TWI541021B - Ｉｌ－１７結合蛋白 - Google Patents

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TWI541021B TW099106520A TW99106520A TWI541021B TW I541021 B TWI541021 B TW I541021B TW 099106520 A TW099106520 A TW 099106520A TW 99106520 A TW99106520 A TW 99106520A TW I541021 B TWI541021 B TW I541021B
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安娃 莫爾塔薩
布拉德福德Ｌ 麥可雷
優利亞 庫特司科伐
約翰Ｅ 梅默特
珍妮佛Ｍ 佩雷茲
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克雷格 瓦利司
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Description

IL-17結合蛋白
本發明係關於一種IL-17結合蛋白，且特定而言係關於其用於預防及/或治療諸如類風濕性關節炎、骨關節炎、牛皮癬、多發性硬化及其他自體免疫疾病之急性及慢性免疫疾病的用途。
相關申請案參考
本申請案為主張2009年3月5日申請之美國臨時申請案第61/209,272號之權益的非臨時申請案。
介白素-17A(IL-17A，與IL-17同義)為由T細胞系TH17產生之細胞激素。IL-17在自齧齒動物T細胞融合瘤選殖而來時最初被命名為「CTL相關抗原8(CTLA-8)」，且被識別為具有與狨疱疹病毒(herpesviurs saimiri，一種造成猴及兔之T細胞淋巴瘤之γ疱疹病毒)之第十三開放框架(ORF-13)同源之胺基酸序列的蛋白質(Rouvier等人,J. Immunol.,150 5445-5556(1993)；Yao等人,Immunity,3: 811-821(1995))。後來選殖出CTLA-8之人類等效物且命名為「IL-17」(Yao等人,J. Immunol.,155(12): 5483-5486(1995)；Fossiez等人,J. Exp. Med.,183(6): 2593-2603(1996))。IL-17之人類基因編碼包含19個胺基酸之信號序列及132個胺基酸之成熟結構域的155個胺基酸之多肽。
人類IL-17A為Mr為17,000道爾頓(dalton)之醣蛋白(Spriggs等人,J. Clin. Immunol.,17: 366-369(1997))。IL-17A可以同型二聚體形式或與同系物IL-17F複合形成雜二聚IL-17A/F而以雜二聚體形式存在。IL-17F(IL-24，ML-1)與IL-17A共有55%胺基酸一致性。IL-17A與IL-17F亦共有相同受體(IL-17R)，該受體表現於多種細胞上，包括血管內皮細胞、周邊T細胞、B細胞、纖維母細胞、肺細胞、骨髓單核細胞及骨髓基質細胞(Kolls等人,Immunity,21: 467-476(2004)；Kawaguchi等人,J. Allergy Clin. Immunol.,114(6): 1267-1273(2004)；Moseley等人,Cytokine Growth Factor Rev.,14(2): 155-174(2003))。已識別出其他IL-17同系物(IL-17B、IL-17C、IL-17D、IL-E)。此等其他家族成員與IL-17A共有不到30%之胺基酸一致性(Kolls等人,2004)。
IL-17A與促炎性反應之誘發有關且誘導或介導多種其他細胞激素、因子及介體之表現，該等其他細胞激素、因子及介體包括組織壞死因子-α(TNF-α)、IL-6、IL-8、IL-1β、粒細胞群落刺激因子(G-CSF)、前列腺素E2(PGE2)、IL-10、IL-12、IL-1R拮抗劑、白血病抑制因子及基質溶素(Yao等人,J. Immunol.,155(12): 5483-5486(1995)；Fossiez等人,J. Exp. Med.,183(6): 2593-2603(1996)；Jovanovic等人,J. Immunol.,160: 3513-3521(1998)；Teunissen等人,J. Investig. Dermatol.,111: 645-649(1998)；Chabaud等人,J. Immunol.,161: 409-414(1998))。IL-17亦在軟骨細胞及人類骨關節炎外植體中誘導產生氧化氮(Shalom-Barak等人,J. Biol. Chem.,273: 27467-27473(1998)；Attur等人,Arthritis Rheum.,40: 1050-1053(1997))。
經由IL-17在T細胞介導之自體免疫力中之作用，IL-17誘導細胞激素、趨化因子及生長因子(如上文所述)之釋放，其為嗜中性白血球積聚之重要局部指揮者(orchestrator)，且在軟骨及骨破壞中起作用。有越來越多的證據表明靶向IL-17信號傳導可能被證明適用於多種自體免疫疾病，包括類風濕性關節炎(RA)、牛皮癬、克羅恩氏病(Crohn's disease)、多發性硬化(MS)、牛皮癬性疾病、哮喘及狼瘡(SLE)(參見例如Aggarwal等人,J. Leukoc. Biol.,71(1): 1-8(2002)；Lubberts等人,「Treatment with a neutralizing anti-murine interleukin-17 antibody after the onset of collagen-induced arthritis reduces joint inflammation,cartilage destruction,and bone erosion」,Arthritis Rheum.,50: 650-659(2004))。
TNF在關節炎中之病原性作用由於TNF-α拮抗劑可在人類疾病中減輕炎症且限制軟骨損傷及骨質侵蝕進程而得以完全確定(van den Berg.「Anti-cytokine therapy in chronic destructive arthritis」,Arthritis Res.,3: 18-26(2001))。儘管TNF拮抗劑革新了RA療法，但相當一部分的患者不能對此等藥物作出充分反應。對TNF-α及IL-17之臨床前研究表明兩者在關節炎病理生理學方面有獨立及重疊之作用。然而，單獨的IL-17或TNF-α僅對促炎性基因表現發揮適度作用，而IL-17與TNF-α之組合則引起強烈的協同反應。此協同作用引起細胞激素(LeGrand等人,Arthritis Rheum.,44: 2078-2083(2001))及促炎性趨化因子(Chabaud等人,J. Immunol.,167: 6015-6020(2001))上調以及誘發軟骨及骨破壞(Van Bezooijen等人,Ann. Rheum. Dis.,61: 870-876(2002))。在對RA患者之2年前瞻性研究中，已證明TNF-α與IL-17之間的相互作用為人類之關節損傷進程之預測因子(Kirkham等人,Arthritis Rheum.,54: 1122-1131(2006))。另外，在RA中IL-17 mRNA含量幾乎與TNF-α表現無關，此指示IL-17阻斷可能補助TNF-α拮抗劑以便最佳地治療RA(Kohno等人,Mod. Rheumatol.,18: 15-22(2008))。
儘管自發現IL-17以來已在將近20年的論文作品中描述了多種針對此關鍵促炎性細胞激素之抗體，但仍需要可在發炎性反應及自體免疫病症中有效介導或中和IL-17活性之改良抗體。
本發明係關於結合人類IL-17(等同於「IL-17A」)之蛋白質。本發明之結合蛋白包括(但不限於)可結合人類IL-17及諸如TNF-α之另一標靶的抗體、其抗原結合部分及多價多特異性結合蛋白，諸如DVD-IgTM結合蛋白。本發明亦提供製備及使用本文所述之IL-17結合蛋白之方法以及各種可用於偵測樣本中之IL-17之方法或治療或預防個體之與IL-17活性有關或懷疑與IL-17活性有關之病症之方法中的組合物。本文所述之結合蛋白可結合人類IL-17A同型二聚體及/或IL-17A與IL-17F同系物之雜二聚體。
在本發明之一態樣中，提供一種結合蛋白，其包含能夠結合人類IL-17之抗原結合域，該抗原結合域包含至少一個包含選自由以下組成之群之胺基酸序列的CDR：
CDR-H1：X1-X2-X3-X4-X5(SEQ ID NO:919)，其中：X1為D或S；X2為Y；X3為E或G；X4為I、M、V或F；X5為H；
CDR-H2：X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12-X13-X14-X15-X16-X17(SEQ ID NO:920)，其中：X1為V；X2為T、I或N；X3為D、H或W；X4為P或不存在；X5為E、G或S；X6為S、N或D；X7為G；X8為G或T；X9為T；X10為L、A、T或F；X11為H或Y；X12為N；X13為P、Q或S；X14為K、A或N；X15為F或L；X16為D、K或R；且X17為G、D或S；
CDR-H3：X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12(SEQ ID NO:921)，其中：X1為Y、F或D；X2為Y、L、S或G；X3為K、T、R或Y；X4為Y或W；X5為E、D或I；X6為S、G或Y；X7為F、Y或T；X8為Y、F或M；X9為G、T或不存在；X10為M或不存在；X11為D；且X12為Y；
CDR-L1：X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12-X13-X14-X15-X16(SEQ ID NO:922)，其中：X1為S、K或R；X2為A或S；X3為S；X4為S或Q；X5為S或不存在；X6為L或不存在；X7為V或不存在；X8為H或不存在；X9為S或不存在；X10為S、N或不存在；X11為S、V或G；X12為I、N或S；X13為S、N、T或I；X14為Y或D；X15為M、V、L或I；且X16為C、A、H、Y或G；
CDR-L2：X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7(SEQ ID NO:923)，其中：X1為D、Y、K、A或H；X2為T、A或V；X3為S或F；X4為K、N或E；X5為L或R；X6為A、Y或F；且X7為S或T；
及
CDR-L3：X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9(SEQ ID NO:924)，其中：X1為Q、S或H；X2為Q；X3為R、D、S或G；X4為S、Y或T；X5為S、G或H；X6為Y、S、V或A；X7為P或不存在；X8為W、Y或L；且X9為T。
在一實施例中，本發明之結合蛋白包含至少一個包含選自由以下組成之群之胺基酸序列的CDR：SEQ ID NO:26之殘基31至35；SEQ ID NO:26之殘基50至66；SEQ ID NO:26之殘基99至110；SEQ ID NO:27之殘基24至33；SEQ ID NO:27之殘基49至55；SEQ ID NO:27之殘基88至96；SEQ ID NO:28之殘基31至35；SEQ ID NO:28之殘基50至66；SEQ ID NO:28之殘基99至108；SEQ ID NO:29之殘基24至34；SEQ ID NO:29之殘基50至56；SEQ ID NO:29之殘基89至97；SEQ ID NO:30之殘基31至35；SEQ ID NO:30之殘基50至66；SEQ ID NO:30之殘基99至108；SEQ ID NO:31之殘基24至34；SEQ ID NO:31之殘基50至56；SEQ ID NO:31之殘基89至97；SEQ ID NO:32之殘基31至35；SEQ ID NO:32之殘基50至65；SEQ ID NO:32之殘基98至109；SEQ ID NO:33之殘基24至39；SEQ ID NO:33之殘基55至61；SEQ ID NO:33之殘基94至101；SEQ ID NO:34之殘基31至35；SEQ ID NO:34之殘基50至66；SEQ ID NO:34之殘基99至110；SEQ ID NO:35之殘基24至33；SEQ ID NO:35之殘基49至55；SEQ ID NO:35之殘基88至96；SEQ ID NO:36之殘基31至35；SEQ ID NO:36之殘基50至66；SEQ ID NO:36之殘基99至108；SEQ ID NO:37之殘基24至34；SEQ ID NO:37之殘基50至56；SEQ ID NO:37之殘基89至97；SEQ ID NO:38之殘基31至35；SEQ ID NO:38之殘基50至65；SEQ ID NO:38之殘基98至107；SEQ ID NO:39之殘基24至39；SEQ ID NO:39之殘基55至61；及SEQ ID NO:39之殘基94至102。
在另一實施例中，本發明之IL-17結合蛋白包含至少3個上文所述之CDR。
在另一實施例中，IL-17結合蛋白包含至少3個選自由以下組成之可變域CDR組之CDR：
在另一實施例中，IL-17結合蛋白可包含至少2個上文所述之可變域CDR組。較佳的是，該2個可變域CDR組係選自由以下組成之群：VH 7D7 CDR組與VL 7D7 CDR組；VH 6C6 CDR組與VL 6C6 CDR組；VH 1D8 CDR組與VL 1D8 CDR組；VH 8B12 CDR組與VL 8B12 CDR組；VH 10F7 CDR組與VL 10F7 CDR組；及VH 5C5 CDR組與VL 5C5 CDR組；及VH 10G9 CDR組與VL 10G9組。
在其他實施例中，結合蛋白包含一或多個上文所述之CDR，進一步包含人類受體構架。較佳的是，該人類構架包含選自由以下組成之群的胺基酸序列：
IL-17結合蛋白可包含人類受體構架，該人類受體構架包含至少一個構架區胺基酸取代，其中該構架之胺基酸序列與該人類受體構架之序列至少65%一致且包含至少70個與該人類受體構架一致之胺基酸殘基。
在另一實施例中，IL-17結合蛋白包含人類受體構架，其中該受體構架在關鍵殘基處包含至少一個構架區胺基酸取代，該關鍵殘基係選自由以下組成之群：與CDR相鄰之殘基；糖基化位點殘基；稀有殘基(rare residue)；能與人類IL-13相互作用之殘基；能與CDR相互作用之殘基；典型殘基(canonical residue)；介於重鏈可變區與輕鏈可變區之間的接觸殘基；處於Vernier區域內之殘基；及在Chothia定義之可變重鏈CDR1與Kabat定義之第一重鏈構架之間重疊的區域中之殘基。
在一較佳實施例中，IL-17A結合蛋白可包含關鍵殘基，其中該關鍵殘基係選自由以下組成之群：2H、4H、24H、26H、27H、29H、34H、35H、37H、39H、44H、45H、47H、48H、49H、50H、51H、58H、59H、60H、63H、67H、69H、71H、73H、76H、78H、91H、93H、94H、2L、4L、25L、29L、27bL、33L、34L、36L、38L、43L、44L、46L、47L、48L、49L、55L、58L、62L、64L、71L、87L、89L、90L、91L、94L、95L(皆為Kabat編號)。此等用於使IL-17抗體人類化之殘基之較佳子集由以下組成：27H、48H、67H、69H、93H、36L、43L、46L、47L、49L、58L、71L及87L。
在另一實施例中，本發明之IL-17結合蛋白包含共同人類可變域，該共同人類可變域為本文所述之共同人類可變域。
在一較佳實施例中，IL-17結合蛋白包含至少一個具有選自由以下組成之群之胺基酸序列的可變域：
更佳的是，本文所述之IL-17結合蛋白包含2個可變域，其中該2個可變域具有選自由以下組成之群的胺基酸序列：SEQ ID NO:34與SEQ ID NO:63；SEQ ID NO:34與SEQ ID NO:67；SEQ ID NO:60與SEQ ID NO:35；SEQ ID NO:60與SEQ ID NO:62；SEQ ID NO:60與SEQ ID NO:63；SEQ ID NO:60與SEQ ID NO:64；SEQ ID NO:60與SEQ ID NO:65；SEQ ID NO:60與SEQ ID NO:66；SEQ ID NO:60與SEQ ID NO:67；SEQ ID NO:60與SEQ ID NO:68；SEQ ID NO:61與SEQ ID NO:35；SEQ ID NO:61與SEQ ID NO:62；SEQ ID NO:61與SEQ ID NO:63；SEQ ID NO:61與SEQ ID NO:64；SEQ ID NO:61與SEQ ID NO:65；SEQ ID NO:61與SEQ ID NO:66；SEQ ID NO:61與SEQ ID NO:67；及SEQ ID NO:61與SEQ ID NO:68。
在另一實施例中，本文所述之結合蛋白包含至少一個可變域，該至少一個可變域具有選自由以下組成之群的胺基酸序列：
在另一實施例中，本發明之結合蛋白包含能夠結合人類IL-17之抗原結合域，該抗原結合域包含至少一個包含選自由以下組成之群之胺基酸序列的CDR：
CDR-H1：X1-X2-X3-X4-X5(SEQ ID NO:925)，其中：X1為N、A、D或S；X2為Y、F或L；X3為G、D或A；X4為M或I；且X5為H、D或S；
CDR-H2：X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12-X13-X14-X15-X16-X17(SEQ ID NO:926)，其中：X1為V、W或G；X2為I、T、M或F；X3為S、N、T或D；X4為Y或P；X5為D、N或I；X6為G、S、L或E；X7為S或G；X8為N、T或E；X9為K、T或A；X10為Y、G、N或V；X11為Y或V；X12為A；X13為D、P或Q；X14為S、K或N；X15為V或F；X16為K、R或Q；且X17為G；
CDR-H3：X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12-X13-X14-X15-X16-X17(SEQ ID NO:927)，其中：X1為V、S、E或I；X2為G、S、P或R；X3為A、E、N或P；X4為S、D或W；X5為G、E、F或L；X6為D、G或W；X7為Y、I、N或G；X8為Y、T、G或A；X9為Y或I；X10為S、G或Y；X11為Y、F或T；X12為G、T或不存在；X13為L、H或不存在；X14為H或不存在；X15為F或不存在；X16為D；且X17為V、N或Y；
CDR-L1：X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12-X13(SEQ ID NO:928)，其中：X1為S、R或K；X2為G或A；X3為S或D；X4為N、K或Q；X5為S或不存在；X6為N或不存在；X7為I、L、N或D；X8為G或I；X9為S、N、G或D；X10為H、R、S或D；X11為S、Y、A或D；X12為V、A、L或M；且X13為N、C或H；
CDR-L2：X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7(SEQ ID NO:929)，其中：X1為G、Q、Y或E；X2為I、D或A；X3為G、N、S或T；X4為Q、K或T；X5為R、S或L；X6為P、I或V；且X7為S或P；及
CDR-L3：X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11(SEQ ID NO:930)，其中：X1為A、Q、H或L；X2為T或Q；X3為W、S或H；X4為D或T；X5為D或S；X6為S、T、L或F；X7為L、T或P；X8為G、H或Y；X9為G、S或T；X10為Y或不存在；且X11為V或不存在；
表21、表23、表24或表27中之任何可變重鏈區(VH)之CDR-H1胺基酸序列、CDR-H2胺基酸序列及CDR-H3胺基酸序列；及
表21、表23、表25或表27中之任何可變輕鏈區(VL)之CDR-L1胺基酸序列、CDR-L2胺基酸序列及CDR-L3胺基酸序列。
在一較佳實施例中，上文所述之IL-17結合蛋白之至少一個CDR包含選自由以下組成之群的胺基酸序列：SEQ ID NO:40之殘基31至35；SEQ ID NO:40之殘基50至66；SEQ ID NO:40之殘基99至103；SEQ ID NO:41之殘基23至35；SEQ ID NO:41之殘基51至57；SEQ ID NO:41之殘基90至110；SEQ ID NO:42之殘基31至35；SEQ ID NO:42之殘基50至66；SEQ ID NO:42之殘基99至103；SEQ ID NO:43之殘基23至35；SEQ ID NO:43之殘基51至57；SEQ ID NO:43之殘基90至110；SEQ ID NO:44之殘基31至35；SEQ ID NO:44之殘基50至66；SEQ ID NO:44之殘基99至101；SEQ ID NO:45之殘基23至35；SEQ ID NO:45之殘基51至57；SEQ ID NO:45之殘基90至110；SEQ ID NO:46之殘基31至35；SEQ ID NO:46之殘基50至66；SEQ ID NO:46之殘基99至115；SEQ ID NO:47之殘基24至34；SEQ ID NO:47之殘基50至56；SEQ ID NO:47之殘基89至97；SEQ ID NO:48之殘基31至35；SEQ ID NO:48之殘基50至66；SEQ ID NO:48之殘基99至101；SEQ ID NO:49之殘基24至34；SEQ ID NO:49之殘基50至56；及SEQ ID NO:49之殘基89至97；表21、表23、表24或表27中之VH的CDR-H1之胺基酸序列、CDR-H2之胺基酸序列及CDR-H3之胺基酸序列；及表21、表23、表25或表27中之VL的CDR-L1之胺基酸序列、CDR-L2之胺基酸序列及CDR-L3之胺基酸序列。
在另一實施例中，本發明之IL-17結合蛋白包含至少3個上文所述之CDR。
在另一實施例中，本發明之IL-17結合蛋白包含抗原結合域，該抗原結合域包含VH。更佳的是，該VH包含選自由以下組成之群的胺基酸序列：SEQ ID NO:40、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:48、表21中之VH之胺基酸序列、表23中之VH之胺基酸序列、表24中之VH之胺基酸序列及表27中之VH之胺基酸序列。
在另一實施例中，本發明之IL-17結合蛋白包含抗原結合域，該抗原結合域包含VL。較佳的是，該VL包含選自由以下組成之群的胺基酸序列：SEQ ID NO:41、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:49、表21中之VL之胺基酸序列、表23中之VL之胺基酸序列、表25中之VL之胺基酸序列及表27中之VL之胺基酸序列。
在另一實施例中，本發明之IL-17結合蛋白包含抗原結合域，該抗原結合域包含VH及VL。在一較佳實施例中，該VH包含選自由以下組成之群的胺基酸序列：SEQ ID NO:40、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:48、表21中之VH之胺基酸序列、表23中之VH之胺基酸序列、表24中之VH之胺基酸序列及表27中之VH之胺基酸序列。
更佳的是，本發明之IL-17結合蛋白之VL包含表21中之VL之胺基酸序列、表23中之VL之胺基酸序列、表25中之VL之胺基酸序列或表27中之VL之胺基酸序列，且該VH包含表21中之VH之胺基酸序列、表23中之VH之胺基酸序列、表24中之VH之胺基酸序列或表27中之VH之胺基酸序列。
在另一實施例中，本文所述之IL-17結合蛋白進一步包含選自由以下組成之群的重鏈免疫球蛋白恆定域：人類IgM恆定域；人類IgG1恆定域；人類IgG2恆定域；人類IgG3恆定域；人類IgG4恆定域；人類IgE恆定域；及人類IgA恆定域。較佳的是，重鏈免疫球蛋白恆定區為人類IgG1恆定域。更佳的是，人類IgG1恆定域包含選自由SEQ ID NO:3及SEQ ID NO:4組成之群的胺基酸序列。
在另一實施例中，本文所述之IL-17結合蛋白包含輕鏈免疫球蛋白恆定域，該輕鏈免疫球蛋白恆定域為人類Igκ恆定域或人類Igλ恆定域。較佳之人類Igκ恆定域包含胺基酸序列SEQ ID NO:5。較佳之人類Igλ恆定域包含胺基酸序列SEQ ID NO:6。
在另一實施例中，本文所述之IL-17結合蛋白係選自由以下組成之群：免疫球蛋白分子；scFv；單株抗體；人類抗體；嵌合抗體；人類化抗體；單域抗體；Fab片段；Fab'片段；F(ab')2；Fv；及二硫鍵連接之Fv。在一較佳實施例中，IL-17結合蛋白為人類抗體。
本發明之另一態樣為能夠結合人類IL-17之結合蛋白，其中該結合蛋白包含：Ig恆定重鏈區，其具有選自由SEQ ID NO:3及SEQ ID NO:4組成之群的胺基酸序列；Ig恆定輕鏈區，其具有選自由SEQ ID NO:5及SEQ ID NO:6組成之群的胺基酸序列；Ig可變重鏈區，其具有表21中之VH之胺基酸序列、表23中之VH之胺基酸序列、表24中之VH之胺基酸序列或表27中之VH之胺基酸序列；及Ig可變輕鏈區，其具有表21中之VL之胺基酸序列、表23中之VL之胺基酸序列、表25中之VL之胺基酸序列或表27中之VL之胺基酸序列。
更佳的是，本發明之結合蛋白能夠結合人類IL-17且包含：具有SEQ ID NO:3胺基酸序列之Ig恆定重鏈區；具有SEQ ID NO:5胺基酸序列之Ig恆定輕鏈區；Ig可變重鏈區，其具有表21中之VH之胺基酸序列、表23中之VH之胺基酸序列、表24中之VH之胺基酸序列或表27中之VH之胺基酸序列；及Ig可變輕鏈區，其具有表21中之VL之胺基酸序列、表23中之VL之胺基酸序列、表25中之VL之胺基酸序列或表27中之VL之胺基酸序列。
在另一態樣中，本發明提供一種多價多特異性DVD-IgTM結合蛋白，其包含多肽鏈，其中該多肽鏈包含VD1-(X1)n-VD2-C-(X2)n，其中：VD1為第一重鏈可變域；VD2為第二重鏈可變域；C為重鏈恆定域；X1為連接子，限制條件為其不為CH1；X2為Fc區；且n為0或1；其中該結合蛋白能夠結合人類IL-17及TNF-α；其中VD1包含抗TNF-α抗體之可變重鏈區(VH)之胺基酸序列，其中該胺基酸序列為SEQ ID NO:563、573、578、593、628、638、648、658、668、678、688、698、708、718、728、738、748、758、763、773、783、793、803、813、823、833、843、853、863、873及883中之任一者；且其中VD2包含抗IL-17抗體之VH區之胺基酸序列，其中該胺基酸序列為SEQ ID NO:565、575、580、595、630、640、650、660、670、680、690、700、710、720、730、740、750、760、765、775、795、805、815、825、835、845、855、865、875及885中之任一者。
在上文所述之DVD-Ig結合蛋白之一實施例中，VD1及VD2包含SEQ ID NO:562、572、577、592、627、637、647、657、667、677、687、697、707、717、727、737、747、757、762、772、782、792、802、812、822、832、842、852、862、872及882中之任一者之胺基酸序列。
在另一實施例中，本發明提供一種多價多特異性DVD-Ig結合蛋白，其包含多肽鏈，其中該多肽鏈包含VD1-(X1)n-VD2-C-(X2)n，其中：VD1為第一輕鏈可變域；VD2為第二輕鏈可變域；C為輕鏈恆定域；X1為連接子，限制條件為其不為CH1；X2不包含Fc區；且n為0或1；其中該結合蛋白能夠結合人類IL-17及TNF-α；其中VD1包含抗TNF-α抗體之可變輕鏈區(VL)之胺基酸序列，其中該胺基酸序列為SEQ ID NO:568、583、588、598、603、608、613、618、623、633、643、653、663、673、683、693、703、713、723、733、743、753、768、778、788、798、808、818、828、848、858、868及878中之任一者；且其中VD2包含抗IL-17抗體之VL區之胺基酸序列，其中該胺基酸序列為SEQ ID NO:570、585、590、600、605、610、615、620、625、635、645、655、665、675、685、695、705、715、725、735、745、755、770、780、790、800、810、820、830、850、860、870及880中之任一者。
在上文所述之DVD-Ig結合蛋白之一實施例中，VD1及VD2輕鏈可變域包含SEQ ID NO:567、582、587、597、602、607、612、617、622、632、642、652、662、672、682、692、702、712、722、732、742、752、767、777、787、797、807、817、827、847、857、867及877中之任一者之胺基酸序列。
在本文所述之多價多特異性DVD-Ig結合蛋白之一較佳實施例中，n為0。
在另一實施例中，本發明提供一種多價多特異性DVD-Ig結合蛋白，其包含第一及第二多肽鏈，其中該第一多肽鏈包含第一VD1-(X1)n-VD2-C-(X2)n，其中：VD1為第一重鏈可變域；VD2為第二重鏈可變域；C為重鏈恆定域；X1為連接子，限制條件為其不為CH1；且X2為Fc區；且其中該第二多肽鏈包含第二VD1-(X1)n-VD2-C-(X2)n，其中：VD1為第一輕鏈可變域；VD2為第二輕鏈可變域；C為輕鏈恆定域；X1為連接子，限制條件為其不為CH1；X2不包含Fc區；且n為0或1；其中該結合蛋白能夠結合人類IL-17及TNF-α；其中該等VD1及VD2重鏈可變域包含SEQ ID NO:562、572、577、592、627、637、647、657、667、677、687、697、707、717、727、737、747、757、762、772、782、792、802、812、822、832、842、852、862、872及882中之任一者之胺基酸序列；且其中該等VD1及VD2輕鏈可變域包含選自由以下組成之群的胺基酸序列：SEQ ID NO:567、582、587、597、602、607、612、617、622、632、642、652、662、672、682、692、702、712、722、732、742、752、767、777、787、797、807、817、827、847、857、867及877。
在本發明之多價多特異性DVD-Ig結合蛋白之一較佳實施例中，X1或X2為選自由SEQ ID NO:888至918組成之群的胺基酸序列。
在另一實施例中，本文所述之多價多特異性DVD-Ig結合蛋白包含2個第一多肽鏈及2個第二多肽鏈。
在本文所述之多價多特異性DVD-Ig結合蛋白之一實施例中，Fc區係選自由天然序列Fc區及變異序列Fc區組成之群。較佳的是，Fc區係選自由來自IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgM、IgE及IgD之Fc區組成之群。
在本文所述的包含第一及第二多肽鏈之多價多特異性DVD-Ig結合蛋白之另一實施例中，第一多肽鏈之VD1及第二多肽鏈之該VD1係分別自相同第一及第二親本抗體或其抗原結合部分獲得。
在本文所述之結合TNF-α及IL-17之DVD-Ig蛋白的一實施例中，親本抗TNF-α抗體結合TNF-α之效能不同於親本抗IL-17抗體結合人類IL-17之效能。
在本文所述之結合TNF-α及IL-17之DVD-Ig蛋白的另一實施例中，親本抗TNF-α抗體結合TNF-α之親和力不同於該抗IL-17抗體結合人類IL-17之親和力。
在本文所述之結合TNF-α及IL-17之DVD-Ig蛋白的另一實施例中，抗TNF-α抗體及該抗IL-17抗體係選自由人類抗體、CDR移植抗體及人類化抗體組成之群。
在另一實施例中，本文所述之結合TNF-α及IL-17之DVD-Ig蛋白具有至少一種由該抗TNF-α抗體或該抗IL-17抗體展現之所需特性。較佳的是，該所需特性係選自一或多種抗體參數。更佳的是，該等抗體參數係選自由以下組成之群：抗原特異性、對抗原之親和力、效能、生物功能、抗原決定基識別、穩定性、溶解度、產生效率、免疫原性、藥物動力學、生物可用性、組織交叉反應性及直系同源抗原結合。
在另一實施例中，本發明提供一種能夠結合2種抗原之多價多特異性DVD-Ig結合蛋白，其包含4個多肽鏈，其中2個多肽鏈包含VD1-(X1)n-VD2-C-(X2)n，其中：VD1為第一重鏈可變域；VD2為第二重鏈可變域；C為重鏈恆定域；X1為連接子，限制條件為其不為CH1；且X2為Fc區；且其中2個多肽鏈包含VD1-(X1)n-VD2-C-(X2)n，其中：VD1為第一輕鏈可變域；VD2為第二輕鏈可變域；C為輕鏈恆定域；X1為連接子，限制條件為其不為CH1；X2不包含Fc區；且n為0或1；其中該等VD1及VD2重鏈可變域包含SEQ ID NO:562、572、577、592、627、637、647、657、667、677、687、697、707、717、727、737、747、757、762、772、782、792、802、812、822、832、842、852、862、872及882中任一者之胺基酸序列；且其中該等VD1及VD2輕鏈可變域包含選自由以下組成之群的胺基酸序列：SEQ ID NO:567、582、587、597、602、607、612、617、622、632、642、652、662、672、682、692、702、712、722、732、742、752、767、777、787、797、807、817、827、847、857、867及877。
在另一實施例中，本發明提供製備本文所述之多價多特異性DVD-Ig結合蛋白之方法，其包含在培養基中，在足以產生該結合蛋白之條件下培養帶有包含本文所述之核酸之載體的宿主細胞。較佳的是，50%-75%的根據該方法製備之結合蛋白為本文所述之雙重特異性四價DVD-Ig結合蛋白。更佳的是，75%-90%的根據此方法製備之結合蛋白為雙重特異性四價結合蛋白。甚至更佳的是，90%-95%的所製備之結合蛋白為雙重特異性四價結合蛋白。
本發明之另一實施例為一種根據所述方法製備之蛋白質。
在另一實施例中，本發明提供一種醫藥組合物，其包含本文所述之多價多特異性DVD-Ig結合蛋白及醫藥學上可接受之載劑。
在另一實施例中，包含多價多特異性DVD-Ig結合蛋白之醫藥組合物進一步包含至少一種其他藥劑。較佳的是，該其他藥劑係選自由以下組成之群：治療劑、顯影劑、細胞毒性劑、血管生成抑制劑；激酶抑制劑；共刺激分子阻斷劑；黏附分子阻斷劑；抗細胞激素抗體或其功能片段；甲胺喋呤(methotrexate)；環孢素(cyclosporin)；雷帕黴素(rapamycin)；FK506；可偵測標記或報導分子；TNF拮抗劑；抗風濕藥；肌肉鬆弛劑、麻藥、非類固醇消炎藥(NSAID)、鎮痛劑、麻醉劑、鎮靜劑、局部麻醉劑、神經肌肉阻斷劑、抗微生物劑、抗牛皮癬藥、皮質類固醇、同化類固醇、紅血球生成素、免疫劑、免疫球蛋白、免疫抑制劑、生長激素、激素替代藥物、放射性藥物、抗抑鬱劑、抗精神病藥、興奮劑、哮喘藥物、β促效劑、吸入型類固醇、腎上腺素或類似物、細胞激素及細胞激素拮抗劑。
本發明之另一實施例提供一種治療個體之疾病或病症的方法，其係藉由向該個體投與本文所述之結合TNF-α及IL-17之多價多特異性DVD-Ig結合蛋白來進行，以便達成治療。
本發明亦提供一種產生本文所述之能夠結合TNF-α及人類IL-17之多價多特異性DVD-Ig結合蛋白的方法，其包含以下步驟：
a)獲得能夠結合TNF-α之第一親本抗體或其抗原結合部分；
b)獲得能夠結合人類IL-17之第二親本抗體或其抗原結合部分；
c)建構包含VD1-(X1)n-VD2-C-(X2)n之第一及第三多肽鏈，其中：VD1為自該第一親本抗體或其抗原結合部分獲得之第一重鏈可變域；VD2為自該第二親本抗體或其抗原結合部分獲得之第二重鏈可變域；C為重鏈恆定域；X1為連接子，限制條件為其不為CH1；X2為Fc區；且n為0或1；及
d)建構包含VD1-(X1)n-VD2-C-(X2)n之第二及第四多肽鏈，其中：VD1為自該第一親本抗體或其抗原結合部分獲得之第一輕鏈可變域；VD2為自該第二親本抗體或其抗原結合部分獲得之第二輕鏈可變域；C為輕鏈恆定域；X1為連接子，限制條件為其不為CH1；X2不包含Fc區；且n為0或1；及
e)使該等第一、第二、第三及第四多肽鏈表現；以便產生能夠結合TNF-α及人類IL-17之DVD-Ig結合蛋白，其中該結合蛋白能夠結合TNF-α及人類IL-17；其中VD1及VD2重鏈可變域包含選自由以下組成之群的胺基酸序列：SEQ ID NO:562、572、577、592、627、637、647、657、667、677、687、697、707、717、727、737、747、757、762、772、782、792、802、812、822、832、842、852、862、872及882；且其中該等VD1及VD2輕鏈可變域包含選自由以下組成之群的胺基酸序列:SEQ ID NO:567、582、587、597、602、607、612、617、622、632、642、652、662、672、682、692、702、712、722、732、742、752、767、777、787、797、807、817、827、847、857、867及877。
在上文所述之方法之另一實施例中，該第一親本抗體或其抗原結合部分以及該第二親本抗體或其抗原結合部分係選自由人類抗體、CDR移植抗體及人類化抗體組成之群。
在上文所述之方法之另一實施例中，該第一親本抗體或其抗原結合部分以及該第二親本抗體或其抗原結合部分係選自由以下組成之群:Fab片段；F(ab')2片段，亦即一種包含鉸鏈區由二硫橋連接之2個Fab片段的二價片段；由VH及CH1域組成之Fd片段；由抗體單臂之VL及VH域組成之Fv片段；dAb片段；分離之互補決定區(CDR)；單鏈抗體；及雙功能抗體(diabody)。
在該方法之另一實施例中，該第一親本抗體或其抗原結合部分具有至少一種由DVD-Ig結合蛋白展現之所需特性。
在上文所述之方法之另一實施例中，該第二親本抗體或其抗原結合部分具有至少一種由DVD-Ig結合蛋白展現之所需特性。
較佳的是，在上文所述之方法中，Fc區係選自由天然序列Fc區及變異序列Fc區組成之群。更佳的是，Fc區係選自由來自IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgM、IgE及IgD之Fc區組成之群。
在另一實施例中，在上文所述之方法中，所需特性係選自第一親本抗體或其抗原結合部分之一或多種抗體參數。
在另一實施例中，在上文所述之方法中，所需特性係選自第二親本抗體之一或多種抗體參數。
較佳的是，該等抗體參數係選自由以下組成之群：抗原特異性、對抗原之親和力、效能、生物功能、抗原決定基識別、穩定性、溶解度、產生效率、免疫原性、藥物動力學、生物可用性、組織交叉反應性及直系同源抗原結合。
在上文所述之方法之另一實施例中，第一親本抗體或其抗原結合部分結合該第一抗原之親和力不同於該第二親本抗體或其抗原結合部分結合該第二抗原之親和力。
在另一實施例中，第一親本抗體或其抗原結合部分結合該第一抗原之效能不同於該第二親本抗體或其抗原結合部分結合該第二抗原之效能。
在另一實施例中，本發明提供一種產生能夠結合TNF-α及人類IL-17且具有所需特性之DVD-Ig結合蛋白的方法，其包含以下步驟：
a)獲得能夠結合TNF-α且具有至少一種由雙可變域免疫球蛋白展現之所需特性的第一親本抗體或其抗原結合部分；
b)獲得能夠結合人類IL-17且具有至少一種由雙可變域免疫球蛋白展現之所需特性的第二親本抗體或其抗原結合部分；
c)建構包含VD1-(X1)n-VD2-C-(X2)n之第一及第三多肽鏈，其中：VD1為自該第一親本抗體或其抗原結合部分獲得之第一重鏈可變域；VD2為自該第二親本抗體或其抗原結合部分獲得之第二重鏈可變域；C為重鏈恆定域；X1為連接子，限制條件為其不為CH1；X2為Fc區；且n為0或1；
d)建構包含VD1-(X1)n-VD2-C-(X2)n之第二及第四多肽鏈，其中：VD1為自該第一親本抗體或其抗原結合部分獲得之第一輕鏈可變域；VD2為自該第二親本抗體或其抗原結合部分獲得之第二輕鏈可變域；C為輕鏈恆定域；X1為連接子，限制條件為其不為CH1；X2不包含Fc區；且n為0或1；
e)使該等第一、第二、第三及第四多肽鏈表現；以便產生能夠結合該TNF-α及該人類IL-17且具有所需特性之DVD-Ig結合蛋白，其中VD1及VD2重鏈可變域包含選自由以下組成之群的胺基酸序列：SEQ ID NO:562、572、577、592、627、637、647、657、667、677、687、697、707、717、727、737、747、757、762、772、782、792、802、812、822、832、842、852、862、872及882；且其中該等VD1及VD2輕鏈可變域包含選自由以下組成之群的胺基酸序列：SEQ ID NO:567、582、587、597、602、607、612、617、622、632、642、652、662、672、682、692、702、712、722、732、742、752、767、777、787、797、807、817、827、847、857、867及877。
在另一實施例中，本文所述之IL-17結合蛋白結合人類IL-17且能夠調節IL-17之生物功能。
本發明亦提供一種中和結合蛋白，其中該中和結合蛋白包含如上文所述之IL-17結合蛋白，且其中該中和結合蛋白能夠中和IL-17。
在另一實施例中，本發明之中和IL-17結合蛋白結合人類IL-17，該人類IL-17係選自由前驅人類IL-17(pro-human IL-17)、成熟人類IL-17及截短型人類IL-17組成之群。
較佳的是，本文所述之中和IL-17結合蛋白減弱IL-17結合其受體之能力。甚至更佳的是，中和IL-17結合蛋白減弱前驅人類IL-17、成熟人類IL-17或截短型人類IL-17結合IL-17受體之能力。
在另一實施例中，本文所述之中和IL-17結合蛋白能夠降低一或多種選自由以下組成之群的IL-17生物活性：Th1調節；Th2調節；Nk調節；嗜中性白血球調節；單核細胞-巨噬細胞系調節；嗜中性白血球調節；嗜伊紅血球調節；B細胞調節；細胞激素調節；趨化因子調節；黏附分子調節；及細胞募集調節。
較佳的是，如由表面電漿共振所測量，本發明之IL-17結合蛋白對該標靶具有選自由以下組成之群的結合速率常數(Kon)：至少約102 M-1s-1、至少約103 M-Is-1、至少約104 M-1s-1、至少約105 M-1s-1及至少約106 M-1s-1。
在另一實施例中，如由表面電漿共振所測量，IL-17結合蛋白對該標靶具有選自由以下組成之群的解離速率常數(Koff)：至多約10-3 s-1、至多約10-4 s-1、至多約10-5 s-1及至多約10-6 s-1。
在另一實施例中，本發明之IL-17結合蛋白對該標靶具有選自由以下組成之群的解離常數(KD)：至多約10-7 M、至多約10-8 M、至多約10-9 M、至多約10-10 M、至多約10-11 M、至多約10-12 M及至多10-13 M。
本發明之另一態樣提供一種IL-17結合蛋白建構體，其包含本文所述之IL-17結合蛋白且進一步包含連接子多肽或免疫球蛋白恆定域。本發明之較佳IL-17結合蛋白建構體包含選自由以下組成之群的IL-17結合蛋白：免疫球蛋白分子；二硫鍵連接之Fv；單株抗體；scFv；嵌合抗體；單域抗體；CDR移植抗體；雙功能抗體；人類化抗體；多特異性抗體；Fab；雙重特異性抗體；Fab'；雙特異性抗體；及F(ab')2；DVD-IgTM。
Fv；在一較佳實施例中，本發明之IL-17結合蛋白建構體包含選自由以下組成之群的重鏈免疫球蛋白恆定域：人類IgM恆定域；人類IgG4恆定域；人類IgG1恆定域；人類IgE恆定域；人類IgG2恆定域；及人類IgG3恆定域；人類IgA恆定域。
在另一實施例中，IL-17結合蛋白建構體包含具有選自由以下組成之群之胺基酸序列的免疫球蛋白恆定域：SEQ ID NO:3；SEQ ID NO:4；SEQ ID NO:5；及SEQ ID NO:6。
在另一實施例中，本文所述之IL-17結合蛋白建構體之活體內半衰期比該IL-17結合蛋白建構體之可溶性對應物長。
本發明之另一態樣提供一種包含IL-17結合蛋白建構體之IL-17結合蛋白接合物(conjugate)，其中該IL-17結合蛋白接合物進一步包含選自由免疫黏附分子、顯影劑、治療劑及細胞毒性劑組成之群的藥劑。
適用於製備IL-17結合蛋白接合物且適用於本發明之其他態樣中的較佳顯影劑包括(但不限於)放射性標記、酶、螢光標記、發光標記、生物發光標記、磁性標記及生物素。
適用於本發明之較佳放射性標記包括(但不限於)選自由以下組成之群的放射性標記：3H、14C、35S、90Y、99Tc、11IIn、125I、131I、177Lu、166Ho及153Sm。
在另一實施例中，本發明之IL-17結合蛋白接合物包含選自由以下組成之群的治療劑或細胞毒性劑:抗代謝物、烷化劑、抗生素、生長因子、細胞激素、抗血管生成劑、抗有絲分裂劑、蒽環黴素(anthracycline)、毒素及細胞凋亡劑。
在另一實施例中，本文所述之結合蛋白具有人類糖基化模式。
在另一實施例中，本文所述之IL-17結合蛋白(包括IL-17結合蛋白建構體及IL-17結合蛋白接合物)可呈結晶結合蛋白之形式。較佳之結晶形式保留本文所述之IL-17結合蛋白之非結晶形式的至少一些生物活性且較佳保留基本上所有的生物活性。該等結晶形式亦可用作無載劑醫藥控制釋放型結晶IL-17結合蛋白。
在另一實施例中，本發明提供分離之編碼本文所述之包括結合蛋白建構體之IL-17結合蛋白的核酸。可將該等核酸插入一載體中以進行各種遺傳分析及重組技術，從而使本文所述之IL-17結合蛋白表現，對本文所述之IL-17結合蛋白進行表徵，或改良本文所述之IL-17結合蛋白的一或多種特性。用於選殖編碼本文所述之結合蛋白之核酸的較佳載體包括(但不限於)pcDNA、pTT、pTT3、pEFBOS、pBV、pJV及pBJ。
本發明亦提供一種宿主細胞，其包含包含編碼本文所述之結合蛋白之核酸的載體。適用於本發明之宿主細胞可為原核或真核細胞。較佳之原核宿主細胞為大腸桿菌(Escherichia coli)。本發明中適用作宿主細胞之真核細胞包括原生生物細胞、動物細胞、植物細胞及真菌細胞。
較佳真菌細胞為酵母細胞，包括釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)。
適用作本發明宿主細胞之較佳動物細胞包括(但不限於)哺乳動物細胞、鳥類細胞及昆蟲細胞。較佳之哺乳動物細胞包括CHO及COS細胞。適用作本發明宿主細胞之昆蟲細胞為昆蟲Sf9細胞。
載體可包含編碼本文所述之IL-17結合蛋白的核酸，其中該核酸可操作地連接於允許該結合蛋白在帶有該載體之特定宿主細胞中表現之適合轉錄及/或轉譯序列。
在另一態樣中，本發明提供一種製備IL-17結合蛋白之方法，其包含在培養基中，在足以產生能夠結合IL-17之結合蛋白的條件下，培養包含編碼IL-17結合蛋白之載體的宿主細胞。由此所產生之蛋白質可經分離且用於本文所述之各種組合物及方法中。
本發明之組合物包括釋放結合蛋白之組合物，該組合物包含：
(a)調配物，其中該調配物包含本文所述之結晶結合蛋白及一成份；及
(b)至少一種聚合載劑。
適用於本發明組合物中之較佳聚合載劑包括(但不限於)由以下組成之群中的一或多者：聚(丙烯酸)、聚(氰基丙烯酸酯)、聚(胺基酸)、聚(酸酐)、聚(縮肽)、聚(酯)、聚(乳酸)、聚(乳酸-共-乙醇酸)或PLGA、聚(β-羥基丁酸酯)、聚(己內酯)、聚(二氧環己酮)、聚(乙二醇)、聚((羥基丙基)甲基丙烯醯胺)、聚[(有機)磷腈(phosphazene)]、聚(原酸酯)、聚(乙烯醇)、聚(乙烯吡咯啶酮)、順丁烯二酸酐-烷基乙烯基醚共聚物、普洛尼克多元醇類(pluronic polyols)、白蛋白、海藻酸鹽、纖維素及纖維素衍生物、膠原蛋白、血纖維蛋白、明膠、玻糖醛酸、寡醣、甘胺基聚糖、硫酸化多醣、其摻合物及共聚物。
在另一態樣中，本發明組合物之一成份係選自由以下組成之群：白蛋白、蔗糖、海藻糖、乳糖醇、明膠、羥基丙基-β-環糊精、甲氧基聚乙二醇及聚乙二醇。
在另一實施例中，本發明提供一種治療哺乳動物之方法，其包含向該哺乳動物投與有效量之本文所述之組合物的步驟。
本發明亦提供醫藥組合物，其包含本文所述之IL-17結合蛋白及醫藥學上可接受之載劑。醫藥學上可接受之載劑亦可用作佐劑以增強本發明組合物中之IL-17結合蛋白的吸收或分散。較佳佐劑為玻尿酸酶。
在另一實施例中，醫藥組合物進一步包含至少一種用於治療IL-17活性有害之病症的其他治療劑。
在另一實施例中，本發明提供一種降低人類IL-17活性之方法，其包含使人類IL-17與本文所述之IL-17結合蛋白接觸，以便降低人類IL-17活性。
在另一實施例中，包含本文所述之IL-17結合蛋白之醫藥組合物包含至少一種其他藥劑。較佳的是，該其他藥劑係選自由以下組成之群：治療劑、顯影劑、細胞毒性劑、血管生成抑制劑；激酶抑制劑；共刺激分子阻斷劑；黏附分子阻斷劑；抗細胞激素抗體或其功能片段；甲胺喋呤；環孢素；雷帕黴素；FK506；可偵測標記或報導分子；TNF拮抗劑；抗風濕藥；肌肉鬆弛劑、麻藥、非類固醇消炎藥(NSAID)、鎮痛劑、麻醉劑、鎮靜劑、局部麻醉劑、神經肌肉阻斷劑、抗微生物劑、抗牛皮癬藥、皮質類固醇、同化類固醇、紅血球生成素、免疫劑、免疫球蛋白、免疫抑制劑、生長激素、激素替代藥物、放射性藥物、抗抑鬱劑、抗精神病藥、興奮劑、哮喘藥物、β促效劑、吸入型類固醇、腎上腺素或類似物、細胞激素及細胞激素拮抗劑。
本發明之另一實施例提供一種治療個體之疾病或病症的方法，其係藉由向該個體投與本文所述之結合TNF-α及IL-17之多價多特異性DVD-Ig結合蛋白來進行，以便達成治療。
在另一實施例中，可用包含向個體投與本文所述之IL-17結合蛋白的本發明方法治療之病症係選自包含以下之群：類風濕性關節炎、骨關節炎、青少年慢性關節炎、敗血性關節炎、萊姆關節炎(Lyme arthritis)、牛皮癬性關節炎、反應性關節炎、脊椎關節病、全身性紅斑狼瘡、克羅恩氏病、潰瘍性結腸炎、發炎性腸病、胰島素依賴型糖尿病、甲狀腺炎、哮喘、過敏性疾病、牛皮癬、皮炎、硬皮病、移植物抗宿主疾病、器官移植排斥反應、與器官移植相關之急性或慢性免疫疾病、類肉瘤病、動脈粥樣硬化、散播性血管內凝血、川崎氏病(Kawasaki's disease)、格雷氏病(Grave's disease)、腎病症候群、慢性疲勞症候群、韋格納氏肉芽腫病(Wegener's granulomatosis)、亨偌-絲奇恩賴紫癜(Henoch-Schoenlein purpurea)、顯微性腎血管炎(microscopic vasculitis of the kidneys)、慢性活動性肝炎、葡萄膜炎、敗血性休克、中毒性休克症候群、敗血症症候群、惡病質、傳染病、寄生蟲病、後天免疫缺乏症候群、急性橫貫性脊髓炎、亨廷頓氏舞蹈病(Huntington's chorea)、帕金森氏症(Parkinson's disease)、阿茲海默氏症(Alzheimer's disease)、中風、原發性膽汁性肝硬化、溶血性貧血、惡性病、心臟衰竭、心肌梗塞、艾迪森氏病(Addison's disease)、偶發性I型多腺體分泌不足症及II型多腺體分泌不足症、施密特氏症候群(Schmidt's syndrome)、成人(急性)呼吸窘迫症候群、禿髮、斑禿、血清陰性關節病、關節病、萊特爾氏病(Reiter's disease)、牛皮癬性關節病、潰瘍性結腸性關節病、腸病性滑膜炎；披衣菌(chlamydia)、耶氏桿菌(yersinia)及沙門氏菌(salmonella)相關性關節病；脊椎關節病、動脈粥樣化疾病/動脈硬化、異位性過敏症、自體免疫性大皰性疾病、尋常天疱瘡、葉狀天疱瘡、類天疱瘡、線性IgA疾病、自體免疫性溶血性貧血、庫姆氏陽性溶血性貧血(Coombs positive haemolytic anaemia)、後天惡性貧血、青少年惡性貧血、肌痛腦炎/皇家自由病(Royal Free Disease)、慢性黏膜皮膚念珠菌病、巨細胞動脈炎、原發性硬化性肝炎、隱原性自體免疫性肝炎、後天免疫缺乏病症候群、後天免疫缺乏相關疾病、B型肝炎、C型肝炎、普通變異型免疫缺乏症(普通變異型低丙種球蛋白血症)、擴張型心肌病、女性不孕症、卵巢功能衰竭、卵巢早衰、纖維變性肺病、隱原性纖維性肺泡炎、發炎後間質性肺病、間質性肺炎、結締組織病相關性間質性肺病、混合結締組織病相關性肺病、全身性硬化相關性間質性肺病、類風濕性關節炎相關性間質性肺病、全身性紅斑狼瘡相關性肺病、皮肌炎/多發性肌炎相關性肺病、休格連氏病相關性肺病(Sjgren's disease associated lung disease)、僵直性脊椎炎相關性肺病、血管炎彌漫性肺病、血鐵質沈著症相關性肺病(haemosiderosis associated lung disease)、藥物誘發性間質性肺病、纖維化、放射性纖維化、阻塞性細支氣管炎、慢性嗜伊紅性肺炎、淋巴細胞浸潤性肺病、感染後間質性肺病、痛風性關節炎、自體免疫性肝炎、1型自體免疫性肝炎(典型自體免疫性或類狼瘡性肝炎)、2型自體免疫性肝炎(抗LKM抗體肝炎)、自體免疫介導之低血糖症、伴有黑棘皮病之B型胰島素抗性、副甲狀腺低能症、與器官移植相關之急性免疫疾病、與器官移植相關之慢性免疫疾病、骨關節炎、原發性硬化性膽管炎、1型牛皮癬、2型牛皮癬、特發性白血球減少症、自體免疫性嗜中性白血球減少症、NOS型腎病、絲球體腎炎、顯微性腎血管炎、萊姆病(Lyme disease)、盤狀紅斑狼瘡、特發性或NOS型男性不孕症、精子自體免疫症、多發性硬化(所有亞型)、交感性眼炎、結締組織疾病繼發性肺高壓、古德帕斯徹氏症候群(Goodpasture's syndrome)、結節性多動脈炎之肺部表現、急性風濕熱、類風濕性脊椎炎、斯蒂爾氏病(Still's disease)、全身性硬化、休格連氏症候群(Sjrgren's syndrome)、高安氏病(Takayasu's disease)/動脈炎、自體免疫性血小板減少症、特發性血小板減少症、自體免疫性甲狀腺病、甲狀腺機能亢進症、甲狀腺腫性自體免疫性甲狀腺功能低下(橋本氏病(Hashimoto's disease))、萎縮性自體免疫性甲狀腺功能低下、原發性黏液水腫、晶狀體源性葡萄膜炎(phacogenic uveitis)、原發性血管炎、白斑病、急性肝病、慢性肝病、酒精性肝硬化、酒精誘發性肝損傷、膽汁淤積、特異體質性肝病、藥物誘發性肝炎、非酒精性脂肝炎、過敏及哮喘、B群鏈球菌(group B streptococci，GBS)感染、精神障礙(例如，抑鬱症及精神分裂症)、Th2型及Th1型介導之疾病、急性及慢性疼痛(不同形式之疼痛)；及癌症，諸如肺癌、乳癌、胃癌、膀胱癌、結腸癌、胰臟癌、卵巢癌、前列腺癌及直腸癌，及造血性惡性病(白血病及淋巴瘤)；無β脂蛋白血症、手足發紺、急性及慢性寄生或感染過程、急性白血病、急性淋巴母細胞白血病(ALL)、急性骨髓白血病(AML)、急性或慢性細菌感染、急性胰臟炎、急性腎衰竭、腺癌、心房異位搏動、AIDS癡呆綜合症、酒精誘發性肝炎、過敏性結膜炎、過敏性接觸性皮炎、過敏性鼻炎、同種異體移植排斥反應、α-1-抗胰蛋白酶缺乏症、肌萎縮性側索硬化、貧血、心絞痛、前角細胞退化、抗CD3療法、抗磷脂症候群、抗受體過敏反應、主動脈瘤及周邊動脈瘤、主動脈剝離(aortic dissection)、動脈高血壓、動脈硬化、動靜脈瘺、運動失調、心房纖維性顫動(持續性或陣發性)、心房撲動、房室傳導阻滯、B細胞淋巴瘤、骨移植排斥反應、骨髓移植(BMT)排斥反應、束支傳導阻滯(bundle branch block)、伯基特氏淋巴瘤(Burkitt's lymphoma)、燒傷、心律不整、心臟頓抑症候群(cardiac stun syndrome)、心臟腫瘤、心肌病、心肺繞道發炎反應(cardiopulmonary bypass inflammation response)、軟骨移植排斥反應、小腦皮質退化、小腦病症、紊亂性或多發性心房心動過速、化學療法相關病症、慢性骨髓性白血病(CML)、慢性酒精中毒、慢性發炎性病變、慢性淋巴球性白血病(CLL)、慢性阻塞性肺病(COPD)、慢性水楊酸鹽中毒、結腸直腸癌、充血性心臟衰竭、結膜炎、接觸性皮炎、肺原性心臟病(cor pulmonale)、冠狀動脈病、庫賈氏症(Creutzfeldt-Jakob disease)、培養陰性敗血症、囊腫纖維化、細胞激素療法相關病症、拳擊員癡呆(Dementia pugilistica)、髓鞘脫失病、出血性登革熱(dengue hemorrhagic fever)、皮炎、皮膚病狀、糖尿病(diabete/diabetes mellitus)、糖尿病性動脈硬化疾病、泛發性路易體疾病(Diffuse Lewy body disease)、擴張型充血性心肌病、基底神經節病症、中年唐氏症候群(Down's Syndrome in middle age)、由阻斷CNS多巴胺受體之藥物誘發之藥物誘發性運動障礙、藥物過敏、濕疹、腦脊髓炎、心內膜炎、內分泌病、會厭炎、埃-巴病毒感染(Epstein-Barr virus infection)、肢端紅痛症、錐體外及小腦病症、家族性噬血淋巴組織球增多症(familial hematophagocytic lymphohistiocytosis)、胎兒胸腺植入物排斥反應、弗里德賴希氏運動失調(Friedreich's ataxia)、功能性周邊動脈病症、真菌性敗血症、氣性壞疽、胃潰瘍、腎小球腎炎、任何器官或組織之移植排斥反應、革蘭氏陰性敗血症、革蘭氏陽性敗血症、由細胞內生物體所致之肉芽腫、毛細胞白血病、哈-施氏病(Hallervorden-Spatz disease)、橋本氏甲狀腺炎(Hashimoto's thyroiditis)、枯草熱、心臟移植排斥反應、血色病、血液透析、溶血性尿毒症候群/血栓性血小板減少性紫癜、出血、肝炎(A)、希氏束心律不整(His bundle arrhythmias)、HIV感染/HIV神經病、霍奇金氏病(Hodgkin's disease)、過動性運動障礙、過敏反應、過敏性肺炎、高血壓、運動不足性運動障礙、下丘腦-垂體-腎上腺軸評價、特發性艾迪森氏病、特發性肺纖維化、抗體介導之細胞毒性、無力、嬰兒脊髓性肌萎縮、主動脈發炎、A型流行性感冒、電離輻射曝露、虹膜睫狀體炎/葡萄膜炎/視神經炎、缺血-再灌注損傷、缺血性中風、青少年類風濕性關節炎、青少年脊髓性肌萎縮、卡波西氏肉瘤(Kaposi's sarcoma)、腎移植排斥反應、退伍軍人桿菌(legionella)、利什曼體病(leishmaniasis)、麻風病、皮質脊髓系統病變、脂性水腫、肝移植排斥反應、淋巴水腫、瘧疾、惡性淋巴瘤、惡性組織球增多症、惡性黑色素瘤、腦膜炎、腦膜炎球菌血症、代謝性/特發性疾病、偏頭痛、粒線體多系統病症、混合結締組織病、單株γ球蛋白病、多發性骨髓瘤、多系統退化(曼切、代哲因-托馬斯、史德爾格及馬查多-約瑟夫(Mencel Dejerine-Thomas Shi-Drager and Machado-Joseph))、重症肌無力、鳥胞內分枝桿菌(mycobacterium avium intracellulare)、結核分枝桿菌(mycobacterium tuberculosis)、骨髓發育不良症候群、心肌梗塞、心肌缺血病症、鼻咽癌、新生兒慢性肺病、腎炎、腎病、神經退化性疾病、I型神經原性肌肉萎縮、中性白血球減少性發熱、非霍奇金氏淋巴瘤、腹主動脈及其分支閉塞、閉塞性動脈病症、OKT3療法、睾丸炎/副睾炎、睾丸炎/輸精管重新接合術、器官腫大、骨質疏鬆症、胰臟移植排斥反應、胰臟癌、惡性病之副腫瘤症候群/高鈣血症、副甲狀腺移植排斥反應、骨盆發炎性疾病、常年性鼻炎、心包病、周邊動脈粥樣硬化疾病、周邊血管病症、腹膜炎、惡性貧血、卡氏肺囊蟲肺炎(pneumocystis carinii pneumonia)、肺炎、POEMS症候群(多發性神經病、器官腫大、內分泌病、單株γ球蛋白病及皮膚變化症候群)、灌注後症候群、泵後症候群(post pump syndrome)、MI心切開術後症候群、子癇前期、進行性核上麻痺、原發性肺高壓、放射療法、雷諾氏現象及疾病(Raynaud's phenomenon and disease)、雷諾氏病、雷夫蘇姆氏病(Refsum's disease)、規則窄QRS心跳過速、腎血管性高血壓、再灌注損傷、限制性心肌病、肉瘤、硬皮病、老年性舞蹈病、路易體型老年性癡呆、血清陰性關節病、休克、鐮狀細胞貧血、皮膚同種異體移植排斥反應、皮膚變化症候群、小腸移植排斥反應、實體腫瘤、特殊心律不整、脊髓性運動失調、脊髓小腦退化、鏈球菌肌炎、小腦結構病變、亞急性硬化性泛腦炎、暈厥、心血管系統梅毒、全身性過敏反應、全身性發炎反應症候群、全身性發作青少年類風濕性關節炎、T細胞或FAB ALL、毛細血管擴張、血栓閉塞性脈管炎、血小板減少症、毒性、移植、創傷/出血、III型過敏反應、IV型過敏、不穩定型心絞痛、尿毒症、尿路敗血症、蕁麻疹、心臟瓣膜疾病、靜脈曲張、血管炎、靜脈疾病、靜脈栓塞、心室纖維性顫動、病毒及真菌感染、病毒性腦炎/無菌性腦膜炎、病毒相關性噬血細胞症候群(viral-associated hemaphagocytic syndrome)、韋尼克-科爾薩科夫症候群(Wernicke-Korsakoff syndrome)、威爾遜氏病(Wilson's disease)、任何器官或組織之異種移植排斥反應、急性冠狀動脈症候群、急性特發性多發性神經炎、急性發炎性髓鞘脫失多神經根神經病、急性缺血、成人斯蒂爾氏病、斑禿、過敏性反應、抗磷脂抗體症候群、再生不全性貧血、動脈硬化、異位性濕疹、異位性皮炎、自體免疫性皮炎、與鏈球菌感染相關之自體免疫病症、自體免疫性腸病、自體免疫性聽力損失、自體免疫性淋巴增生症候群(ALPS)、自體免疫性心肌炎、自體免疫性卵巢早衰、眼瞼炎、支氣管擴張症、大皰性類天疱瘡、心血管疾病、災難性抗磷脂症候群、乳糜瀉、頸椎關節病、慢性缺血、瘢痕性類天疱瘡、有多發性硬化症風險之臨床分離症候群(cis)、結膜炎、兒童發作精神病症、慢性阻塞性肺病(COPD)、淚囊炎、皮肌炎、糖尿病性視網膜病、糖尿病、椎間盤突出(disk herniation)、椎間盤脫出(disk prolapse)、藥物誘發性免疫性溶血性貧血、心內膜炎、子宮內膜異位症、眼內炎、上鞏膜炎、多形性紅斑、重症多形性紅斑、妊娠性類天疱瘡、格-巴氏症候群(Guillain-Barr syndrome、GBS)、枯草熱、休斯氏症候群(Hughes syndrome)、特發性帕金森氏症、特發性間質性肺炎、IgE介導之過敏、免疫性溶血性貧血、包涵體肌炎、傳染性眼發炎性疾病、發炎性髓鞘脫失病、發炎性心臟病、發炎性腎病、IPF/UIP、虹膜炎、角膜炎、乾燥性角膜結膜炎、庫氏病(Kussmaul disease)或庫-梅氏病(Kussmaul-Meier disease)、蘭德里氏麻痺(Landry's paralysis)、蘭氏細胞組織球增多症(Langerhan's cell histiocytosis)、網狀青斑、黃斑退化、顯微性多血管炎、白赫鐵列夫症(morbus bechterev)、運動神經元病症、黏膜類天疱瘡、多器官衰竭、重症肌無力、骨髓發育不良症候群、心肌炎、神經根病症、神經病、非A非B型肝炎、視神經炎、骨質溶解、卵巢癌、少關節型JRA、周邊動脈閉塞性疾病(PAOD)、周邊血管疾病(PVD)、周邊動脈疾病(PAD)、靜脈炎、結節性多動脈炎(或結節性動脈周圍炎)、多軟骨炎、風濕性多肌痛、白髮症、多關節型JRA、多內分泌缺乏症候群、多肌炎、風濕性多肌痛(PMR)、泵後症候群、原發性帕金森氏症(primary Parkinsonism)、前列腺癌及直腸癌及造血性惡性病(白血病及淋巴瘤)、前列腺炎、純紅血球發育不全、原發性腎上腺機能不全、復發性視神經脊髓炎、再狹窄、風濕性心臟病、SAPHO(滑膜炎、痤瘡、膿皰病、骨肥厚及骨炎)、硬皮病、繼發性澱粉樣變性、休克肺、鞏膜炎、坐骨神經痛、繼發性腎上腺機能不全、聚矽氧相關性結締組織病、斯-威氏皮膚病(sneddon-wilkinson dermatosis)、僵直性脊椎炎(spondylitis ankylosans)、斯-約氏症候群(Stevens-Johnson syndrome，SJS)、全身性發炎反應症候群、顳動脈炎、弓形蟲視網膜炎、中毒性表皮壞死溶解、橫貫性脊髓炎、TRAPS(腫瘤壞死因子受體)、1型過敏反應、II型糖尿病、蕁麻疹、常見間質性肺炎(UIP)、血管炎、春季結膜炎、病毒性視網膜炎、沃格特-小柳-原田症候群(Vogt-Koyanagi-Harada syndrome，VKH症候群)、濕性黃斑退化、創傷癒合、耶氏桿菌及沙門氏菌相關性關節病。
本發明之另一實施例提供一種治療個體之IL-17活性有害之疾病或病症的方法，其係藉由向該個體投與本文所述之IL-17結合蛋白來進行，以便達成治療。該方法可用於治療選自由以下組成之群的病症：呼吸病症；哮喘；過敏性及非過敏性哮喘；由感染所致之哮喘；由呼吸道合胞病毒(RSV)感染所致之哮喘；慢性阻塞性肺病(COPD)；涉及氣管炎症之其他病狀；嗜伊紅血球增多症；纖維化及過量黏液產生；囊腫纖維化；肺纖維化；異位性病症；異位性皮炎；蕁麻疹；濕疹；過敏性鼻炎；及過敏性腸胃炎；皮膚之發炎及/或自體免疫病狀；胃腸器官之發炎及/或自體免疫病狀；發炎性腸病(IBD)；潰瘍性結腸炎；克羅恩氏病；肝臟之發炎及/或自體免疫病狀；肝硬化；肝纖維化；由B型及/或C型肝炎病毒所致之肝纖維化；硬皮病；腫瘤或癌症；肝細胞癌；神經膠母細胞瘤；淋巴瘤；霍奇金氏淋巴瘤；病毒感染；HTLV-1感染(例如，來自HTLV-1)；1型保護性免疫反應表現抑制；及疫苗接種期間1型保護性免疫反應表現抑制。
在上述方法之另一實施例中，針對該個體之該投與係藉由至少一種選自以下之模式來進行：非經腸、皮下、肌肉內、靜脈內、關節內、支氣管內、腹內、囊內、軟骨內、腔內、體腔內(intracelial)、小腦內、腦室內、結腸內、子宮頸內、胃內、肝內、心肌內、骨內、骨盆內、心包內、腹膜內、胸膜內、前列腺內、肺內、直腸內、腎內、視網膜內、脊椎內、滑膜內、胸腔內、子宮內、膀胱內、快速注射(bolus)、經陰道、經直腸、經頰、舌下、鼻內及經皮。
本發明之另一態樣為一種治療罹患IL-17有害之病症之患者的方法，其包含在投與第二藥劑之前、同時或之後投與本文所述之IL-17A結合蛋白的步驟，其中該第二藥劑係選自由以下組成之群：吸入型類固醇；β促效劑；速效或長效β促效劑；白三烯或白三烯受體之拮抗劑；ADVAIR；IgE抑制劑；抗IgE抗體；XOLAIR；磷酸二酯酶抑制劑；PDE4抑制劑；黃嘌呤；抗膽鹼藥物；肥大細胞穩定劑；色甘酸(Cromolyn)；IL-4抑制劑；IL-5抑制劑；嗜酸性粒細胞趨化因子(eotaxin)/CCR3抑制劑；包括H1、H2、H3及H4之組織胺或其受體之拮抗劑；前列腺素D或其受體DP1及CRTH2之拮抗劑；TNF拮抗劑；TNF受體之可溶性片段；ENBREL；TNF酶拮抗劑；TNF轉化酶(TACE)抑制劑；蕈毒鹼受體拮抗劑；TGF-β拮抗劑；干擾素γ；吡非尼酮(perfenidone)；化學治療劑甲胺喋呤；來氟米特(leflunomide)；西羅莫司(sirolimus)(雷帕黴素)或其類似物；CCI-779；COX2或cPLA2抑制劑；NSAID；免疫調節劑；p38抑制劑；TPL-2、MK-2及NFkB抑制劑；布替耐德(budenoside)；表皮生長因子；皮質類固醇；環孢素；柳氮磺胺吡啶(sulfasalazine)；胺基水楊酸鹽；6-巰基嘌呤；硫唑嘌呤(azathioprine)；甲硝噠唑(metronidazole)；脂肪加氧酶抑制劑；美沙拉嗪(mesalamine)；奧沙拉嗪(olsalazine)；巴柳氮(balsalazide)；抗氧化劑；血栓素抑制劑；IL-1受體拮抗劑；抗IL-1β抗體；抗IL-6抗體；生長因子；彈性蛋白酶抑制劑；吡啶基-咪唑化合物；TNF、LT、IL-1、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-11、IL-12、IL-14、IL-15、IL-16、IL-17、IL-18、IL-19、IL-20、IL-21、IL-22、IL-23、IL-24、IL-25、IL-26、IL-27、IL-28、IL-29、IL-30、IL-31、IL-32、IL-33、EMAP-II、GM-CSF、FGF或PDGF之抗體或促效劑；CD2、CD3、CD4、CD8、CD25、CD28、CD30、CD40、CD45、CD69、CD90或其配位體之抗體；FK506；雷帕黴素；黴酚酸嗎啉乙酯(mycophenolate mofetil)；布洛芬(ibuprofen)；潑尼松龍(prednisolone)；磷酸二酯酶抑制劑；腺苷促效劑；抗血栓劑；補體抑制劑；腎上腺素激導劑(adrenergic agent)；IRAK、NIK、IKK、p38或MAP激酶抑制劑；IL-1β轉化酶抑制劑；TNF-α轉化酶抑制劑；T細胞信號傳導抑制劑；金屬蛋白酶抑制劑；6-巰基嘌呤；血管收縮素轉化酶抑制劑；可溶性細胞激素受體；可溶性p55 TNF受體；可溶性p75 TNF受體；sIL-1RI；sIL-1RII；sIL-6R；抗發炎細胞激素；IL-4；IL-10；IL-11；及TGF-β。
本發明係關於結合IL-17之IL-17結合蛋白(包括(但不限於)抗IL-17抗體或其抗原結合部分)以及結合IL-17及另一標靶之多價多特異性結合蛋白(諸如DVD-IgTM)。本發明之各種態樣係關於抗體及抗體片段、DVD-Ig結合蛋白、及其醫藥組合物，以及用於製備該等IL-17結合蛋白(包括抗體、DVD-Ig結合蛋白及其片段)之核酸、重組表現載體及宿主細胞。使用本發明之IL-17結合蛋白來偵測人類IL-17A同型二聚體及/或IL-17A/F雜二聚體、活體外或活體內抑制人類IL-17A同型二聚體及/或IL-17A/F雜二聚體、及調控基因表現的方法亦由本發明所涵蓋。
本發明亦涵蓋任何能夠與本文所述之IL-17結合蛋白競爭之結合蛋白或抗體。
除非本文中另作定義，否則關於本發明使用之科學及技術術語應具有一般技術者通常所瞭解之含義。該等術語之含義及範疇應為明確的，然而，在存在任何潛在歧義之情況下，本文提供之定義優先於任何詞典或外來定義。此外，除非上下文另外要求，否則單數術語應包括複數且複數術語應包括單數。在此申請案中，除非另有說明，否則「或」之使用意謂「及/或」。此外，術語「包括」以及其他形式之使用不具限制性。同樣，除非另外明確說明，否則諸如「要素」或「組份」之術語涵蓋包含一個單元之要素及組份以及包含一個以上次單元之要素及組份。
一般而言，關於本文所述之細胞及組織培養、分子生物學、免疫學、微生物學、遺傳學及蛋白質及核酸化學及雜交所用之命名以及本文所述之細胞及組織培養、分子生物學、免疫學、微生物學、遺傳學及蛋白質及核酸化學及雜交之技術為此項技術中熟知且常用之彼等命名及技術。除非另外指出，否則本發明之方法及技術一般根據此項技術中所熟知且如貫穿本說明書所引用及論述之各種一般參考文獻及更特定之參考文獻中所述的習知方法來執行。酶促反應及純化技術係根據製造商之說明書，如此項技術中通常所實現或如本文所述來執行。關於本文所述之分析化學、合成有機化學及醫學及藥物化學所用之命名以及本文所述之分析化學、合成有機化學及醫學及藥物化學之實驗室程序及技術為此項技術中熟知且常用之彼等命名、實驗室程序及技術。使用標準技術來進行化學合成、化學分析、醫藥製備、調配及傳遞、及治療患者。
為了可更易於瞭解本發明，以下定義所選術語。
如本文所用之術語「多肽」係指胺基酸之任何聚合鏈。術語「肽」及「蛋白質」可與術語多肽互換使用且亦指胺基酸之聚合鏈。術語「多肽」涵蓋天然或人工蛋白質、蛋白質片段及蛋白質序列之多肽類似物。多肽可為單體或聚合的。除非上下文另外相矛盾，否則本文中「多肽」之使用意欲涵蓋多肽及其片段及變異體(包括變異體之片段)。對於抗原多肽，多肽片段視情況含有多肽之至少一個鄰接或非線性抗原決定基。該至少一個抗原決定基片段之確切邊界可使用此項技術中之一般技能來確定。該片段包含至少約5個鄰接胺基酸，諸如至少約10個鄰接胺基酸、至少約15個鄰接胺基酸，或至少約20個鄰接胺基酸。多肽之變異體係如本文所述。
術語「分離之蛋白」或「分離之多肽」為如下蛋白質或多肽，其根據起源或衍生來源不與其天然狀態下所伴隨之天然締合組份締合；實質上不含來自同一物種之其他蛋白質；由來自不同物種之細胞表現；或不存在於自然界中。因此，以化學方式合成或在不同於天然起源細胞之細胞系統中所合成之多肽將與其天然締合組份「相分離」。亦可使用此項技術中熟知之蛋白質純化技術，藉由分離使蛋白質實質上不含天然締合組份。
如本文中所用之術語「回收」係指例如使用此項技術中熟知之蛋白質純化技術，藉由分離使化學物質(諸如多肽)實質上不含天然締合組份的過程。
如本文中所用之術語「人類IL-17」(本文縮寫為「hIL-17」)包括二聚細胞激素蛋白。該術語包括包含2個15 kD IL-17A蛋白之同型二聚蛋白。該同型二聚蛋白被稱作「IL-17蛋白」。術語人類「IL-17」意欲包括重組人類IL-17(rhIL-17)，其可用標準重組表現方法來製備。人類IL-17A之序列展示於表1中。
如本文中所用之術語「人類IL-17A/F」與「hIL-17A/F」相同，包括15 kD人類IL-17A及人類細胞激素IL-17F之15 kD次單位。人類IL-17A及IL-17F之胺基酸序列展示於表1中。
如本文中所用之「生物活性」係指細胞激素之所有固有生物特性。IL-17A及IL-17A/F之生物特性包括(但不限於)結合IL-17受體。
如本文中所用的與抗體、蛋白質或肽與第二化學物質之相互作用有關的術語「特異性結合」意謂該相互作用視化學物質上特定結構(例如抗原決定子或抗原決定基)之存在而定；例如，抗體一般識別且結合特定蛋白結構而非蛋白質。若抗體對抗原決定基「A」具有特異性，則含有抗原決定基A(或游離、未標記之A)之分子在含有經標記「A」及抗體之反應中的存在將降低與抗體結合之經標記A之量。
如本文中所用，術語「抗體」泛指任何包含四個多肽鏈(即2個重(H)鏈及2個輕(L)鏈)之免疫球蛋白(Ig)分子，或其保留Ig分子之必需抗原決定基結合特徵之任何功能片段、突變體、變異體或衍生物。該等突變體、變異體或衍生抗體形式在此項技術中為已知的。下文論述其非限制性實施例。
在全長抗體中，各重鏈包含重鏈可變區(本文中縮寫為HCVR或VH)及重鏈恆定區。重鏈恆定區包含3個結構域：CH1、CH2及CH3。各輕鏈包含輕鏈可變區(本文中縮寫為LCVR或VL)及輕鏈恆定區。輕鏈恆定區包含1個結構域，即CL。VH區及VL區可進一步再分為具有高變性之區域(稱作互補決定區(CDR))，其與稱作構架區(FR)之較為保守之區域交替。各VH及VL係由3個CDR及4個FR構成，該等區域自胺基末端至羧基末端按以下順序排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。免疫球蛋白分子可為任何類型(例如IgG、IgE、IgM、IgD、IgA及IgY)、類別(例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1及IgA2)或亞類。
術語「Fc區」係用於定義免疫球蛋白重鏈之C末端區，其可由木瓜蛋白酶消化完整抗體來產生。Fc區可為天然序列Fc區或變異Fc區。免疫球蛋白之Fc區一般包含2個恆定域(即CH2域及CH3域)，且視情況包含CH4域。置換Fc部分中之胺基酸殘基以改變抗體效應功能在此項技術中為已知的(Winter等人，美國專利第5,648,260號及第5,624,821號)。抗體之Fc部分介導若干種重要效應功能，例如，細胞激素誘導、ADCC、吞噬作用、補體依賴性細胞毒性(CDC)以及抗體及抗原-抗體複合物之半衰期/清除率。在一些狀況下，此等效應功能為治療性抗體所需，但在其他狀況下，可能不需要此等效應功能或其甚至為有害的，此視治療目的而定。某些人類IgG同型(尤其IgG1及IgG3)分別經由結合FcγR及補體C1q來介導ADCC及CDC。新生兒Fc受體(FcRn)為決定抗體之循環半衰期之關鍵組份。在另一實施例中，置換抗體之恆定區(例如抗體之Fc區)中之至少一個胺基酸殘基，以便改變抗體之效應功能。免疫球蛋白之2個相同重鏈的二聚合由CH3域之二聚合所介導且由鉸鏈區內之二硫鍵穩定化(Huber等人,Nature,264: 415-20；Thies等人,1999 J. Mol. Biol.,293: 67-79)。鉸鏈區內之半胱胺酸殘基的突變阻止重鏈-重鏈二硫鍵形成，將使CH3域之二聚合不穩定。已識別出負責CH3二聚合之殘基(Dall'Acqua 1998 Biochemistry,37: 9266-9273)。因此，有可能產生單價半Ig。有趣的是，已在自然界中發現IgG及IgA亞類兩者之此等單價半Ig分子(Seligman,1978 Ann. Immunol.,129: 855-70；Biewenga等人,1983 Clin Exp Immunol 51: 395-400)。FcRn:Ig Fc區之化學計量已測定為2:1(West等人,2000 Biochemistry,39: 9698-708)，且一半Fc足以介導FcRn結合(Kim等人,1994,Eur. J. Immunol.,24: 542-548.)。干擾CH3域二聚合之突變可能不會對其FcRn結合產生較大之不利影響，此係因為對於CH3二聚合較重要之殘基位於CH3b摺疊結構之內界面上，而負責FcRn結合之區域位於CH2-CH3域之外界面上。然而，半Ig分子由於其尺寸比常規抗體小而可在組織穿透方面具有某些優勢。在一實施例中，置換本發明結合蛋白之恆定區(例如Fc區)中的至少一個胺基酸殘基，以便干擾重鏈之二聚合，從而產生半DVD Ig分子。IgG之消炎活性完全視IgG Fc片段之N連接聚糖之唾液酸化(sialylation)而定。已確定消炎活性之確切聚糖要求，以便可形成適合IgG1 Fc片段，從而產生效能有極大增強之完全重組的唾液酸化IgG1 Fc(Anthony,R.M.等人,(2008) Science 320:373-376)。
如本文中所用之術語抗體之「抗原結合部分」(或簡稱為「抗體部分」)係指抗體之一或多個保留與抗原(例如hIL-17)特異性結合之能力的片段。已展示抗體之抗原結合功能可由全長抗體之片段來執行。該等抗體實施例亦可為雙特異性、雙重特異性或多特異性形式；其特異性結合兩種或兩種以上不同抗原。涵蓋於術語抗體之「抗原結合部分」內的結合片段之實例包括(i)Fab片段，一種由VL、VH、CL及CH1域組成之單價片段；(ii)F(ab')2片段，一種包含鉸鏈區由二硫橋連接之2個Fab片段的二價片段；(iii)由VH及CH1域組成之Fd片段；(iv)由抗體單臂之VL及VH域組成之Fv片段；(v)dAb片段(Ward等人,(1989) Nature,341:544-546；Winter等人,PCT公開案第WO 90/05144 A1號，其係以引用方式併入本文中)，其包含單個可變域；及(vi)分離之互補決定區(CDR)。此外，儘管Fv片段之2個結構域VL及VH係由獨立基因編碼，但其可使用重組方法經由使其能夠成為單一蛋白質鏈之合成連接子接合，在該單一蛋白質鏈中，VL及VH區配對形成單價分子(稱作單鏈Fv(scFv)；參見例如Bird等人,(1988) Science,242:423-426及Huston等人,(1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA,85: 5879-5883)。該等單鏈抗體亦意欲涵蓋於術語抗體之「抗原結合部分」內。亦涵蓋單鏈抗體之其他形式，諸如雙功能抗體。雙功能抗體為二價雙特異性抗體，其中VH及VL域表現於單一多肽鏈上，但使用過短連接子以致同一鏈上之2個結構域之間無法配對，從而迫使該等結構域與另一鏈之互補結構域配對且形成2個抗原結合位點(參見例如Holliger等人,(1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA,90: 6444-6448；Poljak等人(1994) Structure,2: 1121-1123)。該等抗體結合部分在此項技術中為已知的(Kontermann及Dubel編,Antibody Engineering(2001) Springer-Verlag. New York.第790頁(ISBN 3-540-41354-5))。另外，單鏈抗體亦包括「線性抗體」，其包含連同互補輕鏈多肽形成一對抗原結合區之一對串聯Fv片段(VH-CH1-VH-CH1)(Zapata等人,Protein Eng. 8(10):1057-1062(1995)及美國專利第5,641,870號)。
免疫球蛋白恆定(C)域係指重(CH)鏈或輕(CL)鏈恆定域。鼠類及人類IgG重鏈及輕鏈恆定域胺基酸序列在此項技術中為已知的。
如本文所用之術語「IL-17結合蛋白建構體」(或「結合蛋白建構體」)係指包含一或多個本發明之抗原結合部分連接至連接多肽或免疫球蛋白恆定域的多肽。連接多肽包含2個或2個以上由肽鍵接合之胺基酸殘基且用於連接一或多個抗原結合部分。該等連接多肽在此項技術中為熟知的(參見例如Holliger等人,(1993)Proc. Natl. Acad. Sci. USA,90: 6444-6448；Poljak等人,(1994) Structure,2: 1121-1123)。免疫球蛋白恆定域係指重鏈或輕鏈恆定域。人類IgG重鏈及輕鏈恆定域胺基酸序列在此項技術中為已知的且呈現於表2中。
此外，IL-17結合蛋白(諸如抗體或其抗原結合部分)可為由抗體或抗體部分與一或多種其他蛋白質或肽共價或非共價締合所形成的較大免疫黏附分子之一部分。該等免疫黏附分子之實例包括使用抗生蛋白鏈菌素核心區來製備四聚scFv分子(Kipriyanov,S.M.等人,(1995) Human Antibodies and Hybridomas,6: 93-101)及使用半胱胺酸殘基、標記肽及C末端聚組胺酸標籤來製備二價及經生物素標記之scFv分子(Kipriyanov,S.M.等人,(1994) Mol. Immunol.,31:1047-1058)。可使用習知技術(諸如分別用木瓜蛋白酶或胃蛋白酶消化整個抗體)自整個抗體製備抗體部分，諸如Fab及F(ab')2片段。此外，如本文中所述，可使用標準重組DNA技術來獲得抗體、抗體部分及免疫黏附分子。
如本文中所用之「分離之抗體」意欲指實質上不含其他具有不同抗原特異性之抗體的抗體(例如，特異性結合hIL-17之分離之抗體實質上不含特異性結合除hIL-17以外之抗原的抗體)。然而，特異性結合hIL-17之分離之抗體可對其他抗原(諸如來自其他物種之IL-17分子)具有交叉反應性。此外，分離之抗體可實質上不含其他細胞物質及/或化學物質。
如本文中所用之術語「單株抗體」或「mAb」係指自一群實質上同質之抗體獲得之抗體，亦即構成該群體之個別抗體除可以較少量存在之可能天然存在之突變外皆相同。單株抗體針對單一抗原具有高度特異性。此外，與通常包括針對不同決定子(抗原決定基)之不同抗體的多株抗體製劑對比，各mAb針對抗原上之單一決定子。修飾語「單株」不應理解為需要藉由任何特定方法製備抗體。
如本文中所用之術語「人類抗體」意欲包括具有源自人類生殖系免疫球蛋白序列之可變區及恆定區的抗體。本發明之人類抗體可包括並非由人類生殖系免疫球蛋白序列編碼之胺基酸殘基(例如，由活體外隨機或位點特異性突變誘發或由活體內體細胞突變所引入之突變)，例如在CDR且尤其CDR3中。然而，如本文中所用之術語「人類抗體」並不意欲包括已將源自另一哺乳動物物種(諸如小鼠)生殖系之CDR序列移植於人類構架序列上的抗體。
