CZ298625B6

Patents

Full documents

Title

Abstract

Claims

All

Any

Exact

Not

Add AND condition

These CPCs and their children

These exact CPCs

Add AND condition

Exact

Exact Batch

Similar

Substructure

Substructure (SMARTS)

Full documents

Claims only

Add AND condition

Application Numbers

Publication Numbers

Either

Add AND condition

Inhibitory enzymu konvertujícího interleukin-1beta, zpusob jejich selekce a farmaceutické prostredky, které je obsahují

Abstract

N-acylaminoslouceniny obecných vzorcu .alfa., .sigma., .pi. a .delta., které jsou inhibitory enzymukonvertujícího interleukin-1.beta. (ICE) a vyznacují se specifickými strukturními a fyzikálne chemickými znaky, zpusob jejich selekce a farmaceuticképrostredky, které tyto slouceniny obsahují a jsouvhodné pro ošetrování onemocnení zprostredkovaných interleukinem-1, k nimž patrí zánetlivá onemocnení, autoimunitní onemocnení a neurodegenerativní onemocnení.

Classifications

C07K5/0202

Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link containing the structure -NH-X-X-C(=0)-, X being an optionally substituted carbon atom or a heteroatom, e.g. beta-amino acids

View 5 more classifications

Landscapes

Health & Medical Sciences

Chemical & Material Sciences

CZ298625B6

Czechia

Download PDF

Find Prior Art

Similar

Other languages: English
Inventor: Bemis@Guy; M. C. Golec@Julian; J. Lauffer@David; D. Mullican@Michael; A. Murcko@Mark; J. Livingston@David

1995

1996

1997

1994-06-17

Priority claimed from US08/261,452

1995-05-25

Priority claimed from US08/440,898

1995-06-16

Application filed by Vertex Pharmaceuticals Incorporated

1997-06-11

Publication of CZ369896A3

2007-11-28

Publication of CZ298625B6

Info: Patent citations (50); Cited by (144); Legal events; Similar documents; Priority and Related Applications
External links: Espacenet; Global Dossier; Discuss

Description

(54) Název vynálezu:

Inhibitory enzymu konvertujícího interleukínlbeta, způsob jejich selekce a farmaceutické prostředky, které je obsahují (57) Anotace:

N-acylaminosloučeniny obecných vzorců α, σ, π a δ, které jsou inhibitory enzymu konvertujícího interleukin-ΐβ (ICE) a vyznačují se specifickými strukturními a fyzikálně chemickými znaky, způsob jejich selekce a farmaceutické prostředky, které tyto sloučeniny obsahují a jsou vhodné pro ošetřování onemocnění zprostředkovaných interleukinem-1, k nimž patří zánětlivá onemocnění, autoimunitní onemocnění a neurodegenerativní onemocnění.

CQ at-N'Rí (n)

(8) in oi (O oo σ>

οι

Inhibitory enzymu konvertujícího interleukin-ΐβ, způsob jejich selekce a farmaceutické prostředky, které je obsahují

Oblast techniky

Vynález se týká nových skupin sloučenin, které jsou inhibitory enzymu konvertujícího interleukin-ΐβ (ICE, interleukin-ΐβ converting enzyme). Inhibitory ICE podle vynálezu jsou charakterizovány konkrétními strukturními a fyzikálně chemickými znaky. Vynález se rovněž týká far10 maceutických prostředků, které tyto sloučeniny obsahují. Sloučeniny a farmaceutické prostředky podle vynálezu jsou zejména velmi vhodné pro inhibici aktivity ICE a v důsledku toho je lze výhodně použít jako činidel proti onemocněním zprostředkovaným interleukinem-1 (IL-1), včetně zánětlivých onemocnění, autoimunitních onemocnění a neurodegenerativních onemocnění. Vynález se rovněž týká způsobu inhibice aktivity ICE a způsobů léčení onemocnění zpro15 středkovaných interleukinem-1 za použití sloučenin a prostředků podle vynálezu.

Dosavadní stav techniky

Interleukin 1 (IL—1) je důležitým prozánětlivým a imunoregulačním proteinem, který stimuluje diferenciaci a proliferaci fibroblastů, produkci prostaglandinů, kolagenasy a fosfolipasy synoviálními buňkami a chondrocyty, degranulaci basofilů a eosinofilů a aktivaci neutrofilů (Oppenheim, J. H. a kol., Immunology Today, 7, str. 45 - 56 (1986)). Jako takový se podílí na patogenezi chronických a akutních zánětlivých a autoimunitních onemocnění. IL—1 je produko25 ván převážně periferními krevními monocyty jako součást zánětlivé odpovědi a vyskytuje se ve dvou odlišných agonistických formách, IL-Ία a IL—1 β (Mosely, B. S. a kol., Proč. Nat. Acad. Sci., 84 str. 4572 - 4576 (1987); Lonnemann, G. a kol., Eur. J. Immunol., 19, str. 1531 - 1536 (1989)).

IL-Ιβ je syntetizován jako biologicky neaktivní prekurzor, pIL-Ιβ. pIL-Ιβ postrádá konvenční vedoucí sekvenci (leader sequence) a není upravován signální peptidasou (March. C. J., Nátuře, 315, str. 641 - 647 (1985)). Místo toho je pIL—1 β štěpen enzymem konvertujícím interleukin-ΐβ (ICE, interleukin-ΐβ converting enzyme) mezi Asp-116 a Ala-117, čímž vzniká biologicky aktivní C-koncový fragment nacházející se v lidském séru a synoviální kapalině (Sleath, P. R. a kol., J. Biol, Chem., 265, str. 14526 - 14528 (1992); A. D. Howard a kol., J, Immunol., 147, str. 2964 - 2969 (1991)). Úprava účinkem ICE je rovněž nutná pro transport maturovaného IL—1 β přes buněčnou membránu.

ICE je cysteinová proteáza lokalizovaná převážně v monocytech. Konvertuje prekurzor IL—1 β na jeho maturovanou formu (Black, R. A. a kol., FEBS Lett., 247, str. 386 - 390 (1989); Kostura, M. J. a kol., Proč. Nati. Acad. Sci, USA, 86, str. 527 - 5231 (1989)). Zdá se, že ICE nebo jeho homology se rovněž podílí na regulaci smrti buňky nebo apoptosy (Yuan, J. a kol., Cell, 75, str. 641 - 652 (1993); Miura, M. a kol., Cell, 75, str. 653 - 660 (1993); Nett-Fiordalisi, M. A. a kol., J. Cell Biochem., 17B, str. 117 (1993)). Zejména se má za to, že ICE nebo homology ICE souvisí s regulací apoptosy u nerodegenerativních onemocnění, jako je Alzheimerova a Parkinsonova choroba (Marx, J. A M. Baringa, Science, 259, str. 760 - 762 (1993); Gagliardini, V. a kol., Science, 263, str. 826 - 828 (1994)).

ICE byl již dříve popsán jako heterodimer složený ze dvou podjednotek, p20 a plO (s molekulo50 vou hmotností 20 kDa respektive 10 kDa). Tyto podjednotky vznikají z proenzymu o hmotnosti 45 kDa (p45) přes formu p30, pomocí aktivačního mechanismu, který je autokatalytický (Thomberry, N. A. a kol., Nátuře, 356, str. 768-774 (1992)). Proenzym ICE byl rozdělen na několik funkčních domén: prodoménu (pl4), podjednotku p22/20, polypeptidový linker a podjednotku plO (Thomberry a kol., viz výše; Casano a kol., Genomics, 20, str. 474 - 481 (1994)).

-1 CZ 298625 B6 p45 o plné délce byl charakterizován pomocí své cDNA-sekvence a aminokyselinové sekvence (patentové přihlášky PCT WO 91/15577 a WO 94/00154). Známé jsou i cDNA-sekvence a aminokyselinové sekvence p20 a plO (Thomberry a kol., viz výše). Sekvenovány a klonovány byly rovněž myší a krysí ICE. Vykazují vysokou homologii aminokyselinové sekvence a sekvence nukleové kyseliny s lidským ICE (Miller, D. K. a kol., Ann, N. Y. Acad. Sci., 696, str. 133 - 148 (1993); Molineaux, S. M. a kol., Proč, Nat. Acad. Sci., 90, str. 1809 - 1813 (1993)). Znalost primární struktury ICE však neumožňuje předpovězení jeho terciární struktury. Neumožňuje ani pochopení strukturních, konformačních a chemických interakcí ICE a jeho substrátu pIL—1 β nebo ío jiných substrátů nebo inhibitorů.

Inhibitory ICE představují skupinu sloučenin vhodných pro kontrolu zánětu nebo apoptosy nebo obojího. Byly popsány peptidové a peptidylové inhibitory ICE (patentové přihlášky PCT WO 91/15577; WO 93/05071; WO 93/09135; WO 93/14777 a WO 93/16710; a Evropská patentová přihláška 0 547 699). V důsledku jejich peptidické povahy se však takovéto inhibitory typicky vyznačují nežádoucími farmakologickými vlastnostmi, jako je špatná orální absorpce, špatná stabilita a rychlý metabolismus (Plattner, J. J. a D. W. Norbeck, v Drug Discovery Technologies, C. R. Clark a W. H. Moos, editoři (Ellis Horwood, Chichester, Velká Británie, 1990), str. 92 - 126). To brání vyvinutí účinných léčiv na jejich bázi.

V souladu s tím existuje potřeba nalezení sloučenin, které mohou účinně inhibovat působení ICE, pro použití jako činidel pro prevenci a léčení chronických a akutních forem onemocnění zprostředkovaných IL-1, včetně různých rakovin, jakož i zánětlivých, autoimunitních nebo neurodegenerativních onemocnění.

Podstata vynálezu

Vynález popisuje nové skupiny sloučenin a jejich farmaceuticky přijatelných derivátů, které lze použít jako inhibitoiy ICE. Tyto sloučeniny lze použít samotné nebo v kombinaci s jinými terapeutickými nebo proíylaktickými činidly, jako jsou antibiotika, imunomodulátory nebo jiná protizánětlivá činidla, pro ošetření nebo profylaxi onemocnění zprostředkovaných IL-1. Podle výhodného provedení jsou sloučeniny podle vynálezu schopné vázat se na aktivní centrum ICE a inhibovat aktivitu tohoto enzymu.

Základním předmětem vynálezu jsou N-acylaminosloučeniny obecných vzorců α, σ, π a δ:

-2CZ 298625 B6 (CH₂)_(f-CO₂R /

Ri-NH-CH (a), \

Jednotlivé obecné symboly v těchto obecných vzorcích mají níže uvedený význam.

Tyto sloučeniny náleží do nové skupiny inhibitorů ICE a vyznačují se následujícími strukturními a fyzikálně chemickými znaky:

a) obsahují první a druhý zbytek vytvářející vodíkovou vazbu, přičemž každý z těchto zbytků je schopen vytvářet vodíkovou vazbu s jiným atomem hlavního řetězce ICE, kterýžto atom hlavního řetězce je vybrán ze skupiny kterou tvoří karbonylový atom kyslíku v Arg-341, amidová skupina

-NH- v Arg-341, karbonylový atom kyslíku v Ser-339 a amidová skupina -NH- v Ser-339,

b) obsahují první a druhý mírně hydrofobní zbytek, přičemž každý z těchto zbytků je schopen asociovat se s jinou vazebnou kapsou ICE, pokud je na něj tento inhibitor navázán, kterážto vazebná kapsa je vybrána ze skupiny kterou tvoří vazebná kapsa P2, vazebná kapsa P3, vazebná kapsa P4 a vazebná kapsa P', a

c) obsahují elektronegativní zbytek obsahující jeden nebo několik elektronegativních atomů, kteréžto atomy jsou navázány na stejný atom nebo na sousedící atomy v tomto zbytku a uvedený zbytek je schopen vytvářet jednu nebo několik vodíkových vazeb nebo solných můstků se zbytky ve vazebné kapse Piv ICE.

Předmětem vynálezu je rovněž způsob selekce inhibitorů ICE výše uvedených obecných vzorců α, σ, π a δ, který zahrnuje následující kroky, při nichž se provede:

a) selekce kandidátní sloučeniny s definovanou chemickou strukturou, obsahující alespoň dva zbytky vytvářející vodíkové vazby, alespoň dva mírně hydrofobní zbytky a jeden elektronegativní zbytek obsahující jeden nebo více elektronegativních atomů, kteréžto atomy jsou navázány bud’ najeden atom nebo na sousedící atomy v elektronegativním zbytku,

-3CZ 298625 B6

b) stanovení konformace s nízkou energií pro vazbu shora uvedené sloučeniny na aktivní centrum ICE,

c) zhodnocení schopnosti uvedené sloučeniny v uvedené konformaci vytvářet alespoň dvě vodíkové vazby s atomy hlavního řetězce, jinými než atomy uhlíku, v Arg-341 a Ser-339 ICE,

d) zhodnocení schopnosti shora uvedené sloučeniny ve shora uvedené konformaci asociovat se s alespoň dvěma z vazebných kapes ICE vybraných ze skupiny kterou tvoří vazebná kapsa P2, vazebná kapsa P3, vazebná kapsa P4 a vazebná kapsa P',

e) zhodnocení schopnosti shora uvedené sloučeniny ve shora uvedené konformaci interagovat s vazebnou kapsou PÍ ICE, a

f) přijetí nebo zamítnutí shora uvedené kandidátní sloučeniny jako inhibitoru ICE na základě stanovení a zhodnocení prováděných v předcházejících krocích.

Zkratky a definice

V tomto textu se používají následující zkratky:

Zkratka Činidlo nebo zbytek

Ala alanin

Arg arginin

Asn asparagin

Asp kyselina asparagová

Cys cystein

Gin glutamin

Glu kyselina glutamová

Gly glycin

His histidin

Ile isoleucin

Zkratka Činidlo nebo zbytek

Leu leucin

Lys lysin

Met methionin

Phe fenylalanin

Pro prolin

Ser serin

Thr threonin

Trp tryptofan

Tyr tyrosin

Val valin

V tomto textu se používají následující termíny, které, pokud není uvedeno jinak, mají následující významy:

Termín „aktivní centrum“ označuje kterékoli, kterákoli nebo všechna z následujících míst v ICE: 45 místo kde se váže substrát, místo kde se váže inhibitor a místo kde probíhá štěpení substrátu.

Aktivní centrum je charakterizováno alespoň aminokyselinovými zbytky: 173, 176, 177, 178, 179, 180, 236, 237, 238, 239, 244, 248, 283, 284, 285, 290, 338, 339, 340, 341, 342, 343, 344, 345, 348, 352, 381, 383, za použití sekvence a číslování jak je uvedli Thomberry a kol., viz výše.

-4CZ 298625 B6

Termíny „vazebná kapsa P“, „podmísto S“, „kapsa S“ a podobně označují vazebná podmísta nebo části místa vázajícího substrát na molekule ICE. Aminokyselinové zbytky substrátu jsou označovány podle jejich polohy vzhledem k štěpitelné vazbě, tj. vazbě, která je štěpena proteázou. Zbytky jsou označeny Pl, P2 atd. pro ty zbytky, které se vyskytují směrem kN-konci sub5 strátu a PT, P2' atd. pro ty zbytky, které se vyskytují směrem k C-konci substrátu. Části inhibitoru, které odpovídají zbytkům P nebo P' substrátu, jsou rovněž označeny Pl, PT atd., analogicky se substrátem. Vazebná podmísta molekuly ICE, která přijímají zbytky označené Pl, PT atd., jsou označena Sl, ST atd., nebo mohou být alternativně označena „vazebná kapsa Pl“, „vazebná kapsa PT“ atd. (I. Schechter a A. Berger, „On the Size of the Active Site in Proteázes“,

Biochem. Biophys. Res. Commun., svazek 27, str. 157 - 162 (1967)).

Termíny „vazební kapsa P2“ nebo „podmísto S2“ aktivního centra ICE jsou ekvivalentní a jsou definovány jako prostor obklopený aminokyselinovými zbytky Pro-290, Val-338 nebo Trp-340.

Termíny „vazebná kapsa P3“ nebo „podmísto S3“ aktivního centra ICE jsou ekvivalentní a jsou definovány jako prostor obklopený aminokyselinovými zbytky Pro-177, Arg-178, Thr-180, Arg-341 nebo Pro-343.

Termíny „vazebná kapsa P4“ nebo „podmísto S4“ aktivního centra ICE jsou ekvivalentní a jsou definovány jako prostor obklopený aminokyselinovými zbytky His-342, Met-345, Val-348, Arg-352, Asp-381, Arg-383 nebo Trp-340.

Termíny „vazebná kapsa Pl“ nebo „podmísto Sl“ aktivního centra ICE jsou ekvivalentní a jsou definovány jako prostor obklopený aminokyselinovými zbytky Arg-179, His-237, Gln-283 nebo

Arg-341.

Termíny „vazebná kapsa P' nebo „podmísto S' aktivního centra ICE jsou ekvivalentní a jsou definovány jako prostor obklopený aminokyselinovými zbytky Phe-173, Ile-176, His-237, Gly238, Ile-239, Cys-244 nebo His-248.

Termín „hydrofobní“ označuje zbytek, který má sklon nerozpouštět se ve vodě a je rozpustný v tucích. Mezi hydrofobní zbytky patří, aniž by však šlo o vyčerpávající a omezující výčet, uhlovodíky, jako jsou alkany, alkeny, alkiny, cykloalkany, cykloalkeny, cykloalkiny a aromatické sloučeniny, jako jsou aryly, určité nasycené a nenasycené heterocykly a zbytky, které jsou v podstatě podobné postranním řetězcům hydrofobních přirozených a nepřirozených a-aminokyselin, včetně valinu, leucinu, isoleucinu, methioninu, fenylalaninu, kyseliny a-aminoisomáselné, alloisoleucinu, tyrosinu a tryptofanu.

Termín „mírně hydrofobní“ označuje hydrofobní zbytek, ve kterém byly jeden nebo dva atomy uhlíku nahrazeny více polárními atomy, jako je kyslík nebo dusík.

Termín „heterocyklus“ nebo „heterocyklický“ označuje stabilní mono- nebo polycyklickou sloučeninu, která může popřípadě obsahovat jednu nebo dvě dvojné vazby nebo může popřípadě obsahovat jeden nebo několik aromatických kruhů. Každý heterocyklus tvoří atomy uhlíku a jeden až čtyři heteroatomy nezávisle na sobě vybrané ze skupiny zahrnující dusík, kyslík a síru. Termín „dusíkový heteroatom“, „dusík jako heteroatom“ a „sírový heteroatom“, „síra jako heteroatom“, jak jsou zde používány, zahrnují libovolnou oxidovanou formu dusíku nebo síry nebo kvatemizovanou formu jakéhokoli bazického dusíku. Mezi heterocykly definované výše patří například pyrimidinyl, tetrahydrochinolyl, tetrahydroisochinolinyl, purinyl, pyrimidyl, indolinyl, benzimidazolyl, imidazolyl, imidazolinoyl, imidazolidinyl, chinolyl, isochinolyl, indolyl, pyridyl, pyrrolyl, pyrrolinyl, pyrazolyl, pyrazinyl, chinoxolyl, piperidinyl, morfolinyl, thiamorfolinyl, furyl, thienyl, triazolyl, thiazolyl, β-karbolinyl, tetrazolyl, thiazolidinyl, benzofuranoyl, thiamorfolinyl-sulfon, benzoxazolyl, oxopiperidinyl, oxopyrrolidinyl, oxoazepinyl, azepinyl, isoxazolyl, tetrahydropyranyl, tetrahydrofuranyl, thiadiazolyl, benzodioxolyl, benzothienyl, tetrahydrothio-5CZ 298625 B6 fenyl a sulfolanyl. Další heterocykly jsou popsány v A. R. Katritzky a C. W. Rees, editoři, Comprehensive Heterocyclic Chemistry: The Structure, Reactions, Synthesis and Use of Heterocyclic Compounds, svazek 1-8, Pergamen Press, New York (1984).

Termín „cykloalkyl“ nebo „cykloalkylová skupina“ označuje mono- nebo polycyklickou skupinu, která obsahuje 3 až 15 atomů uhlíku a může popřípadě obsahovat jednu nebo dvě dvojné vazby. Mezi příklady patří cyklohexyl, adamantyl a norbomyl.

Termín „aiyl“ nebo „arylová skupina“ označuje mono- až polycyklickou skupinu která obsahuje ío 6, 10, 12 nebo 14 atomů uhlíku, ve které je alespoň jeden kruh aromatický. Mezi příklady patří fenyl, nafltyl a bifenyl.

Termín „heteroaromatický“ nebo „heteroaromatická skupina“ označuje mono- nebo polycyklickou skupinu, která obsahuje 1 až 15 atomů uhlíku a 1 až 4 heteroatomy, nezávisle na sobě vybrané ze skupiny zahrnující síru, dusík a kyslík, a která dále obsahuje 1 až 3 pěti- nebo šestičlenné kruhy, z nichž alespoň jeden je aromatický.

Termín „α-aminokyselina“ („alfa-aminokyselina“) označuje jak v přírodě se vyskytující aminokyseliny tak jiné „neproteinové“ α-aminokyseliny běžně používané odborníky v chemii peptidů při přípravě syntetických analogů přirozeně se vyskytujících peptidů, včetně D- a L-forem. V přírodě se vyskytujícími aminokyselinami jsou glycin, alanin, valin, leucin, isoleucin, serin, methionin, threonin, fenylalanin, tyrosin, tryptofan, cystein, prolin, histidin, kyselina asparagová, asparagin, kyselina glutamová, glutamin, kyselina γ-karboxyglutamová, arginin, omithin a lysin. Mezi příklady „neproteinových“ a-aminokyselin patří hydroxylysin, homoserin, homotyrosin, homofenylalanin, citrullin, kynurenin, 4-aminofenylalanin, 3-(2-naftyl)alanin, 3-(l-naftyl)alanin, methionin-sulfon, terc-butylalanin, terc-butylglycin, 4-hydroxygenylglycin, aminoalanin, fenylglycin, vinylalanin, propargylglycin, 1,2,4-triazolo-3-alanin, 4,4,4-trifluorthreonin, thyronin, 6-hydroxytryptofan, 5-hydroxytryptofan, 3-hydroxykynurenin, 3-aminotyrosin, trifluormethylalanin, 2-thienylalanin, (2-(4-pyridyl)ethyl)cystein, 3,4-dimethoxyfenylalanin, 330 (2-thiazolyl)alanin, kyselina ibotenová, kyselina 1-amino-l-cyklopentankarboxylová, kyselina 1-amino-1-cyklohexankarboxylová, kyselina chiskvalová, 3-trifluormethylfenylalanin, 4—trifluormethylfenylalanin, cyklohexylalanin, cyklohexylglycin, thiohistidin, 3-methoxytyrosin, elastatinal, norleucin, norvalin, alloisoleucin, homoarginin, thioprolin, dehydroprolin, hydroxyprolin, kyselina isonipektotová, homoprolin, cyklohexylglycin, kyselina a-amino-n-máselná, cyklohexylalanin, kyselina aminofenylmáselná, fenylalaniny substituované v ortho- meta- nebo para-poloze fenylového kruhu jedním nebo dvěma substituenty vybranými ze souboru zahrnujícího alkylové skupiny s 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxyskupiny s 1 až 4 atomy uhlíku, atomy halogenů a nitroskupinu, nebo substituované methylendioxyskupinou, β-2- a 3-thienylalanin, β-2- a -3-furanylalanin, β-2-, -3- a -4-pyridylalanin, β-(benzothienyl-2- a -3-yl)alanin, β-(1- a 240 naftyl)alanin, O-alkylované deriváty šeřinu, threoninu nebo tyrosinu, S-alkylovaný cystein, Salkylovaný homocystein, O-sulfáty, O-fosfáty a O-karboxyláty tyrosinu, 3-sulfotyrosin, 3-karboxytyrosin, 3-fosfotyrosin, ester methansulfonové kyseliny a tyrosinu, ester methanfosfonové kyseliny a tyrosinu, 3,5-dijodtyrosin, 3-nitrotyrosin, ε-alkyllysiny a δ-alkylomithiny. Kterákoli z těchto α-aminokyselin může být substituována methylovou skupinou v α-poloze, halogenem na kterémkoli aromatickém zbytku na postranním řetězci α-aminokyseliny, nebo vhodnou chránící skupinou na atomech kyslíku, dusíku nebo síry ve zbytcích postranních řetězců. Vhodné chránící skupiny jsou uvedeny v práci „Protective Groups in Organic Synthesis“, T. W. Greene a P. G. M. Wuts, J. Wiley and Sons, New York, 1991.

Termín „postranní řetězec α-aminokyseliny“ nebo „zbytek který je postranním řetězcem a-aminokyseliny“ označuje chemický zbytek, který je navázán na α-uhlík a-aminokyseliny.

Termín „bioisostemí náhrada za -CO₂H“ označuje skupinu, která může nahradit karboxylovou skupinu v bioreaktivních molekulách. Příklady takových skupin popsal Christopher A. Lipinski,

-6CZ 298625 B6 „Bioisosteres in Drug Design“, Annual Reports in Medical Chemistry, 21, str. 286 - 88 (1986) a C. W. Thomber, „Isosterism and Molecular Modification in Drug Design“, Chemical Society Reviews, str. 563 - 580 (1979).

Termín „asociace“ je používán k označení stavu blízkosti mezi inhibitorem nebo jeho částmi k molekule ICE nebo jejím částem, při kterém je vzájemná poloha energeticky zvýhodněna elektrostatickými nebo van der Waalsovými interakcemi.

Termín „vodíková vazba“ označuje příznivou interakci, ke které dochází kdykoli jsou vhodný ío donorový atom, X, nesoucí proton a vhodný akceptorový atom, Y, ve vzájemné vzdálenosti mezi

2,5 x ΚΓ¹⁰ m a 3,5 x 10¹ m a úhel X-H---Y je větší než 90°. Vhodné donorové a akceptorové atomy jsou v lékařské chemii dobře známé (G. C. Pimentel a A. L. McClellan, The Hydrogen Bond, Freeman, San Francisco, 1960; R. Taylor a O. Kennard, „Hydrogen Bond Geometry in Organic Crystals“, Acconts of Chemical Research, 17, str. 320 - 326 (1984)).

Termín „solný můstek“ označuje nekovalentní přitažlivou interakci mezi kladně nabitým zbytkem (P) a negativně nabitým zbytkem (N) pokud je vzdálenost mezi těžišti P a N mezi 2x10' ¹⁰ m a 6 x 10 ¹⁰ m. Při výpočtu těžiště se započítávají atomy, které mohou obsahovat formální náboj a atomy které s nimi bezprostředně sousedí. Solný můstek se může například vytvořit mezi kladně nabitým guanidiniovým postranním řetězcem argininového zbytku a záporně nabitým karboxylátovým postranním řetězcem glutamátového zbytku. Solné můstky jsou v lékařské chemii dobře známé (L. Stryer, Biochemistry, Freeman, San Francisco, (1975); K. A. Dill. „Dominant. Forces in Protein Folding“, Biochemistry, 29, č. 31, str. 7133 - 7155, (1990)).

Termín „těžiště“ označuje bod v třírozměrném prostoru, který představuje hmotnostní průměrnou polohu hmoty, která tvoří objekt.

Termín „hlavní řetězec“ označuje část polypeptidu, která obsahuje opakující se jednotku -COCH-NH-.

Termín „skelet“ označuje strukturní stavební blok, který tvoří základ inhibitoru ICE podle vynálezu. K tomuto skeletu mají být připojeny různé zbytky a funkční skupiny. Skelety podle vynálezu jsou tedy uváděny s volnými vazbami. Různé skelety inhibitorů ICE podle vynálezu zahrnují části:

X \ / \ /

N C nebo

X \ / \ /

N SO

V těchto skeletech představují zbytky NH a CO nebo SO₂ první a druhý zbytek vytvářející vodíkovou vazbu, přičemž každý z těchto zbytků je schopen vytvářet vodíkovou vazbu s atomem hlavního řetězce ICE, kterýžto atom hlavního řetězce je vybrán ze skupiny kterou tvoří karbony45 lový atom kyslíku vArg—341, amidová skupina —NH— v Arg—341, karbonylový atom kyslíku v Ser-339 a amidová skupina -NH- v Ser-339.

-7CZ 298625 B6

Termín „substituce“ označuje nahrazení atomu vodíku ve sloučenině substituentovou skupinou. V tomto vynálezu jsou ze substituce vyloučeny ty atomy vodíku, které tvoří část zbytku vytvářejícího vodíkovou vazbu, který je schopen vytvářet vodíkovou vazbu s karbonylovým atomem kyslíku vArg-341 vICE nebo s karbonylovým atomem kyslíku v Ser-339 vICE. Mezi tyto vyloučené atomy vodíku patří ty atomy, které tvoří skupinu -NH-, která je v poloze alfa vzhledem k symbolu Z nebo skupině -CO- a která je uvedena jako -NH- a nikoli jako skupina X nebo nějak jinak označená skupina v následujících obecných vzorcích: (a) až (t), (v) až (y) a (I) až (VIID).

Termín „přímý řetězec“ označuje souvislý nerozvětvený řetěz kovalentně vázaných členů, tj. atomů, které tvoří části řetězce. Přímý řetězec nebo kruh, kterého tvoří tento přímý řetězec součást, mohou být substituovány, ale tyto substituenty nejsou částí přímého řetězce.

Termín „K.“ představuje numerické měřítko účinnosti sloučeniny při inhibici aktivity cílového enzymu, jako je ICE. Nižší hodnoty Kj odrážejí vyšší účinnost. Hodnota K, se získá zpracováním experimentálně stanovených údajů standardními rovnicemi enzymové kinetiky viz. I. H. Segel, Enzyme Kinetics, Wiley-Interscience, 1975).

Termín „minimalizovat“ označuje systematické upravení atomové geometrie molekuly nebo molekulového komplexu tak, že jakákoli drobná odchylka atomové geometrie by způsobila zvýšení celkové energie systému při měření pomocí silového pole molekulární mechaniky. Minimalizace a silová pole molekulární mechaniky jsou dobře známé ve výpočetní chemii (U. Burkert a N. L. Allinger, Molecular Mechanics, ACS Monograph 177, American Chemical Society, Washington, D.C. 1982, str. 59 - 78).

Termín „energie napjatosti“ se v této přihlášce používá pro označení rozdílu mezi volnou konformační energií sloučeniny a vazebnou konformační energií této sloučeniny při navázání na ICE. Energii napjatosti lze stanovit pomocí následujících kroků: Určí se energie molekuly v konformaci nutné pro navázání na ICE. Poté se provede minimalizace a znovu se určí energie 30 to je volná konformační energie. Energií napjatosti pro vazbu potenciálního inhibitoru na ICE je rozdíl mezi volnou konformační energií a vazebnou konformační energií. Ve výhodném provedení činí energie napjatosti inhibitoru podle vynálezu méně než zhruba 42 kJ/mol.

Termín „pacient“, jak je zde používán, označuje libovolného savce, zejména člověka.

Termín „farmaceuticky účinné množství“ označuje množství účinné k léčení nebo zlepšení onemocnění zprostředkovaného 1L-1 u pacienta. Termín „profylakticky účinné množství“ označuje množství účinné k prevenci nebo podstatnému snížení možnosti onemocnění zprostředkovaného IL-1 u pacienta.

Termín „farmaceuticky přijatelná nosná nebo pomocná látka“ označuje netoxickou nosnou nebo pomocnou látku, kterou lze podat pacientovi, spolu se sloučeninou podle vynálezu, a která neničí její farmakologickou účinnost.

Termín „farmaceuticky přijatelný derivát“ znamená libovolnou farmaceuticky přijatelnou sůl, ester, nebo sůl takového esteru, sloučeniny podle vynálezu, nebo jakoukoli jinou sloučeninu, která je po podání příjemci schopná poskytovat (přímo nebo nepřímo) sloučeninu podle vynálezu nebo její metabolit nebo zbytek s anti-ICE aktivitou.

Mezi farmaceuticky přijatelné soli sloučenin podle vynálezu patří například soli odvozené od farmaceuticky přijatelných anorganických a organických kyselin a bází. Mezi příklady vhodných kyselin patří kyselina chlorovodíková, bromovodíková, sírová, dusičná, chloristá, fumarová, maleinová, fosforečná, glykolová, mléčná, salicylová, jantarová, toluen-p-sulfonová, vinná, octová, citrónová, methansulfonová, mravenčí, benzoová, malonová, naftalen-2-sulfonová a benzensulfonová. Další kyseliny, jako je kyselina šťavelová, ačkoli nejsou farmaceuticky přija-8CZ 298625 B6 telné, lze použít k přípravě solí vhodných jako meziprodukty pro získání sloučenin podle vynálezu a jejich farmaceuticky přijatelných adičních solí s kyselinami. Mezi soli odvozené od vhodných bází patří soli s alkalickými kovy (například sodíkem), soli s kovy alkalických zemin (například hořčíkem), amonné soli a tetraalkylamoniové soli s 1 až 4 atomy uhlíku v každé alky5 lové části.

Vynález rovněž bere v úvahu „kvatemizaci“ libovolných bazických skupin obsahujících dusík ve zde popsaných sloučeninách. Bazický dusík lze kvatemizovat libovolným z činidel, která jsou známá odborníkovi, včetně například nižších alkylhalogenidů, jako je methyl-, ethyl-, propyl- a butylchlorid, -bromid a jodid, dialkylsulfátů včetně dimethyl-, diethyl—, dibutyl a diamylsulfátu, halogenidů s dlouhým řetězcem, jako je decyl-, lauryl-, myristyl- a stearylchlorid, -bromid a jodid, a aralkylhalogenidů, včetně benzyl- a fenylethylbromidu. Pomocí takové kvatemizace lze získat produkty rozpustné nebo dispergovatelné ve vodě nebo v oleji.

Inhibitory ICE podle vynálezu mohou obsahovat jeden nebo několik „asymetrických“ atomů uhlíku a mohou se tedy vyskytovat jako racemáty a racemické směsi, jednotlivé enantiomery, směsi diastereomerů a jednotlivé diastereomery. Vynález výslovně zahrnuje všechny takové izomemí formy těchto sloučenin. Každý stereogenní atom uhlíku může být v R- nebo S-konfiguraci. Ačkoli konkrétní sloučenina a skelety zmíněné v této přihlášce jako příklady mohou být uvedeny v konkrétní stereochemické konfiguraci, jsou zahrnuty rovněž sloučeniny a skelety buď s opačnou stereochemií na libovolném z chirálních center nebo jejich směsi.

Inhibitory ICE podle vynálezu mohou obsahovat kruhové struktury, které mohou být popřípadě substituovány na atomech uhlíku, dusíku nebo jiných atomech různými substituenty. Takovéto kruhové struktury mohou být substituovány jednou nebo vícekrát. Výhodně kruhové struktury obsahují mezi 0 a 3 substituenty. Při vícenásobných substitucích může být každý substituent vybrán nezávisle na jiných substituentech, pokud při této kombinaci substituentů vznikne stabilní sloučenina.

Kombinacemi substituentů a proměnných podle vynálezu jsou pouze ty, které mají za následek vytvoření stabilní sloučeniny. Termín „stabilní“, jak je zde používán, označuje sloučeniny, které vykazují dostatečnou stabilitu pro umožnění přípravy a podání savci pomocí způsobů známých v oboru. Typicky jsou takové sloučeniny stabilní při teplotě 40 °C nebo nižší, za nepřítomnosti vlhkosti nebo jiných chemicky reaktivních podmínek, po dobu alespoň jednoho týdne.

Podrobný popis vynálezu

Za účelem úplnějšího pochopení zde popsaného vynálezu je uveden následující podrobný popis.

Bylo zjištěno, že sloučeniny vykazující následující novou kombinaci znaků jsou překvapivě účinnými inhibitory ICE. Tyto sloučeniny:

c) obsahují elektronegativní zbytek obsahující jeden nebo několik elektronegativních atomů, kterážto atomy jsou navázány na stejný atom nebo na sousedící atomy v tomto zbytku a uvedený zbytek je schopen vytvářet jednu nebo několik vodíkových vazeb nebo solných můstků se zbytky ve vazebné kapse PÍ v ICE.

-9CZ 298625 B6

Výhodně se jakýkoli mírně hydrofobní zbytek, který se asociuje s vazebnou kapsou P2 v ICE, asociuje tak, že:

a) vzdálenost od těžiště tohoto mírně hydrofobního zbytku ve vazebné kapse P2 ke karbonylo5 vému atomu kyslíku v Arg-341 v ICE je mezi přibližně 7,1 x 10“’° m a přibližně 12,5 x 1O¹⁰ m,

b) vzdálenost od těžiště tohoto mírně hydrofobního zbytku ve vazebné kapse P2 k amidovému atomu dusíku v Arg-341 v ICE je mezi přibližně 6,0 x 10“’° m a přibližně 12 x 10~’° m, a

c) vzdálenost od těžiště tohoto mírně hydrofobního zbytku ve vazebné kapse P2 ke karbonylovému atomu kyslíku v Ser-339 v ICE je mezi přibližně 3,7 x 10 ¹⁰ m a přibližně 9,5 x ÍO“¹⁰ m.

Výhodně se jakýkoli mírně hydrofobní zbytek, který se asociuje s vazebnou kapsou P3 v ICE, asociuje tak, že:

a) vzdálenost od těžiště tohoto mírně hydrofobního zbytku ve vazebné kapse P3 ke karbonylovému atomu kyslíku v Arg-341 v ICE je mezi přibližně 3,9 x ÍO¹⁰ m a přibližně 9,5 x 10 ¹⁰ m,

b) vzdálenost od těžiště tohoto mírně hydrofobního zbytku ve vazebné kapse P3 k amidovému atomu dusíku v Arg-341 v ICE je mezi přibližně 5,4 x ÍO“¹⁰ m a přibližně 11 x ÍO“¹⁰ m, a

c) vzdálenost od těžiště tohoto mírně hydrofobního zbytku ve vazebné kapse P3 ke karbonylovému atomu kyslíku v Ser-339 v ICE je mezi přibližně 7,0 x 10~¹⁰ m a přibližně 13 x 10¹⁰ m.

Výhodně se jakýkoli mírně hydrofobní zbytek, který se asociuje s vazebnou kapsou P4 v ICE, asociuje tak, že:

a) vzdálenost od těžiště tohoto mírně hydrofobního zbytku ve vazebné kapse P4 ke karbonylovému atomu kyslíku v Arg-341 v ICE je mezi přibližně 4,5 x 10“’° m a přibližně 7,5 x 10 ¹⁰ m,

b) vzdálenost od těžiště tohoto mírně hydrofobního zbytku ve vazebné kapse P4 k amidovému 25 atomu dusíku v Arg-341 v ICE je mezi přibližně 5,5 x 10 ¹⁰ m a přibližně 8,5 x 10 ¹⁰ m, a

c) vzdálenost od těžiště tohoto mírně hydrofobního zbytku ve vazebné kapse P4 ke karbonylovému atomu kyslíku v Arg-339 v ICE je mezi přibližně 8 x ΚΓ¹⁰ m a přibližně 11 x 10“¹⁰ m.

Výhodně se jakýkoli mírně hydrofobní zbytek, který se asociuje s vazebnou kapsou P' v ICE, 30 asociuje tak, že:

a) vzdálenost od těžiště tohoto mírně hydrofobního zbytku ve vazebné kapse P' ke karbonylovému atomu kyslíku v Arg-341 v ICE je mezi přibližně 11 x 10 ¹⁰ m a přibližně 16 x 10“'° m,

b) vzdálenost od těžiště tohoto mírně hydrofobního zbytku ve vazebné kapse P' k amidovému atomu dusíku v Arg-341 v ICE je mezi přibližně 10 x 10“¹⁰ m a přibližně 15 x 10 ¹⁰ m, a

c) vzdálenost od těžiště tohoto mírně hydrofobního zbytku ve vazebné kapse P' ke karbonylovému atomu kyslíku v Ser-339 v ICE je mezi přibližně 8 x 10 ¹⁰ m a přibližně 12 x ÍO¹⁰ m.

Tento inhibitor ICE výhodně vykazuje neutrální nebo příznivý enthalpický příspěvek součtu všech elektrostatických interakcí mezi ním a ICE, je-li na něj tento inhibitor navázán.

Tento inhibitor ICE výhodně dále obsahuje méně než dvě sekundární amidové vazby.

Výhodně tento inhibitor ICE dále obsahuje méně než dvě skupiny vybrané ze souboru zahrnujícího sekundární amidové skupiny a karbamátové skupiny.

V případě, že je tento inhibitor navázán na ICE, výhodně se uvedené mírně hydrofobní zbytky samostatně asociují s vazebnou kapsou P' v ICE a vazebnou kapsou P2 v ICE a vzdálenost od těžiště mírně hydrofobního zbytku ve vazebné kapse P' k těžišti mírně hydrofobního zbytku ve vazebné kapse P2 je mezi přibližně 6,5 x 10“¹⁰ m a přibližně 13 x 10“¹⁰ m.

-10CZ 298625 B6

V případě, že je tento inhibitor navázán na ICE, výhodně se uvedené mírně hydrofobní zbytky samostatně asociují s vazebnou kapsou P' v ICE a vazebnou kapsou P3 v ICE a vzdálenost od těžiště mírně hydrofobního zbytku ve vazebné kapse P' k těžišti mírně hydrofobního zbytku ve vazebné kapse P3 je mezi přibližně 6 x IO“¹⁰ m a přibližně 15 x IO^-10 m.

V případě, že je tento inhibitor navázán na ICE, výhodně se uvedené mírně hydrofobní zbytky samostatně asociují s vazebnou kapsou P' v ICE a vazebnou kapsou P4 v ICE a vzdálenost od těžiště mírně hydrofobního zbytku ve vazebné kapse P' k těžišti mírně hydrofobního zbytku ve vazebné kapse P4 je mezi přibližně 14 x IO“¹⁰ m a přibližně 22 x ÍO“¹⁰ m.

V případě, že je tento inhibitor navázán na ICE, výhodně se uvedené mírně hydrofobní zbytky samostatně asociují s vazebnou kapsou P' v ICE a vazebnou kapsou P2 v ICE a vazebnou kapsou P3 v ICE a vzdálenost od těžiště mírně hydrofobního zbytku ve vazebné kapse P2 k těžišti mírně hydrofobního zbytku ve vazebné kapse P3 je mezi přibližně 5,5 x 10“’°m a přibližně 13 x

10'¹⁰m.

V případě, že je tento inhibitor navázán na ICE, výhodně se uvedené mírně hydrofobní zbytky samostatně asociují s vazebnou kapsou P2 v ICE a vazebnou kapsou P4 v ICE a vzdálenost od těžiště mírně hydrofobního zbytku ve vazebné kapse P2 k těžišti mírně hydrofobního zbytku ve vazebné kapse P4 je mezi přibližně 9 x 10'¹⁰ m a přibližně 17 x 10“¹⁰ m.

V případě, že je tento inhibitor navázán na ICE, výhodně se uvedené mírně hydrofobní zbytky samostatně asociují s vazebnou kapsou P3 v ICE a vazebnou kapsou P4 v ICE a vzdálenost od těžiště mírně hydrofobního zbytku ve vazebné kapse P3 k těžišti mírně hydrofobního zbytku ve vazebné kapse P4 je mezi přibližně 7,5 x 10 ¹⁰ m a přibližně 17 x IO^-10 m.

V případě, že je tento inhibitor navázán na ICE, výhodně uvedený první zbytek vytvářející vodíkovou vazbu tvoří vodíkovou vazbu s karbonylovým atomem kyslíku v Ser-339 v ICE a uvedený druhý zbytek vytvářející vodíkovou vazbu tvoří vodíkovou vazbu s karbonylovým atomem kys30 líku v Arg-341 v ICE a vzdálenost mezi uvedenými zbytky vytvářejícími vodíkovou vazbu je mezi přibližně 5 x IO“¹⁰ m a přibližně 7,5 x IO“¹⁰ m.

V případě, že je tento inhibitor navázán na ICE, výhodně uvedený první zbytek vytvářející vodíkovou vazbu tvoří vodíkovou vazbu s karbonylovým atomem kyslíku v Ser-339 v ICE a uvedený druhý zbytek vytvářející vodíkovou vazbu tvoří vodíkovou vazbu s amidovou skupinou -NH- v Arg-341 v ICE a vzdálenost mezi uvedenými zbytky je mezi přibližně 2,5 x 10’¹⁰ m a přibližně 5 x IO¹⁰ m.

V případě, že je tento inhibitor navázán na ICE, výhodně uvedený první zbytek vytvářející vodí40 kovou vazbu tvoří vodíkovou vazbu s karbonylovým atomem kyslíku v Arg-341 v ICE a uvedený druhý zbytek vytvářející vodíkovou vazbu tvoří vodíkovou vazbu s amidovou skupinou NH- v Arg-341 v ICE a vzdálenost mezi uvedenými zbytky vytvářejícími vodíkovou vazbu je mezi přibližně 2,5 x 10“¹⁰ m a přibližně 4 x 10 ¹⁰ m.

Ještě výhodněji jsou všechny výše uvedené podmínky asociace splněny ve sloučeninách podle vynálezu.

Odborníkovi v oboru je zřejmé, že existuje řada způsobů jak projektovat inhibitory podle vynálezu. Stejné způsoby lze použít pro selekci kandidátní sloučeniny pro zkoumání jako inhibitoru

ICE. Toto projektování nebo selekce může začínat selekcí různých zbytků, které zaplňují vazebné kapsy.

Existuje řada způsobů selektování zbytků, které zaplňují jednotlivé vazebné kapsy. Patří mezi ně vizuální zkoumání fyzikálního modelu nebo počítačového modelu aktivního centra a manuální připojování modelů vybraných zbytků od různých vazebných kapes. Lze použít modelovací

-11 CZ 298625 B6 software, který je v oboru dobře známý a dostupný. Patří sem software QUANTA (Molecular Simulations, lne., Burlington, MA, 1992), SYBYL (Molecular Modeling Software, Tripos Associates, lne., St. Louis, MO, 1992), AMBER (S. J. Weiner, P. A. Kollman, D. A. Čase, U. C. Singh, C. Ghio, G. Alagona a P. Weiner, J. Am, Chem. Soc., svazek 106, str. 765 - 784 (1984)) nebo CHARMM (B. R. Brooks, R. E. Bruccoleri, B. D. Olafson, D. J. States,

S. Swaminathna a M. Karplus, J. Comp. Chem., svazek 4, str. 187-217 (1983)). Po tomto stupni modelování může následovat energetická minimalizace pomocí standardních silových polí molekulární mechaniky, jako je CHARMM a AMBER. Kromě toho existuje řada specializovanějších počítačových programů nepomáhajících při způsobu selekce vazebných zbytků podle vynálezu.

to Patří sem:

1. GRID (Goodford, P. J., A. Computational Proceduře for Determining Energetically Favorable Binding Sites on Biologically Important Macromolecules. J. Med. Chem., 28, str. 849 - 857 (1985)). GRID je dostupný od Oxford University, Oxford, Velká Británie.

2. MCSS (Miranker, A., Karplus, M., Functionality Maps of Binding Sites: A Multiple Copy

Simulatneous Search Method. Proteins: Structure, Functions and Genetics, 11, str. 29- 34 (1991)). MCSS je dostupný od firmy Molecular Simulations, Burlington, MA, USA.

3. AUTODOCK (Goodsell, D. X., Olsen, A. J., Automated Docking of Substrates to Proteins by Simmulated Annealing. PROTEINS: Structure, Functions and Genetics, 8, str. 195- 202 (1990)). AUTODOCK je dostupný od institutu Scripps Research Institute, La Jolla, CA, USA.

4. DOCK (Kuntz, I. D., Blaney, J. M., Oatley, S. J., Langridge, R., Ferrin, T. E., A Geometrie

Approach to Macromolecule-Ligand Interactions, J. Mol. Biol., 161, str. 269- 288 (1982)). DOCK je dostupný od University of Califomia, San Francisco, CA, USA.

Jakmile jsou vyselektovány vhodné vazebné zbytky, lze je sestavit do jediného inhibitoru. Toto sestavení lze provést připojením různých zbytků k centrálnímu skeletu. Proces sestavení lze provést například pomocí vizuálního zkoumání s následujícím manuálním vytvářením modelů, opět za použití softwaru jako je Quanta nebo Sybyl. Pro pomoc při selekci způsobů spojení různých zbytků lze rovněž použít řadu jiných programů. Patří sem:

1. CAVEAT (Bartlett, P. A., Shea, G. T., Tefler, S. J., Waterman, S., CAVEAT: A Program to

Facilitatet the Structure-Derived Design of Biologically Active Molecules. V „Molecular

Recognition in Chemical and Biological Problems,“ zvláštní vydání, Royal Chem. Soc., 78, str. 182- 196 (1989)). CAVEAT je dostupný od University of Califomia, Berkeley, CA, USA.

2. Trojrozměrné databázové systémy jako je MACCS-3D (MDL Information Systems, San

Leandro, CA, USA). O této oblasti napsal v poslední době článek Martin (Martin, Y. C., 3D

Database Searching in Drug Design. J. Med. Chem., 35, str. 2145 - 2154 (1992)).

3. HOOK (dostupný od firmy Molecular Simulations, Burlington, MA, USA).

Kromě výše uvedeného modelování inhibitorů za použití počítačů lze inhibitoiy podle vynálezu konstruovat „de novo“ za použití buď prázdného aktivního centra nebo popřípadě včetně některých částí známého inhibitoru. Takovéto způsoby jsou v oboru dobře známé. Patří knim například:

1. LUDI (Bohm, H. J., The Computer Program LUDI: A New Method for the De Novo Design of Enzyme Inhibitors. J. Comp, Aid. Molec. Design., 6, 61 - 78 (1992)). LUDI je dostupný od firmy Biosym Technologies, San Diego, CA, USA.

2. LEGEND (Nishibata, Y., Itai. A., Tetrahedron, 47, 8985 (1991)). LEGEND je dostupný od firmy Molecular Simulations, Burlington, MA, USA.

3. LeapFrog (dostupný od firmy Tripos associates, St. Louis, MO, USA).

Lze použít řadu způsobů běžně používaných pro modelování léčiv (přehled viz. Cohen, N. C.,

Blaney, J. M., Humblet, C„ Gund, P., Barry, D. C., „Molecular Modeling Software and Methods for Medicinal Chemistry“, J. Med. Chem,, 33, str. 883 - 894 (1990)). Podobně v chemické lite-12CZ 298625 B6 ratuře existuje řada příkladů způsobů, které lze použít při konkrétních projektech projektování léčiv (přehled viz. Navia, M. A. a Murcko, M. A., „The Use of Structural Information in Drug Design“, Current Qpinions in Structural Biology, 2, str. 202 - 210 (1992)). Mezi některé příklady těchto konkrétních použití patří: Baldwin, J. J. a kol., „Thienothiopyran-2-sulfonamides: Novel

Topically Active Carbonic Anhydrase Inhibitors for the Treatment of Glaucoma“, J. Med. Chem., 32, str. 2510- 2513 (1989), Appelt, K. a kol., „Desing of Enzyme Inhibitors Using Iterative Protein Crystallographic Analysis“, J. Med. Chem., 34, str. 1925 - 1934 (1991), a Ealick, S. E. a kol., „Application of Crystallographic and Modeling Methods in the Design of Purine Nucleotide Phosphorylase Inhibitors“ Proč. Nat. Acad. Sci. USA, 88, str. 11540 - 11544 (1991).

Za použití nové kombinace kroků podle vynálezu se odborník může výhodně vyhnout časově náročnému a nákladnému experimentování pro stanovení aktivity konkrétních sloučenin pro inhibici enzymu. Uvedený způsob je rovněž vhodný pro usnadnění racionálního projektování inhibitorů ICE a terapeutických a profylaktických činidel proti onemocněním zprostředkovaným

IL-1. V souladu s tím se vynález týká takových inhibitorů.

Pro provádění každého z výše uvedených zhodnocení stejně jako hodnocení nutných při zkoumání kandidátní sloučeniny pokud jde o její aktivitu při inhibici ICE lze použít řadu běžných způsobů. Obecně mezi tyto způsoby patří stanovení umístění a vazebné blízkosti daného zbytku, zaujímaného prostoru navázaným inhibitorem, deformační energie vazby dané sloučeniny a energií elektrostatických interakcí. Mezi příklady běžných způsobů vhodných při výše uvedených hodnoceních patří: způsoby kvantové mechaniky, molekulární mechaniky, molekulární dynamiky, vzorkování metodou Monte Carlo, systematických vyhledávání a vzdálenostní geometrie (G. R. Marshall, Ann, Rev. Pharmacol. Toxicol., 27, str. 193 (1987)). Pro použití k provádění těchto způsobů byl vyvinut speciální počítačový software. Mezi příklady programů vytvořených pro taková použitá patří: Gaussian 92, revize E.2 (M. J. Frisch, Gaussian, lne., Pittsburgh, PA 1993), AMBER, verze 4.0 (P. A. Kollman, University of Califomia v San Francisco, 1993), QUANTA/CHARMM (Molecular Simulations, lne., Burlington, MA 1992) a Insight II/Discover (Biosysm Technologies lne., San Diego, CA 1992). Tyto programy lze provozovat například za použití pracovní stanice Silicon Graphics Indigo 2 nebo IBM RISC/6000 workstation model 550. Odborníkovi jsou známé, a jsou pro něj zřejmě použitelné, další hardwarové systémy a softwarové systémy.

Různé skupiny aktivních inhibitorů ICE podle vynálezu mohou interagovat podobnými způsoby s různými vazebnými kapsami aktivního centra ICE. Prostorové uspořádání těchto důležitých skupin je často označováno jako farmakofor. Pojem farmakoforu byl dobře popsán v literatuře (D. Mayer, C. B. Naylor, I. Motoc, a G. R. Marshall, J. Comp. Aided Molec. Design, svazek 1, str. 3- 16 (1987), A. Hopfínger a B. J. Burke, v Concepts and Applications of Molecular Similarity, M. A. Johnson a G. M. Maggiora, editoři, Wiley (1990)).

Různé skupiny inhibitorů ICE podle vynálezu mohou rovněž používat různé skelety nebo jaderné struktury, ale všechny z těchto jaderných struktur umožňují, aby byly nutné zbytky umístěny do aktivního centra tak, že lze dosáhnout specifických interakcí nutných pro vazbu. Tyto sloučeniny jsou nejlépe definovány pomocí jejich schopnosti odpovídat farmakoforu, tj. pomocí jejich strukturní shodnosti vzhledem ke tvaru a vlastnostem aktivního centra ICE.

