PL204619B1 - Pochodna peptydowa, kompozycja farmaceutyczna zawierająca taką pochodną i zastosowanie pochodnej peptydowej - Google Patents

Pochodna peptydowa, kompozycja farmaceutyczna zawierająca taką pochodną i zastosowanie pochodnej peptydowej

Info

Publication number
PL204619B1
PL204619B1 PL343611A PL34361199A PL204619B1 PL 204619 B1 PL204619 B1 PL 204619B1 PL 343611 A PL343611 A PL 343611A PL 34361199 A PL34361199 A PL 34361199A PL 204619 B1 PL204619 B1 PL 204619B1
Authority
PL
Poland
Prior art keywords
alkyl
mmol
compound
compounds
ch2cl2
Prior art date
Application number
PL343611A
Other languages
English (en)
Other versions
PL343611A1 (en
Inventor
Marion W. Wannamaker
Guy W. Bemis
Paul S. Charifson
David J. Lauffer
Michael D. Mullican
Mark A. Murcko
Keith P. Wilson
James W. Janetka
Robert J. Davies
Anne-Laure Grillot
Zhan Shi
Cornelia J. Forster
Original Assignee
Vertex Pharma
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Vertex Pharma filed Critical Vertex Pharma
Publication of PL343611A1 publication Critical patent/PL343611A1/xx
Publication of PL204619B1 publication Critical patent/PL204619B1/pl

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/02—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link
    • C07K5/0202—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link containing the structure -NH-X-X-C(=0)-, X being an optionally substituted carbon atom or a heteroatom, e.g. beta-amino acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/02—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/18—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for pancreatic disorders, e.g. pancreatic enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/16—Central respiratory analeptics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/14—Drugs for dermatological disorders for baldness or alopecia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A61P19/10—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease for osteoporosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A61P21/02—Muscle relaxants, e.g. for tetanus or cramps
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A61P21/04—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system for myasthenia gravis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/08—Antiepileptics; Anticonvulsants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A61P25/16—Anti-Parkinson drugs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/30—Drugs for disorders of the nervous system for treating abuse or dependence
    • A61P25/32—Alcohol-abuse
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/14—Drugs for disorders of the endocrine system of the thyroid hormones, e.g. T3, T4
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/48—Drugs for disorders of the endocrine system of the pancreatic hormones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/48—Drugs for disorders of the endocrine system of the pancreatic hormones
    • A61P5/50—Drugs for disorders of the endocrine system of the pancreatic hormones for increasing or potentiating the activity of insulin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/06—Antianaemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Addiction (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Crystallography & Structural Chemistry (AREA)

