SK287422B6 - Inhibítory enzýmu konvertujúceho interleukín-1beta, farmaceutická kompozícia s ich obsahom a ich použitie - Google Patents

Abstract

Opisujú sa inhibítory enzýmu konvertujúceho interleukín- 1beta všeobecného vzorca alfa, farmaceutická kompozícia s ich obsahom, ich použitie na prípravu liečiva na liečenie alebo prevenciu ochorení sprostredkovaných IL-1, autoimúnnych ochorení, zápalových ochorení alebo neurodegeneratívnych ochorení, na prípravu liečiva na inhibíciu funkcie sprostredkovanej ICE, na prípravu liečiva na urýchlenie hojenia zranení a rán a na liečenie alebo prevenciu infekčných ochorení u pacienta, ktorý takéto liečenie alebo prevenciu potrebuje.

Description

Vynález sa týka nových skupín zlúčenín, ktoré sú inhibítoimi enzýmu konvertujúceho interleukín-1/3 (ICE, interleukín-1/3 converting enzýme). Inhibítory ICE podľa vynálezu sú charakterizované konkrétnymi štruktúrnymi a fyzikálno-chemickými znakmi. Vynález sa tiež týka farmaceutických prostriedkov, ktoré tieto zlúčeniny obsahujú. Zlúčeniny a farmaceutické prostriedky podľa vynálezu sú predovšetkým veľmi vhodné pre inhibíciu aktivity ICE a dôsledkom toho sa môžu výhodne použiť ako činidlá proti ochoreniam sprostredkovaných interleukínom-1 (IL-1), vrátane zápalových ochorení, autoimunitných ochorení a neurodegeneratívnych ochorení. Vynález sa tiež týka spôsobu inhibicie aktivity ICE a spôsobov liečenia ochorení sprostredkovaných interleukínom-1 s použitím zlúčenín a prostriedkov podľa vynálezu.

Doterajší stav techniky

Interleukín 1 (IL-1) je dôležitým proti zápalovým a imunoregulačným proteínom, ktorý stimuluje diferenciáciu a proliferáciu fibroblastov, produkciu prostaglandínov, kolagenázy a fosfolipázy synoviálnymi bunkami a chondrocytmi, degranuláciu bazofilov a eozinofilov a aktiváciu neutrofilov (Oppenheim, J. H. a kol., Immunology Today, 7, str. 45 - 56 (1986)). Sám osebe sa podieľa na patogenéze chronických a akútnych zápalových a autoimunitných ochorení. IL-1 produkujú prevažne periférne krvné monocyty ako súčasť zápalovej odpovede a vyskytuje sa vo dvoch odlišných agonistických formách, IL-1 a a IL-1/3 (Mosely, B. S. a kol., Proc. Nat. Acad. Sci., 84 str. 4572 - 4576 (1987); Lonnemann, G. a kol., Eur. J. Immunol., 19, str. 1531 - 1536(1989)).

IL-Ιβ je syntetizovaný ako biologicky neaktívny prekurzor, pIL-Ιβ. pIL-Ιβ nemá konvenčnú vedúcu sekvenciu (leader sequence) a neupravuje ho signálna peptidáza (March. C. J., Náture, 315, str. 641 - 647 (1985)). Namiesto toho je pIL-lb štiepený enzýmom konvertujúcim interleukín-lb (ICE, interleukín-1 b converting enzýme) medzi Asp-116 a Ala-117, čím vzniká biologicky aktívny C-koncový fragment nachádzajúci sa v ľudskom sére a synoviálnej kvapaline (Sleath, P. R. a kol., J. Biol. Chem,, 265, str. 14526 - 14528 (1992); A. D. Howard a kol., J. Immunol., 147, str. 2964 - 2969 (1991)). Úprava účinkom ICE je tiež nutná pre transport maturovaného IL-lb cez bunkovú membránu.

ICE je cysteínová proteáza lokalizovaná prevažne v monocytoch. Konvertuje prekurzor IL-Ιβ na jeho maturovanú formu (Black, R. A. a kol., FEBS Lett., 247, str. 386 - 390 (1989); Kostura, M. J. a kol., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 86, str. 527 - 5231 (1989)). Zdá sa, že ICE alebo jeho homológy sa tiež podieľajú na regulácii smrti bunky alebo apoptózy (Yuan, J. a kol., Celí, 75, str. 641 - 652 (1993); Miura, M. a kol., Celí, 75, str. 653 - 660 (1993); Nett-Fiordalisi, M. A. a kol., J. Celí Biochem., 17B, str. 117 (1993)). Predpokladá sa, že ICE alebo homológy ICE súvisia s reguláciou apoptózy pri neurodegeneratívnych ochoreniach, ako je Alzheimerova a Parkinsonova choroba (Marx, J. A M. Baringa, Science, 259, str. 760 - 762 (1993); Gagliardini, V. a kol., Science, 263, str. 826 - 828 (1994)).

ICE sa už skôr opísal ako heterodimer zložený z dvoch podjednotiek, p20 a plO (s molekulovou hmotnosťou 20 kDa respektíve 10 kDa). Tieto podjednotky vznikajú z proenzýmu s hmotnosťou 45 kDa (p45) cez formu p30, pomocou aktivačného mechanizmu, ktorý je autokatalytický (Thomberry, N. A. a kol., Náture, 356, str. 768 - 774 (1992)). Proenzým ICE sa rozdelil na niekoľko funkčných domén: prodoménu (pl4), podjednotku p22/20, polypeptidový linker a podjednotku plO (Thomberry a kol., pozri vyššie; Casano a kol., Genomics, 20, str. 474 - 481 (1994)).

p45 v celej dĺžke sa charakterizoval pomocou svojej cDNA-sekvencie a aminokyselinovej sekvencie (patentovej prihlášky PCT č. WO 91/15577 a WO 94/00154). Známe sú aj cDNA-sekvencie a aminokyselinové sekvencie p20 a P10 (Thomberry a kol., pozri skôr). Sekvenovali a klonovali sa tiež myšie a krysie ICE. Majú vysokú homológiu aminokyselinovéj sekvencie a sekvencie nukleovej kyseliny s ľudským ICE (Miller, D. K. a kol., Ann. N.Y. Acad. Sci., 696, str. 133 - 148 (1993); Molineaux, S. M. a kol., Proc. Nat. Acad. Sci., 90, str. 1809 - 1813 (1993)). Znalosť primárnej štruktúry ICE však neumožňuje predpovedať jeho terciámu štruktúru. Neumožňuje ani pochopiť štruktúrne, konformačné a chemické interakcie ICE a jeho substrátu pIL-Ιβ alebo iných substrátov alebo inhibítorov.

Inhibítory ICE predstavujú skupinu zlúčenín vhodných na kontrolu zápalu alebo apoptózy, alebo oboch. Opísali sa peptidové a peptidylové inhibítory ICE (patentové prihlášky PCT č. WO 91/15577; WO 93/05071; WO 93/09135; WO 93/14777 a WO 93/16710; a Európska patentová prihláška č. 0 547 699). Dôsledkom ich peptidickej povahy sa však takéto inhibítory typicky vyznačujú nežiaducimi farmakologickými vlastnosťami, ako je zlá orálna absorpcia, zlá stabilita a rýchly metabolizmus (Plattner, J. J. a D. W. Norbeck, v Druq Discoverv Technologies , C. R. Clark a W. H. Moos, vydavatelia (Ellis Horwood, Chichester, Veľká Británia, 1990), str. 92 - 126). To bráni vyvinutiu účinných liečiv na ich báze.

V súlade s tým jestvuje potreba nájsť zlúčeniny, ktoré môžu účinne inhibovať pôsobenie ICE, pre použitie ako činidiel na prevenciu a liečenie chronických a akútnych foriem ochorení sprostredkovaných IL-1, vrá tane rôznych rakovín, ako i zápalových, autoimunitných alebo neurodegeneratívnych ochorení.

Podstata vynálezu

Vynález opisuje nové skupiny zlúčenín a ich farmaceutický prijateľných derivátov, ktoré sa dajú použiť ako inhibítory ICE. Tieto zlúčeniny sa môžu použiť samotné alebo v kombinácii s inými terapeutickými alebo profylaktickými činidlami, ako sú antibiotiká, imunomodulátory alebo iné protizápalové činidlá, na ošetrenie alebo profylaxiu ochorení sprostredkovaných IL-1. Zlúčeniny podľa vynálezu sú schopné viazať sa na aktívne centrum ICE a inhibovať aktivitu tohto enzýmu.

Vynález sa týka nových skupín inhibítorov ICE. Tieto nové skupiny inhibítorov ICE sa vyznačujú nasledujúcimi štruktúrnymi a fyzikálno-chemickými znakmi:

a) obsahujú prvý a druhý zvyšok vytvárajúci vodíkovú väzbu, pričom každý z týchto zvyškov je schopný vytvárať vodíkovú väzbu s iným atómom hlavného reťazca ICE a tento atóm hlavného reťazca sa vybral zo skupiny, ktorú tvorí karbonylový atóm kyslíka v Arg-341, amidová skupina -NH- v Arg-341, karbonylový atóm kyslíka v Ser-339 a amidová skupina -NH- v Ser-339,

b) obsahujú prvý a druhý mierne hydrofóbny zvyšok, pričom každý z týchto zvyškov je schopný asociovať sa s inou väzobnou kapsou ICE, pokiaľ sa naň tento inhibítor naviazal a táto väzobná kapsa sa vybrala zo skupiny, ktorú tvorí väzobná kapsa P2, väzobná kapsa P3, väzobná kapsa P4 a väzobná kapsa P°, a

c) obsahujú elektronegatívny zvyšok obsahujúci jeden alebo niekoľko elektronegatívnych atómov, a tieto atómy sa naviazali na rovnaký atóm alebo na susediace atómy v tomto zvyšku a uvedený zvyšok je schopný vytvárať jednu alebo niekoľko vodíkových väzieb alebo soľných mostíkov so zvyškami vo väzobnej kapse Pl vICE.

Opisuje sa tiež spôsob identifikácie, projektovanie alebo predpovedanie inhibítorov ICE, ktorý zahŕňa nasledujúce kroky:

a) selekciu kandidátnej zlúčeniny s definovanou chemickou štruktúrou, ktorá obsahuje aspoň dva zvyšky vytvárajúce vodíkové väzby, aspoň dva mierne hydrofóbne zvyšky a jeden elektronegatívny zvyšok obsahujúci jeden alebo niekoľko elektronegatívnych atómov, ktoré sa naviazali na rovnaký atóm alebo na susediace atómy v tomto elektronegatívnom zvyšku, b) stanovenie konformácie s nízkou energiou pre väzbu uvedenej zlúčeniny na aktívne centrum ICE,

c) zhodnotenie schopnosti uvedenej zlúčeniny v uvedenej konformácii vytvárať aspoň dve vodíkové väzby s atómami hlavného reťazca, inými ako atómami uhlíka, v Arg-341 a Ser-339 v ICE,

d) zhodnotenie schopnosti uvedenej zlúčeniny v uvedenej konformácii asociovať sa aspoň s dvomi z väzobných káps ICE vybraných zo skupiny, ktorú tvorí väzobná kapsa P2, väzobná kapsa P3, väzobná kapsa P4 a väzobná kapsa P°,

e) zhodnotenie schopnosti uvedenej zlúčeniny v uvedenej konformácii interagovať s väzobnou kapsou Pl v ICE, a

f) prijatie alebo zamietnutie uvedenej kandidátnej zlúčeniny ako inhibítora ICE na základe stanovení a zhodnotení uskutočnených v predchádzajúcich krokoch.

Predmetom vynálezu je nová skupina inhibítorov ICE predstavovaná všeobecným vzorcom (CJ₂)_ro-T /

(a) Ri-NH-Xj \

(CH₂)_g-R₃

Jednotlivé všeobecné symboly v týchto všeobecných vzorcoch majú uvedený význam.

Skratky a definície

V tomto texte sa používajú nasledujúce skratky:

Skratka	Činidlo alebo zvvšok
Ala	alanín
Arg	arginín
Asn	asparagín
Asp	kyselina asparágová
Cys	cysteín
Gin	glutamín

Glu kyselina glutamová

Gly glycín

His histidín íle izoleucín

Leu leucín

Lys lyzín

Met metionín

Phe fenylalanín

Pro prolín

Ser serín

Thr treonín

Trp tryptofán

Tyr tyrozin

Val valín

V tomto texte sa používajú nasledujúce termíny:

Termín „aktívne centrum“ označuje ktorýkoľvek, ktorékoľvek alebo všetky z nasledujúcich miest ICE: miesto, kde sa viaže substrát, miesto, kde sa viaže inhibítor a miesto, kde prebieha štiepenie substrátu. Aktívne centrum charakterizujú aspoň aminokyselinové zvyšky: 173, 176, 177, 178, 179, 180, 236, 237, 238, 239, 244, 248, 283, 284, 285, 290, 338, 339, 340, 341, 342, 343, 344, 345, 348, 352, 381, 383, s použitím sekvencie a číslovania, ako ich uviedli Thomberry a kol., pozri skôr.

Termíny „väzobná kapsa P“, „podmiesto S“, „kapsa S“ a podobne označujú väzobné podmiesta alebo časti miesta viažuceho substrát na molekule ICE. Aminokyselinové zvyšky substrátu sa označujú podľa ich polohy vzhľadom na štiepateľnú väzbu, t. j. väzbu, ktorú štiepi proteáza. Zvyšky sa označujú PI, P2 atď. pre tie zvyšky, ktoré sa vyskytujú smerom ku N-koncu substrátu a P ľ, P2' atď. pre tie zvyšky, ktoré sa vyskytujú smerom k C-koncu substrátu. Časti inhibítora, ktoré zodpovedajú zvyškom P alebo P' substrátu, sú tiež označené PI, Pľ atď., analogicky so substrátom. Väzobné podmiesta molekuly ICE, ktoré prijímajú zvyšky označené PI, Pľ atď., sú označené SI, Sľ atď., alebo sa môžu alternatívne označiť „väzobná kapsa PI“, „väzobná kapsa PI“ atď. (I. Schechter a A. Berger, „On the Size of the Active Site in Proteases“, Biochem. Biophys. Res. Commun., zväzok 27, str. 157 - 162 (1967)).

Termíny „väzobná kapsa P2“ alebo „podmiesto S2“ aktívneho centra ICE sú ekvivalentné a definované ako priestor obklopený aminokyselinovými zvyškami Pro-290, Val-338 alebo Trp-340.

Termíny „väzobná kapsa P3“ alebo „podmiesto S3“ aktívneho centra ICE sú ekvivalentné a definované ako priestor obklopený aminokyselinovými zvyškami Pro-177, Arg-178, Thr-180, Arg-341 alebo Pro-343.

Termíny „väzobná kapsa P4“ alebo „podmiesto S4“ aktívneho centra ICE sú ekvivalentné a definované ako priestor obklopený aminokyselinovými zvyškami His-342, Met-345, Val-348, Arg-352, Asp-381, Arg-383 alebo Trp-340.

Termíny „väzobná kapsa PI“ alebo „podmiesto SI“ aktívneho centra ICE sú ekvivalentné a definované ako priestor obklopený aminokyselinovými zvyškami Arg-179, His-237, Gln-283 alebo Arg-341.

Termíny „väzobná kapsa P'“ alebo „podmiesto S'“ aktívneho centra ICE sú ekvivalentné a definované ako priestor obklopený aminokyselinovými zvyškami Phe-173, Ile-176, His-237, Gly-238, Ile-239, Cys-244 alebo His-248.

Termín „hydrofóbny“ označuje zvyšok, ktorý má sklon nerozpúšťať sa vo vode a je rozpustný v tukoch. Medzi hydrofóbne zvyšky patria, bez toho, aby išlo o vyčerpávajúci alebo obmedzujúci výpočet, uhľovodíky, ako sú alkány, alkény, alkíny, cykloalkány, cykloalkény, cykloalkíny a aromatické zlúčeniny, ako sú aryly, určité nasýtené a nenasýtené heterocykly a zvyšky, ktoré sú v podstate podobné bočným reťazcom hydrofóbnych prirodzených a neprirodzených α-aminokyselín, vrátane valínu, leucínu, izoleucínu, metionínu, fenylalanínu, kyseliny α-aminoizomaslovej, alloizoleucínu, tyrozínu a tryptofánu.

Termín „mierne hydrofóbny“ označuje hydrofóbny zvyšok, v ktorom sa jeden alebo dva atómy uhlíka nahradili viac polárnymi atómami, ako je kyslík alebo dusík.

Termín „heterocyklus“ alebo „heterocyklický“ označuje stabilnú mono- alebo polycyklickú zlúčeninu, ktorá môže prípadne obsahovať jednu alebo dve dvojné väzby alebo môže prípadne obsahovať jeden alebo niekoľko aromatických kruhov. Každý heterocyklus tvoria atómy uhlíka a jeden až štyri heteroatómy nezávisle od seba vybrané zo skupiny zahŕňajúcej dusík, kyslík a síra. Termín „dusíkový heteroatóm“, „dusík ako heteroatóm“ a „sírový heteroatóm“, „síra ako heteroatóm“, ako sa tu používajú, zahŕňajú ľubovoľnú oxidovanú formu dusíka alebo síry alebo kvatemizovanú formu akéhokoľvek zásaditého dusíka.

Medzi definované heterocykly patria napríklad pyrimidinyl, tetrahydrochinolyl, tetrahydroizochinolínyl, purínyl, pyrimidyl, indolinyl, benzimidazolyl, imidazolyl, imidazolinoyl, imidazolidinyl, chinolyl, izochinolyl, indolyl, pyridyl, pyrolyl, pyrolinyl, pyrazolyl, pyrazínyl, chinoxolyl, piperidínyl, morfolínyl, tiamorfolínyl, furyl, tienyl, triazolyl, tiazolyl, -karbolinyl, tetrazolyl, tiazolidinyl, benzofuranoyl, tiamorfolinyl-sulfón, benzoxazolyl, oxopiperidinyl, oxopyrolidinyl, oxoazepinyl, azepinyl, izoxazolyl, tetrahydropyranyl, tetrahyd rofuranyl, tiadiazolyl, benzodioxolyl, benzotienyl, tetrahydrotiofenyl a sulfolanyl. Ďalšie heterocykly sú opísané v A. R. Katritzky a C. W. Rees, vydavatelia, Comprehensive Heterocvclic Chemistry: The Structure. Reactions, Synthesis and Use of Heterocvclic Compounds, zväzok 1-8, Pergamen Press, New York (1984).

Termín „cykloalkyl“ alebo „cykloalkylová skupina“ označuje mono- alebo polycyklickú skupinu, ktorá obsahuje 3 až 15 atómov uhlíka a môže prípadne obsahovať jednu alebo dve dvojné väzby. Medzi príklady patria cyklohexyl, adamantyl a norbomyl.

Termín „aryl“ alebo „arylová skupina“ označuje mono- až polycyklickú skupinu, ktorá obsahuje 6, 10, 12 alebo 14 atómov uhlíka, v ktorej je aspoň jeden kruh aromatický. Medzi príklady patria fenyl, naftyl a bifenyl.

Termín „heteroaromatický“ alebo „heteroaromatická skupina“ označuje mono- alebo polycyklickú skupinu, ktorá obsahuje 1 až 15 atómov uhlíka a 1 až 4 heteroatómy, nezávisle od seba vybrané zo skupiny zahŕňajúcej síru, dusík a kyslík, a ktorá ďalej obsahuje 1 až 3 päť- alebo šesťčlenné kruhy, z ktorých aspoň jeden je aromatický.

Termín „-aminokyselina“ („alfa-aminokyselina“) označuje či už v prírode sa vyskytujúce aminokyseliny tak aj iné „neproteínové“ -aminokyseliny bežne používané odborníkmi v chémii peptidov pri príprave syntetických anológov prirodzene sa vyskytujúcich peptidov, vrátane D- a L-foriem. V prírode sa vyskytujúcimi aminokyselinami sú glycín, alanín, valín, leucín, izoleucín, serín, metionín, treonín, fenylalanín, tyrozín, tryptofán, cysteín, prolín, histidín, kyselina asparágová, asparagín, kyselina glutamová, glutamín, kyselina -karboxyglutamová, arginín, omitín a lyzín. Medzi príklady „neproteínových“ α-aminokyselín patrí hydroxylyzín, homoserín, homotyrozín, homofenylalanín, citrullín, kynurenín, 4-aminofenylalanín, 3-(2-naftyl)alanín, 3-(1-naftyl)alanín, metionín-sulfón, terc.butylalanín, terc.butylglycín, 4-hydroxyfenylglycín, aminoalanín, fenylglycín, vinylalanín, propargylglycín, l,2,4-triazolo-3-alanín, 4,4,4,-trifluórtreonín, tyronín, 6-hydroxytryptofan, 5-hydroxytryptofan, 3-hydroxykynurenín, 3-aminotyrozín, trifluórmetylalanín, 2-tienylalanín, (2-(4-pyridyl)etyl)cysteín, 3,4-dimetoxyfenylalanín, 3-(2-tiazolyl)alanín, kyselina ibotenová, kyselina 1-amino-l-cyklopentánkarboxylová, kyselina 1-amino-l-cyklohexánkarboxylová, kyselina chiskvalová, 3-trifluórmetylfenylalanín, 4-trifluórmetylfenylalanín, cyklohexylalanín, cyklohexylglycín, tiohistidín, 3-metoxytyrozín, elastatinal, norleucín, norvalín, alloizoleucín, homoarginín, tioprolín, dehydroprolín, hydroxyprolín, kyselina izonipektotová, homoprolín, cyklohexylglycín, kyselina α-amino-n-maslová, cyklohexylalanín, kyselina aminofenylmaslová, fenylalaníny substituované v orto-, metá- alebo para-polohe fenylového kruhu jedným alebo dvomi substituentmi vybranými zo súboru zahŕňajúceho alkylové skupiny s 1 až 4 atómami uhlíka, alkoxyskupiny s 1 až 4 atómami uhlíka, atómy halogénov a nitroskupinu, alebo substituované metyléndioxyskupinou, β-2- a -3-tienylalanín, β-2- a -3-furánylalanín, β-2-, -3- a -4-pyridylalanín, 6-(benzotienyl-2- a -3-yl)alanín, 6-(l- a 2-naftyl)alanín, O-alkylované deriváty serínu, treonínu alebo tyrozínu, S-alkylovaný cysteín, S-alkylovaný homocysteín, O-sulfáty, O-fosfáty a O-karboxyláty tyrozínu, 3-sulfotyrozín,

3-karboxytyrozín, 3-fosfotyrozín, ester kyseliny metánsulfónovej a tyrozínu, ester kyseliny metánfosfónovej a tyrozínu, 3,5-di-jódtyrozín, 3-nitrotyrozín, ε-alkyllyzíny a δ-alkylomitíny. Ktorákoľvek z týchto a-aminokyselín môže byť substituovaná metylovou skupinou v α-polohe, halogénom na ktoromkoľvek aromatickom zvyšku na bočnom reťazci α-aminokyseliny, alebo vhodnou chrániacou skupinou na atómoch kyslíka, dusíka alebo síry vo zvyškoch bočných reťazcov. Vhodné chrániace skupiny sú uvedené v práci „Protective Groups In Organic Synthesis“, T. W. Greene a P. G. M. Wuts, J. Wiley and Sons, New York, 1991.

Termín „bočný reťazec α-aminokyseliny“ alebo „zvyšok, ktorý je bočným reťazcom a-aminokyseliny“, označuje chemický zvyšok, ktorý sa naviazal na α-uhlík a-aminokyseliny.

Termín „bioizostemá náhrada za -CO₂H“ označuje skupinu, ktorá môže nahradiť karboxylovú skupinu v bioaktívnych molekulách. Príklady takých skupín opísal Christopher A. Lipinski, „Bioisosteres in Drug Design“, Annual Reports In Medical Chemistry, 21, str. 286 - 88 (1986) a C. W. Thomber, „Isosterism and Molecular Modification in Drug Design“, Chemical Society Reviews. str. 563 - 580 (1979).

Termín „asociácia“ sa používa na označenie stavu blízkosti medzi inhibítorom alebo jeho časťami k molekule ICE alebo jej častiam, pri ktorom j e vzájomná poloha energeticky zvýhodnená elektrostatickými alebo van der Waalsovými interakciami.

Termín „vodíková väzba“ označuje priaznivú interakciu, ku ktorej dochádza kedykoľvek sú vhodný donorový atóm, X, nesúci protón a vhodný akceptorový atóm, Y, vo vzájomnej vzdialenosti medzi 2,5 x 1O’¹⁰ m a 3,5 x 10'¹⁰ m a uhol X-H---Y je väčší ako 90°. Vhodné donorové a akceptorové atómy sú v lekárskej chémii dobre známe (G. C. Pimentel a A. L. McClellan, The Hydrogen Bond, Freeman, San Francisco, 1960; R. Tay-lor a O. Kennard, „Hydrogen Bond Geometry in Organic Crystals“, Acconts of Chemical Research. 17, str. 320- 326(1984)).

Termín „soľný mostík“ označuje nekovalentnú príťažlivú interakciu medzi kladne nabitým zvyškom (P) a negatívne nabitým zvyškom (N), pokiaľ je vzdialenosť medzi ťažiskami P a N medzi 2 x 10'¹⁰ ma 6 x 10’¹⁰ m. Pri výpočte ťažiska sa započítavajú atómy, ktoré môžu obsahovať formálny náboj a atómy, ktoré s nimi bezprostredne susedia. Soľný mostík sa môže napríklad vytvoriť medzi kladne nabitým guanidíniovým bočným reťazcom arginínového zvyšku a záporne nabitým karboxylátovým bočným reťazcom glutamátového zvyšku.

Soľné mostíky sú v lekárskej chémii dobre známe (L. Stryer, Biochemistrv, Freeman, San Francisco, (1975); K. A. Dill. „Dominánt Forces in Proteín Folding“, Biochemistrv, 29, č. 31, str. 7133 - 7155, (1990)).

Termín „ťažisko“ označuje bod v trojrozmernom priestore, ktorý predstavuje hmotnostnú priemernú polohu hmoty, ktorá tvorí objekt.

Termín „hlavný reťazec“ označuje časť polypeptidu, ktorá obsahuje opakujúcu sa jednotku -CO-CH-NH-.

Termín „skelet“ označuje štruktúrny stavebný blok, ktorý tvorí základ inhibítora ICE podľa vynálezu. K tomuto skeletu sa majú pripojiť rôzne zvyšky a funkčné skupiny. Skelety podľa vynálezu sa teda uvádzajú s voľnými väzbami. Rôzne skelety inhibítorov ICE podľa vynálezu zahŕňajú časti:

\ /^X\/

N C

H O alebo \A/

N SO

H O

V týchto skeletoch predstavujú zvyšky NH a CO alebo SO₂ prvý a druhý zvyšok vytvárajúci vodíkovú väzbu, pričom každý z týchto zvyškov je schopný vytvárať vodíkovú väzbu s atómom hlavného reťazca ICE, a tento atóm hlavného reťazca je vybraný zo skupiny, ktorú tvoria karbonylový atóm kyslíka v Arg-341, amidová skupina -NH- v Arg-341, karbonylový atóm kyslíka v Ser-339 a amidová skupina -NH- v Ser-339.

Termín „substitúcia“ označuje nahradenie atómu vodíka v zlúčenine substituentovou skupinou. V tomto vynáleze sa zo substitúcie vylúčili tie atómy vodíka, ktoré tvoria časť zvyšku vytvárajúceho vodíkovú väzbu, ktorý je schopný vytvárať vodíkovú väzbu s karbonylovým atómom kyslíka v Arg-341 v ICE alebo s karbonylovým atómom kyslíka v Ser-339 v ICE. Medzi tieto vylúčené atómy vodíka patria tie atómy, ktoré tvoria skupinu -NH-, ktorá je v polohe alfa vzhľadom na symbol Z alebo skupine -CO- a ktorá je uvedená ako -NHa nie ako skupina X alebo nejako inakšie označená skupina v nasledujúcich všeobecných vzorcoch: (a) až (t), (v) až (y) a (I) až (VIID).

Termín „priamy reťazec“ označuje súvislú nerozvetvenú reťaz kovalentné viazaných členov, t. j. atómov, ktoré tvoria časti reťazca. Priamy reťazec alebo kruh, ktorého tvorí tento priamy reťazec súčasť, môžu byť substituované, ale tieto substituenty nie sú časťou priameho reťazca.

Termín „K¹“ predstavuje numerické meradlo účinnosti zlúčeniny pri inhibícii aktivity cieľového enzýmu, ako je ICE. Nižšie hodnoty K¹ odrážajú vyššiu účinnosť. Hodnota K¹ sa získa spracovaním experimentálne stanovených údajov štandardnými rovnicami enzýmovej kinetiky (pozri I. H. Segel, Enzýme Kine-tics, Wiley-Interscience, 1975).

Termín „minimalizovať“ označuje systematické upravenie atómovej geometrie molekuly alebo molekulového komplexu tak, že akákoľvek drobná odchýlka atómovej geometrie by spôsobila zvýšenie celkovej energie systému pri meraní pomocou silového poľa molekulárnej mechaniky. Minimalizácia a silové polia molekulárnej mechaniky sú dobre známe vo výpočtovej chémii (U. Burkert a N. L. Allinger, Molecular Mechanics, ACS Monograph 177, Američan Chemical Society, Washington, D.C. 1982, str. 59 - 78).

Termín „energia napätosti“ sa v tejto prihláške používa na označenie rozdielu medzi voľnou konformačnou energiou zlúčeniny a väzobnou konformačnou energiou tejto zlúčeniny pri naviazaní na ICE. Energia napätosti sa môže stanoviť pomocou nasledujúcich krokov: Určí sa energia molekuly v konformácii nutnej pre naviazanie na ICE. Potom sa urobí minimalizácia a opäť sa určí energia - to je voľná konformačná energia. Energiou napätosti pre väzbu potenciálneho inhibítora na ICE je rozdiel medzi voľnou konformačnou energiou a väzobnou konformačnou energiou. Pri výhodnej realizácii tvorí energia napätosti inhibítora podľa vynálezu menej ako zhruba 42 kJ/mol.

Termín „pacient“, ako sa tu používa, označuje ľubovoľného cicavca, najmä človeka.

Termín „farmaceutický účinné množstvo“ označuje množstvo účinné na liečenie alebo zlepšenie ochorenia sprostredkovaného IL-1 u pacienta. Termín „profylaktický účinné množstvo“ označuje množstvo účinné na prevenciu alebo na podstatné znížene možnosti ochorenia sprostredkovaného IL-1 u pacienta.

Termín „farmaceutický prijateľná nosná alebo pomocná látka“ označuje netoxickú nosnú alebo pomocnú látku, ktorá sa môže podať pacientovi, spolu so zlúčeninou podľa vynálezu, a ktorá neničí jej farmakologickú účinnosť.

Termín „farmaceutický prijateľný derivát“ znamená ľubovoľnú farmaceutický prijateľnú soľ, ester alebo soľ takého esteru, zlúčeniny podľa vynálezu alebo akúkoľvek inú zlúčeninu, ktorá je po podaní príjemcovi schopná poskytovať (priamo alebo nepriamo) zlúčeninu podľa vynálezu alebo jej metabolit, alebo zvyšok s anti-ICE aktivitou.

Medzi farmaceutický prijateľné soli zlúčenín podľa vynálezu patria napríklad soli odvodené od farmaceutický prijateľných anorganických a organických kyselín a zásad. Medzi príklady vhodných kyselín patria kyselina chlorovodíková, bromovodíková, sírová, dusičná, chloristá, fumarová, maleínová, fosforečná, glykolová, mliečna, salicylová, jantárová, toluén-p-sulfónová, vínna, octová, citrónová, metánsulfónová, mravčia, benzoová, malonová naftalén-2-sulfónová a benzénsulfónová. Ďalšie kyseliny, ako je kyselina šťaveľová, hoci nie sú farmaceutický prijateľné, sa môžu použiť na prípravu solí vhodných ako medziprodukty na získanie zlúčenín podľa vynálezu a ich farmaceutický prijateľných adičných solí s kyselinami. Medzi soli odvodené od vhodných zásad patria soli s alkalickými kovmi (napríklad sodíkom), soli s kovmi alkalických zemín (napríklad horčíkom), amónne soli a tetraalkylamóniové soli s 1 až 4 atómami uhlíka v každej alkylovej časti.

Vynález tiež berie do úvahy „kvatemizáciu“ ľubovoľných zásaditých skupín obsahujúcich dusík v tu opísaných zlúčeninách. Zásaditý dusík sa dá kvatemizovať ľubovoľným z činidiel, ktoré sú známe odborníkovi, vrátane napríklad nižších alkylhalogenidov, ako je metyl-, etyl-, propyl- a butylchlorid, -bromid aj odid, dialkylsulfátov vrátane dimetyl-, dietyl-, dibutyl a diamylsulfátu, halogenidov s dlhým reťazcom, ako je decyl-, lauryl-, myristyl- a stearylchlorid, -bromid a -jodid, a aralkylhalogenidov, vrátane benzyl- a fenyletylbromidu. Pomocou takej kvatemizácie sa dajú získať produkty rozpustné alebo dispergovateľné vo vode alebo v oleji.

Inhibítory ICE podľa vynálezu môžu obsahovať jeden alebo niekoľko „asymetrických“ atómov uhlíka a môžu sa teda vyskytovať ako racemáty a racemické zmesi, jednotlivé enantioméry, zmesi diastereomérov a jednotlivé diastereoméry. Vynález výslovne zahŕňa všetky také izoméme formy týchto zlúčenín. Každý stereogénny atóm uhlíka môže byť v R- alebo S-konfígurácii. Hoci konkrétne zlúčeniny a skelety spomenuté v tejto prihláške ako príklady sa môžu uviesť v konkrétnej stereochemickej konfigurácii, zahrnuli sa tiež zlúčeniny a skelety buď s opačnou stereochémiou na ľubovoľnom z chirálnych centier alebo ich zmesi.

Inhibítory ICE podľa vynálezu môžu obsahovať kruhové štruktúry, ktoré môžu byť prípadne substituované na atómoch uhlíka, dusíka alebo iných atómoch rôznymi substituentmi. Takéto kruhové štruktúry sa môžu substituovať raz alebo viac razy. Výhodne kruhové štruktúry obsahujú medzi 0 a 3 substituentmi. Pri viacnásobných substitúciách sa môže každý substituent vybrať nezávisle od iných substituentov, pokiaľ pri tejto kombinácii substituentov vznikne stabilná zlúčenina.

Kombináciami substituentov a premenných podľa vynálezu sú iba tie, ktoré majú za následok vytvorenie stabilnej zlúčeniny. Termín „stabilný“, ako sa tu používa, označuje zlúčeniny, ktoré majú dostatočnú stabilitu na umožnenie prípravy a podania cicavcovi pomocou spôsobov známych v odbore. Typicky sú takéto zlúčeniny stabilné pri teplote 40 °C alebo nižšej, v neprítomnosti vlhkosti alebo iných chemicky reaktívnych podmienok, počas aspoň jedného týždňa.

Na účely úplnejšieho pochopenia tu opísaného vynálezu sa uvádza nasledujúci podrobný opis.

Zistilo sa, že zlúčeniny majúce nasledujúcu novú kombináciu znakov sú prekvapivo účinnými inhibítormi ICE. Tieto zlúčeniny:

a) obsahujú prvý a druhý zvyšok vytvárajúci vodíkovú väzbu, pričom každý z týchto zvyškov je schopný vytvárať vodíkovú väzbu s iným atómom hlavného reťazca ICE, a tento atóm hlavného reťazca sa vybral zo skupiny, ktorú tvoria karbonylový atóm kyslíka v Arg-341, amidová skupina -NH- v Arg-341, karbonylový atóm kyslíka v Ser-339 a amidová skupina -NH- v Ser-339,

b) obsahujú prvý a druhý mierne hydrofóbny zvyšok, pričom každý z týchto zvyškov je schopný asociovať sa s inou väzobnou kapsou ICE, pokiaľ sa naň tento inhibítor naviaže, a táto väzobná kapsa sa vybrala zo skupiny, ktorú tvoria väzobná kapsa P2, väzobná kapsa P3, väzobná kapsa P4 a väzobná kapsa P', a

c) obsahujú elektronegatívny zvyšok obsahujúci jeden alebo niekoľko elektronegatívnych atómov, a tieto atómy sa naviazali na rovnaký atóm alebo na susediace atómy v tomto zvyšku a uvedený zvyšok je schopný vytvárať jednu alebo niekoľko vodíkových väzieb alebo soľných mostíkov so zvyškami vo väzobnej kapse Pl v ICE.

Výhodne sa akýkoľvek mierne hydrofóbny zvyšok, ktorý sa asociuje s väzobnou kapsou P2 v ICE, asociuje tak, že:

a) vzdialenosť od ťažiska tohto mierne hydrofóbneho zvyšku vo väzobnej kapse P2 ku karbonylovému atómu kyslíka v Arg-341 vICEje približne medzi 7,1 x 10¹⁰ m a približne 12,5 x 10'¹⁰m,

b) vzdialenosť od ťažiska tohto mierne hydrofóbneho zvyšku vo väzobnej kapse P2 k amidovému atómu dusíkavArg-341 v ICE je približne medzi 6,0 x 10’¹⁰ m a približne 12 x 10'¹⁰m,a

c) vzdialenosť od ťažiska tohto mierne hydrofóbneho zvyšku vo väzobnej kapse P2 ku karbonylovému atómu kyslíka v Ser-339 v ICE je približne medzi 3,7 x 10‘¹⁰ m a približne 9,5 x 10‘¹⁰ m.

Výhodne sa akýkoľvek mierne hydrofóbny zvyšok, ktorý sa asociuje s väzobnou kapsou P3 v ICE, asociuje tak, že:

a) vzdialenosť od ťažiska tohto mierne hydrofóbneho zvyšku vo väzobnej kapse P3 ku karbonylovému atómu kyslíka v Arg-341 v ICE je približne medzi 3,9 x 10'¹⁰ m a približne 9,5 x 10'¹⁰ m,

b) vzdialenosť od ťažiska tohto mierne hydrofóbneho zvyšku vo väzobnej kapse P3 k amidovému atómu dusíka v Arg-341 v ICE je približne medzi 5,4 x 10'¹⁰ m a približne 11 x 10¹⁰m, a

c) vzdialenosť od ťažiska tohto mierne hydrofóbneho zvyšku vo väzobnej kapse P3 ku karbonylovému atómu kyslíka v Ser-339 v ICE je približne medzi 7,0 x 10'¹⁰ m a približne 13 x 10‘¹⁰ m.

Výhodne sa akýkoľvek mierne hydrofóbny zvyšok, ktorý sa asociuje s väzobnou kapsou P4 v ICE, asociuje tak, že:

a) vzdialenosť od ťažiska tohto mierne hydrofóbneho zvyšku vo väzobnej kapse P4 ku karbonylovému atómu kyslíka v Arg-341 v ICE je približne medzi 4,5 x 10~‘° m a približne 7,5 x 10^_1°m,

b) vzdialenosť od ťažiska tohto mierne hydrofóbneho zvyšku vo väzobnej kapse P4 k amidovému atómu dusíka v Arg-341 v ICE je približne medzi 5,5 x 10'¹⁰ m a približne 8,5 x 10¹⁰ m, a

c) vzdialenosť od ťažiska tohto mierne hydrofóbneho zvyšku vo väzobnej kapse P4 ku karbonylovému atómu kyslíka v Ser-339 v ICE je približne medzi 8 x 10'¹⁰ m a približne 11 x 10'¹⁰ m.

Výhodne sa akýkoľvek mierne hydrofóbny zvyšok, ktorý sa asociuje s väzobnou kapsou P' v ICE, asociuje tak, že:

a) vzdialenosť od ťažiska tohto mierne hydrofóbneho zvyšku vo väzobnej kapse P' ku karbonylovému atómu kyslíka v Arg-341 v ICE je približne medzi 11 x 10’¹⁰ ma približne 16x 10‘¹⁰m,

b) vzdialenosť od ťažiska tohto mierne hydrofóbneho zvyšku vo väzobnej kapse P' k amidovému atómu dusíka v Arg-341 v ICE je približne medzi 10 x 10’¹⁰ m a približne 15 x 10‘¹⁰m, a

c) vzdialenosť od ťažiska tohto mierne hydrofóbneho zvyšku vo väzobnej kapse P' ku karbonylovému atómu kyslíka v Ser-339 v ICE je približne medzi 8 x 10’¹⁰ m a približne 12 x 10'¹⁰ m.

Tento inhibítor ICE má výhodne neutrálny alebo priaznivý entalpický príspevok súčtu všetkých elektrostatických interakcií medzi ním a ICE, ak je na ňom tento inhibítor naviazaný.

Tento inhibítor ICE ďalej výhodne obsahuje menej ako dve sekundárne amidové väzby.

Výhodne tento inhibítor ICE ďalej obsahuje menej ako dve skupiny vybrané zo súboru zahŕňajúceho sekundárne amidové skupiny a karbamátové skupiny.

V prípade, že je tento inhibítor naviazaný na ICE,výhodne sa uvedené mierne hydrofóbne zvyšky samostatne asociujú s väzobnou kapsou P' v ICE a väzobnou kapsou P2 v ICE a vzdialenosť od ťažiska mierne hydrofóbneho zvyšku vo väzobnej kapse P' k ťažisku mierne hydrofóbneho zvyšku vo väzobnej kapse P2 je približne medzi 6, 5 x 10~¹⁰ m a približne 13 x 10‘¹⁰ m.

V prípade, že je tento inhibítor naviazaný na ICE, výhodne sa uvedené mierne hydrofóbne zvyšky samostatne asociujú s väzobnou kapsou P' v ICE a väzobnou kapsou P3 v ICE a vzdialenosť od ťažiska mierne hydrofóbneho zvyšku vo väzobnej kapse P' k ťažisku mierne hydrofóbneho zvyšku vo väzobnej kapse P3 je približne medzi 6 x 10¹⁰ m a približne 15 x 10¹⁰ m.

V prípade, že je tento inhibítor naviazaný na ICE, výhodne sa uvedené mierne hydrofóbne zvyšky samostatne asociujú s väzobnou kapsou P' v ICE a väzobnou kapsou P4 v ICE a vzdialenosť od ťažiska mierne hydrofóbneho zvyšku vo väzobnej kapse P' k ťažisku mierne hydrofóbneho zvyšku vo väzobnej kapse P4 je približne medzi 14 x 10¹⁰ m a približne 22 x 10‘¹⁰ m.

V prípade, že je tento inhibítor naviazaný na ICE, výhodne sa uvedené mierne hydrofóbne zvyšky samostatne asociujú s väzobnou kapsou P2 v ICE a väzobnou kapsou P3 v ICE a vzdialenosť od ťažiska mierne hydrofóbneho zvyšku vo väzobnej kapse P2 k ťažisku mierne hydrofóbneho zvyšku vo väzobnej kapse P3 je približne medzi 5,5xl0‘¹⁰ma približne 13 x 10‘¹⁰ m.

V prípade, že je tento inhibítor naviazaný na ICE, výhodne sa uvedené mierne hydrofóbne zvyšky samostatne asociujú s väzobnou kapsou P2 v ICE a väzobnou kapsou P4 v ICE a vzdialenosť od ťažiska mierne hydrofóbneho zvyšku vo väzobnej kapse P2 k ťažisku mierne hydrofóbneho zvyšku vo väzobnej kapse P4 je približne medzi 9 x 10’¹⁰ m a približne 17 x 10’¹⁰ m.

V prípade, že je tento inhibítor naviazaný na ICE, výhodne sa uvedené mierne hydrofóbne zvyšky samostatne asociujú s väzobnou kapsou P3 v ICE a väzobnou kapsou P4 v ICE a vzdialenosť od ťažiska mierne hydrofóbneho zvyšku vo väzobnej kapse P3 k ťažisku mierne hydrofóbneho zvyšku vo väzobnej kapse P4 je približne medzi 7,5 x 10’¹⁰ m a približne 17 x 10¹⁰ m.

V prípade, že je tento inhibítor naviazaný na ICE, výhodne uvedený prvý zvyšok vytvárajúci vodíkovú väzbu tvorí vodíkovú väzbu s karbonylovým atómom kyslíka v Ser-339 v ICE a uvedený druhý zvyšok vytvárajúci vodíkovú väzbu tvorí vodíkovú väzbu s karbonylovým atómom kyslíka v Arg-341 v ICE a vzdialenosť medzi uvedenými zvyškami vytvárajúcimi vodíkovú väzbu je približne medzi 5 x 10'¹⁰ m a približne

7,5 x 10‘¹⁰m.

V prípade, že je tento inhibítor naviazaný na ICE, výhodne uvedený prvý zvyšok vytvárajúci vodíkovú väzbu tvorí vodíkovú väzbu s karbonylovým atómom kyslíka v Ser-339 v ICE a uvedený druhý zvyšok vytvárajúci vodíkovú väzbu tvorí vodíkovú väzbu s amidovou skupinou -NH- v Arg-341 v ICE a vzdialenosť medzi uvedenými zvyškami je približne medzi 2,5 x 10^l° m a približne 5 x 10¹⁰ m.

V prípade, že je tento inhibítor naviazaný na ICE, uvedený prvý zvyšok vytvárajúci vodíkovú väzbu tvorí vodíkovú väzbu s karbonylovým atómom kyslíka v Arg-341 v ICE a uvedený druhý zvyšok vytvárajúci vodíkovú väzbu tvorí vodíkovú väzbu s amidovou skupinou -NH- v Arg-341 v ICE a vzdialenosť medzi uvedenými zvyškami vytvárajúcimi vodíkovú väzbu je približne medzi 2,5 x 10'¹⁰ m a približne 4 x 10'¹⁰ m.

Ešte výhodnejšie sú všetky uvedené podmienky asociácie splnené v zlúčeninách podľa vynálezu.

Odborníkovi v odbore je zrejmé, že jestvuje rad spôsobov ako projektovať inhibítory podľa vynálezu. Rovnaké spôsoby sa dajú použiť na selekciu kandidátnej zlúčeniny na skúmanie ako inhibítora ICE. Toto projektovanie alebo selekcia môže začínať selekciou rôznych zvyškov, ktoré zapínajú väzobné kapsy.

Jestvuje rad spôsobov selektovania zvyškov, ktoré zapínajú jednotlivé väzobné kapsy. Patrí medzi ne vizuálne skúmanie fyzikálneho modelu alebo počítačového modelu aktívneho centra a manuálne pripájanie modelov vybraných zvyškov do rôznych väzobných káps. Dá sa použiť modelovací softvér, ktorý je v odbore dobre známy a dostupný. Patrí sem software QUANTA (Molecular Simulations, Inc., Burlington, MA, 1992), SYBYL (Molecular Modeling Software, Tripos Associates, Inc., St. Louis, MO, 1992), AMBER (S. J. Weiner, P. A. Kollman, D. A. Čase, U. C. Singh, C. Ghio, G. Alagona a P. Weiner, J. Am. Chem. Soc., zväzok 106, str. 765 - 784 (1984)) alebo CHARMM (B. R. Brooks, R. E. Bruccoleri, B. D. Olafson, D. J. States, S. Swaminathna a M. Karplus, J, Comp. Chem., zväzok 4, str. 187 - 217 (1983)). Po tomto stupni modelovania môže nasledovať energetická minimalizácia pomocou štandardných silových polí molekulárnej mechaniky, ako je CHARMM a AMBER. Okrem toho jestvuje rad špecializovanejších počítačových programov pomáhajúcich pri spôsobe selekcie väzobných zvyškov podľa vynálezu. Patria sem:

1. GRID (Goodford, P. J., A Computational Procedúre for Determining Energetically Favorable Binding Sites on Biologically Important Macromolecules. J. Med. Chem.. 28, str. 849 - 857 (1985)). GRID je dostupný od Oxford University, Oxford, Veľká Británia.

2. MCSS (Miranker, A., Karplus, M., Functionality Maps of Binding Sites: A Multiple Copy Simultaneous Search Method. Proteins: Structure, Functions and Genetics. 11, str. 29 - 34 (1991)). MCSS je dostupný od firmy Molecular Simulations, Burlington, MA, USA.

3. AUTODOCK (Goodsell, D. X., Olsen, A. J., Automated Docking of Substrates to Proteins by Simmulated Annealing. PROTEINS: Structure. Functions and Genetics. 8, str. 195 - 202 (1990)). AUTODOCK je dostupný od inštitútu Scripps Research Inštitúte, La Jolla, CA, USA.

4. DOCK (Kuntz, I.D., Blaney, J. M., Oatley, S. J., Langridge, R., Ferrin, T. E., A Geometrie Approach to Macromolecule-Ligand Interactions. J. Mol. Biol., 161, str. 269 - 288 (1982)). DOCK je dostupný od University of Califomia, San Francisco, CA, USA.

Len čo sa vyselektujú vhodné väzobné zvyšky, dajú sa zostaviť do jediného inhibítora. Toto zostavenie sa dá uskutočniť pripojením rôznych zvyškov k centrálnemu skeletu. Proces zostavenia sa dá realizovať napríklad pomocou vizuálneho skúmania s nasledujúcim manuálnym vytváraním modelov, opäť s použitím softvéru ako je Quanta alebo Sybyl. Na pomoc pri selekcii spôsobov spojenia rôznych zvyškov sa dá tiež použiť rad iných programov. Patria sem:

1. CAVEAT (Bartlett, P. A., Shea, G. T., Telfer, S. J., Waterman, S., CAVEAT: A Program to Facilitate the Structure-Derived Design of Biologically Active Molecules. V „Molecular Recognition in Chemical and Biological Problems,“ zvláštne vydanie, Royal Chem. Soc., 78, str. 182 - 196 (1989)). CAVEAT je dostupný od University of Califomia, Berkeley, CA, USA.

2. Trojrozmerné databázové systémy ako je MACCS-3D (MDL Information Systems, San Leandro, CA, USA). O tejto oblasti napísal v poslednom čase článok Martin (Martin, Y. C., 3D Database Searching in Drug Design. J. Med. Chem. 35, str. 2145 - 2154 (1992)).

3. HOOK (dostupný od firmy Molecular Simulations, Burlington, MA, USA).

Okrem uvedeného modelovania inhibítorov s použitím počítačov sa dajú inhibítory podľa vynálezu konštruovať „de novo“ s použitím buď prázdneho aktívneho centra, alebo prípadne vrátane niektorých častí známeho inhibítora. Takéto spôsoby sú v odbore dobre známe. Patria k nim napríklad:

1. LUDI (Bohm, H. J., The Computer Program LUDI: A New Method for the De Novo Design of Enzýme Inhibitors. J, Comp. Aid. Molec. Design.. 6, 61 - 78 (1992)). LUDI je dostupný od firmy Biosym Technologies, San Diego, CA, USA.

2. LEGEND (Nishibata, Y., Itai. A., Tetrahedron, 47, 8985 (1991)). LEGEND je dostupný od firmy Molecular Simulations, Burlington, MA, USA.

3. LeapFrog (dostupný od firmy Tripos associates, St. Louis, MO, USA).

Dá sa použiť rad spôsobov bežne používaných na modelovanie liečiv (prehľad pozri Cohen, N. C, Blaney, J. M., Humblet, C., Gund, P., Barry, D. C, „Molecular Modeling Software and Methods for Medicinal Chemistry“, J. Med. Chem. , 33, str. 883 - 894 (1990)). Podobne v chemickej literatúre jestvuje rad príkladov spôsobov, ktoré sa dajú použiť pri konkrétnych projektoch projektovania liečiv (prehľad pozri Navia, M. A. a Mur-cko, M. A., „The Use of structural Information in Drug Design“, Current Opinions in Structural Biology 2, str. 202 - 210 (1992)). Medzi niektoré príklady týchto konkrétnych použití patria: Baldwin, J. J. a kol., „Thienothiopyran-2-sulfon-amides: Novel Topically Active Carbonic Anhydrase Inhibitors for the Treatment of Glaucoma“, J. Med. Chem., 32, str. 2510 - 2513 (1989), Appelt, K. a kol., „Design of Enzýme Inhibitors Using Iterative Proteín Crystallographic Analysis“, J. Med. Chem., 34, str. 1925 - 1934 (1991), a Ealick, S.

E. a kol., ,Application of Crystallographic and Modeling Methods in the Design of Purine Nucleotide Phosphorylase Inhibitors“ Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 88, str. 11540 - 11544 (1991).

Použitím novej kombinácie krokov podľa vynálezu sa odborník môže výhodne vyhnúť časovo náročnému a nákladnému experimentovaniu na stanovenie aktivity konkrétnych zlúčenín pre inhibíciu enzýmu. Uvedený spôsob je tiež vhodný na uľahčenie racionálneho projektovania inhibítorov ICE a terapeutických a profylaktických činidiel proti ochoreniam sprostredkovaných IL-1. V súlade s tým sa vynález týka takýchto inhibítorov.

Na uskutočnenie každého z uvedených zhodnotení rovnako ako hodnotení nutných pri skúmaní kandidátnej zlúčeniny, pokiaľ ide ojej aktivitu pri inhibícii ICE, sa dá použití rad bežných spôsobov. Všeobecne medzi tieto spôsoby patria stanovenie umiestenia a väzobnej blízkosti daného zvyšku, zaberaného priestoru naviazaným inhibítorom, deformačná energia väzby danej zlúčeniny a energií elektrostatických interakcií. Medzi príklady bežných spôsobov vhodných pri uvedených hodnoteniach patria: spôsoby kvantovej mechaniky, molekulárnej mechaniky, molekulárnej dynamiky, vzorkovanie metódou Monte Carlo, systematických vyhľadávaní a vzdialenostná geometria (G. R. Marshall, Ann, Rev. Pharmacol. Toxicol.. 27, str. 193 (1987)). Na použitie a uskutočňovanie týchto spôsobov sa vyvinul špeciálny počítačový softvér. Medzi príklady programov vytvorených na takéto použitie patria: Gaussian 92, revízia E.2 (M. J. Frisch, Gaussian, Inc., Pittsburgh, PA 1993), AM-BER, verzia 4.0 (P. A. Kollman, University of Califomia v San Francisco, 1993), QUANTA/CHARMM (Molecular Simulations, Inc., Burlingron, MA 1992) a Insight II/Discover (Biosysm Technologies Inc., San Diego, CA 1992). Tieto programy sa dajú používať, napríklad s použitím pracovnej stanice Silicon Graphics Indigo 2 alebo IBM RISC/6000 workstation model 550. Odborníkovi sú známe, a sú preň zrejme použiteľné, ďalšie hardvérové systémy a softvérové systémy.

Rôzne skupiny aktívnych inhibítorov ICE podľa vynálezu môžu interagovať podobnými spôsobmi s rôznymi väzobnými kapsami aktívneho centra ICE. Priestorové usporiadanie týchto dôležitých skupín sa často označuje ako farmakofór. Pojem farmakofóru je dobre opísaný v literatúre (D. Mayer, C. B. Naylor, I. Motoc, a G. R. Marshall, J. Comp. Aided Molec. Design, zväzok 1, str. 3 - 16 (1987), A. Hopfinger a B. J. Búrke, v Concepts and Applications of Molecular Similarity, M. A. Johnson a G. M. Maggiora, vydavatelia, Wiley (1990)).

Rôzne skupiny inhibítorov ICE podľa vynálezu môžu tiež používať rôzne skelety alebo jadrové štruktúry, ale všetky z týchto jadrových štruktúr umožňujú, aby sa nutné zvyšky umiestnili do aktívneho centra tak, že sa dajú dosiahnuť špecifické interakcie nutné pre väzbu. Tieto zlúčeniny sú najlepšie definované pomocou ich schopnosti zodpovedať farmakofóru, t. j. pomocou jej štruktúrnej zhodnosti vzhľadom na tvar a vlastnosti aktívneho centra ICE.