如本文中所用之術語「重組人類抗體」意欲包括藉由重組方式製備、表現、形成或分離之所有人類抗體，諸如使用轉染至宿主細胞中之重組表現載體表現之抗體(進一步描述於下文第II C部分中)、自重組的組合人類抗體文庫分離之抗體(Hoogenboom H.R.,(1997) TIB Tech.,15: 62-70；Azzazy H.及Highsmith W.E.,(2002) Clin. Biochem.,35: 425-445；Gavilondo J.V.及Larrick J.W.(2002) BioTechniques,29: 128-145；Hoogenboom H.及Chames P.(2000) Immunology Today,21: 371-378)、自人類免疫球蛋白基因之轉殖基因動物(例如小鼠)分離之抗體(參見例如Taylor,L. D.等人,(1992) Nucl. Acids Res.,20: 6287-6295；Kellermann S-A.及Green L.L.(2002) Current Opinion in Biotechnology,13: 593-597；Little M.等人,(2000) Immunology Today,21: 364-370)或藉由涉及將人類免疫球蛋白基因序列拼接至其他DNA序列上之任何其他方式製備、表現、形成或分離之抗體。該等重組人類抗體具有源自人類生殖系免疫球蛋白序列之可變區及恆定區。然而，在某些實施例中，對該等重組人類抗體進行活體外突變誘發(或者，當使用人類Ig序列之轉殖基因動物時，進行活體內體細胞突變誘發)，且因此，重組抗體之VH及VL區之胺基酸序列為雖然源自人類生殖系VH及VL序列且與人類生殖系VH及VL序列有關，但可能無法天然存在於活體內人類抗體生殖系譜系內的序列。
術語「嵌合抗體」係指包含來自一個物種之重鏈及輕鏈可變區序列及來自另一物種之恆定區序列的抗體，諸如具有鼠類重鏈及輕鏈可變區連接至人類恆定區之抗體。
術語「CDR移植抗體」係指包含來自一個物種之重鏈及輕鏈可變區序列，但VH及/或VL之一或多個CDR區之序列由另一物種之CDR序列置換的抗體，諸如具有鼠類重鏈及輕鏈可變區且一或多個鼠類CDR(例如CDR3)已由人類CDR序列置換之抗體。
術語「Kabat編號」、「Kabat定義」及「Kabat標記」在本文中可互換使用。在此項技術中公認之此等術語係指對比抗體或其抗原結合部分之重鏈及輕鏈可變區中之其他胺基酸殘基更可變(亦即高變)的胺基酸殘基進行編號之系統(Kabat等人,(1971) Ann. NY Aca.,Sci.,190:382-391及Kabat,E.A.等人,(1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest,第5版,U.S. Department of Health and Human Services,NIH出版號：91-3242)。對於重鏈可變區，CDR1之高變區處於胺基酸位置31至35之範圍內，CDR2之高變區處於胺基酸位置50至65之範圍內，且CDR3之高變區處於胺基酸位置95至102之範圍內。對於輕鏈可變區，CDR1之高變區處於胺基酸位置24至34之範圍內，CDR2之高變區處於胺基酸位置50至56之範圍內，且CDR3之高變區處於胺基酸位置89至97之範圍內。
如本文中所用之術語「CDR」係指抗體可變序列內之互補決定區。在重鏈及輕鏈之各可變區中存在3個CDR，針對各可變區，將其命名為CDR1、CDR2及CDR3。如本文中所用之術語「CDR組」係指在單個可變區中存在的3個能夠結合抗原之CDR之群組。已根據不同系統對此等CDR之確切邊界進行不同界定。由Kabat所述之系統(Kabat等人,Sequences of Proteins of Immunological Interest(National Institutes of Health,Bethesda,Md.(1987)及(1991))不僅提供適用於任何抗體可變區之明確殘基編號系統，而且提供界定3個CDR之確切殘基邊界。此等CDR可稱作Kabat CDR。Chothia及其合作者(Chothia及Lesk,J. Mol. Biol.,196: 901-917(1987)及Chothia等人,Nature,342: 877-883(1989))發現Kabat CDR內之某些子部分儘管在胺基酸序列之層面上存在巨大差異，但採用幾乎相同之肽主鏈構形。此等子部分被命名為L1、L2及L3或H1、H2及H3，其中「L」及「H」分別表示輕鏈區及重鏈區。此等區可被稱作Chothia CDR，其具有與Kabat CDR重疊之邊界。界定與Kabat CDR重疊之CDR之其他邊界已由Padlan(FASEB J.,9: 133-139(1995))及MacCallum(J. Mol. Biol.,262(5): 732-45(1996))描述。其他CDR邊界界定可能未必嚴格遵循上述系統之一，但仍將與Kabat CDR重疊，然而其可能會根據特定殘基或殘基群組或甚至整個CDR不會顯著影響抗原結合之預測或實驗結果而有所縮短或延長。本文中所用之方法可利用根據此等系統中之任一者所定義之CDR，但較佳實施例使用Kabat或Chothia定義之CDR。
如本文中所用之術語「典型」殘基係指界定如由Chothia等人(J. Mol. Biol.,196: 901-907(1987)；Chothia等人,J. Mol. Biol.,227: 799(1992)，兩者皆以引用方式併入本文中)所定義之特定典型CDR結構的CDR或構架中之殘基。根據Chothia等人，多種抗體之CDR之關鍵部分儘管在胺基酸序列之層面上存在巨大差異，但具有幾乎相同之肽主鏈構形。各典型結構主要指定形成環之鄰接胺基酸殘基區段的一組肽主鏈扭轉角。
「親和力成熟」抗體為一種在一或多個CDR中具有一或多個變化之抗體，該(等)變化使得抗體對標靶抗原之親和力與不具有該(等)變化之親本抗體相比得以改良。例示性親和力成熟抗體對標靶抗原將具有奈莫耳或甚至皮莫耳(picomolar)級親和力。多種製備親和力成熟抗體之程序在此項技術中為已知的。舉例而言，Marks等人,Bio/Technology,10: 779-783(1992)描述藉由VH及VL域改組進行親和力成熟。以下文獻描述了CDR及/或構架殘基之隨機突變誘發：Barbas等人,Proc. Nat. Acad. Sci. USA,91: 3809-3813(1994)；Schier等人,Gene,169: 147-155(1995)；Yelton等人,J. Immunol.，155: 1994-2004(1995)；Jackson等人,J. Immunol.,154(7): 3310-3319(1995)；Hawkins等人,J. Mol. Biol.,226: 889-896(1992)。在美國專利第6914128B1號中描述了在選擇性突變誘發位置處及接觸或超突變位置處以活性增強型胺基酸殘基進行選擇性突變。
術語「多價結合蛋白」表示包含2個或2個以上抗原結合位點之結合蛋白。多價結合蛋白較佳經工程改造以具有3個或3個以上抗原結合位點，且一般不為天然存在之抗體。術語「多特異性結合蛋白」係指能夠結合2個或2個以上相關或不相關標靶之結合蛋白。本發明之「雙可變域」(「DVD」)結合蛋白包含2個或2個以上抗原結合位點且為四價或多價結合蛋白。DVD可具有單特異性，亦即能夠結合一個抗原，或具有多特異性，亦即能夠結合2個或2個以上抗原。包含2個重鏈DVD多肽及2個輕鏈DVD多肽之DVD結合蛋白被稱作「DVD免疫球蛋白」或「DVD-Ig」。DVD-Ig之每一半包含1個重鏈DVD多肽及1個輕鏈DVD多肽以及2個或2個以上抗原結合位點。各結合位點包含重鏈可變域及輕鏈可變域，每個抗原結合位點具有總共6個CDR涉及抗原結合。
對DVD-Ig分子之設計、表現及表徵的描述係提供於PCT公開案第WO 2007/024715號、美國專利第7,612,181號及Wu等人,Nature Biotech.,25: 1290-1297(2007)中。該等DVD-Ig分子之較佳實例包含：包含結構式VD1-(X1)n-VD2-C-(X2)n之重鏈，其中VD1為第一重鏈可變域，VD2為第二重鏈可變域，C為重鏈恆定域，X1為連接子(限制條件為其不為CH1)，X2為Fc區，且n為0或1，但較佳為1；以及包含結構式VD1-(X1)n-VD2-C-(X2)n之輕鏈，其中VD1為第一輕鏈可變域，VD2為第二輕鏈可變域，C為輕鏈恆定域，X1為連接子(限制條件為其不為CH1)，且X2不包含Fc區，且n為0或1，但較佳為1。該種DVD-Ig可包含2個該等重鏈及2個該等輕鏈，其中各鏈包含以串聯方式連接之可變域而無介於可變區之間的插入恆定區，其中重鏈與輕鏈締合以形成串聯之功能性抗原結合位點，且一對重鏈及輕鏈可與另一對重鏈及輕鏈締合以形成具有4個功能性抗原結合位點之四聚結合蛋白。在另一實例中，DVD-Ig分子可包含各包含3個以串聯方式連接之可變域(VD1、VD2、VD3)而無介於可變域之間的插入恆定區的重鏈及輕鏈，其中一對重鏈及輕鏈可締合以形成3個抗原結合位點，且其中一對重鏈及輕鏈可與另一對重鏈及輕鏈締合以形成具有6個抗原結合位點之四聚結合蛋白。
DVD-Ig結合蛋白可結合IL-17、IL-17A單體、IL-17F單體及其二聚體之一或多種抗原決定基。DVD-Ig結合蛋白亦可結合IL-17之抗原決定基及除IL-17A及/或IL-17F多肽以外之第二標靶抗原之抗原決定基。
如本文中所用之術語「雙特異性抗體」係指藉由以下技術產生之全長抗體：四源雜交瘤(quadroma)技術(參見Milstein,C.及A.C. Cuello,Nature,1983. 305(5934)：第537-40頁)；使2種不同單株抗體進行化學結合(參見Staerz,U.D.等人,Nature,1985. 314(6012): 第628-31頁)；或將突變引入Fc區中之杵臼結構技術(knob-into-hole)或類似方法(參見Holliger等人,Proc. Natl. Acad. Sci. USA,1993,90(14): 6444-6448)，該等技術產生多種不同免疫球蛋白物質，其中僅一者為功能性雙特異性抗體。藉由分子功能，雙特異性抗體在其2個結合臂(一對HC/LC)之一上結合一個抗原(或抗原決定基)，且在其第二臂(不同的一對HC/LC)上結合不同抗原(或抗原決定基)。藉由此定義，雙特異性抗體具有2個不同之抗原結合臂(在特異性及CDR序列方面)，且對於其結合之各抗原而言為單價的。
如本文中所用之術語「雙重特異性抗體」係指可在兩個結合臂(一對HC/LC)中之各者中結合2個不同抗原(或抗原決定基)的全長抗體(參見PCT公開案WO 02/02773)。因此，雙重特異性結合蛋白具有2個具有相同特異性及相同CDR序列之相同抗原結合臂，且對於其結合之各抗原而言為二價的。
結合蛋白之「功能性抗原結合位點」為能夠結合標靶抗原之結合位點。抗原結合位點之抗原結合親和力不一定與抗原結合位點所源自之親本抗體一樣強，但結合抗原之能力必須可使用多種已知用於評價抗體與抗原結合之方法中之任一者來測量。此外，本文中多價抗體之各抗原結合位點之抗原結合親和力不必在數量上為相同的。
術語「細胞激素」為由一個細胞群體釋放且以細胞間介體形式作用於另一細胞群體的蛋白質之通用術語。該等細胞激素之實例為淋巴介質、單核球激素及傳統多肽激素。細胞激素中包括生長激素，諸如人類生長激素、N-甲硫胺醯基人類生長激素及牛生長激素；副甲狀腺激素；甲狀腺素；胰島素；前胰島素；鬆弛素；前鬆弛素；醣蛋白激素，諸如促卵泡激素(FSH)、促甲狀腺激素(TSH)及促黃體生成激素(LH)；肝生長因子；纖維母細胞生長因子；促乳素；胎盤生乳素；腫瘤壞死因子，諸如腫瘤壞死因子-α(TNF-α)及腫瘤壞死因子-β(TNF-β)；苗勒氏抑制物質(mullerian-inhibiting substance)；小鼠促性腺激素相關肽；抑制素；活化素；血管內皮生長因子；整合素；血小板生成素(TPO)；神經生長因子，諸如NGF-α；血小板生長因子；胎盤生長因子；轉化生長因子(TGF)，諸如TGF-α及TGF-β；胰島素樣生長因子-1及胰島素樣生長因子-11；紅血球生成素(EPO)；骨生成誘導因子；干擾素，諸如干擾素-α(IFN-α)、干擾素-β(IFN-β)及干擾素-γ(IFN-γ)；群落刺激因子(CSF)，諸如巨噬細胞-CSF(M-CSF)；粒細胞巨噬細胞-CSF(GM-CSF)；及粒細胞-CSF(G-CSF)；介白素(IL)，諸如IL-1、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-11、IL-12、IL-13、IL-15、IL-17、IL-18、IL-21、IL-22、IL-23、IL-33；及其他多肽因子，包括LIF及kit配位體(KL)。如本文中所用之術語細胞激素包括來自天然來源或來自重組細胞培養物之蛋白質以及天然序列細胞激素之生物活性等效物。
如本文中所用之術語「供體」及「供體抗體」係指提供一或多個CDR之抗體。在一較佳實施例中，供體抗體為來自與構架區所獲自或源自之抗體不同之物種的抗體。在人類化抗體之狀況下，術語「供體抗體」係指提供一或多個CDR之非人類抗體。
如本文中所用之術語「構架」或「構架序列」係指可變區中除去CDR剩餘之序列。由於CDR序列之確切定義可由不同系統確定，故構架序列之意義亦具有相應不同之解釋。6個CDR(輕鏈之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3以及重鏈之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3)亦將輕鏈及重鏈之構架區在各鏈上分成4個子區(FR1、FR2、FR3及FR4)，其中CDR1位於FR1與FR2之間，CDR2位於FR2與FR3之間，且CDR3位於FR3與FR4之間。在未指定特定子區為FR1、FR2、FR3或FR4之情況下，如他人所提及之構架區表示單個天然存在之免疫球蛋白鏈之可變區內的組合FR。如本文中所用，FR表示4個子區之一，且FRs表示構成構架區之4個子區中之兩者或兩者以上。
如本文中所用之術語「受體」及「受體抗體」係指提供一或多個構架區之至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%之胺基酸序列的抗體或編碼一或多個構架區之至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%之胺基酸序列的核酸序列。在一些實施例中，術語「受體」係指提供恆定區之抗體胺基酸或編碼恆定區之核酸序列。在另一實施例中，術語「受體」係指提供構架區及恆定區中之一或多者的抗體胺基酸或編碼構架區及恆定區中之一或多者的核酸序列。在一特定實施例中，術語「受體」係指提供或編碼一或多個構架區之至少80%、較佳為至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%之胺基酸序列的人類抗體胺基酸或核酸序列。根據此實施例，受體可含有至少1個、至少2個、至少3個、至少4個、至少5個或至少10個在人類抗體之一或多個特定位置處並不存在之胺基酸殘基。受體構架區及/或受體恆定區可例如獲自或源自生殖系抗體基因、成熟抗體基因、功能抗體(例如，此項技術中熟知之抗體、正在開發中之抗體或市售抗體)。
人類重鏈及輕鏈受體序列在此項技術中為已知的。在本發明之一個實施例中，人類重鏈及輕鏈受體序列係選自以下所列之序列：抗體胚系基因資料庫(V-base)(http://vbase.mrc-cpe.cam.ac.uk/)或IMGT(國際免疫遺傳學資訊系統(the international ImMunoGeneTics information system))(http://imgt.cines.fr/textes/IMGTrepertoire/LocusGenes/)。在本發明之另一實施例中，人類重鏈及輕鏈受體序列係選自表3及表4中所示之序列。
如本文中所用之術語「生殖系抗體基因」或「基因片段」係指由未經歷會引起基因重排及突變以使特定免疫球蛋白表現之成熟過程的非淋巴細胞編碼之免疫球蛋白序列。(參見例如Shapiro等人,Crit. Rev. Immunol.,22(3): 183-200(2002)；Marchalonis等人,Adv. Exp. Med. Biol.,484: 13-30(2001))。由本發明之各實施例所提供之優勢之一源於以下認知，即與成熟抗體基因相比，生殖系抗體基因更有可能保留物種中個體所特有之基本胺基酸序列結構，因此當以治療方式用於該物種時，不太可能會將其識別為來自外來來源。
如本文中所用之術語「關鍵」殘基係指可變區內對抗體(特定言之，人類化抗體)之結合特異性及/或親和力具有較大影響之某些殘基。關鍵殘基包括(但不限於)以下中的一或多者：與CDR相鄰之殘基、潛在糖基化位點(可為N-糖基化位點或O-糖基化位點)、稀有殘基、能與抗原相互作用之殘基、能與CDR相互作用之殘基、典型殘基、介於重鏈可變區與輕鏈可變區之間的接觸殘基、處於Vernier區域內之殘基及在Chothia定義之可變重鏈CDR1與Kabat定義之第一重鏈構架之間重疊的區域中之殘基。
術語「人類化抗體」係指包含來自非人類物種(例如小鼠)之重鏈及輕鏈可變區序列，但VH及/或VL序列之至少一部分已經改變而更「類似於人類」(亦即與人類生殖系可變序列更相似)的抗體。一種類型之人類化抗體為CDR移植抗體，其中將人類CDR序列引入非人類VH及VL序列中以替代相應的非人類CDR序列。「人類化抗體」亦為免疫特異性結合相關抗原且包含實質上具有人類抗體之胺基酸序列的構架(FR)區及實質上具有非人類抗體之胺基酸序列的互補決定區(CDR)之抗體或其變異體、衍生物、類似物或片段。如本文中所用之術語「實質上」在CDR之情況下係指CDR之胺基酸序列與非人類抗體CDR之胺基酸序列至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%一致。人類化抗體包含至少一個且通常兩個可變域中之實質上全部(Fab、Fab'、F(ab')2、FabC、Fv)，其中所有或實質上所有CDR區對應於非人類免疫球蛋白(亦即供體抗體)之CDR區且所有或實質上所有構架區為人類免疫球蛋白共同序列之構架區。在一實施例中，人類化抗體亦包含免疫球蛋白恆定區(Fc)之至少一部分，典型地為人類免疫球蛋白恆定區之至少一部分。在一些實施例中，人類化抗體含有輕鏈以及至少重鏈之可變域兩者。抗體亦可包括重鏈之CH1區、鉸鏈區、CH2區、CH3區及CH4區。在一些實施例中，人類化抗體僅含有人類化輕鏈。在一些實施例中，人類化抗體僅含有人類化重鏈。在特定實施例中，人類化抗體僅含有輕鏈及/或人類化重鏈之人類化可變域。
人類化抗體可選自免疫球蛋白之任何類別(包括IgM、IgG、IgD、IgA及IgE)及任何同型(包括(但不限於)IgG1、IgG2、IgG3及IgG4)。人類化抗體可包含來自一種以上類別或同型之序列，且可使用此項技術中熟知之技術來選擇特定恆定域以使所需效應功能最佳化。
人類化抗體之構架區及CDR區無須精確對應於親本序列，例如可藉由至少一個胺基酸殘基之取代、插入及/或缺失而對供體抗體CDR或共同構架進行突變誘發，使得該位點之CDR或構架殘基並不與供體抗體或共同構架相對應。然而，在一較佳實施例中，該等突變不會大量存在。通常，至少80%、較佳至少85%、更佳至少90%且最佳至少95%之人類化抗體殘基將與親本FR及CDR序列之殘基相對應。如本文中所用之術語「共同構架」係指共同免疫球蛋白序列中之構架區。如本文中所用之術語「共同免疫球蛋白序列」係指由相關免疫球蛋白序列之家族中最常出現之胺基酸(或核苷酸)形成之序列(參見例如Winnaker,From Genes to Clones(Verlagsgesellschaft,Weinheim,Germany 1987))。在免疫球蛋白家族中，共同序列中之各位置係由該家族中最常出現於彼位置之胺基酸佔據。若兩種胺基酸出現頻率相同，則共同序列中可包括任一者。
關於建構DVD-Ig或其他結合蛋白分子，「連接子」係用於表示包含2個或2個以上由肽鍵接合之胺基酸殘基且用於連接一或多個抗原結合部分的多肽。該等連接多肽在此項技術中為熟知的(參見例如Holliger等人,(1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA,90: 6444-6448；Poljak等人,(1994) Structure,2: 1121-1123)。例示性連接子包括(但不限於)GGGGSG(SEQ ID NO:887)、GGSGG(SEQ ID NO:888)、GGGGSGGGGS(SEQ ID NO:889)、GGSGGGGSGS(SEQ ID NO:890)、GGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO:891)、GGGGSGGGGSGGGG(SEQ ID NO:892)、GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO:893)、ASTKGP(SEQ ID NO:894)、ASTKGPSVFPLAP(SEQ ID NO:895)、TVAAP(SEQ ID NO:896)、TVAAPSVFIFPP(SEQ ID NO:897)、AKTTPKLEEGEFSEAR(SEQ ID NO:898)、AKTTPKLEEGEFSEARV(SEQ ID NO:899)、AKTTPKLGG(SEQ ID NO:900)、SAKTTPKLGG(SEQ ID NO:901)、SAKTTP(SEQ ID NO:902)、RADAAP(SEQ ID NO:903)、RADAAPTVS(SEQ ID NO:904)、RADAAAAGGPGS(SEQ ID NO:905)、RADAAAAGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO:906)、SAKTTPKLEEGEFSEARV(SEQ ID NO:907)、ADAAP(SEQ ID NO:908)、ADAAPTVSIFPP(SEQ ID NO:909)、QPKAAP(SEQ ID NO:910)、QPKAAPSVTLFPP(SEQ ID NO:911)、AKTTPP(SEQ ID NO:912)、AKTTPPSVTPLAP(SEQ ID NO:913)、AKTTAP(SEQ ID NO:914)、AKTTAPSVYPLAP(SEQ ID NO:915)、GENKVEYAPALMALS(SEQ ID NO:916)、GPAKELTPLKEAKVS(SEQ ID NO:917)及GHEAAAVMQVQYPAS(SEQ ID NO:918)。
如本文中所用之「Vernier」區係指如由Foote及Winter(1992,J. Mol. Biol. 224:487-499，其係以引用方式併入本文中)所述，可調整CDR結構且微調對抗原之適合性的構架殘基之子集。Vernier區殘基形成CDR之下伏層且可能影響CDR結構及抗體親和力。
如本文中所用之術語「中和」係指當結合蛋白特異性結合抗原時中和抗原(例如，細胞激素IL-17)之生物活性。較佳的是，本文所述之中和結合蛋白結合hIL-17及/或hIL-17A/F，從而抑制hIL-17及/或hIL-17A/F之生物活性。較佳的是，中和結合蛋白結合hIL-17及/或hIL-17A/F且使hIL-17及/或hIL-17A/F之生物活性降低至少約20%、40%、60%、80%、85%或85%以上。可藉由測量此項技術中熟知之一或多種hIL-17及/或hIL-17A/F生物活性指標來評估中和結合蛋白對hIL-17及/或hIL-17A/F生物活性之抑制作用。舉例而言，抑制HS27細胞中由IL-17誘導之人類IL-6分泌。
術語「活性」包括諸如以下之活性:抗體對抗原之結合特異性/親和力(例如，抗hIL-17抗體與IL-17抗原結合)及/或抗體之中和效能(例如，抗hIL-17抗體與hIL-17結合會抑制hIL-17之生物活性，例如抑制HS27細胞中由IL-17誘導之人類IL-6分泌)。
術語「抗原決定基」包括任何能夠特異性結合免疫球蛋白或T細胞受體之多肽決定子。在某些實施例中，抗原決定基決定子包括分子之化學活性表面基團，諸如胺基酸、糖側鏈、磷醯基或磺醯基，且在某些實施例中，其可能具有特定三維結構特徵及/或特定電荷特徵。抗原決定基為抗原中為抗體所結合之區域。在某些實施例中，當抗體優先識別其在蛋白質及/或巨分子之複雜混合物中的標靶抗原時，則認為該抗體特異性結合該抗原。若抗體交叉競爭(一抗體抑制另一抗體之結合或調節效應)，則認為該等抗體「結合同一抗原決定基」。另外，對抗原決定基之結構定義(重疊、類似、相同)係有意義的，但因為功能定義涵蓋結構(結合)及功能(調節、競爭)參數，所以其通常更有意義。
如本文中所用之術語「表面電漿共振」係指允許藉由例如使用BIAcore系統(Pharmacia Biosensor AB,Uppsala,Sweden and Piscataway,NJ)偵測生物感測器矩陣內之蛋白質濃度變化來分析即時生物特異性相互作用的光學現象。關於其他描述，參見Jnsson,U.等人,(1993) Ann. Biol. Clin.,51: 19-26；Jnsson等人,(1991) BioTechniques,11:620-627；Johnsson等人,(1995) J. Mol. Recognit.,8:125-131；及Johnnson等人,(1991) Anal. Biochem.,198:268-277。
如本文中所用之術語「Kon」(亦稱為「Kon」、「kon」)意欲指如此項技術中所知的結合蛋白(例如抗體)與抗原締合形成締合複合物(例如抗體/抗原複合物)之結合速率常數。「Kon」亦稱作術語「締合速率常數」或「ka」，其在本文中可互換使用。此值指示抗體與其標靶抗原之結合速率或抗體與抗原之間的複合物形成速率，如由以下方程式所示：
抗體(「Ab」)+抗原(「Ag」)→Ab-Ag。
如本文中所用之術語「Koff」(亦稱為「Koff」、「koff」)意欲指如此項技術中所知的結合蛋白(例如抗體)自締合複合物(例如抗體/抗原複合物)解離之脫離速率常數或「解離速率常數」。此值指示抗體自其標靶抗原解離或Ab-Ag複合物隨時間推移分離成游離抗體及抗原之解離速率，如由以下方程式所示：
Ab+Ag←Ab-Ag。
如本文中所用之術語「KD」(亦稱為「Kd」)意欲指「平衡解離常數」，且係指在滴定測量中在平衡時獲得之值或藉由用解離速率常數(Koff)除以締合速率常數(Kon)獲得之值。締合速率常數(Kon)、解離速率常數(Koff)及平衡解離常數(KD)係用於表示抗體與抗原之結合親和力。測定締合及解離速率常數之方法在此項技術中為熟知的。使用基於螢光之技術可提供檢定平衡時生理緩衝液中之樣本的高靈敏度及能力。可使用其他實驗方法及儀器，諸如BIAcore(生物分子相互作用分析)檢定(例如可獲自BIAcore International AB,a GE Healthcare company,Uppsala,Sweden之儀器)。另外，亦可使用可獲自Sapidyne Instruments(Boise,Idaho)之KinExA(動力學排除檢定)檢定。
術語「標記」及「可偵測標記」意謂連接於特定結合搭配物(諸如抗體或分析物)例如以便使特定結合對之成員(諸如抗體及分析物)之間的反應變得可偵測的部分。如此經標記之特定結合搭配物(例如抗體或分析物)被稱作「經可偵測標記」。因此，如本文中所用之術語「經標記結合蛋白」係指合併有使該結合蛋白得以識別之標記的蛋白質。在一實施例中，標記為能產生可用目測或儀器方式偵測出之信號的可偵測標記，例如併入經放射性標記之胺基酸或連接至具有生物素基部分之多肽，該等胺基酸或部分可用經標記抗生物素蛋白或抗生蛋白鏈菌素(例如含有可以光學或比色法偵測之螢光標記或酶活性的抗生蛋白鏈菌素)偵測。多肽之標記的實例包括(但不限於)以下：放射性同位素或放射性核種(例如3H、14C、35S、90Y、99Tc、111In、125I、131I、177Lu、166Ho或153Sm)、色素原、螢光標記(例如FITC、若丹明(rhodamine)、鑭系元素磷光體)、酶標記(例如辣根過氧化酶、螢光素酶、鹼性磷酸酶)、化學發光標記、生物素基、由第二報導體識別之預定多肽抗原決定基(例如白胺酸拉鏈對序列、二次抗體之結合位點、金屬結合域、抗原決定基標籤)及磁性劑(例如釓螯合劑)。通常用於免疫檢定之標記的代表性實例包括產生光之部分(例如吖錠化合物(acridinium compound))及產生螢光之部分(例如螢光素)。本文中描述其他標記。就此而言，部分本身可能未經可偵測標記但在與另一部分反應後可變得可偵測。使用術語「經可偵測標記」意欲涵蓋後一類型之可偵測標記。
術語「IL-17結合蛋白接合物」係指本文所述之IL-17結合蛋白以化學方式連接至第二化學部分(諸如治療劑或細胞毒性劑)。術語「劑」在本文中用於表示化合物、化合物之混合物、生物巨分子或由生物材料製成之提取物。治療劑或細胞毒性劑較佳包括(但不限於)百日咳毒素(pertussis toxin)、紫杉醇(taxol)、細胞鬆弛素B(cytochalasin B)、短桿菌素D(gramicidin D)、溴化乙錠、吐根素(emetine)、絲裂黴素(mitomycin)、依託泊苷(etoposide)、特諾波賽(tenoposide)、長春新鹼(vincristine)、長春鹼(vinblastine)、秋水仙鹼(colchicine)、多柔比星(doxorubicin)、道諾黴素(daunorubicin)、二羥基炭疽菌素二酮(dihydroxy anthracin dione)、米托蒽醌(mitoxantrone)、米拉黴素(mithramycin)、放線菌素D(actinomycin D)、1-去氫睪固酮、糖皮質激素、普魯卡因(procaine)、丁卡因(tetracaine)、利多卡因(lidocaine)、普萘洛爾(propra-nolol)及嘌呤黴素(puromycin)及其類似物或同系物。當用於免疫檢定時，IL-17結合蛋白接合物可為可偵測標記抗體，其用作偵測抗體。
本文中所用之術語「晶體」及「結晶」係指以晶體形式存在之結合蛋白(例如抗體)或其抗原結合部分。晶體為固態物質之一種形式，其不同於諸如非晶形固態或液晶態之其他形式。晶體係由原子、離子、分子(例如蛋白質，諸如抗體)或分子組裝體(例如抗原/抗體複合物)之規則重複三維陣列構成。此等三維陣列係根據此領域中公認之特定數學關係排列。晶體中重複之基本單元或建構嵌段被稱作不對稱單元。不對稱單元以符合既定之明確定義之晶體學對稱性之排列方式重複可提供晶體之「單位晶胞」。單位晶胞在所有三維中藉由規則變換重複可提供晶體。參見Gieg等人，第1章,Crystallization of Nucleic Acids and Proteins,a Practical Approach,第2版,(Ducruix及Gieg編)(Oxford University Press,New York,1999),第1-16頁。
術語「聚核苷酸」意謂2個或2個以上核苷酸(核糖核苷酸或去氧核苷酸或任一類型核苷酸之修飾形式)之聚合形式。該術語包括DNA之單股及雙股形式。
術語「分離之聚核苷酸」意謂一種聚核苷酸(例如基因組、cDNA或合成來源之聚核苷酸，或其某種組合)，根據其來源，「分離之聚核苷酸」不與自然界中所發現與「分離之聚核苷酸」在一起的一種聚核苷酸之全部或一部分締合；可操作地連接於一種自然界中不與其連接之聚核苷酸；或不以較大序列之一部分存在於自然界中。
本文中所用之術語「載體」意欲指能夠轉運所連接之另一核酸的核酸分子。一類載體為「質體」，其係指環狀雙股DNA環，可接合其他DNA片段。另一類載體為病毒載體，其中其他DNA片段可接合至病毒基因組中。某些載體能夠在引入之宿主細胞中自主複製(例如具有細菌複製起點之細菌載體及游離型(episomal)哺乳動物載體)。其他載體(例如非游離型哺乳動物載體)可在引入宿主細胞中之後整合至宿主細胞基因組中，且從而與宿主基因組一起被複製。此外，某些載體能夠引導其可操作連接之基因的表現。該等載體在本文中稱作「重組表現載體」(或簡稱為「表現載體」)。一般而言，適用於重組DNA技術中之表現載體常為質體形式。在本說明書中，由於質體為載體之最常使用形式，所以「質體」與「載體」可互換使用。然而，本發明意欲包括該等提供等效功能之其他表現載體形式，諸如病毒載體(例如複製缺陷反轉錄病毒、腺病毒及腺相關病毒)。
術語「可操作連接」係指所述組份處於允許其以其預期方式起作用之關係中的併接。「可操作連接」於編碼序列之控制序列係以使得在與控制序列相容之條件下達成編碼序列之表現的方式接合。「可操作連接」之序列包括與相關基因鄰接之表現控制序列以及起反式作用或在一定距離處起作用以控制相關基因之表現控制序列。如本文中所用之術語「表現控制序列」係指為實現其所接合之編碼序列之表現及加工所必需的聚核苷酸序列。表現控制序列包括合適轉錄起始、終止、啟動子及強化子序列；有效RNA加工信號，諸如拼接及聚腺苷酸化信號；使細胞質mRNA穩定之序列；增強轉譯效率之序列(亦即，Kozak共同序列)；增強蛋白質穩定性之序列；及必要時增強蛋白質分泌之序列。該等控制序列之性質視宿主生物體而不同；在原核生物中，該等控制序列一般包括啟動子、核糖體結合位點及轉錄終止序列；在真核生物中，該等控制序列一般包括啟動子及轉錄終止序列。術語「控制序列」意欲包括其存在對於表現及加工至關重要的組份，且亦可包括其存在具有益處之其他組份，例如前導序列及融合搭配物序列。
如本文中所定義之「轉型」係指使外源DNA進入宿主細胞中之任何過程。可使用此項技術中熟知之各種方法在天然或人工條件下進行轉型。轉型可依靠將外來核酸序列插入至原核或真核宿主細胞中之任何已知方法。該方法係基於所轉型之宿主細胞來選擇且可包括(但不限於)病毒感染、電穿孔、脂質體轉染及粒子轟擊。該等「轉型」細胞包括所插入之DNA能夠作為自主複製質體或作為宿主染色體之一部分進行複製的穩定轉型細胞。其亦包括在有限時段內短暫表現所插入之DNA或RNA的細胞。
術語「重組宿主細胞」(或簡稱為「宿主細胞」)意欲指已引入有外源DNA之細胞。在一實施例中，宿主細胞包含2種或2種以上(例如，多種)編碼抗體之核酸，諸如例如美國專利第7,262,028號中所述之宿主細胞。該等術語不僅意欲指特定個體細胞，而且指該種細胞之子代。因為某些修飾可能因為突變或環境影響而在繼代中發生，所以該子代實際上可能不與母細胞相同，但其仍包括在如本文所用之術語「宿主細胞」之範疇內。在一實施例中，宿主細胞包括選自生物界中之任一者的原核及真核細胞。在另一實施例中，真核細胞包括原生生物、真菌、植物及動物細胞。在另一實施例中，宿主細胞包括(但不限於)原核細胞株大腸桿菌；哺乳動物細胞株CHO、HEK 293、COS、NS0、SP2及PER.C6；昆蟲細胞株Sf9；及真菌細胞釀酒酵母。
可對重組DNA、寡核苷酸合成及組織培養與轉型(例如電穿孔、脂質體轉染)使用標準技術。酶促反應及純化技術可根據製造商之說明書或者如此項技術中通常所實現或如本文中所述來執行。上述技術及程序一般可根據此項技術中所熟知且如貫穿本說明書所引用及論述之各種一般參考文獻及更特定之參考文獻中所述的習知方法來執行。參見例如Sambrook等人,Molecular Cloning: A Laboratory Manual,第2版,(Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,N.Y.,1989)。
如此項技術中所知之「轉殖基因生物體」係指具有含有轉殖基因之細胞的生物體，其中引入生物體(或生物體祖先)中之轉殖基因表現不天然表現於該生物體中之多肽。「轉殖基因」為穩定且可操作地整合於可發育成轉殖基因生物體之細胞的基因組中，從而引導所編碼之基因產物在轉殖基因生物體之一或多種細胞類型或組織中之表現的DNA建構體。
術語「調控」與「調節」可互換使用，且如本文中所用，其係指使相關分子之活性(例如，hIL-17之生物活性)改變或變化。調節可為使相關分子之某種活性或功能的量值增加或降低。分子之例示性活性及功能包括(但不限於)結合特徵、酶活性、細胞受體活化及信號轉導。
相應地，如本文中所用之術語「調節劑」為能夠使相關分子之活性或功能(例如，hIL-17之生物活性)改變或變化的化合物。舉例而言，調節劑可引起分子之某種活性或功能之量值與在不存在該調節劑之情況下所觀測到之活性或功能之量值相比有所增加或降低。在某些實施例中，調節劑為使分子之至少一種活性或功能之量值降低的抑制劑。例示性抑制劑包括(但不限於)蛋白質、肽、抗體、肽體(peptibody)、碳水化合物或小有機分子。肽體例如描述於WO 01/83525中。
如本文中所用之術語「促效劑」係指當與相關分子接觸時引起分子之某種活性或功能之量值與在不存在促效劑之情況下所觀測到之活性或功能之量值相比有所增加的調節劑。相關特定促效劑可包括(但不限於)結合hIL-17之IL-17多肽、核酸、碳水化合物或任何其他分子。
如本文中所用之術語「拮抗劑」及「抑制劑」係指當與相關分子接觸時引起分子之某種活性或功能之量值與在不存在拮抗劑之情況下所觀測到之活性或功能之量值相比有所降低的調節劑。相關特定拮抗劑包括阻斷或調節hIL-17A及/或hIL-17A/F之生物或免疫活性的拮抗劑。hIL-17A及/或hIL-17A/F之拮抗劑及抑制劑可包括(但不限於)結合hIL-17A及/或hIL-17A/F之蛋白質、核酸、碳水化合物或任何其他分子。
如本文中所用之術語「有效量」係指足以降低或改善病症或其一或多種症狀之嚴重度及/或持續時間；防止病症進展；引起病症消退；阻止與病症相關之一或多種症狀復發、發展、發作或進展；偵測病症；或增強或改良另一療法(例如預防劑或治療劑)之預防或治療效果的療法之量。
「患者」及「個體」在本文中可互換地用以指動物，諸如哺乳動物，包括靈長類動物(例如人類、猴及黑猩猩)、非靈長類動物(例如母牛、豬、駱駝、駱馬、馬、山羊、兔、綿羊、倉鼠、天竺鼠、貓、狗、大鼠、小鼠、鯨)、鳥類(例如鴨或鵝)及鯊魚。較佳的是，患者或個體為人類，諸如針對疾病、病症或病狀治療或評估之人類、具有罹患疾病、病症或病狀風險之人類、罹患疾病、病症或病狀之人類及/或針對疾病、病症或病狀治療之人類。
如本文中所用之術語「樣本」係以其最廣泛意義使用。如本文中所用之「生物樣本」包括(但不限於)來自活物(living thing)或原先活物之任何量之物質。該等活物包括(但不限於)人類、非人類靈長類動物、小鼠、大鼠、猴、狗、兔及其他動物。該等物質包括(但不限於)血液(例如全血)、血漿、血清、尿、羊水、滑液、內皮細胞、白血球、單核細胞、其他細胞、器官、組織、骨髓、淋巴結及脾臟。
「組份」及「至少一種組份」一般係指可包括於用於根據本文所述之方法及此項技術中已知之其他方法檢定測試樣本(諸如患者尿液、血清或血漿樣本)之套組中的捕捉抗體、偵測或結合抗體、對照物、校正劑、一系列校正劑、靈敏度組(sensitivity panel)、容器、緩衝液、稀釋劑、鹽、酶、酶之輔因子、偵測試劑、預處理試劑/溶液、受質(例如呈溶液形式)、停止溶液及其類似物。因此，在本案之上下文中，「至少一種組份」及「組份」可包括如上之多肽或其他分析物，諸如包含分析物(諸如多肽)之組合物，其視情況諸如藉由與抗分析物(例如抗多肽)抗體結合而固定於固體支撐物上。某些組份可呈溶液形式或經冷凍乾燥以便供復原後用於檢定中。
「對照物」係指已知不為分析物(「陰性對照物」)或含有分析物(「陽性對照物」)之組合物。陽性對照物可包含已知濃度之分析物。「對照物」、「陽性對照物」及「校正劑」在本文中可互換地用以指包含已知濃度之分析物的組合物。「陽性對照物」可用於確定檢定效能特徵且為試劑(例如分析物)之完整性的適用指示物。
「預定截止值」及「預定程度」一般係指藉由針對預定截止值/程度比較檢定結果而用於評估診斷/預後/治療功效結果的檢定截止值，其中預定截止值/程度已與各種臨床參數(例如疾病之嚴重度、進展/無進展/改善等)相聯繫或相關聯。雖然本揭示案可提供例示性預定程度，但眾所周知，截止值可視免疫檢定之性質(例如，所用之抗體等)而變化。此外，針對其他免疫檢定來修改本文中之本揭示案以基於此揭示案獲得彼等其他免疫檢定之免疫檢定特定截止值完全屬於此項技術者之一般技能範圍內。儘管預定截止值/程度之確切值可在檢定之間有所不同，但如本文所述之相關關係(若存在)一般應為適用的。
如本文所述之診斷檢定中所用之「預處理試劑」(例如溶解、沈澱及/或增溶試劑)為一種可溶解存在於測試樣本中之任何細胞及/或使存在於測試樣本中之任何分析物增溶的試劑。如本文中進一步所述，預處理並非為所有樣本所必需。其中，使分析物(例如相關多肽)增溶可能需要自存在於樣本中之任何內源性結合蛋白釋放分析物。預處理試劑可為均質的(無需分離步驟)或異質的(需要分離步驟)。藉由使用異質預處理試劑，自測試樣本移除任何沈澱之分析物結合蛋白，然後進行檢定之下一步驟。
「品質控制試劑」在本文所述之免疫檢定及套組的情況下包括(但不限於)校正劑、對照物及靈敏度組。通常使用「校正劑」或「標準品」(例如一或多個，諸如複數個校正劑或標準品)來建立校正(標準)曲線以便內插分析物(諸如抗體或分析物)之濃度。或者，可使用接近預定陽性/陰性截止值之單個校正劑。可聯合使用多個校正劑(亦即，不只1種校正劑或不同量之校正劑)，以便構成「靈敏度組」。
「風險」係指特定事件目前或在將來某個時間點出現之可能性或概率。「風險分層」係指使得醫師可將患者歸於患上特定疾病、病症或病狀之低、中、高或最高風險的一系列已知臨床風險因素。
「特異性」在特異性結合對之成員(例如抗原(或其片段)與抗體(或其抗原反應性片段))之間的相互作用之情況下係指該相互作用之選擇反應性。片語「特異性結合」及其類似片語係指抗體(或其抗原反應性片段)特異性結合分析物(或其片段)且不特異性結合其他實體之能力。
「特異性結合搭配物」為特異性結合對之成員。特異性結合對包含2個不同分子，其經由化學或物理方式彼此特異性結合。因此，除常見免疫檢定之抗原與抗體特異性結合對以外，其他特異性結合對可包括生物素與抗生物素蛋白(或抗生蛋白鏈菌素)；碳水化合物與凝集素；互補核苷酸序列；效應分子與受體分子；輔因子與酶；酶抑制劑與酶；及其類似者。此外，特異性結合對可包括為初始特異性結合成員之類似物的成員，例如分析物-類似物。免疫反應性特異性結合成員包括經分離或以重組方式產生之抗原、抗原片段及抗體，包括單株及多株抗體以及其複合物、片段及變異體(包括變異體片段)。
如本文中所用之「變異體」意謂因胺基酸之添加(例如插入)、缺失或保守性取代而在胺基酸序列方面不同於既定多肽(例如IL-17、BNP、NGAL或HIV多肽，或抗多肽抗體)，但保留既定多肽之生物活性(例如變異體IL-17可與抗IL-17抗體競爭結合IL-17)的多肽。胺基酸之保守性取代(亦即以具有類似性質(例如親水性及程度以及帶電區域分布)之不同胺基酸置換胺基酸)在此項技術中公認為通常涉及較小變化。如此項技術中所瞭解，可部分地藉由考慮胺基酸之親水指數來識別此等較小變化(參見例如Kyte等人,J. Mol. Biol.,157: 105-132(1982))。胺基酸之親水指數係基於對其疏水性及電荷之考慮。在此項技術中已知具有類似親水指數之胺基酸可經取代且仍保留蛋白質功能。在一態樣中，具有±2之親水指數的胺基酸經取代。胺基酸之親水性亦可用於揭示將會產生保留生物功能之蛋白質的取代。對胺基酸親水性之考慮在肽之情況下允許計算該肽之最大局部平均親水性，其為一種已經報導與抗原性及免疫原性密切相關之適用量度(參見例如美國專利第4,554,101號)。如此項技術中所瞭解，具有類似親水性值之胺基酸之取代可產生保留生物活性(例如免疫原性)之肽。在一態樣中，以親水性值處於彼此之±2範圍內之胺基酸進行取代。胺基酸之疏水性指數及親水性值皆受彼胺基酸之特定側鏈的影響。與彼觀測結果一致，如由疏水性、親水性、電荷、尺寸及其他性質所揭示，與生物功能相容之胺基酸取代據瞭解係視胺基酸，且尤其彼等胺基酸之側鏈之相對相似性而定。「變異體」亦可用於描述諸如藉由蛋白質水解、磷酸化或其他轉譯後修飾而以不同方式加工，但仍保留其生物活性或抗原反應性(例如結合IL-17之能力)的多肽或其片段。除非上下文另外相矛盾，否則本文中使用「變異體」意欲涵蓋變異體之片段。
I.結合人類IL-17之抗體
本發明之一態樣提供分離之鼠類單株抗體或其抗原結合部分，其以高親和力、緩慢解離速率及高中和能力結合IL-17。本發明之第二態樣提供結合IL-17之嵌合抗體。本發明之第三態樣提供結合IL-17之CDR移植抗體或其抗原結合部分。本發明之第四態樣提供結合IL-17之人類化抗體或其抗原結合部分。本發明之第五態樣提供結合IL-17及另一標靶之雙可變域免疫球蛋白(DVD-IgTM)分子。較佳的是，抗體或其部分為分離之抗體。較佳的是，本發明之抗體為中和人類抗IL-17A及/或人類抗IL-17A/F抗體。
A.製備抗IL-17抗體之方法
本發明之抗IL-17抗體可用此項技術中已知之多種技術中之任一者來製備。
1.使用融合瘤技術製備抗IL-17單株抗體
單株抗體可使用此項技術中已知之多種技術，包括使用融合瘤、重組及噬菌體呈現技術或其組合來製備。舉例而言，單株抗體可使用融合瘤技術，包括此項技術中已知及例如以下參考文獻中所教示之技術來產生：Harlow等人，Antibodies: A Laboratory Manual,第2版.(Cold Spring Harbor Laboratory Press,1988)；Hammerling等人,Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas 563-681(Elsevier,N.Y.,1981)(該等參考文獻皆以全文引用之方式併入本文中)。如本文中所用之術語「單株抗體」不限於經由融合瘤技術產生之抗體。術語「單株抗體」係指源自包括任何真核、原核或噬菌體純系之單一純系的抗體，而不是產生其之方法。
使用融合瘤技術製備及篩選特異性抗IL-17抗體之方法在此項技術中為常規且熟知的。在一個實施例中，本發明提供產生單株抗體之方法以及由該方法產生之抗體，該方法包含培養分泌本發明抗體之融合瘤細胞，其中，較佳的是，該融合瘤係藉由使自經本發明抗原免疫之小鼠分離的脾細胞與骨髓瘤細胞融合且隨後篩選由分泌能夠結合本發明多肽之抗體的融合瘤純系融合產生之融合瘤來產生。簡言之，可用IL-17抗原使小鼠免疫。在一較佳實施例中，將IL-17抗原與佐劑一起投與以刺激免疫反應。該等佐劑包括完成或不完全弗氏佐劑(Freund's adjuvant)、RIBI(胞壁醯二肽)或ISCOM(免疫刺激複合物)。該等佐劑可藉由使多肽螯合於局部沈積物中來保護該多肽以免快速分散，或其可含有刺激宿主分泌對免疫系統之巨噬細胞及其他組份具有趨化性之因子的物質。較佳的是，若投與多肽，則免疫方案將涉及歷經數週2次或2次以上投與該多肽。
在用IL-17抗原使動物免疫後，自該動物獲得抗體及/或抗體產生細胞。藉由對動物進行取血或處死動物而自動物獲得含抗IL-17抗體之血清。血清可以其自動物獲得之原樣使用，可自血清獲得免疫球蛋白部分，或可自血清純化出抗IL-17抗體。以此方式獲得之血清或免疫球蛋白為多株血清或免疫球蛋白，因此具有一組異質特性。
一旦偵測到免疫反應，例如在小鼠血清中偵測到對抗原IL-17具有特異性之抗體，則獲得小鼠脾臟且分離脾細胞。接著藉由熟知技術使脾細胞與任何合適骨髓瘤細胞融合，該等合適骨髓瘤細胞為例如可獲自美國菌種保存中心(American Type Culture Collection，ATCC,Manassas,Virginia,US)之細胞株SP20之細胞藉由限制性稀釋法選擇及選殖融合瘤。接著藉由此項技術中已知之方法，針對分泌能夠結合IL-17之抗體的細胞來對融合瘤純系進行檢定。可藉由用陽性融合瘤純系使小鼠免疫來產生通常含有高量抗體之腹水。
在另一實施例中，可自經免疫動物製備產生抗體之永生化融合瘤。在免疫後，處死動物且如此項技術中所熟知，使脾臟B細胞與永生化骨髓瘤細胞融合。參見，例如Harlow及Lane(同上)。在一較佳實施例中，骨髓瘤細胞不分泌免疫球蛋白多肽(非分泌性細胞株)。在融合及抗生素選擇後，使用IL-17或其部分或表現IL-17之細胞篩選融合瘤。在一較佳實施例中，使用酶聯免疫檢定(ELISA)或放射免疫檢定(RIA)進行初始篩選，ELISA為較佳的。ELISA篩選之一個實例提供於PCT公開案第WO 00/37504號(其係以引用方式併入本文中)中。
選擇產生抗IL-17抗體之融合瘤，進行選殖，且針對包括旺盛融合瘤生長、高抗體產量及所需抗體特徵之所需特徵作進一步篩選，此如下文中進一步論述。融合瘤可在活體內於同基因動物、缺乏免疫系統之動物(例如裸小鼠)中或在活體外於細胞培養物中培養及擴增。選擇、選殖及擴增融合瘤之方法為一般技術者所熟知。
在一較佳實施例中，融合瘤為如上文所述之小鼠融合瘤。在另一較佳實施例中，融合瘤係在諸如大鼠、綿羊、豬、山羊、牛或馬之非人類、非小鼠物種中產生。在另一實施例中，融合瘤為人類融合瘤，其中使人類非分泌性骨髓瘤與表現抗IL-17抗體之人類細胞融合。
識別特異性抗原決定基之抗體片段可由已知技術產生。舉例而言，本發明之Fab及F(ab')2片段可藉由使用諸如木瓜蛋白酶(旨在產生Fab片段)或胃蛋白酶(旨在產生F(ab')2片段)之酶對免疫球蛋白分子進行蛋白水解裂解而產生。F(ab')2片段含有可變區、輕鏈恆定區及重鏈之CHI域。
2.使用SLAM製備抗IL-17單株抗體
在本發明之另一態樣中，使用如以下文獻中所述在此項技術中稱作所選淋巴細胞抗體方法(SLAM)之程序自單一、分離之淋巴細胞產生重組抗體：美國專利第5,627,052號；PCT公開案第WO 92/02551號；及Babcook等人,Proc. Natl. Acad. Sci. USA,93: 7843-7848(1996)。在此方法中，使用抗原特異性溶血空斑檢定篩選分泌相關抗體之單細胞，例如源自第1部分中所述之經免疫動物中之任一者的淋巴細胞，其中使用連接子(諸如生物素)使抗原IL-17、IL-17之次單位或其片段偶接至綿羊紅血球上，且用於識別分泌對IL-17具有特異性之抗體的單細胞。在識別相關之抗體分泌細胞後，藉由逆轉錄酶-PCR自細胞拯救出重鏈及輕鏈可變區(VH及VL)cDNA，且接著可使此等可變區在適當的免疫球蛋白恆定區(例如人類恆定區)之情況下在哺乳動物宿主細胞(諸如COS或CHO細胞)中表現。接著可對用源自經活體內選擇之淋巴細胞的經擴增之免疫球蛋白序列轉染之宿主細胞，例如藉由淘選該等經轉染細胞以分離表現針對IL-17之抗體的細胞，來進行進一步活體外分析及選擇。可諸如藉由活體外親和力成熟方法(諸如PCT公開案第WO 97/29131號及PCT公開案第WO 00/56772號中所述之方法)進一步活體外操作經擴增之免疫球蛋白序列。
3.使用轉殖基因動物製備抗IL-17單株抗體
在本發明之另一實施例中，藉由用IL-17抗原使包含一些或所有人類免疫球蛋白基因座之非人類動物免疫來產生抗體。在一較佳實施例中，非人類動物為XENOMOUSE轉殖基因小鼠，其為包含人類免疫球蛋白基因座之較大片段且缺乏小鼠抗體產生的經工程改造之小鼠品系。參見例如Green等人,Nature Genetics,7: 13-21(1994)及美國專利第5,916,771號、第5,939,598號、第5,985,615號、第5,998,209號、第6,075,181號、第6,091,001號、第6,114,598及第6,130,364號。亦參見PCT公開案第WO 91/10741號，其於1991年7月25日公開；第WO 94/02602號，其於1994年2月3日公開；第WO 96/34096號及第WO 96/33735號，其皆於1996年10月31日公開；第WO 98/16654號，其於1998年4月23日公開；第WO 98/24893號，其於1998年6月11日公開；第WO 98/50433號，其於1998年11月12日公開；第WO 99/45031號，其於1999年9月10日公開；第WO 99/53049號，其於1999年10月21日公開；第WO 00/09560號，其於2000年2月24日公開；及第WO 00/037504號，其於2000年6月29日公開。XENOMOUSE轉殖基因小鼠產生完全人類抗體之成人樣人類譜系，且產生抗原特異性人類Mab。XENOMOUSE轉殖基因小鼠經由引入人類重鏈基因座及x輕鏈基因座之百萬鹼基大小的生殖系構形YAC片段而含有約80%之人類抗體譜系。參見Mendez等人,Nature Genetics,15:146-156(1997)；及Green及Jakobovits,J. Exp. Med.,188:483-495(1998)，其揭示內容係以引用方式併入本文中。
4.使用重組抗體文庫製備抗IL-17單株抗體
亦可使用活體外方法來製備本發明之抗體，其中篩選抗體文庫以識別具有所需結合特異性之抗體。該種篩選重組抗體文庫之方法在此項技術中為熟知的且包括例如以下文獻中所述之方法：Ladner等人，美國專利第5,223,409號；Kang等人,PCT公開案第WO 92/18619號；Dower等人,PCT公開案第WO 91/17271號；Winter等人,PCT公開案第WO 92/20791號；Markland等人,PCT公開案第WO 92/15679號；Breitling等人,PCT公開案第WO 93/01288號；McCafferty等人,PCT公開案第WO 92/01047號；Garrard等人,PCT公開案第WO 92/09690號；Fuchs等人,Bio/Technology,9: 1369-1372(1991)；Hay等人,Hum. Antibod. Hybridomas,3:81-85(1992)；Huse等人,Science,246: 1275-1281(1989)；McCafferty等人,Nature,348:552-554(1990)；Griffiths等人,EMBO J.,12: 725-734(1993)；Hawkins等人,J. Mol. Biol.,226: 889-896(1992)；Clackson等人,Nature,352: 624-628(1991)；Gram等人,Proc. Natl. Acad. Sci. USA,89: 3576-3580(1992)；Garrard等人,Bio/Technology,9: 1373-1377(1991)；Hoogenboom等人,Nucl. Acid Res.,19: 4133-4137(1991)；及Barbas等人,Proc. Natl. Acad. Sci. USA,88: 7978-7982(1991)；美國專利申請公開案第2003/0186374號；及PCT公開案第WO 97/29131號，其各自的內容係以引用之方式併入本文中。
重組抗體文庫可能來自經IL-17A或IL-17F或IL-17A或IL-17F之一部分免疫之個體。或者，重組抗體文庫可來自未經處理之個體，亦即，尚未經IL-17A或IL-17F免疫之個體，諸如來自尚未經人類IL-17A或IL-17F免疫之人類個體的人類抗體文庫。藉由用包含人類IL-17之肽篩選重組抗體文庫從而選擇識別IL-17之彼等抗體來選出本發明抗體。進行該篩選及選擇之方法在此項技術中為熟知的，諸如前面段落中之參考文獻中所述。為了選擇對hIL-17具有特定結合親和力之本發明抗體，諸如以特定Koff速率常數自人類IL-17解離之抗體，可使用此項技術中已知之表面電漿共振法來選擇具有所需Koff速率常數之抗體。為了選擇對hIL-17具有特定中和活性之本發明抗體，諸如具有特定IC50之抗體，可使用此項技術中已知之用於評估對hIL-17活性之抑制作用的標準方法。
在一態樣中，本發明係關於結合人類IL-17A及/或人類IL-17的分離之抗體或其抗原結合部分。較佳的是，該抗體為中和抗體。在各種實施例中，該抗體為重組抗體或單株抗體。
舉例而言，本發明之抗體亦可使用此項技術中已知之各種噬菌體呈現方法來產生。在噬菌體呈現方法中，使功能性抗體域呈現於帶有編碼其之聚核苷酸序列的噬菌體粒子表面上。在一特例中，可使用該噬菌體來呈現自譜系或組合抗體文庫(例如人類或鼠類)表現之抗原結合域。可用抗原，例如使用經標記之抗原或結合或捕捉於固體表面或珠粒上之抗原來選擇或識別表現結合相關抗原之抗原結合域的噬菌體。此等方法中所用之噬菌體通常為包括自噬菌體表現之fd及M13結合域的絲狀噬菌體，其中Fab、Fv或二硫鍵穩定之Fv抗體結構域與噬菌體基因III或基因VIII蛋白質重組融合。可用於製備本發明抗體之噬菌體呈現方法之實例包括以下文獻中所揭示之方法：Brinkmann等人,J. Immunol. Methods,182: 41-50(1995)；Ames等人,J. Immunol. Methods,184: 177-186(1995)；Kettleborough等人,Eur. J. Immunol.,24: 952-958(1994)；Persic等人,Gene,187: 9-18(1997)；Burton等人,Advances in Immunology,57:191-280(1994)；PCT公開案第WO 90/02809號；第WO 91/10737號；第WO 92/01047號(PCT/GB91/01134)；第WO 92/18619號；第WO 93/11236號；第WO 95/15982號；第WO 95/20401號；及美國專利第5,698,426號；第5,223,409號；第5,403,484號；第5,580,717號；第5,427,908號；第5,750,753號；第5,821,047號；第5,571,698號；第5,427,908號；第5,516,637號；第5,780,225號；第5,658,727號；第5,733,743號；及第5,969,108號，其各自係以全文引用之方式併入本文中。
如以上參考文獻中所述，在噬菌體選擇之後，可自噬菌體分離出抗體編碼區且用於產生包括人類抗體之全抗體或任何其他所需抗原結合片段，且表現於任何所需宿主(包括哺乳動物細胞、昆蟲細胞、植物細胞、酵母及細菌)中，例如下文中所詳述。舉例而言，亦可使用此項技術中已知之方法來利用重組產生Fab、Fab'及F(ab')2片段之技術，該等方法為諸如以下文獻中所揭示之方法：PCT公開案WO 92/22324；Mullinax等人,BioTechniques,12(6): 864-869(1992)；及Sawai等人,Am. J. Reprod. Immunol.,34: 26-34(1995)；及Better等人,Science,240: 1041-1043(1988)(該等參考文獻皆以全文引用方式併入本文中)。可用於產生單鏈Fv及抗體之技術的實例包括以下文獻中所述之技術：US專利第4,946,778號及第5,258,498號；Huston等人,Methods in Enzymology,203: 46-88(1991)；Shu等人,Proc. Natl. Acad. Sci. USA,90: 7995-7999(1993)；及Skerra等人,Science,240: 1038-1041(1988)。
可應用此項技術中已知的用於篩選大型組合文庫之其他方法替代由噬菌體呈現篩選重組抗體文庫來識別本發明之雙重特異性抗體。一種替代性表現系統類型為如以下文獻中所述之重組抗體文庫表現為RNA-蛋白質融合體的表現系統：Szostak及Roberts之PCT公開案第WO 98/31700號以及Roberts,R.W.及Szostak,J.W.(1997) Proc. Natl. Acad. Sci. USA,94: 12297-12302。在此系統中，藉由活體外轉譯在3'末端帶有嘌呤黴素(一種肽基受體抗生素)之合成mRNA而在mRNA與其編碼之肽或蛋白質之間形成共價融合物。因此，可基於所編碼之肽或蛋白質(例如，抗體或其部分)之特性(諸如抗體或其部分與雙重特異性抗原之結合)，自mRNA之複雜混合物(例如，組合文庫)富集特異性mRNA。可由如上所述之重組方式(例如，於哺乳動物宿主細胞中)表現由篩選該等文庫回收之編碼抗體或其部分之核酸序列，且此外，可藉由再對已將突變引入最初選擇之序列中的mRNA-肽融合體進行數輪篩選或藉由如上所述用於對重組抗體進行活體外親和力成熟之其他方法進行進一步的親和力成熟。
在另一方法中，亦可使用此項技術中已知之酵母呈現方法來產生本發明抗體。在酵母呈現方法中，使用遺傳方法將抗體結構域繫栓至酵母細胞壁上且使其呈現於酵母表面上。特定而言，可利用該酵母來呈現由譜系或組合抗體文庫(例如人類或鼠類)所表現之抗原結合域。可用於製備本發明抗體之酵母呈現方法之實例包括Wittrup等人在美國專利第6,699,658號(其係以引用方式併入本文中)中所揭示之方法。
B.產生重組IL-17抗體
本發明抗體可由此項技術中已知之多種技術中之任一者來製備。舉例而言，自宿主細胞表現，其中藉由標準技術將編碼重鏈及輕鏈之表現載體轉染至宿主細胞中。術語「轉染」之各種形式意欲涵蓋通常用於將外源DNA引入原核或真核宿主細胞中之多種技術，例如電穿孔、磷酸鈣沈澱、DEAE-聚葡萄糖轉染及其類似技術。儘管有可能使本發明抗體在原核或真核宿主細胞中表現，但使抗體在真核細胞中表現為較佳的，且最佳使其在哺乳動物宿主細胞中表現，因為該等真核細胞(且尤其哺乳動物細胞)比原核細胞更有可能組裝且分泌適當摺疊及具有免疫活性之抗體。
用於表現本發明之重組抗體之較佳哺乳動物宿主細胞包括中國倉鼠卵巢(CHO)細胞(包括dhfr-CHO細胞，其已描述於Urlaub及Chasin,(1980) Proc. Natl. Acad. Sci. USA,77: 4216-4220中，例如如R. J. Kaufman及P. A. Sharp(1982) Mol. Biol,.159: 601-621中所述，其與DHFR可選標記一起使用)、NS0骨髓瘤細胞、COS細胞及SP2細胞。當將編碼抗體基因之重組表現載體引入哺乳動物宿主細胞中時，藉由將宿主細胞培養足以使抗體在宿主細胞中表現或更佳的是使抗體分泌至生長有宿主細胞之培養基中的時段來產生抗體。可使用標準蛋白質純化方法自培養基回收抗體。
亦可使用宿主細胞來產生功能性抗體片段，諸如Fab片段或scFv分子。應瞭解，對以上程序之變更屬於本發明之範疇內。舉例而言，可能需要用編碼本發明抗體之輕鏈及/或重鏈之功能性片段的DNA轉染宿主細胞。亦可使用重組DNA技術來移除一些或所有編碼並非為結合相關抗原所必需之輕鏈及重鏈中之任一者或兩者的DNA。本發明抗體亦涵蓋由該等截短型DNA分子表現之分子。另外，可藉由標準化學交聯方法使本發明抗體與第二抗體交聯來產生一重鏈及一輕鏈為本發明抗體而另一重鏈及另一輕鏈對除相關抗原以外之抗原具有特異性的雙功能抗體。
在用於重組表現本發明之抗體或其抗原結合部分的較佳系統中，藉由磷酸鈣介導之轉染將編碼抗體重鏈及抗體輕鏈兩者之重組表現載體引入dhfr-CHO細胞中。在重組表現載體內，抗體重鏈與輕鏈基因各自可操作地連接於CMV強化子/AdMLP啟動子調控元件以達成該等基因之高度轉錄。重組表現載體亦帶有DHFR基因，其允許使用甲胺喋呤選擇/擴增來選擇已經載體轉染之CHO細胞。培養所選轉型體宿主細胞以使抗體重鏈及輕鏈表現且自培養基回收完整抗體。使用標準分子生物學技術來製備重組表現載體，轉染宿主細胞，選擇轉型體，培養宿主細胞及自培養基回收抗體。本發明更進一步提供一種合成本發明之重組抗體的方法，該方法係藉由在適合培養基中培養本發明之宿主細胞直至合成出本發明之重組抗體來進行。該方法可進一步包含自該培養基分離出該重組抗體。
1.抗hIL-17抗體
表5為本發明之較佳鼠類抗hIL-17抗體之VH及VL區胺基酸序列的列表。
基於對以上表5中所列之鼠類抗hIL-17抗體VH及VL區之CDR胺基酸序列的比對，本發明提供一種包含能夠結合人類IL-17之抗原結合域的IL-17結合蛋白，該抗原結合域包含至少一個包含選自由以下組成之群之胺基酸序列的CDR：CDR-H1：X1-X2-X3-X4-X5(SEQ ID NO:919)，其中：X1為D或S；X2為Y；X3為E或G；X4為I、M、V或F；X5為H；CDR-H2：X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12-X13-X14-X15-X16-X17(SEQ ID NO:920)，其中：X1為V；X2為T、I或N；X3為D、H或W；X4為P或不存在；X5為E、G或S；X6為S、N或D；X7為G；X8為G或T；X9為T；X10為L、A、T或F；X11為H或Y；X12為N；X13為P、Q或S；X14為K、A或N；X15為F或L；X16為D、K或R；且X17為G、D或S；CDR-H3：X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12(SEQ ID NO:921)，其中：X1為Y、F或D；X2為Y、L、S或G；X3為K、T、R或Y；X4為Y或W；X5為E、D或I；X6為S、G或Y；X7為F、Y或T；X8為Y、F或M；X9為G、T或不存在；X10為M或不存在；X11為D；且X12為Y；CDR-L1：X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12-X13-X14-X15-X16(SEQ ID NO:922)，其中：X1為S、K或R；X2為A或S；X3為S；X4為S或Q；X5為S或不存在；X6為L或不存在；X7為V或不存在；X8為H或不存在；X9為S或不存在；X10為S、N或不存在；X11為S、V或G；X12為I、N或S；X13為S、N、T或I；X14為Y或D；X15為M、V、L或I；且X16為C、A、H、Y或G；CDR-L2：X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7(SEQ ID NO:923)，其中：X1為D、Y、K、A或H；X2為T、A或V；X3為S或F；X4為K、N或E；X5為L或R；X6為A、Y或F；且X7為S或T；及CDR-L3：X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9(SEQ ID NO:924)，其中:X1為Q、S或H；X2為Q；X3為R、D、S或G；X4為S、Y或T；X5為S、G或H；X6為Y、S、V或A；X7為P或不存在；X8為W、Y或L；且X9為T。
表6提供本發明之較佳人類抗hIL-17抗體之VH及VL區胺基酸序列的列表。
基於對以上表6中所列之人類抗hIL-17抗體VH及VL區之CDR胺基酸序列的比對，本發明提供一種包含能夠結合人類IL-17之抗原結合域的IL-17結合蛋白，該抗原結合域包含至少一個包含選自由以下組成之群之胺基酸序列的CDR：CDR-H1：X1-X2-X3-X4-X5(SEQ ID NO:925)，其中：X1為N、A、D或S；X2為Y、F或L；X3為G、D或A；X4為M或I；且X5為H、D或S；CDR-H2：X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12-X13-X14-X15-X16-X17(SEQ ID NO:926)，其中：X1為V、W或G；X2為I、T、M或F；X3為S、N、T或D；X4為Y或P；X5為D、N或I；X6為G、S、L或E；X7為S或G；X8為N、T或E；X9為K、T或A；X10為Y、G、N或V；X11為Y或V；X12為A；X13為D、P或Q；X14為S、K或N；X15為V或F；X16為K、R或Q；且X17為G；CDR-H3：X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12-X13-X14-X15-X16-X17(SEQ ID NO:927)，其中：X1為V、S、E或I；X2為G、S、P或R；X3為A、E、N或P；X4為S、D或W；X5為G、E、F或L；X6為D、G或W；X7為Y、I、N或G；X8為Y、T、G或A；X9為Y或I；X10為S、G或Y；X11為Y、F或T；X12為G、T或不存在；X13為L、H或不存在；X14為H或不存在；X15為F或不存在；X16為D；且X17為V、N或Y；CDR-L1：X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12-X13(SEQ ID NO:928)，其中：X1為S、R或K；X2為G或A；X3為S或D；X4為N、K或Q；X5為S或不存在；X6為N或不存在；X7為I、L、N或D；X8為G或I；X9為S、N、G或D；X10為H、R、S或D；X11為S、Y、A或D；X12為V、A、L或M；且X13為N、C或H；CDR-L2：X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7(SEQ ID NO:929)，其中：X1為G、Q、Y或E；X2為I、D或A；X3為G、N、S或T；X4為Q、K或T；X5為R、S或L；X6為P、I或V；且X7為S或P；及CDR-L3：X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11(SEQ ID NO:930)，其中：X1為A、Q、H或L；X2為T或Q；X3為W、S或H；X4為D或T；X5為D或S；X6為S、T、L或F；X7為L、T或P；X8為G、H或Y；X9為G、S或T；X10為Y或不存在；且X11為V或不存在。
2.抗hIL-17嵌合抗體
嵌合抗體為抗體之不同部分係源自不同動物物種之分子，諸如具有源自鼠類單株抗體之可變區及人類免疫球蛋白恆定區的抗體。產生嵌合抗體之方法在此項技術中為已知的且將在實例部分中予以詳述。參見例如Morrison,Science,229: 1202-1207(1985)；Oi等人,BioTechniques,4: 214-221(1986)；Gillies等人,J. Immunol. Methods,125: 191-202(1989)；美國專利第5,807,715號；第4,816,567號；及第4,816,397號，該等文獻係以全文引用之方式併入本文中。另外，可使用經研發用於產生「嵌合抗體」之技術(Morrison等人,Proc. Natl. Acad. Sci. USA,81: 6851-6855(1984)；Neuberger等人,Nature,312: 604-608(1984)；Takeda等人，Nature,314: 452-454(1985)，該等文獻係以全文引用之方式併入本文中)，其係藉由將來自具有適當抗原特異性之小鼠抗體分子的基因與來自具有適當生物活性之人類抗體分子的基因拼接於一起而進行。
在一實施例中，藉由用人類IgG1恆定區置換第1部分中所述之鼠類單株抗人類IL-17抗體之重鏈恆定區來產生本發明之嵌合抗體。
3.抗IL-17CDR移植抗體
本發明之CDR移植抗體包含來自人類抗體之重鏈及輕鏈可變區序列，其中以本發明之鼠類抗體之CDR序列置換VH及/或VL之CDR區中的一或多者。來自任何人類抗體之構架序列可用作CDR移植之模板。然而，在該種構架上進行直鏈置換常會導致對抗原之結合親和力有某種程度的損失。人類抗體與原始鼠類抗體之同源性愈高，則鼠類CDR與人類構架組合將在CDR中引入會降低親和力之畸變的可能性愈小。因此，較佳的是，經選擇以置換除CDR以外之鼠類可變構架的人類可變構架與鼠類抗體可變區構架具有至少65%之序列一致性。更佳的是，除CDR以外人類可變區與鼠類可變區具有至少70%之序列一致性。甚至更佳的是，除CDR以外人類可變區與鼠類可變區具有至少75%之序列一致性。最佳的是，除CDR以外人類可變區與鼠類可變區具有至少80%之序列一致性。產生嵌合抗體之方法在此項技術中為已知的且將在實例2.2中予以詳述。(亦參見EP 0 239 400；PCT公開案第WO 91/09967號；美國專利第5,225,539號；第5,530,101號；及第5,585,089號)；鑲飾或重塑(resurfacing)(參見例如EP 0 592 106；EP 0 519 596；Padlan,Molecular Immunology,28(4/5): 489-498(1991)；Studnicka等人,Protein Engineering,7(6): 805-814(1994)；Roguska等人,Proc. Natl. Acad. Sci. USA,91: 969-973(1994))；及鏈改組(參見例如美國專利第5,565,352號)。
在一特定實施例中，本發明提供具有如表7中所示之VH及/或VL鏈的CDR移植抗體。
表7. CDR移植抗體
4.抗hIL-17人類化抗體
人類化抗體為源自結合所需抗原之非人類物種抗體之抗體分子，其具有來自非人類物種抗體之一或多個互補決定區(CDR)及來自人類免疫球蛋白分子之構架區。已知人類Ig序列揭示於例如以下全球資訊網站上：www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez-/query.fcgi；www.atcc.org/phage/hdb.html；www.sciquest.com/；www.abcam.com/；www.antibodyresource.com/onlinecomp.html；www.public.iastate.edu/.about.pedro/research_tools.html；www.mgen.uni-heidelberg.de/SD/IT/IT.html；www.whfreeman.com/immunology/CH-05/kuby05.htm；www.library.thinkquest.org/12429/Immune/Antibody.html；www.hhmi.org/grants/lectures/1996/vlab/；www.path.cam.ac.uk/.about.mrc7/m-ikeimages.html；www.antibodyresource.com/；mcb.harvard.edu/BioLinks/Immuno-logy.html.www.immunologylink.com/；pathbox.wustl.edu/.about.hcenter/index.-html；www.biotech.ufl.edu/.about.hcl/；www.pebio.com/pa/340913/340913.html-；www.nal.usda.gov/awic/pubs/antibody/；www.m.ehime-u.acjp/.about.yasuhito-/Elisa.html；www.biodesign.com/table.asp；www.icnet.uk/axp/facs/davies/lin-ks.html；www.biotech.ufl.edu/.about.fccl/protocol.html；www.isac-net.org/sites_geo.html；aximtl.imt.uni-marburg.de/.about.rek/AEP-Start.html；baserv.uci.kun.nl/.about.jraats/linksl.html；www.recab.uni-hd.de/immuno.bme.nwu.edu/；www.mrc-cpe.cam.ac.uk/imt-doc/pu-blic/INTRO.html；www.ibt.unam.mx/vir/V_mice.html；imgt.cnusc.fr:8104/；www.biochem.ucl.ac.uk/.about.martin/abs/index.html；antibody.bath.ac.uk/；abgen.cvm.tamu.edu/lab/wwwabgen.html；www.unizh.ch/.about.honegger/AHOsem-inar/Slide01.html；www.cryst.bbk.ac.uk/.about.ubcg07s/；www.nimr.mrc.ac.uk/CC/ccaewg/ccaewg.htm；www.path.cam.ac.uk/.about.mrc7/h-umanisation/TAHHP.html；www.ibt.unam.mx/vir/structure/stat_aim.html；www.biosci.missouri.edu/smithgp/index.html；www.cryst.bioc.cam.ac.uk/.abo-ut.fmolina/Web-pages/Pept/spottech.html；www.jerini.de/fr roducts.htm；www.patents.ibm.com/ibm.html，Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest,U.S. Dept. Health(1983)各自均以全文引用之方式併入本文中。如此項技術中所知，該等引入序列可用於降低免疫原性或者降低、增強或修飾結合、親和力、結合速率、解離速率、親和性、特異性、半衰期或任何其他適合特徵。
可用來自CDR供體抗體之相應殘基取代人類構架區中之構架(FR)殘基以改變、較佳為改良抗原結合。該等構架取代係用此項技術中熟知之方法識別，例如藉由建立CDR與構架殘基之相互作用模型以識別對於抗原結合重要之構架殘基以及進行序列比較以識別特定位置處之異常構架殘基。參見例如Queen等人，美國專利第5,585,089號；Riechmann等人,Nature,332: 323-327(1988)，其皆以全文引用之方式併入本文中。三維免疫球蛋白模型通常為可用的且為熟習此項技術者所熟悉。可獲得說明及呈現所選擇之候選免疫球蛋白序列之可能三維構形結構的電腦程式。對該等呈現之檢驗允許分析殘基在候選免疫球蛋白序列起作用過程中可能的作用，亦即分析影響候選免疫球蛋白結合其抗原之能力的殘基。以此方式，可自共同及引入序列選擇及組合FR殘基以便獲得所需抗體特徵，諸如對標靶抗原之增大之親和力。一般而言，CDR殘基直接且最實質性地涉及影響抗原結合。可使用此項技術中已知之多種技術使抗體人類化，該等技術為諸如(但不限於)以下文獻中所述之技術：Jones等人,Nature,321:522-525(1986)；Verhoeyen等人,Science,239:1534-1536(1988)；Sims等人,J. Immunol.,151: 2296-2308(1993)；Chothia及Lesk,J. Mol. Biol.,196: 901-917(1987)；Carter等人,Proc. Natl. Acad. Sci. USA,89: 4285-4289(1992)；Presta等人,J. Immunol.,151: 2623-2632(1993)；Padlan,Molecular Immunology,28(4/5): 489-498(1991)；Studnicka等人,Protein Engineering,7(6): 805-814(1994)；Roguska等人,Proc. Natl. Acad. Sci. USA,91: 969-973(1994)；PCT公開案第WO 91/09967號；第WO 90/14443號；第WO 90/14424號；第WO 90/14430號；第WO 99/06834號(PCT/US98/16280)；第WO 97/20032號(PCT/US96/18978)；第WO 92/11272號(PCT/US91/09630)；第WO 92/03461號(PCT/US91/05939)；第WO 94/18219號(PCT/US94/01234)；第WO 92/01047號(PCT/GB91/01134)；及第WO 93/06213號(PCT/GB92/01755)；EP專利第EP 0 592 106號；第EP 0 519 596號及第EP 0 239 400號；美國專利第5,565,332號；第5,723,323號；第5,976,862號；第5,824,514號；第5,817,483號；第5,814,476號；第5,763,192號；第5,723,323號；第5,766,886號；第5,714,352號；第6,204,023號；第6,180,370號；第5,693,762號；第5,530,101號；第5,585,089號；第5,225,539及第4,816,567號，各自皆以全文引用之方式併入本文中，包括其中所引用之參考文獻。
5.抗IL-17 DVD-Ig TM 結合蛋白
亦提供結合IL-17、IL-17A單體、IL-17A二聚體、IL-17F單體及IL-17A/IL-17F雜二聚體之一或多個抗原決定基的雙可變域免疫球蛋白結合蛋白(DVD-Ig)。DVD-Ig結合蛋白亦可結合IL-17之抗原決定基及除IL-17A及/或IL-17F多肽以外之第二標靶抗原的抗原決定基。該等DVD-Ig分子之較佳實施例包含：包含結構式VD1-(X1)n-VD2-C-(X2)n之重鏈，其中VD1為第一重鏈可變域，VD2為第二重鏈可變域，C為重鏈恆定域，X1為連接子(限制條件為其不為CH1)，X2為Fc區，且n為0或1，且較佳為1；以及包含結構式VD1-(X1)n-VD2-C-(X2)n之輕鏈，其中VD1為第一輕鏈可變域，VD2為第二輕鏈可變域，C為輕鏈恆定域，X1為連接子(限制條件為其不為CH1)，且X2不包含Fc區，且n為0或1，且較佳為1。該種DVD-Ig可包含2個該等重鏈及2個該等輕鏈，其中各鏈包含以串聯方式連接之可變域而無介於可變區之間的插入恆定區，其中重鏈與輕鏈締合以形成2個串聯之抗原結合位點，且一對重鏈及輕鏈可與另一對重鏈及輕鏈締合以形成具有4個抗原結合位點之四聚結合蛋白。在另一實施例中，DVD-Ig分子可包含各包含3個以串聯方式連接之可變域(例如VD1、VD2、VD3)而無介於可變域之間的插入恆定區的重鏈及輕鏈，其中一對重鏈與輕鏈可締合以形成3個抗原結合位點，且其中一對重鏈及輕鏈可與另一對重鏈及輕鏈締合以形成具有6個抗原結合位點之四聚結合蛋白。
DVD-Ig中之各可變域(VD)可自結合一或多種所需抗原或抗原決定基(諸如IL-17、IL-17F及/或非IL-17抗原或抗原決定基(例如TNF-a))之一或多種「親本」單株抗體獲得。
A.產生親本單株抗體
DVD-Ig結合蛋白之可變域可自能夠結合相關抗原之親本抗體(包括單株抗體(mAb))獲得。此等抗體可天然產生或可由重組技術產生。應瞭解，若結合所需標靶抗原或抗原決定基之抗體為多株抗體，則仍需要獲得來自多株群體之單個抗體(亦即多株群體之單個單株成員)的抗原結合位點之可變域以用於產生DVD-Ig。單株抗體可由此項技術中已知之多種方法中之任一者產生，該等方法包括本文所述之方法(參見，上文第A.1.-A.4.部分)。
B.選擇親本單株抗體之標準
本發明之一實施例係關於選擇具有DVD-Ig分子所需之至少一或多種特性的親本抗體。在一實施例中，所需特性係選自一或多種抗體參數。在另一實施例中，該等抗體參數係選自由以下組成之群：抗原特異性、對抗原之親和力、效能、生物功能、抗原決定基識別、穩定性、溶解度、產生效率、免疫原性、藥物動力學、生物可用性、組織交叉反應性及直系同源抗原結合。
B1.對抗原之親和力
治療性mAb之所需親和力可視抗原性質及所需治療終點而定。在一實施例中，當阻斷細胞激素-細胞激素受體相互作用時，由於該等相互作用通常為高親和力相互作用(例如<pM-<nM範圍)，所以單株抗體具有較高親和力(Kd=0.01-0.50 pM)。在該等情況下，mAb對其標靶之親和力應等於或高於細胞激素(配位體)對其受體之親和力。另一方面，具有較低親和力(>nM範圍)之mAb可例如在清除循環之潛在病原性蛋白質方面具有治療有效性，例如結合、螯合及清除標靶抗原(諸如A-β類澱粉蛋白)之循環物質的單株抗體。在其他情況下，藉由定點突變誘發降低現有高親和力mAb之親和力或使用對標靶具有較低親和力之mAb可用於避免潛在副作用，例如高親和力mAb會螯合或中和其所有預期標靶，從而完全消耗/消除所靶向之蛋白質之功能。在此情況下，低親和力mAb會螯合/中和一小部分可能造成疾病症狀(病理性或過度產生之含量)之標靶，從而使一小部分標靶可繼續執行其正常生理功能。因此，有可能降低Kd以調整劑量及/或降低副作用。為了達成所需治療結果，親本mAb之親和力可能在適當靶向細胞表面分子方面起一定作用。舉例而言，若標靶以高密度表現於癌細胞上且以低密度表現於正常細胞上，則相較於正常細胞，較低親和力mAb將結合腫瘤細胞上較多數目之標靶，使得經由ADCC或CDC消除腫瘤細胞，且因此可能產生所需治療效果。因此，選擇具有所需親和力之mAb對可溶性標靶與表面標靶兩者可具相關性。
經由受體在與其配位體相互作用後之信號傳導可視受體-配位體相互作用之親和力而定。同樣，可設想mAb對表面受體之親和力可決定細胞內信號傳導之性質及mAb是遞送促效劑信號還是遞送拮抗劑信號。mAb介導之信號傳導的基於親和力之性質可影響其副作用概況。因此，需要藉由活體外及活體內實驗仔細確定治療性單株抗體之所需親和力及所需功能。