Description

Przedmiotem wynalazku jest pochodna peptydowa, kompozycja farmaceutyczna zawierająca taką pochodną i zastosowanie pochodnej peptydowej.
Wynalazek niniejszy dotyczy nowej klasy związków, które są inhibitorami kaspazy, a zwłaszcza inhibitorami enzymu konwertującego interleukinę-1 β („ICE”). Wynalazek dotyczy również kompozycji farmaceutycznych zawierających takie związki. Związki i kompozycje farmaceutyczne według wynalazku są szczególnie odpowiednie do hamowania aktywności kaspazy i w konsekwencji mogą być stosowane jako środki przeciwko chorobom związanym z interleukiną-1 („IL-1”), apoptozą, z czynnikiem pobudzającym interferon-γ (IGIF) lub z interferonem-γ („IFN-γ”), obejmującym choroby zapalne, choroby autoimmunizacyjne, zwyrodnieniowe choroby kości, zaburzenia proliferacyjne, choroby zakaźne i choroby zwyrodnieniowe.
Interleukina-1 („IL-1”) jest głównym białkiem prozapalnym i immunoregulacyjnym, które stymuluje różnicowanie i proliferację fibroblastów, wytwarzanie prostaglandyn, kolagenazy i fosfolipazy przez komórki maziówkowe i chondrocyty, degranulację bazofili i eozynofili i aktywację neutrofili. J.H. Oppenheim i in., Immunology Today, 7, str. 45-56 (1886). Jako taka, interleukina jest związana z patogenezą przewlekłych i ostrych chorób zapalnych i autoimmunizacyjnych. Przykładowo, w reumatoidalnym zapaleniu stawów IL-1 stanowi czynnik pośredniczący zarówno w objawach zapalnych, jak i w destrukcji proteoglikanu w chrząstkach zajętych chorobą stawów. D.D. Wood i in., Arthritis Rheum., 26, 975 (1983); E.J. Pettipher i in., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 71, 295 (1986); W.P. Arend i J,M. Dayer, Arthritis Rheum., 38, 151 (1995). IL-1 jest również wysoce silnym czynnikiem resorpcji kości. J.J. Jandiski, J. Oral Path 17, 145 (1988); F.E. Dewhirst i in., J. Immunol. 8, 2562 (1985). Jest ona również określana jako „czynnik aktywujący osteoklast” w chorobach niszczących kości, takich jak zapalenie kostno-stawowe i szpiczak mnogi. R. Bataille i in., Int. J. Clin. Lab. Res. 21(4), 283 (1992). W niektórych chorobach proliferacyjnych, takich jak ostra białaczka pochodzenia szpikowego lub szpiczak mnogi, IL-1 może pobudzać wzrost i adhezję komórek nowotworowych. M.R. Bani, J. Natl. Cancer Inst. 83, 123 (1991); F. Vidal-Vanaclocha, Cancer Res., 54, 2667 (1994). W takich zaburzeniach IL-1 stymuluje również wytwarzanie innych cytokin, takich jak IL-6, które mogą modulować rozwój nowotworu (Tartour i in., Cancer Res., 54, str. 6243 (1994). IL-1 jest wytwarzana w większości przez monocyty krwi obwodowej jako część odpowiedzi zapalnej i występuje w dwóch odmiennych postaciach agonistów, Il-1a i IL-1 β. B.S. Mosely i in., Proc. Natl. Acad. Sci., 84, str. 4572-4576 (1987); G. Lonnemann i in., Eur. J. Immunol., 19, str. 1531-1536 (1989).
IL-1 β jest syntetyzowana jako nieaktywny biologicznie prekursor, pIL-1e. pIL-1 β nie zawiera konwencjonalnej sekwencji lidera i nie jest obrabiana przez peptydazę sygnałową. C.J. March, Nature, 315, str. 641-647 (1985). W przeciwieństwie do tego, pIL-1 β jest rozszczepiana przez enzym konwertujący interleukinę-1 β („ICE”) pomiędzy Asp-116 i Ala-117, tworząc aktywny biologicznie fragment przy C-końcu znaleziony w surowicy ludzkiej i płynie maziówkowym. P.R. Sleath i in., J. Biol. Chem., 265, str. 14526-14528 (1992); A.D. Howard i in., J. Immunol., 147, str. 2964-2969 (1991). ICE jest proteazą cysteinową zlokalizowaną głównie w monocytach. Przeprowadza ona prekursor IL-1 β w dojrzałą postać. R.A. Black i in., FEBS Lett., 247, str. 386-390 (1989); M.J. Kostura i in. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 86, str. 5227-2532 (1989). Obróbka ICE jest również konieczna do transportu dojrzałej IL-1 β przez błonę komórkową.
ICE (lub kaspaza-1) jest członkiem rodziny homologicznych enzymów zwanych kaspazami. Homologi te mogą wykazywać podobieństwa sekwencji w regionach centrów aktywnych. Homologi takie (kaspazy) obejmują TX (lub ICrel-II lub ICH-2) (kaspaza-4) (Faucheu i in., EMBO J., 14, str. 1914 (1995); J. Kamens i in., J. Biol, Chem., 270, str. 15250 (1995); Nicholson i in., J. Biol, Chem., 270, 15870 (1995), TY (lub ICErel-III) (kaspaza-5) (Nicholson i in., J. Biol, Chem., 270, str. 15870 (1995); ICH-1 (lub Nedd-2) (kaspaza-2) (L. Wang i in., Cell, 78, str. 739 (1994)), MCH-2 (kaspaza-6) (T. Fernandes-Alnemri i in., Cancer Res., 55, str. 2737 (1995), CPP32 (lub YAMA albo apopaina) (kaspaza-3) (T. Fernandes-Alnemri i in., J. Biol. Chem., 269, str. 30761 (1994); D.W. Nicholson i in., Nature, 376, str. 37 (1995)), CMH-1 (lub MCH-3) (kaspaza-7) (Lippke i in., J. Biol. Chem., 271(4), str. 1825-1828 (1996)); (T. Fernandes-Alnemri i in., Cancer Res., (1995)), MCH5 (kaspaza-8) (M. Muzio i in., Cell 85(6), 817-827 (1996)), MCH-6 (kaspaza-9) (H. Duan i in., J. Biol. Chem., 271(34), str. 16720-16724 (1996)), MCH4 (kaspaza-10) (C. Vincenz i in., J. Biol. Chem., 272, str. 6578-6583 (1997); (T. Fernandes-Alnemri i in., Proc. Natl. Acad. Sci., 93, str. 7464-7469 (1996)), ICH-3 (kaspaza-11) (S. Wang i in., J. Biol. Chem., 271, str. 20580-20587 (1996)), mCASP-12 (kaspaza-12) (M. Van de
PL 204 619 B1
Craen i in., FEBS Lett., 403, str. 61-69 (1997); Y. Yuan i M. Miura PCT Publication WO95/00160 (1995)), ERICE (kaspaza-13) (E.W. Humke i in., J. Biol. Chem., 273(25), str. 15702-15707 (1998)) i MICE (kaspaza-14) (S. Hu i in., J. Biol. Chem., 273(45), str. 29648-29653 (1998)).
Każdy z tych homologów ICE, jak również sam ICE, jest zdolny do indukowania apoptozy, gdy jest wytworzony w wyniku nadekspresji w transfekowanych liniach komórkowych. Zahamowanie jednego lub więcej spośród tych homologów inhibitorem peptydylowym ICE Tyr-Val-Ala-Asp-keton chlorometylowy powoduje zahamowanie apoptozy w komórkach pierwotnych lub w liniach komórkowych.
Uważa się, że kaspazy są również związane z regulacją programowanej śmiercią komórek lub apoptozy. J. Yuan i in., Cell, 75, str. 641-652 (1993); M. Miura i in., Cell, 75, str. 653-660 (1993); M,A. Nett-Fiordalisi i in., J. Cell Biochem., 17B, str. 117 (1993). Sądzi się szczególnie, że ICE lub homologi ICE są związane z regulacją apoptozy w chorobach neurodegeneracyjnych, takich jak choroba Alzheimera i choroba Parkinsona. J. Marx i M. Baringa, Science, 259, str. 760-762 (1993); V. Gagliardini i in., Science, 263, str. 826-829 (1994). W terapeutycznych zastosowaniach zahamowanie apoptozy może być przydatne do leczenia choroby Alzheimera, choroby Parkinsona, udaru, zawału mięśnia sercowego, zaniku rdzenia i starzenia.
Jak wykazano, ICE pośredniczy w apoptozie (programowanej śmierci komórek) w niektórych typach tkanek. H. Steller, Science, 267, str. 1445 (1995); M. Whyte i G. Evan, Nature, 376, str. 17 (1995); S.J, Martin i D.R. Green, Cell, 82, str. 349 (1995); E.S. Alnemri i in., J. Biol. Chem., 270, str. 4312 (1995); J. Yuan, Curr. Opin. Cell Biol., 7, str. 211 (1995). Mysz transgeniczna z przerwanym genem ICE nie wykazuje apoptozy za pośrednictwem Fas (K. Kuida i in., Science, 267, 2000 (1995)). Taka aktywność ICE jest inna niż jego funkcję w obróbce pro-IL-1e. Nie jest wykluczone, że w niektórych typach tkanek zahamowanie ICE może nie mieć wpływu na wydzielanie dojrzałej IL-1 β, ale może zahamować apoptozę.
Aktywny enzymatycznie ICE opisano już wcześniej jako heterodimer złożony z dwóch podjednostek, p20 i p10 (odpowiednio o ciężarach cząsteczkowych 20 kDa i 10 kDa). Podjednostki te są utworzone od proenzymu o 45 kDa (p45) poprzez postać p30 na drodze mechanizmu aktywacji, który jest autokatalityczny. N.A. Thornberry i in., Nature, 356, str. 768-774 (1992). Proenzym ICE podzielono na kilka domen funkcyjnych: prodomenę (p14), podjednostkę p22/20, łącznik polipeptydowy i podjednostkę p10. Thornberry i in., supra; Casano i in., Genomics, 20, str. 474-481 (1994).
p45 o pełnej długości scharakteryzowano przez cDNA i sekwencję aminokwasów. Zgłoszenia patentowe PCT WO 91/15577 i WO 94/00154. Znane są również cDNA i sekwencje aminokwasów p20 i p10. Thornberry i in., supra. Zsekwencjonowano i sklonowano również mysie i szczurze ICE. Ich sekwencja aminokwasowa i sekwencja kwasu nukleinowego wykazuje wysoką homologię z ludzkim ICE. D.K. Miller i in., Ann. N.Y. Acad. Sci., 696, str. 133-148 (1993); S.M. Molineaux i in., Proc. Natl. Acad. Sci., 90, str. 1809-1813. Trójwymiarową strukturę ICE określono metodą rentgenokrystalografii z rozdziałem atomów. K.P. Wilson i in., Nature, 370, str. 270-275 (1994). Aktywny enzym występuje jako tetramer dwóch podjednostek p20 i p10.
Jak ostatnio stwierdzono, ICE oraz inni członkowie rodziny ICE/CED-3, są związane z konwersją pro-IGIF do IGIF lub z produkcją IFN-γ in vivo (zgłoszenie PCT/US96/20843, publikacja nr WO 97/22619, którą powołuje się tutaj jako stan techniki). IGIF jest syntetyzowany in vivo jako białko prekursorowe „pro-IGIF”.
Czynnik indukujący interferon-gamma (IGIF) jest polipeptydem o ciężarze około 18 kDA, który stymuluje limfocyty T do produkcji interferonu-gamma (IFN-γ). IGIF jest wytwarzany przez aktywowane komórki Kupffera i makrofagi in vivo i wydalany poza te komórki po stymulacji endotoksyną. Tak więc, związek, który zmniejsza wytwarzanie IGIF, byłby użyteczny jako inhibitor takiej stymulacji limfocytów T, co z kolei zmniejszyłoby poziomy produkcji przez nie IFN-γ.
IFN-γ jest cytokiną wykazującą immunomodulacyjne działanie na różne komórki układu odpornościowego. IFN-γ jest zwłaszcza związany z aktywacją makrofagów i selekcją komórek Th1 (F. Belardelli, APMIS, 103, str. 161 (1995)). IFN-γ wywiera działanie częściowo przez modulowanie ekspresji genów przez szlaki STAT i IRF (C. Schindler i J.E. Darnell, Ann. Rev. Biochem., 64, str. 621 (1995); T. Taniguchi, J. Cancer Res. Clin. Oncol., 121, str. 516 (1995).
Myszy pozbawione IFN-γ lub jego receptora wykazują liczne wady funkcji komórek układu odpornościowego i są oporne na wstrząs endotoksyczny (S. Huang i in., Science, 259, str. 1742 (1993); D. Dalton i in., Science, 259, str. 1739 (1993); B.D, Car i in., J. Exp. Med., 179, str. 1437 (1994)). Wraz z IL-12, IGIF wydaje się być silnym induktorem wytwarzania IFN-γ przez limfocyty T (H. Okamura i in.,
PL 204 619 B1
Infection and Immunity, 63, str. 3966 (1995); H. Okamura i in., Nature, 378, str. 88 (1995); S. Ushio i in., J. Immunol., 156, str. 4247 (1996).
Wykazano, że IFN-γ przyczynia się do patologii towarzyszących różnym zapaleniom, zakażeniom, zaburzeniom i chorobom autoimmunizacyjnym. A zatem, związki zdolne do zmniejszania wytwarzania IFN-γ byłyby użyteczne do łagodzenia skutków patologii związanych z IFN-γ.
Zgodnie z powyższym, kompozycje i metody, przy użyciu których można regulować konwersję pro-IGIF do IGIF, byłyby użyteczne do zmniejszania wytwarzania IFN-γ in vivo, a tym samym do łagodzenia szkodliwego działania tych białek, które przyczynia się do zaburzeń i chorób u ludzi.
Inhibitory kaspazy stanowią klasę związków użytecznych do zwalczania zapalenia i/lub apoptozy. Opisano już peptydowe i peptydylowe inhibitory ICE (opisy patentowe PCT nr nr WO 91/15577, WO 93/05071, WO 93/09135, WO 93/12076, WO 93/14777, WO 93/16710, WO 95/35308, WO 96/30395, WO 96/33209 i WO 98/01133; europejskie zgłoszenia patentowe nr nr 503 561, 547 699, 618 223, 623 592 i 623 606 oraz zgłoszenia patentowe USA nr nr 5,434,248, 5,710,153, 5,716,929 i 5,744,451). Zaobserwowano, że takie peptydylowe inhibitory ICE blokują wytwarzanie dojrzałej IL-1p w mysim modelu zapalenia (patrz powyżej) i powstrzymują wzrost komórek białaczki in vitro (Estrov i in., Blood, 84, 380a (1994)). Jednakże, z uwagi na ich peptydowy charakter, inhibitory takie charakteryzują się na ogół niepożądanymi własnościami farmakologicznymi, takimi jak słabe przenikanie do komórek i słaba aktywność w komórkach, zła absorpcja przy podawaniu doustnym, niestabilność i szybki metabolizm. J.J. Plattner i D.W. Norbeck, w Drug Discovery Technologies, wyd. C.R. Clark i W.H. Moos (Ellis Horwood, Chichester, Anglia, 1990), str. 92-126. Te własności stanowią przeszkodę w stosowaniu tych związków jako skutecznych leków.
Opisano również związki niepeptydylowe, które hamują ICE in vitro. Zgłoszenie PCT WO 95/26958; zgłoszenie patentowe USA nr 5,552,400; Dolle i in., J. Med. Chem., 39, str. 2438-2440 (1996).
Nie jest jednakże pewne, że związki te mają profile farmakologiczne odpowiednie dla użyteczności terapeutycznej.
A zatem, istnieje zapotrzebowanie na związki, które mogą skutecznie hamować kaspazy, mają odpowiednią aktywność in vivo i mogą być stosowane jako środki do zapobiegania i leczenia przewlekłych i ostrych postaci chorób związanych z IL-1, apoptozą, IGIF lub IFN-γ, jak również chorób zapalnych, autoimmunizacyjnych, chorób niszczących kości, chorób proliferacyjnych, zakażeń i chorób zwyrodnieniowych.
Wynalazek niniejszy dostarcza nowej klasy związków, które są użyteczne jako inhibitory kaspazy, a zwłaszcza jako inhibitory ICE. Związki te można stosować same lub w kombinacji z innymi środkami terapeutycznymi i profilaktycznymi, takimi jak antybiotyki, immunomodulatory i inne środki przeciwzapalne, do leczenia lub profilaktyki chorób związanych z IL-1, apoptozą, IGIF lub IFN-γ. Związki według wynalazku są zdolne do wiązania się z aktywnym centrum kaspazy i hamowania aktywności tego enzymu.
Związki według wynalazku stanowią pochodne peptydowe przedstawione wzorem I:
w którym:
PL 204 619 B1
R1 oznacza -C(O)R8, -C(O)C(O)R8, -S(O)2R8, -S(O)R8, -C(O)OR8, -C(O)N(H)R8, -S(O)2N (H)-R8, -S(O)N(H)-R8, -C(O)C(O)N(H)R8, -C(O)CH=CHR8, -C(O)CH2OR8, -C(O)CH2N(H)R8, -C(O)N(R8)2, -S(O)2N(R8)2, -S(O)N(R8)2, -C(O)C(O)N(R8)2 lub -C(O)CH2N(R8)2;
R7 oznacza -OH lub -OR8, lub
B) Y oznacza:
(C)
X oznacza -C(R3)2- lub -N(R3)-;
R1 oznacza -R8, -C(O)R8, -C(O)C(O)R8, -S(O)2R8, -S(O)R8, -C(O)OR8, -C(O)N(H)R8, -S(O)2N(H)-R8, -S(O)N(H)-R8, -C(O)C(O)N(H)R8, -C(O)CH=CHR8, -C(O)CH2OR8, -C(O)CH2N(H)R8, -C(O)N(R8)2, -S(O)2N(R8)2, -S(O)N(R8)2, -C(O)C(O)N(R8)2 lub -C(O)CH2N(R8)2; lub
R1 oznacza -C(O)R8, -C(O)C(O)R8, -S(O)2R8, -S(O)R8, -C(O)OR8, -C(O)N(H)R8, -S(O)2N(H)-R8, -S(O)N(H)-R8, -C(O)C(O)N(H)R8, -C(O)CH=CHR8, -C(O)CH2OR8, -C(O)CH2N(H)R8, -C(O)N(R8)2, -S(O)2N(R8)2, -S(O)N(R8)2, -C(O)C(O)N(R8)2 lub -C(O)CH2N(R8)2;
R7 oznacza -OH lub -OR8;
3 pod warunkiem, że gdy jeden R oznacza -H, wówczas drugi ma znaczenie inne niż -H; lub
PL 204 619 B1
a pozostałe symbole i podstawniki w zwią zku o wzorze I mają nastę pujące znaczenia: m oznacza 0 lub 1,
R2 oznacza -H, a każdy R3 niezależnie oznacza -H, aminokwasowy łańcuch boczny albo -R8, przy czym atom wodoru związany z dowolnym alkilowym lub cykloalkilowym atomem węgla ewentual10 nie jest zastąpiony przez -R10, atom wodoru związany z dowolnym arylowym lub heteroarylowym atomem węgla ewentualnie jest zastąpiony przez -R11, zaś atom wodoru związany z dowolnym atomem azotu w układzie pierścieniowym ewentualnie jest zastąpiony przez -R1;
R4 i jeden R5 razem z atomami, do których są przyłączone, tworzą układ pierścieniowy wybrany spośród:
a drugi R5 oznacza -H, przy czym atom wodoru zwią zany z dowolnym atomem azotu w ukł adzie pierścieniowym ewentualnie jest zastąpiony przez R1, albo R4 i jeden R5 razem z atomami, do których są przyłączone, tworzą układ pierścieniowy:
a drugi R oznacza -H;
R6 oznacza -H;
każdy R8 niezależnie oznacza -alkil, -cykloalkil, -aryl, -heteroaryl, -heterocyklil, -alkilocykloalkil, alkiloaryl, -alkiloheteroaryl lub -alkiloheterocyklil, w których atom wodoru związany z dowolnym alkilo10 wym lub cykloalkilowym atomem węgla ewentualnie jest zastąpiony przez R10, atom wodoru związany z dowolnym arylowym lub heteroarylowym atomem węgla ewentualnie jest zastąpiony przez R11, zaś 1 atom wodoru związany z dowolnym atomem azotu ewentualnie jest zastąpiony przez R1;
każdy R10 niezależnie oznacza -perfluoroalkil, -O-alkil, -N(H)alkil, -N(alkil)2, -S-alkil, -S(O)2alkil,
-S(O)alkil, -C(O)alkil, -CH2N(H)alkil, -CH2N(alkil)2, -alkil, -aryl, -heteroaryl lub -heterocyklil, w których atom wodoru związany z dowolnym arylowym lub heteroarylowym atomem węgla ewentualnie jest zastąpiony przez R piony przez R1; a zaś atom wodoru związany z dowolnym atomem azotu ewentualnie jest zastąPL 204 619 B1 każdy R11 niezależnie oznacza -OH, -SH, -F, -Cl, -Br, -J, -NO2, -CN, -NH2, -CO2H, -C(O)NH2, -N(H)C(O)H, -N(H)C(O)NH2, -alkil, -perfluoroalkil, -O-alkil, - O-aryl, -O-alkiloaryl, -N(H)alkil, -N(H)aryl, -N(H)-alkiloaryl, -N(alkil)2, -C(O)N(H)alkil, -C(O)N(alkil)2, -N(H)C(O)alkil, -N(H)C(O)N(H)alkil, -N(H)C(O)N(alkil)2, -S-alkil, -S-aryl, -S-alkiloaryl, -S(O)2alkil, -S(O)alkil, -C(O)alkil, -CH2NH2, -CH2N(H)alkil lub -CH2N(alkil)2, przy czym w powyższych podstawnikach określenie „alkil” odnosi się do prostołańcuchowego lub rozgałęzionego nasyconego węglowodoru alifatycznego zawierającego 1 do 6 atomów węgla, „cykloalkil” odnosi się do mono- lub policyklicznego niearomatycznego węglowodorowego układu pierścieniowego zawierającego 5 do 10 atomów węgla, który ewentualnie może zawierać wiązania nienasycone, „aryl” odnosi się do mono- lub policyklicznego aromatycznego układu pierścieniowego zawierającego 6, 10, 12 lub 14 atomów węgla, w którym co najmniej jeden pierścień jest aromatyczny, „heteroaryl” odnosi się do mono- lub policyklicznego układu pierścieniowego zawierającego 1 do 15 atomów węgla i 1 do 4 heteroatomów, niezależenie wybranych spośród atomów siarki, azotu lub tlenu i w którym co najmniej jeden pierścień jest aromatyczny, określenie „heterocyklil” odnosi się do mono- lub policyklicznego, niearomatycznego układu pierścieniowego zawierającego 1 do 15 atomów węgla i 1 do 4 heteroatomów, niezależenie wybranych spośród atomów siarki, azotu lub tlenu i w którym mono- lub policykliczny układ pierścieniowy ewentualnie może zawierać wiązania nienasycone, ale nie jest on aromatyczny, określenie „aminokwasowy łańcuch boczny” odnosi się do dowolnej grupy przyłączonej do atomu węgla α aminokwasu występującego naturalnie lub niewystępującego naturalnie, oraz ich farmaceutycznie dopuszczalne pochodne.
W celu lepszego zrozumienia niniejszego wynalazku poniż ej zamieszczono nastę pują cy szczegółowy opis.
W opisie stosuje się nastę pujące skróty i definicje.
Skróty
Ac2O bezwodnik octowy
MeCN acetonitryl
AMC aminometylokumaryna n-Bu n-butyl
DMF dimetyloformamid
DIEA N,N-diizopropyloetyloamina
DMA N,N-dimetyloacetamid
EDC chlorowodorek 1-(3-dimetyloaminopropylo)-3-etylokarbodiimidu
Et2O eter dietylowy
EtOAc octan etylu
Fmoc 9-fluorenylometoksykarbonyl
HBTU heksafluorofosforan O-benzotriazol-1-ilo-N,N,N,N'-tetrametylouroniowy
HOBT hydrat 1-hydroksybenzotriazolu
MeOH metanol
NMP N-metylopirolidynon
TFA kwas trifluorooctowy pNA p-nitroanilina
Określenie „kaspaza” odnosi się do enzymu będącego członkiem rodziny enzymów, która obejmuje ICE (patrz H. Hara Natl. Acad. Sci., 94, str. 2007-2012 (1997)).
Określenia „HBV”, „HCV” i „HGV” odnoszą się odpowiednio do wirusa zapalenia wątroby B, C i G.
Określenie „Ki” odnosi się do liczbowej miary skuteczności związku w hamowaniu aktywności docelowego enzymu, takieg jak ICE. Niższe wartości Ki odpowiadają wyższej skuteczności Wartość Ki wyprowadzono przez dopasowanie eksperymetalnie wyznaczonych danych do standardowych równań kinetyki enzymu (patrz I.H. Segel, Enzyme Kinetics, Wiley-Inter-science, 1975).
Określenie „czynnik indukujący interferon gamma” odnosi się do czynnika, który jest zdolny do stymulowania endogennego wytwarzania IFN-γ.
Określenie „inhibitor kaspazy” odnosi się do związku, który jest zdolny do wykazywania wykrywalnego zahamowania jednej lub więcej kaspaz. Określenie „inhibitor ICE” odnosi się do związku, który jest zdolny do wykazywania wykrywalneg zahamowania ICE i ewentualnie jednej lub więcej dodatkowych kaspaz. Zahamowanie tych enzymów można określić sposobami opisanymi i wprowadzonymi tu jako stan techniki.
PL 204 619 B1
Dla specjalisty w tej dziedzinie techniki oczywiste będzie, że inhibitor enzymu in vivo niekoniecznie jest inhibitorem enzymu in vitro. Przykładowo, w badaniach in vitro związek w formie proleku wykazuje zwykle małą aktywność, lub wcale nie wykazuje aktywności, w badaniach in vitro. Takie postaci proleków mogą zmieniać się w wyniku metabolizmu lub innych procesów biochemicznych zachodzących u pacjenta, dostarczając inhibitora ICE in vivo.
Określenie „cytokina” odnosi się do cząsteczki, która pośredniczy w interakcjach pomiędzy komórkami.
Określenie „stan” odnosi się do każdej choroby, zaburzenia lub działania, które powodują szkodliwe konsekwencje biologiczne dla pacjenta.
Określenie „pacjent” odnosi się do zwierzęcia lub do jednej albo więcej komórek pochodzących z organizmu zwierzę cia. Korzystnie zwierzę ciem jest ssak, a najkorzystniej czł owiek. Komórki mogą być w dowolnej postaci, obejmującej, ale nie wyłącznie, komórki tkanek, gniazda komórek, komórki unie śmiertelnione, komórki transfekowane lub trasnsformowane, oraz komórki pochodzące od zwierząt, które zostały zmienione fizycznie lub fenotypowo.
Stosowane w niniejszym zgłoszeniu określenie „pacjent” odnosi się do każdego ssaka, a korzystnie do ludzi.
Określenie „cykloalkil” odnosi się do mono- lub policyklicznego niearomatycznego węglowodorowego układu pierścieniowego, zawierającego 5 do 10 atomów węgla, który ewentualnie może zawierać wiązania nienasycone. Przykłady obejmują cyklopentyl, adamantyl, norbornyl i spirocyklopentyl.
Określenie „aryl” odnosi się do mono- lub policyklicznego układu pierścieniowego, który zawiera 6, 10, 12 lub 14 atomów węgla i w którym co najmniej jeden pierścień jest aromatyczny. W niniejszym wynalazku grupy arylowe ewentualnie są pojedynczo lub wielokrotnie podstawione przez R11. Przykłady pierścieni arylowych obejmują fenyl, naftyl i tetrahydronaftyl.
Określenie „heteroaryl” odnosi się do mono- lub policyklicznego układu pierścieniowego, który zawiera 1 do 15 atomów węgla i 1 do 4 heteroatomów, a co najmniej jeden pierścień w tym układzie jest aromatyczny. W niniejszym wynalazku grupy heteroarylowe ewentualnie są pojedynczo lub wielokrotnie podstawione przez R11.
Określenie „alkiloaryl” odnosi się do grupy alkilowej, w której atom wodoru zastąpiono rodnikiem arylowym.
Określenie „alkiloheteroaryl” odnosi się do grupy alkilowej, w której atom wodoru zastąpiono rodnikiem heteroarylowym.
Określenie „podstawienie” odnosi się do zastąpienia atomu wodoru w związku grupą podstawnika.
Określenie „prosty łańcuch” odnosi się do ciągłego nierozgałęzionego układu kowalencyjnie związanych atomów. Prosty łańcuch może być podstawiony, ale podstawniki te nie stanowią części prostego łańcucha.
W celu zaznaczenia połączeń w czą steczkach lub grupach, we wzorach chemicznych stosowano nawiasy. Nawiasy stosowano szczególnie w celu wskazania: 1) że z konkretnym atomem związany jest więcej niż jeden atom lub grupa; 2) punktu rozgałęzienia (tzn. atom bezpośrednio przed otwartym nawiasem jest związany zarówno z atomem lub grupą w nawiasach, jak i z atomem i grupą bezpośrednio po zamkniętym nawiasie). Przykładem pierwszego stosowania jest zapis „-N(alkil)2” i wskazujący, że dwie grupy alkilowe są związane z atomem N. Przykładem drugiego stosowania jest zapis „-C(O)NH2” wskazujący, że obydwie grupy, karbonylowa i grupa aminowa („NH2”), są związane ze wskazanym atomem węgla. Grupę „-C(O)NH2” można przedstawić innymi sposobami, na przykład następującym wzorem:
Podstawniki można przedstawiać w różnych formach, które znane są specjalistom w tej dziedzinie techniki i mogą być używane wymiennie. Przykładowo, podstawnik metylowy w pierścieniu fenylowym można przedstawić w dowolnej z następujących postaci:
PL 204 619 B1
W niniejszym opisie stosuje się wymiennie róż ne formy podstawników, takich jak metyl. Jeśli jest to konieczne, w opisie podaje się również inne definicje.
W pochodnej peptydowej według wynalazku w wersji B, korzystnie, X oznacza -C(R3)2-. Korzystnie w wersji B pochodnej peptydowej Y oznacza
w którym V oznacza: CH3O,
Ο”, θ' σ° er· t
lub
W tych przypadkach korzystnie R1 oznacza -C(O)R8 lub -C(O)C(O)R8.
PL 204 619 B1
W wersji (A), (B) lub (C) R1 oznacza -C(O)R8 lub -C(O)C(O)R8.
We wszystkich pochodnych peptydowych korzystnie jeden R3 oznacza -H, a drugi R3 oznacza metyl, izopropyl, tert-butyl, -CH2SR8, -CH2SO2R8, -CH2CH2SR8 lub -CH2CH2SO2R8, korzystnie metyl, gdy X oznacza -C(R3)2-. Gdy jeden R3 oznacza -H, drugi R3 oznacza metyl, a X oznacza -C(R3)2-, wówczas korzystnie R1 oznacza -C(O)R8 lub -C(O)C(O)R8.
Korzystnie w pochodnych peptydowych według wynalazku R4 i jeden spośród R5 razem z atomami, z którymi są związane, tworzą układ pierścieniowy:
a drugi R5 oznacza H, wówczas też korzystnie jeden spoś ród R3 oznacza -H, a drugi R3 oznacza metyl, izopropyl, tert-butyl, -CH2SR8, -CH2SO2R8, -CH2CH2SR8 lub -CH2CH2SO2R8, gdy X oznacza -C(R3)2-. Gdy w tych pochodnych drugi R3 oznacza metyl, korzystnie R1 oznacza -C(O)R8 lub -C(O)C(O)R8.
Takie korzystne znaczenia R3, R1 i X występują też w pochodnych, w których jeden R4 i jeden R5 razem z atomami, do których są przyłączone, tworzą układ pierścieniowy:
Korzystne pochodne peptydowe według wynalazku wybrane są z grupy obejmującej następujące związki: 5a-5bd, 7a-7at, 20a-20t, 23h, 24d-24e, 26e, 34, 52, 57, 61, 65, 69, 73, 121 122a-v:
PL 204 619 B1
PL 204 619 B1
PL 204 619 B1
PL 204 619 B1
PL 204 619 B1
PL 204 619 B1
PL 204 619 B1
PL 204 619 B1
PL 204 619 B1
PL 204 619 B1
20g
PL 204 619 B1
20q
PL 204 619 B1
PL 204 619 B1
PL 204 619 B1
PL 204 619 B1
Natomiast korzystne pochodne peptydowe w wersji B, w których X oznacza -C(R )2- wybrane są z grupy obejmują cej nastę pujące związki: 51, 56, 60, 64, 68, 72, 76-93, 98a-z, 98aa-az, 98ba, 98bb, 101, 102a, 102b, 110 i 111:
PL 204 619 B1
PL 204 619 B1
PL 204 619 B1
PL 204 619 B1
PL 204 619 B1
PL 204 619 B1
PL 204 619 B1
Korzystne są też pochodne peptydowe wybrane z grupy obejmującej następujące związki: 71, 75, 109, 120a i 120b:
PL 204 619 B1
r r 3
Alternatywnie, korzystnymi związkami według wykonań A-D są związki, w których R3 oznacza -H, a drugi R3 oznacza metyl, izopropyl, tert-butyl, -CH2SR8, -CH2SO2R8, -CH2CH2SR8, -CH2CH2SO2R8.
3
Najkorzystniejszymi związkami według wynalazku są związki, w których R oznacza metyl; a
R4 i jeden spośród R5 razem z atomami, z którymi są związane, tworzą układ pierścieniowy:
zaś drugi R5 oznacza H.
Alternatywnie, w najkorzystniejszych związkach według wykonań A-C R3 oznacza metyl; a R4 i jeden spośród R5 razem z atomami, z którymi są związane, tworzą układ pierścieniowy:
drugi R5 oznacza H.
PL 204 619 B1
Związki według wynalazku mogą zawierać jeden lub więcej „asymetrycznych” atomów węgla, tak więc mogą występować w po staci racematów lub mieszanin racemicznych, pojedynczych enancjomerów, mieszanin diastereomerycznych i pojedynczych diastereomerów. Każdy stereogenny atom węgla może występować w konfiguracji R lub S. Aczkolwiek opisane tu konkretnie związki i struktury występują w konkretnej konfiguracji stereochemicznej, w zakres wynalazku wchodzą również związki i struktury o przeciwnej stereochemii przy danym centrum chiralnym, jak równie ż ich mieszaniny. Zakresem wynalazku objęto wyraźnie wszystkie postaci izomeryczne związków według wynalazku oraz ich farmaceutycznie dopuszczalne pochodne.
Określenie „farmaceutycznie dopuszczalna pochodna” oznacza każdą farmaceutycznie dopuszczalną sól, ester lub sól takiego estru związku o wzorze I.
Farmaceutycznie dopuszczalne sole związków o wzorze I obejmują, na przykład, sole utworzone z farmaceutycznie dopuszczalnymi kwasami nieorganicznymi i organicznymi oraz z zasadami. Przykłady odpowiednich kwasów obejmują kwas solny, bromowodorowy, siarkowy, azotowy, nadchlorowy, fumarowy, maleinowy, fosforowy, glikolowy, mlekowy, salicylowy, bursztynowy, tolueno-p-sulfonowy, winowy, octowy, cytrynowy, metano sulfonowy, mrówkowy, benzoesowy, malonowy, naftaleno-2-sulfonowy i benzenosulfonowy. Inne kwasy, takie jak szczawiowy, aczkolwiek same nie są farmaceutycznie dopuszczalne, mogą być stosowane do wytwarzania soli użytecznych jako produkty przejściowe w wytwarzaniu związków według wynalazku oraz ich farmaceutycznie dopuszczalnych soli addycyjnych z kwasami. Sole utworzone z odpowiednimi zasadami obejmują sole z metalami alkalicznymi (np. z sodem), z metalami ziem alkalicznych (np. z magnezem), sole amonowe i sole N-(C1-C4-alkil)4+.
Wynalazek przewiduje również „czwartorzędowanie” dowolnych grup zawierających zasadowy atom azotu w ujawnionych tu związkach. Zasadowy azot można czwartorzędować stosując środki znane fachowcom w tej dziedzinie, obejmujące, na przykład, halogenki niższego alkilu, takie jak chlorki, bromki i jodki metylu, etylu, propylu i butylu; siarczany dialkilu obejmujące siarczan dimetylu, dietylu, dibutylu i diamylu; długołańcuchowe halogenki, takie jak chlorki, bromki i jodki decylu, laurylu, mirystylu i stearylu; oraz halogenki aralkilu, obejmujące bromki benzylu i fenetylu. Dzięki takiemu czwartorzędowaniu otrzymać można produkty rozpuszczalne lub zdolne do tworzenia dyspersji w wodzie lub w oleju.
W przypadku wielokrotnego podstawienia każ dy z podstawników moż e być dobrany niezależ nie od innego podstawnika, pod warunkiem, że kombinacja podstawników prowadzi do wytworzenia trwałej struktury.
W zakres wynalazku wchodzą jedynie takie kombinacje podstawników i zmiennych, które prowadzą do wytworzenia trwałych związków. Stosowany tu termin „trwały” oznacza związki, które wykazują trwałość wystarczającą do ich wytworzenia i podawania ssakowi sposobami znanymi w technice. Zazwyczaj związki takie są trwałe w temperaturze 40°C lub niższej, w nieobecności wilgoci lub innych warunków reaktywnych chemicznie, przez co najmniej tydzień.
Korzystne związki według wynalazku mogą być łatwo absorbowane w krwiobiegu pacjenta po podaniu doustnym. Taka dostępność przy podawaniu doustnym sprawia, że związki są doskonałymi środkami przy leczeniu chorób związanych z IL-1, apoptozą, IGIF lub IFN-γ na drodze doustnego podawania.
Należy rozumieć, że związki według wynalazku mogą występować w różnych równoważnych postaciach, w zależności od warunków obejmujących dobór rozpuszczalnika, pH i inne czynniki znane specjalistom w tej dziedzinie techniki. Zakresem wynalazku wyraźnie objęto wszystkie takie postaci związków. Konkretnie, wiele związków, a szczególnie takie, które zawierają w podstawniku Y grupy aldehydowe lub ketonowe i grupy kwasu karboksylowego, może występować w postaci hemi-acetalu lub w formie uwodnionej. Przykładowo, związki według wykonania A są w postaci hemiacetalu, gdy Y oznacza:
PL 204 619 B1
W zależnoś ci od doboru rozpuszczalnika i innych warunków znanych specjalistom w tej dziedzinie techniki, związki według wynalazku mogą także występować w postaci, acyloksyacetalu, acetalu lub w formie enolowej. Przykładowo, związki według wynalazku są w postaci acyloksyacetalu, gdy Y oznacza:
Należy ponadto zauważyć, że równoważne postaci związków według wynalazku mogą obejmować formy tautomeryczne. W zakres wynalazku wyraźnie włączono wszystkie takie formy.
Związki o wzorze I można zsyntetyzować konwencjonalnymi technikami. Korzystnie związki te syntetyzuje się z dostępnych na rynku substancji wyjściowych.
Związki według wynalazku można wytworzyć stosując opisane poniżej sposoby. Dla specjalistów w tej dziedzinie techniki oczywiste będzie, że sposoby te nie są jedynymi metodami, którymi można zsyntetyzować opisane i zastrzeżone tu związki. Inne metody będą oczywiste dla fachowców. Ponadto, aby uzyskać żądane związki, opisane tu różne etapy syntezy można prowadzić w innej kolejności lub porządku.
Należy rozumieć, że w celu poprawienia selektywnych własności biologicznych, związki według wynalazku można modyfikować odpowiednimi grupami funkcyjnymi. Modyfikacje takie są znane w technice i obejmują modyfikacje, które poprawiają przenikanie związków do danego układu biologicznego (np. do krwi, układu limfatycznego, ośrodkowego układu nerwowego), zwiększają dostępność przy podawaniu doustnym, zwiększają rozpuszczalność, co umożliwia podawanie przez wstrzykiwanie, zmieniają metabolizm lub szybkość wydalania. Ponadto, związki można zmieniać w postać proleku, tak że żądany związek wytwarza się w organizmie pacjenta w wyniku działania na prolek procesów metabolicznych lub innych procesów biologicznych. Takie formy proleków zazwyczaj wykazują małą aktywność, bądź w ogóle nie wykazują aktywności, w badaniach in vitro. Niektóre przykłady proleków obejmują ketalowe, acetalowe, oksymowe, iminowe i hydrazonowe formy związków, które zawierają grupy ketonowe lub aldehydowe, szczególnie, gdy grupy takie występują w podstawniku Y związków według wynalazku. Innymi przykładami proleków są opisane powyżej formy hemi-ketalowe, hemi-acetalowe, acyloksyacetalowe, ketalowe, acetalowe i enolowe.
Związki według wynalazku są inhibitorami kaspazy, a szczególnie inhibitorami ICE. A zatem, związki te są zdolne do osiągania celu i hamowania skutków chorób, w których pośredniczą IL-1, apoptoza, IGI i IFN-γ, a tym samym ostatecznego działania tego białka w chorobach zapalnych, autoimmunizacyjnych, w chorobach niszczących kości, zaburzeniach proliferacyjnych, chorobach zakaźnych i chorobach zwyrodnieniowych. Przykładowo, związki według wynalazku hamują konwersję prekursora IL-1e w dojrzałą IL-1 β przez zahamowanie ICE. Ponieważ ICE odgrywa zasadniczą rolę w wytwarzaniu dojrzałej IL-1, zahamowanie tego enzymu, poprzez zahamowanie wytwarzania dojrzałej IL-1, skutecznie blokuje początek skutków i objawów fizjologicznych, w których pośredniczy IL-1, takich jak zapalenie. Tak więc, przez zahamowanie aktywności prekursora IL-1 β, związki według wynalazku skutecznie działają jako inhibitory IL-1.
Związki według wynalazku poprzez zahamowanie ICE hamują także konwersję pro-IGIF w aktywną, dojrzałą postać IGIF. Ponieważ ICE odgrywa zasadniczą rolę w wytwarzaniu dojrzałego IGIF, zahamowanie ICE, poprzez zahamowanie wytwarzania dojrzałego IGIF, skutecznie blokuje początek skutków i objawów fizjologicznych, w których pośredniczy IGIF. IGIF z kolei ma zasadnicze znaczenie przy wytwarzaniu IFN-γ. A zatem, poprzez zahamowanie wytwarzania dojrzałego IGIF, a tym samym produkcji IFN-γ, ICE skutecznie blokuje początek fizjologicznych skutków i objawów, w których pośredniczy IFN-γ.
Związki według wynalazku mają zaskakującą biodostępność w porównaniu z inhibitorami peptydylowymi, takimi jak opisane na przykład w zgłoszeniach patentowych nr nr EP 618 223, EP 623 592, WO 93/09135, WO 93/16710, USA 5,434,248, WO 95/35308 i WO 96/33209. Tak więc, kompozycje farmaceutyczne według wynalazku będą przydatne do kontrolowania aktywności kaspazy in vivo. Tym samym, kompozycje według wynalazku będą użyteczne do kontrolowania poziomów IL-1, IGIF
PL 204 619 B1 lub IFN-γ in vivo i do leczenia lub zmniejszania postępu, zaawansowania lub skutków chorób, zaburzeń lub stanów związanych z IL-1, apoptozą, IGIF lub IFN-γ.
Kompozycje farmaceutyczne według wynalazku zawierają jako substancję czynną związek o wzorze I, lub jego farmaceutycznie dopuszczalną pochodną, oraz farmaceutycznie dopuszczalny nośnik, adiuwant lub podłoże.
Określenie „farmaceutycznie dopuszczalny nośnik” odnosi się do nietoksycznego nośnika, który można podawać pacjentowi razem ze związkiem według wynalazku, nie znosząc jego aktywności farmakologicznej.
Jako farmaceutycznie dopuszczalne nośniki w kompozycjach według wynalazku można stosować, ale nie wyłącznie, wymieniacze jonowe, tlenek glinu, stearynian glinu, lecytynę, białka surowicy, takie jak albumina surowicy ludzkiej, substancje buforujące, takie jak fosforany, glicyna, kwas sorbinowy, sorbinian potasu, mieszaniny częściowych glicerydów nasyconych roślinnych kwasów tłuszczowych, wodę, sole lub elektrolity, takie jak siarczan protaminy, wodorofosforan disodu, wodorofosforan potasu, chlorek sodu, sole cynku, krzemionkę koloidalną, trikrzemian magnezu, poliwinylopirolidon, substancje oparte na celulozie, glikol polietylenowy, sól sodową karboksymetylocelulozy, poliakrylany, woski, polimery blokowe polietylen-polipropylen, lanolinę i samoemulgujące układy dostarczania leków (SEDDS), takie jak α-tokoferol, bursztynian glikolu polietylenowego 1000 lub inne podobne matryce polimerowe do dostarczania.
Wraz z kompozycją farmaceutyczną, która jako składnik czynny zawiera tylko związek według wynalazku można podawać pacjentowi inny środek. Środki takie obejmują, ale nie wyłącznie, środek przeciwzapalny, inhibitor metaloproteazy matrycowej, inhibitor lipoksygenazy, antagonistę cytokiny, środek immunosupresyjny, środek przeciwnowotworowy, środek przeciwwirusowy, cytokinę, czynnik wzrostowy, immunomodulator, prostaglandynę lub związek przeciw nadmiernej proliferacji naczyń.
Określenie „farmaceutycznie skuteczna ilość” oznacza ilość skuteczną w leczeniu lub łagodzeniu chorób związanych IL-1, apoptozą, IGIF lub IFN-γ u pacjenta. Określenie „profilaktycznie skuteczna ilość” odnosi się do ilości skutecznej zapobieganiu lub zasadniczym złagodzeniu chorób związanych z IL-1, apoptozą, IGIF lub IFN-γ u pacjenta.
Do kontrolowania poziomów IGIF i IFN-γ in vivo i do leczenia lub zmniejszenia postępu, zaawansowania lub skutków chorób związanych z IL-1, apoptozą, IGIF lub IFN-γ związki według wynalazku można stosować w konwencjonalny sposób. Specjalista w tej dziedzinie techniki spośród dostępnych metod technik będzie w stanie wybrać sposoby leczenia oraz poziomy i reżimy dawkowania.
Przykładowo, do podawania pacjentowi cierpiącemu na cho robę związaną z IL-1, apoptozą, IGIF lub IFN-γ, związek według wynalazku można połączyć z farmaceutycznie dopuszczalną substancją pomocniczą w farmaceutycznie dopuszczalny sposób, w ilości skutecznej do złagodzenia stanu leczonej choroby.
Alternatywnie, związki według wynalazku można stosować w kompozycjach i sposobach do leczenia lub zapobiegania chorobom związanym z IL-1, apoptozą, IGIF lub IFN-γ u pacjentów w ciągu dłuższego czasu. Związki można stosować w takich kompozycjach pojedynczo lub w połączeniu z innymi związkami według wynalazku, w sposób zgodny z konwencjonalnym stosowaniem inhibitorów enzymów w kompozycjach farmaceutycznych. Przykładowo, związek według wynalazku można połączyć z farmaceutycznie dopuszczalnymi substancjami pomocniczymi, konwencjonalnie stosowanymi w szczepionkach, i podawać w ilościach profilaktycznych w celu ochrony pacjentów przez dłuższy czas przed chorobami związanymi z IL-1, apoptozą, IGIF lub IFN-γ.
W celu zwiększenia działania leczniczego lub profilaktycznego przeciwko chorobom związanym z IL-1, apoptozą, IGIF lub IFN-γ, związki o wzorze I można również podawać z innymi inhibitorami kaspazy lub ICE.
W celu zapobieżenia lub zwalczenia objawów chorób związanych z IL-1, takich jak zapalenie, związki według wynalazku można również podawać w kombinacji z immunomodulatorami (np. bropiryminą, przeciwciałem przeciwko ludzkiemu alfa-interferonowi, IL-2, GM-CSF, metioninoenkefaliną, interferonem-alfa, ditiokarbaminianem dietylu, czynnikiem martwicy nowotworu, naltreksonem i EPO), z prostaglandynami lub ze środkami przeciwwirusowymi (np. z 3TC, polisiarczanowanymi polisacharydami, ganiklowirem, rybawiryną, acyklowirem, alfa-interferonem, trimetotreksatem i fancyklowirem) lub z prolekami tych, lub spokrewnionych z nimi, związków.
Gdy związki według wynalazku podaje się w terapiach skojarzonych z innymi środkami, można je podawać pacjentowi kolejno lub równocześnie.
PL 204 619 B1
Kompozycje farmaceutyczne według wynalazku można podawać doustnie, pozajelitowo, przez wdmuchiwanie do nosa, miejscowo, doodbytniczo, donosowo, dopoliczkowo, dopochwowo lub ze wszczepianych zbiorników. Korzystne jest podawania doustne. Kompozycje farmaceutyczne według wynalazku mogą zawierać dowolne konwencjonalne, nietoksyczne dopuszczalne farmaceutycznie nośniki, adiuwanty lub rozcieńczalniki. W niektórych przypadkach, w celu poprawienia trwałości zawartego w kompozycji związku lub jego dostarczanej postaci, pH kompozycji można regulować stosując farmaceutycznie dopuszczalne kwasy, zasady lub substancje buforujące. Stosowane tu określenie „pozajelitowo” obejmuje wstrzykiwanie podskórne, śródskórne, dożylne, domięśniowe, dostawowe, domaziówkowe, domostkowe, dooponowe, do miejsca zmienionego zapalnie i doczaszkowe albo przy użyciu technik infuzji.
Kompozycje farmaceutyczne mogą być w postaci sterylnych preparatów nadających się do wstrzyknięć, na przykład, w postaci sterylnej wodnej lub olejowej zawiesiny do wstrzykiwania. Zawiesinę taką wytwarza się sposobami znanymi w technice, stosując odpowiednie środki dyspergujące lub zwilżające (takie jak, na przykład, Tween 80) oraz czynniki zawieszające. Sterylny nadający się do wstrzykiwania preparat może również być w postaci sterylnego roztworu lub zawiesiny w nietoksycznym, dopuszczalnym do podawania pozajelitowego rozcieńczalniku lub rozpuszczalniku, na przykład jako roztwór w 1,3-butanodiolu. Jako dopuszczalne nośniki i rozpuszczalniki można stosować mannit, wodę, roztwór Ringera i izotoniczny roztwór chlorku sodu. Ponadto, jako rozpuszczalnik lub ośrodek zawieszający można stosować konwencjonalnie stosowane sterylne, ciekłe oleje. Do tego celu można stosować dowolny łagodny ciekły olej, łącznie z syntetycznymi mono- lub diglicerydami. Do wytwarzania nadających się do wstrzyknięć preparatów użyteczne są również kwasy tłuszczowe, takie jak kwas oleinowy i jego glicerydowe pochodne, oraz naturalne farmaceutycznie dopuszczalne oleje, takie jak olej z oliwek lub olej rycynowy, zwłaszcza w ich polietoksylowanych wersjach. Takie olejowe roztwory lub zawiesiny jako rozcieńczalnik lub środek dyspergujący mogą również zawierać długołańcuchowy alkohol, taki jak opisany w Pharmacopeia Helvetica, lub podobny.
Kompozycje farmaceutyczne według wynalazku można podawać doustnie w odpowiednich do takiego podawania postaciach użytkowych, obejmujących, ale nie wyłącznie, kapsułki, tabletki oraz wodne zawiesiny i roztwory. W przypadku tabletek do podawania doustnego stosuje się powszechnie używane nośniki, takie jak laktoza i skrobia kukurydziana. Zazwyczaj dodaje się również środki smarujące, takie jak stearynian magnezu. Przy podawaniu doustnym w postaci kapsułek użyteczne rozcieńczalniki obejmują laktozę i suchą skrobię kukurydzianą. Gdy doustnie podaje się zawiesiny wodne, wówczas składnik czynny łączy się ze środkami emulgującymi lub zawieszającymi. W razie potrzeby można również dodać substancje słodzące i/lub smakowo-zapachowe i/lub koloryzujące.
Kompozycje farmaceutyczne według wynalazku można również podawać w postaci czopków do podawania doodbytniczego. Kompozycje takie wytwarza się przez zmieszanie związku według wynalazku z odpowiednim niedrażniącym nośnikiem, który jest stały w temperaturze pokojowej, ale ciekły w temperaturze odbytu, a zatem topi się w odbycie, uwalniając związek czynny. Substancje takie obejmują, ale nie wyłącznie, masło kakaowe, wosk pszczeli i glikole polietylenowe.
Podawanie miejscowe kompozycji farmaceutycznych według wynalazku jest użyteczne zwłaszcza, gdy żądane leczenie obejmuje miejsca i narządy łatwo dostępne przy podawaniu miejscowym. Przy podawaniu miejscowym na skórę, kompozycja farmaceutyczna powinna być sporządzona z odpowiednią maścią zawierającą związki czynne zawieszone lub rozpuszczone w nośniku. Nośniki do podawania miejscowego związków według wynalazku obejmują, ale nie wyłącznie, olej mineralny, ciekłą parafinę, białą parafinę, glikol propylenowy, polietoksylowany polioksypropylen, emulgujące woski i wodę. Alternatywnie, kompozycję farmaceutyczną można sporządzić z odpowiednim lotionem lub kremem zawierającym związek czynny zawieszony lub rozpuszczony w nośniku. Odpowiednie nośniki obejmują, ale nie wyłącznie, olej mineralny, monostearynian sorbitu, polysorbate 60, woski estrów cetylowych, alkohol cetearylowy, 2-oktylododekanol, alkohol benzylowy i wodę. Kompozycje farmaceutyczne według wynalazku można również podawać miejscowo do dolnego odcinka przewodu pokarmowego stosując preparat w postaci czopka doodbytniczego lub w postaci odpowiedniego wlewu. W zakres wynalazku wchodzą również plastry do miejscowego podawania przez skórę.
Kompozycje farmaceutyczne według wynalazku można podawać w postaci aerozolu do nosa lub przez inhalację. Kompozycje takie wytwarza się sposobami znanymi w technice i mogą one być sporządzone jako roztwory w soli fizjologicznej przy użyciu alkoholu benzylowego lub innych odpowiednich substancji konserwujących, zwiększających biodostępność promotorów absorpcji, fluorowęglowodorów i/lub innych znanych w technice środków solubilizujących lub dyspergujących.
PL 204 619 B1
W monoterapii do zapobiegania i leczenia chorób związanych z IL-1, apoptozą, IGIF i IFN-γ, obejmujących choroby zapalne, choroby autoimmunizacyjne, zaburzenia niszczące kości, zaburzenia proliferacyjne, choroby zakaźne, choroby zwyrodnieniowe, martwice, zapalenie otrzewnej, zapalenie kostno-stawowe, ostre zapalenie trzustki, przewlekle zapalenie trzustki, astmę, zespół niewydolności oddechowej u dorosłych, zapalenie kłębuszków nerkowych, reumatoidalne zapalenie stawów, układowy liszaj rumieniowaty, twardzinę skóry, przewlekłe zapalenie tarczycy, chorobę Gravesa, autoimmunizacyjne zapalenie żołądka, cukrzycę insulinozależną (typ I), autoimmunizacyjną anemię hemolityczną, autoimmunizacyjną neutropenię, trombocytopenię, przewlekłe aktywne zapalenie wątroby, miastenia gravis, chorobę zapalną jelita grubego, chorobę Crohna, łuszczycę, atopowe zapalenie skóry, chorobę przeszczep przeciwko gospodarzowi, osteoporozę, zaburzenia kości związane z szpiczakiem mnogim, białaczki i pokrewne im zaburzenia, zespół mielodysplastyczny, ostrą białaczkę pochodzenia szpikowego, przewlekłą białaczkę pochodzenia szpikowego, przerzuty czerniaka, mięsak Kaposi'ego, szpiczak mnogi, posocznicę, wstrząs septyczny, zakażenie pałeczkami Shigella, chorobę Alzheimera, chorobę Parkinsona, niedokrwienie mózgu, niedokrwienie mięśnia sercowego, zanik mięśni rdzenia kręgowego, stwardnienie rozsiane, zapalenie mózgu spowodowane przez AIDS, zapalenie mózgu spowodowane przez HIV, starzenie, łysienie, uszkodzenia układu nerwowego związane z udarem, wrzodziejące zapalenie okrężnicy, zakaźne zapalenie wątroby, cukrzycę młodzieńczą, liszaj płaski, ostre zapalenie skórno-mięśniowe, egzemę, pierwotną żółciową marskość wątroby, zapalenie błony naczyniowej oka, atopową chorobę skóry, brak krwinek czerwonych, anemię aplastyczną, stwardnienie zanikowe boczne, zespół nerczycowy i choroby ogólnoustrojowe lub choroby, których działanie umiejscowione jest w wątrobie lub innych narządach zawierających ognisko zapalne lub apoptozy wywołane przez nadmierny pobór alkoholu lub przez wirusy, takie jak HBV, HCV, HGV, wirus żółtej gorączki, wirus dengi i wirus japońskiego zapalenia mózgu, stosowane poziomy dawkowania mieszczą się w zakresie około 0,01 do około 100 mg/kg, korzystnie 0,5 do około 75 mg/kg, a najkorzystniej od około 1 do 50 mg składnika czynnego/kg ciężaru ciała dziennie.
Kompozycje farmaceutyczne według wynalazku podaje się zwykle od około 1 do około 5 razy dziennie, albo alternatywnie, w postaci ciągłego wlewu. Takie podawanie można stosować w terapii przewlekłej lub ostrej. Ilość składnika czynnego, który można połączyć z nośnikami, uzyskując pojedynczą postać użytkową, będzie zmieniać się w zależności od leczonego pacjenta i konkretnej drogi podawania. Kompozycja zazwyczaj zawiera od około 5% do około 95% wagowych związku czynnego. Korzystnie, kompozycje zawierają od około 20% do około 80% wagowych związku czynnego.
Gdy stan zdrowia pacjenta poprawi się, w razie potrzeby można podawać podtrzymującą dawkę związku lub kompozycji według wynalazku. Następnie, dawkę, częstość podawania lub obydwa te elementy można zmniejszyć w zależności od objawów, do poziomu, przy którym utrzymuje się poprawiony stan złagodzenia objawów, a gdy objawy zostały złagodzone do żądanego poziomu, leczenie można przerwać. Jednakże, gdy powrócą objawy choroby, pacjent może znowu wymagać długotrwałego leczenia.
Dla specjalisty w tej dziedzinie oczywiste będzie, że mogą być wymagane dawki mniejsze lub większe od podanych powyżej. Konkretne dawkowanie i schemat leczenia dla konkretnego pacjenta będzie zależeć od wielu czynników, obejmujących działanie konkretnego stosowanego związku, wiek, ciężar ciała, ogólny stan zdrowia, płeć, dietę, czas podawania, szybkość wydalania, kombinację z innymi lekami, zaawansowanie i przebieg choroby, podatność pacjenta na zakażenie i osąd lekarza prowadzącego.
Stosując związki według wynalazku można leczyć lub zapobiegać chorobom związanym z IL-1 lub apoptozą obejmującym, ale nie wyłącznie, choroby zapalne, choroby autoimmunizacyjne, zaburzenia proliferacyjne, choroby zakaźne i choroby zwyrodnieniowe. Choroby związane z apoptozą, które można leczyć lub im zapobiegać, stosując związki według wynalazku, obejmują choroby zwyrodnieniowe.
Choroby związane z IL-1 lub apoptozą, które można leczyć lub im zapobiegać, obejmują, ale nie wyłącznie, zapalenie kostno-stawowe, ostre zapalenie trzustki, przewlekłe zapalenie trzustki, astmę i zespół niewydolności oddechowej u dorosłych. Korzystnie chorobą taką jest zapalenie kostnostawowe i ostre zapalenie trzustki.
Choroby autoimmunizacyjne związane z IL-1 lub apoptozą, które można leczyć lub im zapobiegać, obejmują, ale nie wyłącznie, zapalenie kłębuszków nerkowych, reumatoidalne zapalenie stawów, ogólnoustrojowy liszaj rumieniowaty, twardzinę skóry, przewlekłe zapalenie tarczycy, chorobę Gravesa, autoimmunizacyjne zapalenie żołądka, cukrzyce insulinozależną (typ I), autoimmunizacyjną
PL 204 619 B1 anemię hemolityczną, autoimmunizacyjną neutropenię, trombocytopenię, przewlekłe aktywne zapalenie wątroby, miastenia gravis, stwardnienie rozsiane, chorobę zapalną jelita grubego, chorobę Crohna, łuszczycę, atopowe zapalenie skóry i chorobę przeszczep przeciwko gospodarzowi. Korzystnie chorobami takimi są reumatoidalne zapalenie stawów, choroba zapalna jelita grubego, choroba Crohna, łuszczyca lub atopowe zapalenie skóry.
Związane z IL-1 lub apoptozą zaburzenia niszczące kości, które można leczyć lub im zapobiegać, obejmują, ale nie wyłącznie, osteoporozę i zaburzenia kości związane ze szpiczakiem mnogim.
Związane z IL-1 lub apoptozą choroby proliferacyjne, które można leczyć lub im zapobiegać, obejmują, ale nie wyłącznie, białaczki i pokrewne im zaburzenia, takie jak zespół mielodysplastyczny, ostra białaczka pochodzenia szpikowego, przewlekła białaczka pochodzenia szpikowego, przerzuty czerniaka, mięsak Kaposi'ego i szpiczak mnogi.
Związane z IL-1 lub apoptozą choroby zakaźne, które można leczyć lub im zapobiegać, obejmują, ale nie wyłącznie, posocznicę, wstrząs septyczny i zakażenie pałeczkami Shigella.
Związane z IL-1 lub apoptozą choroby zwyrodnieniowe lub martwicze, które można leczyć lub im zapobiegać stosując związki według wynalazku, obejmują, ale nie wyłącznie, chorobę Alzheimera, chorobę Parkinsona, niedokrwienie mózgu i niedokrwienie mięśnia sercowego. Korzystnie, chorobą zwyrodnieniową jest choroba Alzheimera.
Związane z IL-1 lub apoptozą choroby zwyrodnieniowe, które można leczyć lub im zapobiegać stosując związki według wynalazku, obejmują, ale nie wyłącznie, chorobę Alzheimera, chorobę Parkinsona, niedokrwienie mózgu, niedokrwienie mięśnia sercowego, zanik mięśni rdzenia kręgowego, stwardnienie rozsiane, zapalenie mózgu wywołane przez AIDS, zapalenie mózgu wywołane przez HIV, starzenie, łysienie i uszkodzenia układu nerwowego związane z udarem.
Związkami według wynalazku można również leczyć lub zapobiegać innym chorobom z ogniskiem zapalnym lub ogniskiem apoptozy. Chorobami takimi mogą być choroby ogólnoustrojowe lub choroby, których działanie umiejscowione jest w wątrobie lub innych narządach i które mogą być spowodowane nadmiernym spożywaniem alkoholu lub wirusami, takimi jak HBV, HCV, HGV, wirus żółtej gorączki, wirus dengi i wirus japońskiego zapalenia mózgu.
Związkami według wynalazku można leczyć lub zapobiegać chorobom związanym z IGIF lub
IFN-γ, które obejmują, ale nie wyłącznie, zapalenia, zakażenia, choroby autoimmunizacyjne, choroby proliferacyjne, choroby neurodegeneracyjne i stany martwicze.
Choroby zapalne związane z IGIF lub IFN-γ, które można leczyć lub im zapobiegać, obejmują, ale nie wyłącznie, zapalenie kostno-stawowe, ostre zapalenie trzustki, przewlekłe zapalenie trzustki, astmę, reumatoidalne zapalenie stawów, chorobę zapalną jelita grubego, chorobę Crohna, wrzodziejące zapalenie okrężnicy, niedokrwienie mózgu, niedokrwienie mięśnia sercowego i zespół niewydolności oddechowej u dorosłych. Korzystnie, chorobami zapalnymi są reumatoidalne zapalenie stawów, wrzodziejące zapalenie okrężnicy, zapalenie wątroby zespół niewydolności oddechowej u dorosłych.
Choroby zakaźne związane z IGIF lub IFN-γ, które można leczyć lub im zapobiegać, obejmują, ale nie wyłącznie, zakaźne zapalenie wątroby, posocznicę, wstrząs septyczny i zakażenie pałeczkami Shigella.
Choroby autoimmunizacyjne związane z IGIF lub IFN-γ, które można leczyć lub im zapobiegać, obejmują, ale nie wyłącznie, zapalenie kłębuszków nerkowych, ogólnoustrojowy liszaj rumieniowaty, twardzinę skóry, przewlekłe zapalenie tarczycy, chorobę Gravesa, autoimmunizacyjne zapalenie żołądka, cukrzycę insulinozależną (typ I), cukrzycę młodzieńczą, autoimmunizacyjną anemię hemolityczną, autoimmunizacyjną neutropenię, trombocytopenię, miastenia gravis, stwardnienie rozsiane, łuszczycę, liszaj płaski, chorobę przeszczep przeciwko gospodarzowi, ostre zapalenie skórnomięśniowe, egzemę, pierwotną żółciową marskość wątroby, zapalenie wątroby zapalenie błony naczyniowej oka, atopową chorobę skóry, brak krwinek czerwonych, anemię aplastyczną, stwardnienie zanikowe boczne i zespół nerczycowy. Korzystnie, chorobą autoimmunizacyjną jest zapalenie kłębuszków nerkowych, cukrzyca insulinozależną (typ I), cukrzyca młodzieńcza, łuszczyca, choroba przeszczep przeciwko gospodarzowi lub zapalenie wątroby.
Bardziej korzystne choroby do leczenia lub zapobiegania obejmują reumatoidalne zapalenie stawów, chorobę zapalną jelita grubego, chorobę Crohna, wrzodziejące zapalenie okrężnicy, zapalenie otrzewnej, wstrząs septyczny, zapalenie trzustki, urazowe uszkodzenie mózgu, odrzucenie przeszczepu narządu, zapalenie kostno-stawowe, astmę, łuszczycę, chorobę Alzheimera, atopowe zapalenie skóry, albo białaczki i pokrewne im zaburzenia, takie jak zespół mielodysplastyczny i szpiczak mnogi.
PL 204 619 B1
Związki według wynalazku są również przydatne jako reagenty handlowe, które skutecznie wiążą kaspazy lub inne proteazy cysteinowe obejmujące, ale nie wyłącznie, ICE. Jako reagenty handlowe związki według wynalazku oraz ich pochodne mogą być stosowane do blokowania proteolizy docelowego peptydu w badaniach biochemicznych i na komórkach dla ICE i homologów ICE, albo mogą być derywatyzowane w celu związania z trwałą żywicą i jako związany substrat mogą być stosowane w chromatografii powinowactwa. Te i inne zastosowanie, charakterystyczne dla handlowych inhibitorów proteazy cysteinowej, będą oczywiste dla specjalistów w tej dziedzinie techniki.
W zakres wynalazku wchodzi też zastosowanie pochodnej peptydowej według wynalazku do wytwarzania leku do leczenia lub zapobiegania chorobie zapalnej wybranej z grupy obejmującej zapalenie kości i stawów, ostre zapalenie trzustki, przewlekłe zapalenie trzustki, zespół niewydolności oddechowej u dorosłych, choroby zapalne wątroby, chorobę zapalną jelita grubego, chorobę Crohna, niedokrwienie mózgu, niedokrwienie mięśnia sercowego, wrzodziejące zapalenie okrężnicy i zapale nie otrzewnej.
Lek wytworzony zgodnie z zastosowaniem według wynalazku jest szczególnie korzystny do leczenia takich chorób jak choroba zapalna jelita grubego, choroba Crohna, wrzodziejące za palenie okrężnicy, zapalenie otrzewnej, ostre zapalenie trzustki, przewlekłe zapalenie trzustki lub zapalenie kości stawów.
W celu lepszego zrozumienia wynalazku, poniż ej zamieszczono nastę pują ce przykł ady. Przykłady te podano wyłącznie w celach ilustracyjnych i w żaden sposób nie ograniczają one zakresu wynalazku.
METODY OGÓLNE
Warunki analitycznej HPLC:
Kolumna: C-18, Wielkość cząstek: 5 um, Wielkość porów: 0,001 μm,
Wymiary kolumny: 4,6 x 150 mm
Rozpuszczalnik A: 0,1% TFA/1% MeCN/98,9% woda
Rozpuszczalnik B: 0,1% TFA/99,9% MeCN
Gradient: A do B w ciągu 20 minut przy szybkości przepływu 1 ml/min.
Kolumna: Cyano, Wielkość cząstek: 5 μ^ι, Wielkość porów: 0,001 um,
Wymiary kolumny: 4,6 x 150 mm
Rozpuszczalnik A: 0,1% TFA/1% MeCN/98,9% woda
Rozpuszczalnik B: 0,1% TFA/99,9% MeCN
Gradient: A/B = 99%/1% do 50%/50% w ciągu 20 minut przy szybkości przepływu 1 ml/min.
Analiza spektralna mas HPLC
Analiza spektralna mas: Wszystkie dane dla widm mas zebrano stosując potrójny kwadrupolowy spektrometr mas Micromass Quattro II (Beverly, MA) z elektrorozpylaniem jako źródłem jonów w przepływie krzyżowym. Spektrometr mas połączono z układem do HPLC produkcji Hewlett-Packard (HP1100). Jako urządzenie do automatycznego pobierania próbek stosowano Gilson 215 (Middleton, WI) liguid handler. Całość wyposażenia kontrolowano stosując pakiet programowy MassLynx zakupiony w firmie Micromass.
W celu określenia czystości i jednoczesnego potwierdzenia ciężaru cząsteczkowego analizy spektralne mas prowadzono stosując MS sprzężony z ciekłą chromatografią. W przypadkach, gdy czystość próbki określono innymi metodami, zamiast pełnej analizy metodą chromatografii stosowano analizę przepływowo-wstrzykową (FIA). We wszystkich przypadkach rejestrowano widma jonów dodatnich i ujemnych.
Warunki rejestracji widm mas: We wszystkich badaniach spektrometr z jonizacją przez elektrorozpylanie połączono w układzie z elektrodą w przeciwprądzie skrzyżowanym. Do zmniejszenia przepływu od HPLC do 40% przepływu początkowego stosowano rozgałęźnik przepływu. Temperaturę przy wlocie ustawiono na 140°C, a przepływ gazu suszącego ustawiono tak, aby zmaksymalizować sygnał. Rozdzielczość spektrometru mas wyregulowano do wartości 0,65 amu FWHM, a dane zbierano sposobem „centroid mode” (przy rejestracji jonów jako linii). Przy rejestracji jonów dodatnich napięcie w strefie jonizacji wynosiło 25V, a napięcie kapilary wynosiło 3,8 kV. Dla jonów ujemnych napięcie w strefie jonizacji wynosiło 25V, a napięcie kapilary wynosiło 3,5 kV. Zarówno dla jonów dodatnich, jak i ujemnych, czas rejestracji pełnego widma wynosił 0,25 sekund pomiędzy rejestracją każdego kolejnego widma. Zakres przemiatania mas dla cząsteczek ze spodziewanym ciężarem cząsteczkowym mniejszym niż 350 amu wynosił 70-500 m/z, a dla cząsteczek ze spodziewanym ciężarem powyżej 350 amu wynosił 200-1000 m/z.
PL 204 619 B1
Warunki chromatografii: Chromatografię cieczową prowadzono stosując kolumnę YMC AQ C18 (150 mm x 3 mm z cząstkami 5 μm o wielkości porów 0,012 μm). We wszystkich badaniach jako gradient do eluowania stosowano MeCN z 0,2% kwasu mrówkowego połączony z wodą zawierającą 0,2% kwasu mrówkowego. Profil gradientu: rozpoczynano od układu 15% MeCN:woda i ilość MeCN zwiększano liniowo w ciągu 10 minut do 90%. Takie stężenie utrzymywano przez 2 minuty na stałym poziomie, po czym powracano do początkowych warunków. Podczas całego badania szybkość przepływu wynosiła 0,9 ml/min.
Przepływowa analiza wstrzykowa: Do uzyskania danych FIA stosowano mieszaninę wody i MeCN, 1:1 (obydwa z dodaniem 0,2% kwasu mrówkowego). Szybkość przepływu ustawiono na 0,3 ml/min.
Wszystkie dane widm 1N MNR rejestrowano stosując spektrometr Bruker Instruments AMX-500 w danym rozpuszczalniku.
SPOSOBY SYNTEZY
Ogólna procedura wytwarzania związków o wzorze I, Wykonanie C (Schematy I-VI)
Procedura wytwarzania analogów 5a-5b
Na Schematach I-VIII LR oznacza łącznik-żywica i jest zdefiniowany, jak przedstawiono na powyższym Schemacie I.
Etap 1: Porcję 6,7 g (0,8 mmola/gram ładunku, 5,36 mmola) żywicy w postaci chlorowodorku 4-metylobenzhydryloaminy (Schemat I) przemyto DMF (3 x 50 ml), 10% DIEA/DMF (3 x 50 ml) i N-metylopirolidynonem (NMP) (3 x 50 ml). Do zawiesiny przemytej żywicy w 25 ml NMP dodano
PL 204 619 B1 kolejno związku 1 (1,1 równoważnika, 3,5 g, 5,90 mmola), DIEA (3,33 równoważnika, 3,1 ml, 17,70 mmola), hydratu 1-hydroksybenzotriazolu (HOBt) (1,1 równoważnika, 797 mg, 5,90 mmola) i heksafluorofosforanu O-benzotriazolo-N,N,N,N'-tetrametylouroniowego (HBTU) (1,1 równoważniki, 2,24 g, 5,90 mmola). Związek 1 wytworzono zgodnie z procedurą opisaną w literaturze przez A.M. Murphy i in., J. Am. Chem. Soc., 114, str. 3156-3157 (1992). Mieszaninę wirowano w temperaturze pokojowej przez noc, stosując mieszalnik z ramieniem kątowym.
Otrzymaną mieszaninę przesączono i żywicę przepłukano DMF, a następnie przez 30 minut w temperaturze pokojowej traktowano 12 ml 20% roztworu bezwodnika octowego w DMF. Mieszaninę przesączono i żywicę przemyto kolejno DMF (2 x 50 ml), CH3OH (50 ml), 1:1 DMF/CH2Cl2 (2 x 50 ml), CH3OH (50 ml) i CH2Cl2 (3 x 50 ml). Po wysuszeniu pod próżnią otrzymano 9 g żywicy 2 (0,48 mmola/gram ładunku).
Etap 2: Do 4,5 g żywicy 2 (0,48 mmola/gram ładunku) dodano 25 ml 20% roztworu piperydyny w DMF. Zawiesinę wirowano w temperaturze pokojowej przez 5 godzin i przesączono. Procedurę tę powtarzano przez 20 minut. Następnie żywicę przemyto kolejno DMF (2 x 40 ml), CH3OH (40 ml), CH2Cl2 (2 x 40 ml), CH3OH (40 ml) i NMP (40 ml). Do zawiesiny żywicy w 40 ml NMP dodano kolejno 2,92 g N-Fmoc-proliny (4 równoważniki, 8,64 mmola), 3,0 ml DIEA (8 równoważników, 17,28 mmola), 1,17 g HOBt (4 równoważniki, 8,64 mmola) i 3,27 g HBTU (4 równoważniki, 8,64 mmola). Zawiesinę wirowano w temperaturze pokojowej przez noc i przesączono. Tę procedurę sprzęgania powtarzano przez 3 godziny. Następnie żywicę przemyto kolejno DMF (2 x 40 ml), CH3OH (40 ml), 1:1 DMF/CH2Cl2 (2 x 40 ml), CH3OH (40 ml) i CH2Cl2 (3 x 40 ml) i suszono krótko pod próżnią, uzyskując żywicę 3.
Etap 3: Zawiesinę żywicy 3 w 25 ml 20% roztworu piperydyny w DMF wirowano w temperaturze pokojowej przez 5 minut, a następnie przesączono. Procedurę tę powtarzano przez 20 minut. Żywicę przemyto kolejno DMF (2 x 40 ml), CH3OH (40 ml), CH2Cl2 (2 x 40 ml), CH3OH (40 ml) i NMP (2 x 40 ml). Do zawiesiny żywicy w 40 ml NMP dodano kolejno 2,93 g N-Fmoc-waliny (4 równoważniki, 8,64 mmola), 3,0 ml DIEA (8 równoważników, 17,28 mmola), 1,17 g HOBt (4 równoważniki, 8,64 mmola) i 3,27 g HBTU (4 równoważniki, 8,64 mmola). Mieszaninę wirowano w temperaturze pokojowej przez noc i przesączono. Tę procedurę sprzęgania powtarzano przez 3godziny. Następnie żywicę przemyto kolejno DMF (2 x 40 ml), CH3OH (40 ml) i CH2Cl2 (3 x 40 ml) i wysuszono pod próżnią, uzyskując żywicę 4 (0,45 mmola/gram).
Etap 4: Do 0,05 mmola porcji żywicy 4 dodano 2 ml 20% roztworu piperydyny w DMF. Zawiesinę wirowano w temperaturze pokojowej przez 5 minut i przesączono. Procedurę tę powtarzano przez 20 minut. Wytworzoną żywicę przemyto kolejno DMF (3 x 5 ml), CH3OH (5 ml) i NMP (3 x 5 ml). Następnie dodano żądanego kwasu karboksylowego (4 równoważniki, 0,2 mmola), po czym 0,8 ml 0,25 M roztworu HOBt w NMP, 0,14 ml DIEA (8 równoważników, 0,4 mmola) i 0,8 ml 0,25M roztworu HBTU w NMP. Mieszaninę wirowano w temperaturze pokojowej przez noc i przesączono. Żywicę przemyto kolejno DMF (2 x 5 ml), CH3OH (5 ml), 1:1 DMF/CH2Cl2 (2 x 5 ml), CH3OH (5 ml) i CH2Cl2 (3 x 5 ml) i wysuszono pod próżnią. Następnie do żywicy dodano 2 ml porcję 95% roztworu TFA w wodzie. Mieszaninę mieszano w temperaturze pokojowej przez 1 godzinę i przesączono. Przesącz odparowano i pozostałość pochłonięto w mieszaninie acetonitryl-woda i oczyszczono metodą preparatywnej HPLC, uzyskując związki 5a-5bd.
Jeśli nie zaznaczono inaczej, w Tablicy I przedstawiono dane dotyczące wydajności produktu, warunków analitycznej HPLC, czasu retencji HPLC, czystości produktu i widma mas, otrzymane dla przykładów 5a-5bd, 7a-7at, 9a-9g, 15a-15f, 16a-16b, 17a-17e, 18a-18f, 20a-20t, 23a-23i, 24a-24e, 25a-25e, 26a-26h, 27a-27n, 28a-28c, 29a-29s, 32a-32e.
T a b l i c a 1. Dane fizyczne dla wybranych przykładów
Przykład Wydajność (mg) HPLC Gradient/czas (min.) RT (min.) Czystość (%) 1 Widmo mas: (M+H lub M+Na)
1 2 3 4 5 6
5a 1,0 5-45%/10' 4,66 92 475,2
5b 1,0 5-45%/10' 6,86 85 457,2
5c 4,0 5-45%/10' 5,98 85 469,2
5d 1,5 5-45%/10' 6,82 95 467,5
PL 204 619 B1 cd. Tablicy 1
1 2 3 4 5 6
5e 1,0 5-45%/10' 5,52 95 418,2
5f 0,6 5-45%/10' 4,28 93 434,2
5g 6,4 10-60%/10' 8,57 97 504,7 (+Na)
5h 15,6 10-60%/10' 4,51 99 459,2
5i 6,6 5%-90%/10' 9,34 90 506,1
5j 5,1 5%-90%/10' 10,04 95 506,1
5k 10,7 5%-90%/10' 8,64 85 520,1
5l 6,6 5%-90%/10' 8,72 85 540,1
5m 6,8 5%-90%/10' 7,89 85 502,0
5n 1,9 5%-90%/10' 6,46 85 494,1
5o 3,8 5%-90%/10' 7,04 85 506,1
5p 6,8 5%-90%/10' 11,62 95 576,0
5q 2,2 5%-90%/10' 9,72 90 508,1
5r 3,8 5%-90%/10' 7,27 85 462,1
5s 4,3 5%-90%/10' 6,46 90 470,1
5t 5,9 5%-60%/9' 60%-90%/2' 10,27 90 486,2
5u 3,1 5%-60%/9' 60%-90%/2' 9,09 80 522,1
5v 1,0 5%-60%/9' 60%-90%/2' 11,63 85 502,2
5W 10,3 5%-60%/9' 60%-90%/2' 8,75 95 470,2
5x 8,8 5%-60%/9' 60%-90%/2' 8,88 95 565,1
5y 6,6 5%-60%/9' 60%-90%/2' 12,32 95 518,2
5z 10,2 5%-60%/9' 60%-90%/2' 12,63 95 502,2
5aa 2,5 5%-60%/9' 60%-90%/2' 9,57 95 554,1
5ab 7,8 5%-60%/9' 60%-90%/2' 10,54 85 538,2
5ac 1,4 5%-60%/9' 60%-90%/2' 9,28 95 476,2
5ad 5,3 5%-60%/9' 60%-90%/2' 6,51 85 469,2
5ae 4,3 5%-60%/9' 60%-90%/2' 9,81 95 551,1
5af 0,9 5%-60%/9' 60%-90%/2” 9,98 90 547,4
5ag 5,7 5%-60%/9' 60%-90%/2' 10,31 90 526,2
PL 204 619 B1 cd. Tablicy 1
1 2 3 4 5 6
5ah 1,4 5%-60%/9' 60%-90%/2' 8,13 85 542,1
5ai 10,9 10%-90%/10' 5,88 85 584,2
5 aj 4,2 10%-90%/10' 5,89 90 556,2
5ak 7,8 10%-90%/10' 5,54 85 568,3
5al 8,4 10%-90%/10' 6,25 95 516,2
5am 7,6 10%-90%/10' 6,49 95 474,3
5an 6,2 10%-90%/10' 6,00 95 500,2
5ao 9,4 10%-90%/10' 6,68 95 581,3
5ap 6,4 10%-90%/10' 4,30 90 500,3
5aq 5,2 10%-90%/10' 6,45 95 559,2
5ar 1,4 10%-90%/10' 5,38 90 561,3
5as 16,2 10%-90%/10' 4,25 95 475,2
5at 15,4 10%-90%/10' 6,68 95 560,3
5au 5,9 10%-90%/10' 6,70 90 498,3
5av 4,1 10%-90%/10' 5,13 85 531,2
5aw 5,5 10%-90%/10' 6,53 85 570,3
5ax 14,0 10%-90%/10' 6,26 90 557,3
5ay 10,4 10%-90%/10' 6,52 90 510,3
5az 9,2 10%-90%/10' 5,96 95 522,3
5ba 8,5 10%-90%/10' 6,69 95 562,3
5bb 4,6 10%-90%/10' 6,00 85 520,2
5bc 8,6 10%-90%/10' 4,36 90 546,2
5bd 8,2 10%-90%/10' 8,01 95 536,3
7a 2,1 5-45%/10'' 5,26 86 440,2
7b 1,7 5-45%/10' 4,12 94 390,2
7c 0,5 5-45%/10' 4,04 94 434,2
7d 1,1 5-45%/10' 4,25 95 441,2
7e 1,1 5-45%/10' 3,28 98 447,2
7f 1,0 5-45%/10' 3,96 57 420,2
7g 11,0 10%-90%/10' 4,00 95 483,4
7h 6,0 10%-90%/10' 4,90 95 439,3
7i 12,0 10%-90%/10' 6,40 95 474,3
7j 6,6 10%-90%/10' 4,50 95 461,4
7k 4,0 10%-90%/10' 5,40 95 480,4
7l 8,6 10%-90%/10' 2,61 95 435,3
7m 6,0 10%-90%/10' 4,29 95 438,4
7n 15,4 10%-90%/10' 2,00 85 433,4
PL 204 619 B1 cd. Tablicy 1
1 2 3 4 5 6
7o 8,4 10%-90%/10' 4,01 90 470,0
7p 3,0 10%-90%/10' 4,61 95 434,4
7q 5,7 10%-90%/10' 3,89 95 434,3
7r 8,8 10%-90%/10' 2,94 95 425,3
7s 10,5 10%-90%/10' 3,89 90 433,4
7t 6,9 10%-90%/10' 2,45 85 419,3
7u 11,6 10%-90%/10' 1,98 85 433,3
7v 4,6 10%-90%/10' 4,60 95 489,4
7w 13,8 10%-90%/10' 4,20 95 453,3
7x 6,0 10%-90%/10' 3,90 95 483,2
7y 12,0 10%-90%/10' 5,40 95 489,2
7z 10,0 10%-90%/10' 5,40 95 517,2
7aa 11,0 10%-90%/10' 5,30 95 453,8
7ab 10,0 10%-90%/10' 5,60 95 595,1
7ac 3,9 10-60%/10' 4,59 88 469,2
7ad 13,0 5-45%/10' 4,48 88 415,2
7ae 4,9 5-45%/10' 4,37 88 426,2
7af 20,6 5-45%/10' 4,68 86 405,3
7ag 14,9 5-45%/10' 4,78 82 406,3
7ah 9,5 5-45%/10' 7,40 91 447,3 (+Na)
7ai 10,8 5-45%/10' 9,21 95 480,8 (+Na)
7 aj 8,3 5-45%/10' 9,14 92 481,1 (+Na)
7ak 13,6 5-45%/10' 8,05 96 464,8 (+Na)
7al 8,1 5-45%/10' 7,04 91 448,8(+Na)
7am 7,8 5-45%/10' 8,54 90 480,4 (+Na)
7an 4,3 5-45%/10' 7,48 88 460,9 (+Na)
7ao 13,5 5-45%/10' 7,45 92 460,7 (+Na)
7ap 2,5 5-45%/10' 6,52 93 440,3 (+Na)
7aq 1,4 5-45%/10' 3,30 84 405,2
7ar 15,10 5-45%/10' 3,79 97 413,30
7as 15,70 5-45%/10' 5,50 88 441,30
7at 22,20 5-45%/10' 4,49 94 415,30
9a 0,5 10-60%/10' 7,08 98 527,4 (+Na)
9b 1,2 10-60%/10' 8,31 93 570,5 (+Na)
9c 2,5 10-60%/10' 8,46 97 569,6
9d 1,2 10-60%/10' 7,22 85 562,1
9e 0,4 10-60%/10' 7,86 95 543,2 (+Na)
9f 4,3 10-60%/10' 8,11 96 542,5
PL 204 619 B1 cd. Tablicy 1
1 2 3 4 5 6
9g 2,1 10-60%/10' 7,18 93 526,3
15a 1,0 10%-60%/10' 5,76 95 477,6
15b 3,9 10%-60%/10' 6,32 91 483,8
15c 2,9 10%-90%/10' 3,30 85 463,3
15d 1,3 10%-90%/10' 4,26 95 531
15e 1,0 10%-90%/10' 3,10 85 482,3
15f 1,2 10%-90%/10' 3,60 95 484,6
16a 2,5 10%-90%/10' 2,80 95 456,3
16b 6,0 10%-90%/10' 1,90 95 454,2
17a 1,0 10%-90%/10' 3,30 85 496,8
17b 1,1 10%-90%/10' 3,62 85 498,3
17c 2,3 10%-90%/10' 5,80 95 573,2
17d 1,6 10%-90%/10' 1,60 95 525,1
17e 1,5 10%-90%/10' 2,62 95 526,3
18a 1,0 10%-90%/10' 3,90 95 528,3
18b 1,2 10%-90%/10' 5,27 95 562,3
18c 2,2 10%-90%/10' 4,09 95 499,2
18d 1,5 10%-90%/10' 3,78 95 498,3
18e 1,2 10%-90%/10' 4,78 95 541,3
18f 7,1 10%-90%/10' 3,84 98 526,1
20a 2,0 5-45%/10' 6,95 91 483,2
20b 1,3 5-45%/10' 7,58 99 482,2
20c 2,5 10%-90%/10' 5,89 85 483,3
20d 4,3 10%-90%/10' 4,09 90 471,3
20e 3,6 10%-90%/10' 4,65 95 455,3
20f 12,2 10%-90%/10' 3,25 95 518,3
20g 12,1 10%-90%/10' 5,01 90 487,2
20h 3,3 10%-90%/10' 4,30 90 533,2
20i 5,0 10%-90%/10' 4,16 90 485,2
20j 1,3 10%-90%/10' 3,45 85 531,2
20k 9,7 10%-90%/10' 5,41 90 516,2
20l 3,8 10%-90%/10' 3,73 85 504,2
20m 6,6 10%-90%/10' 4,52 90 488,2
20n 1,8 10%-90%/10'' 2,85 90 551,2
20o 7,0 10%-90%/10' 4,70 95 520,2
20p 1,2 10%-90%/10' 4,00 95 566,2
20q 2,3 10%-90%/10' 4,93 95 481,3
20r 3,6 10%-90%/10' 4,45 95 519,3
PL 204 619 B1 cd. Tablicy 1
1 2 3 4 5 6
20s 3,0 10%-90%/10' 4,18 95 552,2
20t 6,0 10%-90%/10' 3,80 90 517,4
23a 21,0 10-60%/10' 8,11 99 495,4
23b 25,0 10-60%/10' 8,94 99 539,8 (+Na),
23c 26,0 10-60%/10' 8,55 99 539,9 (+Na)
23d 12,6 10%-90%/10' 3,90 85 453,3
23e 8,3 10%-90%/10' 5,16 85 501,3
23f 12,5 10%-90%/10' 3,41 80 425,3
23g 1,5 10%-90%/10' 3,34 85 452,3
23h 8,4 10%-90%/10' 3,84 90 451,3
23i 9,0 10%-90%/10' 3,78 85 469,4
24a 1,1 10-60%/12' 8,76 90 480,5
24b 3,1 10-60%/10' 5,14 90 375,4
24c 7,2 10-60%/10' 10,33 96 531,0
24d 3,4 10-60%/10' 6,51 95 426,5(+Na)
24e 6,9 10-60%/10' 7,22 99 455,5
25a 1,9 5-45%/10' 5,38 85 455,2
25b 1,5 5-45%/10' 6, 90 97 483,2
25c 1,0 5-45%/10' 8,09 94 497,2
25d 12,8 5-45%/10' 5,75 88 453,3
25e 9,5 5-45%/10' 7,76 90 495,2
26a 10,2 5-45%/10' 7,36 95 455,1 (+Na)
26b 1,1 5-45%/10' 7,38 89 476,3
26c 13,8 5-45%/10' 8,13 96 483,2
26d 2,3 5-45%/10' 10,35 99 503,0
26e 12,8 5-45%/10' 11,11 99 523,2
26f 13,2 10-60%/10' 12,11 99 545,0
26g 0,7 10-60%/10' 10,89 87 523,2
26h 4,4 10-60%/10' 11,62 99 545,8
27a 5,0 10%-90%/10' 4,42 95 475,3
27b 16,4 10-60%/10' 5,20 92 505,1
27c 2,7 5-45%/10' 7,50 82 476,6 (+Na)
27d 1,6 5-45%/12' 8,70 90 503,2
27e 4,4 5-45%/12' 7,80 82 489,2
27f 1,2 5-45%/12' 6,95 85 476,3
27g 2,5 5-45%/12' 6,67 82 510,1
27h 1,1 5-45%/12' 8,49 95 524,1
27i 0,9 5-45%/12' 7,34 90 484,3
PL 204 619 B1 cd. Tablicy 1
1 2 3 4 5 6
27j 4,3 5-45%/12' 5,77 82 470,3
27k 1,3 5-45%/12' 5,33 95 551,1
27l 16,6 5-45%/10' 5,90 91 477,2
27m 7,0 5-45%/10' 7,70 93 494,2
27n 15,1 5-45%/10' 3,99 86 466,2
28a 1,2 5-45%/10' 5,91 86 487,1
28b 0,5 5-45%/10' 6,86 98 486,1
28c 1,5 5-45%/10' 7,47 93 515,1
29a 4,5 5-45%/12' 8,21 98 392
29b 28,0 5-45%/12' 11,80 96 443,3
29c 1,7 5-45%/10' 3,73 97 415,2
29d 1,7 5-45%/10' 4,62 89 414,2
29e 0,6 5-45%/10' 4,94 85 436,2
29f 1,1 5-45%/10' 6,23 97 442,2
29g 1,7 5-45%/10' 6,39 90 457,2
29h 0,7 5-45%/10' 3,56 92 408,2
29i 0,7 5-45%/10' 6,50 96 431,2
29j 0,4 5-45%/10' 7,24 89 445,2
29k 1,6 5-45%/10' 7,07 90 456,2
29l 0,9 5-45%/10' 3,08 99 408,2
29m 1,5 10-60%/10' 6,68 90 406,3
29n 6,4 10-60%/10' 4,27 87 422,3
29o 8,4 10-60%/10' 4,42 86 422,3
29p 13,2 10-60%/10' 5,62 83 450,3
29q 15,1 5-45%/10' 3,79 97 413,3
29r 15,7 5-45%/10' 5,50 88 441,3
29s 19,9 5-45%/10' 4,30 95 394,3
32a 7,7 5-60%/20' 14,2 90 469,3
32b 4,0 5-60%/20' 13,4 85 485,1 (+Na)
32c 2,5 5-60%/20' 11,1 90 459,3
32d 3,0 5-60%/20' 8,19 95 471,3
32e 4,9 5-60%/20' 14,2 90 486,2
PL 204 619 B1
Analogi 7a-7at wytworzono, jak opisano na powyższym Schemacie I, ale w etapie 3 (Schemat II) Fmoc-walinę zastąpiono Fmoc-alaniną.
Etap 3: Zawiesinę żywicy 3 (3,5 g, 1,75 mmola) w 20 ml 20% roztworu piperydyny w DMF wirowano w temperaturze pokojowej przez 5 minut, a następnie przesączono. Procedurę tę powtarzano przez 20 minut. Żywicę przemyto kolejno DMF (2 x 30 ml), CH3OH (30 ml), CH2Cl2 (2 x 30 ml), CH3OH (30 ml) i NMP (2 x 30 ml). Do zawiesiny żywicy w 30 ml NMP dodano kolejno 1,44 g N-Fmoc-alaniny (4 równoważniki, 7,0 mmola), 2,4 ml DIEA (8 równoważników, 14,0 mmola), 0,95 g HOBt (4 równoważniki, 7,0 mmola) i 2,66 g HBTU (4 równoważniki, 7,0 mmola). Mieszaninę wirowano w temperaturze pokojowej przez noc i przesączono. Tę procedurę sprzęgania powtarzano przez 3 godziny. Następnie żywicę przemyto kolejno DMF (2 x 30 ml), CH3OH (30 ml), 1:1 DMF/CH2Cl2 (2 x 30 ml), CH3OH (30 ml) i CH2Cl2 (3 x 30 ml) i wysuszono pod próżnią, uzyskując żywicę 6 (0,50 mmola/gram).
Etap 4: Do porcji 0,125 mmola żywicy 6 dodano 5 ml 20% roztworu piperydyny w DMF. Zawiesinę wirowano w temperaturze pokojowej przez 5 minut i przesączono. Procedurę tę powtarzano przez 20 minut. Wytworzoną żywicę przemyto kolejno DMF (3 x 5 ml), CH3OH (5 ml) i NMP (3 x 5 ml). Następnie dodano żądanego kwasu karboksylowego (4 równoważniki, 0,6 mmola), po czym 2,0 ml 0,25M roztworu HOBt w NMP, 0,35 ml DIEA (8 równoważników, 1,0 mmola) i 2,0 ml 0,25M roztworu HBTU w NMP. Mieszaninę wirowano w temperaturze pokojowej przez noc i przesączono. Żywicę przemyto kolejno DMF (3 x 5 ml), CH3OH (5 ml), 1:1 DMF/CH2Cl2 (2 x 5 ml), CH3OH (5 ml) i CH2Cl2 (3 x 5 ml) i wysuszono pod próżnią. Następnie do żywicy dodano porcję 5 ml 95% roztworu TFA w wodzie. Mieszaninę mieszano w temperaturze pokojowej przez 1 godzinę i przesączono. Przesącz odparowano, pozostałość rozpuszczono w mieszaninie acetonitryl-woda i oczyszczono metodą preparatywnej HPLC, uzyskując związki 7a-7at.
PL 204 619 B1
Procedura wytwarzania analogów 9a-9g
Etap 1: Porcję 10,0 g (0,75 mmola/gram ładunku, 7,5 mmola) żywicy AgroPore-aminometyl (numer katalogowy 80047) przemyto DMF (3 x 40 ml), 10% DIEA/DMF (3 x 40 ml), DMF i NMP (3 x 40 ml). Do powyższej żywicy dodano kolejno związku 1 (0,87 równoważniki, 3,88 g, 6,55 mmola), HBTU (1,14 równoważniki, 3,13 g, 8,25 mmola), HOBt (1,14 równoważniki, 1,26 g, 8,25 mmola) i NMP (40 ml). Reagenty zmieszano, barbotując przez dno kolby azot przez 2 minuty w temperaturze pokojowej. Dodano N,N-diizopropylo-etyloaminy (3,33 równoważniki, 4,35 ml, 25 mmoli) i wytworzoną zawiesinę mieszano w temperaturze pokojowej przez noc, przesączono, a następnie przemyto kolejno NMP (3 x 40 ml) i DMF (3 x 40 ml). Żywicę w ciągu 38 minut w temperaturze pokojowej traktowano następnie 50 ml 20% roztworu bezwodnika octowego w DMF. Mieszaninę przesączono i żywicę przemyto kolejno NMP (3 x 40 ml), CH2Cl2 (3 x 40 ml), 1:1 CH3OH /CH2Cl2 (3 x 40 ml) i CH2OH (3 x 40 ml). Po wysuszeniu pod próżnią otrzymano 13,76 g żywicy 2 (0,35 mmola/gram ładunku).
Etap 2: Do każdego z siedmiu reaktorów wprowadzono 181 mg żywicy 2 (0,48 mmola/gram, 0,063 mmola), po czym przemyto CH2Cl2 (3 x 1 ml) i NMP (3 x 1 ml). Następnie do każdego reaktora dodano 1 ml 25% roztworu piperydyny w DMF i mieszano (wirowo) w temperaturze pokojowej przez 15 minut. Procedurę tę powtórzono trzykrotnie. Następnie każdy reaktor przemyto trzy razy NMP (3 x 1 ml) i do każdego reaktora dodano 50 μ! roztworu 0,4 M kwas (2S,4R)-Fmoc-4-amino-1-Boc-pirolidyno-2-karboksylowy/0,6M HOBt/NMP, 500 μl roztworu 0,4M HBTU/NMP i 250 μl roztworu 1,6M DIEA/NMP i mieszano przez 3 godziny w temperaturze pokojowej. Po mieszaniu zawartość reaktorów przesączono i procedurę powtórzono.
Etap 3: Otrzymaną żywicę przemyto NMP (3 x 1 ml), a następnie potraktowano 1 ml 25% roztworu piperydyny w DMF i mieszano (wirowo) w temperaturze pokojowej przez 15 minut. Procedurę trzykrotnie powtórzono. Wytworzoną żywicę przemyto NMP (3 x 1 ml), a następnie potraktowano bezwodnikiem octowy, albo izocyjanianem izopropylu, albo chlorkiem metanosulfonylu, albo chloromrówczanem metylu. Dla bezwodnika octowego: dodano 300 μl roztworu 1,6M DIEA/NMP i 1 ml roztworu 0,5M
PL 204 619 B1 bezwodnik octowy/0,125M DIEA/0,015M HOBt w NMP. Dla izocyjanianu izopropylu: dodano 300 μl roztworu 1,6M DIEA/NMP i 1 ml roztworu 1M izocyjanianu izopropylu w NMP. Dla chlorku metanosulfonylu: dodano 600 μl roztworu 1M pirydyny w CH2Cl2 i 600 μl roztworu 1M chlorku metanosulfonylu w CH2Cl2. Dla chloro mrówcza nu metylu: dodano 500 μl roztworu 1,6M DIEA/NMP i 1 ml roztworu 0,7M chlorku metanosulfonylu w CH2Cl2. Wytworzone zawiesiny mieszano w temperaturze pokojowej przez 6 godzin, rozpuszczalnik odsączono i powtórzono procedurę sprzęgania.
Etap 4: Wytworzoną żywicę przemyto NMP (3 x 1 ml), a następnie w temperaturze pokojowej w ciągu 30 minut potraktowano mieszaniną TFA/CH2Cl2. Otrzymaną żywicę przemyto następnie CH2Cl2 (3 x 1 ml) i NMP (3 x 1 ml), po czym potraktowano 500 μl roztworu 0,4M kwas Fmoc-walino-karboksylowy/0,4M HOBt/NMP, 500 gl roztworu 0,4M HBTU/NMP i 250 gl roztworu 1,6M DIEA/NMP i mieszano przez 3 godziny w temperaturze pokojowej. Po mieszaniu zawartość reaktorów przesączono i powtórzono procedurę sprzęgania.
Etap 5: Wytworzoną żywicę przemyto NMP (3 x 1 ml), po czym potraktowano 1 ml 25% roztworu piperydyny w DMF i mieszano (wirowo) w temperaturze pokojowej przez 15 minut. Procedurę tę trzykrotnie powtórzono. Otrzymaną żywicę przemyto NMP (3 x 1 ml), po czym potraktowano 500 gl roztworu 0,4M kwas 1-izochinolinokarboksylowy/0,4M HOBt/NMP lub 500 gl roztworu 0,4M kwas anyżowy/0,4M HOBt/NMP. Wytworzone mieszaniny potraktowano 500 gl roztworu 0,4M HBTU/NMP i 250 gl roztworu 1,6M DIEA/NMP, a następnie mieszano przez 3 godziny w temperaturze pokojowej, rozpuszczalnik odsączono i procedurę powtórzono. Uzyskaną żywicę potraktowano 1,5 ml 95% roztworu TFA w wodzie i mieszano w temperaturze pokojowej przez 1 godzinę, a potem przesączono. Przesącz odparowano, pozostałość pochłonięto w mieszaninie DMF/acetonitryl/woda, 2:1:2 i oczyszczono metodą preparatywnej HPLC, uzyskując związki 9a-9g
PL 204 619 B1
Procedura syntezy analogów 15-18
Schemat IV
Wytwarzanie analogów 15 i 16 (Schemat IV):
Synteza estru 4-tert-butylowo-1-(9H-fluoren-9-ylometylowego) kwasu 2-(S)-piperazyno-1,2,4-trikarboksylowego
Do roztworu kwasu 2-(S)-piperazynokarboksylowego (Lonza) (3 g, 15 mmola) w mieszaninie H2O:dioksan, 1:1 (30 ml), dodano roztworu (Boc)2O w dioksanie (3,3 g, 15 mmoli, w 5 ml dioksanu), utrzymując pH na poziomie 11 dodatkiem 1N roztworu NaOH. pH utrzymywano przez 3 godziny w temperaturze pokojowej. Nastę pnie pH roztworu doprowadzono do wartoś ci 9,5 dodatkiem 1N HCl, roztwór oziębiono do temperatury 0°C i potraktowano Fmoc-Cl (3,87 g, 15 mmola). pH utrzymywano na poziomie 9,5 przez 1 godzinę i mieszaninę mieszano w temperaturze pokojowej przez noc. Otrzymaną zawiesinę przesączono i przesącz potraktowano 1N roztworem KHSO4, aż pH osiągnęło wartość 2, po czym ekstrahowano octanem etylu (2 x 75 ml). Warstwę organiczną wysuszono solanką i MgSO4, przesączono i zatężono, uzyskują c bezbarwny olej. Olej ten rozpuszczono w octanie etylu i dodano do heksanu, uzyskując po wyodrębnieniu 3,5 g (51% wydajności) białej substancji stałej.
1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 1,55 (s, 9H), 2,80-3,5 (m, 3H), 3,8-4,9 (m, 5H), 5,7 (bs, 1H), 7,3 (m, 2H), 7,3-7,9 ppm (m, 8H), LC/MS (ES-) m/e 451,3 (M-H).
Etap 1: Do 5 g żywicy 2 (0,375 mmola/gram, 1,82 mmola) dodano 25 ml 20% roztworu piperydyny w DMF. Zawiesinę wirowano w temperaturze pokojowej przez 5 minut i przesączono. Procedurę tę powtarzano przez 20 minut. Następnie żywicę przemyto kolejno DMF (2 x 50 ml), CH3OH (50 ml), CH2Cl2 (2 x 50 ml), CH3OH (50 ml) i NMP (50 ml). Do zawiesiny żywicy w 25 ml NMP dodano kolejno
PL 204 619 B1
3,5 g kwasu N-Fmoc-Boc-piperazynokarboksylowego (4 równ., 7,48 mmola), 1,0 ml DIEA (8 równ., 14,96 mmola), 1,01 HOBt (4 równ., 7,48 mmola) i 2,83 g HBTU (4 równ., 7,48 mmola). Mieszaninę wirowano w temperaturze pokojowej przez noc i przesączono. Tę procedurę sprzęgania powtarzano trzykrotnie. Następnie żywicę przemyto kolejno DMF (2 x 50 ml), CH3OH (50 ml), 1:1 DMF/CH2Cl2 (2 x 50 ml), CH3OH (1 x 50 ml) i CH2Cl2 (3 x 50 ml) i suszono krótko pod próżnią, uzyskując żywicę 10.
Etap 2: Do 5 g (0,335 mmola/gram ładunku, 1,675 mmola) żywicy 10 dodano 25 ml 20% roztworu piperydyny w DMF. Zawiesinę wirowano w temperaturze pokojowej przez noc i przesączono. Procedurę tę powtarzano przez 20 minut. Następnie żywicę przemyto kolejno DMF (2 x 50 ml), CH3OH (50 ml), CH2Cl2 (2 x 50 ml), CH3OH (50 ml) i NMP (2 x 50 ml). Do zawiesiny żywicy w 25 ml NMP dodano kolejno 2,08 g N-Fmoc-waliny lub N-Fmoc-alaniny (4 równ., 6,7 mmola), 1,17 ml DIEA (4 równ., 6,7 mmola), 0,905 g HOBt (4 równ., 6,7 mmola) i 1,38 g HBTU (4 równ., 3,66 mmola). Mieszaninę wirowano w temperaturze pokojowej przez noc i przesączono. Tę procedurę sprzęgania powtarzano przez 3 godziny. Następnie żywicę przemyto kolejno DMF (2 x 50 ml), CH3OH (50 ml), 1:1 DMF/CH2Cl2 (2 x 50 ml), CH3OH (50 ml) i CH2Cl2 (3 x 50 ml) i wysuszono pod próżnią, uzyskując odpowiednio żywicę 11 lub 12 (0,35 mmola/gram, 5 g).
Etap 3: Do porcji 1,5 g (0,165 mmola) żywicy 11 lub 12 dodano 2 ml 20% roztworu piperydyny w DMF. Zawiesinę wirowano w temperaturze pokojowej przez 5 minut i przesą czono. Procedurę tę powtarzano przez 20 minut. Następnie żywicę przemyto kolejno DMF (3 x 50 ml), CH3OH (15 ml) i NMP (3 x 15 ml). Dodano żądanego kwasu karboksylowego (4 równ., 0,66 mmola), a nastę pnie 0,25 g HOBt (0,66 mmola), 0,12 ml DIEA (4 równ., 0,66 mmola) i 0,89 g (0,66 mmola) HBTU i NMP. Mieszaninę wirowano w temperaturze pokojowej przez noc i przesączono. Żywicę przemyto kolejno DMF (2 x 15 ml), CH3OH (15 ml), 1:1 DMF/CH2Cl2 (2 x 15 ml), CH3OH (15 ml) i CH2Cl2 (3 x 15 ml) i wysuszono pod próżnią, uzyskując związek 13 lub 14.
Etap 4: Do żywicy dodano 2 ml porcję 95% roztworu TFA w wodzie. Mieszaninę mieszano w temperaturze pokojowej przez 1 godzinę i przesączono. Przesącz odparowano, pozostałość pochłonięto w mieszaninie acetonitryl-woda i oczyszczono metodą preparatywnej HPLC, uzyskując związki 15 i 16.
PL 204 619 B1
Procedura syntezy analogów 17 i 18 (patrz Schemat IV):
Etap 5: Żywicę 13 lub 14 w ciągu 30 minut potraktowano 2 ml 25% roztworu TFA/CH2Cl2, przemyto
DMF (2 x 5 ml), 10% DIEA/CH2Cl2 (2 x 5 ml), DMF/CH2Cl2 (2 x 5 ml), CH3OH (5 ml) i CH2Cl2 (3 x 5 ml) i suszono przez 5 minut. Otrzymaną żywicę przemyto NMP (3 x 1 ml), a następnie potraktowano bezwodnikiem octowym, albo kwasem metoksyoctowym, albo chlorkiem 2-propanosulfonylu, albo izocyjanianiem izopropylu, albo chlorkiem metanosulfonylu, albo chloromrówczanem metylu, zgodnie z procedurą stosowano do wytworzenia analogu 9 (Schemat III).
Związki 17 i 18 otrzymano jak opisano w etapie 4 dla związków 15 i 16.
Związki 17a i 17b wytworzono przez redukcyjne aminowanie, stosując przed etapem 4
Na(OAc)3BH, HCHO (38% w H2O, 0,2 ml) i CH3COOH (0,02 ml), a związek 18c otrzymano przez działanie fosgenem, a następnie amoniakiem przed etapem 4.
PL 204 619 B1
Procedura wytwarzania analogów 20
Związki 20a-20t wytworzono zgodnie z procedurą opisaną dla związków 5 (Schemat I), ale w etapie 3 Fmoc-walinę zastą piono odpowiednim Fmoc-aminokwasem (Schemat V).
Schemat V
Wytwarzanie kwasu 3-({1-[2-(4-amino-3-chloro-benzoiloamino)-3-metylosulfonylo-propionylo]-pirolidyno-2-karbonylo}-amino)-4-okso-masłowego (20i)
Zawiesinę 0,132 mmola żywicy 3 w 4 ml 20% roztworu piperydyny w DMF wirowano w temperaturze pokojowej przez 5 minut i przesączono. Procedurę tę powtarzano przez 20 minut. Następnie żywicę przemyto kolejno DMF (dwa razy), CH3OH (raz), CH2Cl2 (trzy razy), CH3OH (raz) i NMP (dwa razy). Do zawiesiny żywicy w 4 ml NMP dodano kolejno 189 g N-Fmoc-metylocysteiny (4 równ., 0,528 mmola), 0,185 ml DIEA (8 równ., 1,056 mmola) 71 mg HOBt (4 równ., 0,528 mmola) i 200 mg HBTU (4 równ., 0,528 mmola). Mieszaninę wirowano w temperaturze pokojowej przez noc i przesączono. Tę procedurę sprzęgania powtarzano przez 3 godziny. Następnie żywicę przemyto kolejno DMF (dwa razy), CH3OH (raz), 1:1 DMF/CH2Cl2 (dwa razy), CH3OH (raz) i CH2Cl2 (trzy razy) i wysuszono pod próżnią.
Zawiesinę 100 mg żywicy w 2 ml 20% roztworu piperydyny DMF wirowano w temperaturze pokojowej przez 5 minut i przesączono. Procedurę tę powtarzano przez 20 minut. Następnie żywicę przemyto kolejno DMF (dwa razy), CH3OH (raz), CH2Cl2 (dwa razy), CH3OH (raz) i NMP (dwa razy). Do zawiesiny żywicy w 2 ml NMP dodano kolejno 38 mg kwasu 4-amino-3-chlorobenzoesowego (4 równ., 0,2 mmola), 0,140 ml DIEA (8 równ., 0,4 mmola), 27 mg HOBt (4 równ., 0,2 mmola) i 76 mg HBTU (4 równ., 0,4 mmola). Mieszaninę wirowano w temperaturze pokojowej przez noc i przesączono. Następnie żywicę przemyto kolejno DMF (dwa razy), CH3OH (raz), 1:1 DMF/CH2Cl2 (dwa razy), CH3OH (raz) i CH2Cl2 (trzy razy) i wysuszono pod próżnią. Następnie żywicę w ciągu 1 godziny potraktowano 2 ml 95% roztworu TFA w wodzie. Zawiesinę przesączono, przesącz zatężono pod próżnią i oczyszczono metodą preparatywnej HPLC, uzyskując związek tytułowy (20i).
Wytwarzanie kwasu 3-({1-[2-(3,5-dichloro-4-hydroksy-benzoilo-amino)-4-metanosulfonylo-butyrylo]-pirolidyno-2-karbonylo}-amino)-4-okso-masłowego (20p)
Związek 20p wytworzono zgodnie z procedurą stosowaną do wytwarzania związku 20i, stosując N-Fmoc-metioninę jako pierwszy składnik sprzęgany z żywicą 3 i kwas 3,5-dichloro-4-hydroksybenzoesowy jako drugi składnik.
Wytwarzanie kwasu 3-[(1-{2-[(izochinolino-1-karbonylo)-amino]-3-metanosulfonylo-propionylo}-pirolidyno-2-karbonylo)-amino]-4-okso-masłowego (20r)
N-Fmoc-metylocysteinę utleniano do odpowiedniego sulfonu, zgodnie ze sposobem opisanym przez B.M. Trost i D.P. Curran, Tetrahedron Lett., 22, str. 1287-190 (1991). Do roztworu 0,714 g (2 mmole) N-Fmoc-metylocysteiny w 24 ml roztworu CH3OH-woda, 1:1, podczas mieszania w temperaturze 0°C, dodano 3,68 g (3 równ., 6 mmoli) Oxone™. Mieszaninę mieszano w temperaturze pokojowej przez 48 godzin, rozcieńczono wodą, zakwaszono do pH 2, stosując 6N HCl i ekstrahowano trzy
PL 204 619 B1 razy 100 ml porcjami octanu etylu. Połączone ekstrakty organiczne wysuszono (MgSO4) i zatężono pod próżnią, uzyskując 0,700 g (89% wydajności) sulfonu:
1H-NMR (DMSO-d6, 500 MHz) δ 2,97 (s, 3H), 3,49-3,59 (m, 2H), 4,25 (m, 1H), 4,30-4,38 (m, 2H), 4,46 (m, 1H), 7,33 (t, 2H), 7,42 (t, 2H), 7,00-8,00 (m, 4H); dokładna masa obliczona dla C19H19NO6S m/e 389,09, znaleziono m/e 390,2.
Zawiesinę 0,250 mmola żywicy 3 w 10 ml 20% roztworu piperydyny w DMF wirowano w temperaturze pokojowej przez 5 minut i przesączono. Procedurę tę powtarzano przez 20 minut. Żywicę przemyto kolejno DMF (dwa razy), CH3OH (raz), CH2Cl2 (dwa razy), CH3OH (raz) i NMP (dwa razy). Do zawiesiny żywicy w 6 ml NMP dodano kolejno 200 mg sulfonu N-Fmoc-metylocysteiny (4 równ., 0,50 mmola), 0,175 ml DIEA (8 równ., 1,00 mmola), 70 mg HOBt (4 równ, 0,50 mmola) i 188 mg HBTU (4 równ., 0,50 mmola). Mieszaninę wirowano w temperaturze pokojowej przez noc i przesączono. Tę procedurę sprzęgania powtarzano przez 3 godziny. Następnie żywicę przemyto kolejno DMF (dwa razy), CH3OH (raz), 1:1 DMF/CH2Cl2 (dwa razy), CH3OH (raz) i CH2Cl2 (trzy razy) i wysuszono pod próżnią.
Zawiesinę 150 mg wytworzonej żywicy w 4 ml 20% roztworu piperydyny w DMF wirowano w temperaturze pokojowej przez 5 minut i przesączono. Procedurę tę powtarzano przez 20 minut. Żywicę przemyto kolejno DMF (dwa razy), CH3OH (raz), CH2Cl2 (dwa razy), CH3OH (raz) i NMP (dwa razy). Do zawiesiny żywicy w 3 ml NMP dodano kolejno 52 mg kwasu 1-izochinolinokarboksylowego (4 równ., 0,3 mmola), 0,104 ml DIEA (8 równ., 0,6 mmola), 37 mg HOBt (4 równ., 0,3 mmola) i 104 mg HBTU (4 równ., 0,3 mmola). Mieszaninę wirowano w temperaturze pokojowej przez noc i przesączono. Żywicę przemyto kolejno DMF (dwa razy), CH3OH (raz), 1:1 DMF/CH2Cl2 (dwa razy), CH3OH (raz) i CH2Cl2 (trzy razy) i wysuszono pod próżnią. Następnie żywicę w ciągu 1 godziny potraktowano 2 ml 95% roztworu TFA w wodzie. Zawiesinę przesączono, przesącz zatężono pod próżnią i oczyszczono metodą preparatywnej HPLC, uzyskując związek tytułowy (20r).
Wytwarzanie kwasu 3-({1-[2-(3,5-dichloro-4-hydroksybenzoilo-amino)-3-metanosulfonylo-propionylo]-pirolidyno-2-karbonyl}-amino}-4-okso-masłowego (20s)
Związek 20s wytworzono zgodnie z procedurą stosowaną do wytwarzania związku 20i, stosując kwas 3,5-dichloro-4-hydroksybenzoesowy zamiast kwasu 1-izochinolinokarboksylowego.
Procedura wytwarzania analogów 23
Związki 23a-23i wytworzono zgodnie z procedurą opisaną dla związków 7 (Schemat II), ale w etapie 2 zamiast Fmoc-proliny stosowano odpowiednio Fmoc-aminokwas (Schemat VI)
Schemat VI
PL 204 619 B1
Wytwarzanie kwasu 3-({2-[2-(4-amino-3-chloro-benzoiloamino)-propionylo]-4-metylo-3,4-dihydro-2H-pirazolo-3-karbonylo}-amino)-4-okso-masłowego (23g)
Związek 23g wytworzono zgodnie z procedurą opisaną dla związków 7, ale zamiast Fmoc-proliny (Schemat II) w etapie 2 stosowano ester 1-(9H-fluoren-9-ylometylowy) kwasu 4-metylo-4,5-dihydro-pirazolo-1,5-dikarboksylowego.
Wytwarzanie estru 1-(9H-fluoren-9-ylometylowego) kwasu 4-metylo-4,5-dihydro-pirazolo-1,5-dikarboksylowego
Do roztworu 650 mg (2 mmole) (10,10-dimetylo-3,3-dioksoM-tia-4-aza-tricyklo [5,2,1,00,0]dec-4-ylo)-(4-metylo-3,4-dihydro-2H-pirazol-3-ilo)-metanonu (J. Am. Chem. Soc., 119, str. 8379-8390 (1997)) w 6 ml wody i 14 ml THF podczas mieszania w temperaturze 0°C dodano 420 mg (10 mmoli, 5 równ.) wodorotlenku litu. Mieszaninę mieszano w temperaturze 0°C przez 2 godziny i w temperaturze pokojowej przez 30 minut, rozcieńczono 20 ml wody i przemyto eterem (20 ml). pH roztworu doprowadzono do wartości 9 i dodano roztworu 519 mg (2 mmole, 1 równ.) Fmoc-Cl w 3 ml dioksanu. Mieszaninę mieszano w temperaturze pokojowej przez noc, przemyto eterem, zakwaszano do pH 2-3 i ekstrahowano trzema 40 ml porcjami octanu etylu. Połączone ekstrakty organiczne przemyto solanką, wysuszono (MgSO4) i zatężono pod próżnią, uzyskując 690 mg (98% wydajności) bezbarwnej piany, którą zidentyfikowano jako związek tytułowy.
1H-NMR (DMSO-d6, 500 MHz) δ 1,2 (d, 3H), 3,2 (m, 1H), 4,2-4,6 (m, 3H), 7,1 (s, 1H), 7,2-7,5 (m, 5H), 7,7-8,0 (m, 4H). Dokładna masa obliczona dla C20H18N2O4 m/e 350,13, znaleziono 351,3.
Wytwarzanie kwasu 3-({1-[2-(4-amino-3-chlorobenzoiloamino)-propionylo]-4-metoksy-pirolidyno-2-karbonylo}-amino)-4-okso-masłowego (23i)
Związek 23i wytworzono zgodnie z procedurą opisaną dla związków 7, ale zamiast Fmoc-proliny (Schemat II) w etapie 2 stosowano N-Fmoc-4-metoksyprolinę.
Wytwarzanie N-Fmoc-4-metoksyproliny:
Do roztworu 735 mg (3 mmole) estru metylowego N-Boc-4-hydroksyproliny w 20 ml THF podczas mieszania w temperaturze 0°C dodano 79 mg (1,1 równ., 3,3 mmola) 60% roztworu wodorku sodu w oleju mineralnym. Mieszaninę mieszano w temperaturze 0°C przez 1 godzinę i dodano jodku metylu (0,56 ml, 3 równ., 9 mmoli). Mieszaninę mieszano w temperaturze pokojowej przez noc, reakcję przerwano dodatkiem nasyconego wodnego roztworu chlorku amonu, rozcieńczono wodą i ekstrahowano trzema 80 ml porcjami octanu etylu. Połączone ekstrakty organiczne przemyto solanką, wysuszono (MgSO4) i zatężono pod próżnią, uzyskując bladożółty olej. Olej ten pochłonięto w 9 ml CH3OH i 3 ml wody i dodano 378 mg (3 równ., 9 mmoli) wodorotlenku litu. Mieszaninę mieszano w temperaturze pokojowej przez noc, rozcieńczono wodą, zakwaszono do pH 3 i ekstrahowano trzema 80 ml porcjami octanu etylu. Połączone ekstrakty organiczne przemyto solanką, wysuszono (MgSO4) i zatężono pod próżnią. Resztkowy olej pochłonięto w 10 ml TFA i roztwór mieszano w temperaturze pokojowej przez 2 godziny i zatężono pod próżnią. Resztkowy olej rozcieńczono 6 ml 10% wodnego roztworu węglanu sodu i 3 ml dioksanu i dodano roztworu chloromrówczanu 9-fluorenylometylu (779 mg, 1 równ., 3 mmole) w 5 ml dioksanu. Mieszaninę mieszano w temperaturze pokojowej przez noc, rozcieńczono wodą, zakwaszono do pH 3 i ekstrahowano trzema 80 ml porcjami octanu etylu. Połączone ekstrakty organiczne przemyto solanką, wysuszono (MgSO4) i zatężono pod próżnią, uzyskując olej. Olej ten oczyszczono metodą chromatografii kolumnowej na żelu krzemionkowym, eluując układem CH2Cl2/CH3OH, 20:1, i otrzymano 600 mg (55%) F-moc-4-metoksyproliny; dokładna masa obliczona dla C21H21NO5 m/e 367,14, znaleziono m/e 368,4.
Do porcji 0,125 mmola żywicy 2 dodano 4 ml 20% roztworu piperydyny w DMF. Mieszaninę wirowano w temperaturze pokojowej przez 5 minut i przesączono. Procedurę tę powtarzano przez 20 minut. Żywicę przemyto kolejno DMF (dwa razy), CH3OH (raz), CH2Cl2 (dwa razy), CH3OH (raz) i NMP (dwa razy). Do zawiesiny żywicy w 4 ml NMP dodano kolejno 184 g N-Fmoc-4-metoksyproliny (4 równ., 0,50 mmola), 0,175 ml DIEA (8 równ., 1,00 mmola), 70 mg HOBt (4 równ., 0,50 mmola) i 188 mg HBTU (4 równ., 0,50 mmola). Mieszaninę wirowano w temperaturze pokojowej przez noc i przesączono. Procedurę sprzęgania powtarzano przez 3 godziny. Żywicę przemyto kolejno DMF (dwa razy), CH3OH (raz), 1:1 DMF/CH2Cl2 (dwa razy), CH3OH (raz) i CH2Cl2 (trzy razy) i wysuszono pod próżnią.
Do żywicy dodano 4 ml 20% roztworu piperydyny w DMF. Mieszaninę wirowano w temperaturze pokojowej przez 5 minut i przesączono. Procedurę tę powtarzano przez 20 minut. Żywicę przemyto kolejno DMF (dwa razy), CH3OH (raz), CH2Cl2 (dwa razy), CH3OH (raz) i NMP (dwa razy). Do zawiesiny żywicy w 4 ml NMP dodano kolejno 156 mg N-Fmoc-alaniny (4 równ., 0,50 mmola), 0,175 ml
PL 204 619 B1
DIEA (8 równ., 1,00 mmola), 70 mg HOBt (4 równ., 0,50 mmola) i 188 mg HBTU (4 równ., 0,50 mmola). Mieszaninę wirowano w temperaturze pokojowej przez noc i przesączono Procedurę sprzęgania powtarzano przez 3 godziny. Żywicę przemyto kolejno DMF (dwa razy), CH3OH (raz), 1:1 DMF/CH2Cl2 (dwa razy), CH3OH (raz) i CH2Cl2 (trzy razy) i wysuszono pod próżnią.
Do żywicy dodano 4 ml 20% roztworu piperydyny w DMF. Mieszaninę wirowano w temperaturze pokojowej przez 5 minut i przesączono. Procedurę tę powtarzano przez 20 minut. Żywicę przemyto kolejno DMF (dwa razy), CH3OH (raz), CH2Cl2 (dwa razy), CH3OH (raz) i NMP (dwa razy). Do zawiesiny żywicy w 4 ml NMP dodano kolejno 80 mg kwasu 4-amino-3-chlorobenzoesowego (4 równ., 0,50 mmola), 0,175 DIEA (8 równ., 1,00 mmola), 70 mg HOBt (4 równ., 0,50 mmola) i 188 mg HBTU (4 równ., 0,50 mmola). Mieszaninę wirowano w temperaturze pokojowej przez noc i przesączono. Żywicę przemyto kolejno DMF (dwa razy), CH3OH (raz), 1:1 DMF/CH2Cl2 (dwa razy), CH3OH (raz) i CH2Cl2 (trzy razy) i wysuszono pod próżnią.
Żywicę przez 3 godziny traktowano 4 ml 95% roztworu TFA w wodzie. Mieszaninę przesączono, przesącz zatężono pod próżnią i otrzymano olej, który oczyszczono metodą HPLC, uzyskując związek tytułowy (23i).
Procedura wytwarzania analogów 24a-e
Związki 24a-24e wytworzono zgodnie z procedurą opisaną dla związków 5 (Schemat I), ale zamiast Fmoc-proliny w etapie 2 stosowano kwas Fmoc-azetydynokarboksylowy lub kwas trans-2-fenylo-Fmoc-azetydynokarboksylowy.
PL 204 619 B1
Procedura wytwarzania analogów 25.
Związki 25a-25e wytworzono zgodnie z procedurą opisaną dla związków 5 i 7 (Schemat I i Schemat II), ale zamiast Fmoc-proliny w etapie 2 stosowano kwas Fmoc-2(S)-pipekolinowy, a do sprzęgania w etapie 3 stosowano Fmoc-walinę, Fmoc-alaninę lub Fmoc-tert-leucynę.
Procedura wytwarzania analogów 26a-h
Związki 26a-26h wytworzono zgodnie z procedurą opisaną dla związków 23 (Schemat VI), ale w etapie 3 zamiast Fmoc-alaniny stosowano Fmoc-walinę.
PL 204 619 B1
Procedura wytwarzania analogów 27.
Związki 27a-27n wytworzono zgodnie z procedurą opisaną dla związków 7 (Schemat II), ale zamiast Fmoc-proliny w etapie 2 stosowano Fmoc-4,4-difluoroprolinę.
Wytwarzanie estru metylowego N-Boc-4,4-difluoroproliny
Do roztworu 9,63 ml (7,2 mmola) chlorku oksalilu w 10,6 ml CH2Cl2, podczas mieszania w temperaturze -78oC, dodano roztworu 0,94 ml (13,2 mmola) sulfotlenku metylu w 15 ml CH2Cl2. Roztwór mieszano w temperaturze -78°C przez 30 minut. Następnie wkroplono roztwór 1,47 g (6 mmoli) estru metylowego N-Boc-4-hydroksyproliny w 19 ml CH2Cl2. Mieszaninę mieszano w temperaturze -78°C przez 1,5 godziny, po czym dodano 3,34 ml (24 mmole) trietyloaminy. Roztwór pozostawiono, aby ogrzał się do temperatury pokojowej i mieszano przez noc. Następnie roztwór rozcieńczono 100 ml CH2Cl2, przemyto kolejno 100 ml wody, 100 ml 1N HCl i 100 ml solanki, wysuszono (MgSO4) i zatężono pod próżnią. Pozostałość oczyszczono metodą chromatografii kolumnowej na żelu krzemionkowym (eluowano układem octan etylu/heksany, 1:1) i otrzymano 1,294 g (89% wydajności) estru metylowego N-Boc-4-okso-proliny.
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ 1,45 (m, 9H), 2,60 (m, 1H), 2,95 (m, 1H), 3,75 (m, 3H), 3,90 (m, 2H), 4,80 (m, 1H).
Do roztworu 808 mg (3,33 mmola) estru metylowego N-Boc-4-okso-proliny w 13 ml CH2Cl2 podczas mieszania w temperaturze 0°C dodano 0,88 ml (7,19 mmola, 2,2 równ.) DAST. Mieszaninę mieszano w temperaturze 0°C przez 2 godziny, w temperaturze pokojowej przez 16 godzin i przelano do wody z lodem. Mieszaninę mieszano w temperaturze pokojowej przez 2 godziny. Fazę organiczną oddzielono, przemyto wodą, wysuszono (MgSO4) i zatężono pod próżnią. Pozostałość oczyszczono metodą chromatografii kolumnowej na żelu krzemionkowym (eluowano układem octan etylu-heksany, 1:8) i otrzymano 754 mg (79% wydajności) difluorowanej pochodnej w postaci bladożółtego oleju.
1H-NMR (500 MHz, CDCI3) δ 1,50 (m, 9H), 2,45 (m, 1H), 2,70 (m, 1H), 3,75 (m, 3H), 3,80 (m, 2H), 4,50 (m, 1H).
PL 204 619 B1
Wytwarzanie N-Fmoc-4,4-difluoroproliny:
Do roztworu 754 mg (2,85 mmola) estru metylowego N-Boc-4,4-difluoroproliny w 5 ml THF, podczas mieszania w temperaturze 0°C, dodano roztworu 179 mg (4,27 mmola) wodorotlenku litu w 5 ml wody. Roztwór mieszano w temperaturze 0°C przez 3 godziny, w temperaturze pokojowej przez 1 godzinę, rozcieńczono wodą, ekstrahowano eterem, zakwaszono do pH 2-3 i ekstrahowano dwoma 30 ml porcjami octany etylu. Połączone ekstrakty organiczne przemyto solanką, wysuszono (MgSO4) i zatężono pod próżnią, uzyskując 652 mg (91%) kwasu w postaci bladożółtej substancji stałej.
Roztwór 652 mg (2 mmole) N-Boc-4,4-difluoroproliny w 10 ml mieszaniny TFA/CH2Cl2, 1:1, mieszano w temperaturze 0°C przez 45 minut i zatężono pod próżnią. Pozostałość pochłonięto w 3 ml dioksanu i dodano 5 ml 10% wodnego roztworu węglanu sodu, a następnie roztworu 675 mg (1 równ.) Fmoc-Cl w 5 ml dioksanu. Mieszaninę mieszano w temperaturze pokojowej przez 16 godzin, rozcieńczono 20 ml wody, ekstrahowano dwoma 20 ml porcjami eteru dietylowego, zakwaszono do pH 2 i ekstrahowano trzema 30 ml porcjami octanu etylu. Połączone ekstrakty organiczne przemyto 50 ml solanki, wysuszono (MgSO4) i zatężono pod próżnią. Pozostałość oczyszczono metodą chromatografii kolumnowej na żelu krzemionkowym (eluowano układem CH2Cl2/CH3OH, 10:1) i otrzymano 850 mg (88%) N-Fmoc-4,4-difluoroproliny w postaci brązowawej substancji stałej.
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ 2,55 (m, 1H), 2,95 (m, 1H), 3,80 (m, 2H), 4,20 (m, 1H), 4,30 (m, 2H), 4,55 (m, 1H), 7,32 (m, 2H), 7,45 (m, 2H), 7,70 (m, 2H), 7,90 (m, 2H). Dokładna masa obliczona dla C20H17F2NO4 m/e 373,11, znaleziono m/e 374,4.
PL 204 619 B1
Związki 28a-28c wytworzono zgodnie z procedurą opisaną dla związków 5 i 7 (Schemat I i Schemat II), ale zamiast Fmoc-proliny w etapie 2 stosowano Fmoc-dimetylotioprolinę.
OGÓLNE PROCEDURY WYTWARZANIA ZWIĄZKÓW O WZORZE I WEDŁUG WYKONANIA A (SCHEMATY VII-VIII)
Związki według wykonania A o wzorze I, w którym R4 = H i jeden spośród R5 = H.
Procedura wytwarzania analogów 29.
Związki 29a-29s wytworzono zgodnie z procedurą opisaną dla związków 5 (Schemat I), ale w etapie 2 zamiast Fmoc-proliny stosowano Fmoc-alaninę , a w etapie 3 stosowano Fmoc-walinę , Fmoc-alaninę albo Fmoc-tert-leucynę.
PL 204 619 B1
PL 204 619 B1
Procedura wytwarzania analogów 32
Związki 32a-32e wytworzono zgodnie z procedurą opisaną dla związków 5 (Schemat I), ale w etapie 2 zamiast Fmoc-proliny stosowano kwas 2-(3-tert-butoksykarbonyloamino-2-okso-pirolidyn-1-ylo)-4-metylo-pentanowy (30) (Neosystem, nr katalogowy BB02101), a następnie prowadzono etap 4 (Schemat VII).
Związki według wykonania A o wzorze I, w którym R2 i R3 razem z atomami, z którym są związane, tworzą 5-członowy pierścień
PL 204 619 B1
Związki według wykonania A o wzorze I, w którym X = N-CH3
PL 204 619 B1
Wytwarzanie kwasu 3-({1-[N-(izochinolino-3-karbonylo)-N-metylo-hydrazynokarbonylo]-pirolidyno-2-karbonylo}-amino)-4-okso-masłowego (34)
Zawiesinę 0,250 mmola żywicy 3 (Schemat VII) w 10 ml 20% roztworu piperydyny w DMF wirowano w temperaturze pokojowej przez 5 minut i przesączono. Procedurę tę powtarzano przez 20 minut. Żywicę przemyto kolejno DMF (dwa razy), CH3OH (raz), 1:1 DMF/CH2Cl2 (dwa razy), CH3OH (raz) i CH2Cl2 (trzy razy) i krótko suszono. Do żywicy dodano 5 ml suchego CH2Cl2, 0,128 ml DIEA (3 równ., 0,75 mmola) i 0,400 ml 20% roztworu fosgenu w toluenie (3 równ., 0,75 mmola). Zawiesinę wirowano w temperaturze pokojowej przez 1,5 godziny. Mieszaninę przesączono i żywicę przemyto kilka razy CH2Cl2. Do zawiesiny żywicy w 5 ml CH2Cl2 dodano 0,133 ml metylohydrazyny (10 równ., 2,5 mmola). Mieszaninę wirowano w temperaturze pokojowej przez noc i przesączono. Żywicę przemyto kolejno DMF (dwa razy), CH3OH (raz), 1:1 DMF/CH2Cl2 (dwa razy), CH3OH (raz) i CH2Cl2 (trzy razy) i wysuszono pod próżnią.
Do porcji 0,075 mmola żywicy w 3 ml NMP dodano kolejno 52 mg kwasu 1-izochinolinokarboksylowego (4 równ., 0,3 mmola), 0,19 ml DIEA (8 równ., 0,6 mmola), 37 mg HOBt (4 równ., 0,3 mmola) i 104 mg HBTU (4 równ., 0,3 mmola). Mieszaninę wirowano w temperaturze pokojowej przez noc i przesączono. Żywicę przemyto kolejno DMF (dwa razy), CH3OH (raz), 1:1 DMF/CH2Cl2 (dwa razy), CH3OH (raz) i CH2Cl2 (trzy razy) i wysuszono pod próżnią.
Żywicę w ciągu 1 godziny potraktowano 4 ml 95% roztworu TFA w wodzie. Mieszaninę przesączono. Przesącz zatężono pod próżnią i otrzymano olej, który oczyszczono metodą HPLC i uzyskano związek tytułowy (34).
Związki według wykonania A o wzorze I, w którym R3 = R3 = H:
Kwas 3-({1-[(4-amino-3-chloro-benzoiloamino)-acetylo]-pirolidyno-2-karbonylo}-amino)-4-okso-masłowy (G1)
Związek wytworzono zgodnie z procedurą opisaną dla związków 7, ale w etapie 3 zamiast Fmoc-alaniny (Schemat II) stosowano Fmoc-glicynę i otrzymano 4,3 g związku tytułowego. LC-MS (ES+) m/e = 425,2 (M+H).
Kwas 3-({1-[(4-amino-3-chloro-benzoiloamino)-acetylo]-4,4-difluoro-pirolidyno-2-karbonylo}-amino)-4-okso-masłowy (G2)
Związek wytworzono zgodnie z procedurą opisaną dla związków 7 i 27, ale w etapie 3 zamiast Fmoc-alaniny (Schemat II) stosowano Fmoc-glicynę i otrzymano 10,0 mg związku tytułowego. LC-MS (ES+) m/e = 461,2 (M+H).
PL 204 619 B1
OGÓLNE PROCEDURY WYTWARZANIA ZWIĄZKÓW WEDŁUG WYKONANIA C O WZORZE I i WEDŁ UG WYKONANIA B O WZORZE I.
Schemat IX
PL 204 619 B1
Źródła dla wybranych układów pierścieniowych
Struktura Literatura
Y Blythin, D.J., J. Org. Chem., 59 str. 6098 - 6100 (1994)
Ν—l —co2r o
YY YY O CO2R Deccico, C.P. et al., Syn. Lett., str. 615 - 616, (1995)
CO2R Bennion, C. et al., J. Org. Chem., 34 str. 439 - 447 (1991); Jensen, K.A. et al., Acta Chemica Scand., 13, str. 1097 - 1103 (1961).
&< Commercially available
COjR
Mish, M.R., J. Am. Chem. Soc., 119, str. 8379 - 8380 (1997).
\ CO2R
H Xi, N. et al., J. Am. Chem. Soc., 120 str. 80 - 86 (1998).
1 co2r
CC>2H Merour, J.Y. et al., Tetrahedron Lett., 32 str. 2469 - 2470 (1991); Rossen, K., Tetrahedron Lett., 36, str. 6419 - 6422 (1995).
PL 204 619 B1
41. R=CH3 45. R=4-MeOPh
42. R=CH3 46. R=4-MeOPh
Schemat X
Fmoc<
Bu-t
38. R=CH3 43. R=4-MeOPhPd(Ph3P)4
DMBA
CH2Ciy DMF
Alloc^
Fmoc^
1N NaOH MeOH poliwinylopirydyna -» toluen γ
Cr^OH
Bu-t
39, R=CH3 44, R=4-MeOPhEster etylowy kwasu 5-tert-butylo-3-[2-9H-fluoren-9-ylo-metoksykarbonyloanimo)-3-metylo-butyrylo]-2,3-dihydro[1,3,4]-tiadiazolo-2-karboksylowego (37)
Do zawiesiny poliwinylopirydylu (2,63 g, 25 mmoli) w roztworze estru etylowego kwasu 5-tert-butylo-2,3-dihydro[1,3,4]-tiadiazolo-2-karboksylowego (36) (J. Med. Chem., 34, str. 439 (1991)) (2,15 g, mmoli) w suchym toluenie podczas mieszania wkroplono ester 9H-fluoren-9-ylometylowy kwasu (1-chlorokarbonylo-2-metylo-propylo)-karbaminowego (4,76 g, 12,1 mmola) w 20 ml bezwodnego toluenu. Po mieszaniu przez 16 godzin zawiesinę przesączono i przesącz przemyto nasyconym roztworem wodorowęglanu sodu. Warstwę organiczną oddzielono, przemyto wodą, wysuszono nad bezwodnym siarczanem sodu i odparowano, uzyskując żółty olej. Po oczyszczeniu metodą szybkiej chromatografii, z eluowaniem układem heksan/octan etylu, 9/1, otrzymano 2,66 g (49% wydajności) związku tytułowego (37) w postaci przezroczystego, lepkiego oleju.
1H-NMR (500 MHz, CD3OD) δ 0,89 (d, 1,5H), 0,93 (d, 1,5H), 1,00 (d, 1,5H), 1,06 (d, 1,5H), 1,22 (t, 3H), 1,28 (s, 9H), 2,12-2,22 (m, 0,5H), 2,32-2,42 (m, 0,5 H), 4,18-4,28 (m, 2H), 4,31-4,45 (m, 2H), 4,96-5,01 (m, 0,5H), 5,02-5,10 (m, 0,5H), 5,52 (d, 0,5H), 5,61 (d, 0,5H), 6,10 (s, 0,5H), 6,13 (s, 0,5H), 7,27-7,34 (m, 2H), 7,35-7,42 (m, 2H), 7,56-7,64 (m, 2H), 7,73-7,78 (m, 2H).
PL 204 619 B1
Ester etylowy kwasu 3-(2-acetyloamino-3-metylobutyrylo)-5-tert-butylo-2,3-dihydro-[1,2,4]tiadiazolo-2-karboksylowego (38)
Do roztworu związku 37 (Schemat IX) (0,508 g, 0,94 mmola) w CH3CN (10 ml) dodano dietyloaminy (1 ml). Roztwór mieszano w temperaturze pokojowej przez 2 godziny, rozpuszczalnik usunięto pod próżnią i otrzymany olej poddano destylacji azeotropowej z CH2Cl2 (4 razy). Surowy olej rozpuszczono w CH2Cl2 (5 ml) i dodano trietyloaminy (0,26 ml, 1,86 mmola) i chlorku acetylu (80 gl, 1,1 mmola). Roztwór mieszano w temperaturze pokojowej w atmosferze N2 przez 2 godziny. Rozpuszczalnik odparowano, surowy materiał rozpuszczono w EtOAc i przemyto 0,5N roztworem NaHSO4 (2x), nasyconym roztworem NaHCO3 (2x) i solanką, wysuszono nad bezwodnym Na2SO4, przesączono i odparowano, uzyskując żółty olej. Po oczyszczeniu metodą szybkiej chromatografii na żelu krzemionkowym, stosując układ heksany/EtOAc (95/5 do 90/10%), otrzymano produkt w postaci żółtego oleju (0,301 g, 89%).
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ 0,88 (dd, 3H), 0,99 (dd, 3H), 1,16-1,45 (m, 12H), 2,02 (s, 3H), 2,09-2,19 (m, 0,5H), 2,30-2,40 (m, 0,5H), 4,12-4,29 (m, 2H), 5,20-5,27 (m, 0,5H), 5,30-5,36 (m, 0,5H), 6,60 (s, 0,5H), 6,90 (s, 0,5H), 6,20-6,31 (m, 1H). Analityczna HPLC (kolumna C18) (mieszanina diastereomerów) 7,77, 7,98 min. LC-MS (ES+) m/e = 358,3 (M+H).
Kwas 3-(2-acetyloamino-3-metylobutyrylo)-5-tert-butylo-2,3-dihydro-[1,2,4]tiadiazolo-2-karboksylowy (39)
Do roztworu związku 38 (0,301 g, 0,84 mmola) w MeOH (10 ml) dodano 1N roztworu NaOH (1,7 ml, 1,7 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano w temperaturze pokojowej przez 2 godziny i rozpuszczalnik odparowano. Pozostałość rozpuszczono w EtOAc i przemyto 0,5N roztworem NaHSO4 (2x) i solanką, wysuszono nad bezwodnym Na2SO4, przesączono i odparowano, uzyskując związek tytułowy w postaci żółtej substancji stałej (0,277 g, ilościowo).
Wytwarzanie estru allilowego kwasu 2-(benzyloksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-karbaminowego (40)
Związek 40 wytworzono z estru tert-butylowego kwasu 3-alliloksykarbonyloamino-4-hydroksymasłowego na drodze modyfikacji procedury opisanej w Bioorg. Med. Chem. Lett., vol. 2, nr 6, str. 613-618 (1992).
Do roztworu DMSO (27,52 g, 352 mmole) w CH2Cl2 (240 ml) w temperaturze -78°C dodano chlorku oksalilu (24,4 g, 192 mmole). Po 15 minutach powoli dodano estru tert-butylowego kwasu 3-alliloksykarbonyloamino-4-hydroksy-masłowego (41,44 g, 160 mmoli) w CH2Cl2 (100 ml) i mieszaninę mieszano w temperaturze -78°C jeszcze przez 1,5 godziny. Dodano DIEA (62,0 g, 480 mmoli) i mieszaninę pozostawiono, aby ogrzała się do temperatury pokojowej przez 15 minut. Otrzymany roztwór rozcieńczono CH2Cl2 (300 ml), przemyto 0,5N roztworem NaHSO4 (500 ml x 2), wodą (300 ml x 2) i solanką (400 ml x 2). Warstwę organiczną wysuszono nad bezwodnym Na2SO4, przesączono i zatężono pod próżnią do objętości 200 ml. Do roztworu tego dodano alkoholu benzylowego (48 g, 444 mmole), a następnie sit molekularnych 3 A (30 g) i kwasu p-toluenosulfonowego (0,8 g). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 4 dni i dodano TFA (96 ml). Wytworzoną zawiesinę mieszano przez 1 godzinę, po czym odparowano pod próżnią. Dodano octanu etylu (500 ml) i mieszaninę przesączono przez Celite. Przesącz przemyto nasyconym roztworem NaHCO3 (500 ml x 2), wodą (400 ml x 2) i solanką (300 ml x 2). Roztwór organiczny wysuszono nad bezwodnym Na2SO4, przesączono i odparowano pod próżnią, uzyskując 90 g bladożółtego oleju. Olej ten zmieszano z heksanem (400 ml x 2) i z pozostałości warstwy dolnej otrzymano 31 g surowego produktu. Po chromatografii z układem octan etylu/heksan (4/96 do 22/78) otrzymano 6,97 g estru allilowego kwasu anti-2-(benzyloksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-karbaminowego (wyższy Rf), 4,53 g diastereomeru syn i 12,97 g mieszaniny diastereomerów (łączna wydajność 53%).
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) dla diastereomeru anti: δ 2,41-2,45 (m, H), 3,02-3,07 (m, H), 4,28 (br, H), 4,50-4,80 (m, 3H), 4,80-5,15 (m, 2H), 5,24-5,32 (m, 2H), 5,48 (s, H), 5,88-6,00 (m, H), 7,31 -7,56 (m, 5H); dla diastereomeru syn: δ 2,49-2,53 (m, H), 2,83-2,89 (m, H), 4,57-4,65 (m, 4H), 4,87 -4,90 (m, H), 5,12-5,30 (m, 3H), 5,52-5,53 (d, H), 5,88-6,00 (m, H), 7,31-7,39 (m, 5H); czas retencji w analitycznej HPLC: 10,49 min. dla diastereomeru anti i 10,37 min. dla diastereomeru syn; LC-MS m/z = 292 (M+H+).
(2-benzyloksy-5-okso-tetrahydrofuran-3-ylo)amid kwasu 3-(2-acetyloamino-3-metylobutyrylo)-5-tert-butylo-2,3-dihydro-[1,2,4]tiadiazolo-2-karboksylowego (41)
Do roztworu estru allilowego kwasu (2-benzyloksy-5-okso-tetrahydrofuran-3-ylo)-karbaminowego (40) (0,385 g, 1,32 mmola) w DMF (2 ml) i CH2Cl2 (2 ml) dodano DMBA (0,456 g,
PL 204 619 B1
2,92 mmola) i Pd(PPh3)4 (0,136 g, 0,12 mmola) i roztwór mieszano w temperaturze pokojowej przez 15 minut. Dodano roztworu związku (39) w CH2Cl2 (4,5 ml) i DMF (0,5 ml), a następnie HOBT (0,168 g, 1,24 mmola) i EDC (0,256 g, 1,33 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano w temperaturze pokojowej przez 18 godzin pod N2. Rozpuszczalnik odparowano. Surowy materiał rozpuszczono w EtOAc i przemyto 0,5N roztworem NaHSO4 (2x), nasyconym roztworem NaHCO3 (2x) i solanką, po czym wysuszono nad bezwodnym Na2SO4, przesączono i odparowano, uzyskując żółtą substancję stałą. Po oczyszczeniu metodą szybkiej chromatografii kolumnowej otrzymano związek tytułowy (41) w postaci mieszaniny diastereomerów (374 mg, 88% wydajności).
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ 0,75-1,05 (m, 6H), 1,19-1,34 (m, 9H), 1,93-2,08 (m, 3H), 2,19-2,50 (m, 2H), 2,80-3,03 (m, 1H), 4,56-4,93 (m, 3H), 5,02-5,20 (m, 1H), 5,46-5,56 (m, 1H), 5,95-6,16 (m, 2H), 6,86-6,95 (m, 1H), 7,20-7,43 (m, 5H). Analityczna HPLC (kolumna C18) (mieszanina diastereomerów) 8,58 min. LC-MS (ES+) m/e = 519,2 (M+H).
Wytwarzanie kwasu 3-{[3-(2-acetyloamino-3-metylo-butyrylo)-5-tert-butylo-2,3-dihydro-[1,3,4]tiadiazolo-2-karbonylo]-amino}-4-okso-masłowego (42) mg (0,087 mmola) związku 41 hydrolizowano zgodnie z metodą A (patrz Schemat XIII) i otrzymano 17 mg (45% wydajności) związku tytułowego. Analityczna HPLC (kolumna C18): 5,15 min. LC-MS (ES+) m/e = 429, 3 (M+H).
Ester etylowy kwasu 5-tert-butylo-3-[2-(4-metoksy-benzoilo-amino)-3-metylo-butyrylo]-2,3-dihydro-[1,3,4]tiadiazolo-2-karboksylowego (43)
Związek wytworzono zgodnie ze sposobem opisanym dla związku 38, stosując chlorek anizoilu i otrzymano 216 mg (50%) związku tytułowego w postaci amorficznej substancji stałej.
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ 0,92 (d, 1,5H), 0,98 (d, 1,5H), 1,03 (d, 1,5H), 1,07 (d, 1,5H), 1,21 (t, 3H), 1,28 (s, H), 2,21-2,28 (m, 0,5H), 2,41-2,48 (m, 0,5H), 3,83 (s, 3H), 4,15-4,28 (m, 2H), 5,41 -5,46 (m, 0,5H), 5,48-5,53 (m, 0,5H), 6,08 (s, 0,5H), 6,13 (s, 0,5H), 6,75 (d, 0,5H), 6,85 (d, 0,5H), 6,91 (d, 2H), 7,59 (d, 2H).
Kwas 5-tert-butylo-3-[2-(4-metoksy-benzoiloamino)-3-metylo-butyrylo]-2,3-dihydro-[1,3,4]tiadiazolo-2-karboksylowy (44)
Wytworzony zgodnie ze sposobem opisanym dla związku 39, otrzymano 180 mg (ilościowo) związku tytułowego w postaci białej substancji stałej.
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ 0,92 (d, 1,5H), 0,96 (d, 1,5H), 1,03 (d, 1,5H), 1,07 (d, 1,5H), 2,22 -2,30 (m, 0,5H), 2,37-2,45 (m, 0,5H), 3,83 (s, 1,5H), 3,84 (s, 1,5H), 5,41-5,48 (s, 1H), 6,14 (s, 0,5H), 6,15 (s, 0,5H), 6,87-6,95 (m, 2H), 7,75-7,83 (m, 3H).
(2-benzyloksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)amid kwasu 5-tert-butylo-3-[2-(4-metoksybenzoiloamino)-3-metylo-butyrylo]-2,3-dihydro-[1,3,4]tiadiazolo-2-karboksylowego (45a i 45b)
Wytworzono zgodnie ze sposobem opisanym dla związku 41 i otrzymano surowy związek tytułowy w postaci 4 diastereomerów. Surowy materiał oczyszczono metodą szybkiej chromatografii, eluując gradientem CH2Cl2 do CH2Cl2/octan etylu (6/4) i otrzymano 31 mg składnika o wyższym Rf w postaci pojedynczego enancjomeru (45a). Analityczna HPLC (kolumna Microsorb C18) 19,87 min.
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) (pojedynczy diastereomer) δ 1,04 (d, 3H), 1,14 (d, 3H), 1,28 (s, 9H), 2,77 (d, 0,5H), 2,81 (d, 0,5H), 2,90 (d, 0,5H), 2,95 (d, 0,5H), 3,84 (s, 3H), 4,44-4,49 (m, 1H), 4,53 (d, 1H), 4,85 (d, 1H), 5,02-5,08 (m, 1H), 6,37 (s, 1H), 6,41 (d, 1H), 6,93 (d, 2H), 7,26-7,40 (m, 5H), 7,75 (d, 2H), 7,92-7,96 (m, 1H).
Frakcja o niższym Rf zawierała 185 mg substancji stałej w postaci mieszaniny diastereomerów 3:1:2 (45b). Analityczna HPLC: kolumna Microsorb C28, 19,00, 19,26, 20,02 min., 1H-NMR (500 MHz, CDCl3) (mieszanina trzech diastereomerów, 3:1:2) δ 0,89 (d, 2,25H), 0,98 (d, 0,75H), 1,02 (d, 0,5H), 1,03 (d, 1,5H), 1,08 (d, 0,25H), 1,10 (d, 0,75H), 1,16 (s, 0,75H), 1,17 (s, 2,25H), 1,23 (s, 0,375H), 1,24 (s, 1,125H), 1,28 (s, 1,125H), 1,29 (s, 3,375H), 2,12-2,18 (m, 0,33H), 2,32-2,42 (m, 0,67H), 2,43-2,51 (m, 0,5H), 2,61-2,67 (m, 0,5H), 2,84-2,92 (m, 0,5H), 2,96-3,07 (m, 0,5H), 3,85 (s, 3H), 4,58-4,71 (m, 2H), 4,81 (d, 0,16H), 4,86 (d, 0,32H), 4,91 (d, 0,52H), 5,09-5,13 (m, 0,33H), 5,14-5,18 (m, 0,67H), 5,35 (dd, 1H), 5,46 (s, 0,15H), 5,53 (d, 0,32H), 5,58-5,62 (d, 0,52H), 6,17 (s, 0,52H), 6,20 (s, 0,16H), 6,34 (s, 0,32H), 6,50 (d, 0,32H), 6,62 (d, 0,16H), 6,67 (d, 0,52H), 6,86 (d, 0,33H), 6,91 (d, 0,67H), 6,94 (d, 1,0H), 7,24-7,43 (m, 5H), 7,61 (d, 1H), 7,0 (d, 0,33H), 7,71 (d, 0,67H), 7,76 (d, 1H).
PL 204 619 B1
Wytwarzanie kwasu 3-({5-tert-butylo-3-[2-(4-metoksy-benzoilo amino)-3-metylo-butyrylo]-2,3-dihydro[1,3,4]tiadiazolo-2-karbonylo}-amino)-4-okso-masłowego (46a) mg związku 45a hydrolizowano zgodnie ze sposobem B (patrz Schemat XXIII) i otrzymano 8 mg (30% wydajnoś ci) żądanego produktu. Analityczna HPLC (kolumna Microsorb C-18, acetonitryl/woda, z buforem TFA) 12,85 min., 1H-NMR (500 MHz, CD3OD) δ 0,98-1,1 (m, 6H), 1,28 (s, 9H), 2,20-2,31 (m, 1H), 2,40-2,48 (m, 1H), 2,6-2,72 (m, 1H), 3,84 (s, 3H), 4,18-4,26 (m, 1H), 4,56-4,62 (m, 1H), 5,25-5,32 (m, 1H), 6,24-6,28 (m, 1H), 6,98 (d, 2H), 7,85 (d, 2H).
Wytwarzanie kwasu 3-({5-tert-butylo-3-[2-(4-metoksy-benzoiloamino)-3-metylo-butyrylo]-2,3-dihydro[1,3,4]tiadiazolo-2-karbonylo}-amino)-4-okso-masłowego (46b) mg związku 45b hydrolizowano zgodnie ze sposobem B (patrz Schemat XXIII) i otrzymano 22 mg (84% wydajności) żądanego produktu w postaci mieszaniny diastereomerów, 3;2. Analityczna HPLC (kolumna Microsorb cyano) 7,08, 7,78 min., 1H-NMR (500 MHz, CD3OD) δ 0,98-1,08 (m, 4H), 1,09-1,12 (m, 2H), 1,29 i 1,31 (2 singlety, 9H), 2,23-2,30 (m, 0,5H), 2,36-2,55 (m, 1,5H), 2,62-2,72 (m, 1H), 1,85 (s, 3H), 4,18-4,27 (m, 1H), 4,58-4,65 (m, 1H), 5,27-5,33 (m, 1H), 6,23-6,27 (m, 1H), 7,00 (d, 2H), 7,70-7,88 (m, 2H).
Ester tert-butylowy kwasu 1-(2-benzyloksykarbonyloamino-2-metylo-propionylo)-pirolidyno-2-karboksylowego (49)
Do roztworu estru tert-butylowego proliny (47) (2,00 g, 12 mmoli) w CH2Cl2 (15 ml) dodano N-karbobenzyloksy-2-metyloalaniny (3,05 g, 13 mmola), HOBt (2,36 g, 17 mmoli) i EDC (3,43 g, 18 mmoli) i roztwór mieszano w temperaturze pokojowej pod N2 przez 48 godzin. Rozpuszczalnik odparowano, surowy materiał rozpuszczono w EtOAc i przemyto 0,5N roztworem NaHSO4 (2x), nasyconym roztworem NaHCO3 (2x) i solanką, wysuszono nad bezwodnym Na2SO4, przesączono i odparowano. Otrzymano białą substancję stałą (4,68 g, 100%).
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ 1,20-2,15 (m, 4H), 1,43 (s, 9H), 1,59 (d, 6H), 3,21-3,79 (m, 2H), 4,35 (szer. s, 1H), 4,82-5,19 (m, 3H), 5,74 (szer. s, 1H), 7,17-7,49 (m, 5H). Analityczna HPLC (kolumna C18) 10,66 min. LC-MS (ES+) m/e = 391,3 (M+H).
PL 204 619 B1
Ester tert-butylowy kwasu 1-[2-(4-metoksy-benzoiloamino)-2-metylo-propionylo]-pirolidyno-2-karboksylowego (50)
Do roztworu związku 49 (1,00 g, 2,56 mmola) w MeOH (20 ml) dodano 10% Pd/C (200 mg) i mieszaninę mieszano pod H2 przez 2 godziny. Mieszaninę przesączono przez 0,45 μm filtr PTFE i rozpuszczalnik usunięto pod próżnią, uzyskując bezbarwny olej. Olej ten rozpuszczono w CH2Cl2 (25 ml) i dodano DIEA (660 gl, 3,79 mmola) i chlorku p-anizoilu (480 mg, 2,8 mmola). Roztwór mieszano w temperaturze pokojowej pod N2 przez 18 godzin. Rozpuszczalnik usunięto pod próżnią i olej rozpuszczono w EtOAc. Fazę organiczną przemyto 0,5N NaHSO4 (2x), wodą, nasyconym roztworem NaHCO3 (2x) i solanką. Fazę organiczną wysuszono nad Na2SO4, przesączono i odparowano, uzyskując białą substancję stałą. Po oczyszczeniu metodą szybkiej chromatografii kolumnowej, z eluowaniem układem CH2Cl2/MeOH (99/1 do 98/2%) otrzymano związek tytułowy w postaci białej substancji stałej (655 mg, 65% wydajności).
1H-NMR (500 MHz, CH2Cl2) δ 1,47 (s, 9H), 1,68-2,24 (m, 5H), 1,80 (d, 6H), 3,55-3,68 (m, 1H), 3,72-3,93 (m, 1H), 3,84 (s, 3H), 4,43-4,55 (m, 1H), 6,90 (d, 2H), 7,60 (szer. s, 1H), 7,77 (d, 2H). Analityczna HPLC (kolumna C18) 8,98 min.
(2-benzyloksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)amid kwasu 1-[2-(4-metoksy-benzoilo-amino)-2-metylo-propionylo]-pirolidyno-2-karboksylowego (51)
Do roztworu związku 50 (325 mg, 0,83 mmola) w dioksanie (5 ml) dodano trietyloaminy (463 gl, 3,32 mmola) i trifluorometanosulfonianu TMS (642 gl, 3,32 mmola) i roztwór mieszano w temperaturze 100°C przez 5 godzin, a następnie w temperaturze pokojowej przez 18 godzin. Mieszaninę reakcyjną rozcieńczono wodą, pH doprowadzono do wartości 8 dodatkiem nasyconego roztworu NaHCO3 i ekstrahowano Et2O, wysuszono nad Na2SO4, przesączono i odparowano, uzyskując białą substancję stałą (230 mg, 83% wydajności), którą stosowano bezpośrednio w następnym etapie.
Do roztworu estru allilowego kwasu (2-benzyloksy-5-okso-terahydrofura-3-ylo)-karbaminowego (40) (1,027 g, 3,5 mmola) w CH2Cl2 (20 ml) dodano DMBA (543 mg, 3,48 mmola) i Pd(PPh3)4 (280 mg, 0,24 mmola) i roztwór mieszano w temperaturze pokojowej pod N2 przez 20 minut. Dodano roztworu kwasu 1-[2-(4-metoksy-benzoiloamino)-2-metylo-propionylo]-pirolidyno-2-karboksylowego (818 mg, 2,45 mmola) w CH2Cl2 (5 ml), a następnie HOBT (0,543 g, 3,95 mmola) i EDC (738 mg, 3,84 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano w temperaturze pokojowej przez 18 godzin pod N2. Rozpuszczalnik odparowano, surowy materiał rozpuszczono w EtOAc i przemyto 0,5N roztworem NaHSO4 (2x), nasyconym roztworem NaHCO3 (2x) i solanką, wysuszono nad bezwodnym Na2SO4, przesączono i odparowano, uzyskując żółtą substancję stałą. Po oczyszczeniu metodą szybkiej chromatografii kolumnowej, z eluowaniem układem octan etylu/heksany (20/80 do 50/50%) otrzymano produkt w postaci żółtej substancji stałej (760 mg, 61% wydajności).
1H-NMR (500 MHz, CD3OD) δ 1,53 (d, 6H), 1,65-1,93 (m, 3H), 1,96-2,14 (m, 1H), 2,60 (dd, 0,1H), 2,77 (dd, 0,85H), 2,94 (dd, 0,85H), 3,04-3,11 (m, 0,2H), 3,42-3,52 (m, 1H), 3,57-3,67 (m, 1H), 3,84 (s, 3H), 4,38-4,76 (m, 3H), 4,84 (dd, 1H), 5,64-5,70 (m, 1H), 6,96-7,03 (m, 2H), 7,23-7,43 (m, 5H), 7,78-7,97 (m, 2H). Analityczna HPLC (kolumna C18) 13,32, 14,37 min. LC-MS (ES+) m/e = 524,3 (M+H).
Wytwarzanie kwasu 3-({1-[2-(4-metoksy-benzoiloamino)-2-metylo-propionylo]-pirolidyno-2-karbonylo}-amino)-4-okso-masłowego (52) mg (0,14 mmola) związku 51 hydrolizowano zgodnie ze sposobem C (patrz Schemat XXIII) i otrzymano 30 mg (60% wydajności) związku tytułowego: Analityczna HPLC (kolumna C18) 6,79 min. LC-MS (ES+) m/e = 434, 3 (M+H).
PL 204 619 B1
Ester tert-butylowy kwasu 1-[2-(4-metoksy-benzoiloamino)-3-metylobutyrylo]-pirolidyno2-karboksylowego (54)
Do zawiesiny H-Val-Pro-OtBu.HCl (53) (2,011 g, 7,44 mmola) w CH2Cl2 (20 ml) dodano DIEA (3,2 ml, 18,4 mmola), a następnie roztworu chlorku 4-metoksy-benzoilu (1,25 g, 7,4 mmola) w CH2Cl2 (5 ml). Roztwór mieszano w temperaturze pokojowej pod azotem przez 1 godzinę, po czym zatężono. Uzyskany olej rozpuszczono w EtOAc i przemyto 0,5N roztworem KHSO4 (2x), nasyconym roztworem NaHCO3 (2x) i solanką, a następnie zatężono pod próżnią i otrzymano związek tytułowy w postaci białej substancji stałej (2,814 g, 94% wydajności).
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ 1,05 (dd, 6H), 1,46 (s, 9H), 1,88-2,29 (m, 5H), 3,65-3,74 (m, 1H), 3,81-3,92 (m, 1H), 3,85 (s, 3H), 4,32-4,42 (m, 1H), 4,81-4,91 (m, 1H), 6,79-6,86 (m, 1H), 6,91 (d, 2H), 7,78 (d, 2H). Analityczna HPLC (kolumna cyano) 10,18 min.
2-(benzyloksy-5-okso-tetrahydrofuran-3-ylo)amid kwasu 1-[2-(4-metoksy-benzoiloamino)-3-metylobutyrylo]-pirolidyno-2-karboksylowego (56)
Porcję 1,079 g (2,67 mmola) związku 54 rozpuszczono w 15% roztworze TFA w CH2Cl2 (40 ml) i mieszano w temperaturze pokojowej przez 4 godziny. Rozpuszczalnik zatężono pod próżnią i otrzymano związek 55 w postaci białej substancji stałej (0,93 g, 100%), który stosowano w następnym etapie.
Do roztworu związku 40 (1,796 g, 6,17 mmola) w CH2Cl2 (20 ml) dodano DMBA (1,119 g, 7,17 mmola) i Pd(PPh3)4 (0,683 g, 0,59 mmola) i roztwór mieszano w temperaturze pokojowej przez 20 minut. Dodano roztworu związku 55 (0,928 g, 2,67 mmola) w CH2Cl2 (17 ml) i DMF (2 ml), a następnie dodano HOBT (0,811 g, 6,01 mmola) i EDC (1,16 g, 6,04 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano w temperaturze pokojowej przez 18 godzin pod N2. Rozpuszczalnik odparowano, surowy materiał rozpuszczono w EtOAc i przemyto 0,5N roztworem NaHSO5 (2x), nasyconym roztworem NaHCO3 (2x)
PL 204 619 B1 i solanką, wysuszono nad bezwodnym Na2SO4, przesączono i odparowano, uzyskując żółtą substancję stałą. Po oczyszczeniu metodą szybkiej chromatografii, z eluowaniem układem octan etylu/CH2Cl2 (10/90 do 40/60%) otrzymano związek tytułowy w postaci bladożółtej substancji stałej (910 mg, 63% wydajności).
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ 0,96 (dd, 6H), 1,84-2,19 (m, 4H), 2,25-2,38 (m, 1H), 2,45 (dd, 1H), 2,80-2,98 (m, 1H), 3,60-3,72 (m, 1H), 3,82-3,95 (m, 1H), 3,86 (s, 3H), 4,26-4,95 (m, 6H), 5,41 (s, 0,2H), 5,53 (d, 0,8H), 6,67-6,77 (m, 1H), 6,88-6,99 (d, 2H), 7,22-7,57 (m, 5H), 7,71-7,82 (d, 2H). Analityczna HPLC (kolumna cyano) (mieszanina 2 diastereomerów) 9,21 min. LC-MS (ES+) m/e = 538, 3 (M+H).
Kwas 3-({1-[2-(4-metoksy-benzoiloamino)-3-metylo-butyrylo]-pirolidyno-2-karbonylo}-amino)-4-okso-masłowy (57)
Porcję 125 mg (0,23 mmola) związku 56 hydrolizowano zgodnie ze sposobem A (patrz Schemat XXIII) i otrzymano 60 mg (58% wydajności) związku tytułowego: Analityczna HPLC 5,71 min. LC-MS (ES+) m/e = 448,2 (M+H).
Wytwarzanie kwasu 4-amino-3-chloro-benzoesowego:
Zawiesinę 4-amino-3-chlorobenzonitrylu (4,82 g, 31,58 mmola) ogrzewano do wrzenia pod chłodnicą zwrotną w 6N HCl (140 ml). Po ogrzewaniu osad rozpuścił się i otrzymano bezbarwny roztwór, który po dalszym ogrzewaniu stał się mętny. Po 9 godzinach mieszaninę reakcyjną oziębiono do temperatury pokojowej. Wytworzony osad odsączono, a następnie rozpuszczono w THF i rozpuszczalnik odparowano. Pozostałość ponownie zatężono z toluenu i otrzymano białą substancję stałą (3,18 g, 59% wydajności).
1H-NMR (500 MHz, CD3OD:CDCl3, 1:4) δ 6,80 (d, 1H), 7,75 (dd, 1H), 7,94 (d, 1H). Analityczna HPLC (kolumna cyano) 8,73 min.
Ester tert-butylowy kwasu 1-[2-(4-amino-3-chloro-benzoilo-amino)-3-metylobutyrylo]pirolidyno-2-karboksylowego (58)
Do zawiesiny związku 53 (1,707 mg, 6,31 mmola) w CH2Cl2 (25 ml) w temperaturze 0°C dodano DIEA (3,2 ml, 18,4 mmola), a następnie roztworu kwasu 4-amino-3-chlorobenzoesowego (1,298 g, 7,56 mmola), HOBT (1,005 g, 7,44 mmola) i EDC (1,456 g, 7,58 mmola). Wytworzoną mieszaninę mieszano w temperaturze 0°C przez 15 minut, pozostawiono, aby ogrzała się do temperatury pokojowej i mieszano przez 18 godzin. Rozpuszczalnik odparowano i otrzymany olej rozpuszczono w EtOAc, przemyto 0,5N roztworem NaHSO4 (2x), nasyconym roztworem NaHCO3 (2x) i solanką i otrzymano białą substancję stałą (2,68 g). Po szybkiej chromatografii z układem MeOH/CH2Cl2 (1/99 do 2/98%) otrzymano 2,04 g (76% wydajności) związku 58 w postaci białej substancji stałej.
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ 1,05 (dd, 6H), 1,47 (s, 9H), 1,86-2,29 (m, 5H), 3,62-3,78 (m, 1H), 3,78-3,94 (m, 1H), 4,39 (dd, 1H), 4,79-4,89 (dd, 1H), 6,73 (d, 1H), 6,78 (d, 1H), 7,52 (dd, 1H), 7,75 (d, 1H). Analityczna HPLC (kolumna cyano) 16,18 min. LC-MS (ES+) m/e = 424,3 (M+H).
2-(benzyloksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-amid kwasu 1-[2-(4-amino-3-chloro-benzoiloamino)-3-metylobutyrylo]-pirolidyno-2-karboksylowego (60)
Porcję 0,632 g (1,49 mmola) związku 58 rozpuszczono w 50% roztworze TFA w CH2Cl2 (20 ml) roztwór mieszano w temperaturze pokojowej przez 2 godziny. Resztkowy TFA usunięto przez zatężanie z CH2Cl2 (3x) i otrzymano produkt w postaci białej substancji stałej.
Porcję 385 mg (1,04 mmola) wytworzonego produktu poddano reakcji ze związkiem 40 sposobem opisanym dla związku 56.
Związek tytułowy (60) wyodrębniono w postaci żółtej substancji stałej (265 mg, 45% wydajności).
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ 0,89-1,12 (m, 6H) , 1,72-2,26 (m, 5H), 2,49 (dd, 0,25H), 2,60 (dd, 0,7H), 2,80 (dd, 0,75H), 2,96-3,09 (m, 0,3H), 3,64-3,77 (m, 1H), 3,94-4,10 (m, 1H), 4,20-4,74 (m, 4H),
4,76-4,95 (m ,1H), 5,51 (s, 0,5H), 5,61-5,70 (m, 1,5H), 6,79 (dd, 1H), 7,23-7,43 (m, 5H), 7,48-7,61 (m, 1,4H), 7,68-7,81 (m, 1H), 7,99-8,12 (m, 0,6H). Analityczna HPLC (kolumna cyano) (mieszanina diastereomerów) 14,90, 15,20 min. LC-MS (ES+) m/e = 557,2 (M+H).
Kwas 3-({1-[2-(4-amino-3-chloro-benzoiloamino)-3-metylo-butyrylo]-pirolidyno-2-karbonylo}-amino)-4-okso-masłowy (61)
Porcję 45 mg (0,08 mmola) związku 60 hydrolizowano zgodnie ze sposobem A (patrz Schemat XXIII) i otrzymano 30 mg (80% wydajności) związku tytułowego:
PL 204 619 B1 1H-NMR (500 MHz, CD3OD) δ 1,06 (dd, 6H), 1,78-2,38 (m, 5H), 2,38-2,86 (m, 2H), 3,62-3,83 (m, 1H), 4,12-4,76 (m, 4H), 7,04-7,21 (m, 1H) , 7,58-8,01 (m, 2H); Analityczna HPLC 8,16 min., LC-MS (ES+) m/e = 467,3 (M+H).
Schemat XIII
Ester tert-butylowy kwasu 1-[2-(4-hydroksy-3,5-dimetylo-benzoiloamino)-3-metylobutyrylo]-pirolidyno-2-karboksylowego (63)
Do roztworu związku 62 (wytworzonego ze związku 53 i Fmoc-Cl) (600 mg, 1,22 mmola) w bezwodnym DMF (10 ml) dodano dietyloaminy (3 ml). Roztwór mieszano w temperaturze pokojowej pod N2 przez 3 godziny i rozpuszczalnik odparowano. Wytworzony olej rozpuszczono w CH2Cl2 (8 ml) i dodano kwasu 3,5-dimetylo-4-hydroksybenzoesoweggo (0,302 g, 1,82 mmola), HOBT (338 mg, 2,5 mmola) i EDC (0,465 g, 2,43 mmola) i roztwór mieszano w temperaturze pokojowej pod N2 przez 18 godzin. Rozpuszczalnik zatężono pod próżnią i otrzymany olej rozpuszczono w EtOAc, przemyto 0,5N roztworem NaHSO4 (2x), nasyconym roztworem NaHCO3 (2x) i solanką, uzyskując surowy produkt w postaci białej substancji stałej (0,80 g). Po szybkiej chromatografii z eluowaniem układem MeOH/ CH2Cl2 (1/99 do 2/98%) otrzymano 380 mg (75% wydajności) białej substancji stałej.
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ 1,06 (dd, 6H), 1,47 (s, 9H), 1,90-2,32 (m, 5H), 2,24 (s, 6H), 3,65 -3,75 (m, 1H), 3,84-3,92 (m, 1H), 4,36-4,42 (m, 1H), 4,82-4,88 (m, 1H), 5,53-5,61 (m, 1H), 6,77-6,85 (m, 1H), 7,42 (s, 2H). Analityczna HPLC (kolumna cyano) 17,53 min. LC-MS (ES+) m/c = 419,3 (M+H).
(2-benzyloksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-amid kwasu 1-[2-(4-hydroksy-3,5-dimetylo-benzoiloamino)-3-metylobutyrylo]-pirolidyno-2-karboksylowego (64)
Ze związku 63 i 40 sposobami stosowanymi do wytworzenia związku 56 wytworzono związek (64) w postaci bladożółtej substancji stałej (352 mg, 72% wydajności).
1H-NMR (500 MHz, CD3OD) δ 0,83-1,28 (m, 6H), 1,66-2,37 (m, 3H), 2,23 (s, 6H), 2,48-2,54 (m, 0,2H), 2,61 (ddd, 0,8H), 2,72 (ddd, 0,9H), 3,01-3,09 (m, 1H), 3,66-3,76 (m, 1H), 3,95-4,07 (m, 1H), 4,48-4,73 (m, 3H), 4,75-4,92 (m, 1H), 5,45-5,48 (m, 0,1H), 5,61-5,64 (m, 0,1H), 5,65-5,70 (m, 0,8H), 7,21-7,62 (m, 6H), 7,88-8,04 (m, 1H). Analityczna HPLC (kolumna cyano) (mieszanina 2 diastereomerów) 17,73 min. LC-MS (ES+) m/e = 552, 3 (M+H).
Kwas 3-({1-[2-(4-hydroksy-3,5-dimetylo-benzoiloamino)-3-metylo-butyrylo]-pirolidyno-2-karbonylo}-amino)-4-okso-masłowy (65)
Porcję 160 mg (0,29 mmola) związku 64 hydrolizowano zgodnie ze sposobem A (patrz Schemat XXIII) i otrzymano 13,1 mg (10% wydajności) związku tytułowego. Analityczna HPLC (kolumna cyano) 10,28 min. LC-MS (ES+) m/e = 462,2 (M+H).
PL 204 619 B1
Ester tert-butylowy kwasu 1-[2-(2-9H-fluoren-9-ylo-acetylo-amino)-3,3-dimetylobutyrylo]-pirolidyno-2-karboksylowego (66)
Do roztworu H-Pro-OtBu (53) (1,033 mg, 6,0 mmola, II, Schemat 5) w CH2Cl2 (20 ml) i DMF (5 ml) dodano Fmoc-Leu-OH (2,337 g, 6,60 mmola, I, Schemat 5), HOBT (1,63 g, 12,1 mmola) i EDC (2,30 g, 12,0 mmola) i roztwór mieszano w temperaturze pokojowej pod N2 przez 18 godzin. Rozpuszczalnik usunięto pod próżnią i pozostałość rozpuszczono w EtOAc, a następnie przemyto 0,5N roztworem NaHSO4 (2x), nasyconym roztworem NaHCO3 (2x) i solanką. Warstwę organiczną wysuszono nad bezwodnym Na2SO4 i odparowano, uzyskując bladożółtą substancję stałą (3,65 g). Po szybkiej chromatografii z układem EtOAc/heksany (10/90 do 20/80%) otrzymano związek tytułowy (66) (2,25 g, 74% wydajności).
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ 1,09 (s, 9H), 1,47 (s, 9H), 1,79-2,28 (m, 3H), 3,62-3,72 (m, 1H),
3,76-3,83 (m, 1H), 4,18-4,43 (m, 4H), 5,48-5,67 (m, 1H), 7,28-7,44 (m, 4H), 7,55-7,64 (m, 2H), 7,72 -7,82 (m, 2H). Ana lityczna HPLC (kolumna cyano) 11,95 min. LC-MS (ES+) m/e = 507,3 (M+H).
Ester tert-butylowy kwasu 1-[2-(4-metoksy-benzoiloamino)-3,3-dimetylo-butyrylo]-pirolidyno-2-karboksylowego (67)
Do roztworu związku 66 (0,503 g, 0,99 mmola) w DMF (8 ml) dodano dietyloaminy (2,5 ml), roztwór mieszano w temperaturze pokojowej przez 1 godzinę i rozpuszczalnik odparowano. Wytworzoną pozostałość zatężano z CH2Cl2 (3x). Otrzymany olej rozpuszczono w CH2Cl2 (9 ml) i dodano DIEA (260 gl, 1,49 mmola) i chlorku 4-metoksy-benzoilu (190 mg, 1,05 mmola). Roztwór mieszano pod N2 przez 18 godzin i rozpuszczalnik zatężono pod próżnią. Pozostałość rozpuszczono w EtOAC i przemyto 0,5N roztworem NaHSO4 (2x), nasyconym roztworem NaHCO3 (2x) i solanką, po czym wysuszono nad bezwodnym Na2SO4 i odparowano, uzyskując białą substancję stałą (0,529 g). Po szybkiej chromatografii na żelu krzemionkowym z układem MeOH/ CH2Cl2 (1/99 do 2/98%) otrzymano związek tytułowy (2,25 g, 74% wydajności).
1H-NMR (500 MHz, CD3OD) δ 1,01 (s, 1,4H), 1,11 (s, 7,6H), 1,73-2,25 (m, 4H), 2,47-2,77 (m, 1H), 2,81 (dd, 0,7H) 2,91-3,11 (m, 0,3H), 3,61-4,03 (m, 3H), 3,84 (s, 3H), 4,29-4,49 (m, 1H), 4,49 -5,00 (m, 5H), 5,46 (s, 0,15H), 5,58-5,73 (m, 0,85H), 6,94-7,04 (m, 2H), 7,27-7,41 (m, 4H), 7,61-7,84 (m, 2H). Analityczna HPLC (kolumna cyano) 13,10 min.
(2-benzyloksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-amid kwasu 1-[2-(4-metoksy-benzoiloamino)-3,3-dimetylo-butyrylo]-pirolidyno-2-karboksylowego (68)
Do roztworu związku 67 (0,90 g, 1,74 mmola) w CH2Cl2 (25 ml) dodano 2,6-lutydyny (2,1 ml, 18,0 mmola) i trifluorometanosulfonianu-TMS (2,3 ml, 11,9 mmola) i mieszaninę reakcyjną mieszano w temperaturze pokojowej pod N2 przez 1,5 godziny. Otrzymaną mieszaninę rozcieńczono CH2Cl2, przemyto 10% roztworem NaHCO3 (2x) i solanką, po czym wysuszono nad Na2SO4, przesączono i odparowano. Pozostałość rozpuszczono w CH2Cl2 i potraktowano DIEA (0,6 ml, 3,5 mmola) i chlorkiem 4-metoksy-benzoilu (0,355 g, 2,09 mmola) i mieszano w temperaturze pokojowej pod N2 przez
PL 204 619 B1 godzin. Surowy produkt oczyszczono metodą szybkiej chromatografii, eluując układem CH2Cl2/ /MeOH (99/1) i otrzymano związek tytułowy (274 mg, 28% wydajności) 1H-NMR (500 MHz, CD3OD) δ 1,01 (s, 1,4H), 1,11 (s, 7,6H), 1,73-2,25 (m, 4H), 2,47-2,77 (m, 1H), 2,81 (dd, 0,7H), 2,92-3,11 (m, 0,3H), 3,61-4,03 (m, 3H), 3,84 (s, 3H), 4,29-4,49 (m, 1H), 4,49 -5,00 (m, 5H), 5,46 (s, 0,15H), 5,58-5,73 (m, 0,85H), 6,94-7,04 (m, 2H), 7,27-7,41 (m, 4H), 7,61-7,73 (m, 1H), 7,74-7,84 (m, 2H). Analityczna HPLC (kolumna cyano) (mieszanina 2 diastereomerów) 17,03, 17,39 min. LC-MS (ES+) m/e = 552,3 (M+H).
Kwas 3-({1-[2-(4-metoksy-benzoiloamino)-3,3-dimetylo-butyrylo]-pirolidyno-2-karbonylo}-amino)-4-okso-masłowy (69)
Porcję 117 mg (0,21 mmola) związku 68 hydrolizowano zgodnie ze sposobem C (patrz Schemat XXIII) i otrzymano 40 mg (41% wydajności) związku tytułowego. Analityczna HPLC 7,16 min.
LC-MS (ES+) m/e = 462,3 (M+H).
Ester benzylowy kwasu 1-(2-tert-butoksykabonyloamino-3,3-dimetylo-butyrylo)-pirolidyno-2-karboksylowego (70)
Do zawiesiny H-Pro-OBzl.HCl (2,00 g, 8,66 mmola) w CH2Cl2 (20 ml) dodano DIEA (2,25 ml, 12,92 mmola) i otrzymano bezbarwny roztwór. Dodano Boc-tLeu-OH (1,95 g, 9,52 mmola), HOBT (1,76 g, 13,03 mmola) i EDC (2,49 g, 12,95 mmola) i roztwór mieszano pod N2 w temperaturze pokojowej przez 18 godzin. Rozpuszczalnik usunięto pod próżnią, pozostałość rozpuszczono w EtOAc i przemyto H2O, 0,5N roztworem NaHSO4 (2x), nasyconym roztworem NaHCO3 (2x) i solanką. Po wysuszeniu nad bezwodnym Na2SO4 i odparowaniu otrzymano związek tytułowy (3,57 g, 99% wydajności).
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ 0,99 (s, 9H), 1,40 (s, 9H), 1,88-2,33 (m, 4H), 3,58-3,90 (m, 2H), 4,21-4,35 (d, 1H), 4,53-4,66 (m, 1H), 5,04-5,38 (m, 3H), 7,14-7,42 (m, 5H). LC-MS (ES+) m/e = 419,4 (M+H).
Ester tert-butylowy kwasu {1-[2-(2-benzyloksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylokarbamoilo)-pirolidyno-1-karbonylo]-2,2-dimetylopropylo}-karbaminowego (71)
Porcję 871 mg (2,08 mmola) związku 70 rozpuszczono w Me-OH (15 ml) i dodano 10% Pd/C (200 mg). Zawiesinę mieszano pod H2 przez 1 godzinę, po czym przesączono przez Celite i rozpuszczalnik odparowano. Otrzymaną pozostałość poddano reakcji ze związkiem 40, zgodnie ze sposobem stosowanym do wytworzenia związku 56, i uzyskano 889 mg (71% wydajności) związku tytułowego (71).
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ 0,93 (s, 9H), 1,44 (s, 9H), 1,78-2,18 (m, 4H), 2,29-2,49 (m, 2H),
2,76-3,04 (m, 1H), 3,50-3,70 (m, 1H), 3,70-3,85 (m, 1H), 4,20-4,37 (m, 1H), 4,49-4,78 (m, 3H), 4,78 -4,98 (m, 1H), 5,12-5,26 (m, 1H), 5,40-5,59 (m, 1H), 7,10-7,78 (m, 5H). Analityczna HPLC (kolumna cyano) 11,17 min., LC-MS (ES+) m/e = 518,3 (M+H).
PL 204 619 B1 (2-benzyloksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-amid kwasu 1-[2-(4-amino-3-chloro-benzoiloamino)-3,3-dimetylobutyrylo]-pirolidyno-2-karboksylowego (72)
Do roztworu 456 mg (0,088 mmola) związku 71 w CH2Cl2 (20 ml) dodano bezwodnego TFA (5 ml), po czym całość mieszano w temperaturze pokojowej pod N2 przez 1 godzinę i odparowano do suchości. Pozostałość zatężano z CH2Cl2 (3x), a następnie wysuszono pod próżnią. Otrzymaną pozostałość rozpuszczono w CH2Cl2 (20 ml), oziębiono do temperatury 0°C, po czym dodano DIEA (1,3 ml, 8 równ., 2,46 mmola), a nastę pnie kwasu 4-amino-3-chloro-benzoesowego (202 mg, 1,17 mmola), HOBT (183 mg, 1,35 mmola) i EDC (279 mg, 1,45 mmola). Otrzymaną mieszaninę pozostawiono, aby ogrzała się do temperatury pokojowej i mieszano przez 18 godzin. Rozpuszczalnik usunięto pod próżnią i pozostałość rozpuszczono w EtOAc, a następnie przemyto destylowaną wodą (3x), 0,5N roztworem NaHSO4 (2x), nasyconym roztworem NaHCO3 (2x) i solanką. Warstwę organiczną wysuszono nad Na2SO4, przesączono i odparowano, uzyskując pozostałość. Pozostałość tę oczyszczono metodą szybkiej chromatografii, eluując układem CH2Cl2/MeOH (99/1 do 97/3%) i otrzymano 285 mg (57% wydajności) związku tytułowego (72) w postaci żółtej substancji stałej.
1H-NMR (500 MHz, CD3OD) δ 0,91-1,24 (m, 9H), 1,70-2,27 (m, 4H), 2,47-2,85 (m, 1,5H), 2,993,13 (m, 0,5H), 3,39-3,53 (m, 0,5H), 3,60-3,78 (m, 1,5H), 3,85-4,04 (m, 1H), 4,24-4,47 (m, 2H), 4,534,97 (m, 4H), 5,46 (s, 0,3H), 3,88-4,02 (m, 0,1H), 5,60-5,69 (m, 0,6H), 6,80 (d, 1H), 7,22-7,77 (m, 7H). Analityczna HPLC (kolumna cyano) (mieszanina 2 diastereomerów) 15,90, 16,23 min. LC-MS (ES+) m/e = 571,2 (M+H).
Kwas 3-({1-[2-(4-amino-3-chloro-benzoiloamino)-3,3-dimetylo-butyrylo]-pirolidyno-2-karbonylo}-amino)-4-okso-masłowy (73)
Porcję 40 mg (0,07 mmola) związku 72 hydrolizowano zgodnie ze sposobem A (patrz Schemat XXIII) i otrzymano 25 mg (74% wydajności) związku tytułowego. Analityczna HPLC (kolumna cyano) 10,66 min. LC-MS (ES+) m/e = 481,3 (M+H).
Ester tert-butylowy kwasu {2-[2-(2-benzyloksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylokarbamoilo)-pirolidyn-1-ylo]-1-metylo-2-okso-etylo}karbaminowego (75)
Do roztworu związku 40 (6,69 g, 23,0 mmola) w bezwodnym CH2Cl2 dodano kwasu 1,3-dimetylobarbiturowego (DMBA) (3,97 g, 25,4 mmola) i Pd(PPh3)4 (1,12 g, 0,97 mmola). Roztwór mieszano pod N2 w temperaturze pokojowej przez 15 minut, oziębiono do temperatury 0°C, a następnie dodano Boc-Ala-Pro-OH (BaChem) (5,087 g, 17,8 mmola), HOBT (3,60 g, 26,7 mmola) i EDC (5,12 g, 26,7 mmola). Otrzymany roztwór pozostawiono, aby ogrzał się do temperatury pokojowej i mieszano pod N2 przez 18 godzin. Rozpuszczalnik zatężono pod próżnią i pozostałość rozpuszczono w EtOAc, po czym przemyto 0,5N roztworem NaHSO4 (2x), nasyconym roztworem NaHCO3 (2x) i solanką. Warstwę organiczną wysuszono nad bezwodnym Na2SO4 i odparowano, uzyskując pomarańczowy olej (12,23 g). Po chromatografii kolumnowej na żelu krzemionkowym z układem CH2Cl2/EtOAc (80/20 do 60/40) otrzymano związek tytułowy 75 w postaci żółtej substancji stałej (7,28 g, 86% wydajności).
PL 204 619 B1 1H-NMR (500 MHz, CD3OD) δ 1,19-1,31 (m, 3H), 1,42 (s, 9H), 1,69-2,29 (m, 4H), 2,45-2,67 (m, 0,9H), 2,71-2,86 (m, 0,5H), 2,99-3,10 (m, 0,6H), 3,49-3,84 (m, 2H), 4,24-4,45 (m, 2,5H), 4,57-4,73 (m, 1,5H), 4,76-4,92 (m, 1H), 5,45 (s, 0,45H), 5,63-5,68 (m, 0,55H), 7,25-7,40 (m, 5H). Analityczna HPLC (kolumna cyano) (mieszanina 2 diastereomerów) 15,99, 16,33 min. LC-MS (ES+) m/e = 476,3 (M+H).
(2-benzyloksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-amid kwasu [1-[2-(4-amino-3-chloro-benzoiloamino)-propionylo]-pirolidyno-2-karboksylowego (76)
Porcję 1,899 g (3,99 mmola) związku 75 w CH2Cl2 (20 ml) potraktowano bezwodnym TFA (5 ml), po czym mieszano w temperaturze pokojowej pod N2 przez 1 godzinę i odparowano do suchości. Pozostałość zatężano z CH2Cl2 (3x), a następnie wysuszono pod próżnią. Otrzymaną pozostałość rozpuszczono w CH2Cl2 (20 ml), oziębiono do temperatury 0°C i potraktowano DIEA (5,6 ml, 8 równ.,
32.1 mmola), kwasem 4-amino-3-chloro-benzoesowym (0,910 g, 5,3 mmola), HOBT (0,824 g,
6.1 mmola) i EDC (1,197 g, 6,23 mmola). Wytworzoną mieszaninę ogrzano do temperatury pokojowej i mieszano przez 18 godzin. Rozpuszczalnik usunię to pod próż nią i pozostał o ść rozpuszczono w EtOAc, a następnie przemyto wodą destylowaną (3x), 0,5N roztworem NaHSO4 (2x), nasyconym roztworem NaHCO3 (2x) i solanką. Warstwę organiczną wysuszono nad Na2SO4, przesączono i odparowano, uzyskując pozostałość, którą oczyszczono metodą szybkiej chromatografii z układem CH2Cl2/MeOH (99/1 do 97/3%). Związek tytułowy otrzymano w postaci białej substancji stałej (1,221 g, 58% wydajności).
1H-NMR (500 MHz, CD3OD) δ 1,15 (d, 0,25H), 1,29-1,60 (m, 2,75H), 2,41-2,54 (m, 0,5H), 2,55 -2,70 (m, 0,5H), 2,77 (dd, 0,5H), 3,03 (ddd, 0,5H), 3,59-3,75 (m, 1H), 3,75-3,98 (m, 1H), 4,26-5,01 (m, 5H), 5,41-5,57 (m, 1H), 5,60-5,76 (m, 0,5H), 6,70-6,92 (m, 0,5H), 7,15-7,48 (m, 5H), 7,48-7,68 (m, 1H), 7,68-7,88 (m, 1H), 8,15-8,34 (m, 1H), Analityczna HPLC (kolumna cyano) (mieszanina 2 diastereomerów) 14,44, 14,89 min. LC-MS (ES+) m/e = 529,3 (M+H).
(2-benzyloksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-amid kwasu [1-[2-(4-metoksy-3,5-dimetylo-benzoiloamino)-propionylo]-pirolidyno-2-karboksylowego (77) zsyntetyzowano ze związku 75 i kwasu 3,5-dimetylo-4-metoksybenzoesowego, zgodnie z procedurą stosowaną do wytworzenia związku 76 i otrzymano związek tytułowy (1,18 g, 44% wydajności).
1H-NMR (500 MHz, CD3OD) δ 1,40 (m, 3H), 1,67-2,41 (m, 4H), 2,28 (s, 6H), 2,48 (ddd, 0,5H), 2,62 (dd, 0,5H), 2,78 (ddd, 0,5H), 3,04 (dd, 0,5H), 3,62-3,94 (m, 3H), 3,71 (s, 3H), 4,21-4,51 (m, 2H), 4,59-4,85 (m, 4H), 5,46 (s, 0,25H), 5,52 (s, 0,25H), 5,63 (d, 0,4H), 5,67 (d, 0,1H), 7,17-7,45 (m, 5H), 7,45-7,65 (m, 2H). Analityczna HPLC (kolumna cyano) (mieszanina 2 diastereomerów) 15,06, 15,39 min. LC-MS (ES+) m/e = 538 (M+H).
Wytwarzanie kwasu 4-acetyloamino-3-chloro-benzoesowego
Do roztworu kwasu 4-amino-3-chloro-benzoesowego (10,0 g, 58,3 mmola) w bezwodnym THF (100 ml) dodano chlorku acetylu (20,7 ml, 291,1 mmola) i roztwór mieszano w temperaturze pokojowej przez 48 godzin. Rozpuszczalnik odparowano i produkt wytrącono z heksanów, a następnie przesączono i wysuszono, uzyskując białą substancję stałą (11,73 g, 94% wydajności).
1H-NMR (500 MHz, CD3OD) δ 2,28 (s, 3H), 7,92 (dd, 1H), 7,99-8,16 (m, 2H). Analityczna HPLC (kolumna cyano) 7,84 min.
PL 204 619 B1
(2-benzyloksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-amid kwasu 1-[2-(4-acetyloamino-3-chloro-benzoiloamino)-propionylo]-pirolidyno-2-karboksylowego (78)
Ze związku 75 i kwasu 4-acetyloamino-3-chloro-benzoesowego, zgodnie z procedurą stosowaną do wytwarzania związku 76, otrzymano związek tytułowy (146 mg, 19% wydajności).
1H-NMR (500 MHz, CD3OD) δ 1,28-1,52 (m, 3H), 1,68-2,38 (m, 4H), 2,20 (s, 3H), 2,41-2,88 (m, 1,5H), 2,96-3,10 (m, 0,5H), 2,96-3,10 (m, 0,5H), 3,43-3,75 (m, 1H), 3,80-3,96 (m, 1H), 4,25-5,00 (m, 5H), 5,42-5,54 (m, 0,5H), 5,63-5,78 (m, 0,5H), 7,13-7,48 (m, 0,5H), 7,79-8,14 (m, 2,5H), 8,56-8,70 (m, 0,5H). Analityczna HPLC (kolumna cyano) (mieszanina 2 diastereomerów) 8,64 min. LC-MS (ES+) m/e = 571,2 (M+H).
(2-benzyloksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-amid kwasu 1-[2-(3-izopropoksy-benzoiloamino)-propionylo]-pirolidyno-2-karboksylowego (79)
Ze związku 75 i kwasu 3-izopropoksybenzoesowego, zgodnie z procedurą stosowaną do wytworzenia związku 76, otrzymano związek tytułowy (120 mg, 58% wydajności).
1H-NMR (500 MHz, CD3OD) δ 1,27 (d, 6H), 1,33-1,52 (m, 3H), 1,69-2,31 (m, 4H), 2,49 (dd, 0,3H), 2,63 (dd, 0,7H), 2,78 (dd, 0,7H), 3,03 (dd, 0,3H), 3,43-3,73 (m, 1H) , 3,78-3,94 (m, 1H) , 4,274,47 (m, 2H), 4,47-4,87 (m, 4H), 5,47 (s, 0,7H), 5,53 (d, 0,3H), 5,64 (d, 0,8H), 5,72 (d, 0,2H), 6,98-7,12 (m, 1H), 7,19-7,47 (m, 9H). Analityczna HPLC (kolumna cyano) (mieszanina 2 diastereomerów) 14,54,
14,85 min. LC-MS (ES+) m/e = 538 (M+H).
{2-[2-(2-benzyloksy-5-okso-tetrahydrofuran-3-ylokarbamoilo)-pirolidyn-1-ylo]-1-metylo-2-okso-etylo}-amid kwasu chinoksalino-2-karboksylowego (80)
Związek tytułowy (122 mg, 60% wydajności) wytworzono ze związku 75 i kwasu 2-chinoksalinowego, zgodnie z procedurą stosowaną do wytworzenia związku 76.
1H-NMR (500 MHz, CD3OD) δ 1,12-1,67 (m, 3H), 1,68-2,34 (m, 4H), 2,35-2,70 (m, 0,85H), 2,70 -2,95 (m, 0,75H), 3,06 (dd, 0,4H), 3,41-3,49 (m, 2H), 4,18-5,03 (m, 6H), 5,47 (d, 0,5H), 5,55 (d, 2H), 5,67 (dd, 1H), 5,71 (dd, 0,3H), 7,03-7,53 (m, 5H), 7,80-8,06 (m, 2H), 8,06-8,34 (m, 2H), 9,43-9,48 (m, 1H). Analityczna HPLC (kolumna cyano) (mieszanina 2 diastereomerów) 9,06 min. LC-MS (ES+) m/e = 532,3 (M+H).
PL 204 619 B1
(2-benzyloksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-amid kwasu 1-[2-(3-benzyloksy-4-metoksy-benzoiloamino)-propionylo]-pirolidyno-2-karboksylowego (81)
Związek tytułowy (142 mg, 58% wydajności) wytworzono ze związku 75 i kwasu 3-benzyloksy-4-metoksybenzoesowego, zgodnie z procedurą stosowaną do wytworzenia związku 76.
1H-NMR (500 MHz, CD3OD) δ 1,14 (d, 0,3H), 1,27-1,52 (m, 2,7H), 1,66-2,30 (m, 4H), 2,47 (dd, 0,4H), 2,59 (dd, 0,6H), 2,77 (dd, 0,6H), 3,02 (dd, 0,4H), 3,41-3,72 (m, 1H) , 3,72-3,99 (m, 2H), 3,86 (s, 3H), 4,19-4,86 (m, 5H), 4,99-5,15 (m, 2H), 5,45 (m, 0,8H), 5,65 (m, 1,2H), 6,98 (dd, 1H), 7,11 -7,63 (m, 12H). Analityczna HPLC (kolumna cyano) (mieszanina 2 diastereomerów) 12,28, 12,44 min. LC-MS (ES+) m/e = 616,3 (M+H).
Kwas 4-alliloksy-3,5-dimetylo-benzoesowy
Mieszaninę kwasu 4-hydroksy-3,5-dimetylo-benzoesowego (3,32 g, 20 mmoli), bromku allilu (7,26 g, 60 mmoli), chlorku benzylotrietyloamoniowego (455 mg, 2 mmole) i K2CO3 (6,9 g, 50 mmoli) w DMF (50 ml) mieszano w temperaturze pokojowej przez 16 godzin. Mieszaninę rozcieńczono octanem etylu (200 ml) i przemyto wodą i solanką. Warstwę organiczną wysuszono nad Na2SO4, przesączono i odparowano pod próżnią, uzyskując 5,3 g estru w postaci oleju. Ester ten ogrzewano do wrzenia pod chłodnicą zwrotną z NaOH (5 g, 125 mmoli) w mieszaninie woda/metanol (50 ml/50 ml) przez 6 godzin. W celu usunię cia metanolu mieszaninę odparowano pod próż nią i otrzymany roztwór rozcieńczono wodą (200 ml) i przemyto układem octan etylu/heksan (30 ml/70 ml). Warstwę wodną w temperaturze 0°C zakwaszono stężonym roztworem HCl do pH 2. Wytworzony osad zebrano przez odsączenie i przemyto wodą, wysuszono pod wysoką próżnią i otrzymano 3,86 g (wydajność 94%) związku tytułowego.
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ 2,33 (s, 6H), 4,35-4,37 (m, 2H), 5,28-5,30 (m, H), 5,42-5,46 (m, H), 6,07-6,15 (m, H), 7,79 (s, 2H); czas retencji w analitycznej HPLC: 11,28 min., LC-MS: m/z = 205 (M-H+).
(2-benzyloksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-amid kwasu 1-[2-(4-alliloksy-3,5-dichloro-benzoiloamino)-propionylo]-pirolidyno-2-karboksylowego (82)
Związek tytułowy (208 mg, 47% wydajności) wytworzono ze związku 75 i kwasu 4-alliloksy-3,5-dichloro-benzoesowego, zgodnie z procedurą stosowaną do wytworzenia związku 76.
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ 1,05-1,58 (m, 3H), 1,68-3,21 (m, 7H), 3,39-3,90 (m, 3H), 4,05-5,01 (m, 6H), 5,22-5,62 (m, 3H), 6,04-6,25 (m, 1H), 6,94-7,63 (m, 8H). Analityczna HPLC (kolumna cyano) (mieszanina 2 diastereomerów) 9,69, 9,89 min LC-MS (ES+) m/e = 604,2 (M+H).
PL 204 619 B1 (2-benzyloksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-amid kwasu 1-[2-(3,5-dichloro-4-hydroksy-benzoiloamino)-propionylo]-pirolidyno-2-karboksylowego (83)
Porcję 140 mg związku 82 (0,23 mmola) rozpuszczono w CH2Cl2 (4 ml) i potraktowano DMBA (35,4 mg, 0,26 mmola) i Pd(PPh3)4 (32 mg, 0,028 mmola). Roztwór mieszano w temperaturze 0°C przez 15 minut, ogrzewano do temperatury pokojowej przez 2 godziny, po czym rozcieńczono CH2Cl2 i przemyto wodą (2x) i solanką. Rozpuszczalnik zatężono pod próżnią i pozostałość oczyszczono metodą szybkiej chromatografii na żelu krzemionkowym z układem MeOH/CH2Cl2 i otrzymano związek tytułowy (93,2 mg, 71%).
1H-NMR (500 MHz, CD3OD) δ 1,16 (d, 0,25H), 1,28-1,49 (m, 2,75H), 1,63-2,33 (m, 4H), 2,48 (dd, 0,4H), 3,39-3,59 (m, 0,2H), 3,60-3,73 (m, 0,8H), 3,73-3,96 (m, 1H), 4,24-4,48 (m, 2H), 4,57-4,92 (m, 7H), 5,44 (s, 0,4H), 5,50 (d, 0,4H), 5,64 (d, 0,8H), 5,75 (d, 0,5H), 7,16-7,43 (m, 5H), 7,78-7,89 (m, 1,6H), 8,40-8,63 (m, 0,4H). Analityczna HPLC (kolumna cyano) (mieszanina 2 diastereomerów) 11,57, 11,82 min. LC-MS (ES+) m/e = 564,1 (M+H).
(2-benzyloksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-amid kwasu 1-(2-benzyloamino-propionylo)-pirolidyno-2-karboksylowego (84)
Związek tytułowy (8 mg, 38% wydajności) w postaci bezbarwnego oleju wytworzono ze związku 75 i chlorku benzoilu, zgodnie z procedurą stosowaną do wytworzenia związku 76.
1H-NMR (500 MHz, CD3OD) δ 1,35-1,54 (m, 3H), 1,72-2,30 (m, 4H), 2,42-2,70 (m, 1,3H), 2,74 -2,84 (m, 0,5H), 3,30 (dd, 0,2H), 3,41-3,75 (m, 2H), 3,81-3,96 (m, 1H), 4,22-4,86 (m, 4H), 5,46 (s, 0,3H), 5,51-5,54 (m, 0,1H), 5,66 (d, 0,5H), 5,72 (d, 0,1H), 7,20-7,57 (m, 7H), 7,77-7,89 (m, 2H), 8,42-8,67 (m, 1H). Analityczna HPLC (kolumna cyano) (mieszanina 2 diastereomerów) 15,23, 15,67 min. LC-MS (ES+) m/e = 481,2 (M+H).
{2-(2-benzyloksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylokarbamoilo)-pirolidyn-1-ylo]-1-metylo-2-okso-etylo}-amid kwasu izochinolino-1-karboksylowego (85)
Związek tytułowy (732 mg, 53% wydajności) wytworzono ze związku 75 i kwasu 1-izochinolinokarboksylowego, zgodnie z procedurą stosowaną do wytworzenia związku 76.
1H-NMR (500 MHz, CD3OD) δ 1,22-1,56 (m, 3H), 1,70-2,34 (m, 4H), 2,43-2,71 (m, 0,9H), 2,73 -2,89 (m, 0,5H), 3,06 (ddd, 0,6H), 3,42-3,81 (m, 2H), 3,84-4,01 (m, 1H), 4,29-5,00 (m, 5H), 5,47 (d, 0,65H), 5,55 (s, 0,3H), 5,67 (d, 0,8H), 5,72 (d, 0,25H), 7,21-7,43 (m, 5H), 7,49-7,83 (m, 2,8H), 7,88-8,04 (m, 1,8H(, 8,45-8,54 (m, 0,8H), 8,97-9,06 (m, 0,6H). Analityczna HPLC (mieszanina 2 diastereomerów) 15,71, 16,04 min. LC-MS (ES+) m/e = 531,2 (M+H).
PL 204 619 B1 (2-benzyloksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-amid kwasu 1-[2-(4-amino-5-chloro-2-metoksy-benzoiloamino)-propionylo]-pirolidyno-2-karboksylowego (86)
Związek tytułowy (330 mg, 61% wydajności) wytworzono ze związku 75 i kwasu 4-amino-5-chloro-metoksybenzoesowego, zgodnie z procedurą stosowaną do wytworzenia związku 76.
1H-NMR (500 MHz, CD3OD) δ 1,22 (d, 0,25H), 1,29-1,50 (m, 0,75H), 1,68-2,36 (m, 4H), 2,38 -2,89 (m, 1,5H), 2,94-3,14 (m, 0,5H), 3,37-3,98 (m, 6H), 4,27-4,98 (m, 6H), 5,44-5,50 (m, 0,4H), 5,53 -5,56 (s, 0,1H), 5,60-5,75 (m, 0,5H), 6,50 (s, 1H), 7,17-7,45 (m, 4H), 7,73-7,90 (m, 1H), 8,49-8,70 (m, 1H). Analityczna HPLC (kolumna cyano) (mieszanina 2 diastereomerów) 16,39, 16,82 min. LC-MS (ES+) m/e = 559,2 (M+H).
(2-benzyloksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-amid kwasu 1-[2-(4-acetyloamino-5-chloro-2-metoksy-benzoiloamino)-propionylo]-pirolidyno-2-karboksylowego (87)
Związek tytułowy (364 mg, 64% wydajności) wytworzono ze związku 75 i kwasu 4-acetyloamino-5-chloro-2-metoksybenzoesowego, zgodnie z procedurą stosowaną do wytworzenia związku 76.
1H-NMR (500 MHz, CD3OD) δ 1,20-1,27 (m, 0,25), 1,35-1,49 (m, 0,75H), 1,72-2,30 (m, 4H), 2,23 (s, 3H), 2,42-2,58 (m, 0,6H), 2,59-2,68 (m, 0,5H), 2,73-2,86 (m, 0,7H), 2,99-3,11 (m, 0,7H), 3,41 -4,07 (m, 5H), 4,29-4,97 (m, 5H), 4,79-5,56 (m, 0,5H), 5,64-5,73 (m, 0,5H), 7,18-7,44 (m, 4,3H), 7,90 -8,09 (m, 2H), 8,71-8,85 (m, 0,7H). Analityczna HPLC (kolumna cyano) (mieszanina 2 diastereomerów) 15,61, 16,01 min. LC-MS (ES+) m/e = 601, 1 (M+H).
{2-[2-(2-benzyloksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylokarbamoilo) pirolidyn-1-ylo]-1-metylo-2-okso-etylo}-amid kwasu pirydyno-2-karboksylowego (88)
Związek tytułowy (233 mg, 42% wydajności) wytworzono ze związku 75 i kwasu pirydyno-2-karboksylowego zgodnie z proce durą stosowaną do wytworzenia związku 76.
1H-NMR (500 MHz, CD3OD) δ 1,30-1,59 (m, 3H), 1,68-2,36 (m, 4H), 2,39-2,57 (m, 0,6H), 2,57 -2,69 (m, 0,35H), 2,71-2,87 (m, 0,4H), 3,05 (dd, 0,65H), 3,39-3,93 (m, 3H), 4,24-4,99 (m, 5H), 5,49 -5,55 (m, 0,8H), 5,63-5,77 (m, 1,2H), 7,17-7,46 (m, 5H), 7,49-7,60 (m, 1H), 7,89-7,99 (m, 1H), 8,038,12 (m, 1H), 8,58-8,67 (m, 1H). Analityczna HPLC (kolumna cyano) (mieszanina 2 diastereomerów) 8,63 min. LC-MS (ES+) m/e = 481,3 (M+H).
(2-benzyloksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-amid kwasu [1-[2-(4-amino-3,5-dichloro-benzoiloamino)-propionylo]-pirolidyno-2-karboksylowego (89)
Związek tytułowy (162 mg, 70% wydajności) wytworzono ze związku 75 i kwasu 3,5-dichloro-4-aminobenzoesowego, zgodnie z procedurą stosowaną do wytworzenia związku 76.
PL 204 619 B1 1H-NMR (500 MHz, CD3OD) δ 1,21-1,58 (m, 3H), 1,58-2,37 (m, 4H), 2,37-3,13 (m, 2H), 3,433,74 (m, 1,5H), 3,77-3,94 (m, 1H), 4,28-4,51 (m, 1,5H), 4,50-5,01 (m, 3H), 5,41-5,77 (m, 1H), 7,15 -7,49 (m, 5H), 7,66-7,88 (m, 2H). Analityczna HPLC (kolumna cyano) (mieszanina 2 diastereomerów) 8,36 min. LC-MS (ES+) m/e = 563,2 (M+H).
(2-benzyloksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-amid kwasu 1-[2-(4-metoksy-benzoiloamino)-propionylo]-pirolidyno-2-karboksylowego (90)
Związek tytułowy (404 mg, 50%) wytworzono ze związku 75 i chlorku 4-metoksy-benzoilu, zgodnie z procedurą stosowaną do wytworzenia związku 76.
1H-NMR (500 MHz, CD3OD) δ 1,19 (d, 0,3H), 1,29-1,58 (m, 2,7H), 1,58-2,38 (m, 4H), 2,43-2,69 (m, 1H), 2,74-2,86 (m, 0,6H), 2,99-3,11 (m, 0,4H), 3,39-3,75 (m, 1,5H), 3,77-3,94 (m, 1H), 3,84 (s, 3H), 4,29-4,94 (m, 4,5H), 5,45-5,55 (m, 4,5H), 5,63-5,71 (m, 0,5H), 5,73 (d, 0,1H), 6,85-7,09 (m, 2H), 7,19-7,44 (m, 4H), 7,73-7,92 (m, 2H), 8,26-8,44 (m, 1H). Analityczna HPLC (kolumna cyano) (mieszanina 2 diastereomerów) 15,18, 15,65 min. LC-MS (ES+) m/e = 510,2 (M+H).
(2-benzyloksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-amid kwasu 1-{2-[(9-okso-9H-fluoreno-4-karbonylo)-amino]-propionylo}-pirolidyno-2-karboksylowego (91)
Związek tytułowy (403 mg, 44% wydajności) wytworzono ze związku 75 i kwasu 9-okso-9H-fluoreno-karboksylowego, zgodnie z procedurą stosowaną do wytworzenia związku 76.
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ 1,38-1,59 (m, 3H), 1,75-2,37 (m, 4H), 2,43-2,59 (m, 0,65H), 2,59 -2,72 (m, 0,35H), 2,79-2,89 (m, 0,35H), 3,01-3,11 (m, 0,65H), 3,68-3,86 (m, 1H), 3,92-4,09 (m, 1H), 4,35-5,03 (m, 7H), 5,42-5,90 (m, 1H), 7,06-8,00 (m, 12H). Analityczna HPLC (kolumna cyano) (mieszanina 2 diastereomerów) 12,30 min. LC-MS (ES+) m/e = 582,1 (M+H).
(2-benzyloksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-amid kwasu 1-[2-(3,5-dichloro-4-metoksy-benzoiloamino)-propionylo]-pirolidyno-2-karboksylowego (92)
Związek tytułowy (364 mg, 46% wydajności) wytworzono ze związku 75 i kwasu 3,5-dichloro-4-metoksy-benzoesowego, zgodnie z procedurą stosowaną do wytworzenia związku 76.
1H-NMR (500 MHz, CD3OD) δ 1,17 (d, 0,25H), 1,28-1,53 (m, 2,75H), 1,64-2,33 (m, 4H), 2,39 -2,94 (m, 1,5H), 2,94-3,12 (m, 0,5H), 3,41-3,74 (m, 2H), 3,74-4,00 (m, 1H), 3,91 (s, 3H), 4,26-5,02 (m, 5H), 5,42-5,81 (m, 1H), 7,08 (d, 0,4H), 7,21-7,43 (m, 4,6H), 7,53-7,69 (m, 0,8H), 7,85-7,97
PL 204 619 B1 (m, 1,2H). Analityczna HPLC (kolumna cyano) (mieszanina 2 diastereomerów) 10,79 min. LC-MS (ES+) m/e = 578,2 (M+H).
{2-(2-benzyloksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylokarbamoilo)-pirolidyn-1-ylo]-1-metylo-2-okso-etylo}-amid kwasu chinolino-6-karboksylowego (93)
Związek tytułowy (344 mg, 71% wydajności) wytworzono ze związku 75 i kwasu 6-chinolinokarboksylowego, zgodnie z procedurą stosowaną do wytworzenia związku 76.
1H-NMR (500 MHz, CD3OD) δ 1,11-1,58 (m, 3H), 1,69-2,40 (m, 4H), 2,42-3,15 (m, 2H), 3,80 -4,01 (m, 1H), 4, 29-4, 99 (m, 5H), 5,44-5,54 (m, 0,5H), 5,63-5,73 (d, 0,4H), 5,73-5,79 (d, 0,1H), 7,18 -7,43 (m, 5H), 7,56-7,67 (m, 1H), 8,08 (d, 1H), 8,13-8,25 (m, 1H), 8,40-8,56 (m, 2H), 8,88-8,99 (m, 1H). Analityczna HPLC (kolumna cyano) (mieszanina 2 diastereomerów) 10,27, 10,50 min. LC-MS
Ester tert-butylowy kwasu 1-(2-benzyloksykarbonyloaminopropionylo)-pirolidyno-2-karboksylowego (95)
Związek ten wytworzono zgodnie ze sposobem opisanym przez Pierre Chevallet, Patrick Garrouste, Barbara Malawska i Jean Martinez w Tetrahedron Letters, Vol. 34, str. 7409-7412 (1993). Mieszaninę Cbz-Ala-Pro-OH (10,0 g, 31,2 mmola), bromku tert-butylu (180 g, 1,31 mola), chlorku benzylotrietylo-amoniowego (7,11 g, 31,2 mmola) i K2CO3 (180 g, 1,30 mola) w N,N-dimetyloacetamidzie
PL 204 619 B1 (DMA) (225 ml) mieszano w temperaturze 55°C przez 24 godziny. Mieszaninę reakcyjną oziębiono do temperatury pokojowej i rozcieńczono 1 l wody z lodem i ekstrahowano octanem etylu (200 ml x 3). Warstwę organiczną wysuszono nad bezwodnym Na2SO4, przesączono i odparowano pod próżnią, uzyskując 14 g oleju. Olej ten oczyszczono metodą szybkiej chromatografii z układem heksan/octan etylu (95/5 do 50/50) i otrzymano 11,73 g (wydajność 99,7%) związku tytułowego w postaci przezroczystego oleju.
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ 1,25-1,50 (m, 12H), 1,85-2,25 (m, 4H), 3,42-3,70 (m, 2H), 4,25 -4,57 (m, 2H), 5,07-5,11 (m, 2H), 5,69 (d, H), 7,28-7,38 (m, 5H); czas retencji w analitycznej HPLC: 11,07 min.; LC-MS: m/z = 377 (M+H+).
Ester tert-butylowy kwasu 1-[2-(4-amino-3-chloro-benzoilo-amino)-propionylo]-pirolidyno-2-karboksylowego (96a)
Do roztworu związku 95 (10,50 g, 27,9 mmola) w MeOH (100 ml) dodano zawiesinę 10% Pd/C (5,00 g) w EtOAc (50 ml). Mieszaninę mieszano pod H2 przez 48 godzin, przesączono przez Celite i rozpuszczalnik odparowano, uzyskując woskowatą substancję stałą. Substancję tę rozpuszczono w CH2Cl2 (100 ml) i DMF (50 ml) i roztwór ozię biono do temperatury 0°C. Dodano kwasu 4-amino-3-chlorobenzoesowego (14,58 ml, 83,7 mmola), HOBT (3,77 g, 27,9 mmola) i EDC (6,68 g, 34,8 mmola) i roztwór mieszano w temperaturze 0°C przez 15 minut, a następnie w temperaturze pokojowej przez 24 godziny. Mieszaninę reakcyjną rozcieńczono EtOAc, przemyto NaHSO4 (2x), 10% roztworem NaHCO3 (2x) i solanką, po czym wysuszono nad MgSO4, przesączono i odparowano. Surowy produkt oczyszczono metodą szybkiej chromatografii kolumnowej, stosując układ CH2Cl2/MeOH (99/1 do 97/3%), i otrzymano związek tytułowy w postaci białej substancji stałej (7,75 g, 70% wydajności).
1H-NMR (500 MHz, CD3OD) δ 1,27-1,67 (m, 12H), 1,82-2,14 (m, 4H), 3,48-3,85 (m, 2H), 4,26 -4,53 (m, 3H), 4,81-4,98 (m, 1H), 6,71 (d, 1H), 7,15 (m, 1H), 7,50 (dd, 1H), 7,75 (d, 1H). Analityczna HPLC 10,83 min. LC-MS (ES+) m/e = 396, 3 (MH+).
Kwas 1-[2-(4-amino-3-chloro-benzoiloamino)-propionylo]-pirolidyno-2-karboksylowy (97a)
Związek ten wytworzono ze związku 96a przez działanie TFA/CH2Cl2. Po zakończeniu reakcji rozpuszczalnik usunięto pod próżnią i pozostałość kilka razy zatężano z toluenu. Otrzymaną pozostałość wysuszono pod próżnią do stałego ciężaru.
Ester tert-butylowy kwasu 1-[2-(4-acetyloamino-3-chloro-benzoiloamino)-propionylo]-pirolidyno-2-karboksylowego (96b)
Związek tytułowy (9,18 g, 77% wydajności) w postaci białej substancji stałej wytworzono ze związku 95 i kwasu 4-acetyloamino-3-chlorobenzoesowego, zgodnie ze sposobem stosowanym do wytworzenia związku 96a.
1H-NMR (500 MHz, CD3OD) δ 1,30-1,62 (m, 12H), 1,85-2,16 (m, 3H), 2,16-2,44 (m, 1H), 2,27 (s, 3H), 3,47-3,83 (m, 2H), 4,34-4,54 (m, 1H), 4,89 (m, 1H), 7,27-7,39 (m, 1H), 7,59-7,71 (m, 2H), 7,83-7,97 (m, 1H), 8,47 (d, 1H). Analityczna HPLC: 9,43 min.
Kwas 1-[2-(4-acetyloamino-3-chloro-benzoiloamino)-propionylo]-pirolidyno-2-karboksylowy (97b)
Związek ten wytworzono ze związku 96a przez działanie TFA/CH2CI2. Po zakończeniu reakcji rozpuszczalnik usunięto pod próżnią i pozostałość kilka razy zatężano z toluenu. Otrzymaną pozostałość wysuszono pod próżnią do stałego ciężaru.
Kwas 4-acetyloamino-5-chloro-2-metoksy-benzoesowy
Ester metylowy kwasu 4-acetyloamino-5-chloro-2-metoksy-benzoesowego (2,09 g, 8,11 mmola) rozpuszczono w MeOH (110 ml), dodano roztworu LiOH (25,48 mmola w 30 ml mieszaniny
PL 204 619 B1
MeOH:H2O, 1:1) i roztwór mieszano w temperaturze pokojowej przez 6 godzin. Rozpuszczalnik zatężono pod próżnią, dodano EtOAc i fazę organiczną przemyto 0,5N HCl, a następnie ekstrahowano nasyconym roztworem NaHCO3 (2x). Fazę wodną zakwaszono 12N HCl do pH 1 i otrzymany osad ekstrahowano w CH2Cl2. Połączone ekstrakty wysuszono nad bezwodnym Na2SO4, przesączono i odparowano, uzyskują c zwią zek tytuł owy w postaci białej substancji stałej (0,933 g, 50% wydajnoś ci).
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ 2,31 (s, 3H), 4,10 (s, 3H), 7,78-7,82 (szer. s. 1H), 8,17 (s, 1H),
8,45 (s, 1H). Analityczna HPLC: 5,62 min.
Ester tert-butylowy kwasu 1-[2-(4-acetyloamino-5-chloro-2-metoksy-benzoiloamino)-propionylo]-pirolidyno-2-karboksylowego (96c)
Do roztworu związku 95 (1,534 g, 4,07 mmola) w MeOH (40 ml) dodano 10% Pd/C (650 mg) i mieszaninę mieszano pod H2 przez 2 godziny. Zawiesinę przesączono przez Celite i odparowano, uzyskując żółty olej. Olej ten poddano reakcji z kwasem 4-acetylo-5-chloro-2-metoksybenzoesowym, zgodnie z procedurą stosowaną do wytworzenia związku 96a, i otrzymano związek tytułowy (497 mg, 52% wydajności).
1H-NMR (500 MHz, CD3OD) δ 1,46 (d, 3H), 1,49 (s, 9H), 1,80-2,01 (m, 3H), 2,19-2,40 (m, 1H), 2,22 (s, 3H), 3,58-3,72 (m, 1H), 3,78-3,89 (m, 1H), 3,98-4,09 (s, 3H), 4,31-4,45 (s, 1H), 4,78-4,95 (m, 1H), 7,89-8,10 (m, 2H). Analityczna HPLC: 11,31 min.
Kwas 1-[2-(4-acetyloamino-5-chloro-2-metoksy-benzoiloamino)-propionylo]-pirolidyno-2-karboksylowy (97c)
Związek ten wytworzono ze związku 96c przez działanie TFA/CH2Cl2. Po zakończeniu reakcji rozpuszczalnik usunięto pod próżnią i pozostałość kilka razy zatężano z toluenu. Otrzymaną pozostałość wysuszono pod próżnią do stałego ciężaru.
(5-okso-2-fenetyloksy-tetrahydro-furan-3-ylo)-amid kwasu 1-[2-(4-amino-3-chloro-benzoiloamino)-propionylo]-pirolidyno-2-karboksylowego (98a)
Do roztworu estru allilowego kwasu (5-okso-2-fenetyloksy-tetrahydro-furan-3-ylo)-karbaminowego (194 mg, 0,54 mmola) (wytworzonego jak opisano dla związku (40) przy użyciu alkoholu fenetylowego) w bezwodnym CH2Cl2 (5 ml) w temperaturze 0°C dodano DMBA (196 mg, 1,26 mmola) i Pd(PPh3)4 (32 mg, 0,03 mmola). Roztwór mieszano przez 15 minut i dodano roztworu związku 97a (wytworzonego ze związku 96a przez działanie TFA w CH2Cl2) (166 mg, 0,49 mmola) i DIEA (680 ^,
3,90 mmola) w CH2Cl2 (2 ml), a następnie HOBT (98 mg, 0,73 mmola) i EDC (122 mg, 0,63 mmola).
Roztwór mieszano w temperaturze 0°C przez 15 minut i w temperaturze pokojowej przez 18 godzin. Rozpuszczalnik usunięto pod próżnią i pozostałość rozpuszczono w EtOAc, po czym przemyto 0,5N roztworem NaHSO4 (2x), nasyconym roztworem NaHCO3 (2x) i solanką. Po wysuszeniu nad bezwodnym Na2SO4 i odparowaniu otrzymano pomarańczową substancję stałą, którą oczyszczono metodą szybkiej chromatografii kolumnowej, stosując układ CH2Cl2/MeOH (99/1 do 97/3%).
Otrzymano związek tytułowy w postaci białej substancji stałej (190 mg, 73% wydajności).
1H-NMR (500 MHz, CD3OD) δ 1,29 (d, 0,6H), 1,41 (d, 2,4H), 1,78 (m, 1H), 2,08 (m, 3H), 2,56 (m, 1H), 2,77 (dd, 1H), 2,94 (t, 2H), 3,53 (m, 0,3H), 3,67 (m, 0,8H), 3,85 (m, 2H), 3,96-4,08 (m, 1H), 4,40 (m, 2H), 4,62 (m, 1H), 4,67-4,79 (m, 1H), 5,57 (d, 0,7H), 5,60 (d, 0,3H), 6,78 (dd, 1H), 7,21 (m, 5H), 7,58 (m, 1H), 7,79 (m, 1H), 8,26 (d, 1H). Analityczna HPLC: 14,52 min. LC-MS (ES+) m/e = 543,2 (MH+).
PL 204 619 B1
(2-benzyloksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-amid kwasu 1-[2-(4-amino-3-chloro-benzoiloamino)-propionylo]-pirolidyno-2-karboksylowego (98b)
Związek ten wytworzono z diastereomeru syn estru allilowego kwasu (2-benzyloksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-karbaminowego i związku 97a, zgodnie ze sposobem stosowanym dla związku 98a. Związek tytułowy wyodrębniono w postaci bladożółtej substancji stałej (720 mg, 51%).
1H-NMR (500 MHz, CD3OD) δ 1,16 (d, 0,5H), 1,40 (d, 2,5H), 1,64-2,25 (m, 4H), 2,61 (dd, 1H), 2,79 (dd, 1H), 3,37-3,59 (m, 1H), 3,59-3,74 (m, 1H), 3,77-3,92 (m, 1H), 4,29-4,47 (m, 1H), 4,47-5,02 (m, 4H), 5,48 (s, 0,5H), 5,66 (d, 1H), 5,68 (d, 0,5H), 6,79 (d, 1H), 7,17-7,52 (m, 5H), 7,48-7,62 (m, 1H), 7,68-7,83 (m, 1H). Analityczna HPLC: 15,98 min. LC-MS (ES+) m/e = 529,2 (MH+).
(2-benzyloksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-amid kwasu 1-[2-(4-amino-3-chloro-benzoiloamino)-propionylo]-pirolidyno-2-karboksylowego (98c)
Związek ten wytworzono z estru allilowego kwasu anti-(2-benzyloksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-karbaminowego (40) i związku 97a, zgodnie ze sposobem stosowanym dla związku 98a. Związek tytułowy wyodrębniono w postaci białej substancji stałej (186,6 mg, 46%).
1H-NMR (500 MHz, CD3OD) δ 1,30-1,52 (m, 3H), 1,76-2,33 (m, 4H), 2,41-2,59 (m, 1H), 2,90 (dd, 0,15H), 3,04 (dd, 0,85H), 3,44-3,75 (m, 1,5H), 3,82-3,95 (m, 1H), 4,27-4,42 (m, 2H), 4,42-4,56 (m, 0,5H), 4,56-4,66 (m, 4H), 5,42-5,55 (m, 1H), 6,79 (d, 1H), 7,21-7,42 (m, 4,6H), 7,54-7,63 (m, 1,4H), 7,76-7,83 (m, 0,65H), 8,60-8,68 (m, 0,35H). Analityczna HPLC: 15,19 min. LC-MS (ES+) m/e = 529,3 (MH+).
Ester allilowy kwasu 2-(etoksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-karbaminowego
Związek ten wytworzono z estru tert-butylowego kwasu 3-alliloksykarbonyloamino-4-hydroksy-masłowego, jak opisano dla związku (40), stosując etanol. Po chromatografii z układem heksan/octan etylu (95/5 do 80/20) otrzymano 0,94 g estru allilowego kwasu anti-2-(etoksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-karbaminowego (wyższy Rf), 1,96 g diastereomeru syn (niższy Rf) i 8,08 g mieszaniny diastereomerów (łączna wydajność 60%).
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) dla diastereomeru anti: δ 1,13-1,31 (m, 3H), 2,31-2,45 (m, 1H), 2,923,08 (m, 1H), 3,52-3,72 (m, 1H), 3,78-3,92 (m, 1H), 4,10-4,25 (m, 1H), 4,45-4,70 (m, 2H), 5,00 (bs, 1H), 5,12-5,45 (m, 3H), 5,80-5,95 (m, 1H); dla diastereomeru syn: 1,13-1,35 (m, 3H), 2,38-2,50 (m, 1H), 2,75-2,92 (m, 1H), 3,60-3,73 (m, 1H), 3,82-3,95 (m, 1H), 4,40-4,70 (m, 3H), 5,10-5,52 (m, 4H), 5,80-5,94 (m, 1H); LC-MS: m/z = 230 (M+H+) dla obydwu diastereomerów.
PL 204 619 B1 (2-etoksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-amid kwasu 1-[2-(4-amino-3-chloro-benzoilo-amino)-propionylo]-pirolidyno-2-karboksylowego (98d)
Związek wytworzono z estru allilowego kwasu (2-etoksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-karbaminowego i związku 97a, zgodnie ze sposobem stosowanych dla związku 98a. Związek tytułowy wyodrębniono w postaci białej substancji stałej (175 mg, 77% wydajności).
1H-NMR (500 MHz, CD3OD) δ 1,13 (t, 0,5H), 1,23 (t, 2,5H), 1,36 (d, 0,5H), 1,44 (d, 2,5H), 1,75 -2,38 (m, 4H), 2,56 (dd, 1H), 2,76 (dd, 1H), 3,45-3,97 (m, 5H), 4,47 (dd, 1H), 4,59-4,67 (m, 1H), 4,74 (q, 1H), 5,55 (d, 0,2H), 5,56 (d, 0,8H), 6,75-6,82 (m, 1H), 7,56 (dd, 1H), 7,77 (d, 1H), 8,39 (d, 1H). Analityczna HPLC: 8,17. LC-MS (ES+) m/e = 467, 4 (MH+).
Ester allilowy kwasu (2-cyklopentyloksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-karbaminowego
Związek wytworzono z estru tert-butylowego kwasu 3-alliloksykarbonyloamino-4-hydroksy-masłowego, jak opisano dla związku 40, przy użyciu cyklopentanolu. Związek tytułowy otrzymano w postaci mieszaniny diastereomerów. Po szybkiej chromatografii kolumnowej z ukł adem heksany/EtOAc (90/10 do 80/20) otrzymano diastereomer syn związku tytułowego: diastereomer syn:
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ 1,5-2,0 (m, 8H), 2,45 (dd, 1H), 2,81 (dd, 0,9H), 3,0 (dd, 0,1H), 4,31 (m, 1H), 4,59 (m, 4H), 5,23 (m, 1H), 5,32 (m, 1H), 5,45 (s, 0,1H), 5,51 (s, 0,9H), 5,92 (m, 1H) ppm; diastereomer anti:
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ 1,50 (m, 2H), 1,67 (m, 6H), 2,36 (d, 1H), 2,8 (dd, 0,08H), 2,96 (dd, 0,92H), 4,13 (m, 1H), 4,25 (m, 1H), 4,55 (br, 2H), 5,20 (d, 1H), 5,30 (m, 2H), 5,43 (s, 0,92H), 5,5 (d, 0,08H), 5,89 (s, 1H) ppm.
(2-cyklopentyloksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-amid kwasu 1-[2-(4-amino-3-chlorobenzoiloamino)-propionylo]-pirolidyno-2-karboksylowego (98e)
Związek tytułowy (280 mg, 51% wydajności) wytworzono z estru allilowego kwasu (2-cyklo-pentyloksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-karbaminowego i związku 97a sposobem stosowanym do wytworzenia związku 98a.
1H-NMR (500 MHz, CD3OD) δ 1,38 (d, 0,5H), 1,44 (d, 2,5H), 1,49-2,35 (m, 12H), 2,47 (dd, 0,7H), 2,56 (dd, 0,3H), 2,75 (dd, 0,3H), 2,81-2,88 (m, 0,1H), 2,97 (dd, 0,6H), 3,47-3,76 (m, 0,2H), 3,82-3,96 (m, 1H), 4,10-4,40 (m, 2H), 4,40-4,46 (m, 1H), 5,44 (d, 0,5H), 5,50 (d, 0,2H), 5,65 (d, 0,3H), 6,79 (d, 1H), 7,54-7,64 (m, 1H), 7,78 (d, 1H), 8,21-8,31 (m, 1H). Analityczna HPLC: 15,02, 15,34 min. LC-MS (ES+) m/e = 507, 3 (MH+).
Ester allilowy kwasu (2-cykloheksyloksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-karbaminowego
Sposobem opisanym dla związku 40, z estru tert-butylowego kwasu 3-alliloksykarbonyloamino-4-hydroksy-masłowego i cykloheksanolu wytworzono związek tytułowy w postaci mieszaniny diastereomerów (bladożółty olej) (4,62 g, 85% wydajności). Po szybkiej chromatografii kolumnowej z układem heksany/EtOAc (90/10 do 80/20) otrzymano 394 mg (7% wydajności diastereomeru syn związku tytułowego.
PL 204 619 B1 1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ 1,11-2,09 (m, 10H), 2,35-2,61 (dd, 1H), 2,72-2,98 (dd, 10H, 3,60 -3,83 (m, 10H, 4,32-4,72 (m, 3H), 5,06-5,43 (m, 2H), 5,60 (d, 1H), 5,82-6,03 (m, 1H).
(2-cykloheksyloksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-amid kwasu 1-[2-(4-acetyloamino-3-chloro-benzoiloamino)-propionylo]-pirolidyno-2-karboksylowego (98f)
Związek tytułowy (121 mg, 33% wydajności) wytworzono z estru allilowego kwasu syn-(2-cykloheksyloksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-karbaminowego i związku 97b, zgodnie ze sposobem opisanym dla związku 98a.
1H-NMR (500 MHz, CD3OD) δ 1,06-1,61 (m, 9H), 1,61-2,37 (m, 7H), 2,22 (s, 3H), 2,52-2,81 (m, 2H), 3,49-3,78 (m, 2H), 3,84-3,97 (m, 1H), 4,42-4,57 (m, 1H), 4,57-4,69 (m, 1H), 5,67-5,81 (m, 1H), 7,72-7,89 (m, 1H), 7,89-8,12 (m, 2H). Analityczna HPLC: 9,84 min. LC-MS (ES+) m/e = 563, 3 (MH+).
(2-cykloheksyloksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-amid kwasu 1-[2-(4-amino-3-chloro-benzoiloamino)-propionylo]-pirolidyno-2-karboksylowego (98g)
Związek tytułowy (153 mg, 47% wydajności) wytworzono z estru allilowego kwasu syn-(2-cykloheksyloksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-karbaminowego i związku 97a, zgodnie ze sposobem opisanym dla związku 98a.
1H-NMR (500 MHz, CD3OD) δ 1,06-2,38 (m, 14H), 1,42 (d, 3H), 2,50-2,66 (m, 1H), 2,69-2,82 (dd, 1H), 3,06-3,75 (m, 2H), 3,80-3,94 (m, 1H), 4,40-4,52 (m, 1H), 4,57-4,65 (m, 1H), 4,70-4,80 (m, 1H), 5,72 (d, 1H), 6,71 (m, 1H), 7,50-7,63 (m, 1H), 7,78 (d, 0,6H), 8,42 (d, 0,4H). Analityczna
HPLC: 10,30 min. LC-MS (ES+) m/e = 521,2 (MH+).
(2-etoksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-amid kwasu 1-[2-(4-amino-3-chloro-benzoiloamino)-propionylo]-pirolidyno-2-karboksylowego (98h)
Wytworzony z estru allilowego kwasu (2-etoksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-karbaminowego i związku 97a, zgodnie ze sposobem stosowanym dla związku 98a. Związek tytułowy wyodrębniono w postaci białej substancji stałej (195 mg, 82% wydajności).
1H-NMR (500 MHz, CD3OD) δ 1,32-1,55 (m, 3H), 1,58-1,77 (m, 3H), 1,98-2,54 (m, 4H), 2,68 -2,76 (d, 0,3H), 2,79-2,88 (m, 0,7H), 2,96-3,10 (m, 0,7H), 3,18-3,27 (dd, 0,3H), 3,72-4,18 (m, 4H), 4,46-5,12 (m, 3H), 5,60 (s, 0,4H), 5,74-5,84 (m, 0,6H), 7,03 (d, 0,8H), 7,75-7,85 (m, 1H), 8,01 (d, 0,7H), 8,35 (d, 0,3H), 8,74 (d, 0,2H). Analityczna HPLC: 8,31 min. LC-MS (ES+) m/e = 467,3 (MH+).
PL 204 619 B1
Ester allilowy kwasu [5-okso-2-(tricyklo[3.3.1.10,0]dec-2-yloksy)-tetrahydro-furan-3-ylo]-karbaminowego
Związek tytułowy w postaci bladożółtego oleju (1,52 g, 61% wydajności) wytworzono z estru tert-butylowego kwasu 3-alliloksykarbonyloamino-4-hydroksy-masłowego, sposobem opisanym dla związku 40, stosując 2-adamantol (6,21 g, 5 równ.).
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ 1,38-2,22 (m, 14H), 2,40 (d, 0,2H), 2,53 (dd, 0,7H), 2,87 (dd, 0,7H), 2,87 (dd, 0,8H), 3,00-3,12 (m, 0,3H), 3,84-3,97 (m, 1H), 4,40-4,71 (m, 3H), 5,18-5,44 (m, 2H), 5,53-5, 69 (m, 1H), 5, 82-6,02 (m, 1H).
[5-okso-2-(tricyklo[3.3.1.10,0]dec-2-yloksy)-tetrahydro-furan-3-ylo]-amid kwasu 1-[2-(4-amino-3-chloro-benzoiloamino)-propionylo]-pirolidyno-2-karboksylowego (98i)
Wytworzony z estru allilowego kwasu [5-okso-2-(tricyklo [3. 3.1.10,0]dec-2-yloksy)-tetrahydro-furan-3-ylo]-karbaminowego i związku 97a, sposobem stosowanym do wytworzenia związku 98a. Związek tytułowy wyodrębniono w postaci białej substancji stałej (76 mg, 13% wydajności).
1H-NMR (500 MHz, CD3OD) δ 1,38-2,22 (m, 14H), 2,40 (d, 0,2H), 2,53 (dd, 0,7H), 2,87 (dd, 0,8H), 3,00-3,12 (m, 0,3H), 3,84-3,97 (m, 1H), 4,40-4,71 (m, 3H), 5,18-5,44 (m, 2H), 5,53-5,69 (m, 1H), 5,82-6,02 (m, 1H). Analityczna HPLC: 11,89 min. LC-MS (ES+) m/e = 573,2 (MH+).
(2-benzyloksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-amid kwasu 1-[2-(4-acetyloamino-5-chloro-2-metoksy-benzoiloamino)-propionylo]-pirolidyno-2-karboksylowego (98j)
Związek tytułowy (222 mg, 82% wydajności) wytworzono z estru tert-butylowego kwasu syn-{2-[2-(2-benzyloksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylokarbamoilo)-pirolidyn-1-ylo]-1-metylo-2-okso-etylo}-karbaminowego i związku 97c, zgodnie z procedurą stosowaną dla związku 98a.
1H-NMR (500 MHz, CD3OD) δ 1,23 (d, 0,6H), 1,42 (d, 2,4H), 1,72-2,27 (d, 4H), 2,23 (s, 3H), 2,63 (dd, 1H), 2,77-2,88 (m, 1H), 3,43-3,52 (m, 0,5H), 3,56-3,71 (m, 1,5H), 3,74-3,85 (m, 1H), 3,98 (s, 3H), 4,38-4,50 (m, 1,5H), 4,51-4,92 (m, 4,5H), 5,63-5,76 (m, 1H), 7,23-7,40 (m, 5H), 7,97 (s, 1H),
8,45 (d, 1H), 8,69-8,80 (m, 1H). Analityczna HPLC: 11,63 min. LC-MS (ES+) m/e = 601,2 (MH+).
Synteza (2-etoksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-amidu kwasu 1-[2-(4-amino-3-chloro-benzoiloamino)-propionylo]-pirolidyno-2-karboksylowego (98k)
175 mg (59%) związku tytułowego wytworzono z estru allilowego kwasu anti-(2-etoksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-karbaminowego i związku 97a, zgodnie ze sposobem stosowanym dla związku 98a.
1H-NMR (500 MHz, 1:1 CDCl3:CD3OD) δ 1,10-1,28 (m, 3H), 1,42 (d, 0,6H), 1,46 (d, 2,4H), 1,75 -2,45 (m, 4H), 2,45-2,70 (m, 1H), 2,80-3,05 (m, 1H), 3,50-3,95 (m, 4H), 4,20-4,75 (m, 3H), 4,75-4,90 (m, 1H), 5,32 (s, 0,8H), 5,38 (s, 0,2H), 6,80 (d, 1H), 7,55-7,84 (m, 2H). Analityczna HPLC: 10,47 min. LC-MS (ES+) m/e = 467,3 (M+H).
PL 204 619 B1
Synteza (2-etoksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-amidu (891) kwasu 1-[2-(4-amino-3,5-dichloro-benzoiloamino)-propionylo]-pirolidyno-2-karboksylowego
Związek tytułowy w ilości 158 mg (54% wydajności) wytworzono z estru allilowego kwasu (2-etoksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-karbaminowego i estru tert-butylowego kwasu 1-[2-(4-amino-3,5-dichloro-benzoiloamino)-propionylo]-pirolidyno-2-karboksylowego, zgodnie ze sposobem stosowanym dla związku 98a.
1H-NMR (500 MHz, 1:1 CDCl3:CD3OD) δ 1,08-1,30 (m, 3H), 1,32-1,53 (m, 3H), 1,72-2,44 (m, 4H), 2,40-3,05 (m, 2H), 3,50-3,97 (m, 4H), 4,25-4,70 (m, 3H), 4,70-4,86 (m, 1H), 5,33 (s, 0,4H),
5,47 (s, 0,1H), 5,56 (d, 0,4H), 5,62 (d, 0,1H), 7,50 (s, 1H), 7,80 (s, 1H). Analityczna HPLC: 10,84 min.
LC-MS (ES+) m/e = 501,2 (M+H).
(2-benzyloksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-amid kwasu 1-[2-(4-amino-3-chloro-benzoiloamino)-propionylo]-pirolidyno-2-karboksylowego (98m)
Związek tytułowy w ilości 230 mg (69% wydajności) wytworzono zgodnie z procedurą stosowaną dla związku 98a, stosując Cbz-Ala-D-Pro-OH.
1H-NMR (500 MHz, 1:1 CDCl3:CD3OD) δ 1,30 (d, 1,2H), 1,45 (d, 1,8H), 1,45 (d, 1,8H), 1,62-2,40 (m, 4H), 2,40-3,10 (m, 2H), 3,30-3,97 (m, 2H), 4,33-4,95(m, 5H), 5,30 (s, 0,5H), 5,68 (d, 0,5H), 6,80 (d, 1H), 7,25-7,95 (m, 7H). Analityczna HPLC: 11,56, 11,91 min. LC-MS (ES+) m/e = 529,2 (M+H).
(2-benzyloksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-amid kwasu 1-[2-(4-acetyloamino-3-chloro-benzoiloamino)-propionylo]-pirolidyno-2-karboksylowego (98n)
Związek tytułowy w ilości 210 mg wytworzono ze związku 97b i estru allilowego kwasu syn-(2-benzyloksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-karbaminowego, zgodnie z procedurą stosowaną dla związku 98a.
1H-NMR (500 MHz, 1:1 CDCl3:CD3OD) δ 1,33, (d, 0,6H), 1,44 (d, 2,4H), 1,68-2,40 (m, 4H), 2,26 (s, 3H), 2,55-3,05 (m, 2H), 3,40-3,90 (m, 2H), 4,20-4,95 (m, 5H), 5,68 (d, 0,8H), 5,84 (d, 0,2H), 7,15 -8,30 (m, 8H). Analityczna HPLC: 15,67 min., LC-MS (ES+): m/e = 571,1 (M+H+).
PL 204 619 B1
Ester allilowy kwasu (2-izopropoksy-5-okso-tetrahydrofuran-3-ylo)-karbaminowego
Związek tytułowy w ilości 3,80 g (81% wydajności) w postaci bezbarwnego oleju wytworzono, jak opisano dla związku 40, stosując izopropanol.
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ 1,10-1,35 (m, 6H), 2,32-2,60 (m,1H), 2,82 (dd, 0,5H), 3,02 (dd, 0,5H), 3,82-4,11 (m, 1H), 4,48-4,66 (m, 3H), 5,20-5,36 (m, 2H), 5,54 (dd, 1H), 5, 82-6, 05 (m, 1H). LC-MS (ES+): m/e 244,2 (M+H+).
(2-izopropoksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-amid kwasu 1-[2-(4-amino-3-chloro-benzoiloamino)-propionylo]-pirolidyno-2-karboksylowego (98o)
Związek tytułowy w ilości 200 mg (66% wydajności) wytworzono ze związku 97a i estru allilowego kwasu (2-izopropoksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-karbaminowego, zgodnie z procedurą stosowaną do wytworzenia związku 98a.
1H-NMR (500 MHz, 1:1 CDCl3:CD3OD) δ 1,05-1,35 (m, 6H), 1,35-1,50 (m, 3H), 1,70-2,45 (m, 4H), 2,45-3,05 (m, 2H), 3,55-4,10 (m, 3H), 4,15-4,88 (m, 4H), 5,48 (s, 0,4H), 5,58 (s, 0,1H), 5,64 (d, 0,4H), 5,70 (d, 0,1H), 6,78 (d, 1H), 7,58 (d, 1H), 7,80 (s, 1H). Analityczna HPLC: 12,19, 12,40 min.,
LC-MS (ES+): m/e = 581,2 (M+H)+.
(2-benzyloksy-5-okso-tetrahydrofuran-3-ylo)-amid kwasu 1-[2-(4-acetyloamino-3,5-dichloro-benzoiloamino)-propionylo]-pirolidyno-2-karboksylowego (98p)
Związek tytułowy w ilości 230 mg (72% wydajności) wytworzono z estru tert-butylowego kwasu 1-[2-(4-acetyloamino-3,5-dichloro-benzoiloamino)-propionylo]-pirolidyno-2-karboksylowego i estru allilowego kwasu syn-(2-benzyloksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-karbaminowego, zgodnie z procedurą stosowaną do wytworzenia związku 98a.
1H-NMR (500 MHz, 1:1 CDCl3: CD3OD) δ 1,36 (d, 0,6H), 1,47 (d, 2,4H), 1,68-2,47 (m, 4H), 2,23 (s, 3H), 2,60-3,15 (m, 2H), 3,40-3,90 (m, 2H), 4,15-4,95 (m, 5H), 5,68 (d, 0,8H), 5,84 (d, 0,2H), 7,20 -7,98 (m, 7H). Analityczna HPLC: 13,07. LC-MS (ES+): m/e = 605,1 (M+H)+.
(2-cyklopentyloksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-amid kwasu 1-[2-(4-acetyloamino-3-chloro-benzoiloamino)-propionylo]-pirolidyno-2-karboksylowego (98q)
Związek tytułowy w ilości 215 mg (69%) wytworzono ze związku 97b i estru allilowego kwasu (2-cyklopentyloksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-karbaminowego, zgodnie z procedurą stosowaną do wytworzenia związku 98a.
1H-NMR (500 MHz, 1:1 CDCl3: CD3OD) δ 1,90-2,35 (m, 4H), 2,24 (s, 3H), 2,40-3,10 (m, 2H), 3,50-3,95 (m, 3H), 4,15-4,90 (m, 3H), 5,44 (s, 0,55H), 5,56 (s, 0,15H), 5,64 (d, 0,22H), 5,71 (d, 0,08H), 7,70-8,25 (m, 3H). Analityczna HPLC: 12,13 min. LC-MS (ES+): m/e = 549,2 (M+H+).
PL 204 619 B1
Synteza (2-etoks-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-amid kwasu 1-[2-(4-acetyloamino-3-chloro-benzoiloamino)-propionylo]-pirolidyno-2-karboksylowego (98r)
Związek tytułowy w ilości 68 mg (24%) wytworzono ze związku 97b i estru allilowego kwasu syn-(2-etoksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)karbaminowego, zgodnie z procedurą stosowaną do wytwarzania związku 98a.
1H-NMR (500 MHz, CDCl3:CD3OD) δ 1,13 (t, 0,6H), 1,28 (t, 2,4H), 1,38 (d, 0,6H), 1,48 (d, 2,4H), 1,75-2,40 (m, 4H), 2,22 (s, 3H), 2,55-2,88 (m, 2H), 3,50-3,92 (m, 4H), 4,40-4,90 (m, 3H), 3,57 (d, 0,8H), 5,61 (d, 0,2H), 7,60-8,20 (m, 3H). Analityczna HPLC: 8,64 min. LC-MS (ES+): m/e = 509,2 (M+H+).
Wytwarzanie estru allilowego kwasu (2-cyklopentylometoksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-karbaminowego
Związek tytułowy w ilości 2,98 g (52% łącznej wydajności) w postaci mieszaniny epimerów wytworzono z estru tert-butylowego kwasu 3-alliloksykarbonyloamino-4-hydroksy-masłowego, jak opisano dla związku 40, stosując cyklopentylo-metanol (6,5 ml, 60 mmola). Po oczyszczeniu otrzymano 0,97 g (17% wydajności) 4(S), 5(R) w postaci bezbarwnego oleju.
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ 1,19 (m, 2H), 1,54 (m, 4H), 1,71 (m, 2H), 2,16 (m, 1H), 2,44 (dd, J = 17,2, 10,4 Hz, 1H), 2,82 (dd, J = 17,2, 8,4 Hz, 1H), 3,44 (dd, J = 9,3, 7,2 Hz, 1H), 3,71 (dd, J = 9,3, 7,2 Hz, 1H), 4,57 (m, 3H), 5,32 (m, 3H), 5,41 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 5,91 (ddt, J = 17,1, 10,4, 5 Hz, 1H) ppm. LC-MS (ES+): m/e = 284.
Wyodrębniono również mieszaninę epimerów (0,66 g, 11% wydajności) i epimer 4(S), 5(S) (1,35 g, 24% wydajności) w postaci woskowatej substancji stałej.
1H-NMR (500 MHz, CDCI3) δ 1,20 (m, 2H), 1,54 (m, 4H), 1,69 (m, 2H), 2,10 (m, 1H), 2,37 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 2,97 (dd, J = 18,0, 7,6 Hz, 1H), 3.42 (dd, J = 7,3, 1,7 Hz, 1H), 3,49 (m, 2H), 3,64 (dd, J = 9,9, 7,3 Hz, 1H), 4,19 (br, 1H), 4,55 (m, 2H), 5,25 (m, 2H), 5,36 (s, 1H), 5,87 (m, 1H) ppm. LC-MS (ES+): m/e = 284 (M+H).
(2-cyklopentylometoksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-amid kwasu 1-[2-(4-amino-3-chloro-benzoiloamino)-propionylo]-pirolidyno-2-karboksylowego (98s)
Związek tytułowy w ilości 195 g (51% wydajności) wytworzono ze związku 97a i estru allilowego kwasu syn-(2-cyklopentylometoksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-karbaminowego, zgodnie z procedurą stosowaną do wytworzenia związku 98a.
1H-NMR (500 MHz, CDCl3:CD3OD) δ 1,15-1,90 (m, 11H), 1,90-2,40 (m, 5H), 2,55-2,78 (m, 2H), 3,50-3,90 (m, 4H), 4,38-4,92 (m, 3H), 3,53 (d, 0,8H), 5,57 (d, 0,2H), 6,78 (d, 1H), 7,50-8,15 (m, 2H). Analityczna HPLC: 10,48 min. LC-MS (ES+): m/e = 521,2 (M+H+).
Ester allilowy kwasu (5-okso-2-(3-fenylo-propoksy)-tetrahydrofuran-3-ylo)-karbaminowego
Związek tytułowy w ilości 1,15 g (32% wydajności) wytworzono z estru tert-butylowego kwasu 3-alliloksykarbonylo-amino-4-hydroksy-masłowego, jak opisano dla związku 40, stosując 3-fenylopropanol.
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ 1,82-2,05 (m, 2H), 2,38 (dd, 1H), 2,68 (m, 2H), 2,82 (dd, 1H), 3,55-3,65 (m, 1H), 3,82-3,92 (m, 1H), 4,48-4,72 (m, 3H), 5,12-5,59 (m, 3H), 5,82-6,03 (m, 1H), 7,117,45 (m, 5H). Analityczna HPLC: 9,08 min. LC-MS (ES+) m/e = 320,2 (M+H).
PL 204 619 B1 (5-okso-2-(3-fenylo-propoksylo)-tetrahydro-furan-3-ylo)-amid kwasu 1-[2-(4-amino-3-chloro-benzoiloamino)-propionylo]-pirolidyno-2-karboksylowego (98t)
Związek tytułowy w ilości 200 mg (57% wydajności) wytworzono ze związku 97b i estru allilowego kwasu syn-(5-okso-2-(3-fenylo-propoksylo)-tetrahydro-furan-3-ylo)-karbaminowego, zgodnie z procedurą stosowaną do wytworzenia związku 98a.
1H-NMR (500 MHz, 1:1 CDCl3:CD3OD) δ 1,34 (d, 0,6H), 1,44 (d, 2,4H), 1,75-2,40 (m, 6H), 2,50 -2,95 (m, 4H), 3,47-3,95 (m, 4H), 4,38-4,82 (m, 3H), 5,52 (d, 0,8H), 5,56 (d, 0,2H), 6,75-8,25 (m, 8H). Analityczna HPLC: 10,79 min. LC-MS (ES+) m/e = 557,2 (M+H+).
Synteza (2-cyklopentylometoksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-amid kwasu 1-[2-(4-acetyloamino-3-chloro-benzoiloamino)-propionylo]-pirolidyno-2-karboksylowego (98u)
Związek tytułowy w ilości 215 mg (67% wydajności) wytworzono ze związku 97b i estru allilowego kwasu syn-(2-cyklopentylometoksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-karbaminowego, zgodnie z procedurą stosowaną do wytworzenia związku 98a.
1H-NMR (500 MHz, 1:1 CDCl3: CD3OD) δ 1,38 (d, 0,6H), 1,47 (d, 2,4H), 1,11-1,88 (m, 8H), 1,92-2,40 (m, 5H), 2,24 (s, 3H), 2,53-2,86 (m, 2H), 3,30-3,90 (m, 4H), 4,38-4,89 (m, 3H), 5,53 (d, 0,8H), 5,60 (d, 0,2H), 7,68-8,22 (m, 3H). Analityczna HPLC: 9,90 min. LC-MS (ES+) m/e = 563,3 (M+H+).
(5-okso-2-(3-fenylo-propoksylo)-tetrahydro-furan-3-ylo)-amid kwasu 1-[2-(4-acetyloamino-3-chloro-benzoiloamino)-propionylo]-pirolidyno-2-karboksylowego (98v)
Związek tytułowy w ilości 238 mg (75% wydajności) wytworzono estru tert-butylowego kwasu 1-[2-(4-acetyloamino-3-chloro-benzoiloamino)-propionylo]-pirolidyno-2-karboksylowego i estru allilowego kwasu syn-[5-okso-2-(3-fenylo-propoksylo)-tetrahydrofuran-3-ylo)-karbaminowego, zgodnie z procedurą stosowaną do wytworzenia związku 98a.
1H-NMR (500 MHz, 1,1 CDCl3:CD3OD) δ 1,33 (d, 0,6H), 1,56 (d, 2,4H), 1,78-2,45 (m, 6H), 2,27 (s, 3H), 2,53-2,97 (m, 4H), 3,53-3,94 (m, 4H), 4,47-4,86 (m, 3H), 5,53 (d, 0,8H), 5,62 (d, 0,2H), 7,11 -8,26 (m, 8H). Analityczna HPLC: 10,27 min. LC-MS (ES+) m/e = 599,2 (M+H+).
(2-benzyloksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-amid kwasu 1-[2-(4-amino-3-trifluorometylo-benzoiloamino)-propionylo]-pirolidyno-2-karboksylowego (98w)
Związek tytułowy w ilości 56 mg (48% wydajności) wytworzono z estru tert-butylowego kwasu {2-[2-(2-benzyloksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylokarbamoilo)-pirolidyn-1-ylo]-1-metylo-2-okso-etylo}PL 204 619 B1
-karbaminowego i kwasu 4-amino-3-trifluorometylo-benzoesowego, zgodnie z procedurą stosowaną do wytworzenia związku 98a.
1H-NMR (500 MHz, 1:1 CDCl3:CD3OD) δ 1,20-1,55 (m, 3H), 1,75-2,50 (m, 4H), 2,50-3,10 (m, 2H), 3,50-4,00 (m, 2H), 4,30-5,00 (m, 5H), 5,42 (s, 0,4H), 5,51 (s, 0,2H), 5,62 (d, 0,3H), 5,78 (d, 0,1H), 6,84 (d, 1H), 7,20-8,15 (m, 7H). Analityczna HPLC: 14,90, 15,20 min. LC-MS (ES+) m/e = 563, 2 (M+H+).
(2-benzyloksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-amid kwasu 1-[2-(3-chloro-4-dimetyloamino-benzoiloamino)-propionylo]-pirolidyno-2-karboksylowego (98x)
Związek tytułowy w ilości 82 mg (44% wydajności) wytworzono z estru tert-butylowego kwasu {2-[2-(2-benzyloksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylokarbamoilo)-pirolidyn-1-ylo]-1-metylo-2-okso-etylo}-karbaminowego i kwasu 3-chloro-4-dimetyloamino-benzoesowego, zgodnie z procedurą stosowaną do wytworzenia związku 98a.
1H-NMR (500 MHz, 1:1 CDCl3:CD3OD) δ 1,18-1,53 (m, 3H), 1,70-2,40 (m, 4H), 2,55-3,10 (m, 2H), 2,84 (s, 6H), 3,45-3,94 (m, 2H), 4,25-4,95 (m, 5H), 5,46 (s, 0,3H), 5,51 (s, 0,2H), 5,63 (d, 0,4H), 5,73 (d, 0,1H), 7,05 (d, 1H), 7,15-7,95 (m, 7H). Analityczna HPLC: 11,85, 12,19 min. LC-MS (ES+) m/e = 557,3 (M+H+).
(2-benzyloksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-amid kwasu 1-[2-(4-dimetyloamino-3,5-difluoro-benzoiloamino)-propionylo]-pirolidyno-2-karboksylowego (98y)
Związek tytułowy w ilości 106 mg (65% wydajności) wytworzono z estru tert-butylowego kwasu {2-[2-(2-benzyloksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylokarbamoilo)-pirolidyn-1-ylo]-1-metylo-2-okso-etylo}-karbaminowego i kwasu 4-dimetyloamino-3,5-dichloro-benzoesowego, zgodnie z procedurą stosowaną do wytworzenia związku 98a.
1H-NMR (500 MHz, 1:1 CDCl3:CD3OD) δ 1,10-1,55 (m, 3H), 1,75-2,30 (m, 4H), 2,45-3,15 (m, 2H), 2,84 (s, 6H), 3,40-3,95 (m, 2H), 4,15-4,95 (m, 5H), 5,47 (s, 0,35H), 5,54 (s, 0,15H), 5,67 (d, 0,4H), 5,77 (d, 0,1H), 7,20-7,70 (m, 7H). Analityczna HPLC: 12,21, 12,51 min. LC-MS (ES+) m/e = 559, 2 (M+H+).
(2-benzyloksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-amid kwasu 1-[2-(4-amino-2,3,5,6-tetrafluoro-benzoiloamino)-propionylo]-pirolidyno-2-karboksylowego (98z)
Związek tytułowy w ilości 58 mg (73% wydajności) wytworzono z estru tert-butylowego kwasu {2-[2-(2-benzyloksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylokarbamoilo)-pirolidyn-1-ylo]-1-metylo-2-okso-etylo}-karbaminowego i kwasu 4-amino-2,3,5,6-tetrafluoro-benzoesowego, zgodnie z procedurą stosowaną do wytworzenia związku 98a.
PL 204 619 B1 1H-NMR (500 MHz, 1:1 CDCl3:CD3OD) δ 1,30-1,50 (m, 3H), 1,62-2,35 (m, 4H), 2,45-3,12 (m, 2H), 3,50-3,90 (m, 2H), 4,20-4,95 (m, 5H), 5,42 (s, 0,4H), 5,52 (s, 0,1H), 5,64 (d, 0,4H), 5,82 (d, 0,1H), 7,25-7,65 (m, 5H) Analityczna HPLC: 16,56, 16,90 min. LC-MS (ES+) m/e = 567,2 (M+H+).
(2-benzyloksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-amid kwasu 1-{2-[3-chloro-4-(2,2-dimetylopropionyloamino)-benzoilo-amino]-propionylo}-pirolidyno-2-karboksylowego (98aa)
Do zawiesiny związku 98b (100 mg, 0,19 mmola) i poli(4-winylopirydyny) (200 ml) dodano chlorku piwaloilu (70 gl, 0,57 mmola). Wytworzoną zawiesinę mieszano przez noc w temperaturze pokojowej, przesączono i rozcieńczono EtOAc (25 ml). Warstwę organiczną przemyto 10% roztworem
NaHCO3 (2 x 25 ml), nasyconym roztworem NaCl (1 x 25 ml), wysuszono (MgSO4) i odparowano do suchości. Po chromatografii otrzymano 98 mg związku tytułowego (85% wydajności).
1H-NMR (500 MHz, 1:1 CDCl3:CD3OD) δ 1,10-1,55 (m, 3H), 1,38 (s, 9H), 1,65-2, 40 (m, 4H),
2,60-3,10 (m, 2H), 3,46-3,88 (m, 2H), 4,20-4,95 (m, 5H), 5,62 (d, 0,8H), 5,78 (d, 0,2H), 7,15-8,30 (m, 8H). Analityczna HPLC: 11,82 min. LC-MS (ES+) m/e = 613,2 (M+H+).
(2-benzyloksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-amid kwasu 1-[2-(3-chloro-4-propionylo-amino)-benzoiloamino)-propionylo]-pirolidyno-2-karboksylowego (98ab)
Związek tytułowy w ilości 104 mg (95% wydajności) wytworzono ze związku 98b i chlorku propionylu, zgodnie z procedurą stosowaną do wytworzenia związku 98aa.
1H-NMR (500 MHz, 1:1 CDCl3:CD3OD) δ 1,16 (t, 0,6H), 1,8 (d, 0,6H), 1,27 (t, 2,4H), 1,38 (d, 2,4H), 1,72-2,35 (m, 4H), 2,45-2,58 (m, 2H), 2,58-3,05 (m, 2H), 3,45-3,85 (m, 2H), 4,20-4,88 (m, 5H), 5,64 (d, 0,8H), 5,76 (d, 0,2H), 7,20-8,35 (m, 5H). Analityczna HPLC: 9,89 min. LC-MS (ES+) m/e = 585,2 (M+H+).
(2-benzyloksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-amid kwasu 1-[2-(3-chloro-4-fenyloacetyloamino)-benzoiloamino)-propionylo]-pirolidyno-2-karboksylowego (98ac)
Związek tytułowy w ilości 85 mg (77% wydajności) wytworzono ze związku 98b i chlorku fenyloacetylu, zgodnie z procedurą stosowaną do wytworzenia związku 98aa.
1H-NMR (500 MHz, 1:1 CDCl3 CD3OD) δ 1,18 (d, 0,6H), 1,40 (d, 2,4H), 1,72-2,38 (m, 4H), 2,58 -3,05 (m, 2H), 3,46-3,78 (m, 2H), 3,85 (s, 2H), 4,18-4,92 (m, 5H), 5,63 (d, 0,8H), 5,75 (d, 0,2H), 7,15 -8,34 (m, 13H). Analityczna HPLC: 11,63 min. LC-MS (ES+) m/e = 647,2 (M+H+).
PL 204 619 B1
(2-benzyloksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-amid kwasu 1-[2-(3-chloro-4-metylo-butyryloamino)-benzoiloamino)-propionylo]-pirolidyno-2-karboksylowego (98ad)
Związek tytułowy w ilości 60 mg (58% wydajności) wytworzono ze związku 98b i chlorku izowalerylu, zgodnie z procedurą stosowaną do wytworzenia związku 98aa.
1H-NMR (500 MHz, 1:1 CDCl3:CD3OD) δ 1,07 (d, 5H), 1,15 (d, 0,8H), 1,27 (d, 1H), 1,45 (d, 2,2H), 1,67-2,30 (m, 5H), 2,34 (d, 2H), 2,58-3,05 (m, 2H), 3,48-3,88 (m, 2H), 4,10-4,98 (m, 5H), 5,68 (d, 0,7H), 5,78 (m, 0,3H), 7,18-8,33 (m, 8H). Analityczna HPLC: 10,74 min. LC-MS (ES+) m/e = 613,2 (M+H+).
(2-etoksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-amid kwasu 1-[2-(4-metoksy-3,5-dimetylo-benzoiloamino)-propionylo]-pirolidyno-2-karboksylowego (98ae)
Związek tytułowy w ilości 174 mg (81% wydajności) wytworzono z estru tert-butylowego kwasu 1-[2-(4-metoksy-3,5-dimetylo-benzoiloamino)-propionylo]-pirolidyno-2-karboksylowego i estru allilowego kwasu syn-(2-etoksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-karbaminowego, zgodnie z procedurą stosowaną do wytworzenia związku 98a.
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ 1,04 (t, 0,45H), 1,27 (t, 2,55H), 1,34-1,45 (m, 3H), 1,95-2,45 (m, 10H), 2,78-2,84 (m, H), 3,60-3,90 (m, 8H), 4,50-4,70 (m, 2H), 4,90-4,94 (m, H), 5,45 (d, 0,85H), 5,61 (d, 0,15H), 6,99 (d, H), 7,15 (d, H), 7,45 (s, 2H); czas retencji w analitycznej HPLC: 10,09 min., LC-MS (ES+) m/e = 476 (M+H+).
(2-etoksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-amid kwasu 1-[2-(4-metoksy-3,5-dimetylo-benzoiloamino)-propionylo]-pirolidyno-2-karboksylowego (98af)
Związek tytułowy w ilości 168 mg (77% wydajności) wytworzono z estru tert-butylowego kwasu 1-[2-(4-metoksy-3,5-dimetylo-benzoiloamino)-propionylo]-pirolidyno-2-karboksylowego i estru allilowego kwasu anti-(2-etoksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-karbaminowego, zgodnie z procedurą stosowaną do wytworzenia związku 98a.
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ 1,10-1,35 (m, 3H), 1,35-1,60 (m, 3H), 1,90-2,45 (m, 10H), 2,60 -3,00 (m, H), 3,55-3,95 (m, 8H), 4,15-4,60 (m, 2H), 4,83-5,00 (m, H), 5,29 (s, H), 6,95-7,06 (m, H), 7,50 (s, 2H), 7,92 (d, H); czas retencji w analitycznej HPLC: 10,14 min., LC-MS (ES+) m/e = 476 (M+H+).
100
PL 204 619 B1
(2-benzyloksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-amid kwasu 1-[2-(4-metoksy-3,5-dimetylo-benzoiloamino)-propionylo]-pirolidyno-2-karboksylowego (98ag)
Związek tytułowy w ilości 406 mg (71% wydajności) wytworzono z estru tert-butylowego kwasu 1-[2-(4-metoksy-3,5-dimetylo-benzoiloamino)-propionylo]-pirolidyno-2-karboksylowego i estru allilowego kwasu syn-(2-benzyloksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-karbaminowego (40), zgodnie z procedurą stosowaną do wytworzenia związku 98a.
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ 1,09 (d, 0,6H), 1,35 (m, 2,4H), 1,90-2,20 (m, 3H), 2,22-2,50 (m, 10H), 2,84-2,90 (m, H), 3,52-3,62 (m, 1,6H), 3,65-3,80 (m, 3,4H), 4,10-4,40 (m, H), 4,50-4,75 (m, 3H), 4,82-4,95 (m, 2H), 5,54 (d, 0,8H), 5,80 (d, 0,2H), 6,87 (d, H), 7,10-7,40 (m, 6H), 7,45 (s, 2H); czas retencji w analitycznej HPLC: 16,71 min., LC-MS (ES+) m/e = 538 (M+H+).
(2-benzyloksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-amid kwasu 1-[2-(4-alliloksy-3,5-dimetylo-benzoiloamino)-propionylo]-pirolidyno-2-karboksylowego (98ah)
Związek tytułowy w ilości 264 mg (46% wydajności) wytworzono z estru tert-butylowego kwasu 1-[2-(4-alliloksy-3,5dimetylo-benzoiloamino)-propionylo]-pirolidyno-2-karboksylowego i związku 40, zgodnie z procedurą stosowaną do wytworzenia związku 98a.
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ 1,09-1,43 (m, 3H), 1,90-2,20 (m, 3H), 2,20-2,38 (m, 7H), 2,38-2,52 (m, H), 2,80-2,95 (m, H), 3,52-3,67 (m, H), 3,70-3,80 (m, H), 4,10-4,40 (m, 2H), 4,40-4,95 (m, 5H), 5,26-5,55 (m, 3H), 6,00-6,14 (m, H), 6,87 (d, H), 7,10-7,70 (m, 8H); czas retencji w analitycznej HPLC: 18,56 i 18,92 min., LC-MS (ES+) m/e = 564 (M+H+).
Ester allilowy kwasu {2-[1R-(2S-izopropylo-5R-metylo-cyklo-heksyloksy)]-5-okso-tetra-hydro-furan-3-ylo}-karbaminowego
Związek ten wytworzono z estru tert-butylowego kwasu 3-alliloksykarbonyloamino-4-hydroksymasłowego, jak opisano dla związku 40, stosując (1R,2S,5R)-(-)-mentol i otrzymano 0,23 g diastereomeru syn (niższy Rf) związku tytułowego i 4,25 g mieszaniny diastereomerów anti/syn (łączna wydajność 67%).
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) mieszanina: δ 0,70-1,05 (m, 13H), 1,20-1,47 (m, 2H), 1,60-1,80 (m, 2H), 1,94-2,20 (m, 2H), 2,35-2,50 (m, H), 2,82-3,04 (m, H), 3,40-3,61 (m, H), 4,43-4,70 (m, 3H), 5,15-5,35 (m, 2H), 5,48-5,61 (m, H), 5,90-5,94 (m, H); dla diastereomeru syn: 0,70-1,05 (m, 13H), 1,20-1,47 (m, 2H), 1,60-1,80 (m, 2H), 1,94-2,18 (m, H), 2,82-2,92 (m, H), 3,54-3,61 (m, H), 4,45-4,70 (m, 3H), 5, 18-5, 325 (m, 2H), 5,58-5,61 (m, H), 5, 90-5, 93 (m, H); LC-MS: m/z = 340 (M+H+) dla mieszaniny diastereomerów anti/syn.
PL 204 619 B1
101
Kwas 4-benzyloksy-3,5-dimetylo-benzoesowy
Związek tytułowy w ilości 2,43 g (wydajność 56%) wytworzono sposobem stosowanym do syntezy kwasu 4-alliloksy-3,5-dimetylo-benzoesowego.
1H-NMR (500 MHz, CDCl3): δ 4,87 (s, 2H), 7,36-7,48 (m, 5H), 7,92 (s, 2H); LC-MS: m/z = 255 (M-H+).
{2-[1R-(2S-izopropylo-5R-metylo-cykloheksyloksy)]-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo}-amid kwasu 1-[2-(4-benzyloksy-3,5-dimetylo-benzoiloamino)-propionylo]-pirolidyno-2-karboksylowego (98ai)
Związek tytułowy w ilości 130 mg (wydajność 39%) wytworzono z estru tert-butylowego kwasu 1-[2-(4-benzyloksy-3,5-dimetylo-benzoiloamino)-propionylo]-pirolidyno-2-karboksylowego i estru allilowego kwasu {2-[1R-(2S-izopropylo-5R-metylo-cykloheksyloksy)]-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo]-karbaminowego, zgodnie z procedurą stosowano do wytworzenia związku 98a.
1H-NMR (500 MHz, CDCl3): δ 0,45-1,10 (m, 12H), 1,15-1,90 (m, 8H), 1,90-2,45 (m, 12H), 2,80 -2,84 (m, H), 3,50-3,85 (m, 3H), 4,45-4,70 (m, 2H), 4,80-4,95 (m, 3H), 5,62 (d, H), 7,05 (d, H), 7,17 (d, H), 7,30-7,60 (m, 7H), 7,62-7,75 (m, H); czas retencji w analitycznej HPLC: 15,90 i 16,08 min.,
LC-MS: m/z = 662 (M+H+).
{2-[1R-(2S-izopropylo-5R-metylo-cykloheksyloksy)]-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo}-amid kwasu 1-[2-(4-hydroksy-3,5-dimetylo-benzoiloamino)-propionylo]-pirolidyno-2-karboksylowego (98aj)
Roztwór {2-[1R-(2S-izopropylo-5R-metylo-cykloheksyloksy)]-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo}-amidu kwasu 1-[2-(4-benzyloksy-3,5-dimetylo-benzoiloamino)-propionylo]-pirolidyno-2-karboksylowego (110 mg, 0,17 mmola) w octanie etylu (2 ml) mieszano z 10% palladem na węglu (20 mg) w atmosferze wodoru przez 24 godziny, po czym przesączono przez Celite i odparowano pod próżnią. Otrzymaną pozostałość oczyszczono metodą chromatografii z układem CH2Cl2/metanol (99/1 do 96/4) i otrzymano 58 mg związku tytułowego.
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ 0,70-1,00 (m, 10H), 1,20-1,80 (m, 10H), 1,90-2,40 (m, 11H), 2,82 -2,86 (m, H), 3,57-3,78 (m, 3H), 4,55-4,67 (m, 2H), 4,90-4,94 (m, H), 5,29 (s, H), 5,62 (d, H), 6,90 (d, H), 7,14 (d, H), 7,42 (s, 2H); czas retencji w analitycznej HPLC: 12,84 i 13,05 min., LC-MS: m/z = 572 (M+H+).
(2-benzyloksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-amid kwasu 1-[2-(4-hydroksy-3,5-dimetylobenzoiloamino)-propionylo]-pirolidyno-2-karboksylowego (98ak)
Do roztworu związku 98ah (230 mg, 0,41 mmola) w CH2Cl2 (10 ml) przez 20 godzin w temperaturze pokojowej dodawano DMBA (65 mg, 0,42 mmola) i Pd(PPh3)4 (50 mg). Mieszaninę zatężono do suchości pod próżnią, oczyszczono metodą szybkiej chromatografii z układem CH2Cl2/metanol (99,5/0,5 do 97/3) i otrzymano 181 mg związku tytułowego.
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ 1,08 (d, 0,75H), 1,20-1,35 (m, 2,2H), 1,70-2,50 (m, 12H), 2,802,90 (m, H), 3,50-3,65 (m, H), 3,70-3,80 (m, H), 4,10-4,25 (m, H), 4,35-4,98 (m, 3H), 5,53 (d, 0,75H),
102
PL 204 619 B1
5,85 (d, 0,25H), 6,81 (d, H), 7,13-7,60 (m, 8H); czas retencji w analitycznej HPLC: 10,38 i 10,56 min.,
LC-MS: m/z = 524 (M+H+).
(2-benzyloksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-amid kwasu 1-[2-(4-dimetyloamino-benzoiloamino)-propionylo]-pirolidyno-2-karboksylowego (98al)
Związek tytułowy w ilości 68 mg (45% wydajności) wytworzono z estru tert-butylowego kwasu 1-[2-(4-dimetyloamino-benzoiloamino)propionylo]-pirolidyno-2-karboksylowego i estru allilowego kwasu syn-(2-benzyloksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-karbaminowego, zgodnie z procedurą stosowaną do wytworzenia związku 98a.
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ 1,04 (d, 0,75H), 1,35 (d, 2,25H), 1,80-2,50 (m, 5H), 2,75-3,20 (m, 8H), 3,45-3,75 (m, 2H), 4,05-4,20 (m, 0,5H), 4,30-4,80 (m, 3,5H), 4,80-4,95 (m, 1,5H), 5,52 (d, H),
5,75-6,00 (m, 0,5H), 6,60-6,90 (m, 3H), 7,10-7,50 (m, 4H), 7,50-7,80 (m, 2H); czas retencji w analitycznej HPLC: 10,46 min., LC-MS: m/z = 523 (M+H+).
{2R-[1R-(2S-izopropylo-5R-metylo-cykloheksyloksy)]-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo}-amid kwasu 1-[2-(4-amino-3-chloro-benzoiloamino)-propionylo]-pirolidyno-2-karboksylowego (98am)
Związek tytułowy w ilości 103 mg (67% wydajności) wytworzono z estru tert-butylowego kwasu 1-[2-(4-amino-3-chloro-benzoiloamino)-propionylo]-pirolidyno-2-karboksylowego (97a) i estru allilowego kwasu syn-{2-[1R-(2S-izopropylo-5R-metylo-cykloheksyloksy)]-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo}-karbaminowego, zgodnie z procedurą stosowaną do wytworzenia związku 98a.
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ 0,70-1,10 (m, 12H), 1,20-1,50 (m, 5H), 1,50-1,85 (m, 2H), 1,90 -2,30 (m, 5H), 2,75-2,85 (m, H), 3,50-3,70 (m, 2H), 3,70-3,82 (m, H), 4,20-4,65 (m, 4H), 4,80-4,95 (m, H), 5,61 (d, H), 6, 70-6,73 (m, H), 6,95 (d, H), 7,15 (d, H), 7,49-7,51 (m, H), 7,73 (s, H); czas retencji w analitycznej HPLC: 12,88 min., LC-MS: m/z = 577 (M+H+).
PL 204 619 B1
103
Ester allilowy kwasu {2-[1S-[2R-izopropylo-5S-metylo-cyklo-heksyloksy)]-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo}-karbaminowego
Związek ten wytworzono z estru tert-butylowego kwasu 3-alliloksykarbonyloamino-4-hydroksy-masłowego, jak opisano dla związku 40, stosując (1S,2R,5S)-(+)-mentol. Otrzymano 855 mg diastereomeru anti (wyższy Rf), 503 mg diastereomeru syn (niższy Rf) i 459 mg mieszaniny diastereomerów anti/syn (łączna wydajność 66%).
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) diastereomer anti: δ 0,74-1,00 (m, 12H), 1,20-1,45 (m, 2H), 1,58 -1,72 (m, 2H), 1,98-2,12 (m, 2H), 2,18-2,40 (m, H), 2,98-3,03 (m, H), 3,49-3,54 (m, H), 4,17 (br, H), 4,59 (br, 2H), 4,97 (br, H), 5,22-5,33 (m, 2H), 5,58 (s, H), 5,87-5,93 (m, H); dla diastereomeru syn: 0,75-1,02 (m, 12H), 1,25-1,45 (m, 2H), 1,57-1,70 (m, 2H), 2,00-2,16 (m, 2H), 2,40-2,52 (m, H), 2,78 -2,90 (m, H), 3,40-3,50 (m, H), 4,58 (br, 2H), 5,24-5,35 (m, 2H), 5,51-5,52 (d, H), 5,85-5,98 (m, H); LC-MS: m/z = 340 (M+H+) dla obydwu diastereomerów.
{2R-[1S-(2R-izopropylo-5S-metylo-cykloheksyloksy)]-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo}-amid kwasu 1-[2-(4-amino-3-chloro-benzoiloamino)-propionylo]-pirolidyno-2-karboksylowego (98an)
Związek tytułowy w ilości 88 mg (50% wydajności) wytworzono ze związku 97a i estru allilowego kwasu syn-{2-[1S-(2R-izopropylo-5S-metylo-cykloheksyloksy)]-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo}-karbaminowego, zgodnie z procedurą stosowaną do wytworzenia związku 98a.
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ 0,70-1,10 (m, 12H), 1,20-1,50 (m, 14H), 1,50-1,70 (br, 2H), 1,90 -2,25 (m, 4H), 2,27-2,37 (m, H), 2,40-2,50 (m, H), 2,75-2,79 (m, H), 3,35-3,80 (m, 3H), 4,20-4,57 (m, 3H), 4,60-4,70 (m, H), 4,88-4,92 (m, H), 5,53 (d, H), 6,71-6,75 (m, H), 6,90 (d, H), 7,20 (d, H), 7,50 -7,53 (m, H), 7,75 (d, H); czas retencji w analitycznej HPLC: 13,20 min., LC-MS: m/z = 577 (M+H+).
Ester allilowy kwasu (2-cykloheksylometoksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-karbaminowego
Związek ten wytworzono z estru tert-butylowego kwasu 3-alliloksykarbonyloamino-4-hydroksy-masłowego, jak opisano dla związku 40, stosując cykloheksylometanol, i otrzymano 1,04 g (wyższy Rf) (35% wydajności) diastereomer anti związku tytułowego i 1,295 g (niższy Rf) (44% wydajności) diastereomeru syn.
1H-NMR (300 MHz, CDCl3) dla diastereomeru anti: δ 0,90-0,96 (m, 2H), 1,10-1,30 (m, 3H), 1,55 -1,85 (m, 6H), 2,37-2,41 (d, H), 2,97-3,03 (m, H), 3,34-3,38 (m, H), 3,58-3,62 (m, H), 4, 55-4, 70 (m, 2H), 4,70-4,73 (m, H), 5,03 (bs, H), 5,22-5,37 (m, 3H), 5,87-5,93 (m, H); dla diastereomeru syn: 0,91-0,97 (m, 2H), 1,10-1,31 (m, 3H), 1,56-1,90 (m, 7H), 2,44-2,48 (m, H), 2,81-2,87 (m, H), 3,35-3,39 (m, H), 3,63-3,67 (m, H), 4,53-4,70 (m, 3H), 5,20-5,50 (m, 3H), 5,89-5,95 (m, H); LC-MS: m/z = 298 (M+H+) dla obydwu diastereomerów.
(2-cykloheksylometoksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-amid kwasu 1-[2-(4-acetyloamino-3-chloro-benzoiloamino)-propionylo]-pirolidyno-2-karboksylowego (98ao)
Związek tytułowy w ilości 212 mg (64% wydajności) wytworzono ze związku 97b i estru allilowego kwasu syn-(2-cykloheksylometoksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-karbaminowego, zgodnie z procedurą stosowaną do wytworzenia związku 98a.
1H-NMR (500 MHz, CDCl3): δ 0,70-1,30 (m, 5H), 1,30-1,85 (m, 9H), 1,85-2,60 (m, 8H), 2,75 -3,00 (m, H), 3,10-3,80 (m, 4H), 4,30-4,95 (m, 3H), 5,42 (d, 0,85H), 5,62 (d, 0,15H), 6,87 (d, 0,15H), 7,08 (d, 0,85H), 7,25 (d, H), 7,60-7,90 (m, 3H), 8,08 (d, 0,15H), 8,50 (d, 0,85H); czas retencji w analitycznej HPLC: 11,81 min., LC-MS: m/z = 577 (M+H+).
104
PL 204 619 B1
{2R-[1S-(2R-izopropylo-5S-metylo-cykloheksyloksy)]-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo}-amid kwasu 1-[2-(4-acetyloamino-3-chloro-benzoiloamino)-propionylo]-pirolidyno-2-karboksylowego (98ap)
Związek tytułowy w ilości 223 mg (63% wydajności) wytworzono ze związku 97b i estru allilowego kwasu syn-{2-[1S-(2R-izopropylo-5S-metylo-cykloheksyloksy)]-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo}-karbaminowego, zgodnie z procedurą stosowaną do wytworzenia związku 98a.
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ 0,70-1,15 (m, 12H), 1,20-1,85 (m, 8H), 1,85-2,60 (m, 9H), 2,74-2,88 (m, H), 3,35-3,85 (m, 3H), 4,40-4,45 (m, H), 4,65-4,78 (m, H), 4,88-4,91 (m, H), 5,53 (d, H), 7,00-7,25 (m, 2H), 7,60-7,90 (m, 3H), 8,50 (d, H); czas retencji w analitycznej HPLC: 13,31 min., LC-MS: m/z = 619 (M+H+).
(2-cykloheksylometoksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-amid kwasu 1-[2-(4-amino-3-chloro-benzoiloamino)-propionylo]-pirolidyno-2-karboksylowego (98aq)
Związek tytułowy w ilości 113 mg (56% wydajności) wytworzono ze związku 97b i estru allilowego kwasu syn-(2-cyklo-heksylornetoksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo}-karbaminowego, zgodnie z procedurą stosowaną do wytworzenia związku 98a.
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ 0,70-1,35 (m, 5H), 1,35-1,90 (m, 8H), 1,90-2,20 (m, 3H), 2,30-2,60 (m, H), 2,80-3,00 (m, H), 3,15-3,80 (m, 4H), 4,28-4,75 (m, 4H), 4,89-4,93 (m, H), 5,42 (d, H), 6,74 (d, H), 6,87 (d, H), 7,30 (d, H), 7,51-7,53 (m, H), 7,74 (d, H); czas retencji w analitycznej HPLC: 12,02 min., LC-MS: m/z = 535 (M+H+).
Ester allilowy kwasu (2-butoksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-karbaminowego
Związek ten wytworzono z estru tert-butylowego kwasu 3-alliloksykarbonyloamino-4-hydroksy-masłowego, jak opisano dla związku 40, stosując n-butanol, i otrzymano 878 mg (29% wydajności) związku tytułowego (313 mg diastereomeru anti, 260 mg diastereomeru syn i 305 mg mieszaniny).
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) dla diastereomeru anti: δ (wyższy Rf) 0,89-0,96 (t, 3H), 1,32-1,40 (m, 2H), 1,54-1,63 (m, 2H), 2,37-2,41 (d, H), 2,98-3,04 (q, H), 3,55-3,50 (m, H), 3,77-3,82 (m, H), 4,19 -4,22 (m, H), 4,58 (br, 2H), 5,03 (br, H), 5,23-5,40 (m, 3H), 5,87-5,93 (M, H); dla diastereomeru syn (niższy Rf) 0,91-0,95 (t, 3H), 1,34-1,39 (m, 2H), 1,56-1,63 (m, 2H), 2,42-2,50 (m, H), 2,83-2,87 (m, H), 4,07-4,11 (t, H), 4,45-4,50 (m, 0,5H), 4,51-4,70 (m, 2,5H), 5,23-5,35 (m, 2H), 5,42-5,43 (d, H), 5,80 -5,95 (m, H); LC-MS: m/z = 258 (M+H+) dla obydwu diastereomerów.
PL 204 619 B1
105 (2-butoksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-amid kwasu 1-[2-(4-amino-3-chloro-benzoilo-amino)-propionylo]-pirolidyno-2-karboksylowego (98ar)
Związek tytułowy w ilości 118 mg (48% wydajności), w postaci diastereomeru syn, wytworzono ze związku 97a i estru allilowego kwasu syn-(2-butoksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo}-karbaminowego, zgodnie z procedurą stosowaną do wytworzenia związku 98a.
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ 0,80-1,02 (m, 2H), 1,35-1,51 (m, 5H), 1,51-1,70 (m, 2H), 1,90-2,27 (m, 3H), 2,30-2,46 (m, H), 2,80-2,90 (m, H), 3,55-3,94 (m, 4H), 4,30-4,75 (m, 4H), 4,90-5,00 (m, H), 5,44-5,46 (m, H), 6,73-6,80 (m, H), 6,80-6,93 (m, H), 7,16-7,25 (m, H), 7,49-7,60 (m, H), 7,70-7,84 (m, H); czas retencji w analitycznej HPLC: 9,71 min., LC-MS: m/z = 495 (M+H+).
Ester allilowy kwasu (2-izobutoksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-karbaminowego
Związek ten wytworzono z estru tert-butylowego kwasu 3-alliloksykarbonyloamino-4-hydroksy-masłowego, jak opisano dla związku 40, stosując izobutanol i otrzymano 190 mg (wydajność 7,3%) związku tytułowego w postaci diastereomeru anti i 290 mg (wydajność 11%) diastereomeru syn.
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) dla diastereomeru anti: δ (wyższy Rf) 0,85-1,05 (m, 6H), 1,82-1,98 (m, H), 2,37-2,42 (d, H), 2,98-3,04 (m, H), 3,31-3,35 (m, H), 3,55-3,58 (m, H), 4,20-4,30 (t, H), 4,58 (br, 2H), 5,07 (br, H), 5,22-5,43 (m, 3H), 5,84-5,96 (m, H), dla diastereomeru syn (niższy Rf) 0,85-1,05 (m, 6H), 1,88-1,95 (m, H), 2,40-2,51 (ra, H), 2, 83-2, 90 (m, H), 3, 33-3, 36 (m, H), 3,61-3,65 (m, H), 3,87-3,88 (d, H), 4,40-4,68 (m, 3H), 5,20-5,40 (m, 2H), 5,42-5,43 (d, H), 5,80-5,97 (m, H); LC-MS: m/z = 258 (M+H+) dla obydwu diastereomerów.
(2-izobutoksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-amid kwasu 1-[2-(4-amino-3-chloro-benzoiloamino)-propionylo]-pirolidyno-2-karboksylowego (98as)
Związek tytułowy w ilości 93 mg (38% wydajności) wytworzono ze związku 97a i estru allilowego kwasu syn-(2-izobutoksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo}-karbaminowego, zgodnie z procedurą stosowaną do wytworzenia związku 98a.
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ 0,74-0,76 (t, 0,6H), 0,80-1,00 (m, 5,4H), 1,40-1,50 (m, 3H), 1,90 -2,22 (m, 3H), 2,33-2,45 (m, H), 2,80-2,90 (m, H), 3,32-3,38 (m, H), 3,55-3,80 (m, 3H), 4,38 (br, H), 4,50-4,60 (m, H), 4,70-4,80 (m, H), 4,90-5,00 (m, H), 5,42-5,45 (m, H), 6,74-6,76 (d, H), 6,86-6,88 (d, H), 7,31-7,33 (d, H), 7,51-7,53 (m, H), 7,74-7,75 (d, H); czas retencji w analitycznej HPLC: 9,63 i 9,80 min., LC-mS: m/z = 495 (M+H+).
Ester allilowy kwasu [2-(indan-2-ylo)oksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo]-karbaminowego
Związek tytułowy w ilości 4,10 g (65% wydajności), w postaci mieszaniny epimerów, wytworzono z estru tert-butylowego kwasu 3-alliloksykarbonyloamino-4-hydroksy-masłowego (5,2 g, 60 mmoli), jak opisano dla związku 40, stosując 2-indanol (8,05 g, 60 mmoli). Po oczyszczeniu otrzymano 1,76 g (28% wydajności) epimeru 4(S), 5(R) w postaci żółtego oleju.
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ 2,42 (dd, J = 17,2, 10,5 Hz, 1H), 2,79 (dd, J = 17,2, 8,4 Hz, 1H), 2,99 (dd, J = 16,7, 4,1 H, 1H), 3,04 (dd, J = 16,7, 4,1 Hz, 1H), 3,22 (dd, J = 17,2, 6,6 Hz, 1H), 3,26 (dd, J = 17,2, 6,6 Hz, 1H), 4,53 (m, 3H), 4,70 (m, 1H), 5,20 (m, 2H), 5,60 (d, J = 5,3 Hz, 1H), 5,87 (m, 1H), 7,17 (m, 4H) ppm. LC-MS (ES+): m/e 318 (M+H).
Wyodrębniono również mieszaninę epimerów 4(S), 5(S) (0,75 g, 12% wydajności) w postaci białej substancji stałej.
106
PL 204 619 B1 1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ 2,38 (d, J = 17,9 Hz, 1H), 3,0 (m, 3H), 3,22 (m, 2H), 4,13 (m, 1H), 4,58 (m, 2H), 4,48 (m, 2H), 4,98 (szer. s, 1H), 5,26 (m, 1H), 5,57 (s, 1H), 5,88 (ddt, J = 18,0, 11,1, 5,4 Hz, 1H), 7,20 (m, 4H) ppm. Analityczna HPLC (kolumna C18): 17,025 (5,5%), 17,325 (94,5%) min.
[2-(indan-2-yloksy)-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo]-amid kwasu 1-[2-(4-amino-3-chloro-benzoiloamino)-propionylo]-pirolidyno-2-karboksylowego (98at)
Związek tytułowy w postaci mieszaniny epimerów 71:29 (0,20 g, 58% wydajności) wytworzono ze związku 97a i estru allilowego kwasu [2-(indanol-2-ilo)oksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-karbaminowego, zgodnie z procedurą stosowaną do wytworzenia związku 98a.
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ 1,0-1,5 (m, 3H), 1,6-2,3 (m, 4H), 2,42 (m, 1H), 2,6-3,4 (m, 6H), 3,5-4,1 (m, 3H), 4,2-4,9 (m, 4H), 5,65 (d, J = 5,0 Hz, 0,80H), 5,8 (m, 0,07H), 5,85 (d, J = 5,0 Hz, 0,13H), 6,8-7,3 (m, 6H), 7,4-7,9 (m, 3H) ppm. Analityczna HPLC (kolumna C18): 16,035 (26,8%) min.
LC-MS (ES+): m/e = 555 (M+H).
[2-(indan-2-yloksy)-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo]-amid kwasu 1-[2-(4-acetyloamino-3-chloro-benzoiloamino)-propionylo]-pirolidyno-2-karboksylowego (98au)
Związek tytułowy jako mieszaninę epimerów 76:24, w postaci białawej substancji stałej (0,22 g, 57% wydajności) wytworzono ze związku 97a i estru allilowego kwasu [2-(indanol-2-ilo)oksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-karbaminowego, zgodnie z procedurą stosowaną do wytworzenia związku 98a.
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ 1,08 (d, J = 6,9 Hz, 0,4H), 1,26 (d, J = 6,9 Hz, 0,6H), 1,35 (d, J = 6,9 Hz, 2H), 1,8-2,3 (m, 3H), 2,28 (s, 2H), 2,29 (s, 1H), 2,4 (m, 1H), 2,8 (m, 1H), 3,10 (m, 2H), 3,27 (m, 2H), 3,58 (m, 2H), 3,69 (m, 1H), 4,5-4,9 (m, 4H), 5,65 (d, J = 5,3 Hz, 0,68H), 5,84 (d, J = 5,3 Hz, 0,18H), 6,38 (br, 0,14H), 6,9-7,7 (m, 6H), 7,6-7,9 (m, 3H), 8,33 (szer. D, J = 6,8 Hz, 0,18H), 8,51 (szer. d, J = 8,0 Hz, 0,82H). Analityczna HPLC (kolumna C18): 15,596 (76,2%), 15,934 (23,8%) min. LC-MS (ES+): m/e = 597 (M+H).
(2-cyklopentyloksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-amid kwasu 1-[2-(4-amino-3-chloro-benzoiloamino)-propionylo]-pirolidyno-2-karboksylowego (98av)
Związek tytułowy w postaci białawej substancji stałej (0,19 g, 59% wydajności) wytworzono ze związku 97a i estru allilowego kwasu syn-(2-cyklopentyloksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-karbaminowego, zgodnie z procedurą stosowaną do wytworzenia związku 98a.
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ 1,2-2,4 (m, 15H), 2,4-3,1 (m, 2H), 3,6-3,9 (m, 2H), 4,2-4,4 (m, 2H), 4,5-5,0 (m, 4H), 5,40 (d, J = 5,0 Hz, 0,35H), 5,55 (d, J = 5,0 Hz, 0,65H), 6,8-8,2 (m, 5H) ppm. Analityczna HPLC (kolumna C18): 14,065 min. LC-MS (ES+): m/e = 507 (M+H).
PL 204 619 B1
107 (2-benzyloksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-amid kwasu 1[2-(3,5-dichloro-4-hydroksy-benzoiloamino)-propionylo]-pirolidyno-2-karboksylowego (98aw)
Związek tytułowy w postaci bladożółtej substancji stałej (1,087 g, 64% wydajności) wytworzono z estru tert-butylowego kwasu 1-[2-(4-alliloksy-3,5-dimetylo-benzoiloamino)-propionylo]-pirolidyno-2-karboksylowego i związku syn-40, zgodnie z procedurą stosowaną do wytworzenia związku 98a.
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ 1,09 (d, J = 6,9 Hz, 0,6H), 1,33 (d, J = 6,9 Hz, 2,4 Hz), 1,96 (m, 1H), 2,03 (m, 1H), 2,10 (m, 1H), 2,28 (m, 0,8H), 2,40 (dd, J = 17,3, 10,2 Hz, 0,8H), 2,56 (m, 0,2H), 2,85 (dd, J = 17,3, 8,5Hz, 0,8H), 3,09 (dd, J = 17,7, 10,2 Hz, 0,2H), 3,57 (m, 1H), 3,73 (dt, J = 9,2, 7,9 Hz, 0,8H), 4,09 (m, 0,2H), 4,21 (d, J = 7,9 Hz, 0,2H), 4,44 (d, J = 9,8 Hz, 0,2H), 4,55 (dd, J = 8,0, 3,0 Hz, 0,8H), 4,62 (d, J = 11,6 Hz, 1H), 4,70 (m, 1H), 4,80 (m, 1H), 4,89 (d, J = 11,6 Hz, 0,8 Hz), 5,52 (d, J = 5,2 Hz, 0,8H), 5,82 (d, J = 5,2 Hz, 0,2H), 6,51 (br, 0,2H), 6,62 (br, 0,8H), 7,0-7,4 (m, 7H), 7,43 (s, 0,4H), 7,66 (d, J = 1,0 Hz, 1,6H). Analityczna HPLC (kolumna C18): 10,135 min. LC-MS (ES+): m/e = 564, 566 (6:4) (M+H).
(2-cyklopentyloksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-amid kwasu 1-[2-(4-amino-3-chloro-benzoiloamino)-propionylo]-pirolidyno-2-karboksylowego (98ax)
Związek tytułowy w postaci białawej substancji stałej (0,24 g, 74% wydajności) wytworzono zgodnie z procedurą stosowaną do wytworzenia związku (98av), stosując anti-(2-cyklopentyloksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-amid.
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ 1,41 (d, J = 6,5 Hz, 3H), 1,7 (m, 7H), 1,98 (br, 2H), 2,13 (br, 2H), 2,27 (m, 1H), 2,69 (m, 1H), 2,86 (dd, J = 18,0, 6,8 Hz, 0,7H), 2,98 (dd, J = 18,3, 8,2 Hz, 0,3H), 3,60 (br, 1,4H), 3,77 (br, 0,6H), 4,1-4,6 (m, 5H), 4,82 (m, 1H), 5,27 (m, 0,65H), 5,51 (d, J = 5,3 Hz, 0,05H), 5,59 (szer. s, 0,3H), 6,76 (br, 1H), 7,00 (br, 1H), 7,49 (br, 1H), 7,74 (br, 1H), 7,89 (br, 1H) ppm. Analityczna HPLC (kolumna C18): 9,756 min. LC-MS (ES+): m/e = 507 (6:4) (M+H).
(2-etoksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-amid kwasu 1-[2-(4-acetyloamino-3-chloro-benzoiloamino)-propionylo]-pirolidyno-2-karboksylowego (98ay)
Wytworzony z estru allilowego kwasu (2-etoksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-karbaminowego i związku 97b, zgodnie ze sposobem stosowanym dla związku 98a. Związek tytułowy wyodrębniono w postaci białej substancji stałej (51 mg, 18% wydajności).
1H-NMR (500 MHz, 1:1 CDCl3:CD3OD) δ 1,08-1,35 (m, 3H), 1,35-1,55 (m, 3H), 1,75-2,44 (m, 4H), 2,26 (s, 3H), 2,44-3,07 (m, 2H), 3,48-3,97 (m, 2H), 4,18-4,92 (m, 5H), 5,32 (d, 0,4H), 5,47 (d, 0,1H), 5,38 (d, 0,4H), 5,64 (d, 0,1H), 7,70-8,35 (m, 3H). Analityczna HPLC: 10,37, 10,54 min. LC-MS (ES+) m/e = 509, 2 (M+H+).
108
PL 204 619 B1
Ester allilowy kwasu [2-(2-chloro-etoksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo]-karbaminowego
Związek tytułowy w ilości 1,84 g (35% wydajności), w postaci mieszaniny epimerów, wytworzono z estru tert-butylowego kwasu 3-alliloksykarbonyloamino-4-hydroksy-masłowego (5,2 g, 20 mmoli), jak opisano dla związku 40, stosując chloroetanol (4,05 ml, 60 mmoli). Dla diastereomeru anti:
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ 2,42 (dd, J = 18,1 Hz, 1H), 3,00 (dd, J = 18,1, 7,8 Hz, 1H), 3,63 (m, 2H), 3,85 (m, 1H), 4,02 (m, 1H), 4,57 (szer. s, 2H), 5,17 (szer. s, 1H), 5,22 (d, J = 11,5 Hz, 1H), 5,29 (d, J = 16,8 Hz, 1H), 5,44 (s, 1H), 5,89 (m, 1H) ppm; LC-MS (ES+) m/e = 264 (M+H).
Dla diastereomeru syn:
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ 2,47 (dd, J = 17,3, 10,7 Hz, 1H), 2,83 (dd, J = 17,3, 8,4 Hz, 1H), 3,65 (m, 2H), 3,83 (m, 1H), 4,11 (ra, 1H), 4,57 (m, 3H), 5,22 (d, J = 10,4 Hz, 1H), 5,30 (d, J = 17,2 Hz, 1H), 5,33 (m, 1H), 5,47 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 5,89 (ddt, J = 17,1, 11,0, 5,4 Hz, 1H) ppm; LC-MS (ES+) m/e = 264 (M+H).
Ester allilowy kwasu [2-(2-morfolin-4-ylo-etoksy)-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-karbaminowego
Związek ten wytworzono z estru allilowego kwasu [2-(2-chloro-etoksy)-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-karbaminowego przez reakcję z morfoliną (2 równ.) i KJ (1 równ.) w DMF.
[2-(2-morfolin-4-ylo-etoksy)-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo]-amid kwasu 1-[2-(4-amino-3-chloro-benzoiloamino)-propionylo]-pirolidyno-2-karboksylowego (98az)
Związek ten wytworzono ze związku 97a i estru allilowego kwasu syn-[2-(2-morfolin-4-ylo-etoksy)-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo]-karbaminowego, zgodnie ze sposobem stosowanym dla związku 98a.
Ester allilowy kwasu [2-(4-chloro-benzyloksy)-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo]-karbaminowego
Związek tytułowy w postaci białej substancji stałej wytworzono z estru tert-butylowego kwasu
3-alliloksykarbonylo-amino-4-hydroksy-masłowego, jak opisano dla związku 40, stosując alkohol chlorobenzylowy. Diastereomer anti: HPLC (kolumna C18) 10,924 min.;
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ 2,41 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 3,02 (dd, J = 18,1, 7,8 Hz, 1H), 4,25 (br, 1H), 4,56 (m, 2H), 4,58 (d, J = 11,7 Hz, 1H), 4,79 (d, J = 11,7 Hz, 1H), 4,99 (br, 1H), 5,22 (dd, J = 10,4, 1,1 Hz, 1H), 5,28 (dd, J = 17,2, 1,3 Hz, 1H), 5,44 (s, 1H), 5,86 (m, 1H), 7,25 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,32 (d, J = 8,4 Hz, 2H) ppm; LC-MS (ES+) m/e = 326 (M+H);
Diastereomer syn: HPLC (kolumna C18) 10,780 min.;
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ 2,47 (dd, J = 17,3, 10,5Hz, 1H), 2,85 (dd, J = 17,3, 8,4 Hz, 1H), 4,55 (m, 3H), 4,58 (d, J = 11,7 Hz, 1H), 4,84 (d, J = 11,7 Hz, 1H), 5,23 (dd, J = 10,4, 1,1 Hz, 1H), 5,30 (d, J = 16,6 Hz, 1H), 5,49 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 5,89 (ddt, J = 17,1, 11,0, 5,4 Hz, 1H), 7,23 (d, J = 8,3 Hz, 2H), 7,31 (d, J = 8,3 Hz, 2H) ppm; LC-MS (ES+) m/e = 326 (M+H).
[2-(4-chloro-benzyloksy)-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo]-amid kwasu 1-[2-(4-amino-3-chloro-benzoiloamino)-propionylo]-pirolidyno-2-karboksylowego (98ba)
Związek tytułowy w ilości 154 mg (65% wydajności) w postaci bladoróżowej substancji stałej wytworzono ze związku 97a i estru allilowego kwasu syn-[2-(4-chloro-benzyloksy)-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo]-karbaminowego, zgodnie ze sposobem stosowanym do wytworzenia związku 98a. HPLC (kolumna C18) 10,597 min.;
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ 1,14 (d, J = 6,8 Hz, 0,75H), 1,34 (d, J = 6,8 Hz, 2,25 H), 1,6 (br, 0,25H), 1,91 (m, 1H), 2,03 (m, 1H), 2,10 (m, 1H), 2,29 (m, 0,75H), 2,40 (dd, J = 17,3, 10,3 Hz, 0,75H), 2,51 (m, 0,25H), 2,82 (dd, J = 17,3, 8,5 Hz, 0,75H), 3,08 (dd, J = 17,9, 10,9 Hz, 0,25H), 3,58 (m, 1H), 3,72 (dd, J = 16,5, 8,7 Hz, 0,75H), 4,10 (m, 0,25H), 4,22 (d, J = 8,0 Hz, 0,25H), 4,39 (d, J = 10,8 Hz, 0,25H), 4,54 (dd, J = 9,1, 2,9 Hz, 0,75Hz), 4,60 (d, J = 11,9 Hz, 0,75H), 4,68 (m, 1H), 4,85 (d, J = 11,7 Hz, 0,75H), 4,86 (m, 1H), 5,49 (d, J = 5,2 Hz, 0,75H), 5,81 (d, J = 5,2 Hz, 0,25H), 6,2 (br, 0,25H), 6,74 (m, 2H), 7,05 (d, J = 8,5 Hz, 0,5H), 7,17 (d, J = 8,4 Hz, 0,5H), 7,30 (m, 3,25H), 7,48
PL 204 619 B1
109 (dd, J = 8,4, 2,0 Hz, 0,75H), 7,56 (d, J = 1,9 Hz, 0,25H), 7,73 (d, J = 1,9 Hz, 0,75H), 8,42 (d, J = 7,5Hz,
0,25H) ppm; LC-MS (ES+) m/e = 565 (M+H).
[2-(4-chloro-benzyloksy)-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo]-amid kwasu 1-[2-(4-acetylo-amino-3-chloro-benzoiloamino)-propionylo]-pirolidyno-2-karboksylowego (98bb)
Związek tytułowy w ilości 165 mg (64% wydajności) w postaci bladożółtej substancji stałej wytworzono ze związku 97b i estru allilowego kwasu syn-[2-(4-chloro-benzyloksy)-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo]-karbaminowego, zgodnie ze sposobem stosowanym do wytworzenia związku 98a. HPLC (kolumna C18) 10,491 min.;
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ 1,16 (d, J = 6,8 Hz, 0,6H), 1,35 (d, J = 6,8 Hz, 2,4H), 1,94 (m, 1H), 2,04 (m, 1H), 2,10 (m, 1H), 2,25 (s, 3H), 2,28 (m, 1H), 2,40 (dd, J= 17,3, 10,4 Hz, 0,8H), 2,53 (m, 0,2H), 2,84 (dd, J = 17,3, 8,5 Hz, 0,8H), 3,02 (dd, J = 17,5, 10,5 Hz, 0,2H), 3,58 (m, 1H), 3,72 (ddd, J = 17,2, 8,3, 0,8H), 4,13 (m, 0,2H), 4,22 (d, J = 8,2 Hz, 0,2H), 4,40 (d, J = 10,9 Hz, 0,2H), 4,54 (dd, J = 8,1, 3,0 Hz, 0,8H), 4,60 (d, J = 11,8 Hz, 0,8H), 4,69 (m, 1H), 4,85 (d, J = 11,8 Hz, 0,8H), 4,87 (m, 1H), 5,49 (d, J = 5,2 Hz, 0,8H), 5,80 (d, J = 5,2 Hz, 0,2H), 6,47 (br, 0,2H), 6,95 (d, J = 8,3 Hz, 0,8 H), 7,05 (d, J = 8,3 Hz, 0,4 Hz), 7,18 (d, J = 8,3 Hz, 0,4H), 7,29 (m, 3,2H), 7,49 (dd, J = 8,6, 1,9 Hz, 0,2H), 7,63 (dd, J = 8,6, 1,9 Hz, 0,8 Hz), 7,74 (d, J = 1,9 Hz, 1H), 7,85 (d, J = 1,9 Hz, 0,8H), 8,25 (d, J = 6,4 Hz, 0,2H), 8,51 (m, 0.8H) ppm; LC-MS (ES+) m/e = 605,607 (M+H).
Ester tert-butylowy kwasu 2-(2-benzyloksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylokarbamoilo)-piperydyno-1-karboksylowego (100)
Związek tytułowy w postaci żółtej substancji stałej (2,63 g, 57% wydajności) wytworzono z estru tert-butylowego kwasu piperydyno-1,2-dikarboksylowego 99 i 40, zgodnie ze sposobem stosowanym do wytworzenia związku 75.
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ 1,15-1,79 (m, 15H), 2,12-2,50 (m, 2H), 2,56-2,83 (m, 1H), 2,89 (dd, 0,5H), 3,05 (dd, 0,5H), 3,81-4,15 (szer. s, 1H), 4,35-4,97 (m, 3H), 5,37-5,61 (m, 1H), 6,42-6,89 (szer. s, 1H), 7,17-7,51 (m, 5H), LC-MS (ES+) m/e = 419, 4 (MH+).
110
PL 204 619 B1
Ester tert-butylowy kwasu {2-[2-(2-benzyloksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylokarbamoilo)-piperydyn-1-ylo]-1-metylo-2-okso-etylo}-karbaminowego (101)
Ester tert-butylowy kwasu 2-(2-benzyloksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylokarbamoilo)-piperydyno-1-karboksylowego (100) rozpuszczono w 20% roztworze TFA w CH2Cl2 (25 ml) i mieszano w temperaturze pokojowej przez 50 minut. Rozpuszczalnik odparowano i resztkowy kwas poddano destylacji a-zeotropowej z CH2Cl2 (4x). Wytworzony olej rozpuszczono w CH2Cl2 (20 ml) i DMF (5 ml), oziębiono do temperatury 0°C, potraktowano DIEA (4,7 ml, 27,0 mmola), Boc-alaniną (970 mg, 5,1 mmola), HOBT (924 mg, 6,8 mmola) i EDC (1,31 g, 6,8 mmola) i roztwór mieszano pod N2 przez 18 godzin. Rozpuszczalnik zatężono pod próżnią, po czym mieszaninę rozpuszczono w EtOAc i przemyto 0,5N roztworem NaHSO4 (2x), nasyconym roztworem NaHCO3 (2x) i solanką. Warstwę organiczną wysuszono nad bezwodnym Na2SO4 i odparowano, uzyskując pomarańczową substancję stałą, którą rozpuszczono w CH2Cl2 i wkroplono do eteru dietylowego, z wytworzeniem białego osadu. Związek tytułowy wyodrębniono w postaci białej substancji stałej (1,21 g, 73%).
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ 1,10-1,79 (m, 18H), 1,98-2,19 (m, 0,5H), 2,28-2,88 (m, 3H), 2,89 -3,13 (m, 0,5H), 3,78-3,95 (m, 0,5H), 4,21-5,15 (m, 5,5H), 5,38-5,59 (m, 0,3H), 5,66 (d, 0,4H), 5,80 (d, 0,3H), 7,24-7,40 (m, 5H). LC-MS (ES+) m/e = 490, 3 (MH+).
(2-benzyloksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)amid kwasu 1-[2-(4-acetyloamino-3-chloro-benzoiloamino)-propionylo]-piperydyno-2-karboksylowego (102a).
Związek tytułowy (71 mg, 47%) wytworzono z estru tert-butylowego kwasu {2-[2-(2-benzyloksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylokarbamoilo)-piperydyn-1-ylo]-1-metylo-2-okso-etylo}-karbaminowego i kwasu 4-acetyloamino-3-chlorobenzoesowego, zgodnie z procedurą stosowaną do wytworzenia związku 98a.
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ 1,10-1,97 (m, 10H), 2,10-2,68 (m, 5H), 2,73-3,24 (m, 2H), 3, 62 -3,92 (m, 1H), 4,24-5,27 (m, 5H), 5,48-5,59 (m, 0,5H), 5,75-5,85 (m, 0,5H), 6,51-6,61 (d, 1H), 7,05 -7,45 (m, 4H), 7,52-8,12 (m, 4H). Analityczna HPLC: 8,30 min. LC-MS (ES+) m/e = 585, 3 (MH+).
(2-benzyloksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-amid kwasu 1-[2-(4-amino-3-chloro-benzoiloamino)-propionylo]-piperydyno-2-karboksylowego (102b)
Związek tytułowy (0,06 g, 27% wydajności) w postaci żółtej substancji stałej wytworzono sposobem opisanym dla związku 102a.
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ 1,2-1,8 (m, 7H), 2,1-2,6 (m, 2H), 2,7-2,3 (m, 4H), 3,6-4,0 (m, 1H), 4,3-4,9 (m, 7H), 5,0-5,8 (m, 2H), 6,5-7,0 (m, 2H), 7,2-7,8 (m, 8H). Analityczna HPLC (kolumna cyano): 14, 559 (39,6%), 15, 198 (60,4%). LC-MS (ES+) m/e = 543 (M+H).
PL 204 619 B1
111
Ester 1-benzylowo-2-tert-butylowy kwasu 4-hydroksy-pirolidyno-1,2-dikarboksylowego (104)
Związek 104 wytworzono zgodnie z procedurą stosowaną do wytworzenia związku 95.
Zawiesinę Cbz-Hyp-OH (4,854 g, 18 mmola) w DMA (135 ml), chlorku benzylotrietyloamoniowego (4,105 g, 18 mmola), K2CO3 (64 g, 46 mmoli) i 2-bromo-2-metylopropanu (99 ml, 859 mmoli) mieszano w temperaturze 55°C przez 18 godzin. Mieszaninę rozcieńczono EtOAc (3x). Fazę organiczną przemyto wodą, 0,5N roztworem NaHSO4 i solanką, wysuszono i rozpuszczalnik usunięto pod próżnią, uzyskując związek tytułowy w postaci żółtego oleju (5,368 g, 98% wydajności).
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ 1,33 (s, 5H), 1,47 (s, 4H), 2,01-2,14 (m, 1H), 2,22-2,38 (m, 1H), 3,50-3,72 (m, 2H), 4,34-4,45 (m, 1H), 4,45-4,53 (m, 1H), 5,04-5,20 (m, 2H), 7,22-7,42 (m, 5H). Analityczna HPLC: 10,14 min., LC-MS (ES+) m/e = 322,2 (MH+).
Ester 1-benzylowo-2-tert-butyłowy kwasu 4-fluoro-pirolidyno-1,2-dikarboksylowego (105)
Do roztworu związku 104 (4,262 g, 13,96 mmola) w CH2Cl2 (100 ml) w temperaturze 78°C dodano DAST (1,80 ml, 13,6 mmola), mieszano przez 10 minut, po czym ogrzano do temperatury pokojowej i mieszano przez 60 godzin pod N2. Mieszaninę przelano do NaHCO3 z lodem (10%, 350 ml) i ekstrahowano CH2Cl2 (2x). Fazę organiczną przemyto wodą i solanką, wysuszono nad bezwodnym Na2SO4 i zatężono, uzyskując brązowy olej (4,299 g). Olej ten oczyszczono metodą chromatografii kolumnowej na żelu krzemionkowym, stosując układ heksany/EtOAc (90/10 do 80/20%). Związek tytułowy otrzymano w postaci żółtego oleju (2,805 g, 64% wydajności).
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ 1,37 (s, 4,5H), 1,45 (s, 4,5H), 2,20-2,55 (m, 2H), 3,61-3,93 (m, 2H), 4,41 (d, 0,5H), 4,49 (d, 0,5H), 5,03-5,21 (m, 3H), 7,23-7,44 (m, 5H). Analityczna HPLC: 12,15 min., LC-MS (ES+) m/e = 324, 2 (MH+).
Ester 1-benzylowo-2-tert-butylowy kwasu 1-(2-benzyloksykarbo-nyloamino-propionylo)-4-fluoro-pirolidyno-1,2-dikarboksylowego (106)
Roztwór związku 105 (2,72 g, 8,42 mmola) w MeOH (50 ml) i 10% Pd/C (1,27 g) mieszano pod H2 przez 2 godziny, a następnie przesączono przez Celite i rozpuszczalnik odparowano, uzyskując żółty olej (1,562 g). Olej ten rozpuszczono w CH2Cl2 (30 ml) i w temperaturze 0°C potraktowano DIEA (1,5 ml, 8,6 mmola), Cbz-Ala-OH (2,34 g, 10,5 mmola) i EDC (2,32 g, 12 mmoli). Mieszaninę mieszano jeszcze przez 10 minut w temperaturze 0°C, po czym pozostawiono, aby ogrzała się do temperatury pokojowej i mieszano przez 18 godzin. Rozpuszczalnik zatężono pod próżnią i pozostałość rozpuszczono w E-tOAc, a następnie przemyto 0,5N roztworem NaHSO4 (2x), nasyconym roztworem NaHCO3 (2x) i solanką. Warstwę organiczną wysuszono nad bezwodnym Na2SO4 i odparowano, uzyskując białą substancję stałą, którą oczyszczono metodą szybkiej chromatografii kolumnowej, eluując układem heksany/EtOAc (80/20 do 60/40%). Związek tytułowy wyodrębniono w postaci białej substancji stałej (286 g, 86% z estru 1-benzylowo-2-tert-butylowego kwasu 4-fluoro-pirolidyno-1,2-dikarboksylowego).
1H-NMR (500 MHz, CD3OD) δ 1,26-1,59 (m, 12H), 2,20-2,67 (m, 2H), 3,45-4,13 (m, 2H), 4,25 -4,47 (m, 1H), 4,58-4,71 (m, 1H), 4,96-5,17 (m, 2H), 5,19-5,45 (m, 1H), 7,23-7,48 (m, 5H). Analityczna HPLC: 16,36 min. LC-MS (ES+) m/e = 395, 3 (M+H+).
Ester tert-butylowy kwasu 1-[2-(4-amino-3-chloro-benzoilo-amino)-propionylo]-4-fluoro-pirolidyno-2-karboksylowego (107)
Zawiesinę związku 106 (2,65 g, 6,72 mmola) w MeOH (40 ml) i 10% Pd/C (1,32 g) mieszano w atmosferze H2 przez 1,5 godziny, przesączono przez Celite i zatężono, uzyskując woskowatą substancję stałą (1,694 g). Substancję tę rozpuszczono w CH2Cl2 (25 ml) i w temperaturze 0°C pod N2 potraktowano DIEA (3,4 ml, 19,5 mmola), kwasem 4-amino-3-chlorobenzoesowym (1,362 g, 7,9 mmola), HOBT (1,164 g, 8,62 mmola) i EDC (1,645 g, 8,57 mmola). Mieszaninę pozostawiono, aby ogrzała się do temperatury pokojowej i mieszano przez 18 godzin. Rozpuszczalnik zatężono pod próżnią. Pozostałość rozpuszczono w EtOAc, przemyto wodą (4x), 0,5N roztworem NaHSO4 (2x), nasyconym roztworem NaHCO3 (2x) i solanką. Warstwę organiczną wysuszono nad bezwodnym Na2SO4 i odparowano, uzyskując białą substancję stałą, którą oczyszczono metodą szybkiej chromatografii kolumnowej, z układem CH2Cl2/MeOH (99/1 do 98/2%). Produkt otrzymano w postaci białej substancji stałej (2,705 g, 97%).
1H-NMR (500 MHz, CD3OD) δ 1,33 (s, 9H), 1,48 (d, 3H), 2,31-2,55 (m, 2H), 3,93 (d,d, 1H), 4,02 -4,21 (m, 1H), 4,59-4,76 (m, 1H), 5,31 (szer. s, 0,5H), 5,41 (szer. s, 0,5H), 6,78 (d, 1H), 7,57 (d,d, 1H), 7,78 (s, 1H), 8,31 (d, 1H). Analityczna HPLC: 14,14 min. LC-MS (ES+) m/e = 414,2 (M+H+).
112
PL 204 619 B1
(2-benzyloksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-amid kwasu 1-[2-(4-amino-3-chloro-benzoiloamino)-propionylo]-4-fluoro-pirolidyno-2-karboksylowego (108a)
Związek tytułowy w postaci białej substancji stałej (41 mg, 15% wydajności) wytworzono z estru allilowego kwasu syn-(2-benzyloksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-karbaminowego i związku 107a, zgodnie ze sposobem stosowanym do syntezy związku 98a.
1H-NMR (500 MHz, CD3OD) δ 0,94 (d, 0,3H), 1,07 (d, 1H), 1,40 (m, 1,7H), 2,21-2,65 (m, 2,2H), 2,70-2,85 (m, 1,4H), 2,96-3,08 (m, 1,4H), 2,96-3,08 (dd, 0,4H), 3,57-4,24 (m, 3H), 4,41-4,93 (m, 4H), 5,14-5,45 (m, 1H), 5,60-5,67 (m, 0,6H), 5,77 (d, 0,4H), 6,77 (dd, 1H), 7,15-7,41 (m, 5H), 7,51-7,62 (m, 1H), 7,77 (dd, 1H). Analityczna HPLC: 12,83 min. LC-MS (ES+) m/e = 547, 1 (M+H+).
(2-benzyloksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-amid kwasu 1-[2-(4-amino-3-chloro-benzoiloamino)-propionylo]-4-fluoro-pirolidyno-2-karboksylowego (108b)
Związek tytułowy w postaci białej substancji stałej (651 mg, 54% wydajności) wytworzono z estru allilowego kwasu (2-benzyloksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-karbaminowego i związku 107a, zgodnie ze sposobem stosowanym do syntezy związku 98a.
1H-NMR (500 MHz, CD3OD) δ 1,07 (d, 0,5H), 1,25-1,56 (m, 2,5H), 2,21-2,65 (m, 2,3H), 2,68 -2,89 (m, 1H), 2,91-3,10 (m, 0,7H), 3,57-4,23 (m, 2H), 4,32-4,95 (m, 5H), 5,16-5,52 (m, 1H), 5,45-5,58 (m, 0,2H), 5,61-5,67 (m, 0,3H), 5,77 (d, 0,2H), 6,72-6,84 (m, 1H), 7,16-7,41 (m, 5H), 7,50-7,65 (m, 1H), 7,71-7,87 (m, 1H). Analityczna HPLC: 12,83 min. LC-MS (ES+) m/e = 547, 1 (M+H+).
(2-etoksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-amid kwasu 1-[2-(4-amino-3-chloro-benzoilo-amino)-propionylo]-4-fluoro-pirolidyno-2-karboksylowego (108c)
Związek tytułowy (100,3 mg, 38% wydajności) wytworzono estru allilowego kwasu syn-(2-etoksy-5-okso-tetrahydro-furan 3-ylo)-karbaminowego i związku 107a, zgodnie ze sposobem sto sowanym do syntezy związku 98a.
1H-NMR (500 MHz, CD3OD) δ 1,09 (t, 1,2H), 1,25 (t, 1,8H), 1,40 (d, 1H), 1,49 (d, 2H), 2,33-2,61 (m, 2H), 2,65-2,95 (m, 2H), 3,44-4,30 (m, 4H), 4,47-4,79 (m, 3H), 5,18-5,25 (m, 0,2H), 5,27-5,36 (m, 0,5H), 5,39-5,46 (m, 0,3H), 5,56 (m, 1H), 6,72-6,94 (m, 0,8H), 7,54 7,69 (m, 0,8H), 7,79
PL 204 619 B1
113 (d, 0,55H); 8,06 (d, 0,55H), 9,00 (d, 0,3H). Analityczna HPLC: 8,46 min. LC-MS (ES+) m/e = 485,2 (M+H+).
[2-(2-izopropylo-5-metylo-cykloheksylo)-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo]-amid kwasu 1-[2-(4-amino-3-chloro-benzoilo-amino)-propionylo]-4-fluoro-pirolidyno-2-karboksylowego (108d)
Związek tytułowy (95 mg, 31% wydajności) wytworzono z estru allilowego kwasu {2-[1R-(2S-izopropylo-5R-metylo-cykloheksyloksy)]-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo}-karbaminowego i związku 107a, zgodnie ze sposobem stosowanym do syntezy związku 98a.
1H-NMR (500 MHz, CD3OD) δ 0,42 (d, 2H), 0,57 (d, 2H), 0,60-1,10 (m, 10H), 1,22-1,76 (m, 6H), 1,96-2,17 (m, 1H), 2,29-2,60 (m, 2H), 2,61-2,88 (m, 1,5H), 3,02-3,23 (dd, 0,5H), 3,37-3,47 (m, 0,5H), 3,50-3,61 (m, 0,5H), 3,63-4,24 (m, 2H), 4,48-4,62 (m, 3H), 5,18-5,48 (m, 1H), 5,72 (d, 0,4H), 5,82 (d, 0,6H), 6,77-6,84 (m, 1H), 7,53-7,67 (m, 1H), 7,79 (d, 0,4H), 7,84 (d, 1H). Analityczna HPLC: 8,34 min. LC-MS (ES+) m/e = 595 (M+H+).
Ester tert-butylowy kwasu {2-[2-(2-etoksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylokarbamoilo)-pirolidyn-1-ylo]-1-metylo-2-okso-etylo}karbaminowego (109)
Związek tytułowy w postaci bladożółtej substancji stałej (660 mg, 73% wydajności) wytworzono z estru allilowego kwasu (2-etoksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)karbaminowego 74, sposobem stosowanym do syntezy związku 75.
1H-NMR (500 MHz, CD3OD) δ 1,14-1,36 (m, 6H), 1,42 (s, 9H), 1,75-2,29 (m, 4H), 2,48 (dd, 0,5H), 2,58 (dd, 0,5H), 2,72-2,85 (m, 0,5H), 2,99 (dd, 0,5H), 3,43-3,91 (m, 4H), 4,07-4,52 (m, 2,5H), 4,53-4,72 (m, 0,5H), 5,37 (s, 0,5H), 5,57 (d, 0,5H). Analityczna HPLC (mieszanina 2 diastereomerów) 7,92, 8,14 min. LC-MS (ES+) m/e = 414, 3 (MH+).
114
PL 204 619 B1 (2-etoksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-amid kwasu 1-[2-(4-alliloksy-3,5-dichloro-benzoiloamino)-propionylo]-pirolidyno-2-karboksylowego (110)
Związek tytułowy w postaci białej substancji stałej (228 mg, 65%) wytworzono ze związku 109 i kwasu 4-alliloksy-3,5-dichloro-benzoesowego, zgodnie ze sposobem stosowanym do syntezy związku 82.
1H-NMR (500 MHz, CD3OD) δ 1,10-1,30 (m, 4H), 1,32-1,52 (m, 3H), 1,63-2,31 (m, 4H), 2,41 -2,50 (d, 0,5H), 2,52-2,61 (dd, 0,5H), 2,67-2,81 (m, 0,5H), 2,94-3,05 (dd, 0,5H), 3, 47-3,96 (m, 4H), 4,21-4,81 (m, 5H), 5,22-5, 32 (m, 1H), 5, 35-5, 49 (m, 1,5H), 5, 55-5, 63 (m, 0,5H), 6,06-6,21 (m, 1H), 7,90 (s, 2H). Analityczna HPLC (mieszanina 2 diastereomerów): 12,56 min. LC-MS (ES+) m/e = 542,3 (M+H+).
(2-benzyloksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-amid kwasu 1-[2-(3,5-dichloro-4-hydroksy-benzoiloamino)-propionylo]-pirolidyno-2-karboksylowego (111)
Do roztworu związku 110 (194 mg, 0,36 mmola) w CH2Cl2 (5 ml) w temperaturze 0°C dodano DMBA (70,7 mg, 0,45 mmola) i Pd(PPh3)4 (50,3 mg, 0,44 mmola). Roztwór ogrzewano do temperatury pokojowej przez 15 minut, mieszano przez 2 godziny, rozcieńczono CH2Cl2, a następnie przemyto wodą (2x) i solanką. Warstwę organiczną wysuszono nad bezwodnym Na2SO4 i odparowano, uzyskując surowy produkt. Po szybkiej chromatografii z układem CH2Cl2/MeOH (99/1 do 95/5%) otrzymano związek tytułowy (138,6 mg, 77% wydajności).
1H-NMR (500 MHz, CD3OD) δ 1,13-1,31 (m, 3H), 1,35-1,49 (m, 3H), 1,84-2,35 (m, 4H), 2,43 -3,05 (m, 2H), 3,48-3,93 (m, 4H), 4,22-4,80 (m, 3H), 5,38 (d, 0,4H), 5,46 (s, 0,1H), 5,55-5,61 (m, 0,5H), 7,76-7,94 (m, 2H). Analityczna HPLC: 8,70 min. LC-MS (ES+) m/e = 502,2 (MH+).
Związki 116a-116h wytworzono, jak opisano powyżej dla związków 98, ale zamiast estru tertbutylowego kwasu 1-(2-benzyloksykarbonyloamino-propionylo)-pirolidyno-2-karboksylowego (95) stosowano ester tert-butylowy kwasu 1-(2-benzyloksykarbonyloamino-propionylo)-4,4-difluoro-pirolidyno-2-karboksylowego (114).
PL 204 619 B1
115
Wytwarzanie estru tert-butylowego kwasu 1-(2-benzyloksy-karbonyloamino-propionylo]-4,4-difluoro-pirolidyno-2-karboksylowego (114)
Roztwór estru 1-benzylo-2-tert-butylowego kwasu 4,4-difluoro-pirolidyno-1,2-dikarboksylowego (113) (Karanewsky i in., J. Med. Chem., 33, str. 1459-1469 (1990)] (0,42 g, 1,23 mmola) i 10% palladu na węglu (0,22 g) w metanolu (6 ml) mieszano pod ciśnieniem 1 atmosfery wodoru przez 3 godziny.
Mieszaninę przesączono przez Celite i odparowano. Pozostałość rozpuszczono w CH2Cl2 (4 ml) i DMF (2 ml) i oziębiono do temperatury 0°C. Dodano kwasu 2-benzyloksykarbonyloamino-propionowego (0,30 g, 1,35 mmola), EDC (0,30 g, 1,54 mmola), DIEA (0,65 ml) i HOBt (0,17 g, 1,23 mmola) i mieszaninę reakcyjną mieszano przez 0,5 godziny w temperaturze 0°C, a następnie przez 16 godzin w temperaturze pokojowej pod azotem. Rozpuszczalnik usunięto pod próżnią i pozostałość rozpuszczono w octanie etylu, po czym przemyto 10% roztworem wodorosiarczanu sodu, nasyconym roztworem wodorowęglanu sodu, wodą i solanką, wysuszono nad siarczanem sodu i odparowano. Po oczyszczeniu metodą chromatografii na krzemionce, z eluowaniem układem octan etylu:heksany, 25:75, otrzymano ester tert-butylowy kwasu 1-(2-benzyloksykarbonyloamino-propionylo]-4,4-difluoro-pirolidyno-2-karboksylowego (0,39 g, 77% wydajności) w postaci bezbarwnego oleju.
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ 1,3-1,6 (m, 12H), 2,5 (m, 0,8H), 2,7 (m, 1,2H), 3,9 (m, 1H), 4,1 (m, 1H), 4,4 (m, 1H), 4,7 (m, 1H), 5,1 (m, 2H), 5,59 (szer. d. J = 7,7 Hz, 0,8H), 5,7 (szer. d. J = 7,7 Hz, 0,2H), 7,35 (m, 5H) ppm. Analityczna HPLC(kolumna cyano): 17,069 min. LC-MS (ES+) m/e = 413 (M+H), 357 (M+H-tert-butyl), 313 [M+H-(CO2tert-butyl)].
(2-benzyloksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-amid kwasu 1-[2-(4-amino-3-chloro-benzoiloamino)-propionylo]-4,4-difluoro-pirolidyno-2-karboksylowego (116a)
Związek tytułowy w postaci białawej substancji stałej (0,14 g, 73% wydajności) wytworzono ze związku 115a i syn-40.
1H-NMR (500 MHz, CD3OD) δ 1,0-1,5 (m, 3H), 2,0-3,5 (m, 4H+CH3OH), 3,5-5,5 (M, 6H+H2O), 5,6-5,8 (m, 1H), 6,7-6,8 (m, 1H), 7,1-7,8 (m, 8H), 8,2-8,6 (m, 1H) ppm. Analityczna HPLC (kolumna cyano): 13, 744 min. LC-MS (ES+) m/e = 565 (M+H+).
(2-benzyloksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-amid kwasu 1-[2-(4-acetyloamino-3-chloro-benzoiloamino)-propionylo]-4,4-difluoro-pirolidyno-2-karboksylowego (116b)
Związek tytułowy w postaci białawej substancji stałej (0,08 g, 38% wydajności) wytworzono ze związku 115b i syn-40.
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ 1,03 (d, J = 6, 9 Hz, 0,4H), 1,30 (d, J = 6,9 Hz, 0,6H), 2,25 (d, J = 2,9 Hz, 3H), 2,4-3,2 (m, 4H), 3,6-4,4 (m, 4H), 4,6-4,9 (m, 3H), 5,52 (d, J = 5,2 Hz, 0,6H), 5,78 (d, J = 8,1 Hz, 0,4H), 6,6 (szer. s, 1H), 6,9-7,9 (m, 8H), 8,39 (d, J = 8,1 Hz, 0,4H), 8,44 (d, J = 8,3 Hz, 0,6H), 8,74 (d, J = 6,8 Hz, 1H), Analiryczna HPLC (kolumna cyano): 11,830 min. LC-MS (ES+) m/e = 607 (M+H).
116
PL 204 619 B1
(2-benzyloksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-amid kwasu 1-[2-(4-acetyloamino-5-chloro-2-metoksy-benzoiloamino)-propionylo]-4,4-difluoro-pirolidyno-2-karboksylowego (116c)
Związek tytułowy w postaci białawej substancji stałej (0,07 g, 29% wydajności) wytworzono ze związku 115c i syn-40.
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ 0,99 (d, J = 6, 9 Hz, 1,35H), 1,32 (d, J = 6,9 Hz, 1,65H), 2,25 (s, 1,5H), 2,26 (s, 1,5H), 2,3-3,2 (m, 4H), 3,95 (s, 0,55H), 3,98 (s, 0,45H), 3,7-4,1 (m, 2,5H), 4,2-4,5 (m, 1,5H), 4,6-4,9 (m, 3H), 5,52 (d, J=5,3 Hz, 0,55H), 5,80 (d, J = 5,3 Hz, 0,45H), 7,0-7,4 (m, 4H), 7,7 -7,9 (m, 2H), 8,0-8,4 (m, 2H), 8,49 (d, J = 6,5 Hz, 1H), 8,93 (d, J = 6,7 Hz, 1H) ppm. Analityczna HPLC (kolumna cyano): 12,959 min. LC-MS (ES+) m/e = 637 (M+H).
(2-etoksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-amid kwasu 1-[2-(4-acetyloamino-3-chloro-benzoiloamino)-propionylo]-4,4-difluoro-pirolidyno-2-karboksylowego (116d)
Związek tytułowy w postaci białawej substancji stałej (0,27 g, 66% wydajności), jako mieszaninę epimerów 92:8, wytworzono ze związku 115b i estru allilowego kwasu syn-(2-etoksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-karbaminowego.
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ 1,0-1,5 (m, 6H), 2,25 (s, 1,8H), 2,26 (s, 1,2H), 2,3-3,1 (m, 4H), 3,3 -4,3 (m, 4H), 4,5-4,9 (m, 3H), 5,45 (d, J = 5,3 Hz, 0,75H), 5,59 (d, J = 5,2 Hz, 0,25H), 6,7-7,1 (m, 2H), 7,62 (dd, J = 8,7, 2,0 Hz, 1H), 7,76 (m, 1H), 7,85 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 8,48 (m, 1H) ppm. Analityczna HPLC (kolumna C18): 13,300 (91,8%), 14,045 (8,2%) min. LC-MS (ES+) m/e = 545 (M+H).
(2-cykloheksyloksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-amid kwasu 1-[2-(4-acetyloamino-3-chloro-benzoiloamino)-propionylo]-4,4-difluoro-pirolidyno-2-karboksylowego (116e)
Związek tytułowy w postaci mieszaniny epimerów 93:7 wytworzono ze związku 115b i estru allilowego kwasu syn-{2-cykloheksyloksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-karbaminowego.
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ 1,0-2,0 (m, 13H), 2,25 (s, 2H), 2,26 (s, 1H), 2,40 (dd, J = 17,3, 10,1 Hz, 1H), 2,84 (dd, J = 17,3, 8,5 Hz, 1H), 2,5-3,0 (m, 2H), 3,5-4,3 (m, 3,5H), 4,5-4,9 (m, 2,5H), 5,59 (d, J = 5,3 Hz, 0,75H), 5,76 (d, J = 5,2 Hz, 0,25H), 6,74 (szer. d, J = 5,7 Hz, 0,25H), 6,93 (szer. d, J = 7,1 Hz, 1H), 7,06 (szer. d, J = 7,8 Hz, 0,75H), 7,62 (dd, J = 8,6, 2,0 Hz, 1H), 7,78 (m, 1H), 7,85 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 8,35 (szer. d, J = 6,6 Hz, 0,25H), 8,50 (szer. d, J = 8,2 Hz, 0,75H) ppm. Analityczna HPLC (kolumna C18): 17,112 (93%), 17,433 (7%) min. LC-MS (ES+) m/e = 599 (M+H).
PL 204 619 B1
117
[2-(indanol-2-ilo-)oksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo]-amid kwasu 1-[2-(4-acetyloamino-3-chloro-benzoiloamino)-propionylo]-4,4-difluoro-pirolidyno-2-karboksylowego (116f)
Związek tytułowy w postaci białawej substancji stałej (0,34 g, 71%), jako mieszaninę epimerów 62:38, wytworzono ze związku 115b i estru allilowego kwasu [2-(indanol-2-ilo]oksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-karbaminowego.
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ 1,09 (d, J = 6,9 Hz, 0,6H), 1,21 (d, J = 6,9 Hz, 0,9H), 1,33 (d, J = 6,9 Hz, 0,9H), 1,42 (d, J = 6,9 Hz, 0,6H), 2,28 (s, 2H), 2,29 (s, 1H), 2,40 (dd, J = 17,4, 10,3 Hz, 1H), 2,4-3,3 (m, 7H) , 3,6-4,2 (m, 2H) , 4,5-4,8 (m, 4H) , 5,66 (m, 0,6H), 5,84 (d, J = 4,3 Hz, 0,2H), 6,22 (m, 0,2H), 6,7-7,0 (m, 2H), 7,2-7,3 (m, 4H), 7,5-7,7 (m, 1H), 7,8-8,0 (m, 2H), 8,52 (m, 0,6H), 8,62 (szer. d. J = 6,5 Hz, 0,4H) ppm. Analityczna HPLC (kolumna C18): 16,556 (62,0%), 16,824 (38,0%) min. LC-MS (ES+) m/e = 633 (M+H).
(2-cyklopentylometoksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-amid kwasu 1-[2-(4-acetyloamino-3-chloro-benzoiloamino)-propionylo]-4,4-difluoro-2-karboksylowego (116g)
Związek tytułowy w postaci białawej substancji stałej (0,20 g, 44%) wytworzono ze związku 115b i estru allilowego kwasu syn-(2-cyklopentylometoksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-karbaminowego.
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ 1,0-1,8 (m, 11H), 1,9-3,0 (m, 5H), 2,26 (s, 3H), 3,29 (m, 0,25H), 3,47 (m, 0,75H), 3,58 (m, 0,25H), 3,74 (m, 0,75H), 3,8 (m, 0,75H) 4,1 (m, 0,25H), 4,25 (m, 1H), 4,4-4,8 (m, 3H), 5,44 (d, J= 5,2 Hz, 0,75H), 5,62 (d, J = 5,2 Hz, 0,25H), 6,7 (br, 0,25H) 6,91 (d, J = 7,1 Hz, 1H), 7,1 (m, 0,75H), 7,59 (d, J = 8,5 Hz, 0,25H), 7,63 (dd, J = 8,5, 2,5 Hz, 0,75H), 7,75 (m, 1H), 7,86 (d, J = 1,8 Hz, 1H), 8,33 (szer. d, J = 6,5 Hz, 0,25H), 8,49 (szer. d, J = 8,4 Hz, 0,75H) ppm. Analityczna HPLC (kolumna C18): 17,705 min. LC-MS (ES+) m/e = 599 (M+H).
(2-fenyloetoksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-amid kwasu 1-[2-(4-acetyloamino-3-chloro-benzoiloamino)-propionylo]-4,4 difluoro-2-karboksylowego (116h)
Związek tytułowy w postaci białawej substancji stałej (0,15 g, 24%) wytworzono ze związku 115b i estru allilowego kwasu syn-(5-okso-2-fenyloetoksy-tetrahydro-furan-3-ylo)-karbaminowego.
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ 1,29 (d, J = 6,9 Hz, 0,75H), 1,40 (d, J = 6,9 Hz, 2,25H), 2,25 (s, 2,25H), 2,26 (s, 0,75H), 2,3-3,0 (m, 6H), 3,7-4,8 (m, 7H), 5,38 (d, J = 5,3 Hz, 0,75H), 5,67 (d, J = 5,1 Hz, 0,25H), 6,65 (m, 1H), 6,90 (d, J = 7,0 Hz, 0,75H), 7,06 (d, J = 7,6 Hz, 0,25H), 7,1-7,3 (m, 5H), 7,57 (d, J = 8,6 Hz, 0,25H), 7,63 (d, J = 8,6 Hz, 0,75H), 7,75 (m, 1H), 7,86 (d, J = 1,8 Hz, 1H),
118
PL 204 619 B1
8,35 (d, J = 6,2 Hz, 0,25H), 8,49 (d, J = 8,3 Hz, 0,75H) ppm. Analityczna HPLC (kolumna C18): 17,265 min. LC-MS (ES+) m/e = 621 (M+H).
Ester tert-butylowy kwasu 2-(2-benzyloksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylokarbamoilo)-pirolidyno-1-karboksylowego (118)
Związek tytułowy w ilości 1,53 g (94% wydajności), w postaci białej substancji stałej, wytworzono ze związku 40 (1,16 g, 4,0 mmola) i Boc-Pro-OH, zgodnie z procedurą stosowaną do wytworzenia związku 100 (Schemat XVIII).
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ 1,61 (br, 9H), 188 (br, 2H), 2,00-2,50 (m, 3H), 2,80-3,10 (m, H), 3,20-3,60 (m, 2H), 4,05-4,45 (m, 1,5H), 4,58-4,80 (m, 1,5H), 4,83-4,98 (m, H), 5,43-5,53 (m, H), 7,26 -7,45 (m, 5H), 7,60-7,80 (d, H). Analityczna HPLC: 11,32 min., LC-MS: m/e = 405 (M+H+).
Kwas 2-fenyloaminopropionowy (119)
Mieszaninę alaniny (356 mg, 4,0 mmola), jodobenzenu (816 mg, 4,0 mmola), trans-dichlorobis(tri-o-to]ilofosfino)palladu (II) {Pd[P(o-Tol)3]2Cl2} (160 mg, 0,2 mmola), jodku miedzi (I) (40 mg, 0,2 mmola), K2CO3 (552 mg, 4,0 mmola), chlorku benzylotrietyloamoniowego (160 mg, 0,8 mmola), trietyloaminy (1,6 ml) i wody (0,8 ml) w DMF (8 ml) mieszano w atmosferze azotu w temperaturze 100°C przez 20 godzin. Mieszaninę oziębiono do temperatury pokojowej, rozcieńczono octanem etylu (50 ml) i wodą (50 ml) i zakwaszono 6N HCl do pH 2 do 3. Warstwę wodną ekstrahowano octanem etylu (50 ml x 4). Połączone warstwy organiczne przemyto wodą, solanką, wysuszono nad bezwodnym Na2SO4, przesączono i odparowano pod próżnią, uzyskując czerwony olej. Po szybkiej chromatografii z układem heksan/octan etylu/kwas octowy (95/5/0 do 80/20/0,5) otrzymano 300 mg (45% wydajności) związku tytułowego w postaci różowej substancji stałej.
1H-NMR (500 MHz, CDCl3/CD3OD = 0,5 ml/3 krople): δ 1,45 (d, 3H), 4,02-4,15 (m, H), 6,57-6,70 (m, 3H), 7,11-7,25 (m, 2H); Analityczna HPLC: 6,10 min., LC-MS: m/e = 166 (M+H+).
(2-benzyloksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-amid kwasu 1-(2-fenyloamino-propionylo)-pirolidyno-2-karboksylowego (120a i (120b).
Do roztworu związku 118 (405 mg, 1,0 mmola) przez 1 godzinę dodawano TFA (2 ml) w CH2Cl2 (2 ml). Roztwór reakcyjny odparowano pod próżnią i cztery razy poddano destylacji azeotropowej z CH2Cl2. Otrzymano (2-benzyloksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-amid kwasu pirolidyno-2-karboksylowego w postaci bladożółtej substancji stałej.
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ 1,87-2,15 (m, 4H), 2,30-2,70 (m, 2H), 2,80-3,09 (m, H), 3,45 (br, 2H), 4,35-4,98 (m, 3H), 5,30-5,56 (m, H), 7,10-7,60 (m, 5H); Analityczna HPLC: 7,78/8,20 min., LC-MS: m/e = 305 (M+H+).
Do roztworu kwasu 2-fenyloaminopropionowego (119) (300 mg, 1,8 mmola) w CH2Cl2 (10 ml) w temperaturze 0°C w ciągu 10 minut dodano HOBT (270 mg, 2,0 mmola) i EDC (2,1 g, 11 mmoli).
PL 204 619 B1
119
Dodano diizopropyloetyloaminy (2 ml), a następnie roztworu (2-benzyloksy-5-okso-tetrahydro-furan-3-ylo)-amidu kwasu pirolidyno-2-karboksylowego w CH2Cl2 (10 ml). Mieszaninę mieszano w temperaturze pokojowej przez 4 godziny, rozcieńczono CH2Cl2 (40 ml), przemyto wodą, a potem solanką. Warstwę organiczną wysuszono nad bezwodnym Na2SO4, przesączono i odparowano pod próżnią, uzyskując bladożółtą substancję stałą. Po szybkiej chromatografii z układem CH2Cl2/metanol (99/1 do 98/2) otrzymano 151 mg (33% wydajności) diastereomeru anti związku tytułowego (120a) i 129 mg (29% wydajności) diastereomeru syn (120b) w postaci białej substancji stałej.
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) dla diastereomeru anti: δ 1,37-1,41 (m, 3H), 1,50-2,45 (m, 4H), 2,60 -1,70 (m, 0,3H), 2,89-2,94 (m, 0,7H), 3,40-3,80 (m, 2H), 4,10-4,50 (m, 3H), 4,50-4,90 (m, 3H), 5,26 (s, 0,3H), 5,38 (s, 0,7H), 6,45-6,60 (m, 2,3H), 6,65-6,80 (m, H), 7,10-7,20 (m, 2,5H), 7,25-7,50 (m, 4,5H), 7,53-7,70 (m, 0,7H), 7,82 (d, H). Dla diastereomeru syn: δ 0,86-0,89 (m, H), 1,20-1,40 (m, 4H), 1,60-2,45 (m, 4H), 2,80-2,86 (m, H), 3,58-3,65 (m, 2H), 4,20-4,40 (m, H), 4,50-4,75 (m, 2H), 4,90 (d, H), 5,52 (d, HO, 6,45-6,70 (m, 3H), 6,75-6,85 (m, H), 7,10-7,20 (m, 2,3H), 7,30-7,50 (m, 5,7H); Analityczna HPLC: 10,55 dla diastereomeru anti i 10,62 min. dla diastereomeru syn; LC/MS: m/e =4 52 (M+H+) dla obydwu diastereomerów.
Kwas 4-okso-3-{[1-(2-fenyloamino-propionylo]-pirolidyno-2-karbonylo]-amino}-masłowy (121)
Związek tytułowy w ilości 101 mg (83% wydajności) w postaci białej substancji stałej wytworzono ze związku 120 (151 mg, 0,33 mmola) prowadząc hydrolizę według sposobu A.
1H-NMR (500 MHz, CDCl3/CD3OD = 1/1): δ 1,20-1,65 (m, 2H), 1,65-2,35 (m, 3H), 2,40-3,00 (m, H), 3,20-3,80 (m, 2H), 3,90-4,90 (m, 7H), 7,25-7,80 (m, 5H). Analityczna HPLC: 6,38 min. LC-MS m/e = 362 (M+H+).
PROCEDURA OGÓLNA WYWATWARZANIA ZWIĄZKÓW O WZORZE I WEDŁUG WYKONANIA C (SCHEMATY XXIII-XXV)
Schemat XXIII
Sposób hydrolizy A:
Porcję 0,005-50 mmola hemiacetalu alkilowego rozpuszczono w 2,5N roztworze HCl/CH3CN (10/1) i mieszano w temperaturze pokojowej aż do zakończenia reakcji. Otrzymaną warstwę wodną przemyto eterem dietylowym i liofilizowano, uzyskując produkt.
Sposób hydrolizy B:
Porcję 0,005-50 mmola hemiacetalu alkilowego pochłonięto w nierozcieńczonym kwasie mrówkowym i mieszano przez noc w temperaturze pokojowej. Mieszaninę roztarto z mieszaninę heksan/eter dietylowy, 3:1, uzyskując osad. Rozpuszczalnik zdekantowano i osad przemyto eterem dietylowym, otrzymując produkt.
Sposób hydrolizy C:
Porcję 0,005-50 mmola hemiacetalu alkilowego rozpuszczono w CH3OH i 20% Pd(OH)2/C i mieszano pod H2 aż do zakończenia reakcji. Otrzymaną zawiesinę przesączono i roztwór zatężono pod próżnią, a następnie roztarto z mieszaniną heksan/eter dietylowy, 3:1 i otrzymano osad. Rozpuszczalnik zdekantowano i osad przemyto eterem dietylowym, otrzymując produkt.
120
PL 204 619 B1
Sposób hydrolizy D:
Porcję 0,005-50 mmola hemiacetalu alkilowego w mieszaninie CH3CN/woda (1/2) mieszano z kwaś ną żywicą (Dowex 50w x 2, typ H+) aż do zakończenia reakcji, Roztwór przesączono i żywicę przemyto mieszaninę CH3CN/woda (1/4). Otrzymaną warstwę wodną przemyto eterem dietylowym, zatężono do mniejszej objętości pod próżnią i liofilizowano, uzyskując produkt.
Kwas 4-okso-3-[(1-{2-(9-okso-9H-fluoreno-4-karbonylo)-amino]-propionylo}-pirolidyno-2-karbonylo)-amino]-masłowy (122a).
Porcję 109,0 mg (0,19 mmola) związku 91 hydrolizowano zgodnie ze sposobem A i otrzymano 88 mg (96% wydajności) związku tytułowego. Analityczna HPLC: 7,15 min., LC-MS (ES+) m/e = 492,2 (M+H).
Kwas 3-({1-[2-(4-amino-3-chloro-benzoiloamino)-propionylo]-pirolidyno-2-karbonylo}-amino)-4-okso-masłowy (122b).
Porcję 51,0 mg (0,096 mmola) związku 76 hydrolizowano zgodnie ze sposobem A i otrzymano 43,0 mg (100% wydajności) związku tytułowego.
1H-NMR (500 MHz, CD3OD/D2O: 0,5 ml/10 kropli): δ 1,37-1,52 (m, 3H), 1,80-2,20 (m, 3H), 2,20 -2,37 (m, H), 2,49-2,60 (m, H), 2,60-2,75 (m, H), 3,70-3,80 (m, H), 3,80-3, 95 (m, H), 4, 20-4,35 (m, H), 4, 40-4, 50 (m, H), 4,50-4,70 (m, H), 4,70-4,85 (m, H), 6,85-6,87 (d, H), 7,58-7,60 (m, H), 7,77 (s, H); czas retencji w analitycznej HPLC: 6,54 min. LC-MS m/z = 439 (M+H+).
PL 204 619 B1
121
Kwas 3-({1-[2-(3,5-dichloro-4-metoksy-benzoiloamino)-propionylo]-pirolidyno-2-karbonylo}-amino)-4-okso-masłowy (122c)
Porcję 51,0 mg (0,088 mmola) związku 92 hydrolizowano zgodnie ze sposobem A i otrzymano
24,0 mg (56% wydajności) związku tytułowego: Analityczna HPLC: 6,41 min. LC-MS (ES+) m/e = 488,3 (M+H).
Kwas 3-({1-[2-(4-metoksy-3,5-dimetylo-benzoiloamino)-propionylo]-pirolidyno-2-karbonylo}-amino)-4-okso-masłowy (122d)
Porcję 55,0 mg (0,102 mmola) związku 77 hydrolizowano zgodnie ze sposobem A i otrzymano 44,0 mg (96% wydajności) związku tytułowego. Analityczna HPLC (C18): 8,70 min.
1H-NMR (CDCl3, 500 MHz): δ 1,23-1,70 (m, 3H), 1,80-2,70 (m, 10H), 2,70-3,15 (m, 2H), 3,58 -4,20 (m, 5H), 4,32-5,50 (m, 3H), 5,60-6,00 (m, H), 6,80-7,90 (m, 4H); LC-MS (ES+) m/e = 448,2 (M+H).
Kwas 4-okso-3-[(1-{2-[pirydyno-2-karbonylo)-amino]-propionylo}-pirolidyno-2-karbonylo)-amino]-masłowy (122e)
Porcję 55,0 mg (0,114 mmola) związku 88 hydrolizowano zgodnie ze sposobem A i otrzymano 30,0 mg (67% wydajności) związku tytułowego. Analityczna HPLC: 6,41 min. LC-MS (ES+) m/e = 391,3 (M+H).
Kwas 3-({1-[2-(4-acetyloamino-3-chloro-benzoiloamino)-propionylo]-pirolidyno-2-karbonylo}-amino)-4-okso-masłowy (122f)
Porcję 52 mg (0,091 mmola) związku 78 hydrolizowano zgodnie ze sposobem A i otrzymano 40 mg (91% wydajności) związku tytułowego.
1H-NMR (500 MHz, CD3OD) δ 1,08-1,61 (m, 3H), 1,77-2,41 (m, 3H), 2,21 (s, 3H), 2,41-2,77 (m, 2H), 3,43-3,63 (m, 0,3H), 3,65-3,76 (m, 1H), 3,81-3,94 (m, 1H), 4,18-4,34 (m, 1H), 4,42-4,64 (m, 1,7H), 4,77 (q, 1H), 7,79 (dd, 1H). Analityczna HPLC: 4,97 min. LC-MS (ES+) m/e = 481,3 (M+H).
122
PL 204 619 B1
Kwas 3-({1-[2-(4-amino-3,5-dichloro-benzoiloamino)-propionylo]-pirolidyno-2-karbonylo}amino)-4-okso-masłowy (122g)
Porcję 44,3 mg (0,079 mmola) związku 89 hydrolizowano zgodnie ze sposobem A i otrzymano 30 mg (81% wydajności) związku tytułowego. Analityczna HPLC: 5,40 min. LC-MS (ES+) m/e = 473,2 (M+H).
Kwas 3-({1-[2-(3-izopropoksy-benzoiloamino)-propionylo]-pirolidyno-2-karbonylo}-amino)-4-okso-masłowy (122h)
Porcję 52,0 mg (0,097 mmola) związku 79 hydrolizowano zgodnie ze sposobem A i otrzymano 30,0 mg (69% wydajności) związku tytułowego. Analityczna HPLC: 8,92 min. LC-MS (ES+) m/e = 448,3 (M+H).
Kwas 3-({1-[2-(3-benzyloksy-4-metoksy-benzoiloamino)-propionylo]-pirolidyno-2-karbonylo}-amino)-4-okso-masłowy (122i)
Porcję 50,8 mg (0,082 mmola) związku 81 hydrolizowano zgodnie ze sposobem A i otrzymano 22,4 mg (52% wydajności) związku tytułowego. Analityczna HPLC: 6,72 min. LC-MS (ES+) m/e = 526,3 (M+H).
PL 204 619 B1
123
Kwas 4-okso-3-[(1-{2-[(chinoksalino-2-karbonylo)-amino]-propionylo}-pirolidyno-2-karbonylo)-amino]-masłowy (122j)
Porcję 38,0 mg (0,072 mmola) związku 80 hydrolizowano zgodnie ze sposobem A i otrzymano
32,0 mg (100% wydajności) związku tytułowego. Analityczna HPLC: 5,95 min. LC-MS (ES+) m/e = 442,3 (M+H).
Kwas 3-({1-[2-(3,5-dichloro-4-hydroksy-benzoiloamino)-propionylo]-pirolidyno-2-karbonylo}-amino)-4-okso-masłowy (122k)
Porcję 35 mg (0,060 mmola) związku 83 hydrolizowano zgodnie ze sposobem A i otrzymano 29,4 mg (75% wydajności) związku tytułowego. Analityczna HPLC: 7,91 min.
1H-NMR (500 MHz, CD3OD) δ 1,47 (m, 3H), 1,8-2,3 (m, 4H), 2,49 (m, 1H), 2,61 (m, 1H), 3,5 (szer. m, 0,2H), 3,69 (szer. m, 0,9H), 3,84 (szer. m, 0,9H), 4,27 (m, 1H), 4,46 (m, 1H), 4,57 (m, 1H), 4,73 (m, 1H), 7,83 (m, 2H) ppm. LC-MS (ES+) m/e = 474,1 (M+H).
Kwas 3-({1-[2-(4-amino-3-trifluorometylo-benzoiloamino)-propionylo]-pirolidyno-2-karbonylo}-amino)-4-okso-masłowy (1221)
Porcję 10 mg (0,021 mmola) związku 98w hydrolizowano zgodnie ze sposobem A i otrzymano 7,9 mg (94% wydajności) związku tytułowego. Analityczna HPLC: 6,64 min. LC-MS (ES+) m/e = 473,3 (M+H).
Kwas 3-({1-[2-(3-chloro-4-dimetyloamino-benzoiloamino)-propionylo]-pirolidyno-2-karbonylo}-amino)-4-okso-masłowy (122m)
Porcję 10,0 mg (0,021 mmola) związku 98x hydrolizowano zgodnie ze sposobem A i otrzymano 7,0 mg (84% wydajności) związku tytułowego. Analityczna HPLC: 5,15 min. LC-MS (ES+) m/e = 467,3 (M+H).
124
PL 204 619 B1
Kwas 3-({1-[2-(4-dimetyloamino-3,5-difluoro-benzoiloamino)-propionylo]-pirolidyno-2-karbonylo}-amino)-4-okso-masłowy (122n)
Porcję 20,0 mg (0,043 mmola) związku 98y hydrolizowano zgodnie ze sposobem A i otrzymano
16,8 mg (100% wydajności) związku tytułowego. Analityczna HPLC: 5,86 min. LC-MS (ES+) m/e =
469,3 (M+H)
Kwas 3-({1-[2-(4-amino-3-chloro-benzoiloamino)-propionylo]-pirolidyno-2-karbonylo}-amino)-4-okso-masłowy (122o)
Porcję 20,0 mg (0,046 mmola) związku 98m hydrolizowano zgodnie ze sposobem A i otrzymano 16,7 mg (100% wydajności) związku tytułowego. Analityczna HPLC: 8,47 min. LC-MS (ES+) m/e = 439,2 (M+H).
Kwas 3-({1-[2-(4-amino-2,3,5,6-tetrafluoro-benzoiloamino)-propionylo]-pirolidyno-2-karbonylo}-amino)-4-okso-masłowy (122p)
Porcję 20,0 mg (0,042 mmola) związku 98z hydrolizowano zgodnie ze sposobem A i otrzymano 15,3 mg (91% wydajności) związku tytułowego. Analityczna HPLC: 7,90 min. LC-MS (ES+) m/e =
477,2 (M+H).
Kwas 4-okso-3-[(1-{2-[(chinolino-6-karbonylo)-amino]-propionylo}-pirolidyno-2-karbonylo)-amino]-masłowy (122q)
Porcję 44 mg (0,080 mmola) związku 93 hydrolizowano zgodnie ze sposobem A i otrzymano 41 mg (100% wydajności) związku tytułowego.
1H-NMR (500 MHz, CD3OD) δ 1,24-1,69 (m, 3H), 1,75-2,37 (m, 4H), 2,39-2,87 (m, 2H), 3,46 -4,04 (m, 2H) 4,11-4,77 (m, 3H), 8,19 (dd, 1H), 8,33 (d, 1H), 8,56-8,58 (m 1H), 8,85 (s, 1H), 9,27-9,39 (m, 2H); Analityczna HPLC: 4,91 min. LC-MS (ES+) m/e = 441,2 (M+H).
PL 204 619 B1
125
Kwas 3-({1-[2-(4-acetyloamino-5-chloro-4-metoksy-benzoilo-amino)-propionylo]-pirolidyno-2-karbonylo}-amino)-4-okso-masłowy (122r)
Porcję 44,5 mg (0,074 mmola) związku 87 hydrolizowano zgodnie ze sposobem A i otrzymano
34,5 mg (91% wydajności) związku tytułowego. Analityczna HPLC: 6,88 min. LC-MS (ES+) m/e = 511,2 (M+H).
Kwas 3-[(1-{2-[3-chloro-4-(2,2-dimetylo-propionyloamino)-benzoiloamino]-propionylo}-pirolidyno-2-karbonylo)-amino]-4-okso-masłowy (122s)
Porcję 19,0 mg (0,036 mmola) związku 98aa hydrolizowano zgodnie ze sposobem A i otrzymano 14,5 mg (90% wydajności) związku tytułowego. Analityczna HPLC: 7,28 min. LC-MS (ES+) m/e = 523,3 (M+H).
Kwas 3-({l-[2-(3-chloro-4-propionylo-benzoiloamino)-propionylo]-pirolidyno-2-karbonylo}-amino)-4-okso-masłowy (122t)
Porcję 21,0 mg (0,042 mmola) związku 98ab hydrolizowano zgodnie ze sposobem A i otrzymano 17,5 mg (97% wydajności) związku tytułowego. Analityczna HPLC: 5,72 min. LC-MS (ES+) m/e = 495,2 (M+H).
Kwas 3-({1-[2-(3-chloro-4-fenyloacetyloamino-benzoiloamino)-propionylo]-pirolidyno-2-karbonylo}-amino)-4-okso-masłowy (122u)
Porcję 10,0 mg (0,017 mmola) związku 98ac hydrolizowano zgodnie ze sposobem A i otrzymano 7,9 mg (85% wydajności) związku tytułowego. Analityczna HPLC: 7,52 min. LC-MS (ES+) m/e = 557,2 (M+H).
126
PL 204 619 B1
Kwas 3-[(1-{2-[3-chloro-4-(3-metylo-butyryloamino)-benzoilo-amino]-propionylo}-pirolidyno-2-karbonylo}-amino]-4-okso-masłowy (122v)
Porcję 8,0 mg (0,015 mmola) związku 98ad hydrolizowano zgodnie ze sposobem A i otrzymano
6,5 mg (96% wydajności) związku tytułowego. Analityczna HPLC: 6,92 min. LC-MS (ES+) m/e = 523,2 (M+H).
Schemat XXV
108a, X=CI, Y=NH2, Z=H. Qi=F, Qz=H 123a, X=CI. Y=NH2. Z=H, Qi=F. Q2=H
116b. X=CI. Y=AcNH, Z=H, Qi=Cb=F 123b, X=CI. Y=AcNH, Z=H, Qi=Cb=F
116c, X=CI, Y=AcNH, Z=CH3O.Qi=Q2=F 123c, X=CI, Y=AcNH, Z=CHaO,Qi =Q2=F
Kwas 3-({1-[2-amino-3-chloro-benzoiloamino)-propionylo]-4-fluoro-pirolidyno-2-karbonylo}-amino)-4-okso-masłowy (123a)
Porcję 12,4 mg (0,022 mmola) związku 108b hydrolizowano zgodnie ze sposobem A i otrzymano 9,6 mg (93% wydajności) związku tytułowego. Analityczna HPLC: 6,99 min. LC-MS (ES+) m/e = 473,2 (M+H).
Kwas 3-({1-[2-(4-acetyloamino-3-chloro-benzoiloamino)-propionylo]-4,4-difluoro-pirolidyno-2-karbonylo}-amino)-4-okso-masłowy (123b)
Porcję 26,2 mg (0,043 mmola) związku 116b hydrolizowano zgodnie ze sposobem A i otrzymano 10,8 mg (49% wydajności) związku tytułowego. Analityczna HPLC: 9,89 min. LC-MS (ES+) m/e = 517,2.
Kwas 3-({1-[2-(4-acetyloamino-3-chloro-2-metoksy-benzoiloamino)-propionylo]-4,4-difluoro-pirolidyno-2-karbonylo}-amino)-4-okso-masłowy (123c)
Porcję 23,1 mg (0,036 mmola) związku 116c hydrolizowano zgodnie ze sposobem A i otrzymano 1,8 mg (9% wydajności) związku tytułowego. Analityczna HPLC: 11,87 min. LC-MS (ES+) m/e = 547,1 (M+H).
METODY BIOLOGICZNE
Dane z badań in vitro, ex vivo i in vivo dla wybranych związków według wynalazku otrzymaliśmy stosując opisane poniżej sposoby. Wyniki przedstawiono w Tablicach 2-8. Oznaczenie „ND” wskazuje, że w opisanym badaniu związku nie badano.
W badaniach kaspazy ICE kategoria „A” wskazuje <10 nM zahamowania. Kategoria „B” wskazuje 10-1000 nM zahamowania. Kategoria „C” wskazuje >1000 nM zahamowania. Patrz Tablice 2 i 3.
W badaniach PBMC kategoria „A” wskazuje <500 nM zahamowania. Kategoria „B” wskazuje 500-1000 nM zahamowania. Kategoria „C” wskazuje 1001-2000 nM zahamowania. Kategoria „D” wskazuje >2000 nM zahamowania Patrz Tablica 4.
W badaniu pełnej krwi kategoria „A” wskazuje <2500 nM zahamowania. Kategoria „B” wskazuje 2500-7500 nM zahamowania. Kategoria „C” wskazuje >7500 nM zahamowania. Patrz Tablica 5.
W badaniach metabolizmu in situ, podane wartości [f(g) X f(h)] mają następujące znaczenia: kategoria „A” oznacza <0,25. Kategoria „B” oznacza 0,25-0, 49. Kategoria „C” oznacza 0,5-0,75. Kategoria „D” oznacza >0,75. W pomiarach wydalania żółci kategoria „A” oznacza <5%. Kategoria „B” oznacza 5-10%. Kategoria „C” oznacza >10%. Patrz Tablica 6.
W badaniu klirensu i.v., podane wartości mają następujące znaczenia: kategoria „A” oznacza <50. Kategoria „B” oznacza 50-80. Kategoria „C” oznacza >80. Patrz Tablica 7.
W badaniu biodostępności podane wartości Cmax ^g/ml) mają następujące znaczenia: kategoria „A” oznacza <2,5. Kategoria „B” oznacza 2,5-5,0. Kategoria „C” oznacza >5. Wartości AUC ^g x godz./ml) mają następujące znaczenia: kategoria „A” oznacza <2,5. Kategoria „B” oznacza 2,5-5,0. Kategoria „C” oznacza >5. Zakresy półtrwania (w godzinach) mają następujące znaczenia: kategoria „A”
PL 204 619 B1
127 oznacza <1,5. Kategoria „B” oznacza 1,5-2,0. Kategoria „C” oznacza >2,0. Wartości F (%) mają następujące znaczenia: kategoria „A” oznacza <33. Kategoria „B” oznacza 33-67. Kategoria „C” oznacza >67. Patrz Tablica 8.
Badania in vitro
Zahamowanie enzymu
Wartości Ki dla badanych związków z różnymi kaspazami otrzymano zgodnie z metodą opisaną przez Margolin i in. (J. Biol. Chem., 272, str. 7223-7228 (1997)). Badania prowadzono w 10 mM Tris (Sigma Corp., St. Louis, MO), pH 7,5, 1 mM di-tiotreitolu (DTT, Research Organic Inc., Cleveland, OH) i 0,1% CHAPS (Pierce, Rockford, IL) w temperaturze 37°C. Dla kaspazy-3 w celu poprawienia trwałości enzymu do buforu do badań dodano roztworu 8% gliceryny. Porcję 65 gl buforu do badań i porcję 5 gl inhibitora w odpowiednich rozcieńczeniach w DMSO pipetowano do 96-studzienkowej płytki, potraktowano 10 gl kaspazy, a następnie rozcieńczono w buforze do badań (0,5 40 nM aktywnego białka przez miareczkowanie centrum aktywnego). W każdym z oznaczeń stosowano próbę kontrolną zawierającą DMSO, ale bez wprowadzania związku. Następnie płytki inkubowano w temperaturze 37°C przez 15 minut, po czym w celu zapoczątkowania reakcji dodano odpowiedniego substratu (20 gl, końcowe stężenie 1-4 x KM, końcowa objętość 100 gl). Szybkości reakcji mierzono w temperaturze 37°C albo przez pomiar następującego w czasie wzrostu absorbancji przy 405 nM (dla substratów pNA), albo przez pomiar wzrostu fluorescencji (Ex 390, Em 460) (dla substratów AMC). Uzyskane szybkości wykreślono w funkcji stężenia inhibitora i dane dopasowano do równania Morrisona na ścisłe wiązanie dla inhibitorów kompetycyjnych (J.F. Morrison, Biochem. Biophys. Acta, 185, str. 269 -286 (1996)). W poszczególnych badaniach stosowano następujące substraty:
Kaspaza-1: Suc-YVAD-pNA (Bachem, King of Prussia, PA) (końcowe stężenie w badaniu - 80 gM),
Kaspaza-3: Ac-DEVD-pNA (Bachem, King of Prussia, PA) (końcowe stężenie w badaniu - 60 gM),
Kaspaza-4: Ac-WEHD-AMC (Synpep, Dublin, CA) (końcowe stężenie w badaniu - 20 gM),
Kaspaza-7: Ac-DEVD-AMC (Bachem, King of Prussia, PA) (końcowe stężenie w badaniu - 50 gM),
Kaspaza-8: Ac-DEVD-pNA (Bachem, King of Prussia, PA) (końcowe stężenie w badaniu - 80 gM).
T a b l i c a 2. Kaspaza-1. Dane dotyczące zahamowania
Przykład Kaspaza-1 Ki (nM)
1 2
5a A
5b A
5c A
5d A
5e B
5f B
5g B
5h A
5i A
5j A
5k A
5l B
5m A
5n A
5o B
5p B
5q B
5r B
128
PL 204 619 B1 cd. tablicy 2
1 2
5s B
5t C
5u B
5v B
5w B
5x A
5y A
5z A
5aa A
5ab B
5ac A
5ad A
5ae B
5af B
5ag A
5ah B
5ai A
5 aj B
5ak B
5al A
5am A
5an B
5ao B
5ap B
5aq B
5ar A
5as A
5at B
5au B
5av B
5aw A
5ax A
5ay A
5az A
5ba A
5bb A
5bc B
5bd A
PL 204 619 B1
129 cd. tablicy 2
1 2
7a A
7b B
7c A
7d A
7e B
7f B
7g A
7h B
7i B
7j C
7k B
7l B
7m B
7n B
7o A
7p A
7q B
7r B
7s B
7t B
7u B
7v B
7w A
7x B
7y B
7z B
7aa A
7ab B
7ac B
7ad B
7ae B
7af B
7ag B
7ah A
7ai A
7 aj A
7ak A
7al B
7am A
130
PL 204 619 B1 cd. tablicy 2
1 2
7an A
7ao B
7ap B
7aq B
7ar A
7as A
7at A
9a B
9b A
9c A
9d A
9e A
9f A
9g A
15a A
15b A
15c A
15d B
15e B
15f B
16a B
16b A
17a B
17b B
17c A
17d B
17e B
18a B
18b A
18c B
18d B
18e A
18f B
20a A
20b A
20c A
20d B
20e A
PL 204 619 B1
131 cd. tablicy 2
1 2
20f A
20g A
20h A
20i B
20j B
20k A
20l A
20m A
20n A
20o A
20p A
20q B
20r B
20s A
20t B
23a A
23b B
23c A
23d A
23e A
23f B
23g A
23h A
23i B
24a A
24b C
24c AS
24d B
24e B
25a A
25b A
25c A
25d A
25e A
26a A
26b A
26c A
26d A
132
PL 204 619 B1 cd. tablicy 2
1 2
26e A
26f A
26g A
26h A
27a B
27b B
27c B
27d A
27e B
27f B
27g A
27h B
27i B
27j B
27k B
27l B
27m B
27n B
28a A
28b A
28c A
29a A
29b A
29c A
29d A
29e A
29f A
29g A
29h A
29i A
29j A
29k A
29l B
29m A
29n B
29o B
29p A
29q A
29r A
PL 204 619 B1
133 cd. tablicy 2
1 2
29s B
32a C
32b C
32c C
32d C
32e B
34 C
G1 C
G2 B
42 B
46b A
46a C
57 A
65 A
61 A
69 A
73 A
121 C
122a A
122b A
122c A
122d A
122e B
122f A
122g A
122h B
122i A
122j B
122k A
122l B
122m B
122n B
122o C
122p A
122q B
122r B
122s B
122t B
122u A
134
PL 204 619 B1 cd. tablicy 2
1 2
122v B
123a B
123b B
123c B
T a b l i c a 3. Dane dotyczące zahamowania kaspazy-3, kaspazy-4 i kaspazy-8
Przykład Kaspaza-3 Ki (nM) Kaspaza-4 Ki (nM) Kaspaza-8 Ki (nM)
7c C ND C
7d C ND B
7f C ND C
24a C ND ND
29a C ND ND
29b C ND ND
32d B ND ND
46b B ND ND
69 C ND B
122b C A B
122d C A C
122f C ND B
122k C ND B
Badanie na komórkach PMBC
Badanie IL-1 β z mieszaną populacją jednojądrzastych komórek ludzkiej krwi obwodowej (PBMC) lub wzbogaconych przylegających komórek jednojądrzastych
Obróbka pre-IL-1 β przez ICE można zmierzyć w hodowli komórek, stosując różne źródła komórek. Ludzkie PBMC uzyskane od zdrowych dawców dostarczyły mieszanej populacji podtypów limfocytów i komórek jednojądrzastych, które w odpowiedzi na różnego rodzaju bodźce fizjologiczne produkują wiele interleukin i cytokin. Przylegające jednojądrzaste komórki z PBMC dostarczyły wzbogaconego źródła normalnych monocytów do selektywnych badań wytwarzania cytokin przez aktywowane komórki.
Procedura eksperymentalna:
Przygotowano serie początkowych rozcieńczeń badanego związku w DMSO lub etanolu, a następnie rozcieńczano dalej, stosując pożywkę RPMI-10% FBS (zawierającą 2 mM L-glutaminy, 10 mM HEPES, 50 U i 50 mg/ml penicyliny/streptomycyny), odpowiednio, aby otrzymać leki w 4-krotnym stężeniu końcowym, zawierające 0,4% DMSO lub 0,4% etanolu. Końcowe stężenie DMSO wynosiło 0,1% dla wszyskich rozcieńczeń leków. W podstawowym skriningu związków zwykle wykorzystuje się miareczkowanie stężeniowe, które obejmuje pozorne Ki dla badanego związku oznaczone w próbie na hamowanie ICE.
Badano zwykle 5-6 rozcieńczeń danego związku, zaś badanie ze składnikiem komórkowym powtarzano dwukrotnie, z dwukrotnymi oznaczeniami w badaniu ELISA dla każdego supernatantu hodowli komórek.
Izolowanie PBMC i badanie IL-1:
Komórki kożuszka krwi wyizolowane z półkwarty krwi ludzkiej (uzyskując 40-45 ml końcowej objętości osocza plus komórki) rozcieńczono pożywką do 80 ml i każdą z probówek do rozdzielania LeukoPREP (Becton Dickinson) dopełniono 10 ml zawiesiny komórek. Po 15 minutach wirowania przy 1500-1800 xg, warstwę osocze/pożywka odciągnięto, a następnie pipetą Pasteura zebrano warstwę
PL 204 619 B1
135 komórek jednojądrzastych i przeniesiono do 15 ml wirówki stożkowej (Corning). Dodano pożywki do objętości 15 ml, komórki delikatnie mieszano przez odwracanie i wirowano przy 300 x g przez 15 minut. Osad PBMC ponownie zawieszono w małej objętości pożywki, komórki policzono i doprowadzono do 6 x 106 komórek/ml.
W badaniu komórek, do każdej studzienki 24-studzienkowej płaskodennej płytki do hodowli tkanek (Corning) dodano 1,0 ml zawiesiny komórek, 0,5 ml badanego związku w rozcieńczeniu i 0,5 ml roztworu LPS (Sigma #L-3012; 20 ng/ml roztworu wytworzonego w kompletnym RPMI; końcowe stężenie LPS 5 ng/ml). Do wymieszania zawartości studzienek zazwyczaj wystarczające jest dodanie 0,5 ml badanego związku i LPS. W celu doprowadzenia do końcowej objętości hodowli do 2,0 ml, w badaniu stosowano trzy mieszaniny kontrolne, z samym LPS, z rozpuszczalnikiem jako nośnikiem i/lub z dodatkową pożywką. Hodowle komórek inkubowano przez 16-18 godzin w temperaturze 37°C w obecności 5% CO2.
Pod koniec okresu inkubacji komórki zebrano i przeniesiono do 15 ml stożkowych probówek do wirowania. Po odwirowaniu przez 10 minut przy 200 x g, supernatanty zebrano i przeniesiono do 1,5 ml probówek Eppendorfa. Należy podkreślić, że osad komórek można stosować do biochemicznej oceny zawartości pre-IL-1 β i/lub dojrzałej IL-1 β w ekstraktach cytosolowych metodą Western blotting lub ELISA z surowicami odpornościowymi swoistymi wobec pre-IL-1 β.
Izolowanie przylegających komórek jednojądrzastych:
PBMC wyizolowano i przygotowano, jak opisano powyżej. Do studzienek najpierw dodano pożywkę (1,0 ml), a następnie 0,5 ml zawiesiny PBMC. Po 1 godzinie inkubacji płytki delikatnie wytrząśnięto i z każdej studzienki odciągnięto nieprzylegające komórki. Studzienki delikatnie przemyto trzy razy 1,0 ml pożywki i ponownie zawieszano w 1,0 ml pożywki. Wzbogacenie dla komórek przylegających zazwyczaj wynosi 2,5-3,0 x 105 komórek na studzienkę. Dodawanie badanych związków, LPS, warunki inkubacji komórek i obróbkę supernatantów prowadzono, jak opisano powyżej.
ELISA:
Do pomiaru dojrzałej IL-1 β można stosować zestawy Quan-tikine (R&D Systems). Badania prowadzono zgodnie z zaleceniami producenta. W dodatnich kontrolnych hodowlach PBMC i przylegających komórek jednojądrzastych obserwowano poziomy dojrzałej IL-1 β około 1-3 ng/ml. W celu dobrania optymalnego rozcieńczenia supernatantów w danym badaniu, badania ELISA prowadzono przy rozcieńczeniach 1:5, 1:10 i 1:20 supernatantów z prób kontrolnych pozytywnych dla LPS.
Działanie hamujące związków można określić przez wartość IC50, która stanowi takie stężenie inhibitora, przy którym w supernatancie wykrywa się 50% dojrzałej IL-^, w porównaniu z dodatnimi próbami kontrolnymi.
Dla specjalisty w tej dziedzinie techniki oczywiste będzie, że wartości uzyskane w badaniach na komórkach mogą zależeć od wielu czynników. Wartości niekoniecznie oznaczają dokładne wyniki ilościowe.
T a b l i c a 4. Dane z badania komórek PBMC
Przykład PBMC IC50 (nM)
1 2
5a D
5b B
5c B
5d B
5e B
5f C
5g C
5h A
5i C
5j D
136
PL 204 619 B1 cd. tablicy 4
1 2
5k D
5l A
5m A
5n B
5r D
5s B
5u C
5v D
5w B
5x B
5y B
5z B
5aa B
5ab B
5ac A
5ad A
5ag B
5ai A
5 aj B
5ak B
5al D
5am D
5ao D
5aq D
5ar D
5as D
5at D
5au D
5av D
5aw C
5ax B
5ay B
5az B
5ba C
5bb B
5bd C
7a D
7b B
PL 204 619 B1
137 cd. tablicy 4
1 2
7c A
7d A
7e D
7f D
7g A
7h B
7k B
7l B
7m B
7n B
7o A
7p D
7q D
7s B
7t D
7u D
7v D
7w C
7x D
7y D
7z C
9a B
9b B
9c A
9d B
9e C
9f B
9g C
15a D
15b C
15c B
15d C
15e D
15f D
16a A
16b C
17b C
17c D
138
PL 204 619 B1 cd. tablicy 4
1 2
17d D
17e B
18a B
18b B
18c B
18d B
18e C
18f D
20a B
20b B
20c C
20d D
20e C
20f B
20g A
20h A
20i B
20j D
20k A
20l B
20m B
20n B
20o A
20p A
20q B
20r B
20s C
20t B
23a C
23b B
23c C
23d B
23e B
23f C
23g C
23h C
23i A
24a B
PL 204 619 B1
139 cd. tablicy 4
1 2
24b D
24c A
24d B
24e C
25a A
25b B
25c B
26a C
26b B
26c B
26d B
26e A
26f A
26g A
26h A
27a A
28a B
28b B
28c B
29a A
29b C
29c B
29d B
29e A
29g B
29h A
29i A
29j B
29k A
29l B
29m B
42 D
46b D
57 B
65 B
61 B
69 A
73 B
140
PL 204 619 B1 cd. tablicy 4
1 2
122a D
122b B
122c D
122d B
122e C
122f B
122g B
122h C
122i C
122j D
122k A
122l B
Badanie pełnej krwi na wytwarzanie IL-1 β
W badaniu pełnej krwi wartości IC50 dla związków według wynalazku otrzymano stosując sposób opisany poniżej:
Cel:
Badanie pełnej krwi stanowi prostą metodę pomiaru wytwarzania IL-1 β (lub innych cytokin) i aktywności potencjalnych inhibitorów. Badanie to w swojej złożoności, z całkowitym uzupełnieniem o typy komórek limfoidalnych i zapalnych, szeroki zakres białek osocza i czerwonych krwinek, stanowi idealne przedstawienie in vitro stanu fizjologicznego człowieka in vivo.
Materia ły:
Strzykawki wolne od pirogenu (~ 30 cm3)
Sterylne probówki próżniowe wolne od pirogenu zawierające liofilizowaną Na2EDTA (4,5 mg/10 ml probówkę)
Próbka pełnej krwi ludzkiej (~ 30-50 cm3)
1,5 ml probówki Eppendorfa
Roztwory podstawowe badanych związków (~ 25 mM w DMSO lub innym rozpuszczalniku)
Roztwór chlorku sodu wolny od endotoksyny (0,9%) i HBSS
Roztwór podstawowy lipopolisacharydu (Sigma; Cat. # L-3012) o stężeniu 1 mg/ml w HBSS
Zestaw IL-1 β ELISA (R & D Systems; Cat # DLB50)
Zestaw TNFa ELISA (R & D Systems; Cat # DTA50)
Łaźnia wodna lub inkubator
Procedura eksperymentalna badania pełnej krwi:
Inkubator lub łaźnię wodną nastawiono na 30°C. Porcję 0,25 ml krwi wprowadzono do 1,5 ml probówki Eppendorfa.
Uwaga: należy upewnić się, że probówki z próbkami pełnej krwi zostały odwrócone po każdych dwóch porcjach. Gdy komórki osadzą się i nie zostaną jednorodnie zawieszone, w powtórzeniach badań mogą wystąpić różnice. Różnice te mogą być zmniejszone przez stosowanie pipety z pozytywnym przesunięciem.
Przygotowano rozcieńczenia leków w sterylnym wolnym od pirogenu roztworze soli fizjologicznej. Do oceny związku stosowano na ogół serie rozcieńczeń, które obejmują wartości Ki dla badanego związku wyznaczone w badaniu na zahamowanie ICE. Dla związków wysoce hydrofobowych w celu zwiększenia rozpuszczalności przygotowano rozcieńczenia w świeżym osoczu otrzymanym z krwi tego samego dawcy lub w 5% DMSO zawierającym PBS.
Do próbki dodano 25 gl rozcieńczenia badanego związku lub kontrolnego nośnika i próbkę delikatnie wymieszano. Następnie dodano 5,0 gl roztworu LPS (250 ng/ml świeżo przygotowanego roztworu: końcowe stężenie PLC - 5,0 ng/ml) i ponownie wymieszano. Probówki inkubowano w emperaturze 30°C w łaźni wodnej przez 16-18 godzin, mieszając od czasu do czasu. Alternatywnie, proPL 204 619 B1
141 bówki można umieścić w wirówce ustawionej na 4 obr./min., przy tym samym czasie trwania inkubacji. Badanie to należy prowadzić dwukrotnie lub trzykrotnie z następującymi próbami kontrolnymi: kontrola ujemna - bez LPS; kontrola dodatnia - bez badanego inhibitora; kontrola z nośnikiem - najwyższe stężenie DMSO lub rozpuszczalnika związku stosowanego w badaniu. W celu znormalizowania objętości, zarówno próbek kontrolnych, jak i w badanich z próbkami pełnej krwi, do wszystkich probówek w badaniach kontrolnych dodaje się soli fizjologicznej.
Po okresie inkubacji próbki pełnej krwi odwirowano przez 10 minut przy ~ 2000 obr./min. w mikrowirówce, osocze przeniesiono do świeżej mikrowirówki i w razie potrzeby, w celu osadzenia się resztkowych płytek, odwirowano przy 1000 x g. Przed badaniem poziomów cytokin metodą ELISA próbki osocza można przechowywać w stanie zamrożenia w -70°C. ELISA:
Do pomiaru IL-1 β i TNF-α można stosować zestawy Quantikine R & D Systems (614 McKinley Placwe N.E. Minneapolis, NM 55413). Badania prowadzono zgodnie z zaleceniami producenta. W badaniach kontrolnych dodatnich u szerokiej rzeszy pacjentów obserwowano pozorny IL-1 β w zakresie 1-5 ng/ml. Do badań we wszystkich próbkach zwykle wystarczające jest rozcieńczenie osocza 1:200, aby wyniki ELISA mieściły się w zakresie standardowych krzywych liniowych. W przypadku zaobserwowania różnic w badaniu pełnej krwi, konieczna może być optymalizacja standardowych rozcieńczeń. J.L. Nerad i in., J. Leukocyte Biol., str. 687-692 (1992).
T a b l I c a 5. Dane z badania pełnej krwi
Przykład Pełna krew IC50 (nM)
1 2
5a A
5b A
5c A
5d B
5e A
5f B
5h A
5i C
5j C
5k B
5l C
5m A
5n B
5r C
5s C
5u A
5w A
5x A
5y B
5z C
5aa A
5ab B
5ac A
5ad A
5ag B
142
PL 204 619 B1 cd. tablicy 5
1 2
5ai C
5 aj C
5ak C
5ax B
5ay B
5az A
5bb B
7a B
7b A
7c A
7d B
7e C
7f B
7g B
7h A
7k A
7l A
7m B
7n A
7o A
7p B
7q A
7s B
7t B
7u B
7v A
7w A
7x C
7y C
7z A
7aa B
7ab A
7ac B
7ad B
7ah B
7ai B
7 aj C
7ak B
PL 204 619 B1
143 cd. tablicy 5
1 2
7am B
7an B
7ao B
7ap C
9a B
9b B
9c A
9d A
9e B
9f A
9g B
15a B
15b B
15c A
16b A
18a A
18b A
18c A
18d A
18e A
18f B
20a A
20b C
20c B
20d B
20e B
20f A
20g A
20h A
20i A
20k A
20l A
20m A
20n A
20o A
20p A
20q C
20r B
144
PL 204 619 B1 cd. tablicy 5
1 2
20s A
20t A
23a B
23b B
23c B
23d A
23e B
23f A
23g A
23h A
23i B
24a B
24c B
24d B
24e B
25a B
25b B
25c B
25d A
25e C
26c B
26d A
26e A
26f B
26g B
26h A
27a A
27b A
27d A
27e A
27f B
27g B
27h B
27i B
27l B
27m B
27n A
28a B
PL 204 619 B1
145 cd. tablicy 5
1 2
28b B
28c C
29a A
29c A
29d A
29e A
29g A
29h A
29i A
29j A
29k A
29l A
29n B
29o A
29p A
29q A
29r A
29s A
G2 B
42 B
46b B
57 C
65 A
61 A
69 A
73 A
122a A
122b A
122c B
122d A
122e B
122f A
122g A
122h A
122i A
122j B
122k A
122l A
146
PL 204 619 B1 cd. tablicy 5
1 2
122m B
122p B
122q B
122r B
122s B
123a A
123b B
Badania ex vivo
Metabolizm i wydalanie
W celu oceny metabolizmu w ścianach układu pokarmowego (G1) (f(g)), w wątrobie (f(h) i wydalania żółci prowadzono badanie z perfuzją z pojedynczym przejściem szczurach. Stosowano metodę opisaną przez C.S. Pang, w J. Pharmacol. Exp. Therapeutics, 333 str. 788-798 (1984).
T a b l i c a 6. Dane dotyczące metabolizmu i wydalania
Przykład f(g)Xf(h) Wydalanie żółci
1 2 3
5c A C
5k B A
5m B C
7d D A
7f C A
7ac C C
18f D A
20f B C
20g B A
23b B B
24a C A
24c A C
24e A C
25d C C
25e C B
26c A C
26e B B
26f A C
27a C A
27b B A
29b B A
29g B B
29n C A
29o C A
PL 204 619 B1
147 cd. tablicy 6
1 2 3
29p B C
29q C A
29r C B
46b B C
57 B B
65 B C
69 C A
122a B A
122b C A
122c C B
122d C A
122r B A
Badania in vivo
Badania klirensu in vivo u szczurów - szybkości klirensu
Szybkość klirensu u szczurów (ml/min./kg) dla związków według wynalazku można uzyskać stosując opisaną poniżej metodę:
Na 1 dzień przed badaniem farmakokinetycznym naczynia szyjne żylne i tętnicze szczurów kaniugowano w znieczuleniu. M.J. Free, R.A. Jaffe, 'Cannulation techniques for collection blood and other bodily fluids' w: Animal Models; str. 480-495; N.J. Alexander, wyd., Academic Press (1978). Lek (10 mg/ml) podawano przez tętnicę szyjną w nośniku obejmującym: układ glikol propylenowy/sól fizjologiczna, zawierający 100 mM wodorowęglanu sodu w stosunku 1:1. Zwierzętom podawano 10-20 mg leku/kg i pobierano próbki krwi w 0, 2, 5, 7, 10, 15, 20, 30, 60 i 90 minucie, przez cewnik założony na stałe do tętnicy szyjnej. Krew odwirowano do osocza i przechowywano w temperaturze -20°C aż do analizy. W celu uzyskania wartości klirensu farmakokinetyczną analizę danych prowadzono stosując standardowe oprogramowanie nieliniowej regresji, takie jak RStrip (MicroMath Software, UT) i/lub Pcnonlin (SCI Software, NC).
Reprezentatywne analizy:
Osocze krwi szczura ekstrahowano równą objętością acetonitrylu (zawierającego 0,1% TFA). Następnie próbki odwirowano przy około 1 000 x g i supernatant analizowano metodą HPLC z eluowaniem gradientem rozpuszczalnika.
Typową metodę badania opisano poniżej.
200 μl osocza wytrącono 200 μl 0,1% kwasu trifluorooctowego (TFA) w acetonitrylu w 10 μl 50% wodnego roztworu chlorku cynku, odwrócono, a następnie odwirowano przy ~ 1000 x g.
Supernatant zebrano i analizowano metodą HPLC.
HPLC:
Kolumna: Zorbax SB-CN (4,6 x 150 mm) (wielkość cząstek 5 μ)
Temperatura kolumny: 50°C
Szybkość przepływu: 1,0 ml/min.
Objętość wtrysku: 75 μ!.
Faza ruchoma: A = 0,1% TFA w wodzie i B = 100% acetonitryl
Stosowany gradient: 100% A do 30% A w ciągu 15,5 min.
0% A w ciągu 16 min.
100% A w ciągu 19,2 min.
Długość fali: 214 nm
Standardową krzywą wykreślono przy stężeniach 20, 10, 5 i 2 i 1 μg/ml.
148
PL 204 619 B1
T a b l i c a 7. Dane dotyczące klirensu
Przykład Klirens, szczury i.v. (ml/min./kg)
7d A
7f B
20h B
20m A
65 C
122b B
122c C
122d B
122f A
Biodostępność
Badania farmakokinetyczne przy podawaniu doustnym
Samce szczura Sprague-Dawley (Harlan, Indianapolis, IN, 300-350 g) znieczulono przez domięśniowe wstrzyknięcie mieszaniny ketamina/rompun. W celu pobrania próbki krwi tętniczej do prawej tętnicy szyjnej wprowadzono kaniulę PE-50. Po zabiegu chirurgicznym szczury pozostawiono na noc (> 16 godzin), aby doszły do siebie przed badaniem. Badane związki podawano doustnie w mieszaninie 25% Cremophor EL/woda (wag./wag.) lub 100% glikolu propylenowego (PG) w dawce 10 ml/kg. Próbki krwi (~ 0,30 ml) pobierano w 0,25, 0,50, 1,0, 1,5, 2, 3, 4, 6 i 8 godzinie po podaniu dawki, osocze oddzielono przez odwirowanie i przechowywano w temperaturze -20°C aż do badania. Ilościowe oznaczenie próbek krwi prowadzono stosując gradient HPLC/MS/MS lub opisaną poniżej metodę enzymatyczną:
Metoda HPLC/MS/MS ilościowego oznaczenia inhibitorów ICE w osoczu krwi szczura
Przygotowanie próbki * Do fiolek Eppendorfa wprowadzono 50 μl porcje osocza * Do osocza dodano równą objętość acetonitrylu, w celu wytrącenia białek * Próbki mieszano przez odwracanie przez 5 minut i odwirowano przy 14 000 x g przez 5 minut * Do probówek kolektora frakcji wprowadzono 75 μl supernatantu * 50 μl próbki wtryskiwano do spektrometru mas w celu analizy
Parametry aparatury HPLC
HPLC: Hewlett Packard HP1100 Binary Solvent Delivery
System
Warunki gradientu HPLC
A = H2O 0,2% kwas mrówkowy
B = acetonitryl 0,2% kwas mrówkowy
Faza ruchoma
Czas %A %B
0 100 0
2 100 0
5 0 100
11 0 100
11,5 100 0
17 100 0
Kolumna do analitycznej HPLC: Keystone Phenyl -2 Hypersil, 2,0 x 100 mm, 5 μ, wielkość porów 120 A, P/N# 105-39-2
Objętość wtrysku: 50 μl Szybkość przepływu: 0,20 ml/min.
Parametry aparatury do spektrometrii mas Aparat: spektrometr mas P E Sciex API-365 Tandem Technika jonizacji: Turbo-Ionspray (ESI)
PL 204 619 B1
149
Polarność: Dodatnia
Czas przemiatania: 300 msek.
Czas pauzy: 5 msek.
Czas skanowania: 0,9 sek.
Typ skanowania: NRM (Multiple Reaction Monitoring)
BADANIE ENZYMATYCZNE ICE NA ILOŚCIOWE OZNACZENIE INHIBITORÓW ICE W OSOCZU KRWI SZCZURA gl osocza ekstrahowano 150 μl acetonitrylu, sonikowano, odwrócono, odwirowano przy 10 000 x g i 180 gl supernatantu wysuszono w wyparce Sorvall vortex w temperaturze pokojowej. Próbki rekonstytuowano w 100 μl buforu (10 mM Tris-HCl, pH 7,5 z 0,1% CHAPS, 1 mM DTT) z sonikacją. 10 μl każdej próbki zmieszano z 10 μl ICE (1,1 mg/ml) na płytce do mikromiareczkowania z 60 gl buforu. Próbki inkubowano przez 15 minut w temperaturze pokojowej, po czym dodano 20 μl Succ YVAD-pNA (400 μΜ, ogrzany wstępnie do 37°C) i płytkę monitorowano przy 405 nm przez 20 minut w temperaturze 37°C, stosując czytnik SpectraMax. Dane wykreślono stosując oprogramowanie SpectraMax z dopasowaniem 4 parametrów i wyprowadzoną standardową krzywą. Badanie było liniowe od 0,15 do 2,0-3,0 μg/ml aldehydu.
Parametry farmakokinetyczne
Analizy farmakokinetyczne tych danych dla stężenia w o-soczu prowadzono stosując metody niekompartmentalne. Powierzchnię pod krzywą AUC(O-t) wyliczono od czasu zero do czasu ostatniego pomiaru stosując regułę liniowo-trapezoidalną. Szybkość eliminacji (ke) oceniano metodą logarytmicznej regresji liniowej z krzywych końcowa faza stężenia w osoczu-czas. Powierzchnię pod ogonem krzywej oceniano jako stosunek ostatniego zmierzonego stężenia do ke. Powierzchnię pod krzywą od czasu zero do nieskończoności (AUC(O-/) uzyskano przez dodanie powierzchni pod ogonem do AUC(O-t). Półokres eliminacji oszacowano na 0,693/ke. Zapisano uzyskane wartości dla piku stężenia w osoczu (Cmax). Dla badań proleków: dostępność aldehydu (biodostępność) obliczono jako: (AUCald/prolek p.o)/AUCald/ald i.v.) x (dawka ald. i. v./dawka proleku, prolek p.o) x (MW proleku/MW aldehydu).
T a b l i c a 8. Dane dotyczące biodostępności
Przykład Cmax (gg/ml) AUC (ggXh/ml) t 1/2 (godziny) F (%)
1 2 3 4 5
56 A B A
45 A B
90 C C A C
85 A B B A
68 A C B
76 C C C
77 B B A A
78 A A B A
89 A C C
83 A C C
98d A A B
98b A C B
98e C C B
98c B C C
98k B C B
98ae A A B
150
PL 204 619 B1 cd. tablicy 8
1 2 3 4 5
98af A A B
98b C C B
111 A A C
98o A A B
108a A A B
98aq C C B C
98a B B C
98am A A B
116a C C B
98an A A B
116g A A C
116h A A B
116e A A B
108b A A B
Badania przeciwwirusowe
Skuteczność związków według wynalazku w leczeniu lub zapobieganiu chorobom, zaburzeniom lub stanom wywołanym przez wirusy można ocenić w różnych badaniach in vitro i in vivo. Przykładowo, można prowadzić badania oceny zdolności tych związków do zahamowania odpowiedzi zapalnych związanych z zakażeniami wirusowymi. Do badań in vitro można stosować całe komórki lub wyizolowane składniki komórek. Badania in vivo obejmują zwierzęce modele chorób wirusowych. Przykładami takich modeli są, ale nie wyłącznie, modele gryzoni dla zakażeń HBV i HCV, model Woodchucka dla zakażenia HBV i model szympansi dla zakażeń HCV.
Związki można również oceniać w modelach zwierzęcych dla choroby spowodowanej nadmiernym spożywaniem alkoholu.
Do oceny związków według wynalazku można stosować również inne badania, jak ujawnione w zgłoszeniu PCT/US96/20843, opublikowanym 26 czerwca 1997, nr publikacji WO 97/22619. Badania takie obejmują badania farmakokinetyczne na myszach, badanie zahamowania homologów ICE, badanie zahamowania apoptozy, badanie ostrej skuteczności przeciwzapalnej in vivo, pomiary poziomu leków w krwi, badania IGIF, badanie wywołanego karageniną zapalenia otrzewnej u myszy i zapalenia kostno-stawowego typu II wywołanego kolagenem.
Dopóki związki według wynalazku są zdolne do hamowania kaspaz, a zwłaszcza ICE, in vitro, a ponadto można je dostarczać doustnie ssakom, są one w oczywisty sposób klinicznie użyteczne do leczenia chorób związanych z IL-1, apoptozą, IGIF i IFN-γ.
Aczkolwiek opisano wiele wykonań wynalazku, oczywiste jest, że można wprowadzać różne zmiany, uzyskując inne rozwiązania, w których stosuje się produkty i sposoby według wynalazku.

Claims (17)

1. Pochodna peptydowa przedstawiona wzorem I:
PL 204 619 B1
151 w którym:
R1 oznacza -C(O)R8, -C(O)C(O)R8, -S(O)2R8, -S(O)R8, -C(O)OR8, -C(O)N(H)R8, -S(O)2N(H)-R8, -S(O)N(H)-R8, -C(O)C(O)N(H)R8, -C(O)CH=CHR8, -C(O)CH2OR8, -C(O)CH2N(H)R8,-C(O)N(R8)2, -S(O)2N(R8)2, -S(O)N(R8)2, -C(O)C(O)N(R8)2 lub -C(O)CH2N(R8)2;
R7 oznacza -OH lub -OR8; lub
B) Y oznacza:
X oznacza -C(R3)2- lub -N(R3)-;
R1 oznacza -R8, -C(O)R8, -C(O)C(O)R8, -S(O)2R8, -S(O)R8, -C(O)OR8, -C(O)N(H)R8 -S(O)2N(H)-R8, -S(O)N(H)-R8, -C(O)C(O)N(H)R8, -C(O)CH=CHR8, -C(O)CH2OR8, -C(O)CH2N(H)R8
R1 oznacza -C(O)R8, -C(O)C(O)R8, -S(O)2R8, -S(O)R8, -C(O)OR8, -C(O)N(H)R8, -S(O)2N(H)-R8 -S(O)N(H)-R8, -C(O)C(O)N(H)R8, -C(O)CH=CHR8, -C(O)CH2OR8, -C(O)CH2N(H)R8, -C(O)N(R8)2 -S(O)2N(R8)2, -S(O)N(R8)2, -C(O)C(O)N(R8)2 lub -C(O)CH2N(R8)2;
R7 oznacza -OH lub - OR8;
pod warunkiem, że gdy jeden R3 oznacza -H, wówczas drugi ma znaczenie inne niż -H; lub
152
PL 204 619 B1
X oznacza -C(R3)2- lub -N(R3)-; R1 oznacza -R8;
R7 oznacza -OH lub -OR8; lub E) Y oznacza:
X oznacza -C(R3)2;
R1 oznacza -R8;
R7 oznacza -OH lub -OR8;
a pozostałe symbole i podstawniki w związku o wzorze I mają następujące znaczenia: m oznacza 0 lub 1,
R2 oznacza -H, a każdy R3 niezależnie oznacza -H, aminokwasowy łańcuch boczny albo -R8, przy czym atom wodoru związany z dowolnym alkilowym lub cykloalkilowym atomem węgla ewentual10 nie jest zastąpiony przez -R10, atom wodoru związany z dowolnym arylowym lub heteroarylowym atomem węgla ewentualnie jest zastąpiony przez -R11, zaś atom wodoru związany z dowolnym atomem azotu w układzie pierścieniowym ewentualnie jest zastąpiony przez -R1;
R4 i jeden R5 razem z atomami, do których są przyłączone, tworzą układ pierścieniowy wybrany spośród:
a drugi R5 oznacza -H, przy czym atom wodoru związany z dowolnym atomem azotu w układzie pierścieniowym ewentualnie jest zastąpiony przez R1, albo R4 i jeden R5 razem z atomami, do których są przyłączone, tworzą układ pierścieniowy:
a drugi R5 oznacza -H;
każdy R8 niezależnie oznacza -alkil, -cykloalkil, -aryl, -heteroaryl, -heterocyklil, -alkilocykloalkil,
-alkiloaryl, -alkiloheteroaryl lub -alkiloheterocyklil, w których atom wodoru związany z dowolnym alki10 lowym lub cykloalkilowym atomem węgla ewentualnie jest zastąpiony przez R10, atom wodoru związany z dowolnym arylowym lub heteroarylowym atomem węgla ewentualnie jest zastąpiony przez R11, 1 zaś atom wodoru związany z dowolnym atomem azotu ewentualnie jest zastąpiony przez R1;
każdy R10 niezależnie oznacza -perfluoroalkil, -O-alkil, -N(H)alkil, -N(alkil)2, -S-alkil, -S(O)2alkil,
-S(O)alkil, -C(O)alkil, -CH2N(H)alkil, -CH2N(alkil)2, -alkil, -aryl, -heteroaryl lub -heterocyklil, w których
PL 204 619 B1
153 atom wodoru związany z dowolnym arylowym lub heteroarylowym atomem węgla ewentualnie jest zastąpiony przez R11, zaś atom wodoru związany z dowolnym atomem azotu ewentualnie jest zastąpiony przez R1; a każdy R11 niezależnie oznacza -OH, -SH, -F, -Cl, -Br, -J, -NO2, -CN, -NH2, -CO2H, -C(O)NH2, -N(H)C(O)H, -N(H)C(O)NH2, -alkil, -perfluoroalkil, -O-alkil, -O-aryl, -O-alkiloaryl, -N(H)alkil, -N(H)aryl, -N(H)-alkilo-aryl, -N(alkil)2, -C(O)N(H)alkil, -C(O)N(alkil)2, -N(H)C(O)alkil, -N(H)C(O)N(H)alkil, -N(H)C(O)N(alkil)2, -S-alkil, -S-aryl, -S-alkiloaryl, -S(O)2alkil, -S(O)alkil, -C(O)alkil, -CH2NH2, -CH2N(H)alkil lub -CH2N(alkil)2, przy czym w powyższych podstawnikach określenie „alkil” odnosi się do prostołańcuchowego lub rozgałęzionego nasyconego węglowodoru alifatycznego zawierającego 1 do 6 atomów węgla, „cykloalkil” odnosi się do mono- lub policyklicznego niearomatycznego węglowodorowego układu pierścieniowego zawierającego 5 do 10 atomów węgla, który ewentualnie może zawierać wiązania nienasycone, „aryl” odnosi się do mono- lub policyklicznego aromatycznego układu pierścieniowego zawierającego 6, 10, 12 lub 14 atomów węgla, w którym co najmniej jeden pierścień jest aromatyczny, „heteroaryl” odnosi się do mono- lub policyklicznego układu pierścieniowego zawierającego 1 do 15 atomów węgla i 1 do 4 heteroatomów, niezależenie wybranych spośród atomów siarki, azotu lub tlenu i w którym co najmniej jeden pierścień jest aromatyczny, określenie „heterocyklil” odnosi się do mono- lub policyklicznego, niearomatycznego układu pierścieniowego zawierającego 1 do 15 atomów węgla i 1 do 4 heteroatomów, niezależenie wybranych spośród atomów siarki, azotu lub tlenu i w którym mono- lub policykliczny układ pierścieniowy ewentualnie może zawierać wiązania nienasycone, ale nie jest on aromatyczny, określenie „aminokwasowy łańcuch boczny” odnosi się do dowolnej grupy przyłączonej do atomu węgla α aminokwasu występującego naturalnie lub niewystępującego naturalnie, oraz ich farmaceutycznie dopuszczalne pochodne.
2. Pochodna peptydowa według zastrz. 1, znamienna tym, że w wersji B X oznacza -C(R3)2-.
3. Pochodna peptydowa według zastrz. 1, znamienna tym, że w wersji B Y oznacza:
w którym V oznacza: CH3O,
154
PL 204 619 B1 1
4. Pochodna peptydowa według zastrz. 1, znamienna tym, że w wersji (A), (B) lub (C)R1 oznacza -C(O)R8 lub -C(O)C(O)R8.
5. Pochodna peptydowa według zastrz. 2 lub 3, w której R1 oznacza -C(O)R8 lub -C(O)C(O)R8.
6. Pochodna peptydowa według zastrz. 1-3, w której jeden R3 oznacza -H, a drugi R3 oznacza metyl, izopropyl, tert-butyl, -CH2SR8, -CH2SO2R8, -CH2CH2SR8 lub -CH2CH2SO2R8, gdy X oznacza -C(R3)2-.
7. Pochodna peptydowa według zastrz. 6, w której jeden spośród R3 oznacza -H, a drugi R3 oznacza metyl, gdy X oznacza -C(R3)2-.
8. Pochodna peptydowa według zastrz. 7, w której R1 oznacza -C(O)R8 lub -C(O)C(O)R8.
9. Pochodna peptydowa według zastrz. 1 lub 2, w której
R4 i jeden spośród R5 razem z atomami, z którymi są związane, tworzą układ pierścieniowy:
a drugi R5 oznacza H.
10. Pochodna peptydowa według zastrz. 9, w której jeden spośród R3 oznacza -H, a drugi R3 oznacza metyl, izopropyl, tert-butyl, -CH2SR8, -CH2SO2R8, -CH2CH2SR8 lub -CH2CH2SO2R8, gdy X oznacza -C(R3)2-.
11. Pochodna peptydowa według zastrz. 10, w której jeden R3 oznacza -H, a drugi R3 oznacza metyl, gdy X oznacza -C(R3)2-.
12. Pochodna peptydowa według zastrz. 11, w której R1 oznacza -C(O)R8 lub -C(O)C(O)R8.
13. Pochodna peptydowa według zastrz. 1 lub 2, w której jeden R4 i jeden R5 razem z atomami, do których są przyłączone, tworzą układ pierścieniowy:
, a drugi R5 oznacza H.
PL 204 619 B1
155
14. Pochodna peptydowa według zastrz. 13, w której jeden R3 oznacza -H, a drugi R3 oznacza metyl, izopropyl, tert-butyl, -CH2SR8, -CH2SO2R8, -CH2CH2SR8 lub -CH2CH2SO2R8, gdy X oznacza -C(R3)2-.
15. Pochodna peptydowa według zastrz. 14, w której jeden R3 oznacza -H, a drugi R3 oznacza metyl, gdy X oznacza -C(R3)2-.
16. Pochodna peptydowa według zastrz. 15, w której R1 oznacza -C(O)R8 lub -C(O)C(O)R8.
17. Pochodna peptydowa według zastrz.1 wybrana z grupy obejmującej następujące związki;
5a-5bd, 7a-7at, 20a-20t, 23h, 24d-24e, 26e, 34, 52, 57, 61, 65, 69, 73, 121 i 122a-v;
PL343611A 1998-03-19 1999-03-19 Pochodna peptydowa, kompozycja farmaceutyczna zawierająca taką pochodną i zastosowanie pochodnej peptydowej PL204619B1 (pl)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US7877098P 1998-03-19 1998-03-19
PCT/US1999/005919 WO1999047545A2 (en) 1998-03-19 1999-03-19 Inhibitors of caspases

Publications (2)

Publication Number Publication Date
PL343611A1 PL343611A1 (en) 2001-08-27
PL204619B1 true PL204619B1 (pl) 2010-01-29

Family

ID=22146109

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL343611A PL204619B1 (pl) 1998-03-19 1999-03-19 Pochodna peptydowa, kompozycja farmaceutyczna zawierająca taką pochodną i zastosowanie pochodnej peptydowej

Country Status (34)

Country Link
US (3) US6531474B1 (pl)
EP (6) EP2261233A3 (pl)
JP (3) JP4594520B2 (pl)
KR (2) KR100928878B1 (pl)
CN (1) CN1321129C (pl)
AP (1) AP2000001919A0 (pl)
AR (1) AR019011A1 (pl)
AT (1) ATE410439T1 (pl)
AU (1) AU769033B2 (pl)
BG (1) BG104863A (pl)
BR (2) BR9909660A (pl)
CA (1) CA2324226C (pl)
CZ (1) CZ302281B6 (pl)
DE (1) DE69939689D1 (pl)
DK (1) DK1064298T3 (pl)
ES (1) ES2315010T3 (pl)
GE (1) GEP20043163B (pl)
HK (1) HK1035733A1 (pl)
HU (1) HU227920B1 (pl)
ID (1) ID27002A (pl)
IL (3) IL138469A0 (pl)
IS (1) IS5622A (pl)
NO (1) NO331829B1 (pl)
NZ (2) NZ506963A (pl)
PL (1) PL204619B1 (pl)
PT (1) PT1064298E (pl)
RU (1) RU2274642C2 (pl)
SI (1) SI1064298T1 (pl)
SK (1) SK286736B6 (pl)
TR (1) TR200103406T2 (pl)
TW (1) TWI243828B (pl)
UA (2) UA74133C2 (pl)
WO (1) WO1999047545A2 (pl)
ZA (1) ZA200004652B (pl)

Families Citing this family (76)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
HU227920B1 (en) * 1998-03-19 2012-06-28 Vertex Pharma Inhibitors of caspases, pharmaceutical compositions comprising thereof and their use
US7157430B2 (en) 1998-10-22 2007-01-02 Idun Pharmaceuticals, Inc. (Substituted)acyl dipeptidyl inhibitors of the ICE/CED-3 family of cysteine proteases
US6242422B1 (en) * 1998-10-22 2001-06-05 Idun Pharmacueticals, Inc. (Substituted)Acyl dipeptidyl inhibitors of the ice/ced-3 family of cysteine proteases
US6720415B2 (en) 1998-12-02 2004-04-13 Princeton University Compositions and methods for regulating bacterial pathogenesis
US7326542B2 (en) 1998-12-02 2008-02-05 Princeton University Compositions and methods for regulating bacterial pathogenesis
WO2001027085A1 (en) * 1999-10-13 2001-04-19 Merck Frosst Canada & Co. Nicotinyl aspartyl ketones as inhibitors of caspase-3
US6395767B2 (en) 2000-03-10 2002-05-28 Bristol-Myers Squibb Company Cyclopropyl-fused pyrrolidine-based inhibitors of dipeptidyl peptidase IV and method
US6525024B1 (en) 2000-04-17 2003-02-25 Idun Pharmaceuticals, Inc. Inhibitors of the ICE/ced-3 family of cysteine proteases
US6559176B1 (en) 2000-05-10 2003-05-06 Princeton University Compounds and methods for regulating bacterial growth and pathogenesis
PE20011350A1 (es) 2000-05-19 2002-01-15 Vertex Pharma PROFARMACO DE UN INHIBIDOR DE ENZIMA CONVERTIDORA DE INTERLEUCINA-1ß (ICE)
ATE510837T1 (de) * 2000-09-13 2011-06-15 Vertex Pharma Caspase inhibitoren und deren verwendung
US20030039661A1 (en) * 2001-03-02 2003-02-27 Teresa Aja Methods, compositions and kits for preserving antigenicity
US7364736B2 (en) 2001-06-26 2008-04-29 Amgen Inc. Antibodies to OPGL
US7410956B2 (en) * 2002-02-11 2008-08-12 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Caspase inhibitor prodrugs
WO2003075853A2 (en) 2002-03-08 2003-09-18 Bristol-Myers Squibb Company Cyclic derivatives as modulators of chemokine receptor activity
FR2839309B1 (fr) 2002-05-03 2004-07-23 Aventis Pharma Sa Nouveaux derives de l'acide hexahydro-pyridazine-3- carboxylique, chimiotheques les contenant, leur utilisation comme medicaments, compositions pharmaceutiques les contenant et leurs procedes de preparation
US7001899B2 (en) 2002-06-10 2006-02-21 The Procter & Gamble Company Interleukin converting enzyme inhibitors
AU2003263393A1 (en) * 2002-09-04 2004-03-29 Glenmark Pharmaceuticals Limited New heterocyclic amide compounds useful for the treatment of inflammatory and allergic disorders: process for their preparation and pharmaceutical compositions containing them
TWI289668B (en) 2002-09-06 2007-11-11 Amgen Inc Therapeutic human anti-IL-1R1 monoclonal antibody
AP2021A (en) 2002-10-23 2009-08-03 Glenmark Pharmaceuticals Ltd Novel tricyclic compounds useful for the treatmentof inflammatory and allergic disorders: Process f or their preparation and pharmaceutical compositions containing them
FR2846969A1 (fr) * 2002-11-08 2004-05-14 Salles Jean Pierre Nouveaux vecteurs moleculaires amphiphiles fluorocarbones a usage biomedical et medical
FR2847160A1 (fr) * 2002-11-20 2004-05-21 Oreal Composition capillaire contenant un compose pyrasol-carboxamide, son utilisation pour stimuler la pousse des cheveux et/ou freiner leur chute
AU2003295041A1 (en) * 2002-11-20 2004-06-18 L'oreal Composition for hair care or eyelashes containing a pyrazol-carboxamide, its use for stimulating hair and eyelash growth and/or for preventing loss thereof
NZ542882A (en) 2003-04-11 2007-10-26 Glenmark Pharmaceuticals Sa Novel heterocyclic compounds useful for the treatment of inflammatory and allergic disorders: process for their preparation and pharmaceutical compositions containing them
AU2003902704A0 (en) * 2003-05-29 2003-06-19 Crc For Waste Management And Pollution Control Limited Of Unsw Process for producing a nanoscale zero-valent metal
WO2005117846A2 (en) 2004-05-27 2005-12-15 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Ice inhibitors for the treatment of autoinflammatory diseases
US20050233974A1 (en) * 2003-12-01 2005-10-20 John Randle Treating infectious diseases using ice inhibitors
DE60326150D1 (de) * 2003-12-12 2009-03-26 Straetmans Chemische Produkte Anisinsäure und Glyceride enthaltende Zusammensetzungen
AU2011226946B2 (en) * 2004-02-27 2012-05-03 Vertex Pharmaceuticals Incoporated Caspase Inhibitors and Uses Thereof
NZ549665A (en) 2004-02-27 2010-09-30 Vertex Pharma Caspase inhibitors and uses thereof
CA2820541A1 (en) * 2004-02-27 2005-09-15 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Caspase inhibitors and uses thereof
HUE024556T2 (hu) * 2004-03-12 2016-02-29 Vertex Pharma Eljárások és intermedierek aszparagin acetál kapszáz inhibitorok elõállítására
AU2012200214B2 (en) * 2004-05-14 2013-10-24 Emisphere Technologies, Inc. Compounds and compositions for delivering active agents
WO2005112633A2 (en) * 2004-05-14 2005-12-01 Emisphere Technologies, Inc. Compounds and compositions for delivering active agents
US20060128696A1 (en) * 2004-05-15 2006-06-15 Annamaria Vezzani Treating seizures using ice inhibitors
GB0411056D0 (en) 2004-05-18 2004-06-23 Novartis Ag Organic compounds
WO2006017295A2 (en) * 2004-07-12 2006-02-16 Idun Pharmaceuticals, Inc. Tetrapeptide analogs
DE602005008622D1 (de) * 2004-09-17 2008-09-11 Biomas Ltd Neue tellurium-verbindungen und ihre verwendung als immunmodulatoren
MX2007004400A (es) 2004-10-13 2007-06-19 Glenmark Pharmaceuticals Sa Procedimiento para la preparacion de n-(3,5-dicloropirid-a-il)-4- ifluorometoxi-8-metanosulfonamido-dibenzo [b,d] difuran-1-carboxamida.
PL1831227T3 (pl) 2004-12-17 2013-10-31 Glenmark Pharmaceuticals Sa Nowe związki heterocykliczne użyteczne w leczeniu stanów zapalnych i dolegliwości alergicznych
PT1831227E (pt) 2004-12-17 2013-08-23 Glenmark Pharmaceuticals Sa Proteínas buganina modificadas, citotoxinas e métodos e utilizações das mesmas
JP4673068B2 (ja) * 2005-01-19 2011-04-20 独立行政法人科学技術振興機構 Ｔｈ１型アレルギー疾患治療用組成物
DE102005017116A1 (de) * 2005-04-13 2006-10-26 Novartis Ag Hemmstoffe für Inhibitoren von Apoptose Proteinen (IAP)
WO2007015931A2 (en) * 2005-07-28 2007-02-08 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Caspase inhibitor prodrugs
AR056806A1 (es) 2005-11-14 2007-10-24 Amgen Inc Moleculas quimericas de anticuerpo rankl- pth/ pthrp
JP2009542689A (ja) * 2006-07-07 2009-12-03 ザ ボード オブ トラスティーズ オブ ザ リーランド スタンフォード ジュニア ユニバーシティ 選択的カスパーゼ阻害剤
EP2099454A4 (en) * 2006-11-17 2010-11-10 Abbott Lab AMINOPYRROLIDINES AS CHEMOKINE RECEPTOR ANTAGONISTS
US8618663B2 (en) 2007-09-20 2013-12-31 International Business Machines Corporation Patternable dielectric film structure with improved lithography and method of fabricating same
US7709370B2 (en) 2007-09-20 2010-05-04 International Business Machines Corporation Spin-on antireflective coating for integration of patternable dielectric materials and interconnect structures
US8084862B2 (en) * 2007-09-20 2011-12-27 International Business Machines Corporation Interconnect structures with patternable low-k dielectrics and method of fabricating same
WO2009124265A1 (en) * 2008-04-03 2009-10-08 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Probes for in vivo targeting of active cysteine proteases
AU2009252995A1 (en) * 2008-05-27 2009-12-03 Imperial Innovations Limited Process for producing porous scaffolds from sinterable glass
US20110152343A1 (en) * 2009-12-22 2011-06-23 Functional Genetics, Inc. Protease inhibitors and broad-spectrum antiviral
GB201001070D0 (en) 2010-01-22 2010-03-10 St George's Hospital Medical School Theraputic compounds and their use
WO2011094426A1 (en) * 2010-01-29 2011-08-04 The United State Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health & Human Services Caspase inhibitors
GB201011411D0 (en) 2010-07-06 2010-08-18 St Georges Hosp Medical School Therapeutic compounds and their use
JP6006908B2 (ja) 2010-11-05 2016-10-12 ブランダイス ユニバーシティＢｒａｎｄｅｉｓ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｉｃｅ阻害化合物およびその使用
US9956260B1 (en) 2011-07-22 2018-05-01 The J. David Gladstone Institutes Treatment of HIV-1 infection and AIDS
MY165742A (en) 2011-10-14 2018-04-23 Bristol Myers Squibb Co Substituted tetrahydroisoquinoline compounds as factor xia inhibitors
WO2013055984A1 (en) 2011-10-14 2013-04-18 Bristol-Myers Squibb Company Substituted tetrahydroisoquinoline compounds as factor xia inhibitors
CN103987696B (zh) 2011-10-14 2016-12-21 百时美施贵宝公司 作为因子xia抑制剂的取代的四氢异喹啉化合物
CA2882088C (en) 2012-08-23 2021-11-23 Alios Biopharma, Inc. Compounds for the treatment of paramoxyvirus viral infections
US9403774B2 (en) 2012-10-12 2016-08-02 Bristol-Myers Squibb Company Guanidine and amine substituted tetrahydroisoquinoline compounds as factor xia inhibitors
JP6154473B2 (ja) 2012-10-12 2017-06-28 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニーＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏｍｐａｎｙ 第ＸＩａ因子阻害剤の結晶形
WO2014059202A1 (en) 2012-10-12 2014-04-17 Bristol-Myers Squibb Company Guanidine substituted tetrahydroisoquinoline compounds as factor xia inhibitors
WO2014160668A1 (en) 2013-03-25 2014-10-02 Bristol-Myers Squibb Company Tetrahydroisoquinolines containing substituted azoles as factor xia inhibitors
NO2760821T3 (pl) 2014-01-31 2018-03-10
EP3988549A1 (en) 2014-01-31 2022-04-27 Bristol-Myers Squibb Company Macrocycles with heterocyclic p2' groups as factor xia inhibitors
US9737556B2 (en) 2014-06-13 2017-08-22 Trustees Of Tufts College FAP-activated therapeutic agents, and uses related thereto
US10081623B2 (en) 2014-09-04 2018-09-25 Bristol-Myers Squibb Company Diamide macrocycles that are FXIa inhibitors
US9453018B2 (en) 2014-10-01 2016-09-27 Bristol-Myers Squibb Company Pyrimidinones as factor XIa inhibitors
US10550070B2 (en) 2015-09-17 2020-02-04 City Of Hope PCNA inhibitors
EP3459941A4 (en) 2016-07-22 2020-02-19 Kissei Pharmaceutical Co., Ltd. pyrrolidine
PL3558335T3 (pl) 2016-12-23 2023-08-21 Casp-Aid Inc. Inhibicja kaspazy-1 i jej zastosowanie w zapobieganiu i leczeniu schorzeń neurologicznych
EP3836954A1 (en) 2018-08-13 2021-06-23 Iltoo Pharma Combination of interleukin-2 with an interleukin 1 inhibitor, conjugates and therapeutic uses thereof
US20230404972A1 (en) * 2020-11-25 2023-12-21 Lysosomal and Rare Disorders Research and Treatment Center, Inc. Inhibition of caspase pathway as a treatment for lysosomal storage disorders

Family Cites Families (80)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2973111A (en) * 1958-02-11 1961-02-28 Dempster Brothers Inc Compaction bodies
US5874424A (en) 1995-12-20 1999-02-23 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of interleukin-1β converting enzyme
US6204261B1 (en) * 1995-12-20 2001-03-20 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of interleukin-1β Converting enzyme inhibitors
US4465679A (en) 1983-01-31 1984-08-14 Usv Pharmaceutical Corporation 1,2-Diaza-3-one compounds, their use in treating hypertension and pharmaceutical compositions thereof
IL72523A (en) 1983-08-12 1988-06-30 Takeda Chemical Industries Ltd 3-amino-4-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-1,5-benzoxazepine derivatives,their production and pharmaceutical compositions containing them
US5055451A (en) 1986-12-22 1991-10-08 Syntex Inc. Aryloxy and arylacyloxy methyl ketones as thiol protease inhibitors
US5158936A (en) 1986-12-22 1992-10-27 Syntex (U.S.A.) Inc. Aryloxy and arylacyloxy methyl ketones as thiol protease inhibitors
US5008245A (en) 1988-10-27 1991-04-16 University Of Kentucky Research Foundation Novel peptidyl carbamate inhibitors of the enzyme elastase
CA2021660A1 (en) 1989-07-26 1991-01-27 Philippe Bey Peptidase inhibitors
NZ235155A (en) 1989-09-11 1993-04-28 Merrell Dow Pharma Peptidase substrates in which the carboxy terminal group has been replaced by a tricarbonyl radical
US5416013A (en) 1990-04-04 1995-05-16 Sterling Winthrop Inc. Interleukin 1β protease and interleukin 1β protease inhibitors
AU7775991A (en) 1990-04-04 1991-10-30 Immunex Corporation Interleukin 1beta protease
ES2124710T3 (es) 1991-03-15 1999-02-16 Hoechst Ag Procedimiento para el acoplamiento pinacolinico reductor diastereoselectivo de alfa-aminoaldehidos homoquirales.
CA2071674C (en) * 1991-06-21 2003-08-19 Kevin T. Chapman Peptidyl derivatives as inhibitors of interleukin-1.beta. converting enzyme
JP3190431B2 (ja) 1991-07-01 2001-07-23 三菱化学株式会社 ケトン誘導体
US5278061A (en) 1991-08-16 1994-01-11 Merck & Co., Inc. Affinity chromatography matrix useful in purifying interleukin-1β converting enzyme
EP0533226A3 (en) 1991-08-16 1993-08-18 Merck & Co. Inc. Novel chromophore containing compounds
US6348570B1 (en) 1991-08-16 2002-02-19 Merck & Co., Inc. Chromophore containing compounds and their use in determining interleukin-1β convertase activity
EP0533350B1 (en) 1991-08-16 1999-05-26 Merck & Co. Inc. DNA encoding precursor interleukin 1B converting enzyme
AU657701B2 (en) 1991-08-30 1995-03-23 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Interleukin 1beta protease and interleukin 1beta protease inhibitors
ATE140449T1 (de) 1991-10-07 1996-08-15 Hoechst Ag Verfahren zur diastereoselektiven reduktiven pinakol-kupplung von homochiralen alpha- aminoaldehyden
GB9123326D0 (en) 1991-11-04 1991-12-18 Sandoz Ltd Improvements in or relating to organic compounds
AU1339092A (en) 1991-12-13 1993-07-19 Corvas International, Inc. Reagents for automated synthesis of peptide analogs
EP0547699A1 (en) 1991-12-19 1993-06-23 Merck & Co. Inc. Peptidyl derivatives as inhibitors of interleukin-1B converting enzyme
AU3479593A (en) 1992-01-31 1993-09-01 Merck & Co., Inc. Peptidyl derivatives as inhibitors of interleukin-1beta converting enzyme
ATE169224T1 (de) 1992-02-21 1998-08-15 Merck & Co Inc Peptidylderivate und inhibitoren des interleukin- 1-g(b)-konvertierenden enzyms
JPH08500242A (ja) 1992-06-24 1996-01-16 メルク エンド カンパニー インコーポレーテッド インターロイキン１β前駆体の転換酵素をコードするＤＮＡ
DK0654041T3 (da) 1992-07-31 1998-10-26 Pfizer Peptidyl-4-amino-2,2-difluor-3-oxo-1,6-hexandisyre-derivater som anto-inflammatoriske midler
CA2109646C (en) 1992-11-24 2000-03-07 Gaston O. Daumy Para-nitroanilide peptides
EP0618223A3 (en) 1993-03-08 1996-06-12 Sandoz Ltd Peptides, the release of Interleukin 1-Bêta, useful as anti-inflammatory agents.
TW494094B (en) 1993-04-29 2002-07-11 Vertex Pharma Peptide analogs as irreversible interleukin-1β protease inhibitors and pharmaceutical compositions comprising the same
US5462939A (en) 1993-05-07 1995-10-31 Sterling Winthrop Inc. Peptidic ketones as interleukin-1β-converting enzyme inhibitors
US5411985A (en) 1993-05-17 1995-05-02 Merck & Co., Inc. Gamma-pyrone-3-acetic acid as an inhibitor or interleukin-1 β inventory enzyme
JPH0789951A (ja) 1993-06-03 1995-04-04 Sterling Winthrop Inc インターロイキン−１β転換酵素阻害剤
JPH0725887A (ja) 1993-06-04 1995-01-27 Sterling Winthrop Inc インターロイキン−１β転換酵素阻害剤
CA2165777A1 (en) 1993-06-24 1995-01-05 Junying Yuan Programmed cell death genes and proteins
US5866545A (en) 1993-08-13 1999-02-02 Merck & Co., Inc. Substituted ketone derivatives as inhibitors of interleukin-1β converting enzyme
DK0653417T3 (da) * 1993-11-11 1998-03-30 Basf Ag P-Hydroxyanilinderivater, fremgangsmåde til deres fremstilling og deres anvendelse til bekæmpelse af skadelige svampe eller skadedyr
US5714484A (en) 1993-12-08 1998-02-03 Prototek, Inc. α-(1,3-dicarbonylenol ether) methyl ketones as cysteine protease inhibitors
US5486623A (en) 1993-12-08 1996-01-23 Prototek, Inc. Cysteine protease inhibitors containing heterocyclic leaving groups
CN1118458C (zh) 1994-03-31 2003-08-20 弗特克斯药品有限公司 作为白细胞介素抑制剂的嘧啶基衍生物
WO1995029672A1 (en) 1994-04-29 1995-11-09 Sanofi Winthrop, Inc. HALOMETHYL AMIDES AS IL-1β PROTEASE INHIBITORS
US5492824A (en) 1994-05-12 1996-02-20 Basf Ag Ice and ice-like compositions and methods of making same
US5552400A (en) 1994-06-08 1996-09-03 Sterling Winthrop Inc. Fused-bicyclic lactams as interleukin-1β converting enzyme inhibitors
US6057119A (en) 1994-06-17 2000-05-02 Vertex Pharmaceuticals, Incorporated Crystal structure and mutants of interleukin-1β converting enzyme
US5716929A (en) 1994-06-17 1998-02-10 Vertex Pharmaceuticals, Inc. Inhibitors of interleukin-1β converting enzyme
US5756466A (en) 1994-06-17 1998-05-26 Vertex Pharmaceuticals, Inc. Inhibitors of interleukin-1β converting enzyme
US5847135A (en) 1994-06-17 1998-12-08 Vertex Pharmaceuticals, Incorporated Inhibitors of interleukin-1β converting enzyme
US5565430A (en) 1994-08-02 1996-10-15 Sterling Winthrop Inc. Azaaspartic acid analogs as interleukin-1β converting enzyme inhibitors
GB2292149A (en) * 1994-08-09 1996-02-14 Ferring Res Ltd Peptide inhibitors of pro-interleukin-1beta converting enzyme
US5498616A (en) 1994-11-04 1996-03-12 Cephalon, Inc. Cysteine protease and serine protease inhibitors
TW394764B (en) 1995-02-14 2000-06-21 Mitsubishi Chemcal Corp Oxygen-containing heterocyclic derivatives
EP0820464A2 (en) 1995-03-31 1998-01-28 Takeda Chemical Industries, Ltd. Cysteine protease inhibitor
JPH09165360A (ja) * 1995-03-31 1997-06-24 Takeda Chem Ind Ltd システインプロテアーゼ阻害剤
US5798442A (en) 1995-04-21 1998-08-25 Merck Frosst Canada, Inc. Peptidyl derivatives as inhibitors of pro-apoptotic cysteine proteinases
WO1997007805A1 (en) 1995-08-31 1997-03-06 Smithkline Beecham Corporation Interleukin converting enzyme and apoptosis
WO1997008174A1 (en) 1995-08-31 1997-03-06 Smithkline Beecham Corporation Interleukin converting enzyme and apoptosis
EP0761680A3 (en) 1995-09-12 1999-05-06 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. Tetrazole compounds having Interleukin-1beta converting enzyme inhibitory activity
US5744451A (en) 1995-09-12 1998-04-28 Warner-Lambert Company N-substituted glutamic acid derivatives with interleukin-1 β converting enzyme inhibitory activity
US6136834A (en) * 1995-12-27 2000-10-24 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. Tetrazole compounds and pharmaceutical agents containing such derivative
AU3359697A (en) 1996-07-08 1998-02-02 Yamanouchi Pharmaceutical Co., Ltd. Bone resorption inhibitors
WO1998004539A1 (fr) 1996-07-29 1998-02-05 Mitsubishi Chemical Corporation Derives heterocycliques oxygenes
DE69718012T2 (de) * 1996-09-12 2003-09-25 Idun Pharmaceuticals Inc C-terminale modifizierte (n-substituierte)-2-indolyl dipeptide als inhibitoren von der ice/ced-3 cysteinprotease familie
NZ330451A (pl) 1996-09-12 2000-01-28 Idun Pharmaceuticals Inc
US5869519A (en) * 1996-12-16 1999-02-09 Idun Pharmaceuticals, Inc. C-terminal modified (n-substituted)-2-indolyl dipeptides as inhibitors of the ICE/ced-3 family of cysteine proteases
DE69734718T2 (de) 1996-09-12 2006-08-24 Idun Pharmaceuticals, Inc., San Diego Hemmung der apoptose unter verwendung von inhibitoren der interleukin-1 beta converting enzym (ice)/ced-3 familie
US5968927A (en) * 1996-09-20 1999-10-19 Idun Pharmaceuticals, Inc. Tricyclic compounds for the inhibition of the ICE/ced-3 protease family of enzymes
US6184244B1 (en) * 1996-12-16 2001-02-06 Idun Pharmaceuticals, Inc. C-terminal modified (N-substituted)-2-indolyl dipeptides as inhibitors of the ICE/ced-3 family of cysteine proteases
US5877197A (en) * 1996-12-16 1999-03-02 Karanewsky; Donald S. C-terminal modified (N-substituted)-2-indolyl dipeptides as inhibitors of the ICE/ced-3 family of cysteine proteases
US6054487A (en) * 1997-03-18 2000-04-25 Basf Aktiengesellschaft Methods and compositions for modulating responsiveness to corticosteroids
HUP9700816A3 (en) 1997-04-28 1999-06-28 Gyogyszerkutato Intezet 3(r)-3-amino-4-carboxy-butiraldehyde derivatives inhibiting release of interleukin-1-beta
US6184210B1 (en) * 1997-10-10 2001-02-06 Cytovia, Inc. Dipeptide apoptosis inhibitors and the use thereof
EP1024721B1 (en) * 1997-10-31 2004-09-15 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Creped nonwoven materials and liner
HU227920B1 (en) * 1998-03-19 2012-06-28 Vertex Pharma Inhibitors of caspases, pharmaceutical compositions comprising thereof and their use
US6197750B1 (en) * 1998-07-02 2001-03-06 Idun Pharmaceuticals, Inc. C-terminal modified oxamyl dipeptides as inhibitors of the ICE/ced-3 family of cysteine proteases
US6242422B1 (en) * 1998-10-22 2001-06-05 Idun Pharmacueticals, Inc. (Substituted)Acyl dipeptidyl inhibitors of the ice/ced-3 family of cysteine proteases
PE20011350A1 (es) * 2000-05-19 2002-01-15 Vertex Pharma PROFARMACO DE UN INHIBIDOR DE ENZIMA CONVERTIDORA DE INTERLEUCINA-1ß (ICE)
US20050209162A1 (en) * 2003-11-10 2005-09-22 Amit Roy Methods for monitoring IL-18
WO2005117846A2 (en) * 2004-05-27 2005-12-15 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Ice inhibitors for the treatment of autoinflammatory diseases
NZ549665A (en) * 2004-02-27 2010-09-30 Vertex Pharma Caspase inhibitors and uses thereof

Also Published As

Publication number Publication date
EP2261234A3 (en) 2011-04-20
NO20004546D0 (no) 2000-09-12
HUP0103575A2 (hu) 2002-02-28
SI1064298T1 (sl) 2009-02-28
UA74133C2 (uk) 2005-11-15
JP2010241822A (ja) 2010-10-28
PT1064298E (pt) 2009-01-02
SK286736B6 (sk) 2009-04-06
EP2011800A2 (en) 2009-01-07
CN1323314A (zh) 2001-11-21
NZ506963A (en) 2003-10-31
UA96113C2 (en) 2011-10-10
EP2261234A2 (en) 2010-12-15
CA2324226C (en) 2012-06-05
BG104863A (en) 2001-04-30
EP1064298B1 (en) 2008-10-08
EP2261232A2 (en) 2010-12-15
NZ528282A (en) 2005-05-27
EP2261235A2 (en) 2010-12-15
DK1064298T3 (da) 2009-01-19
US8691848B2 (en) 2014-04-08
IL138469A (en) 2010-11-30
RU2274642C2 (ru) 2006-04-20
NO20004546L (no) 2000-11-09
GEP20043163B (en) 2004-01-26
CZ20003409A3 (cs) 2001-01-17
ZA200004652B (en) 2002-04-24
DE69939689D1 (de) 2008-11-20
EP2011800A3 (en) 2009-06-24
EP2261233A2 (en) 2010-12-15
HUP0103575A3 (en) 2002-10-28
HK1035733A1 (en) 2001-12-07
US6531474B1 (en) 2003-03-11
KR20010042038A (ko) 2001-05-25
US7358273B2 (en) 2008-04-15
ID27002A (id) 2001-02-22
JP2002506878A (ja) 2002-03-05
BR9909660A (pt) 2000-11-21
ES2315010T3 (es) 2009-03-16
WO1999047545A3 (en) 1999-11-25
CA2324226A1 (en) 1999-09-23
IL138469A0 (en) 2001-10-31
EP2261235A3 (en) 2011-04-20
CN1321129C (zh) 2007-06-13
TR200103406T2 (tr) 2002-06-21
EP2261233A3 (en) 2011-04-20
IS5622A (is) 2000-09-08
JP4594520B2 (ja) 2010-12-08
KR20080020703A (ko) 2008-03-05
AR019011A1 (es) 2001-12-26
EP2261232A3 (en) 2011-04-20
BRPI9909660B8 (pt) 2021-05-25
EP1064298A2 (en) 2001-01-03
AU3098699A (en) 1999-10-11
BRPI9909660B1 (pt) 2018-09-18
HU227920B1 (en) 2012-06-28
TWI243828B (en) 2005-11-21
AP2000001919A0 (en) 2000-09-30
CZ302281B6 (cs) 2011-01-26
WO1999047545A2 (en) 1999-09-23
US20090048226A1 (en) 2009-02-19
KR100928878B1 (ko) 2009-11-30
AU769033B2 (en) 2004-01-15
PL343611A1 (en) 2001-08-27
NO331829B1 (no) 2012-04-16
IL206621A0 (en) 2010-12-30
JP2006206600A (ja) 2006-08-10
ATE410439T1 (de) 2008-10-15
US20030232986A1 (en) 2003-12-18
SK13822000A3 (sk) 2001-04-09
KR100898094B1 (ko) 2009-05-18

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2274642C2 (ru) Ингибиторы каспаз
CZ300171B6 (cs) N-Acylaminoslouceniny jako inhibitory enzymu konvertujícího interleukin-1beta, zpusob jejich prípravy a farmaceutické prostredky, které je obsahují
SK287070B6 (sk) Profarmakum ICE inhibítora, farmaceutická kompozícia s jeho obsahom, jeho použitie a medziprodukt
US6426413B1 (en) Inhibitors of caspases
BRPI9917881B1 (pt) compostos inibidores de caspases, composição farmacêutica e uso de ditos compostos
MXPA00009162A (en) Inhibitors of caspases
AU2003255217A1 (en) Inhibitors of Caspases
AU2007200251A1 (en) Inhibitors of Caspases
KR100856767B1 (ko) 인터류킨-1 베타 전환효소의 억제제

Legal Events

Date Code Title Description
RECP Rectifications of patent specification