Inhibítory ICE podľa uskutočnenia (realizácia A) vynálezu sú zlúčeniny všeobecného vzorca (oc)

R^{v * * * * x}-NH-X^x \

(CH ) -R^{3 2} ’ (a), v ktorom

X¹ predstavuje skupinu CH alebo atóm dusíka, g má hodnotu 0 alebo 1, každý zo symbolov J sa nezávisle vybral zo súboru zahŕňajúceho atóm vodíka, hydroxyskupinu a atóm fluóru, s tým, že v prípade, že sú prvý a druhý zvyšok J naviazané na atóm uhlíka a uvedeným prvým zvyškom J je hydroxyskupina, je uvedeným druhým zvyškom J atóm vodíka, m má hodnotu 0, 1 alebo 2,

T znamená skupinu -Ar³, hydroxyskupinu, trifluórmetylovú skupinu, skupinu -CO-CO₂H, skupinu -CO₂H alebo ľubovoľnú bioizostému náhradu za -CO H,

R¹ je vybraný zo súboru zahŕňajúceho skupiny nasledujúcich všeobecných vzorcov (a) až (v), v ktorých môže byť ľubovoľný kruh prípadne raz alebo viac razy substituovaný na ľubovoľnom atóme uhlíka zvyškom Q¹, na ľubovoľnom atóme dusíka zvyškom R⁵, alebo na ľubovoľnom atóme skupinou =O, -OH, -CO₂H alebo halogénom, a v ktorých môže byť ľubovoľný nasýtený kruh prípadne nenasýtený na jednej alebo dvoch väzbách x-x

(a)

l H

(b)

(c) (d)

(e)

(f) (g) (h) (i)

(k) (1)

(m)

(n)

(o) (p)

(CHád (q) (r)

(s) (t) a

(v)

R²⁰je vybraný zo súboru zahŕňajúceho skupiny aal až aa5, bb až ff, gg, gga, ggb a ggc

(ô. 3.1) ( 3.3.2 ' (aac) (aa4) (aaS) (bb)

(cc) (dd) (ee)

(ff)

(gg) (gga) (ggb) (ggc) každý kruh C je nezávisle vybraný zo súboru zahŕňajúceho benzoskupinu, pyridoskupinu, tienoskupinu, pyroloskupinu, furanoskupinu, tiazoloskupinu, izotiazoloskupinu, oxazoloskupinu, izoxazoloskupinu, pyrimidoskupinu, imidazoloskupinu, cyklopentylovú skupinu a cyklohexylovú skupinu,

R³ predstavuje skupinu

CN,

CH=CH-R⁹,

CH=N-O-R⁹, (CH^j-T'-R’,

CJ²-R⁹,

CO-R¹³ alebo

X

-CO-CO-N \r¹⁰ každý zo symbolov R⁴ sa nezávisle vybral zo súboru zahŕňajúceho atóm vodíka,

-Ar¹,

-R⁹,

-T‘-R⁹, a

-(CH^-T'-R⁹, každý zo symbolov T¹ sa nezávisle vybral zo súboru zahŕňajúceho

-CH=CH-, -O-,

-S-,

-SO-,

-SO₂-,

-NR¹⁰-,

-NR¹⁰-CO-,

-CO-,

-O-CO-,

-CO-O-,

-CO-NR¹⁰-,

-O-CO-NR¹⁰-,

-NR¹⁰-CO-O-,

-NR¹⁰-CO-NR¹⁰-,

-SO₂-NR¹⁰-,

-NR¹⁰-SO₂- a

-NR^l0-SO₂-NR¹⁰-, každý zo symbolov R^s sa nezávisle vybral zo súboru zahŕňajúceho atóm vodíka,

-Ar¹,

-CO-Ar¹,

-SO₂-Ar’,

-CO-R⁹,

-CO-O-R⁹,

-SO₂-R⁹, /Ar¹

-CO-N \r|°, /Ar¹

-so₂-n \r'o,

X

-CO-N

-SO₂-N \r^,0>

symboly R⁶ a R⁷ spoločne tvoria nasýtený stvor- až osemčlenný karbocyklický kruh alebo heterocyklický kruh obsahujúci atóm kyslíka, atóm síry alebo skupinu-ΝΗ-, alebo

R⁷ predstavuje atóm vodíka, a

R⁶ znamená atóm vodíka,

-Ar',

-R⁹ alebo

-(CH^^-T'-R⁹, každý zo symbolov R⁹ predstavuje priamu alebo rozvetvenú alkylovú skupinu s 1 až 6 atómami uhlíka, prípadne raz alebo viac razy substituovanú hydroxyskupinou, fluórom alebo =O a prípadne substituovanú jednou alebo dvomi skupinami Ar¹, každý zo symbolov R¹⁰ sa nezávisle vybral zo súboru zahŕňajúceho atóm vodíka a priame a rozvetvené alkylové skupiny s 1 až 6 atómami uhlíka, každý zo symbolov R¹³ sa nezávisle vybral zo súboru zahŕňajúceho skupiny -Ar² a -R⁴, každý zo symbolov Ar¹ predstavuje cyklickú skupinu nezávisle vybranú zo súboru zahŕňajúceho arylové skupiny obsahujúce 6, 10, 12 alebo 14 atómov uhlíka a 1 až 3 kruhy, cykloalkylovú skupiny obsahujúce 3 až 15 atómov uhlíka a 1 až 3 kruhy, a na tieto cykloalkylová skupiny je prípadne nakondenzované benzénové jadro, a heterocyklické skupiny obsahujúce 5 až 15 kruhových atómov a 1 až 3 kruhy, a tieto heterocyklické skupiny obsahujú aspoň jedno heteroatómové zoskupenie vybrané zo súboru zahŕňajúceho -O-, -S-, -SO-, -SO =N- a -NH-, a tieto heterocyklické skupiny prípadne obsahujú jednu alebo niekoľko dvojných väzieb, a tieto heterocyklické skupiny prípadne obsahujú jeden alebo niekoľko aromatických kruhov, pričom uvedená cyklická skupina je prípadne raz alebo viac razy substituovaná atómom kyslíka, hydroxyskupinou, perfluóralkylovou skupinou s 1 až 3 atómami uhlíka alebo skupinu -Q¹, každý zo symbolov Ar² sa nezávisle vybral zo súboru zahŕňajúceho skupiny nasledujúcich všeobecných vzorcov (hh) až (kk), v ktorých môže byť prípadne ľubovoľný kruh substituovaný skupinou -Q¹,

(hh) (kk)

Ar³ znamená cyklickú skupinu vybranú zo súboru zahŕňajúceho fenylovú skupinu, päťčlenné heteroaromatické kruhy a šesťčlenné heteroaromatické kruhy, a tieto heteroaromatické kruhy obsahujú 1 až 3 heteroatómové zoskupenia vybrané zo súboru zahŕňajúceho -O-, -S-, -SO-, -SO₂-, =N-a -NH-, a táto cyklická skupina je prípadne raz alebo viac razy substituovaná atómom kyslíka, hydroxyskupinou, halogénom, perfluóralkylovou skupinou s 1 až 3 atómami uhlíka alebo skupinou -CO₂H, každý zo symbolov Q¹ sa nezávisle vybral zo súboru zahŕňajúceho

-Ar¹,

-R⁹,

-Τ'-R⁹ a

-(CH,)!, „-T'-R⁹, s tým, že pokiaľ je -Ar¹ substituovaný skupinou Q¹, ktorá obsahuje jednu alebo niekoľko ďalších skupín -Ar¹, nie sú uvedené ďalšie skupiny -Ar¹ substituované Q¹, každý zo symbolov X sa nezávisle vybral zo súboru zahŕňajúceho =N- a =CH-, každý zo symbolov X² sa nezávisle vybral zo súboru zahŕňajúceho atóm kyslíka, skupinu -CH2-, skupinu -NH-, atóm síry a skupiny -SO- a -SO2-, každý zo symbolov X³ sa nezávisle vybral zo súboru zahŕňajúceho skupinu -CH atóm síry, skupinu -SO- a skupinu -SO2-, každý zo symbolov X⁴ sa nezávisle vybral zo súboru zahŕňajúceho skupinu -CH₂- a skupinu -NH-, každý zo symbolov X^s sa nezávisle vybral zo súboru zahŕňajúceho skupinu -CH- a -N-,

X^ó predstavuje skupinu CH alebo atóm dusíka, s tým, že pokiaľ X⁶ znamená atóm dusíka v skupine všeobecného vzorca (o) vo význame symbolu R¹, a X⁵ znamená skupinu CH a X² predstavuje skupinu CH2, musí byť kruh všeobecného vzorca (o) vo význame symbolu R* substituovaný Q¹ alebo naň musí byť nakondenzované benzénové jadro, každý zo symbolov Y sa nezávisle vybral zo súboru zahŕňajúceho atóm kyslíka a atóm síry, každý zo symbolov Z nezávisle predstavuje skupinu CO alebo SO2, každý so symbolov a má nezávisle hodnotu 0 alebo 1, každý zo symbolov c má nezávisle hodnotu 1 alebo 2, každý zo symbolov d má nezávisle hodnotu 0, 1 alebo 2, a každý zo symbolov e má nezávisle hodnotu 0, 1, 2 alebo 3.

Inhibítory ICE podľa ďalšieho uskutočnenia (realizácia B) vynálezu sú zlúčeniny všeobecného vzorca (a) (CJ ) -T / 2 ' m le-NH-X¹ (CH ) -R³ ' 2 ' <3 v ktorom

X¹ predstavuje skupinu -CH, g má hodnotu 0 alebo 1, každý zo symbolov J sa nezávisle vybral zo súboru zahŕňajúceho atóm vodíka, hydroxyskupinu a atóm fluóru, s tým, že v prípade, že sú prvý a druhý zvyšok J naviazané na atóm uhlíka a uvedeným prvým zvyškom J je hydroxyskupina, je uvedeným druhým zvyškom J atóm vodíka, m má hodnotu 0, 1 alebo 2,

T znamená hydroxyskupinu, skupinu -CO-CO₂H, skupinu -CO₂H alebo ľubovolnú bioizostému náhradu za -CO₂H,

R¹ je vybraný zo súboru zahŕňajúceho skupiny nasledujúcich všeobecných vzorcov (a) až (y), v ktorých môže byť ľubovoľný kruh prípadne raz alebo viac razy substituovaný na ľubovoľnom atóme uhlíka zvyškom Q¹, na ľubovoľnom atóme dusíka zvyškom R⁵, alebo na ľubovoľnom atóme skupinou =0, -OH, -CO₂H alebo halogénom, ľubovoľný nasýtený kruh môže byť prípadne nenasýtený na jednej alebo dvoch väzbách, a pričom na skupiny všeobecného vzorca (e) a (y) vo význame symbolu R¹ je prípadne nakondenzované benzénové jadro x-x R.⁶ / Á-z-N-C-C—

N >71 (a)

(b) (c)

(d)

(e)

(f)

(g)

(h) (i) (j)

(k)

(1)

(m)

A_nÁ_c_r²⁰-z· (n)

(o) (p) (q)

(r) (s)

(CH^d y ť | (CH2)d (CK2)a||

O (t)

4x(CH2)d (OYje (CH^e V v v

I J5 ! i

Ά./Χ AZ ² (CK2)a J

O (c:-h)c— A (v)

(w)

R í (x) a

(y)

R²⁰ j e vybraný zo súboru zahŕňajúceho skupiny aal až aa5, bb až ff, gg, gga, ggb a ggc

(aal) (aa2) (aa3} (aa4) (aa5) (bb) (cc) (dd) (ee) (ff)

(99) (gga) (ggb) (ggc) každý kruh C sa nezávisle vybral zo súboru zahŕňajúceho benzoskupinu, pyridoskupinu, tienoskupinu, pyroloskupinu, furanoskupinu, tiazoloskupinu, izotiazoloskupinu, oxazoloskupinu, izoxazoloskupinu, pyrimidoskupinu, imidazoloskupinu, cyklopentylovú skupinu a cyklohexylovú skupinu,

R³ predstavuje skupinu

CN,

CH=CH-R⁹,

CH=N-O-R⁹,

CJ²-R⁹,

CO-R¹³ alebo

X

-CO-CO-N \r¹⁰, každý zo symbolov R⁴ sa nezávisle vybral zo súboru zahŕňajúceho atóm vodíka,

-Ar¹, -R⁹,

-T'-R⁹ a

-(CH₂)_1(2i3-T¹-R⁹, každý zo symbolov T¹ sa nezávisle vybral zo súboru zahŕňajúceho

-CH=CH-, -O-,

-S-,

-SO-,

-so₂-,

Nín Ιθ

-CO-,

-O-CO-, -CO-O-, -CO-NR¹⁰-, -O-CO-NR¹⁰-, -NR‘°-CO-O-,

-NR¹⁰-CO-NR¹⁰-,

-SO₂-NR¹⁰-,

-NR¹⁰-SO₂- a

-nr'°-so₂-nr¹⁰-, každý zo symbolov R⁵ sa nezávisle vybral zo súboru zahŕňajúceho atóm vodíka,

-CO-Ar¹,

-SOz-Ar¹,

-CO-NH₂, -so₂-nh₂, -r⁹, -CO-R⁹, -CO-O-R⁹, -SO₂-R⁹, /Ar¹ -CO-N \r>°,

-SO-N

-CO-N

-so₂-n \r¹⁰>

symboly R⁶ a R⁷ spoločne tvoria nasýtený štvor- až osemčlenný karbocyklický kruh alebo heterocyklický kruh obsahujúci atóm kyslíka, atóm síry alebo skupinu -ΝΗ-, alebo

R⁷ predstavuje atóm vodíka a

R⁶ znamená atóm vodíka,

alebo zvyšok bočného reťazca -aminokyseliny, každý zo symbolov R⁹ predstavuje priamu alebo rozvetvenú alkylovú skupinu s 1 až 6 atómami uhlíka, prípadne raz alebo viac razy substituovanú hydroxyskupinou, fluórom alebo =0, a prípadne substituovanú jednou alebo dvomi skupinami Ar¹, každý zo symbolov R¹⁰ sa nezávisle vybral zo súboru zahŕňajúceho atóm vodíka a priame a rozvetvené alkylové skupiny s 1 až 6 atómami uhlíka, každý zo symbolov R¹³ sa nezávisle vybral zo súboru zahŕňajúceho skupiny -Ar², -R⁴ a -N-OH,

R⁵ každý zo symbolov Ar¹ predstavuje cyklickú skupinu nezávisle vybranú zo súboru zahŕňajúceho arylové skupiny obsahujúce 6, 10, 12 alebo 14 atómov uhlíka a 1 až 3 kruhy, cykloalkylová skupiny obsahujúce 3 až 15 atómov uhlíka a 1 až 3 kruhy, a na tieto cykloalkylová skupiny je prípadne nakondenzované benzénové jadro, a heterocyklické skupiny obsahujúce 5 až 15 kruhových atómov a 1 až 3 kruhy, a tieto heterocyklické skupiny obsahujú aspoň jedno heteroatómové zoskupenie vybrané zo súboru zahŕňajúceho -O-, -S-, -SO-, -SO₂-, =N- a -NH-, a tieto heterocyklické skupiny prípadne obsahujú jednu alebo niekoľko dvojných väzieb, a tieto heterocyklické skupiny prípadne obsahujú jeden alebo niekoľko aromatických kruhov, pričom uvedená cyklická skupina je prípadne raz alebo viac razy substituovaná aminoskupinou, karboxylovou skupinou, chlórom, fluórom, brómom, jódom, nitroskupinou, kyanoskupinou, atómom kyslíka, hydroxyskupinou, perfluóralkylovou skupinou s 1 až 3 atómami uhlíka skupinou

alebo skupinou -Q¹, každý zo symbolov Ar² sa nezávisle vybral zo súboru zahŕňajúceho skupiny nasledujúcich všeobecných vzorcov (hh) až (kk), v ktorých môže byť prípadne ľubovoľný kruh raz alebo viac razy substituovaný -Q¹ a -Q²

(hh) (ii) (jj) (kk) každý zo symbolov Q¹ sa nezávisle vybral zo súboru zahŕňajúceho

-Ar¹,

-O-Ar¹,

-R⁹,

-T-R⁹ a

-(CH₂)₁,₂.3-T’-R⁹, každý zo symbolov Q² sa nezávisle vybral zo súboru zahŕňajúceho hydroxyskupinu, aminoskupinu, karboxylovú skupinu, atóm chlóru, fluóru, brómu a jódu, nitroskupinu, kyanoskupinu, trifluórmetylovú skupinu a skupinu

s tým, že pokiaľ je -Ar¹ substituovaný skupinou Q¹, ktorá obsahuje jednu alebo niekoľko ďalších skupín -Ar¹, nie sú uvedené ďalšie skupiny -Ar¹ substituované Q¹, každý zo symbolov X sa nezávisle vybral zo súboru zahŕňajúceho =N- a =CH-, každý zo symbolov X² sa nezávisle vybral zo súboru zahŕňajúceho atóm kyslíka, skupinu -CH skupinu -NH-, atóm síry a skupiny -SO- a -SO₂-, každý zo symbolov X³ sa nezávisle vybral zo súboru zahŕňajúceho skupinu -CH₂-, atóm síry, skupinu -SO- a skupinu -SO₂-, každý zo symbolov X⁴ sa nezávisle vybral zo súboru zahŕňajúceho skupinu -CH₂- a skupinu -NH-, každý zo symbolov X⁵ sa nezávisle vybral zo súboru zahŕňajúceho skupinu -CH- a -N-,

X⁶ predstavuje skupinu CH alebo atóm dusíka, s tým, že pokiaľ X⁶ znamená atóm dusíka v skupine všeobecného vzorca (o) vo význame symbolu R¹, a X⁵ znamená skupinu CH a X² predstavuje skupinu CH₂, musí byť kruh všeobecného vzorca (o) vo význame symbolu R¹ substituovaný Q¹ alebo naň musí byť nakondenzované benzénové jadro, každý zo symbolov Y sa nezávisle vybral zo súboru zahŕňajúceho atóm kyslíka, atóm síry a skupinu -NH, každý zo symbolov Z nezávisle predstavuje skupinu CO alebo SO₂, každý so symbolov a má nezávisle hodnotu 0 alebo 1, každý zo symbolov c má nezávisle hodnotu 1 alebo 2, každý zo symbolov d má nezávisle hodnotu 0, 1 alebo 2, a každý zo symbolov e má nezávisle hodnotu 0, 1, 2 alebo 3, s tým, že pokiaľ

R¹ predstavuje skupinu všeobecného vzorca (f),

R⁶ znamená zvyšok bočného reťazca a-aminokyseliny, a

R⁷ predstavuje atóm vodíka, potom musia byť skupiny vzorcov (aal) a (aa2) substituované Q¹, taktiež s tým, že pokiaľ R¹ predstavuje skupinu všeobecného vzorca (o), g má hodnotu 0,

J znamená atóm vodíka, m má hodnotu 1,

R⁶ predstavuje zvyšok bočného reťazca cc-aminokyseliny,

R⁷ znamená atóm vodíka,

X² predstavuje skupinu -CH,

X⁵ znamená skupinu -CH-,

X⁶ predstavuje atóm dusíka -N- a

R³ znamená skupinu -CO-N alebo -CO-R¹³, pokiaľ \_R1°

R^l3predstavuje skupinu

-CH₂-O-CO-Ar',

-CHz-S-CO-Ar¹,

-CHz-O-Ar¹,

-CHz-S-Ar' alebo

-R⁴, pokiaľ -R⁴ znamená atóm vodíka, potom musí byť kruh skupiny všeobecného vzorca (o) vo význame symbolu R¹ substituovaný Q¹ alebo naň musí byť nakondenzované benzénové jadro, a s tým, že pokiaľ

R¹ predstavuje skupinu všeobecného vzorca (w), g má hodnotu 0,

J znamená atóm vodíka, m má hodnotu 1,

T predstavuje skupinu -CO₂H alebo -CO-NH-OH,

X² znamená atóm kyslíka,

R⁵ predstavuje benzyloxykarbonylovú skupinu, a kruhom C je benzoskupina, potom R³ nemôže znamenať skupinu -CO-R¹³, pokiaľ

R¹³ predstavuje skupinu -CH₂-O-Ar', a

Ar¹ znamená l-fenyl-3-chlór- alebo 3-trifluórmetylpyrazol-5-ylovú skupinu, alebo pokiaľ

R¹³predstavuje skupinu -CH₂-O-CO-Ar', a

Ar¹ znamená 2,6-dichlórfenylovú skupinu.

Výhodnými formami skupiny všeobecného vzorca (a) vo význame symbolu R¹ na realizáciu A a B sú skupiny všeobecných vzorcov (al) a (a2)

H

H

R⁵ R⁶

I I

Z—N—C—C—

7 II p^z o (al) (a2)

Výhodnými formami skupiny všeobecného vzorca (b) vo význame symbolu R¹ sú skupiny všeobecných (bi) vzorcov (bl) až (b3)

(b2) (b3)

Výhodnými formami skupiny všeobecného vzorca (c) vo význame symbolu R¹ sú skupiny všeobecných vzorcov (cl) a (c2)

(Cl) (C2) s tým, že pokiaľ

R¹ predstavuje skupinu všeobecného vzorca (cl), g má hodnotu 0,

J znamená atóm vodíka, m má hodnotu 1,

T predstavuje karboxylovú skupinu,

X znamená atóm dusíka,

R⁵ predstavuje benzyloxykarbonylovú skupinu a

R⁶ znamená atóm vodíka, potom R³ nemôže znamenať skupinu -CO-R¹³, pokiaľ

R¹³ predstavuje skupinu -CH₂-O-Ar^!, a

Ar¹ znamená chlórsubstituovanú l-fenyl-3-trifluórmetylpyrazol-5-ylovú skupinu, alebo pokiaľ

R¹³ predstavuje skupinu -CH₂-O-CO-Ar¹, a

Ar¹ znamená 2,6-dichlórfenylovú skupinu, a pokiaľ poloha 2 skeletového kruhu je substituovaná para-fluórfenylovou skupinou.

Výhodnými formami skupiny všeobecného vzorca (d) vo význame symbolu R¹ sú skupiny všeobecných vzorcov (dl) až (d4) (dl)

(d2)

(d3) (d4) ₅ vzorcov (e l)tó (S™™ ^{VSeobecného v}™ (e) vo význame symbolu R¹ sú skupiny všeobecných

(el) (e2)

(e3) (e4)

(e5) (eS) (CHz)c

(e7) pričom na skupinu všeobecného vzorca (e7) je prípadne nakondenzované benzénové jadro, (CHjjc

(eS)

(e9) s tým, že pokiaľ R¹ predstavuje skupinu všeobecného vzorca (e4), g má hodnotu 0,

J znamená atóm vodíka, m má hodnotu 1,

T predstavuje karboxylovú skupinu,

R⁵ znamená benzyloxykarbonylovú skupinu a c má hodnotu 1, potom R³ nemôže znamenať skupinu -CO-R¹³, pokiaľ

R¹³ predstavuje skupinu -CI^-O-Ar¹, a

Ar¹ znamená l-fenyl-3-trifluórmetylpyrazol-5-ylovú skupinu, kde je fenylový kruh prípadne substituovaný atómom chlóru, alebo pokiaľ

R¹³ predstavuje skupinu -CH₂-O-CO-Ar', a

Ar¹ znamená 2,6-dichlórfenylovú skupinu, a pokiaľ poloha 2 skeletového kruhu je substituovaná para-fluórfenylovou skupinou, taktiež s tým, že pokiaľ

R¹ predstavuje skupinu všeobecného vzorca (e7), g má hodnotu 0,

J znamená atóm vodíka, m má hodnotu 1,

T predstavuje skupinu -CO₂H alebo -CO-NH-OH,

R^s znamená chrániacu skupinu pre atóm dusíka zvyšku bočného reťazca aminokyseliny, a každý zo symbolov c má hodnotu 1, potom R³ nemôže znamenať skupinu -CO-R¹³, pokiaľ

R¹³ predstavuje skupinu

-CH₂-O-CO-Ar’,

-CHrS-CO-Ar¹,

-CH₂-O-Ar^l alebo

-CHz-S-Ar¹.

Výhodnými formami skupiny všeobecného vzorca (g) vo význame symbolu R¹ sú skupiny všeobecných vzorcov (gl) a (g2)

(al) (92)

Výhodnými formami skupiny všeobecného vzorca (h) vo význame symbolu R¹ sú skupiny všeobecných vzorcov (hl) až (h3)

(hl) (h2) (h3)

Výhodnými formami skupiny všeobecného vzorca (i) vo význame symbolu R¹ sú skupiny všeobecných vzorcov (il) až (i4)

(CH2)c(CH2)C

Y i

O (il)

O

(12) (Í3)

(14)

Výhodnými formami skupiny všeobecného vzorca (j) vo význame symbolu R¹ sú skupiny všeobecných vzorcov (j 1) až (j4)

(j 2)

H

(j3)

H

I

(j4)

Výhodnými formami skupiny všeobecného vzorca (k) vo význame symbolu R¹ sú skupiny všeobecných vzorcov (kl) až (k5)

H (k2)

R⁵ R⁶

I I

(k3) (k4)

I H

(kS)

Výhodnými formami skupiny všeobecného vzorca (1) vo význame symbolu R¹ sú skupiny všeobecných vzorcov (11) až (15)

H

(11) (12) (13) (14) (15)

Výhodnými formami skupiny všeobecného vzorca (m) vo význame symbolu R¹ sú skupiny všeobecných vzorcov (ml) až (m6)

(ml)

(m2)

(m3)

(m4)

(m5) (m6)

Výhodnými formami skupiny všeobecného vzorca (n) vo význame symbolu R¹ sú skupiny všeobecných vzorcov (nl) až (n6)

(ni)

(n2) (n3)

(n4)

(n5) (π6)

Výhodnými formami skupiny všeobecného vzorca (o) vo význame symbolu R¹ sú skupiny všeobecných vzorcov (ol) až (o5)

(ol)

(02) (03)

(04 )

(05)

Výhodnou formou skupiny všeobecného vzorca (o) vo význame symbolu R¹ v realizácii B je skupina všeobecného vzorca (06)

(06), kde

X predstavuje atóm kyslíka, atóm síry, skupinu -S0₂- alebo -NH.

Výhodnými formami skupiny všeobecného vzorca (p) vo význame symbolu R¹ pre realizáciu A a B sú skupiny všeobecných vzorcov (pl) až (p5)

(pl) (p2)

(p3) (p4) (p5)

Výhodnými formami skupiny všeobecného vzorca (q) vo význame symbolu R¹ sú skupiny všeobecných vzorcov (ql) až (q6)

(ql) (q2) (q3) (q4) (q5)

?⁶ T? H O <qs)

Výhodnými formami skupiny všeobecného vzorca (r) vo význame symbolu R¹ sú skupiny všeobecných 10 vzorcov (r 1) až (r7)

Výhodnými formami skupiny všeobecného vzorca (s) vo význame symbolu R¹ sú skupiny všeobecných 5 vzorcov (s 1) až (s4)

(Sl) (s2) (s3)

(S4)

Výhodnými formami skupiny všeobecného vzorca (t) vo význame symbolu R¹ sú skupiny všeobecných vzorcov (tl) až (t5)

(tl) (t2)

(tS)

Výhodnými formami skupiny všeobecného vzorca (v) vo význame symbolu R¹ sú skupiny všeobecných vzorcov (vl) až (v4)

(vl) (V2)

(v3) (v4)

Výhodnou formou skupiny všeobecného vzorca (w) vo význame symbolu R¹ v realizácii B je skupina všeobecného vzorca (wl)

(wl), v ktorom

X² predstavuje atóm kyslíka, atóm síry, skupinu -SO₂- alebo -NH-.

Výhodnými zlúčeninami realizácie A a B tohto vynálezu sú tie zlúčeniny všeobecného vzorca (a), v ktorých

X¹ predstavuje skupinu CH, g má hodnotu 0,

J predstavuje atóm vodíka, m má hodnotu 0 alebo 1 a T predstavuje skupinu -Ar³, -CO-CO₂H, -CO₂H alebo ľubovoľnú bioizostému náhradu za -CO₂H, alebo m má hodnotu 1 alebo 2 a T predstavuje hydroxyskupinu, trifluórmetylovú skupinu alebo skupinu -CO₂H, výhodnejšie m má hodnotu 1 a T predstavuje skupinu -CO₂H,

R¹ predstavuje skupinu všeobecného vzorca (c), (d), (e), (f), (g) alebo (r)

(C) (d)

ZX (CHzje

O (ChŤzJd _? > 7 * (CHád *

Wa J (e)

R⁶

(f) r^xy__z__R ²⁰_zY ' ^ÄN

1-1 (g)

R²⁰ predstavuje skupinu vzorca (aal), (aa2), (aa3) alebo (dd),

(aal) (aa2) (aa3) (dd) kruh C predstavuje benzoskupinu,

R³ predstavuje skupinu

-CO-R¹³ alebo

-CO-CO N

X_Rxo najvýhodnejšie má R³ ľubovoľný z významov uvedených pod nasledujúcimi bodmi 1., 2. a 3.

1. -CO-Ar²,

2. -CO-R⁹, kde R⁹ predstavuje alkylovú skupinu s 3 až 6 atómami uhlíka substituovanú dvomi skupinami Ar¹ alebo jednou skupinou Ar¹, ktorá je sama substituovaná skupinou Ar¹, -Ci^-Ar¹, chlórom, metylovou skupinou alebo trifluórmetylovou skupinou, alebo

3. -(CEyi^-T'-R⁹, kde T¹ znamená atóm kyslíka alebo síry a R⁹ predstavuje alkylovú skupinu s 1 až 2 atómami uhlíka substituovanú dvomi skupinami Ar¹ alebo jednou skupinou Ar¹, ktorá je sama substituovaná skupinou Ar¹, -Ci^-Ar¹, chlórom, metylovou skupinou alebo trifluórmetylovou skupinou,

R⁴ predstavuje atóm vodíka alebo skupinu-R⁹,

T¹ znamená

-0-,

-S-,

-CO-,

-O-CO- alebo -SO₂-, pokiaľ R¹ predstavuje skupinu všeobecného vzorca (a), (b), (k) alebo (m), R⁵ znamená výhodne skupinu -Ar¹ alebo C_M-Ar‘, pokiaľ R¹ predstavuje skupinu všeobecného vzorca (c), (e), (f), (o) alebo (r), R^s znamená výhodne skupinu -SOz-Ar¹, -SO₂-R⁹ alebo -CO-C^-Ar¹,

R⁷ predstavuje atóm vodíka a

R⁶ znamená skupinu Ci^-Ar¹,

R¹⁰ predstavuje atóm vodíka alebo priamu, alebo rozvetvenú alkylovú skupinu s 1 až 3 atómami uhlíka,

R¹³ znamená skupinu-Ar²,

Ar¹ predstavuje fenylovú, naftylovú, pyridylovú, benzotiazolylovú, tienylovú, benzotienylovú, benzoxazolylovú, 2-indanylovú alebo indolylovú skupinu,

Ar² je výhodne substituovaný skupinou -Ar¹ alebo -Cm-At¹,

Ar³ predstavuje fenylovú, tiofenovú, tiazolovú, pyridinovú alebo oxazolovú skupinu, a

Q¹ znamená skupinu -R⁹ alebo -(CH2)1>2-T¹-(CH2)₁.3-Ar¹, kde T¹ predstavuje atóm kyslíka alebo atóm síry.

Výhodné sú zlúčeniny realizácie B tohto vynálezu všeobecného vzorca (a), v ktorých

X¹ predstavuje skupinu -CH, g má hodnotu 0,

J predstavuje atóm vodíka, m má hodnotu 0 alebo 1 a T predstavuje skupinu -CO-CO₂H alebo ľubovoľnú bioizostému náhradu za -CO₂H, alebo m má hodnotu 1 a T predstavuje skupinu -CO₂H,

R¹ sa vybral zo súboru zahŕňajúceho skupiny nasledujúcich všeobecných vzorcov (a), (b), (c), (e), (f), (g), (h), (o), (r) a (w), v ktorých môže byť ľubovoľný kruh prípadne raz alebo viac razy substituovaný na ľubovoľnom atóme uhlíka zvyškom Q¹, na ľubovoľnom atóme dusíka zvyškom R⁵ alebo na ľubovoľnom atóme skupinou =0, -OH, -CO₂H alebo halogénom, pričom sa môže ku skupine všeobecného vzorca (e) prípadne nakondenzovať benzénové jadro

(a) (b) (c)

(CJ-š)c (Chz)d

I ς 16 Á rx^Q ,xc—c— r Ύ

IIHO

(f) (g) (h) (o) (r) (w)

R²⁰ predstavuje skupinu vzorca (aal) alebo (aa2),

(aal) (aa2) a c má hodnotu 1, kruh C predstavuje benzoskupinu prípadne substituovanú alkylovou skupinou s 1 až 3 atómami uhlíka, sku10 pinou -O-alkyl s 1 až 3 atómami uhlíka, chlórom, fluórom alebo trifluórmetylovou skupinou,

R³ predstavuje skupinu

-CO-R¹³ alebo

-CO-CO-N,

výhodnejšie má R³ ľubovoľný z významov uvedených pod nasledujúcimi bodmi 1., 2. a 3.

1. -CO-Ar²,

2. -CO-R⁹, kde R⁹ predstavuje alkylovú skupinu s 1 až 5 atómami uhlíka substituovanú skupinou Ar¹ alebo

3. -CH₂-T'-R⁹, kde T¹ znamená atóm kyslíka alebo síry a R⁹ predstavuje alkylovú skupinu s 1 až 2 atómami uhlíka substituovanú jednou skupinou Ar¹,

R⁴ predstavuje atóm vodíka alebo skupinu -R⁹,

T¹ znamená

-O-,

-S-,

-CO-,

-O-CO- alebo

-SO₂-, pokiaľ R¹ predstavuje skupinu všeobecného vzorca (a) alebo (b),

R⁵ znamená výhodne atóm vodíka, pokiaľ R¹ predstavuje skupinu všeobecného vzorca (c), (e), (f), (o), (r), (w), (x) alebo (y), R⁵ znamená výhodne skupinu

-CO-Ar¹,

-SO₂-Ar',

-CO-NH₂,

-CO-NH-Ar¹,

-CO-R⁹,

-CO-O-R⁹,

-SO₂-R⁹ alebo

-CO-NH-R⁹,

R⁷ predstavuje atóm vodíka a

R⁶ znamená atóm vodíka,

-R⁹ alebo

-Ar¹,

R⁹ predstavuje priamu alebo rozvetvenú alkylovú skupinu s 1 až 6 atómami uhlíka, prípadne substituovanú atómom kyslíka a prípadne substituovanú skupinou -Ar¹,

R¹⁰predstavuje atóm vodíka alebo priamu, alebo rozvetvenú alkylovú skupinu s 1 až 3 atómami uhlíka, R¹³ znamená atóm vodíka,

-R⁹, -Ar² alebo -CH₂-T'-R⁹, výhodnejšie, kde -Ar² predstavuje skupinu všeobecného vzorca (hh) a skupina všeobecného vzorca (hh) je prípadne substituovaná raz alebo viac razy alkylovou skupinou s 1 až 6 atómami uhlíka, skupinou -O-alkyl s 1 až 6 atómami uhlíka, skupinou -NH-alkyl s 1 až 6 atómami uhlíka, skupinou -N-(alkyl)₂ s 1 až 6 atómami uhlíka v každej alkylovej časti, skupinou -S-alkyl s 1 až 6 atómami uhlíka, chlórom, fluórom, trifluórmetylovou skupinou alebo skupinou

Ar¹ predstavuje fenylovú, naftylovú, pyridylovú, benzotiazolylovú, tienylovú, benzotienylovú, benzoxazolylovú, 2-indanylovú alebo indolylovú skupinu prípadne jeden alebo viackrát substituovanú skupinou -O-alkyl s 1 až 3 atómami uhlíka, skupinou -NH-alkyl s 1 až 3 atómami uhlíka, skupinou -N-(alkyl)₂ s 1 až 3 atómami uhlíka v každej alkylovej časti, chlórom, fluórom, trifluórmetylovou skupinou, alkylovou skupinou s 1 až 3 atómami uhlíka alebo skupinou

výhodne kde Ar² predstavuje skupinu všeobecného vzorca (ii), (jj) alebo (kk)

každý zo symbolov X sa nezávisle vybral zo súboru zahŕňajúceho =N- a =CH-, každý zo symbolov X² sa nezávisle vybral zo súboru zahŕňajúceho atóm kyslíka, skupinu -CH₂-, skupinu -NH-, atóm síry a skupiny -SO- a SO₂-, každý zo symbolov X³ sa nezávisle vybral zo súboru zahŕňajúceho skupinu -CH- a -N-,

X⁶ predstavuje skupinu -CH- alebo -N- a

Z znamená skupinu C=O, s tým, že ak

R¹ predstavuje skupinu všeobecného vzorca (f),

R⁶ znamená zvyšok bočného reťazca a-aminokyseliny, a

R⁷ predstavuje atóm vodíka, potom musia byť skupiny všeobecného vzorca (aal) a (aa2) substituované Q¹, taktiež s tým, že pokiaľ

R¹ predstavuje skupinu všeobecného vzorca (o), g má hodnotu 0,

J znamená atóm vodíka, m má hodnotu 1,

R⁶ predstavuje zvyšok bočného reťazca a-aminokyseliny,

R⁷ znamená atóm vodíka,

X² predstavuje skupinu -CH₂X^s znamená skupinu -CH-,

X⁶ predstavuje atóm dusíka -N- a /R¹⁰

R³ znamená skupinu -CO-N alebo -CO-R¹³, pokiaľ \_RW

R¹³ predstavuje skupinu

-CH₂-O-CO-Ar',

-CH₂-S-CO-Ar‘,

-CHz-O-Ar¹,

-CH₂-S-Ar’ alebo

R⁴, pokiaľ -R⁴ znamená atóm vodíka, potom musí byť kruh skupiny všeobecného vzorca (o) vo význame symbolu R¹ substituovaný Q¹ alebo naň musí byť nakondenzované benzénové jadro, a s tým, že pokiaľ

R¹ predstavuje skupinu všeobecného vzorca (w), g má hodnotu 0,

J znamená atóm vodíka, m má hodnotu 1,

T predstavuje skupinu -CO₂H, X² znamená atóm kyslíka, R⁵ predstavuje benzyloxykarbonylovú skupinu a kruhom C je benzoskupina, potom R³ nemôže znamenať skupinu -CO-R¹³, pokiaľ R¹³ predstavuje skupinu -CH₂-O-Ar', a

Ar¹ znamená l-fenyl-3-trifluórmetylpyrazol-5-ylovú skupinu, v ktorej je fenylový kruh prípadne substituovaný atómom chlóru, alebo pokiaľ

R¹³ predstavuje skupinu -CH₂-O-CO-Ar’, kde

Ar¹ znamená 2,6-dichlórfenylovú skupinu.

Výhodným významom substituenta R¹³ je skupina -CH2-O-R⁹, v ktorej R⁹ znamená priamu alebo rozvetvenú alkylovú skupinu s 1 až 6 atómami uhlíka prípadne substituovanú atómom kyslíka a prípadne substituovanú skupinou Ar¹, ďalším výhodným významom substituenta R¹³ je skupina -CH2-S-R⁹, v ktorej R⁹ znamená priamu alebo rozvetvenú alkylovú skupinu s 1 až 6 atómami uhlíka prípadne substituovanú skupinou Ar¹, ďalším výhodným významom substituenta R¹³ je skupina -CH₂-O-R⁹, v ktorej R⁹ znamená priamu alebo rozvetvenú alkylovú skupinu s 1 až 6 atómami uhlíka prípadne substituovanú skupinou Ar¹, ďalším výhodným významom substituenta R¹³ je atóm vodíka.

Výhodnejšou formou skupiny všeobecného vzorca (a) vo význame symbolu R¹ je skupina všeobecného vzorca (a2)

S 8

F. R“

N-C—C— ' 7 H

P/ o prípadne substituovaná Q¹, kde

R⁵ predstavuje atóm vodíka,

R⁷ znamená atóm vodíka a

Z predstavuje skupinu C=O, v ktorom

R⁵ predstavuje atóm vodíka, výhodnejšou formou skupiny všeobecného vzorca (b) vo význame symbolu R¹ je skupina všeobecného vzorca (b)

H

(b)

R⁷ znamená atóm vodíka a

Z predstavuje skupinu C=O, výhodnejšími formami skupiny všeobecného vzorca (c) vo význame symbolu R¹ sú skupiny všeobecného vzorca (cl) a (c2)

(cl)

(c2) s tým, že pokiaľ R¹ predstavuje skupinu všeobecného vzorca (cl), g má hodnotu 0,

J znamená atóm vodíka, m má hodnotu 1,

T predstavuje skupinu -CO₂H,

X znamená atóm dusíka,

R⁵ predstavuje benzyloxykarbonylovú skupinu a

R⁶ znamená atóm vodíka, potom R³ nemôže znamenať skupinu -CO-R¹³, pokiaľ

R¹³ predstavuje skupinu -CH₂-O-Ar‘, a

Ar¹ znamená l-fenyl-3-trifluórmetylpyrazol-5-ylovú skupinu, v ktorej je fenylový kruh prípadne substituovaný atómom chlóru, alebo pokiaľ

R¹³ predstavuje skupinu -CH₂-O-CO-Ar', kde

Ar¹ znamená 2,6-dichlórfenylovú skupinu, a kde poloha 2 skeletového kruhu je substituovaná para-fluórfenylovou skupinou, výhodnejšími formami skupiny všeobecného vzorca (e) vo význame symbolu R¹ sú skupiny všeobecného vzorca (el), (e2) (CH2)t

(el)

(e2) kde c má hodnotu 2, a všeobecného vzorca (e4) a (e7)

(e4) (e7) na ktorú je prípadne nakondenzované benzénové jadro, kde c má hodnotu 1 alebo 2, s tým, že pokiaľ R¹ predstavuje skupinu všeobecného vzorca (e4), g má hodnotu 0,

J znamená atóm vodíka, m má hodnotu 1,

T predstavuje skupinu -CO₂H,

R⁵ predstavuje benzyloxykarbonylovú skupinu a c má hodnotu 1, potom R nemôže znamenať skupinu -CO-R¹³, pokiaľ

R¹³ predstavuje skupinu -CH₂-O-Ar', a

Ar¹ znamená l-fenyl-3-trifluórmetylpyrazol-5-ylovú skupinu, v ktorej je fenylový kruh prípadne substituovaný atómom chlóru, alebo pokiaľ

R¹³ predstavuje skupinu -CH₂-O-CO-Ar‘, kde

Ar¹ znamená 2,6-dichlórfenylovú skupinu, a kde poloha 2 skeletového kruhu je substituovaná para-fluórfenylovou skupinou, a taktiež s tým, že pokiaľ

R¹ predstavuje skupinu všeobecného vzorca (e7), g má hodnotu 0,

J znamená atóm vodíka, m má hodnotu 1,

T predstavuje skupinu -CO₂H, -CO-NH-OH alebo bio-izostému náhradu za -CO₂H,

R⁵ znamená chrániacu skupinu pre atóm dusíka zvyšku bočného reťazca oc-aminokyseliny, a každý zo symbolov c má hodnotu 1, potom R³ nemôže znamenať skupinu -CO-R¹³, pokiaľ R¹³ predstavuje skupinu -CH₂-O-CO-Ar’,

-CH₂-S-CO-Ar',

-CH₂-O-Ar' alebo

-CHrS-Ar¹, výhodnejšou formou skupiny všeobecného vzorca (f) vo význame symbolu R¹ je skupina všeobecného vzorca (fl)

R® rs-N-C-C-R^-C-(fl)

I IIII

H ROO výhodnejšou formou skupiny všeobecného vzorca (g) vo význame symbolu R¹ je skupina všeobecného vzorca (g2)

kde

R²⁰ predstavuje skupinu vzorca (aal), prípadne raz alebo viac razy substituovanú Q¹, a

Z znamená skupinu C=O, výhodnejšou formou skupiny všeobecného vzorca (h) vo význame symbolu R¹ je skupina všeobecného vzorca (h)

(h) kde

R²⁰ predstavuje skupinu vzorca (aal), prípadne raz alebo viac razy substituovanú Q¹, a

Z znamená skupinu C=O, výhodnejšími formami skupiny všeobecného vzorca (o) vo význame symbolu R¹ je skupina všeobecného vzorca (ol)

kde d má hodnotu 1 alebo 2, a skupina všeobecného vzorca (06)

(06) výhodnejšími formami skupiny všeobecného vzorca (r) vo význame symbolu R¹ sú skupiny všeobecného vzorca (r3), (r4) a (r5)

(r3)

a táto skupina je prípadne substituovaná Q¹, výhodnejšou formou skupiny všeobecného vzorca (w) vo význame symbolu R¹ je skupina všeobecného vzorca (wl)

kde

X² predstavuje skupinu

-NH-,

-S-,

-O- alebo -SO₂-, ktorá je prípadne substituovaná skupinou R⁵ alebo Q¹ na X², pokiaľ X² predstavuje -N-, a kruh C je benzosubstituovaný alkylovou skupinou s 1 až 3 atómami uhlíka, skupinou -O-alkyl s 1 až 3 atómami uhlíka, chlórom, fluórom alebo trifluórmetylovou skupinou.

Pokiaľ R¹ predstavuje skupinu všeobecného vzorca (a2)

(a2) patria medzi výhodné zlúčeniny podľa vynálezu nasledujúce zlúčeniny, bez toho, aby išlo o obmedzujúci výpočet:

(20d) a (142)·

Jedna vhodná zlúčenina realizácie B tohto vynálezu zodpovedá všeobecnému vzorcu (a), v ktorom R¹ predstavuje skupinu všeobecného vzorca (c2)

(c2)

Medzi výhodné zlúčeniny tejto realizácie patria nasledujúce zlúčeniny, bez toho, aby išlo o obmedzujúci výpočet:

(54a) (54b) (54g) (54 j ) (54k) (57b)

(88) (90) (91) (125a) (12 6) (127) (128)

(129)

Pokiaľ R¹ predstavuje skupinu všeobecného vzorca (e)

patria medzi výhodné zlúčeniny podľa vynálezu nasledujúce zlúčeniny, bez toho, aby išlo o obmedzujúci výpočet:

(132a)

O

O

(132b)

(133) (140) a

Jedna výhodná zlúčenina realizácie B tohto vynálezu zodpovedá všeobecnému vzorcu (a), v ktorom

R¹ predstavuje skupinu všeobecného vzorca (e 1) alebo (e2)

(el;

(e2)

SK 287422 Β6 a c má hodnotu 2, má hodnotu 1, predstavuje skupinu -CO₂H a znamená skupinu -CO-R¹³.

Medzi výhodné zlúčeniny tejto realizácie patria nasledujúce zlúčeniny, bez toho, aby išlo o obmedzujúci výpočet:

(47a) (47b) (125b)

(135a)

(135b)

Pokiaľ R¹ predstavuje skupinu všeobecného vzorca (fl)

R* _RX_N__C__C._R2O__C.

III í

H R’O O (fl) patria medzi výhodné zlúčeniny podľa vynálezu nasledujúce zlúčeniny, bez toho, aby išlo o obmedzujúci výpočet:

(86) (87)

(158) a (160) .

Pokiaľ R¹ predstavuje skupinu všeobecného vzorca (g2)

(g2) patria medzi výhodné zlúčeniny podľa vynálezu nasledujúce zlúčeniny, bez toho, aby išlo o obmedzujúci výpočet:

Pokiaľ R¹ predstavuje skupinu všeobecného vzorca (o)

R⁵

I

I II

H 0 (O) patrí medzi výhodné zlúčeniny podľa vynálezu nasledujúca zlúčenina, bez toho, aby išlo o obmedzujúci výpočet:

Jedna výhodná zlúčenina realizácie B tohto vynálezu zodpovedá všeobecnému vzorcu (a), v ktorom R¹ predstavuje skupinu všeobecného vzorca (06)

X² znamená skupinu -NH-, m má hodnotu 1,

T predstavuje skupinu -CO₂H a

R³ znamená skupinu -CO-R¹³.

Medzi výhodné zlúčeniny tejto realizácie patria nasledujúce zlúčeniny, bez toho, aby išlo o obmedzujúci výpočet:

Pokiaľ R¹ predstavuje skupinu všeobecného vzorca (r3), (r4) alebo (r5)

(r3) (r4)

(rS) a táto skupina je prípadne substituovaná Q¹, patria medzi výhodné zlúčeniny realizácie B tohto vynálezu nasledujúce zlúčeniny, bez toho, aby išlo o obmedzujúci výpočet:

(38) (lC2a)

patria medzi výhodné zlúčeniny podľa vynálezu nasledujúce zlúčeniny, bez toho, aby išlo o obmedzujúci výpočet:

(106a) (106b) (106c)

Výhodné sú zlúčeniny podľa vynálezu, ktoré majú molekulovú hmotnosť menšiu alebo rovnajúcu sa približne 700 daltonom, a výhodnejšie medzi približne 400 a 600 daltonmi. Tieto výhodné zlúčeniny sa môžu ľahko absorbovať krvou pacienta pri orálnom podaní. Táto orálna dostupnosť spôsobuje, že tieto zlúčeniny sú výborné činidlá pre orálne sprostredkované liečenie a prevenciu proti ochoreniam sprostredkovaných IL-1.

Inhibitory ICE podľa vynálezu sa dajú syntetizovať s použitím bežných postupov. Výhodne sa tieto zlúčeniny účelne syntetizujú z ľahko dostupných východiskových materiálov.

Zlúčeniny podľa vynálezu patria medzi najľahšie syntetizovateľné známe inhibitory ICE. Už opísané inhibítory ICE často obsahujú štyri alebo viacero chirálnych centier a rad peptidických väzieb. Relatívna jednoduchosť syntézy zlúčenín podľa vynálezu predstavuje nesmiernu výhodu pri veľkovýrobnej produkcii týchto zlúčenín.

Je potrebné zobrať do úvahy, že zlúčeniny podľa vynálezu sa môžu vyskytovať v rôznych rovnovážnych formách, v závislosti od podmienok vrátane výberu rozpúšťadla, pH a ďalších, ako je odborníkovi v odbore známe. Všetky také formy týchto zlúčenín sú výslovne zahrnuté v rozsahu vynálezu. Predovšetkým sa môžu mnohé zlúčeniny podľa vynálezu, obzvlášť tie, ktoré obsahujú aldehydické skupiny alebo ketoskupiny vo zvyšku R³ a karboxylové skupiny vo zvyšku T, vyskytovať v hemiketálových (alebo hemiacetálových) alebo hydratovaných formách, ako je znázornené:

(EQ1)

(CJj)rrr-O OH

OH = ¹ 13 (CHj)g—C—R ^{, J}

OH

O II (CHzJg-C-R¹³

O

II

OH hydrátovaná forma hemiketálová alebo hemiacetálová forma

V závislosti od výberu rozpúšťadla a ďalších podmienok známych odborníkovi v odbore sa môžu zlúčeniny podľa vynálezu vyskytovať tiež v acyloxyketálovej, acyloxyacetálovej, ketálovej alebo acetálovej for59 me:

(EQ2)

J rtO ti (C-b)rrr- C

Ό _

OR

Ä \ (CH-js

F?—N-X

H ’

O

II (CJ-)rr—

CH (CJf?—n—y

H \ acyloxyketálová alebo acyloxyacetálová forma ketálová alebo acetálová forma

Okrem toho je potrebné zobrať do úvahy, že rovnovážne formy zlúčenín podľa vynálezu môžu zahŕňať tautoméme formy. Všetky takéto formy týchto zlúčenín sú výslovne zahrnuté v rozsahu vynálezu.

Je potrebné zobrať do úvahy, že zlúčeniny podľa vynálezu sa dajú modifikovať vhodnými funkčnými skupinami pre rozšírenie selektívnych biologických vlastností. Takéto modifikácie sú v odbore známe a patria medzi ne modifikácie, ktoré zvyšujú biologickú penetráciu do daného biologického systému (napríklad krvi, lymfatického systému, centrálneho nervového systému), zvyšujú orálnu dostupnosť, zvyšujú rozpustnosť pre umožnenie injekčného podania, menia metabolizmus a menia rýchlosť vylučovania. Okrem toho sa dajú zlúčeniny podľa vynálezu meniť do formy prekurzorov, takže sa požadovaná zlúčenina vytvára v tele pacienta ako výsledok pôsobenia metabolických alebo iných biochemických procesov na prekurzor. Medzi niekoľko príkladov prekurzorových foriem patria ketálové, acetálové, oximové a hydrazónové formy zlúčenín, ktoré obsahujú ketoskupiny alebo aldehydové skupiny, najmä pokiaľ sa vyskytujú v skupine R³ zlúčenín podľa vynálezu.

Zlúčeniny podľa vynálezu sú výbornými ligandmi pre ICE. V súlade s tým sú tieto zlúčeniny schopné zamerať sa na určité procesy súvisiace s ochoreniami sprostredkovanými IL-1 a inhibovať ich, ako je to v prípade konverzie prekurzora IL-Ιβ na maturovaný IL-Ιβ, a tým inhibovať rozhodujúcu aktivitu tohto proteínu pri zápalových ochoreniach, autoimunitných ochoreniach a neurodegeneratívnych ochoreniach. Zlúčeniny podľa vynálezu napríklad inhibujú konverziu prekurzoru IL-Ιβ na maturovaný IL-Ιβ v dôsledku inhibície ICE. Pretože ICE má zásadný význam pre produkciu maturovaného IL-1, inhibícia tohto enzýmu účinne blokuje začatie fyziologických účinkov a symptómov sprostredkovaných IL-1, ako sú zápaly, pomocou inhibície produkcie maturovaného IL-1. Inhibíciou aktivity prekurzora IL-1 b teda zlúčeniny podľa vynálezu účinne fungujú ako inhibítory IL-1.

Zlúčeniny podľa vynálezu sa dajú použiť bežným spôsobom na liečenie ochorení, ktoré sú sprostredkované IL-1. Takéto spôsoby liečenia, dávkovania pri nich a podmienky liečenia môže odborník v odbore vybrať z dostupných spôsobov a techník. Napríklad sa zlúčenina podľa vynálezu dá kombinovať s farmaceutický prijateľnou nosnou a/alebo pomocnou látkou pre podanie pacientovi postihnutému ochorením sprostredkovaným IL-1 farmaceutický prijateľným spôsobom a v množstve účinnom na zníženie závažnosti tohto ochorenia.

Alternatívne sa zlúčeniny podľa vynálezu dajú použiť v prostriedkoch a spôsoboch liečenia alebo ochrany jedincov proti ochoreniam sprostredkovaných IL-1 počas dlhšieho časového obdobia.

Tieto zlúčeniny sa dajú použiť v takých prostriedkoch buď samotné, alebo spolu s inými zlúčeninami podľa vynálezu, spôsobom, ktorý je v súlade s bežným využitím inhibítorov ICE vo farmaceutických prostriedkoch. Napríklad sa dá zlúčenina podľa vynálezu miešať s farmaceutický prijateľnými nosnými a/alebo pomocnými látkami bežne používanými vo vakcínach a podávať v profylaktický účinných množstvách na ochranu jedincov po dlhší čas proti ochoreniam sprostredkovaných IL-1.

Zlúčeniny podľa vynálezu sa tiež dajú podávať spoločne s inými inhibítormi ICE na zvýšenie účinku terapie alebo profylaxie proti rôznym ochoreniam sprostredkovaných IL-1.

Okrem toho sa zlúčeniny podľa vynálezu dajú použiť v kombinácii buď s bežnými protizápalovými činidlami, alebo s matricovými metaloproteázovými inhibítormi, lipoxygenázovými inhibítormi a antagonistami cytokínov iných ako IL-Ιβ.

Zlúčeniny podľa vynálezu sa tiež dajú podávať v kombinácii s imunomodulátormi (napríklad bropirimínom, protilátkou proti ľudskému alfa-interferónu, IL-2, GM-CSF, metionín-enke-falínom, interferónom alfa, dietylditiokarbamátmi, faktorom nekrózy nádorov (tumor necrosis factor, naltrexonom a rEPO) alebo s prostaglandínmi, na prevenciu alebo potláčanie symptómov ochorení sprostredkovaných IL-1, ako je zápal.

Pokiaľ sa zlúčeniny podľa vynálezu podávajú v kombinačných terapiách s inými činidlami, dajú sa pa cientovi podávať postupne alebo súčasne. Alternatívne sa môžu farmaceutické alebo profylaktické prostriedky podľa vynálezu tvoriť kombináciou inhibítora ICE podľa vynálezu a iného terapeutického alebo profylaktického činidla.

Farmaceutické prostriedky podľa vynálezu obsahujú ľubovoľné zo zlúčenín podľa vynálezu a ich farmaceutický prijateľných solí, s ľubovoľným farmaceutický prijateľným nosičom, pomocnou látkou alebo vehikulom. Medzi farmaceutický prijateľné nosiče, pomocné látky a vehikulá, ktoré sa dajú použiť vo farmaceutických prostriedkoch podľa vynálezu patria, bez toho, aby išlo o obmedzujúci výpočet, iónomeniče, alumína, alumínium-stearát, lecitín, sérové proteíny, ako je albumín ľudského séra, pufrovacie látky, ako sú fosfáty, glycín, kyselina sorbová, sorbát draselný, zmesi čiastočných glyceridov nasýtených rastlinných mastných kyselín, voda, soli alebo elektrolyty, ako je protamín-sulfát, hydrogénfosforečnan sodný, hydrogénfosforečnan draselný, chlorid sodný, soli zinku, koloidný oxid kremičitý, magnézium-trisilikát, polyvinyl-pyrolidón, látky na báze celulózy, polyetylénglykol, nátrium-karboxymefylcelulóza, polyakryláty, vosky, polyetylénpolyoxypropylénové blokové polyméry, polyetylénglykol a lanolín.

Farmaceutické prostriedky podľa vynálezu sa dajú podávať orálne, parenterálne, inhalačným sprejom, miestne, rektálne, nazálne, bukálne, vaginálne alebo pomocou implantovaného zásobníka. Výhodné je orálne podanie. Farmaceutické prostriedky podľa vynálezu môžu obsahovať ľubovoľné bežné netoxické farmaceutický prijateľné nosiče, pomocné látky alebo vehikulá. Termín „parenterálny“, ako sa tu používa, zahŕňa subkutánne, intrakutánne, intravenózne, intramuskuláme, intraartikuláme, intrasynoviálne, intrastemálne, intrathekálne, intralezionálne a intrakraniálne injekcie alebo infúzie.

