CZ302281B6 - Inhibitory kaspázy a farmaceutická kompozice, která je obsahuje - Google Patents

Inhibitory kaspázy a farmaceutická kompozice, která je obsahuje Download PDF

Info

Publication number
CZ302281B6
CZ302281B6 CZ20003409A CZ20003409A CZ302281B6 CZ 302281 B6 CZ302281 B6 CZ 302281B6 CZ 20003409 A CZ20003409 A CZ 20003409A CZ 20003409 A CZ20003409 A CZ 20003409A CZ 302281 B6 CZ302281 B6 CZ 302281B6
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
alkyl
mmol
hydrogen
group
compound
Prior art date
Application number
CZ20003409A
Other languages
English (en)
Other versions
CZ20003409A3 (cs
Inventor
W. Wannamaker@Marion
W. Bemis@Guy
S. Charifson@Paul
J. Lauffer@David
D. Mullican@Michael
A. Murcko@Mark
P. Wilson@Keith
W. Janetka@James
J. Davies@Robert
Grillot@Anne-Laure
Shi@Zhan
J. Forster@Cornelia
Original Assignee
Vertex Pharmaceuticals Incorporated
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Vertex Pharmaceuticals Incorporated filed Critical Vertex Pharmaceuticals Incorporated
Publication of CZ20003409A3 publication Critical patent/CZ20003409A3/cs
Publication of CZ302281B6 publication Critical patent/CZ302281B6/cs

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/02—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/02—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link
    • C07K5/0202—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link containing the structure -NH-X-X-C(=0)-, X being an optionally substituted carbon atom or a heteroatom, e.g. beta-amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/18—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for pancreatic disorders, e.g. pancreatic enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/16—Central respiratory analeptics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/14—Drugs for dermatological disorders for baldness or alopecia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A61P19/10—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease for osteoporosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A61P21/02—Muscle relaxants, e.g. for tetanus or cramps
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A61P21/04—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system for myasthenia gravis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/08—Antiepileptics; Anticonvulsants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A61P25/16—Anti-Parkinson drugs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/30—Drugs for disorders of the nervous system for treating abuse or dependence
    • A61P25/32—Alcohol-abuse
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/14—Drugs for disorders of the endocrine system of the thyroid hormones, e.g. T3, T4
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/48—Drugs for disorders of the endocrine system of the pancreatic hormones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/48—Drugs for disorders of the endocrine system of the pancreatic hormones
    • A61P5/50—Drugs for disorders of the endocrine system of the pancreatic hormones for increasing or potentiating the activity of insulin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/06—Antianaemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Addiction (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)

Abstract

Slouceniny, které jsou inhibitory kaspázy, zejména enzymu konvertujícího interleukin-1.beta. ("ICE"). Farmaceutické kompozice obsahující tyto slouceniny. Slouceniny a farmaceutické prostredky je obsahující jsou zejména velmi vhodné pro inhibici aktivity kaspázy a v dusledku toho je lze s výhodou použít jako cinidel proti onemocnením zprostredkovaným interleukinem-1 ("IL-1"), apoptózou, faktorem vyvolávajícím interferon gama ("IGIF") a interferonem-.gama. ("IFN-.gama."), vcetne zánetlivých onemocnení, autoimunních onemocnení, rozkladných onemocnení kosti, proliferativních poruch, infekcních onemocnení a degenerativních onemocnení. Zpusoby prípravy sloucenin podle vynálezu.