Inhibitory ICE podle jednoho provedení vynálezu (provedení A) jsou N-acylaminosloučeniny obecného vzorce a (CH₂)_ra-CO₂R /

Ri-NH-CH (a), \

^R3

-13 CZ 298625 B6 ve kterém

Ri je vybrán ze souboru sestávajícího ze skupin následujících obecných vzorců:

Cg2)

Qí

přičemž m je 1;

R je atom vodíku nebo přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

R₂o je skupina ⁷ N popřípadě substituovaná fenoxyskupinou nebo 1,3-dithiolanovou skupinou,

Qi je atom vodíku, přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku a substituovaná fenylovou skupinou, kde fenylová skupina je popřípadě substituovaná skupinou -OH, -Oalkyl s přímou či rozvětvenou alkylovou skupinou obsahující 1 až 6 atomů uhlíku nebo -CF₃,

R3 je -C(O)H, -C(=N-N(H)-C(O)-NH₂)H, -C(O)CH₂OC(O)Ari, kde Αη je 2,6-dichlorfenylová skupina nebo skupina

- 14CZ 298625 B6

R₅ je atom vodíku nebo přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku a substituovaná fenylovou skupinou a

R₆ je atom vodíku nebo přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku; nebo Rije:

m je 1;

R je atom vodíku nebo přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, 15 x je CH,

Rs je:

-C(O)H,

-C(O)CH₂OH,

-C(O)CH₂CH₃,

-C(O)CH₂OC(O)Ar_b kde Αη je 2,6-dichlorfenylová skupina,

-C(O)CH₂OCH₂Ari, kde Αη je 2-chlorfenylová skupina,

-C(O)CH₂SCH₂Ari, kde Ar, je 2-chlorfenylová skupina,

R₅ je -COR9, -CO-O-Rg, -SO₂-R₉ nebo N-acetyl-tyrosinylová skupina, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku a substituovaná fenylovou skupinou,

-15CZ 298625 B6 je atom vodíku nebo přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku a

Qi je atom vodíku, fenylová skupina nebo přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 5 až 6 atomů uhlíku a popřípadě substituovaná fenylovou skupinou;

nebo Rije:

přičemž m je 1,

R je atom vodíku,

Qi je přímá ěi rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku a

R₃ je-C(O)H;

nebo Rije:

(el) (e2)

přičemž m je 1;

R je atom vodíku nebo přímá ěi rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, 30 x je CH,

Rsje:

-C(O)R₉, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů 35 uhlíku a popřípadě substituovaná fenylovou skupinou,

4-pyridylakryloylová skupina,

-C(O)C(O)N(H)-Ari, kde Ari je 4-chlorfenylová skupina,

-16CZ 298625 B6

-C(O)C(O)-Ari, kde Αη je fenylová skupina nebo 2,6-(R₉O)₂-fenylová skupina, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

-C(O)OR₉, kde R₉ je přímá ěi rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku a popřípadě substituovaná fenylovou skupinou, nebo

-C(0)NR₉R!o, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku a Rio je atom vodíku, nebo

-SO₂-R₉, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

-SO₂-Ari, kde Αη je fenylová skupina, ío -S0₂-N(R₉)(Rio), kde R₉ a R_]0 jsou každý přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, nebo

-COAr_b kde Αη je:

fenylová skupina,

4-R₉C(O)-amino-3-chlorfenylová skupina, kde R₉ je přímá či rozvětvená 15 alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

1- isochinolinylová skupina,

2,6-dichlorfenylová skupina,

3-chlor-4-(R₉C(O)N(H)fenylová skupina, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

2-chinolinylová skupina,

3- chinolinylová skupina,

4- chinolinylová skupina,

6-chinolinylová skupina,

8-chinolinylová skupina,

4-alkoxy-2-chinolinylová skupina, kde alkoxyskupinou je přímá nebo rozvětvená alkoxyskupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

2- R₉C(O)-aminofenylová skupina, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

3- (R₉)₂N-fenylová skupina, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

4- (R₉)₂N-fenylová skupina, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

4-R₉C(O)N(H)fenylová skupina, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, a kde alkylová skupina je popřípadě substituovaná fenylovou skupinou,

3- R₉C(0)N(H)fenylová skupina, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

4- R₉C(O)N(R₉)fenylová skupina, kde každý R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

4—R₉N(H)C(O)N(H)fenylová skupina, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

4-R₉OC(0)N(H)fenylová skupina, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

3,4-(R₉C(O)N(H))₂ fenylová skupina, kde každý R₉ je přímá či rozvětvená 45 alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

4-R₉S(O)₂-aminofenylová skupina, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

-17CZ 298625 B6

4-R₉S(O)₂-fenylová skupina, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

4-aminosulfonylfenylová skupina,

2-R₉-fenylová skupina, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsa5 hující 1 až 6 atomů uhlíku,

2- R₉-3-hydroxyfenylová skupina, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

3.5- (R₉)₂-4-hydroxyfenylová skupina, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

2-R₉O-fenylová skupina, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

3- R₉O-fenylová skupina, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

4- R₉O-fenylová skupina, kde R₉ je přímá ěi rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, a kde alkylová skupina je popřípadě substituovaná fenylovou skupinou,

2- chlorfenylová skupina,

3- chlorfenylová skupina,

4- chlorfenylová skupina,

3,4-dichlorfenylová skupina,

3.5- dichlorfenylová skupina,

3.5- dich lor-4-hydroxyfeny lová skupina,

3.5- dichlor-4-R₉O-fenylová skupina, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

2-R₉-3-chlorfenylová skupina, kde R₉ je přímá ěi rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

2- R₉-5-chlorfenylová skupina, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

3- chlor-4-R₉O-fenylová skupina, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

3-chlor-4-hydroxyfenylová skupina,

3- chlor-4-aminofenylová skupina,

3.5- dichlor-4-aminofenylová skupina,

2- fluorfenylová skupina,

3-fluorfenylová skupina,

4- fluorfenylová skupina,

3,4-difluorfenylová skupina,

3- chlor-A-fluorfenylová skupina,

3- fluor-4-R₉O~fenylová skupina, kde R₉ je přímá ěi rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

4- hydroxyfenylová skupina,

4-(4-hydroxybenzoyloxy)fenylová skupina,

4-benzyloxyfenylová skupina,

4-hydroxy-3-methyl-N-morfolinylfenylová skupina,

4-hydroxyalkylfenylová skupina, kde alkylovou skupinou je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

4-R₉C(O)fenylová skupina, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

-18CZ 298625 B6

4-benzoylaminofenylová skupina,

4-aminofenylová skupina,

4-fenoxyfenylová skupina, cinnamoylová skupina,

1-nafty lová skupina,

2-naftylová skupina,

4-bifenylová skupina,

1- hydroxy-2-naftylová skupina,

6-hydroxy-2-naftylová skupina, ío 2-amino-3-naftylová skupina,

4- (R,₀)₂N-l-naftylová skupina, kde každý R₁₀ je atom vodíku nebo přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

2- R₉—4,5-methylendioxyfenylová skupina, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

3,4-methylendioxyfenylová skupina,

2- thienylová skupina,

3- thienylová skupina,

2-thienothienylová skupina,

2-benzothienylová skupina,

2-benzofuranylová skupina,

2-pyridylová skupina, cyklopropylová skupina, cyklohexylová skupina

3,4,5-(R₉O)₃-fenylová skupina, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová sku25 pina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

1.3- dialkyl-5-pyrazol, kde každou zalkylových skupin je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

1.4- dialkyl-5-thiazol, kde každou z alkylových skupin je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

4-alkyl-2-trifluormethylfenyl-5-thiazol, kde alkylovou skupinou je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

5- alkyl-3-isoxazol, kde alkylovou skupinou je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

6- benzotriazolylová skupina,

2-indolylová skupina,

1- alkyl-2-indolylová skupina, kde alkylovou skupinou je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

2- imidazol,

6-benzimidazol, nebo

5-(l,2,3-thiadiazol), a

R₃ je:

-C(O)H,

-C(O)CH₂SCH₂Ari, kde Ar, je 2-chlorfenylová skupina,

-C(O)CH₂OCH₂Ari, kde Ar, je 2-chlorfenylová skupina,

-C(O)CH₂OC(O)Ar,, kde Ar, je:

2,6-dichlorfenylová skupina,

-19CZ 298625 B6

1- nafty lová skupina,

4-(3-fenyl-5-methylisoxazolyl)ová skupina,

2- fenoxyfenylová skupina,

3- fenoxyfenylová skupina,

3-methyl-2-thienylová skupina, nebo

2,6-{R₉)₂fenylová skupina, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

-C(O)CH₂F,

-C(O)CH₂Br, ío -CN,

-C(=N-O-(CH₂)_nAri)H, kde n je 1 až 6 a Αη je fenylová skupina nebo 2,6-dichlorfenylová skupina, —C(—N—O—R₉)H, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

-C(=N-N(H)C(O)NH₂)H,

-(C(O)CH₂S(CH₃)CH₂Ar₁)⁺BF₄“, kde Arj je 2-chIorfenylová skupina,

-20CZ 298625 B6

H₃CO ró

-21 CZ 298625 B6

kde m je 1,

R je atom vodíku, io Rs je:

-COR₉, kde R9 je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku a substituovaná fenylovou skupinou, nebo

-COAri, kde Αη je fenylová skupina, a 15 R₃ je-C(O)H, nebo m je 2,

R je atom vodíku nebo přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, 20

R5 je -COAri, kde Αη je fenylová skupina, a R₃ je -C(O)H nebo -C(=N-N(H)C(O)NH₂)H;

nebo R] je:

-22CZ 298625 B6 (e6)

přičemž m je 1,

R₃ je-C(O)H, a io R₅ je:

-C(O)R₉, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, kde alkylová skupina je popřípadě nenasycená a kde alkylová skupina je popřípadě substituovaná:

fenylovou skupinou,

4-chlorfenylovou skupinou,

3.4- methylendioxyfenylovou skupinou,

3.4- dichlorfenylovou skupinou, cyklohexylovou skupinou, a

2,4,6-(R9)3-fenylovou skupinou, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová 20 skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

-SO₂-Ari, kde Ar, je 2-nafitylová skupina,

-C(O)NHAr_b kde Ar, je fenylová skupina, 2-R₉O-fenylová skupina nebo 3-R₉Ofenylová skupina, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

-C(O)Ari, kde Ar₃ je:

fenylová skupina,

2,3-methylendioxyfenylová skupina,

4-R₉C(O)N(H)fenylová skupina, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

4-R₉O-fenylová skupina, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

2-benzothienylová skupina,

4-hydroxyfenylová skupina,

2- indolylová skupina,

4-R₉O-3,5-R₉-fenylová skupina, kde každý R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

4-R₉O-3,5-dichlorfenylová skupina, kde každý R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

-C(O)C(O)Ari, kde Αη je:

fenylová skupina, thienylová skupina,

3- indolylová skupina,

-23 CZ 298625 B6

3,4-methylendioxyfenylová skupina,

2-R₉O-fenylová skupina, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina 5 obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

2.6- (R₉O)2-fenylová skupina, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

2.4.6- (R₉)3-fenylová skupina, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, nebo ío 3,4,5-(R₉O)3-fenylová skupina, kde každý R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, nebo

-C(O)C(O)N(H)Ari, kde Αη je 4-chlorfenylová skupina;

nebo R]je:

nebo

přičemž m je 1,

R5 je -C(O)R₉, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, kde alkylová skupina je substituovaná fenylovou skupinou, a

R₃ je-C(O)H;

nebo Rije:

přičemž 5 m jel,

Rs je -CORg, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, každý Ré je nezávisle přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku popřípadě substituovaná 4-hydroxyfenylovou skupinou,

Qi je -O-fenylová skupina nebo skupina -OR₉, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová sku15 pina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, přičemž alkylová skupina je substituovaná fenylovou skupinou, neboje R₉ alkenylová nebo alkynylová skupina obsahující 2 až 6 atomů uhlíku, a

Rs je:

-C(O)H,

-C(=N-N(H)-C(O)-NH₂)H,

-C(O)CH₂SCH₂An, kde Αη je 2-chlorfenylová skupina,

-25CZ 298625 B6

nebo t

nebo Rije:

m je 1,

R je atom vodíku R₃ je-C(O)H, a

R₂o je nebo Rije:

-26CZ 298625 B6

přičemž m je 1,

R je atom vodíku,

R₃ je-C(O)H,

Qi je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku a substituovaná fenylovou skupinou, každý R₅ je nezávisle:

—C(O)R₉, kde Rg je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku a substituovaná fenylovou skupinou nebo 4-hydroxyfenylovou skupinou, nebo

-C(O)OR₉, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku a substituovaná fenylovou skupinou, a

R₆ je atom vodíku nebo přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku;

nebo Ri je:

přičemž m je 1,

R je atom vodíku nebo přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku; R₃ je:

-C(O)H,

-27CZ 298625 B6

-C(=N-N(H)-C(O)-NH₂)H,

-C(O)CH₂OC(O)Ari, kde Ar, je 2,6-dichlorfenylová skupina,

R₅je:

-C(O)Ar_b kde Αη je fenylová skupina, nebo

-C(O)R9, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlí ku a substituovaná fenylovou skupinou;

nebo Ri je:

m je 1,

R je atom vodíku nebo přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku;

Rsje:

-C(O)H,

-C(O)CH₂OH,

-C(O)CH₂CH₃,

-C(O)CH₂OC(O)Ari, kde Αη je 2,6-dichlorfenylová skupina,

-C(=N-O-CH₂Ari)H, kde Αη je 2,6-dichlorfenylová skupina,

-28CZ 298625 B6

nebo t

Rs je:

—C(O)R₉, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku a popřípadě substituovaná fenylovou skupinou, 3,4-dichlorfenylovou skupinou,

3,4-methylendioxyfenylovou skupinou, 2,4-dihydroxy-5-thiazolylovou skupinou, nebo 5-hydantoinylovou skupinou, přičemž alkylová skupina je popřípadě nenasycená,

-R₉, kde R₉ je přímá ěi rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku a substituovaná fenylovou skupinou nebo 2-naftylovou skupinou, ío -C(O)Ari, kde Αη je fenylová skupina, 1-nafitylová skupina, 2-naftylová skupina, 6hydroxy-2-naftylová skupina, 6-(6-hydroxy-2-naftoyloxy)-2-naftylová skupina, 2chinolinylová skupina, 4-chinolinylová skupina, 8-chinolinylová skupina, 1-isochinolinylová skupina, 2-hydroxy-4-chinolinylová skupina, 4-hydroxy-6-chlor-8-R₉-3chinolinylová skupina, 4-R₉O-2-chinolinylová skupina, 4-hydroxy-7-R₉O-3-chinoliny15 lová skupina, 3-thienylová skupina, 2,4-dialkyl-5-thiazolylová skupina, 2-alkyl-3-hydroxyfenylová skupina, 4-R₉C(O)N(H)fenylová skupina, 3,4-methylendioxyfenylová skupina, 3,5-(R₉)2-4-hydroxyfenylová skupina, 3,5-(R₉)₂-4-R₉O-fenylová skupina, 2-indolylová skupina, 5-benzimidazolylová skupina, 3,5-dichlor-4-aminofenylová skupina, 3chlor-4-hydroxyfenylová skupina, 3,5-(R9O)₂-4-hydroxyfenylová skupina, 3-(1^0)-420 hydroxyfenylová skupina, 4-hydroxyfenylová skupina, 4-(R₉O)-fenylová skupina, 4(R₉)₂N-fenylová skupina, 3,5-dichlor-4-hydroxyfenylová skupina, 3,5-dichlor-4-R₉Ofenylová skupina, 3-chlor-4-aminofenylová skupina, 3-chlor-4-R₉C(O)N(H)-fenylová skupina, 3,5-dichlor-4-R₉C(O)N(H)-fenylová skupina, 2-chlor-3-hydroxy-4-pyridylová skupina, 3,5-dichlorpyridylová skupina, 6-benzothiazolylová skupina, 2-(l,8-naftyridin),

5-(4-chlorfenyl)-4-oxazolylová skupina, 4-cinnolinylová skupina, 3-fenyl-5-alkyl-4isoxazolylová skupina, 3-chlor-4-alkylsulfonyl-2-thienylová skupina, 2-pyrazinylová skupina, 4-pyridinyl-N-oxid, 3-pyridinyl-N-oxid, 2-hydroxy-6-pyridinylová skupina,

2-R₉C(O)N(H)-3-thienylová skupina, 2,3-dialkyl-7-indolylová skupina, 2-hydroxy-5-29CZ 298625 B6 pyridylová skupina, 2,6-(R9O)-5-pyridylová skupina, 2-chlor-6-R90-4-pyridylová skupina, 2-chinoxalinylová skupina, 2-(l,6-naftyridinylová skupina), 3-pyridylová skupina,

2,6-dichlorfenylová skupina, 6-benzotriazolylová skupina, nebo 4-(N-morfolinylalkyloxy)fenylová skupina, kde každý R9 a každá alkylová skupina jsou přímá či rozvět5 vená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, a každá alkoxyskupina je přímá či rozvětvená alkoxyskupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

-S(O)₂-Ari, kde Ar, je fenylová skupina,

-S(O)₂-Rg, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku a substituovaná fenylovou skupinu,

-C(O)OAr_b kde Αη je 3-tetrahydrofuran,

-C(O)C(O)Ar_b kde Arje:

fenylová skupina,

2.6- (R₉O)₂-fenylová skupina, kde R₉ je přímá ci rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

2-thienylová skupina,

3,4-methylendioxyfeny lová skupina,

3- indolylová skupina,

4- (R9O)fenylová skupina, kde Rg je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

2-(R₉O)fenylová skupina, kde Rg je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

2.4.6- (R9)3-fenylová skupina, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

4-chlorfenylová skupina, nebo 25 2-furanylová skupina,

-C(O)C(O)N(H)Ari, kde Αη je 4-chlorfenylová skupina, -C(O)-C(H)(CH₂CO₂H)N(H)C(O)CH₃,

-C(O)-C(H)(CH₂CH₂CO₂H)N(H)C(O)CH₃,

-30CZ 298625 B6

R?je:

-H,

-R₉, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku a substituovaná fenylovou skupinou,

-C(O)R₉, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku a popřípadě substituovaná:

fenylovou skupinou,

-OR₉, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

-C(O)R₉, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

4-pyridylovou skupinou,

3-R₉-fenylovou skupinou, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

-OC(O)R₉, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

-OH,

-N(H)C(O)R₉, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až atomů uhlíku,

-N(H)R₉, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

-OAr_b kde Ar₉ je fenylová skupina,

3-pyridylovou skupinou,

-SO2R9, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

N-morfolinylovou skupinou,

-31 CZ 298625 B6

-CN,

2-amino-4-thiazolylovou skupinou,

5-tetrazolylovou skupinou,

2-alkyl-R₉-4-thiazolylovou skupinou,

N-piperidinylovou skupinou,

N-pyrrolidinylovou skupinou,

N-thiamorfolinylovou skupinou,

4-R₉-l-piperazinylovou skupinou,

4-hydroxy-N-piperidinylovou skupinou,

N-thiamorfolinyl-S,S-dioxidem,

-N(R₉)-O(R₉),

4-fenyl-1 -piperazinylovou skupinou,

4-oxopiperidinylovou skupinou, l-R₉-2-merkaptoimidazolylovou skupinou,

4-R₉C(O)-l-piperazinylovou skupinou,

-S-fenylovou skupinou, nebo dihydroxyskupinou,

-C(O)Ar_b kde Ar, je fenylová skupina nebo 2-R₉-4-thiazolylová skupina, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

-C(O)C(O)OR₉, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

-C(O)C(O)R₉, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

-C(O)OR₉, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

-S(O)₂R₉, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

-C(O)N(H)R₉, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku a substituovaná fenylovou skupinou,

-C(O)OAr_b kde Αη je 2-tetrahydrofuranylová skupina,

-C(O)H, nebo

-Ar_b kde Ar! 5-tetrazolylová skupina; nebo Ri je:

přičemž m je 1,

-32CZ 298625 B6

R je atom vodíku,

X je -H, -F nebo -R₉, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

Y je -H, -F, -N(R₉)₂, kde každý R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, nebo -CF₃,

Z je -H, -R₉, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, -F, -Cl, -OR₉, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku a popřípadě substituovaná fenylovou skupinou, -SO₂R₉, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, -OH nebo NH₂,

R₃ je-C(O)H,

R₅ je -C(O)Ari, kde Αη je fenylová skupina, 3,5-(R₉)₂-4-hydroxyfenylová skupina, 1isochinolinylová skupina nebo 2-indolylová skupina, a

R₇ je -C(O)R₉, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku a substituovaná skupinu -OR₉, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku;

nebo Ri je:

m je 1,

R je atom vodíku,

R₃ je-C(O)H,

Q je-0-,-S-,-C(O)-, nebo-S(O)₂-, a

R₅ je 1-isochinolinylová skupina, 3-indolylová skupina, nebo 3,5-(R₉)₂-4-hydroxyfenylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku;

nebo Rije:

-33CZ 298625 B6

přičemž m je 1,

R je atom vodíku,

R₃ je-C(O)H, a o

R5 je 1-isochinolinylová skupina.

Výhodnými sloučeninami jsou v rámci provedení A sloučeniny, ve kterých R] představuje sku pinu obecného vzorce

nebo t

Dalšími výhodnými sloučeninami jsou v rámci provedení A sloučeniny, ve kterých R] předsta 20 vuje skupinu obecného vzorce (c)

-34CZ 298625 B6

Dalšími výhodnými sloučeninami jsou v rámci provedení A sloučeniny, ve kterých Ri předsta vuje skupinu obecného vzorce (d2) {<32)

Dalšími výhodnými sloučeninami jsou v rámci provedení A sloučeniny, ve kterých R] předsta vuje skupinu obecného vzorce <el)

nebo

Dalšími výhodnými sloučeninami jsou v rámci provedení A sloučeniny, ve kterých Ri předsta vuje skupinu obecného vzorce

Dalšími výhodnými sloučeninami jsou v rámci provedení A sloučeniny, ve kterých R] předsta vuje skupinu obecného vzorce

-35CZ 298625 B6

Dalšími výhodnými sloučeninami jsou v rámci provedení A sloučeniny, ve kterých R] předsta vuje skupinu obecného vzorce (h2) (h2)

-36CZ 298625 B6

Η (06) *5 ,Ν

Re 'a o Re

Dalšími výhodnými sloučeninami jsou v rámci provedení A sloučeniny, ve kterých Ri předsta vuje skupinu obecného vzorce (r3)

Dalšími výhodnými sloučeninami jsou v rámci provedení A sloučeniny, ve kterých Ri předsta vuje skupinu obecného vzorce (wl) (wl)

-37CZ 298625 B6

Výhodnějšími sloučeninami jsou v rámci provedení A sloučeniny vybrané ze skupiny zahrnující sloučeniny:

(20d) (142) (20a)

-38CZ 298625 B6

Me = methylová skupina, Ph = fenylová skupina,

-39CZ 298625 B6

Dalšími výhodnými sloučeninami jsou v rámci provedení A sloučeniny vybrané ze skupiny zahr

-40CZ 298625 B6

-42CZ 298625 B6

-43CZ 298625 B6

Další výhodnou sloučeninou je v rámci provedení A sloučenina vzorce 43

Dalšími výhodnými sloučeninami jsou v rámci provedení A sloučeniny vybrané ze skupiny zahr nující sloučeniny:

-44CZ 298625 B6

-45CZ 298625 B6 (137) (138) (139)

(140) (141)

-46CZ 298625 B6

-47CZ 298625 B6

-48CZ 298625 B6

Další výhodnou sloučeninou je v rámci provedení A sloučenina vzorce 43 (39)

-49CZ 298625 B6 (7)

A™ ,K (98) (102a)

(102b)

(102c)

-50CZ 298625 B6 (106a)

Dalšími výhodnými sloučeninami jsou v rámci provedení A sloučeniny vybrané ze skupiny zahr5 nující sloučeniny:

-51 CZ 298625 B6 (302) (220b) (223e) (226e) (227e)

(223b)

(429)

-52CZ 298625 B6

(217c)

(217e)

(246)

O (280)

(281)

(282) (283) (284) (285) (286) (287)

ΌΗ

&04) (405) (406) (407) (408) (409)

-55CZ 298625 B6 (410) (411) (413) (416) (417) (418)

-56CZ 298625 B6 (419) (420) (422) (423) (424) (425)

-57CZ 298625 B6

-58CZ 298625 B6 (435) (436) (437) (438) (439) (440)

-59CZ 298625 B6 (441) (442) (443) (444) (445)

-60CZ 298625 B6 (446) (447) (448) (449) (450)

-61 CZ 298625 B6 (451) (452) (453) (454) (455)

-62CZ 298625 B6

-63 CZ 298625 B6 (462) (463) (464) (465) (466) (467)

-65CZ 298625 B6

(476)

(477)

-66CZ 298625 B6 (478) (479) (480) (481) (481s)

-67CZ 298625 B6 (482) (482S) (483) (484)

-68CZ 298625 B6

-69CZ 298625 B6 (493) (494) (495) (497) (498) (499)

-70CZ 298625 B6 (421) (427)

(214w)

(415) (5002)

(605b)

-72CZ 298625 B6 (605c) (605d) (605e) (605f) (605g)

O (605h) (605Í) (605j) (605ra) (605n)

-74CZ 298625 B6 (605θ) (605p)

(605S) (605t)

-75CZ 298625 B6

(609a) (609b)

( 619) (620 )

-76CZ 298625 B6 (621) (622) (623) (624) (625)

-77CZ 298625 B6 (626 ) (627) (628 ) (629) (630)

-78CZ 298625 B6 (631) ( 632) (633 )

(3049) (3050) (3051) (3053)

(3052)

-80CZ 298625 B6 (3054) (3055) (3056) (3057)

-81 CZ 298625 B6 (3058) (3059)

(3062) (3063) (3064) (3065) (3066)

83CZ 298625 B6 (3067) (3068) (3069) (3070)

-84CZ 298625 B6 (3071) (3072) (3073) (3074) (3075)

O-CHj

-85CZ 298625 B6 (3076) (3077) (3078) (3079)

(3080) (3081) (3082) (3083)

-87CZ 298625 B6

(3086)

(3087) (3088) (3089) (3090)

(3091) (3092) (3093) (3094)

-90CZ 298625 B6 (3095) (3096) (3097) (3098)

-91 CZ 298625 B6 (3099) (3100) (3101)

92CZ 298625 B6 (3102) (3103) (3104) (3105)

-93 CZ 298625 B6 (3106)

(3107) (3108)

Λυ (3109) (3110) ^-4? λ.

-94CZ 298625 B6 (3111) (3112) (3113) (3114) (3115)

(3116)

(3118) (3119)

(3120)

-96CZ 298625 B6 (3121) (3122) (3123) (3124)

-97CZ 298625 B6

(3129) (3130) (3131) (3132)

99CZ 298625 B6 (3133) (3134) (3136) (3135)

-100 (3137) (3138) (3139) (3140)

101 (3141) (3142) (3143) (3144)

- 102 (3145) (3146) (3147) (3148)

- 103CZ 298625 B6

(3152)

- 104CZ 298625 B6 (3153) (3154) (3156) (3157)

(3155)

- 105CZ 298625 B6 (3158) (3159) (3160)

-106

‘diastereome

- 107

- 108CZ 298625 B6

-109CZ 298625 B6

HO (691b) ( 911) (912 )

(913)

- 110CZ 298625 B6 (916) (662 ) (656 )

(669)

(686)

-111 (689a)

(914)

(915)

(918 ) ( 671)

-112CZ 298625 B6 (684) (689b) (691a) ( 694)

-113CZ 298625 B6 (917 )

(922)

(919) (920)

-114CZ 298625 B6

(699 ) (910) (5021)

-115CZ 298625 B6

116CZ 298625 B6

117CZ 298625 B6

Dalším provedením vynálezu (provedením B) jsou N-acylaminosloučeniny obecného vzorce σ

ve kterém je kruh popřípadě substituován skupinou R, a ve kterém:

R je -H nebo -Oalkylová skupina, kde alkylová skupina obsahuje 1 až 6 atomů uhlíku a je přímá nebo rozvětvená;

Ri je:

t nebo n jel nebo 2;

každý R₂ je nezávisle přímá nebo rozvětvená alkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku, popřípadě substituovaná hydroxyfenylovou skupinou; a

R₅ je:

-CO-Rg, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku, nebo —CO—O—R₉, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku, substituovaná fenylovou skupinou.

Výhodnými sloučeninami jsou v rámci provedení B sloučeniny vzorců Q, R, S, T a V

-118CZ 298625 B6

-119CZ 298625 B6 ve kterém:

Ri je:

O Řg O Ř₂ nebo

každý R₂ je nezávisle přímá nebo rozvětvená alkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku, popřípadě substituovaná hydroxyfenylovou skupinou;

R₅ je:

-CO-R4, kde R4 je přímá či rozvětvená alkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku, nebo

-CO-O-R4, kde R4 je přímá či rozvětvená alkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku, substituovaná fenylovou skupinou; a

R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku, substituovaná chlorfenylovou skupinou nebo dichlorfenylovou skupinou.

Výhodnými sloučeninami jsou v rámci provedení C sloučeniny vzorců W, X, Y a Z

- 120CZ 298625 B6

Dalším provedením vynálezu (provedením D) jsou N-acylaminosloučeniny obecného vzorce

- 121 CZ 298625 B6 (ž)

ve kterém:

nebo

každý R₂ je nezávisle přímá nebo rozvětvená alkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku, ío popřípadě substituovaná hydroxyfenylovou skupinou;

Rs je:

-CO-O-R4, kde R4 je přímá či rozvětvená alkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku, 15 substituovaná fenylovou skupinou;

každý Ar₂ je nezávisle vybrán z následující skupiny, ve které je libovolný z kruhů popřípadě jednou nebo vícenásobně substituován skupinou -Q,:

- 122CZ 298625 B6

Qi je fenylová skupina, kde fenylová skupina je popřípadě substituovaná chloroskupinou, dichloroskupinou nebo trifluormethylovou skupinou.

Výhodnými sloučeninami jsou v rámci provedení D sloučeniny vybrané ze skupiny zahrnující sloučeniny:

- 123

-124CZ 298625 B6

Veškerá výhodná provedení vynálezu zde uvedená nelze chápat jako omezující rozsah vynálezu 5 pouze na toto provedení.

Výhodné jsou sloučeniny podle vynálezu, které mají molekulovou hmotnost menší nebo rovnou přibližně 700 daltonům, a výhodněji mezi přibližně 400 a 600 daltony. Tyto výhodné sloučeniny mohou být snadno absorbovány krví pacienta při orálním podání. Tato orální dostupnost způso10 buje, že jsou tyto sloučeniny výbornými činidly pro orálně zprostředkované léčení a prevenci proti onemocněním zprostředkovaným IL-1.

Inhibitory ICE podle vynálezu lze syntetizovat za použití běžných postupů. Výhodně se tyto sloučeniny účelně syntetizují ze snadno dostupných výchozích materiálů.

Sloučeniny podle vynálezu patří mezi nejsnadněji syntetizovatelné známé inhibitory ICE. Dříve popsané inhibitory ICE často obsahují čtyři nebo více chirálních center a řadu peptidických vazeb. Relativní jednoduchost syntézy sloučenin podle vynálezu představuje nesmírnou výhodu při velkovýrobní produkci těchto sloučenin.

Je třeba vzít v úvahu, že sloučeniny podle vynálezu se mohou vyskytovat v různých rovnovážných formách, v závislosti na podmínkách včetně výběru rozpouštědla, pH a dalších, jak je známo odborníkovi v oboru. Všechny takové formy těchto sloučenin jsou výslovně zahrnuty v rozsahu vynálezu. Zejména se mohou mnohé sloučeniny podle vynálezu, obzvláště ty, které obsahují aldehydické skupiny nebo ketoskupiny ve zbytku R₃ a karboxylové skupiny ve zbytku CO₂R, vyskytovat v hemiketalových (nebo hemiacetalových) nebo hydratovaných formách.

-125CZ 298625 B6

V závislosti na výběru rozpouštědla a dalších podmínkách známých odborníkovi v oboru se mohou sloučeniny podle vynálezu vyskytovat rovněž v acyloxyketalové, acyloxyacetalové, ketalové nebo acetalové formě.

Kromě toho je třeba vzít v úvahu, že rovnovážné formy sloučenin podle vynálezu mohou zahrnovat tautomemí formy. Všechny takové formy těchto sloučenin jsou výslovně zahrnuty v rozsahu vynálezu.

Je třeba vzít v úvahu, že sloučeniny podle vynálezu lze modifikovat vhodnými funkčními skupilo námi pro rozšíření selektivních biologických vlastností. Takové modifikace jsou v oboru známé a patří mezi ně modifikace, které zvyšují biologickou penetraci do daného biologického systému (například krve, lymfatického systému, centrálního nervového systému), zvyšují orální dostupnost, zvyšují rozpustnost pro umožnění injekčního podání, mění metabolismus a mění rychlost vylučování. Kromě toho lze sloučeniny podle vynálezu měnit do formy prekurzorů, takže se požadovaná sloučenina vytváří v těle pacienta jako výsledek působení metabolických nebo jiných biochemických procesů na prekurzor. Mezi několik příkladů prekurzorových forem patří ketalové, acetalové, oximové a hydrazonové formy sloučenin, které obsahují ketoskupiny nebo aldehydové skupiny, zejména pokud se vyskytují ve skupině R₃ sloučenin podle vynálezu.

Sloučeniny podle vynálezu jsou výhodnými ligandy pro ICE. V souladu s tím jsou tyto sloučeniny schopné zaměřit se na určité procesy související s onemocněními zprostředkovanými IL-1 a inhibovat je, jako je tomu v případě konverze prekurzoru IL-1 β na maturovaný IL-1 β, a tím inhibovat rozhodující aktivitu tohoto proteinu při zánětlivých onemocněních, autoimunitních onemocněních a neurodegenerativních onemocněních. Sloučeniny podle vynálezu například inhibují konverzi prekurzoru IL-Ιβ na maturovaný IL-Ιβ v důsledku inhibice ICE. Jelikož má ICE zásadní význam pro produkci maturovaného IL-1, blokuje inhibice tohoto enzymu účinně zahájení fyziologických účinků a symptomů zprostředkovaných IL-1, jako jsou záněty, pomocí inhibice produkce maturovaného IL-1. Inhibicí aktivity prekurzoru IL-Ιβ tedy sloučeniny podle vynálezu účinně fungují jako inhibitory IL-1.

Sloučeniny podle vynálezu lze použít běžným způsobem pro léčení onemocnění, která jsou zprostředkována IL-1. Takovéto způsoby léčení, dávkování při nich a podmínky léčení může odborník v oboru vybrat z dostupných způsobů a technik. Například lze sloučeninu podle vynálezu kombinovat s farmaceuticky přijatelnou nosnou nebo/a pomocnou látkou pro podání pacientovi postiženému onemocněním zprostředkovaným IL-1 farmaceuticky přijatelným způsobem a v množství účinném pro snížení závažnosti tohoto onemocnění.

Alternativně lze sloučeniny podle vynálezu použít v prostředcích a způsobech léčení nebo ochrany jedinců proti onemocněním zprostředkovaným IL-1 po delší časová období. Tyto sloučeniny lze použít v takových prostředcích buďto samotné nebo spolu s jinými sloučeninami podle vynálezu, způsobem, který je v souladu s běžným využitím inhibitorů ICE ve farmaceutických prostředcích. Například lze sloučeninu podle vynálezu míchat s farmaceuticky přijatelnými nosnými nebo/a pomocnými látkami běžně používanými ve vakcínách a podávat v profylakticky účinných množstvích pro ochranu jedinců po delší dobu proti onemocněním zprostředkovaným IL-1.

Sloučeniny podle vynálezu lze rovněž podávat společně s jinými inhibitory ICE pro zvýšení účinku terapie nebo profylaxe proti různým onemocněním zprostředkovaným IL-1.

Kromě toho lze sloučeniny podle vynálezu použít v kombinaci buď s běžnými protizánětlivými činidly nebo s matricovými metaloproteázovými inhibitory, lipoxygenasovými inhibitory a antagonisty cytokinů jiných než IL-1 β.

Sloučeniny podle vynálezu lze rovněž podávat v kombinaci s imunomodulátory (například bropiriminem, protilátkou proti lidskému alfa-interferonu, IL-2, GM-CSF, methionin-enkefalinem, interferonem alfa, diethyldithiokarbamáty, faktorem nekrosy tumorů (tumor necrosis factor),

-126CZ 298625 B6 naltrexonem a rEPO) nebo s prostaglandiny, pro prevenci nebo potírání symptomů onemocnění zprostředkovaných IL-1, jako je zánět.

Pokud se sloučeniny podle vynálezu podávají v kombinačních terapiích s jinými činidly, lze je pacientovi podávat postupně nebo současně. Alternativně mohou být farmaceutické nebo profylaktické prostředky podle vynálezu tvořeny kombinací inhibitoru ICE podle vynálezu a jiného terapeutického nebo profylaktického činidla.

Farmaceutické prostředky podle vynálezu obsahují libovolné ze sloučenin podle vynálezu a jejich farmaceuticky přijatelných solí, s libovolným farmaceuticky přijatelným nosičem, pomocnou látkou nebo vehikulem. Mezi farmaceuticky přijatelné nosiče, pomocné látky a vehikula, které lze použít ve farmaceutických prostředcích podle vynálezu patří, aniž by však šlo o omezující výčet, iontoměniče, alumina, aluminium-stearát, lecithin, sérové proteiny, jako je albumin lidského séra, pufrovací látky, jako jsou fosfáty, glycin, kyselina sorbová, sorbát draselný, směsi částečných glyceridů nasycených rostlinných mastných kyselin, voda, soli nebo elektrolyty, jako je protamin-sulfát, hydrogenfosforečnan sodný, hydrogenfosforečnan draselný, chlorid sodný, soli zinku, koloidní oxid křemičitý, magnesium-trisilikát, polyvinyl-pyrrolidon, látky na bázi celulosy, polyethylenglykol, natrium-karboxymethylcelulosa, polyakryláty, vosky, polyethylenpolyoxypropylenové blokové polymery, polyethylenglykol a lanolín.

Farmaceutické prostředky podle vynálezu lze podávat orálně, parenterálně, inhalačním sprayem, místně, rektálně, nasálně, bukálně, vaginálně nebo pomocí implantovaného zásobníku. Výhodné je orální podání. Farmaceutické prostředky podle vynálezu mohou obsahovat libovolné běžné netoxické farmaceuticky přijatelné nosiče, pomocné látky nebo vehikula. Termín „parenterální“, jak je zde používán, zahrnuje subkutánní, intrakutánní, intravenózní, intramuskulámí, intraartikulámí, intrasynoviální, intrastemální, intrathekální, intralezionální a intrakraniální injekce nebo infuze.

Farmaceutické prostředky mohou být ve formě sterilního injikovatelného přípravku, například ve formě sterilní injikovatelné vodné nebo olejové suspenze. Tuto suspenzi lze formulovat podle postupů známých v oboru za použití vhodných dispergátorů nebo smáčedel (jako je například Tween 80) a suspendujících činidel. Sterilním injikovatelným přípravkem může být rovněž sterilní injikovatelný roztok nebo suspenze v netoxickém parenterálně přijatelném ředidle nebo rozpouštědle, například roztok v 1,3-butandiolu. Mezi přijatelná vehikula a rozpouštědla, která lze použít, patří mannitol, voda, Ringerůr roztok a isotonický roztok chloridu sodného. Kromě toho se jako rozpouštědlo nebo suspendující prostředí běžně používají sterilní nevysychavé oleje. Pro tento účel lze použít libovolný nedráždivý nevysychavý olej včetně syntetických mono- a diglyceridů. Pro přípravu injikovatelných prostředků jsou vhodné mastné kyseliny, jako je kyselina olejová a její glyceridové deriváty, stejně jako v přírodě se vyskytující farmaceuticky přijatelné oleje, jako je olivový olej nebo ricinový olej, zejména v jejich polyoxyethylovaných formách. Tyto olejové roztoky nebo suspenze mohou rovněž obsahovat alkohol s dlouhým řetězcem jako ředidlo nebo dispergátor, jako je Ph, Helv nebo podobný alkohol.

Farmaceutické prostředky podle vynálezu mohou být orálně podávány v libovolné orálně přija45 telné dávkovači formě, včetně, aniž by však šlo o omezující výčet, kapslí, tablet a vodných suspenzí a roztoků. V případě tablet pro orální použití patří mezi běžně používané nosiče laktosa a kukuřičný škrob. Typicky se přidávají rovněž lubrikační činidla, jako je stearát hořečnatý. Pro orální podání ve formě kapslí patří mezi vhodná ředidla laktosa a sušený kukuřičný škrob. Pokud se orálně podávají vodné suspenze, kombinuje se účinná látka s emulgátory a suspendujícími činidly. Pokud je to žádoucí, lze přidávat některá sladidla nebo/a chuťové přísady nebo/a barviva.

Farmaceutické prostředky podle vynálezu lze rovněž podávat ve formě čípků pro rektální podání. Tyto prostředky lze připravit smícháním sloučeniny podle vynálezu s vhodným nedráždivým vehikulem, které je pevné při teplotě místnosti, ale kapalné při teplotě rekta a tudíž v rektu taje,

-127CZ 298625 B6 čím se uvolní účinné složky. Mezi takové materiály patří, aniž by však šlo o vyčerpávající výčet, kakaové máslo, včelí vosk a polyethylenglykoly.

Místní podání farmaceutických prostředků podle vynálezu je zejména vhodné pokud požadované ošetření zahrnuje oblasti nebo orgány snadno dostupné místním podáním. Pro místní podání na kůži by měl být farmaceutický prostředek formulován jako vhodná mast obsahující účinné složky suspendované nebo rozpuštěné v nosiči. Mezi nosiče pro místní podání sloučenin podle vynálezu patří, aniž by však šlo o vyčerpávající výčet, minerální oleje, vazelínový olej, albolen, propylenglykol, polyoxyethylen-polyoxypropylenové sloučeniny, emulgační vosk a voda. Alternativně lze farmaceutický prostředek formulovat jako vhodný lotion nebo krém obsahující účinnou sloučeninu suspendovanou nebo rozpuštěnou v nosiči. Mezi vhodné nosiče patří, aniž by však šlo o vyčerpávající výčet, minerální oleje, sorbitan-monostearát, polysorbat 60, cetylesterový vosk, cetearylalkohol, 2-oktyldodekanol, benzylalkohol a voda. Farmaceutické prostředky podle vynálezu lze rovněž místně aplikovat na spodní část intestinálního traktu pomocí rektálních čípků nebo ve vhodném klystýru. Vynález rovněž zahrnuje místně transdermální náplasti.

Farmaceutické prostředky podle vynálezu lze podávat nasálním aerosolem nebo inhalací. Takovéto prostředky se připraví pomocí způsobů dobře známých v oboru vytváření farmaceutických prostředků a lze je připravit jako roztoky ve fyziologickém roztoku, za použití benzylalkoholu nebo jiných vhodných konzervačních přísad, látek podporujících absorpci pro zvýšení biologické dostupnosti, fluorovaných uhlovodíků nebo/a jiných solubilizačních nebo dispergačních činidel známých v oboru.

Mezi onemocnění zprostředkovaná IL—1, která lze léčit nebo jejichž prevenci lze provádět pomocí sloučenin podle vynálezu, patří, aniž by však šlo o omezující výčet, zánětlivá onemocnění, autoimunitní onemocnění a neurodegenerativní onemocnění.

Mezi zánětlivá onemocnění, která lze léčit nebo jejichž prevenci lze provádět, patří například septický šok, septikémie a syndrom respirační tísně dospělých (adult respirátory distress syn30 drome). Mezi cílová autoimunitní onemocnění patří například revmatická artritida, systémový lupus erythematosus, sklerodermie, chronická thyroiditida, Gravesova choroba, autoimunitní gastritida, diabetes mellitus závislá na inzulínu, autoimunitní hemolytická anemie, autoimunitní neutropenie, thrombocytopenie, chronická aktivní hepatitida, myastenie gravis a roztroušená skleróza. Mezi cílová neurodegenerativní onemocnění patří například amyotrofní laterální skle35 róza, Alzheimerova choroba, Parkinsonova choroba a primární laterální skleróza. Inhibitory ICE podle vynálezu lze rovněž používat pro zlepšení hojení poranění. Inhibitory ICE podle vynálezu lze rovněž použít k léčení infekčních chorob.

Ačkoli se vynález zaměřuje na použití zde popsaných sloučenin na prevenci a léčení onemocnění zprostředkovaných IL-1, lze sloučeniny podle vynálezu použít rovněž jako inhibiční činidla pro další cysteinové proteázy.

Sloučeniny podle vynálezu jsou rovněž vhodné jako komerční reakční činidla, která se účinně vážou na ICE nebo jiné cysteinové proteázy. Jako komerční reakční činidla lze sloučeniny podle vynálezu a jejich deriváty použít pro blokování proteolýzy cílového peptidu nebo z nich lze tvořit deriváty vázající se na stabilní pryskyřici jako imobilizovaný substrát pro afinitní chromatografie. Tato a další použití, která charakterizují komerční inhibitory cysteinových proteáz, jsou odborníkovi v oboru zřejmá.

Dalším provedením vynálezu je způsob selekce inhibitorů ICE obecných vzorců α, σ, π a δ definovaných výše, který zahrnuje následující kroky, při nichž se provede:

a) selekce kandidátní sloučeniny s definovanou chemickou strukturou, obsahující alespoň dva zbytky vytvářející vodíkové vazby, alespoň dva mírně hydrofobní zbytky a jeden elektronega-128CZ 298625 B6 tivní zbytek obsahující jeden nebo více elektronegativních atomů, kteréžto atomy jsou navázány buď najeden atom nebo na sousední atomy v elektronegativním zbytku,

Výhodně výše uvedený způsob podle vynálezu dále zahrnuje následující kroky, které následují po kroku e) a předcházejí krok f), při nichž se provede:

g) zhodnocení deformační energie vazby uvedené sloučeniny na ICE, a

h) zhodnocení příspěvku součtu všech elektrostatických interakcí mezi ICE a shora uvedenou sloučeninou v uvedené konformaci, navázanou na ICE.

Pro úplnější pochopení vynálezu jsou uvedeny následující příklady. Tyto příklady jsou uvedeny pouze pro ilustraci a rozsah vynálezu se jimi v žádném směru neomezuje.

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1

Následující příklad demonstruje způsob projektování léčiva, který je provedením vynálezu.

Stupeň 1) v ICE se vyberou 2 zbytky vytvářející vodíkovou vazbu, v tomto případě zbytky C=O a N-H v Arg-341 v hlavním řetězci.

Stupeň 2) Vybere se skelet, v tomto případě pyridinový derivát, a potvrdí se, že zbytky vytvářející vodíkovou vazbu skeletu jsou schopné tvořit uspokojivé vodíkové vazby se zbytky vytvářejícími vodíkové vazby vybranými ve stupni 1. Toto potvrzení se provede za použití způsobů molekulární mechaniky pro minimalizaci skeletového fragmentu vzhledem k aktivnímu centru ICE.

(Zl)

Ó H

G í —S-N—.

j Arg-341 |

-129CZ 298625 B6

Stupeň 3) Vybere se hydrofobní kapsa, v tomto případě S2, jako další cíl a hydrofobní zbytek, v tomto případě benzen. Benzenová skupina se minimalizuje v kapse S2 pro zajištění toho, aby se dosáhlo podstatného hydrofobního překrytí.

Stupeň 4) Vybere se jiná hydrofobní kapsa, v tomto případě S4, jako další cíl a hydrofobní zbytek, v tomto případě benzen. Benzenová skupina se minimalizuje v kapse S4 pro zajišio tění toho, aby se dosáhlo podstatného hydrofobního překrytí.

Stupeň 5) Polární kapsa SI se vyplní elektronegativním zbytkem, v tomto případě karboxylátovým postranním řetězcem poskytnutým asparagovou kyselinou ve kterém byl C-konec redukován na aldehyd. Provede se minimalizace pro zajištění toho, aby si karboxylátový postranní řetězec zachoval příznivou elektrostatickou interakci s polární kapsou S1.

(Z4)

Stupeň 6) Skelet se spojí se zbytky ze stupňů 3, 4 a 5, výhodně za použití minimálního počtu vazeb v souladu s chemicky racionální strukturou. Celá složená molekula se minimalizuje v aktivním centru ICE.

(Z5)

130CZ 298625 B6

Stupeň 7) Určí se energie molekuly v konformaci nutné pro navázání na ICE. Poté se provede minimalizace a znovu se určí energie - to je volná konformační energie. Rozdíl mezi volnou konformační energií a vazebnou konformační energií je energií napjatosti pro vazbu potenciálního inhibitoru na ICE. Energie napjatosti má činit méně než zhruba 42 kJ/mol.

V tomto případě činí vazebná konformační energie -6,7 kJ/mol a volná konformační energie —49,0 kJ/mol. Energie napjatosti tedy činí 42,3 kJ/mol.

Stupeň 8) Připraví se inhibitor vyprojektovaný za použití výše uvedených stupňů a zjistí se, že vykazuje K, 150 nm.

Příklad 2

Byly získány inhibiční konstanty (Kj) a hodnoty IC₅o pro několik sloučenin podle vynálezu za 15 použití tří níže popsaných metod:

1. Enzymový test se substrátem viditelným v UV-světle

Tento test se provádí za použití sukcinyl-Tyr-Val-Ala-Asp-p-nitroanilidového substrátu. Syn20 tézu analogických substrátů popsal L. A. Reiter (Int. J. Peptide Protein Res. 43, 87 - 96 (1994)).

Testovaná směs obsahuje:

μΐ pufru (10 mM Tris, 1 mM DTT (dithiothreitolu), 0,1 % CHAPS (3-[(3-cholamidopropyl)dimethylamonio]-l-propansulfonátu), pH 8,1), μΐ ICE (konečná koncentrace 50 nM, pro dosažení rychlosti zhruba 1 mOD/min),

5 μΐ směsi dimethylsulfoxidu a inhibitoru, ul 400 μΜ substrátu (konečná koncentrace 80 μΜ)

100 μΐ = celkový reakční objem

Vizuálně vyhodnocovaný test ICE se provádí na mikrotitrační desce s 96 jamkami. Pufr, ICE a 30 dimethylsulfoxid (pokud je přítomen inhibitor) se dají do jamek v uvedeném pořadí. Složky se nechají inkubovat při teplotě místnosti po dobu 15 minut, počítáno od doby, kdy jsou všechny složky přítomné ve všech jamkách. Inkubace se provádí při teplotě 37 °C. Po 15 minutách inkubace se do jamek přímo přidá substrát a reakce se monitoruje pomocí následujícího uvolňování chromoforu (pNA) při 405 - 603 nm při teplotě 37 °C po dobu 20 minut. Provede se lineární vyhodnocení údajů a vypočítá se rychlost v mOD/min. Dimethylsulfoxid je přítomen pouze při experimentech za použití inhibitorů, při ostatních experimentech se na doplnění objemu na 100 μΐ použije pufr.

2. Enzymový test a fluorescentním substrátem

Tento test se provádí v podstatě jak popsali Thomberry a kol. (Nátuře 356: 768 - 774 (1992)), za použití substrátu 17 popsaného ve výše uvedeném článku. Substrátem je acetyl-Tyr-Val-AlaAsp-amino-4-methylkumarin (AMC). Smíchají se následující složky:

μΐ pufru (10 mM Tris, 1 mM DTT (dithiothreitolu), 0,1 % CHAPS (3-[(3-cholamidopropyl)45 dimethylamonio]-l-propansulfonátu), pH 8,1), μΐ ICE konečná koncentrace 2-10 nM), μΐ roztoku inhibitoru v dimethylsulfoxidu, a 20 μ.1 150μΜ substrátu (konečná koncentrace 30 μΜ)

100 μΐ = celkový reakční objem

-131 CZ 298625 B6

Test se provádí na mikrotitrační desce s 96 jamkami. Do jamek se dá pufr a ICE. Složky se nechají inkubovat při teplotě 37 °C po dobu 15 minut v desce s řízenou teplotou. Po 15 minutách inkubace se zahájí reakce přidáním substrátu přímo do jamek a reakce se monitoruje při teplotě 37 °C po dobu 30 minut pomocí sledování uvolňování AMC-fluoroforu za použití excitační vlnové délky 380 nm a emisní vlnové délky 460 nm. Provede se lineární vyhodnocení údajů pro každou jamku a stanoví se rychlost v jednotkách fluorescence za sekundu.

Pro stanovení enzymových inhibičních konstant (Kj) nebo způsobu inhibice (kompetitivní, akompetitivní, nekompetitivní) se údaje o rychlosti stanovené v enzymových testech s různými konío centracemi inhibitoru počítačově zpracují standardními rovnicemi enzymové kinetiky (viz. I. H.

Segel, Enzyme Kinetics, Wiley-Interscience, 1975).

3. Buněčný test

Test IL-Ιβ se smíšenou populací lidských periferních krevních mononukleámích buněk (peripheral blood mononuclear cells, PBMC) nebo obohacenými adherentními mononukleámími buňkami

Úpravu (processing) pre-IL-1 β působením ICE lze měřit v buněčné kultuře za použití řady 20 zdrojů buněk. Lidské PBMC získané ze zdravých donorů poskytují smíšenou populaci subtypů lymfocytů a mononukleámích buněk, která produkuje řadu interleukinů a cytokinů jako odpověď na mnoho druhů fyziologických stimulací. Adherentní mononukleámí buňky z PBMC jsou obohaceným zdrojem normálních monocytů pro selektivní studie produkce cytokinů aktivovanými buňkami.

Postup experimentu:

Připraví se počáteční série ředění testované sloučeniny v dimethylsulfoxidu nebo ethanolu s následujícím naředěním do média RPMI-10% FBS (obsahujícího 2 mM L-glutaminu, 10 mM

HEPES (4-(2-hydroxyethyl)-l-piperazinethansulfonové kyseliny), 50 U a 50 pg/ml pen/strep) pro dosažení koncentrace léčiv, která je čtyřnásobkem konečné testové koncentrace, tedy koncentrace 0,4 % dimethylsulfoxidu nebo 0,4 % ethanolu. Konečná koncentrace dimethylsulfoxidu činí 0,1 % pro všechna ředění léčiv. Pro počáteční orientační testování sloučeniny se obecně použije titrace koncentrace, která vymezuje zjevnou K; pro testovanou sloučeninu stanovenou v testu inhibice ICE.

Obecně se testuje 5-6 ředění sloučeniny a celulámí část testu se provádí ve dvou opakováních, se dvojím stanovením ELISA-testem na každém supematantu buněčné kultury.

Izolace PBMC a test IL-1:

Vysrážené buňky (buffy coat cells) izolované ze zhruba 0,5 1 lidské krve (ze které se získá 40 45 ml konečného objemu plazmy + buňky) se naředí médiem na 80 ml a separační kyvety LeukoPREP (Becton Dickinson) se naplní 10 ml suspenze buněk. Po 15 minutách centrifugace při 1500 - 1800 g se vrstva plazmy a média odsaje a vrstva mononukleámích buněk se poté izoluje Pasteurovou pipetou a přenese se do kónické centrifugační kyvety (Corning) o objemu 15 ml. Přidá se médium pro upravení objemu na 15 ml, buňky se jemně promíchají převrácením kyvety a provádí se centrifugace při 300 g po dobu 15 minut. Peleta PBMC se resuspenduje v malém objemu média, buňky se spočítají a koncentrace se upraví na 6 x 10⁶ buněk/ml.

Pro buněčný test se do každé jamky desky pro tkáňovou kultivaci s 24 jamkami s rovným dnem (Corning) vnese 1,0 ml buněčné suspenze, 0,5 ml ředění testované sloučeniny a 0,5 ml roztoku LPS (Sigma č. L-3012, roztok o koncentraci 20 ng/ml připravený v kompletním médiu RPMI, konečná koncentrace LPS činí 5 ng/ml). Přidáváním 0,5 ml testované sloučeniny a LPS se obsahy jamek obvykle dostatečně promíchají. Pro každý experiment se provádí tři kontroly, a to buď

-132CZ 298625 B6 kontrola se samotným LPS, kontrola s rozpouštědlem nebo/a kontrola s dalším médiem pro úpravu konečného kultivačního objemu na 2,0 ml. Buněčné kultury se inkubují po dobu 1618 hodin při teplotě 37 °C za přítomnosti 5 % oxidu uhličitého.

Na konci inkubační doby se buňky izolují a přenesou do kónických centrifugačních kyvet o objemu 15 ml. Po centrifugaci po dobu 10 minut při 200 g se supematanty izolují a přenesou do Eppendorfových zkumavek. Buněčné pelety lze využít pro biochemické zhodnocení obsahu preIL-Ιβ nebo/a maturovaného IL-Ιβ v cytosolových extraktech pomocí western blottingu nebo ELISA-testu s antisérem specifickým pro pre-IL-Ιβ.

Izolace adherentních mononukleámích buněk:

Jak je popsáno výše, izolují a preparují se PBMC. Do jamek se vnese nejprve 1,0 ml média a poté 0,5 ml suspenze PBMC. Po jednohodinové inkubaci se deskami mírně zatřese a neadherentní buňky se z každé jamky odsají. Jamky se poté opatrně promyjí třikrát 1,0 ml média a nakonec se resuspendují v 1,0 ml média. Obohacením adherentních buněk se obecně získá 2,5 - 3,0 x 10⁵ buněk na jamku. Přidání testovaných sloučenin a LPS, podmínky inkubace buněk a zpracování supematantů se provádí jak je popsáno výše.

ELISA-test:

Pro měření maturované IL-Ιβ se použijí soupravy Quantikine (R&D Systems). Testy se provádějí podle pokynů výrobce. V pozitivních kontrolách jak s PBMC tak s adherentními mononukleámími buňkami jsou pozorovány hladiny maturovaného IL-Ιβ přibližně 1-3 ng/ml. Provedou se ELISA-testy na ředěních 1:5, 1 : 10 a 1 : 20 supematantů z LPS-pozitivních kontrol pro výběr optimálního ředění pro supematanty v testovaném souboru.

Inhibiční účinnost sloučenin může být reprezentována hodnotou IC50, což je koncentrace inhibitoru, při které je v supematantů detekováno 50 % maturovaného IL-Ιβ ve srovnání s pozitivními kontrolami.

Za použití výše uvedených testů byly pro sloučeniny A až N stanoveny následující hodnoty Kj a IC50. Vzorce sloučenin A až N jsou uvedeny za tabulkou.

sloučenina	hodnoty získané testem:
	viditelným v UV-světle Ki (μΜ)	fluorescenčním Κί(μΜ)	buněčným IC₅₀ (μΜ)
A	5,5		25,0
B	8,6		20,0
C	10		více než 30
D	4,7
E	3,2
F	0,15		2-4
G	4,8
H	0,023	0,0047	6-11
I	0,0072	0,0052	2,6
J	0,012	0,0039	5,7
K	0,010	0,002	2-11
L	0,014
M	0,15
N	0,95

- 133CZ 298625 B6

Vzorce sloučenin A až N:

(A) (B5

- 134CZ 298625 B6

-135

HCL

(J)

(Κί

ÍL

(Μ) (Ν!

- 136CZ 298625 B6

Příklad 3

Sloučeniny z příkladu 2 se syntetizují následovně:

H. N-(N-acetyl-tyrosinyl-valinyl-pipekolyl)-3-amino-4-oxobutanová kyselina

Stupeň A. N-(N-terc-butoxykarbonylpipekolyl)-4-amino-5-benzyloxy-2-oxotetrahydrofuran

Analogickým způsobem jako popsal Chapman (Bioorg. and Med. Chem. Lett. 1992, 2, 613 618) se provede reakce 460 mg (2,0 mmol) N-terc-butoxykarbonylpipekolové kyseliny a 530 mg (1,82 mmol) N-allyloxykarbonyl^t-amino-5-benzyloxy-2-oxotetrahydrofuranu, čímž se získá 654 mg sloučeniny uvedené v názvu.

'H-NMR (500 MHz, deuterochloroform (existuje jako rotameiy)), hodnoty δ: 7,35 (m, 5H), 6,88 (široký s, 1H), 4,9 - 4,45 (m, 4H), 3,95 (široký m, 2H), 3,06 (m, 1H), 2,9 (m, 1H), 2,7 (široký m, 1H), 2,45 (m, 1H), 2,2 (m, 1H), 1,7 - 1,5 (m, 3H), 1,45 (dva s, 9H)

Stupeň B. N-pipekolyl-4—amino-5-benzyloxy-2-oxotetrahydrofuran

654 mg N-(N-terc-butoxykarbonylpipekolyl)-4-amino-5-benzyloxy-2-oxotetrahydrofuranu se rozpustí v 15 ml 25% kyseliny trifluoroctové v dichlormethanu a směs se míchá při teplotě místnosti. Směs se zahustí, čímž se získá gumovitý zbytek. Tento zbytek se rozpustí v dichlor25 methanu a promyje se 10% hydrogenuhličitanem sodným. Organická vrstva se vysuší nad bezvodým síranem sodným, zfiltruje se a zahustí, čímž se získá 422 mg sloučeniny uvedené v názvu ve formě béžové pevné látky.

’Η-NMR (500 MHz, deuterochloroform), hodnoty δ: 7,38 (m, 5H), 7,15 (d, 1H), 5,55 (d, 1H), 4395 - 4,8 (m, 1H), 4,78 (m, 1H), 4,65 (d, 1H), 4,45 (m, 1H), 3,2 (m, 0,5H), 3,05 (m, 0,5H), 2,95 (m, 0,5H), 2,85 (m, 0,5H), 2,65 (m, 1H), 2,55 - 2,38 (m, 1H), 1,95 (m, 1H), 1,8 (m, 1H), 1,6 (m, 2H), 1,38 (m, 2H)

Stupeň C. N-(N-acetyl-tyrosinyl-valinyl-pipekolyl)-4-amino-5-benzyloxy-2-oxotetra35 hydrofuran

464 mg (1,44 mmol) N-acetyl-tyrosinyl-valinu a 412 mg (1,3 mmol) N-pipekolyl^l-amino-5benzyloxy-2-oxotetrahydrofuranu se rozpustí ve směsi 5 ml dimethylformamidu a 5 ml dichlormethanu a směs se ochladí na teplotu 0 °C. K ochlazenému roztoku se přidá 210 mg (1,56 mmol)

1-hydroxybenzotriazolu (HOBT) a poté 326 mg (1,7 mmol) l-(3-dimethylaminopropyl)-3ethylkarbodiimid-hydrochloridu (EDC). Směs se míchá po dobu 18 hodin, poté se naředí ethylacetátem, promyje se vodou, 10% hydrogensíranem sodným, 10% hydrogenuhličitanem sodným a znovu vodou. Organická vrstva se zahustí, čímž se získá surová pevná látka, která se vyčistí pomocí velmi rychlé chromatografie na silikagelu za použití směsi dichlormethanu, isopropanolu a pyridinu v poměru 94 : 6 : 1 jako elučního činidla, čímž se získá 370 mg sloučeniny uvedené v názvu.

'H-NMR (500 MHz, perdeuteromethanol (existuje jako diastereomery jakož i rotamery)), hodnoty δ: 7,35 (m, 5H), 7,05 (m, 2H), 6,68 (m, 2H), 5,65 a 5,25 (m, 1H), 4,9 - 3,95 (m, 8H), 3,4 50 2,6 (m, H), 2,5 - 2,1 (m, 1H), 1,98 (s, 1H), 1,9 (s, 1H), 1,85 (s, 1H), 1,8 - 1,6 (m, 2H), 1,55 - 1,3 (m, 4H), 0,95 - 0,85 (m, 6H)

Stupeň D. N-(N-acetyl-tyrosinyl-valinyl-pipekolyl)-3-amino-4-oxobutanová kyselina

- 137CZ 298625 B6

K roztoku 100 mg N-(N-acetyl-tyrosinyl-valinyl-pipekolyl)-4-amino-5-benzyloxy-2-oxotetrahydrofuranu v 10 ml methanolu se přidá 60 mg hydroxidu paladnatého na uhlí a směs se udržuje ve vodíkové atmosféře. Směs se zfíltruje přes celit a zahustí, čímž se získá bílá pevná látka. Tato surová pevná látka se rozpustí ve 2 ml methanolu a trituruje se s diethyletherem, čímž se získá 26 mg sloučeniny uvedené v názvu.

'H-NMR (500 MHz, perdeuteromethanol (existuje jako diastereomery jakož i rotamery)), hodnoty δ: 7,1 (m, 2H), 6,7 (m, 2H), 5,2 (široký m, 1H), 4,8 - 3,6 (m, 6H), 3,2 - 2,5 (m, 4H), 2,5 2.1 (m, 1H), 1,95 (tři s, 3H), 1,9-1,3 (m, 6H), 1,1-0,7 (m, 6H)

Následující sloučeniny se připraví analogickým způsobem jako je uveden pro sloučeninu H:

J. N-[N-acetyl-tyrosinyl-valinyl-(4-hydroxyprolinyl)]-3-amino-4-oxobutanová kyselina N-terc-butoxykarbonylpipekolová kyselina se nahradí N-terc-butoxykarbonyl-4-benzyloxy15 prolinem.

L. N-[2-(N-acetyl-tyrosinyl-valinyl-(S)-l,2,3,4-tetrahydroisochinolin-3-karbonyl]-3aminooxobutanová kyselina

N-terc-butoxykarbonylpipekolová kyselina se nahradí (S)-N-terc-butoxykarbonyl-l,2,3,4tetrahydroisochinolin-3-karboxylovou kyselinou.

I. N-(N-acetyl-tyrosinyl-valinyl-(4-fenoxyprolinyl))-3-amino-4-oxobutanová kyselina

Stupeň A. Methylester N-terc-butoxykarbonyl-4-fenoxyprolinu

K roztoku 2,0 g (8,15 mmol) N-terc-butoxy-cis-4-hydroxyprolinu, 0,77 g (8,15 mmol) fenolu a 2,14 g (8,15 mmol) trifenylfosfinu ve 20 ml tetrahydrofuranu chlazenému na teplotu 0 °C se po kapkách v průběhu 30 minut přidá 1,4 ml (9 mmol) diethyl-azodikarboxylátu. Reakční směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 16 hodin a poté se zahustí, čímž se získá viskózní zbytek. Surový zbytek se vyčistí pomocí velmi rychlé chromatografie na silikagelu za použití směsi ethylacetátu a hexanu v poměru 3 : 7 jako elučního činidla, čímž se získá 1,89 g sloučeniny uvedené v názvu.

’Η-NMR (500 MHz, deuterochloroform), hodnoty δ: 7,3 (m, 2H), 6,95 (m, 1H), 6,85 (d, 2H), 4,9 (široký m, 1H), 4,55- 4,15 (m, 2H), 3,88 - 3,65 (m, 1H), 3,70 (s, 3H), 2,58 (m, 1H), 2,22 (m, 1H), 1,4 (3 x s, 9H)

Stupeň B. Hydrochlorid methylesteru 4-fenoxyprolinu

Roztokem 0,6 g methylesteru N-terc-butoxykarbonyl-4-fenoxyprolinu ve 20 ml ethylacetátu, chlazeným v ledové lázni, se probublává bezvodý chlorovodík, až se dosáhne nasycení roztoku. Směs se zahřeje na teplotu místnosti, míchá se po dobu 3 hodin a poté se zahustí, čímž se získá 480 mg sloučeniny uvedené v názvu.

'Η-NMR (500 MHz, deuterochloroform), hodnoty δ: 7,22 (m, 2H), 6,95 (m, 1H), 6,83 (m, 2H),

5.1 (široký signál, 1H), 4,6 (široký m, 1H), 4,06 (širokým, 1H), 3,75 (s, 3H), 3,55 (širokým, 1H), 2,58 (m, 2H)

Stupeň C. Methylester N-acetyl-tyrosinyl-valinyl-(4-fenoxy)prolinu

0,524 g (1,63 mmol) N-acetyl-tyrosinyl-valinu a 0,381 g (1,48 mmol) methylesteru 4-fenoxyprolinu se rozpustí ve směsi 4 ml dimethylformamidu a 4 ml dichlormethanu a směs se ochladí na teplotu 0 °C. K ochlazenému roztoku se přidá 28 μΐ (1,86 mmol) diisopropylethylaminu, 0,24g (1,78 mmol) 1-hydroxybenzotriazolu (HOBT) a 0,37 g (1,92 mmol) l-(3-dimethylaminopro-138CZ 298625 B6 pyl)-3-ethylkarbodiimid-hydrochloridu (EDC) a směs se míchá po dobu 18 hodin. Směs se naředí 400 ml ethylacetátu, promyje se vodou, 10% hydrogensíranem sodným, 10% hydrogenuhličitanem sodným a znovu vodou. Organická vrstva se zahustí, čímž se získá zbytek, který se vyčistí pomocí velmi rychlé chromatografie na silikagelu za použití směsi dichlormethanu, iso5 propanolu a pyridinu v poměru 94 : 6 : 1 jako elučního činidla, čímž se získá 360 mg sloučeniny uvedené v názvu.

' H-NMR (500 MHz, deuterochloroform (existuje jako rotamery)), hodnoty δ: 7,3 (m, 2H), 7,05 (m, 1H), 6,95 (d, 2H), 6,9 - 6,2 (4 x d, 4H), 5,05 (široký s, 1H), 4,7 - 3,94 (m, 5H), 2,93 (m, 1H), 2,82 (m, 1H), 2,65 (m, 1H), 2,2 (m, 1H), 2,05 (m, 1H), 1,95 (s, 3H), 1,86 (m, 1H), 0,98 (d, 3H), 0,88 (d, 3H)

Stupeň D. N-acetyl-tyrosinyl-valinyl-(4-fenoxy)prolin

K roztoku 360 mg (0,685 mmol) methylesteru N-acetyl-tyrosinyl-valinyl-(4-fenoxy)prolinu rozpuštěného v 8 ml směsi tetrahydrofuranu a vody v poměru 1 : 1 se přidá 57 mg (1,37 mmol) hydroxidu lithného a směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 1 hodiny. Směs se okyselí 10% kyselinou chlorovodíkovou za vzniku bílé sraženiny, která se izoluje, čímž se získá 175 mg sloučeniny uvedené v názvu.

'H-NMR (500 MHz, perdeuterodimethylsulfoxid), hodnoty δ: 9,2 (široký s, 1H), 8,05- 7,95 (m, 2H), 7,3 (m, 1H), 7,0 - 6,9 (m, 4H), 6,65 (d, 2H), 4,42 (m, 1H), 4,35 (m, 1H), 4,05 - 3,95 (m,2H), 3,3 (široký s, 2H), 2,75 (m, 1H), 2,55- 2,38 (m, 2H), 2,2 (m, 1H), 2,0 (m, 1H), 1,7 (s, 3H), 0,95 (d, 3H), 0,85 (d, 3H)

Stupeň E. N-[N-acetyl-tyrosinyl-valinyl-(4-fenoxy)prolinyl]^l-amino-5-benzyloxy-2oxotetrahydrofuran

Sloučenina uvedená v názvu se připraví způsobem uvedeným v případě sloučeniny H, stupeň A, reakcí N-acetyl-tyrosinyl-valinyl-(4-fenoxy)prolinu a N-allyloxykarbonyl-4-amino-5-benzyloxytetrahydrofuranu.

'H-NMR (500 MHz, deuterochloroform (existuje jako směs diastereomerů hemiacetalu v poměru 1 : 1)), hodnoty δ: 7,8-6,3 (m, 17H), 5,6 (d, 1H), 5,1-4,15 (m, 5H), 4,15 - 3,75 (m, 2H), 2,9535 2,15 (m, 5H), 2,15 -1,95 (m, 1H), 1,9 - 1,85 (2 x s, 3H), 1,1 - 0,75 (m, 6H)

Stupeň F. N-[N-acetyl-tyrosinyl-valinyl-(4-fenoxy)prolinyl]-3-amino-4-oxobutanová kyselina

Sloučenina uvedená v názvu se připraví hydrogenolýzou prováděnou způsobem uvedeným v případě sloučeniny H, stupeň D.

'H-NMR (500 MHz, perdeuteromethanol (existuje jako směs diastereomerů hemiacetalu v poměru 1:1)), hodnoty δ: 7,25 (m, 2H), 7,10 - 6,85 (m, 5H), 6,65 (d, 2H), 5,1 (široký m, 1H),

4,65 - 4,05 (m, 5H), 4,0 - 3,40 (m, 2H), 2,95 - 2,35 (m, 5H), 2,25 (m, 1H), 2,05 (m, 1H), 1,85 (s, 3H), 1,0 (d, 3H), 0,95 (d, 3H)

K. N-[N-acetyl-tyrosinyl-valinyl-(4-benzyloxy)prolinyl]-3-amino-4-oxobutanová kyselina

Stupeň A. Semikarbazon terc-butylesteru N-(N-allyloxykarbonyW-benzyloxyprolinyl)-3amino-4-oxobutanové kyseliny

Sloučenina uvedená v názvu se připraví reakcí N-allyloxykarbonyl-4-benzyloxyprolinu a semikarbazonu terc-butylesteru 3-amino-4-oxobutanové kyseliny (T. L. Graybill a kol., Abstracts of papers, 206^th National Meeting of the American Chemical Society, Abstract MEDI-235,

-139CZ 298625 B6

Chicago, IL, USA (1993)) za podobných podmínek kondenzace peptidu jako jsou uvedeny výše v případě sloučeniny H, stupeň C.

'H-NMR (500 MHz, deuterochloroform), hodnoty δ: 9,05 (široký s, 1H), 7,85 (širokým, 1H),

7,4 - 7,2 (m, 5H), 7,15 (široký s, 1H), 6,55 (široký s, 1H), 5,9 (m, 1H), 5,1 - 4,9 (široký m, 2H),

4,65- 4,4 (m, 4H), 4,2 (široký m, 1H), 3,75- 3,5 (m, 2H), 2,75- 2,55 (m, 2H), 2,5 (široký m, 1H), 2,25 (široký m, 1H), 1,4 (s, 9H)

Stupeň B. Semikarbazon terc-butylesteru N-(N-acetyl-tyrosinyl-valinyl-(4-benzyloxyproliío nyl))-3-amino-4-oxobutanové kyseliny

Sloučenina uvedená v názvu se připraví reakcí N-acetyl-tyrosinyl-valinu a semikarbazonu tercbutylesteru N-(N-allyloxykarbonyl-4-benzyloxyprolinyl)-3-amino-4-oxobutanové kyseliny za reakčních podmínek uvedených v případě sloučeniny H, stupeň A.

'H-NMR (500 MHz, perdeuteromethanol), hodnoty δ: 7,35-7,2 (m, 6H), 7,0 (d, 2H), 6,65 (d, 2H), 4,85 (m, 1H), 4,6 - 4,45 (m, 4H), 4,3 (široký m, 1H), 4,15 (m, 1H), 3,7 (m, 1H), 2,95 (m, 1H), 2,75 - 2,6 (m, 3H), 2,35 (m, 1H), 2,1 (m, 1H), 1,9 (s, 3H), 1,4 (s, 9H), 0,95 (d, 3H), 0,90 (s, 3H)

Stupeň C. N-(N-acetyl-tyrosinyl-valinyl-(4-benzyloxyprolinyl))-3-amino-4-oxobutanová kyselina

270 mg semikarbazonu terc-butylesteru N-(N-acetyl-tyrosinyl-valinyl-(4-benzyloxyprolinyl))25 3-amino-4-oxobutanové kyseliny se rozpustí v 10 ml 25% kyseliny trifluoroctové vdichlormethanu a směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 3 hodin. Směs se zahustí, čímž se získá pevný zbytek. Tento zbytek se rozpustí v 10 ml směsi methanolu, kyseliny octové a 37% formaldehydu v poměru 3:1:1 a směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 1 hodiny. Směs se zahustí a výsledný zbytek se vyčistí pomocí velmi rychlé chromatografie na silikagelu za použití směsi dichlormethanu, methanolu a kyseliny mravenčí v poměru 100:5:0,5 jako elučního činidla, čímž se získá 37 mg sloučeniny uvedené v názvu.

'H-NMR (500 MHz, perdeuteromethanol (existuje jako směs diastereomerů hemiacetalu v poměru 1 : 1)), hodnoty δ: 7,4 - 7,25 (m, 5H), 7,0 (d, 2H), 6,65 (d, 2H), 4,65 - 4,05 (m, 7H),

3,75 - 3,4 (m, 2H), 3,05 - 2,3 (m, 5H), 2,2 - 1,95 (m, 2H), 1,90 (s, 3H), 1,0 (d, 3H), 0,95 (d, 3H)

Příklad 4

Byly získány inhibiční konstanty (Kj) a hodnoty IC₅₀ pro několik sloučenin podle vynálezu za použití enzymových testů se substrátem viditelným v UV-světle a buněčných testů, jak jsou popsány v příkladu 2. Za použití těchto testů byly pro sloučeniny 7a, 7b, 20a-d, 21c-f, 22e, 25, 28, 33a-c, 36a, 36b, 39, 43, 47a, 47b, 54a-l, 63, 69a, 69b, 84a a 84b stanoveny následující hodnoty Kj a IC50. Odpovídající označení sloučenin pomocí písmen jsou uvedena v závorkách.

Vzorce sloučenin jsou uvedeny v příkladech 2 a 5.

-140CZ 298625 B6

sloučenina	test
se substrátem viditelným v UV-světle Kj (μΜ)	buněčný Ι<3₅₀(μΜ)
7a	35
7b	1,2
20a (= E)	3,2
20b	0,85	16,4
20c (=N)	0,95
20d	0,1	6,2
21c	0,64
21d	0,24	4,8
21e	0,22	2,9
21f	0,17	2,9
22e	0,19
25	6,2
28	12,0
33a(=A)	5,5	25,0
33b(= C)	10,0	více než 30,0
33c (= B	8,6	20,0
36a(= D)	4,7
36b	0,8	17,0
39	2,5
43	20,0
47a	0,019	2,1
47b	0,027	2,1
54a (= F)	0,15	2,7
54b (= M)	0,15	9,1
54c	1,2	více než 19,0
54d	1,0
54e	3,5
54f	0,9
54g(=G)	4,8	více než 20,0
54h	0,97
54i	0,054	2,4
54j	0,28
54k	0,085
541	0,215	7,0
63 (=Q)	0,85	4,1
69a (= R)	0,011	0,735
69b (= S)	0,050	0,745
84a(= V)	0,100	3,3
84b (= W)	0,019	0,50

Příklad 5 5

Sloučeniny z příkladu 4 se syntetizují následovně:

-141 CZ 298625 B6

(7) (Et = ethyl, Me = methyl, tBu = terc-butyl)

Methylester 3-benzoylamino-4-oxo-4,6,7,8-tetrahydropyrrolo[ 1,2-a]pyrimidin-6-karboxylové kyseliny (sloučenina 3)

Směs 0,44 g (2,38 mmol) hydrochloridu ethylesteru (4S)-2-amino-l-pyrrolin-5-karboxylové kyseliny (sloučeniny 1, připravené analogickým způsobem jako methylester, jehož přípravu popsali Lee a Lown, J, Org. Chem,, 52, 2717 - 21 (1987)), 0,50 g (2,31 mmol) 4-ethoxymethylen10 2-fenyl-2-oxazolin-5-onu (sloučeniny 2) a 0,12 g (2,22 mmol) methoxidu sodného v 10 ml ethanolu se zahřívá kvaru pod zpětným chladičem po dobu 2 hodin. Reakční směs se nechá ochladit na teplotu místnosti a zahustí se ve vakuu. Zbytek se suspenduje ve vodě a přidává se IN kyselina sírová až se dosáhne hodnoty pH 1. Vodná směs se extrahuje dichlormethanem, organická vrstva se oddělí a zahustí ve vakuu, čímž se získá 0,6 g oranžové pevné látky. Velmi rych15 lou chromatografií na silikagelu za použití gradientově eluce s postupným gradientem 60 % ethylacetátu v hexanu až 100 % ethylacetátu, a poté 10% methanolu v dichlormethanu se získá 0,5 g oranžové pevné látky. Směs této oranžové pevné látky a 0,03 g (0,5 mmol) kyanidu draselného v 10 ml methanolu se přes noc zahřívá k varu pod zpětným chladičem. Ochlazená reakční směs se zahustí ve vakuu, čímž se získá žlutá pevná látka. Velmi rychlou chromatografií na sili20 kagelu za použití gradientově eluce s postupným gradientem 40 % ethylacetátu v hexanu až 100 % ethylacetátu se získá 0,22 g (31,6 %) sloučeniny uvedené v názvu.

-142CZ 298625 B6 'H-NMR (perdeuterodimethylsulfoxid), hodnoty δ: 2,25 (m, 1H), 2,65 (m, 1H), 3,15 (m, 2H), 3,75 (s, 3H), 5,15 (dd, 1H), 7,5 (t, 2H), 7,6 (t, 1H), 7,95 (d, 2H), 8,6 (s, 1H), 9,5 (s, 1H)

Semikarbazon terc-butylesteru (3S)-[(3-benzoylamino-4-oxo-4,6,7,8-tetrahydropyrrolo[l ,25 a]pyrimidin-6-karbonyl)amino]-4-oxobutanové kyseliny (sloučeniny 5a a 5b)

Směs 0,22 g (0,70 mmol) ethylesteru 3-benzoylamino-4-oxo-4,6,7,8-tetrahydropyrrolo[l,2-a]pyrimidin-6-karboxylové kyseliny (sloučeniny 3) a 0,032 g (0,76 mmol) hydrátu hydroxidu lithného v 5 ml methanolu a 5 ml tetrahydrofuranu se míchá při teplotě místnosti po dobu 18 hodin. Reakční směs se zahustí, čímž se získá lithná sůl 3-benzoylamino-4-oxo-4,6,7,8-tetrahydropyrrolo[l,2-a]pyrimidin-6-karboxylové kyseliny (sloučenina 4) jako bílá pevná látka. Tato látka se použije v následující reakce bez dalšího čištění.

Ke směsi 0,163 g (0,71 mmol) semikarbazonu terc-butylesteru (3S)-amino-4-oxobutanové kyseliny (Graybill a kol., Int. J. Protein Res., 44, str. 173 - 82 (1994)) a lithné soli 3-benzoylamino-4-oxo-4,6,7,8-tetrahydropyrrolo[ 1,2-a]pyrimidin-6-karboxylové kyseliny (sloučeniny 4) v 5 ml dimethylformamidu a 5 ml dichlormethanu o teplotě 0 °C se přidá 0,104 g (0,77 mmol) hydroxybenzotriazolu a 0,148 g (0,37 mmol) l-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimidhydrochloridu. Reakční směs se nechá zahřát na teplotu místnosti a míchá se po dobu 18 hodin.

Reakční směs se vylije do 50 ml vody a extrahuje se dvakrát vždy 50 ml ethylacetátu. Smíchané organické vrstvy se promyjí vodným 1M roztokem hydrogensíranu sodného, 50 ml zředěného vodného hydrogenuhličitanu sodného a nasyceným vodným chloridem sodným. Organická vrstva se zahustí ve vakuu, čímž se získá 0,43 g žluté pevné látky. Velmi rychlou chromatografií na silikagelu za použití směsi hydroxidu amonného, methanolu a dichlormethanu s postupným gra25 dientem 1 : 1 : 99 až 1 : 10 : 90 jako elučního činidla se získá 0,11 g (30,9 %) diastereomeru s vyšším R_f (sloučenina 5a) 'H-NMR (perdeuteromethanol), hodnoty δ: 1,45 (s, 9H), 2,29 - 2,35 (m, 1H), 2,6 - 2,7 (m, 2H), 2,8 (dd, 1H), 3,1-3,15 (m, 1H), 3,2-3,3 (m, 1H), 4,9-4,95 (m, 1H), 5,2 (dd, 1H), 7,25 (d, 1H),

7,5 - 7,55 (m, 2H), 7,55 - 7,6 (m, 1H), 7,95 (d, 2H), 8,9 (s, 1H) a 0,11 g (30,9 %) diastereomeru s nižším R_f (sloučenina 5b).

¹ H-NMR (perdeuteromethanol), hodnoty δ: 1,45 (s, 9H), 2,3 - 2,4 (m, 1H), 2,6- 2,7 (m, 2H),

2,7 - 2,8 (m, 2H), 3,1-3,15 (m, 1H), 3,2 - 3,3 (m, 1H), 4,85 - 4,95 (m, 1H), 5,15 (dd, 1H), 7,25 (d, 1H), 7,55 (t, 2H), 7,6 (t, 1H), 7,95 (d, 2H), 8,9 (s, 1H)

Diastereomer 5a a diastereomer 5b se odeberou odděleně.

(3 S)-[(3-benzoylamino-4-oxo-4,6,7,8-tetrahydropyrrolo[ 1,2-a]pyrimidin-6-karbonyl)amino]4-oxobutanová kyselina (sloučenina 7a)

Suspenze 0,11 g (0,22 mmol) semikarbazonu terc-butylesteru (3S)-[(3-benzoylamino-4-oxo4,6,7,8-tetrahydropyrrolo[l ,2-a]pyrimidin-6-karbonyl)amino]^4-oxobutanové kyseliny (slouče45 niny 5a) v 7,5 ml dichlormethanu a 2,5 ml kyseliny trifluoroctové se míchá po dobu 5 hodin. Reakční směs se zahustí ve vakuu, zbytek se vyjme dichlormethanem, zahustí se ve vakuu, suspenduje v toluenu a zahustí ve vakuu, čímž se získá 0,07 g semikarbazonu (3S)-[(3-benzoylamino-4-oxo-4,6,7,8-tetrahydropyrrolo[l,2-a]pyrimidin-6-karbonyl)amino]^l-oxobutanové kyseliny (sloučeniny 6a) ve formě bílé pevné látky. Tato pevná látka se suspenduje ve směsi 37% vodného formaldehydu, kyseliny octové a methanolu v poměru 1:1:5a míchá se při teplotě místnosti po dobu 18 hodin. Reakční směs se zahustí ve vakuu, zbytek se suspenduje v acetonitrilu a zahustí ve vakuu, čímž se získá 0,1 g bílé pevné látky. Vysoceúčinnou kapalinovou chromatografií (HPLC) s obrácenými fázemi na Ci₈—silikagelu za použití gradientově eluce 1% až 75% acetonitrilem ve vodě (pufrováno 0,1 % kyseliny trifluoroctové) se získá 0,05 g (60 %) sloučeniny 7a ve formě bílé pevné látky.

-143CZ 298625 B6

Retenční čas: 7,9 min (vysoceúčinná kapalinová chromatografie (HPLC) s obrácenými fázemi na Cig-silikagelu za použití 20-minutové gradientově eluce 1% až 100% acetonitrilem ve vodě (pufrováno 0,1 % kyseliny trifluoroctové) 'H-NMR (perdeuteromethanol (existuje jako směs anomerů hemiacyloxyacetalové formy v poměru 1 : 1)), hodnoty δ: 2,25 - 2,4 (m, 1H), 2,45 - 2,8 (m, 4H), 3,05-3,15 (m, 1H), 4,25 4,35 (m, 1H), 4,55 - 4,6 (m, 1H), 5,1 - 5,2 (m, 1H), 7,45 - 7,65 (m, 3H), 7,9 - 8,0 (m, 2H), 8,9 (s, 1H) (3 S)-[(3-benzoylamino-4-oxo-4,6,7,8-tetrahydropyrrolo[ 1,2-a]pyrimidin-6-karbonyl)amino]4-oxobutanová kyselina (sloučenina 7b)

Tato sloučenina se připraví jak je popsáno výše v případě diastereomeru 7a. Získá se 0,03 g 15 (35 %) sloučeniny 7b ve formě bílé pevné látky.

Retenční čas: 8,1 min (vysoceúčinná kapalinová chromatografie (HPLC) s obrácenými fázemi na Cig-silikagelu za použití 20-minutové gradientově eluce 1% až 100% acetonitrilem ve vodě (pufrováno 0,1 % kyseliny trifluoroctové) 'H-NMR (perdeuterodimethylsulfoxid (existuje jako směs anomerů hemiacyloxyacetalové formy v poměru 1 : 1)), hodnoty δ: 2,1 - 2,2 (m, 1H), 2,4 (d, 1H), 2,7 - 2,8 (m, 1H), 3,0 - 3,2 (m, 3H), 5,0 (dd, 1H), 5,1 - 5,2 (m, 1H), 5,5 (s, 1H), 5,7 - 5,8 (m, 1H), 7,55 (t, 2H), 7,67 (t, 1H), 7,95 (d, 2H), 8,55 (s, 1H), 9,0 - 9,15 (m, 1H), 9,4 - 9,5 (m, 1H)

- 144CZ 298625 B6

(Ph = fenyl, Bn = benzyl, Boc = terc-butoxykarbonyl)

(Μ)

(a) R = H (b) R = fenyl-CH₂(c) R = fenyl-(CH₂)₂(d) R = fenyl-(CH₂)₃(e) R = 4-methoxyfenyl-(CH₂)₃10 (f) R = 4-hydroxyfenyl-(CH₂)₃Imidazol-2-karboxylové kyseliny 13 se připraví za použití modifikací popsaných postupů (Yamanaka a kol., Chem. Pharm. Bull., 31, str. 4549 - 53 (1983), Suzuki a kol., J. Org. Chem,, 38, str. 3571 - 75 (1973), a Oliver a kol., J. Org, Chem,, 38, str. 1437 - 38 (1973)).

Imidazol 2-karboxylová kyselina (sloučenina 13a) se připraví způsobem, který popsali Curtis a Brown, J, Org. Chem,, 45, str. 4038 - 40 (1980)

4-benzylimidazol-2-karboxylová kyselina (sloučenina 13b) se izoluje jako špinavě bílá pevná 20 látka o teplotě tání 153 až 155 °C.

Infračervené spektrum (KBr): 3026-2624, 1630, 1515, 1498, 1438, 1405

-145CZ 298625 B6 'H-NMR (perdeuterodimethylsulfoxid), hodnoty δ: 7,31 (5H, m), 7,14 (1H, s), 3,95 (2H, s)

4-(2-fenylethyl)imidazol-2-karboxylová kyselina (sloučenina 13c) se izoluje jako světle žlutá pevná látka o teplotě tání 151 až 153 °C.

Infračervené spektrum (KBr): 3054-2617, 1637, 1497, 1376 ’Η-NMR (perdeuterodimethylsulfoxid), hodnoty δ: 7,27 (5H, m), 7,11 (1H, s), 2,92 (4H, s) ío 4-(3-fenylpropyl)imidazol-2-karboxylová kyselina (sloučenina 13d) se izoluje jako světle žlutá pevná látka o teplotě tání 148 až 150 °C.

Infračervené spektrum (KBr): 3020-2615, 1636, 1509, 1498, 1383 ’Η-NMR (perdeuterodimethylsulfoxid), hodnoty δ: 7,35- 7,22 (5H, m), 7,01 (1H, s), 2,62 (4H, m), 1,94 (2H, m)

4-[3-(4-methoxyfenyl)propyl]imidazol-2-karboxylová kyselina (sloučenina 13e) se izoluje jako bílá krystalická pevná látka tající za rozkladu při teplotě 155 až 156 °C.

Infračervené spektrum (KBr): 3300 - 2300, 1633, 1513, 1376, 1244 'H-NMR (perdeuterodimethylsulfoxid), hodnoty δ: 9,50 - 7,50 (2H, široký s), 7,15 (1H, s), 7,11 (2H, d, J = 8,5), 6,84 (2H, d, J = 8,5), 3,71 (3H, s), 2,60 - 2,50 (4H, m), 1,86 (2H, m)

Analýza pro Ci₄Hi6N₂O₃:

vypočteno: 64,60 % C, 6,20 % H, 10,76 % N;

nalezeno: 64,45 % C, 6,21 % Η, 10,70 % N.

4-[3-(4-hydroxyfenyl)propyl] imidazol-2-karboxylová kyselina (sloučenina 131)

K roztoku 1,15 g (4,0 mmol) ethylesteru sloučeniny 13e v 50 ml suchého dichlormethanu se při teplotě 0 °C přidá 16 ml l,0M roztoku bromidu boritého v dichlormethanu (16,0 mmol). Po 15 minutách při teplotě 0 °C se směs zahřeje na teplotu 25 °C a míchá se po dobu 16 hodin.

Reakční směs se ochladí v ledové lázni a po kapkách se přidá 20 ml vody. Výsledná směs se krátce míchá při teplotě 25 °C a poté se zfiltruje. Filtrát se opatrně neutralizuje přidáním pevného hydrogenuhličitanu sodného, čímž se získá 700 mg (71 %) sloučeniny 13f ve formě bíle zbarvené pevné látky tající za rozkladu 186 až 187 °C (překrystalováno z methanolu).

Infračervené spektrum (KBr): 3500 - 2400, 2935, 1640, 1516, 1396, 1232 'Η-NMR (perdeuterodimethylsulfoxid), hodnoty δ: 9,83 (3H, široký s), 7,16 (1H, s), 6,98 (2H, d, J = 8,2), 6,66 (2H, d, J = 8,2), 2,60 - 2,40 (4H, m), 1,84 (2H, m)

Analýza pro C13H14N2O3:

vypočteno: 63,40 % C, 5,73 % Η, 11,38 % N; nalezeno: 62,96 % C, 5,70 % Η, 11,27 % N.

(2R, S, 3 S)-N²-terc-butoxykarbonyl-N-(tetrahydro-2-benzyloxy-5-oxo-3-furanyl)-L-alan in50 amid (sloučenina 14)

K roztoku 2,91 g (10 mmol) (2R,S,3S)-3-(N-allyloxykarbonyl)amino-2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuranu (Chapman, Biorg. Med. Chem. Letí., 2, str. 613 - 17 (1992)), 2,08 g (11 mmol) N-146CZ 298625 B6 terc-butoxykarbonyl-L-alaninu a 150 mg bis(trifenylfosfin)palladium(ll)chloridu v 75 ml dichlormethanu se po kapkách přidá 4,0 ml (14,9 mmol) tri-n-butylcínhydridu, až barva roztoku přejde do tmavě oranžové. Přidá se 2,70 g (20 mmol) hydroxybenzotriazolu a směs se ochladí na teplotu 0 °C. Přidá se 2,30 g (12 mmol) l-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimid-hydro5 chloridu a poté se směs nechá v průběhu 4 hodin pomalu ohřát na teplotu místnosti. Směs se naředí 250 ml ethylacetátu, promyje se třikrát vždy 150 ml IN kyseliny chlorovodíkové, třikrát vždy 150 ml nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a dvakrát vždy 150 ml roztoku chloridu sodného, poté se vysuší síranem hořečnatým, zfiltruje se a zahustí. Surový produkt se vyčistí sloupcovou chromatografií za použití 50% - 70% ethylacetátu v hexanu jako ío elučního činidla, čímž se získá 3,17 g (84 %) směsi diastereomerů. Překiystalováním ze směsi ethylacetátu a hexanu se získají bezbarvé krystaly o teplotě tání 132 až 145 °C.

Infračervené spektrum (KBr): 3357, 3345, 1781, 1688, 1661, 1535, 1517, 1165 'H-NMR (perdeuterodimethylsulfoxid), hodnoty δ: 8,49 (d, J = 6,8), 8,23 (d, J = 7,4), 7,40 (5H, m), 7,01 (1H, m), 5,68 (d, J = 5,0), 4,75 (m), 4,31 (m), 3,97 (1H, m), 2,82 (m), 3,11 (m),

2,82 (m), 2,59 (m), 2,45 (m,), 1,40 (9H, s), 1,20 (d, J = 7,2), 1,16 (d, J = 7,2)

Analýza pro Ci9H₂₆N₂O₆:

vypočteno: 60,31 % C, 6,92 % H, 7,40 % N; nalezeno: 60,30 % C, 6,91 % H, 7,38 % N.

(2R,S, 3S)-terc-butoxykarbonyl-N-(tetrahydro-2-benzyloxy-5-oxo-3-furanyl)-L-prolinamid (sloučenina 15) se připraví způsobem popsaným v případě sloučeniny 14, přičemž se získá 1,64 g (81 %) bezbarvé sklovité látky.

Infračervené spektrum (KBr): 3317, 2978, 1797, 1697, 1670, 1546, 1400, 1366, 1164, 1121 ’Η-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,68 (1H, široký m), 7,35 (5H, m), 5,53 (d, J = 5,2),

5,43 (s), 4,93 - 4,61 (m), 4,44 (m), 4,25 (širokým), 3,39 (2H, širokým), 3,10- 2,81 (1H, m),

2,44 (1H, m), 2,32 (široký m), 1,88 (široký m), 1,67 (široký m), 1,42 (9H, s) (2R,S, 3S)-N-(N-terc-butoxykarbonyl-(4(R)-fenoxy-L-prolinyl)-3-amino-2-benzyloxy-5oxotetrahydrofuran (sloučenina 16) se připraví způsobem popsaným v případě sloučeniny 14, přičemž se získá 530 mg (84 %) bezbarvé amorfní pevné látky.

^]H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,65 (1H, m), 7,4 - 7,2 (7H, m), 6,95 (1H, m), 6,85 (1H, m), 5,55 (1H, d), 4,95 (1H, d), 4,8 - 4,7 (1H, široký m), 4,65 (1H, d), 4,55 - 4,55 (1H, široký m), 4,4 - 4,3 (0,5H, široký m), 3,95 - 3,85 (0,5H, široký m), 3,75 - 3,58 (2H, m), 2,95 40 2,8 (1H, m), 2,7 - 2,55 (1H, m), 2,54 - 2,4 (1H, m), 2,35 - 2,2 (1H, m), 1,4 (9H, s) (2R,S, 3S)-N²-[4-(3-fenylpropyl)imidazol-2-karbonyl]-N-(tetrahydro-2-benzyloxy-5-oxo-3furanyl)-L-alaninamid (sloučenina 17d)

K roztoku 1,00 g (2,64 mmol) (2R,S, 3S)-N²-terc-butoxykarbonyl-N-(tetrahydro-2-benzyloxy-5-oxo-3-furanyl)-L-alaninamidu (sloučeniny 14) v 7 ml dichlormethanu se při teplotě 0 °C přidá 7 ml kyseliny triíluoroctové. Směs se míchá při teplotě 0 °C po dobu 75 minut. Směs se zahustí, ke zbytku se přidá diethylether a ether se poté odstraní ve vakuu. Tento postup se dvakrát opakuje, čímž se získá světle žlutá sklovitá látka. Tato pevná látka se rozpustí ve 20 ml dimethylformamidu. K tomuto roztoku se poté přidá 1,38 ml (7,92 mmol) diizopropylethylaminu a následně 0,67 g (290 mmol) 4-(3-fenylpropyl)imidazol-2-karboxylové kyseliny (sloučeniny 13d), 0,56 g (2,90 mmol) l-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimid-hydrochloridu a 0,71 g (5,28 mmol) hydroxybenzotriazolu. Směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 20 hodin a poté se vylije do roztoku chloridu sodného. Směs se extrahuje třikrát vždy 50 ml ethylacetátu.

- 147CZ 298625 B6

Smíchané organické extrakty se promyjí dvakrát vždy 100 ml nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a poté dvakrát vždy 100 ml roztoku chloridu sodného, vysuší se síranem hořečnatým, zfiltrují a zahustí. Zbytek se vyčistí sloupcovou chromatografií za použití ethylacetátu jako elučního činidla, čímž se získá 0,99 g (76 %) sloučeniny 17d jako směsi diastereomerů.

Infračervené spektrum (KBr): 3293,3064, 2937, 1793, 1650, 1530, 1451, 1446, 1119 ’Η-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,96 (široký m), 7,62 (široký d), 7,36 - 7,10 (10H, m), 6,88 (s), 6,86 (s), 5,53 (d, J = 5,2), 5,48 (s), 4,87 - 4,52 (4H, m), 3,11 - 2,38 (2H, m), 2,65 (4H, ío m), 1,99 (2H, m), 1,47 (d, J = 6,9), 1,46 (d, J = 7,0)

Podobným způsobem se připraví následující sloučeniny:

(2R,S, 3S)-N²-(imidazol-2-karbonyl)-N-(tetrahydro-2-benzyloxy-5-oxo-3-furanyl)-L-ala15 ninamid (sloučenina 17a) se izoluje, s výtěžkem 74 %, jako světle žlutá pevná látka.

Infračervené spektrum (KBr): 3289, 3056, 2937, 1793, 1664, 1642, 1528, 1453, 1440, 1124 'H-NMR (perdeuterodimethylsulfoxid), hodnoty δ: 13,13 (1H, široký s), 8,67 (d, J = 7,0), 8,48 20 (d, J = 7,8), 8,29 (d, J = 6,8), 8,25 (d, J = 7,6), 7,40 - 7,34 (6H, m), 7,11 (1H, s), 5,69 (d, J = 5,0),

5,49 (d, J = 0,8), 4,85 - 4,31 (4H, m), 3,19 - 2,42 (2H, m), 1,3 8 (d, J = 7,4), 1,34 (d, J = 7,4) (2R, S, 3 S)-N²-(4-benzimidazol-2-karbonyl)-N-(tetrahydro-2-benzyloxy-5-oxo-3-furany 1)L-alaninamid (sloučenina 17b) se izoluje, s výtěžkem 75 %, jako světle žlutá sklovitá látka.

Infračervené spektrum (KBr): 3294, 3031,2937, 1792, 1650, 1530, 1453, 1444, 1119 ’Η-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,99 (široký m), 7,75 (široký d), 7,36 - 7,11 (10H, m),

6.81 (1H, s), 5,51, 5,45 (d, s, J = 5,3), 4,85-4,47 (4H, m), 3,95 (2H, s), 3,04-2,72 (1H, m), 2,48

-2,35 (1H, m), 1,44 (d, J = 6,9), 1,43 (d, J = 7,1) (2R,S, 3S)-N²-[4-(2-fenylethyl)imidazol-2-karbonyl]-N-(tetrahydro-2-benzyloxy-5-oxo-3furanyl)-L-alaninamid (sloučenina 17c) se izoluje, s výtěžkem 79 %, jako světle žlutá sklovitá látka.

Infračervené spektrum (KBr): 3292, 3029, 2936, 1793, 1650, 1530, 1453, 1444, 1119 ’Η-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 8,06 (široký m), 7,70 (široký s), 7,39 - 7,15 (10H, m),

6.82 (s), 6,81 (s), 5,53 (d, J = 5,2), 5,48 (s), 4,87 - 4,53 (4H, m), 2,95 (4H, m), 3,11 - 2,37 (2H,

m), 1,48 (d, J = 5,6), 1,45 (d, J = 6,7) (2R,S, 3S)-l-[4-(2-fenylethyl)imidazol-2-karbonyl]-N-(tetrahydro-2-benzyloxy-5-oxo-3furanyl)-L-prolinamid (sloučenina 18c) se izoluje, s výtěžkem 79 %, jako světle žlutá sklovitá látka.

Infračervené spektrum (dichlormethan): 3422, 2959, 1795, 1685, 1611, 1497, 1116 ^]H-NMR (perdeuterodimethylsulfoxid), hodnoty δ: 12,78 - 12,59 (1H, m), 8,61 - 8,34 (1H, m), 7,39 - 7,22 (10H, m), 6,99- 6,61 (1H, m), 5,71- 5,26 (lH,m), 4,85- 4,02 (4H, m), 3,63 (1H, m), 3,18-1,74(1 lH,m) (2R,S, 3S)-l-[4-(3-fenylpropyl)imidazol-2-karbonyl]-N-(tetrahydro-2-benzyloxy-5-oxo-3furanyl)-L-prolinamid (sloučenina 18d) se izoluje, s výtěžkem 87 %, jako bezbarvá sklovitá látka.

-148CZ 298625 B6

Infračervené spektrum (dichlormethan): 3422, 3214, 2945, 1794, 1685, 1604, 1496, 1117 'H-NMR (perdeuterodimethylsulfoxid), hodnoty δ: 12,71 (ÍH, široký m), 8,61 - 8,34 (ÍH, m), 7,45-7,18 (10H, m), 7,05- 6,64 (ÍH, m), 5,70 - 5,28 (ÍH, m), 4,85- 4,02 (4H, m), 3,62 (ÍH, m), 3,18-1,71 (13H,m) (2R,S, 3S)-l-{4-[3-(4-methoxyfenyl)propyl]imidazol-2-karbonyl}-N-(tetrahydro-2-benzyloxy-5-oxo-3-furanyl)-L-prolinamid (sloučenina 18e) se izoluje, s výtěžkem 72%, jako bílá sklovitá látka o teplotě tání 62 až 65 °C.

Infračervené spektrum (KBr): 3213, 2937, 1793, 1680, 1606, 1606, 1512, 1245 'H-NMR (perdeuterodimethylsulfoxid), hodnoty δ: 12,71, 12,67, 12,58 (ÍH, 3 x široký s), 8,60 8,30 (ÍH, m), 7,40 - 7,20 (5H, m), 5,66 - 5,20 (ÍH, m), 4,81 - 4,59 (2H, m), 4,55 - 4,05 (2H, m),

3,71 (3H, s), 3,65-3,45 (ÍH, m), 3,15 - 1,50 (13H, m)

Hmotová spektroskopie (FABSMS): m/z 547 (M⁺, 100 %), 439, 412, 340, 312, 243, 177, 154 (2R,S, 3S)-l-{4-[3-(4-hydroxyfenyl)propyl]imidazol-2-karbonyl}_N-(tetrahydro-2-benzyl20 oxy-5-oxo-3-furanyl)-L-prolinamid (sloučenina 181) se izoluje, s výtěžkem 70 %, jako světle žlutá sklovitá látka o teplotě tání 86 až 90 °C.

Infračervené spektrum (KBr): 3298, 1790, 1669, 1606, 1515, 1242 *H-NMR (perdeuterodimethylsulfoxid), hodnoty δ: 12,66, 12,56 (ÍH, 2 x široký s), 9,14 (ÍH, s), 8,57 - 8,30 (ÍH, m), 7,36 - 7,30 (5H, m), 7,02 - 6,83 (3H, m), 6,70 - 6,57 (2H, m), 5,65 - 5,28 (1H, m), 4,80 - 4,49 (2H, m), 4,50 - 4,05 (2H, m), 3,65 - 3,45 (ÍH, m), 3,15 - 1,55 (13H, m)

Hmotová spektroskopie (FAB - ionizace rychlými neutrálními částicemi) m/e 533 (M⁺, 100 %),

425,298,229,176,154 l-{5-[3-(4-methoxyfenyl)propyl]-lH-imidazol-2-karbonyl}-4(R)-fenoxypyrrolidin-2(S)karbonyl(tetrahydro-2(R,S)-benzyloxy-5-oxofuran-3(S)-yl)amid (sloučenina 19e) se izoluje, s výtěžkem 77 %, jako čirá bezbarvá amorfní pevná látka.

’Η-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 9,95 - 9,75 (ÍH, m), 7,95 (ÍH, široký s), 7,40 - 7,2 (7H, m), 7,2 - 6,78 (7H, m), 5,65 - 5,6 (ÍH, m), 5,55 - 5,45 (ÍH, m), 5,3 - 5,2 (ÍH, m), 5,15 5,0 (ÍH, m), 4,95 - 4,75 (ÍH, m), 4,7 - 4,6 (ÍH, m), 4,5 - 4,4 (ÍH, m), 4,35 - 4,25 (ÍH, m), 3,8 (3H, s), 3,05- 1,75 (1 OH, m) (3S)-3-{N-[4-(3-fenylpropyl)imidazol-2-karbonyl]-L-alaninyl}amino-4-oxobutanová kyselina (sloučenina 20d)

Směs 0,93 g (1,90 mmol) (2R,S, 3S)-N²-[4-(3-fenylpropyl)imidazol-2-karbonyl]-N-(tetra45 hydro-2-benzyloxy-5-oxo-3-furanyl)-L-alaninamidu a 10% palladia na aktivním uhlí (0,93 g) ve 100 ml methanolu se míchá v atmosféře vodíku po dobu 5 hodin. Výsledná směs se zfíltruje a zahustí, čímž se získá bezbarvá sklovitá látka. Překrystalováním ze směsi methanolu a diethyletheru se získá 401 mg (53 %) sloučeniny 20d ve formě bezbarvé pevné látky o teplotě tání 94 až 96 °C.

[a]_D ²⁷ +16,4° (c = 0,5, methanol)

Infračervené spektrum (KBr): 3300, 3287, 1786, 1732, 1659, 1651, 1532, 1451

-149CZ 298625 B6 'H-NMR (perdeuteromethanol), hodnoty δ: 7,19 (5H, m), 6,91 (1H, s), 4,60 - 4,46 (2H, m), 4,27 (1H, m), 2,63 (4H, m), 2,75 - 2,40 (2H, m), 1,96 (2H, m), 1,44 (3H, d, J = 7,0)

Podobným způsobem se připraví následující sloučeniny:

(3S)-3-[N-(imidazol-2-karbonyl)-L-alaninyl]amino-4-oxobutanová kyselina (sloučenina 20a, E) se izoluje, s výtěžkem 83 %, jako bezbarvá pevná látka o teplotě tání 115 °C.

[a]_D ²⁵ +4,4° (c = 0,5, methanol)

Infračervené spektrum (KBr): 3303, 1782, 1658, 1650, 1563, 1521, 1454 ’Η-NMR (perdeuteromethanol), hodnoty δ: 7,18 (2H, s), 4,55 (2H, m), 4,27 (1H, m), 2,56 (2H, m), 1,45 (d, J = 7,1), 1,44 (d, J = 7,0) (3S)-3-[N-(4-benzylimidazol-2-karbonyl)-L-alaninyl]amino-4-oxobutanová kyselina (sloučenina 20b) se izoluje, s výtěžkem 56 %, jako bezbarvé pevná látka o teplotě tání 113 až 115 °C. [a]_D ²⁹ +18,2° (c = 0,5, methanol)

Infračervené spektrum (KBr): 3301,3288, 1783, 1727, 1650, 1531, 1452 ’Η-NMR (perdeuteromethanol), hodnoty δ: 7,25 (5H, m), 6,90 (1H, s), 4,59 - 4,45 (2H, m), 4,26 (1H, m), 3,95 (2H, s), 2,74 - 2,39 (2H, m), 1,42 (3H, d, J = 7,0)

Analýza pro C18H20N4O5:

vypočteno: 56,69 % C, 5,55 % H, 14,69 % N;

nalezeno: 57,06 % C, 5,54 % H, 14,41 % N.

(3S}-3-{N-[4-(2-fenylethyl)imidazol-2-karbonyl]-L-alaninyl}amino-4-oxobutanová kyselina (sloučenina 20c, N) se izoluje, s výtěžkem 53 %, jako bezbarvá pevná látka o teplotě tání 102 až 104 °C.

[a]_D ²⁷ +13,7° (c = 0,5, methanol)

Infračervené spektrum (KBr): 3299, 3289, 1785, 1732, 1650, 1531, 1452 ’Η-NMR (perdeuteromethanol), hodnoty δ: 7,20 (5H, m), 6,82 (1H, s), 4,60 - 4,46 (2H, m), 4,29 (1H, m), 2,92 (4H, s), 2,76 - 2,41 (2H, m), 1,44 (3H, 2 x d, J = 7,1)

Analýza pro C19H22N4O5.H2O:

vypočteno: 56,43 % C, 5,98 % H, 13,85 % N;

nalezeno: 56,65 % C, 5,84 % Η, 13,91 % N.

(3S)-3-{N-[4-(2-fenylethyl)imidazol-2-karbonyl]-L-prolinyl}amino-4-oxobutanová kyselina (sloučenina 21c) se izoluje, s výtěžkem 85 %, jako bezbarvá sklovitá látka o teplotě tání 101 až 103 °C (překrystalována ze směsi methanolu a diethyletheru).

[a]_D ²⁷ -63,8° (c = 0,25, methanol)

Infračervené spektrum (KBr): 3275, 1784, 1728, 1664, 1606, 1498, 1429

-150CZ 298625 B6 ’Η-NMR (perdeuteromethanol), hodnoty δ: 7,24 (5H, m), 6,83 (s), 6,79 (s), 4,58-4,14 (3H, m), 3,69 (1H, m), 2,93 (4H, široký s), 2,75 - 1,99 (6H, m)

Analýza pro C21H24N4O5.H2O:

vypočteno: 58,60 % C, 6,09 % H, 13,02 % N; nalezeno: 58,34 % C, 5,95 % H, 12,67 % N.

(3 S)-3-{N-[4-(2-fenylpropyl)imidazol-2-karbonyl]-L-prolinyl} am ino-4-oxobutanová kyselina (sloučenina 2 ld) se izoluje, s výtěžkem 81 %, jako bezbarvá sklovitá látka o teplotě tání 91 až 94 °C (překrystalováním ze směsi methanolu a diethyletheru).

[a]_D ²⁷ -68° (c = 0,25, methanol)

Infračervené spektrum (KBr): 3277, 2939, 1784, 1727, 1662, 1606, 1498, 1429 ^]H-NMR (perdeuteromethanol), hodnoty δ: 7,29 - 7,16 (5H, m), 6,92 (s), 6,86 (s), 4,58-4,16 (3H, m), 3,71 (1H, m), 2,75 - 1,92 (13H, m)

Analýza pro C22H26N4O5.H2O:

vypočteno: 59,45 % C, 6,35 % H, 12,60 % N; nalezeno: 59,75 % C, 6,21 % H, 12,41 % N.

(3S)-3-{N-[4-[3-(4-methoxyfenyl)propyl]imidazol-2-karbonyl]-L-prolinyl}amino-4-oxobutanová kyselina (sloučenina 21 e) se izoluje, s výtěžkem 65 %, jako bílá sklovitá pevná látka o teplotě tání 101 až 105 °C.

[a]_D ²⁷ -60,6° (c = 0,5, methanol)

Infračervené spektrum (KBr): 3231, 1784, 1726, 1611, 1512, 1245 ‘H-NMR (perdeuteromethanol), hodnoty δ: 7,09 (2H, d, J = 8,6), 6,92, 6,85 (1H, 2x s), 6,81 (2H, d, J = 8,6), 5,45 - 5,30 (1H, m), 4,64 - 4,46 (1H, m), 4,28 - 4,10 (2H, m), 3,75 (3H, s), 3,74 - 3,66 (1H, m), 2,67 - 1,84 (13H, m)

Analýza pro C₂₃H₂8N4O₆.H₂O:

vypočteno: 58,22 % C, 6,37 % Η, 11,81 % N; nalezeno: 58,39 % C, 6,34 % Η, 11,45 % N.

Hmotová spektrometrie (FABMS): m/e 457 (M⁺), 405, 312, 243, 215, 176, 154 (100 %) (3S)-3-{N-[4-[3-(4-hydroxyfenyl)propyl]imidazol-2-karbonyl]-L-prolinyl}amino-4-oxobutanová kyselina (sloučenina 21 f) se izoluje, s výtěžkem 43 %, jako bílá sklovitá pevná látka o teplotě tání 114 až 118 °C.

[a]_D ²⁷ -55,7° (c = 0,05, methanol)

Infračervené spektrum (KBr): 3288, 2935, 1780, 1715, 1662, 1610, 1515, 1441 'H-NMR (perdeuteromethanol), hodnoty δ: 6,99 (2H, d, J = 8,5), 6,91, 6,85 (1H, 2x s), 6,68 (2H, d, J= 8,5), 5,45- 5,30 (1H, m), 4,60- 4,47 (1H, m), 4,30-4,10 (2H, m), 3,80 - 3,55 (1H, m), 2,70- 1,80 (13H, m)

Analýza pro C₂₂H₂6N₄O₆.H₂O:

-151 CZ 298625 B6 vypočteno: 57,38 % C, 6,13 % H, 12,17 % N; nalezeno: 57,68 % C, 6,25 % Η, 11,66 % N.

Hmotová spektrometrie (FABMS): m/e 443 (M⁺), 298, 229, 154 (100 %) (3S)-3-[(l-{5-[3-(4-methoxyfenyl)propyl]-l H-imidazol-2-karbonyl}-4(R)-fenoxypyrrolidin-2(S)-karbonyl)amino]-4-oxobutanová kyselina (sloučenina 22e) se izoluje, s výtěžkem 43 %, jako béžová pevná látka.

ío ’Η-NMR (perdeuteromethanol), hodnoty δ: 7,35 - 7,2 (3H, m), 7,15 - 7,0 (2H, m), 6,98 - 6,85 (3H, m), 6,83 - 6,77 (2H, d), 5,4 - 5,1 (1H, m), 4,65 - 4,5 (1H, m), 4,35 - 4,2 (2H, m), 4,15 3,90 (1H, m), 3,78 (3H, s), 3,62 - 3,48 (1H, m), 2,78 - 2,25 (8H, m), 2,02 - 1,9 (2H, m)

(134)

O COjM» (2S)

Terc-butylesteru {fenylethyl-[5-(3-fenylpropyl)-lH-imidazol-2-karbonyl]amino}octové kyseliny (sloučenina 23)

- 152CZ 298625 B6

K roztoku 150 mg (0,65 mmol) 4-(3-fenylpropyl)-imidazol-2-karboxylové kyseliny (sloučenina 13d) a 140 mg (0,59 mmol) terc-butylesteru N-(2-fenylethyl)glycinu v 5 ml bezvodého dimethylformamidu o teplotě 0 °C se přidá 154 μΐ (0,89 mmol) diisopropylethylaminu a 136 mg (0,71 mmol) l-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimid-hydrochloridu. Reakční směs se míchá po dobu 36 hodin a poté se vylije do nasyceného vodného roztoku chloridu sodného a extrahuje se třikrát vždy 50 ml ethylacetátu. Smíchané organické extrakty se promyjí dvakrát nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a jednou nasyceným vodným roztokem chloridu sodného, vysuší se síranem sodným, zfiltrují a zahustí ve vakuu, čímž se získá hněío dá olejovitá látka. Velmi rychlou chromatografií na silikagelu za použití 30% ethylacetátu v hexanu jako elučního činidla se získá 160 mg (61 %) sloučeniny 23 jako bílé pevné látky.

'H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,38 - 7,14 (10H, m), 6,85 - 6,8 (1H, m), 4,84 - 4,76 (1H, d), 4,5 - 4,42 (1H, m), 4,07-4,0 (1H, d), 3,78- 3,72 (1H, m), 3,12-2,94 (2H, 2 x m),

2,75 - 2,55 (4H, m), 2,1 - 1,95 (2H, m), 1,5 - 1,45 (9H, 3 x s)

Semikarbazon terc-butylesteru (3 S)-(2-fenylethyl-[5-(3-fenylpropyl)-1 H-imidazol-2-karbonyl]amino}acetylamino)-4-oxobutanové kyseliny (sloučenina 24)

Na 160 mg (0,357 mmol) esteru 23 se působí 7 ml 25% kyseliny trifluoroctové v dichlormethanu po dobu 4 hodin. Reakční směs se zahustí ve vakuu, čímž se získá 180 mg kyseliny. 180 mg (0,357 mmol) této kyseliny se podrobí reakci se 161 mg (0,357 mmol) semikarbazonu tercbutylesteru (3S)-3-amino-4-oxobutanové kyseliny, jak je popsáno v případě přípravy sloučeniny 5a a 5b, čímž se získá 86 mg (33 %) sloučeniny 24 (jednoho diastereomeru) ve formě bílé pevné látky.

’Η-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 10,9- 10,3 (1H, 2d), 10,08 - 9,78 (1H, 2d), 9,259,15 (1H, m), 8,35- 8,10 (1H, 2m), 7,9 - 7,85 (1H, 2s), 7,40 - 7,05 (10H,m), 6,9- 6,75 (1H, m), 6,3 - 5,8 (1H, široký s), 5,2 - 4,65 (2H, m), 4,35 - 3,5 (3H, m), 3,25 - 3,0 (2H, m),

2,9 - 2,45 (6H, m), 2,05 - 1,8 (2H, m), 1,4 (9H, s)

Sůl (3S)-(2-{fenylethyl-[5-(3-fenylpropyl)-lH-imidazol-2-karbonyl]amino}acetylamino)-4oxobutanové kyseliny s kyselinou trifluoroctovou (sloučenina 25) se připraví způsobem popsaným v případě sloučeniny 7a, čímž se získá 32 mg (82 %) této sloučeniny ve formě bílé pevné látky.

¹ H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,05 - 7,35 (m, 11H), 4,65 (m, 1H), 4,4 (m, 1H), 4,3 (s, 2H), 3,6 - 4,0 (m, 2H), 2,5 - 2,95 (m, 8H), 2,05 (m, 2H)

Methylester 7-[5-(3-fenylpropyl)-l H-imidazol-2-karbonyl]-l ,4-dithia-7-azaspiro[4,4]nonan8(S)-karboxylové kyseliny (sloučenina 26)

4-(3-fenylpropyl)imidazol-2-karboxylová kyselina (sloučenina 13d) se podrobí reakci s hydrobromidem methylesteru l,4-dithia-7-azaspiro[4,4]nona-8(S)-karboxylové kyseliny (Smith a kol., J. Med. Chem., 31, str. 875 - 85 (1988)) způsobem popsaným v případě sloučeniny 23, čímž se získá 140 mg (65 %) této sloučeniny ve formě žluté pryskyřice.

'H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,34 - 7,15 (5H, m), 6,98- 6,8 (1H, 3s), 5,7 - 5,65 (0,5H, m), 5,2 - 5,1 (1H, m), 4,82 - 4,75 (0,5H, m), 4,4 - 4,35 (1H, m), 4,05 (1H, d), 3,75 - 3,7 (3H, 2s), 3,4 - 3,3 (4H, m), 2,95 - 2,45 (8H, m), 2,05 - 1,95 (2H, m)

Semikarbazon terc-butylesteru (3S)-({7-[5-(3-fenylpropyl)-lH-imidazol-2-karbonyl]-l,4dithia-7-azaspiro[4,4]nonan-8(S)-karbonyl}amino)-4-oxobutanové kyseliny (sloučenina 27)

-153CZ 298625 B6

Způsobem popsaným pro sloučeninu 4 se ester 26 převede na jeho kyselinu, která se následně podrobí reakci se semikarbazonem terc-butylesteru (3S)-3-amino-4-oxobutanové kyseliny, jak je popsáno v případě sloučeniny 24, čímž se získá 70 mg (33 %) sloučeniny 27 jako hnědé pevné látky.

’Η-NMR (perdeuteromethanol), hodnoty δ: 7,28 - 7,10 (5H, m), 6,90 (1H, široký s), 4,94 (1H, m), 3,96 - 3,86 (2H, q), 3,35 - 3,25 (4H, d), 3,0 (2H, s), 2,73 - 2,59 (6H, m), 2,0- 1,92 (2H, m), 1,44 (9H, s) ío (3S)-({7-[5-(3-fenylpropyl)-lH-imidazol-2-karbonyl]-l,4-dithia-7-azaspiro[4,4]nonan8(S)-karbonyl}amino)-4-oxobutanová kyselina (sloučenina 28) se připraví způsobem popsaným v případě sloučeniny 7a, čímž se získá 17 mg (26 %) sloučeniny 28 ve formě světle hnědé pevné látky.

'H-NMR (perdeuteromethanol), hodnoty δ: 7,4 (s, 1H), 7,1 - 7,25 (m, 5H), 4,9 (m, 1H), 4,6 (m, 1H), 4,3 (m, 1H), 3,95 (s, 2H), 3,25 - 3,4 (m, 4H), 3,0 (d, 2H), 2,6 - 2,8 (m, 5H), 2,45 (m, 1H), 2,05 (m, 2H)

(Me = methyl, Bn = benzyl) (a) R = fenyl-(CH₂)₂(b) R = 4-CF₃-fenyl-(CH₂)₂25 (c) R = fenyl-CH₂Estery 4,5-dihydroimidazol-4-karboxylových kyselin (sloučeniny 29) se připraví modifikací postupu, který popsali Jones a kol., Tetrahedron Lett., 29, str. 3853 - 56 (1988).

(4R,S)-methyl-2-(2-fenylethyl)-4,5-dihydroimidazol-4-karboxylát (sloučenina 29a)

Roztokem 3,28 ml (25 mmol) hydrocinnamonitrilu ve 125 ml methanolu o teplotě 0 °C se po dobu 45 minut probublává suchý chlorovodík. Rozpouštědla se odstraní, čímž se získá imidát, který se rozpustí ve 125 ml methanolu spolu s 25 mmol methyl-2,3-diaminopropionátu (Jones a kol., viz. výše). Směs se nechá stát při teplotě místnosti po dobu 2,5 hodiny a poté se zahustí za vzniku žlutého oleje. Surový produkt se vyčistí sloupcovou chromatografií za použití 10 až 20% methanolu v dichlormethanu jako elučního činidla, čímž se získá 3,52 g (61 %) bezbarvé sklovité látky.

’Η-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,30 - 7,15 (5H, m), 4,63 (1H, t, J = 9,7), 3,96 (2H, d, J = 9,7), 3,72 (3H, s), 3,10 (4H, m)

-154CZ 298625 B6 ¹³C-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 171,3, 168,8, 138,3, 128,4, 128,2, 126,6, 57,3, 53,0, 47,7,31,7, 27,9 (4R,S)-methyl-2-[2-(4-trifluormethylfenyl)ethyl]—4,5-dihydroimidazol-4-karboxylát (sloučenina 29b) se připraví způsobem popsaným v případě sloučeniny 29a, čímž se získá 6,80 g (78 %) bezbarvé pevné látky o teplotě tání 136 až 141 °C.

'H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,45 (4H, s), 4,71 (1H, dd, J = 8,6, 10,8), 4,02 ίο (2H, m), 3,73 (3H,s), 3,19 (4H,m)

Estery imidazoM-karboxylových kyselin (sloučeniny 30) se připraví modifikací postupu, který popsali Martin a kol., J. Org. Chem., 33, str. 3758 - 61 (1968).

Methyl-2-(2-fenylethyl)imidazol-4-karboxylát (sloučenina 30a)

Směs 3,40 g (14,64 mmol) (4R,S)-methyl-2-(2-fenylethyl)M,5-dihydroimidazoM-karboxylátu (sloučeniny 29a), 75 ml chloroformu a 13,0 g (150 mmol) oxidu manganičitého se zahřívá k varu pod zpětným chladičem po dobu 21 hodin a poté se zfiltruje za horka. Pevné látky se pro20 myjí chloroformem a methanolem. Smíchané filtráty se zahustí, čímž se získá žlutohnědá pevná látka, která se vyčistí sloupcovou chromatografií za použití 2 až 5% methanolu v dichlormethanu jako elučního činidla, čímž se získá 1,46 g (43 %) světle žluté pevné látky o teplotě tání 151 až 155 °C.

Infračervené spektrum (KBr): 3028, 2946, 1720, 1533, 1433, 1348, 1195, 1166 'H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,62 (1H, s), 7,26 - 7,02 (5H, m), 3,82 (3H, s), 3,03 (4H, široký s) ¹³C-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 162,9, 150,2, 140,3, 128,5, 128,2, 126,3, 51,5, 34,5, 30,4

Analýza pro C13H14N2O2:

vypočteno: 67,81 % C, 6,13 % H, 12,16 % N;

nalezeno: 67,70 % C, 6,15 % H, 12,16 % N.

Methyl-2-[2-(4-trifluormethylfenyl)ethyl]imidazoM-karboxylát (sloučenina 30b) se připraví způsobem popsaným v případě sloučeniny 30a. Překrystaluje se z ethylacetátu, čímž se získá 1,88 g (33 %) krémově zbarvených krystalů o teplotě tání 225 až 26 °C.

Infračervené spektrum (KBr): 3239, 2951, 1715, 1532, 1331, 1158, 1105, 1068 ‘H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,61 (1H, s), 7,54 (2H, d, J = 8,1), 7,26 (2H, d, J = 8,1), 3,89 (3H, s), 3,10 (4H, m)

Analýza pro C14H13F3N2O2:

vypočteno: 56,38 % C, 4,39 % H, 9,39 % N, 19,11 % F; nalezeno: 56,23 % C, 4,44 % H, 9,33 % N, 19,08 % F.

2-(2-fenylethyl)imidazol-4-karboxylová kyselina (sloučenina 31 a)

Směs 1,38 g (6 mmol) methyl-2-(2-fenylethyl)imidazoM-karboxylátu (sloučeniny 30a), 30 ml methanolu a 30 ml 1M vodného hydroxidu sodného se zahřívá k varu pod zpětným chladičem po

- 155CZ 298625 B6 dobu 16 hodin. Methanol se odstraní za sníženého tlaku a výsledný vodný roztok se neutralizuje 4M kyselinou chlorovodíkovou, čímž se vysráží světle žlutá pevná látka. Sraženina se izoluje, promyje se vodou a vysuší, čímž se získá 1,18 g (91 %) světle žluté pevné látky o teplotě tání 117 až 120 °C.

Infračervené spektrum (KBr): 3375, 3131, 2616, 2472, 1638, 1592, 1551, 1421, 1388, 1360 'H-NMR (perdeuterodimethylsulfoxid), hodnoty δ: 7,59 (1H, s), 7,26 (5H, m), 2,99 (4H, m) ío Analýza pro Cj₂H₁₂N₂O₂.0,25H₂O:

vypočteno: 65,29 % C, 5,71 % H, 12,69 % N; nalezeno. 65,00 % C, 5,64 % H, 12,58 % N.

2-[2-(4-trifluormethylfenyl)ethyl]imidazol-4-karboxylová kyselina (sloučenina 31b) se připraví způsobem popsaným v případě sloučeniny 31a, čímž se získá 1,09 g (76 %) světle žluté pevné látky o teplotě tání 126 až 130 °C.

Infračervené spektrum (KBr): 3339, 2640 - 2467, 1638, 1589, 1545, 1383, 1323 ¹ H-NMR (perdeuterodimethylsulfoxid), hodnoty δ: 7,69 (2H, d, J = 8,0), 7,59 (1H, s), 7,47 (2H, d, J = 8,0), 3,06 (4H, m) (2R,S, 3 Sý-N²-[2-(2-fenylethyl)imidazoM-karbonyl]-N-(tetrahydro-2-benzyloxy-5-Oxo-3furanyl)-L-alaninamid (sloučenina 32a)

K roztoku 1,59 g (4,20 mmol) (2R,S, 3S)-N²-terc-butoxykarbonyl-N-(tetrahydro-2-benzyloxy-5-oxo-3-furanyl)-L-alaninamidu (sloučeniny 14) (Chapman, Biorg. Med. Chem. Lett., 2, str. 613 - 18 (1992)) v 15 ml dichlormethanu, chlazenému na teplotu 0 °C, se přidá 15 ml kyseliny trifluoroctové. Směs se míchá při teplotě 0 °C po dobu 1 hodiny a poté se zahustí. Ke zbytku se přidá ether a poté se ether odstraní ve vakuu. Tento postup se opakuje dvakrát, čímž se získá světle žlutá sklovitá látka. Tato pevná látka se rozpustí ve 20 ml dimethylformamidu a poté se k tomuto roztoku přidá 2,19 ml (12,6 mmol) diisopropylethylaminu, 1,0 g (4,62 mmol) 2-(2fenylethyl)imidazol-4-karboxylové kyseliny (sloučeniny 31a), 0,89 g (4,62 mmol) l-(3dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimid-hydrochloridu a 1,14 g (8,40 mmol) hydroxybenzo35 triazolu. Reakční směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 20 hodin a poté se vylije do roztoku chloridu sodného. Směs se extrahuje třikrát vždy 50 ml ethylacetátu. Smíchané organické extrakty se promyjí třikrát vždy 100 ml nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a poté třikrát vždy 100 ml roztoku chloridu sodného, vysuší se síranem hořečnatým a zahustí. Zbytek se vyčistí sloupcovou chromatografií za použití 2 až 10% isopropanolu v dichlor40 methanu a poté 0 až 6% isopropanolu v ethylacetátu jako elučního činidla, čímž se získá 1,10 g (55 %) sloučeniny 32a jako směsi diastereomerů.

Infračervené spektrum (KBr): 3278,3065, 1790, 1641, 1577, 1545, 1499, 1454, 1120 ¹ H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 10,26 (1H, s), 8,14 (1H, s), 7,66 (d, J = 7,0), 7,56 (d,

J = 7,0), 7,43 (1H, s), 7,31 - 7,1 (10H, m), 5,49 (d, J = 5,6), 5,48 (s), 4,83 - 4,41 (4H, m), 3,04 2,41 (2H, m), 2,99 (4H, s), 1,45 (d, J = 7,0), 1,44 (d, J = 7,0) (2R,S, 3S)-N²-{2-[2-(4-trifluormethylfenyl)ethyl]imidazol-4-karbonyl}-N-(tetrahydro-250 benzyloxy-5-oxo-3-furanyl)-L-alaninamid (sloučenina 32b) se připraví způsobem popsaným v případě sloučeniny 32a, čímž se získá 1,08 g (62 %) světle žluté sklovité látky.

Infračervené spektrum (KBr): 3376, 3284, 3070, 2938, 1791, 1642, 1578, 1546, 1327, 1165, 122, 1068

-156CZ 298625 B6 ’Η-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,95 (0,5H, m), 7,55 - 7,25 (11,5H, m), 5,53 (s), 5,49 (d, J = 5,3), 4,88 - 4,48 (4H, m), 3,11 - 2,96 (4H, m), 2,91 (1H, m), 2,51 (1H, m), 1,47 (3H, d, J = 7,1) (2R,S, 3S)-N²-(N-benzylimidazol-4-karbonyl}-N-(tetrahydro-2-benzyloxy-5-oxo-3-furanyl)-L-alaninamid (sloučenina 32c) se připraví způsobem popsaným v případě sloučeniny 32a z 2-benzylimidazol-4-karboxylové kyseliny (německý zveřejňovací spis DE 3427136), čímž se získá 1,13 g (83 %) světle žluté sklovité látky.

Infračervené spektrum (dichlormethan): 3433, 3062, 2990, 1803, 1693, 1584, 1504, 1429, 1285, 1258 ’Η-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 9,50 (s), 9,37 (s), 7,86 (0,5H, d, J = 6,1), 7,56- 7,1 15 (10,5H, m), 7,48 (1H, s), 5,51 (d, J = 5,2), 5,48 (s), 4,87 - 4,41 (4H, m), 4,08 (s), 4,07 (s), 3,03 2,39 (2H, m), 1,46 (3H, d, J = 7,0) (3S)-3-{N-[2-(2-fenylethyl)imidazol—4-karbonyl]-L-alaninyl}amino-4-oxobutanová kyselina (sloučenina 33a, A)

Směs 1,0 g (2,10 mmol) (2R,S, 3S)-N²-[2-(2-fenylethyl)imidazol-4-karbonyl]-N-(tetrahydro2-benzyloxy-5-oxo-3-furanyl)-L-alaninamidu (sloučeniny 32a) a 10% palladia na aktivním uhlí (1,0 g) v 50 ml methanolu se míchá v atmosféře vodíku po dobu 4,5 hodiny. Výsledná směs se zfiltruje a zahustí, čímž se získá bezbarvá sklovitá látka. Překrystalováním ze směsi methanolu a diethyletheru se získá 510 mg (63 %) bezbarvé pevné látky o teplotě tání 127 °C.

[a]_D ²⁷ +16,4° (c = 0,5, methanol)

Infračervené spektrum (KBr): 3360, 3279, 2981, 1781, 1732, 1646, 1577, 1547 ’Η-NMR (perdeuteromethanol), hodnoty δ: 7,54 (1H, s), 7,29 - 7,12 (5H, m), 4,60- 4,47 (2H, m), 4,28 (1H, m), 3,01 (4H, s), 2,76 - 2,39 (2H, m), 1,43 (3H, 2 x d, J = 7,0, J = 7,0)

13.

C-NMR (perdeuteromethanol), hodnoty δ: 176,2, 176,0, 174,7, 174,6, 164,4, 164,3, 150,5, 141,9, 134,8, 129,5, 129,3, 127,3, 122,3, 98,8, 98,4, 52,3, 52,0, 50,3, 35,6, 31,2, 18,8, 18,7

Analýza pro Ci9H₂₂N₄O₅.H₂O:

vypočteno: 56,43 % C, 5,98 % H, 13,85 % N;

nalezeno: 56,78 % c, 5,70 % Η, 13,77 % N.

(3S)-3-{N-[2-(2-[4-trifluormethylfenyl]ethyl)imidazol-4-karbonyl]-L-alaninyl}amino-4oxobutanová kyselina (sloučenina 33b, C) se připraví způsobem popsaným v případě sloučeniny 33a, čímž se získá 612 mg (73 %) bezbarvé pevné látky o teplotě tání 120 až 124 °C.

[a]_D ²³+14,3° (c = 0,5, methanol)

Infračervené spektrum (KBr): 3287, 2985, 2937, 1782, 1732, 1646, 1579, 1547, 1327 ‘H-NMR (perdeuteromethanol), hodnoty δ: 7,56 (2H, d, J= 8,0), 7,54 (1H, s), 7,36 (2H, d, 50 J = 8,0), 4,60 - 4,48 (2H, m), 4,28 (1H, m), 3,08 (4H, m), 2,75 - 2,41 (2H, m), 1,43 (3H, d,

J = 7,0)

Analýza pro C₂oH₂₁F₃N₄05.0,5H₂0:

- 157CZ 298625 B6 vypočteno: 51,84 % C, 4,78 % H, 12,09 % N, 12,30 % F; nalezeno: 51,83 % C, 4,72 % H, 12,14 % N, 12,36 % F.

(3 S)-3-[N-(2-benzylimidazol-4“karbonyl)-L-alaninyl]amino-4-oxobutanová kyselina (slouče5 nina 33c, B) se připraví způsobem popsaným v případě sloučeniny 33a, čímž se získá 426 mg (64 %) bezbarvé pevné látky.

[a]_D ²³ +13,4° (c = 0,407, methanol)

Infračervené spektrum (KBr): 3260, 3150, 2980, 1779, 1727, 1649, 1573, 1547 'H-NMR (perdeuteromethanol), hodnoty δ: 7,58 (1H, s), 7,34 - 7,22 (5H, m), 4,59- 4,47 (2H, m), 4,28 (1H, m), 4,07 (2H, s), 2,74 - 2,41 (2H, m), 1,42 (3H, d, J = 6,7) ³C-NMR (perdeuteromethanol), hodnoty δ: 175,6, 175,5, 175,0, 164,6, 164,5, 150,1, 138,7, 135,3, 130,3, 129,9, 128,2, 122,9, 98,9, 98,5, 52,5, 52,2, 35,5, 35,1, 35,0, 19,0, 18,9

Analýza pro C18H20N4O5.H2O:

vypočteno: 55,37 % C, 5,68 % H, 14,35 % N;

nalezeno: 55,83 % C, 5,75 % H, 13,96 % N.

Hmotová spektrometrie (FAB, m/z): 373 (M⁺), 228, 185, 91 o

(«) (Bn = benzyl) (a) R = H (b) R = -CH₂-fenyl

5-benzylpyrrol-2-karboxylová kyselina (sloučenina 34b)

Směs 0,7 g (3,05 mmol) ethyl-5-benzylpyrrol-2-karboxylátu (Elder a kol., Synthetic Communications, 19, 763 - 767 (1989)), 20 ml ethanolu a 9,2 ml (9,2 mmol) 1M hydroxidu sodného se míchá a zahřívá k varu pod zpětným chladičem po dobu 3 hodin. Hlavní část ethanolu se odstraní a zbývající kapalina se naředí vodou, promyje se etherem, ochladí se v ledu a okyselí se koncentrovanou kyselinou chlorovodíkovou. Směs se extrahuje etherem. Smíchané extrakty se promyjí roztokem chloridu sodného, vysuší se síranem sodným a zahustí, čímž se získá 0,567 g (92 %) špinavě bílé pevné látky o teplotě tání 130 až 134 °C.

’Η-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 8,87 (2H, široký s), 7,37 - 6,95 (5H, m), 6,97 (1H, m), 6,07 (1H, m), 4,00 (2H, s) (2R,S, 3S)-N²-(pyrrol-2-karbonyl)-N-(tetrahydro-2-benzyloxy-5-oxo-3-furanyl)-L-alaninamid (sloučenina 35a)

Na roztok 756 mg (2,0 mmol) (2R,S, 3S)-N²-terc-butoxykarbonyl-N-(tetrahydro-2-benzyloxy5-oxo-3-furanyl)-L-alaninamidu (sloučeniny 14) v 8 ml suchého dichlormethanu se při teplotě 0 °C působí 8 ml kyseliny trifluoroctové po dobu 1 hodiny a poté se směs odpaří do sucha. Ke

-158CZ 298625 B6 zbytku se přidá suchý ether a směs se zahustí, čímž se získá viskózní olej. Tento olej se rozpustí v 10 ml dimethylformamidu. Přidá se 244 mg (2,2 mmol) pyrrol-2-karboxylové kyseliny (sloučeniny 34a), roztok se ochladí v ledové lázni a poté se přidá 0,78 g (6,0 mmol) N,N-diisopropylaminu, 0,54 g (4,0 mmol) 1-hydroxybenzotriazolu a 0,42 g (2,2 mmol) ethyldimethylamino5 propylkarbodiimid-hydrochloridu. Výsledná směs se míchá při teplotě 25 °C po dobu 17 hodin a poté se přidá 30 ml nasyceného vodného roztoku chloridu sodného. Směs se extrahuje třikrát vždy 20 ml ethylacetátu a smíchané organické extrakty se promyjí třikrát vždy 10 ml 5% vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a 10 ml roztoku chloridu sodného, vysuší se síranem hořečnatým a zahustí. Velmi rychlou chromatografii za použití 25% hexanu v ethylacetátu jako ío elučního činidla se získá 557 mg (75 %) směsi diastereomerů v poměru 1 : 1 ve formě bílé sklovité pevné látky o teplotě tání 85 až 90 °C.

Infračervené spektrum (KBr): 3288, 1789, 1665, 1629, 1557 a 1122 'H-NMR (perdeuterodimethylsulfoxid), hodnoty δ: 11,46 (1H, široký s), 8,55 (0,5H, d, J = 7,0), 8,30 (0,5H, d, J = 7,6), 8,06 (0,5H, d, J = 7,0), 8,04 (0,5H, d, J - 7,6), 7,36 - 7,30 (5H, m), 6,88 6,85 (2H, m), 6,10 - 6,07 (lH,m), 5,63 (0,5H, d, J = 5,0), 5,42 (0,5H, s), 4,72 (2H, q, J = 12,2),

4.74 - 4,25 (2H, m), 3,14-2,35 (2H, m), 1,29, 1,25 (3H, 2 x d, J = 7,2) (2R,S, 3 S)-N²-(5-benzylpyrrol-2-karbonyl)-N-(tetrahydro-2-benzyloxy-5-oxo-3-furanyl)L-alaninamid (sloučenina 35b) se připraví z 5-benzylpyrrol-2-karboxylové kyseliny (sloučeniny 34b) způsobem popsaným v případě sloučeniny 35a, s výtěžkem 65 %. Údaje jsou uvedeny pro jediný diastereomer.

^!H-NMR (perdeuterodimethylsulfoxid), hodnoty δ: 11,37 (1H, široký s), 8,27 (1H, d, J = 7,4), 7,93 (1H, d, J = 7,6), 7,33 - 7,16 (10H, m), 6,76 (1H, m), 5,82 (1H, m), 5,62 (1H, d, J= 5,2), 4,76 (1H, d, J = 12,0), 4,65 (1H, m), 4,62 (1H, d, J = 12,2), 4,47 (1H, m), 3,88 (2H, s), 2,77 (1H, dd, J = 9,0, 18,0), 2,5 (dd), 1,23 (3H, d, J = 7,0) (3S)-3-[N-(pyrrol-2-karbonyl)-L-alaninyl]amino-4-oxobutanová kyselina (sloučenina 36a, D)

Směs 612 mg (1,65 mmol) sloučeniny 35a, 40 ml methanolu a 10% palladia na uhlí (500 mg) se intenzivně míchá v atmosféře vodíku po dobu 4 hodin. Směs se zfiltruje přes nylonovou membránu (0,2 μΜ) a poté se zahustí. Zbytek se vyčistí velmi rychlou chromatografii za použití 5 až

10% methanolu v methylenchloridu jako elučního činidla, čímž se získá 223 mg (48 %) hemihydrátu sloučeniny 36a ve formě bílé pevné látky po překrystalování ze směsi ethylacetátu a etheru. V produktu jsou přítomné stopy rozpouštědla. Teplota tání produktu činí 96 až 100 °C.

Infračervené spektrum (KBr): 3381, 1774, 1729 (ethylacetát), 1632, 1558, 1523, 1123 'H-NMR (perdeuteromethanol), hodnoty δ: 6,94- 6,85 (2H, m), 6,17 (1H, dd, J = 3,8 a 2,6), 4,58 (035H, d, J = 3,94), 4,56 (0,5H, d, J = 4,24), 4,51 (1H, q, J = 7,16), 4,35 - 4,20 (1H, m),

2.74 - 2,40 (2H, m), 1,42 a 1,41 (3H, 2 x d, J = 7,13) (3S)-3-[N-(5-benzylpyrrol-2-karbonyl)-L-alaninyl]amino-4-oxobutanová kyselina (sloučenina 36b) se připraví s výtěžkem 41 % ze sloučeniny 35b způsobem popsaným pro sloučeninu 36a, přičemž se získá ve formě špinavě bílé pevné látky o teplotě tání 109 až 112 °C.

[cc]_D ²⁵ +6,3° (c = 0,3, methanol)

Infračervené spektrum (KBr): 3368, 1724, 1630, 1530, 1453, 1414, 1233 1049 ’Η-NMR (perdeuteromethanol), hodnoty δ: 7,25 - 7,11 (5H, m), 6,76 (1H, d, J = 3,5), 5,84 (1H, d, J = 3,5), 4,51 (1H, m), 4,43 (1H, q, J = 7,1), 4,23 (1H, m), 2,5 (2H, m), 1,35 (3H, d, J = 7,0)

-159CZ 298625 B6

Analýza pro Ci9H2iN₃O5.1,75H₂O: vypočteno: 56,64 % C, 6,13 % Η, 10,43 % N;

nalezeno: 56,34 % C, 5,72 % Η, 10,00 % N.

(Bn = benzyl) ío (2R,S, 3S)-l-(indol-2-karbonyl)-N-(tetrahydro-2-benzyloxy-5-oxo-3-furanyl)-L-prolinamid (sloučenina 38)

K roztoku 0,607 g (1,5 mmol) (2R,S, 3S)-l-terc-butoxykarbonyl-N-(tetrahydro-2-benzyloxy5-oxo-3-furanyl)-L-prolinamidu (sloučeniny 15) ve 4 ml dichlormethanu se při teplotě 0 °C přidají 4 ml kyseliny trifluoroctové. Směs se míchá při teplotě 0 °C po dobu 75 minut. Směs se zahustí, ke zbytku se přidá diethylether a ether se poté odstraní ve vakuu. Tento postup se dvakrát opakuje, čímž se získá žlutý olej, který se rozpustí ve 12 ml dimethylformamidu. K tomuto roztoku se poté přidá 0,78 ml (4,5 mmol) diisopropylethylaminu a následně 266 mg (1,65 mmol) indol-2-karboxylové kyseliny, 316 mg (1,65 mmol) l-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylkar20 bodiimid-hydrochloridu a 405 mg (3 mmol) hydroxybenzotriazolu. Směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 20 hodin a poté se vylije do roztoku chloridu sodného. Směs se extrahuje třikrát vždy 30 ml ethylacetátu. Smíchané organické extrakty se promyjí dvakrát vždy 60 ml nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a poté dvakrát vždy 60 ml roztoku chloridu sodného, vysuší se síranem hořečnatým, zfíltrují a zahustí. Zbytek se vyčistí sloupcovou chro25 matografíí za použití ethylacetátu jako elučního činidla, čímž se získá 518 mg (77 %) směsi diastereomerů.

Infračervené spektrum (KBr): 3314, 1780, 1677, 1609, 1524, 1435, 1406, 1344 'H-NMR (perdeuterodimethylsulfoxid), hodnoty δ: 11,58 (1H, m), 8,81 - 8,41 (1H, m), 7,71 6,67 (10H, m), 5,70 (d, J = 5,2), 5,48 (s), 4,89 - 4,29 (4H, m), 3,99 - 3,74 (2H, m), 3,20 - 2,44 (2H, m), 2,39- 1,77 (4H, m) (3S)-3-[l-(indol-2-karbonyl)-L-prolinyl]amino-4-oxobutanová kyselina (sloučenina 39)

Směs 478 mg (1,07 mmol) (2R,S, 3S)-l-(indol-2-karbonyl)-N-(tetrahydro-2-benzyloxy-5oxo-3-furanyl)-L-prolinamidu (sloučeniny 38), 10% palladia na uhlí (475 mg) a 150 ml methanolu se míchá v atmosféře vodíku po dobu 6 hodin. Výsledná směs se zfdtruje a zahustí, čímž se získá bezbarvá sklovitá látka. Překrystalováním ze směsi methanolu a diethyletheru se získá

202 mg (53 %) bezbarvé pevné látky o teplotě tání 135 až 138 °C.

[ct]_D ²⁵ -44° (c = 0,25, methanol)

Infračervené spektrum (KBr): 3287, 2977, 2879, 1781, 1725, 1716, 1667, 1662, 1600, 1529,

1441, 1346

-160CZ 298625 B6 'H-NMR (perdeuteromethanol), hodnoty δ: 7,65 (1H, d, J = 8,0), 7,44 (1H, d, J = 8,4), 7,22 (ÍH,m), 7,09 - 6,84 (2H, m), 4,62 (2H, m), 4,29 (ÍH,m), 4,15- 3,73 (2H, m), 2,74 - 1,72 (6H, m)

(40)

(4Z)

(Me = methyl, Bn = benzyl)

Methyl-2-(3,5-dihydro-7-methyl-4-oxo-4H-pyrrolo[3,2-d]pyrimidin-3-yl)acetát (sloučenina ío 40)

K míchanému roztoku 1,56 g (7,0 mmol) ethyl-3-[N-(dimethylamino)methylen]amino-4methylpyrrol-2-karboxylátu (Lim a kol., J, Orch. Chem., 44, str. 3826- 29 (1979)) v 60 ml suchého methanolu se přidá 1,25 g (14 mmol) čerstvě připraveného methylglycinátu. Výsledná směs se zahřívá na teplotu 70 °C. Po 18 hodinách a 42 hodinách zahřívá se přidají dvě další dávky methylglycinátu (1,25 g, 14,0 mmol). 24 hodin po posledním přidání se směs ochladí a zfiltruje. Filtrát se zahustí a zbytek se vyčistí velmi rychlou chromatografií za použití 2 až 5% methanolu v chloroformu jako elučního činidla, čímž se získá 0,54 g (35 %) bílé krystalické pevné látky o teplotě tání 233 až 235 °C (překrystalováno z ethylacetátu).

Infračervené spektrum (KBr): 3135, 2958, 1745, 1675, 1254 'H-NMR (perdeuterodimethylsulfoxid), hodnoty δ: 11,90 (1H, s), 8,07 (lH,s), 7,23 (1H, s), 4,83 (2H, s), 3,69 (3H, s), 2,16 (3H, s)

Analýza pro C^H) 1^03.0,1H₂O: vypočteno: 53,85 % C, 5,07 % H, 18,84 % N; nalezeno: 53,85 % C, 4,96 % H, 18,81 % N.

Hmotová spektroskopie (70eVE.I.): m/e 222, 221 (M⁺, 100 %), 189, 162, 133, 105

Sodná sůl 2-(3,5-dihydro-7-methyl-4-oxo-4H-pyrrolo[3,2-d]pyrimidin-3-yl)octové kyseliny (sloučenina 41)

K suspenzi 354 mg (1,6 mmol) sloučeniny 40 v 15 ml methanolu se přidá 4,8 ml 0,5N hydroxidu sodného a výsledná směs se míchá při teplotě 25 °C po dobu 1 hodiny. Reakční směs se zfiltruje, čímž se získá hemihydrát sloučeniny 41 (354 mg, 97 %) ve formě bílé krystalické látky o teplotě tání vyšší než 340 °C (překrystalováno z methanolu).

-161 CZ 298625 B6

Infračervené spektrum (KBr): 3461, 3143, 1676, 1666, 1605, 1415 'H-NMR (perdeuterodimethylsulfoxid), hodnoty δ: 11,63 (ÍH, s), 7,83 (ÍH, s), 7,11 (ÍH, d, J = 2,0), 4,24 (2H, s), 2,14 (3H, s)

Analýza pro C₉H8N₃O₃Na.0,5H₂O: vypočteno: 45,39 % C, 3,81 % H, 17,64 % N; nalezeno: 45,57 % C, 4,05 % Η, 17,39 % N.

io (2R,S, 3S)-2-(3,5-dihydro-7-methyl-4-oxo-4H-pyrrolo[3,2-d]pyrimidin-3-yl)-N-(tetrahydro-2-benzyloxy-5-oxo-3-furanyl)acetamid (sloučenina 42)

K suspenzi 344 mg (1,5 mmol) sodné soli 41 v 15 ml suchého dimethylformamidu se přidá 373 mg (1,95 mmol) ethyldimethylaminopropylkarbodiimid-hydrochloridu a 405 mg (3,0 mmol)

1-hydroxybenzotriazolu. Směs se nechá stát při teplotě 25 °C po dobu 1 hodiny, poté se přidá 437 mg (1,5 mmol) (2R,S, 3S)-N-allyloxykarbonyl-3-amino-2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuranu (Chapman, Biorg, Med. Chem. Lett., 2, str. 613 - 18 (1992)) a 25 mg (fenyl₃P)₂PdCl2 a následně se po kapkách přidá 0,6 ml (2,25 mmol) n-tributylcínhydridu. Výsledná směs se míchá při teplotě 25 °C po dobu 1 hodiny a poté se přidá 20 ml vody. Směs se extrahuje třikrát vždy

15 ml ethylacetátu a smíchané organické extrakty se promyjí 5 ml vody, vysuší se síranem hořečnatým a zahustí, čímž se získá směs diastereomerů. Odpařením vodné fáze a vyčištěním zbytku velmi rychlou chromatografií za použití 5% methanolu v chloroformu jako elučního činidla se získá další množství požadované látky. Celkem se získá 182 mg (31 %) sloučeniny 42 o teplotě tání 240 až 244 °C.

Infračervené spektrum (KBr): 3274, 1772, 1691, 1664, 1562 'H-NMR (perdeuterodimethylsulfoxid), hodnoty δ: 11,81 (ÍH, s), 8,85 (0,6H, d, J = 6,6), 8,72 (0,4H, d, J = 7,4), 7,98 (0,6H, s), 7,95 (0,4H, s), 7,40 - 7,30 (5H, m), 7,20 (ÍH, d, J = 2,2), 5,61 (0,4H, d, J = 5,0), 5,46 (s), 4,85 - 4,60 (m), 4,28 (m), 3,20 - 2,35 (2H, m), 2,16 (3H, s) (3S)-3-[2-(3,5-dihydro-7-methyl-4-oxo-4H-pyrrolo[3,2-d]pyrimidin-3-yl)-l-oxoethylamino]-4-oxobutanová kyselina (sloučenina 43)

Směs 131 mg (0,33 mmol) sloučeniny 42 v 50 ml methanolu a 10% palladia na uhlí (100 mg) se intenzivně míchá v atmosféře vodíku po dobu 2 hodin. Přidá se dalších 100 g katalyzátoru a směs se hydrogenuje po dobu dalších 2 hodin. Směs se zfíltruje přes nylonovou membránu (0,2 μΜ) a poté se zahustí. Zbytek se překrystaluje ze směsi methanolu a diethyletheru, čímž se získá 79 mg (78 %) sloučeniny 43 ve formě hygroskopické bílé pevné látky, tající za rozkladu při teplotě 222 až 226 °C.

[a]_D ³² = +0,5° (c = 0,02, methanol)

Infračervené spektrum (KBr): 3282, 1680, 1558, 1425, 1275 ‘H-NMR (perdeuteromethanol), hodnoty δ: 8,03 (ÍH, s), 7,18 (ÍH, d, J = 0,7), 4,79- 4,74 (2H, m), 4,63 - 4,58 (ÍH, 2 x d, J = 3,6), 4,36 - 4,25 (ÍH, m), 2,78 - 2,39 (2H, m),2,24 (3H, d, J = 0,7)

Analýza pro C^H^N^s. 1,4H₂O:

vypočteno: 47,10 % C, 5,12 % H, 16,90 % N; nalezeno: 47,00 % C, 4,79 % H, 16,59 % N.

-162CZ 298625 B6

Hmotová spektrometrie (FAB): m/e 307, 306 (M⁺), 244, 207, 190, 152, 115 (100 %)

(«) (47) (t-Bu = terc-butyl, Bn = benzyl) (a) X = O (b) X = H₂ ίο (1 S,9S)-terc-butyl-6,10-dioxooktahydro-9-(3-fenylpropionylamino)-6H-pyridazino[ 1,2-a][l,2]diazepin-l-karboxylát (sloučenina 44a)

K roztoku 690 mg (2,32 mmol) (lS,9S)-terc-butyl-9-amino-6,10-dioxooktahydro-6H-pyridazino[l,2-a][l,2]diazepin-l-karboxylátu (GB 2128984) v 16 ml dioxanu a 4 ml vody se při tep15 lote 0 °C přidá 292 mg (3,48 mmol) pevného hydrogenuhličitanu sodného a poté se po kapkách přidá 470 mg (2,78 mmol) 3-fenylpropionylchloridu. Směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 2 hodin a poté se přidá dalších 200 mg (2,38 mmol) hydrogenuhličitanu sodného a 100 mg (0,6 mmol) 3-fenylpropionylchloridu. Směs se míchá po dobu dalších 2 hodin při teplotě místnosti, naředí se 50 ml ethylacetátu, promyje se dvakrát vždy 25 ml nasyceného roztoku hydro20 genuhličitanu sodného, poté se vysuší síranem hořečnatým a zahustí. Zbytek se vyčistí velmi rychlou chromatografií za použití 0 až 50% ethylacetátu v chloroformu jako elučního činidla a poté se vykrystaluje triturováním s etherem, čímž se získá 860 mg (86 %) bílé pevné látky o teplotě tání 137 až 138 °C.

[<x]_D ²³ -95,1° (c = 0,549, dichlormethan)

Infračervené spektrum (KBr): 3327, 1736, 1677, 1664, 1536, 1422, 1156 'H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,24 (5H, m), 6,50 (1H, d, J = 7,5), 5,24 (1H, m), 4,90 (1H, m), 4,60 (1H, m), 3,44 (1H, m), 2,93 (2H, m), 2,84 (1H, m), 2,64 (1H, m), 2,54 (2H, m),

2,26 (2H, m), 1,70 (4H, m), 1,70 (9H, s)

Hmotová spektrometrie (FAB, m/z): 430 (M⁺ + 1), 374, 242, 105, 91 (1S, 9S)-terc-butyl-oktahydro-l 0-oxo-9-(3-fenylpropionylamino)-6H-pyridazino[ 1,2a] [1,2]diazepin-1-karboxylát (sloučenina 44b) se připraví z (lS,9S)-terc-butyl-9-amino-10-163CZ 298625 B6 oxo-6H-pyridazino[l,2-a[l,2]diazepin-l-karboxylátu (Attwood a kol., J. Chem, Soc. Perkin 1, str. 1011 - 19 (1986)) způsobem jako v případě sloučeniny 44a, čímž se získá 810 mg (81 %) bezbarvého oleje.

⁵ [®]d²³ -33,5° (c = 0,545, dichlormethan)

Infračervené spektrum (film): 3334, 2935, 1737, 1728, 1659, 1642 'H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,24 (5H, m), 6,75 (1H, d, J = 6,7), 5,27 (1H, m), 4,92 ίο (1H, m), 3,39 (1H, m), 3,03 (4H, m), 2,55 (3H, m), 2,33 (1H, m), 2,17 (1H, m), 1,80 (5H, m),

1,47 (9H, s), 1,39 (1H, m)

Hmotová spektrometrie (FAB, m/z): 416 (M⁺ + 1), 360, 211, 143, 97 (1S, 9S)-6,10-dioxooktahydro-9-(3-fenylpropionylamino)-6H-pyridazino[ 1,2-a][ 1,2]diazepin1-karboxylová kyselina (sloučenina 45a)

K roztoku 800 mg (1,863 mmol) (lS,9S)-terc-butyl-6,10-dioxooktahydro-9-(3-fenylpropionylamino)-6H-pyridazino[l,2-a][l,2]diazepin-l-karboxylátu (sloučeniny 44a) v 5 ml suchého dichlormethanu se při teplotě 0 °C přidá 5 ml kyseliny trifluoroctové. Roztok se míchá při teplotě místnosti po dobu 3 hodiny a poté se zahustí. Ke zbytku se přidá 10 ml suchého etheru a poté se ether odstraní ve vakuu. Tento postup se třikrát opakuje, čímž se získá krystalická pevná látka. Tato pevná látka se trituruje s etherem a zfíltruje, čímž se získá 590 mg (85 %) bílé krystalické pevné látky o teplotě tání 196 až 197,5 °C.

[cc]_D ²³ -129,5° (c = 0,2, methanol)

Infračervené spektrum (KBr): 3237, 1729, 1688, 1660, 1633, 1574, 1432, 1285, 1205 'H-NMR (perdeuteromethanol), hodnoty δ: 8,28 (1H, d, J = 7,4), 7,22 (5H, m), 5,32 (1H, dd, J = 5,9, 2,9), 4,75 (1H, m), 4,51 (1H, m), 3,50 (1H, m), 3,01 (1H, m), 2,91 (2H, m), 2,55 (2H, m), 2,29 (3H, m), 1,95 (2H, m), 1,71 (2H, m)

Analýza pro C19H23N3O5:

vypočteno: 61,12 % C, 6,21 % Η, 11,25 % N; nalezeno. 60,80 % C, 6,28 % Η, 10,97 % N.

Hmotová spektrometrie (FAB, m/z): 374 (M⁺ + 1), 242, 105, 91 (1 S,9S)-oktahydro-l 0-oxo-9-(3-fenylpropionylamino)-6H-pyridazino[ 1,2-a] [ 1,2]diazepin-lkarboxylová kyselina (sloučenina 45b) se připraví z (lS,9S)-terc-butyl-oktahydro-10-oxo-9(3-fenylpropionylamino)-6H-pyridazino[ 1,2-a] [ 1,2]diazepin-l-karboxylátu (sloučeniny 44b) způsobem popsaným v případě sloučeniny 45a, čímž se získá 657 mg (96 %) sloučeniny 45b jako krystalické pevné látky o teplotě tání 198 až 202 °C.

[a]_D ²³ -86,2° (c = 0,5, methanol)

Infračervené spektrum (KBr): 3294, 2939, 1729, 1645, 1620, 1574, 1453, 1214 ’Η-NMR (perdeuteromethanol), hodnoty δ: 7,92 (1H, d, J= 7,9), 7,20 (5H, m), 5,29 (1H, m), 4,90 (1H, m), 3,47 (lH,m), 3,08 (2H, m), 2,90 (2H, m), 2,55 (3H, m), 2,36 (lH,m), 1,81 (5H, m), 1,43 (2H, m)

Hmotová spektrometrie (FAB, m/z): 360 (M⁺ + 1), 211, 143, 91

-164CZ 298625 B6 [3 S, 2R,S, (1 S,9S)]-N-(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)-6,] 0-dioxooktahydro-9-(3fenylpropionylamino)-6H-pyridazino[ 1,2-a][ 1,2]diazepin-l-karboxamid (sloučenina 46a)

K roztoku 662 mg (1,773 mmol) (lS,9S)-6,10-dioxooktahydro-9-(3-fenylpropionylamino)6H-pyridazino[l,2-a[l,2]diazepin-l-karboxylové kyseliny (sloučeniny 45a) v 9 ml suchého dichlormethanu a 3 ml suchého dimethylformamidu se při teplotě místnosti přidá 30 mg bis(trifenylfosfin)palladiumchloridu a 568 mg (1,95 mmol) (3S, 2R,S)-3-allyloxykarbonylamino-2benzyloxy-5-oxotetrahydrofuranu (Chapman, Biorg. Med, Chem. Lett., 2, str. 613 - 18 (1992)) a ío poté se po kapkách přidá 1,19 g (4,09 mmol) tri-n-butylcínhydridu. Ke směsi se přidá 479 mg (3,546 mmol) 1-hydroxybenzotriazolu, směs se ochladí na teplotu 0 °C a poté se přidá 408 mg (2,128 mmol) l-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimid-hydrochloridu. Směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 3,25 hodiny, poté se naředí 50 ml ethylacetátu, promyje se dvakrát 20 ml zředěné kyseliny chlorovodíkové, dvakrát 20 ml nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a jednou roztokem chloridu sodného, poté se vysuší síranem hořečnatým a zahustí. Výsledný olej se vyčistí velmi lychlou chromatografií za použití 0 až 100% ethylacetátu v chloroformu jako elučního činidla, čímž se získá 810 mg (81 %) sloučeniny 46a ve formě směsi anomerů o teplotě tání 92 až 94 °C.

Infračervené spektrum (KBr): 3311, 1791, 1659, 1651, 1536 'H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,49, 6,56 (1H, 2d, J = 6,7, 7,8), 7,29 (10H, m), 6,37, 6,18 (1H, 2d, J = 7,7, 7,6), 5,56, 5,34, (1H, d, s, J= 5,2), 5,08- 4,47 (6H), 3,18 - 2,80 (5H), 2,62 - 2,28 (5H), 2,04 - 1,53 (5H)

Hmotová spektrometrie (FAB, m/z): 563 (M⁺ + 1), 328, 149, 91 [3 S, 2R,S, (1 S,9S)]-N-(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)oktahydro-10-oxo-9-(3fenylpropionylamino)-6H-pyridazino[l,2-a][l,2]diazepin-1-karboxamid (sloučenina 46b) se připraví ze sloučeniny 45b způsobem popsaným v případě sloučeniny 46a, čímž se získá 790 mg (96 %) sklovité látky o teplotě tání 58 až 60 °C.

Infračervené spektrum (KBr): 3316, 2940, 1793, 1678, 1641, 1523, 1453, 1120 'H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,28 (10H, m), 6,52, 6,42 (1H, 2d, J = 7,2, 7,1), 5,53, 5,44 (1H, d, s, J = 5,2), 5,35 (1H, m), 4,6 - 4,9, 4,34 (4H, m), 3,1 - 2,8 (6H, m), 2,6 - 2,1 (7H), 1,95- 1,05 (5H)

Hmotová spektrometrie (FAB, m/z): 549 (M⁺ + 1), 400, 310, 279, 91 [3 S, (1S,9S)]—3-(6,10-dioxooktahydro-9-(3-fenylpropionylamino)-6H-pyridazino[ 1,2a][l,2]diazepin-l-karboxamido)-4-oxobutanová kyselina (sloučenina 47a)

Směs 205 mg (0,364 mmol) [3S, 2R,S, (lS,9S)]-N-(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)45 6,10-dioxooktahydro-9-(3-fenylpropionylamino)-6H-pyridazino[ 1,2-a] [ 1,2]diazepin-l-yl karboxamidu (sloučeniny 46a), 10 % palladia na uhlí (200 mg) a 20 ml methanolu se míchá v atmosféře vodíku za atmosférického tlaku po dobu 5 hodin. Směs se zfiltruje a poté se zahustí, čímž se získá 154 mg (90 %) sklovité látky o teplotě tání 116 až 118 °C.

[a]_D ²³ -140° (c = 0,1, methanol)

Infračervené spektrum (KBr): 3323, (široký signál), 1783, 1731, 1658, 1539, 1455, 1425

-165CZ 298625 B6 'H-NMR (perdeuteromethanol), hodnoty δ: 7,21 (5H, m), 5,17 (1H, m), 4,73 (1H, m), 4,50 (2H, m), 4,23 (1H, m), 3,38 (1H, m), 3,06 (1H, m), 2,91 (2H, m), 2,73 - 2,18 (6H, m), 2,01 1,59 (5H, m)

Analýza pro C23H27N4O7 + H₂O:

vypočteno: 56,32 % C, 6,16 % Η, 11,42 % N; nalezeno: 56,29 % C, 6,11 % Η, 11,25 % N.

Hmotová spektrometrie (FAB, m/z): 473 (M⁺ + 1), 176, 149, 105, 91 [3S, (1S, 9S)]-3-(oktahydro-l 0-oxo-9-(3-fenylpropionylamino)-6H-pyridazino[ 1,2-a][1,2]diazepin-l-karboxamido)—4-oxobutanová kyselina (sloučenina 47b) se připraví ze sloučeniny 46b způsobem popsaným v případě sloučeniny 47a. Zbytek vyčistí velmi rychlou chromatografíí za použití 0 až 10% methanolu v chloroformu jako elučního činidla, čímž se získá 65 mg (52 %) sklovité látky o teplotě tání 87 až 90 °C.

[a]_D ²³ -167,0° (c = 0,1, methanol)

Infračervené spektrum (KBr): 3329, 2936, 1786, 1727, 1637

Ή-NMR (perdeuteromethanol), hodnoty δ: 7,23 (5H, m), 5,29 (1H, m), 4,83 (1H, m), 4,59 (1H, d, J = 3,6), 4,29 (1H, m), 3,3 - 3,0 (3H, m), 2,91 (2H, m), 2,70 - 2,34 (5H, m), 2,19 (2H, m), 1,75 (4H, m), 1,36 (2H,m)

Analýza pro C₂₃H₃oN₄06 + 0,5H₂O:

vypočteno: 59,09 % C, 6,68 % Η, 11,98 % N; nalezeno: 58,97 % C, 6,68 % Η, 11,73 % N.

Hmotová spektrometrie (FAB, m/z): 459 (M⁺ + 1), 310, 149, 105, 91

(Me = methyl)

	Ri	r₂	r₃
(a)	fenyl-CH₂-	H	(S)-methyl
(b)	fenyl-CH₂-	-CH₂-fenyl	H
(c)	fenyl-CH₂-	(CH₂)₂-fenyl	H
(d)	fenyl-CH₂-	n-butyl	H
(e)	fenyl-CH₂-	methyl	H
(f)	fenyl-CH₂-	fenyl	H
(g)	fenyl-CH₂-	H	H
(h)	fenyl-CH₂-	-CH₂-fenyl	(S)-methyl
(i)	fenyl-(CH₂)₂-	-CH₂-fenyl	H

-166CZ 298625 B6

Pyridony 48 se připraví způsobem, který popsali Damewood a kol., J. Med. Chem., 37, str. 3303 - 12 (1994).

Sloučenina 48d je nová.

3-benzyloxykarbonylamino-6-butylpyrid-2-on (sloučenina 48d) se izoluje jako krémová pevná látka o teplotě tání 158 až 160 °C.

Infračervené spektrum (KBr): 3382, 2953, 2930, 2866, 1729, 1643, 1524, 1468, 1202, 1044 ¹ H-NMR (perdeuterochloroform), hodnoty δ: 8,26 (1H, s), 7,72 (1H, d), 7,39 (5H, m), 6,00 (1H, d), 5,14 (2H, s), 2,41 (2H, t), 1,52 (2H, m), 1,24 (2H, m), 0,87 (3H, t)

Analýza pro C17H20N2O3:

vypočteno: 67,98 % C, 6,71 % H, 9,33 % N; nalezeno: 67,69 % C, 6,68 % H, 9,20 % N.

Hmotová spektrometrie (Cl - chemická ionizace): M⁺ = 300 (m) 28 %) (2S)-methyl-2-[3-benzyloxykarbonylamino-l,2-dihydro-2-oxo-l-pyridyl]propionát (sloučenina 49a)

K míchané směsi 2,58 g (10,58 mmol) 3-(benzyloxykarbonylamino)pyrid-2-onu (sloučeniny 48a) a 100 ml tetrahydrofuranu se při teplotě místnosti přidá 80% disperze natřiumhydridu v oleji (0,35 g, 11,64 mmol). Směs se míchá po dobu 10 minut. Výsledný roztok se při teplotě místnosti během 10 minut přidá k roztoku 2,5 g (10,58 mmol) 2(R)-methyl-2-((trifluormethan)sulfonyloxy)propionátu (Feenstra a kol., Tetrahedron Lett., 28, str. 1215 - 18 (1987)) v 5 ml tetrahydrofuranu. Směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 80 minut a poté se vylije do ethylacetátu. Směs se promyje dvakrát 1M kyselinou chlorovodíkovou, dvakrát vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a poté roztokem chloridu sodného. Vysuší se síranem hořečnatým a zahustí. Zbytek se vyčistí velmi rychlou chromatografií za použití 30% ethylacetátu v hexanu jako eluěního činidla, čímž se získá 2,945 g (84 %) bezbarvé pevné látky o teplotě tání 96 až 97 °C.

[a]_D ²⁰ -71,36° (c = 2,5, dichlormethan)

Infračervené spektrum (KBr): 3370, 1764, 1729, 1648, 1602, 1564, 1523, 1515, 1503, 1449, 1359,1203, 1064 'H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 8,04 (1H, d, J = 7,2), 7,86 (1H, s), 7,36 (5H, m), 6,98 (1H, dd, J = 7,1, J = 1,7), 6,30 (1H, t, J = 7,2), 5,46 (1H, q, J = 7,4), 5,20 (2H, s), 3,74 (3H, s), 1,66 (3H, d, J = 7,4)

Analýza pro Ci7Hi₈N₂O₅:

vypočteno: 61,81 % C, 5,49 % H, 8,48 % N; nalezeno: 61,49 % C, 5,51 % H, 8,41 % N.

Hmotová spektrometrie (FAB, m/z): 331 (M⁺ + 1), 299, 223, 196, 163, 91

Methyl-[6-benzyl-3-benzyloxykarbonylamino-l,2-dihydro-2-oxo-l-pyridyl]acetát (sloučenina 49b)

-167CZ 298625 B6

K míchané směsi 7,3 g (2,18 mmol) 6-benzyl-3-(benzyloxykarbonylamino)pyrid-2-onu (sloučeniny 48b) a 150 ml tetrahydrofuranu se při teplotě místnosti přidá 80% disperze natriumhydridu voleji (0,65 g, 26,2 mmol). Směs se míchá po dobu 10 minut, poté se přidá 2,5 ml (26,2 mmol) methyl-bromacetátu a směs se nechá stát po dobu 3 hodin. Výsledná směs se vylije do směsi ledu a 1M kyseliny chlorovodíkové. Výsledná pevná látka se odfiltruje a poté se rozpustí v dichlormethanu. Výsledný roztok se vysuší síranem hořečnatým, odbarví se aktivním uhlím a zahustí. Zbytek se chromatograficky vyčistí za použití 2 až 5% ethylacetátu v dichlormethanu jako elučního činidla, čímž se získá 7,2 g (81 %) bezbarvých krystalů o teplotě tání 117 až 119°C.

Infračervené spektrum (KBr): 3375, 1753, 1730, 1651, 1605, 1513, 1384, 1223, 1185, 1071 'H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 8,02 (1H, d, J = 7,5), 7,78 (1H, s), 7,31 (8H, m), 7,10 (2H, m), 6,15 (1H, d, J = 7,5), 5,20 (2H, s), 4,70 (2H, s), 3,88 (2H, s), 3,66 (3H, s)

Následující sloučeniny se připraví podobným způsobem:

Methyl-[3-benzyloxykarbonylamino-l,2-dihydro-2-oxo-6-fenylethyl-l-pyridyl]acetát (sloučenina 49c)

Výtěžek činí 97 %. Teplota tání produktu je 102 až 104 °C.

Infračervené spektrum (KBr): 3245, 3232, 1741, 1725, 1648, 1600, 1526, 1216 ’H-NMR (perdeuterodimethylsulfoxid), hodnoty δ: 8,45 (1H, s), 7,76 (1H, d, J = 7,6), 7,35 (10H, m), 6,15 (1H, d, J = 7,6), 5,15 (2H, s), 4,85 (2H, s), 3,68 (3H, s), 2,86 (4H, s)

Methyl-[3-benzyloxykarbonylamino-6-butyl-l,2-dihydro-2-oxo-l-pyridyl]acetát (sloučenina 49d)

Výtěžek činí 90 %. Teplota tání produktu je 111 až 112 °C.

Infračervené spektrum (KBr): 3393, 1738, 1731, 1645, 1598, 1517, 1225, 1208 'H-NMR (perdeuterodimethylsulfoxid), hodnoty δ: 8,39 (1H, s), 7,78 (1H, d, J = 7,7), 7,35 (5H, m), 6,17 (1H, d, J = 7,7), 5,15 (2H, s), 4,80 (2H, s), 3,67 (3H, s), 1,38 (6H, m), 0,89 (3H, t)

Methyl-[3-benzyloxykarbonylamino-l,2-dihydro-6-methyl-2-oxo-l-pyridyl]acetát (sloučenina 49e)

Sloučenina 49e se získá s výtěžkem 84 % v formě bezbarvé pevné látky. Teplota tání produktu činí 115 až 116 °C.

Infračervené spektrum (KBr): 3246, 1740, 1725, 1649, 1598, 1573, 1535, 1417, 1365, 1259,

1219,1193,1090,1068,1006 'H-NMR (perdeuterodimethylsulfoxid), hodnoty δ: 8,40 (1H, s), 7,75 (1H, d, J = 7,6), 7,38 (5H, m), 6,20 (1H, d, J = 7,6), 5,15 (2H, s), 4,85 (2H, s), 3,68 (3H, s), 2,26 (3H, s)

Methyl-[3-benzyloxykarbonylamino-l,2-dihydro-6-fenyl-2-oxo-l-pyridyl]acetát (sloučenina 49f)

Sloučenina 49f se získá s výtěžkem 67 % v formě bezbarvého oleje.

-168CZ 298625 B6

Infračervené spektrum (KBr): 3266, 1739, 1727, 1646, 1606, 1566, 1517, 1490, 1365, 1213, 1163, 1075 ’Η-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 8,15 (1H, d), 7,85 (1H, s), 7,39 (10H, m), 6,22 (1H, d), 5,22 (2H, s), 4,57 (2H, s), 3,74 (3H, s)

Methyl-[3-benzyloxykarbonylamino-l,2-dihydro-2-oxo-l-pyridyl]acetát (sloučenina 49g)

Sloučenina 49 g se získá s výtěžkem 80 % ve formě bezbarvé krystalické pevné látky o teplotě ío tání 110 až 111 °C.

Infračervené spektrum (KBr): 3385, 1745, 1726, 1650, 1601, 1512, 1502, 1378, 1369, 1358, 1215,1195, 1162, 1067 'H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 8,06 (1H, d), 7,84 (lH,s), 7,36 (5H, m), 6,88 (1H, dd), 6,27 (1H, t), 5,20 (2H, s), 4,68 (2H, s), 3,78 (3H, s)

Analýza pro C16H16N2O5:

vypočteno: 60,75 % C, 5,10 % H, 8,85 % N;

nalezeno: 60,65 % C, 5,15 % H, 8,85 % N.

Hmotová spektrometrie (FAB) (+) M+ = 317 (M + 1)

2(S)-methyl-2-methyl-[6-benzyl-(3-benzyloxykarbonylamino)-l,2-dÍhydro-2-oxo-l-pyri25 dyljacetát (sloučenina 49h) se připraví způsobem použitým k přípravě sloučeniny 49a, přičemž se získá s výtěžkem 58 % ve formě oleje.

[a]_D ²⁵ -25,0° (c = 1, dichlormethan)

Infračervené spektrum (KBr): 3381, 1736, 1650, 1604, 1513, 1218, 1190, 1068 'H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,97 (1H, d), 7,78 (1H, s), 7,4 - 7,14 (10H, m), 6,17 (1H, d), 5,19 (2H, s), 4,64 (1H, q), 3,98 (2H, s), 3,62 (3H, s), 1,31 (3H, d)

Methyl-[6_benzyl-l,2-dihydro-2-oxo-3-(2-fenylethoxy)karbonylamino-l-pyridyl]acetát (sloučenina 49i) se izoluje s výtěžkem 88 % ve formě bezbarvé pevné látky o teplotě tání 130 až 133 °C.

Infračervené spektrum (KBr): 3363, 1746, 1732, 1651, 1604, 1515, 1368, 1231, 1212, 1185 ’Η-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 8,00 (1H, d, J= 7,0), 7,68 (1H, s), 7,36 - 7,10 (10H, m), 6,15 (1H, d, J = 7,6), 4,7 (2H, s), 4,38 (2H, t, J = 7,0), 3,88 (2H, s), 3,67 (3H, s), 2,98 (2H, t, J = 7)

(«) w (Me = methyl, Ph = fenyl)

-169CZ 298625 B6

2(S)-methyl-2-[3-amino-l,2-dihydro-2-oxo-l-pyridyl]propionát (sloučenina 50a)

Směs 2,75 g (8,33 mmol) 2(S)-methyl-2[3-benzyloxykarbonylamino-l,2-dihydro-2-oxo-l5 pyridyljpropionátu (sloučeniny 49a), 100 ml methanolu a 10% palladia na uhlí (300 mg) se míchá v atmosféře vodíku po dobu 30 minut. Směs se zfiltruje a zahustí, čímž se získá 1,63 g (100 %) bezbarvé pevné látky.

’Η-NMR (perdeuterodimethylsulfoxid), hodnoty δ: 8,35 (1H, široký s), 7,46 (1H, d), 7,22 ίο (1H, d), 6,29 (1H, t), 5,22 (1H, q), 3,63 (3H, s), 1,55 (3H, d)

Následující sloučeniny se připraví podobným způsobem:

Methyl-[3-amino-6-benzyl-l,2-dihydro-2-oxo-l-pyridyl]acetát (sloučenina 50b) se získá s výtěžkem 100 % ve formě šedé pevné látky o teplotě tání 134 až 136 °C.

Infračervené spektrum (KBr): 3418, 3312, 1723, 1658, 1596, 1548, 1435, 1290, 1245, 1011 'H-NMR (perdeuterodimethylsulfoxid), hodnoty δ: 7,25 (5H, m), 6,45 (1H, d, J = 7,4), 5,92 (1H, d, J = 7,4), 5,00 (2H, s), 4,63 (2H, s), 3,88 (2H, s), 3,51 (3H, s)

Methyl-[3-amino-l,2-dihydro-2-oxo-6-fenylethyl-l-pyridyl]acetát (sloučenina 50c) se získá s výtěžkem 99 % ve formě viskózního oleje.

Infračervené spektrum (KBr): 3456, 341, 2953, 1745, 1649, 1600, 1548, 1219 'H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,25 (5H, m), 6,51 (1H, d, J = 7,4), 5,92 (1H, d, J = 7,4), 4,79 (2H, s), 3,77 (3H, s), 2,80 (4H, m)

Methyl-[3-amino-6-butyl-l,2-dihydro-2-oxo-l-pyridyl]-acetát (sloučenina 5Od) se získá s výtěžkem 97 % ve formě hnědé pevné látky o teplotě tání 75 až 77 °C.

Infračervené spektrum (KBr): 3437, 3342, 2955, 1745, 165, 1609, 1550, 1432, 1301, 1222, 1200 'H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 6,53 (1H, d, J = 6,8), 5,93 (1H, d, J = 6,8), 4,81 (2H, s), 3,77 (3H, s), 2,44 (2H, t), 1,45 (4H m), 0,93 (3H, t)

Methyl-[3-amino-l,2-dihydro-6-methyl-2-oxo-l-pyridyl]acetát (sloučenina 50e) se izoluje s výtěžkem 100 % ve formě bezbarvé krystalické pevné látky o teplotě tání 87 až 89 °C.

Infračervené spektrum (KBr): 342, 3326, 1735, 1647, 1600, 1549, 1434, 1407, 1383, 1366, 1225, 1209 'H-NMR (perdeuterodimethylsulfoxid), hodnoty δ: 6,40 (1H, d, J = 7,3), 5,93 (1H, d, J = 7,3),

4,86 (2H, s), 4,79 (2H, s), 3,67 (3H, s), 2,15 (3H, s)

Methyl-[3-amino-l,2-dihydro-2-oxo-6-fenyl-l-pyridyl]acetát (sloučenina 50f) se izoluje s výtěžkem 86 % ve formě šedé pevné látky o teplotě tání 207 až 209 °C.

Infračervené spektrum (KBr): 3473, 3345, 1750, 1644, 1600, 1536, 1443, 1366, 1309, 1212, 1184, 1156 ’Η-NMR (perdeuterodimethylsulfoxid), hodnoty δ: 7,30 (5H, m), 6,54 (1H, d), 6,03 (1H, d), 5,25 (2H, s), 4,49 (2H, s), 3,61 (3H, s)

-170CZ 298625 B6

Methyl-[3-amino-l,2-dihydro-2-oxo-l-pyridyl]acetát (sloučenina 50g) se získá ve formě bezbarvého oleje a použije se bezprostředně v dalším stupni.

2(S)-methyl-2-methyl-[3-amino-6-benzyl-l ,2-dihydro-2-oxo-l-pyridyl]acetát (sloučenina

50h) se izoluje s výtěžkem 69 % ve formě bezbarvého oleje.

Infračervené spektrum (film): 3354, 1743, 1646, 1600, 1548, 1494, 1455, 1309, 1268, 1227, 113 'H-NMR (perdeuterobenzen), hodnoty δ: 7,29 - 6,76 (5H, m), 5,86 (1H, d, J = 7,2), 5,51 (1H, d, J = 7,2), 4,43 (1H, q, J = 6,7), 3,69 (2H, s), 3,41 (2H, s), 3,36 (3H, s), 1,43 (3H, d, J = 6,7) íV'

:o,Mt

O Mi (so) («)

15	(a)	Ri fenyl-(CH₂)₂-CO-	(Me = r₂ H	methyl) r₃ (S)-methyl
	(b)	fenyHCH₂)2-CO-	-CH₂-fenyl	H
20	(c)	fenyl-(CH₂)₂-CO-	-(CH₂)₂-fenyl	H
	(d)	fenyl-(CH₂)₂-CO-	n-butyl	H
	(e)	fenyl-(CH₂)₂-CO-	methyl	H
	(f)	fenyl-(CH₂)₂-CO-	fenyl	H
	(g)	fenyl-(CH₂)₂-CO-	H	H
25	(h)	fenyl-(CH₂)₂-CO-	-CH₂-fenyl	(S)-methyl nebo (R,S-methyl)
	(i)	Acetyl-Tyr	-CH₂-fenyl	H
	(i)	fenyl-(CH₂)₂-SO₂-	-CH₂-fenyl	H
	(k)	fenyl-(CH₂)₂-OCO-	-CH₂-fenyl	H
	(1)	fenyl-(CH₂)₃-CO-	-CH₂-fenyl	H

2(S)-methyl-2-[ 1,2-dihydro-2-oxo-3-(3-fenylpropionyl)amino-l-pyridyl]propionát (sloučenina 51 a)

K míchané směsi 1,63 g (8,33 mmol) 2(S)-methyl-2-[3-amino-l,2-dihydro-2-oxo-l-pyri35 dyl]propionátu (sloučeniny 50a), 60 ml dioxanu, 15 ml vody a 1,54 g (16,7 mmol) hydrogenuhličitanu sodného se po kapkách přidá 1,5 g (9 mmol) 3-fenylpropionylchloridu. Směs se nechá po dobu 1 hodiny a poté se extrahuje ethylacetátem. Extrakty se promyjí vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, vysuší se síranem hořečnatým a zahustí. Výsledný červený olej se vyčistí velmi rychlou chromatografií, čímž se získá 2,54 g (93 %) oleje.

[cc]_D ²⁰ -68° (c = 1, dichlormethan)

Infračervené spektrum (dichlormethan): 3369, 1747, 1690, 1650, 1602, 1512, 1267, 1260, 1217 ’Η-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 8,41 (1H, dd), 8,36 (1H, s), 7,24 (5H, m), 7,02 (1H, dd), 6,32 (1H, t), 5,44 (1H, q), 3,75 (3H, s), 3,03 (2H, t), 2,70 (2H, t), 1,66 (3H, d)

-171 CZ 298625 B6

Hmotová spektrometrie (FAB) M+ = 329 (M + 1), 197, 165, 131, 110, 91

Následující sloučeniny se připraví podobným způsobem:

Methyl-[6-benzyl-l,2-dihydro-2-oxo-3-(3-fenylpropionyl)amino-l-pyridyl]acetát (sloučenina 5 lb) se izoluje s výtěžkem 93 % ve formě krystalů o teplotě tání 95 až 97 °C.

Infračervené spektrum (KBr): 3265, 1747, 1686, 1652, 1590, 1563, 1511, 1454, 1401, 1220,

1183,1133 ’Η-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 8,39 (1H, d, J = 7,7), 8,27 (1H, s), 7,21 (10H, m), 6,17 (1H, d, J = 7,7), 4,70 (2H, s), 3,89 (2H, s), 3,67 (3H, s), 3,02 (2H, m), 2,70 (2H, m)

Methyl-[l,2-dihydro-2-oxo-6-fenylmethyl-3-(3-fenylpropionyl)amino-l-pyridyl]acetát (sloučenina 51c) se izoluje s výtěžkem 81 % ve formě bezbarvých krystalů o teplotě tání 105 až 108 °C.

Infračervené spektrum (KBr): 3378, 1746, 1680, 1646, 1597, 1517, 1221 'H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 8,34 (1H, d, J = 7,7), 8,25 (1H, s), 7,23 (10H, m), 6,11 (1H, d, J = 7,7), 4,77 (2H, s), 3,78 (3H, s), 2,88 (8H, m)

Methyl-[6-butyl-l,2-dihydro-2-oxo-3-(3-fenylpropionyl)amino-l-pyridyl]acetát (sloučenina

5 ld) se izoluje s výtěžkem 88 % ve formě bezbarvých krystalů o teplotě tání 84 až 85 °C.

Infračervené spektrum (KBr): 3345, 2958, 2930, 1756, 1693, 1650, 1602, 1510, 1227, 1180, 1137 ’Η-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 8,34 (1H, d, J = 7,7), 8,22 (1H, s), 7,26 (5H, m), 6,12 (1H, d, J = 7,7), 4,80 (2H, s), 3,79 (3H, s), 3,03 (2H, t), 2,68 (2H, t), 2,50 (2H, t), 1,46 (4H, m), 0,95 (3H, t)

Methyl-[ 1,2-dihydro-6-methyl-2-oxo-3-(3-fenylpropionyl)amino-l-pyridyl]acetát (sloučeni35 na 5le) se izoluje s výtěžkem 100 % ve formě světle žlutého oleje.

Infračervené spektrum (film): 3264, 1745, 1691, 1644, 1587, 1566, 1518, 1495, 1400, 1215, 1183,1136 'H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 8,33 (1H, d, J = 7,6), 7,26 (5H, m), 6,13 (1H, d, J = 7,6), 4,83 (2H, s), 3,79 (3H, s), 3,03 (2H, m), 2,69 (2H, m), 2,28 (3H, s)

Methyl-[ 1,2-dihydro-2-oxo-6-fenyl-3-(3-fenylpropionyl)amino-l-pyridyl]acetát (sloučenina 5 lf) se izoluje s výtěžkem 99 % ve formě světle žlutého oleje.

Infračervené spektrum (film): 3365, 3299, 1751, 1689, 1643, 1600, 1563, 1519, 1493, 1419, 1370,1224 'H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 8,46 (1H, d, J = 7,7), 8,32 (1H, s), 7,32 (10H, m), 6,24 (1H, d, J = 7,7), 4,57 (2H, s), 3,73 (3H, s), 3,06 (2H, m), 2,72 (2H, m)

Methyl-[l,2-dihydro-2-oxo-3-(3-fenylpropionyl)amino-l-pyridyl]acetát (sloučenina 51g) se izoluje s výtěžkem 81 % ve formě oleje.

Infračervené spektrum (film): 3330, 1753, 1689, 1650, 1600, 1560, 1517, 1374, 1225, 1208

-172CZ 298625 B6 'H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 8,43 (1H, dd, J = 7,4, 1,7), 8,33 (1H, s), 7,28 (5H, m), 6,92 (1H, dd, J = 6,9, 1,7), 6,29 (1H, t), 4,67 (2H, s), 3,79 (3H, s), 3,04 (2H, m), 2,70 (2H, m)

Hmotová spektrometrie (FAB) (+) M + = 315 (M + 1)

2(S)-methyl-2-methyl-[6-benzyl-l,2-dihydro-2-oxo-3-(3-fenylpropionyl)amino-l-pyridyljacetát (sloučenina 5 Ih) se izoluje s výtěžkem 93 % ve formě bezbarvého oleje.

to [a]_D ³⁰ -19° (c = 1, dichlormethan)

Infračervené spektrum (film): 3354, 3313, 3028, 2950, 1745, 1687, 1645, 1600, 1567, 1514, 1454, 1225 ’Η-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 8,35 (1H, d, J = 7,5), 8,26 (1H, s), 7,27 (10H, m), 6,20 (1H, d, J = 7,5), 4,65 (1H, q, J = 6,8), 3,99 (2H, s), 3,71 (3H, s), 3,03 (2H, m), 2,68 (2H, m), 1,31 (3H, d, J = 6,8)

Methyl-[3-(N-acetyl-0-benzyl-L-tyrosin)amino-6-benzyl-l,2-dihydro-2-oxopyridyl]acetát (sloučenina 51 i)

Směs 100 mg (0,367 mmol) methyl-[3-amino-6-benzyl-l,2-dihydro-2-oxo-l-pyridyl]acetátu, 136 mg (0,367 mmol) terc-butoxykarbonyl-Tyr(benzyl)-OH, 1 ml dimethylformamidu, 0,25 ml (1,468 mmol) diizopropylethylaminu a 118 m (0,367 mmol) 2-(lH-benzotriazol-l-yl)-l,1,3,325 tetramethyluronium-hexaíluorfosfátu se míchá přes noc při teplotě místnosti. Směs se naředí ethylacetátem, promyje se dvakrát 1M kyselinou chlorovodíkovou, dvakrát vodným hydrogenuhličitanem sodným a jednou roztokem chloridu sodného, poté se vysuší síranem hořečnatým a zahustí. Zbytek se vyčistí velmi rychlou chromatografií za použití 10% ethylacetátu v dichlormethanu jako elučního činidla, čímž se získá 162 mg (70%) bezbarvého oleje. 160 mg (0,255 mmol) tohoto oleje se rozpustí v 1 ml dichlormethanu a poté se při teplotě 0 °C přidá 1 ml kyseliny trifluoroctové. Výsledný roztok se nechá v průběhu 40 minut dosáhnout teploty místnosti a poté se odpaří do sucha při teplotě 30 °C. Zbytek se rozpustí v dichlormethanu a poté se znovu odpaří do sucha. Tento postup se opakuje třikrát. Zbytek se rozpustí v 0,5 ml pyridinu a při teplotě 0 °C se přidá 0,03 ml (0,3 mmol) acetanhydridu. Výsledná směs se nechá dosáhnout tep35 loty místnosti a nechá se stát po dobu 3,5 hodiny. Poté se směs naředí ethylacetátem, promyje se dvakrát 1M kyselinou chlorovodíkovou a dvakrát vodným hydrogenuhličitanem sodným, vysuší se síranem hořečnatým a zahustí, čímž se získá 128 mg (86 %) bezbarvého oleje.

Infračervené spektrum (film): 3290, 1751, 1649, 1602, 1568, 1513, 1455, 1438,1375, 1224, 1179 'H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 8,78 (1H, s), 8,33 (1H, d, J = 7,6), 7,33 (8H, m), 7,11 (4H, m), 6,86 (2H, d, J = 8,5), 6,47 (1H, d, J = 7,6), 6,12 (1H, d, J = 7,6), 4,99 (2H, s), 4,85 (1H, m), 4,69 (2H, s), 3,87 (2H, s), 3,62 (3H, s), 3,08 (2H, m), 1,96 (3H, s)

Methyl-[6-benzyl-l,2-dihydro-2-oxo-3-(2-fenylethansulfonyl)amino-l-pyridyl]acetát (sloučenina 5 lj)

K míchané směsi 1,0 g (3,67 mmol) methyl-[3-amino-6-benzyl-2-oxo-l,2-dihydro-l-pyridyljacetátu (sloučeniny 49b), 15 ml dichlormethanu a 1,0 ml (7,34 mmol) triethylaminu se přidá

2-fenylethansulfonylchlorid (Zhong a kol., J, Am. Chem. Soc., 113, str. 2259 - 63 (1991)). Směs se uchovává přes noc a poté se vylije do ethylacetátu. Výsledná směs se promyje dvakrát vodným hydrogenuhličitanem sodným, třikrát 1M kyselinou chlorovodíkovou a poté roztokem chloridu sodného. Vysuší se síranem hořečnatým a zahustí. Výsledná světle hnědá pevná látka se vyčistí velmi rychlou chromatografií za použití 10% ethylacetátu v dichlormethanu jako elučního činidla, čímž se získá 1,25 g (77 %) světle žluté pevné látky o teplotě tání 92 až 94 °C.

-173CZ 298625 B6

Infračervené spektrum (KBr): 3181, 1737, 1646, 1595, 1565, 1454, 1241, 1220, 1150 ’Η-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,53 (1H, d, J= 7,5), 7,29 (10H,m), 6,10 (1H, d, 5 J = 7,5), 4,75 (2H, s), 3,89 (2H, s), 3,67 (3H, s), 3,34 (2H, m), 3,14 (2H, m)

Methyl-[6-benzyl-l,2-dihydro-2-oxo-3-(4-fenylbutyryl)amino-l-pyridyl]acetát (sloučenina 511) se izoluje s výtěžkem 74 % ve formě bezbarvých krystalů o teplotě tání 93 až 95 °C.

ío Infračervené spektrum (KBr): 3285, 1747, 1683, 1642, 1591, 1563, 1512, 1455, 1220, 1181 'H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 8,39 (1H, d, J = 7,6), 8,24 (1H, s), 7,2 (10H, m), 6,18 (1H, d, J = 7,6), 4,7 (2H, s), 3,90 (2H, s), 3,67 (3H, s), 2,69 (2H, t), 2,40 (2H, t), 2,04 (2H, m)

(si) («) (Me = methyl)

2(S)—2—[ 1,2-dihydro-2-oxo-3-(3-fenylpropionyl)amino-l -pyridyljpropionová kyselina (slou20 cenina 52a)

K míchanému roztoku 2,39 g (7,3 mmol) 2(S)-methyl-2-[l,2-dihydro-2-oxo-3-(3-fenylpropionyl)amino-l-pyridyl]propionátu (sloučeniny 51a) ve 30 ml methanolu se při teplotě 0 °C přidá 15 ml (15 mmol) 1M hydroxidu sodného. Teplota směsi se udržuje na uvedené hodnotě po dobu 2 hodin, poté se směs okyselí 15,1 ml 1M kyseliny chlorovodíkové a extrahuje se ethylacetátem. Extrakty se promyjí roztokem chloridu sodného, vysuší se síranem hořečnatým a zahustí, čímž se získá 1,98 g (87 %) bezbarvé pevné látky.

[a]_D ²⁰ -75° (c = 1, dichlormethan)

Infračervené spektrum (KBr): 3301, 1724, 1693, 1637, 1563, 1523, 1453, 1233, 1216, 765 ‘H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 8,47 (2H, m), 7,20 (5H, m), 7,03 (1H, d), 6,36 (1H, t), 5,35 (1H, q), 3,01 (2H, m), 2,70 (2H, m), 1,69 (3H, m)

Následující sloučeniny se připraví podobným způsobem:

[6-benzyl-l ,2-dihydro-2-oxo-3-(3-fenylpropionyl)amino-l-pyridyl]octová kyselina (sloučenina 52b) se izoluje s výtěžkem 100 % ve formě světle jantarového oleje.

Infračervené spektrum (film): 3291, 1738, 1686, 1644, 1591, 1554, 1519, 1496, 1454, 1403, 1215, 1182 'H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 8,44 (1H, d, J = 7,8), 7,21 (10H, m), 6,19 (1H, d,

J = 7,8), 4,71 (2H, s), 3,90 (2H, s), 2,99 (2H, m), 2,71 (2H, m)

-174CZ 298625 B6 [1,2-dihydro-2-oxo-6-fenylethyl-3-(3-fenylpropionyl)amino-l-pyridyl]octová kyselina (sloučenina 52c) se izoluje s výtěžkem 94 % ve formě béžové pevné látky o teplotě tání 214 až 216 °C.

Infračervené spektrum (KBr): 3289, 1740, 1680, 1640 ‘H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 9,24 (1H, s), 8,14 (1H, d, J = 7,7), 7,22 (10H, m), 6,11 (1H, d, J = 7,8), 4,78 (2H, s), 2,81 (8H, m) ío [6-butyl-l,2-dihydro-2-oxo-3-(3-fenylpropionyl)amino-l-pyridyl]octová kyselina (sloučenina 52d) se izoluje s výtěžkem 99 % ve formě hnědé pevné látky o teplotě tání 132 až 134 °C

Infračervené spektrum (KBr): 3286, 1739, 1676, 1641, 1584, 1555, 1535, 1455, 1414, 1249, 1227, 1204 ‘H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 8,42 (1H, d, J = 7,8), 8,37 (1H, s), 7,24 (5H, m), 6,19 (1H, d, J = 7,8), 4,82 (2H, s), 3,55 (1H, s), 3,00 (2H, t), 2,67 (2H, t), 2,53 (2H, t), 1,41 (4H, m), 0,94 (3H, t) [l,2-dihydro-6-methyl-2-oxo-3-(3-fenylpropionyl)amino-l-pyridyl]octová kyselina (sloučenina 52e) se izoluje s výtěžkem 100 % ve formě pevné látky o teplotě tání 159 až 161 °C.

Infračervené spektrum (KBr): 3335, 1731, 1686, 1642, 1536, 1516, 1430, 1420, 1401, 1222, 1195 'H-NMR (perdeuterodimethylsulfoxid), hodnoty δ: 9,21 (1H, s), 8,13 (1H, d, J = 7,6), 7,20 (5H, m), 6,15 (1H, d, J = 7,6), 4,77 (2H, s), 2,87 (2H,m), 2,70 (2H, m), 2,25 (3H, s) [ 1,2-dihydro-2-oxo-6-fenyl-3-(3-fenylpropionyl)amino- l-pyridyl]octová kyselina (slouče30 nina 52f) se izoluje s výtěžkem 100 % ve formě světle žluté pěny.

Infračervené spektrum (KBr): 3271, 1747, 1683, 1634, 1580, 1536, 1490, 1406, 1392, 1365, 1235,1219 ‘H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 8,52 (1H, d, J = 7,7), 7,31 (10H, m), 6,48 (2H, s), 6,30 (1H, d, J = 7,7), 4,60 (2H, s), 3,03 (2H, m), 2,71 (2H, m) [l,2-dihydro-2-oxo-3-(3-fenylpropionyl)amino-l-pyridyl]octová kyselina (sloučenina 52g) se izoluje s výtěžkem 94 % ve formě bezbarvé pevné látky o teplotě tání 195 až 197 °C.

Infračervené spektrum (KBr): 3324, 1724, 1693, 1644, 1569, 1555, 1512, 1427, 1370, 1240 ‘H-NMR (perdeuterodimethylsulfoxid), hodnoty δ: 9,31 (1H, s), 8,23 (1H, d, J = 6,8), 7,36 (1H, dd, J = 6,8, 1,71), 7,25 (5H, m ), 6,25 (1H, t), 4,66 (2H, s), 2,84 (4H, m)

2(R,S)-2-[6-benzyl-l,2-dihydro-2-oxo-3-(3-fenylpropionyl)amino-l-pyridyl]propionová kyselina (sloučenina 52h) se připraví hydrolýzou sloučeniny 51h ve vodném tetrahydrofuranu během 5 hodin při teplotě 40 °C, čímž se získá 95 % požadované sloučeniny ve formě žlutého oleje.

Infračervené spektrum (film): 3330, 1734, 1686, 1643, 1600, 1587, 1553, 1524, 1498, 1208

- 175CZ 298625 B6 ’Η-NMR (perdeuterodimethylsulfoxid), hodnoty δ: 9,29 (1H, s), 8,18 (1H, d, J = 7,5), 7,21 (10H, m), 6,22 (1H, d, J = 7,6), 4,82 (1H, q, J = 6,6), 4,08 (2H, m), 2,76 (4H, m), 1,05 (3H, d, J = 6,6) [3-(acetyl-Tyr(benzyl))amino-6-benzyl-l,2-dihydro-2-oxo-l-pyridyl]octová kyselina (sloučenina 52i) se izoluje s výtěžkem 93 % ve formě pěny.

Infračervené spektrum (KBr): 3302, 1731, 1646, 1603, 1562, 1512, 1454, 1428, 1379, 1231, 1178 'H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 9,48 (1H, s), 8,36 (1H, d, J = 7,6), 7,30 (8H, m), 7,10 (2H, m), 6,85 (2H, d, J = 8,3), 6,91 (2H, d, J = 8,3), 6,71 (1H, d, J = 7,6), 4,95 (1H, m), 4,90 (2H, s), 4,68 (2H, s), 3,92 (2H, s), 3,17 - 2,83 (2H,m), 1,92 (3H, s) [6-benzyl-l ,2-dihydro-2-oxo-3-(2-fenylethansulfonyl)amino-l-pyridyl]octová kyselina (sloučenina 52j) se izoluje s výtěžkem 100% ve formě bezbarvé pevné látky o teplotě tání 165 až 167 °C.

Infračervené spektrum (KBr): 3174, 1760, 1646, 1593, 1567, 1497, 1453, 1424, 1326, 1225,

1140,1127 'H-NMR (perdeuterodimethylsulfoxid), hodnoty δ: 13,09 (1H, s), 9,08 (1H, s), 7,30 (11H, m), 6,02 (1H, d), 4,68 (2H, s), 4,99 (2H, s), 3,29 (2H, m), 3,03 (2H, m) [6-benzyl-l ,2-dihydro-2-oxo-3-(2-fenylethoxy)karbonylamino-l-pyridyl]octová kyselina (sloučenina 52k) se připraví s výtěžkem 70 % hydrolýzou sloučeniny 49i během 1 hodiny při teplotě 60 °C.

Infračervené spektrum (dichlormethan): 1797, 1689, 1649, 1601, 1512, 734 ’Η-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 8,39 (1H, s), 8,03 (1H, d), 7,81 (1H, s), 7,33 - 7,07 (10H, m), 6,13 (1H, d, J= 7,8), 4,72 (2H, s), 4,33 (2H, t, J = 7,0), 3,86 (2H, s), 2,93 (2H, t,

J = 7,0) [6-benzyl-l,2-dihydro-2-oxo-3-(4-fenylbutyryl)amino-l-pyridyl]octová kyselina (sloučenina 521) se izoluje s výtěžkem 100 % ve formě bílé pěny o teplotě tání 159 až 161 °C.

Infračervené spektrum (KBr): 3373 - 3310, 1787, 1726, 1691, 1649, 1599, 1567, 1517, 1367, 1215 ‘H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 8,43 (1H, d, J= 7,7), 8,25 (1H, s), 7,37 - 7,09 (10H, m), 6,21 (1H, d, J = 7,7), 4,73 (2H, s), 4,15 (3H, s), 3,91 (2H, s), 2,67 (2H, t), 2,39 (2H, t), 2,02 (2H, m)

(«) (»)

176CZ 298625 B6

2(S), N-3(S) 2-[ 1,2-dihydro-2-oxo-3-(3-fenylpropionyl)amino-l-pyridyl]-N-(2-benzyloxy5-oxotetrahydrofuran-3-yl)propionamid (sloučenina 53a)

K míchané směsi 1,1 g (3,49 mmol) S(2)-2-[l,2-dihydro-2-oxo-3-(3-fenylpropionyl)amino-l5 pyridyljpropionové kyseliny (sloučeniny 52a), 1,02 g (3,49 mmol) 3(S), 2(R,S) 3-allyloxykarbonylamino-2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuranu (Chapman, Biorg. Med. Chem. Lett., 2, str,

613- 18 (1992), 55 mg bis(trifenylfosfin)palladium(II)chloridu, 35 ml dichlormethanu a 1 ml dimethylformamidu se po kapkách přidá 1,7 ml (6,3 mmol) tri-n-butylcínhydridu. Výsledná směs se míchá po dobu 5 minut a poté se přidá 946 mg (7 mmol) 1-hydroxybenzotriazolu. Směs ío se ochladí na teplotu 0 °C a poté se přidá 740 mg (3,84 mmol) l-(3-dimethylaminopropyl)-2ethylkarbodiimid-hydrochloridu. Směs se uchovává přes noc při teplotě místnosti a poté se vylije do ethylacetátu. Směs se promyje dvakrát 1M kyselinou chlorovodíkovou, dvakrát vodným hydrogenuhličitanem sodným a poté roztokem chloridu sodného. Směs se vysuší síranem hořečnatým a zahustí. Zbytek se trituruje s pentanem. Zbylá pevná látka se vyčistí velmi rychlou chro15 matografií za použití 40 až 60% ethylacetátu v hexanu jako elučního činidla, čímž se získá 1,28 g (73 %) bezbarvé pevné látky.

Infračervené spektrum (KBr): 1796, 1692, 1647, 1595, 1557, 1512, 1119 'H-NMR (perdeuterodimethylsulfoxid), hodnoty δ: 9,28, 9,26 (1H, 2 x s), 8,77, 8,69 (1H, 2 x d), 8,24, 8,20 (1H, 2 xdd), 7,20 (11H, m), 6,31, 6,26 (1H, 2 xt), 5,65 (0,5H, d), 5,46 (0,5H, d), 5,41, 5,28 (1H, 2 x q), 4,7 (2,5H, m), 4,24 (0,5H, t), 3,24 (2H, m), 2,80 (4H, m), 1,51, 1,46 (3H, 2 x d)

Následující sloučeniny se připraví podobným způsobem:

N(3(S)) 2-[6-benzyl-l,2-dihydro-2-oxo-3-(3-fenylpropionyl)amino-l-pyridyl]-N-{2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)acetamid (sloučenina 53b) se získá s výtěžkem 86 % ve formě pěny.

Infračervené spektrum (KBr): 3345, 3297, 1807, 1791, 1688, 1679, 1650, 1602, 1554, 1525, 1497,1453, 1372, 1257, 1119 'H-NMR (perdeuterodimethylsulfoxid), hodnoty δ: 9,25 (0,5H, s), 9,23 (0,5H, s), 8,75 (0,5H, d, J= 6,5), 8,67 (0,5H,d, J= 7,4), 8,18 (1H, 2d), 7,21 (15H, m), 6,07 (1H, 2d), 5,65 (0,5H, d,

J = 5,0), 5,38 (0,5H, s), 4,83 - 4,45 (4,5H, m), 4,19 (0,5H, m), 3,94, 3,83 (2H, m), 3,10 - 2,31 (6H, m)

N(3(S)) 2-[ 1,2-dihydro-2-oxo-6-fenylethyl-3-(3-fenylpropionyl)amino-l-pyridyl]-N-(2benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-4-yl)acetamid (sloučenina 53c) se získá s výtěžkem 74 % ve formě směsi anomerů.

'H-NMR (perdeuterodimethylsulfoxid), hodnoty δ: 9,71 (1H, d), 9,41 (0,5H, d), 9,25 (0,5H, d), 8,64 (1H, d, J = 7,7), 7,75 (15H, m), 6,61 (1H, 2d), 6,11 (0,5H, d), 5,93 (0,5H, s), 5,17 (5H, m), 4,77 (0,5H, m), 3,68 - 2,94 (2H, m), 3,32 (8H, m)

N(3(S)) 2-[6-butyl-l,2-dihydro-2-oxo-3-(3-fenylpropionyl)amino-l-pyridyl]-N-(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)acetamid (sloučenina 53d) se získá s výtěžkem 74 % ve formě směsi anomerů.

Infračervené spektrum (KBr): 3300, 1791, 169, 1645, 1597, 1566, 1546, 1514, 1454, 1417, 1378 ⁵H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 8,38 (1H, d, J = 7,7), 8,13 (1H, s), 7,30 (10H, m), 6,18 (1H, t), 5,47 (0,5H,d, J = 5,2), 5,43 (0,5H, s), 4,75 (4,5H, m), 4,38 (0,5H, m), 3,08- 2,35 (8H, m), 1,43 (4H, m), 0,95 (3H, t)

- 177CZ 298625 B6

N(3(S)) 2-[l,2-dihydro-6-methyl-2-oxo-3-(3-fenylpropionyl)amino-l-pyridyl]-N-(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)acetamid (sloučenina 53e) se získá s výtěžkem 67 % ve formě směsi anomerů.

Infračervené spektrum (KBr): 3282, 1774, 1667, 1651, 1596, 1561, 1556, 1498, 1254, 1254, 1236,1199, 1143 “H-NMR (perdeuterodimethylsulfoxid), hodnoty δ: 9,17 a 9,15 (1H, 2 x s), 8,89 (0,5H, d, J = 6,5), 8,73 (0,5H, d, J= 7,4), 7,25 (10H,m), 6,13 (1H, t), 5,64 (0,5H, d, J= 5,0), 5,45 (0,5H, s), 4,89 - 4,61 (4,5H, m), 4,26 (0,5H, m), 3,17 - 2,36 (6H, m), 2,23 a 2,15 (3H, 2s)

N(3(S)) 2-[l,2-dihydro-2-oxo-6-fenyl-3-(3-fenylpropionyl)amino-l-pyridyl]-N-(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)acetamid (sloučenina 53f) se získá s výtěžkem 73 % ve formě směsi anomerů.

Infračervené spektrum (KBr): 3296, 1792, 1691, 1643, 1595, 1561, 1514, 1489, 1420, 1373, 1230,1118 'H-NMR (perdeuterodimethylsulfoxid), hodnoty δ: 9,40, 9,36 (1H, 2s), 8,70 (0,5H, d, J = 7,6), 20 8,52 (0,5H, d, J = 7,5), 8,29 (1H, dd), 7,25 (15H, m), 6,20 (1H, d, J = 7,6), 5,61 (0,5H, d, J = 5,0),

5,28 (0,5H, s), 4,78 - 4,20 (5H, m), 3,12 - 2,24 (6H, m)

N(3(S)) 2-[ 1,2-dihydro-2-oxo-3-(3-fenylpropionyl)amino-l-pyridyl]-N-(2-benzyloxy-5oxotetrahydrofuran-3-yl)acetamid (sloučenina 53g) se získá s výtěžkem 70 % ve formě směsi anomerů.

Infračervené spektrum (KBr): 3336, 3290, 1791, 1691, 1646, 1595, 1582, 1556, 1518, 1454, 1376, 1351, 1150, 1122 'H-NMR (perdeuterodimethylsulfoxid), hodnoty δ: 9,26 (1H, 2s), 8,86 (0,5H, d, J = 6,4), 8,67 (0,5H,d, J = 7,5), 8,23 (1H, m), 7,40- 7,13 (llH,m), 6,24 (1H, 2t, J = 7,2), 5,61 (0,5H, d, J = 5,0), 5,44 (0,5H, s), 4,83 - 4,59 (2,5H, m), 4,25 (0,5H, m), 3,15 - 2,34 (2H, m), 2,94 - 2,70 (4H,m)

Analýza pro C27H27N3O6.H2O:

vypočteno: 63,90 % C, 5,76 % H, 8,28 % N; nalezeno: 63,70 % C, 5,68 % H, 8,22 % N.

Hmotová spektrometrie (FAB): M⁺ = 490 (M + 1)

2(R, S), N(3(S)) 2-[6-benzyl-l,2-dihydro-2-oxo-3-(3-fenylpropionyl)amino-l-pyridyl]-N(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)propionamid (sloučenina 53h se získá s výtěžkem 89 % ve formě směsi diastereomerů. Údaje jsou uvedeny pro jediný diastereomer.

Infračervené spektrum (film): 3356, 1788, 1677, 1645, 1602,1517, 1455, 1377, 1203, 1167, 1120 ‘H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 8,34 (1H, d, J = 7,6), 8,19 (1H, s), 7,38 - 7,13 (10H, m), 6,26 (1H, d, J = 7,6), 5,58 (1H, t), 5,31, 5,24 (1H, 2 x s), 4,62 (2H, 2q), 4,60 (1H, m), 4,27 (1H, m), 2,98, 2,68 (4H, 2m), 3,0 - 2,0 (2H, m), 1,42 (3H, d)

N(3(S)) 2-[6-benzyl-l,2-dihydro-2-oxo-3-(N-acetyl-O-benzyltyrosinyl)amino-l-pyridyl]N-(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)acetamid (sloučenina 53 i) se získá s výtěžkem 76 % ve formě směsi anomerů.

-178CZ 298625 B6

Infračervené spektrum (KBr): 1794, 1698, 1651, 1612, 1514, 1454, 1374, 1247, 1177, 1126 'H-NMR (perdeuterodimethylsulfoxid), hodnoty δ: 9,34, 9,31 (2 x 0,5H, 2s), 8,71 (1H, 2d), 8,38 (1H, m), 8,17 (1H, d), 7,48 - 6,88 (19H, m), 6,08 (1H, 2d), 5,65 (0,5H, d, J = 5,0), 5,40 (0,5H, s), 5,04 (2H, s), 4,68 (5,5H, m), 4,15 (0,5H, m), 3,95, 3,84 (2H, s + ABq), 3,20 - 2,40 (4H, m), 1,78 (3H, s)

N(3(S)) 2-[6-benzyl-l,2-dihydro-2-oxo-3-(2-fenylethansulfonyl)amino-l-pyridyl]-N-(2benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)acetamid (sloučenina 53j) se získá s výtěžkem 78 % ve ío formě směsi anomerů.

Infračervené spektrum (KBr): 3344, 1792, 1691, 1647, 1599, 1566, 1454, 1365, 1150, 1121, 973 ’Η-NMR (perdeuterodimethylsulfoxid), hodnoty δ: 9,02, 8,99 (1H, 2s), 8,80 (0,5H, d, J = 6,4), 15 8,70 (0,5H, d, J = 7,4), 7,26 (15H, m), 6,00 (1H, dd), 5,63 (0,5H, d, J = 5,0), 5,39 (0,5H, s), 4,68 (4,5H, m), 4,18 (0,5H, m), 3,90 (2H, m), 3,30 - 2,30 (6H, m)

N(3(S)) 2-[6-benzyl-l,2-dihydro-2-oxo-3-(2-fenylethoxy)karbonylamino-l-pyridyl]-N-(2benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)acetamid (sloučenina 53k) se získá s výtěžkem 78 % ve formě směsi anomerů.

Infračervené spektrum (KBr): 3386, 1794, 1726, 1650, 1603, 1518, 1366, 1214, 699 ’Η-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 8,03 (1H, široký d), 7,63, 7,61 (1H, 2 x s), 7,34 - 7,04 (15H, m), 6,21, 6,18 (1H, 2d), 5,44 (0,5H, d, J = 5,4), 5,37 (0,5H, s), 4,85, 4,83 (1H, 2d, J = 11,6, 11,5), 4,61 - 4,48, 4,32 (4H, 2m), 4,4 (2H, t), 4,08, 4,03 (2H, 2 široký s), 3,07 - 2,78 (3H, m), 2,47-2,30 (1H, m)

N(3(S)) 2-[6-benzyl-l,2-dihydro-2-oxo-3-(4-fenylbutyryl)amino-l-pyridyl]-N-(2-benzyl30 oxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)acetamid (sloučenina 531) se získá s výtěžkem 86 % ve formě bezbarvého oleje.

Infračervené spektrum (dichlormethan): 1797, 1689, 1649, 1601, 1512, 734 ’Η-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 8,42, 8,40 (1H, 2d, J = 7,6), 7,35 - 7,07 (15H, m), 6,21, 6,19 (1H, 2d, J = 7,6), 5,44 (0,5H, d), 5,37 (0,5H, s), 4,84, 4,81 (1H, 2d, J = 11,7, 11,4), 4,73 - 4,48, 4,34 (4H, 2m), 4,05 (2H, m), 3,05 - 2,63, 2,46 - 2,30 (6H, 2m), 2,01 (2H, m) o

(53) (54) (Bn = benzyl)

(a)	Ri fenyl-(CH2)2-CO-	r₂ H	r₃ (S)-methyl
45 (b)	fenyl-(CH₂)2-CO-	-CH₂-fenyl	H
(c)	fenyHCH₂)2-CO-	-(CH₂)2-fenyl	H
(d)	fenyHCH₂)₂-CO-	n-butyl	H

- 179CZ 298625 B6

(e)	fenyl-(CH₂)₂-CO-	methyl	H
(f)	fenyl—(CH₂)₂—CO—	fenyl	H
(g)	fenyl-(CH₂)2-CO-	H	H
(h)	fenyl-(CH₂)₂-CO-	-CH₂-fenyl	(R,S-methyl)
(i)	Acetyl-Tyr	-CH₂-fenyl	H
(i)	fenyl-(CH₂)₂-SO₂-	-CH₂-fenyl	H
(k)	fenyl-(CH₂)₂-OCO-	-CH₂-fenyl	H
(1)	fenyl-(CH₂)3-CO-	-CH₂-fenyl	H

ίο (3(S), N(2(S)) 3-(2-( l,2-dihydro-2-oxo-3-(3-fenylpropionylamino-l-pyridyl)propionylamino)-4-oxobutanová kyselina (sloučenina 54a, F)

Směs 1,28 g (2,5 mmol) (2(S), N-3(S)) 2-[l,2-dihydro-2-oxo-3-(3-fenylpropionyl)amino-lpyridyl]-N-(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)propionamidu (sloučeniny 53a), 140 ml methanolu, 60 ml ethylacetátu a 10% palladia na uhlí (1,4 g) se míchá v atmosféře vodíku. Po 2,5 hodinách se přidá dalších 300 mg katalyzátoru a v hydrogenaci se pokračuje po dobu další 1 hodiny. Směs se zfíltruje přes celit a poté se znovu zfíltruje přes nylonový filtr (0,2 μΜ) a zahustí. Zbylý olej se trituruje se směsí methanolu a etheru, čímž se získá 916 mg (87 %) bezbarvých krystalů o teplotě tání 198 až 200 °C.

[ct]_D ²⁸ -120° (c = 0,1, methanol)

Infračervené spektrum (KBr): 3330, 1794, 1688, 1644, 1583, 1556, 1515, 1427 'H-NMR (perdeuteromethanol), hodnoty δ: 8,28 (1H, d), 7,35 (1H, d), 7,20 (5H, m), 6,36 (1H, t), 5,49 (1H, q), 4,59 (1H, t), 4,25 (1H, m), 2,98, 2,74 (2 x 2H, 2 x m), 2,59 (2H, m), 1,57 (3H, d)

Analýza pro C₂iH₂3N3O₅.0,75H₂O: vypočteno: 59,09 % C, 5,78 % H, 9,84 % N;

nalezeno: 59,24 % C, 5,96 % H, 9,84 % N.

Hmotová spektrometrie (FAB) M⁺ = 414 (M + 1), 297, 165, 91

Následující sloučeniny se připraví podobným způsobem:

3(S) 3-(6-benzyl-l,2-dihydro-2-oxo-3-(3-fenylpropionyl)amino-l-pyridyl)acetylamino-4oxobutanová kyselina (sloučenina 54b, M) se izoluje s výtěžkem 59 % ve formě bezbarvých krystalů tajících za rozkladu při teplotě 115 °C.

Infračervené spektrum (KBr): 3440, 3297, 1718, 1646, 1598, 1565, 1526, 1496, 1260 ¹ H-NMR (perdeuteromethanol): 8,25 (1H, d, J = 7,7), 7,25 (10H, m), 6,15 (1H, 2d, vždy J = 7,7), 4,73 (2H, 2q), 4,59 (1H, m), 4,30 (1H, m), 3,95 (2H, s), 2,98 (2H, m), 2,75 (2H, m), 2,8 - 2,42 (2H, m)

Analýza pro C₂7H₂₇N3O₆.0,7H₂O: vypočteno: 64,58 % C, 5,70 % H, 8,37 % N; nalezeno: 64,51 % C, 5,63 % H, 8,38 % N.

Hmotová spektrometrie (FAB+) M+ = 490 (Μ + 1)

-180CZ 298625 B6

3(S) 3-(1,2-dihydro-2-oxo-6-fenylethyl-3-(3-fenylpropionyl)amino-l-pyridyl)acetylamino4-oxobutanová kyselina (sloučenina 54c) se izoluje s výtěžkem 46 % ve formě bílé pevné látky.

Infračervené spektrum (KBr): 3375, 1694, 1643, 1586, 1561, 1515, 1377, 1254, 1188, 1070 5 'H-NMR (perdeuteromethanol): 8,18 (1H, d, J = 7,8), 7,22 (10H, m), 6,15 (1H, d, J = 7,8), 4,75 (2H, s), 4,58 (1H, m), 4,30 (1H, m), 3,01-2,28 (10H, m)

Hmotová spektrometrie (FAB+) M+ = 504 (M + 1)

3(S) 3-(6-butyl-l,2-dihydro-2-oxo-3-(3-fenylpropionyl)amino-l-pyridyl)acetylamino-4oxobutanová kyselina (sloučenina 54d) se izoluje s výtěžkem 90 % ve formě bezbarvých krystalů o teplotě tání 120 až 125 °C

Infračervené spektrum (KBr): 3315, 1784, 1679, 1644, 1589, 1561, 1556, 1520, 1415, 1379, 1186 'H-NMR (perdeuteromethanol): 8,22 (1H, d, J = 7,8), 7,24 (5H, m), 6,22 (1H, d, J = 7,8), 4,80 (2H, m), 4,60 (1H, s), 4,28 (1H, m), 2,98 (2H, m), 2,72 (2H, m), 2,58 (4H, m), 1,48 (4H, m), 0,97 (3H,t,J = 7,l)

Analýza pro C₂4H₂9N₃O₆.0,5H₂O:

vypočteno: 62,06 % C, 6,51 % H, 9,05 % N;

nalezeno: 62,08 % C, 6,43 % H, 9,01 % N.

Hmotová spektrometrie (FAB+) M+ = 456 (M + 1)

3(S) 3-( 1,2-dihydro-6-methyl-2-oxo-3-(3-fenylpropionyl)amino-l-pyridyl)acetylamino-4oxobutanová kyselina (sloučenina 54e) se izoluje s výtěžkem 85 % ve formě bezbarvé pevné látky o teplotě tání 129 až 138 °C.

Infračervené spektrum (KBr): 327, 3294, 1710, 1695, 1682, 1554, 1525, 1379, 1272, 1240 'H-NMR (perdeuteromethanol), hodnoty δ: 8,19 (1H, d, J = 7,6), 7,19 (5H, m), 6,21 (1H, d, J = 7,6), 4,80 (2H, m), 4,59 (1H, m), 4,30 (1H, m), 2,98 (2H, m), 2,72 (2H, m), 2,80 - 2,40 (2H, m), 2,30 (3H, s)

Analýza pro C₂iH₂₂N₃O₆.H₂O: vypočteno: 58,46 % C, 5,84 % H, 9,74 % N;

nalezeno: 58,82 % C, 6,05 % H, 9,42 % N.

3(S) 3-(l,2-dihydro-2-oxo-6-fenyl-3-(3-fenylpropionyl)amino-l-pyridyl)acetylamino-4oxobutanová kyselina (sloučenina 54f) se izoluje s výtěžkem 73 % ve formě špinavě bílé pevné látky tající za rozkladu při teplotě 140 °C.

[cc]_D ²⁴ -8,5° (c = 0,1, methanol)

Infračervené spektrum (KBr): 3302, 1796, 1726, 1679, 1643, 1590, 1560, 1516, 1490, 1449, 1420,1398, 1376, 1231 'H-NMR (perdeuteromethanol): hodnoty δ: 8,36 (1H, d), 7,49 - 7,14 (10H, m), 6,27 (1H, dd), 4,54 (3H, m), 4,30 (1H, m), 3,0, 2,73 (2 x 2H, 2 x m), 2,7 - 2,29 (2H, m)

-181 CZ 298625 B6

3(S) 3-(1,2-dihydro-2-oxo-3-(3-fenylpropionyl)amino-l-pyridyl)acetylamino-4-oxobutanová kyselina (sloučenina 54g, G) se izoluje s výtěžkem 73 % ve formě pěny tající za rozkladu při teplotě 140 až 145 °C.

Infračervené spektrum (KBr): 3352, 3314, 1719, 1700, 1668, 1649, 1600, 1559, 1514, 1379, 1261 ’Η-NMR (perdeuteromethanol), hodnoty δ: 8,32 (ÍH, d, J = 7,5), 7,19 (6H, m), 6,34 (ÍH, t), 5,1 - 4,6 (3H, m), 4,32 (ÍH, m), 2,7 (6H, m) io

Analýza pro C₂₀H₂₁N₃O₆.0,6H₂O: vypočteno: 58,50 % C, 5,45 % H, 10,24 % N; nalezeno: 58,43 % C, 5,35 % H, 9,85 % N.

Hmotová spektrometrie (FAB+) M+ = 400 (M + 1) (3 (S), N(2(R,S)) 3-(2-(6-benzyl-l ,2-dihydro-2-oxo-3-(3-fenylpropionyl)amino-l —pyridyl)propionylamino)-4-oxobutanová kyselina (sloučenina 54h) se získá s výtěžkem 69 % ve formě bezbarvé pěny o teplotě tání 120 °C.

[a]_D ²⁰ -16,0° (c = 0,11, dichlormethan)

Infračervené spektrum (KBr): 3315, 1783, 1727, 1666, 1644, 1599, 1564, 1517, 1454, 1379 ’Η-NMR (perdeuteromethanol), hodnoty δ: 8,23 (ÍH, m), 7,27 (10H, m), 6,28 (ÍH, m), 4,84 (ÍH, m), 4,53 (ÍH, m), 4,22 (ÍH, m), 4,10 (2H, m), 2,96 (2H, m), 2,72 (2H, m), 2,39 (2H, m), 1,21 (3H, m)

Analýza pro C₂8H₂₉N₃O₆.1,25H₂O:

vypočteno: 63,93 % C, 6,03 % H, 7,99 % N; nalezeno: 63,98 % C, 5,85 % H, 7,86 % N.

Hmotová spektrometrie (FAB (+)) M+ = 504 (M + 1)

3(S) 3-(3-(2-acetyl-F-tyrosinyl)amino-6-benzyl-l,2-dihydro-2-oxo-l-pyridyl)acetylamino4-oxobutanová kyselina (sloučenina 541) se izoluje s výtěžkem 79 % ve formě bezbarvých krystalů tajících za rozkladu při teplotě 193 až 196 °C.

Infračervené spektrum (KBr): 3284, 1644, 1599, 1565, 1519, 1455, 1429, 1407, 1375, 1267,

1251 'H-NMR (směs perdeuterodimethylsulfoxidu a deuterochloroformu), hodnoty δ: 8,16 (ÍH, d, J = 7,7), 7,26 (5H, m), 7,03 (2H, d, J = 8,4), 6,61 (2H, d, J = 8,4), 6,03 (ÍH, d, J = 7,7), 4,58 (3H, m), 4,44 (ÍH, m), 4,13 (ÍH, m), 3,84 (2H, s), 3,07 - 2,30 (4H, m)

Analýza pro C₂₉H₃₀N₄O8.2H₂O: vypočteno: 58,19 % C, 5,72 % H, 9,36 % N; nalezeno: 58,11 % C, 5,63 % H, 9,29 % N.

Hmotová spektrometrie (FAB+) M+ = 563 (Μ + 1)

-182CZ 298625 B6

3(S) 3-(6-benzyl-l,2-dihydro-2-oxo-3-(2-fenylethansulfonyl)amino-l-pyridyl)acetylamino4-oxobutanová kyselina (sloučenina 54j) se izoluje s výtěžkem 85 % ve formě bezbarvé pevné látky o teplotě tání 102 až 105 °C.

⁵ [a]_D ²³-9,9° (c = 0,1, methanol)

Infračervené spektrum (KBr): 3452, 3328, 3155, 1719, 1679, 1645, 1694, 1567, 1453, 1425, 1357, 1307, 1225, 1148, 1132 ío ’Η-NMR (perdeuteromethanol), hodnoty δ: 7,52 (1H, d, J = 7,6), 7,33 (10H, m), 6,12 (1H, d, J = 7,6), 4,73 (2H, m), 4,58 (1H, d, J = 3,7), 4,34 (1H, m), 3,97 (2H, s), 3,29 (2H, m), 3,08 (2H,m), 2,75-2,37 (2H, m)

Analýza pro C₂6H₂7N₃O7S.1,7H₂O:

vypočteno: 56,14 % C, 5,51 % H, 7,55 % N; nalezeno: 56,20 % C, 5,49 % H, 7,29 % N.

Hmotová spektrometrie (FAB+) M+ = 526 (M + 1)

3(S) 3-(6-benzyl-l,2-dihydro-2-oxo-3-(2-fenylethoxy)karbonylamino-l-pyridyl)acetylamino-4-oxobutanová kyselina (sloučenina 54k) se izoluje s výtěžkem 54 % ve formě špinavě bílé pevné látky o teplotě tání 84 až 86 °C.

Infračervené spektrum (KBr): 3373 - 3310, 1787, 1726, 1691, 1649, 1599, 1567, 1517, 1367,

1215 'H-NMR (perdeuteromethanol), hodnoty δ: 7,93 (1H, široký d, J = 7,4), 7,37-7,18 (10H, m), 6,15 (1H, d, J = 7,4), 4,77 (1H, d, J = 3,7), 4,67 a 4,58 (2H, 2m), 4,35 (1H, m), 3,94 (2H, s), 2,98 (2H, t, J = 6,9), 2,76 - 2,39 (2H, m)

3(S) 3-(6-benzyl-l,2-dihydro-2-oxo-3-(4-fenylbutyryl)karbonylamino-l-pyridyI)acetylamino-4-oxobutanová kyselina (sloučenina 541) se izoluje s výtěžkem 50 % ve formě bílé pevné látky o teplotě tání 89 až 93 °C.

Infračervené spektrum (KBr): 3369-3302, 1678, 1645, 1594, 1565, 1517, 1379, 1258 ’Η-NMR (perdeuteromethanol), hodnoty δ: 8,25 (1H, d, J= 7,6), 7,37 - 7,18 (10H, m), 6,15 (1H, d, J = 7,4), 4,74 (2H, m), 4,60 (1H, m), 4,30 (1H, m), 3,97 (2H, s), 2,76 - 2,37 (2H, m), 2,67 (2H, t), 2,45 (2H, t), 1,98 (2H, m)

Analýza pro C₂₈H₂9N3O₆.1,5H₂O: vypočteno: 63,39 % C, 6,08 % H, 7,92 % N; nalezeno: 63,69 % C, 5,74 % H, 7,83 % N.

-183CZ 298625 B6

(t-Bu = terc-butyl, Ph = fenyl)

Terc-butyl-N-2-(3-benzyloxykarbonylamino-l,2-dihydro-2-oxo-l-pyridyl)acetyl-3-amino5-(2,6-dichlorbenzoyloxy)-4-oxopentanoát (sloučenina 56a)

Octová kyselina 55a (WO 93 21213) ve 2 ml tetrahydrofuranu se míchá při teplotě místnosti a přidá se 60 mg (0,448 mmol) 1-hydroxybenzotriazolu a 47 mg (0,246 mmol) dimethylaminoproío pyl-3-ethylkarbodiimid-hydrochloridu. Po uplynutí 5 minut se přidají 2 kapky vody a v míchání se pokračuje po dobu 20 minut. Přidá se 6 mg bís(trifenylfosfm)palladium(II)chloridu a poté roztok 103 mg (0,224 mmol) terc-butyl-3-(allyloxykarbonylamino)-4-oxo-5-(2,6-dichlorbenzoyloxy)pentanoátu (WO 93 16710) v 1 ml tetrahydrofuranu. V průběhu 1 hodiny se při teplotě místnosti po kapkách přidá 0,09 ml (0,336 mmol) tributylcínhydridu. Směs se míchá po dobu dalších 3 hodin a vylije se do ethylacetátu, promyje se 1M kyselinou chlorovodíkovou, vodným hydrogenuhličitanem sodným a roztokem chloridu sodného, vysuší se nad síranem hořečnatým a zahustí ve vakuu. Zbytek se trituruje s pentanem a supematant se odstraní. Zbylá pevná látka se vyčistí velmi rychlou chromatografií za použití 50% ethylacetátu v hexanu jako elučního činidla, čímž se získá 92 mg (63 %) sloučeniny uvedené v názvu ve formě bezbarvého oleje.

[a]o²⁶ -29,6° (c = 1,1, dichlormethan)

Infračervené spektrum (film): 3377, 3365, 3332, 3312, 1733, 1691, 1650, 1599, 1515, 1366, 1261, 1153, 1068, 747 'H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 8,09 (1H, d, J= 6,8), 7,84 (1H, s), 7,58 (1H, d, J = 8,3), 7,33 (8H, m), 7,02 (1H, dd, J = 6,9, 1,7), 6,33 (1H, t, J = 7,2), 5,20 (2H, s), 5,12 (2H, m), 4,89 (1H, dt), 4,65 (2H, m), 2,80 (2H, m), 1,38 (9H, s)

T erc-butyl-N-2-(6-benzyl-l ,2-dihydro-2-oxo-3-(3-fenylpropionyl)amino-l -pyridyl)acetyl30 3-amino-5-(2,6-dichlorbenzyloxy)-4-oxopentanoát (sloučenina 56b) se připraví způsobem popsaným v případě sloučeniny 56a, přičemž se získá sloučenina uvedená v názvu s výtěžkem 66 % ve formě bezbarvého oleje.

Infračervené spektrum (film): 3364, 3313, 1738, 1688, 1648, 1600, 1566, 1514, 1433, 1369,

1 254, 1152

-184CZ 298625 B6 'H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 8,40 (1H, d, J = 7,6), 8,30 (1H, s), 7,28 (13H, m), 6,20 (1H, d, J = 7,6), 5,12 (2H, q), 4,86 (1H, m), 4,65 (2H, q), 4,06 (2H, s), 3,07 - 2,61 (6H, m), 1,39 (9H, s)

(Só) (57)

R¹ R² R³ ř

<«) PhCtí^O^· Η H

O (b) PhCH^H/^ -CHj-Ph H (tBu = terc-butyl, Ph = fenyl)

N-2-(3-benzyloxykarbonylamino-l,2-dihydro-2-oxo-l-pyridyl)acetyl-3-amino-5-(2, βίο dichlorbenzoyloxy)-4-oxopentanová kyselina (sloučenina 57a, O)

210 mg (0,356 mmol) esteru 56a v 0,5 ml dichlormethanu se ochladí na teplotu 0 °C a přidá se 0,5 ml kyseliny trifluoroctové. Směs se míchá po dobu 30 minut, v jejichž průběhu se zahřeje na teplotu 20 °C. Roztok se odpaří do sucha za sníženého tlaku, znovu se rozpustí v dichlormethanu a zahustí. Tento postup se provádí třikrát. Zbytek se trituruje s ethylacetátem a naředí etherem, čímž se získá 162 mg (85 %) sloučeniny uvedené v názvu ve formě bezbarvé pevné látky, tající za rozkladu při teplotě 165 až 168 °C.

[oc]_D ²³ -38,8° (c = 0,1, methanol)

Infračervené spektrum (film): 3332, 3275, 1723, 1658, 1649, 1597, 1581, 1562, 1526, 1432, 1385, 1258, 1218, 1206 ’Η-NMR (perdeuterodimethysulfoxid), hodnoty δ: 8,96 (1H, d, J = 7,3), 8,34 (1H, s), 7,85 (1H, dd, J = 7,3), 7,58 (3H, m), 7,35 (5H, m), 6,29 (1H, t, J = 7,3), 5,26 (2H, m), 5,15 (2H, s), 4,69 (3H, m), 2,75 (2H, m)

Analýza pro C27H₂3N₃O9C1₂:

vypočteno: 53,66 % C, 3,84 % H, 6,95 % N;

nalezeno: 53,36 % C, 3,90 % H, 6,81 % N.

Hmotová spektrometrie (+ FAB): 604 (M⁺ + 1), 285, 241, 195, 173, 149, 91

N-2-(6-benzyl-l,2-dihydro-2-oxo-3-(3-fenylpropionyl)amino-l-pyridyl)acetyl-3-amino-535 (2,6-dichlorbenzoyloxy)-4-oxopentanová kyselina (sloučenina 57b, P) se připraví způsobem popsaným v případě sloučeniny 576a, přičemž se získá sloučenina uvedená v názvu s výtěžkem 78 % ve formě bezbarvých krystalů tajících za rozkladu při teplotě 116 až 120 °C.

-185CZ 298625 B6 [a]_D ²⁶ -41,1° (c = 0,1, methanol)

Infračervené spektrum (KBr): 3299, 1739, 1715, 1689, 1666, 1645, 1598, 1563, 1518, 1432, 1209, 1151 'H-NMR (perdeuterodimethylsulfoxid), hodnoty δ: 9,24 (1H, s), 8,88 (1H, d, J = 7,6), 8,18 (1H, d, J = 7,7), 7,60 (3H, m), 7,26 (10H, m), 6,06 (1H, d, J = 7,7), 5,23 (2H, ABq), 4,69 (3H, m), 3,93 (2H, s), 2,78 (6H, m) i o Analýza pro C₃₅H₃ iN₃O₈C 1₂ .H₂O:

vypočteno: 59,16 % C, 4,68 % H, 5,91 % N; nalezeno: 59,38 % C, 4,53 % H, 5,84 % N.

Hmotová spektrometrie (+ FAB): 694 (Cl = 35, 37), (M⁺ + 1), 692 (Cl = 35, 35) (M⁺ + 1)

CO2H (tBu = terc-butyl, Cbz = benzyloxykarbonyl) (3S, 4R,S) terc-butyl-N-(benzyloxykarbonyl)-3-amíno-4-(2-benzoxazolyl)-4-hydroxybutanoát (sloučenina 59)

K míchanému roztoku 250,2 mg (2,1 mmol) benzoxazolu v 10,5 ml bezvodého tetrahydrofuranu se při teplotě -78 °C v atmosféře dusíku po kapkách přidá 0,96 ml (2,2 mmol) 2,3M n-butyllithia v hexanech. Směs se míchá po dobu 20 minut při teplotě -78 °C a poté se přidá 594,0 mg

-186CZ 298625 B6 (2,3 mmol) MgBr₂0ethyl₂ v pevné formě. Výsledná heterogenní směs se zahřeje na teplotu -45 °C a míchá se po dobu 15 minut. Reakční směs se poté znovu ochladí na teplotu -78 °C a po kapkách se přidá roztok 644,6 mg (2,1 mmol) aldehydu 58 (Graybill a kol., Int. J. Peptide Protein Res., 44, str. 173 - 182 (1993) v 10,5 ml tetrahydrofuranu. Reakční směs se míchá při teplotě 5 78 °C po dobu 30 minut, zahřeje se na 0 °C na 1 hodinu a poté se míchá při teplotě místnosti po dobu 16 hodin. K reakční směsi se přilije 2,0 ml 5% hydrogenuhličitanu sodného a tetrahydrofuran se odstraní ve vakuu. Výsledný vodný zbytek se extrahuje čtyřikrát methylenchloridem. Smíchané extrakty se promyjí roztokem chloridu sodného, vysuší se síranem hořečnatým, zfiltrují a zahustí ve vakuu, čímž se získá 880,0 mg surového produktu. Velmi rychlou chromatografií za ío použití směsi ethylacetátu a hexanu v poměru 45 : 55 jako elučního činidla se získá 567,2 mg (63

%) sloučeniny uvedené v názvu ve formě oleje. Jedná se o směs diastereomerů na 4. uhlíku.

Infračervené spektrum (film): 3324, 2976, 1726, 1517, 1455, 1368, 1243, 1159, 1048, 747 ’Η-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,71 - 7,64 (1H, m), 7,52 - 7,48 (1H, m), 7,37 - 7,20 (7H, m), 5,91 (1H, široký d, J = 9,0), 5,79 (1H, d, J = 9,0), 5,41 - 4,78 (4H, m), 4,75 - 4,54 (1H, m), 2,91-2,51 (2H, m), 1,42 (9H, s), 1,37 (9H, s) (3S, 4R,S) terc-butyl-3-amino-4-(2-benzoxazolyl)-4-hydroxybutanoát (sloučenina 60)

K roztoku 189,0 mg (0,44 mmol) esteru 59 v 5,0 ml ethanolu se přidá 10% palladium na uhlí (20,5 mg) a směs se míchá v atmosféře vodíku po dobu 21 hodin. Směs se zfíltruje přes celit a rozpouštědlo se odpaří, čímž se získá 125,0 g (98 %) surového aminu 60 ve formě oleje, který se použije bez dalšího čištění.

’Η-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,73 - 7,64 (1H, m), 7,51 - 7,42 (1H, m), 7,35 - 7,22 (2H, m), 6,48 (3H, široký s), 5,58 (1H, d, J = 3,0), 5,27 (1H, d, J = 6,5), 4,23 - 4,05 (1H, m), 2,92 - 2,63 (2H, m), 1,36 (9H, s), 1,33 (9H, s) (3S, 4R,S) terc-butyl-N-(N-benzyloxykarbonyl-(S)-valinyl-{S)-alamnyl)-3-amino-4-(2-benzoxazolyl)-4-hydroxybutanoát (sloučenina 61)

K roztoku 261,4 mg (0,89 mmol) aminu 60, 286,9 mg (0,89 mmol) benzyloxykarbonyl-ValAla-OH (připraveného pomocí standardních postupů syntézy peptidů) a 120,3 mg (0,89 mmol) hydroxybenzotriazolu v 3,0 ml dimethylformamidu se při teplotě 0 °C přidá 179,2 mg (0,93 mmol) l-ethyl-3-[3-(dimethylamino)propyl]karbodiimid-hydrochloridu. Reakční směs se zahřeje na teplotu místnosti a míchá se po dobu 16 hodin. Poté se reakční směs naředí ethylacetátem a promyje se dvakrát 1M hydrogensíranem sodným, dvakrát nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, poté vodou a roztokem chloridu sodného. Organická vrstva se vysuší síranem hořečnatým, zfíltruje a zahustí ve vakuu, čímž se získá 494,8 surového produktu. Velmi rychlou chromatografií za použití směsi methylenchloridu a methanolu v poměru 95 : 5 jako elučního činidla se získá 480,9 mg (91 %) sloučeniny uvedené v názvu ve formě žluté pevné látky o teplotě tání 81 až 83 °C.

Infračervené spektrum (KBr): 3312, 2974, 1723, 1709, 1529, 1455, 1368, 1243, 1156, 747 ’Η-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,79 (0,5H, d, J = 8,0), 7,73 - 7,20 (9,5H, m), 6,15 (1H, t, J = 8,5), 5,74 (0,5H, široký d, J = 5,5), 5,45 (1H, široký d, J = 7,5), 5,28 - 5,20 (0,5H, m), 4,82 - 4,11 (3,5H, m), 4,78 - 4,55 (1H, m), 4,40 - 4,22 (1H, m), 2,95 - 2,51 (2H, m), 2,12 - 1,95 (lH,m), 1,45- 1,32( 12H,m), 1,11-0,81 (6H, m) ¹³C-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 173,14, 172,94, 171,82, 171,03, 170,78, 165,98, 165,45, 157,29, 157,17, 151,23, 151,10, 140,92, 140,82, 136,83, 136,79, 128,91, 128,52, 125,75, 124,97, 120,60, 120,40, 111,38, 81,82, 81,68, 70,27, 68,97, 67,44, 60,43, 50,74, 50,55, 49,18, 49,07, 36,87, 36,57, 32,37, 28,51, 19,88, 19,80, 18,53

-187CZ 298625 B6

Analýza pro C31H40N4O8.H2O: vypočteno: 60,57 % C, 6,89 % H, 9,11 % N;

nalezeno: 60,84 % C, 6,64 % H, 9,09 % N.

Hmotová spektrometrie (+ FAB): 597 (M⁺ + 1), 541,91 (3S) terc-butyl-N-(N-benzyloxykarbonyl-(S)-valinyl-(S)-alaninyl)-3-amino-4-(2-benzoxazolyl)-4-oxobutanoát (sloučenina 62)

100,3 mg (0,17 mmol) alkoholu 61 se rozpustí ve 2,0 ml methylenchloridu a přidá se 142,6 mg (0,34 mmol) Dess-Martinova činidla (Ireland a kol., J. Qrg. Chem,, 58, str. 2899 (1993), Dess a kol., J. Qrg. Chem., 48, str. 4155 - 41,56 (1983)). Výsledná směs se míchá po dobu 22 minut a poté se roztřepe mezi 10 ml směsi nasyceného thiosíranu sodného a nasyceného hydrogenuhliči15 tanu sodného v poměru 1 : 1 a 10 ml ethylacetátu. Výsledná organická fáze se promyje směsí nasyceného thiosíranu sodného a nasyceného hydrogenuhličitanu sodného v poměru 1:1, nasyceným hydrogenuhličitanem sodným a roztokem chloridu sodného. Organická fáze se vysuší síranem hořečnatým, zfiltruje a zahustí ve vakuu, čímž se získá 111,3 mg surového produktu. Velmi rychlou chromatografií za použití směsi methylenchloridu a methanolu v poměru 95 : 5 jako elučního činidla se získá 97,3 mg (96 %) sloučeniny uvedené v názvu ve formě oleje.

[cc]_D ²³ -11,74° (c = 0,95, dichlormethan)

Infračervené spektrum (dichlormethan): 3419, 2974, 1721, 1677, 1501, 1369, 1221, 1156 ’Η-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,89 - 7,84 (1H, m), 7,73 - 7,22 (10H, m), 5,98 (1H? d, J = 9,0), 5,72 (1H, m), 5,10 (2H, q, J = 12,5), 4,73 (2H, m), 4,20 (1H, dd, J = 7,0, 8,5), 3,30 (1H, dd, J = 5,0, 46,5), 3,03 (1H, dd, J = 5,5, 16,5), 2,18 - 1,97 (1H, m), 1,39 (3H, d, J = 7,0), 1,34 (9H, s), 0,93 (3H, d, J - 6,0), 0,90 (3H, d, J = 6,0)

C-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 186,46, 172,73, 171,90, 170,13, 157,17, 156,28, 151,16, 140,99, 136,99, 129,39, 129,08, 128,66, 128,59, 126,49, 123,06, 112,55, 82,73, 67,60, 60,84, 53,75, 49,41, 38,58, 32,05, 28,52, 19,85, 19,32, 18,51

Hmotová spektrometrie (+ FAB): 595 (M⁺ + 1), 539,91 (3S) N-(N-benzyloxykarbonyl-(S)-valinyl-(S)-alaninyl)-3-amino-4-(2-benzoxazolyl)-4-oxobutanoát (sloučenina 63, Q)

Roztok 95,0 mg (0,16 mmol) esteru 62 v 10,0 ml směsi methylenchloridu a kyseliny trifluoroctové v poměru 1 : 1 se míchá po dobu 1 hodiny v suché atmosféře dusíku. Roztok se poté zahustí ve vakuu, vyjme se etherem a znovu se zahustí. Tento postup se opakuje šestkrát, čímž se získá surový produkt ve formě špinavě bílé pevné látky. Velmi rychlou chromatografií za použití směsi methylenchloridu a methanolu v poměru 95 : 5 jako elučního činidla se získá 60,0 mg (69 %) sloučeniny uvedené v názvu ve formě bílé pevné látky. Produkt existuje v perdeuteromethanolu jako směs tří izomerů, tvořená ketonovou formou (jeden izomer, tvořící 44 %) a jeho acyloxy-ketalovou formou (dva izomery na 4. atomu uhlíku, tvořící 56 %). Teplota tání produktu činí 156 až 159 °C.

[a]_D ²⁶ -45,6° (c = 0,13, methanol)

Infračervené spektrum (KBr): 3440, 2967, 1713, 1703, 1638, 1531, 1427

-188CZ 298625 B6 ¹ H-NMR (perdeuteromethanol), hodnoty δ: 7,93 - 7,24 (9H, m), 5,59 (1H, široký t), 5,16 - 5,00 (2H, m), 5,0-4,78 (1H, m), 4,50- 4,22 (1H, m), 3,95-3,81 (1H, m), 3,11 (2H, d, J = 6,5), 3,05 - 2,92 (1H, m), 2,70 - 2,39 (1H, m), 2,08 - 1,89 (1H, m), 1,19 - 0,78 (9H, m)

Analýza pro C₂₇H₃oN₄0₈.0,5H₂0:

vypočteno: 59,22 % C, 5,71 % H, 10,23 % N; nalezeno: 59,48 % C, 5,36 % H, 10,17 % N. Hmotová spektrometrie (+ FAB): 539 (M⁺ + 1), 91

(a) R¹ = OCH₃, R² = H (b) R¹ = H, R² = OCH₃ i 5 (tBu = terc-butyl)

7-methoxybenzoxazol (sloučenina 65a)

Směs 2,62 g (15,5 mmol) 2-nitro-6-methoxyfenolu (EP 333176) a 10% palladia na uhlí 20 (130 mg) v 50,0 ml ethanolu se míchá v atmosféře vodíku po dobu 75 minut. Směs se zfiltruje

-189CZ 298625 B6 přes celit a bezprostředně poté se k ní přidá 32,0 mg p-toluensulfonové kyseliny a 6,45 ml (38,8 mmol) triethylorthoformiátu. Poté se směs zahřívá k varu pod zpětným chladičem v atmosféře dusíku. Po 20 hodinách se přidá 30,0 mg o-toluensulfonové kyseliny a 6,45 ml (38,8 mmol) triethylorthoformiátu. Po celkové době zahřívání 44 hodin se reakční směs nechá vychladnout a zahustí se ve vakuu. Výsledný zbytek se vyčistí velmi rychlou chromatografií za použití směsi ethylacetátu a hexanu v poměru 25 : 75 jako elučního činidla, čímž se získá 1,97 g (85 %) sloučeniny uvedené v názvu ve formě žluté pevné látky o teplotě tání 28 až 31 °C.

Infračervené spektrum (film): 1629, 1497, 1434, 1285, 1097 ‘H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 8,09 (1H, s), 7,40 (1H, d, J = 8,0), 7,28 (1H, t, J = 8,0), 6,89 (1H, d, J = 8,0), 4,02 (3H, s) ^I3C-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 152,84, 145,82, 142,50, 139,99, 125,75, 113,42,

108,80,56,97

Analýza pro ΟκΗγΝ^.Ο,ΙΙΤΟ: vypočteno: 63,65 % C, 4,81 % H, 9,29 % N; nalezeno: 63,43 % C, 4,88 % H, 9,05 % N.

Hmotová spektrometrie (+ FAB): 150 (M⁺ + 1)

4-methoxybenzoxazol (sloučenina 65b)

K suspenzi 2,00 g (14,8 mmol) 4-hydroxybenzoxazolu (Musser a kol., J. Med. Chem,, 30, str. 62 - 67 (1987)) v 80,0 ml acetonu se přidá 2,25 g (16,3 mmol) vysušeného uhličitanu draselného a poté 1,38 ml (22,2 mmol) jodmethanu. Reakční směs se zahřívá k varu pod zpětným chladičem v atmosféře dusíku po dobu 4,5 hodiny, poté se zfiltruje a zahustí ve vakuu, čímž se získá surový produkt. Výsledný zbytek se vyčistí velmi rychlou chromatografií za použití směsi ethylacetátu a hexanu v poměru 25 : 75 jako elučního činidla, čímž se získá 2,0 g (91 %) sloučeniny uvedené v názvu ve formě bílé krystalické pevné látky o teplotě tání 72 až 74 °C. Infračervené spektrum (KBr): 3089, 1619, 1610, 1503, 1496, 1322, 1275, 1090, 1071, 780, 741 ‘H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 8,02 (1H, s), 7,32 (1H, t, J = 8,0), 7,18 (1H, d, J = 8,0), 6,81 (1H, d, J = 8,0), 4,04 (3H, s)

Analýza pro C₈H₇NO₂:

vypočteno: 64,42 % C, 4,73 % H, 9,39 % N;

nalezeno. 64,40 % C, 4,84 % H, 9,31 % N.

Hmotová spektrometrie (m/z; El, ionizace nárazem elektronů): 149 (M⁺ + 1,100 %) (3S, 4R,S)-terc-butyl-N-(allyloxykarbonyl)-3-amino-4-hydroxy-4-(2-(7-methoxybenzoxa45 zolyl))butanoát (sloučenina 66a)

K míchanému roztoku 548,6 mg (3,68 mmol) 7-methoxybenzoxazolu 65a v 18,5 ml bezvodého tetrahydrofuranu se při teplotě -78 °C v atmosféře dusíku po kapkách přidá 2,47 ml 1,56M roztoku n-butyllithia v hexanech (3,86 mmol), za vzniku žlutě zbarveného roztoku. Směs se míchá při teplotě -78 °C po dobu 20 minut a poté se přidá 1,045 g (4,05 mmol) suchého MgBr₂0ethyl₂ve formě pevné látky. Výsledná heterogenní směs se zahřeje na teplotu -45 °C a míchá se po dobu 15 minut. Reakční směs se poté novu ochladí na teplotu -78 °C a po kapkách se přidá roztok 946,4 mg (3,68 mmol) (S)-allyloxykarbonyl-Asp(terc-butyl)H^lb v 18,5 ml tetrahydrofuranu.

-190CZ 298625 B6

Reakční směs se míchá při teplotě -78 °C po dobu 30 minut, zahřeje se na teplotu 0 °C a míchá se po dobu 1 hodiny. Výsledná homogenní reakční směs se zahřeje na teplotu místnosti a míchá se po dobu 16 hodin. K reakční směsi se přidá 3,5 ml 5% roztoku hydrogenuhličitanu sodného a poté se ve vakuu odstraní tetrahydrofuran. Výsledný vodný zbytek se extrahuje šestkrát methyl5 enchloridem. Smíchané extrakty se promyjí roztokem chloridu sodného, vysuší se síranem hořečnatým, zfiltrují a zahustí ve vakuu, čímž se získá 1,8 g surového produktu. Velmi rychlou chromatografii za použití směsi ethylacetátu a hexanu v poměru 40 : 60 se získá 1,21 g (81 %) sloučeniny uvedené v názvu ve formě oleje, jako směsi diastereoizomerů na uhlíku C-4.

ío Infračervené spektrum (dichlormethan): 3425, 2983, 1725, 1504, 1290, 1157, 1101 ‘H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,35 - 7,19 (2H, m), 6,89 - 6,81 (1H, m), 6,00 - 5,57 (2H, m), 5,32 - 5,05 (3H, m), 4,68- 4,35 (3H, m), 4,01 (3H, s), 2,86 - 2,59 (2H, m), 1,45 (9H, s), 1,41 (9H, s) ¹³C-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 171,18, 171,09, 165,80, 165,30, 156,71, 156,60, 145,65, 142,76, 142,71, 140,82, 140,72, 133,23, 125,81, 125,72, 118,41, 118,21, 113,07, 112,87, 108,95, 82,16, 70,28, 69,98, 66,52, 66,39, 57,03, 52,57, 52,29, 37,83, 36,86, 28,65

Analýza pro C2oH26N₂07.0,6H₂0:

vypočteno: 57,57 % C, 6,57 % H, 6,72 % N; nalezeno: 57,49 % C, 6,34 % H, 6,60 % N.

Hmotová spektrometrie (+ FAB): 407 (M⁺ + 1), 351, 307, 154 (3S, 4R,S)-terc-butyl-N-(allyloxykarbonyl)-3-amino-4-hydroxy-4-(2-(4-methoxybenzoxazolyl))butanoát (sloučenina 66b) se připraví způsobem popsaným v případě sloučeniny 66a, čímž se získá 1,29 g (26 %, 68 % vztaženo na zpětně izolovaný výchozí materiál) sloučeniny uvedené v názvu ve formě oleje, jako směsi diastereomerů na uhlíku C-4.

Infračervené spektrum (dichlormethan): 3400, 1725, 1625, 1505, 1369, 1354, 1281, 1263, 1226, 1158, 1092, 1048 ‘H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,34 - 7,24 (1H, m), 7,16 (1H, d, J = 8,2), 6,79 (1H, d,

J = 7,9), 6,00 - 5,50 (2H, m), 5,30 - 5,05 (3H, m), 4,70 - 4,35 (4H, m), 4,02 (3H, s), 2,90 - 2,45 (2H, m), 1,45-1,41 (9H,2xs)

Analýza pro C₂oH₂₆N₂0₇.0,4H₂0: vypočteno: 58,07 % C, 6,53 % H, 6,77 % N;

nalezeno: 58,09 % C, 6,41 % H, 6,63 % N.

Hmotová spektrometrie (+ FAB): 407 (M⁺ + 1, 88 %), 351 (100) (3S, 4R,S)-terc-butyl-N-(N-acetyl-(S)-(C)-terc-butyl-tyrosinyl-(S)-valinyl-(S)-alaninyl)-345 amino-4-hydroxy-4-(2-(7-methoxybenzoxazolyl))butanoát (sloučenina 67a)

K míchanému roztoku 481,9 mg (1,19 mmol) benzoxazolu 66a a 586,3 mg (1,30 mmol) acetylTyr(terc-butyl)-Val-Ala-OH v 3,5 ml methylenchloridu a 3,5 ml dimethylformamidu se přidá 18,0 mg bis(trifenylfosfm)palladium(II)chloridu a poté po kapkách 0,80 ml (2,96 mmol) tributyl50 cínhydridu. Přidá se 320,4 mg (2,37 mmol) hydroxybenzotriazolu a směs se ochladí na teplotu 0 °C. Přidá se 278,2 mg (1,42 mmol) l-ethyl-3-[3-(dimethylamino)propyl]karbodiimid-hydrochloridu, směs se nechá zahřát na teplotu místnosti a míchá se po dobu 16,5 hodiny. Reakční směs se naředí ethylacetátem a promyje se dvakrát 1M roztokem hydrogensíranu sodného, dva-191 CZ 298625 B6 krát nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, vodou a roztokem chloridu sodného. Organická vrstva se vysuší síranem hořečnatým, zfiltruje a zahustí ve vakuu, čímž se získá 2,0 g surového produktu. Velmi rychlou chromatografií za použití směsi methylenchloridu a methanolu v poměru 95 : 5 se získá 844,0 mg (94 %) sloučeniny uvedené v názvu ve formě bílé pevné látky o teplotě tání 205 °C.

Infračervené spektrum (bromid draselný): 3399, 3304, 2977, 1729, 1643, 1506, 1367, 1290, 1161 ’H-NMR (perdeuterodimethylsulfoxid), hodnoty δ: 8,24 - 7,78 (4H, m), 7,43 - 7,32 (2H, m), 7,23 (2H, d, J = 8,5), 7,16 - 7,07 (1H, m), 6,93 (2H, d, J = 8,5), 6,52, 6,40 (1H, 2 x d, J = 5,5, J = 5,0), 5,03, 4,78 - 4,49, 4,45 - 4,16 (5H, široký t, 2 x m), 4,05, 4,04 (3H, 2 x s), 3,08 - 2,35 (14H, m), 2,11 - 1,89 (1H, m), 1,83 (3H, s), 1,49-4,32, 1,15, 1,0-0,81 (27H, s,2xm,J = 7,0)

C-NMR (perdeuterodimethylsulfoxid), hodnoty δ: 175,55, 175,18, 173,88, 173,55, 173,05, 15 169,23, 157,28, 148,55, 146,16, 143,21, 136,63, 133,55, 128,87, 127,17, 115,78, 111,92, 84,02,

81,50, 71,40, 61,15, 60,05, 57,79, 53,39, 51,62, 43,76, 40,52, 34,58, 32,52, 31,60, 26,35, 23,11, 22,71,21,76

Analýza pro C39H₅₅N50io.O,5H₂0:

vypočteno: 61,40 % C, 7,40 % H, 9,18 % N; nalezeno: 61,43 % C, 7,31 % H, 9,07 % N.

Hmotová spektrometrie (+ FAB): 754 (M⁺ + 1), 698, 338, 267 (3 S, 4R,S)-terc-butyl-N-(N-acetyl-(S)-(O-terc-butyl-tyrosinyl-(S)-valinyl-(S)-alaninyl)-3amino-4-hydroxy-4-(2-(4-methoxybenzoxazolyl))butanoát (sloučenina 67b) se připraví způsobem popsaným v případě sloučeniny 67a, čímž se získá 1,05 g (94 %) sloučeniny uvedené v názvu ve formě jemného bílého prášku, který taje za rozkladu při teplotě 210 až 213 °C.

Infračervené spektrum (bromid draselný): 3284, 2977, 1736, 1691, 1632, 1536, 1505, 1452, 1392,1367, 1258, 1236, 1161, 1091 ¹ H-NMR (perdeuterodimethylsulfoxid), hodnoty δ: 8,20 -7,75 (4H, m), 7,40 - 7,10 (4H, m), 7,00 - 6,80 (3H, m), 6,45, 6,34 (1H, 2 x d, J = 5,3, J = 5,0), 5,00 - 4,10 (5H, m), 4,00, 3,99 (3H,

2 x s), 3,00 - 2,25 (4H, m), 1,95 (1H, m), 1,78 (3H, s), 1,39 - 0,80 (27H, m)

Analýza pro C3₉H₅₅N50io.O,5H₂0: vypočteno: 61,40 % C, 7,40 % H, 9,18 % N;

nalezeno: 61,58 % C, 7,38 % H, 8,91 % N.

Hmotová spektrometrie (+ FAB): 754 (M⁺ + 1, 30 %), 72 (100) (3S)-terc-butyl-N-(N-acetyl-(S)-(0-terc-butyl-tyrosinyl-(S)-valinyl-(S)-alaninyl)-3-amino4-hydroxy-4-{2-(7-methoxybenzoxazolyl)-4-oxobutanoát (sloučenina 68a)

K míchané suspenzi 641,0 mg (0,85 mmol) alkoholu 67a ve 46,0 ml methylenchloridu se přidá 1,082 g (2,55 mmol) Dess-Martinova činidla (Ireland a kol., J. Org, Chem., 58, str. 2899 (1993), Dess a kol., J. Org. Chem., 48, str. 4155 až 4156 (1983)). Výsledná směs se míchá po dobu 1 hodiny a poté se roztřepe mezi 86,0 ml směsi nasyceného thiosíranu sodného a nasyceného hydrogenuhličitanu sodného v poměru 1:1a 86,0 ml ethylacetátu. Výsledná organická fáze se postupně promyje směsí nasyceného thiosíranu sodného a nasyceného hydrogenuhličitanu sodného v poměru 1:1, nasyceným hydrogenuhličitanem sodným a roztokem chloridu sodného. Organická fáze se vysuší síranem hořečnatým, zfiltruje a zahustí ve vakuu, čímž se získá 660,0 mg surového produktu. Velmi rychlou chromatografií za použití směsi methylenchloridu a

-192CZ 298625 B6 methanolu v poměru 94 : 6 jako elučního činidla se získá 636,0 mg (100 %) sloučeniny uvedené v názvu ve formě bílé pevné látky o teplotě tání 209 °C.

[ct]_D ²⁴ -21,8° (c = 0,16, methanol)

Infračervené spektrum (bromid draselný): 3395, 3294, 2977, 1722, 1641, 1535, 1505, 1161 ‘H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 8,43 - 8,16 (1H, m), 7,97 - 7,62 (2H, m), 7,49 - 7,14 (3H, m), 7,08 - 6,95 (3H, m), 6,89 - 6,73 (2H, m), 5,81 - 5,68 (1H, m), 5,16 - 4,86 (2H, m), 4,53 ίο (1H, široký t), 4,03 (3H, s), 3,16- 2,84 (4H, m), 2,11 - 1,84 (4H, m), 1,46- 1,14 (21H, m),

0,92 - 0,78 (6H, m) ¹³C-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 186,28, 173,39, 171,90, 171,19, 171,03, 169,89, 156,43, 154,75, 146,32, 142,88, 140,983, 132,31, 130,54, 126,98, 124,73, 114,95, 111,42, 82,44, 78,71, 58,92, 57,20, 54,91, 53,47, 48,77, 39,43, 38,15, 32,79, 29,44, 28,60, 23,55, 20,27, 19,70, 19,34

Hmotová spektrometrie (+ FAB): 752 (M⁺ + 1), 696, 336, 265 (3S)-terc-butyl-N-(N-acetyl-(S)-(C)-terc-butyl-tyrosinyl-(S)-valinyl-(S)-alaninyl)-3-amino4-hydroxy-4-(2-(4-methoxybenzoxazolyl))-4-oxobutanoát (sloučenina 68b) se připraví způsobem popsaným v případě sloučeniny 68a, čímž se získá 420 mg (55 %) sloučeniny uvedené v názvu ve formě bílé pevné látky tající za rozkladu při teplotě 211 až 213 °C.

[a]_D ²⁴ -23,9° (c - 0,82, methanol)

Infračervené spektrum (bromid draselný): 3277, 3075, 1723, 1690, 1632, 1530, 1506, 1392, 1366,1269,1234, 1160, 1094 ’Η-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 8,15 (1H, široký s), 7,7 (2H, široký s), 7,46 (1H, t, J = 8,3), 7,24 (2H, d, J = 8,3), 7,10 (1H, široký s), 7,03 (2H, d, J = 8,3), 6,83 (3H, m), 5,74 (1H, q, J = 6,9), 5,00 (2H, m), 4,51 (1H, t, J = 7,0), 4,07 (3H, s), 3,20 - 2,95 (4H, m), 2,00 (4H, m), 1,42 (3H, d, J = 6,8), 1,35 (9H,s), 1,23 (9H, s), 0,86 (6H,d, J = 6,7)

Hmotová spektrometrie (+ FAB): 752 (M⁺ +1,7 %), 72 (100) (3S)-N-(N-acetyl-(S)-tyrosinyl-(S)-valinyl-(S)-alaninyl)-3-amino-4-(2-(7-methoxybenzoxazolyl))-4-oxobutanoát (sloučenina 69a, R)

Roztok 600,0 mg (0,80 mmol) esteru 68a v 65,0 ml směsi methylenchloridu a kyseliny trifluoroctové v poměru 1 : 1 se míchá po dobu 1 hodiny v suché atmosféře dusíku. Roztok se poté zahustí ve vakuu, vyjme se etherem a znovu se zahustí. Tento proces se šestkrát opakuje, čímž se získá surový produkt ve formě špinavě bílé pevné látky. Velmi rychlou chromatografií za použití směsi methylenchloridu a methanolu s gradientem 95 : 5 do 80 : 20 jako elučního činidla se získá

420,8 mg (83 %) sloučeniny uvedené v názvu jako hygroskopické bílé pevné látky. Tato sloučenina existuje v perdeuteromethanolu jako směs tří izomerů, kterou tvoří ketoforma (koncentrace 50 %) a její acyloxyketoforma (dva izomery na uhlíku C-4, koncentrace 50 %). Produkt taje za rozkladu při teplotě vyšší než 150 °C.

[oc]d²⁴ -23,2° (c = 0,17, methanol)

Infračervené spektrum (bromid draselný): 3300, 1715, 1658, 1650, 1531, 1517, 1204

-193CZ 298625 B6 'H-NMR (perdeuteromethanol), hodnoty δ: 7,46 - 7,19 (2H, m), 7,16-6,91 (3H, m), 6,70 - 6,59 (2H, m), 5,62 - 5,49 (1H, m), 5,00 - 4,72 (1H, nejasné m), 4,69 - 4,51 (1H, m), 4,49 - 4,08 (2H, m), 4,05- 3,89 (3H, m), 3,16-2,47 (4H, m), 2,05 - 1,78 (4H, m), 1,41-1,11, 1,05-0,70 (9H, 2 x m)

Analýza pro C₃iH₃₇N50io.3H₂0: vypočteno: 53,67 % C, 6,25 % H, 10,10 % N; nalezeno: 53,76 % C, 5,56 % Η, 10,28 % N.

ío Hmotová spektrometrie (+ FAB): 640 (M⁺ + 1), 435, 147 (3S)-terc-butyl-N-(N-acetyl-(S)-tyrosinyl-(S)-valinyl-(S)-alaninyl)-3-amino-4-(2-(4methoxybenzoxazolyl))-4-oxobutanoát (sloučenina 69b, S) se připraví způsobem popsaným v případě sloučeniny 69a, čímž se získá 252 mg (96 %) hygroskopické sloučeniny uvedené v názvu. Tato sloučenina existuje v perdeuteromethanolu jako směs tří izomerů, kterou tvoří ketoforma a její acyloxyketoforma (dva izomery na uhlíku C-4). V perdeuterodimethylsulfoxidu existuje tento produkt jako jediný izomer. Taje za rozkladu při teplotě 200 až 203 °C.

[ot]_D ²⁴ -38,0° (c = 0,23, methanol)

Infračervené spektrum (bromid draselný): 3289, 2968, 1718, 1713, 1658, 1634, 1548, 1547, 1506,1461, 1453, 1393, 1369, 1268, 1228, 1174, 1092 ’Η-NMR (perdeuterodimethylsulfoxid), hodnoty δ: 9,20 (1H, široký s), 8,71 (1H, d, J = 6,2), 8,10 (2H, m), 7,83 (1H, d, J = 8,7), 7,61 (1H, t, J = 8,2), 7,46 (1H, d, J = 8,2), 7,08 (3H, m), 6,65 (2H, d, J = 8,3), 5,50 (1H, q, J = 6,5), 4,50 (1H, m), 4,37 (1H, m), 4,20 (1H, m), 4,05 (3H, s), 3,09 - 2,77 (4H, m), 1,94 (1H, m), 1,79 (3H, s), 1,23 (3H, d, J = 7,0), 0,82 (6H, m)

Analýza pro C₃iH₃7N₅Oi₀.1,5H₂O:

vypočteno: 55,85 % C, 6,05 % H, 10,51 % N;

nalezeno: 55,21 % C, 5,69 % H, 10,13 % N.

Hmotová spektrometrie (+ FAB): 640 (M⁺ + 1, 22 %), 107 (100) (3S)-terc-butyl-N-(N-acetyl-(S)-tyrosinyl-(S)-valinyl-(S)-alaninyl)-3-amino-4-(2-(4methoxybenzoxazolyl))-4-oxobutanoát (sloučenina 69b, S) se připraví způsobem popsaným v případě sloučeniny 69a, čímž se získá 252 mg (96 %) hygroskopické sloučeniny uvedené v názvu. Tato sloučenina existuje v perdeuteromethanolu jako směs tří izomerů, kterou tvoří ketoforma a její acykloxyketoforma (dva izomery na uhlíku C-4). V perdeuterodimethyl40 sulfoxidu existuje tento produkt jako jediný izomer. Taje za rozkladu při teplotě 200 až 203 °C. [a]_D ²⁴ -38,0° (c = 0,23, methanol)

Infračervené spektrum (bromid draselný): 3289, 2968, 1718, 1713, 1658, 1634, 1548, 1547, 45 1506, 1461, 1453, 1393, 1369, 1268, 1228, 1174, 1092 ¹ H-NMR (perdeuterodimethylsulfoxid), hodnoty δ: 9,20 (1H, široký s), 8,71 (1H, d, J = 6,2), 8,10 (2H, m), 7,83 (1H, d, J = 8,7), 7,61 (1H, t, J = 8,2), 7,46 (1H, d, J = 8,2), 7,08 (3H, m), 6,65 (2H, d, J = 8,3), 5,50 (1H, q, J = 6,5), 4,50 (1H, m), 4,37 (1H, m), 4,20 (1H, m), 4,05 (3H, s),

3,09-2,77 (4H, m), 1,94 (1H, m), 1,79 (3H, s), 1,23 (3H, d, J = 7,0), 0,82 (6H, m)

Analýza pro C₃iH₃₇N50io.1,5H₂0: vypočteno: 55,85 % C, 6,05 % H, 10,51 % N;

-194CZ 298625 B6 nalezeno: 55,21 % C, 5,69 % Η, 10,13 % N.

Hmotová spektrometrie (+ FAB): 640 (M⁺ + 1, 22 %), 107 (100)

(tBu = terc-butyl, Cbz = benzyloxykarbonyl) (3 S)—terč—butyl—N—(allyloxykarbonyl)—3—amino-4—oxo-5—(1,2—dioxo—2—fenylethyloxy)penta10 noát (sloučenina 80)

K míchanému roztoku 2,17 g (6,20 mmol) (3S)-terc-butyl-N-(allyloxykarbonyl)-3-amino-5brom-4-oxopentanoátu (WO 93 16710) ve 30 ml dimethylformamidu se přidá 792 mg (13,6 mmol) fluoridu draselného a poté 1,02 g (6,82 mmol) benzoylmravenčí kyseliny. Směs se míchá po dobu 140 minut, přilije se 50 ml vody a poté se směs extrahuje dvakrát vždy 50 ml ethylacetátu. Smíchané organické extrakty se promyjí čtyřikrát vždy 50 ml vody a poté 50 ml roztoku chloridu sodného. Poté se vysuší síranem hořečnatým a zahustí se za vzniku oleje, který se vyčistí velmi iychlou chromatografií za použití 20 - 45% ethylacetátu v hexanu jako elučního činidla, čímž se získá 2,44 g (94 %) bezbarvého oleje.

-195CZ 298625 B6 [a]_D ²⁰ -35,0° (c = 1,41, dichlormethan)

Infračervené spektrum (film): 3359, 2981, 2938, 1752, 1740, 1726, 1712, 1512, 1369, 1285, 1177, 1053,991,939, 688 ’Η-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 8,15 (2H, m), 7,66 (ÍH, m), 7,53 (2H, m), 5,90 (2H, m), 5,33 (2H, m), 5,31 (ÍH, d, J = 16,9), 5,18 (ÍH, d, J = 16,9), 4,63 (3H, m), 3,03 (ÍH, dd, J = 17,3, 4,6), 2,74 (ÍH, dd, J = 17,3, 4,9), 1,44 (9H, s) io Hmotová spektrometrie (Cl): 420 (M⁺ + 1, 20 %), 364 (100) (3 S)-terc-butyl-N-(allyloxykarbonyl)-3-am ino-5-hydroxy-4-oxopentanoát (sloučenina 81)

Směs 2,40 g (5,71 mmol) esteru 80, 200 ml tetrahydrofuranu a 200 ml 1M vodného roztoku hyd15 rogenuhličitanu draselného se intenzivně míchá při teplotě místnosti po dobu 18 hodin. Vrstvy se oddělí a vodná část se extrahuje 100 ml ethylacetátu. Smíchané organické extrakty se promyjí 100 ml roztoku chloridu sodného, vysuší se síranem hořečnatým a zahustí. Zbytek se vyčistí velmi rychlou chromatografií za použití 10 až 60% ethylacetátu v hexanu jako elučního činidla, čímž se získá 1,48 g (90 %) světle žlutého oleje.

[a]_D ²⁰ -5,9° (c = 1,06, dichlormethan)

Infračervené spektrum (film): 3345, 2981, 2936, 1739, 1725, 1712, 1692, 1515, 1368, 1259, 1158,1051 ’Η-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 5,92 (2H, m), 5,30 (2H, m), 4,36 - 4,69 (5H, m), 3,05 (ÍH, dd, J = 17,4, 4,3), 2,93 (ÍH, t), 2,70 (ÍH, dd, J = 17,4, 4,9), 1,43 (9H, s)

Analýza pro Ci₈H₂iN₁O₆.0,25H₂O:

vypočteno: 53,51 % C, 7,43 % H, 4,80 % N; nalezeno: 53,61 % C, 7,18 % H, 4,71 % N.

Hmotová spektrometrie (Cl): 280 (M⁺ + 1, 87 %), 232 (100) (3S)-terc-butyl-N-(allyloxykarbonyl)-3-amino-5-(2,6-dichlorfenylmethoxy)-4-oxopentanoát (sloučenina 82)

Míchaná směs 1,44 g (5,01 mmol) alkoholu 81, 4,31 g (15,0 mmol) 2,6-dichlorbenzyljodidu (Abraham a kol., J. Chem. Soc„ str. 1605 - 1607 (1936)), 2,32 g (10,0 mmol) oxidu stříbrného a

25 ml dichlormethanu se zahřívá k varu pod zpětným chladičem po dobu 45 hodin. Směs se nechá vychladnout na teplotu místnosti, naředí se 50 ml vody a poté se extrahuje ethylacetátem (50 ml a 25 ml). Organická vrstva se promyje 50 ml vody a poté 50 ml roztoku chloridu sodného, vysuší se síranem hořečnatým a zahustí. Zbytek se vyčistí pomocí velmi rychlé chromatografíe za použití 10 až 100% ethylacetátu v hexanu jako elučního činidla, čímž se získá 1,65 g (74 %) bez45 barvého oleje.

[α]ι?° +8,8° (c = 1,13, dichlormethan)

Infračervené spektrum (film): 3339, 2980, 2935, 1724, 1712, 1503, 1438, 1368, 1246, 1156,

1106, 770 ‘H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,33 (2H, m), 7,22 (ÍH, dd), 5,92 (2H, m), 5,28 (2H, m), 4,87 (2H, m), 4,67 (ÍH, m), 4,58 (2H, široký d), 4,56 (ÍH, d, J = 16,9), 4,31 (ÍH, d, J = 16,9), 3,04 (ÍH, dd, J = 16,7, 4,5), 2,77 (ÍH, dd, J = 16,7, 4,9), 1,40 (9H, s)

-196CZ 298625 B6

Analýza pro C₂oH₂5C1₂Ni06.0,25H₂0: vypočteno: 53,28 % C, 5,70 % H, 3,11 % N;

nalezeno: 53,15 % C, 5,52 % H, 2,98 % N.

Hmotová spektrometrie (Cl): 446 (M⁺, 27 %), 390 (100) (3R,S)-terc-butyl-N-[N-fenylmethyloxykarbonylvalinyl-alanÍnyl]-3-amino-5-(2,6-dichlorfenylmethoxy)-4-oxopentanoát (sloučenina 83a)

K míchanému roztoku 637 mg (1,98 mmol) N-fenylmethyloxykarbonylvalinylalaninu ve 40 ml tetrahydrofuranu a 1 ml vody se přidá 379 g (1,98 mmol) l-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimid-hydrochloridu a 486 mg (3,60 mmol) 1-hydroxybenzotriazolu. Tato směs se míchá po dobu 15 minut a poté se přidá 802 mg (1,80 mmol) etheru 82 a přibližně 5 mg bis(trifenylfosfin)palladium(II)chloridu. Poté se v průběhu 20 minut po kapkách přidá 785 mg (725 ml, 2,70 mmol) tributylcínhydridu, výsledný roztok se míchá po dobu 3,75 hodiny a poté se přilije 50 ml 1M kyseliny chlorovodíkové. Směs se extrahuje dvakrát ethylacetátem. Smíchané organické extrakty se promyjí 1M kyselinou chlorovodíkovou , dvakrát vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, vodou a poté roztokem chloridu sodného, vysuší se síranem hořečna20 tým a zahustí. Zbytek se vyčistí pomocí velmi rychlé chromatografie za použití 10 až 30% ethylacetátu v dichlormethanu jako elučního činidla, čímž se získá 941 mg (79 %) světle žluté pevné látky o teplotě tání 148 až 152 °C.

Infračervené spektrum (bromid draselný): 3287, 3070, 1730, 1691, 1641, 1536, 1369, 1289,

1247,1156 'H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,33 (8H, m), 7,23 (1H, dd), 6,61 (1H, široký d), 5,42 (1H, široký d), 5,11 (2H, s), 4,85 (3H, m), 4,50 (1H, m), 4,40 (1H, d, J= 16,9), 4,26 (1H, d, J = 16,9), 4,02 (1H, m), 2,99 (1H, dd, J = 16,8, 4,7), 2,73 (1H, dd, J = 16,8, 5,0), 2,09 (1H, m), 1,37 (12H, m), 0,96 (3H, d, J = 6,9), 0,91 (3H, d, J = 6,8)

Analýza pro C3₂H4iCl₂N₃O8.0,25H₂O:

vypočteno: 57,25 % C, 6,23 % H, 10,57 % Cl, 6,26 % N;

nalezeno: 57,18 % C, 6,23 % H, 10,58 % Cl, 5,95 % N.

Hmotová spektrometrie (+ FAB): 667 (M⁺ 1, 1 %), 666 (3), 159 (25), 91 (100) (3R,S)-terc-butyl-N-[(N-acetyl-O-terc-butyltyrosinyl)valinyl-alaninyl]-3-amino-5-(2,6dichlorfenylmethoxy)-4—oxopentanoát (sloučenina 83b) se připraví způsobem popsaným v případě sloučeniny 83a, čímž se získá 554 mg (64 %) bezbarvé pevné látky o teplotě tání 184 až 186 °C.

Infračervené spektrum (bromid draselný): 3282, 3075, 1736, 1690, 1633, 1536, 1508, 1366, 1236, 1161 'H-NMR (perdeuterodimethylsulfoxid), hodnoty δ: 8,49 (1H, d), 8,14 (1H, d), 8,08 (1H, d), 7,84 (1H, d), 7,43 (3H, m), 7,14 (2H, d), 6,83 (2H, d), 4,71 (2H, s), 4,51 (2H, m), 4,36 (2H, dd), 4,17 (2H, m), 2,93 (1H, m), 2,74 (1H, m), 1,94 (1H, m), 1,74 (3H, s), 1,37 (9H, s), 1,23 (12H, m), 0,83 (6H, m)

Analýza pro C₃₂H4iCl₂N3O₈.0,25H₂O:

vypočteno: 57,25 % C, 6,23 % H, 10,57 % Cl, 6,26 % N;

nalezeno: 57,18 % C, 6,23 % H, 10,58 % Cl, 5,95 % N.

-197CZ 298625 B6

Hmotová spektrometrie (+ FAB): 793 (M⁺, 1, 4 %), 737 (5), 681 (1), 178 (40), 159 (45), 136 (100), 107 (40)

Hmotová spektrometrie (- FAB): 792 (20), 791 (40), 447 (100) (R,S)-N-[N-(fenylmethyloxy)karbonyl-valinyl-alaninyl]-3-amino-5-(2,6-clichlorfenylmethoxy)-4-oxopentanová kyselina (sloučenina 84a, V) ίο K míchanému roztoku 918mg (1,38 mmol) esteru 83a ve 20 ml dichlormethanu se přidá 5 ml kyseliny trifluoroctové. Směs se míchá po dobu 2,5 hodiny a poté se odpaří do sucha. Ke zbytku se přidá 25 ml etheru a znovu se odpaří do sucha. Tento postup se opakuje třikrát. Výsledný produkt se trituruje s 10 ml etheru a poté se vysuší, čímž se získá 730 mg (87 %) světle hnědého prášku o teplotě tání 156 až 160 °C.

Infračervené spektrum (bromid draselný): 3282, 2965, 1702, 1694, 1642, 1536, 1438, 1246, 1230 'H-NMR (perdeuterodimethylsulfoxid), hodnoty δ: 8,48 (1H, d), 8,09 (1H, d), 7,47 (9H, m), 5,02 (2H, s), 4,70 (2H, s), 4,49 (1H, m), 4,37 (2H, dd), 4,27 (1H, m), 3,88 (1H, m), 2,75 (1H, dd), 2,54 (1H, dd), 1,96 (1H, m), 1,19 (3H, s), 0,84 (6H, m)

Analýza pro C₂8H₃₃Cl₂N₃O8.0,5H₂O:

vypočteno: 54,27 % C, 5,53 % Η, 11,45 % Cl, 6,78 % N;

nalezeno: 54,49 % C, 5,39 % Η, 11,33 % Cl, 6,73 % N.

Hmotová spektrometrie (+ FAB): 610 (M⁺, 10 %), 91 (100) (R,S)-N-[N-(acetyl)tyrosmyl-valinyl-alaninyl]-3-amino-5-(2,6-dichlorfenylmethoxy)-4oxopentanová kyselina (sloučenina 84b, W) se získá způsobem použitým v případě sloučeniny

84a ve formě bezbarvého prášku s výtěžkem 95 %. Teplota tání produktu činí 165 až 168 °C.

Infračervené spektrum (bromid draselný): 3295, 2968, 1733, 1642, 1517, 1438, 1231, 1105 'H-NMR (perdeuterodimethylsulfoxid), hodnoty δ: 9,2 (1H, široký), 8,14 (1H, široký d), 8,02 (1H, široký d), 7,81 (1H, široký d), 7,45 (3H, m), 7,02 (2H, d), 6,62 (2H, d), 4,70 (2H, s), 4,12 4,53 (3H, m), 3,60 (3H, m), 2,51 - 2,92 (4H, m), 1,96 (1H, m), 1,75 (3H, s), 1,21 (3H, d), 0,83 (6H, m)

Analýza pro C₃iH₃8Cl₂N₄O9.H₂O:

vypočteno: 53,22 % C, 5,76 % H, 10,14 % Cl, 8,09 % N; nalezeno: 53,33 % C, 5,54 % Η, 10,02 % Cl, 7,85 % N.

Hmotová spektrometrie (+ FAB): 682 (M⁺, 2, 30 %), 681 (67), 158 (100)

Hmotová spektrometrie (- FAB): 680 (45), 679 (100)

Příklad 6

Byly získány inhibiční konstanty (K,) a hodnoty IC₅₀ pro několik sloučenin podle vynálezu za použití enzymových testů se substrátem viditelným v UV-světle a fluorescenčním substrátem a buněčných testů, jak jsou popsány v příkladu 2. Za použití těchto testů byly pro sloučeniny 22e, 54b, 54j, 54k, 57b, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 98, 102a-c, 106a-c, 108a-c, 114a, 114b, 115,

-198CZ 298625 B6

121, 125a, 125b, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132a, 132b, 133, 135a, 135b, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156, 157, 158, 159, 160, 161, 162 a 163 stanoveny následující hodnoty K; a IC50. Vzorce sloučenin 22e, 54b, 54j, 54k a 57b jsou uvedeny v příkladu 5. Vzorce ostatních sloučenin jsou uvedeny v příkladu 7.

sloučenina	test
se substrátem viditelným v UV-světle Ki (μΜ)	buněčný ICso (μΜ)
22e	0,19	>20
54b		20
54j		¹⁰
54k		6,6
57b		2,2
85	0,0035	9,8
86	0,175	4,0
87	7,2	35,0
88	0,9
89	0,018
90	0,42	6,2
91	0,26	>25
92	3,8
98	0,535	4,0
102a		4,0
102b	0,29	1,75
102c	0,68
106a	2,3	30,0
106b	0,2	2,9
106c	3,8	>30,0
108a		17,5
108b	0,4	25,0
108c	0,43

-199CZ 298625 B6

sloučenina	test
se substrátem viditelným v UV-světle Ki (μΜ)	buněčný IC_SO (μΜ)
114a	0,12	3,8
114b	3,7
115	0,345	6,0
121	4,3
125a	0,39	>30,0
125b	0,060	0,30
126	0,45	1,5
127	0,39	8,0
128	0,04	7,5
1 129	0,59	25,0
130		1,20
131	12,0	30,0
132a	5,0	>30,0
132b	12,5
133	50,0	>30,0
135a	0,090	0,90
135b	0,32	0,95
136		1,0
137	0,04	0,25
138		0,375
139	0,350	2,0
140	0,87	>30,0
141	0,670

-200CZ 298625 B6

sloučenina	test
se substrátem viditelným v UV-světle K,_ (μΜ)	buněčný IC_sa (μΜ)
142		1,75
144	0,32	>20,0
145	0,34	8,5
146	0,16	3,8
147	0,26	8,5
14 Θ	6,3	30,0
149	14,0	>30,0
150	10,0	30,0
151	13,0	30,0
152	8,8
153	0,24
154	0,042	2,4
155	0,023
156	0,001	2,7
157	0,26
158	1,1
159	0,0017	8,0
160	0,145	2,25
161	0,011
162	0,0025
163	0,0028	1,2

-201 CZ 298625 B6

Příklad 7

Sloučeniny 126, 127, 128, 129, 135a, 135b, 137, 144, 145, 146, 147, 147, 149, 150, 151, 152, 5 153, 154, 155, 156, 157, 158, 159, 160, 162 a 163 se syntetizují podobným způsobem jako je způsob použitý při syntéze sloučeniny 69a.

{126) {127 5 (128) (1291 (135a) (135b)

-202CZ 298625 B6 (137)

(144)

(145) (146)

(147) (148) (149)

203 CZ 298625 B6 (150)

(151) (152) (153)

(154)

(1555 (156)

-204CZ 298625 B6 (157)

(159) (ISO)

(162) ¢163)

-205

Sloučenina 158 se syntetizuje podobným způsobem jako je způsob použitý při syntéze sloučeniny K

Sloučenina 130 se syntetizuje podobným způsobem jako je způsob použitý při syntéze sloučeniny 56b

Sloučenina 131, 136, 138 a 142 se syntetizují podobným způsobem jako je způsob použitý při syntéze sloučeniny 57b

II 'N' o

(131) (136)

206CZ 298625 B6

Sloučeniny 132a, 132b, 139, 140 a 141 se syntetizují podobným způsobem jako je způsob použitý při syntéze sloučeniny 47a. Výchozí materiál pro sloučeninu 140 se získá jak je popsáno v práci: Robi a kol., J. Am. Chem. Soc., 116, str. 2348 - 2355 (1994). Výchozí materiál pro sloučeninu 141 se získá jak je popsáno v práci: Wyvratt a kol., Pept. Struct: Funct. Proč. (8. Am. Pept. Symp.), (1983) nebo USP 4415496.

(132a) (132b) (139) (140)

-207CZ 298625 B6

Sloučenina 133 se syntetizuje podobným způsobem jako je způsob použitý při syntéze sloučeniny

47b

(133)

Sloučenina 161 se syntetizuje podobným způsobem jako je způsob použitý při syntéze sloučeniny 125a.

Sloučeniny 22e, 54b, 54j, 54k a 57b se syntetizují jak je popsáno v příkladu 5.

Sloučeniny 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 98, 102a, 102b, 102c, 106a, 106b, 106c, 108a, 108b, 108c, 114a, 114b, 115, 121, 125a a 125b se syntetizují následovně.

N-(N-acetyl-tyrosinyl-valinyl-(4(R)-allyloxyprolinyl))-3-(S)-amino-4-oxobutanová kyselina (sloučenina 85)

Stupeň A. N-terc-butoxykarbonyl-4(R)-allyloxyprolin

K roztoku 60% natrium-hydridu (3,36 g, 84 mmol) ve 100 ml bezvodého tetrahydrofuranu se přidá 9,25 g (40 mmol) N-terc-butoxykarbonyl-(4R)-hydroxyprolinu a směs se míchá po dobu

2 hodin při teplotě místnosti. Ke směsi se přidá 6,9 ml (80 mmol) allylbromidu a směs se zahřívá k varu pod zpětným chladičem po dobu 6 hodin. Ke směsi se přidá drcený led, poté se dále přidá voda a směs se promyje hexanem. Vodná vrstva se okyselí 10% hydrogensíranem sodným a extrahuje se dvakrát vždy 150 ml ethylacetátu. Smíchané extrakty se vysuší nad bezvodým síranem sodným, zfiltrují a odpaří, čímž se získá 5 g produktu uvedeného v názvu, který se dále nečistí.

-208CZ 298625 B6 ’Η-NMR (deuterochloroform, existuje jako rotamery), hodnoty δ: 5,92 - 5,82 (1H, m), 5,3 - 5,14 (2H, m), 4,5 - 4,31 (1H, m), 4,16 - 4,05 (1H, m), 4,04 - 3,9 (1H, m), 3,79 - 3,5 (3H, m), 2,43 2,2 (1,5H, m), 2,15 - 2,10 (0,5H, m), 1,45 (4,5H, s), 1,35 (4,5H, s)

Stupeň B. Hydrochlorid methylesteru 4(R)-allyloxyprolinu g (18,4 mmol) N-terc-butoxykarbonyl—l(R)-allyloxyprolinu se po dobu 6 hodin zahřívá k varu pod zpětným chladičem v 50 ml nasyceného methanolického chlorovodíku. Směs se odpaří ve vakuu, čímž se získá 3,78 g sloučeniny uvedené v názvu ve formě žluté pryskyřice.

'H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 5,83 - 5,72 (1H, m), 5,24 - 5,14 (1H, d), 5,13 - 5,08 (1H, d), 4,55 - 4,3 (3H, m), 4,25 - 4,15 (1H, m), 3,9 (1,5H, s), 3,78 (1,5H, s), 3,7 - 3,28 (3H, m), 2,45 - 2,32 (1H, m), 2,2 - 2,05 (1H, m)

Stupeň C. Methylester N-acetyl-tyrosinyl-valinyl-(4(R)-allyloxyprolinu)

1,05 g (4,75 mmol) hydrochloridu methylesteru 4(R)-allyloxyprolinu a 1,68 g (5,21 mmol) Nacetyl-Tyr-Val-OH se rozpustí v 10 ml směsi dichlormethanu a dimethylformamidu v poměru 1:1a směs se ochladí na teplotu 0 °C. K ochlazené směsi se přidá 1 ml (5,93 mmol) diizo20 propylethylaminu a poté 0,769 g (5,69 mmol) N-hydroxybenzotriazolu a 1,18 g (6,2 mmol) 1(3-dimethylaminopropyl)-3-eťhylkarbodiimid-hydrochloridu. Směs se míchá po dobu 2 hodin, poté se zahřeje na teplotu místnosti a míchá se po dobu dalších 16 hodin. Reakční směs se vylije do 150 ml ethylacetátu a promyje se vždy 50 ml vody, 10% hydrogensíranu sodného a 10% hydrogenuhličitanu sodného. Organická vrstva se vysuší nad síranem sodným, zfiltruje a odpaří, čímž se získá světle žlutá pevná látka. Tato látka se vyčistí pomocí velmi rychlé chromatografie za použití směsi dichlormethanu, methanolu a pyridinu v poměru 100 : 3 : 0,5 jako eluěního činidla, čímž se získá 780 mg sloučeniny uvedené v názvu.

'H-NMR (perdeuteromethanol), hodnoty δ: 7,02 - 6,96 (2H, d), 6,67 - 6,63 (2H, d), 5,95 - 5,85 (1H, m), 5,34 - 5,27 (1H, d), 5,16 - 5,13 (1H, d), 4,53 - 4,38 (3H, m), 4,28 - 4,22 (1H, m), 4,12

-3,97 (3H, m), 3,82- 3,73 (1H, m), 3,72 (3H, s), 3,04 - 2,88 (2H, m), 2,85 - 2,72 (2H, m), 2,45 - 2,34 (1H, m), 2,08 - 1,95 (2H, m), 1,92 (3H, s), 1,00 - 0,92 (6H, 2 x d)

Stupeň D. Semikarbazon terc-butylesteru N-(N-acetyl-tyrosinyl-valinyl-(4(R)-allyloxyproli35 nyl))-3(S)-amino-4-oxobutanové kyseliny

770 mg (1,57 mmol) methylesteru N-acetyl-tyrosinyl-valinyl-(4-allyloxyprolinu) se rozpustí ve 20 ml tetrahydrofuranu a 4 ml methanolu. Ke směsi se přidá 145 mg (3,46 mmol) hydroxidu lithného a směs se míchá při teplotě místnosti. Po 2 hodinách se přidá 1 ml 10% kyseliny chloro40 vodíkové a směs se odpaří ve vakuu, čímž se získá pevný zbytek, který se poté roztřepe mezi 5 ml vody a 50 ml ethylacetátu. Organická vrstva se oddělí a odpaří ve vakuu, čímž se získá 430 mg kyseliny, která se použije bezprostředně v následujícím stupni.

Ze 420 mg (0,88 mmol) N-acetyl-tyrosinyl-valinyl-4-allyloxyprolinu a 184 mg (0,8 mmol) semikarbazonu terc-butylesteru 3-amino-4-oxomáselné kyseliny (Graybill a kol., Int. J. Protein Res., 44, str. 173 - 182 (1994)) se získá 100 mg (20 %) sloučeniny uvedené v názvu ve formě bílé amorfní pevné látky.

¹ H-NMR (perdeuteromethanol), hodnoty δ: 7,24 - 7,2 (1H, m), 7,04 - 6,97 (2H, d), 6,73 - 6,65 (2H, d), 5,98- 5,86 (1H, m), 5,35 - 5,24 (1H, d), 5,17 - 5,12 (1H, m), 4,12-3,98 (2H, m),

3,72 - 3,67 (1H, m), 2,98 - 2,92 (3H, m), 2,38 - 2,32 (1H, m), 2,1 - 2,02 (2H, m), 1,92 (3H, s), 0,98 - 0,89 (6H, 2 x d)

-209CZ 298625 B6

Stupeň E. N-(N-acetyl-tyrosinyl-valinyl-(4(R)-allyloxyprolinyl))-3(S)-amino-4-oxobutylová kyselina (sloučenina 85)

Ze 100 mg semikarbazonu terč- butylesteru N-(N-acetyl-tyrosinyl-valinyl-(4-(R)-allyloxyprolinyl))-3(S)-amino-4-oxobutanové kyseliny se odstraní chránící skupina jak je popsáno v příkladu 3, u sloučeniny K, stupeň C, čímž se získá 44,2 mg (53 %) sloučeniny uvedené v názvu.

’Η-NMR (perdeuteromethanol), hodnoty δ: 7,04-6,97 (2H, d), 6,72 - 6,65 (2H, d), 5,97 - 5,86 (1H, m), 5,32 - 5,25 (1H, d), 5,17 - 5,12 (1H, m), 4,62 - 4,40 (3H, m), 4,30-4,15 (2H, m), 4,12 - 3,96 (3H, m), 3,75 - 3,68 (1H, m), 2,99 - 2,92 (1H, m), 2,78 - 2,70 (1H, m), 2,70 - 2,48 (2H, m), 2,35 - 2,30 (1H, m), 2,17-1,95 (2H, m), 1,92 (3H, s), 0,98 - 0,88 (6H, 2 x d)

Sloučeniny 86 a 87 se připraví podobným způsobem jako je způsob popsaný pro syntézu sloučeniny 69a v příkladu 5:

N-acetyl-(S)-valinyl-(4-(S)-fenoxy)propinyl-3(S)-amino-4-(7-methoxybenzoxazol-2-yl)-4oxobutanová kyselina (sloučenina 86)

N-acetyl-(S)-valinyl-(S)-(4-(S)-fenoxy)prolin se přemění na sloučeninu 86 ve formě bílého prášku.

^]H-NMR (perdeuterodimethylsulfoxid), hodnoty δ: 8,75 (d, 1H), 7,6 - 7,2 (m, 4H), 7,0 - 6,8 (m, 4H), 5,5 (m, 1H), 5,05 (s, 1H), 4,5 (t, 1H), 4,29 (t, 1H), 4,0 (s, 3H), 4,0 - 3,8 (m, 2H), 3,0 - 2,8 (dd, 2H), 2,3 (m, 1H), 2,09 (m, 1H), 1,95 - 1,8 (m, 2H), 1,78 (s, 3H), 1 - 0,7 (dd, 6H)

N-acetyl-(4-(R)-fenoxy)prolinyl-3(S)-amino-4-(7-methoxybenzoxazol-2-yl)-4-oxobutanová kyselina (sloučenina 87)

N-acetyl-(S)-(4-(S)-fenoxy)prolin se přemění na sloučeninu 87 ve formě bílého prášku.

’Η-NMR (perdeuterodimethylsulfoxid), hodnoty δ: 9,1 (d, 1H), 8,76 (d), 1H), 7,6 - 7,2 (m, 4H), 7,0 - 6,9 (m, 4H), 5,55 (m, 1H), 5,45 (m, 1H), 5,0 (m, 2H), 4,56 (t, 1H), 4,40 (t, 1H), 4,0 (s, 3H),

-210CZ 298625 B6

3,9 (dd, 1H), 3,76 (d, 1H), 3,64 (d, 1H), 3,1 - 2,9 (m, 1H), 2,8 (m, 1H), 2,50 (m, 1H), 2,3 - 2,2 (m, 1H), 2,09 (m, 1H), 1,95 a 1,75 (2 x s, 3H, rotamery)

(88)

N-2-(6-benzyl-l,2-dihydro-2-oxo-3-(3-fenylpropionyl)amino-l-pyridyl)acetyl-3(S)-amino5-hydroxy-4-oxopentanová kyselina (sloučenina 88)

Terc-butylester N-2-(6-benzyl-l,2-dihydro-2-oxo-3-(3-fenylpropionyl)amino-l-pyridyl)ío acetyl-3(S)-amino-5—hydroxy-4-oxopentanové kyseliny se připraví ze sloučeniny 52b a sloučeniny 81 způsobem popsaným pro syntézu sloučeniny 83a za vzniku bílé pevné látky. Výtěžek činí 45 %.

’Η-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 8,40 (d, 1H), 8,20 (s, 1H), 7,4 - 7,1 (m, 11H), 6,18 (s, 15 1H), 4,72 (m, 1H), 4,65 - 4,5 (q, 2H), 4,4 - 4,2 (dd, 2H), 4,0 (s, 2H), 3,04 (t, 2H), 2,9 (dd, 1H),

2,76 (t, 2H), 2,55 (dd, 1H), 1,39 (s, 9H)

Výsledný produkt se přemění na sloučeninu 88 způsobem popsaným v příkladu 5 pro sloučeninu 84a, čímž se získá sloučenina uvedená v názvu ve formě bílé pevné látky. Výtěžek činí 42 %.

¹ H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 8,5 (d, 1H), 8,1 (d, 1H), 8,0 (m, 1H), 7,4 - 7,1 (m, 11H), 6,3 (d, 1H), 4,9 - 4,8 (m, 2H), 4,6 - 4,4 (m, 2H), 4,3 (dd, 1H), 4,1 (s, 2H), 3,3 (t, 1H), 3,05 (t,2H), 2,8-2,6 (m, 3H)

Sloučeniny 89 a 90 se připraví podobným způsobem jako je způsob popsaný pro přípravu sloučeniny 84a v příkladu 5.

N-acetyl-(S)-tyrosinyl-(S)-valinyl-(S)-alaninyl-3(S)-amino-5-(2-chlorbenzyloxy)-4-oxopentanová kyselina (sloučeniny 89) se připraví z acetyl-Tyr-Val-Ala-OH a (3S)-terc-butyl-N(allyloxykarbonyl)-3-amino-5-(2-chlorfenylmethoxy)-4-oxopentanoátu (připraveného podobným způsobem jako sloučenina 82) za vzniku bílé pevné látky.

‘H-NMR (perdeuterodimethylsulfoxid), hodnoty δ: 9,15 (s, 1H), 8,5 (d, 1H), 7,98 (d, 1H), 7,75 (d, 1H), 7,55 - 7,3 (m, 4H), 7,0 (d, 1H), 6,6 (d, 2H), 4,6 - 4,3 (m, 6H), 4,3 - 4,1 (m, 2H), 2,9 (d, 1H), 2,76 (dd, 1H), 2,7 - 2,5 (m, 2H), 1,95 (m, 1H), 1,75 (s, 3H), 1,2 (d, 3H), 0,9 - 0,7 (dd, 6H)

-211 CZ 298625 B6

N-2-(6-benzyl-l,2-dihydro-2-oxo-3-(3-fenylpropionyl)amino-l-pyridyl)acetyl-3-amino-5(2-chlorbenzyloxy)-4-oxopentanová kyselina (sloučenina 90) se připraví ze sloučeniny 52b a (3S)-terc-butyl-N-(allyloxykarbonyl)-3-amino-5-(2-chlorfenylmethoxy)-4-oxopentanoátu (připraveného podobným způsobem jako sloučenina 82) za vzniku bílé pevné látky.

‘H-NMR (perdeuterodimethylsulfoxid), hodnoty δ: 9,2 (s, 1H), 8,75 (d, 1H), 7,7 - 7,1 (m, 14H), 6,4 (d, 1H), 4,65 (d, 6H), 4,56 (s, 1H), 4,6 - 4,35 (dd, 1H), 3,9 (s, 2H), 2,9 - 2,6 (m, 6H)

N-2-(6-benzy 1-1,2-dihydro-2-oxo-3-(3-fenylpropionyl)am ino-1 -pyridyl)acety 1-3 (S)-amino5-(5-(2,6-dichlorfenyl)thiazol-2-yl)-4-oxopentanová kyselina (sloučenina 91) se připraví ze sloučeniny 52b a terc-butylesteru 3-(allyloxykarbonyl)amino-4-[(2,6-dichlorfenyl)thiazol-2yl]-4-hydroxymáselné kyseliny (sloučeniny 99), způsobem jako je popsáno pro přípravu sloučeniny 69, za vzniku špinavě bílého prášku.

‘H-NMR (perdeuterodimethylsulfoxid), hodnoty δ: 9,32 (s, 1H), 9,05 (d, 1H), 8,27 (d, 1H), 8,18 (d, 1H), 7,7 (d, 1H), 7,6 (t, 1H), 7,4-7,1 (m, 11H), 6,1 (d, 1H), 5,64 (m, 1H), 4,8 - 4,6 (dd, 2H),

3,85 (s, 2H), 3,02 (m, 1H), 2,9 - 2,7 (m, 4H)

3-(S)-(2-(3-[3-(S)-(4-hydroxyfenyl)propionylamino]-2-oxoazepan-l-yl)acetylamino)-4-oxomáselná kyselina (sloučenina 92) se připraví z 2-(3-[3-(S)-(4-hydroxyfenyl)propionylamino]2-oxoazepan-l-yl)octové kyseliny a N-allyloxykarbonyl-4-amino-5-benzyloxy-2-oxotetrahydrofuranu (Chapman, Biorg. Med. Chem. Lett, 2, str. 613 -618 (1992)) podobným způsobem, jako je popsáno v případě syntézy sloučeniny 54a, za vzniku sloučeniny uvedené v názvu jako bílé pevné látky.

‘H-NMR (perdeuteridimethylsulfoxid), hodnoty δ: 9,10 - 9,20 (s, 1H), 8,40 (s, 1H), 7,88 (d, 1H), 7,0 (d, 2H), 6,64 (d, 2H), 4,60 (t, 1H), 4,10 (q, 2H), 3,9 - 4,2 (m, 2H), 3,6 (m, 1H), 3,18 (d, 2H), 2,70 (t, 2H), 2,40 (m, 2H), 1,85 - 1,40 (m, 8H)

-212CZ 298625 B6

(98) (Et = ethyl)

4-ethoxymethyl-2-styryl-4H-oxazol-5-on (sloučenina 94) se připraví jak popsal Comforth, The Chemistry of Pěnici 1 lín, Clarke, Johnson, Robinson (editoři), Princeton University Press, str. 804 (1949).

Ethylester 4-oxo-3-(3-fenylaktryloylamino)-4,6„7,8-tetrahydropyrrolo[ 1,2-a]pyrimidin-(6S)ío karboxylové kyseliny (sloučenina 95) se připraví ze sloučeniny 94 postupem popsaným v příkladu 5 pro sloučeninu 3, přičemž se získá 4,5 g (30 %) sloučeniny uvedené v názvu.

'H-NMR (perdeuteromethanol), hodnoty δ: 1,3 (t, 3H), 2,35 (m, 1H), 2,65 (m, 1H), 3,1 (m, 1H),

3.15 (m, 1H), 4,25 (q, 2H), 5,15 (dd, 1H), 6,95 (d, 1H), 7,4 (m, 3H), 7,6 (m, 2H), 7,65 (d, 1H),

8,95 (s, 1H)

4-oxo-3-(3-fenylakryloylamino)-4,6,7,8-tetrahydropyrrolo[l,2-a]pyrimidin-(6S)-karboxylová kyselina (sloučenina 96)

Směs 3,1 g (8,8 mmol) ethylesteru 4-oxo-3-(3-fenylakryloylamino)-4,6,7,8-tetrahydropyrrolo[l,2-a]pyrimidin-(6S)-karboxylové kyseliny (sloučeniny 95) a 8,8 ml (8,8 mmol) IN hydroxidu lithného v 10 ml methanolu se míchá po dobu 18 hodin při teplotě místnosti. Reakční smě se naředí vodou a promyje se jednou 20 ml ethyletheru. Vodná vrstva se okyselí koncentrovanou kyselinou chlorovodíkovou a pevná látka se izoluje filtrací a promyje se vodou. Pevná látka se suší ve vakuové peci při teplotě 50 °C po dobu 18 hodin, čímž se získá 2,2 g (75 %) sloučeniny uvedené v názvu ve formě světle hnědé pevné látky.

‘H-NMR (perdeuteromethanol), hodnoty δ: 2,4 (m, 1H), 2,7 (m, 1H), 3,1 (m, 1H), 3,2 (m, 1H),

5.15 (dd, 1H), 7,0 (d, 1H), 7,4 (m, 3H), 7,6 (m, 2H), 7,65 (d, 1H), 8,95 (s, 1H) (2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-(3S)-yl)amid4-oxo-3-<3-fenylakryloylamino)-4,6,7,8tetrahydropyrrolo[l,2-a]pyrimidin-(6S)-karboxylové kyseliny (sloučenina 97) se připraví ze

-213CZ 298625 B6 sloučeniny 6 způsobem popsaným v příkladu 3 pro sloučeninu H, ve stupni A. Získá se 0,52 g (75 %) sloučeniny uvedené v názvu ve formě směsi diastereomerů.

’Η-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 2,3 - 2,7 (m, 3H), 2,9 (dd, 1H), 3,05 (m, 1H), 3,3 (m, 5 1H), 4,4 - 4,8 (m, 2H), 4,9 (2 x d, 1H), 5,05 (m, 1H), 5,55 (2 x s, 1H), 6,6 (2 x d, 1H), 7,4 (m,

6H), 7,55 (m, 4H), 7,65 (2 x d, 1H), 8,0 (m, 2H), 9,2 (s x 2, 1H)

4-oxo-(3 S)-{ [4-oxo-3-(3-fenylpropionylamino)-4,6,7,8-tetrahydropyrrolo[ 1,2-a]pyrimidin(6S)-karbonyl]amino}máselná kyselina (sloučenina 98) se připraví postupem popsaným ío v příkladu 3 pro sloučeninu H, ve stupni D. Získá se 0,13 g (45 %) sloučeniny uvedené v názvu.

’Η-NMR (perdeuteromethanol), hodnoty δ: 2,35 (m, 1H), 2,45 - 2,75 (m, 3H), 2,8 (t, 2H), 3,0 (t, 2H), 3,1 (m, 1H), 3,25 (m, 1H), 4,3 (m, 1H), 6,65 (dd, 1H), 5,15 (m, 1H), 7,15 (m, 1H), 7,3 (m, 4H), 8,8 (a, 1H)

(tBu = terc-butyl)

Terc-butylester 3(S)-(allyloxykarbonyl)amino-4-[(2,6-dichlorfenyl)oxazol-2-yl]^l(R,S)-hydroxymáselné kyseliny (sloučenina 99)

Roztok 2,71 g (12,7 mmol) 5-(2,6-dichlorfenyl)oxazolu (připraveného podobným způsobem jako je popsán v Tet. Lett. 23, str. 2367 (1972)) v 65 ml tetrahydrofuranu se ochladí v atmosféře dusíku na teplotu -78 °C. K tomuto roztoku se přidá 8,5 ml 1,5M roztoku n-butyllithia v hexanech (13,3 mmol) a směs se míchá při teplotě -78 °C po dobu 30 minut. Přidá se 3,6 g (13,9 mmol) etherátu bromidu hořečnatého a teplota roztoku se na 15 minut nechá vystoupit na 45 °C. Reakční směs se ochladí na teplotu -78 °C a po kapkách se přidá roztok 3,26 g (12,7 mmol) aldehydu 58 (Graybill a kol., Int. J. Protein Res., 44, str. 173 - 182 (1993)) v 65 ml tetrahydrofuranu. Reakční směs se míchá po dobu 25 minut, poté se teplota nechá vystoupit na 40 °C a směs se míchá po dobu 3 hodiny a poté se míchá po dobu 1 hodiny při teplotě místnosti. K reakční směsi se přilije 12 ml 5% roztoku hydrogenuhličitanu sodného a směs se míchá po dobu 3 hodin. Tetrahydrofuran se odstraní ve vakuu a výsledný zbytek se extrahuje dichlormethanem. Organická vrstva se promyje nasyceným roztokem chloridu sodného a vysuší se nad síranem hořečnatým, zfíltruje a zahustí, čímž se získá 6,14 g sloučeniny uvedené v názvu. Vyčištěním se získá 4,79 g (80 %) sloučeniny 99.

'H-NMR (deuterochloroform) hodnoty δ: 1,45 (s, 9H), 2,7 - 2,5 (m, 2H), 2,8 (dd, 1H), 4,2, 4,4 (2 x d, 1H), 4,7 - 4,5 (m, 3H), 5,35 - 5,1 (m, 2H), 5,6,5,7 (2 x d, 1H), 6,0 - 5,8 (m, 1H), 7,2 (d,

1H), 7,3 (m, 1H), 7,4 (m, 2H),

4-oxo-3-(3-fenylpropionylamino)-4,6,7,8-tetrahydrpyrrolo[l,2-a]pyrimidin-(6S)-karboxylová kyselina (sloučenina 100)

Směs 2,1 g (6,5 mmol) 4-oxo-3-(3-fenylakryloylammo)-4,6,7,8-tetrahydropyrrolo[l,2-a]pyrimidin-(6S)-karboxylové kyseliny (sloučeniny 96) a 20% hydroxidu palladia na uhlí (0,5 g) v 50 ml methanolu se míchá v atmosféře vodíku po dobu 4 hodin. Výsledná směs se zfíltruje a zahustí, čímž se získá 2,1 g (100 %) sloučeniny uvedené v názvu ve formě bílé pevné látky.

-214CZ 298625 B6 'H-NMR (perdeuteromethanol), hodnoty δ: 2,35 (m, 1H), 2,65 (m, 1H), 2,75 (t, 2H), 3,0 (t, 2H), 3,1 (m, 1H), 3,15 (m, 1H), 5,1 (dd, 1H), 7,15 (m, 1H), 7,25 (m, 4H), 8,75 (s, 1H)

(96)

c o a

(tBu = terc-butyl)

4-terc-butoxykarbonyl-2-oxo-(3S)- {[4-oxo-3-(3-fenylpropionylamino)-4,6,7,8-tetrahydroío pyrrolo[l,2-a]pyrimidin-(6S)-karbonyl]amino}butylester 2,6-dichlorbenzoové kyseliny (sloučenina 101a) se připraví postupem popsaným v příkladu 5 v příkladě sloučeniny 56a, čímž se získá 0,16 g (20 %) sloučeniny uvedené v názvu.

’Η-NMR (perdeuteromethanol), hodnoty δ: 1,45 (s, 9H), 2,3 (m, 1H), 2,6 (m, 1H), 2,7 (m, 3H), 15 2,95 (m, 3H), 4,8 (m, 1H), 5,1 (m, 1H), 5,2 (q, 2H), 7,1 (m, 1H), 7,2 (m, 4H), 7,4 (m, 3H), 8,75 (s, 1H)

Terc-butylester 4-(7-methoxybenzoxazol-2-yl)-4-oxo-(3S)-{[4-oxo-3-(3-fenyl-l-propionylamino)-4,6,7,8-tetrahydropyrrolo[l,2-a]pyrimidin-(6S)-karbonyl]amino}máselné kyseliny (sloučenina 101b)

Terc-butylester 4-hydroxy-4-(7-methoxybenzoxazol-2-yl)-(3S)- {[4-oxo-3-(3-fenylpropionylamino)-4,6,7,8-tetrahydropynOlo[l,2-a]pyrimidin-(6S)-karbonyl]amino}máselné kyseliny se připraví ze sloučeniny 100 a sloučeniny 66a postupem popsaným v příkladu 5 v případě slou25 ceniny 67a, čímž se získá 0,95 g (kvantitativní výtěžek) produktu ve formě směsi diastereomerů.

-215CZ 298625 B6 ’Η-NMR (perdeuteromethanol), hodnoty δ: 1,45 (2 x s, 9H), 2,2 (2 x m, 1H), 2,35 - 3,0 (m, 9H), 4,0 (m, 3H), 4,75 (m, 1H), 4,85 (m, 1H), 5,05 (s, dd, 1H), 7,1 (2 x dd, 1H), 7,15 - 7,3 (m, 4H), 7,5 (2 x t, 1H), 7,8 (2 x d, 1H), 8,55 (2 x dd, 1H), 8,7 (2 x s, 1H)

Výsledný produkt se přemění na sloučeninu 101b postupem popsaným v příkladu 5 v případě sloučeniny 68a, přičemž se získá 0,36 g (50 %) sloučeniny uvedené v názvu.

'H-NMR (perdeuteromethanol), hodnoty δ: 1,4 (s, 9H), 2,35 (m, 1H), 2,55 (m, 1H), 2,75 (t, 2H),

2,95 (t, 2H), 3,00 (m, 1H), 3,1 (dd, 2H), 3,15 (m, 1H), 5,15 (dd, 1H), 5,65 (t, 1H), 7,1 (m, 2H), ío 7,2 (m, 4H), 7,4 (m, 2H), 8,7 (s, 1H)

Terc-butylester 4-(5-(2,6-dichlorfeny l)oxazol-2-y l]-4-oxo-(3 S)-{ [4-oxo-3-(3-fenylpropionylamino)-4,6,7,8-tetrahydropyrrolo[l,2-a]pyrimidin-(6S)-karbonyl]amino}máselné kyseliny (sloučenina 101c)

Terc-butylester 4-(5-(2,6-dichlorfenyl)oxazoI-2-yl]-4-hydroxy-(3 S)-{ [4-oxo-3-{3-fenylproponylamino)-4,6,7,8-tetrahydropyrrolo[l,2-a]pyrimidin-{6S)-karbonyl]amino}máselné kyseliny se připraví ze sloučeniny 100 a sloučeniny 99 za použití postupu popsaného v příkladu 5 v případě sloučeniny 67a, čímž se získá 0,09 g (60 %) produktu ve formě směsi diastereomerů.

¹ H-NMR (perdeuteromethanol), hodnoty δ: 1,45 (2 x s, 9H), 2,2 (m, 1H), 2,5 (m, 2H), 2,7 (2 x dd, 1H), 2,75 (t, 2H), 2,9 - 3,1 (m, 4H), 4,7 (m, 1H), 5,1 (m, 2H), 7,1 (m, 1H), 7, 1- 7,25 (m, 4H), 7,4 (t, 1H), 7,5 (t, 1H), 8,55 (d, 1H), 8,75 (s, 1H)

Výsledný produkt se přemění na sloučeninu 101c postupem popsaným v příkladu 5 v případě sloučeniny 68a, přičemž se získá 0,04 g (45 %) sloučeniny uvedené v názvu.

¹ H-NMR (perdeuteromethanol), hodnoty δ: 1,4 (s, 9H), 2,3 (m, 1H), 2,6 (m, 1H), 2,75 (t, 2H),

2,95 (t, 2H), 2,9 - 3,2 (m, 4H), 5,2 (dd, 1H), 5,55 (t, 1H), 7,1 (m, 1H), 7,25 (m, 4H), 7,55 (m,

3H), 8,75 (s, 1H)

4-karboxy-2-oxo-(3 S)-{ [4-oxo-3-(3-fenylpropionylamino)-4,6,7,8-tetrahydropyrrolo[ 1,2a]pyrimidin-(6S)-karbonyl]amino}butylester 2,6-dichlobenzoové kyseliny (sloučenina 102a) se připraví ze sloučeniny 101a postupem popsaným v příkladu 5 v případě sloučeniny 57a, čímž se získá 0,12 g (80 %) sloučeniny uvedené v názvu.

'H-NMR (perdeuteromethanol), hodnoty δ: 2,35 (m, 1H), 2,65 (m, 1H), 2,75 (m, 2H), 2,85 (dd, 1H), 2,95 (m, 2H), 3,0 (dd, 1H), 3,15 (m, 1H), 3,25 (m, 1H), 4,55 (dd, 1H), 5,15 (m, 1H), 5,25 (q, 2H), 7,15 (m, 1H), 7,25 (m, 4H), 7,45 (m, 1H), 8,88 (s, 1H)

4-(7-methoxybenzoxazol-2-yl)-4-oxo-(3S)-{ (4-oxo-3-(3-fenylpropionylamino)-4,6,7,8tetrahydropyrrolo[l,2-a]pyrimidin-(6S)-karbonyl]amino}máselná kyselina (sloučenina 102b) se připraví ze sloučeniny 101b postupem popsaným v příkladu 5 v případě sloučeniny 69a, čímž se získá 0,12 g (35 %) sloučeniny uvedené v názvu.

*H-NMR (perdeuterodimethylsulfoxid) hodnoty δ: 2,1 (m, 1H), 2,55 (m, 1H), 2,7 - 3,1 (m, 8H), 4,05 (s, 3H), 5,1 (dd, 1H), 5,55 (t, 1H), 7,2 (m, 1H), 7,25 (m, 5H), 7,5 (t, 1H), 7,55 (d, 1H), 8,7 (s, 1H), 9,2 (d, 1H), 9,4 (s, 1H), 12,7 (široký signál, 1H)

4-[5-(2,6-dichlorfenyl)oxazol-2-yl]-4-oxo-(3S)-{[4-oxo-3-(3-fenylpropionylamino)4,6,7,8-tetrahydropyrrolo[l,2-a]pyrimidin-(6S)-karbonyl]amino}máselná kyselina (sloučenina 102c) se připraví ze sloučeniny 101c jak je popsáno v příkladu 5 v případě sloučeniny 69a, čímž se získá 0,01 g (40 %) sloučeniny uvedené v názvu.

-216CZ 298625 B6 ’Η-NMR (perdeuteromethanol), hodnoty δ: 2,35 (m, 1H), 2,6 (m, 1H), 2,75 (t, 2H), 2,95 (t, 2H), 3,05 (m, 1H), 3,15 (m, 3H), 5,15 (dd, 1H), 5,55 (t, 1H), 7,15 (m, 1H), 7,2 (m, 4H), 7,55 (m, 3H), 8,8 (s, 1H)

(BOC = terc-butoxykarbonyl)

Methylester (3-terc-butoxykarbonylamino-2-oxo-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]diazepin-lío yl)octové kyseliny (sloučenina 103)

Stupeň A. 2(S)-terc-butoxykarbonylamino-3-(2-nitrofenylamino)propionová kyselina

Do 130 ml dimethylformamidu se přidá 10 g (49 mmol) 2-terc-butoxykarbonylamino-3-amino15 propionové kyseliny, 5,7 ml (54 mmol) 2-fluomitrobenzenu a 8,25 g (98 mmol) hydrogenuhličitanu sodného a směs se zahřívá po dobu 18 hodin na teplotu 80 °C. Reakční směs se odpaří ve vakuu, čímž se získá viskózní oranžový zbytek, který se rozpustí ve 300 ml vody a extrahuje se třikrát vždy 150 ml diethyletheru. Vodný roztok se okyselí na pH 5 10% hydrogensíranem sodným a extrahuje se třikrát vždy 250 ml ethylacetátu. Smíchané extrakty se vysuší nad bezvodým síranem sodným, zfiltrují a odpaří, čímž se získá 12,64 g (83 %) sloučeniny uvedené v názvu ve formě oranžové amorfní pevné látky.

’Η-NMR (perdeuteromethanol), hodnoty δ: 8,15 - 8,10 (1H, d), 7,54 - 7,48 (1H, t), 7,13 - 7,08 (1H, d), 6,73 - 6,65 (1H, t), 4,45 - 4,35 (1H, m), 3,9 - 3,8 (1H, dd), 3,65 - 3,55 (1H, dd), 1,45 (9H, s).

Stupeň B. 2(S)-terc-butoxykarbonylamino-3-(2-aminofenylamino)propionová kyselina

Směs 12,65 g(40,5 mmol) 2-terc-butoxykarbonylamino-3-(2-nitrofenylammo)propionovékyse30 liny a 0,5 g 10% palladia na uhlí ve 100 ml methanolu se míchá v atmosféře vodíku za tlaku 100 kPa po dobu 4 hodin. Roztok se zfiltruje přes Celit 545 a filtrát se odpaří ve vakuu, čímž se získá 11,95 g sloučeniny uvedené v názvu s kvantitativním výtěžkem ve formě tmavě hnědé pevné látky, která se použije bez čištění.

’Η-NMR (perdeuteromethanol), hodnoty δ: 6,75 - 6,70 (3H, m), 6,65 - 6,58 (1H, m), 4,35 - 4,3 (1H, m), 3,6 - 3,38 (2H, m), 1,45 (9H, s)

Stupeň C. 3(S)-terc-butoxykarbonylamino-l,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]diazepin-2-on

K roztoku 11,95 g (40,5 mmol) 2-terc-butoxykarbonylamino-3-(2-aminofenylamino)propionové kyseliny ve 100 ml dimethylformamidu chlazeném na teplotu 0 °C se přidá 8,54 g (44,5 mmol) l-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimid-hydrochloridu a smě se míchá po dobu 18 hodin. Reakční směs se vylije do 700 ml ethylacetátu a promyje se čtyřikrát 100 ml vody. Organická vrstva se vysuší nad bezvodým síranem sodným, zfiltruje se a odpaří, čímž se

-217CZ 298625 B6 získá hnědá pevná látka, která se vyčistí velmi rychlou chromatografií za použití směsi ethylacetátu a hexanu v poměru 3 : 7 jako elučního činidla. Získá se 8 g (71 %) sloučeniny uvedené v názvu.

'H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,78 (1H, s), 7,02 - 6,95 (1H, m), 6,88 - 6,82 (1H, m), 6,82 - 6,78 (1H, m), 6,75 - 6,70 (1H, m), 5,8 - 5,7 (1H, d), 4,55 - 4,45 (1H, m), 3,95 (1H, s), 3,9 - 3,82 (1H, m), 3,48 - 3,40 (1H, m), 1,45 (9H, s)

Stupeň D. Methylester (3(S)-terc-butoxykarbonylamino-2-oxo-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b]10 [l,4]diazapin-l-yl)octové kyseliny (sloučenina 103)

K roztoku 0,94 g (3,38 mmol) 3-terc-butoxykarbonylamino-l,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]diazepin-2-onu ve 20 ml bezvodého tetrahydrofuranu o teplotě -78 °C se po kapkách přidá 3,4 ml (3,4 mmol) l,0M roztoku lithiumbis(trimethylsilyl)amidu v tetrahydrofuranu a směs se míchá po dobu 30 minut. K reakční směsi se po kapkách přidá 0,44 ml (4 mmol) methyl-bromacetátu a směs se poté zahřeje na teplotu místnosti. Reakční směs se naředí 100 ml ethylacetátu a promyje se 50 ml 0,3N hydrogensíranu draselného, dvakrát vždy 50 ml vody a roztokem chloridu sodného. Smíchané organické roztoky se vysuší nad bezvodým síranem sodným, zfiltrují a odpaří, čímž se získá pryskyřice, která se vyčistí velmi rychlou chromatografií za použití směsi ethylacetátu a hexanu v poměru 3 : 7 jako elučního činidla. Získá se 0,98 g (83 %) sloučeniny uvedené v názvu ve formě bílé pevné látky.

'H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,15 - 7,07 (2H, m), 6,98 - 6,94 (1H, m), 6,88 - 6,84 (1H, d), 5,62 - 5,55 (1H, d), 4,71 - 4,65 (1H, d), 4,65 - 4,6 (1H, m), 4,33 - 4,27 (1H, d), 3,96 25 3,90 (1H, m), 3,78 (3H, s), 3,44 - 3,37 (1H, m), 1,4 (9H, s)

UM) aR = H b R = COCH₂CH₂Ph c R = CH₂Ph (BOC = terc-butoxykarbonyl, Ph = fenyl)

Methylester [2-oxo-3(S)-(3-fenylpropionylamino)-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]diazepin-lyl]octové kyseliny (sloučenina 104a)

-218CZ 298625 B6

Roztokem 1 g (2,86 mmol) methylesteru (3(S)-terc-butoxykarbonylamino-2-oxo-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]diazepin-l-yl)octové kyseliny (sloučeniny 103) ve 25 ml ethylacetátu se po dobu 2 minut nechá probublávat bezvodý chlorovodík a směs se poté míchá po dobu 1 hodiny při teplotě místnosti. Reakční směs se odpaří, čímž se získá hydrochlorid methylesteru 2-oxo-3(S)5 amino-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]diazepin-l-yloctové kyseliny ve formě bílé pevné látky. Tento hydrochlorid a 0,47 g (3,15 mmol) hydroskořicové kyseliny se rozpustí ve 20 ml dimethylformamidu a roztok se ochladí na teplotu 0 °C. K tomuto roztoku se přidá 1 ml (5,72 mmol) diisopropyletheru a poté se přidá N-hydroxybenzotriazol a l-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimid-hydrochlorid. Směs se míchá po dobu 18 hodin při teplotě místnosti, poté se naředí ío 150 ml ethylacetátu a promyje se 10% hydrogensíranem sodným, 10% hydrogenuhličitanem sodným a roztokem chloridu sodného. Organická vrstva se vysuší nad bezvodým síranem sodným, zfíltruje a odpaří, čímž se získá surová pevná látka, která se vyčistí velmi rychlou chromatografií za použití směsi ethylacetátu a dichlormethanu v poměru 7:3 jako elučního činidla. Získá se 600 mg (55 %) sloučeniny uvedené v názvu ve formě bílé pevné látky.

’Η-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,3 - 6,85 (9H, m), 6,55 - 6,0 (1H, d), 4,88 - 4,82 (1H, m), 4,72 - 4,65 (1H, d), 4,28 - 4,22 (1H, m), 3,95 -3,9 (1H, m), 3,78 (3H, s), 3,65 (1H, široký s), 3,28 - 3,2 (1H, m), 2,95 - 2,85 (2H, m), 2,55 - 2,4 (2H, m) (3(S)-(3-fenylpropionylamino)-2-oxo-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]diazepin-l-yl)octová kyselina (sloučenina 105a)

Methylester (3(S)-(3-fenylpropionylamino)-2-oxo-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]diazepin-lyl)octové kyseliny (sloučenina 104a) se rozpustí v 90% methanolu. K reakční směsi se přidá hyd25 rát hydroxidu lithného a směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 4 hodin. Reakční směs se odpaří ve vakuu, čímž se získá bílá pevná látka. Tato pevná látka se rozpustí ve 20 ml vody, roztok se okyselí na pH 5 a extrahuje se ethylacetátem, čímž se získá 304 mg (88 %) sloučeniny uvedené v názvu ve formě bílé pevné látky.

¹ H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,5 - 6,9 (11H, m), 4,92 - 4,8 (1H, m), 4,7 - 4,58 (1H,

d), 4,38 - 4,25 (1H, d), 3,88 - 3,78 (1H, m), 3,45 - 3,25 (1H, m), 3,05 - 2,85 (2H, m), 2,55 2,45 (2H, m).

4-oxo-3(S)-{2-[2-oxo-3(S)-(3_fenylpropionylamino)-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]diaze35 pin-l-yl]acetylamino}máselná kyselina (sloučenina 106a)

N-[ 1 -(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-ylkarbamoylmethyl)-2-oxo-2,3,4,5-tetrahydrolH-benzo[b][l,4]diazepin-3-yl]-3-fenylpropionamid se připraví ze sloučeniny 105a postupem popsaným v příkladu 3 pro sloučeninu H (stupeň A), čímž se získá 390 mg (93 %) produktu ve formě disateteomerů.

’Η-NMR (perdeuteromethanol), hodnoty δ: 7,58 - 7,22 (14H, m), 5,78 - 5,73 (0,5H, d), 5,64 (0,5H, s), 5,0 - 4,72 (4H, m), 4,54 - 4,42 (2H, m), 3,82 - 3,76 (0,5H, m), 3,68 - 3,62 (0,5H, m), 3,28 - 3,21 (0,5H, m), 3,19-3,12 (0,5H, m), 3,07 - 2,98 (2H, m), 2,78 - 2,48 (4H, m)

Výsledný produkt se přemění na sloučeninu 106a způsobem popsaným v příkladu 3, v případě sloučeniny H (stupeň D), přičemž se získá sloučenina uvedená v názvu ve formě bílé pevné látky s výtěžkem 17 %.

’Η-NMR (perdeuteromethanol), hodnoty δ: 7,54 - 6,98 (9H, m), 5,58 - 5,44 (1H, m), 4,8 - 4,2 (4H, m), 3,96 - 3,3 (2H, m), 3,30 - 3,05 (1H, m), 2,98 - 2,25 (5H, m)

Methylester [2-oxo-5-(3-fenylpropionyl)-3(S)-(3-fenylpropionylamino)-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]diazepin-l-yl]octové kyseliny (sloučenina 104b)

-219CZ 298625 B6

Roztokem 1 g (2,86 mmol) methylesteru (3(S)-terc-butoxykarbonylamino-2-oxo-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]diazepin-l-yl)octové kyseliny (sloučeniny 103) ve 25 ml ethylacetátu se po dobu 2 minut nechá probublávat bezvodý chlorovodík a směs se poté míchá po dobu 1 hodiny při teplotě místnosti. Reakční směs se odpaří, čímž se získá hydrochlorid methylesteru 2-oxo-3(S)amino-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]diazepin-l-yloctové kyseliny ve formě bílé pevné látky. Tento hydrochlorid se suspenduje ve 20 ml dichlormethanu a ochladí se na teplotu 0 °C. K suspenzi se přidá 1,6 ml (11,5 mmol) triethylaminu a poté se po kapkách přidá 0,9 ml (6 mmol) dihydrocinnamoyl-chloridu. Směs se zahřeje na teplotu místnosti a míchá se po dobu io 18 hodin. Poté se směs naředí 25 ml dichlormethanu a promyje se dvakrát 50 ml vody a jednou 50 ml roztoku chloridu sodného. Organická vrstva se vysuší nad bezvodým síranem sodným, zfíltruje se a odpaří, čímž se získá viskózní žlutý olej, který se vyčistí velmi rychlou chromatografií za použití směsi ethylacetátu a dichlormethanu v poměru 1 : 1 jako elučního činidla. Získá se 1,35 g (92 %) sloučeniny uvedené v názvu ve formě bílé pevné látky.

'H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,45 - 7,02 (14H, m), 6,37 - 6,32 (ÍH, d), 4,78 - 4, 72 (ÍH, m), 4,52 - 4,3 (3H, m), 3,82 - 3,77 (ÍH, m), 3,74 (3H, s), 3,03 - 2,87 (4H, m), 2,58 - 2,45 (2H, m), 2,45 - 2,35 (ÍH, m), 2,25 - 2,16 (ÍH, m) [2-oxo-5-(3-fenylpropionyl)-3-(3-(S)-fenylpropionylamino)-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]diazepin-l-yl]octová kyselina (sloučenina 105b)

680 mg (1,32 mmol) methylesteru [2-oxo-5-(3-fenylpropionyl)-3-(3-fenylpropionylamino)2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]diazepin-l-yl]octové kyseliny sloučeniny (104b) se hydrolyzuje postupem popsaným v příkladu 105a, čímž se získá 645 mg (98 %) sloučeniny uvedené v názvu ve formě bílé pevné látky.

’Η-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,5 (ÍH, široký s), 7,5 - 7,42 (ÍH, m), 7,35 - 6,95 (14H, m), 4,95 - 4,88 (ÍH, m), 4,64 - 4,55 (ÍH, d), 4,54 - 4,45 (ÍH, t), 4,15 - 4,05 (ÍH, d), 3,75 (ÍH, m), 3,05 - 2,75 (4H, m), 2,58 - 2,45 (2H, m), 2,45 - 2,28 (ÍH, m), 2,25 - 2,14 (ÍH, m)

2-oxo-3(S)-{2-[2-oxo-5-(3-fenylpropionyl)-3(S)-(3-fenylpropionylamino)-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]diazepin-l-yl]acetylamino}máselná kyselina (sloučenina 106b) [2-oxo-5-(3-fenylpropionyl)-3-(3-fenylpropionylamino)-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]diazepin-l-yl]octová kyselina a semikarbazol terc-butylesteru 3-amino-4-oxomáselné kyseliny se podrobí reakci postupem uvedeným v příkladu 3 v případě sloučeniny K (stupeň A), čímž se získá 350 mg (85 %) bílé pevné látky.

’Η-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 9,05 (ÍH, široký s), 7,58 - 7,55 (ÍH, d), 7,5 - 7,35 (ÍH, m), 7,35 - 6,95 (14H, m), 6,75 - 6,72 (ÍH, d), 6,25 (ÍH, široký s), 5,25 (ÍH, široký s), 4,95 - 4,88 (ÍH, m), 4,8 - 4,72 (ÍH, m), 4,55 - 4,4 (2H, m), 3,92 - 3,88 (ÍH, d), 3,73 - 3,68 (ÍH, m),

2,95 - 2,8 (4H, m), 2,8 - 2,72 (ÍH, m), 2,62 - 2,55 (ÍH, m), 2,55 - 2,45 (2H, m), 2,4 - 2,32 (ÍH, m), 2,2 - 2,12 (ÍH, m), 1,45 (9H, s)

Ze semikarbazonu terc-butylesteru 4-oxo-3-{2-[2-oxo-5-(3-fenylpropionyl)-3-(3-fenylpropionylamino)-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]diazepin-l-yl]acetylamino}máselné kyseliny se odstraní chránící skupina jak je popsáno v příkladu 3, v případě sloučeniny K (stupeň C), čímž se získá 118 mg (47 %) sloučeniny uvedené v názvu ve formě bílé pevné látky.

’Η-NMR (perdeuteromethanol), hodnoty δ: 7,48 - 6,95 (14H, m), 4,65 - 4,15 (6H, m), 3,5 - 3,4 (ÍH, m), 2,85 - 2,72 (4H, m), 2,65 - 2,5 (ÍH, m), 2,5 - 2,34 (3H, m), 2,34 - 2,15 (2H, m)

-220CZ 298625 B6

Methylester [5-benzyl-2-oxo-3(S)-(3-fenylpropionylamino)-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]diazepin-2-yl]octové kyseliny (sloučenina 104c)

Do 10 ml dimethylformamidu se přidá 500 mg (1,31 mmol) methylesteru [2-oxo-5-(3-fenyl5 propionyl)-3-(3-fenylpropionylamino)-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]diazepin-l-yl]octové kyseliny (sloučeniny 104a), 155 mg (1,58 mmol) uhličitanu vápenatého a 170 μΐ (1,44 mmol) benzylbromidu a smě se zahřívá po dobu 8 hodin na teplotu 80 °C. Směs se naředí 150 ml ethylacetátu a promyje se čtyřikrát 50 ml vody. Organická vrstva se vysuší nad bezvodým síranem sodným, zfiltruje a odpaří, čímž se získá viskózní žlutý olej, který se vyčistí velmi rychlou chro10 matografií za použití směsi dichlormethanu a ethylacetátu v poměru 8 : 2 jako elučního činidla. Získá se 460 mg (75 %) sloučeniny uvedené v názvu ve formě bílé pevné látky.

‘H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ 7,34 - 7,05 (14H, m), 6,32 - 6,28 (1H, d), 4,84 - 4,76 (1H, d), 4,76 - 4,70 (1H, m), 4,43 - 4,37 (1H, d), 4,26 - 4,18 (1H, d), 4,06 - 4,00 (1H, d), 3,79 (3H, s), 3,45 - 3,37 (1H, m), 3,02 - 2,95 (1H, m), 2,90 - 2,82 (2H, m), 2,5 - 2,34 (2H, m) [5-benzyl-2-oxo-3(S)-(3-fenylpropionylamino)-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]diazepin-lyljoctová kyselina (sloučenina 105c) se připraví hydrolýzou esteru 102c postupem popsaným v případě sloučeniny 105a, čímž se získá 450 mg (98 %) sloučeniny uvedené v názvu ve formě bílé pevné látky.

'H-NMR (perdeuteromethanol), hodnoty δ: 7,5 - 7,05 (14H, m), 6,4 (1H, široký s), 4,85 - 4,55 (2H, m), 4,45 - 4,21 (2H, m), 4,12 - 3,92 (1H, d), 3,45 - 3,3 (1H, m), 3,1 - 2,8 (3H, m), 2,55 2,28 (3H, m)

3(S)-{2-[5-benzyl-2-oxo-3-(3(S)-fenylpropionylamino)-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]diazepin-l-yl]acetylamino}-4-oxomáselná kyselina (sloučenina 106c) [5-benzyl-2-oxo-3(S)-(3-fenylpropionylamino)-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]diazepin-l30 yljoctová kyselina a semikarbazol terc-butylesteru 3(S)amino-4-oxomáselné kyseliny se podrobí reakci postupem uvedeným v příkladu 3 v případě sloučeniny K (stupeň A), čímž se získá 260 mg (85 %) bílé pevné látky.

’Η-NMR (perdeuteromethanol), hodnoty δ: 7,35 - 7,0 (15H, m), 4,94 - 4,88 (1H, m), 4,68 - 4,58 35 (1H, d), 4,57 - 4,52 (1H, m), 4,41 - 4,34 (1H, d), 4,3 - 4,23 (1H, d), 4,1 - 4,04 (1H, d), 3,18 3,11 (1H, m), 3,09 - 2,98 (1H, m), 2,78 - 2,72 (2H, t), 2,65 - 2,57 (1H, m), 2,42 - 2,33 (3H, m).

Ze semikarbazonu terc-butylesteru 3(S)-{2-[5-benzyl-2-oxo-3(S)-{3-fenylpropionylamino)2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]diazepin-l-yl]acetylamino}-A-oxomáselné kyseliny se odstraní chránící skupina jak je popsáno v příkladu 3, v případě sloučeniny K (stupeň C), čímž se získá 168 mg (81 %) sloučeniny uvedené v názvu ve formě bíle zbarvené pevné látky.

‘H-NMR (perdeuteromethanol), hodnoty δ: 7,37 - 7,0 (14H, m), 4,75 - 4,62 (1H, m), 4,6 - 4,45 (2H, m), 4,4 - 4,21 (2H, m), 4,15 - 3,95 (2H, m), 3,15 - 3,0 (2H, m), 2,82 - 2,67 (2H, m), 2,65 45 2,52 (1H, m), 2,5 - 2,32 (3H, m)

-221 CZ 298625 B6

(Ph = fenyl, tBu = terc-butyl)

4-terc-butoxykarbonyl-2-oxo-3(S)-{2-[2-oxo-5-(3-fenylpropionyl)-3(S)-(3-fenylpropionylamino)-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]diazepin-l-yl]acetylamino}butylester 2,6-dichlorbenzoové kyseliny (sloučenina 107a)

Výsledný semikarbazon se připraví reakcí sloučeniny 105b a terc-butyl-3-(allyloxykarbonylío amino)-4-oxo-5-(2,6-dichlorbenzoyloxy)pentanoátu (WO 93 16710), jak je popsáno v případě sloučeniny 56a, čímž se získá 256 mg (58 %) sloučeniny uvedené v názvu ve formě bílé pevné látky.

'H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,45 - 7,04 (17H, m), 6,45 - 6,34 (2H, m), 5,28 - 5,21 (1H, m), 5,1 - 5,0 (1H, m), 4,95 - 4,90 (1H, m,), 4,75 - 4,70 (1H, m), 4,55 - 4,44 (1H, m), 4,32 4,22 (1H, dd), 3,99 - 3,85 (1H, dd), 3,85 - 3,76 (1H, m), 3,06 - 2,85 (5H, m), 2,83 - 2,74 (1H, m), 2,6 - 2,44 (2H, m), 2,43 - 2,33 (1H, m), 2,24 - 2,15 (1H, m). 1,45 (9H, s)

4-karboxy-2-oxo-3(S)-{2-[2-oxo-5-(3-fenylpropionyl)-3(S)-(3-fenylpropionylamino)-2,3,20 4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]diazepin-l-yl]acetylamino}butylester 2,6-dichlorbenzoové kyseliny (sloučenina 108a) se připraví ze sloučeniny 107a způsobem popsaným v případě sloučeniny 57a, čímž se získá 156 mg (68 %) sloučeniny uvedené v názvu ve formě bílé pevné látky.

¹ H-NMR (perdeuteromethanol), hodnoty δ: 7,5 - 6,9 (17H, m), 5,16 - 5,02 (1H, dd), 4,88 - 4,71 (2H, m), 4,62 - 4,44 (2H, m), 4,42 - 4,28 (2H, m), 4,27 - 4,18 (1H, m), 3,47 - 3,41 (1H, m), 2,90

- 2,60 (5H, m), 2,46 - 2,4 (2H, m), 2,39 - 2,18 (2H, m)

Terc-butylester 4-(7-methoxybenzoxazol-2-yl}-4-oxo-3(S)-{2-[2-oxo-5-(3-fenylpropionyl)3(S)-(3-fenylpropionylamino)-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]diazepin-l-yl]acetylamino}30 máselné kyseliny (sloučenina 107b)

Terc-butylester 4(R,S)-hydroxy-4-(7-methoxybenzoxazol-2-yl)-3(S)-{2-[2-oxo-5-(3-fenylpropionyl)-3(S)-(3-fenylpropionylamino)2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]diazepin-lyl]acetylamino}máselné kyseliny (sloučeniny 107b)

-222CZ 298625 B6

Terc-butylester 4(R,S)-hydroxy—4-(7-methoxybenzoxazol-2-yl)-3(S)-{2-[2-oxo-5-(3-fenylpropionyl)-3(S)-(3-fenylpropionylamino)-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]diazepin-l-yl]acetylaminojmáselné kyseliny se připraví ze sloučeniny 105b a sloučeniny 66a způsobem popsaným v příkladu 5 v případě sloučeniny 67, čímž se získá pevná látka s výtěžkem 56 %.

’Η-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,72 - 6,78 (19H, m), 6,37 - 6,28 (1H, m), 5,17 - 5,08 (0,5H, m), 4,92 - 4,82 (0,5H, m), 4,81 - 4,6 (1H, m), 4,6 - 4,35 (3H, m), 4,05 - 3,9 (1H, m), 3,95 (3H, s), 3,82-3,7 (1H, m), 2,96-2,05 (10H, m), 1,45 (4,5H, s), 1,38 (4,5H, s)

Výsledný produkt se přemění na sloučeninu 107b způsobem popsaným v příkladu 5 v případě sloučeniny 68a, čímž se získá sloučenina uvedená v názvu ve formě bílé pevné látky s výtěžkem 56 %.

*H-NMR (perdeuteromethanol), hodnoty δ: 7,62 - 6,8 (17H, m), 5,64 - 5,58 (0,5, t), 5,52 - 5,46 (0,5H, t), 4,62 - 4,47 (2H, m), 4,40 - 4,32 (1H, m), 3,9 (1,5H, s), 3,88 (1,5H, s), 3,43 - 3,37 (1H, m), 3,0 - 2,92 (1H, m), 2,90 - 2,62 (6H, m), 2,5 - 2,4 (2H, m), 2,28 - 2,15 (2H, m), 1,32 (4,5H, s), 1,25 (4,5H, s).

4-(7-methoxybenzoxazol-2-yl)-4-oxo3(S)-{2-[2-oxo-5-(3-fenylpropionyl)-3(S)-(3-fenyl20 propiony lamino)-2,3,4,5-tetrahydrobenzo [b] [ 1,4] diazepin-1 -y 1] acetylamino} máselná kysel ina (sloučenina 108b) se připraví způsobem popsaným v příkladu 5 v případě sloučeniny 69a, čímž se získá sloučenina uvedená v názvu ve formě bílé pevné látky s výtěžkem 50 %.

'H-NMR (perdeuteromethanol), hodnoty δ: 7,41 - 6,88 (17H, m), 5,6 - 5,55 (0,5, t), 5,48 - 5,43 (0,5H, t), 4,64 - 4,45 (2H, m), 4,45 - 4,30 (1H, m), 3,93 (1,5H, s), 3,90 (1,5H, s), 3,47 - 3,34 (1H, m), 3,10 - 2,85 (2H, m), 2,84 - 2,63 (5H, m), 2,6 - 2,4 (2H, m), 2,3 - 2,1 (2H, m)

Terc-butylester 4-[5-(2,6-dichIorfenyl)oxazol-2-yl]-4-oxo-3(S)-{2-[2-oxo-5-(3-fenylpropionyl)-3-(S)-(3-fenylpropionylamino]-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]diazepin-l-yl]acetyl30 amino}máselné kyseliny (sloučenina 107c)

Terc-butylester 4-[5-(2,6-dichlorfenyl)oxazol-2-yl]-4(R,S)-hydroxy-3(S)-{2-[2-oxo-5-(3fenylpropionyl)-3(S)-(3-fenylpropionylamino)-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]diazepin-l-yl]acetylamino}máselné kyseliny se připraví ze sloučeniny 106c a sloučeniny 99 podobným způso35 bem jako je popsán v případě sloučeniny 67a v příkladu 5, čímž se získá bílá pevná látka s výtěžkem 72 %.

'H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,71 - 7,64 (1H, m), 7,58 - 7,42 (2H, m), 7,42 - 6,92 (15H, m), 6,5 - 6,37 (2H, m), 5,15 - 5,04 (1H, m), 4,88 - 4,68 (2H, m), 4,57 - 4,37 (2H, m), 4,28

- 4,13 (1H, m), 3,87 - 3,64 (2H, m), 3,04 - 2,80 (4H, m), 2,76 - 2,68 (1H, m), 2,67 - 2,42 (3H,

m), 2,41-2,31 (1H, m), 2,22 -2,12 (1H, m), 1,45 (9H, s)

Výsledný produkt se přemění na sloučeninu 107c podobným způsobem jako je popsán v případě sloučeniny 68a v příkladu 5, čímž se získá sloučenina uvedená v názvu ve formě bílé pevné látky s kvantitativním výtěžkem.

'H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,47 - 6,98 (18H, m), 6,52 - 6,42 (1H, d), 5,6 - 5,52 (1H, m), 4,78 - 4,71 (1H, m), 4,52 - 4,40 (2H, m), 4,03 - 3,94 (0,67H, m), 3,94 - 3,85 (0,33H, m), 3,85 - 3,75 (1H, m), 3,45 - 3,33 (lH,m), 3,08 - 2,98 (1H, m), 2,97 - 2,84 (4H, m), 2,55 50 2,43 (2H, m), 2,43 - 2,32 (1H, m), 2,23 - 2,13 (1H, m), 1,35 (9H, s)

4-[5-(2,6-dichlorfenyl)oxazol-2-yl]-4-oxo-3(S)-{2-[2-oxo-5-(3-fenylpropionyl)-3(S)-(3fenylpropionylamino)-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]diazepin-l-yl]acetylamino}máselná kyselina (sloučenina 108c) se připraví ze sloučeniny 107c, podobným způsobem jako je popsáno

-223 CZ 298625 B6 v případě sloučeniny 69a v příkladu 5, čímž se získá sloučenina uvedená v názvu ve formě bílé pevné látky s výtěžkem 72 %.

'H-NMR (perdeuteromethanol), hodnoty δ: 7,58 - 7,0 (18H, m), 5,62 - 5,53 (0,67H, m), 5,52 5 5,47 (0,33H, m), 4,68 (3H, m), 3,54 - 3,42 (1H, m), 3,1 - 2,92 (2H, m), 2,88 - 2,68 (5H, m), 2,63

- 2,45 (2H, m), 2,40 - 2,22 (2H, m)

(109) (no)

Stupeň C ř

CFjCOz*

(114) aRi = CH₃aR, =H ^NWn

Stupeň 1

Stupeň D

(Ph = fenyl, Me = methyl, But = terc-butyl, Cbz = benzyloxykarbonyl, Boc = terc-butoxykarbonyl)

Sůl 3(S)-{2(R,S)-[4-benzyl-7-oxo-6(S)-(N-benzyloxykarbonylamino}-[l,4]diazepan-2-yl]propionylamino}^t-oxomáselné kyseliny s kyselinou trifluoroctovou (sloučenina 114a)

Stupeň A. K roztoku 0,85 g (2,2 mmol) terc-butyl-2-N-benzyloxykarbonyl-3-N-benzyl-(S)2,3-diaminopropionátu (sloučeniny 110), 0,65 g (2,7 mmol) methylesteru 3-(N20 terc-butoxykarbonyl)amino-2-methyl-5-oxopentanové kyseliny (sloučeniny 109a),

0,1 ml (1,8 mmol) kyseliny octové, 0,36 g (2 mmol) octanu sodného a 1 g molekulárního síta (4 x 10¹⁰ m) ve 45 ml methanolu a přidá 0,33 g (5,3 mmol) natriumkyanborohydridu. Směs se míchá přes noc při teplotě 25 °C, poté se zfiltruje přes celit a zahustí za sníženého tlaku. Zbytek se rozpustí v IN hydroxidu sodného a extrahuje se třikrát vždy 40 ml ethylacetátu. Organická vrstva se vysuší síranem hořečnatým, zfiltruje a odpaří za vzniku oleje. Chromatografickým zpracováním na

-224CZ 298625 B6 silikagelu za použití směsi hexanu a ethylacetátu v poměru 4 : 1 jako elučního činidla se získá 0,92 g (výtěžek 68 %) sloučeniny 11 la ve formě oleje.

Stupeň B. Výše uvedený materiál se rozpustí ve 3 ml dichlormethanu, roztok se ochladí na teplotu 0 °C a přidá se 25% roztok kyseliny trifluoroctové v dichlormethanu (20 ml).

Směs se poté nechá zahřát na teplotu 25 °C a míchá se, až se pomocí chromatografie na tenké vrstvě za použití směsi hexanu a ethylacetátu v poměru 4:1 jako elučního činidla zjistí, že je reakce dokončená. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se vysuší ve vakuu, poté se rozpustí ve 40 ml dichlormethanu a přidá se 1 ml ío (9 mmol) 4-methylmorfolinu, 0,2 g (1,5 mmol) 1-hydroxybenzotriazolu (HOBT) a

0,61 g (3,2 mmol) l-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimid-hydrochloridu (EDC). Výsledná směs se míchá před noc při teplotě 25 °C, poté se naředí dichlormethanem a promyje se vodou. Organická vrstva se vysuší síranem hořečnatým, zfiltruje a odpaří, čímž se získá olej. Chromatografickým zpracováním na silikagelu za použití směsi hexanu a ethylacetátu v poměru 3 : 2 jako elučního činidla se získá

0,49 g (výtěžek 74 %) sloučeniny 112a ve formě viskózního oleje.

Stupeň C. Roztok 0,15g (0,32 mmol) methylesteru 2(R,S)-[4-benzyl-7-oxo-6(S)-(N-benzyloxykarbonylamino)-[l,4]diazepan-l-yl]propionové kyseliny (sloučeniny 112a) se rozpustí v methanolu, přidá se 0,32 mí 1M hydroxidu lithného, směs se míchá po dobu 5,5 hodiny při teplotě 25 °C a poté se odpaří do sucha. Zbytek se azeotropuje dvakrát vždy s 10 ml ethanolu, dvakrát vždy s 10 ml acetonitrilu a dvakrát vždy s 10 ml benzenu, a poté se vysuší ve vakuu. Výsledný zbytek se přemění na sloučeninu 114a podobným způsobem jako je popsán v příkladu 3 v případě sloučeniny K (stupně A, B a C) a vyčistí se vysoceúčinnou kapalinovou chromatografií (HPLC) s obrácenými fázemi na Ci₈-silikagelu za použití 0,1% kyseliny trifluoroctové ve vodě/0,1% kyseliny trifluoroctové v acetonitrilu jako elučního činidla. Získá se 17 mg (výtěžek 10 %) požadované sloučeniny uvedené v názvu ve formě viskózního oleje.

'H-NMR (500 mHz, perdeuteromethanol), hodnoty δ: 1,15 (m, 3H), 2,30 - 2,70 (m, 6H), 2,72 2,95 (široký m, 6H), 3,30 - 3,80 (m, 4H), 4,10 (m, 1H), 4,40 (m, 4H), 4,95 (m, 1H), 6,95 - 7,10 (široký s, 5H) a 7,12 - 7,20 ppm (široký s, 5H)

Sůl 3(S)-{2-[4-benzyl-7-oxo-6(S)-(N-benzyloxykarbonylamino)-[l,4]diazepan-l-yl]acetylamino}-4-oxomáselné kyseliny s kyselinou trifluoroctovou (sloučenina 114b) se připraví ze sloučeniny 109b podobným způsobem jako je popsán v případě syntézy sloučeniny 114a, čímž se získá 85 mg viskózního oleje.

'H-NMR (500 Mhz, perdeuteromethanol), hodnoty δ: 1,20 (d, J = 7 Hz, 3H), 2,28 (m, 2H), 2,60 (m, 2H), 3,18 (široký s, 6H), 3,35 - 3,45 (m, 2H), 3,60 - 3,95 (m, 2H), 4,15 (m, 1H), 4,32 (m, 1H), 4,42 (m, 1H), 5,00 (široký m, 2H), 7,20 (široký s, 5H) a 7,40 ppm (široký s, 5H) ¹⁹F-NMR (470 MHz, perdeuteromethanol), hodnota δ: - 10,72 ppm (s, 3F)

4-oxo-3(S)-{2-(R,S)-[7-oxo-4-(3-fenylpropionyl)-6(S)-(3-fenylpropionylamino)[l,4]diazepan-l-yl]propionylamino}máselná kyselina (sloučenina 115)

Stupeň D. Suspenze 0,22 g (0,49 mmol) methylesteru 2(R,S)-[4-benzyl-7-oxo-6(S)-(N-ben50 zyloxykarbonylamino)-[l,4]diazepan-l-yl]propionové kyseliny (sloučeniny 112b) a 20% hydroxidu palladnatého na uhlí (50 mg) v ethanolu se míchá v hydroxidu palladnatého na uhlí (50 mg) v ethanolu se míchá v atmosféře vodíku po dobu 7 hodin. Rozpouštědlo se odpaří za sníženého tlaku a zbytek se rozpustí ve 20 ml dichlormethanu, poté se přidá 1 ml triethylaminu a 170 mg (1 mmol) dihydro-225 CZ 298625 B6 cinnamoylchloridu. Výsledná směs se míchá přes noc, poté se naředí ethylacetátem a promyje se IN hydroxidem sodným. Organická vrstva se vysuší síranem hořečnatým, zfiltruje a odpaří za vzniku oleje. Chromatografickým zpracováním na silikagelu za použití směsi hexanu a ethylacetátu v poměru 4 : 1 jako elučního činidla se získá 0,175 g (výtěžek 75 %) sloučeniny 113 ve formě oleje.

Stupeň C. 0,15 g (0,32 mmol) sloučeniny 113 se rozpustí v methanolu, přidá se 0,32 ml 1M hydroxidu lithného, směs se míchá při teplotě 40 °C přes noc a odpaří se do sucha. Zbytek se azeotropuje dvakrát vždy s 10 ml ethanolu, dvakrát vždy s 10 ml acetonitrilu a dvakrát vždy s 10 ml benzenu a poté se vysuší ve vakuu. Výsledný zbytek se přemění na sloučeninu 115 podobným způsobem jako je popsáno v příkladu 3 v případě sloučeniny K (stupně A, B a C).

-s „„ Z* f StutenE

CbzSr^COjBu-t I i ~ O B«e

COjBu-t (11<) (no) (117)

Stupen F

Stupeň G

H O

(Ph - fenyl, Bu-t = terc-butyl, Cbz = benzyloxykarbonyl, Boc = terc-butoxykarbonyl)

3-{2-[2,4-dibenzyl-3,7-dioxo-6-(N-benzyloxykarbonylamino)-[l,4]diazepan-l-yl]acetylamino}-4-oxomáselná kyselina (sloučenina 121)

Stupeň E. Roztok 1,77 g (4,6 mmol) terc-butyl-2-N-benzyloxykarbonyl-3-N-benzyl-(S)2,3-diaminopropionátu (sloučeniny 110), 1,04 g (4,8 mmol) N-allyl-N-terc-butoxykarbonyl-(S)-fenylalaninu (sloučeniny 116), 0,74 g (5,5 mmol) 1-hydroxybenzotriazolu (HOBT) a 1,33 g (6, 9 mmol) l-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodi25 imid-hydrochloridu (EDC) v 50 ml dichlormethanu se míchá při teplotě 25 °C po dobu 16 hodin, poté se naředí 100 ml dichlormethanu a promyje se vodou.

-226CZ 298625 B6

Organická vrstva se vysuší síranem hořečnatým, zfiltruje a odpaří za vzniku oleje. Chromatografickým zpracováním na silikagelu za použití směsi hexanu a ethylacetátu v poměru 85 : 15 se získá 1,34 g (výtěžek 43 %) sloučeniny 117 ve formě bezbarvého viskózního oleje.

Stupeň F: 1,34 g sloučeniny 117 se rozpustí ve 3 ml dichlormethanu a přidá se 50% roztok kyseliny trifluoroctové v dichlormethanu (20 ml). Po uplynutí 1,5 hodiny se rozpouštědlo odstraní za sníženého tlaku, zbytek se vysuší ve vakuu, poté se rozpustí v 50 ml dichlormethanu a přidá se 0,2 ml (2 mmol) 4-methylmorfolinu, 0,27 g (2 ío mmol) 1-hydroxybenzotriazolu (HOBT) a 0,8 g (4 mmol) l-(3-dimethylbenzotriazolu (HOBT) a 0,8 g (4 mmol) l-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimidhydrochloridu (EDC). Směs se míchá přes noc při teplotě 25 °C, poté se naředí dichlormethanem a promyje se vodou. Organická vrstva se vysuší síranem hořečnatým, zfiltruje a odpaří za vzniku oleje. Chromatografickým zpracováním na silikagelu za použití směsi hexanu a ethylacetátu v poměru 7 : 3 se získá 0,8 g (výtěžek 80 %) sloučeniny 118 ve formě viskózního oleje.

Stupeň G. 0,8 g sloučeniny 118 se rozpustí ve 40 ml methanolu, roztok se ochladí na teplotu 78 °C a sytí se ozónem až je barva roztoku modrá. Nadbytek ozónu se odstraní profoukáním argonem, poté se přidá 5 ml dimethylsulfidu, směs se nechá zahřát na teplotu 25 °C a míchá se po dobu 3 hodin. Odtraněním rozpouštědla a chromatografickým zpracováním na silikagelu za použití směsi hexanu a ethylacetátu v poměru 1 : 1 se získá 0,74 g (výtěžek 74 %) sloučeniny 119 ve formě bílé pevné látky.

Stupeň H. 0,2 g (0,4 mmol) sloučeniny 119 se rozpustí ve 25 ml acetonu, roztok se ochladí na teplotu 0 °C a po kapkách se přidá roztok Jonesova činidla, až dojde k trvalému oranžovému zabarvení. Poté se ke směsi přidá 5 ml 2-propanolu a výsledný roztok se zfiltruje přes celit a promyje se acetonem. Odstraněním rozpouštědla se získá zelenobílá pevná látka, která se vysuší ve vakuu, čímž s získá sloučenina 120.

Výsledný zbytek se přemění na sloučeninu 121 podobným způsobem jako je popsáno v případě sloučeniny K (stupně A, B a C). Chromatografickým zpracováním na silikagelu za použití směsi dichlormethanu, methanolu a kyseliny octové v poměru 95 : 4,5 : 0,5 jako elučního činidla se získá 85 mg (výtěžek 53 %) krémově zbarvené pevné látky, která se identifikuje na základě následujících spektrálních údajů jako 3-{21-[2,4-dibenzyl-3,7-dioxo-6-(6-benzyloxykarbonylamino)-[l,4]diazepan-l-yl]acetylamino}-4-oxomáselná kyselin a(sloučenina 121).

’Η-NMR (500 MHz, perdeuteromethanol), hodnoty δ: 2,38 (m, 1H), 2,45 (m, 1H), 3,21 (široký s,

2H), 3,32 - 3,39 (široký m, 6H), 3,85 (m, 1H), 4,05 (m, 1H), 4,21 (široký m, 1H), 4,31 (široký s,

1H), 4,45 (široký m, J = 11 Hz, 1H), 4,95 (široký s, 4H), 7,20 (široký s, 5H) a 7,33 - 7,45 ppm (m, 5H) ^I9F-NMR (470 MHz, perdeuteromethanol), hodnota δ: - 10,62 ppm (s, 3F)

-227CZ 298625 B6

(tBu = terc-butyl)

Terc-butyl-(3S)-N-(allyloxykarbonyl)-3-amino-5-(2-chlorfenylmethylthio)-4-oxopentanoát (sloučenina 123)

K míchanému roztoku 749 mg (2,14 mmol) (3S)-terc-butyl-N-(allyloxykarbonyl)-3-amino-5brom-4-oxopentanoátu (sloučenina 122; WO 93 16710) ve 20 ml dimethylformamidu se přidá ío 273 mg (4,70 mmol) fluoridu draselného a poté 373 mg (2,35 mmol) 2-chlorfenylmethylthio.

Směs se míchá po dobu 3,5 hodiny, poté se přilije 50 ml vody a směs se extrahuje dvakrát vždy ml ethylacetátu. Smíchané organické extrakty se promyjí čtyřikrát vždy 50 ml vody a poté ml roztoku chloridu sodného. Vysuší se nad síranem hořečnatým a zahustí, čímž se získá olej, který se vyčistí pomocí velmi rychlé chromatografie za použití 10 až 35% ethylacetátu v hexanu jako elučního činidla, čímž se získá 832 mg (91 %) bezbarvé pevné látky o teplotě tání 45 až °C.

[oc]_D ²⁰ -19,0° (c = 1,0, dichlormethan)

Infračervené spektrum (film): 3340, 2980, 2935, 1725, 1712, 1511, 1503, 1471, 1446, 1421,

1393,1368, 1281, 1244, 1157, 1052, 1040, 995, 764, 739 'H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,36 (2H, m), 7,21 (2H, m), 5,91 (2H, m), 5,27 (2H, m), 4,76 (1H, m), 4,59 (2H, d), 3,78 (2H, s), 3,36 (2H, m), 2,91 (1H, dd), 2,74 (1H, dd), 1,43 (9H, s)

Analýza pro C20H26CINO5S:

vypočteno: 56,13 % C, 6,12 % H, 3,27 % N, 7,49 % S;

nalezeno: 56,08 % C, 6,11 % H, 3,26 % N, 7,54 % S.

Hmotová spektrometrie (Cl): 430/28 (M⁺ +1,3 %), 374/2 (100)

Terc-butyl-(3S)-3-(2-(6-benzyl-l,2-dibenzo-2-oxo-3-(3-fenylpropionylamino)-l-pyridyl)acetylamino-5-(2-chlorfenylmethylthio)-4-oxopentanoát (sloučenina 124a)

-228CZ 298625 B6

300 mg (0,76 mmol) 6-benzyl-l,2-dihydro-2-oxo-3-(3-fenylpropionylamino)pyridyloctové kyseliny (sloučeniny 52b) v 7 ml tetrahydrofuranu se míchá s 205 mg (1,52 mmol) 1-hydroxybenzotriazolu a l-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimid-hydrochloridem. Po uplynutí 3 minut se přidá 12 kapek vody, směs se míchá po dobu 10 minut a poté se přidá 325 mg (0,76 mmol) terc-butyl-(3S)-N-(allloxykarbonyl)-3-ammo-5-(2-chlorfenylmethylthio)-4-oxopentanoátu (sloučeniny 123), 20 mg bis(trifenylfosfm)palladium (II) chloridu a 0,6 ml (2,28 mmol) tributylcínhydridu. Směs se míchá po dobu 5 hodin při teplotě místnosti, vylije se do ethylacetátu, promyje se vodnou 1M kyselinou chlorovodíkovou (dvakrát), vodným hydrogenio uhličitanem sodným, roztokem chloridu sodného, vysuší se síranem hořečnatým a zahustí. Zbytek se trituruje s pentanem a supematant se odstraní. Chromatografickým zpracováním na silikagelu za použití 50% ethylacetátu v hexanu jako elučního činidla se získá 439 mg (81 %) bezbarvé pěny.

[a]_D ²¹ -18,3° (c = 0,5, dichlormethan)

Infračervené spektrum (bromid draselný): 3356, 3311, 1722, 1689, 1646, 1599, 1567, 1513, 1367,1154 ’Η-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ 8,39 (1H, d), 8,23 (1H, s), 7,24 (14H, m), 6,16 (1H, d), 4,95 (1H, m), 4,63 (2H, m), 4,012 (2H, s), 3,74 (2H, s), 3,27 (2H, s), 2,85 (6H, m), 1,40 (9H, s).

Analýza pro QyjH^ClNsOňS: vypočteno: 65,39 %C, 5,91 % H, 5,87 % N;

nalezeno: 65,51 % C, 5,99 % H, 5,77 % N.

Terc-butyl-[3 S( 1 S,9S)]-3-(6,10-dioxo-l ,2,3,4,7,8,9,10-oktahydro)-9-(3-fenylpropionylamino)-6H-pyridazino[ 1,2-a] [ 1,2]diazepin-l-karboxamido-5-(2-chlorfenylmethylthio)-4oxopentanoát (sloučenina 124b) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 124a z thio30 etheru 123 a 3S(lS,9S)-3-(6,10-dioxo-l,2,3,4,7,8,9,10-oktahydro)-9-(3-fenylpropionylamino)-6H-pyridazino[l,2-a][l,2]diazepin-l-karboxylové kyseliny (sloučeniny 45a), čímž se získá 452 mg (50 %) bezbarvé pěnovité látky o teplotě tání 55 až 57 °C.

[a]_D ²² -94,0° (c = 0,12, dichlormethan)

Infračervené spektrum (bromid draselný): 3288, 2934, 1741, 1722, 1686, 1666, 1644, 1523, 1433,1260, 1225, 1146, 757 ’Η-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,35 (3H, m), 7,20 (7H, m), 6,46 (1H, d), 5,21 (1H,

m), 4,97 (2H, m), 4,56 (1H, m), 3,75 (2H, s), 3,25 (3H, m), 2,93 (5H, m), 2,71 (1H, dd), 2,55 (2H, m), 2,30 (1H, m), 1,92 (3H, m), 1,66 (2H, m), 1,42 (9H, s)

Analýza pro C35H43ClN₄O7S.0,25H₂O:

vypočteno: 59,73 % C, 6,23 % H, 5,04 % Cl, 7,96 % N, 4,56 % S;

nalezeno: 59,73 % C, 6,19 % H, 5,10 % Cl, 7,79 % N, 4,58 % S.

Hmotová spektrometrie (-FAB): 697 (M-l, 100) (3S)-3-(2-(6-benzyl-l,2-dihydro-2-oxo-3-(3-fenylpropionylamino)-l-pyridyl)acetylamino50 5-(2-chlorfenylmethylthio)-4-oxopentanová kyselina (sloučenina 125a)

K 400 mg (0,56 mmol) terc-butyl-3-(2-(6-benzyl-l,2-dihydro-2-oxo-3-(3-fenylpropoinylamino)-l-pyridyl)acetylamino-5-(2-chlorfenylmethylthio)-4-oxopentanoátu (sloučeniny 124a)

-229CZ 298625 B6 ve 3 ml dichlormethanu se při teplotě 0 °C přidají 3 ml kyseliny trifluoroctové a směs se míchá při teplotě 0 °C po dobu 1 hodiny a při teplotě místnosti po dobu 0,5 hodiny. Roztok se zahustí, poté se znovu rozpustí v dichlormethanu a znovu zahustí. Tento postup se opakuje třikrát. Zbytek se míchá v etheru po dobu 1 hodiny a zfíltruje, čímž se získá 364 mg (99 %) bezbarvé pevné látky o teplotě tání 165 až 167 °C.

[a]_D ²² -27,7° (c = 0,2, dichlormethan)

Infračervené spektrum (bromid draselný): 3280, 1712, 1682, 1657, 1645, 1593, 1562, 1527, ío 1497,1416,1203,1182 ’Η-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 8,47 (1H, d), 8,21 (1H, s), 7,70 (1H, d), 7,22 (14H, m), 6,24 (1H, d), 5,03 (1H, m), 4,65 (2H, m), 4,06 (2H, s), 3,6 (2H, m), 3,23 (2H, m), 2,88 (6H, m) [3S( 1S, 9S)]—3—(6,10-dioxo-l ,2,3,4,7,8,9,10-oktahydro)-9-(3-fenylpropionylamino)-6H-pyridazino[ 1,2-a][ 1,2]diazepin-l-karboxamido-5-(2-chlorfenylmethylthio)-4-oxapentanová kyselina (sloučenina 125b) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 125a z terc-butylesteru 124b, čímž se získá 362 mg (93 %) bezbarvého prášku o teplotě tání 76 až 80 °C.

[a]_D ²¹-134° (c = 0,10, methanol)

Infračervené spektrum (bromid draselný): 3309, 2935, 1725, 1658, 1528, 1445, 1417, 1277, 1219, 1175 'H-NMR (perdeterodimethylsulfoxid), hodnoty δ: 8,80 (1H, d), 8,19 (1H, d), 7,31 (9H, m), 5,09 (1H, m), 4,74 (1H, m), 4,63 (1H, m), 4,35 (1H, m), 3,76 (2H, m), 3,28 (3H, m), 2,80 (5H, m), 2,52 (4H, m), 2,16 (2H, m), 1,90 (3H, m)

Analýza pro C₃iH₃5Cl2N4O7S.0,25H₂O:

vypočteno: 57,49 % C, 5,53 % H, 8,65 %N, 4,95 % S; nalezeno: 57,35 % C, 5,43 % H, 8,45 % N, 4,88 % S.

Hmotová spektrometrie (-FAB): 641 (M-l, 100)

Údaje ve výše uvedených příkladech svědčí o tom, že sloučeniny podle vynálezu vykazují inhibiční účinnost na enzym konvertující interleukin-ΐβ.

Pokud jsou sloučeniny podle vynálezu schopné inhibovat ICE in vitro a dále mohou být orálně podávány savcům, jsou zřejmě klinicky využitelné při léčení onemocnění zprostředkovaných IL1. Uvedené testy předpovídají schopnost sloučenin inhibovat ICE in vivo.

Ačkoli byla popsána řada provedení vynálezu, je zřejmé, že základní konstrukce lze měnit při vytvoření jiných provedení, která využívají produkty a způsoby podle vynálezu, Je tedy třeba vzít v úvahu, že rozsah vynálezu je definován připojenými patentovými nároky a nikoliv konkrétními provedeními, která byl uvedena jako příklady.

-230CZ 298625 B6

PATENTOVÉ

Claims (20)

Hide Dependent

NÁROKY

1. N-acylaminosloučenina obecného vzorce a (CH₂)_ro-CO₂R /

Ri-NH-CH (a) , \

^r3

10 ve kterém

Ri je vybrán ze souboru sestávajícího ze skupin následujících obecných vzorců al-g2:

přičemž m je 1;

20 R je atom vodíku nebo přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

R20 je skupina ⁷ N popřípadě substituovaná fenoxyskupinou nebo 1,3-dithiolanovou skupinou,

Qi je atom vodíku, přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku a 25 substituovaná fenylovou skupinou, kde fenylová skupina je popřípadě substituovaná sku-231 CZ 298625 B6 pinou -OH, -Oalkyl s přímou či rozvětvenou alkylovou skupinou obsahující 1 až 6 atomů uhlíku nebo -CF₃,

R₃ je -C(O)H, -C(=N-N(H)-C(0)-NH2)H, -C(O)CH₂OC(O)A_r|, kde Ar, je 2,6-dichlorfeny5 lová skupina nebo skupina

Rs je atom vodíku nebo přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku 10 a substituovaná fenylovou skupinou a

R<, je atom vodíku nebo přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku;

nebo R,je:

20 m je 1;

R je atom vodíku nebo přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, X jeCH,

R3 je:

-C(O)H,

-C(O)CH₂OH,

-C(O)CH₂CH₃,

30 -C(O)CH₂OC(O)Ar,, kde Ar, je 2,6-dichlorfenylová skupina,

-C(O)CH₂OCH₂Ar,, kde Ar, je 2-chlorfenylová skupina,

-C(O)CH₂SCH₂Ar,, kde Ar, je 2-chlorfenylová skupina,

-232CZ 298625 B6

R₅ je -CORg, -CO-O-R9, -SO2-R9 nebo N-acetyl-tyrosinylová skupina, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku a substituovaná fenylovou

5 skupinou,

R<5 je atom vodíku nebo přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku a

10 Qi je atom vodíku, fenylová skupina nebo přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku a popřípadě substituovaná fenylovou skupinou;

nebo Rije:

přičemž m je 1,

R je atom vodíku,

Qi je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku a 25 R₃ je -C(O)H;

nebo R]je:

-233 CZ 298625 B6 (el) (e2) přičemž

5 m jel;

R je atom vodíku nebo přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, x je CH,

Rs je:

-C(O)R₉, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku a popřípadě substituovaná fenylovou skupinou,

4-pyridylakryloylová skupina,

15 -C(O)C(O)N(H)-Ari, kde Ar, je 4-chlorfenylová skupina,

-C(O)C(O)-Ari, kde Ar, je fenylová skupina nebo 2,6-(R₉O)₂-fenylová skupina, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

-C(O)OR₉, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku a popřípadě substituovaná fenylovou skupinou, nebo

20 -C(O)NR₉R₁₀, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku a Rio je atom vodíku, nebo

-SO₂-R₉, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

-SO₂-Ar_b kde Ar, je fenylová skupina,

25 -S0₂-N(R₉)(Rio), kde R₉ a R,o jsou každý přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, nebo

-COAri, kde Ar, je:

fenylová skupina,

4-R₉C(O)-amino-3-chlorfenylová skupina, kde R₉ je přímá či rozvětvená 30 alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

1-isochinolinylová skupina,
2,6-dichlorfenylová skupina,
3-chlor-^l-(R₉C(O)N(H))fenylová skupina, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

35 2-chinolinylová skupina,

3- chinolinylová skupina,
4- chinolinylová skupina,

6-chinolinylová skupina,

8-chinolinylová skupina,

-234CZ 298625 B6

4-alkoxy-2-chinolinylová skupina, kde alkoxyskupinou je přímá nebo rozvětvená alkoxyskupina, obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

2- R₉C(O)-aminofenylová skupina, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,
5 3-(R₉)₂N-fenylová skupina, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

4-(R9)2N-fenylová skupina, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

4-R₉C(O)N(H)fenylová skupina, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skulo pina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, a kde alkylová skupina je popřípadě substituovaná fenylovou skupinou,

3- R₉C(O)N(H)fenylová skupina, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

4- R₉C(O)N(R₉)fenylová skupina, kde každý R₉ je přímá či rozvětvená alky15 lová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

4-R₉N(H)C(O)N(H)fenylová skupina, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

4-R₉OC(O)N(H)fenylová skupina, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

20 3,4-(R9C(O)N(H))₂fenylová skupina, kde každý R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

4-R₉S(O)₂-aminofenylová skupina, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

4-R₉S(O)₂-fenylová skupina, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina 25 obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

4-aminosulfonylfenylová skupina,

2-R₉-fenylová skupina, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

2-R₉-3-hydroxyfenylová skupina, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová 30 skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

3,5-(R₉)₂-4-hydroxyfenylová skupina, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

2- R₉O-fenylová skupina, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

35 3-R₉O-fenylová skupina, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

4-R₉O-fenylová skupina, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, a kde alkylová skupina je popřípadě substituovaná fenylovou skupinou,

40 2-chlorfenylová skupina,

3- chlorfenylová skupina,

4- chlorfenylová skupina,

3.4- dichlorfenylová skupina,

3.5- dichlorfenylová skupina,

45 3,5-dichlor-4-hydroxyfenylová skupina,

3.5- dichlor-4-R₉O-fenylová skupina, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

-235 CZ 298625 B6

2-R₉-3-chlorfenylová skupina, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

2- R9-5-chlorfenylová skupina, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

5 3_chlor-4-R9O-fenylová skupina, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

3- chlor-4-hydroxyfenylová skupina,

3-chlor-4-aminofenylová skupina,

3,5-dichlor-4-aminofeny lová skupina,

10 2-fluorfenylová skupina,

3- fluorfenylová skupina,

4- fluorfenylová skupina,

3.4- difluorfenylová skupina,

3- chlor-4-fluorfenylová skupina,

15 3-fluor-4-R9O-fenylová skupina, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

4- hydroxyfenylová skupina,

4-(4-hydroxybenzoyloxy)fenylová skupina,

4-benzoyloxyfenylová skupina,

20 4-hydroxy-3-methyl-N-morfolinylfenylová skupina,

4-hydroxyalkylfenylová skupina, kde alkylovou skupinou je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

4-R₉C(O)fenylová skupina, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

25 4-benzoylaminofenylová skupina,

4-aminofenylová skupina,

4-fenoxyfenylová skupina, cinnamoylová skupina,

1-naftylová skupina,

30 2-naftylová skupina,

4-bifenylová skupina,

1- hydroxy-2-naftylová skupina,
6-hydroxy-2-naftylová skupina,

2- amino-3-naftylová skupina,

35 4-(R_I0)2N-l-naftylová skupina, kde každý Rio je atom vodíku nebo přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

2- R₉-4,5-methylendioxyfenylová skupina, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

3.4- methylendioxyfenylová skupina,

40 2-thienylová skupina,

3- thienylová skupina,

2-thienothienylová skupina,

2-benzothienylová skupina,

2-benzofuranylová skupina,

-236CZ 298625 B6

2-pyridylová skupina, cyklopropylová skupina, cyklohexylová skupina,

3,4,5-{R₉O)₃-fenylová skupina, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová sku5 pina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

1.3- dialkyl-5-pyrazol, kde každou zalkylových skupin je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

1.4- dialkyl-5-thiazol, kde každou z alkylových skupin je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, ío 4-alkyl-2-trifluormethylfenyl-5-thiazol, kde alkylovou skupinou je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

5- alkyl-3-isoxazol, kde alkylovou skupinou je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

6- benzotriazolylová skupina,

15 2-indolylová skupina,

1- alkyl-2-indolylová skupina, kde alkylovou skupinou je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

2- imidazol,

6-benzimidazol, nebo

20 5-(l,2,3-thiadiazol), a

R₃ je:

-C(O)H,

-C(O)CH2SCH₂Ari, kde Αη je 2-chlorfenylová skupina,

25 -C(O)CH₂OCH₂Ar_b kde Ar! je 2-chlorfenylová skupina,

-C(O)CH₂OC(O)Ar_b kde Ar, je:

2.6- dichlorfenylová skupina,

1-naftylová skupina,

4-(3-fenyl-5-methylisoxazolyl)ová skupina,

30 2-fenoxyfenylová skupina,

3- fenoxyfenylová skupina,

3-methyl-2-thienylová skupina, nebo

2.6- (R9)₂fenylová skupina, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

35 -C(O)CH₂F,

-C(O)CH₂Br,

-CN,

-C(=N-O-(CH2)_nAri)H, kde n je 1 až 6 a Ar, je fenylová skupina nebo 2,6-dichlorfenylová skupina,

40 -C(=N-O-R₉)H, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

-C(=N-N(H)C(O)NH₂)H,

-(C(O)CH₂S(CH3)CH₂Arj)⁺BF4·, kde Ar, je 2-chlorfenylová skupina,

-237 CZ 298625 B6

-238 CZ 298625 B6

-239CZ 298625 B6 kde m je 1,

R je atom vodíku,

R₅ je:

-COR9, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku 10 a substituovaná fenylovou skupinou, nebo

-CO Ar,, kde Ar, je feny lová skupina, a R₃ je -C(O)H, nebo

15 m je 2,

R je atom vodíku nebo přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

R₅ je -COAr_b kde Ar, je fenylová skupina, a 20

R₃ je -C(O)H nebo -C(=N-N(H)C(O)NH₂)H;

nebo R]je:

(e6) přičemž m je 1,

R je atom vodíku nebo přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, R₃ je-C(O)H, a

35 R₅ je:

-C(O)R₉, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, kde alkylová skupina je popřípadě nenasycená a kde alkylová skupina je popřípadě substituovaná:

fenylovou skupinou,

40 4-chlorfenylovou skupinou,

3.4- methylendioxyfenylovou skupinou,

3.4- dichlorfenylovou skupinou, cyklohexylovou skupinou, a

-240CZ 298625 B6

2.4.6- (R9)3-fenylovou skupinou, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

-SO₂-Ari, kde Ar_t je 2-naftylová skupina,

-C(O)NHAri, kde Ar, je fenylová skupina, 2-R₉O-fenylová skupina nebo 3-R₉O5 fenylová skupina, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

-C(O)Ar_b kde Ar, je:

fenylová skupina,

2,3-methylendioxyfenylová skupina, ío 4-R₉C(O)N(H)fenylová skupina, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

4-R₉O-fenylová skupina, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

2-benzothienylová skupina,

15 4-hydroxyfenylová skupina,

2- indolylová skupina,

4-R₉O-3,5-R₉-fenylová skupina, kde každý R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

4-R₉O-3,5-dichlorfenylová skupina, kde každý R₉ je přímá ěi rozvětvená 20 alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

-C(O)C(O)Ar_b kde Arje: fenylová skupina, thienylová skupina,

3- indolylová skupina,

25 3,4-methylendioxyfenylová skupina,

4- R₉O-fenylová skupina, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

2-R₉O-fenylová skupina, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

30 2,6-(R₉O)₂-fenylová skupina, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

2.4.6- (R₉)3-fenylová skupina, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, nebo

3,4,5-(R₉O)₃-fenylová skupina, kde každý R₉ je přímá či rozvětvená alkylová 35 skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, nebo

-C(O)C(O)N(H)Ar_b kde Αη je 4-chlorfenylová skupina; nebo Rije:

-241 CZ 298625 B6 (e4j přičemž m je 1,

R₅ je -C(O)R₉, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, kde alkylová skupina je substituovaná fenylovou skupinou, a

R₃ je-C(O)H;

nebo Rj je:

(fl) (f2)

-242CZ 298625 B6 přičemž m je 1,

R je atom vodíku nebo přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

Rs je -COR9, kde Reje přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

10 každý R₆ je nezávisle přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku popřípadě substituovaná 4-hydroxyfenylovou skupinou,

Qi je -O-fenylová skupina nebo skupina -ORg, kde R9 je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, přičemž alkylová skupina je substituovaná fenylovou

15 skupinou, nebo je R₉ alkenylová nebo alkynylová skupina obsahující 2 až 6 atomů uhlíku, a

R₃ je:

-C(O)H,

20 -C(=N-N(H)-C(O)-NH₂)H,

-C(O)CH₂SCH₂Ari, kde Αη je 2-chlorfenylová skupina,

-243 CZ 298625 B6 nebo nebo R] je:

m je 1,

R je atom vodíku

R2oje nebo Ri je:

-244CZ 298625 B6 přičemž 5 m je 1,

R je atom vodíku,

R₃ je-C(O)H,

Qi je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku a substituovaná fenylovou skupinou, každý R₅ je nezávisle:

15 -C(O)R₉, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku a substituovaná fenylovou skupinou nebo 4-hydroxyfenylovou skupinou, nebo

-C(O)OR₉, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku a substituovaná fenylovou skupinou, a

20 Rf, je atom vodíku nebo přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku; nebo Ri je:

přičemž m je 1,

30 R je atom vodíku nebo přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku; R₃ je:

-C(O)H,

-245CZ 298625 B6

-C(=N-N(H)-C(O)-NH₂)H,

-C(O)CH₂OC(O)Ari, kde Ar! je 2,6-dichlorfenylová skupina,

R₅ je:

-C(O)Ar_b kde Αη je fenylová skupina, nebo

10 —C(O)R₉, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku a substituovaná fenylovou skupinou;

nebo Rije:

(wl) pricemz m je 1,

R je atom vodíku nebo přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku; Rs je:

-C(O)H,

25 -C(O)CH₂OH,

-C(O)CH₂CH₃,

-C(O)CH₂OC(O)Ar_b kde Ari je 2,6-dichlorfenylová skupina,

-C(=N-O-CH₂Ari)H, kde Ar, je 2,6-dichlorfenylová skupina,

-246CZ 298625 B6

N—N , nebo

R₅ je:

-C(O)R₉, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů

5 uhlíku a popřípadě substituovaná fenylovou skupinou, 3,4-dichlorfenylovou skupinou,

3.4- methylendioxyfenylovou skupinou, 2,4-dihydroxy-5-thiazolylovou skupinou, nebo

5- hydantoinylovou skupinou, přičemž alkylová skupina je popřípadě nenasycená,

-R₉, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku a substituovaná fenylovou skupinou nebo 2-naftylovou skupinou, ío -C(O)Ari, kde Αη je fenylová skupina, 1-naftylová skupina, 2-naftylová skupina,

6- hydroxy-2-naftylová skupina, 6-(6-hydroxy-2-naftoyloxy)-2-naftylová skupina, 2chinolinylová skupina, 4-chinolinylová skupina, 8-chinolinylová skupina, 1-isochinolinylová skupina, 2-hydroxy-4-chinolinylová skupina, 4-hydroxy-6-chlor-8-R₉-3-chinolinylová skupina, 4-R₉O-2-chinolinylová skupina, 4-hydroxy-
7-R₉O-3-chinolinylová

15 skupina, 3-thienylová skupina, 2,4-dialkyl-5-thiazolylová skupina, 2-alkyl-3-hydroxyfenylová skupina, 4-R₉C(O)N(H)fenylová skupina, 3,4-methylendioxyfenylová skupina,

3.5- (R₉)₂—4-hydroxyfenylová skupina, 3,5-(R₉)₂^l-R₉O-fenylová skupina, 2-indolylová skupina, 5-benzimidazolylová skupina, 3,5-dichlor-4-aminofenylová skupina, 3-chlor-Ahydroxyfenylová skupina, 3,5-(R₉O)₂^^:l-hydroxyfenylová skupina, 3-(R₉O)-4-hydroxy20 fenylová skupina, 4-hydroxyfenylová skupina, 4-(R₉O)-fenylová skupina, 4-(R₉)₂Nfenylová skupina, 3,5-dichlor-4-hydroxyfenylová skupina, 3,5-dichlor-4-R₉O-fenylová skupina, 3-chlor—4-aminofenylová skupina, 3-chlor-A-R₉C(O)N(H)-fenylová skupina,

3.5- dichlor—4-R₉C(O)N(H)-fenylová skupina, 2-chlor-3-hydroxy—4-pyridylová skupina,

3.5- dichlorpyridylová skupina, 6-benzothiazolylová skupina, 2-(l,8-naftyridin), 5-(425 chlorfenyl)-4-oxazolylová skupina, 4-cinnolinylová skupina, 3-fenyl-5-alkyl-4-isoxazolylová skupina, 3-chlor-4-alkylsulfonyl-2-thienylová skupina, 2-pyrazinylová skupina,

4-pyridinyl-N-oxid, 3-pyridinyl-N-oxid, 2-hydroxy-6-pyridinylová skupina, 2R₉C(O)N(H)-3-thienylová skupina, 2,3-dialkyl-7-indolylová skupina, 2-hydroxy-5-247CZ 298625 B6 pyridylová skupina, 2,6-(R₉O)₂-5-pyridylová skupina, 2-chlor-6-R₉O^4-pyridylová skupina, 2-chinoxalinylová skupina, 2-(l,6-naftyridinylová skupina), 3-pyridylová skupina,

2,6-dichlorfenylová skupina, 6-benzotriazolylová skupina, nebo 4-(N-morfolinylalkyloxy)fenylová skupina, kde každý R₉ a každá alkylová skupina jsou přímá či rozvětvená

5 alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, a každá alkoxyskupina je přímá či rozvětvená alkoxyskupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

-S(O)₂-Ar_b kde Ar, je fenylová skupina,

-S(O)₂-R₉, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku a substituovaná fenylovou skupinu, io -C(O)OAr_b kde Αη je 3-tetrahydrofuran,

-C(O)C(O)Ar_b kde Αη je:

fenylová skupina,

2.6- {R₉O)₂-fenylová skupina, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

15 2-thienylová skupina,

3,4-methy lendioxyfenylová skupina,

3- indolylová skupina,

4- (R₉O)fenylová skupina, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

20 2-(R₉O)fenylová skupina, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

2.4.6- (R₉)3-fenylová skupina, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

4-chlorfenylová skupina, nebo 25 2-furanylová skupina,

-C(O)C(O)N(H)Ar_b kde Αη je 4-chlorfenylová skupina, -C(O)-C(H)(CH₂CO₂H)N(H)C(O)CH3,

-C(O)-C(H)(CH₂CH₂CO2H)N(H)C(O)CH3,

-248CZ 298625 B6

-Η, nebo

5 -R₉, kde Říje přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku a substituovaná fenylovou skupinou,

-C(O)R₉, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku a popřípadě substituovaná:

fenylovou skupinou, ío -OR₉, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

-C(O)R₉, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

4-pyridylovou skupinou,

15 3-R₉-fenylovou skupinou, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

-OC(O)R₉, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

-OH,

20 -N(H)C(O)R₉, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až

6 atomů uhlíku,

-N(H)R₉, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

-ΟΑη, kde Ar₉ je fenylová skupina,

25 3-pyridylovou skupinou,

-SO₂R₉, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

-249CZ 298625 B6

N-morfolinylovou skupinou,

-CN,

2-amino-4-thiazolylovou skupinou,

5-tetrazolylovou skupinou,

5 2-alkyl-R₉-4-thiazolylovou skupinou,

N-piperidinylovou skupinou,

N-pyrrolidinylovou skupinou,

N-thiamorfolinylovou skupinou,

4-R₉-l-piperazinylovou skupinou,

10 4-hydroxy-N-piperidinylovou skupinou,

N-thiamorfolinyl-S,S-dioxidem,

-N(R₉)-O(R₉),

4-fenyl-l -piperazinylovou skupinou,

4-oxopiperidinylovou skupinou,

15 l-R₉-2-merkaptoimidazolylovou skupinou,

4-R₉C(O)-l-piperazinylovou skupinou,

-S-fenylovou skupinou, nebo dihydroxyskupinou,

-C(O)Ari, kde Αη je fenylová skupina nebo 2-R₉-4-thiazolylová skupina, kde R₉ je

20 přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

-C(O)C(O)OR₉, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

-C(O)C(O)R₉, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

25 -C(O)OR₉, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

-S(O)₂R₉, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

-C(O)N(H)R₉, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6

30 atomů uhlíku a substituovaná fenylovou skupinou,

-C(O)OAri, kde Ar! je 2-tetrahydrofuranylová skupina,

-C(O)H, nebo

-Αη, kde Αη 5-tetrazolylová skupina;

35 nebo Ri je:

-250CZ 298625 B6 přičemž m je 1,

5 R je atom vodíku,

X je -H, -F nebo -R₉, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, ίο Y je -H, -F, -N(R₉)₂, kde každý R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, nebo -CF₃,

Z je -H, -R₉, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

-F, -Cl, -OR₉, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů

15 uhlíku a popřípadě substituovaná fenylovou skupinou, -SO₂R₉, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, -OH nebo NH₂,

R₃ je-C(O)H,

20 R₅ je -C(O)Arj, kde Arj je fenylová skupina, 3,5-{R₉)₂-4-hydroxyfenylová skupina, 1-isochinolinylová skupina nebo 2-indolylová skupina, a

R₇ je -C(O)R₉, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku a substituovaná skupinou -OR₉, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující

25 1 až 6 atomů uhlíku;

přičemž m je 1,

35 R je atom vodíku,

R₃ je-C(O)H,

Q je-O-,-S-,-C(O)-,nebo-S(O)2-,a

R₅ je 1-isochinolinylová skupina, 3-indolylová skupina, nebo 3,5-(R₉)₂-A-hydroxyfenylová skupina, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku;

nebo Rije:

-251 CZ 298625 B6 přičemž m je 1,

R je atom vodíku,

R₃ je-C(O)H, a

R₅ je 1-isochinolinylová skupina.

2. N-acylaminosloučenina podle nároku 1, obecného vzorce a, ve kterém R] představuje sku pinu obecného vzorce:

, nebo (g2)

20 3. N-acylaminosloučenina podle nároku 1, obecného vzorce a, ve kterém R| představuje sku pinu obecného vzorce c:

-252CZ 298625 B6

4. N-acylaminosloučenina podle nároku 1, obecného vzorce a, ve kterém R, představuje sku pinu obecného vzorce d2:

(d2)

5. N-acylaminosloučenina podle nároku 1 pinu obecného vzorce el, e2:

(el) obecného vzorce a, ve kterém R, představuje sku nebo

15 6. N-acylaminosloučenina podle nároku 1, obecného vzorce a, ve kterém R, představuje sku pinu obecného vzorce e4, el:

20 7. N-acylaminosloučenina podle nároku 1, obecného vzorce a, ve kterém R, představuje sku pinu obecného vzorce Ω, f2 nebo 0:

-253 CZ 298625 B6
8. N-acylaminosloučenina podle nároku 1, obecného vzorce a, ve kterém R, představuje sku pinu obecného vzorce h2:

(h2)
9. N-acylaminosloučenina podle nároku 1, obecného vzorce a, ve kterém R, představuje sku pinu obecného vzorce ol-a, o6-a nebo 06:

osa.

(ol-a) (06) nebo

Re

R₅ .N ,N

0 R_e
10. N-acylaminosloučenina podle nároku 1, obecného vzorce a, ve kterém Ri představuje sku pinu obecného vzorce r3:

(r3)
11. N-acylaminosloučenina podle nároku 1, obecného vzorce a, ve kterém R] představuje sku pinu obecného vzorce wl:

(wl)
12. N-acylaminosloučenina podle nároku 1, vybraná ze skupiny zahrnující sloučeniny:

-255 CZ 298625 B6 (20d) (142) (20a)

-256CZ 298625 B6

Me = methylová skupina, Ph = fenylová skupina,

-257 CZ 298625 B6
13. N-acylaminosloučenina podle nároku 3 vybraná ze skupiny zahrnující sloučeniny:

-258CZ 298625 B6 (54d) (54e) (54f) (54g) (54h) (54 i)

-259CZ 298625 B6

-260 (127)

-261 CZ 298625 B6 (128)
14.

(129)
15. N-acylaminosloučenina podle nároku 5 vybraná ze skupiny zahrnující sloučeniny:

-262CZ 298625 B6

-263 CZ 298625 B6

O (139) CHr-jL, O H
16. N-acylaminosloučenina podle nároku 6 vybraná ze skupiny zahrnující sloučeniny: 5 (140) (141)
17. N-acylaminosloučenina podle nároku 7 vybraná ze skupiny zahrnující sloučeniny:

-264CZ 298625 B6
18. N-acylaminosloučenina podle nároku 2 vybraná ze skupiny zahrnující sloučeniny:

-265 CZ 298625 B6 (157)

-266CZ 298625 B6
19. N-acylaminosloučenina podle nároku 9 vybraná ze skupiny zahrnující sloučeniny:

-267CZ 298625 B6

22. N-acylaminosloučenina podle nároku 11 vybraná ze skupiny zahrnující sloučeniny:

-268CZ 298625 B6

23.

(106a) (108b)

-269 (σ), ve kterém je kruh popřípadě substituován skupinou R, a ve kterém:

5 R je -H nebo -Oalkylová skupina, kde alkylová skupina obsahuje 1 až 6 atomů uhlíku a je přímá nebo rozvětvená;

Ri je:

nebo n je 1 nebo 2;

každý R₂ je nezávisle přímá nebo rozvětvená alkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku, popřípadě 15 substituovaná hydroxyfenylovou skupinou; a

R₅ je:

-CO-Rg, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku, nebo

-CO-O-R9, kde R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku, sub20 stituovaná fenylovou skupinou.

-270CZ 298625 B6

24. N-acylaminosloučenina podle nároku 23 vybraná ze skupiny zahrnující sloučeniny vzorců Q,R,S,TaV (£) (T)

H3C. >

(V)

H₃<

H3C

OH

5 25. N-acylaminosloučenina obecného vzorce π (π)

-271 CZ 298625 B6 n je 1 nebo 2;

ίο každý R₂ je nezávisle přímá nebo rozvětvená alkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku, popřípadě substituovaná hydroxyfenylovou skupinou;

R₅ je:

-CO-Rt, kde R4 je přímá či rozvětvená alkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku, nebo

15 -CO-O-R4, kde R4 je přímá či rozvětvená alkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku, substituovaná fenylovou skupinou; a

R₉ je přímá či rozvětvená alkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku, substituovaná chlorfenylovou skupinou nebo dichlorfenylovou skupinou.

26. N-acylaminosloučenina podle nároku 25 vybraná ze skupiny zahrnující sloučeniny vzorců W,X, YaZ

-272CZ 298625 B6

27. N-acylaminosloučenina podle nároku 25, kterou je sloučenina vzorce 89

O

28. N-acylaminosloučenina podle nároku 7 vybraná ze skupiny zahrnující sloučeniny:

-273 CZ 298625 B6

274CZ 298625 B6

-275 CZ 298625 B6

29. N-acylaminosloučenina obecného vzorce δ každý R₂ je nezávisle přímá nebo rozvětvená alkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku, popřípadě substituovaná hydroxyfenylovou skupinou;

15 R₅ je:

-CO-R4, kde R4 je přímá či rozvětvená alkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku, nebo

-CO-O-R4, kde R4 je přímá či rozvětvená alkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku, substituovaná fenylovou skupinou;
20 každý Ar₂ je nezávisle vybrán z následující skupiny, ve které je libovolný z kruhů popřípadě jednou nebo vícenásobně substituován skupinou -Q_b

-276CZ 298625 B6 s-⁴

Qi je fenylová skupina, kde fenylová skupina je popřípadě substituovaná chloroskupinou, di chloroskupinou nebo trifluormethylovou skupinou.

30. N-acylaminosloučenina podle nároku 29 vybraná ze skupiny zahrnující sloučeniny:

-277

-278

31. N-acylaminosloučenina podle nároku 1 vybraná ze skupiny zahrnující sloučeniny:

(302) (220b)

-279CZ 298625 B6 (223b) (223e) (226e) (227e) (429)

-280 (214C) (217c) (217e) (246) (280) (281)

-281 (282) (283) (284) (285) (286) (287)

282 (404) (405) (406) (407) (408) (409)

-283 CZ 298625 B6 (410) (411) (413) (416) (417) (418)

-284CZ 298625 B6 (419) (420) (422) (423) (424) (425)

-285 CZ 298625 B6 (426) (430)

-286CZ 298625 B6 (435) (436) (437) (438) (439) (440)

-287CZ 298625 B6 (441) (442) (443) (444) (445)

-288 CZ 298625 B6 (446) (447) (448) (449) (450)

O

-289CZ 298625 B6 (451) (452)

-290CZ 298625 B6

-291 CZ 298625 B6 (462) (463) (464) (465) (466) (467)

-292CZ 298625 B6

-293 CZ 298625 B6 (474) (475) (476) (477)

-294CZ 298625 B6 (478) (479) (480) (481) (481s)

O

-295 (482) (482s) (483) (484)

-296CZ 298625 B6 (487) (488) (489) (490) (491)

-297CZ 298625 B6 (497) (498) (499)

-298CZ 298625 B6 (421) (427)

-299CZ 298625 B6 (214w) (415) (5002) (605b)

-300CZ 298625 B6 (605c) (605d) (605e) (605f)

-301 CZ 298625 B6 (605h) (6051) (605j) (605m) (605n)

O

-302CZ 298625 B6 (605θ) (605p) (605s) (605t)

-303 CZ 298625 B6 (609a) (609b) ( 619)

O (620 )

-304CZ 298625 B6 (621)

5-Í&4 (Η O Η ϊ ( 622) (623)

-Λ (624) (625)

ΟΗ

-305 CZ 298625 B6 (626 ) (627) (628 ) (629) (630 )

-306CZ 298625 B6 (631) (632) (633 )

-307CZ 298625 B6 (3049) (3050) (3051) (3052)

OH (3053)

-308 CZ 298625 B6 (3054) (3055) (3056) (3057)

-309CZ 298625 B6 (3058) (3060) (3061) (3059)

-310 (3062) (3064) (3065) (3063) (3066)

-311 (3067) (3069) (3068)

312CZ 298625 B6 (3073)

L· lf (3075) °~CH,

-313CZ 298625 (3076) (3077) (3078) (3079)

314

315 (3084) (3086)

-316 (3087) (3089) (3090) (3088)

-317 (3091) (3092) (3093) (3094)

-318CZ 298625 B6 (3095) (3098) (3096) (3097)

-319CZ 298625 B6 (3099) (3100) (3101)

320CZ 298625 B6 (3102) (3103) (3104) (3105)

-321 CZ 298625 B6 (3106) (3107) (3108) (3109) (3110)

-322 CZ 298625 B6 (3115)

-323 (3116) (3117) (3118) (3119) (3120)

-324CZ 298625 B6 (3121)

XX (3122) (3123)

-325 (3126) (3127) (3128)

-326CZ 298625 B6 (3129) (3130) (3131) (3132)

327CZ 298625 B6 (3133) (3134) (3135) (3136)

-328 (3138) (3139) (3140)

329 (3141) (3142) (3143) (3144)

-330CZ 298625 B6 (3146) (3147) (3148)

-331 CZ 298625 B6 (3152)

-332 CZ 298625 B6 (3154) (3155) (3156) (3157)

333 (3158) (3161) (3159) (3160)

H^-°, -9 —o. ,9

-334 * diastereome

- 335 CZ 298625 B6

-336CZ 298625 B6 (668)

- 337 CZ 298625 B6

HO (691b) ( 911) (912) (913)

- 338 CZ 298625 B6 (916) (662 ) (656 ) (669) (686)

-339 (689a)

CL

ΌΗ

-H (914) (915) (918) ( 671)

-340CZ 298625 B6

341 CZ 298625 B6 (917 ) (922 ) (919) (920)

342 (699 ) (910 ) (5021)

-343

32. Farmaceutický prostředek, vyznačující se tím, že obsahuje N-acylaminosloučeninu podle libovolného z nároků 1 až 31 a farmaceuticky přijatelný nosič.

33. Použití N-acylaminosloučeniny podle libovolného z nároků 1 až 31 pro výrobu léčiva k léčení nebo prevenci onemocnění zprostředkovaného interleukinem-1, autoimunitního onemocnění, zánětlivého onemocnění nebo neurodegenerativního onemocnění u pacienta, který takové ošetření potřebuje.

34. Použití N-acylaminosloučeniny podle libovolného z nároků 1 až 31 pro výrobu léčiva k inhibici funkce zprostředkované ICE u pacienta, který takové ošetření potřebuje.

35. Použití N-acylaminosloučeniny podle libovolného z nároků 1 až 31 pro výrobu léčiva pro podporu hojení ran u pacienta, který takové ošetření potřebuje.

36. Použití N-acylaminosloučeniny podle libovolného z nároků 1 až 31 pro výrobu léčiva k léčení nebo prevenci infekční choroby u pacienta, který takové ošetření potřebuje.

37. Způsob selekce inhibitorů ICE obecných vzorců α, σ, π a δ podle nároků 1 až 31,vyznačující se tím, že zahrnuje následující kroky, při nichž se provede:

a) selekce kandidátní sloučeniny s definovanou chemickou strukturou, obsahující alespoň dva zbytky vytvářející vodíkové vazby, alespoň dva mírně hydrofobní zbytky a jeden elektronegativní zbytek obsahující jeden nebo více elektronegativních atomů, kteréžto atomy jsou navázány buď najeden atom nebo na sousedící atomy v elektronegativním zbytku,

b) stanovení konformace s nízkou energií pro vazbu shora uvedené sloučeniny na aktivní centrum ICE,

c) zhodnocení schopnosti uvedené sloučeniny v uvedené konformaci vytvářet alespoň dvě vodíkové vazby s atomy hlavního řetězce, jinými než atomy uhlíku, v Arg-341 a Ser-339 ICE,

d) zhodnocení schopnosti shora uvedené sloučeniny ve shora uvedené konformaci asociovat se s alespoň dvěma z vazebných kapes ICE vybraných ze skupiny kterou tvoří vazebná kapsa P2, vazebná kapsa P3, vazebná kapsa P4 a vazebná kapsa P',

e) zhodnocení schopnosti shora uvedené sloučeniny ve shora uvedené konformaci interagovat s vazebnou kapsou PÍ ICE, a

f) přijetí nebo zamítnutí shora uvedené kandidátní sloučeniny jako inhibitoru ICE na základě stanovení a z hodnocení prováděných v předcházejících krocích.

38. Způsob podle nároku 37, vy z n a č uj í c í se tím, že dále zahrnuje následující kroky, které následují po kroku e) a předcházejí krok f), při nichž se provede:

g) zhodnocení deformační energie vazby uvedené sloučeniny na ICE, a

h) zhodnocení příspěvku součtu všech elektrostatických interakcí mezi ICE a shora uvedenou sloučeninou v uvedené konformaci, navázanou na ICE.

Patent Citations (50)

Publication number Priority date Publication date Assignee Title

EP0519748A2

* 1991-06-21 1992-12-23 Merck & Co. Inc. Peptidyl derivatives as inhibitors of interleukin-1B converting enzyme

EP0529713A1

* 1991-08-16 1993-03-03 Merck & Co. Inc. Affinity chromatography matrix useful in purifying interleukin-1B converting enzyme

EP0533350A1

* 1991-08-16 1993-03-24 Merck & Co. Inc. DNA encoding precursor interleukin 1B converting enzyme

WO1993009135A1

* 1991-11-04 1993-05-13 Sandoz Ltd. Peptides inhibiting il-1 beta release

EP0547699A1

* 1991-12-19 1993-06-23 Merck & Co. Inc. Peptidyl derivatives as inhibitors of interleukin-1B converting enzyme

WO1993014777A1

* 1992-01-31 1993-08-05 Merck & Co., Inc. PEPTIDYL DERIVATIVES AS INHIBITORS OF INTERLEUKIN-1β CONVERTING ENZYME

WO1993016710A1

* 1992-02-21 1993-09-02 Merck & Co., Inc. PEPTIDYL DERIVATIVES AS INHIBITORS OF INTERLEUKIN-1β CONVERTING ENZYME

Family To Family Citations

US4276298A

* 1978-03-24 1981-06-30 Merck & Co., Inc. 2-Aryl-1,2-benzisothiazolinone-1,1-dioxides and their use as selective protease inhibitors

US4369183A

* 1979-09-06 1983-01-18 Merck & Co., Inc. 2-Pyridyl-1,2-benzisothiazolinone-1,1-dioxides and their use as selective protease inhibitors

US4499295A

* 1983-05-09 1985-02-12 G. D. Searle & Co. Protease inhibitors

US4584397A

* 1983-05-09 1986-04-22 G. D. Searle & Co. Protease inhibitors

US4551279A

* 1984-01-09 1985-11-05 G. D. Searle & Co. Protease inhibitors

US5055451A

* 1986-12-22 1991-10-08 Syntex Inc. Aryloxy and arylacyloxy methyl ketones as thiol protease inhibitors

US5158936A

* 1986-12-22 1992-10-27 Syntex (U.S.A.) Inc. Aryloxy and arylacyloxy methyl ketones as thiol protease inhibitors

NZ223148A

* 1987-01-16 1989-10-27 Merrell Dow Pharma Peptide derivatives having peptidase inhibition activity

WO1989004838A1

* 1987-11-25 1989-06-01 Immunex Corporation Interleukin-1 receptors

US4968607A

* 1987-11-25 1990-11-06 Immunex Corporation Interleukin-1 receptors

US5081228A

* 1988-02-25 1992-01-14 Immunex Corporation Interleukin-1 receptors

US5008245A

* 1988-10-27 1991-04-16 University Of Kentucky Research Foundation Novel peptidyl carbamate inhibitors of the enzyme elastase

CA2021660A1

* 1989-07-26 1991-01-27 Philippe Bey Peptidase inhibitors

NZ235155A

* 1989-09-11 1993-04-28 Merrell Dow Pharma Peptidase substrates in which the carboxy terminal group has been replaced by a tricarbonyl radical

US5416013A

* 1990-04-04 1995-05-16 Sterling Winthrop Inc. Interleukin 1β protease and interleukin 1β protease inhibitors

WO1991015577A1

* 1990-04-04 1991-10-17 Black, Roy, A. INTERLEUKIN 1'beta' PROTEASE

IL99527A

* 1990-09-28 1997-08-14 Lilly Co Eli Tripeptide antithrombotic agents

EP0504938A3

* 1991-03-22 1993-04-14 Suntory Limited Prophylactic and therapeutic agent for bone diseases comprising di- or tripeptide derivative as active ingredient

JP3190431B2

* 1991-07-01 2001-07-23 三菱化学株式会社ケトン誘導体

US6348570B1

* 1991-08-16 2002-02-19 Merck & Co., Inc. Chromophore containing compounds and their use in determining interleukin-1β convertase activity

EP0533226A3

* 1991-08-16 1993-08-18 Merck & Co. Inc. Novel chromophore containing compounds

DE69133354T2

* 1991-08-30 2004-11-11 Vertex Pharmaceuticals Inc., Cambridge Interleukin 1-beta protease und ihre inhibitoren

WO1993025694A1

* 1992-06-12 1993-12-23 Massachusetts Institute Of Technology Inhibitors of ced-3 and related proteins

WO1993025685A1

* 1992-06-12 1993-12-23 Massachusetts Institute Of Technology Cloning and characterization of the cell death genes ced-3 and ced-4

WO1993025683A1

* 1992-06-12 1993-12-23 Massachusetts Institute Of Technology A gene which prevents programmed cell death

JPH08500242A

* 1992-06-24 1996-01-16 メルクエンドカンパニーインコーポレーテッドインターロイキン１β前駆体の転換酵素をコードするＤＮＡ

DK0654041T3

* 1992-07-31 1998-10-26 Pfizer Peptidyl-4-amino-2,2-difluor-3-oxo-1,6-hexandisyre-derivater som anto-inflammatoriske midler

US5374623A

* 1992-08-20 1994-12-20 Prototek, Inc. Cysteine protease inhibitors effective for in vivo use

CA2109646C

* 1992-11-24 2000-03-07 Gaston O. Daumy Para-nitroanilide peptides

EP0618223A3

* 1993-03-08 1996-06-12 Sandoz Ltd Peptides, the release of Interleukin 1-Bêta, useful as anti-inflammatory agents.

TW494094B

* 1993-04-29 2002-07-11 Vertex Pharma Peptide analogs as irreversible interleukin-1β protease inhibitors and pharmaceutical compositions comprising the same

US5462939A

* 1993-05-07 1995-10-31 Sterling Winthrop Inc. Peptidic ketones as interleukin-1β-converting enzyme inhibitors

US5411985A

* 1993-05-17 1995-05-02 Merck & Co., Inc. Gamma-pyrone-3-acetic acid as an inhibitor or interleukin-1 β inventory enzyme

JPH0789951A

* 1993-06-03 1995-04-04 Sterling Winthrop Inc インターロイキン−１β転換酵素阻害剤

DE69413167T2

* 1993-06-04 1999-05-06 Vertex Pharmaceuticals Inc., Cambridge, Mass. Peptid-Phosphinyloxymethyl-Ketonen als Inhibitoren von Interleukin-1 beta-konvertierenden Enzymen

DK0628550T3

* 1993-06-08 1998-09-28 Vertex Pharma Pyridazin som interleukin-1 beta-omdannede enzyminhibitorer

EP0711174A4

* 1993-06-24 1997-11-12 Gen Hospital Corp GENES FOR PROGRAMMED CELL DEATH AND PROTEINS

WO1995005192A1

* 1993-08-13 1995-02-23 Merck & Co., Inc. SUBSTITUTED KETONE DERIVATIVES AS INHIBITORS OF INTERLEUKIN-1β CONVERTING ENZYME

US5486623A

* 1993-12-08 1996-01-23 Prototek, Inc. Cysteine protease inhibitors containing heterocyclic leaving groups

CN1504462A

* 1994-03-31 2004-06-16 ��˹ҩƷ��˾ 作为白细胞介素抑制剂的嘧啶基衍生物

US5552400A

* 1994-06-08 1996-09-03 Sterling Winthrop Inc. Fused-bicyclic lactams as interleukin-1β converting enzyme inhibitors

US5565430A

* 1994-08-02 1996-10-15 Sterling Winthrop Inc. Azaaspartic acid analogs as interleukin-1β converting enzyme inhibitors

US5498616A

* 1994-11-04 1996-03-12 Cephalon, Inc. Cysteine protease and serine protease inhibitors

* Cited by examiner, † Cited by third party

Cited By (144)

Publication number Priority date Publication date Assignee Title

Family To Family Citations

US6204261B1

* 1995-12-20 2001-03-20 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of interleukin-1β Converting enzyme inhibitors

US5874424A

* 1995-12-20 1999-02-23 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of interleukin-1β converting enzyme

US5798355A

* 1995-06-07 1998-08-25 Gpi Nil Holdings, Inc. Inhibitors of rotamase enzyme activity

US5846981A

* 1993-05-28 1998-12-08 Gpi Nil Holdings Inc. Inhibitors of rotamase enzyme activity

US6420522B1

* 1995-06-05 2002-07-16 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of interleukin-1β converting enzyme

US6699869B1

1995-03-24 2004-03-02 Myriad Genetics Inc. β-sheet mimetics and use thereof as inhibitors of biologically active peptides or proteins

US6245764B1

1995-03-24 2001-06-12 Molecumetics Ltd. β-sheet mimetics and use thereof as inhibitors of biologically active peptides or proteins

US6020331A

* 1995-03-24 2000-02-01 Molecumetics, Ltd. β-sheet mimetics and use thereof as protease inhibitors

WO1996030395A2

* 1995-03-31 1996-10-03 Takeda Chemical Industries, Ltd. Cysteine protease inhibitor

US5859031A

* 1995-06-07 1999-01-12 Gpi Nil Holdings, Inc. Small molecule inhibitors of rotamase enzyme activity

US5696135A

* 1995-06-07 1997-12-09 Gpi Nil Holdings, Inc. Inhibitors of rotamase enzyme activity effective at stimulating neuronal growth

US5744451A

* 1995-09-12 1998-04-28 Warner-Lambert Company N-substituted glutamic acid derivatives with interleukin-1 β converting enzyme inhibitory activity

US5801197A

* 1995-10-31 1998-09-01 Gpi Nil Holdings, Inc. Rotamase enzyme activity inhibitors

US5843904A

* 1995-12-20 1998-12-01 Vertex Pharmaceuticals, Inc. Inhibitors of interleukin-1βconverting enzyme

US5834457A

* 1996-01-26 1998-11-10 The Regents Of The University Of California Method of modulating radical formation by mutant cuznsod enzymes

US6117896A

* 1997-02-10 2000-09-12 Molecumetics Ltd. Methods for regulating transcription factors

AU732174B2

* 1996-08-05 2001-04-12 Myriad Genetics, Inc. Use of beta-sheet mimetics as protease and kinase inhibitors and as inhibitors of transcription factors

EP1661566A3

* 1996-08-05 2008-04-16 Myriad Genetics, Inc. Use of beta-sheet mimetics as protease and kinase inhibitors and as inhibitors of transcription factors

US5869519A

* 1996-12-16 1999-02-09 Idun Pharmaceuticals, Inc. C-terminal modified (n-substituted)-2-indolyl dipeptides as inhibitors of the ICE/ced-3 family of cysteine proteases

US6218424B1

1996-09-25 2001-04-17 Gpi Nil Holdings, Inc. Heterocyclic ketone and thioester compounds and uses

US5801187A

1996-09-25 1998-09-01 Gpi-Nil Holdings, Inc. Heterocyclic esters and amides

US5786378A

* 1996-09-25 1998-07-28 Gpi Nil Holdings, Inc. Heterocyclic thioesters

US6194435B1

1996-10-11 2001-02-27 Cor Therapeutics, Inc. Lactams as selective factor Xa inhibitors

US6369080B2

1996-10-11 2002-04-09 Cor Therapeutics, Inc. Selective factor Xa inhibitors

US5919790A

* 1996-10-11 1999-07-06 Warner-Lambert Company Hydroxamate inhibitors of interleukin-1β converting enzyme

US6316415B1

1996-10-11 2001-11-13 Basf Aktiengesellschaft Sulfonamide interleukin-1β converting enzyme inhibitors

US6063794A

1996-10-11 2000-05-16 Cor Therapeutics Inc. Selective factor Xa inhibitors

IL129124A0

* 1996-10-11 2000-02-17 Warner Lambert Co Sulfonamide substituted aspartic acid interleukin -1beta converting enzyme inhibitors

US6262047B1

1996-10-11 2001-07-17 Cor Therapeutics, Inc. Selective factor Xa inhibitors

EP2409985A3

* 1996-10-18 2013-05-01 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors de serine proteases, especially of the NS3 protease of the hepatitis C virus

EP1136498A1

* 1996-10-18 2001-09-26 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of serine proteases, particularly hepatitis c virus NS3 protease

KR20000052775A

* 1996-10-25 2000-08-25 가마쿠라 아키오 신규한 헤테로사이클릭 아미드 화합물 및 의약으로서의 그의 용도

EP1466921A1

* 1996-12-06 2004-10-13 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of interleukin-1 beta converting enzyme

PT944645E

1996-12-06 2005-06-30 Vertex Pharma Inibidores da enzima conversora de interleucina 1beta

JP4094066B2

* 1996-12-06 2008-06-04 バーテックスファーマシューティカルズインコーポレイテッドインターロイキン−１β変換酵素のインヒビター

US6184244B1

1996-12-16 2001-02-06 Idun Pharmaceuticals, Inc. C-terminal modified (N-substituted)-2-indolyl dipeptides as inhibitors of the ICE/ced-3 family of cysteine proteases

US5877197A

* 1996-12-16 1999-03-02 Karanewsky; Donald S. C-terminal modified (N-substituted)-2-indolyl dipeptides as inhibitors of the ICE/ced-3 family of cysteine proteases

US5846979A

1997-02-28 1998-12-08 Gpi Nil Holdings, Inc. N-oxides of heterocyclic esters, amides, thioesters, and ketones

US6054487A

* 1997-03-18 2000-04-25 Basf Aktiengesellschaft Methods and compositions for modulating responsiveness to corticosteroids

JP2002514214A

1997-04-14 2002-05-14 シーオーアールセラピューティクスインコーポレイテッド選択的Ｘａ因子阻害剤

WO1998046626A1

1997-04-14 1998-10-22 Cor Therapeutics, Inc. SELECTIVE FACTOR Xa INHIBITORS

NZ500351A

* 1997-04-14 2001-10-26 Cor Therapeutics Inc Cyclic diaza compounds as selective factor Xa inhibitors

HUP9700816A3

* 1997-04-28 1999-06-28 Gyogyszerkutato Intezet 3(r)-3-amino-4-carboxy-butiraldehyde derivatives inhibiting release of interleukin-1-beta

US20010049381A1

1997-06-04 2001-12-06 Gpl Nil Holdings, Inc., Pyrrolidine derivative hair growth compositions and uses

FR2766188B1

* 1997-07-15 2000-02-11 Hoechst Marion Roussel Inc Nouveau procede de preparation de derives amines d'alkyloxy furanone, composes issus de ce procede et utilisation de ces composes

US6218382B1

1997-08-11 2001-04-17 Cor Therapeutics, Inc Selective factor Xa inhibitors

US6333321B1

1997-08-11 2001-12-25 Cor Therapeutics, Inc. Selective factor Xa inhibitors

US6228854B1

1997-08-11 2001-05-08 Cor Therapeutics, Inc. Selective factor Xa inhibitors

EP1034164B1

* 1997-11-24 2004-05-19 Merck & Co., Inc. Substituted beta-alanine derivatives as cell adhesion inhibitors

US6645939B1

1997-11-24 2003-11-11 Merck & Co., Inc. Substituted β-alanine derivatives as cell adhesion inhibitors

ES2302363T3

* 1997-12-18 2008-07-01 Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals Inc. Piridonas como inhibidores del dominia sh2 del grupo src.

EP1062210B1

* 1998-03-09 2005-06-01 Vertex Pharmaceuticals Incorporated 1,2-diazepane derivatives as interleukin-1beta converting enzyme inhibitors

KR100898094B1

* 1998-03-19 2009-05-18 버텍스 파마슈티칼스 인코포레이티드 카스파제의 억제제

GB9809664D0

* 1998-05-06 1998-07-01 Hoffmann La Roche a-Ketoamide derivatives

PL348661A1

1998-06-03 2002-06-03 Gpi Nil Holdings N-linked sulfonamides of n-heterocyclic carboxylic acids or carboxylic acid isosteres

US6331537B1

1998-06-03 2001-12-18 Gpi Nil Holdings, Inc. Carboxylic acids and carboxylic acid isosteres of N-heterocyclic compounds

US6335348B1

1998-08-14 2002-01-01 Gpi Nil Holdings, Inc. Nitrogen-containing linear and azepinyl/ compositions and uses for vision and memory disorders

US6376517B1

1998-08-14 2002-04-23 Gpi Nil Holdings, Inc. Pipecolic acid derivatives for vision and memory disorders

US6384056B1

1998-08-14 2002-05-07 Gpi Nil Holdings, Inc. Heterocyclic thioesters or ketones for vision and memory disorders

US7338976B1

1998-08-14 2008-03-04 Gpi Nil Holdings, Inc. Heterocyclic esters or amides for vision and memory disorders

US6339101B1

1998-08-14 2002-01-15 Gpi Nil Holdings, Inc. N-linked sulfonamides of N-heterocyclic carboxylic acids or isosteres for vision and memory disorders

US6506788B1

1998-08-14 2003-01-14 Gpi Nil Holdings, Inc. N-linked urea or carbamate of heterocyclic thioesters for vision and memory disorders

US6218423B1

1998-08-14 2001-04-17 Gpi Nil Holdings, Inc. Pyrrolidine derivatives for vision and memory disorders

US6399648B1

1998-08-14 2002-06-04 Gpi Nil Holdings, Inc. N-oxides of heterocyclic ester, amide, thioester, or ketone for vision and memory disorders

US6333340B1

1998-08-14 2001-12-25 Gpi Nil Holdings, Inc. Small molecule sulfonamides for vision and memory disorders

US6337340B1

1998-08-14 2002-01-08 Gpi Nil Holdings, Inc. Carboxylic acids and isosteres of heterocyclic ring compounds having multiple heteroatoms for vision and memory disorders

US6395758B1

1998-08-14 2002-05-28 Gpi Nil Holdings, Inc. Small molecule carbamates or ureas for vision and memory disorders

US6201118B1

1998-08-19 2001-03-13 Vertex Pharmaceuticals Inc. Process for forming an N-acylated, N,N-containing bicyclic ring from piperazic acid or an ester thereof especially useful as an intermediate in the manufacture of a caspase inhibitor

US6177565B1

1998-08-19 2001-01-23 Vertex Pharmaceuticals Inc. Process for synthesizing piperazic acid

US6559304B1

* 1998-08-19 2003-05-06 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Method for synthesizing caspase inhibitors

US6462072B1

1998-09-21 2002-10-08 Gpi Nil Holdings, Inc. Cyclic ester or amide derivatives

JP2003524603A

* 1998-10-06 2003-08-19 スミスクライン・ビーチャム・コーポレイションカスパーゼおよびアポトーシス

AU764860B2

1998-12-02 2003-09-04 Merck Frosst Canada & Co. Gamma-ketoacid tetrapeptides as inhibitors of caspase-3

CA2360740A1

1999-03-02 2000-09-08 Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals, Inc. Compounds useful as reversible inhibitors of cathepsin s

TW200404789A

* 1999-03-15 2004-04-01 Axys Pharm Inc Novel compounds and compositions as protease inhibitors

US6724942B1

1999-05-24 2004-04-20 Fuji Photo Film Co., Ltd. Image processing method and system

ES2274795T3

* 1999-07-19 2007-06-01 Merck Frosst Canada Ltd. Pirazinonas, composiciones que contienen tales compuestos.

US6420364B1

1999-09-13 2002-07-16 Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals, Inc. Compound useful as reversible inhibitors of cysteine proteases

US7253169B2

1999-11-12 2007-08-07 Gliamed, Inc. Aza compounds, pharmaceutical compositions and methods of use

US6417189B1

1999-11-12 2002-07-09 Gpi Nil Holdings, Inc. AZA compounds, pharmaceutical compositions and methods of use

US6358928B1

1999-11-22 2002-03-19 Enzyme Systems Products Peptidyl sulfonyl imidazolides as selective inhibitors of serine proteases

EP1244670B1

1999-12-21 2006-03-08 MGI GP, Inc. Hydantoin derivative compounds, pharmaceutical compositions, and methods of using same

AU2001257006A1

2000-04-11 2001-10-23 Du Pont Pharmaceuticals Company Substituted lactams as inhibitors of abeta protein production

EP1282435A2

* 2000-05-12 2003-02-12 Immunex Corporation Interleukin-1 inhibitors in the treatment of diseases

PE20011350A1

* 2000-05-19 2002-01-15 Vertex Pharma PROFARMACO DE UN INHIBIDOR DE ENZIMA CONVERTIDORA DE INTERLEUCINA-1ß (ICE)

US6509333B2

2000-06-01 2003-01-21 Bristol-Myers Squibb Pharma Company Lactams substituted by cyclic succinates as inhibitors of Aβ protein production

WO2001094351A1

2000-06-07 2001-12-13 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Caspase inhibitors and uses thereof

SV2003000617A

* 2000-08-31 2003-01-13 Lilly Co Eli Inhibidores de la proteasa peptidomimetica ref. x-14912m

KR20040020042A

* 2000-11-21 2004-03-06 버텍스 파마슈티칼스 인코포레이티드 이미다졸 및 벤즈이미다졸 카스파제 억제제 및 이의 용도

AU2002230763A1

* 2000-12-13 2008-01-03 Bristol-Myers Squibb Pharma Company Inhibitors of hepatitis c virus ns3 protease

US6653295B2

2000-12-13 2003-11-25 Bristol-Myers Squibb Company Inhibitors of hepatitis C virus NS3 protease

AUPR215700A0

* 2000-12-19 2001-01-25 Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd. Carboxylic acid compound having cyclopropane ring

DE10105039A1

* 2001-02-05 2002-08-08 Tell Pharm Ag Hergiswil Tripeptid-Derivate für die Behandlung neurodegenerativer Krankheiten

DE10105040A1

* 2001-02-05 2002-08-14 Tell Pharm Ag Hergiswil Tripeptid-Derivate für die Behandlung von postläsionalen Krankheiten des Nervensystems

DE10105038B4

* 2001-02-05 2005-07-07 Neurotell Ag Tripeptid-Derivate für die Behandlung von postläsionalen Krankheiten des Nervensystems

DE10105041A1

* 2001-02-05 2002-08-14 Tell Pharm Ag Hergiswil Tripeptide und Tripeptid-Derivate für die Behandlung neurodegenerativer Krankheiten

US20050192228A1

* 2001-02-05 2005-09-01 Jean Rapin Tripeptide derivatives for the treatment of neurodegenerative diseases

WO2002094787A1

* 2001-05-23 2002-11-28 Ucb, S.A. 2-oxo-piperidinyl- and 2-oxo-azepanyl alkanoic acid derivativ es for the treatment of epilepsy and other neurological disorders

GB0129260D0

2001-12-06 2002-01-23 Eisai London Res Lab Ltd Pharmaceutical compositions and their uses

JP2005170790A

* 2002-01-09 2005-06-30 Ajinomoto Co Inc Ｎ−アルキルスルフォニル置換アミド誘導体

EP1485107A1

* 2002-02-11 2004-12-15 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Phospholipids as caspase inhibitor prodrugs

CA2476113A1

2002-02-14 2003-08-21 Myriad Genetics, Inc. Beta-sheet mimetics and composition and methods relating thereto

JP4431959B2

* 2002-04-22 2010-03-17 ユニバーシティーオブメリーランド，バルチモアカウンティーキャプシドタンパク質の抗ウイルス性阻害

US7001899B2

* 2002-06-10 2006-02-21 The Procter & Gamble Company Interleukin converting enzyme inhibitors

US7138395B2

* 2002-06-10 2006-11-21 The Procter & Gamble Company Interleukin-1β converting enzyme inhibitors

AU2003238304A1

* 2002-06-26 2004-01-19 Bristol-Myers Squibb Company Bicyclic pyrimidinones as coagulation cascade inhibitors

EP1523483A4

2002-06-26 2006-03-08 Bristol Myers Squibb Co AMINO-BICYCLIC PYRAZINONE AND PYRIDINONE FOR INHIBITING THE COOKING OF SERIN PROTEASE

MXPA05000069A

* 2002-06-28 2005-04-11 Vertex Pharma Inhibidores de caspasa y uso de los mismos.

US7612091B2

* 2002-12-20 2009-11-03 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Caspase inhibitors and uses thereof

PE20050159A1

2003-05-27 2005-04-19 Vertex Pharma Derivados de acido 3-[2-(3-amino-2-oxo-2h-piridin-1-il)-acetilamino]-4-oxo-pentanoico como inhibidores de caspasa

UY28500A1

2003-09-05 2005-04-29 Vertex Pharma Inhibidores de proteasas de serina, en particular proteasa ns3-ns4a del vhc.

CA2820541A1

* 2004-02-27 2005-09-15 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Caspase inhibitors and uses thereof

AU2011226946B2

* 2004-02-27 2012-05-03 Vertex Pharmaceuticals Incoporated Caspase Inhibitors and Uses Thereof

AR047981A1

* 2004-02-27 2006-03-15 Vertex Pharma Inhibidores de caspasa y sus usos correspondientes

EP1725548B1

2004-03-12 2015-01-14 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Processes and intermediates for the preparation of aspartic acetal caspase inhibitors

PL217743B1

2004-05-15 2014-08-29 Vertex Pharma Zastosowanie inhibitorów ICE/kaspazy-1 do leczenia napadów i konwulsji w epilepsji oraz zawierające je kompozycja farmaceutyczna i zestaw

GB0411056D0

2004-05-18 2004-06-23 Novartis Ag Organic compounds

CN1980658A

2004-05-27 2007-06-13 沃泰克斯药物股份有限公司治疗自身炎性疾病的ice抑制剂

ATE543803T1

* 2004-11-24 2012-02-15 Vertex Pharma 3-ä2-(3-azylamino-2-oxo-2h-pyridin-1- yl)acetylaminoü-4-oxopentansäurederivate und deren verwendung als caspase-inhibitoren

JPWO2006126730A1

* 2005-05-26 2008-12-25 味の素株式会社二環式ピリミジン化合物及びその製造方法

CN101268084A

2005-07-28 2008-09-17 沃泰克斯药物股份有限公司天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶抑制剂前体药物

MX2008001528A

* 2005-08-02 2008-04-04 Vertex Pharma Inhibidores de serina proteasas.

US7964624B1

2005-08-26 2011-06-21 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of serine proteases

AR055395A1

* 2005-08-26 2007-08-22 Vertex Pharma Compuestos inhibidores de la actividad de la serina proteasa ns3-ns4a del virus de la hepatitis c

CN102614490A

2006-02-27 2012-08-01 弗特克斯药品有限公司包含vx-950的共晶体和包含所述共晶体的药物组合物

JP2009531315A

* 2006-03-16 2009-09-03 バーテックスファーマシューティカルズインコーポレイテッド重水素化ｃ型肝炎プロテアーゼインヒビター

AP2009004960A0

* 2007-02-27 2009-08-31 Vertex Pharma Co-crystals and pharmaceutical compositions comprising the same

NZ579295A

* 2007-02-27 2012-03-30 Vertex Pharma Inhibitors of serine proteases

ATE530546T1

* 2007-08-30 2011-11-15 Vertex Pharma Kokristalle und pharmazeutische zusammensetzungen damit

TW200920355A

* 2007-09-06 2009-05-16 Lexicon Pharmaceuticals Inc Compositions and methods for treating immunological and inflammatory diseases and disorders

JP5781928B2

* 2008-07-16 2015-09-24 ビトップアーゲーｂｉｔｏｐＡＧ環状アミジンの合成

US20140309172A1

2010-11-05 2014-10-16 Dagmar Ringe Ice inhibiting compounds and uses thereof

HU1000676D0

2010-12-17 2011-02-28 Pharmahungary 2000 Kft Inhibitors of matrix metalloproteinase, pharmaceutical compositions thereof and use of them for preventing and treating diseases where the activation of mmp is involved

US9956260B1

2011-07-22 2018-05-01 The J. David Gladstone Institutes Treatment of HIV-1 infection and AIDS

EP2888240B1

2012-08-23 2020-01-15 Janssen BioPharma, Inc. Compounds for the treatment of paramoxyvirus viral infections

AR103297A1

2014-12-30 2017-05-03 Forma Therapeutics Inc Pirrolo y pirazolopirimidinas como inhibidores de la proteasa 7 específica de ubiquitina

MA41291A

2014-12-30 2017-11-07 Forma Therapeutics Inc Dérivés de la pyrrolotriazinone et de l'imidazotriazinone en tant qu'inhibiteurs de la protéase spécifique de l'ubiquitine n° 7 (usp7) pour le traitement d'un cancer

US9840491B2

2015-02-05 2017-12-12 Forma Therapeutics, Inc. Quinazolinones and azaquinazolinones as ubiquitin-specific protease 7 inhibitors

HK1248221A1

2015-02-05 2018-10-12 Forma Therapeutics, Inc. 异噻唑啉酮类，吡唑并嘧啶酮类和吡咯并嘧啶酮作为泛蛋白特异性蛋白酶7抑制剂

US9932351B2

2015-02-05 2018-04-03 Forma Therapeutics, Inc. Thienopyrimidinones as ubiquitin-specific protease 7 inhibitors

WO2021252491A1

2020-06-10 2021-12-16 Aligos Therapeutics, Inc. Anti-viral compounds for treating coronavirus, picornavirus, and norovirus infections

MX2024000299A

2021-07-09 2024-03-14 Aligos Therapeutics Inc Compuestos antivirales.

WO2023043816A1

2021-09-17 2023-03-23 Aligos Therapeutics, Inc. Anti-viral compounds for treating coronavirus, picornavirus, and norovirus infections

WO2025113519A1

* 2023-11-28 2025-06-05 成都地奥制药集团有限公司内酰胺环类化合物及其用途

* Cited by examiner, † Cited by third party, ‡ Family to family citation

Priority And Related Applications

Applications Claiming Priority (3)

Application Filing date Title

US08/261,452

1994-06-17 Inhibitors of interleukin-1β converting enzyme

US08/405,581

1995-03-17 Inhibitors of interleukin-1β converting enzyme

US08/440,898

1995-05-25 Inhibitors of interleukin-1β converting enzyme

Legal Events

Date Code Title Description

2000-06-30 PD00 Pending as of 2000-06-30 in czech republic

2014-01-15 MM4A Patent lapsed due to non-payment of fee

Effective date: 20130616

Data provided by IFI CLAIMS Patent Services