Farmaceutické prostriedky môžu byť vo forme sterilného injikovateľného prípravku, napríklad vo forme sterilnej injikovateľnej vodnej alebo olejovej suspenzie. Táto suspenzia sa dá formulovať podľa postupov známych v odbore s použitím vhodných dispergátorov alebo namáčadiel (ako je napríklad Tween 80) a suspendujúcich činidiel. Sterilným injikovateľným prípravkom môže byť tiež sterilný injikovateľný roztok alebo suspenzia v netoxickom parenterálne prijateľnom riedidle alebo rozpúšťadle, napríklad roztok v 1,3-butándiolu. Medzi prijateľné vehikulá a rozpúšťadlá, ktoré sa dajú použiť, patria mannitol, voda, Ringerov roztok a izotonický roztok chloridu sodného. Okrem toho sa ako rozpúšťadlo alebo suspendujúce prostredie bežne používajú sterilné nevysychavé oleje. Na tento účel sa dá použiť ľubovoľný nedráždivý nevysýchavý olej vrátane syntetických mono- a diglyceridov. Na prípravu injikovateľných prostriedkov sú vhodné mastné kyseliny, ako je kyselina olejová a jej glyceridové deriváty, rovnako ako v prírode sa vyskytujúce farmaceutický prijateľné oleje, ako je olivový olej alebo ricínový olej, najmä v ich polyoxyetylovaných formách. Tieto olejové roztoky alebo suspenzie môžu tiež obsahovať alkohol s dlhým reťazcom ako riedidlo alebo dispergátor, ako sú tie, ktoré sú opísané v Pharmacopeia Helvetica, alebo podobný alkohol.

Farmaceutické prostriedky podľa vynálezu sa môžu orálne podávať v ľubovoľnej orálne prijateľnej dávkovacej forme, bez toho, aby išlo o obmedzujúci výpočet, vrátane kapsúl, tabliet a vodných suspenzií a roztokov. V prípade tabliet na orálne použitie patria medzi bežne používané nosiče laktóza a kukuričný škrob. Typicky sa pridávajú tiež lubrikačné činidlá, ako je stearát horečnatý. Pre orálne podanie vo forme kapsúl patria medzi vhodné riedidlá laktóza a sušený kukuričný škrob. Pokiaľ sa orálne podávajú vodné suspenzie, kombinuje sa účinná látka s emulgátormi a suspendujúcimi činidlami. Pokiaľ je to žiaduce, môžu sa pridávať: niektoré sladidlá a/alebo chuťové prísady, a/alebo farbivá.

Farmaceutické prostriedky podľa vynálezu sa dajú tiež podávať vo forme čapíkov na rektálne podanie. Tieto prostriedky sa dajú pripraviť zmiešaním zlúčeniny podľa vynálezu s vhodným nedráždivým vehikulom, ktoré je pevné pri izbovej teplote, ale kvapalné pri teplote rekta a preto sa v rekte topí, čím sa uvoľnia účinné zložky. Medzi takéto materiály patria, bez toho, aby išlo o vyčerpávajúci výpočet, kakaové maslo, včelí vosk a polyetylénglykoly.

Miestne podanie farmaceutických prostriedkov podľa vynálezu je predovšetkým vhodné pokiaľ požadované ošetrenie zahŕňa oblasti alebo orgány ľahko dostupné miestnym podaniam. Pre miestne podanie na kožu by mal byť farmaceutický prostriedok formulovaný ako vhodná masť obsahujúca účinné zložky suspendované alebo rozpustené v nosiči. Medzi nosiče pre miestne podanie zlúčenín podľa vynálezu patria, bez toho, aby išlo o vyčerpávajúci výpočet, minerálne oleje, vazelínový olej, albolén, propylénglykol, polyoxyefylénpolyoxypropylénové zlúčeniny, emulgačný vosk a voda. Alternatívne sa farmaceutický prostriedok dá formulovať ako vhodný lotion alebo krém obsahujúci účinnú zlúčeninu suspendovanú alebo rozpustenú v nosiči. Medzi vhodné nosiče patria, bez toho, aby išlo o vyčerpávajúci výpočet, minerálne oleje, sorbitanmonostearát, polysorbát 60, cetylesterový vosk, cetearylalkohol, 2-oktyldodekanol, benzylalkohol a voda. Farmaceutické prostriedky podľa vynálezu sa dajú tiež miestne aplikovať na spodnú časť intestinálneho traktu pomocou rektálnych čapíkov alebo vo vhodnom klystíre. Vynález tiež zahŕňa miestne transdermálne náplasti.

Farmaceutické prostriedky podľa vynálezu sa dajú podávať nazálnym aerosólom alebo inhaláciou. Takéto prostriedky sa pripravia pomocou spôsobov dobre známych v odbore vytvárania farmaceutických prostriedkov a dajú sa pripraviť ako roztoky vo fyziologickom roztoku, s použitím benzylalkoholu alebo iných vhodných konzervačných prísad, látok podporujúcich absorpciu na zvýšenie biologickej dostupnosti, fluorova ných uhlovodíkov a/alebo iných solubilizačných alebo dispergačných činidiel známych v odbore.

Medzi ochorenia sprostredkované IL-1, ktoré sa dajú liečiť alebo ktorých prevencia sa dá uskutočňovať pomocou zlúčenín podľa vynálezu, patria, bez toho, aby išlo o vyčerpávajúci výpočet, zápalové ochorenia, autoimunitné ochorenia a neurodegeneratívne ochorenia.

Medzi zápalové ochorenia, ktoré sa dajú liečiť, alebo sa dá robiť prevencia, patria napríklad septický šok, septikémia a syndróm respiračnej ťažkosti dospelých (adult respirátory distress syndróme). Medzi cieľové autoimunitné ochorenia patria napríklad reumatická artritída, systémový lupus erythematosus, sklerodermia, chronická thyroiditída, Gravesova choroba, autoimunitná gastritída, diabetes mellitus závislá od inzulínu, autoimunitná hemolytická anémia, autoimunitná neutropenia, trombocytopénia, chronická aktívna hepatitída, myasténia gravis a roztrúsená skleróza. Medzi cieľové neurodegeneratívne ochorenia patria napríklad amyotrofná laterálna skleróza, Alzheimerova choroba, Parkinsonova choroba a primárna laterálna skleróza. Inhibítory ICE podľa vynálezu sa dajú tiež používať na zlepšenie hojenia poranení. Inhibítory ICE podľa vynálezu sa dajú tiež použiť na liečenie infekčných chorôb.

Hoci sa vynález zameriava na použitie tu opísaných zlúčenín pre prevenciu a liečenie ochorení sprostredkovaných IL-1, dajú sa zlúčeniny podľa vynálezu použiť tiež ako inhibičné činidlá pre ďalšie cysteínové proteázy.

Zlúčeniny podľa vynálezu sú tiež vhodné ako komerčné reakčné činidlá, ktoré sa účinne viažu na ICE alebo iné cysteínové proteázy. Ako komerčné reakčné činidlá sa zlúčeniny podľa vynálezu a ich deriváty dajú použiť na blokovanie proteolýzy cieľového peptidu alebo sa z nich dajú tvoriť deriváty viažuce sa na stabilnú živicu ako imobilizovaný substrát pre afmitné chromatografíe. Tieto a ďalšie použitia, ktoré charakterizujú komerčné inhibítory cysteínových proteáz, sú odborníkovi v odbore zrejmé.

Pre úplnejšie pochopenie vynálezu sú uvedené nasledujúce príklady. Tieto príklady sú uvedené iba pre ilustráciu a rozsah vynálezu sa nimi v žiadnom smere neobmedzuje.

Príklady uskutočnenia vynálezu

Príklad 1

Nasledujúci príklad demonštruje spôsob projektovania liečiva, ktorý je uskutočnením vynálezu.

Stupeň 1. V ICE sa vyberú 2 zvyšky vytvárajúce vodíkovú väzbu, v tomto prípade zvyšky C=O a N-H v Arg-341 v hlavnom reťazci.

Stupeň 2. Vyberie sa skelet, v tomto prípade pyridonový derivát, a potvrdí sa, že zvyšky vytvárajúce vodíkovú väzbu skeletu sú schopné tvoriť uspokojivé vodíkové väzby so zvyškami vytvárajúcimi vodíkové väzby vybranými v stupni 1. Toto potvrdenie sa urobí použitím spôsobov molekulárnej mechaniky pre minimalizáciu skeletového fragmentu vzhľadom na aktívne centrum ICE.

(Zl)

Stupeň 3. Vyberie sa hydrofóbna kapsa, v tomto prípade S2, ako ďalší cieľ a hydrofóbny zvyšok, v tomto prípade benzén. Benzénová skupina sa minimalizuje v kapse S2 na zaistenie dosiahnutia podstatného hydrofóbneho prekrytia.

(Z2)

S2

Stupeň 4. Vyberie sa iná hydrofóbna kapsa, v tomto prípade S4, ako ďalší cieľ a hydrofóbny zvyšok, v tomto prípade benzén. Benzénová skupina sa minimalizuje v kapse S4 na zaistenie dosiahnutia podstatného hydrofóbneho prekrytia.

(23)

Stupeň 5. Polárna kapsa SI sa vyplní elektronegatívnym zvyškom, v tomto prípade karboxylátovým bočným reťazcom poskytnutým kyselinou asparágovou, v ktorom sa C-koniec redukoval na aldehyd. Urobí sa minimalizácia na zaistenie toho, aby si karboxylátový bočný reťazec zachoval priaznivú elektrostatickú interakciu s polárnou kapsou S1.

(24)

Stupeň 6. Skelet sa spojí so zvyškami zo stupňov 3, 4 a 5, výhodne s použitím minimálneho počtu väzieb v súlade s chemicky racionálnou štruktúrou. Celá zložená molekula sa minimalizuje v aktívnom centre ICE.

(25)

Stupeň 7. Určí sa energia molekuly v konformácii nutnej na naviazanie ICE. Potom sa urobí minimalizácia a opäť sa určí energia - to je voľná konformačná energia. Rozdiel medzi voľnou konformačnou energiou a väzobnou konformačnou energiou je energiou napätosti pre väzbu potenciálneho inhibítora na ICE. Energia napätosti má byť menej ako zhruba 42 kJ/mol. V tomto prípade je väzobná konformačná energia -6,7 kJ/mol a voľná konformačná energia -49,0 kJ/mol. Energia napätosti je teda 42,3 kJ/mol.

Stupeň 8. Pripraví sa inhibítor vyprojektovaný s použitím uvedených stupňov a zistí sa, že má K, 150 nm.

Príklad 2

Získali sa inhibičné konštanty (K,) a hodnoty IC_SO pre niekoľko zlúčenín podľa vynálezu s použitím troch opísaných metód:

1. Enzýmový test so substrátom viditeľným v UV-svetle

Tento test sa robí s použitím sukcinyl-Tyr-Val-Ala-Asp-p-nitroanilidového substrátu. Syntézu analogických substrátov opísal L. A. Reiter (Int. J. Peptide Proteín Res. 43, 87 - 96 (1994)). Testovaná zmes obsahuje:

μΐ pufŕa (10 mM Tris, 1 mM DTT (ditiotreitolu), 0,1 % CHAPS (3-[(3-cholamidopropyl)dimetylamonio]-l-propánsulfonátu), pH 8,1), μΐ ICE (konečná koncentrácia 50 nM, na dosiahnutie rýchlosti zhruba 1 mOD/min.), μΐ zmesi dimetylsulfoxidu a inhibítora, ul 400 μΜ substrátu (konečná koncentrácia 80 μΜ),

100 μΐ = celkový reakčný objem.

Vizuálne vyhodnocovaný test ICE sa robí na mikrotitračnej doske s 96 jamkami. Tlmivý roztok, ICE a dimetylsulfoxid (pokiaľ je prítomný inhibítor) sa dajú do jamiek v uvedenom poradí. Zložky sa nechajú inkubovať pri izbovej teplote počas 15 minút, počítané od času, kedy sú všetky zložky prítomné vo všetkých jamkách. Inkubácia sa uskutočňuje pri teplote 37 °C. Po 15 minútach inkubácie sa do jamiek priamo pridá substrát a reakcia sa monitoruje pomocou nasledujúceho uvoľňovania chromoforu (pNA) pri 405 - 603 nm pri teplote 37 °C počas 20 minút. Urobí sa lineárne vyhodnotenie údajov a vypočíta sa rýchlosť v mOD/min. Dimetylsulfoxid je prítomný iba pri experimentoch s použitím inhibítorov, pri ostatných experimentoch sa na doplnenie objemu na 100 μΐ použije tlmivý roztok.

2. Enzýmový test s fluorescenčným substrátom

Tento test sa v podstate uskutočňuje, ako opísali Thom-berry a kol. (Náture 356: 768 - 774 (1992)), s použitím substrátu 17 opísaného v uvedenom článku. Substrátom je acetyl-Tyr-Val-Ala-Asp-amino-4-metylkumarín (AMC). Zmiešajú sa nasledujúce zložky:

μΐ pufŕa (10 mM Tris, 1 mM DTT (ditiotreitolu), 0,1 % CHAPS (3-[(3-cholamidopropyl)dimetylamonio]-l-propán-sulfonátu), pH 8,1), μΐ ICE (konečná koncentrácia 2-10 nM), μΐ roztoku inhibítora v dimetylsulf oxide a ul 150 μΜ substrátu (konečná koncentrácia 30 μΜ),

100 μΐ = celkový reakčný objem.

Test sa uskutočňuje na mikrotitračnej doske s 96 jamkami. Do jamiek sa dá tlmivý roztok a ICE. Zložky sa nechajú inkubovať pri teplote 37 °C počas 15 minút v doske s riadenou teplotou. Po 15 minútach inkubácie sa začne reakcia pridaním substrátu priamo do jamiek a reakcia sa monitoruje pri teplote 37 °C počas 30 minút pomocou sledovania uvoľňovania AMC-fluoroforu s použitím excitačnej vlnovej dĺžky 380 nm a emisnej vlnovej dĺžky 460 nm. Urobí sa lineárne vyhodnotenie údajov pre každú jamku a stanoví sa rýchlosť v jednotkách fluorescencie za sekundu.

Na stanovenie enzýmových inhibičných konštánt (K,) alebo spôsobu inhibície (kompetitívna, akompetitívna, nekompetitívna) sa údaje o rýchlosti stanovené v enzýmových testoch s rôznymi koncentráciami inhibítora počítačovo spracujú štandardnými rovnicami enzýmovej kinetiky (pozri I. H. Segel, Enzýme Kinetics, Wiley-Interscience, 1975).

3. Bunkový test

Test IL-Ιβ so zmiešanou populáciou ľudských periférnych krvných mononukleámych buniek (peripheral blood mononuclear cells, PBMC) alebo obohatenými adherentnými mononukleámymi bunkami

Úpravu (processing) pre-IL-lb pôsobením ICE sa dá merať v bunkovej kultúre s použitím radu zdrojov buniek. Ľudské PBMC získané zo zdravých donorov poskytujú zmiešanú populáciu subtypov lymfocytov a mononukleámych buniek, ktorá produkuje rad interleukínov a cytokínov ako odpoveď na mnoho druhov fyziologických stimulácií. Adherentné mononukleáme bunky z PBMC sú obohateným zdrojom normálnych monocytov pre selektívne štúdie produkcie cytokínov aktivovanými bunkami.

Postup experimentu:

Pripraví sa počiatočná séria riedenia testovanej zlúčeniny v dimetylsulfoxide alebo etanole s nasledujúcim nariedením do média RPMI-10 % FBS (obsahujúceho 2 mM L-glutamínu, 10 mM HEPES (kyseliny 4-(2-hydroxyetyl)-l-piperazínetánsulfónovej), 50 U a 50 pg/ml pen/strep) na dosiahnutie koncentrácie liečiv, ktorá je štvornásobkom konečnej testovej koncentrácie, teda koncentrácie 0,4 % dimetylsulfoxidu alebo 0,4 % etanolu.

Konečná koncentrácia dimetylsulfoxidu je 0,1 % pre všetky riedenia liečiv. Pre počiatočné orientačné testovanie zlúčeniny sa všeobecne použije titrácia koncentrácie, ktorá vymedzuje zjavnú K, pre testovanú zlúčeninu stanovenú v teste inhibície ICE.

Všeobecne sa testuje 5-6 riedení zlúčeniny a celuláma časť testu sa uskutočňuje vo dvoch opakovaniach s dvojakým stanovením ELISA-testom na každom supematante bunkovej kultúry.

Izolácia PBMC a test IL-1:

Vyzrážané bunky (buffy coat cells) izolované z približne 0,5 1 ľudskej krvi (z ktorej sa získa 40 - 45 ml konečného objemu plazmy + bunky) sa nariedi médiom na 80 ml a separačné kyvety LeukoPREP (Becton Dickinson) sa naplnia 10 ml suspenzie buniek. Po 15 minútach centrifugácie pri 1500 - 1800 g sa vrstva 5 plazmy a média odsaje a vrstva mononukleámych buniek sa potom izoluje Pasteurovou pipetou a prenesie sa do kónickej centrifugačnej kyvety (Coming) s objemom 15 ml. Pridá sa médium na upravenie objemu na 15 ml, bunky sa jemne premiešajú prevrátením kyvety a urobí sa centrifugácia pri 300 g počas 15 minút. Peleta PBMC sa resuspenduje v malom objeme média, bunky sa spočítajú a koncentrácia sa upraví na 6 x 10⁶ buniek/ml.

Pre bunkový test sa do každej jamky dosky na tkanivovú kultiváciu s 24 jamkami s rovným dnom (Corning) vnesie 1,0 ml bunkovej suspenzie, 0,5 ml riedenia testovanej zlúčeniny a 0,5 ml roztoku LPS (Sigma č. L-3012, roztok s koncentráciou 20 ng/ml pripravený v kompletnom médiu RPMI, konečná koncentrácia LPS je 5 ng/ml). Pridávaním 0,5 ml testovanej zlúčeniny a LPS sa obsahy jamiek obvykle dostatočne premiešajú. Pre každý experiment sa robia tri kontroly, a to buď kontrola so samotným LPS, kontrola s rozpúšťadlom a/alebo kontrola s ďalším médiom na úpravu konečného kultivačného objemu na 2,0 ml. Bunkové kultúry sa inkubujú počas 16-18 hodín pri teplote 37 °C v prítomnosti 5 % oxidu uhličitého.

Na konci inkubačnej doby sa bunky izolujú a prenesú do kónických centrifugačných kyviet s objemom 15 ml. Po centrifugácii počas 10 minút pri 200 g sa supematanty izolujú a prenesú do Eppendorfových skúmaviek. Bunkové pelety sa dajú využiť na biochemické zhodnotenie obsahu pre-IL-Ιβ a/alebo maturovaného 20 IL-Ιβ v cytosolových extraktoch pomocou western blot-tingu alebo ELISA-testu s antisérom špecifickým preIL-LB.

Izolácia adherentných mononukleámych buniek:

Ako sa opísalo, izolujú a preparujú sa PBMC. Do jamiek sa vnesie najskôr 1,0 ml média a potom 0,5 ml 25 suspenzie PBMC. Po jednohodinovej inkubácii sa doskami mierne zatrasie a neadherentné bunky sa z každej jamky odsajú. Jamky sa potom opatrne premyjú trikrát 1,0 ml média a nakoniec sa resuspendujú v 1,0 ml média. Obohatením adherentných buniek sa všeobecne získa 2,5 - 3,0 x 10⁵ buniek na jamku. Pridanie testovaných zlúčenín a LPS, podmienky inkubácie buniek a spracovanie supematantov sa uskutočňuje tak, ako sa už opísalo.

ELISA-test:

Na meranie maturovanej IL-ΙΒ sa použijú súpravy Quanti-kine (R&D Systems). Testy sa robia podľa pokynov výrobcu. V pozitívnych kontrolách tak s PBMC ako aj s adherentnými mononukleámymi bunkami sa pozorujú hladiny maturovaného IL-ΙΒ približne 1-3 ng/ml. Uskutočnia sa ELISA-testy na riedeniach 1 : 5, 35 1 : 10 a 1 : 20 supematantov z LPS-pozitívnych kontrol na výber optimálneho riedenia pre supematanty v testovanom súbore.

Inhibičná účinnosť zlúčenín sa môže reprezentovať hodnotou IC_S0, čo je koncentrácia inhibítora, pri ktorej sa v supematante detekuje 50 % maturovaného IL-Ιβ v porovnaní s pozitívnymi kontrolami.

Použitím uvedených testov sa pre zlúčeniny A až N stanovili nasledujúce hodnoty Kj a IC_S0. Vzorce zlú40 cenín A až N sa uvádzajú za tabuľkou.

zlúčenina	hodnoty získané testom
viditelným v UV-svetle Κχ (μΜ)	fluorescenčným Κχ (μΜ)	bunkovým ICgo (μΜ)
A	5,5		25,0
B	8,6		20,0
C	10		viac ako 30
D	4,7
E	3,2
F	0,15		2-4
G	4,8
H	0,023	0,0047	6-11
I	0,0072	0,0052	2,6
J	0,012	0,0039	5-7
K	0,010	0,002	2-11
L	0,014
M	0,15
N	0,95

Vzorce zlúčenín A až N:

(A)

OH

Príklad 3

Zlúčeniny z príkladu 2 sa syntetizujú takto:

H Kyselina N-(N-acetyl-tyrozinyl-valinyl-pipekolyl)-3-amino-4-oxobutánová

Stupeň A. N-(N-Terc.butoxykarbonylpipekolyl)-4-amino-5-benzyloxy-2-oxotetrahydrofurán

Analogickým spôsobom ako opísal Chapman (Bioorg. and Med. Chem. Lett. 1992, 2, 613 - 618) sa uskutoční reakcia 460 mg (2,0 mmol) kyseliny N-terc.buroxykarbonylpipekolovej a 530 mg (1,82 mmol) N-alyl10 oxykarbonyl-4-amino-5-benzyloxy-2-oxotetrahydrofuránu, čím sa získa 654 mg zlúčeniny uvedenej v názve.

*H-NMR (500 MHz, deuterochloroform (jestvuje ako rotaméry)), hodnoty δ: 7,35 (m, 5H), 6,88 (široký s, 1H), 4,9 - 4,45 (m, 4H), 3,95 (široký m, 2H), 3,06 (m, 1H), 2,9 (m, 1H), 2,7 (širokým, 1H), 2,45 (m, 1H), 2,2 (m, 1H), 1,7 - 1,5 (m, 3H), 1,45 (dva s, 9H)

Stupeň B. N-Pipekolyl-4-amino-5-benzyloxy-2-oxotetrahydrofurán

654 mg N-(N-terc.butoxykarbonylpipekolyl)-4-amino-5-benzyloxy-2-oxotetrahydrofuránu sa rozpustí v ml 25 % kyseliny trifluóroctovej v dichlórmetáne a zmes sa mieša pri izbovej teplote. Zmes sa zahustí, čím sa získa gumovitý zvyšok. Tento zvyšok sa rozpustí v dichlórmetáne a premyje sa 10 % hydrogenuhličitanom sodným. Organická vrstva sa vysuší nad bezvodným síranom sodným, prefiltruje sa a zahustí, čím sa získa 422 mg, zlúčeniny uvedenej v názve vo forme béžovej pevnej látky.

'H-NMR (500 MHz, deuterochloroform), hodnoty δ: 7,38 (m, 5H), 7,15 (d, 1H), 5,55 (d, 1H), 4395 - 4,8 (m, 1H), 4,78 (m, 1H), 4,65 (d, 1H), 4,45 (m, 1H), 3,2 (m, 0,5H), 3,05 (m, 0,5H), 2,95 (m, 0,5H), 2,85 (m, 0,5H),

2,65 (m, 1H), 2,55 - 2,38 (m, 1H), 1,95 (m, 1H), 1,8 (m, 1H), 1,6 (m, 2H), 1,38 (m, 2H)

Stupeň C. N-(N-Acetyl-tyrozinyl-valinyl-pipekoIyl)-4-amino-5-benzyloxy-2-oxotetrahydrofurán

464 mg (1,44 mmol) N-acetyl-tyrozinyl-valínu a 412 mg (1,3 mmol) N-pipekolyl-4-amino-5-benzyloxy-2-oxotetrahydrofuránu sa rozpustí v zmesi 5 ml dimetylformamidu a 5 ml dichlórmetánu a zmes sa ochladí na teplotu 0 °C. K ochladenému roztoku sa pridá 210 mg (1,56 mmol) 1-hydroxybenzotriazolu (HOBT) a potom 326 mg (1,7 mmol) l-(3-dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimid-hydrochloridu (EDC). Zmes sa mieša počas 18 hodín, potom sa nariedi etylacetátom, premyje sa vodou, 10 % hydrogénsíranom sodným, 10 % hydrogenuhličitanom sodným a opäť vodou. Organická vrstva sa zahustí, čím sa získa surová pevná látka, ktorá sa vyčistí pomocou flash chromatografíe na silikagéli s použitím zmesi dichlórmetánu, izopropanolu a pyridínu v pomere 94 : 6 : 1 ako elučného činidla, čím sa získa 370 mg zlúčeniny uvedenej v názve. ’H-NMR (500 MHz, perdeuterometanol (jestvuje ako diastereoméry ako i rotaméry)), hodnoty δ: 7,35 (m, 5H), 7,05 (m, 2H), 6,68 (m, 2H), 5,65 a 5,25 (m, 1H), 4,9 - 3,95 (m, 8H), 3,4 - 2,6 (m, H), 2,5 - 2,1 (m, 1H), 1,98 (s, 1H), 1,9 (s, 1H), 1,85 (s, 1H), 1,8 - 1,6 (m, 2H), 1,55 - 1,3 (m, 4H), 0,95 - 0,85 (m, 6H)

Stupeň D. Kyselina N-(N-acetyl-tyrozinyl-valinyl-pipekolyl)-3-amino-4-oxobutánová

K roztoku 100 mg N-(N-acetyl-tirozinyl-valinyl-pipekolyl)-4-amino-5-benzyloxy-2-oxotetrahydrofuránu v 10 ml metanolu sa pridá 60 mg hydroxidu paladnatého na uhlí a zmes sa udržiava vo vodíkovej atmosfére. Zmes sa prefiltruje cez celit a zahustí, čím sa získa biela pevná látka. Táto surová pevná látka sa rozpustí v 2 ml metanolu a trituruje sa s dietyléterom, čím sa získa 26 mg zlúčeniny uvedenej v názve.

’H-NMR (500 MHz, perdeuterometanol (jestvuje ako diastereoméry i ako rotaméry)), hodnoty δ: 7,1 (m, 2H), 6,7 (m, 2H), 5,2 (široký m, 1H), 4,8 - 3,6 (m, 6H), 3,2 - 2,5 (m, 4H), 2,5 - 2,1 (m, 1H), 1,95 (tri s, 3H),

I, 9 -1,3 (m, 6H), 1,1 - 0,7 (m, 6H)

Nasledujúce zlúčeniny sa pripravia analogickým spôsobom, ako je uvedený pre zlúčeninu H:

J. Kyselina N-[ N-acetyl-tyrozinyl-valinyl-(4-hydroxyprolinyl)]-3-amino-4-oxobutánová

Kyselina N-terc.butoxykarbonylpipekolová sa nahradí N-terc.butoxykarbonyl-4-benzyloxyprolínom.

L. Kyselina N-[2-(N-acetyl-tyrozinyl-valinyl-(S)-1,2,3,4-tetrahydroizochinolín-3-karbonyl]-3-aminooxobutánová

Kyselina N-terc.butoxykarbonylpipekolová sa nahradí kyselinou (S)-N-terc.butoxykarbonyl-l,2,3,4-tetrahydroizochinolín-3-karboxylovou.

I. Kyselina N-(N-acetyl-tyrozinyl-valinyl-(4-fenoxyprolinyl))-3-amiho-4-oxobutánová

Stupeň A. Metylester N-terc.butoxykarbonyl-4-fenoxyprolínu

K roztoku 2,0 g (8,15 mmol) N-terc.butoxy-cis-4-hydroxyprolínu, 0,77 g (8,15 mmol) fenolu a 2,14 g (8,15 mmol) trifenylfosfínu v 20 ml tetrahydrofuránu chladenému na teplotu 0 °C sa po kvapkách v priebehu 30 minút pridá 1,4 ml (9 mmol) dietyl-azodikarboxylátu. Reakčná zmes sa mieša pri izbovej teplote počas 16 hodín a potom sa zahustí, čím sa získa viskózny zvyšok. Surový zvyšok sa vyčistí flash chromatografiou na silikagéli s použitím zmesi etylacetátu a hexánu v pomere 3 : 7 ako elučného činidla, čím sa získa 1,89 g zlúčeniny uvedenej v názve.

‘H-NMR (500 MHz, deuterochloroform), hodnoty δ: 7,3 (m, 2H), 6,95 (m, 1H), 6,85 (d, 2H), 4,9 (široký m, 1H), 4,55 - 4,15 (m, 2H), 3,88 - 3,65 (m, 1H), 3,70 (s, 3H), 2,58 (m, 1H), 2,22 (m, 1H), 1,4 (3 x s, 9H)

Stupeň B. Hydrochlorid metylesteru 4-fenoxyprolínu

Roztokom 0,6 g metylesteru N-terc.butoxykarbonyl-4-fenoxyprolínu v 20 ml etylacetátu, chladeným v ľadovom kúpeli, sa prebubláva bezvodný chlorovodík, až kým sa dosiahne nasýtenie roztoku. Zmes sa zohreje na izbovú teplotu, mieša sa počas 3 hodín a potom sa zahustí, čím sa získa 480 mg zlúčeniny uvedenej v titule.

*H-NMR (500 MHz, deuterochloroform), hodnoty δ: 7,22 (m, 2H), 6,95 (m, 1H), 6,83 (m, 2H), 5,1 (široký signál, 1H), 4,6 (širokým, 1H), 4,06 (širokým, 1H), 3,75 (s, 3H), 3,55 (široký m, 1H), 2,58 (m, 2H)

Stupeň C. Metylester N-acetyl-tyrozinyl-valinyl-(4-fenoxy)prolínu

0,524 g (1,63 mmol) N-acetyl-tyrozinylvalinu a 0,381 g (1,48 mmol) metylesteru 4-fenoxyprolínu sa rozpustí v zmesi 4 ml dimetylformamidu a 4 ml dichlórmetánu a zmes sa ochladí na teplotu 0 °C. K ochladenému roztoku sa pridá 28 μΐ (1,86 mmol) diizopropyletylamínu, 0,24 g (1,78 mmol) 1-hydroxybenzotriazolu (HOBT) a 0,37 g (1,92 mmol) l-(3-dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimid-hydrochloridu (EDC) a zmes sa mieša počas 18 hodín. Zmes sa nariedi 400 ml etylacetátu, premyje sa vodou, 10 % hydrogénsíranom sodným, 10 % hydrogenuhličitanom sodným a opäť vodou. Organická vrstva sa zahustí, čím sa získa zvyšok, ktorý sa vyčistí pomocou flash chromatografie na silikagéli s použitím zmesi dichlórmetánu, izopropanolu a pyridínu v pomere 94 : 6 : 1 ako elučného činidla, čím sa získa 360 mg zlúčeniny uvedenej v titule.

’H-NMR (500 MHz, deuterochloroform (jestvuje ako rotaméry)), hodnoty δ: 7,3 (m, 2H), 7,05 (m, 1H), 6,95 (d, 2H), 6,9 - 6,2 (4 x d, 4H), 5,05 (široký s, 1H), 4,7 - 3,94 (m, 5H), 2,93 (m, 1H), 2,82 (m, 1H), 2,65 (m, 1H), 2,2 (m, 1H), 2,05 (m, 1H), 1,95 (s, 3H), 1,86 (m, 1H), 0,98 (d, 3H), 0,88 (d, 3H)

Stupeň D. N-Acetyl-tyrozinyl-valinyl-(4-fenoxy)prolín

K roztoku 360 mg (0,685 mmol) metylesteru N-acetyl-tyrozinyl-valinyl-(4-fenoxy)prolmu rozpusteného v 8 ml zmesi tetrahydrofuránu a vody v pomere 1 : 1 sa pridá 57 mg (1,37 mmol) hydroxidu lítneho a zmes sa mieša pri izbovej teplote počas 1 hodiny. Zmes sa okyslí 10 % kyselinou chlorovodíkovou pri vzniku bielej zrazeniny, ktorá sa izoluje, čím sa získa 175 mg zlúčeniny uvedenej v titule.

'H-NMR (500 MHz, perdeuterodimetylsulfoxid), hodnoty δ: 9,2 (široký s, 1H), 8,05 - 7,95 (m, 2H), 7,3 (m, 1H), 7,0 - 6,9 (m, 4H), 6,65 (d, 2H), 4,42 (m, 1H), 4,35 (m, 1H), 4,05 - 3,95 (m, 2H), 3,3 (široký s, 2H), 2,75 (m, 1H), 2,55 - 2,38 (m, 2H), 2,2 (m, 1H), 2,0 (m, 1H), 1,7 (s, 3H), 0,95 (d, 3H), 0,85 (d, 3H)

Stupeň E. N-[N-Acetyl-tyrozinyl-valinyl-(4-fenoxy)prolinyl]-4-amino-5-benzyloxy-2-oxotetrahydrofurán

Zlúčenina uvedená v názve sa pripraví spôsobom uvedeným v prípade zlúčeniny H, stupeň A, reakciou N-acetyl-tyrozinyl-valinyl-(4-fenoxy)prolínu a N-alyloxykarbonyl-4-amino-5-benzyloxytetrahydrofuránu. ’H-NMR (500 MHz, deuterochloroform (jestvuje ako zmes diastereomérov hemiacetálu v pomere 1 : 1)), hodnoty δ: 7,8 -6,3 (m, 17H), 5,6 (d, 1H), 5,1 - 4,15 (m, 5H), 4,15 - 3,75 (m, 2H), 2,95 - 2,15 (m, 5H), 2,15 - 1,95 (m, 1H), 1,9 - 1,85 (2 X s, 3H), 1,1 - 0,75 (m, 6H)

Stupeň F. Kyselina N-[N-acetyl-tyrozinyl-valinyl-(4-fenoxy)prolinyl]-3-amino-4-oxobutánová

Zlúčenina uvedená v názve sa pripraví hydrogenolýzou uskutočnenou spôsobom uvedeným v prípade zlúčeniny H, stupeň D.

'H-NMR (500 MHz, perdeuterometanol (jestvuje ako zmes diastereomérov hemiacetálu v pomere 1 : 1)), hodnoty δ: 7,25 (m, 2H), 7,10 - 6,85 (m, 5H), 6,65 (d, 2H), 5,1 (široký m, 1H), 4,65 - 4,05 (m, 5H), 4,0 - 3,40 (m, 2H), 2,95 - 2,35 (m, 5H), 2,25 (m, 1H), 2,05 (m, 1H), 1,85 (s, 3H), 1,0 (d, 3H), 0,95 (d, 3H)

K. Kyselina N-[N-acetyl-tyrozinyl-valinyl-(4-benzyloxy)prolinyl]-3-ainino-4-oxobutánová

Stupeň A. Semikarbazon kyseliny terc.butylesteru N-(N-allyloxykarbonyl-4-benzyloxyprolinyl)-3-amino-4-oxobutánovej

Zlúčenina uvedená v názve sa pripraví reakciou N-alyl-oxykarbonyl-4-benzyloxyprolínu a semikarbazonu terc.butylesteru kyseliny 3-amino-4-oxobutánovej (T. L. Graybill a kol., Ab-stracts of papers, 206th National Meeting of the Američan Chemical Society, Abstract MEDI-235, Chicago, IL, USA (1993)) v podmienkach podobných kondenzácii peptidu, ako sa uviedli v prípade zlúčeniny H, stupeň C.

‘H-NMR (500 MHz, deuterochloroform), hodnoty δ: 9,05 (široký s, 1H), 7,85 (širokým, 1H), 7,4 - 7,2 (m, 5H), 7,15 (široký s, 1H), 6,55 (široký s, 1H), 5,9 (m, 1H), 5,1 - 4,9 (široký m, 2H), 4,65 - 4,4 (m, 4H), 4,2 (široký m, 1H), 3,75 - 3,5 (m, 2H), 2,75 - 2,55 (m, 2H), 2,5 (široký m, 1H), 2,25 (široký m, 1H), 1,4 (s, 9H)

Stupeň B. Semikarbazon terc.butylesteru kyseliny N-(N-acetyl-tirozinyl-valinyl-(4-benzyloxyprolin-yl))-3-amino-4-oxobutánovej

Zlúčenina uvedená v titule sa pripraví reakciou N-acetyl-tyrozinyl-valínu a semikarbazonu terc.butylesteru kyseliny N-(N-alyloxykarbonyl-4-benzyloxyprolinyl)-3-amino-4-oxobutánovej v reakčných podmienkach uvedených v prípade zlúčeniny H, stupeň A.

'H-NMR (500 MHz, perdeuterometanol) hodnoty δ: 7,35 - 7,2 (m, 6H), 7,0 (d, 2H), 6,65 (d, 2H), 4,85 (m, 1H), 4,6 - 4,45 (m, 4H), 4,3 (širokým, 1H), 4,15 (m, 1H), 3,7 (m, 1H), 2,95 (m, 1H), 2,75 - 2,6 (m, 3H), 2,35 (m, 1H), 2,1 (m, 1H), 1,9 (s, 3H), 1,4 (s, 9H), 0,95 (d, 3H), 0,90 (s, 3H)

Stupeň C. Kyselina N-(N-acetyl-tyrozinyl-valinyl-(4-benzyloxyprolinyl))-3-amino-4-oxobutánová

270 mg semikarbazonu terc.butylesteru kyseliny N-(N-acetyl-tyrozinyl-valinyl-(4-benzyloxyprolinyl))-3-amino-4-oxo-butánovej sa rozpustí v 10 ml 25 % kyseliny trifluóroctovej v dichlórmetáne a zmes sa mieša pri izbovej teplote počas 3 hodín. Zmes sa zahustí, čím sa získa pevný zvyšok. Tento zvyšok sa rozpustí v 10 ml zmesi metanolu, kyseliny octovej a 37 % formaldehydu v pomere 3:1:1a zmes sa mieša pri izbovej teplote počas 1 hodiny. Zmes sa zahustí a výsledný zvyšok sa vyčistí pomocou flash chromatografie na silikagéli s použitím zmesi dichlórmetánu, metanolu a kyseliny mravčej v pomere 100 : 5 : 0,5 ako elučného činidla, 5 čím sa získa 37 mg zlúčeniny uvedenej v titule.

’H-NMR (500 MHz, perdeuterometanol (jestvuje ako zmes diastereomérov hemiacetálu v pomere 1 : 1)), hodnoty δ: 7,4 - 7,25 (m, 5H), 7,0 (d, 2H), 6,65 (d, 2H), 4,65 - 4,05 (m, 7H), 3,75 - 3,4 (m, 2H), 3,05 - 2,3 (m, 5H), 2,2 - 1,95 (m, 2H), 1,90 (s, 3H), 1,0 (d, 3H), 0,95 (d, 3H)

Príklad 4

Získali sa inhibičné konštanty (K_;) a hodnoty IC_S0 pre niekoľko zlúčenín podľa vynálezu s použitím enzýmových testov so substrátom viditeľným v UV-svetle a bunkových testov, ako sa opísali v príklade 2. Použitím týchto testov sa pre zlúčeniny 7a, 7b, 20a-d, 21c-f, 22e, 25, 28, 33a-c, 36a, 36b, 39, 43, 47a, 47b, 54a-l, 63, 69a, 69b, 84a a 84b stanovili nasledujúce hodnoty K; a IC₅₀. Zodpovedajúce označenia zlúčenín pomocou 15 písmen sú uvedené v zátvorkách. Vzorce zlúčenín sú uvedené v príkladoch 2 a 5.

zlúčenina	test
so substrátom viditeľným v UV-svetle K± (μΜ)	bunkový ICSO (μΜ)
7a	35
7b	1/2
20a (=E)	3,2
20b	0,85	16,4
20C (=N)	0,95
20d	0,1	6,2
21C	0,64
21d	0,24	4,8
21e	0,22	2,9
21f	0,17	2,9
22e	0,19
25	6,2
28	12,0
33a (-A)	5,5	25,0
33b (—C)	10,0	viac ako 30,0
33C (—B)	8,6	20,0
36a (=D)	4,7
36b	0,8	17,0
39	2,5
43	20,0
47a	0,019	2,1
47b	0,027	2,1
54a (=F)	0,15	2,7
54b (=M)	0,15	9,1
54c	1,2	viac ako 19,0
54d	1,0
54e	3,5
54 f	0,9

zlúčenina	test
so substrátom vidíte Iným v UV-svetle K± (μ«)	bunkový IC (μΜ)
54g (=G)	4,8	viac ako 20,0
54h	0,97
54i	0,054	2,4
54j	0,28
54k	0,085
541	0,215	7,0
63 (~Q)	0,85	4,1
69a (=R)	0,011	0,735
69b (=S)	0,050	0,745
84a (=V)	0,100	3,3
84b (=W)	0,019	0,50

Príklad 5

Zlúčeniny z príkladu 4 sa syntetizujú takto:

CO-.Ει hc:

(Et = etyl, Me = metyl, tBu = terc.butyl)

Metylester kyseliny 3-benzoylamino-4-oxo-4,6,7,8-tetrahydropyrolo-[l,2-a]pyrimidín-6-karboxylovej (zlúčenina 3)

Zmes 0,44 g (2,38 mmol) hydrochloridu etylesteru kyseliny (4S)-2-amino-l-pyrolín-5-karboxylovej (zlúčeniny 1, pripravenej analogickým spôsobom ako metylester, ktorého prípravu opísali Lee a Lown, J, Org, Chem., 52, 2717 - 21 (1987)), 0,50 g (2,31 mmol) 4-etoxymetylén-2-fenyl-2-oxazolín-5-onu (zlúčeniny 2) a 0,12 g (2,22 mmol) metoxidu sodného v 10 ml etanolu sa zohrieva do varu pod spätným chladičom počas 2 hodín. Reakčná zmes sa nechá ochladiť na izbovú teplotu a zahustí sa vo vákuu. Zvyšok sa suspenduje vo vode a pridáva sa IN kyselina sírová, až sa dosiahne hodnoty pH 1. Vodná zmes sa extrahuje dichlórmetánom, organická vrstva sa oddelí a zahustí vo vákuu, čím sa získa 0,6 g oranžovej pevnej látky. Flash chromatografíou na silikagéli s použitím gradientovej elúcie s postupným gradientom 60 % etylacetátu v hexáne až 100 % etylacetátu, a potom 10 % metanolu v dichlórmetáne sa získa 0,5 g oranžovej pevnej látky. Zmes tejto oranžovej pevnej látky a 0,03 g (0,5 mmol) kyanidu draselného v 10 ml metanolu sa cez noc zohrieva do varu pod spätným chladičom. Ochladená reakčná zmes sa zahustí vo vákuu, čím sa získa žltá pevná látka. Flash chromatografiou na silikagéli s použitím gradientovej elúcie s postupným gradientom 40 % etylacetátu v hexáne až 100 % etylacetátu sa získa 0,22 g (31,6 %) zlúčeniny uvedenej v titule.

*H-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid) hodnoty δ: 2,25 (m, 1H) , 2,65 (m, 1H), 3,15 (m, 2H), 3,75 (s, 3H),

5,15 (dd, 1H), 7,5 (t, 2H), 7,6 (t, 1H), 7,95 (d, 2H), 8,6 (s, 1H), 9,5 (s, 1H)

Semikarbazón terc.butylesteru kyseliny (3S)-[(3-benzoylamino-4-oxo-4,6,7,8-tetrahydropyrolo[ 1,2-a]pyrimidín-6-karbonyl)amino]-4-oxobutánovej (zlúčeniny 5a a 5b)

Zmes 0,22 g (0,70 mmol) etylesteru kyseliny 3-benzoylamino-4-oxo-4,6,7,8-tetrahydropyrolo[l,2-a]pyrimidín-6-karboxylovej (zlúčeniny 3) a 0,032 g (0,76 mmol) hydrátu hydroxidu lítneho v 5 ml metanolu a 5 ml tetrahydrofuránu sa mieša pri izbovej teplote počas 18 hodín. Reakčná zmes sa zahustí, čím sa získa lítna soľ kyseliny 3-benzoylamino-4-oxo-4,6,7,8-tetrahydropyrolo[l,2-a]pyrimidín-6-karboxylovej (zlúčenina 4) ako biela pevná látka. Táto látka sa použije v nasledujúcej reakcii bez ďalšieho čistenia.

K zmesi 0,16 3 g (0,71 mmol) semikarbazonu terc.butylesteru kyseliny (3S)-amino-4-oxobutánovej (Graybill a kol., Int. J. Protein Res.. 44, str. 173 - 82 (1994)) a lítnej soli kyseliny 3-benzoylamino-4-oxo-4,6,7,8-tetrahydropyrolo[l,2-a]pyrimidín-6-karboxylovej (zlúčeniny 4) v 5 ml dimetylformamidu a 5 ml dichlórmetánu s teplotou 0 °C sa pridá 0,104 g (0,77 mmol) hydroxybenzotriazolu a 0,148 g (0,37 mmol) l-(3-dimetylamino-propyl)-3-etylkarbodiimid-hydrochloridu. Reakčná zmes sa nechá zohriať na izbovú teplom a mieša sa počas 18 hodín. Reakčná zmes sa vyleje do 50 ml vody a extrahuje sa dvakrát vždy 50 ml etylacetátu. Zmiešané organické vrstvy sa premyjú vodným IM roztokom hydrogénsíranu sodného, 50 ml zriedeného vodného hydrogenuhličitanu sodného a nasýteným vodným chloridom sodným. Organická vrstva sa zahustí vo vákuu, čím sa získa 0,43 g žltej pevnej látky. Flash chromatografiou na silikagéli s použitím zmesi hydroxidu amónneho, metanolu a dichlórmetánu s postupným gradientom 1 : 1 : 99 až 1 : 10 : 90 ako elučného činidla sa získa 0,11 g (30,9 %) diastereoméru s vyšším R_f (zlúčenina 5a) 'H-NMR (perdeuterometanol), hodnoty δ: 1,45 (s, 9H), 2,29 - 2,35 (m, 1H), 2,6 - 2,7 (m, 2H), 2,8 (dd, 1H),

3,1 - 3,15 (m, 1H), 3,2 - 3,3 (m, 1H), 4,9 - 4,95 (m, 1H), 5,2 (dd, 1H), 7,25 (d, 1H), 7,5 - 7,55 (m, 2H), 7,55 - 7,6 (m, 1H), 7,95 (d, 2H), 8,9 (s, 1H) a 0,11 g (30,9 %) diastereoméru s nižším R_f (zlúčenina 5b).

’H-NMR (perdeuterometanol), hodnoty δ: 1,45 (s, 9H), 2,3 - 2,4 (m, 1H), 2,6 - 2,7 (m, 2H), 2,7 - 2,8 (m, 2H),

3,1 - 3,15 (m, 1H), 3,2 - 3,3 (m, 1H), 4,85 - 4,95 (m, 1H), 5,15 (dd, 1H), 7,25 (d, 1H), 7,55 (t, 2H), 7,6 (t, 1H), 7,95 (d, 2H), 8,9 (s, 1H)

Diastereomér 5a a diastereomér 5b sa odoberú oddelene.

Kyselina (3S)-[(3-benzoylamino-4-oxo-4,6,7,8-tetrahydropyrolo-[l,2-a]pyrimidín-6-karbonyl)amino]-4-oxobutánová (zlúčenina 7a)

Suspenzia 0,11 g (0,22 mmol) semikarbazonu terc.butyl-esteru kyseliny (3S)-[(3-benzoylamino-4-oxo-4,6,7,8-tetrahydropyrolo[l,2-a]pyrimidín-6-karbonyl)amino]-4-oxobutánovej (zlúčeniny 5a) v 7,5 ml dichlórmetánu a 2,5 ml kyseliny tri-fluóroctovej sa mieša počas 5 hodín. Reakčná zmes sa zahustí vo vákuu, zvyšok sa vyberie dichlórmetánom, zahustí sa vo vákuu, suspenduje v toluéne a zahustí vo vákuu, čím sa získa 0,07 g semikarbazonu kyseliny (3S)-[(3-benzoylamino-4-oxo-4,6,7,8-tetrahydropyrolo[l,2-a]pyrimidín-6-karbonyl)amino]-4-oxobutánovej (zlúčenina 6a) vo forme bielej pevnej látky. Táto pevná látka sa suspenduje v zmesi 37 % vodného formaldehydu, kyseliny octovej a metanolu v pomere 1:1:5a mieša sa pri izbovej teplote počas 18 hodín. Reakčná zmes sa zahustí vo vákuu, zvyšok sa suspenduje v acetonitrile a zahustí vo vákuu, čím sa získa 0,1 g bielej pevnej látky. Vysokoúčinnou kvapalinovou chromatografiou (HPLC) s obrátenými fázami na Ci₈-silikagélu s použitím gradientovej elúcie 1 % až 75 % acetonitrilom vo vode (pufŕované 0,1 % kyseliny trifluóroctovej) sa získa 0,05 g (60 %) zlúčeniny 7a vo forme bielej pevnej látky.

Retenčný čas: 7,9 min. (vysokoúčinná kvapalinová chromatografia (HPLC) s obrátenými fázami na C₁₈-silikagélu s použitím 20-minútovej gradientovej elúcie 1 % až 100 % acetonitrilom vo vode (puftované

0,1 % kyseliny trifluóroctovej) 'H-NMR (perdeuterometanol (jestvuje ako zmes anomérov hemiacyloxyacetálovej formy v pomere 1 : 1)), hodnoty δ: 2,25 - 2,4 (m, 1H), 2,45 - 2,8 (m, 4H), 3,05 - 3,15 (m, 1H), 4,25 - 4,35 (m, 1H), 4,55 - 4,6 (m, 1H), 5,1 - 5,2 (m, 1H), 7,45 - 7,65 (m, 3H), 7,9 - 8,0 (m, 2H), 8,9 (s, 1H)

Kyselina (3S)-[(3-benzoylamino-4-oxo-4,6,7,8-tetrahydropyrolo-[l,2-a]pyrimidín-6-karbonyl)amino]-4-oxobutánová (zlúčenina 7b)

Táto zlúčenina sa pripraví, ako sa opísalo v prípade diastereoméru 7a. Získa sa 0,03 g (35 %) zlúčeniny 7b vo forme bielej pevnej látky.

Retenčný Čas: 8,1 min. (vysokoúčinná kvapalinová chromatografia (HPLC) s obrátenými fázami na Ci₈-silikagélu s použitím 20-minútovej gradientovej elúcie 1 % až 100 % acetonitrilom vo vode (pufrované 0,1% kyseliny trifluóroctovej) 'H-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid (jestvuje ako zmes anomérov hemiacyloxyacetálovej formy v pomere 1 : 1)), hodnoty δ: 2,1 - 2,2 (m, 1H), 2,4 (d, 1H), 2,7 - 2,8 (m, 1H), 3,0 - 3,2 (m, 3H), 5,0 (dd, 1H), 5,1 - 5,2 (m, 1H), 5,5 (s, 1H), 5,7 - 5,8 (m, 1H), 7,55 (t, 2H), 7,67 (t, 1H), 7,95 (d, 2H), 8,55 (s, 1H), 9,0 - 9,15 (m, 1H), 9,4 - 9,5 (m, 1H)

n o

R —

CChH ‘C-iO

H j! H

O ^!

Ph '0

(Ph = fenyl, Bn = benzyl, Boe = terc.butoxykarbonyl) (a) R = H (b) R = fenyl-CH₂- (c) R = fenyl-(CH₂)₂- (d) R = fenyl-(CH₂)₃- (e) R = 4-metoxyfenyl-(CH₂)₃- (f) R = 4-hydroxyfenyl-(CH₂)₃-

Kyseliny imidazol-2-karboxylové (zlúčenina 13) sa pripravia s použitím modifikácií opísaných postupov (Yamanaka a kol., Chem, Pharm. Bull,, 31, str. 4549 - 53 (1983), Suzuki a kol., J. Org, Chem., 38, str. 3571 - 75 (1973), a Oliver a kol., J. Org. Chem.. 38, str. 1437 - 38 (1973)).

Kyselina imidazol-2-karboxylová (zlúčenina 13a) sa pripraví spôsobom, ktorý opísali Curtis a Brown, J. Orq. Chem., 45, str. 4038 - 40 (1980)

Kyselina 4-benzylimidazol-2-karboxylová (zlúčenina 13b) sa izoluje ako špinavobiela pevná látka s teplotou topenia 153 - 155 °C.

Infračervené spektrum (KBr): 3026 - 2624, 1630, 1515, 1498, 1438, 1405 ’H-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid), hodnoty δ: 7,31 (5H, m), 7,14 (1H, s), 3,95 (2H, s)

Kyselina 4-(2-fenyletyl)imidazol-2-karboxylová (zlúčenina 13c) sa izoluje ako bledožltá pevná látka s teplotou topenia 151 - 153 °C.

Infračervené spektrum (KBr): 3054 - 2617, 1637, 1497, 1376 'H-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid), hodnoty δ: 7,27 (5H, m), 7,11 (1H, s), 2,92 (4H, s)

Kyselina 4-(3-fenylpropyl)imidazol-2-karboxylová (zlúčenina 13d) sa izoluje ako bledožltá pevná látka s teplotou topenia 148 - 150 °C.

Infračervené spektrum (KBr): 3020 - 2615, 1636, 1509, 1498, 1383 'H-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid), hodnoty Ô: 7,35 - 7,22 (5H, m), 7,01 (1H, s), 2,62 (4H, m), 1,94 (2H, m)

Kyselina 4-[3-(4-metoxyfenyl)propyl] imidazol-2-karboxylová (zlúčenina 13e) sa izoluje ako biela kryštalická pevná látka s teplotou topenia pri rozklade 155 - 156 °C.

Infračervené spektrum (KBr): 3300 - 2300, 1633, 1513,1376, 1244 ’H-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid), hodnoty δ: 9,50-7,50 (2H, široký s), 7,15 (1H, s), 7,11 (2H, d, J = = 8,5), 6,84 (2H, d, J = 8,5), 3,71 (3H, s), 2,60 - 2,50 (4H, m) 1,86 (2H, m)

Analýza pre C|₄H|₆N₂O₃: vypočítané: 64,60 % C, 6,20% H, 10,76% N;

nájdené: 64,45 % C, 6,21% H, 10,70% N.

Kyselina 4-[3-(4-hydroxyfenyl)propyl]imidazol-2-karboxylová (zlúčenina 13f)

K roztoku 1,15 g (4,0 mmol) etylesteru zlúčeniny 13e v 50 ml suchého dichlórmetánu sa pri teplote 0 °C pridá 16 ml l,0M roztoku bromidu boritého v dichlórmetáne (16,0 mmol). Po 15 minútach pri teplote 0 °C sa zmes zohreje na teplotu 25 °C a mieša sa počas 16 hodín. Reakčná zmes sa ochladí v ľadovom kúpeli a po kvapkách sa pridá 20 ml vody. Výsledná zmes sa krátko mieša pri teplote 25 °C a potom sa prefiltruje. Filtrát sa opatrne neutralizuje pridaním pevného hydrogenuhličitanu sodného, čím sa získa 700 mg (71 %) zlúčeniny 13f vo forme bielej pevnej látky s teplotou topenia pri rozklade 186 - 187 °C (prekryštalizované z metanolu).

Infračervené spektrum (KBr): 3500 - 2400, 2935, 1640, 1516, 1396, 1232 'H-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid), hodnoty δ: 9,83 (3H široký s), 7,16 (1H, s), 6,98 (2H, d, J = 8,2), 6,66 (2H, d, J = 8,2), 2,60 - 2,40 (4H, m) 1,84 (2H, m)

Analýza pre Ci3Hi₄N₂O₃: vypočítané: 63,40% C, 5,73 % H, 11,38% N;

nájdené: 62,96 % C, 5,70% H, 11,27% N.