Description

Oblast techniky
Předkládaný vynález se týká nové třídy sloučenin, které jsou inhibitory kaspázy, zejména enzymu konvertujícího interleukin-ΐβ („ICE“). Tento vynález se také týká farmaceutických prostředků obsahujících tyto sloučeniny. Sloučeniny a farmaceutické prostředky podle předkládaného vynálezu jsou zejména velmi vhodné pro inhibici aktivity kaspázy a v důsledku toho je lze s výhodou použít jako činidel proti onemocněním zprostředkovaným interleukinem-1 („IL-1“), apoptózou, faktorem vyvolávajícím interferon gama („IGIF“) a interferonem-γ („IFN“), včetně zánětlivých onemocnění, autoimunních onemocnění, rozkladných onemocnění kosti, proliferativních poruch, nakažlivých onemocnění a degenerativních onemocnění. Předkládaný vynález se také týká způsobu inhibice aktivity kaspázy a potlačení produkce IGEF a IFN—γ a způsobu léčby onemocnění způsobených interleukinem-1-, apoptózou, IGIF a IFN-γ za použití sloučenin a prostředků podle předkládaného vynálezu. Předkládaný vynález se také týká způsobu přípravy sloučeniny podle vynálezu.
Dosavadní stav techniky
Interleukin 1 („IL-1“) je důležitým prozánětlivýtn a imunoregulačním proteinem, který stimuluje diferenciaci a proliferaci fibroblastů, produkci prostaglandinů, kolagenasy a fosfolipasy synoviálními buňkami a chondrocyty, degranulaci basofilů a eosinofilů a aktivaci neutrofilů (Oppenheim,
J. H. a kol., Immunology Today, 7, str. 45 až 56 (1986)). Jako takový se podílí na patogenezi chronických a akutních zánětlivých a autoimunitních onemocnění. Například u revmatoidní artritidy je IL-1 jak mediátorem zánětlivých symptonů, tak mediátorem rozpadu chrupavkového proteoglykanu v postiženém místě. Wood, D. D. a kol., Arthritis Rheum. 26, 975, (1983); Pettipher, E. J, a kol., Proč. Nati. Acad. Sci. USA 71, 295 (1986); Arend, W. P. a Dayer, J. M„
Arthritis Rheum. 38, 151 (1995). IL-1 je také velmi účinným činidlem vstřebávání kostní tkáně. Jandiski, J. J., J. Oral. Path. 17, 145 (1988); Dewhirst, F. E. a kol., J. Immunol. 8, 2562 1985). Alternativně se nazývá jako „aktivační faktor osteoklastů“ při destruktivních onemocněních kosti jako je osteoartritida a mnohočetný myelom. Bataille, R. a kol., Int. J. Clin. Lab. Res. 21(4), 283 (1992). Při určitých proliferačních poruchách, jako je akutní myelogenní leukémie a mnohočetný myelom, může IL-1 podpořit růst a adhezi nádorových buněk. Bani, M. R., J, Nati. Cancer Inst, 83, 123 (1991); Vidal-Vanaclocha, F„ Cancer Res. 54, 2667 (1994). Při těchto poruchách IL-1 také stimuluje vylučování jiných cytokinů, jako je IL-6, které mohou regulovat vývoj nádoru. (Tartour a kol., Cancer Res. 54, 6243 (1994). IL-1 je produkován převážně periferními krevními monocyty jako součást zánětlivé odpovědi a vyskytuje se ve dvou odlišných agonistických for40 mách, IL-Ια a IL-Ιβ (Mosely, B. S. a kol., Proč. Nat. Acad. Sci,, 84 str. 4572 až 4576 (1987); Lonnemann, G. a kol., Eur. J. Immunol., 19, str. 1531 až 1536(1989)).
IL-1 β je syntetizován jako biologicky neaktivní prekurzor, pIL-Ιβ. pIL-Ιβ postrádá konvenční vedoucí sekvenci a není upravován signální peptidázou (March. C. J„ Nátuře, 315, str. 641 až
647 (1985)). Místo toho je pIL-Ιβ štěpen enzymem konvertujícím interleukin-1 β („ICE“) mezi
Asp-116 a Ala-117, čímž vzniká biologicky aktivní C-koncový fragment nacházející se v lidském séru a synoviální kapalině (Sleath, P. R. a kol., J. Biol. Chem., 265, str. 14526 až 14528 (1992); A. D. Howard a kol., J. Immunol., 147,str. 2964 až 2969 (1991)). ICE je cysteinová proteáza primárně umístěná v monocytech. Převádí prekurzor DL-1 β na maturovanou formu.
Black, R. A. a kol., FEBS Lett., 247, str. 386 až 390 (1989); Kostura, M, J. a kol., Proč. Nati. Acad. Sci. United States of America, 86, str. 5227 až 5231 (1989). Úprava účinkem ICE je rovněž nutná pro transport maturovaného IL-Ιβ přes buněčnou membránu.
-1 CZ 302281 B6
ICE (nebo kaspá/al) je členem skupiny homologních enzymů nazývaných kaspázy. Tato limnologa vykazují sekvenční podobnosti v oblastech aktivního místa enzymů. Tato homologa (kaspázy) zahrnují TX (nebo ICEre| ti nebo ICH-2) (kaspá/a4) (Faucheu, a kol., EMBO J„ 14, strana 1914 (1995); KamensJ., a kol., J. Biol. Chem., 270, str. 15250 (1995); Nicholson a kol., J. Biol. Chem., 270 15870 (1995)), TY (nebo ICErcl m) (kaspáza-5) (Nicholson a kol., J. Biol. Chem., 270, strana 15870 (1995); ICH-1 (nebo Nedd-2) (kaspáza-2) (Wang, L. a kol.. Cell, 78, str. 739 (1994)), MCH-2 (kaspáza-ó), (Eernandes-Alnemri, T. a kol., Cancer Res., 55, str. 2737 (1995), CPP32 (nebo YAMA nebo apopain) (kaspáza-3) (Eernandes-Alnemri, T. a kol., J. Biol. Chem., 269, str. 30761 (1994); Nichoison, D. W. a kol.. Nátuře, 376, str. 37 (1995)), CMH-1 (nebo MCH-3) (kaspáza-7) (Lippke, a kol., J. Biol. Chem. 271(4), str. 1825 až 1828 (1996)); Fernandes-Alnemri, T. a kol., Cancer Res., (1995)), Mch5 (kaspáza S) (Muzio, M. a kol., Cell 85(6), 817 až 827 (1996)), MCH-6 (kaspáza-9) (Duan, H, a kol., J. Biol. Chem., 271(34), str. 16720 až 16724 (1996)), Mch4 (kaspáza-10) (Vincenz, C. a kol., J. Biol. Chem., 272, str. 6578 až 6583 (1997); Fernandes-Alnemri, T. a kol., Proč. Nati. Acad. Sci. 93, str. 7464 až 7469 (1996)), Ich-3 (kaspáza-11) (Wang, S. a kol., J. Biol. Chem. 271, str. 20580 až 20587 (1996)), mCASP-12 (kaspáza-12), (Van de Crean, M. a kol., FEBS Lett. 403, str. 61 až 69 (1997); Yuan, Y. a Miura, M. PCT přihláška WO95/00I60 (1995)), ERICE (kaspáza-13), (Humke, E. W„ a kok, J. Biol. Chem., 273(25) str. 15702 až 15707 (1998)), a MÍCE (kaspáza14) (Hu, S. a kol., .1. Biol. Chem., 273(45) str. 29648 až 29653 (1998)).
Každý z těchto hoinologů a také ICE samotný jsou schopny vyvolat apoptózu, pokud se nadměrně exprimují v transfekovaných buňkách. Inhibice jednoho nebo více těchto homologú inhibitorem peptidyI ICE Tyr-Val-Ala-Asp-chlormethylketonem vede k inhibicí apoptózy u primárních buněk nebo buněčných kmenů. Lazebník a kok, Nátuře, 371, str. 346 (1994).
Ukázalo se také, že kaspáza je zapojena do řízení programované buněčné smrti nebo apoptózy. Yuan, J. a kok, Cell, 75, str. 641 až 652 (1993); Miura, M.a kok, Cell, 75, str. 653 až 660 (1993); Nctt-Fiordalisi, M. A. a kok, J. Cell. Biochem.. 17B, str. 117 (1993). Zejména se má za to, že ICE nebo homologa ICE souvisí s regulací apoptózy u neurodegenerativních onemocnění, jako je Alzheimerova a Parkinsonova choroba (Marx, J. a M. Baringa, Science, 259, str. 760 až 762 (1993); Gagliardini, V. a kok. Science, 263, str. 826 až 828 (1994)). Léčebné aplikace pro inhibici apoptózy mohou zahrnovat léčbu Alzheimerovy nemoci, Parkinsonovy nemoci, mrtvice, infarktu myokardu, atrofie pátere a stárnutí.
Ukázalo se, že ICE zprostředkuje apoptózu (programovaná buněčná smrt) u určitých typů tkání. Steller, hk, Science, 267, str. 1445 (1995); Whyte, M. a Evan, G., Nátuře, 376, str. 17 (1995); Martin, S. J. a Green, D. R., Cell, 82, str. 349 (1995); Alnemri, E. S., a kok, J. Biol. Chem., 270, str. 4312 (1995); Yuan, J. Curr. Opin, Cell Biok, 7, str. 211 (1995). Transgenní myš s přerušeným ICE genem je deficientní při apoptóze zprostředkované Fas (Kuida, K. a kok, Science 267, 2000 (1995). Tato aktivita ICE je odlišná od aktivity jako enzymu pro zpracování pro-IL-Ιβ. Je možné, že u určitých typů tkání nemusí inhibice ICE ovlivňovat sekreci maturovaného IL-Ιβ, ale může inhibovat apoptózu.
Enzymaticky aktivní ICE byl již dříve popsán jako heterodímer složený ze dvou podjednotek, p20 a plO (s molekulovou hmotností 20 kDa respektive 10 kDa). Tyto podjednotky jsou odvozeny od proenzymu o hmotnosti 45 kDa (p45) přes formu p30, pomocí aktivačního mechanismu, který je autokatalytický (Thornberry, N. A. a kok, Nátuře, 356, str. 768 až 774 (1992)). Proenzym ICE je rozdělen na několik funkčních domén; prodoménu (p!4), podjednotku p22/20, polypeptidovou spojku a podjednotku plO (Thornberrry a kok, viz výše; Casano a kok, Genomics, 20, str. 474 až 481 (1994)).
p45 o plné délce byl charakterizován pomocí své cDNA-sekvence a aminokyselinové sekvence (mezinárodní patentové přihlášky PCT WO 91/15577 a WO 94/00154). Známé jsou i cDNAsekvence a aminokyselinové sekvence p20 a plO (Thornberry a kok, viz výše). Sekvenovány a klonovány byly rovněž myší a krysí ICE. Vykazují vysokou homologii aminokyselinové sekven ce a sekvence nukleové kyseliny s lidským ICE (Miller, D. K. a kol., Ann. N. Y. Acad. Sci., 696, str. 133 až 148 (1993); Molineaux, S. M. a kol., Proč. Nat. Acad. Sci., 90, str. 1809 až 1813 (1993). Pomocí rozlišení atomů za použití rentgenové krystalografie byla určena trojrozměrná struktura ICE. Wilson, K. P., a kol., Nátuře, 370, str. 270 až 275 (1994). Aktivní enzym se vysky5 tuje jako tetramer dvou p20 a dvou plO podjednotek.
V nedávné době byly do konverze pro-IGlF na IGIF nebo do produkce IFN-γ in vivo zapojeny ICE a další členy skupiny ICE/CED-3 (PCT patentová přihláška PCT/US96/20843, přihláška WO 97/22619, které jsou zde uvedeny jako odkaz). IGIF se syntetizuje in v/vojako prekurzor io proteinu „pro-IGIF“.
Faktor vyvolávající interferon gama (IGIF) je přibližně 18-kDa polypeptíd, který stimuluje vylučování interferonu gama (IFNy) T-buňkami. IGIF je vylučován aktivovanými Kupfferovými buňkami a makrofágy in vivo a z těchto buněk je přenášen za stimulace endotoxinu. Tedy, sloui? ceniny, které potlačují vylučování IGIF, mohou být užitečné jako inhibitory takové stimulace buněk T, což může snížit hladinu vylučování IFN-γ těmito buňkami.
IFN-γ je cytokin s imunomodulačními účinky na různé imunní buňky. IFN-γ je zapojen zejména do aktivace makrofágu a výběru Thl buněk (F. Belardellí, APMIS, 103, str. 161 (1995)). IFN—γ uplatňuje svůj účinek zejména pomocí modulace vylučování genů přes STÁT a IRF dráty (C. Schindler a J. E. Damell, Ann. Rev. Biochem., 64, str. 621 (1995); T. Taniguchi, J. Cancer
Res. Clin. Oncol., 121, str. 516 (1995)).
Myši, které mají nedostatek IFN-γ nebo jeho receptoru, mají mnohonásobné poruchy funkce 25 imunních buněk a jsou odolné k endotoxickému šoku (S. Huang a kol,, Science, 259, str. 1742 (2993); D. Dalton a kol., Science, 259, str. 1739 (1993); B. D. Car a kol., J. Exp. Med,, 179, str. 1437 (1994)). Ukazuje se, že stejně jako IL-12, i IGIF vykazuje schopnost vyvolat produkci IFN-γ buňkami T (H. Okamura a kol., Infection and Immunity, 63, str. 3966 (1995); H. Okamura a kol., Nátuře, 378, str. 88 (1995); S. Ishio a kol., J. Immunol., 156, str, 4274 (1996)).
Ukázalo se, že IFN-γ přispívá k patologii spojené s různými zánětlivými, nakažlivými a autoimunními poruchami a onemocněními. Tedy, sloučeniny schopné potlačit vylučování IFN-γ by mohly být využitelné pro zmírnění vlivů onemocnění spojených s IFN-γ.
Proto prostředky a způsoby schopné regulovat převedení pro-IGIF na IGIF mohou být využitelné pro potlačení vylučování IGIF a IFN-γ in vivo a tedy pro zmírnění škodlivého vlivu těchto proteinů, které přispívají k poruchám a onemocněním člověka.
Inhibitory kaspázy představují třídu sloučenin vhodných pro kontrolu zánětů nebo apoptózy nebo obojího. Jsou popsány peptidové a peptidylové inhibitory ICE (PCT patentové přihlášky WO 91/15577, WO 93/05071, WO 93/09135, WO 93/12076, WO 93/14777, WO 93/16710, WO 95/35308, WO 96/30395, WO 96/33209 a WO 98/01133; Evropské patentové přihlášky EP 503 561, EP 547 699, EP 618 223, EP 623 592, a EP 623 606; a patenty US 5 434 248, US 5 710 153, US 5 716 929, a US 5 744 451). Ukázalo se, že tyto peptidylové inhibitory ICE blokují vylučování maturovaného IL-Ιβ na myším modelu zánětu (viz. výše) a potlačují růst leukemických buněk in vitro (Estrov a kol., Blood, 84, 380a (1994)). Avšak díky své peptidické povaze se tyto inhibitory vyznačují nežádoucími farmakologickými vlastnostmi, jako je špatná penetrace do buněk a buněčná aktivita, špatná absorpce při orálním podávání a rychlý metabolismus. (Plattner, J. J. a D. W. Norbeck, Drug Discovery Technologies, C. R. Clark a W. H. Moos (Ellis Horwood, Chichester, Anglie, 1990) str. 92 až 126. Tyto vlastnosti brání jejich využití jako účinných léčiv.
Je také známo, že ICE inhibujt in vitro také nepeptidylové sloučeniny. PCT patentová přihláška WO 95/26958; patent US 5 552 400; Dolle a kol., J. Med. Chem., 39, str. 2438 až 2440 (1996).
Není však jasné, zda tyto sloučeniny mají vhodný farmakotogícký profil pro terapeutické využití.
Existuje tedy potřeba sloučenin, které budou účinně ínhibovat kaspázu a které budou mít výhodnou in vivo aktivitu pro použití jako činidel pro prevenci a léčbu chronických a akutních forem onemocnění zprostředkovaných 1L-1, apoptózou, IGIF a lFN-γ, a také zánětlivých onemocnění, autoimunních onemocnění, rozkladných onemocnění kosti, proliferativních poruch, nakažlivých onemocnění a degenerativních onemocnění.
Podstata vynálezu
Předkládaný vynález poskytuje novou třídu sloučenin a jejich farmaceuticky přijatelných derivátů, které jsou využitelné jako inhibitory kaspázy, zejména inhibitory ICE. Tyto sloučeniny mohou být použity samotné nebo ve spojení s jinými léčebnými nebo profylaktickými činidly jako jsou antibiotika, imunomodulátory nebo jiná protizánětlivá činidla, pro léčbu nebo profylaxí onemocnění zprostředkovaných 1L-1, apoptózou, IGIF nebo IFN-γ. V souladu s výhodným provedením jsou sloučeniny podle předkládaného vynálezu schopny vázat se na aktivní místo kaspázy a inhibovat aktivitu tohoto enzymu.
Předmětem podle předkládaného vynálezu je poskytnout novou třídu sloučenin obecného vzorce I, které mají výhodné in vivo profily:
kde jsou různé substituenty popsány podle předkládaného vynálezu.
Dalším předmětem podle předkládaného vynálezu je poskytnout farmaceutické kompozice, včetně mnohasložkových kompozic. Předkládaný vynález také poskytuje způsoby použití a přípravy sloučenin podle předkládaného vynálezu a podobných sloučenin.
Podrobný popis vynálezu
Aby mohl být vynález lépe pochopen, následuje podrobný popis.
V předkládaném vynálezu se používají následující zkratky a definice.
Zkratky:
Ac2O anhydrid kyseliny octové
MeCn acetonitril
AMC aminomethylkumarin n-Bu normální butylová skupina
DMF dimethylformamid
DIEA Ν,Ν-diisopropylethylamin
DMA N,N-dimethylacetamid
EDC hydrochlorid l -(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiímidu
Et2O diethylether
-4 CZ 302281 B6
EtOAc
Fmoc
HBTU
HOBT
MeOH
NMP
TFA pNA ethyl acetát
9-fluoreny I methoxy karbony I
0-benzotriazol-l-yl-N,N,N'N'-tetramethyluronium hexafluorfosfát hydrát 1-hydroxybenzotriazolu methanol
N-methy I py rro I idon kyselina trifluoroctová p—nitroanilin
Definice
Termín „kaspáza“ znamená enzym, který je členem skupiny enzymů, které zahrnují ICE (viz.
H. Hara, Ntl. Acad. Sci., 94, str. 2007 až 2012 (1997)).
Termíny „HBV“, „HCV“, a „HGV“ znamenají virus hepatitidy-B, virus hepatitidy-C a virus hepatitidy-G.
Termín „K,“ znamená číselnou míru účinnosti sloučeniny inhibující aktivitu cílového enzymu, jako je ICE. Nižší hodnoty K, znamenají vyšší účinnost. Hodnota K, je odvozena pomocí úpravy experimentálně zjištěných údajů podle standardních rovnic pro kinetiku enzymů (viz. I. H. Segel, Enzyme Kinetics, Wiley-lnterscience, 1975).
Termín „faktor indukující interferon gama“ nebo „IGIF“ znamená faktor, který je schopen vyvolat endogenní produkci IFN—γ.
Termín „inhibitor kaspázy“ znamená sloučeninu, která je schopna vykázat detekovatelnou inhibici jedné nebo více kaspáz. Termín „inhibitor ICE“ znamená sloučeninu, která je schopna inhibovat enzym ICE a popřípadě dále jednu nebo více dalších kaspáz. Inhibice ICE může být určena za použití postupů popsaných a uvedených jako odkazy.
Odborníci zjistili, že in vivo inhibitor enzymu není nutně in vitro inhibitorem enzymu. Například pro léková forma sloučeniny typicky vykazuje nízkou nebo žádnou aktivitu při in vitro testech. Takové prolékové formy mohou být přeměněny pomocí metabolického nebo jiného biochemického postupu v těle pacienta za získání in vivo inhibitoru ICE.
Termín „cytokin“ znamená molekulu, která zprostředkuje interakce mezi buňkami.
Termín „stavu“ znamená jakékoli onemocnění, poruchu nebo účinek, který způsobuje škodlivé biologické následky pro subjekt.
Termín „subjekt“ znamená živočicha nebo jednu nebo více buněk živočišného původu. S výhodou je živočichem savec, výhodněji člověk. Buňky mohou být v jakékoli formě, včetně, ale bez omezení, buněk ponechaných v tkáních, shluků buněk, imortalizovaných buněk, transfektovaných buněk nebo transformovaných buněk a buněk odvozených od živočichů, které jsou fyzikálně nebo fenotypicky pozměněné.
Termín „pacient“, jak je podle vynálezu používán, označuje libovolného savce, zejména člověka.
Termín „alkylová skupina“ je přímý nebo rozvětvený, nasycený alifatický uhlovodík obsahující 1 až 6 atomů uhlíku.
Termín „alkenylová skupina“ znamená přímý nebo rozvětvený nenasycený uhlovodík obsahující 2 až 6 atomů uhlíku a nejméně jednu dvojnou vazbu.
- 5 CZ 302281 B6
Termín „alkynylové skupina“ znamená přímý nebo rozvětvený nenasycený uhlovodík obsahující 2 až 6 atomů uhlíku a nejméně jednu trojnou vazbu.
Termín „cykloal kýlová skupina znamená mono- nebo polycyklický. nearomatický uhlovodíko5 vý kruhový systém, který může popřípadě obsahovat nenasycené vazby v kruhovém systému.
Mezí příklady patří cyklohexylová skupina, adamantylová skupina, norbornylová skupina a spirocyklopentylová skupina.
Termín „arylová skupina“ znamená mono- nebo polycyklický kruhový systém, který obsahuje 6, io 10, 12 nebo 14 atomu uhlíku, ve kterém je alespoň jeden kruh aromatický. Arylové skupiny podle předkládaného vynálezu jsou popřípadě jednou nebo vícekrát substituovaná skupinou R11. Mezi příklady patří fenylová skupina, naftylová skupina a tetrahydronaftylová skupina.
Termín „heteroarylová skupina znamená mono- nebo polycyklický kruhový systém, který 15 obsahuje l,až 15 atomů uhlíku a 1 až 4 heteroatomy, přičemž je alespoň jeden z kruhů aromatický. Heteroatomy jsou atom síry, dusíku nebo kyslíku. Heteroarylové skupiny podle předkládaného vynálezu jsou popřípadě jednou nebo vícekrát substituované skupinou R11.
Termín „heteroeyklícka skupina, znamená mono- nebo polycyklický kruhový systém, který 20 obsahuje l až 15 atomů uhlíku a 1 až 4 heteroatomy, kde mono— nebo polycyklický kruhový systém může popřípadě obsahovat nenasycené vazby, ale není aromatický. Heteroatomy jsou nezávisle na sobě atom síry, dusíku a kyslíku.
Termín „alkylarylová skupina znamená alkylovou skupinu, kde atom vodíku alkylové skupiny 25 je nahrazen arylovou skupinou.
Termín „alkylheteroarylová skupina“ znamená alkylovou skupinu, kde atom vodíku alkylové skupiny je nahrazen heteroarylovou skupinou.
Termín „aminokyselinový postranní řetězec“ znamená jakoukoli skupinu připojenou k a uhlíku přírodní nebo nepřírodní aminokyseliny.
Termín „substituovaný“ znamená nahrazení atomu vodíku ve sloučenině substituující skupinou.
Termín „přímý řetězec“ znamená postupně nerozvětvený řetězec kovalentně vázaných atomů. Přímý řetězec může být substituovaný, ale tyto substituenty netvoří součást přímého řetězce.
V chemických vzorcích znamenají kulaté závorky způsob vazby v molekulách nebo skupinách. Závorky se používají zejména pro vyznačení: 1) až k příslušnému atomu je vázán více než jeden to atom nebo skupina; 2) místa rozvětvení (tj. atom těsně před otevřením závorky je vázaný jak k atomu nebo skupině v závorkách, tak k atomu nebo skupině těsně za ukončením závorky). Příkladem prvního použití je skupina ,,-N(alky 1)2“. která znamená, že jsou dvě alkylové skupiny vázané k atomu dusíku. Příkladem druhého použití je skupina „ C(O)NH2, která znamená, že karbonylová skupina a aminoskupina („NH2“) jsou obě vázány k vyznačenému atomu uhlíku.
Skupina-C(O)NIT může být znázorněna jinými způsoby, včetně následující struktury:
O nh2
Substituenty mohou být znázorněny v různých formách. Tyto různé formy jsou odborníkům pracujícím v této oblasti známé a mohou se používat zaměnitelným způsobem. Například methylový substituent na fenylovém kruhu může být znázorněn v následujících formách:
-6 CZ 302281 B6
Η
Různé formy substituentů, jako je methylová skupina, se podle vynálezu používají zaměnitelným způsobem.
Pokud je to možné, jsou další definice uvedeny v popise.
Sloučeniny podle předkládaného vynálezu
Sloučeninami podle provedení A podle předkládaného vynálezu jsou sloučeniny vzorce I:
(A) Yje:
nebo (b) (a)
O
R7 je skupina -OH, skupina -OR8, nebo skupina -N(H)OH; a
X je skupina -C(R3)2-;
m je 0;
R1 je atom vodíku, skupina -C(O)R8, skupina -C(O)C(O)R8, skupina -S(O)2R8, skupina -S(O)R8, skupina -C(O)OR\ skupina -C(O)N(H)R8, skupina -S(O)2N(H)-R8, skupina -S(O)N(H)—R8, skupina -C(O)C(O)N(H)R8. skupina -£(O)CH=CHR8, skupina -C(O)CH2OR8, skupina -C(O)CH2N(H)R8, skupina -C(O)N(R8)2, skupina -S(O)2N(R8)2, skupina -S(O)N(Rs)2, skupina -C(O)C(O)N(R8)2, skupina -C(O)CH2N(R8)2, skupina -CH2R8, skupina -CH2-atkenylR8, nebo skupina -CH2-alkyny!-R8;
R2 je atom vodíku a každá skupina R3 je nezávisle atom vodíku, skupina -R8, skupina alkenyl-R9 nebo skupina alkynyl-R9, nebo R2 a jedna skupina R3 společně s atomy, ke kterým jsou vázány, tvoří tříčlenný až sedmičlenný cyklický nebo heterocyklický kruhový systém, kde heteroatomy jsou nezávisle atomy síry, dusíku nebo kyslíku, kde atom vodíku vázaný k jakémukoli atomu uhlíku na cykloalkylové skupině je popřípadě nahrazen skupinou -R10, atom vodíku vázaný k jakémukoli atomu dusíku kruhového systému je popřípadě nahrazen skupinou -R1;
-7 CZ 302281 B6
R4 a jedna skupina R5 společně s atomy, ke kterým jsou vázány, tvoří kruhový systém vybraný ze skupiny, kterou tvoří:
a druhá skupina R je atom vodíku, nebo R4 a jedna skupina R5 společně s atomy, ke kterým jsou vázány, tvoří kruhový systém;
a druha skupina R5 je atom vodíku; io R6 je atom vodíku;
každá skupina R9 je nezávisle arylová skupina, heteroarylová skupina, cykloalkylová skupina, nebo heterocyklylová skupina, kde atom vodíku vázaný kjakémukoli atomu uhlíku na cykloalkylové skupině je popřípadě nahrazen skupinou -RKt, atom vodíku vázaný kjakémukoli uhlíku arylové nebo heteroarylové skupiny je popřípadě nahrazen skupinou -R11, a atom vodíku vázaný kjakémukoli atomu dusíku kruhového systému je popřípadě nahrazen skupinou -Rl;
každá skupina R10 je nezávisle hydroxylová skupina, thioskupina, atom fluoru, atom chloru, atom bromu, atom jodu, nitroskupina, kyanoskupina, aminoskupina, karboxylová skupina, skupina
-C(O)NH2, skupina -N(H)C(O)H, skupina -N(H)C(O)NH2, perfluoralkylová skupina,
-O—alkylová skupina, -O-arylová skupina, -O-alkylarylová skupina, N(H)alkylová skupina, -N(H)arylová skupina, -N(H)-alkylarylová skupina, skupina -N(alkyl)2, C(O)N(H)alkylová skupina, skupina -C(O)N(alkyl)2, -N(H)C(O)alkylová skupina, -N(H)C(O)N(H)alkylová skupina, skupina -N(H)C(O)N(alky1)2, -S-alkylová skupina, -S-arylová skupina, -S-alkylarylová skupina, S(O)2alkýlová skupina, ~S(O)alkylová skupina, -C(O)alkylová skupina, skupina -CH2NH2, -CH2N(H)alkýlová skupina, skupina-CH2N(alkyl)2, alkylová skupina, cykloalkylová
-8CZ 302281 B6 skupina, arylová skupina, heteroarylová skupina, heterocyklylová skupina, alkylcykloalkylová skupina, alkylarylová skupina, alkyl heteroarylová skupina, nebo alkylheterocyklylová skupina, kde atom vodíku vázaný k jakémukoli atomu uhlíku arylové skupiny nebo heteroarylové skupiny je popřípadě nahrazen skupinou Ru a atom vodíku vázaný k jakémukoli atomu dusíku je popří5 pádě nahrazen skupinou R ;
každá skupina R11 je nezávisle hydroxylová skupina, thioskupina, atom fluoru, atom chloru, atom bromu, atom jodu, nitroskupina, kyanoskupina, aminoskupina, karboxylová skupina, skupina -C(O)NH2, skupina -N(H)C(O)H, skupina -N(H)C(O)NH2, alkylová skupina, cykloalkylová io skupina, perfluoralkylová skupina, -Ό-alkylová skupina, -O-arylová skupina, -O-alkyl arylová skupina, - N(H)alkylová skupina, -N(H)arylová skupina, -N(H)-alkylarylová skupina, skupina
-N(alkyl)2, -C(O)N(H)alkylová skupina, skupina -C(O)N(alkyl)2, -N(H)C(O)aIkylová skupina, -N(H)C(O)N(H)alkylová skupina, skupina -N(H)C(O)N(alkyl)2, -S-alkylová skupina, -S-arylová skupina, -S-alkylarylová skupina, -S(O)2alkýlová skupina, -S(O)alkylová skupina,
-C(O)alkylová skupina, skupina -CH2NH2, -CH2N(H)alkylová skupina, nebo skupina -CH2N(alkyl)2.
Podle dalšího provedení B předkládaný vynález poskytuje sloučeninu vzorce 1:
kde každá skupina R8 je nezávisle alkylová skupina, cykloalkylová skupina, arylová skupina, hetero25 arylová skupina, heterocyklylová skupina, alkylcykloalkylová skupina, alkylaiylová skupina, alkylheteroarylová skupina nebo alkylheterocyklylová skupina, kde atom vodíku vázaný k jakémukoli atomu uhlíku na alkylové nebo cykloalkylová skupině je popřípadě nahrazen skupinou
-R10, atom vodíku vázaný k jakémukoli uhlíku arylové nebo heteroarylové skupiny je popřípadě nahrazen skupinou -R11, a atom vodíku vázaný k jakémukoli atomu dusíku kruhového systému je popřípadě nahrazen skupinou -R1;
R12 je -C(O)alkylová skupina, -C(O)cykloalkýlová skupina, -C(O)alkylarylová skupina, —C(O)alkylheteroarylová skupina, -C(O)heterocyklyIová skupina, nebo -C(O)alkylheterocyklylová skupina;
přičemž každá „alkylová skupina“ je přímá nebo rozvětvená, nasycená alifatická uhlovodíková skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku;
-9CZ 302281 B6 každá „alkenylová skupina je přímá nebo rozvětvená nenasycená uhlovodíková skupina obsahující 2 až 6 atomů uhlíku a nejméně jednu dvojnou vazbu;
každá „alkynylová skupina“ je přímá nebo rozvětvená nenasycená uhlovodíková skupina obsas bující 2 až 6 atomů uhlíku a nejméně jednu trojnou vazbu;
každá „cykloalkylová skupina“ je mono- nebo polycyklický, nearomatický, uhlovodíkový kruhový systém, obsahující 5 až 10 atomů uhlíku, který může popřípadě obsahovat nenasycený vazby v kruhovém systému;
io každá „arylová skupina“ je mono- nebo polycyklický kruhový systém, který obsahuje 6, 10, 12 nebo 14 atom uhlíku, ve kterém je nejméně jeden kruh kruhového systému aromatický;
každá „heteroarylová skupina“ je mono- nebo polycyklický kruhový systém, který obsahuje 1 až 15 4 heteroatomy a ve kterém je nejméně jeden kruh kruhového systému aromatický;
každá „heterocyktická skupina“ je mono- nebo polycyklický kruhový systém, který obsahuje 1 až 15 atomů uhlíku a 1 až 4 heteroatomy, ve kterém mono— nebo polycyklický kruhový systém může popřípadě obsahovat nenasycené vazby, ale není aromatický; a každý heteroatom je atom síry, atom dusíku nebo atom kyslíku.
Výhodné je provedení (A), kde R2 je atom vodíku a každé R3 je nezávisle atom vodíku, skupina -R\ skupina alkenyl-R9 nebo skupina alkynyl-R9, pod podmínkou, že pokud jedna skupina R3 je atom vodíku, potom druhá skupina R3 není atom vodíku.
Alternativní výhodné provedení je provedení (B), kde R2 je atom vodíku a každé R3 je nezávisle atom vodíku, skupina -R8, skupina alkenyl-R9 nebo skupina alkynyl-R9.
- 10CZ 302281 B6
Dále je výhodné takové provedení (B), kde Y je:
kde m je 0, a V je: CH30,
- 11 CZ 302281 B6
\^N
/
N
- 12CZ 302281 B6
m je 0;
Výhodné je v případě (A) i (B) takové provedení kde jedna skupina R3 je atom vodíku a druhá skupina R3 je methylová skupina, isopropyl, /erc-butyl, -CH2Salkyl, -CH2SO2alkyl, -CH2CH2Salkyl nebo-CH2CH2SO2alkyl.
Výhodněji jedna skupina R3 je atom vodíku a druhá skupina R3 je methylová skupina.
Alternativně výhodněji R1 je skupina -C(O)R8 nebo skupina-C(O)C(O)R8.
Alternativní výhodné provedení je takové, kde R4 a jedna skupina R5 tvoří společně s atomy, ke kterým jsou vázány, kruhový systém vybraný ze skupiny, kterou tvoří:
a druhá skupina R5 je atom vodíku.
Výhodné je rovněž takové provedení, kde jedna skupina R3 je atom vodíku a druhá skupina R3 je methylová skupina, isopropylová skupina, fórc-butylová skupina, skupina -CH2Salkvl, skupina ^CH2SO2alkyl, skupina -CH2CH2Salkyl nebo skupina -CH2CH2SO2alkyl; a kde R4 a jedna skupina R společně s atomy, ke kterým jsou vázány, tvoří kruhový systém vybraný ze skupiny, kterou tvoří:
a druhá skupina R5 je atom vodíku.
Výhodněji jedna skupina R3 je atom vodíku a druhá skupina R3 je methylová skupina. Ještě výhodněji R1 je skupina -C(O)R8 nebo skupina _C(O)C(O)R8.
- 13 CZ 302281 B6
Alternativně je výhodným provedením takové, kde R4 a jedna skupina IV společné s atomy, ke kterým jsou vázány, tvoří kruhový systém:
a druhá skupina R5 je atom vodíku.
Dalším výhodným provedením je takové kde R' je atom vodíku a druhá skupina R je methylová skupina, isopropylová skupina, /m-biitylová skupina, skupina -CHiSalkyl, skupina -CH2SO2alkyl, skupina CH2CH2Salkyl nebo skupina -CFUCHiSCbalkyl; a kde R4 a jedna skupina R5 ιο společně s atomy, ke kterým jsou vázány, tvoří kruhový systém vybraný ze skupiny, kterou tvoří:
a druhá skupina Rs aje atom vodíku.
Ve výhodném provedení jedna skupina R’ je atom vodíku a druhá skupina R3 je methylová sku15 pina.
V ještě výhodnějším provedení R1 je skupina -C(O)R8 nebo skupina -C(O)C(O)RS.
Specifické sloučeniny podle předkládaného vynálezu zahrnují příklady 5a-5bd, 7a -7at. 20a-20t,
24d-24e, 51, 52, 56, 57, 60, 61, 64, 65, 68, 69, 72, 73, 71, 75, 76-93, 98a-z, 98aa-az, 98ba,
98bb, 109, 110, 111, 122 a-v, vynález se však neomezuje pouze na tyto příklady.
Sloučeniny podle předkládaného vynálezu mohou obsahovat jeden nebo více „asymetrických“ atomů uhlíku a mohou se tedy vyskytovat ve formě racemátů nebo racemických směsí, jednotli25 vých enantiomerů, diastereomemích směsí a jednotlivých diastereomerů. Všechny stereogenní atomy uhlíku mohou mít R nebo S konfiguraci. Ačkoli mohou být specifické sloučeniny a struktury uvedené jako příklady podle předkládaného vynálezu znázorněny v určité stereochemické konfiguraci, vynález zahrnuje také sloučeniny a struktury, které mají také opačnou stereochemii na daném chirálním centru a dále také jejich směsi.
Všechny tyto isomerní formy těchto sloučenin jsou záměrně součástí podle předkládaného vynálezu, stejně jako jejích farmaceuticky přijatelné deriváty.
Termín „farmaceuticky přijatelný derivát“ znamená farmaceuticky přijatelné soli, estery nebo soli těchto esterů sloučenin podle předkládaného vynálezu nebo jakékoli jiné sloučeniny, které jsou po podávání pacientovi schopné poskytnout (přímo nebo nepřímo) sloučeninu podle předkládaného vynálezu nebo její aktivní metabolit nebo zbytek.
Farmaceuticky přijatelné soli sloučenin podle předkládaného vynálezu zahrnují například soli
4i) odvozené od farmaceuticky přijatelných anorganických a organických kyselin a bází. Příklady vhodných kyselin zahrnují kyselinu chlorovodíkovou, kyselinu bromovodíkovou, kyselinu sírovou, kyselinu dusičnou, kyselinu chloristou, kyselinu fumarovou, kyselinu maleinovou, kyselinu fosforečnou, kyselinu glykolovou, kyselinu mléčnou, kyselinu salicylovou, kyselinu jantarovou, kyselinu p-toluensulfonovou, kyselinu vinnou, kyselinu octovou, kyselinu citrónovou, kyselinu methansulfonovou, kyselinu mravenčí, kyselinu benzoovou, kyselinu malonovou, kyselinu
- 14 CZ 302281 B6 naftalen-2-sulfonovou a kyselinu benzensulionovou. Další kyseliny, jako je kyselina šťavelová, přestože nejsou samotné farmaceuticky přijatelné, mohou se použít při přípravě solí vhodných jako meziprodukty při přípravě sloučenin podle vynálezu a jejich farmaceuticky přijatelných kyselých adičních solí. Soli odvozené od příslušných bází zahrnují soli alkalických kovů (například sodíku), soli kovů alkalických zemin (například hořčíku), amoniové soli a soli N-Calkyl)/ obsahující v každé alkylové části 1 až 4 atomy uhlíku.
Předkládaný vynález také předpokládá „kvartemizaci“ skupin obsahujících bazické atomy dusíku sloučenin podle vynálezu. Bazické atomy dusíku se mohou kvartemizovat jakýmkoli činidlem známým odborníkům pracujícím v této oblasti, přičemž mezi tato činidla patří například nižší alkylhalogenidy, jako jsou methyl, ethyl, propyl a butyichloridy, bromidy a jodidy; dialkylsulfáty, včetně dimethyl, diethyl, dibutyl a diamylsulfátů; halogenidy s dlouhým řetězcem, jako jsou decyl, lauryl, myristyl a stearylchloridy, bromidy a jodidy a arylalkylhalogenidy včetně benzyl a fenethylbromidů. Pomocí takovéto kvartemizace se mohou získat produkty rozpustné nebo dispergovatelné v oleji nebo ve vodě.
Pokud jsou sloučeniny mnohokrát substituované, každý substituent může být vybrán nezávisle na ostatních substituentech, pokud taková kombinace poskytne stabilní sloučeninu.
Kombinacemi substituentů a proměnných podle předkládaného vynálezu jsou pouze ty, které vedou ke vzniku stabilních sloučenin. Termín „stabilní“ znamená sloučeniny, které mají dostatečnou stabilitu, aby umožňovala výrobu a podávání savcům pomocí způsobů známých v této oblasti. Typicky jsou tyto sloučeniny stabilní při teplotě 40 °C nebo nižší, v nepřítomnosti vlhkosti nebo jiných chemicky reaktivních podmínek, alespoň jeden týden.
Výhodné sloučeniny podle předkládaného vynálezu se mohou po orálním podání snadno absorbovat do krevního řečiště pacienta. Tato orální využitelnost umožňuje použití těchto sloučenin jako vynikajících činidel pro léčení a prevenci onemocnění zprostředkovaných IL-1-, apoptózou, IG1F nebo IFN-γ orálním podáváním.
Je třeba poznamenat, že sloučeniny podle předkládaného vynálezu mohou existovat v různých rovnovážných formách, v závislosti na podmínkách, mezi které patří výběr rozpouštědla, pH, a další podmínky, které jsou odborníkům pracujícím v této oblasti známé. Předkládaný vynález výslovně zahrnuje všechny takové formy. Zejména se může mnoho sloučenin podle předkládaného vynálezu (zvláště sloučeniny obsahující aldehydovou nebo ketonovou skupinu a karboxylovou kyselinovou skupinu v Y) vyskytovat ve formě poloacetalu nebo hydrátu. Například sloučeniny podle provedení A jsou ve formě poloacetalu, když Y je:
V závislosti na výběru rozpouštědla a dalších podmínek, které jsou odborníkům v této oblasti známé, mohou být sloučeniny také ve formě hydrátů, acyloxyacetalů, acetalů nebo enolů. Sloučeniny podle předkládaného vynálezu jsou v hydratované formě, když Y je:
O^^OR8
- 15 CZ 302281 B6 a R* je atom vodíku;
ve formě acyloxyacetalu, když Y je:
ve formě acetalu, když Y je:
<Λ a R je jiné, než atom vodíku; a ve formě enolů, když Y je:
Dále je třeba poznamenat, že rovnovážné formy sloučenin podle předkládaného vynálezu mohou zahrnovat tautomemí formy. Všechny takové formy jsou výslovně součástí podle předkládaného vynálezu.
Sloučeniny vzorce I se mohou syntetizovat za použití běžných způsobů. S výhodou se tyto sloučeniny běžně syntetizují ze snadno dostupných výchozích látek.
Sloučeniny podle předkládaného vynálezu se mohou připravit za použití způsobů popsaných podle předkládaného vynálezu. Jak bude odborníkům pracujícím v této oblasti zřejmé, tyto způsoby sami o sobě neznamenají, že je sloučeniny popsané a nárokované podle předkládaného vynálezu možné syntetizovat pouze tímto způsobem. Další způsoby budou odborníkům pracujícím v této oblastí zřejmé. Dále se mohou různé syntetické kroky vedoucí k požadovaným sloučeninám popsané podle vynálezu provádět v zaměněném pořadí.
Je třeba poznamenat, že sloučeniny podle předkládaného vynálezu se mohou modifikovat příslušnými funkčními skupinami za účelem zlepšení jejich určitých biologických vlastností. Tyto modifikace jsou odborníkům pracujícím v této oblasti známé a patří mezi ně úpravy zvyšující biologickou penetraci do daného biologického systému (například krevního, lymfatického systému, centrálního nervového systému), zvyšující orální biologickou využitelnost, zvyšující rozpustnost, aby bylo možné injekční podávání, změní metabolismus nebo mění rychlost vylučování. Dále se mohou sloučeniny změnit do forem proléčiva tak, že požadovaná sloučenina vznikne v těle pacienta jako důsledek působení metabolických nebo biochemických procesů na pro léčivu. Takové formy proléčiv typicky vykazují malou nebo žádnou aktivitu při in vitro testech. Mezi některé příklady proléčiv patří ketalové, acetalové, oximové, iminové a hydrazonové formy sloučenin, které obsahují ketonové nebo aldehydové skupiny, zejména pokud se vyskytují ve skupině
- 16 CZ 302281 B6
Y sloučenin podle předkládaného vynálezu. Mezi další příklady proléčiv patří poloketalové, poloacetalové, acyloxyketalové, acyloxyacetalové, ketalové, acetalové a enolové formy, které jsou popsané podle předkládaného vynálezu.
Kompozice a způsoby
Sloučeniny podle předkládaného vynálezu jsou inhibitory kaspázy a zejména inhibitory ICE. Sloučeniny podle předkládaného vynálezu jsou tedy schopné zasáhnout a inhibovat onemocnění zprostředkovaná IL-1, apoptózou, IGIF a IFN-γ a tedy omezovat aktivitu tohoto proteinu při io zánětlivých onemocněních, autoimunních onemocněních, destruktivních kostních onemocněních, proliferativních onemocněních, infekčních onemocněních a degenerativních onemocněních.
Sloučeniny podle předkládaného vynálezu například inhibují konverzi prekurzoru IL-Ιβ na maturovaný IL-Ιβ pomocí inhibice ICE. Protože je ICE esenciální pro vznik maturovaného IL-1, inhibice tohoto enzymu účinně blokuje iniciaci fyziologických účinků a symptomů zpro15 středkovaných IL-1, jako jsou záněty, pomocí inhibice vzniku maturovaného IL-1. Tedy pomocí inhibice aktivity prekurzoru IL-Ιβ sloučeniny podle předkládaného vynálezu účinně fungují jako inhibitory IL-1.
Sloučeniny podle předkládaného vynálezu také inhibují konverzi pro-IGIF na aktivní, maturovalo ný IGIF pomocí inhibice ICE. Protože je ICE esenciální pro vznik maturovaného IGIF, inhibice
ICE účinně blokuje vznik fyziologických účinků a symptomů zprostředkovaných IGIF, pomocí inhibice vzniku maturovaného IGIF. IGIF je tedy esenciální pro vznik IFN-y. ICE tedy účinně blokuje vznik fyziologických účinků a symptomů zprostředkovaných IFN-y pomocí inhibice vzniku maturovaného IGIF a tedy produkce IFN-y.
Sloučeniny podle předkládaného vynálezu jsou překvapivě biologicky využitelné ve srovnání s peptidylovými inhibitory, které jsou popsané například v EP 618 223, EP 623 592, WO 93/09135, WO 93/16710, patentu US 5 434 248, WO 95/35308 nebo WO 96/33209.
Farmaceutické kompozice a způsoby podle předkládaného vynálezu budou tedy vhodné pro kontrolu aktivity kaspázy in vivo. Kompozice a způsoby podle předkládaného vynálezu budou tedy vhodné pro kontrolu hladiny IL-1, IGIF nebo IFN—y in vivo pro léčení nebo zpomalení postupu, závažnosti nebo účinku onemocnění zprostředkovaných IL-1, apoptózou, IGIF nebo IFN-y, včetně onemocnění, poruch nebo účinků.
Farmaceutické kompozice podle předkládaného vynálezu obsahují sloučeninu vzorce I nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl a farmaceuticky přijatelný nosič. Tyto kompozice mohou popřípadě obsahovat další terapeutické činidlo. Tato činidla zahrnují protizánětlivá činidla, inhibitor matricové metaloproteázy, inhibitor lipoxygenázy, antagonistu cytokinu, imunosupresivum, protirako40 vinné činidlo, antivirové činidlo, cytokin, růstový faktor, imunomodulátor, prostaglandin nebo sloučeninu proti hyperproliferaci cév, vynález se však neomezuje pouze na tyto příklady.
Termín „farmaceuticky přijatelný nosič“ zahrnuje netoxický nosič, který se může podávat pacientovi společně se sloučeninou podle předkládaného vynálezu a který neruší její farmakologic45 kou aktivitu.
Farmaceuticky přijatelné nosiče, které se mohou použít ve farmaceutických kompozicích podle předkládaného vynálezu, zahrnují iontoměniče, aluminu, stearát hlinitý, lecitin, sérové proteiny, jako je lidský sérový albumin, pufrovací látky, jako jsou fosfáty, glycin, kyselinu sorbovou, sor50 ban draselný, částečné směsi glyceridu nasycených rostlinných mastných kyselin, vodu, soli nebo elektrolyty, jako je protaminsulfát, hydrogenfosforečnan sodný, hydrogenfosforečnan draselný, chlorid sodný, soli zinku, koloidní oxid křemičitý, trikřemíčitan hořečnatý, polyvinylpyrrolidon, látky založené na celulóze, polyethylenglykol, sodnou sůl karboxymethylcelulózy, polyakryláty, vosky, blokové polymery po lyethylen-polyoxy propy len, lanolin a samoemulgační systémy pro
- 17 CZ 302281 B6 dodávání léku (SEEDS), jako jsou α-tokoferol, polyethylenglykol 1000 sukcinát, nebo další podobné polymeru í doručovací matrice.
Ve farmaceutických kompozicích obsahujících pouze sloučeninu z provedení A a B jako aktivní složku, mohou způsoby podávání těchto kompozic dále zahrnovat krok podávání dalšího činidla tomuto pacientovi. Tato činidla zahrnují protizánětlivá činidla, inhibitor matricové metaloproteázy, inhibitor lípoxygenázy, antagonistu cytokinu, imunosupresivum, protirakovinné činidlo, antivirové činidlo, cytokin, růstový faktor, imunomodulátor, prostaglandin nebo sloučeninu proti cévní hyperproliferaci, vynález se však neomezuje pouze na tyto příklady.
io
Termín „farmaceuticky přijatelné množství“ znamená množství účinné při léčení nebo zlepšení onemocnění zprostředkovaných IL-1, apoptózou, IGIF nebo IFN-γ u pacienta. Termín „profylaktícky účinné množství“ znamená množství účinné při prevenci nebo zmírnění onemocnění zprostředkovaných IL-1, apoptózou, IGIF nebo IFN-γ u pacienta.
Sloučeniny podle předkládaného vynálezu se mohou použít běžným způsobem při kontrole hladiny IGIF a IFN-γ in vivo a pro léčení onemocnění nebo snížení postupu nebo závažnosti účinků, které jsou zprostředkovány IL-1, apoptózou, IGIF nebo IFN-γ. Tyto způsoby léčení, jejich dávkovači hladiny a režimy mohou být vybrány odborníkům pracujícím v této oblasti z dostupných způsobů a technik.
Například se může sloučenina podle předkládaného vynálezu kombinovat s farmaceuticky přijatelnými přísadami pro podávání pacientovi trpícímu onemocněním zprostředkovaným IL-1, apoptózou, IGIF nebo IFN-γ farmaceuticky přijatelným způsobem a v množství účinném pro snížení závažnosti tohoto onemocnění.
Alternativně se mohou sloučeniny podle předkládaného vynálezu použít v kompozicích a způsobech pro léčení a ochranu pacientů proti onemocněním zprostředkovaným IL-1. apoptózou, IGIF nebo IFN-γ po delší dobu. Sloučeniny se mohou v těchto prostředcích použít buď samotné, nebo společně s jinými sloučeninami podle předkládaného vynálezu způsobem, který odpovídá běžnému použití inhibitorů enzymů ve farmaceutických kompozicích. Například se může sloučenina podle předkládaného vynálezu kombinovat s farmaceuticky přijatelnými přísadami, které jsou běžné pro použití ve vakcínách a mohou se podávat v profylakticky účinných množstvích pro ochranu pacientů po delší časový úsek proti onemocněním zprostředkovaným
IL-1, apoptózou, IGIF nebo IFN-γ.
Sloučeniny vzorce I se mohou také podávat společně s jinými inhibitory kaspázy nebo ICE, čímž se zvýší účinek léčení nebo profylaxe proti různým onemocněním zprostředkovaným IL-1, apoptózou, IGIF nebo IFN-γ.
Sloučeniny podle předkládaného vynálezu se mohou dále použít v kombinaci buď s běžnými protizánětlivými činidly, nebo s inhibitory matricové metaloproteázy, inhibitory lipogenázy a antagonisty cytokinů jinými než IL-Ιβ.
Sloučeniny podle předkládaného vynálezu se mohou také podávat v kombinaci s imunomodulátory (například jako je bropirimin, protilátka proti lidskému interferonu alfa, IL-2, GM-CSF, methioninenkefalin, interferon alfa, diethyldithiokarbamát, nádorový nekrózní faktor, naltrexon a EPO), s prostaglandiny nebo protivirovými činidly (například jako je 3TC, polysulfatované polysacharidy, ganiclovir, ribavirin, acyclovir, interferon alfa, trimethotrexate a faneyelovir) nebo proléčivy těchto nebo podobných sloučenin pro prevenci nebo léčbu symptomů onemocnění zprostředkovaných IL-1, jako jsou záněty.
Pokud se sloučeniny podle předkládaného vynálezu podávají při kombinované terapii s jinými činidly, mohou se pacientovi podávat postupně nebo současně. Alternativně mohou farmaceu- 18CZ 302281 B6 tické nebo profylaktické kompozice podle předkládaného vynálezu obsahovat kombinaci sloučeniny vzorce I a dalšího terapeutického nebo profylaktického činidla.
Farmaceutické kompozice podle předkládaného vynálezu se mohou podávat perorálně, parenterálně, pomocí inhalačního spreje, místně, rektálně, nasálně, bukálně, vaginálně nebo pomocí implantovaného zásobníku. Výhodné je perorální podávání. Farmaceutické kompozice podle vynálezu mohou obsahovat jakékoli běžné netoxické farmaceuticky přijatelné nosiče, přísady nebo vehikula. V některých případech se může pH kompozice upravit pomocí farmaceuticky přijatelných kyselin, bází nebo pufrů, čímž se zvýší stabilita formulované sloučeniny nebo její dodávací formy. Termín parenterální zahrnuje podle předkládaného vynálezu subkutánní, intrakutánní, nitrožilní, intramuskulámí, intraartikulámí, intrasynoviální, intrastemální, intrathekální, intralesionální a intrakraniální injekční nebo infúzní techniky.
Farmaceutické kompozice mohou být buď ve formě sterilních injektovatelných přípravků, například sterilních injektovatelných vodných nebo olejových suspenzí. Tyto suspenze mohou být formulovány pomocí technik, které jsou odborníkům pracujícím v této oblastí známé, za použití vhodných disperguj ících nebo zvlhčujících činidel (jako je například Tween 80) a suspendujících činidel. Sterilní injektovatelné přípravky mohou být také sterilní injektovatelné roztoky nebo suspenze v netoxických parenterálně přijatelných ředidlech nebo rozpouštědlech, například jako je roztok v 1,3-butandiolu. Mezi přijatelná vehikula a rozpouštědla, která se mohou použít, patří mannitol, voda, Ringerův roztok a izotonický roztok chloridu sodného. Dále se jako rozpouštědlo nebo suspendující médium používají sterilní, fixované oleje. Pro tento účel se mohou použít jakékoli směsi fixovaných olejů, včetně syntetických mono- nebo diglyceridů. Při přípravě injekčních prostředků jsou vhodné mastné kyseliny, jako je kyselina olejová a její glyceridové deriváty, jako jsou přírodní farmaceuticky přijatelné oleje, jako je olivový olej nebo ricínový olej, zejména jejich polyethoxylováné formy. Tyto olejové roztoky nebo suspenze mohou také obsahovat ředidla nebo dispergační činidla na bázi alkoholů s dlouhým řetězcem, které jsou popsány například v Pharmacopoeia Helvetica, nebo podobné alkoholy.
Farmaceutické kompozice podle předkládaného vynálezu se mohou také podávat perorálně v jakékoli perorálně přijatelné dávkovači formě včetně tobolek, tablet a vodných suspenzí a roztoků, vynález se však neomezuje pouze na tyto příklady. V případě tablet pro perorální použití se obvykle používají laktoza a kukuřičný škrob. Typicky se také přidávají lubrikační činidla, jako je stearát hořečnatý. Pro perorální podávání ve formě tobolek jsou vhodnými ředidly laktóza a sušený kukuřičný škrob. Pokud se perorálně podávají vodné suspenze a roztoky a propylenglykol, aktivní činidlo se smísí s emulgačním nebo suspendujícím činidlem. Pokud je to nutné, mohou se přidat určitá sladidla a/nebo příchutě a/nebo barviva.
Farmaceutické kompozice podle předkládaného vynálezu se mohou také podávat ve formě čípků pro rektální podávání. Tyto kompozice se mohou připravit smísením sloučeniny podle předkládaného vynálezu s vhodnou nedráždivou přísadou, která je pevná při teplotě místnosti, ale kapalná při rektální teplotě a proto taje v rektu za uvolnění aktivních složek. Mezi takové látky patří kakaové máslo, včelí vosk a polyethylenglykoly.
Místní podávání farmaceutických kompozic podle předkládaného vynálezu je zvláště vhodné, pokud se léčí místa nebo orgány, které jsou snadno dostupné pro místní aplikaci, Pro místní aplikaci na pokožku se mohou farmaceutické kompozice formulovat do formy vhodných mastí obsahujících aktivní sloučeniny suspendované nebo rozpuštěné v nosiči. Nosiče pro místní podávání sloučenin podle předkládaného vynálezu zahrnují minerální oleje, kapalná vazelína, bílá vazelína, propylenglykol, sloučenina polyoxyethylen polyoxypropylen, emulgační vosk a voda, vynález se však neomezuje pouze na tyto příklady. Alternativně může být farmaceutická kompozice formulována do formy mléka nebo krému obsahujícího aktivní sloučeninu suspendovanou nebo rozpouštěnou v nosiči. Mezi vhodné nosiče patří minerální oleje, sorbitanmonostearát, polysorbát 60, cetylestery vosků, cetearylalkohol, 2-oktyldodekanol, benzylalkohol a voda, vynález se však neomezuje pouze na tyto příklady. Farmaceutické kompozice podle předkládaného vynálezu se
- 19CZ 302281 B6 mohou také místně aplikovat do dolní části intestinálního traktu pomocí rektálních čípkových prostředků nebo vhodného klystýrového prostředku. Předmětem podle předkládaného vynálezu jsou také místně aplikované transdermální náplasti.
Farmaceutické kompozice podle předkládaného vynálezu se mohou také podávat pomocí nosního aerosolu nebo inhalačně. Tyto kompozice se připraví podle postupů, které jsou odborníkům v oblasti farmaceutických prostředků známé a mohou se připravit jako roztoky v šalinu, za použití benzylalkoholu nebo jiné vhodné konzervační látky, látky podporující absorpci pro zvýšení biologické využitelnosti, fluorovaných uhlovodíků a/nebo jiných solubilizačních nebo dispergačni nich činidel, která jsou odborníkům pracujícím v této oblasti známá.
Při monoterapii pro prevenci a léčení onemocnění zprostředkovaných IL-I, apoptózou, IGIF a IFN-γ, mezi která patří zánětlivá onemocnění, autoimunní onemocnění, destrukční onemocnění kostí, proliferativní onemocnění, infekční onemocnění, degenerativní onemocnění, nekrotická onemocnění, zánětlivá peritonitida, osteoartritida, akutní pankreatitida, chronická pankreatitida, astma, syndrom dýchacího stresu dospělých, glomerulonefritida, revmatoidní artritida, systémový iupus erythematosus, skleroderma, chronická thyroiditida, Gravesova nemoc, autoimunní gastritida, diabetes mellitus závislý na insulinu (typ 1), autoimunní hemolytická anemie, autoimunní neutropenie, thrombocytopenie, chronická aktivní hepatitida, myastenia gravis, zánětlivá střevní onemocnění, Crohnova nemoc, psoriáza, atopická dermatitida, onemocnění štěp vs. hostitel, osteoporóza, onemocnění kostí spojená s mnohočetným myelomem, leukémie a podobná onemocnění, myelodysplastický syndrom, akutní myclogenní leukemie, chronická myelogenní leukemie, metastatická melanom, Kaposiho sarkom, mnohočetný myelom, sepse, septický šok, Shigellosa, Alzheimerova nemoc, Parkinsonova nemoc, mozková ischemie, ischemie myokardu, spinální muskulární atrofie, mnohočetná skleróza, encefalitida související s AIDS, stárnutí, vypadávání vlasů, neurologické poškození způsobené mrtvicí, ulcerativní kolitida, infekční hepatitida, mladický diabetes, lišej, akutní dermatomyositida, ekzém, primární cirrhosa, uveitida, Behcetova nemoc, atopické kožní onemocnění, čistá aplasie červených krvinek, aplastická anémie, amyotrofní laterální skleróza, nefrotický syndrom a systémová onemocnění nebo onemocnění
3o s účinkem lokalizovaným na játrech nebo jiných orgánech, která mají zánětlivou nebo apoptotickou složku způsobenou přebytkem konzumovaného alkoholu v potravinách nebo virem, jako je HBV, HCV, HGV, virus žluté horečky, virus dengue a virus japonské encefalitidy, jsou vhodné dávkovači hladiny mezi 0,01 až 100 mg/kg tělesné hmotnosti za den, s výhodou 0,5 až 75 mg/kg tělesné hmotnosti za den a nejvýhodněji 1 až 50 mg/kg tělesné hmotnosti za den aktivní složky sloučeniny podle vynálezu.
Typicky se farmaceutické kompozice podle předkládaného vynálezu podávají 1 až 5krát denně nebo alternativně jako kontinuální infuze. Toto podávání se může použít při chronické i akutní terapii. Množství aktivní složky, která se může kombinovat s nosičem za vzniku jednotlivé dáv40 kovací formy, se bude měnit podle léčeného pacienta a konkrétního způsobu podávání. Typický přípravek bude obsahovat 5 až 95 % hmotnostních aktivní složky. S výhodou takový prostředek obsahuje 20 až 80 % aktivní složky.
Pokud kompozice podle předkládaného vynálezu obsahuje kombinaci sloučeniny vzorce I a jedné nebo více dalších terapeutických nebo profylaktických látek, budou jak sloučenina, tak další činidlo přítomny v dávkové hladině 10 až 80 % dávky normálně používané při monoterapii.
Po zlepšení stavu pacienta se může, pokud je to nutné, podávat pacientovi udržovací dávka sloučeniny, kompozice nebo kombinace podle předkládaného vynálezu. Potom se může dávka nebo frekvence podávání nebo obojí snížit, jako funkce symptomů, na hladinu, při které se udržuje zlepšený stav a pokud se symptomy zmírní na požadovanou hladinu, léčení se může ukončit. Může být však nutné pacienty občasně léčit po dlouhou dobu při jakémkoli opakování onemocnění nebo symptomů.
-20CZ 302281 B6
Jak bude odborníkům v této oblasti zřejmé, je možné použít nižší nebo vyšší dávky, než bylo uvedeno výše. Specifické dávkování a režimy léčby pro každého konkrétního pacienta budou záviset na různých faktorech, včetně aktivity specifické použité sloučeniny, věku, tělesné hmotnosti, celkového zdravotního stavu, času podávání, rychlosti vylučování, kombinace léků, závaž5 nosti a průběhu onemocnění a dispozice pacienta k onemocnění a úsudku ošetřujícího lékaře.
Onemocnění zprostředkovaná IL-1 nebo apoptózou, která je možné léčit nebo předcházet sloučeninami podle předkládaného vynálezu, zahrnují zánětlivá onemocnění, autoimunní onemocnění, poruchy proliferace, infekční onemocnění a degenerativní onemocnění. Onemocnění zproio středkovaná apoptózou, která je možné léčit nebo předcházet sloučeninami podle předkládaného vynálezu, zahrnují degenerativní onemocnění, vynález se však neomezuje pouze na tyto příklady.
Zánětlivá onemocnění zprostředkovaná IL-1 nebo apoptózou, která lze léčit nebo předcházet, zahrnují osteoartritidu, akutní pankreatitidu, chronickou pankreatitidu, astma, a syndrom dýchai5 čího stresu dospělých, vynález se však neomezuje pouze na tyto příklady. Zánětlivá onemocnění s výhodou zahrnují osteoartritidu nebo akutní pankreatitidu.
Autoimunní onemocnění zprostředkovaná IL-1 nebo apoptózou, která lze léčit nebo předcházet, zahrnují glomerulonefritidu, revmatoidní artritidu, systémový lupus erythematosus, skleroderma,
2o chronickou thyroitidu, Gravesovu nemoc, autoimunní gastritídu, diabetes meílitus závislý na insulinu (typu I), autoimunní hemolytickou anemii, autoimunní neutropeníi, thrombocytopenii, chronickou aktivní hepatitidu, myasthenii gravis, mnohočetnou sklerózu, zánětlivé střevní onemocnění, Crohnovu nemoc, psoriázu, atopickou dermatitidu, a onemocnění štěp vs. hostitel, vynález se však neomezuje pouze na tyto příklady. S výhodou autoimunní onemocnění zahrnují revmatoidní artritidu, zánětlivé střevní onemocnění, Crohnovu nemoc, psoriázu, nebo atopickou dermatitidu.
Destruktivní onemocnění kostí zprostředkovaná IL-l nebo apoptózou, která lze léčit nebo předcházet, zahrnují osteoporózu a kostní onemocnění spojené s mnohočetným myelomem, vynález se však neomezuje pouze na tyto příklady.
Proliferativní onemocnění zprostředkovaná IL-1 nebo apoptózou, která lze léčit nebo předcházet, zahrnují leukémie a podobná onemocnění, jako je myelodysplastický syndrom, akutní myelogenní leukémie, chronická myelogenní leukémie, metastatický melanom, Kaposiho sarkom a mnohočetný myelom, vynález se však neomezuje pouze na tyto příklady.
Infekční onemocnění zprostředkované IL-1 nebo apoptózou, která lze léčit nebo předcházet, zahrnují sepsi, septický šok a Shigellózu, vynález se však neomezuje pouze na tyto příklady.
-io Degenerativní nebo nekrotická onemocnění zprostředkovaná ÍL-l nebo apoptózou, která lze léčit nebo předcházet sloučeninami podle předkládaného vynálezu, zahrnují Alzheimerovu nemoc, Parkinsonovu nemoc, mozkovou ischemii a ischemií myokardu, vynález se však neomezuje pouze na tyto příklady. Degenerativním onemocněním je s výhodou Alzheimerova nemoc.
Degenerativní onemocnění zprostředkovaná IL-1 nebo apoptózou, která lze léčit nebo předcházet sloučeninami podle předkládaného vynálezu, zahrnují Alzheimerovu nemoc, Parkinsonovu nemoc, mozkovou ischemii, ischemii myokardu, spinální svalovou atrofii, mnohočetnou sklerózu, encefalitidu, související s AIDS, encefalitidu související s HIV, stárnutí, vypadávání vlasů, a neurologické poškození způsobené mrtvicí, vynález se však neomezuje pouze na tyto příklady.
Pomocí sloučenin podle předkládaného vynálezu se mohou léčit další onemocnění, která mají zánětlivou nebo apoptotickou složku. Těmito onemocněními mohou být systémová onemocnění nebo onemocnění s účinkem lokalizovaným v játrech nebo jiných orgánech a mohou být způsobena například nadměrnou konzumací alkoholu v potravinách nebo viry, jako jsou HBV, HCV,
HGV, virus žluté horečky, virus dengue a virus Japonské encefalitidy.
-21 CZ 302281 B6
Onemocnění zprostředkovaná IGIF nebo IFN-γ, která se mohou léčit nebo předcházet pomocí sloučenin podle předkládaného vynálezu, zahrnují zánětlivá onemocnění, infekční, autoimunní, proIiterativní, neurodegenerativní a nekrotícké stavy, vynález se však neomezuje pouze na tyto ? příklady,
Zánětlivá onemocnění zprostředkovaná IGIF nebo IFN-γ, která se mohou léčit nebo předcházet pomocí sloučenin podle předkládaného vynálezu, zahrnují osteoartritidu, akutní pankreatitidu, chronickou pankreatitidu, astma, revmatoidní artritidu, zánetlivé střevní onemocnění, Crohnovu io nemoc, ulcerativní kolítidu, mozkovou ischemii, ischemii myokardu a syndrom dýchacího stresu dospělých, vynález se však neomezuje pouze na tyto příklady. Zánětlivá onemocnění s výhodou zahrnují revmatoidní artritidu, ulcerativní kolítidu, Crohnovu nemoc, hepatitidu nebo syndrom dýchacího stresu dospělých.
Infekční onemocnění zprostředkovaná IGIF nebo IFN-γ, která se mohou léčit nebo předcházet pomocí sloučenin podle předkládaného vynálezu, zahrnují hepatitidu, sepse, septícký šok a Shigellosu, vynález se však neomezuje pouze na tyto příklady.
Autoimunní onemocnění zprostředkovaná IGIF nebo IFN-γ, která se mohou léčit nebo předchází zet pomocí sloučenin podle předkládaného vynálezu, zahrnují glomerulonefritidu, systémový lupus erythematosus, skleroderma, chronickou thyroitidu, Gravesovu nemoc, autoimunní gastritidu, diabetes mellitus závislý na insulinu (typu I), mladický diabetes, autoimunní hemolytickou anemii, autoimunní neutropenii, thrombocytopenii, myasthenii gravis, mnohočetnou sklerózu, psoriázu, lichenplanus, onemocnění štěp vs. hostitel, akutní dermatomyositidu, ekzém, primární cirrhosu, hepatitidu, uveitidu, Behcetovu nemoc, atopické kožní onemocnění, čistou aplasii červených krvinek, aplastickou anemii, amyotrofní laterální sklerózu, a nefrotický syndrom, vynález se však neomezuje pouze na tyto příklady. S výhodou autoimunní onemocnění zahrnují glomerulonefritidu, diabetes mellitus závislý na insulinu (typu I), mladický diabetes psoriázu, onemocnění štěp vs. hostitel nebo hepatitidu.