結合蛋白(例如抗體)之所需Kd可視所需治療結果而定以實驗方式確定。在一實施例中，選擇對特定抗原之親和力(Kd)等於或高於DVD-Ig對同一抗原之所需親和力的親本抗體。藉由Biacore或另一相似技術評估抗原結合親和力及動力學。在一實施例中，各親本抗體對其抗原具有選自由以下組成之群的解離常數(Kd)：至多約10-7M、至多約10-8 M、至多約10-9 M、至多約10-10 M、至多約10-11 M、至多約10-12 M，及至多10-13 M。VD1所獲自之第一親本抗體及VD2所獲自之第二親本抗體可對各別抗原具有相似或不同親和力(KD)。如由表面電漿共振所測量，各親本抗體對抗原具有選自由以下組成之群的結合速率常數(Kon)：至少約102 M-1s-1、至少約103 M-1s-1、至少約104 M-1s-1、至少約105 M-1s-1，及至少約106 M-Is-1。例如VD1所獲自之第一親本抗體及VD2所獲自之第二親本抗體可對各別抗原具有相似或不同之結合速率常數(Kon)。在一實施例中，如由表面電漿共振所測量，各親本抗體對抗原具有選自由以下組成之群的解離速率常數(Koff)：至多約10-3 s-1、至多約10-4 s-1、至多約10-5 s-1，及至多約10-6 s-1。VD1所獲自之第一親本抗體及VD2所獲自之第二親本抗體可對各別抗原具有相似或不同解離速率常數(Koff)。
B2.效能
親本單株抗體之所需親和力/效能將視所需治療結果而定。舉例而言，對於受體-配位體(R-L)相互作用，親和力(kd)等於或高於R-Lkd(pM範圍)。對於單純清除病理性循環蛋白質，Kd可處於低nM範圍內，例如清除各種循環A-β肽物質。另外，Kd亦將視標靶是否表現相同抗原決定基之多個複本而定，例如靶向Aβ寡聚物中之構形抗原決定基的mAb。
若VDI及VD2結合相同抗原但結合不同抗原決定基，則DVD-Ig將含有相對於該相同抗原之結合位點，因此增大親和性且從而增大DVD-Ig之表觀Kd。在一實施例中，選擇Kd等於或低於DVD-Ig所需之Kd的親本抗體。對親本mAb之親和力考慮亦可視DVD-Ig是否含有4個或4個以上相同抗原結合位點(亦即來自單個mAb之DVD-Ig)而定。在此狀況下，表觀Kd歸因於親和性而會大於mAb。該等DVD-Ig可用於使表面受體交聯、增大中和效能、增強對病理性蛋白的清除等。
在另一實施例中，選擇對特異性抗原之中和效能等於或大於DVD-Ig對相同抗原之所需中和潛力的親本抗體。可藉由標靶依賴性生物檢定評估中和效能，其中適合類型之細胞回應於標靶刺激而產生可測量信號(亦即增殖或細胞激素產生)，且由mAb對標靶之中和可以劑量依賴性方式降低該信號。
B3.生物功能
單株抗體可潛在地執行若干功能。此等功能中之一些功能列於表8中。此等功能可由活體外檢定(例如，基於細胞之檢定及生物化學檢定)及活體內動物模型來評估。
具有本文實例中及表8中所述之不同功能的MAb可經選擇以達成所需治療結果。接著可以DVD-Ig形式使用2種或2種以上所選親本單株抗體以達成單一DVD-Ig分子之2種不同功能。舉例而言，可藉由選擇中和特定細胞激素(諸如IL-17)功能之親本mAb及選擇增強對病理性蛋白之清除的親本mAb來產生DVD-Ig。同樣，可選擇識別2種不同細胞表面受體之2種親本mAb，一種mAb對一種受體具有促效劑功能，而另一種mAb對另一受體具有拮抗劑功能。此等2種各具有不同功能之所選mAb可用於建構在單一分子中具有所選單株抗體之2種不同功能(促效劑及拮抗劑)的單一DVD-Ig分子。同樣，2種各阻斷各別受體配位體(例如EGF及IGF)之結合的對細胞表面受體具有拮抗性之mAb可以DVD-Ig形式使用。相反地，可選擇拮抗性抗受體mAb(例如抗EGFR)及中和抗可溶性介體(例如抗IGF1/2)mAb來製備DVD-Ig。
B4.抗原決定基識別：
不同蛋白質區域可執行不同功能。舉例而言，細胞激素(諸如IL-17)之特定區域與細胞激素受體相互作用以使受體活化，而其他蛋白質區域可能為使細胞激素穩定所需。在此情況下，可選擇特異性結合細胞激素上之受體互相作用區域且從而阻斷細胞激素-受體相互作用的mAb。在一些狀況下，例如在某些結合多個配位體之趨化因子受體的狀況下，可選擇結合於僅與一種配位體相互作用之抗原決定基(趨化因子受體上之區域)的mAb。在其他情況下，單株抗體可結合於標靶上不直接負責蛋白質生理功能之抗原決定基，但mAb與此等區域之結合會干擾蛋白質之生理功能(位阻)或者改變蛋白質之構形，使得蛋白質不能起作用(mAb與具有多個配位體之受體結合會改變受體構形，使得任何一個配位體皆不可結合)。亦已識別出不阻斷細胞激素與其受體結合但阻斷信號轉導之抗細胞激素單株抗體(例如125-2H，一種抗IL-18 mAb)。
抗原決定基及mAb功能之實例包括(但不限於)阻斷受體-配位體(R-L)相互作用(中和結合R-相互作用位點之mAb)；引起R-結合減少或無R-結合之位阻。抗體可在除受體結合位點以外之位點處結合標靶，但仍藉由引起構形變化及消除功能(例如XOLAIR奧馬珠單抗(omalizumab)，Genetech/Novartis)、結合於R但阻斷信號傳導(125-2H mAb)來干擾標靶之受體結合及功能。
在一實施例中，親本mAb需要靶向適合抗原決定基以達成最大功效。該抗原決定基應在DVD-Ig中為保守的。mAb之結合抗原決定基可由若干方法來測定，包括共結晶術、mAb-抗原複合物之限制性蛋白質水解加上質譜肽圖分析(mass spectrometric peptide mapping)(Legros V.等人,2000 Protein Sci. 9:1002-10)、噬菌體呈現肽文庫(O'Connor KH等人,2005 J Immunol Methods. 299:21-35)以及突變誘發(Wu C.等人,2003 J Immunol 170:5571-7)。
B5.物理化學及醫藥特性：
以抗體進行治療性處理常需要投與高劑量，常為每公斤數毫克(歸因於由通常大分子量引起之低效能，以質量計)。為了調節患者順應性且為了適當地進行慢性疾病治療及門診患者治療，需要皮下(s.c.)或肌肉內(i.m.)投與治療性mAb。舉例而言，皮下投藥之所需最大體積為約1.0 mL，且因此，需要>100 mg/mL之濃度以限制每劑量之注射次數。在一實施例中，以單劑量投與治療性抗體。然而，該等調配物之研發受蛋白質-蛋白質相互作用(例如，潛在地增大免疫原性風險之聚集)及在加工及傳遞期間之限制因素(例如黏度)所制約。因此，達成臨床功效所需之較大數量及相關研發制約因素限制了對高劑量方案中抗體調配及皮下投藥之潛能的充分開發。顯而易見的是，蛋白質分子及蛋白質溶液之物理化學及醫藥特性(例如穩定性、溶解度及黏度特徵)極為重要。
B5.1.穩定性
「穩定」抗體調配物為調配物中之抗體在儲存後基本上保留其物理穩定性及/或化學穩定性及/或生物活性的調配物。可在所選溫度下歷時所選時段後測量穩定性。在一實施例中，調配物中之抗體在室溫(約30℃)下或在40℃下至少1個月保持穩定及/或在約2℃-8℃下至少1年，甚至至少2年保持穩定。此外，在一實施例中，調配物在冷凍(至例如-70℃)及解凍調配物(下文稱作「凍/融循環」)後保持穩定。在另一實例中，「穩定」調配物可為少於約10%及少於約5%之蛋白質以聚集體形式存在於調配物中之調配物。
活體外在各種溫度下長時段保持穩定之DVD-Ig為合乎需要的。可藉由快速篩選活體外在高溫下(例如在40℃下)2-4週保持穩定之親本mAb，且接著評估穩定性來達成此目的。在2℃-8℃下儲存期間，蛋白質在至少12個月，例如至少24個月內展現穩定性。穩定性(單體完整分子之百分比)可使用各種技術(諸如陽離子交換層析、尺寸排阻層析、SDS-PAGE以及生物活性測試)來評估。關於可用於分析共價及構形修飾之分析技術更全面的列舉，參見Jones,A. J. S.(1993)「Analytical methods for the assessment of protein formulations and delivery systems,」Cleland,J. L.；Langer,R.編. Formulation and delivery of peptides and proteins,第1版,(Washington,ACS)，第22-45頁；及Pearlman,R.;Nguyen,T. H.(1990)「Analysis of protein drugs,」Lee,V. H.編. Peptide and protein drug delivery,第1版,(New York,Marcel Dekker,Inc.),第247-301頁。
異質性及聚集體形成：抗體之穩定性可如下：調配物可顯示低於約10%，且在一實施例中，低於約5%，在另一實施例中，低於約2%，或在一實施例中，處於0.5%至1.5%或1.5%以下之範圍內的以聚集體形式存在之GMP抗體物質。尺寸排阻層析為一種靈敏、可再現且極穩固之偵測蛋白質聚集體的方法。
除低聚集體含量之外，在一實施例中，抗體須具有化學穩定性。化學穩定性可由離子交換層析(例如陽離子或陰離子交換層析)、疏水性相互作用層析或其他諸如等電聚焦或毛細管電泳之方法來測定。舉例而言，抗體之化學穩定性可如下：在2℃-8℃下儲存至少12個月後，與儲存測試前之抗體溶液相比，陽離子交換層析中表示未經修飾之抗體的峰值可能增加至多20%，在一實施例中，增加至多10%，或在另一實施例中，增加至多5%。
在一實施例中，親本抗體呈現結構完整性、正確二硫鍵形成及正確摺疊：由抗體二級或三級結構變化所致之化學不穩定性會影響抗體活性。舉例而言，如由抗體活性所指示之穩定性可如下：在2℃-8℃下儲存至少12個月後，與儲存測試前之抗體溶液相比，抗體活性可能降低至多50%，在一實施例中，降低至多30%或甚至至多10%，或在一實施例中，降低至多5%或1%。可使用適合之抗原結合檢定來測定抗體活性。
B5.2.溶解度：
mAb之「溶解度」與正確摺疊之單體IgG的產生有關。因此可藉由HPLC評估IgG之溶解度。舉例而言，可溶性(單體)IgG將在HPLC層析譜上產生單個峰值，而不可溶性(例如多聚及聚集)IgG將產生複數個峰值。熟習此項技術者因此將能夠使用常規HPLC技術偵測IgG溶解度的增加或降低。關於可用於分析溶解度之分析技術的更全面列舉，參見Jones,A. G. Dep. Chem. Biochem. Eng.,Univ. Coll. London,London,UK. Shamlou,P. Ayazi編,Process. Solid-Liquid Suspensions(1993),93-117.(Butterworth-Heinemann,Oxford,UK)及Pearlman,Rodney;Nguyen,Tue H,Advances in Parenteral Sciences(1990),4(Pept. Protein Drug Delivery),247-301。治療性mAb之溶解度對於調配成常為足夠給藥所需之高濃度而言為關鍵的。如本文所述，可能需要大於100 mg/mL之溶解度以提供有效抗體給藥。舉例而言，抗體溶解度在早期研究階段可能不低於約5 mg/mL，在一實施例中，在高級過程科學階段可能不低於約25 mg/mL，或在一實施例中，可能不低於約100 mg/mL，或在一實施例中，可能不低於約150 mg/mL。蛋白質分子之固有特性對於蛋白質溶液之物理化學特性(例如穩定性、溶解度、黏度)而言為重要的。然而，熟習此項技術者應瞭解存在多種可用作添加劑以有利地影響最終蛋白質調配物之特徵的賦形劑。此等賦形劑可包括：(i)液體溶劑、共溶劑(例如醇類，諸如乙醇)；(ii)緩衝劑(例如，磷酸鹽、乙酸鹽、檸檬酸鹽、胺基酸緩衝劑)；(iii)糖或糖醇(例如蔗糖、海藻糖、果糖、棉子糖、甘露糖醇、山梨糖醇、聚葡萄糖)；(iv)界面活性劑(例如聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯80、泊洛沙姆(poloxamer))；(v)等張性調節劑(例如諸如NaCl之鹽、糖、糖醇)；及(vi)其他賦形劑(例如防腐劑、螯合劑、抗氧化劑、螯合物質(例如EDTA)、生物可降解聚合物、載劑分子(例如HSA、PEG))。
黏度為與抗體製造及抗體加工(例如透濾/超濾)、填充-精整製程(泵送態樣、過濾態樣)及傳遞態樣(可注射性、複雜裝置傳遞)有關之非常重要的參數。低黏度使抗體液體溶液能夠具有較高濃度。此使得以較小體積投與相同劑量成為可能。小注射體積存在有注射疼痛感覺較小之優勢，且溶液不一定必須為等張的以減輕患者注射時之疼痛。抗體溶液之黏度可如下：在100(l/s)之剪切速率下，抗體溶液黏度低於200 mPa s，在一實施例中，低於125 mPa s，在另一實施例中，低於70 mPa s，且在另一實施例中低於25 mPa s或甚至低於10 mPa s。
B5.3.產生效率
在一實施例中，有效表現於哺乳動物細胞(諸如中國倉鼠卵巢細胞(CHO))中之DVD-Ig的產生將需要2種自身可有效表現於哺乳動物細胞中之親本單株抗體。來自穩定哺乳動物細胞株(亦即CHO)之產生產率應高於約0.5 g/L，在一實施例中，高於約1 g/L，且在另一實施例中，處於約2 g/L至約5 g/L或約5 g/L以上之範圍內(Kipriyanov SM,Little M. 1999 Mol Biotechnol. 12:173-201；Carroll S,Al-Rubeai M. 2004 Expert Opin Biol Ther. 4:1821-9)。
抗體及Ig融合蛋白在哺乳動物細胞中之產生受若干因素影響。經由併入強啟動子、強化子及選擇標記對表現載體進行工程改造可使相關基因自整合載體複本之轉錄最大化。對允許高度基因轉錄之載體整合位點的識別可增加由載體之蛋白質表現(Wurm等人,2004,Nature Biotechnology,2004,22(11): 1393-1398)。此外，產生程度受抗體重鏈與輕鏈之比率及蛋白質組裝與分泌過程中之各種步驟影響(Jiang等人,2006,Biotechnology Progress,2006年1月-2月，第22卷，第1期，第313-318頁)。
B6.免疫原性
投與治療性mAb可能引起在一定程度上發生免疫反應(亦即形成針對治療性mAb之內源抗體)。在選擇親本單株抗體期間應分析可能誘導免疫原性之潛在要素且可採取措施降低該種風險以在DVD-Ig建構前最佳化親本單株抗體。已發現源自小鼠之抗體在患者體內具有高度免疫原性。包含小鼠可變區及人類恆定區之嵌合抗體的產生提供降低治療性抗體免疫原性之下一合理步驟(Morrison及Schlom,1990)。或者，如由Riechmann等人,1988關於治療性抗體所述，可藉由將鼠類CDR序列轉移至人類抗體構架中(重構(reshaping)/CDR移植/人類化)來降低免疫原性。另一方法係稱作「表面重塑」或「鑲飾」，以齧齒動物輕鏈可變域及重鏈可變域為起始，僅將表面可及之構架胺基酸變為人類之構架胺基酸，而CDR及內埋之胺基酸仍來自親本齧齒動物抗體(Roguska等人,1996)。在另一人類化類型中，一種技術僅移植「特異性決定區」(SDR)而非移植整個CDR，該等SDR係定義為涉及抗體與其標靶之結合的CDR殘基子集(Kashmiri等人,2005)。此需要經由分析抗體-標靶複合物之有效三維結構或對抗體CDR殘基進行突變分析以確定哪一者與標靶相互作用來識別SDR。或者，與鼠類、嵌合或人類化抗體相比，完全人類抗體之免疫原性已降低。
另一降低治療性抗體之免疫原性的方法為消除某些經預測具有免疫原性之特定序列。在一方法中，在已對人類測試第一代生物劑且發現其具有不可接受之免疫原性後，可對B細胞抗原決定基進行定位且接著進行改變以避免免疫偵測。另一方法使用預測及移除潛在T細胞抗原決定基之方法。已開發出用於掃描且識別具有與MHC蛋白質結合之潛能的生物治療劑之肽序列的計算方法(Desmet等人,2005)。或者，可使用基於人類樹突狀細胞之方法來識別潛在蛋白質過敏原中之CD4+ T細胞抗原決定基(Stickler等人,2005；S.L. Morrison及J. Schlom,Important Adv. Oncol.(1990),第3-18頁；Riechmann,L.,Clark,M.,Waldmann,H.及Winter,G. 「Reshaping human antibodies for therapy,」Nature(1988)332: 323-327；Roguska-M-A,Pedersen-J-T,Henry-A-H,Searle-S-M,Roja-C-M,Avery-B,Hoffee-M,Cook-S,Lambert-J-M,Bl ttler-W-A,Rees-A-R,Guild-B-C,「A comparison of two murine mAbs humanized by CDR-grafting and variable domain resurfacing,」Protein Engineering,(1996),9:. 895-904；Kashmiri-Syed-V-S,De-Pascalis-Roberto,Gonzales-Noreen-R,Schlom-Jeffrey,「SDR grafting--a new approach to antibody humanization,」Methods(San Diego Calif.),2005年5月,36(1): 25-34；Desmet-Johan,Meersseman-Geert,Boutonnet-Nathalie,Pletinckx-Jurgen,De-Clercq-Krista,Debulpaep-Maja,Braeckman-Tessa,Lasters-Ignace,「Anchor profiles of HLA-specific peptides: analysis by a novel affinity scoring method and experimental validation,」Proteins(2005)58: 53-69；Stickler-M-M,EsteII-D-A,Harding-F-A.,「CD4+ T-cell epitope determination using unexposed human donor peripheral blood mononuclear cells,」J. Immunother.(2000)23: 654-60)。
B7.活體內功效
為產生具有所需活體內功效之DVD-Ig分子，產生且選擇在以組合形式提供時具有同樣所需之活體內功效的mAb為重要的。然而，在一些情況下，DVD-Ig可能展現不能由2種各別mAb之組合達成之活體內功效。舉例而言，DVD-Ig可使2個標靶緊密鄰近，從而產生不能由2種各別mAb之組合達成之活性。其他所需之生物功能描述於本文B3部分中。具有DVD-Ig分子所需之特徵的親本抗體可基於諸如藥物動力學半衰期(t)、組織分布、可溶性標靶相對於細胞表面標靶、及標靶濃度-可溶性/密度-表面之因素來選擇。
B8.活體內組織分布
為產生具有所需活體內組織分布之DVD-Ig分子，在一實施例中，須選擇具有相似所需之活體內組織分布概況之親本mAb。或者，基於雙重特異性靶向策略之機制，在其他情況下可能不需要選擇在以組合形式提供時具有同樣所需之活體內組織分布的親本mAb。舉例而言，在DVD-Ig之狀況下，其中一結合組份使DVD-Ig靶向一特異性位點，從而將第二結合組份引至同一標靶位點。舉例而言，DVD-Ig之一結合特異性可靶向胰臟(胰島細胞)，而另一特異性可將GLP1引至胰臟以誘導胰島素。
B9.同型
為產生具有所需特性(包括(但不限於)同型、效應功能及循環半衰期)之DVD-Ig分子，視治療效用及所需治療終點而定來選擇具有適合Fc-效應功能之親本mAb。存在5個主要重鏈類別或同型，其中一些類別或同型具有若干子型且此等類別或同型決定抗體分子之效應功能。此等效應功能存在於抗體分子之鉸鏈區、CH2及CH3域中。然而，抗體分子之其他部分中之殘基亦可能對效應功能產生影響。鉸鏈區Fc-效應功能包括：(i)抗體依賴性細胞毒性(ADCC)；(ii)補體(Clq)結合、活化及補體依賴性細胞毒性(CDC)；(iii)對抗原-抗體複合物之吞噬/清除；及(iv)細胞激素釋放(在一些情況下)。抗體分子之此等Fc-效應功能係經由Fc區與一組類別特異性細胞表面受體之相互作用來介導。IgG1同型抗體最具活性，而IgG2及IgG4具有最小效應功能或不具有效應功能。IgG抗體之效應功能係經由與3種結構上同源之細胞Fc受體類型(及子型)(FcgR1、FcgRII及FcgRIII)相互作用來介導。可藉由使較低鉸鏈區中為FcgR及Clq結合所需之特定胺基酸殘基突變(例如L234A、L235A)來消除IgG1之此等效應功能。Fc區(尤其CH2-CH3域)中之胺基酸殘基亦決定抗體分子之循環半衰期。此Fc功能係經由Fc區與新生兒Fc受體(FcRn)之結合來介導，該結合負責使抗體分子自酸性溶酶體再循環回全身循環中。
mAb是否應具有活性或非活性同型應視抗體之所需治療終點而定。同型之使用及所需治療結果之一些實例如下所列：
1.若所需終點為功能性中和可溶性細胞激素，則可使用非活性同型；
2.若所需結果為清除病理性蛋白，則可使用活性同型；
3.若所需結果為清除蛋白質聚集體，則可使用活性同型；
4.若所需結果為拮抗表面受體，則使用非活性同型(泰沙比(Tysabri)，IgG4；OKT3，突變型IgG1)；
5.若所需結果為消除標靶細胞，則使用活性同型(赫賽汀(Herceptin)，IgG1(且具有增強之效應功能))；及
6.若所需結果為自循環清除蛋白質而不進入CNS中，則可使用IgM同型(例如清除循環Ab肽物質)。
親本mAb之Fc效應功能可由此項技術中熟知之各種活體外方法來測定。
如所論述，對同型之選擇，及從而對效應功能之選擇應視所需治療終點而定。在需要單純中和循環標靶(例如阻斷受體-配位體相互作用)之狀況下，可能不需要效應功能。在該等情況下，抗體之消除效應功能之同型或Fc區中之突變為合乎需要的。在消除標靶細胞為治療終點(例如消除腫瘤細胞)之其他情況下，增強效應功能之同型或Fc區中之突變或去岩藻糖基化(de-fucosylation)為合乎需要的(Presta GL,Adv. Drug Delivery Rev.,58: 640-656,2006；Satoh M.,Iida S.,Shitara K.,Expert Opinion Biol. Ther.,6: 1161-1173,2006)。同樣，視治療效用而定，抗體分子之循環半衰期可藉由在Fc區中引入特定突變來調節抗體-FcRn相互作用而得以縮短/延長(Dall'Acqua WF,Kiener PA,Wu H.,J. Biol. Chem.,281: 23514-23524(2006)；Petkova SB.,Akilesh S.,Sproule TJ.等人,Internat. Immunol.,18: 1759-1769(2006)；Vaccaro C.,Bawdon R.,Wanjie S等人,Proc. Natl. Acad. Sci. USA,103:18709-18714(2007))。
可需要確定DVD-Ig的關於各種影響正常治療性mAb之不同效應功能之殘基的公開資訊。有可能在DVD-Ig形式中，除經識別用於調節單株抗體效應功能之Fc區殘基以外之其他(不同)Fc區殘基為重要的。
總之，關於哪種Fc-效應功能(同型)將在最終DVD-Ig形式中至關重要之決定將視疾病適應症、治療標靶、所需治療終點及安全考慮而定。以下列出例示性適合重鏈及輕鏈恆定區，包括(但不限於)：IgG1-異型：G1mz；IgG1突變體-A234、A235；IgG2-異型：G2m(n-)；K-Km3；λ。
Fc受體及C1q研究：可藉由(例如L234A、L235A)鉸鏈區突變來消除由抗體與細胞膜上任何過度表現之標靶複合引起的不合需要之抗體依賴性細胞介導之細胞毒性(ADCC)及補體依賴性細胞毒性(CDC)的可能性。此等存在於mAb之IgG1鉸鏈區中的經取代之胺基酸預期會使mAb與人類Fc受體(而非FcRn)之結合減少，因為認為FcgR結合出現於IgG1鉸鏈區上之重疊位點內。mAb之此種特徵可使其安全性概況與含有野生型IgG之抗體相比有所改良。mAb與人類Fc受體之結合可藉由流動式細胞測量實驗使用表現FcgRIIb(或其他FcgR)之細胞株(例如THP-1、K562)及經工程改造之CHO細胞株來測定。與IgG1對照單株抗體相比，mb展示與FcgRI及FcgRIIa之結合降低，而與FcgRIIb之結合不受影響。C1q與抗原/IgG免疫複合物之結合及C1q活化引發典型補體級聯，繼而出現發炎性及/或免疫調節反應。IgG上之C1q結合位點已定位於IgG鉸鏈區內之殘基。藉由C1q ELISA評估C1q與遞增濃度之mAb的結合。結果表明如所預期，當與野生型對照IgG1之結合相比時，mAb不能結合C1q。總之，L234A、L235A鉸鏈區突變消除mAb與FcgRI、FcgRIIa及C1q之結合，但不影響mAb與FcgRIIb之相互作用。此等資料表示活體內具有突變型Fc之mAb將通常與抑制性FcgRIIb相互作用，但可能不能與活化FcgRI及FcgRIIa受體或C1q相互作用。
人類FcRn結合：新生兒受體(FcRn)負責轉運IgG穿過胎盤且控制IgG分子之分解代謝半衰期。可能需要增加抗體之終末半衰期以改良功效，降低投藥之劑量或頻率，或改良對標靶之定位。或者，可能適宜進行相反操作，亦即減小抗體之終末半衰期以降低全身暴露量或改良標靶與非標靶結合比。調整IgG與其救助受體FcRn之間的相互作用可提供一種增加或減小IgG之終末半衰期之途徑。循環中包括IgG之蛋白質在流體相中經由微胞飲作用由某些細胞(諸如血管內皮之細胞)吸收。IgG在略微酸性之條件(pH 6.0-6.5)下可結合核內體中之FcRn且可再循環至細胞表面，其中其在幾乎中性條件(pH 7.0-7.4)下得到釋放。對FcRn80、16、17上Fc區結合位點之定位展示在物種之間保守之2種組胺酸殘基(即His310及His435)負責此相互作用之pH值依賴性。使用噬菌體呈現技術，識別出增加與FcRn之結合且延長小鼠IgG之半衰期的小鼠Fc區突變(參見Victor,G.等人,Nature Biotechnology,15(7): 637-640(1997))。亦已識別出可增加人類IgG在pH 6.0下而非在pH 7.4下對FcRn之結合親和力的Fc區突變(參見Dall'Acqua等人，J. Immunol.,169(9): 5171-80(2002))。此外，在一狀況下，對於恆河猴FcRn，亦觀測到結合之相似pH值依賴性增加(多達27倍)，且此使得與親本IgG相比恆河猴體內之血清半衰期增加兩倍(參見Hinton等人,J. Biol. Chem.,279(8): 6213-6216(2004))。此等發現指示藉由調整Fc區與FcRn之相互作用來延長抗體治療劑之血漿半衰期為可行的。相反，削弱與FcRn之相互作用之Fc區突變可縮短抗體半衰期。
B.10.藥物動力學(PK)
為產生具有所需藥物動力學概況之DVD-Ig分子，在一實施例中，選擇具有類似所需之藥物動力學概況之親本mAb。一個考慮因素為對單株抗體之免疫原性反應(亦即「HAHA」，人類抗人類抗體反應；「HACA」，人類抗嵌合抗體反應)進一步使此等治療劑之藥物動力學複雜化。在一實施例中，使用具有最低免疫原性或不具有免疫原性之單株抗體來建構DVD-Ig分子以使得所得DVD-Ig亦將具有最低免疫原性或不具有免疫原性。決定mAb之PK的一些因素包括(但不限於)mAb之固有特徵(VH胺基酸序列)、免疫原性、FcRn結合及Fc功能。
所選親本單株抗體之PK概況可易於在齧齒動物體內測定，此係因為齧齒動物體內之PK概況與單株抗體在石蟹獼猴(cynomolgus monkey)及人類體內之PK概況密切相關(或可接近地預測後者)。
在選擇了具有所需PK特徵(及如本文所述之其他所需功能特性)之親本單株抗體後，建構DVD-Ig。由於DVD-Ig分子含有2個來自2種親本單株抗體之抗原結合域，所以亦評估DVD-Ig之PK特性。因此，在測定DVD-Ig之PK特性時，可採用基於源自2種親本單株抗體之2個抗原結合域之功能性來測定PK概況的PK檢定。可測定DVD-Ig之PK概況。可影響DVD-Ig之PK概況的其他因素包括抗原結合域(CDR)定向、連接子尺寸及Fc/FcRn相互作用。親本抗體之PK特徵可藉由評估以下參數來評價：吸收、分布、代謝及排泄。
吸收：迄今為止，治療性單株抗體係經由非經腸途徑(例如靜脈內[IV]、皮下[SC]或肌肉內[IM])投與。在SC或IM投藥後，mAb主要經由淋巴路徑自間質空間吸收至體循環中。可飽和之體循環前(presystemic)蛋白水解降解可在血管外投藥後產生可變之絕對生物可用率。通常，由於在較高劑量下蛋白水解容量飽和，所以可觀測到絕對生物可用率隨單株抗體劑量增加而增加。由於淋巴液緩慢排放至血管系統中，所以mAb之吸收過程通常相當緩慢，且吸收持續時間可歷經數小時至數天。SC投與後單株抗體之絕對生物可用率一般處於50%至100%之範圍內。在血腦障壁(BBB)處由DVD-Ig建構體靶向之轉運調節結構的狀況下，可能由於血腦障壁(BBB)處進入CNS代謝區(其中DVD-Ig經釋放以能夠經由其第二抗原識別位點相互作用)之跨細胞轉運(trans-cellular transport)增強而使血漿中之循環時間減少。
分布：在IV投與之後，單株抗體通常遵循兩相血清(或血漿)濃度-時間概況，亦即自快速分布相開始，繼之以緩慢消除相。一般而言，雙指數藥物動力學模型可極好地說明該種藥物動力學概況。mAb於中心室(Vc)中之分布容積通常等於或略高於血漿容積(2公升-3公升)。在其他非經腸投藥途徑(諸如IM或SC)下，血清(血漿)濃度相對於時間之概況的獨特兩相模式可能不明顯，因為血清(血漿)濃度-時間曲線之分布相由長吸收部分遮蓋。包括物理化學特性、位點特異性及標靶定向性受體介導之吸收、組織之結合能力及mAb劑量之多種因素可影響mAb之生物分布。此等因素中之一些因素可促成mAb生物分布之非線性。
代謝及排泄：歸因於分子大小，完整單株抗體不可經由腎排泄至尿中。其主要藉由代謝(例如分解代謝)而失活。對於基於IgG之治療性單株抗體，半衰期通常處於數小時或1-2天至20天以上之範圍內。對mAb之消除可受多種因素影響，該等因素包括(但不限於)對FcRn受體之親和力、mAb之免疫原性、mAb之糖基化程度、mAb對蛋白質水解之敏感性及受體介導之消除。
B.11.對人類及毒理學物種之組織交叉反應性模式
相同染色模式表明可以毒理學物種評價潛在人類毒性。毒理學物種為研究不相關毒性之動物。
選擇滿足以下2個標準之個別抗體：(1)組織染色適合於已知之抗體標靶表現，及(2)來自相同器官之人類組織與毒理學物種組織之間的染色模式類似。
標準1：免疫及/或抗體選擇通常採用重組或合成抗原(蛋白質、碳水化合物或其他分子)。與天然對應物之結合及針對不相關抗原之反篩選(counterscreen)常為用於治療性抗體之篩選漏斗(screening funnel)的一部分。然而，針對大量抗原進行篩選常不切實際。因此，用來自所有主要器官之人類組織進行組織交叉反應性研究可用於避免抗體與任何不相關抗原之不合需要之結合。
標準2：對人類及毒理學物種組織(石蟹獼猴、狗，可能為齧齒動物及其他動物，如人類研究中般測試之相同36或37個組織)之比較組織交叉反應性研究有助於驗證對毒理學物種之選擇。在對冷凍組織切片之典型組織交叉反應性研究中，治療性抗體可展現與已知抗原之預期結合及/或基於低度相互作用(非特異性結合、與相似抗原之低度結合、基於電荷之低度相互作用等)與組織以較低程度結合。在任何狀況下，最具相關性之毒理學動物物種為與人類及動物組織之結合重合度最高的動物物種。
組織交叉反應性研究遵循適當管理準則，包括EC CPMP準則III/5271/94「Production and quality control of mAbs」及1997 US FDA/CBER「Points to Consider in the Manufacture and Testing of Monoclonal Antibody Products for Human Use」。在物鏡上固定在屍體解剖或活組織檢查時獲得之人類組織冷凍切片(5 μm)，且加以乾燥。使用抗生物素蛋白-生物素系統，對組織切片進行過氧化酶染色。參見FDA指導「Points to Consider in the Manufacture and Testing of Monoclonal Antibody Products for Human Use」。相關參考文獻包括Clarke,J.(2004)；Boon,L. (2002a)；Boon,L.(2002b)；Ryan,A.(1999)。
組織交叉反應性研究常分2個階段進行，其中第一階段包括製成來自一個人類捐獻者之32個組織(通常為腎上腺、胃腸道、前列腺、膀胱、心臟、骨骼肌、血細胞、腎、皮膚、骨髓、肝、脊髓、乳房、肺、脾臟、小腦、淋巴結、睾丸、大腦皮層、卵巢、胸腺、結腸、胰臟、甲狀腺、內皮、副甲狀腺、輸尿管、眼、垂體、子宮、輸卵管及胎盤)的冷凍切片。在第二階段中，用來自3個不相關成人之多達38個組織(包括腎上腺、血液、血管、骨髓、小腦、大腦、子宮頸、食道、眼、心臟、腎、大腸、肝、肺、淋巴結、乳房乳腺、卵巢、輸卵管、胰臟、副甲狀腺、周邊神經、垂體、胎盤、前列腺、唾液腺、皮膚、小腸、脊髓、脾臟、胃、橫紋肌、睾丸、胸腺、甲狀腺、扁桃體、輸尿管、膀胱及子宮)進行完全交叉反應性研究。通常以最少2個劑量進行研究。
治療性抗體(亦即測試物品)及同型匹配對照抗體可經生物素標記以用於抗生物素蛋白-生物素複合物(ABC)偵測；其他偵測方法可包括對經FITC(或以其他方式)標記之測試物品進行三次抗體偵測，或使未標記之測試物品與經標記之抗人類IgG預複合。
簡言之，固定在屍體解剖或活組織檢查時獲得之人類組織冷凍切片(約5 μm)且將其在物鏡上乾燥。使用抗生物素蛋白-生物素系統，對組織切片進行過氧化酶染色。首先(在預複合偵測系統之狀況下)，將測試物品與經生物素標記之二次抗人類IgG一起培育且形成免疫複合物。將免疫複合物以2 μg/mL及10 μg/mL測試物品之最終濃度添加至物鏡上之組織切片上，且接著使組織切片與抗生物素蛋白-生物素-過氧化酶套組反應30分鐘。隨後，塗覆DAB(3,3'-二胺基聯苯胺)(過氧化酶反應之受質)，歷時4分鐘以用於組織染色。抗原-瓊脂糖珠粒係用作陽性對照組織切片。
基於所討論之標靶抗原的已知表現來判定任何特異性染色為預期之反應性(例如符合抗原表現)或出人意料之反應性。針對強度及頻率，對任何經判定具特異性之染色進行評分。抗原或血清競爭或阻斷研究可進一步協助判定所觀測到之染色是否為特異性的或非特異性的。
若發現2種所選抗體滿足選擇標準(即組織染色適合、人類與毒理學動物特定組織之間的染色匹配)，則其可選用於DVD-Ig產生。
須用最終DVD-Ig建構體重複組織交叉反應性研究，但雖然此等研究遵循如本文所述之相同方案，但對其之評估更為複雜，因為任何結合可能由2種親本抗體中之任一者所致，且需要用複雜抗原競爭研究確定任何無法解釋之結合。
易於顯而易見的是，若選擇如下之2種親本抗體，則對多特異性分子(如DVD-Ig)之組織交叉反應性研究之複雜操作可極大簡化：(1)缺乏出人意料之組織交叉反應性研究結果及(2)相應人類與毒理學動物物種組織之間的組織交叉反應性研究結果存在適當相似性。
B.12.特異性及選擇性
為產生具有所需特異性及選擇性之DVD-Ig分子，需要產生且選擇具有同樣所需特異性及選擇性概況之親本mAb。
對於DVD-Ig之特異性及選擇性的結合研究歸因於4個或4個以上結合位點(每兩個結合位點針對一種抗原)而變得複雜。簡言之，以DVD-Ig使用ELISA、BIAcore、KinExA之結合研究或其他相互作用研究需要監測1種、2種或2種以上抗原與DVD-Ig分子之結合。雖然BIAcore技術可解決多種抗體之連續獨立之結合，但較傳統之方法(包括ELISA)或較現代之技術(如KinExA)卻不能。因此，對各親本抗體進行仔細表徵為關鍵的。在已針對特異性對各個別抗體進行表徵後，對DVD-Ig分子中個別結合位點之特異性保留的確認將極大簡化。
易於顯而易見的是，若在將2種親本抗體組合成DVD-Ig之前針對特異性來選擇該2種親本抗體，則測定DVD-Ig特異性之複雜操作將極大簡化。
抗原-抗體相互作用研究可採用多種形式，包括多種典型蛋白質-蛋白質相互作用研究，包括ELISA(酶聯免疫吸附檢定)、質譜、化學交聯、具有光散射之SEC、平衡透析、凝膠滲透、超濾、凝膠層析、大區域分析型SEC、微量製備級超速離心(沈降平衡)、光譜方法、滴定微量熱法、沈降平衡(在分析型超速離心機中)、沈降速度(在分析型離心機中)、表面電漿共振(包括BIAcore)。相關參考文獻包括「Current Protocols in Protein Science,」John E. Coligan,Ben M. Dunn,David W. Speicher,Paul T,Wingfield(編)第3卷，第19及20章，由John Wiley & Sons Inc.出版及其中所包括之參考文獻以及「Current Protocols in Immunology,」John E. Coligan,Barbara E. Bierer,David H. Margulies,Ethan M. Shevach, Warren Strober(編)，由John Wiley & Sons Inc出版及其中所包括之相關參考文獻。
全血中之細胞激素釋放：可藉由細胞激素釋放檢定研究mAb與人類血細胞之相互作用(Wing,M. G.,Therapeutic Immunology(1995),2(4): 183-190；「Current Protocols in Pharmacology,」S.J. Enna,Michael Williams,John W. Ferkany,Terry Kenakin,Paul Moser,(編)，由John Wiley & Sons Inc出版；Madhusudan,S.,Clinical Cancer Research(2004),10(19): 6528-6534；Cox,J. Methods(2006),38(4): 274-282；Choi,I.,Eur. J. Immunol.,(2001),31(1): 94-106)。簡言之，將各種濃度之mAb與人類全血一起培育24小時。所測試之濃度應涵蓋包括模擬患者體內典型血液含量之最終濃度的廣泛範圍(包括(但不限於)100 ng/ml-100 mg/ml)。培育後，針對IL-1Rα、TNF-α、IL-1b、IL-6及IL-8之存在分析上清液及細胞溶胞物。將mAb產生之細胞激素濃度分布圖與由陰性人類IgG對照及陽性LPS或PHA對照產生之分布圖相比較。將來自細胞上清液及細胞溶胞物由mAb呈現之細胞激素分布圖與使用對照人類IgG之分布圖相比較。在一實施例中，單株抗體不與自發釋放發炎性細胞激素之人類血細胞相互作用。
對於DVD-Ig之細胞激素釋放研究歸因於4個或4個以上結合位點(2個結合位點針對一種抗原)而變得複雜。簡言之，如本文所述之細胞激素釋放研究測量整個DVD-Ig分子對全血或其他細胞系統之影響，但不能解決分子之哪一部分引起細胞激素釋放。一旦偵測到細胞激素釋放，則須確定DVD-Ig製劑的純度，因為一些共純化細胞組份自身可引起細胞激素釋放。若純度無問題，則可能需要使用DVD-Ig之片段化(包括(但不限於)移除Fc部分、分離結合位點等)、結合位點突變誘發或其他方法來解釋任何觀測結果。易於顯而易見的是，若在將2種親本抗體組合成DVD-Ig之前選擇缺乏細胞激素釋放之2種親本抗體，則此複雜操作可極大簡化。
B.13.對用於毒物學研究之其他物種的交叉反應性
在一實施例中，選擇對適合毒理學物種(例如石蟹獼猴)具有充足交叉反應性之個別抗體。親本抗體需要結合直系同源物種標靶(亦即石蟹獼猴)且引發適當反應(調節、中和、活化)。在一實施例中，對直系同源物種標靶之交叉反應性(親和力/效能)應處於對人類標靶之10倍範圍內。實際上，針對包括小鼠、大鼠、狗、猴(及其他非人類靈長類動物)之多種物種以及疾病模型物種(亦即用於哮喘模型之綿羊)評價親本抗體。親本單株抗體對毒理學物種之可接受交叉反應性允許將來以同一物種進行對DVD-Ig之毒理學研究。出於彼原因，2種親本單株抗體應對常見毒理學物種具有可接受之交叉反應性，從而允許以同一物種對DVD-Ig進行毒理學研究。
親本mAb可選自各種能夠結合特異性標靶且此項技術中熟知之mAb。此等親本mAb包括(但不限於)抗IL-17、抗IL-17F、抗TNF抗體(美國專利第6,258,562號)、抗IL-12及/或抗IL-12p40抗體(美國專利第6,914,128號)；抗IL-18抗體(美國專利申請公開案第2005/0147610 A1號)、抗C5、抗CBL、抗CD147、抗gp120、抗VLA-4、抗CD11a、抗CD18、抗VEGF、抗CD40L、抗CD-40(例如參見WO2007124299)、抗Id、抗ICAM-1、抗CXCL13、抗CD2、抗EGFR、抗TGF-β2、抗HGF、抗cMet、抗DLL-4、抗NPR1、抗PLGF、抗ErbB3、抗E選擇素、抗Fact VII、抗Her2/neu、抗F gp、抗CD11/18、抗CD14、抗ICAM-3、抗RON、抗CD-19、抗CD80(例如參見PCT公開案第WO 2003/039486號)、抗CD4、抗CD3、抗CD23、抗β2-整合素、抗α4β7、抗CD52、抗HLA DR、抗CD22(參見例如美國專利第5,789,554號)、抗CD20、抗MIF、抗CD64(FcR)、抗TCRαβ、抗CD2、抗Hep B、抗CA 125、抗EpCAM、抗gp120、抗CMV、抗gpIIbIIIa、抗IgE、抗CD25、抗CD33、抗HLA、抗IGF1,2、抗IGFR、抗VNR整合素、抗IL-1α、抗IL-1α、抗IL-1受體、抗IL-2受體、抗IL-4、抗IL-4受體、抗IL5、抗IL-5受體、抗IL-6、抗IL-6R、RANKL、NGF、DKK、αVβ3、抗IL-8、抗IL-9、抗IL-13、抗IL-13受體及抗IL-23、抗IL-23p19(參見Presta,「Selection,design,and engineering of therapeutic antibodies,」J. Allergy Clin. Immunol.,116：731-736(2005)及全球資訊網站http://www.path.cam.ac.uk/~mrc7/humanisation/antibodies.html)。
親本mAb亦可選自各種批准用於臨床試驗或正開發供臨床使用之治療性抗體。該等治療性抗體包括(但不限於)利妥昔單抗(rituximab，Rituxan，IDEC/Genentech/Roche)(參見例如美國專利第5,736,137號)，一種批准治療非霍奇金氏淋巴瘤之嵌合抗CD20抗體；HuMax-CD20，一種當前正由Genmab研發之抗CD20；美國專利第5,500,362號中所述之抗CD20抗體AME-133(Applied Molecular Evolution)；hA20(Immunomedics,Inc.)；HumaLYM(Intracel)；及PRO70769(PCT/US2003/040426，標題為「Immunoglobulin Variants and Uses Thereof」)；曲妥珠單抗(trastuzumab，Herceptin，Genentech)(參見例如美國專利第5,677,171號)，一種批准治療乳癌之人類化抗Her2/neu抗體；當前由Genentech研發之帕妥珠單抗(pertuzumab，rhuMab-2C4，Omnitarg)；美國專利第4,753,894號中所述之抗Her2抗體；西妥昔單抗(cetuximab，Erbitux，Imclone)(美國專利第4,943,533號；PCT WO 96/40210)，一種在臨床試驗中用於多種癌症之嵌合抗EGFR抗體；當前正由Abgenix-Immunex-Amgen研發之ABX-EGF(美國專利第6,235,883號)；當前正由Genmab研發之HuMax-EGFr(美國序號：10/172,317)；425、EMD55900、EMD62000及EMD72000(Merck KGaA)(美國專利第5,558,864號；Murthy等人,1987,Arch Biochem Biophys. 252(2):549-60；Rodeck等人,1987,J Cell Biochem. 35(4):315-20；Kettleborough等人,1991,Protein Eng. 4(7):773-83)；IC R62(Institute of Cancer Research)(PCT WO 95/20045；Modjtahedi等人,1993,J. Cell Biophys. 1993,22(1-3):129-46；Modjtahedi等人,1993,Br J Cancer. 1993,67(2):247-53；Modjtahedi等人,1996,Br J Cancer,73(2):228-35；Modjtahedi等人,2003,Int J Cancer,105(2):273-80)；TheraCIM hR3(YM Biosciences,Canada and Centro de Immunologia Molecular,Cuba)(美國專利第5,891,996號；美國專利第6,506,883號；Mateo等人,1997,Immunotechnology,3(1):71-81)；mAb-806(Ludwig Institute for Cancer Research,Memorial Sloan-Kettering)(Jungbluth等人,2003,Proc Natl Acad Sci USA. 100(2):639-44)；KSB-102(KS Biomedix)；MR1-1(IVAX,National Cancer Institute)(PCT WO 0162931A2)；及SC100(Scancell)(PCT WO 01/88138)；阿來組單抗(alemtuzumab，Campath，Millenium)，一種當前批准用於治療B細胞慢性淋巴球性白血病之人類化mAb；莫羅單抗-CD3(muromonab-CD3，Orthoclone OKT3)，一種由Ortho Biotech/Johnson & Johnson研發之抗CD3抗體；替伊莫單抗(ibritumomab tiuxetan，zevalin)，一種由IDEC/Schering AG研發之抗CD20抗體；吉妥單抗(gemtuzumab ozogamicin，Mylotarg)，一種由Celltech/Wyeth研發之抗CD33(p67蛋白質)抗體；阿法賽特(alefacept，Amevive)，一種由Biogen研發之抗LFA-3 Fc融合體；由Centocor/Lilly研發之阿昔單抗(abciximab，ReoPro)；由Novartis研發之巴利昔單抗(basiliximab，Simulect)；由Medimmune研發之帕利珠單抗(palivizumab，Synagis)；英利昔單抗(infliximab，Remicade)，一種由Centocor研發之抗TNFα抗體；阿達木單抗(adalimumab，Humira)，一種由Abbott研發之抗TNFα抗體；Humicade，一種由Celltech研發之抗TNFα抗體；戈利木單抗(golimumab，CNTO-148)，一種由Centocor研發之完全人類TNF抗體；依那西普(etanercept，Enbrel)，一種由Immunex/Amgen研發之p75 TNF受體Fc融合體；來那西普(lenercept)，一種先前由Roche研發之p55TNF受體Fc融合體；ABX-CBL，一種正由Abgenix研發之抗CD147抗體；ABX-IL8，一種正由Abgenix研發之抗IL8抗體；ABX-MA1，一種正由Abgenix研發之抗MUC18抗體；帕姆替珠單抗(Pemtumomab，R1549，90Y-muHMFG1)，一種由Antisoma研發之抗MUC1；斯萊克(Therex，R1550)，一種正由Antisoma研發之抗MUC1抗體；正由Antisoma研發之AngioMab(AS1405)；正由Antisoma研發之HuBC-1；正由Antisoma研發之斯鉑(Thioplatin，AS1407)；Antegren(那他珠單抗(natalizumab))，一種正由Biogen研發之抗α-4-β-1(VLA-4)及α-4-β-7抗體；VLA-1 mAb，一種正由Biogen研發之抗VLA-1整合素抗體；LTBR mAb，一種正由Biogen研發之抗淋巴毒素β受體(LTBR)抗體；CAT-152，一種正由Cambridge Antibody Technology研發之抗TGF-β2抗體；ABT 874(J695)，一種正由Abbott研發之抗IL-12 p40抗體；CAT-192，一種正由Cambridge Antibody Technology及Genzyme研發之抗TGFβ1抗體；CAT-213，一種正由Cambridge Antibody Technology研發之抗嗜酸性粒細胞趨化因子1抗體；LymphoStat-B，一種正由Cambridge Antibody Technology及Human Genome Sciences Inc.研發之抗Blys抗體；TRAIL-R1mAb，一種正由Cambridge Antibody Technology及Human Genome Sciences,Inc.研發之抗TRAIL-R1抗體；Avastin(貝伐單抗(bevacizumab)，rhuMAb-VEGF)，一種正由Genentech研發之抗VEGF抗體；正由Genentech研發之抗HER受體家族抗體；抗組織因子(ATF)，一種正由Genentech研發之抗組織因子抗體；Xolair(奧馬珠單抗)，一種正由Genentech研發之抗IgE抗體；Raptiva(依法珠單抗(Efalizumab))，一種正由Genentech及Xoma研發之抗CD11a抗體；正由Genentech及Millenium Pharmaceuticals研發之MLN-02抗體(先前為LDP-02)；HuMax CD4，一種正由Genmab研發之抗CD4抗體；HuMax-IL15，一種正由Genmab及Amgen研發之抗IL15抗體；正由Genmab及Medarex研發之HuMax-Inflam；HuMax-Cancer，一種正由Genmab及Medarex及Oxford GcoSciences研發之抗肝素酶I抗體；正由Genmab及Amgen研發之HuMax-Lymphoma；正由Genmab研發之HuMax-TAC；IDEC-131，一種正由IDEC Pharmaceuticals研發之抗CD40L抗體；IDEC-151(克立昔單抗(Clenoliximab))，一種正由IDEC Pharmaceuticals研發之抗CD4抗體；IDEC-114，一種正由IDEC Pharmaceuticals研發之抗CD80抗體；IDEC-152，一種正由IDEC Pharmaceuticals研發之抗CD23；正由IDEC Pharmaceuticals研發之抗巨噬細胞遷移因子(MIF)抗體；BEC2，一種由Imclone研發之抗個體基因型抗體(anti-idiotypic antibody)；IMC-1C11，一種正由Imclone研發之抗KDR抗體；DC101，一種正由Imclone研發之抗flk-1抗體；正由Imclone研發之抗VE鈣黏素抗體；CEA-Cide(拉貝珠單抗(labetuzumab))，一種正由Immunomedics研發之抗癌胚抗原(CEA)抗體；LymphoCide(依帕珠單抗(Epratuzumab))，一種正由Immunomedics研發之抗CD22抗體；正由Immunomedics研發之AFP-Cide；正由Immunomedics研發之MyelomaCide；正由Immunomedics研發之LkoCide；正由Immunomedics研發之ProstaCide；MDX-010，一種正由Medarex研發之抗CTLA4抗體；MDX-060，一種正由Medarex研發之抗CD30抗體；正由Medarex研發之MDX-070；正由Medarex研發之MDX-018；Osidem(IDM-1)，一種正由Medarex及Immuno-Designed Molecules研發之抗Her2抗體；HuMax-CD4，一種正由Medarex及Genmab研發之抗CD4抗體；HuMax-IL15，一種正由Medarex及Genmab研發之抗IL15抗體；CNTO 148，一種正由Medarex及Centocor/Johnson & Johnson研發之抗TNFα抗體；CNTO 1275，一種正由Centocor/Johnson & Johnson研發之抗細胞激素抗體；MOR101及MOR102，正由MorphoSys研發之抗細胞間黏附分子-1(ICAM-1)(CD54)抗體；MOR201，一種正由MorphoSys研發之抗纖維母細胞生長因子受體3(FGFR-3)抗體；Nuvion(維西珠單抗(visilizumab))，一種正由Protein Design Labs研發之抗CD3抗體；HuZAF一種正由Protein Design Labs研發之抗γ干擾素抗體；正由Protein Design Labs研發之抗α5β1整合素；正由Protein Design Labs研發之抗IL-12；ING-1，一種正由Xoma研發之抗Ep-CAM抗體；Xolair(奧馬珠單抗)，一種由Genentech及Novartis研發之人類化抗IgE抗體；及MLN01，一種正由Xoma研發之抗β2整合素抗體。在另一實施例中，治療劑包括KRN330(克利寧(Kirin))；huA33抗體(A33，Ludwig Institute for Cancer Research)；CNTO 95(αV整合素，Centocor)；MEDI-522(αVβ3整合素，Medimmune)；伏洛昔單抗(volociximab)(αVβ1整合素，Biogen/PDL)；人類mAb 216(B細胞糖化抗原決定基，NCI)；BiTE MT103(雙特異性CD19×CD3，Medimmune)；4G7xH22(雙特異性B細胞×FcγR1，Medarex/Merck KGa)；rM28(雙特異性CD28×MAPG，美國專利第EP1444268號)；MDX447(EMD 82633)(雙特異性CD64×EGFR，Medarex)；卡妥索單抗(Catumaxomab，removab)(雙特異性EpCAM×抗CD3，Trion/Fres)；厄妥索單抗(Ertumaxomab)(雙特異性HER2/CD3，Fresenius Biotech)；奧戈伏單抗(oregovomab，OvaRex)(CA-125，ViRexx)；Rencarex(WX G250)(碳酸酐酶IX，Wilex)；CNTO 888(CCL2，Centocor)；TRC105(CD105(內皮因子(endoglin))，Tracon)；BMS-663513(CD137促效劑，Brystol Myers Squibb)；MDX-1342(CD19，Medarex)；西利珠單抗(Siplizumab，MEDI-507)(CD2，Medimmune)；奧法木單抗(Ofatumumab，Humax-CD20)(CD20，Genmab)；利妥昔單抗(Rituxan)(CD20，Genentech)；維塔珠單抗(veltuzumab，hA20)(CD20，Immunomedics)；依帕珠單抗(CD22，Amgen)；魯昔單抗(lumiliximab，IDEC 152)(CD23，Biogen)；莫羅單抗-CD3(CD3，Ortho)；HuM291(CD3 fc受體，PDL Biopharma)；HeFi-1(CD30，NCI)；MDX-060(CD30，Medarex)；MDX-1401(CD30，Medarex)；SGN-30(CD30，Seattle Genentics)；SGN-33(林妥珠單抗(Lintuzumab))(CD33，Seattle Genentics)；紮木單抗(Zanolimumab，HuMax-CD4)(CD4，Genmab)；HCD122(CD40，Novartis)；SGN-40(CD40，Seattle Genentics)；Campathlh(阿來組單抗)(CD52，Genzyme)；MDX-1411(CD70，Medarex)；hLL1(EPB-1)(CD74.38，Immunomedics)；加利昔單抗(Galiximab，IDEC-144)(CD80，Biogen)；MT293(TRC093/D93)(分解之膠原蛋白，Tracon)；HuLuc63(CS1，PDL Pharma)；伊利木單抗(ipilimumab，MDX-010)(CTLA4，Brystol Myers Squibb)；川利木單抗(Tremelimumab，Ticilimumab，CP-675,2)(CTLA4，Pfizer)；HGS-ETR1(馬帕木單抗(Mapatumumab))(DR4 TRAIL-R1促效劑，Human Genome Science/Glaxo Smith Kline)；AMG-655(DR5，Amgen)；Apomab(DR5，Genentech)；CS-1008(DR5，Daiichi Sankyo)；HGS-ETR2(來沙木單抗(lexatumumab))(DR5 TRAIL-R2促效劑，HGS)；西妥昔單抗(Erbitux)(EGFR，Imclone)；IMC-11F8(EGFR，Imclone)；尼妥珠單抗(Nimotuzumab)(EGFR，YM Bio)；帕尼單抗(Panitumumab，Vectabix)(EGFR，Amgen)；紮魯木單抗(Zalutumumab，HuMaxEGFr)(EGFR，Genmab)；CDX-110(EGFRvIII，AVANT Immunotherapeutics)；阿德木單抗(adecatumumab，MT201)(Epcam，Merck)；依決洛單抗(edrecolomab，Panorex，17-1A)(Epcam，Glaxo/Centocor)；MORAb-003(葉酸受體a，Morphotech)；KW-2871(神經結醣脂GD3，Kyowa)；MORAb-009(GP-9，Morphotech)；CDX-1307(MDX-1307)(hCGb，Celldex)；曲妥珠單抗(Herceptin)(HER2，Celldex)；帕妥珠單抗(rhuMAb 2C4)(HER2(DI)，Genentech)；阿泊珠單抗(apolizumab)(HLA-DRβ鏈，PDL Pharma)；AMG-479(IGF-1R，Amgen)；抗IGF-1R R1507(IGF1-R，Roche)；CP 751871(IGF1-R，Pfizer)；IMC-A12(IGF1-R，Imclone)；BIIB022(IGF-1R，Biogen)；Mik-β-1(IL-2Rb(CD122)，Hoffman LaRoche)；CNTO 328(IL6，Centocor)；抗KIR(1-7F9)(殺手細胞Ig樣受體(KIR)，Novo)；Hu3S193(Lewis(y)，Wyeth,Ludwig Institute of Cancer Research)；hCBE-11(LTβR，Biogen)；HuHMFG1(MUC1，Antisoma/NCI)；RAV12(N連接之碳水化合物抗原決定基，Raven)；CAL(副甲狀腺激素相關蛋白(PTH-rP)，University of California)；CT-011(PD1，CureTech)；MDX-1106(ono-4538)(PD1，Medarex/Ono)；MAb CT-011(PD1，Curetech)；IMC-3G3(PDGFRa，Imclone)；巴維昔單抗(bavituximab)(磷脂醯絲胺酸，Peregrine)；huJ591(PSMA，Cornell Research Foundation)；muJ591(PSMA，Cornell Research Foundation)；GC1008(TGFb(pan)抑制劑(IgG4)，Genzyme)；英利昔單抗(Infliximab，Remicade)(TNFa，Centocor)；A27.15(轉鐵蛋白受體，Salk Institute，INSERN WO 2005/111082)；E2.3(轉鐵蛋白受體，Salk Institute)；貝伐單抗(阿瓦斯汀(Avastin))(VEGF，Genentech)；HuMV833(VEGF，Tsukuba Research Lab-WO/2000/034337,University of Texas)；IMC-18F1(VEGFR1，Imclone)；IMC-1121(VEGFR2,Imclone)。
C.建構DVD-Ig TM 結合蛋白
多價多特異性雙可變域免疫球蛋白(DVD-IgTM)結合蛋白係經設計以藉由重組DNA技術使來自2種不同親本單株抗體之2個不同輕鏈可變域(VL)以串聯方式直接或經由短連接子連接，繼之以輕鏈恆定域。同樣，重鏈包含2個以串聯方式連接之不同重鏈可變域(VH)，繼之以恆定域CH1及Fc區。
可使用重組DNA技術自由本文所述之方法中之任一者產生之親本抗體獲得可變域。在一實施例中，可變域為鼠類重鏈或輕鏈可變域。在另一實施例中，可變域為CDR移植或人類化重鏈可變域或輕鏈可變域。在一實施例中，可變域為人類重鏈或輕鏈可變域。
在一實施例中，使用重組DNA技術使第一及第二可變域彼此直接連接。在另一實施例中，可變域係經由連接子序列連接。在一實施例中，2個可變域相連接。3個或3個以上可變域亦可直接或經由連接子序列連接。可變域可結合相同抗原或可結合不同抗原。本發明之DVD-Ig分子可包括1個免疫球蛋白可變域及1個非免疫球蛋白可變域(諸如受體之配位體結合域、酶之活性結構域)。DVD-Ig分子亦可包含2個或2個以上非Ig結構域。
連接子序列可為單個胺基酸或多肽序列。在一實施例中，連接子序列係選自由以下組成之群：GGGGSG(SEQ ID NO:887)、GGSGG(SEQ ID NO:888)、GGGGSGGGGS(SEQ ID NO:889)、GGSGGGGSGS(SEQ ID NO:890)、GGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO:891)、GGGGSGGGGSGGGG(SEQ ID NO:892)、GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO:893)、ASTKGP(SEQ ID NO:894)、ASTKGPSVFPLAP(SEQ ID NO:895)、TVAAP(SEQ ID NO:896)、TVAAPSVFIFPP(SEQ ID NO:897)、AKTTPKLEEGEFSEAR(SEQ ID NO:898)、AKTTPKLEEGEFSEARV(SEQ ID NO:899)、AKTTPKLGG(SEQ ID NO:900)、SAKTTPKLGG(SEQ ID NO:901)、SAKTTP(SEQ ID NO:902)、RADAAP(SEQ ID NO:903)、RADAAPTVS(SEQ ID NO:904)、RADAAAAGGPGS(SEQ ID NO:905)、RADAAAAGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO:906)、SAKTTPKLEEGEFSEARV(SEQ ID NO:907)、ADAAP(SEQ ID NO:908)、ADAAPTVSIFPP(SEQ ID NO:909)、QPKAAP(SEQ ID NO:910)、QPKAAPSVTLFPP(SEQ ID NO:911)、AKTTPP(SEQ ID NO:912)、AKTTPPSVTPLAP(SEQ ID NO:913)、AKTTAP(SEQ ID NO:914)、AKTTAPSVYPLAP(SEQ ID NO:915)、GENKVEYAPALMALS(SEQ ID NO:916)、GPAKELTPLKEAKVS(SEQ ID NO:917)及GHEAAAVMQVQYPAS(SEQ ID NO:918)。基於對若干Fab分子之晶體結構分析來選擇連接子序列。在Fab或抗體分子結構中，可變域與CH1/CL恆定域之間存在天然可撓性鍵聯。此天然鍵聯包含約10-12個胺基酸殘基，由來自V域之C末端之4-6個殘基及來自CL/CH1域之N末端之4-6個殘基提供。本文所述之DVD-Ig可分別使用CL或CH1之N末端5-6個胺基酸殘基或11-12個胺基酸殘基作為DVD-Ig之輕鏈及重鏈中之連接子而產生。CL或CH1域之N末端殘基(尤其最前面5-6個胺基酸殘基)採用環構形而無穩固二級結構，且從而可充當介於2個可變域之間的可撓性連接子。CL或CH1域之N末端殘基由於其為Ig序列之一部分而為可變域之天然延長，且從而在很大程度上使任何由連接子及接合點潛在引起之免疫原性降至最低。
其他連接子序列可包括CL/CH1域之任何長度之任何序列(例如CL/CH1域之最前面5-12個胺基酸殘基)但非CL/CH1域之所有殘基；輕鏈連接子可來自Cκ或Cλ；且重鏈連接子可源自任何同型之CH1，包括Cγ1、Cγ2、Cγ3、Cγ4、Cα1、Cα2、Cδ、Cε及Cμ。連接子序列亦可源自其他蛋白質，諸如Ig樣蛋白(例如TCR、FcR、KIR)；基於G/S之序列；源自鉸鏈區之序列；及來自其他蛋白質之其他天然序列。
在一實施例中，使用重組DNA技術使恆定域連接至2個連接之可變域上。在一實施例中，包含串聯連接之重鏈可變域的序列係連接至重鏈恆定域而包含串聯連接之輕鏈可變域的序列係連接至輕鏈恆定域。在一實施例中，恆定域分別為人類重鏈恆定域及人類輕鏈恆定域。在一實施例中，DVD重鏈係進一步連接至Fc區。Fc區可為天然序列Fc區或變異型Fc區。在另一實施例中，Fc區為人類Fc區。在另一實施例中，Fc區包括來自IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgM、IgE或IgD之Fc區。
在一最佳實施例中，2個重鏈DVD多肽及2個輕鏈DVD多肽經組合形成DVD-Ig分子。對能夠結合特異性標靶抗原(諸如IL-17)之特異性DVD-Ig分子及製備其之方法的詳細描述係提供於以下實例部分中。
D.產生DVD-Ig結合蛋白
本發明之DVD-Ig結合蛋白可藉由此項技術中已知之多種技術中之任一者來製備，該等技術為例如由宿主細胞表現，其中藉由標準技術將編碼DVD-Ig重鏈及DVD-Ig輕鏈之表現載體轉染至宿主細胞中。術語「轉染」之各種形式意欲涵蓋通常用於將外源DNA引入原核或真核宿主細胞中之多種技術，例如電穿孔、磷酸鈣沈澱、DEAE-聚葡萄糖轉染及其類似者。儘管有可能使本發明之DVD-Ig蛋白在原核或真核宿主細胞中表現，但應使DVD-Ig蛋白在真核細胞(例如哺乳動物宿主細胞)中表現，因為該等真核細胞(且尤其哺乳動物細胞)比原核細胞更有可能組裝且分泌適當摺疊且具有免疫活性之DVD-Ig蛋白。
用於表現本發明重組抗體之例示性哺乳動物宿主細胞包括中國倉鼠卵巢(CHO)細胞(包括dhfr-CHO細胞，其係描述於Urlaub及Chasin,(1980) Proc. Natl. Acad. Sci. USA,77: 4216-4220中，例如如R.J. Kaufman及P.A. Sharp(1982) Mol. Biol.,159: 601-621中所述，其係與DHFR可選標記一起使用)、NS0骨髓瘤細胞、COS細胞、SP2及PER.C6細胞。當將編碼DVD-Ig蛋白之重組表現載體引入哺乳動物宿主細胞中時，藉由培養宿主細胞，歷時足以使DVD-Ig蛋白在宿主細胞中表現或足以將DVD蛋白分泌至宿主細胞於其中生長之培養基中的時段來製備DVD-Ig蛋白。可使用標準蛋白質純化方法自培養基回收DVD-Ig蛋白。
在用於重組表現本發明之DVD-Ig蛋白的例示性系統中，藉由磷酸鈣介導之轉染將編碼DVD-Ig重鏈及DVD-Ig輕鏈兩者之重組表現載體引入dhfr-CHO細胞中。在重組表現載體內，DVD-Ig重鏈與輕鏈基因各可操作地連接於CMV強化子/AdMLP啟動子調控元件以達成該等基因之高度轉錄。重組表現載體亦帶有DHFR基因，其允許使用甲胺喋呤選擇/擴增來選擇已經載體轉染之CHO細胞。培養所選轉型體宿主細胞以使DVD-Ig重鏈及輕鏈表現且自培養基回收完整DVD-Ig蛋白。使用標準分子生物學技術來製備重組表現載體，轉染宿主細胞，選擇轉型體，培養宿主細胞及自培養基回收DVD-Ig蛋白。本發明仍進一步提供合成本發明DVD-Ig蛋白之方法，其係藉由在適合培養基中培養本發明宿主細胞直至合成本發明DVD-Ig蛋白為止。本發明可進一步包含自培養基分離出DVD-Ig蛋白。
DVD-Ig之重要特徵在於其可以與習知抗體相似之方式製備及純化。DVD-Ig之製備產生具有所需雙重特異性活性之均質單一主要產物，而無對恆定區之任何序列修飾或任何種類之化學修飾。其他先前所述之產生「雙特異性」、「多特異性」及「多特異性多價」全長結合蛋白之方法不產生單一主產物，反而引起細胞內產生或分泌產生經組裝之非活性、單特異性、多特異性、多價全長結合蛋白及具有不同結合位點組合之多價全長結合蛋白的混合物。舉例而言，基於Miller及Presta(PCT公開案第WO 2001/077342(A1)號)所述之設計，存在重鏈與輕鏈之16種可能組合。因此，僅6.25%蛋白質可能呈所需之活性形式，而與其他15種可能組合相比，並非為單一主要產物或單一主產物。使用通常用於大規模生產之標準層析技術分離蛋白質之所需完全活性形式與蛋白質之非活性及部分活性形式仍有待論證。
出人意料的是，本發明之「雙重特異性多價全長結合蛋白」之設計產生主要組裝成所需「雙重特異性多價全長結合蛋白」的雙可變域輕鏈及雙可變域重鏈。
至少50%、至少75%且至少90%之經組裝及經表現之DVD-Ig分子為所需雙重特異性四價蛋白質。本發明之此態樣尤其增進本發明之商業效用。因此，本發明包括使雙可變域輕鏈及雙可變域重鏈在單細胞中表現以產生「雙重特異性四價全長結合蛋白」之單一主產物的方法。
本發明提供使雙可變域輕鏈及雙可變域重鏈在單細胞中表現以產生「雙重特異性四價全長結合蛋白」之「主產物」的方法，其中該「主產物」佔所有經組裝蛋白質之50%以上，其包含雙可變域輕鏈及雙可變域重鏈。
本發明提供使雙可變域輕鏈及雙可變域重鏈在單細胞中表現以產生「雙重特異性四價全長結合蛋白」之單一「主產物」的方法，其中該「主產物」佔所有經組裝蛋白質之75%以上，其包含雙可變域輕鏈及雙可變域重鏈。
本發明提供使雙可變域輕鏈及雙可變域重鏈在單細胞中表現以產生「雙重特異性四價全長結合蛋白」之單一「主產物」的方法，其中該「主產物」佔所有經組裝蛋白質之90%以上，其包含雙可變域輕鏈及雙可變域重鏈。
6.產生IL-17結合蛋白及產生結合蛋白之細胞株
較佳，例如，如藉由此項技術中已知之若干活體外及活體內檢定中之任一者所評估，本發明之LI-17結合蛋白(包括抗IL-17抗體)展現較高之降低或中和IL-17活性的能力。較佳，本發明之IL-17結合蛋白亦展現較高之降低或中和IL-17活性之能力。
在較佳實施例中，結合蛋白或其抗原結合部分結合人類IL-17，其中如由表面電漿共振所測定，結合蛋白或其抗原結合部分以約0.1 s-1或約0.1 s-1以下之koff速率常數與人類IL-17解離，或其以約1×10-6 M或約1×10-6 M以下之IC50抑制人類IL-17A及/或人類IL-17F之活性。或者，如由表面電漿共振所測定，結合蛋白或其抗原結合部分可以約1×10-2 s-1或約1×10-2 s-1以下之koff速率常數與人類IL-17解離，或其可以約1×10-7 M或約1×10-7 M以下之IC50抑制人類IL-17A及/或人類IL-17F之活性。或者，如由表面電漿共振所測定，結合蛋白或其抗原結合部分可以約1×10-3 s-1或約1×10-3 s-1以下之koff速率常數與人類IL-17解離，或其可以約1×10-8 M或約1×10-8 M以下之IC50抑制人類IL-17A及/或人類IL-17F。或者，如由表面電漿共振所測定，結合蛋白或其抗原結合部分可以約1×10-4 s-1或約1×10-4 s-1以下之koff速率常數與人類IL-17解離，或其可以約1×10-9 M或約1×10-9 M以下之IC50抑制人類IL-17A及/或人類IL-17F之活性。或者，如由表面電漿共振所測定，結合蛋白或其抗原結合部分可以約1×10-5 s-1或約1×10-5 s-1以下之koff速率常數與人類IL-17解離，或其可以約1×10-10 M或約1×10-10 M以下之IC50抑制人類IL-17A及/或人類IL-17F之活性。或者，如由表面電漿共振所測定，結合蛋白或其抗原結合部分可以約1×10-5 s-1或約1×10-5 s-1以下之koff速率常數與人類IL-17解離，或其可以約1×10-11 M或約1×10-11 M以下之IC50抑制人類IL-17A及/或人類IL-17F之活性。
在某些實施例中，結合蛋白包含重鏈恆定區，諸如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgE、IgM或IgD之恆定區。較佳，重鏈恆定區為IgG1重鏈恆定區或IgG4重鏈恆定區。此外，抗體可包含輕鏈恆定區，其為κ輕鏈恆定區或λ輕鏈恆定區。較佳，抗體包含κ輕鏈恆定區。或者，抗體部分可為例如Fab片段或單鏈Fv片段。
置換Fc部分中之胺基酸殘基以改變抗體效應功能在此項技術中為已知的(Winter等人，美國專利第5,648,260號及第5624821號)。抗體之Fc部分介導若干重要效應功能，例如細胞激素誘導、ADCC、吞噬、補體依賴性細胞毒性(CDC)以及抗體及抗原-抗體複合物之半衰期/清除率。在一些狀況下，此等效應功能為治療性抗體所需，而在其他狀況下，可能不需要此等效應功能或甚至為有害的，視治療目的而定。某些人類IgG同型(尤其IgG1及IgG3)分別經由結合FcγR及補體C1q來介導ADCC及CDC。新生兒Fc受體(FcRn)為決定抗體之循環半衰期的關鍵組份。在另一實施例中，在抗體恆定區(例如抗體之Fc區)中置換至少一個胺基酸殘基，從而改變抗體之效應功能。
一實施例提供經標記之結合蛋白，其中本發明之抗體或抗體部分係經衍生化或連接於另一功能性分子(例如另一肽或蛋白質)上。舉例而言，本發明之經標記結合蛋白可藉由將本發明之抗體或抗體部分(藉由化學偶合、基因融合、非共價締合或其他方式)功能性連接於一或多種其他分子實體(諸如另一抗體(例如雙特異性抗體或雙功能抗體)、可偵測劑、細胞毒性劑、醫藥劑及/或可介導抗體或抗體部分與另一分子(諸如抗生蛋白鏈菌素核心區或聚組胺酸標籤)締合之蛋白質或肽)上而得以產生。
適用於使本發明之結合蛋白(諸如抗體或抗體部分)衍生化之可偵測劑包括螢光化合物。例示性螢光可偵測劑包括螢光素、異硫氰酸螢光素、若丹明、5-二甲胺-1-萘磺醯氯、藻紅素及其類似者。亦可用可偵測酶(諸如鹼性磷酸酶、辣根過氧化酶、葡萄糖氧化酶及其類似者)使抗體衍生化。當用可偵測酶使抗體衍生化時，其係藉由添加該酶用以產生可偵測反應產物之其他試劑來偵測。舉例而言，當存在可偵測劑辣根過氧化酶時，添加過氧化氫及二胺基聯苯胺會產生可偵測之有色反應產物。抗體亦可用生物素加以衍生化，且可經由間接測量抗生物素蛋白或抗生蛋白鏈菌素結合來偵測。
本發明之另一實施例提供結晶之結合蛋白。較佳，本發明係關於如本文所揭示之整個抗IL-17抗體及其片段之晶體以及包含該等晶體之調配物及組合物。在一實施例中，結晶之結合蛋白的活體內半衰期比該結合蛋白之可溶性對應物長。在另一實施例中，結合蛋白在結晶後仍保留生物活性。
可根據此項技術中已知且如PCT公開案第WO 02072636號(其係以引用方式併入本文中)中所揭示之方法製備本發明之結晶之結合蛋白。
本發明之另一實施例提供糖基化結合蛋白，其中抗體或其抗原結合部分包含一或多個碳水化合物殘基。初期活體內蛋白質產生可經歷稱為轉譯後修飾之進一步加工。特定而言，可以酶促方式添加糖(糖基)殘基，其為一種稱作糖基化之過程。所得帶有共價連接之寡醣側鏈的蛋白質係稱作糖基化蛋白質或醣蛋白。
天然存在之抗體為在Fc域以及可變域中具有一或多個碳水化合物殘基之醣蛋白。Fc域中之碳水化合物殘基對Fc域之效應功能具有重要影響，其中對抗體之抗原結合或半衰期的影響最小(R. Jefferis,Biotechnol. Prog.,21: 11-16(2005))。相反，可變域之糖基化可能對抗體之抗原結合活性產生影響。可變域中之糖基化可能歸因於位阻而對抗體結合親和力產生負面影響(Co,M.S.等人,Mol. Immunol.,30: 1361-1367(1993))，或可能使對抗原之親和力增加(Wallick,S.C.等人,Exp. Med.,168:1099-1109(1988)；Wright,A.等人,EMBO J.,10: 2717-2723(1991))。
本發明之一態樣係關於產生糖基化位點突變體,其中結合蛋白之O-連接或N-連接之糖基化位點已發生突變。熟習此項技術者可使用標準熟知技術產生該等突變體。保留生物活性但結合活性有所增加或降低之糖基化位點突變體為本發明之另一目標。
在另一實施例中,本發明之抗體或抗原結合部分之糖基化係經修飾。舉例而言,可製成去糖基化抗體(亦即抗體缺乏糖基化)。糖基化可經改變以例如增加抗體對抗原之親和力。該等碳水化合物修飾可藉由例如改變抗體序列中之一或多個糖基化位點來實現。舉例而言,可進行一或多個胺基酸取代以消除一或多個可變區糖基化位點,從而消除在彼位點上之糖基化。該等去糖基化可增加抗體對抗原之親和力。該種方法係進一步詳細描述於PCT公開案WO 2003/016466A2及美國專利第5,714,350號及第6,350,861號中。
另外或或者，可製成具有經改變之糖基化類型的本發明之經修飾結合蛋白，諸如岩藻糖基殘基量降低之低岩藻糖化抗體(參見Kanda,Yutaka等人,Journal of Biotechnology(2007),130(3),300-310)或平分型(bisecting)GlcNAc結構增加之抗體。該等經改變之糖基化型態經證明可增加抗體之ADCC能力。該等碳水化合物修飾可藉由例如使抗體在具有經改變之糖基化機構的宿主細胞中表現來實現。具有經改變之糖基化機構的細胞已在此項技術中得以描述且可用作表現本發明之重組抗體從而產生糖基化得以改變之抗體的宿主細胞。參見例如Shields,R. L.等人,(2002)J. Biol. Chem. 277:26733-26740；Umana等人,「Engineered glycoforms of an antineuroblastoma IgG1 With optimized antibody-dependent cellular cytotoxic activity,」Nat. Biotech.,17: 176-180(1999)以及歐洲專利第EP 1,176,195號；PCT公開案第WO 03/035835號及第WO 99/54342號。
蛋白質糖基化視相關蛋白質之胺基酸序列以及表現蛋白質之宿主細胞而定。不同生物體可產生不同糖基化酶(例如糖基轉移酶及糖苷酶)且具有適用之不同受質(核苷酸糖)。歸因於該等因素，蛋白質糖基化型態及糖基殘基之組成可視表現特定蛋白質之宿主系統而有所不同。適用於本發明之糖基殘基可包括(但不限於)葡萄糖、半乳糖、甘露糖、岩藻糖、n-乙醯葡糖胺及唾液酸。較佳，糖基化結合蛋白包含糖基殘基從而糖基化型態為人類糖基化型態。
熟習此項技術者已知不同蛋白質糖基化可產生不同蛋白質特徵。舉例而言，在微生物宿主(諸如酵母)中產生且利用酵母內源路徑得以糖基化之治療性蛋白質的功效與在諸如CHO細胞株之哺乳動物細胞中表現之相同蛋白質的功效相比有所降低。該等醣蛋白亦可能對人類具有免疫原性且在投與後展示活體內半衰期有所減少。人類及其他動物體內之特異性受體可識別特異性糖基殘基且促進蛋白質自血流快速清除。其他不利影響可包括蛋白質摺疊、溶解度、對蛋白酶之敏感性、運輸(trafficking)、轉運、區室化(compartmentalization)、分泌、由其他蛋白質或因子之識別、抗原性或過敏性方面之變化。從而，專業人員可能偏好具有特定糖基化組成及型態的治療性蛋白質，例如與人類細胞中或預期個體動物之物種特異性細胞中所產生之糖基化組成及型態相同或至少相似的糖基化組成及型態。表現不同於宿主細胞之糖化蛋白質的糖化蛋白質可藉由遺傳修飾宿主細胞以表現異源糖基化酶來實現。使用此項技術中已知之技術，專業人員可製成展現人類蛋白質糖基化之抗體或其抗原結合部分。舉例而言，酵母菌株已經遺傳修飾而表現非天然存在之糖基化酶，從而此等酵母菌株中產生之糖基化蛋白質(醣蛋白)展現與動物細胞(尤其人類細胞)之蛋白質糖基化相同的蛋白質糖基化(美國專利申請公開案第20040018590號及第20020137134號)。
除結合蛋白以外，本發明亦關於對本發明之該等結合蛋白具有特異性之抗個體基因型(抗Id)抗體。抗Id抗體為識別通常與另一抗體之抗原結合區締合之獨特決定子的抗體。抗Id可藉由用結合蛋白或其含CDR之區域使動物免疫來製備。經免疫之動物將識別免疫抗體之個體基因型決定子且對其起反應且產生抗Id抗體。易於顯而易見的是，可能較易於產生針對併入DVD-Ig分子中之2種或2種以上親本抗體的抗個體基因型抗體，且較易於藉由此項技術中公認之方法(例如BIAcore、ELISA)確認結合研究以確定針對各親本抗體之個體基因型具有特異性之抗個體基因型抗體在DVD-Ig之情況下亦識別個體基因型(例如抗原結合位點)。針對DVD-Ig之兩個或兩個以上抗原結合位點中每一者具有特異性之抗個體基因型抗體提供測量患者血清中人類DVD-Ig之DVD-Ig濃度的理想試劑。舉例而言，DVD-Ig濃度檢定可使用「夾心檢定ELISA形式」建立，其中將針對第一抗原結合區之抗體塗布於固相(例如BIAcore晶片、ELISA板等)上，用沖洗緩衝液沖洗，與血清樣本一起培育，再進行沖洗步驟，且最終與另一針對另一抗原結合位點之抗個體遺傳型抗體一起培育，該另一抗個體遺傳型抗體本身經用於定量結合反應之酶標記。在一實施例中，對於具有2個以上不同結合位點之DVD-Ig，針對2個最外側結合位點(位於恆定區之最遠端及最近端)的抗個體基因型抗體將不僅有助於測定人類血清中之DVD-Ig濃度，且亦有助於證明分子在活體內之完整性。各抗Id抗體亦可用作「免疫原」以在另一動物體內誘發免疫反應，產生所謂之抗抗Id抗體。
此外，熟習此項技術者應瞭解，可使用經遺傳工程改造以表現各種糖基化酶之宿主細胞之文庫來表現相關蛋白質，以使文庫之成員宿主細胞產生具有不同糖基化型態之相關蛋白質。專業人員可接著選擇且分離具有特定新穎糖基化型態之相關蛋白質。較佳，具有經特定選擇之新穎糖基化型態之蛋白質展現改良或改變之生物特性。
7. IL-17結合蛋白之用途
鑒於本發明之IL-17結合蛋白或其抗原結合部分結合人類IL-17之能力，其可用於使用諸如酶聯免疫吸附檢定(ELISA)、放射免疫檢定(RIA)或組織免疫組織化學之習知免疫檢定偵測IL-17A及/或人類IL-17F(例如，在諸如血清或血漿之生物樣本中)。本發明提供偵測生物樣本中之IL-17A及/或人類IL-17F之方法，其包含使生物樣本與本發明之結合蛋白或抗原結合部分接觸且偵測與IL-17A及/或人類IL-17F結合之結合蛋白(或抗原結合部分)或未結合之結合蛋白(或結合部分)，從而偵測生物樣本中之IL-17A及/或人類IL-17F。結合蛋白係經可偵測物質直接或間接標記以促成對結合或未結合之抗體的偵測。適合可偵測物質包括各種酶、輔基、螢光物質、發光物質及放射性物質。適合酶之實例包括辣根過氧化酶、鹼性磷酸酶、β-半乳糖苷酶或乙醯膽鹼酯酶；適合輔基複合物之實例包括抗生蛋白鏈菌素/生物素及抗生物素蛋白/生物素；適合螢光物質之實例包括傘酮(umbelliferone)、螢光素、異硫氰酸螢光素、若丹明、二氯三嗪基胺螢光素、丹醯氯或藻紅素；發光物質之實例包括魯米諾(luminol)；且適合放射性物質之實例包括3H、14C、35S、90Y、99Tc、111In、125I、131I、177Lu、166Ho或153Sm。
替代標記結合蛋白，可藉由競爭免疫檢定利用經可偵測物質標記之rhIL-17標準品及未標記之人類IL-17結合蛋白檢定生物流體中之人類IL-17。在此檢定中，組合生物樣本、經標記之rhIL-17標準品及人類IL-17結合蛋白且測定與未標記之抗體結合之經標記rhIL-17標準品之量。生物樣本中之人類IL-17之量與結合IL-17結合蛋白之經標記rhIL-17標準品之量成反比。同樣，亦可藉由競爭免疫檢定利用經可偵測物質標記之rhIL-17標準品及未標記之人類IL-17結合蛋白檢定生物流體中之人類IL-17。