(2R,S,3S)-N²-Terc.butoxykarbonyl-N-(tetrahydro-2-benzyloxy-5-oxo-3-fiiranyl)-L-alanínamid (zlúčenina 14)

K roztoku 2,91 g (10 mmol) (2R,S, 3S)-3-(N-alyloxykarbonyl)amino-2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuránu (Chapman, Biorq. Med. Chem. Lett.. 2, str.613 - 17 (1992)), 2,08 g (11 mmol) N-(terc.butoxykarbonyl-L-alanínu a 150 mg bis(trifenylfosfín)-paládium (II) chloridu v 75 ml dichlórmetánu sa po kvapkách pridá 4,0 ml (14,9 mmol) tri-n-butylcínhydridu, až kým farba roztoku prejde do tmavooranžovej. Pridá sa 2,70 g (20 mmol) hydroxybenzotriazolu a zmes sa ochladí na teplotu 0 °C. Pridá sa 2,3 0 g (12 mmol) l-(3-dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimid-hydrochloridu a potom sa zmes nechá v priebehu 4 hodín pomaly zohriať na izbovú teplotu. Zmes sa nariedi 250 ml etylacetátu, premyje sa trikrát vždy 150 ml IN kyseliny chlorovodíkovej, trikrát vždy 150 ml nasýteného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a dvakrát vždy 150 ml roztoku chloridu sodného, potom sa vysuší síranom horečnatým, prefiltruje sa a zahustí. Surový produkt sa vyčistí stĺpcovou chromatografiou s použitím 50 % - 70 % etylacetátu v hexáne ako elučného činidla, čím sa získa 3,17 g (84 %) zmesi diastereomérov. Prekryštalizovaním zo zmesi etylacetátu a hexánu sa získajú bezfarebné kryštály s teplotou topenia 132 až 145 °C.

Infračervené spektrum (KBr): 3357, 3345, 1781, 1688,1661, 1535, 1517,1165 ’H-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid), hodnoty δ: 8,49 (d, J = 6,8), 8,23 (d, J = 7,4), 7,40 (5H, m), 7,01 (1H, m), 5,68 (d, J = 5,0), 4,75 (m), 4,31 (m), 3,97 (1H, m), 2,82 (m), 3,11 (m), 2,82 (m), 2,59 (m), 2,45 (m), 1,40 (9H, s), 1,20 (d, J = 7,2), 1,16 (d, J = 7,2)

Analýza pre ^₉Η₂₆Ν₂Ο₆:

vypočítané: 60,31% C, 6,92 % H, 7,40 % N;

nájdené: 60,30 % C, 6,91% H, 7,38% N.

(2R,S,3S)-Terc.butoxykarbonyl-N-(tetrahydro-2-benzyloxy-5-oxo-3-furanyl)-L-prolínamid (zlúčenina 15) sa pripraví spôsobom opísaným v prípade zlúčeniny 14, pričom sa získa 1,64 g (81 %) bezfarebnej sklovitej látky.

Infračervené spektrum (KBr): 3317, 2978, 1797, 1697, 1670, 1546, 1400, 1366, 1164, 1121 *H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,68 (1H, široký m), 7,35 (5H, m), 5,53 (d, J = 5,2), 5,43 (s), 4,93 -

- 4,61 (m), 4,44 (m), 4,25 (široký m), 3,39 (2H, široký m), 3,10 - 2,81 (1H, m), 2,44 (1H, m), 2,32 (široký m), 1,88 (širokým), 1,67 (širokým), 1,42 (9H, s) (2R,S,3S)-N-(N-Terc.butoxykarbonyl-(4(R)-fenoxy-L-prolinyl)-3-amino-2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofurán (zlúčenina 16) sa pripraví spôsobom opísaným v prípade zlúčeniny 14, pričom sa získa 530 mg (84 %) bezfarebnej amorfnej pevnej látky.

’H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,65 (1H, m), 7,4 - 7,2 (7H, m), 6,95 (1H, m), 6,85 (1H, m), 5,55 (1H, d), 4,95 (1H, d), 4,8 - 4,7 (1H, širokým), 4,65 (1H, d), 4,55 - 4,45 (1H, širokým), 4,4 - 4,3 (0,5H, širokým), 3,95 - 3,85 (0,5H, široký m), 3,75 - 3,58 (2H, m), 2,95 - 2,8 (1H, m), 2,7 - 2,55 (1H, m), 2,54 - 2,4 (1H, m), 2,35 - 2,2 (1H, m), 1,4 (9H, s) (2R,S,3S)-N²-[4-(3-Fenylpropyl)imidazol-2-karbonyl]-N-(tetra-hydro-2-benzyloxy-5-oxo-3-furanyl)-L-alanínamid (zlúčenina 17d)

K roztoku 1,00 g (2,64 mmol) (2R,S, 3S)-N²-terc.butoxykarbonyl-N-(tetrahydro-2-benzyloxy-5-oxo-3-furanyl)-L-alanínamidu (zlúčeniny 14) v 7 ml dichlórmetánu sa pri teplote 0 °C pridá 7 ml kyseliny trifluóroctovej. Zmes sa mieša pri teplote 0 °C počas 75 minút. Zmes sa zahustí, ku zvyšku sa pridá diétyléter a éter sa potom odstráni vo vákuu. Tento postup sa dvakrát opakuje, čím sa získa bledožltá sklovitá látka. Táto pevná látka sa rozpustí v 20 ml dimetylformamidu. K tomuto roztoku sa potom pridá 1,38 ml (7,92 mmol) diizopropyletylamínu a následne 0,67 g (290 mmol) kyseliny 4-(3-fenylpropyl)imidazol-2-karboxylovej (zlúčeniny 13d), 0,56 g (2,90 mmol) l-(3-dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimid-hydrochloridu a 0,71 g (5,28 mmol) hydroxybenzotriazolu. Zmes sa mieša pri izbovej teplote počas 20 hodín a potom sa vyleje do roztoku chloridu sodného. Zmes sa extrahuje tri razy vždy 50 ml etylacetátu. Zmiešané organické extrakty sa premyjú dvakrát vždy 100 ml nasýteného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a potom dvakrát vždy 100 ml roztoku chloridu sodného, vysušia sa síranom horečnatým, prefiltrujú a zahustia. Zvyšok sa vyčistí stĺpcovou chromatografiou s použitím etylacetátu ako elučného činidla, čím sa získa 0,99 g (76 %) zlúčeniny 17d ako zmesi diastereomérov.

Infračervené spektrum (KBr): 3293, 3064, 2937, 1793,1650, 1530, 1451, 1446, 1119 ’H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,96 (široký m), 7,62 (široký d), 7,36 - 7,10 (10H, m), 6,88 (s),

6,86 (s), 5,53 (d, J = 5,2), 5,48 (s), 4,87 - 4,52 (4H, m) 3,11 - 2,38 (2H, m), 2,65 (4H, m), 1,99 (2H, m), 1,47 (d, J = 6,9), 1,46 (d, J = 7,0)

Podobným spôsobom sa pripravia nasledujúce zlúčeniny:

(2R,S, 3S)-N²-(Imidazol-2-karbonyl)-N-(tetrahydro-2-benzyloxy-5-oxo-3-furanyl)-L-alanmamid (zlúčenina 17a) sa izoluje, s výťažkom 74 %, ako bledožltá pevná látka.

Infračervené spektrum (KBr): 3289, 3056, 2937, 1793,1664, 1642, 1528, 1453, 1440, 1124 ’H-NMR (perdeuterodimetylsulf oxid), hodnoty δ: 13,13 (1H, široký s), 8,67 (d, J = 7,0), 8,48 (d, J = 7,8), 8,29 (d, J = 6,8), 8,25 (d, J = 7,6), 7,40 - 7,34 (6H, m), 7,11 (1H, s), 5,69 (d, J = 5,0), 5,49 (d, J = 0,8), 4,85 -

- 4,31 (4H, m) 3,19 - 2,42 (2H, m), 1,38 (d, J = 7,4), 1,34 (d, J = 7,4) (2R,S,3S)-N²-(4-Benzimidazol-2-karbonyl)-N-(tetrahydro-2-benzyloxy-5-oxo-3-furanyl)-L-alanínamid (zlúčenina 17b) sa izoluje, s výťažkom 75 %, ako bledožltá sklovitá látka.

Infračervené spektrum (KBr): 3294, 3031, 2937, 1792, 1650, 1530, 1453, 1444, 1119 ’H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,99 (široký m), 7,75 (široký d), 7,36 - 7,11 (10H, m), 6,81 (1H, s), 5,51, 5,45 (d, s, J = 5,3), 4,85 - 4,47 (4H, m), 3,95 (2H, s), 3,04 - 2,72 (1H, m), 2,48 - 2,35 (1H, m), 1,44 (d, 1 = 6,9), 1,43 (d, J = 7,1) (2R,S,3S)-N²-[4-(2-Fenyletyl) imidazol-2-karbonyl]-N-(tetrahydro-2-benzyloxy-5-oxo-3-furányl)-L-alaninamid (zlúčenina 17c) sa izoluje, s výťažkom 79 %, ako bledožltá sklovitá látka.

Infračervené spektrum (KBr): 3292, 3029, 2936, 1793, 1650, 1530, 1453, 1444, 1119 ’H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 8,06 (široký m), 7,70 (široký s), 7,39 - 7,15 (10H, m), 6,82 (s),

6,81 (s), 5,53 (d, J = 5,2), 5,48 (s), 4,87 - 4,53 (4H, m), 2,95 (4H, m), 3,11 - 2,37 (2H, m), 1,48 (d, J = 5,6),

1,45 (d, J = 6,7) (2R,S,3S)-l-[4-(2-Fenyletyl)imidazol-2-karbonyl]-N-(tetrahydro-2-benzyloxy-5-oxo-3-furányl)-L-prolínamid (zlúčenina 18c) sa izoluje, s výťažkom 79 %, ako bledožltá sklovitá látka.

Infračervené spektrum (dichlórmetán): 3422, 2959, 1795, 1685, 1611, 1497, 1116 ’H-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid), hodnoty δ: 12,78 - 12,59 (1H, m), 8,61 - 8,34 (1H, m), 7,39 - 7,22 (10H, m), 6,99 - 6,61 (1H, m), 5,71 - 5,26 (1H, m) 4,85 - 4,02 (4H, m), 3,63 (1H, m), 3,18 - 1,74 (11H, m) (2R,S,3S)-l-[4-(3-Fenylpropyl)imidazol-2-karbonyl]-N-(tetrahydro-2-benzyloxy-5-oxo-3-furányl)-L-prolínamid (zlúčenina 18d) sa izoluje, s výťažkom 87 %, ako bezfarebná sklovitá látka.

Infračervené spektrum (dichlórmetán): 3422, 3214, 2945, 1794, 1685, 1604, 1496, 1117 ¹ H-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid), hodnoty δ: 12,71 (1H, široký m), 8,61 - 8,34 (1H, m), 7,45 - 7,18 (10H, m), 7,05 - 6,64 (1H, m) 5,70 - 5,28 (1H, m), 4,85 - 4,02 (4H, m), 3,62 (1H, m), 3,18 - 1,71 (13H, m) (2R,S,3S)-l-{4-[3-(4-Metoxyfenyl)propyl]imidazol-2-karbonyl}-N-(tetrahydro-2-benzyloxy-5-oxo-3-furanyl)-L-prolínamid (zlúčenina 18e) sa izoluje, s výťažkom 72 %, ako biela sklovitá látka s teplotou topenia 62 - 65 °C.

Infračervené spektrum (KBr): 3213, 2937, 1793, 1680, 1606, 1606, 1512, 1245 'H-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid), hodnoty δ: 12,71, 12,67, 12,58 (1H, 3 x široký s), 8,60 - 8,30 (1H, m), 7,40 - 7,20 (5H, m), 5,66 - 5,20 (1H, m), 4,81 - 4,59 (2H, m), 4,55 - 4,05 (2H, m), 3,71 (3H, s), 3,65 - 3,45 (1H, m), 3,15-1,50 (13H, m)

Hmotnostná spektrometria (FABSMS): m/e 547 (M⁺, 100 %), 439,412, 340, 312, 243, 177, 154 (2R,S,3S)-l-{4-[3-(4-Hydroxyfenyl)propyl]imidazol-2-karbonyl}-N-(tetrahydro-2-benzyloxy-5-oxo-3-furanyl)-L-prolínamid (zlúčenina 18f) sa izoluje, s výťažkom 70 %, ako bledožltá sklovitá látka s teplotou topenia 86 - 90 °C.

Infračervené spektrum (KBr): 3298,1790,1669, 1606,1515,1242 'H-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid), hodnoty δ: 12,66, 12,56 (1H, 2 x široký s), 9,14 (1H, s), 8,57 - 8,30 (1H, m), 7,36 - 7,30 (5H, m), 7,02 - 6,83 (3H, m), 6,70 - 6,57 (2H, m), 5,65 - 5,28 (1H, m), 4,80 - 4,49 (2H, m), 4,50 - 4,05 (2H, m), 3,65 - 3,45 (1H, m), 3,15 -1,55 (13H, m)

Hmotnostná spektrometria (FAB - ionizácia rýchlymi neutrálnymi časticami): m/e 533 (M⁺, 100 %), 425, 298,229, 176, 154 l-{5-[3-(4-Metoxyfenyl)propyl]-lH-imidazol-2-karbonyl}-4(R)-fenoxypyrolidín-2(S)-karbonyl(tetrahydro-2(R,S)-benzyloxy-5-oxofuran-3(S)-yl)amid (zlúčenina 19e) sa izoluje, s výťažkom 77 %, ako číra bezfarebná amorfná pevná látka.

‘H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 9,95 - 9,75 (1H, m), 7,95 (1H, široký s), 7,40 - 7,2 (7H, m), 7,2 - 6,78 (7H, m), 5,65 - 5,6 (1H, m) 5,55 - 5,45 (1H, m), 5,3 - 5,2 (1H, m), 5,15 - 5,0 (1H, m), 4,95 - 4,75 (1H, m), 4,7 - 4,6 (1H, m), 4,5 - 4,4 (1H, m), 4,35 - 4,25 (1H, m), 3,8 (3H, s), 3,05 - 1,75 (10H, m)

Kyselina (3S)-3-{N-[4-(3-fenylpropyl)imidazol-2-karbonyl]-L-alaninyl}amino-4-oxobutánová (zlúčenina 20d)

Zmes 0,93 g (1,90 mmol) (2R,S, 3S)-N²-[4-(3-fenylpropyl)imidazol-2-karbonyl]-N-(tetrahydro-2-benzyloxy-5-oxo-3-fu-ranyl)-L-alanínamidu a 10 % paládia na aktívnom uhlí (0,93 g) v 100 ml metanolu sa mieša v atmosfére vodíka počas 5 hodín. Výsledná zmes sa prefiltruje a zahustí, čím sa získa bezfarebná sklovitá látka. Prekryštalizovaním zo zmesi metanolu a dietyléteru sa získa 401 mg (53 %) zlúčeniny 20d vo forme bezfarebnej pevnej látky s teplotou topenia 94 - 96 °C.

[oc]_D ²⁷ +16,4 ⁰ (c = 0,5, metanol)

Infračervené spektrum (KBr): 3300, 3287, 1786, 1732, 1659, 1651, 1532, 1451 'H-NMR (perdeuterometanol), hodnoty δ: 7,19 (5H, m), 6,91 (1H, s), 4,60 - 4,46 (2H, m), 4,27 (1H, m), 2,63 (4H, m), 2,75 - 2,40 (2H, m), 1,96 (2H, m), 1,44 (3H, d, J = 7,0)

Podobným spôsobom sa pripravia nasledujúce zlúčeniny:

Kyselina (3S)-3-[N-(imidazol-2-karbonyl)-L-alaninyl]amino-4-oxobutánová (zlúčenina 20a, E) sa izoluje, s výťažkom 83 %, ako bezfarebná pevná látka s teplotou topenia 115 °C.

[a]_D ²⁵ +4,4 ° (c = 0,5, metanol)

Infračervené spektrum (KBr): 3303, 1782, 1658, 1650, 1563, 1521, 1454 ’H-NMR (perdeuterometanol), hodnoty δ: 7,18 (2H, s), 4,55 (2H, m), 4,27 (1H, m), 2,56 (2H, m), 1,45 (d, J = = 7,1),1,44 (d, J = 7,0)

Kyselina (3S)-3-[N-(4-benzylimidazol-2-karbonyl)-L-alaninyl]amino-4-oxobutánová (zlúčenina 20b) sa izoluje, s výťažkom 56 %, ako bezfarebná pevná látka s teplotou topenia 113 až 115 °C.

[cc]_D ²⁹ +18,2 ⁰ (c = 0,5, metanol)

Infračervené spektrum (KBr): 3301, 3288, 1783, 1727, 1650, 1531, 1452 'H-NMR (perdeuterometanol), hodnoty δ: 7,25 (5H, m), 6,90 (1H, s), 4,59 - 4,45 (2H, m), 4,26 (1H, m), 3,95 (2H, s), 2,74 - 2,39 (2H, m), 1,42 (3H, d, J = 7,0)

Analýza pre C₁₈H₂oN₄0₅:

vypočítané: 56,69 % C, 5,55 % H, 14,69% N;

nájdené: 57,06 % C, 5,54 % H, 14,41% N.

Kyselina (3S)-3-{N-[4-(2-fenyletyl)imidazol-2-karbonyl]-L-alaninyllamino-4-oxobutánová (zlúčenina 20c, N) sa izoluje, s výťažkom 53 %, ako bezfarebná pevná látka s teplotou topenia 102 až 104 °C.

[oc]_D ²⁷ +13,7 ⁰ (c = 0,5, metanol)

Infračervené spektrum (KBr): 3299, 3289, 1785, 1732, 1650, 1531, 1452 'H-NMR (perdeuterometanol), hodnoty δ: 7,20 (5H, mj, 6,82 (1H, s), 4,60 - 4,46 (2H, m), 4,29 (1H, m), 2,92 (4H, s), 2,76 - 2,41 (2H, m), 1,44 (3H, 2 x d, J = 7,1)

Analýza pre C19H22N4O5.H2O: vypočítané: 56,43 % C, 5,98 % H, 13,85 % N;

nájdené: 56,65 % C, 5,84% H, 13,91% N.

Kyselina (3S)-3-{N-[4-(2-fenyletyl)imidazol-2-karbonyl]-L-prolinyl}amino-4-oxobutánoyá (zlúčenina 21c) sa izoluje, s výťažkom 85 %, ako bezfarebná sklovitá látka s teplotou topenia 101 až 103 °C (prekryštalizované zo zmesi metanolu a dietyléteru).

[oc]_D ²⁷ -63,8 ⁰ (c = 0,25, metanol)

Infračervené spektrum (KBr): 3275, 1784, 1728, 1664, 1606, 1498, 1429 ‘H-NMR (perdeuterometanol), hodnoty δ: 7,24 (5H, m), 6,83 (s), 6,79 (s), 4,58 - 4,14 (3H, m), 3,69 (1H, m),

2,93 (4H, široký s), 2,75 - 1,99 (6H, m)

Analýza pre C21H24N4O5H2O: vypočítané: 58,60 % C, 6,09 % H, 13,02 % N;

nájdené: 58,34 % C, 5,96% H, 12,67% N.

Kyselina (3S)-3-{N-[4-(3-fenylpropyl)imidazol-2-karbonyl]-L-prolinyl}amino-4-oxobutánová (zlúčenina 21 d) sa izoluje, s výťažkom 81 %, ako bezfarebná sklovitá látka s teplotou topenia 91 - 94 °C (prekryštalizovaná zo zmesi metanolu a dietyléteru).

[oc]_d ^2S -68 ⁰ (c = 0,25, metanol)

Infračervené spektrum (KBr): 3277, 2939, 1784, 1727,1662, 1606, 1498, 1429 'H-NMR (perdeuterometanol), hodnoty δ: 7,29 - 7,16 (5H, m), 6,92 (s), 6,86 (s), 4,58 - 4,16 (3H, m), 3,71 (1H, m), 2,75 - 1,92 (13H, m) Analýza pre C22H26N4O5.H2O: vypočítané: 59,45 % C, 6,35 % H, 12,60% N;

nájdené: 59,75 % C, 6,21% H, 12,41% N.

Kyselina (3S)-3-{N-[4-[3-(4-metoxyfenyl)propyl]imidazol-2-karbonyl]-L-prolinyl}amino-4-oxobutánová (zlúčenina 21 e) sa izoluje, s výťažkom 65 %, ako biela sklovitá pevná látka s teplotou topenia 101 - 105 °C. [oc]_D ²³ -60,6 ⁰ (c = 0,5, metanol)

Infračervené spektrum (KBr): 3231, 1784,1726, 1611, 1512, 1245 *H-NMR (perdeuterometanol), hodnoty δ: 7,09 (2H, d, J =8,6), 6,92, 6,85 (1H, 2 x s), 6,81 (2H, d, J = 8,6),

5,45 - 5,30 (1H, m) 4,64 - 4,46 (1H, m), 4,28 - 4,10 (2H, m) 3,75 (3H, s), 3,74 - 3,66 (1H, m), 2,67 - 1,84 (13H, m)

Analýza pre C₂₃H₂₈N₄C)₆.H₂O: vypočítané: 58,22 % C, 6,37 % H, 11,81% N;

nájdené: 58,39 % C, 6,34% H, 11,45% N.

Hmotnostná spektrometria (FABMS): m/e 457 (M⁺), 405, 312, 243, 215, 176, 154 (100 %)

Kyselina (3S)-3-{N-[4-[3-(4-hydroxyfenyl)propyl]imidazol-2-karbonyl]-L-prolinyl}amino-4-oxobutánová (zlúčenina 21 f) sa izoluje, s výťažkom 43 %, ako biela sklovitá pevná látka s teplotou topenia 114 -

- 118 °C.

[a]_D ²⁵ -55,7 ⁰ (c = 0,05, metanol)

Infračervené spektrum (KBr); 3288, 2935, 1780, 1715, 1662, 1610, 1515, 1441 ’H-NMR (perdeuterometanol), hodnoty δ: 6,99 (2H, d, J =8,5), 6,91, 6,85 (1H, 2 X s), 6,68 (2H, d, J = 8,5),

5,45 - 5,30 (1H, m), 4,60 - 4,47 (1H, m), 4,30 - 4,10 (2H, m), 3,80 - 3,55 (1H, m), 2,70 - 1,80 (13H, m) Analýza pre C₂₂H26N₄O₆.H₂O:

vypočítané: 57,38 % C, 6,13% H, 12,17% N; nájdené: 57,68 % C, 6,25 % H, 11,66% N.

Hmotnostná spektrometria (FABMS): m/e 443 (M⁺), 298, 229, 154 (100 %)

Kyselina (3S)-[(l-{5-[3-(4-metoxyfenyl)propyl]-lH-imidazol-2-karbonyl}-4(R)-fenoxypyrolidín-2(S)-karbonyl)amino]-4-oxobutánová (zlúčenina 22e) sa izoluje, s výťažkom 43 %, ako béžová pevná látka. 'H-NMR (perdeuterometanol), hodnoty δ: 7,35 - 7,2 (3H, m), 7,15 - 7,0 (2H, m), 6,98 - 6,85 (3H, m), 6,83 -

- 6,77 (2H, d), 5,4 - 5,1 (1H, m), 4,65 - 4,5 (1H, m), 4,35 - 4,2 (2H, m), 4,15 - 3,90 (1H, m), 3,78 (3H, s),

3,62 - 3,48 (1H, m), 2,78 - 2,25 (8H, m), 2,02 - 1,9 (2H, m)

(Me = metyl, t-Bu = terc.butyl)

Terc.butylester kyseliny {fenyletyl-[5-(3-fenylpropyl)-lH-imidazol-2-karbonyl]amino}octovej (zlúčenina 23) K roztoku 150 mg (0,65 mmol) kyseliny 4-(3-fenylpropyl)-imidazol-2-karboxylovej (zlúčeniny 13d) a 5 140 mg (0,59 mmol) terc.butylesteru N-(2-fenyletyl)glycínu v 5 ml bezvodného di-metylformamidu s teplotou 0 °C sa pridá 154 μΐ (0,89 mmol) di-izopropyletylamínu a 136 mg (0,71 mmol) l-(3-dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimid-hydrochloridu. Reakčná zmes sa mieša počas 36 hodín a potom sa vyleje do nasýteného vodného roztoku chloridu sodného a extrahuje sa trikrát vždy 50 ml etylacetátu. Zmiešané organické extrakty sa premyjú dvakrát nasýteným vodným roztokom hydrogenuhličitanu sodného a raz nasýteným 10 vodným roztokom chloridu sodného, vysušia sa síranom sodným, prefiltrujú a zahustia vo vákuu, čím sa získa hnedá olejovitá látka. Flash chromatografiou na silikagéli s použitím 30 % etylacetátu v hexáne ako eluč78 ného činidla sa získa 160 mg (61 %) zlúčeniny 23 ako bielej pevnej látky.

'H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,38 - 7,14 (10H, m), 6,85 - 6,8 (1H, m), 4,84 - 4,76 (1H, d), 4,5 -

- 4,42 (1H, m), 4,07 - 4,0 (1H, d), 3,78 - 3,72 (1H, m), 3,12 - 2,94 (2H, 2 X m), 2,75 - 2,55 (4H, m), 2,1 -

- 1,95 (2H, m), 1,5 - 1,45 (9H, 3 x s)

Semikarbazón terc.butylesteru kyseliny (3S)-(2- {fenyletyl-[5-(3-fenylpropyl)-lH-imidazol-2-karbonyl]amino}acetylamino)-4-oxobutánovej (zlúčenina 24)

Na 160 mg (0,357 mmol) esteru 23 sa pôsobí 7 ml 25 % kyseliny trifluóroctovej v dichlórmetáne počas 4 hodín. Reakčná zmes sa zahustí vo vákuu, čím sa získa 180 mg kyseliny. 180 mg (0,357 mmol) tejto kyseliny sa podrobí reakcii so 161 mg (0,357 mmol) semikarbazónu terc.butylesteru kyseliny (3S)-3-amino-4-oxobutánovej, ako sa opísalo v prípade prípravy zlúčeniny 5a a 5b, čím sa získa 86 mg (33 %) zlúčeniny 24 (jedného diastereoméru) vo forme bielej pevnej látky.

‘H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 10,9 - 10,3 (1H, 2d), 10,08 - 9,78 (1H, 2d), 9,25 - 9,15 (1H, m),

8,35 - 8,10 (1H, 2m), 7,9 - 7,85 (1H, 2s), 7,40 - 7,05 (10H, m), 6,9 - 6,75 (1H, m), 6,3 - 5,8 (1H, široký s),

5,2 - 4,65 (2H, m), 4,35 - 3,5 (3H, m), 3,25 - 3,0 (2H, m), 2,9 - 2,45 (6H, m), 2,05 - 1,8 (2H, m), 1,4 (9H, s)

Soľ kyseliny (3S)-(2-{fenyletyl-[5-(3-fenylpropyl)-lH-imidazol-2-karbonyl]amino}acetylamino)-4-oxobutánovej s kyselinou trifluóroctovou (zlúčenina 25) sa pripraví spôsobom opísaným v prípade zlúčeniny 7a, čím sa získa 3 2 mg (82 %) tejto zlúčeniny vo forme bielej pevnej látky.

'H-NMR (perdeuterometanol), hodnoty δ: 7,05 - 7,35 (m, 11H), 4,65 (m, 1H), 4,4 (m, 1H), 4,3 (s, 2H), 3,6 -

- 4,0 (m, 2H), 2,5 - 2,95 (m, 8H), 2,05 (m, 2H)

Metylester kyseliny 7-[5-(3-fenylpropyl)-lH-imidazol-2-karbonyl]-1,4-ditia-7-azaspiro[4,4]nonán-8(S)-karboxylovej (zlúčenina 26)

Kyselina 4-(3-fenylpropyl)imidazol-2-karboxylová (zlúčenina 13d) sa podrobí reakcii s hydrobromidom metylesteru kyseliny l,4-ditia-7-azaspiro[4,4]nonán-8(S)-karboxylovej (Smith a kol., J. Med. Chem,, 31, str. 875 - 85 (1988)) spôsobom opísaným v prípade zlúčeniny 23, čím sa získa 140 mg (65 %) tejto zlúčeniny vo forme žltej živice.

’H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,34 - 7,15 (5H, m), 6,98 - 6,8 (1H, 3s), 5,7 - 5,65 (0,5H, m), 5,2 -

- 5,1 (1H, m), 4,82 - 4,75 (0,5H, m), 4,4 - 4,35 (1H, m), 4,05 (1H, d), 3,75 - 3,7 (3H, 2s), 3,4 - 3,3 (4H, m),

2,95 - 2,45 (8H, m), 2,05 - 1,95 (2H, m)

Semikarbazón terc.butylesteru kyseliny (3S)-((7-[5-(3-fenylpropyl)-lH-imidazol-2-karbonyl]-l,4-ditia-7-azospiro[4,4]nonán-8(S)-karbonyl} amino)-4-oxobutánovej (zlúčenina 27)

Spôsobom opísaným pre zlúčeninu 4 sa ester 26 prevedie na jeho kyselinu, ktorá sa následne podrobí reakcii so semikarbazónom terc.butylesteru kyseliny (3S)-3-amino-4-oxobutánovej, ako sa opísalo v prípade zlúčeniny 24, čím sa získa 70 mg (33 %) zlúčeniny 27 ako hnedej pevnej látky.

’H-NMR (perdeuterometanol), hodnoty δ: 7,28 - 7,10 (5H, m), 6,90 (1H,široký s), 4,94 (1H, m), 3,96 - 3,86 (2H, q), 3,35 - 3,25 (4H, d), 3,0 (2H, s), 2,73 - 2,59 (6H, m) 2,0 - 1,92 (2H, m), 1,44 (9H, s)

Kyselina (3S)-({7-{5-(3-fenylpropyl)-lH-imidazol-2-karbonyl]-l,4-ditia-7-azospiro[4,4]nonán-8(S)-karbonyl)amino)-4-oxobutánová, (zlúčenina 28) sa pripraví spôsobom opísaným v prípade zlúčeniny 7a, čím sa získa 17 mg (26 %) zlúčeniny 28 vo forme bledohnedej pevnej látky.

‘H-NMR (perdeuterometanol), hodnoty δ: 7,4 (s, 1H), 7,1 - 7,25 (m, 5H), 4,9 (m, 1H), 4,6 (m, 1H), 4,3 (m, 1H), 3,95 (s, 2H), 3,25 - 3,4 (m, 4H) 3,0 (d, 2H), 2,6 - 2,8 (m, 5H), 2,45 (m, 1H), 2,05 (m, 2H)

x

COjM·

(Me = metyl, Bn = benzyl) (a) R = fenyl-(CH₂)₂- (b) R = 4-CF₃-fenyl-(CH₂)₂- (c) R = fenyl-CH₂-

Estery 4,5-dihydroimidazol-4-karboxylových kyselín (zlúčeniny 29) sa pripravia modifikáciou postupu, ktorý opísali Jones a kol., Tetrahedron Lett., 29, str. 3853 - 56 (1988).

(4R,S)-Metyl-2-(2-fenyletyl)-4,5-dihydroimidazol-4-karboxylát (zlúčenina 29a)

Roztokom 3,28 ml (25 mmol) hydrocinnamonitrolu v 125 ml metanolu s teplotou 0 °C sa počas 45 minút prebubláva suchý chlorovodík. Rozpúšťadlá sa odstránia, čím sa získa imidát, ktorý sa rozpustí v 125 ml metanolu spolu s 25 mmol metyl-2,3-diaminopropionátu (Jones a kol., pozri skôr). Zmes sa nechá stáť pri izbovej teplote počas 2,5-hodiny a potom sa zahustí pri vzniku žltého oleja. Surový produkt sa vyčistí stĺpcovou chromatografiou s použitím 10 - 20 % metanolu v dichlórmetáne ako elučného činidla, čím sa získa

3,52 g (61 %) bezfarebnej sklovitej látky.

’H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,30 - 7,15 (5H, m), 4,63 (1H, t, J = 9,7), 3,96 (2H, d, J = 9,7),

3,72 (3H, s), 3,10 (4H, m) ¹³C-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 171,3, 168,8, 138,3, 128,4, 128,2, 126,6, 57,3, 53,0, 47,7, 31,7,

27,9 (4R,S)-Metyl-2-[2-(4-trifluórmetylfenyl)etyl]-4,5-dihydroimidazol-4-karboxylát (zlúčenina 29b) sa pripraví spôsobom opísaným v prípade zlúčeniny 29a, čím sa získa 6,80 g (78 %) bezfarebnej pevnej látky s teplotou topenia 136 až 141 °C.

'H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,45 (4H, s), 4,71 (1H, dd, J = 8,6, 10,8), 4,02 (2H, m), 3,73 (3H, s), 3,19 (4H, m)

Estery imidazol-4-karboxylových kyselín (zlúčeniny 30) sa pripravia modifikáciou postupu, ktorý opísali Martin a kol., J. Org, Chem.. 33, str. 3758 - 61 (1968).

Metyl-2-(2-fenyletyl)imidazol-4-karboxylát (zlúčenina 30a)

Zmes 3,40 g (14,64 mmol) (4R,S)-metyl-2-(2-fenyletyl)-4,5-dihydroimidazol-4-karboxylátu (zlúčeniny 29a), 75 ml chloroformu a 13,0 g (150 mmol) oxidu manganičitého sa zahrieva do varu pod spätným chladičom počas 21 hodín a potom sa za horúca prefiltruje. Pevné látky sa premyjú chloroformom a metanolom. Zmiešané filtráty sa zahustia, čím sa získa žltohnedá pevná látka, ktorá sa vyčistí stĺpcovou chromatografiou s použitím 2 - 5 % metanolu v dichlórmetáne ako elučného činidla, čím sa získa 1,46 g (43 %) bledožltej pevnej látky s teplotou topenia 151 -155 °C.

Infračervené spektrum (KBr): 3028, 2946, 1720, 1533, 1433, 1348, 1195, 1166 'H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,62 (1H, s), 7,26 - 7,02 (5H, m), 3,82 (3H, s), 3,03 (4H, široký s) ¹³C-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ; 162,9, 150,2, 140,3, 128,5, 128,2, 126,3, 51,5, 34,5, 30,4 Analýza pre C]₃H₁₄N₂O₂: vypočítané: 67,81% C, 6,13% H, 12,16% N;

nájdené: 67,70 % C, 6,15% H, 12,16% N.

Metyl-2-[2-(4-trifluórmetylfenyl)etyl]imidazol-4-karboxylát (zlúčenina 30b) sa pripraví spôsobom opísaným v prípade zlúčeniny 30a. Prekryštalizuje sa z etylacetátu, čím sa získa 1,88 g (33 %) krémovo sfarbených kryštálov s teplotou topenia 225 - 226 °C.

Infračervené spektrum (KBr): 3239, 2951, 1715, 1532, 1331, 1158, 1105, 1068 'H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,61 (1H, s), 7,54 (2H, d, J = 8,1), 7,26 (2H, d, J = 8,1), 3,89 (3H, s), 3,10 (4H, m)

Analýza pre Ci₄Hi₃F₃N₂O₂: vypočítané: 56,38 % C, 4,39 % H, 9,39% N, 19,11% F;

nájdené: 56,23 % C, 4,44% H, 9,33% N, 19,08% F.

Kyselina 2-(2-fenyletyl)imidazol-4-karboxylová (zlúčenina 31a)

Zmes 1,38 g (6 mmol) metyl-2-(2-fenyletyl)imidazol-4-karboxylátu (zlúčeniny 30a), 30 ml metanolu a 30 ml IM vodného hydroxidu sodného sa zohrieva do varu pod spätným chladičom počas 16 hodín. Metanol sa odstráni pri zníženom tlaku a výsledný vodný roztok sa neutralizuje 4M kyselinou chlorovodíkovou, čím sa vyzráža bledožltá pevná látka. Zrazenina sa izoluje, premyje sa vodou a vysuší, čím sa získa 1,18 g (91 % bledožltej pevnej látky s teplotou topenia 117 - 120 °C.

Infračervené spektrum (KBr): 3375, 3131, 2616, 2472, 1638, 1592, 1551, 1421, 1388, 1360 'H-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid), hodnoty δ: 7,59 (1H, s), 7,26 (5H, m), 2,99 (4H, m) Analýza pre C[₂H₁₂N₂O₂.0,25H₂O: vypočítané: 65,29 % C, 5,71% H, 12,69% N;

nájdené: 65,00 % C, 5,64% H, 12,58% N.

Kyselina 2-[2-(4-trifluórmetylfenyl)etyl]imidazol-4-karboxylová (zlúčenina 31b) sa pripraví spôsobom opísaným v prípade zlúčeniny 31a, čím sa získa 1,09 g (76 %) bledožltej pevnej látky s teplotou topenia 126 - 130 °C.

Infračervené spektrum (KBr): 3339, 2640 - 2467, 1638, 1589, 1545, 1383, 1323 'H-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid), hodnoty δ: 7,69 (2H, d, J = 8,0), 7,59 (1H, s), 7,47 (2H, d, J = 8,0), 3,06 (4H, m) (2R,S,3S)-N²-[2-(2-Fenyletyl)imidazol-4-karbonyl]-N-(tetrahydro-2-benzyloxy-5-oxo-3-furanyl)-L-alanínamid (zlúčenina 32a)

K roztoku 1,59 g (4,20 mmol) (2R,S, 3S)-N²-terc.butoxy-karbonyl-N-(tetrahydro-2-benzyloxy-5-oxo-3-furánylj-L-alanínamidu (zlúčeniny 14) (Chapman, Biorg. Med. Chem. Lett. 2, str. 613 - 18 (1992)) v 15 ml dichlórmetánu, chladenému na teplotu 0 °C, sa pridá 15 ml kyseliny trifluóroctovej. Zmes sa mieša pri teplote 0 °C počas 1 hodiny a potom sa zahustí. Ku zvyšku sa pridá éter, ktorý sa odstráni vo vákuu. Tento postup sa opakuje dvakrát, čím sa získa bledožltá sklovitá látka. Táto pevná látka sa rozpustí v 20 ml dimetylformamidu a potom sa k tomuto roztoku pridá 2,19 ml (12,6 mmol) diizopropyletylamínu, 1,0 g (4,62 mmol) kyseliny 2-(2-fenyletyl)imidazol-4-karboxylovej (zlúčeniny 31a), 0,89 g (4,62 mmol) l-(3-dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimid-hydrochloridu a 1,14 g (8,40 mmol) hydroxybenzotriazolu. Reakčná zmes sa mieša pri izbovej teplote počas 20 hodín a potom sa vyleje do roztoku chloridu sodného. Zmes sa extrahuje trikrát vždy 50 ml etylacetátu. Zmiešané organické extrakty sa premyjú trikrát vždy 100 ml nasýteného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a potom trikrát vždy 100 ml roztoku chloridu sodného, vysušia sa síranom horečnatým a zahustia. Zvyšok sa vyčistí stĺpcovou chromatografiou s použitím 2 - 10 % izopropanolu v dichlórmetáne a potom 0 - 6 % izopropanolu v etylacetáte ako elučného činidla, čím sa získa 1,10 g (55 %) zlúčeniny 32a ako zmesi diastereomérov.

Infračervené spektrum (KBr): 3278, 3065, 1790, 1641,1577, 1545, 1499, 1454, 1120 'H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 10,26 (1H, s), 8,14 (1H, s), 7,66 (d, J = 7,0), 7,56 (d, J = 7,0) 7,43 (1H, s), 7,31 - 7,11 (10H, m), 5,49 (d, J = 5,6), 5,48 (s), 4,83 - 4,41 (4H, m), 3,04 - 2,41 (2H, m), 2,99 (4H, s), 1,45 (d, J = 7,0), 1,44 (d, J = 7,0) (2R,S, 3S)-N²-{2-[2-(4-Trifluórmetylfenyl)etyl]imidazol-4-karbonyl}-N-(tetrahydro-2-benzyloxy-5-oxo-3-furányl)-L-alanínamid (zlúčenina 32b) sa pripraví spôsobom opísaným v prípade zlúčeniny 32a, čím sa získa 1,08 g (62 %) bledožltej sklovitej látky.

Infračervené spektrum (KBr): 3376, 3284, 3070, 2938,1791, 1642, 1578, 1546, 1327, 1165, 1122, 1068 'H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,95(0,5H,m),7,55-7,25 (11,5H, m), 5,53 (s), 5,49 (d, J = 5,3), 4,88 - 4,48 (4H, m), 3,11 - 2,96 (4H, m) 2,91 (lH,m), 2,51 (1H, m), 1,47 (3H, d, J = 7,1) (2R,S,3S)-N²-(N-Benzylimidazol-4-karbonyl)-N-(tetrahydro-2-benzyloxy-5-oxo-3-furanyl)-L-alanínamid (zlúčenina 32c) sa pripraví spôsobom opísaným v prípade zlúčeniny 32a z kyseliny 2-benzylimidazol-4-karboxylovej (nemecký zverejňovací spis DE 3427136), čím sa získa 1,13 g (83 %) bledožltej sklovitej látky.

Infračervené spektrum (dichlórmetán): 3433, 3062, 2990, 1803, 1693, 1584,1504, 1429, 1285, 1258 'H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 9,50 (s), 9,37 (s), 7,86 (0,5H, d, J = 6,1), 7,56 - 7,21 (10,5H, m), 7,48 (1H, s), 5,51 (d, J = 5,2), 5,48 (s), 4,87 - 4,41 (4H, m), 4,08 (s), 4,07 (S), 3,03 - 2,39 (2H, m), 1,46 (3H, d, J = 7,0)

Kyselina (3S)-3-{N-[2-(2-fenyletyl)imidazol-4-karbonyl]-L-alaninyl}amino-4-oxobutánová (zlúčenina 33a, A)

Zmes 1,0 g (2,10 mmol) (2R,S, 3S)-N²-[2-(2-fenyletyl)-imidazol-4-karbonyl]-N-(tetrahydro-2-benzyloxy-5-oxo-3-furanyl)-L-alanínamidu (zlúčeniny 32a) a 10 % paládia na aktívnom uhlí (1,0 g) v 50 ml metanolu sa mieša v atmosfére vodíka počas 4,5-hodiny. Výsledná zmes sa prefiltruje a zahustí, čím sa získa bezfarebná sklovitá látka. Prekryštalizovaním zo zmesi metanolu a dietyléteru sa získa 510 mg (63 %) bezfarebnej pevnej látky s teplotou topenia 127 °C.

[a]_D ²⁷ +16,4 ° (c = 0,5, metanol)

Infračervené spektrum (KBr): 3360, 3279, 2981, 1781, 1732, 1646, 1577, 1547 ’H-NMR (perdeuterometanol), hodnoty δ: 7,54 (1H, S), 7,29 - 7,12 (5H, m), 4,60 - 4,47 (2H, m), 4,28 (1H, m) 3,01 (4H, s), 2,76 - 2,39, (2H, m), 1,43 (3H, 2 x d, J = 7,0, J = 7,0) ¹³C-NMR (perdeuterometanol), hodnoty δ: 176,2, 176,0, 174,7, 174,6, 164,4, 164,3, 150,5, 141,9, 134,8, 129,5, 129,3, 127,3, 122,3, 98,8, 98,4, 52,3, 52,0, 50,3, 35,6, 31,2, 18,8, 18,7

Analýza pre Cigl^N^jOs.FEO: vypočítané: 56,43 % C, 5,98 % H, 13,85 % N;

nájdené: 56,78 % C, 5,70 % H, 13,77% N.

Kyselina (3S)-3-{N-[2-(2-[4-trifluórmetylfenyl]etyl)-imidazol-4-karbonyl]-L-alaninyl}amino-4-oxobutánová (zlúčenina 33b, C) sa pripraví spôsobom opísaným v prípade zlúčeniny 33a, čím sa získa 612 mg (73 %) bezfarebnej pevnej látky s teplotou topenia 120 - 124 °C.

[ct]_D ²³ +14,3 ⁰ (c = 0,5, metanol)

Infračervené spektrum (KBr): 3287, 2985, 2937, 1782, 1732, 1646, 1579, 1547, 1327 ¹ H-NMR (perdeuterometanol), hodnoty δ: 7,56 (2H, d, J =8,0), 7,54 (1H, s), 7,36 (2H, d, J = 8,0), 4,60 - 4,48 (2H, m), 4,28 (1H, m), 3,08 (4H, m), 2,75 - 2,41 (2H, m), 1,43 (3H, d, J = 7,0)

Analýza pre C₂₀H₂iF₃N₄O₅.0,5H₂O:

vypočítané: 51,84% C, 4,78% H, 12,09% N, 12,30% F;

nájdené: 51,83% C, 4,72% H, 12,14% N, 12,36% F.

Kyselina (3S)-3-[N-(2-benzylimidazol-4-karbonyl)-L-alaninyl]amino-4-oxobutánová (zlúčenina 33c, B) sa pripraví spôsobom opísaným v prípade zlúčeniny 33a, čím sa získa 426 mg (64 %) bezfarebnej pevnej látky.

[a]_D ²³ +13,4 ° (c = 0,407, metanol)

Infračervené spektrum (KBr): 3260, 3150, 2980, 1779, 1727, 1649, 1573, 1547 ’H-NMR (perdeuterometanol), hodnoty δ: 7,58 (1H, s), 7,34 - 7,22 (5H, m), 4,59 - 4,47 (2H, m), 4,28 (1H, m), 4,07 (2H, s), 2,74 - 2,41 (2H, m), 1,42 (3H, d, J = 6,7) ¹³C-NMR (perdeuterometanol), hodnoty δ: 175,6, 175,5, 175,0, 164,6, 164,5, 150,1, 138,7, 135,3, 130,3,

129,9, 128,2, 122,9, 98,9, 98,5, 52,5, 52,2, 35,5, 35,1, 35,0, 19,0, 18,9

Analýza pre Ci₈H₂oN₄05.H₂0:

vypočítané: 55,37 % C, 5,68 % H, 14,35 % N;

nájdené: 55,83 % C, 5,75% H, 13,96% N.

Hmotnostná spektrometria (FAB, m/z): 373 (M⁺), 228, 185, 91

H

M

(Bn = benzyl) (a) R = H (b) R = -CH₂-fenyl

Kyselina 5-benzylpyrol-2-karboxylová (zlúčenina 34b)

Zmes 0,7 g (3,05 mmol) etyl-5-benzylpyrol-2-karboxylátu (Elder a kol., Svnthetic Communications, 19, 763 - 767 (1989)), 20 ml etanolu a 9,2 ml (9,2 mmol) IM hydroxidu sodného sa mieša a zohrieva do varu pod spätným chladičom počas 3 hodín. Hlavná časť etanolu sa odstráni a zvyšná kvapalina sa nariedi vodou, premyje sa éterom, ochladí sa v ľade a okyslí sa koncentrovanou kyselinou chlorovodíkovou. Zmes sa extrahuje éterom. Zmiešané extrakty sa premyjú roztokom chloridu sodného, vysušia sa síranom sodným a zahustia, čím sa získa 0,567 g (92 %) špinavobielej pevnej látky s teplotou topenia 130 - 134 °C.

'H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 8,87 (2H, široký s), 7,37 - 6,95 (5H, m) 6,97 (1H, m), 6,07 (1H, m) 4,00 (2H, s) (2R,S,3S)-N²-(Pyrol-2-karbonyl)-N-(tetrahydro-2-benzyloxy-5-oxo-3-furanyl)-L-alanínamid (zlúčenina 35a)

Na roztok 756 mg (2,0 mmol) (2R,S, 3S)-N²-terc.butoxykarbonyl-N-(tetrahydro-2-benzyloxy-5-oxo-3-íuranyl)-L-alanínamidu (zlúčenina 14) v 8 ml suchého dichlórmetánu sa pri teplote 0 °C pôsobí 8 ml kyseliny trifluóroctovej počas 1 hodiny a potom sa zmes odparí do sucha. Ku zvyšku sa pridá suchý éter a zmes sa zahustí, čím sa získa viskózny olej. Tento olej sa rozpustí v 10 ml dimetylformamidu. Pridá sa 244 mg (2,2 mmol) kyseliny pyrol-2-karboxylovej (zlúčeniny 34a), roztok sa ochladí v ľadovom kúpeli a potom sa pridá 0,78 g (6,0 mmol) N,N-diizopropylamínu, 0,54 g (4,0 mmol) 1-hydroxybenzotriazolu a 0,42 g (2,2 mmol) etyldimetylaminopropylkarbodiimid-hydrochloridu. Výsledná zmes sa mieša pri teplote 25 °C počas 17 hodín a potom sa pridá 30 ml nasýteného vodného roztoku chloridu sodného. Zmes sa extrahuje trikrát vždy 20 ml etylacetátu a zmiešané organické extrakty sa premyjú trikrát vždy 10 ml 5 % vodného roztoku hydro genuhličitanu sodného a 10 ml roztoku chloridu sodného, vysušia sa síranom horečnatým a zahustia. Flash chromatografiou s použitím 25 % hexánu v etylacetáte ako elučného činidla sa získa 557 mg (75 %) zmesi diastereomérov v pomere 1 : 1 vo forme bielej sklovitej pevnej látky s teplotou topenia 85 - 90 °C. Infračervené spektrum (KBr): 3288, 1789, 1665, 1629, 1557 a 1122 'H-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid), hodnoty δ: 11,46 (1H, široký s), 8,55 (0,5H, d, J = 7,0), 8,30 (0,5H, d, J = 7,6) 8,06 (0,5H, d, J = 7,0), 8,04 (0,5H, d, J = 7,6), 7,36 - 7,30 (5H, m), 6,88 - 6,85 (2H, m), 6,10 - 6,07 (1H, m), 5,63 (0,5H, d, J = 5,0), 5,42 (0,5H, s), 4,72 (2H, q, J = 12,2), 4,74 - 4,25 (2H, m), 3,14 - 2,35 (2H, m), 1,29, 1,25 (3H, 2 x d, J = 7,2) (2R,S,3S)-N²-(5-Benzylpyrol-2-karbonyl)-N-(tetrahydro-2-benzyloxy-5-oxo-3-furanyl)-L-alanínamid (zlúčenina 35b) sa pripraví z kyseliny 5-benzylpyrol-2-karboxylovej (zlúčeniny 34b) spôsobom opísaným v prípade zlúčeniny 35a, s výťažkom 65 %. Údaje sú uvedené pre jediný diastereomér.

’H-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid), hodnoty δ: 11,37 (1H, široký s), 8,27 (1H, d, J= 7,4), 7,93 (1H, d, J = = 7,6) 7,33 - 7,16 (10H, m), 6,76 (1H, m), 5,82 (1H, m), 5,62 (1H, d, J = 5,2), 4,76 (1H, d, J = 12,0), 4,65 (1H, m), 4,62 (1H, d, J = 12,2), 4,47 (1H, m), 3,88 (2H, s), 2,77 (1H, dd, J = 9,0, 18,0), 2,5 (dd), 1,23 (3H, d, J = 7,0)

Kyselina (3S)-3-[N-(pyrol-2-karbonyl)-alaninyl]amino-4-oxo-butánová (zlúčenina 36a, D)

Zmes 612 mg (1,65 mmol) zlúčeniny, 35a, 40 ml metanolu a 10 % paládia na uhlí (500 mg) sa intenzívne mieša v atmosfére vodíka počas 4 hodín. Zmes sa prefiltruje cez nylonovú membránu (0,2 μΜ) a potom sa zahustí. Zvyšok sa vyčistí flash chromatografiou s použitím 5 - 10 % metanolu v metylénchloride ako elučného činidla, čím sa získa 223 mg (48 %) hemihydrátu zlúčeniny 36a vo forme bielej pevnej látky po prekryštalizovaní zo zmesi etylacetátu a éteru. V produkte sú prítomné stopy rozpúšťadla. Teplota topenia produktu je 96 - 100 °C.

Infračervené spektrum (KBr): 3381, 1774, 1729 (etylacetát), 1632, 1558, 1523, 1123 ‘H-NMR (perdeuterometanol), hodnoty δ: 6,94 - 6,85 (2H, m), 6,17 (1H, dd, J = 3,8 a 2,6), 4,58 (0,35H d, J = = 3,94), 4,56 (0,5H, d, J =4,24), 4,51 (1H, q, J = 7,16), 4,35 -4,20 (1H, m), 2,74 -2,40 (2H, m), 1,42 a 1,41 (3H, 2 x d, J = 7,13)

Kyselina-(3S)-3-[N-(5-benzylpyrol-2-karbonyl)-L-alanín-yl]amino-4-oxobut4nová (zlúčenina 36b) sa pripraví s výťažkom 41 % zo zlúčeniny 35b spôsobom opísaným pre zlúčeninu 36a, pričom sa získa vo forme špinavobielej pevnej látky s teplotou topenia 109 - 112 °C.

[a]_D ²⁵ +6,3 ° (c = 0,3, metanol)

Infračervené spektrum (KBr): 3368, 1724, 1630, 1530, 1453, 1414, 1233, 1049 ‘H-NMR (perdeuterometanol), hodnoty δ: 7,25 - 7,11 (5H, m), 6,76 (1H, d, J = 3,5), 5,84 (1H, d, J = 3,5), 4,51 (1H, m), 4,43 (1H, q, J = 7,1), 4,23 (1H, m), 2,5 (2H, m), 1,35 (3H, d, J = 7,0)

Analýza pre C|9H₂iN₃O₅.l,75H₂O: vypočítané: 56,64 % C, 6,13% H, 10,43% N;

nájdené: 56,34 % C, 5,72% H, 10,00% N.

(Bn = benzyl) (2R,S, 3S)-l-(Indol-2-karbonyl)-N-(tetrahydro-2-benzyloxy-5-oxo-3-furanyl)-L-prolínamid (zlúčenina 38)

K roztoku 0,607 g (1,5 mmol) (2R,S,3S)-l-terc.butoxy-karbonyl-N-(tetrahydro-2-benzyloxy-5-oxo-3-furanyl)-L-prolínamidu (zlúčeniny 15) v 4 ml dichlórmetánu sa pri teplote 0 “C pridajú 4 ml kyseliny trifluóroctovej. Zmes sa mieša pri teplote 0 °C počas 75 minút. Zmes sa zahustí, ku zvyšku sa pridá dietyléter a éter sa potom odstráni vo vákuu. Tento postup sa dvakrát opakuje, čím sa získa žltý olej, ktorý sa rozpustí v 12 ml dimetylformamidu. K tomuto roztoku sa potom pridá 0,78 ml (4,5 mmol) diizopropyletylamínu a následne 266 mg (1,65 mmol) kyseliny indol-2-karboxylovej, 316 mg (1,65 mmol) l-(3-dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimid-hydrochloridu a 405 mg (3 mmol) hydroxybenzotriazolu. Zmes sa mieša pri izbovej teplote počas 20 hodín a potom sa vyleje do roztoku chloridu sodného. Zmes sa extrahuje trikrát vždy 30 ml etylacetá tu. Zmiešané organické extrakty sa premyjú dvakrát vždy 60 ml nasýteného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a potom dvakrát vždy 60 ml roztoku chloridu sodného, vysušia sa síranom horečnatým, prefiltrujú a zahustia. Zvyšok sa vyčistí stĺpcovou chromatografiou s použitím etylacetátu ako elučného činidla, čím sa získa 518 mg (77 %) zmesi diastereomérov.

Infračervené spektrum (KBr): 3314,1780,1677, 1609,1524,1435, 1406,1344 'H-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid), hodnoty δ: 11,58 (1H, m), 8,81 - 8,41 (1H, m), 7,71 - 6,67 (10H, m),

5,70 (d, J = 5,2), 5,48 (s), 4,89 - 4,29 (4H, m), 3,99 - 3,74 (2H, m), 3,20 - 2,44 (2H, m), 2,39 - 1,77 (4H, m)

Kyselina (3S)-3-[l-(indol-2-karbonyl)-L-prolinyl]amino-4-oxo-butánová (zlúčenina 39)

Zmes 478 mg (1,07 mmol) (2R,S, 3S)-l-(indol-2-karbonyl)-N-(tetrahydro-2-benzyloxy-5-oxo-3-furanyl)-L-prolínamidu (zlúčeniny 38), 10 % paládia na uhlí (475 mg) a 150 ml metanolu sa mieša v atmosfére vodíka počas 6 hodín. Výsledná zmes sa prefiltruje a zahustí, čím sa získa bezfarebná sklovitá látka. Prekryštalizovaním zo zmesi metanolu a dietyléteru sa získa 202 mg (53 %) bezfarebnej pevnej látky s teplotou topenia 135 - 138 °C.

[ct]_D ²⁴ -44 ° (c = 0,25, metanol)

Infračervené spektrum (KBr): 3287, 2977, 2879, 1781, 1725, 1716, 1667, 1662, 1600, 1529, 1441, 1346 *H-NMR (perdeuterometanol), hodnoty δ: 7,65 (1H, d, J = 8,0), 7,33 (1H, d, J = 8,4), 7,22 (1H, m), 7,09 - 6,84 (2H, m), 4,62 (2H, m), 4,29 (1H, m), 4,15 - 3,73 (2H, m), 2,74 - 1,72 (6H, m)

(Me = metyl, Bn = benzyl)

Metyl-2-(3 ,5-dihydro-7-metyl-4-oxo-4H-pyrolo[3,2-d]pyrimidin-3-yl)acetát (zlúčenina 40)

K miešanému roztoku 1,56 g (7,0 mmol) etyl-3-[N-(dimetylamino)metylén]amino-4-metylpyrol-2-karboxylátu (Lim a kol., J. Orch. Chem., 44, str. 3826 - 29 (1979)) v 60 ml suchého metanolu sa pridá 1,25 g (14 mmol) práve pripraveného metylglycinátu. Výsledná zmes sa zohrieva na teplotu 70 °C. Po 18 hodinách a 42 hodinách zohrievania sa pridajú dve ďalšie dávky metylglycinátu (1,25 g, 14,0 mmol). 24 hodín po poslednom pridaní sa zmes ochladí a prefiltruje. Filtrát sa zahustí a zvyšok sa vyčistí flash chromatografiou s použitím 2 - 5 % metanolu v chloroforme ako elučného činidla, čím sa získa 0,54 g (35 %) bielej kryštalickej pevnej látky s teplotou topenia 233 - 235 °C (prekryštalizované z etylacetátu).