Výhodnější onemocnění, která lze léčit nebo předcházet, zahrnují revmatoidní artritidu, zánětlivé střevní onemocnění, včetně Crohnovy nemoci a ulcerativní kolitidy, zánětlivou peritonitidu, septický šok, pankreatitidu, traumatickou mozkovou příhodu, odmítnutí transplantovaného orgánu, osteoartritidu, astma, psoriázu, Alzheimerovu nemoc, atopickou dermatitidu nebo leukémii a podobná onemocnění, jako je myelodysplastický syndrom nebo mnohočetný myelom.
Podle jednoho provedení tedy předkládaný vynález poskytuje způsob léčení nebo prevenci onemocnění zprostředkovaného IL-1 nebo apoptózou u pacienta, přičemž způsob zahrnuje krok podávání jakékoli sloučeniny, farmaceutické kompozice nebo požadované kombinace popsané podle vynálezu a farmaceuticky přijatelného nosiče pacientovi.
Další provedení podle předkládaného vynálezu poskytuje způsob potlačení produkce IGIF u pacienta, kdy způsob zahrnuje krok podávání jakékoli sloučeniny, farmaceutické kompozice nebo požadované kombinace popsané podle vynálezu a farmaceuticky přijatelného nosiče paci45 entovi.
Ještě další provedení podle předkládaného vynálezu poskytuje způsob snížení produkce IFN-γ u pacienta, kdy způsob zahrnuje krok podávání jakékoli sloučeniny, farmaceutické kompozice nebo požadované kombinace popsané podle vynálezu a farmaceuticky přijatelného nosiče pacien50 tovi.
Ačkoli je předkládaný vynález zaměřen na použití sloučenin podle předkládaného vynálezu pro prevenci a léčení onemocnění zprostředkovaných IL-1, apoptózou, IGIF a IFN-γ, sloučeniny
-22 CZ 302281 B6 podle předkládaného vynálezu se mohou také použít jako inhibiční činidla pro další cysteinové proteázy.
Sloučeniny podle předkládaného vynálezu jsou také vhodné jako komerční reagencie, které se účinně váží ke kaspáze nebo jiným cysteinovým proteázám, mezi které patří ICE, vynález se však neomezuje pouze na tento příklad. Jako komerční reagenty se mohou sloučeniny podle předkládaného vynálezu ajejich deriváty použít pro blokování proteolýzy cílového peptidů při biochemických nebo buněčných testech na ICE a homologa ICE nebo se mohu derivatizovat tak, že se váží ke stabilní pryskyřici jako vazebnému substrátu pro použití při afinitní chromatografii. Tato io a další použití, která charakterizují komerční inhibitory cysteinových proteáz, budou odborníkům pracujícím v této oblasti zřejmá.
Aby mohl být vynález lépe pochopen, jsou připojeny následující příklady. Tyto příklady slouží pouze pro ilustraci a rozhodně je nelze považovat za omezení rozsahu předkládaného vynálezu.
Příklady provedení vynálezu
Podmínky analytické vysokotlaké chromatografíe (HPLC):
Kolona: C-18, velikost částic: 5 μ, velikost pórů: 100 A,
Velikost kolony: 4,6 x 150 mm
Rozpouštědlo A: OJ % TFA/1 % MeCN/98,9 % voda
Rozpouštědlo B: OJ % TFA/99,9 % MeCN
Gradient: A ku B během 20 minut při průtoku 1 ml/min
Kolona: Kyano, velikost částic: 5 μ, velikost pórů: 100 A,
Velikost kolony: 4,6 x 150 mm,
Rozpouštědlo A: OJ % TFA/1 % MeCN/98,9 % voda
Rozpouštědlo B: OJ % TFA/99,9 % MeCN
Gradient: A/B = 99 %/l % ku 50 %/50 % během 20 minut při průtoku 1 ml/min HPLC hmotová spektrální analýza:
Hmotová spektrální analýza: Všechna hmotová spektrální data se měří za použití hmotového spektrometru Micromass Quattro II triple quadrupole (Beverly, MA) opatřeného kapa li nokružným elektronsprejovým ionizačním zdrojem. Hmotový spektrometr je spojen s HPLC systémem vyrobeným společností Hewlett-Packard (HP 1100). Automatickým samplerem systému je kapalinový manipulátor Gilson 215 (Middleton, WI). Celé zařízení se kontroluje pomocí soft4« ware MassLynx od společnosti Micromass.
Hmotová spektrální analýza se provádí pomocí kapalinové chromatografie-MS pro určení čistoty za současného potvrzení molekulové hmotnosti. V případech, kdy se čistota vzorku určí jinými způsoby, se místo úplné chromatografické analýza použije průtoková nástřiková analýza (FIA).
Shromáždí se všechny případy jak pozitivních, tak negativních iontových spekter.
Podmínky získání hmotového spektra: Při všech experimentech byl hmotový spektrometr konfigurován v elektrosprejovém módu s kapalinokružnou odečtovou elektrodou. Pro snížení průtoku z HPLC na 40 % původního průtoku se použil separátor toku. Teplota u vstupu byla nastavena na
140 °C a průtok sušicího plynu byl nastaven na maximální signál. Rozlišení hmotového spektrometru bylo nastaveno na 0,65 amu FWHM a data se odečítala centroidním způsobem. Při pozitivním iontovém módu bylo kuželové napětí nastaveno na 25 V, kapilární napětí na 3,8 kV. Při negativním iontovém módu bylo kuželové napětí nastaveno na 25 V, kapilární napětí na 3,5 kV. Jak při pozitivním, tak při negativním iontovém módu byl čas získání úplného spektra 1 s při spínacím čase 0,25 sekundy mezi skeny. Rozsah hmoty skenovaný při očekávané molekulové
-23 CZ 302281 B6 hmotnosti nižší než 350 amu byl 70 až 500 m/z, zatímco u molekul s očekávanou hmotností vyšší než 350 amu byl skenovaný poměr hmoty k náboji 200-1000 m/z.
Podmínky chromatografie: Kapalinová chromatografie se provádí za použití YMC AQ 08 5 kolony (150 m x 3 mm při 5μτπ částicích a velikostí pórů 120 A). Při analýze se MeCN s 0.2 % kyseliny mravenčí smísí s vodou s 0,2 % kyseliny mravenčí za vzniku elučního gradientu. Profil gradientu se skládá z výchozích 15 % MeCN: voda a množství MeCN se zvyšuje lineárně během minut na 90 %. Tato koncentrace se udržuje konstantní 2 minuty a potom se nastaví výchozí podmínky. Během celé analýzy je průtok 0,9 ml/min.
io
Podmínky průtokové nástřikové analýzy: Při získávání F1A údajů se použije směs 1:1 vody a acetonitrilu (přičemž obě kapaliny obsahují 0,2 % kyseliny mravenčí). Průtok se nastaví na 0,3 ml/mín.
! H-NMR
Všechna 'H NMR spektra se získají za použití NMR spektrometru Bruker Instruments AMX-500 v daném rozpouštědle.
Způsoby syntézy
Obecný postup pro přípravu sloučeniny vzorce 1, provedení C (Schémata I až VI)
Postup při přípravě analogů 5a-5bd
-24CZ 302281 B6
Ve schématech I-VIII znamená proměnná LR připojení pryskyřice a je definovaná tak, jak je popsáno ve schématu I výše.
Krok 1: 6,7 g (0,8 mmol/gram vsádky, 5,36 mmol) pryskyřice obsahující hydrochlorid 4-methylbenzhydrylaminu (schéma I) se promyje 3x50 ml dim ethyl formám idu, 3x50 ml 10% DIEA/DMF a 3x50 ml N-methylpyrrolidinonu. K suspenzi promyté pryskyřice v 25 ml NMP se postupně přidá 3,5 g (1,1 ekvivalentu, 5,90 mmol) sloučeniny vzorce l, 3,1 ml (3,33 ekvivalentu, io 17,70 mmol) DIEA, 797 mg (1,1 ekvivalentu, 5,90 mmol) hydrátu 1-hydroxybenzotriazolu a 2,24 g (1,1 ekvivalentu, 5,90 mmol) 0-benzotriazol-N,N,N',N'-tetramethyluroniumhexafluorofosfátu (HBTU). Sloučenina vzorce l se připraví podle postupu popsaného v literatuře
A. M. Murphy a kol., J. Am. Chem. Soc., 114, strany 3156 až 3157 (1992). Směs se míchá při teplotě místnosti přes noc za použití ramenového míchadla.
Získaná směs se filtruje a pryskyřice se promyje d i methyl formám idem, potom se reaguje s 12 ml 20% roztoku anhydridu kyseliny octové v dimethylformamidu 30 minut při teplotě místnosti. Směs se filtruje a pryskyřice se postupně promyje 2x50 ml dimethylformamidu, 50 ml methanolu, 2x50 ml směsi dimethylformamidu a dichlormethanu 1:1, 50 ml methanolu a 3x50 ml dichlormethanu. Po sušení ve vakuu se získá 9,0 g pryskyřice 2 (0,48 mmol/gram navážky).
-25 CZ 302281 B6
Krok 2: K 4,5 g pryskyřice 2 (0,48 mmol/gram, 2,16 mmol) se přidá 25 ml 20% roztoku piperidinu v dimethylformamidu. Suspenze se míchá 5 minut pri teplotě místnosti a potom se odstraní rozpouštědlo. Postup se opakuje po 20 minutách. Pryskyřice se potom postupné promyje 2x40 ml dimethylformamidu, 40 ml methanolu, 2x40 ml dichlormethanu, 40 ml methanolu a 40 ml NMP. K suspenzi pryskyřice v 40 ml NMP se postupně přidá 2,92 g N-Fmco-prolinu (4 ekvivalenty, 8,64 mmol), 3,0 ml DIEA (8 ekvivalentu, 17,28 mmol), 1,17 HOBt (4 ekvivalenty, 8,64 mmol) a 3,27 g HBTU (4 ekvivalenty, 8,64 mmol). Směs se míchá pří teplotě místnosti pres noc a rozpouštědlo se odstraní. Tento kondenzační postup se zopakuje po 3 hodinách. Pryskyřice se potom postupně promyje 2x40 ml dimethylformamidu, 40 ml methanolu, 2x40 ml směsi dimethylformamidu a dichlormethanu 1:1,40 ml methanolu a 3x40 ml dichlormethanu a krátce se suší ve vakuu za získání pryskyřice 3.
Krok 3: Suspenze pryskyřice 3 v 25 ml 20% roztoku piperidinu v dimethylformamidu se míchá 5 minut při teplotě místnosti. Ze suspenze se odstraní rozpouštědlo. Postup se zopakuje po 20 minutách. Pryskyřice se postupně promyje 2x40 ml dimethylformamidu, 40 ml methanolu, 2x40 ml dichlormethanu, 40 ml methanolu, a 2x40 ml NMP. K suspenzi pryskyřice v 40 ml NMP se postupně přidá 2,93 g N-Fmoc-valinu (4 ekvivalenty, 8,64 mmol), 3,0 ml DIEA (8 ekvivalentů, 17,28 mmol), 1,17 g HOBt (4 ekvivalenty, 8,64 mmol), a 3,2 g HBTU (4 ekvivalenty, 8,64 mmol). Směs se míchá přes noc při teplotě místnosti a rozpouštědlo se odstraní. Tento kondenzační postup se zopakuje po 3 hodinách. Pryskyřice se potom promyje 2x40 ml dimethylformamidu, 40 ml methanolu, 2x40 ml směsi dimethylformamidu a dichlormethanu 1:1, 40 ml methanolu a 3x40 ml dichlormethanu a suší se ve vakuu za získání pryskyřice 4 (0,45 mmol/gram).
Krok 4; K 0,05 mmol podílu piyskyřice 4 se přidají 2 ml 20% roztoku piperidinu v dimethylformamidu. Suspenze se míchá 5 minut pri teplotě místnosti a rozpouštědlo se odstraní. Postup se zopakuje po 20 minutách. Získaná pryskyřice se potom postupně promyje 3x5 ml dimethylformamidu, 5 ml methanolu a 3x5 ml NMP. Potom se přidá požadovaná karboxylová kyselina (4 ekvivalenty, 0,2 mmol), potom 0,8 ml 0,25M roztoku HOBt v NMP, 0,14 mi DIEA (8 ekvivalentů, 0,4 mmol) a 0,8 ml 0,25M roztoku HBTU v NMP. Směs se míchá pri teplotě místnosti přes noc a rozpouštědlo se odstraní. Pryskyřice se promyje postupně 2x5 ml dimethylformamidu, 5 ml methanolu, 2x5 ml směsi dimethylformamidu a dichlormethanu 1:1, 5 ml methanolu a 3x5 ml dichlormethanu a suší se ve vakuu. K pryskyřici se potom přidá 2ml část 95% roztoku kyseliny trifluoroctové ve vodě. Směs se míchá 1 hodinu při teplotě místnosti a filtruje se. Filtrát se odpaří a zbytek se převede do směsi aceton i tri lu a vody a čistí se pomocí preparativní vysokotlaké kapalinové chromatografie za získání sloučenin 5a-5bd.
Pokud není uvedeno jinak, získané produkty, podmínky analytické HPLC, HPLC retenční časy, čistota produktu a hmotová spektrální data získaná v příkladech 5a-5bd, 7a-7at, 9a-9g, 15a-15f, 16a—16b, 17a—17e, 18a- 18f, 20a-20t, 23a-23i, 24a-24e, 25a-25e, 26a-26h, 27a-27n, 28a-28c, 29a—29s, 32a—32ejsou uvedeny v tabulce 1.
-26CZ 302281 B6
Tabulka I: Fyzikální údaje pro vybrané příklady
Př. Výtěžek (mg) HPLC gradient/ čas (min) Retenční čas (min) Čistota (¾) Hmo t. sp. (M+H nebo M+Na)
5a 1,0 5-45%/10' 4,66 92 475,2
5b 1,3 5-45%/l0' 6,86 8 5 4 5 7,2
5c 4,0 5-45%/l0' 5 , 98 85 463,2
5d 1,5 5-45%/l0' 6,82 95 467,5
5e 1,0 S-45%/10 1 5,52 95 415,2
5f 0,5 S-45%/10* 4,28 93 434,2
sg 6,4 10-60%/101 3 , 57 97 504,7 í+Na)
5h 15,6 10-60%/lG' 4,51 99 455,2
5i 6,6 5%-90%/10' 9,34 90 50 6,1
5j 5,1 5%-90%/10' 10,04 95 506,1
5k 10,7 5%-90%/10’ 8,64 85 520,1
51 6 , 6 5%-90%/lQ* 3,72 85 5 40,1
5m 6,8 A 5%-90%/l0' 7,89 85 502,0
5n 1,9 5%-0%/l0' 6,46 35 494,1
50 3,8 5%-90%/l0‘ 7,04 85 506,1
5p 6,8 5%-90%/10! 11,62 35 576,0
5q 2,2 5%-90%/10' 9,72 90 50S, 1
Sr 3 , 3 5%~90%/l0 ' 7,27 35 462,1
Ss 4,3 5% -90Í/10’ 6,46 90 470,1
5t 5,9 5%-60%/9' 60%-90 %/21 10,27 90 4 3 6,2
Su 3,1 5%-60%/9’ 60%-90 %/2ř 9,09 80 522,1
5v i, 0 5%-60%/9‘ 60%-90%/21 11,63 85 502,2
5w 10,3 S%-60%/9· 6Q%-90%/2' 8,75 95 470,2
-27CZ 302281 B6
Př. Výtěžek (mg) HPLC gradient/ čas (min) Retenční čas (min) Čistota (%) Hmot. sp. (M+H nebo M+Na)
5x 8 , 3 5%-6Q%/9’ 50%’90%/2' 3,38 95 5 65,1
5y 6,6 5%-60%/9' 60%-90%/2' 12,32 95 513,2
5 z 10 ,2 5%-60%/9' 60%-9Q%/2’ 12,63 9 5 50 2,2
5aa 2,5 5%-6C%/91 60%-90%/2' 9,57 95 554 , 1
5ab 7,3 5%-60%/9' 60%-90%/21 10,54 35 533,2
5ac 1,4 5%-60%/9' 60%-90%/2’ 9,23 95 476,2
5aó 5,3 5%-60%/9’ 60%-90%/2' 6,51 35 469,2
=ae 4,3 5%-60%/9' 60%-90%/2’ 9,31 95 551,1
5af 0,9 5%-60%/9’ 60%-90%/2' 9 , 98 90 547,4
5ag 5,7 5%-60%/S' 60%-90%/21 10,31 90 5 2 6,2
5ah 1 1,4 5%-60%/9' 60%-90%/2’ 3,13 85 54 2,1
5ai 10,9 10%-90%/l0' 5,83 85 534,2
Saj 4,2 10%-90%/lG1 5,89 90 556,2
5 ak 7,3 10%-90%/lQ’ 5/54 35 563,3
5al 8,4 10%-90%/lQ' 6,25 95 516,2
Sam 7, δ 10%-90%/lG' 6,49 95 474,3
5an 6,2 10%-90%/10’ 6,00 95 500,2
5ao 9,4 10%-90%/10· 6,63 95 531, 3
5ap 6,4 10%-90%/l0* 4,30 90 500, 3
5aq 5,2 10%-90%/1C' 6,45 95 559,2
5ar 1,4 10% -90%/10' 5,38 90 561 , 3
5 as 15,2 10%-90%/lG' 4,25 95 4 75,2
Sat 15,4 10%-90%/lQf 6,68 95 560,3
5au 5,9 10%-90%/10··’ , 6,70 90 498,3
Sav 4,1 10%-90%/10’ 5,13 85 531,2
5aw .5,5 10%-90%/lG' 5,53 85 570, 3
5ax 14,0 10%-30%/lC’ 6,26 90 55? , 3
5av 10,4 10%-90%/lG' 6,52 90 510,3
5az 9,2 10%-90%/lG1 5, 96 95 522,3
5 ba 8,5 10%-90%/lQ' 6,69 95 562,3
5bb 4,6 10%-90%/i0' 6,00 85 520,2
5bc 3,3 1Q%-90%/101 4,96 90 546,2
-28 CZ 302281 B6
Př. Výtěžek (mg) HPLC gradient/ čas (min) Retenční Čas (min) Čistota (%) Hmot. sp. (M+H nebo M+Na)
5bd 8,2 10%-90%/10' 8,01 95 536,3
7a 2,1 5-45%/l0' 5,28 86 440,2
7b 1/7 5-45%/lQ’ 4,12 94 390,2
7C 0,5 5-45%/10‘ 4,04 94 434,2
7d I, 1 5-45%/10' 4,29 95 441,2
7e 1,1 5-45%/l0’ 3,28 98 447,2
7ř 1,0 5-45%/101 3 , 96 97 42 0,2
7g 11,0 l0%-90%/10’ 4,00 95 483,4
7h 5,0 10%-90%/lQ' 4,90 95 439,3
7i 12, 0 10%-90%/10' 6,40 95 474,3
7j 6,6 10%-90%/10’ 4,50 95 461,4
7k 4,0 10%-90%/10' 5,40 95 430,4
71 8,6 10%-90%/l0' 2,61 95 435,3
7m 6,0 10%-90%/10* 4,29 95 438,4
7n 15,4 10%-90%/lQ' 2,00 85 433,4
70 8,4 10%-90%/101 4,01 90 470,0
7? 3,0 10%’90%/10' 4,61 95 434,4
7q 5,7 10%-90%/10' 3,89 95 434,3
7r 8,3 10%-90%/101 2,94 95 425,3
7s 10,5 10%-90%/lQ’ 3,89 90 4 3 3,4
7t 6,9 10%-90%/101 2,45 85 419,3
7u 11,6 10%-90%/l0’ 1,98 85 433,3
7V 4,6 10%-90%/10' 4,60 95 439,4
7w 13,8 10%-90%/lQ1 4,20 95 453,3
7x 6,0 10%-90%/10’ 3 , 90 95 4 83,2
7y 12,0 10%-90%/10' 5,40 95 439,2
7z 10,0 10%-90%/10’ 5,40 95 517,2
7aa 11,0 10%-90%/10’ 5,30 95 4 5 3,8
7ab 10, 0 10%-90%/101 5,60 95 595,1
7ac 3,9 10-60%/lQ‘ 4,59 88 459,2
7 ad 13,0 S-45%/101 4,48 38 415,2
7ae 4,9 5-45%/101 4,37 88 426,2
7ař 20,6 5-45%/l0,0' 4,68 86 405,3
7ag 14,9 5-45%/10' 4,78 82 406,3
7ah 9,5 5-45%/10' 7,40 91 447,3 >Na)
7ai 10,8 5-45%/10' 9,21 95 480,8 í-ř-Na)
7aj 8,3 5-45%/XO· 9,14 92 481,1 (+Naj
7ak 13,6 5-45%/l0 r 8,05 96 464,8 ( +Na)
7al 8,1 S-45%/10’ 7,04 91 443,8(+Na)
7am 7,8 5-45%/XO' 8,54 90 480,4(+Na)
7an 4,3 S-45%/101 7,48 88 460,9 í+Na)
7ao 13,5 S-45%/101 7,4 5 92 460,7 (+Na)
7ap ! 2,5 5-45%/XO' 6,52 93 440,3 (+Na)
-29CZ 302281 B6
Př. Výtěžek (mg) HPLC gradient/ Čas (min) Retenční čas (min) Čistota (%) Hcio t. sp . (M+H nebo M+Na)
1,4 5-45%/l01 3 , 30 84 4 0 5,2
7 ar 15,10 5 -45%/l01 3 , 79 97 1 - . ............ j t 413,30 L
7 as 15,7 0 5-45%/l0’ 5,50 83 i 441,30
7at 2 2,20 5-45%/10' 4,49 94 415,30
9 a 0,5 1O-6O%/1O' 7,08 98 527,4(+Ka)
9 b 1,2 10-60%/lQ1 8,31 93 570,5 Í+Na)
9 c 2,5 10-60%/1G1 9,46 97 569,6
9d 1,2 10-60%/10’ 7,22 85 562,1
Se 0,4 10-60%/l01 7,86 95 543,2(+Na)
9f 4,5 10-60%/10' 3,11 96 54 2,5
9g 2,1 10 ·60%/ΐ0' 7 , 13 93 526,3
15a 1,0 10%-60%/10' 5 , 76 95 477,6
15b 3,9 10%-60%/10' 6,32 91 433,3
15c 2 , 9 lQ%-9Q%/10' 3 ,30 85 463,3
15d 1,3 10%-90%/l0' 4,26 95 531
15e 1,0 10%-90%/101 3 , 10 85 4 32,3
15f 1,2 1Q%-90%/101 3,60 95 4S4,6
16a 2 , 5 1O%-9O%/1O' 2,30 95 456,3
16b 6,0 1C%-90%/10' 1,90 95 4Ξ4,2
1.7a 1,0 l0%-90%/10‘ 3,30 85 496,8
17b 1 , 1 10%-90'fe/lO1 3,62 85 493,3
17c 2 , 3 10%-90%/lQ' 5,80 95 575,2
17d 1,6 lo%-9o%/io1 1,60 95 523,1
17e 1 , 5 j IG%-90%/101 2,62 55 526,3
13a 1,0 j 10%-90%/.lÓ ' 3 , 90 95 523, 3
13b 1,2 1O%-9O%/1O' 5,27 95 562,3
18c 2,2 í.0%-90%/10' 4,09 95 499,2
ISd 1,5 10%-90%/1Q' 3,73 95 493,3
18e 1,2 10%-90%/lQ' 4,73 95 541,3
181 7, 1 10%-90%/l0' 3,84 93 526,1
2 0a 2,0 5-45%/iO’ 6, 95 91 433,2
7 0b 1,3 5-45%/101 7, sa 99 4 32,2
2 0c 2, 5 10%-90%/L01 5,89 35 4 33,3
2 Od 4,3 10%-90%/10’ 4,09 90 471,3
20c 3,5 10%-90%/lQ/ 4,65 95 455,3
201 12,2 10%-90%/lQ1 3,25 95 513,3
2 0g 12 , 1 10%-90%/101 5,01 90 4 3 7,2
20h 3,3 10%-90%/Ίθ1 4,30 90 53 3,2
201 5,0 lG%-90%/101 4 , 16 90 455,2
20j 1,3 10%-90%/101 3,45 85 531,2
2 Ok 9,7 10%-90%/10’ 5,41 90 516,2
201 3,8 10%-90%/XO' 3,73 85 504,2
20m 6,6 10%-90%/iO' 4,52 90 438,2
-30CZ 302281 B6
Př. Výtěžek (mg) HPLC gradient/ čas (min) Retenční čas (min) Čistota (%) Hmot. sp. (M+H nebo M+Na)
20n 1,8 10%-90%/lQ' 2,85 90 551,2
200 7,0 10%-90%/lQ[ 4,70 95 520,2
2Óp 1,2 10%-90%/lQ' 4,00 95 566,2
20q 2,3 10%-90%/lC1 4,93 95 491,3
20r 3,6 10%-90%/101 4,45 95 519,3
2 Os 3,0 10%-90%/10’ 4,18 95 552,2
20t 6, 0 10%-90%/10' 3,80 90 517,4
23a 21,0 10-60%/l0‘ 8, 11 99 495,4
23b 25,0 10-60%/l0' 8,94 99 539,8(+Ma)
2 3c 26,0 10-60%/lQ' 8,55 99 539,9 ( +Na)
23d 12,6 10%-90%/lCr 3,90 85 453,3
23e 8,3 10%-90%/lC)1 5,16 85 501, 3
2 3f 12,5 10%-90%/lÓ’ 3,41 80 425,3
23g 1,5 Π 10%-90%/lQ' 3,34 85 452,3
23h 8,4 10%-90%/lQ' 3,84 90 4 51,3
23i 9,0 10%-90%/ÍÓ ' 3,73 85 469,4
24a 1,1 1Q-6O%/12' 3,76 90 430,5
24b 3,1 lQ-60%/10’ 5,14 90 375,4
24c 7,2 10-60%/lQ' 10,33 96 531,0
24d 3,4 10-60%/10' 6,51 95 426,5(+Na)
2 4 e 5,9 10-60%/lG1 7,22 93 455,5
25a 1,9 5-45%/lC' 5,3S 85 455,2
25b 1,5 5-45%/10' 6,90 97 4 8 3,2
25c 1,0 5-45%/lQ1 8,09 94 497,2
25d 12,8 5-45%/10' 5,75 88% 453,3
25e 9,5 5-45%/10’ 7,76 90% 495,2
2 6 a. 10,2 5-45%/lG1 7,36 95 4 55,1 (+Na)
26b 1,1 5-45%/10’ 7,38 39 476,3
26c 13,8 5-45%/101 8, 13 98 483,2
26d 2,3 5-45%/101 10,35 99 503,0
26e 12,8 5-45%/lQ’ 11,11 99 523,2
26f 13,2 10-60%/10r 12,11 99 545,0
26g 0,7 10-60%/l0' 10, 39 37 523,2
26h 4,4 10-60%/10‘ 11,62 99 545,8
27a 5,0 10%-90%/lC1 4,42 95 4 75,3
27b 16,4 10-60%/10' 5,20 92 50 5,1
27c 2,7 5-45%/10' 7,50 82 476,6(+Na)
27d 1,6 5-45%/12· 8,70 90 503,2
27e 4,4 5-45%/12' 7,80 82 489,2
27f 1,2 5-45%/l2' 6,95 35 476,3
2 7g 2,5 5-45%/l21 6,67 82 510,1
27h 1,1 5-45%/12' 8,49 95 524,1
2 7 i. 0', 9 5-45%/12’ , . i3-4 90 484,3
-31 CZ 302281 B6
Př. “Ί Výtěžek (mg) HPLC gradient/ čas (min) Retenční čas (min) Čistota (¾) Hmot. sp. (M+H nebo M+Na)
27 j 4,3 S-45%/12’ 5,7 7 82 4 7 0,3
2 7k 1, 3 5-45%/i2’ 5,33 95 5 51,1
271 16,6 5-45%/10’ 5,90 91 4 7 7,2
2 7m 7, 0 5-45%/Í0' 7,70 93 4 34,2
2 7n 15,1 5-45%/iO1 3,99 36 ~4 6 6 , ~2
23a 1,2 5-45%/lQ' 5,91 86 4 8 7,1
23b 0,5 S-45%/10’ 6,86 98 4 3 6,1
28c 1,5 5-45%/10' 7,47 93 515 , 1
29a 4,5 S-45%/12' 8,21 98 3 92
2 9b 23,0 S-45%/12 ' 11,80 96 44 3, 3
2 9c 1,7 S-45%/10’ 3,73 97 “‘415,2
29d 1,7 5-45%/Í0' 4 , 62 89 414,2
2 9e (3,6 S-45%/10' 4,94 85 436,2
29f 1,1 5-45%/10’ 6,2 3 97 442,2
2 9g 1,7 5-45%/lC' 6,39 90 4 57,2
2 9h 0,7 S-45%/101 3,56 32 408,2
29i 0,7 5-45%/lG1 6,50 96 431,2
29j 0,4 5-45%/lG1 7,24 39 445,2
29k 1,6 S-45%/101 7,07 90 456,2
291 0,9 S-45%/10' 3,08 99 408,2
i 2 9rn 1, 5 10 -60%/lQ' 6,63 9 0 406, 3
2 9n 6,4 10 - 6 0 %/10' 4,27 87% ’ϊ2ς;3 “
2 9G 9,4 10-60%/ 10' 4,42 86% 4 2 2,3
i 2 9p 13,2 lQ-60%/10' 5 , 62 83% 4 50,3
i 2 9q 15,1 5-45%/l0’ 3,79 97% 413,3
j 2 9r 15,7 S-45%/10' 5,50 88% 441,3
29s 19,9 S-45%/10' 4,30 95% 3 94,3
3 2a 7,7 5-60%/20' 14,2 90 46 9,3
32b 4,0 5-6C%/20 T 13,4 85 485,1 ( i-Na)
32c 2,5 5-60%/20' 11,1 90 4 5 9,3
3 2d j. 3,0 5-6Q%/201 8,19 95 471,3
32e 4,9 S-60%/201 14,2 90 4 86,2
- 32 CZ 302281 B6
-33CZ 302281 B6
- 34 CZ 302281 B6
-35CZ 302281 B6
*36CZ 302281 B6
Postup přípravy analogů 7a-7at.
Schéma II
Analoga 7a-7at se připraví pomocí postupu popsaného výše ve schématu I pouze náhradou Fmoc-valinu za Fmoc-alanin v kroku 3 (schéma II).
Krok 3: Suspenze 3,5 g (1,75 mmol) pryskyřice 3 v 20 ml 20% roztoku piperídinu v dimethylformamidu se míchá 5 minut při teplotě místnosti. Ze suspenze se odstraní rozpouštědlo. Postup se zopakuje po 20 minutách. Pryskyřice se postupně promyje 2x30 ml dimethylformamidu, 30 ml methanolu, 2x30 ml dichlormethanu, 30 ml methanolu, a 2x30 ml NMP. K suspenzi pryskyřice v 30 ml NMP se postupně přidá 1,44 g N~Fmoc-alaninu (4 ekvivalenty, 7,0 mmol), 2,4 ml DIEA (8 ekvivalentů, 14,0 mmol), 0,95 g HOBt (4 ekvivalenty, 7,0 mmol), a 2,66 g HBTU (4 ekvivalenty, 7,0 mmol). Směs se míchá přes noc při teplotě místnosti a rozpouštědlo se odstraní. Tento kondenzační postup se zopakuje po 3 hodinách. Pryskyřice se potom promyje 2x30 ml dimethylformamidu, 30 mí methanolu, 2x30 ml směsi dimethylformamidu a dichlormethanu 1:1, 30 ml methanolu a 3x30 ml dichlormethanu a suší se ve vakuu za získání pryskyřice
6 (0,50 mmol/gram).
-37CZ 302281 B6
Krok 4: K 0,125 mmol podílu pryskyřice 6 se přidá 5 ml 20% roztoku piperidinu v dirnethylformamidu. Suspenze se míchá 5 minut při teplotě místností a rozpouštědlo se odstraní. Postup se zopakuje po 20 minutách. Získaná pryskyřice se potom postupně promyje 3x5 ml d i methyl formani idu, 5 ml methanolu a 3x5 ml NMP. Potom se přidá požadovaná karboxylová kyselina (4 ekvivalenty, 0,6 mmol), potom 2,0 ml 0,25M roztoku HOBt v NMP, 0,35 ml DIEA (8 ekvivalentů, 1,0 mmol) a 0,8 ml O,25M roztoku HBTU v NMP. Směs se míchá při teplotě místnosti přes noc a rozpouštědlo se odstraní. Pryskyřice se promyje postupně 3x5 ml dimethylformamidu, 5 ml methanolu, 2x5 ml směsi dimethylformamidu a dichlormethanu 1:1, 5 ml methanolu a 3x5 ml dichlormethanu a suší se ve vakuu. K pryskyřici se potom přidá 5ml část a 95% roztoku kyseliny trifluoroctové ve vodě. Směs se míchá 1 hodinu při teplotě místnosti a filtruje se. Filtrát se odpaří a zbytek se převede do směsi acetonitrilu a vody a čistí se pomocí preparativní vysokotlaké kapalinové chromatografie za získání sloučenin 7 a—7at.
- 38 CZ 302281 B6
(7g)
-39CZ 302281 B6
-40CZ 302281 B6
-41 C7. 302281 B6
Postup pří přípravě analog 9a-9g
Schéma III
Krok 1: 10,0 g (0,75 mmol/gram navážky, 7,5 mmol) pryskyřice AgroPore-aminomethyl (katalogové číslo 800047) se promyje 3x40 ml dimethylformamidu, 3x40 ml 10% D1EA/DMF,
-42 CZ 302281 B6
3x40 ml dimethylformamidu a NMP. K výše uvedené pryskyřici se postupně přidá 3,88 g (0,87 ekvivalentu, 6,55 mmol) sloučeniny 1, 3,13 g (1,14 ekvivalentu, 8,25 mmol) HBTU, 1,26 g (1,14 ekvivalentu, 8,25 mmol) HOBt, a 40 ml NMP. Reagenty se potom smísí probubláváním dusíku přes dno baňky 2 minuty při teplotě místnosti. Přidá se 4,35 ml (3,33 ekvivalentu, s 25 mmol) N,N-diisopropylethylaminu a získaná suspenze se přes noc míchá při teplotě místnosti, filtruje se, potom se postupně promyje 3x40 ml NMP a 3x40 ml dimethylformamidu. Pryskyřice se potom reaguje s 50 ml 20% roztoku anhydridu kyseliny octové v dimethylformamidu 38 minut při teplotě místnosti. Směs se filtruje a pryskyřice se promyje postupně 3x40 ml NMP, 3x40 ml dichlormethanu, 3x40 ml směsi methanolu a dichlormethanu 1:1 a 3x40 ml methanolu. Po sušení io ve vakuu se získá 13,76 g pryskyřice 2 (0,35 mmol/gram navážky).
Krok 2: Sedm reakčních nádob (každá) se naplní 181 g pryskyřice 2 (0,48 mmol/gram, 0,063 mmol), potom se promyjí 3x1 ml dichlormethanu a 3x1 ml NMP. Potom se každá nádoba reaguje s 1 ml 25% roztoku piperidinu v dimethylformamidu a míchá se (vír) při teplotě místnosti
15 minut. Tento postup se zopakuje třikrát. Každá nádoba se potom promyje třikrát 1 ml NMP.
Obsah nádob se potom reaguje s 500 μΐ 0,4M roztoku (2S,4R)-Fmoc-4—amino-l-Boc-pyrrolidin~2-karboxylové kyseliny (0,4M HOBT) v NMP, 500 μΙ 0,4M roztoku HBTU/NMP a 250 μΐ 1,6M roztoku DIEA/NMP a míchá se potom 3 hodiny při teplotě místnosti. Po míchání se z nádob odstraní rozpouštědlo a postup se opakuje.
Krok 3: Získaná pryskyřice se promyje 3x1 ml NMP a potom se zpracuje 1 ml 25% roztoku piperidinu v dimethylformamidu a míchá se (vír) 15 minut při teplotě místnosti. Postup se zopakuje třikrát. Získaná pryskyřice se promyje 3x1 ml NMP a potom se reaguje buď s anhydridem kyseliny octové, nebo s isopropylisokyanátem nebo s methan sulfony Ichloridem nebo methylchloro25 formiátem. Pro acetanhydrid: se přidá 300 μΐ 1,6M roztoku DIEA/NMP v 1 ml roztoku 0,5M acetanhydridu/0,125M DEIA/0,015M HOBt v NMP. Pro isopropylisokyanát: se přidá 300 μΐ 1,6M roztoku DIEA/NMP a 1 ml roztoku 1M isopropylisokyanátu v NMP. Pro methansulfonylchlorid: se přidá 600 μΐ roztoku 1M pyridinu v dichlormethanu a 600 μΐ roztoku 1M methansulfonylchloridu v dichlormethanu. Pro methylchloroformiát: se přidá 500 μΙ 1,6M rozto30 ku DIEA/NMP a 1 ml roztoku 0,7M methylchloroformiátu v dichlormethanu. Získané suspenze se míchají 6 hodin při teplotě místnosti, rozpouštědlo se odstraní a kondenzační postup se zopakuje.
Krok 4: Získaná pryskyřice se promyje 3x1 ml NMP, potom se reaguje se směsí kyseliny trifluor35 octové a dichlormethanu 1:1 30 minut při teplotě místnosti. Získaná pryskyřice se promyje 3x1 ml dichlormethanu a 3x1 ml NMP. Pryskyřice se potom reaguje s 500 μΐ roztoku 0,4M Fmoc-valin-karboxylové kyseliny/0,4M HOBt/NMP, 500 μΐ roztoku 0,4M HBTU/NMP a250pl roztoku 1,6M DIEA/NMP a míchá se 3 hodiny při teplotě místnosti. Po míchání se z nádob odstraní rozpouštědlo a kondenzační postup se zopakuje.
Krok 5: Získaná pryskyřice se promyje 3x1 ml NMP, potom se reaguje s 1 ml 25% roztoku piperidinu v dimethylformamidu a míchá se (vír) 15 minut při teplotě místnosti. Postup se zopakuje třikrát. Získaná pryskyřice se promyje 3x1 ml NMP, potom buď 500 μΐ roztoku 0,4M 1-isochinolinkarboxylové kyseIÍny/0,4M HOBt/NMP, nebo 500 μΐ roztoku 0,4M p-anisové kyseli45 ny/0,4M HOBt/NMP. Získaná směs se reaguje s 500 μΐ roztoku 0,4M HBTU/NMP a 250 μΐ roztoku 1,6M DIEA/NMP, potom se míchá 3 hodiny při teplotě místnosti, rozpouštědlo se odstraní a postup se zopakuje. Získaná pryskyřice se reaguje s 1,5 ml 95% roztoku kyseliny trifluoroctové ve vodě a míchá se při teplotě místnosti jednu hodinu a filtruje se. Filtrát se odpaří a zbytek se převede do směsi 2:1:2 dimethylformamidu/acetonitrilu/vody a čistí se pomocí preparativní vysokotlaké chromatografíe za získání sloučenin 9a~9g.
-43 CZ 302281 B6
-44CZ 302281 B6
Postup při přípravě analogů 15-18:
Schéma IV:
CO2H
Krok 1
(13)R3»CH(CHa)2 ( 14)Ro=CH3
Krok 4
Y r3
{I5)R3^CH(CK3)2 (1 6)R3-CH-j >.
Fmac'
(11)R3=CH(CK3)2
(17)R3^CH(CH3)2 (í8)R3=CH3
Příprava analogů 15 a 16 (schéma IV):
Syntéza 4-terc-butylesteru l-(9H-fluoren-9-ylmethyl)esteru 2-(S)-piperazin-l ,2,4-trikarboxylové kyseliny io
K roztoku 3 g (15 mmol) 2-(S)-piperazinkarboxylové kyseliny (Lonza) v 30 ml směsi vody a dioxanu 1:1 se přidá roztok 3,3 g (15 mmol, v 5 ml dioxanu) (Boc)2O v dioxanu, přičemž se pH udržuje pomocí IN roztoku hydroxidu sodného na hodnotě II. pH se udržuje 3 hodiny při teplotě místnosti. pH roztoku se potom pomocí IN kyseliny chlorovodíkové upraví na 9,5, ochladí se na
0 °C a reaguje se s 3,87 g (15 mmol) Fmoc-CI. pH se udržuje 1 hodinu na hodnotě 9,5 a směs se míchá přes noc při teplotě místnosti. Získaná suspenze se filtruje a filtrát se zpracuje IN roztokem hydrogensíranu draselného na pH 2 a extrahuje se 2x75 ml ethylacetátu. Organická vrstva se
-45 CZ 302281 B6 promyje solankou a suší se síranem horečnatým, filtruje se a odpaří se za získání bezbarvého oleje. Olej se rozpustí v ethylacetátu a přidá se k hexanu za získání 3,5 g (výtěžek 51 %) bílé pevné látky (po izolaci), 'H NMR spektrum (500 MHz, perdeuterodimethylsulfoxid) Ó 1,55 (s, 9H), 2,80 - 3,5 (m, 3H), 3,8 - 4,9 (m, 5H), 5,7 (šs, 111), 7,3 (m, 2H), 7,3 - 7,9 (m, 8H), kapalino5 vá chromatografie/hmotové spektrum (ES ) m/z 451,3 (M-H).
Krok 1: K 5 g pryskyřice 2 (0,375 mmol/gram, 1,82 mmol) se přidá 25 ml 20% roztoku piperídinu v dimethylformamidu. Suspenze se míchá 5 minut při teplotě místnosti a rozpouštědlo se odstraní. Po 20 minutách se postup opakuje. Pryskyřice se potom postupně promyje 2x50 ml io dimethylformamidu, 50 ml methanolu, 2x50 ml dichlormethanu, 50 ml methanolu a 50 ml NMP.
K suspenzi pryskyřice v 25 ml NMP se postupně přidá 3,5 g (4 ekvivalenty, 7,48 mmol)
N-Fmoc-Boc-píperazinkarboxylové kyseliny, 1,0 ml (8 ekvivalentů, 14,96 mmol) D1EA, 1,01 g (4 ekvivalenty, 7,48 mmol) HOBt a 2,83 g (4 ekvivalenty, 7,48 mmol) HBTU. Směs se míchá přes noc při teplotě místnosti a rozpouštědlo se odstraní. Kondenzační postup se zopakuje po
3 hodinách. Pryskyřice se potom postupně promyje 2x50 ml dimethylformamidu, 50 ml methanolu, 2x50 ml směsi dimethylformamidu a dichlormethanu, 1x50 ml methanolu a 3x50 ml dichlormethanu a krátce se suší ve vakuu za získání pryskyřice 10.
Krok 2: K 5 g (0,335 mmol/gram, 1,675 mmol) pryskyřice 10 se přidá 25 ml 20% roztoku piperi2o dinu v dimethylformamidu. Suspenze se míchá 5 minut při teplotě místnosti a rozpouštědlo se odstraní. Postup se zopakuje po 20 minutách. Pryskyřice se potom postupně promyje 2x50 ml dimethylformamidu, 50 ml methanolu, 2x50 ml dichlormethanu, 50 ml methanolu a 2x50 ml NMP. K suspenzi pryskyřice s 25 ml NMP se postupně přidá 2,08 g N-Fmoc-valinu nebo N-Fmoc—alaninu (4 ekvivalenty, 6,7 mmol), 1,17 ml (4 ekvivalenty, 6,7 mmol) D1EA, 0,905 g (4 ekvivalenty, 6,7 mmol) HOBt a 1,38 g (4 ekvivalenty, 3,66 mmol) HBTU). Směs se míchá přes noc při teplotě místnosti a rozpouštědlo se odstraní. Tento kondenzační postup se zopakuje po 3 hodinách. Pryskyřice se potom postupně promyje 2x50 ml dimethylformamidu, 50 ml methanolu, 2x50 ml směsi dimethylformamidu a dichlormethanu 1:1, 50 ml methanolu a 3x50 ml dichlormethanu a suší se ve vakuu za získání pryskyřice 11 nebo 12 (0,35 mmol/gram, 5g).
Krok 3: K 1,5 g (0,165 mmol) pryskyřice 11 nebo 12 se přidají 2 ml 20% roztoku piperidínu v dimethylformamidu. Suspenze se míchá 5 minut při teplotě místnosti a rozpouštědlo se odstraní. Postup se zopakuje po 20 minutách. Získaná pryskyřice se postupně promyje 3x15 ml dimethylformamidu, 15 ml methanolu a 3x15 ml NMP. Potom se přidá požadovaná karboxylová kyselina (4 ekvivalenty, 0,66 mmol), potom 0,25 g (0,66 mmol) HOBT, 0,12 ml (4 ekvivalenty, 0,66 mmol) DIEA a 0,89 g (0,66 mmol) HBTU v NMP. Směs se míchá přes noc při teplotě místnosti a rozpouštědlo se odstraní. Pryskyřice se postupně promyje 2x15 ml dimethylformamidu, 15 ml methanolu, 2x15 ml směsi dimethylformamidu a dichlormethanu, 15 ml methanolu a 3x15 ml dichlormethanu a suší se ve vakuu za získání pryskyřice 13 nebo 14.
Krok 4: Potom se přidají k piyskyřici 2 ml 95% roztoku kyseliny trifluoroctové ve vodě. Směs se míchá při teplotě místnosti a filtruje se. Filtrát se odpaří a zbytek se převede do směsi aceton i triivoda a čistí se pomocí preparativní vysokotlaké chromatografíe za získání sloučenin 15 a 16.
-46CZ 302281 B6
Postup při syntéze analogů 17 a 18 (viz. schéma IV):
Krok 5: Pryskyřice 13 nebo 14 se reaguje s 2 ml 25% roztoku kyseliny trifluoroctové v dichlor5 methanu 30 minut a promyje se 2x5 ml dimethylformamidu, 2c5 ml 10% DIEA v dichlormethanu, 2x5 ml směsi dimethylformamidu v dichlormethanu, 5 ml methanolu a 3x5 ml dichlormethanu a suší se 5 minut. Získaná pryskyřice se promyje 3x1 ml NMP, potom se reaguje s anhydridem kyseliny octové nebo methoxyoctovou kyselinou, nebo 2-propansulfonylchloridem nebo isopropylisokyanátem nebo methansulfonylchloridem nebo methylchloroformiátem podle io postupu použitého pro přípravu analogů 9 (schéma III). Sloučeniny 17 a 18 se získají tak, jak je popsáno v kroku 4 pro přípravu sloučeniny 15 a 16.
Sloučenina 17a a 17b se připraví pomocí reduktivní aminace za použití Na(OAc)3BH a HCHO (38% ve vodě, 0,2 ml) a 0,02 ml kyseliny octové před krokem 4 a sloučenina 18c se připraví 15 reakcí s fosgenem následované amoniakem před krokem 4.
-47CZ 302281 B6
O
-48CZ 302281 B6
Postup při přípravě analogů 20
Sloučeniny 20a-20t se připraví podle postupu popsaného pro přípravu sloučenin 5 (schéma I), pouze se zamění příslušná Fmoc-aminokyselina za Fmoc-valin v kroku 3 (schéma V).
Schéma V
Příprava 3-( {1 -|2-(4-am i no-3-c hlorbenzoy lam ino)-3-methy I sulfony lpropiony l]pyrro lidi n-2karbonyl}amino}-4-oxobutanové kyseliny (20i)
Suspenze 0,132 mmol pryskyřice 3 v 4 ml 20% roztoku piperídinu v dimethylformamidu se míchá 5 minut při teplotě místnosti a ze směsi se odstraní rozpouštědlo. Postup se zopakuje po 20 minutách. Pryskyřice se postupně promyje dvakrát dirrtethylformamidem, jednou methanolem, dvakrát dichlormethanem, jednou methanolem a dvakrát NMP. K suspenzi pryskyřice ve 4 ml NMP se postupně přidá 189 mg N-Fmoc-methylcysteinu (4 ekvivalenty, 0,528 mmol), 0,185 ml DIEA (8 ekvivalentů, 1,056 mmol), 71 mg HOBt (4 ekvivalenty, 0,528 mmol) a 200 mg HBTU (4 ekvivalenty, 0,528 mmol). Směs se míchá pres noc při teplotě místnosti a rozpouštědlo se odpaří. Tento kondenzační postup se zopakuje po 4 hodinách. Pryskyřice se potom postupně promyje dvakrát dimethylformámidem, jednou methanolem a dvakrát směsí dimethylformamidu a dichlormethanu 1:1, jednou methanolem a třikrát dichlormethanem a suší se ve vakuu.
Suspenze 100 mg této pryskyřice ve 2 ml 20% roztoku piperídinu v dimethylformamidu se míchá 5 minut při teplotě místnosti a rozpouštědlo se odstraní. Postup se zopakuje po 20 minutách. Piyskyřice se potom postupně promyje dvakrát dimethylformamidem, jednou methanolem, dvakrát dichlormethanem, jednou methanolem a dvakrát NMP. K suspenzi pryskyřice ve 2 ml NMP se postupně přidá 38 mg 4-amíno-3~chlorbenzoové kyseliny (4 ekvivalenty, 0,2 mmol), 0,140 ml (8 ekvivalentů, 0,4 mmol) DIEA, 27 mg (4 ekvivalenty, 0,2 mmol) HOBt a 76 ml (4 ekvivalenty, 0,4 mmol) HBTU. Směs se míchá přes noc při teplotě místnosti a rozpouštědlo se odstraní. Pryskyřice se potom postupně promyje dvakrát dimethylformamidem, jednou methanolem a dvakrát směsí dimethylformamidu a dichlormethanu 1:1, jednou methanolem třikrát dichlormethanem a suší se ve vakuu. Pryskyřice se potom 1 hodinu reaguje s 2 ml 95% kyseliny trifluoroctové ve vodě. Suspenze se filtruje, filtrát se odpaří ve vakuu a čistí se pomocí preparativní vysokotlaké kapalinové chromatografie za získání sloučeniny uvedené v názvu (20i).
-49CZ 302281 B6
Příprava 3-( {1-(2-(3,5-diehlor-4-hydroxybenzoylamino}-4-methansulfony Ibutyryljpyrrolidin2-karbonyl}amíno>-4-oxobutanové kyseliny (20p)
Sloučenina 20p se připraví podle postupu popsaného pro přípravu sloučeniny 20i za použití
N-Fmoc-methioninu jako první složky kondenzované k pryskyřici 3 a 3,5- dicldor-4-hydroxybenzoové kyseliny jako druhé složky.
Příprava 3-[( l-{2-[(Ísochinolín-l-karbonyl)-5-amino]-3-methansulfonylpropionyl}pyrrolidin-2-karbonyl)aminoJ—4-oxobutové kyseliny (20r)
N-Fmoc-methylcysteín se za použití způsobu popsaného v B. M. Trošt a D. P. Curran, Tetrahedron Lett. 22, str. 1287 až 1290 (1981) oxiduje na odpovídající sulfon. K roztoku 0,714 g (2 mmol) N-Fmoc-methylcysteinu v 24 ml směsi methanolu a vody 1:1 se při 0 °C přidá 3,68 g (3 ekvivalenty, 6 mmol) Oxone'M. Směs se míchá 48 hodin při teplotě místnosti, pomocí 6N kyseliny chlorovodíkové se okyselí na pH 2 a extrahuje se třikrát 100 ml ethylacetátu. Spojené organické extrakty se suší nad síranem horečnatým a odpaří se ve vakuu za získání 0,700 g (výtěžek 89%) sulfonu: 'H NMR (perdeuterodimethylsulfoxid, 500 MHz) δ 2,97 (s, 3H), 3,49 - 3,59 (m, 2H), 4,25 (m, ! H), 4,30, 4,38 (m, 2H), 4,46 (m, 1 H), 7,33 (t, 2H), 7,42 (t, 2H), 7.70 8.00 (m, 4H); přesná hmotnost vypočtena pro Ci.jHpNOf.S m/z 389,09, nalezeno m/e
390,2.
Suspenze 0,250 mmol pryskyřice 3 v 10 ml 20% roztoku piperidinu v dimethylformamidu se míchá 5 minut při teplotě místnosti a ze směsi se odpaří rozpouštědlo. Postup se zopakuje po 20 minutách. Pryskyřice se postupně promyje dvakrát dimethylformamidem, jednou methanolem, dvakrát dichlormethanem, jednou methanolem a dvakrát NMP. K suspenzi pryskyřice v 6 ml NMP se postupně přidá 200 mg N Fmoc methyJcysteinsulfonu (4 ekvivalenty, 0,50 mmol), 0,175 ml DIEA (8 ekvivalentů, 1,00 mmol), 70 mg HOBt (4 ekvivalenty, 0,50 mmol) a 188 mg HBTU (4 ekvivalenty, 0,50 mmol). Směs se míchá přes noc při teplotě místnosti a rozpouštědlo se odstraní. Tento kondenzační postup se opakuje po 3 hodinách. Pryskyřice se postupně promyje .ío dvakrát dimethylformamidem, jednou methanolem, dvakrát směsí dimethylformamidu a dichlormethanu 1:1 Jednou methanolem a třikrát dichlormethanem a suší se ve vakuu.
Suspenze 150 mg této pryskyřice ve 4 ml 20% roztoku piperidinu v dimethylformamidu se míchá 5 minut při teplotě místnosti a rozpouštědlo se odstraní. Pryskyřice se potom postupně promyje dvakrát dimethylformamidem, jednou methanolem, dvakrát dichlormethanem, jednou methanolem a dvakrát NMP. Ksuspenzi pryskyřice ve 3 ml NMP se postupně přidá 52 mg 1-isochinolinkarboxylové kyseliny (4 ekvivalenty, 0,3 mmol), 0,104 ml DIEA (8 ekvivalentů, 0,6 mmol), 37 mg HOBt (4 ekvivalenty, 0,3 mmol) a 104 mg HBTU (4 ekvivalenty, 0,3 mmol). Směs se míchá při teplotě místnosti přes noc a rozpouštědlo se odstraní. Pryskyřice se postupně promyje dvakrát dimethylformamidem, jednou methanolem, a dvakrát směsí dimethylformamidu a dichlormethanu 1:1, jednou methanolem a třikrát dichlormethanem a suší se ve vakuu. Pryskyřice se potom reaguje se 2 ml 95% kyseliny trifluoroctové ve vodě 1 hodinu. Suspenze se filtruje, filtrát se odpaří ve vakuu a Čistí se pomocí preparát i vní vysokotlaké kapalinové ehromatografle za získání sloučeniny uvedené v názvu 20r.
Příprava 3-({ 1-[2—(3,5—dichlor—4--hydroxybcnzoylamino)3methansulfonylpropionyl]pyrrolidin-2-karbonyl}amino)-4-oxobutanové kyseliny (20s)
Sloučenina 20s se připraví podle postupu použitého pro přípravu sloučeniny 20i, za použití
3,5-dichlor-4-hydroxybenzoové kyseliny místo 1-isochinolinkarboxylové kyseliny.
-50CZ 302281 B6
SO2CH3
(200
-51 CZ 302281 B6 ς —
Postup při přípravě analogů 23
Sloučeniny 23a-23i se připraví podle postupu popsaného pro přípravu sloučenin 7 (schéma II) pouze náhradou vhodné Fmoc-aminokyseliny za Fmoc-prolin v kroku 2 (schéma VI).
- 52 CZ 302281 B6
Schéma VI
Fmac^ ^CO2Bu-t
A “-NH
O) C^NX' H
Krok 1
Fmoc^.
N, (2) .C02Bu-t
H
LR
HíN
H
R4
Fmoc 7—
Rs cAoh
Krok 2
Fmoc^
R4
Krok 3 Fmoc<Nx£?R5|^CC
020 u-t
Fmocx.
hV i'· f H N.
(21)
LR
Příprava 3—({2-[2-(4-amino-3-chorbenzoylamino)-propionyl]-4-methyj-3,4-dihydro-2Hpyrazol-3-karbonyl}amino)-4-oxobutanové kyseliny (23g)
Sloučenina 23g se připraví podle postupu popsaného pro přípravu sloučeniny 7, pouze náhradou l-(9H-fliioren-9-ylmethyl)esteru 4-methyl-4,5-dihydro-pyrazol-l,5-dikarboxylové kyseliny za Fmoc-prolin (schéma II) v kroku 2.
i o Příprava l-(9H-fluoren-9-ylmethyl)esteru 4-methyl-4,5-dÍhydropyrazol-1,5-dikarboxylové kyseliny:
K roztoku 650 mg (2 mmol) (10,10-dimethyI-3,3-dioxo-X6-thia—4-aza-tricyklo[5,2, l ,O°’°]dec4-vl)-(4-methyl-3,4—dihydro-2H~pyrazol-3~yl)~methanonu (J. Am. Chem. Soc., 119, str. 8379 až 8380 (1997)) v 6 ml vody a 14ml tetrahydrofuranu míchajícímu se při 0 °C se přidá 420 mg (10 mmol, 5 ekvivalentů) hydroxidu lithného. Směs se míchá 2 hodiny při 0 °C a 30 minut při teplotě místnosti, zředí se 20 ml vody a promyje se 20 ml etheru. pH roztoku se upraví na 9 a přidá se roztok 519 mg (2 mmol, 1 ekvivalent) Fmoc-Cl ve 3 ml dioxanu. Směs se míchá přes noc při teplotě místnosti, promyje se etherem, okyselí se na pH 2-3 a extrahuje se 3x40 ml ethy 120 acetátu. Spojené organické extrakty se promyjí solankou, suší se nad síranem hořeěnatým a odpaří se ve vakuu za získání 690 mg (výtěžek 98 %) bezbarvé pěny, která se identifikuje jako sloučenina uvedená v názvu. 'H NMR (perdeuterodimethylsulfoxid, 500 MHz) δ 1,2 (d, 3H),
-53CZ 302281 B6
3,2 ιη, IH), 4,2 - 4,6 (m, 3H), 7,1 (s, IH), 7,2-7,5 (m, 5H), 7,7-8,0 (m, 4H). Přesná hmota vypočtená pro C2«H|kN2O4 m/e 350,13, nalezeno m/e 351,3.
Příprava 3-({ l-[2-{4-aniino-3-chlorbenzoylamino)-propÍonyl]-4-methoxypyrrolÍdin-2-karbonyl}amino)-4—oxobutanové kyseliny (23 i)
Sloučenina 23i se připraví podle postupu popsaného pro přípravu sloučeniny 7 pouze náhradou N l moc 4 -methoxyprolinu za Fmoc-prolin (schéma II) v kroku 2.
Příprava N-Fmoc^-methoxy prolinu:
K roztoku 735 mg (3 mmol) methylesteru N-Boc-^-hydroxyprolinu v 20 ml tetrahyd rot uranu míchajícímu se při 0 °C se přidá 79 mg (1,1 ekvivalentu, 3,3 mmol) 60% hydridu sodného v minerálním oleji. Směs se míchá při 0 °C 1 hodinu a přidá se 0,56 ml methyljodidu (3 ekvivalenty, 9 mmol). Směs se míchá při teplotě místnosti přes noc, rozloží se přidáním nasyceného vodného roztoku chloridu amonného, zředí se vodou a extrahuje se třikrát 80 ml ethylacetátu. Spojené organické extrakty se promyjí solankou, suší se nad síranem hořečnatým a odpaří se ve vakuu za získání světle žlutého oleje. Olej se převede do 9 ml methanolu a 3 ml vody a přidá se 378 mg (3 ekvivalenty, 9 mmol) hydroxidu lithného. Směs se míchá přes noc při teplotě místnosti, zředí se vodou, okyselí se na pH 3 a extrahuje se třikrát 80 ml ethylacetátu. Spojené organické extrakty se promyjí solankou, suší se nad síranem hořečnatým a odpaří se ve vakuu. Zbylý olej se převede do 10 ml kyseliny trifluoroctové a roztok se míchá 2 hodiny při teplotě místnosti a odpaří se ve vakuu. Zbývající olej se zředí 6 ml 10% vodného roztoku uhličitanu sodného a 3 ml dioxanu a přidá se roztok 779 mg (1 ekvivalent, 3 mmol) 9-ťluorenylmethylehloroformiátu v 5 ml dioxanu. Směs se míchá přes noc pří teplotě místnosti, zředí se vodou, okyselí se na pH 3 a extrahuje se třikrát 80 ml ethylacetátu. Spojené organické extrakty se promyjí solankou, suší se nad síranem hořečnatým a odpaří se ve vakuu za získání oleje, který se čistí pomocí kolonové chromatografie na silikagelu za eluce směsí dichlormethanu a methanolu 20:1. Získá se 600 mg (55 %) N-Fmoc^t-methoxyprolinu: přesná hmotnost vypočtena pro C2|H2iNO; m/e 367,14, nalezeno m/e 368,4.
K roztoku 0,125 mmol pryskyřice 2 se přidají 4 ml 20% roztoku piperidinu v dimethylformamidu. Směs se míchá 5 minut při teplotě místnosti a rozpouštědlo se odstraní. Postup se zopakuje po 20 minutách. Pryskyřice se postupně promyje dvakrát dimethylformamidem, jednou methanolem, dvakrát dichlormethanem, jednou methanolem a dvakrát NMP. K suspenzi pryskyřice ve 4 ml NMP se postupně přidá 184 mg (4 ekvivalenty, 0,50 mmol) M-Fmoc-4-methoxyprolinu, 0,175 ml (8 ekvivalentů, 1,00 mmol) D1EA, 70 mg (4 ekvivalenty, 0,50 mmol) HOBt a 188 mg (4 ekvivalenty, 0,50 mmol) HBTU. Směs se míchá přes noc při teplotě místnosti a rozpouštědlo se odpaří. Tento kondenzační postup se zopakuje po 3 hodinách. Pryskyřice se postupně promyje dvakrát dimethylformamidem, jednou methanolem, dvakrát směsí dimethyIformamidu a dichlormethanu 1:1, jednou methanolem a třikrát dichlormethanem a suší se ve vakuu,
K pryskyřice se přidají 4 ml 20% roztoku piperidinu v dimethylformamidu. Směs se míchá 5 minut při teplotě místnosti a rozpouštědlo se odstraní. Postup se zopakuje po 20 minutách. Pryskyřice se postupně promyje dvakrát dimethylformamidem, jednou methanolem, dvakrát dichlormethanem, jednou methanolem a dvakrát NMP. K suspenzi pryskyřice v 4 ml NMP se postupně přidá 156 mg (4 ekvivalenty, 0,50 mmol) N-Fmoc-alaninu, 0,175 ml (8 ekvivalentů, 1,00 mmol) DIEA, 70 mg (4 ekvivalenty, 0,50 mmol) HOBt a 188 mg (4 ekvivalenty, 0,50 mmol) HBTU. Směs se míchá přes noc při teplotě místnosti a rozpouštědlo se odstraní. Tento kondenzační postup se zopakuje po 3 hodinách. Pryskyřice se postupně promyje dvakrát dimethylformamidem, jednou methanolem, dvakrát směsí dimethylformamidu a dichlormethanu 1:1 Jednou methanolem a třikrát dichlormethanem a suší se ve vakuu.
K pryskyřici se přidají 4 ml 20% roztoku piperidinu v dimethylformamidu. Směs se míchá 5 minut při teplotě místnosti a rozpouštědlo se odstraní. Postup se zopakuje po 20 minutách.
-54CZ 302281 B6
Pryskyřice se postupně promyje dvakrát dimethylfortnamidem, jednou methanolem, dvakrát dichlormethanem, jednou methanolem a dvakrát NMP. K suspenzi pryskyřice ve 4 ml NMP se postupně přidá 80 mg (4 ekvivalenty, 0,50 mmol) 4-amino-3-chlorbenzoové kyseliny, 0,175 ml (8 ekvivalentů, 1,00 mmol) DIEA, 70 mg (4 ekvivalenty, 0,50 mmol) HOBt a 188 mg (4 ekviva5 lenty, 0,50 mmol) HBTU. Směs se míchá při teplotě místnosti přes noc a rozpouštědlo se odstraní. Pryskyřice se postupně promyje dvakrát dimethylformamidem, jednou methanolem, dvakrát směsí dimethylformamidu a dichlormethanu 1:1, jednou methanolem a třikrát dichlormethanem a suší se ve vakuu.
io Pryskyřice se 1 hodinu reaguje s 4 ml 95% kyseliny trifluoroctové ve vodě. Směs se filtruje. Filtrát se odpaří ve vakuu za získání oleje, který se čistí pomocí vysokotlaké kapalinové chromatografie za získání sloučeniny uvedené v názvu (23 i).
-55CZ 302281 B6
Postup při přípravě analog 24a-e
Sloučeniny 24a-24e se připraví podle postupu popsaného pro přípravu sloučenin 5 (schéma 1) pouze náhradou bud1 Fmoc-azetidinkarboxylové kyseliny, nebo trans-2-fenyl-Fmoc-azetidín5 karboxylové kyseliny za Fmoe-prolin v kroku 2.
<24c)
Postup při přípravě analog 25
Sloučenina 25a-25e se připraví podle postupů popsaných pro přípravu sloučenin 5 a 7 (schéma I i) a schéma II) pouze náhradou Fmoc-2(S)-pipekolové kyseliny za Fmoc-prolin v kroku 2 a kondenzací bud’ Fmoc-valinu, nebo Fmocalaninu nebo Fmoeterc-ieucinu v kroku 3.
-56 CZ 302281 B6
N
H
Postup při přípravě analog 26a-h
Sloučeniny 26a-26h se připraví podle postupu popsaného pro přípravu sloučenin 23 (schéma VI) pouze náhradou Fmoc-valínu za Fmoc-alanin v kroku 3.
-57CZ 302281 B6
Postup při přípravě analog 27
Sloučeniny 27a-27n se připraví podle postupu popsaného pro přípravu sloučenin 7 (schéma II) pouze náhradou Fmoc-4,4-difluorprolínu za Fmoc-prolin v kroku 2.
Příprava dimethylesteru 4,4-difluorprolinu:
K roztoku 9,63 ml (7,2 mmol) oxalylchloridu v 10,6 ml dichlormethanu míchajícím se při —78 °C io se přidá roztok 0,94 ml (13,2 mmol) methylsulfoxidu v 15 ml dichlormethanu. Roztok se míchá minut při teplotě -78 °C. Potom se přikape roztok 1,47 g (6 mmol) methyiesteru N-Boc^Fhydroxyprolinu v 19 ml dichlormethanu. Směs se míchá 1,5 hodiny při teplotě -78 °C a přidá se 3,34 ml (24 mmol) triethylaminu. Roztok se nechá ohřát na teplotu místnosti a míchá se přes noc. Zředí se 100 ml dichlormethanu, postupně se promyje 100 ml vody, 100 ml IN roztoku kyseliny chlorovodíkové a 100 ml solanky, suší se nad síranem hořečnatým a odpaří se ve vakuu. Zbytek se čistí pomocí kolonové chromatografie na silikagelu za eluce směsí ethylacetátu a hexanu 1:3. Získá sc 1,294 g (výtěžek 89%) methyiesteru Nboe-4-oxoprolinu. 'HNMR (500 MHz, deuterochloroform) δ 1,45 (m, 9H), 2,60 (m, 1H), 2,95 (m, 1H), 3,75 (m, 3H), 3,90 (m, 2H), 4,80 (m, 25 1H).
K roztoku 808 mg (3,33 mmol) methyiesteru N -Boc—4-oxoprolinu v 13 ml dichlormethanu míchajícímu se při teplotě 0 °C se přidá 0,88 ml (7,19 mmol, 2,2 ekvivalentu) DAST. Směs se míchá 2 hodiny při 0 °C, 16 hodin při teplotě místnosti a nalije se do ledové vody. Směs se míchá 2 hodiny pri teplotě místnosti. Organická vrstva se oddělí, promyje se vodou, suší se nad síranem hořečnatým odpaří se ve vakuu. Zbytek se čistí pomocí kolonové chromatografie na silikagelu za eluce směsí ethylacetátu a hexanu 1:8 za získání 754 mg (výtěžek 79 %) difluorovaného derivátu ve formě světle žlutého oleje. 'HNMR (500 MHz, deuterochloroform) δ 1,50 (m, 9H), 2,45 (m, 1H), 2,70(m, 1H),3,75 (m, 3H), 3,80 (m, 2H), 4,50 (m, 1H).
Příprava N-Fmoc—4,4—difluorprolínu:
K roztoku 754 mg (2,85 mmol) methyiesteru N-Boc 4,4-difluorprolinu v 5 ml tetrahydrofuranu míchajícímu se pri 0 °C se přidá roztok 179 mg (4,27 mmol) hydroxidu lithného ve vodě. Roztok se míchá 3 hodiny při 0 °C, 1 hodinu při teplotě místnosti, zředí se vodou, extrahuje se etherem, okyselí se na pH 2 až 3 a extrahuje se dvakrát 30 ml ethylacetátu. Spojené organické extrakty se promyjí solankou, suší se nad síranem hořečnatým a odpaří se ve vakuu za získání 652 mg (91 %) kyseliny ve formě světle žluté pevné látky.
-58CZ 302281 B6
Roztok 652 mg (2 mmol) N-Boc-4,4-difluorprolinu v 10 ml směsi kyseliny trifluoroctové a dichlormethanu 1:1 se míchá 45 minut při 0 °C a odpaří se ve vakuu. Zbytek se převede do 3 ml dioxanu a přidá se 5 ml 10% vodného roztoku uhličitanu sodného, potom 675 mg (1 ekvivalent) Fmoc-Cl v 5 ml dioxanu. Směs se míchá při teplotě místnosti 16 hodin, zředí se 20 ml vody, extrahuje se dvakrát 20 ml diethyletheru, okyselí se na pH 2 a extrahuje se třikrát 30 ml ethylacetátu. Spojené organické extrakty se promyjí 50 ml solanky, suší se nad síranem hořečnatým a odpaří se ve vakuu. Zbytek se čistí pomocí kolonové chromatografie na silikagelu za eluce směsí dichlormethanu a methanolu 10:1), za získání 850 mg (88 %) N-Fmoc—4,4-difluorprohnu ve formě hnědavé pevné látky. 'HNMR (500 MHz, deuterochloroform) δ 2,55 (m, 1H), 2,95 (m, io 1H), 3,80 (m, 2H), 4,20 (m, 1H), 4,30 (m, 2H), 4,55 (m, 1H), 7,32 (m, 2H), 7,45 (m, 2H), 7,70 (m, 2H), 7,90 (m, 2H). Přesně vypočtená hmotnost pro C20H17F2NO4 m/e 373,11, nalezeno m/e
374,4.
-59 CZ 302281 B6
Sloučeniny 28a-28c se připraví podle postupu popsaného pro sloučeniny 5 a schéma II) pouze náhradou Fmoc-dimethylthiprolinu za Fmoc-prolin v kroku 2 a 7 (schéma 1
i28b)X=C
Obecné postupy pro přípravu sloučenin provedení A vzorce I (schémata Vil—Vlil)
Sloučeniny podle provedení A vzorce I, kde R4 je atom vodíku a jedna skupina R5 je atom vodíku
Postup přípravy analog 29 o
Sloučeniny 29a-29s se připraví podle postupu popsaného pro přípravu sloučeniny 5 (schéma I) pouze náhradou Fmoc-alaninu za Fmoc-prolin v kroku 2 a za použití buď Fmoc-valinu, pro Fmoc-alaninu nebo Fmoc-terc-leucinu v kroku 3.
-60CZ 302281 B6
(29a) (29g)
(29q)
Postup přípravy analog 32
Sloučeniny 32a—32e se připraví podle postupu popsaného pro přípravu sloučenin 5 (schéma I) 5 pouze náhradou 2-(3-terc-butoxykarbonylamino-2-oxopyrrolidin-l-yl)—4-methylpentanové kyseliny (30) (Neosystem katalogové číslo BB02101) za Fmoc-prolin v kroku 2, po kterém následuje krok 4 (schéma Vil),
Sloučeniny podle provedení A vzorce I, kde R? a R3 společně s atomy, ke kterým jsou vázány, io tvoří pětičlenný kruh
-62 CZ 302281 B6
Schéma VII
(30)
Ní
H
Sloučeniny podle provedení A vzorce I, kde X je skupina N-CH3
-63 CZ 302281 ΕΪ6
Schéma Vlil
Krok 3
1) 20% COCW To)
Příprava 3-( {1 -[N-(isochinolin-1 -karbonyl)-N-methylhydrazinokarbonyl]pyrrolidin-2-karbonyl}amtno)-4-oxobutanové kyseliny (34)
Suspenze 0,250 mmol pryskyřice 3 (schéma Vlil) v 10 ml 20% roztoku piperidinu v dimethylformamidu se míchá 5 minut při teplotě místnosti a rozpouštědlo se odstraní. Postup se zopakuje po 20 minutách. Pryskyřice se postupně promyje dvakrát dimethylformamidem, jednou methanolem, dvakrát směsí dimethylfbrmamidu a dichlormethanu 1:1, jednou methanolem a třikrát io dichlormethanem, a krátce se suší. K pryskyřici se přidá 5 ml suchého dichlormethanu, 0,128 ml (3 ekvivalenty, 0,75mmol) DIEA a 0,400 ml (3 ekvivalenty, 0,75 mmol) 20% roztoku fosgenu v toluenu. Suspenze se míchá 1,5 hodiny při teplotě místnosti. Směs se zbaví rozpouštědla a pryskyřice se promyje několikrát dichlormethanem. K suspenzi pryskyřice v 5 ml dichlormethanu se přidá 0,133 ml (10 ekvivalentů, 2,5 mmol) methylhydrazinu. Směs se míchá přes noc pri tep15 lote místnosti. Pryskyřice se postupně promyje dvakrát dimethylformamidem, jednou methanolem, dvakrát směsí dimethylformamidu a dichlormethanu 1:1), jednou methanolem a třikrát dichlormethanem a suší se ve vakuu.
K 0,075 mmol pryskyřice ve 3 ml NMP se postupně přidá 52 mg (4 ekvivalenty, 0,3 mmol) l-isochinolinkarboxylové kyseliny, 0,19 ml (8 ekvivalentů, 0,6 mmol) DIEA, 37 mg (4 ekvivalenty, 0,3 mmol) HOBt a 104 mg (4 ekvivalenty, 0,3 mmol) HBTU. Směs se míchá přes noc při teplotě místnosti a rozpouštědlo se odstraní. Pryskyřice se postupně promyje dvakrát dimethylformamidem, jednou methanolem, dvakrát směsí dimethylformamidu 1:1, jednou methanolem a třikrát dichlormethanem a suší se ve vakuu.
Pryskyřice se reaguje se 4 ml 95% kyseliny trifluoroctové ve vodě 1 hodinu. Směs se filtruje. Filtrát se odpaří ve vakuu za získání oleje, který se čistí pomocí vysokotlaké chromatografie za získání sloučeniny uvedené v názvu 34.
Sloučeniny podle provedení A vzorce I, kde R3 = R3 = atom vodíku:
-64 CZ 302281 B6
3-( {1-[(Am ino-3-chlorbenzoy Iamino)acety 1]ργιτο1 idin-2-karbony 1} amino)-4--oxobutanová kyselina (Gl)
Sloučenina se připraví podle postupu popsaného pro přípravu sloučeniny 7 pouze náhradou Fmoc-glycinu za Fmoc-alanin v kroku 3 (schéma II) za získání 4,3 mg sloučeniny uvedené v názvu. Kapalinová chromatografie-hmotové spektrum (ES+) m/z = 425,2 (M+H).
3-({ l~[(Amino-3-chlorbenzoyIamino)acetyl]-4,4-difluorpyrrolidin-2-karbonyl}amino)~4io oxobutanová kyselina (G2)
Sloučenina se připraví podle postupu popsaného pro přípravu sloučeniny 7 a 27 pouze náhradou Fmoc-glycinu za Fmoc-alanin v kroku 3 (schéma II). Získá se 10,0 mg sloučeniny uvedené v názvu. Kapalinová chromatografie-hmotové spektrum (ES+) m/z = 461,2 (M+H).
Obecné postupy pro přípravu sloučenin podle provedení C vzorce I a provedení D vzorce I, kde Y = C (schémata IX-XXII)
-65 CZ 302281 B6
Schéma IX
Cesta A
EDC
R1CO2H
EDC
Cesta B
-66 CZ 302281 B6
Zdroje vybraných cyklických systémů
Struktura Odkaz
O Blythín, D.J., J. Orq. Chem., 59, str . 1
609Q-610G (1994)
N—I —CO2S 0 i
Decicco, C.P. a kol., Syn. Lett,, 615-616, (1995) str.
Yr o co2r
/ Bennion, C. a kol., J. Med. Chem. , 34 ,
J c» str. 439-447 (1991);
1 /s CO->R Jensen, K.A. a kol., Acta Chemica
1 Scand., 13, str. 1097-1103 (1961)
komerčně dostupný 1 i
o c°tR i
Mish, Μ. R. , J. Am. Chem. Soc., , 119
χ-ΝΎ str. 8379-8380 (1997)
co2r
Xi, N. a kol., J. Am. Chem. Soc. , 120
str. 30-86 (1998)
co2r i
-67CZ 302281 B6
i Struktura Odkaz
! Merour, J. Y. a kol., Tetrahedron
Lett., 32 , str . 2469-2470 (1991;;
i f } CONH Rossen, K. , Tetrahedron Lett., 36,
i str. 6429 -6422 (1395)
Schéma X
1N NaOH MeOH (39) R=CH3 (44) R=4-MeOPh-
Pd(Ph3P)<
DMSA
CH2Ciy DMF
Alloc^
(45) =<=4-MeOPh-
(46) R=4-MeOPh-68CZ 302281 B6
Ethylester 5-terc-buty l-3-[2-(9H-fluoren-9-ylmethoxykarbony lamí no)-3 -methy lbutyryl]-2,3dihydro[l,3,4]thiadiazol-2~karboxylové kyseliny (37)
K míchající se suspenzi 2,63 g (25 mmol) polyvinylpyridinu v roztoku 2,16 g (10 mmol) ethyl5 esteru 5-terc-butyl-2,3-dihydro[l,3,4]thiadiazol-2-karboxylové kyseliny (36), (J. Med. Chem., 34, str. 439 (1991)) v suchém toluenu se přikape 4,76 g (12,1 mmol) 9H-fluoren-9-ylmethylesteru (l-chlorkarbonyl-2-methylpropyl)karbamové kyseliny v 20 mi bezvodého toluenu. Po 16 hodinách míchání se suspenze filtruje a filtrát se promyje nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného. Organická vrstva se oddělí, promyje se vodou, suší se nad bezvodým síranem io sodným a odpaří se za získání žlutého oleje. Po čištění pomocí velmi rychlé chromatografie za eluce směsí hexanu a ethylacetátu 9/1 se získá 2,66 g (výtěžek 49 %) sloučeniny uvedené v názvu 37 ve formě čirého, viskózního oleje. *H NMR (500 MHz, deuterochloroform) δ 0,89 (d, 1,5H), 0,93 (d, 1,5H), 1,00 (d, 1,5H), 1,06 (d, 1,5H), 1,22 (t, 3H), 1,28 (s, 9H), 2,12-2,22 (m, 0,5H), 2,32 - 2,42 (m, 0,5H), 4,18- 4,28 (m, 2H), 4,31 - 4,45 (m, 2H), 4,96-5,01 (m, 0,5H),
5,02 - 5,10 (m, 0,5H), 5,52 (d, 0,5H), 5,61 (d, 0,5H), 6,10 (s, 0,5H), 6,13 (s, 0,5H), 7,27 - 7,34 (m, 2H), 7,35 - 7,42 (m, 2H), 7,56 - 7,64 (m, 2H), 7,73 - 7,78 (m, 2H).
Ethylester 3-{2-acetylamino-3-methylbutyryl)-5-terc-butyl-2,3-dihydrí>-[l,2,4]thiadiazol_2karboxylové kyseliny (38)
K roztoku 0,508 g (0,94 mmol) sloučeniny (37) (schéma IX) v 10 ml acetonitrilu se přidá 1 ml diethylaminu. Roztok se míchá 2 hodiny při teplotě místnosti, rozpouštědlo se odstraní ve vakuu a získaný olej se azeotropicky destiluje a dichlormethanem (4x). Surový olej se rozpustí v 5 mi dichlormethanu a přidá se 0,26 ml (1,86 mmol) triethylaminu a 80 μΐ (1,1 mmol) acetylchloridu.
Roztok se míchá v dusíkové atmosféře při teplotě místnosti 2 hodiny. Rozpouštědlo se odpaří, surová látka se rozpustí v ethylacetátu a promyje se dvakrát 0,5N roztokem hydrogensíranu sodného, dvakrát nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a solankou a suší se nad bezvodým síranem sodným, filtruje se a odpaří se za získání žlutého oleje. Po čištění pomocí velmi rychlé kolonové chromatografie na silikagelu za použití směsi hexanu a ethylacetátu 95/5 až
90/10 % jako eluentu se získá 0,301 g (výtěžek 89%) produktu ve formě žlutého oleje.
'H-NMR (500 MHz, deuterochloroform) δ 0,88 (dd, 3H), 0,99 (dd, 3H), 1,16 - 1,45 (m, 12H), 2,02 (s,3H), 2,09- 2,19 (m, 0,5H), 2,30 - 2,40 (m, 0,5H), 4,12-4,29 (m, 2H), 5,20- 5,27 (m, 0,5H), 5,30 - 5,36 (m, 0,5H), 6,60 (s, 0,5H), 6,90 (s, 0,5H), 6,20 - 6,31 (m, IH). Analytická HPLC (kolona Cl8), (směs diastereomerů) 7,77, 7,98 min. Kapalinová chromatografie~HS (ES+) m/e=358,3 20 (M+H).
3-(2~Acetylamino-3-methylbutyryl)-5-terc-butyl-2,3-dihydro[l,2,4]thiadiazol-2-karboxylová kyselina (39)
K roztoku 0,301 g (0,84 mmol) sloučeniny 38 v 10 ml methanolu se přidá 1,7 ml (1,7 mmol) IN roztoku hydroxidu sodného. Reakční směs se mích 2 hodiny při teplotě místnosti a rozpouštědlo se odpaří. Zbytek se rozpustí v ethylacetátu a promyje se dvakrát 0,5N roztokem hydrogensíranu sodného a solankou a suší se nad bezvodým síranem sodným, filtruje se a odpaří se za získání 0,277 g, kvantitativně) sloučeniny uvedené v názvu ve formě žluté pevné látky.
Příprava allylesteru 2-(benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yI)karbamové kyseliny (40)
Sloučenina 40 se připraví z terc-butylesteru 3~allyloxykarbonylamíno-4-hydroxybutanové kyseliny pomocí modifikace postupu popsaného v Bioorg. Med. Chem. Lett. Vol. 2, No. 6, str. 613 —
618,(1992).
K roztoku 27,52 g (352 mmol) dimethylsulfoxidu v 240 ml dichlormethanu se při -78 °C přidá 24,4 g (192 mmol) oxalylchloridu. Po 15 minutách se pomalu přidá roztok 41,44 g (160 mmol) terc-butylesteru 3~allyloxykarbonylamino-4—hydroxybutanové kyseliny ve 100 ml dichlor55 methanu a směs se míchá při -78 °C dalších 1,5 hodiny. Přidá se 62,0 g (480 mmol) DIEA
-69CZ 302281 B6 a směs se nechá 15 minut ohřívat na teplotu místnosti. Získaný roztok se zředí 300 ml dichlormethanu, promyje se dvakrát 500 ml 0,5N roztoku hydrogensíranu sodného, dvakrát 300 ml vody a dvakrát 400 ml solanky. Organická vrstva se suší nad bezvodým síranem sodným a odpaří se ve vakuu na objem 200 ml. K tomuto roztoku se přidá 48 g (444 mmol) benzylalkoholu, potom 30 g
3A molekulových sít a 0,8 g p-toluensulfonové kyseliny. Reakční směs se nechá míchat 4 dny a přidá se 96 ml kyseliny trifluoroctové. Získaná suspenze se míchá 1 hodinu a potom se odpaří ve vakuu. Přidá se 500ml ethylacetátu a směs se filtruje přes křemelinu. Filtrát se promyje dvakrát 500 ml hydrogenuhličitanu sodného, dvakrát 400 ml vody a dvakrát 300 ml solanky. Organický roztok se suší nad bezvodým síranem sodným, filtruje se a odpaří se ve vakuu za získání κι 90 g světle žlutého oleje, který se míchá dvakrát se 400 ml hexanu za získání 31 g surového produktu ze spodní vrstvy zbytku. Pomocí chromatografie za použití směsí ethylacetátu a hexanu (4/96 až 22/78) se získá 6,97 g allylesteru anti~2-(benzyloxy-5~oxo-tetrahydrofuran-3-yl)karbamové kyseliny (vyšší Rf), 4,53 g syndiastereomeru a 12,97 g směsi diastereomerů (celkový výtěžek 53 %). 'H-NMR (500 MHz, deuterochloroform) pro anti diastereomer: δ 2,41 - 2,45 (m,
H), 3,02- 3,07 (m, H), 4,28 (š, H), 4,50- 4,80 (m, 3H), 4,80- 5,15 (m, 2H), 5,24- 5,32 (m,
