Gly Thr Thr Val Thr 245 250 255
Val Ser Ser <210> 235 <211> 228 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 235
Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Va3 Gly 1 5 10 15
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Ser lie Ser A.sn Asn 20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys AU Pto Lys Leu I^u lie 35 40 45
Tyr Tyr Thr Ser Arg Phe His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly -195- 158366-序列表.doc 201211252 50 55 60
Set Gly Ser Gly Hir Asp Phe Thr Phe Thr He Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80
Glu Asp lie Ala Thr 丁yr Tyr Cys Gin Gin Glu His Thr Leu Pro Tyr S5 90 95
Thr Phe Gly Gin Giy Thr Lys Leu Glu He Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110
Fro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro 115 120 125
Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg 130 135 140
Ala Ser Gin Gly He Arg lie Asp Leu Gly Trp Tyr Gin Gin Lys Pro 145 150 155 160
Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu lie Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gin Ser 165 170 175
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Set Gly Thr Qlu Phe lie 180 185 190
Phe Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro Glu Asp Phe Ala Ser Tyr Tyr Cys 195 200 205
Leu Gin His Lys Ser Tyr Pro Leu Thr Pile G3y Gly Gly Thr Lys Val 210 215 220
Glu lie Lys Arg 225 <210> 236 <21I> 249 <212> PKT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 236
Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu lie Gin Pro Gly Gly 1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Set Gly Phe Thr Val Ser Arg Asn 20 25 30
Tyr Met Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ser Val lie Tyr Ser Gly Asp Arg Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 50 55 60
Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 65 70 75 80 -196- 158366-序列表.doc 201211252
Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95
Arg Gly Giu Gly Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Giy Thr Lea Val Thr 100 105 110
Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro 115 120 125
Gin Val Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Scr Glu 130 135 140
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Tht Val Set Gly Phe Sex Leu lie Gly Tyr 145 150 155 160
Asp Leu Asn Trp lie Arg Gin Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp He 165 170 175
Gly lie lie Trp Gly Asp Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Ser Ala Val Lys ISO 185 190 Ο
Ser Arg Val Thr lie Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gin Phe Ser Leu 195 200 205
Lys Leu Ser Scr Val Thr Aia Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 210 215 220
Arg Gly Gly Tyr Trp Tyr Aia Thr Ser Tyr Tyr Phe Asp 丁yr Trp Gly 225 230 235 240
Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 245 <210> 237 <211> 227 <212> ?R1 <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 237
Glu lie Val Met Thr Gin Ser Fro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly 15 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser G】n Ser Val Ser Ser Asn 20 25 30
Leu Ala Trp Tyt Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Arg Leu Leu lie 35 40 45
His Gly Ala Ser lie Arg Ala Thr Gly Leu Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Ser 65 70 75 80 -197- 158366-序列表.doc 201211252
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gin Gin Tyr Asn Tyr Trp Trp Thr 85 90 95
Phe Gly Gin (Hy Thr Lys Va] Glu ile Lys Arg Thr Val Ala Aia Pto 100 105 110
Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Asp He Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser 115 120 125
Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Tlir lie rHir Cys Arg Ala 130 135 140
Ser Gin Ser lie Ser Asn Asn Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly 145 150 155 160
Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie Tyr Tyr Thr Ser Arg Phe His Set Gly 165 170 175
Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe 180 185 190
Thr He Ser Ser Leu Gin Pro Glu Asp He Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin 195 200 205
Gin Glu His Thr Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Leu Glu 210 215 220 lie Lys Arg 225 <210> 238 <211> 249 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述··合成多肽 <400> 238
Gin Val Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser GJu 1 5 10 15
Tlir Leu Sex Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu lie Gly Tyr 20 25 30
Asp Leu Asn Trp lie Arg Gin Pro Pro Gly Lys Gly Leu Giu Trp lie 35 40 45
Gly lie lie 丁rp Gly Asp Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Ser Ala Val Lys 50 55 60
Ser Arg Val llir lie Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gin Phe Ser Leu 65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 -198- 158366·序列表.doc 201211252
Arg Gly Gly Tyr Trp Tyr Ala Ήιγ Ser Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly 100 105 110
Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125
Val Pbe Pro Leu Ala Pro Glu Val Gin Leu Val Giu Ser Gly Gly Gly 130 135 140
Leu lie Gin Pro Gly Gly Scr Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser G1 145 150 155 16
Phe Thr Val Scr Arg Asn Tyr Met Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly 165 170 175
Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Val lie Tyr Ser Gly Asp Arg Thr Tyr 180 185 190
Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser 195 200 205 ❹
Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr 210 215 220
Ala Vai Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Glu Gly Gly Phe Asp Tyr Trp Gly 225 230 235 240
Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 245 <210> 239 <211> 227 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 239
Asp I3e Gin Met Thr Gin Ser Pro Scr Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15
Asp Arg Vaf Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Ser lie Ser Asn Asn 20 25 30
Leu Asn Ττρ Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45
Tyr Tyr Thr Ser Arg Phe His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80
Glu Asp lie Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Glu His Thr Leu Pro Tyr 85 90 95
Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Leu Glu He Lys Arg Thr Val Ala Ala -199- 158366-序列表.doc 201211252 100 105 110
Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Glu lie Val Met Thr Gin Ser Pro 115 120 125
Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg 130 135 140
Ala Ser Gin Ser Val Ser Ser Asn Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro 345 150 155 160
Gly Gin Ala Pro Arg Leu Leu lie His Gly Ala Ser lie Arg Ala Thr 165 270 175
Gly Leu Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr 180 185 190
Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Ser Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys 195 200 205
Gin Gin Tyr Asn Tyr Trp Trp Thr Phe Gly Gin Gly Tiir Lys Val Glu 210 215 220 lie Lys Arg 225 <210> 240 <211> 249 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 240
Gin Val Gin Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gin 15 10 15
Ser Leu Set lie Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Asp Tyr 20 25 30
Gly Val Asn Trp Val Arg Gin Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45
Gly Met lie Trp Gly Asp Gly Ser Thr Asp Tyr Asp Ser Tlir Leu Lys 50 55 60
Ser Arg Leu Ser lie Ser Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gin lie Phe Leu 65 70 75 80
Lys Met Asn Ser Leu Gin Thr Asp Asp Thr AU Arg Tyj· Tyr Cys Ala 85 90 95
Arg Glu Trp His His Gly Pro Val Ala Tyr Trp Gly Gin Gly Tlir Leu 100 105 110
Val Thr Val Ser Ala Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu 115 120 125 -200- 158366-序列表.doc 201211252
Ala Pro Glu Val Gin Leu Gin Gin Scr Gly Pro Glu Leu Val Thr Pro 130 135 140
Gly AU Ser Val Lys lie Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Hu Phe Thr 145 150 155 160
Asp His Tyr Met Ser Trp Val Lys Gin Ser His Gly Lys Scr Leu Glu 165 170 175
Trp lie Gly Asp lie Asn Pro Tyr Ser Gly Glu Thr Thr Tyr Asn Gin 180 185 190
Lys Phe Lys Gly Thr Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser He 195 200 205
Ala Tyr Met Glu He Arg Gly Leu Tlir Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr 210 215 220
Tyr Cys Ala Arg Asp Asp Tyr Asp Ala Ser Pro Phe A【a Tyr Trp Giy 225 230 235 240 ❹
Gin Gly Thr Leu Va] Thr Va】Ser Ala 245 <210> 241 <211> 228 <212> PKT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 241
Asp lie Val Met Thr Gin Ser His Lys Phe Met Ser Thr Thr Val Gly 15 10 15
Asp Arg Val Ser lie Thr Cys Lys Ala Ser Gin Ala Val Ser Ser Ala 20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ser Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45
Tyr Trp Ala Ser Tlir Arg His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Tht Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Val Thr Asp Phe Tlir Leu Thr lie His Asn Leu Gin Ala 65 70 75 80
Glu Asp Leu Ala Leu Tyr Tyr Cys Gin Gin His Tyr Ser Thr Pro Phe 85 90 95
Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110
Pro Ser Val Fhe lie Phe Pro Pro Asp Val Gin Met lie Gin Scr Pro 115 120 125 -201 - 158366·序列表.doc 201211252
Ser Ser Leu Ser Ala Set Leu Gly Asp lie Val Thr Met Thr Cys Gin 130 135 140
Ala Ser Gin Gly Thr Ser lie Asn Leu Asn Trp Phe Gin Gin Lys Pro 145 150 155 160
Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie Tyr Gly Ser Ser Asn Leu Glu Asp 165 170 175
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Arg Tyr Gly Thr Asp Phe Thr 180 185 190
Leu Thr lie Ser Ser Leu Glu Asp Glu Asp Leu Ala Thr Tyr Phe Cys 195 200 205
Leu Gin His Ser Tyr Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu 210 215 220
Glu lie Lys Arg 225 <210> 242 <211> 249 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <>242
Glu Val Gin Leu Gin Gin Ser Gly Pro Glu Leu Val Thr Pro Gly Ala 15 10 15
Set Val Lys He Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp His 20 25 30
Tyr Met Ser Trp Val Lys Gin Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp lie 35 40 45
Gly Asp lie Asn Pro Tyr Ser Gly Glu Thr Thr Tyr Asn Gin Lys Phe 50 55 60
Lys Gly Thr Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser lie Ala Tyr 65 70 75 80
Met Glu He Arg Gly Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Asp Asp 丁yr Asp Ala Ser Pro Phe Ala Tyr 丁rp Giy Gin Gly 100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ala Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 115 220 125
Pro Leu AJa Pro Gin Val Gin Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val 130 135 140 -202- 158366-序列表.doc 201211252
Ala Pro Ser Gin Ser Leu Ser He Thr Cys Thr Val Scr Gly Phe Ser 145 150 155 160
Leu Thr Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gin Pro Pro Gly Lys Gly 165 170 175
Leu Glu Trp Leu Gly Met lie Trp Gly Asp Gly Ser Thr Asp Tyr Asp 180 185 190
Ser Thr Leu Lys Ser Arg Leu Ser lie Ser Lys Asp Asn Ser Lys Scr 195 200 205
Gin lie Phe Leu Lys Met Asn Ser Leu Gin TKr Asp Asp Thx Ala Arg 210 2L5 220
Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Trp His His Gly Pro Val Ala Tyr Trp Gly 225 230 235 240
Gin Gly Thr Leu Vai Thr Val Ser Ala 245
O <210> 243 <211> 228 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 243
Asp Val Gin Met lie Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly 1 5 10 15
Asp lie Val Thr Met Thr Cys Gin Ala Ser Gin Gly Tbr Ser lie Asn 20 25 30
Leu Asn Trp Phe Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45
Tyr Gly Ser Ser Asn Leu Glu Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Arg Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Glu Asp 65 70 75 阅
Glu Asp Leu Ala Thr Tyr Phe Cys Leu Gin His Ser Tyr Leu Pro Tyr 85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys Arg Thr Val Ala Aia 100 105 110
Fro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Asp He Val Met Thr Gin Set His 115 120 125
Lys Phe Met Ser Thr Tbr Val Gly Asp Arg Val Ser lie Thr Cys Lys 130 135 140
Ala Ser Gin Ala Val Ser Ser Ala Val Ala Trp Tyr G!n Gin Lys Pro -203 - 158366-序列表.doc 201211252 H5 150 155 160
Gly Gin Ser Pro Lys Leu Leu lie Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr 165 170 175
Giy Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Va] Thr Asp Phe Thr 180 185 190
Leu Thr lie His Asn Leu Gin Ala Glu Asp Leu Ala Leu Tyr Tyr Cys 195 200 205
Gin Gin His Tyr Ser Thr Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu 210 215 220
Glu lie Lys Arg 225 <210> 244 <211> 252 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 244
Glu Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 30 15
Ser Met Lys Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe lie Phe Ser Asn His 20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gin Ser Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ala Glu He Arg Ser Lys Ser lie Asn Ser Ala Thr His Tyr Ala Glu 50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Ala 65 70 75 80
Val Tyr Leu Gin Met Thr Asp Leu Arg Thr Glu Asp llir Gly Val Tyr 85 90 95
Tyr Cys Ser Arg Asii Tyr Tyr Giy Ser Thr Tyr Asp Tyr Trp Gly Gin 100 105 110
Gly Thr Thr Leu Thr Va丨 Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Clu Val Gin Leu G3n Gin Ser Gly Pro GJu Leu 130 135 140
Val Thr Pro Gly Ala Ser Val Lys lie Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyt 145 150 155 160
Thr Phe Thr Asp His Tyr Met Ser Trp Val Lys Gin Ser His Gly Lys 165 170 175 •204 - 158366-序列表.doc 201211252
Ser Leu Glu Tr〇P He Gly Asp He Asn Pro Tyr Ser Gly Glu Thr Thr
Tyr Ash Gin Lys Phe Lys Gly Thr Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser 195 200 205
Ser Ser lie Ala Tyr Met Glu lie Arg Gly Leu Thr Ser Glu Asp Ser 210 225 220
Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Asp Tyr Asp Ala Ser Pro Phe Ala 225 230 235 240
Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala 245 250 <210> 245 <211> 228 <212> PRT <213>人工序列 <220> Ο <223>人工序列之描述：合成多肽 <4Q0> 245
Asp lie Leu Leu Thr Gin Scr Pro Ala lie Leu Ser Val Ser Pro Gly 1 5 10 15
Glu Arg Val Ser Phe Scr Cys Arg Ala Ser Gin Phe Val Gly Ser vSer 20 25 30 lie His Trp Tyr Gin Gin Arg Thr Asn Gly Ser Pro Arg Leu Leu lie 35 40 45
Lys Tyr Ala Ser Glu Set Met Ser Gly lie Pro !5cr Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Ser lie Asn Thr Val Glu Ser 65 70 75 80
Glu Asp lie Ala Asp Tyr Tyr Cys Gin Glu Ser His Ser Trp Pro Phe 85 90 95
Thr Phe Gly Ser Gly Thr Asn Uu Glu Val Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110
Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pto Asp Val Gin Met Ue Gin Ser Pro 115 120 125
Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly Asp lie Val Thr Met Thr Cys Gin 130 135 140
Ala Ser Gin Gly Thr Ser lie Asn Leu Asn Trp Phe Gin Gin Lys Pro 145 150 155 160
Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie Tyr Gly Ser Ser Asn Leu Glu Asp 165 170 175 -205 - 158366-序列表.doc 201211252
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Arg Tyr Gly Thr Asp Phe Thr 180 185 190
Lea Thr He Ser Ser Leu Glu Asp Glu Asp Leu Ala Thr Tyr Phe Cys 195 200 205
Leu Gin His Ser Τγτ Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu 210 215 220
Glu lie Lys Arg 225 <210> 246 <211> 252 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 246
Glu Val Gin Leu Gin Gin Ser Gly Pro Glu Leu Val Thr Pro Gly Ala 15 10 15
Ser Val Lys lie Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp His 20 25 30
Tyr Met Ser Trp Val Lys Gin Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp He 35 40 45
Gly Asp lie Asn Pro 丁yr Ser Gly Glu Thr Thr Tyr Asn G】n Lys Phe 50 55 60
Lys Gly Thr Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Set Ser Ser lie Ala Tyr 65 70 75 80
Met Glu lie Arg Gly Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Asp Asp Tyr Asp Ala Ser Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gin Gly 100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ala Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 115 120 125
Fro Leu Ala Pro Giu Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val 130 135 140
Gin Pro Giy Gly Ser Met Lys Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe lie 145 150 155 160
Phe Ser Asn His Trp Met Asn Trp Val Arg Gin Ser Pro Glu Lys Gly 165 170 175
Leu Glu Trp Val Ala Glu lie Arg Ser Lys Ser He Asn Ser Ala Thr 180 185 190 -206- 158366-序列表.doc 201211252
His Tyr Ala Glu Ser \ral Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asp 195 200 205
Ser Lys Ser Ala Val Tyr Leu Gin Met Thr Asp Leu Arg Thr Glu Asp 210 215 220
Thr Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Arg Asn Tyr Tyr CUy Ser Ήκ Tyr Asp 225 230 235 240
Tyr Trp Giy Gin Gly Thr Thr Lea Thr Val Ser Ser 245 250 <210> 247 <211> 228 <212> m <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 247
Asp Val Gin Met He Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly 1 5 10 15
Asp lie Val Thr Met Thr Cys Gin Ala Ser Gin Gly Thr Ser He Asn 20 25 30
Leu Asn Trp Phc Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu He 35 40 45
Tyr Gly Scr Ser Asn Leu Glu Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Arg Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Glu Asp 65 70 75 80
Glu Asp Leu Ala Thr Tyr Phe Cys Leu Gin His Ser Tyr Leu Pro Tyr 85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110
Pro Ser Val Phe 3le Phe Pro Pro Asp lie Leu Ixu Thr Gin Ser Pro 115 120 125
Ala He Leu Ser Val Ser Pro Gly Glu Arg Val Ser Phe Ser Cys Arg 130 135 140
Ala Ser Gin Phe Val Gly Ser Ser He His Trp Tyr Gin Gin Arg Thr 145 !50 155 160
Asn Gly Ser Pro Arg Leu Leu lie Lys Tvr Ma Ser Glu Ser Met Ser 165 170 175
Gly lie Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr 180 185 190
Leu Ser He Asn Thr Val Glu Ser Glu Asp lie Ala Asp Tyr Tyr Cys -207- 158366-序列表.doc 201211252 195 200 205
Gin Glu Ser His Ser Trp Pro Phe fThr Phe Gly Ser G]y Tbr Asn Leu 210 215 220
Glu VaJ Lys Arg 225 <210> 248 <211> 258 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 248
Gin Vai Gin Leu Val Glu Ser Gly Giy Gly Val Val Gin Pro Gly Arg 15 10 IS
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala vSer Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Asn Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ala Phe Met Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys 丁yr Ala Lys Asp Ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser F>eu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Asp Arg Gly lie Ala Ala Gly Gly Asn Tyr Tyr Tyr Tyr Gly 100 105 110
Met Asp Val Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser 115 120 125
Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Glu Val Gin Leu Gin 130 135 140
Gin Ser Gly Pro Glu Leu Val Thr Pro Gly Ala Ser Val Lys lie Ser 145 150 155 160
Cys Lys Ala Scr Gly Tyr Thr Phe Thr Asp His Tyr Met Ser Trp Val 165 170 175
Lys Gin Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp lie Gly Asp lie Asn Pro 180 185 190
Tyr Ser Gly Glu Thr Thr Tyr Asn G)n Lys Phe Lys Gly Thr Ala Thr 195 2(K) 205
Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser lie Ala Tyr Met Glu lie Arg Gly 210 215 220 -208- 158366-序列表.doc 201211252
Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Asp Tyr 225 230 235 240
Asp Ala Ser Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gin Giy Thr Leu Val Thr Val 245 250 255
Ser Ala <21Q> 249 <211> 229 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 249
Glu lie Val Leu Thr Gin Ser Pro Ala Thr Leu Scr Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Ο
Clu Arg Ala Thr Leu Scr Cys Arg Ala Ser Gin Ser Val Tyr Scr Tyr 20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Arg Leu Leu lie 35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly lie Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Tbr Leu Thr lie Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 SO
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gin Gin Arg Ser Asn Trp Pro Pro S5 90 95
Phe Thr Phe Giy Pro Gly Thr Lys Val Asp lie Lys Arg Thr Val Ala 100 105 110
Ma Pro Scr Val Phe lie Phe Pro Pro Asp Val Gin Met lie Gin Ser 115 120 125
Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly Asp lie Val Thr Met Thr Cys 130 335 140
Gin Ala Ser Gin Gly Thr Ser lie Asn Leu Asn Trp PKe Gin Gin Lys 145 150 155 160
Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie Tyr Gly Ser Ser Asn Leu Glu 165 170 175
Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Scr Arg Tyr Gly Thr Asp Phe 180 185 190
Thr Leu Thr lie Scr Ser Leu Glu Asp GIu Asp Leu Ala Thr Tyr Phe 195 200 205 -209- 158366-序列表.doc 201211252
Cys Leu Gin His Scr Tyr Lea Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Hir Lys 210 215 220
Leu Glu lie Lys Arg 225 <210> 250 <211> 25S <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 250
Glu Val Gin Leu Gin Gin Ser Gly Pro Glu Leu Val Tlir Pro Gly Ala 15 10 15
Ser Val Lys He Set Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thx Asp His 20 25 30
Tyr Met Ser Trp Val Lys Gin Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp lie 35 40 45
Gly Asp ile Asn Pro Tyr Ser Gly Glu Thf Thr Tyr Asn Gin Lys Phe 50 55 60
Lys Gly Thr Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser lie Ala Tyr 65 70 75 80
Met Glu He Arg Gly Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Asp Asp Tyr Asp Ala Scr Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gin Gly 100 105 110
Thr Leu Val T\\t Val Scr Ala Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 115 120 125
Pro Leu Ala Pro Gin Va] Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val 130 135 140
Gin Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr 145 150 155 160
Phe Ser Ser Tyr Ala Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Asn Gly 165 170 175
Leu Glu Trp Val Ala Phe Met Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Ala ISO 185 m
Lys Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr lie Scr Arg Asp Asn Ser Lys 195 200 205
Asn Thr Leu Tyr Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala 210 215 220 -210. 158366-序列表.doc 201211252
Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Arg Gly lie Ala Ala Gly Gly Asn Tyr 225 230 235 240
Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val 245 250 255
Ser Ser <210> 251 <211> 229 <212> PR丁 <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 251
Asp Val Gin Met lie Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly 15 10 15 Ο
Asp lie Va! Thr Met Thr Cys Gin Ala Ser Gin Gly Thr Ser He Asn 20 25 30
Leu Asn Trp Phe Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45
Tyr Gly Ser Ser Asn Leu Glu Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Arg Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Glu Asp 65 70 7S 80
Glu Asp Leu Ala Thr Tyr Phe Cys Leu Gin His Ser Tyr Leu Pro Tyr S5 90 95
Tht Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110
Pro Set Val Phe lie Phe Pro Pro Glu lie Val Leu Ήιτ Gin Ser Pro 115 120 125
Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg 130 135 140
Ala Ser Gin Ser Val Tyr Ser Tyr Leu Ala Trp Tyr G!n Gin Lys Pro 145 150 155 160
Gly Gin Ala Pro Arg Leu Leu lie Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr 165 170 175
Gly lie Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr 180 185 190
Leu 111r lie Ser Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys 195 200 205
Gin Gin Arg Ser Asn Trp Pro Pro Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys -211 - 158366·序列表.doc 201211252 210 2i5 220
Yal Asp lie Lys Arg 225 <210> 252 <211> 257 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 252
Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gin Pro Gly Arg 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30
Asp Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Va! 35 40 45
Ala Val lie Trp Ser Asp Gly Ser lie Lys Tyt Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60
Lys Giy Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Glu Val Glu Ser Ala Met Gly Gly Phe Tyr Tyr Asn Gly Met 100 105 110
Asp Val Trp Gly Gin Gly Thr TTir Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr 115 120 125
Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Glu Val Gin Leu Gin Gin 130 135 140
Ser Gly Pro Glu Leu Val Thr Pro Gly Ala Ser Val Lys lie Ser Cys 145 150 155 160
Lys Ala Ser Gly Tyr rHir Phe Thr Asp His Tyr Met Ser Trp Val Lys 165 170 175
Gin Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp lie Gly Asp He Asn Pro Tyr 180 185 190
Ser Gly Glu Tlir Thr Tyr Asn Gin Lys Phe Lys CHy Thi* Ala Thr Leu 195 200 205
Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser lie Ala Tyr Met Glu lie Arg Gly Leu 210 215 220
Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Asp Tyr Asp 225 230 235 240 -212- 158366-序列表.doc 201211252
Ala Ser Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu Vai Thr Val Ser 245 250 255
Ala <210> 253 <211> 228 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 253
Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Gly lie Arg lie Asp 20 25 30 ❹
Leu Gly Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu lie 35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe lie Phe Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Ser Tyr Tyr Cys Leu Gin His Lys Ser Tyr Pro Leu 85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110
Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Asp Val Gin Met He Gin Ser Pro 115 Ϊ20 125
Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly Asp lie Val Thr Met Thr Cys Gin 130 135 140
Ala Ser Gin Gly Thr Ser lie Asn Leu Asn Trp Phe Gin Gin Lys Pro 145 150 155 160
Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie Tyr Gly Ser Ser Asn Leu Glu Asp 165 170 175
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Arg Tyr Gly Thr Asp Phe Thr 180 185 190
Leu Thr lie Ser Ser Leu Glu Asp Glu Asp Leu Ala Thr Tyr Phe Cys 195 200 205
Leu Gin His Ser Tyr Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu 210 215 220 -213- 158366-序列表.doc 201211252
Glu lie Lys Arg 225 <210> 254 <211> 257 <212> PRT c21.3>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 254
Glu Val Gin Leu G]n Gin Ser Gly Pro Glu Leu Val Thr Pro Gly Ala 15 10 15
Ser Val Lys He Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp His 20 25 30
Tyr Met Ser 丁rp Va] Lys GJn Ser His G]y Lys Ser Leu Glu Trp lie 35 40 45
Gly Asp lie Asn Pro Tyr Ser Gly Glu Thr Thr Tyr Asn Gin Lys Phe 50 55 60
Lys Gly Thr Ala Tht Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser lie Ala Tyr 65 70 75 80
Mel Glu He Arg Gly Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Asp Asp Tyr Asp Ala Ser Pro Pbe Ala Tyr Trp Gly Gin Gly 100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Set Ala Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Fhe 115 120 125
Pro Leu Ala Pro Gin Val Gin Leu Val Glu Scr Gly Gly Gly Val Val 130 135 140
Gin Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr 145 150 155 160
Phe Ser Ser Tyr Asp Met His Trp Va) Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly 165 170 175
Leu Glu Trp Val Ala Val lie Trp Ser Asp G]y Ser lie Lys Tyr Tyr 180 185 190
Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys 195 2CX) 205
Asn Thr Leu Tyr Leu Met Asm Ser Leu Arg A】a Glu Asp Thr A】a 210 215 220
Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Val Glu Ser Ala Met Gly Giy Phe Tyr 225 230 235 240 -214· 158366-序列表.doc 201211252
Tyr Asn Gly Met Asp Val Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser 245 250 255
Ser <210> 255 <211> 228 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <40〇> 255
Asp Val Gin Met lie Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly 15 10 15
Asp lie Val Thr Met Tlir Cys Gin Ala Ser Gin Gly Thr Ser He Asn 20 25 30 Ο
Leu Asn Trp Phe Gin G3n Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45
Tyr Gly Ser Ser Asn Leu Glu Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Arg Tyr Gly Thr Asp Fhe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Glu Asp 65 70 75 80
Glu Asp Leu Ala Thr Tyr Phe Cys Leu Gin His Ser Tyr Leu Pro Tyr 85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu G!u lie Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110
Pro Scr Val Phe He Phe Pro Pro Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro 115 120 125
Set Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg 130 135 140
Ala Ser Gin Gly lie Arg lie Asp Leu Gly Trp Tyr Gin Gin Lys Pro 145 150 155 160
Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu He Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gin SeT 165 170 175
Gly Vai Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe lie 180 185 190
Phe Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro Glu Asp Phe Ala Ser Tyr Tyr Cys 195 200 205
Leu Gin His Lys Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val 210 215 220
Glu lie Lys Arg 215- 158366-序列表.doc 201211252 225 <210> 256 <211> 247 <212> PRT <213>人工序列 C220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 256
Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu lie Gin Pro Gly Gly 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Val Ser Arg Asn 20 25 30
Tyr Met Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ser Val He Tyr Ser Gly Asp Arg Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 50 55 60
Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 65 70 75 80
Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95
Arg Gly Glu Giy Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110
Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro 115 120 125
Glu Val Gin Leu Gin Gin Ser Gly Pro Glu Leu Val Thr Pro Gly Ala 130 135 140
Ser Val Lys lie Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp His 145 250 155 160
Tyr Met Set Trp Val Lys Gin Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp lie 165 170 175
Gly Asp lie Asn Pro Tyr Ser Gly Glu Thr Thr Tyr Asn Gin Lys Phe 180 185 J90
Lys Gly Thr Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser vSer Ser He Ala Tyr 195 200 205
Met Glu He Arg Gly Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 210 215 220
Ala Arg Asp Asp Tyr Asp Ala Ser Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gin Gly 225 230 235 240
Thr Leu Val Thr Val Ser Ala 245 -216- 158366-序列表.doc 201211252 <210> 257 <211> 227 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 257
Glu lie Yal Met Thr Gin Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly 15 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gin Ser Val Ser Ser Asn 20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Arg Leu Leu lie 35 40 45
His Gly Ala Ser lie Arg Ala Thr Gly Leu Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ο
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Ser 65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Vai Tyr Tyr Cys Gin Gin Tyr Asn Tyr Trp Trp Thr 85 90 95
Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro 100 105 110
Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Asp Val Gin Met lie Gin Ser Pro Ser 115 120 125
Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly Asp lie Val Thr Met Thr Cys G3n Ala 130 135 HO
Ser Gin Giy Thr Ser lie Asn Leu Asn Trp Phe Gin Gin Lys Pro Gly 145 150 155 160
Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie Tyr Gly Ser Ser Asn Leu Glu Asp Gly 165 170 175
Val Pro Scr Arg Phe Ser Gly Ser Arg Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Leu 180 185 190
Thr lie Ser Ser Leu Glu Asp Glu Asp Leu Ala Thr Tyr Phe Cys Leu 195 200 205
Gin His Scr Tyr Lea Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Giu 230 215 220 lie Lys Arg 225
<210〉 258 <211> 247 <212> PRT •217- 158366-序列表.doc 201211252 <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 258
Glu Val Gin Leu Gin Gin Ser Gly Pro GIu Leu Val Thr Pro Gly Ala 15 10 15
Ser Val Lys lie Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp His 20 25 30
Tyr Met Ser Trp Val Lys Gin Ser His Gly Lys Set Leu Glu Trp lie 35 40 45
Gly Asp lie Asn Pro Tyr Ser Gly Glu Thr Thr Tyr Asn Gin Lys Phe 50 55 60
Lys Glv Thr Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser He Ala Tyr 65 - 70 75 80
Met Glu lie Arg Gly Leu Thr Ser Glu Asp Set Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Asp Asp Tyi Asp A]a Ser Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gin Gly 100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ala Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 115 120 125
Pro Leu Ala Pro Glu Va] Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Me 130 135 140
Gin Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Sct Cys Ala Ala Ser Gly Phe Tlir 145 150 155 160
Val Ser Arg Asn Tyr Met Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Oly 165 170 175
Leu Glu 丁rp Val Ser Val lie Tyr Ser Gly Asp Arg Thr Tyr 丁yr Ala 180 185 190
Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn 195 200 205
Thr Leu Tyr Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Tlir Ala Val 210 215 220
Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Glu Gly Giy Phe Asp Tyr Trp GJy Gin Gly 225 230 235 240
Thr Leu Val ΊΙιγ Va! Ser Ser 245 <210> 259 <2H> 227 <212> PRT <2!3>人工序列 -218- 158366-序列表.doc 201211252 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <m> 259
Asp Val Gin Met lie Gin Scr Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly 1 5 10 15
Asp lie Val Thr Met Thr Cys Gin Ala Scr Gin Gly Tlir Ser lie Asn 20 25 30
Leu Asn Trp Phe Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45
Tyr Gly Ser Ser Asn Leu GIu Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Arg Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Glu Asp 65 70 75 80 Ο
Glu Asp Leu Ala Tbr Tyr Phe Cys Leu Gin His Ser Tyr Leu Pro Tyr 85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110
Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Glu lie Val Met Tht Gin Ser Pro 115 120 125
Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg 130 135 140
Ala Ser Gin Ser Val Ser Scr Asn Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro 145 150 155 160
Gly Gin Ala Pro Arg Leu Leu lie His Gly Ala Ser lie Arg Ala Thr 165 170 175
Gly Leu Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr 180 1S5 190
Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Ser Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys 195 200 205
Gin Gin Tyr Asn Tyr Trp Trp Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu 210 215 220 lie Lys Arg 225 <210〉 260 <211> 246 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 •219- 15 83 66-序列表.doc 201211252 <400> 260
Gin Val Gin Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gin 15 10 15
Ser Leu Ser lie Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Asp Tyr 20 25 30
Giy Val Asn Trp Val Arg Gin Pro Pro Gly 乙ys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45
Gly Met 〖le Trp Gly Asp Gly Ser Thr Asp Tyr Asp Ser Thr Leu Lys 50 55 60
Ser Arg Leu Ser lie Ser Lys Asp Asn Set Lys Ser Gin He Phe Leu 65 70 75 80
Lys Met Asn Ser Leu Gin Thr Asp Asp Thr Ala Arg Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95
Arg Glu Trp His His Gly Pro Val Ala Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu 100 105 110
Val Thr Val Ser Ala Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu 115 120 125
Ala Pro Glu Val Gin Leu Val Gin Ser Giy Ala Glu Val Lys Lys Pro 130 135 140
Gly Ala Ser Val Lys Val Ser CyvS Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr 145 150 155 160
Lys Tyr Trp Leu Gly Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu 165 170 175
Trp Met Gly Asp lie Tyr Pro Gly Tyr Asp Tyr Thr His Tyr Asn Glu 180 185 190
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Ala Tyr Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp ITir Ala Val Tyr 210 215 220
Tyr Cys Ala Arg Ser Asp Gly Ser Ser Thr Tyr Trp Gly Gin Gly Thr 225 230 235 240
Leu Val Thr Vai Ser Ser 245 <210> 261 <211> 233 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 261 -220· 158366-序列表.doc 201211252
Asp 11c Val Met Thr Gla Ser His Lys Phc Met Ser Thr Thr Val G!y 15 10 15
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Val Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Scr Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45
Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Val Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie His Asn Leu Gin Ala
65 70 75 SO
Glu Asp Leu Ala Leu Tyr Tyr Cys Gin Gin His Tyr Ser Thr Pro Phe 85 90 95
Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110
Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Asp Va! Leu Met Thr Gin Thr Pro 115 120 125
Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Giy Glu Pro Ala Scr lie Ser Cys Thr 130 135 140
Ser Scr Gin Asn lie Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp 145 150 155 160
Tyr Leu Gin Lys Pro Gly Gin Ser Pro Gin Leu Leu lie Tyr Lys Val 165 170 175
Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser 180 185 190
Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys He Ser Arg Val Glu Ala Giu Asp Val 195 200 205
Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gin Val Ser His Val Pro Tyr Thr Phe Gly 210 215 220
Gly Gly Tlir Lys Val Glu lie Lys Arg 225 230 <210> 262 <21I> 246 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 262
Glu Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15
Sex Val Lys Vai Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phc Thr Lys Tyr -221 - 158366-序列表.doc 201211252 20 25 30
Trp Leu Gly Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45
Gly Asp lie Tyr Pro Gly Tyr Asp Tyr Thr His Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60
Lys Asp Arg Vai Thr Leu Thr Ήίϊ· Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Ser Asp Gly Ser Ser Thr Tyr Trp Gly Gin Gly llir Leu VaJ 100 105 110
Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125
Pro Gin Val Gin Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser 130 135 140
Gin Scr Leu Ser lie Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Set Leu Thr Asp 145 150 155 160
Tyr Gly Val Asn Trp Vai Arg Gin Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 165 170 175
Leu Gly Met lie Trp Gly Asp Gly Ser Thr Asp Tyr Asp Ser Thr Leu 180 185 190
Lys Ser Arg Leu Ser He Ser Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gin lie Phe 195 200 205
Leu Lys Met Asn Ser Lea Gin Thr Asp Asp Thr Ala Arg Tyr Tyr Cys 210 225 220
Ala Arg Glu Trp His His Gly Pro Val Ala Tyr Trp Gly Gin Gly Thr 225 230 235 240
Leu Val Thr Val Ser Ala 245 <230> 263 <211> 233 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 263
Asp Val Leu Met Thr Gin Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser He Ser Cys Thr Ser Ser Gin Asn lie Val His Ser 20 25 30 -222- 158366-序列表.doc 201211252
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gin Lys Pro Gly Gin Ser 35 40 45
Pro Gin Leu Leu lie Tyr Lys Val Scr Asn Arg Phe Scr Gly Val Pro 50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Scr Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie 65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gin Val 85 90 95
Ser His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu He Lys 100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Asp He Val 115 120 125
Met Thr Gin Ser His Lys Fhe Met Ser Thr Thr Val Gly Asp Arg Val 130 135 140 Ο
Ser lie Thr Cys Lys Ala Ser Gin Ala Val Scr Ser Ala Val Ala Trp 145 150 155 160
Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ser Pro Lys Leu Leu lie Tyr Trp Ala 165 170 175
Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser 180 185 190
Val Thr Asp Phe Thr Leu Ttir lie His Asn Leu Gin Ala Glu Asp Leu 195 200 205
Ala Leu Tyr Tyr Cys Gin Gin His Tyr Ser Ήιγ Pro Phe Thr Fhe Gly 210 215 220
Ser Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys Arg 225 230 <210> 264 <211> 249 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 264
Glu Vai Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15
Scr Met Lys Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe lie Phe Ser Asn His 20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gin Scr Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 223- 158366-序列表.doc 201211252
Ala Glu He Arg Ser Lys Ser He Asn Ser Ala Thr His Tyr Ala Glu 50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr He Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Ala 65 70 75 80
Val Tyr Leu Gin Met Thr Asp Leu Arg Thr Glu Asp Hu Gly Val Tyr 85 90 95
Tyr Cys Ser Arg Asn Tyr Tyr Gly Ser Thr Tyr Asp Tyr Trp Gly Gin loo 105 no
Gly Thr Thr Leu rrhr Val Ser Scr Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Glu Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val 130 135 140
Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Scr Gly Tyr 145 150 155 160
Thr Phe Thr Lys Tyr Trp Leu Gly Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin 165 170 175
Gly Leu Glu Trp Met Gly Asp lie Tyr Pro Gly Tyr Asp Tyr Thr His ISO 185 190
Tyr Asn Glu Lys Phe Lys Asp Arg Val rfhr Leu Thr Thr Asp Thr Ser 195 200 205
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Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 245 <210> 265 <211> 233 <212> PRT <213>人工序列 <220〉 <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 265
Asp lie Leu Leu Thr Gin Ser Pro Ala lie Leu Ser Val Ser Pro Gly 1 5 10 15
Glu Arg Val Ser Phe Ser Cys Arg Ala Ser Gin Phe Val Gly Ser Ser 20 25 30 lie His 丁rp Tyr G]n Gin Arg Thi. Asn Gly Ser Pro Arg Uu Leu lie 35 40 45 -224- 158366-序列表.doc 201211252
Lys Tyr Ala Ser Glu Ser Met Ser Gly lie Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser G!y Ser Giy Thr Asp Phe Thr Leu Ser lie Asn Thr Val Glu Ser 65 70 75 80
Glu Asp lie Ala Asp Tyr Tyr Cys Gin Glu Ser His Ser Trp Pro Phe 85 90 95
Thr Phe Gly Ser Gly Thr Asn Leu Glu Val Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110
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Tyr Leu Gin Lys Pro Gly Gin Ser Pro Gin Leu Leu lie Tyr Lys Val 165 170 175
Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Set Gly Ser 180 185 190
Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val 195 200 205
Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gin Val Ser His Val Pro Tyr Thr Phe Gly 210 215 220
Gly Gly Thr Lys Val GJu He Lys Arg 225 230 <210> 266 <211> 249 <212> m <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <4O0> 266
Glu Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Giy Ala 15 10 15
Ser Val Lys Val Set Cys Ly% Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Lys Tyr 20 25 30
Trp Leu Gly Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45
Gly Asp lie Tyr Pro Giy Tyr Asp Tyr Thr His Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60
Lys Asp Arg Val Tlir Leu Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr -225 - 158366-序列表.doc 201211252 65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Ser Asp Gly Set Ser Thr Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val 100 105 110 Ίΐκ Val Ser Scr Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125
Pro Glu Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly 130 135 140
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Glu Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser 195 200 205
Ala Vai Tyr Leu Cfln Met Thr Asp Leu Arg Thr G】u Asp Thr Gly Val 210 215 220
Tyr Tyr Cys Ser Arg Asn Tyr Tyr Gly Ser Thr Tyr Asp Tyr Trp Gly 225 230 235 240
Gin Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser 245 <210〉 267 <211> 233 <212> FRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 267
Asp Val Leu Met Thr Gin Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser lie Ser Cys Thr Ser Ser Gin Asa He Val His Ser 20 25 30
Asn Gly Asn ITir Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gin Lys Pro Gly Gin Ser 35 40 45
Pro Gin Leu Leu lie Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Giy Val Pro 50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie 65 70 75 80 -226- 158366-序列表.doc 201211252
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gin Val 85 90 95
Ser His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe lie Phe Fro Pro Asp lie Leu L15 120 125
Leu llir G3n Ser Pro Ala lie Leu Ser Val Ser Pro Gly Glu A\g Val 130 135 140
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Tyr Gin Gin Arg Thr Asn Gly Ser Pro Arg Leu Leu lie Lys Tyr Ala 165 170 175
Ser Glu Ser Met Ser Gly lie Pro Scr Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser 180 185 190
Gly Thr Asp Phe Thr Leu Ser lie Asn T^r Val Glu Ser Glu Asp lie 195 200 205
Ala Asp TyT Tyr Cys Gin Glu Ser His Ser 丁rp Pro Phe Thr Phe Gly 210 215 220
Ser Gly Thr Asn Leu Glu Val Lys Arg 225 230 <21Q> 268 <211> 255 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 268
Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gin Pro Gly Arg 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Giy Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Asn Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ala Phe Met Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Ala Lys Asp Ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Set Leu Arg Ala Glu Asp Thx Ala Val T^r Tyr Cys 85 90 95 -227- 158366-序列表.doc 201211252
Ala Arg Asp Arg Gly lie Ala Ala Gly Gly Asn Tyr Tyr Tyr Tyr Gly 100 105 110
Met Asp Va! Trp Gly Gin Gly Tlir Thr Val Tlir Val Ser Ser Ala Ser 115 120 125
Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Glu Val Gin Leu VaL 130 135 140
Gin Ser Gly Ala Giu Val Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser 145 150 155 160
Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Lys Tyr Trp Leu Gly Trp Val 165 170 175
Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Gla Trp Met Gly Asp lie Tyr Pro 180 185 190
Gly Tyr Asp Tyr Thr His Tyr Asn Glu Lys Phe Lys Asp Aig Val Thr 195 200 205
Leu Thr Tlir Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Arg Ser 210 215 220
Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Asp Gly 225 230 235 240
Ser Ser Thr Tyr Trp Gly G3n Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 245 250 255 <210> 269 <21i> 234 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 269
Glu He Val Leu Thr Gin Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 15 10 15
Glu Arg AU Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gin Ser Va丨丁yr Ser 丁yr 20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Arg Leu Leu lie 35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly lie Fro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Glu Pro 65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gin Gin Arg Scr Asn Trp Pro Fro 85 90 95 -228· 158366-序列表.doc 201211252
Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp lie Lys ATg Thr Val Ala 100 105 110
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Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly Glu Pro Ala Ser lie Ser Cys 130 135 140
Thr Ser Ser Gin Asn lie Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu H5 150 155 160
Trp Tyr Leu Gin Lys Pro Gly Gin Ser Pro Gin Leu Leu He Tyr Lys 165 170 175
Vai Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly 180 185 190
Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie Ser Arg Val Glu Ala G\m Asp 195 200 205
Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gin Val Ser His Val Fro Tyr Thr Phe 210 215 220
Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu He Lys Arg 225 230 <210> 270 <2U> 255 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 270
Glu Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala I 5 10 15
Ser Val Lys Val Sot Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Lys Tyr 20 25 30
Trp Leu Gly Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45
Gly Asp lie Tyr Pro Gly Tyr Asp Tyr Thr His Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60
Lys Asp Arg Val Thr Leu Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Ser Asp Gly Scr Ser Thr Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val 100 105 110
Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala -229- 158366-序列表.doc 201211252 115 120 125
Pro Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Oly Gly Gly Val Val Gin Pro Gly 130 135 140
Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser 145 150 155 160
Tyr Ala Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Asn Gly Leu Glu Trp 165 170 175
Val Ala Phe Met Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Ala Lys Asp Scr 180 185 190
Val Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu 195 200 205
Tyr Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 210 215 220
Cys Ala Arg Asp Ar£ Gly He Ala Ala Gly Gly Asn Tyr Tyr Tyr Tyr 225 230 235 240
Gly Met Asp Val Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Set 245 250 255 <210> 271 <211> 234 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <>271
Asp Val Leu Met Thr Gin Thr Pro Leu Ser Leu Pro Vai Thr Pro Gly 15 10 15
Giu Pro AJa Ser lie Ser Cys Thr Ser Ser Gin Asn lie Val His Ser 20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gin Lys Pro Gly Gin Ser 35 40 45
Pro Gin Leu Leu He Tyr Lys Val Ser Asu Arg Phe Ser Gly Yal Pro 50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser G]y Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys I]e 65 70 75 80
Ser Arg Val Giu AJa Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Fhe Gin Va] 85 90 95
Ser His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly G3y Thr Lys Va] Glu He Lys 100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Glu lie Vai 115 120 125 -230- 158366-序列表.doc 201211252
Leu Thr Gin Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala 130 135 140
Thr I^eu Ser Cys Arg Ala Ser Gin Scr Val Tyr Ser Tyr Leu Ala Trp 145 150 155 160
Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Arg Leu Leu lie Tyr Asp Ala 165 170 175
Ser Asn Arg Ala Thr Gly lie Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser 180 185 190
Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr He Set Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe 195 200 205
Ala Val Tyr Tyr Cys Gin Gin Arg Ser Asft Trp Pro Pro Phe Thr Phe 210 215 220
Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp lie Lys ^rg 225 230
<210> 272 <211> 254 <212> PRT <2i3>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 272 G!n Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gin Pro Gly Arg 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30
Asp Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ala Val lie Trp Ser Asp Gly Ser lie Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Tbr lie Ser Arg Asp Asti Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Glu Val Glu Ser Ala Mot Gly Gly Phe Tyr Tyr Asn Gly Mel 100 105 110
Asp Val Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr 115 120 125
Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Fro Glu Val Gin Leu Val Gin 130 135 140 -231 - 15 83 66-序列表.doc 201211252
Ser Gly Ala GIu Val Lys Lys Pro Gly Aia Ser Val Lys Val Ser Cys 145 150 355 160
Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Lys Tyr Trp Leu Gly Trp Val Arg 165 170 175
Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Giu Trp Met Gly Asp lie Tyr Pro Gly 180 185 190
Tyr Asp Tyr Thr His Tyr Asn Giu Lys Phe Lys Asp Arg Val Thr Leu 195 200 205
Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Giu Leu Arg Ser Leu 210 215 220
Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Asp Gly Ser 225 230 235 240
Ser Thr Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 245 250 <210> 273 <211> 233 <212> PET <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 273
Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Gly lie Arg lie Asp 20 25 30
Leu Gly Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu lie 35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Giu Phe lie Phe Thr He Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80
Giu Asp Phe Ala Ser Tyr Tyr Cys Leu Gin His Lys Ser Tyr Pro Leu 85 90 95 llir Phe Gly Giy Gly frhr Lys Val Giu lie Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110
Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Asp Val Leu Met Thr Gin Thr Pro 115 120 125
Leu Ser Lea Pro Val Thr Pro Gly Giu Pro Ala Ser lie Ser Cys Thr 130 135 140 •232 · 158366-序列表.doc 201211252
Ser Set Gin Asn lie Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp 145 150 3 55 160
Tyr Leu Gin Lys Pro Gly Gin Ser Pro Gin Leu Leu lie Tyr Lys Val 165 170 175
Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser G1y Ser G]y Ser 180 185 190
Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val 195 200 205 G]y Val Tyr Tyr Cys Phe Gin Vaf Ser His Val Pro Tyr Tlir Phe Gly 210 215 220
Gly Gly Thr Lys Val Glu He Lys Arg 225 230 Ο <210> 274 <21l> 254 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 274
Glu Val Gin Leu Val Gin Scr Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Lys Tyr 20 25 30
Trp Leu Gly Tip Val Axg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45
Gly Asp lie Tyr Pro Gly Tyr Asp Tyr Thr His Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60
Lys Asp Arg Val Thr Lea Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Scr Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyx Tyi Cys 85 90 95
Ala Arg Ser Asp Gly Scr Ser Thr Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val 1CK) 105 110
Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125
Pro Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly GLy Val Val Gin Pro Gly 130 135 140
Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala vSer Gly Phe Thr Phe Ser Ser 145 150 155 160
Tyr Asp Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp -233 - 158366-序列表.doc 201211252 165 170 175
Yal Ala Val He Trp Ser Asp Gly Ser lie Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser 180 185 190
Val Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu 195 200 205
Tyr Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 210 215 220
Cys Ala Arg Glu Val Glu Ser Ala Met Gly Gly Phe Tyr Tyr Asn Gly 225 230 235 240
Met Asp Va丨 Trp Gly Gin Gly Tlir Thr Val Thr Va! Ser &r 245 250 <210> 275 <211> 233 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 275
Asp Val Leu Met Thr Gin Thr Pro Lea Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 15 10 15
Glu Pro Ala Ser He Ser Cys Thr Ser Ser Gin Asn lie Val His Ser 20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gin Lys Pro Gly Gin Ser 35 40 45
Pro Gin Leu Leu lie Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie 65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gin Val 85 90 95
Ser His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly ITir Lys Val GIu He Lys 100 105 110
Arg Tlir Val Ala Ala Fro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Asp lie Gin 115 120 125
Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val 130 135 140
Thr He Thr Cys Arg Ala Ser Gin Gly He Arg lie Asp Leu Gly Trp 145 150 155 160
Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu lie Tyr Ala Ala 165 170 175 -234- 158366·序列表.doc 201211252
Ser Thr Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe 180 185
Ser Gly Ser Gly Ser 190
Gly Thr Glu Phe lie Phe Thr He Ser Ser Leu 195 200
Gin Pro Glu Asp Phe 205
Ala Ser Tyr Tyr Cys Leu Gin His Lys Ser Tyr 210 215
Pro Leu Thr Phe Gly 220
Gly Giy Thv Lys Val Glu lie Lys kxg 225 230 <210> 276 <211> 244 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽
<400> 276 Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Lea 1 5 10 lie Gin Pro Gly Gly 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe 20 25 1111 VaI ATg Asn
Tyr Met Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys 35 40
Gly Leu Glu Trp Val 45
Ser Val lie Tyr Ser Gly Asp Arg Tlir Tyr Tyr 50 55
Ala Asp Ser Val Lys 60
Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys 65 70 75
Asn Thr Leu Tyr Leu 80
Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala &5 90
Val Tyr Tyr Cys Ala 95
Arg Gly Glu Gly Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gin 100 105
Gly Thr Leu Val Thr 130
Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120
Phe Pro Leu Ala Pro 125
Glu Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val 130 135
Lys Lys Pro Gly Ala 140
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr 145 150 155
Thr Phe Thr Lvs Tyr 160
Trp Leu Gly Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin 165 170
Gly Leu Glu Trp Met 175
Gly Asp lie Tyr Pro Gly T^r Asp Tyr Thr His ISO 185
Tyr Asn Glu Lys Phe 1.90 158366-序列表.doc -235 - 201211252
Lys Asp Arg Val Thr Leu Thr Thr Asp Thr Set Thr Ser Thr Ala Tyr 195 200 205
Met Glu Leu Arg Scr Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 210 215 220
Ala Arg Ser Asp Gly Ser Ser Thr Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val 225 230 235 240
Thr Val Ser Ser <210> 277 <211> 232 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 277
Glu He Val Met Thr Gin Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly 15 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gin Ser Val Ser Ser Asn 20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Arg Leu Leu lie 35 40 45
His Gly Ala Scr lie Arg Ala Thr Gly Leu Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Gly wSer Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Ser 65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gin Gin Tyr Asn Tyr Trp Trp Thr 85 90 95
Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro 100 105 110
Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Asp Val Leu Met Thr Gin Thr Pro Leu 215 320 225
Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly Glu Pro Ala Ser lie Ser Cys Tlir Scr 130 135 140
Ser Gin Asn lie Val His Set Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr 145 150 155 160
Leu Gin Lys Pro Gly Gin Ser Pro Gin Uu Leu lie Tyr Lys Val Ser 165 170 175
Asn Arg Phe Ser Gly Va] Pro Asp Arg Phe Ser Giy Ser Gly Ser Gly 180 185 190 •236· 158366·序列表.doc 201211252
Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie Scr Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly 195 200 205
Val Tyr Tyr Cys Phe Gin Val Ser His Val Pro Tyr Thr Phe Gty Gly 210 215 220
Gly Ήιγ Lys Val Glu He Lys Arg 225 230 <210> 278 <211> 244 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <m> 278
Glu Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ο
Ser Val Lys Va丨 Ser Cys Lys Ala Sei* Gly Tyr Thr Pbe Thr Lys Tyr 20 25 30
Trp Leu Gly Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45
Gly Asp lie Tyr Pro Gly Tyr Asp Tyr Thr His Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 .
Lys Asp Arg Yal Thr Leu Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 SO
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val 丁yr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Ser Asp Gly Ser Ser Thr Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val 100 105 110
Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125
Pro Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu lie Gin Pro Gly 130 135 140
Giy Ser Leu Arg Leu Scr Cys Ala Ala Ser Gly Phe ThT Val Sex Aig 145 150 155 160
Asn 丁yr Met Ser Trp Val Arg Gin Aia Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 165 170 175
Va! Ser Val lie Tyr Ser Gly Asp Arg Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 180 185 190
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 195 200 205
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys • 237· 158366-序列表.doc 201211252 210 215 220
Ala Arg Gly Glu Gly Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val 225 230 235 240
Thr Val Ser Ser <210> 279 <211> 232 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 279
Asp Val Leu Met Thr Gin Thr Pro Leu Scr Leu Pro Val Thr Pro Gly 15 10 15
Glu Pro Ala Ser lie Ser Cys Thr Ser Ser Gin Asn lie Val His Ser 20 25 30
Asn Giy Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gin Lys Pro G3y Gin Ser 35 40 45
Pro Gin Leu Lea lie Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie 65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gin Val 85 90 95
Ser His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 110
Arg llir Val Ala Ala Pro Ser Va) Phe He Phe Pro Pro Glu lie Val 115 120 125
Met Tlir Gin Ser Pro Ala Thr Leu Scr Val Ser Pro Gly Glu Arg Ala ]30 135 140
Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gin Ser Val Ser Ser Asn Leu Ala Trp 145 150 155 160
Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Arg Leu Leu lie His Giy Ala 165 170 175
Ser He Arg Ala llir Gly Leu Pro Ala Arg Phe Ser Gly Scr Gly Ser 180 185 190
Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Jle Ser Ser Leu Gin Ser Glu Asp Phe 195 200 205
Ala Val Tyr Tyr Cys Gin Gin Tyr Asn Tyr Trp Trp Thr Phe Giy Gin 210 215 220 • 238 · 158366·序列表.doc 201211252
Gly Thr Lys Val GIu He Lys Arg 225 230 <2!0> 280 <211> 252 <212> POT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <m> 280
Gin Val Gin Leu Lys GIu Sex Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gin I 5 10 15
Ser Leu Set lie Thr Cys Thi Val Ser Gly Fhe Ser Leu Thr Asp Tyr 20 25 30
Gly Val Asn Trp Val Arg Gin Pro Pro Gly Lys Gly Leu GIu Trp Leu 35 40 45
Gly Met lie Trp Gly Asp Gly Ser Thr Asp Tyr Asp Ser Thr Leu Lys 50 55 60
Ser Arg Leu Ser lie Ser Lys Asp Asn Ser Lys Scr Gin He Phe Leu 65 70 75 80
Lys Met Asn Ser Leu Gin Hir Asp Asp Thr Ala Arg Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95
Arg GIu Trp His His Gly Pro Val Ala Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu 100 105 110
Val Thr Val Ser Ala Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu 115 120 125
Ala Pro Gin Val Gin Leu Gin Gin Ser Gly Ala G3u Leu Val Arg Pro 130 135 140
Gly Thr Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Gly Phe lie 145 150 155 160
Asn Tyr Leu lie GIu Trp lie Lys Gin Arg Pro Gly Gin Gly Leu GIu 165 170 175
Trp lie Gly Leu lie Asn Pro Gly Ser Asp T>r Thr Asn Tyr Asn GIu 180 185 190
Asn Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Scr Ser Thr 195 200 205
Ala Tyr Ket His Leu Ser Ser Leu Thr Ser GIu Asp Ser Ala Val Tyr 210 215 220
Phe Cys Ala Arg Arg Phe Gly Tyr Tyr Gly Scr Gly Asn Tyr Phe Asp 225 230 235 240 -239- 158366-序列表.doc 201211252
Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Thr Leu Thr Val Scr Ser 245 250 <210> 281 <2il> 233 <212> PRT <213>人工序列 <22Q> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 281
Asp He Val Met Thr Gin Ser His Lys Phe Met Scr rFhr Thr Val Gly 15 10 15
Asp Arg Val Ser lie Thr Cys Lys Ala Sct Gin Ala Val Ser Ser Ala 20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ser Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45
Tyr Trp Ala Ser Thx Arg His Tlu Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Giy 50 55 60
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Glu Asp Leu Ala Leu Tyr Tyr Cys Gin Gin His Tyr Ser Thr Pro Phe S5 90 95
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Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly Asp Gin Ala Ser lie Ser Cys Thr 130 135 140
Ser Gly Gin Ser Leu Val His He Asn Gly Asn Tlir Tyr Leu His Trp 145 150 155 160
Tyr Leu Gin Lys Pro Gly Gin Ser Pro Lys Leu Leu lie Tyr Lys Val 165 170 175
Ser Asn Leu Phe Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser 180 385 190
Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys He Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu 195 200 205
Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gin Ser Thr His Phe Pro Phe Thr Phe Gly 210 215 220
Thr Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys Arg 225 230 - 240- 158366-序列表.doc 201211252 <210> 282 <211> 252 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 282
Gin Val Gin Leu Gin Gin Ser Gly Ala GIu Leu Val Arg Pro Gly Thr 15 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Gly Fhe lie Asn Tyr 20 25 30
Leu lie Glu Trp lie Lys Gin Aig Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp lie 35 40 45
Gly Leu lie Asn Pro Gly Ser Asp Tyr Thr Asn Tyr Asn Glu Asn Phe 50 55 60 Ο
Lys Giy Lys Ala Tlir Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80
Met His Leu Ser Ser Leu Tbr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95
Ala Arg Arg Phe Gly Tyr Tyr Glv Ser Glv Asn Tyr Phe Asp Tyr Trp 100 105 110
Gly Gin Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro 115 120 125
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Gin Val Gin Leu Lys Glu Ser Gly Pro 130 135 140
Gly Leu Val Ala Pro Ser Gin Ser Leu Ser I3e Thr Cys Thr Val Ser 145 150 155 160
Gly Phe Ser Leu Thr Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gin Pro Pro 165 170 175 G】y Lys Gly Leu Glu Trp Leu Gly Met lie 丁rp Gly Asp Gly Ser Thr 180 185 190
Asp Tyr Asp Ser Thr Leu Lys Ser Arg Leu Ser lie Ser Lys Asp Asn 195 200 205
Ser Lys Ser Gin lie Phe Leu Lys Met Asn Ser Leu Gin Thr Asp Asp 210 215 220
Thr Ala Arg Tyr Tyr Cys Ala Arg Gla Trp His His Gly Pro Val Ala 225 230 235 240
Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala 245 250 <210> 283 -241 · 158366-序列表.doc 201211252 <211> 233 <212> FRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 283
Asp Val Val Met Thr Gin Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly 15 10 15
Asp Gin Ala Ser He Ser Cys Thr Ser Gly Gin Ser Leu Val His lie 20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gin Lys Pro Gly Gin Ser 35 40 45
Pro Lys Leu Leu lie Tyr Lys Val Ser Asn Leu Phe Ser Gly VaL Pro 50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Tbr Asp Phe Hir Leu Lys lie 65 70 75 80
Ser Arg Val Giu Ala Glu Asp Leu Gly Vai Tyr Phe Cys Ser Gin Ser 85 90 95
Thr His Fhe Pro Phe Thr Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys 100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Asp lie Val 115 120 125
Met Thr Gin Ser His Lys Phe Met Ser Thr Thr Val Gly Asp Arg Val 130 135 140
Ser lie Thr Cys Lys Ala Ser Gin Ala Val Ser Ser Ala Val Ala Trp 345 150 155 160
Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Ciln Ser Pro Lys Leu Leu lie Tyr Trp Ala 165 170 175
Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser 180 185 190
Val Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie His Asn Leu Gin AJa Glu Asp Leu 195 200 205
Ala Leu Tyr Tyr Cys Gin Gin His Tyr Ser ΊΙιγ Pro Phe Thr Phe Gly 210 215 220
Ser Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys Arg 225 230 <210> 284 <211> 255 <212> PRT <213>人工序列 <220> 15 83 66-序列表.doc - 242 - 201211252 <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 284
Glu Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 1 5 10 15
Ser Met Lys Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe lie Phe Scr Asn His 20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gin Ser Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ala Glu lie Arg Ser Lys Ser lie Asn Ser Ala Thr His Tyr Ala Glu 50 55 60
Ser Vai Lys Gly Arg Phe Thr He Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Ala 65 70 75 80 Ο
Val Tyr Leu Gin Met Thr Asp Leu Arg Thr Glu Asp Thr Gly Val Tyr 85 90 95
Tyr Cys Ser Arg Asn Tyr Tyr Gly Ser Thr Tyr Asp Tyr Trp Gly Gin 100 105 110
Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125
Phe Pro Lea Ala Pro Gin Val Gin Leu Gin Gin Ser Gly Ala Glu Leu 130 135 140
Val Arg Pro Gly Thr Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr 145 150 155 160
Gly Phe lie Asn Tyr Leu lie Glu Trp lie Lys Gin Arg Pro Gly Gin 165 170 175
Gly Leu Glu Trp He Gly Leu lie Asn Pro Gly Ser Asp Tyr Thr Asn 180 185 190
Tyr Asn Glu Asn Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser 195 200 205
Ser Ser Thr Ala Tyr Met His Leu Ser Ser L^u Thr Ser Glu Asp Ser 210 215 220
Ala Val Tyt Phe Cys Ala Arg Arg Phe Gly Tyr Tyr Gly Ser Giy Asn 225 230 235 240
Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser 245 250 255 <210> 285 <211> 233 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工·序列之描述：合成多肽 -243 - 158366-序列表.doc 201211252 <400> 285
Asp He Leu Leu Thr Gin Ser Pro Ala lie Leu Ser Val Ser Pro Gly 1 5 10 15
Glu Arg Val Ser Phe Ser Cys Arg Ala Ser Gin Phe Val Gly Ser Ser 20 25 30 lie His Trp Tyr Gin Gin Ar^ Thr Asn Gly Ser Pro Arg Leu Leu lie 35 40 45
Lys Tyr Ala Ser Glu Ser Met Ser Gly lie Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Scr lie Asn Thr Val Glu Ser 65 70 75 80
Glu Asp He Ala Asp Tyr Tyr Cys Gin Glu Ser His Ser Trp Pro Phe 85 90 95
Thr Phe Gly Ser Gly Thr Asn Leu Giu Val Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110
Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Asp Val Val Met Thr Gin Thr Pro 115 120 125
Leu Ser Lea Pro Val Ser Leu Gly Asp Gin Ala Ser lie wSer Cys Thr 130 135 140
Ser Gly Gin Ser Leu Val His He Asn Gly Asn Tlir Tyr Leu His Trp 145 150 155 160
Tyr Leu Gin Lys Pro Gly Gin Ser Pro Lys Leu Leu He Tyr Lys Val 165 170 175
Ser Asn Leu Phe Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser 180 185 190
Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu 195 200 205
Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gin Ser Thr His Phe Pro Phe Thr Phe Gly 210 215 220
Thr Gly Thr Lys Leu Glu He Lys Arg 225 230 <210> 2S6 <2il> 255 <212> PRT <2i3>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 2S6
Gin Val Gin Leu Gin Gin Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Thr 15 10 15 244- 158366-序列表.doc 201211252
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Gly Phe ile Asn Tyr 20 25 30
Leu Ile Giu Trp lie Lys Gin Arg Fro Gly Gin Gly Leu Glu Trp lie 35 40 45
Gly Leu Ile Asn Pro Gly Ser Asp Tyr Thr Asn Tyr Asn Glu Asn Phe 50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80
Met His Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95
Ala Arg Arg Phe Gly Tyr Tyr Gly Ser Gly Asn Tyr Phe Asp Tyr Trp 100 105 110
Gly Gin Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro 115 120 125
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Glu Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly 130 135 140
Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly Ser Met Lys Leu Ser Cys Val Ala Ser 145 150 155 160
Gly Phe Ile Phe Ser Asn His Trp Met Asn Trp Val Arg Gin Ser Pro 165 170 175
Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Glu Ile Arg Ser Lys Ser Ile Asn 180 185 190
Ser Ala Thr His Tyr Ala Glu Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser 195 200 205
Arg Asp Asp Ser Lys Ser Ala Val Tyr Leu Gin Met Thr Asp Leu Arg 210 215 220
Thr Glu Asp Thr Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Arg Asn Tyr Tyr Gly Ser 225 230 235 240
Thr Tyr Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser 245 250 255 <210> 287 <211> 233 <212> PRT <2]3>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 287
Asp Val Val Met Thr Gin Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Qly 1 5 10 15 -245 - 158366-序列表.doc 201211252
Asp Gin Ala Ser lie Ser Cys Thr Ser Gly Gin Ser Leu Val His lie 20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gin Lys Pro Gly Gin Ser 35 40 45
Pro Lys Leu Leu ile Tyi: Lys Val Ser Asn Leu Phe Ser Gly Va】Pro 50 55 60
Asp Arg Phe Ser Q\y Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie 65 70 75 80
Ser Arg Yal Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyx Phe Cys Ser Gin Ser S5 90 95
Thr His Phe Pro Phe Thr Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys 100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Asp lie Leu 115 120 125
Leu Thr Gin Ser Pro Ala lie Leu Ser Vai Ser Pro Gly Glu Arg Val 130 135 140
Ser Phe Ser Cys Arg Ala Ser Gin Phe Val Gly vSer Ser lie His Trp 145 250 155 160
Tyr Gin Gin Arg Thr Asn Gly Ser Pro Arg Leu Leu He Lys Tyr Ala 165 170 175
Ser Glu Ser Met Ser Gly lie Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser 180 185 190
Giy Thr Asp Phe Tht Leu Ser He Asn Thr Val Glu Ser Giu Asp lie 195 200 205
Ala Asp Tyr Tyr Cys Gin Glu Ser His Ser Trp Pro Phe Thr Phe Gly 210 215 220
Ser Gly Thr Asn Leu Glu Val Lys Arg 225 230 <210> 288 <211> 261 <212> PKT <2U3>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 288
Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Giy Gly Val Val Gin Pro Gly Arg 1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 -246- 158366-序列表.doc 201211252
Ala Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Asn Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ala Phe Met Ser Tyr Asp Gly Scr Asn Lys Tyr Ala Lys Asp Ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Scr Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Asp Arg Gly lie Ala Ala Gly Gly Asn Tyr Tyr Tyr Tyr Gly 100 105 110
Met Asp Val 丁rp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser 115 120 125
Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Gin Val Gin Leu Gin 130 〗35 140 Ο
Gin Scr Glj Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Thr Sex Val Lys Val Ser 145 150 155 160
Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Gly Phe lie Asn Tyr Leu lie Glu Trp lie 165 170 175
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Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met His Leu Ser Ser 210 215 220
Leu Thr Ser Gla Asp Scr Ala Val Tyr Phe Cys Ala Arg Arg Phe Gly 225 230 235 240
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Glu He Val Leu Thr Gin Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 15 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Axg Ala Ser Gin Scr Val Tyr Ser Tyr -247- 158366-序列表.doc 201211252 20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Giy Gin Ala Pro Arg Leu Leu He 35 40 45
Tyr Asp Ala Set Asn Arg Ala Br Giy He Pro Ala Arg Phe Ser Gly
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Scr Leu Glu Pro 65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gin Gin Arg Ser Asn Trp Pro Pro 85 90 95
Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp He Lys Arg Thr Va] Ala 100 105 110
Ala Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Asp Val Val Met Thr Gin Thr 115 120 125
Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly Asp Gin Ala Scr lie Ser Cys 130 135 140
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Trp Tyr Leu Gin Lys Pro Gly Gin Ser Pro Lys Leu Leu He Tyr Lys 165 170 175
Val Ser Asn Leu Phe Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly 180 185 190
Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp 195 200 205
Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gin Ser Thr His Phe Pro Phe Thr Phe 210 215 220
Gly Thr Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys Arg 225 230 <210> 290 <211> 261 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 290
Gin Val Gin Leu Gin Gin Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Thr 1 5 10 15
Scr Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Gly Phe lie Asn Tyr 20 25 30
Leu lie Glu Trp lie Lys Gin Arg Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp lie 35 40 45 •248· 158366-序列表.doc 201211252
Gly Leu lie Asn Pro Gly Ser Asp Tyr Thr Asn Tyr Asn Glu Asn Phe 50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80
Met His Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Scr Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95
Ala Arg Arg Phe Gly Tyr Tyr Gly Ser Gly Asn Tyr Phe Asp Tyr Trp 100 105 110
Gly Gin Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Fro 115 120 125
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly 130 135 140 Ο
Gly Val Vsl Gin Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser 145 150 155 160
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro 165 170 175
Gly Asn Cly Leu Glu Trp Val Ala Phe Met Ser Tyr Asp Gly Ser Asn 180 185 190
Lys Tyr Ala Lys Asp Ser Va! Lys Gly Arg Phe Hir lie Ser Arg Asp 195 200 205
Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu 210 215 220
Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Arg Gly He Ala Ala Gly 225 230 235 240
Gly Asn Tyr Tyr Tyr Tyr Giy Met Asp Val Trp Gly Gin Gly Thr Thr 245 250 255
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Asp Val Val Met Thr Gin Thr Pro Leu Ser Leu Fro Val Ser Leu Gly 15 10 15
Asp Gin Ala Ser lie Ser Cys Hir Ser Gly Gin Ser Leu Val His lie 20 25 30 -249- 158366-序列表.doc 201211252
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gin Lys Pro G3y G3n Ser 35 40 45
Pro Lys Leu Leu He Tyr Lys Val Ser Asn Leu Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60
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Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Giy Vai Tyr Phe Cys Ser Gin Ser 85 90 95
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Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Glu lie Val 115 120 125
Leu Thr Gin Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala 130 135 140
Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gin Ser Va! Tyr Ser 丁yr Leu AU 丁rp 145 150 155 160
Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Arg Leu Leu lie Tyr Asp Ala 165 170 175
Ser Asn Arg Ala Thr Gly lie Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser 180 〗85 190
Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe 195 200 205
Ala Val Tyr Tyr Cys Gin G]n Arg Ser Asn Trp Pro Pro Phe Thr Phe 210 215 220
Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp lie Lys Arg 225 230 <210> 292 <2U> 256 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 292
Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Arg 1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr 20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gin Ala Fro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 -250- 158366-序列表.doc 201211252
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Glu Gly Arg Phc Thr lie Set Arg Asp Asn Ala Lys ^sn Ser Leu Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Scr Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Lys Val Ser Tyr Leu Ser Thr Ala Ser Ser Leu Asp Tyr Trp Gly 100 105 110
Gin Gly Hir Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Gin Val Gin Leu Gin Gin Ser Gly Ala Glu 130 135 140
Leu Val Arg Pro Gly Thr Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly 145 150 155 160 Ο
Tyr Gly Phc lie Asn Tyr Leu lie Glu Trp lie Lys Gin Arg Pro Gly 165 170 175
Gin Gly Leu Glu Trp lie Gly Leu He Asn Fxo Gly Ser Asp Tyr Thr 180 185 190
Asn Tyr Asn Glu Asn Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys 195 200 205
Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met His Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp 210 215 220
Ser Ala Val Tyr Phe Cys Ala Arg Arg Phe Gly Tyr Tyr Gly Ser Gly 225 230 235 240
Asn Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Thr Leu l*hr Val Ser Sex 245 250 255 <210> 293 <211> 233 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 293
Asp Tie Gin Met Thr Gin Ser Pro Scr Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15
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Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly -251 - 158366-序列表.doc 201211252 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80
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Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110
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Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly Asp Gin Ala Ser He Ser Cys Thr 130 135 140
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Tyr Leu Gin Lys Pro Gly Gin Ser Pro Lys Leu Leu He Tyr Lys Val 165 170 175
Ser Asn Leu Phe Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser 180 185 190
Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys He Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu 195 200 205
Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gin Ser Thr His Phe Pro Phe Thr Phe Gly 210 215 220
Thr Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys Arg 225 230 <210> 294 <21]> 256 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 294
Gin Val Gin Leu Gin Gin Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Thr 15 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Gly Phe lie Asn Tyr 20 25 30
Leu He Glu Trp He Lys Gin Arg Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp lie 35 40 45
Gly Leu lie Asn Pro Gly Ser Asp Tyr Thr Asn Tyr Asn Glu Asn Phe 50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 -252 - 158366-序列表.doc 201211252
Met His Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala VaJ Tyr Phe Cys 85 90 95
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Gly Leu Val Gin Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser 145 150 155 160
Gly Fhe Thr Phe Asp Asp Tyr Ala Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro 165 170 175
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lie Asp Tyr Ala Asp Ser Val Glu Gly Arg Phe Thr lie Ser Axg Asp 195 200 205
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Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gin Ser 85 90 95
Thr His Phe Pro Phe Thr Phe Gly Ήη* Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys 100 105 110
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Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val 130 135 140
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Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie Tyr Ala Ala 165 170 175
Ser Thr Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser 180 185 190
Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro Glu Asp Val 195 200 205
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<210> 296 <211> 260 <212> PRT 人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 296
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Ala Val lie Ttp Ser Asp Gly Ser lie Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60
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Scr Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Thr Scr Val Lys Val Ser Cys 145 150 155 160
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O
Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met His Leu Ser Ser Leu 210 215 220
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Ser Gly Gin Ser Leu Val His lie Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp 145 150 155 160
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Ala Arg Arg Phe Gly Tyr Tyr Gly Ser Gly Asn Tyr Phe Asp Tyr Trp 100 105 110 - 256- 158366-序列表.doc 201211252
Gly Gin Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Scr Ala Ser Thr Lys Gly Pro 115 120 125
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Thr His Phe Pro Phe Thr Phe Gly Thr Gly ITir Lys Leu Glu lie Lys 100 105 110
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Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu lie Tyr Ala Ala 165 170 175
Ser Ήιγ Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser 180 185 190
Gly Thr Glu Phe lie Phe Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro Glu Asp Phe 195 200 205
Ala Ser Tyr Tyr Cys Leu Gin His Lys Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly 210 215 220
Giy Gly Thr Lys Val Glu He Lys Arg 225 230 <210> 300 <211> 250 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 300
Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu lie Gin Pro Gly Gly i 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Val Ser Arg Asn 20 25 30
Tyr Met Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40
Ser Val lie Tyr Ser Gly Asp Arg Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 50 55 60
Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 65 70 75 SO
Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95
Arg Gly Glu Gly Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu Vai Thr 100 105 110 - 258 - 158366·序列表.doc 201211252
Val Ser Ser Ala Scr Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro 115 120 125
Gin Val Gin Leu Gin Gin Ser G】y Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Thr 130 135 140
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Scr Gly Tyr Gly Phe lie Asn Tyc 145 150 155 160
Leu lie Glu Trp lie Lys Gin Arg Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp lie 165 170 175
Giy Leu lie Asn Pro Gly Ser Asp TyT Asn Tyr Asn Glu Asu Phe 180 185 190
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thx Ala Tyr 195 200 205
Met His Leu Ser Scr Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys 210 215 220
Ala Arg Arg Phe Gly Tyr Tyr Gly Ser Gly Asn Tyx Fbe Asp Tyr Trp 225 230 235 240
Gly Gin Gly Thr Tbr Leu Thr Val Ser Ser 245 250 <210> 301 <212> 232 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 301
Glu lie Val Met Thr Gin Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly 15 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gin Ser Val Ser Ser Asn 20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro GJy Gin Ala Pro Arg Leu Leu lie 35 40 45
His Gly Ala Ser lie Arg Ala Thr Gly Leu Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser G]y Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Ser 65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gin Gin Tyr Asn Tyr Trp Trp Thr 85 90 95
Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro 100 105 110
Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Asp Val Val Met Thr Gin Thr Pro Leu -259- 158366-序列表.doc 201211252 115 120 125
Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly Asp G]n Ala Ser lie Ser Cys Thr Ser 130 135 140
Gly Gin Ser Leu Val His lie Asn Gly Asn Tbr Tyr Leu His Trp Tyr 145 150 155 160
Leu Gin Lys Pro Gly Gin Ser Pro Lys Leu Leu lie Tyr Lys Val Ser 165 170 175
Asn Leu Phe Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly 180 185 190
Thr Asp Phe Thr Lea Lys lie Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly 195 200 205
Val Tyr Phe Cys Ser Gin Ser Thr His Phe Pro Phe Thr Phe Gly Thr 210 215 220
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Gin Val Gin Leu Gin Gin Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Thr 15 10 15
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Gly Leu lie Asn Fro Gly Ser Asp Tyr Thr Asn Tyr Asn G)a Asn Phe 50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80
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Gly Gin Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro 115 120 125
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Giy 130 135 140 -260- 158366-序列表.doc 201211252
Gly Leu lie Gin Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Scr 145 150 155 160
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Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Fhe Thr lie Ser Arg Asp Asn 195 200 205
Ser Lys Asn Thr Leu Tyt Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp 210 215 220 llir Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Glu Gly Gly Phe Asp Tyr Trp 225 230 235 240
Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 245 250 Ο <21〇> 303 <211> 232 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成多肽 <400> 303
Asp Val Val Met Thr Gin Thr Pro Leu Scr Leu Pro Val Scr Leu Gly 15 10 15
Asp Gin Ala Ser lie Ser Cys Thr Ser Gly Gin Ser Leu Val His lie 20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gin Lys Pro Gly Gin Ser 35 40 45
Pro Lys Leu Leu lie Tyr Lys Val Ser Asn Leu Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie 65 70 75 80
Ser Arg Vai Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gin Ser 85 90 95
Thr His Phe Pro Phe Thr Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Glu He Lys loo 105 no
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe 11c Phe Pro Pro Glu lie Val 115 120 125
Met Thr Gin Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly Glu Arg Ala 130 135 140 •261 - 158366-序列表.doc 201211252
Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gin Ser Val Ser Ser Asn Leu Ala 145 150 155
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Ser lie Arg Ala Tht Gly Leu Pro Ala Arg Phc Ser Gly Ser Gly Ser 380 185 190
Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr lie SeT Ser Leu Gin Ser Glu Asp Phc 195 200 205
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cgacatctct actlgccaac ctctgactgt ttcatcctgg actcttggct agactacggg accctcaaga agcatatgct tgttacccaa agcgatatct gagggtagtg aactctcctg ctgagttgtg cccagaataa ccctcacaaa taacaauga aatttatggc gtgtcccagg ggaaa£agag attaaacggg ttgaaattgt gtaaaataag acttgcccac ccaagatagg cgccaagcac atgttgccat atatctgggt atatctgggt atatctgggt gtatccgggt atatctgggt ctgggtagca ctgggtagca ctgg£tagca ctgggtagta ctgtcaaaca ggttaatgtc gcgcggaacc gcccct tctt tgggccctgt agttgacatc agcagacttt gaagctctta aggctacacc gggcattagc tcccgggtag cgggaagcat cccaccccat aaccatttta aatcttcficc aacagtaagg aatttggacg ccccttgggc aatccatggg tatgggcaac cagggaccaa tggacgccga gctccacgcc ggagtggggg ggtgtaataa aaaaccacta ggcgcgattg aggSttgUg gggtagcata agcataggct agtatatgct agcatatgct agcatatgct agcatatact tatgctatcc tatgctatcc taggctatcc tatgctatcc tgagaatttt atgataataa cctatttgtt cgcggggcag tccacatgtg cuataaatg gcagtctgtg caccaatgct aacgtcaatc aatagtgttt tagtatatac atgctatcga gagctgtcac gtcacaaggg tgcttctica tgtatgtgag gggggttcag aataaatact 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201211252 cccatggctg actaattttt tttatttatg cagaggccga ggccgcctcg gcctctgagc tattccagaa gtagtgagga ggcttttttg gaggcctagg cttttgcaaa aagctttgca aagatggata aagttttaaa cagagaggaa tctttgcagc taatggacct tctaggtctt gaaaggagtg ggaattggct ccggtgcccg tcagtgggca gagcgcacat cgcccacagt ccccgagaag ttggggggag gggtcggcaa ttgsaccggt gcctagagaa ggtggcgcgg ggtaaactgg gaaagtgatg tcgtgtactg gctccgcctt tttcccgagg gtgggggaga accgtatata agtgcagtag tcgccgtgaa cgttcttttt cgcaacgggt ttgccgccag aacacaggta astgccgtgt gtggttcccg cgggcctggc ctctttacsg gttatggccc ttgcgtgcct tgaattactt ccacctggct gcagtacgtg attcttgatc ccgagcttcg ggttggaagt gggtgggaga gttcgaggcc ttgcgcllaa ggagcccctt cgcctcgtgc ttgagttgag gcclggcctg ggcgctgggg ccgccgcgtg cgaatctggt ggcaccttcg cgcctgtctc gctgctttcg ataagtctct agccatttaa aatttttgat gacctgctgc gacgcttttt ttctggcaag atagtcttgt aaatgcgggc caagatctgc acactggtat ttcggttttt ggggccgcgg gcggcgacgg ggcccgtgcg tcccagcgca catgttcggc gaggcggggc ctgcgagcgc £gccaccgag aatcggacgg gggtagtctc aagctggccg 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201211252 gataataatg gtttcttaga cgtcaggtgg cacttttcgg ggaaatgtgc gcggaacccc tatttgttta tttttctaaa tacattcaaa tatgtatccg ctcatgagac aataaccctg ataaatgctt caataatatt gaaaaaggaa gagtatgagt attcaacatt tccgtgtcgc ccttattccc ttttttgcgg cattttgcct tcctgttttt gctcacccag aaacgctggt gaaagtaaaa gatgctgaag atcagttggg tgcacgagtg ggttacatcg aactggatct caacagcggt aagatccttg agagttttcg ccccgaagaa cgttttccaa tgatgagcac ttttaaagtt ctgctatgtg gcgcggtatt atcccgtgtt gacgccgggc aagagcaact cggtcgccgc atacactatt ctcagaatga citggttgag tactcaccag tcacagaaaa gcatcttacg gatggcatga cagtaagaga attatgcagt gctgccataa ccatgagtga taacactgcg gccaacttac ttetgacaac gatcggagga ccgaaggagc taaccgcttt tttgcacaac atgggggatc atgtaactcg ccttgatcgt tgggaaccgg agctgaatga agccatacca aacgacgagc gtgacaccac gatgcctgca gcaatggcaa caacgttgcg caaactatta actggcgaac tacttactct agcttcccgg caacaattaa tagactggat ggaggcggat aaagttgcag gaccacttct gcgctcggcc cttccggctg gctggtttat tgctgataaa tctggagccg gtgagcgtgg gtctcgcggt atcattgcag cactggggcc agatggtaag ccctcccgta tcgtagttat ctacacgacg gggagtcagg caactatgga tgaacgaaat agacagatcg ctgagatasg tgcctcactg attaagcatt ggtaactgtc agaccaagtt tactcatata tactttagat tgatttaaaa cttcatttti aatttaaaag gatctaggtg aagatccttt ttgataatct catgaccaaa atcccttaac gtgagttttc gttccactga gcgtcagacc ccgtagaaaa gatcaaagga tcttcttgag atcctttctt tctgcgcgta atctgctgct tgcaaacaaa aaaaccaccg ctaccagcgg tggtttgttt gccggatcaa gagctaccaa ctctttttcc gaaggtaact ggcttcagca gagcgcagat accaaatacc gttcttctag tgtagccgta gttaggccac cacttcaaga actctgtagc accgcctaca tacctcgctc tgctaatcct gttaccagtg gctgctgcca gtggcgataa gtcgtgtctt accgggttgg actcaagacg atagttaccg gataaggcgc agcggtcggg ctgaacgggg ggttcgtgca cacagcccag cttggagcga acgacctaca ccgaactgag atacctacag cgtgagctat gagaaagcgc cacgcttccc gaagggagaa aggcggacag gtatccggta agcggcaggg tcggaacagg agagcgcacg agggagcttc cagggggaaa cgcctggtat ctttatagtc ctgtcgggtt tcgccacctc tgacttgagc gtcgattitt gtgatgctcg tcaggggggc ggagcctatg gaaaaacgcc agcaacgcgg cctttttacg gttcctggcc ttttgctggc cttttgctca catgttcttt cctgcgttat cccctgattc tgtggataac cgtattaccg cctttgagtg agctgatacc gctcgccgca gccgaacgac cgagcgcagc gagtcagtga gcgaggaagc ggaagagcgc ccaatacgca aaccgcctct ccccgcgcgt tggccgattc attaatgcag ctggcacgac aggtttcccg actggaaagc gggcagtgag cgcaacgcaa ttaatgtgag ttagctcact cattaggcac cccaggcttt acactttatg cttccggctc gtatgttgtg tggaattgtg agcggataac aatttcacac aggaaacagc tatgaccatg attacgccaa gctctagcta gaggtcgagt ccctccccag 158366·序列表.doc • 267- 2760 2820 2880 2940 3000 3060 3120 3180 3240 3300 3360 3420 3480 3540 3600 3660 3720 3780 3840 3900 3960 4020 4080 4140 4200 4260 4320 4380 4440 4500 4560 4620 4680 4740 4800 4860 4920 201211252 caggcagaag tatgcaaagc atgcatcica attagtcagc aaccatagtc ccgcccctaa ctccgcccat cccgccccta actccgccca gttccgccca ttctccgccc catggctgac taaltttttt tatttatgca gaggccgagg ccgcctcggc ctctgagcla ttccagaagt agtgaggagg cttttttgga ggcctaggct tttgcaaaaa gctttgcaaa gatggataaa gtttiaaaca gagaggaatc tttgcagcta atggaccttc taggtcttga aaggagtggg aattggctcc ggtgcccgtc agtgggcaga gcgcacatcg cccacagtcc ccgagaagtt ggggggagfig gtcggcaatt gaaccggtgc ctagagaagg tggcgcgggg taaactggga aagtgatgtc gtgtactggc tccgcctttt tcccgagggt gggggagaac cgtatataag tgcagtagtc gccgtgaacg ttctttttcg caacgggttt gccgccagaa cacaggtaag tgccgtglgt ggttcccgcg ggcctggcct ctttacgggt tatggccctt gcgtgccttg aattacttcc acctggctgc agtacgtgat tcttgatccc gagcttcggg ttggaagtgg gtgggagagt tcgaggcctt gcgcttaagg agccccttcg cctcgtgctt gagttgaggc ctggcctggg cgctggggcc gccgcgtgcg aatctggtgg caccttcgcg cctgtctcgc tgctttcgat aagtctctag ccatttaaaa tttttgatga cctgctgcga cgcttttttt ctggcaagat agtcttgtaa atgcgggcca agatctgcac actggtattt cggtttttgg ggccgcgggc ggcgacgggg cccgtgcgtc ccagcgcaca tgttcggcga ggcggggcct gcgagcgcgg ccaccgagaa tcggacgggg gtagtctcaa gctggccggc ctgctctggt gcctggcctc gcgccgccgt gtatcgcccc gccctgggcg gcaaggctgg cccggtcggc accagttgcg tgagcggaaa gatggccgct tcccggccct gctgcaggga gctcaaaatg gaggacgcgg cgctcgggag agcgggcggg tgagtcaccc acacaaagga aaagggcctt tccgtcctca gccgtcgctt catgtgactc cacggagtac cgggcgccgt ccaggcacct cgattagttc tcgagctttt ggagtacgtc gtctttaggt tggggggagg £gttttatgc gatggagttt ccccacactg agtgggtgga gactgaagtt aggccagctt ggcacttgat gtaattctcc ttggaatttg ccctttttga gtttggatct tggttcattc tcaagcctca gacagtggtt caaagttttt ttcttccatt tcaggtgtcg tgaggaattc tctagagatc cctcgacctc gagatccatt gtgcccgggc gcaccatgga catgcgcgtg cccgcccagc tgctgggcct gctgctgctg tggttccccg sctcgcgatg c <210> 306 <211> 6513 <212> DMA <2i3>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成聚核苷酸 4980 5040 5100 5160 5220 5280 5340 5400 5460 5520 5580 5640 5700 5760 5820 5880 5940 6000 6060 6120 6180 6240 6300 6360 6420 6480 6521 60 120 180 240 300 <400> 306 caacccaagg aacaaggcca tggaaggcag agcaacaaca cacagaagct ctgcccccic cactggtgtg atagcagccc agtacgcggc acagctgcca ggtcactctg tctcataagt cgtcaaggcg cagcagctac ggtcacgcat ttcccgccct gacttctacc gmtggaga ctgagcctga gaagggagca cctctgagga cgggagccgt ccaccacacc cgcctgafica ccgtggagaa gcttcaagcc gacagtggcc ctccaaacaa fitggaagicc gacagtggcc 268 - 158366-序列表.doc
201211252 cctacagaat gttcatgagc ggccgctcga ggccggcaag gccggatccc ccgacctcga cctctggcta ataaaggaaa tttattttca ttgcaatagt gtgttggaat tttttgtgtc tctcactcgg aaggacatat gggagggcaa atcatttggt cgagatccct cggagatctc tagctagagg atcgatcccc gccccggacg aactaaacct gacucgaca tctctgcccc ttcttcgcgg ggcagtgcat gtaatccctt cagttggttg gtacaacttg ccaactgggc cctgttccac atgtgacacg gggggggacc aaacacaaag gggttctctg actgtagttg acatccttat aaatggatgt gcacatttgc caacactgag tggctttcat cctggagcag actttgcagt ctgtggactg caacacaaca ttgcctttat gtgtaactct tggctgaagc tcttacacca atgctggggg acatgtacct cccaggggcc caggaagact acgggaggct acaccaacgt caatcagagg ggcctgtgta gctaccgata agcggaccct caagagggca tta^caatag tgtttataag gcccccttgt taaccctaaa cgggtagcat atgcttcccg ggtagtagta tatactatcc agactaaccc taattcaata gcatatgtta cccaacggga agcatatgct atcgaattag ggttagtaaa agggtcctaa ggaacagcga tatctcccac cccatgagct gtcacggttt tatttacatg gggtcaggat tccacgaggg tagtgaacca ttttagtcac aagggcagtg gctgaagatc aaggagcggg cagtgaactc tcctgaatct 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201211252 ctttatgctt ccggctcgta tgttgtgtgg aattgtgagc ggataacaat ttcacacagg aaacagctat gaccatgatt acgccaagct clagctagag gtcgagtccc tccccagcag gcagaagtat gcaaagcatg catctcaatt agtcagcaac catagtcccg cccctaactc cgcccatccc gcccctaact ccgcccagtt ccgcccattc tccgccccat ggctgactaa ttttttttat ttatgcagag gccgaggccg cctcggcctc tgagctattc cagaagtagt gaggaggctt ttttggaggc ctaggctttt gcaaaaagct ttgcaaagat ggataaagtt ttaaacagag aggaatcttt gcagctaatg gaccttctag gtcttgaaag gagtgggaat tggctccggt gcccgtcagt gggcagagcg cacatcgccc acagtccccg agaagttggg SSgaggggtc ggcaattgaa ccggtgccta gagaaggtgg cgcggggtaa actgggaaag tgatgtcgtg tactggctcc gcctttttcc cgagggtggg ggagaaccgt atataagtgc agtagtcgcc gtgaacgttc tttttcgcaa cgggtttgcc gccagaacac aggtaagtgc cgtgtgtggt tcccgcgggc ctggcctcti tacgggttat ggcccttgcs tgccttgaat tacttccacc tggctgcagt acgtgattct tgatcccgag cttcgggttg gaagtgggtg ggagagttcg aggccttgcg cttaaggagc cccttcgcct cgtgcttgag ttgaggcctg gcctgggcgc tggggccgcc gcgtgcgaat ctggtggcac cttcgcgcct gtctcgctgc tttcgataag tctctagcca tttaaaattt ttgatgacct gctgcgacgc tuttttctg gcaagatagt cttgtaaatg cgggccaaga tctgcacact ggtatttcgg tttuggggc cgcgggcggc gacggggccc gtgcgtccca gcgcacatgt tcggcgaggc ggggcctgcg agcgcggcca ccgagaatcg gac^ggggta gtctcaagct ggccggcctg ctctggtgcc tggcctcgcg ccgccgtgta tcgccccgcc ctgggcggca aggctggccc ggtcggcacc asttgcgtga gcggaaagat ggccgcttcc cggccctgct gcagggagct caaaatggag gacgcggcgc tcgggagagc gggcgggtga gtcacccaca caaaggaaaa gggcctttcc gtcctcagcc gtcgcttcat gtgactccac ggagtaccgg gcgccgtcca ggcacctcga ttagttctcg agcttttgga gtacgtcgtc tttaggttgg ggggaggggt tttatgcgat ggagtttccc cacactgagt gggtggagac tgaagttagg ccagcttggc acttgatgta attctccttg gaatttgccc tttttgagtt tggatctlgg ttcattctca agcctcagac agtggttcaa agmttttc ttccattica ggtgtcgtga ggaattctct agagatccct cgacctcgag atccattgtg cccgggcgcc accatgactt ggaccccact cctcttcctc accctcctcc tccactgcac aggaagctta teg <210> 307 <211> 6515 <212> Wk <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成聚核苷酸 <400> 307 acggtggctg caccatctgt cttcatcttc ccgccatctg atgageagtt gaaatctgga actgcctctg ttgtgtgcct gctgaataac ttctatccca gagaggccaa agtacagtgg aaggtggata acgccctcca atcgggtaac tcccaggaga gtgtcacaga gcaggacagc 158366-序列表.doc -271· 4860 4920 4980 5040 5100 5160 5220 5280 5340 5400 5460 5520 5580 5640 5700 5760 5820 5880 5940 6000 6060 6120 6180 6240 6300 6360 6420 6480 6513
60 120 ISO 201211252 aaggacagca cctacagcct cagcagcacc ctgacgctga gcaaagcaga ctacgagaaa 240 cacaaagtct acgcctgcga agtcacccat cagggcctga gctcgcccgt cacaaagagc 300 ttcaacaggg gagagtgttg agcggccgct cgaggccggc aaggccggat cccccgacct 360 cgacctctgg ctaataaagg aaatttattt tcatfgcaat agigtgttgg aattttttgt 420 gtctctcact cggaaggaca tatgggaggg caaatcattt ggtcgagatc cctcggagat 480 ctctagctag agfiatcgatc cccgccccgg acgaactaaa cctgactacg acatctctgc 540 cccttcttcg cggggcagtg catgtaatcc cttcagttgg ttggtacaac itgccaactg 600 ggccctgttc cacatgtgac acgggggggg accaaacaca aaggggttct ctgactgtag 660 ttgacatcct tataaatgga tgtgcacatt tgccaacact gagtggcttt catcctggas 720 cagactttgc agtctgtgga ctgcaacaca acattgcctl tatgtgtaac tcttggctga 780 agctcttaca ccaatgctgg gggacatgta cctcccaggg gcccaggaag actacgggag 840 gctacaccaa cgtcaatcag aggggcctgt gtagctaccg ataagcggac cctcaagagg 900 gcattagcaa tagtgtttat aaggccccct tgttaaccct aaacgggtag catatgcttc 960 ccgggtagta gtatatacta tccagactaa ccctaattca atagcatatg ttacccaacg 1020 ggaagcatat gctatcgaat tagggttagt aaaagggtcc taaggaacag cgatatctcc 1080 caccccatga gctgtcacgg tttiatttac atggggtcag gaitccacga gggtaitgaa 1140 ccattttagt cacaagggca gtggctgaag atcaaggagc gggcagtgaa ctctcctgaa 1200 tcttcgcctg cttcttcatt ctccttcgtt tagctaatag aataactgct gagttsigaa 1260 cagtaaggts tatgtgaggt gctcgaaaac aaggtttcag fitgacgcccc cagaataaaa 1320 tttggacggg gggttcagtg gtggcattgt gctatgacac caaiataacc ctcacaaacc 1380 ccttgggcaa taaatactag tgtaggaatg aaacattctg aatatcttta acaalagaaa 1440 tccatggggt ggggacaagc cgtaaagact ggaigtccat ctcacacgaa tttatggcta 1500 tgggcaacac ataatcctag tgcaatatga tactggggtt attaagatgt stcccaggca 1560 £ggaccaaga caggtgaacc atsttgttac actctatttg taacaagggg aaagagagtg 1620 gacgccgaca gcagcggact ccactggttg tctctaacac ccccgaaaat taaacggggc 1680 tccacgccaa tggggcccat aaacaaagac aagtggccac tctttttttt gaaattgtgg 1740 agtgggggca cgcgtcagcc cccacacgcc gccctgcggt tttggactgt aaaataaggg 1800 tgtaataact tggctgattg taaccccgct aaccactgcg gtcaaaccac ttgcccacaa 1860 aaccactaat ggcaccccgg ggaatacctg cataagtagg tgggcgggcc aagatagggg 1920 c^cgattgct gcgatctgga ggacaaatta cacacacttg cgcctgagcg ccaagcacag 1980 ggttgttggt cctcatattc acgaggtcgc tgagagcacg gtgggctaat gttgccatgg 2040 gtagcatata ctacccaaat atctggatag catatgctat cctaatctat atctgggtag 2100 cataggctat cctaatctat atctgggtag catatgctat cctaatctat atctgggtag 2160 tatatgctat cctaatttat atctgggtag cataggctat cctaatctat atctgggtag 2220 catatgctat cctaatctat atctgggtag tatatgctat cctaatctgt aiccgggtag 2280 catatgctat cctaatagag attagggtag tatatgctat cctaatttat atctgggtag 2340 catatactac ccaaatatct ggatagcata tgctatccta aictatatct gggtagcata 2400 tgctatccta atctatatct gggtagcata ggctatccta atctatatct gggtagcata 2460 -272- 158366·序列表.doc
201211252 tgctatccta atctatatct gggtastata tgctatccta atttatatct gggtagcata ggctatccta atctatatct gggcagcata tgctatccta atctautct gggtagtata tgctatccta atctgtatcc gggtagcata tgctatcctc atgataagct gtcaaacatg agaattttct tgaagacgaa agggcctcgt gatacgccta ttlttatagg ttaatgtcat gataataatg gtttcttaga cgtcaggtgg cacttttcgg ggaaatgtgc gcggaacccc tatttgttta tttttctaaa tacattcaaa tatgtatccg ctcatgagac aataaccctg ataaatgctt caataatatt gaaaaaggaa gagtatgagt attcaacatt tccgtgtcgc ccttattccc ttttttgcgg cattttgcct tcctgttttt gctcacccag aaacgctggt gaaagtaaaa gatgctgaag atcagttggg tgcacgagtg ggttacatcg aactggatct caacagcggt aagatccttg a^agttttcg ccccgaagaa cgttttccaa tgatgagcac tittaaagtt ctgctatgtg gcgcggtatt atcccgtgtt gacgccgggc aagagcaact cggtcgccgc atacactatt ctcagaatga cttggttgag tactcaccag tcacagaaaa gcatcttacg gatggcatga cagtaagaga attatgcagt gctgccataa ccatgagtga taacactgcg gccaacttac ttctgacaac satcggagga ccgaaggagc taaccgcttt tttgcacaac atgggggatc atgtaactcg ccttgatcgt tgggaaccgg agctgaatga agccatacca aacgacgagc gtgacaccac gatgcctgca gcaatggcaa caacgttgcg caaactatta actggcgaac tacttactct agcttcccgg caacaattaa tagactggat ggaggcggat aaagttgcag gaccacttct gcgctcggcc cttccggctg gctggtttat tgctgataaa tctggagccg gtgagcgtgg gtctcgcggt atcattgcag cactggggcc agatggtaag ccctcccgta tcgtagttat ctacacgacg gggagtcagg caactatgga tgaacgaaat agacagatcg ctgagatagg tgcctcactg attaagcatt ggtaactgtc agaccaagtt tactcatata tactttagat tgatttaaaa cttcattttt aatttaaaag gatctaggtg aagatccttt ttgataatct catgaccaaa atcccttaac gtgagttttc gttccactga gcgtcagacc ccgtagaaaa gatcaaagga tctlcttgag atcctttttt tctgcgcgta atctgctgct tgcaaacaaa aaaaccaccg ctaccagcgg tggtttgttt gccggatcaa gagctaccaa ctctttttcc gaaggtaact ggcttcagca gagcgcagat accaaatact gttcttctag tgtagccgta gttaggccac cacttcaaga actctgtagc accgcctaca tacctcgctc tgctaatcct gttaccagtg gctgctscca gtggcgataa gtcgtgtctt accgggttgg actcaagacg atagttaccg gataaggcgc agcggtcggg ctgaacgggg ggttcgtgca cacagcccag ctiggagcga acgacctaca ccgaactgag atacctacag cgtgagctat gagaaagcgc cacgcttccc gaagggagaa aggcggacag gtatccggta agcggcaggg tcggaacagg agagcgcacg agggagcttc cagggggaaa cgcctggtat ctttatagtc ctgtcgggtt tcgccacctc tgacttgagc gtcgattttt gtgatgctcg tcaggggggc ggagcctatg gaaaaacgcc agcaacgcgg cctttttacg gttcctggcc Uttgctggc citttgctca catgttcttt cctgcgttat cccctgattc tgtggataac cgtatlaccg cctttgagtg agctgatacc gctcgccgca gccgaacgac cgagcgcagc gagtcagtga gcgaggaagc ggaagagcgc ccaatacgca aaccgcctct 158366·序列表.doc • 273 - 2520 2580 2640 2700 2760 2820 2880 2940 3000 3060 3120 3180 3240 3300 3360 3420 3480 3540 3600 3660 3720 3780 3840 3900 3960 4020 4080 4140 4200 4260 4320 4380 4440 4500 4560 4620 4680 201211252 ccccgcgcgt tggccgattc attaatgcag ctsgcacgac aggtttcccg actggaaagc gggcagtgas cgcaacgcaa ttaatgtgag ttagctcact cattaggcac cccaggcttt acactttatg cttccggctc gtaigttgtg tggaattgtg agcggataac aatttcacac aggaaacagc tatgaccatg attacgccaa gctctagcta gaggtcgagt ccctccccag caggcagaag tatgcaaagc atgcatctca attagtcagc aaccaiagtc ccgcccctaa ctccgcccat cccgccccta actccgccca gttccgccca ttctccgccc catggctgac taattttttt tatttatgca gaggccgagg ccgcctcggc clctgagcta ttccagaagt agtgaggagg cttttttgga ggcctaggct tttgcaaaaa gctttgcaaa gatggataaa gitttaaaca gagaggaatc tttgcagcta atggaccttc taggtcttga aaggagtggg aattggctcc ggtgcccgtc agtgggcaga gcgcacatcg cccacagtcc ccgagaaftt ggggggaggg gtcggcaatt £aaccggtgc ctagagaagg tggcgcgggg taaactggga aagtgatgtc gtgtactggc tccgcctttt tcccgagggt gggggagaac cgtatataag tgcagtagtc gccgtgaacg ttctttttcg caacgggttt gccgccagaa cacaggtaag tgccgtgtgt ggttcccgcg ggcctggcct ctttacgggt tatggccctt gcgtgccttg aattacttcc acctggctgc agtacgtgat tcttgatccc gagcttcggg ttggaagigg gtgggagagt tcgaggcctt gcgcttaagg agccccttcg cctcgtgctt gagttgaggc ctggcctggg cgctggggcc gccgcgtgcg aatctggtgg caccttcgcg cctgtctcgc tgctttcgat aagtctctag ccatttaaaa tttttgatga cctgctgcga cgcttttitt ctggcaagat agtctigtaa atgcgggcca agatctgcac actggtattt cggtttttgg ggccgcgggc ggcgacgggg cccgtgcgtc ccagcgcaca tgttcggcga ggcg^ggcct gcgagcgcgg ccaccgagaa tcggacgggg gtagtctcaa gctggccggc ctgctctggt gcctggcctc gcgccgccgt gtatcgcccc gccctgggcg gcaaggctgg cccggtcggc accagttgcg tgagcggaaa gatggccgct tcccggccct gctgcaggga gctcaaaatg gaggacgcgg cgctcgggag agcgggcggg tgagtcaccc acacaaagga aaaggecctt tccgicctca gccgtcgctt catgtgactc cacggagtac cgggcgccgt ccaggcacct cgattagttc tcgagctttt ggagtacgtc gtctttaggt tggggggagg ggttttatgc gatggagttt ccccacactg agtgggtgga gactgaagtt aggccagctt ggcacttgat gtaattctcc ttggaatltg ccctttttga gtttggatct tggttcattc tcaagcctca gacagtggtt caaagttttt ttcttccatt tcaggtgtcg tgaggaattc tctagagatc cctcgacctc gagatccatt gtgcccgsgc gcaccatgac ttggacccca ctcctcitcc tcaccctcct cctccactgc acaggaagct tatcg <210> 308 <211> 6519 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成聚核苷酸 <400> 308 caacccaagg ctgccccctc ggtcacictg ttcccgccct cclctgagga gcttcaagcc 1583 66-序列表.doc -274- 4740 4800 4860 4920 4980 5040 5100 5160 5220 5280 5340 5400 5460 5520 5580 5640 5700 5760 5820 5880 5940 6000 6060 6120 61S0 6240 6300 6360 6420 6480 6515 201211252 Ο aacaaggcca tggaaggcag agcaacaaca cacagaasct cctacagaat cctctggcta tctcactcgg tagctagagg ttcttcgcgg cctgttccac acatccttat actttgcagt tcttacacca acaccaacgt ttagcaatag ggtagtagta agcatatgct cccatgagct ttuagtcac tcgcctgctt taaggtgtat ggacgggggg tgggcaataa atggggtggg gcaacacata accaagacag gccgacagca acgccaatgg gggggcacgc aataacttgg cactaatggc gattgctgcg tgttggtcct gcatatacta aggctatcct atgctatcct atgctatcct atgctatcct cactggtgtg atagcagccc agtacgcggc acagcigcca gttcatgagc ataaaggaaa aa^gacatat atcgatcccc ggcagtgcat atgtgacacg aaatggatgt ctgtggactg atsctgeggg caatcagagg tgtttataag tatactatcc atcgaattag gtcacggttt aagggcagtg cttcattctc gtgaggtgct ttcagtggtg atactagtgt gacaagccgt atcctagtgc gtgaaccatg gcggactcca ggcccataaa gtcagccccc ctgattgtaa accccgggga atctggagga catattcacg cccaaatatc aatctatatc aatttatatc aatctatatc aatagagatt tctcataagt cgtcaaggcg cagcagctac ggtcacgcat ggccgctcga tttattttca gggagggcaa gccccggacg gtaatccctt gggggggacc gcacatttgc caacacaaca acalgtacct ggcctgtgta gcccccttgt agactaaccc ggttagtaaa tatttacatg gctsaagatc cttcgtttag cgaaaacaag gcattgtgct aggaatgaaa aaagactgga aatatgatac ttgttacact
Ct£gttgtCt caaagacaag acacgccgcc ccccgctaac atacctgcat caaattacac aggtcgctga tggatagcat tgggtagcat tgggtagcat tgfigtagtat agggtagtat gacttctacc ggagtggaga ctgagcctga gaagggagca ggccggcaag ttgcaatagt atcatttggt aaccaaacct cagttggttg aaacacaaag caacactgag ttgcctttat cccaggggcc gctaccgata taaccctaaa taattcaata agggtcctaa gggtcaggat aaggagcggg ctaatagaat gtttcaggtg atgacaccaa cattctgaat tgtccatctc tggggttatt ctatttgtaa ctaacacccc tggccactct ctgcggtttt cactgcggtc aagtaggtgg acacttgcgc gagcacggtg atgctatcct atgctatcct aggctatcct atgctatcct atgctatcct cgggagccgt ccaccacacc cgcctgagca ccgtggagaa gccggatccc gtgttggaat cgagatccct gactacgaca gtacaacttg gggttctctg tggctttcat gtgtaactct caggaagact agcggaccct cgggtagcat gcatatgita ggaacagcga tccacgaggg cagtgaactc aactgctgag acgcccccag tataaccctc atctttaaca acacgaattt aagatgtgtc caaggggaaa cgaaaattaa mttttgaa ggactgtaaa aaaccacttg gcgggccaag ctgagcgcca ggctaatgtt aatctatatc aatctatatc aatctatatc aatctgtatc aatttatatc gacagtggcc ctccaaacaa gtggaagtcc gacagtggcc ccgacctcga tttttgtgtc cggagatctc tctctgcccc ccaactgggc actgtagttg cctggagcag tggctgaagc acgggaggct caagagggca atgcttcccg cccaacggga tatctcccac cagtgaacca tcctgaatct ttgtgaacag aataaaattt acaaacccct atagaaatcc atggctatgg ccaggcaggg gagagtggac acggg^ctcc attgt£gagt ataagggtgt cccacaaaac ataggggcgc agcacagggt gccatgggta tgggtagcat tgggtagtat tgggtagcat cgggtagcat tgggtagcat 120 180 240 300 360 420 480 540 600 660 720 780 840 900 960 1020 1080 1140 1200 1260 1320 1380 1440 1500 1560 1620 1680 1740 im 1860 1920 1980 2040 2100 2160 2220 2280 2340 -275- 158366-序列表.doc 201211252 atactaccca aatatctgga tagcatatgc tatcctaatc tatatctggg tagcatatgc 2400 tatcctaatc tatatctggg tagcataggc taicctaatc tatatctggg tagcatatgc 2460 tatcctaatc tatatctggg tagtatatgc tatcctaatt tatatctggg tagcataggc 2520 tatcctaatc tatatctggg tagcatatgc tatcctaatc tatatctggg tagtatatgc 2580 tatcctaatc tgtaiccggg tagcatatgc tatcctcatg ataagctgtc aaacatgaga 2640 attttcttga agacgaaagg gcctcgtgat acgcctattt ttatagstta atgtcatgat 2700 aataatggtt tcttasacgt caggtggcac ttttcgggga aatgtgcgcg gaacccctat 2760 ttgittatti ttctaaatac attcaaatat gtatccgctc atgagacaat aaccctgata 2820 aatgciicaa taatattgaa aaaggaagag tatgagtatt caacatttcc gtgtcgcccl 2880 tattcccttt tttgcggcat tttgccttcc tgtttttgct cacccagaaa cgctggtgaa 2940 agtaaaagat gctgaagatc agttgggtgc acgagtgggt tacatcgaac tggatctcaa 3000 cagcggtaag atccttgaga gttttcgccc cgaagaacgt tttccaatga tgagcacttt 3060 taaagttctg ctatgtggcg cggtattatc ccgtgttgac gccgggcaag agcaactcgg 3120 tcgccgcata cactattctc agaatgactt ggttgagtac tcaccagica cagaaaagca 3180 tcttacggat ggcatgacag taagagaatt atgcagtgct gccataacca tgagtgataa 3240 cactgcggcc aacttacttc tgacaacgat cggaggaccg aaggagctaa ccgciuttt 3300 gcacaacatg ggggatcatg taactcgcct tgatcgttgg gaaccggagc tgaatgaagc 3360 cataccaaac gacgagcgtg acaccacgat gcctgcagca atggcaacaa cgttgcgcaa 3420 actattaact ggcgaactac ttactctagc ttcccggcaa caattaatag actggatgga 3480 ggcggataaa gttgcaggac cacttctgcg ctcggccctt ccggctggct ggttlattgc 3540 tgataaatct ggagccggtg agcgtgggtc tcgcggtatc attgcagcac tggggccaga 3600 tggtaagccc tcccgtatcg tagttatcta cacgacgggg agtcaggcaa ctatggatga 3660 acgaaataga cagatcgctg agataggtgc ctcactgatt aaacattggt aactgtcaga 3720 ccaagtttac tcatatatac tttagattga tttaaaactt catttttaat ttaaaaggat 3780 ctaggtgaag atcctttttg ataatctcat gaccaaaatc ccttaacglg agttttcgtt 3840 ccactgagcg tcagaccccg tagaaaagat caaaggatct tcttgagatc ctttttttct 3900 gcgcgtaatc tgctgcttgc aaacaaaaaa accaccgcta ccagcggtgg tttgtttgcc 3960 ggatcaagag ctaccaactc tttttccgaa gglaactggc ttcagcagag cgcagatacc 4020 aaatactgtt cttctagtgt agccgtagtt aggccaccac ttcaagaact ctgtagcacc 4080 gcctacatac ctcgctctgc taatcctgtt accagtggct gctgccagtg gcgataagtc 4140 gtgtcttacc gggttggact caagacgata gtiaccggat aaggcgcagc ggtcgggctg 4200 aacg£ggggt tcgtgcacac agcccagctt ggagcgaacg acctacaccg aactgagata 4260 cctacagcgt gagctatgag aaagcgccac gcttcccgaa gggagaaagg cggacaggta 4320 tccggtaagc ggcagggtcg gaacaggaga gcgcacgagg gagcttccag ggggaaacgc 4380 ctggtatctt tatagtcctg tcgggtttcg ccacctctga cttgagcgtc gatttttgtg 4440 atgctcgtca ggggggcgga gcctatggaa aaacgccagc aacgcggcct ttttacggtt 4500 cctggccttt tgctggcctt ttgctcacat gttctttcct gcgttatccc ctgattctgt 4560 -276- 158366·序列表.doc Ο
201211252 ggataaccgt attaccgcct ttgagtgagc tgataccgct cgccgcagcc gaacgaccga gcgcagcgag tcagtgagcg aggaagcgga agagcgccca atacgcaaac cgcctctccc cgcgcgtigg ccgattcatt aatgcagctg gcacgacagg tttcccgact ggaaagcggg cagtgascgc aacgcaatta atgtgagtta gctcactcat taggcacccc aggctttaca ctttatgctt ccggctcgta tgttgtgtgg aattgtgagc ggataacaat ttcacacagg aaacagctat gaccatgatt acgccaagct ctagctagag gtcgagtccc tccccagcag gcagaagtat gcaaagcatg catctcaatt agtcagcaac catagtcccg cccctaactc cgcccatccc gcccctaact ccgcccagtt ccgcccattc tccgccccat ggctgactaa UttttUat ttatgcagag gccgaggccg cctcggcctc tgagctattc cagaagtagt gaggaggctt ttttggafigc ctaggctttt gcaaaaagct ttgcaaagat ggataaagtt ttaaacagag aggaatcttt gcagctaatg gaccttctag gtcttgaaag gagtgggaat tggctccggt gcccgtcagt gggcagagcg cacatcgccc acagtccccg agaagttigg ggS^ggggtc ggcaattgaa ccggtgccta gagaaggtgg cgcggggtaa actgggaaag tgatgtcgtg tactggctcc gcctttttcc cgagggtggg ggagaaccgt atataagtgc agtagtcgcc gtgaacgttc tttttcgcaa cgggtttgcc gccagaacac aggtaagtgc cgtgtgtggt tcccgcgggc ctggcctctt tacgggttat ggcccttgcg tgccttgaat tacttccacc tggctgcagt acgtgattct tgatcccgag cttcgggttg gaagtgggtg ggagagttcg aggccttgcg cttaaggagc cccttcgcct cgtgcttgag ttgaggcctg gcctgggcgc tggggccgcc gcgtgcgaat ctggtggcac cttcgcgcct gtctcgctgc tttcgataag tctctagcca tttaaaattt ttgatgacct gctgcgacgc UUtUctg gcaagatagt cttgtaaatg cgggccaaga tctgcacact ggtatttcgg tttttggggc cgcgggcggc gacggggccc gtgcgtccca gcgcacatgt tcg£cgaggc jggggcctgcg agcgcggcca ccgagaatcg gacgggggta gtctcaagct ggccggcctg ctctggtgcc tggcctcgcg ccgccgtgta tcgccccgcc ctgggcggca aggctggccc ggtcggcacc agttgcgtga gcggaaagat ggccgcttcc cggccctgct gcagggagct caaaatggag gacgcggcgc tcgggagagc ggecgggtga gtcacccaca caaaggaaaa gggcctttcc gtcctcagcc gtcgcttcat gtgactccac ggagtacc£g gcgccgtcca ggcacctcga uagttctcg agcttttgga gtacgtcgtc tttaggttgg ggggaggggt tttatgcgat ggagtttccc cacactgagt gggtggagac tgaagttagg ccagcttggc acttgatgta attctccttg gaatttgccc tttttgagtt tggatcttgg ttcattctca agcctcagac agtggttcaa agtttttttc ttccatttca ggtgtcgtga ggaattctct agagatccct cgacctcgag atcGattgtg cccgggcgcc accatggaca tgcgcgtgcc cgcccagctg ctgggcctgc tgctgctgtg gttccccggc tcgcgatgc <210> 309 <211> 71S5 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>人工序列之描述：合成聚核苷酸 158366-序列表,doc •277- 4620 4680 4740 4800 4860 4920 4980 5040 5100 5160 5220 5280 5340 5400 5460 5520 5580 5640 5700 5760 5820 5880 5940 6000 6060 6120 6180 6240 6300 6360 6420 6480 6519 201211252 <400> 309 gcgtcgacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcaccct cctccaagag cacctctggg 60 ggcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg 120 iggaactcag gcgccctgac cagcggcgtg cacaccttcc cggctgtcct acagtcctca 180 ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcagcttggg cacccagacc 240 tacatctgca acgtgaatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagaa agligagccc 300 aaatcttgtg acaaaactca cacatgccca ccgtgcccag cacctgaagc cgcgggggga 360 ccstcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aa£gacaccc tcatgatctc ccggacccct 420 gaggtcacat gcgtggtEgt ggacgtgagc cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg 480 tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagtacaac 540 agcacgtacc gtgiggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc aggactggct gaatggcaag 600 gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc 660 aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccgcgaggag 720 atgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc 780 gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg 840 ctggactccg acsgctcctt cttcctctac agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg 900 cagcagg^ga acgtcttctc atgctccgig atscatgagfi ctctgcacaa ccactacacg 960 cagaagagcc tctccctgtc tccgggtaaa tgagcggcc^ ctcgaggccg gcaaggccgg 1020 atcccccgac ctcgacctct ggctaataaa ggaaatttat tttcattgca atagtgtgtt 1080 ggaatttttt gtgtclctca ctcggaagga catatgggag ggcaaatcat ttggtcgaga 1140 tccctcggag atctctagct agaggatcga tccccgcccc ggacgaacta aacctgacta 1200 cgacatctct gccccttcit cgcggggcag tgcatgtaat cccttcagtt ggttggtaca 1260 acttgccaac tgggccctgt tccacatgtg acacgfgggg ggaccaaaca caaaggggtt 1320 ctctgactgt agttgacatc cttataaatg gatgtgcaca tttgccaaca ctgagtggct 1380 ttcatccigg agcagacttt gcagtctgtg gactgcaaca caacattgcc tttatgtgla 1440 actcttggct gaagctctta caccaatgct gggggacatg tacctcccag gggcccagga 15(X) agactacggg aggctacacc aacgtcaatc agaggggcct gtgtagctac cgataagcgg 1560 accctcaaga gggcattagc aatagtgttt ataaggcccc cttgttaacc ctaaacgggt 1620 agcatatgct tcccgggtag tagtatatac tatccagact aaccctaatt caatagcata 3680 tgttacccaa cgggaagcat atgctatcga attagggtta gtaaaagggt cctaaggaac J740 agcgatatct cccaccccat gagctgtcac ggttttattt acatggggtc aggattccac 1800 gagggtagtg aaccatttta gtcacaaggg cagtggctga agatcaagga gcgggcagtg I860 aactctcctg aatcttcgcc tgcitcttca ttctccticg tttagctaat agaataactg 1920 ctgagttgtg aacagtaagg tgtatgtgag gtgctcgaaa acaaggtttc aggtgacgcc i960 cccagaataa aatttggacg gggggttcag tggtggcatt gtgctatgac accaatataa 2040 ccctcacaaa ccccttgggc aataaatact agtgtaggaa tgaaacattc tgaatatctt 2100 taacaataga aatccatggg gt£gggacaa gccgtaaaga ctggatgtcc atctcacacg 2160 aatttatggc tatgggcaac acataatcct agtgcaatat gatactgggg ttattaagat 2220 •278- 158366* 序列表.doc
201211252 gtgtcccagg cagggaccaa gacaggtgaa ccatgttgtt acactctatt tgtaacaagg ggaaagagag tggacgccga cagcagcgga ctccactggt tgtctctaac acccccgaaa attaaacggg gctccacgcc aatggggccc ataaacaaag acaagtggcc actctttttt ttgaaattgt ggagtggggg cacgcgtcag cccccacacg cciccctgcg gttttggact gtaaaaiaag ggtgtaataa cttggctgat tgtaaccccg ctaaccactg cggtcaaacc acttgcccac aaaaccacta atggcacccc ggggaatacc tgcataagta ggtgggcggg ccaagatagg ggcgcgattg ctgcgatctg gaggacaaat tacacacact tgcgcctgag cgccaagcac agggttgttg gtcctcatat tcacgaggtc gctgagagca cggtgggcta atgttgccat gggtagcata tactacccaa atatctggat agcatatgct atcctaatct atatctgggt agcataggct atcctaatct atatctgggt agcatatgct atcctaatct atatctgggt agtatatgct atcctaattt atatctgggt agcataggct atcctaatct atatctgggt agcatatgct atcctaatct atatctgggt agtatatgct atcctaatct gtatccgggt agcatatgct atcctaatag agattagggt agtatatgct atcctaattt atatctgggt agcatatact acccaaatat ctggatagca tatgctatcc taatctatat ctgggtagca tatgctatcc taatctatat ctgggtagca taggctatcc taatctatat ctgggtagca tatgctatcc taatctatat ctgggtagta tatgctatcc taatttatat ctgggtagca taggctatcc taatctatat ctgggtagca tatgctatcc taatctatat ctgggtagta tatgctatcc taatctgtat ccgggtagca tatgctatcc tcatgataag ctgtcaaaca igagaatttt cttgaagacg aaagggcctc gtgatacgcc tatttttata ggttaatgtc atgataataa tggtttctta gacgtcaggt ggcacttttc ggggaaatgt gcgcggaacc cctatttgtt tatttttcta aatacattca aatatgtatc cgctcatgag acaataaccc tgataaatgc ttcaataata ttgaaaaagg aagagtatga gtattcaaca tttccgtgtc gcccttattc ccttttttgc ggcattttgc cttcctgttt ttgctcaccc agaaacgctg gtgaaagtaa aagatgctga agatcagttg ggtgcacgag tgggttacat cgaactggat ctcaacagcg gtaagatcct tgagagtttt cgccccgaag aacgttttcc aatgatgagc acttttaaag ttctgctatg tggcgcggta ttatcccgtg ttgacgccgg gcaagagcaa ctcggtcgcc gcatacacta ttctcagaat gacttggttg agtactcacc agtcacagaa aagcatctta cggatggcat gacagtaaga gaattatgca gtgctgccat aaccatgagt gataacacig cggccaactt acttctgaca acgatcggag gaccgaagga gctaaccgct titttgcaca acatggggga tcatgtaact cgccttgatc gttgggaacc ggagctgaat gaagccatac caaacgacga gcgtgacacc acgatgcctg cagcaatg&c aacaacgttg cgcaaactat taactggcga actacttact ctagcttccc ggcaacaatt aatagactgg atggaggcgg ataaagttgc aggaccactt ccgcgctcgg cccttccggc tggctggttt attgctgata aatctggagc cgstgagcgt gggtctcgcg gtatcattgc agcactgggg ccagatggta agccctcccg tatcgtagtt atctacacga cggggagtca ggcaactatg gatgaacgaa atagacagat cgctgagata ggtgcctcac tgattaagca ttggtaactg tcagaccaag tttactcata tatactttag attgatttaa aacttcattt 158366·序列表.doc -279- 22S0 2340 2400 2460 2520 2580 2640 2700 2760 2820 2880 2940 3000 3060 3120 3180 3240 3300 3360 3420 3480 3540 3600 3660 3720 3780 3840 3900 3960 4020 4080 4140 4200 4260 4320 4380 4440 201211252 ttaatttaaa aggatctagg tgaagatcct ttttgataat ctcatgacca aaatccctta 4500 acgtgagttt tcgitccact gagcgtcaga ccccgtagaa aagatcaaag gatctlcttg 4560 agatcctttt tttctgcgcg taatctgctg cttgcaaaca aaaaaaccac cgctaccagc 4620 ggtggtttgt ttgccggatc aagagctacc aactcttttt ccgaaggtaa ctggcttcag 4680 cagagcgcag ataccaaata ctgttcttct agtgtagccg tagttaggcc accactlcaa 4740 gaactctgta gcaccgccta catacctcgc tctgctaatc ctgttaccag tggctgclgc 4800 cagtggcgat aagtcgtgtc ttaccgggtt ggactcaaga cgatagttac cggataaggc 4860 gcagcggtcg ggctgaacgg ggggttcgtg cacacagccc agcttggagc gaacgaccta 4920 caccgaactg agatacctac agcgtgagct atgagaaagc gccacgcttc ccgaagggag 4980 aaaggcggac aggtatccgg laagcggcag ggtcggaaca ggagagcgca cgagggagct 5040 tccaggggga aacgcctggt atctttatag tcctgtcggg tttcgccacc tctgacttga 5100 gcgtcgattt ttgtgatgct cgtcaggggg gcggagccta tggaaaaacg ccagcaacgc 5160 ggccttttta cggttcctgg ccttttgctg gccttttgct cacatgttct ttcctgcgtt 5220 atcccctgat tcigtgsata accgtattac cgcctttgag tgagctgata ccgctcgccg 5280 cagccgaacg accgagcgca gcgagtcagt gagcgaggaa gcggaagagc gcccaatacg 5340 caaaccgcct ctccccgcgc gttggccgat tcattaatgc agctggcacg acaggtitcc 5400 cgactggaaa gcgggcagtg agcgcaacgc aattaatgtg agttagctca ctcattaggc 5460 accccaggct ttacacttta tgcttccggc tcgtatgttg tgtggaattg tgagcggata 5520 acaatttcac acaggaaaca gctatgacca tgattacgcc aagctctagc tagaggtcga 5580 gtccctcccc agcaggcaga agtatgcaaa gcatgcatct caattagtca gcaaccatag 5640 tcccgcccct aactccgccc atcccgcccc taactccgcc cagttccgcc cattctccgc 5700 cccatggcig actaattttt ittatttatg cagaggccga ggccgcctcg gcctctgagc 5760 tattccagaa gtagtgagga ggctmttg gaggcctagg cttttgcaaa aagctttgca 5820 aagatggata aagttttaaa cagagaggaa tctttgcagc laatggacct tctaggtctt 5880 gaaaggagtg ggaattggct ccggtgcccg tcagtgggca gagcgcacat cgcccacagt 5940 ccccgagaag ttggggggag gggtcggcaa ttgaaccggt gcciagagaa ggtggcgcgg 6000 ggtaaactgg gaaagtgatg tcgtgiactg gctccgcctt tttcccgagg gtgggggaga 6060 accgtatata aglgcagtag tcgccgtgaa csttcttttt cgcaacgggt ttgccgccag 6120 aacacaggta agtgccgtgt gtggttcccg cgggcctggc ctctttacgg gttatggccc 6180 ttgcgtgcct tgaattactt ccacctggct gcagtacgtg attctt£atc ccgagcttcg 6240 ggttggaagt gggtgggaga gttcgaggcc ttgcgcttaa ggagcccctt cgcctcgtgc 6300 ttgagttgag gcctggcctg ggcgctgggg ccgccgcgtg cgaatctggt ggcaccttcg 6360 cgcctgtctc gctgctttcg ataagtctct agccatttaa aatttttgat gacctgctgc 6420 gacgcttttt ttctggcaag atagtcttgt aaatgcgggc caagatctgc acactggtat 6480 ttcggttttt ggggccgcgg gcggcgacgg ggcccgtgcg tcccagcgca catgttcggc 6540 sasgcggsgc ctgcgagcgc ggccaccgag aatcggacgg gggtagtctc aagctggccg 6600 gcctgctctg gtgcctggcc tcgcgccgcc gtgtatcgcc ccgccctggg cggcaaggct 6660 ggcccggtcg gcaccagttg cgtgagcgga aagatggccg cttcccggcc ctgctgcagg 6720 -280- 158366-序列表.doc 201211252 gagctcaaaa tggaggacgc ggcgctcggg agagcgggcg ggtgagtcac ccacacaaag gaaaagggcc tttccgtcct cagccgtcgc ttcatgtgac tccacggagt acc^ggcgcc gtccaggcac ctcgattagt tctcgagctt ttggagtacg tcgtctttag gttgggggga ggggttttat gcgatggagt ttccccacac tgagtgggtg gagactgaag uaggccagc ttggcacttg atgtaattct ccttggaatt tgcccttttt gagtttggat cttggttcat tctcaagcct cagacagtgg ttcaaagttt ttttcttcca tttcaggtst cgtgaggaat tctctagaga tccctcgacc tcgagatcca ttgtgcccgg gcgccaccat ggagtttggg clgagctggc tttttctt£t cgcgatttta aaaggtgtcc agtgc
O -281- 6780 6840 6900 6960 7020 7080 7140 7185 158366-序列表.d〇c

Claims (1)

  1. 201211252 七、申請專利範圍： 1. 一種能夠結合兩個抗原且包含第一及第二多肽鏈之結合 蛋白，其中該第一多肽鏈包含第一 VDl-(Xl)n-VD2-C-(X2)n，其中 VD1為第一重鏈可變區域； VD2為第二重鏈可變區域； C為重鏈恆定區域； XI為連接子，限制條件為XI不為CH1 ;及 () X2為Fc區；及 其中該第二多肽鏈包含第二VDl-(Xl)n-VD2-C-(X2)n， 其中 VD 1為第一輕鏈可變區域； VD2為第二輕鏈可變區域； C為輕鍵恆定區域； XI為連接子； X2不包含Fc區；及 Q 其中η為0或1，及 其中該結合蛋白能夠結合TNF與NGF ; TNF與SOST ; TNF與 PGE2 ;或 TNF與 LPA ; 其中： (a)該第一重鏈可變區域與該第二重鏈可變區域之 間的XI為ASTKGP (SEQ ID NO: 21)且該第一輕鏈可變 區域與該第二輕鏈可變區域之間的XI為TVAAPSVFIFPP (SEQ ID NO: 14)； 158366.doc 201211252 (b) 該第一重鏈可變區域與該第二重鏈可變區域之 間的 XI 為 ASTKGPSVFPLAP (SEQ ID NO: 22)且該第 一輕鏈可變區域與該第二輕鏈可變區域之間的XI為 TVAAP (SEQ ID NO: 13);或 (c) 該第一重鏈可變區域與該第二重鏈可變區域之 間的 XI 為 ASTKGPSVFPLAP (SEQ ID NO: 22)且該第 一輕鏈可變區域與該第二輕鏈可變區域之間的XI為 TVAAPSVFIFPP (SEQ ID NO: 14)。 2.如請求項1之結合蛋白，其中該結合蛋白包含兩個第一 多肽鍵及兩個第二多肽鍵。 3 . —種能夠結合兩個抗原且包含四個多狀鍵之結合蛋白， 其中兩個多肽鏈包含VDl-(Xl)n-VD2-C-(X2)n，其中 VD1為第一重鏈可變區域； VD2為第二重鏈可變區域； C為重鏈恆定區域； XI為連接子，限制條件為XI不為CH1 ; X2為Fc區； 且η為1 ;及 其中兩個多肽鏈包含VDl-(Xl)n-VD2-C-(X2)n，其中 VD1為第一輕鏈可變區域； VD2為第二輕鏈可變區域； C為輕鏈恆定區域； XI為連接子； X2不包含Fc區；及 158366.doc 201211252 η為0或1 ; 其中該結合蛋白能夠結合TNF與NGF ; TNF與SOST ; TNF與 PGE2 ;或 TNF與 LPA ; 其中： (a)該第一重鏈可變區域與該第二重鏈可變區域之 間的XI為ASTKGP (SEQ ID NO: 21)且該第一輕鏈可變 區域與該第二輕鏈可變區域之間的XI為TVAAPSVFIFPP (SEQ ID NO: 14); O (b)該第一重鏈可變區域與該第二重鏈可變區域之 間的 XI 為 ASTKGPSVFPLAP (SEQ ID NO: 22)且該第 一輕鏈可變區域與該第二輕鏈可變區域之間的XI為 TVAAP (SEQ ID NO: 13);或 (c)該第一重鏈可變區域與該第二重鏈可變區域之 間的 XI 為 ASTKGPSVFPLAP (SEQ ID NO: 22)且該第 一輕鏈可變區域與該第二輕鏈可變區域之間的又1為 TVAAPSVFIFPP (SEQ ID NO: 14)。 〇 4. 一種能夠結合兩個抗原且包含四個多肽鏈之結合蛋白， 其中兩個多肽鏈包含VDl-(Xl)n-VD2-C-(X2)n，其中 VD1為第一重鏈可變區域； VD2為第二重鏈可變區域； C為重鏈恆定區域； XI為連接子，限制條件為XI不為CH1 ; X2為F c區，及 η為0或1 ;及 158366.doc 201211252 其中兩個多肽鏈包含VDl-(Xl)n-VD2-C-(X2)n，其中 VD1為第一輕鏈可變區域； VD2為第二輕鏈可變區域； C為輕鏈恆定區域； XI為連接子； X2不包含Fc區；及 η為0或1 ; 其中該結合蛋白能夠結合TNF、NGF、SOST、PGE2或 LPA，及 其中： (a) 該第一重鏈可變區域與該第二重鏈可變區域之 間的XI為ASTKGP (SEQ ID NO: 21)且該第一輕鏈可變 區域與該第二輕鏈可變區域之間的XI為TVAAPSVFIFPP (SEQ ID NO: 14)； (b) 該第一重鏈可變區域與該第二重鏈可變區域之 間的 XI 為 ASTKGPSVFPLAP (SEQ ID NO: 22)且該第 一輕鏈可變區域與該第二輕鏈可變區域之間的XI為 TVAAP (SEQ ID NO: 13);或 (c) 該第一重鏈可變區域與該第二重鏈可變區域之 間的 XI 為 ASTKGPSVFPLAP (SEQ ID NO: 22)且該第 一輕鏈可變區域與該第二輕鏈可變區域之間的XI為 TVAAPSVFIFPP (SEQ ID NO: 14)。 5.如請求項1、3或4之結合蛋白，其中該等重鏈可變區域 中至少一者包含來自SEQ ID NO: 28 ' 30、32、34、36、 158366.doc 201211252 38、40、42、44或46中任一者的三個CDR序列；且其中 該等輕鏈可變區域中至少一者包含來自SEQ ID NO: 29、 31、33、35、37、39、41、43、45 或 47 中任一者的三個 CDR序列。 6.如請求項1、3或4之結合蛋白，其中該VD1重鏈可變區域 及該VD2重鏈可變區域獨立地包含胺基酸序列SEq m NO: 28、30、32、34、36、38、40、42、44 或 46 ;且其 中該VD1輕鏈可變區域及該vd2輕鏈可變區域獨立地包 含胺基酸序列 SEq ID NO: 29、31、33、35、37、39、 41、43、45或47。 7·如咕求項1、3或4之結合蛋白，其中該Fc區為變異序列 F 〇 (¾ 〇 8· 士”月求項1、3或4之結合蛋白，其中該^區來自IgG1、 、IgG3、IgG4、IgA、IgM、IgE 或 IgD。 9. 如明求項丨、3或4之結合蛋白，其中該結合蛋白具有至 少一種由該第一親本抗體或其抗原結合部分或該第二親 本抗體或其抗原結合部分展現之所要特性。 10. 如哨求項9之結合蛋白，其中該所要特性為抗原特異 性、對抗原之親和力、效能、生物功能、抗原決定基識 別生穩定性、溶解度、生產效率、免疫原性、藥物動 力學、生物可用性、組織交叉反應性或直系同源抗原結 合性。 11 ·如請求項1、2 4 旦 ^ 3或4之結合蛋白，其中如表面電漿子共振 、 、、、° 口蛋白對该抗原具有以下締合速率常數 158366.doc 201211252 (K〇n):至少約1〇2 】 '/r-1 -i s ;至少約 10 JVrV1 . Ζί , , Μ s ;至少約ΐο5!^!」 ，至少約104 12.如請求項卜3或4之二;或至少約1〇6M_V。 斛旦、<、、'°合蛋白’其中如表面雷將2 U上 所里剛，該結合β U纟面電毁子共振 (K0ff):最多約ΗΤ3 -丨 原有以下解離速率常數 或最多約10、' S ;最多約最多約10、' 13·如請求項i、3或 所量剩，該^蛋6。5蛋白’其中如表面電毁子共振 最多約…ι/最該抗原具有以下解離常數（Kd): M。 、 M，最多約10 12 Μ ;或最多1〇-13 14· 一種結合蛋白結合物，其包含如請求項卜3或4之結合 蛋白’該結合蛋白結合物進一步包含免疫黏附分子、顯 影剤、治療劑或細胞毒性劑。 15·如研求項14之結合蛋白結合物，其中該顯影劑為放射性 心、酶、螢光標記、發光標記、生物發光標記、磁性 標記或生物素。 16·如請求項15之結合蛋白結合物，其中該放射性標記為 3H、14C、％、9〇γ、99Tc、l"In、1251、…j、⑺匕、 166H〇或 153sm。 17.如請求項14之結合蛋白結合物，其中該治療劑或細胞毒 性劑為抗代謝物、烷基化劑、抗生素、生長因子、細胞 激素、抗血管生成劑、抗有絲分裂劑、蒽環黴素 (anthracycline)、毒素或細胞〉周亡劑。 158366.doc 201211252 18. 如請求項1、3或4之結合蛋白，其中該結合蛋白為結晶 結合蛋白。 19. 如請求項18之結合蛋白，其中該晶體為無載劑醫藥控制 釋放晶體。 20. —種經分離核酸，其編碼如請求項5之結合蛋白胺基酸 序列。 2 1. —種載體，其包含如請求項20之經分離核酸。 22. 如請求項21之載體，其中該載體為pcDNA、pTT、 Ο ρΤΤ3、pEFBOS、pBV、pJV、pcDNA3.1 TOPO、pEF6 TOPO、pBJ 或 pHybE。 23. —種宿主細胞，其包含如請求項21之載體。 24. 如請求項23之宿主細胞，其中該宿主細胞為原核細胞。 25. 如請求項24之宿主細胞，其中該宿主細胞為大腸桿菌 (E.coli)。 26. 如請求項23之宿主細胞，其中該宿主細胞為真核細胞。 27. 如請求項26之宿主細胞，其中該真核細胞為原生生物細 ❹ 胞、動物細胞、植物細胞、哺乳動物細胞、禽類細胞、 昆蟲細胞或酵母細胞。 28. 如請求項27之宿主細胞，其中該哺乳動物細胞為CHO細 胞。 29. 如請求項27之宿主細胞，其中該哺乳動物細胞為COS細 胞。 3 0.如請求項27之宿主細胞，其中該酵母細胞為釀酒酵母 158366.doc 201211252 包括由如請求項23至30中 ’在足以產生該結合蛋白 31. —種產生結合蛋白之方法，其 任一項之宿主細胞在培養基中 之條件下培養。 32. 33. 34. 35. 36. 如睛求項31之方法，廿丄 其中所產生之結合蛋白中5〇〇/0至 75%為雙特異性四價結合蛋白。 如晴求項31之方法，甘 其中所產生之結合蛋白中75%至 9〇%為雙特異性四價結合蛋白。 如請求項31之方法，其中所產生之結合蛋白中90%至 95%為雙特異性四價結合蛋白。 種'。口蛋白，其藉由如請求項3ι之方法產生。 種醫藥組合物’其包含如請求項1至19或35中任一項 之結合蛋白及醫藥學上可接受之載劑。 37.如請求項36之醫藥組合物， 治療劑。 其進一步包含至少一種其他 38.如請求項37之醫藥組合物 .Τ该具他治療劑為湖% & 、細胞毒性劑、血管生成抑制劑、激酶抑制劑、協民 ^激分子阻_、㈣分子阻斷劑、抗細胞激素抗體邊 功能片段、甲胺嗓吟（meth〇trexate)、環孢雙 (丫 SP〇nne)、雷帕黴素（raPamycin)、FK506、可偵浪 標記或報導體、TNF拮抗齊卜抗風濕藥、肌肉鬆弛劑、、' ::樂、非類固醇消炎藥⑽AID)、止痛劑、麻醉劑、 :"劑、局部麻醉劑、神經肌肉崎劑、抗微生物劑、 :牛皮癬藥、皮質類_、同化類固醇、紅血球生成 素、免疫接種、免疫球蛋白、免疫抑制劑q長激素、 J5S366.doc 201211252 激素替代藥物、放射性藥物、抗抑鬱劑、抗精神病藥、 刺激劑（stimulant)、哮喘藥物、β促效劑、吸入性類固 醇、腎上腺素或類似物、細胞激素或細胞激素枯抗劑。 39· -種治療個體之疾病或病症之方法，其藉由向該個體投 與如請求項！至19及35中任一項之結合蛋白以達成治 療。 40.如叫求項39之方法，其中該病症為類風濕性關節炎、骨 關節炎、青少年慢性關節炎、敗血性關節炎、萊姆關節 炎（Lyme arthritis)、牛皮癬性關節炎、反應性關節炎、 脊椎關節病、全身性紅斑狼瘡症、&羅恩氏病（Crow disease)、潰瘍性結腸炎、發炎性腸病、姨島素依賴性糖 尿病、曱狀腺炎、哮喘、過敏性疾病、牛皮癬、皮膚炎 性硬皮病、移植物抗宿主疾病、3官移植排斥反應、與 器官移植有關之急性或慢性免疫疾病、肉狀瘤病、動脈 粥樣硬化、散播性血管内凝血、川崎氏病（Kawasaki，s dlsease)、格雷氏病（Graveis disease)、腎病症候群、慢 性疲勞症候群、韋格納氏肉芽腫病（Wegener,s granulomatosis)、亨偌絲奇恩賴紫癜（Hen〇ch Sch〇eniein purpurea)、腎顯微性血管炎、慢性活動型肝炎、葡萄膜 炎、敗血性休克、中毒性休克症候群、敗血症症候群、 惡病質、感染性疾病、寄生蟲病、急性橫貫性脊髓炎、 亨廷頓氏舞蹈病（Huntingt〇nis chorea)、帕金森氏病 (Parkinson's diSease)、阿茲海默氏病（^^则^ disease)、中風、原發性膽汁性肝硬化、溶血性貧血、惡 158366.doc 201211252 性病、心臟衰竭、心肌梗塞、艾迪森氏病（Addison，s disease)、偶發性I型多腺體分泌不足症及π型多腺體分 泌不足症、施翁特氏症候群（Schmidt's syndrome)、成人 (急性）呼吸窘迫症候群、脫髮、斑形脫髮、血清陰性關 節病、關節病、萊特爾氏病（Reiter，s disease)、牛皮癖性 關節病、潰瘍性結腸炎關節病、腸病性滑膜炎、與彼衣 菌（chlamydia)、耶氏桿菌（yersinia)及沙門氏菌 (salmonella)相關之關節病、脊椎關節病、動脈粥樣瘤病/ 動脈硬化、異位性過敏、自體免疫大皰病、尋常天疱 瘡、葉狀天疱瘡、類天疱瘡、線狀IgA病、自體免疫溶 血性貧血、庫姆氏陽性溶血性貧血（c〇〇rnbs p〇sitive haemolytic anaemia)、後天惡性貧血、青少年惡性貧 血、肌痛腦炎/皇家自由病（Royal Free Disease)、慢性皮 膚黏膜念珠菌病、巨細胞動脈炎、原發性硬化性肝炎、 原因不明性自體免疫肝炎、後天免疫缺乏症候群、後天 免疫缺乏相關疾病、B型肝炎、c型肝炎、普通變異性免 疫缺乏症（通變異性低γ球蛋白血症）、擴張性心肌病、 雌性不孕症、卵巢衰竭、卵巢早衰、纖維變性肺病、原 因不明性纖維化肺泡炎、發炎後間質性肺病、間質性肺 炎、結締組織病相關之間質性肺病、混合結締組織病相 關之肺病、全身性硬化症相關之間質性肺病、類風濕性 關節火相關之間質性肺病、全身性紅斑狼瘡症相關之肺 病、皮肌炎/多肌炎相關之肺病、休格連氏病相關之肺病 (Sj6gren’s disease ass〇ciated lung disease)、僵直性脊椎 158366.doc •10. 201211252 炎相關之肺病、血管炎擴散性肺病、含鐵血黃素沈積症 (haemosiderosis)相關之肺病、藥物誘發之間質性肺病、 纖維化、放射性纖維化、阻塞性細支氣管炎、慢性嗜伊 紅血球性肺炎、淋巴細胞浸潤性肺病、感染後間質性肺 病、痛風性關節炎、自體免疫性肝炎、1型自體免疫性 肝炎（典型自體免疫或類狼瘡性肝炎）、2型自體免疫性肝 炎（抗LKM抗體肝炎）、自體免疫介導之低血糖症、B型 胰島素抗性伴黑色棘皮病、副甲狀腺低能症、與器官移 植有關之急性免疫疾病、與器官移植有關之慢性免疫疾 病、骨性關節病、原發性硬化性膽管炎、1型牛皮癬、2 型牛皮癬、特發性白血球減少病、自體免疫性嗜中性球 減少症、NOS型腎病、血管球性腎炎、腎顯微性血管 炎、萊姆病（lyme disease)、盤狀紅斑狼瘡、特發性或 NOS型雄性不育症、精子自體免疫、多發性硬化症（所有 亞型）、交感性眼炎、結締組織病繼發之肺高血壓、古巴 士德氏症候群（Goodpasture’s syndrome)、結節性多動脈 炎之肺表現、急性風濕熱、類風濕性脊椎炎、史提爾氏 病（Still’s disease)、全身性硬化症、休格連氏症候群、 尚安氏病（Takayasu's disease)/動脈炎、自體免疫性血小 板減少症、特發性血小板減少症、自體免疫性甲狀腺 病、甲狀腺機能亢進症、甲狀腺腫性自體免疫性曱狀腺 低月b症（橋本氏病（Hashim〇t〇's disease))、萎縮性自體免 疫性甲狀腺低能症、原發性黏液水腫、晶狀體源性葡萄 膜炎、原發性血管炎、白斑病急性肝病、慢性肝病、酒 158366.doc -11 - 201211252 精!·生：硬化、酒精誘發之肝損傷、膽汁鬱滯、特質性肝 病藥物誘發之肝炎、非酒精性脂肪性肝炎、過敏症及 哮而B群鏈球菌（GBS)感染、精神障礙（諸如抑鬱症及 精神分裂症）、Th2型及Thl型介導之疾病、急性及慢性 疼痛及諸如肺癌、乳癌、胃癌、膀胱癌、結腸癌、胰 腺癌、印巢癌、前列腺癌及直腸癌之癌症及造血系統惡 性疾病（白血病及淋巴瘤）、無P脂蛋白血症、手足發紺、 急性及慢性寄生或感染過程、急性白血病、急性淋巴母 、、田胞白血病（all)、急性骨髓白血病（AML)、急性或慢性 細菌感染、急性胰腺炎、急性腎衰竭、腺癌、心房異位 搏動、AIDS癡呆複合症、酒精誘發之肝炎、過敏性結膜 炎、過敏性接觸性皮膚炎、過敏性鼻炎、同種異體移植 排斥反應、α-1-抗胰蛋白酶缺乏症、肌肉萎縮性側索硬 化、貧血、心絞痛、前角細胞退化、抗cd3療法、抗磷 脂症候群、抗受體過敏反應、主動脈及周邊動脈瘤、主 動脈剝離、動脈性高金麼、動脈硬化症、動靜脈瘤、此 濟失調、心房纖維性顫動（持續性或陣發性）、心房撲 動、房室傳導阻滯、B細胞淋巴瘤、骨移植物排斥反 應、骨髓移植（BMT)排斥反應、束枝傳導阻滞、伯基特 氏淋巴瘤（Burkitt’s lymphoma)、燒傷、心律不整、心臟 頓抑症候群、心臟腫瘤、心肌病、心肺繞道發炎反應、 軟骨移植排斥反應、小腦皮質退化、小腦病症、奮亂性 或多灶性心房心動過速、與化學療法有關之病症、慢性 髓·細胞白jk病（CML)、慢性酒精中毒、慢性發炎性病 158366.doc •12- 201211252 變、慢性淋巴細胞性白血病（CLL)、慢性阻塞性肺病 (COPD)、慢性水揚酸中毒、結腸直腸癌、充血性心臟衰 竭、纟。膜炎、接觸性皮膚炎、肺原性心臟病、冠狀動脈 疾病、庫賈氏病（Creutzfeidt-Jakob disease)、培養物陰 性敗血症、囊腫性纖維化、細胞激素療法相關之病症、 拳擊員癡呆、脫髓鞘疾病、出血性登革熱（dengue hemorrhagic fever)、皮膚炎 '皮膚病病狀、糖尿病 (diabete、diabetes mellitus)、糖尿病性動脈硬化病、彌 /更性路易體疾病（Diffuse Lewy body disease)、擴張型充 血性心肌病、基底神經節病症、中年唐氏症候群（Down's Syndrome in middle age) '由阻斷CNS多巴胺受體之藥物 誘發的藥物誘發之運動障礙、藥物敏感、濕疹、腦脊髓 炎、心内膜炎、内分泌病、會厭炎、EB病毒感染 (epstein-barr virus infection)、肢端紅痛症、錐體外及小 腦病症、家族性噬血淋巴組織細胞瘤病、胎兒胸腺移植 排斥反應、弗里德賴希氏共濟失調（Friedreichls ataxia)、功能性周邊動脈病症、真菌性敗血症、氣性壞 疽、胃潰瘍、任何器官或組織的移植物排斥反應、革蘭 氏陰性敗jk症（gram negative sepsis)、革蘭氏陽性敗金 症、胞内生物體引起之肉芽腫、毛細胞白血病、哈洛弗 登-史巴兹氏症（Hallervorden-Spatz disease)、齊本氏甲 狀腺炎（hashimoto’s thyroiditis)、枯草熱、心臟移植排斥 反應、血色素沈著症、血液透析、溶血性尿毒癥候群/血 栓溶解性血小板減少性紫癜、出血、A型肝炎、希氏束 15S366.doc 13- 201211252 心律不整（His bundle arrythmias)、HIV 感染 /HIV 神經 病、霍奇金氏病（Hodgkin’s disease)、過動性運動病症、 過敏反應、過敏性肺炎、高血壓、運動不足運動病症、 下丘腦-垂體-腎上腺軸評估、特發性艾迪森氏病、特發 性肺纖維化、抗體介導之細胞毒性、衰弱（Asthenia)、嬰 兒脊髓性肌萎縮症、主動脈發炎、a型流感、電離輻射 曝露、虹膜睫狀體炎/葡萄膜炎/視神經炎、缺血再灌注 損傷、缺血性中風、青少年類風濕性關節炎、青少年脊 髓性肌萎縮症、卡波西氏肉瘤（KaP〇si，s sarcorna)、腎臟 移植排斥反應、退伍軍人病（legi〇nella)、利什曼體病 (leishmaniasis)、麻風病、皮質脊髓系統病變、脂性水 腫、肝移植排斥反應、淋巴水腫、癔疾、惡性淋巴瘤、 惡性組織細胞增多病、惡性黑素瘤 '腦膜炎、腦膜炎球 菌血症、代謝性/特發性疾病、偏頭痛、粒線體多系統病 症、/昆合結締組織病、單株γ球蛋白症、多發性骨趙 瘤、多系統退化（曼切、代哲因-托馬斯、史德爾格及馬 查多-約瑟夫（Mencel Dejerine-Thomas Shy-Drager and Machado-Joseph))、重症肌無力、禽細胞内分枝捍菌 (mycobacterium avium intracellulare)、結核分枝桿菌 (mycobacterium tuberculosis)、骨髓發育不良症候群、心 肌缺血病症、鼻咽癌、新生兒慢性肺病、腎炎、腎病、 神經退化性疾病、I型神經性肌肉萎縮、嗜中性球減少性 發熱、非霍奇金氏淋巴瘤（non_H〇dgkin's lymphoma)、腹 主動脈及其分支閉塞、阻塞性動脈病症、〇kt3療法、睾 158366.doc -14· 201211252 丸炎/副睾丸炎、睾丸炎/輸精管復通術、器官腫大、骨 質疏鬆症、胰腺移植排斥反應、胰腺癌、副腫瘤症候群/ 惡性高血鈣症、副曱狀腺移植排斥反應、骨盆發炎疾 病、常年性鼻炎、心包疾病、周邊動脈粥樣硬化疾病、 周邊企管疾病、腹膜炎、惡性貧血、卡氏肺囊蟲肺炎 (Pneumocystis carinii pneumonia)、肺炎、p〇emS症候群 (多發性神經病、器官腫大、内分泌病、單株^球蛋白症 及皮膚變化症候群）、灌注後症候群、泵後症候群、河工 心切開術後症候群、子癇前症、進行性核上性麻痹、原 發性肺高血壓、放射性療法、雷諾氏現象（Raynaud,s phenomenon)及疾病、雷諾氏病（Raynoud，s disease)、雷 弗素姆氏病（Refsum's disease)、規則性狹窄qRS心動過 速、腎血管性高血壓、再灌注損傷、限制型心肌病、肉 瘤、硬皮病、老年性舞蹈病、路易體型老年癡呆（senile dementia of Lewy body type)、血清陰性關節病、休克、 鐮形細胞性貧血、皮膚同種異體移植排斥反應、皮膚變 化症候群、小腸移植排斥反應、實體腫瘤、特異性心律 不整、脊椎共濟失調、脊髓小腦退化、鏈球菌肌炎、小 腦結構病變、亞急性硬化性全腦炎、昏厥、心血管系統 梅毒、全身性過敏、全身性發炎反應症候群、全身發作 型青少年類風濕性關節炎、T細胞或Fab ALL、毛細管擴 張、金栓閉塞性血管炎、血小板減少症、中毒、移植、 創傷/出血、III型過敏反應、IV型過敏、不穩定型心絞 痛、尿毒癥、尿敗血病、蓴麻疹、心臟瓣膜病、靜脈曲 158366.doc -15- 201211252 張、血官炎、靜脈疾病、靜脈血栓形成、心室纖維性顫 動、病毒及真菌感染、病毒性腦炎/無菌性腦膜炎、病毒 相關之噬血細胞症候群、韋尼克_科爾薩科夫症候群 (Wernicke-Korsakoff syndrome)、威爾遜氏病（Wils〇n，s disease)、任何器官或組織的異種移植物排斥反應、急性 冠狀動脈症候群、急性特發性多發性神經炎、急性發炎 性脫髓鞘性多神經根神經病、急性局部缺血、成人史提 爾氏病（adult StiU，s disease)、全身性過敏反應、抗磷脂 抗體症候群、再生不全性貧血、異位性濕疹、異位性皮 膚炎、自體免疫性皮膚炎、與鏈球菌感染有關之自體免 疫病症、自體免疫性腸病、自體免疫性聽力損失、自體 免疫淋巴組織增生症候群（ALPS)、自體免疫性心肌炎、 自體免疫性卵巢早衰、瞼炎、支氣管擴張、大皰性類天 疱瘡、心血管疾病、災難性抗磷脂症候群、乳糜瀉、頸 椎關節病、慢性局部缺血、瘢痕性類天疱瘡、具有多發 性硬化症風險之臨床單一症候群（CIS)、兒童期初發型精 神病症、淚囊炎、皮肌炎、糖尿病性視網膜病變、椎間 盤突出症、椎間盤脫垂、藥物誘發之免疫性溶血性貧 血、子宮内膜異位、眼内炎、上鞏膜炎、多形性紅斑、 重症多形性紅斑、妊娠類天疱瘡、格_巴氏症候群 (GUillain-Barre syndr〇me)(GBS)、枯草熱、休斯症候群 (Hughes syndrome)、特發性帕金森氏病、特發性間質性 肺炎、IgE介導之過敏症、免疫性溶血性貧血、勺 肌炎、感染性眼發炎疾病、發炎性脫髓鞘疾病、發炎性 158366.doc -16- 201211252 心臟病、發炎性腎病、IPF/UIP、虹膜炎、角膜炎、乾燥 性角膜結膜炎、庫斯毛爾氏病（Kussmaul disease)或庫斯 毛爾-米爾氏病（Kussmaul-Meier disease)、蘭德里氏麻痒 (Landry’s paralysis)、朗格罕氏細胞組織細胞增多病 (Langerhan’s cell histiocytosis)、網狀青斑、黃斑變性、 顯微性多灰管炎、白赫鐵列夫症（morbus bechterev)、運 動神經元病症、黏膜類天疱瘡、多器官衰竭、骨髓發育 不良症候群、心肌炎、神經根病症、神經病、非A非B型 肝炎、視神經炎、骨質溶解、卵巢癌、少關節型 JRA(pauciarticular JRA)、周邊動脈閉塞性疾病 (PAOD)、周邊血管疾病（PVD)、周邊動脈疾病（pad)、 靜脈炎、結節性多動脈炎（或結節性動脈周圍炎）、多軟 骨炎、風濕性多肌痛、白髮症、多關節型JRA、多内分 泌缺乏症候群 '多肌炎、泵後症候群、原發性帕金森氏 症、前列腺及直腸癌及造血惡性病（白血病及淋巴瘤）、 前列腺炎、純紅血球發育不全、原發性腎上腺機能不 全、復發性視神經脊髓炎、再狹窄、風濕性心臟病、 saPh〇(滑膜炎、痤瘡、膿皰病、骨肥厚及骨炎）、硬皮 病、繼發性殿粉樣變性病、休克肺、鞏膜炎、坐骨神經 痛、繼發性腎上腺機能不全、聚矽氧相關之結締組織疾 病、史奈登-威爾金森皮膚病（snedd〇n wilkins〇n dermatosis)、強直性脊椎炎、史蒂芬·瓊森症候群 (Stevens-Johnson syndrome ’ SJS)、全身性發炎反應症候 群、顧動脈炎、弓形蟲性視網膜炎、中毒性表皮壞死溶 158366.doc •17· 201211252 解、橫貫性脊髓炎、TRAPS(腫瘤壞死因子受體）、1型過 敏反應、II型糖尿病、尋常性間質性肺炎（UIP)、春季結 膜炎、病毒性視網膜炎、沃格特-小柳-原田症候群 (Vogt-Koyanagi-Harada syndrome)(VKH症候群）、濕式黃 斑變性或創傷癒合。 41 ·如請求項40之方法，其中向該個體之該投與為皮下、肌 肉内、靜脈内、關節内、支氣管内、腹内、囊内、軟骨 内、腔内、體腔内、小腦内、腦室内、結腸内、子宮頸 内、胃内、肝内、心肌内、骨内、骨盆内、心包内、腹 膜内、胸膜内、前列腺内、肺内、直腸内、腎内、視網 膜内、脊椎内、滑膜内、胸腔内、子宮内、膀胱内、快 速注射、經陰道、經直腸、經頰、舌下、鼻内或經皮投 與。 42. —種產生能夠結合兩個抗原之結合蛋白之方法，該方法 包括以下步驟 a) 獲得能夠結合第一抗原之第一親本抗體或其抗原 結合部分； b) 獲得能夠結合第二抗原之第二親本抗體或其抗原 結合部分； c) 建構包含VDl-(Xl)n-VD2-C-(X2)n之第一及第三多 肽鏈，其中 VD1為自該第一親本抗體或其抗原結合部分獲得之第 一重鏈可變區域； VD2為自該第二親本抗體或其抗原結合部分獲得之第 158366.doc -18- 201211252 二重鏈可變區域； c為重鏈恆定區域； X1為連接子’限制條件為X1不為Ch 1 ; X2為F c區；及 η為0或1 ;及 d)建構包含VDl-(Xl)n_VD：2_C_(X2)n之第二及第四多 肽鏈，其中 VD1為自該第一親本抗體或其抗原結合部分獲得之第 〇 一輕鏈可變區域； VD2為自該第二親本抗體或其抗原結合部分獲得之第 二輕鏈可變區域； C為輕鏈恆定區域； XI為連接子； X2不包含Fc區；及 η為0或1 ;及 e)表現該第一多肽鏈、該第二多肽鏈、該第三多 〇 肽鏈及該第四多肽鏈’使得產生能夠結合兩個抗原之 結合蛋白； 其中該結合蛋白能夠結合TNF、NGF、SOST、PGE2或 LPA，及 其中： (a)該第一重鏈可變區域與該第二重鏈可變區域之 間的XI為ASTKGP (SEQ ID NO: 21)且該第一輕鏈可變 區域與該第二輕鏈可變區域之間的XI為TVAAPSVFIFPP 158366.doc -19- 201211252 (SEQ ID NO: 14)； (b) 該第一重鏈可變區域與該第二重鏈可變區域之 間的 XI 為 ASTKGPSVFPLAP (SEQ ID NO: 22)且該第 一輕鏈可變區域與該第二輕鏈可變區域之間的XI為 TVAAP (SEQ ID NO: 13);或 (c) 該第一重鏈可變區域與該第二重鏈可變區域之 間的 XI 為 ASTKGPSVFPLAP (SEQ ID NO: 22)且該第 一輕鏈可變區域與該第二輕鏈可變區域之間的XI為 TVAAPSVFIFPP (SEQ ID NO: 14)。 43. 如請求項42之方法，其中該結合蛋白能夠結合TNF與 NGF ; TNF與 SOST ; TNF與 PGE2 ;或 TNF與 LPA。 44. 如請求項43之方法，其中該等重鏈可變區域中至少一者 包含來自 SEQ ID NO: 28、30、32、34、36、38、40、 42、44或46的三個CDR序列；且其中該等輕鏈可變區域 中至少一者包含來自SEQ ID NO: 29、31、33、35、37、 39、41、43、45或47的三個CDR序列。 45. 如請求項43之方法’其中該VD1重鏈可變區域及該VD2 重鏈可變區域獨立地包含胺基酸序列SEQ ID NO: 28、 30、32、34、36、38、40、42、44 或 46 ;且其中該 VD1 輕鏈可變區域及該VD2輕鍵可變區域獨立地包含胺基酸 序歹|J SEQ ID NO: 29、31、33、35、37、39、41、43、45 或 47。. 46. —種藉由免疫分析法測定測試樣品中至少一種抗原或其 片段之存在的方法， 158366.doc •20· 201211252 其中該免疫分析法包括使該測試樣品與至少一種結合 蛋白及至少一種可偵測標記接觸， 其中該至少一種結合蛋白包含如請求項1至19或35中 任一項之結合蛋白。 47.如請求項46之方法，其進一步包括： (i)使該測試樣品與該至少一種結合蛋白接觸，其中 該結合蛋白結合於該抗原或其片段上之抗原決定基，而 形成第一複合物； 〇 (ii)使該複合物與該至少一種可偵測標記接觸，其中 該可偵測標記結合於該結合蛋白，或該抗原或其片段上 未與δ亥結合蛋白結合之抗原決定基，而形成第二複合 物；及 (iii)基於該第二複合物中該可偵測標記所產生之信號 4貞測該測試樣品中該抗原或其片段之存在，其中該抗原 或其片段之存在與該可偵測標記所產生之信號直接相 關。 〇 48·如請求項46之方法，其進一步包括： (i)使該測試樣品與該至少一種結合蛋白接觸，其中 該結合蛋白結合於該抗原或其片段上之抗原決定基，而 形成第一複合物； (11)使該複合物與該至少一種可偵測標記接觸，其中 該可偵測標記與該抗原或其片段競爭結合於該結合蛋 白，而形成第二複合物；及 (iii)基於該第二複合物中該可偵測標記所產生之信號 158366.doc -21· 201211252 债測該測試樣品中該抗原或其片段之存在，其中該抗原 或其片段之存在與該可價測標記所產生之信號間接相 關。 49.如請求項46至48中任一頊之古、上 _ , 1 項之方法’其中該測試樣品來自 患者’且該m步包括診斷、預測或評估該患者之 治療性/預防性治療之效率，及 其中若該方法進-步包括評估該患者之治療性/預防性 治療之功效’則該方法視情況進一步包括根據需要修改 該患者之該治療性/預防性治療，以改良功效。 5〇.如請求項46至48中任-項之方法，其中該方法經修改配 合用於自動化系統或半自動化系統中。 51. 如請求項46至48中任一項之方法，其中該方法測定該樣 品中一種以上抗原之存在。 52. —種藉由免疫分析法測定測試樣品中抗原或其片段之量 或濃度的方法， 其中該免疫分析法（a)採用至少一種結合蛋白及至少一 種可谓測標記，及（b)包括比較該可偵測標記所產生之信 號與包含該抗原或其片段之對照組或校準物（calibrat〇r)， 其中該校準物視情況為一系列校準物的一部分，其中 各校準物與該系列中其他校準物不同之處在於該抗原或 其片段之濃度， 其中該至少一種結合蛋白包含如請求項1至19或35中 任一項之結合蛋白。 53.如請求項52之方法，其進一步包括： 158366.doc -22- 201211252 (i)使該測試樣品與該至少一種結合蛋白接觸，其中 該結合蛋白結合於該抗原或其片段上之抗原決定基，而 形成第一複合物； (11)使該複合物與該至少一種可偵測標記接觸，其中 該可债測標記結合於該抗原或其片段上未與該結合蛋白 結合之抗原決定基，而形成第二複合物；及 (iii)基於該第二複合物中該可偵測標記所產生之信號 測定s亥測試樣品中該抗原或其片段之量或濃度，其中該 0 抗原或其片段之量或濃度與該可偵測標記所產生之信號 成正比。 54. 如請求項52之方法，其進一步包括： (i) 使該測試樣品與該至少一種結合蛋白接觸，其中 該結合蛋白結合於該抗原或其片段上之抗原決定基，而 形成第一複合物； (ii) 使該複合物與該至少一種可偵測標記接觸，其中 該可偵測標記與該抗原或其片段競爭結合於該結合蛋 〇 白，而形成第二複合物；及 (ui)基於該第二複合物中該可偵測標記所產生之信號 測定該測試樣品中該抗原或其片段之量或濃度，其中該 抗原或其片段之存在與該可偵測標記所產生之信號成反 比。 55. 如請求項52至54中任一項之方法，其中該測試樣品來自 患者’且該方法進一步包括診斷、預測或評估該患者之 治療性/預防性治療之效率，及 158366.doc • 23- 201211252 其中右a方法進-步包括評估該患者之治療性/預防性 治療之功效’則該方法視情況進—步包括根據需要修改 該患者之該治療性/預防性治療，以改良功效。 56. 如請求項52至54中任-項之方法，其中該方法經修改配 合用於自動化系統或半自動化系統中。 57. 如請求項52至54中任一項之方法，其中該方法測定該樣 品中一種以上抗原之量或濃度。 58. —種分析測試樣品中抗原或其片段之存在、量或濃度之 套組，該套組包含 (a) 關於分析該測試樣品中該抗原或其片段之說明 書；及 (b) 至）種結合蛋白，其包含如請求項1至1 9或3 5中 任一項之結合蛋白。 59. 如明求項1、3或4之結合蛋白，其中該第一輕鏈可變區 域與該第二輕鏈可變區域之間的（Xl)n不為CL。 60. A吻求項42之方法，其中該第一輕鏈可變區域與該第二 輕鏈可變區域之間的（Χ1)η不為CL·。 158366.doc 24-
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