Infračervené spektrum (KBr): 3135, 2958, 1745, 1675, 1254 'H-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid), hodnoty δ: 11,90 (1H, s), 8,07 (1H, s), 7,23 (1H, s), 4,83 (2H, s), 3,69 (3H, s), 2,16 (3H, s)

Analýza pre CioH_hN₃0₃.0,lH₂O: vypočítané: 53,85 % C, 5,07 % H, 18,84% N;

nájdené: 53,85 % C, 4,96% H, 18,81% N.

Hmotnostná spektrometria (070eVE.I.): m/e 222, 221 (M⁺, 100 %), 189, 162, 133, 105

Sodná soľ kyseliny 2-(3,5-dihydro-7-metyl-4-oxo-4H-pyrolo[3,2-d]pyrimidin-3-yl)octovej (zlúčenina 41)

K suspenzii 345 mg (1,6 mmol) zlúčeniny 40 v 15 ml metanolu sa pridá 4,8 ml 0,5N hydroxidu sodného a výsledná zmes sa mieša pri teplote 25 °C počas 1 hodiny. Reakčná zmes sa prefiltruje, čím sa získa hemihydrát zlúčeniny 41 (354 mg, 97 %) vo forme bielej kryštalickej látky s teplotou topenia vyššou ako 340 °C (prekryštalizované z metanolu).

Infračervené spektrum (KBr): 3461, 3143, 1676, 1666,1605, 1415 'H-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid), hodnoty δ: 11,63 (1H, s), 7,83 (1H, s), 7,11 (1H, d, J = 2,0), 4,24 (2H, s), 2,14 (3H, s)

Analýza pre C₉H₈N₃O₃Na.0,5H₂O: vypočítané: 45,39 % C, 3,81% H, 17,64% N;

nájdené: 45,57 % C, 4,05 % H, 17,39% N.

(2R,S,3S)-2-(3,5-Dihydro-7-metyl-4-oxo-4H-pyrolo[3,2-d]pyrimidin-3-yl)-N-(tetrahydro-2-benzyloxy-5-oxo-3-furanyl)acetamid (zlúčenina 42)

K suspenzii 344 mg (1,5 mmol) sodnej soli 41 v 15 ml suchého dimetylformamidu sa pridá 373 mg (1,95 mmol) etyldimetylaminopropylkarbodiimid-hydrochloridu a 405 mg (3,0 mmol) 1-hydroxybenzotriazolu. Zmes sa nechá stáť pri teplote 25 °C počas 1 hodiny, potom sa pridá 437 mg (1,5 mmol) (2R,S,3S)-N-alyloxykarbonyl-3-amino-2-benzyloxy-5-oxotetra-hydrofuránu (Chapman, Biorg. Med. Chem. Lett., 2, str. 613 - 18 (1992)) a 25 mg (fenyl₃P)₂PdCl₂ a následne sa po kvapkách pridá 0,6 ml (2,25 mmolov) n-tributycínhydridu. Výsledná zmes sa mieša pri teplote 25 °C počas 1 hodiny a potom sa pridá 20 ml vody. Zmes sa extrahuje trikrát vždy 15 ml etylacetátu a zmiešané organické extrakty sa premyjú 5 ml vody, vysušia sa síranom horečnatým a zahustia, čím sa získa zmes diastereomérov. Odparením vodnej fázy a vyčistením zvyšku flash chromatografiou s použitím 5 % metanolu v chloroforme ako elučného činidla sa získa ďalšie množstvo požadovanej látky. Celkom sa získa 182 mg (31 % zlúčeniny 42 s teplotou topenia 240 - 244 °C.

Infračervené spektrum (KBr): 3274, 1772, 1691, 1664,1562, ’H-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid), hodnoty δ: 11,81 (1H, s), 8,85 (0,6H, d, J = 6,6), 8,72 (0,4H, d, J = = 7,4), 7,98 (0,6H, s), 7,95 (0,4H, s), 7,40 - 7,30 (5H, m), 7,20 (1-H, d, J = 2,2), 5,61 (,0,4H, d, J = 5,0), 5,46 (s), 4,85 - 4,60 (-m), 4,28 (m), 3,20 - 2,35 (2H, m),.2,16 (3H, s)

Kyselina (3 S)-3-[2-(3,5 -dihydro-7-metyl-4-oxo-4H-pyrolo [3,2-d]-pyrimidin-3 -yl)-l-oxoetylamino] -4-oxobutánová (zlúčenina 43)

Zmes 131 mg (0,33 mmol) zlúčeniny 42 v 50 ml metanolu a 10 % paládia na uhlí (100 mg) sa intenzívne mieša v atmosfére vodíka počas 2 hodín. Pridá sa ďalších 100 g katalyzátora a zmes sa hydrogenuje počas ďalších 2 hodín. Zmes sa prefiltruje cez nylonovú membránu (0,2 μΜ) a potom sa zahustí. Zvyšok sa prekryštalizuje zo zmesi metanolu a dietyléteru, čím sa získa 79 mg (78 %) zlúčeniny 43 vo forme hygroskopickej bielej pevnej látky, topiacej sa pri rozklade pri teplote 222 - 226 °C.

[a]_D ³² +0,5 ° (c = 0,02, metanol) Infračervené spektrum (KBr): 3282, 1680, 1558, 1425,1275 ’H-NMR (perdeuterometanol), hodnoty δ: 8,03 (1H, s), 7,18 (1H, d, J = 0,7), 4,79 - 4,74 (2H, m), 4,63 - 4,59 (1H, 2 x d, I = 3,6), 4,36 - 4,25 (1H, m), 2,78 - 2,39 (2H, m), 2,24 (3H, d, J = 0,7)

Analýza pre Ci₃H₁₄N₄O5.1,4H₂O: vypočítané: 47,10% C, 5,12% H, 16,90% N;

nájdené: 47,00 % C, 4,79 % H, 16,59% N.

(t-Bu = ter.butyl, Bn = benzyl) (a) X = O (b) X = H₂

Hmotnostná spektrometria (FAB): m/e 307, 306 (M⁺), 244, 207, 190, 152, 115 (100 %) (1 S, 9S) -Terc.butyl-6,10-dioxooktahydro-9-(3-fenylpropionylamino)-6H-pyridazino[ 1,2-a] [ 1,2]diazepín-l-karboxylát (zlúčenina 44a)

K roztoku 690 mg (2,32 mmol) (lS,9S)-terc.butyl-9-amino-6,10-dioxooktahydro-6H-pyridazino[l,2-a][l,2]diazepín-l-karboxylátu (GB 2128984) v 16 ml dioxánu a 4 ml vody sa pri teplote 0 °C pridá 292 mg (3,48 mmol) pevného hydrogenuhličitanu sodného a potom sa po kvapkách pridá 470 mg (2,78 mmol) 3-fenylpropionylchloridu. Zmes sa mieša pri izbovej teplote počas 2 hodín a potom sa pridá ďalších 200 mg (2,38 mmol) hydrogenuhličitanu sodného a 100 mg (0,6 mmol) 3-fenylpropionylchloridu. Zmes sa mieša počas ďalších 2 hodín pri izbovej teplote, nariedi sa 50 ml etylacetátu, premyje sa dvakrát vždy 25 ml nasýteného roztoku hydrogenuhličitanu sodného, potom sa vysuší síranom horečnatým a zahustí. Zvyšok sa vyčistí flash chromatografiou s použitím 0 - 50 % etylacetátu v chloroforme ako elučného činidla a potom sa vykryštalizuje triturovaním s éterom, čím sa získa 860 mg (86 %) bielej pevnej látky s teplotou topenia 137 - 138 °C.

[a]_D ²³ -95,1 ⁰ (c = 0,549, dichlórmetán) Infračervené spektrum (KBr): 3327, 1736, 1677, 1664, 1536, 1422, 1156 'H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,24 (5H, m), 6,50 (1H, d, J = 7,5), 5,24 (1H, m), 4,90 (1H, m),

4,60 (1H, m), 3,44 (1H, m), 2,93 (2H, m), 2,84 (1H, m), 2,64 (1H, m), 2,54 (2H, m), 2,26 (2H, m), 1,70 (4H, m), 1,70 (9H, s)

Hmotnostná spektrometria (FAB, m/z): 430 (M⁺ + 1), 374, 242, 105, 91 (1 S,9S)-Terc.butyl-oktahydro-10-oxo-9-(3-fenylpropionylamino)-6H-pyridazino[ 1,2-a] [ 1,2]diazepín-1 -karboxylát (zlúčenina 44b) sa pripraví z (lS,9S)-terc.butyl-9-amino-10-oxo-6H-pyridazino[l,2-a][l,2]diazepín-1-karboxylátu (Attwood a kol., J, Chem. Soc. Perkin 1, str. 1011 - 19 (1986)) spôsobom ako v prípade zlúčeniny 44a, čím sa získa 810 mg (81 %) bezfarebného oleja.

[a]_D ²³ -33,5 ⁰ (c = 0,545, dichlórmetán) Infračervené spektrum (film): 3334, 2935, 1737, 1728, 1659, 1642 ’H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,24 (5H, m), 6,75 (1H, d, J = 6,7), 5,27 (1H, m), 4,92 (1H, m),

3,39 (1H, m), 3,03 (4H, m), 2,55 (3H, m), 2,33 (1H, m), 2,17 (1H, m), 1,80 (5H, m), 1,47 (9H, s), 1,39 (1H, m)

Hmotnostná spektrometria (FAB, m/z): 416 (M⁺ + 1), 360, 211, 143, 97

Kyselina (1 S,9S)-6,10-dioxooktahydro-9-(3-fenylpropionylamino)-6H-pyridazino[ 1,2-a] [ 1,2]diazepín-1 -karboxylová (zlúčenina 45a)

K roztoku 800 mg (1,863 mmol) (lS,9S)-terc.butyl-6,10-dioxooktahydro-9-(3-fenylpropionylamino)-6H-pyridazino [l,2-a][l,2]diazepín-l-karboxylátu (zlúčeniny 44a) v 5 ml suchého dichlórmetánu sa pri teplote 0 °C pridá 5 ml kyseliny trifluóroctovej. Roztok sa mieša pri izbovej teplote počas 3 hodín a potom sa zahustí. K zvyšku sa pridá 10 ml suchého éteru a potom sa éter odstráni vo vákuu. Tento postup sa trikrát opakuje, čím sa získa kryštalická pevná látka. Táto pevná látka sa trituruje s éterom a prefiltruje, čím sa získa 590 mg (85 %) bielej kryštalickej pevnej látky s teplotou topenia 196 - 197,5 °C.

[a]_D ²³ -129,5 ° (c = 0,2, metanol) Infračervené spektrum (KBr): 3237, 1729, 1688, 1660, 1633, 1574, 1432, 1285, 1205 'H-NMR (perdeuterometanol), hodnoty δ: 8,28 (1H, d, J = 7,4), 7,22 (5H, m), 5,32 (1H, dd, J = 5,9, 2,9),

4,75 (1H, m), 4,51 (1H, m), 3,50 (1H, m), 3,01 (1H, m), 2,91 (2H, m), 2,55 (2H, m), 2,29 (3H, m), 1,95 (2H, m), 1,71 (2H, m)

Analýza pre C₁₉H₂₃N₃O₅: vypočítané: 61,12% C, 6,21% H, 11,25% N;

nájdené: 60,80 % C, 6,28 % H, 10,97% N.

Hmotnostná spektrometria (FAB, m/z): 374 (M⁺ + 1), 242, 105, 91

Kyselina (1 S,9S)-oktahydro-10-oxo-9-(3-fenylpropionyl-amino)-6H-pyridazino[ 1,2-a] [ 1,2]diazepín-l-karboxylová (zlúčenina 45b) sa pripraví z (lS,9S)-terc.butyl-oktahydro-10-oxo-9-(3-fenylpropionylamino)-6H-pyrídazino[l,2-a][l,2]diazepín-l-karboxylátu (zlúčeniny 44b) spôsobom opísaným v prípade zlúčeniny 45a, čím sa získa 657 mg (96 %) zlúčeniny 45b ako kryštalickej pevnej látky s teplotou topenia 198 - 202 °C. [a]_D ²³ -86,2 ⁰ (c = 0,5, metanol)

Infračervené spektrum (KBr): 3294, 2939, 1729, 1645, 1620, 1574, 1453, 1214 'H-NMR (perdeuterometanol), hodnoty δ: 7,92 (1H, d, J =7,9), 7,20 (5H, m), 5,29 (1H, m), 4,90 (1H, m),

3,47 (1H, m), 3,08 (2H, m), 2,90 (2H, m), 2,55 (3H, m), 2,36 (1H, m), 1,81 (5H, m), 1,43 (2H, m) Hmotnostná spektrometria (FAB, m/z): 360 (M⁺ + 1), 211, 143, 91 [3S,2R,S,(lS,9S)]-N-(2-Benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)-6,10-dioxooktahydro-9-(3-fenylpropionylamino)-6H-pyridazino-[ 1,2-a] [ 1,2]diazepín-l-karboxamid (zlúčenina 46a)

K roztoku 662 mg (1,773 mmol) kyseliny (lS,9S)-6,10-dioxooktahydro-9-(3-fenylpropionylamino)-6H-pyridazino[l,2-a]-[l,2]diazepín-l-karboxylovej (zlúčeniny 45a) v 9 ml suchého dichlórmetánu a 3 ml suchého dimetylformamidu sa pri izbovej teplote pridá 30 mg bis(trifenylfosfm)paládiumchloridu a 568 mg (1,95 mmol) (3S, 2R,S)-3-alyloxykarbonylamino-2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuránu (Chapman, Biorg. Med. Chem. Lett., 2, str. 613 - 18 (1992)) a potom sa po kvapkách pridá 1,19 g (4,09 mmol) tri-n-butylcínhydridu. K zmesi sa pridá 479 mg 3,546 mmol) 1-hydroxybenzotriazolu, zmes sa ochladí na teplotu 0 °C a potom sa pridá 408 mg (2,128 mmol) l-(3-dimetylamino-propyl)-3-etylkarbodiimid-hydrochloridu. Zmes sa mieša pri izbovej teplote počas 3,25 hodiny, potom sa nariedi 50 ml etylacetátu, premyje sa dvakrát 20 ml zriedenej kyseliny chlorovodíkovej, dvakrát 20 ml nasýteného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a raz roztokom chloridu sodného, potom sa vysuší síranom horečnatým a zahustí. Výsledný olej sa vyčistí flash chromatografiou s použitím 0 - 100 % etylacetátu v chloroforme ako elučného činidla, čím sa získa 810 mg (81 %) zlúčeniny 46a vo forme zmesi anomérov s teplotou topenia 92 - 94 °C.

Infračervené spektrum (KBr): 3311, 1791, 1659, 1651,1536 ’H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,49, 6,56 (1H, 2d, J = 6,7, 7,8), 7,29 (10H, m), 6,37 6,18 (1H, 2d, J = 7,7, 7,6), 5,56, 5,34 (1H, d, s, J = 5,2), 5,08 - 4,47 (6H), 3,18 - 2,80 (5H), 2,62 - 2,28 (5H), 2,04 - 1,53 (5H)

Hmotnostná spektrometria (FAB, m/z): 563 (M⁺ + 1), 328, 149, 91 [3S,2R,S,(lS,9S)]-N-(2-Benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)oktahydro-10-oxo-9-(3-fenylpropionylamino)-6H-pyridazino-[l,2-a][l,2]diazepín-l-karboxamid (zlúčenina 46b) sa pripraví zo zlúčeniny 45b spôsobom opísaným v prípade zlúčeniny 46a, čím sa získa 790 mg (96 %) sklovitej látky s teplotou topenia 58 - 60 °C.

Infračervené spektrum (KBr): 3316, 2940, 1793, 1678, 1641, 1523, 1453, 1120 'H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,28, (10H, m), 6,52, 6,42 (1H, 2d, J =7,2, 7,1), 5,53, 5,44 (1H, d, s, J = 5,2), 5,35 (1H, m), 4,6 - 4,9, 4,34 (4H, m), 3,1 - 2,8 (6H, m), 2,6 - 2,1 (7H), 1,95 - 1,05 (5H) Hmotnostná spektrometria (FAB, m/z): 549 (M⁺ + 1), 400, 310, 279, 91

Kyselina [3S,( 1 S,9S)]-3-(6,10-dioxooktahydro-9-(3-fenylpropionylamino)-6H-pyridazino[l ,2-a] [ 1,2]diazepín-l-karboxamido)-4-oxobutánová (zlúčenina 47a)

Zmes 205 mg (0,3-64 mmol) [3S,2R,S,(lS,9S)]-N-(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)-6,10-dioxooktahydro-9-(3-fenylpropionylamino)-6H-pyridazmo[ 1,2-a] [ 1,2]diazepín-l-karboxamidu (zlúčeniny 46a), 10 % paládia na uhlí (200 mg) a 20 ml metanolu sa mieša v atmosfére vodíka pri atmosférickom tlaku počas 5 hodín. Zmes sa prefiltruje a potom sa zahustí, čím sa získa 154 mg (90 %) sklovitej látky s teplotou topenia 116- 118 °C.

[a]_D ²³ -140 ° (c = 0,1, metanol)

Infračervené spektrum (KBr): 3323 (široký signál), 1783, 1731, 1658, 1539,1455, 1425 ‘H-NMR (perdeuterometanol), hodnoty δ: 7,21 (5H, m), 5,17 (1H, m), 4,73 (1H, m), 4,50 (2H, m), 4,23 (1H, m), 3,38 (1H, m), 3,06 (1H, m), 2,91 (2H, m), 2,73 - 2,18 (6H, m), 2,01 - 1,59 (5H, m)

Analýza pre C23H27N4O7 + H₂O: vypočítané: 56,32 % C, 6,16% H, 11,42% N;

nájdené: 56,29 % C, 6,11% H, 11,25% N.

Hmotnostná spektrometria (FAB, m/z): 473 (M⁺ + 1), 176, 149, 105, 91

Kyselina [3S,(1 S,9S)]-3-(oktahydro-10-oxo-9-(3-fenyl-propionylamino)-6H-pyridazino[ 1,2-a] [ 1,2]diazepín-l-karboxamido)-4-oxobutánová (zlúčenina 47b) sa pripraví zo zlúčeniny 46b spôsobom opísaným v prípade zlúčeniny 47a. Zvyšok sa vyčistí flash chromatografiou s použitím 0 - 10 % metanolu v chloroforme ako elučného činidla, čím sa získa 65 mg (52 %) sklovitej látky s teplotou topenia 87 - 90 °C.

[oc]_D ²³ -167,0 ° (c = 0,1, metanol)

Infračervené spektrum (KBr): 3,329, 2936, 1786, 1727, 1637 'H-NMR (perdeuterometanol), hodnoty δ: 7,23 (5H, m), 5,29 (1H, m), 4,83 (1H, m), 4,59 (1H, d, J = 3,6), 4,29 (1H, m), 3,3 - 3,0 (3H, m), 2,91 (2H, m), 2,70 - 2,34 (5H, m), 2,19 (2H, m), 1,75 (4H, m), 1,36 (2H, m) Analýza pre C23H3₀N₄O₆ +0,5H₂O: vypočítané: 59,09 % C, 6,68 % H, 11,98% N;

nájdené: 58,97 % C, 6,68 % H, 11,73% N.

Hmotnostná spektrometria (FAB, m/z): 459 (M⁺ + 1), 310, 149, 105, 91

(Me = metyl)

R1	R2	R3
(a)	fenyl-CH2-	H	(S)-metyl
(b)	fenyl-CH2-	-CH2-fenyl	H
(c)	fenyl-CH2-	(CH2)2-fenyl	H
(d)	fenyl-CHz-	n-butyl	H
(e)	fenyl-CH2-	metyl	H
(f)	fenyl-CH2-	fenyl	H
(g)	fenyl-CH2-	H	H
(h)	fenyl-CH2-	-CH2-fenyl	(S)-metyl
(i)	fenyl-(CH2)2-	-CH2-fenyl	H

Pyridony 48 sa pripravia spôsobom, ktorý opísali Damewood a kol., J. Med. Chem,. 37, str. 3303 - 12 (1994).

Zlúčenina 48d je nová.

3-Benzyloxykarbonylamino-6-butylpyrid-2-on (zlúčenina 48d) sa izoluje ako krémová pevná látka s teplotou topenia 158 až 160 °C.

Infračervené spektrum (KBr): 3382, 2953, 2930, 2866, 1729, 1643, 1524, 1468, 1202, 1044 'H-NMR (perdeuterochloroform), hodnoty δ: 8,26 (1H, s), 7,72 (1H, d), 7,39 (5H, m), 6,00 (1H, d), 5,14 (2H, s), 2,41 (2H, t), 1,52 (2H, m), 1,24 (2H, m), 0,87 (3H, t)

Analýza pre C17H20N2O3: vypočítané: 67,98 % C, 6,71% H, 9,33% N;

nájdené: 67,69 % C, 6,68% H, 9,20% N.

Hmotnostná spektrometria (Cl - chemická ionizácia): M⁺ = 300 (m) 28 % (2S)-Metyl-2-[3-benzyloxykarbonylamino-l,2-dihydro-2-oxo-l-pyridyl]propionát (zlúčenina 49a)

K miešanej zmesi 2,58 g (10,58 mmol) 3-benzyloxykarbonylamino)pyrid-2-onu (zlúčeniny 48a) a 100 ml tetrahydrofuránu sa pri izbovej teplote pridá 80 % disperzia nátriumhydridu v oleji (0,35 g, 11,64 mmol). Zmes sa mieša počas 10 minút. Výsledný roztok sa pri izbovej teplote počas 10 minút pridá k roztoku 2,5 g (10,58 mmol) 2(R)-metyl-2-((trifluórmetán)sulfonyloxy)propionátu (Feenstra a kol., Tetrahedron Lett., 28, str. 1215 - 18 (1987)) v 5 ml tetrahydrofuránu. Zmes sa mieša pri izbovej teplote počas 80 minút a potom sa vyleje do etylacetátu. Zmes sa premyje dvakrát IM kyselinou chlorovodíkovou, dvakrát vodným roztokom hydrogenuhličitanu sodného a potom roztokom chloridu sodného. Vysuší sa síranom horečnatým a zahustí. Zvyšok sa vyčistí flash chromatografiou s použitím 30 % etylacetátu v hexáne ako elučného činidla, čím sa získa 2,945 g (84 %) bezfarebnej pevnej látky s teplotou topenia 96-7 °C.

[<x]_D ²° -71,36 ° (c = 2,5, dichlórmetán) Infračervené spektrum (KBr): 3370, 1764, 1729, 1648, 1602, 1564, 1523, 1515, 1503, 1449, 1359, 1203, 1064 ‘H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 8,04 (1H, d, J = 7,2), 7,86 (1H, s), 7,36 (5H, m), 6,98 (1H, dd, J = = 7,1, J = 1,7), 6,30 (1H, t, J = 7,2), 5,46 (1H, q, J = 7,4), 5,20 (2H, s), 3,74 (3H, s), 1,66 (3H, d, J = 7,4) Analýza pre C₁₇H_I8N2O₅: vypočítané: 61,81% C, 5,49 % H, 8,48 % N;

nájdené: 61,49% C, 5,51% H, 8,41% N.

Hmotnostná spektrometria (FAB, m/z): 331 (M⁺ + 1), 299, 223, 196, 163, 91

Metyl-[6-benzyl-3-benzyloxykarbonylamino-l,2-dihydro-2-oxo-l-pyridyl]acetát (zlúčenina 49b)

K miešanej zmesi 7,3 g (2,18 mmol) 6-benzyl-3-(benzyloxykarbonylamino)pyrid-2-onu (zlúčeniny 48b) a

150 ml tetrahydrofuránu sa pri izbovej teplote pridá 80 % disperzia nátrium-hydridu v oleji (0,65 g, 26,2 mmol). Zmes sa mieša počas 10 minút, potom sa pridá 2,5 ml (26,2 mmol) metyl-brómacetátu a zmes sa nechá stáť počas 3 hodín. Výsledná zmes sa vyleje do zmesi ľadu a IM kyseliny chlorovodíkovej. Výsledná pevná látka sa odfiltruje a potom sa rozpustí v dichlórmetáne. Výsledný roztok sa vysuší síranom horečnatým, odfarbí sa aktívnym uhlím a zahustí. Zvyšok sa chromatograficky vyčistí s použitím 2 - 5 % etylacetátu v dichlórmetáne ako elučného činidla, čím sa získa 7,2 g (81 %) bezfarebných kryštálov s teplotou topenia 117- 119 °C

Infračervené spektrum (KBr): 3375, 1753, 1730, 1651,1605, 1513, 1384, 1223, 1185, 1071 ‘H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 8,02 (1H, d, J = 7,5), 7,78 (1H, s), 7,31 (8H, m), 7,10 (2H, m),

6,15 (1H, d, J = 7,5), 5,20 (2H, s), 4,70 (2H, s), 3,88 (2H, S), 3,66 (3H, S)

Nasledujúce zlúčeniny sa pripravia podobným spôsobom:

Metyl-[3-benzyloxykarbonylamino-1,2-dihydro-2-oxo-6-fenyletyl-1 -pyridyljacetát (zlúčenina 49c)

Výťažok tvorí 97 %. Teplota topenia produktu je 102 až 104 °C.

Infračervené spektrum (KBr): 3245, 3232, 1741, 1725,1648, 1600, 1526, 1216 'H-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid), hodnoty δ: 8,45 (1H, s), 7,76 (1H, d, J = 7,6), 7,35 (10H, m), 6,15 (1H, d, J = 7,6), 5,15 (2H, s), 4,85 (2H, s), 3,68 (3H, s), 2,86 (4H, s)

Metyl-[3-benzyloxykarbonylamino-6-butyl-l, 2-dihydro-2-oxo-l-pyridyl]acetát (zlúčenina 49d)

Výťažok tvorí 90 %. Teplota topenia produktu je 111 až 112 °C.

Infračervené spektrum (KBr): 3393, 1738, 1731, 1645,1598, 1517, 1225, 1208 'H-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid), hodnoty δ: 8,39 (1H, s), 7,78 (1H, d, J = 7,7), 7,35 (5H, m), 6,17 (1H, d, J = 7,7), 5,15 (2H, s), 4,80 (2H, s), 3,67 (3H, s), 1,38 (6H, m), 0,89 (3H, t)

Metyl-[3-benzyloxykarbonylamino-1,2-dihydro-6-metyl-2-oxo-1 -pyridyljacetát (zlúčenina 49e)

Zlúčenina 49e sa získa s výťažkom 84 % vo forme bezfarebnej pevnej látky. Teplota topenia produktu je 115 až 116°C.

Infračervené spektrum (KBr): 3246, 1740, 1725, 1649, 1598, 1573, 1535, 1417, 1365, 1259, 1219, 1193, 1090, 1068, 1006 'H-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid), hodnoty δ: 8,40 (1H, s), 7,75 (1H, d, J = 7,6), 7,38 (5H, m), 6,20 (1H, d, J = 7,6), 5,15 (2H, s), 4,85 (2H, s), 3,68 (3H, s), 2,26 (3H, s)

Metyl-[3-benzyloxykarbonylamino-l,2-dihydro-6-fenyl-2-oxo-l-pyridyl]acetát (zlúčenina 49f)

Zlúčenina 49f sa získa výťažkom 67 % vo forme bezfarebného oleja.

Infračervené spektrum (KBr): 3266, 1739, 1727, 1646,1606, 1566, 1517, 1490, 1365, 1213, 1163, 1075 'H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 8,15 (1H, d), 7,85 (1H, s), 7,39 (10H, m), 6,22 (1H, d), 5,22 (2H,

s) , 4,57 (2H, s), 3,74 (3H, s)

Metyl-[3-benzyloxykarbonylamino-l,2-dihydro-2-oxo-l-pyridyl]-acetát (zlúčenina 49g)

Zlúčenina 49g sa získa výťažkom 80 % vo forme bezfarebnej kryštalickej pevnej látky s teplotou topenia 110- 111 °C.

Infračervené spektrum (KBr): 3385, 1745, 1726, 1650, 1601, 1512, 1502, 1378, 1369, 1358, 1215, 1195, 1162, 1067 'H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 8,06 (1H, d), 7,84 (1H, s), 7,36 (5H, m), 6,88 (1H, dd), 6,27 (1H,

t) , 5,20 (2H, s), 4,68 (2H, s), 3,78 (3H, s)

Analýza pre CieH₁₆N₂O5:

vypočítané: 60,75 % C, 5,10% H, 8,85% N;

nájdené: 60,65 % C, 5,15% H, 8,85 % N.

Hmotnostná spektrometria (FAB) (+) M+ = 317 (M+l)

2(S)-Metyl-2-metyl-[6-benzyl-(3-benzyloxykarbonylamino)-l,2-dihydro-2-oxo-l-pyridyl]acetát (zlúčenina 49h) sa pripraví spôsobom použitým na prípravu zlúčeniny 49a, pričom sa získa s výťažkom 58 % vo forme oleja.

[a]_D ²⁵ -25,0 ° (c = 1, dichlórmetán)

Infračervené spektrum (KBr): 3381, 1736, 1650, 1604, 1513, 1218, 1190, 1068 'H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,97 (1H, d), 7,78 (1H, s), 7,4 - 7,14 (10H, m), 6,17 (1H, d), 5,19 (2H, s), 4,64 (1H, q), 3,98 (2H, s), 3,62 (3H, s), 1,31 (3H, d)

Metyl-[6-benzyl-l,2-dihydro-2-oxo-3-(2-fenyletoxy)-karbonylamino-l-pyridyl]acetát (zlúčenina 49i) sa izoluje s výťažkom 88 % vo forme bezfarebnej pevnej látky s teplotou topenia 130 - 133 °C.

Infračervené spektrum (KBr): 3363, 1746, 1732, 1651, 1604, 1515, 1368, 1231, 1212, 1185 'H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 8,00 (1H, d, J = 7,0), 7,68 (1H, s), 7,36 - 7,10 (10H, m), 6,15 (1H, d, J = 7,6), 4,7 (2H, s), 4,38 (2H, t, J = 7,0), 3,88 (2H, s), 3,67 (3H, s), 2,98 (2H, t, J = 7)

5« (Me = metyl, Ph = fenyl)

2(S)-Metyl-2-[3-amino-l,2-dihydro-2-oxo-l-pyridyl]propionát (zlúčenina 50a)

Zmes 2,75 g (8,33 mmol) 2(S)-metyl-2-[3-benzyloxykarbonylamino-l,2-dihydro-2-oxo-l-pyridyl]propionátu (zlúčeniny 49a), 100 ml metanolu a 10 % paládia na uhlí (300 mg) sa mieša v atmosfére vodíka počas 30 minút. Zmes sa prefiltruje a zahustí, čím sa získa 1,63 g (100 %) bezfarebnej pevnej látky.

’H-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid), hodnoty δ: 8,35 (1H, široký s), 7,46 (1H, d), 7,22 (1H, d), 6,29 (1H, t), 5,22 (1H, q), 3,63 (3H, s), 1,55 (3H, d)

Nasledujúce zlúčeniny sa pripravia podobným spôsobom:

Metyl-[3-amino-6-benzyl-l,2-dihydro-2-oxo-l-pyridyl]acetát (zlúčenina 50b) sa získa s výťažkom 100 % vo forme sivej pevnej látky s teplotou topenia 134 - 136 °C.

Infračervené spektrum (KBr): 3418, 3312, 1723, 1658, 1596, 1548, 1435, 1290, 1245, 1011 ’H-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid), hodnoty δ: 7,25 (5H, m), 6,45 (1H, d, J = 7,4), 5,92 (1H, d, J = 7,4), 5,00 (2H, s), 4,63 (2H, s), 3,88 (2H, s), 3,51 (3H, s),

Metyl-[3-amino-l,2-dihydro-2-oxo-6-fenyletyl-l-pyridyl]-acetát (zlúčenina 50c) sa získa s výťažkom 99 % vo forme viskózneho oleja.

Infračervené spektrum (KBr): 3456, 341, 2953, 1745, 1649, 1600, 1548, 1219 ’H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,25 (5H, m), 6,51 (1H, d, J = 7,4), 5,92 (1H, d, J = 7,4), 4,79 (2H, s), 3,77 (3H, s), 2,80 (4H, m)

Metyl-[3-amino-6-butyl-l,2-dihydro-2-oxo-l-pyridyl]-acetát (zlúčenina 50d) sa získa s výťažkom 97 % vo forme hnedej pevnej látky s teplotou topenia 75 - 77 °C.

Infračervené spektrum (KBr): 3437, 3342, 2955, 1745, 165, 1609, 1550, 1432, 1301, 1222, 1200 ’H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 6,53 (1H, d, J = 6,8), 5,93 (1H, d, J = 6,8), 4,81 (2H, s), 3,77 (3H, s), 2,44 (2H, t), 1,45 (4H, m), 0,93 (3H, t)

Metyl-[3-amino-l,2-dihydro-6-metyl-2-oxo-l-pyridyl]-acetát (zlúčenina 50e) sa izoluje s výťažkom 100 % vo forme bezfarebnej kryštalickej pevnej látky s teplotou topenia 87 - 89 °C.

Infračervené spektrum (KBr): 3442, 3326, 1735, 1647, 1600, 1549, 1434, 1407, 1383, 1366, 1225, 1209 ’H-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid), hodnoty δ: 6,40 (1H, d, J = 7,3), 5,93 (1H, d, J = 7,3), 4,86 (2H, s), 4,79 (2H, s), 3,67 (3H, s), 2,15 (3H, s)

Metyl-[3-amino-l,2-dihydro-2-oxo-6-fenyl-l-pyridyl]-acetát (zlúčenina 50f) sa izoluje s výťažkom 86 % vo forme sivej pevnej látky s teplotou topenia 207 - 209 °C.

Infračervené spektrum (KBr): 3473, 3345, 1750, 1644, 1600, 1536, 1443, 1366, 1309, 1212, 1184, 1156 ’H-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid), hodnoty δ: 7,30 (5H, m), 6,54 (1H, d), 6,03 (1H, d), 5,25 (2H, s), 4,49 (2H, s), 3,61 (3H, s),

Metyl-[3-amino-l,2-dihydro-2-oxo-l-pyridyl] acetát (zlúčenina 50g) sa získa vo forme bezfarebného oleja a použije sa bezprostredne v ďalšom stupni.

2(S)-Metyl-2-metyl-[3-amino-6-benzyl-l,2-díhydro-2-oxo-l-pyridyl]acetát (zlúčenina 50h) sa izoluje s výťažkom 69 % vo forme bezfarebného oleja.

Infračervené spektrum (film): 3354, 1743, 1646, 1600, 1548, 1494, 1455, 1309, 1268, 1227, 113 ’H-NMR (perdeuterobenzén), hodnoty δ: 7,29 - 6,76 (5H, m), 5,86 (1H, d, J = 7,2), 5,51 (1H, d, J = 7,2), 4,43 (1H, q, J = 6,7), 3,69 (2H, s), 3,41 (2H, s), 3,36 (3H, s), 1,43 (3H, d, J = 6,7)

U JĹ

(Me = metyl)

	R1	R2	R3
(a)	fenyl-(CH2)2-CO-	H	(S)-metyl
(b)	fenyl-(CH2)2-CO-	-CH2-fenyl	H
(c)	fenyl-(CH2)2-CO-	-(CH2)2-fenyl H
(d)	fenyl-(CH2)2-CO-	n-butyl	H
(e)	fenyl-(CH2)2-CO-	metyl	H
(f)	fenyl-(CH2)2-CO-	fenyl	H
(g)	fenyl-(CH2)2-CO-	H	H
(h)	fenyl-(CH2)2-CO-	-CH2-fenyl	(S)-metyl alebo (R,S-metyl)
(i)	Acetyl-Tyr	-CH2-fenyl	H
(D	fenyl-(CH2)2-SOa-	-CH2-fenyl	H
(k)	fenyl-(CH2)2-OCO-	-CH2-fenyl	H
(1)	fenyl-(CH2)3-CO-	-CH2-fenyl	H

2(S)-Metyl-2-[l,2-dihydro-2-oxo-3-(3-fenylpropionyl)amino-l-pyridyl]propionát (zlúčenina 51a)

K miešanej zmesi 1,63 g (8,33 mmol) 2(S)-metyl-2-[3-amino-l,2-dihydro-2-oxo-l-pyridyl]propionátu (zlúčeniny 50a), 60 ml dioxánu, 15 ml vody a 1,54 g (16,7 mmol) hydrogenuhličitanu sodného sa po kvapkách pridá 1,5 g (9 mmol) 3-fenylpropionylchloridu. Zmes sa nechá počas 1 hodiny a potom sa extrahuje etylacetátom. Extrakty sa premyjú vodným roztokom hydrogenuhličitanu sodného, vysušia sa síranom horečnatým a zahustia. Výsledný červený olej sa vyčistí flash chromatografiou, čím sa získa 2,54 g (93 %) oleja. [oc]_D ²⁰ -68 ° (c = 1, dichlórmetán)

Infračervené spektrum (dichlórmetán): 3369, 1747, 1690, 1650, 1602, 1512,1267, 1260, 1217 'H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 8,41 (1H, dd), 8,36 (1H, s), 7,24 (5H, m), 7,02 (1H, dd), 6,32 (1H, t), 5,44 (1H, q), 3,75 (3H, s), 3,03 (2H, t), 2,70 (2H, t), 1,66 (3H, d)

Hmotnostná spektrometria (FAB) M+ = 329 (M + 1), 197, 165, 131, 110, 91

Nasledujúce zlúčeniny sa pripravia podobným spôsobom:

Metyl-[6-benzyl-l,2-dihydro-2-oxo-3-(3-fenylpropionyl)-amino-l-pyridyl]acetát (zlúčenina 51b) sa izoluje s výťažkom 93 % vo forme kryštálov s teplotou topenia 95 - 97 °C.

Infračervené spektrum (KBr): 3265, 1747, 1686, 1652, 1590, 1563, 1511, 1454, 1401, 1220, 1183, 1133 'H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 8,39 (1H, d, J =7,7), 8,27 (1H, s), 7,21 (10H, m), 6,17 (1H, d, J = = 7,7), 4,70 (2H, s), 3,89 (2H, s), 3,67 (3H, s), 3,02 (2H, m), 2,70 (2H, m)

Metyl-[l,2-dihydro-2-oxo-6-fenyletyl-3-(3-fenylpropionyl) amino-l-pyridyl] acetát (zlúčenina 51c) sa izoluje s výťažkom 81 % vo forme bezfarebných kryštálov s teplotou topenia 105 - 108 °C.

Infračervené spektrum (KBr): 3378, 1746, 1680, 1646, 1597, 1517, 1221 'H-NMR (deuterochloroform), hodnoty 5; 8,34 (1H, d, J = 7,7), 8,25 (1H, s), 7,23 (10H, m), 6,11 (1H, d, J = = 7,7), 4,77 (2H, s), 3,78 (3H, s), 2,88 (8H, m)

Metyl-[6-butyl-l,2-dihydro-2-oxo-3-(3-fenylpropionyl) amino-l-pyridyl]acetát (zlúčenina 51 d) sa izoluje s výťažkom 88 % vo forme bezfarebných kryštálov s teplotou topenia 84 - 85 °C.

Infračervené spektrum (KBr): 3345, 2958, 2930, 1756, 1693, 1650, 1602, 1510, 1227, 1180, 1137 'H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 8,34 (1H, d, J = 7,7), 8,22 (1H, s), 7,26 (5H, m), 6,12 (1H, d, J = = 7,7), 4,80 (2H, s), 3,79 (3H, s), 3,03 (2H, t), 2,68 (2H, t), 2,50 (2H, t), 1,46 (4H, m), 0,95 (3H, t)

Metyl-[l,2-dihydro-6-metyl-2-oxo-3-(3-fenylpropionyl) amino-l-pyridyl]acetát (zlúčenina 51e) sa izoluje s výťažkom 100 % vo forme bledožltého oleja.

Infračervené spektrum (film): 3264, 1745, 1691, 1644, 1587, 1566, 1518, 1495, 1400, 1215, 1183, 1136 'H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 8,33 (1H, d, J = 7,6), 7,26 (5H, m), 6,13 (1H, d, J = 7,6), 4,83 (2H,

s), 3,79 (3H, s), 3,03 (2H, m), 2,69 (2H, m), 2,28 (3H, s),

Metyl-[l,2-dihydro-2-oxo-6-fenyl-3-(3-fenylpropionyl) amino-l-pyridyl]acetát (zlúčenina 5lf) sa izoluje s výťažkom 99 % vo forme bledožltého oleja.

Infračervené spektrum (film): 3365, 3299, 1751, 1689, 1643, 1600, 1563, 1519, 1493, 1419, 1370, 1224 'H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 8,46 (1H, d, J = 7,7), 8,32 (1H, s), 7,32 (10H, m), 6,24 (1H, d, J = = 7,7), 4,57 (2H, s), 3,73 (3H, s), 3,06 (2H, m), 2,72 (2H, m)

Metyl-[l,2-dihydro-2-oxo-3-(3-fenylpropionyl)amino-l-pyridyl]acetát (zlúčenina 5lg) sa izoluje s výťažkom 81 % vo forme oleja.

Infračervené spektrum (film): 3330, 1753, 1689, 1650, 1600, 1560, 1517, 1374, 1225, 1208 'H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 8,43 (1H, d, J =7,4, 1,7), 8,33 (1H, s), 7,28 (5H, m), 6,92 (1H, dd, J = 6,9, 1,7), 6,29 (1H, t), 4,67 (2H, s), 3,79 (3H, s), 3,04 (2H, m), 2,70 (2H, m)

Hmotnostná spektrometria (FAB) (+) M + = 315 (M + 1)

2(S)-Metyl-2-metyl-[6-benzyl-l,2-dihydro-2-oxo-3-(3-fenylpropionyl)amino-l-pyridyl]acetát (zlúčenina 51 h) sa izoluje s výťažkom 93 % vo forme bezfarebného oleja.

[α]ο³° -19 ⁰ (c = 1, dichlórmetán)

Infračervené spektrum (film): 3354, 3313, 3028, 2950, 1745, 1687, 1645, 1600, 1567, 1514, 1454, 1225 ‘H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 8,35 (1H, d, J = 7,5), 8,26 (1H, S), 7,27 (10H, m), 6,20 (1H, d, J = = 7,5), 4,65 (1H, q, J= 6,8), 3,99 (2H, s), 3,71 (3H, s), 3,03 (2H, m), 2,68 (2H, m), 1,31 (3H, d, J = 6,8)

Metyl-[3-(N-acetyl-O-benzyl-L-tyrozín)amino-6-benzyl-l,2-dihydro-2-oxopyridyl]acetát (zlúčenina 51i)

Zmes 100 mg (0,367 mmol) metyl-[3-amino-6-benzyl-l,2-dihydro-2-oxo-l-pyridyl]acetátu, 136 mg (0,367 mmol) tec.butoxykarbonyl-Tyr(benzyl)-OH, 1 ml dimetylformamidu, 0,25 ml (1,468 mmol) diizopropyletylamínu a 118 mg (0,367 mmol) 2-(lH-benzotriazol-l-yl)-l,l,3,3-tetrametyluronium-hexafluórfosfátu sa mieša cez noc pri izbovej teplote. Zmes sa nariedi etylacetátom, premyje sa dvakrát IM kyselinou chlorovodíkovou, dvakrát vodným hydrogenuhličitanom sodným a raz roztokom chloridu sodného, potom sa vysuší síranom horečnatým a zahustí. Zvyšok sa vyčistí flash chromatografiou s použitím 10 % etylacetátu v dichlórmetáne ako elučného činidla, čím sa získa 162 mg (70 %) bezfarebného oleja. 160 mg (0,255 mmol) tohto oleja sa rozpustí v 1 ml dichlórmetánu a potom sa pri teplote 0 °C pridá 1 ml kyseliny trifluóroctovej. Výsledný roztok sa ponechá, aby v priebehu 40 minút dosiahol izbovú teplotu a potom sa odparí do sucha pri teplote 30 °C. Zvyšok sa rozpustí v dichlórmetáne a potom sa znova odparí do sucha. Tento postup sa opakuje tri razy. Zvyšok sa rozpustí v 0,5 ml pyridínu a pri teplote 0 °C sa pridá 0,03 ml (0,3 mmol) acetanhydridu. Keď výsledná zmes dosiahne izbovú teplotu, nechá sa stáť 3,5-hodiny. Potom sa zmes nariedi etylacetátom, premyje sa dvakrát IM kyselinou chlorovodíkovou a dvakrát vodným hydrogenuhličitanom sodným, vysuší sa síranom horečnatým a zahustí, čím sa získa 128 mg (86 %) bezfarebného oleja.

Infračervené spektrum (film): 3290, 1751, 1649, 1602, 1568, 1513, 1455, 1438, 1375, 1224, 1179 'H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 8,78 (1H, s), 8,33 (1H, d, J = 7,6), 7,33 (8H, m), 7,11 (4H, m),

6,86 (2H, d, J = 8,5), 6,47 (1H, d, J = 7,6), 6,12 (1H, d, J = 7,6), 4,99 (2H, s), 4,85 (1H, m), 4,69 (2H, s), 3,87 (2H, s), 3,62 (3H, s), 3,08 (2H, m), 1,96 (3H, s)

Metyl-[6-benzyl-l,2-dihydro-2-oxo-3-(2-fenyletánsulfonyl)amino-l-pyridyl]acetát (zlúčenina 5lj)

K miešanej zmesi 1,0 g (3,67 mmol) metyl-[3-amino-6-benzyl-2-oxo-l,2-dihydro-l-pyridyl]acetátu (zlúčeniny 49b), 15 ml dichlórmetánu a 1,0 ml (7,34 mmol) trietylamínu sa pridá 2-fenyletánsulfonylchlorid (Zhong a kol., J. Am. Chem. Soc,, 113, str. 2259 - 63 (1991)). Zmes sa uchováva cez noc a potom sa vyleje do etylacetátu. Výsledná zmes sa premyje dvakrát vodným hydrogenuhličitanom sodným, trikrát IM kyselinou chlorovodíkovou a potom roztokom chloridu sodného. Vysuší sa síranom horečnatým a zahustí. Výsledná bledohnedá pevná látka sa vyčistí flash chromatografiou s použitím 10 % etylacetátu v dichlórmetáne ako elučného činidla, čím sa získa 1,25 g (77 %) bledožltej pevnej látky s teplotou topenia 92 - 94 °C. Infračervené spektrum (KBr): 3181, 1737, 1646, 1595, 1565, 1454, 1241, 1220, 1150 ’H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,53 (1H, d, J =7,5), 7,29 (10H, m), 6,10 (1H, d, J= 7,5), 4,75 (2H, s), 3,89 (2H, s), 3,67 (3H, s), 3,34 (2H, m), 3,14 (2H, m)

Metyl-[6-benzyl-l,2-dihydro-2-oxo-3-(4-fenylbutyryl)amino-l-pyridyl]acetát (zlúčenina 511) sa izoluje s výťažkom 74 % vo forme bezfarebných kryštálov s teplotou topenia 93 - 95 °C.

Infračervené spektrum (KBr): 3285, 1747, 1683, 1642, 1591, 1563, 1512, 1455, 1220, 1181 'H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 8,39 (1H, d, J =7,6), 8,24 (1H, s), 7,2 (10H, m), 6,18 (1H, d, J = = 7,6), 4,7 (2H, s), 3,90 (2H, s), 3,67 (3H, s), 2,69 (2H, t), 2,40 (2H, t), 2,04 (2H, m)

(Me = metyl)

Kyselina 2(S)-2-[l,2-dihydro-2-oxo-3-(3-fenylpropionyl)amino-l-pyridyl]propiónová (zlúčenina 52a)

K miešanému roztoku 2,39 g (7,3 mmol) 2(S)-metyl-2-[l,2-dihydro-2-oxo-3-(3-fenylpropionyl)amino-l-pyridyľjpropionátu (zlúčeniny 51a) v 30 ml metanolu sa pri teplote 0 °C pridá 15 ml (15 mmol) IM hydroxidu sodného. Teplota zmesi sa udržiava na uvedenej hodnote počas 2 hodín, potom sa zmes okyslí 15,1 ml IM kyseliny chlorovodíkovej a extrahuje sa etylacetátom. Extrakty sa premyjú roztokom chloridu sodného, vysušia sa síranom horečnatým a zahustia, čím sa získa 1,98 g (87 %) bezfarebnej pevnej látky.

[a]_D ²⁰ -75 ° (c = 1, dichlórmetán)

Infračervené spektrum (KBr): 3301, 1724, 1693, 1637,1563, 1523, 1453, 1233, 1216, 765 ‘H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 8,47 (2H, m), 7,20 (5H, m), 7,03 (1H, d), 6,36 (1H, t), 5,35 (1H, q), 3,01 (2H, m), 2,70 (2H, m), 1,69 (3H, m)

Nasledujúce zlúčeniny sa pripravia podobným spôsobom:

Kyselina [6-benzyl-l,2-dihydro-2-oxo-3-(3-fenylpropionyl)amino-l-pyridyl] octová (zlúčenina 52b) sa izoluje s výťažkom 100 % vo forme bledojantárového oleja.

Infračervené spektrum (film): 3291, 1738, 1686, 1644,1591, 1554, 1519, 1496, 1454, 1403, 1215, 1182 *H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 8,44 (1H, d, J = 7,8), 7,21 (10H, m), 6,19 (1H, d, J = 7,8), 4,71 (2H, s), 3,90 (2H, s), 2,99 (2H, m), 2,71 (2H, m)

Kyselina [l,2-dihydro-2-oxo-6-fenyletyl-3-(3-fenylpropionyl)amino-l-pyridyl] octová (zlúčenina 52c) sa izoluje s výťažkom 94 % vo forme béžovej pevnej látky s teplotou topenia 214 - 216 °C.

Infračervené spektrum (KBr): 3289, 1740, 1680, 1640 ’H-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid), hodnoty δ: 9,24 (1H, s), 8,14 (1H, d, J = 7,7), 7,22 (10H, m), 6,11 (1H, d, J = 7,8), 4,78 (2H, s), 2,81 (8H, m)

Kyselina [6-butyl-l,2-dihydro-2-oxo-3-(3-fenylpropionyl)amino-l-pyridyl]octová (zlúčenina 52d) sa izoluje s výťažkom 99 % vo forme bledohnedej pevnej látky s teplotou topenia 132 - 134 °C.

Infračervené spektrum (KBr): 3286, 1739, 1676, 1641, 1584, 1555, 1535, 1455, 1414, 1249, 1227, 1204 'H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 8,42 (1H, d, J =7,8), 8,37 (1H, s), 7,24 (5H, m), 6,19 (1H, d, J = = 7,8), 4,82 (2H, s), 3,55 (1H, s), 3,00 (2H, t), 2,67 (2H, t), 2,53 (2H, t), 1,41 (4H, m), 0,94 (3H, t)

Kyselina [l,2-dihydro-6-metyl-2-oxo-3-(3-fenylpropionyl)amino-l-pyridyl]octová (zlúčenina 52e) sa izoluje s výťažkom 100 % vo forme pevnej látky s teplotou topenia 159 - 161 °C.

Infračervené spektrum (KBr): 3335, 1731, 1686, 1642, 1536, 1516, 1430, 1420, 1401, 1222, 1195 'H-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid), hodnoty δ: 9,21 (1H, s) 8,13 (1H, d, J = 7,6), 7,20 (5H, m), 6,15 (1H, d, J = 7,6), 4,77 (2H, s), 2,87 (2H, m), 2,70 (2H, m), 2,25 (3H, s)

Kyselina [l,2-dihydro-2-oxo-6-fenyl-3-(3-fenylpropionyl)amino-l-pyridyl]octová (zlúčenina 52f) sa izoluje s výťažkom 100 % vo forme bledožltej peny.

Infračervené spektrum (KBr): 3271, 1747, 1683, 1634,1580, 1536, 1490, 1406, 1392, 1365, 1235, 1219 *H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 8,52 (1H, d, J =7,7), 7,31 (10H, m), 6,48 (2H, s), 6,30 (1H, d, J = = 7,7), 4,60 (2H, s), 3,03 (2H, m), 2,71 (2H, m)

Kyselina [l,2-dihydro-2-oxo-3-(3-fenylpropionyl)amino-l-pyridyl]octová (zlúčenina 52g) sa izoluje s výťažkom 94 % vo forme bezfarebnej pevnej látky s teplotou topenia 195 až 197 °C.

Infračervené spektrum (KBr): 3324, 1724, 1693, 1644,1569, 1555, 1512, 1427, 1370, 1240 'H-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid), hodnoty δ: 9,31 (1H, s), 8,23 (1H, d, J = 6,8), 7,36 (1H, dd, J = 6,8, 1,71), 7,25 (5H, m), 6,25 (1H, t), 4,66 (2H, s), 2,84 (4H, m)

Kyselina 2(R,S)-2-[6-benzyl-l,2-dihydro-2-oxo-3-(3-fenylpropionyl)amino-l-pyridyl]propiónová (zlúčenina 52h) sa pripraví hydrolýzou zlúčeniny 51h vo vodnom tetrahydrofuráne počas 5 hodín pri teplote 40 °C, čím sa získa 95 % požadovanej zlúčeniny vo forme žltého oleja.

Infračervené spektrum (film): 3330, 1734, 1686, 1643, 1600, 1587, 1553, 1524, 1498, 1208 *H-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid), hodnoty δ: 9,29 (1H, s), 8,18 (1H, d, J = 7,6), 7,21 (10H, m), 6,22 (1H, d, J = 7,6), 4,82 (1H, q, J = 6,6), 4,08 (2H, m), 2,76 (4H, m), 1,05 (3H, d, J = 6,6)

Kyselina [3-(acetyl-Tyr(benzyl))amino-6-benzyl-l,2-di-hydro-2-oxo-l-pyridyl]octová (zlúčenina 52i) sa izoluje s výťažkom 93 % vo forme peny.

Infračervené spektrum (KBr): 3302, 1731, 1646, 1603, 1562, 1512, 1454, 1428, 1379, 1231, 1178 ’H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 9,48 (1H, s), 8,36 (1H, d, J = 7,6), 7,30 (8H, m), 7,10 (2H, m), 6,85 (2H, d, J = 8,3), 6,91 (2H, d, J = 8,3), 6,71 (1H, d, J = 7,6), 4,95 (1H, m), 4,90 (2H, s), 4,68 (2H, s), 3,92 (2H, s), 3,17 - 2,83 (2H, m), 1,97 (3H, s)

Kyselina [6-benzyl-l,2-dihydro-2-oxo-3-(2-fenyletánsulfonyl)amino-l-pyridyl]octová (zlúčenina 52j) sa izoluje s výťažkom 100 % vo forme bezfarebnej pevnej látky s teplotou topenia 165 - 167 °C.

Infračervené spektrum (KBr): 3174, 1760, 1646, 1593, 1567, 1497, 1453, 1424, 1326, 1225, 1140, 1127 'H-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid), hodnoty δ: 13,09 (1H, s), 9,08 (1H, s), 7,30 (11H, m), 6,02 (1H, d), 4,68 (2H, s), 4,99 (2H, s), 3,29 (2H, m), 3,03 (2H, m)

Kyselina [6-benzyl-l,2-dihydro-2-oxo-3-(2-fenyletoxy)-karbonylamino-l-pyridyl]octová (zlúčenina 52k) sa pripraví s výťažkom 70 % hydrolýzou zlúčeniny 49i počas 1 hodiny pri teplote 60 °C.

Infračervené spektrum (dichlórmetán): 1797, 1689, 1649, 1601, 1512, 734 *H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 8,39 (1H, s), 8,03 (1H, d), 7,81 (1H, S), 7,33 - 7,07 (10H, m), 6,13 (1H, d, J = 7,8), 4,72 (2H, s), 4,33 (2H, t, J = 7,0), 3,86 (2H, S), 2,93 (2H, t, J = 7,0)

Kyselina [6-benzyl-l,2-dihydro-2-oxo-3-(4-fenylbutyryl)-amino-l-pyridyl]octová (zlúčenina 521) sa izoluje s výťažkom 100 % vo forme bielej peny s teplotou topenia 159 až 161 °C.