2H), 5,48 (s, H), 5,88 - 6,00 (m, H), 7,31 - 7,56 (m, 5H); pro syn diastereomer: 82,49 - 2,53 (m, 11), 2,83 - 2,89 (m, H), 4,57 - 4,65 (m, 4H), 4,87 - 4,90 (m, H), 5,12 - 5,30 (m, 3H), 5,52 - 5,53 (d, 11), 5,88- 6,00 (m, H), 7,31 - 7,39 (m, 5H), retenční čas při analytické HPLC: 10,49 minut pro anti diastereomer a 10,37 minut pro syn diastereomer; LC-MS: m/z = 292 (M+H).
(2-benzyloxy-5-oxo-tetrahydrofuran-3-yl)-amid 3-(2-acetylamino-3-methylbutyryl)~5-tercbutyl-2,3-dihydro[l,2,4]thiadiazol-2-karboxylové kyseliny (41)
K roztoku 0,385 g (1,32 mmol) allylesteru (2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)karbamové kyseliny (40) v 2 ml dimethylformamidu se přidá 0,456 g (2,92 mmol) DMBA a 0,136 g (0,12 mmol) Pd(PPhi)4 a roztok se míchá 15 minut při teplotě místnosti. Přidá se roztok sloučeniny 39 v 4,5 ml dichlormethanu a 0,5 ml dimethylformamidu, potom 0,168 g (1,24 mmol) HOBT a 0,256 g (1,33 mmol) EDC. Reakční směs se míchá v dusíkové atmosféře 18 hodin při teplotě místnosti. Rozpouštědlo se odpaří. Surová látka se rozpustí v ethylacetátu a promyje se dvakrát jo 0,5N roztokem hydrogensíranu sodného, dvakrát nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a solankou a suší se nad bezvodým síranem sodným, filtruje se a odpaří se za získání žluté pevné látky. Po čištění pomocí velmi rychlé kolonové chromatografie se získá 374 mg (výtěžek 88%) sloučeniny uvedené v názvu (41) ve formě směsi diastereomerů. 'H-NMR (500 MHz, deuterochloroform) δ 0,75 - 1,05 (m, 6H), 1,19 - 1,34 (m, 9H), 1,93 - 2,08 (m, 3H),
2,19 - 2,50 (m, 2H), 2,80 - 3,03 (m, 1H), 4,56 - 4,93 (m, 3H), 5,02 - 5,20 (m, 1H), 5,46 - 5,56 (m, 1H), 5,95-6,16 (m, 2H), 6,86- 6,95 (m, IH), 7,20- 7,43 (m, 5H). Analytická HPLC (kolonaCl8), (směs diastereomerů) 8,58 minuty. LC-MS (ES+) m/z=519,2 (M+H).
Příprava 3-{[3-(2-acetylamino-3-methylbutyryl)-5-terc-butyl-2,3-dihydro-[ 1,3,4]thiadiazol40 2-karbonylJ-amino}-4-oxobutanové kyseliny (42)
Podle způsobu A (viz schéma XXIII) se hydrolyzuje vzorek 45 mg (0,087 mmol) sloučeniny 41 a získá se 17 mg (výtěžek 45 %) sloučeniny uvedené v názvu. Analytická HPLC (kolona Cl8):
5.15 minuty. LC-MS (ES1) m/z-429,3 (M+H).
Ethylester 5-terc-buty l-3-[2-(4-methoxy-benzoy lamino)-3-methy lbutyryl)-2,3-dihydro-[ 1,3,4] thiad i azo 1-2-karboxylové kyseliny (43)
Sloučenina se připraví podle postupu uvedeného výše pro sloučeninu 38, za použití anisoyl50 chloridu. Získá se 216 mg (50 %) sloučeniny uvedené v názvu ve formě amorfní pevné látky. 'HNMR (500 MHz, deuterochloroform) δ 0,92 (d, 1,5H), 0,98 (d, 1,5H), 1,03 (d, 1,5H), 1,07 (d, 1,5H), 1,21 (t, 3H), 1,28 (s, H), 2,21 - 2,28 (m, 0,5H), 2,41 - 2,48 (m, 0,5H), 3,83 (s, 3H),
4.15 - 4,28 (m, 2H), 5,41 - 5,46 (m, 0,5H), 5,48 - 5,53 (m, 0,5H), 6,08 (s, 0,5H), 6,13 (s, 0,5H), 6,75 (d, 0,5H), 6,85 (d, 0,5H), 6,91 (d, 2H), 7,59 (d, 2H).
-70CZ 302281 B6
5-terc-buty í-3-[2-(4-methoxybenzoy lamino)-3-methy lbutyryl]-2,3-dihydro-[ 1,3,4]thiadiazol-2-karboxylové kyseliny (44)
Sloučenina se připraví pomocí postupu popsaného pro přípravu sloučeniny 39. Získá se 180 mg (kvantitativně) sloučeniny uvedené v názvu ve formě bílé pevné látky. lHNMR (500 MHz, deuterochloroform) δ 0,92 (d, 1,5H), 0,96 (d, 1,5H), 1,03 (d, 1,5H), 1,07 (d, 1,5H), 2,22- 2,30 (m, 0,5H), 2,37- 2,45 (m, 0,5H), 3,83 (s, 1,5H), 3,84 (s, 1,5H), 5,41 - 5,48 (m, 1H), 6,14 (s, 0,5H), 6,15 (s, 0,5H), 6,87 - 6,95 (m, 2H), 7,75 - 7,83 (m, 3H).
(2-benzyloxy-5-oxotetrahydro-furan-3-yl)amid 5-terc~butyl_3-[2-(4-methoxy-benzoylamino)-3-methylbutyryl]-2,3-dÍhydro-[4,3,4]thiadiazol-2-karboxylové kyseliny (45a a 45b)
Sloučenina se připraví podle postupu popsaného pro přípravu sloučeniny 41. Získá se surová sloučenina uvedená v názvu ve formě 4 diastereomerů. Surová látka se čistí pomocí velmi rychlé chromatografie za eluce gradientem směsi dichlormethan až dichlormethan/ethylacetát 6/4 za získání 31 mg složky o vyšším Rf jako jednoho diastereomerů (45a). Analytická HPLC (kolona Microsorb Cl8) 19,87 minuty. 'HNMR (500 MHz, deuterochloroform) (jeden diastereomer) δ 1,04 (d, 3H), 1,14 (d, 3H), 1,28 (s, 9H), 2,77 (d, 0,5H), 2,81 (d, 0,5H), 2,90 (d, 0,5H), 2,95 (d, 0,5H), 3,84 (s, 3H), 4,44-4,49 (m, 1H), 4,53 (d, 1H), 4,85 (d, 1H), 5,02 - 5,08 (m, 1H), 6,37 (s, 1H), 6,41 (d, 1H), 6,93 (d, 2H), 7,26 - 7,40 (m, 5H), 7,75 (d, 2H), 7,92 - 7,96 (m, 1H).
Frakce o nižším Rf obsahuje 185 mg pevné látky jako směsi diastereomerů (45b) 3:1:2. Analytická HPLC: kolona Microsorb 08 19,00, 19,26, 20,02 minut, 'H NMR (500 MHz, deuterochloroform) (3:1:2 směs tří diastereomerů) δ 0,89 (d, 2,25 H), 0,98 (d, 0,75H), 1,02 (d, 0,5H), 1,03 (d, 1,5H), 1,08 (d, 0,25H), 1,10 (d, 0,75H), 1,16 (s, 0,75H), 1,17 (s, 2,25H), 1,23 (s, 0,375H), 1,24 (s, 1,125H), 1,28 (s, 1,125 H), 1,29 (s, 3,375H), 2,12- 2,18 (m, 0,33H), 2,32- 2,42 (m, 0,67H), 2,43 - 2,51 (m, 0,5H), 2,61 - 2,67 (m, 0,5H), 2,84 - 2,92 (m, 0,5H), 2,96 - 3,07 (m, 0,5H), 3,85 (s, 3H), 4,58-4,71 (m, 2H), 4,81 (d, 0,16H), 4,86 (d, 0,32H), 4,91 (d, 0,52H), 5,09-5,13 (m, 0,33 H), 5,14-5,18 (m, 0,67H), 5,35 (dd, 1H), 5,46 (s, 0,16H), 5,53 (d, 0,32H), 5,58- 5,62 (d, 0,52H), 6,17 (s, 0,52H), 6,20 (s, 0,16H), 6,34 (s, 0,32H), 6,50 (d, 0,32H), 6,62 (d, 0,16H), 6,67 (d, 0,52H), 6,86 (d, 0,33H), 6,91 (d, 0,67H), 6,94 (d, 1,OH), 7,24 - 7,43 (m, 5H), 7,61 (d, 1H), 7,70 (d, 0,33 H), 7,71 (d, 0,67H), 7,76 (d, 1H).
Příprava 3-({ 5-terc-buty l-3-[2-(4-methoxybenzoy lam i no)-3-methylbuty ryl]-2,3-dihy dro[1.3.4] thiadiazol-2-karbonyl}amino}-4-oxobutanové kyseliny 46a
30mg vzorek sloučeniny 45a se hydrolyzuje podle postupu B (viz, schéma XXIII) a získá se 8 mg (30% výtěžek) požadované látky. Analytická HPLC (kolona Microsorb C-18, acetonitril/voda s pufrem TFA) 12,85 minut, 'H NMR (500 MHz, deuteromethanol) δ 0,98- 1,1 (m, 6H), 1,28 (s, 9H), 2,20-2,31 (m, 1H), 2,40- 2,48 (m, 1), 2,6-2,72 (m, 1H), 3,84 (s, 3H), 4,18-4,26 (m, 1H), 4,56- 4,62 (m, 1H), 5,25- 5,32 (m, 1H), 6,24- 6,28 (m, 1H), 6,98 (d, 2H), 7,85 (d, 2H).
Příprava 3—({5-terc-buty 1-3-(2-(4- methoxybenzoy lamino)-3-methy 1-butyry l]-2,3-dihydro[1.3.4] thiadiazol-2-karbonyl}amino)-4-oxobutanové kyseliny 46b
30mg vzorek sloučeniny 45b (směs 3 diastereomerů) se hydrolyzuje podle postupu B (viz. schéma ΧΧΙΠ) a získá se 22 mg (výtěžek 84 %) požadovaného produktu ve formě směsi diastereomerů 3:2. Analytická HPLC (kolona Microsorb kyano) 7,08, 7,78 minut. 'H NMR (500MHz, deuteromethanol) δ 0,98 - 1,08 (m, 4H), 1,09 - 1,12 (m, 2H), 1,29 a 1,31 (2 singlety, 9H), 2,23 2,30 (m, 0,5H), 2,36- 2,55 (m, 1,5H), 2,62- 2,72 (m, 1H), 3,85 (s, 3H), 4,18-4,27 (m, 1H), 4,58-4,65 (m, 1H), 5,27 - 5,33 (m, 1H), 6,23 -6,27 (m, 1H), 7,00 (d, 2H), 7,70- 7,88 (m, 2H).
-71 CZ 302281 B6
Schéma XI
terc-butylester 1-(2-benzyloxykarbonylamino-2-methyl-propionyl)pynOlidin-2-karboxylové kyseliny (49)
K roztoku 2,00 g (12 mmol) terc-butylesteru prolinu (47) v 15 ml dichlormethanu se přidá 3,05 g (13 mmol) N-karbobenzyloxy-2-methylalaninu, 2,36 g (17 mmol) HOBT (2,36 g, 17 mmol) a 3,43 g (18 mmol) EDC a roztok se míchá při teplotě místnosti v dusíkové atmosféře 48 hodin. Rozpouštědlo se odpaří, surová látka se rozpustí v ethylacetátu a dvakrát se promyje 0,5N roztoio kem hydrogen síranu sodného, dvakrát nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a solankou a suší se nad bezvodým síranem sodným, filtruje se a odpaří se za získání 4,68 g (100%) bílé pevné látky. 'H-NMR (500MHz, deuterochloroform) δ 1,20- 2,15 (m, 4H), 1,43 (s, 9H), 1,59 (d, 6H), 3,21 - 3,79 (m, 2H), 4,35 (šs. I H), 4,82- 5,19 (m, 3H), 5,74 (šs, 1H), 7,17-7,49 (m, 5H). Analytická HPLC (kolona C18) 10,66 minuty. LC-MS (ES+) m/e = 391,3 (M+H).
terc-butylester 1 —(2—(4-methoxybenzoy lam i no)-2—methyl—propionyljpyrro lidi n-2-karboxylové kyseliny (50)
2« K roztoku 1,00 g (2,56 mmol) sloučeniny 49 v 20 ml methanolu se přidá 200 mg 10% palladia na uhlí a směs se míchá ve vodíkové atmosféře 2 hodiny. Směs se filtruje přes 0,45 pm PTFE filtr a rozpouštědlo se odpaří ve vakuu za získání bezbarvého oleje. Tento olej se rozpustí v 25 ml dichlormethanu a přidá se 660 μΐ (3,79 mmol) DIEA a 480 mg (2,8 mmol) p-anisoylchloridu. Roztok se míchá 18 hodin při teplotě místnosti v dusíkové atmosféře. Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu a olej se rozpustí v ethylacetátu. Organická fáze se promyje dvakrát 0,5N roztokem hydrogensíranu sodného, vodou, dvakrát nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a solankou. Organická fáze se suší nad síranem sodným, filtruje se a odpaří se za získání bílé pevné látky, která se čistí pomocí kolonové chromatografie za eluce směsí dichlormethanu a methanolu (99/1 až 98/2 %) a získá se 655 mg (výtěžek 65 %) sloučeniny uvedené v názvu. 'H-NMR (500MHz,
-72CZ 302281 B6 deuterochloroform) δ 1,47 (s, 9H), 1,68 - 2,24 (m, 5H), 1,80 (d, 6H), 3,55 - 3,68 (m, 1H), 3,72 3,93 (m, 1H), 3,84 (s, 3H), 4,43- 4,55 (m, 1H), 6, 90 (d, 2H), 7,60 (šs, 1H), 7,77 (d, 2H). Analytická HPLC (kolona Cl8) 8,98 minuty.
(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amid l-[2-(4-methoxybenzoylamino)-2-methyIpropionyl]-pyrrolidin-2-karboxylové kyseliny (51)
K roztoku 325 mg (0,83 mmol) sloučeniny 50 v 5 ml dioxanu se přidá 463 μΐ (3,32 mmol) triethylaminu a 642 μΐ (3,32 mmol) TMS-triflátu a roztok se míchá 5 hodin při 100°C, potom io 18 hodin při teplotě místnosti. Reakční směs se zředí vodou, pomocí nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného se pH upraví na hodnotu 8 a extrahuje se diethyletherem, suší se nad bezvodým síranem sodným, filtruje se a odpaří se za získání 230 mg (výtěžek 83 %) bílé pevné látky, která se použije přímo v dalším kroku.
K roztoku 1,027 g (3,5 mmol) allylesteru (2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)karbamové kyseliny (40) v 20 ml dichlormethanu se přidá 543 mg (3,48 mmol) DMBA a 280 mg (0,24 mmol) Pd(PPh3)4 a roztok se míchá 20 minut v při teplotě místnosti v dusíkové atmosféře. Přidá se 818 mg (2,45 mmol) l-[2-<4—methoxybenzoylamino)-2-methyl-propionyl]pyrrolidin2-karboxylové kyseliny v 5 ml dichlormethanu a potom 0,534g (3,95 mmol) HOBT a 738 mg (3,84 mmol) EDC. Reakční směs se míchá v dusíkové atmosféře 18 hodin při teplotě místnosti.
Rozpouštědlo se odpaří, surová látka se rozpustí v ethylacetátu a dvakrát se promyje 0,5N roztokem hydrogensíranu sodného, dvakrát nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, filtruje se a odpaří se za získání žluté pevné látky. Po čištění pomocí velmi rychlé kolonové chromatografie za eluce směsí ethylacetátu a hexanu 20/80 až 50/50 % se získá 760 mg (výtěžek 61 %) produktu ve formě světle žluté pevné látky. lNMR (500MHz, deuteromethanol) δ 1,53 (d, 6H), 1,65 - 1,93 (m, 3H), 1,96-2,14 (m, 1H), 2,60 (dd, 0,lH), 2,77 (dd, 0,85H), 2,94 (dd, 0,85H), 3,04 - 3,11 (m, 0,2H), 3,42- 3,52 (m, 1H), 3,57- 3,67 (m, 1H), 3,84 (s, 3H), 4,38 - 4,76 (m, 3H), 4,84 (d, 1H), 5,64 - 5,70 (m, 1H), 6,96 - 7,03 (m, 2H), 7,23 - 7,43 (m, 5H),
7.78 -7,97 (m, 2H). Analytická HPLC (kolona Cl8) 13,32, 14,37 minuty, LC-MS (ES+) m/e=524,3 (M+H).
Příprava 3-({ 1—[2—(4—methoxybenzoylamino)-2-methylpropionyl]pyrrolÍdin-2-karbonyl}amino)-4~oxobutanové kyseliny (52)
61 mg (0,14 mmol) vzorek sloučeniny 51 se hydrolyzuje podle způsobu C (viz. schéma XXIII) a získá se 30 mg (výtěžek 60 %) sloučeniny uvedené v názvu. Analytická HPLC (kolona Cl8)
6.79 minuty. LC-MS (ES+) m/e = 434,3 (M+H).
-73 C7 302281 B6
Schéma XII
(54)X-H, Y^MeO (58)X=CI, Y=NK2
(56) X-H, Y-MeO (60) X^Cl(Y^NH2 (55) X-H, Y=MeO (59) X=C1, Y=NH2
terc-butylester l-[2-(4-methoxybenzoylamino)-3-methylbutyryl]-pyrrolidin-2-karboxylové kyseliny (54)
K suspenzi 2,011 g (7,44 mmol H-val-pro-OtBu.HCl (53) v 20 ml dichlormethanu se přidá 3,2 ml (18,4 mmol) DIEA a potom roztok 1,26 g (7,4 mmol) 4—methoxybenzoylchloridu v 5 ml dichlormethanu. Roztok se míchá I hodinu v dusíkové atmosféře při teplotě místnosti a potom se odpaří. Získaný olej se rozpustí v ethylacetátu a promyje se dvakrát 0.5N roztokem hydrogenio síranu draselného, dvakrát nasyceným roztokem hydrogen uhličitanu sodného a solankou, potom se odpaří ve vakuu a získá se 2,814 g (výtěžek 94 %) sloučeniny uvedené v názvu ve formě bílé pevné látky. 1 H-NMR (500Mhz, deuterochloroform) δ 1,05 (dd, 6H), 1,46 (s, 9H), 1,88 - 2,29 (m, 5H), 3,65 - 3,74 (m, IH), 3,81-3,92 (m, IH), 3,85 (s, 3H), 4,32 - 4,42 (m, IH), 4,81 -4,91 (m, IH), 6,79- 6,86 (m, IH), 6,91 (d, 2H), 7,78 (d, 2H). Analytická HPLC (kolona kyano)
10,18 minuty.
(2-benzyloxy—5-oxotetrahydrofuran—3—yl)amid 1-(2-(4-methoxybenzoylamino)-3-methylbutyr\ t]pyrrolidin -2 -karboxylové kyseliny (56) l,079g (2,67 mmol) vzorek sloučeniny 54 se rozpustí v 40 ml 15% kyseliny trifluoroctové v dichlormethanu a směs se míchá 4 hodiny při teplotě místnosti. Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu a získá se 0,93 g (100 %) sloučeniny 55 ve formě bílé pevné látky, která se použije v dalším kroku.
-74 CZ 302281 Β6
Κ. roztoku 1,796 g (6,17 mmol) sloučeniny 40 v 20 ml dichlormethanu se přidá 1,119 g (7,17 mmol) DMBA a 0,683 (0,59 mmol) Pd(PPh3)4 a roztok se míchá 20 minut při teplotě místnosti. Přidá se roztok 0,928 g (2,67 mmol) sloučeniny 55 v 17 ml dichlormethanu a 2 ml dimethylformamidu, potom 0,811 g (6,01 mmol) HOBT a 1,16 g (6,04 mmol) EDC. Reakční směs se míchá v dusíkové atmosféře 18 hodin při teplotě místnosti. Rozpouštědlo se odpaří a zbytek se promyje dvakrát 0,5N roztokem hydrogensíranu sodného, dvakrát nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a solankou a suší se nad bezvodým síranem sodným, filtruje se a odpaří se za získání žluté pevné látky. Po čištění pomocí velmi rychlé chromatografie za eluce směsí ethylacetátu a dichlormethanu (10/90 až 40/60) se získá 910mg (63 %) sloučeniny uvedené v názvu ve formě světle žluté pevné látky. lH-NMR (500MHz, deuterochloroform) δ 0,96 (dd, 6H), 1,84-2,19 (m, 4H), 2,25 - 2,38 (m, 1H), 2,45 (dd, 1H), 2,80- 2,98 (m, 1H), 3,60-3,72 (m, 1H), 3,82- 3,95 (m, 1H), 3,86 (s, 3H), 4,26-4,95 (m, 6H), 5,41 (s, 0,2H), 5,53 (d, 0,8H), 6,67-6,77 (m, 1H), 6,88- 6,99 (d, 2H), 7,22- 7,57 (m, 5H), 7,71 - 7,82 (d, 2H). Analytická HPLC (kolona kyano) (směs 2 díastereomerů) 9,21 minuty. LC-MS (ES+) m/e = 538,3 (M+H).
3—({1—[2—(4—Methoxybenzoylamino)-3-methylbutyryl]pyrrolidin-2-karbonyl}amino)-4-oxobutanová kyselina (57)
125mg (0,23 mmol) vzorek sloučeniny 56 se hydrolyzuje podle způsobu A (viz. schéma XXIII) a získá se 60 mg (výtěžek 58%) sloučeniny uvedené v názvu: Analytická HPLC 5,71 minuty. LC-MS (ES+) m/e-448,2 (M+H),
Příprava 4-amino-3-chlorbenzoové kyseliny:
Suspenze 4,82 g (31,58 mmol) 4-amino-3-chlorbenzonitrilu se ve 140 ml 6N roztoku kyseliny chlorovodíkové zahřívá k varu pod zpětným chladičem. Sraženina se rozpustí zahříváním a získá se bezbarvý roztok. Po dalším zahřívání se roztok zakalí. Po 9 hodinách se reakční směs ochladí na teplotu místnosti. Získaná sraženina se filtruje, potom se rozpustí v tetrahydrofuranu a rozpouštědlo se odpaří. Zbytek se opakovaně odpaří z toluenu a získá se 3,18g (59%) bílé pevné látky. *H-NMR (500MHz, deuteromethanokdeuterochloroform 1:4) δ 6,80 (d, 1H), 7,75 (dd, 1H), 7,94 (d, 1H). Analytická HPLC (kolona kyano) 8,73 minuty.
terc-butylester 1-[2-(4-amino-3-chÍorbenzoylamino)-3-methylbutyryl]pynOlidin-2-karboxylové kyseliny (58)
K suspenzi 1,707 g (6,31 mmol) sloučeniny 53 v 25 ml dichlormethanu se při 0 °C přidá 3,2 ml (18,4 mmol) DIEA, potom roztok 1,298 g (7,56 mmol) 4-amino-3-chlorbenzoové kyseliny, 1,005 g (7,44 mmol) HOBT a 1,456 g (7,58 mmol) EDC. Získaná směs se míchá 15 minut při 0 °C, potom se nechá ohřát na teplotu místnosti a míchá se 18 hodin. Rozpouštědlo se odpaří a získaný olej se rozpustí v ethylacetátu, promyje se dvakrát 0,5N roztokem hydrogensíranu sodného, dvakrát nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a solankou a získá se 2,68 g bílé pevné látky. Po čištění pomocí velmi rychlé chromatografie za použití směsi methanolu a dichlormethanu (1/99 až 2/98) jako eluentu se získá 2,04 G (výtěžek 76 %) sloučeniny 58 ve formě bílé pevné látky. 'H-NMR (500MHz, deuterochloroform) δ 1,05 (dd, 6H), 1,47 (s, 9H), 1,86-2,2 (m, 5H), 3,62-3,76 (m, 1H), 3,78 - 3,94 (m, lH),4,39(dd, 1H), 4,79-4,89 (dd, 1H), 6,73 (d, 1H), 6,78 (d, IH), 7,52 (dd, 1H), 7,75 (d, 1H). Analytická HPLC (kolona kyano) 16,18 minuty. LC-MS (ES-) m/e=424,3 (M+H).
(2-benzyloxy-5—oxotetrahydrofuran-3-yI)amin l-[2-(4-amino-3—chlorbenzoy lamino)—3methylbutyryl]pyrrolidin-2-karboxylové kyseliny (60)
0,632g (1,49 mmol) vzorek sloučeniny 58 se rozpustí v 20 ml 50% kyseliny trifluoroctové v dichlormethanu a roztok se míchá 2 hodiny při teplotě místnosti. Zbývající kyselina trifluor-75CZ 302281 B6 octová se odstraní opakovaným odpařením z dichlormethanu (3x) a získá se produkt ve formě bílé pevné látky.
385mg (1,04 mmol) vzorek se nechá reagovat se sloučeninou 40 pomocí postupu popsaného pro přípravu sloučeniny 56. Izoluje se 265 mg (45 %) sloučeniny uvedené v názvu (60) ve formě žluté pevné látky. 'HNMR (500 MHz, deuteromethanol) ft 0,89- 1,12 (m, 6H), 1,72- 2,26 (m, 511). 2.49 (dd, 0,25H), 2,60 (dd, 0,7H), 2,80 (dd, 0,75H), 2,96 - 3,09 (m, 0,3H), 3,64 - 3,77 (m, 1H), 3,94 - 4,10 (m, 1H), 4,20 - 4,74 (m, 4H), 4,76- 4,95 (m, IH), 5,51 (s, 0,5H), 5,61 - 5,70 (m, 1,5H), 6,79 (dd, IH), 7,23 - 7,43 (m, 5H), 7,48 - 7,61 (m, 1,4H), 7,68 - 7,81 io (m, IH), 7,99-8,12 (m, 0,6H).
Analytická HPLC (kolona kyano) (směs 2 dtastereomerů) 14,90, 15,20 minuty. LC-MS (ES*) m/e-557,2 (M+H).
3-({ l-[2-(4-Amino-3-chlorbenzoylamino)-3-methylbutyryl]pynOlidÍn-2-karbonyl}amino)4-oxobutanová kyselina(61)
45mg (0,08 mmol) vzorek sloučeniny 60 se hydrolyzuje podle způsobu A (viz. schéma XXIII) a získá se 30 mg (výtěžek 80%) sloučeniny uvedené v názvu: 'HNMR (500MHz, deutero20 methanol) 1,06 (dd, 6H), 1,78 - 2,38 (m, 5H), 2,38 - 2,86 (m, 2H), 3,62- 3,83 (m, IH), 4,12-4,76 (m, 4H), 7,04 - 7,21 (m, IH), 7,58-8,01 (m, 2H); Analytická HPLC 8,16 minuty. LC-MS (ES+) m/e=467,3 (M+H).
Schéma XIII
terc-butyl ester l-[2-(4-hydroxy~3,5-dimethylbenzoylamino)-3-methylbutyryl]-pyrrolidin-2karboxylové kyseliny (63)
K roztoku 600 mg (1,22 mmol) sloučeniny 62 (připravené ze sloučeniny 53 a Fmoc-Cl) v 10 ml bezvodého dimethylformamidu se přidají 3 ml diethylaminu. Roztok se míchá v dusíkové atmosféře pri teplotě místnosti 3 hodiny a rozpouštědlo se odpaří. Získaný olej se rozpustí v 9 ml dichlormethanu a přidá se 0,302 g (1,82 mmol) 3.5-dimcthyl 4-hydroxybenzoové kyseliny, 338mg (2,5mmol) HOBT a 0,456g (2,43mmol) EDC a roztok se míchá 18 hodin v dusíkové atmosféře při teplotě místnosti. Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu a získaný olej se rozpustí v ethylacetátu, promyje se dvakrát 0,5N roztokem hydrogen síranu sodného, dvakrát nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a solankou a získá se 0,80 g surového produktu ve formě
-76CZ 302281 B6 bílé pevné látky. Po čištění pomocí velmi rychlé chromatografie za eluce směsí methanolu a dichlormethanu (1,99 až 2,98 %) se získá 380 mg (výtěžek 75 %) sloučeniny, uvedené v názvu ve formě bílé pevné Jatky. 'H-NMR (500MHz, deuterochloroform) δ l,06(dd,6H), 1,47 (s,9H), 1,90-2,32 (m, 5H), 2,24 (s, 6H), 3,65-3,75 (m, 1H), 3,84-3,92 (m, 1H), 4,36-4,42 (m, 1H),
4,82—4,88 (m, IH), 5,53-5,61 (m, 1H), 6,77-6,85 (m, IH), 7,42 (s, 2H). Analytická HPLC (kolona kyano) 17,53 minuty. LC-MS (ES+) m/e=419,3 (M+H).
(2-benzyloxy-5-oxo-tetrahydrofuran-3-yl)-amid l-[2-(4-hydroxy-3,5-dÍmethylbenzoylamino)-3-inethylbutyryl]-pyrTolidin-2-karboxylové kyseliny (64) io
Sloučenina se připraví ze sloučeniny 63 a sloučeniny 40 pomocí způsobu použitého pro přípravu sloučeniny 56 a získá se 352 mg (72 %) sloučeniny uvedené v názvu (64) ve formě světle žluté pevné látky. ’Η-NMR (500MHz, deuteromethanol) 6 0,83-1,28 (m, 6H), 1,66-2,37 (m, 3H), 2,23 (s, 6H), 2,48-2,54 (m, 0,2H), 2,61 (ddd, 0,8H), 2,72 (ddd, 0,9H), 3,01-3,09 (m, IH), »5 3,66-3,76 (m, IH), 3,95-4,07 (m, IH), 4,48-4,73 (m, 3H), 4,75-4,92 (m, IH), 5,45-5,48 (m,
0,lH), 5,61-5,64 (m, 0,lH), 5,64-5,70 (m, 0,8H), 7,21-7,62 (m, 6H), 7,88-8,04 (m, IH). Análytická HPLC (kolona kyano) (směs 2 diastereomerů) 17,73 minuty. LC-MS (ES+) m/e = 552,3. (M+H).
3-({l-[2-(4_Hydroxy-3,5-dimethylbenzoylamino)-3-methylbutyryl]pyrrolidin-2-karbonyl}amino)—4-oxobutanová kyselina (65)
160mg (0,29 mmol) vzorek sloučeniny 64 se hydrolyzuje podle způsobu A (viz. schéma XXIII) a získá se 13,1 mg (výtěžek 10%) sloučeniny uvedené v názvu: Analytická HPLC (kolona kyano) 10,28 minuty. LC-MS (ES+) m/e=462,2 (M+H).
Schéma XIV
terc.butylester l-[2-(2-9H-fluoren-9-yl-acetylamino)-3,3-dimethylbutyryl]_pyrrolidin-2-karboxylové kyseliny (66)
K roztoku 1,033 g (6,0 mmol), II schéma 5) H-pro-OtBu (53) v 20 ml dichlormethanu a 5 ml dimethylformamidu se přidá 2,337 g (6,60 mmol, I, schéma 5) Fmoc-tLeu~OH, 1,63 g (12,1 mmol) HOBT a 2,30 g (12,0mmol) EDC a roztok se míchá při teplotě místnosti v dusíkové atmosféře 18 hodin. Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu a zbytek se rozpustí v ethylacetatu, potom se promyje dvakrát 0,5N roztokem hydrogensíranu sodného, dvakrát nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a solankou. Organická vrstva se suší nad bezvodým síranem sodným a
-77CZ 302281 B6 odpaří se za získání 3,65 g světle žluté pevné látky. Po čištění pomocí velmi rychlé chromatografie na silikagelu za eluce směsí ethylacetátu a hexanu (10/90 až 20/80) se získá 2,25 g (výtěžek 74 %) sloučeniny uvedené v názvu. 'll-NMR (500MHz, deuterochloroform) Ó 1,09 (s, 9H), 1,47 (s, 9H), 1,79-2,28 (m, 3H), 3,62-3,72 (m, IH), 3,76-3,83 (m, 111), 4,18-4,43 (m,4H), s 5,48-5,67 (m, IH), 7,28-7,44 (m, 4H), 7,55-7,64 (m, 2H), 7,72-7,82 (ιη, 2H). Analytická HPLC (kolona kyano) 11,95 minuty. LCMS (ES ) m/e=5O7,3 (M+H).
terc.butylestcr l-[2-(4-methoxybenzoy lamino )-3,3-dimethylbutyryl]pyrrolidin-2-karboxy lové kyseliny (67) io
K roztoku 0,503 g (0,99 mmol) sloučeniny 66 v 8 ml dimethylformamidu se přidá 2,5 ml diethylaminu a roztok se míchá 1 hodinu při teplotě místnosti a rozpouštědlo se odpaří. Zbytek se třikrát odpaří z dichlormethanu. Získaný olej se rozpustí v 9 ml dichlormethanu a přidá se 260 μΐ (1,49 mmol) DIEA a 190 mg (1,05 mmol) 4-methoxybenzoylchloridu. Roztok se míchá 18 hodin v dusíkové atmosféře a rozpouštědlo se odpaří ve vakuu. Zbytek se rozpustí v ethylacetátu a dvakrát se promyje 0,5N roztokem hydrogensÍránu sodného, dvakrát nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a solankou a potom se suší nad bezvodým síranem sodným a odpaří se za získání 0,529 g bílé pevné látky. Po čištění pomocí velmi rychlé chromatografíe na silikagelu za použití směsi methanolu a dichlormethanu (1,99 až 2,98 %) jako eluentu se získá 2,25 g ( 74 %) sloučeniny uvedené v názvu. 'HNMR (500MHz, deuteromethanol) δ 1,01 (s, 1,4H), 1,11 (s, 7,6H), 1,73-2,25 (m, 4H), 2,47-2,77 (m, 1H),2,81 (dd, 0,7H), 2,91-3,11 (m, 0,3 H), 3,61-4,03 (m, 3H). 3,84 (s, 311), 4,29-4,49 (m, IH), 4,49-5,00 (m, 5H), 5,46 (s, 0,15H), 5,58-5,73 (m, 0,85H), 6,94-7,04 (m, 2H), 7,27-7,41 (m, 4H), 7,61-7,73 (m, 1 H), 7,74-7,84 (m, 2H). Analytická HPLC (kolona kyano) 13,10 minuty.
(2-benzyloxy—5-oxotetrahydrofuran-3-yl)-amid 1-[ 2—(4-methoxybenzoy lamino)—L3—dimethylbutyryl]pyrrolidin-2-karboxylové kyseliny (68)
K roztoku 0,90 g (1,74 mmol) sloučeniny 67 v 25 ml dichlormethanu se přidá 2,1 ml (18,0 mmol)
2,6-lutidinu a 2,3 ml (11,9 mmol) TMS-triflátu a reakční směs se míchá 1,5 hodiny při teplotě místnosti v dusíkové atmosféře. Získaná směs se zředí dichlormethanem, dvakrát se promyje 10% roztokem hydrogenuhličitanu sodného a solankou a suší se nad bezvodým síranem sodným,-filtr uje se a odpaří se. Zbytek se rozpustí v dichlormethanu, potom se reaguje s 0,6 ml (3,5 mmol) DIEA a 0,355 g (2,09 mmol) 4-methoxybenzoylchloridu a nechá se v dusíkové atmosféře, pří teplotě místnosti míchat 18 hodin. Surový produkt se čistí pomocí velmi rychlé chromatografíe za eluce směsí dichlormethanu a methanolu 99/1 za získání 274 mg (výtěžek 28 %) sloučeniny uvedené v názvu. 'H-NMR (500MHz, deuteromethanol) δ 1,01 (s, 1,4H), 1,11 (s, 7,6H), 1,73-2,25 (m, 4H), 2,47-2,77 (m, IH), 2,81 (dd, 0,7H), 2,91-3,11 (m, 0,3H), 3,6W,03 (m, 3H), 3,84 (s, 3H), 4,29-4,49 (m, IH), 4,49-5,00 (m, 5H), 5,46 (s, 0,15H), 5,58,-5,73 (m,O,85H), 6,94-7,04 (m, 2H), 7,27-7,41 (m, 4H), 7,61,-7,73 (m, IH), 7,74-7,84 (m, 2H).
Analytická HPLC (kolona kyano) (směs 2 diastereomerů) 17,03, 17,39 minuty. LC-MS (ESj m/e=552,3 (M+H).
3-({ l-[2-(4-Methoxybenzoylamino)-3,3-dimethylbutyryl]pyrrolidin-2-karbonyl}amino)-445 oxobutanová kyselina (69)
117mg (0,21 mmol) vzorek sloučeniny 68 se hydrolyzuje podle způsobu C (viz. schéma XXI11) a získá se 40 mg (výtěžek 41 %) sloučeniny uvedené v názvu: Analytická HPLC 7,16 min. LC-MS (ES+) m/e-462.3 (M+H).
- 78 CZ 302281 B6
Schéma XV
benzylester l-(2-terc-butoxykarbonylarnino—3,3—dirnethyl-butyryl)pyrrc>lidin-2-karboxylové kyseliny (70)
K supenzi 2,00 g (8,66 mmol) H-pro-OBzl. HC1 v 20 ml dichlormethanu se přidá 2,25 ml (12,92 mmol) DIEA za vzniku bezbarvého roztoku. Přidá se 1,95 g (9,52 mmol) Boc-tLeu-OH, 1,76 g (13,03 mmol) HOBT a 2,49 g (12,95 mmol) EDC a roztok se míchá v dusíkové atmosféře při teplotě místnosti 18 hodin. Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu, zbytek se rozpustí v ethylacetátu io a promyje se vodou, dvakrát 0,5N roztokem hydrogensíranu sodného, dvakrát nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a solankou. Organická fáze se suší nad bezvodým síranem sodným a odpaří se za získání 3,57 g (výtěžek 99%) sloučeniny uvedené v názvu. ‘H-NMR (500MHz, deuterochloroform) 6 0,99 (s, 9H), 1,40 (s, 9H), 1,88-2,33 (m, 4H), 3,58-3,90 (τη, 2H), 4,21-4,35 (d, 1H), 4,53 A,66 (m, 1H), 5,04-5,38 (m, 3H), 7,14-7,42 (m, 5H). LC-MS (ES+) m/e=419,4 (M+H).
terc-butytester {l-[2 -(2-benzyioxy-5-oxo-tetrahydro-furan-3-ylkarbamoyl)-pyrro!idin-l karbonyl]-2,2-dimethylpropyl}karbamové kyseliny (71)
871 mg (2,08 mmol) vzorek sloučeniny 70 se rozpustí v 15 ml methanolu a přidá se 200 mg 10% palladia na uhlí. Suspenze se míchá 1 hodinu ve vodíkové atmosféře, potom se filtruje přes křemelinu a rozpouštědlo se odpaří. Získaný zbytek se reaguje se sloučeninou 40 podle postupu použitého pro přípravu sloučeniny 56 za získání 889 mg (výtěžek 71 %) sloučeniny uvedené v názvu 7L 'H-NMR (500MHz, deuterochloroform) 6 0,93 (s, 9H), 1,44 (s, 9H), 1,78-2,18 (m,
4H), 2,29-2,49 (m, 2H), 2,76-3,04 (m, 1H), 3,50-3,70 (m, 1H), 3,70-3,85 (m, 1H), 4,20-4,37 (m, 1H), 4,49-4,78 (m, 3H), 4,78-4,98 (m, 1H), 5,12-5,26 (m, 1H), 5,40-5,59 (m, 1H), 7,10-7,78 (m, 5H). Analytická HPLC (kolona kyano) 11,17 minuty. LC-MS (ES+) m/e=518,3 (M+H).
(2-benzyloxy-5-oxo-tetrahydro-furan-3-yl)amid l-[2-(4-amino-3-chlorbenzoylamino)-3,3dimethyIbutyryl]pyrrolidin-2-karboxylové kyseliny (72)
Roztok 456 mg (0,088 mmol) sloučeniny 71 v 20 ml dichlormethanu se reaguje s 5 ml bezvodé kyseliny trifluoroctové, potom se míchá v dusíkové atmosféře při teplotě místnosti 1 hodinu a odpaří se do sucha. Zbytek se třikrát opakovaně odpaří z dichlormethanu, potom se suší ve vakuu. Získaný zbytek se rozpustí v 20 ml dichlormethanu, ochladí se na 0 °C, potom se reaguje s 1,3 ml (8 ekvivalentů, 2,46 mmol) DIEA, potom se 202 mg (1,17 mmol) 4~amino-3-chlor-79CZ 302281 Bó benzoové kyseliny, 183 mg (1,35 mmol) HOBT a 279 mg (1,45 mmol) EDC. Získaná směs se nechá ohřát na teplotu místnosti a míchá se 18 hodin. Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu a zbytek se rozpustí v ethylacetátu, potom se promyje třikrát destilovanou vodou, dvakrát 0,5N roztokem hydrogensíranu sodného, dvakrát nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a solankou.
Organická vrstva se suší nad síranem sodným, filtruje se a odpaří se do sucha za získání zbytku, který se čistí pomocí velmi rychlé chromatografie za eluee směsí dichlormethanu a methanolu (99,1 až 97,3 %). Získá se 285 mg (výtěžek 5,7 %) sloučeniny uvedené v nazvu (72) ve formě žluté pevné látky.
ιο 'H-NMR (500MHz, deuteromethanol) 8 0,91-1,24 (m, 9H), 1,70-2,27 (m, 4H), 2,47-2,85 (m, 1,5H), 2,99-3,13 (m, 0,5H), 3,39-3,53 (m, 0,5H), 3,60-3,78 (m, l,5H), 3,85- 4,04 (m, 1H), 4.24-T47 (m. 2H), 4,53-4,97 (m, 4H), 5,46 (s, 0,3H), 3,88-4,02 (m, 0,lH), 5,60-5,69 (m, 0,6H), 6,80 (d, 1H), 7,22-7,77 (m, 7H). Analytická HPLC (kolona kyano) (směs 2 diastereomerů) 15,90, 16,23 minuty. LC-MS (ES ) m/e=571,2 (M+H).
3-( í l -[2 (4- Amíno- 3-chlorbenzoylamino)-3.3-<límethylbutyr\l]pyrrolidin-2-karbonyl 0 amíno)-4-oxobutanová kyselina (73)
40mg (0,07 mmol) vzorek sloučeniny 72 se hydrolyzuje podle způsobu A (viz. schéma XXIII) a získá se 25 mg (výtěžek 74 %) sloučeniny uvedené v názvu: Analytická HPLC (kolona kyano) 10,66 minuty., LC-MS (ES') m/e=481,3 (M+H).
Schéma XVI
terč—butylester {2 [2 (2 benzyloxy-5 oxotetrahydrofuran-3-yí- karbamovl) pyrrolidin- l-yl]
1-methyl—2oxo-ethyl}karbamové kyseliny (75)
K roztoku 6,69 g (23,0 mmol) sloučeniny 40 v bezvodém dichlormethanu se přidá 3,97 g (25,4 mmol) 1,3-dimethylbarbiturové kyseliny (DMBA) a 1,12 g (0,97 mmol) Pd(PPh3)4. Roztok se míchá 15 minut při teplotě místnosti v dusíkové atmosféře, ochladí se na 0 °C, potom se přidá 5,087 g (17,8 mmol) Boc-ala-pro-OH (BaChem), 3,60 g (26,7 mmol) HOBT a 5,12 g (26,7 mmol) EDC. Získaný roztok se nechá ohřát na teplotu místnosti a míchá se 18 hodin v dusíkové atmosféře. Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu a zbytek se rozpustí v ethylacetátu, potom se dvakrát promyje 0,5N roztokem hydrogens íranu sodného, dvakrát nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a solankou. Organická vrstva se suší nad bezvodým síranem sodným a odpaří se za získání 12,23 g oranžového oleje. Po čištění pomocí velmi rychlé chromatografie
-80CZ 302281 B6 na silikagelu za použití směsi dichlormethanu a ethylacetátu (80/20 až 60/40) jako eluentu se získá 7,28 g (výtěžek 86 %) sloučeniny uvedené v názvu (75) ve formě žluté pevné látky. 'H-NMR(500MHz, deuteromethanol) δ 1,19-1,31 (m, 3H), 1,42 (s, 9H), 1,69-2,29 (m, 4H), 2,45-2,67 (m, 0,9H), 2,71-2,86 (m, 0,5H), 2,99-3,10 (m, 0,6H), 3,49-3,84 (m, 2H), 4,24-4,45 (m, 2,5H), 4,57—4,73 (m, 1,5H), 4,76-4,92 (m, 1H), 5,45 (s, 0,45H), 5,63-5,68 (m, O,55H),
7,25-7,40 (m, 5H). Analytická HPLC (kolona kyano) (směs 2 diastereomerů) 15,99, 16,33 minuty. LC-MS (ES+) m/e=476,3 (M+H).
(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)-amíd l-[2-(4-amino-3-chlorbenzoylamino)propioio nyl]pyrrolidin-2-karboxylové kyseliny (76) l,899g (3,99 mmol) vzorek sloučeniny 75 v 20 ml dichlormethanu se reaguje s 5 ml bezvodé kyseliny trifluoroctové, potom se míchá 1 hodinu v dusíkové atmosféře při teplotě místnosti a odpaří se do sucha. Zbytek se třikrát opakovaně odpaří z dichlormethanu a potom se suší ve vakuu. Získaný zbytek se rozpustí ve 20 ml dichlormethanu, ochladí se na 0 °C, potom se reaguje s 5,6 ml (8 ekvivalentů, 32,1 mmol) DIEA, 0,910 g (5,3 mmol) 4-amino~3-chlorbenzoové kyseliny, 0,824 g (6,1 mmol) HOBT a 1,197 g (6,23 mmol) EDC. Získaná směs se ohřeje na teplotu místnosti a míchá se 18 hodin. Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu a zbytek se rozpustí v ethylacetátu, potom se promyje třikrát destilovanou vodou, dvakrát 0,5N roztokem hydrogensíranu sodného, dvakrát nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a solankou. Organická vrstva se suší nad síranem sodným, filtruje se a odpaří se za získání zbytku, který se čistí pomocí velmi rychlé chromatografie za použití směsi dichlormethanu a methanolu (99,1 až 97,3) jako eluentu. Získá se 1,221 g (výtěžek 58%) sloučeniny uvedené v názvu ve formě bílé pevné látky. lHNMR (500MHz, deuterochloroform) δ 1,15 (d, 0,25H), 1,29-1,60 (m, 2,75H), 2,41-2,54 (m, 0,5H), 2,55-2,70 (m, 0,5H), 2,77 (dd, 0,5H), 3,03 (ddd, 0,5H), 3,59-3,75 (m, 1H), 3,75-3,98 (m, IH), 4,26-5,01 (m, 5H), 5,41-5,57 (m, 1H), 5,60-5,76 (m, 0,5H), 6,70-6,92 (m, 0,5H), 7,15-7,48 (m, 5H), 7,48-7,68 (m, 1H), 7,68-7,88 (m, 1H), 8,15-8,34 (m, 1H). Analytická HPLC (kolona kyano) (směs 2 diastereomerů) 14,44, 14,89 minuty. LC-MS (ES+) m/e=529,3 (M+H).
(2_benzyloxy-5-oxo-tetrahydro-furan-3-yl)amid l-[2-(4-methoxy-3,5-dimethy lbenzoy 1amino)propionyl]-pyrrolidin-2-karboxylové kyseliny (77)
Sloučenina se syntetizuje ze sloučeniny 75 a 3,5-dimethyl-4-methoxybenzoové kyseliny podle postupu použitého pro přípravu sloučeniny 76. Získá se 1,18 g (44%) sloučeniny uvedené v názvu. 'H-NMR (500MHz, deuteromethanol) δ 1,40 (m, 3H), 1,67-2,41 (m, 4H), 2,28 (s, 6H), 2,48 (ddd, 0,5H), 2,62 (dd, 0,5H), 2,78 (ddd, 0,5H), 3,04 (ddd, 0,5H), 3,62-3,94 (m, 3H), 3,71 (s, 3H), 4,21—4,51 (m, 2H), 4,59-4,85 (m, 4H), 5,46 (s, 0,25H), 5,52 (s, 0,25H), 5,63 (d, 0,4H), 5,67 (d, 0,1H), 7,17-7,45 (m, 5H),-7,45-7,65 (m, 2H). Analytická HPLC (kolona kyano) (směs 2 diastereomerů) 15,06, 15,39 minuty. LC-MS (ES+) m/e=538 (M+H)
-81 CZ 302281 B6
Příprava 4-acety lam i no-3-chlorbenzoové kyseliny
K roztoku 4-amino-3—chlorbenzoové' kyseliny (10,0 g, 58,3 mmol) ve 100 ml bezvodého tetrahydrofuranu se přidá 20,7 ml (291,1 mmol) acetylchloridu a roztok se míchá při teplotě místnosti
48 hodin. Rozpouštědlo se odpaří a produkt se sráží z hexanu, odfiltruje se a získá se I 1,73 g (výtěžek 94%) sloučeniny uvedené v názvu ve formě bílé pevné látky, 'H-NMR (500MHz, deuteromethanol) 6 2,28 (s, 3H), 7,92 (dd, IH), 7,99-8,16 (m, 2H). Analytická HPLC (kolona kyano) 7,48 min.
io (2-benzyloxy-5-oxotetrahydro-furan-3-yl)amid l-[2-(4-acetylamino-3-chlorbenzoy lamino)propionyl]pyrrolidin-2-karboxylové kyseliny (78)
Sloučenina se připraví ze sloučeniny 75, a 4-acety lam i no-3-chlorbenzoové kyseliny podle postupu použitého pro přípravu sloučeniny 76. Získá se 146 mg (výtěžek 19 %) sloučeniny uvedené v názvu. ’H-NMR (500MHz, deuteromethanol) δ 1,28-1,52 (m, 3H), 1,68-2,38 (m, 4H), 2,20 (s, 3H), 2,41-2,88 (m, 1,5H), 2,96-3,10 (m, 0,5H), 2,96-3,10 (m, 0,5H), 3,43-3,75 (m, IH), 3,803,96 (m, IH), 4,25-5,00 (m, 1H), 5,42-5,54 (m, 0,5H), 5,63-5,78 (m, 0,5H),
7,13-7,48 (m, 05H), 7,79-8,14 (m, 2,5H), 8,56-8,70 (m, 0,5H). Analytická HPLC (kolona kyano) (směs 2 diastereomerů) 8,64 min. LC-MS (ESJ m/e=571,2 (M+H).
(2-benzyloxy-5-oxotetrahydro-furan-3-yl)amid 1—[2-(3-isopropoxybenzoy lam ino)prop Sony ljpyrrolidín—2-karboxylové kyseliny (79)
Sloučenina se připraví ze sloučeniny 75 a 3-isopropoxybenzoové kyseliny podle postupu použi25 tého pro přípravu sloučeniny 76. Získá se 120 mg (výtěžek 58 %) sloučeniny uvedené v názvu.
’Η-NMR (500MHz, deuteromethanol) δ 1,27 (d, 6H), 1,33-1,52 (m, 3H), 1,69-2,31 (m, 4H), 2,49 (dd, 0,3H), 2,63 (dd, 0,7H), 2,78 (dd, 0,7H), 3,03 (dd, 0,3H), 3,43-3,73 (m, IH), 3,78-3,94 (m, IH), 4,27—4,47 (m, 2H), 4,47-4,87 (m, 4H), 5,47 (s, 0,7H), 5,53 (d, 0,3H), 5,64 (d, 0,8H), 5,72 (d, 0,2H), 6,98-7,12 (m, IH), 7,19-7,47 (m, 9H). Analytická HPLC (kolona kyano) (směs 2 diastereomerů) 14,54, 14,85 minuty. LC-MS (ES\) m/e=538 (M+H).
(2-[2-(2-benzyloxy-5—oxotetrahydrofuran-3-y lkarbamoyl)pyrrolidin-1 -yl]-1 -methy 1-2—oxoethyl}amid chinoxalin-2-karboxylové kyseliny (80)
Sloučenina se připraví ze sloučeniny 75 a 2-chinoxalinkarboxylové kyseliny podle postupu popsaného pro přípravu sloučeniny 76. Získá se 122 mg (výtěžek 60%) sloučeniny uvedené v názvu. 'H-NMR (500MHz, deuteromethanol) δ 1,12-1,67 (m, 3H), 1,68-2,34 (m, 4H),
-82CZ 302281 B6
2,35-2,70 (m, 0,85H), 2,70-2,95 (m, 0,75H), 3,06 (dd, 0,4H), 3,41-3,49 (m, 2H), 4,18-5,03 (m,6H), 5,47 (d, 0,5H), 5,55 (d, 2H), 5,67 (dd, 1H), 5,71 (dd, 0,3H), 7,03-7,53 (m, 5H), 7,80-8,06 (m, 2H), 8,06-8,34 (m, 2H), 9,43-9,48 (m, 1H). Analytická HPLC (kolona kyano) (směs 2 diastereomerů) 9,06 minuty. LC-MS (ES+) m/e=532,3 (M+H).
(2-benzyloxy-5—oxotetrahydrofuran-3-yl)amid l-[2-(3-benzyloxy—4-methoxybenzoylamino)propionyljpyrrolidin-2-karboxylové kyseliny (81)
Sloučenina se připraví ze sloučeniny 75 a 3-benzyloxy-4-methoxybenzoové kyseliny podle pošlo tupu popsaného pro přípravu sloučeniny 76. Získá se 142 mg (výtěžek 58 %) sloučeniny uvedené v názvu. 'H-NMR (500MHz, deuteromethanol) δ 1,14 (d, 0,3H), 1,27-1,52 (m, 2,7H), 1,66-2,30 (m, 4H), 2,47 (dd, 0,4H), 2,59 (dd, 0,6H), 2,77 (dd, 0,6H), 3,02 (dd, 0,4H), 3,41-3,72 (m, 1H), 3,72-3,99 (m, 2H), 3,86 (s, 3H), 4,19-4,86 (m, 5H), 4,99-5,15 (m, 2H), 5,45 (m, 0,8H), 5,65 (m, 1,2H), 6,98 (dd, 1H), 7,11-7,63 (m, 12H). Analytická HPLC (kolona kyano) (směs 2 diastereot5 merů) 12,28, 12,44 minuty. LC-MS (ES+) m/e=616,3 (M+H).
4-Allyloxy—3,5-dimethylbenzoová kyselina
Směs 3,32 g (20 mmol) 4-hydroxy-3,5-dimethylbenzoové kyseliny, 7,26 g (60 mmol) ailyl20 bromidu, 455 mg (2 mmol) benzyltriethylamoniurnchloridu a 6,9 g (50 mmol) uhličitanu draselného v 50 ml dimethylformamidu se míchá 16 hodin při teplotě místnosti. Směs se zředí 200 ml ethylacetátu, promyje se vodou a solankou. Organická vrstva se suší nad síranem sodným, filtruje se a odpaří se ve vakuu za získání 5,3 g esteru ve formě oleje. Ester se zahřívá k varu pod zpětným chladičem s 5 g (125 mmol) hydroxidu sodného ve směsi vody a methanolu (50 ml/50 ml)
6 hodin. Směs se odpaří ve vakuu, čímž se odstraní methanol a získaný roztok se zředí 200 ml vody, promyje se směsí ethylacetátu a hexanu (30 ml/70 ml) Vodná vrstva se při 0 °C okyselí pomocí koncentrovaného roztoku kyseliny chlorovodíkové na pH 2. Získaná sraženina se odfiltruje a promyje se vodou, suší se za vysokého vakua a získá se 3,86 g (výtěžek 94 %) sloučeniny uvedené v názvu. 'H-NMR (500 MHz, deuterochloroform): δ 2,33 (s, 6H), 4,35-4,37 (m, 2H),
5,28-5,30 (m, H), 5,42-5,46 (m, H), 6,07-6,15 (m, H), 7,79 (s, 2H); retenční čas při analytické
HPLC: 11,28 minuty; LC-MS: m/z - 205 (M-fT).
(2-benzyloxy-5-oxotetrahydro-furan-3-yl)-amid l-[2-(4-allyloxy-3,5-dichlorbenzoylamino)propionyljpyrrolidin-2-karboxylové kyseliny (82)
Sloučenina se připraví ze sloučeniny 75 a 4-allyloxy-3,5-dichlorbenzoové kyseliny podle postupu popsaného pro přípravu sloučeniny 76. Získá se 208 mg (47 %) sloučeniny uvedené v názvu.
'H-NMR (500MHz, deuterochloroform) δ 1,05-1,58 (m, 3H), 1,68-3,21 (m, 7H), 3,39-3,90 (m,
3H), 4,05-5,01 (m, 6H), 5,22-5,62 (m, 3H), 6,04-6,25 (m, 1H), 6,94-7,63 (m, 8H). Analytická
-83 CZ 302281 B6
HPLC (kolona kyano) (směs 2 diastereomeru) 9,69, 9,89 minuty. LC-MS (ES ) m/e=604,2 (M+H).
(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)-amid 1 -|2 (3,5 -diehlor-4-hydroxybenzoylamino)5 propionyl]pyrrolidin-2-karboxylové kyseliny (83)
140mg (0,23mmol) vzorek sloučeniny 82 se rozpustí v 4 ml dichlormethanu s reaguje se s 35,4 mg (0,26 mmol) DMBA a 32 mg (0,028 mmol) Pd(PPh3)4. Roztok se míchá 15 minut při 0 °C, 2 hodiny se zahřívá na teplotu místnosti, potom se zředí dichlormethanem a dvakrát se proio myje vodou a solankou. Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu a zbytek se čistí pomocí velmi rychlé chromatografíe na silikagelu za použití směsi methanolu a dichlormethanu (1,99 až 3,97) jako eluentu a získá se 93,2 mg (výtěžek 71 %) sloučeniny uvedené v názvu. 1 H-NMR (500MHz, deuleromethanol) δ 1,16 (d, 0,25H), 1,28-1,49 (m, 2,75H), 1,63-2,33 (m, 4H), 2,48 (dd, 0,4H),
3,39-3,59 (m, 0,2H), 3,60-3,73 (m, 0,8H), 3,73-3,96 (m, IH), 4,24-4,48 (m, 2H), 4,57 4,92 15 (m,7H), 5,44 (s, 0,4H), 5,50 (d, 0,4H), 5,64 (d, 0,8H), 5,75 (d, 0,5H), 7,16-7,43 (m, 5H),
7,78-7,89 (m, 1,6H), 8,40-8,63 (m, 0,4H). Analytická HPLC (kolona kyano) (směs 2 diastereomerů) 11,57, 11,82 minuty. LC-MS (ES') m/e=564,l (M+H)
(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)-amid l-(2-benzoylaminopropionyl)pyrrolidin-220 karboxylové kyseliny (84)
Sloučenina se připraví ze sloučeniny 75 a benzoylchloridu podle postupu použitého pro přípravu sloučeniny 76. Získá se 8 mg (výtěžek 38 %) sloučeniny uvedené v názvu ve formě bezbarvého oleje. 'H-NMR (500MHz, deuteromethanol) δ 1,35-1,54 (m, 3H), 1,72-2,30 (m, 4H), 2,42-2,70 (m, 1,3H), 2,74-2,84 (m, 0,5H), 3,03 (dd, 0,2H), 3,41-3,75 (m, 2H), 3,91-3,96 (m, IH),
4,22-4,86 (m, 4H), 5,46 (s, 0,3H), 5,51-5,54 (m, 0,1 H), 5,66 (d, 0,5H), 5,72 (d, 0,lH), 7,20-7,57 (m, 7H), 7,77-7,89 (m, 2H), 8,42-8,67 (m, IH). Analytická HPLC (kolona kyano) (směs 2 diastereomerů) 15,23, 15,67 minuty. LC-MS (ES ) m/e=481,2 (M+H)
{2-(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-ylkarbamoyl)pyrrolidin-l-yl]-l-methyl-2-oxoethyljamid isochinolin-l-karboxylové kyseliny (85)
Sloučenina se připraví ze sloučeniny 75 a 1-isochinolinkarboxylové kyseliny podle postupu popsaného pro přípravu sloučeniny 76. Získá se 732 mg (Výtěžek 53) sloučeniny uvedené v názvu.
'H-NMR (500MHz, deuteromethanol) δ 1,22-1,56 (m, 3H), 1,70-2,34 (m, 4H),
2,43-2,7 (m, 0,9H), 2,73-2,89 (m, 0,5H), 3,06 (ddd, 0,6H), 3,42-3,81 (m, 2H), 3.84-4,01
- 84 CZ 302281 B6 (m, 1H), 4,29-5,00 (m, 5H), 5,47 (d, 0,65H), 5,55 (s, 0,3H), 5,67 (d, 0,8H), 5,72 (d, 0,25H), 7,21-7,43 (m, 5H), 7,49-7,83 (m, 2,8H), 7,88-8,04 (m, 1,8H), 8,45-8,54 (m, 0,8H), 8,97-9,06
(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)-amid l-[2-(4-AmÍno-5-chlor-2-methoxybenzoylamino)propionyl]pyrrolidin-2-karboxylove kyseliny (86)
Sloučenina se připraví ze sloučeniny 75 a 4-amino-5-chlor-2-methoxybenzoové kyseliny podle io postupu popsaného pro přípravu sloučeniny 76. Získá se 330 mg (výtěžek 61 %) sloučeniny uvedené v názvu. ‘H-NMR (500MHz, deuteromethanol) δ 1,22 (d, 0,25H), 1,29-1,50 (m, 0,75H),
1,68-2,36 (m, 4H), 2,38-2,89 (m, 1,5H), 2,94-3,14 (m, 0,5H), 3,37-3,98 (m, 6H), 4,27-4,98 (m, 6H), 5,44-5,50 (m, 0,4H), 5,53-5,56 (s, 0,lH), 5,60-5,75 (m, 0,5H), 6,50 (s, 1H), 7,17-7,45 (m, 4H), 7,73-7,90 (m, 1H), 8,49-8,70 (m, 1H). Analytická HPLC (kolona kyano) (směs 2 diastereo-
(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amid l-[2~(4-acetylamÍno-5-chlor-2-methoxybenzoylamino)propionyl]pyrrolidin-2-karboxylové kyseliny (87)
Sloučenina se připraví ze sloučeniny 75 a 4-acetylamino-5-chlor-2-methoxybenzoové kyseliny podle postupu popsaného pro přípravu sloučeniny 76. Získá se 364 mg (výtěžek 74 %) sloučeniny uvedené v názvu. ‘H-NMR (500MHz, deuteromethanol) δ 1,20-1,27 (m, 0,25), 1,35—1,49 (m, 0,75H), 1,72-2,30 (m, 4H), 2,23 (s, 3H), 2,42-2,58 (m, 0,6H), 2,59-2,68 (m, 0,5H), 2,73-2,86 (m, 0,7H), 2,99-3,11 (m, 0,7), 3,41-4,07 (m 5H), 4,29-4,97 (m, 5H), 4,79-5,56 (m, 0,5H), 5,6525 5,73 (m, 0,5H), 7,18-7,44 (m, 4,3H), 7,90-8,09 (m, 2H), 8,71-8,85 (m, 0,7H). Analytická HPLC (kolona kyano) (směs 2 diastereomerů) 15,61, 16,01 minuty. LC-MS (ES+) m/e = 601,l(M+H).
{2-[2-(2-benzy loxy-5-oxotetrahydro-furan-3 -y 1 karbamoy l)-pyrrol i di η-1 -y 1]-1 -methy 1-2oxoethyljamid pyridin-2-karboxylové kyseliny (88)
Sloučenina se připraví ze sloučeniny 75 a pyridin-2-karboxylové kyseliny podle postupu popsaného pro přípravu sloučeniny 76. Získá se 233 mg (výtěžek 42 %) sloučeniny uvedené v názvu. 'H-NMR (500MHz, deuteromethanol) δ 1,30-1,59 (m, 3H), 1,68-2,36 (m, 4H), 2,39-2,57 (m, 0,6H), 2,57-2,69 (m, 0,35H), 2,71-2,87 (m, 0,4H), 3,05 (dd, 0,65H), 3,39-3,93 (m, 3H), 4,244,99 (m, 5H), 5,49-5,55 (m, 0,8H), 5,63-5,77 (m, 1,2H), 7,17-7,46 (m, 5H), 7,49-7,60 (m, 1H),
-85CZ 302281 B6
7,89-7,99 (m, IH), 8,03-8,12 (m, IH), 8,58-8,67 (m, IH). Analytická HPLC (kolona kyano) (směs 2 diastereomeró) 8,63 min. LC-MS (ES') m/e-481,3 (M+H).
(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)-amidl l-[2-(4-amino-3,5-dichlorbenzoylamino)5 propionylJpyrrolÍdin-2-karboxylové kyseliny (89)
Sloučenina se připraví ze sloučeniny 75 a 3,5-dichlor—4-aminobenzoové kyseliny podle postupu popsaného pro přípravu sloučeniny 76. Získá se 162 mg (70 %) sloučeniny uvedené v názvu. 'H-NMR (500MHz, deuteromethanol) 0 1,21-1,58 (m, 3H), 1,58-2,37 (m, IH), 2,37-3,13 io (m, 2H), 3,43-3,74 (m, l,5H), 3,77-3,94 (m, IH), 4,28^1,51 (m, 1,5H), 4,50-5,01 (m, 3H),
5,41-5,77 (m, IH), 7,15-7,49 (m, 5H), 7,66-7,88 (m, 2H). Analytická HPLC (kolona kyano) (směs 2 diastereomerů) 8,36 min. LCMS (ES ) m/e=563,2 (M+H).
(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)-amid 1-[2-(4-methoxybenzoylamino)propionyl]15 pyrrolidin-2-karboxylové kyseliny (90)
Sloučenina se připraví ze sloučeniny 75 a 4-methoxy-benzoytchloridu podle postupu použití pro přípravu sloučeniny 76. Získá se 404 mg (50%) sloučeniny uvedené v názvu. ’Η-NMR (500MHz, deuteromethanol) δ 1,19 (d, 0,3H), 1,29-1,58 (m, 2,7H), 1,58-2,38 (m, 4H), 2,43-2,69 (m, IH), 2,74-2,86 (m, 0,6H), 2,99-3,11 (m, 0,4H), 3,39-3,75 (m, 1,5H), 3,77-3,94 (m, IH),
3,84 (s, 3H), 4,29-4,94 (m, 4,5H), 5,45-5,55 (m, 4,5H), 5,63-5,71 (m, 0,5H), 5,73 (d, 0,lH), 6,85-7,09 (m, 2H), 7,19-7,44 (m, 4H), 7,73-7,92 (m, 2H), 8,26-8,44 (m, IH). Analytická HPLC (kolona kyano) (směs 2 diastereomerů) 15,18, 15,65 min. LC-MS (ES') m/e-510,2 (M+H).
(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amid l-(2-[(9-oxo-9H-fluoren-4-karbonyl)amino]propionyl}pyrrolidin-2-karboxylové kyseliny (91)
Sloučenina se připraví ze sloučeniny 15 a 9-oxo-9H-fluorenkarboxylové kyseliny podle postupu popsaného pro přípravu sloučeniny 76. Získá se 403 mg (44 %) sloučeniny uvedené v názvu.
'H-NMR (500MHz, deuterochloroform) δ 1,38-1,59 (m, 3H), 1,75-2,37 (m, 4H), 2,43-2,59 (m, 0,65H), 2,59-2,72 (m, 0,35H), 2,79-2,89 (m, 0,35H), 3,01-3,11 (m, 0,65H), 3,68-3,86 (m, IH), 3.92-4,09 (m, IH), 4,35-5,03 (m, 7H), 5,42-5,90 (m, IH), 7,06-8,00 (tn, 12H). Analytická HPLC (kolona kyano) (směs 2 diastereomerů) 12,30 min. LC-MS (ES+) m/e=582,l (M+H).
- 86 CZ 302281 B6
(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)-amid l-[2-(3,5-dichlor-4-methoxybenzoy lamino)propionyl]pyrroIidin-2-karboxylové kyseliny (92)
Sloučenina se připraví ze sloučeniny 75 a 3,5-dichlor-4_methoxybenzoové kyseliny podle postupu popsaného pro přípravu sloučeniny 76. Získá se 364 mg (46 %) sloučeniny uvedené v názvu. 'H-NMR (500MHz, deuteromethanol) δ 1,17 (d, 0,25H), 1,28-1,53 (m, 2,751-1), 1,64-2,33 (m, 4H), 2,39-2,94 (m, 1,5H), 2,94-3,12 (m, 0,5H), 3,41-3,74 (m, 2H), 3,74-4,00 (m, IH), 3,91 (s, 3H), 4,26-5,02 (m, 5H), 5,42-5,81 (m, IH), 7,08 (d, 0,4H), 7,21-7,43 (m, 4,6H), 7,53-7,69 io (m, 0,8H), 7,85-7,97 (m, 1,2H). Analytická HPLC (kolona kyano) (směs 2 diastereomerů)
10,79 min. LC-MS (ESf) m/e-578,2 (M+H).
(93) {2-(2-benzy loxy-5-oxotetrahydrofuran-3-ylkarbamoyl)-pyiTolidin-1 —y 1]—1 -methyl-2~oxoethyljamid chinolin-6-karboxylové kyseliny (93)
Sloučenina se připraví ze sloučeniny 75 a 6-chinolinkarboxylové kyseliny podle postupu popsaného pro přípravu sloučeniny 76. Získá se 344 mg (71 %) sloučeniny uvedené v názvu. 'H-NMR (500MHz, deuteromethanol) δ 1,11-1,58 (m, 3H), 1,69-2,40 (m, 4H), 2,42-3,11 (m, 2H), 3,804,01 (m, IH), 4,29-4,99 (m, 5H), 5,44-5,54 (m, 0,5H), 5,63-5,73 (d, 0,4H), 5,73-5,79 (d, 0,1H),
7,18-7,43 (m, 5H), 7,56-7,67 (m, IH), 8,08 (d, IH), 8,13-8,25 (m, IH), 8,40-8,56 (m, 2H),
8,88-8,99 (m, IH). Analytická HPLC (kolona kyano) (směs 2 diastereomerů) 10,27, 10,50 min. LC-MS (ES+) m/e-531,2 (M+H).
-87CZ 302281 B6
Schéma XVII o
(94) co2h
terc-butylester l-(2-benzyloxykarbonylaminopropionyl)pyrTolidin-2-karboxylové kyseliny (95)
Sloučenina se’ připraví podle postupu pospaného v Pierre Chevallet, Patrick Garrouste, Barbara Malawaska & Jean Martinez, Tetrahedron Letters, Vol. 34, str. 74097412, (1993). Směs 10,0g (31,2 mmol) Cbz-ala-pro-OH, 180 g (1,31 mol) terc.butylbromidu, 7,11 g (31,2 mmol) benzyltriethylamoniumchloridu a 180 g (1,30 mol) uhličitanu draselného a 225 ml N,N-dimethylacetamidu (DMA) se míchá 24 hodin při teplotě 55 °C. Reakční směs se ochladí na teplotu místnosti io a. zředí se I litrem ledové vody, extrahuje se třikrát 200 ml ethylacetátu. Organická vrstva se suší nad bezvodým síranem sodným, filtruje se a odpaří se ve vakuu za získání 14 g oleje, který se čistí pomocí velmi rychlé chromatografie za použití směsi hexanu a ethylacetátu 95/5 až 50/50. Získá se 11,73 g (výtěžek 99,7 %) sloučeniny uvedené v názvu ve formě čirého oleje. 'H—NMR (500 MHz, deuterochloroform): δ 1,25-1,50 (m, I2H), 1,85-2,25 (m, 4H), 3,42-3,70 (m, 2H),
4,25-4,57 (m, 2H), 5,07-5,11 (m, 2H), 5,69 (d, H), 7,28-7,38 (m, 5H); retenční čas analytické
HPLC: 11,07 min; LC-MS: m/z = 377 (M+H+).
(96a) X=Cí, Y-NHj, (96b)X=CI, Y^AcNH, Z=H (96c)X“CI, Y=AcNH. 2<H2O
(97a) X=CI, Y=NH?. Z=H (97b)X-Ct, Y=AcNH, Z=H (97c)X=CI. Y=AcNH. Z=CH3O terc-butylester l-[2-(4-amino-3-<hlorbenzoylamino)propionyl]pyrrolidin-2-karboxylové kyseliny (96a)
K 10,50 g (27,9 mmol) roztoku sloučeniny 95 v 100 ml methanolu se přidá suspenze 5,00 g 10% palladia na uhlí v 50 ml ethylacetátu. Reakční směs se míchá 48 hodin ve vodíkové atmosféře, filtruje se přes křemelinu a rozpouštědlo se odpaří a získá se voskovitá pevná látka. Ta se rozpustí ve 100 ml dichlormethanu a 50 ml dimethylformamidu a roztok se ochladí na 0 °C. Přidá se 5,82 g (27,2 mmol) 4-amino_3-chlorbenzoové kyseliny, 14,58ml (83,7 mmol) DIEA, 3,77 g (27,9 mmol) HOBT a 6,68 g (34,8 mmol) EDC a roztok se míchá 15 minut při 0 °C, potom ιο 24 hodin při teplotě místnosti. Reakční směs se zředí ethylacetátem, promyje se dvakrát hydrogensíranem sodným, dvakrát 10% roztokem hydrogenuhličitanu sodného a solankou, potom se suší nad síranem horečnatým, filtruje a odpaří. Surový produkt se čistí pomocí velmi rychlé kolonové chromatografie za použití směsi dichlormethanu a methanolu (99/1 až 97/3 %) a získá se
7,75 g (70 %) sloučeniny uvedené v názvu. 'H-NMR (500MHz, deuteromethanol), δ 1,27-1,67 (m, 12H), 1,82-2,14 (m, 4H), 3,48-3,85 (m,2H), 4,26-4,53 (m, 3H), 4,81-1,98 (m, 1H), 6,71 (d,
1H), 7,15 (m, 1H), 7,50 (dd, 1H), 7,75 (d, 1H). Analytická HPLC 10,83 min. LC-MS (ES+) m/e=396,3 (MH+).
-[2-(4-Amino-3-chlorbenzoylamino)propionyI]pyrro!idin-2-karboxylová kyselina (97a)
Sloučenina se připraví ze sloučeniny 96a reakcí s kyselinou trifluoroctovou v dichlormethanu. Po dokončení reakce se rozpouštědlo odpaří ve vakuu a zbytek se opakovaně odpaří z toluenu. Získaný zbytek se suší ve vakuu do konstantní hmotnosti.
terc-butylester l-[2-(4-acetylamino-3-chlorbenzoylamino)-propionyl]pyrrolidin-2-karboxylové kyseliny (96b)
Sloučenina se připraví ze sloučeniny 95 a 4-acety lamino-3-chlorbenzoové kyseliny za použití způsobu popsaného pro přípravu sloučeniny 96a. Získá se 9,18 g (77%) sloučeniny uvedené vnázvu.'H-NMR (500MHz, deuteromethanol) δ 1,30-1,62 (m, 12H), 1,85-2,16 (m, 3H), 2,16-2,44 (m, 1H), 2,27 (s, 3H), 3,47-3,83 (m, 2H), 4,34-4,54 (m, 1H), 4,89 (m, 1H), 7,27-7.39 (m, 1H), 7,59-7,71 (m, 2H), 7,83-7,97 (m, 1H), 8,47 (d, 1H). Analytická HPLC 9,43 min.
1- [2-(4-Acetylmino-3-chlorbenzoylamino)propionyl]pyrrolidin-2-karboxyIová kyselina (97b)
Sloučenina se připraví ze sloučeniny 96b pomocí reakce s kyselinou trifluoroctovou v dichlormethanu. Po ukončení reakce se rozpouštědlo odpaří ve vakuu a zbytek se opakovaně odpaří z toluenu. Získaný zbytek se suší ve vakuu do konstantní hmotnosti.
4-Acety lam i no-5-chlor-2-methoxy benzoová kyselina
2,09 g (8,11 mmol) methylesteru 4-acetylamino-5-chlor-2-methoxybenzoové kyseliny se rozpustí v 110 ml methanolu a přidá se 25,48 mmol hydroxidu lithného rozpuštěného v 30 ml směsi methanolu a vody 1:1a roztok se míchá 6 hodin při teplotě místnosti. Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu, přidá se ethylacetát a organická fáze se promyje 0,5N roztokem kyseliny chlorovodíkové a potom se dvakrát extrahuje nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného. Vodná fáze se okyselí 12N roztokem kyseliny chlorovodíkové na pH 1 a vyloučená sraženina se extrahuje do dichlormethanu. Spojené extrakty se suší nad bezvodým síranem sodným, filtrují se a odpaří se za získání 0,933 g (výtěžek 50%) sloučeniny uvedené v názvu. 'H-NMR (500MHz, deutero50 chloroform) δ 2,31 (s, 3H), 4,10 (s, 3H), 7,78-7,92 (šs, 1H), 8,17 (s, 1H), 8,45 (s, 1H). Analytická HPLC 5,62 min.
terc-butylester 1—[2—(4—acetylamino-5-chlor-2-methoxy-benzoylamino)propionyl]pyrrolidin2- karboxylové kyseliny (96c)
-89CZ 302281 B6
K roztoku 1,534 g (4,07 mmol) sloučeniny 95 v 40 ml methanolu se přidá 650 mg 10% palladia na ulili a směs se míchá 2 hodiny ve vodíkové atmosféře. Suspenze se filtruje přes křemelinu a získá se žlutý olej. Ten se nechá reagovat s 4-acetyl-5-chlor-2-methoxybenzoovou kyselinou podle postupu popsaného pro přípravu sloučeniny 96a a získá se 497 mg (výtěžek 52 %) slouče? niny uvedené v názvu. 'H-NMR (500MHz, deuteromethanol) 6 1,46 (d, 3H), 1,49 (s, 9H), 1,802,01 (m, 311), 2,19-2,40 (m, 1H), 2,22 (s, 3H), 3,58-3,72 (m, 1H), 3,78-3,89 (m, I H), 3.98 4.09 (s, 3 H), 4,31-4,45 (s, 1H), 4,78-4,95 (m, 1H), 7,89-8,10 (m, 2H). Analytická HPLC 11,31 min.
l-[2-(4-Aeety lam ino-5-chlor-2-methoxybenzoy lam Íno)propiony l]py rrolidin-2-karboxylová i» kyselina (97c)
Sloučenina se připraví ze sloučeniny 96c pomocí reakce s kyselinou trifluoroctovou v dichlormethanu. Po dokončení reakce se rozpouštědlo odpaří ve vakuu a zbytek se opakovaně odpaří z toluenu. Získaný zbytek se suší ve vakuu do konstantní hmotnosti.
(5“Oxo-2-fenetbyloxytetrahydrofuran-3-yl)-amid l-[2 (4 amino-3-chlorbenz.oylamino)propionyl]pyrrolidin-2-karboxylové kyseliny (98a)
K roztoku 194 mg (0,54 mmol) allylesteru (5-oxo-2—fenethyloxytetrahydrofuran-3-y1)karbamo2o vé kyseliny (připraveného podle postupu použitého pro přípravu sloučeniny 40 za použití fenethylalkoholu) v 5 ml dichlormethanďse při 0 °C přidá 196 mg (1,26 mmol) DMBA a 32 mg (0,03 mmol) Pd(PPh3)4. Roztok se míchá 15 minut a přidá se roztok 166 mg (0,49 mmol) sloučeniny 97a (připravené ze sloučeniny 96a reakcí s kyselinou trifluoroctovou v dichlormethanu) a 680 μΐ (3,90 mmol) ve 2 ml dichlormethanu s potom 98 mg (0,73 mmol) HOBT a 122 mg (0,63 mmol) EDC. Roztok se míchá 15 minut při 0 °C, potom 18 hodin při teplotě místnosti.
Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu a zbytek se rozpustí v ethylacetátu a dvakrát se promyje 0,5N roztokem hydrogensíranu sodného, dvakrát, nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a solankou. Suší se nad bezvodým síranem sodný a odpaří za získání oranžové pevné látky, která se čistí pomocí velmi rychlé kolonové ehromatografle za použití směsi dichlormethanu a metha3o nolu (99/1 až 97/3 %) jako eluentu a získá se 190 mg (73 %) sloučeniny uvedené v názvu ve formě bílé pevné látky. 'H-NMR (500MHz, deuteromethanol) δ 1,29 (d, 0,6H), 1,41 (d, 2,4H), 1,78 (m, 1H), 2,08 (m, 3H), 2,56 (m, 1H), 2,77 (dd, 1H), 2,94 (t, 2H), 3,53 (m, 0,3H), 3,67 (m, 0.8H), 3,85 (m, 2H), 3,96-4,08 (m, 1H), 4,40 (m, 2H), 4,62 (m, 1H), 4,67-4,79 (m, 1H), 5,57 (d, 0,7H), 5,60 (d, 0,3H), 6,78 (dd, 1H), 7,21 (m, 5H), 7,58 (m, 1H), 7,79 (m, I H), 8,26 (d, 1H).
Analytická HPLC 14,52 min. LC-MS (ESJ m/e=543,2 (MH J.
(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)-amid l-[2-(4-amino-3-chlorbenzoylamino)propionyljpyrrolidin-2-karboxylové kyseliny (98b)
-90CZ 302281 B6
Sloučenina se připraví ze syn diastereomerů allylesteru (2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3yl)karbamové kyseliny (40) a sloučeniny 97a podle způsobu použitého pro přípravu sloučeniny 98a. Izoluje se 720 mg (výtěžek 51 %) sloučeniny uvedené v názvu ve formě světle žluté pevné látky. 'H-NMR (500MHz, deuteromethanol) δ 1,16 (d, 0,5H), 1,40 (d, 2,5H), 1,64-2,25 (m, 4H), 2,61 (dd, 1H), 2,79 (dd, 1H), 3,37-3,59 (m, 1H), 3,59-3,74 (m, 1H), 3,77-3,92 (m, 1H),
4,29-4,47 (m, 1H), 4,47-5,02 (m, 4H), 5,48 (s, 0,5H), 5,66 (d, 1H), 5,68 (d, 0,5H), 6,79 (d, 1H), 7,17-7,52 (m, 5H), 7,48-7,62 (m, 1H), 7,68-7,83 (m, 1H). Analytická HPLC 15,98 min. LC-MS (ES+) m/e=529,2 (MH+).
io (2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)-amid l-[2—(4-amino~3-chlorbenzoylamino)propionyl]pyrrolidin-2-karboxylové kyseliny (98c)
Sloučenina se připraví z allylesteru anti-(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)-karbamové kyseliny (40) a sloučeniny 97a podle způsobu použitého pro přípravu sloučeniny 98a. Izoluje se
186,6 mg (výtěžek 46%) sloučeniny uvedené v názvu ve formě bílé pevné látky. 1 H-NMR (500MHz, deuteromethanol) δ 1,30-1,52 (m, 3H), 1,76-2,33 (m,4H), 2,41-2,59 (m, 1H), 2,90 (dd, 0,15H), 3,04 (dd, 0,85H), 3,44-3,75 (m, 1,5H), 3,82-3,95 (m, 1H), 4,27-4,42 (m, 2H), 4,42-4,56 (m, 0,5H), 4,56-4,86 (m, 4H), 5,42-5,55 (m, 1H), 6,79 (d, 1H), 7,21-7,42 (m, 4,6H), 7,54-7,63 (m, 1,4H), 7,76-7,83 (m, 0,65H), 8,60-8,68 (m, 0,35H). Analytická HPLC 15,19 min.
LC-MS (ES+) m/e=529,3 (MH+).
allylester 2-(ethoxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)karbamové kyseliny
Sloučenina se připraví z terc-butylesteru 3-allyloxykarbonylámino-4-hydroxybutanové kyseliny tak, jak popsáno pro přípravu sloučeniny 40 za použití ethanolu.Po chromatografií za použití směsi hexanu a ethylacetátu (95/5 až 80/20) se získá 0,94 g allylesteru anti-2-(ethoxy~5-oxotetrahydrofuran-3-yl)karbamové kyseliny (vyšší Rf), 1,96 g syn diastereomerů (nižší Rť) a 8,08 g směsi diastereomerů (celkový výtěžek 60 %). 'H-NMR (500 MHz, deuterochloroform) pro anti diastereomer: δ 1,13-1,31 (m, 3H), 2,31-2,45 (m, IH), 2,92-3,08 (m, 1H), 3,52-3,72 (m, IH), 3,78-3,92 (m, IH), 4,10-4,25 (m, IH), 4,45-4,70 (m, 2H), 5,00 (šs, IH), 5,12-5,45 (m, 3H), 5,80-5,95 (m, IH), pro syn diastereomer 1,13-1,35 (m, 3H), 2,38-2,50 (m, IH), 2,75-2,92 (m, IH), 3,60-3,73 (m, IH), 3,82-3,95 (m, IH), 4,4(M,70 (m, 3H), 5,10-5,52 (m, 4H), 5,80-5,94 (m, IH); LC-MS: m/z = 230 (M+H+) pro oba diastereomery.
(2-ethoxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yI)amid l--[2-(4-amino-3-chlorbenzoylamino)propionyl]pyrrolidin-2-karboxylové kyseliny (98d)
Sloučenina se připraví z allylesteru (2-ethoxy~5-oxo-tetrahydrofuran-3-yl)karbamové kyseliny a sloučeniny 97a podle postupu použitého pro přípravu sloučeniny 98a. Izoluje se 175 mg (77 %)
-91 CZ 302281 B6 sloučeniny uvedené v názvu ve formě bílé pevné látky. ‘if-NMR (500MHz, deuteromelhanol) 6 1,13 (t, 0,5H), 1,23 (t, 2,511), 1,36 (d, 0,5H), 1,44 (d, 2.5H), 1,75-2,38 (m, 411), 2,56 (dd, 1 H).
2,76 (dd, 1H), 3,45-3,97 (m, 511), 4,47 (dd, 111), 4,59-4,67 (ni, til), 4,74 (kv, 111), 5,55 (d. 0,211), 5,56 (d, 0,911),6,75-6,82 (m, IH), 7,56 (dd, IH), 7,77 (d, 111), 8,39 (d, IH). Analytická HPLC 8,1 7 min. LC-MS (ES1) m/e=467,4 (MH’).
O
O (98e) allyIester (2 eyklopentylo\y-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)-karbamové kyseliny
Sloučenina se připraví z terc-butylesteru 3-allyloxykarbonylamino-4-hydroxybutanové kyseliny podle postupu, který je popsaný pro přípravu sloučeniny 40 za použití cyklopentanolu. Získá se sloučenina uvedená v názvu ve formě směsi diastereomerů. Po čištění pomocí velmi rychlé kolonové chromatograťíe za použití směsi hexanu a ethylacetátu (90/10-až 80/20 se získá syn diastereomer sloučeniny uvedené v názvu: syn diastereomer ’H NMR (500MHz, deuterochloroform) δ 1,5-2,0 (m, 811), 2,45 (dd, IH), 2,81 (dd, 0,9H), 3,0 (dd, 0,111), 4,31 (m, IH), 4,59 (m, 4H), 5,23 (m, IH), 5,32 (m, 1H), 5,45 (s, O,IH), 5,51 (s, 0,9H), 5,92, (m, 1H) ppm, anti diastereomer 'H-NMR (500 MHz, deuterochloroform) δ 1,50 (m, 2H), 1,67 (m, 6H), 2,36 (d, IH), 2,8 (dd, 0,08H), 2,96 (dd, 0,92H), 4,13 (m, IH), 4,25 (m, IH), 4,55 (š, 2H), 5,20 (d, IH), 5,30 (m, 2H), 5,43 (s, 0,92H), 5,5 (d, 0,08H), 5,89 (s, 1H) ppm.
(2-cyklopentyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amid l-[2-(4-amino-3-chlorbenzoylamÍno)propionyl]pyrrolidin-2-karboxylové kyseliny (98e)
Sloučenina se připraví zallylesteru (2-cyklopentyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)karbamové kyseliny a sloučeniny 97a podle způsobu použitého pro přípravu sloučeniny 98a a získá se 280 mg (51 %) sloučeniny uvedené v názvu. ’Η-NMR (500MHz, deuteromethanol) δ 1,38
allylester (2 cyklohexyloxy-5—oxotetrahydrofuran-3 yl) karbamové kyseliny
Sloučenina se připraví z terc-butylesteru 3-ally loxy karbony lam i no-4-hydroxy butanové kyseliny podle postupu popsaného pro přípravu sloučeniny 40 za použití cyklohexanolu. Získá se 4,62 g (výtěžek 85 %) sloučeniny uvedené v názvu jako směsi diastereomerů ve formě světle žlutého oleje. Po čištění pomocí velmi rychlé kolonové chromatografíe za použití směsi hexanu a ethylacetátu (90/10 až 80/20) jako eluentu se získá 394 mg (výtěžek 7 %) syn diastereomerů sloučeniny uvedené v názvu. ‘H-NMR (500MHz, deuterochloroform) δ 1,11-2,09 (m, 10H),
-92CZ 302281 B6
2,35-2,61 (dd, 1H), 2,72-2,98 (dd, 1H), 3,60-3,83 (m, IH), 4,32-4,72 (m, 3H), 5,06-5,43 (m, 2H), 5,60 (d, IH), 5,82-6,03 (m, IH).
(2-cyklohexyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)-amid l-[2-(4-acetylamino-3-ehlorbenzoyl5 amino)propionyl]pyrrolidin-2-karboxylove kyseliny (98f)
Sloučenina se připraví zallylesteru syn-(2-cyklohexyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)karbamové kyseliny a sloučeniny 97b podle způsobu použitého pro přípravu sloučeniny 98a. Získá se 121 mg (výtěžek 33%) sloučeniny uvedené v názvu. 'H-NMR (500MHz, deuteromethanol) ίο δ 1,06-1,61 (m, 9H), 1,61-2,37 (m, 7H), 2,22 (s, 3H), 2,52-2,81 (m, 2H), 3,49-3,78, (m, 2H),
3,84-3,97 (m, IH), 4.42-4.57 (m, IH), 4,57-4,69 (m, IH), 5,67-5,81 (m, IH),
7,72-7,89 (m, IH), 7,89-8,12 (m, 2H). Analytická HPLC 9,84 min. LC-MS (ES*) m/e-563.3 (MH+).
(2-cyklohexyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)-amid l-[2-(4-amino-3-chlorbenzoylamino)propionyl]pyrrolidin-2-karboxylové kyseliny (98g)
Sloučenina se připraví zallylesteru syn-(2-cyklohexyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)karbamové kyseliny a sloučeniny 97a podle způsobu použitého pro přípravu sloučeniny 98a. Získá se
153 mg (výtěžek 47%) sloučeniny uvedené v názvu. 'H-NMR (500MHz, deuteromethanol) δ 1,06-2,38 (m, 14H), 1,42 (d, 3H), 2,50-2,66 (m, IH), 2,69-2,82 (dd, IH), 3,06-3,75 (m, 2H), 3,80-3,94 (m, IH), 4.40-1,52 (m, IH), 4,57-4,65 (m, IH), 4,70-4,80 (m, IH), 5,72 (d, IH), 6,71 (m, IH), 7,50-7,63 (m, IH), 7,78 (d, 0,6H), 8,42 (d, 0,4H). Analytická HPLC 10,30 min. LC-MS
(2-ethoxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amid l-[2-(4-amino-3-chlorbenzoylamino)propionyl]pyrrolidin-2-karbamové kyseliny (98h)
Sloučenina se připraví z allyIesteru(2-ethoxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)karbamové kyseliny 30 a sloučeniny 97a podle postupu použitého pro přípravu sloučeniny 98a. Izoluje se 195 mg (výtěžek 82 %) sloučeniny uvedené v názvu ve formě bílé pevné látky. 'H-NMR (500MHz, deuteromethanol) δ 1,32-1,55 (m, 3H), 1,58-1,77 (m, 3H), 1,98-2,54 (m, 4H), 2,68-2,76 (d,0,3H),
2,79-2,89 (m, 0,7H), 2,96-3,10 (m, 0,7H), 3,18-3,27 (dd, 0,3H), 3,72—4,18 (m, 4H), 4,46-5,12 (m, 3H), 5,60 (s, 0,4H), 5,74-5,84 (m, 0,6H), 7,03 (d, 0,8H), 7,75-7,86 (m, IH), 8,01 (d, 0,7H),
8,35 (d, 0,3H), 8,74 (d, 0,2H). Analytická HPLC 8,31 min. LC-MS (ES+) m/e = 467,3 (MH+),
-93 CZ 302281 Bó
allylester [5-oxo-2--(tricyklo[3,3,l,lt)lí]dec-2-yloxy)tetrahydrofLiran-3-yl|karbamovó kyseliny Sloučenina se připraví z terc-butylesteru 3-al ly loxykarbony lamino—4-hydroxybutanové kyseliny podle postupu popsaného pro přípravu sloučeniny 40 za použití 6,21 g (5 ekvivalentů)
2-adamantanolu. Získá se 1,52 g (výtěžek 61 %) sloučeniny uvedené v názvu ve formě žlutého oleje. IH NMR (500MHz, deuterochloroform) 6 1,38-2,22 (m, 14H), 2,40 (d, 0,2H), 2,53 (dd, 0,7H), 2,87 (dd, 0,7H), 2,87 (dd, 0,9H), 3,00-3,12 (m, 0,3H), 3,84-3,97 (m, 1H), 4,40-4,71 (m, 3H), 5,18-5,44 (m, 2H), 5,53-5,69 (m, IH), 5,82-6,02 (m, IH).
ιο [5-oxo-2-(tricyklo[3,3,1,10,0 ]dec-2-yloxy)-tetrahydrofuran-3-yl] amid l-[2-(4-amino-3-chlorbenzoylamino)propionyl]pyrrolidin-2-karboxylové,kyseliny (98i)
Sloučenina se připraví zallylesteru [5-oxo-2-(tricyklo [3,3,1,1 l)t)]dec-2-yloxy)tetrahydrofuran3-yl|karbamové kyseliny a sloučeniny 97a podle způsobu použitého pro přípravu sloučeniny 98a.
Izoluje se 76 mg (výtěžek 13%) sloučeniny uvedené v názvu ve formě bílé pevné látky. 'H-NMR (500MHz, deuteromethanol) δ 1,38-2,22 (m, 14H), 2,40 (d, 0,2H), 2,53 (dd, 0,7H), 2,87 (dd, 0,8H), 3,00-3,12 (m, 0,3H), 3,84-3,97 (m, 1H), 4,40-4,71 (m, 3H), 5,18-5,44 (m, 2H), 5,53-5,69 (m, IH), 5,82-6,02 (m, 1H). Analytická HPLC. I 1,89 min. LC-MS (ES+) m/e=573,2 (MH*).
(98j) (2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran,-3-yl)amid l--[2-<4-acety]amino-5 <h]or-2-methoxybenzoylamino)propionyl]-pyrrolidin-2-karboxylové kyseliny (98j)
Sloučenina se připraví z terc.butylesteru syn-{2-{2-(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-ylkarbamoyl)pyrrolidin-l-yl]-l-methyl-2-oxoethyl}karbamové kyseliny a sloučeniny 97c podle postupu použitého pro přípravu sloučeniny 98a. Získá se 222 mg (82 %) sloučeniny uvedené v názvu. 'H-NMR (500MHz, deuteromethanol) 6 1,23 (d, 0,6H), 1,42 (d, 2,4H), 1,72-2,27 (m, 4H), 2,23 (s, 3H), 2,63 (dd, IH), 2,77-2,88 (m, IH), 3,43-3,52 (m, 0,5H), 3,56-3,71 (m, 1,5H), 3,74-3,85 (m, IH), 3,98 (s, 3H), 4,38-4,50 (m, 1,5H), 4,51-4,92 (m, 4,5H), 5,63-5,76 (m, IH), 7,23-7,40 (m, 5H), 7,97 (s, IH), 8,45 (d, IH), 8,69-8,80 (m, IH). Analytická HPLC 11,63 min. LC-MS (ES+) m/e=601,2 (MH*).
-94 CZ 302281 B6
Syntéza (2-ethoxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amidu l-[2-(4-amino-3-chlorbenzoylamino)propionyl]pyrrolidin-2-karboxylové kyseliny (98k)
Sloučenina se připraví zallylesteru anti-(2-ethoxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)karbamové 5 kyseliny a sloučeniny 97a podle postupu použitého pro přípravu sloučeniny 98a. Získá se 175 mg (59%) sloučeniny uvedené v názvu. 'H-NMR (500 MHz, 1:1 deuterochloroform .‘deuteromethanol) δ 1,10-1,28 (m, 3H), 1,42 (d, 0,6H), 1,46 (d, 2,4H), 1,75-2,45 (m, 4H), 2,45-2,70 (m, IH), 2,80-3,05 (m, IH), 3,50-3,95 (m, 4H), 4,20-4,75 (m, 3H), 4,75-4,90 (m, IH), 5,32 (s, 0,8H), 5,38 (s, 0,2H), 6,80 (d, IH), 7,55-7,84 (m, 2H). Analytická HPLC: 10,47 min. LC-MS io (ES): m/e=467,3 (M+H).
Syntéza (2-ethoxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amidu l-[2-(4-amino-3,5-dichlorbenzoylamÍno)propionyl]pyrrolidin-2-karboxylové kyseliny (981)
Sloučenina se připraví zallylesteru (2-ethoxy-5-oxo-tetrahydrofuran-3-yl)karbamové kyseliny a terc-butyl l-[2-(4-amino-3,5-dichlorbenzoylamino)propionyl]pyrrolidin-2-karboxylové kyseliny podle způsobu použitého pro přípravu sloučeniny 98a. Získá se 158 mg (výtěžek 54 %) sloučeniny uvedené v názvu). 1 H-NMR (500 MHz, 1:1 deuterochloroform:deuteromethanol) δ 1,08-1,30 (m, 3H), 1,32-1,52 (m, 3H), 1,72-2,44 (m, 4H), 2,40-3,05 (m, 2H), 3,50-3,97 (m,4H), 4,25-4,70 (m, 3H), 4,70-4,86 (m, IH), 5,33 (s, 0,4H), 5,47 (s, 0,lH), 5,56 (d, 0,4H),
5,62 (d, 0,lH), 7,50 (s, IH), 7,80 (s, IH). Analytická HPLC: 10,84 min. LC-MS (ES): m/e-501,2 (M+H).
(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amid l-[2-(4-amino-3-chlorbenzoylammo)propio25 nyl]pyrrolidin-2-karboxylové kyseliny (98m)
Sloučenina se připraví podle způsobu použitého pro přípravu sloučeniny 98a za použití Cbz-AlaD-pro-OH. Získá se 230 mg (výtěžek 69 %) sloučeniny uvedené v názvu. 'H-NMR (500 MHz, 1:1 deuterochloroform:deuteromethanol) δ 1,30 (d, 1,2H), 1,45 (d, 1,8H), 1,62-2,40 (m, 4H),
2,40-3,10 (m, 2H), 3,30-3,97 (m, 2H), 4,33-4,95 (m, 5H), 5,30 (s, 0,5H), 5,68 (d, 0,5H), 6,80 (d, IH), 7,25-7,95 (m, 7H). Analytická HPLC: 11,56, 11,91 min. LC-MS (ES): m/e=529,2 (M+H).
(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amÍd i-[2-(4-acetylamino-3-chlorbenzoylamino)35 propionyl]pyrrolidin-2-karboxylové kyseliny (98n)
-95 C7. 302281 B6
Sloučenina se připraví ze sloučeniny 97b a allylesteru syn- (2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran3-yl)karbamové kyseliny podle způsobu popsaného pro přípravu sloučeniny 98a. Získá se 210 mg (64%) sloučeniny uvedené v názvu. 'H-NMR (500 MHz, 1:1 deuteroehloroform:deuteromethanol) δ 1,33 (d, 0,611), 1.44 (d, 2.4H), 1,68-2,40 (m, 411), 2,26 (s, 3H), 2,55-3,05 (m, 2H), 3,40-3,90 (m, 2H), 4,20-4,95 (m, 5H), 5,68 (d, 0,8H), 5,84 (d, 0,2H), 7,15-8,30 (m, 8H). Analytická HPLC: 15,67 min. LC-MS (ES'): m/e = 571J (M+H ).
Allylester (2-isopropoxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)karbamové kyseliny io Sloučenina se připraví podle postupu použitého pro přípravu sloučeniny 40 za použití isopropanolu. Získá se 3,80 g (výtěžek 81 %) sloučeniny uvedené v názvu ve formě bezbarvého oleje. 1HNMR (500MHZ, deuterochloroform) δ 1,10-1,35 (m, 6H), 2,32-2,60 (m, I H), 2,82 (dd, 0,5H), 3,02 (dd, 0,5 H), 3.82^4.11 (m, IH), 4.48-4,66 (m, 3H), 5,20-5,36 (m, 2H), 5,54 (dd, 1 H), 5,826,05 (ιη, IH). LC-MS (ES1): m/e = 244,2 (M+H').
(2-Ísopropoxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amid l-[2-(4-amino-3-chlorbenzoylamino)propionyl-3-pyrrolidin-2-karboxylové kyseliny (98o)
Sloučenina se připraví ze sloučeniny 97a a allylesteru (2-isopropoxy-5—oxo-tetrahydrofuran-32o yl)karbamové kyseliny podle postupu použitého pro přípravu sloučeniny 98a. Získá se 200 mg (výtěžek 66%) sloučeniny uvedené v názvu. 'H-NMR (500 MHz, 1:1 deuterochloroform:deuteromethanol) δ 1,05-1,35 (m, 6H), 1,35-1,50 (m, 3H), 1,70-2,45 (m, 4H), 2,45-3,05 (m, 2H), 3,55-4,10 (m, 3H), 4,15-4,88 (m, 4H), 5,48 (s, 0,4H), 5,58 (s, OJH), 5,64 (d, 0,4H), 5,70 (d, OJH), 6,78 (d, IH), 7,58 (d, IH), 7,80 (s, 1 H). Analytická HPLC: 12,19, 12,40 min.
LC-MS (ES): m/e = 581,2 (M+Hj.
(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amid 1-[2-(4-acetylamino-3,5-dichlorbenzoylamino)propionyl]-pyrrolidin-2-karboxylové kyseliny (98p)
Sloučenina se připraví z terc-butylesteru l-[2-(4-acetylamino-3,5-dichlorbenzoylamino)propÍonyl]pynOlidin-2-karboxylové kyseliny a allylesteru syn—(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran3-yl)karbamove kyseliny podle postupu použitého, pro přípravu sloučeniny 98a. Získá se 230 mg (výtěžek 72%) sloučeniny uvedené v názvu. 'H-NMR (500 MHz, 1:1 deuterochloroform:deuteromethanol) δ 1,36 (d, 0,6H), 1,47 (d, 2,4H), 1,68-2,47 (m, 4H), 2,23 (s, 3H), 2,60-3,15 (m,
2H), 3,40-3,90 (m, 2H), 4,15-4,95 (m, 5H), 5,68 (d, 0,8H), 5,84 (d, 0,2H), 7,20-7,98 (m, 7H).
Analytická HPLC: 13,07 min. LC-MS (ES+): m/e = 605J (M+H+).
-96CZ 302281 B6
(2-cyklopentyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amid l-[2-(4-acetylamino-3-chlorbenzoyl· amino)propionyl]pyrrolidin-2-karboxylové kyseliny (98q)
Sloučenina se připraví ze sloučeniny 97b a allylesteru (2-cyklopentyloxy-5-oxotetrahydrofuran3-yl)karbamové kyseliny podle postupu použitého pro přípravu sloučeniny 98a. Získá se 215 mg (69%) sloučeniny uvedené v názvu. ‘H-NMR (500 MHz, 1:1 deuterochloroform:deuteromethanol) δ 1,35-1,90 (m, 11H), 1,90-2,35 (m, 4H), 2,24 (s, 3H), 2,40-3,10 (m, 2H), 3,50-3,95 (m, 3H), 4,15-4,90 (m, 3H), 5,44 (s, 0,55H), 5,56 (s, 0,15H), 5,64 (d, 0,22H), 5,71 (d, 0,08H), io 7,70-8,25 (m, 3H). Analytická HPLC: 12,13 min. LC-MS (ES+): m/e = 549,2 (M+H+).
Syntéza (2-ethoxy-5-oxotetrahydro_furan-3-yl)amid l-[2-(4-acetylamino-3-ehlorbenzoylamino)propionyl]-pyrrolidin_2-karboxylové kyseliny (98r)
Sloučenina se připraví ze sloučeniny 97b a allylesteru syn-(2ethoxy~5-oxotetrahydrofuran-3yl)karbamové kyseliny podle postupu použitého pro přípravu sloučeniny 98a. Získá se 68 mg (24%) sloučeniny uvedené v názvu. 'H-NMR (500 MHz, 1:1, deuterochloroform .•deuteromethanol) δ 1,13 (t, 0,6H), 1,28 (t, 2,4H), 1,38 (d, 0,6H), 1,48 (d, 2,4H), 1,75-2,40 (m, 4H), 2,22 (s, 3H), 2,55-2,88 (m, 2H), 3,50-3,92 (m, 4H), 4,40-4,90 (m, 3H), 5,57 (d, 0,8H), 5,61 (d, 0,2H),
7,60-8,20 (m, 3H). Analytická HPLC: 8,64 min. LC-MS (ES+): m/e = 509,2 (M+H+).
Příprava allylesteru (2-cyklopentylmethoxy-5_oxotetrahydrofuran-3-yl)karbamové kyseliny
Sloučenina se připraví z terc-butylesteru 3-allyloxykarbonylamino-4-hydroxy-butanové kyseli25 ny podle postupu popsaného pro přípravu sloučeniny 40 za použití 6,5 ml (60 mmol) cyklopentylmethanolu. Získá se 2,98 g (celkový výtěžek 52 %) sloučeniny uvedené v názvu ve formě směsi epimerů. Po čištění se získá 0,97 g (výtěžek 17 %) 4(S),5(R) ve formě bezbarvého oleje.
'Η. NMR (500 MHz, deuterochloroform) δ 1,19 (m, 2H), 1,54 (m, 4H), 1,71 (m, 2H), 2,16 (m, 1H), 2,44 (dd, J=17,2, 10,4 Hz, 1H), 2,82 (dd, J-l 7,2, 8,4 Hz, 1H), 3,44 (dd, J=9,3, 7,2 Hz,
1H), 3,71 (dd, J=9,3, 7,2Hz, 1H), 4,57 (m, 3H), 5,32 (m, 3H), 5,41 (d, J=5,2Hz, 1H), 5,91 (ddt, >17,1, 10,4, 5Hz, 1H) ppm. LC-MS (ES+): m/e = 284.
Také se izoluje 0,66 g (výtěžek 11 %) epimemí směsi a 1,35 g (výtěžek 24 %) 4(S),5(S) epimeru ve forměvoskovité pevné látky. *H-NMR (500Hz, deuterochloroform) δ 1,20 (m, 2H), 1,54 (m, 4H), 1,69 (m, 2H), 2,10 (m, 1H), 2,37 (d, J=8,l Hz, 1H), 2,97 (dd, J=18,0, 7,6 Hz, 1H), 3,42
-97C7. 302281 B6 (dd, J=7,3, 1,7 Hz, 111), 3,49 (m, 2H), 3,64 (dd, J-9,0, 7,3 Hz, 1H), 4,19 (š, lil), 4,55 (m, 2H),
5,25 (m, 211), 5,36 (s, 1II), 5,87 (ni, lil) ppm. LC-MS (ES'): m/c=284 (M+ll).
(2-cy klopen tyl methoxy-5 o\o-telrahyd rolu ran-3-yl)--amid 1 -(2-( 4-amino-3-chlorbenzoy 1aniino)propionyl|pyrrolídin-2-karboxylové kyseliny (98s)
Sloučenina se připraví ze sloučeniny 97a a allylesteru syn-(2-cyklopentylmethoxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)karbamové kyseliny podle postupu použitého pro přípravu sloučeniny 98a. Získá se 195 mg (výtěžek 51 %) sloučeniny uvedené v názvu. 1 H-NMR (500 MHz, 1:1 deuteroio chloroform: deuteromethanol) δ 1,15-1,90 (m, 11H), 1,90-2,40 (ni, 5H), 2,55-2,78 (m, 2H),
3,50-3,90 (m. 411), 4,38-4,92 (tn, 3H), 5,53 (d, 0,8H), 5,57 (d, 0,2H), 6,78 (d, IH), 7,50-8,15 (m, 2H). Analytická HPLC: 10,48 min. LC-MS (ES*): m/e - 521,2 (M+H*).
allylester (5-oxo-2-(3-fenylpropoxy)tetrahydrofuran-3-yl)karbamové kyseliny
Sloučenina se připraví z terc-butylesteru 3-allyloxykarbonylamino-4-hydroxybutanové kyseliny podle postupu popsaného pro přípravu sloučeniny 40 za použití 3-ťenylpropanolu. Získá se 1,15 g (výtěžek 32%) sloučeniny uvedené v názvu ve formě bezbarvého oleje. ! H-NMR (500 MHz, deuterochloroform) δ 1,82-2,05 (m, 2H), 2,38 (dd, I H), 2,68 (m, 2H), 2,82 (dd, IH),
3,55-3,65 (m, IH), 3,82-3,92 (m, III), 4,48-4,72 (m, 311), 5,12-5,59 (m, 3H), 5,82-0,03 (m, 1H), 7,11-745 (m, 5H). Analytická HPLC: 9,08 min. LC-MS (ES4): m/e - 320,2 (M+H ).
(5-oxo-2-(3-fenylpropoxyl)tetrahydrofuran-3-yl)amid l-[2-(4-amino-3-chlorbenzoylamino)propionyllpyrrolidin-2-karboxylové kyseliny (98t)
Sloučenina se připraví ze sloučeniny 97b a allylesteru syn (5-oxo-2-(3-fcnylpropoxy)tetrahydrofuran-3-yl)karbamové kyseliny podle postupu použitého pro přípravu sloučeniny 98a. Získá se 200 mg (výtěžek 57%) sloučeniny uvedené v názvu. ‘H-NMR (500 MHz, 1:1 deuterochloroform-.deutcromethanol) δ 1,34 (d, 0,6H), 1,44 (d, 2,4H), 1,75-2,40 (m, 6H), 2,50-2,95 jo (m,4H), 3,47-3,95 (m, 4H), 4,38^4,82 (m, 3H), 5,52 (d, 0,8H), 5,56 (d, 0,211), 6,75-8,25 (m, 8H). Analytická HPLC: 10,79 min. LC-MS (ES ): m/e = 557,2 (M+H).
Syntéza (2-cy klopen ty lmethoxy-5~oxotetrahydrofuran-3-y l)amidu 1 -[2-(4-acetylamino-3chlorbenzoylamino)propionyl]-pyrrolidin-2-karboxylové kyseliny (98u)
Sloučenina se připraví ze sloučeniny 97b a allylesteru syn—(2-cyklopentylmethoxy-5—oxotetrahydrofuran-3-yl)karbamové kyseliny podle postupu popsaného pro přípravu sloučeniny 98a. Získá se 215 mg (výtěžek 67 %) sloučeniny uvedené- v názvu. ‘H-NMR (500 MHz, 1:1 deuterochlorofornrdeuteromethanol) 8 1,38 (d, 0,6H), 1,47 (d, 2,4H), 1,11-1,88 (m, 8H), 1,92-2,40 (m, 5H), 2,24 (s, 3H), 2,53-2,86 (m, 2H), 3,30-3,90 (m, 4H), 4,38-4,89 (m, 3H), 5,53 (d, 0,8H),
5,60 (d, 0,2H), 7,68-8,22 (m, 3H). Analytická HPLC: 9,90 min. LC-MS (ES+): m/e = 563,3 (M+H+).
-98CZ 302281 B6
(5-oxo-2-(3-fenylpropoxyl)tetrahydrofuran-3-yl)amid l-[2-(4-acetylamino-3-chlorbenzoylamino)propionyl]pyrrolidin-2-karboxylové kyseliny (98v)
Sloučenina se připraví z terc-butylesteru l-[2-(4-acetylamino-3-chlorbenzoylamino)propionyI]pyrrolidin-2-karboxylové kyseliny a allylesteru syn-(5-oxo-2-(3-fenylpropoxyl)tetrahydrofuran-3-yl)karbamové kyseliny podle postupu použitého pro přípravu sloučeniny 98a. Získá se 238 mg (výtěžek 75 %) sloučeniny uvedené v názvu. 1 H-NMR (500 MHz, 1:1 deuterochloroform: deuteromethanol) 6 1,33 (d, 0,6H), 1,56 (d, 2,4H), 1,78-2,45 (m, 6H), 2,27 (s, 3H), 2,5310 2,97 (m, 4H), 3,53-3,94 (m, 4H), 4,47-4,86 (m, 3H), 5,53 (d, 0,8H), 5,62 (d, 0,2H), 7,11-8,26 (m, 8H). Analytická HPLC: 10,27 min. LC-MS (EST): m/e = 599,2 (M+H+).
(2-benzyloxy-5-xotetrahydrofuran—3-yl)amid l-[2-(4-amino-3-trifluormethylbenzoylamino)propionyl]pyrrolidin-2-karboxylové kyseliny (98w)
Sloučenina se připraví z terc-butylesteru {2-[2-(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-ylkarbmoyl)pyrroIidin-l-yl]-l-methyl-2-oxoethyl}karbamové kyseliny a 4-amino-3-trifluormethy 1 benzoové kyseliny podle postupu použitého pro přípravu sloučeniny 98a. Získá se 56 mg (výtěžek 48%) sloučeniny uvedené v názvu. ‘H-NMR (500 MHz, 1:1 deuterochloroform:20 deuteromethanol) δ 1,20-1,55 (m, 3H), 1,75-2,50 (m, 4H), 2,50-3,10 (m, 2H), 3,50-4,00 (m, 2H), 4,30-5,00 (m, 5H), 5,42 (s, 0,4H), 5,51 (s, 0,2H), 5,62 (d, 0,3H), 5,78 (d, 0,lH), 6,84 (d, IH), 7,20-8,15 (m, 7H). Analytická HPLC: 14,90, 15,20 min. LC-MS (ES+): m/e = 563,2 (M+H+).
(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amid l-[2-(3-chlor-4-dimethylaminobenzoylamino)propionyl]pyrroIidin-2-karboxylové kyseliny (98x)
Sloučenina se připraví z terc-butylesteru {2-[2-(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-ylkarbmoyl)pyrrolidin-l-yl]-l-methyl-2-oxoethyl}-karbamové kyseliny a 3-chlor~4-dimethyl30 aminobenzoové kyseliny podle postupu pro přípravu sloučeniny 98a. Získá se 82 mg (výtěžek 44%) sloučeniny uvedené v názvu. 1 H-NMR (500 MHz, 1:1 deuterochloroform:deuteromethanol) δ 1,18-1,53 (m, 3H), 1,70-2,40 (m, 4H), 2,55-3,10 (m, 2H), 2,84 (s, 6H), 3,45-3,94 (m, 2H), 4,25-1,95 (m, 5H), 5,46 (s, 0,3H), 5,51 (s, 0,2H), 5,63 (d, 0,4H), 5,73 (d, 0,lH), 7,05 (d, IH), 7,15-7,95 (m, 7H). Analytická HPLC: 11,85, I2,19min. LC-MS (ES+): m/e = 557,3 (M+H+).
-99CZ 302281 B6
(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amid l-[2—(4—dimethyl-annn(>3,5-difliiorbenzoyl· amino)propionyl]pyrrolidin-2-karboxylové kyseliny (98y)
Sloučenina se připraví z terc-butylesteru {2 -[2-(2-benzyloxy--5-oxotetrahydrofuran 3ylkarbamoyl)pyrroIidin-l-y]]-l-methyl-2-oxoethy!}karbamové kyseliny a 4-dimethylamino3,5-dichlorbenzoové kyseliny podle postupu použitého pro přípravu sloučeniny 98a. Získá se 106 mg (výtěžek 65 %) sloučeniny uvedené v názvu). 'H-NMR (500 MHz, 1:1 deuterochloroIbrm-.deuteromethanol) Ó 1,10-1,55 (m, 3H), 1,75-2,30 (m, 4H), 2,45-3,15 (m, 2H), 2,84 (s, 6H), io 3,40-3,95 (in, 2H), 4,15—4,95 (m, 5H), 5,47 (s, 0,35H), 5,54 (s, 0,15H), 5,67 (d, 0,4H), 5,77 (d, 0,1 H), 7,20-7,70 (m, 7H). Analytická HPLC: 12,21, 12,51 min. LC-MS (ES1): m/e = 559,2 (M+H*).
(2 benzyloxy-5-oxotetraliydrofuran-3-yl)amid 1 -[2-{4-amino-2,3,5,6-tctrafluorbenzoylis amino)propionyl]pyrrolidin-2-karboxylové kyseliny (98z)
Sloučenina se připraví z terč butylesteru {2-[2-(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-ylkarbamoyl)pyrrolidin-1-yl]-l-methyl-2-oxoethyl}-karbamové kyseliny a 4-amino-2,3,5,6-tetrafluorbenzoové kyseliny podle postupu popsaného pro přípravu sloučeniny 98a. Získá se 58 mg (výtěžek 73 %) sloučeniny uvedené v názvu, 'H-NMR (500 MHz, 1:1 deuterochloroíbrm:deuteromethanol) δ 1,30-1,50 (m, 3H), 1,62-2,35 (m, 4H), 2,45-3,12 (m, 2H), 3,50-3,90 (m, 2H), 4,20-4,95 (m, 5H), 5,42 (s, 0,4H), 5,52 (s, 0,lH), 5,64 (d, 0,4H), 5,82 (d, 0,lH), 7,257,65 (m, 5H). Analytická HPLC: 16,56, 16,90 min. LC-MS (ES'): m/e = 567,2 (M+H').
(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amid l-{2-[3-chlor-4-(2,2-dimethylpropionylamino)benzoylamino]propionyl}pyrrolidin-2-karboxylové kyseliny (98aa)
K suspenzi 100 mg (0,19 mmol) sloučeniny 98b a 200 mg poly(4-viny(pyridinu) se přidá 70 μΐ (0,57 mmol) pivaloy[chloridu. Získaná suspenze se míchá přes noc při teplotě místnosti, filtruje se a zředí se 25 ml ethylacetátu. Organická vrstva se promyje dvakrát 25 ml 10% vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného, jednou 25 ml nasyceného roztoku chloridu sodného, suší se nad síranem hořečnatým a odpaří se do sucha a získá se 98 mg (výtěžek 85 %) sloučeniny uvedené v názvu. H-NMR. (500 MHz, 1:1 deuterochloroform:deuteromethanol) 6 1,10-1,55 (m, 3H), 1,38 (s, 9H), 1,65-2,40 (m, 4H), 2,60-3,10 (m, 2H), 3,46-3,88 (m, 2H), 4,20-4,95 (m, 5H), 5,62 (d, 0,8H), 5,78 (d, 0,2H), 7,15-8,30 (m, 8H). Analytická HPLC: 11,82 min. LC-MS (ES+):
m/e -613,2 (M+H>
-100CZ 302281 B6
(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amid l-[2-(3-chlor-4-propionylamino)benzoylamino)propionyl]pyrrolidin-2-karboxylové kyseliny (98ab)
Sloučenina se připraví ze sloučeniny 98b a propionylehloridu podle postupu popsaného pro přípravu sloučeniny 98aa. Získá se 104 mg (95%) sloučeniny uvedené v názvu. 'H-NMR (500 MHz, 1:1 deuterochloroform:deuteromethanol) 5 1,16 (t, 0,6H), 1,18 (d, 0,6H), 1,27 (t, 2,4H), 1,38 (d, 2,4H), 1,72-2,35 (m, 4H), 2,45-2,58 (m, 2H), 2,58-3,05 (m, 2H), 3,45-3,85 (m, 2H), 4,20—4,88 (m, 5H), 5,64 (d, 0,8H), 5,76 (d, 0,2H), 7,20-8,35 (m, 8H). Analytická io HPLC: 5,89 min. LC-MS (ES+): m/e (M+H+).
(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amid l-[2-(3-chlor-4-fenylacetylamino)benzoylamino)propionyl]-pyrrolidin-2-karboxylové kyseliny (98ac)
Sloučenina se připraví ze sloučeniny 98b a fenylacetylehloridu podle postupu popsaného pro přípravu sloučeniny 98aa. Získá se 85 mg (77 %) sloučeniny uvedené v názvu. 'H-NMR (500 MHz, 1:1 deuterochloroform:deuteromethanol) 5 1,18 (d, 0,6H), 1,40 (d, 2,4H), 1,72-2,38 (m, 4H), 2,58-3,05 (m, 2H), 3,46-3,78 (m, 2H), 3,85 (s, 2H), 4,18-4,92 (m, 5H), 5,63 (d, 0,8H), 5,75 (d, 0,2H), 7,15-8,34 (m, 13H); Analytická HPLC: 11,63 min. LC-MS (ES+): m/e = 647,2 (M+H+).
(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amide l-[2-(3-chlor-4—methylbutyrylamino)benzoylamino)propionyl]-pyrrolídin-2-karboxylové kyseliny (98ad)
Sloučenina se připraví ze sloučeniny 98 b a isovalery leh loridu podle postupu popsaného pro přípravu sloučeniny 98aa. Získá se 60 mg (58 %) sloučeniny uvedené v názvu. 'H-NMR (500 MHz, 1:1 deuterochloroform:deuteromethanol) 5 1,07 (d, 5H), 1,15 (d, 0,5H), 1,27 (d, 1H), 1,45 (d, 2,2H), 1,67-2,30 (m, 5H), 2,34 (d, 2H), 2,58-3,05 (m, 2H), 3,48-3,88 (m, 2H), 4,10-4,98 (m, 5H), 5,68 (d, 0,7H), 5,78 (m, 0,3H), 7,18-8,33 (m, 8H) Analytická HPLC:
10,74 min. LC-MS (ES+): m/e = 613,2 (M+H+).
- 101 (2-ethoxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amid l-[2-(4-Methoxy-3,5-dimethylbenzoylamino)propionyl|pyrrolidin-2-karboxylové kyseliny (98ae)
Sloučenina se připraví z terc-buty l esteru 1 -[2-(4-methoxy-3,5-d i methyl benzoy lamí no)propio5 nyl]pyrrolidin-2-karboxylové kyseliny a allylesteru svn (2 cthoxv 5 oxotetrahydrofuran 3 yl)karbamové kyseliny podle postupu použitého pro přípravu sloučeniny 98a. Získá se I 74 mg (výtěžek 81 %) sloučeniny uvedené v názvu. 'H-NMR (500 MHz, deuterochloroform): 1,04 (t, 0.45 H), 1,27 (t, 2,55H), 1,34-1,45 (m, 3H), 1,95-2,45 (m, 1 OH), 2,78-2,84 (m, H), 3,60-3,90 (m, 8H), 4,50-4,70 (m, 2H), 4,90-4,94 (m, H), 5,45 (d, 0,85H), 5,61 (d, 0,l5H), 6,99 (d, H), 7,15 (d, io H), 7,45 (s, 211); retenční čas při analytické HPLC: 10,09 min; LC-MS: m/z - 476 (M+H ).
(2-ethoxy-5-oxotetrahydroťuran-3-yl)amid 1-[2-(4-methoxy-3,5-dimethylbenzoy lamino)propionyl]pyrrolidin-2-karboxylové kyseliny (98af)
Sloučenina se připraví z terc-buty 1 esteru l-[2-(4-methoxy-3,5“dimethylbenzoytamÍno)propionylJ-pyrrolidin-2-karboxylové kyseliny a allylesteru anti-(2-ethoxy-5-oxotetrahydrofuran-3yl)karbamové kyseliny podle postupu použitého pro přípravu sloučeniny 98a. Získá se 168 mg (výtěžek 77%) sloučeniny uvedené v názvu. 'H-NMR (500 MHz, deuterochloroform): δ 1,101,35 (m, 3H), 1,35-1,60 (m, 3H), 1,90-2,45 (m, 10H), 2,60-3,00 (m, H), 3,55-3,95 (m, 8H), ?o 4.15 4.60 (m, 2H), 4,83-5,00 (m, H), 5,29 (s, H), 6,95-7,06 (m, H), 7.50 (s, 2H), 7,92 (d, H); retenční čas při analytické HPLC: 10,14 min; LC-MS: m/z = 476 (M+H ).
(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amid l-[2-(4-methoxy-3,5-dÍmethylbenzoylamino)propionyl]pyrrolidin-2-karboxylové kyseliny (98ag)
Sloučenina se připraví z tere-buty 1 esteru l-[2-(4-inethoxy-3,5-dimethylbenzoylamino)propionyl]pyrrolidin-2-karboxylové kyseliny a allylesteru syn-(2-benzytoxy-5—oxotetrahydrofuran3yl)karbamovč kyseliny podle postupu použitého pro přípravu sloučeniny 98a. Získá se 406 mg (výtěžek 71 %) sloučeniny uvedené v názvu. 'H-NMR (500MHz, deuterochloroform): δ 1,09 (d,
0,6H), 1,35 (m, 2,4H), 1,90-2,20 (tn, 3H), 2,22-2,50 (m, 10H), 2,84-2,90 (m, H), 3,52-3,62 (m, l,6H), 3,65-3,80 (m, 3,4H), 4,104,40 (m, H), 4,50-4,75 (m, 3H), 4,82-4,95 (m,2H), 5,54 (d, 0,8H), 5,80 (d, 0,2H), 6,87 (d, H), 7,10-7,40 (m, 6H), 7,45 (s, 2H); retenční čas při analytické HPLC: 16,71 min1; LC-MS: m/z = 538 (M+H+).
(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amid 1 -[2-(4-al lyloxy-3,5-d i methyl benzoy lamino)propionyl]pyrrolidin-2-karboxylové kyseliny (98ah)
- 102 CZ 302281 B6
Sloučenina se připraví z terc-butylesteru l-[2-(4-allyloxy-3,5-dimethylbenzoylamino)propionyl]pyrrolidin-2-karboxylové kyseliny a sloučeniny 40 podle postupu použitého pro přípravu sloučeniny 98a. Získá se 264 mg (výtěžek 46 %) sloučeniny uvedené v názvu. 1 H-NMR (500 MHz, deuterochloroform): δ 1,09-1,43 (m, 3H), 1,90-2,20 (m, 3H), 2,20-2,38 (m, 7H), 2,38-2,52 (m, H), 2,80-2,95 (m, H), 3,52-3,67 (m, H), 3,70-3,80 (m, H), 4,10-4,40 (m, 2H), 4,40-4,95 (m, 5H), 5,26-5,55 (m, 3H), 6,00-6,14 (m, H), 6,87 (d, H), 7,10-7,70 (m, 8H); retenční čas při analytické HPLC: 18,56 a 18,92 min1; LC-MS: m/z = 564 (M+FT)·
ailylester {2-[ 1 R-(2S-isopropyl-5R-methyIcyklohexyIoxy)]-5-oxotetrahydrofuran-3-yI}karbamové kyseliny
Sloučenina se připraví z terc-butylesteru 3-allyloxykarbonylamino-4—hydroxybutanové kyseliny podle postupu použitého pro přípravu sloučeniny 40 za použití (lR,2S,5R)-(-)-mentholu. Získá se 0,32 g syn diastereomerů (nižší Rf) sloučeniny uvedené v názvu a 4,25 g směsi anti/syn diastereomerů (celkový výtěžek 67 %). ’Η-NMR (500MHz, deuterochloroform) směs: δ 0,701,05 (m, 13H), 1,20-1,47 (m, 2H), 1,60-1,80 (m, 2H), 1,94-2,20 (m, 2H), 2,35-2,50 (m, H), 2,82-3,04 (m, H), 3,40-3,61 (m, H), 4,43^1,70 (m, 3H), 5,15-5,35 (m, 2H), 5,48-5,61 (m, H), 5,90-5,94 (m, H), pro syn diastereomer 0,70-1,05 (m, 13H), 1,20-1,47 (m, 2H), 1,60-1,80 (m, 2H), 1,94-2,18 (m, 2H), 2,40-2,50 (m, H), 2,82-2,92 (m, H), 3,54-3,61 (m, H), 4,45^1,70 (m, 3H), 5,18-5,35 (m, 2H), 5,58-5,61 (m, H), 5,90-5,93 (m, H); LC-MS: m/z-340 (M+H+) pro směs anti/syn diastereomerů.
4-Benzyloxy-3,5-dimethylbenzoová kyselina
Sloučenina se připraví podle způsobu popsaného pro přípravu 4-allyloxy-3,5-di methy lbenzoové kyseliny. Získá se 2,43 g (56 %) sloučeniny uvedené v názvu. 'H-NMR (500 MHz, deuterochloroform): δ 4,87 (s, 2H), 7,36-7,48 (m, 5H), 7,92 (s, 2H); LC-MS: m/z = 255 (M-H+).
{2-[lR-{2S-isopropyl-5R-methylcyklohexyloxy)]-5-oxotetrahydrofuran-3~yl}-amid 1-(2-(4benzyloxy-3,5-dimethylbenzoylamino)propionyl]-pyrrolidin-2-karboxylové kyseliny (98at)
Sloučenina se připraví z terc-butylesteru l-[2-(4-benzyloxy-3,5-dimethylbenzoylamino)propionyljpyrrolidin^-karboxylové kyseliny a allylesteru {2-[lR-(2S-isopropyl-5R-tnethylcyklohexyloxy)]-5-oxotetrahydrofuran-3-yl}karbamové kyseliny podle postupu popsaného pro přípravu sloučeniny 98a. Získá se 130 mg (výtěžek 39%) sloučeniny uvedené v názvu. ’Η-NMR (500 MHz, deuterochloroform): δ 0,45-1,10 (m, 12H), 1,15-1,90 (m, 8H), 1,90-2,45 (m, 12H), 2,80-2,84 (m, H), 3,50-3,85 (m, 3H), 4,45-4,70 (m, 2H), 4,80-4,95 (m, 3H), 5,62 (d, H), 7,05 (d, H), 7,17 (d, H), 7,30-7,60 (m, 7H), 7,62-7,75 (m, H); retenční čas při analytické HPLC: 15,90 a 16,08 min; LC-MS: m/z = 662 (M+H+).
-103CZ 302281 B6
{2-( I R-(2S-Ísopropyl-5R-methyl-cyklohexyloxy))-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amid l—J2—(4— hydroxy-3,5-dimethylbenzoylamino)propionylJpyrrolidÍn-2-karboxylové kyseliny (98aj)
Roztok 110 tng (0,17 mmol) {2-[IR-(2S-isopropyl-5R-methylcyklohexyloxy)]-5-oxotetrahydro-furan-3-yl} amidu l-[2-(4-benzyioxy-3,5-dimethylbenzoylamino)propionyl]pyrrolidin2-karboxylové kyseliny ve 2 ml ethylacetátu se míchá s 20 mg 10% palladia na uhlí 24 hodin ve vodíkové atmosféře, potom se filtruje pres křemelinu a odpaří se ve vakuu. Zbytek se čistí pomocí chromatografie za použití směsi dichlormethanu a methanolu (99/1 až 96/4) jako eluentu a získá se 58 mg sloučeniny uvedené v názvu. 'H-NMR (500 MHz, deuterochloroform): 6 0,701,00 (m, 10H), 1,20-1,80 (m, 1 OH), 1,90-2,40 (m, 1 IH), 2,82-2,86 (m, H), 3,57-3,78 (in, 3H), 4.55 4,67 (m, 2H), 4,90 4,94 (m, H), 5,29 (s, H), 5,62 (d, H), 6,90 (d, H), 7,14 (d, H), 7,42, (s, 211); retenční čas při analytické HPLC: 12,84 a 13,05 min; LC-MS: in/z = 572 (M+H).
(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran—3-yl)-amid 1— [2-(4-hydroxy-3,5-dimethylbenzoyl· amino)propionyl]pyirolidin-2-karboxylové kyseliny (98ak)
Roztok 230 mg (0,41 mmol) sloučeniny 98ah v 10 ml dichlormethanu se 20 hodin pří teplotě místnosti reaguje s 65 mg (0,42 mmol) DMBA a 50 mg Pd(PPh3)4. Směs se odpaří ve vakuu do sucha a čistí se pomocí velmi rychlé chromatografie za použití směsi dichlormethanu a methanolu (99,5/0,5 až 97/3) jako eluentu. Získá se 181 mg sloučeniny uvedené v názvu. 'H-NMR (500 MHz, deuterochloroform): δ 1,08 (d, 0,75H), 1,20-1,35 (m, 2,25H), 1,70-2,50 (m, 12H), 2,80-2,90 (m, H), 3,50-3,65 (m, H), 3,70-3,80 (m, H), 4,10-4,25 (m, H), 4.35-4,98 (m, 3H), 5,53 (d, 0,75H), 5,85 (d, 0,25H), 6,81 (d, H), 7,13-7,60 (m, 8H); retenční čas při analytické HPLC: 10,38 a 10,56 min; LC-MS: m/z = 524 (M+Hr).
(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amíd l-[2-(4-dÍmethylaminobenzoylamino)propionyl]pyrrolidin-2-karboxylové kyseliny (98al)
Sloučenina se připraví z terc-butylesteru l-[2-(4-dimethylaminobenzoylamino)propionyl]pyrrolidin—2-karboxylové kyseliny a allylesteru syn—(2-benzyloxy-5—oxotetrahydrofuran—3—yl)karbamové kyseliny podle postupu popsaného pro přípravu sloučeniny 98a. Získá se 60 mg (výtěžek 45%) sloučeniny uvedené v názvu. 'H-NMR (500 MHz, deuterochloroform): δ 1,04
- 104CZ 302281 B6 (d, 0,75H), 1,35 (d, 2,25H), 1,80-2,50 (m, 5H), 2,75-3,20 (m, 8H), 3,45-3,75 (m, 2H), 4,05—4,20 (m, 0,5H), 4,30—4,80 (m, 3,5H), 4,80-4,95 (m, 1,5H), 5,52 (d, H), 5,75-6,00 (m, 0,5H), 6,606,90 (m, 3H), 7,10-7,50 (m, 4H), 7,50-7,80 (m, 2H); retenční čas analytické HPLC: 10,46 min; LC-MS: m/z = 523 (M+H+).
{2R-[ 1 R-(2S-isopropyl-5R-methyl-cyklohexyloxy)]-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amid l-[2(4-amino-3-chlorbenzoylamino)-propionyl]pyrrolidin-2-karboxylové kyseliny (98am)
Sloučenina se připraví z terc-butylesteru l-[2-(4-amÍno-3-chlorbenzoylamino)propionyl]pyrrolidÍn-2-karboxylové kyseliny (97a) a allylesteru syn-{2-[lR-(2S-isopropyl-5R-methylcyklohexyloxy)]-5-oxotetrahydrofuran-3-yl}karbamové kyseliny podle postupu popsaného pro přípravu sloučeniny 98a. Získá se 103 mg (67 %) sloučeniny uvedené v názvu. 'H-NMR (500 MHz, deuterochloroform): δ 0,70-1,10 (m, 12H), 1,20-1,50 (m, 5H), 1,50-1,85 (m, 2H), 1,90-2,30 (m, 5H), 2,75-2,85 (m, H), 3,50-3,70 (m, 2H), 3,70-3,82 (m, H), 4,20-4,65 (m, 4H), 4,80-4,95 (m, H), 5,61 (d, H), 6,70—6,73 (m, H), 6,95 (d, H), 7,15 (d, H), 7,49-7,51 (m, H), 7,73 (s, H); retenční čas při analytické HPLC: 12,88 min; LC-MS: m/z = 577 (M+H+).
allylester {2-[ 1 S-(2R-isopropyl-5S-methylcyklohexyloxy)]-5-oxotetrahydro-furan-3-yl)karbamové kyseliny
Sloučenina se připraví z terc-butylesteru 3-allyloxykarbonylamino-4-hydroxybutanové kyseliny podle postupu popsaného pro přípravu sloučeniny 40 za použití (1S,2R,5S)~(+) -mentholu. Získá se 855 mg anti diastereomerů (vyšší Rf) sloučeniny uvedené v názvu, 503 mg syn diastereomerů (nižší Rf) a 459 mg směsi anti/syn diastereomerů (celkový výtěžek 66 %). 'H-NMR (500 MHz, deuterochloroform) anti diastereotner: 8 0,74—1,00 (m, 12H), 1,20-1,45 (m, 2H), 1,58-1,72 (m, 2H), 1,98-2,12 (m, 2H), 2,18-2,40 (m, H), 2,98-3,03, (m, H), 3,49-3,54 (m, H), 4,17 (š, H), 4,59 (š, 2H), 4,97 (š, H), 5,22-5,33 (m, 2H), 5,58 (s, H), 5,87-5,93 (m, H), pro syn diastereomer 0,75-1,02 (m, I2H), 1,25-1,45 (m, 2H), 1,57-1,70 (m, 2H), 2,00-2,16 (m, 2H), 2,40-2,52 (m, H), 2,78-2,90 (m, H), 3,40-3,50 (m, H), 4,58 (š, 2H), 5,24-5,35 (m, 2H), 5,51-5,52 (d, H), 5,85-5,98 (m, H); LC-MS: m/z = 340 (M+H+) pro oba diastereomery.
{2R-[lS~(2R-isopropyl~5S-methyl~cyklohexyIoxy)]-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amid l-[2(4-amino-3-chlorbenzoylamino)propionyI]pyrrolidin-2-karboxylové kyseliny (98an)
Sloučenina se připraví ze sloučeniny 97a a allylesteru syn-{2-[lS-(2R-isopropyl-5S-methyl· cyk!ohexyloxy)]--5-oxotetrahydrofuran-3-yl}karbamové kyseliny podle postupu použitého pro
-105 Q7. 302281 B6 přípravu sloučeniny 98a. Získá se 88 mg (výtěžek 50 %) sloučeniny uvedené v názvu. 1 H-NMR (500 MHz, deuterochloroform): 80,70-1,10 (m, 12H), 1,20-1,50 (m, I4H), 1,50-1,70 (š, 2H), 1,90-2,25 (m, 4H), 2,27-2,37 (m, H), 2,40-2,50 (m, H), 2,75-2,79 (m, H), 3,35-3,80 (m, 3H), 4,20-4,57 (m. 3H), 4,60-4,70 (m, H), 4,88-4,92 (ni, H), 5,53 (d, II), 6,71-6,75 (m, H), 6,90 (d, H), 7,20 (d, H), 7.50-7,53 (m, H), 7,75 (d, H); retenční čas při analytické HPLC: 13,20 min;
LC-MS: m/z = 577 (M+H’).
allylester (2-cyklohexy1methoxy -5-oxotetrahydrofnran-3-yl)karbamové kyseliny ιο Sloučenina se připraví z terc-butylesteru 3-a I ly loxy karbony lam i no-4-hydroxy butanové kyseliny podle postupu popsaného pro přípravu sloučeniny 40 za použití cyklohexylmethanoiu. Získá se 1,04 g (vyšší Rt) (výtěžek 35 %) anti diastereomerů sloučeniny uvedené v názvu a 1,295 g (nižší Rť) (výtěžek 44%) syn diastereomerů. 'H NMR (500 MHz, deuterochloroform) pro anti diastereomer: δ 0,90-0,96 (m, 2H), 1,10-1,30 (m, 3H), 1,55-1,85 (ni, 6H), 2,37-2,41 (d, H),
2,97-3,03 (m, H), 3,34-3,38 (m, H), 3,58-3,62 (m, H), 4,55^1,70 (m, 2H), 4,70-4,73 (m, H),
5,03 (šs. H), 5,22-5,37 (m, 3H), 5,87-5,93 (m, H), pro syn diastereomer 0,91-0,97 (m, 2H),
1.10- 1.31 (m, 3H), 1,56-1,90 (m, 7H), 2,44-2,48 (m, H), 2,81-2,87 (m, H), 3,35-3,39 (m, H), 3,63-3,67 (m, H), 4,53-1,70 (m, 3H), 5,20-5,50 (m, 3H), 5,89-5,95 (m, H); LC-MS: m/z - 298 (M+H ) pro oba diastereomery.
(2-cyklohexylmethoxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amid l-[2-(4-acetylamino-3-chlorbenzoylamino)propionyl]pyrrolidin-2-karboxylové kyseliny (98ao)
Sloučenina se připraví ze sloučeniny 97b a allylesteru syn-(2-cyklohexylmethoxy-5-oxotetra25 hydrofuran-3-yl)karbamové kyseliny podle postupu popsaného pro přípravu sloučeniny 98a. Získá se 212 mg (výtěžek 64%) sloučeniny uvedené v názvu. 'H NMR (500 MHz, deuterochloroform): 8 0,70-1,30 (m, 5H), 1,30-1,85 (m, 9H), 1,85-2,60 (m, 8H), 2,75-3,00 (m, H),
3.10- 3,80 (m, 4H), 4,30-4,95 (m, 3H), 5,42 (d, 0,85H), 5,62 (d, 0,15H), 6,87 (d, 0,15H), 7,08 (d,0,85H), 7,25 (d, 1H), 7,60-7,90 (m, 3H), 8,08 (d, 0,15H), 8,50 (d. 0,85H); retenční čas při analytické HPLC: 11,81 min; LC-MS: m/z = 577 (M+H1).
(2R-[1 S-(2R-isopropyl-5S-methylcyklohexyloxy)]-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amid l-[2-(4— acetylamino-3-chlor-benzoylamino)-propionyl]pyrrolidin-2-karboxylové kyseliny (98ap)
Sloučenina se připraví ze sloučeniny 97b a allylesteru syn-{2-[lS-(2R-isopropyl-5S-methylcyklohexyloxy)]-5-oxotetrahydrofuran-3-yl}karbamové kyseliny podle postupu popsaného pro přípravu sloučeniny 98a. Získá se 223 mg (výtěžek 63 %) sloučeniny uvedené v názvu. 'H-NMR (500 MHz, deuterochloroform): 8 0,70-1,15 (m, 12H), 1,20-1,85 (m, 8H), 1,85-2,60 (m, 9H), 2,74-2,88 (m, H), 3,35-3,85 (m, 3H), 4,40-4,55 (m, H), 4,65-1,78 (m, H), 4,88-4,91 (m, H),
- 106CZ 302281 B6
5,53 (d, H), 7,00-7,25 (m, 2H), 7,60-7,90 (m, 3H), 8,50 (d, H); retenční čas při analytické HPLC: 13,31 min; LC-MS: m/z = 619 (M+H).
(2-cyklohexylmethoxy-5-oxotetrahydro-furan-3-yl)amid l-[2-(4-amino-3-chlorbenzoyl· amino)propionyl]pyrrolidin-2-karboxylové kyseliny (98aq)
Sloučenina se připraví ze sloučeniny 97a a ailylesteru syn-(2-cyktohexylmethoxy-5-oxotetrahydrofuran-3~yl]karbamové kyseliny podle postupu použitého pro přípravu sloučeniny 98a. Získá se 113 mg (výtěžek 56%) sloučeniny uvedené v názvu. lH NMR (500 MHz, deuteroio chloroform): 6 0,70-1,35 (m, 5H), 1,35-1,90 (m, 5H), 1,90-2,20 (m, 3H), 2,30-2,60 (m, H),
2,80-3,00 (m, H), 3,15-3,80 (m, 4H), 4,28-4,75 (m, 4H), 4,89^,93 (m, H), 5,42 (d, H), 6,74 (d, H), 6,87 (d, H), 7,30 (d, H), 7,51-7,53 (m, H), 7,74 (d, H); retenční čas při analytické HPLC:
12,02 min; LC-MS: m/z = 535 (M+H).
i s allylester (2-butoxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)karbamové kyseliny
Sloučenina se připraví z terc-butylesteru 3-ally loxy karbony lam ino-4-hydroxy butanové kyseliny podle postupu popsaného pro přípravu sloučeniny 40 za použití n-butanolu. Získá se 878 mg (výtěžek 29 %) sloučeniny uvedené v názvu (313 mg anti diastereomerů, 260 mg syn diastereo20 meru a 305 mg směsi). 'H-NMR (500 MHz, deuterochloroform) pro anti diastereomer: δ (vyšší Rť) 0,89-0,96 (t, 3H), 1,32-1,40 (m, 2H), 1,54-1,63 (m, 2H), 2,37-2,41 (d, H), 2,98-3,04 (kv, H), 3,55-3,60 (m, H), 3,77-3,82 (m, H), 4,19-4,22 (m, H), 4,58 (š, 2H), 5,03 (š, H), 5,23-5,40, (m, 3H), 5,87-5,93 (m, H), pro syn diastereomer (nižší Rf) 0,91-0,95 (t, 3H), 1,34-1,39 (m, 2H), 1,56-1,63 (m, 2H), 2,42-2,50 (m, H), 2,83-2,87 (m, IH), 4,07-4,11 (t, H), 4,45-1,50 (m, 0,5H),
4,51-4,70 (m, 2,5H), 5,23-5,35 (m, 2H), 5,42-5,43 (d, H), 5,80-5,95 (m, H), LC-MS: m/z = 258 (M+H+) pro oba diastereomery.
(2~butoxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yI)amid l-[2-(4-amino-3-chlorbenzoylamino)propionyl]pyrrolidin-2-karboxylové kyseliny (98ar)
Sloučenina se připraví ze sloučeniny 97a a ailylesteru syn-(2-butoxy-5-oxotetrahydrofuran-3yl)karbamové kyseliny podle postupu použitého pro přípravu sloučeniny 98a. Získá se 118 mg (výtěžek 48 %) sloučeniny uvedené v názvu jako syn diastereomerů. 'H-NMR (500 MHz, deuterochloroform): δ 0,80-1,02 (m, 2H), 1,35-1,51 (m, 5H), 1,51-1,70 (m, 2H), 1,90-2,27 (m, 3H), 2,30-2,46 (m, H), 2,80-2,90 (m, H), 3,55-3,94 (m, 4H), 4,30-4,75 (m, 4H), 4,90-5,00 (m, H), 5,44—5,46 (m, H), 6,73-6,80 (m, H), 6,80-6,93 (m, H), 7,16-7,25 (m, H), 7,49-7,60 (m, H), 7,70-7,84 (m, H); retenční čas pro analytickou HPLC: 9,71 min; LC-MS: m/z = 495 (M+H).
- 107CZ 302281 B6
allylester (2-isobutoxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)karbamové kyseliny
Sloučenina se připraví z terc-butylesteru 3-allyloxykarbonylamino-4-hydroxybutanové kyseliny 5 podle postupu popsaného pro přípravu sloučeniny za použití isobutanolu. Získá se 190 mg (výtěžek 7,3 %) sloučeniny uvedené v názvu jako anti diastereomerů a 290 mg (výtěžek 1 1 %) syn diastereomerů. 'H-NMR (500 MHz, deuterochloroform) pro antidiastereomer: 5 (vyšší Rf) 0,851,05 (m, 6H), 1,82-1,98 (m, H), 2,37-2,42 (d, H), 2,98-3,04 (m, H), 3,31-3,35 (m, H), 3,55-3,58 (m, H), 4,20—4,30 (t, H), 4,58 (š, 2H), 5,07 (š, H), 5,22-5,43 (m, 3H), 5,84-5,96 (m, H), prosyn io diastereomer (nižší Rf) 0,85-1,05 (m, 6H), 1,88-1,95 (m, H), 2,40-2,5! (m, H), 2,83-2,90 (m,
H), 3,33-3,36 (m, H), 3,61-3,65 (m, H), 3,87-3,88 (d, H), 4,40-4,68 (m, 3H), 5,20-5,40 (m, 2H),
5,42-5,43 (d, H), 5,80-5,97 (m, H); LC-MS: m/z = 258 (M+Hb) pro oba diastereomery.
(2-isobutoxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amid >[2-(4~amino-3-chlorbenzoylamino)propio15 nyl]pyrrolidin-2-karboxylové kyseliny (98as)
Sloučenina se připraví ze sloučeniny 97a a allylesteru syn-(2-isobutoxy-5—oxotetrahydrofuran3-yl)karbamové kyseliny za použití postupu popsaného pro přípravu sloučeniny 98a. Získá se mg (výtěžek 38%) sloučeniny uvedené v názvu. 'H-NMR (500 MHz, deuterochloroform): 20 6 0,74-0,76 (t, 0,6H), 0,80-1,00 (m, 5,4H), 1,40-1,50 (m, 3H), 1,90-2,22 (m, 3H), 2,33-2,45 (m, H), 2,80-2,90 (m, H), 3,32-3,38 (m, H), 3,55-3,80 (m, 3H), 4,38 (š, H), 4,50-4,60 (m, H),
4,70-4,80 (m, H), 4,90-5,00 (m, H), 5,42-5,45 (m, H), 6,74-6,76 (d, H), 6,86-6,88 (d, H), 7,317,33 (d, H), 7,51-7,53 (m, H), 7,74-7,75 (d, H); retenční čas při analytické HPLC: 9,63 & 9,80 min; LC-MS: m/z = 495 (M+H).
allylester [2-(indan-2-yl)oxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl]karbamové kyseliny
Sloučenina se připraví z 5,2 g (20 mmol) terc-butylesteru 3-allyloxykarbonyiamino-4—hydroxybutanové kyseliny podle postupu popsaného pro přípravu sloučeniny vzorce 40 za použití 8,05 g (60 mmol) 2-indanolu. Získá se 4,10 g (výtěžek 65 %) sloučeniny uvedené v názvu ve formě směsi epimerů. Po čištění se získá 1,76 g (výtěžek 28%) 4(S),5(R) epimeru ve formě žlutého oleje. 'H NMR (500 MHz, deuterochloroform) δ 2,42 (dd, >17,2, 10,5Hz, IH), 2,79 (dd, >17,2, 8,4Hz, IH), 2,99 (dd, >16,7, 4,1Hz, IH), 3,04 (dd,>16,7, 4,1Hz, 1H),3,22 (dd, >17,2, 6,6Hz, IH), 3,26 (dd, >17,2, 6,6Hz, IH), 4,53 (m, 3H), 4,70 (m, 1H), 5,20 (m, 2H), 5,60 (d, >5,3Hz,
IH), 5,87 (m, IH), 7,17 (m, 4H) ppm. LC-MS (ES+): m/e=318 (M+H). Analytická HPLC (kolona Cl 8): 17,094 min.
Také se izoluje 0,75 g (výtěžek 12 %) a 1,59 g (25 %) 4(S),5(S) epimeru ve formě bílé pevné látky. 'H-NMR (500MHz, deuterochloroform) δ 2,38 (d, J17.9Hz, IH), 3,0, (m, 3H), 3,22 (m, 2H), 4,13 (m, 1H), 4,58 (m, 2H), 4,68 (m, 2H), 4,98 (šs, IH), 5,26 (m, lH);5,57(s, IH), 5,88
- 108 CZ 302281 B6 (dd t, J=18,0, 11,1, 5,4Hz, IH), 7,20 (m, 4H) ppm. LC-MS (E,S+): m/e=3l8 (M+H). Analytická
HPLC (kolona C18): 17,025 (5,5 %), 17,325 (94,5 %) min.
[2-(indan-2-yloxy)-5-oxotetrahydroťuran-3-yl]amid l-[2-(4-amÍno-3-chlorbenzoylamino)5 propionyl]pyrrolidin-2-karboxylové kyseliny (98at)
Sloučenina se připraví ze sloučeniny 97a a allylesteru [2-(indanol-2-yl)oxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl]karbamové kyseliny podle postupu popsaného pro přípravu sloučeniny 98a. Získá se 0,20 g (výtěžek 58%) sloučeniny uvedené v názvu ve formě směsi epimerů 71:29 jako bílé io pevné látky. 'H-NMR (500 MHz, deuterochloroform) δ 1,0-1,5 (m, 3H), 1,6-2,3 (m, 4H), 2,42 (m, IH), 2,6-3,4 (m, 6H), 3,5-4,1 (m, 3H), 4,2-4,9 (m, 4H), 5,65 (d, J=5,0Hz, 0,80H), 5,8 (m, 0,07H), 5,85 (d, J=5,0Hz, 0,13H), 6,8-7,3 (m, 6H), 7,4-7,9 (m, 3H) ppm. Analytická HPLC (kolona 08) 16,035 (71,4 %); 16,476 (28,6 %) min. LC-MS (ES+): m/e-555 (M+H).
[2-(indan-2-yloxy)-5-oxotetrahydrofuran-3-yl]amid l-[2-(4-acetylamino-3-chlorbenzoyl· amino)propionyl]pyrrolidin-2-karboxylové kyseliny (98au)
Sloučenina se připraví ze sloučeniny 97b a allylesteru [2-(indanol-2-yl)oxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl]karbamové kyseliny podle postupu popsaného pro přípravu sloučeniny 98a. Získá se
0,22 g (výtěžek 57 %) sloučeniny uvedené v názvu ve formě směsi epimerů 76:24 jako bělavé pevné látky. 'H-NMR (500 MHz, deuterochloroform) δ 1,08 (d, J=6,9Hz, 0,4H), 1,26 (d, J=6,9Hz, 0,6H), 1,35 (d, J=6,9Hz, 2Η), 1,8-2,3 (m, 3Η), 2,28 (s, 2Η), 2,29 (s, IH), 2,4 (m,lH), 2,8 (m, IH), 3,10 (m, 2H), 3,27 (m, 2H), 3,58 (m, 2H), 3,69 (m, IH), 4,5-4,9 (m, 4H), 5,65 (d, J=5,3Hz, 0,68H), 5,84 (d, J=5,3Hz, 0,18H), 6,38 (š, 0,14H), 6,9-7,7 (m, 6H), 7,6-7,9 (m, 3H), 8,33 (šd, J=6,8Hz, 0,18H), 8,51 (šd, J=8,0Hz, 0,82H) ppm. Analytická HPLC (kolona
Cl8) 15,596 (76,2 %), 15,932 (23,8 %) min. LC-MS (ES+): m/e=597 (M+H).
(2-cyklopentyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amid l-[2-(4-amino-3-chlorbenzoylamino)propionyl]pyrrolidin-2~karboxylové kyseliny (98av)
Sloučenina se připraví ze sloučeniny 97a a allylesteru syn-(2-cyklopentylo\y-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)karbamové kyseliny podle postupu použitého pro přípravu sloučeniny 98a. Získá se 0,19 g (výtěžek 59%) sloučeniny uvedené v názvu ve formě bělavé pevné látky. 'H-NMR (500 MHz, deuterochloroform) δ 1,2-2,4 (m, 15H), 2,4-3,1 (m, 2H), 3,6-3,9 (m, 2H), 4,2-1,4 (m, 2H), 4,5-5,0 (m, 4H), 5,40 (d, J=5,0Hz, O,35H), 5,55 (d, J=5,0Hz, 0,65H), 6,8-8,2 (m, 5H) ppm. Analytická HPLC (kolona Cl8) 14,065 min. LC-MS (ES+): m/e=507 (M+H).
- 109CZ 302281 B6
(2--benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amid l-[2-<3,5-diehlor-4-hydroxybenzoylamino)propionylJpyrrotidin-2-karboxylové kyseliny (98aw)
Sloučenina se připraví z terc-butylesteru l-[2-(4-allyloxy-3,5-dimethylbenzoylamino)propionyllpyrrolidin-2-karboxylové kyseliny a sloučeniny syn-40 podle postupu popsaného pro přípravu sloučeniny 98a. Získá se 1,087 g (výtěžek 64%) sloučeniny uvedené v názvu ve formě světle žluté pevné látky. 'H-NMR (500MHz, deuterochloroform) δ 1,09 (d, J-6,9Hz, 0,6H), 1,33 (d, .1-6,9Hz, 2,4H), 1,96 (m, 1H), 2,03 (m, 1H), 2,10 (m, IH), 2,28 (m, 0,8H), 2,40 (dd, >17,3, ío 10,2 Hz, 0,8H), 2,56 (m, 0,2H), 2,85 (dd, J -17,3, 8,5 Hz, 0,8H), 3,09 (dd, >17,7, 10,2Hz, 0,2H), 3,57 (m, 1H), 3,73 (dt, J=9,2, 7,9Hz, 0,8H), 4,09 (m, 0,2H), 4,21 (d, >7,9Hz, 0,2H), 4,44 (d, >9,511/, 0,2H), 4,55 (dd, >8,0, 3,0Hz, 0.8H), 4,62 (d, >11,6 Hz, IH), 4,70 (m, 1H), 4,80 (m, IH), 4,89 (d, > 11,6Hz, 0,8H), 5,52 (d, J5,211z. 0,8,H), 5,82 (d, >5,2Hz, 0,2H), 6,51 (š, 0,2H), 6,62 (š, 0,8H), 7,0-7,4 (m, 7H), 7,43 (s, 0,4H), 7,66 (d, >1.0Hz, 1,6H) ppm. Analytičtí ká HPLC (kolona Cl 8) 10,135 min. LC-MS (ES’): m/e=564, 566 (6:4) (M+H).
(2-cykÍopentyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amid l-[2-(4-amino-3-chlorbenzoylamino)propionyljpyrrolidin-2-karboxylově kyseliny (98ax)
Sloučenina se připraví podle postupu použitého pro přípravu sloučeniny (98av) za použité anti-f2-cyklopentyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amidu. Získá se 0,24 g (výtěžek 74 %) sloučeniny uvedené v názvu ve formě bělavé pevné látky. 'H-NMR (500MHz, deuterochloroform) δ 1,41 (d, >6,5Hz, 3H), 1,7 (m, 7H), 1,98 (š, 2H), 2,13 (Š,2H), 2,27 (m, IH), 2,69 (m, IH), 2,86 (dd, J=18,0, 6,8Hz, 0,7H), 2,98 (dd, >18,3, 8,2Hz, 0,3H), 3,60 (š, 1,4H), 3,77 (š, 0,6H), 4,1^1,6 (m. 5H), 4,82 (m, IH), 5,27 (m, 0,65H), 5,51 (d, >5,3Hz, 0,05H), 5,59 (šs, 0,3H), 6,76 (š, IH).
7,00 (š, IH), 7,49 (š, IH), 7,74 (š, IH), 7,89 (š, IH) ppm. Analytická HPLC (kolona Cl8) 9,756 min. LCMS (ES‘): m/e-507 (M+H).
(2-ethoxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amid ! [2--(4-acetylamíno- 3—chlorbenzoylamino)propi30 onyl]pyrrolidin-2-karboxylové kyseliny (98ay)
Sloučenina se-připraví z allylesteru (2-ethoxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)karbamové kyseliny a sloučeniny 97b podle postupu použitého pro přípravu sloučeniny 98a. Získá se 51 mg (výtěžek 18 %) sloučeniny uvedené v názvu ve formě bílé pevné látky. 'H-NMR (500MHz, 1:1 deutero-110CZ 302281 B6 chloroform:deuteromethanol) 5 1,08-1,35 (m, 3H), 1,35-1,55 (m, 3H), 1,75-2,44 (m, 4H), 2,26 (s, 3H), 2,44-3,07 (m, 2H), 3,48-3,97 (m, 2H), 4,18—4,92 (m, 5H), 5,32 (d, 0,4H), 5,47 (d, 0,1 H), 5,58 (d, 0,4H), 5,64 (d, O,1H), 7,70-8,35 (m, 3H). Analytická HPLC 10,37, 10,54 min. LC-MS (ES+) m/e=509,2 (M+H+).
allylester [2-(2-chlorethoxy)-5-oxotetrahydrofuran-3-yI]karbamové kyseliny
Sloučenina se připraví z 5,2 g (20 mmol) terc-buty lesteru 3-a!ly loxy karbony lam ino-4-hydroxybutanové kyseliny podle postupu popsaného pro přípravu sloučeniny 40 za použití 4,05 ml io (60 mmol) chlorethanolu. Získá se l,84g (výtěžek 35 %) sloučeniny uvedené v názvu ve formě směsi epimerů. Pro antidiastereomer: 'H-NMR (500 MHz, deuterochloroform) δ 2,42 (dd, J=18,lHz, 1H), 3,00 (dd, >18,1, 7,8Hz, 1H), 3,63 (m, 2H), 3,85 (m, 1H), 4,02 (m, 1H), 4,23 (m, 1H), 4,57 (šs, 2H), 5,17 (šs, 1H), 5,22 (d, >11,5 Hz, 1H), 5,29 (d, J=16,8Hz, 1H), 5,44 (s, 1H), 5.89 (m, 1H) ppm, LC-MS(ES+) m/e = 264 (M+H). Pro syn-diastereomer: 'H-NMR (5 (500 MHz, deuterochloroform) δ 2,47 (dd, >17,3, 10,7Hz, 1H), 2,83 (dd, J=17,3, 8,4Hz, 1H),
3,65 (m, 2H), 3,83 (m, 1H), 4,11 (m, 1H), 4,57 (m, 3H), 5,22 (d, H=10,4Hz, 1H), 5,30 (d, Jé=17,2Hz, 1H), 5,33 (m, 1H), 5,47 (d, >5,2Hz, 1H), 5,89 (ddt, 3=17,1, 11,0, 5,4Hz, 1H) ppm, LC-MS (ES+) m/e = 264 (M+H).
allylester [2-(2-morfolin-4-ylethoxy)-5-oxotetrahydrofuran-3-yl]karbamové kyseliny
Sloučenina se připraví z allylesteru [2-(2-chlorethoxy)-5~oxotetrahydrofuran-3-yl]karbamové kyseliny a reakcí s 2 ekvivalenty morfolinu a 1 ekvivalentem jodidu draselného v dimethylformamidu.
[2-(2-morfolin-4-ylethoxy)~5-oxotetrahydrofuran-3-yl]amid l-[2-(4~amino-3-chlorbenzoylamino)propionyl]pyrrolidin-2-karboxylové kyseliny (98az)
Sloučenina se připraví ze sloučeniny 97a a allylesteru syn-[2-(2-morfolin-4-ylethoxy)-5-oxo30 tetrahydrofuran-3-yl]karbamové kyseliny podle způsobu popsaného pro přípravu sloučeniny 98a.
allylester [2-<4-chlorbenzyloxy)-5-oxotetrahydrofuran-3-yl]karbamové kyseliny
Sloučenina se připraví z terc-buty lesteru 3-allyloxy karbony lam i no-4-hydroxy butanové kyseliny podle postupu popsaného pro přípravu sloučeniny 40 za použití 4-chlorbenzylalkoholu. Získá se sloučenina uvedená v názvu ve formě bílé pevné látky. Antidiastereomer: HPLC (kolona Cl8) 10,924 min; 'H-NMR (500 MHz, deuterochloroform) δ 2,41 (d, J=8,0Hz, 1H), 3,02 (dd, >18,1, 7,5Hz, 1H), 4,25 (š, 1H), 4,56 (m, 2H), 4,58 (d, >ll,7Hz, 1H), 4,79 (d, >11,7Hz, 1H), 4,99 (š, 1H), 5,22 (dd, >10,4, 1,1Hz, 1H), 5,28 (dd, >17,2, 1,3Hz, 1H), 5,44 (s, 1H), 5,86 (m, 1H),
- lil CZ 302281 B6
7,25 (d, J-8,4Hz, 2H), 7,32 (d, >8,4Hz, 2H) ppm, LC-MS (ES ) m/e=326 (M+H); Syn—diastereomer: HPLC (kolona C18) 10,780 min; 'H-NMR (500 MHz, deuterochloroform) 62,47 (dd, J—17.3, 10,5 Hz, IH), 2,85 (dd,J=l7,3, 8,4Hz, 1H),4,55 (m, 3H), 4,58 (d, >11,7Hz, IH). 4,84 (d, J=11,7Hz, IH), 5,23 (dd, H=IO,4, 1,1Hz, IH), 5,30 (d, >l6,6Hz, IH), 5,49 (d, >5,01 Iz, IH), 5,89 (ddt, >17,1, 1 1,0, 5,4 Hz, IH), 7,23 (d, >8,3Hz, 2H), 7,31 (d, J=8,3Hz,
2H) ppm, LC-MS (ES ) m/e=326 (M+H).
[2-(4—chlorbenzyloxy)-5-oxotetrahydrofuran—3-yl]amid I-[2-(4-amino-3-chlorbenzoylamino)propionylJpyrrolidin-2-karboxylové kyseliny (98ba) io
Sloučenina se připraví ze sloučeniny 97a a allylesteru syn-[2-(4-chlorbenzyloxy)-5-oxotetrahydrofuran-3-yllkarbamové kyseliny podle postupu popsaného pro přípravu sloučeniny 98a. Získá se 1 54 mg (výtěžek 65 %) sloučeniny uvedené v názvu ve formě světle růžové pevné látky. HPLC (kolona Cl8) 10,597 min; 'H-NMR (500 MHz, deuterochloroform) δ 1,14 (d, J=6,8Hz,
O.75H), 1,34, (d, >6,8Hz, 2,25H), 1,6 (š, 0,25 H), 1,91 (m, 1H),2,03(m, lH),2,10(m, 1H);2,29 (m, 0,75 H), 2,40 (dd, >17.3, 10,3 Hz, 0,75H), 2,51 (m, 0,25H), 2,82 (dd, J= 17,3, 8,5Hz, 0,75H), 3,08 (dd, >17,9, 10,9Hz, 0,25H), 3,58 (m, IH), 3,72 (dd, >16,5, 8,7Hz, 0,75H), 4,10 (m, 0,25 H), 4,22 (d, J-8.0H/. 0,25H), 4,39 (d, >10,8Hz, 0,25H), 4,54 (dd, J=9,1, 2,9Hz, O,75H), 4,60 (d, > 11,9Hz, 0,75H), 4,68 (m, IH), 4,85 (d, > 11,7Hz, 0,75H), 4,86 (m, IH), 5,49 (d, J-5,2Hz, O.75H), 5,81 (d, J 5.2Hz. 0,25H), 6,2 (š, 0,25H), 6,74 (m, 2H), 7,05 (d, J=8,5Hz,
0,5H), 7,17 (d, >8,4Hz, 0,5H), 7,30 (m, 3,25H), 7,48 (dd, J-8,4, 2,0Hz, 0,75H), 7,56 (d, >L9Hz, 0,25H), 7,73 (d, > 1,9Hz, 0,75H), 8,42 (d, J -5.7Hz. 0,25H) ppm, LC-MS (ES') m/e=563, 565 (M+H).
[2—(4—chlorbenzyloxy)-5-oxotetrahydrofuran-3-yl]amÍd l-[2-{4-acetylamino-3-ch!orbenzoylamino)propionyl]pynOlidin-2-karboxylové kyseliny (98bb)
Sloučenina se připraví ze sloučeniny 97b a allylesteru syn—[2-(4—chlor-benzyloxy)-5—oxotetrahydrofuran-3-yl]karbamové kyseliny podle postupu popsaného pro přípravu sloučeniny 98a. jo Získá se 165 mg (výtěžek 64 %) sloučeniny uvedené v názvu ve formě světle žluté pevné látky.
HPLC (kolona Cl8) 10,491 min; 'H-NMR (500 MHz, deuterochloroform) δ 1,16 (d, >6,8Hz,
0,6H), 1,35, (d, J=6,8Hz, 2,4H), 1,94 (m, IH), 2,04 (m, IH), 2,10 (m, IH), 2,25 (s, 3H), 2,28 (m, IH), 2,40 (dd, >17,3, 10,4Hz, 0,8H), 2,53 (m, 0,2H), 2,84 (dd, >17,3, 8,5Hz, 0,8H); 3,02 (dd, >17,5, 10,5 Hz, 0,2H), 3,58 (m, IH), 3,72 (ddd, >17,2, 8,3, 8,3Hz, 0,8H), 4,13 (m, 0,2H), 35 4,22 (d, >8,2Hz, 0,2H), 4,40 (d, >10,9Hz, 0,2H), 4,54 (dd, >8,1, 3,0Hz, 0,8H), 4,60 (d,>11,8Hz, 0,8H), 4,69 (m, IH), 4,85 (d, >11,5Hz, 0,8H), 4,87 (m, IH), 5,49 (d, >5,2Hz,
0,8H), 5,80 (d, J 5,2Hz, 0,2H), 6,47 (š, 0,2H), 6,95 (d, >8,3Hz, 0,8H), 7,05 (d, >8,3Hz, 0,4H),
7,18 (d, >8,3 Hz, 0,4H), 7,29 (m, 3,2H), 7,49 (dd, >8,6, 1,9Hz, 0,2H), 7,63 (dd, >8,6, 1,9Hz,
0,8H), 7,74 (d, > 1,9Hz, IH), 7,85 (d, >l,9Hz, 0,8H), 8,25 (d, >6,4Hz, 0,2H), 8,51 (m, 0,8H) 40 ppm, LC-MS (ES) m/e = 605, 607 (M+H).
-112CZ 302281 B6
Schéma XVI11
Boď
(99)
COťH
Bo<
Q r-/ o
H *
O
(100)
,0 o
Cl (102a) Y=AcNH (102b) Y=NH2
.0
O (101) terc-butylester 2-(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-ylkarbamoyl)piperidin-l -karboxylové kyseliny (100)
Sloučenina se připraví z 1-terc-butylesteru piperidin-l,2-dikarboxylové kyseliny 99 a sloučeniny 40 podle způsobu použitého pro přípravu sloučeniny 75. Získá se 2,63 g (výtěžek 57%) sloučeniny uvedené v názvu. 'H-NMR (500MHz, deuterochloroform) δ 1,15-1,79 (m, 15H), 2,12-2,50 (m, 2H), 2,56-2,83 (m, IH), 2,89 (dd, 0,5H), 3,05 (dd, 0,5H), 3,81^1,15 (šs, IH), 4,36-4,97 (m, 3H), 5,37-5,61 (m, IH), 6,42-6,89 (šs, IH), 7,17-7,51 (m, 5H). LC-MS (ES') m/c-419.4 (MH+).
terc-butylester {2-[2-(2-benzyloxy-5-oxo-tetrahydrofuran-3-yIkarbamoyl)piperidin-l-yl]-1 methy 1-2-oxoethy 1} karbamové kyseliny (101) terc.Butylester 2-(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-ylkarbamoyl)piperidin-l-karboxylové kyseliny (100) se rozpustí v 25 ml 20% kyseliny trifluoroctové v dichlormethanu a míchá se 50 minut při teplotě místnosti. Rozpouštědlo se odpaří a zbytek se azeotropicky čtyřikrát destiluje s dichlormethanem. Získaný olej se rozpustí v 20 ml dichlormethanu a 5 ml dimethylformamidu, ochladí se na 0 °C a reaguje se s 4,7 ml (27,0 mmol) DIEA, 970 mg (5,1 mmol) Boc-alaninu, 924 mg (6,8 mmol) HOBT a 1,31 g (6,8 mmol) EDC a roztok se 18 hodin míchá v dusíkové atmosféře. Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu, zbytek se rozpustí v ethylacetátu a dvakrát se promyje 0,5N roztokem hydrogensíranu sodného, dvakrát nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a solankou. Organická vrstva se suší nad bezvodým síranem sodným a odpaří se. Získá se oranžová pevná látka, která se rozpustí v dichlormethanu a přikape se k diethyletheru a získá se bílá sraženina. Získá se 1,21 g (výtěžek 73 %) sloučeniny uvedené v názvu ve formě bílé pevné látky. 'H-NMR (500MHz, deuterochloroform) δ 1,10-1,79 (m, 18H), 1,98-2,19
(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amid l-[2-(4_acety]amino~3-chlorbenzoylamÍno)propionyl]piperidin-2-karboxylové kyseliny (102a)
Sloučenina se připraví z terc-butylesteru {2-[2-(2-benzyloxy-5-oxotetrahydro-furan-3-ylkarbamoyl)piperidin-1-yl]-l-methyl-2_oxoethyl}karbamové kyseliny a 4-acetylamino-3chlorbenzoové kyseliny podle postupu použitého pro přípravu sloučeniny 98a. Získá se 71 mg
-113CZ 302281 B6 (výtěžek 47%) sloučeniny uvedené v názvu. 'H-NMR. (500MHz, deuterochloroform) δ 1,101,97 (m, 10H), 2,10-2,68 (ni, 5H), 2,73-3,24 (m, 2H), 3,62-3,92 (tn, IH), 4,24-5,27 (m, 5H), 5,48-5,59 (m, 0,5H), 5,75-5,85 (m, 0,5H), 6,51-6,61 (d, I H), 7,05-7,45 (m, 4H), 7,52-8,12 (m, 411). Analytická HPLC 8,30 min. LC-MS (ES) m/e=585,3 (MH*).
(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amid l-[2-(4-amino-3-chlorbenzoylamino)propiO“ nylIpiperidin-2-karboxylové kyseliny (102b)
Sloučenina se připraví podle postupu popsaného výše pro přípravu sloučeniny 102a. Získá se io 0,06 g (výtěžek 27%) sloučeniny uvedené v názvu ve formě žluté pevné látky. 'H-NMR (500MHz, deuterochloroform) δ 1,2-1,8 (m, 7H), 2,1-2,6 (m, 2H), 2,7-3,2 (m, 4H), 3,6-4,0 (m, IH), 4,3 4.9 (m, 7H), 5,0-5,8 (m, 2H), 6,5-7,0 (m, 2H), 7,2-7,8 (m, 8H) ppm. Analytická HPLC (kolona kyano) 14,559 (39,6 %); 15,198 (60,4 %). LC-MS (ES*): m/e = 543 (M+H)
Schéma XIX
1-benzylester 2-terc-butytester 4—hydroxy-pyrrolidin-l,2—dikarboxylové kyseliny (104)
Sloučenina 104 se připraví podle postupu popsaného pro přípravu sloučeniny 95.
Suspenze 4,854 g (18 mmol) Cbz-Hyp-OH ve 135 ml DMA, 4,105 g (18 mmol) benzyltriethylamoniumchlorídu, 64 g (46 mmol) uhličitanu draselného a 99 ml (859 mmol) 2-brom-2-methylpropanu se míchá 18 hodin při 55 °C. Směs se zředí ledovou vodou a třikrát se extrahuje ethyl25 acetátem. Organická vrstva se promyje vodou, 0,5N roztokem hydrogen síranu sodného a solankou a rozpouštědlo se odpaří ve vakuu a získá se 5,368 g (výtěžek 98 %) sloučeniny uvedené v názvu ve formě žlutého oleje. 'H-NMR (500MHz, deuterochloroform) δ 1,33 (s, 5H), 1,47 (s, 4H), 2,01-2,14 (m, IH), 2,22-2,38 (m, IH), 3,50-3,72 (m, 2H), 4,34-4,45 (m, IH), 4,45^1,53 (m, IH), 5,04-5,20 (m, 2H), 7,22-7,42 (m, 5H). Analytická HPLC 10,14 min. LC-MS (ES+) m/e=322,2 (MH+)
1-benzylester 2-terc-butylester 4-fluorpyrrolidin-l,2-dikarboxylové kyseliny (105)
-114CZ 302281 B6
Roztok 4,262 g (13,96 mmol) sloučeniny 104 ve 100 ml dichlormethanu se při -78°C reaguje s 1,80 ml (13,6 mmol) DAST, míchá se 10 minut a potom se ohřeje na teplotu místnosti a míchá se 60 hodin v dusíkové atmosféře. Směs se nalije do 350 ml 10% ledového roztoku hydrogenuhličitanu sodného a dvakrát se extrahuje dichlormethanem, Organická vrstva se promyje vodou, solankou, suší se nad bezvodým síranem sodným a odpaří se za získání 4,299 g hnědého oleje, který se čistí pomocí velmi rychlé kolonové chromatografie na silikagelu za použití směsi hexanu a ethylacetátu (90/10 až 80/20 %) jako eluentu. Získá se 2,805 g (výtěžek 64 %) sloučeniny uvedené v názvu ve formě žlutého oleje. 'H-NMR (500MHz, deuterochloroform) δ 1,37 (s, 4,5H), 1,45 (s, 4,5H), 2,20-2,55 (m, 2H), 3,61-3,93 (m, 2H), 4,41 (d,0,5H), 4,49 (d, 0,5H), 5,03-5,21 io (m, 3H), 7,23-7,44 (m, 5H). Analytická HPLC 12,15 min. LC-MS (ES+) m/e=324,2 (MH+).
1-benzylester 2-terc-butylester l-(2-benzyloxykarbonylaminopropionyl)-4-fluorpyrrolidin1,2-dikarboxylové kyseliny (106)
Roztok 2,72 g (8,42 mmol) sloučeniny 105 v 50 mí methanolu a 1,27 g 10% palladia na uhlí se míchá 2 hodiny ve vodíkové atmosféře, potom se filtruje přes křemelinu a rozpouštědlo se odpaří a získá se 1,526 g žlutého oleje. Tento olej se rozpustí v 30 ml dichlormethanu a reaguje se při 0°C s 1,5 ml (8,6 mmol) DIEA, 2,34 g (10,5 mmol) Cbz-ala-OH a 2,32 g (12 mmol) EDC. Směs se míchá dalších 10 minut pří teplotě 0 °C, potom se nechá ohřát na teplotu místnosti
2o a míchá se 18 hodin. Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu a zbytek se rozpustí v ethylacetátu, potom se dvakrát promyje 0,5N roztokem hydrogensíranu sodného, dvakrát nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a solankou. Organická vrstva se suší nad bezvodým síranem sodným a odpaří se za získání bílé pevné látky, která se čistí pomocí velmi rychlé kolonové chromatografie za použití směsi hexanu a ethylacetátu (80/20 až 60/40 %) jako eluentu. Získá se 286 g (výtěžek
86 % z 1-benzylesteru 2-terc.butylesteru 4-fluorpyrrolidin-l,2-dikarboxylové kyseliny). *HNMR (500MHz, deuteromethanol) δ 1,26-1,59 (m, 12H), 2,20-2,67 (m, 2H), 3,45-4,13 (m, 2H), 4,25—4,47 (m, 1H), 4,58-4,71 (m, 1H), 4,96-5,17 (m, 2H), 5,19-5,45 (m, 1H), 7,23-7,48 (m, 5H). Analytická HPLC 16,36 min. LC-MS (ES+) m/e-395,3 (MH+), terc-butylester l_[2-(4-amino-3-ehlorbenzoylamino)propionyl]-4-fluorpyrrolidin-24<arboxylové kyseliny (107)
Suspenze 2,65 g (6,72 mmol) sloučeniny 106 v 40 ml methanolu a 1,32-g 10% palladia na uhlí se míchá 115 hodiny ve vodíkové atmosféře, filtruje se přes křemelinu a odpaří se za získání 1,694 g voskovité pevné látky. Pevná látka se rozpustí v 25 ml dichlormethanu a reaguje se při 0 °C s 3,4 ml (19,5 mmol) DIEA, 1,362 g (7,9 mmol) 4-amino-3-chlorbenzoové kyseliny, 1,164 g (8,62 mmol) HOBT a 1,645 g (8,57 mmol) EDC. Směs se nechá ohřát na teplotu místnosti a míchá se 18 hodin. Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu. Zbytek se rozpustí v ethylacetátu, čtyřikrát se promyje vodou, dvakrát 0,5N roztokem hydrogensíranu sodného, dvakrát nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a solankou. Organická vrstva se suší nad bezvodým síranem sodným a odpaří se za získání bílé pevné látky, která se Čistí pomocí velmi rychlé kolonové chromatografie za použití směsi dichlormethanu a methanolu (99/¼ až 98/2 %) jako eluentu. Získá se 2,705 g (výtěžek 97 %) produktu ve formě bílé pevné látky.1 H-NMR (500MHz, deuteromethanol) δ 1,33 (s, 9H), 1,48 (d, 3H), 2,31-2,55 (m, 2H), 3,93 (dd, 1H), 4,02-4,21 (m, 1H),
4,59-4,76 (m, 1H), 5,31 (šs, 0,5H), 5,41 (šs, 0,5H), 6,78 (d, 1H), 7,57 (dd, 1H), 7,78 (s, 1H), 8,31 (d, 1H). Analytická HPLC 14,14 min. LC-MS (ES+) m/e-414,2 (MLf).
-115CZ 302281 B6 (2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amid l-[2-(4-amino-3-clilorbenzoylamino)propÍonyl|—4- fluorpyrrolidin-2-karboxylové kyseliny (108a)
Sloučenina se připraví zallylesteru syn-(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)karbamové 5 kyseliny a sloučeniny 107a podle způsobů použitého pro přípravu sloučeniny 98a. Izoluje se mg (výtěžek 15%) sloučeniny uvedené v názvu ve formě bílé pevné látky. 'H-NMR (500MHz, deuteromethanol) δ 0,94 (d, 0,311), 1,07 (d, IH), 1,40 (m, l,7H), 2,21-2,65 (m, 2,2H),
2,70-2,85 (m, 1,4H), 2,96-3,08 (m, 1,4H), 2,96-3,08 (dd, 0,4H), 3,57-4,24 (m, 3H); 4,41-4,93 (m, 4H), 5,14-5,45 (m, IH), 5,60-5,67 (m, 0,6H), 5,77 (d, 0,4H), 6,77 (dd, 1 H), 7,15-7,41 io (ni, 5H), 7,51-7,62 (m, IH), 7,77 (dd, IH). Analytická. HPLC 12,83 min. LC-MS (ES') m/e=547,l (MHj.
(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amid l-[2-(4-amino-3-chlorbenzoylamino)propionyl]-4-fltiorpyrrolidin-2--karboxylové kyseliny (108b)
Sloučenina se připraví zallylesteru (2-benzyloxy-5-Oxotetrahydrofuran-3-yl)karbamové kyseliny a sloučeniny 107a podle postupu použitého pro přípravu sloučeniny 98a. Izoluje se 654 mg (výtěžek 54%) sloučeniny uvedené v názvu ve formě bílé pevné látky. 'H—NMR (50()MHz, deuteromethanol) δ 1,07 (d, 0,5 H), 1,25-1,56 (m, 2,5 H), 2,21-2,65 (m, 2,3H), 2,68-2,89 (m, IH),
2,91-3,10 (m, 0,7H), 3,57-4,23 (m, 2H), 4,32-4,95 (m, 5H), 5,16-5,52 (m, 1 H), 5,45-5,50 (m,
0,3H), 5,54-5,58 (m, 0,2H), 5,61-5,67 (m, 0,3H), 5,77 (d, 0,2H), 6,72-6,84 (m, 1 H), 7,16-7,41 (rn, 5H), 7,50-7,65 (m, IH), 7,71-7,87 (m, IH). Analytická HPLC 12,83 min. LC-MS (ES ) m/e=547,1 (MH+).
(2-ethoxy-5-oxotetrahydrofuran—3-yl)amid 1 — [2—(4—amino-3-c hlorbenzoy lam i no)propionyl]4-fluor-pyrrolídin-2-karboxylové kyseliny (108c)
Sloučenina se připraví z allylesteru syn-(2-ethoxy-5-oxotetrahydrofuran—3-yl)karbamové kyseliny a sloučeniny 107a podle postupu popsaného pro přípravu sloučeniny 98a. Získá se 100,3 mg
3o (výtěžek 38%) sloučeniny uvedené v názvu. 'H-NMR (500MHz, deuteromethanol) δ 1,09 (t, 1,2H), 1,25 (t, 1,8H), 1,40 (d, IH), 1,49 (d, 2H), 2,33-2,61 (m, 2H), 2,65-2,95 (m, 2H), 3,444,30 (m, 4H), 4,47-4.79 (m, 3H), 5,18-5,25 (m, 0,2H), 5,27-5,36 (m, 0,5H), 5,39-5,46 (m, 0,3H), 5,56 (m, IH), 6,72-6,94 (m, 0,8H), 7,54-7,69 (m, 0,8H), 7,79 (d, 0,55H), 8,06 (d, 0,55H), 9,00 (d, 0,3H). Analytická HPLC 8,46 min. LC-MS (ESť) m/e=485,2 (MH).
-116CZ 302281 B6
[2-(2-isopropyl“5-methyleyklohexyl]-5—oxotetrahydrofuran-3-yl]amid l-[2-(4-amino-3chlorbenzoylamino)propionyl]^4-fluorpyrrolidin-2-karboxylové kyseliny (108d)
Sloučenina se připraví z allylesteru (2-{lR-(2S-isopropyl-5R-methylcyklohexyloxy)]-5-oxotetrahydrofuran-3-yl}karbamové kyseliny a sloučeniny 107a podle postupu popsaného pro přípravu sloučeniny 98a. Získá se 95 mg (výtěžek 31 %) sloučeniny uvedené v názvu. 'H-NMR (500 MHz, deuteromethanol) δ 0,42 (d, 2H), 0,57 (d, 2H), 0,60-1,10 (m, 10H), 1,22-1,76 (m, 6H), 1,96-2,17 (m, IH), 2,29-2,60 (m, 2H), 2,61-2,88 (m, 1,5H), 3,02-3,23 (dd, 0,5H), io 3,37-3,47 (m, 0,5H), 3,50-3,61 (m, 0,5H), 3,63^1,24 (m, 2H), 4,48-4,62 (m, 3H), 5,18-5,48 (m, IH), 5,72 (d, 0,4H), 5,82 (d, 0,6H), 6,77-6,84 (m, IH), 7,53-7,67 (m, IH), 7,78 (d, 0,4H),
7,84 (d, IH). Analytická HPLC 8,34 min. LC-MS (ES+) m/e=595 (MH+).
i? Schéma XX
terc-butylester {2-[2-(2-ethoxy-5-oxotetrahydrofuran-3-ylkarbamoyl)-pyrrolidin-l-yl]-lmethyI-2-oxoethyl}karbamové kyseliny (109)
Sloučenina se připraví z allylesteru (2-ethoxy-5-oxotetráhydrofuran-3-yl)karbamové kyseliny 74 podle způsobu použitého pro přípravu sloučeniny 75. Získá se 660 mg (výtěžek 73 %) sloučeniny uvedené v názvu ve formě světle žluté pevné látky. 1 H-NMR (500 MHz, deuteromethanol) δ 1,14-1,36 (m, 6H), 1,42 (s, 9H), 1,75-2,29 (m, 0,5H), 2,99 (dd, 0,5H), 3,43-3,91 (m, 4H), 4,07-4,52 (m, 2,5H), 4,53-4,72 (m, 0,5H), 5,37 (s, 0,5H), 5,57 (d, 0,5H). Analytická HPLC (směs 2 díastereomerů) 7,92, 8,14 min. LC-MS (ES‘) m/e = 414,3 (MH+).
-117CZ 302281 B6 (2-ethoxy-5-oxoterahydrofuran-3-yl)amid l-[2-(4—allyloxy^^-diehlorbenzoylaminoJpropionyljpyiTolidin—2-karboxylové kyseliny (110)
Sloučenina se připraví ze sloučeniny 109 a 4-allyloxy-3,5—dichlorbenzoové kyseliny podle pos5 tupu popsaného pro přípravu sloučeniny 82. Získá se 228 mg (65 %) sloučeniny uvedené v názvu ve formě bílé pevné látky. *H NMR (500 MHz, deuteromethanol) δ 1,10-1,30 (m, 4H), 1,32-1,52 (m, 3H), 1,63-2,31 (m, 4H), 2,41-2,50 (d, 0,5H), 2,52-2,61 (dd, 0,5H), 2,67-2,81 (m, 0,5H), 2,94-3,05 (dd, 0,5H), 3,47-3,96 (m, 4H), 4,21-4,81 (m, 5H), 5,22-5,32 (m, 1H), 5,35-5,49 (m, 1,5H), 5,55-5,63 (m, 0,5H), 6,06-6,21 (m, 1H), 7,90 (s, 1H). Analytická HPLC (směs 2 ιο diastereomerů) 12,56 min, LC-MS (ES+) m/e ~ 542,3 (MH+).
(2-ethoxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amid l-[2-(3,5-diehlor-4-hydroxybenzoylamino)propionyl]pyrrolidin—2-karboxylové kyseliny (111)
K roztoku 194 mg (0,36 mmol) sloučeniny 110 v 5 ml dichlormethanu se při 0 °C přidá 70,7 mg (0,45 mmol) DMBA a 50,3 mg (0,044 mmol) Pd(PPh3)4. Roztok se po 15 minutách ohřeje na teplotu místnosti, míchá se 2 hodiny, zředí se dichlormethanem, potom se dvakrát promyje vodou a solankou. Organická vrstva se suší nad bezvodým síranem sodným a odpaří se za získání surového produktu. Po čištění pomocí velmi rychlé chromatografie za použití směsi dichlormethanu a methanolu (99/1 až 95/5 %)jako eluentu se získá 138,6 mg (výtěžek 77 %) sloučeniny uvedené v názvu. 'H NMR (500MHz, deuteromethanol) δ 1,13-1,31 (m, 3H), 1,35-1,49 (m, 3H), 1,842,35 (m, 4H), 2,43-3,05 (m, 2H), 3,48-3,93 (m, 4H), 4,22-1,80 (m, 3H), 5,38 (d, 0,4H), 5,46 (s, 0,lH), 5,55-5,61 (m, 0,5H), 7,76-7,94 (m, 2H). Analytická HPLC 8,70 min. LC-MS (ES1) m/e=502,2 (MH'j.
Schéma XXI
(103)
(114)
CCSBu-t
(115a) X=CI, Y=NH2, Z=H (11 5b)X=Cl. Y=AcNH. Z=H (115c)X=Cl. Y-AcNH, Z=CH3O *8
Y
- 118 CZ 302281 B6
Sloučeniny 116a-116h se připraví podle postupu popsaného pro přípravu sloučeniny 98 pouze náhradou terc-butylesteru l-(2-benzyloxykarbonylaminopropionyl)-4,4-difluorpyrrolidin-2karboxylové kyseliny (114) za terc-butylester l-(2-benzyloxykarbonylaminopropionyl)pyrroIidin-2-karboxylové kyseliny (95).
Příprava terc-butylesteru 1 -(2-benzyloxykarbonylaminopropionyl)~4.4-difluorpyrrolidin-2karboxylové kyseliny (114)
Roztok 0,42 g (1,23 mmol) 1-benzylesteru 2-terc-butylesteru 4,4-dÍfluorpyrrolidin-l,2-dikario boxy lové kyseliny (113) (Karanewsky, a kol., J. Med. Chem. 33, str. 1459-1469 (1990)) a 0,22 g
10% palladia na uhlí v 6 ml methanolu se míchá 3 hodiny při tlaku vodíku 105 Pa. Směs se filtruje přes křemelinu a odpaří se. Zbytek se rozpustí ve 4 ml dichlormethanu a 2 ml dimethylformamidu a ochladí se na 0 °C. Přidá se 0,30 g (1,35 mmol) 2-benzyloxykarbonylaminopropionové kyseliny, 0,30 g (1,54 mmol) EDC, 0,65 ml DIEA a 0,17 g (1,23 mmol) HOBt a reakční směs se míchá 0,5 Hodiny při 0 °C, potom 16 hodin při teplotě místnosti v dusíkové atmosféře. Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu a zbytek se rozpustí v ethylacetátu, potom se promyje 10% roztokem hydrogensíranu sodného, nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, vodou a solankou, suší se nad síranem sodným a odpaří se. Po čištění pomocí velmi rychlé chromatografíe na silikagelu za použití směsi 25:75 ethylacetátu a hexanu se získá 0,39 g (výtěžek 77 %) terc20 butylesteru l-(2-benzyloxykarbonylaminopropionylý-4,4-difluorpyrrolidin-2-karboxylové kyseliny ve formě bezbarvého oleje.
'H-NMR (500 MHz, deuterochloroform) δ 1,3 - 1,6 (m, 12H), 2,5 (m, 0,8H), 2,7 (m, 1,2H), 3,9 (m, IH), 4,1 (m, IH), 4,4 (m, IH), 4,7 (m, IH), 5,1 (m, 2H), 5,59 (šd, J = 7,7 Hz, 0,8H), 5,7 (šd, J = 7,7 Hz, 0,2H), 7,35 (m, 5H) ppm. Analytická HPLC (kolona kyano) 17,069 min. LC-MS (ES+): m/e=413 (M+H), 357 (M+H-terc-butyl), 313 [M+H-(CO2terc.butyl)].
(2-benzyIoxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amid l_[2-(4-amino-3-chlorbenzoylamino)propionyI]-4,4-difluor-pyrrolidin-2-karboxylové kyseliny (116a)
Sloučenina se připraví ze sloučeniny 115a a sloučeniny syn-40. Získá se 0,14 g (výtěžek 73 %) sloučeniny uvedené v názvu ve formě bělavé pevné látky. ‘HNMR (500 MHz, deuteromethanol) δ 1,0 - 1,5 (m, 3H), 2,0- 3,5 (m, 4H+CH3OH), 3,5- 5,5 (M, 6H+H2O), 5,6- 5,8 (m, IH), 6,7-6,8 (m, IH), 7,1 - 7,8 (m, 8H), 8,2 - 8,6 (m, IH) ppm. Analytická HPLC (kolona kyano)
1 3,744 min. LC-MS (ES+): m/e = 565 (M+H).
(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)-amid l-[2-(4-acetylamino-3-chlorbenzoylamino) propionyl)~4,4-difluorpyrrolidin-2-karboxylové kyseliny (116b)
-119CZ 302281 B6
Sloučenina se připraví ze sloučeniny 115b a sloučeniny syn- 40. Získá se 0,08 g (výtežek 38 %) sloučeniny uvedené v názvu ve formě bělavé pevné látky. I1-\MR (500 MHz, deuterochloroform) δ 1,03 (d, J = 6,9 Hz, 0,4H), 1,30 (d, J - 6,9 Hz, 0,6H), 2,25 (d, J “ 2,9 Hz, 3H), 2,4-3,2 (m, 4H), 3,6- 4,4 (m. 4H), 4,6- 4,9 (m, 3H), 5,52 (d, J 5,2 Hz, 0,6H), 5,78 (d, J - 5,2 Hz, 0,4H), 6,6 (šs, 1H), 6,9- 7,9 (rn, 8H), 8,39 (d, J- 8,1 Hz, 0,4H), 8,44 (d, J = 8,3 Hz, 0,6H), 8,74 (d, J = 6,8Hz, IH) ppm. Analytická HPLC (kolona kyano) 11,830 min. LC-MS (ES'); m/e = 607 (M+H).
(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amÍd l-[2-(4-acetylamino-5-chlor-2-methoxyto benzoylamino)propionyl]-4,4-diťluorpyrrolidin-2-karboxylové kyseliny (1 16c)
Sloučenina se připraví ze sloučeniny 1 15c a sloučeniny syn 40. Získá se 0,07 g (výtěžek 29 %) sloučeniny uvedené v názvu ve formě bělavé pevné látky. 'H-NMR (500 MHz, deuterochlorofortn) δ 0,99 (d, J - 6,9 Hz, 1,35H), 1,32 (d, J ’ 6,9 Hz, 1,65H), 2,25 (s, 1,5H), 2,26 (s, 1,5H),
2,3 - 3,2 (m, 4H), 3,95 (s, 0,55H), 3,98 (s, 0,45H), 3,7 - 4,1 (m, 2,5H), 4,2 - 4,5 (m, 1,5H), 4,6 4,9 (m, 3H), 5,52 (d, J = 5,3 Hz, 0,55H), 5,80 (d, J “ 5,3 Hz, 0,45H), 7,0 - 7,4 (m, 4H), 7,7 - 7,9 (ιη, 2H), 8,0-8,4 (m, 2H), 8,49 (d, J - 6,5 Hz, IH), 8,93 (d, J 6,7 Hz, IH) ppm. Analytická HPLC (kolona kyano) 12,959 min. LC-MS (ES4): m/e-638 (M+H).
(2-ethoxy-5-oxo-tetrahydrofuran-3-yl)amid 1 -[2-(4-acety lamino-3-chl orběnzoy lam ino)propionyl J—L4-difluorpyrrolidin-2-karboxylové kyseliny (116d)
Sloučenina se připraví ze sloučeniny 115b a allylesteru syn-(2-ethoxy-5—oxotetrahydrofuran-3yl)karbamové kyseliny. Získá se 0,27 g (výtěžek 66 %) bělavé pevné látky ve formě směsi epi25 merů 92:8. 'H-NMR. (500 MHz, deuterochloroform) δ 1,0- 1,5 (m, 6H), 2,25 (s, 1,8H), 2,26 (s, 1,2H), 2,3 - 3,1 (m, 4H), 3,3 - 4,3 (m, 4H), 4,5 - 4,9 (m, 3H), 5,45 (d, J “ 5,3 Hz, 0,75H), 5,59 (d, J = 5,2 Hz, 0,25H), 6,7 - 7,1 (m, 2H), 7,62 (dd, J = 8,7, 2,0 Hz, 1 H), 7,76 (m, 1H), 7,85 (d, J = 2,0Hz, IH), 8,48 (m, lH)ppm. Analytická HPLC (kolona C18) 13,300 (91,8 %), 14,046 (8,2 %) min. LC-MS (ES'): m/e 545 (M+H).
- 120CZ 302281 B6 (2-cyklohexyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amid l-[2-(4-acetylamino-3-chlorbenzoylamino)propionyl]—k4-difluorpyrrolidin-2-karboxylové kyseliny (116e)
Sloučenina se připraví ze sloučeniny 115b a allylesteru syn-(2-cyklohexyloxy-5-oxotetrahydro5 furan-3-yl)karbamové kyseliny. Získá se sloučenina uvedená v názvu ve formě směsi epimerů
93:7. ‘H-NMR (500 MHz, deuterochloroform) 6 1,0-2,0 (m, 13H), 2,25 (s, 2H), 2,26 (s, IH),
2,40 (dd, J = 17,3, 10,1Hz, IH), 2,84 (dd, J= 17,3, 8,5Hz, IH), 2,5 - 3,0 (m, 2H), 3,5 - 4,3 (m, 3,5H), 4,5 - 4,9 (m, 2,5H), 5,59 (d, J = 5,3 Hz, 0,75H), 5,76 (d, J = 5,2 Hz, 0,25 H), 6,74 (šd, J = 5,7 Hz, 0,25H), 6,93 (šd, J = 7,1Hz, IH), 7,06 (šd, J = 7,8 Hz, 0,75H), 7,62 (dd, J = 8,6, io 2,0Hz, IH), 7,78 (m, IH), 7,85 (d, J = 2,0 Hz, IH), 8,35 (šd, J = 6,6 Hz, 0,25H), 8,50 (šd, J =
8,2 Hz, 0,75H) ppm. Analytická HPLC (kolona 08) 17,112 (93 %), 17,433 (7 %) min. LC-MS (ES+): m/e = 599 (M+H).
[2-(indanol-2-yl)oxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl]amid l-[2-(4-acetylamino-3-chlorbenzoyl~ amino)propionyl]-4,4-difluorpyrroÍidin-2-karboxylové kyseliny (1160
Sloučenina se připraví ze sloučeniny 115b a allylesteru [2-(indanol-2-yl)oxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl]karbamové kyseliny. Získá se 0,34 g (výtěžek 71 %) sloučeniny uvedené v názvu ve formě směsi epimerů 62:38 jako bělavé pevné látky. ‘H-NMR (500 MHz, deuterochloroform) δ
1,09 (d, J= 6,9 Hz, 0,6H), 1,21 (d, J = 6,9 Hz, 0,9H), 1,33 (d, J= 6,9 Hz, 0,9H), 1,42 (d, J = 6,9 Hz, 0,6H), 2,28 (s, 2H), 2,29 (s, IH), 2,40 (dd, J = 17,4, 10,3 Hz, IH), 2,4 - 3,3 (m, 7H), 3,6 - 4,2 (m, 2H), 4,5 - 4,8 (m, 4H), 5,66 (m, 0,6H), 5,84 (d, J = 4,3 Hz, 0,2H), 6,22 (m, 0,2H), 6,7- 7,0 (m, 2H), 7,2-7,3 (m, 4H), 7,5- 7,7 (m, IH), 7,8- 8,0 (m, 2H), 8,52 (m, 0,6H), 8,62 (šd, 6,5 Hz, 0,4H) ppm. Analytická HPLC (kolona 08) 16,566 (62,0%),
1 6,824 (38,0 %) min. LC-MS (ES+): m/e = 633 (M+H).
(2~cy klopen ty lmethoxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amid l-[2-(4-acetylamino-3-chlorbenzoylamino)propionyl]-4,4-difluorpyrrolidin-2-karboxylové kyseliny (116g)
Sloučenina se připraví ze sloučeniny 115b a allylesteru syn-(2-cyklopentylmethoxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl]karbamové kyseliny. Získá se 0,20 g (výtěžek 44 %) sloučeniny uvedené v názvu ve formě bělavé pevné látky. 1 H-NMR (500 MHz, deuterochloroform) 5 1,0-1,8 (m, 11H), 1,9-3,0 (m, 5H), 2,26 (s, 3H), 3,29 (m, O,25H), 3,47 (m, 0,75H), 3,58 (m, 0,25H), 3,74 (m, 0,75H), 3,8 (m, 0,75H), 4,1 (m, 0,25H), 4,25 (m, IH), 4,4 - 4,8 (m, 3H), 5,44 (d, J = 5,2 Hz, 0,75H), 5,62 (d, J= 5,2 Hz, 0,25H), 6,7 (š, 0,25H), 6,91 (d, J= 7,1 Hz, IH), 7,1 (m, 0,75H), 7,59 (d, J = 8,5 Hz, 0,25H), 7,63 (dd, J= 8,5, 2,5 Hz, 0,75H), 7,75 (m, IH), 7,86 (d, J = 1,8 Hz, IH), 8,33 (šd, J = 6,5 Hz, 0,25H), 8,49 (šd, J = 8,4 Hz, 0,75H) ppm. Analytická HPLC (kolona 08) 17,705 min. LC-MS (ES+): m/e = 599 (M+H).
- 121 CZ 302281 B6
(2-fenylethoxy-5-oxotetrahydrofuran—3-yl)amid 1— [2—(4—acetylamino-3-chlorbenzoylamino)propionyl)—4,4-difluorpyrrolidin-2-karboxylové kyseliny (l I6h)
Sloučenina se připraví ze sloučeniny 115b a allylesteru syn-(5—oxo-2-fenethyloxytetrahydroíuran-3-yl|karbamové kyseliny. Získá se 0,15 g (výtěžek 24 %) sloučeniny uvedené v názvu ve formě bělavé pevné látky. 'H-NMR (500 MHz, deuterochloroform) Ó 1,29 (d, J - 6,9 Hz, O,75H), 1,40 (d, J = 6,9 Hz, 2,25H), 2,25 (s, 2,25H), 2,26 (s, 0,75H), 2,3 - 3,0 (m, 6H), 3,7 - 4,8 (m, 7H), 5,38 (d, J = 5,3 Hz, 0,75H), 5,67 (d, J -5,1 Hz, O,25H), 6,65 (m, 1 H), 6,90 (d, J = 7,0 Hz, ιο 0,75H), 7,06 (d, J= 7,6 Hz, O,25H), 7,1 -7,3 (m, 5H), 7,57 (d, J = 8,6 Hz, 0,25H), 7,63 (d, J = 8,6 Hz, 0,75 H), 7,75 (m, IH), 7,86 (d, J = 1,8 Hz, IH), 8,35 (d, J - 6,2 Hz, 0,25H), 8,49 (d, J= 8,3 Hz, 0,75H) ppm. Analytická HPLC (kolona 08) 17,265 min. LC-MS (ES*):
m/e = 621 (M+H).
Schéma XXII
(120b) = syn terc-buty tester 2-f2-benzyloxy-5—oxotetrahydrofuran-3-ylkarbamoyl)pyrrolidin-l-karboxylové kyseliny (118)
Sloučenina se připraví z 1,16 g (4,0 mmol) sloučeniny 40 a Boc-Pro-OH podle postupu použitého pro přípravu sloučeniny 100 (schéma XVIII). Získá se 1,53 g (výtěžek 94 %) sloučeniny uvedené v názvu ve formě bílé pevné látky. ’Η-NMR (500 MHz, deuterochloroform) δ 1,61 (š, 9H), 1,88 (š, 2H), 2,00- 2,50 (m, 3H), 2,803,10 (m, H), 3,20 - 3,60 (m, 2H), 4,05 - 4,45 (m,
1,5H), 4,58 - 4,80 (m, 1,5H), 4,83 - 4,98 (m, H), 5,43 - 5,53 (m, H), 7,26 - 7,45 (m, 5H), 7,60 7,80 (d, H); Analytická HPLC: 11,32 min; LC-MS: m/e = 405 (M+H+).
2-Fenylaminopropionová kyselina (119)
Směs 356 mg (4,0 mmol) ataninu, 816 mg (4,0 mmol) jodbenzenu, 160 mg (0,2 mmol) trans-dichlorbis(tri-o-tolylfosfin) palladia (II) {Pd[P(o-Tol)3)2Cl2}, 40 mg (0,2 mmol) jodidu měďného,
552 mg (4,0 mmol) uhličitanu draselného, 160 mg (0,8 mmol) benzyltriethylamoniumchloridu,
1,6 ml triethylaminu a 0,8 ml vody v 8 ml dimethylformamidu se 20 hodin míchá při 100 °C v dusíkové atmosféře. Směs se ochladí na teplotu místnosti, zředí se 50 ml ethylacetátu a 50 ml vody, okyselí se přidáním 6N kyseliny chlorovodíkové na pH - 2 až 3. Vodná vrstva se extrahuje čtyřikrát 50 ml ethylacetátu. Spojené organické vrstvy se promyjí vodou, solankou, suší se nad io bezvodým síranem sodným, filtrují se a odpaří se ve vakuu za získání červeného oleje. Po čištění pomocí směsi hexanu, ethylacetátu a kyseliny octové (95/5/0,5 až 80/20/0,5) se získá 300 mg (výtěžek 45 %) sloučeniny uvedené v názvu ve formě růžové pevné látky. 1 H-NMR (500 MHz, deuterochloroform/deuteromethanol = 0,5 ml/3 kapky): δ 1,45 (d, 3H), 4,02 - 4,15 (m, H), 6,57 6,70 (m, 3H), 7, U - 7,25 (m, 2H); analytická HPLC: 6,10 min. LC-MS: m/e = 166 (M+H+).
(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)-amid l-(2-fenylatninopropionyl)pyrrolidin-2-karboxylové kyseliny (120a a 120b)
Roztok 405 mg (1,0 mmol) sloučeniny 118 se 1 hodinu reaguje s 2 ml kyseliny trifluoroctové v 2 ml dichlormethanu, Reakční roztok se odpaří ve vakuu a azeotropicky čtyřikrát destiluje s dichlormethanem a získá se (2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amid pyrrolidin-2karboxylové kyseliny ve formě světle žluté pevné látky. ’H NMR (500 MHz, deuterochloroform): δ 1,87 - 2,15 (m, 4H), 2,30 - 2,70 (m, 2H), 2,80 - 3,08 (m, H), 3,45 (š, 2H), 4,35 - 4,98 (m, 3H), 5,30- 5,56 (m, H), 7,10-7,60 (m, 5H); analytická HPLC: 7,78/8,20 min; LC -MS:
m/e = 305 (M+H+).
300 mg (1,8 mmol) 2-Fenylaminopropionové kyseliny (119) v 10 ml dichlormethanu se při 0 °C 10 minut reaguje s 270 mg (2,0 mmol) HOBT a 2,1 g (11 mmol) EDC. Přidají se 2 ml diisopropylethylaminu a potom roztok (2-benzyloxy-5-oxo-tetrahydrofuran-3-yl)amidu pyrrolidin30 2-karboxylové kyseliny v 10 ml dichlormethanu. Směs se míchá 4 hodiny při teplotě místnosti, zředí se 40 ml dichlormethanu, promyje se vodou a potom solankou. Organická vrstva se suší nad bezvodým síranem sodným, filtruje se a odpaří se ve vakuu a získá se žíutá pevná látka. Po čištění pomocí velmi rychlé chromatografie za použití směsi dichlormethanu a methanolu (99/1 až 98/2) se získá 151 mg (výtěžek 33 %) anti diastereomerů sloučeniny uvedené v názvu 120a a 129 mg (výtěžek 29 %) syn diastereomerů (120 b) ve formě bílé pevné látky. 'H-NMR (500 MHz, deuterochloroform) pro anti diastereomer: δ 1,37 - 1,41 (m, 3H), 1,50 - 2,45 (m, 4H), 2,60- 2,70 (m, 0,3H), 2,89- 2,94 (m, 0,7H), 3,40- 3,80 (m, 2H), 4,10- 4,50 (m, 3H), 4,50 - 4,90 (m, 3H), 5,26 (s, 0,3H), 5,38 (s, 0,7H), 6,45 - 6,60 (m, 2,3H), 6,65 - 6,80 (m, H), 7,10- 7,20 (m, 2,5H), 7,25- 7,50 (m, 4,5H), 7,53 - 7,70 (m, 0,7H), 7,82 (d, H). Pro syn diastereomer: 0,86-0,89 (m, H), 1,20- 1,40 (m, 4H), 1,80 - 2,45 (m, 4H), 2,80-2,86 (m, H), 3,58 - 3,65 (m, 2H), -4,20 - 4,40 (m, H), 4,50 - 4,75 (m, 2H), 4,90 (d, H), 5,52 (d, H), 6,456,70 (m,3H), 6,75-6,85 (m, H), 7,10- 7,20 (m, 2,3H), 7,30-7,50 (m, 5,7H); Analytická HPLC: 10,55 min pro anti diastereomer a 10,62 min pro syn diastereomer; LC/MS: m/e = 452 (M+H+) pro oba diastereomery.
4~Oxo-3-{[1-(2-fenylaminopropionyl)pynOlidin-2-karbonyl]amino}-butanová kyselina (121)
Sloučenina se připraví ze 151 mg (0,33 mmol) sloučeniny 120 pomocí hydrolýzy podle způsobu A. Získá se 101 mg (výtěžek 83 %) sloučeniny uvedené v názvu ve formě bílé pevné látky.
*H-NMR (500 MHz, deuterochloroform/deuteromethanol 1/1): δ 1,20- 1,65 (m, 2H), 1,652,35 (m, 3H), 2,40 - 3,00 (m, H), 3,20 - 3,80 (m, 2H), 3,90 - 4,90 (m, 7H), 7,25 - 7,80 (m, 5H); Analytická HPLC: 6,38 min.; LC-MS: m/e = 362 (M+H+).
Obecné způsoby pro přípravu sloučenin podle provedení C vzorce I (schémata XXIII-XXV)
- 123 CZ 302281 B6
Schéma XX1I1
Způsob hydrolýzy A:
0,005 až 50 mmol vzorek alkylpoloacetalu se rozpustí v 2,5N kyselině chlorovodíkové v aceto5 nitrilu (10/1) a míchá se při teplotě místnosti dokud neskončí chemická reakce. Vznikající vodná vrstva se promyje dvakrát 20 ml diethyletheru a lyofilizuje se za získání produktu.
Způsob hydrolýzy B:
0,005 až 50 mmol vzorek alkylpoloacetalu se převede do čisté kyseliny mravenčí a míchá se přes io noc při teplotě místnosti. Směs se trituruje směsí hexanu a diethyletheru 3:1a získá se sraženina.
Rozpouštědlo se slije a sraženina se promyje diethyletherem a získá se produkt.
Způsob hydrolýzy C:
0,005 až 50 mmol vzorek alkylpoloacetalu se rozpustí v methanolu a přidá se 20% Pd(OH)2 na uhlí a míchá se vodíkové atmosféře, dokud se reakce nedokončí. Získaná suspenze se filtruje a roztok se odpaří ve vakuu, potom se trituruje směsí 3:1 hexanu a diethyletheru a získá se sraženina. Rozpouštědlo se slije a sraženina se promyje diethyletherem a získá se produkt.
Způsob hydrolýzy D:
0,005 až 50 mmol vzorek alkylpoloacetalu ve směsi acetonitrilu a vody (1/2) se protřepává s kyselou pryskyřicí (Dowex 50w x 2, H+ typ) dokud se reakce nedokončí. Roztok se filtruje a pryskyřice se promyje směsí acetonitrilu a vody (1/4). Získaná vodná vrstva se promyje diethyletherem, odpaří se do malého objemu ve vakuu, potom se lyofilizuje a získá se produkt.
Schéma XXIV:
- 124 CZ 302281 B6
4-Oxo-3-[(l-{2-[9-oxo-9H-fluoren-4-karbonyl)amino]propionyl}pyrrolidin-2-karbonyl)aminojbutanová kyselina (122a)
109,0 mg (0,19 mmol) vzorek sloučeniny 91 se hydrolyzuje podle způsobu A a získá se 88 mg
5 (výtěžek 96 %) sloučeniny uvedené v názvu: m/e = 492,2 (M+H). analytická HPLC 7,15 min. LC-MS (ES+)
Π o . H \ f°H
Ó J cr
Cl (J22b) H o
3-({l~[2-(4-Amino-3-chlorbenzoylamino)propionyl]pyrrolidin-2_karbonyl}amino)-4-oxobutanová kyselina (122b) to
51,0 mg (0,096 mmol) vzorek sloučeniny 76 se hydrolyzuje podle způsobu A a získá se 43,0 mg (výtěžek 100 %) sloučeniny uvedené v názvu: 'H-NMR (500 MHz, deuteromethanol/deuterovaná voda: 0,5 ml/10 kapek): δ 1,37 - 1,52 (m, 3H), 1,80- 2,20 (m, 3H), 2,20 - 2,37 (m, H), 2,49 - 2,60 (m, H), 2,60- 2,75 (m, H), 3,70- 3,80 (m, H), 3,80- 3,95 (m, H), 4,20- 4,35 (m, H), 4,40 - 4,50 (m, H), 4,50 - 4,70 (m, H), 4,70 - 4,85 (m, H), 6,85 - 6,87 (d, H), 7,58 - 7,60 (m, H), 7,77 (s, H); retenční čas analytické HPLC: 6,54 min; LC-MS: m/z = 439 (M+H+).
3-({ 1-(2-(3,5-Dichlor-4-methoxybenzoylamino)propionyl]pyrrolidin-2-karbonyl}amino)-4oxobutanová kyselina (122c)
51,0 mg (0,088 mmol) vzorek sloučeniny 92 se hydrolyzuje podle způsobu A a získá se 24,0 mg (výtěžek 56%) sloučeniny uvedené v názvu. Analytická HPLC 6,41 min, LC-MS (ES+) m/e = 488,3 (M+H).
3-<{l-[2-(4-Methoxy-3,5-dimethylbenzoylamino)propionyl]pyrrolidin-2-karbonyI}amino)-4oxobutanové kyseliny (122d)
55,0 mg (0,102 mmol) vzorek sloučeniny 77 se hydrolyzuje podle způsobu A a získá se 44,0 mg (výtěžek 96%) sloučeniny uvedené v názvu: analytická HPLC (Cl8) 8,70 min, 'HNMR (deuterochloroform, 500 MHz): δ 1,23- 1,70 (m, 3H), 1,80- 2,70 (m, 10H), 2,70- 3,15 (m, 2H), 3,58 - 4,20 (m, 5H), 4,32 - 5,50 (m, 3H), 5,60 - 6,00 (m, H), 6,80 - 7,90 (m, 4H); LCMS (ES+) m/e = 448,2 (M+H).
- 125 CZ 302281 B6
4-Oxo-3-(( l-{2-[pyridin-2-karbonyl)amino]propionyl}pyrrolidin-2-karbonyl)aminojbutanová kyselina (122e)
55,0 mg (0,1 14 mmol) vzorek sloučeniny 88 se hydrolyzuje podle způsobu A a získá se 30,0 mg (výtěžek 67 %) sloučeniny uvedené v názvu: analytická HPLC 4,60 min. LC-MS (ES ) m/e = 391.3 (M+H),
3- ({l-[2-(4-Acetylamino-3-chlorbenzoylamino)propionyl]pyrrolidin—2—karbony I Jam Íno)-4— io oxobutanové kyseliny (122f) mg (0,091 mmol) vzorek sloučeniny 78 se hydrolyzuje podle způsobu A a získá se 40 mg (výtěžek 91 %) sloučeniny uvedené v názvu: 'HNMR (500 MHz, deuteromethanol) δ 1,081,61 (m, 3H), 1,77- 2,41 (m, 3H), 2,21 (s, 3H), 2,41 - 2,77 (m, 2H), 3,43 - 3,63 (m, 0,3 H),
3,65 - 3,76 (m, IH), 3.81 - 3,94 (m, lH), 4,18 - 4,34 (m, 1H), 4,42 - 4,64 (m, 1,7H), 4,77 (kv,
IH), 7,79 (dd, 1 H); analytická HPLC 4,97 min. LCMS (ES*) m/e = 481,3 (M+H),
3-({ 1 —[2—·(4-Amino-3,5-dichlorbenzoylamino)propionyl]pyrrolidin-2-karbonyl}amino)-4oxobutanová kyselina (I22g)
44,3 mg (0,079 mmol) vzorek sloučeniny 89 se hydrolyzuje podle způsobu A a získá se 30 mg (výtěžek 81%) sloučeniny uvedené v názvu: analytická HPLC 5,40 min. LC-MS (ES+) m/e = 473,2 (M+H).
3- ({ 1[2 (3-Isopropoxybenzoylamino)propionyljpyrrolidin-2-karbonyl)amino) 4 oxobutanová kyselina (I22h)
- 126 CZ 302281 B6
52,0 mg (0,097 mmol) vzorek sloučeniny 79 se hydrolyzuje podle způsobu A a získá se 30,0 mg (výtěžek 69 %) sloučeniny uvedené v názvu: analytická HPLC 8,92 min. LC-MS (ES+) m/e = 448,3 (M+H).
3-({ l-[2-(3-benzyloxy—1—methoxybenzoylamino)propionyltpyrrolidin-2-karbonyl}amino)-4oxobutanová kyselina (122i)
50,8 mg (0,082 mmol) vzorek sloučeniny 81 se hydrolyzuje podle způsobu A a získá se 22,4 mg io (výtěžek 52 %) sloučeniny uvedené v názvu: analytická HPLC 6,72 min. LC-MS (ES+) m/e = 526,3 (M+H).
4-Oxo-3-[(l-{2-[(chinoxalin-2-karbonyl)amino]propionyl}pyrrolidin-2-karbonyl)amino]butanová kyselina (122j)
38,0 mg (0,072 mmol) vzorek sloučeniny 80 se hydrolyzuje podle způsobu A a získá se 32,0 mg (výtěžek 100%) sloučeniny uvedené v názvu: analytická HPLC 5,95 min. LC-MS (ES+) m/e = 442,3 (M+H).
3-{{ 1-(2-(3,5-Dichlor—4—hydroxybenzoylamino)propionyl]pyrrolidin-2-karbonyl}amino)-4oxobutanová kyselina (122k) mg (0,060 mmol) vzorek sloučeniny 83 se hydrolyzuje podle způsobu A a získá se 29,4 mg (výtěžek 75 %) sloučeniny uvedené v názvu: analytická HPLC 7,91 min. ’Η-NMR (500 MHz, deuteromethanol) δ 1,47 (m, 3H), 1,8 - 2,3 (m, 4H), 2,49 (m, 1H), 2,61 (m, 1H), 3,5 (šm, 0,2H), 3,69 (šm, 0,9H), 3,84 (šm, 0,9H), 4,27 (m, 1H), 4,46 (m, 1H), 4,57 (m, 1H), 4,73 (m, ÍH), 7,83 (m, 2H) ppm, LC-MS (ES+) m/e = 474,1 (M+H).
- 127CZ 302281 B6
-({1--[2-(4-Amino-3-triťluormethylbenzoylamino)propionyl]pyrrolidin-2-karbonyl}amino) 4-oxobutanová kyselina (1221)
10 mg (0,021 mmol) vzorek sloučeniny 98w se hydrolyzuje podle způsobu A a získá se 7,9 mg (výtěžek 94 %) sloučeniny uvedené v názvu: analytická HPLC 6,64 min. LC-MS (ES1) m/e - 473 J (M+H).
3-(í 1-(2-(3-Chlor-4-dimethy lam inobenzoylamino)propionyl Ipyrrol idÍn-2-karbonyl} amino)io 4-oxobutanová kyselina (122m)
10.0 mg (0,021 mmol) vzorek sloučeniny 98x se hydrolyzuje podle způsobu A a získá se 7,0 mg (výtěžek 84 %) sloučeniny uvedené v názvu: analytická HPLC 5,15 min. LC-MS (ES1) m/e - 467.3 (M+H).
3-({ l-[244-DimethyIamino-3,5-difluorbenzoylamino)propionyl]pyrrolidin-2-karbonyl}amino)-4-oxobutanová kyselina (122n)
20,0 mg (0,043 mmol) vzorek sloučeniny 98y se hydrolyzuje podle způsobu A a získá se 16,8 mg 20 (výtěžek 100 %) sloučeniny uvedené v názvu: analytická HPLC 5,86 min. LC-MS (ES*) m/e = 469,3 (M+H).
(122o)
3-{{l-[2-(4-AminO“3-chlorbenzoylamino)propionyl]pyiTolidin-2-karbonyl}amino)-4-oxobutanová kyselina (122o)
- 128 CZ 302281 B6
20,0 mg (0,046 mmol) vzorek sloučeniny 98m se hydrolyzuje podle způsobu A a získá se 16,7 mg (výtěžek 100 %) sloučeniny uvedené v názvu: analytická HPLC 8,47 min. LC-MS (ES^) m/e = 439,2 (M+H).
(122p)
3-({ 1—[2—(4—Amino-2,3,5,6-tetrafluorbenzoylamino)propionyl]pyrrolidin-2-karbonyl}amino)4—oxobutanová kyselina (122p)
20,0 mg (0,042 mmol) vzorek sloučeniny 98z se hydrolyzuje podle způsobu A a získá se 15,3 mg
(výtěžek 91 %) sloučeniny uvedené v názvu: analytická HPLC 7,90 min. LC-MS (ES+)
to m/e = 477,2 (M+H).
π I /-“Λ O
ÍJ ηΛγ -O Á>H
N* o X J
T Ctn γ
H II o
<122q)
4-Oxo-3-[(l-{2-[(chmolin-6-karbonyl)amino]propionyl}pyrrolidin-2-karbonyl)amino]butanová kyselina (122q)
44 mg (0,080 mmol) vzorek sloučeniny 93 se hydrolyzuje podle způsobu A a získá se 41 mg (výtěžek 100%) sloučeniny uvedené v názvu: ’HNMR (500 MHz, deuteromethanol) 5 1,241,69 (m, 3H), 1,75 - 2,37 (m, 4H), 2,39 - 2,87 (m, 2H), 3,46 - 4,04 (m, 2H), 4,11 - 4,77 (m, 3H), 8,19 (dd, IH), 8,33 (d, IH), 8,56- 8,58 (m, IH), 8,85 (s, IH), 9,27- 9,39 (m, 2H); analytická HPLC 4,91 min. LC-MS (ES+) m/e = 441,2 (M+H).
3—({1 — [2—(4—Acetylamino-5-ch lor—2-methoxybenzoy lamino)-propiony ljpyrrol id in—2—karbonyl}amino)-4—oxobutanová kyselina (122r)
44,5 mg (0,074 mmol) vzorek sloučeniny 87 se hydrolyzuje podle způsobu A a získá se 34,5 mg 25 (výtěžek 91 %) sloučeniny uvedené v názvu: analytická HPLC 6,88 min. LC-MS (ES+) m/e = 511,2 (M+H).
- 129 (+/. 302281 B6
3-1 (Ι-ι2 -(3 Chlor-4—(2.2-díinethvlpropionvlamino)benzoylaminoJpropionyl}pyrrolidin-2karbony1)amino] -4-oxobutanová kyselina (122s)
19,0 mg (0,036 mmol) vzorek sloučeniny 98aa se hydrolyzuje podle způsobu A a získá se 14.5 mg (výtěžek 90 %) sloučeniny uvedené v nazvu: analytická HPLC 7,28 mín. LC-MS (ES*) m/e = 523,3 (M+H).
3- ({ l-[2-(3-Chlor-4-propionylaminobenzoylammo)propionyl]pyrrolidin-2-karbonyl}amÍno)4- oxobutanová kyselína(122t)
21,0 mg (0,042 mmol) vzorek sloučeniny 98ab se hydrolyzuje podle způsobu A a získá se 17,5 mg (výtěžek 97 %) sloučeniny uvedené v názvu: analytická HPLC 5,72 min. LC-MS (ES ) m/c = 495,2 (M+H).
3-( í I -[2 {3- Chlor 4--fenylacetylaminobenzoylaniino)propionyl]pyrrolidin-2-karbonyl }amino)-4-oxobutanová kyselina (122u)
10,0 mg (0,017 mmol) vzorek sloučeniny 98ac se hydrolyzuje podle způsobu A a získá se 7,9 mg (výtěžek 85%) sloučeniny uvedené v názvu: analytická HPLC 7,52 min. LC-MS (ES ) m/e = 557,2 (M+H).
3-[( l-{2-[3-Ch!or-4-(3-methylbutyrylamino)benzoylamino]propionyl }pyrrolidin-2-karbonyl)amino]- 4-oxobutanová kyselina (122v)
8,0 mg (0,051 mmol) vzorek sloučeniny 98ad se hydrolyzuje podle způsobu A a získá se 6,5 mg (výtěžek 96%) sloučeniny uvedené v názvu: analytická HPLC 6,92 min. LC-MS (ESh) m/e = 523,2 (M+H).
-130CZ 302281 B6
Schéma XXV
(108a) X=C1. Y=NH2. Z=H. Qi=F. Q?=H (116b)X=Cl. Y=AcNH. 2=H, Q^Cfe-F (ll6c)X=Ct, Y=AcNH. Z=CH3O,Qi=Q2=F (123a)X-CI, Y=NH2> 2=H. Q*=F, Qř=H (123b)X-Cl. Y-AcNH, Z=H. Qi=Q2=F (123c)X=Cl, Y=AcNH, ZsCHaO.Q! =Οζ=Ρ
3- ( {1 -[2-(4-Amino—3—chlorbenzoylamino)propionyl]—4-fluorpyrrolidin-2-karbonyl) amino)4- oxobutanová kyselina (123a)
12,4 mg (0,022 mmol) vzorek sloučeniny 108b se hydrolyzuje podle způsobu A a získá se 9,6 mg (výtěžek 93 %) sloučeniny uvedené v názvu: analytická HPLC 6,99 min. LC-MS (ES+) m/e = 473,2 (M+H).
ιο 3-({ l-[2-(4—Acetylamino-3-chlorbenzoylamino)propionyl]—L4—difluorpyrrolidin-2-karbonyl}amino)-4—oxobutanová kyselina (123b)
26,2 mg (0,043 mmol) vzorek sloučeniny 116b se hydrolyzuje podle způsobu A a získá se 10,8 mg (výtěžek 49 %) sloučeniny uvedené v názvu: analytická HPLC 9,89 min. LC-MS (ES+) m/e = 517,2.
3-( {1 — [2-(4—Acety lamí no—3—chlor—2—methoxybenzoylamino)propiony 1]—4,4-difluorpyrrol idin— 2-karbonyl}amino)-4-oxobutanová kyselina (123c)
23,1 mg (0,036 mmol) vzorek sloučeniny 116c se hydrolyzuje podle způsobu A a získá se 1,8 mg (výtěžek 9%) sloučeniny uvedené v názvu: analytická HPLC 11,87 min. LC-MS (ES+) m/e = 547,1 (M+H).
Biologické způsoby
Za použití způsobů popsaných dále byly získány in vitro, ex vivo a in vivo údaje o vybraných sloučeninách podle předkládaného vynálezu. Výsledky jsou uvedeny v tabulkách 2 až 8. Označení „ND“ znamená, že se sloučenina v uvedeném testu netestovala.
V testech ÍCE kaspázy znamená kategorie „A“ inhibicí <10 nM. Kategorie „B“ znamená inhibicí 10 až 100 nM. Kategorie „C“ znamená inhibicí >1000 nM. Viz. tabulky 2 a 3.
Při testu PBMC znamená kategorie „A“ inhibicí <500 nM. Kategorie „B“ znamená inhibicí 500 až 1000 nM. Kategorie ,,C“ znamená inhibicí 1001 až 2000 nM. Kategorie „D“ znamená inhibicí >2000 nM. Viz tabulka 4.
Při testu úplné krve znamená kategorie „A“ inhibicí <2500 nM. Kategorie „B“ znamená inhibicí 2500 až 7500 nM. Kategorie „C“ znamená inhibicí >7500 nM. Viz tabulka 5,
Při in šitu metabolickém testu jsou hodnoty [f(g)) x f(h)] uvedeny následujícím způsobem: kategorie „A <0,25. Kategorie „B“ znamená 0,25 až 0,49. Kategorie „C“ znamená 0,5 až 0,75. Kategorie „D“ znamená >0,75. Při měření vylučování žluče znamená kategorie „A“ < 5 %. Kategorie „B“ znamená 5 až 10%. Kategorie „C“ znamená >10%. Viz. tabulka 6.
- 131 CZ 302281 B6
Při i.v. clearance testu jsou hodnoty uvedeny následujícím způsobem: kategorie „A“ znamená < 50. Kategorie „B znamená 50 až 80. Kategorie „C“ znamená > 80. Viz. tabulka 7.
Při testu biologické využitelnosti jsou uvedeny hodnoty Cmax (pg/ml) následujícím způsobem:
kategorie „Awt znamená < 2,5. Kategorie ,.tí. znamená 2,5 až 5,0. Kategorie „C“ znamená > 5,0. Hodnoty AUC (pg x hod/ml) jsou uvedeny následujícím způsobem: kategorie „A“ znamená < 2,5. Kategorie „B“ znamená 2,5 až 5,0. Kategorie „C“ znamená > 5,0. Rozmezí poločasů života (hodiny) jsou uvedeny následujícím způsobem: kategorie „A“ znamená < 1,5. Kategorie „B“ znamená 1,5 až 2,0. Kategorie „C“ znamená > 2,0. Hodnoty F (%) jsou uvedeny následujícím io způsobem: kategorie „A“ znamená < 33. Kategorie „B“ znamená 33 až 67. Kategorie „C“ znamená > 67. Viz tabulka 8.
In vitrotesty lnhibice enzymu ís Hodnoty K, pro testované sloučeniny s různými kaspázami se získají podle způsobu popsaného v Margolin a kol. (J. Biol. Chem., str. 272 7223 až 7228 (1997)). Testy se provádějí v 10 nM Tris (Sigma Corp., St Louis MO) pH 7,5, 1 mM dithiothreitolu (DTT, Research Organic INC, Clevelans, OH) a 0,1 % CHAPS (Pierce, Rockford IL) při teplotě 37 °C. Pro kaspázu 3- se pro zlepšení stability enzymu přidá k pufru 8% glycerol. Do 96jamkové mikrotitrační destičky se
2o pipetují 65μ1 alikvoty testovaného pufru a 5μϊ alikvoty příslušných roztoků inhibitorů v dimethylsulfoxidu, reagují se s 10 μΐ kaspázy, potom se zředí testovým pufrem (0,5 až 40 nM aktivního proteinu pomocí titrace aktivního místa). Pro každé stanovení se použije kontrolní vzorek obsahující dimethylsulfoxid, ale žádnou sloučeninu. Destičky se potom inkubují 15 minut při teplotě 30 °C, potom se přidá 20 μΙ příslušného substrátu (konečná koncentrace IA X KM, konečný objem testu 100 μΐ), čímž se zahájí reakce. Reakční rychlost se měří při 37 °C bud1 sledováním vzrůstu absorbance závislého na čase při 405 nm (pro substráty pNA), nebo fluorescence (Ex 390, Em 460) (pro substráty AMC). Získané rychlosti se vynesou proti koncentraci inhibitoru a upraví se podle Morrisonovy rovnice síly vazby pro kompetitivní inhibitory (Morrison, J. F., Biochem., Biophys. Acta, str. 185, 269-286 (1969)). Pro jednotlivé testy se použijí následující jo substráty:
Kaspáza-1 Suc-YVAD-pNA (Bachem, King of Prussia, PA) (konečná koncentrace při testu 80 μΜ),
Kaspáza-3 Ac-DEVD-pNA (Bachem, King of Prussia, PA) (konečná koncentrace při testu 60 μΜ),
Kaspáza 4 Ac-WEHD-AMC (Synpep, Dublin, CA) (konečná koncentrace při testu 20 μΜ),
Kaspáza-7 Ac—DEVD-AMC (Bachem, King of Prussia, PA) (konečná koncentrace při testu 50 μΜ),
Kaspáza-8 Ac-DEVD-pNA (Bachem, King of Prussia, PA) (konečná koncentrace při testu 80 μΜ),
Tabulka 2: Údaje o inhibici kaspázy-1
Přiklad Kaspáza-1 Ki (nM)
5a A
5b A
5c A
5d A
5e B
f Ξ z B
- 132 CZ 302281 B6
Příklad Kaspáza-1 Ki (nM)
sg B
5h A
5i A
5j A
5k A
5.1 B
Sm A
5n A
5o B
5p B
5q B
5r B
5s B
5t C
5u B
5V B
5w B
5X A
sy A
5z A
5aa A
Sab B
5ac A
Sad A
Sae B
5af | B
5ag 1 ί A
Sah B
Sai A
Saj B
Sak B
- 133CZ 302281 B6
Příklad Kaspáza-1 Ki {nM}
5al A
Sam A
5an 3
5ao B
5ap B
5ag B
5ar A
Sas A
5at B
Sau B
5av B
5aw A
5ax A
5ay A
5az A
5ba A
Sbb A
5bc B
Sbd A
7a A
7b B
7c A
7d A
7e B
7f B
7g A
7h B
7i B
7j C
7JS B
71 B
- 134CZ 302281 B6
Příklad Kaspáza-1 Ki (nM)
7τη B
7n B
7o A
7p A
B
7r B
7S B
7t B
7u B
7V B
7w A
7x B
7y B
7z B
7aa A
7ab B
7ac B
7ad B
7ae B
7af 5
7ag B
7ah A
7ái A
7aj A
7ak A
7al B
7am A
Van A
7ao 3
7ap a
7aq B
- 135CZ 302281 B6
Příklad Kaspáza-1 Ki (nM)
7ar A
7as A
7at A
9a B
9b A
9c A
9d A
9e A
9ř A
99 A
15a A
15b A
15c A
15d B
I5e B
15f B
16a B
16b A
17a 3
17b B
17c A
17d 3
17e B
10a B
18b A
18C B
18d B
18e A
18f 3
20a A
20b A
- 136CZ 302281 B6
Příklad Kaspáza-1 Ki (nM)
20c A
20d B
20e A
20f A
20g A
20h A
20i B
20j B
20k A
201 A
2 0m A
2 On A
20o A
20p A
20q B
20r B
20s A
20t B
23a A
23b B
23c A
23d A
23e A
23f B
23g A
23h A
23i B
24a | A
24b C
24C A
24d B
- 137 CZ 302281 B6
Příklad Kaspáza-1 Ki (nM)
24e B
25a A
25b A
25c A
25d A
25e A
26a A
26b A
26c A
26d A
26e A
26f A
26g A
26h A
27a B
27b B
27c B
27d A
27e B
27f B
27g A
27h B
27i 3
27j B
27k B
271 B
27m B
27n B
28a A
28b A
) 28c A
- 138CZ 302281 B6
Příklad Kaspáza-1 Ki (nM)
29a A
29b A
29C A
29d A
29e A
29f A
29g A
29h A
29i A
29j A
29k A
291 B
2 9m A
2 9n B
29o ! B
2 9p 1 1 A
2 9q A
29r A
29s B
32a C
32b C
32c C
32d c
32e δ
34 c
G2 c
G2 B
42 B
46b A
46a C
57 A
- 139CZ 302281 B6
Příklad Kaspáza-1 Ki (nM)
65 A
61 A
65 A
73 A
121 C
122a A
122b A
122C A
122d A
I22e B
122f A
122g A
122h B
122i A
122j B
122k A
1221 I B
12 2 τη B
122n B
1220 C
122p A
122q B
122r B
122s B
122t B
122u A
122v 3
123a B
123b B
12 3 c B
- 140CZ 30228í B6
Tabulka 3: Údaje o inhibici kaspázy-3, kaspázy—4 a kaspázy-8
Příklad Kaspáza-3 Ki ÍnM) Kaspáza-4 Ki ÍnM) Kaspáza-8 Ki ÍnM)
7c c ND C
7d c ND 3
7f c ND C
24a c ND ND
29a c ND ND
29b c ND ND
32d B ND ND
46b B ND ND
69 C ND B
122b C A B
122d C A C
122f C ND B
122k C ND 3
PBMC buněčný test
Test IL-Ιβ se smíšenou populací mononukleámích buněk lidské periferní krve (PBMC) nebo mononukleámích obohacených adherentních buněk
Zpracování pre-IL-Ιβ pomocí ICE se může měřit v buněčné kultuře za použití různých zdrojů buněk. Lidské PBMC získané od zdravých dárců poskytují smíšenou populaci subtypů lymfocytů io a monojaderných buněk, které poskytují spektrum interleukinů a cytokinů jako odezvu na mnoho tříd fyziologických stímulátorů. Adherentní monojademé buňky z PBMC nabízejí obohacený zdroj normálních monocytů pro selektivní studii produkce cytokinů aktivovanými buňkami.
Experimentální postup:
Připraví se počáteční série roztoků testované sloučeniny v dimethyIsulfoxidu, potom se zředí do RPMI-10% FBS média (obsahujícího 2 mM L-glutaminu, 10 mM HEPES, 50 U a 50 gg/ml pen/strep) v tomto pořadí a získají se léčiva o čtyřnásobné koncentraci, než je konečná koncentrace, obsahující 0,4 % dimethyIsulfoxidu nebo 0,4 % ethanolu. Konečná koncentrace dimethy 120 sulfoxidu je 0,1 % pro všechny roztoky léčiv. Pro počáteční screening sloučeniny se obvykle použije titrace koncentrace, která vymezuje zjevné Ki pro testované sloučeniny určené při testu inhibice ICE.
Obvykle se testuje 5 až 6 roztoků sloučeniny a buněčná složka testů se provádí dvojnásobně, při dvojnásobném ELIS A stanovení u každého supematantu buněčné kultury.
Izolace PBMS a test IL-1
Buňky „buffy coat“ izolované z jedné pinty (0,473 1) lidské krve (získá se konečný objem 40 až 45 ml plazmy plus buněk) se zředí médiem na 80 ml a dělicí zkumavky LeukoPREP (Becton Dickinson) se převrství vždy 10 ml suspenze buněk. Po 15 minutách odstřeďování při 1500 až
1 800 x g se vrstva plazma/médium odsaje a potom se Pasteurovou pipetou odebere vrstva mononukleámích buněk a převede se do 15ml kuželovité odstřeďovací zkumavky (Corning). Přidá se médium do konečného objemu 15 ml, buňky se pomocí obrácení opatrně promíchají a odstřeďuje
- 141 CZ 302281 B6 se 15 minut při 300xg. PBMC peleta se resuspenduje v malém objemu média, buňky se spočítají a upraví se na 6 x IO6 buněk/ml.
Pro buněčný test se do každé jamky 24jamkové mikrotitrační destičky pro tkáňové kultury s plo5 chým dnem (Corning) přidá 1,0 ml suspenze buněk, 0,5 ml roztoku testované sloučeniny a 0,5 ml roztoku LPS (Sigma #L—3012; 20 ng/ml roztok připravený v úplném RPM1 médiu; konečná koncentrace LPS 5 ng/ml). Přidání 0,5 ml testované sloučeniny a LPS je obvykle dostačující pro promíchání obsahu jamek. Pro pokus se použijí tři kontrolní směsi buď s LPS samotným, kontrolním rozpouštědlem, a/nebo dalším médiem pro úpravu konečného objemu kultury na in 2,0 ml. Buněčné kultury se inkubují 16 až 18 hodin při 37 °C v přítomností 5 % oxidu uhličitého.
Na končí doby inkubace se buňky sklidí a převedou se do I5ml kuželovité odstřeďovací zkumavky. Po 10 minutách odstřeďování při 200 xg se supematanty sklidí a převedou se do l,5ml Eppendorfových zkumavek. Je třeba poznamenat, že buněčná peleta se může použít při bioche15 mickém testování pre ll- ΐβ a/nebo maturovaného IL-Ιβ v cytosolových extraktech pomocí Westernového přenosu nebo ELISA se specifickými protilátkami pre-IL-Ιβ.
Izolace adherentních monojademých buněk:
2o PBMC se izoluje a připraví podle postupu popsaného výše.Do jamek se nejprve přidá 1,0 ml média, potom 0,5 ml suspenze PBMC. Po 1 hodině inkubace se destičky opatrně protřepou a z každé jamky se odsají neadherentní buňky. Buňky se potom opatrně třikrát promyjí 1,0 ml média a nakonec se suspendují v 1,0 ml média. Obohacení na adherentní buňky obvykle poskytne 2,5 až 3,0 x 105 buněk na jamku. Přidání testovaných sloučenin, LPS, podmínky inkubace buněk a zpracování supematantů probíhá podle postupu popsaného výše.
ELISA:
Pro měření maturovaného IL— 1 β se může použít sada Quantikin (R&D Systems). Testy se provádějí podle doporučení výrobce. Pozorují se hladiny maturovaného IL-Ιβ asi I až 3 ng/ml v PBMC a pozitivním kontrolním vzorku monojademých buněk. ELISA test se provádí při zře30 děních supernatantů 1:5, 1:10a 1:20 z LPS pozitivní kontroly, čímž se vybere optimální zředění supematantů v testovém poli.
Inhibiční účinnost sloučenin se může prezentovat hodnotou IC50, což je koncentrace inhibitoru, při které se v supernatantu detekuje 50 % maturovaného IL—1β ve srovnání s pozitivní kontrolou.
Odborníkům v této oblasti je zřejmé, že hodnoty získané při testech mohou být závislé na mnoha faktorech. Hodnoty nemusí nutně představovat kvantitativní výsledky.
Tabulka 4: Údaje z PBMC buněčného testu
Příklad PBMC IC50 (nM)
5a D
5b B
Sc B
5d i 1 S
5e B
5f C
55 c
5h A
- 142 CZ 302281 B6
Příklad PBMC IC50 (nM)
5i c
53 D
Sk D
51 A
5m A
5n B
5r D
5s B
5u C
5v D
5w B
SX B
5Y B
Sz 3
Saa B
Sab B
5ac A
Sad A
Sag B
Sai A
Saj B
Sak S
Sal D
Sam D
Sao D
Saq D
Sar D
Sas D
Sat D
5 au D
Sav D
- 143CZ 302281 B6
Příklad PBKC IC50 (nM)
5aw C
Sax B
5ay B
Saz B
Sba C
Sbb B
Sbd C
7a D
7b B
7c ' A
7d A
7e D
7f D
7g A
7h B
7k B
71 B
7m 3
7n B
7o A
7p D
D
7s B
7t D
7u D
7v D
7w C
7X D
7y D
7z C
9a B
- 144 CZ 302281 B6
Příklad PBMC IC5 0 (nM)
9b B
9c A
9d B
9e C
9f B
sg C
15a D
15b C
15c B
I5d C
15e D
I5f D
íea A
16b C
17b C
17c D
17d D
17e B
18a B
18b B
18c B
18d B
18e C
iaf D
20a B
2 0b B
20c C
20d D
20e C
20í B
20g A
- 145CZ 302281 B6
Příklad PBMC IC50 (nM)
20h A
20i B
20 j 3
20k A
201 B
2 0m B
20n B
200 A
2 Op A
20q B
20r B
20S C
20t B
23a C
23b B
23c C
23d B
23e B
23f C
23g C
23h c
23i A
24a B
24b D
24c A
24d B
24e C
25a A
25b B
25c B
26a C
- 146 CZ 302281 B6
Příklad PBMC IC50 (nM)
26b B
26c B
26d B
26e A
26f A
26g A
26h A
27a A
28a 3
28b B
28c B
29a A
29b C
29c B
29d B
29e A
29g B
29h A
29i A
29j B
29k A
291 B
2 9τη B
42 D
4 6b D
57 B
65 3
61 B
69 A
73 B
122a D
- 147 CZ 302281 B6
Příklad PBMC IC50 (nM)
122b 3
122c D
122d B
122e C
122f B
122g 3
122h C
122i C
I22j D
122k A
1221 B
l est úplné krve na produkci IL-1 β
Hodnoty IC5« sloučenin podle předkládaného vynálezu při testu úplné krve se získají pomocí 5 způsobu popsaných níže:
Záměr:
Test úplné krve je jednoduchý způsob pro měření produkce IL-Ιβ (nebo jiných cytokinů) lo a aktivity potenciální inhibitorů. Komplexnost tohoto testovacího systému, s plným obsazením typů lymfoidních a zánětlivých buněk, spektrem plazmových proteinů a červených krvinek, je ideální in vitro simulací lidských in vivo fyziologických podmínek.
Materiály:
Stříkačky prosté pyrogenu (asi 30 cm3)
Sterilní vakuové zkumavky prosté pyrogenu obsahující lyofilizovaný Na?EDTA (4,5 mg/lOml zkumavku)
Vzorek úplné lidské krve (asi 30 až 50 cm3) l,5ml Eppendorfovy zkumavky
Zásobní roztoky testované sloučeniny (25 mM v dimethylsulfoxidu nebo jiném rozpouštědle
Roztok chloridu sodného (0,9%) a HBSS prostý endotoxinu
Zásobní roztok lipopolysacharidu (Sigma; kat. č. # L-3012) při 1 mg/ml v HBSS
IL-1 β ELISA sada (R&D Systems; kat. č. # DLB50)
TNFa ELISA sada (R&D Systems; kat. č. # DTA50)
Vodní lázeň nebo inkubátor
Experimentální postup testu úplné krve:
Inkubátor nebo vodní lázeň se nastaví na teplotu 30 °C. Do l,5ml Eppendorfových zkumavek se umístí alikvot 0,25 ml krve.
Poznámka: je třeba zajistit převrácení zkumavky se vzorkem úplné krve po každých dvou alikvotech. Pokud se buňky usadí a nejsou jednotně suspendované, mohou vzniknout rozdíly
-148CZ 302281 B6 mezi opakovanými stejnými pokusy. Tyto rozdíly mezi opakovanými alikvoty lze také minimalizovat použitím pipety s plastovou jednorázovou špičkou.
Pomocí série zředění se připraví roztoky léčiva ve sterilním šalinu prostém pyrogenu. Pro počáteční screening sloučeniny se obvykle použije série roztoků, která vymezuje zjevné Ki pro testovanou sloučeninu určené při testu inhibice ICE. Pro mimořádné hydrofobní sloučeniny se připraví roztoky v čerstvé plasmě získané od stejného dárce krve nebo v 5% di methy lsulfoxídu obsahujícím PBS, čímž se zvýší rozpustnost.
Přidá se 25 μΐ roztoku testované sloučeniny nebo kontrolního vehikula a vzorek se opatrně promíchá. Potom se přidá 5,0 μΐ roztoku LPS (250 ng/ml čerstvě připraveného zásobního roztoku: konečná koncentrace LPS 5,0 ng/ml) a vzorek se opět promíchá. Zkumavky se za občasného míchání inkubují při 30 °C ve vodní lázni 16 až 18 hodin. Alternativně se mohou zkumavky na stejný inkubační čas umístit do otočné sady při 4 otáčkách za minutu. Tento test se může provést dvojnásobně až trojnásobně s následujícími kontrolními vzorky: negativní kontrola - bez LPS; pozitivní kontrola - bez testovaného inhibitoru; kontrolní vehikulum - nejvyšší koncentrace DMSO nebo rozpouštědla sloučeniny použitého při pokusu. Ke kontrolním zkumavkám se přidá další šalin, čímž se normalizují objemy pro kontrolní a experimentální vzorky úplné krve.
Po inkubační době se vzorky úplné krve odstřeďují 10 minut při 2000 otáčkách za minutu, plazma se převede do čerstvé odstřeďovací zkumavky a odstřeďuje se při 1000 x g, aby se odstranily zbývající destičky, pokud je to nutné. Vzorky plazmy se mohou před testem na hladinu cytokinů pomocí testu ELIS A zmrazit na -70 °C.
ELISA:
Pro měření IL-Ιβ a TNF-ct se může použít sada Quantikin R & D Systems (614 McKinley Plače N. E. Minneapolis, MN 55413). Testy se provádějí podle instrukce výrobce. V pozitivních kontrolních vzorcích se pozorují hladiny IL-Ιβ a 1-5 ng/ml. Aby výsledky ELISA spadaly do lineárního rozmezí standardních křivek ELISA, je obvykle dostačující zředění plazmy pro všechny vzorky 1:200. Pokud se pozorují rozdíly při testu úplné krve, může být nutné optimalizovat standardní zředění. Nerad, J. L. a kol., J. Leukocyte Biol., 52, str. 687 až 692 (1992).
- 149CZ 302281 B6 t abulka 5: Údaje z testu úplné krve
Příklad Úplná krev IC50 (nM)
5a A
5b A
5c A
Sd B
5e A
5f B
5h A
5i C
5j C
5k 3
51 C
5m A
5n B
5r i c
5s c
5ú A
5.w A
5x A
5y B
5z C
Saa A
5ab B
5ac A
Sad A
Sag B
5ai C
5aj C
Sak C
5ax 1 3
5ay B
- 150CZ 302281 B6
Příklad Úplná krev ICS0 (nM)
Saz A
5bb B
7a B
7b A
7c A
7d B.
7e C
7f B
i B
|------ 1 7h A
7k A
71 A
7m B
7n A
7o A
B
7q A
7s B
7t B
7u B
7v A
7w A
7x C
7y C
7z A
7aa B
7ab A
7ac B
7ad B
7ab B
7 a. i B
- 151 CZ 302281 B6
Příklad Úplná krev ICs0(nM)
7aj C
7ak B
7am 3
7an B
7ao B
7ap C
9a B
9b B
9c A
9d A
9e B
9Í A
sg B
15a B
15b B
15c A
16b A
18a A
18b A
13c A
18d A
18e A
18f B
20a A
20b C
20c B
20d B
20e B
20f A
2 0g A
20h A
- 152CZ 302281 B6
Příklad Úplná krev IC50{nM)
20Ϊ A
20k A
201 A
2 0m A
20n A
200 A
20p A
20q C
20r B
20s A
20t A
23a B
23b 5
23C 3
23d A
23e B
23f A
23g A
23h A
23i B
24a 3
24C B
24d B
24e B
25a B
25b B
25c B
25d A
25e C
26c B
2 6d A
- 153 CZ 302281 B6
Příklad Úplná krev IC50 (nM)
26e A
26f B
26g 3
26h A
27a A
27b A
27d A
27e A
27f B
27g B
27h B
27i B
271 B
27rn B
27n A í
28a B
28b B
28c C
29a A
29C A
29d A
29e A
2sa. ... A
2 9h A
29i A
29j A
29k A
291 A
2 9n B
290 A
2 9p A
- 154CZ 302281 B6
Příklad Úplná krev ICS0 (nM)
29q A
29r A
29s A
G2 B
42 B
4Gb 3
57 C
65 A
61 A
69 A
73 A
122a A
122b A
122C B
122d A
122e B
122f A
122g A
122h A
122i A
122j B
122k A
1221 A
122m B
122p B
122q B
122r B
122S B
123a A
123b B
Ex vivo testy
Metabolismus a vylučování
Pro testování metabolismu gastrointestinální stěny (GI), metabolismu jater (f(b)) a vylučování žluči se provádí u krys jednocestná perfuzní studie. Použitý způsob je popsaný v Pang C. S.,
J. Pharmacol. Exp. Therapeutics, 333, str. 788 až 798 (1984).
- 155 CZ 302281 B6
Tabulka 6: Údaje o metabolismu a vylučování
Příklad f (g)Xf (h) Vylučování žluči
5c A C
5k B A
5m B C
7d D A
7f C A
7ac C C
lBf D A
20f B C
2 0g B A
23b 3 B
24a c A
24c A C
24e A c
25d C c
25e c B
26c A c
26e B B
26f A C
27a C A
í 27b B A
ί 2 9b A B
- 156CZ 302281 B6
Příklad f (g)Xf (h) Vylučování žluči
2 9g B B
2 9n C A
290 c A
29p B C
29q C A
29r c B
46b B C
57 B B
55 B C
69 C A
122a B 1 i A
122b C A
122c c B
122d c A
122r 3 A
In vivo testy
In vivo test clearance u krys - rychlost clearance
Rychlost clearance u krys (ml/min/kg) pro sloučeniny podle předkládaného vynálezu se může určit pomocí způsobů popsaných níže:
Reprezentativní postup
Jeden den před farmakokinetickou studií se kanylují krční žíla a tepna. M. J. Free, R, A. Jaffee; „Cannulation techniques for the collection blood and other hodily fluids“; Animal Models; str. 480 až 495; N. J. Alexander; Ed.; Academie Press; (1978). Pomocí krční žíly se podává 10 mg léčiva na ml v nosiči, který obvykle obsahuje: propylenglykol/salin obsahující 100 mM hydrogenuhličitanu sodného v poměru 1:1. Zvířata se dávkují 10 až 20 mg léčiva/kg a vzorky krve se odebírají v čase 0, 2, 5, 7, 10, 15, 20, 30, 60 a 90 minut ze zbývajícího katétru v krční tepně. Vzorky krve se odstředí na plazmu a skladují se před analýzou při teplotě -20 °C. Farmakokinetická analýza údajů se provádí pomocí nelineární regrese za použití standardního software, jako je Rstrip (MicroMath Software, UT) a/nebo Pcnonlin (SCI Software, NC), čímž se získají údaje o clearance.
Reprezentativní provedení analýzy:
Plazma krys se extrahuje v ekvivalentním objemu acetonitrilu (obsahujícím 0,1% kyselinu tri25 fluoroctovou). Vzorky se potom odstřeďují přibližně při 1 000 x g a supematant se analyzuje za použití gradientní HPLC. Typický postup testuje popsán dále.
200 μΐ plazmy se sráží s 200 μΐ 0,1% kyseliny trifluoroctové (TFA) v acetonitrilu a 10 μΐ 50% vodného roztoku chloridu zinečnatého, promíchá se a odstřeďuje se při 1000 x g a supematant se odebere a analyzuje se pomocí HPLC.
-157C7, 302281 B6
Postup HPLC:
Kolona: Zorbae SB-CN (4,6 x 150 mm) (velikost částic 5 pm)
Teplota na koloně: 50 °C
Průtok: 1,0 m!/rnin Objem nástřiku: 75 μΙ
Mobilní táze: A=0,l% TFA ve vodě a B-100% acetonitril
Použitý gradient: 100 % A až 30 % A v 15,5 min., 0 % A v 16 min., 100 % A v 19,2 min.
Vlnová délka: 214 nm o
Standardní křivka se získá při koncentraci 20, 10, 5, 2 a 1 pg/ml.
Tabulka 7: Údaje o clearance
Příklad Test clearance u krys i.v, (ml/min/kg)
7d A
7f B
20h B
20m A
65 C
122b B
122c C
122d B
122f A
Biologická využitelnost
Perorální ťarmakokinetická studie
Samci krys Sprague-Dawley (Harlan, Indianapolis, IN, 300-350 g) se anestetizují nitrosvalovou injekcí směsi ketaminu/rompunu. Do pravé krční tepny se vloží kanýIa PE-50, pomocí které se odebírají vzorky krve. Krysy se před použitím při studii nechají zotavit z chirurgického zákroku přes noc (> 16 hodin). Testované sloučeniny se perorálně podávají v 25% Cremophor EL/voda (hmotnostně) nebo 100% propylenglykolu (PG) v objemu dávky lOml/kg. Vzorky krve (asi
0,30 ml) se odebírají v 0,25, 0,50, 1,0, 1,5, 2, 3, 4, 6, a 8 hodinách po dávkování, plazma se oddělí odstředěním a před analýzou se skladuje při teplotě -20 °C. Kvantitativní hodnocení vzorků plazmy se provede za použití gradientní HPLC/MS/MS nebo pomocí enzymatického způsobu popsaného dále:
HPLC/MS/MS způsob kvantitativního hodnocení ICE inhibitorů v plazmě krys Příprava vzorku • do Eppendorfových odstřeďo vacích viálek se dávkují alikvotní díly 50μ1 plazmy, • k plazmě, se pro vysrážení plazmových proteinů přidá stejný objem acetonitrilu, * vzorky se 5 minut míchají a odstřeďují se 5 minut při 14 000 otáčkách za minutu, • do 12 mm HPLC viálek na kapalné vzorky se umístí 75 μΐ supematantu, • pro analýzu prostřednictvím hmotového spektrometru se nastřikuje 50μΙ vzorek.
- 158CZ 302281 Β6
Instrumentální parametry HPLC:
HPLC: Hewlet Packard HP1100 Binaiy Solvent Delivery System. Podmínky HPLC gradientu:
A = voda 0,2 % kyseliny mravenčí
B = acetonitril 0,2 % kyseliny mravenčí
Mobilní fáze:
Čas % A %B
0 100 0
2 100 0
5 0 100
11 0 100
11,5 100 0
17 100 0
HPLC analytická kolona: Keystone Phenyl -2 Hypersil 2,0x100 mm, 5 μ 120 A velikost pórů, P/N# 105-39-2 Objem nástřiku: 50 μΐ Průtok: 0,20 ml/min
Instrumentální parametry hmotové spektrometrie:
Zařízení: P E Sciex API-365 Tandem Mass Spectrometer
Způsob ionizace: Turbo-ionspray (ESI)
Polarita: pozitivní
Klidová doba: 300 msec
Doba přerušení: 5 msec
Doba skenování: 0,9 sec
Skenovací mód: MRM (Multiple Reaction Monitoring)
ICE enzymatický test pro určení množství inhibitorů 1CE v plazmě krys μΙ plazmy se extrahuje 150 μΐ acetonitrilu, zpracuje se ultrazvukem, míchá se, odstředí se při 10 000 x g a 150 μΐ supematantu se suší při teplotě místnosti za míchání v odparce Sorvall Vzorky se rekonstruují v 100 μΐ pufru (10 mM tris-HCl, pH 7,5 s 0,1 % CHAPS, 1 mM DTT) za současného zpracovávání ultrazvukem. 10 μΐ každého vzorku se smísí s 10 μΐ ICE (1,1 mg/ml) v mikrotitrační destičce s 60 μΐ pufru. Vzorky se inkubují 15 minut při teplotě místnosti, potom se přidá 20 μΐ Succ YVAD-pNA (400 μΜ, předehřáto na 37 °C) a destičky se monitorují 20 minut při 405 nm při 37 °C za použití počítadla SpectraMax. Údaje se zpracují za použití čtyřparametrové rovnice se Software SpectraMax za použití extrahované standardní křivky. Testy jsou lineární od 0,15 do 2,0 až 3,0 pg/ml aldehydu.
Farmakokinetické parametry:
Farmakokinetická analýza těchto údajů o koncentraci v plazmě se provádí za použití nedělených způsobů. Plocha pod křivkou (AUC(o_,)) se určí z času nula do posledního měřeného časového okamžiku za použití lineárního lichoběžníkového pravidla. Rychlost eliminace (ke) se určí
- 159 CZ 302281 B6 pomocí nelineární regrese z poslední fáze křivky koncentrace plazmy a času. Plocha pod koncem křivky se určí jako poměr poslední měřené koncentrace ku ke. Plocha pod křivkou od času nula k afinitě (AUC(O-co)) se získá přičtením plochy pod koncem k AUC(O-t). Poločas eliminace se určí jako 0,693/ke. Zaznamenají se pozorované hodnoty pro pík koncentrace plazmy (Cmax). Pro studii proléčiva: využitelnost aldehydu (biologická využitelnost) se vypočte následujícím způsobem: (AUCattj/proléčivo p.o.)/(AUCaid/ ald i.v.) x (dávka ald, ald i.v./dávka proléčiva, proléčivo p.o.) x (MW proléciva/MW aldehydu).
io Tabulka 8: Údaje o biologické využitelnosti
Příklad Cmax (pg/mL) AUC (pgXh/mL) t 1/2 (h) F (¾)
5 6 A B A
45 A B
90 C C A C
85 A B B A
63 A C B
76 C c C
1 77 5 B A A
i 78 A A B A
i as i 3 C C
' 83 í A C c _______ 1
- 160CZ 302281 B6
Příklad Cmax Íug/mL) AUC ^gXh/mLÍ t 1/2 (hod) F (¾)
98d A A B
98h A C 3 1
98e C C B
98c 3 c C
j- | 98k 3 c 0
98ae A A 3
98af A A 3
98b C C B
111 A A C
98ο 1 A A 3
108a A A S
| 98ag C C 3 c
98a 3 B C
9 8am A A B
116a C C B
9 San A A ! B
116g A A C
116h A A B
1- 116e A A B
108b | A A B
Antivirové testy
Účinnost sloučenin podle předkládaného vynálezu při léčení nebo prevenci virových onemocně5 ní, poruch nebo stavů, se může určit pomocí různých in vitro a in vivo testů. Mohou se například provádět testy pro určení schopnosti těchto sloučenin ínhibovat zánětlivé odezvy spojené s virovými infekcemi. Při in vitro testech se mohou využít úplné buňky nebo izolované části buněk. In vivo testy zahrnují zvířecí modely virových onemocnění.
Mezi příklady těchto zvířecích modelů patří modely HBV nebo HCV infekcí u hlodavců, model HBV infekce u sviště lesního a model HCV infekce u šimpanze.
Sloučeniny podle předkládaného vynálezu se mohou také hodnotit na zvířecích modelech nadměrného příjmu alkoholu v potravě, vynález se však neomezuje pouze na tyto příklady.
Další testy, které se mohou použít pro hodnocení sloučenin podle předkládaného vynálezu, jsou popsány v PCT patentové přihlášce PCT/US96/20843, zveřejněné 26, června 1997 pod číslem WO 97/22619. Mezi tyto testy patří in vivo farmakokinetické studie u myší, inhibice homologů ICE, inhibice apoptózy, in vivo akutní test na protizánětlivou účinnost, měření hladiny léčiva v krvi, testy IGIF, karagénový peritoneální zánětlivý test u myší a artritida vyvolaná kolagenem typu II.
- 161 CZ 302281 B6
Protože jsou sloučeniny podle předkládaného vynálezu schopné inhibovat kaspázu, zejména ICE, in vitro a dále se mohou podávat orálně savcům, jsou zjevně klinicky využitelné pro léčení onemocnění zprostředkovaných IL-1, apoptózou, IGIF a IFN-γ.
Přestože bylo popsáno mnoho provedení podle předkládaného vynálezu, je zřejmé, že se naše základní konstrukce mohou změnit za získání jiných provedení, která využívají produkty a způsoby podle předkládaného vynálezu.

Claims (22)

  1. (A) Y je (a) nebo (b)
    B7 ,o 'mí
    R7 je skupina -OH, skupina -OR8, nebo skupina -N(H)OH; nebo (Β) Y je:
    íc) a
    30 X je skupina -C(R3)2-; m je 0;
    mí (f)
    - 162CZ 302281 B6
    R1 je atom vodíku, skupina -C(O)R8, skupina -C(O)C(O)R8, skupina -S(O)2R8, skupina -S(O)R8, skupina -C(O)OR8, skupina -C(O)N(H)R8, skupina -S(O)2N(H>R8, skupina -S(O)N(H)-Rs, skupina -C(O)C(O)N(H)R8, skupina -€(O)CH=CHR8, skupina -C(O)CH2OR5,
    5 skupina ~C(O)CH2N(H)R8, skupina -C(O)N(R8)2, skupina -S(O)2N(R8)2, skupina -S(O)N(R8)2, skupina -C(O)C(O)N(R8)2, skupina -C(O)CH2N(R8)2, skupina -CH2RÍ skupina -CH2-alkenylR8, nebo skupina -CH2-alkynyl-R8;
    R2 je atom vodíku a každá skupina R3 je nezávisle atom vodíku, skupina -R8, skupina alkenyl10 R9 nebo skupina alkynyl-R9, nebo R2 a jedna skupina R3 společně s atomy, ke kterým jsou vázány, tvoří tříčlenný až sedmičlenný cyklický nebo heterocyklický kruhový systém, kde heteroatomy jsou nezávisle atomy síry, dusíku nebo kyslíku, kde atom vodíku vázaný k jakémukoli atomu uhlíku na cykloalkylové skupině je popřípadě nahrazen skupinou -R10, atom vodíku vázaný k jakémukoli atomu dusíku kruhového systému je popřípadě nahrazen skupinou -R1;
    R4 a jedna skupina R5 společně s atomy, ke kterým jsou vázány, tvoří kruhový systém vybraný ze skupiny, kterou tvoří:
    20 a druhá skupina R5 je atom vodíku, nebo R4 ajedna skupina R5 společně s atomy, ke kterým jsou vázány, tvoří kruhový systém;
    a druhá skupina R5 je atom vodíku;
    - 163 CZ 302281 B6
    Rf> je atom vodíku;
    každá skupina Rx je nezávisle alkylová skupina, cykloalkylová skupina, arylová skupina, heteroarylová skupina, heterocyklylová skupina, alkyleykloalkylová skupina, alkylarylová skupina, > alkylheteroarylová skupina nebo alkyl heterocyklylová skupina, kde atom vodíku vázaný k jakémukoli atomu uhlíku na alkylové nebo cykloalkylové skupině je popřípadě nahrazen skupinou -R10, atom vodíku vázaný k jakémukoli uhlíku arylové nebo heteroarylové skupiny je popřípadě nahrazen skupinou -R11, a atom vodíku vázaný k jakémukoli atomu dusíku kruhového systému je popřípadě nahrazen skupinou -R1;
    io každá skupina R9 je nezávisle arylová skupina, heteroarylová skupina, cykloalkylová skupina, nebo heterocyklylová skupina, kde atom vodíku vázaný kjakémukoli atomu uhlíku na cykloalkylové skupině je popřípadě nahrazen skupinou -RJ0, atom vodíku vázaný kjakémukoli uhlíku arylové nebo heteroarylové skupiny je popřípadě nahrazen skupinou -R11, a atom vodíku vázaný
    15 kjakémukoli atomu dusíku kruhového systému je popřípadě nahrazen skupinou -R1;
    každá skupina R10 je nezávisle hydroxylová skupina, thioskupina, atom fluoru, atom chloru, atom bromu, atom jodu, nitroskupina, kyanoskupina, aminoskupina, karboxylová skupina, skupina -C(O)NH2, skupina -N(H)C(O)H, skupina -N(H)C(0)NH2, perfluoralkylová skupina.
    20 -O-alkylová skupina, -O-arylová skupina, -O-alkylarylová skupina, -N(H)alkylová skupina, -N(H)arylová skupina, -N(H)-alkylarylová skupina, skupina -N(alkyl)2, -C(O)N(H)alkylová skupina, skupina -C(O)N(alkyl)2, -N(H)C(0)alkylová skupina, -N(H)C(O)N(H)alkylová skupina, skupina -N(H)C(O)N(alkyl)2, -S-alkylová skupina, -S-arylová skupina, -S-alkyl ary lová skupina, -S(O)2alkylová skupina, -S(O)alkylová skupina, -C(O)alkylová skupina, skupina
    25 -CH?NH2, -CH2N(H)alkylová skupina, skupina -CH2N(alkyl)2, alkylová skupina, cykloalkylová skupina, arylová skupina, heteroarylová skupina, heterocyklylová skupina, alkyleykloalkylová skupina, alkylarylová skupina, alkylheteroarylová skupina, nebo alkylheterocyklylová skupina, kde atom vodíku vázaný kjakémukoli atomu uhlíku arylové skupiny nebo heteroarylové skupiny je popřípadě nahrazen skupinou Rtl a atom vodíku vázaný kjakémukoli atomu dusíku je popří30 pádě nahrazen skupinou Rl;
    každá skupina R je nezávisle hydroxylová skupina, thioskupina, atom fluoru, atom chloru, atom bromu, atom jodu, nitroskupina, kyanoskupina, aminoskupina, karboxylová skupina, skupina -C(O)NH2, skupina -N(H)C(O)H, skupina -N(H)C(O)NH2, alkylová skupina, cykloalkylová
    35 skupina, perfluoralkylová skupina, -O-alkylová skupina, -O-arylová skupina, -O-alkylarylová skupina, -N(H)alkylová skupina, -N(H)arylová skupina, -N(H)-alkyl ary lová skupina, skupina -N(alkyl)2, -C(O)N(1 l)alkýlová skupina, skupina -C(O)N(alkyl)2, -N(H)C(O)alkylová skupina, -N(H)C(O)N(H)alkylová skupina, skupina -N(H)C(O)N(aIkyl)2, -S-alkylová skupina, -S-arylová skupina, -S-alkylarylová skupina, -S(O)2alkylová skupina, -S(O)alkylová skupina,
    40 -C(O)alkýlová skupina, skupina -CH2NH2, -CH2N(H)alkylová skupina, nebo skupina -CH2N(alkyl)2;
    R12 je -C(0)alkylová skupina, -C(O)cykloalkylová skupina, -C(O)aIkylarylová skupina, -C(O)alkylheteroarylová skupina, -C(O)heterocyklylová skupina, nebo -C(O)alkylheterocyklylová
    45 skupina;
    každá „alkylová skupina44 je přímá nebo rozvětvená, nasycená alifatická uhlovodíková skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku;
    50 každá „alkenylová skupina44 je přímá nebo rozvětvená nenasycená uhlovodíková skupina obsahující 2 až 6 atomů uhlíku a nejméně jednu dvojnou vazbu;
    každá „alkynylová skupina“ je přímá nebo rozvětvená nenasycená uhlovodíková skupina obsahující 2 až 6 atomů uhlíku a nejméně jednu trojnou vazbu;
    - 164CZ 302281 B6 každá „cykloalkylová skupina“ je mono- nebo polycyklický, nearomatický, uhlovodíkový kruhový systém, obsahující 5 až 10 atomů uhlíku, který může popřípadě obsahovat nenasycené vazby v kruhovém systému;
    5 každá „arylová skupina“ je mono- nebo polycyklický kruhový systém, který obsahuje 6, 10, 12 nebo 14 atom uhlíku, ve kterém je nejméně jeden kruh kruhového systému aromatický;
    každá „heteroarylová skupina“ je mono- nebo polycyklický kruhový systém, který obsahuje 1 až 15 atomů uhlíku a 1 až 4 heteroatomy a ve kterém je nejméně jeden kruh kruhového systému io aromatický;
    každá „heterocyklická skupina“ je mono- nebo polycyklický kruhový systém, který obsahuje 1 až 15 atomů uhlíku a 1 až 4 heteroatomy, ve kterém mono- nebo polycyklický kruhový systém může popřípadě obsahovat nenasycené vazby, ale není aromatický; a každý heteroatom je atom síry, atom dusíku nebo atom kyslíku.
  2. 2. Sloučenina podle nároku I, možnost (A), kde R2 je atom vodíku a každé R3 je nezávisle atom vodíku, skupina -R8, skupina alkenyl-R9 nebo skupina alkynyl-R9, pod podmínkou, že
    2o pokud jedna skupina R3 je atom vodíku, potom druhá skupina R3 není atom vodíku.
  3. 3. Sloučenina podle nároku 1, možnost (B), kde R2 je atom vodíku a každé R3 je nezávisle atom vodíku, skupina -R8, skupina alkenyl-R9 nebo skupina alkynyl-R9.
    - 165CZ 302281 B6
  4. 4. Sloučenina podle nároku 1, možnost (B), nebo nároku 3, kde Y je:
    kde m je 0, a V je: CH3O,
    - 166CZ 302281 B6 nebo
    - 167 CZ 302281 B6
  5. 5. Sloučenina podle kteréhokoliv z nároků 1 až 3, kde jedna skupina R' je atom vodíku a druhá skupina R' je methylová skupina, isopropyl, /erc-butyl, -CFhSalkyl, -CH2SO2alkyl, -CH2CH2Salkyl nebo-CH2CH2SO2alkyl.
    5
  6. 6. Sloučenina podle nároku 5, kde jedna skupina R3 je atom vodíku a druhá skupina R3 je methylová skupina.
  7. 7. Sloučenina podle nároku 5, kde R1 je skupina -C(O)R8 nebo skupina -C(O)C(O)R8.
    io
  8. 8. Sloučenina podle nároku 1, kde R4 a jedna skupina R3 tvoří společně s atomy, ke kterým jsou vázány, kruhový systém vybraný ze skupiny, kterou tvoří:
    N^\
    I
    N^/ a druhá skupina R5 je atom vodíku.
    i5
  9. 9. Sloučenina podle kteréhokoliv z nároků 1 až 3, kde jedna skupina R3 je atom vodíku a druhá skupina R3 je methylová skupina, isopropylová skupina, /err-butylová skupina, skupina -CH2Salkyl, skupina -CH2SO2alkyl, skupina =CH2CH2Salkyl nebo skupina -CH2CH2SO2alkyl; a kde R4 a jedna skupina Rs společně s atomy, ke kterým jsou vázány, tvoří kruhový systém vybraný ze skupiny, kterou tvoří:
    , nebo a druhá skupina R5 je atom vodíku.
  10. 10. Sloučenina podle nároku 9, kde jedna skupina R3 je atom vodíku a druhá skupina R3 je methylová skupina,
  11. 11. Sloučenina podle nároku 10, kde R1 je skupina ~C(O)R8 nebo skupina-C(O)C(O)R8.
    - 168CZ 302281 B6
  12. 12. Sloučenina podle nároku 1, kde R4 a jedna skupina R5 společně s atomy, ke kterým jsou vázány, tvoří kruhový systém:
    a druhá skupina R5 je atom vodíku.
  13. 13. Sloučenina podle kteréhokoliv z nároků 1 až 3, kde R3 je atom vodíku a druhá skupina R3 je methylová skupina, isopropylová skupina, Zerc-butylová skupina, skupina —CH2Salkyl, skupina -CH2SO2alkyl, skupina -CH2CH2Salkyl nebo skupina-CH2CH2SO2alkyl; a kde R4 a jedna skupina R5 společně s atomy, ke kterým jsou vázány, tvoří kruhový systém vybraný ze skupiny, kteio rou tvoří:
    a druhá skupina R5 je atom vodíku.
  14. 14. Sloučenina podle nároku 13, kde jedna skupina R3 je atom vodíku a druhá skupina R3 je 15 methylová skupina.
  15. 15. Sloučenina podle nároku 14 kde R1 je skupina -C(O)R8 nebo skupina -C(O)C(O)R8.
    - 169CZ 302281 B6
  16. 16. Sloučenina vybraná ze skupiny, kterou tvoří: 5a—5bd, 7a-7at, 20a-20t, 24d-24e, 52, 57, 61,
    65,69, 73 a 122a-v:
    170CZ 302281 B6 c/X)
    - 171 CZ 302281 B6
    -172CZ 302281 B6
    - 173 CZ 302281 B6
    174CZ 302281 B6
    175 CZ 302281 B6
    - 176CZ 302281 B6
    177CZ 302281 B6
    178 CZ 302281 B6
    -179CZ 302281 B6
    - 180 CZ 302281 B6
  17. 17. Sloučenina podle nároku 3, vybraná ze skupiny, kterou tvoří: 51, 56, 60, 64, 68, 72, 76-93, 98a-z, 98aa-az, 98ba, 98bb, 110, a 111:
    - 181
    - 182 CZ 302281 B6
    - 183 (98v)
    H2N' cf3 (98h)
    Cl (98x) ll
    - 184CZ 302281 B6 (98aa>
    cl (98ac) (98ag)
    Ol (98aj)
    - 185 CZ 302281 B6
    - 186CZ 302281 B6
    5 19. Farmaceutická kompozice, vyznačující se tím, že obsahuje
    a) sloučeninu podle kteréhokoli z nároků 1 až 17; a
    b) farmaceuticky přijatelný nosič, adjuvant nebo vehikulum.
  18. 20. Použití sloučeniny podle kteréhokoli z nároků l až 17 nebo farmaceutické kompozice podle io nároku 19 pro přípravu léčiva k léčení nebo prevenci onemocnění vybraného ze skupiny kterou tvoří onemocnění zprostředkované IL-1, onemocnění zprostředkované apoptózou, zánětlivé onemocnění, autoimunní onemocnění, destrukční onemocnění kosti, proliferativní onemocnění, infekční onemocnění, degenerativní onemocnění, nekrotické onemocnění, onemocnění způsobené nadbytečným příjmem alkoholu v potravě, onemocnění zprostředkované virem, zánětlivá
    15 peritonitida, osteoartritida, pankreatitida, astma, syndrom dýchacího stresu dospělých, glomerulonefritida, revmatoidní artritida, systémový lupus erythematosus, skleroderma, chronická thyroiditida, Graveova nemoc, autoimunní gastritida, diabetes mellitus závislý na insulinu (typ 1), autoimunní hemolytická anemie, autoimunní neutropenie, thrombocytopenie, chronická aktivní hepatitida, myastenia gravis, zánětlivá střevní onemocnění, Crohnova nemoc, psoriáza, atopic20 ká dermatitida, onemocnění štěp vs. hostitel, osteoporóza, leukémie a podobná onemocnění, myelodysplastický syndrom, kostní onemocnění spojené smnohočetným myelomem, akutní myelogenní leukemie, chronická myelogenní leukemie, metastatický melanom, Kaposiho sarkom, mnohočetný myelom, sepse, septícký šok, Shigellosa, Alzheimerova nemoc, Parkinsonova
    - 187CZ 302281 B6 nemoc, mozková ischemíe, ischemie myokardu, spinální muskulární atrofie, mnohočetná skleróza, encefalitida související s AIDS, encefalitida spojená s HIV, stárnutí, vypadávání vlasů, neurologické poškození způsobené mrtvicí, ulcerativní kolitida, traumatické poškození mozku, odmítnutí transplantovaného orgánu, hepatitida-B, hepatitidaC. hepatitida-G, žlutá horečka, s horečka dengue, nebo japonská inceťalitida, u pacienta.
  19. 21. Použití sloučeniny podle nároku 20, kde onemocněním je revmatoidní artritida, zánětlivé střevní onemocnění, Crohnova nemoc, ulcerativní kolitida, zánětlivá peritonitida, septický šok, pankreatitida, traumatické poškození mozku, odmítnutí transplantovaného orgánu, osteoartritida, io astma, psoriáza, Alzheimerova nemoc, atopická dermatitida, leukemie a podobná onemocnění, myelodysplastický syndrom nebo mnohočetný myelom.
  20. 22. Použití sloučeniny podle kteréhokoli z nároků 1 až 17 nebo farmaceutické kompozice podle nároku 19 při výrobě léčiva pro inhibici funkce zprostředkované ICE u pacienta.
  21. 23. Použití sloučeniny podle kteréhokoli z nároků I až 17 nebo farmaceutické kompozice podle nároku 19 při výrobě léčiva pro snížení produkce IGIF nebo IFN-γ u pacienta.
  22. 24. Sloučenina podle kteréhokoliv z nároků 1 až 4, kde Rl je skupina -C(O)RS nebo skupina ?o -C(O)C(O)R8.
CZ20003409A 1998-03-19 1999-03-19 Inhibitory kaspázy a farmaceutická kompozice, která je obsahuje CZ302281B6 (cs)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US7877098P 1998-03-19 1998-03-19

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CZ20003409A3 CZ20003409A3 (cs) 2001-01-17
CZ302281B6 true CZ302281B6 (cs) 2011-01-26

Family

ID=22146109

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ20003409A CZ302281B6 (cs) 1998-03-19 1999-03-19 Inhibitory kaspázy a farmaceutická kompozice, která je obsahuje

Country Status (33)

Country Link
US (3) US6531474B1 (cs)
EP (6) EP2261233A3 (cs)
JP (3) JP4594520B2 (cs)
KR (2) KR100928878B1 (cs)
CN (1) CN1321129C (cs)
AP (1) AP2000001919A0 (cs)
AR (1) AR019011A1 (cs)
AT (1) ATE410439T1 (cs)
AU (1) AU769033B2 (cs)
BG (1) BG104863A (cs)
BR (2) BR9909660A (cs)
CA (1) CA2324226C (cs)
CZ (1) CZ302281B6 (cs)
DE (1) DE69939689D1 (cs)
DK (1) DK1064298T3 (cs)
ES (1) ES2315010T3 (cs)
GE (1) GEP20043163B (cs)
HU (1) HU227920B1 (cs)
ID (1) ID27002A (cs)
IL (3) IL138469A0 (cs)
IS (1) IS5622A (cs)
NO (1) NO331829B1 (cs)
NZ (2) NZ506963A (cs)
PL (1) PL204619B1 (cs)
PT (1) PT1064298E (cs)
RU (1) RU2274642C2 (cs)
SI (1) SI1064298T1 (cs)
SK (1) SK286736B6 (cs)
TR (1) TR200103406T2 (cs)
TW (1) TWI243828B (cs)
UA (2) UA74133C2 (cs)
WO (1) WO1999047545A2 (cs)
ZA (1) ZA200004652B (cs)

Families Citing this family (80)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7244677B2 (en) 1998-02-04 2007-07-17 Semitool. Inc. Method for filling recessed micro-structures with metallization in the production of a microelectronic device
WO1999047545A2 (en) * 1998-03-19 1999-09-23 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of caspases
US6242422B1 (en) 1998-10-22 2001-06-05 Idun Pharmacueticals, Inc. (Substituted)Acyl dipeptidyl inhibitors of the ice/ced-3 family of cysteine proteases
US7157430B2 (en) 1998-10-22 2007-01-02 Idun Pharmaceuticals, Inc. (Substituted)acyl dipeptidyl inhibitors of the ICE/CED-3 family of cysteine proteases
US7326542B2 (en) 1998-12-02 2008-02-05 Princeton University Compositions and methods for regulating bacterial pathogenesis
US6720415B2 (en) 1998-12-02 2004-04-13 Princeton University Compositions and methods for regulating bacterial pathogenesis
WO2001027085A1 (en) * 1999-10-13 2001-04-19 Merck Frosst Canada & Co. Nicotinyl aspartyl ketones as inhibitors of caspase-3
US6395767B2 (en) * 2000-03-10 2002-05-28 Bristol-Myers Squibb Company Cyclopropyl-fused pyrrolidine-based inhibitors of dipeptidyl peptidase IV and method
US6525024B1 (en) 2000-04-17 2003-02-25 Idun Pharmaceuticals, Inc. Inhibitors of the ICE/ced-3 family of cysteine proteases
US6559176B1 (en) 2000-05-10 2003-05-06 Princeton University Compounds and methods for regulating bacterial growth and pathogenesis
PE20011350A1 (es) 2000-05-19 2002-01-15 Vertex Pharma PROFARMACO DE UN INHIBIDOR DE ENZIMA CONVERTIDORA DE INTERLEUCINA-1ß (ICE)
ATE510837T1 (de) * 2000-09-13 2011-06-15 Vertex Pharma Caspase inhibitoren und deren verwendung
WO2002070544A2 (en) * 2001-03-02 2002-09-12 Idun Pharmaceuticals, Inc. Methods, compositions and kits for preserving antigenicity
SG10201603108QA (en) 2001-06-26 2016-05-30 Amgen Inc Antibodies To OPGL
WO2003068242A1 (en) * 2002-02-11 2003-08-21 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Phospholipids as caspase inhibitor prodrugs
EP1483241A4 (en) 2002-03-08 2006-12-13 Bristol Myers Squibb Co CYCLIC DERIVATIVES AS MODULATORS OF CHEMOKINE RECEPTOR ACTIVITY
FR2839309B1 (fr) 2002-05-03 2004-07-23 Aventis Pharma Sa Nouveaux derives de l'acide hexahydro-pyridazine-3- carboxylique, chimiotheques les contenant, leur utilisation comme medicaments, compositions pharmaceutiques les contenant et leurs procedes de preparation
US7001899B2 (en) 2002-06-10 2006-02-21 The Procter & Gamble Company Interleukin converting enzyme inhibitors
WO2004022536A1 (en) * 2002-09-04 2004-03-18 Glenmark Pharmaceuticals Limited New heterocyclic amide compounds useful for the treatment of inflammatory and allergic disorders: process for their preparation and pharmaceutical compositions containing them
CN100471871C (zh) 2002-09-06 2009-03-25 安姆根有限公司 治疗性人抗－il－1r1单克隆抗体
MXPA05004432A (es) 2002-10-23 2005-11-23 Glenmark Pharmaceuticals Ltd Compuestos triciclicos novedosos utiles para el tratamiento de desordenes inflamatorios y alergicos, procedimiento para su preparacion y composiciones farmaceuticas que lo contienen.
FR2846969A1 (fr) * 2002-11-08 2004-05-14 Salles Jean Pierre Nouveaux vecteurs moleculaires amphiphiles fluorocarbones a usage biomedical et medical
JP2006519755A (ja) * 2002-11-20 2006-08-31 ロレアル ピラゾール−カルボキシアミドを含有する毛髪の手入れ用又は睫毛用の組成物、毛髪及び睫毛の成長を刺激し、及び／又は抜毛を防止するためのそれらの使用
FR2847160A1 (fr) * 2002-11-20 2004-05-21 Oreal Composition capillaire contenant un compose pyrasol-carboxamide, son utilisation pour stimuler la pousse des cheveux et/ou freiner leur chute
SI1620429T1 (sl) 2003-04-11 2009-08-31 Glenmark Pharmaceuticals Sa Nove heterociklične spojine, uporabne za zdravljenje vnetnih in alergijskih motenj: postopek za njihovo pripravo in farmacevtski sestavki, ki jih vsebujejo
AU2003902704A0 (en) * 2003-05-29 2003-06-19 Crc For Waste Management And Pollution Control Limited Of Unsw Process for producing a nanoscale zero-valent metal
CN101524351A (zh) * 2003-12-01 2009-09-09 沃泰克斯药物股份有限公司 使用ice抑制剂治疗感染疾病
EP1541124B1 (en) * 2003-12-12 2009-02-11 Dr. Straetmans Chemische Produkte GmbH Compositions with anisic acid and glycerides
AR047981A1 (es) 2004-02-27 2006-03-15 Vertex Pharma Inhibidores de caspasa y sus usos correspondientes
AU2011226946B2 (en) * 2004-02-27 2012-05-03 Vertex Pharmaceuticals Incoporated Caspase Inhibitors and Uses Thereof
CA2820541A1 (en) * 2004-02-27 2005-09-15 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Caspase inhibitors and uses thereof
ES2532967T3 (es) * 2004-03-12 2015-04-06 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Proceso y productos intermedios para la preparación de inhibidores de la acetal caspasa aspártica
NZ551196A (en) * 2004-05-14 2010-08-27 Emisphere Tech Inc Compounds and compositions for delivering active agents
AU2012200214B2 (en) * 2004-05-14 2013-10-24 Emisphere Technologies, Inc. Compounds and compositions for delivering active agents
AU2005247409B2 (en) 2004-05-15 2011-11-10 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Treating seizures using ICE inhibitors
GB0411056D0 (en) 2004-05-18 2004-06-23 Novartis Ag Organic compounds
CN1980658A (zh) 2004-05-27 2007-06-13 沃泰克斯药物股份有限公司 治疗自身炎性疾病的ice抑制剂
EP1778718B1 (en) * 2004-07-02 2014-10-08 Genentech, Inc. Inhibitors of iap
US20100190688A1 (en) * 2004-07-12 2010-07-29 Bin Chao Tetrapeptide analogs
PT1796660T (pt) * 2004-09-17 2017-02-13 Biomas Ltd Utilização de tricloro(dioxietileno-o,o¿)telurato de amónio (as101) para a inibição da enzima de conversão da interleucina-1 beta
AR051933A1 (es) 2004-10-13 2007-02-21 Glenmark Pharmaceuticals Sa Proceso para la preparacion de n-(3,5 dicloropirid-4-ilo)-4-difluormetoxi-8-metano sulfonamido-dibenzo[b,d] furano-1-carboxamida
KR101317119B1 (ko) 2004-12-17 2013-10-11 그렌마크 파머수티칼스 에스. 아. 염증성 및 알레르기성 장애의 치료에 유용한 신규한헤테로사이클릭 화합물
PT1831227E (pt) 2004-12-17 2013-08-23 Glenmark Pharmaceuticals Sa Proteínas buganina modificadas, citotoxinas e métodos e utilizações das mesmas
JP4673068B2 (ja) * 2005-01-19 2011-04-20 独立行政法人科学技術振興機構 Ｔｈ１型アレルギー疾患治療用組成物
DE102005017116A1 (de) * 2005-04-13 2006-10-26 Novartis Ag Hemmstoffe für Inhibitoren von Apoptose Proteinen (IAP)
WO2007015931A2 (en) * 2005-07-28 2007-02-08 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Caspase inhibitor prodrugs
TW200736277A (en) 2005-11-14 2007-10-01 Amgen Inc RANKL antibody-PTH/PTHrP chimeric molecules
US20100068150A1 (en) * 2006-07-07 2010-03-18 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Selective Caspase Inhibitors
JP2010510224A (ja) * 2006-11-17 2010-04-02 アボット・ラボラトリーズ ケモカイン受容体拮抗薬としてのアミノピロリジン類
US8084862B2 (en) 2007-09-20 2011-12-27 International Business Machines Corporation Interconnect structures with patternable low-k dielectrics and method of fabricating same
US7709370B2 (en) * 2007-09-20 2010-05-04 International Business Machines Corporation Spin-on antireflective coating for integration of patternable dielectric materials and interconnect structures
US8618663B2 (en) 2007-09-20 2013-12-31 International Business Machines Corporation Patternable dielectric film structure with improved lithography and method of fabricating same
US8343458B2 (en) * 2008-04-03 2013-01-01 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Probes for in vivo targeting of active cysteine proteases
JP2011523927A (ja) * 2008-05-27 2011-08-25 インペリアル イノベーションズ リミテッド 焼結可能なガラスから多孔質足場を製造する方法
US20110152343A1 (en) * 2009-12-22 2011-06-23 Functional Genetics, Inc. Protease inhibitors and broad-spectrum antiviral
GB201001070D0 (en) 2010-01-22 2010-03-10 St George's Hospital Medical School Theraputic compounds and their use
US9365612B2 (en) 2010-01-29 2016-06-14 United States Of America As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Caspase inhibitors
GB201011411D0 (en) 2010-07-06 2010-08-18 St Georges Hosp Medical School Therapeutic compounds and their use
WO2012061785A2 (en) 2010-11-05 2012-05-10 Brandeis University Ice inhibiting compounds and uses thereof
US9956260B1 (en) 2011-07-22 2018-05-01 The J. David Gladstone Institutes Treatment of HIV-1 infection and AIDS
IN2014CN02806A (cs) 2011-10-14 2015-07-03 Bristol Myers Squibb Co
IN2014CN02805A (cs) 2011-10-14 2015-07-03 Bristol Myers Squibb Co
MY165742A (en) 2011-10-14 2018-04-23 Bristol Myers Squibb Co Substituted tetrahydroisoquinoline compounds as factor xia inhibitors
MX2015002231A (es) 2012-08-23 2015-07-17 Alios Biopharma Inc Compuestos antivirales.
US9315519B2 (en) 2012-10-12 2016-04-19 Bristol-Myers Squibb Company Guanidine substituted tetrahydroisoquinoline compounds as factor XIa inhibitors
EP2906551B1 (en) 2012-10-12 2018-02-28 Bristol-Myers Squibb Company Crystalline forms of a factor xia inhibitor
US9403774B2 (en) 2012-10-12 2016-08-02 Bristol-Myers Squibb Company Guanidine and amine substituted tetrahydroisoquinoline compounds as factor xia inhibitors
ES2712699T3 (es) 2013-03-25 2019-05-14 Bristol Myers Squibb Co Tetrahidroisoquinolinas que contienen azoles sustituidos como inhibidores del factor XIa
UY35971A (es) 2014-01-31 2015-07-31 Bristol Myers Squibb Company Una Corporación Del Estado De Delaware Macrociclos con grupos p2? aromáticos como inhibidores del factor xia
NO2760821T3 (cs) 2014-01-31 2018-03-10
US9737556B2 (en) 2014-06-13 2017-08-22 Trustees Of Tufts College FAP-activated therapeutic agents, and uses related thereto
IL249370B (en) 2014-06-13 2022-06-01 Tufts College Fap-activated therapeutic agents, and uses related thereto
ES2714283T3 (es) 2014-09-04 2019-05-28 Bristol Myers Squibb Co Macrociclos de diamida que son inhibidores de FXIa
US9453018B2 (en) 2014-10-01 2016-09-27 Bristol-Myers Squibb Company Pyrimidinones as factor XIa inhibitors
MX2021006326A (es) 2015-09-17 2022-12-16 Inhibidores de pcna.
US10995084B2 (en) 2016-07-22 2021-05-04 Kissei Pharmaceutical Co., Ltd. Pyrrolidine derivative
FI3558335T3 (fi) 2016-12-23 2023-07-19 Casp Aid Inc Kaspaasi-1-inhibitio ja sen käyttötarkoituksia neurologisten tilojen ehkäisyyn ja hoitoon
EP3836954B1 (en) 2018-08-13 2025-05-07 Iltoo Pharma Combination of interleukin-2 with an interleukin 1 inhibitor, conjugates and therapeutic uses thereof
WO2020168294A1 (en) 2019-02-15 2020-08-20 Lysosomal And Rare Disorders Research And Treatment Center, Llc Methods and compositions for treating lysosomal storage disorders: ambroxol as treatment agent for mucopolysaccharidoses iii (sanfilippo syndrome)
US20230404972A1 (en) * 2020-11-25 2023-12-21 Lysosomal and Rare Disorders Research and Treatment Center, Inc. Inhibition of caspase pathway as a treatment for lysosomal storage disorders

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1995035308A1 (en) * 1994-06-17 1995-12-28 Vertex Pharmaceuticals Incorporated INHIBITORS OF INTERLEUKIN-1β CONVERTING ENZYME
WO1997022619A2 (en) * 1995-12-20 1997-06-26 Vertex Pharmaceuticals Incorporated INHIBITORS OF INTERLEUKIN-1β CONVERTING ENZYME
EP1064298A2 (en) * 1998-03-19 2001-01-03 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of caspases

Family Cites Families (77)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2973111A (en) * 1958-02-11 1961-02-28 Dempster Brothers Inc Compaction bodies
US5874424A (en) 1995-12-20 1999-02-23 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of interleukin-1β converting enzyme
US4465679A (en) 1983-01-31 1984-08-14 Usv Pharmaceutical Corporation 1,2-Diaza-3-one compounds, their use in treating hypertension and pharmaceutical compositions thereof
IL72523A (en) 1983-08-12 1988-06-30 Takeda Chemical Industries Ltd 3-amino-4-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-1,5-benzoxazepine derivatives,their production and pharmaceutical compositions containing them
US5055451A (en) 1986-12-22 1991-10-08 Syntex Inc. Aryloxy and arylacyloxy methyl ketones as thiol protease inhibitors
US5158936A (en) 1986-12-22 1992-10-27 Syntex (U.S.A.) Inc. Aryloxy and arylacyloxy methyl ketones as thiol protease inhibitors
US5008245A (en) 1988-10-27 1991-04-16 University Of Kentucky Research Foundation Novel peptidyl carbamate inhibitors of the enzyme elastase
CA2021660A1 (en) 1989-07-26 1991-01-27 Philippe Bey Peptidase inhibitors
NZ235155A (en) 1989-09-11 1993-04-28 Merrell Dow Pharma Peptidase substrates in which the carboxy terminal group has been replaced by a tricarbonyl radical
US5416013A (en) 1990-04-04 1995-05-16 Sterling Winthrop Inc. Interleukin 1β protease and interleukin 1β protease inhibitors
WO1991015577A1 (en) 1990-04-04 1991-10-17 Black, Roy, A. INTERLEUKIN 1'beta' PROTEASE
EP0503561B1 (de) 1991-03-15 1998-10-28 Hoechst Aktiengesellschaft Verfahren zur diastereoselektiven reduktiven Pinakol-Kupplung von homochiralen alpha-Aminoaldehyden
CA2071674C (en) * 1991-06-21 2003-08-19 Kevin T. Chapman Peptidyl derivatives as inhibitors of interleukin-1.beta. converting enzyme
JP3190431B2 (ja) 1991-07-01 2001-07-23 三菱化学株式会社 ケトン誘導体
DE69229252T2 (de) 1991-08-16 1999-12-16 Merck & Co., Inc. DNS, welche das Interleukin-1B-Vorläufer-Converting-Enzym kodiert
US5278061A (en) 1991-08-16 1994-01-11 Merck & Co., Inc. Affinity chromatography matrix useful in purifying interleukin-1β converting enzyme
US6348570B1 (en) 1991-08-16 2002-02-19 Merck & Co., Inc. Chromophore containing compounds and their use in determining interleukin-1β convertase activity
EP0533226A3 (en) 1991-08-16 1993-08-18 Merck & Co. Inc. Novel chromophore containing compounds
WO1993005071A1 (en) 1991-08-30 1993-03-18 Sterling Winthrop Inc. INTERLEUKIN 1β PROTEASE AND INTERLEUKIN 1β PROTEASE INHIBITORS
ATE140449T1 (de) 1991-10-07 1996-08-15 Hoechst Ag Verfahren zur diastereoselektiven reduktiven pinakol-kupplung von homochiralen alpha- aminoaldehyden
GB9123326D0 (en) 1991-11-04 1991-12-18 Sandoz Ltd Improvements in or relating to organic compounds
AU1339092A (en) 1991-12-13 1993-07-19 Corvas International, Inc. Reagents for automated synthesis of peptide analogs
EP0547699A1 (en) 1991-12-19 1993-06-23 Merck & Co. Inc. Peptidyl derivatives as inhibitors of interleukin-1B converting enzyme
AU3479593A (en) 1992-01-31 1993-09-01 Merck & Co., Inc. Peptidyl derivatives as inhibitors of interleukin-1beta converting enzyme
ES2118940T3 (es) 1992-02-21 1998-10-01 Merck & Co Inc Peptidil-derivados utiles como inhibidores de la enzima conversora de la interleucina-1 beta.
AU4634993A (en) 1992-06-24 1994-01-24 Merck & Co., Inc. Dna encoding precursor interleukin 1beta converting enzyme
WO1994003480A1 (en) 1992-07-31 1994-02-17 Pfizer Inc. Peptidyl 4-amino-2,2-difluoro-3-oxo-1,6-hexanedioic acid derivatives as antiinflammatory agents
CA2109646C (en) 1992-11-24 2000-03-07 Gaston O. Daumy Para-nitroanilide peptides
EP0618223A3 (en) 1993-03-08 1996-06-12 Sandoz Ltd Peptides, the release of Interleukin 1-Bêta, useful as anti-inflammatory agents.
CA2122227A1 (en) 1993-04-29 1994-10-30 Roland E. Dolle Peptide analogs as irreversible interleukin-1.beta. protease inhibitors
US5462939A (en) 1993-05-07 1995-10-31 Sterling Winthrop Inc. Peptidic ketones as interleukin-1β-converting enzyme inhibitors
US5411985A (en) 1993-05-17 1995-05-02 Merck & Co., Inc. Gamma-pyrone-3-acetic acid as an inhibitor or interleukin-1 β inventory enzyme
JPH0789951A (ja) 1993-06-03 1995-04-04 Sterling Winthrop Inc インターロイキン−１β転換酵素阻害剤
DK0644197T3 (da) 1993-06-04 1999-06-07 Vertex Pharma Peptidphosphinyloxymethylketoner som inhibitorer af interleukin-1beta-konverterende enzymer
EP0711174A4 (en) 1993-06-24 1997-11-12 Gen Hospital Corp GENES FOR PROGRAMMED CELL DEATH AND PROTEINS
WO1995005192A1 (en) 1993-08-13 1995-02-23 Merck & Co., Inc. SUBSTITUTED KETONE DERIVATIVES AS INHIBITORS OF INTERLEUKIN-1β CONVERTING ENZYME
DE59405370D1 (de) * 1993-11-11 1998-04-09 Basf Ag P-Hydroxyanilinderivate, Verfahren zu ihrer Herstellung und ihre Verwendung zur Bekämpfung von Schadpilzen oder Schädlingen
US5714484A (en) 1993-12-08 1998-02-03 Prototek, Inc. α-(1,3-dicarbonylenol ether) methyl ketones as cysteine protease inhibitors
US5486623A (en) 1993-12-08 1996-01-23 Prototek, Inc. Cysteine protease inhibitors containing heterocyclic leaving groups
ES2210289T3 (es) 1994-03-31 2004-07-01 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Derivados de pirimidinilo como inhibidores de interleuquinas.
EP0758891A4 (en) 1994-04-29 1997-12-03 Sanofi Winthrop Inc HALOMETHYLAMIDES AS IL-1 BETA PROTEASE INHIBITORS
US5492824A (en) 1994-05-12 1996-02-20 Basf Ag Ice and ice-like compositions and methods of making same
US5552400A (en) 1994-06-08 1996-09-03 Sterling Winthrop Inc. Fused-bicyclic lactams as interleukin-1β converting enzyme inhibitors
US6057119A (en) 1994-06-17 2000-05-02 Vertex Pharmaceuticals, Incorporated Crystal structure and mutants of interleukin-1β converting enzyme
US5756466A (en) 1994-06-17 1998-05-26 Vertex Pharmaceuticals, Inc. Inhibitors of interleukin-1β converting enzyme
US5847135A (en) 1994-06-17 1998-12-08 Vertex Pharmaceuticals, Incorporated Inhibitors of interleukin-1β converting enzyme
US5565430A (en) 1994-08-02 1996-10-15 Sterling Winthrop Inc. Azaaspartic acid analogs as interleukin-1β converting enzyme inhibitors
GB2292149A (en) * 1994-08-09 1996-02-14 Ferring Res Ltd Peptide inhibitors of pro-interleukin-1beta converting enzyme
US5498616A (en) 1994-11-04 1996-03-12 Cephalon, Inc. Cysteine protease and serine protease inhibitors
TW394764B (en) 1995-02-14 2000-06-21 Mitsubishi Chemcal Corp Oxygen-containing heterocyclic derivatives
JPH09165360A (ja) * 1995-03-31 1997-06-24 Takeda Chem Ind Ltd システインプロテアーゼ阻害剤
CA2215211A1 (en) 1995-03-31 1996-10-03 Takeda Chemical Industries, Ltd. Cysteine protease inhibitor
US5798442A (en) 1995-04-21 1998-08-25 Merck Frosst Canada, Inc. Peptidyl derivatives as inhibitors of pro-apoptotic cysteine proteinases
EP0851760A4 (en) 1995-08-31 1998-11-25 Smithkline Beecham Corp INTERLEUKIN CONVERSION ENZYME AND APOPTOSIS
WO1997008174A1 (en) 1995-08-31 1997-03-06 Smithkline Beecham Corporation Interleukin converting enzyme and apoptosis
US5744451A (en) 1995-09-12 1998-04-28 Warner-Lambert Company N-substituted glutamic acid derivatives with interleukin-1 β converting enzyme inhibitory activity
EP0761680A3 (en) 1995-09-12 1999-05-06 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. Tetrazole compounds having Interleukin-1beta converting enzyme inhibitory activity
WO1997024339A1 (fr) * 1995-12-27 1997-07-10 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. Derives de tetrazole et medicaments les contenant a titre d'ingredients actifs
WO1998001133A1 (fr) 1996-07-08 1998-01-15 Yamanouchi Pharmaceutical Co., Ltd. Inhibiteurs de la resorption osseuse
WO1998004539A1 (fr) 1996-07-29 1998-02-05 Mitsubishi Chemical Corporation Derives heterocycliques oxygenes
EP0929311B8 (en) 1996-09-12 2006-02-01 Idun Pharmaceuticals, Inc. INHIBITION OF APOPTOSIS USING INTERLEUKIN-1 beta-CONVERTING ENZYME (ICE)/CED-3 FAMILY INHIBITORS
ATE229973T1 (de) * 1996-09-12 2003-01-15 Idun Pharmaceuticals Inc C-terminale modifizierte (n-substituierte)-2- indolyl dipeptide als inhibitoren von der ice/ced-3 cysteinprotease familie
AU739496B2 (en) 1996-09-12 2001-10-11 Idun Pharmaceuticals, Incorporated Novel tricyclic compounds for the inhibition of the ice/ced-3 protease family of enzymes
US5869519A (en) * 1996-12-16 1999-02-09 Idun Pharmaceuticals, Inc. C-terminal modified (n-substituted)-2-indolyl dipeptides as inhibitors of the ICE/ced-3 family of cysteine proteases
US5968927A (en) * 1996-09-20 1999-10-19 Idun Pharmaceuticals, Inc. Tricyclic compounds for the inhibition of the ICE/ced-3 protease family of enzymes
US6184244B1 (en) * 1996-12-16 2001-02-06 Idun Pharmaceuticals, Inc. C-terminal modified (N-substituted)-2-indolyl dipeptides as inhibitors of the ICE/ced-3 family of cysteine proteases
US5877197A (en) * 1996-12-16 1999-03-02 Karanewsky; Donald S. C-terminal modified (N-substituted)-2-indolyl dipeptides as inhibitors of the ICE/ced-3 family of cysteine proteases
US6054487A (en) * 1997-03-18 2000-04-25 Basf Aktiengesellschaft Methods and compositions for modulating responsiveness to corticosteroids
HUP9700816A3 (en) 1997-04-28 1999-06-28 Gyogyszerkutato Intezet 3(r)-3-amino-4-carboxy-butiraldehyde derivatives inhibiting release of interleukin-1-beta
US6184210B1 (en) * 1997-10-10 2001-02-06 Cytovia, Inc. Dipeptide apoptosis inhibitors and the use thereof
AU742034B2 (en) * 1997-10-31 2001-12-13 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Creped nonwoven materials and liner
US6197750B1 (en) * 1998-07-02 2001-03-06 Idun Pharmaceuticals, Inc. C-terminal modified oxamyl dipeptides as inhibitors of the ICE/ced-3 family of cysteine proteases
US6242422B1 (en) * 1998-10-22 2001-06-05 Idun Pharmacueticals, Inc. (Substituted)Acyl dipeptidyl inhibitors of the ice/ced-3 family of cysteine proteases
PE20011350A1 (es) 2000-05-19 2002-01-15 Vertex Pharma PROFARMACO DE UN INHIBIDOR DE ENZIMA CONVERTIDORA DE INTERLEUCINA-1ß (ICE)
WO2005047906A1 (en) * 2003-11-10 2005-05-26 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Methods for monitoring il-18
AR047981A1 (es) * 2004-02-27 2006-03-15 Vertex Pharma Inhibidores de caspasa y sus usos correspondientes
CN1980658A (zh) * 2004-05-27 2007-06-13 沃泰克斯药物股份有限公司 治疗自身炎性疾病的ice抑制剂

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1995035308A1 (en) * 1994-06-17 1995-12-28 Vertex Pharmaceuticals Incorporated INHIBITORS OF INTERLEUKIN-1β CONVERTING ENZYME
WO1997022619A2 (en) * 1995-12-20 1997-06-26 Vertex Pharmaceuticals Incorporated INHIBITORS OF INTERLEUKIN-1β CONVERTING ENZYME
EP1064298A2 (en) * 1998-03-19 2001-01-03 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of caspases

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Mullican a kol. (1994) Bioorg. Med. Chem. Lett. 4 (19), 2359-2364 *

Also Published As

Publication number Publication date
WO1999047545A2 (en) 1999-09-23
PL343611A1 (en) 2001-08-27
CN1321129C (zh) 2007-06-13
PL204619B1 (pl) 2010-01-29
TR200103406T2 (tr) 2002-06-21
UA74133C2 (uk) 2005-11-15
IS5622A (is) 2000-09-08
EP2261233A3 (en) 2011-04-20
SK286736B6 (sk) 2009-04-06
EP2261233A2 (en) 2010-12-15
NO20004546L (no) 2000-11-09
NZ506963A (en) 2003-10-31
NO20004546D0 (no) 2000-09-12
BR9909660A (pt) 2000-11-21
ATE410439T1 (de) 2008-10-15
AP2000001919A0 (en) 2000-09-30
KR100928878B1 (ko) 2009-11-30
EP1064298A2 (en) 2001-01-03
JP2010241822A (ja) 2010-10-28
AU3098699A (en) 1999-10-11
BRPI9909660B1 (pt) 2018-09-18
US20030232986A1 (en) 2003-12-18
NO331829B1 (no) 2012-04-16
WO1999047545A3 (en) 1999-11-25
AR019011A1 (es) 2001-12-26
KR100898094B1 (ko) 2009-05-18
NZ528282A (en) 2005-05-27
DK1064298T3 (da) 2009-01-19
EP2261234A2 (en) 2010-12-15
IL138469A0 (en) 2001-10-31
UA96113C2 (en) 2011-10-10
HUP0103575A2 (hu) 2002-02-28
CA2324226A1 (en) 1999-09-23
EP2261235A3 (en) 2011-04-20
ES2315010T3 (es) 2009-03-16
HUP0103575A3 (en) 2002-10-28
HK1035733A1 (en) 2001-12-07
BRPI9909660B8 (pt) 2021-05-25
US6531474B1 (en) 2003-03-11
ID27002A (id) 2001-02-22
EP2261234A3 (en) 2011-04-20
KR20080020703A (ko) 2008-03-05
TWI243828B (en) 2005-11-21
EP1064298B1 (en) 2008-10-08
JP2006206600A (ja) 2006-08-10
PT1064298E (pt) 2009-01-02
US20090048226A1 (en) 2009-02-19
BG104863A (en) 2001-04-30
AU769033B2 (en) 2004-01-15
SK13822000A3 (sk) 2001-04-09
EP2261235A2 (en) 2010-12-15
EP2011800A2 (en) 2009-01-07
US8691848B2 (en) 2014-04-08
RU2274642C2 (ru) 2006-04-20
HU227920B1 (en) 2012-06-28
CA2324226C (en) 2012-06-05
CN1323314A (zh) 2001-11-21
KR20010042038A (ko) 2001-05-25
JP4594520B2 (ja) 2010-12-08
EP2261232A3 (en) 2011-04-20
ZA200004652B (en) 2002-04-24
JP2002506878A (ja) 2002-03-05
US7358273B2 (en) 2008-04-15
IL206621A0 (en) 2010-12-30
EP2261232A2 (en) 2010-12-15
IL138469A (en) 2010-11-30
CZ20003409A3 (cs) 2001-01-17
DE69939689D1 (de) 2008-11-20
SI1064298T1 (sl) 2009-02-28
GEP20043163B (en) 2004-01-26
EP2011800A3 (en) 2009-06-24

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CZ302281B6 (cs) Inhibitory kaspázy a farmaceutická kompozice, která je obsahuje
US6426413B1 (en) Inhibitors of caspases
BRPI9917881B1 (pt) compostos inibidores de caspases, composição farmacêutica e uso de ditos compostos
HK1152052A (en) Inhibitors of caspases
AU2003255217A1 (en) Inhibitors of Caspases
MXPA00009162A (en) Inhibitors of caspases
HK1035733B (en) Inhibitors of caspases
AU2007200251A1 (en) Inhibitors of Caspases
HK1033828B (en) 1,2-diazepane derivatives as interleukin-1beta converting enzyme inhibitors

Legal Events

Date Code Title Description
MK4A Patent expired

Effective date: 20190319