本發明之結合蛋白及IL-17結合部分較佳能夠在活體外及活體內中和人類IL-17A及/或人類IL-17F活性。從而，本發明之該等結合蛋白及其IL-17結合部分可用於例如在含有hIL-17A及/或hIL-17F之細胞培養物中，在人類個體體內，或在具有本發明抗體會與之進行交叉反應之IL-17A及/或IL-17F的其他哺乳動物個體體內抑制hIL-17A及/或hIL-17F活性。在一實施例中，本發明提供抑制hIL-17A及/或hIL-17F活性之方法，其包含使hIL-17A及/或hIL-17F與本發明之IL-17結合蛋白或其結合部分接觸，從而抑制hIL-17A及/或hIL-17F活性。舉例而言，在含有或懷疑含有hIL-17A及/或hIL-17F之細胞培養物中，可將本發明之IL-17結合蛋白或其結合部分添加至該培養基中以抑制培養物中之hIL-17A及/或hIL-17F活性。
在另一實施例中，本發明提供降低個體體內之hIL-17A及/或hIL-17F活性的方法，該個體宜為罹患IL-17A或IL-17F活性有害之疾病或病症的個體。本發明提供降低罹患該種疾病或病症之個體體內之IL-17A及/或IL-17F活性的方法，該方法包含向該個體投與本發明抗體或抗體部分以使個體體內之IL-17A及/或IL-17F活性降低。較佳，IL-17A為人類IL-17A，IL-17F為人類IL-17F，且個體為人類個體。或者，個體可為表現本發明抗體能夠結合之IL-17A及/或IL-17F的哺乳動物。此外，個體可為已引入IL-17A及/或IL-17F(例如藉由投與IL-17A及/或IL-17F或藉由使IL-17A及/或IL-17F轉殖基因表現)之哺乳動物。可出於治療目的向人類個體投與本發明之IL-17結合蛋白。此外，可向表現該抗體能夠結合之IL-17A及/或IL-17F的非人類哺乳動物投與本發明之結合蛋白以用於獸醫學目的或作為人類疾病之動物模型。關於後者，該等動物模型可適用於評價本發明抗體之治療功效(例如，測試投藥之劑量及時程)。
如本文所用，術語「IL-17A及/或IL-17F活性有害之病症」意欲包括IL-17A及/或IL-17F在罹患該病症之個體體內的存在已經展示或懷疑對病症之病理生理學或促進病症惡化之因素負有責任的疾病及其他病症。因此，IL-17A及/或IL-17F活性有害之病症為降低IL-17A及/或IL-17F活性預期會減輕病症之症狀及/或進展的病症。該等病症可例如藉由例如使用如上文所述之抗IL-17抗體偵測到罹患該病症之個體之生物流體中IL-17A及/或IL-17F濃度有所增加(例如個體之血清、血漿、滑膜液等中IL-17A及/或IL-17F濃度增加)來證實。可用本發明抗體治療之病症之非限制性實例包括以下關於本發明抗體之醫藥組合物之部分中所述之病症。
本發明之DVD-Ig可單獨結合IL-17(例如hIL-17或hIL-17F)或多個抗原(例如hIL-17及另一非IL-17抗原)。因此，DVD-Ig可阻斷或降低huIL-17之活性及另一標靶抗原之活性。該等其他標靶抗原可包括可溶性標靶(例如TNF)及細胞表面受體標靶(例如VEGFR、EGFR)。
該等其他抗原包括(但不限於)公共可用之資料庫中所列之標靶，該等資料庫包括可在全球資訊網上獲得且以引用方式併入本文中之資料庫。此等標靶資料庫包括以下所列：治療標靶(http://xin.cz3.nus.edu.sg/group/cjttd/ttd.asp)；細胞激素及細胞激素受體(http://www.cytokinewebfacts.com/；http://www.copewithcytokines.de/cope.cgi；及http://cmbi.bjmu.edu.cn/cmbidata/cgf/CGF_Database/cytokine.medic.kumamoto-u.ac.jp/CFC/indexR.html)；趨化因子(http://cytokine.medic.kumamoto-u.ac.jp/CFC/CK/Chemokine.html)；趨化因子受體及GPCR(http://csp.medic.kumamoto-u.ac.jp/CsP/Receptor.html；http://www.gpcr.org/7tm/)；嗅覺受體(Olfactory Receptor)(http://senselab.med.yale.edu/senselab/ORDB/default.asp)；受體(http://www.iuphar-db.org/iuphar-rd/list/index.htm)；癌症標靶(http://cged.hgc.jp/cgi-bin/input.cgi)；作為潛在抗體標靶之分泌蛋白(http://spd.cbi.pku.edu.cn/)；蛋白激酶(http://spd.cbi.pku.edu.cn/)；及人類CD標記(http://content.labvelocity.com/tools/6/1226/CD_table_final_locked.pdf)及(Zola H,2005 CD molecules 2005: human cell differentiation molecules Blood,106:3123-6)。
DVD-Ig適用作治療劑以同時阻斷2種或2種以上不同標靶(亦即hIL-17(及/或hIL-17F)及一或多種其他非IL-17標靶抗原)從而增強功效/安全性及/或增加患者適用範圍。該等標靶可包括可溶性標靶(TNF)及細胞表面受體標靶(VEGFR及EGFR)。
另外，本發明之DVD-Ig可用於組織特異性傳遞(靶向組織標記及疾病介體以增強局部PK，從而產生較高功效及/或較低毒性)，包括細胞內傳遞(靶向內化受體及細胞內分子)，向腦內部傳遞(靶向轉鐵蛋白受體及CNS疾病介體以跨越血腦障壁)。DVD-Ig亦可用作載體蛋白以經由與抗原之非中和抗原決定基結合將彼抗原傳遞至特定位置以及以增加抗原之半衰期。此外，DVD-Ig可經設計而以物理方式連接於植入患者體內之醫藥裝置上或靶向此等醫藥裝置(參見Burke,Sandra E.;Kuntz,Richard E.;Schwartz,Lewis B.,Zotarolimus eluting stents. Advanced Drug Delivery Reviews(2006),58(3),437-446；Surface coatings for biological activation and functionalization of medical devices,Hildebrand,H.F.;Blanchemain,N.;Mayer,G.;Chai,F.;Lefebvre,M.;Boschin,F.,Surface and Coatings Technology(2006),200(22-23),6318-6324；Wu等人,「Drug/device combinations for local drug therapies and infection prophylaxis,」Biomaterials,27: 2450-2467(2006)；Marques等人,「Mediation of the Cytokine Network in the Implantation of Orthopedic Devices,」第21章,Biodegradable Systems in Tissue Engineering and Regenerative Medicine,(Reis等人編)(CRC Press LLC,Boca Raton,2005)第377-397頁)。簡言之，將適合類型之細胞導引至醫藥植入物之部位可促進癒合且修復正常組織功能。或者，亦提供藉由偶接於裝置上或靶向裝置之DVD-Ig對在裝置植入後釋放之介體(包括(但不限於)細胞激素)的抑制作用。舉例而言，血管支架多年來在介入心臟病學中用於疏通阻塞之動脈且改善流向心肌之血液流動。然而，傳統裸金屬血管支架已據知在一些患者體內會引起再狹窄(經治療區域中之動脈再變狹窄)且可產生血液凝塊。最近，已描述塗有抗CD34抗體之血管支架，其藉由捕捉在整個血液中循環之內皮祖細胞(EPC)來減輕再狹窄且防止出現血液凝塊。內皮細胞為襯於血管內使血液順暢流動之細胞。EPC黏附於血管支架之硬質表面上，形成光滑層，該光滑層不僅促進癒合且亦防止再狹窄及血液凝塊，後兩者為先前與使用血管支架相關之併發症(Aoji等人,2005 J Am Coll Cardiol. 45(10):1574-9)。除改善需要血管支架之患者的結果以外，對需要心血管繞通手術之患者亦存在意義。舉例而言，塗有抗EPC抗體之修復血管管道(人工動脈)將消除使用來自患者腿部或手臂之動脈用於繞通手術移植的需要。此將減少手術及麻醉次數，繼而將減少冠狀動脈手術死亡。DVD-Ig係以其可與細胞表面標記(諸如CD34)以及已塗於植入之裝置上以促進細胞募集之蛋白質(或任何種類之抗原決定基，包括(但不限於)蛋白質、脂質及多醣)結合的方式設計。該等方法通常亦可用於其他醫藥植入物。或者，可將DVD-Ig塗於醫藥裝置上且在裝置植入且自該裝置釋放所有DVD後(或任何可能需要額外新鮮DVD-Ig之其他需求，包括已裝載之DVD-Ig老化及變性)，可藉由向患者全身性投與新鮮DVD-Ig再裝載該裝置，其中DVD-Ig係經設計而以一組結合位點與相關標靶(細胞激素、細胞表面標記(諸如CD34)等)結合且以另一組結合位點與裝置上塗有之標靶(包括蛋白質，任何種類之抗原決定基，包括(但不限於)脂質、多醣及聚合物)結合。此技術具有擴展經塗布植入物之適用性的優勢。
A. DVD-Ig在各種疾病中之用途
本發明之DVD-Ig分子亦適用作治療各種疾病之治療性分子。該等DVD分子可結合一或多種涉及特定疾病之標靶。各種疾病中之該等標靶之實例係描述如下。
人類自體免疫及發炎反應
在一態樣中，本發明之DVD-Ig結合蛋白能夠結合人類IL-17A及一或多個涉及一般自體免疫及發炎反應之抗原，包括C5、CCL1(I-309)、CCL11(嗜酸性粒細胞趨化因子)、CCL13(mcp-4)、CCL15(MIP-1d)、CCL16(HCC-4)、CCL17(TARC)、CCL18(PARC)、CCL19、CCL2(mcp-1)、CCL20(MIP-3a)、CCL21(MIP-2)、CCL23(MPIF-1)、CCL24(MPIF-2/嗜酸性粒細胞趨化因子-2)、CCL25(TECK)、CCL26、CCL3(MIP-1a)、CCL4(MIP-1b)、CCL5(RANTES)、CCL7(mcp-3)、CCL8(mcp-2)、CXCL1、CXCL10(IP-10)、CXCL11(I-TAC/IP-9)、CXCL12(SDF1)、CXCL13、CXCL14、CXCL2、CXCL3、CXCL5(ENA-78/LIX)、CXCL6(GCP-2)、CXCL9、IL13、IL8、CCL13(mcp-4)、CCR1、CCR2、CCR3、CCR4、CCR5、CCR6、CCR7、CCR8、CCR9、CX3CR1、IL8RA、XCR1(CCXCR1)、IFNA2、IL10、IL13、IL17C、IL1A、IL1B、IL1F10、IL1F5、IL1F6、IL1F7、IL1F8、IL1F9、IL22、IL5、IL8、IL9、LTA、LTB、MIF、SCYE1(內皮單核細胞活化細胞激素)、SPP1、TNF、TNFSF5、IFNA2、IL10RA、IL10RB、IL13、IL13RA1、IL5RA、IL9、IL9R、ABCF1、BCL6、C3、C4A、CEBPB、CRP、ICEBERG、IL1R1、IL1RN、IL8RB、LTB4R、TOLLIP、FADD、IRAK1、IRAK2、MYD88、NCK2、TNFAIP3、TRADD、TRAF1、TRAF2、TRAF3、TRAF4、TRAF5、TRAF6、ACVR1、ACVR1B、ACVR2、ACVR2B、ACVRL1、CD28、CD3E、CD3G、CD3Z、CD69、CD80、CD86、CNR1、CTLA4、CYSLTR1、FCER1A、FCER2、FCGR3A、GPR44、HAVCR2、OPRD1、P2RX7、TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR6、TLR7、TLR8、TLR9、TLR10、BLR1、CCLI、CCL2、CCL3、CCL4、CCL5、CCL7、CCL8、CCL11、CCL13、CCL15、CCL16、CCL17、CCL18、CCL19、CCL20、CCL21、CCL22、CCL23、CCL24、CCL25、CCR1、CCR2、CCR3、CCR4、CCR5、CCR6、CCR7、CCR8、CCR9、CX3CL1、CX3CR1、CXCL1、CXCL2、CXCL3、CXCL5、CXCL6、CXCL10、CXCL11、CXCL12、CXCL13、CXCR4、GPR2、SCYE1、SDF2、XCL1、XCL2、XCR1、AMH、AMHR2、BMPR1A、BMPR1B、BMPR2、C19orf10(IL27W)、CER1、CSF1、CSF2、CSF3、DKFZp451J0118、FGF2、GFI1、IFNA1、IFNB1、IFNG、IGF1、IL1A、IL1B、IL1R1、IL1R2、IL2、IL2RA、IL2RB、IL2RG、IL3、IL4、IL4R、IL5、IL5RA、IL6、IL6R、IL6ST、IL7、IL8、IL8RA、IL8RB、IL9、IL9R、IL10、IL10RA、IL10RB、IL11、IL11RA、IL12A、IL12B、IL12RB1、IL12RB2、IL13、IL13RA1、IL13RA2、IL15、IL15RA、IL16、IL17、IL17R、IL18、IL18R1、IL19、IL20、KITLG、LEP、LTA、LTB、LTB4R、LTB4R2、LTBR、MIF、NPPB、PDGFB、TBX21、TDGF1、TGFA、TGFB1、TGFB1I1、TGFB2、TGFB3、TGFBI、TGFBR1、TGFBR2、TGFBR3、TH1L、TNF、TNFRSF1A、TNFRSF1B、TNFRSF7、TNFRSF8、TNFRSF9、TNFRSF11A、TNFRSF21、TNFSF4、TNFSF5、TNFSF6、TNFSF11、VEGF、ZFPM2及RNF110(ZNF144)。
哮喘
過敏性哮喘特徵在於嗜伊紅血球增多、杯狀細胞化生、上皮細胞改變、氣管過度反應(AHR)以及Th2及Th1細胞激素表現以及血清IgE含量升高的存在。目前廣泛接受的是，氣管炎症為作為哮喘發病機制之基礎的關鍵因素，涉及諸如T細胞、B細胞、嗜伊紅血球、肥大細胞及巨噬細胞之發炎性細胞及其分泌之介體(包括細胞激素及趨化因子)的複雜相互作用。皮質類固醇為當今針對哮喘之最重要的消炎治療，然而其作用機制不具特異性，且尤其在青少年患者群體中存在安全性問題。因此有理由研發更具特異性及靶向性之治療。
炎症及AHR皆可得以評估之諸如OVA誘發性哮喘小鼠模型之動物模型在此項技術中為已知的且可用於判定各種DVD-Ig分子治療哮喘之能力。用於研究哮喘之動物模型係揭示於Coffman等人,Journal of Experimental Medicine(2005),201(12),1875-1879；Lloyd等人,Advances in Immunology(2001),77,263-295；Boyce等人,Journal of Experimental Medicine(2005),201(12),1869-1873；及Snibson等人,Journal of the British Society for Allergy and Clinical Immunology(2005),35(2),146-52中。除對此等標靶對之常規安全性評估以外，可能需要針對免疫抑制度之特定測試且其有助於選擇最佳標靶對(參見Luster等人,Toxicology(1994),92(1-3),229-43；Descotes等人,Developments in biological standardization(1992),7799-102；Hart等人,Journal of Allergy and Clinical Immunology(2001),108(2),250-257)。
本發明之一態樣係關於能夠結合IL-17(及/或IL-17F)以及一或多種(例如2種)選自由以下組成之群之標靶的DVD-Ig分子：IL-4、IL-5、IL-8、IL-9、IL-13、IL-18、IL-5R(α)、TNFSF4、IL-4R(α)、干擾素α、嗜酸性粒細胞趨化因子、TSLP、PAR-2、PGD2及IgE。一實施例包括雙重特異性抗IL-17/IL-13DVD-Ig作為有益於治療哮喘之治療劑。
類風濕性關節炎(RA)
類風濕性關節炎(RA)為一種全身性疾病，其特徵在於關節滑膜中之慢性發炎反應且與軟骨退化及關節旁骨質侵蝕相關。包括TNF、趨化因子及生長因子之多種促炎性細胞激素在罹病之關節中表現。向RA小鼠模型全身性投與抗TNF抗體或sTNFR融合蛋白經展示具有消炎及關節保護作用。各種細胞激素(包括IL-17)已涉及RA。RA患者體內之TNF活性由靜脈內投與之英利昔單抗(一種嵌合抗TNF mAb)阻斷之臨床研究(Harriman G,Harper LK,Schaible TF. 1999 Summary of clinical trials in rheumatoid arthritis using infliximab,an anti-TNFalpha treatment. Ann. Rheum. Dis.,58 Suppl l: I61-4)，已提供以下證據：TNF調控IL-6、IL-8、MCP-1及VEGF產生、免疫及發炎性細胞於關節中之募集、血管生成且降低基質金屬蛋白酶-1及基質金屬蛋白酶-3之血液含量。對類風濕性關節炎中之發炎路徑之較透徹瞭解已使其他涉及類風濕性關節炎之治療標靶得以識別。諸如介白素-6拮抗劑(IL-6抗體MRA，其由Chugai,Roche研發(參見Nishimoto,Norihiro等人,Arthritis & Rheumatism,(2004),50(6): 1761-1769))、CTLA4Ig(阿巴西普(abatacept)，Genovese等人,(2005)「Abatacept for rheumatoid arthritis refractory to tumor necrosis factor alpha inhibition,」N. Engl. J. Med.,353: 1114-23)及抗B細胞治療(利妥昔單抗，Okamoto H,Kamatani N.(2004)「Rituximab for rheumatoid arthritis,」N. Engl. J. Med.,351: 1909)之有前景治療已經去年在隨機化對照試驗中得以測試。IL-17及其他細胞激素(諸如IL-15及IL-18)已使用RA動物模型識別為起作用(治療性抗體HuMax-IL_15,AMG 714，參見Baslund,Bo等人,Arthritis & Rheumatism(2005),52(9): 2686-2692)。組合抗TNF及抗另一介體(諸如IL-17)之雙重特異性抗體治療具有增強臨床功效及/或患者適用範圍的極大潛力。舉例而言，阻斷TNF及VEGF兩者可潛在地消除皆涉及RA病理生理學之炎症及血管生成。
涵蓋能夠阻斷TNF-α及IL-17之DVD-Ig結合蛋白。除對此等標靶對之常規安全性評估以外，可能需要針對免疫抑制度之特定測試且其有助於選擇最佳標靶對(參見Luster等人,Toxicology(1994),92(1-3),229-43；Descotes等人,Developments in biological standardization(1992),7799-102；Hart等人,Journal of Allergy and Clinical Immunology(2001),108(2),250-257)。可使用臨床前動物RA模型(諸如膠原蛋白誘發性關節炎小鼠模型)來評估DVD-Ig分子是否適用於治療類風濕性關節炎。其他適用之模型在此項技術中亦為熟知的(參見Brand DD.,Comp. Med.,(2005) 55(2):114-22)。基於親本抗體對人類及小鼠直系同源之交叉反應性(例如針對人類及小鼠TNF、人類及小鼠IL-15等之反應性)，可用源自「匹配替代抗體」之DVD-Ig分子對小鼠CIA模型進行驗證研究；簡言之，可將基於2種(或2種以上)小鼠標靶特異性抗體之DVD-Ig以儘可能之程度與用於人類DVD-Ig建構之親本人類或人類化抗體之特徵相匹配(相似親和力、相似中和效能、相似半衰期等)。
在一實施例中，結合hIL-17及另一非IL-17標靶之本發明DVD-Ig亦可用於治療IL-17起作用之其他疾病。該等疾病包括(但不限於)SLE、多發性硬化(MS)、敗血症、各種神經疾病，及癌症(包括子宮頸癌、乳癌、胃癌)。下文亦提供IL-17起作用之疾病及病症之較詳盡的列舉。
本發明之一實施例係關於能夠結合huIL-17及/或hIL-17F以及一或多種選自由以下組成之群之標靶的DVD-Ig分子：TNFα、IL-12、TWEAK、IL-23、CXCL13、CD40、CD40L、IL-18、VEGF、VLA-4、TNFβ、CD45RB、CD200、IFN-γ、GM-CSF、FGF、C5、CD52、硬化蛋白(sclerostin)及CCR2。
SLE(狼瘡)
SLE之免疫病原性標誌為多株B細胞活化，其導致高球蛋白血症、自體抗體產生及免疫複合物形成。基本異常看似為T細胞歸因於全身性T細胞失調而不能抑制禁忌B細胞純系。另外，B細胞與T細胞相互作用係由若干細胞激素(諸如IL-10)以及引發第二信號之共刺激分子(諸如CD40及CD40L、B7及CD28及CTLA-4)促成。此等相互作用連同吞噬細胞對免疫複合物及細胞凋亡物質之清除異常一起維持導致組織損傷之免疫反應。
在一態樣中，本發明之DVD-Ig結合蛋白能夠結合人類IL-17A及一或多種以下已涉及SLE之抗原：B細胞靶向治療：CD-20、CD-22、CD-19、CD28、CD4、CD80、HLA-DRA、IL10、IL2、IL4、TNFRSF5、TNFRSF6、TNFSF5、TNFSF6、BLR1、HDAC4、HDAC5、HDAC7A、HDAC9、ICOSL、IGBP1、MS4A1、RGS1、SLA2、CD81、IFNB1、IL10、TNFRSF5、TNFRSF7、TNFSF5、AICDA、BLNK、GALNAC4S-6ST、HDAC4、HDAC5、HDAC7A、HDAC9、IL10、IL11、IL4、INHA、INHBA、KLF6、TNFRSF7、CD28、CD38、CD69、CD80、CD83、CD86、DPP4、FCER2、IL2RA、TNFRSF8、TNFSF7、CD24、CD37、CD40、CD72、CD74、CD79A、CD79B、CR2、IL1R2、ITGA2、ITGA3、MS4A1、ST6GAL1、CD1C、CHST10、HLA-A、HLA-DRA及NT5E.；共刺激信號：CTLA4或B7.1/B7.2；抑制B細胞存活：BlyS、BAFF；補體失活：C5；細胞激素調節：關鍵原則為任何組織中之總生物反應為促炎性或抗發炎細胞激素之局部含量之間平衡的結果(參見Sfikakis PP等人,2005 Curr Opin Rheumatol 17:550-7)。SLE係視作Th-2驅動之疾病，其經證實血清IL-4、IL-6、IL-10升高。亦涵蓋能夠結合一或多種選自由以下組成之群之標靶的DVD-Ig：IL-4、IL-6、IL-10、IFN-α及TNF-α。本文所述之標靶組合將增強針對SLE之治療功效，其可在多種狼瘡臨床前模型中得以測試(參見Peng SL(2004) Methods Mol. Med.,102: 227-72)。基於親本抗體對人類及小鼠直系同源之交叉反應性(例如針對人類及小鼠CD20、人類及小鼠干擾素α等之反應性)，可用源自「匹配替代抗體」之DVD-Ig分子對小鼠狼瘡模型進行驗證研究：簡言之，可將基於2種(或2種以上)小鼠標靶特異性抗體之DVD-Ig以儘可能之程度與用於人類DVD-Ig建構之親本人類或人類化抗體之特徵相匹配(相似親和力、相似中和效能、相似半衰期等)。
多發性硬化(MS)
多發性硬化(MS)為病因基本上未知之一種複雜的人類自體免疫型疾病。在整個神經系統中髓鞘鹼性蛋白(MBP)的免疫破壞為多發性硬化之主要病變。MS為具有複雜病理之疾病，其涉及CD4+及CD8+T細胞浸潤以及中樞神經系統內之反應。細胞激素、反應性氮物質及共刺激分子在CNS中之表現皆已關於MS有所描述。主要考慮為促進產生自體免疫的免疫機制。特定而言，抗原表現、細胞激素與白血球相互作用及有助於平衡/調節其他T細胞(諸如Th1及Th2細胞)之調節性T細胞為關於治療標靶識別之重要方面。
IL-12為由APC產生且促進Th1效應細胞分化之促炎性細胞激素。IL-12在罹患MS之患者形成之病變中以及在罹患EAE之動物體內產生。先前已展示干擾IL-12路徑會有效防止齧齒動物罹患EAE，且使用抗IL-12 mAb活體內中和IL-12p40對普通狨猿之髓鞘誘發性EAE模型具有有益作用。
TWEAK為TNF家族之成員，其組成性表現於中樞神經系統(CNS)中，具有促炎性、增殖性或細胞凋亡效應，視細胞類型而定。其受體Fn14係由內皮細胞、反應性星形膠質細胞及神經元表現於CNS中。在實驗性自體免疫腦脊髓炎(EAE)期間，在脊髓中TWEAK及Fn14 mRNA表現增加。對C57BL/6小鼠之髓鞘寡樹突神經膠質細胞醣蛋白(MOG)誘發性EAE進行抗TWEAK抗體治療在預致敏階段後治療小鼠時會引起疾病嚴重度及白血球浸潤減輕。
本發明之一態樣係關於能夠結合IL-17(及/或IL-17F)以及一或多種(例如2種)選自由以下組成之群之標靶的DVD-Ig分子：IL-12、TWEAK、IL-23、CXCL13、CD40、CD40L、IL-18、VEGF、VLA-4、TNF、CD45RB、CD200、IFNγ、GM-CSF、FGF、C5、CD52、骨橋蛋白及CCR2。一實施例包括雙重特異性抗IL-17/TWEAK DVD-Ig作為有益於治療MS之治療劑。
若干用於評估DVD-Ig分子治療MS之適用性的動物模型在此項技術中為已知的(參見Steinman L等人,(2005)Trends Immunol. 26(11):565-71；Lublin FD.等人,(1985)Springer Semin Immunopathol. 8(3):197-208；Genain CP等人,(1997)J Mol Med. 75(3):187-97；Tuohy VK等人,(1999) J Exp Med. 189(7):1033-42；OWens T等人,(1995)Neurol Clin. 13(1):51-73；及't Hart等人,J. Immunol.,175(7): 4761-4768(2005))。基於親本抗體對人類及動物物種直系同源之交叉反應性(例如針對人類及小鼠IL-17、人類及小鼠TWEAK等之反應性)，可用源自「匹配替代抗體」之DVD-Ig分子對小鼠EAE模型進行驗證研究：簡言之，可將基於2種(或2種以上)小鼠標靶特異性抗體之DVD-Ig以儘可能之程度與用於人類DVD-Ig建構之親本人類或人類化抗體之特徵相匹配(相似親和力、相似中和效能、相似半衰期等)。相同概念適用於其他非齧齒動物物種之動物模型，其中源自「匹配替代抗體」之DVD-Ig將選用於預期藥理學且可能選用於安全性研究。除對此等標靶對之常規安全性評估以外，可能需要針對免疫抑制度之特定測試且其適用於選擇最佳標靶對(參見Luster等人,Toxicology(1994),92(1-3),229-43；Descotes等人,Developments in biological standardization(1992),77 99-102；Jones R. 2000 Rovelizumab(ICOS Corp). IDrugs. 3(4):442-6)。
敗血症
敗血症之病理生理異常係由革蘭氏陰性生物體(脂多醣[LPS]、脂質A、內毒素)及革蘭氏陽性生物體(脂磷壁酸(lipoteichoic acid)、肽聚糖)之外膜組份引發。此等外膜組份能夠結合單核細胞表面上之CD14受體。根據最近描述之toll樣受體，接著將信號傳遞至細胞，引起促炎性細胞激素腫瘤壞死因子-α(TNF-α)及介白素-1(IL-1)最終產生。嚴重發炎及免疫反應為敗血性休克之基本特徵且在由敗血症誘發之組織損傷、多器官衰竭及死亡之發病機制中起重要作用。細胞激素(尤其腫瘤壞死因子(TNF)及介白素(IL-1))已經展示為敗血性休克之關鍵介體。此等細胞激素對組織具有直接毒性作用；其亦活化磷脂酶A2。此等及其他作用導致血小板活化因子濃度增加、促進氧化氮合成酶活性、促進嗜中性白血球對組織之浸潤及促進嗜中性白血球活性。
對敗血症及敗血性休克之治療仍為臨床難題，且以針對發炎反應之生物反應調節劑(亦即抗TNF、抗MIF)的新近前瞻性試驗僅展示有限臨床效益。最近，關注轉向目的在於逆轉伴隨免疫抑制期之治療。對實驗動物及危急疾病患者之研究已表明淋巴器官及某些實質組織之細胞凋亡增強促成此免疫抑制、無反應性(anergy)及器官系統功能障礙。在敗血症症候群期間，淋巴細胞細胞凋亡可由缺乏IL-2或由釋放糖皮質激素、顆粒酶(granzyme)或所謂之「死亡」細胞激素(即腫瘤壞死因子α或Fas配位體)引發。
細胞凋亡經由胞內及/或粒線體卡斯蛋白酶之自體活化繼續進行，該自體活化可受Bcl-2家族之促細胞凋亡及抗細胞凋亡成員影響。對於實驗動物，用細胞凋亡抑制劑治療不僅可阻止淋巴細胞細胞凋亡；其亦可改善結果。儘管對抗細胞凋亡劑之臨床試驗在很大程度上歸因於與其投藥及組織靶向相關之技術困難而仍很遙遠，然而抑制淋巴細胞細胞凋亡代表用於敗血症患者之有吸引力的治療標靶。同樣，靶向發炎性介體及細胞凋亡介體之雙重特異性藥劑可使效益增加。本發明之一態樣係關於能夠結合IL-17及/或IL-17F以及一或多種選自由以下組成之群之涉及敗血症之標靶的DVD-Ig：TNF、IL-1、MIF、IL-6、IL-8、IL-18、IL-12、IL-23、FasL、LPS、Toll樣受體、TLR-4、組織因子、MIP-2、ADORA2A、CASP1、CASP4、IL-10、IL-1B、NFKB1、PROC、TNFRSF1A、CSF3、CCR3、IL1RN、MIF、NFKB1、PTAFR、TLR2、TLR4、GPR44、HMOX1、HMG-B1、中期因子、IRAK1、NFKB2、SERPINA1、SERPINE1及TREM1。該等DVD-Ig對於敗血症之功效可在此項技術中已知之臨床前動物模型中得以評估(參見Buras JA等人,(2005)Nat. Rev. Drug Discov.,4(10): 854-65及Calandra T等人,(2000) Nat. Med.,6(2):164-70)。
神經病症及神經退化性疾病
神經退化性疾病為慢性的(在該狀況下，其通常與年齡相關)或急性的(例如中風、創傷性腦損傷、脊髓損傷等)。其特徵在於神經元功能進行性喪失(神經元細胞死亡、髓鞘脫失)、運動性喪失及記憶喪失。湧現之對作為慢性神經退化性疾病(例如阿茲海默氏症，AD)之基礎之機制的認識展示複雜病源學及多種因子已經識別促成其形成及進展例如年齡、血糖狀況、類澱粉蛋白產生及多聚化、結合其受體RAGE(AGE之受體)之晚期糖基化終點產物(AGE)積聚、腦氧化應激增加、大腦血流量減少、包括發炎性細胞激素及趨化因子之釋放的神經炎症、神經元功能障礙及微神經膠質細胞活化。因此，此等慢性神經退化性疾病代表多個細胞類型及介體之間的複雜相互作用。針對該等疾病之治療策略有限且主要為用非特異性消炎劑(例如皮質類固醇、COX抑制劑)阻斷發炎過程或使用防止神經元喪失及/或突觸功能之藥劑。此等治療不能阻止疾病進展。新近研究提示更具靶向性之治療(諸如針對可溶性Aβ肽(包括Aβ寡聚形式)之抗體)不僅有助於阻止疾病進展且亦有助於維持記憶。此等初步觀測結果提示靶向一種以上疾病介體(例如Aβ及促炎性細胞激素(諸如TNF))之特異性治療對慢性神經退化性疾病的治療功效比在靶向單一疾病機制(例如單獨可溶性Aβ)下所觀測到之治療功效甚至更好(參見C.E. Shepherd等人,Neurobiol Aging. 2005年10月24日；Nelson RB.,Curr Pharm Des. 2005;11:3335；William L. Klein.;Neurochem Int. 2002;41:345；Janelsins等人,「Early correlation of microglial activation with enhanced tumor necrosis factor-alpha and monocyte chemoattractant protein-I expression specifically within the entorhinal cortex of triple transgenic Alzheimer's disease mice,」Journal of Neuroinflammation,2(23): 1-12(2005)；Soloman B.,Curr Alzheimer Res. 2004;1:149；Igor Rlyubin等人,Nat Med. 2005;11:556-61；Arancio O等人,EMBO Journal(2004) 1-10；Bornemann KD等人,Am J Pathol. 2001;158:63；Deane R等人,Nat Med. 2003;9:907-13；及Eliezer Masliah等人,Neuron. 2005;46:857)。
本發明之DVD-Ig分子可結合IL-17(及/或IL-17F)及一或多種涉及諸如阿茲海默氏症之慢性神經退化性疾病的標靶。該等標靶包括(但不限於)任何涉及AD發病機制之可溶性或細胞表面介體，例如AGE(S100 A、兩性黴素)、促炎性細胞激素(例如IL-1)、趨化因子(例如MCP1)、抑制神經再生之分子(例如Nogo、RGM A)、增強神經突生長之分子(神經營養因子(neurotrophin))及可在血腦障壁處介導轉運之分子(例如轉鐵蛋白受體、胰島素受體或RAGE)。DVD-Ig分子之功效可在諸如過度表現類澱粉前驅蛋白質或RAGE且形成阿茲海默氏症樣症狀之轉殖基因小鼠的臨床前動物模型中得以驗證。另外，可建構DVD-Ig分子且測試其對動物模型之功效，且可選擇最佳治療性DVD-Ig用於對人類患者進行測試。DVD-Ig分子亦可用於治療其他神經退化性疾病，諸如帕金森氏症。α-突觸核蛋白(Alpha-Synuclein)涉及帕金森氏症的病理。能夠靶向IL-17(及/或IL-17F)及LINGO-1、α-突觸核蛋白及/或發炎性介體(諸如TNF、IL-1、MCP-1)之DVD-Ig可證明為有效用於帕金森氏症之治療且涵蓋於本發明中。
神經元再生及脊髓損傷
儘管對病理機制的認識不斷增加，但脊髓損傷(SCI)仍為一種破壞性病狀且代表特徵在於高醫藥需求之醫學病症。大多數脊髓損傷為挫傷或擠壓損傷且原發性損傷後通常為使初始損傷惡化且引起病變部位顯著腫大(有時10倍以上)之繼發性損傷機制(發炎性介體，例如細胞激素及趨化因子)。SCI中之此等原發性及繼發性機制與由其他方式(例如中風)引起之腦損傷中之原發性及繼發性機制極相似。不存在令人滿意之治療且高劑量快速注射潑尼松龍(MP)為僅有的在損傷後8小時之有限時間窗內使用之治療。然而此治療僅意欲預防繼發性損傷而不引起任何顯著功能恢復。其由於缺乏明確功效以及引發若干不利影響(如伴有繼發感染之免疫抑制及嚴重組織病理學肌肉改變)而受到嚴厲批評。無其他刺激內源再生潛能之藥物、生物劑或小分子得到批准，但有前景之治療原則及藥物候選者近年來已在SCI動物模型中展示功效。在很大程度上，人類SCI之功能恢復的缺乏係由病變部位處、疤痕組織中、髓鞘中以及損傷相關細胞上之抑制神經突生長之因子所引起。該等因子為髓鞘相關蛋白NogoA、OMgp及MAG、RGMA、疤痕相關CSPG(硫酸軟骨素蛋白聚糖)及反應性星形膠質細胞上之抑制因子(一些信號蛋白(semaphorin)及促紅血球生成素肝細胞受體配位體(ephrin))。然而，在病變部位處不僅發現生長抑制性分子且亦發現神經突生長刺激因子(如神經營養因子、層黏連蛋白、L1及其他神經突生長刺激因子)。神經突生長抑制性分子及生長促進分子之此整體可解釋阻斷如NogoA或RGM A之單個因子會在齧齒動物SCI模型中引起顯著功能恢復，因為減小抑制性影響可使平衡自生長抑制作用轉向生長促進作用。然而，在阻斷單一神經突外生長抑制分子下觀測到之恢復不完全。為達成更快且更顯著之恢復，可能需要阻斷2種神經突外生長抑制分子(例如Nogo及RGM A)，或阻斷神經突外生長抑制分子且增強神經突外生長增強分子之功能(例如Nogo與神經營養因子)，或阻斷神經突外生長抑制分子(例如Nogo)及例如TNF之促炎性分子(參見McGee AW等人,(2003) Trends Neurosci.,26: 193；Marco Domeniconi等人,(2005) J. Neurol. Sci.,233: 43；Milan Makwanal等人,(2005) FEBS J. 272:2628；Barry J. Dickson(2002)Science,298: 1959；Felicia Yu Hsuan Teng等人,(2005) J.Neurosci. Res. 79:273；Tara Karnezis等人,(2004) Nature Neuroscience,7: 736；Gang Xu等人,(2004) J. Neurochem.,91: 1018)。
在一態樣中，結合hIL-17及/或hIL-17F之DVD-Ig亦可結合一或兩種標靶對：諸如NgR與RGM A；NogoA與RGM A；MAG與RGM A；OMGp與RGM A；RGM A與RGM B；CSPG與RGM A；聚集蛋白聚糖(aggrecan)、中期因子、神經蛋白聚糖(neurocan)、多功能蛋白聚糖(versican)、磷酸蛋白聚糖(phosphacan)、Te38與TNF-α；提供與促進樹狀突及軸突發芽之抗體組合之Aβ球聚體特異性抗體。樹狀突病變為AD之極早出現之體徵且已知NOGO A限制樹狀突生長。可將該類型之抗體與SCI-候選者(髓鞘-蛋白質)抗體中之任一者組合。其他DVD-Ig標靶可包括NgR-p75、NgR-Troy、NgR-Nogo66(Nogo)、NgR-Lingo、Lingo-Troy、Lingo-p75、MAG或Omgp之任何組合。另外，標靶亦可包括任何涉及抑制神經突之可溶性或細胞表面之介體，例如Nogo、Ompg、MAG、RGM A、信號蛋白、促紅血球生成素肝細胞受體配位體、可溶性Aβ、促炎性細胞激素(例如IL-1)、趨化因子(例如MIP 1a)、抑制神經再生之分子。抗nogo/抗RGM A或類似DVD-Ig分子之功效可在脊髓損傷之臨床前動物模型中得以驗證。另外，可建構此等DVD-Ig分子且測試其對動物模型之功效，且可選擇最佳治療性DVD-Ig用於對人類患者進行測試。另外，可建構靶向單個受體(例如結合3種配位體Nogo、Ompg及MAG之Nogo受體以及結合Aβ及S100 A之RAGE)上之2個不同配位體結合位點的DVD-Ig分子。此外，在如多發性硬化之免疫疾病中，例如nogo及nogo受體之神經突外生長抑制劑亦在阻止神經再生方面起作用。對nogo-nogo受體相互作用之抑制已在多發性硬化之動物模型中展示增強之恢復作用。因此，可阻斷一種免疫介體(例如細胞激素，如IL-12)及神經突外生長抑制分子(例如Nogo或RGM)功能的DVD-Ig分子之功效可能比單獨阻斷免疫或神經突外生長抑制分子之功效更快且更大。
一般而言，抗體不以有效且相關方式跨越血腦障壁(BBB)。然而，在例如中風、創傷性腦損傷、多發性硬化等之某些神經疾病中，BBB可能受損且使DVD-Ig及抗體進入腦部之穿透作用增強。在未出現BBB滲漏之其他神經病狀中，可使用對內源轉運系統之靶向，該等轉運系統包括載體介導之轉運體(諸如葡萄糖及胺基酸載體)及BBB血管內皮上的受體介導之轉胞吞作用(transcytosis)調節性細胞結構/受體，從而使跨BBB轉運DVD-Ig成為可能。BBB處使該種轉運成為可能之結構包括(但不限於)胰島素受體、轉鐵蛋白受體、LRP及RAGE。另外，策略使DVD-Ig亦能夠用作將潛在藥物(包括低分子量藥物、奈米粒子及核酸)轉運至CNS中之穿梭載體(shuttle)(Coloma MJ等人,(2000)Pharm Res. 17(3):266-74；Boado RJ等人,(2007)Bioconjug. Chem. 18(2):447-55)。
腫瘤學病症
單株抗體治療已出現作為用於癌症之重要治療模態(von Mehren等人,Annu. Rev. Med.,54: 343-69(2003))。抗體可藉由誘導細胞凋亡、重導向細胞毒性、干擾配位體-受體相互作用或阻止對於贅生性表型關鍵之蛋白質表現來發揮抗腫瘤作用。另外，抗體可靶向腫瘤微環境之組份，擾亂重要結構，諸如腫瘤相關血管結構形成。抗體亦可靶向配位體為生長因子之受體，諸如表皮生長因子受體。抗體因此抑制刺激細胞生長之天然配位體與靶向之腫瘤細胞結合。或者，抗體可誘導抗個體基因型網路、補體介導之細胞毒性或抗體依賴性細胞毒性(ADCC)。使用靶向2種各別腫瘤介體之雙重特異性抗體相較於單特異性抗體將可能提供附加之效益。
在另一實施例中，本發明之結合hIL-17(及/或hIL-17F)之DVD-Ig亦能夠結合另一涉及腫瘤學疾病之標靶，其包括(但不限於)：IGFR、IGF、VGFR1、PDGFRb、PDGFRa、IGF1,2、ERB3、CDCP、1BSG2、ErbB3、CD52、CD20、CD19、CD3、CD4、CD8、BMP6、IL12A、IL1A、IL1B、IL2、IL24、INHA、TNF、TNFSF10、BMP6、EGF、FGF1、FGF10、FGF11、FGF12、FGF13、FGF14、FGF16、FGF17、FGF18、FGF19、FGF2、FGF20、FGF21、FGF22、FGF23、FGF3、FGF4、FGF5、FGF6、FGF7、FGF8、FGF9、GRP、IGF1、IGF2、IL12A、IL1A、IL1B、IL2、INHA、TGFA、TGFB1、TGFB2、TGFB3、VEGF、CDK2、FGF10、FGF18、FGF2、FGF4、FGF7、IGF1R、IL2、BCL2、CD164、CDKN1A、CDKN1B、CDKN1C、CDKN2A、CDKN2B、CDKN2C、CDKN3、GNRH1、IGFBP6、IL1A、IL1B、ODZ1、PAWR、PLG、TGFB1I1、AR、BRCA1、CDK3、CDK4、CDK5、CDK6、CDK7、CDK9、E2F1、EGFR、ENO1、ERBB2、ESR1、ESR2、IGFBP3、IGFBP6、IL2、INSL4、MYC、NOX5、NR6A1、PAP、PCNA、PRKCQ、PRKD1、PRL、TP53、FGF22、FGF23、FGF9、IGFBP3、IL2、INHA、KLK6、TP53、CHGB、GNRH1、IGF1、IGF2、INHA、INSL3、INSL4、PRL、KLK6、SHBG、NR1D1、NR1H3、NR1I3、NR2F6、NR4A3、ESR1、ESR2、NR0B1、NR0B2、NR1D2、NR1H2、NR1H4、NR1I2、NR2C1、NR2C2、NR2E1、NR2E3、NR2F1、NR2F2、NR3C1、NR3C2、NR4A1、NR4A2、NR5A1、NR5A2、NR6A1、PGR、RARB、FGF1、FGF2、FGF6、KLK3、KRT1、APOC1、BRCA1、CHGA、CHGB、CLU、COL1A1、COL6A1、EGF、ERBB2、ERK8、FGF1、FGF10、FGF11、FGF13、FGF14、FGF16、FGF17、FGF18、FGF2、FGF20、FGF21、FGF22、FGF23、FGF3、FGF4、FGF5、FGF6、FGF7、FGF8、FGF9、GNRH1、IGF1、IGF2、IGFBP3、IGFBP6、IL12A、IL1A、IL1B、IL2、IL24、INHA、INSL3、INSL4、KLK10、KLK12、KLK13、KLK14、KLK15、KLK3、KLK4、KLK5、KLK6、KLK9、MMP2、MMP9、MSMB、NTN4、ODZ1、PAP、PLAU、PRL、PSAP、SERPINA3、SHBG、TGFA、TIMP3、CD44、CDH1、CDH10、CDH19、CDH20、CDH7、CDH9、CDH1、CDH10、CDH13、CDH18、CDH19、CDH20、CDH7、CDH8、CDH9、ROBO2、CD44、ILK、ITGA1、APC、CD164、COL6A1、MTSS1、PAP、TGFB1I1、AGR2、AIG1、AKAP1、AKAP2、CANT1、CAV1、CDH12、CLDN3、CLN3、CYB5、CYC1、DAB2IP、DES、DNCL1、ELAC2、ENO2、ENO3、FASN、FLJ12584、FLJ25530、GAGEB1、GAGEC1、GGT1、GSTP1、HIP1、HUMCYT2A、IL29、K6HF、KAI1、KRT2A、MIB1、PART1、PATE、PCA3、PIAS2、PIK3CG、PPID、PR1、PSCA、SLC2A2、SLC33A1、SLC43A1、STEAP、STEAP2、TPM1、TPM2、TRPC6、ANGPT1、ANGPT2、ANPEP、ECGF1、EREG、FGF1、FGF2、FIGF、FLT1、JAG1、KDR、LAMA5、NRP1、NRP2、PGF、PLXDC1、STAB1、VEGF、VEGFC、ANGPTL3、BAI1、COL4A3、IL8、LAMA5、NRP1、NRP2、STAB1、ANGPTL4、PECAM1、PF4、PROK2、SERPINF1、TNFAIP2、CCL11、CCL2、CXCL1、CXCL10、CXCL3、CXCL5、CXCL6、CXCL9、IFNA1、IFNB1、IFNG、IL1B、IL6、MDK、EDG1、EFNA1、EFNA3、EFNB2、EGF、EPHB4、FGFR3、HGF、IGF1、ITGB3、PDGFA、TEK、TGFA、TGFB1、TGFB2、TGFBR1、CCL2、CDH5、COL18A1、EDG1、ENG、ITGAV、ITGB3、THBS1、THBS2、BAD、BAG1、BCL2、CCNA1、CCNA2、CCNDI、CCNE1、CCNE2、CDH1(E-鈣黏素)、CDKN1B(p27Kip1)、CDKN2A(p16INK4a)、COL6A1、CTNNB1(β-索烴素)、CTSB(組織蛋白酶B)、ERBB2(Her-2)、ESR1、ESR2、F3(TF)、FOSL1(FRA-1)、GATA3、GSN(膠溶素)、IGFBP2、IL2RA、IL6、IL6R、IL6ST(醣蛋白130)、ITGA6(a6整合素)、JUN、KLK5、KRT19、MAP2K7(c-Jun)、MKI67(Ki-67)、NGFB(NGF)、NGFR、NME1(NM23A)、PGR、PLAU(uPA)、PTEN、SERPINB5(乳腺絲抑蛋白(maspin))、SERPINE1(PAI-1)、TGFA、THBS1(血小板反應蛋白-1)、TIE(Tie-1)、TNFRSF6(Fas)、TNFSF6(FasL)、TOP2A(拓撲異構酶Iia)、TP53、AZGP1(鋅-a-醣蛋白)、BPAG1(網蛋白(plectin))、CDKN1A(p21Wap1/Cip1)、CLDN7(緊密連接蛋白-7(claudin-7))、CLU(凝聚素(clusterin))、ERBB2(Her-2)、FGF1、FLRT1(纖維結合蛋白)、GABRP(GABAa)、GNAS1、ID2、ITGA6(a6整合素)、ITGB4(b4整合素)、KLF5(GC Box BP)、KRT19(角蛋白19)、KRTHB6(毛髮特異性II型角蛋白)、MACMARCKS、MT3(金屬硫蛋白-III(metallothionectin-III))、M UC1(黏蛋白)、PTGS2(COX-2)、RAC2(p21Rac2)、S100A2、SCGB1D2(親脂素B(lipophilin B))、SCGB2A1(乳腺珠蛋白2(mammaglobin 2))、SCGB2A2(乳腺珠蛋白1)、SPRR1B(Spr1)、THBS1、THBS2、THBS4及TNFAIP2(B94)、RON、c-Met、CD64、DLL4、PLGF、CTLA4、磷脂醯絲胺酸、ROBO4、CD80、CD22、CD40、CD23、CD28、CD55、CD38、CD70、CD74、CD30、CD138、CD56、CD33、CD2、CD137、DR4、DR5、RANKL、VEGFR2、PDGFR、VEGFR1、MTSP1、MSP、EPHB2、EPHA1、EPHA2、EpCAM、PGE2、NKG2D、LPA、SIP、APRIL、BCMA、MAPG、FLT3、PDGFRα、PDGFRβ、ROR1、PSMA、PSCA、SCD1及CD59。
D.醫藥組合物
本發明亦提供醫藥組合物，其包含本發明之抗體或其抗原結合部分以及醫藥學上可接受之載劑。包含本發明抗體之醫藥組合物係用於(但不限於)診斷、偵測或監測病症；預防、治療、管理或改善病症或其一或多種症狀；及/或研究。在一特定實施例中，組合物包含一或多種本發明之抗體。在另一實施例中，醫藥組合物包含一或多種本發明之抗體以及除本發明抗體以外的一或多種用於治療IL-17A及/或IL-17F活性有害之病症的預防劑或治療劑。在一實施例中，該等預防劑或治療劑據知適用於或已用於或當前正用於預防、治療、管理或改善病症或其一或多種症狀。根據此等實施例，組合物可進一步包含載劑、稀釋劑或賦形劑。
本發明之抗體及抗體部分可併入適於向個體投與之醫藥組合物中。通常，醫藥組合物包含本發明之抗體或抗體部分及醫藥學上可接受之載劑。如本文所用，「醫藥學上可接受之載劑」包括生理學上相容之任何及所有溶劑、分散介質、包衣、抗細菌劑及抗真菌劑、等張劑及吸收延遲劑及其類似者。醫藥學上可接受之載劑的實例包括水、生理食鹽水、磷酸鹽緩衝之生理食鹽水、右旋糖、甘油、乙醇及其類似者中之一或多者以及其組合。在多種狀況下，較佳組合物中包括等張劑，例如糖、多元醇(諸如甘露糖醇、山梨糖醇)或氯化鈉。醫藥學上可接受之載劑可進一步包含較少量之助劑物質，諸如濕潤劑或乳化劑、防腐劑或緩衝劑，其增加抗體或抗體部分之存放期或效用。
各種傳遞系統為已知的且可用於投與一或多種本發明之抗體或者一或多種本發明抗體與適用於預防、管理、治療或改善病症或其一或多種症狀之預防劑或治療劑的組合，例如囊封於脂質體、微粒、微囊中；能夠表現抗體或抗體片段之重組細胞；受體介導之內飲作用(參見例如Wu及Wu,J. Biol. Chem.,262: 4429-4432(1987))；建構作為反轉錄病毒或其他載體之一部分的核酸。投與本發明之預防劑或治療劑之方法包括(但不限於)非經腸投藥(例如經皮內、肌肉內、腹膜內、靜脈內及皮下)、硬膜外投藥、瘤內投藥及經黏膜投藥(例如鼻內及經口途徑)。另外，可例如藉由使用吸入器或噴霧器及含有霧化劑之調配物來使用經肺投藥。參見例如美國專利第6,019,968號、第5,985,320號、第5,985,309號、第5,934,272號、第5,874,064號、第5,855,913號、第5,290,540號及第4,880,078號；及PCT公開案第WO 92/19244號、第WO 97/32572號、第WO 97/44013號、第WO 98/31346號及第WO 99/66903號，其每一者係以全文引用之方式併入本文中。在一實施例中，使用Alkermes AIR肺用藥物傳遞技術(Alkermes,Inc.,Cambridge,Massachusetts,US)投與本發明之抗體或抗體部分、組合治療或本發明之組合物。在一特定實施例中，肌肉內、靜脈內、瘤內、經口、鼻內、經肺或皮下投與本發明之預防劑或治療劑。預防劑或治療劑可由任何適當途徑，例如藉由輸注或快速注射、藉由經上皮或皮膚黏膜內壁(例如口腔黏膜、直腸及腸黏膜等)吸收來投與且可與其他生物活性劑一起投與。投藥可為全身或局部投藥。
在一實施例中，可使用如下方法靶向腫瘤細胞：使偶接抗體之碳奈米管(CNT)與腫瘤細胞在活體外特異性結合，繼而用近紅外(NIR)光對其進行高特異性切除術。舉例而言，可使用經生物素標記之極性脂質來製備穩定、生物相容性、無細胞毒性之CNT分散液，接著使其連接於一或兩種不同之針對一或多種腫瘤抗原(例如CD22)之經neutralite抗生物素蛋白衍生化之DVD-Ig上(Chakravarty,P.等人,(2008)Proc. Natl. Acad. Sci. USA,105:8697-8702)。
在一特定實施例中，可能需要將本發明之預防劑或治療劑局部投與需要治療之部位；此可由例如(但不限於)局部輸注、注射或藉助於植入物達成，該植入物為多孔或無孔物質，包括膜及基質，諸如矽橡膠膜(sialastic membrane)、聚合物、纖維基質(例如，Tissel)或膠原蛋白基質。在一實施例中，向個體之罹病部位局部投與有效量之一或多種本發明之抗體拮抗劑以預防、治療、管理及/或改善病症或其症狀。在另一實施例中，向個體之罹病部位局部投與有效量之一或多種本發明之抗體以及有效量之一或多種除本發明之抗體以外的治療(例如，一或多種預防劑或治療劑)以預防、治療、管理及/或改善病症或其一或多種症狀。
在另一實施例中，預防劑或治療劑可以控制釋放或持續釋放系統傳遞。在一實施例中，可使用泵來達成控制或持續釋放(參見Langer(同上)；Sefton,1987,CRC Crit. Ref. Biomed. Eng.,14: 20；Buchwald等人,1980,Surgery,88: 507；Saudek等人,1989,N. Engl. J. Med.,321: 574)。在另一實施例中，可使用聚合材料來達成控制或持續釋放本發明之治療(參見例如Goodson,J. M.,第6章,Medical Applications of Controlled Release,第II卷,Applications and Evaluation,(Langer及Wise編)(CRC Press,Inc.,BocaRaton,1984),第115-138頁；Ranger及Peppas,1983,J. Macromol. Sci. Rev. Macromol. Chem. 23:61；亦參見Levy等人,1985,Science 228:190；During等人,1989,Ann. Neurol. 25:351；Howard等人,1989,J. Neurosurg. 71:105；美國專利第5,679,377號；美國專利第5,916,597號；美國專利第5,912,015號；美國專利第5,989,463號；美國專利第5,128,326號；PCT公開案第WO 99/15154號；及PCT公開案第WO 99/20253號)。用於持續釋放調配物之聚合物之實例包括(但不限於)聚(甲基丙烯酸2-羥基乙酯)、聚(甲基丙烯酸甲酯)、聚(丙烯酸)、聚(乙烯-共-乙酸乙烯酯)、聚(甲基丙烯酸)、聚乙交酯(PLG)、聚酸酐、聚(N-乙烯吡咯啶酮)、聚(乙烯醇)、聚丙烯醯胺、聚(乙二醇)、聚丙交酯(PLA)、聚(丙交酯-共-乙交酯)(PLGA)及聚原酸酯。在一較佳實施例中，持續釋放調配物中使用之聚合物為惰性的、不含可浸出雜質、具儲存穩定性、無菌且生物可降解。在另一實施例中，控釋或持續釋放系統可經置放而鄰近預防或治療標靶，從而僅需要全身劑量之一部分(參見例如Goodson,Medical Applications of Controlled Release,supra,vol. 2,pp. 115-138(1984)).
控制釋放系統係論述於Langer之綜述(1990,Science 249:1527-1533)中。可使用熟習此項技術者已知之任何技術製備包含一或多種本發明治療劑之持續釋放調配物。參見例如美國專利第4,526,938號；PCT公開案WO 91/05548；PCT公開案WO 96/20698；Ning等人,1996,「Intratumoral Radioimmunotherapy of a Human Colon Cancer Xenograft Using a Sustained-Release Gel,」Radiotherapy & Oncology,39: 179-189；Song等人,1995,「Antibody Mediated Lung Targeting of Long-Circulating Emulsions,」PDA Journal of Pharmaceutical Science & Technology,50: 372-397；Cleek等人,1997,「Biodegradable Polymeric Carriers for a bFGF Antibody for Cardiovascular Application,」Pro. Int'1. Symp. Control. Rel. Bioact. Mater. 24: 853-854；及Lam等人,1997,「Microencapsulation of Recombinant Humanized Monoclonal Antibody for Local Delivery,」Proc. Int'1. Symp. Control Rel. Bioact. Mater. 24: 759-760，其每一者係以全文引用之方式併入本文中。
在本發明之組合物為編碼預防劑或治療劑之核酸的一特定實施例中，可藉由將核酸建構成適當核酸表現載體之一部分，且例如藉由使用反轉錄病毒載體(參見美國專利第4,980,286號)或藉由直接注射或藉由使用微粒轟擊(例如基因槍；Biolistic,Dupont)或以脂質或細胞表面受體或轉染劑包覆或藉由將其與已知進入核內之同源盒樣肽連接投與(例如參見Joliot等人，1991,Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88:1864-1868)來將其投與以使其變為細胞內一部分，來活體內投與該核酸以促進其所編碼之預防劑或治療劑表現。或者，可將核酸引入細胞內且將其藉由同源重組併入宿主細胞DNA中以供表現。
本發明之醫藥組合物係調配成與其預期投藥途徑相容。投藥途徑之實例包括(但不限於)非經腸，例如靜脈內、皮內、皮下、經口、鼻內(例如，吸入)、經皮(例如，局部)、經黏膜，及經直腸投藥。在一特定實施例中，組合物係根據常規程序調配成適合於向人類靜脈內、皮下、肌肉內、經口、鼻內或局部投與之醫藥組合物。通常，用於靜脈內投與之組合物為於無菌等張水性緩衝液中之溶液。必要時，組合物亦可包括助溶劑及減輕注射部位疼痛之諸如利多卡因(lignocaine)的局部麻醉劑。
若欲局部投與本發明之組合物，則可將組合物調配成軟膏、乳膏、經皮貼片、洗劑、凝膠劑、洗髮精、噴霧劑、氣霧劑、溶液、乳液的形式或熟習此項技術者熟知之其他形式。參見例如Remington's Pharmaceutical Sciences and Introduction to Pharmaceutical Dosage Forms,第19版,Mack Pub. Co.,Easton,Pa.(1995)。對於不可噴霧之局部劑型，通常使用包含與局部施用相容之載劑或一或多種賦形劑且動力黏度較佳大於水之黏性乃至半固體或固體形式。適合調配物包括(不限於)溶液、懸浮液、乳液、乳膏、軟膏、散劑、擦劑、油膏劑及其類似者，必要時將其滅菌或與影響諸如滲透壓之各種特性之助劑(例如防腐劑、穩定劑、濕潤劑、緩衝劑或鹽)混合。其他適合之局部劑型包括可噴霧之氣霧劑製劑，其中活性成份較佳與固體或液體惰性載劑組合以與加壓揮發物(例如，諸如FREON之氣體推進劑)之混合物的形式封裝或封裝於壓擠瓶(squeeze bottle)中。必要時，亦可向醫藥組合物及劑型中添加增濕劑或保濕劑。該等其他成份之實例在此項技術中為熟知的。
若本發明之方法包含鼻內投與組合物，則可將組合物調配成氣霧劑形式、噴霧劑、薄霧或滴劑之形式。特定而言，根據本發明使用之預防劑或治療劑宜藉助於適合推進劑(例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其他適合氣體)以來自加壓包裝或噴霧器之氣霧劑噴霧呈遞之形式傳遞。在加壓氣霧劑之狀況下，劑量單位可藉由提供閥門以傳遞計量之量來確定。可調配含有化合物與諸如乳糖或澱粉之適合粉末基質之粉末混合物的膠囊及藥筒(由例如明膠構成)用於吸入器或吹入器中。
若本發明之方法包含經口投藥，則可將組合物調配成經口之錠劑、膠囊、扁膠劑、膠囊錠(gelcap)、溶液、懸浮液及其類似者之形式。錠劑或膠囊可藉由習知方式用醫藥學上可接受之賦形劑製備，該等賦形劑為諸如黏合劑(例如預膠凝化玉米澱粉、聚乙烯吡咯啶酮或羥基丙基甲基纖維素)；填充劑(例如乳糖、微晶纖維素或磷酸氫鈣)；潤滑劑(例如硬脂酸鎂、滑石或矽石)；崩解劑(例如馬鈴薯澱粉或乙醇酸澱粉鈉)；或濕潤劑(例如十二烷基硫酸鈉)。錠劑可藉由此項技術中熟知之方法包覆。經口投與之液體製劑可採用(但不限於)溶液、糖漿或懸浮液之形式，或其可以臨用前用水或其他適合媒劑復原之乾燥產品形式提供。該等液體製劑可藉由習知方式用醫藥學上可接受之添加劑製備，該等添加劑為諸如懸浮劑(例如山梨糖醇糖漿、纖維素衍生物或氫化可食用脂肪)；乳化劑(例如卵磷脂或阿拉伯膠)；非水性媒劑(例如杏仁油、油酯(oily ester)、乙醇或分餾植物油)；及防腐劑(例如對羥基苯甲酸甲酯或對羥基苯甲酸丙酯或山梨酸)。必要時，該等製劑亦可含有緩衝鹽、調味劑、著色劑及甜味劑。經口投與之製劑可經適當調配以緩慢釋放、控制釋放或持續釋放預防劑或治療劑。
本發明之方法可包含例如藉由使用吸入器或噴霧器經肺投與與霧化劑一起調配之組合物。參見例如美國專利第6,019,968號；第5,985,320號；第5,985,309號；第5,934,272號；第5,874,064號；第5,855,913號；第5,290,540號；及第4,880,078號；及PCT公開案第WO 92/19244號、第WO 97/32572號、第WO 97/44013號、第WO 98/31346號及第WO 99/66903號，其每一者係以全文引用之方式併入本文中。在一特定實施例中，使用Alkermes AIR肺用藥物傳遞技術(Alkermes,Inc.,Cambridge,Mass.)投與本發明之抗體、組合治療及/或本發明之組合物。
本發明之方法可包含藉由注射(例如，藉由快速注射或連續輸注)投與經調配用於非經腸投藥之組合物。用於注射之調配物可以添加有防腐劑之單位劑型(例如於安瓿中或於多劑量容器中)提供。組合物可採用諸如於油性或水性媒劑中之懸浮液、溶液或乳液之形式，且可含有諸如懸浮劑、穩定劑及/或分散劑之調配劑。或者，活性成份可呈臨用前用適合媒劑(例如無菌無熱原質水)復原之粉末形式。
本發明之方法可另外包含投與調配成儲槽式製劑的組合物。該等長效調配物可藉由植入(例如皮下或肌肉內)或藉由肌肉內注射來投與。因此，舉例而言，組合物可用適合之聚合或疏水性物質(例如於可接受之油中的乳液)或離子交換樹脂調配，或調配成微溶衍生物(例如微溶鹽)之形式。
本發明之方法涵蓋投與調配成中性或鹽形式之組合物。醫藥學上可接受之鹽包括與陰離子形成之鹽，諸如源自鹽酸、磷酸、乙酸、草酸、酒石酸等之鹽；及與陽離子形成之鹽，諸如源自氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化銨、氫氧化鈣、氫氧化鐵、異丙胺、三乙胺、2-乙基胺基乙醇、組胺酸、普魯卡因等之鹽。
一般而言，組合物之成份各別或以混合在一起之單位劑型(例如以乾燥凍乾粉末或無水濃縮物形式)於指示活性劑量的密閉容器(諸如安瓿或藥囊(sachet))中提供。當投藥模式為輸注時，組合物可用含有滅菌醫藥級水或鹽水之輸注瓶分配。當投藥模式為注射時，可提供注射用滅菌水或鹽水之安瓿以在投藥前混合各成份。
本發明亦特別提供本發明之一或多種預防劑或治療劑或醫藥組合物封裝於指示藥劑量的密閉容器(諸如安瓿或藥囊)中。在一個實施例中，本發明之一或多種預防劑或治療劑或醫藥組合物係以乾燥滅菌凍乾粉末或無水濃縮物形式於密閉容器中提供，且可復原(例如用水或鹽水)成適於投與個體之濃度。本發明之一或多種預防劑或治療劑或醫藥組合物較佳以乾燥滅菌凍乾粉末形式於密閉容器中以至少5 mg、更佳至少10 mg、至少15 mg、至少25 mg、至少35 mg、至少45 mg、至少50 mg、至少75 mg或至少100 mg之單位劑量提供。凍乾之本發明預防劑或治療劑或醫藥組合物應在其最初容器中儲存於2℃至8℃，且本發明之預防劑或治療劑或醫藥組合物應在復原後1週內，較佳5天內、72小時內、48小時內、24小時內、12小時內、6小時內、5小時內、3小時內或1小時內投與。在一替代性實施例中，本發明之一或多種預防劑或治療劑或醫藥組合物係以液體形式於指示藥劑之量及濃度的密閉容器中提供。所投與組合物之液體形式較佳於密閉容器中以至少0.25 mg/ml、更佳至少0.5 mg/ml、至少1 mg/ml、至少2.5 mg/ml、至少5 mg/ml、至少8 mg/ml、至少10 mg/ml、至少15 mg/kg、至少25 mg/ml、至少50 mg/ml、至少75 mg/ml或至少100 mg/ml提供。液體形式應在其最初容器中儲存於2℃至8℃。
本發明之抗體及抗體部分可併入適於非經腸投與之醫藥組合物中。較佳，將抗體或抗體部分製備成含有0.1-250 mg/ml抗體之可注射溶液。可注射溶液可由於燧石或琥珀色小瓶、安瓿或預填充注射器中之液體或凍乾劑型構成。緩衝劑可為L-組胺酸(1-50 mM)，最佳為5-10 mM，pH值為5.0至7.0(最佳pH值為6.0)。其他適合之緩衝劑包括(但不限於)琥珀酸鈉、檸檬酸鈉、磷酸鈉或磷酸鉀。可使用濃度為0-300 mM(對於液體劑型，最佳為150 mM)之氯化鈉來調節溶液毒性。對於凍乾劑型，可包括低溫保護劑，主要為0%-10%蔗糖(最佳為0.5%-1.0%)。其他適合之低溫保護劑包括海藻糖及乳糖。對於凍乾劑型，可包括增積劑，主要為1%-10%甘露糖醇(最佳為2%-4%)。液體及凍乾劑型中皆可使用穩定劑，主要為1-50 mM L-甲硫胺酸(最佳為5-10 mM)。其他適合之增積劑包括甘胺酸、精胺酸，可包括如0%-0.05%聚山梨醇酯-80(最佳為0.005%-0.01%)。其他界面活性劑包括(但不限於)聚山梨醇酯20及BRIJ界面活性劑。製備成用於非經腸投與之可注射溶液的包含本發明抗體或抗體部分之醫藥組合物可進一步包含適用作佐劑之藥劑，諸如用於增加治療性蛋白質(例如抗體)之吸收或分散的藥劑。尤其適用之佐劑為玻尿酸酶(諸如Hylenex重組人類玻尿酸酶)。在可注射溶液中添加玻尿酸酶會改良非經腸投藥，尤其皮下投藥後之人類生物可用性。其亦使得在較小疼痛及不適以及最小注射部位反應發生率下較大注射部位體積(亦即大於1 ml)成為可能(參見WO 2004/078140及美國專利申請公開案第2006104968號)。
本發明之組合物可呈多種形式。此等形式包括例如液體、半固體及固體劑型，諸如液體溶液(例如，可注射溶液及可輸注溶液)、分散液或懸浮液、錠劑、丸劑、散劑、脂質體及栓劑。較佳形式視預期投藥模式及治療應用而定。典型較佳組合物呈可注射或可輸注溶液之形式，諸如與用於以其他抗體使人類被動免疫之組合物類似的組合物。較佳投藥模式為非經腸(例如，靜脈內、皮下、腹膜內、肌肉內)投藥。在一較佳實施例中，抗體係藉由靜脈內輸注或注射來投與。在另一較佳實施例中，抗體係藉由肌肉內或皮下注射來投與。
治療組合物在製造及儲存條件下通常須為無菌且穩定的。可將組合物調配為溶液、微乳液、分散液、脂質體或適於高藥物濃度之其他有序結構。可藉由將所需量之活性化合物(亦即，抗體或抗體部分)與上文所列之成份中之一者或該等成份之組合併入適合溶劑中，繼而根據需要過濾滅菌，來製備無菌可注射溶液。一般而言，藉由將活性化合物併入無菌媒劑中來製備分散液，該無菌媒劑含有基礎分散介質及來自上文所舉之成份之所需其他成份。在用於製備無菌可注射溶液之無菌凍乾粉末之狀況下，較佳製備方法為真空乾燥及噴霧乾燥，得到活性成份加上來自其先前經無菌過濾之溶液的任何其他所需成份的粉末。可例如藉由使用諸如卵磷脂之包衣，在分散液之狀況下藉由維持所需粒子尺寸，及藉由使用界面活性劑來維持溶液之適當流動性。可藉由在組合物中包括例如單硬脂酸鹽及明膠之延遲吸收劑來使可注射組合物之吸收延長。
可藉由此項技術中已知之多種方法來投與本發明之抗體及抗體部分，但對於許多治療應用而言，較佳投藥途徑/模式為皮下注射、靜脈內注射或輸注。如熟習此項技術者所應瞭解，投藥途徑及/或模式將視所需結果而不同。在某些實施例中，活性化合物可用將保護化合物以免快速釋放之載劑來製備，諸如控制釋放調配物，包括植入物、經皮貼片及微囊封傳遞系統。可使用生物可降解、生物相容性聚合物，諸如乙烯乙酸乙烯酯、聚酸酐、聚乙醇酸、膠原蛋白、聚原酸酯及聚乳酸。多種製備該等調配物之方法已取得專利權或通常為熟習此項技術者所知。參見例如Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems,J.R. Robinson編,Marcel Dekker,Inc.,New York,1978。
在某些實施例中，本發明之抗體或抗體部分可例如與惰性稀釋劑或可吸收之可食用載劑一同經口投與。該化合物(必要時，連同其他成份)亦可密封於硬殼或軟殼明膠膠囊中，壓製成錠劑，或直接併入個體之飲食中。對於經口治療性投藥，可將化合物連同賦形劑一起併入且可以可攝取錠劑、經頰錠劑、糖衣錠、膠囊、酏劑、懸浮液、糖漿、粉片及其類似者之形式使用。為經由除非經腸投藥以外之方式投與本發明之化合物，可能需要用防止其失活之物質包覆化合物或將化合物與防止其失活之物質共同投與。
亦可將補充性活性化合物併入組合物中。在某些實施例中，本發明之抗體或抗體部分係與一或多種適於治療IL-17活性有害之病症的其他治療劑共同調配及/或共同投與。舉例而言，本發明之抗hIL-17抗體或抗體部分可與一或多種結合其他標靶之其他抗體(例如，結合其他細胞激素或結合細胞表面分子之抗體)共同調配及/或共同投與。此外，一或多種本發明抗體可與兩種或兩種以上上述治療劑組合使用。該等組合治療宜利用較低劑量之所投與之治療劑，從而避免與各種單治療相關之可能毒性或併發症。
在某些實施例中，針對IL-17之抗體或其片段係連接於此項技術中已知之半衰期延長媒劑上。該等媒劑包括(但不限於)Fc域、聚乙二醇及聚葡萄糖。該等媒劑係描述於例如美國序號09/428,082及公開之PCT公開案第WO 99/25044號中，其係出於任何目的以引用之方式併入本文中。
在一特定實施例中，投與包含編碼本發明之抗體或者本發明之另一預防劑或治療劑之核苷酸序列的核酸序列以藉由基因治療之方式治療、預防、管理或改善病症或其一或多種症狀。基因治療係指藉由向個體投與已表現或可表現之核酸而得以進行之治療。在本發明之此實施例中，核酸產生其所編碼之介導預防或治療作用之本發明之抗體或者預防劑或治療劑。
根據本發明可使用此項技術中可用之任何用於基因治療的方法。關於基因治療方法之綜合性評述，參見Goldspiel等人,1993,Clinical Pharmacy,12: 488-505；Wu等人,「Delivery systems for gene therapy,」Biotherapy,3: 87-95(1991)；Tolstoshev,1993,Ann. Rev. Pharmacol. Toxicol.,32: 573-596；Mulligan,Science,260: 926-932(1993)；及Morgan及Anderson,「Human Gene Therapy,」Ann. Rev. Biochem.,62:191-217(1993)；Robinson,C.,Trends Biotechnol.,11:155(1993)。重組DNA技術中通常已知之可使用之方法係描述於Ausubel等人(編),Current Protocols in Molecular Biology,John Wiley & Sons,NY(1993)；及Kriegler,Gene Transfer and Expression,A Laboratory Manual,Stockton Press,NY(1990)中。對於各種基因治療方法之詳細描述係揭示於美國申請公開案第US 2005/0042664 A1號中，其係以引用之方式併入本文中。
IL-17在與涉及免疫及發炎性要素之多種疾病相關的病理學中起關鍵作用。此等疾病包括(但不限於)後天免疫缺乏病症候群；後天免疫缺乏相關疾病；後天惡性貧血；急性冠狀動脈症候群；急性及慢性疼痛(不同形式之疼痛)；急性特發性多發性神經炎；與器官移植相關之急性免疫疾病；與器官移植相關之急性或慢性免疫疾病；急性發炎性髓鞘脫失多神經根神經病；急性缺血；急性肝病；急性風濕熱；急性橫貫性脊髓炎；艾迪森氏病；成人(急性)呼吸窘迫症候群；成人斯蒂爾氏病；酒精性肝硬化；酒精誘發性肝損傷；過敏性疾病；過敏；禿髮；斑禿；阿茲海默氏症；全身性過敏反應；僵直性脊椎炎；僵直性脊椎炎相關性肺病；抗磷脂抗體症候群；再生不全性貧血；動脈硬化；關節病；哮喘；動脈粥樣化疾病/動脈硬化；動脈粥樣硬化；異位性過敏症；異位性濕疹；異位性皮炎；萎縮性自體免疫性甲狀腺功能低下；自體免疫性大皰性疾病；自體免疫性皮炎；自體免疫糖尿病；與鏈球菌感染相關之自體免疫病症；自體免疫性腸病；自體免疫性溶血性貧血；自體免疫性肝炎；自體免疫性聽力損失；自體免疫性淋巴增生症候群(ALPS)；自體免疫介導之低血糖症；自體免疫性心肌炎；自體免疫性嗜中性白血球減少症；自體免疫卵巢早衰；自體免疫性血小板減少症(AITP)；自體免疫性甲狀腺病；自體免疫葡萄膜炎；阻塞性細支氣管炎；白塞氏病(Behcet's disease)；眼瞼炎；支氣管擴張症；大皰性類天疱瘡；惡病質；心血管疾病；災難性抗磷脂症候群；乳糜瀉；頸椎關節病；披衣菌；膽汁淤積；慢性活動性肝炎；慢性嗜伊紅性肺炎；慢性疲勞症候群；與器官移植相關之慢性免疫疾病；慢性缺血；慢性肝病；慢性黏膜皮膚念珠菌病；瘢痕性類天疱瘡；伴有多發性硬化症風險之臨床上分離症候群(CIS)；普通變異型免疫缺乏症(普通變異型低丙種球蛋白血症)；結締組織病相關性間質性肺病；結膜炎；庫姆氏陽性溶血性貧血；兒童發作精神病症；慢性阻塞性肺病(COPD)；克羅恩氏病；隱原性自體免疫性肝炎；隱原性纖維性肺泡炎；淚囊炎；抑鬱症；皮炎；硬皮病；皮肌炎；皮肌炎/多發性肌炎相關性肺病；糖尿病性視網膜病；糖尿病；擴張型心肌病；盤狀紅斑狼瘡；椎間盤突出；椎間盤脫出；散播性血管內凝血；藥物誘發性肝炎；藥物誘發性間質性肺病；藥物誘發性免疫性溶血性貧血；心內膜炎；子宮內膜異位症；眼內炎；腸病性滑膜炎；上鞏膜炎；多形性紅斑；重症多形性紅斑；女性不孕症；纖維化；纖維變性肺病；妊娠性類天疱瘡；巨細胞動脈炎(GCA)；絲球體腎炎；甲狀腺腫性自體免疫性甲狀腺功能低下(橋本氏病)；古德帕斯徹氏症候群；痛風性關節炎；移植物抗宿主疾病(GVHD)；格雷氏病；B群鏈球菌(GBS)感染；格-巴氏症候群(GBS)；血鐵質沈著症相關性肺病；枯草熱；心臟衰竭；溶血性貧血；亨偌-絲奇恩賴紫癜；B型肝炎；C型肝炎；休斯氏症候群；亨廷頓氏舞蹈病；甲狀腺機能亢進症；副甲狀腺低能症；特發性白血球減少症；特發性血小板減少症；特發性帕金森氏症；特發性間質性肺炎；特異體質性肝病；IgE介導之過敏；免疫性溶血性貧血；包涵體肌炎；傳染病；傳染性眼發炎性疾病；發炎性腸病；發炎性髓鞘脫失病；發炎性心臟病；發炎性腎病；胰島素依賴型糖尿病；間質性肺炎；IPF/UIP；虹膜炎；青少年慢性關節炎；青少年惡性貧血；青少年類風濕性關節炎；川崎氏病；角膜炎；乾燥性角膜結膜炎；庫氏病或庫-梅氏病；蘭德里氏麻痺；蘭氏細胞組織球增多症；線性IgA疾病；網狀青斑；萊姆關節炎；淋巴細胞浸潤性肺病；黃斑退化；特發性或NOS型男性不孕症；惡性病；顯微性腎血管炎；顯微性多血管炎；混合結締組織病相關性肺病；白赫鐵列夫症；運動神經元病症；黏膜類天疱瘡；多發性硬化(所有亞型：原發進展型、繼發進展型、復發緩解型等)；多器官衰竭；肌痛腦炎/皇家自由病；重症肌無力；骨髓發育不良症候群；心肌梗塞；心肌炎；腎病症候群；神經根病症；神經病；非酒精性脂肝炎；非A非B型肝炎；視神經炎；器官移植排斥反應；骨關節炎；骨質溶解；卵巢癌；卵巢功能衰竭；胰臟炎；寄生蟲病；帕金森氏症；少關節型JRA；類天疱瘡；葉狀天疱瘡；尋常天疱瘡；周邊動脈閉塞性疾病(PAOD)；周邊血管疾病(PVD)；周邊動脈疾病(PAD)；晶狀體源性葡萄膜炎；靜脈炎；結節性多動脈炎(或結節性動脈周圍炎)；多軟骨炎；風濕性多肌痛；白髮症；多關節型JRA；多內分泌缺乏症候群；多肌炎；偶發性I型多腺體分泌不足症及II型多腺體分泌不足症；風濕性多肌痛(PMR)；感染後間質性肺病；發炎後間質性肺病；泵後症候群；卵巢早衰；原發性膽汁性肝硬化；原發性黏液水腫；原發性帕金森氏症；原發性硬化性膽管炎；原發性硬化性肝炎；原發性血管炎；前列腺癌及直腸癌及造血性惡性病(白血病及淋巴瘤)；前列腺炎；牛皮癬；1型牛皮癬；2型牛皮癬；牛皮癬性關節炎；牛皮癬性關節病；結締組織疾病繼發性肺高壓；結節性多動脈炎之肺部表現；純紅血球發育不全；原發性腎上腺機能不全；放射性纖維化；反應性關節炎；萊特爾氏病；復發性視神經脊髓炎；NOS型腎病；再狹窄；類風濕性關節炎；類風濕性關節炎相關性間質性肺病；風濕性心臟病；SAPHO(滑膜炎、痤瘡、膿皰病、骨肥厚及骨炎)；類肉瘤病；精神分裂症；施密特氏症候群；硬皮病；繼發性澱粉樣變性；休克肺；鞏膜炎；坐骨神經痛；繼發性腎上腺功能不全；敗血症症候群；敗血性關節炎；敗血性休克；血清陰性關節病；聚矽氧相關性結締組織病；休格連氏病相關性肺病；休格連氏症候群；斯-威氏皮膚病；精子自體免疫症；脊椎關節病；僵直性脊椎炎；斯-約氏症候群(SJS)；斯蒂爾氏病；中風；交感性眼炎；全身性發炎反應症候群；全身性紅斑狼瘡；全身性紅斑狼瘡相關性肺病；全身性硬化；全身性硬化相關性間質性肺病；高安氏病/動脈炎；顳動脈炎；Th2型及Th1型介導之疾病；甲狀腺炎；中毒性休克症候群；弓形蟲視網膜炎；中毒性表皮壞死溶解；橫貫性脊髓炎；TRAPS(1型腫瘤壞死因子受體(TNFR)相關性週期性症候群)；伴有黑棘皮病之B型胰島素抗性；1型過敏反應；1型自體免疫性肝炎(典型自體免疫性或類狼瘡性肝炎)；2型自體免疫性肝炎(抗LKM抗體肝炎)；II型糖尿病；潰瘍性結腸性關節病；潰瘍性結腸炎；蕁麻疹；普通型間質性肺炎(UIP)；葡萄膜炎；血管炎彌漫性肺病；血管炎；春季結膜炎；病毒性視網膜炎；白斑病；沃格特-小柳-原田症候群(VKH症候群)；韋格納氏肉芽腫病；濕性黃斑退化；創傷癒合；耶氏桿菌及沙門氏菌相關性關節病。
本發明之抗體及抗體部分可用於治療罹患自體免疫疾病，尤其與炎症、類風濕性關節炎(RA)、骨關節炎、牛皮癬、多發性硬化(MS)及其他自體免疫疾病相關之自體免疫疾病的人類。
本發明之抗體或抗體部分亦可與一或多種其他適用於治療自體免疫及發炎性疾病之治療劑一起投與。
在一實施例中，可以本發明之組合物及方法治療或診斷之疾病包括(但不限於)原發性及轉移性癌症，包括乳癌、結腸癌、直腸癌、肺癌、口咽癌、下嚥部癌、食道癌、胃癌、胰臟癌、肝癌、膽囊癌及膽管癌、小腸癌、泌尿道癌(包括腎癌、膀胱癌及尿道上皮癌)、女性生殖道癌(包括子宮頸癌、子宮癌及卵巢癌以及絨膜癌及妊娠滋養細胞疾病)、男性生殖道癌(包括前列腺癌、貯精囊癌、睾丸癌及生殖細胞腫瘤)、內分泌腺癌(包括甲狀腺癌、腎上腺癌及垂體腺癌)及皮膚癌，以及血管瘤、黑素瘤、肉瘤(包括由骨及軟組織產生之肉瘤以及卡波西氏肉瘤)，腦、神經、眼及腦膜之腫瘤(包括星形細胞瘤、神經膠質瘤、神經膠母細胞瘤、視網膜胚細胞瘤、神經瘤、神經母細胞瘤、神經鞘瘤及腦膜瘤)，由造血性惡性病(諸如白血病及淋巴瘤(霍奇金氏及非霍奇金氏淋巴瘤))產生之實體腫瘤。
在另一實施例中，本發明之抗體或其抗原結合部分係用於治療癌症或用於預防腫瘤轉移。該治療可涉及投與單獨抗體或其抗原結合部分或其與另一治療劑或治療(諸如放射線治療及/或化學治療劑)之組合。
本發明之抗體或其抗原結合部分可與包括(但不限於)以下之藥劑組合：抗腫瘤劑、放射線治療、化學治療，諸如DNA烷化劑、順鉑、卡鉑、抗微管蛋白劑、太平洋紫杉醇(paclitaxel)、多烯紫杉醇(docetaxel)、紫杉酚、小紅莓、吉西他濱(gemcitabine)、健擇(gemzar)、蒽環黴素、阿德力黴素(adriamycin)、拓撲異構酶I抑制劑、拓撲異構酶II抑制劑、5-氟尿嘧啶(5-FU)、甲醯四氫葉酸、伊立替康(irinotecan)、受體酪胺酸激酶抑制劑(例如埃羅替尼(erlotinib)、吉非替尼(gefitinib))、COX-2抑制劑(例如賽利克西(celecoxib))、激酶抑制劑及siRNA。
本發明之結合蛋白亦可與一或多種其他適用於治療各種疾病之治療劑一起投與。
本發明之抗體或其抗原結合部分可單獨或組合使用以治療此等疾病。應瞭解，本發明之抗體或其抗原結合部分可單獨使用或與其他藥劑(例如治療劑)組合使用，該其他藥劑係由熟習此項技術者出於其預期目的來選擇。舉例而言，該其他藥劑可為此項技術公認為適用於治療正由本發明抗體治療之疾病或病狀之治療劑。該其他藥劑亦可為賦予治療組合物以有益屬性的藥劑，例如影響組合物黏度之藥劑。
應進一步瞭解，將包括於本發明內之組合為適用於其預期目的之組合。以下所述之藥劑係出於說明性目的且不意欲具有限制性。作為本發明之一部分的組合可為本發明之抗體及至少一種選自以下列舉之其他藥劑。組合亦可包括一種以上其他藥劑，例如兩種或三種其他試劑，只要該組合使得所形成之組合物可執行其預期作用即可。
較佳組合為非類固醇消炎藥(亦稱作NSAIDS)，其包括如布洛芬之藥物。其他較佳組合為皮質類固醇，包括潑尼松龍；可藉由逐漸減少在與本發明之抗IL-17抗體組合治療患者時所需之類固醇劑量來降低或甚至消除類固醇使用之熟知副作用。可與本發明之抗體或抗體部分組合之用於類風濕性關節炎之治療劑的非限制性實例包括(但不限於)以下：細胞激素抑制性消炎藥(CSAID)；針對其他人類細胞激素或生長因子之抗體或拮抗劑，該等其他人類細胞激素或生長因子為例如TNF、LT、IL-1、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-15、IL-16、IL-18、IL-21、干擾素、EMAP-II、GM-CSF、FGF及PDGF。本發明之抗體或其抗原結合部分可與針對細胞表面分子(諸如CD2、CD3、CD4、CD8、CD25、CD28、CD30、CD40、CD45、CD69、CD80(B7.1)、CD86(B7.2)、CD90、CTLA)或其配位體(包括CD154(gp39或CD40L))之抗體組合。
治療劑之較佳組合可在不同點干擾自體免疫及繼發發炎性級聯；較佳實例包括TNF拮抗劑，如嵌合、人類化或人類TNF抗體、D2E7(PCT公開案第WO 97/29131號)、CA2(RemicadeTM)、CDP 571及可溶性p55或p75TNF受體、其衍生物(p75TNFR1gG(EnbrelTM)或p55TNFR1gG(來那西普)；以及TNFα轉化酶(TACE)抑制劑；同樣出於相同原因，IL-1抑制劑(介白素-1轉化酶抑制劑、IL-1RA等)可為有效的。其他較佳組合包括介白素11。另一較佳組合為可與IL-17功能平行起作用、依賴於IL-17功能起作用或與IL-17功能協同起作用的其他自體免疫反應關鍵作用者。另一較佳組合為非消耗性抗CD4抑制劑。其他較佳組合包括共刺激路徑CD80(B7.1)或CD86(B7.2)之拮抗劑，包括抗體、可溶性受體或拮抗性配位體。
本發明之抗體或其抗原結合部分亦可與諸如以下之藥劑組合：甲胺喋呤、6-MP、硫唑嘌呤、柳氮磺胺吡啶、美色拉秦(mesalazine)、奧沙拉嗪、氯喹/羥基氯喹、青黴胺(pencillamine)、硫代蘋果酸鹽(aurothiomalate)(肌肉內及經口)、硫唑嘌呤、秋水仙鹼、皮質類固醇(經口、吸入及局部注射)、β-2腎上腺素受體促效劑(沙丁胺醇(salbutamol)、特布他林(terbutaline)、沙美特羅(salmeteral))、黃嘌呤(茶鹼(theophylline)、胺茶鹼(aminophylline))、色甘酸鹽(cromoglycate)、奈多羅米(nedocromil)、酮替酚(ketotifen)、異丙托銨(ipratropium)及氧托銨(oxitropium)、環孢素、FK506、雷帕黴素、黴酚酸嗎啉乙酯、來氟米特、NSAID(例如布洛芬)、皮質類固醇(諸如潑尼松龍)、磷酸二酯酶抑制劑、腺苷促效劑、抗血栓劑、補體抑制劑、腎上腺素激導劑、干擾促炎性細胞激素(諸如TNF-α或IL-1)信號傳導之藥劑(例如IRAK、NIK、IKK、p38或MAP激酶抑制劑)、IL-1β轉化酶抑制劑、TNFα轉化酶(TACE)抑制劑、T細胞信號傳導抑制劑(諸如激酶抑制劑)、金屬蛋白酶抑制劑、柳氮磺胺吡啶、硫唑嘌呤、6-巰基嘌呤、血管收縮素轉化酶抑制劑、可溶性細胞激素受體及其衍生物(例如可溶性p55或p75 TNF受體及衍生物p75TNFRIgG(EnbrelTM及p55TNFRIgG(來那西普))、sIL-1RI、sIL-1RII、sIL-6R)、抗發炎細胞激素(例如IL-4、IL-10、IL-11、IL-13及TGFβ)、賽利克西、葉酸、硫酸羥基氯喹、羅非考昔(rofecoxib)、依那西普、英利昔單抗、萘普生(naproxen)、伐地考昔(valdecoxib)、柳氮磺胺吡啶、甲潑尼龍(methylprednisolone)、美儂西康(meloxicam)、乙酸甲潑尼龍、硫代蘋果酸金鈉、阿司匹靈(aspirin)、曲安奈德(triamcinolone acetonide)、萘磺酸丙氧芬(propoxyphene napsylate)/apap、葉酸鹽、萘丁美酮(nabumetone)、雙氯芬酸(diclofenac)、吡羅昔康(piroxicam)、依託度酸(etodolac)、雙氯芬酸鈉(diclofenac sodium)、奧沙普嗪(oxaprozin)、鹽酸羥考酮(oxycodone hcl)、重酒石酸二氫可待因酮(hydrocodone bitartrate)/apap、雙氯芬酸鈉/米索前列醇(misoprostol)、芬太尼(fentanyl)、人類重組阿那白滯素(anakinra,human recombinant)、鹽酸曲馬多(tramadol hcl)、雙水楊酯(salsalate)、舒林酸(sulindac)、氰鈷胺素(cyanocobalamin)/fa/吡哆醇(pyridoxine)、乙醯胺苯酚(acetaminophen)、阿侖膦酸鈉(alendronate sodium)、潑尼松龍、硫酸嗎啡(morphine sulfate)、鹽酸利多卡因、吲哚美辛(indomethacin)、硫酸葡糖胺(glucosamine sulf)/軟骨素、鹽酸阿米替林(amitriptyline hcl)、磺胺嘧啶(sulfadiazine)、鹽酸羥考酮/乙醯胺苯酚、鹽酸奧洛他定(olopatadine hcl)、米索前列醇、萘普生鈉、奧美拉唑(omeprazole)、環磷醯胺(cyclophosphamide)、利妥昔單抗、IL-1 TRAP、MRA、CTLA4-IG、IL-18 BP、抗IL-18、抗IL15、BIRB-796、SCIO-469、VX-702、AMG-548、VX-740、羅氟司特(Roflumilast)、IC-485、CDC-801及美索潘(Mesopram)。較佳組合包括甲胺喋呤或來氟米特，且在中度或重度類風濕性關節炎狀況下，包括環孢素。
亦可與結合蛋白組合用於治療類風濕性關節炎(RA)之非限制性其他藥劑包括(但不限於)以下：非類固醇消炎藥(NSAID)；細胞激素抑制性消炎藥(CSAID)；CDP-571/BAY-10-3356(人類化抗TNFα抗體；Celltech/Bayer)；cA2/英利昔單抗(嵌合抗TNFα抗體；Centocor)；75 kd TNFR-IgG/依那西普(75 kD TNF受體-IgG融合蛋白；Immunex；參見例如Arthritis & Rheumatism(1994)第37卷,S295；J. Invest. Med.(1996)第44卷,235A)；55 kd TNF-IgG(55 kD TNF受體-IgG融合蛋白；Hoffmann-LaRoche)；IDEC-CE9.1/SB 210396(非消耗性靈長類動物化抗CD4抗體(non-depleting primatized anti-CD4 antibody)；IDEC/SmithKline；參見例如Arthritis & Rheumatism(1995)第38卷,S185)；DAB 486-IL-2及/或DAB 389-IL-2(IL-2融合蛋白；Seragen；參見例如Arthritis & Rheumatism(1993)第36卷,1223)；抗Tac(人類化抗IL-2Rα；Protein Design Labs/Roche)；IL-4(抗發炎細胞激素)；DNAX/Schering)；IL-10(SCH 52000；重組IL-10抗發炎細胞激素；DNAX/Schering)；IL-4；IL-10及/或IL-4促效劑(例如促效劑抗體)；IL-1RA(IL-1受體拮抗劑；Synergen/Amgen)；阿那白滯素(/Amgen)；TNF-bp/s-TNF(可溶性TNF結合蛋白；參見例如Arthritis & Rheumatism(1996)第39卷，第9期(增刊),S284；Amer. J. Physiol.-Heart and Circulatory Physiology(1995)第268卷，第37-42頁)；R973401(IV型磷酸二酯酶抑制劑；參見例如Arthritis & Rheumatism(1996)第39卷，第9期(增刊),S282)；MK-966(COX-2抑制劑；參見例如Arthritis & Rheumatism(1996)第39卷，第9期(增刊),S81)；伊洛前列素(Iloprost)(參見例如Arthritis & Rheumatism(1996)第39卷，第9期(增刊),S82)；甲胺喋呤；沙立度胺(thalidomide)(參見例如Arthritis & Rheumatism(1996)第39卷，第9期(增刊),S282)及沙立度胺相關藥物(例如塞爾金(Celgen))；來氟米特(消炎藥及細胞激素抑制劑；參見例如Arthritis & Rheumatism(1996)第39卷，第9期(增刊),S131；Inflammation Research(1996)第45卷，第103-107頁)；凝血酸(tranexamic acid)(纖維蛋白溶酶原活化抑制劑；參見例如Arthritis & Rheumatism(1996)第39卷，第9期(增刊),S284)；T-614(細胞激素抑制劑；參見例如Arthritis & Rheumatism(1996)第39卷，第9期(增刊),S282)；前列腺素E1(參見例如Arthritis & Rheumatism(1996)第39卷，第9期(增刊),S282)；替尼達普(Tenidap)(非類固醇消炎藥；參見例如Arthritis & Rheumatism(1996)第39卷，第9期(增刊),S280)；萘普生(非類固醇消炎藥；參見例如Neuro Report(1996)第7卷，第1209-1213頁)；美儂西康(非類固醇消炎藥)；布洛芬(非類固醇消炎藥)；吡羅昔康(非類固醇消炎藥)；雙氯芬酸(非類固醇消炎藥)；吲哚美辛(非類固醇消炎藥)；柳氮磺胺吡啶(參見例如Arthritis & Rheumatism(1996)第39卷，第9期(增刊),S281)；硫唑嘌呤(參見例如Arthritis & Rheumatism(1996)第39卷，第9期(增刊),S281)；ICE抑制劑(酶介白素-1β轉化酶之抑制劑)；zap-70及/或lck抑制劑(酪胺酸激酶zap-70或lck之抑制劑)；VEGF抑制劑及/或VEGF-R抑制劑(血管內皮細胞生長因子或血管內皮細胞生長因子受體之抑制劑；血管生成抑制劑)；皮質類固醇消炎藥(例如SB203580)；TNF轉化酶抑制劑；抗IL-12抗體；抗IL-18抗體；介白素-11(參見例如Arthritis ＆ Rheumatism(1996)第39卷，第9期(增刊),S296)；介白素-13(參見例如Arthritis ＆ Rheumatism(1996)第39卷，第9期(增刊),S308)；介白素-17抑制劑(參見例如Arthritis ＆ Rheumatism(1996)第39卷，第9期(增刊),S120)；金；青黴胺；氯喹；苯丁酸氮芥(chlorambucil)；羥基氯喹；環孢素；環磷醯胺；全身淋巴組織照射；抗胸腺細胞球蛋白；抗CD4抗體；CD5毒素；經口投與之肽及膠原蛋白；氯苯紮利二鈉(lobenzarit disodium)；細胞激素調節劑(CRA)HP228及HP466(Houghten Pharmaceuticals,Inc.)；ICAM-1反義硫代磷酸酯寡去氧核苷酸(ISIS 2302；Isis Pharmaceuticals,Inc.)；可溶性補體受體1(TP10；T Cell Sciences,Inc.)；強的松；肝蛋白(orgotein)；葡糖胺聚糖多硫酸酯(glycosaminoglycan polysulphate)；二甲胺四環素(minocycline)；抗IL2R抗體；海洋生物及植物脂質(魚及植物種子脂肪酸；參見例如DeLuca等人,(1995) Rheum. Dis. Clin. North Am.,21: 759-777)；金諾芬(auranofin)；苯基丁氮酮(phenylbutazone)；甲氯滅酸(meclofenamic acid)；氟滅酸(flufenamic acid)；靜脈內免疫球蛋白；齊留通(zileuton)；阿紮立平(azaribine)；黴酚酸(mycophenolic acid)(RS-61443)；他克莫司(tacrolimus)(FK-506)；西羅莫司(雷帕黴素)；胺普立糖(amiprilose)(鹽酸胺普立糖(therafectin))；克拉曲濱(cladribine)(2-氯去氧腺苷)；甲胺喋呤；bcl-2抑制劑(參見Bruncko,Milan等人,Journal of Medicinal Chemistry(2007),50(4),641-662)；抗病毒劑及免疫調節劑。
在一實施例中，結合蛋白或其抗原結合部分係與以下用於治療類風濕性關節炎(RA)之藥劑中之一者組合投與：KDR之小分子抑制劑；Tie-2之小分子抑制劑；甲胺喋呤；強的松；賽利克西；葉酸；硫酸羥基氯喹；羅非考昔；依那西普；英利昔單抗；來氟米特；萘普生；伐地考昔；柳氮磺胺吡啶；甲潑尼龍；布洛芬；美儂西康；乙酸甲潑尼龍；硫代蘋果酸金鈉；阿司匹靈；硫唑嘌呤；曲安奈德；萘磺酸丙氧芬/apap；葉酸鹽；萘丁美酮；雙氯芬酸；吡羅昔康；依託度酸；雙氯芬酸鈉；奧沙普嗪；鹽酸羥考酮；重酒石酸二氫可待因酮/apap；雙氯芬酸鈉/米索前列醇；芬太尼；人類重組阿那白滯素；鹽酸曲馬多；雙水楊酯；舒林酸；氰鈷胺素/fa/吡哆醇；乙醯胺苯酚；阿侖膦酸鈉；潑尼松龍；硫酸嗎啡；鹽酸利多卡因；吲哚美辛；硫酸葡糖胺/軟骨素；環孢素；鹽酸阿米替林；磺胺嘧啶；鹽酸羥考酮/乙醯胺苯酚；鹽酸奧洛他定；米索前列醇；萘普生鈉；奧美拉唑；黴酚酸嗎啉乙酯；環磷醯胺；利妥昔單抗；IL-1 TRAP；MRA；CTLA4-IG；IL-18 BP；IL-12/23；抗IL 18；抗IL15；BIRB-796；SCIO-469；VX-702；AMG-548；VX-740；羅氟司特；IC-485；CDC-801；及美索潘。
可與本發明之結合蛋白組合之用於發炎性腸病之治療劑的非限制性實例包括以下：布替耐德；表皮生長因子；皮質類固醇；環孢素；柳氮磺胺吡啶；胺基水楊酸鹽；6-巰基嘌呤；硫唑嘌呤；甲硝噠唑；脂氧合酶抑制劑；美沙拉嗪；奧沙拉嗪；巴柳氮；抗氧化劑；血栓素抑制劑；IL-1受體拮抗劑；抗IL-1β mAbs；抗IL-6 mAbs；生長因子；彈性蛋白酶抑制劑；吡啶基-咪唑化合物；針對其他人類細胞激素或生長因子(例如TNF、LT、IL-1、IL-2、IL-6、IL-7、IL-8、IL-15、IL-16、IL-17、IL-18、EMAP-II、GM-CSF、FGF及PDGF)之抗體或拮抗劑。本發明之抗體或其抗原結合部分可與針對細胞表面分子(諸如CD2、CD3、CD4、CD8、CD25、CD28、CD30、CD40、CD45、CD69、CD90)或其配位體之抗體組合。本發明之抗體或其抗原結合部分亦可與諸如以下之藥劑組合：甲胺喋呤；環孢素；FK506；雷帕黴素；黴酚酸嗎啉乙酯；來氟米特；NSAID，例如布洛芬；皮質類固醇，諸如潑尼松龍；磷酸二酯酶抑制劑；腺苷促效劑；抗血栓劑；補體抑制劑；腎上腺素激導劑；干擾促炎性細胞激素(諸如TNFα或IL-1)信號傳導之藥劑(例如IRAK、NIK、IKK、p38或MAP激酶抑制劑)；IL-1β轉化酶抑制劑；TNFα轉化酶抑制劑；T細胞信號傳導抑制劑，諸如激酶抑制劑；金屬蛋白酶抑制劑；柳氮磺胺吡啶；硫唑嘌呤；6-巰基嘌呤；血管收縮素轉化酶抑制劑；可溶性細胞激素受體及其衍生物(例如可溶性p55或p75 TNF受體、sIL-1RI、sIL-1RII、sIL-6R)；及抗發炎細胞激素(例如IL-4、IL-10、IL-11、IL-13及TGFβ)；及bcl-2抑制劑。
可與結合蛋白組合之用於克羅恩氏病之治療劑的實例包括以下：TNF拮抗劑，例如抗TNF抗體、阿達木單抗(PCT公開案第WO 97/29131號；HUMIRA)、CA2(類克(REMICADE))、CDP 571、TNFR-Ig建構體(p75TNFRIgG(ENBREL)及p55TNFRIgG(LENERCEPTTM))抑制劑及PDE4抑制劑。本發明之抗體或其抗原結合部分可與皮質類固醇(例如布替耐德及地塞米松(dexamethasone))組合。
本發明之結合蛋白或其抗原結合部分亦可與諸如以下之藥劑組合：柳氮磺胺吡啶、5-胺基水楊酸及奧沙拉嗪，及干擾諸如IL-1之促炎性細胞激素合成或作用的藥劑，例如IL-1β轉化酶抑制劑及IL-1ra。本發明之抗體或其抗原結合部分亦可與T細胞信號傳導抑制劑(例如酪胺酸激酶抑制劑6-巰基嘌呤)一起使用。本發明之結合蛋白或其抗原結合部分可與IL-11組合。本發明之結合蛋白或其抗原結合部分可與以下藥劑組合：美沙拉嗪、強的松、硫唑嘌呤、巰基嘌呤、英利昔單抗、甲潑尼龍琥珀酸鈉、地芬諾酯(diphenoxylate)/硫酸阿托品(atrop sulfate)、鹽酸洛哌丁胺(loperamide hydrochloride)、甲胺喋呤、奧美拉唑、葉酸鹽、環丙沙星(ciprofloxacin)/右旋糖-水、重酒石酸二氫可待因酮/apap、鹽酸四環素(tetracycline hydrochloride)、醋酸氟輕鬆(fluocinonide)、甲硝噠唑、硫柳汞(thimerosal)/硼酸、消膽胺(cholestyramine)/蔗糖、鹽酸環丙沙星、硫酸莨菪鹼(hyoscyamine sulfate)、鹽酸哌替啶(meperidine hydrochloride)、鹽酸咪達唑侖(midazolam hydrochloride)、鹽酸羥考酮/乙醯胺苯酚、鹽酸普敏太定(promethazine hydrochloride)、磷酸鈉、磺胺甲噁唑(sulfamethoxazole)/甲氧苄胺嘧啶(trimethoprim)、賽利克西、聚卡波非(polycarbophil)、萘磺酸丙氧芬、氫化可的松(hydrocortisone)、多種維生素劑(multivitamin)、巴柳氮二鈉、磷酸可待因(codeine phosphate)/apap、鹽酸考來維侖(colesevelam hcl)、氰鈷胺素、葉酸、左氧氟沙星(levofloxacin)、甲潑尼龍、那他珠單抗及干擾素-γ。
可與本發明之結合蛋白組合之用於多發性硬化(MS)之治療劑的非限制性實例包括以下：皮質類固醇；潑尼松龍；甲潑尼龍；硫唑嘌呤；環磷醯胺；環孢素；甲胺喋呤；4-胺基吡啶；替紮尼定(tizanidine)；干擾素-β1a(AVONEX；Biogen)；干擾素-β1b(BETASERON；Chiron/Berlex)；干擾素α-n3)(Interferon Sciences/Fujimoto)；干擾素-α(Alfa Wassermann/J&J)；干擾素β1A-IF(Serono/Inhale Therapeutics)；聚乙二醇化干擾素α2b(Enzon/Schering-Plough)；共聚物1(Cop-1；克帕松(COPAXONE)；Teva Pharmaceutical Industries,Inc.)；高壓氧；靜脈內免疫球蛋白；克拉曲濱(clabribine)；針對其他人類細胞激素或生長因子及其受體(例如TNF、LT、IL-1、IL-2、IL-6、IL-7、IL-8、IL-23、IL-15、IL-16、IL-18、E M AP-II、GM-CSF、FGF及PDGF)之抗體或拮抗劑。本發明之結合蛋白可與針對細胞表面分子(諸如CD2、CD3、CD4、CD8、CD19、CD20、CD25、CD28、CD30、CD40、CD45、CD69、CD80、CD86、CD90)或其配位體之抗體組合。本發明之結合蛋白亦可與諸如以下之藥劑組合：甲胺喋呤、環孢素、FK506、雷帕黴素、黴酚酸嗎啉乙酯、來氟米特、NSAID(例如布洛芬)、皮質類固醇(諸如潑尼松龍)、磷酸二酯酶抑制劑、腺苷促效劑、抗血栓劑、補體抑制劑、腎上腺素激導劑、干擾促炎性細胞激素(諸如TNFα或IL-1)信號傳導之藥劑(例如IRAK、NIK、IKK、p38或MAP激酶抑制劑)、IL-1β轉化酶抑制劑、TACE抑制劑、T細胞信號傳導抑制劑(諸如激酶抑制劑)、金屬蛋白酶抑制劑、柳氮磺胺吡啶、硫唑嘌呤、6-巰基嘌呤、血管收縮素轉化酶抑制劑、可溶性細胞激素受體及其衍生物(例如可溶性p55或p75 TNF受體、sIL-1RI、sIL-1RII、sIL-6R)、抗發炎細胞激素(例如IL-4、IL-10、IL-13及TGFβ)及bc1-2抑制劑。
可與本發明結合蛋白組合之用於多發性硬化之治療劑的實例包括干擾素-β，例如IFNβ1a及IFNβ1b；克帕松、皮質類固醇、卡斯蛋白酶抑制劑(例如卡斯蛋白酶-1抑制劑)、IL-1抑制劑、TNF抑制劑及針對CD40配位體及CD80之抗體。
本發明之結合蛋白亦可與諸如以下之藥劑組合：阿來組單抗、屈大麻酚(dronabinol)、尤利美(Unimed)、達利珠單抗、米托蒽醌、鹽酸紮利羅登(xaliproden hydrochloride)、胺吡啶(fampridine)、乙酸格拉替美(glatiramer acetate)、那他珠單抗、西納吡哆(sinnabidol)、a-免疫調節蛋白質NNSO3(a-immunokine NNSO3)、ABR-215062、AnergiX.MS、趨化因子受體拮抗劑、BBR-2778、卡拉胍素(calagualine)、CPI-1189、LEM(脂質體囊封之米托蒽醌)、THC.CBD(大麻鹼促效劑)、MBP-8298、美索潘(PDE4抑制劑)、MNA-715、抗IL-6受體抗體、萘羅瓦西(neurovax)、哌非尼酮(pirfenidone)、阿羅曲普1258(allotrap 1258)(RDP-1258)、sTNF-R1、他侖帕奈(talampanel)、特立氟胺(teriflunomide)、TGF-β2、替利莫肽(tiplimotide)、VLA-4拮抗劑(例如TR-14035、VLA4 Ultrahaler、Antegran-ELAN/Biogen)、干擾素γ拮抗劑、IL-4促效劑。
可與本發明之結合蛋白組合之用於心絞痛之治療劑的非限制性實例包括以下：阿司匹靈、硝化甘油(nitroglycerin)、單硝酸異山梨醇酯、琥珀酸美托洛爾(metoprolol succinate)、阿替洛爾(atenolol)、酒石酸美托洛爾、苯磺酸胺氯地平(amlodipine besylate)、鹽酸地爾硫卓(diltiazem hydrochloride)、二硝酸異山梨醇酯、硫酸氫氯吡格雷(clopidogrel bisulfate)、硝苯地平(nifedipine)、阿托伐他汀鈣(atorvastatin calcium)、氯化鉀、呋喃苯胺酸(furosemide)、辛伐他汀(simvastatin)、鹽酸維拉帕米(verapamil hcl)、地高辛(digoxin)、鹽酸普萘洛爾、卡維地洛(carvedilol)、賴諾普利(lisinopril)、螺內酯(spironolactone)、氫氯苯噻噠嗪(hydrochlorothiazide)、順丁烯二酸依拉普利(enalapril maleate)、納多洛爾(nadolol)、雷米普利(ramipril)、依諾肝素鈉(enoxaparin sodium)、肝素鈉、纈沙坦(valsartan)、鹽酸索他洛爾(sotalol hydrochloride)、非諾貝特(fenofibrate)、依澤替米貝(ezetimibe)、布美他尼(bumetanide)、氯沙坦鉀(losartan potassium)、賴諾普利/氫氯苯噻噠嗪、非洛地平(felodipine)、卡托普利(captopril)、反丁烯二酸比索洛爾(bisoprolol fumarate)。
可與本發明之結合蛋白組合之用於僵直性脊椎炎之治療劑的非限制性實例包括以下：布洛芬、雙氯芬酸及米索前列醇、萘普生、美儂西康、吲哚美辛、雙氯芬酸、賽利克西、羅非考昔、柳氮磺胺吡啶、甲胺喋呤、硫唑嘌呤、二甲胺四環素、強的松、依那西普、英利昔單抗。
可與本發明之結合蛋白組合之用於哮喘之治療劑的非限制性實例包括以下：舒喘甯(albuterol)、沙美特羅(salmeterol)/氟替卡松(fluticasone)、孟魯司特鈉(montelukast sodium)、丙酸氟替卡松、布地奈德(budesonide)、強的松、羥萘甲酸沙美特羅、鹽酸左旋沙丁胺醇(levalbuterol hcl)、硫酸舒喘寧/異丙托銨、潑尼松龍磷酸鈉、曲安奈德、二丙酸倍氯米松(beclomethasone dipropionate)、溴化異丙托銨、阿奇黴素(azithromycin)、乙酸吡布特羅(pirbuterol acetate)、潑尼松龍、無水茶鹼、甲潑尼龍琥珀酸鈉、克拉黴素(clarithromycin)、紮魯司特(zafirlukast)、反丁烯二酸福莫特羅(formoterol fumarate)、流感病毒疫苗、甲潑尼龍、三水合阿莫西林(amoxicillin trihydrate)、氟尼縮松(flunisolide)、過敏注射液、色甘酸鈉、鹽酸非索非那定(fexofenadine hydrochloride)、氟尼縮松/薄荷醇、阿莫西林/棒酸鹽(clavulanate)、左氧氟沙星、吸入器輔助裝置、愈創甘油醚(guaifenesin)、地塞米松磷酸鈉、鹽酸莫西沙星(moxifloxacin hcl)、鹽酸多西環素(doxycycline hyclate)、愈創甘油醚/d-美沙芬(d-methorphan)、對麻黃素/cod/氯芬那敏(chlorphenir)、加替沙星(gatifloxacin)、鹽酸西替利嗪(cetirizine hydrochloride)、糠酸莫美他松(mometasone furoate)、羥萘甲酸沙美特羅、苯佐那酯(benzonatate)、頭孢胺苄(cephalexin)、pe/二氫可待因酮/氯芬那敏、鹽酸西替利嗪/假麻黃素(pseudoephed)、苯腎上腺素/cod/普敏太定、可待因/普敏太定、頭孢丙烯(cefprozil)、地塞米松、愈創甘油醚/假麻黃素、氯芬尼拉明(chlorpheniramine)/二氫可待因酮、奈多羅米鈉、硫酸特布他林、腎上腺素、甲潑尼龍、硫酸奧西那林(metaproterenol sulfate)。
可與本發明之結合蛋白組合之用於COPD之治療劑的非限制性實例包括以下：硫酸舒喘寧/異丙托銨、溴化異丙托銨、沙美特羅/氟替卡松、舒喘寧、羥萘甲酸沙美特羅、丙酸氟替卡松、強的松、無水茶鹼、甲潑尼龍琥珀酸鈉、孟魯司特鈉、布地奈德、反丁烯二酸福莫特羅、曲安奈德、左氧氟沙星、愈創甘油醚、阿奇黴素、二丙酸倍氯米松、鹽酸左旋沙丁胺醇、氟尼縮松、頭孢曲松鈉(ceftriaxone sodium)、三水合阿莫西林、加替沙星、紮魯司特、阿莫西林/棒酸鹽、氟尼縮松/薄荷醇、氯芬尼拉明/二氫可待因酮、硫酸奧西那林、甲潑尼龍、糠酸莫美他松、對麻黃素/cod/氯芬那敏、乙酸吡布特羅、對麻黃素/洛拉他定(loratadine)、硫酸特布他林、噻托溴銨(tiotropium bromide)、(R,R)-福莫特羅、TgAAT、西洛司特(Cilomilast)、羅氟司特。
可與本發明之結合蛋白組合之用於HCV之治療劑的非限制性實例包括以下：干擾素α-2a、干擾素α-2b、干擾素αcon1、干擾素α-n1、聚乙二醇化干擾素α-2a、聚乙二醇化干擾素α-2b、病毒唑(ribavirin)、聚乙二醇化干擾素α-2b+病毒唑、熊去氧膽酸(Ursodeoxycholic Acid)、甘草酸(Glycyrrhizic Acid)、胸腺法新(Thymalfasin)、二鹽酸組胺(Maxamine)、VX-497及任何用於經由干預以下標靶治療HCV之化合物：HCV聚合酶、HCV蛋白酶、HCV解螺旋酶、HCV IRES(內部核糖體進入位點)。
可與本發明之結合蛋白組合之用於特發性肺纖維化之治療劑的非限制性實例包括以下：強的松、硫唑嘌呤、舒喘甯、秋水仙鹼、硫酸舒喘甯、地高辛、γ干擾素、甲潑尼龍琥珀酸鈉、勞拉西泮(lorazepam)、呋喃苯胺酸、賴諾普利、硝化甘油、螺內酯、環磷醯胺、溴化異丙托銨、放線菌素d、阿替普酶(alteplase)、丙酸氟替卡松、左氧氟沙星、硫酸奧西那林、硫酸嗎啡、鹽酸羥考酮、氯化鉀、曲安奈德、無水他克莫司、鈣、干擾素α、甲胺喋呤、黴酚酸嗎啉乙酯、干擾素γ-1β。
可與本發明之結合蛋白組合之用於心肌梗塞之治療劑的非限制性實例包括以下：阿司匹靈、硝化甘油、酒石酸美托洛爾、依諾肝素鈉、肝素鈉、硫酸氫氯吡格雷、卡維地洛、阿替洛爾、硫酸嗎啡、琥珀酸美托洛爾、華法林鈉(warfarin sodium)、賴諾普利、單硝酸異山梨醇酯、地高辛、呋喃苯胺酸、辛伐他汀、雷米普利、替奈普酶(tenecteplase)、順丁烯二酸依拉普利、托西邁(torsemide)、瑞替普酶(retavase)、氯沙坦鉀、鹽酸喹那普利(quinapril hcl)/碳酸鎂、布美他尼、阿替普酶、依那普利拉(enalaprilat)、鹽酸乙胺碘呋酮(amiodarone hydrochloride)、單水合鹽酸替羅非班(tirofiban hcl m-hydrate)、鹽酸地爾硫卓、卡托普利、厄貝沙坦(irbesartan)、纈沙坦、鹽酸普萘洛爾、福辛普利鈉(fosinopril sodium)、鹽酸利多卡因、埃替菲巴肽(eptifibatide)、頭孢唑林鈉(cefazolin sodium)、硫酸阿托品(atropine sulfate)、胺基己酸、螺內酯、干擾素、鹽酸索他洛爾、氯化鉀、多庫酯鈉(docusate sodium)、鹽酸多巴酚丁胺(dobutamine hcl)、阿普唑侖(alprazolam)、普伐他汀鈉(pravastatin sodium)、阿托伐他汀鈣、鹽酸咪達唑侖、鹽酸哌替啶、二硝酸異山梨醇酯、腎上腺素、鹽酸多巴胺、比伐盧定(bivalirudin)、羅素他汀(rosuvastatin)、依澤替米貝/辛伐他汀、阿伐麥布(avasimibe)、卡立泊來德(cariporide)。
可與本發明之結合蛋白組合之用於牛皮癬之治療劑的非限制性實例包括以下：KDR之小分子抑制劑、Tie-2之小分子抑制劑、鈣泊三醇(calcipotriene)、丙酸氯氟美松(clobetasol propionate)、曲安奈德、丙酸鹵貝他索(halobetasol propionate)、他紮羅汀(tazarotene)、甲胺喋呤、醋酸氟輕鬆、強化二丙酸倍他米松(betamethasone diprop augmented)、丙酮化氟新龍(fluocinolone acetonide)、阿曲汀(acitretin)、植物性洗髮精(tar shampoo)、戊酸倍他米松、糠酸莫美他松、酮康唑(ketoconazole)、普莫卡因(pramoxine)/氟輕鬆、戊酸氫化可的松、氟氫縮松(flurandrenolide)、脲、倍他米松、丙酸氯氟美松/潤膚劑、丙酸氟替卡松、阿奇黴素、氫化可的松、增濕配方(moisturizing formula)、葉酸、地奈德(desonide)、吡美莫司(pimecrolimus)、煤焦油(coal tar)、二乙酸二氟拉松(diflorasone diacetate)、葉酸依那西普、乳酸、甲氧沙林(methoxsalen)、hc/鹼式沒食子酸鉍(bismuth subgal)/znox/resor、乙酸甲潑尼龍、強的松、防曬劑、哈西奈德(halcinonide)、水楊酸、蒽三酚(anthralin)、特戊酸氯可托龍(clocortolone pivalate)、煤提取物、煤焦油/水楊酸、煤焦油/水楊酸/硫、去羥米松(desoximetasone)、安定(diazepam)、潤膚劑、醋酸氟輕鬆/潤膚劑、礦物油/蓖麻油/乳酸鈉、礦物油/花生油、石油/十四烷酸異丙酯、補骨脂素(psoralen)、水楊酸、皂類/三溴沙侖(tribromsalan)、硫柳汞/硼酸、賽利克西、英利昔單抗、環孢素、阿法賽特、依法珠單抗、他克莫司、吡美莫司、PUVA、UVB、柳氮磺胺吡啶。
可與本發明之結合蛋白組合之用於牛皮癬性關節炎之治療劑的非限制性實例包括以下：甲胺喋呤、依那西普、羅非考昔、賽利克西、葉酸、柳氮磺胺吡啶、萘普生、來氟米特、乙酸甲潑尼龍、吲哚美辛、硫酸羥基氯喹、強的松、舒林酸、強化二丙酸倍他米松、英利昔單抗、甲胺喋呤、葉酸鹽、曲安奈德、雙氯芬酸、二甲亞碸、吡羅昔康、雙氯芬酸鈉、酮洛芬(ketoprofen)、美儂西康、甲潑尼龍、萘丁美酮、托美丁鈉(tolmetin sodium)、鈣泊三醇、環孢素、雙氯芬酸鈉/米索前列醇、醋酸氟輕鬆、硫酸葡糖胺、硫代蘋果酸金鈉、重酒石酸二氫可待因酮/apap、布洛芬、利塞膦酸鈉(risedronate sodium)、磺胺嘧啶、硫鳥嘌呤(thioguanine)、伐地考昔、阿法賽特、依法珠單抗及bc1-2抑制劑。
可與本發明之結合蛋白組合之用於再狹窄之治療劑的非限制性實例包括以下：西羅莫司、太平洋紫杉醇、依維莫司(everolimus)、他克莫司、唑他莫司(Zotarolimus)、乙醯胺苯酚。
可與本發明之結合蛋白組合之用於坐骨神經痛之治療劑的非限制性實例包括以下：重酒石酸二氫可待因酮/apap、羅非考昔、鹽酸環苯紮林(cyclobenzaprine hcl)、甲潑尼龍、萘普生、布洛芬、鹽酸羥考酮/乙醯胺苯酚、賽利克西、伐地考昔、乙酸甲潑尼龍、強的松、磷酸可待因/apap、鹽酸曲馬多/乙醯胺苯酚、美他沙酮(metaxalone)、美儂西康、美索巴莫(methocarbamol)、鹽酸利多卡因、雙氯芬酸鈉、加巴噴丁(gabapentin)、地塞米松、肌安寧(carisoprodol)、酮咯酸胺丁三醇(ketorolac tromethamine)、吲哚美辛、乙醯胺苯酚、安定、萘丁美酮、鹽酸羥考酮、鹽酸替紮尼定、雙氯芬酸鈉/米索前列醇、萘磺酸丙氧芬/apap、乙醯水楊酸/oxycod/羥考酮ter、布洛芬/重酒石酸二氫可待因酮、鹽酸曲馬多、依託度酸、鹽酸丙氧芬、鹽酸阿米替林、肌安寧/磷酸可待因/乙醯水楊酸、硫酸嗎啡、多種維生素劑、萘普生鈉、檸檬酸奧芬那君(orphenadrine citrate)、替馬西泮(temazepam)。
可與本發明之結合蛋白組合之用於SLE(狼瘡)之治療劑的實例包括以下：NSAID，例如雙氯芬酸、萘普生、布洛芬、吡羅昔康、吲哚美辛；COX2抑制劑，例如賽利克西、羅非考昔、伐地考昔；抗瘧劑，例如羥基氯喹；類固醇，例如強的松、潑尼松龍、布替耐德、地塞米松；細胞毒性劑，例如硫唑嘌呤、環磷醯胺、黴酚酸嗎啉乙酯、甲胺喋呤；PDE4抑制劑或嘌呤合成抑制劑，例如驍悉(Cellcept)。本發明之結合蛋白亦可與諸如以下之藥劑組合：柳氮磺胺吡啶、5-胺基水楊酸、奧沙拉嗪、依木蘭(Imuran)及干擾促炎性細胞激素(諸如IL-1)合成、產生或作用之藥劑，例如卡斯蛋白酶抑制劑，如IL-1β轉化酶抑制劑及IL-1ra。本發明之結合蛋白亦可與T細胞信號傳導抑制劑(例如酪胺酸激酶抑制劑)；或靶向T細胞活化分子之分子(例如CTLA-4-IgG)或抗B7家族抗體、抗PD-1家族抗體一起使用。本發明之結合蛋白可與IL-11或抗細胞激素抗體(例如芳妥珠單抗(fonotolizumab)(抗IFNg抗體))或抗受體之受體抗體(例如抗IL-6受體抗體)及針對B細胞表面分子之抗體組合。本發明之抗體或其抗原結合部分亦可與以下藥劑一起使用：LJP 394(阿貝莫司(abetimus))；消耗B細胞或使B細胞失活之藥劑，例如利妥昔單抗(抗CD20抗體)、貝利單抗(lymphostat-B)(抗BlyS抗體)；TNF拮抗劑，例如抗TNF抗體、阿達木單抗(PCT公開案第WO 97/29131號；HUMIRA)、CA2(REMICADE)、CDP 571、TNFR-Ig建構體(p75TNFRIgG(ENBREL)及p55TNFRIgG(LENERCEPT)；及bcl-2抑制劑，由於bcl-2在轉殖基因小鼠體內之過度表現已經證明產生狼瘡像表型(參見Marquina,Regina等人,Journal of Immunology(2004),172(11),7177-7185)，因此抑制預期產生治療作用。
本發明之醫藥組合物可包括「治療有效量」或「預防有效量」之本發明抗體或抗體部分。「治療有效量」係指在必需劑量下及歷時必需時段有效達成所需治療結果之量。抗體或抗體部分之治療有效量可由熟習此項技術者確定且可根據諸如疾病狀態、個體之年齡、性別及體重以及抗體或抗體部分在個體中引起所需反應之能力的因素而變化。治療有效量亦為抗體或抗體部分之治療有益作用超過任何毒性或有害作用之量。「預防有效量」係指在必需劑量下且歷時必需時段有效達成所需預防結果之量。通常，由於預防劑量係在疾病之前或在疾病早期階段時用於個體，所以預防有效量將低於治療有效量。
可調整劑量方案以提供最佳所需反應(例如治療或預防反應)。舉例而言，可投與單個單次劑量(bolus)；可隨時間投與若干分次劑量；或可按治療情況之緊急需要指示按比例減小或增加劑量。出於投藥簡便性及劑量均一性考慮，尤其適宜將非經腸組合物調配成單位劑型。如本文所使用之單位劑型係指適宜以整體劑量用於待治療之哺乳動物個體的物理不連續單元；各單元含有與所需醫藥載劑締合之經計算將產生所需治療作用之預定量的活性化合物。本發明之單位劑型的規格係由以下因素決定且直接視以下因素而定：(a)活性化合物之獨特特徵及欲達成之特定治療或預防作用；及(b)混配該活性化合物以治療個體敏感性之技術內所固有之限制。
應注意，劑量值可隨待減輕之病狀之類型及嚴重度而變化。應進一步瞭解，對於任何特定個體，特定劑量方案應根據個體需要及投與或監督組合物投與之人員的專業判斷隨著時間來加以調整，且本文所述之劑量範圍僅為例示性的，而不意欲限制所主張之組合物的範疇或實踐。
診斷
本發明亦提供診斷應用。下文將對此進行進一步闡述。本發明之結合IL-17及/或IL-17F之抗體可以任何多種形式用於活體內、活體外或離體偵測IL-17及/或IL-17F(亦即，自活個別獲得，歷經一定程序，繼而返回至個體之細胞或組織)。本發明之DVD-Ig提供能夠在各種診斷及偵測檢定形式中結合IL-17之抗原決定基以及其他抗原或抗原決定基之額外優勢。
I.檢定方法
本發明亦提供使用至少一種抗IL-17結合蛋白或其抗原結合部分(包括如本文所述之DVD-Ig)測定測試樣本中IL-17或其片段(「分析物」)之存在、量或濃度的方法。此項技術中已知之任何適合檢定可用於該方法中。實例包括(但不限於)免疫檢定，諸如夾心免疫檢定(例如單株、多株及/或DVD-Ig夾心免疫檢定或其任何變體(例如單株/DVD-Ig、DVD-Ig/多株等)，包括放射性同位素偵測(放射免疫檢定(RIA))及酶偵測(酶免疫檢定(EIA)或酶聯免疫吸附檢定(ELISA)(例如Quantikine ELISA檢定,R & D Systems,Minneapolis,MN)))、競爭抑制免疫檢定(例如正向及反向)、螢光偏振免疫檢定(FPIA)、酶放大免疫檢定技術(EMIT)、生物發光共振能量傳遞(BRET)及均質化學發光檢定等。在基於SELDI之免疫檢定中，將特異性結合相關分析物(或其片段)之捕捉試劑連接於質譜探針(諸如預先活化之蛋白質晶片陣列)表面。接著將分析物(或其片段)特異性捕捉於生物晶片上，且藉由質譜偵測所捕捉之分析物(或其片段)。或者，可自捕捉試劑溶離分析物(或其片段)且藉由傳統MALDI(基質輔助雷射脫附/離子化)或藉由SELDI加以偵測。化學發光微粒免疫檢定(尤其使用ARCHITECT自動分析器(Abbott Laboratories,Abbott Park,IL)之化學發光微粒免疫檢定)為較佳免疫檢定之一實例。
舉例而言，在如本文所述之抗IL-17結合蛋白用作免疫診斷試劑及/或用於分析物免疫檢定套組中時，使用此項技術中熟知用於收集、處理及加工尿、血液、血清及血漿及其他體液之方法來實踐本發明。測試樣本除相關分析物以外可包含其他部分，諸如抗體、抗原、半抗原、激素、藥物、酶、受體、蛋白質、肽、多肽、寡核苷酸及/或聚核苷酸。舉例而言，樣本可為自個體獲得之全血樣本。在如本文所述之免疫檢定前可能必需或需要例如用預處理試劑處理測試樣本(尤其全血)。即使在預處理並非必需之狀況(例如大多數尿樣本)下，仍可視情況進行預處理(例如，作為商業平台上之方案的一部分)。
預處理試劑可為任何適於與本發明之免疫檢定及套組一起使用之試劑。預處理視情況包含：(a)一或多種溶劑(例如甲醇及乙二醇)及視情況選用之鹽，(b)一或多種溶劑及鹽及視情況選用之清潔劑，(c)清潔劑，或(d)清潔劑及鹽。預處理試劑在此項技術中為已知的，且如文獻(參見例如Yatscoff等人,Abbott TDx Monoclonal Antibody Assay Evaluated for Measuring Cyclosporine in Whole Blood,Clin. Chem. 36: 1969-1973(1990)及Wallemacq等人,Evaluation of the New AxSYM Cyclosporine Assay: Comparison with TDx Monoclonal Whole Blood and EMIT Cyclosporine Assays,Clin. Chem. 45: 432-435(1999))中所述,該預處理可用於例如Abbott TDx、AxSYM及ARCHITECT分析器(Abbott Laboratories,Abbott Park,IL)上進行之檢定，及/或用於市售。另外，預處理可如Abbott之美國專利第5,135,875號；歐洲專利公開案第0 471 293號；PCT公開案第WO 2008/082984號；及美國專利申請公開案第2008/0020401號(對於其關於預處理之教示，其係以全文引用之方式併入本文中)中所述進行。預處理試劑可為異質試劑或均質試劑。
在使用異質預處理試劑下，預處理試劑使樣本中存在之分析物結合蛋白(例如可結合分析物或其片段之蛋白質)沈澱。該預處理步驟包含藉由分離沈澱之分析物結合蛋白與藉由將預處理劑添加至樣本中所形成之混合物的上清液來移除任何分析物結合蛋白。在該檢定中，不存在任何結合蛋白之混合物上清液係用於檢定，直接進行抗體捕捉步驟。
在使用均質預處理試劑下，不存在該分離步驟。使測試樣本與預處理試劑之整個混合物與針對分析物(或其片段)之經標記特異性結合搭配物(諸如經標記之抗分析物抗體(或其抗原反應性片段))接觸。在由第一特異性結合搭配物捕捉之前或期間，用於該檢定之預處理試劑通常得以稀釋於經預處理之測試樣本混合物中。儘管存在該稀釋，但在捕捉期間測試樣本混合物中仍存在(或殘留)一定量預處理試劑。根據本發明，較佳之經標記特異性結合搭配物可為DVD-Ig(或其片段、變異體或變異體之片段)。
在異質形式中，在自個體獲得測試樣本後，製備第一混合物。混合物含有待評估分析物(或其片段)之測試樣本及第一特異性結合搭配物，其中該第一特異性結合搭配物與測試樣本中所含之任何分析物形成第一特異性結合搭配物-分析物複合物。較佳，第一特異性結合搭配物為抗分析物抗體或其片段。第一特異性結合搭配物可為如本文所述之DVD-Ig(或其片段、變異體或變異體之片段)。添加測試樣本及第一特異性結合搭配物以形成混合物之順序並非關鍵。較佳，將第一特異性結合搭配物固定於固相上。用於免疫檢定(用於第一特異性結合搭配物及視情況用於第二特異性結合搭配物)之固相可為此項技術中已知之任何固相，諸如(但不限於)磁性粒子、珠粒、試管、微量滴定板、光析管、膜、骨架分子、薄膜、濾紙、圓盤及晶片。
形成含有第一特異性結合搭配物-分析物複合物之混合物後，使用此項技術中已知之任何技術自複合物移除任何未結合之分析物。舉例而言，可藉由洗滌移除未結合之分析物。然而，合意的是，存在之第一特異性結合搭配物過量於測試樣本中存在之任何分析物以使測試樣本中存在之所有分析物皆與第一特異性結合搭配物結合。
移除任何未結合之分析物後，將第二特異性結合搭配物添加至混合物中以形成第一特異性結合搭配物-分析物-第二特異性結合搭配物複合物。第二特異性結合搭配物較佳為與分析物上不同於分析物上與第一特異性結合搭配物結合之抗原決定基之抗原決定基結合的抗分析物抗體。此外，同樣較佳，第二特異性結合搭配物經如上文所述之可偵測標記標記或含有如上文所述之可偵測標記。第二特異性結合搭配物可為如本文所述之DVD-Ig(或其片段、變異體或變異體之片段)。
可使用此項技術中已知之任何適合之可偵測標記。舉例而言，可偵測標記可為放射性標記(諸如3H、125I、35S、14C、32P及33P)、酶標記(諸如辣根過氧化酶、鹼性過氧化酶、葡萄糖6-磷酸脫氫酶及其類似者)、化學發光標記(諸如吖錠酯、硫酯、或磺醯胺；魯米諾、異魯米諾(isoluminol)、啡錠酯(phenanthridinium ester)及其類似者)、螢光標記(諸如螢光素(例如5-螢光素、6-羧基螢光素、3'6-羧基螢光素、5(6)-羧基螢光素、6-六氯-螢光素、6-四氯螢光素、異硫氰酸螢光素及其類似者))、若丹明、藻膽蛋白(phycobiliprotein)、R-藻紅素、量子點(例如硫化鋅封端之硒化鎘)、測溫標記或免疫聚合酶鏈反應標記。標記之引入、標記程序及對標記之偵測可見於Polak及Van Noorden,Introduction to Immunocytochemistry,第2版,Springer Verlag,N.Y.(1997)及Haugland,Handbook of Fluorescent Probes and Research Chemicals(1996)(其為由Molecular Probes,Inc.,Eugene,Oregon出版之組合手冊及目錄)中。螢光標記可用於FPIA中(參見例如美國專利第5,593,896號、第5,573,904號、第5,496,925號、第5,359,093號及第5,352,803號)。吖錠化合物可在均質或異質化學發光檢定中用作可偵測標記(參見例如AdamcZyk等人,Bioorg. Med. Chem. Lett. 16: 1324-1328(2006)；Adamczyk等人,Bioorg. Med. Chem. Lett. 4: 2313-2317(2004)；Adamczyk等人,Biorg. Med. Chem. Lett. 14: 3917-3921(2004)；及Adamczyk等人,Org. Lett. 5: 3779-3782(2003))。
較佳吖錠化合物為吖錠-9-甲醯胺。製備吖錠9-甲醯胺之方法係描述於Mattingly,J. Biolumin. Chemilumin. 6: 107-114(1991)；Adamczyk等人,J. Org. Chem.,63: 5636-5639(1998)；Adamczyk等人,Tetrahedron,55: 10899-10914(1999)；Adamczyk等人,Org. Lett.,1: 779-781(1999)；Adamczyk等人,Bioconjugate Chem.,11: 714-724(2000)；Mattingly等人,In Luminescence Biotechnology: Instruments and Applications;Dyke,K. V.編；CRC Press: Boca Raton,第77-105頁(2002)；Adamczyk等人,Org. Lett.,5: 3779-3782(2003)；及美國專利第5,468,646號、第5,543,524號及第5,783,699號中。另一較佳吖錠化合物為吖錠-9-甲酸芳酯。吖錠-9-甲酸芳酯之實例為10-甲基-9-(苯氧基羰基)吖錠氟磺酸酯(可自Cayman Chemical,Ann Arbor,MI獲得)。製備吖錠9-甲酸芳酯之方法係描述於McCapra等人,Photochem. Photobiol.,4: 1111-21(1965)；Razavi等人,Luminescence,15: 245-249(2000)；Razavi等人,Luminescence,15: 239-244(2000)；及美國專利第5,241,070號中。關於吖錠-9-甲酸芳酯及其使用之其他細節係闡述於US 2008-0248493中。
可根據Adamczyk等人,Anal. Chim. Acta,579(1): 61-67(2006)中所述之方法進行化學發光檢定(例如，使用如上文所述之吖錠或其他化學發光劑)。雖然可使用任何適合之檢定形式，但微板化學發光計(Mithras LB-940,Berthold Technologies U.S.A.,LLC,Oak Ridge,TN)使快速檢定多個具有小體積之樣本成為可能。
添加測試樣本及特異性結合搭配物以形成用於化學發光檢定之混合物的順序並非關鍵。若第一特異性結合搭配物經諸如吖錠化合物之化學發光劑可偵測標記，則形成經可偵測標記之第一特異性結合搭配物-分析物複合物。或者，若使用第二特異性結合搭配物且第二特異性結合搭配物經諸如吖錠化合物之化學發光劑可偵測標記，則形成經可偵測標記之第一特異性結合搭配物-分析物-第二特異性結合搭配物複合物。可使用此項技術中已知之任何技術(諸如洗滌)自混合物移除任何經標記或未經標記的未結合之特異性結合搭配物。
在添加上述吖錠化合物之前、同時或之後，可現場在混合物中產生過氧化氫或可向混合物中提供或供應過氧化氫(例如，過氧化氫之來源為一或多種已知含有過氧化氫之緩衝液或其他溶液)。過氧化氫可以多種方式(諸如為熟習此項技術者所顯而易見之方式)現場產生。
在向樣本中添加至少一種鹼性溶液同時或之後，產生指示分析物存在之可偵測信號，即化學發光信號。鹼性溶液含有至少一種鹼且具有大於或等於10，較佳大於或等於12之pH值。鹼性溶液之實例包括(但不限於)氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化鈣、氫氧化銨、氫氧化鎂、碳酸鈉、碳酸氫鈉、氫氧化鈣、碳酸鈣及碳酸氫鈣。添加至樣本中之鹼性溶液之量視鹼性溶液之濃度而定。基於所用鹼性溶液之濃度，熟習此項技術者易於判定添加至樣本中之鹼性溶液之量。
可使用熟習此項技術者所知之常規技術偵測所產生之化學發光信號。基於所產生之信號強度，可定量樣本中分析物之量。特定而言，樣本中分析物之量與所產生之信號強度成正比。可藉由將所產生光之量與分析物之標準曲線相比較或藉由與參照標準品相比較來定量存在之分析物之量。可藉由質譜分析、重量分析法及其他此項技術中已知之技術使用分析物之已知濃度之連續稀釋液或溶液產生標準曲線。雖然上文在強調使用吖錠化合物作為化學發光劑下進行描述，但一般技術者易於針對其他化學發光劑之使用來修改此描述。
分析物免疫檢定通常可使用此項技術中已知之任何形式(諸如(但不限於)夾心形式)來進行。特定而言，在一種免疫檢定形式中，使用至少2種抗體來分離及定量樣本中之分析物，諸如人類分析物或其片段。更特定而言，至少2種抗體結合分析物(或其片段)上之不同抗原決定基以形成免疫複合物，其稱作「夾心」。一般而言，在免疫檢定中，可使用一或多種抗體來捕捉測試樣本中之分析物(或其片段)(此等抗體常稱作「捕捉」抗體)，且可使用一或多種抗體以使可偵測(即可定量)標記與夾心結合(此等抗體常稱作「偵測抗體」、「接合物」)。因此，在夾心免疫檢定形式之情況下，如本文所述之DVD-Ig(或其片段、變異體或變異體之片段)可用作捕捉抗體、偵測抗體或兩者。舉例而言，一具有可結合分析物(或其片段)上之第一抗原決定基之結構域的DVD-Ig可用作捕捉抗體及/或另一具有可結合分析物(或其片段)上之第二抗原決定基之結構域的DVD-Ig可用作偵測抗體。就此而言，具有可結合分析物(或其片段)上之第一抗原決定基之第一結構域及可結合分析物(或其片段)上之第二抗原決定基之第二結構域的DVD-Ig可用作捕捉抗體及/或偵測抗體。或者，一個具有可結合第一分析物(或其片段)上之抗原決定基之第一結構域及可結合第二分析物(或其片段)上之抗原決定基之第二結構域的DVD-Ig可用作捕捉抗體及/或偵測抗體來偵測且視情況定量兩種或兩種以上分析物。在分析物可能以一種以上形式(諸如單體形式及二聚/多聚形式，其可為同聚(homomeric)或雜聚(heteromeric)的)存在於樣本中之情況下，一個具有可結合僅暴露於單體形式上之抗原決定基之結構域的DVD-Ig及另一具有可結合二聚/多聚形式之不同部分上之抗原決定基之結構域的DVD-Ig可用作捕捉抗體及/或偵測抗體，從而使偵測及視情況定量各種形式之既定分析物成為可能。此外，使用親和力在單個DVD-Ig中及/或介於DVD-Ig之間有所不同之DVD-Ig可提供親和性優勢。在如本文所述之免疫檢定之情況下，一般可能有助於或需要將一或多個連接子併入DVD-Ig之結構中。若存在，則最佳連接子應具有足夠長度及結構可撓性以使內結構域與一抗原決定基之結合以及外結構域與另一抗原決定基之結合成為可能。就此而言，若DVD-Ig可結合2種不同分析物且一種分析物大於另一種，則合意的是，由外結構域結合較大分析物。
一般而言，可使待測試(例如懷疑含有)IL-17蛋白質(或其片段)之樣本同時或連續及按任何順序與至少一種捕捉抗體及至少一種偵測抗體(例如在捕捉及/或偵測抗體包含多種抗體之情況下，其可為第二偵測抗體或第三偵測抗體或甚至依次標號之抗體)接觸。舉例而言，可使測試樣本首先與至少一種捕捉抗體接觸且接著(連續)與至少一種偵測抗體接觸。或者，可使測試樣本首先與至少一種偵測抗體接觸且接著(連續)與至少一種捕捉抗體接觸，在另一替代方案中，可使測試樣本同時與捕捉抗體及偵測抗體接觸。
在夾心檢定形式中，使懷疑含有IL-17(或其片段)之樣本首先與至少一種第一捕捉結合蛋白(例如IL-17抗體)在使得第一結合蛋白/IL-17複合物形成之條件下接觸。若使用一種以上捕捉結合蛋白，則形成包含2種或2種以上捕捉結合蛋白之第一捕捉結合蛋白/IL-17複合物。在夾心檢定中，以測試樣本中預期之IL-17分析物(或其片段)之最大量的莫耳過量之量使用結合蛋白(亦即較佳至少一種捕捉結合蛋白)。舉例而言，可使用每毫升緩衝液(例如微粒塗料緩衝液)約5微克至約1毫克抗體。
由於僅需要使分析物與一種抗體結合而常用於測量小分析物之競爭抑制免疫檢定包含連續及典型形式。在連續競爭抑制免疫檢定中，將針對IL-17之捕捉結合蛋白塗布於微量滴定板之孔或其他固體支撐物上。當將含有IL-17之樣本添加至孔中時，IL-17與捕捉結合蛋白結合。洗滌後，將已知量之經標記(例如生物素或辣根過氧化酶(HRP))之IL-17添加至孔中。需要酶標記之受質以產生信號。適用於HRP之受質之實例為3,3',5,5'-四甲基聯苯胺(TMB)。洗滌後，測量由經標記之分析物產生之信號且該信號與樣本中IL-17之量成反比。在典型競爭抑制免疫檢定中，將針對IL-17之結合蛋白塗布於固體支撐物(例如微量滴定板之孔)上。然而，不同於連續競爭抑制免疫檢定，同時將樣本及經標記之IL-17添加至孔中。樣本中之任何IL-17與經標記之IL-17競爭結合捕捉結合蛋白。洗滌後，測量由經標記之IL-17產生之信號且該信號與樣本中IL-17之量成反比。
視情況，在使測試樣本與至少一種捕捉結合蛋白(例如第一捕捉抗體)接觸之前，可使至少一種捕捉結合蛋白結合於固體支撐物上，該固體支撐物有助於使第一結合蛋白/IL-17(或其片段)複合物與測試樣本分離。結合捕捉結合蛋白之基板可為有助於捕捉抗體-分析物複合物自樣本分離之任何適合之固體支撐物或固相。
實例包括板(諸如微量滴定板)之孔、試管、多孔凝膠(例如矽膠、瓊脂糖、聚葡萄糖或明膠)、聚合薄膜(例如聚丙烯醯胺)、珠粒(例如聚苯乙烯珠粒或磁性珠粒)、過濾器/膜之條帶(例如硝化纖維或耐綸)、微粒(例如乳膠粒子、可磁化微粒(例如具有氧化鐵或氧化鉻核心及均聚或雜聚塗層及約1-10微米之半徑的微粒)。基板可包含適合之多孔材料，其具有適於結合抗原之表面親和力及足以使偵測抗體通過之孔隙率。儘管可使用呈水合狀態之凝膠材料，但微孔材料通常為較佳的。該等多孔基板較佳為具有約0.01 mm至約0.5 mm，較佳約0.1 mm之厚度的薄片形式。雖然微孔尺寸可大不相同，但較佳微孔尺寸為約0.025微米至約15微米，更佳為約0.15微米至約15微米。該等基板之表面可藉由使抗體與基板共價連接之化學製程加以活化。引起抗原或抗體與基板一般藉由經疏水力吸附而不可逆結合；或者，可使用化學偶合劑或其他方式使抗體與基板共價結合，只要該結合不干擾抗體結合分析物之能力即可。或者，抗體可與微粒結合，該等微粒先前塗有抗生蛋白鏈菌素(例如DYNAL磁性珠粒，Invitrogen,Carlsbad,CA)或生物素(例如，使用Power-BindTM-SA-MP抗生蛋白鏈菌素塗布之微粒(Seradyn,Indianapolis,IN))或抗物種特異性單株抗體。必要時，基板可經衍生化以允許與抗體上之各種官能基反應。該衍生化需要使用某些偶合劑，其實例包括(但不限於)順丁烯二酸酐、N-羥基丁二醯亞胺及1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳化二亞胺。必要時，可使一或多種捕捉試劑(諸如抗體(其片段)，其每一者皆具有針對分析物之特異性)與固相在不同物理或可達之位置上連接(例如，諸如呈生物晶片組態(參見例如美國專利第6,225,047號；PCT公開案第WO 99/51773號；美國專利第6,329,209號；PCT公開案第WO 00/56934號；及美國專利第5,242,828號)。若使捕捉試劑連接於作為固體支撐物之質譜探針上，則可藉由雷射脫附離子化質譜偵測與探針結合之分析物之量。或者，可用經一或多種捕捉試劑衍生化之不同珠粒填充單個管柱，從而在單個位置上捕捉分析物(參見，基於經抗體衍生化之珠粒的技術，例如Luminex(Austin,TX)之xMAP技術)。
在使待檢定分析物(或其片段)之測試樣本與至少一種捕捉抗體(例如第一捕捉抗體)接觸後，培育混合物以使第一抗體(或多種抗體)-分析物(或其片段)複合物形成。可在約4.5至約10.0之pH值下，在約2℃至約45℃之溫度下且歷經至少約1分鐘至約18小時，較佳約1分鐘至約24分鐘，最佳約4至約18分鐘之時段進行培育。本文所述之免疫檢定可分一個步驟進行(意謂連續或同時將測試樣本、至少一種捕捉抗體及至少一種偵測抗體全部添加至反應容器中)或分一個以上步驟，諸如兩個步驟、三個步驟等進行。
在(第一或多種)捕捉抗體/分析物(或其片段)複合物形成後，接著使複合物與至少一種偵測抗體在允許(第一或多種)捕捉抗體/分析物(或其片段)/第二偵測抗體複合物形成之條件下接觸。雖然出於清楚起見而冠以「第二」抗體(例如第二偵測抗體)之名稱，但實際上在使用多種抗體以用於捕捉及/或偵測時，至少一種偵測抗體可為用於免疫檢定之第二、第三、第四等抗體。若使捕捉抗體/分析物(或其片段)複合物與一種以上偵測抗體結合，則形成(第一或多種)捕捉抗體/分析物(或其片段)/(多種)偵測抗體複合物。如同捕捉抗體(例如第一捕捉抗體)，當使至少一種(例如，第二及任何隨後)偵測抗體與捕捉抗體/分析物(或其片段)複合物接觸時，需要在與上文所述之條件類似的條件下培育一定時段以形成(第一或多種)捕捉抗體/分析物(或其片段)/(第二或多種)偵測抗體複合物。較佳，至少一種偵測抗體含有可偵測標記。可偵測標記可在(第一或多種)捕捉抗體/分析物(或其片段)/(第二或多種)偵測抗體複合物形成之前、同時或之後與至少一種偵測抗體(例如第二偵測抗體)結合。可使用此項技術中已知之任何可偵測標記(參見上文論述，包括Polak及Van Noorden(1997)及Haugland(1996)參考文獻)。
可偵測標記可直接或經由偶合劑與抗體連接。可使用之偶合劑之實例為EDAC(1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽)，其可自Sigma-Aldrich,St. Louis,MO購得。其他可使用之偶合劑在此項技術中為已知的。使可偵測標記與抗體結合之方法在此項技術中為已知的。另外，多種已含有促成可偵測標記與抗體偶合之端基的可偵測標記可購得或合成，諸如CPSP-吖錠酯(亦即9-[N-甲苯磺醯基-N-(3-羧基丙基)]-10-(3-磺丙基)吖錠甲醯胺)或SPSP-吖錠酯(亦即N10-(3-磺丙基)-N-(3-磺丙基)-吖錠-9-甲醯胺)。
在定量標記之前，可將(但並非必需)(第一或多種)捕捉抗體/分析物/(第二或多種)偵測抗體複合物與測試樣本之剩餘部分分離。舉例而言，若至少一種捕捉抗體(例如第一捕捉抗體)與固體支撐物(諸如孔或珠粒)結合，則分離可藉由移除與固體支撐物接觸之(測試樣本之)流體來實現。或者，若至少第一捕捉抗體與固體支撐物結合，則其可同時與含有分析物之樣本及至少一種第二偵測抗體接觸以形成第一(多種)抗體/分析物/第二(多種)抗體複合物，繼而移除與固體支撐物接觸之流體(測試樣本)。若至少一種第一捕捉抗體未與固體支撐物結合，則無須自測試樣本移除(第一或多種)捕捉抗體/分析物/(第二或多種)偵測抗體複合物以定量標記之量。
在經標記之捕捉抗體/分析物/偵測抗體複合物(例如第一捕捉抗體/分析物/第二偵測抗體複合物)形成後，使用此項技術中已知之技術定量複合物中之標記之量。舉例而言，若使用酶標記，則使經標記之複合物與標記之受質反應，產生可定量反應，諸如顯色。若標記為放射性標記，則使用適合方式(諸如閃爍計數器)定量標記。若標記為螢光標記，則藉由用一種色彩之光(其稱作「激發波長」)刺激標記且偵測由標記回應於刺激所發射之另一色彩(其稱作「發射波長」)來定量標記。若標記為化學發光標記，則藉由視覺上或使用光度計、X射線膠片、高速感光膠片、CCD攝像機等偵測所發射之光來定量標記。一旦定量複合物中標記之量，則藉由適合方式，諸如藉由使用已使用已知濃度之分析物或其片段之連續稀釋液產生之標準曲線來測定測試樣本中分析物或其片段之濃度。除使用分析物或其片段之連續稀釋液以外，可以重量分析方式、藉由質譜分析及藉由此項技術中已知之其他技術產生標準曲線。
在使用ARCHITECT分析器之化學發光微粒檢定中，接合物稀釋劑pH值應為約6.0 +/- 0.2，微粒塗料緩衝液應維持於約室溫下(亦即在約17℃至約27℃下)，微粒塗料緩衝液pH值應為約6.5 +/- 0.2，且微粒稀釋劑pH值應為約7.8 +/- 0.2。固體較佳少於約0.2%，諸如少於約0.15%、少於約0.14%、少於約0.13%、少於約0.12%或少於約0.11%，諸如約0.10%。
FPIA係基於競爭性結合免疫檢定原理。經螢光標記之化合物在由線性偏振光激發時將發射偏振度與其旋轉速率成反比之螢光。當藉由線性偏振光激發經螢光標記之示蹤劑-抗體複合物時，所發射之光仍高度偏振，因為螢光團在吸收光之時間與發射光之時間之間旋轉受限。當藉由線性偏振光激發「自由」示蹤劑化合物(亦即未與抗體結合之化合物)時，其旋轉比競爭性結合免疫檢定中所產生之相應示蹤劑-抗體接合物快得多。FPIA由於不存在需要特殊處理及處置之放射性物質而優於RIA。另外，FPIA為易於進行且可快速進行之均質檢定。
鑒於上文，提供測定測試樣本中分析物(或其片段)之存在、量或濃度的方法。該方法包含藉由如下檢定來針對分析物(或其片段)檢定測試樣本，該檢定(i)使用(I')可結合分析物之抗體、抗體片段、可結合分析物之抗體之變異體、可結合分析物之抗體變異體之片段及可結合分析物之DVD-Ig(或其片段、變異體或變異體之片段)中之至少一者，及(ii')至少一種可偵測標記；且(ii)包含將由可偵測標記產生作為測試樣本中分析物(或其片段)之存在、量或濃度之直接或間接指示的信號與產生作為對照或校正劑中分析物(或其片段)之存在、量或濃度之直接或間接指示的信號相比較。校正劑視情況為一系列校正劑之一部分，其中各校正劑與其他校正劑之不同之處在於分析物濃度。
該方法可包含(i)使測試樣本與至少一種選自由以下組成之群之針對分析物(或其片段)之第一特異性結合搭配物接觸以形成第一特異性結合搭配物/分析物(或其片段)複合物：可結合分析物之抗體、抗體片段，可結合分析物之抗體之變異體，可結合分析物之抗體變異體之片段，及可結合分析物之DVD-Ig(或其片段、變異體或變異體之片段)；(ii)使第一特異性結合搭配物/分析物(或其片段)複合物與至少一種選自由以下組成之群之針對分析物(或其片段)之第二特異性結合搭配物接觸以形成第一特異性結合搭配物/分析物(或其片段)/第二特異性結合搭配物複合物：可結合分析物的經可偵測標記之抗分析物抗體、經可偵測標記之抗分析物抗體片段，可結合分析物的經可偵測標記之抗分析物抗體變異體，可結合分析物的經可偵測標記之抗分析物抗體變異體片段，及經可偵測標記之DVD-Ig(或其片段、變異體或變異體之片段)；及(iii)藉由偵測或測量由(ii)中所形成之第一特異性結合搭配物/分析物(或其片段)/第二特異性結合搭配物複合物中之可偵測標記產生之信號來測定測試樣本中分析物之存在、量或濃度。至少一種針對分析物(或其片段)之第一特異性結合搭配物及/或至少一種針對分析物(或其片段)之第二特異性結合搭配物為如本文所述之DVD-Ig(或其片段、變異體或變異體之片段)的方法可為較佳的。
或者，該方法可包含使測試樣本與至少一種選自由以下組成之群的針對IL-17分析物(或其片段)之第一特異性結合搭配物接觸：可結合分析物之抗體、抗體之片段，可結合分析物之抗體變異體，可結合分析物之抗體變異體之片段，及DVD-Ig(或其片段、變異體或變異體之片段)；且同時或連續以任一順序使測試樣本與至少一種第二特異性結合搭配物接觸，該至少一種第二特異性結合搭配物可與分析物(或其片段)競爭結合至少一種第一特異性結合搭配物且係選自由以下組成之群：可結合第一特異性結合搭配物的經可偵測標記之分析物、經可偵測標記之分析物片段，可結合第一特異性結合搭配物的經可偵測標記之分析物變異體，及可結合第一特異性結合搭配物的經可偵測標記之分析物變異體片段。測試樣本中存在之任何IL-17(或其片段)與至少一種第二特異性結合搭配物互相競爭以分別形成第一特異性結合搭配物/分析物(或其片段)複合物與第一特異性結合搭配物/第二特異性結合搭配物複合物。該方法進一步包含藉由偵測或測量由(ii)中所形成之第一特異性結合搭配物/第二特異性結合搭配物複合物中之可偵測標記所產生之信號來測定測試樣本中分析物之存在、量或濃度，其中由第一特異性結合搭配物/第二特異性結合搭配物複合物中之可偵測標記產生之信號與測試樣本中分析物之量或濃度成反比。
上述方法可進一步包含診斷、預測或評估對產生測試樣本之患者之治療性/預防性治療的功效。若該方法進一步包含評估對產生測試樣本之患者之治療性/預防性治療的功效，則該方法視情況進一步包含改變對需要改良功效之患者的治療性/預防性治療。該方法可適用於自動系統或半自動系統中。
關於檢定方法(及因此套組)，有可能使用市售之抗分析物抗體或如文獻中所述產生抗分析物之方法。各種抗體之商業來源包括(但不限於)Santa Cruz Biotechnology Inc.(Santa Cruz,CA)、GenWay Biotech,Inc.(San Diego,CA)及R&D Systems(RDS;Minneapolis,MN)。一般而言，使用預定含量作為基準，針對其評估在針對分析物或其片段檢定測試樣本後獲得之結果以例如偵測疾病或疾病風險。一般而言，在進行該比較中，藉由進行特定檢定足夠次數且在適合條件下進行特定檢定以使分析物存在、量或濃度與疾病、病症或病狀之特定階段或終點或與特定臨床指標產生關聯或建立聯繫來獲得預定含量。通常，藉由檢定參照個體(或個體之群體)獲得預定含量。所測量之分析物可包括其片段、其降解產物及/或其酶分解產物。
特定而言，關於用於監測疾病進展及/或治療之預定含量，分析物或其片段之量或濃度可能「無變化」、「有利的」(或「有利改變」)或「不利的」(「不利改變」)。「升高」或「增加」係指測試樣本中之量或濃度高於典型或正常含量或範圍(例如預定含量)，或高於另一參考含量或範圍(例如早期或基線樣本)。術語「降低」或「增加」係指測試樣本中之量或濃度低於典型或正常含量或範圍(例如預定含量)，或低於另一參考含量或範圍(例如早期或基線樣本)。術語「改變」係指樣本中之量或濃度相較於典型或正常含量或範圍(例如預定含量)或相較於另一參考含量或範圍(例如早期或基線樣本)有所不同(增加或減少)。
分析物之典型或正常含量或範圍係根據標準操作來定義。由於分析物含量在一些情況下極低，所以當與典型或正常含量或範圍，或參考含量或範圍相比存在不能由實驗誤差或樣本變異解釋之任何淨變化時，可認為出現所謂之改變之含量或改變。因此，將在特定樣本中所測量之含量與在來自所謂之正常個體之類似樣本中所測定之含量或含量範圍相比較。在此情況下，舉例而言，「正常個體」為未罹患可偵測疾病之個體，且舉例而言，「正常」(有時稱作「對照」)患者或群體分別為未展現可偵測疾病之患者或群體。此外，假定在大部分人類群體中通常未發現高含量之分析物，則「正常個體」可視作分析物之量或濃度未實質可偵測增加或升高之個體，且「正常」(有時稱作「對照」)患者或群體為未展現實質可偵測增加或升高量或濃度之分析物的患者或群體。「表面上正常之個體」為還未評估分析物或當前正評估分析物之個體。當分析物通常為不可偵測的(例如正常含量為零，或處於正常群體之約25%至約75%之範圍內)，但在測試樣本中偵測到分析物時，以及當分析物以高於正常含量之含量存在於測試樣本中時，將分析物之含量稱作「升高」。因此，尤其，本發明提供篩選罹患特定疾病、病症或病狀或有罹患特定疾病、病症或病狀之風險之個體的方法。檢定方法亦可涉及檢定其他標記及其類似者。
因此，本文所述之方法亦可用於判定個體是否罹患既定疾病、病症或病狀或有形成既定疾病、病症或病狀之風險。特定而言，該方法可包含以下步驟：
(a)測定來自個體之測試樣本中IL-17(或其片段)之濃度或量(例如使用本文所述之方法或此項技術中已知之方法)；及
(b)將步驟(a)中測定之IL-17(或其片段)之濃度或量與預定含量相比較，其中若步驟(a)中所測定之分析物之濃度或量相對於預定含量而言為有利的，則判定個體未罹患既定疾病、病症或病狀或無罹患既定疾病、病症或病狀之風險。然而，若步驟(a)中測定之IL-17之濃度或量相對於預定含量而言為不利的，則判定個體罹患既定疾病、病症或病狀或有罹患既定疾病、病症或病狀之風險。
另外，本文提供監測個體體內之疾病進展的方法。最佳，該方法包含以下步驟：
(a)測定來自個體之測試樣本中IL-17之濃度或量；
(b)測定隨後來自個體之測試樣本中IL-17之濃度或量；及
(c)將如步驟(b)中所測定之分析物之濃度或量與步驟(a)中所測定之IL-17之濃度或量相比較，其中若步驟(b)中所測定之濃度或量在與步驟(a)中測定之IL-17之濃度或量相比較時無變化或為不利的，則判定該個體之疾病延續、進展或惡化。相比而言，若步驟(b)中所測定之IL-17之濃度或量在與步驟(a)中所測定之IL-17之濃度或量相比較時為有利的，則判定該個體之疾病已得以中止、消退或改善。
視情況，該方法進一步包含將步驟(b)中所測定之IL-17分析物之濃度或量與例如預定含量相比較。此外，視情況，該方法包含若比較展示步驟(b)中所測定之分析物之濃度或量例如相對於預定含量而言有所不利改變，則用一或多種醫藥組合物治療個體一定時段。
此外，該方法可用於監測接受以一或多種醫藥組合物治療之個體之治療。特定而言，該等方法涉及在向個體投與一或多種醫藥組合物之前自個體獲得第一測試樣本。接著，測定來自個體之第一測試樣本中IL-17之濃度或量(例如使用本文所述或如此項技術中已知之方法)。在測定IL-17之濃度或量後，視情況接著將IL-17之濃度或量與預定含量相比較。若在第一測試樣本中所測定之IL-17之濃度或量低於預定含量，則不用一或多種醫藥組合物治療個體。然而，若在第一測試樣本中所測定之IL-17之濃度或量高於預定含量，則用一或多種醫藥組合物治療個體一定時段。以一或多種醫藥組合物治療個體之時段可由熟習此項技術者來決定(例如，該時段可為約7天至約2年，較佳為約14天至約1年)。
在以一或多種醫藥組合物治療過程期間，接著自個體獲得第二及後繼之測試樣本。測試樣本之數目及自個體獲得該等測試樣本之時間並非關鍵。舉例而言，可在最初向個體投與一或多種醫藥組合物後第7天獲得第二測試樣本，可在最初向個體投與一或多種醫藥組合物後第2週獲得第三測試樣本，可在最初向個體投與一或多種醫藥組合物後第3週獲得第四測試樣本，可在最初向個體投與一或多種醫藥組合物後第4週獲得第五測試樣本等。
在自個體獲得各個第二或後繼之測試樣本後，測定第二或後繼之測試樣本中IL-17分析物之濃度或量(例如使用本文所述或如此項技術中已知之方法)。接著將在各個第二及後繼之測試樣本中所測定之IL-17之濃度或量與在第一測試樣本(例如，最初視情況與預定含量相比較之測試樣本)中所測定之分析物之濃度或量相比較。若步驟(c)中所測定之IL-17之濃度或量在與步驟(a)中所測定之分析物之濃度或量相比較時為有利的，則判定個體之疾病已得以中止、消退或改善，且應繼續向該個體投與步驟(b)之一或多種醫藥組合物。然而，若步驟(c)中所測定之濃度或量在與步驟(a)中所測定之分析物之濃度或量相比較時無變化或為不利的，則判定個體之疾病延續、進展或惡化，且應用較高濃度之一或多種在步驟(b)中向個體投與之醫藥組合物治療該個體或應用一或多種不同於步驟(b)中向個體投與之一或多種醫藥組合物的醫藥組合物治療該個體。特定而言，可用一或多種不同於該個體先前所接受之一或多種醫藥組合物的醫藥組合物來治療個體以減少或降低該個體之分析物含量。
一般而言，對於可能進行重複測試之檢定(例如，監測疾病進展及/或對治療之反應)，在已自個體獲得第一測試樣本後歷經一定時段後獲得第二或後繼測試樣本。特定而言，可在已自個體獲得第一測試樣本後數分鐘、數小時、數天、數週或數年後獲得來自個體之第二測試樣本。舉例而言，可在自個體獲得第一測試樣本後歷經約1分鐘、約5分鐘、約10分鐘、約15分鐘、約30分鐘、約45分鐘、約60分鐘、約2小時、約3小時、約4小時、約5小時、約6小時、約7小時、約8小時、約9小時、約10小時、約11小時、約12小時、約13小時、約14小時、約15小時、約16小時、約17小時、約18小時、約19小時、約20小時、約21小時、約22小時、約23小時、約24小時、約2天、約3天、約4天、約5天、約6天、約7天、約2週、約3週、約4週、約5週、約6週、約7週、約8週、約9週、約10週、約11週、約12週、約13週、約14週、約15週、約16週、約17週、約18週、約19週、約20週、約21週、約22週、約23週、約24週、約25週、約26週、約27週、約28週、約29週、約30週、約31週、約32週、約33週、約34週、約35週、約36週、約37週、約38週、約39週、約40週、約41週、約42週、約43週、約44週、約45週、約46週、約47週、約48週、約49週、約50週、約51週、約52週、約1.5年、約2年、約2.5年、約3.0年、約3.5年、約4.0年、約4.5年、約5.0年、約5.5年、約6.0年、約6.5年、約7.0年、約7.5年、約8.0年、約8.5年、約9.0年、約9.5年或約10.0年之時段後自個體獲得第二測試樣本。
當上述檢定用於監測疾病進展時，上述檢定可用於監測罹患急性病狀之個體之疾病進展。亦稱作危急護理病狀之急性病狀係指涉及例如心血管系統或排泄系統之急性危急生命之疾病或其他危急醫學病狀。通常，危急護理病狀係指需要在基於醫院之配置(包括(但不限於)急救室、重病監護室、創傷中心或其他急救護理配置)中進行急性醫藥介入或藉由護理人員或基於其他領域之醫務人員進行投藥的病狀。對於危急護理病狀，一般在較短時間範圍內，即數分鐘、數小時或數天內進行反覆監測(例如約1分鐘、約5分鐘、約10分鐘、約15分鐘、約30分鐘、約45分鐘、約60分鐘、約2小時、約3小時、約4小時、約5小時、約6小時、約7小時、約8小時、約9小時、約10小時、約11小時、約12小時、約13小時、約14小時、約15小時、約16小時、約17小時、約18小時、約19小時、約20小時、約21小時、約22小時、約23小時、約24小時、約2天、約3天、約4天、約5天、約6天或約7天)，且同樣一般在疾病或病狀發作之較短時間範圍內，例如約數分鐘、數小時或數天內進行初始檢定。
該等檢定亦可用於監測罹患慢性或非急性病狀之個體之疾病進展。非危急護理或非急性病狀係指除涉及例如心血管系統及/或排泄系統之急性危急生命之疾病及其他危急醫學病狀以外的病狀。通常，非急性病狀包括具有較長期或慢性持續時間之病狀。對於非急性病狀，一般在較長時間範圍內，例如數小時、數天、數週、數月或數年內進行反覆監測(例如約1小時、約2小時、約3小時、約4小時、約5小時、約6小時、約7小時、約8小時、約9小時、約10小時、約11小時、約12小時、約13小時、約14小時、約15小時、約16小時、約17小時、約18小時、約19小時、約20小時、約21小時、約22小時、約23小時、約24小時、約2天、約3天、約4天、約5天、約6天、約7天、約2週、約3週、約4週、約5週、約6週、約7週、約8週、約9週、約10週、約11週、約12週、約13週、約14週、約15週、約16週、約17週、約18週、約19週、約20週、約21週、約22週、約23週、約24週、約25週、約26週、約27週、約28週、約29週、約30週、約31週、約32週、約33週、約34週、約35週、約36週、約37週、約38週、約39週、約40週、約41週、約42週、約43週、約44週、約45週、約46週、約47週、約48週、約49週、約50週、約51週、約52週、約1.5年、約2年、約2.5年、約3.0年、約3.5年、約4.0年、約4.5年、約5.0年、約5.5年、約6.0年、約6.5年、約7.0年、約7.5年、約8.0年、約8.5年、約9.0年、約9.5年或約10.0年)，且同樣一般在疾病或病狀發作之較長時間範圍內，例如約數小時、數天、數月或數年內進行初始檢定。
此外，可使用自個體獲得之第一測試樣本進行上述檢定，其中該第一測試樣本係得自一種來源，諸如尿、血清或血漿。視情況，接著可使用自個體獲得之第二測試樣本重複上述檢定，其中該第二測試樣本係得自另一來源。舉例而言，若第一測試樣本得自尿，則第二測試樣本可得自血清或血漿。可比較自使用第一測試樣本與第二測試樣本之檢定獲得之結果。該比較可用於評估個體之疾病或病狀之狀態。
此外，本發明亦關於判定易患或罹患既定疾病、病症或病狀之個體是否將得益於治療之方法。特定而言，本發明係關於分析物伴侶診斷方法及產品。因此，如本文所述之「監測對個體之疾病治療」之方法亦進一步最佳涵蓋選擇或識別用於治療之候選者。
因此，在特定實施例中，本發明亦提供判定罹患既定疾病、病症或病狀或由罹患既定疾病、病症或病狀之風險得個體是否為用於治療之候選者的方法。一般而言，個體為經受既定疾病、病症或病狀之一些症狀或實際上已診斷罹患既定疾病、病症或病狀或有罹患既定疾病、病症或病狀之風險及/或如本文所述表現不利濃度或量之分析物或其片段的個體。
該方法視情況包含如本文所述之檢定，其中在用一或多種醫藥組合物(例如，尤其用與涉及分析物之作用機制相關之藥物)、用免疫抑制治療或藉由免疫吸附治療來治療個體之前及之後評估IL-17，或其中在該治療後評估分析物且將分析物之濃度或量與預定含量相比較。在治療後所觀測到之不利濃度或量之IL-17確定該個體將不得益於接受進一步或繼續治療，而在治療後觀測到之有利濃度或量之分析物確定該個體將得益於接受進一步或繼續治療。此確定協助管理臨床研究且提供改良之患者護理。
不言而喻，雖然本文之某些實施例在用於評估如本文所述之既定疾病、病症或病狀時為有益的，但可使用檢定及套組來評估其他疾病、病症及病狀中之分析物。檢定方法亦可涉及檢定其他標記及其類似者。
檢定方法亦可用於識別改善既定疾病、病症或病狀之化合物。舉例而言，可使表現分析物之細胞與候選化合物接觸。可使用本文所述之檢定方法將與化合物接觸之細胞中分析物之表現含量與對照細胞中之分析物表現含量相比較。
II.套組
亦提供用於針對測試樣本中分析物(或其片段)之存在、量或濃度檢定測試樣本之套組。該套組包含至少一種針對IL-17(或其片段)檢定測試樣本之組份及用於針對分析物(或其片段)檢定測試樣本之說明書。至少一種針對分析物(或其片段)檢定測試樣本之組份可包括包含抗IL-17結合蛋白，諸如如本文所述之單株抗體或DVD-Ig(或其片段、變異體或變異體之片段)且視情況固定於固相上之組合物。
套組可包含至少一種藉由免疫檢定(例如化學發光微粒免疫檢定)針對IL-17分析物檢定測試樣本之組份及用於藉由免疫檢定(例如化學發光微粒免疫檢定)針對IL-17分析物檢定測試樣本之說明書。舉例而言，套組可包含至少一種針對IL-17之特異性結合搭配物，諸如抗IL-17單株/多株抗體(或其可結合IL-17分析物之片段，其可結合分析物之變異體，或可結合分析物之變異體片段)或抗IL-17 DVD-Ig(或其片段、變異體或變異體片段)，其任一者可經可偵測標記。或者或另外，套組可包含經可偵測標記之IL-17分析物(或其可結合抗分析物單株/多株抗體或抗分析物DVD-Ig(或其片段、變異體或變異體片段)之片段)，其可與測試樣本中之任何分析物競爭結合抗分析物單株/多株抗體(或其可結合分析物之片段，其可結合分析物之變異體，或可結合分析物之變異體片段)或抗分析物DVD-Ig(或其片段、變異體或變異體片段)，其任一者可固定於固體支撐物上。套組可包含校正劑或對照，例如分離或純化之分析物。套組可包含至少一種用於進行檢定之容器(例如管、微量滴定板或條帶，其可能例如已塗有第一特異性結合搭配物)；及/或緩衝液，諸如檢定緩衝液或洗滌緩衝液，其任一者可以濃縮溶液之形式提供；可偵測標記(例如酶標記)之受質溶液；或停止溶液。較佳，套組包含所有為進行檢定所必需之組份，亦即試劑、標準品、緩衝液、稀釋劑等。說明書可為紙張形式或電腦可讀之形式，諸如碟片、CD、DVD或其類似者。
任何結合蛋白(諸如抗IL-17結合蛋白或抗分析物DVD-Ig)或示蹤劑可併有如本文所述之可偵測標記，諸如螢光團、放射性部分、酶、生物素/抗生物素蛋白標記、發色團、化學發光標記或其類似者，或套組可包括執行可偵測標記之試劑。抗體、校正劑及/或對照可提供於各別容器中或預先分配於適合之檢定形式中，例如預先分配於微量滴定板中。
視情況，套組包括品質控制組份(例如靈敏度組、校正劑及陽性對照)。品質控制試劑之製備在此項技術中為熟知的且係描述於多種免疫診斷產品之說明書上。靈敏度組成員視情況用於確定檢定效能特徵，且進一步視情況為免疫檢定套組試劑之完整性及檢定之標準化的適用指標。
套組亦可視情況包括其他為進行診斷檢定或有助於品質控制評價所需之試劑，諸如緩衝液、鹽、酶、酶輔因子、酶受質、偵測試劑及其類似者。套組中亦可包括其他組份，諸如用於分離及/或處理測試樣本之緩衝液及溶液(例如預處理試劑)。套組可另外包括一或多種其他對照。套組之一或多個組份可經凍乾，在該狀況下，套組可進一步包含適於復原凍乾組份之試劑。
套組之各種組份根據需要視情況提供於適合容器中，例如微量滴定板。套組可進一步包括容納或儲存樣本之容器(例如用於尿樣本之容器或筒)。適當時，套組視情況亦可含有反應容器、混合容器及其他有助於製備試劑或測試樣本之組件。套組亦可包括一或多種協助獲得測試樣本之儀器，諸如注射器、吸液管、鉗子、測量匙或其類似者。
若可偵測標記為至少一種吖錠化合物，則套組可包含至少一種吖錠-9-甲醯胺、至少一種吖錠-9-甲酸芳酯或其任何組合。若可偵測標記為至少一種吖錠化合物，則套組亦可包含過氧化氫之來源，諸如緩衝液、溶液及/或至少一種鹼性溶液。必要時，套組可含有固相，諸如磁性粒子、珠粒、試管、微量滴定板、光析管、膜、骨架分子、薄膜、濾紙、圓盤或晶片。
111.套組與方法之適用性
藉由如本文所述之檢定(諸如免疫檢定)測定測試樣本中分析物之存在、量或濃度的套組(或其組份)以及方法可適用於例如美國專利第5,089,424號及第5,006,309號中所述且例如由Abbott Laboratories(Abbott Park,IL)以出售之多種自動及半自動系統(包括固相包含微粒之系統)中。
自動或半自動系統相較於非自動系統(例如ELISA)的一些差異包括連接有第一特異性結合搭配物(例如，抗分析物單株/多株抗體(或其片段、其變異體或其變異體片段)或抗分析物DVD-Ig(或其片段、其變異體或其變異體片段))之基板(任一方式皆可影響夾心形成及分析物反應性)，以及捕捉、偵測及/或任何視情況存在之洗滌步驟的時間長短及時序。儘管非自動形式(諸如ELISA)可能需要樣本與捕捉試劑之相對較長之培育時間(例如約2小時)，但自動或半自動形式(例如ARCHITECT,Abbott Laboratories)會具有相對較短之培育時間(例如對於ARCHITECT，為約18分鐘)。同樣，儘管非自動形式(諸如ELISA)培育偵測抗體(諸如接合物試劑)可能持續相對較長之培育時間(例如約2小時)，但自動或半自動形式(例如ARCHITECT)會具有相對較短之培育時間(例如對於ARCHITECT，為約4分鐘)。
可自Abbott Laboratories獲得之其他平台包括(但不限於)AxSYM、IMx(參見例如美國專利第5,294,404號)、PRISM、EIA(珠粒)及QuantumTM II以及其他平台。另外，檢定、套組及套組組份可以其他形式使用，例如在電化學或其他掌上型或即時(point-of-care)檢定系統上。本揭示案例如適用於執行夾心免疫檢定之市售Abbott即時(Abbott Point of Care，i-STAT,Abbott Laboratories)電化學免疫檢定系統。免疫感應器及其製造及在一次性測試裝置中操作之方法例如描述於美國專利第5,063,081號、美國專利申請公開案第2003/0170881號、美國專利申請公開案第2004/0018577號、美國專利申請公開案第2005/0054078號及美國專利申請公開案第2006/0160164號中。
特定而言，關於分析物檢定對I-STAT系統之適應性，以下組態為較佳的。製造具有一對金電流分析工作電極及銀-氯化銀參考電極的微型裝配之矽晶片。在一個工作電極上，將固定有抗分析物單株/多株抗體(或其片段、其變異體或其變異體片段)或抗分析物DVD-Ig(或其片段、其變異體或其變異體片段)之聚苯乙烯珠粒(0.2 mm直徑)黏附於電極上經圖案化之聚乙烯醇之聚合物塗層上。將此晶片以適用於免疫檢定之射流學形式組裝至I-STAT筒中。在該筒之容納樣本之腔室壁的一部分上，存在包含對分析物具特異性之結合搭配物(諸如抗分析物單株/多株抗體(或其可結合分析物之片段、其變異體或其變異體片段)或抗分析物DVD-Ig(或其可結合分析物之片段、其變異體或其變異體片段)，其皆可經可偵測標記)之層。在該筒之流體囊內為包括對胺基苯酚磷酸酯之水性試劑。
在操作中，將懷疑含有分析物之樣本添加至測試筒之容納腔室中，且將該筒插入I-STAT讀取器中。在對分析物具特異性之結合搭配物溶解於樣本中之後，該筒內之泵元件推動樣本進入容納晶片之管道中。此處，將其振盪以促進形成夾心。在檢定之倒數第二個步驟中，將流體自流體囊推出且進入管道中以將樣本自晶片洗去且進入廢料腔室中。在檢定之最終步驟中，鹼性磷酸酶標記與對胺基苯酚磷酸酯反應以裂解磷酸酯基且允許釋放之對胺基苯酚在工作電極處被電化學氧化。基於所測量之電流，讀取器能夠藉助於嵌入式算法及工廠確定之校正曲線來計算樣本中分析物之量。
更不言而喻的是，如本文所述之方法及套組必然涵蓋其他用於進行免疫檢定之試劑及方法。舉例而言，涵蓋各種緩衝液，諸如此項技術中已知及/或可易於製備或最佳化以例如用於洗滌、用作接合物稀釋劑、微粒稀釋劑及/或用作校正劑稀釋劑之緩衝液。例示性接合物稀釋劑為某些套組(Abbott Laboratories,Abbott Park,IL)中所用且含有2-(N-嗎啉基)乙磺酸(MES)、鹽、蛋白質阻斷劑、抗微生物劑及清潔劑之ARCHITECT接合物稀釋劑。例示性校正劑稀釋劑為某些套組(Abbott Laboratories,Abbott Park,IL)中所用之ARCHITECT人類校正劑稀釋劑，其包含含有MES、其他鹽、蛋白質阻斷劑及抗微生物劑之緩衝液。另外，如美國專利申請案第12/650,241號(亦參見PCT/US2009/069846)中所述，可例如在I-Stat筒形式中，使用連接於信號抗體之核酸序列作為信號放大劑獲得改良之信號產生。
熟習此項技術者應易於瞭解，本文所述之本發明方法的其他適合之修改及調適為明顯的且可使用適合之等效形式來進行，而不背離本發明或本文所揭示之實施例的範疇。
現已詳細描述了本發明，參考下列實例可更清楚地理解本發明，該等實例僅出於說明之目的包括在內而不意欲限制本發明。
實例
實例1：鼠類、嵌合及人類化抗人類IL-17抗體
1.1：建構及表現鼠類單株及重組嵌合抗人類IL-17抗體
利用標準方法獲得針對人類IL-17(hIL-17)之鼠類單株抗體。用重組人類IL-17以皮下方式使Balb/c及A/J小鼠(4-6週大)免疫且增強免疫。每3週對動物進行注射，以於完全弗氏佐劑中之15 μg主要注射以及於不完全弗氏佐劑中之15 μg增強免疫注射為開始。在融合前4天，用含IL-17之生理食鹽水靜脈內注射為了融合而選擇之小鼠。自經免疫之動物移取脾臟且製備單細胞懸浮液。自培養物收集SP2/0骨髓瘤細胞且加以洗滌。以5:1之比率混合脾臟細胞與腫瘤細胞且使用標準技術使用50% PEG 3000進行融合(Kohler及Milstein,Nature,256: 495-497(1975))。將融合細胞以每孔2.5×105個脾臟細胞之密度接種於96孔板中之選擇性培養基中。在37℃下培育融合體7-10天。當觀測到宏觀群落時，移除上清液且藉由ELISA進行測試。對顯示與人類及石蟹獼猴IL-17蛋白結合之細胞進行次選殖且純化出抗體蛋白質。分離出鼠類抗hIL-17單株抗體10F7、5C5、6C6、7D7、1D8、8B12及10G9且測定可變重鏈(VH)及可變輕鏈(VL)之胺基酸序列。參見表5。
藉由在細菌中同源重組來將編碼鼠類抗人類IL-17單株抗體10F7、5C5、6C6、7D7、1D8、8B12及10G9之重鏈恆定區的DNA置換為編碼含有2個鉸鏈區胺基酸突變之人類IgG1恆定區的cDNA片段。此等突變為在位置234(EU編號)處白胺酸變化為丙胺酸，及在位置235處白胺酸變化為丙胺酸(Lund等人,J. Immunol.,147: 2657(1991))。將此等抗體各自之輕鏈恆定區置換為人類κ恆定區。藉由共轉染接合至pHybE表現質體之嵌合重鏈及輕鏈cDNA來使全長嵌合抗體短暫表現於HEK293細胞中。藉由蛋白質A瓊脂糖層析法純化含有重組嵌合抗體之細胞上清液且藉由添加酸緩衝液溶離所結合之抗體。將抗體中和且透析至PBS中。
接著藉由ELISA測試經純化之嵌合抗人類IL-17單株抗體結合hIL-17蛋白之能力以確定抗原結合。參見，以下實例1.5.1。
1.2：建構CDR移植及人類化抗人類IL-17抗體
藉由應用此項技術中熟知之標準方法，將單株抗體10F7及5C5之VH及VL鏈之CDR序列(參見以上表5)移植於不同人類重鏈及輕鏈受體序列中。
基於與本發明之單株抗體10F7之VH及VL序列的序列VH及VL比對，選擇以下已知人類序列：a)用於建構重鏈受體序列之VH1-69(IGHV1-69)及接合序列hJH6；b)用於建構輕鏈受體序列之1-17/A30及6-21/A26以及hJK2及hJK4。
藉由將10F7之相應VH及VL CDR移植至該等受體序列中來製備CDR移植、人類化及經修飾之VH及VL序列。
基於與本發明之單株抗體5C5之VH及VL序列的序列VH及VL比對，選擇以下已知人類序列：c)用於建構重鏈受體序列之VH1-69(IGHV1-69)及接合序列hJH1、hJH3、hJH4、hJH5及hJH6；d)用於建構輕鏈受體序列之1-33/O18及3-15/L2以及hJK2及hJK4。
藉由將5C5之相應VH及VL CDR移植至該等受體序列中來製備CDR移植、人類化及經修飾之VH及VL序列(參見以上表7)。
1.3：在CDR移植抗體中建構構架回復突變
為了產生人類化抗體構架回復突變，藉由重新合成可變域及/或使用突變誘發引子及PCR以及此項技術中熟知之方法將突變引入CDR移植抗體序列中。如下建構各CDR移植物的回復突變及其他突變之不同組合：此等突變之殘基編號係基於Kabat編號系統。
對於重鏈h10F7VH.1z，如下對下列一或多個Vernier及VH/VL界面殘基(interfacing residue)進行回復突變：M48→I、V67→A、I69→L及A93→T。
其他突變包括以下：Q1→E、G27→Y及S30→T。
對於輕鏈h10F7Vk.1z及h10F7Vk.3z，如下對下列一或多個Vernier及VH/VL界面殘基進行回復突變：D1→Q、Q3→V、M4→L、Y36→F、A43→S、L47→W及F71→Y。
其他突變包括以下：E70→D、D1→E。
對於輕鏈h10F7Vk.2及h10F7Vk.4，如下對下列一或多個Vernier及VH/VL界面殘基進行回復突變：E1→Q、Y36→F、L46→R、L47→W、K49→Y及F71→Y。
對於重鏈h5C5VH.1z，如下對下列一或多個Vernier及VH/VL界面殘基進行回復突變：M48→I、V67→A、I69→L、A93→T。
其他突變包括以下：Q1→E、S16→A、G27→Y及S30 → T。
對於輕鏈h5C5Vk.1z及h5C5Vk.2z，如下對下列一或多個Vernier及VH/VL界面殘基進行回復突變：D1→N、Q3→V、Y36→F、A43→S及Y87→F。
其他突變包括以下：S7→T、I83→F。
對於輕鏈h5C5Vk.3z及h5C5Vk.4z，如下對下列一或多個Vernier及VH/VL界面殘基進行回復突變：E1→N、Y36→F、A43→S、I58→V、Y87→F。
其他突變包括以下：S7→T、E70→D及S80→P。
1.4：產生含有CDR移植抗體中之構架回復突變的人類化抗hIL-17抗體
將鼠類單株抗體10F7之下列人類化可變區選殖至IgG表現載體中以用於功能表徵。
基於VH及VL改組之人類化10F7抗體之不同組合列於下表中。
‧ VH.1a含有4個回復突變(M48I、V67A、I69L、A93T)
‧ Vk.1a含有4個回復突變(M4L、Y36F、A43S、L47W)
‧ Vk.1b含有2個額外回復突變(D1Q及Q3V)
‧ Vk.1c將回復突變D1Q變為D1E以避免產生焦麩胺酸鹽
‧ Vk.2a含有4個回復突變(Y36F、L46R、L47W、K49Y)
‧ Vk.2b含有1個額外回復突變(E1Q)
將鼠類單株抗體5C5之下列人類化可變區選殖至IgG表現載體中以用於功能表徵。
‧ VH.1b含有4個回復突變(M48I、V67A、I69L、A93T)
‧ Vk.1a含有3個回復突變(Y36F、A43S、Y87F)
‧ Vk.1c含有2個額外回復突變(D1N、Q3V)
‧ Vk.3a含有4個回復突變(Y36F、A43S、I58V、Y87F)
‧ Vk.3c含有1個額外回復突變(E1N)
1.5：小鼠及人類化IL-17抗體之功能表徵
1.5.1: IL-17酶聯免疫吸附檢定方案(ELISA)
使用下列方案來利用酶聯免疫吸附檢定(ELISA)表徵IL-17抗體與人類IL-17之結合。
1.　用每孔50 μl之2 μg/ml山羊抗小鼠IgG-Fc塗布ELISA板，在4℃下培育隔夜(Jackson，目錄號：115-005-164)。
2.　用3×PBS/Tween洗滌板。
3.　將於PBS/0.1% BSA中稀釋至1 μg/ml之50 μl Mab添加至適當孔中。在室溫(RT)下培育1小時。
4.　用3×PBS/Tween洗滌板。
5.　將50 μl連續稀釋之生物素-IL17(人類IL-17、IL-17A/F、石蟹獼猴IL-17)添加至適當孔中。在室溫(RT)下培育1小時。
6.　用3×PBS/Tween洗滌板。
7.　添加於PBS/0.1% BSA中按1:10,000稀釋之50 μl抗生蛋白鏈菌素(Thermo Scientific，目錄號：21126)。在室溫下培育1小時。
8.　用3×PBS/Tween洗滌板。
9.　添加50 μl TMB(Zymed，目錄號：002023)，使反應進行1分鐘。
10.　用50 μl之2 N H2SO4停止反應。
11.　在450 nm下讀取吸光度。
1.5.2：對於初級人類包皮纖維母細胞HS27中IL-17A及IL-17A/F誘導之IL-6分泌的檢定
人類HS27細胞株(ATCC寄存編號：CRL-1634)回應於IL-17而分泌IL-6。藉由中和抗IL-17抗體來抑制IL-17誘導之IL-6分泌(參見例如J. Immunol.,155: 5483-5486(1995);Cytokine,9: 794-800(1997))。
將HS27細胞維持於如下之檢定培養基中：DMEM高葡萄糖培養基(Gibco，編號：11965)+10%胎牛血清(Gibco，編號：26140)、4 mM L-麩醯胺酸、1 mM丙酮酸鈉、青黴素G(100 U/500 ml)及鏈黴素(100 μg/500 ml)。使細胞生長於T150燒瓶中直至檢定當天其為約80%-90%匯合。將人類IL-17A(R&D Systems，編號：317-IL/CF)或石蟹獼猴(cynomolgous monkey，cyno)IL-17A(在Abbott產生)於無Ca2+及Mg2+之無菌PBS中復原，冷凍儲存，新鮮解凍以供使用且在檢定培養基中稀釋至240 pM(4X)或對於IL-17A/F稀釋至4 nM(4X)。在各別板中製成抗體之連續稀釋液(4X濃度)，與等體積之240 pM(4X)huIL-17或石蟹獼猴IL-17A或4 nM(4X)huIL-17A/F混合且在37℃下培育1小時。將HS27細胞(通常為於50 μl檢定培養基中約20,000個細胞)添加至96孔平底組織培養板(Costar，編號：3599)之各孔中，繼而添加預先培育之抗體加上IL-17之50 μl混合物。人類及石蟹獼猴IL-17A之最終濃度為60 pM。人類IL-17A/F之最終濃度為1 nM。在37℃下培育細胞約24小時。接著收集培養基上清液。藉由使用市售之Meso Scale Discovery套組(目錄號：L411AKB-1)根據製造商之說明書測定上清液中之IL-6量來測量對IL-17之中和度。對抗體相對於IL-6之量的對數的可變斜率進行擬合來獲得IC50值。
1.5.3：對於IL-17及TNF-α誘導IL-6自鼠類胚胎纖維母細胞細胞株(NIH3T3)分泌之檢定
鼠類NIH3T3細胞株(ATCC寄存編號：CRL-1658)回應於鼠類、大鼠或兔IL-17A及鼠類TNFα(R&D Systems，目錄號：410-MT)而分泌IL-6。藉由中和抗IL-17抗體來抑制IL-17誘導之IL-6分泌。
將NIH3T3細胞維持於如下之檢定培養基中：DMEM(Invitrogen，目錄號：11965-092)+10%胎牛血清(Gibco，編號：26140-079)、1%非必需胺基酸、2 mM L-麩醯胺酸、1 mM丙酮酸鈉、青黴素G(100 U/500 ml)及鏈黴素(100 μg/500 ml)。使細胞生長於T150燒瓶中直至檢定當天其為約80%-90%匯合。將大鼠IL17A(Prospec bio，目錄號：CYT-542)在無Ca2+及Mg2+之含有0.1% BSA之無菌PBS中以100 μg/mL復原，加以等分且冷凍儲存。將兔IL17A(Abbott，A-1239293.0)以260 μg/mL復原，加以等分且冷凍儲存。將鼠類TNF-α在無Ca2+及Mg2+之0.1%BSA/PBS中以10 μg/mL之濃度復原，加以等分且冷凍儲存。將新鮮解凍之IL-17抗體在檢定培養基中稀釋至200 μg/ml(4X)。在各別板中製成抗體之連續稀釋液(4X濃度)，與等體積之40 ng/ml(4X)鼠類或大鼠IL-17A 或100 ng/mL兔IL-17A混合，且在37℃下培育1小時。
將NIH3T3細胞(通常為於50 μl檢定培養基中約400,000個細胞)添加至96孔平底組織培養板(Costar，編號：3599)之各孔中，繼而添加預先培育之抗體加上IL-17之50 μl混合物。將11 μl含5.5 ng/mL(10X)鼠類TNF-α之培養基添加至各孔中。鼠類及大鼠IL-17A之最終濃度為10 ng/ml且兔IL-17A之最終濃度為25 ng/mL。鼠類TNFα之最終濃度為0.55 ng/mL。在37℃下培育細胞約24小時。接著收集培養基上清液。藉由使用市售之Meso Scale Discovery套組(目錄號：K112AKA-4)根據製造商之說明書測定上清液中之IL-6量來測量對IL-17之中和度。對抗體相對於IL-6之量的對數的可變斜率進行擬合來獲得IC50值。
1.5.4：藉由表面電漿共振對IL-17抗體進行親和力測量
藉由在25℃下用 3000儀器( AB,Uppsala,Sweden)使用操作HBS-EP(10 mM HEPES[pH 7.4]、150 mM NaCl、3 mM EDTA及0.005%界面活性劑P20)進行基於表面電漿共振之測量來測定抗體與純化之重組人類、石蟹獼猴、大鼠、小鼠、兔IL-17及人類IL-17A/F之結合。所有化學製劑皆獲自 AB(Uppsala,Sweden)或以其他方式獲自如文本中所述之不同來源。根據製造商之說明書及程序使用標準胺偶合套組以2 5μg/ml將稀釋於10 mM乙酸鈉(pH 4.5)中之約5000RU山羊抗小鼠或抗人類IgG(Fcγ)片段特異性多株抗體(Pierce Biotechnology Inc,Rockford，IL)直接固定於CM5研究級生物感測器晶片上。用乙醇胺阻斷生物感測器表面上之未反應部分。將流槽2及4中之經修飾之羧甲基聚葡萄糖表面用作反應表面。將流槽1及3中之未經修飾且無山羊抗小鼠或抗人類IgG之羧甲基聚葡萄糖用作參照表面。對於動力學分析，藉由使用Biaevaluation 4.0.1軟體將源自1:1朗繆結合模型(Langmuir binding model)之速率方程式同時針對所有8次注射之締合及解離相進行擬合(使用整體擬合分析)。將純化之抗體稀釋於HEPES緩衝之生理食鹽水中以捕捉在山羊抗小鼠或抗人類IgG特異性反應表面上。將欲作為配位體捕捉之抗體(25微克/毫升)以5微升/分鐘之流速注射於反應基質上。在25微升/分鐘之連續流速下測定締合及解離速率常數kon(單位為M-1s-1)及koff(單位為s-1)。藉由以10個處於10 nM至200 nM範圍內之不同抗原濃度進行動力學結合測量來獲得速率常數。接著根據下列公式由動力學速率常數計算出抗體與純化之重組IL-17抗原之間的反應之平衡解離常數(單位為M)：KD=koff/kon。記錄隨時間而變之結合且計算動力學速率常數。在此檢定中，可測量到快至106 M-1s-1之結合速率及慢至10-6 s-1之解離速率。
1.5.5：小鼠抗人類IL-17抗體之中和效能
利用HS27細胞中IL-17驅動之IL-6產生來評估抗IL-17抗體針對人類及石蟹獼猴抗原或IL-17之效能(根據上述檢定，實例1.5.2.)。下表總結針對人類IL-17A之效能。
1.5.6：10F7系之人類化IL-17抗體之中和效能
利用HS27細胞中IL-17驅動之IL-6產生來評估人類化10F7抗體針對人類及石蟹獼猴抗原之效能(上述檢定，實例1.5.2)或利用NIH3T3細胞中IL-17及TNF-α驅動之IL-6產生來評估人類化10F7抗體針對大鼠、小鼠及兔抗原之效能(上述檢定，實例1.5.3)。下表總結針對人類、石蟹獼猴及大鼠IL-17A之效能。僅測試活性人類化抗體之效能。
註釋：m10FhIgG1為含有鼠類10F7可變域之嵌合抗體。ND：未測出。
1.5.7：5C5系之人類化IL-17抗體之中和效能
利用HS27細胞中IL-17驅動之IL-6產生來評估人類化5C5抗體針對人類及石蟹獼猴抗原之效能(上述檢定，實例1.5.2)或利用NIH3T3細胞中IL-17及TNF-α驅動之IL-6產生來評估人類化5C5抗體針對大鼠、小鼠及兔抗原之效能(上述檢定，實例1.5.3)。下表總結針對人類、石蟹獼猴及大鼠IL-17A之效能。僅測試活性人類化抗體之效能。
註釋：m5C5.hIgG1為含有鼠類5C5可變域之嵌合抗體。ND：未測出。
1.5.8：藉由表面電漿共振對IL-17抗體進行親和力測量
如上文所述(實例1.5.4)，藉由在25℃下用Biacore 3000儀器(BiacoreAB,Uppsala,Sweden)使用操作HBS-EP(10 mM HEPES[pH 7.4]、150 mM NaCl、3 mM EDTA及0.005%界面活性劑P20)進行基於表面電漿共振之測量來測定抗體與純化之重組人類(人類IL-17A)、石蟹獼猴(石蟹獼猴IL-17A)、大鼠(大鼠IL-17A)、小鼠(小鼠IL-17A)、兔IL-17(兔IL-17A)及人類IL-17A/F(HuIL-17A/F)之結合。下表展示所選小鼠單株及人類化抗人類IL-17A抗體之親和力測量結果。
ND：未測出。
實例2：完全人類抗IL-17抗體
2.1　自IL17-TN-L7-G9及自IL17-K7-B6產生親和力成熟之完全人類IL-17抗體
藉由PRO融合mRNA呈現技術利用結合人類IL-17蛋白質之能力自人類抗體文庫分離出完全人類抗hIL-17單株抗體IL17-TN-L7-G9、IL-17-TN-L7-A7、IL-TN-L7-C8、IL17-TN-K7-B6及IL17-LN-K9-F5。由DNA測序確定可變重鏈(VH)及可變輕鏈(VL)之胺基酸序列。參見表6。
隨後藉由PRO融合mRNA呈現技術對針對人類IL-17之IL17-TN-L7-G9人類抗體進行親和力成熟。建構一個在下列殘基處含有有限突變誘發之輕鏈文庫：CDRL1：26、26、30、31、32、34；CDRL2：50、51、52、53；CDRL3：89、90、94、95a、95b、96(Kabat編號)。此文庫亦含有G3V構架生殖系回復突變以及位置48(I/M)、64(G/V)、66(K/Q)及100(S/T)處之二元多樣性以允許在文庫選擇期間進行構架生殖系化(germ-lining)。製成2個在CDRH1及CDRH2中於殘基30、31、32、50、52、52a、55、56、57、58及60(Kabat編號)處或在CDRH3中於殘基95至100、100a至100g及102處含有有限突變誘發之重鏈文庫。在遞減濃度之經生物素標記之人類IL-17、石蟹獼猴IL-17或人類IL-17A/F存在下針對結合IL-17之能力各別地選擇所有3個文庫且藉由磁性抗生蛋白鏈菌素粒子(Invitrogen)回收。接著將所有突變之CDR序列重組成一個文庫且使該重組之文庫經受更嚴格之選擇條件，然後識別出個別抗體。
下表提供已經受親和力成熟選擇方案分析之完全人類G9抗體之VH及VL胺基酸序列的列表。各VH及VL序列之個別CDR之胺基酸殘基係以粗體指示。
在表20中，VLG9之胺基酸序列(SEQ ID NO:78)含有表6中所示之完全人類IL17-TN-L7-G9之VL(SEQ ID NO:41)的上文所提及之G3V構架生殖系回復突變。
下表提供源自IL17-TN-L7-G9之親和力成熟之完全人類IL-17抗體的VH及VL區胺基酸序列的列表。各VH及VL序列之個別CDR之胺基酸殘基係以粗體指示。
可比對上表中來自IL17-TN-L7-G9之親和力成熟之完全人類IL-17抗體的VH及VL區之個別CDR序列以提供共同CDR序列，諸如下表中之序列。
來自IL17-TN-L7-G9之親和力成熟之完全人類IL-17抗體的VH區之CDR-H1之序列資料亦揭示CDR-H1之第一胺基酸(X1位置)較佳處於選自S、R、N、T、G及P之胺基酸之後。
認為來自親和力成熟之人類IL-17抗體(表22)及來自分離之完全人類IL-17抗體(表6)的經比對CDR會產生較全面之共同CDR序列組。參見上述之發明內容。
將以下轉化為IgG以供進一步表徵。
同樣，亦採用親和力成熟選擇法自IL-17-TN-K7-B6產生親和力成熟之完全人類IL-17抗體。(以上表6中展示完全人類IL-17-TN-K7-B6抗體之VH及VL區胺基酸序列。)建構一個在下列殘基處含有有限突變誘發之輕鏈文庫：CDRL1：28、30、31、32；CDRL2：50、53、55；CDRL3：91、92、93、96、97(Kabat編號)。此文庫亦含有V2I、M4L及L104V構架生殖系回復突變以及位置77(S/G)、84(G/A)及100(P/Q)處之二元多樣性以允許在文庫選擇期間進行構架生殖系化。製成2個在CDRH1及CDRH2中於殘基30、31、33、34、35、52a、53、54、55、56、57及58(Kabat編號)處或在CDRH3中於殘基95至100、100a至100i及102處含有有限突變誘發之重鏈文庫。該等重鏈文庫亦含有P108T構架生殖系回復突變加上殘基16(S/E)、18(V/L)、20(V/I)及73(K/E)處之二元多樣性以允許在文庫選擇期間進行構架生殖系化。利用遞減濃度之人類IL-17、石蟹獼猴IL-17或人類IL-17A/F各別選擇所有3個文庫。接著將所有突變之CDR序列重組成一個文庫且使該重組之文庫經受更嚴格之選擇條件，然後識別出個別抗體。
下表提供源自IL-17-TN-K7-B6之親和力成熟之完全人類IL-17抗體的VH區胺基酸序列的列表。各VH序列之個別CDR之胺基酸殘基係以粗體指示。
下表提供源自IL-17-TN-K7-B6之親和力成熟之完全人類IL-17抗體的VL區胺基酸序列的列表。各VL序列之個別CDR之胺基酸殘基係以粗體指示。
可比對上表中來自IL17-TN-K7-B6之親和力成熟之完全人類IL-17抗體的VH及VL區之個別CDR序列以提供共同CDR序列，諸如下表中之CDR序列。
來自IL17-TN-K7-B6之親和力成熟之完全人類IL-17抗體的VH區之CDR-H1之序列資料亦揭示CDR-H1之第一胺基酸(X1位置)較佳處於選自R、S、I、T、G、L、K、V、P、W及H之胺基酸之後。
認為來自親和力成熟之人類IL-17抗體(表22及26)及來自分離之完全人類IL-17抗體(表6)的經比對CDR會產生較全面之共同CDR序列組。參見上述之發明內容。
將以下轉化為IgG以供進一步表徵。
2.2：人類IL-17抗體之功能表徵
2.2.1：IL-17酶聯免疫吸附檢定方案
藉由ELISA(上述檢定，實例1.5.1)評估人類抗體與IL-17之結合。結果展示於下表中。
2.2.2：人類IL-17抗體之中和效能
利用HS27細胞中IL-17驅動之IL-6產生來評估藉由PRO融合mRNA呈現技術自人類抗體文庫識別出之若干種完全人類抗體之效能(上述檢定，實例1.5.2)。下表總結針對人類IL-17A之效能。應注意此等檢定中人類IL-17A之最終濃度為0.3 nM。
2.2.3：親和力成熟之人類抗體的中和效能
利用HS27細胞中IL-17驅動之IL-6產生來評估源自IL17-TN-L7-G9及IL17-TN-K7-B6之親和力成熟的完全人類抗體針對人類及石蟹獼猴抗原之效能(上述檢定，實例1.5.2)。
對於鼠類、大鼠或兔IL-17A中和檢定，利用鼠類胚胎纖維母細胞細胞株NIH3T3之IL-17及TNF誘導之IL-6分泌(上述檢定，實例1.5.3)。下表總結中和效能。
NI：無抑制。ND：未測出。
2.2.3：藉由表面電漿共振對IL-17抗體進行親和力測量
如上文所述(實例1.5.4)，藉由在25℃下用Biacore 3000儀器(Biacore AB,Uppsala,Sweden)使用操作HBS-EP(10 mM HEPES[pH 7.4]、150 mM NaCl、3 mM EDTA及0.005%界面活性劑P20)進行基於表面電漿共振之測量來測定人類抗IL-17抗體與純化之重組人類(人類IL-17A)、石蟹獼猴(石蟹獼猴IL-17A)、大鼠(大鼠IL-17A)、小鼠(小鼠IL-17A)、兔IL-17(兔IL-17A)及人類IL-17A/F之結合。下表展示所選人類抗人類IL-17A抗體之親和力測量結果。
ND：未測出。
2.2.4：用大鼠對IL-17抗體作藥物動力學分析
用史泊格多利大鼠(Sprague Dawley rat)對人類抗人類IL-17抗體進行藥物動力學研究。向雄性大鼠靜脈內投與單劑量4 mg/kg之抗體蛋白質，且使用基於抗原捕捉之化學發光MSD(Meso Scale Discovery)方法分析血清樣本。藉由非隔室分析法(non-compartmental analysis)使用WinNonlin計算藥物動力學參數。
2.2.4.1：製備大鼠血清
自Charles River實驗室(Wilmington,MA)購得經手術改變(頸靜脈插管，JVC)及正常之雄性史泊格多利大鼠(約7週大，體重為240-390公克)。將動物飼養於維持在恆溫及恆濕下且處於12小時光/暗週期條件下之房間內，用正常齧齒動物食物餵養且允許任意攝取食物及水。每日監測動物的水合狀態及臨床狀態。
在各個時間點採集血液樣本(0.2 mL)，使其在室溫下凝結30分鐘，且以13,200 rpm離心8分鐘。接著，將血清轉移至Eppendorf管中且於-80℃下冷凍儲存。
2.2.4.2：使用MSD檢定定量PK血清樣本中之IL-17抗體
用含有0.05% Tween-20之磷酸鹽緩衝生理食鹽水(自10X PBS(Abbott Bioresearch Center,Media Room,Worcester,MA)及Tween-20(Sigma,St. Louis,MO)稀釋)洗滌MSD抗生蛋白鏈菌素板(Meso Scale Discovery)。用每孔150 μL之阻斷溶液(MSD阻斷劑，Meso Scale Discovery，於PBS中稀釋至3%最終濃度)阻斷板1小時，加蓋，伴隨在室溫下振盪(600 rpm)。
在分析前，將大鼠血清樣本在冰上解凍，輕輕混合，且用Eppendorf離心機在4℃下以14,000 rpm離心3分鐘。在大鼠血清中製備標準曲線及對照樣本。在室溫下將研究樣本、標準曲線樣本、空白樣及品質控制樣本在各別2 mL深孔96孔板(Corning,Corning,NY)中與經生物素標記之人類IL-17(於檢定緩衝液中0.1 μg/mL)及經磺基標記之山羊抗人類IgG(Meso Scale Discovery，於檢定緩衝液中1 μg/mL)以1:1:1(V:V:V)在溶液中培育1小時。接著將樣本轉移至MSD板中，且在室溫下在振盪(600 rpm)下再培育1小時。用2x讀取緩衝液(Meso Scale Discovery)洗滌MSD板且使其顯色。在MSD Sector影像儀6000上在10分鐘內測量化學發光。
使用四參數邏輯斯諦擬合(four-parameter logistic fit)分析標準曲線且藉由XLfit4軟體2.2.1版Build 16(Microsoft Corporation,Redmond,WA)計算樣本濃度。藉由非隔室分析法使用Winonlin軟體5.0.1版(Pharsight Corporation,Mountain View,CA)計算各動物之藥物動力學參數。
所選之人類抗人類IL-17A抗體之藥物動力學概況展示於下表中。
2.3：IL-17抗體之治療功效
2.3.1：IL-17抗體在急性IL-17誘導之KC模型中的中和效能
以急性活體內rhIL17誘導之KC模型評價針對人類IL-17之2種完全人類抗體。向雌性BALB/cJ小鼠經腹膜內(i.p.)預先投與抗體，且18小時後，以500 μL體積向其腹膜內注射3 μg rhIL17。1小時後，處死小鼠，且藉由MesoScale評估KC之含量。確定針對KC抑制百分比之ED50值。如表W中所示，B6-5及B6-17兩者分別以7.5 mg/kg及17.1 mg/kg之ED50充分中和IL-17誘導之KC產生。
實例3：產生TNF/IL-17 DVD-Ig TM 分子
3.1：建構TNF/IL-17 DVD-Ig DNA建構體
藉由重疊PCR擴增用插入連接子DNA序列將抗TNF抗體可變域(D2E7)與多個IL-17抗體可變域組合。將擴增之PCR產物次選殖至適於在HEK293細胞中短暫表現之表現載體中，且在DVD-Ig表現之前，藉由測序確認開放閱讀框架區。
3.2：表現及產生TNF/IL17 DVD-Ig結合蛋白
在藉由測序確認DNA後，使所有DVD-Ig DNA建構體在大腸桿菌中擴增，且使用Qiagen Hispeed Maxi Prep(目錄號：12662，QIAGEN)純化DNA。藉由將PEI與DNA(其中0.2 μg/ml重鏈DNA及0.3 μg/ml輕鏈DNA)以2:1比率混合來將DVD-Ig DNA轉染至對數期293E細胞(每毫升0.5×106個細胞，活力>95%)中。在向293E細胞中添加之前，在室溫下在TC蓋中形成DNA:PEI複合物，歷時15分鐘。24後，將0.5% TN1添加至293E細胞中。第5天，收集上清液以用於人類IgG1力價測量。在第7天收集細胞上清液且經0.2 μM PES過濾器過濾。藉由使用蛋白質A瓊脂糖親和層析法根據製造商之說明書純化上清液。利用0.1 M甘胺酸(pH 2.99)自管柱溶離出純化之DVD-Ig，且立即透析至15 mM組胺酸緩衝液(pH 6.0)中。利用A280定量結合蛋白且藉由質譜及SEC加以分析。
3.3：TNF/IL-17 DVD-Ig建構體之序列
測定能夠結合人類TNF及hIL-17之DVD-Ig蛋白質之重鏈及輕鏈的胺基酸序列。TNF/IL-17 DVD-Ig結合蛋白之可變重鏈、可變輕鏈及恆定區之胺基酸序列展示於下表中。
3.4：DVD-Ig重鏈及輕鏈組合
下表列出用於不同TNF/IL-17 DVD-Ig結合蛋白之表現的重鏈及輕鏈序列。
3.5：TNF/IL-17 DVD-Ig蛋白質之功能表征
3.5.1：IL-17酶聯免疫吸附檢定方案
藉由ELISA(上述檢定，實例1.5.1)評估TNF/IL-17 DVD-Ig結合蛋白與IL-17之結合。結果展示於下表中。
3.5.2：鼠類胚胎纖維母細胞細胞株(NIH3T3)之IL-17及S1P誘導之IL-6分泌
鼠類NIH3T3細胞株(ATCC寄存編號：CRL-1658)回應於鼠類、大鼠或兔IL-17及S1P(Cayman Chemical，目錄號：62570)而分泌IL-6。藉由中和抗IL-17抗體來抑制IL-17誘導之IL-6分泌。
將NIH3T3細胞維持於如下之檢定培養基中：DMEM(Invitrogen，目錄號：11965-092)+10%胎牛血清(Gibco，編號：26140-079)、1%非必需胺基酸、2 mM L-麩醯胺酸、1 mM丙酮酸鈉、青黴素G(100 U/500 ml)及鏈黴素(100 μg/500 ml)。使細胞生長於T150燒瓶中直至檢定當天其為約80%-90%匯合。
將鼠類IL17A HIS(Abbott,A-1229793.0)在無Ca2+及Mg2+之0.1% BSA/PBS中稀釋至40 μg/mL，加以等分且冷凍儲存。將大鼠IL17A(Prospec bio，目錄號：CYT-542)在無Ca2+及Mg2+且含有0.1% BSA之無菌PBS中以100 μg/mL復原，加以等分且冷凍儲存。將兔IL17A(Abbott,A-1239293.0)以260 μg/mL復原，加以等分且冷凍儲存。將S1p在0.3 M NaOH中以10.54 mM復原，加以等分且冷凍儲存。將新鮮解凍之IL-17抗體在檢定培養基中稀釋至200 μg/ml(4X)。在各別板中製成抗體之連續稀釋液(4X濃度)，與等體積之40 ng/ml(4X)鼠類或大鼠IL-17A或100 ng/mL兔IL17A混合，且在37℃下培育1小時。
將NIH3T3細胞(通常為於50 μl檢定培養基中約400,000個細胞)添加至96孔平底組織培養板(Costar，編號：3599)之各孔中，繼而添加預先培育之抗體加上IL-17之50 μl混合物。將11 μl含100 μM(10×)S1P之培養基添加至各孔中。鼠類及大鼠IL-17A之最終濃度為10 ng/ml且兔IL-17A之最終濃度為25 ng/mL。S1P之最終濃度為10 μM。在37℃下培育細胞約24小時。接著收集培養基上清液。藉由使用市售之Meso Scale Discovery套組(目錄號：K112AKA-4)根據製造商之說明書測定上清液中之IL-6量來測量對IL-17之中和度。對抗體相對於IL-6之量的對數的可變斜率進行擬合來獲得IC50值。
3.5.3：TNF/IL-17 DVD-Ig分子對IL-17之中和效能
產生在連接外部D2E7可變域至內部B6-17可變域之連接子方面存在迭代變化(短連接子相對於長連接子及不同序列)之多個DVD-Ig分子以用於功能表征(B6-5.2、B6-5.8、B6-11.3、B6-11.5、B6-11.8等)。利用HS27細胞中IL-17或IL-17A/F驅動之人類IL-6產生來評估DVD-Ig分子針對人類及石蟹獼猴抗原之效能(上述檢定，實例1.5.2)，或利用NIH3T3細胞中IL-17加上S1P驅動之小鼠IL-6產生來評估DVD-Ig分子針對大鼠、小鼠及兔抗原之效能(上述檢定，實例3.5.2)。下表總結針對人類IL-17A及IL-17A/F及石蟹獼猴、大鼠、小鼠及兔IL-17A之效能。
NI：無抑制。ND：未測出。
3.5.4：TNF/IL-17 DVD-Ig分子對TNF之中和效能
3.5.4.1：測量TNF中和效能之L929生物檢定
人類TNF(批號：1277249，1.85 mg/mL)係在Abbott生物研究中心(Abbott Bioresearch Center，Worcester,Massachusetts,US)製備且自Biologics Pharmacy獲得。小鼠TNF(批號：1420095，1.0 mg/mL)係在Abbott生物研究中心製備且自Biologics Pharmacy獲得。大鼠TNF(批號：1436667，3.0 mg/mL)係在Abbott生物研究中心製備且自Biologics Pharmacy獲得。自R＆D Systems購得兔TNF(目錄號：5670-TG-025)。自R＆D Systems購得恆河猴/獼猴TNF(rhTNF)(目錄號：1070-RM-025)。自Sigma Aldrich購得放線菌素D(目錄號：A1410)且以10 mg/mL之儲備濃度再懸浮於DMSO中。
檢定培養基：10% FBS(Hyclone，編號：SH30070.03)，Gibco試劑：RPMI 1640(編號21870)、2 mM L-麩醯胺酸(編號：25030)、50 U/mL青黴素/50 μg/mL鏈黴素(編號：15140)、0.1 mM MEM非必需胺基酸(編號：11140)及5.5×10-5 M 2-巰基乙醇(編號：21985-023)。
使L929細胞長至半匯合密度且使用0.05%胰蛋白酶(Gibco，編號：25300)收集。用PBS洗滌細胞，計數且以每毫升1E6個細胞再懸浮於含有4 μg/mL放線菌素D之檢定培養基中。將細胞以50 μL之體積及每孔5E4個細胞接種於96孔板(Costar，編號：3599)中。向各孔添加50 μL檢定培養基，使體積達到100 μL。
如下製備測試樣本。將DVD-IgTM及對照IgG在檢定培養基中稀釋至4×濃度且進行連續1:3稀釋。將TNF物質在檢定培養基中稀釋至下列濃度：400 pg/mL人類TNF、200 pg/mL鼠類TNF、600 pg/mL大鼠TNF及100 pg/mL兔TNF。將抗體樣本(200 μL)按1:2稀釋方案添加至TNF(200 μL)中且在室溫下培育0.5小時。
為在此檢定中測量DVD-Ig對人類TNF之中和效能，將100μL DVD-Ig/TNF溶液添加至所接種之細胞中，DVD-Ig之最終濃度為375 nM-0.019 nM DVD-Ig。TNF之最終濃度如下：100 pg/mL人類TNF、50 pg/mL鼠類TNF、150 pg/mL大鼠TNF及25 pg/mL兔TNF。在37℃、5% CO2下培育各板20小時。為定量活力，自各孔移除100 μL且添加10 μL WST-1試劑(Roche，目錄號：11644807001)。在檢定條件下培育各板3.5小時，以500×g離心，且將75 μL上清液轉移至ELISA板(Costar，目錄號：3369)中。在Spectromax190 ELISA板讀取器上於OD 420 nm-600 nm下讀取各板。所選TNF/IL-17 DVD-Ig結合蛋白之中和效能展示於下表中。
3.5.5：親和力測量
使用如上文所述之表面電漿共振(實例1.5.4)測定TNF/IL-17 DVD-Ig與純化之重組人類、石蟹獼猴、大鼠、小鼠、兔IL-17及人類IL-17A/F以及與人類及石蟹獼猴/恆河猴TNF之結合。
ND：未測出。
3.5.6：用大鼠對TNF/IL-17 DVD-Ig作藥物動力學分析
基本上如上文所述(實例2.2.4)，用史泊格多利大鼠對TNF/IL-17 DVD-Ig進行藥物動力學研究。向雄性大鼠靜脈內或皮下投與單劑量4 mg/kg之TNF/IL-17 DVD-Ig，且使用基於抗原捕捉之化學發光MSD(Meso Scale Discovery)方法分析血清樣本。
藉由非隔室分析法使用WinNonlin計算藥物動力學參數。MSD檢定形式基本上相同，例外為使用經生物素標記之人類TNF代替經生物素標記之人類IL-17以用於樣本培育。
TNF/IL-17 DVD-Ig之藥物動力學概況展示於下表中。
3.6：TNF/IL-17 DVD-Ig及組合之TNF及IL-17抗體的治療功效
3.6.1：TNF/IL-17DVD-Ig在急性IL-17誘導之KC模型中的中和效能
使用重組人類IL-17誘導鼠類趨化因子KC之小鼠模型證明TNF/IL-17DVD-Ig結合蛋白活體內中和細胞激素之能力。向雌性BALB/cJ小鼠經腹膜內(i.p.)預先投與抗體，且18小時後，以500 μL體積向其腹膜內注射3 μg rhIL-17。1小時後，處死小鼠，且藉由MesoScale評估KC之含量。確定針對KC抑制百分比之ED50值且展示於下表中。
3.6.2：TNF/IL-17DVD-Ig在rhTNF/D-半乳胺糖誘發之致死小鼠模型中之中和效能
亦以rhTNF/D-半乳胺糖誘發之致死模型評價TNF/IL17DVD-Ig分子之TNF臂。向雌性C57BL6/N小鼠預先投與(i.p.)結合蛋白，且18小時後，用500 μL 0.9%氯化鈉中之0.1 μg rhTNF及20 mgD-半乳胺糖攻毒(i.p.)，且經48小時監測存活率。計算針對存活率百分比之ED50值。如下表中所示，在此等模型中測試3種不同抗IL-17/TNF DVD-Ig建構體且所有三種建構體充分中和人類IL-17及人類TNF誘導之生物活性。
實例4：IL-17抗體在小鼠膠原蛋白誘發之關節炎模型中的治療功效
用此項技術中熟知之膠原蛋白誘發之關節炎小鼠模型評價抗IL-17之治療效果。簡言之，用CFA中之II型牛膠原蛋白在尾巴底部使雄性DBA-1小鼠免疫。在第21天，用酵母聚糖經腹膜內(i.p)對小鼠增強免疫。在第24-27天疾病發作後，選擇小鼠且分成各有10隻小鼠之各別組。在治療開始時，對照組及抗細胞激素組之平均關節炎得分為可比的。每隔一天用抗IL-17單株抗體MAB421(12 mg/kg，R＆D Systems,Inc.,Minneapolis,MN,US)注射(i.p.)小鼠。一週3次針對周邊關節之關節炎外觀仔細檢查小鼠，且判定疾病活動度之得分。藉由司徒頓t-測試(Student's t-test)測定統計學差異且將小於0.05之p值視作顯著的。
如下表中所示，用任一抗IL-17抗體治療小鼠會使平均關節炎得分(MAS)降低43%。
實例5：IL-17抗體在小鼠實驗性自體免疫腦脊髓炎(EAE) 模型中之治療功效
使用下列方案使SJL/J小鼠免疫以誘發活動性實驗性自體免疫腦脊髓炎(EAE)(一種人類多發性硬化(MS)模型)：將2mg/ml PLP139-151於PBS中之儲備溶液與含4 mg/ml結核分枝桿菌(M. tuberculosis)H37Ra(經熱滅活且經乾燥)之不完全弗氏佐劑以1:1比率組合，得到1 mg/ml PLP139-151乳液。遍布背側面3個部位處用0.1 ml乳液使小鼠免疫(s.c.)。在免疫時，小鼠亦接受60ng百日咳毒素(i.p.)。在免疫後第7天、第14天及第21天，向小鼠投與(s.c.)小鼠IgG或抗小鼠IL-17抗體(MAB421，R&D Systems)。使用下列評分系統密切觀察動物之疾病臨床症狀：0-正常；1-尾部緊張性喪失(軟垂)；2-翻正反射受損，不規則步態；3-部分後肢局部麻痺；4-完全後肢麻痺；5-瀕死/死亡。第28天使動物安樂死。此實驗之資料總結於下表中。抗IL-17抗體在所測試之1.5 mg/kg劑量下顯著抑制臨床病程。平均最大得分及平均累積得分亦受此治療影響。抗IL-17 mAb治療亦顯著抑制疾病復發的頻率。此等資料一致表明IL-17在CNS之組織特異性自體免疫反應中起重要作用。
實例6：組合之TNF及IL-17抗體在小鼠膠原蛋白誘發之關節炎模型中的治療功效
用此項技術中熟知之膠原蛋白誘發之關節炎小鼠模型評價抗IL-17、抗TNF及組合之抗IL-17/抗TNF之治療效果。簡言之，用CFA中之II型牛膠原蛋白在尾巴底部使雄性DBA-1小鼠免疫。在第21天，用酵母聚糖經腹膜內(i.p)對小鼠增強免疫。在(第24-27天)疾病發作後，選擇小鼠且分成各有12隻小鼠之各別組。在治療開始時，對照組及抗細胞激素組之平均關節炎得分為可比的。一週兩次向小鼠腹膜內注射抗IL-17單株抗體MAB421(12 mg/kg)、抗TNF抗體8C11(12 mg/kg)或抗IL-17/抗TNF單株抗體(各12 mg/kg)之組合。針對周邊關節之關節炎外觀，第一週每日監測小鼠，而隨後一週三次監測小鼠，且判定疾病活動度之得分。藉由非參數曼-惠特尼測試(non-parametric Mann-Whitney test)測定統計學差異且將小於0.05之p值視作顯著的。
如下表中所示，單獨以抗IL-17或抗TNF抗體治療小鼠分別使平均關節炎得分(MAS)降低43%及36%。以抗IL-17及抗TNF單株抗體兩者治療小鼠使MAS得分進一步降低至60%(p<0.05)，表明功效優於單獨的任一單株抗體之治療功效。
以引用方式併入
本發明以全文引用之方式合併分子生物學、藥物傳遞、免疫學、分子生物學及細胞生物學之領域中熟知之技術。此等技術包括(但不限於)以下出版物中所述之技術：Ausubel等人(編)，Current Protocols in Molecular Biology,John Wiley & Sons,NY(1993)；Ausubel,F. M.等人編，Short Protocols In Molecular Biology(第4版，1999) John Wiley & Sons,NY.(ISBN 0-471-32938-X)；Controlled Drug Bioavailability Drug Product Design and Performance,Smolen及Ball(編)，Wiley,New York(1984)；Giege,R.及Ducruix,A. Barrett,Crystallization of Nucleic Acids and Proteins,a Practical Approach，第2版，第201-16頁，Oxford University Press,New York,N.Y.,(1999)；Goodson,Medical Applications of Controlled Release，第2卷，第115-138頁(1984)；Hammerling等人，Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas 563-681,Elsevier,N.Y.,1981；Harlow等人，Antibodies: A Laboratory Manual,(Cold Spring Harbor Laboratory Press，第2版，1988)；Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest,National Institutes of Health,Bethesda,Md. (1987) and(1991)；Kabat,E. A.等人,(1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest,第5版,U.S. Department of Health and Human Services,NIH出版號：91-3242；Kontermann及Dubel編,Antibody Engineering(2001) Springer-Verlag. New York.第790頁(ISBN 3-540-41354-5)；Kriegler,Gene Transfer and Expression,A Laboratory Manual,Stockton Press,NY(1990)；Lu及Weiner編,Cloning and Expression Vectors for Gene Function Analysis(2001) BioTechniques Press. Westborough,Mass.第298頁(ISBN 1-881299-21-X)；Medical Applications of Controlled Release,Langer及Wise(編),CRC Pres.,Boca Raton,Fla.(1974)；Old,R. W. ＆ S. B. Primrose,Principles of Gene Manipulation: An Introduction To Genetic Engineering(第3版,1985)Blackwell Scientific Publications,Boston. Studies in Microbiology;V.2：第409頁(ISBN 0-632-01318-4)；Sambrook,J.等人編,Molecular Cloning: A Laboratory Manual(第2版,1989) Cold Spring Harbor Laboratory Press,NY.第1-3卷(ISBN 0-87969-309-6)；Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems,J. R. Robinson編,Marcel Dekker,Inc.,New York,1978；Winnacker,E. L. From Genes To Clones: Introduction To Gene Technology(1987) VCH Publishers,N.Y.(由Horst Ibelgaufts翻譯).第634頁(ISBN 0-89573-614-4)。
此外，為了達成任何目的，可能貫穿本申請案引用之所有引用之參考資料(包括參考文獻、專利、專利申請案及網站)的內容據此以全文引用之方式明確地併入本文中，如同其中引用之參考資料一樣。
等效形式
在不背離本發明之精神或基本特徵的情況下可以其他特定形式實施本發明。因此，就各方面而言上述實施例應視作說明性的而非限制本文所述之本發明。因此，本發明之範疇係由隨附申請專利範圍而非由上述描述所指示，且因此屬於申請專利範圍之等效性含義及範圍內的所有變化均意欲包涵於本文中。
<110> 美商亞培公司
<120> IL-17結合蛋白
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<213> 人工序列
<220>
<223> 人類化抗體VL
<400> 62
<210> 63
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人類化抗體VL
<400> 63
<210> 64
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人類化抗體VL
<400> 64
<210> 65
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人類化抗體VL
<400> 65
<210> 66
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人類化抗體VL
<400> 66
<210> 67
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人類化抗體VL
<400> 67
<210> 68
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人類化抗體VL
<400> 68
<210> 69
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人類化抗體VH
<400> 69
<210> 70
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人類化抗體VH
<400> 70
<210> 71
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人類化抗體VL
<400> 71
<210> 72
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人類化抗體VL
<400> 72
<210> 73
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人類化抗體VL
<400> 73
<210> 74
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人類化抗體VL
<400> 74
<210> 75
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人類化抗體VL
<400> 75
<210> 76
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人類化抗體VL
<400> 76
<210> 77
<211> 124
<212> PRT
<213> 智慧人
<400> 77
<210> 78
<211> 111
<212> PRT
<213> 智慧人
<400> 78
<210> 79
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(與親本抗體 VH相同)
<400> 79
<210> 80
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#1)
<400> 80
<210> 81
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#2)
<400> 81
<210> 82
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#2)
<400> 82
<210> 83
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#3)
<400> 83
<210> 84
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#3)
<400> 84
<210> 85
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#4)
<400> 85
<210> 86
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#4)
<400> 86
<210> 87
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#5)
<400> 87
<210> 88
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#5)
<400> 88
<210> 89
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#6)
<400> 89
<210> 90
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#6)
<400> 90
<210> 91
<400> 91 000
<210> 92
<400> 92 000
<210> 93
<400> 93 000
<210> 94
<400> 94 000
<210> 95
<400> 95 000
<210> 96
<400> 96 000
<210> 97
<400> 97 000
<210> 98
<400> 98 000
<210> 99
<400> 99 000
<210> 100
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#7)
<400> 100
<210> 101
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#7)
<400> 101
<210> 102
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#8)
<400> 102
<210> 103
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#8)
<400> 103
<210> 104
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#9)
<400> 104
<210> 105
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#9)
<400> 105
<210> 106
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#10)
<400> 106
<210> 107
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#10)
<400> 107
<210> 108
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#11)
<400> 108
<210> 109
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#11)
<400> 109
<210> 110
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#12)
<400> 110
<210> 111
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#12)
<400> 111
<210> 112
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#13)
<400> 112
<210> 113
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#13)
<400> 113
<210> 114
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#14)
<400> 114
<210> 115
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#14)
<400> 115
<210> 116
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#15)
<400> 116
<210> 117
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#15)
<400> 117
<210> 118
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#16)
<400> 118
<210> 119
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#16)
<400> 119
<210> 120
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#17)
<400> 120
<210> 121
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#17)
<400> 121
<210> 122
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#18)
<400> 122
<210> 123
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#18)
<400> 123
<210> 124
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#19)
<400> 124
<210> 125
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#19)
<400> 125
<210> 126
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#20)
<400> 126
<210> 127
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#20)
<400> 127
<210> 128
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#21)
<400> 128
<210> 129
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#21)
<400> 129
<210> 130
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#22)
<400> 130
<210> 131
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#22)
<400> 131
<210> 132
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#23)
<400> 132
<210> 133
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#23)
<400> 133
<210> 134
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#24)
<400> 134
<210> 135
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#24)
<400> 135
<210> 136
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#25)
<400> 136
<210> 137
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#25)
<400> 137
<210> 138
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#26)
<400> 138
<210> 139
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#26)
<400> 139
<210> 140
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#27)
<400> 140
<210> 141
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#27)
<400> 141
<210> 142
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#28)
<400> 142
<210> 143
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#28)
<400> 143
<210> 144
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#29)
<400> 144
<210> 145
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#29)
<400> 145
<210> 146
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#30)
<400> 146
<210> 147
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#30)
<400> 147
<210> 148
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#31)
<400> 148
<210> 149
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#31)
<400> 149
<210> 150
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#32)
<400> 150
<210> 151
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#32)
<400> 151
<210> 152
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#33)
<400> 152
<210> 153
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#33)
<400> 153
<210> 154
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#34)
<400> 154
<210> 155
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#34)
<400> 155
<210> 156
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#35)
<400> 156
<210> 157
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#35)
<400> 157
<210> 158
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#36)
<400> 158
<210> 159
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#36)
<400> 159
<210> 160
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#37)
<400> 160
<210> 161
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#37)
<400> 161
<210> 162
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#38)
<400> 162
<210> 163
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#38)
<400> 163
<210> 164
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#39)
<400> 164
<210> 165
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#39)
<400> 165
<210> 166
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#40)
<400> 166
<210> 167
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#40)
<400> 167
<210> 168
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#41)
<400> 168
<210> 169
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#41)
<400> 169
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<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#42)
<400> 170
<210> 171
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#42)
<400> 171
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<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#43)
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<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#43)
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<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#44)
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<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#44)
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#45)
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#45)
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<213> 人工序列
<220>
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#46)
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#47)
<400> 181
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<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#48)
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<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#49)
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#49)
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<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#50)
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<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#50)
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<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#51)
<400> 188
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<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#51)
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#52)
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<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#52)
<400> 191
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<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#53)
<400> 192
<210> 193
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#53)
<400> 193
<210> 194
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#54)
<400> 194
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<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#54)
<400> 195
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<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#55)
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#56)
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<212> PRT
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<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#57)
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#57)
<400> 201
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#58)
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#58)
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#59)
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#59)
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#60)
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<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#60)
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<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#61)
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<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#61)
<400> 209
<210> 210
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#62)
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#62)
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<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#63)
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<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#64)
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<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#64)
<400> 215
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<211> 124
<212> PRT
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<220>
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#65)
<400> 217
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<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#66)
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#66)
<400> 219
<210> 220
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#67)
<400> 220
<210> 221
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#67)
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<210> 222
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#68)
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<211> 124
<212> PRT
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<220>
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#69)
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<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#70)
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#70)
<400> 227
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<211> 124
4212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#71)
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<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#71)
<400> 229
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<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#72)
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<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#72)
<400> 231
<210> 232
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#73)
<400> 232
<210> 233
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#73)
<400> 233
<210> 234
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#74)
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<210> 235
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
4223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#74)
<400> 235
<210> 236
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#75)
<400> 236
<210> 237
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#75)
<400> 237
<210> 238
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#76)
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<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#76)
<400> 239
<210> 240
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#77)
<400> 240
<210> 241
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#77)
<400> 241
<210> 242
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#78)
<400> 242
<210> 243
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#78)
<400> 243
<210> 244
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#79)
<400> 244
<210> 245
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#79)
<400> 245
<210> 246
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#80)
<400> 246
<210> 247
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#80)
<400> 247
<210> 248
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#81)
<400> 248
<210> 249
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#81)
<400> 249
<210> 250
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#82)
<400> 250
<210> 251
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#82)
<400> 251
<210> 252
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#83)
<400> 252
<210> 253
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#83)
<400> 253
<210> 254
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#84)
<400> 254
<210> 255
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#84)
<400> 255
<210> 256
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#85)
<400> 256
<210> 257
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#85)
<400> 257
<210> 258
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#86)
<400> 258
<210> 259
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#86)
<400> 259
<210> 260
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#87)
<400> 260
<210> 261
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#87)
<400> 261
<210> 262
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#88)
<400> 262
<210> 263
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#88)
<400> 263
<210> 264
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#89)
<400> 264
<210> 265
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#89)
<400> 265
<210> 266
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#90)
<400> 266
<210> 267
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#90)
<400> 267
<210> 268
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#91)
<400> 268
<210> 269
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#91)
<400> 269
<210> 270
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#92)
<400> 270
<210> 271
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#92)
<400> 271
<210> 272
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#93)
<400> 272
<210> 273
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#93)
<400> 273
<210> 274
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#94)
<400> 274
<210> 275
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#94)
<400> 275
<210> 276
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#95)
<400> 276
<210> 277
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#95)
<400> 277
<210> 278
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#96)
<400> 278
<210> 279
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#96)
<400> 279
<210> 280
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#97)
<400> 280
<210> 281
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#97)
<400> 281
<210> 282
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#98)
<400> 282
<210> 283
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#98)
<400> 283
<210> 284
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#99)
<400> 284
<210> 285
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#99)
<400> 285
<210> 286
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#100)
<400> 286
<210> 287
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#100)
<400> 287
<210> 288
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#101)
<400> 288
<210> 289
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#101)
<400> 289
<210> 290
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#102)
<400> 290
<210> 291
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#102)
<400> 291
<210> 292
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#103)
<400> 292
<210> 293
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#103)
<400> 293
<210> 294
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#104)
<400> 294
<210> 295
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#104)
<400> 295
<210> 296
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#105)
<400> 296
<210> 297
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#105)
<400> 297
<210> 298
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#106)
<400> 298
<210> 299
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#106)
<400> 299
<210> 300
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#107)
<400> 300
<210> 301
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#107)
<400> 301
<210> 302
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#108)
<400> 302
<210> 303
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#108)
<400> 303
<210> 304
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#109)
<400> 304
<210> 305
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#109)
<400> 305
<210> 306
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#110)
<400> 306
<210> 307
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#110)
<400> 307
<210> 308
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#111)
<400> 308
<210> 309
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#111)
<400> 309
<210> 310
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#112)
<400> 310
<210> 311
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#112)
<400> 311
<210> 312
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#113)
<400> 312
<210> 313
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#113)
<400> 313
<210> 314
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#114)
<400> 314
<210> 315
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#114)
<400> 315
<210> 316
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#115)
<400> 316
<210> 317
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#115)
<400> 317
<210> 318
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#116)
<400> 318
<210> 319
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#116)
<400> 319
<210> 320
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#117)
<400> 320
<210> 321
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#117)
<400> 321
<210> 322
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#118)
<400> 322
<210> 323
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#118)
<400> 323
<210> 324
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#119)
<400> 324
<210> 325
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#119)
<400> 325
<210> 326
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#120)
<400> 326
<210> 327
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#120)
<400> 327
<210> 328
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#121)
<400> 328
<210> 329
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#121)
<400> 329
<210> 330
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#122)
<400> 330
<210> 331
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#122)
<400> 331
<210> 332
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#123)
<400> 332
<210> 333
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#123)
<400> 333
<210> 334
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#124)
<400> 334
<210> 335
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#124)
<400> 335
<210> 336
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VH(#125)
<400> 336
<210> 337
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟之人類IL-17抗體G9之VL(#125)
<400> 337
<210> 338
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR-H1一致序列
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (1)..(1)
<223> N,D,Y或H
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (2)..(2)
<223> Y,N,H,Q,或F
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (3)..(3)
<400> 338
<210> 339
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR-H2一致序列
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (3)..(3)
<223> A,G,或S
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (4)..(4)
<223> Y,N,S,H,R,F,C,M,K,或A
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (7)..(7)
<223> S,R,T,G,W,H,C,Y,或A
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (8)..(8)
<223> N,R,K,S,H,G,或Y
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (9)..(9)
<223> K,Q,T,R,N,A,G,S,或E
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (12)..(12)
<223> A,S,V,G,T,E,P,R,Q,或L
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (15)..(15)
<223> V或L
<400> 339
<210> 340
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR-H3一致序列
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (1)..(1)
<223> V或L
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (2)..(2)
<223> G或S
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (3)..(3)
<223> A,L,或G
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (4)..(4)
<223> S,Y,L,F,W,N,或K
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (6)..(6)
<223> D,P,N,E,或A
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (10)..(10)
<223> S或T
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (11)..(11)
<223> Y,P,或F
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (13)..(13)
<223> L或F
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (15)..(15)
<223> V,L,Y,G,F,A,S,或E
<400> 340
<210> 341
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR-L1一致序列
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (3)..(3)
<223> R,S,T,N,H,I,Y,K,G,或A
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (4)..(4)
<223> N,Q,K,H,R,Y,T,I,P,S,M,或D
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (9)..(9)
<223> R,S,N,Y,T,C,V,M,H,或G
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (10)..(10)
<223> H或R
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (11)..(11)
<223> Y,S,P,A,F,T,H,E,D,或C
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (13)..(13)
<223> D,H,N,T,或Y
<400> 341
<210> 342
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR-L2一致序列
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (1)..(1)
<223> Y,G,D,W,F,S,E,或A
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (2)..(2)
<223> D,I,F,T,S,N,G,Y,V,M,或L
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (3)..(3)
<223> G,S,D,V,W,C,或F
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (4)..(4)
<223> Q,I,Y,E,L,H,W,M,V,T,S,N,F,或D
<400> 342
<210> 343
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR-L3一致序列
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (1)..(1)
<223> A或G
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (2)..(2)
<223> T,S,M,L,或I
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (6)..(6)
<223> S,W,R,M,L,K,H,G,或F
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (8)..(8)
<223> G,A,或V
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (9)..(9)
<223> G,A,E,D,V,或S
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (11)..(11)
<223> V或D
<400> 343
<210> 344
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IL-17抗體G9-1之VH
<400> 344
<210> 345
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IL-17抗體G9-1之VL
<400> 345
<210> 346
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IL-17抗體G9-3之VH
<400> 346
<210> 347
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IL-17抗體G9-3之VL
<400> 347
<210> 348
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IL-17抗體G9-4之VL
<400> 348
<210> 349
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IL-17抗體G9-M3之VH
<400> 349
<210> 350
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IL-17抗體G9-M2之VL
<400> 350
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<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IL-17抗體G9-2之VH
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IL-17抗體G9-2之VL
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IL-17抗體G9-6之VL
<400> 356
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IL-17抗體G9-M1之VH
<400> 357
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IL-17抗體G9-M1之VL
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟全人類IL-17抗體IL-17-TN-K7-B6之VH
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<213> 人工序列
<220>
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<212> PRT
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<220>
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<212> PRT
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<220>
<223> 親和力成熟全人類IL-17抗體IL-17-TN-K7-B6之VH
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<220>
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<220>
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<220>
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<220>
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<220>
<223> 親和力成熟全人類IL-17抗體IL-17-TN-K7-B6之VH
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟全人類IL-17抗體IL-17-TN-K7-B6之VH
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟全人類IL-17抗體IL-17-TN-K7-B6之VH
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<213> 人工序列
<220>
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<220>
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<213> 人工序列
<220>
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<213> 人工序列
<220>
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟全人類IL-17抗體IL-17-TN-K7-B6之VH
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟全人類IL-17抗體IL-17-TN-K7-B6之VH
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<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟全人類IL-17抗體IL-17-TN-K7-B6之VH
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<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟全人類IL-17抗體IL-17-TN-K7-B6之VH
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟全人類IL-17抗體IL-17-TN-K7-B6之VH
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟全人類IL-17抗體IL-17-TN-K7-B6之VH
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<210> 382
<211> 126
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟全人類IL-17抗體IL-17-TN-K7-B6之VH
<400> 382
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟全人類IL-17抗體IL-17-TN-K7-B6之VH
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟全人類IL-17抗體IL-17-TN-K7-B6之VH
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟全人類IL-17抗體IL-17-TN-K7-B6之VH
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟全人類IL-17抗體IL-17-TN-K7-B6之VH
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<213> 人工序列
<220>
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<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟全人類IL-17抗體IL-17-TN-K7-B6之VH
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<220>
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟全人類IL-17抗體IL-17-TN-K7-B6之VH
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<213> 人工序列
<220>
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<213> 人工序列
<220>
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<220>
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<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟全人類IL-17抗體IL-17-TN-K7-B6之VH
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<213> 人工序列
<220>
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟全人類IL-17抗體IL-17-TN-K7-B6之VH
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<213> 人工序列
<220>
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<220>
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<212> PRT
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<220>
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<213> 人工序列
<220>
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<220>
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<213> 人工序列
<220>
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<220>
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<213> 人工序列
<220>
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<220>
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<220>
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<220>
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<220>
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<213> 人工序列
<220>
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<213> 人工序列
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟全人類IL-17抗體IL-17-TN-K7-B6之VH
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟全人類IL-17抗體IL-17-TN-K7-B6之VH
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟全人類IL-17抗體IL-17-TN-K7-B6之VH
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<211> 126
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟全人類IL-17抗體IL-17-TN-K7-B6之VH
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟全人類IL-17抗體IL-17-TN-K7-B6之VH
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟全人類IL-17抗體IL-17-TN-K7-B6之VH
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<212> PRT
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<220>
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟全人類IL-17抗體IL-17-TN-K7-B6之VH
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟全人類IL-17抗體IL-17-TN-K7-B6之VH
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<211> 126
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟全人類IL-17抗體IL-17-TN-K7-B6之VH
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<210> 433
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<400> 522
<210> 523
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟全人類IL-17抗體IL-17-TN-K7-B6之VL
<400> 523
<210> 524
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟全人類IL-17抗體IL-17-TN-K7-B6之VL
<400> 524
<210> 525
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟全人類IL-17抗體IL-17-TN-K7-B6之VL
<400> 525
<210> 526
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟全人類IL-17抗體IL-17-TN-K7-B6之VL
<400> 526
<210> 527
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟全人類IL-17抗體IL-17-TN-K7-B6之VL
<400> 527
<210> 528
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟全人類IL-17抗體IL-17-TN-K7-B6之VL
<400> 528
<210> 529
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟全人類IL-17抗體IL-17-TN-K7-B6之VL
<400> 529
<210> 530
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟全人類IL-17抗體IL-17-TN-K7-B6之VL
<400> 530
<210> 531
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟全人類IL-17抗體IL-17-TN-K7-B6之VL
<400> 531
<210> 532
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟全人類IL-17抗體IL-17-TN-K7-B6之VL
<400> 532
<210> 533
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟全人類IL-17抗體IL-17-TN-K7-B6之VL
<400> 533
<210> 534
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟全人類IL-17抗體IL-17-TN-K7-B6之VL
<400> 534
<210> 535
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟全人類IL-17抗體IL-17-TN-K7-B6之VL
<400> 535
<210> 536
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟全人類IL-17抗體IL-17-TN-K7-B6之VL
<400> 536
<210> 537
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟全人類IL-17抗體IL-17-TN-K7-B6之VL
<400> 537
<210> 538
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟全人類IL-17抗體IL-17-TN-K7-B6之VL
<400> 538
<210> 539
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 親和力成熟全人類IL-17抗體IL-17-TN-K7-B6之VL
<400> 539
<210> 540
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 來自IL-17-TN-K7-B6抗體之CDR-H1一致序列
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (1)..(1)
<223> S,G,T,V,或R
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (3)..(3)
<223> G,D,V,S,A,C,或I
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (4)..(4)
<223> I,F,T,Y,M,或V
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (5)..(5)
<223> S,G,C,N,V,或H
<400> 540
<210> 541
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 來自IL-17-TN-K7-B6抗體之CDR-H2一致序列
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (2)..(2)
<223> I或V
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (4)..(4)
<223> P,H,N,T,L,I,V,S,或F
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (5)..(5)
<223> F,I,M,V,S,或L
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (6)..(6)
<223> F或L
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (7)..(7)
<223> G,M,L,E,或A
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (8)..(8)
<223> T,I,S,W,A,F,L,M,V,或H
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (9)..(9)
<223> A,T,V,S,E,D,P,I,G,或R
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (10)..(10)
<223> D,N,Y,S,T,V,或I
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (17)..(17)
<223> G或D
<400> 541
<210> 542
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 來自IL-17-TN-K7-B6抗體之CDR-H3一致序列
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (1)..(1)
<223> E,D,或V
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (2)..(2)
<223> P,S,或T
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (3)..(3)
<223> N,S,T,或H
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (4)..(4)
<223> E,D,或A
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (10)..(10)
<223> Y或F
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (11)..(11)
<223> T,A,S,D,P,N,C,或V
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (13)..(13)
<223> H,D,Q,N,或L
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (14)..(14)
<223> D,H,Y,或N
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (15)..(15)
<223> F,L,或Y
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (17)..(17)
<223> Y,S,L,N,F,C,I,H,A,或D
<400> 542
<210> 543
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 來自IL-17-TN-K7-B6抗體之CDR-L1一致序列
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (1)..(1)
<223> R或W
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (2)..(2)
<223> A或V
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (5)..(5)
<223> N,D,E,A,或I
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (7)..(7)
<223> G,D,或E
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (8)..(8)
<223> S,Y,A,E,F,T,或G
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (9)..(9)
<223> A,E,D,S,或G
<400> 543
<210> 544
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 來自IL-17-TN-K7-B6抗體之CDR-L2一致序列
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (4)..(4)
<223> H,Q,Y,E,N,S,或W
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (5)..(5)
<223> S,P,或C
<220>
<221> misc_特徵
<222> (6)..(6)
<223> Xaa可為任何自然存在之胺基酸
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (7)..(7)
<223> S或P
<400> 544
<210> 545
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 來自IL-17-TN-K7-B6抗體之CDR-L3一致序列
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (3)..(3)
<223> S,T,或G
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (4)..(4)
<223> T,D,A,Y,S,F,N,I,E,或M
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (5)..(5)
<223> S,D,N,G,I,T,F,Y,W,C,E,R,V,L,或M
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (8)..(8)
<223> H,Y,Q,F,I,V,D,或N
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (9)..(9)
<223> T,S,A,I,N,或L
<400> 545
<210> 546
<211> 126
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IL-17抗體B6.1-5之VH區域
<400> 546
<210> 547
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IL-17抗體B6.1-5之Vk區域
<400> 547
<210> 548
<211> 126
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IL-17抗體B6.1-15之VH區域
<400> 548
<210> 549
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IL-17抗體B6.1-15之Vk區域
<400> 549
<210> 550
<211> 126
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IL-17抗體B6.1-16之VH區域
<400> 550
<210> 551
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IL-17抗體B6.1-16之Vk區域
<400> 551
<210> 552
<211> 126
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IL-17抗體B6.1-17之VH區域
<400> 552
<210> 553
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IL-17抗體B6.1-17之Vk區域
<400> 553
<210> 554
<211> 126
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IL-17抗體B6.1-18之VH區域
<400> 554
<210> 555
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IL-17抗體B6.1-18之Vk區域
<400> 555
<210> 556
<211> 126
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IL-17抗體B6.1-46之VH區域
<400> 556
<210> 557
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IL-17抗體B6.1-46之Vk區域
<400> 557
<210> 558
<211> 126
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IL-17抗體B6.1-44之VH區域
<400> 558
<210> 559
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IL-17抗體B6.1-44之Vk區域
<400> 559
<210> 560
<211> 126
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IL-17抗體B6.11之VH區域
<400> 560
<210> 561
<211> 126
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IL-17抗體B6.29之VH區域
<400> 561
<210> 562
<211> 253
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,D2-GS6-B6 DVD之雙重VH區域
<400> 562
<210> 563
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TNF抗體D2E7之VH區域
<400> 563
<210> 564
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,D2-GS6-B6 DVD之VH區域之連接子片段
<400> 564
<210> 565
<211> 126
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IL-17抗體B6之VH區域
<400> 565
<210> 566
<211> 330
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,D2-GS6-B6 DVD之CH區域
<400> 566
<210> 567
<211> 221
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,E7.GS6-B6 DVD之雙重VL區域
<400> 567
<210> 568
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TNF抗體D2E7之VL區域
<400> 568
<210> 569
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,E7.SL-B6 DVD之VL連接子片段
<400> 569
<210> 570
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IL-17抗體B6之VL區域
<400> 570
<210> 571
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,E7-SL-B6 DVD之CL區域
<400> 571
<210> 572
<211> 253
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,D2-SL-B6 DVD之雙重VH區域
<400> 572
<210> 573
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TNF抗體D2E7之VH區域
<400> 573
<210> 574
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,D2-SL-B6 DVD之VH連接子
<400> 574
<210> 575
<211> 126
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IL-17抗體B6之VH區域
<400> 575
<210> 576
<211> 330
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,D2-SL-B6 DVD之CH區域
<400> 576
<210> 577
<211> 252
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,D2-GS6-G9 DVD之雙重VH區域
<400> 577
<210> 578
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TNF抗體D2E7之VH區域
<400> 578
<210> 579
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,D2-GS6-G9 DVD之VH連接子
<400> 579
<210> 580
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IL-7抗體G9之VH區域
<400> 580
<210> 581
<211> 330
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,D2-GS6-G9 DVD之CH區域
<400> 581
<210> 582
<211> 329
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,E7-GS6-G9 DVD之雙重VL區域
<400> 582
<210> 583
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TNF抗體D2E7之VL區域
<400> 583
<210> 584
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,E7-GS6-G9 DVD之VH連接子
<400> 584
<210> 585
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IL-17抗體G9之VL區域
<400> 585
<210> 586
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,E7-SG6-G9 DVD之CL區域
<400> 586
<210> 587
<211> 224
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,E7-SL-G9 DVD之雙重VL區域
<400> 587
<210> 588
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TNF抗體D2E7之VL區域
<400> 588
<210> 589
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,E7-SL-G9 DVD之VL連接子
<400> 589
<210> 590
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IL-17抗體G9之VL區域
<400> 590
<210> 591
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,E7-SL-G9 DVD之CL區域
<400> 591
<210> 592
<211> 251
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,D2-SL-G9 DVD之雙重VH區域
<400> 592
<210> 593
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TNF抗體D2E7之VH區域
<400> 593
<210> 594
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,D2-SL-G9 DVD之VH連接子
<400> 594
<210> 595
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IL-17抗體G9之VH區域
<400> 595
<210> 596
<211> 330
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,D2-SL-G9 DVD之CH區域
<400> 596
<210> 597
<211> 224
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,E7-GS6-G9-1之雙重VL區域
<400> 597
<210> 598
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TNF抗體D2E7之VL區域
<400> 598
<210> 599
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,E7-GS6-G9-1 DVD之VL連接子
<400> 599
<210> 600
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IL-17抗體G9-1之VL區域
<400> 600
<210> 601
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,E7-GS6-G9-1 DVD之CL區域
<400> 601
<210> 602
<211> 224
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,E7-SL-G9-1 DVD之雙重VL區域
<400> 602
<210> 603
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TNF抗體D2E7之VL區域
<400> 603
<210> 604
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,E7-SL-G9-1 DVD之VL連接子
<400> 604
<210> 605
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IL-17抗體G9-1之VL區域
<400> 605
<210> 606
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,E7-SL-G9-1 DVD之CL區域
<400> 606
<210> 607
<211> 224
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,E7-GS6-G9-4 DVD之雙重VL區域
<400> 607
<210> 608
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TNF抗體D2E7之VL區域
<400> 608
<210> 609
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,E7-GS6-G9-4 DVD之VL連接子
<400> 609
<210> 610
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IL-17抗體G9-4之VL區域
<400> 610
<210> 611
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,E7-GS6-G9-4 DVD之CL區域
<400> 611
<210> 612
<211> 224
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,E7-SL-G9-4 DVD之雙重VL區域
<400> 612
<210> 613
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TNF抗體D2E7之VL區域
<400> 613
<210> 614
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,E7-SL-G9-4 DVD之VL連接子
<400> 614
<210> 615
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IL-17抗體G9-4之VH區域
<400> 615
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<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,E7-SL-G9-4 DVD之CL區域
<400> 616
<210> 617
<211> 224
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,E7-GS6-G9-M2 DVD之雙重VL區域
<400> 617
<210> 618
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TNF抗體D2E7之VL區域
<400> 618
<210> 619
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,E7-GS6-G9-M2 DVD之VL連接子
<400> 619
<210> 620
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IL-17抗體G9-M2之VL區域
<400> 620
<210> 621
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,E7-GS6-G9-M2 DVD之CL區域
<400> 621
<210> 622
<211> 224
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,E7-SL-G9-M2 DVD之雙重VL區域
<400> 622
<210> 623
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TNF抗體D2E7之VL區域
<400> 623
<210> 624
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,E7-SL-G9-M2 DVD之VL連接子
<400> 624
<210> 625
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IL-17抗體G9-M2之VL區域
<400> 625
<210> 626
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,E7-SL-G9-M2 DVD之CL區域
<400> 626
<210> 627
<211> 255
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,D2-GS10-G9-2 DVD之雙重VH區域
<400> 627
<210> 628
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TNF抗體D2E7之VH區域
<400> 628
<210> 629
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,D2-GS10-G9-2 DVD之VH連接子
<400> 629
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IL-17抗體G9-2之VH區域
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<210> 631
<211> 330
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,D2-GS10-G9-2 DVD之CH區域
<400> 631
<210> 632
<211> 229
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,E7-GS10-G9-2 DVD之雙重VL區域
<400> 632
<210> 633
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TNF抗體D2E7之VL區域
<400> 633
<210> 634
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,E7-GS10-G9-2 DVD之VL連接子
<400> 634
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<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IL-17抗體G9-2之VL區域
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<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,E7-GS10-G9-2 DVD之CL區域
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<211> 251
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,D2-GS6-G9-2 DVD之雙重VH區域
<400> 637
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<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TNF抗體D2E7之VH區域
<400> 638
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,D2-GS6-G9-2 DVD之VH連接子
<400> 639
<210> 640
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IL-17抗體G9-2之VH區域
<400> 640
<210> 641
<211> 330
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,D2-GS6-G9-2 DVD之CH區域
<400> 641
<210> 642
<211> 224
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,E7-GS6-G9-2 DVD之雙重VL區域
<400> 642
<210> 643
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TNF抗體D2E7之VL區域
<400> 643
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<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,E7-GS6-G9-2 DVD之VL連接子
<400> 644
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<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IL-17抗體G9-2之VL區域
<400> 645
<210> 646
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,E7-GS6-G9-2 DVD之CL區域
<400> 646
<210> 647
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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<400> 647
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<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TNF抗體D2E7之VH區域
<400> 648
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IL-17抗體G9-2之VH區域
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<211> 330
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,D2-GS14-G9-2 DVD之CH區域
<400> 651
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<211> 232
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,E7-GS14-G9-2 DVD之雙重VL區域
<400> 652
<210> 653
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TNF抗體D2E7之VL區域
<400> 653
<210> 654
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,E7-GS14-G9-2 DVD之VL連接子
<400> 654
<210> 655
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IL-17抗體G9-2之VL區域
<400> 655
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<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,E7-GS14-G9-2 DVD之CL區域
<400> 656
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<211> 251
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,D2-SL-G9-2 DVD之雙重VH區域
<400> 657
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<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TNF抗體D2E7之VH區域
<400> 658
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<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,D2-SL-G9-2 DVD之VH連接子
<400> 659
<210> 660
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IL-17抗體G9-2之VH區域
<400> 660
<210> 661
<211> 330
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,D2-SL-G9-2 DVD之CH區域
<400> 661
<210> 662
<211> 224
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,E7-SL-G9-2 DVD之雙重VL區域
<400> 662
<210> 663
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TNF抗體D2E7之VL區域
<400> 663
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<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,E7-SL-G9-2 DVD之VL連接子
<400> 664
<210> 665
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IL-17抗體G9-2之VL區域
<400> 665
<210> 666
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,E7-SL-G9-2 DVD之CL區域
<400> 666
<210> 667
<211> 257
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,D2-GS10-B6-17 DVD之雙重VH區域
<400> 667
<210> 668
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TNF抗體D2E7之VH區域
<400> 668
<210> 669
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,D2-GS10-B6-17 DVD之VH連接子
<400> 669
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<211> 126
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IL-17抗體B6-17之VH區域
<400> 670
<210> 671
<211> 330
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,D2-GS10-B6-17 DVD之CH區域
<400> 671
<210> 672
<211> 226
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,E7-GS10-B6-17 DVD之雙重VL區域
<400> 672
<210> 673
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TNF抗體D2E7之VL區域
<400> 673
<210> 674
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,E7-GS10-B6-17 DVD之VL連接子
<400> 674
<210> 675
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IL-17抗體B6-17之VL區域
<400> 675
<210> 676
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,E7-GS10-B6-17 DVD之CL區域
<400> 676
<210> 677
<211> 253
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,D2-GS6-B6-17 DVD之雙重VH區域
<400> 677
<210> 678
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TNF抗體D2E7之VH區域
<400> 678
<210> 679
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,D2-GS6-B6-17 DVD之VH連接子
<400> 679
<210> 680
<211> 126
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IL-17抗體B6-17之VH區域
<400> 680
<210> 681
<211> 330
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,D2-SG6-B6-17 DVD之CH區域
<400> 681
<210> 682
<211> 221
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,E7-GS6-B6-17 DVD之雙重VL區域
<400> 682
<210> 683
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TNF抗體D2E7之VL區域
<400> 683
<210> 684
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,E7-SG6-B6-17 DVD之VL連接子
<400> 684
<210> 685
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IL-17抗體B6-17之VL區域
<400> 685
<210> 686
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,E7-GS6-B6-17 DVD之CL區域
<400> 686
<210> 687
<211> 261
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,D2-GS14-B6-17 DVD之雙重VH區域
<400> 687
<210> 688
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TNF抗體D2E7之VH區域
<400> 688
<210> 689
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,D2-GS14-B6-17 DVD之VH連接子
<400> 689
<210> 690
<211> 126
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IL-17抗體B6-17之VH區域
<400> 690
<210> 691
<211> 330
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,D2-GS14-B6-17 DVD之CH區域
<400> 691
<210> 692
<211> 229
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,E7-GS14-B6-17 DVD之雙重VL區域
<400> 692
<210> 693
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TNF抗體D2E7之VL區域
<400> 693
<210> 694
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,E7-GS14-B6-17 DVD之CL區域
<400> 694
<210> 695
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IL-17抗體B6-17之VL區域
<400> 695
<210> 696
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,E7-GS14-B6-17 DVD之CL區域
<400> 696
<210> 697
<211> 253
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,D2-SL-B6-17 DVD之雙重VH區域
<400> 697
<210> 698
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TNF抗體D2E7之VH區域
<400> 698
<210> 699
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,D2-SL-B6-17 DVD之VL連接子
<400> 699
<210> 700
<211> 126
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IL-17抗體B6-17之VH區域
<400> 700
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,D2-SL-B6-17 DVD之CH區域
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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<213> 人工序列
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,E7-SL-B6-17 DVD之VL連接子
<400> 704
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<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IL-17抗體B6-17之VL區域
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<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,D2-LL-B6-17 DVD之雙重VH區域
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<213> 人工序列
<220>
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<213> 人工序列
<220>
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<213> 人工序列
<220>
<223> IL-17抗體B6-17之VH區域
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<220>
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<220>
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<220>
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<220>
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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<213> 人工序列
<220>
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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<220>
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,E7-GS10-B6-5 DVD之VL連接子
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IL-17抗體B6-5之VL區域
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,E7-GS10-B6-5 DVD之CL區域
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,D2-GS6-B6-5 DVD之雙重VH區域
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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<212> PRT
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<220>
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<220>
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<212> PRT
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<220>
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<212> PRT
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<220>
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<212> PRT
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<220>
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<212> PRT
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<220>
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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<212> PRT
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<220>
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TNF抗體D2E7之VH區域
<400> 738
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,D2-SL-B6-15 DVD之VH連接子
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IL-17抗體B6-15之VH區域
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,D2-SL-B6-15 DVD之CH區域
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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<213> 人工序列
<220>
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<212> PRT
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<220>
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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<400> 748
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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<211> 330
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,D2-GS10-h5C5Vh1 DVD之CH區域
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TNF抗體D2E7之VL區域
<400> 753
<210> 754
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,E7-GS10-h5C5Vk3a DVD之VL連接子
<400> 754
<210> 755
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,E7-GS10-h5C5Vk3a DVD之CL區域
<400> 756
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<211> 250
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,D2-GS10-6C6 DVD之雙重VH區域
<400> 757
<210> 758
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TNF抗體D2E7之VH區域
<400> 758
<210> 759
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,D2-GS10-6C6 DVD之VH連接子
<400> 759
<210> 760
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IL-17抗體6C6之VH區域
<400> 760
<210> 761
<211> 330
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,D2-GS10-6C6 DVD之CH區域
<400> 761
<210> 762
<211> 252
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,D2-GS10-h10F7Vh1aDVD之雙重VH區域
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<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TNF抗體D2E7之VH區域
<400> 763
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,D2-GS10-h10F7Vh1a DVD之VH連接子
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IL-17抗體h10F7Vh1a之VH區域
<400> 765
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,D2-GS10-h10F7Vh1a DVD之CH區域
<400> 766
<210> 767
<211> 225
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,E7-GS10-h10F7Vk1a DVD之雙重VL區域
<400> 767
<210> 768
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TNF抗體D2E7之VL區域
<400> 768
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,E7-GS10-h10F7Vk1a DVD之VL連接子
<400> 769
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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<400> 770
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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<400> 772
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<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TNF抗體D2E7之VH區域
<400> 773
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<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,D2-GS6-h5C5Vh1 DVD之VH連接子
<400> 774
<210> 775
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IL-17抗體h5C5Vh1之VH區域
<400> 775
<210> 776
<211> 330
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,D2-GS6-h5C5Vh1 DVD之VH連接子
<400> 776
<210> 777
<211> 221
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,E7-SL-h5C5Vk1a DVD之雙重VL區域
<400> 777
<210> 778
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TNF抗體D2E7之VL區域
<400> 778
<210> 779
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,E7-SL-h5C5Vk1a DVD之VL連接子
<400> 779
<210> 780
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IL-17抗體h5C5-Vk1a之VL區域
<400> 780
<210> 781
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,E7-SL-h5C5Vk1a DVD之CL區域
<400> 781
<210> 782
<211> 246
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,D2-GS6-h5C5Vh1b DVD之雙重VH區域
<400> 782
<210> 783
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TNF抗體D2E7之VH區域
<400> 783
<210> 784
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,D2-GS6-h5C5Vh1b DVD之VL連接子
<400> 784
<210> 785
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IL-17抗體h5C5Vh1b之VH區域
<400> 785
<210> 786
<211> 330
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,D2-GS6-h5C5Vh1b DVD之CH區域
<400> 786
<210> 787
<211> 221
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,E7-SL-h5C5Vk3a DVD之雙重VL區域
<400> 787
<210> 788
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TNF抗體D2E7之VL區域
<400> 788
<210> 789
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,E7-SL-h5C5Vk3a DVD之VL連接子
<400> 789
<210> 790
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IL-17抗體h5C5Vk3a之VL區域
<400> 790
<210> 791
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,E7-SL-h5C5Vk3a DVD之CL區域
<400> 791
<210> 792
<211> 248
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,D2-GS6-10F7 DVD之雙重VH區域
<400> 792
<210> 793
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TNF抗體D2E7之VH區域
<400> 793
<210> 794
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,D2-GS6-10F7 DVD之VH連接子
<400> 794
<210> 795
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IL-17抗體10F7之VH區域
<400> 795
<210> 796
<211> 330
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,D2-GS6-10F7 DVD之CH區域
<400> 796
<210> 797
<211> 220
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,E7-SL-10F7 DVD之雙重VL區域
<400> 797
<210> 798
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TNF抗體D2E7之VL區域
<400> 798
<210> 799
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,E7-SL-10F7 DVD之VL連接子
<400> 799
<210> 800
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IL-17抗體10F7之VL區域
<400> 800
<210> 801
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,E7-SL-10F7 DVD之CL區域
<400> 801
<210> 802
<211> 246
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,D2-GS6-5C5 DVD之雙重VH區域
<400> 802
<210> 803
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TNF抗體D2E7之VH區域
<400> 803
<210> 804
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,D2-GS6-5C5 DVD之VH連接子
<400> 804
<210> 805
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IL-17抗體5C5之VH區域
<400> 805
<210> 806
<211> 330
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,D2-GS6-5C5 DVD之CH區域
<400> 806
<210> 807
<211> 221
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,E7-SL-5C5 DVD之雙重VL區域
<400> 807
<210> 808
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TNF抗體D2E7之VL區域
<400> 808
<210> 809
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,E7-SL-5C5 DVD之VL連接子
<400> 809
<210> 810
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IL-17抗體5C5之VL區域
<400> 810
<210> 811
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,E7-SL-5C5 DVD之CL區域
<400> 811
<210> 812
<211> 246
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,D2-GS6-1D8 DVD之雙重VH區域
<400> 812
<210> 813
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TNF抗體D2E7之VH區域
<400> 813
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<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,D2-GS6-1D8 DVD之VH連接子
<400> 814
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<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IL-17抗體1DH之VH區域
<400> 815
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<211> 330
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,D2-GS6-1D8 DVD之CH區域
<400> 816
<210> 817
<211> 221
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,E7-SL-1D8 DVD之雙重VH區域
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<210> 818
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TNF抗體D2E7之VL區域
<400> 818
<210> 819
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,E7-SL-1D8 DVD之VL連接子
<400> 819
<210> 820
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IL-17抗體1D8之VL區域
<400> 820
<210> 821
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,E7-SL-1D8 DVD之CL區域
<400> 821
<210> 822
<211> 246
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,D2-GS6-6C6 DVD之雙重VH區域
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<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TNF抗體D2E7之VH區域
<400> 823
<210> 824
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,D2-GS6-6C6 DVD之VH連接子
<400> 824
<210> 825
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IL-17抗體6C6之VH區域
<400> 825
<210> 826
<211> 330
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,D2-GS6-6C6 DVD之CH區域
<400> 826
<210> 827
<211> 221
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,E7-SL-6C6 DVD之雙重VL區域
<400> 827
<210> 828
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TNF抗體D2E7之VL區域
<400> 828
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<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,E7-SL-6C6 DVD之VL連接子
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<210> 830
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IL-17抗體6C6之VH區域
<400> 830
<210> 831
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,E7-SL-6C6 DVD之CL區域
<400> 831
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<211> 247
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,D2-GS6-8B12 DVD之雙重VH區域
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<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TNF抗體D2E7之VH區域
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<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,D2-GS6-8B12 DVD之VH連接子
<400> 834
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<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IL-17抗體8B12之VH區域
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<210> 836
<211> 330
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,D2-GS6-8B12 DVD之CH區域
<400> 836
<210> 837
<211> 225
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,E7-SL-8B12 DVD之雙重VL區域
<400> 837
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<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TNF抗體D2E7之VL區域
<400> 838
<210> 839
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,E7-SL-8B12 DVD之VL連接子
<400> 839
<210> 840
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IL-17抗體8B12之VL區域
<400> 840
<210> 841
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,E7-SL-8B12 DVD之CL區域
<400> 841
<210> 842
<211> 257
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,D2-GS10-B6-11 DVD之雙重VH區域
<400> 842
<210> 843
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TNF抗體D2E7之VH區域
<400> 843
<210> 844
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,D2-GS10-B6-11 DVD之VH連接子
<400> 844
<210> 845
<211> 126
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IL-17抗體B6-11之VH區域
<400> 845
<210> 846
<211> 330
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,D2-GS10-B6-11 DVD之CH區域
<400> 846
<210> 847
<211> 226
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,E7-GS10-B6.1 DVD之雙重VL區域
<400> 847
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TNF抗體D2E7之VL區域
<400> 848
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<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,E7-GS10-B6.1 DVD之VL連接子
<400> 849
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<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IL-17抗體B6.1之VL區域
<400> 850
<210> 851
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,E7-GS10-B6.1 DVD之CL區域
<400> 851
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<211> 260
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,D2-LL-B6-11 DVD之雙重VH區域
<400> 852
<210> 853
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TNF抗體D2E7之VH區域
<400> 853
<210> 854
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,D2-LL-B6-11 DVD之VH連接子
<400> 854
<210> 855
<211> 126
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IL-17抗體B6-11之VH區域
<400> 855
<210> 856
<211> 330
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,D2-LL-B6-11 DVD之CH區域
<400> 856
<210> 857
<211> 228
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,E7-LL-B6.1 DVD之雙重VL區域
<400> 857
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<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TNF抗體D2E7之VL區域
<400> 858
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<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,E7-LL-B6.1 DVD之VL連接子
<400> 859
<210> 860
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IL-17抗體B6.1之VL區域
<400> 860
<210> 861
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,E7-LL-B6.1 DVD之CL區域
<400> 861
<210> 862
<211> 252
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,D2-SL-B6-11 DVD之雙重VH區域
<400> 862
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<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TNF抗體D2E7之VH區域
<400> 863
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<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,D2-SL-B6-11 DVD之VH連接子
<400> 864
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<211> 126
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IL-17抗體B6-11之VH區域
<400> 865
<210> 866
<211> 330
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,D2-SL-B6-11 DVD之CH區域
<400> 866
<210> 867
<211> 221
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,E7-GS6-B6.1 DVD之雙重VL區域
<400> 867
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<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TNF抗體D2E7之VL區域
<400> 868
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<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,E7-GS6-B6.1 DVD之VL連接子
<400> 869
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<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IL-17抗體B6.1之VL區域
<400> 870
<210> 871
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,E7-GS6-B6.1 DVD之CL區域
<400> 871
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<211> 252
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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<400> 872
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<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TNF抗體D2E7之VH區域
<400> 873
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<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,D2-SL-B6-16DVD之VH連接子
<400> 874
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<211> 126
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IL-17抗體B6-16之VH區域
<400> 875
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,D2-SL-B6-16DVD之CH區域
<400> 876
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<211> 221
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,E7-GS6-B6-16 DVD之雙重VL區域
<400> 877
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TNF抗體D2E7之VL區域
<400> 878
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<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,E7-GS6-B6-16 DVD之VL連接子
<400> 879
<210> 880
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IL-17抗體B6-16之VL區域
<400> 880
<210> 881
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,E7-GS6-B6-16 DVD之CL區域
<400> 881
<210> 882
<211> 253
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,D2-GS6-B6-16 DVD之雙重VH區域
<400> 882
<210> 883
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TNF抗體D2E7之VH區域
<400> 883
<210> 884
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,D2-GS6-B6-16DVD之VH連接子
<400> 884
<210> 885
<211> 126
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IL-17抗體B6-16之VH區域
<400> 885
<210> 886
<211> 330
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DVD-Ig,D2-GS6-B6-16 DVD之CH區域
<400> 886
<210> 887
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 寡肽連接子
<400> 887
<210> 888
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 寡肽連接子
<400> 888
<210> 889
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 寡肽連接子
<400> 889
<210> 890
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 寡肽連接子
<400> 890
<210> 891
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 寡肽連接子
<400> 891
<210> 892
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 寡肽連接子
<400> 892
<210> 893
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 寡肽連接子
<400> 893
<210> 894
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 寡肽連接子
<400> 894
<210> 895
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 寡肽連接子
<400> 895
<210> 896
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 寡肽連接子
<400> 896
<210> 897
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 寡肽連接子
<400> 897
<210> 898
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 寡肽連接子
<400> 898
<210> 899
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 寡肽連接子
<400> 899
<210> 900
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 寡肽連接子
<400> 900
<210> 901
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 寡肽連接子
<400> 901
<210> 902
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 寡肽連接子
<400> 902
<210> 903
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 寡肽連接子
<400> 903
<210> 904
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 寡肽連接子
<400> 904
<210> 905
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 寡肽連接子
<400> 905
<210> 906
<211> 27
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 寡肽連接子
<400> 906
<210> 907
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 寡肽連接子
<400> 907
<210> 908
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 寡肽連接子
<400> 908
<210> 909
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 寡肽連接子
<400> 909
<210> 910
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 寡肽連接子
<400> 910
<210> 911
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 寡肽連接子
<400> 911
<210> 912
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 寡肽連接子
<400> 912
<210> 913
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 寡肽連接子
<400> 913
<210> 914
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 寡肽連接子
<400> 914
<210> 915
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 寡肽連接子
<400> 915
<210> 916
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 寡肽連接子
<400> 916
<210> 917
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 寡肽連接子
<400> 917
<210> 918
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 寡肽連接子
<400> 918
<210> 919
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR-H1一致序列
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (1)..(1)
<223> D或S
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (3)..(3)
<223> E或G
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (4)..(4)
<223> I,M,V,或F
<400> 919
<210> 920
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR-H2一致序列
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (2)..(2)
<223> T,I,或N
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (3)..(3)
<223> D,H,或W
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (4)..(4)
<223> P,或不存在
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (5)..(5)
<223> E,G,或S
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (6)..(6)
<223> S,N,或D
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (8)..(8)
<223> G或T
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (10)..(10)
<223> L,A,T,或F
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (11)..(11)
<223> H或Y
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (13)..(13)
<223> P,Q,或S
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (14)..(14)
<223> K,A,或N
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (15)..(15)
<223> F或L
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (16)..(16)
<223> D,K,或R
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (17)..(17)
<223> G,D,或S
<400> 920
<210> 921
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR-H3一致序列
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (1)..(1)
<223> Y,F,或D
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (2)..(2)
<223> Y,L,S,或G
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (3)..(3)
<223> K,T,R,或Y
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (4)..(4)
<223> Y或W
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (5)..(5)
<223> E,D,或I
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (6)..(6)
<223> S,G,或Y
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (7)..(7)
<223> F,Y,或T
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (8)..(8)
<223> Y,F,或M
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (9)..(9)
<223> G,T,或不存在
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (10)..(10)
<223> M,或不存在
<400> 921
<210> 922
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR-L1一致序列
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (1)..(1)
<223> S,K,或R
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (2)..(2)
<223> A或S
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (4)..(4)
<223> S或Q
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (5)..(5)
<223> S,或不存在
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (6)..(6)
<223> L,或不存在
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (7)..(7)
<223> V,或不存在
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (8)..(8)
<223> H,或不存在
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (9)..(9)
<223> S,或不存在
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (10)..(10)
<223> S,N,或不存在
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (11)..(11)
<223> S,V,或G
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (12)..(12)
<223> I,N,或S
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (13)..(13)
<223> S,N,T,或I
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (14)..(14)
<223> Y或D
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (15)..(15)
<223> M,V,L,或I
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (16)..(16)
<223> C,A,H,Y,或G
<400> 922
<210> 923
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR-L2一致序列
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (1)..(1)
<223> D,Y,K,A,或H
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (2)..(2)
<223> T,A,或V
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (3)..(3)
<223> S或F
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (4)..(4)
<223> K,N,或E
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (5)..(5)
<223> L或R
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (6)..(6)
<223> A,Y,或F
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (7)..(7)
<223> S或T
<400> 923
<210> 924
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR-L3一致序列
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (1)..(1)
<223> Q,S,或H
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (3)..(3)
<223> R,D,S,或G
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (4)..(4)
<223> S,Y,或T
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (5)..(5)
<223> S,G,或H
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (6)..(6)
<223> Y,S,V,或A
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (7)..(7)
<223> P,或不存在
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (8)..(8)
<223> W,Y,或L
<400> 924
<210> 925
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR-H1一致序列
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (1)..(1)
<223> N,A,D,或S
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (2)..(2)
<223> Y,F,或L
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (3)..(3)
<223> G,D,或A
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (4)..(4)
<223> M或I
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (5)..(5)
<223> H,D,或S
<400> 925
<210> 926
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR-H2一致序列
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (1)..(1)
<223> V,M,或G
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (2)..(2)
<223> I,T,M,或F
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (3)..(3)
<223> S,N,T,或D
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (4)..(4)
<223> Y或P
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (5)..(5)
<223> D,N,或I
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (6)..(6)
<223> G,S,L,或E
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (7)..(7)
<223> S或G
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (8)..(8)
<223> N,T,或E
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (9)..(9)
<223> K,T,或A
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (10)..(10)
<223> Y,G,N,或V
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (11)..(11)
<223> Y或V
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (13)..(13)
<223> D,P,或Q
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (14)..(14)
<223> S,K,或N
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (15)..(15)
<223> V或F
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (16)..(16)
<223> K,R,或Q
<400> 926
<210> 927
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR-H3一致序列
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (1)..(1)
<223> V,S,E,或I
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (2)..(2)
<223> G,S,P,或R
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (3)..(3)
<223> A,E,N,或P
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (4)..(4)
<223> S,D,或W
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (5)..(5)
<223> G,E,F,或L
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (6)..(6)
<223> D,G,或W
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (7)..(7)
<223> Y,I,N,或G
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (8)..(8)
<223> Y,T,G,或A
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (9)..(9)
<223> Y或I
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (10)..(10)
<223> S,G,或Y
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (11)..(11)
<223> Y,F,或T
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (12)..(12)
<223> G,T,或不存在
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (13)..(13)
<223> L,H,或不存在
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (14)..(14)
<223> H,或不存在
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (15)..(15)
<223> F,或不存在
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (17)..(17)
<223> V,N,或Y
<400> 927
<210> 928
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR-L1一致序列
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (1)..(1)
<223> S,R,或K
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (2)..(2)
<223> G或A
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (3)..(3)
<223> S或D
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (4)..(4)
<223> N,K,或Q
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (5)..(5)
<223> S,或不存在
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (6)..(6)
<223> N,或不存在
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (7)..(7)
<223> I,L,N,或D
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (8)..(8)
<223> G或I
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (9)..(9)
<223> S,N,G,或D
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (10)..(10)
<223> H,R,S,或D
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (11)..(11)
<223> S,Y,A,或D
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (12)..(12)
<223> V,A,L,或M
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (13)..(13)
<223> N,C,或H
<400> 928
<210> 929
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR-L2一致序列
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (1)..(1)
<223> G,Q,Y,或E
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (2)..(2)
<223> I,D,或A
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (3)..(3)
<223> G,N,S,或T
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (4)..(4)
<223> Q,K,或T
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (5)..(5)
<223> R,S,或L
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (6)..(6)
<223> P,I,或V
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (7)..(7)
<223> Sor P
<400> 929
<210> 930
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR-L3一致序列
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (1)..(1)
<223> A,Q,H,或L
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (2)..(2)
<223> T或Q
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (3)..(3)
<223> W,S,或H
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (4)..(4)
<223> D或T
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (5)..(5)
<223> D或S
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (6)..(6)
<223> S,T,L,或F
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (7)..(7)
<223> L,T,或P
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (8)..(8)
<223> G,H,或Y
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (9)..(9)
<223> G,S,或T
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (10)..(10)
<223> Y,或不存在
<220>
<221> MISC_特徵
<222> (11)..(11)
<223> V,或不存在
<400> 930
<210> 931
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人類化抗體VH
<400> 931
<210> 932
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人類化抗體Vk
<400> 932
<210> 933
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人類化抗體Vk
<400> 933

Claims (69)

  1. 一種能夠結合IL-17及TNF-α之結合蛋白，其包含第一及第二多肽鏈，其中該第一多肽鏈包含第一VD1-(X1)n-VD2-C-(X2)n，其中：VD1為第一重鏈可變域；VD2為第二重鏈可變域；C為重鏈恆定域；X1為連接子，限制條件為其不為CH1；X2為Fc區；n為0或1；及其中該第二多肽鏈包含第二VD1-(X1)n-VD2-C-(X2)n，其中：VD1為第一輕鏈可變域；VD2為第二輕鏈可變域；C為輕鏈恆定域；X1為連接子，限制條件為其不為CH1；X2不包含Fc區；n為0或1；及其中在第一多肽鏈中，該VD1或VD2重鏈可變域包含選自由以下組成之群之胺基酸序列：SEQ ID NO：565、670、720、740、845及875；及其中在第二多肽鏈中，該VD1或VD2輕鏈可變域包含選自由以下組成之群的胺基酸序列：570、675、725、745、850及880。
  2. 如請求項1之結合蛋白，其中X1包含選自由SEQ ID NO：887至918組成之群的胺基酸序列。
  3. 一種能夠結合IL-17及TNF-α之結合蛋白，其包含兩個第一多肽鏈及兩個第二多肽鏈，其中兩個第一多肽鏈包含VD1-(X1)n-VD2-C-(X2)n，其中：VD1為第一重鏈可變域；VD2為第二重鏈可變域；C為重鏈恆定域；X1為連接子，限制條件為其不為CH1；X2為Fc區；n為0或1；及其中兩個第二多肽鏈包含VD1-(X1)n-VD2-C-(X2)n，其中：VD1為第一輕鏈可變域；VD2為第二輕鏈可變域；C為輕鏈恆定域；X1為連接子，限制條件為其不為CH1；X2不包含Fc區；n為0或1；及其中在兩個第一多肽鏈中，該VD1或VD2重鏈可變域包含選自由以下組成之群的胺基酸序列：SEQ ID NO：565、670、720、740、845及875；及其中在兩個第二多肽鏈中，該VD1或VD2輕鏈可變域包含選自由以下組成之群的胺基酸序列：SEQ ID NO：570、675、725、745、850及880。
  4. 如請求項1之結合蛋白，其中另一個VD1或VD2重鏈可變域包含抗TNF-α抗體之可變重鏈區(VH)之胺基酸序列，其中該胺基酸序列為SEQ ID NO：668。
  5. 如請求項1之結合蛋白，其中該第一多肽鏈包含選自由以下組成之群之胺基酸序列：SEQ ID NO：562、572、667、677、687、697、707、717、727、737、842、852、862、872及882。
  6. 如請求項1之結合蛋白，其中另一個VD1或VD2輕鏈可變域包含抗TNF-α抗體之可變輕鏈區(VL)之胺基酸序列，其中該胺基酸序列為SEQ ID NO：673。
  7. 如請求項1之結合蛋白，其中該第二多肽鏈包含選自由以下組成之群之胺基酸序列：SEQ ID NO：567、672、682、692、702、712、722、732、742、847、857、867及877。
  8. 如請求項1之結合蛋白，其中該VD2重鏈可變域包含SEQ ID NO：565之胺基酸序列，該VD2輕鏈可變域包含SEQ ID NO：570之胺基酸序列，該VD1重鏈可變域包含SEQ ID NO：668之胺基酸序列，且該VD1輕鏈可變域包含SEQ ID NO：673之胺基酸序列。
  9. 如請求項1之結合蛋白，其中該VD2重鏈可變域包含SEQ ID NO：670之胺基酸序列，該VD2輕鏈可變域包含SEQ ID NO：675之胺基酸序列，該VD1重鏈可變域包含SEQ ID NO：668之胺基酸序列，且該VD1輕鏈可變域包含SEQ ID NO：673之胺基酸序列。
  10. 如請求項1之結合蛋白，其中該VD1重鏈可變域包含SEQ ID NO：670之胺基酸序列，該VD1輕鏈可變域包含SEQ ID NO：675之胺基酸序列，該VD2重鏈可變域包含SEQ ID NO：668之胺基酸序列，且該VD2輕鏈可變域包含SEQ ID NO：673之胺基酸序列。
  11. 如請求項1之結合蛋白，其中該VD2重鏈可變域包含SEQ ID NO：720之胺基酸序列，該VD2輕鏈可變域包含SEQ ID NO：725之胺基酸序列，該VD1重鏈可變域包含SEQ ID NO：668之胺基酸序列，且該VD1輕鏈可變域包含SEQ ID NO：673之胺基酸序列。
  12. 如請求項1之結合蛋白，其中該VD2重鏈可變域包含SEQ ID NO：740之胺基酸序列，該VD2輕鏈可變域包含SEQ ID NO：745之胺基酸序列，該VD1重鏈可變域包含SEQ ID NO：668之胺基酸序列，且該VD1輕鏈可變域包含SEQ ID NO：673之胺基酸序列。
  13. 如請求項1之結合蛋白，其中該VD2重鏈可變域包含SEQ ID NO：845之胺基酸序列，該VD2輕鏈可變域包含SEQ ID NO：850之胺基酸序列，該VD1重鏈可變域包含SEQ ID NO：668之胺基酸序列，且該VD1輕鏈可變域包含SEQ ID NO：673之胺基酸序列。
  14. 如請求項1之結合蛋白，其中該VD2重鏈可變域包含SEQ ID NO：875之胺基酸序列，該VD2輕鏈可變域包含SEQ ID NO：880之胺基酸序列，該VD1重鏈可變域包含SEQ ID NO：668之胺基酸序列，且該VD1輕鏈可變域包含SEQ ID NO：673之胺基酸序列。
  15. 如請求項1之結合蛋白，其中該VD1重鏈可變域包含SEQ ID NO：668之胺基酸序列，且該VD1輕鏈可變域包含SEQ ID NO：673之胺基酸序列。
  16. 如請求項15之結合蛋白，其中該VD2重鏈可變域包含SEQ ID NO：565之胺基酸序列，且該VD2輕鏈可變域包含SEQ ID NO：570之胺基酸序列。
  17. 如請求項15之結合蛋白，其中該VD2重鏈可變域包含SEQ ID NO：670之胺基酸序列，且該VD2輕鏈可變域包含SEQ ID NO：675之胺基酸序列。
  18. 如請求項15之結合蛋白，其中該VD2重鏈可變域包含SEQ ID NO：720之胺基酸序列，且該VD2輕鏈可變域包含SEQ ID NO：725之胺基酸序列。
  19. 如請求項15之結合蛋白，其中該VD2重鏈可變域包含SEQ ID NO：740之胺基酸序列，且該VD2輕鏈可變域包含SEQ ID NO：745之胺基酸序列。
  20. 如請求項15之結合蛋白，其中該VD2重鏈可變域包含SEQ ID NO：845之胺基酸序列，且該VD2輕鏈可變域包含SEQ ID NO：850之胺基酸序列。
  21. 如請求項15之結合蛋白，其中該VD2重鏈可變域包含SEQ ID NO：875之胺基酸序列，且該VD2輕鏈可變域包含SEQ ID NO：880之胺基酸序列。
  22. 如請求項3之結合蛋白，其中該VD2重鏈可變域包含SEQ ID NO：565之胺基酸序列，該VD2輕鏈可變域包含SEQ ID NO：570之胺基酸序列，該VD1重鏈可變域包含SEQ ID NO：668之胺基酸序列，且該VD1輕鏈可變域包含SEQ ID NO：673之胺基酸序列。
  23. 如請求項3之結合蛋白，其中該VD2重鏈可變域包含SEQ ID NO：670之胺基酸序列，該VD2輕鏈可變域包含SEQ ID NO：675之胺基酸序列，該VD1重鏈可變域包含SEQ ID NO：668之胺基酸序列，且該VD1輕鏈可變域包含SEQ ID NO：673之胺基酸序列。
  24. 如請求項3之結合蛋白，其中該VD1重鏈可變域包含SEQ ID NO：670之胺基酸序列，該VD1輕鏈可變域包含SEQ ID NO：675之胺基酸序列，該VD2重鏈可變域包含SEQ ID NO：668之胺基酸序列，且該VD2輕鏈可變域包含SEQ ID NO：673之胺基酸序列。
  25. 如請求項3之結合蛋白，其中該VD2重鏈可變域包含SEQ ID NO：720之胺基酸序列，該VD2輕鏈可變域包含SEQ ID NO：725之胺基酸序列，該VD1重鏈可變域包含SEQ ID NO：668之胺基酸序列，且該VD1輕鏈可變域包含SEQ ID NO：673之胺基酸序列。
  26. 如請求項3之結合蛋白，其中該VD2重鏈可變域包含SEQ ID NO：740之胺基酸序列，該VD2輕鏈可變域包含SEQ ID NO：745之胺基酸序列，該VD1重鏈可變域包含SEQ ID NO：668之胺基酸序列，且該VD1輕鏈可變域包含SEQ ID NO：673之胺基酸序列。
  27. 如請求項3之結合蛋白，其中該VD2重鏈可變域包含SEQ ID NO：845之胺基酸序列，該VD2輕鏈可變域包含SEQ ID NO：850之胺基酸序列，該VD1重鏈可變域包含SEQ ID NO：668之胺基酸序列，且該VD1輕鏈可變域包含SEQ ID NO：673之胺基酸序列。
  28. 如請求項3之結合蛋白，其中該VD2重鏈可變域包含SEQ ID NO：875之胺基酸序列，該VD2輕鏈可變域包含SEQ ID NO：880之胺基酸序列，該VD1重鏈可變域包含SEQ ID NO：668之胺基酸序列，且該VD1輕鏈可變域包含SEQ ID NO：673之胺基酸序列。
  29. 如請求項1至28中任一項之結合蛋白，其中該結合蛋白為結晶之結合蛋白。
  30. 如請求項29之結合蛋白，其中該結晶之結合蛋白包含無載劑之醫藥控制釋放型晶體。
  31. 一種醫藥組合物，其包含如請求項3之結合蛋白及醫藥上可接受之載劑。
  32. 一種醫藥組合物，其包含如請求項1至30中任一項之結合蛋白及醫藥學上可接受之載劑。
  33. 如請求項32之醫藥組合物，其進一步包含至少一種其他治療劑。
  34. 如請求項33之醫藥組合物，其中該其他治療劑係選自由以下組成之群：治療劑、顯影劑、細胞毒性劑、血管生成抑制劑；激酶抑制劑；共刺激分子阻斷劑；黏附分子阻斷劑；抗細胞激素抗體或其功能片段；甲胺喋呤；環 孢素；雷帕黴素；FK506；可偵測標記或報導分子；TNF拮抗劑；抗風濕藥；肌肉鬆弛劑、麻藥、非類固醇消炎藥(NSAID)、鎮痛劑、麻醉劑、鎮靜劑、局部麻醉劑、神經肌肉阻斷劑、抗微生物劑、抗牛皮癬藥、皮質類固醇、同化類固醇、紅血球生成素、免疫劑、免疫球蛋白、免疫抑制劑、生長激素、激素替代藥物、放射性藥物、抗抑鬱劑、抗精神病藥、興奮劑、哮喘藥物、β促效劑、吸入型類固醇、腎上腺素或類似物、細胞激素及細胞激素拮抗劑。
  35. 一種結合蛋白接合物，其包含如請求項1至30中任一項之結合蛋白，該結合蛋白接合物進一步包含選自由免疫黏附分子、顯影劑、治療劑及細胞毒性劑組成之群的藥劑。
  36. 如請求項35之結合蛋白接合物，其中該顯影劑為選自由放射性標記、酶、螢光標記、發光標記、生物發光標記、磁性標記及生物素組成之群。
  37. 如請求項36之結合蛋白接合物，其中該放射性標記為選自由以下組成之群：3H、14C、35S、90Y、99Tc、111In、125I、131I、177Lu、166Ho及153Sm。
  38. 如請求項35之結合蛋白接合物，其中該治療劑或細胞毒性劑為選自由以下組成之群：抗代謝物、烷化劑、抗生素、生長因子、細胞激素、抗血管生成劑、抗有絲分裂劑、蒽環黴素、毒素及細胞凋亡劑。
  39. 一種分離之核酸，其編碼如請求項1至30中任一項之結 合蛋白之胺基酸序列。
  40. 一種載體，其包含如請求項39之分離之核酸。
  41. 如請求項40之載體，其中該載體係選自由pcDNA、pTT、pTT3、pEFBOS、pBV、pJV、pcDNA3.1 TOPO、pEF6 TOPO及pBJ組成之群。
  42. 一種宿主細胞，其包含如請求項40或41之載體，其中該宿主細胞不為人體內之轉型宿主細胞。
  43. 如請求項42之宿主細胞，其中該宿主細胞為原核細胞。
  44. 如請求項43之宿主細胞，其中該原核細胞為大腸桿菌。
  45. 如請求項42之宿主細胞，其中該宿主細胞為真核細胞。
  46. 如請求項45之宿主細胞，其中該真核細胞係選自由原生生物細胞、動物細胞、植物細胞及真菌細胞組成之群。
  47. 如請求項46之宿主細胞，其中該動物細胞為選自由哺乳動物細胞、鳥類細胞及昆蟲細胞組成之群。
  48. 如請求項47之宿主細胞，其中該哺乳動物細胞為CHO細胞。
  49. 如請求項47之宿主細胞，其中該哺乳動物細胞為COS細胞。
  50. 如請求項45之宿主細胞，其中該真核細胞為酵母細胞。
  51. 如請求項50之宿主細胞，其中該酵母細胞為釀酒酵母。
  52. 如請求項47之宿主細胞，其中該昆蟲細胞為Sf9細胞。
  53. 一種製備結合蛋白之方法，其包含在足以產生該結合蛋白之條件下於培養基中培養如請求項42至52中任一項之宿主細胞。
  54. 如請求項53之方法，其中50%至75%所製備之結合蛋白為雙重特異性四價結合蛋白。
  55. 如請求項53之方法，其中75%至90%所製備之結合蛋白為雙重特異性四價結合蛋白。
  56. 如請求項53之方法，其中90%至95%所製備之結合蛋白為雙重特異性四價結合蛋白。
  57. 一種結合蛋白，其係以如請求項53之方法製備。
  58. 一種產生能夠結合IL-17及TNF-α之結合蛋白的方法，其包含以下步驟：建構如請求項1至30中任一項之多肽鏈，其中該第一多肽鏈係來自第一親本抗體或其抗原結合部分，且該第二多肽鏈係來自第二親本抗體或其抗原結合部分；及表現該或該等多肽鏈，以產生能夠結合TNF-α及IL-17之結合蛋白。
  59. 如請求項58之方法，其中該第一親本抗體或其抗原結合部分以及該第二親本抗體或其抗原結合部分係選自由人類抗體、CDR移植抗體及人類化抗體組成之群。
  60. 如請求項58之方法，其中該第一親本抗體或其抗原結合部分以及該第二親本抗體或其抗原結合部分係選自由以下組成之群：Fab片段；F(ab')2片段，一種包含在鉸鏈區由二硫橋連接之2個Fab片段的二價片段；由VH及CH1域組成之Fd片段；由抗體單臂之VL及VH域組成之Fv片段；dAb片段；分離之互補決定區(CDR)；單鏈抗體；及雙功能抗體。
  61. 如請求項58之方法，其中該第一親本抗體或其抗原結合部分具有至少一種該DVD-Ig結合蛋白展現之所需性質，其中該所需性質係選自一或多種抗體參數，其中該抗體參數係選自由以下組成之群：抗原特異性、對抗原之親和力、效能、生物功能、抗原決定基識別、穩定性、溶解度、產生效率、免疫原性、藥物動力學、生物可用性、組織交叉反應性及直系同源抗原結合。
  62. 如請求項58之方法，其中該第二親本抗體或其抗原結合部分具有至少一種該DVD-Ig結合蛋白展現之所需性質，其中該所需性質係選自一或多種抗體參數，其中該抗體參數係選自由以下組成之群：抗原特異性、對抗原之親和力、效能、生物功能、抗原決定基識別、穩定性、溶解度、產生效率、免疫原性、藥物動力學、生物可用性、組織交叉反應性及直系同源抗原結合。
  63. 如請求項58之方法，其中該Fc區係選自由天然序列Fc區及變異序列Fc區組成之群。
  64. 如請求項63之方法，其中該Fc區係選自由來自IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgM、IgE及IgD之Fc區組成之群。
  65. 如請求項58之方法，其中該第一親本抗體或其抗原結合部分結合該第一抗原之親和力不同於該第二親本抗體或其抗原結合部分結合該第二抗原之親和力。
  66. 如請求項58之方法，其中該第一親本抗體或其抗原結合部分結合該第一抗原之效能不同於該第二親本抗體或其 抗原結合部分結合該第二抗原之效能。
  67. 一種如請求項1至30中任一項之結合蛋白之用途，其係用於製備治療個體之自體免疫疾病或自體免疫病症的藥物。
  68. 如請求項67之用途，其中該病症係類風濕性關節炎。
  69. 如請求項67或68之用途，其中該結合蛋白係經調配用於以至少一種選自以下之方式投與：非經腸、皮下、肌肉內、靜脈內、關節內、支氣管內、腹內、囊內、軟骨內、腔內、體腔內、小腦內、腦室內、結腸內、子宮頸內、胃內、肝內、心肌內、骨內、骨盆內、心包內、腹膜內、胸膜內、前列腺內、肺內、直腸內、腎內、視網膜內、脊椎內、滑膜內、胸腔內、子宮內、膀胱內、快速注射、經陰道、經直腸、經頰、舌下、鼻內及經皮。
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