Infračervené spektrum (KBr): 3373 - 3310, 1787, 1726, 1691, 1649, 1599, 1567, 1517, 1367, 1215 ’H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 8,43 (1H, d, J =7,7), 8,25 (1H, S), 7,37 - 7,09 (10H, m), 6,21 (1H, d, J = 7,7), 4,73 (2H, s), 4,15 (3H, s), 3,91 (2H, s), 2,67 (2H, t), 2,39 (2H, t), 2,02 (2H, m)

(Bn = benzyl)

2(S),N-3(S)2-[l,2-Dihydro-2-oxo-3-(3-fenylpropionyl)amino-l-pyridyl]-N-(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)propionamid (zlúčenina 53a)

K miešanej zmesi 1,1 g (3,49 mmol) kyseliny S(2)-2-[l,2-dihydro-2-oxo-3-(3-fenylpropionyl)amino-l-pyridyljpropiónovej (zlúčeniny 52a), 1,02 g (3,49 mmol) 3(S), 2(R,S) 3-allyloxykarbonylamino-2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuránu (Chapman, Biorg. Med. Chem. Lett.. 2, str. 613 - 18 (1992), 55 mg bis(trifenylfosfin)paládium(II)chloridu, 35 ml dichlórmetánu a 1 ml dimetylformamidu sa po kvapkách pridá 1,7 ml (6,3 mmol) tri-n-butylcínhydridu. Výsledná zmes sa mieša počas 5 minút a potom sa pridá 946 mg (7 mmol) 1-hydroxybenzotriazolu. Zmes sa ochladí na teplotu 0 “C a potom sa pridá 740 mg (3,84 mmol) l-(3-dimetylaminopropyl)-2-etylkarbodiimid-hydrochloridu. Zmes sa uchováva cez noc pri izbovej teplote a potom sa vyleje do etylacetátu. Zmes sa premyje dvakrát IM kyselinou chlorovodíkovou, dvakrát vodným hydrogenuhličitanom sodným a potom roztokom chloridu sodného. Zmes sa vysuší síranom horečnatým a zahustí. Zvyšok sa trituruje s pentánom. Zvyšná pevná látka sa vyčistí flash chromatografiou s použitím 40 - 60 % etylacetátu v hexáne ako elučného činidla, čím sa získa 1,28 g (73 %) bezfarebnej pevnej látky. Infračervené spektrum (KBr): 1796,1692, 1647, 1595,1557,1512, 1119 *H-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid), hodnoty δ: 9,28, 9,26 (1H, 2 X s), 8,77, 8,69 (1H, 2 X d), 8,24, 8,20 (1H, 2 x dd), 7,20 (11H, m), 6,31, 6,26 (1H, 2 x t), 5,65 (0,5H, d), 5,46 (0,5H, d), 5,41, 5,28 (1H, 2 x q), 4,7 (2,5H, m), 4,24 (0,5H, t), 3,24 (2H, m), 2,80 (4H, m), 1,51, 1,46 (3H, 2 x d)

Nasledujúce zlúčeniny sa pripravia podobným spôsobom:

N(3(S))2-[6-Benzyl-l,2-dihydro-2-oxo-3-(2-fenylpropionyl)amino-l-pyridyl]-N-(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)-acetamid (zlúčenina 53b) sa získa s výťažkom 86 % vo forme peny.

Infračervené spektrum (KBr): 3345, 3297, 1807, 1791, 1688, 1679, 1650, 1602, 1554, 1525, 1497, 1453, 1372, 1257, 1119 ’H-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid), hodnoty δ: 9,25 (0,5H, s), 9,23 (0,5H, S), 8,75 (0,5H, d, J = 6,5), 8,67 (0,5H, d, J = 7,4), 8,18 (1H, 2d), 7,21 (15H, m), 6,07 (1H, 2d), 5,65 (0,5H, d, J = 5,0), 5,38 (0,5H, s), 4,83 -

- 4,45 (4,5H, m), 4,19 (0,5H, m), 3,94, 3,83 (2H, m), 3,10 - 2,31 (6H, m)

N(3(S))2-[l,2-Dihydro-2-oxo-6-fenyletyl-3-(3-fenylpropionyl)amino-l-pyridyl]-N-(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-4-yl)acetamid (zlúčenina 53c) sa získa s výťažkom 74 % vo forme zmesi anomérov.

'H-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid), hodnoty δ: 9,71 (1H, d), 9,41 (0,5H, d), 9,25 (0,5H, d), 8,64 (1H, d, J = 7,7), 7,75 (15H, m), 6,61 (1H, 2d), 6,11 (0,5H, d), 5,93 (0,5H, s), 5,17 (5H, m), 4,77 (0,5H, m), 3,68 -

- 2,94 (2H, m), 3,32 (8H, m)

N(3(S)) 2-[6-Butyl-l,2-dihydro-2-oxo-3-(3-fenylpropionyl)amino-l-pyridyl]-N-(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)acetamid (zlúčenina 53d) sa získa s výťažkom 74 % vo forme zmesi anomérov. Infračervené spektrum (KBr): 3300, 1791, 169, 1645, 1597, 1566, 1546, 1514, 1454, 1417, 1378 'H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 8,38 (1H, d, J = 7,7), 8,13 (1H, s), 7,30 (10H, m), 6,18 (1H, t),

5,47 (0,5H, d, J= 5,2), 5,43 (0,5H, s), 4,75 (4,5H, m), 4,38 (0,5H, m), 3,08 - 2,35 (8H, m), 1,43 (4H, m), 0,95 (3H, t)

N(3(S))2-[l,2-Dihydro-6-metyl-2-oxo-3-(2-fenylpropionyl)amino-l-pyridyl]-N-(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)-acetamid (zlúčenina 53e) sa získa s výťažkom 67 % vo forme zmesi anomérov. Infračervené spektrum (KBr): 3282, 1774, 1667, 1651, 1596, 1561, 1556, 1498, 1265, 1254, 1236, 1199, 1143 'H-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid), hodnoty δ: 9,17 a 9,15 (1H, 2 x s), 8,89 (0,5H, d, J = 6,5), 8,73 (0,5H, d, J = 7,4), 7,25 (10H, m), 6,13 (1H, t), 5,64 (0,5H, d, J = 5,0), 5,45 (0,5H, s), 4,89 - 4,61 (4,5H, m), 4,26 (0,5H, m), 3,17 - 2,36 (6H, m), 2,23 a 2,15 (3H, 2s)

N(3(S))2-[l,2-Dihydro-2-oxo-6-fenyl-3-(3-fenylpropionyl)amino-l-pyridyl]-N-(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)-acetamid (zlúčenina 53f) sa získa s výťažkom 73 % vo forme zmesi anomérov. Infračervené spektrum (KBr): 3296, 1792, 1691, 1643, 1595, 1561, 1514, 1489, 1453, 1420, 1373, 1230, 1118 'H-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid), hodnoty δ: 9,40, 9,36 (1H, 2s), 8,70 (0,5H, d, J = 7,6), 8,52 (0,5H, d, J = 7,5), 8,29 (1H, dd), 7,25 (15H, m), 6,20 (1H, d, J = 7,6), 5,61 (0,5H, d, J = 5,0), 5,28 (0,5H, s), 4,78 - 4,20 (5H, m), 3,12-2,24 (6H, m)

N(3(S))2-[l,2-Dihydro-2-oxo-3-(3-fenylpropionyl)amino-l-pyridyl]-N-(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)acetamid (zlúčenina 53g) sa získa s výťažkom 70 % vo forme zmesi anomérov.

Infračervené spektrum (KBr): 3336, 3290, 1791, 1691, 1646, 1595, 1582, 1556, 1518, 1454, 1376, 1351, 1150,1122 'H-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid), hodnoty δ: 9,26 (1H, 2s), 8,86 (0,5H, d, J = 6,4), 8,67 (0,5H, d, J = = 7,5), 8,23 (1H, m), 7,40 - 7,13 (11H, m), 6,24 (1H, 2t, J = 7,2), 5,61 (0,5H, d, J = 5,0), 5,44 (0,5H, s), 4,83 -

- 4,59 (2,5H, m), 4,25 (0,5H, m), 3,15 - 2,34 (2H, m), 2,94 - 2,70 (4H, m)

Analýza pre C27H27N3O6.H2O:

vypočítané: 63,90 % C, 5,76% H, 8,28% N; nájdené: 63,70% C, 5,68% H, 8,22% N.

Hmotnostná spektrometria (FAB): M⁺ = 490 (M + 1)

2(R,S),N(3(S))2-[6-Benzyl-l,2-dihydro-2-oxo-3-(3-fenylpropionyl)amino-l-pyridyl]-N-(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)propionamid (zlúčenina 53h) sa získa s výťažkom 89 % vo forme zmesi diastereomérov. Uvedené údaje sú pre jediný diastereomér.

Infračervené spektrum (film): 3356, 1788, 1677, 1645,1602, 1517, 1455, 1377, 1203, 1167, 1120 'H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 8,34 (1H, d, J = 7,6), 8,19 (1H, s), 7,38 - 7,13 (10H, m), 6,26 (1H, d, J = 7,6), 5,58 (1H, t), 5,31, 4,24 (1H, 2 x s), 4,62 (2H, 2q), 4,60 (1H, m), 4,27 (1H, m), 2,98, 2,68 (4H, 2m), 3,0 - 2,0 (2H, m), 1,42 (3H, d)

N(3(S)) 2-[6-Benzyl-l,2-dihydro-2-oxo-3-(N-acetyl-O-benzyltyrozinyl) amino-l-pyridyl]-N-(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofiiran-3-yl)acetamid (zlúčenina 53i) sa získa s výťažkom 76 % vo forme zmesi anomérov. Infračervené spektrum (KBr): 1794, 1698, 1651, 1612,1514, 1454, 1374, 1247, 1177, 1126 ‘H-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid), hodnoty δ: 9,34, 9,31 (2 x 0,5H, 2s), 8,71 (1H, 2d), 8,38 (1H, m), 8,17 (1H, d), 7,48 - 6,88 (19H, m), 6,08 (1H, 2d), 5,65 (0,5H, d, J = 5,0), 5,40 (0,5H, s), 5,04 (2H, s), 4,68 (5,5H, m), 4,15 (0,5H, m), 3,95, 3,84 (2H, s + abq), 3,20 - 2,40 (4H, m), 1,78 (3H, s)

N(3(S))2-[6-Benzyl-l,2-dihydro-2-oxo-3-(2-fenyletánsulfonyl)amino-l-pyridyl]-N-(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)acetamid (zlúčenina 53j) sa získa s výťažkom 78 % vo forme zmesi anomérov. Infračervené spektrum (KBr): 3344, 1792, 1691, 1647, 1599, 1566, 1454, 1365, 1150, 1121, 973 'H-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid), hodnoty δ: 9,02, 8,99 (1H, 2s), 8,80 (0,5H, d, J = 6,4), 8,70 (0,5H, d, J = 7,4), 7,26 (15H, m), 6,00 (1H, dd), 5,63 (0,5H, d, J = 5,0), 5,39 (0,5H, s), 4,68 (4,5H, m), 4,18 (0,5H, m),

3,90 (2H, m), 3,30 - 2,30 (6H, m)

N(3(S))2-[6-Benzyl-l,2-dihydro-2-oxo-3-(2-fenyletoxy)-karbonylamino-l-pyridyl]-N-(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)acetamid (zlúčenina 53k) sa získa s výťažkom 78 % vo forme zmesi anomérov. Infračervené spektrum (KBr): 3386, 1794, 1726, 1650, 1603, 1518, 1366, 1214, 699 ’H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 8,03 (1H, široký d), 7,63, 7,61 (1H, 2 x s), 7,34 - 7,04 (15H, m), 6,21, 6,18 (1H, 2d), 5,44 (0,5H, d, J = 5,4), 5,37 (0,5H, s), 4,85, 4,83 (1H, 2d, J = 11,6, 11,5), 4,61 - 4,48,

4,32 (4H, 2m), 4,4 (2H, t), 4,08, 4,03 (2H, 2 široký s), 3,07 - 2,78 (3H, m), 2,47 - 2,30 (1H, m)

N(3(S))2-[6-Benzyl-l,2-dihydro-2-oxo-3-(4-fenylbutyryl)amino-l-pyridyl]-N-(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl) -acetamid (zlúčenina 531) sa získa s výťažkom 86 % vo forme bezfarebného oleja. Infračervené spektrum (dichlórmetán): 1797, 1689, 1649, 1601, 1512, 734 ’H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 8,42, 8,40 (1H, 2d, J = 7,6), 7,35 - 7,07 (15H, m), 6,21, 6,19 (1H, 2d, J = 7,6), 5,44 (0,5H, d), 5,37 (0,5H, s), 4,84, 4,81 (1H, 2d, J = 11,7, 11,4), 4,73 - 4,48, 4,34 (4H, 2m), 4,05 (2H, m), 3,05 - 2,63, 2,46 - 2,30 (6H, 2m), 2,01 (2H, m)

^CO,H

H (Bn » benzyl)

	R1	R2	R3
(a)	fenyl-(CH2)2-CO-	H	(S)-metyl
(b)	fenyl-(CH2)2-CO-	-CH2-fenyl	H
(c)	fenyl-(CHa)2-CO-	-(CH2)2-fenyl	H
(d)	fenyl-(CH2)2-CO-	n-butyl	H
(e)	fenyl-(CH2)2-CO-	metyl	H
(f)	fenyl-(CH2)2-CO-	fenyl	H
(g)	fenyl-(CH2)2-CO-	H	H
(h)	fenyl-(CH2)2-CO-	-CH2-fenyl	(R,S)-metyl)
(i)	Acetyl-Tyr	-CH2-fenyl	H
0)	fenyl-(CH2)2-SO2-	-CH2-fenyl	H
(k)	fenyl-(CH2)2-OCO-	-CH2-fenyl	H
(1)	fenyl-(CH2)3-CO-	-CH2-fenyl	H

Kyselina (3(S),N(2(S))3-(2-(l,2-dihydro-2-oxo-3-(3-fenylpropionylamino-l-pyridyl)propionylamino)-4-oxobutánová (zlúčenina 54a, F)

Zmes 1,28 g (2,5 mmol) (2(S),N-3(S)) 2-[l,2-dihydro-2-oxo-3-(3-fenylpropionyl)amino-l-pyridyl]-N-(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)propionamidu (zlúčeniny 53a), 140 ml metanolu, 60 ml etylacetátu a 10 % paládia na uhlí (1,4 g) sa mieša v atmosfére vodíka. Po 2,5-hodinách sa pridá ďalších 300 mg katalyzátora a v hydrogenácii sa pokračuje počas ďalšej 1 hodiny. Zmes sa prefiltruje cez celit a potom sa opäť prefiltruje cez nylonový filter (0,2 μΜ) a zahustí. Zvyšný olej sa trituruje so zmesou metanolu a éteru, čím sa získa 916 mg (87 %) bezfarebných kryštálov s teplotou topenia 198 až 200 °C.

[oc]d²⁸ -120 ° (c = 0,1, metanol) Infračervené spektrum (KBr): 3330, 1794, 1688, 1644, 1583, 1556, 1515, 1427 'H-NMR (perdeuterometanol), hodnoty δ: 8,28 (1H, d), 7,35 (1H, d), 7,20 (5H, m), 6,36 (1H, t), 5,49, (1H, q), 4,59 (1H, t), 4,25 (1H, m), 2,98, 2,74 (2 x 2H, 2 x m), 2,59 (2H, m), 1,57 (3H, d)

Analýza pre C₂iH₂₃N₃O₆ ,0,75H₂O: vypočítané: 59,08 % C, 5,78% H, 9,84% N;

nájdené: 59,24 % C, 5,96 % H, 9,84% N.

Hmotnostná spektrometria (FAB): M⁺ = 414 (M + 1), 297,165,91

Nasledujúce zlúčeniny sa pripravia podobným spôsobom:

Kyselina 3(8)3-( 6-benzyl-l,2-dihydro-2-oxo-3-(3-fenyl-propionyl)amino-l-pyridyl)acetylamino-4-oxobutánová (zlúčenina 54b, M) sa izoluje s výťažkom 59 % vo forme bezfarebných kryštálov topiacich sa pri rozklade pri teplote 115 °C.

Infračervené spektrum (KBr): 3440, 3297, 1718, 1646, 1598, 1565, 1526, 1496, 1260 *H-NMR (perdeuterometanol), hodnoty δ: 8,25 (1H, d, J =7,7), 7,25 (10H, m), 6,15 (1H, 2d, vždy J = 7,7),

4,73 (2H, 2q), 4,59 (1H, m), 4,30 (1H, m), 3,95 (2H, s), 2,98 (2H, m), 2,75 (2H, m), 2,8 - 2,42 (2H, m)

8.37 % N;

8.38 % N.

Analýza pre C₂₇H₂₇N₃O₆ ,0,7H₂O: vypočítané: 64,58 % C, 5,70 % H, nájdené: 64,51% C, 5,63 % H,

Hmotnostná spektrometria (FAB+): M+ = 490 (M + 1)

Kyselina 3(S)3-(l,2-dihydro-2-oxo-6-fenyletyl-3-(3-fenylpropionyl)amino-l-pyridyl)acetylamino-4-oxobutánová (zlúčenina 54c) sa izoluje s výťažkom 46 % vo forme bielej pevnej látky.

Infračervené spektrum (KBr): 3375, 1694, 1643, 1586, 1561, 1515, 1377, 1254, 1188, 1070 ’H-NMR (perdeuterometanol), hodnoty δ: 8,18 (1H, d, J = 7,8), 7,22 (10H, m), 6,15 (1H,' d, J = 7,8), 4,75 (2H, s), 4,58 (1H, m), 4,30 (1H, m), 3,01 - 2,28 (10H, m)

Hmotnostná spektrometria (FAB+): M+ = 504 (M + 1)

Kyselina 3(S)3-(6-butyl-l,2-dihydro-2-oxo-3-(3-fenylpropionyl)amino-l-pyridyl)acetylamino-4-oxobutánová (zlúčenina 54d) sa izoluje s výťažkom 90 % vo forme bezfarebných kryštálov s teplotou topenia 120 -

- 125 °C.

Infračervené spektrum (KBr): 3315, 1784, 1679, 1644, 1589, 1561, 1556, 1520, 1415, 1379, 1186 'H-NMR (perdeuterometanol), hodnoty δ: 8,22 (1H, d, J = 7,8), 7,24 (5H, m), 6,22 (1H, d, J = 7,8), 4,80 (2H, m), 4,60 (1H, s), 4,28 (1H, m), 2,98 (2H, m), 2,72 (2H, m), 2,58 (4H, m-), 1,48 (4H, m), 0,97 (3H, t, J = 7,1) Analýza pre C₂₄H₂₉N₃O6 .0,5H₂O: vypočítané: 62,06 % C, 6,51 % H, nájdené: 62,08 % C, 6,43 % H,

Hmotnostná spektrometria (FAB+ ): M+ = 456(M + 1)

Kyselina 3(S) 3-( 1,2-dihydro-6-metyl-2-oxo-3-(3-fenylpropionyl)amino-l-pyridyl)acetylamino-4-oxobutánová (zlúčenina 54e) sa izoluje s výťažkom 85 % vo forme bezfarebnej pevnej látky s teplotou topenia 129- 138 °C.

Infračervené spektrum (KBr): 327, 3294, 1710, 1695, 1682, 1554, 1525, 1379, 1272, 1240 ’H-NMR (perdeuterometanol), hodnoty δ: 8,19 (1H, d, J=7,6), 7,19 (5H, m), 6,21 (1H, d, J = 7,6), 4,80 (2H, m), 4,59 (1H, m), 4,30 (1H, m), 2,98 (2H, m), 2,72 (2H, m), 2,80 - 2,40 (2H, m), 2,30 (3H, s)

Analýza pre C₂iH₂₂N₃O₆.H₂O: vypočítané: 58,46 % C, 5,84 % H, nájdené: 58,82 % C, 6,05 % H,

Kyselina 3(S)3-(l,2-dihydro-2-oxo-6-fenyl-3-(3-fenyl-propionyl)amino-l-pyridyl)acetylamino-4-oxobutánová (zlúčenina 54f) sa izoluje s výťažkom 73 % vo forme špinavobielej pevnej látky topiacej sa pri rozklade pri teplote 140 °C.

[a]_D ²⁴ - 8,5 ° (c = 0,1, metanol)

Infračervené spektrum (KBr): 3302, 1796, 1726, 1679, 1643, 1590, 1560, 1516, 1490, 1449, 1420, 1398, 1376, 1231 'H-NMR (perdeuterometanol), hodnoty δ: 8,36 (1H, d), 7,49 - 7,14 (10H, m), 6,27 (1H, dd), 4,54 (3H, m),

4,30 (1H, m), 3,0, 2,73 (2 x 2H, 2 x m), 2,7 - 2,29 (2H, m)

Kyselina 3(S)3-(l,2-dihydro-2-oxo-3-(3-fenylpropionyl)-amino-l-pyridyl)acetylamino-4-oxobutánová (zlúčenina 54g, G) sa izoluje s výťažkom 73 % vo forme peny topiacej sa pri rozklade pri teplote 140 -

- 145 °C.

Infračervené spektrum (KBr): 3352, 3314, 1719, 1700,1668, 1649, 1600, 1559, 1514, 1379, 1261 ’H-NMR (perdeuterometanol), hodnoty δ: 8,32 (1H, d, J = 7,5), 7,19 (6H, m), 6,34 (1H, t), 5,1 - 4,6 (3H, m),

4,32 (1H, m), 2,7 (6H, m) Analýza pre C₂oH₂iN₃06.0,6H₂0: vypočítané: 58,50 % C, 5,45 % H, nájdené: 58,43 % C, 5,35 % H,

Hmotnostná spektrometria (FAB+): M⁺ - 400 (M+l)

Kyselina (3(S),N(2(R,S))3-(2-(6-benzyl-l,2-dihydro-2-oxo-3-(3-fenylpropionyl)amino-l-pyridyl)propionylamino-4-oxo-butánová (zlúčenina 54h) sa získa s výťažkom 69 % vo forme bezfarebnej peny s teplotou topenia 120 °C.

[a]_D ²⁰ -16,0 ° (c =0,11, dichlórmetán)

Infračervené spektrum (KBr): 3315, 1783, 1727, 1666, 1644, 1599, 1564, 1517, 1454, 1379 'H-NMR (perdeuterometanol), hodnoty δ: 8,23 (1H, m), 7,27 (10H, m), 6,28 (1H, m), 4,84 (1H, m), 4,53 (1H, m), 4,22 (1H, m), 4,10 (2H, m), 2,96 (2H, m), 2,72 (2H, m), 2,39 (2H, m), 1,21 (3H, m) Analýza pre Ο₂₈Η₂₉Ν₃Ο₆ .1,25H₂O: vypočítané: 63,93 % C, 6,03 % H, nájdené: 63,98 % C, 5,85 % H,

Hmotnostná spektrometria (FAB(+)): M⁺ = 504 (M + 1)

Kyselina 3-(S) 3-(3-(2-acetyl-L-tyrozinyl)amino-6-benzyl-l,2-dihydro-2-oxo-l-pyridyl)acetylamino-4-oxobutánová (zlúčenina 54i) sa izoluje s výťažkom, 79 % vo forme bezfarebných kryštálov topiacich sa pri

9,05 % N;

9,01 %N.

9,74 % N;

9,42 % N.

10,24% N;

9,85 % N.

7,99 % N

7,86 % N.

rozklade pri teplote 193 až 196 °C.

Infračervené spektrum (KBr): 3284, 1644, 1599, 1565, 1519, 1455, 1429, 1407, 1375, 1267, 1251 ’H-NMR (zmes perdeuterodimetylsulfoxidu a deuterochloroformu), hodnoty δ: 8,16 (1H, d, J = 7,7), 7,26 (5H, m), 7,03 (2H, d, J = 8,4), 6,61 (2H, d, J = 8,4), 6,03 (1H, d, J = 7,7), 4,58 (3H, m), 4,44 (1H, m), 4,13 (1H, m), 3,84 (2H, s), 3,07 - 2,30 (4H, m)

Analýza pre C₂₉H₃oN₄0₈.2H₂0:

vypočítané: 58,19% C, 5,72% H, 9,36% N;

nájdené: 58,11% C, 5,63% H, 9,29% N.

Hmotnostná spektrometria (FAB+): M⁺ = 56 3 (M + 1)

Kyselina 3(S) 3-(6-benzyl-l,2-dihydro-2-oxo-3-(2-fenyl-etánsulfonyl)amino-l-pyridyl) acetylamino-4-oxobutánová (zlúčenina 54j) sa izoluje s výťažkom 85 % vo forme bezfarebnej pevnej látky s teplotou topenia 102- 105 °C.

[a]_D ²³ -9,9 ⁰ (c = 0,1, metanol)

Infračervené spektrum (KBr): 3452, 3328, 3155, 1719, 1679, 1645, 1694, 1567, 1453, 1425, 1357, 1307, 1225, 1148, 1132 *H-NMR (perdeuterometanol), hodnoty δ: 7,52 (1H, d, J = 7,6), 7,33 (10H, m), 6,12 (1H, d, J = 7,6), 4,73 (2H, m), 4,58 (1H, d, J = 3,7), 4,34 (1H, m), 3,97 (2H, s), 3,29 (2H, m), 3,08 (2H, m), 2,75 - 2,37 (2H, m) Analýza pre C₂6H₂7N₃O7S.1,7H₂O:

vypočítané: 56,14% C, 5,51% H, 7,55 % N;

nájdené: 56,20 % C, 5,49% H, 7,29% N.

Hmotnostná spektrometria (FAB+): M⁺ = 526 (M + 1)

Kyselina 3(S)3-(6-benzyl-l,2-dihydro-2-oxo-3-(2-fenyletoxy)karbonylamino-l-pyridyl)acetylamino-4-oxobutánová (zlúčenina 54k) sa izoluje s výťažkom 54 % vo forme špinavobielej pevnej látky s teplotou topenia 84 - 86 °C.

Infračervené spektrum (KBr): 3373 -3310, 1787, 1726, 1691, 1649, 1599, 1567, 1517, 1367, 1215 *H-NMR (perdeuterometanol), hodnoty δ: 7,93 (1H, široký d, J = 7,4), 7,37 - 7,18 (10H, m), 6,15 (1H, d, J = = 7,4), 4,77 (1H, d, J = 3,7), 4,67 a 4,58 (2H, 2m), 4,35 (1H, m), 3,94 (2H, s), 2,98 (2H, t, J = 6,9), 2,76 -

2,39 (2H, m)

Kyselina 3(S)3-(6-benzyl-l,2-dihydro-2-oxo-3-(4-fenyl-butyryl)karbonylamino-l-pyridyl)acetylamino-4-oxobutánová (zlúčenina 541) sa izoluje s výťažkom 50 % vo forme bielej pevnej látky s teplotou topenia 89 - 93 °C.

Infračervené spektrum (KBr): 3369- 3302, 1678, 1645, 1594, 1565, 1517, 1379, 1258 ’H-NMR (perdeuterometanol), hodnoty δ: 8,25 (1H, d, J =7,6), 7,37 - 7,18 (10H, m), 6,15 (1H, d, J = 7,4),

4,74 (2H, m), 4,60 (1H, m), 4,30 (1H, m), 3,97 (2H, s), 2,76 -2,37 (2H, m), 2,67 (2H, t), 2,45 (2H, t), 1,98 (2H, m)

Analýza pre C₂8H₂9N₃O₆.1,5H₂O: vypočítané: nájdené:

63,39 % C, 6,08 % H,

63,69 % C, 5,74 % H,

7,92 % N;

7,83% N.

(t-Bu = terc.butyl, Ph = fenyl)

Terc.butyl-N-2-(3-benzyloxykarbonylamino-l,2-dihydro-2-oxo-l-pyridyl)acetyl-3-amino-5-(2,6-dichlórbenzoyloxy)-4-oxopentanoát (zlúčenina 56a)

Kyselina octová 55a (WO 93 21213) v 2 ml tetrahydrofuránu sa mieša pri izbovej teplote a pridá sa 60 mg (0,448 mmol) 1-hydroxybenzotriazolu a 47 mg (0,246 mmol) dimetylaminopropyl-3-etylkarbodiimid5 hydrochloridu. Po uplynutí 5 minút sa pridajú 2 kvapky vody a v miešaní sa pokračuje počas 20 minút. Pridá sa 6 mg bis(trifenylfosfm)paládium(II)-chloridu a potom roztok 103 mg (0,224 mmol) terc.butyl-3-(allyloxykarbonylamino)-4-oxo-5-(2,6-dichlórbenzoyloxy)pentanoátu (WO 93 16710) v 1 ml tetrahydrofuránu. V priebehu 1 hodiny sa pri izbovej teplote po kvapkách pridá 0,09 ml (0,336 mmol) tributyl-cinhydridu. Zmes sa mieša počas ďalších 3 hodín a vyleje sa do etylacetátu, premyje sa IM kyselinou chlorovodíkovou, 10 vodným hydrogenuhličitanom sodným a roztokom chloridu sodného, vysuší sa nad síranom horečnatým a zahustí sa vo vákuu. Zvyšok sa trituruje s pentánom a supematant sa odstráni. Zvyšná pevná látka sa vyčistí flash chromatografiou s použitím 50 % etylacetátu v hexáne ako elučného činidla, čím sa získa 92 mg (63 %) zlúčeniny uvedenej v titule vo forme bezfarebného oleja.

[a]_D ²⁶ -29,6 ° (c = 1,1, dichlórmetán)

Infračervené spektrum (film): 3377, 3365, 3332, 3312, 1733, 1691, 1650, 1599, 1515, 1366, 1261, 1153, 1068, 747 ’H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 8,09 (1H, d, J = 6,8), 7,84 (1H, s), 7,58 (1H, d, J = 8,3), 7,33 (8H, m), 7,02 (1H, dd, J = 6,9, 1,7), 6,33 (1H, t, J = 7,2), 5,20 (2H, s), 5,12 (2H, m), 4,89 (1H, dt), 4,65 (2H, m), 2,80 (2H, m), 1,38 (9H, s)

Terc.butyl-N-2-(6-benzyl-l,2-dihydro-2-oxo-3-(3-fenyl-propionyl)amino-l-pyridyl)acetyl-3-amino-5-(2,6-dichlórbenzyloxy)-4-oxopentanoát (zlúčenina 56b) sa pripraví spôsobom opísaným v prípade zlúčeniny 56a, pričom sa získa zlúčenina uvedená v titule s výťažkom 66 % vo forme bezfarebného oleja.

Infračervené spektrum (film): 3364, 3313, 1738, 1688,1648, 1600, 1566, 1514, 1433, 1369, 1254, 1152 ’H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 8,40 (1H, d, J =7,6), 8,30 (1H, s), 7,28 (13H, m) 6,20 (1H, d, J = 25 = 7,6), 5,12 (2H, q), 4,86 (1H, m), 4,65 (2H, q), 4,06 (2H, s), 3,07 - 2,61 (6H, m), 1,3,9 (9H, s)

5ó

R1	R2	R3
O
II
(8) PhCH2O'x^'	H	H
O
(b) PhCH^Hj^	-CHj-P h	H

(tBu = terc.butyl, Ph ** fenyl)

Kyselina N-2-(3-benzoyloxykarbonylamino-l,2-dihydro-2-oxo-l-pyridyl)acetyl-3-amino-5-(2,6-dichlórben30 zoyloxy)-4-oxopentánová (zlúčenina 57a, O)

210 mg (0,356 mmol) esteru 56a v 0,5 ml dichlórmetánu sa ochladí na teplotu 0 °C a pridá sa 0,5 ml kyseliny trifluóroctovej. Zmes sa mieša počas 30 minút a v ich priebehu sa zohreje na teplotu 20 °C. Roztok sa odparí do sucha pri zníženom tlaku, opäť sa rozpustí v dichlórmetáne a zahustí. Tento postup sa urobí trikrát. Zvyšok sa trituruje s etylacetátom a nariedi éterom, čím sa získa 162 mg (85 %) zlúčeniny uvedenej v názve 35 vo forme bezfarebnej pevnej látky, topiacej sa pri rozklade pri teplote 165 - 168 °C.

[a]_D ²³ -38,8 ° (c = 0,1, metanol)

Infračervené spektrum (KBr): 3332, 3275, 1723, 1658, 1649, 1597, 1581, 1562, 1526, 1432, 1385, 1258, 1218, 1206 ’H-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid), hodnoty δ: 8,96 (1H, d, J = 7,3), 8,34 (1H, s), 7,85 (1H, dd, J = 7,3),

7,58 (3H, m), 7,35 (5H, m), 6,29 (1H, t, J = 7,3), 5,26 (2H, m), 5,15 (2H, s), 4,69 (3H, m), 2,75 (2H, m) Analýza pre C27H23N3O9CI2:

vypočítané: 53,66 % C, 3,84 % H, 6,95 % N;

nájdené: 53,36 % C, 3,90% H, 6,81% N.

Hmotnostná spektrometria (+ FAB): 604 (M⁺ + 1), 285,241, 195, 173, 149, 91

Kyselina N-2-(6-benzyl-1,2-dihydro-2-oxo-3-(3-fenylpropionyl) amino-1 -pyridyl) acetyl-3-amino-5-(2,6-dichlórbenzoyloxy)-4-oxopentánová (zlúčenina 57b, P) sa pripraví spôsobom opísaným v prípade zlúčeniny 57a, pričom sa získa zlúčenina uvedená v názve s výťažkom 78 % vo forme bezfarebných kryštálov topiacich sa pri rozklade pri teplote 116 - 120 °C.

[oc]_D ²⁶ -41,1 ⁰ (c = 0,1, metanol)

Infračervené spektrum (KBr): 3299, 1739, 1715, 1689, 1666, 1645, 1598, 1563, 1518, 1432, 1209, 1151 'H-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid), hodnoty δ: 9,24 (1H, s), 8,88 (1H, d, J = 7,6), 8,18 (1H, d, J = 7,7),

7,60 (3H, m), 7,26 (10H, m), 6,06 (1H, d, J = 7,7), 5,23 (2H, ABq), 4,69 (3H, m), 3,93 (2H, s), 2,78 (6H, m) Analýza pre C₃₅H3iN₃O₈Cl₂.H₂O:

vypočítané: 59,16% C, 4,68% H, 5,91% N; nájdené: 59,38 % C, 4,53% H, 5,84% N.

Hmotnostná spektrometria (+ FAB): 694 (Cl = 35, 37), (M⁺ + 1), 692 (Cl = 35, 35) (M⁺ + 1)

(tBu = terc.butyl, Cbz = benzyloxykarbonyl) (3S,4R,S) Terc.butyl-N-(benzyloxykarbonyl)-3-amino-4-(2-benzoxazolyl)-4-hydroxybutanoát (zlúčenina 59)

K miešanému roztoku 250,2 mg (2,1 mmol) benzoxazolu v 10,5 ml bezvodného tetrahydrofuránu sa pri teplote -78 °C v atmosfére dusíka po kvapkách pridá 0,96 ml (2,2 mmol) 2,3M n-butyllítia v hexáne. Zmes sa mieša počas 20 minút pri teplote -78 °C a potom sa pridá 594,0 mg (2,3 mmol) MgBr₂Oetyl₂ v pevnej forme. Výsledná heterogénna zmes sa zohreje na teplotu -45 °C a mieša sa počas 15 minút. Reakčná zmes sa potom opäť ochladí na teplotu -78 °C a po kvapkách sa pridá roztok 644,6 mg (2,1 mmol) aldehydu 58 (Graybill a kol., Int. J. Peptíde Proteín Res., 44, str. 173 - 182 (1993) v 10,5 ml tetrahydrofuránu. Reakčná zmes sa mieša pri teplote -78 °C počas 30 minút, zohreje sa na 0 °C na 1 hodinu a potom sa mieša pri izbovej teplote počas 16 hodín. K reakčnej zmesi sa prileje 2,0 ml 5 % hydrogenuhličitanu sodného a tetrahydrofúrán sa odstráni

100 vo vákuu. Výsledný vodný zvyšok sa extrahuje štyrikrát metylénchloridom. Zmiešané extrakty sa premyjú roztokom chloridu sodného, vysušia sa síranom horečnatým, prefiltrujú a zahustia vo vákuu, čím sa získa 880,0 mg surového produktu. Flash chromatografiou s použitím zmesi etylacetátu a hexánu v pomere 45 : 55 ako elučného činidla sa získa 567,2 mg (63 %) zlúčeniny uvedenej v titule vo forme oleja. Ide o zmes diastereomérov na 4. uhlíku.

Infračervené spektrum (film): 3324, 2976, 1726, 1517, 1455, 1368, 1243, 1159, 1048, 747 'H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,71 - 7,64 (1H, m), 7,52 - 7,48 (1H, m), 7,37 - 7,20 (7H, m), 5,91 (1H, široký d, J = 9,0), 5,79 (1H, d, J = 9,0), 5,41 - 4,78 (4H, m), 4,75 - 4,54 (1H, m), 2,91 - 2,51 (2H, m), 1,42 (9H, s), 1,37 (9H, s) (3S, 4R,S) Terc.butyl-3-amino-4-(2-benzoxazolyl)-4-hydroxybutanoát (zlúčenina 60)

K roztoku 189,0 mg (0,44 mmol) esteru 59 v 5,0 ml etanolu sa pridá 10 % paládium na uhli (20,5 mg) a zmes sa mieša v atmosfére vodíka počas 21 hodín. Zmes sa prefiltruje cez celit a rozpúšťadlo sa odparí, čím sa získa 125,0 g (98 %) surového amínu 60 vo forme oleja, ktorý sa použije bez ďalšieho čistenia.

'H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,73 - 7,64 (1H, m), 7,51 - 7,42 (1H, m), 7,35 - 7,22 (2H, m), 6,48 (3H, široký s), 5,58 (1H, d, J = 3,0), 5,27 (1H, d, J = 6,5), 4,23 - 4,05 (1H, m), 2,92 - 2,63 (2H, m), 1,36 (9H, s), 1,33 (9H, s) (3S,4R,S) terc.butyl-N-(N-benzyloxykarbonyl-(S)-valinyl-(S)-alaninyl)-3-amino-4-(2-benzoxazolyl)-4-hydroxybutanoát (zlúčenina 61)

K roztoku 261,4 mg (0,89 mmol) amínu 60, 286,9 mg (0,89 mmol) benzyloxykarbonyl-Val-Ala-OH (pripraveného pomocou štandardných postupov syntézy peptidov) a 120,3 mg (0,89 mmol) hydroxybenzotriazolu v 3,0 ml dimetylformamidu sa pri teplote 0 °C pridá 179,2 mg (0,93 mmol) l-etyl-3-[3-(dimetylamino)propyljkarbodiimid-hydrochloridu. Reakčná zmes sa zohreje na izbovú teplotu a mieša sa počas 16 hodín. Potom sa reakčná zmes nariedi etylacetátom a premyje sa dvakrát IM hydrogénsíranom sodným, dvakrát nasýteným roztokom hydrogenuhličitanu sodného, potom vodou a roztokom chloridu sodného. Organická vrstva sa vysuší síranom horečnatým, prefiltruje a zahustí vo vákuu, čím sa získa 494,8 mg surového produktu. Flash chromatografiou s použitím zmesi metylénchloridu a metanolu v pomere 95 : 5 ako elučného činidla sa získa 480,9 mg (91 %) zlúčeniny uvedenej v titule vo forme žltej pevnej látky s teplotou topenia 81 - 83 °C.

Infračervené spektrum (KBr): 3312, 2974, 1723, 1709,1529, 1455, 1368, 1243, 1156, 747 'H-NMR (deuterochlorof orm), hodnoty δ: 7,79 (0,5H, d, J = 8,0), 7,73 - 7,20 (9,5H, m), 6,15 (1H, t, J = 8,5),

5,74 (0,5H, široký d, J = 5,5), 5,45 (1H, široký d, J = 7,5), 5,28 - 5,20 (0,5H, m), 4,82 - 4,11 (3,5H, m), 4,78 - 4,55 (1H, m), 4,40 - 4,22 (1H, m), 2,95 - 2,51 (2H, m), 2,12 - 1,95 (1H, m), 1,45 - 1,32 (12H, m), 1,11 -0,81 (6H, m) ¹³C-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 173,14, 172,94, 171,82, 171,03, 170,78, 165,98, 165,45, 157,29, 157,17, 151,23, 151,10, 140,92, 140,82, 136,83, 136,79, 128,91, 128,52, 125,75, 124,97, 120,60, 120,40, 111,38, 81,82, 81,68, 70,27, 68,97, 67,44, 60,43, 50,74, 50,55, 49,18, 49,07, 36,87, 36,57, 32,37, 28,51, 19,88, 19,80, 18,53

Analýza pre C₃iH₄₀N₄O₅.H2O: vypočítané: 60,57 % C, 6,89% H, 9,11% N;

nájdené: 60,84 % C, 6,64 % H, 9,09% N.

Hmotnostná spektrometria (+ FAB): 597 (M⁺ + 1), 541,91 (3S) terc.butyl-N-(benzyloxykarbonyl)-(S)-valinyl-(S)-alanin-yl-3-amino-4-(2-benzoxazolyl)-4-oxobutanoát (zlúčenina 62)

100,3 mg (0,17 mmol) alkoholu 61 sa rozpustí v 2,0 ml metylénchloridu a pridá sa 142,6 mg (0,34 mmol) Dess-Martinov-ho činidla (Ireland a kol., J. Org. Chem., 58, str. 2899 (1993), Dess a kol., J. Org. Chem., 48, str. 4155 - 4156 (1983)). Výsledná zmes sa mieša počas 22 minút a potom sa roztrasie medzi 10 ml zmesi nasýteného tiosíranu sodného a nasýteného hydrogenuhličitanu sodného v pomere 1 : 1 a 10 ml etylacetátu. Výsledná organická fáza sa premyje zmesou nasýteného tiosíranu sodného a nasýteného hydrogenuhličitanu sodného v pomere 1:1, nasýteným hydrogenuhličitanom sodným a roztokom chloridu sodného. Organická fáza sa vysuší síranom horečnatým, prefiltruje a zahustí vo vákuu, čím sa získa 111,3 mg surového produktu. Flash chromatografiou s použitím zmesi metylénchloridu a metanolu v pomere 95 : 5 ako elučného činidla sa získa 97,3 mg (96 %) zlúčeniny uvedenej v titule vo forme oleja.

[cc]_D ²³ -11,74 ° (c = 0,95, dichlórmetán)

Infračervené spektrum (dichlórmetán): 3419, 2974, 1721, 1677, 1501, 1369, 1221, 1156 'H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,89 - 7,84 (1H, m), 7,73 - 7,22 (10H, m), 5,98 (1H, d, J = 9,0), 5,72 (1H, m), 5,10 (2H, q, J = 12,5), 4,73 (2H, m), 4,20 (1H, dd, J = 7,0, 8,5), 3,30 (1H, dd, J = 5,0, 46,5), 3,03 (1H, dd, J = 5,5, 16,5), 2,18 - 1,97 (1H, m), 1,39 (3H, d, J = 7,0), 1,34 (9H, s), 0,93 (3H, d, J = 6,0), 0,90 (3H, d, J = 6,0)

101 ¹³C-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 186,46, 172,73, 171,90, 170,13, 157,17, 156,28, 151,16, 140,99, 136,99, 129,39, 129,08, 128,66, 128,59, 126,49, 123,06, 112,55, 82,73, 67,60, 60,84, 53,75, 49,41, 38,58, 32,05, 28,52,19,85, 19,32, 18,51

Hmotnostná spektrometria (+ FAB): 595 (M⁺ + 1), 539,91 (3S)N-(N-Benzyloxykarbonyl-(S)-valinyl-(S)-alaninyl)-3-amino-4-(2-benzoxazolyl)-4-oxobutanoát (zlúčenina 63, Q)

Roztok 95,0 mg (0,16 mmol) esteru 62 v 10,0 ml zmesi metylénchloridu a kyseliny trifluóroctovej v pomere 1 : 1 sa mieša počas 1 hodiny v suchej atmosfére dusíka. Roztok sa potom zahustí vo vákuu, vyberie sa éterom a opäť sa zahustí. Tento postup sa opakuje šesťkrát, čím sa získa surový produkt vo forme špinavobielej pevnej látky. Flash chromatografiou s použitím zmesi metylénchloridu a metanolu v pomere 95 : 5 ako elučného činidla sa získa 60,0 mg (69 %) zlúčeniny uvedenej v titule vo forme bielej pevnej látky. Produkt jestvuje v perdeuterometanole ako zmes troch izomérov, tvorená ketónovou formou (jeden izomér, tvoriaci 44 %) a jeho acyloxy-ketálovou formou (dva izoméry na 4. atóme uhlíka, tvoriace 56 %). Teplota topenia produktu je 156 - 159 °C.

[ct]_D ²⁶ -45,6 ° (c = 0,13, metanol)

Infračervené spektrum (KBr): 3440, 2967, 1713,1703,1638,1531, 1427 ’H-NMR (perdeuterometanol), hodnoty δ: 7,93 - 7,24 (9H, m), 5,59 (1H, široký t), 5,16 - 5,00 (2H, m), 5,0 - 4,78 (1H, m), 4,50 - 4,22 (1H, m), 3,95 - 3,81 (1H, m), 3,11 (2H, d, J = 6,5), 3,05 - 2,92 (1H, m), 2,70 - 2,39 (1H, m), 2,08 - 1,89 (1H, m), 1,19 - 0,78 (9H, m)

Analýza pre C27H30N4O8.0,5H₂O: vypočítané: 59,22 % C, 5,71% H, 10,23% N;

nájdené: 59,48 % C, 5,36% H, 10,17% N.

Hmotnostná spektrometria (+ FAB): 539 (M⁺ + 1), 91

(a) R'- = OCH,, R² = H (b) R² ® H, R² - OCH₃

(tBu = terc.butyl)

102

7-Metoxybenzoxazol (zlúčenina 65 a)

Zmes 2,62 g (15,5 mmol) 2-nitro-6-metoxyfenolu (EP 3 33176) a 10 % paládia na uhlí (130 mg) v 50,0 ml etanolu sa mieša v atmosfére vodíka počas 75 minút. Zmes sa prefiltruje cez celit a bezprostredne potom sa k nej pridá 32,0 mg kyseliny p-toluénsulfónovej a 6,45 ml (38,8 mmol) trietylortoformiátu. Potom sa zmes zohrieva do varu pod spätným chladičom v atmosfére dusíka. Po 20 hodinách sa pridá 30,0 mg kyseliny o-toluénsulfónovej a 6,45 ml (38,8 mmol) trietylortoformiátu. Po celkovej dobe zohrievania 44 hodín sa reakčná zmes nechá vychladnúť a zahustí sa vo vákuu. Výsledný zvyšok sa vyčistí flash chromatografiou s použitím zmesi etylacetátu a hexánu v pomere 25 : 75 ako elucného činidla, čím sa získa 1,97 g (85 %) zlúčeniny uvedenej v titule vo forme žltej pevnej látky s teplotou topenia 28-31 °C.

Infračervené spektrum (film): 1629, 1497, 1434, 1285, 1097, 'H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 8,09 (1H, s), 7,40 (1H, d, J = 8,0), 7,28 (1H, t, J = 8,0), 6,89 (1H, d, J = 8,0), 4,02 (3H, s) ¹³C-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 152,84, 145,82, 142,50, 139,99, 125,75, 113,42, 108,80,56,97 Analýza pre C₈H₇NiO₂ .0,lH₂O: vypočítané: 63,65 % C, 4,81% H, 9,29% N;

nájdené: 63,43 % C, 4,88 % H, 9,05% N.

Hmotnostná spektrometria (+ FAB): 150 (M⁺ + 1)

4-Metoxybenzoxazol (zlúčenina 65b)

K suspenzii 2,00 g (14,8 mmol) 4-hydroxybenzoxazolu (Musser a kol., J. Med. Chem, , 30, str. 62 - 67 (1987)) v 80,0 ml acetónu sa pridá 2,25 g (16,3 mmol) vysušeného uhličitanu draselného a potom 1,38 ml (22,2 mmol) jódmetánu. Reakčná zmes sa zohrieva do varu pod spätným chladičom v atmosfére dusíka počas

4,5-hodiny, potom sa prefiltruje a zahustí vo vákuu, čím sa získa surový produkt. Výsledný zvyšok sa vyčistí flash chromatografiou s použitím zmesi etylacetátu a hexánu v pomere 25 : 75 ako elučného činidla, čím sa získa 2,0 g (91 %) zlúčeniny uvedenej v titule vo forme bielej kryštalickej pevnej látky s teplotou topenia 72 - 74 °C.

Infračervené spektrum (KBr): 3089, 1619, 1610, 1503,1496, 1322, 1275, 1090, 1071, 780, 741 'H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 8,02 (1H, s), 7,32 (1H, d, J = 8,0), 7,18 (1H, d, J = 8,0), 6,81 (1H, d, J= 8,0), 4,04 (3H, s)

Analýza pre C₈H₇NO₂: vypočítané: 64,42 % C, 4,73% H, 9,39% N;

nájdené: 64,40 % C, 4,84% H, 9,31% N.

Hmotnostná spektrometria (m/z; EI, ionizácia nárazom elektrónov): 149 (M⁺ + 1, 100 %) (3S,4R,S)-terc.butyl-N-(allyloxykarbonyl)-3-amino-4-hydroxy-4-(2-(7-metoxybenzoxazolyl))butanoát (zlúčenina 66a)

K miešanému roztoku 548,6 mg (3,68 mmol) 7-metoxybenzoxazolu 65a v 18,5 ml bezvodného tetrahydrofuránu sa pri teplote -78 °C v atmosfére dusíka po kvapkách pridá 2,47 ml 1,56M roztoku n-butyllítia v hexánoch (3,86 mmol), pri vzniku žlto zafarbeného roztoku. Zmes sa mieša pri teplote -78 °C počas 20 minút a potom sa pridá 1,045 g (4,05 mmol) suchého MgBr₂O-etyl₂ vo forme pevnej látky. Výsledná heterogénna zmes sa zahreje na teplotu -45 °C a mieša sa počas 15 minút. Reakčná zmes sa potom opäť ochladí na teplotu -78 °C a po kvapkách sa pridá roztok 946,4 mg (3,68 mmol) (S)-allyloxykarbonyl-Asp-(terc.butyl)H^lb v 18,5 ml tetrahydrofuránu. Reakčná zmes sa mieša pri teplote -78 °C počas 30 minút, zohreje sa na teplotu 0 °C a mieša sa počas 1 hodiny. Výsledná homogénna reakčná zmes sa zohreje na izbovú teplotu a mieša sa počas 16 hodín. K reakčnej zmesi sa pridá 3,5 ml 5 % roztoku hydrogenuhličitanu sodného a potom sa vo vákuu odstráni tetrahydrofurán. Výsledný vodný zvyšok sa extrahuje šesťkrát metylénchloridom. Zmiešané extrakty sa premyjú roztokom chloridu sodného, vysušia sa síranom horečnatým, prefiltrujú a zahustia vo vákuu, čím sa získa 1,8 g surového produktu. Flash chromatografiou s použitím zmesi etylacetátu a hexánu v pomere 40 : 60 sa získa 1,21 g (81 %) zlúčeniny uvedenej v titule vo forme oleja ako zmesi diastereoizomérov na uhlíku C-4.

Infračervené spektrum (dichlórmetán): 3425, 2983, 1725, 1504, 1290, 1157, 1101 'H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,35 - 7,19 (2H, m), 6,89 - 6,81 (1H, m), 6,00 - 5,57 (2H, m), 5,32 - 5,05 (3H, m), 4,68 - 4,35 (3H, m), 4,01 (3H, s), 2,86 - 2,59 (2H, m), 1,45 (9H, s), 1,41 (9H, s) ¹³C-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 171,18, 171,09, 165,80, 165,30, 156,71, 156,60, 145,65, 142,76, 142,71, 140,82, 140,72, 133,23, 125,81, 125,72, 118,41, 118,21, 113,07, 112,87, 108,95, 82,16, 70,28, 69,98, 66,52, 66,39, 57,03, 52,57, 52,29, 37,83, 36,86, 28,65

Analýza pre C₂oH₂₆N₂0₇.0,6H₂O: vypočítané: 57,57 % C, 6,57% H, 6,72% N;

nájdené: 57,49 % C, 6,34% H, 6,60% N.

Hmotnostná spektrometria (+ FAB): 407 (M⁺ + 1), 351, 307, 154

103 (3S,4R,S)-Terc.butyl-N-(allyloxykarbonyl)-3-amino-4-hydroxy-4-(2-(4-metoxybenzoxazolyl))butanoát (zlúčenina 66b) sa pripraví spôsobom opísaným v prípade zlúčeniny 66a, čím sa získa 1,29 g (26 %, 68 % vzťahujúce sa na spätne izolovaný východiskový materiál) zlúčeniny uvedenej v názve vo forme oleja ako zmesi diastereomérov na uhlíku C-4.

Infračervené spektrum (dichlórmetán): 3400, 1725, 1625, 1505, 1369, 1354, 1281, 1263, 1226, 1158, 1092, 1048 'H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,34 - 7,24 (1H, m), 7,16 (1H, d, J = 8,2), 6,79 (1H, d, J = 7,9), 6,00 - 5,50 (2H, m), 5,30 - 5,05 (3H, m), 4,70 - 4,35 (4H, m), 4,02 (3H, s), 2,90 - 2,45 (2H, m), 1,45 - 1,41 (9H, 2 x s)

Analýza pre C₂₀H₂₆N₂O₇.0,4H₂O: vypočítané: 58,07 % C, 6,53 % H, 6,77% N;

nájdené: 58,09 % C, 6,41% H, 6,63% N.

Hmotnostná spektrometria (+ FAB): 407 (M⁺ 1, 88 %), 351 (100) (3S,4R,S)-Terc.butyl-N-(N-acetyl-(S)-(0-terc.butyl-tyrozinyl-(S)-valinyl-(S)-alaninyl)-3-amino-4-hydroxy-4-(2-(7-metoxy-benzoxazolyl))butanoát (zlúčenina 67a)

K miešanému roztoku 481,9 mg (1,19 mmol) benzoxazolu 66a a 586,3 mg (1,30 mmol) acetyl-Tyr(terc.butyl)-Val-Ala-OH v 3,5 ml metylénchloridu a 3,5 ml dimetylformamidu sa pridá 18,0 mg bis(trifenylfosfm)paládium(II)chloridu a potom po kvapkách 0,80 ml (2,96 mmol) tributylcínhydridu. Pridá sa 320,4 mg (2,37 mmol) hydroxybenzotriazolu a zmes sa ochladí na teplotu 0 °C. Pridá sa 278,2 mg (1,42 mmol) l-etyl-3-[3-(dimetylamino)propyl]karbodiimid-hydrochloridu, zmes sa nechá zohriať na izbovú teplotu a mieša sa počas 16,5-hodiny. Reakčná zmes sa nariedi etylacetátom a premyje sa dvakrát IM roztokom hydrogénsíranu sodného, dvakrát nasýteným roztokom hydrogénuhličitanu sodného, vodou a roztokom chloridu sodného. Organická vrstva sa vysuší síranom horečnatým, prefiltruje a zahustí vo vákuu, čím sa získa 2,0 g surového produktu. Flash chromatografiou sa použitím zmesi metylénchloridu a metanolu v pomere 95 : 5 sa získa 844,0 mg (94 %) zlúčeniny uvedenej v titule vo forme bielej pevnej látky s teplotou topenia 205 °C.

Infračervené spektrum (bromid draselný): 3399, 3304, 2977, 1729, 1643, 1506, 1367, 1290, 1161 'H-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid), hodnoty δ: 8,24 - 7,78 (4H, m), 7,43 - 7,32 (2H, m), 7,23 (2H, d, J = = 8,5), 7,16 - 7,07 (1H, m), 6,93 (2H, d, J = 8,5) 6,52, 6,40 (1H, 2 x d, J = 5,5, J = 5,0), 5,03, 4,78 - 4,49,

4,45 - 4,16 (5H, široký t, 2 x m), 4,05, 4,04 (3H, 2 x s), 3,08 - 2,35 (14H, m), 2,11 - 1,89 (1H, m), 1,83 (3H, s), 1,49 - 1,32, 1,15, 1,0 - 0,81 (27H, s, 2 x m, J = 7,0) ¹³C-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid), hodnoty δ: 175,55, 175,18, 173,88, 173,75, 173,05, 169,23, 157,28, 148,55, 146,16, 143,21, 136,63, 133,55, 128,87, 127,17, 115,78, 111,92, 84,02, 81,50, 71,40, 61,15 60,05, 57,79, 53,39, 51,62,43,76,40,52, 34,58, 32,52, 31,60, 26,35, 23,11, 22,71, 21,76

Analýza pre C₃9H5₅N5Oi₀.0,5H₂O: vypočítané: 61,40% C, 7,40 % H, 9,18% N;

nájdené: 61,43 % C, 7,31% H, 9,07% N.

Hmotnostná spektrometria (+ FAB): 754 (M⁺ + 1), 698, 338, 267 (3S,4R,S)-Terc.butyl-N-(N-acetyl-(S)-(O-terc.butyl-tyrozinyl-(S)-valinyl-(S)-alaninyl)-3-amino-4-hydroxy-4-(2-(4-metoxybenzoxazoIyl) )butanoát (zlúčenina 67b) sa pripraví spôsobom opísaným v prípade zlúčeniny 67a, čím sa získa 1,05 g (94 %) zlúčeniny uvedenej v názve vo forme jemného bieleho prášku, ktorý sa topí pri rozklade pri teplote 210 až 213 °C.

Infračervené spektrum (bromid draselný): 3284, 2977, 1736, 1691, 1632, 1536, 1505, 1452, 1392, 1367, 1258, 1236, 1161, 1091 'H-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid), hodnoty δ: 8,20-7,75 (4H, m), 7,40 - 7,10 (4H, m), 7,00 - 6,80 (3H, m), 6,45, 6,34 (1H, 2 x d, J = 5,3, J = 5,0), 5,00 - 4,10 (5H, m), 4,00, 3,99 (3H, 2 X s), 3,00 - 2,25 (4H, m),

1,95 (1H, m), 1,78 (3H, s), 1,39 - 0,80 (27H, m)

Analýza pre C ₃9Η₅₅Ν5θιο . 0,5H₂O: vypočítané: 61,40% C, 7,40% H, 9,18% N;

nájdené: 61,58% C, 7,38% H, 8,91% N.

Hmotnostná spektrometria (+ FAB): 754 (M⁺ + 1, 30 %) 72 (100) (3S)-Terc.butyl-N-(N-acetyl-(S)-(O-terc.butyl-tyrozinyl-(S)-valinyl-(S)-alaninyl)-3-amino-4-hydroxy-4-(2-(7-metoxybenzoxazolyl))-4-oxobutanoát (zlúčenina 68a)

K miešanej suspenzii 641,0 mg (0,85 mmol) alkoholu 67a v 46,0 ml metylénchloridu sa pridá 1,082 g (2,55 mmol) Dess-Martinovho činidla (Ireland a kol., J. Ora. Chem. 58, str. 2899 (1993), Dess a kol., J. Org. Chem., 48, str. 4155 až 4156 (1983)). Výsledná zmes sa mieša počas 1 hodiny a potom sa roztrasie medzi 86,0 ml zmesi nasýteného tiosíranu sodného a nasýteného hydrogenuhličitanu sodného v pomere 1:1a 86,0 ml etylacetátu. Výsledná organická fáza sa postupne premyje zmesou nasýteného tiosíranu sodného a nasýte104 ného hydrogenuhličitanu sodného v pomere 1:1, nasýteným hydrogenuhličitanom sodným a roztokom chloridu sodného. Organická fáza sa vysuší síranom horečnatým, prefiltruje a zahustí vo vákuu, čím sa získa 660,0 mg surového produktu. Flash chromatografiou s použitím zmesi metylénchloridu a metanolu v pomere 94 : 6 ako elučného činidla sa získa 636,0 mg (100 %) zlúčeniny uvedenej v titule vo forme bielej pevnej látky s teplotou topenia 209 °C.

[oc]_D ²⁴ - 21,8 ° (c = 0,16, metanol)

Infračervené spektrum (bromid draselný): 3395, 3294, 2977, 1722, 1641, 1535, 1505, 1161 *H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 8,43 - 8,16 (1H, m), 7,97 - 7,62 (2H, m), 7,49 - 7,14 (3H, m), 7,08 - 6,95 (3H, m), 6,89 - 6,73 (2H, m), 5,81 - 5,68 (1H, m), 5,16 - 4,86, (2H, m), 4,53 (1H, široký t), 4,03 (3H, s), 3,16 - 2,84 (4H,m), 2,11-1,84 (4H, m), 1,46-1,14 (21H, m), 0,92 - 0,78 (6H, m) ^l3C-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 186,28, 173,39, 171,90, 171,19, 171,03, 169,89, 156,43, 154,75, 146,32, 142,88, 140,983, 132,31, 130,54, 126,98, 124,73, 114,95, 111,42, 82,44, 78,71, 58,92, 57,20, 54,91, 53,47, 48,77, 39,43, 38,15, 32,79, 29,44, 28,60, 23,55, 20,27, 19,70, 19,34

Hmotnostná spektrometria (+ FAB): 752 (M⁺ + 1), 696, 336, 265 (3S)-Terc-butyl-N-(N-acetyl-(S)-(O-terc.butyl-tyrozin-yl-(S)-valinyl-(S)-alaninyl)-3-amino-4-hydroxy-4-(2-(4-metoxy-benzoxazolyl))-4-oxobutanoát (zlúčenina 68b) sa pripraví spôsobom opísaným v prípade zlúčeniny 68a, čím sa získa 420 mg (55 %) zlúčeniny uvedenej v titule vo forme bielej pevnej látky topiacej sa pri rozklade pri teplote 211 až 213 °C.

[ci]d²⁴ - 23,9 ⁰ (c = 0,82, metanol)

Infračervené spektrum (bromid draselný): 3277, 3075, 1723, 1690, 1632, 1530, 1506, 1392, 1366, 1269, 1234, 1160, 1094 ’H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 8,15 (1H, široký s), 7,7 (2H, široký s), 7,46 (1H, t, J = 8,3), 7,24 (2H, d, J = 8,3), 7,10 (1H, široký s), 7,03 (2H, d, J = 8,3), 6,83 (3H, m), 5,74 (1H, q, J = 6,9), 5,00 (2H, m), 4,51 (1H, t, J = 7,0), 4,07 (3H, s), 3,20 - 2,95 (4H, m), 2,00 (4H, m), 1,42 (3H, d, J = 6,8), 1,35 (9H, s), 1,23 (9H, s), 0,86 (6H, d, J = 6,7)

Hmotnostná spektrometria (+ FAB): 752 (M⁺ +1,7 %), 72 (100) (3S)-N-(N-Acetyl-(S)-tyrozinyl-(S)-valinyl-(S)-alaninyl)-3-amino-4-(2-(7-metoxybenzoxazolyl))-4-oxobutanoát (zlúčenina 69a, R)

Roztok 600,0 mg (0,80 mmol) esteru 68a v 65,0 ml zmesi metylénchloridu a kyseliny trifluóroctovej v pomere 1 : 1 sa mieša počas 1 hodiny v suchej atmosfére dusíka. Roztok sa potom zahustí vo vákuu, vyberie sa éterom a opäť zahustí. Tento proces sa opakuje šesťkrát, čím sa získa surový produkt vo forme špinavobielej pevnej látky. Flash chromatografiou s použitím zmesi metylénchloridu a metanolu s gradientom 95 : 5 do 80 : 20 ako elučného činidla sa získa 420,8 mg (83 %) zlúčeniny uvedenej v názve ako hygroskopickej bielej pevnej látky. Táto zlúčeniny jestvuje v perdeuterometanole ako zmes troch izomérov, ktorú tvorí ketoforma (koncentrácia 50 %) a jej acykloxyketoforma (dva izoméry na uhlíku C-4, koncentrácia 50 %). Produkt sa topí pri rozklade pri teplote vyššej ako 150 °C.

[cc]d²⁴ - 33,2 ° (c = 0,17, metanol)

Infračervené spektrum (bromid draselný): 3300, 1715, 1658, 1650, 1531, 1517, 1204 *H-NMR (perdeuterometanol), hodnoty δ: 7,46 - 7,19 (2H, m), 7,16 - 6,91 (3H, m), 6,70 - 6,59 (2H, m),

5,62 - 5,49 (1H, m), 5,00 - 4,72 (1H, nejasné m), 4,69 - 4,51 (1H, m), 4,49 - 4,08 (2H, m), 4,05 - 3,89 (3H, m), 3,16 - 2,47 (4H, m), 2,05 - 1,78 (4H, H), 1,41 - 1,11, 1,05 - 0,70 (9H, 2 X m)

Analýza pre C₃iH₃₇N5O₁₀.3H₂O: vypočítané: 53,67 % C, 6,25 % H, 10,10% N;

nájdené: 53,76% C, 5,56% H, 10,28% N.

Hmotnostná spektrometria (+ FAB): 640 (M⁺ + 1), 435, 147 (3S)-Terc.butyl-N-(N-acetyl-(S)-tyrozinyl-(S)-valinyl-(S)-alaninyl)-3-amino-4-(2-(4-metoxybenzoxazolyl))-4-oxobutanoát (zlúčenina 69b, S) sa pripraví spôsobom opísaným v prípade zlúčeniny 69a, čím sa získa 252 mg (96 %) hygroskopickej zlúčeniny uvedenej v titule. Táto zlúčenina jestvuje v perdeuterometanole ako zmes troch izomérov, ktorú tvorí ketoforma a jej cykloxyketoforma (dva izoméry na uhlíku C-4). V perdeuterodimetylsulf oxide jestvuje tento produkt ako jediný izomér. Topí sa pri rozklade pri teplote 200 - 203 °C. [oc]_D ²⁴ - 38,0 ° (c = 0,23, metanol)

Infračervené spektrum (bromid draselný): 3289, 2968, 1718, 1713, 1658, 1634, 1548, 1547, 1506, 1461, 1453, 1393, 1369, 1268, 1228, 1174, 1092 'H-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid), hodnoty δ: 9,20 (1H, široký s), 8,71 (1H, d, J = 6,2), 8,10 (2H, m),

7,83 (1H, d, J = 8,7), 7,61 (1H, t, J = 8,2), 7,46 (1H, d, J = 8,2), 7,08 (3H, m), 6,65 (2H, d, J = 8,3), 5,50 (1H, q, J = 6,5), 4,50 (1H, m), 4,37 (1H, m), 4,20 (1H, m), 4,05 (3H, s), 3,09 - 2,77 (4H, m), 1,94 (1H, m), 1,79 (3H, s), 1,23 (3H, d, J = 7,0), 0,82 (6H, m)

Analýza pre C₃iH₃7N50io.l,5H₂0:

105 vypočítané: 55,85 % C, 6,05% H, 10,51% N;

nájdené: 55,21% C, 5,69% H, 10,13% N.

Hmotnostná spektrometria (+ FAB): 640 (M⁺ + 1, 22 %), 107 (100)

(tBu = terc.butyl, Cbz = benzyloxykarbonyl) (3S)-Terc.butyl-N-(allyloxykarbonyl)-3-amino-4-oxo-5-( 1,2-di-oxo-2-fenyletyloxy)pentanoát (zlúčenina 80)

K miešanému roztoku 2,17 g (6,20 mmol) (3S)-terc.butyl-N-(allyloxykarbonyl)-3-amino-5-bróm-4-oxopentanoátu (WO 93 16710) v 30 ml dimetylformamidu sa pridá 792 mg (13,6 mmol) fluoridu draselného a potom 1,02 g (6,82 mmol) kyseliny benzoylmravčej. Zmes sa mieša počas 140 minút, prileje sa 50 ml vody a potom sa zmes extrahuje dvakrát vždy 50 ml etylacetátu.

Zmiešané organické extrakty sa premyjú štyri razy vždy 50 ml vody a potom 50 ml roztoku chloridu sodného. Potom sa vysušia síranom horečnatým a zahustia sa pri vzniku oleja, ktorý sa vyčistí flash chromatografiou s použitím 20 - 45 % etylacetátu v hexáne ako elučného činidla, čím sa získa 2,44 g (94 %) bezfarebného oleja.

[ct]_D ²° - 35,0 ° (c = 1,41, dichlórmetán)

Infračervené spektrum (film): 3359, 2981, 2938, 1752, 1740, 1726, 1712, 1512, 1369, 1285, 1177, 1053, 991, 939, 688 ‘H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 8,15 (2H, m), 7,66 (1H, m), 7,53 (2H, m), 5,90 (2H, m), 5,33 (2H, m), 5,31 (1H, d, J = 16,9), 5,18 (1H, d, J = 16,9), 4,63 (3H, m), 3,03 (1H, dd, J = 17,3, 4,6), 2,74 (1H, dd, J = = 17,3, 4,9), 1,44 (9H, s)

106

Hmotnostná spektrometria (Cl): 420 (M⁺ + 1, 20 %), 364 (100) (3S)-Terc.butyl-N-(allyloxykarbonyl) -3-amino-5-hydroxy-4-oxo-pentanoát (zlúčenina 81)

Zmes 2,40 g (5,71 mmol) esteru 80, 200 ml tetrahydrofuránu a 200 ml IM vodného roztoku hydrogénuhličitanu draselného sa intenzívne mieša pri izbovej teplote počas 18 hodín. Vrstvy sa oddelia a vodná časť sa extrahuje 100 ml etylacetátu. Zmiešané organické extrakty sa premyjú 100 ml roztoku chloridu sodného, vysušia sa síranom horečnatým a zahustia. Zvyšok sa vyčistí flash chromatografiou s použitím 10 - 60 % etylacetátu v hexáne ako elučného činidla, čím sa získa 1,48 g (90 %) bledožltého oleja.

[a]_D ²⁰ - 5,9 ° (c = 1,06, dichlórmetán) Infračervené spektrum (film): 3345, 2981, 2936, 1739, 1725, 1712, 1692, 1515, 1368, 1259, 1158, 1051 'H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 5,92 (2H, m), 5,30 (2H, m), 4,36 - 4,69 (5H, m), 3,05 (1H, dd, J = = 17,4, 4,3), 2,93 (1H, t), 2,70 (1H, dd, J = 17,4, 4,9), 1,43 (9H, s)

Analýza pre Ci₈H₂₁NiO₆ ,0,25H₂O: vypočítané: 53,51% C, 7,43% H, 4,80% N;

nájdené: 53,61 % C, 7,18% H, 4,71% N.

Hmotnostná spektrometria (Cl): 280 (M⁺ + 1, 87 %), 232 (100) (3S)-Terc. butyl-N-(allyloxykarbonyl)-3-amino-5-(2,6-dichlórfenylmetoxy)-4-oxopentanoát (zlúčenina 82)

Miešaná zmes 1,44 g (5,01 mmol) alkoholu 81, 4,31 g (15,0 mmol) 2,6-dichlórbenzyljodidu (Abrahám a kol., J. Chem. Soc.. str. 1605 - 1607 (1936)), 2,32 g (10,0 mmol) oxidu strieborného a 25 ml dichlórmetánu sa zohrieva do varu pod spätným chladičom počas 45 hodín. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu, nariedi sa 50 ml vody a potom sa extrahuje etylacetátom (50 ml a 25 ml). Organická vrstva sa premyje 50 ml vody a potom 50 ml roztoku chloridu sodného, vysuší sa síranom horečnatým a zahustí. Zvyšok sa vyčistí pomocou flash chromatografíe s použitím 10 - 100 % etylacetátu v hexáne ako elučného činidla, čím sa získa

1,65 g (74 %) bezfarebného oleja. Md²° +8,8 ⁰ (c = 1,13, dichlórmetán) Infračervené spektrum (film): 3339, 2980, 2935, 1724,1712, 1503, 1438, 1368, 1246, 1156, 1106, 770 ’H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,33 (2H, m), 7,22 (1H, dd), 5,92 (2H, m), 5,28 (2H, m), 4,87 (2H, m), 4,67 (1H, m), 4,58 (2H, široký d), 4,56 (1H, d, J = 16,9), 4,31 (1H, d, J = 16,9), 3,04 (1H, dd, J = = 16,7, 4,5),

2,77 (1H, dd, J = 16,7, 4,9), 1,40 (9H, s) Analýza pre C₂₀H₂₅Cl₂NiO₆.0,25H₂O: vypočítané: 53,28 % C, 5,70% H, 3,11% N;

nájdené: 53,15% C, 5,52 % H, 2,98 % N.

Hmotnostná spektrometria (Cl): 446 (M⁺, 27 %), 390 (100) (3R,S)-Terc.butyl-N-[N-fenylmetyloxykarbonylvalinyl-alaninyl]-3-ammo-5-(2,6-dichlórfenylmetoxy)-4-oxopentanoát (zlúčenina 83a)

K miešanému roztoku 637 mg (1,98 mmol) N-fenylmetyloxy-karbonylvalinylalanínu v 40 ml tetrahydrofuránu a 1 ml vody sa pridá 379 g (1,98 mmol) l-(3-dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimid-hydrochloridu a 486 mg (3,60 mmol) 1-hydroxybenzotriazolu. Táto zmes sa mieša počas 15 minút a potom sa pridá 802 mg (1,80 mmol) éteru 82 a približne 5 mg bis(trifenylfosfm)paládium(II)chloridu. Potom sa v priebehu 20 minút po kvapkách pridá 785 mg (725 ml, 2,70 mmol) tributylcínhydridu, výsledný roztok sa mieša počas 3,75-hodiny a potom sa prileje 50 ml IM kyseliny chlorovodíkovej. Zmes sa extrahuje dva razy etylacetátom. Zmiešané organické extrakty sa premyjú IM kyselinou chlorovodíkovou, dvakrát vodným roztokom hydrogenuhličitanu sodného, vodou a potom roztokom chloridu sodného, vysušia sa síranom horečnatým a zahustia. Zvyšok sa vyčistí pomocou flash chromatografíe s použitím 10 - 30 % etylacetátu v dichlórmetáne ako elučného činidla, čím sa získa 941 mg (79 %) bledožltej pevnej látky s teplotou topenia 148 - 152 °C. Infračervené spektrum (bromid draselný): 3287, 3070, 1730, 1691, 1641, 1536, 1369, 1289, 1247, 1156 'H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,33 (8H, m), 7,23 (1H, dd), 6,61 (1H, široký d), 5,42 (1H, široký

d), 5,11 (2H, s), 4,85 (3H, m), 4,50 (1H, m), 4,40 (1H, d, J = 16,9), 4,26 (1H, d, J = 16,9), 4,02 (1H, m), 2,99 (1H, dd, J = 16,8, 4,7), 2,73 (1H, dd, J = 16,8, 5,0), 2,09 (1H, m), 1,37 (12H, m), 0,96 (3H, d, J = 6,9), 0,91 (3H, d, J = 6,8)

Analýza pre C₃₂H₄₁Cl₂N₃O₈.0,25H₂O: vypočítané: 57,25 % C, 6,23 % H, 10,57 % Cl, 6,26% N;

nájdené: 57,18% C, 6,23% H, 10,58 % Cl, 5,95% N.

Hmotnostná spektrometria (+ FAB): 667 (M⁺ 1,1 %), 666 (3), 159 (25), 91 (100) (3R,S)-Terc.butyl-N-[(N-acetyl-O-terc.butyltyrozinyl)-valinyl-alaninyI]-3-amino-5-(2,6-dichlórfenylmetoxy)-4-oxo-pentanoát (zlúčenina 83b) sa pripraví spôsobom opísaným v prípade zlúčeniny 83a, čím sa získa

107

554 mg (64 %) bezfarebnej pevnej látky s teplotou topenia 184 - 186 °C. Infračervené spektrum (bromid draselný): 3282, 3075, 1736, 1690, 1633, 1536, 1508, 1366, 1236, 1161 'H-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid), hodnoty δ: 8,49 (1H, d), 8,14 (1H, d), 8,08 (1H, d), 7,84 (1H, d), 7,43 (3H, m), 7,14 (2H, d), 6,83 (2H, d), 4,71 (2H, s), 4,51 (2H, m), 4,36 (2H, dd), 4,17 (2H, m), 2,93 (1H, m), 2,73 (1H, m), 1,94 (1H, m), 1,74 (3H, s), 1,37 (9H, s), 1,23 (12H, m), 0,83 (6H, m) Analýza pre C₃₂H₄₁Cl₂N₃O₈.0,25H₂O: vypočítané: 57,25 % C, 6,23% H, 10,57 % Cl, 6,26% N;

nájdené: 57,18% C, 6,23 % H, 10,58 % Cl, 5,95% N.

Hmotnostná spektrometria (+ FAB): 793 (M⁺ 1, 4 %), 737 (5), 681 (1), 178 (40), 159 (45), 136 (100), 107 (40)

Hmotnostná spektrometria (- FAB): 792 (20), 791 (40), 447 (100)

Kyselina (R,S)-N-[N-(fenylmetyloxy)karbonyl-valinyl-alaninyl]-3-amino-5-(2,6-dichlórfenylmetoxy)-4-oxopentánová (zlúčenina 84a, V)

K miešanému roztoku 918 mg (1,38 mmol) esteru 83a v 20 ml dichlórmetánu sa pridá 5 ml kyseliny trifluóroctovej. Zmes sa mieša počas 2,5-hodiny a potom sa odparí do sucha. K zvyšku sa pridá 25 ml éteru a opäť sa odparí do sucha. Tento postup sa opakuje štyri razy. Výsledný produkt sa trituruje s 10 ml éteru a potom sa vysuší, čím sa získa 730 mg (87 %) bledohnedého prášku s teplotou topenia 156 - 160 °C. Infračervené spektrum (bromid draselný): 3282, 2965, 1702, 1694, 1642, 1536, 1438, 1246, 1230 'H-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid), hodnoty δ: 8,48 (1H, d), 8,09 (1H, d), 7,47 (9H, m), 5,02 (2H, s), 4,70 (2H, s), 4,49 (1H, m), 4,37 (2H, dd), 4,27 (1H, m), 3,88 (1H, m), 2,75 (1H, dd), 2,54 (1H, dd), 1,96 (1H, m),

1,19 (3H, s), 0,84 (6H, m)

Analýza pre C28H₃₃Cl₂N₃O8.0,5H₂O: vypočítané: 54,27 % C, 5,53% H, 11,45%C1, 6,78% N;

nájdené: 54,49 % C, 5,39 % H, 11,33%C1, 6,73% N.

Hmotnostná spektrometria (+ FAB): 610 (M⁺ 1, 10 %), 91 (100)

Kyselina (R,S)-N-[N-(acetyl)tyrozinyl-valinyl-alaninyl]-3-amino-5-(2,6-didhlórfenylmetoxy)-4-oxopentánová (zlúčenina 84b, W) sa získa spôsobom použitým v prípade zlúčeniny 84a vo forme bezfarebného prášku s výťažkom 95 %. Teplota topenia produktu je 165 - 168 °C.

Infračervené spektrum (bromid draselný): 3295,2968, 1733, 1642, 1517, 1438, 1231, 1105 *H-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid), hodnoty δ: 9,2 (1H, široký s), 8,48 (1H, široký d), 8,14 (1H, široký d), 8,02 (1H, široký d), 7,81 (1H, široký d), 7,45 (3H, m), 7,02 (2H, d), 6,62 (2H, d), 4,70 (2H, s), 4,12 - 4,53 (3H, m), 3,60 (3H, m), 2,51 - 2,92 (4H, m), 1,96 (1H, m), 1,75 (3H, s), 1,21 (3H, d), 0,83 (6H, m) Analýza pre C₃iH₃₈Cl₂N₄O₉.H₂O: vypočítané: 53,22 % C, 5,76% H, 10,14 % Cl, 8,09% N;

nájdené: 53,33 % C, 5,54% H, 10,02 % Cl, 7,85% N.

Hmotnostná spektrometria (+ FAB): 682 (M⁺ 2, 30 %), 681 (67), 158 (100) Hmotnostná spektrometria (- FAB): 680 (45), 679 (100)

Príklad 6

Získali sa inhibičné konštanty (K,) a hodnoty IC_S0 pre niekoľko zlúčenín podľa vynálezu s použitím enzýmových testov so substrátom viditeľným v UV-svetle a fluorescentným substrátom a bunkových testov, ako sa opísali v príklade 2. S použitím týchto testov sa pre zlúčeniny 22e, 54b, 54j, 54k, 57b, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 98, 102a-c, 106a-c, 108a-c, 114a, 114b, 115, 121, 125a, 125b, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132a, 132b, 133, 135a, 135b, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156, 157, 158, 159, 160, 161, 162 a 163 stanovili nasledujúce hodnoty a IC_SO. Vzorce zlúčenín 22e, 54b, 54j, 54k a 57 sú uvedené v príklade 5. Vzorce ostatných zlúčenín sú uvedené v príklade 7.

108

zlúčenina	test
sg substrátam viditeľným v UV-svétle K. (μΜ)	bunkový IC50 (μΜ) 1
22e	0,19	>20 I
54b		20
54j		10
54k		6,6
57b		i 2.2
85	0,0035	9,8
86	0,175	4,0
87	7,2	35,0
88	0,9	í
89	0,018
90	0,42	6,2
91	0,26	.>25
92	3,8
98	0,535	4,0
102a		4,0
102b	0,29	1,75
102c	0,68
106a	2,3	30,0
106b	0,2	2,9
106c	3,8	>30,0
108a		17,5
108b	0,4	25,0
108c	0,43

109

zlúčenina	test
so substrátom viditeľným v UV-svetle K (μΜ)	bunkový IC50 (μΜ)
114a	0,12	3,8
114b	3,7
115	0,345	6,0
121	4,3
125a	0,39	>30,0
125b	0,060	0,30
125	0,45	1,5
127	0,39	8,0
128	0,04	7,5
129	0,59	25,0
130		1,20
131	12,0	30,0
132a	5,0	>30,0
132b	12,5
133	50,0	>30,0
135a	0,090	0,90
135b	0,32	0,95
136		1,0
137	0,04	0,25
138		0,375
139	0,350	2,0
140	0,87	>30,0
141	0,670

110

zlúčenina	test 1
sa substrátom vidi- teľným v UV-svetle Kt (μΜ)	bunkový IC50 (μΜ) i
142		1,75
144	0,32	>20,0 I
145	0,34	8,5
146	0,16	3,8
147	0,26	8,5
148	6,3	30,0
149	14,0	>30,0
150	10,0	30,0
151	13,0	30,0
152	8,8
153	0,24
154	0,042	2,4
155	0,023
156	0,001	2,7
157	0,26
158	1,1
159	0,0017	8,0
160	0,145	2,25
161	0,011
162	0,0025
163	0,0028	1,2

Príklad 7

Zlúčeniny 126, 127, 128, 129, 135a, 135b, 137, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154,

111

155, 156, 157, 158, 159, 160, 162 a 163 sa syntetizujú podobným spôsobom, ako je spôsob použitý pri syntéze zlúčeniny 69a.

(126;

(127) (128)

(129) (135a) (135b)

112

O

(137)

(144 ) (145) (145)

O

(147)

(148)

(149)

113

(155) (156)

114

(160) (162)

(163)

Zlúčenina 158 sa syntetizuje podobným spôsobom, ako je spôsob použitý pri syntéze zlúčeniny K

115 (158}

Zlúčenina 130 sa syntetizuje podobným spôsobom ako je spôsob použitý pri syntéze zlúčeniny 56b

(130)

Zlúčeniny 131, 136, 138 a 142 sa syntetizujú podobným spôsobom ako je spôsob použitý pri syntéze zlúčeniny 57b

(13 8) (136)

116

Zlúčeniny 132a, 132b, 139, 140 a 141 sa syntetizujú podobným spôsobom, ako je spôsob použitý pri syntéze zlúčeniny 47a. Východiskový materiál pre zlúčeninu 140 sa získa, ako sa opísalo v práci: Robí a kol., J. Am, Chem. Soc., 116, str. 2348 - 2355 (1994). Východiskový materiál pre zlúčeninu 141 sa získa, ako sa opísalo v práci: Wyvratt a kol., Pept. Struct: Funct. Proc. (8. AM. Pept. Symp,). (1983) alebo USP 4415496.

(132a) (132b) (139)

Zlúčenina 133 sa syntetizuje podobným spôsobom, ako je spôsob použitý pri syntéze zlúčeniny 47b.

(133}

Zlúčenina 161 sa syntetizuje podobným spôsobom, ako je spôsob použitý pri syntéze zlúčeniny 125a.

117

Zlúčeniny 22e, 54b, 54j, 54k a 57b sa syntetizujú, ako sa opísalo v príklade 5.

Zlúčeniny 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 98, 102a, 102b, 102c, 106a, 106b, 106c, 108a, 108b, 108c, 114a, 114b, 115, 121, 125a a 125b sa syntetizujú nasledovne.

Kyselina N-(N-acetyl-tyrozinyl-valinyl-(4(R)-allyloxyprolin-yl))-3(S)-ainino-4-oxobutánová (zlúčenina 85)

Stupeň A. N-Terc.butoxykarbonyl-4(R)-allyloxyprolín

K roztoku 60 % nátrium-hydridu (3,36 g, 84 mmol) v 100 ml bezvodného tetrahydrofuránu sa pridá

9,25 g (40 mmol) N-terc.butoxykarbonyl-(4R)-hydroxyprolínu a zmes sa mieša počas 2 hodín pri izbovej teplote. K zmesi sa pridá 6,9 ml (80 mmol) allylbromidu a zmes sa zohrieva do varu pod spätným chladičom počas 6 hodín. K zmesi sa pridá drvený ľad, potom sa pridá voda a zmes sa premyje hexánom. Vodná vrstva sa okyslí 10 % hydrogénsíranom sodným a extrahuje sa dva razy vždy 150 ml etylacetátu. Zmiešané extrakty sa vysušia nad bezvodným síranom sodným, prefiltrujú a odparia, čím sa získa 5 g produktu uvedeného v titule, ktorý sa ďalej nečistí.

*H-NMR (deuterochloroform, jestvuje ako rotaméry), hodnoty δ: 5,92 - 5,82 (1H, m), 5,3 - 5,14 (2H, m),

4,5 - 4,31 (1H, m), 4,16 - 4,05 (1H, m), 4,04 - 3,9 (1H, m), 3,79 - 3,5 (3H, m), 2,43 - 2,2 (1,5H, m), 2,15 -

- 2,10 (0,5H, m), 1,45 (4,5H, s), 1,35 (4,5H, s)

Stupeň B. Hydrochlorid metylesteru 4(R)-alyloxyprolínu g (18,4 mmol) N-terc.butoxykarbonyl-4(R)-allyloxyprolínu sa počas 6 hodín zohrieva do varu pod spätným chladičom v 50 ml nasýteného metanolického chlorovodíka. Zmes sa odparí vo vákuu, čím sa získa

3,78 g zlúčeniny uvedenej v názve vo forme žltej živice.

'H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 5,83 - 5,72 (1H, m), 5,24 - 5,14 (1H, d), 5,13 - 5,08 (1H, d), 4,55 -

- 4,3 (3H, m), 4,25 - 4,15 (1H, m), 3,9 (1,5H, s), 3,78 (1,5H, s), 3,7 - 3,28 (3H, m), 2,45 - 2,32 (1H, m), 2,2 -

- 2,05 (1H, m)

Stupeň C. Metylester N-acetyl-tyrozinyl-valinyl-4(R)-alyloxyprolínu)

1,05 g (4,75 mmol) hydrochloridu metylesteru 4(R)-alyloxyprolínu a 1,68 g (5,21 mmol) N-acetyl-Tyr-Val-OH sa rozpustí v 10 ml zmesi dichlórmetánu a dimetylformamidu v pomere 1:1a zmes sa ochladí na teplotu 0 °C. K ochladenej zmesi sa pridá 1 ml (5,93 mmol) diizopropyletylamínu a potom 0,769 g (5,69 mmol) N-hydroxybenzotriazolu a 1,18 g (6,2 mmol) l,(3-dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimid-hydrochloridu. Zmes sa mieša počas 2 hodín, potom sa zohreje na izbovú teplotu a mieša sa počas ďalších 16 hodín. Reakčná zmes sa vyleje do 150 ml etylacetátu a premyje sa vždy 50 ml vody, 10 % hydrogénsíranu sodného a 10 % hydrogenuhličitanu sodného. Organická vrstva sa vysuší nad síranom sodným, prefiltruje a odparí, čím sa získa bledožltá pevná látka. Táto látka sa vyčistí pomocou flash chromatografie s použitím zmesi dichlórmetánu, metanolu a pyridínu v pomere 100 : 3 : 0,5 ako elučného činidla, čím sa získa 780 mg zlúče118 niny uvedenej v názve.

'H-NMR (perdeuterometanol), hodnoty δ: 7,02 - 6,96 (2H, d), 6,67 - 6,63 (2H, d), 5,95 - 5,85 (1H, m), 5,34 -

- 5,27 (1H, d), 5,16 - 5,13 (1H, d), 4,53 - 4,38 (3H, m), 4,28 - 4,22 (1H, m), 4,12 - 3,97 (3H, m), 3,82 - 3,73 (1H, m), 3,72 (3H, s), 3,04 - 2,88 (2H, m), 2,85 - 2,72 (2H, m), 2,45 - 2,34 (1H, m), 2,08 - 1,95 (2H, m), 1,92 (3H, s), 1,00-0,92 (6H, 2 x d)

Stupeň D. Semikarbazon terc.butylesteru kyseliny N-(N-acetyl-tyrozinyl-valinyl-(4(R)-alyloxyprolin-yl))-3(S)-amino-4-oxobutánovej

770 mg (1,57 mmol) metylesteru N-acetyl-tyrozinyl-valinyl-(4-alyloxyprolínu) sa rozpustí v 20 ml tetrahydrofuránu a 4 ml metanolu. K zmesi sa pridá 145 mg (3,46 mmol) hydridu lítneho a zmes sa mieša pri izbovej teplote. Po 2 hodinách sa pridá 1 ml 10 % kyseliny chlorovodíkovej a zmes sa odparí vo vákuu, čím sa získa pevný zvyšok, ktorý sa potom roztrasie medzi 5 ml vody a 50 ml etylacetátu. Organická vrstva sa oddelí a odparí vo vákuu, čím sa získa 430 mg kyseliny, ktorá sa použije bezprostredne v nasledujúcom stupni.

Zo 420 mg (0,88 mmol) N-acetyl-tyrozinyl-valinyl-4-alyloxyprolínu a 184 mg (0,8 mmol) semikarbazonu terc.butylesteru kyseliny 3-amino-4-oxomaslovej (Graybill a kol., Int. J, Proteín Res., 44, str. 173 - 182 (1994)) sa získa 100 mg (20 %) zlúčeniny uvedenej v titule vo forme bielej amorfnej pevnej látky.

‘H-NMR (perdeuterometanol), hodnoty δ: 7,24 - 7,2 (1H, m), 7,04 - 6,97 (2H, d), 6,73 - 6,65 (2H, d), 5,98 -

- 5,86 (1H, m), 5,35 - 5,24 (1H, d), 5,17 - 5,12 (1H, m), 4,12 - 3,98 (2H, m), 3,72 - 3,67 (1H, m), 2,98 - 2,92 (3H, m), 2,38 - 2,32 (1H, m), 2,1 - 2,02 (2H, m), 1,92 (3H, s), 0,98 - 0,89 (6H, 2 X d)

Stupeň E. Kyselina N-(N-acetyl-tyrozinyl-valinyl-(4(R)-alyloxyprolinyl))-3(S)-amino-4-oxobutánová (zlúčenina 85)

Zo 100 mg semikarbazonu terc.butylesteru kyseliny N-(N-acetyl-tyrozinyl-valinyl-(4(R)-alyloxyprolinyl))-3 (S)-amino-4-oxobutánovej sa odstráni chrániaca skupina ako sa opísalo v príklade 3, pri zlúčenine K, stupeň C, čím sa získa 44,2 mg (53 %) zlúčeniny uvedenej v titule.

‘H-NMR (perdeuterometanol), hodnoty δ: 7,04 - 6,97 (2H, d), 6,72 - 6,65 (2H, d), 5,97 - 5,86 (1H, m), 5,32 -

- 5,25 (1H, d), 5,17 - 5,12 (1H, m), 4,62 - 4,40 (3H, m), 4,30 - 4,13 (2H, m), 4,12 - 3,96 (3H, m), 3,75 - 3,68 (1H, m), 2,99 - 2,92 (1H, m), 2,78 - 2,70 (1H, m), 2,70 - 2,48 (2H, m), 2,35 - 2,30 (1H, m), 2,17 - 1,95 (2H, m), 1,92 (3H, s), 0,98 - 0,88 (6H, 2 x d)

Zlúčeniny 86 a 87 sa pripravia podobným spôsobom, ako je spôsob opísaný pre syntézu zlúčeniny 69a v príklade 5:

(86)

Kyselina N-acetyl-(S)-valinyl-(4-(S)-fenoxy)prolinyl-3(S)-amino-4-(7-metoxybenzoxazol-2-yl)-4-oxobutánová (zlúčenina 86)

N-Acetyl-(S)-valinyl-(S)-(4-(S)-fenoxy)prolín sa premení na zlúčeninu 86 vo forme bieleho prášku. ‘H-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid), hodnoty δ: 8,75 (d, 1H), 7,6 - 7,2 (m, 4H), 7,0 - 6,8 (m, 4H), 5,5 (m, 1H), 5,05 (s, 1H), 4,5 (t, 1H), 4,29 (t, 1H), 4,0 (s, 3H), 4,0 -3,8 (m, 2H), 3,0 - 2,8 (dd, 2H), 2,3 (m, 1H), 2,09 (m, 1H), 1,95 -1,8 (m, 2H), 1,78 (s, 3H), 1 - 0,7 (dd, 6H)

Kyselina N-acetyl-(4-(R)-fenoxy)prolinyl-3(S)-amino-4-(7-metoxybenzoxazol-2-yl)-4-oxobutánová (zlúče119 nina 87)

N-Acetyl-(S)-(4-(S)-fenoxy)prolín sa premení na zlúčeninu 87 vo forme bieleho prášku.

’H-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid), hodnoty δ: 9,1 (d, 1H), 8,76 (d, 1H), 7,6 - 7,2 (m, 4H), 7,0 - 6,9 (m, 4H), 5,5 (m, 1H), 5,45 (m, 1H), 5;0 (m, 2H), 4,56 (t, 1H), 4,40 (t, 1H), 4,0 (s, 3H), 3,9 (dd, 1H), 3,76 (d, 1H),

3,64 (d, 1H), 3,1 - 2,9 (m, 1H), 2,8 (m, 1H), 2,50 (m, 1H), 2,3 - 2,2 (m, 1H), 2,09 (m, 1H), 1,95 a 1,75 (2 x s, 3H, rotaméry)

Kyselina N-2-(6-benzyl-l,2-dihydro-2-oxo-3-(3-fenylpropionyl)-amino-l-pyridyl)acetyl-3(S)-amino-5-hydroxy-4-oxopentánová (zlúčenina 88)

Terc.butylester kyseliny N-2-(6-benzyl-l,2-dihydro-2-oxo-3-(3-fenylpropionyl)amino-l-pyridyl)acetyl-3(S)-amino-5-hydroxy-4-oxopentánovej sa pripraví zo zlúčeniny 52b a zlúčeniny 81 spôsobom opísaným pre syntézu zlúčeniny 83a, pri vzniku bielej pevnej látky. Výťažok je 45 %.

'H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 8,40 (d, 1H), 8,20 (s, 1H), 7,4 - 7,1 (m, 11H), 6,18 (s, 1H), 4,72 (m, 1H), 4,65 - 4,5 (q, 2H), 4,4 - 4,2 (dd, 2H), 4,0 (s, 2H), 3,04 (t, 2H), 2,9 (dd, 1H), 2,76 (t, 2H), 2,55 (dd, 1H), 1,39 (s, 9H)

Výsledný produkt sa premení na zlúčeninu 88 spôsobom opísaným v príklade 5 pre zlúčeninu 84a, čím sa získa zlúčenina uvedená v titule vo forme bielej pevnej látky. Výťažok je 42 %.

'H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 8,5 (d, 1H), 8,1 (d, 1H), 8,0 (m, 1H), 7,4 - 7,1 (m, 11H), 6,3 (d, 1H), 4,9 - 4,8 (m, 2H), 4,6 - 4,4 (m, 2H), 4,3 (dd, 1H), 4,1 (s, 2H), 3,3 (t, 1H), 3,05 (t, 2H), 2,8 - 2,6 (m, 3H)

Zlúčeniny 89 a 90 sa pripravia podobným spôsobom, ako je spôsob opísaný na prípravu zlúčeniny 84a v príklade 5.

Kyselina N-acetyl-(S)-tirozinyl-(S)-valinyl-(S)-alanin-yl-3(S)-amino-5-(2-chlórbenzyloxy)-4-oxopentánová (zlúčenina 89) sa pripraví z acetyl-Tyr-Val-Ala-OH a (3S)-terc.butyl-N-(allyloxykarbonyl)-3-amino-5-(2-chlórfenylmetoxy)-4-oxopentanoátu (pripraveného podobným spôsobom ako zlúčenina 82) pri vzniku bielej pevnej látky.

'H-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid), hodnoty δ: 9,15 (s, 1H), 8,5 (d, 1H), 7,98 (d, 1H), 7,75 (d, 1H), 7,55 -

- 7,3 (m, 4H), 7,0 (d, 1H), 6,6 (d, 2H), 4,6 - 4,3 (m, 6H), 4,3 - 4,1 (m, 2H), 2,9 (d, 1H), 2,76 (dd, 1H), 2,7 -

- 2,5 (m, 2H), 1,95 (m, 1H), 1,75 (s, 3H), 1,2 (d, 3H), 0,9 - 0,7 (dd, 6H)

Kyselina N-2-(6-benzyl-l,2-dihydro-2-oxo-3-(3-fenylpropionyl)amino-l-pyridyl)acetyl-3-amino-5-(2-chlórbenzyloxy)-4-oxopentánová (zlúčenina 90) sa pripraví zo zlúčeniny 52b a (3S)-terc.butyl-N-(alyl

120 oxykarbonyl)-3-amino-5-(2-chlórfenylmetoxy)-4-oxopentanoátu (pripraveného podobným spôsobom ako zlúčenina 82) pri vzniku bielej pevnej látky.

^lH-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid), hodnoty δ: 9,2 (s, 1H), 8,75 (d, 1H), 7,7 - 7,1 (m, 14H), 6,4 (d, 1H),

4,65 (d, 6H), 4,56 (S, 1H), 4,6 - 4,35 (dd, 1H), 3,9 (s, 2H), 2,9 - 2,6 (m, 6H)

Kyselina N-2-(6-benzyl-l,2-dihydro-2-oxo-3-(3-fenylpropionyl)amino-l-pyridyl)acetyl-3(S)-amino-5-(5-(2,6-dichlórfenyl)tiazol-2-yl)-4-oxopentánová (zlúčenina 91) sa pripraví zo zlúčeniny 52b a terc.butylesteru 3-(alyloxykarbonyl)amino-4-[(2,6-dichlórfenyl)tiazol-2-yl]-4-hydroxymaslovej (zlúčeniny 99), spôsobom ako sa opísal pre prípravu zlúčeniny 69a, pri vzniku špinavobieleho prášku.

’H-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid), hodnoty δ: 9,32 (s, 1H), 9,05 (d, 1H), 8,27 (d, 1H), 8,18 (d, 1H), 7,7 (d, 1H), 7,6 (t, 1H), 7,4 - 7,1 (m, 11H), 6,1 (d, 1H), 5,64 (m, 1H), 4,8 - 4,6 (dd, 2H), 3,85 (s, 2H), 3,02 (m, 1H), 2,9 - 2,7 (m, 4H)

O

Kyselina 3-(S)-(2-(3-[3-(S)-(4-hydroxyfenyl)propionylamino]-2-oxoazepan-l-yl)acetylamino)-4-oxomaslová (zlúčenina 92) sa pripraví z kyseliny 2-(3-[3-(S)-(4-hydroxyfenyl)propionylamino]-2-oxoazepan-l-yljoctovej a N-alyloxykarbonyl-4-amino-5-benzyloxy-2-oxotetrahydrofiiránu (Chapman, Biorg, Med. Chem. Lett., 2, str. 613 - 618 (1992)) podobným spôsobom, ako sa opísal v prípade syntézy zlúčeniny 54a, pri vzniku zlúčeniny uvedenej v titule ako bielej pevnej látky.

’H-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid), hodnoty δ: 9,10 - 9,20 (s, 1H), 8,40 (s, 1H), 7,88 (d, 1H), 7,0 (d, 2H),

6,64 (d, 2H), 4,60 (t, 1H), 4,10 (q, 2H), 3,9 - 4,2 (m, 2H), 3,6 (m, 1H), 3,18 (d, 2H), 2,70 (t, 2H), 2,40 (m, 2H), 1,85 - 1,40 (m, 8H)

?8 (Et= etyl)

121

4-Etoxymetylén-2-styryl-4H-oxazol-5-on (zlúčenina 94) sa pripraví, ako opísal Comforth, The Chemistry of Penicillín, Čiarke, Johnson, Robinson (vydavatelia), Princeton University Press, str. 804 (1949).

Etylester kyseliny 4-oxo-3-(3-fenylakryloylamino)-4,6,7,8-tetrahydropyrolo[l,2-a]pyrimidín-(6S)-karboxylovej (zlúčenina 95) sa pripraví zo zlúčeniny 94 postupom opísaným v príklade 5 pre zlúčeninu 3, pričom sa získa 4,5 g (30 %) zlúčeniny uvedenej v titule.

'H-NMR (perdeuterometanol), hodnoty δ: 1,3 (t, 3H), 2,35 (m, 1H), 2,65 (m, 1H), 3,1 (m, 1H), 3,15 (m, 1H),

4,25 (q, 2H), 5,15 (dd, 1H), 6,95 (d, 1H), 7,4 (m, 3H), 7,6 (m, 2H), 7,65 (d, 1H), 8,95 (s, 1H)

Kyselina 4-oxo-3-(3-fenylakryloylamino)-4,6,7,8-tetrahydropyrolo[l,2-a]pyrimidín-(6S)-karboxylová (zlúčenina 96)

Zmes 3,1 g (8,8 mmol) etylesteru kyseliny 4-oxo-3-(3-fenylakryloylamino)-4,6,7,8-tetrahydropyrolo[l,2-a]pyrimidín-(6S)-karboxylovej (zlúčeniny 95) a 8,8 ml (8,8 mmol) IN hydroxidu lítneho v 10 ml metanolu sa mieša počas 18 hodín pri izbovej teplote. Reakčná zmes sa nariedi vodou a jedenkrát sa premyje 20 ml etyléteru. Vodná vrstva sa okyslí koncentrovanou kyselinou chlorovodíkovou, pevná látka sa izoluje filtráciou a premyje sa vodou. Pevná látka sa suší vo vákuovej peci pri teplote 50 °C počas 18 hodín, čím sa získa

2,2 g (75 %) zlúčeniny uvedenej v titule vo forme bledohnedej pevnej látky.

*H-NMR (perdeuterometanol), hodnoty δ: 2,4 (m, 1H), 2,7 (m, 1H), 3,1 (m, 1H), 3,2 (m, 1H), 5,15 (dd, 1H), 7,0 (d, 1H), 7,4 (m, 3H), 7,6 (m, 2H), 7,65 (d, 1H), 8,95 (s, 1H) (2-Benzyloxy-5-oxotetrahydroíuran-(3S)-yl)amid kyseliny 4-oxo-3-(3-fenylakryloylamino)-4,6,7,8-tetrahydropyrolo[l,2-a]pyrimidín-(6S)-karboxylovej (zlúčenina 97) sa pripraví zo zlúčeniny 96 spôsobom opísaným v príklade 3 pre zlúčeninu H, v stupni A. Získa sa 0,52 g (75 %) zlúčeniny uvedenej v titule vo forme zmesi diastereomérov.

*H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 2,3 - 2,7 (m, 3H), 2,9 (dd, 1H), 3,05 (m, 1H), 3,3 (m, 1H), 4,4 - 4,8 (m, 2H), 4,9 (2 X d, 1H), 5,05 (m, 1H), 5,55 (2 x s, 1H), 6,6 (2 x d, 1H), 7,4 (m, 6H), 7,55 (m, 4H), 7,65 (2 x d, 1H), 8,0 (m, 2H), 9,2 (s x 2, 1H)

Kyselina 4-oxo-(3S)-{[4-oxo-3-(3-fenylpropionylamino)-4,6,7,8-tetrahydropyrolo[I,2-a]pyrimidín-(6S)-karbonyl]amino}maslová (zlúčenina 98) sa pripraví postupom opísaným v príklade 3 pre zlúčeninu H, v stupni D. Získa sa 0,13 g (45 %) zlúčeniny uvedenej v názve.

’H-NMR (perdeuterometanol), hodnoty δ: 2,35 (m, 1H), 2,45 - 2,75 (m, 3H), 2,8 (t, 2H), 3,0 (t, 2H), 3,1 (m, 1H), 3,25 (m, 1H), 4,3 (m, 1H), 6,65 (dd, 1H), 5,15 (m, 1H), 7,15 (m, 1H), 7,3 (m, 4H), 8,8 (s, 1H)

-COj®u i ť

H

(tBu * terc.butyl)

Terc.butylester kyseliny 3(S)-(alyloxykarbonyl)amino-4-[(2,6-dichlórfenyl)oxazol-2-yl]-4(R,S)-hydroxymaslovej (zlúčeniny 99)

Roztok 2,71 g (12,7 mmol) 5-(2,6-dichlórfenyl)oxazolu (pripraveného podobným spôsobom ako je opísaný v Tet. Lett. 23, str. 2369 (1972)) v 65 ml tetrahydrofuránu sa ochladí v atmosfére dusíka na teplotu -78 °C. K tomuto roztoku sa pridá 8,5 ml 1,5M roztoku n-butyllitia v hexánoch (13,3 mmol) a zmes sa mieša pri teplote -78 °C počas 30 minút. Pridá sa 3,6 g (13,9 mmol) eterátu bromidu horečnatého a teplota roztoku sa na 15 minút nechá vystúpiť na -45 °C. Reakčná zmes sa ochladí na teplotu -78 °C a po kvapkách sa pridá roztok

3,26 g (12,7 mmol) aldehydu 58 (Graybill a kol., Int. J. Proteín Res., 44, str. 173 - 182 (1993)) v 65 ml tetrahydrofuránu. Reakčná zmes sa mieša počas 25 minút, potom sa teplota nechá vystúpiť na -40 °C a zmes sa mieša počas 3 hodín, na to sa mieša počas 1 hodiny pri izbovej teplote. K reakčnej zmesi sa prileje 12 ml 5 % roztoku hydrogenuhličitanu sodného a zmes sa mieša počas 3 hodín. Tetrahydrofurán sa odstráni vo vákuu a výsledný zvyšok sa extrahuje dichlórmetánom. Organická vrstva sa premyje nasýteným roztokom chloridu sodného a vysuší sa nad síranom horečnatým, prefiltruje a zahustí, čím sa získa 6,14 g zlúčeniny uvedenej v titule. Vyčistením sa získa 4,79 g (80 %) zlúčeniny 99.

'H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 1,45 (s, 9H), 2,7 - 2,5 (m, 2H), 2,8 (dd, 1H), 4,2, 4,4 (2 X d, 1H), 4,7 - 4,5 (m, 3H), 5,35 - 5,1 (m, 2H), 5,6, 5,7 (2 x d, 1H), 6,0 - 5,8 (m, 1H), 7,2 (d, 1H), 7,3 (m, 1H), 7,4 (m,

122

2H)

Kyselina 4-oxo-3-(3-fenylpropionylamino)-4,6,7,8-tetrahydropyrolo[ 1,2-a]pyrimidín-(6S)-karboxylová (zlúčenina 100)

Zmes 2,1 g (6,5 mmol) kyseliny 4-oxo-3-(3-fenylakryloylamino)-4,6,7,8-tetrahydropyrolo[l,2-a]pyrimidín-(6S)-karboxylovej (zlúčeniny 96) a 20 % hydroxidu paládia na uhlí (0,5 g) v 50 ml metanolu sa mieša v atmosfére vodíka počas 4 hodín. Výsledná zmes sa prefíltruje a zahustí, čím sa získa 2,1 g (100 %) zlúčeniny uvedenej v titule vo forme bielej pevnej látky.

’H-NMR (perdeuterometanol), hodnoty δ: 2,35 (m, 1H), 2,65 (m, 1H), 2,75 (t, 2H), 3,0 (t, 2H), 3,1 (m, 1H),

(tBu = terc.butyl)

4-Terc.butoxykarbonyl-2-oxo-(3S)-{[4-oxo-3-(3-fenylpropionylamino)-4,6,7,8-tetrahydropyrolo[l,2-a]pyrimidín-(6S)-karbonyl]amino}butylester kyseliny 2,6-dichlórbenzoovej (zlúčenina 101a) sa pripraví postupom opísaným v príklade 5 v prípade zlúčeniny 56a, čim sa získa 0,16 g (20 %) zlúčeniny uvedenej v titule. ‘H-NMR (perdeuterometanol), hodnoty δ: 1,45 (s, 9H), 2,3 (m, 1H), 2,6 (m, 1H), 2,7 (m, 3H), 2,95 (m, 3H),

4,8 (m, 1H), 5,1 (m, 1H), 5,2 (g, 2H), 7,1 (m, 1H), 7,2 (m, 4H), 7,4 (m, 3H), 8,75 (s, 1H)

Terc.butylester kyseliny 4-(7-metoxybenzoxazol-2-yl)-4-oxo-(3S)-{[4-oxo-3-(3-fenyl-l-propionylamino)-4,6,7,8-tetrahydropyrolo [l,2-a]pyrimidín-(6S)-karbonyl]amino}maslovej (zlúčenina 101b)

Terc.butylester kyseliny 4-hydroxy-4-(7-metoxybenzoxazol-2-yl)-4-oxo-(3S)-{[4-oxo-3-(3-fenylpropionylamino)-4,6,7,8-tetrahydropyrolo[I,2-a]pyrimidín-(6S)-karbonyl]amino}maslovej sa pripraví zo zlúčeniny 100 a zlúčeniny 66a postupom opísaným v príklade 5 v prípade zlúčeniny 67a, čím sa získa 0,95 g (kvantitatívny výťažok) produktu vo forme zmesi diastereomérov.

'H-NMR (perdeuterometanol), hodnoty δ: 1,45 (2 x s, 9H), 2,2 (2 x m, 1H), 2,35 - 3,0 (m, 9H), 4,0 (m, 3H),

123

4,75 (m, 1H), 4,85 (m, 1H), 5,05 (2 x dd, 1H), 7,1 (2 x dd, 1H), 7,15 - 7,3 (m, 4H), 7,5 (2 x t, 1H), 7,8 (2 x d, 1H), 8,55 (2 x dd, 1H), 8,7 (2 x s, 1H)

Výsledný produkt sa premení na zlúčeninu 101b postupom opísaným v príklade 5 v prípade zlúčeniny 68a, pričom sa získa 0,36 g (50 %) zlúčeniny uvedenej v titule.

‘H-NMR (perdeuterometanol), hodnoty δ: 1,4 (s, 9H), 2,35 (m, 1H), 2,55 (m, 1H), 2,75 (t, 2H), 2,95 (t, 2H), 3,00 (m, 1H), 3,1 (dd, 2H), 3,15 (m, 1H), 5,15 (dd, 1H), 5,65 (t, 1H), 7,1 (m, 2H), 7,2 (m, 4H), 7,4 (m, 2H), 8,7 (s, 1H)

Terc.butylester kyseliny 4-[5-(2,6-dichlórfenyl)oxazol-2-yl]-4-oxo-(3S)-{[4-oxo-3-(3-fenylpropionylamino)-4,6,7,8-tetrahydropyrolo [l,2-a]pyrimidín-(6S)-karbonyl]amino}maslovej (zlúčenina 101c)

Terc.butylester kyseliny 4-[5-(2,6-dichlórfenyl)oxazol-2-yl]-4-hydroxy-(3S)-{[4-oxo-3-(3-fenylpropionylamino)-4,6,-7,8-tetrahydropyrolo[l,2-a]pyrimidín-(6S)-karbonyl]amino}maslovej sa pripraví zo zlúčeniny 100 a zlúčeniny 99 s použitím postupu opísaného v príklade 5 v prípade zlúčeniny 67a, čím sa získa 0,09 g (60 %) produktu vo forme zmesi diastereomérov.

'H-NMR (perdeuterometanol), hodnoty δ: 1,45 (2 x s, 9H), 2,2 (m, 1H), 2,5 (m, 2H), 2,7 (2 x dd, 1H), 2,75 (t, 2H), 2,9 - 3,1 (m, 4H), 4,7 (m, 1H), 5,1 (m, 2H), 7,1 (m, 1H), 7,1 - 7,25 (m, 4H), 7,4 (t, 1H), 7,5 (t, 1H),

8,55 (d, 1H), 8,75 (s, 1H)

Výsledný produkt sa premení na zlúčeninu 101c postupom opísaným v príklade 5 v prípade zlúčeniny 68a, čím sa získa 0,04 g (45 %) zlúčeniny uvedenej v názve.

*H-NMR (perdeuterometanol), hodnoty δ: 1,4 (s, 9H), 2,3 (m, 1H), 2,6 (m, 1H), 2,75 (t, 2H), 2,95 (t, 2H), 2,9 - 3,2 (m, 4H), 5,2 (dd, 1H), 5,55 (t, 1H), 7,1 (m, 1H), 7,25 (m, 4H), 7,55 (m, 3H), 8,75 (s, 1H)

4-Karboxy-2-oxo-(3S)-{[4-oxo-3-(3-fenylpropionylamino)-4,6,7,8-tetrahydropyrolo[l,2-a]pyrimidín-(6S)-karbonyl]amino}-butylester kyseliny 2,6-dichlórbenzoovej (zlúčenina 102a) sa pripraví zo zlúčeniny 101a postupom opísaným v príklade 5 v prípade zlúčeniny 57a, čím sa získa 0,12 g (80 %) zlúčeniny uvedenej v názve.

'H-NMR (perdeuterometanol), hodnoty δ: 2,35 (m, 1H), 2,65 (m, 1H), 2,75 (m, 2H), 2,85 (dd, 1H), 2,95 (m, 2H), 3,0 (dd, 1H), 3,15 (m, 1H), 3,25 (m, 1H), 4,55 (dd, 1H), 5,15 (m, 1H), 5,25 (q, 2H), 7,15 (m, 1H), 7,25 (m, 4H), 7,45 (m, 1H), 8,8 (s, 1H)

Kyselina 4-(7-metoxybenzoxazol-2-yl)-4-oxo-(3S)-{[4-oxo-3-(3-fenylpropionylamino)-4,6,7,8-tetrahydropyrolo[l,2-a]pyrimidín-(6S)-karbonyl]amino}maslová (zlúčenina 102b) sa pripraví zo zlúčeniny 101b postupom opísaným v príklade 5 v prípade zlúčeniny 69a, čím sa získa 0,12 g (35 %) zlúčeniny uvedenej v názve.

'H-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid), hodnoty δ: 2,1 (m, 1H), 2,55 (m, 1H), 2,7 - 3,1 (m, 8H), 4,05 (s, 3H),

5,1 (dd, 1H), 5,55 (t, 1H), 7,2 (m, 1H), 7,25 (m, 5H), 7,5 (t, 1H), 7,55 (d, 1H), 8,7 (s, 1H), 9,2 (d, 1H), 9,4 (s, 1H), 12,7 (široký signál, 1H)

Kyselina 4-[5-(2,6-dichlórfenyl)oxazol-2-yl]-4-oxo-(3S)-{[4-oxo-3-(3-fenylpropionylamino)-4,6,7,8-tetrahydropyrolo [l,2-a]pyrimidín-(6S)-karbonyl]amino}maslová (zlúčenina 102c) sa pripraví zo zlúčeniny 101c, ako sa opísalo v príklade 5 v prípade zlúčeniny 69a, čím sa získa 0,01 g (40 %) zlúčeniny uvedenej v názve.

(BOC = terc.butoxykarbony1)

124

Metylester kyseliny (3-terc.butoxykarbonylamino-2-oxo-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]diazepin-l-yl)octovej (zlúčenina 103) ’H-NMR (perdeuterometanol), hodnoty δ: 2,35 (m, 1H), 2,6 (m, 1H), 2,75 (t, 2H), 2,95 (t, 2H), 3,05 (m, 1H),

3,15 (m, 3H), 5,15 (dd, 1H), 5,55 (t, 1H), 7,15 (m, 1H), 7,2 (m, 4H), 7,55 (m, 3H), 8,8 (s, 1H)

Stupeň A. Kyselina 2(S)-terc.butoxykarbonylamino-3-(2-nitrofenylamino) propiónová

Do 130 ml dimetylformamidu sa pridá 10 g (49 mmol) kyseliny 2-terc.butoxykarbonylamino-3-aminopropiónovej, 5,7 ml (54 mmol) 2-íluómitrobenzénu a 8,25 g (98 mmol) hydrogenuhličitanu sodného a zmes sa zohrieva počas 18 hodín na teplotu 80 °C. Reakčná zmes sa odparí vo vákuu, čím sa získa viskózny oranžový zvyšok, ktorý sa rozpustí v 300 ml vody a extrahuje sa trikrát vždy 150 ml dietyléteru. Vodný roztok sa okyslí na pH 5 10 % hydrogénsíranom sodným a extrahuje sa tri razy vždy 250 etylacetátu. Zmiešané extrakty sa vysušia nad bezvodným síranom sodným, prefíltrujú a odparia, čím sa získa 12,64 g (83 %) zlúčeniny uvedenej v titule vo forme oranžovej amorfnej pevnej látky.

’H-NMR (perdeuterometanol), hodnoty δ: 8,15 - 8,10 (1H, d), 7,54 - 7,48 (1H, t), 7,13 - 7,08 (1H, d), 6,73 -

- 6,65 (1H, t), 4,45 - 4,35 (1H, m), 3,9 - 3,8 (1H, dd), 3,65 - 3,55 (1H, dd), 1,45 (9H, s)

Stupeň B. Kyselina 2(S)-terc.butoxykarbonylamino-3-(2-aminofenylamino)propiónová

Zmes 12,65 g (40,5 mmol) kyseliny 2-terc.butoxykarbonylamino-3-(2-nitrofenylamino)propiónovej a 0,5 g 10 % paládia na uhlí v 100 ml metanolu sa mieša v atmosfére vodíka pri tlaku 100 kPa počas 4 hodín. Roztok sa prefiltruje cez Celit 545 a filtrát sa odparí vo vákuu, čím sa získa 11,95 g zlúčeniny uvedenej v titule s kvantitatívnym výťažkom vo forme tmavohnedej pevnej látky, ktorá sa použije bez čistenia.

’H-NMR (perdeuterometanol), hodnoty δ: 6,75 - 6,70 (3H, m), 6,65 - 6,58 (1H, m), 4,35 - 4,3 (1H, m), 3,6 -

- 3,38 (2H, m), 1,45 (9H, s)

Stupeň C. 3(S)-Terc.butoxykarbonylamino-1,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][ 1,4]diazepin-2-on

K roztoku 11,95 g (40,5 mmol) kyseliny 2-terc.butoxykarbonylamino-3-(2-aminofenylamino)propiónovej v 100 ml dimetylformamidu chladenom na teplotu 0 °C sa pridá 8,54 g (44,5 mmol) l-(3-dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimid-hydrochloridu a zmes sa mieša počas 18 hodín. Reakčná zmes sa vyleje do 700 ml etylacetátu a premyje sa štyri razy 100 ml vody. Organická vrstva sa vysuší nad bezvodným síranom sodným, prefiltruje sa a odparí, čím sa získa hnedá pevná látka, ktorá sa vyčistí flash chromatografiou s použitím zmesi etylacetátu a hexánu v pomere 3 : 7 ako elučného činidla. Získa sa 8 g (71 %) zlúčeniny uvedenej v titule. ’H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,78 (1H, s), 7,02 - 6,95 (1H, m), 6,88 - 6,82 (1H, m), 6,82 - 6,78 (1H, m), 6,75 - 6,70 (1H, m), 5,8 - 5,7 (1H, d), 4,55 - 4,45 (1H, m), 3,95 (1H, s), 3,9 - 3,82 (1H, m), 3,48 -3,4O(1H, m), 1,45 (9H, s)

Stupeň D. Metylester kyseliny (3(S)-terc.butoxykarbonylamino-2-oxo-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]diazepin-l-yl)octovej (zlúčenina 103)

K roztoku 0,94 g (3,38 mmol) 3-terc.butoxykarbonylamino-l,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]diazepin-2-onu v 20 ml bezvodného tetrahydrofuránu s teplotou -78 °C sa po kvapkách pridá 3,4 ml (3,4 ml (3,4 mmol) l,0M roztoku lítiumbis(trimetylsilyl)amidu v tetrahydrofuráne a zmes sa mieša počas 30 minút. K reakčnej zmesi sa po kvapkách pridá 0,44 ml (4 mmol) metyl-brómacetátu a zmes sa potom zohreje na izbovú teplotu. Reakčná zmes sa nariedi 100 ml etylacetátu a premyje sa 50 ml 0,3N hydrogénsíranu draselného, dvakrát vždy 50 ml vody a roztokom chloridu sodného. Zmiešané organické roztoky sa vysušia nad bezvodným síranom sodným, prefíltrujú a odparia, čím sa získa živica, ktorá sa vyčistí flash chromatografiou s použitím zmesi etylacetátu a hexánu v pomere 3 : 7 ako elučného činidla. Získa sa 0,98 g (83 %) zlúčeniny uvedenej v titule vo forme bielej pevnej látky.

’H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,15 - 7,07 (2H, m), 6,98 - 6,94 (1H, m), 6,88 - 6,84 (1H, d), 5,62 -

- 5,55 (1H, d), 4,71 - 4,65 (1H, d), 4,65 - 4,6 (1H, m), 4,33 - 4,27 (1H, d), 3,96 - 3,90 (1H, m), 3,78 (3H, s),

3,44 - 3,37 (1H, m), 1,4 (9H, s)

125

103

b R = COCH CH Ph

2 c R = CH Ph (BOC = terc.butoxykarbonyl, Ph = fenyl)

Metylester kyseliny [2-oxo-3(S)-(3-fenylpropionylamino)-2,3,-4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]diazepin-l-yl]octovej (zlúčenina 104a)

Roztokom 1 g (2,86 mmol) metylesteru kyseliny (3(S)-terc.butoxykarbonylamino-2-oxo-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b]-[l,4]diazepin-l-yl)octovej (zlúčeniny 103) v 25 ml etylacetátu sa počas 2 minút nechá prebublávať bezvodný chlorovodík a zmes sa potom mieša počas 1 hodiny pri izbovej teplote. Reakčná zmes sa odparí, čím sa získa hydrochlorid metylesteru kyseliny 2-oxo-3(S)-amino-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[bJ- [1.4] diazepin-l-yloctovej vo forme bielej pevnej látky. Tento hydrochlorid a 0,47 g (3,15 mmol) kyseliny hydroškoricovej sa rozpustí v 20 ml dimetylformamidu a roztok sa ochladí na teplotu 0 °C. K tomuto roztoku sa pridá 1 ml (5,72 mmol) diizopropyl-etylamínu a potom sa pridá N-hydroxybenzotriazol a l-(3-dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimid-hydrochlorid. Zmes sa mieša počas 18 hodín pri izbovej teplote, potom sa nariedi 150 ml etylacetátu a premyje sa 10 % hydrogénsíranom sodným, 10 % hydrogenuhličitanom sodným a roztokom chloridu sodného. Organická vrstva sa vysuší nad bezvodným síranom sodným, prefiltruje a odparí, čím sa získa surová pevná látka, ktorá sa vyčistí flash chromatografiou s použitím zmesi etylacetátu a dichlórmetánu v pomere 7 : 3 ako elučného činidla. Získa sa 600 mg (55 %) zlúčeniny uvedenej v titule vo forme bielej pevnej látky.

'H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,3 - 6,85 (9H, m), 6,55 - 6,0 (1H, d), 4,88 - 4,82 (1H, m), 4,72 -

- 4,65 (1H, d), 4,28 - 4,22 (1H, m), 3,95 - 3,9 (1H, m), 3,78 (3H, s), 3,65 (1H, široký s), 3,28 - 3,2 (1H, m),

2,95 - 2,84 (2H, m), 2,55 - 2,4 (2H, m)

Kyselina (3(S)-(3-fenylpropionylamino)-2-oxo-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]diazepin-l-yl]octová (zlúčenina 105 a)

Metylester kyseliny (3(S)-(3-fenylpropionylamino)-2-oxo-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]diazepin-l-yl) octovej (zlúčenina 104a) sa rozpustí v 90 % metanole. K reakčnej zmesi sa pridá hydrát hydroxidu lítneho a zmes sa mieša pri izbovej teplote počas 4 hodín. Reakčná zmes sa odparí vo vákuu, čím sa získa biela pevná látka. Táto pevná látka sa rozpustí v 20 ml vody, roztok sa okyslí na pH 5 a extrahuje sa etylacetátom, čím sa získa 304 mg (88 %) zlúčeniny uvedenej v názve vo forme bielej pevnej látky.

'H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,5 - 6,9 (11H, m), 4,92 - 4,8 (1H, m), 4,7 - 4,58 (1H, d), 4,38 -

- 4,25 (1H, d), 3,88 - 3,78 (1H, m), 3,45 - 3,25 (1H, m), 3,05 - 2,85 (2H, m), 2,55 - 2,45 (2H, m)

Kyselina 4-oxo-3(S)-{2-[2-oxo-3(S)-(3-fenylpropionylamino)-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]diazepin-l-yl]acetylamino}-maslová (zlúčenina 106a)

N-[l-(2-Benzyloxy-5-oxotetrahydrofiiran-3-ylkarbamoyl-metyl)-2-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-lH-benzo[b]- [1.4] diazepin-3-yl]-3-fenylpropionamid sa pripraví zo zlúčeniny 105a postupom opísaným v príklade 3 pre

126 zlúčeninu H (stupeň A), čím sa získa 390 mg (93 %) produktu vo forme diastereomérov.

’H-NMR (perdeuterometanol), hodnoty δ: 7,58 - 7,22 (14H, m), 5,78 - 5,73 (0,5H, d), 5,64 (0,5H, s), 5,0 -

- 4,72 (4H, m), 4,54 - 4,42 (2H, m), 3,82 - 3,76 (0,5H, m), 3,68 - 3,62 (0,5H, m), 3,28 - 3,21 (0,5H, m), 3,19 -

- 3,12 (0,5H, m), 3,07 - 2,98 (2H, m), 2,78 - 2,48 (4H, m)

Výsledný produkt sa premení na zlúčeninu 106a spôsobom opísaným v príklade 3, v prípade zlúčeniny H (stupeň D), pričom sa získa zlúčenina uvedená v titule vo forme bielej pevnej látky s výťažkom 17 %. ’H-NMR (perdeuterometanol), hodnoty δ: 7,54 - 6,98 (9H, m), 5,58 - 5,44 (1H, m), 4,8 - 4,2 (4H, m) 3,96 -

- 3,3 (2H, m), 3,30 - 3,05 (1H, m), 2,98 - 2,25 (5H, m)

Metylester kyseliny [2-oxo-5-(3-fenylpropionyl)-3(S)-(3-fenylpropionylamino)-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b]- [l,4]diazepin-l-yl]-octovej (zlúčenina 104b)

Roztokom 1 g (2,86 mmol) metylesteru kyseliny (3(S)-terc.butoxykarbonylamino-2-oxo-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b]-[l,4]diazepin-l-yl)octovej (zlúčeniny 103) v 25 ml etylacetátu sa počas 2 minút nechá prebublávať bezvodný chlorovodík a zmes sa potom mieša počas 1 hodiny pri izbovej teplote. Reakčná zmes sa odparí, čím sa získa hydrochlorid metylesteru kyseliny 2-oxo-3(S)-amino-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]diazepin-l-yloctovej vo forme bielej pevnej látky. Tento hydrochlorid sa suspenduje v 20 ml dichlórmetánu a ochladí sa na teplotu 0 °C. K suspenzii sa pridá 1,6 ml (11,5 mmol) trietyl-amínu a potom sa po kvapkách pridá 0,9 ml (6 mmol) dihydrocin-namoyl-chloridu. Zmes sa zohreje na izbovú teplotu a mieša sa počas 18 hodín. Potom sa zmes nariedi 25 ml dichlórmetánu a premyje sa dvakrát 50 ml vody a raz 50 ml roztoku chloridu sodného. Organická vrstva sa vysuší nad bezvodným síranom sodným, prefiltruje a odparí, čím sa získa viskózny žltý olej, ktorý sa vyčistí flash chromatografiou s použitím zmesi etylacetátu a dichlórmetánu v pomere 1 : 1 ako elučného činidla. Získa sa 1,35 g (92 %) zlúčeniny uvedenej v titule vo forme bielej pevnej látky.

'H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,45 - 7,02 (14H, m), 6,37 - 6,32 (1H, d), 4,78 - 4,72 (1H, m),

4,52 - 4,3 (3H, m), 3,82 - 3,77 (1H, m), 3,74 (3H, s), 3,03 - 2,87 (4H, m), 2,58 - 2,45 (2H, m), 2,45 - 2,35 (1H, m), 2,25-2,16 (1H, m)

Kyselina [2-oxo-5-(3-fenylpropionyl)-3-(3(S)-fenylpropionylamino)-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]diazepin-l-yl]octová (zlúčenina 105b)

680 mg (1,32 mmol) metylesteru kyseliny [2-oxo-5-(3-fenylpropionyl)-3-(3-fenylpropionylamino)-2,3,-

4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]diazepin-l-yl]octovej (zlúčeniny 104b) sa hydrolyzuje postupom opísaným v príklade 105a, čím sa získa 645 mg (98 %) zlúčeniny uvedenej v titule vo forme bielej pevnej látky.

'H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,58 (1H, široký s), 7,5 - 7,42 (1H, m), 7,35 - 6,95 (14H, m),

4,95 - 4,88 (1H, m), 4,64 - 4,55 (1H, d), 4,54 - 4,45 (1H, t), 4,15 - 4,05 (1H, d), 3,75 (1H, m), 3,05 - 2,75 (4H, m), 2,58 - 2,45 (2H, m), 2,45 - 2,28 (1H, m), 2,25 - 2,14 (1H, m)

Kyselina 2-oxo-3(S)-{2-[2-oxo-5-(3-fenylpropionyl)-3(S)-(3-fenylpropionylamino)-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]diazepin-l-yl]acetylamino}maslová (zlúčenina 106b)

Kyselina [2-oxo-5-(3-fenylpropionyl)-3-(3-fenylpropionylamino)-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]diazepin-l-yl]octová a semikarbazón terc.butylesteru kyseliny 3-amino-4-oxomaslovej sa podrobí reakcii postupom uvedeným v príklade 3 v prípade zlúčeniny K (stupeň A), čím sa získa 350 mg (85 %) bielej pevnej látky.

'H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 9,05 (1H, široký s), 7,58 - 7,55 (1H, d), 7,5 - 7,35 (1H, m), 7,35 -

- 6,95 (14H, m), 6,75 - 6,72 (1H, d), 6,25 (1H, široký s), 5,25 (1H, široký s), 4,95 - 4,88 (1H, m), 4,8 - 4,72 (1H, m), 4,55 - 4,4 (2H, m), 3,92 - 3,88 (1H, d), 3,73 - 3,68 (1H, m), 2,95 - 2,8 (4H, m), 2,8 - 2,72 (1H, m),

2,62 - 2,55 (1H, m), 2,55 - 2,45 (2H, m), 2,4 - 2,32 (1H, m), 2,2 - 2,12 (1H, m), 1,45 (9H, s)

Zo semikarbazonu terc.butylesteru kyseliny 4-oxo-3-{2-[2-oxo-5-(3-fenylpropionyl)-3-(3-fenylpropionylamino)-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]diazepin-l-yl]acetylamino}maslovej sa odstráni chrániaca skupina, ako sa opísalo v príklade 3, v prípade zlúčeniny K (stupeň C), čím sa získa 118 mg (47 %) zlúčeniny uvedenej v titule vo forme bielej pevnej látky.

'H-NMR (perdeuterometanol), hodnoty δ: 7,48 - 6,95 (14H, m), 4,65 - 4,15 (6H, m), 3,5 - 3,4 (1H, m), 2,85 -

- 2,72 (4H, m), 2,65 - 2,5 (1H, m), 2,5 - 2,34 (3H, m), 2,34 - 2,15 (2H, m)

Metylester kyseliny [5-benzyl-2-oxo-3(S)-(3-fenylpropionylamino)-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b] [ 1,4]diazepin-1-yl] octovej (zlúčenina 104c)

Do 10 ml dimetylformamidu sa pridá 500 mg (1,31 mmol) metylesteru kyseliny [2-oxo-3-(3-fenylpropionylamino)-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]diazepin-l-yl]octovej (zlúčeniny 104a), 155 mg (1,58 mmol) uhličitanu vápenatého a 170 μΐ (1,44 mmol) benzylbromidu a zmes sa zohrieva počas 8 hodín na teplotu 80 °C. Zmes sa nariedi 150 ml etylacetátu a premyje sa štyri razy 50 ml vody. Organická vrstva sa vysuší nad bezvodným síranom sodným, prefiltruje a odparí, čím sa získa viskózny žltý olej, ktorý sa vyčistí flash chro

127 matografiou s použitím zmesi dichlórmetánu a etylacetátu v pomere 8 : 2 ako elučného činidla. Získa sa 460 mg (75 %) zlúčeniny uvedenej v titule vo forme bielej pevnej látky.

*H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,34 - 7,05 (14H, m), 6,32 - 6,28 (1H, d), 4,84 - 4,76 (1H, d),

4,76 - 4,70 (1H, m), 4,43 - 4,37 (1H, d), 4,26 - 4,18 (1H, d), 4,06 - 4,00 (1H, d), 3,79 (3H, s), 3,45 - 3,37 (1H, m), 3,02 - 2,95 (1H, m), 2,90 - 2,82 (2H, m), 2,5 - 2,34 (2H, m)

Kyselina [5-benzyl-2-oxo-3(S)-(3-fenylpropionylamino)-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]diazepin-l-yl]octová (zlúčenina 105c) sa pripraví hydrolýzou esteru 102c postupom opísaným v prípade zlúčeniny 105a, čím sa získa 450 mg (98 %) zlúčeniny uvedenej v titule vo forme bielej pevnej látky.

'H-NMR (perdeuterometanol), hodnoty δ: 7,5 - 7,05 (14H, m), 6,4 (1H, široký S), 4,85 - 4,55 (2H, m), 4,45 -

- 4,21 (2H, m), 4,12 - 3,92 (1H, d), 3,45 - 3,3 (1H, m), 3,1 - 2,8 (3H, m), 2,55 - 2,28 (3H, m)

Kyselina 3(S)-{2-[5-benzyl-2-oxo-3-(3(S)-fenylpropionylamino)-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]diazepin-l-yl]acetylamino}-4-oxomaslová (zlúčenina 106c)

Kyselina [5-benzyl-2-oxo-3(S)-(3-fenylpropionylamino)-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]diazepin-l-yl]octová a semikaŕbazon terc.butylesteru kyseliny 3(S)-amino-4-oxomaslovej sa podrobí reakcii postupom uvedeným v príklade 3 v prípade zlúčeniny K (stupeň A), čím sa získa 260 mg (85 %) bielej pevnej látky. 'H-NMR (perdeuterometanol), hodnoty Ô: 7,35 - 7,0 (15H, m), 4,94 - 4,88 (1H, m), 4,68 - 4,58 (1H, d), 4,57 -

- 4,52 (1H, m), 4,41 - 4,34 (1H, d), 4,3 - 4,23 (1H, d), 4,1 - 4,04 (1H, d), 3,18 - 3,11 (1H, m), 3,09 - 2,98 (1H, m), 2,78 - 2,72 (2H, t), 2,65 - 2,57 (1H, m), 2,42 - 2,33 (3H, m)

Zo semikarbazonu terc.butylesteru kyseliny 3(S)-{2-[5-benzyl-2-oxo-3(S)-(3-fenylpropionylamino)-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b] [l,4]diazepin-l-yl]acetylamino}-4-oxomaslovej sa odstráni chrániaca skupina, ako sa opísalo v príklade 3, v prípade zlúčeniny K (stupeň C), čím sa získa 168 mg (81 %) zlúčeniny uvedenej v názve vo forme bielej pevnej látky.

’H-NMR (perdeuterometanol), hodnoty δ: 7,37 - 7,0 (14H, m), 4,75 - 4,62 (1H, m), 4,6 - 4,45 (2H, m), 4,4 -

- 4,21 (2H, m), 4,15 - 3,95 (2H, m), 3,15 - 3,0 (2H, m), 2,82 - 2,67 (2H, m), 2,65 - 2,52 (1H, m), 2,5 - 2,32 (3H, m)

(Ph = fenyl, tBu = terc.butyl)

4-Terc.butoxykyrbonyl-2-oxo-3(S)-{2-[2-oxo-5-(3-fenylpropionyl)-3(S)-(3-fenylpropionylamino)-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b] [l,4]-diazepin-l-yl]acetylamino}butylester kyseliny 2,6-dichlórbenzoovej (zlúčenina 107a)

Výsledný semikarbazón sa pripraví reakciou zlúčeniny 105b a terc.butyl-3-(alyloxykarbonylamino)-4-oxo-5-(2,6-di-chlórbenzoyloxy)pentanoátu (WO 93 16710), ako sa opísalo v prípade zlúčeniny 56a, čím sa získa 256 mg (58 %) zlúčeniny uvedenej v titule vo forme bielej pevnej látky.

’H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,45 - 7,04 (17H, m), 6,45 - 6,34 (2H, m), 5,28 - 5,21 (1H, m),

5,1 - 5,0 (1H, m), 4,95 - 4,90 (1H, m), 4,75 - 4,70 (1H, m), 4,55 - 4,44 (1H, m), 4,32 - 4,22 (1H, dd), 3,99 - 3,85 (1H, dd), 3,85 - 3,76 (1H, m), 3,06 - 2,83 (5H, m), 2,83 - 2,74 (1H, m), 2,6 - 2,44 (2H, m), 2,43 - 2,33 (1H, m), 2,24 - 2,15 (1H, m), 1,45 (9H, s)

4-Karboxy-2-oxo-3(S)-{2-[2-oxo-5-(3-fenylpropionyl)-3(S)-(3-fenylpropionylamino)-2,3,4,5-tetrahydro

128 benzo[b][l,4]-diazepin-l-yl]acetylamino}butylester kyseliny 2,6-dichlórbenzoovej (zlúčenina 108a) sa pripraví zo zlúčeniny 107a spôsobom opísaným v prípade zlúčeniny 57a, čím sa získa 156 mg (68 %) zlúčeniny uvedenej v titule vo forme bielej pevnej látky.

'H-NMR (perdeuterometanol), hodnoty δ: 7,5 - 6,9 (17H, m), 5,16 - 5,02 (1H, dd), 4,88 - 4,71 (2H, m), 4,62 -

- 4,44 (2H, m), 4,42 - 4,28 (2H, m), 4,27 - 4,18 (1H, m), 3,47 - 3,41 (1H, m), 2,90 - 2,60 (5H, m), 2,46 - 2,4 (2H, m), 2,39-2,18 (2H, m)

Terc.butylester kyseliny 4-(7-metoxybenzoxazol-2-yl)-4-oxo-3(S){2-[2-oxo-5-(3-fenylpropionyl)-3(S)-(3-fenylpropionylamino)-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]diazepin-l-yl]acetylamino}-maslovej (zlúčenina 107b)

Terc.butylester kyseliny 4(R,S)-hydroxy-4-(7-metoxy-benzoxazol-2-yl)-3(S)-{2-[2-oxo-5-(3-fenylpropionyl)-3(S)-(3-fenylpropionylamino)-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]diazepin-l-yl]acetylamino}maslovej sa pripraví zo zlúčeniny 105b a zlúčeniny 66a spôsobom opísaným v príklade 5 v prípade zlúčeniny 67, čím sa získa biela pevná látka s výťažkom 56 %.

'H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,72 - 6,78 (19H, m), 6,37 - 6,28 (1H, m), 5,17 - 5,08 (0,5H, m),

4,92 - 4,82 (0,5H, m), 4,81 - 4,6 (1H, m), 4,6 - 4,35 (3H, m), 4,05 - 3,9 (1H, m), 3,95 (3H, s), 3,82 - 3,7 (1H, m), 2,96 - 2,05 (10H, m), 1,45 (4,5H, s), 1,38 (4,5H, s)

Výsledný produkt sa premení na zlúčeninu 107b spôsobom opísaným v príklade 5 v prípade zlúčeniny 68a, čím sa získa zlúčenina uvedená v titule vo forme bielej pevnej látky s výťažkom 56 %.

’H-NMR (perdeuterometanol), hodnoty δ: 7,62 - 6,8 (17H, m), 5,64 - 5,58 (0,5H, t), 5,52 - 5,46 (0,5H, t),

4,62 - 4,47 (2H, m), 4,40 - 4,32 (1H, m), 3,9 (1,5H, s), 3,88 (1,5H, s), 3,43 -3,37 (1H, m), 3,0 - 2,92 (1H, m),

2,90 - 2,62 (6H, m), 2,5 - 2,4 (2H, m), 2,28 - 2,15 (2H, m), 1,32 (4,5H, s), 1,25 (4,5H, s)

Kyselina 4-(7-metoxybenzoxazol-2-yl)-4-oxo-3(S)-{2-[2-oxo-5-(3-fenylpropionyl)-3(S)-(3-fenylpropionylamino)-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]diazepin-l-yl]acetylamino}maslová (zlúčenina 108b) sa pripraví spôsobom opísaným v príklade 5 v prípade zlúčeniny 69a, čím sa získa zlúčenina uvedená v titule vo forme bielej pevnej látky s výťažkom 50 %.

’H-NMR (perdeuterometanol), hodnoty δ: 7,41 - 6,88 (17H, m), 5,6 - 5,55 (0,5H, t), 5,48 - 5,43 (0,5H, t),

4,64 -4,45 (2H, m), 4,45 - 4,30 (1H, m), 3,93 (1,5H, s), 3,90 (1,5H, s), 3,47 - 3,34 (1H, m), 3,10 - 2,85 (2H, m), 2,84 - 2,63 (5H, m), 2,6 - 2,4 (2H, m), 2,3 - 2,1 (2H, m)

Terc.butylester kyseliny 4-[5-(2,6-dichlórfenyl)oxazol-2-yl]-4-oxo-3(S)-{2-[2-oxo-5-(3-fenylpropionyl)-3(S)-(3-fenylpropionylamino)-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]diazepin-l-yl]acetyl-amino}maslovej (zlúčenina 107c)

Terc.butylester kyseliny 4-[5-(2,6-dichlórfenyl)oxazol-2-yl]-4(R,S)-hydroxy-3(S)-{2-[2-oxo-5-(3-fenylpropionyl)-3(S)-(3-fenylpropionylamino)-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]diazepin-l-yl]acetylamino}maslovej sa pripraví zo zlúčeniny 106c a zlúčeniny 99 podobným spôsobom, ako sa opísal v prípade zlúčeniny 67a v príklade 5, čím sa získa biela pevná látka s výťažkom 72 %.

‘H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,71 - 7,64 (1H, m), 7,58 - 7,42 (2H, m), 7,42 - 6,92 (15H, m),

6,5 - 6,37 (2H, m), 5,15 - 5,04 (1H, m), 4,88 - 4,68 (2H, m), 4,57 - 4,37 (2H, m), 4,28 - 4,13 (1H, m), 3,87 -

- 3,64 (2H, m), 3,04 - 2,80 (4H, m), 2,76 - 2,68 (1H, m), 2,67 - 2,42 (3H, m), 2,41 - 2,31 (1H, m), 2,22 - 2,12 (1H, m), 1,45 (9H, s)

Výsledný produkt sa premení na zlúčeninu 107c podobným spôsobom, ako sa opísal v prípade zlúčeniny 68a v príklade 5, čím sa získa zlúčenina uvedená v titule vo forme bielej pevnej látky s kvantitatívnym výťažkom.

’H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,47 - 6,98 (18H, m), 6,52 - 6,42 (1H, d), 5,6 - 5,52 (1H, m), 4,78 -

- 4,71 (1H, m), 4,52 - 4,40 (2H, m), 4,03 - 3,94 (0,67H, m), 3,94 - 3,85 (0,33H, m), 3,85 - 3,75 (1H, m),

3,45 - 3,33 (1H, m), 3,08 - 2,98 (1H, m), 2,97 - 2,84 (4H, m), 2,55 - 2,43 (2H, m), 2,43 - 2,32 (1H, m), 2,23 -

- 2,13 (1H, m), 1,35 (9H, s)

Kyselina 4-[5-(2,6-dichlórfenyl)oxazol-2-yl]-4-oxo-3(S)-{2-[2-oxo-5-(3-fenylpropionyl)-3(S)-(3-fenylpropionylamino)-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]diazepin-l-yl]acetylamino} maslová (zlúčenina 108c) sa pripraví zo zlúčeniny 107c podobným spôsobom, ako sa opísal v prípade zlúčeniny 69a v príklade 5, čím sa získa zlúčeniny uvedená v titule vo forme bielej pevnej látky s výťažkom 72 %.

’H-NMR (perdeuterometanol), hodnoty δ: 7,58 - 7,0 (18H, m), 5,62 - 5,53 (0,67H, m), 5,52 - 5,47 (0,33H, m), 4,68 (3H, m), 3,54 - 3,42 (1H, m), 3,1 - 2,92 (2H, m), 2,88 - 2,68 (5H, m), 2,63 - 2,45 (2H, m), 2,40 -

- 2,22 (2H, m)

129

109

110

111

Stupeň B

Stupeň D

Stupeň C t

a R^X=CH b R^X=H (Ph - fenyl, Me = metyl, Bu.t = terc.butyl,

Cbz = benzyloxykarbonyl, Boe = terc.butoxykarbonyl)

Soľ kyseliny 3(S)-{2(R,S)-[4-benzyl-7-oxo-6(S)-(N-benzyloxy-karbonylamino)-[l,4]diazepan-l-yl]propionylamino}-4-oxomaslovej s kyselinou triíluóroctovou (zlúčenina 114a)

Stupeň A. K roztoku 0,85 g (2,2 mmol) terc.butyl-2-N-benzyloxykarbonyl-3-N-benzyl-(S)-2,3-diaminopropionátu (zlúčeniny 110), 0,65 g (2,7 mmol) metylesteru kyseliny 3-(N-terc.butoxy-karbonyl)amino-2-metyl-5-oxopentánovej (zlúčeniny 109a), 0,1 ml (1,8 mmol) kyseliny octovej, 0,36 g (2 mmol) octanu sodného a 1 g molekulárneho sita (4 x 10'¹⁰ m) v 45 ml metanolu sa pridá 0,33 g (5,3 mmol) nátriumkyanbórohydridu. Zmes sa mieša cez noc pri teplote 25 °C, potom sa prefiltruje cez celit a zahustí pri zníženom tlaku. Zvyšok sa rozpustí v IN hydroxide sodnom a extrahuje sa trikrát vždy 40 ml etylacetátu. Organická vrstva sa vysuší síranom horečnatým, prefiltruje a odparí pri vzniku oleja. Chromatografickým spracovaním na silikagéli s použitím zmesi hexánu a etylacetátu v pomere 4 : 1 ako elučného činidla sa získa 0,92 g (výťažok 68 %) zlúčeniny 11 la vo forme oleja.

Stupeň B. Uvedený materiál sa rozpustí v 3 ml dichlórmetánu, roztok sa ochladí na teplotu 0 °C a pridá sa 25 % roztok kyseliny trifluóroctovej v dichlórmetáne (20 ml). Zmes sa potom nechá zohriať na teplotu 25 °C a mieša sa, až kým sa pomocou chromatografie na tenkej vrstve s použitím zmesi hexánu a etylacetátu v pomere 4 : 1 ako elučného činidla zistí, že sa reakcia skončila. Rozpúšťadlo sa odstráni pri zníženom tlaku a zvyšok sa vysuší vo vákuu, potom sa rozpustí v 40 ml dichlórmetánu a pridá sa 1 ml (9 mmol) 4-me

130 tylmorfolínu, 0,2 g (1,5 mmol) 1-hydroxybenzotriazolu (HOBT) a 0,61 g (3,2 mmol) l-(3-dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimid-hydrochloridu (EDC). Výsledná zmes sa mieša cez noc pri teplote 25 °C, potom sa nariedi dichlórmetánom a premyje sa vodou. Organická vrstva sa vysuší síranom horečnatým, prefiltruje a odparí, čím sa získa olej. Chromatografickým spracovaním na silikagéli s použitím zmesi hexánu a etylacetátu v pomere 3 : 2 ako elučného činidla sa získa 0,49 g (výťažok 74 %) zlúčeniny 112a vo forme viskózneho oleja.

Stupeň C. Roztok 0,15 g(0,3 2 mmol) metylesteru kyseliny 2(R, S)-[4-benzyl-7-oxo-6(S)-(N-benzyloxykarbonylamino)-[l,4]-diazepan-l-yl]propiónovej (zlúčeniny 112a) sa rozpustí v metanole, pridá sa 0,32 ml IM hydroxidu lítneho, zmes sa mieša počas 5,5-hodiny pri teplote 25 °C a potom sa odparí do sucha. Zvyšok sa azeotropuje dvakrát vždy s 10 ml etanolu, dvakrát vždy s 10 ml acetonitrilu a dvakrát vždy s 10 ml benzénu, a potom sa vysuší vo vákuu. Výsledný zvyšok sa premení na zlúčeninu 114a podobným spôsobom, ako sa opísal v príklade 3 v prípade zlúčeniny K (stupňa A, B a C) a vyčistí sa vysokoúčinnou kvapalinovou chromatografiou (HPLC) s obrátenými fázami na Ci₈-silikagélu s použitím 0,1 % kyseliny trifluóroctovej vo vode /0,1 % kyseliny trifluóroctovej v acetonitrile ako elučného činidla. Získa sa 17 mg (výťažok 10 %) požadovanej zlúčeniny uvedenej v názve vo forme viskózneho oleja.

'H-NMR (500 MHz, perdeuterometanol), hodnoty δ: 1,15 (m, 3H), 2,30 - 2,70 (m, 6H), 2,72 - 2,95 (široký m, 6H), 3,30 - 3,80 (m, 4H) , 4,10 (m, 1H), 4,40 (m, 4H), 4,95 (m, 1H), 6,95 - 7,10 (široký s, 5H), a 7,12 - 7,20 ppm (široký s, 5H)

Soľ kyseliny 3(S)-{2-[4-benzyl-7-oxo-6(S)-(N-benzyloxykarbonylamino)-[l,4]diazepan-l-yl]acetylamino}-4-oxomaslovej s kyselinou trifluóroctovou (zlúčenina 114b) sa pripraví zo zlúčeniny 109 b podobným spôsobom, ako sa opísal v prípade syntézy zlúčeniny 114a, čím sa získa 85 mg viskózneho oleja.

'H-NMR (500 MHz, perdeuterometanol), hodnoty δ: 1,20 (d, J = 7 Hz, 3H), 2,28 (m, 2H), 2,60 (m, 2H), 3,18 (široký s, 6H), 3,35 - 3,45 (m, 2H), 3,60 - 3,95 (m, 2H), 4,15 (m, 1H), 4,32 (m, 1H), 4,42 (m, 1H), 5,00 (širokým, 2H), 7,20 (široký s, 5H), a 7,40 ppm (široký s, 5H) ¹⁹F-NMR (470 MHz, perdeuterometanol), hodnota δ: -10,72 ppm (s, 3F)

Kyselina 4-oxo-3(S)-{2(R,S)-[7-oxo-4-(3-fenylpropionyl)-6(S)-(3-fenylpropionylamino)-[l,4]diazepan-l-yl]propionylamino} maslová (zlúčenina 115)

Stupeň D. Suspenzia 0,22 g (0,49 mmol) metylesteru kyseliny 2(R,S)-[4-benzyl-7-oxo-6(S)-(N-benzyloxykarbonylamino)-[l,4]diazepan-l-yl]propiónovej (zlúčeniny 112b) a 20 % hydroxidu paládnatého na uhlí (50 mg) v etanole sa mieša v atmosfére vodíka počas 7 hodín. Rozpúšťadlo sa odparí pri zníženom tlaku a zvyšok sa rozpustí v 20 ml dichlórmetánu, potom sa pridá 1 ml trietylamínu a 170 mg (1 mmol) dihydrocínnamoyl-chloridu. Výsledná zmes sa mieša cez noc, potom sa nariedi etylacetátom a premyje sa IN hydroxidom sodným. Organická vrstva sa vysuší síranom horečnatým, prefiltruje a odparí pri vzniku oleja. Chromatografickým spracovaním na silikagéli s použitím zmesi hexánu a etylacetátu v pomere 4 : 1 ako elučného činidla sa získa 0,175 g (výťažok 75 %) zlúčeniny 113 vo forme oleja.

Stupeň C. 0,15 g (0,32 mmol) zlúčeniny 113 sa rozpustí v metanole, pridá sa 0,32 ml IM hydroxidu lítneho, zmes sa mieša pri teplote 40 °C cez noc a odparí sa do sucha. Zvyšok sa azeotropuje dva razy vždy s 10 ml etanolu, dvakrát vždy s 10 ml acetonitrilu a dvakrát vždy s 10 ml benzénu a potom sa vysuší vo vákuu. Výsledný zvyšok sa premení na zlúčeninu 115 podobným spôsobom, ako sa opísal v príklade 3 v prípade zlúčeniny K (stupňa A, B a C).

Boe

11í .N?® n

H

117 no

Stupeň F

131

Ph f Y'

H q

11,

Stupeň H

Stupeň G

111

121 (Ph = fenyl, Bu-t - terc.butyl, Cbz = benzyloxykarbonyl,

Boe = terc.butoxykarbonyl)

Kyselina 3-{2-[2,4-dibenzyl-3,7-dioxo-6-(N-benzyloxykarbonylamino)-[l,4]diazepan-l-yl]acetylamino}-4-oxomaslová (zlúčenina 121)

Stupeň E. Roztok 1,77 g (4,6 mmol) terc.butyl-2-N-benzoxykarbonyl-3-N-benzyl-(S)-2,3-diaminopropionátu (zlúčeniny 110) 1,04 g (4,8 mmol) N-alyl-N-terc.butoxykarbonyl-(S)-fenylalanínu (zlúčeniny 116), 0,74 g (5,5 mmol) 1-hydroxybenzo-triazolu (HOBT) a 1,33 g (6,9 mmol) l-(3-dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimid-hydrochloridu (EDC) v 50 ml dichlórmetánu sa mieša pri teplote 25 °C počas 16 hodín, potom sa nariedi 100 ml dichlórmetánu a premyje sa vodou. Organická vrstva sa vysuší síranom horečnatým, prefiltruje a odparí pri vzniku oleja. Chromatografickým spracovaním na silikagéli s použitím zmesi hexánu a etylacetátu v pomere 85 : 15 sa získa 1,34 g (výťažok 43 %) zlúčeniny 117 vo forme bezfarebného viskózneho oleja.

Stupeň F. 1,34 g zlúčeniny 117 sa rozpustí v 3 ml dichlórmetánu a pridá sa 50 % roztok kyseliny trifluóroctovej v dichlórmetáne (20 ml). Po uplynutí 1,5-hodiny sa rozpúšťadlo odstráni pri zníženom tlaku, zvyšok sa vysuší vo vákuu, potom sa rozpustí v 50 ml dichlórmetánu a pridá sa 0,2 ml (2 mmol) 4-metylmorfolínu, 0,27 g (2 mmol) 1-hydroxybenzotriazolu (HOBT a 0,8 g (4 mmol) l-(3-dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimid-hydrochloridu (EDC). Zmes sa mieša cez noc pri teplote 25 °C, potom sa nariedi dichlórmetánom a premyje sa vodou. Organická vrstva sa vysuší síranom horečnatým, prefiltruje a odparí pri vzniku oleja. Chromatografickým spracovaním na silikagéli s použitím zmesi hexánu a etylacetátu v pomere 7 : 3 sa získa 0,8 g (výťažok 80 %) zlúčeniny 118 vo forme viskózneho oleja.

Stupeň G. 0,8 g zlúčeniny 118 sa rozpustí v 40 ml metanolu, roztok sa ochladí na teplom -78 °C a sýti sa ozónom, až sa farba roztoku zafarbí na modro. Prebytok ozónu sa odstráni prefúkaním argónom, potom sa pridá 5 ml dimetylsulfidu, zmes sa nechá zohriať na teplotu 25 °C a mieša sa počas 3 hodín. Odstránením rozpúšťadla a chromatografickým spracovaním na silikagéli s použitím zmesi hexánu a etylacetátu v pomere 1 : 1 sa získa 0,74 g (výťažok 74 %) zlúčeniny 119 vo forme bielej pevnej látky.

Stupeň H. 0,2 g (0,4 mmol) zlúčeniny 119 sa rozpustí v 25 ml acetónu, roztok sa ochladí na teplotu 0 °C a po kvapkách sa pridáva roztok Jonesovho činidla, až kým dôjde k trvalému oranžovému zafarbeniu. Potom sa k zmesi pridá 5 ml 2-propanolu a výsledný roztok sa prefiltruje cez celit a premyje sa acetónom. Odstránením rozpúšťadla sa získa zelenobiela pevná látka, ktorá sa vysuší vo vákuu, čím sa získa zlúčenina 120. Výsledný

132 zvyšok sa premení na zlúčeninu 121 podobným spôsobom, ako sa opísal v príklade 3 v prípade zlúčeniny K (stupňa A, B a C). Chromatografickým spracovaním na silikagéli s použitím zmesi dichlórmetánu, metanolu a kyseliny octovej v pomere 95 : 4,5 : 0,5 ako elučného činidla sa získa 85 mg (výťažok 53 %) krémovo zafarbenej pevnej látky, ktorá sa identifikuje na základe nasledujúcich spektrálnych údajov ako kyselina 3-{25 -[2,4-di-benzyl-3,7-dioxo-6-(N-benzyloxykarbonylamino)-[l,4]diazepan-l-yl]acetylamino}-4-oxomaslová (zlúčenina 121).

‘H-NMR (500 MHz, perdeuterometanol), hodnoty δ: 2,38 (m, 1H), 2,45 (m, 1H), 3,21 (široký s, 2H), 3,32 - 3,39 (široký m, 6H), 3,85 (m, 1H), 4,05 (m, 1H), 4,21 (širokým, 1H) , 4,31 (široký s, 1H), 4,45 (široký m, J = 11 Hz, 1H), 4,95 (široký s, 4H), 7,20 (široký s, 5H) a 7,33 - 7,45 ppm (m, 5H) ¹⁹F-NMR (470 MHz, perdeuterometanol), hodnoty 6: -10,62 ppm (s, 3F)

(tBu = terc.butyl)

Terc. butyl-(3S)-N-(alyloxykarbonyl)-3-amino-5-(2-chlórfenyl-metyltio)-4-oxopentanoát (zlúčenina 123)

K miešanému roztoku 749 mg (2,14 mmol) (3S)-terc.butyl-N-(alyloxykarbonyl)-3-amino-5-bróm-4-oxopentanoátu (zlúčenina 122; WO 93 16710) v 20 ml dimetylformamidu sa pridá 273 mg (4,70 mmol) fluoridu draselného a potom 373 mg (2,35 mmol) 2-chlórfenylmetyltiolu. Zmes sa mieša počas 3,5-hodiny, potom sa prileje 50 ml vody a zmes sa extrahuje dva razy vždy 50 ml etylacetátu. Zmiešané organické extrakty sa premyjú štyri razy vždy 50 ml vody a potom 50 ml roztoku chloridu sodného. Vysuší sa nad síranom horečna20 tým a zahustí, čím sa získa olej, ktorý sa vyčistí pomocou flash chromatografíe s použitím 10 - 35 % etylacetátu v hexáne ako elučného činidla, čím sa získa 832 mg (91 %) bezfarebnej pevnej látky s teplotou topenia 45 - 46 °C.

[a]_D ²⁰ -19,0 ° (c = 1,0, dichlórmetán)

Infračervené spektrum (film): 3340, 2980, 2935, 1725, 1712, 1511, 1503, 1471, 1446, 1421, 1393, 1368, 25 1281, 1244, 1157, 1052, 1040, 995, 764, 739 ‘H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,36 (2H, m), 7,21 (2H, m), 5,91 (2H, m), 5,27 (2H, m), 4,76 (1H, m), 4,59 (2H, d), 3,78 (2H, s), 3,36 (2H, m), 2,91 (1H, dd), 2,74 (1H, dd), 1,43 (9H, s) Analýza pre C20H26CINO5S: vypočítané: 56,13% C, 6,12% H, 3,27% N, 7,49 % S;

nájdené: 56,08 % C, 6,11% H, 3,26% N, 7,54 % S.

Hmotnostná spektrometria (Cl): 430/28 (M⁺ +1, 3 %), 374/2 (100)

133

Terc.butyl-(3S)-3-(2-(6-benzyl-l,2-dihydro-2-oxo-3-(3-fenylpropionylamino)-l-pyridyl)acetylamino-5-(2-chlórfenylmetyltio)-4-oxopentanoát (zlúčenina 124a)

300 mg (0,76 mmol) kyseliny 6-benzyl-l,2-dihydro-2-oxo-3-(3-fenylpropionylamino)pyridyloctovej (zlúčeniny 52b) v 7 ml tetrahydrofuránu sa mieša s 205 mg (1,52 mmol) 1-hydroxy-benzotriazolu a l-(3-dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimid-hydrochloridom. Po uplynutí 3 minút sa pridá 12 kvapiek vody, zmes sa mieša počas 10 minút a potom sa pridá 325 mg (0,76 mmol) terc.butyl-(3S)-N-(alyloxykarbonyl)-3-amino-5-(2-chlór-fenylmetyltio)-4-oxopentanoátu (zlúčeniny 123), 20 mg bis(tri-fenylfosfín)paládium(II)chloridu a 0,6 ml (2,28 mmol) tributylcmhydridu. Zmes sa mieša počas 5 hodín pri izbovej teplote, vyleje sa do etylacetátu, premyje sa vodnou IM kyselinou chlorovodíkovou (dva razy), vodným hydrogenuhličitanom sodným, roztokom chloridu sodného, vysuší sa síranom horečnatým a zahustí. Zvyšok sa trituruje s pentánom a supernatant sa odstráni. Chromatografickým spracovaním na silikagéli s použitím 50 % etylacetátu v hexáne ako elučného činidla sa získa 439 mg (81 %) bezfarebnej peny.

[cc]_D ²¹ -18,3 ⁰ (c = 0,5, dichlórmetán)

Infračervené spektrum (bromid draselný): 3356, 3311, 1722, 1689, 1646, 1599, 1567, 1513, 1367, 1154 'H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 8,39 (1H, d), 8,23 (1H, s), 7,24 (14H, m), 6,16 (1H, d), 4,95 (1H, m), 4,63 (2H, m), 4,02 (2H, s), 3,74 (2H, S), 3,27 (2H, s), 2,85 (6H, m), 1,40 (9H, s)

Analýza pre C₃9H₄₂C1N₃O₆S: vypočítané: 65,39 % C, 5,91% H, 5,87% N;

nájdené: 65,51% C, 5,99% H, 5,77% N.

Terc.butyl-[3S(lS,9S)]-3-(6,10-dioxo-l,2,3,4,7,8,9,10-oktahydro)-9-(3-fenylpropionylamino)-6H-pyridazino[l,2-a][l,-2]diazepín-l-karboxamido-5-(2-chlórfenylmetyltio)-4-oxopentanoát (zlúčenina 124b) sa pripraví podobným spôsobom ako zlúčenina 124a z tioéteru 123 a kyseliny 3S(lS,9S)-3-(6,10-dioxo-1,2,3,4,7,8,9,10-oktahydro)-9-(3-fenylpropionylamino)-6H-pyridazino[l ,2-a][ 1,2]diazepín-l-karboxylovej (zlúčeniny 45a), čím sa získa 452 mg (50 %) bezfarebnej penovitej látky s teplotou topenia 55 - 57 °C. [a]_D ²² -94,0 ° (c = 0,12, dichlórmetán)

Infračervené spektrum (bromid draselný): 3288, 2934, 1741, 1722, 1686, 1666, 1644, 1523, 1433, 1260, 1225, 1146, 757, 'H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,35 (3H, m), 7,20 (7H, m), 6,46 (1H, d), 5,21 (1H, m), 4,97 (2H, m), 4,56 (1H, m), 3,75 (2H, s), 3,25 (3H, m), 2,93 (5H, m), 2,71 (1H, dd), 2,55 (2H, m), 2,30 (1H, m), 1,92 (3H, m), 1,66 (2H, m), 1,42 (9H, s) Analýza pre C₃₅H4₃ClN₄O7S.0,25H₂O: vypočítané: 59,73 % C, 6,23 % H, 5,04 % Cl, 7,96 % N, 4,56 % S;

nájdené: 59,73 % C, 6,19% H, 5,10 % Cl, 7,79% N, 4,58% S.

Hmotnostná spektrometria (-FAB): 697 (M-l, 100)

Kyselina (3S)-3-(2-(6-benzyl-l,2-dihydro-2-oxo-3-(3-fenylpropionylamino)-l-pyridyl)acetylamino-5-(2-chlórfenylmetyltio)-4-oxopentánová (zlúčenina 125a)

K 400 mg (0,56 mmol) terc.butyl-3-(2-(6-benzyl-l,2-di-hydro-2-oxo-3-(3-fenylpropionylamino)-l-pyridyl)acetyíamino-5-(2-chlórfenylmetyltio)-4-oxopentanoátu (zlúčeniny 124a) v 3 ml dichlórmetánu sa pri teplote 0 °C pridajú 3 ml kyseliny trifluóroctovej a zmes sa mieša pri teplote 0 °C počas 1 hodiny a pri izbovej teplote počas 0,5-hodiny. Roztok sa zahustí, potom sa opäť rozpustí v dichlórmetáne a zasa zahustí. Tento postup sa tri razy opakuje. Zvyšok sa mieša v éteri počas 1 hodiny a prefiltruje, čím sa získa 364 mg (99 %) bezfarebnej pevnej látky s teplotou topenia 165 až 167 °C.

[ct]_D ²² -27,7 ° (c = 0,2, dichlórmetán)

Infračervené spektrum (bromid draselný): 3289, 1712, 1682, 1657, 1645, 1593, 1562, 1527, 1497, 1416, 1203, 1182 *H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 8,47 (1H, d), 8,21 (1H, s), 7,70 (1H, d), 7,22 (14H, m), 6,24 (1H,

d), 5,03 (1H, m), 4,65 (2H, m), 4,06 (2H, s), 3,69 (2H, m), 3,23 (2H, m), 2,88 (6H, m)

Kyselina [3S(lS,9S)]-3-(6,10-dioxo-l,2,3,4,7,8,9,10-oktahydro)-9-(3-fenylpropionylamino)-6H-pyridazino[l,2-a][l,2]-diazepín-l-karboxamido-5-(2-chlórfenylmetyltio)-4-oxopentánová (zlúčenina 125b) sa pripraví podobným spôsobom ako zlúčenina 125a z terc.butylesteru 124b, čím sa získa 362 mg (93 %) bezfarebného prášku s teplotou topenia 76 - 80 °C.

[cc]_D ²¹ -134 ° (c = 0,10, metanol)

Infračervené spektrum (bromid draselný): 3309, 2935, 1725, 1658, 1528, 1445, 1417, 1277, 1219, 1175 'H-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid), hodnoty δ: 8,80 (1H, d), 8,19 (1H, d), 7,31 (9H, m), 5,09 (1H, m),

4,74 (1H, m), 4,63 (1H, m), 4,35 (1H, m), 3,76 (2H, m), 3,28 (3H, m), 2,80 (5H, m), 2,52 (4H, m), 2,16 (2H, m), 1,90 (3H, m)

134

8,65 % N,

8,45 % N,

4,95 % S;

4,88 % S.

Analýza pre C₃iH₃5Cl₂N4O₇S.0,25H₂O: vypočítané: 57,49 % C, 5,53 % H, nájdené: 57,35 % C, 5,43% H,

Hmotnostná spektrometria (-FAB): 641 (M-l, 100)

Údaje v uvedených príkladoch svedčia o tom, že zlúčeniny podľa vynálezu majú inhibičnú účinnosť na enzým konvertujúci interleukín-ΐβ.

Pokiaľ sú zlúčeniny podľa vynálezu schopné inhibovať ICE in vitro a môžu sa orálne podávať cicavcom, sú očividne klinicky využiteľné pri liečení ochorení sprostredkovaných IL-1. Uvedené testy predpovedajú schopnosť zlúčenín inhibovať ICE in vivo.

Hoci sa opísal rad uskutočnení vynálezu, je zrejmé, že sa základné konštrukcie dajú meniť na vytvorenie iných realizácií, ktoré využívajú produkty a spôsoby podľa vynálezu. Je teda potrebné zobrať do úvahy, že rozsah vynálezu je definovaný pripojenými patentovými nárokmi a nie konkrétnou realizáciou, ktorá sa uviedla ako príklady.

PATENTOVÉ NÁROKY

Claims (1)

1. Inhibítor enzýmu konvertujúceho interleukín l-β všeobecného vzorca (a) /

Ri-NH-Xi \

(CH_:)_m-R₃ (a), v ktorom

X¹ predstavuje skupinu CH, g má hodnotu 0 alebo 1,

J znamená atóm vodíka, pričom atóm vodíka je prípadne nahradený hydroxyskupinou alebo atómom fluóru s podmienkou, že ak je prvý atóm vodíka nahradený hydroxyskupinou, druhý atóm vodíka nie je nahradený, m má hodnotu 0, 1 alebo 2,

T znamená skupinu -Ar³, hydroxyskupinu, trifluórmetylovú skupinu, skupinu -CO-CO₂H, skupinu -CO₂H alebo ľubovoľnú bioízostérickú náhradu za -CO₂H,

R¹ je vybraný zo súboru zahŕňajúceho skupiny nasledujúcich všeobecných vzorcov (a) až (v), pričom ľubovoľný atóm vodíka viazaný na ľubovoľnom atóme uhlíka v kruhu je prípadne nahradený skupinou Q¹, ľubovoľný atóm vodíka viazaný na ľubovoľnom atóme dusíka v kruhu je prípadne nahradený skupinou R⁵, ľubovoľný atóm vodíka viazaný na ľubovoľnom atóme v kruhu je prípadne nahradený skupinou =0, -OH, CO₂H alebo halogéno'm, a ľubovoľný nasýtený kruh je prípadne nenasýtený na jednej alebo dvoch väzbách: