ES2315010T3 - Inhibidores de caspasas. - Google Patents

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ES2315010T3 ES99912662T ES99912662T ES2315010T3 ES 2315010 T3 ES2315010 T3 ES 2315010T3 ES 99912662 T ES99912662 T ES 99912662T ES 99912662 T ES99912662 T ES 99912662T ES 2315010 T3 ES2315010 T3 ES 2315010T3
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Marion W. Wannamaker
Guy W. Bemis
Paul S. Charifson
David J. Lauffer
Michael D. Mullican
Mark A. Murcko
Keith P. Wilson
James W. Janetka
Robert J. Davies
Anne-Laure Grillot
Zhan Shi
Cornelia J. Forster
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Abstract

Un compuesto representado por la fórmula I: (Ver fórmula) en la que: A) Y es: (Ver fórmula) R 2 es -H y cada R 3 es independientemente -H, una cadena lateral de aminoácidos, -R 8 , alquenil-R 9 o alquinil-R 9 , o cada R 3 , junto con el átomo al que está unido, forma un sistema de anillos cíclico o heterocíclico de 3 a 7 miembros, o R 2 y un R 3 , junto con los átomos a los que están unidos, forman un sistema de anillos cíclico o heterocíclico de 3 a 7 miembros, en donde un átomo de hidrógeno unido a cualquier átomo de carbono de alquilo o cicloalquilo está opcionalmente reemplazado con -R 10 , un átomo de hidrógeno unido a cualquier átomo de carbono de arilo o heteroarilo está opcionalmente reemplazado con -R 11 , un átomo de hidrógeno unido a cualquier átomo de nitrógeno del sistema de anillos está opcionalmente reemplazado con -R 1 ; R 7 es -OH, -OR 8 o -N(H)OH; cada R 10 es independientemente -OH, -SH, -F, -Cl, -Br, -I, -NO2, -CN, -NH2, -CO2H, -C(O)NH2, -N(H)C(O)H, -N (H)C(O)NH2, -perfluoroalquilo, -O-alquilo, -O-arilo, -O-alquilarilo, -N(H)alquilo; -N(H)arilo, -N(H)-alquilarilo, -N (alquilo)2, -C(O)N(H)alquilo, -C(O)N(alquilo)2, -N(H)C(O)alquilo, -N(H)C(O)N(H)alquilo, -N(H)C(O)N(alquilo)2, -S-alquilo, -S-arilo, -S-alquilarilo, -S(O)2alquilo, -S(O)alquilo, -C(O)alquilo, -CH2NH2, -CH2N(H)alquilo, -CH2N(alquilo) 2, -alquilo, -cicloalquilo, -arilo, -heteroarilo, -heterociclilo, -alquilcicloalquilo, -alquilarilo, -alquilheteroarilo o -alquilheterociclilo, en donde un átomo de hidrógeno unido a cualquier átomo de carbono de arilo o heteroarilo está opcionalmente reemplazado con R 11 y un átomo de hidrógeno unido a cualquier átomo de nitrógeno está opcionalmente reemplazado con R 1 ; o B) Y es:...

Description

Inhibidores de caspasas.
Campo técnico de la invención
La presente invención se refiere a nuevas clases de compuestos que son inhibidores de caspasa, en particular inhibidores de la enzima convertidora de interleucina 1\beta ("ICE"). La presente invención se refiere además a composiciones farmacéuticas que comprenden estos compuestos. Los compuestos y las composiciones farmacéuticas de la presente invención son particularmente adecuados para inhibir la actividad de las caspasas y, en consecuencia, se pueden utilizar ventajosamente como agentes contra enfermedades mediadas por interleucina 1 ("IL-1"), apoptosis, factor inductor de interferón \gamma (IGIF) o interferón \gamma ("IFN-\gamma"), incluyendo enfermedades inflamatorias, enfermedades autoinmunitarias, trastornos destructivos óseos, trastornos proliferativos, enfermedades infecciosas y enfermedades degenerativas. La presente invención también se refiere a métodos para inhibir la actividad de la caspasa y disminuir la producción de IGIF y la producción de IFN-\gamma y a métodos para tratar enfermedades mediadas por interleucina 1, apoptosis e interferón \gamma, usando los compuestos y composiciones de la presente invención. La presente invención se refiere también a métodos para preparar los compuestos de la presente invención.
Antecedentes de la invención
La interleucina 1 ("IL-1") es una importante proteína proinflamatoria e inmunorreguladora que estimula la diferenciación y proliferación de fibroblastos, la producción de prostaglandinas, colagenasa y fosfolipasa por células sinoviales y condrocitos, desgranulación de basófilos y eosinófilos, y activación de neutrófilos. Oppenheim, J.H. et al, Immunology Today. 7, pp. 45-56 (1986). Como tal, está implicada en la patogenia de enfermedades inflamatorias y autoinmunitarias crónicas y agudas. Por ejemplo, en artritis reumatoidea, la IL-1 es tanto un mediador de síntomas inflamatorios como de destrucción del cartílago proteoglicano en articulaciones afectadas. Wood, D.D. et al., Arthritis Rheum. 26, 975, (1983); Pettipher, E.J. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 71, 295 (1986); Arend, W.P. y Dayer, J.M., Arthritis Rheum. 38, 151 (1995). La IL-1 es también un agente de resorción ósea altamente potente. Jandiski, J.J., J. Oral Path 17, 145 (1988); Dewhirst, F.E. et al., J. Immunol. 8, 2562 1985). Alternativamente, se lo denomina "factor activador de osteoclastos" en las enfermedades destructivas óseas tales como artrosis y mieloma múltiple. Bataille, R. et al., Int. J. Clin. Lab. Res. 21(4). 283 (1992). En determinados trastornos proliferativos, como leucemia mielógena aguda y mieloma múltiple, la IL-1 puede promover el desarrollo y la adhesión de células tumorales. Bani, M.R., J. Natl. Cancer Inst. 83, 123 (1991); Vidal-Vanaclocha, F., Cancer Res. 54, 2667 (1994). En estos trastornos, la IL-1 también estimula la producción de otras citocinas tales como IL-6, que pueden modular el desarrollo de tumores (Tartour et al., Cancer Res. 54, p. 6243 (1994). La IL-1 es predominantemente producida por monocitos de sangre periférica como parte de la respuesta inflamatoria y existe en dos formas agonistas distintas, IL-1\alpha e IL-1\beta. Mosely, B.S. et al., Proc. Nat. Acad. Sci., 84, pp. 4572-4576 (1987); Lonnemann, G. et al., Eur. J. Immunol., 19, pp, 1531-1536 (1989).
La IL-1\beta se sintetiza como un precursor biológicamente inactivo, pIL-1\beta. El pIL-1\beta carece de una secuencia principal convencional y no es procesado por una peptidasa de señal. March, C.J., Nature, 315, pp. 641-647 (1985). En cambio, el pIL-1\beta es escindido por la enzima convertidora de interleucina 1\beta ("ICE") entre Asp-116 y Ala-117 para producir el fragmento C terminal biológicamente activo que se encuentra en fluido de suero humano y fluido sinovial. Sleath, P.R., et al., J. Biol. Chem., 265, pp. 14526-14528 (1992); A.D. Howard et al., J. Immunol., 147, pp. 2964-2969 (1991). La ICE es una cisteína proteasa localizada principalmente en monocitos. Convierte el precursor IL-1\beta a la forma madura. Black, R.A. et al., FEBS Lett., 247, pp.- 386-390 (1989); Kostura, M.J. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 86, pp. 5227-5231 (1989). El procesamiento por ICE es también necesario para el transporte de IL-1\beta madura a través de la membrana celular. La ICE (o caspasa 1) es un miembro de una familia de enzimas homólogas llamadas caspasas. Estos homólogos tienen similitudes de secuencias en las regiones del sitio activo de las enzimas. Dichos homólogos (caspasas) incluyen TX (o ICE_{rel-II} o ICH-2) (caspasa-4) (Paucheu, et al., EMBO J., 14, p. 1914 (1995); Kamens J., et al., J. Biol. Chem. 270, p. 15250 (1995); Nicholson et al., J. Biol. Chem., 270 15870 (1995)), TY (o ICE_{rel-III}) (caspasa-5) (Nicholson et al., J. Biol. Chem., 270, p. 15870 (1995); ICH-1 (o Nedd-2) (caspasa-2) (Wang, L. et al., Cell, 78, p. 739 (1994)), MCH-2 (caspasa-6), (Fernandes-Alnemri, T. et al., Cancer Res., 55, p. 2737 (1995), CPP32 (o YAMA o apopaína) (caspasa-3) (Fernandes-Alnemri, T. et al., J. Biol. Chem., 269, p. 30761 (1994); Nicholson, D.W. et al., Nature, 376, p. 37 (1995)), CMH-1 (o MCH-3) (caspasa-7) (Lippke, et al., J. Biol. Chem., 271(4), p1825-1828 (1996)); Fernandes-Alnemri, T. et al., Cancer Res., (1995)), Mch5 (caspasa-8) (Muzio, M. et. al., Cell 85(6), 817-827, (1996)), MCH-6 (caspasa-9) (Duan, H. et. al., J. Biol. Chem., 271(34), p. 16720-16724 (1996)), Mch4 (caspasa-10) (Vincenz, C. et. al., J. Biol. Chem., 272, p. 6578-6583 (1997); Fernandes-Alnemri, T. et. al., Proc. Natl. Acad. Sci. 93, p. 7464-7469 (1996)), Ich-3 (caspasa-11) (Wang, S. et. al., J. Biol. Chem., 271, p. 20580-20587 (1996)), mCASP-12 (caspasa-12), (Van de Craen, M. et. al., FEBS Lett. 403, p. 61-69 (1997); Yuan, Y. y Miura, M. Publicación PCT WO95/00160 (1995)), ERICE (caspasa-13), (Humke, E.W., et. al., J. Biol. Chem., 273(25) p. 15702-15707 (1998)) y MICE (caspasa-14) (Hu, S. et. al., J. Biol. Chem., 273(45) p. 29648-29653 (1998)).
Cada uno de estos homólogos de ICE, como también la ICE propiamente dicha, es capaz de inducir la apoptosis cuando se sobre-expresa en líneas celulares transfectadas. La inhibición de uno o más de estos homólogos con el inhibidor de peptidil ICE Tyr-Val-Ala-Asp-clorometilcetona provoca la inhibición de la apoptosis en líneas celulares o células primarias. Lazebnik et al., Nature, 371, p. 346, (1994).
Las caspasas también parecen estar implicadas en la regulación de la muerte celular programada o apoptosis. Yuan, J. et al., Cell, 75, pp. 641-652 (1993); Miura, M. et al., Cell, 75, pp. 653-660 (1993); Nett-Fiordalisi, M.A. et al., J: Cell Biochem., 17B, p. 117 (1993). En particular, se cree que la ICE o los homólogos de ICE están asociados a la regulación de la apoptosis en enfermedades neurodegenerativas, como la enfermedad de Alzheimer y la enfermedad de Parkinson. Marx, J. y M. Baringa, Science, 259, pp. 760-762 (1993); Gagliardini, V. et al., Science, 263, pp. 826-828 (1994). Las aplicaciones terapéuticas para la inhibición pueden incluir el tratamiento de la enfermedad de Alzheimer, la enfermedad de Parkinson, accidentes cerebrovasculares, infarto de miocardio, atrofia espinal y envejecimiento.
Se ha demostrado que la ICE media la apoptosis (muerte celular programada) en determinados tipos de tejido. Steller, H., Science, 267, p. 1445 (1995); Whyte, M. y Evan, G., Nature, 376, p. 17 (1995); Martin, S.J. y Green, D.R., Cell, 82, p. 349 (1995); Alnemri, E.S., et al., J. Biol. Chem., 270, p. 4312 (1995); Yuan, J. Curr. Opin. Cell Biol., 7, p. 211 (1995). Un ratón transgénico con una ruptura del gen de ICE es deficiente en la apoptosis mediada por Fas (Kuida, K. et al., Science 267, 2000 (1995)). Esta actividad de la ICE es distinta de su función como enzima de procesamiento de pro-IL-1\beta. Se concibe que en ciertos tipos de tejido, la inhibición de la ICE puede no afectar la secreción de IL-1\beta madura, pero puede inhibir la apoptosis.
Ya se ha descrito la ICE enzimáticamente activa como un heterodímero compuesto por dos subunidades, p20 y p10 (peso molecular de 20 kDa y 10 kDa, respectivamente). Estas subunidades derivan de una proenzima de 45 kDa (p45) mediante una forma de p30, a través de un mecanismo de activación que es autocatalítico. Thornberry, N.A. et al., Nature, 356, pp. 768-774 (1992). La proenzima ICE se ha dividido en varios dominios funcionales: un prodominio (p14), una subunidad p22/20, un enlazador de polipéptidos y una subunidad p10. Thornberry et al., supra: Casano et al., genomics, 20, pp. 474-481 (1994).
Se ha caracterizado p45 de longitud total por su cDNA y secuencias de aminoácidos. Solicitudes de patentes PCT WO 91/15577 y WO 94/00154. También se conocen el cDNA y las secuencias de aminoácidos de p20 y p10. Thornberry et al., supra. Las ICE de murino y ratón también se han secuenciado y clonado. Tienen alta homología de secuencia de aminoácidos y ácido nucleico a la ICE humana. Miller, D.K. et al., Ann. N.Y. Acad. Sci., 696, pp. 133-148 (1993); Molineaux, S.M. et al., Proc. Nat. Acad. Sci., 90, pp. 1809-1813 (1993). La estructura tridimensional de la ICE se ha determinado en la resolución atómica por cristalografía de rayos X. Wilson, K.P., et al., Nature, 370, pp. 270-275 (1994). La enzima activa existe como un tetrámero de dos subunidades p20 y dos p10.
Recientemente, la ICE y otros miembros de la familia ICE/CED-3 se han asociado a la conversión de pro-IGIF a IGIF o a la producción de IFN-\gamma in vivo (solicitud PCT PCT/US96/20843, publicación no. WO 97/22619, que se incorpora a la presente memoria por referencia). El IGIF se sintetiza in vivo como la proteína precursora "pro-IGIF".
El factor de inducción de interferón-gamma (IGIF) es un polipéptido de aproximadamente 18-kDa que estimula la producción de células T de interferón-gamma (IFN-\gamma). El IGIF es producido por células Kupffer activadas y macrófagos in vivo y se exporta hacia afuera de dichas células tras la estimulación de endotoxina. Por lo tanto, un compuesto que disminuya la producción de IGIF sería útil como inhibidor de dicha estimulación de células T que, a su vez, reduciría los niveles de producción de IFN-\gamma por parte de esas células.
El IFN-\gamma es una citocina con efectos inmunomoduladores en una diversidad de células inmunitarias. En particular, el IFN-\gamma está implicado en la activación de macrófagos y en la selección de células Th1 (F. Belardelli, APMIS, 103, p. 161 (1995)). El IFN-\gamma ejerce sus efectos en parte modulando la expresión de genes a través de las vías de STAT e IRF (C. Schindler y J.E. Darnell, Ann. Rev. Biochem., 64, p. 621 (1995); T. Taniguchi, J. Cancer Res. Clin. Oncol., 121, p. 516 (1995)).
Los ratones que carecen de IFN-\gamma o su receptor tienen múltiples defectos en el funcionamiento de las células inmunitarias y son resistentes a choque endotóxico (S. Huang et al., Science, 259, p. 1742 (1993); D. Dalton et al., Science, 259, p.-1739 (1993); B.D. Car et al., J. Exp. Med., 179, p. 1437 (1994)). Junto con la IL-12, el IGIF parece ser un potente inductor de la producción de IFN-\gamma por parte de las células T (H. Okamura et al., Infection and Immunity, 63, p. 3966 (1995); H. Okamura et al., Nature, 378, p. 88 (1995); S. Ushio et al., J. Immunol., 156, p. 4274 (1996)).
Se ha demostrado que el IFN-\gamma contribuye a la patología asociada con una diversidad de enfermedades y trastornos inflamatorios, infecciosos y autoinmunitarios. Por consiguiente, compuestos que sean capaces de disminuir la producción de IFN-\gamma serían útiles para aliviar los efectos de patologías relacionadas con el IFN-\gamma.
Por ende, las composiciones y los métodos capaces de regular la conversión de pro-IGIF a IGIF serían útiles para disminuir la producción de IGIF e IFN-\gamma in vivo y, por lo tanto, para aliviar los efectos perjudiciales de estas proteínas que contribuyen a trastornos y enfermedades humanas.
Los inhibidores de caspasa representan una clase de compuestos útiles para el control de inflamación o apoptosis, o ambos. Se han descrito los inhibidores de peptidilo y péptidos de ICE (solicitudes de patente PCT WO 91/15577, WO 93/05071, WO 93/09135, WO 93/12076, WO 93/14777, WO 93/16710, WO 95/35308, WO 96/30395, WO 96/33209 y WO 98/01133; solicitudes de patente europeas 503 561, 547 699, 618 223, 623 592 y 623 606; y patentes estadounidenses nos. 5.434.248, 5.710.153, 5.716.929 y 5.744.451). Se ha observado que dichos inhibidores de peptidilo de ICE bloquean la producción de IL-1\beta madura en un modelo de inflamación en ratón (véase a continuación) y suprimen el desarrollo de células de leucemia in vitro (Estrov et al., Blood, 84, 380a (1994)). No obstante, debido a su naturaleza peptídica, dichos inhibidores típicamente se caracterizan por propiedades farmacológicas indeseables, como penetración celular y actividad deficientes, absorción oral deficiente, inestabilidad y metabolismo rápido. Plattner, J.J. y D.W. Norbeck, en Drug Discovery Technologies, C.R. Clark y W.H. Moos, Eds. (Ellis Horwood, Chichester, Inglaterra, 1990), pp. 92-126. Estas propiedades han obstaculizado su desarrollo en fármacos eficaces.
También se ha publicado que los compuestos no peptidilo inhiben la ICE in vitro. Solicitud de patente PCT WO 95/26958; patente estadounidense 5.552.400; Dolle et al., J. Med. Chem., 39, pp. 2438-2440 (1996).
No está claro, no obstante, si estos compuestos tienen perfiles farmacológicos apropiados para ser terapéuticamente útiles.
Por consiguiente, existe la necesidad de compuestos que puedan inhibir eficazmente las caspasas, y que tengan actividad favorable in vivo, para uso como agentes para prevenir y tratar formas crónicas y agudas de enfermedades mediadas por IL-1, apoptosis, IGIF o IFN-\gamma, como enfermedades inflamatorias, autoinmunitarias, destructivas óseas, proliferativas, infecciosas o degenerativas.
Sumario de la invención
La presente invención provee nuevas clases de compuestos y sus derivados farmacéuticamente aceptables, útiles como inhibidores de caspasa, en particular, como inhibidores de ICE. Estos compuestos se pueden usar solos o combinados con otros agentes terapéuticos o profilácticos, como antibióticos, inmunomoduladores u otros agentes anti-inflamatorios, para el tratamiento o la profilaxis de enfermedades mediadas por IL-1, apoptosis, IGIF o IFN-\gamma. De acuerdo con una realización preferida, los compuestos de la presente invención son capaces de unirse al sitio activo de un caspasa e inhibir la actividad de esa enzima.
Es un objeto principal de la presente invención proveer nuevas clases de compuestos representados por la fórmula I, que tengan perfiles favorables in vivo:
1
en donde los diversos sustituyentes se describen en esta memoria.
Es otro objetivo de la presente invención proveer composiciones farmacéuticas, incluyendo composiciones de múltiples componentes. La presente invención también provee métodos para usar y preparar los compuestos de la presente invención y compuestos relacionados.
Descripción detallada de la invención
Con el fin de que la invención aquí descrita pueda ser más completamente entendida, se expone la siguiente descripción detallada.
Las siguientes abreviaturas y definiciones se usan en toda la solicitud.
Abreviaturas
Ac_{2}O
anhídrido acético
MeCN
acetonitrilo
AMC
aminometil cumarina
n-Bu
butilo normal
DMF
dimetilformamida
DIEA
N,N-diisopropiletilamina
DMA
N,N-dimetilacetamida
EDC
Hidrocloruro de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida
Et_{2}O
éter dietílico
EtOAc
acetato de etilo
Fmoc
9-fluorenilmetoxicarbonilo
HBTU
Hexaflurofosfato de O-benzotriazol-1-ol-N,N,N,N'-tetrametiluronio
HOBT
hidrato de 1-hidroxibenzotriazol
MeOH
metanol
NMP
N-metilpirrolidinona
TFA
ácido trifluoroacético
pNA
p-nitroanilina
El término "caspasa" se refiere a una enzima que es miembro de la familia de enzimas que incluye ICE (véase, H. Hara, Natl. Acad. Sci., 94, pp. 2007-2012 (1997)).
Los términos "HBV", "HCV" y "HGV" se refieren al virus de hepatitis B, virus de hepatitis C y virus de hepatitis G, respectivamente.
El término "K_{i}" se refiere a una medida numérica de la eficacia de un compuesto para inhibir la actividad de una enzima diana tal como ICE. Los valores inferiores de K_{i} reflejan una mayor eficacia. El valor K_{i} deriva de ajustar datos de un índice experimentalmente determinado a las ecuaciones de cinética de enzimas estándar (véase I.H. Segel, Enzyme Kinetics, Wiley-Interscience, 1975).
La expresión "factor inductor de interferón gamma" o "IGIF" se refiere a un factor que es capaz de estimular la producción endógena de IFN-\gamma.
La expresión "inhibidor de caspasa" se refiere a un compuesto capaz de demostrar la inhibición detectable de una o más caspasas. La expresión "inhibidor de ICE " se refiere a un compuesto capaz de demostrar inhibición detectable de ICE y opcionalmente una o más caspasas adicionales. La inhibición de estas enzimas puede determinarse usando los métodos descritos e incorporados a la presente memoria por referencia.
El experto en la técnica se dará cuenta de que un inhibidor enzimático in vivo no es necesariamente un inhibidor enzimático in vitro. Por ejemplo, una forma de profármaco de un compuesto típicamente demuestra poca o ninguna actividad en ensayos in vitro. Dichas formas de profármacos pueden alterarse por procedimientos metabólicos u otros procedimientos bioquímicos en el paciente al que se proporcionará un inhibidor de ICE in vivo.
El término "citocina" se refiere a una molécula que media las interacciones entre las células.
El término "afección" se refiere a cualquier enfermedad, trastorno o efecto que produce consecuencias biológicas perjudiciales en un sujeto.
El término "sujeto" se refiere a un animal o a una o más células derivadas de un animal. Preferiblemente, el animal es un mamífero, lo más preferiblemente un ser humano. Las células pueden estar en cualquier forma, incluyendo, aunque sin limitación, células retenidas en tejido, grupos de células, células inmortalizadas, células transfectadas o transformadas y células derivadas de un animal que han sido física o fenotípicamente alteradas.
El término "paciente", tal como se emplea en esta solicitud, se refiere a cualquier mamífero, preferiblemente a seres humanos.
El término "alquilo" se refiere a un hidrocarburo de cadena recta o ramificado, saturado, alifático que contiene 1 a 6 átomos de carbono.
El término "alquenilo" se refiere a un hidrocarburo de cadena recta o ramificado, insaturado, que contiene 2 a 6 átomos de carbono y por lo menos un doble enlace.
El término "alquinilo" se refiere a un hidrocarburo de cadena recta o ramificado insaturado, que contiene 2 a 6 átomos de carbono y por lo menos un triple enlace.
El término "cicloalquilo" se refiere a un sistema de anillos hidrocarbonado, mono o policíclico, no aromático, que puede opcionalmente contener enlaces insaturados en el sistema de anillos. Los ejemplos incluyen ciclohexilo, adamantilo, norbornilo y espirociclopentilo.
El término "arilo" se refiere a un sistema de anillos mono o policíclico que contiene 6, 10, 12 ó 14 carbonos en donde por lo menos un anillo del sistema de anillos es aromático. Los grupos arilo de la presente invención están opcionalmente sustituidos en forma sencilla o múltiple con R^{11}. Los ejemplos de sistemas de anillos arilo incluyen fenilo, naftilo y tetrahidronaftilo.
El término "heteroarilo" se refiere a un sistema de anillos mono o policíclico que contiene 1 a 15 átomos de carbono y 1 a 4 heteroátomos, y en donde por lo menos un anillo del sistema de anillos es aromático. Los heteroátomos son azufre, nitrógeno u oxígeno. Los grupos heteroarilo de la presente invención están opcionalmente sustituidos en forma sencilla o múltiple con R^{11}.
El término "heterocíclico" se refiere a un sistema de anillos mono o policíclico que contiene 1 a 15 átomos de carbono y 1 a 4 heteroátomos, en donde el sistema de anillos mono o policíclico puede opcionalmente contener enlaces insaturados pero no es aromático. Los heteroátomos son independientemente azufre, nitrógeno u oxígeno.
El término "alquilarilo" se refiere a un grupo alquilo, en el que un átomo de hidrógeno del grupo alquilo se reemplaza con un radical arilo.
El término "alquilheteroarilo" se refiere a un grupo alquilo, en el que un átomo de hidrógeno del grupo alquilo se reemplaza con un radical heteroarilo.
La expresión "cadena lateral de aminoácidos" se refiere a cualquier grupo unido al carbono de un aminoácido natural o no natural.
El término "sustituir" se refiere al reemplazo de un átomo de hidrógeno en un compuesto con un grupo sustituyente.
La expresión "cadena recta" se refiere a un hilo no ramificado contiguo de átomos covalentemente unidos. La cadena recta puede estar sustituida, pero estos sustituyentes no son parte de la cadena recta.
En las fórmulas químicas, los paréntesis se usan aquí para denotar conectividad en las moléculas o grupos. En particular, los paréntesis se usan para indicar: 2) que más de un átomo o grupo está unido a un átomo particular; o 2) un punto de ramificación (es decir, el átomo inmediatamente antes del paréntesis de apertura está unido tanto al átomo o al grupo en el paréntesis como al átomo grupo inmediatamente después del paréntesis de cierre). Un ejemplo del primer uso es "-N(alquilo)_{2}", indicando un enlace de dos grupos alquilo a un átomo N. Un ejemplo del segundo uso es "-C (O)NH_{2}", indicando un grupo carbonilo y un grupo amino ("NH_{2}") unidos al átomo de carbono indicado. Un grupo "-C(O)NH_{2}" puede estar representado de otra manera, incluyendo la siguiente estructura:
2
Los sustituyentes pueden estar representados en diversas formas. El experto en la técnica conoce estas diversas formas, y se pueden usar de modo intercambiable. Por ejemplo, un sustituyente metilo en un anillo fenilo puede estar representado por cualquiera de las siguientes formas:
3
Las diversas formas de sustituyentes tales como metilo se usan en la presente memoria de manera intercambiable.
Otras definiciones se exponen en la memoria, cuando es necesario.
Compuestos de la presente invención
1. Un compuesto representado por la fórmula I:
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4
donde:
A) Y es:
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5 
\vskip1.000000\baselineskip
R^{2} es -H y cada R^{3} es independientemente -H, una cadena lateral de aminoácidos, -R^{8}, alquenil-R^{9} o alquinil-R^{9} o cada R^{3}, junto con el átomo al que está unido, forma un sistema de anillos cíclico o heterocíclico de 3 a 7 miembros, o R^{2} y un R^{3}, junto con los átomos a los que están unidos, forman un sistema de anillos cíclico o heterocíclico de 3 a 7 miembros, en donde un átomo de hidrógeno unido a cualquier átomo de carbono de alquilo o cicloalquilo está opcionalmente reemplazado con -R^{10}, un átomo de hidrógeno unido a cualquier átomo de carbono de arilo o heteroarilo está opcionalmente reemplazado con -R^{11}, un átomo de hidrógeno unido a cualquier átomo de nitrógeno del sistema de anillos está opcionalmente reemplazado con -R^{1};
R^{7} es -OH, -OR^{8} o -N(H)OH;
cada R^{10} es independientemente -OH, -SH, -F, -Cl, -Br, -I, -NO_{2}, -CN, -NH_{2}, -CO_{2}H, -C(O)NH_{2}, -N(H)C(O)H, -N (H)C(O)NH_{2}, -perfluoroalquilo, -O-alquilo, -O-arilo, -O-alquilarilo, -N(H)alquilo, -N(H)arilo, -N(H)-alquilarilo, -N(alquilo)_{2}, -C(O)N(H)alquilo, -C(O)N(alquilo)_{2}, -N(H)C(O)alquilo, -N(H)C(O)N(H)alquilo, -N(H)C(O)N(alquilo)_{2},
-S-alquilo, -S-arilo, -S-alquilarilo, -S(O)_{2}alquilo, -S(O)alquilo, -C(O)alquilo, -CH_{2}NH_{2}, -CH_{2}N(H)alquilo, -CH_{2}N(alquilo)_{2}, -alquilo, -cicloalquilo, -arilo, -heteroarilo, -heterociclilo, -alquilcicloalquilo, -alquilarilo, -alquilheteroarilo o -alquilheterociclilo, en donde un átomo de hidrógeno unido a cualquier átomo de carbono de arilo o heteroarilo está opcionalmente reemplazado con R^{11} y un átomo de hidrógeno unido a cualquier átomo de nitrógeno está opcionalmente reemplazado con R^{1}; o
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6 
\newpage
siempre que cuando R^{6} no es hidrógeno, R^{6} y Y, junto con el nitrógeno al que están unidos, forman un anillo (g):
7
R^{2} es -H y cada R^{3} es independientemente -H, una cadena lateral de aminoácidos, -R^{8}, alquenil-R^{9} o alquinil-R^{9}, o cada R^{3}, junto con el átomo al que está unido, forma un sistema de anillos cíclico o heterocíclico de 3 a 7 miembros, o R^{2} y un R^{3}, junto con los átomos a los que están unidos, forman un sistema de anillos cíclico o heterocíclico de 3 a 7 miembros, en el que un átomo de hidrógeno unido a cualquier átomo de carbono de alquilo o -cicloalquilo está opcionalmente reemplazado con -R^{10}, un átomo de hidrógeno unido a cualquier átomo de carbono de arilo o heteroarilo está opcionalmente reemplazado con -R^{11}, un átomo de hidrógeno unido a cualquier átomo de nitrógeno del sistema de anillos está opcionalmente reemplazado con -R^{1};
cada R^{10} es independientemente -OH, -SH, -F, -Cl, -Br, -I, -NO_{2}, -CN, -NH_{2}, -CO_{2}H, -C(O)NH_{2}, -N(H)C(O)H, -N(H)C(O)NH_{2}, -perfluoroalquilo, -O-alquilo, -O-arilo, -O-alquilarilo, -N(H)alquilo, -N(H)arilo, -N(H)-alquilarilo, -N(alquilo)_{2}, -C(O)N(H)alquilo, -C(O)N(alquilo)_{2}, -N(H)C(O)alquilo, -N(H)C(O)Oalquilo, -N(H)C(O)Oarilo,
-N(H)C(O)Oalquilarilo, -N(H)C(O)Oheteroarilo, -N(H)C(O)Oalquilheteroarilo, -N(H)C(O)Ocicloalquilo, -N(H)C(O)N(H)alquilo, -N(H)C(O)N(alquilo)_{2}, -N(H)C(O)N(H)arilo, -N(H)C(O)M(H)alquilarilo, -N(H)C(O)N(H)heteroarilo,
-N(H)C(O)N(H)alquilheteroarilo, -N(H)C(O)N(H)cicloalquilo, -S-alquilo, -S-arilo, -S-alquilarilo, -S(O)_{2}alquilo, -3(O)alquilo, -C(O)alquilo, -CH_{2}NH_{2}, -CH_{2}N(H)alquilo o -CH_{2}N(alquilo)_{2}, -alquilo, -cicloalquilo, -arilo, -heteroarilo, -heterociclilo, -alquilcicloalquilo, -alquilarilo, -alquilheteroarilo o -alquilheterociclilo, en donde un átomo de hidrógeno unido a cualquier átomo de carbono de arilo o heteroarilo está opcionalmente reemplazado con R^{11} y un átomo de hidrógeno unido a cualquier átomo de nitrógeno está opcionalmente reemplazado con R^{1}; o
C) Y es:
8
R^{2} es -H y cada R^{3} es independientemente -H, una cadena lateral de aminoácidos, -R^{8}, alquenil-R^{9} o alquinil-R^{9}, o cada R^{3}, junto con el átomo de nitrógeno al que está unido, forma un sistema de anillos cíclico o heterocíclico de 3 a 7 miembros, en donde un átomo de hidrógeno unido a cualquier átomo de carbono de alquilo o cicloalquilo está opcionalmente reemplazado con -R^{10}, un átomo de hidrógeno unido a cualquier átomo de carbono de arilo o heteroarilo está opcionalmente reemplazado con -R^{11}, un átomo de hidrógeno unido a cualquier átomo de nitrógeno del sistema de anillos está opcionalmente reemplazado con -R^{1};
R^{7} es -OH, -OR^{8} o -N(H)OH;
cada R^{10} es independientemente -OH, -SH, -F, -Cl, -Br, -I, -NO_{2}, -CN, -NH_{2}, -CO_{2}H, -C(O)NH_{2}, -N(H)C(O)H, -N(H)C(O)NH_{2}, -perfluoroalquilo, -O-alquilo, -O-arilo, -O-alquilarilo, -N(H)alquilo, -N(H)arilo, -N(H)-alquilarilo, -N(alquilo)_{2}, -C(O)N(H)alquilo, -C(O)N(alquilo)_{2}, -N(H)C(O)alquilo, -N(H)C(O)N(H)alquilo, -N(H)C(O)N(alquilo)_{2},
-S-alquilo, -S-arilo, -S-alquilarilo, -S(O)_{2}alquilo, -S(O)alquilo, -C(O)alquilo, -CH_{2}NH_{2}, -CH_{2}N(H)alquilo, -CH_{2}N(alquilo)_{2}, -alquilo, -cicloalquilo, -arilo, -heteroarilo, -heterociclilo, -alquilcicloalquilo, -alquilarilo, -alquilheteroarilo o -alquilheterociclilo, en donde un átomo de hidrógeno unido a cualquier átomo de carbono de arilo o heteroarilo está opcionalmente reemplazado con R^{11} y un átomo de hidrógeno unido a cualquier átomo de nitrógeno está opcionalmente reemplazado con R^{1};
siempre que si un R^{3} es -H, entonces el otro R^{3} no es -H; o
D) Y es:
9
R^{2} es -H y cada R^{3} es independientemente -H, una cadena lateral de aminoácidos, -R^{3}, alquenil-R^{9} o alquinil-R^{9} o cada R^{3}, junto con el átomo de nitrógeno al que está unido, forma un sistema de anillos cíclico o heterocíclico de 3 a 7 miembros, en el que un átomo de hidrógeno unido a cualquier átomo de carbono de alquilo o cicloalquilo está opcionalmente reemplazado con -R^{10}, un átomo de hidrógeno unido a cualquier átomo de carbono de arilo o heteroarilo está opcionalmente reemplazado con -R^{11}, un átomo de hidrógeno unido a cualquier átomo de nitrógeno del sistema de anillos está opcionalmente reemplazado con -R^{1};
cada R^{10} es independientemente -OH, -SH, -F, -Cl, -Br, -I, -NO_{2}, -CN, -NH_{2}, -CO_{2}H, -C(O)NH_{2}, -N(H)C(O)H, -N(H)C(O)NH_{2}, -perfluoroalquilo, -O-alquilo, -O-arilo, -O-alquilarilo, -N(H)alquilo, -N(H)arilo, -N(H)-alquilarilo, -N(alquilo)_{2}, -C(O)N(H)alquilo, -C(O)N(alquilo)_{2}, -N(H)C(O)alquilo, -N(H)C(O)Oalquilo, -N(H)C(O)Oarilo, -N(H)C(O)Oalquilarilo, -N(H)C(O)Oheteroarilo, -N (H)C(O)Oalquilheteroarilo, -N(H)C(O)Ocicloalquilo, -N(H)C(O)N(H)alquilo, -N(H)C(O)N(alquilo)_{2}, -N (H)C(O)N(H)arilo, -N(H)C(O)N(H)alquilarilo, -N(H)C(O)N(H)heteroarilo, -N(H)C(O)N(H)alquilheteroarilo, -N(H)C(O)N(H)cicloalquilo, -S-alquilo, -S-arilo, -S-alquilarilo, -S(O)_{2}alquilo, -S(O)alquilo, -C(O) alquilo, -CH_{2}NH_{2}, -CH_{2}N (H)alquilo, -CH_{2}N (alquilo)_{2}, -alquilo, -cicloalquilo, -arilo, -heteroarilo, -heterociclilo, -alquilcicloalquilo, -alquilarilo, -alquilheteroarilo o -alquilheterociclilo, en donde un átomo de hidrógeno unido a cualquier átomo de carbono de -arilo o -heteroarilo está opcionalmente reemplazado con R^{11} y un átomo de hidrógeno unido a cualquier átomo de nitrógeno está opcionalmente reemplazado con R^{1}; y
en donde:
X es -C(R^{3})_{2}-;
m es 0 ó 1;
R^{1} es -H, -R^{8}, -C(O)R^{8}, -C(O)C(O)R^{8}, -S(O)_{2}R^{8}, -S(O)R^{8}, -C(O)OR^{8}, -C(O)N(H)R^{8}, -S (O)_{2}N(H)-R^{8}, -S(O)N(H)-R^{8}, -C(O)C(O)N(H)R^{8}, -C(O)CH=CHR^{8}, -C(O)CH_{2}OR^{8}, -C(O)CH_{2}N(H)R^{8}, -C(O)N(R^{8})_{2}, -S(O)_{2}N(R^{8})_{2}, -S(O)N
(R^{8})_{2}, -C(O)C(O)N(R^{8})_{2}, -C(O)CH_{2}N(R^{8})_{2}, -CH_{2}R^{8}, -CH_{2}-alquenil-R^{8} o -CH_{2}-alquinil-R^{8};
R^{4} y uno de R^{5}, junto con los átomos a los que están unidos, forman un sistema de anillos seleccionado entre:
10
1000
y el otro R^{5} es H, en donde un átomo de hidrógeno unido a cualquier átomo de carbono de alquilo o cicloalquilo está opcionalmente reemplazado con R^{10}, o R^{4} y un R^{5}, junto con los átomos a los que están unidos, forman un sistema de anillos:
11 y el otro R^{5} es H; R^{6} es -H;
cada R^{8} es independientemente -alquilo, -cicloalquilo, -arilo, -heteroarilo, -heterociclilo, -alquilcicloalquilo, -alquilarilo, -alquilheteroarilo o -alquilheterociclilo, en donde un átomo de hidrógeno unido a cualquier átomo de carbono de alquilo o cicloalquilo está opcionalmente reemplazado con R^{10}, un átomo de hidrógeno unido a cualquier átomo de carbono de arilo o heteroarilo está opcionalmente reemplazado con R^{11}, y un átomo de hidrógeno unido a cualquier átomo de nitrógeno está opcionalmente reemplazado con R^{1};
cada R^{9} es independientemente -arilo, -heteroarilo, cicloalquilo o -heterociclilo, en donde un átomo de hidrógeno unido a cualquier átomo de carbono de alquilo o cicloalquilo está opcionalmente reemplazado con R^{10}, un átomo de hidrógeno unido a cualquier átomo de carbono de arilo o heteroarilo está opcionalmente reemplazado con R^{11}, y un átomo de hidrógeno unido a cualquier átomo de nitrógeno está opcionalmente reemplazado con R^{1};
cada R^{11} es independientemente -OH, -SH, -F, -Cl, -Br, -I, -NO_{2}, -CN, -NH_{2}, -CO_{2}H, -C(O)NH_{2}, -N(H)C(O)H, -N(H)C(O)NH_{2}, -alquilo, -cicloalquilo, -perfluoroalquilo, -O-alquilo, -O-arilo, -O-alquilarilo, -N(H)alquilo, -N(H)arilo, -N(H)-alquilarilo, -N(alquilo)_{2}, -C(O)N(H)alquilo, -C(O)N(alquilo)_{2}, -N(H)C(O)alquilo, -N(H)C(O)N(H)alquilo, -N(H)C(O)N(alquilo)_{2}, -S-alquilo, -S-arilo, -S-alquilarilo, -S(O)_{2}alquilo, -S(O)alquilo, -C(O)alquilo, -CH_{2}NH_{2}, -CH_{2}N(H)alquilo o -CH_{2}N(alquilo)_{2};
R^{12} es -c(O)alquilo, -C(O)cicloalquilo, -C(O)alquenilo, -C(O)alquilarilo, -C(O)alquilheteroarilo, -C(O)heterociclilo o -C(O)alquilheterociclilo;
R^{13} es -h, -alquilo, -arilo, -alquilarilo o -alquilheteroarilo; y en donde el término:
"alquilo" se refiere a un hidrocarburo alifático saturado que tiene 1 a 6 átomos de carbono,
"alquenilo" se refiere a un hidrocarburo alifático insaturado que tiene 2 a 6 átomos de carbono y por lo menos un doble enlace,
"alquinilo" se refiere a un hidrocarburo alifático insaturado que tiene 2 a 6 átomos de carbono y por lo menos un triple enlace,
"cicloalquilo" se refiere a un sistema de anillos hidrocarbonado mono o policíclico, no aromático,
"arilo" se refiere a un sistema de anillos aromático mono o policíclico, que tiene 6, 10, 12 ó 14 átomos de carbono,
"heteroarilo" se refiere a un sistema de anillos aromático mono o policíclico que tiene 1 a 15 átomos de carbono y 1 a 4 heteroátomos independientemente seleccionados entre azufre, nitrógeno y oxígeno, y
"heterociclilo" se refiere a un sistema de anillos mono o policíclico no aromático, que tiene 1 a 15 átomos de carbono y 1 a 4 heteroátomos independientemente seleccionados entre azufre, nitrógeno y oxígeno.
\vskip1.000000\baselineskip
2. El compuesto según 1, opción (B) o (D), en donde Y es:
12
y V se selecciona del grupo que consiste en: CH_{3}O,
13
14
15
3. El compuesto según 1 ó 2, en donde un R^{3} es -H y el otro R^{3} es metilo, isopropilo, terc-butilo, -CH_{2}S R^{8}, -CH_{2}SO_{2} R^{8}, -CH_{2}CH_{2}SR^{8} o -CH_{2}CH_{2}SO_{2}R^{8}.
4. El compuesto según 3, en el que un R^{3} es -H y el otro R^{3} es metilo.
5. El compuesto según uno cualquiera de 1-4, en el que R^{1} es -C(O)R^{8} o -C(O)C(O)R^{8}.
6. El compuesto según 1 ó 2, en el que R^{4} y uno de R^{5}, junto con los átomos a los que están unidos, forman un sistema de anillos seleccionado entre:
16
y el otro R^{5} es H, en donde un átomo de hidrógeno unido a cualquier átomo de carbono de -alquilo o -cicloalquilo está opcionalmente reemplazado con R^{10}.
7. El compuesto según 6, en el que un R^{3} es -H y el otro R^{3} es metilo, isopropilo, terc-butilo, -CH_{2}SR^{8}, -CH_{2}SO_{2}R^{8}, -CH_{2}CH_{2}SR^{8} o -CH_{2}CH_{2}SO_{2}R^{8}.
8. El compuesto según 7, en el que un R^{3} es -H y el otro R^{3} es metilo.
9. El compuesto según 8, en el que R^{1} es -C(O)R^{8} o -C(O)C(O)R^{8}.
10. El compuesto según 1 ó 2, en el que un R^{4} y un R^{5}, junto con los átomos a los que están unidos, forman un sistema de anillos:
17, y el otro R^{5} es H.
11. El compuesto según 10, en el que un R^{3} es -H y el otro R^{3} es metilo, isopropilo, terc-butilo, -CH_{2}SR^{8},
-CH_{2}SO_{2}R^{8}, -CH_{2}CH_{2}SR^{8} o -CH_{2}CH_{2}SO_{2}R^{8}.
12. El compuesto según 11, en el que un R^{3} es -H y el otro R^{3} es metilo.
13. El compuesto según 12, en el que R^{1} es -C(O)R^{8} o -C(O)C(O)R^{8}.
Los compuestos específicos de la presente invención incluyen, aunque sin limitarse a ellos, los Ejemplos 5a-5bd, 7a-7at, 20a-20t, 23g-23h, 24a-24e, 41, 42, 45, 46, 51, 52, 56, 57, 60, 61, 64, 65, 68, 69, 72, 73, 76-93, 98a-Z, aa-az y ba-bb, 110, 111, 121 y 122 a-v.
Los compuestos de la presente invención pueden contener uno o más átomos de carbono "asimétricos" y, por lo tanto, pueden ocurrir como racematos y mezclas racémicas; enantiómeros simples, mezclas diastereoméricas y diastereómeros individuales. Cada carbono estereogénico puede estar en la configuración R o S. Si bien los compuestos y andamios específicos ejemplificados en esta solicitud pueden representarse en una configuración estereoquímica particular, los compuestos y andamios que tienen o bien la estereoquímica opuesta en cualquier centro quiral o sus mezclas también se contemplan.
Todas esas formas isoméricas de estos compuestos se incluyen expresamente en la presente invención, como también su derivado farmacéuticamente aceptable.
La expresión "derivado farmacéuticamente aceptable" significa cualquier sal, éster farmacéuticamente aceptable, o sal de dicho éster, de un compuesto de la presente invención o cualquier otro compuesto que, tras la administración a un receptor, es capaz de proveer (directa o indirectamente) un compuesto de la presente invención o un metabolito activo o su residuo.
Las sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos de la presente invención incluyen, por ejemplo, aquellos derivados de ácidos y bases orgánicas e inorgánicas farmacéuticamente aceptables. Los ejemplos de ácidos adecuados incluyen ácidos clorhídrico, bromhídrico, sulfúrico, nítrico, perclórico, fumárico, maleico, fosfórico, glicólico, láctico, salicílico, succínico, tolueno-p-sulfónico, tartárico, acético, cítrico, metanosulfónico, fórmico, benzoico, malónico, naftalen-2-sulfónico y bencenosulfónico. Otros ácidos, como oxálico, si bien por sí mismos no son farmacéuticamente aceptables, se pueden emplear en la preparación de sales útiles como intermedios para obtener los compuestos de la invención y sus sales de adición de ácido farmacéuticamente aceptables. Las sales derivadas de bases apropiadas incluyen sales de metal alcalino (p. ej., sodio), metal alcalino térreo (p. ej., magnesio), amonio y N-(alquilo C_{1-4})_{4}^{+}.
La presente invención también contempla la "cuaternización" de cualquier grupo que contiene nitrógeno básico de los compuestos descritos en esta memoria. El nitrógeno básico puede ser cuaternizado con agentes conocidos por los expertos en la técnica incluyendo, por ejemplo, haluros de alquilo inferior, como metilo, etilo, propilo y cloruro de butilo, bromuros y yoduros; sulfatos de dialquilo incluyendo sulfatos de dimetilo, dietilo, dibutilo y diamilo; haluros de cadena larga tales como cloruro de decilo, laurilo, miristilo y estearilo, bromuros y yoduros; y haluros de aralquilo incluyendo bromuros de bencilo y fenetilo. Se pueden obtener productos solubles o dispersables en agua o en aceite mediante dicha cuaternización.
Cuando se sustituye de manera múltiple, cada sustituyente puede escogerse independientemente de cualquier otro sustituyente, siempre y cuando la combinación de sustituyentes proporcione la formación de un compuesto estable.
Las combinaciones de sustituyentes y variables contempladas por la presente invención son solamente aquellas que resulten en la formación de compuestos estables. El término "estable", tal como se emplea en la presente memoria, se refiere a compuestos que poseen estabilidad suficiente para permitir la preparación y administración a un mamífero por métodos conocidos en la técnica. Típicamente, dichos compuestos son estables a una temperatura de 40ºC o menos, en ausencia de humedad u otras condiciones químicamente reactivas, durante por lo menos una semana.
Los compuestos preferidos de la presente invención pueden ser fácilmente absorbidos por el torrente circulatorio de los pacientes tras la administración oral. Esta disponibilidad oral hace que dichos compuestos sean excelentes agentes para el tratamiento de administración oral y para regímenes de prevención contra enfermedades mediadas por IL-1, apoptosis, IGIF o IFN-\gamma.
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Se ha de entender que los compuestos de la presente invención pueden existir en diversas formas de equilibrio, dependiendo de las condiciones que incluyen la opción de disolvente, pH y otras conocidas para el especialista en la técnica. Todas las formas de estos compuestos se incluyen expresamente en la presente invención. En particular, muchos de los compuestos de la presente invención, especialmente aquellos que contienen grupos aldehído o cetona y grupos ácido carboxílico en Y, pueden tomar las formas de hemi-acetal o hidratadas. Por ejemplo, los compuestos de la realización A están en una forma de hemiacetal cuando Y es:
18
Dependiendo de la opción de disolvente y otras condiciones conocidas por el experto en la técnica, los compuestos de la invención pueden también tomar las formas hidratada, aciloxi acetal, acetal o enol. Por ejemplo, los compuestos de la presente invención están en las formas hidratadas cuando Y es:
\hskip6cm
19
en las formas aciloxi acetal cuando Y es:
20
en las formas acetal cuando Y es y R^{8} es distinto de H:
21
y en las formas enol cuando Y es:
22
Además, se ha de entender que las formas de equilibrio de los compuestos de la presente invención pueden incluir formas tautoméricas. Todas las formas de estos compuestos se incluyen expresamente en la presente invención.
Los compuestos de fórmula I se pueden sintetizar usando técnicas convencionales. Ventajosamente, estos compuestos se sintetizan convenientemente a partir de materiales de partida fácilmente disponibles.
Los compuestos de la presente invención se pueden preparar usando los procedimientos descritos en esta memoria. Como puede apreciar el experto en la técnica, estos procedimientos no son el único medio mediante el cual se pueden sintetizar los compuestos descritos y reivindicados en esta solicitud. Otros métodos serán obvios para aquellos con experiencia ordinaria en la técnica. Adicionalmente, las distintas etapas sintéticas descritas en esta memoria se pueden llevar a cabo en una secuencia u orden alternativo para dar los compuestos deseados.
Se ha de entender que los compuestos de la presente invención se pueden modificar por funcionalidades apropiadas para potenciar las propiedades biológicas selectivas. Dichas modificaciones se conocen en la técnica e incluyen aquellas que aumentan la penetración biológica en un sistema biológico determinado (p. ej., sangre, sistema linfático, sistema nervioso central), aumentan la disponibilidad oral, aumentan la solubilidad para permitir la administración por inyección, alteran el metabolismo y alteran el índice de excreción. Además, los compuestos se pueden cambiar a la forma profármaco de modo tal que el compuesto deseado se cree en el organismo del paciente como consecuencia de la acción de procesos metabólicos y otros procesos bioquímicos en el profármaco. Dichas formas profármaco típicamente demuestran poca o ninguna actividad en ensayos in vitro. Algunos ejemplos de formas profármaco incluyen las formas cetal, acetal, oxima, imina e hidrazona de los compuestos que contienen grupos cetona o aldehído, especialmente cuando ocurren en el grupo Y de los compuestos de la presente invención. Otros ejemplos de formas profármaco incluyen las formas hemi-cetal, hemi-acetal, aciloxi cetal, aciloxi acetal, cetal, acetal y enol que se describen en este documento.
Composiciones y métodos
Los compuestos de la presente invención son inhibidores de caspasa y, en particular, inhibidores de ICE. Por consiguiente, estos compuestos son capaces de dirigirse a, e inhibir los eventos en enfermedades mediadas por IL-1, apoptosis, IGIF e IFN-\gamma, y, por lo tanto, la última actividad de esa proteína en enfermedades inflamatorias, enfermedades autoinmunitarias, trastornos destructivos óseos, trastornos proliferativos, enfermedades infecciosas y enfermedades degenerativas. Por ejemplo, los compuestos de la presente invención inhiben la conversión del precursor IL-1\beta a IL-1\beta maduro, inhibiendo la ICE. Dado que la ICE es esencial para la producción de IL-1 madura, la inhibición de esa enzima bloquea eficazmente la iniciación de efectos y síntomas fisiológicos mediados por IL-1, como inflamación, inhibiendo la producción de IL-1 madura. Por lo tanto, al inhibir la actividad del precursor IL-1\beta, los compuestos de la presente invención funcionan eficazmente como inhibidores de IL-1.
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Los compuestos de la presente invención inhiben también la conversión de pro-IGIF a IGIF activo, maduro, inhibiendo la ICE. Ya que la ICE es esencial para la producción de IGIF maduro, la inhibición de ICE bloquea eficazmente la iniciación de efectos y síntomas fisiológicos mediados por IGIF, inhibiendo la producción de IGIF maduro. El IGIF es, a su vez, esencial para la producción de IFN-\gamma. Por lo tanto, la ICE bloquea eficazmente la iniciación de efectos y síntomas fisiológicos mediados por IFN-\gamma, inhibiendo la producción de IGIF maduro y, por ende, la producción de IFN-\gamma.
Los compuestos de la presente invención son sorprendentemente biodisponibles comparados con los inhibidores de peptidilo, como aquellos descritos, por ejemplo, en los documentos EP 618 223, EP 623 592, WO 93/09135, WO 93/16710, patente estadounidense no. 5.434.248, WO 95/35308 o WO 96/33209.
Por consiguiente, las composiciones farmacéuticas de la presente invención serán útiles para controlar la actividad de la caspasa in vivo. Las composiciones de la presente invención serán, por lo tanto, útiles para controlar niveles de IL-1, IGIF o IFN-\gamma in vivo y para tratar o reducir el avance/gravedad o los efectos de afecciones mediadas por IL-1, apoptosis, IGIF o IFN-\gamma, incluyendo enfermedades, trastornos o efectos.
Las composiciones farmacéuticas de la presente invención comprenden un compuesto de fórmula I, o su sal farmacéuticamente aceptable, y un vehículo farmacéuticamente aceptable. Dichas composiciones puede opcionalmente comprender un agente terapéutico adicional. Dichos agentes incluyen, aunque sin limitarse a ellos, un agente antiinflamatorio, un inhibidor de metaloproteasa de matriz, un inhibidor de lipoxigenasa, un antagonista de citocina, un inmunosupresor, un agente antineoplásico, un agente antivírico, una citocina, un factor de crecimiento, un inmunomodulador, una prostaglandina o un compuesto de hiperproliferación antivascular.
La expresión "vehículo farmacéuticamente aceptable" se refiere a un vehículo no toxico que se puede administrar a un paciente, junto con un compuesto de la presente invención, y que no destruye su actividad farmacológica.
Los vehículos farmacéuticamente aceptables que se pueden emplear en las composiciones farmacéuticas de la presente invención incluyen, aunque sin limitarse a ellos, intercambiadores iónicos, alúmina, estearato de aluminio, lecitina, proteínas del suero, como albúmina de suero humano, sustancias tampón como fosfatos, glicina, ácido sórbico, sorbato de potasio, mezclas parciales de glicérido de ácidos grasos vegetales saturados, agua, sales o electrolitos, como sulfato de protamina, hidrógeno fosfato disódico, hidrógeno fosfato potásico, cloruro de sodio, sales de zinc, sílice coloidal, trisilicato de magnesio, polivinilpirrolidona, sustancias a base de celulosa, polietilenglicol y carboximetilcelulosa sódica, poliacrilatos, ceras, copolímeros en bloque de polietileno-polioxipropileno, grasa de lana y sistemas de administración de fármacos autoemulsionantes (SEDDS) tales como \alpha-tocoferol, succinato de polietilenglicol 1000 u otras matrices de administración polimérica similares.
En la composición farmacéutica que comprende solamente un compuesto de las realizaciones A-D como el componente activo, los métodos para administrar estas composiciones pueden además comprender la etapa de administrar al sujeto un agente adicional. Dichos agentes incluyen, aunque sin limitarse a ellos, un agente antiinflamatorio, un inhibidor de metaloproteasa de matriz, un inhibidor de lipoxigenasa, un antagonista de citocina, un inmunosupresor, un agente antineoplásico, un agente antivírico, una citocina, un factor de crecimiento, un inmunomodulador, una prostaglandina o un compuesto de hiperproliferación antivascular.
La expresión "cantidad farmacéuticamente eficaz" se refiere a una cantidad eficaz para tratar o aliviar una enfermedad mediada por IL-1, apoptosis, IGIF, o IFN-\gamma-en un paciente. La expresión "cantidad profilácticamente eficaz" se refiere a una cantidad eficaz para prevenir o sustancialmente aliviar enfermedades mediadas por IL-1, apoptosis, IGIF o IFN-\gamma en un paciente.
Los compuestos de la presente invención se pueden emplear en un modo convencional para controlar niveles de IGIF e IFN-\gamma in vivo y para tratar enfermedades o reducir el avance o la gravedad de los efectos mediados por IL-1, apoptosis, IGIF o IFN-\gamma. En dichos tratamientos, los niveles y requerimientos de dosificación pueden ser seleccionados por la persona con experiencia ordinaria en la técnica a partir de métodos y técnicas existentes.
Por ejemplo, un compuesto de la presente invención se puede combinar con un adyuvante farmacéuticamente aceptable para administración a un paciente que sufre de una enfermedad mediada por IL-1, apoptosis, IGIF o IFN-\gamma en un modo farmacéuticamente aceptable y en una cantidad eficaz para disminuir la gravedad de esa enfermedad.
Alternativamente, los compuestos de la presente invención se pueden usar en las composiciones y métodos para tratar o proteger a individuos contra enfermedades mediadas por IL-1, apoptosis, IGIF o IFN-\gamma durante períodos extensos de tiempo. Los compuestos se pueden emplear en dichas composiciones o bien solos o junto con otros compuestos de la presente invención en un modo coherente con la utilización convencional de inhibidores enzimáticos en composiciones farmacéuticas. Por ejemplo, un compuesto de la presente invención se puede combinar con adyuvantes farmacéuticamente aceptables convencionalmente empleados en vacunas y administrarse en cantidades profilácticamente eficaces para proteger a individuos durante un período de tiempo extenso contra enfermedades mediadas por IL-1, apoptosis, IGIF o IFN-\gamma.
Los compuestos de fórmula I también pueden administrarse conjuntamente con otros inhibidores de caspasa o ICE para aumentar el efecto de la terapia o profilaxis contra diversas enfermedades mediadas por IL-1, apoptosis, IGIF o IFN-\gamma.
Además, los compuestos de la presente invención se pueden usar en combinación con agentes antiinflamatorios convencionales o con inhibidores de metaloproteasa de matriz, inhibidores de lipoxigenasa y antagonistas de citocinas que no sean IL-1\beta.
Los compuestos de la presente invención también se pueden administrar combinados con inmunomoduladores (p. ej., bropirimina, anticuerpo alfa-interferón anti-humano, IL-2, GM-CSF, metionina encefalina, interferón-alfa, dietilditiocarbamato, factor de necrosis tumoral, naltrexona y EPO), con prostaglandinas o con agentes antivíricos (p, ej., 3TC, polisacáridos polisulfatados, ganiclovir, ribavirina, aciclovir, alfa interferón, trimetotrexato y fanciclovir) o profármacos de estos compuestos o de compuestos relacionados para prevenir o combatir síntomas de enfermedades mediadas por IL-1, como inflamación.
Cuando los compuestos de la presente invención se administran en terapias de combinación con otros agentes, se pueden administrar secuencial o concurrentemente al paciente. Alternativamente, las composiciones farmacéuticas o profilácticas de acuerdo con la presente invención comprenden una combinación de un compuesto de fórmula I y otro agente terapéutico o profiláctico.
Las composiciones farmacéuticas de la presente invención se pueden administrar por vía oral, parenteral, por inhalación, por vía tópica, rectal, nasal, bucal, vaginal o vía un reservorio implantado. Se prefiere la administración oral. Las composiciones farmacéuticas de la presente invención pueden contener vehículos o adyuvantes farmacéuticamente aceptables no tóxicos. En algunos casos, el pH de la formulación se puede ajustar con ácidos, bases o tampones farmacéuticamente aceptables para potenciar la estabilidad del compuesto formulado o su forma de administración. El término parenteral, tal como se emplea en esta memoria, incluye técnicas de inyección o infusión subcutánea, intracutánea, intravenosa, intramuscular, intra-articular, intrasinovial, intraesternal, intratecal, intralesional e intracraneal.
Las composiciones farmacéuticas pueden estar en la forma de una preparación inyectable estéril, por ejemplo, como una suspensión acuosa u oleaginosa inyectable estéril. Esta suspensión se puede formular de acuerdo con técnicas conocidas en el campo, usando agentes de dispersión o humectación adecuados (como, por ejemplo, Tween 80) y agentes de suspensión. La preparación inyectable estéril puede también ser una solución o suspensión inyectable estéril en un diluyente o disolvente parenteralmente aceptable, no tóxico, por ejemplo, como una solución en 1,3-butanodiol. Entre los vehículos y disolventes aceptables que se pueden emplear están manitol, agua, solución de Ringer y solución isotónica de cloruro de sodio. Además, se emplean convencionalmente aceites fijos, estériles como medio disolvente o de suspensión. Para este propósito, se puede emplear cualquier aceite fijo insípido, incluyendo mono o diglicéridos sintéticos. Los ácidos grasos, como ácido oleico y sus derivados de glicérido son útiles en la preparación de inyectables, ya que son aceites farmacéuticamente aceptables naturales, como el aceite de oliva o aceite de ricino, especialmente en sus versiones polioxietiladas. Estas soluciones o suspensiones oleosas pueden también contener un diluyente
o dispersante de alcohol de cadena larga, como aquellos descritos en la Farmacopea Helvetica, o un alcohol similar.
Las composiciones farmacéuticas de la presente invención pueden administrarse oralmente en cualquier forma de dosificación oralmente aceptable, incluyendo, aunque sin limitarse a ello, cápsulas, comprimidos y suspensiones o soluciones acuosas. En el caso de comprimidos para uso oral, los vehículos comúnmente utilizados incluyen almidón de maíz y lactosa. Los agentes lubricantes, tales como estearato de magnesio, típicamente también se añaden. Para administración oral en cápsulas, los diluyentes útiles incluyen lactosa y almidón de maíz seco. Cuando se administran oralmente suspensiones, soluciones y propilenglicol, el ingrediente activo se combina con agentes emulsionantes y de suspensión. Si se desea, se pueden añadir ciertos agentes edulcorantes y/o saborizantes y/o colorantes.
Las composiciones farmacéuticas de la presente invención se pueden administrar también en la forma de supositorios para administración rectal. Estas composiciones se pueden preparar mezclando un compuesto de la presente invención con un excipiente no irritante adecuado, que sea sólido a la temperatura ambiente pero líquido a la temperatura rectal y, en consecuencia, se funda en el recto para liberar los componentes activos. Dichos materiales incluyen, aunque sin limitarse a ellos, manteca de cacao, cera de abeja y polietilenglicoles.
La administración tópica de las composiciones farmacéuticas de la presente invención es especialmente útil cuando el tratamiento deseado implica áreas u órganos fácilmente accesibles por aplicación tópica. Para aplicación tópica a la piel, la composición farmacéutica debe formularse con un ungüento adecuado que contenga los componentes activos suspendidos o disueltos en un vehículo. Los vehículos para administración tópica de los compuestos de la presente invención incluyen, aunque sin limitarse a ellos, aceite mineral, vaselina líquida, vaselina blanca, propilenglicol, compuesto de polioxietileno polioxipropileno, cera emulsionante y agua. Alternativamente, la composición farmacéutica se puede formular con una loción o crema adecuada que contenga el compuesto activo suspendido o disuelto en un vehículo. Los vehículos adecuados incluyen, aunque sin limitarse a ellos, aceite mineral, sorbitan monoestearato, polisorbato 60, cera de ésteres cetílicos, alcohol cetearílico, 2-octildodecanol, alcohol bencílico y agua. Las composiciones farmacéuticas de la presente invención pueden también aplicarse tópicamente al tubo digestivo mediante una formulación en supositorios rectales o en una formulación en enema adecuada. Los parches transdérmicos que se administran tópicamente también se incluyen en la presente invención.
Las composiciones farmacéuticas de la presente invención se pueden administrar mediante aerosol nasal o por inhalación. Dichas composiciones se preparan de acuerdo con técnicas conocidas en el campo de formulación farmacéutica, y se pueden preparar como soluciones en solución salina, empleando alcohol bencílico u otros conservantes adecuados, promotores de absorción para potenciar la biodisponibilidad, fluorocarburos y/u otros agentes de solubilización o dispersión conocidos en la técnica.
Los niveles de dosificación comprendidos entre aproximadamente 0,01 y aproximadamente 100 mg/kg de peso corporal por día, preferiblemente entre 0,5 y aproximadamente 75 mg/kg de peso corporal por día y lo más preferiblemente entre aproximadamente 1 y 50 mg/kg de peso corporal por día del compuesto de ingrediente activo son útiles en una monoterapia para la prevención y el tratamiento de enfermedades mediadas por IL-1, apoptosis, IGIP e IFN-\gamma, incluyendo enfermedades inflamatorias, enfermedades autoinmunitarias, trastornos destructivos óseos, trastornos proliferativos, enfermedades infecciosas, enfermedades degenerativas, enfermedades necróticas, peritonitis inflamatoria, artrosis, pancreatitis aguda, pancreatitis crónica, asma, síndrome de dificultad respiratoria aguda, glomerulonefritis, artritis reumatoidea, lupus eritematoso sistémico, escleroderma, tiroiditis crónica, enfermedad de Graves, gastritis autoinmunitaria, diabetes mellitus insulinodependiente (Tipo I), anemia hemolítica autoinmunitaria, neutropenia autoinmunitaria, trombocitopenia, hepatitis activa crónica, miastenia grave, enfermedad inflamatoria de los intestinos, enfermedad de Crohn, psoriasis, dermatitis atópica, enfermedad injerto contra hospedante, osteoporosis, trastorno óseo asociado con mieloma múltiple, leucemias y trastornos relacionados, síndrome mielodisplásico, leucemia mielógena aguda, leucemia mielógena crónica, melanoma metastásico, sarcoma de Kaposi, mieloma múltiple, septicemia, choque septicémico, Shigelosis, enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson, isquemia cerebral, isquemia de miocardio, atrofia muscular espinal, esclerosis múltiple, encefalitis relacionada con el sida, encefalitis relacionada con el VIH, senilidad, alopecia, daño neurológico debido a accidente cerebrovascular, colitis ulcerosa, hepatitis infecciosa, diabetes juvenil, liquen plano, dermatomiositis aguda, eczema, cirrosis primaria, uveítis, enfermedad de Behcet, dermatitis atópica, aplasia eritrocítica pura, anemia aplásica, esclerosis amiotrófica lateral, síndrome nefrótico y enfermedades sistémicas o enfermedades con efectos localizados en el hígado u otros órganos que tienen un componente inflamatorio o apoptótico causado por la ingesta excesiva de alcohol en la dieta o por virus, como HBV, HCV, HGV, virus de la fiebre amarilla, virus de la fiebre del dengue y virus de encefalitis japonesa.
Típicamente, las composiciones farmacéuticas de la presente invención se administran entre aproximadamente 1 y 5 veces por día o, alternativamente, como una infusión continua. Dicha administración se puede usar como terapia crónica o aguda. La cantidad de ingrediente activo que se puede combinar con los materiales vehículo para producir una forma de dosificación individual variará dependiendo del hospedante tratado y del modo de administración particular. Una preparación típica contendrá entre aproximadamente 5% y aproximadamente 95% de compuesto activo (p/p). Preferiblemente, dichas preparaciones contienen entre aproximadamente 20% y aproximadamente 80% de compuesto activo.
Cuando las composiciones de la presente invención comprenden una combinación de un compuesto de fórmula I y uno o más agentes terapéuticos o profilácticos adicionales, tanto el compuesto como el agente adicional deberán estar presentes a niveles de dosificación entre aproximadamente 10% y 80% de la dosis normalmente administrada en un régimen de monoterapia.
Tras la mejoría en la afección del paciente, se puede administrar una dosis de mantenimiento de un compuesto, composición o combinación de la presente invención, en caso de ser necesaria. Posteriormente, la dosis o la frecuencia de administración, o ambas, pueden reducirse, en función de los síntomas, hasta un nivel en el que se retenga la mejoría de la afección. Cuando se hayan aliviado los síntomas hasta el nivel deseado, el tratamiento deberá cesar. Los pacientes podrán, no obstante, requerir el tratamiento intermitente a largo plazo frente a cualquier recurrencia o síntomas de la enfermedad.
El especialista en la técnica apreciará que pueden ser necesarias dosis inferiores o superiores a aquellas mencionadas anteriormente. Los regímenes de dosificación y tratamiento específicos para cualquier paciente en particular dependerán de una diversidad de factores, incluyendo la actividad del compuesto específico empleado, la edad, el peso corporal, el estado de salud general, el sexo, la dieta, el tiempo de administración, el índice de excreción, la combinación de fármacos, la gravedad y el curso de la enfermedad, y la disposición del paciente a la enfermedad y el criterio del médico que lo esté tratando.
Las enfermedades mediadas por IL-1 o apoptosis que se pueden tratar o prevenir con los compuestos de la presente invención incluyen, aunque sin limitarse a ellas, enfermedades inflamatorias, enfermedades autoinmunitarias, trastornos proliferativos, enfermedades infecciosas y enfermedades degenerativas. Las enfermedades mediadas por apoptosis que se pueden tratar o prevenir con los compuestos de la presente invención incluyen enfermedades degenerativas.
Las enfermedades inflamatorias mediadas por IL-1 o apoptosis que se pueden tratar o prevenir incluyen, aunque sin limitarse a ellas, artrosis, pancreatitis aguda, pancreatitis crónica, asma y síndrome de dificultad respiratoria aguda. Preferiblemente, la enfermedad inflamatoria es artrosis o pancreatitis aguda.
Las enfermedades autoinmunitarias mediadas por IL-1 o apoptosis que se pueden tratar o prevenir incluyen, aunque sin limitarse a ellas, glomerulonefritis, artritis reumatoidea, lupus eritematoso sistémico, escleroderma, tiroiditis crónica, enfermedad de Graves, gastritis autoinmunitaria, diabetes mellitus insulinodependiente (Tipo I), anemia hemolítica autoinmunitaria, neutropenia autoinmunitaria, trombocitopenia, hepatitis activa crónica, miastenia grave, esclerosis múltiple, enfermedad inflamatoria de los intestinos, enfermedad de Crohn, psoriasis, dermatitis atópica y enfermedad injerto contra hospedante. Preferiblemente, la enfermedad autoinmunitaria es artritis reumatoidea, enfermedad inflamatoria de los intestinos, enfermedad de Crohn, psoriasis o dermatitis atópica.
Los trastornos destructivos óseos mediados por IL-1 o apoptosis que se pueden tratar o prevenir incluyen, aunque sin limitarse a ellos, osteoporosis y trastorno óseo relacionado con mieloma múltiple.
Las enfermedades proliferativas mediadas por IL-1 o apoptosis que se pueden tratar o prevenir incluyen, aunque sin limitarse a ellas, leucemias y trastornos asociados, como síndrome mielodisplásico, leucemia mielógena aguda, leucemia mielógena crónica, melanoma metastásico, sarcoma de Kaposi y mieloma múltiple. Las enfermedades infecciosas mediadas por IL-1 o apoptosis que se pueden tratar o prevenir incluyen, aunque sin limitarse a ellas, septicemia, choque septicémico y Shigelosis.
Las enfermedades degenerativas o necróticas mediadas por IL-1 o apoptosis que se pueden tratar o prevenir con los compuestos de la presente invención incluyen, aunque sin limitarse a ellas, enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson, isquemia cerebral e isquemia de miocardio.
Preferiblemente, la enfermedad degenerativa es la enfermedad de Alzheimer.
Las enfermedades degenerativas mediadas por IL-1 o apoptosis que se pueden tratar o prevenir con los compuestos de la presente invención incluyen, aunque sin limitarse a ellas, enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson, isquemia cerebral, isquemia de miocardio, atrofia muscular espinal, esclerosis múltiple, encefalitis relacionada con el sida, encefalitis relacionada con el VIH, senilidad, alopecia y daño neurológico debido a un accidente cerebro-
vascular.
Otras enfermedades que tengan un componente inflamatorio o apoptótico podrán tratarse o prevenirse con los compuestos de la presente invención. Dichas enfermedades pueden ser enfermedades sistémicas o enfermedades con efectos localizados en el hígado u otros órganos, y pueden ser causadas, por ejemplo, por ingesta excesiva de alcohol en la dieta o virus, como HBV, HCV, HGV, virus de la fiebre amarilla, virus de la fiebre del dengue y virus de encefalitis japonesa.
Las enfermedades mediadas por IGIF o IFN-\gamma que se pueden tratar o prevenir con los compuestos de la presente invención incluyen, aunque sin limitarse a ellas, afecciones inflamatorias, infecciosas, autoinmunitarias, proliferativas, neurodegenerativas y necróticas.
Las enfermedades inflamatorias mediadas por IGIF o IFN-\gamma que se pueden tratar o prevenir incluyen, aunque sin limitarse a ellas, artrosis, pancreatitis aguda, pancreatitis crónica, asma, artritis reumatoidea, enfermedad inflamatoria de los intestinos, enfermedad de Crohn, colitis ulcerosa, isquemia cerebral, isquemia de miocardio y síndrome de dificultad respiratoria aguda. Preferiblemente, la enfermedad inflamatoria es artritis reumatoidea, colitis ulcerosa, enfermedad de Crohn, hepatitis o síndrome de dificultad respiratoria aguda.
Las enfermedades infecciosas mediadas por IGIF o IFN-\gamma que se pueden tratar o prevenir incluyen, aunque sin limitarse a ellas, hepatitis infecciosa, septicemia, choque septicémico y Shigelosis.
Las enfermedades autoinmunitarias mediadas por IGIF o IFN-\gamma que se pueden tratar o prevenir incluyen, aunque sin limitarse a ellas, glomerulonefritis, lupus eritematoso sistémico, escleroderma, tiroiditis crónica, enfermedad de Graves, gastritis autoinmunitaria, diabetes mellitus insulinodependiente (Tipo I), diabetes juvenil, anemia hemolítica autoinmunitaria, neutropenia autoinmunitaria, trombocitopenia, miastenia grave, esclerosis múltiple, psoriasis, liquen plano, enfermedad injerto contra hospedante, dermatomiositis aguda, eczema, cirrosis primaria, hepatitis, uveítis, enfermedad de Behcet, dermatitis atópica, aplasia eritrocítica pura, anemia aplásica, esclerosis amiotrófica lateral y síndrome nefrótico. Preferiblemente, la enfermedad autoinmunitaria es glomerulonefritis, diabetes mellitus insulinodependiente (Tipo I), diabetes juvenil, psoriasis, enfermedad injerto contra hospedante o hepatitis.
Las enfermedades más preferidas que se pueden tratar o prevenir incluyen artritis reumatoidea, enfermedad inflamatoria de los intestinos, incluyendo enfermedad de Crohn y colitis ulcerosa, peritonitis inflamatoria, choque septicémico, pancreatitis, lesión cerebral traumática, rechazo a trasplante de órganos, artrosis, asma, psoriasis, enfermedad de Alzheimer, dermatitis atópica o leucemias y trastornos relacionados, como síndrome mielodisplásico o mieloma múltiple.
Por consiguiente, una realización de la presente invención provee el uso de cualquier compuesto, composición farmacéutica o combinación descrita en la presente memoria y un vehículo farmacéuticamente aceptable en la elaboración de un medicamento para tratar o prevenir una enfermedad mediada por IL-1 o apoptosis en un paciente.
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Otra realización de la presente invención provee el uso de cualquier compuesto, composición farmacéutica o combinación descrita en esta memoria y un vehículo farmacéuticamente aceptable en la elaboración de un medicamento para disminuir la producción de IGIF en un paciente.
Incluso otra realización de la presente invención provee el uso de cualquier compuesto, composición farmacéutica o combinación descrita en esta memoria y un vehículo farmacéuticamente aceptable en la elaboración de un medicamento para disminuir la producción de IFN-\gamma en un paciente.
Si bien la invención se centra en el uso de los compuestos descritos en esta memoria para prevenir y tratar enfermedades mediadas por IL-1, apoptosis, IGIF e IFN-\gamma, los compuestos de la presente invención pueden también emplearse como agentes inhibidores para otras cisteína proteasas.
Los compuestos de la presente invención son también útiles como reactivos comerciales que se unen eficazmente a caspasas u otras cisteína proteasas que incluyen, aunque sin limitación, ICE. Como reactivos comerciales, los compuestos de la presente invención, y sus derivados, se pueden usar para bloquear la proteólisis de un péptido diana en ensayos bioquímicos o celulares para ICE y homólogos de ICE, o se pueden derivatizar para unirse a una resina estable como un sustrato anclado para aplicaciones de cromatografía de afinidad. Éstos y otros usos que caracterizan a los inhibidores de cisteína proteasa comerciales serán obvios para aquellos con experiencia ordinaria en la
técnica.
Con el fin de comprender más ampliamente la presente invención, se exponen los siguientes ejemplos. Estos ejemplos tienen fines ilustrativos solamente y no deberán interpretarse como limitativos al alcance de la invención en modo alguno.
Métodos generales Condiciones de HPLC analítica
Columna: C-18, tamaño de partícula: 5 \mu, tamaño de poro: 100 \ring{A}, tamaño de columna: 4,6 x 150 mm
Disolvente A: 0,1% TFA / 1% MeCN / 98,9% agua
Disolvente B: 0,1% TFA / 99,9% MeCN
Gradiente: A a B durante 20 min. a un caudal de 1 ml/min.
Columna: Cyano, tamaño de partícula: 5 \mu, tamaño de poro: 100 \ring{A}, tamaño de partícula: 4,6 x 150 mm
Disolvente A: 0,1% TFA / 1% MeCN / 98,9% agua
Disolvente B: 0,1% TFA / 99,9% MeCN
Gradiente: A / B = 99% / 1% a 50% / 50% durante 20 min. a un caudal de 1 ml/min.
Análisis espectral de masas HPLC
Análisis espectral de masas: Todos los datos espectrales de masas se recogieron usando un espectrómetro de masas de cuadripolo triple Micromass Quattro II (Beverly, MA) equipado con una fuente de ionización por electropulverización con flujo cruzado. El espectrómetro de masas se acopló a un sistema HPLC fabricado por Hewlett-Packard (HP1100). El automuestreador para el sistema fue un manipulador de líquidos Gilson 215 (Middleton, WI). Todo el equipo se controló con el paquete de software MassLynx adquirido de Micromass.
El análisis espectral de masas se realizó por cromatografía líquida-MS para determinar la pureza y confirmar el peso molecular simultáneamente. En casos en los que la pureza de la muestra se había determinado por otros medios, se usó un análisis de inyección de flujo (FIA) en lugar del análisis de cromatografía total. En todos los casos, se recogieron ambos espectros iónicos positivos y negativos.
Condiciones de adquisición de espectro de masas: Para todos los experimentos, el espectrómetro de masas se configuró en modo de electropulverización con el electrodo del contador de flujo cruzado. Se usó un separador de flujo para reducir el flujo del HPLC hasta 40% del flujo original. La temperatura de entrada se fijó en 140ºC y el flujo de gas de secado se fijó para maximizar la señal. La resolución del espectrómetro de masas se ajustó hasta 0,65 amu FWHM y se recogieron los datos en modo centroide. En el modo ión positivo, el voltaje del cono se fijó a 25V, el voltaje capilar fue 3,8 kV. En el modo ión negativo, el voltaje del cono se fijó a 25 V y el voltaje capilar se fijó a 3,5 kV. En ambos modos de iones positivos y negativos, el tiempo para adquirir un espectro total fue 1s con un tiempo de conmutación de 0,25 segundos entre barridos. El intervalo de masas barrido para moléculas con un peso molecular esperado de menos de 350 amu fue 70-500 m/z, mientras que para moléculas con una masa esperada de más de 350 amu, la relación masa a carga barrida fue 200-1000 m/z.
Condiciones de cromatografía: la cromatografía líquida se realizó usando una columna YMC AQ C18 (150 mm X 3 mm con un tamaño de partícula de 5 \mum y un tamaño de poro de 120 \ring{A}). Para todos los análisis, se combinó MeCN con ácido fórmico al 0,2% con agua con ácido fórmico al 0,2% para formar el gradiente de elución. El perfil del gradiente consistió en comenzar con 15% MeCN: agua y aumentar la cantidad de MeCN linealmente durante diez minutos hasta 90%. Esa concentración se mantuvo constante durante 2 minutos antes de volver a las condiciones iniciales. Durante todo el análisis, el caudal fue 0,9 ml/min.
Condiciones de inyección de flujo: se usó una mezcla 1:1 de agua a MeCN (ambos con adición de ácido fórmico al 0,2%) para adquirir los datos FIA. El caudal se fijo hasta 0,3 ml/min.
^{1}H NMR
Todos los espectros ^{1}H NMR se adquirieron usando un espectrómetro de NMR Bruker Instruments AMX-500 en el disolvente determinado.
Métodos sintéticos Procedimiento General para la Preparación de los Compuestos de Fórmula I, Realización C (Esquemas I-VI)
Procedimiento para la preparación de análogos de 5a-5bd.
Esquema I
23
En los Esquemas I-VIII, LR se refiere a enlazador-resina y se define como se mostró anteriormente en el Esquema I.
Etapa 1: Una porción de 6,7 g (carga de 0,8 mmol/gramo, 5,36 mmol) de resina de sal hidrocloruro de benzhidrilamina de 4-metilo (Esquema I) se lavó con DMF (3 x 50 ml), 10% DIEA/DMF (3 x 50 ml) y N-metilpirrolidinona (NMP) (3 x 50 ml). A una suspensión de la resina lavada en 25 ml de NMP se le añadieron sucesivamente el compuesto 1 (1,1 eq, 3,5 g, 5,90 mmol) DIEA (3,33 eq, 3,1 ml, 17,70 mmol), hidrato de 1-hidroxibenzotriazol (HOBt) (1,1 eq, 797 mg, 5,90 mmol) y hexafluorofosfato de O-benzotriazol-N,N,N,N'-tetrametiluronio (HBTU) (1,1 eq, 2,24 g, 5,90 mmol). El compuesto 1 se preparó de acuerdo con el procedimiento de la bibliografía de A. M. Murphy et al, J. Am. Chem. Soc., 114, pp. 3156-3157 (1992). La mezcla se rotó a temperatura ambiente durante una noche, usando un agitador manual.
La mezcla resultante se filtró, y la resina se enjuagó con DMF, luego se trató con 12 ml de una solución al 20% de anhídrido acético en DMF durante 30 minutos a temperatura ambiente. La mezcla se filtró, y la resina se lavó sucesivamente con DMF (2 x 50 mL), CH_{3}OH (50 mL), 1:1 DMF/CH_{2}Cl_{2} (2 X 50 mL), CH_{3}OH (50 mL) y CH_{2}Cl_{2} (3 x 50 mL). Después de secar a vacío, se obtuvieron 9,0 gramos de resina 2 (carga de 0,48 mmol/gramo).
Etapa 2: A una resina de 4,5 g 2 (0,48 mmol/gramo, 2,16 mmol) se le añadieron 25 ml de una solución al 20% de piperidina en DMF. La suspensión se rotó a temperatura ambiente durante 5 minutos y se drenó. El procedimiento se repitió durante 20 minutos. La resina luego se lavó sucesivamente con DMF (2 x 40 ml), CH_{3}OH (40 ml), CH_{2}Cl_{2} (2 x 40 ml), CH_{3}OH (40 ml) y NMP (40 ml). A una suspensión de resina en 40 ml de NMP se le añadieron sucesivamente 2,92 g de N-Fmoc-prolina (4 eq, 8,64 mmol), 3,0 ml de DIEA (8 eq, 17,28 mmol), 1,17 g de HOBt (4 eq, 8,64 mmol) y 3,27 g de HBTU (4 eq, 8,64 mmol). La mezcla se rotó a temperatura ambiente durante una noche y se drenó. Este procedimiento de acoplamiento se repitió durante 3 horas. La resina se lavó luego sucesivamente con DMF (2 x 40 ml), CH_{3}OH (40 ml), 1:1 DMF/CH_{2}Cl_{2} (2 x 40 ml), CH_{3}OH (40 ml) y CH_{2}Cl_{2} (3 x 40 ml), y se secó brevemente a vacío para proporcionar la resina 3.
Etapa 3: Una suspensión de la resina 3 en 25 ml de una solución al 20% de piperidina en DMF se rotó a temperatura ambiente durante 5 minutos. La suspensión se drenó. El procedimiento se repitió durante 20 minutos. La resina se lavó sucesivamente con DMF (2 x 40 ml), CH_{3}OH (40 ml), CH_{2}Cl_{2} (2 x 40 ml), CH_{3}OH (40 ml) y NMP (2 X 40 ml). A una suspensión de resina en 40 ml de NMP se le añadieron sucesivamente 2,93 g de N-Fmoc-valina (4 eq, 8,64 mmol), 3,0 ml de DIEA (8 eq, 17,28 mmol), 1,17 g de HOBt (4 eq, 8,64 mmol) y 3,27 g de HBTU (4 eq, 8,64 mmol). La mezcla se rotó a temperatura ambiente durante una noche y se drenó. Este procedimiento de acoplamiento se repitió durante 3 horas. La resina se lavó luego sucesivamente con DMF (2 x 40 ml), CH_{3}OH (40 ml), 1:1 DMF/CH_{2}Cl_{2} (2 x 40 ml), CH_{3}OH (40 ml) y CH_{2}Cl_{2} (3 x 40 ml), y se secó a vacío para proporcionar la resina 4 (0,45 mmol/gramo).
Etapa 4: A una porción de 0,05 mmol de la resina 4 se le añadieron 2 ml de una solución al 20% de piperidina en DMF. La suspensión se rotó a temperatura ambiente durante 5 minutos y se drenó. El procedimiento se repitió durante 20 minutos. La resina resultante se lavó sucesivamente con DMF (3 x 5 ml)/CH_{3}OH (5 ml) y NMP (3 x 5 ml). Se añadió luego el ácido carboxílico deseado (4 eq, 0,2 mmol), seguido de 0,8 ml de una solución 0,25M de HOBt en NMP, 0,14 ml de DIEA (8 eq, 0,4 mmol) y 0,8 ml de una solución 0,25M de HBTU en NMP. La mezcla se rotó a temperatura ambiente durante una noche y se drenó. La resina se lavó sucesivamente con DMF (2 x 5 ml), CH_{3}OH (5 ml), 1:1 DMF/CH_{2}Cl_{2} (2 x 5 ml), CH_{3}OH (5 ml) y CH_{2}Cl_{2} (3 x 5 ml), y se secó a vacío. Se añadió luego una porción de 2 ml de una solución al 95% de TFA en agua a la resina. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante una hora y se filtró. El filtrado se evaporó, y el residuo se absorbió en acetonitrilo-agua y se purificó por HPLC preparativa para proporcionar los compuestos 5a-5bd.
El rendimiento de producto, las condiciones de HPLC analítica, tiempo de retención de HPLC, pureza del producto y datos espectrales de masas obtenidos para los ejemplos 5a-5bd, 7a-7at, 20a-20t, 23g-23h, 24a-24e se exponen en la Tabla 1, a menos que se indique otra cosa.
TABLA 1 Datos físicos para los ejemplos seleccionados
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Procedimiento para la preparación de los análogos 7a-7at
Esquema XX
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Los análogos de 7a-7at se prepararon como se describió anteriormente en el Esquema I, solamente que sustituyendo Fmoc-valina por Fmoc-alanina en la Etapa 3 (Esquema II).
Etapa 3: Una suspensión de la resina 3 (3,5 g, 1,75 mmol) en 20 ml de una solución al 20% de piperidina en DMF se rotó a temperatura ambiente durante 5 minutos. La suspensión se drenó. El procedimiento se repitió durante 20 minutos. La resina se lavó sucesivamente con DMF (2 X 30 ml), CH_{3}OH (30 ml), CH_{2}Cl_{2} (2 x 30 ml), CH_{3}OH (30 ml) y NMP (2 x 30 ml). A una suspensión de resina en 30 ml de NMP se le añadieron sucesivamente 1,44 g de N-Fmoc-alanina (4 eq, 7,0 mmol), 2,4 ml de DIEA (8 eq, 14,0 mmol), 0,95 g de HOBt (4 eq, 7,0 mmol) y 2,66 g de HBTU (4 eq, 7,0 mmol). La mezcla se rotó a temperatura ambiente durante una noche y se drenó. Este procedimiento de acoplamiento se repitió durante 3 horas. La resina se lavó luego sucesivamente con DMF (2 x 30 ml), CH_{3}OH (30 ml), 1:1 DMF/CH_{2}Cl_{2} (2 X 30 ml), CH_{3}OH (30 ml) y CH_{2}Cl_{2} (3 x 30 ml), y se secó a vacío para proporcionar la resina 6 (0,50 mmol/gramo).
Etapa 4: A una porción de 0,125 mmol de la resina 6 se le añadieron 5 ml de una solución al 20% de piperidina en DMF. La suspensión se rotó a temperatura ambiente durante 5 minutos y se drenó. El procedimiento se repitió durante 20 minutos. La resina resultante se lavó sucesivamente con DMF (3 x 5 ml), CH_{3}OH (5 ml) y NMP (3 x 5 ml). Se añadió luego el ácido carboxílico deseado (4 eq, 0,6 mmol), seguido de 2,0 ml de una solución 0,25M de HOBt en NMP, 0,35 ml de DIEA (8 eq, 1,0 mmol) y 2,0 ml de una solución 0,25M de HBTU en NMP. La mezcla se rotó a temperatura ambiente durante una noche y se drenó. La resina se lavó sucesivamente con DMF (3 x 5 ml), CH_{3}OH (5 ml), 1:1 DMF/CH_{2}Cl_{2} (2 X 5 ml), CH_{3}OH (5 ml) y CH_{2}Cl_{2} (3 x 5 ml), y se drenó a vacío. Se añadió luego una porción de 5 ml de una solución al 95% de TFA en agua a la resina. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante una hora y se filtró. El filtrado se evaporó, y el residuo se disolvió en acetonitrilo-agua y se purificó por HPLC preparativa para proporcionar los compuestos 7a-7at.
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Procedimiento para la preparación de los análogos 20. Los compuestos 20a-20t se prepararon de acuerdo con el procedimiento descrito para los compuestos 5 (Esquema I), solamente sustituyendo Fmoc-Valina por el Fmoc-aminoácido apropiado en la Etapa 3 (Esquema V).
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Esquema V
38
Preparación de ácido 3-({1-12-(4-amino-3-cloro-benzoilamino)-3-metilsulfonil-propionil]-pirrolidina-2-carbonil}-amino)-4-oxo-butírico (20i)
Una suspensión de 0,132 mmol de la resina 3 en 4 ml de piperidina al 20% en DMF se rotó a temperatura ambiente durante 5 minutos, y la mezcla se drenó. El procedimiento se repitió durante 20 minutos. La resina se lavó sucesivamente con DMF (dos veces), CH_{3}OH (una vez), CH_{2}Cl_{2} (dos veces), CH_{3}OH (una vez) y NMP (dos veces). A una suspensión de la resina en 4 ml de NMP se le añadieron sucesivamente 189 mg de N-Fmoc-metil cisteína (4 eq, 0,528 mmol), 0,185 ml de DIEA (8 eq, 1,056 mmol), 71 mg de HOBt (4 eq, 0,528 mmol) y 200 mg de HBTU (4 eq, 0,528 mmol). La mezcla se rotó a temperatura ambiente durante una noche y se drenó. Este procedimiento de acoplamiento se repitió durante 3 horas. La resina se lavó luego sucesivamente con DMF (dos veces), CH_{3}OH (una vez) y 1:1 DMF/CH_{2}Cl_{2} (dos veces), CH_{3}OH (una vez) y CH_{2}Cl_{2} (tres veces), y se drenó a vacío.
Una suspensión de 100 mg de esta resina en 2 ml de piperidina al 20% en DMF se rotó a temperatura ambiente durante 5 minutos y se drenó. El procedimiento se repitió durante 20 minutos. La resina se lavó sucesivamente con DMF (dos veces), CH_{3}OH (una vez), CH_{2}Cl_{2} (dos veces), CH_{3}OH (una vez) y NMP (dos veces). A una suspensión de resina en 2 ml de NMP se le añadieron sucesivamente 38 mg de ácido 4-amino-3-clorobenzoico (4 eq, 0,2 mmol), 0,140 ml de DIEA (8 eq, 0,4 mmol), 27 mg de HOBt (4 eq, 0,2 mmol) y 76 mg de HBTU (4 eq, 0,4 mmol). La mezcla se rotó a temperatura ambiente durante una noche y se drenó. La resina se lavó luego sucesivamente con DMF (dos veces), CH_{3}OH (una vez) y 1:1 DMF/CH_{2}Cl_{2} (dos veces), CH_{3}OH (una vez) y CH_{2}Cl_{2} (tres veces) y se secó a vacío. La resina se trató luego con 2 ml de TFA al 95% en agua durante 1 h. La suspensión se filtró, el filtrado se concentró a vacío y se purificó por HPLC preparativa para proporcionar el compuesto del título (20i).
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Preparación de ácido 3-({1-[2-(3,5-dicloro-4-hidroxi-benzoilamino)-4-metanosulfonil-butiril]-pirrolidina-2-carbo- nil}-amino)-4-oxo-butírico (20p)
El compuesto 20p se preparó de acuerdo con el procedimiento utilizado para la preparación de 20i, usando N-Fmoc-metionina como el primer componente acoplado a la resina 3, y ácido 3,5-dicloro-4-hidroxibenzoico como el segundo componente.
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Preparación de ácido 3-[(l-{2-[(isoquinolina-1-carbonil)-amino]-3-metanosulfonil-propionil}-pirrolidina-2-carbonil)-amino]-4-oxo-butírico (20r)
Se oxidó N-Fmoc metil cisteína a la correspondiente sulfona, usando el método de B. M. Trost y D. P. Curran, Tetrahedron Lett. 22, pp. 1287-190 (1981). A una solución de 0,714 g (2 mmol) de N-Fmoc metil cisteína en 24 ml de una solución 1:1 de CH_{3}OH-agua agitada a 0ºC se le añadieron 3,68 g (3 eq, 6 mmol) de Oxone^{TM}. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 48 h, se diluyó con agua, se acidificó hasta pH 2 usando HCl 6N y se extrajo con tres porciones de 100 ml de acetato de etilo. Los extractos orgánicos combinados se secaron (MgSO_{4}) y concentraron a vacío para proporcionar 0,700 g (89% de rendimiento) de sulfona: ^{1}H NMR (DMSO-d_{6}, 500 MHz) 6 2,97 (S, 3H), 3,49-3,59 (m, 2H), 4,25 (m, 1H), 4,30-4,38 (m, 2H), 4,46 (m, 1H), 7,33 (t, 2H), 7,42 (t, 2H), 7,70-8,00 (m, 4H); masa exacta calculada para C_{19}H_{19}NO_{6}S m/e 389,09, encontrado m/e 390,2.
Una suspensión de 0,250 mmol de la resina 3 en 10 ml de piperidina al 20% en DMF se rotó a temperatura ambiente durante 5 minutos, y la mezcla se drenó. El procedimiento se repitió durante 20 minutos. La resina se lavó sucesivamente con DMF (dos veces), CH_{3}OH (una vez), CH_{2}Cl_{2} (dos veces), CH_{3}OH (una vez) y NMP (dos veces). A una suspensión de la resina en 6 ml de NMP se le añadieron sucesivamente 200 mg de N-Fmoc-metil cisteína sulfona (4 eq, 0,50 mmol), 0,175 ml de DIEA (8 eq, 1,00 mmol), 70 mg de HOBt (4 eq, 0,50 mmol) y 188 mg de HBTU (4 eq, 0,50 mmol). La mezcla se rotó a temperatura ambiente durante una noche y se drenó. Este procedimiento de acoplamiento se repitió durante 3 horas. La resina se lavó sucesivamente con DMP (dos veces), CH_{3}OH (una vez), 1:1 DMF/CH_{2}Cl_{2} (dos veces), CH_{3}OH (una vez) y CH_{2}Cl_{2} (tres veces), y se secó a vacío.
Una suspensión de 150 mg de esta resina en 4 ml de piperidina al 20% en DMF se rotó a temperatura ambiente durante 5 minutos, y se drenó. El procedimiento se repitió durante 20 minutos. La resina se lavó sucesivamente con DMF (dos veces), CH_{3}OH (una vez), CH_{2}Cl_{2} (dos veces), CH_{3}OH (una vez) y NMP (dos veces). A una suspensión de resina en 3 ml de NMP se le añadieron sucesivamente 52 mg de ácido 1-isoquinolinacarboxílico (4 eq, 0,3 mmol), 0,104 ml de DIEA (8 eq, 0,6 mmol), 37 mg de HOBt (4 eq, 0,3 mmol) y 104 mg de HBTU (4 eq, 0,3 mmol). La mezcla se rotó a temperatura ambiente durante una noche y se drenó. La resina se lavó sucesivamente con DMF (dos veces), CH_{3}OH (una vez) y 1:1 DMF/CH_{2}Cl_{2} (dos veces), CH_{3}OH (una vez) y CH_{2}Cl_{2} (tres veces), y se secó a vacío. La resina se trató entonces con 2 ml de TFA al 95% en agua durante 1 hora. La suspensión se filtró, el filtrado se concentró a vacío y se purificó por HPLC preparativa para proporcionar el compuesto del título (20r).
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Preparación de ácido 3-({1-[2-(3,5-dicloro-4-hidroxi-benzoilamino)-3-metanosulfonil-propionil]-pirrolidina-2-car- bonil}-amino)-4-oxo-butírico (20s)
El compuesto 20s se preparó de acuerdo al procedimiento utilizado para la preparación de 20i, usando ácido 3,5-dicloro-4-hidroxibenzoico en lugar de ácido 1-isoquinolinacarboxílico.
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40 
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Procedimiento para la preparación de los análogos 23 Los compuestos 23g-23h se prepararon de acuerdo con el procedimiento descrito para los compuestos 7 (Esquema II) solamente que sustituyendo Fmoc-prolina por el Fmoc-aminoácido apropiado en la etapa 2 (Esquema VI).
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(Esquema pasa a página siguiente)
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Esquema VI
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Preparación de ácido 3-({2-[2-(4-Amino-3-cloro-benzoilamino)-propionil]-4-metil-3,4-dihidro-2H-pirazol-3-carbo- nil}-amino)-4-oxo-butírico (23g)
El compuesto 23g se preparó de acuerdo con el procedimiento descrito para los compuestos 7 solamente que sustituyendo Fmoc-prolina por éster 1-)9H-fluoren-9-ilmetílico) del ácido 4-metil-4,5-dihidro-pirazol-1,5-dicarboxílico (Esquema II) en la Etapa 2.
Preparación de éster 1-(9H-fluoren-9-ilmetílico) del ácido 4-metil-4,5-dihidro-pirazol-1,5-dicarboxílico
A una solución de 650 mg (2 mmol) de (10,10-dimetil-3,3-dioxo-\lambda^{6}-tia-4-aza-triciclo [5.2.1.0^{0,0}]dec-4-il)-(4-metil-3,4-dihidro-2H-pirazol-3-il)-metanona (J. Am. Chem. Soc, 119, pp. 8379-8380 (1997)) en 6 ml de agua y 14 ml de THF, agitada a 0ºC, se le añadieron 420 mg (10 mmol, 5 eq) de hidróxido de litio. La mezcla se agitó a 0ºC durante 2 horas y a temperatura ambiente durante 30 minutos, se diluyó con 20 ml de agua y se lavó con éter (20 ml). El pH de la solución se ajustó entonces hasta 9, y se añadió una solución de 519 mg (2 mmol, 1 eq) de Fmoc-Cl en 3 ml de dioxano. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante una noche, se lavó con éter, se acidificó hasta pH 2-3 y se extrajo con 3 porciones de 40-ml de acetato de etilo. Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron (MgSO_{4}) y se concentraron a vacío para dar 690 mg (98% de rendimiento) de una espuma incolora que se identificó como el compuesto del título. ^{1}H NMR (DMSO-d_{6}, 500 MHz) \delta 1,2 (d, 3H), 3,2 (m, 1H), 4,2-4,6 (m, 3H), 7,1 (s, 1H), 7,2-7,5 (m, 5H), 7,7-8,0 (m, 4H). Masa exacta calculada para C_{20}H_{18}N_{2}O_{4} m/e 350,13, encontrado m/e 351,3.
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Procedimiento para la preparación de los análogos 24a-e
Los compuestos 24a-24e se prepararon de acuerdo con el procedimiento descrito para los compuestos 5 (Esquema I) solamente que sustituyendo Fmoc-prolina por ácido Fmoc-azetidina carboxílico o ácido trans-2-fenil-Fmoc-azetidina carboxílico en la Etapa 2.
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Procedimientos generales para la preparación de los compuestos de la realización C fórmula I y la realización D fórmula I en donde Y = C (Esquemas IX-XXII) 
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Esquema IX
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Fuentes para los sistemas de anillos seleccionados
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Esquema X
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Éster etílico del ácido 5-terc-butil-3-[2-(9H-fluoren-9-ilmetoxicarbonilamino)-3-metil butiril]-2,3-dihidro-[1,3,4]tiadiazol-2-carboxílico (37)
Una suspensión agitada de polivinilpiridina (2,63 g, 25 mmol) en una solución de éster etílico del ácido 5-terc-butil-2,3-dihidro-[1,3,4]tiadiazol-2-carboxílico (36), (J. Med. Chem., 34, p. 439 (1991)), (2,16 g, 10 mmol), en tolueno seco, se trató con la adición gota a gota de éster 9H-fluoren-9-ilmetílico del ácido (1-clorocarbonil-2-metil-propil)-carbámico (4,76 g, 12,1 mmol) en 20 ml de tolueno anhidro. Después de agitar durante 16 horas, la suspensión se filtró y el filtrado se lavó con solución saturada de bicarbonato sódico. La capa orgánica se separó, se lavó con agua, se secó sobre sulfato de sodio anhidro y se evaporó para dar un aceite amarillo. La purificación por cromatografía ultrarrápida, eluyendo con 9/1 hexano/acetato de etilo proporcionó 2,66 g (49% de rendimiento) del compuesto del título (37) como un aceite claro, viscoso. ^{1}H NMR (500 MHz, CD_{3}OD) \delta 0,89(d, 1,5H), 0,93 (d, 1,5H), 1,00 (d, 1,5H), 1,06 (d, 1,5H), 1,22 (t, 3H), 1,28 (s, 9H), 2,12-2,22 (m, 0,5H), 2,32-2,42 (m, 0,5H), 4,18-4,28 (m, 2H), 4,31-4,45 (m, 2H), 4,96-5,01 (m, 0,5H), 5,02-5,10 (m, 0,5H), 5,52 (d, 0,5H), 5,61 (d, 0,5H), 6,10 (s, 0,5H), 6,13 (s, 0,5H), 7,27-7,34 (m, 2H), 7,35-7,42 (m, 2H), 7,56-7,64 (m, 2H), 7,73-7,78 (m, 2H).
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Éster etílico del ácido 3-(2-acetilamino-3-metilbutiril)-5-terc-butil-2,3-dihidro-[1,2,4]tiadiazol-2-carboxílico (38)
A una solución de (37) (Esquema IX) (0,508 g, 0,94 mmol) en CH_{3}CN (10 ml) se le añadió dietilamina (1 ml). La solución se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas, el disolvente se eliminó a vacío y el aceite resultante se azeotropó con CH_{2}Cl_{2} (4x). El aceite bruto se disolvió en CH_{2}Cl_{2} (5 ml) y trietilamina (0,26 mL, 1,86 mmol) y se añadió cloruro de acetilo (80 \mul, 1,1 mmol). La solución se agitó a temperatura ambiente en una atmósfera de N_{2} durante 2 horas. El disolvente se evaporó y el material bruto se disolvió en EtOAc y se lavó con NaHSO_{4} 0,5 N (2x), NaHCO_{3} saturado (2x) y salmuera, y se secó sobre Na_{2}SO_{4} anhidro, se filtró y evaporó para dar un aceite amarillo. La purificación por cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice, usando hexanos/EtOAc (95/5 a 90/10%) proporcionó el producto como un aceite amarillo (0,301 g, 89% de rendimiento). ^{1}H-NMR (500 MHz, CDCl_{3}) \delta 0,88 (dd, 3H), 0,99 (dd, 3H), 1,16-1,45 (m, 12H), 2,02 (s, 3H), 2,09-2,19 (m, 0,5H), 2,30-2,40 (m, 0,5H), 4,12-4,29 (m, 2H), 5,20-5,27 (m, 0,5H), 5,30-5,36 (m, 0,5H), 6,60 (s, 0,5H), 6,90 (s, 0,5H), 6,20-6,31 (m, 1H). La HPLC analítica (columna C18), (mezcla de diastereómeros) 7,77, 7,98 min. LC-MS (ES^{+}) m/e = 358,3 (M+H).
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Ácido 3-(2-acetilamino-3-metilbutiril)-5-terc-butil-2,3-dihidro-[1,2,4]tiadiazol-2-carboxílico (39)
A una solución de 38 (0,301 g, 0,84 mmol) en MeOH (10 mL) se le añadió solución de NaOH 1N (1,7 mL, 1,7 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas y el disolvente se evaporó. El residuo se disolvió en EtOAc y se lavó con NaHSO_{4} 0,5 N (2x) y salmuera, y se secó sobre Na_{2}SO_{4} anhidro, se filtró y se evaporó para dar el compuesto del título en forma de un sólido amarillo (0,277 g, cuantitativo).
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Preparación de éster alílico del ácido 2-(benciloxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il)-carbámico (40)
El compuesto 40 se preparó a partir del éster terc-butílico del ácido 3-aliloxicarbonilamino-4-hidroxi-butírico por una modificación del procedimiento descrito en Bioorg. Med. Chem. Lett. Vol, 2, No. 6, pp. 613-618, (1992).
A una solución de DMSO (27,52 g, 352 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (240 ml) a -78ºC se le añadió cloruro de oxalilo (24,4 g, 192 mmol). Después de 15 min, se añadió lentamente una solución de éster terc-butílico del ácido 3-aliloxicarbonilamino-4-hidroxi-butírico (41,44 g, 160 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (100 ml) y la mezcla se agitó a -78ºC durante 1,5 h. más. Se añadió DIEA (62,0 g, 480 mmol) y la mezcla se dejó calentar hasta temperatura ambiente durante 15 min. La solución resultante se diluyó con CH_{2}Cl_{2} (300 ml), se lavó con NaHSO_{4} 0,5 N (500 ml x 2), agua (300 ml x 2) y salmuera (400 ml x 2). La capa orgánica se secó sobre Na_{2}SO_{4} anhidro, se filtró y se concentró a vacío hasta un volumen de 200 ml. A esta solución se le añadió alcohol bencílico (48 g, 444 mmol), seguido de tamices moleculares 3A (30 g) y ácido p-toluenosulfónico (0,8 g). La mezcla de reacción se dejó agitar durante 4 días y se añadió TFA (96 ml). La suspensión resultante se agitó durante una hora, luego se evaporó a vacío. Se añadió acetato de etilo (500 ml) y la mezcla se filtró a través de Celite. El filtrado se lavó con NaHCO_{3} saturado (500 ml x 2), agua (400 ml x 2) y salmuera (300 ml x 2). La solución orgánica se secó sobre Na_{2}SO_{4} anhidro, se filtró y se evaporó a vacío para dar 90 g de un aceite amarillo pálido, que se agitó con hexano (400 ml x 2) para dar 31 g de producto bruto del residuo de la capa inferior. La cromatografía, usando acetato de etilo/hexano (4/96 a 22/78) proporcionó 6,97 g de éster alílico del ácido anti-2-(benciloxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il)-carbámico (Rf superior), 4-53 g de diastereómero syn y 12,97 g de la mezcla de los diastereómeros (rendimiento total de 53%). ^{1}H-NMR (500 MHz, CDCl_{3}) para el anti diastereómero: \delta 2,41-2,45 (m, H), 3,02-3,07 (m, H), 4,28 (br, H), 4,50-4,80 (m, 3H), 4,80-5,15 (m, 2H), 5,24-5,32 (m, 2H), 5,48 (s, H), 5,88-6,00 (m, H), 7,31-7,56 (m, 5H); para el diastereómero syn: \delta 2,49-2,53 (m, H), 2,83-2,89 (m, H), 4,57-4,65 (m, 4H), 4,87-4,90 (m, H), 5,12-5,30 (m, 3H), 5,52-5,53 (d, H), 5,88-6,00 (m, H), 7,31-7,39 (m, 5H); tiempo de retención en HPLC analítica: 10,49 min para el anti diastereómero y 10,37 min. para el diastereómero syn; LC-MS: m/z = 292 (M+H^{+}).
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(2-benciloxi-5-oxo-tetrahidrofuran-3-il)-amida del ácido 3-(2-acetilamino-3-metilbutiril)-5-terc-butil-2,3-dihidro- [1,2,4]tiadiazol-2-carboxílico (41)
A una solución de éster alílico del ácido (2-benciloxi-5-oxo-tetrahidrofuran-3-il)-carbámico (40) (0,385 g, 1,32 mmol) en DMF (2 ml) y CH_{2}Cl_{2} (2 ml) se le añadieron DMBA (0,456 g, 2,92 mmol) y Pd(PPh_{3})_{4} (0,136 g, 0,12 mmol) y la solución se agitó a temperatura ambiente durante 15 min. Se añadió una solución de (39) en CH_{2}Cl_{2} (4,5 ml) y DMF (0,5 ml), seguida de HOBT (0,168 g, 1,24 mmol) y EDC (0,256 g, 1,33 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 18 horas en N_{2}. El disolvente se evaporó. El material bruto se disolvió en EtOAc y se lavó con NaHSO_{4} 0,5N (2x), NaHCO_{3} saturado (2x) y salmuera, y se secó sobre Na_{2}SO_{4} anhidro, se filtró y se evaporó para dar un sólido amarillo. La purificación por cromatografía en columna ultrarrápida proporcionó el compuesto del título (41) como una mezcla de diastereómeros (374 mg, 88% de rendimiento). ^{1}H-NMR (500 MHz, CDCl_{3}) \delta 0,75-1,05 (m, 6H), 1,19-1,34 (m,9H), 1,93-2-08 (m, 3H), 2,19-2,50 (m, 2H), 2,80-3,03 (m, 1H), 4,56-4,93 (m, 3H), 5,02-5,20 (m, 1H), 5,46-5,56 (m, 1H), 5,95-6,16 (m, 2H), 6,86-6,95 (m, 1H), 7,20-7,43 (m, 5H). HPLC analítica (columna C18), (mezcla de diastereómeros) 8,58 min. LC-MS (ES^{+}) m/e = 519,2 (M+H).
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Preparación de ácido 3-{[3-(2-acetilamino-3-metil-butiril)-5-terc-butil-2,3-dihidro-[1,3,4]tiadiazol-2-carbonil]-ami- no}-4-oxo-butírico (42)
Se hidrolizó una muestra de 45 mg (0,087 mmol) de 41 de acuerdo con el método A (véase Esquema XXIII) para dar 17 mg (45% de rendimiento) del compuesto del título. HPLC analítica (columna C18): 5,15 min. LC-MS (ES^{+}) m/e = 429,3 (M+H).
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Éster etílico del ácido 5-terc-butil-3-[2-(4-metoxi-benzoilamino)-3-metil-butiril)-2,3-dihidro-[1,3,4]tiadiazol-2-carboxílico (43)
Se preparó por el método indicado anteriormente para el compuesto 38, usando cloruro de anisoílo para dar 216 mg (50%) del compuesto del título como un sólido amorfo. ^{1}H NMR (500 MHz, CDCl_{3}) \delta 0,92 (d, 1,5H), 0,98 (d, 1,5H), 1,03 (d, 1,5H), 1,07 (d, 1,5H), 1,21 (t, 3H), 1,28 (s, (H), 2,21-2,28 (m, 0,5H), 2,41-2,48 (m, 0,5H), 3,83 (s, 3H), 4,15-4,28 (m, 2H), 5,41-5,46 (m, 0,5H), 5,48-5,53 (m, 0,5H), 6,08 (s, 0,5H), 6,13 (S, 0,5H), 6,75 (d, 0,5H), 6,85 (d, 0,5H), 6,91 (d, 2H), 7,59 (d, 2H).
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Ácido 5-terc-butil-3-[2-(4-metoxi-benzoilamino)-3-metil-butiril]-2,3-dihidro-[1,3,4]tiadiazol-2-carboxílico (44)
Se preparó por el procedimiento descrito para 39 para dar 180 mg (cuantitativo) del compuesto del título en forma de un sólido blanco. ^{1}H NMR (500 MHz, CDCl_{3}) \delta 0,92 (d, 1,5H), 0,96 (d, 1,5H), 1,03 (d, 1,5H), 1,07 (d, 1,5H), 2,22-2,30 (m, 0,5H), 2,37-2,45 (m, 0,5H), 3,83 (s, 1,5H) 3,84 (s, 1,5H), 5,41-5,48 (m, 1H), 6,14 (s, 0,5H), 6,15 (S, 0,5H), 6,87-6,95 (m, 2H), 7,75-7,83 (m, 3H).
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(2-Benciloxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il)-amida del ácido 5-terc-butil-3-[2-(4-metoxi-benzoilamino)-3-metil-butiril]-2,3-dihidro-[1,3,4]tiadiazol-2-carboxílico (45a y 45b)
Se preparó por el procedimiento descrito para el compuesto 41 para dar el compuesto del título bruto como 4 diastereómeros. El material bruto se purificó por cromatografía ultrarrápida, eluyendo con un gradiente de CH_{2}Cl_{2} a CH_{2}Cl_{2}/acetato de etilo (6/4) para dar 31 mg del componente R_{f} superior como un diastereómero individual (45a). HPLC analítica (columna Microsorb C18) 19,87 min. ^{1}H NMR (500 MHz, CDCl_{3}) (diastereómero individual) \delta 1,04 (d, 3H), 1,14 (d, 3H), 1,28 (s, 9H), 2,77 (d, 0,5H), 2,81 (d, 0,5H), 2,90 (d, 0,5H), 2,95 (d, 0,5H), 3,84 (s, 3H), 4,44-4,49 (m, 1H), 4,53 (d, 1H), 4,85 (d, 1H), 5,02-5,08 (m, 1H), 6,37 (s, 1H), 6,41 (d, 1H), 6,93 (d, 2H), 7,26-7,40 (m, 5H), 7,75 (d, 2H), 7,92-7,96 (m, 1H).
La fracción R_{f} inferior contenía 185 mg de un sólido como una mezcla 3:1:2 de diastereómeros (45b). HPLC analítica: columna Microsorb C18. 19,00, 19,26, 20,02 min, ^{1}H NMR (500 MHz, CDCl_{3}) (mezcla 3:1:2 de 3 diastereómeros) \delta 0,89 (d, 2,25H), 0,98 (d, 0,75H), 1,02 (d, 0,5H), 1,03 (d, 1,5H), 1,08 (d, 0,25H), 1,10 (d, 0,75H), 1,16 (s, 0,75H), 1,17 (s, 2,25H), 1,23 (s, 0,375H), 1,24 (s, 1,125H), 1,28 (s, 1,125H), 1,29 (s, 3,375H), 2,12-2,18 (m, 0,33H), 2,32-2,42 (m, 0,67H), 2,43-2,51 (m, 0,5H), 2,61-2,67 (m, 0,5H), 2,84-2,92 (m, 0,5H), 2,96-3,07 (m, 0,5H), 3,85 (s, 3H), 4,58-4,71 (m, 2H), 4,81 (d, 0,16H), 4,86 (d, 0,32H), 4,91 (d, 0,52H), 5,09-5,13 (m, 0,33H), 5,14-5,18 (m, 0,67H), 5,35 (dd, 1H), 5,46 (s, 0,16H), 5,53 (d, 0,32H), 5,58-5,62 (d, 0,52H), 6,17 (s, 0,52H), 6,20 (s, 0,16H), 6,34 (s, 0,32H), 6,50 (d, 0,32H), 6,62 (d, 0,16H), 6,67 (d, 0,52H), 6,86 (d, 0,33H), 6,91 (d, 0,67H), 6,94 (d, 1,0H), 7,24-7,43 (m, 5H), 7,61 (d, 1H), 7,70 (d, 0,33H), 7,71 (d, 0,67H), 7,76 (d, 1H).
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Preparación de ácido 3-({5-terc-butil-3-[2-(4-metoxi-benzoilamino)-3-metil-butiril]-2,3-dihidro-[1,3,4]tiadiazol-2-carbonil}-amino)-4-oxo-butírico (46a)
Se hidrolizó una muestra de 30 mg de 45a de acuerdo con el método B (véase Esquema XXIII) para dar 8 mg (30% de rendimiento) del producto deseado. HPLC analítica (columna Microsorb C-18, acetonitrilo/agua, con tampón de TFA) 12,85 min/^{1}H NMR (500 MHz, CD_{3}OD) \delta 0,98-1,1 (m, 6H), 1,28 (s, 9H), 2,20-2,31 (m, 1H), 2,40-2,48 (m, 1H), 2,6-2,72 (m, 1H), 3,84 (s, 3H), 4,18-4,26 (m, 1H), 4,56-4,62 (m, 1H), 5,25-5,32 (m, 1H), 6,24-6,28 (m, 1H), 6,98 (d, 2H), 7,85 (d, 2H).
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Preparación de ácido 3-({5-terc-butil-3-[2-(4-metoxi-benzoilamino)-3-metil-butiril]-2,3-dihidro-[1,3,4]tiadiazol-2-carbonil}-amino)-4-oxo-butírico (46b)
Se hidrolizó una muestra de 30 mg de 45b (mezcla de 3 diastereómeros) de acuerdo con el método B (véase Esquema XXIII) para dar 22 mg (84% de rendimiento) del producto deseado como una mezcla 3:2 de diastereómeros. HPLC analítica (columna Microsorb Cyano) 7,08, 7,78 min, ^{1}H NMR (500 MHz, CD_{3}OD) \delta 0,98-1,08 (m, 4H), 1,09-1,12 (m, 2H), 1,29 & 1,31 (2 singletes, 9H), 2,23-2,30 (m, 0,5H), 2,36-2,55 (m, 1,5H), 2,62-2,72 (m, 1H), 3,85 (s, 3H), 4,18-4,27 (m, 1H), 4,58-4,65 (m, 1H), 5,27-5,33 (m, 1H), 6,23-6,27 (m, 1H), 7,00 (d, 2H), 7,70-7,88 (m, 2H).
Esquema XI
48
Éster prolina-terc-butílico del ácido 1-(2-benciloxicarbonlamino-2-metil-propionil)-pirrolidina-2-carboxílico (49)
A una solución de éster prolina-terc-butílico (47) (2,00 g, 12 mmol, en CH_{2}Cl_{2} (15 ml) se le añadieron N-carbobenciloxi-2-metilalanina (3,05 g, 13 mmol), HOBT (2,36 g, 17 mmol) y EDC (3,43 g, 18 mmol) y la solución se agitó a temperatura ambiente en N_{2} durante 48 horas. El disolvente se evaporó, el material bruto se disolvió en EtOAc y se lavó con NaHSO_{4} 0,5 N (2x), NaHCO_{3} saturado (2x) y salmuera, y se secó sobre Na_{2}SO_{4} anhidro, se filtró y se evaporó para dar un sólido blanco (4,68 g, 100%). ^{1}H-NMR (500 MHz, CDCl_{3}) \delta 1,20-2,15 (m, 4H), 1,43 (s, 9H), 1,53 (d, 6H), 3,21-3,79 (m, 2H), 4,35 (br s, 1H), 4,82-5,19 (m, 3H), 5,74 (br s, 1H), 7,17-7,49 (m, 5H). HPLC analítica (columna C18) 10,66 min. LC-MS (ES^{+}) m/e = 391,3 (M+H).
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Éster terc-butílico del ácido 1-[2-(4-metoxi-benzoilamino)-2-metil-propionil]-pirrolidina-2-carboxílico (50)
A una solución de 49 (1,00 g, 2,56 mmol) en MeOH (20 ml) se le añadió Pd/C al 10% (200 mg) y la mezcla se agitó en H_{2} durante 2 horas. La mezcla se filtró a través de un filtro de PTFE de 0,45 \mum y el disolvente se eliminó a vacío para proporcionar un aceite incoloro. Este aceite se disolvió en CH_{2}Cl_{2} (25 mL) y se añadieron DIEA (660 \mul, 3,79 mmol) y cloruro de p-anisoílo (480 mg, 2,8 mmol). La solución se agitó a temperatura ambiente en H_{2} durante 18 horas. El disolvente se eliminó a vacío y el aceite se disolvió en EtOAc. La fase orgánica se lavó con NaHSO_{4} 0,5 N (2x), agua, KaHCO_{3} saturado (2x) y salmuera. La fase orgánica se secó sobre Na_{2}SO_{4}, se filtró y se evaporó para dar un sólido blanco que se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida, eluyendo con CH_{2}Cl_{2}/MeOH (99/1 a 98/2%) para dar el compuesto del título en forma de un sólido blanco (655 mg, 65% de rendimiento). ^{1}H-NMR (500 MHz, CDCl_{3}) \delta 1,47 (S, 9H), 1,68-2,24 (m, SH), 1,80 (d, 6H), 3,55-3,68 (m, 1H), 3,72-3,93 (m, 1H), 3,84 (s, 3H), 4,43-4,55 (m, 1H), 6,90 (d, 2H), 7,60 (br s, 1H), 7,77 (d, 2H). HPLC analítica (columna C18) 8,98 min.
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(2-benciloxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il)-amida del ácido 1-[2-(4-metoxi-benzoilamino)-2-metil-propionil]-pirrolidina-2-carboxílico (51)
A una solución de 50 (325 mg, 0,83 mmol) en dioxano (5 mL) se le añadió trietilamina (463 \mul, 3,32 mmol) y TMS-triflato (642 \mul, 3,32 mmol) y la solución se agitó a 100ºC durante 5 horas, luego a temperatura ambiente durante 18 horas. La reacción se diluyó con agua, se ajustó hasta pH 8 con NaHCO_{3} saturado y se extrajo con Et_{2}O, se secó sobre Na_{2}SO_{4}, se filtró y se evaporó para dar un sólido blanco (230 mg, 83% de rendimiento) que se usó directamente en la etapa siguiente.
A una solución de éster alílico del ácido (2-benciloxi-5-oxo-tetrahidrofuran-3-il)-carbámico (40) (1,027 g, 3,5 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (20 ml) se le añadieron DMBA (543 mg, 3,48 mmol) y Pd(PPh_{3})_{4} (280 mg, 0,24 mmol) y la solución se agitó a temperatura ambiente en N_{2} durante 20 minutos. Se añadió una solución de ácido 1-[2-(4-metoxi-benzoilamino)-2-metil-propionil]-pirrolidina-2-carboxílico (818 mg, 2,45 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (5 ml), seguida de HOBT (0,534 g, 3,95 mmol) y EDC (738 mg, 3,84 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 18 horas en N_{2}. El disolvente se evaporó, el material bruto se disolvió en EtOAc y se lavó con NaHSO_{4} 0,5N (2x), NaHCO_{3} saturado (2x) y salmuera, y se secó sobre Na_{2}SO_{4} anhidro, se filtró y evaporó para dar un sólido amarillo. La purificación por cromatografía en columna ultrarrápida, eluyendo con acetato de etilo/hexanos (20/80 a 50/50%), proporcionó el producto como un sólido amarillo pálido (760 mg, 61% de rendimiento). ^{1}H-NMR (500 MHz, CD_{3}OD) \delta 1,53 (d, 6H), 1,65-1,93 (m, 3H), 1,96-2,14 (m, 1H), 2,60 (dd, 0,1H), 2,77 (dd, 0,85H), 2,94 (dd, 0,85H), 3,04-3,11 (m, 0,2H), 3,42-3,52 (m, 1H), 3,57-3,67 (m, 1H), 3,84 (s, 3H), 4,38-4,76 (m, 3H), 4,84 (d, 1H), 5,64-5,70 (m, 1H), 6,96-7,03 (m, 2H), 7,23-7,43 (m, 5H), 7,78-7,97 (m, 2H). HPLC analítica (columna C18) 13,32, 14,37 min. LC-MS (ES^{+}) m/e = 524.3 (M+H).
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Preparación de ácido 3-({1-[2-(4-metoxi-benzoilamino)-2-metil-propionil]-pirrolidina-2-carbonil}-amino)-4-oxo-butírico (52)
Se hidrolizó una muestra de 61 mg (0,14 mmol) de 51 de acuerdo con el método C (véase Esquema XXIII) para proporcionar 30 mg (60% de rendimiento) del compuesto del título: HPLC analítica (columna C18) 6,79 min. LC-MS (ES^{+}) m/e = 434,3 (M+H).
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Esquema XII
49
Éster terc-butílico del ácido 1-[2-(4-metoxi-benzoilamino)-3-metilbutiril]-pirrolidina-2-carboxílico (54)
A una suspensión de H-val-pro-OtBu.HCl (53) (2,011 g, 7,44 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (20 ml) se le añadió DIEA (3,2 ml, 18,4 mmol) seguido de una solución de cloruro de 4-metoxi-benzoílo (1,26 g, 7,4 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (5 ml). La solución se agitó a temperatura ambiente en nitrógeno durante 1 hora, luego se concentró. El aceite resultante se disolvió en EtOAc y se lavó con KHSO_{4} 0,5N (2x), NaHCO_{3} saturado (2x) y salmuera, luego se concentró a vacío para dar el compuesto del título en forma de un sólido blanco (2,814 g, 94% de rendimiento). ^{1}H-KMR (500 MHz, CDCl_{3}) \delta 1,05 (dd, 6H), 1,46 (s, 9H), 1,88-2 ,29 (m, 5H), 3,65-3,74 (m, 1H), 3,81-3,92 (m, 1H), 3,85 (s, 3H), 4,32-4,42 (m, 1H), 4,81-4,91 (m, 1H), 6,79-6,86 (m, 1H), 6,91 (d, 2H), 7,78 (d, 2H). HPLC analítica (columna Cyano) 10,18 min.
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2-benciloxi-5-oxo-tetrahidrofuran-3-il) amida del ácido 1-[2-(4-metoxi-benzoilamino)-3-metilbutiril]-pirrolidina-2-carboxílico (56)
Una muestra de 1,079 g (2,67 mmol) de 54 se disolvió en TFA al 15% en CH_{2}Cl_{2} (40 mL) y se agitó a temperatura ambiente durante 4 horas. El disolvente se concentró a vacío para dar 55 en forma de un sólido blanco (0,93 g, 100%) que se usó en la etapa siguiente.
A una solución de 40 (1,796 g, 6,17 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (20 ml) se le añadieron DMBA (1,119 g, 7,17 mmol) y Pd(PPh_{3})_{4} (0,683 g, 0,59 mmol) y la solución se agitó a temperatura ambiente durante 20 minutos. Se añadió una solución de 55 (0,928 g, 2,67 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (17 ml) y DMF (2 ml), seguida de HOBT (0,811 g, 6,01 mmol) y EDC (1,16 g, 6,04 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 18 horas en N_{2}. El disolvente se evaporó, el material bruto se disolvió en EtOAc y se lavó con NaHSO_{4} 0,5 N (2x), NaHCO_{3} saturado (2x) y salmuera, y se secó sobre Na_{2}SO_{4} anhidro, se filtró y se evaporó para dar un sólido amarillo. La purificación por cromatografía ultrarrápida, eluyendo con acetato de etilo/CH_{2}Cl_{2} (10/90 a 40/60%) proporcionó el compuesto del título en forma de un sólido amarillo pálido (910 mg, 63% de rendimiento). ^{1}H-NMR (500 MHz, CDCl_{3}) \delta 0,96 (dd, 6H), 1,84-2,19 (m, 4H), 2,25-2,38 (m, 1H), 2,45 (dd, 1H), 2,80-2,98 (m, 1H), 3,60-3,72 (m, 1H), 3,82-3,95 (m, 1H), 3,86 (s, 3H), 4,26-4,95 (m, 6H), 5,41 (s, 0,2H), 5,53 (d, 0,8H), 6,67-6,77 (m, 1H), 6,88-6,99 (d, 2H), 7,22-7,57 (m, 5H), 7,71-7,82 (d, 2H). HPLC analítica (columna Cyano) (mezcla de 2 diastereómeros) 9,21 min. LC-MS (ES^{+}) m/e = 538,3 (M+H).
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Ácido 3-({1-[2-(4-metoxi-benzoilamino)-3-metil-butiril]-pirrolidina-2-carbonil}-amino)-4-oxo-butírico (57)
Se hidrolizó una muestra de 125 mg (0,23 mmol) de 56 de acuerdo con el método A (véase Esquema XXIII) para proporcionar 60 mg (58% de rendimiento) del compuesto del título: HPLC analítica 5,71 min. LC-MS (ES^{+}) m/e = 448,2 (M+H).
Preparación de Ácido 4-amino-3-cloro-benzoico
Una suspensión de 4-amino-3-clorobenzonitrilo (4,82 g, 31,58 mmol) se calentó a reflujo en HCl 6N (140 ml). El precipitado se disolvió tras calentar para dar una solución incolora. Tras calentar incluso más, la solución se tornó turbia. Después de 9 horas, la reacción se enfrió hasta temperatura ambiente. El precipitado resultante se filtró, luego se disolvió en THF y se evaporó el disolvente. El residuo se concentró repetidamente a partir de tolueno para dar un sólido blanco (3,18 g, 59% de rendimiento). ^{1}H-NMR (500 MHz, CD_{3}OD:CDCl_{3} 1:4) \delta 6,80 (d, 1H), 7,75 (dd, 1H), 7,94 (d, 1H). HPLC analítica (columna Cyano) 8,73 min.
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Éster terc-butílico del ácido 1-[2-(4-amino-3-cloro-benzoilamino)-3-metilbutiril]-pirrolidina-2-carboxílico (58)
A una suspensión de 53 (1,707 g, 6,31 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (25 ml) a 0ºC se le añadió DIEA (3,2 ml, 18,4 mmol) seguida de una solución de ácido 4-amino-3-clorobenzoico (1,298 g, 7,56 mmol), HOBT (1,005 g, 7,44 mmol) y EDC (1,456 g, 7,58 mmol). La mezcla resultante se agitó a 0ºC durante 15 minutos, luego se dejó calentar hasta temperatura ambiente y se agitó durante 18 horas. El disolvente se evaporó y el aceite resultante se disolvió en EtOAc, se lavó con NaHSO_{4} 0,5 N (2x), NaHCO_{3} saturado (2x) y salmuera para dar un sólido blanco (2,68 g). La cromatografía ultrarrápida, usando MeOH/CH_{2}Cl_{2} (1/99 a 2/98%), proporcionó 2,04 g (76% de rendimiento) de 58 en forma de un sólido blanco. ^{1}H-NMR (500 MHz, CDCl_{3}) \delta 1,05 (dd, 6H), 1,47 (s, 9H), 1,86-2,29 (m, 5H), 3,62-3,78 (m, 1H), 3,78-3,54 (m, 1H), 4,35 (dd, 1H), 4,79-4,89 (dd, 1H), 6,73 (d, 1H), 6,78 (d, 1H), 7,52 (dd, 1H), 7,75 (d, 1H). HPLC analítica (columna Cyano) 16,18 min. LC-MS (ES^{-}) m/e = 424,3 (M+H).
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(2-Benciloxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il)-amida del ácido 1-[2-(4-amino-3-cloro-benzoilamino)-3-metilbutiril]-pirrolidina-2-carboxílico (60)
Se disolvió una muestra de 0,632 g (1,49 mmol) de 58 en TFA al 50% en CH_{2}Cl_{2} (20 mL) y la solución se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. Se eliminó el TFA residual por concentración repetida de CH_{2}Cl_{2}- (3x) para dar el producto como un sólido blanco.
Se dejó reaccionar una muestra de 385 mg (1,04 mmol) con 40 por el método utilizado para el compuesto 56. El compuesto del título (60) se aisló en forma de un sólido amarillo (265 mg, 45% de rendimiento). ^{1}H-NMR (500 MHz, CD_{3}OD) \delta 0,89-1,12 (m, 6H), 1,72-2,26 (m, 5H), 2,49 (dd, 0,25H), 2,60 (dd, 0,7H), 2,80 (dd, 0,75H), 2,96-3,09 (m, 0,3H), 3,64-3,77 (m, 1H), 3,94-4,10 (m, 1H), 4,20-4,74 (m, 4H), 4,76-4,95 (m, 1H), 5,51 (s, 0,5H), 5,61-5,70 (m, 1,5H), 6,79 (dd, 1H), 7,23-7,43 (m, 5H), 7,48-7,61 (m, 1,4H), 7,68-7,81 (m, 1H), 7,99-8,12 (m, 0,6H).
HPLC analítica (columna Cyano) (mezcla de 2 diastereómeros) 14,90, 15,20 min. LC-MS (ES^{+}) m/e = 557,2 (M+H).
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Ácido 3-({1-[2-(4-amino-3-cloro-benzoilamino)-3-metil-butiril]-pirrolidina-2-carbonil}-amino)-4-oxo-butírico (61)
Se hidrolizó una muestra de 45 mg (0,08 mmol) de 60 de acuerdo con el método A (véase Esquema XXIII) para proporcionar 30 mg (80% de rendimiento) del compuesto del título: ^{1}H NMR (500 MHz, CD_{3}OD) \delta 1,06 (dd, 6H), 1,78-2,38 (m, 5H), 2,38-2,86 (m, 2H), 3,62-3,83 (m, 1H), 4,12-4,76 (m, 4H), 7,04-7,21 (m, 1H), 7,58-8,01 (m, 2H); HPLC analítica 8,16 min. LC-MS (ES^{+}) m/e = 467,3 (M+H).
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Esquema XIII
50
Éster terc-butílico del ácido 1-[2-(4-hidroxi-3,5-dimetil-benzoilamino)-3-metil-butiril]-pirrolidina-2-carboxílico (63)
A una solución de 62 (preparada a partir de 53 y Fmoc-Cl) (600 mg, 1,22 mmol) en DMF anhidra (10 ml) se le añadió dietilamina (3 ml). La solución se agitó a temperatura ambiente en N_{2} durante 3 horas y el disolvente se evaporó. El aceite resultante se disolvió en CH_{2}Cl_{2} (8 ml) y se añadieron ácido 3,5-dimetil-4-hidroxibenzoico (0,302 g, 1,82 mmol), HOBT (338 mg, 2,5 mmol) y EDC (0,456 g, 2,43 mmol), y la solución se agitó a temperatura ambiente en N_{2} durante 18 horas. El disolvente se concentró a vacío y el aceite resultante se disolvió en EtOAc, se lavó con NaHSO_{4} 0,5 N (2x), NaHCO_{3} saturado (2x) y salmuera para dar el producto bruto en forma de un sólido blanco (0,80 g). La cromatografía ultrarrápida, eluyendo con MeOH/CH_{2}Cl_{2} (1/99 a 2/98%), proporcionó 380 mg (75% de rendimiento) de un sólido blanco. ^{1}H-HMR (500 MHz, CDCl_{3}) \delta 1,06 (dd, 6H), 1,47 (s, 9H), 1,90-2,32 (m, 5H), 2,24 (s, 6H), 3,65-3,75 (m, 1H), 3,84-3,92 (m, 1H), 4,36-4,42 (m, 1H), 4,82-4,88 (m, 1H), 5,53-5,61 (m, 1H), 6,77-6,85 (m, 1H), 7,42 (s, 2H). HPLC analítica (columna Cyano) 17,53 min. LC-MS (ES^{+}) m/e = 419,3 (M+H).
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(2-benciloxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il)-amida del ácido 1-[2-(4-hidroxi-3,5-dimetil-benzoilamino)-3-metil-butiril]-pirrolidina-2-carboxílico (64)
Se preparó a partir de 63 y 40 por el método empleado para preparar 56 para dar el compuesto del título (64) en forma de un sólido amarillo pálido (352 mg, 72% de rendimiento). ^{1}H-NMR (500 MHZ, CD_{3}OD) \delta 0,83-1,28 (m, 6H), 1,66-2,37 (m, 3H), 2,23 (s, 6H), 2,48-2,54 (m, 0,2H), 2,61 (ddd, 0,8H), 2,72 (ddd, 0,9H), 3,01-3,09 (m, 1H), 3,66-3,76 (m, 1H), 3,95-4,07 (m, 1H), 4,48-4,73 (m, 3H), 4,75-4,92 (m, 1H), 5,45-5,48 (m, 0,1H), 5,61-5,64 (m, 0,1H), 5,64-5,70 (m, 0,8H), 7,21-7,62 (m, 6H), 7,88-8,04 (m, 1H). HPLC analítica (columna Cyano) (mezcla de 2 diastereómeros) 17,73 min. LC-MS (ES^{+}) m/e = 552,3(M+H).
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Ácido 3-({1-[2-(4-hidroxi-3,5-dimetil-benzoilamino)-3-metil-butiril]-pirrolidina-2-carbonil}-amino)-4-oxo-butírico (65)
Se hidrolizó una muestra de 160 mg (0,29 mmol) de 64 de acuerdo con el método A (véase Esquema XXIII) para proporcionar 13,1 mg (10% de rendimiento) del compuesto del título: HPLC analítica (columna Cyano) 10,28 min. LC-MS (ES^{+}) m/e = 462,2 (M+H).
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Esquema XIV
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51 
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Éster terc-butílico del ácido 1-[2-(2-9H-fluoren-9-il-acetilamino)-3,3-dimetil-butiril]-pirrolidina-2-carboxílico (66)
A una solución de H-pro-OtBu (53) (1,033 g, 6,0 mmol, II, Esquema 5) en CH_{2}Cl_{2} (20 ml) y DMF (5 ml) se le añadieron Fmoc-tLeu-OH (2,337 g, 6,60 mmol, I, Esquema 5), HOBT (1,63 g, 12,1 mmol) y EDC (2,30 g, 12,0 mmol) y la solución se agitó a temperatura ambiente en N_{2} durante 18 horas. El disolvente se eliminó a vacío, y el residuo se disolvió en EtOAc, luego se lavó con NaHSO_{4} 0,5 N (2x), NaHCO_{3} saturado (2x) y salmuera. La capa orgánica se secó sobre Na_{2}SO_{4} anhidro y se evaporó para dar un sólido amarillo pálido (3,65 g). La cromatografía ultrarrápida, usando EtOAc/hexanos (10/90 a 20/80%) proporciona el compuesto del título (66) (2,25 g, 74% de rendimiento). ^{1}H-NMR (500 MHz, CDCl_{3}) \delta 1,09 (s, 9H), 1,47 (s, 9H), 1,79-2,28 (m, 3H), 3,62-3,72 (m, 1H), 3,76-3,83 (m, 1H), 4,18-4,43 (m, 4H), 5,48-5,67 (m, 1H), 7,28-7,44 (m, 4H), 7,55-7,64 (m, 2H), 7,72-7,82 (m, 2H). HPLC analítica (columna Cyano) 11,95 min. LC-MS (ES^{+}) m/e = 507,3 (M+H).
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Éster terc-butílico del ácido 1-[2-(4-metoxi-benzoilamino)-3,3-dimetil-butiril]-pirrolidina-2-carboxílico (67)
A una solución de 66 (0,503 g, 0,99 mmol) en DMP (8 ml) se le añadió dietilamina (2,5 ml), la solución se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora, y el disolvente se evaporó. El residuo resultante se concentró repetidamente a partir de CH_{2}Cl_{2} (3x). El aceite resultante se disolvió en CH_{2}Cl_{2} (9 ml) y DIEA (260 \mul, 1,49 mmol) y se añadió cloruro de 4-metoxi-benzoílo (190 mg, 1,05 mmol). La solución se agitó en N_{2} durante 18 horas y el disolvente se concentró a vacío. El residuo se disolvió en EtOAc y se lavó con KaHSO_{4} 0,5 N (2x), NaHCO_{3} saturado (2x) y salmuera, luego se secó sobre Na_{2}SO_{4} anhidro y se evaporó para dar un sólido blanco (0,529 g). La cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice, usando MeOH/CH_{2}Cl_{2} (1/99 a 2/98%) proporcionó el compuesto del título (2,25 g, 74% de rendimiento). ^{1}H-NMR (500 MHz, CD_{3}OD) \delta 1,01 (s, 1,4H), 1,11 (s, 7,6H), 1,73-2,25 (m, 4H), 2,47-2,77 (m, 1H), 2,81 (dd, 0,7H), 2,91-3,11 (m, 0,3H), 3,61-4,03 (m, 3H), 3,84 (s, 3H), 4,29-4,49 (m, 1H), 4,49-5,00 (m, 5H), 5,46 (s, 0,15H), 5,58-5,73 (m, 0,85H), 6,94-7,04 (m, 2H), 7,27-7,41 (m, 4H), 7,61-7,73 (m, 1H), 7,74-7,84 (m, 2H). HPLC analítica (columna Cyano) 13,10 min.
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(2-Benciloxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il)-amida del ácido 1-[2-(4-metoxi-benzoilamino)-3,3-dimetil-butiril]-pirrolidina-2-carboxílico (68)
A una solución de 67 (0,90 g, 1,74 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (25 ml) se le añadieron 2,6-lutidina (2,1 ml, 18,0 mmol) y TMS-triflato (2,3 ml, 11,9 mmol) y la reacción se agitó a temperatura ambiente en N_{2} durante 1,5 horas. La mezcla resultante se diluyó con CH_{2}Cl_{2}, se lavó con NaHCO_{3} al 10% (2x) y salmuera, luego se secó sobre Na_{2}SO_{4}, se filtró y se evaporó. El residuo se disolvió en CH_{2}Cl_{2}, luego se trató con DIEA (0,6 ml, 3,5 mmol) y cloruro de 4-metoxi-benzoílo (0,355 g, 2,09 mmol) y se dejó agitar en N_{2} a temperatura ambiente durante 18 horas. El producto bruto se purificó por cromatografía ultrarrápida, eluyendo con CH_{2}Cl_{2}/MeOH (99/1) para dar el compuesto del título (274 mg, 28% de rendimiento). ^{1}H-NMR (500 MHz, CD_{3}OD) \delta 1,01 (s, 1,4H), 1,11 (S, 7,6H), 1,73-2,25 (m, 4H), 2,47-2,77 (m, 1H), 2,81 (dd, 0,7H), 2,91-3,11 (m, 0,3H), 3,61-4,03 (m, 3H), 3,84 (s, 3H), 4,29-4,49 (m, 1H), 4,49-5,00 (m, 5H), 5,46 (s, 0,15H), 5,58-5,73 (m, 0,85H), 6,94-7,04 (m, 2H), 7,27-7,41 (m, 4H), 7,61-7,73 (m, 1H), 7,74-7,84 (m, 2H). HPLC analítica (columna Cyano) (mezcla de 2 diastereómeros) 17,03, 17,39 min. LC-MS (ES^{+}) m/e = 552,3 (M+H).
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Ácido 3-({1-[2-(4-metoxi-benzoilamino)-3,3-dimetil-butiril]-pirrolidina-2-carbonil}-amino)-4-oxo-butírico (69)
Se hidrolizó una muestra de 117 mg (0,21 mmol) de 68 de acuerdo con el método C (véase Esquema XXIII) para proporcionar 40 mg (41% de rendimiento) del compuesto del título: HPLC analítica 7,16 min. LC-MS (ES^{+}) m/e = 462,3 (M+H).
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Esquema XV
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52 
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Éster bencílico del ácido 1-(2-terc-butoxicarbonilamino-3,3-dimetil-butiril)-pirrolidina-2-carboxílico (70)
A una suspensión de H-pro-OBzl.HCl (2,00 g, 8,66 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (20 ml) se le añadió DIEA (2,25 ml, 12,92 mmol) para obtener una solución incolora. Se añadieron Boc-tLeu-OH (1,95 g, 9,52 mmol), HOBT (1,76 g, 13,03 mmol) y EDC (2,49 g, 12,95 mmol), y la solución se agitó en N_{2} a temperatura ambiente durante 18 horas. Se eliminó el disolvente a vacío, se disolvió en EtOAc y se lavó con H_{2}O, NaHSO_{4} 0,5N (2x), NaHCO_{3} saturado (2x) y salmuera. Se secó sobre Na_{2}SO_{4} anhidro y se evaporó para dar el compuesto del título. (3,57 g, 99% de rendimiento). ^{1}H-NMR (500 MHz, CDCl_{3}) \delta 0,99 (s, 9H), 1,40 (s, 9H), 1,88-2,33 (m, 4H), 3,58-3,90 (m, 2H), 4,21-4,35 (d, 1H), 4,53-4,66 (m, 1H), 5,04-5,38 (m, 3H), 7,14-7,42 (m, 5H). LC-MS (ES^{+}) m/e = 419,4 (M+H).
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Éster terc-butílico del ácido {1-[2-(2-benciloxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-ilcarbamoil)-pirrolidina-1-carbonil]-2,2-dimetil-propil}-carbámico (71) Éster terc-butílico del ácido {2-[2-(2-benciloxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-ilcarbamoil)-pirrolidin-1-il]-1-metil-2-oxo-etil}-carbámico (75)
A una solución de 40 (6,69 g, 23,0 mmol) en CB_{2}Cl_{2} anhidro se le añadieron ácido 1,3-dimetilbarbitúrico (DMBA) (3,97 g, 25,4 mmol) y Pd(PPh_{3})_{4} (1,12 g, 0,97 mmol). La solución se agitó en N_{2} a temperatura ambiente durante 15 min, se enfrió hasta 0ºC, luego se añadieron Boc-ala-pro-OH (BaChem) (5,087 g, 17,8 mmol), HOBT (3,60 g, 26,7 mmol) y EDC (5,12 g, 26,7 mmol). La solución resultante se dejó calentar hasta temperatura ambiente y se agitó en N_{2} durante 18 horas. El disolvente se concentró a vacío y el residuo se disolvió en EtOAc, después se lavó con NaHSO_{4} 0,5 N (2x), NaHCO_{3} saturado (2x) y salmuera. La capa orgánica se secó sobre Na_{2}SO_{4} anhidro y se evaporó para dar un aceite anaranjado (12,23 g). La cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice, usando CH_{2}Cl_{2}/EtOAc (80/20 a 60/40), proporciono el compuesto del título 75 como un sólido amarillo (7,28 g, 86% de rendimiento). ^{1}H-NMR (500 MHZ, CD_{3}OD) \delta 1,19-1,31 (m, 3H), 1,42 (s, 9H), 1,69-2,29 (m, 4H), 2,45-2,67 (m, 0,9H), 2,71-2,86 (m, 0,5H), 2,99-3,10 (m, 0,6H), 3,49-3,84 (m, 2H), 4,24-4,45 (m, 2,5H), 4,57-4,73 (m, 1,5H), 4,76-4,92 (m, 1H), 5,45 (s, 0,45H), 5,63-5,68 (m, 0,55H), 7,25-7,40 (m, 5H). HPLC analítica (columna Cyano) (mezcla de 2 diastereómeros) 15,99, 16,33 min. LC-MS (ES^{+}) m/e = 476,3 (M+H).
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53 
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(2-benciloxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il)-amida] del ácido [1-[2-(4-amino-3-cloro-benzoilamino)-propionil]-pirrolidina-2-carboxílico (76)
Se trató una muestra de 1,899 g (3,99 mmol) de 75 en CH_{2}Cl_{2} (20 ml) con TFA anhidro (5 ml), luego se agitó a temperatura ambiente bajo K_{2} durante 1 hora y se evaporó hasta sequedad. El residuo se concentró repetidamente a partir de CH_{2}Cl_{2} (3x), después se secó a vacío. El residuo resultante se disolvió en CH_{2}Cl_{2} (20 ml), se enfrió hasta 0ºC, luego se trató con DIEA (5,6 ml, 8 eq, 32,1 mmol), ácido 4-amino-3-cloro-benzoico (0,910 g, 5,3 mmol), HOBT (0,824 g, 6,1 mmol) y EDC (1,197 g, 6,23 mmol). La mezcla resultante se calentó hasta temperatura ambiente y se agitó durante 18 horas. El disolvente se eliminó a vacío y el residuo se disolvió en EtOAc, después se lavó con agua destilada (3x), NaHSO_{4} 0,5N (2x), NaHCO_{3} saturado (2x) y salmuera. La capa orgánica se secó sobre Na_{2}SO_{4}, se filtró y se evaporó para dar un residuo que se purificó por cromatografía ultrarrápida, usando CH_{2}Cl_{2}/MeOH (99/1 a 97/3%). El compuesto del título se obtuvo en forma de un sólido blanco (1,221 g, 58% de rendimiento). ^{1}H-NMR (500 MHz, CD_{3}OD) \delta 1,15 (d, 0,25H), 1,29-1,60 (m, 2,75H), 2,41-2,54 (m, 0,5H), 2,55-2,70 (m, 0,5H), 2,77 (dd, 0,5H), 3,03 (ddd, 0,5H), 3,59-3,75 (m, 1H), 3,75-3,98 (m, 1H), 4,26-5,01 (m, 5H), 5,41-5,57 (m, 1H), 5,60-5,76 (m, 0,5H), 6,70-6,92 (m, 0,5H), 7,15-7,48 (m, 5H), 7,48-7,68 (m, 1H), 7,68-7,88 (m, 1H), 8,15-8,34 (m, 1H). HPLC analítica (columna Cyano) (mezcla de 2 diastereómeros) 14,44, 14,89 min. LC-MS (ES^{+}) m/e = 529,3 (M+H).
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54 
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Se sintetizó (2-benciloxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il)-amida] del ácido [1-[2-(4-Metoxi-3,5-dimetil-benzoilamino)-propionil]-pirrolidina-2-carboxílico (77) a partir de 75 y ácido 3,5-dimetil-4-metoxi benzoico de acuerdo con el procedimiento empleado para preparar 76, a fin de proporcionar el compuesto del título (1,18 g, 44% de rendimiento). ^{1}H-NMR (500 MHz, CD_{3}OD) \delta 1,40 (m, 3H), 1,67-2,41 (m, 4H), 2,28 (s, 6H), 2,48 (ddd, 0,5H), 2,62 (dd, 0,5H), 2,78 (ddd, 0,5H), 3,04 (ddd, 0,5H), 3,62-3,94 (m, 3H), 3,71 (s, 3H), 4,21-4,51 (m, 2H), 4,59-4,85 (m, 4H), 5,46 (s, 0,25H), 5,52 (s, 0,25H), 5,63 (d, 0,4H), 5,67 (d, 0,1H), 7,17-7,45 (m, 5H), 7,45-7,65 (m, 2H). HPLC analítica (columna Cyano) (mezcla de 2 diastereómeros) 15,06, 15,39 min. LC-MS (ES^{+}) m/e = 538 (M+H)
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Preparación de ácido 4-acetilamino-3-clorobenzoico
A una solución de ácido 4-amino-3-cloro-benzoico (10,0 g, 58,3 mmol) en THF anhidro (100 mL) se le añadió cloruro de acetilo (20,7 ml, 291,1 mmol), y la solución se agitó a temperatura ambiente durante 48 horas. El disolvente se evaporó y el producto precipitó a partir de hexanos, luego se filtró y secó para dar un sólido blanco (11,73 g, 94% de rendimiento). ^{1}H-HMR (500 MHz, CD_{3}OD) \delta 2,28 (s, 3H), 7,92 (dd, 1H), 7,99-8,16 (m, 2H). HPLC analítica (columna Cyano) 7,84 min.
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(2-Benciloxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il)-amida del ácido 1-[2-(4-acetilamino-3-cloro-benzoilamino)-propionil]- pirrolidina-2-carboxílico (78)
Se preparó a partir de 75 y ácido 4-acetilamino-3-cloro-benzoico de acuerdo con el procedimiento utilizado para preparar 76, a fin de el compuesto del título (146 mg, 19% de rendimiento). ^{1}H-NMR (500 MHz, CD_{3}OD) \delta 1,28-1,52 (m, 3H), 1,68-2,38 (m, 4H), 2,20 (s, 3H), 2,41-2,88 (m, 1,5H), 2,96-3,10 (m, 0,5H), 2,96-3,10 (m, 0,5H), 3,43-3,75 (m, 1H), 3,80-3,96 (m, 1H), 4,25-5,00 (m, %H), 5,42-5,54 (m, 0,5H), 5,63-5,78 (m, 0,5H), 7,13-7,48 (m, 05H), 7,79-8,14 (m, 2,5H), 8,56-8,70 (m, 0,5H). HPLC analítica (columna Cyano) (mezcla de 2 diastereómeros) 8,64 min. LC-MS (ES^{+}) m/e = 571,2 (M+H).
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(2-Benciloxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il)-amida del ácido 1-[2-(3-isopropoxi-benzoilamino)-propionil]-pirrolidina-2-carboxílico (79)
Se preparó a partir de 75 y ácido 3-isopropoxibenzoico de acuerdo con el procedimiento utilizado para preparar 76, a fin de proporcionar el compuesto del título (120 mg, 58% rendimiento). ^{1}H-NHR (500 MHz, CD_{3}OD) \delta 1,27 (d, 6H), 1,33-1,52 (m, 3H), 1,69-2,31 (m, 4H), 2,49 (dd, 0,3H), 2,63 (dd, 0,7H), 2,78 (dd, 0,7H), 3,03 (dd, 0,3H), 3,43-3,73 (m, 1H), 3,78-3,94 (m, 1H), 4,27-4,47 (m, 2H), 4,47-4,87 (m, 4H), 5,47 (s, 0,7H), 5,53 (d, 0,3H), 5,64 (d, 0,8H), 5,72 (d, 0,2H), 6,98-7,12 (m, 1H), 7,19-7,47 (m, 9H). HPLC analítica (columna Cyano) (mezcla de 2 diastereómeros) 14,54, 14,85 min. LC-MS (ES^{+}) m/e = 538 (M+H).
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{2-[2-(2-Benciloxi-5-oxo-tetrahidrofuran-3-ilcarbamoil)-pirrolidin-1-il]-1-metil-2-oxo-etil}-amida del ácido quinoxalina-2-carboxílico (80)
Se preparó a partir de 75 y ácido 2-quinoxalina carboxílico de acuerdo con el procedimiento utilizado para preparar 76, a fin de proporcionar el compuesto del título (122 mg, 60% de rendimiento). ^{1}H-NMR (500 MHz, CD_{3}OD) \delta 1,12-1,67 (m, 3H), 1,68-2,34 (m, 4H), 2,35-2,70 (m, 0,85H), 2,70-2,95 (m, 0,75H), 3,06 (dd, 0,4H), 3,41-3,49 (m, 2H), 4,18-5,03 (m, 6H), 5,47 (d, 0,5H), 5,55 (d, 2H), 5,67 (dd, 1H), 5,71 (dd, 0,3H), 7,03-7,53 (m, 5H), 7,80-8,06 (m, 2H), 8,06-8,34 (m, 2H), 9,43-9,48 (m, 1H). HPLC analítica (columna Cyano) (mezcla de 2 diastereómeros) 9,06 min. LC-MS (ES^{+}) m/e = 532,3 (M+H).
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(2-Benciloxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il)-amida del ácido 1-[2-(3-benciloxi-4-metoxi-benzoilamino)-propionil)-pirrolidina-2-carboxílico (81)
Se preparó a partir de 75 y ácido 3-benciloxi-4-metoxi benzoico de acuerdo con el procedimiento empleado para preparar 76, a fin de proveer el compuesto del título (142 mg, 58% de rendimiento). ^{1}H-NMR (500 MHz, CD_{3}OD) \delta 1,14 (d, 0,3H), 1,27-1,52 (m, 2,7H), 1,66-2,30 (m, 4H), 2,47 (dd, 0,4H), 2,59 (dd, 0,6H), 2,77 (dd, 0,6H), 3,02 (dd, 0,4H), 3,41-3,72 (m, 1H), 3,72-3,99 (m, 2H), 3,86 (s, 3H), 4,19-4,86 (m, 5H), 4,99-5,15 (m, 2H), 5,45 (m, 0,8H), 5,65 (m, 1,2H), 6,98 (dd, 1H), 7,11-7,63 (m, 12H). HPLC analítica (columna Cyano) (mezcla de 2 diastereómeros) 12,28, 12,44 min. LC-MS (ES^{+}) m/e = 616,3 (M+H).
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Ácido 4-aliloxi-3,5-dietil-benzoico
Una mezcla de ácido 4-hidroxi-3,5-dimetil-benzoico (3,32 g, 20 mmol), bromuro de alilo (7,26 g, 60 mmol), cloruro de benciltrietilamonio (455 mg, 2 mmol) y K_{2}CO_{3} (6,9 g, 50 mmol) en DMF (50 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 16 horas. La mezcla se diluyó con acetato de etilo (200 ml), se lavó con agua y salmuera. La capa orgánica se secó sobre Na_{2}SO_{4}, se filtró y se evaporó a vacío para dar 5,3 g del éster en forma de un aceite. El éster se mantuvo a reflujo con NaOH (5 g, 125 mmol) en agua/metanol (50 ml/50 ml) durante 6 horas. La mezcla se evaporó a vacío para eliminar el metanol, y la solución resultante se diluyó con agua (200 ml), se lavó con acetato de etilo/hexano (30 ml/70 ml). La capa acuosa se acidificó a 0ºC con solución de HCl concentrado hasta pH 2. El precipitado resultante se recogió por filtración y se lavó con agua, se secó en alto vacío para proporcionar 3,86 g (94% de rendimiento) del compuesto del título. ^{1}H-NMR (500 MHz, CDCl_{3}): \delta 2,33 (s, 6H), 4,35-4,37 (m, 2H), 5,28-5,30 (m, H), 5,42-5,46 (m, H), 6,07-6,15 (m, H), 7,79 (s, 2H); tiempo de retención en HPLC analítica: 11,28 min; LC-MS: m/z = 205 (M-H^{+}).
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(2-Benciloxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il)-amida del ácido 1-[2-(4-aliloxi-3,5-dicloro-benzoilamino)-propionil]-pirrolidina-2-carboxílico (82)
Se preparó a partir de 75 y ácido 4-aliloxi-3,5-dicloro-benzoico de acuerdo con el procedimiento utilizado para preparar 76, a fin de proveer el compuesto del título (208 mg, 47% de rendimiento). ^{1}H-NMR (500 MHz, CDCl_{3}) \delta 1,05-1,58 (m, 3H), 1,68-3,21 (m, 7H), 3,39-3,90 (m, 3H), 4,05-5,01 (m, 6H), 5,22-5,62 (m, 3H), 6,04-6,25 (m, 1H), 6,94-7,63 (m, 8H). HPLC analítica (columna Cyano) (mezcla de 2 diastereómeros) 9,69, 9,89 min. LC-MS (ES^{+}) m/e = 604,2 (M+H).
60 
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(2-Benciloxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il)-amida del ácido 1-[2-(3,5-Dicloro-4-hidroxi-benzoilamino)-propionil]- pirrolidina-2-carboxílico (83)
Se disolvió una muestra de 140 mg de 82 (0,23 mmol) en CH_{2}Cl_{2}- (4 mL) y se trató con DMBA (35,4 mg, 0,26 mmol) y Pd(PPh_{3})_{4} (32 mg, 0,028 mmol). La solución se agitó a 0ºC durante 15 min, se calentó hasta temperatura ambiente durante 2 horas, después se diluyó con CH_{2}Cl_{2} y se lavó con agua (2x) y salmuera. El disolvente se concentró a vacío y el residuo se purificó por cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice, usando MeOH/CH_{2}Cl_{2} (1/99 a 3/97) para dar el compuesto del título (93,2 mg, 71% de rendimiento). ^{1}H-NMR (500 MHz, CD_{3}OD) \delta 1,16 (d, 0,25H), 1,28-1,49 (m, 2,75H), 1,63-2,33 (m, 4H), 2,48 (dd, 0,4H), 3,39-3,59 (m, 0,2H), 3,60-3,73 (m, 0,8H), 3,73-3,96 (m, 1H), 4,24-4,48 (m, 2H), 4,57-4,92 (m, 7H), 5,44 (s, 0,4H), 5,50 (d, 0,4H), 5,64 (d, 0,8H), 5,75 (d, 0,5H), 7,16-7,43 (m, 5H), 7,78-7,89 (m, 1,6H), 8,40-8,63 (m, 0,4H). HPLC analítica (columna Cyano) (mezcla de 2 diastereómeros) 11,57, 11,82 min. LC-MS (ES^{+}) m/e = 564,1 (M+H)
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61 
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(2-Benciloxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il)-amida del ácido 1-(2-benzoilamino-propionil)-pirrolidina-2-carboxílico (84)
Se preparó a partir de 75 y cloruro de benzoílo de acuerdo con el procedimiento empleado para preparar 76, a fin de proveer el compuesto del título en forma de un aceite incoloro (8 mg, 38% de rendimiento). ^{1}H-NMR (500 MHz, CD_{3}OD) \delta 1,35-1,54 (m, 3H), 1,72-2,30 (m, 4H), 2,42-2,70 (m, 1,3H), 2,74-2,84 (m, 0,5H), 3,03 (dd, 0,2H), 3,41-3,75 (m, 2H), 3,81-3,96 (m, 1H), 4,22-4,86 (m, 4H), 5,46 (s, 0,3H), 5,51-5,54 (m, 0,1H), 5,66 (d, 0,5H), 5,72 (d, 0,1H), 7,20-7,57 (m, 7H), 7,77-7,89 (m, 2H), 8,42-8,67 (m, 1H). HPLC analítica (columna Cyano)(mezcla de 2 diastereómeros) 15,23, 15,67 min. LC-MS (ES^{+}) m/e = 481,2 (M+H)
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62 
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{2-(2-Benciloxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-ilcarbamoil)-pirrolidin-1-il]-1-metil-2-oxo-etil}-amida del ácido isoquinolina-1-carboxílico (85)
Se preparó a partir de 75 y ácido 1-isoquinolinacarboxílico de acuerdo con el procedimiento empleado para preparar 76, a fin de proveer el compuesto del título (732 mg, 53% de rendimiento). ^{1}H-NMR (500 MHz, CD_{3}OD) \delta 1,22-1,56 (m, 3H), 1,70-2,34 (m, 4H), 2,43-2,71 (m, 0,9H), 2,73-2,89 (m, 0,5H), 3,06 (ddd, 0,6H), 3,42-3,81 (m, 2H), 3,84-4,01 (m, 1H), 4,29-5,00 (m, 5H), 5,47 (d, 0,65H), 5,55 (s, 0,3H), 5,67 (d, 0,8H), 5,72 (d, 0,25H), 7,21-7,43 (m, 5H), 7,49-7,83 (m, 2,8H), 7,88-8,04 (m, 1,8H), 8,45-8,54 (m, 0,8H), 8,97-9,06 (m, 0,6H). HPLC analítica (mezcla de 2 diastereómeros) 15,71, 16,04 min. LC-MS (ES^{+}) m/e = 531,2 (M+H).
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(2-Benciloxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il)-amida del ácido 1-[2-(4-amino-5-cloro-2-metoxi-benzoilamino)-propionil]-pirrolidina-2-carboxílico (86)
Se preparó a partir de 75 y ácido 4-amino-5-cloro-2-metoxi benzoico de acuerdo con el procedimiento utilizado para 76, a fin de proporcionar el compuesto del título (330 mg, 61% de rendimiento). ^{1}H-MMR (500 MHz, CD_{3}OD) \delta 1,22 (d, 0,25H), 1,29-1,50 (m, 0,75H), 1,68-2,36 (m, 4H), 2,38-2,89 (m, 1,5H), 2,94-3,14 (m, 0,5H), 3,37-3,98 (m, 6H), 4,27-4,98 (m, 6H), 5,44-5,50 (m, 0,4H), 5,53-5,56 (s, 0,1H), 5,60-5,75 (m, 0,5H), 6,50 (s, 1H), 7,17-7,45 (m, 4H), 7,73-7,90 (m, 1H), 8,49-8,70 (m, 1H). HPLC analítica (columna Cyano) (mezcla de 2 diastereómeros) 16,39, 16,82 min. LC-MS (ES^{+}) m/e = 559,2 (M+H).
64
(2-Benciloxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il)-amida del ácido 1-[2-(4-acetilamino-5-cloro-2-metoxi-benzoilamino)-propionil]-pirrolidina-2-carboxílico (87)
Se preparó a partir de 75 y ácido 4-acetilamino-5-cloro-2-metoxi benzoico de acuerdo con el procedimiento utilizado para preparar 76, a fin de proveer el compuesto del título (364 mg, 64% de rendimiento). ^{1}H-NMR (500 MHZ, CD_{3}OD) \delta 1,20-1,27 (m, 0,25), 1,35-1,49 (m, 0,75H), 1,72-2,30 (m, 4H), 2,23 (s, 3H), 2,42-2,58 (m, 0,6H), 2,59-2,68 (m, 0,5H), 2,73-2,86 (m, 0,7H), 2,99-3,11 (m, 0,7H), 3,41-4,07 (m, 5H), 4,29-4,97 (m, 5H), 4,79-5,56 (m, 0,5H), 5,65-5,73 (m, 0,5H), 7,18-7,44 (m, 4,3H), 7,90-8,09 (m, 2H), 8,71-8,85 (m, 0,7H). HPLC analítica (columna Cyano) (mezcla de 2 diastereómeros) 15,61, 16,01 min. LC-MS (ES^{+}) m/e = 601,1 (M+H).
65
{2-[2-(2-Benciloxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-ilcarbamoil)-pirrolidin-1-il]-1-metil-2-oxo-etil}-amida del ácido piridina-2-carboxílico (88)
Se preparó a partir de 75 y ácido piridina-2-carboxílico de acuerdo con el procedimiento utilizado para 76, a fin de obtener el compuesto del título (233 mg, 42% de rendimiento). ^{1}H-NMR (500 MHz, CD_{3}OD) \delta 1,30-1,59 (m, 3H), 1,68-2,36 (m, 4H), 2,39-2,57 (m, 0,6H), 2,57-2,69 (m, 0,35H), 2,71-2,87 (m, 0,4H), 3,05 (dd, 0,65H), 3,39-3,93 (m, 3H), 4,24-4,99 (m, 5H), 5,49-5,55 (m, 0,8H), 5,63-5,77 (m, 1,2H), 7,17-7,46 (m, 5H), 7,49-7,60 (m, 1H), 7,89-7,99 (m, 1H), 8,03-8,12 (m, 1H), 8,58-8,67 (m, 1H). HPLC analítica (columna Cyano) (mezcla de 2 diastereómeros) 8,63 min. LC-MS (ES^{+}) m/e = 481,3 (M+H).
66
(2-Benciloxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il)-amida] del ácido [1-[2-(4-Amino-3,5-dicloro-benzoilamino)-propionil]- pirrolidina-2-carboxílico (89)
Se preparó a partir de 75 y ácido 3,5-dicloro-4-aminobenzoico de acuerdo con el procedimiento empleado para 76, a fin de proveer el compuesto del título (162 mg, 70% rendimiento). ^{1}H-NMR (500 MHz, CD_{3}OD) \delta 1,21-1,58 (m, 3H), 1,58-2,37 (m, 4H), 2,37-3,13 (m, 2H), 3,43-3,74 (m, 1,5H), 3,77-3,94 (m, 1H), 4,28-4,51 (m, 1,5H), 4,50-5,01 (m, 3H), 5,41-5,77 (m, 1H), 7,15-7,49 (m, 5H), 7,66-7,88 (m, 2H). HPLC analítica (columna Cyano) (mezcla de 2 diastereómeros) 8,36 min. LC-MS (ES^{+}) m/e = 563,2 (M+H).
67
(2-Benciloxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il)-amida del ácido 1-[2-(4-Metoxi-benzoilamino)-propionil]-pirrolidina-2- carboxílico (90)
Se preparó a partir de 75 y cloruro de 4-metoxi-benzoílo de acuerdo con el procedimiento empleado para 76, a fin de proveer el compuesto del título (404 mg, 50%). ^{1}H-NMR (500 MHz, CD_{3}OD) \delta 1,19 (d, 0,3H), 1,29-1,58 (m, 2,7H), 1,58-2,38 (m, 4H), 2,43-2,69 (m, 1H), 2,74-2,86 (m, 0,6H), 2,99-3,11 (m, 0,4H), 3,39-3,75 (m, 1,5H), 3,77-3,94 (m, 1H), 3,84 (s, 3H), 4,29-4,94 (m, 4,5H), 5,45-5,55 (m, 4,5H), 5,63-5,71 (m, 0,5H), 5,73 (d, 0,1H), 6,85-7,09 (m, 2H), 7,19-7,44 (m, 4H), 7,73-7,92 (m, 2H), 8,26-8,44 (m, 1H). HPLC analítica (columna Cyano) (mezcla de 2 diastereómeros) 15,18, 15,65 min. LC-MS (ES^{+}) m/e = 510,2 (M+H).
68
(2-Benciloxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il)-amida del ácido 1-{2-[(9-Oxo-9H-fluoren-4-carbonil)-amino]-propionil}-pirrolidina-2-carboxílico (91)
Se preparó a partir de 75 y ácido 9-oxo-9H-fluoren-carboxílico de acuerdo con el procedimiento empleado para 76, a fin de proporcionar el compuesto del título (403 mg, 44% de rendimiento). ^{1}H-MMR (500 MHz, CDCl_{3}) \delta 1,38-1,59 (m, 3H), 1,75-2,37 (m, 4H), 2,43-2,59 (m, 0,65H), 2,59-2,72 (m, 0,35H), 2,79-2,89 (m, 0,35H), 3,01-3,11 (m, 0,65H), 3,68-3,86 (m, 1H), 3,92-4,09 (m, 1H), 4,35-5,03 (m, 7H), 5,42-5,90 (m, 1H), 7,06-8,00 (m, 12H). HPLC analítica (columna Cyano) (mezcla de 2 diastereómeros) 12,30 min. LC-MS (ES^{+}) m/e = 582,1 (M+H).
69 
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2-Benciloxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il)-amida del ácido 1-[2-(3,5-Dicloro-4-metoxi-benzoilamino)-propionil]-pirrolidina-2-carboxílico (92)
Se preparó a partir de 75 y ácido 3,5-dicloro-4-metoxi-benzoico de acuerdo con el procedimiento empleado para 76, a fin de obtener el compuesto del título (364 mg, 46% de rendimiento). ^{1}H-NMR (500 MHz, CD_{3}OD) \delta 1,17 (d, 0,25H), 1,28-1,53 (m, 2,75H), 1,64-2,33 (m, 4H), 2,39-2,94 (m, 1,5H), 2,94-3,12 (m, 0,5H), 3,41-3,74 (m, 2H), 3,74-4,00 (m, 1H), 3,91 (s, 3H), 4,26-5,02 (m, 5H), 5,42-5,81 (m, 1H), 7,08 (d, 0,4H), 7,21-7,43 (m, 4,6H), 7,53-7,69 (m, 0,8H), 7,85-7,97 (m, 1,2H). HPLC analítica (columna Cyano) (mezcla de 2 diastereómeros) 10,79 min. LC-MS (ES^{+}) m/e = 578,2 (M+H).
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70 
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{2-(2-Benciloxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-ilcarbamoil)-pirrolidin-1-il]-1-metil-2-oxo-etil}-amida del ácido quinolina-6-carboxílico (93)
Se preparó a partir de 75 y ácido 6-quinolinacarboxílico de acuerdo con el procedimiento empleado para 76, a fin de proporcionar el compuesto del título (344 mg, 71% rendimiento). ^{1}H-NMR (500 MHz, CD_{3}OD) \delta 1,11-1,58 (m, 3H), 1,69-2,40 (m, 4H), 2,42-3,15 (m, 2H), 3,80-4,01 (m, 1H), 4,29-4,99 (m, 5H), 5,44-5,54 (m, 0,5H), 5,63-5,73 (d, 0,4H), 5,73-5,79 (d, 0,1H), 7,18-7,43 (m, 5H), 7,56-7,67 (m, 1H), 8,08 (d, 1H), 8,13-8,25 (m, 1H), 8,40-8,56 (m, 2H), 8,88-8,99 (m, 1H). HPLC analítica (columna Cyano) (mezcla de 2 diastereómeros) 10,27, 10,50 min. LC-MS (ES^{+}) m/e = 531,2 (M+H).
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Esquema XVII
71
Éster terc-butílico del ácido 1-(2-benciloxicarbonilamino-propionil)-pirrolidina-2-carboxílico (95)
Se preparó de acuerdo con el método descrito en Pierre Chevallet, Patrick Garrouste, Barbara Malawaska y Jean Martinez en Tetrahedron Letters, Vol. 34, pp. 7409-7412, (1993). Una mezcla de Cbz-ala-pro-OH (10,0 g, 31,2 mmol), bromuro de terc-butilo (180 g, 1,31 mol), cloruro de benciltrietilamonio (7,11 g, 31,2 mmol) y K_{2}CO_{3} (180 g, 1,30 mol) en N,N-dimetilacetamida (DMA) (225 ml) se agitó a 55ºC durante 24 horas. La mezcla de reacción se enfrió hasta temperatura ambiente y se diluyó con un litro de agua con hielo, se extrajo con acetato de etilo (200 ml x 3). La capa orgánica se secó sobre Na_{2}SO_{4} anhidro, se filtró y se evaporó a vacío para dar 14 g de aceite, que se purificó por cromatografía ultrarrápida usando hexano/acetato de etilo (95/5 a 50/50) para proporcionar 11,73 g (rendimiento 99,7%) del compuesto del título en forma de un aceite claro. ^{1}H-NMR (500 MHz, CDCl_{3}) \delta 1,25-1,50 (m, 12 H), 1,85-2,25 (m, 4H), 3,42-3,70 (m, 2H), 4,25-4,57 (m, 2H), 5,07-5,11 (m, 2H), 5,69 (d, H), 7,28-7,38 (m, 5H); tiempo de retención en HPLC analítica: 11,07 min; LC-MS: m/z = 377 (M+H^{+}).
72
Éster terc-butílico del ácido 1-[2-(4-amino-3-cloro-benzoilamino)-propionil]-pirrolidina-2-carboxílico (96a)
A una solución de 95 (10,50 g, 27,9 mmol) en MeOH (100 ml) se la añadió una suspensión de Pd/C al 10% (5,00 g) en EtOAc (50 ml). La mezcla se agitó en H_{2} durante 48 horas, se filtró a través de celite y el disolvente se evaporó para proporcionar un sólido ceroso. Éste se disolvió en CH_{2}Cl_{2} (100 ml) y DMF (50 ml), y la solución se enfrió hasta 0ºC. Se añadieron ácido 4-amino-3-clorobenzoico (5,82 g, 27,2 mmol), DIEA (14,58 ml, 83,7 mmol), HOBT (3,77 g, 27,9 mmol) y EDC (6,68 g, 34,8 mmol) y la solución se agitó a 0ºC durante 15 min., luego a temperatura ambiente durante 24 horas. La mezcla de reacción se diluyó con EtOAc, se lavó con NaHSO_{4} (2x), NaHCO_{3} al 10% (2x) y salmuera, después se secó sobre MgSO_{4}, se filtró y se evaporó. El producto bruto se purificó por cromatografía ultrarrápida, usando CH_{2}Cl_{2}/MeOH (99/1 a 97/3%) para proveer el compuesto del título en forma de un sólido blanco (7,75 g, 70% de rendimiento). ^{1}H-NMR (500 MHz, CD_{3}OD) \delta 1,27-1,67 (m, 12H), 1,82-2,14 (m, 4H), 3,48-3,85 (m, 2H), 4,26-4,53 (m, 3H), 4,81-4,98 (m, 1H), 6,71 (d, 1H), 7,15 (m, 1H), 7,50 (dd, 1H), 7,75 (d, 1H). HPLC analítica 10,83 min. LC-MS (ES^{+}) m/e = 396,3 (MH^{+}).
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Ácido 1-[2-(4-amino-3-cloro-benzoilamino)-propionil]-pirrolidina-2-carboxílico (97a)
Se preparó a partir de 96a por tratamiento con TFA/CH_{2}Cl_{2}. Después de completar la reacción, el disolvente se eliminó a vacío y el residuo se concentró repetidamente a partir de tolueno. El residuo resultante se secó a vacío hasta un peso constante.
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Éster terc-butílico del ácido 1-[2-(4-acetilamino-3-cloro-benzoilamino)-propionil]-pirrolidina-2-carboxílico (96b)
Se preparó a partir de 95 y ácido 4-acetilamino-3-clorobenzoico de acuerdo con el método utilizado para 96a para proporcionar el compuesto del título en forma de un sólido blanco (9,18 g, 77% de rendimiento). ^{1}H-NMR (500 MHZ, CD_{3}OD) \delta 1,30-1,62 (m, 12H), 1,85-2,16 (m, 3H), 2,16-2,44 (m, 1H), 2,27 (s, 3H), 3,47-3,83 (m, 2H), 4,34-4,54 (m, 1H), 4,8,9 (m, 1H), 7,27-7,39 (m, 1H), 7,59-7,71 (m, 2H), 7,83-7,97 (m, 1H), 8,47 (d, 1H). HPLC analítica 9,43 min.
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Ácido 1-[2-(4-acetilamino-3-cloro-benzoilamino)-propionil)-pirrolidina-2-carboxílico (97b)
Se preparó a partir de 96b por tratamiento con TFA/CH_{2}Cl_{2}. Después de completar la reacción, el disolvente se eliminó a vacío y el residuo se concentró repetidamente a partir de tolueno. El residuo resultante se secó a vacío hasta un peso constante.
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Ácido 4-acetilamino-5-cloro-2-metoxi-benzoico
Se disolvió éster metílico del ácido 4-acetilamino-5-cloro-2-metoxi-benzoico (2,09 g, 8,11 mmol) en MeOH (110 ml) y se añadió solución de LiOH (25,48 mmol en 30 ml, 1:1 MeOH:H_{2}O), y la solución se agitó a temperatura ambiente durante 6 horas. El disolvente se concentró a vacío, se añadió EtOAc y la fase orgánica se lavó con HCl 0,5N, luego se extrajo con NaHC0_{3} saturado (2x). La fase acuosa se acidificó con HCl 1N HC1 hasta pH 1 y el precipitado resultante se extrajo en CH_{2}Cl_{2}. Los extractos combinados se secaron sobre Na_{2}SO_{4} anhidro, se filtraron y se evaporaron para dar el compuesto del título en forma de un sólido blanco (0,933 g, 50% de rendimiento). ^{1}H-NMR (500 MHz, CDCl_{3}) \delta 2,31 (s, 3H), 4,10 (s, 3H), 7,78-7,92 (br s, 1H), 8,17 (s, 1H), 8,45 (s, 1H). HPLC analítica 5,62 min.
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Éster terc-butílico del ácido 1-[2-(4-acetilamino-5-cloro-2-metoxi-benzoilamino)-propionil]-pirrolidina-2-carboxílico (96c)
A una solución de 95 (1,534 g, 4,07 mmol) en MeOH (40 ml) se le añadió Pd/C al 10% (650 mg) y la mezcla se agitó en H_{2} durante 2 horas. La suspensión se filtró a través de celite y se evaporó para dar un aceite amarillo. Éste se dejó reaccionar con ácido 4-acetil-5-cloro-2-metoxi benzoico siguiendo el procedimiento utilizado para la preparación de 96a a fin de proporcionar el compuesto del título (497 mg, 52% de rendimiento). ^{1}H-NMR (500 MHz, CD_{3}OD) \delta 1,46 (d, 3H), 1,49 (s, 9H), 1,80-2,01 (m, 3H), 2,19-2,40 (m, 1H), 2,22 (s, 3H), 3,58-3,72 (m, 1H), 3,78-3,89 (m, 1H), 3,98-4,09 (s, 3H), 4,31-4,45 (s, 1H), 4,78-4,95 (m, 1H), 7,89-8,10 (m, 2H). HPLC analítica 11,31 min.
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Ácido 1-[2-(4-acetilamino-5-cloro-2-metoxi-benzoilamino)-propionil]-pirrolidina-2-carboxílico (97c)
Se preparó a partir de 96c por tratamiento con TFA/CH_{2}Cl_{2}. Después de completar la reacción, el disolvente se eliminó a vacío y el residuo se concentró repetidamente a partir de tolueno. El residuo resultante se secó a vacío hasta un peso constante.
73
(5-Oxo-2-fenetiloxi-tetrahidro-furan-3-il)-amida del ácido 1-[2-(4-amino-3-cloro-benzoilamino)-propionil]-pirrolidina-2-carboxílico (98a)
A una solución de éster alílico del ácido (5-oxo-2-fenetiloxi-tetrahidro-furan-3-il)-carbámico (194 mg, 0,54 mmol) (se preparó como se describió para (40) usando alcohol fenetílico) en CH_{2}Cl_{2} anhidro (5 mL), a 0ºC, se le añadieron DMBA (196 mg, 1,26 mmol) y Pd(PPh_{3})_{4} (32 mg, 0,03 mmol). La solución se agitó durante 15 min y se añadieron una solución de 97a (se preparó a partir de 96a por tratamiento con TFA en CH_{2}Cl_{2}) (166 mg, 0,49 mmol) y DIEA (680 \mul, 3,90 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (2 mL) y luego HOBT (98 mg, 0,73 mmol) y EDC (122 mg, 0,63 mmol). La solución se agitó a 0ºC durante 15 min, luego a temperatura ambiente durante los tratamientos. El disolvente se eliminó a vacío y el residuo se disolvió en EtOAc, luego se lavó con NaHSO_{4} (2x) 0,5N, NaHCO_{3} saturado (2x) y salmuera. Se secó sobre Na_{2}sO_{4} anhidro y se evaporó para dar un sólido anaranjado que se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida, usando CH_{2}Cl_{2}/MeOH (99/1 a 97/3%) para proporcionar el compuesto del título como un sólido blanco (190 mg, 73% de rendimiento). ^{1}H-NMR (500 MHz, CD_{3}OD) \delta 1-29 (d, 0,6H), 1,41 (d, 2,4H), 1,78 (m, 1H), 2,08 (m, 3H), 2,56 (m, 1H), 2,77 (dd, 1H), 2,94 (t, 2H), 3,53 (m, 0,3H), 3,67 (m, 0,8H), 3,85 (m, 2H), 3,96-4,08 (m, 1H), 4,40 (m, 2H), 4,62 (m, 1H), 4,67-4,79 (m, 1H), 5,57 (d, 0,7H), 5,60 (d, 0,3H), 6,78 (dd, 1H), 7,21 (m, 5H), 7,58 (m, 1H), 7,79 (m, 1H), 8,26 (d, 1H). HPLC analítica 14,52 min. LC-MS (ES^{+}) m/e = 543,2 (MH^{+}).
74
(2-Benciloxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il)-amida del ácido 1-[2-(4-amino-3-cloro-benzoilamino)-propionil]-pirrolidina-2-carboxílico (98b)
Se preparó a partir del diastereómero syn de éster alílico del ácido (2-benciloxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il)-carbámico (40) y 97a, siguiendo el método utilizado para 98a. El compuesto del título se aisló en forma de un sólido amarillo pálido (720 mg, 51% de rendimiento). ^{1}H-MMR (500 MHz, CD_{3}OD) \delta 1,16 (d, 0,5H), 1,40 (d, 2,5H), 1,64-2,25 (m, 4H), 2,61 (dd, 1H), 2,79 (dd, 1H), 3,37-3,59 (m, 1H), 3,59-3,74 (m, 1H), 3,77-3,92 (m, 1H), 4,29-4,47 (m, 1H), 4,47-5,02 (m, 4H), 5,48 (s, 0,5H), 5,66 (d, 1H), 5,68 (d, 0,5H), 6,79 (d, 1H), 7,17-7,52 (m, 5H), 7,48-7,62 (m, 1H), 7,68-7,83(m, 1H). HPLC analítica 15,98 min. LC-MS (ES^{+}) m/e = 529,2 (MH^{+}).
75
(2-Benciloxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il)-amida del ácido 1-[2-(4-amino-3-cloro-benzoilamino)-propionil]-pirrolidina-2-carboxílico (98c)
Se preparó a partir de éster alílico del ácido anti-(2-benciloxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il)-carbámico (40) y 97a, siguiendo el método utilizado para 98a. El compuesto del título se aisló como un sólido blanco (186,6 mg, 46% de rendimiento). ^{1}H-NMR (500 MHz, CD_{3}OD) \delta 1,30-1,52 (m, 3H), 1,76-2,33 (m,4H), 2,41-2,59 (m, 1H), 2,90 (dd, 0,15H), 3,04 (dd, 0,85H), 3,44-3,75 (m, 1,5H), 3,82-3,95 (m, 1H), 4,27-4,42 (m, 2H), 4,42-4,56 (m, 0,5H), 4,56-4,86 (m, 4H), 5,42-5,55 (m, 1H), 6,79 (d, 1H), 7,21-7,42 (m, 4,6H), 7,54-7,63 (m, 1,4H), 7,76-7,83 (m, 0,65H), 8,60-8,68 (m, 0,35H). HPLC analítica 15,19 min. LC-MS (ES^{+}) m/e = 529,3 (MH^{+}).
76
Éster alílico del ácido 2-(etoxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il)-carbámico
Se preparó a partir de éster terc-butílico del ácido 3-aliloxicarbonilamino-4-hidroxi-butírico como se describió para (40), usando etanol. La cromatografía, usando hexano/acetato de etilo (95/5 a 80/20) proporcionó 0,94 g de éster alílico del ácido anti-2-(etoxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il)-carbámico (Rf superior), 1,96 g de diastereómero syn (Rf inferior) y 8,08 g de la mezcla de los diastereómeros (rendimiento total 60%). ^{1}H-NMR (500 MHz, CDCl_{3}) para el anti diastereómero: \delta 1,13-1,31 (m, 3H), 2,31-2,45 (m, 1H), 2,92-3,08 (m, 1H), 3,52-3,72 (m, 1H), 3,78-3,92 (m, 1H), 4,10-4,25 (m, 1H), 4,45-4,70 (m, 2H), 5,00 (bs, 1H), 5,12-5,45 (m, 3H), 5,80-5,95 (m, 1H); para el diastereómero syn 1,13-1,35 (m, 3H), 2,38-2,50 (m, 1H), 2,75-2,92 (m, 1H), 3,60-3,73 (m, 1H), 3,82-3,95 (m, 1H), 4,40-4,70 (m, 3H), 5,10-5,52 (m, 4H), 5,80-5,94 (m, 1H); LC-MS: m/z = 230 (M+H^{+}) para ambos diastereómeros.
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(2-Etoxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il)-amida del ácido 1-[2-(4-amino-3-cloro-benzoilamino)-propionil]-pirrolidina-2-carboxílico (98d)
Se preparó a partir de éster alílico del ácido (2-etoxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il)-carbámico y 97a, siguiendo el método utilizado para 98a. El compuesto del título se aisló como un sólido blanco (175 mg, 77% de rendimiento). ^{1}H-NMR (500 MHz, CD_{3}OD) \delta 1,13 (t, 0,5H), 1,23 (t, 2,5H), 1,36 (d, 0,5H), 1,44 (d, 2,5H), 1,75-2,38 (m, 4H), 2,56 (dd, 1H), 2,76 (dd, 1H), 3,45-3,97 (m, SH), 4,47 (dd, 1H), 4,59-4,67 (m, 1H), 4,74 (q, 1H), 5,55 (d, 0,2H), 5,56 (d, 0,8H), 6,75-6,82 (m, 1H), 7,56 (dd, 1H), 7,77 (d, 1H), 8,39 (d, 1H). HPLC analítica 8,17 min. LC-MS (ES^{+}) m/e = 467,4 (MH^{+}).
77
Éster alílico del ácido (2-ciclopentiloxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il)-carbámico
Se preparó a partir de éster terc-butílico del ácido 3-aliloxicarbonilamino-4-hidroxi-butírico como se describió para 40, usando ciclopentanol para dar el compuesto del título como una mezcla de diastereómeros. La cromatografía en columna ultrarrápida usando hexanos/EtOAc (90/10 a 80/20) proporcionó el diastereómero syn del compuesto del título: diastereómero syn ^{1}H NMR (500 MHz, CDCl_{3}) \delta 1,5-2,0 (m, 8H), 2,45 (dd, 1H), 2,81 (dd, 0,9H), 3,0 (dd, 0,1H), 4,31 (m, 1H), 4,59 (m, 4H), 5,23 (m, 1H), 5,32 (m, 1H), 5,45 (s, 0,1H), 5,51 (s, 0,9H), 5,92, (m, 1H) ppm; anti diastereómero ^{1}H-NMR (500 MHz, CDCl_{3}) \delta 1,50 (m, 2H), 1,67 (m, 6H), 2,36 (d, 1H), 2,8 (dd, 0,08H), 2,96 (dd, 0,92H), 4,13 (m, 1H), 4,25 (m, 1H), 4,55 (br, 2H), 5,20 (d, 1H), 5,30 (m, 2H), 5,43 (s, 0,92H), 5,5 (d, 0,08H), 5,89 (s, 1H) ppm.
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(2-Ciclopentiloxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il)-amida del ácido 1-[2-(4-amino-3-cloro-benzoilamino)-propionil]- pirrolidina-2-carboxílico (98e)
Se preparó a partir de éster alílico del ácido (2-ciclopentiloxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il)-carbámico y 97a, siguiendo el método utilizado para 98a a fin de proporcionar el compuesto del título (280 mg, 51% de rendimiento). ^{1}H-NMR (500 MHz, CD_{3}OD) \delta 1,38 (d, 0,5H), 1,44 (d, 2,5H), 1,49-2,35 (m, 12H), 2,47 (dd, 0,7H), 2,56 (dd, 0,3H), 2,75 (dd, 0,3H), 2,81-2,88 (m, 0,1H), 2,97 (dd, 0,6H), 3,47-3,76 (m, 0,2H), 3,82-3,96 (m, 1H), 4,10-4,40 (m, 2H), 4,40-4,46 (m, 1H), 5,44 (d, 0,5H), 5,50 (d, 0,2H), 5,65 (d, 0,3H), 6,79 (d, 1H), 7,54-7,64 (m, 1H), 7,78 (d, 1H), 8,21-8,31 (m, 1H). HPLC analítica 15,02, 15,34 min. LC-MS (ES^{+}) m/e = 507,3.
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78 
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Éster alílico del ácido (2-ciclohexiloxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il)-carbámico
Se preparó a partir de éster terc-butílico del ácido 3-aliloxicarbonilamino-4-hidroxi-butírico como se describió para 40, usando ciclohexanol para dar el compuesto del título como una mezcla de diastereómeros (aceite amarillo pálido) (4,62 g, 85% de rendimiento). La cromatografía en columna ultrarrápida usando hexanos/EtOAc (90/10 a 80/20) proporcionó 394 mg (7% de rendimiento) del diastereómero syn del compuesto del título. ^{1}H NMR (500 MHz, CDCl_{3}) \delta 1,11-2,09 (m, 10H), 2,35-2,61 (dd, 1H), 2,72-2,98 (dd, 1H), 3,60-3,83 (m, 1H), 4,32-4,72 (m, 3H), 5,06-5,43 (m, 2H), 5,60 (d, 1H), 5,82-6,03 (m, 1H).
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(2-Ciclohexiloxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il)-amida del ácido 1-[2-(4-acetilamino-3-cloro-benzoilamino)-propionil]-pirrolidina-2-carboxílico (98f)
Se preparó a partir de éster alílico del ácido syn-(2-ciclohexiloxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il)-carbámico y 97b, siguiendo el método empleado para 98a a fin de proveer el compuesto del título (121 mg, 33% de rendimiento). ^{1}H-NMR (500 MHz, CD_{3}OD) \delta 1,06-1,61 (m, 9H), 1,61-2,37 (m, 7H), 2,22 (s, 3H), 2,52-2,81 (m, 2H), 3,49-3,78 (m, 2H), 3,84-3,97 (m, 1H), 4,42-4,57 (m, 1H), 4,57-4,69 (m, 1H), 5,67-5,81 (m, 1H), 7,72-7,89 (m, 1H), 7,89-8,12 (m, 2H). HPLC analítica 9,84 min. LC-MS (ES^{+}) m/e = 563,3 (MH^{+}).
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79 
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(2-Ciclohexiloxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il)-amida del ácido 1-[2-(4-amino-3-cloro-benzoilamino)-propionil]-pirrolidina-2-carboxílico (98g)
Se preparó a partir de éster alílico del ácido syn-(2-ciclohexiloxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il)-carbámico y 97a, siguiendo el método utilizado para 98a a fin de dar el compuesto del título (153 mg, 47% de rendimiento). ^{1}H-NMR (500 MHz, CD_{3}OD) \delta 1,06-2,38 (m, 14H), 1,42 (d, 3H), 2,50-2,66 (m, 1H), 2,69-2,82 (dd, 1H), 3,06-3,75 (m, 2H), 3,80-3,94 (m, 1H), 4,40-4,52 (m, 1H), 4,57-4,65 (m, 1H), 4,70-4,80 (m, 1H), 5,72 (d, 1H), 6,71 (m, 1H), 7,50-7,63 (m, 1H), 7,78 (d, 0,6H), 8,42 (d, 0,4H). HPLC analítica 10,30 min. LC-MS (ES^{+}) m/e = 521,2 (MH^{+}).
80 
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(2-Etoxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il)-amida del ácido 1-[2-(4-amino-3-cloro-benzoilamino)-propionil]-pirrolidina-2-carboxílico (98h)
Se preparó a partir de éster alílico del ácido (2-etoxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il)-carbámico y 97a, siguiendo el método utilizado para 98a. El compuesto del título se aisló como un sólido blanco (195 mg, 82% de rendimiento). ^{1}H-NMR (500 MHz, CD_{3}OD) \delta 1,32-1,55 (m, 3H), 1,58-1,77 (m, 3H), 1,98-2,54 (m, 4H), 2,68-2,76 (d, 0,3H), 2,79-2,89 (m, 0,7H), 2,96-3,10 (m, 0,7H), 3,18-3,27 (dd, 0,3H), 3,72-4,18 (m, 4H), 4,46-5,12 (m, 3H), 5,60 (s, 0,4H), 5,74-5,84 (m, 0,6H), 7,03 (d, 0,8H), 7,75-7,86 (m, 1H), 8,01(d, 0,7H), 8,35 (d, 0,3H), 8,74 (d, 0,2H). HPLC analítica 8,31 min. LC-MS (ES^{+}) m/e = 467,3 (MH^{+}).
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Éster alílico del ácido [5-oxo-2-(triciclo[3.3.1.1^{0,0}]dec-2-iloxi)-tetrahidro-furan-3-il]-carbámico
Se preparó a partir de éster terc-butílico del ácido 3-aliloxicarbonilamino-4-hidroxi-butírico como se describió para 40, usando 2-adamantanol (6,21 g, 5 equivalentes) para proporcionar el compuesto del título como un aceite amarillo pálido (1,52 g, 61% de rendimiento). ^{1}H NMR (500 MHz, CDCl_{3}) \delta 1,38-2,22 (m, 14H), 2,40 (d, 0,2H), 2,53 (dd, 0,7H), 2,87 (dd, 0,7H), 2,87 (dd, 0,8H), 3,00-3,12 (m, 0,3H), 3,84-3,97 (m, 1H), 4,40-4,71 (m, 3H), 5,18-5,44 (m, 2H), 5,53-5,69 (m, 1H), 5,82-6,02 (m, 1H).
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[5-Oxo-2-(triciclo[3.3.1.1^{0,0}]dec-2-iloxi)-tetrahidro-furan-3-il] amida del ácido 1-[2-(4-Amino-3-cloro-benzoilamino)-propionil]-pirrolidina-2-carboxílico (98i)
Se preparó a partir de éster alílico del ácido [5-oxo-2-(triciclo[3.3.1.1^{0,0}]dec-2-iloxi)-tetrahidro-furan-3-il]-carbámico y 97a, siguiendo el método utilizado para 98a. El compuesto del título se aisló como un sólido blanco (76 mg, 13% de rendimiento). ^{1}H-NMR (500 MHz, CD_{3}OD) \delta 1,38-2,22 (m, 14H), 2,40 (d, 0,2H), 2,53 (dd, 0,7H), 2,87 (dd, 0,8H), 3,00-3,12 (m, 0,3H), 3,84-3,97 (m, 1H), 4,40-4,71 (m, 3H), 5,18-5,44 (m, 2H), 5,53-5,69 (m, 1H), 5,82-6,02 (m, 1H). HPLC analítica. 11,89 min. LC-MS (ES^{+}) m/e = 573,2 (MH^{+}).
82
(2-Benciloxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il)-amida del ácido 1-[2-(4-acetilamino-5-cloro-2-metoxi-benzoilamino)-propionil]-pirrolidina-2-carboxílico (98j)
Se preparó a partir de éster terc-butílico del ácido syn-{2-[2-(2-benciloxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-ilcarbamoil)-pirrolidin-1-il]-1-metil-2-oxo-etil}-carbámico y 97c, siguiendo el procedimiento empleado para 98a a fin de proporcionar el compuesto del título (222 mg, 82% de rendimiento). ^{1}H-NMR (500 MHz, CD_{3}OD) \delta 1,23 (d, 0,6H), 1,42 (d, 2,4H), 1,72-2,27 (m, 4H), 2,23 (s, 3H), 2,63 (dd, 1H), 2,77-2,88 (m, 1H), 3,43-3,52 (m, 0,5H), 3,56-3,71 (m, 1,5H), 3,74-3,85 (m, 1H), 3,98 (s, 3H), 4,38-4,50 (m, 1,5H), 4,51-4,92 (m, 4,5H), 5,63-5,76 (m, 1H), 7,23-7,40 (m, 5H), 7,97 (s, 1H), 8,45 (d, 1H), 8,69-8,80 (m, 1H) HPLC analítica 11,63 min LC-MS (ES^{+}) m/e = 601,2 (MH^{+}).
83
Síntesis de (2-etoxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il)-amida del ácido 1-[2-(4-amino-3-cloro-benzoilamino)-propionil]-pirrolidina-2-carboxílico (98k)
Se preparó a partir de éster alílico del ácido anti-(2-etoxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il)-carbámico y 97a, siguiendo el método empleado para 98a a fin de proveer 175 mg del compuesto del título (59%). ^{1}H-NMR (500 MHz, 1:1 CDCl_{3}:CD_{3}OD) \delta 1,10-1,28 (m, 3H), 1,42 (d, 0,6H), 1,46 (d, 2,4H), 1,75-2,45 (m, 4H), 2,45-2,70 (m, 1H), 2,80-3,05 (m, 1H), 3,50-3,95 (m, 4H), 4,20-4,75 (m, 3H), 4,75-4,90 (m, 1H), 5,32 (s, 0,8H), 5,38 (s, 0,2H), 6,80 (d, 1H), 7,55-7,84 (m, 2H). HPLC analítica: 10,47 min. LC-MS (ES^{+}): m/e = 467,3 (M+H*).
84
Síntesis de (2-etoxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il)-amida del ácido 1-[2-(4-amino-3,5-dicloro-benzoilamino)-propionil]-pirrolidina-2-carboxílico (98l)
Se preparó a partir de éster alílico del ácido (2-etoxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il)-carbámico y éster terc-butílico del ácido 1-[2-(4-amino-3,5-dicloro-benzoilamino)-propionil)-pirrolidina-2-carboxílico de acuerdo con el método utilizado para 98a a fin de proporcionar 158 mg del compuesto del título (54% de rendimiento). ^{1}H-NMR (500 MHz, 1:1 CDCl_{3}:CD_{3}OD) \delta 1,08-1,30 (m, 3H), 1,32-1,52 (m, 3H), 1,72-2,44 (m, 4H), 2,40-3,05 (m, 2H), 3,50-3,97 (m, 4H), 4,25-4,70 (m, 3H), 4,70-4,86 (m, 1H) , 5,33 (s, 0,4H), 5,47 (s, 0,1H), 5,56 (d, 0,4H), 5,62 (d, 0,1H), 7,50 (s, 1H), 7,80 (s, 1H). HPLC analítica: 10,84 min. LC-MS (ES^{+}): m/e = 501,2 (M+H^{+}).
85
(2-Benciloxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il)-amida del ácido 1-[2-(4-amino-3-cloro-benzoilamino)-propionil]-pirrolidina-2-carboxílico (98m)
Se preparó de acuerdo con el procedimiento utilizado para preparar 98a, usando Cbz-Ala-D-pro-OH a fin de proveer 230 mg del compuesto del título (69% de rendimiento). ^{1}H-NMR (500 MHz, 1:1 CDCl_{3}:CD_{3}OD) \delta 1,30 (d, 1,2H), 1,45 (d, 1,8H), 1,62-2,40 (m, 4H), 2,40-3,10 (m, 2H), 3,30-3,97 (m, 2H), 4,33-4,95 (m, 5H), 5,30 (s, 0,5H), 5,68 (d, 0,5H), 6,80 (d, 1H), 7,25-7,95 (m, 7H). HPLC analítica: 11,56, 11,91 min. LC-MS (ES^{+}): m/e = 529,2 (M+H^{+}).
86
(2-Benciloxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il)-amida del ácido 1-[2-(4-acetilamino-3-cloro-benzoilamino)-propionil)- pirrolidina-2-carboxílico (98n)
Se preparó a partir de alilo del ácido 97b y syn-(2-benciloxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il)-carbámico, de acuerdo con el procedimiento empleado para preparar 98a, a fin de proveer 210 mg del compuesto del título (64% rendimiento). ^{1}H-NMR (500 MHz, 1:1 CDCl_{3}:CD_{3}OD) \delta 1,33 (d, 0,6H), 1,44 (d, 2,4H), 1,68-2,40 (m, 4H), 2,26 (s, 3H), 2,55-3,05 (m, 2H), 3,40-3,90 (m, 2H), 4,20-4,95 (m, 5H), 5,68 (d, 0,8H), 5,84 (d, 0,2H), 7,15-8,30 (m, 8H). HPLC analítica: 15,67 min. LC-MS (ES^{+}): m/e = 571,1 (M+H^{+}).
87
Éster alílico del ácido (2-isopropoxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il)-carbámico
Se preparó como se describió para el compuesto 40, usando isopropanol para proveer 3,80 gramos (81% de rendimiento) del compuesto del título en forma de un aceite incoloro. ^{1}H-NMR (500 MHz, CDCl_{3}) \delta 1,10-1,35 (m, 6H), 2,32-2,60 (m, 1H), 2,82 (dd, 0,5H), 3,02 (dd, 0,5H), 3,82-4,11 (m, 1H), 4,48-4,66 (m, 3H), 5,20-5,36 (m, 2H), 5,54 (dd, 1H), 5,82-6,05 (m, 1H). LC-MS (ES^{+}): m/e = 244,2 (M+H^{+}).
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(2-Isopropoxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il)-amida del ácido 1-[2-(4-amino-3-cloro-benzoilamino)-propionil]-pirrolidina-2-carboxílico (98o)
Se preparó a partir de 97a y éster alílico del ácido (2-isopropoxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il)-carbámico de acuerdo con el procedimiento utilizado para preparar 98a, a fin de proveer 200 mg del compuesto del título (66% de rendimiento). ^{1}H-NMR (500 MHz, 1:1 CDCl_{3}:CD_{3}OD) \delta 1,05-1,35 (m, 6H), 1,35-1,50 (m, 3H), 1,70-2,45 (m, 4H), 2,45-3,05 (m, 2H), 3,55-4,10 (m, 3H), 4,15-4,88 (m, 4H), 5,48 (s, 0,4H), 5,58 (s, 0,1H), 5,64 (d, 0,4H), 5,70 (d, 0,1H), 6,78 (d, 1H), 7,58 (d, 1H), 7,80 (s, 1H). HPLC analítica: 12,19, 12,40 min. LC-MS (ES^{+}): m/e = 581,2 (M+H^{+}).
88 
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(2-Benciloxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il)-amida del ácido 1-[2-(4-acetilamino-3,5-dicloro-benzoilamino)-propionil]-pirrolidina-2-carboxílico (98p)
Se preparó a partir de éster terc-butílico del ácido 1-[2-(4-acetilamino-3,5-dicloro-benzoilamino)-propionil]-pirrolidina-2-carboxílico y éster alílico del ácido syn-(2-benciloxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il)-carbámico de acuerdo con el procedimiento utilizado para preparar 98a a fin de proporcionar 230 mg del compuesto del título (72% rendimiento). ^{1}H-NMR (500 MHz, 1:1 CDCl_{3}:CD_{3}OD) \delta 1,36 (d, 0,6H), 1,47 (d, 2,4H), 1,68-2,47 (m, 4H), 2,23 (s, 3H), 2,60-3,15 (m, 2H), 3,40-3,90 (m, 2H), 4,15-4,95 (m, 5H), 5,68 (d, 0,8H), 5,84 (d, 0,2H), 7,20-7,98 (m, 7H). HPLC analítica: 13,07 min. LC-MS (ES^{+}): m/e = 605,1 (M+H^{+}).
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89 
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2-Ciclopentiloxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il)-amida del ácido 1-[2-(4-acetilamino-3-cloro-benzoilamino)-propionil]-pirrolidina-2-carboxílico (98q)
Se preparó a partir de 97b y éster alílico del ácido (2-ciclopentiloxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il)-carbámico de acuerdo con el procedimiento utilizado para preparar 98a a fin de proporcionar 215 mg del compuesto del título (69% rendimiento). ^{1}H-NMR (500 MHZ, 1:1 CDCl_{3}:CD_{3}OD) \delta 1,35-1-90 (m, 11H), 1,90-2,35 (m, 4H), 2,24 (s, 3H), 2,40-3,10 (m, 2H), 3,50-3,95 (m, 3H), 4,15-4,90 (m, 3H), 5,44 (s, 0,55H), 5,56 (s, 0,15H), 5,64 (d, 0,22H), 5,71 (d, 0,08H), 7,70-8,25 (m, 3H). HPLC analítica: 12,13 min. LC-MS (ES^{+}): m/e = 549,2 (M+H^{+}).
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90 
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Síntesis de (2-etoxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il)-amida del ácido 1-[2-(4-acetilamino-3-cloro-benzoilamino)-propionil]-pirrolidina-2-carboxílico (98r)
Se preparó a partir de 97b y éster alílico del ácido syn-(2-etoxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il)-carbámico de acuerdo con el procedimiento empleado para preparar 98a, a fin de proveer 68 mg del compuesto del título (24%). ^{1}H-NMR (500 MHz, 1:1 CDCl_{3}:CD_{3}OD) \delta 1,13 (t, 0,6H), 1,28 (t, 2,4H), 1,38 (d, 0,6H), 1,48 (d, 2,4H), 1,75-2,40 (m, 4H), 2,22 (s, 3H), 2,55-2,88 (m, 2H), 3,50-3,92 (m, 4H), 4,40-4,90 (m, 3H), 5,57 (d, 0,8H), 5,61 (d, 0,2H), 7,60-8,20 (m, 3H). HPLC analítica: 8,64 min. LC-MS (ES^{+}): m/e = 509,2 (M+H^{+}).
91
Preparación de éster alílico del ácido (2-ciclopentilmetoxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il)-carbámico
Se preparó a partir de éster terc-butílico del ácido 3-aliloxicarbonilamino-4-hidroxi-butírico como se describió para el compuesto 40, usando ciclopentilmetanol (6,5 ml, 60 mmol) a fin de proveer 2,98 gramos (52% de rendimiento total) del compuesto del título como una mezcla de epímeros. La purificación proporcionó 0,97 gramos (17% de rendimiento) de 4(S),5(R) en forma de un aceite incoloro. ^{1}H NMR (500 MHz, CDCl_{3}) \delta 1,19 (m, 2H), 1,54 (m, 4H), 1,71 (m, 2H), 2,16 (m, 1H), 2,44 (dd, J = 17,2, 10,4 Hz, 1H), 2,82 (dd, J = 17,2, 8,4 Hz, 1H), 3,44 (dd, J = 9,3, 7,2 Hz, 1H), 3,71 (dd, J = 9,3, 7,2 Hz, 1H), 4,57 (m, 3H), 5,32 (m, 3H), 5,41 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 5,91 (ddt, J = 17,1, 10,4, 5 Hz, 1H) ppm. LC-MS. (ES+): m/e = 284.
También se aisló la mezcla de epímeros (0,66 gramo, 11% de rendimiento) y el epímero 4(S),5(S) (1,35 gramos, 24% de rendimiento) en forma de un sólido ceroso. ^{1}H-NMR (500 MHz, CDCl_{3}) \delta 1,20 (m, 2H), 1,54 (m, 4H), 1,69 (m, 2H), 2,10 (m, 1H), 2,37 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 2,97 (dd, J = 18,0, 7,6 Hz, 1H), 3,42 (dd, J = 7,3, 1,7 Hz, 1H), 3,49 (m, 2H), 3,64 (dd, J = 9,0, 7,3 Hz, 1H), 4,19 (br, 1H), 4,55 (m, 2H), 5,25 (m, 2H), 5,36 (s, 1H), 5,87 (m, 1H) ppm. LC-MS (ES+): m/e = 284 (M+H).
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(2-Ciclopentilmetoxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il)-amida del ácido 1-[2-(4-amino-3-cloro-benzoilamino)-propionil]-pirrolidina-2-carboxílico (98s)
Se preparó a partir de 97a y éster alílico del ácido syn-(2-ciclopentilmetoxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il)-carbámico de acuerdo con el procedimiento utilizado para preparar 98a, a fin de proveer 195 mg del compuesto del título (51% de rendimiento). ^{1}H-NMR (500 MHz, 1:1 CDCl_{3}:CD_{3}OD) \delta 1,15-1,90 (m, 11H), 1,90-2,40 (m, 5H), 2,55-2,78 (m, 2H), 3,50-3,90 (m, 4H), 4,38-4,92 (m, 3H), 5,53 (d, 0,8H), 5,57 (d, 0,2H), 6,78 (d, 1H), 7,50-8,15 (m, 2H), HPLC analítica: 10,48 min. LC-MS (ES^{+}): m/e = 521,2 (M+H^{+}).
92
Éster alílico del ácido (5-oxo-2-(3-fenil-propoxi)-tetrahidro-furan-3-il)-carbámico
Se preparó a partir de éster terc-butílico del ácido 3-aliloxicarbonilamino-4-hidroxi-butírico como se describió para el compuesto 40, usando 3-fenilpropanol a fin de obtener 1,15 gramos (32% de rendimiento) del compuesto del título como un aceite incoloro. ^{1}H-HMR (500 MHz, CDCl_{3}) \delta 1,82-2,05 (m, 2H), 2,36 (dd, 1H), 2,68 (m, 2H), 2,82 {dd, 1H), 3,55-3,65 (m, 1H), 3,82-3,92 (m, 1H), 4,48-4,72 (m, 3H), 5,12-5,59 (m, 3H), 5,82-6,03 (m, 1H), 7,11-7,45 (m, 5H). HPLC analítica: 9,08 min. LC-MS (ES^{+}): m/e = 320,2 (M+H^{+}).
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(5-Oxo-2-(3-fenil-propoxil)-tetrahidro-furan-3-il)-amida del ácido 1-[2-(4-amino-3-cloro-benzoilamino)-propionil]-pirrolidina-2-carboxílico (98t)
Se preparó a partir de 97b y éster alílico del ácido syn-(5-oxo-2-(3-fenil-propoxil)-tetrahidro-furan-3-il)-carbámico de acuerdo con el procedimiento utilizado para preparar 98a, a fin de obtener 200 mg del compuesto del título (57% de rendimiento). ^{1}H-NMR (500 MHZ, 1:1 CDCl_{3}:CD_{3}OD) \delta 1,34 (d, 0,6H), 1,44 (d, 2,4H), 1,75-2,40 (m, 6H), 2,50-2,95 (m, 4H), 3,47-3,95 (m, 4H), 4,38-4,82 (m, 3H), 5,52 (d, 0,8H), 5,56 (d, 0,2H), 6,75-8,25 (m, 8H). HPLC analítica: 10,79 min. LC-MS (ES^{+}): m/e = 557,2 (M+H^{+}).
93
Síntesis de 2-ciclopentilmetoxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il)-amida del ácido 1-[2-(4-acetilamino-3-cloro-benzoilamino)-propionil]-pirrolidina-2-carboxílico (98u)
Se preparó a partir de 97b y éster alílico del ácido syn-(2-ciclopentilmetoxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il)-carbámico de acuerdo con el procedimiento utilizado para preparar 98a, a fin de proveer 215 mg del compuesto del título (67% de rendimiento). ^{1}H-NMR (500 MHz, 1:1 CDCl_{3}:CD_{3}OD) \delta 1,38 (d, 0,6H), 1,47 (d, 2,4H), 1,11-1,88 (m, 8H), 1,92-2,40 (m, 5H), 2,24 (s, 3H), 2,53-2,86 (m, 2H), 3,30-3,90 (m, 4H), 4,38-4,89 (m, 3H), 5,53 (d, 0,8H), 5,60 (d, 0,2H), 7,68-8,22 (m, 3H). HPLC analítica: 9,90 min. LC-MS (ES^{+}): m/e = 563,3 (M+H^{+}).
94
(5-Oxo-2-(3-fenil-propoxil)-tetrahidro-furan-3-il)-amida del ácido 1-[2-(4-acetilamino-3-cloro-benzoilamino)-propionil]-pirrolidina-2-carboxílico (98v)
Se preparó a partir de éster terc-butílico del ácido 1-[2-(4-acetilamino-3-cloro-benzoilamino)-propionil]-pirrolidina-2-carboxílico y éster alílico del ácido syn-(5-oxo-2-(3-fenil-propoxil)-tetrahidro-furan-3-il)-carbámico de acuerdo con el procedimiento utilizado para preparar 98a, a fin de obtener 238 mg del compuesto del título (75% rendimiento). ^{1}H-NMR (500 MHZ, 1:1 CDCl_{3}:CD_{3}OD) \delta 1,33 (d, 0,6H), 1,56 (d, 2,4H), 1,78-2,45 (m, 6H), 2,27 (s, 3H), 2,53-2,97 (m, 4H), 3,53-3,94 (m, 4H), 4,47-4,86 (m, 3H), 5,53 (d, 0,8H), 5,62 (d, 0,2H), 7,11-8,26 (m, 8H). HPLC analítica: 10,27 min. LC-MS (ES^{+}): m/e = 599,2 (M+H^{+}).
95
(2-Benciloxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il)-amida del ácido 1-[2-(4-amino-3-trifluorometil-benzoilamino)-propionil]-pirrolidina-2-carboxílico (98w)
Se preparó a partir de éster terc-butílico del ácido {2-[2-(2-benciloxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-ilcarbamoil)-pirrolidin-1-il]-l-metil-2-oxo-etil}-carbámico y ácido 4-amino-3-trifluorometil-benzoico de acuerdo con el procedimiento utilizado para preparar 98a para proporcionar 56 mg del compuesto del título (48% de rendimiento). ^{1}H-NMR (500 MHz, 1:1 CDCl_{3}:CD_{3}OD) \delta 1,20-1,55 (m, 3H), 1,75-2,50 (m, 4H), 2,50-3,10 (m, 2H), 3,50-4,00 (m, 2H), 4,30-5,00 (m, 5H), 5,42 (s, 0,4H), 5,51 (s, 0,2H), 5,62 (d, 0,3H), 5,78 (d, 0,1H), 6,84 (d, 1H), 7,20-8,15 (m, 7H). HPLC analítica: 14,90, 15,20 min. LC-MS (ES^{+}): m/e = 563,2 (M+H^{+}).
96
(2-Benciloxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il)-amida del ácido 1-[2-(3-cloro-4-dimetilamino-benzoilamino)-propionil]- pirrolidina-2-carboxílico (98x)
Se preparó a partir de éter terc-butílico del ácido {2-[2-(2-benciloxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-ilcarbmoil)-pirrolidin-1-il]-1-metil-2-oxo-etil}-carbámico y ácido 3-cloro-4-dimetilamino-benzoico de acuerdo con el procedimiento utilizado para preparar 98a, a fin de obtener 82 mg del compuesto del título (44% de rendimiento). ^{1}H-NMR (500 MHz, 1:1 CDCl_{3}:CD_{3}OD) \delta 1,18-1,53 (m, 3H), 1,70-2,40 (m, 4H), 2,55-3,10 (m, 2H), 2,84 (s, 6H), 3,45-3,94 (m, 2H), 4,25-4,95 (m, 5H), 5,46 (s, 0,3H), 5,51 (s, 0,2H), 5,63 (d, 0,4H), 5,73 (d, 0,1H), 7,05 (d, 1H), 7,15-7,95 (m, 7H), HPLC analítica: 11,85, 12,19 min. LC-MS (ES^{+}): m/e = 557,3 (M+H^{+}).
97
(2-Benciloxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il)-amida del ácido 1-[2-(4-dimetilamino-3,5-difluoro-benzoilamino)-propionil]-pirrolidina-2-carboxílico (98y)
Se preparó a partir de éster terc-butílico del ácido {2-[2-(2-benciloxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-ilcarbmoil)-pirrolidin-1-il]-1-metil-2-oxo-etil}-carbámico y ácido 4-dimetilamino-3,5-dicloro-benzoico de acuerdo con el procedimiento utilizado para preparar 98a, a fin de proveer 106 mg del compuesto del título (65% rendimiento). ^{1}H-NMR (500 MHz, 1:1 CDCl_{3}:CD_{3}OD) \delta 1,10-1,55 (m, 3H), 1,75-2,30 (m, 4H), 2,45-3,15 (m, 2H), 2,84 (s, 6H), 3,40-3,95 (m, 2H), 4,15-4,95 (m, 5H), 5,47 (s, 0,35H), 5,54 (s, 0,15H), 5,67 (d, 0,4H), 5,77 (d, 0,1H), 7,20-7,70 (m, 7H). HPLC analítica: 12,21, 12,51 min. LC-MS (ES^{+}): m/e = 559,2 (M+H^{+}).
98
(2-Benciloxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il)-amida del ácido 1-[2-(4-amino-2,3,5,6-tetrafluoro-benzoilamino)-propionil]-pirrolidina-2-carboxílico (98z)
Se preparó a partir de éster terc-butílico del ácido {2-[2-(2-benciloxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-ilcarbmoil)-pirrolidin-1-il]-1-metil-2-oxo-etil}-carbámico y ácido 4-amino-2,3,5,6-tetrafluoro-benzoico de acuerdo con el procedimiento utilizado para preparar 98a, a fin de proveer 58 mg del compuesto del título (73% de rendimiento). ^{1}H-NMR (500 MHz, 1:1 CDCl_{3}:CD_{3}OD) \delta 1,30-1,50 (m, 3H), 1,62-2,35 (m, 4H), 2,45-3,12 (m, 2H), 3,50-3,90 (m, 2H), 4,20-4,95 (m, 5H), 5,42 (s, 0,4H), 5,52 (s, 0,1H), 5,64 (d, 0,4H), 5,82 (d, 0,1H), 7,25-7,65 (m, 5H). HPLC analítica: 16,56, 16,90 min. LC-MS (ES^{+}): m/e = 567,2 (M+H^{+}).
99 
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(2-Benciloxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il)-amida del ácido l-{2-[3-cloro-4-(2,2-dimetilpropionilamino)-benzoilami- no]-propionil}-pirrolidina-2-carboxílico (98aa)
A una suspensión de 98b (100 mg, 0,19 mmol) y poli (4-vinilpiridina) (200 mg) se le añadió cloruro de pivaloílo (70 \muL, 0,57 mmol). La suspensión resultante se agitó durante una noche a temperatura ambiente y se filtró y diluyó con EtOAc (25 ml). La capa orgánica se lavó con NaHCO_{3} al 10% (2 X 25 ml), NaCl saturado (1 x 25 ml), se secó (MgSO_{4}) y se evaporó hasta sequedad para proporcionar 98 mg del compuesto del título (85% de rendimiento) después de la cromatografía. ^{1}H-NMR (500 MHz, 1:1 CDCl_{3}:CD_{3}OD) \delta 1,10-1,55 (m, 3H), 1,38 (s, 9H), 1,65-2,40 (m, 4H), 2,60-3,10 (m, 2H), 3,46-3,88 (m, 2H), 4,20-4,95 (m, 5H), 5,62 (d, 0,8H), 5,78 (d, 0,2H), 7,15-8,30 (m, 8H). HPLC analítica: 11,82 min. LC-MS (ES^{+}): m/e = 613,2 (M+H^{+}).
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100 
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(2-Benciloxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il)-amida del ácido 1-[2-(3-cloro-4-propionilamino)-benzoilamino)-propionil]-pirrolidina-2-carboxílico (98ab)
Se preparó a partir de 98b y cloruro de propionilo de acuerdo con el procedimiento utilizado para preparar 98aa, a fin de proveer 104 mg del compuesto del título (95% de rendimiento). ^{1}H-NMR (500 MHz, 1:1 CDCl_{3}: CD_{3}OD) \delta 1,16 (t, 0,6H), 1,18 (d, 0, 6H), 1,27 (t, 2,4H), 1,38 (d, 2,4H), 1,72-2,35 (m, 4H), 2,45-2,58 (m, 2H), 2,58-3,05 (m, 2H), 3,45-3,85 (m, 2H), 4,20-4,88 (m, 5H), 5,64 (d, 0,8H), 5,76 (d, 0,2H), 7,20-8,35 (m, 8H). HPLC analítica: 9,89 min. LC-MS (ES^{+}): m/e = 585,2 (M+H^{-}).
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101
(2-Benciloxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il)-amida del ácido 1-[2-(3-cloro-4-fenilacetilamino)-benzoilamino)-propionil]-pirrolidina-2-carboxílico (98ac)
Se preparó a partir de 98b y cloruro de fenilacetilo de acuerdo con el procedimiento empleado para preparar 98aa, a fin de obtener 85 mg del compuesto del título (77% de rendimiento). ^{1}H-NMR (500 MHz, 1:1 CDCl_{3}: CD_{3}OD) \delta 1,18 (d, 0,6H), 1,40 (d, 2,4H), 1,72-2,38 (m, 4H), 2,58-3,05 (m, 2H), 3,46-3,78 (m, 2H), 3,85 (s, 2H), 4,18-4,92 (m, 5H), 5,63 (d, 0,8H), 5,75 (d, 0,2H), 7,15-8,34 (m, 13H). HPLC analítica: 11,63 min. LC-MS (ES^{+}): m/e = 647,2 (M+H^{+}).
102 
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(2-Benciloxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il)-amida del ácido 1[2-(3-cloro-4-metil-butirilamino)-benzoilamino)-propionil]-pirrolidina-2-carboxílico (98ad)
Se preparó a partir de 98b y cloruro de isovalerilo de acuerdo con el procedimiento utilizado para preparar 98aa, a fin de proveer 60 mg del compuesto del título (58% de rendimiento). ^{1}H-NMR (500 MHz, 1:1 CDCl_{3}:CD_{3}OD) \delta 1,07 (d, 5H), 1,15 (d, 0,8H), 1,27 (d, 1H), 1,45 (d, 2,2H), 1,67-2,30 (m, 5H), 2,34 (d, 2H), 2,58-3,05 (m, 2H), 3,48-3,88 (m, 2H), 4,10-4,98 (m, 5H), 5,68 (d, 0,7H), 5,78 (m, 0,3H), 7,18-8,33 (m, 8H). HPLC analítica: 10,74 min. LC-MS (ES^{+}): m/e = 613,2 (M+H^{+}).
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103 
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(2-Etoxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il)-amida del ácido 1-[2-(4-metoxi-3,5-dimetil-benzoilamino)-propionil]-pirrolidina-2-carboxílico (98ae)
Se preparó a partir de éster terc-butílico del ácido 1-[2-(4-metoxi-3,5-dimetil-benzoilamino)-propionil]-pirrolidina-2-carboxílico y éster alílico del ácido syn-(2-etoxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il)-carbámico de acuerdo con el procedimiento empleado para preparar 98a, a fin de proveer 174 mg (81% de rendimiento) del compuesto del título. ^{1}H-NMR (500 MHz, CDCl_{3}): \delta 1,04 (t, 0,45H), 1,27 (t, 2,55H), 1,34-1,45 (m, 3H), 1,95-2,45 (m, 10H), 2,78-2,84 (m, H), 3,60-3,90 (m, 8H), 4,50-4,70 (m, 2H), 4,90-4,94 (m, H), 5,45 (d, 0,85H), 5,61 (d, 0,15H), 6,99 (d, H), 7,15 (d, H), 7,45 (s, 2H); tiempo de retención en HPLC analítica: 10,09 min; LC-MS: m/z = 476 (M+H^{+}).
104 
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(2-Etoxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il)-amida del ácido 1-[2-(4-metoxi-3,5-dimetil-benzoilamino)-propionil]-pirrolidina-2-carboxílico (98af)
Se preparó a partir de éster terc-butílico del ácido 1-[2-(4-metoxi-3,5-dimetil-benzoilamino)-propionil]-pirrolidina-2-carboxílico y éster alílico del ácido anti-(2-etoxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il)-carbámico de acuerdo con el procedimiento empleado para preparar 98a, a fin de proporcionar 168 mg (77% de rendimiento) del compuesto del título. ^{1}H-HMR (500 MHz, CDCl_{3}): \delta 1,10-1,35 (m, 3H), 1,35-1,60 (m, 3H), 1,90-2,45 (m, 10H), 2,60-3,00 (m, H), 3,55-3,95 (m, 8H), 4,15-4,60 (m, 2H), 4,83-5,00 (m, H), 5,29 (s, H), 6,95-7,06 (m, H), 7,50 (s, 2H), 7,92 (d, H); tiempo de retención en HPLC analítica: 10,14 min; LC-MS: m/z = 476 (M+H^{+}).
105
(2-Benciloxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il)-amida del ácido 1-[2-(4-metoxi-3,5-dimetil-benzoilamino)-propionil]-pirrolidina-2-carboxílico (98ag)
Se preparó a partir de éster terc-butílico del ácido 1-[2-(4-metoxi-3,5-dimetil-benzoilamino)-propionil]-pirrolidina-2-carboxílico y éster alílico del ácido syn-(2-benciloxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il)-carbámico (40) de acuerdo con el procedimiento utilizado para preparar 98a, a fin de obtener 406 mg (rendimiento de 71%) del compuesto del título. ^{1}H-NMR (500 MHz, CDCl_{3}): \delta 1,09 (d, 0,6H), 1,35 (m, 2,4H), 1,90-2,20 (m, 3H), 2,22-2,50 (m, 10H), 2,84-2,90 (m, H), 3,52-3,62 (m, 1,6H), 3,65-3,80 (m, 3,4H), 4,10-4,40 (m, H), 4,50-4,75 (m, 3H), 4,82-4,95 (m, 2H), 5,54 (d, 0,8H), 5,80 (d, 0,2H), 6,87 (d, H), 7,10-7,40 (m, 6H), 7,45 (s, 2H); tiempo de retención en HPLC analítica: 16,71 min^{1}; LC-MS: m/z = 538 (M+H^{+}).
106
{2-Benciloxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il)-amida del ácido 1-[2-(4-aliloxi-3,5-dimetil-benzoilamino)-propionil]-pirrolidina-2-carboxílico (98ah)
Se preparó a partir de éster terc-butílico del ácido 1-[2-(4-aliloxi-3,5-dimetil-benzoilamino)-propionil]-pirrolidina-2-carboxílico y 40 de acuerdo con el procedimiento utilizado para preparar 98a, a fin de obtener 264 mg (rendimiento 46%) del compuesto del título. ^{1}H-NMR (500 MHz, CDCl_{3}): \delta 1,09-1,43 (m, 3H), 1,90-2,20 (m, 3H), 2,20-2,38 (m, 7H), 2,38-2,52 (m, H), 2,80-2,95 (m, H), 3,52-3,67 (m, H), 3,70-3,80 (m, H), 4,10-4,40 (m, 2H), 4,40-4,95 (m, 5H), 5,26-5,55 (m, 3H), 6,00-6,14 (m, H), 6,87 (d, H), 7,10-7,70 (m, 8H); tiempo de retención en HPLC analítica: 18,56 y 18,92 min^{1}; LC-MS: m/z = 564 (M+H^{+}).
107
Éster alílico del ácido {2-[1R-(2S-isopropil-5R-metil-ciclohexiloxi)]-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il}-carbámico
Se preparó a partir de éster terc-butílico del ácido 3-aliloxicarbonilamino-4-hidroxi-butírico como se describió para 40, usando (1R, 2S, 5R)-(-)-mentol para proveer 0,32 g del diastereómero syn (Rf inferior) del compuesto del título y 4,25 g de la mezcla de diastereómeros anti/syn (rendimiento total de 67%). ^{1}H-NMR (500 MHz, CDCl_{3}): \delta 0,70-1,05 (m, 13H), 1,20-1,47 (m, 2H), 1,60-1,80 (m, 2H), 1,94-2,20 (m, 2H), 2,35-2,50 (m, H), 2,82-3,04 (m, H), 3,40-3,61 (m, H), 4,43-4,70 (m, 3H), 5,15-5,35 (m, 2H), 5,48-5,61 (m, H), 5,90-5,94 (m, H); para el diastereómero syn 0,70-1,05 (m, 13H), 1,20-1,47 (m, 2H), 1,60-1,80 (m, 2H), 1,94-2,18 (m, 2H), 2,40-2,50 (m, H), 2,82-2,92 (m, H), 3,54-3,61 (m, H), 4,45-4,70 (m, 3H), 5,18-5,35 (m, 2H), 5,58-5,61 (m, H), 5,90-5,93 (m, H); LC-MS: m/z = 340 (M+H^{+}) para la mezcla de diastereómeros anti/syn.
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Ácido 4-benciloxi-3,5-dimetil-benzoico
Se preparó por el método utilizado para sintetizar ácido 4-aliloxi-3,5-dimetil-benzoico a fin de proporcionar 2,43 g (rendimiento de 56%) del compuesto del título. ^{1}H-NMR (500 MHz, CDCl_{3}): \delta 4,87 (s, 2H), 7,36-7,48 (m, 5H), 7,92 (s, 2H); LC-MS: m/z = 255 (M-H^{+}).
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{2-[1R-(2S-Isopropil-5R-metil-ciclohexiloxi)]-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il}-amida del ácido 1-[2-(4-benciloxi-3,5-dimetil-benzoilamino)-propionil]-pirrolidina-2-carboxílico (98ai)
Se preparó a partir de éster terc-butílico del ácido 1-[2-(4-benciloxi-3,5-dimetil-benzoilamino)-propionil]-pirrolidina-2-carboxílico y éster alílico del ácido {2-[1R-(2S-Isopropil-5R-metil-ciclohexiloxi)]-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il}-carbámico de acuerdo con el procedimiento utilizado para preparar 98a, a fin de proveer 130 mg (rendimiento 39%) del compuesto del título. ^{1}H-NMR (500 MHz, CDCl_{3}): \delta 0,45-1,10 (m, 12H), 1,15-1,90 (m, 8H), 1,90-2,45 (m, 12H), 2,80-2,84 (m, H), 3,50-3,85 (m, 3H), 4,45-4,70 (m, 2H), 4,80-4,95 (m, 3H), 5,62 (d, H), 7,05 (d, H), 7,17 (d, H), 7,30-7,60 (m, 7H), 7,62-7,75 (m, H); tiempo de retención en HPLC analítica: 15,90 y 16,08 min; LC-MS: m/z = 662 (M+H^{+}).
108
{2-[1R-(2S-Isopropil-5R-metil-ciclohexiloxi)]-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il}-amida del ácido 1-[2-(4-hidroxi-3,5-dimetil-benzoilamino)-propionil]-pirrolidina-2-carboxílico (98aj)
Se agitó una solución de {2-[1R-(2S-isopropil-5R-metil-ciclohexiloxi)]-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il}-amida del ácido 1-[2-(4-benciloxi-3,5-dimetil-benzoilamino)-propionil]-pirrolidina-2-carboxílico (110 mg, 0,17 mmol) en acetato de etilo (2 ml) con paladio al 10% sobre carbono (20 mg) en atmósfera de hidrógeno durante 24 horas, luego se filtró a través de Celite y se evaporó a vacío. El residuo resultante se purificó por cromatografía, usando CH_{2}Cl_{2}/metanol (99/1 a 96/4) para proporcionar 58 mg del compuesto del título. ^{1}H-NMR (500 MHz, CDCl_{3}): \delta 0,70-1,00 (m, 10H), 1,20-1,80 (m, 10H), 1,90-2,40 (m, 11H), 2,82-2,86 (m, H), 3,57-3,78 (m, 3H), 4,55-4,67 (m, 2H), 4,90-4,94 (m, H), 5,29 (s, H), 5,62 (d, H), 6,90 (d, H), 7,14 (d, H), 7,42 (s, 2H); tiempo de retención en HPLC analítica: 12,84 y 13,05 min; LC-MS: m/z = 572 (M+H^{+}).
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109 
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(2-Benciloxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il)-amida del ácido 1-[2-(4-hidroxi-3,5-dimetil-benzoilamino)-propionil]-pirrolidina-2-carboxílico (98ak)
Se trató una solución de 98ah (230 mg, 0,41 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (10 ml) con DMBA (65 mg, 0,42 mmol) y Pd
(PPh_{3})_{4} (50 mg) a temperatura ambiente durante 20 horas. La mezcla se concentró hasta sequedad a vacío y se purificó por cromatografía ultrarrápida usando CH_{2}Cl_{2}/metanol (99,5/0,5 a 97/3) para dar 181 mg del compuesto del título. ^{1}H-NMR (500 MHz, CDCl_{3}): \delta 1,08 (d, 0,75H), 1,20-1,35 (m, 2,25H), 1,70-2,50 (m, 12H), 2,80-2,90 (m, H), 3,50-3,65 (m, H), 3,70-3,80 (m, H), 4,10-4,25 (m, H), 4,35-4,98 (m, 3H), 5,53 (d, 0,75H), 5,85 (d, 0,25H), 6,81 (d, H), 7,13-7,60 (m, 8H); tiempo de retención en HPLC analítica: 10,38 y 10,56 min; LC-MS: m/z = 524 (M+H^{+}).
110 
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(2-Benciloxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il)-amida del ácido 1-[2-(4-dimetilamino-benzoilamino)-propionil]-pirrolidina-2-carboxílico (98al)
Se preparó a partir de éster terc-butílico del ácido 1-[2-(4-dimetilamino-benzoilamino)-propionil]-pirrolidina-2-carboxílico y éster alílico del ácido syn-(2-benciloxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il)-carbámico de acuerdo con el procedimiento utilizado para preparar 98a a fin de obtener 60 mg (45% de rendimiento). ^{1}H-NMR (500 MHz, CDCl_{3}): \delta 1,04 (d, 0,75H), 1,35 (d, 2,25H), 1,80-2,50 (m, 5H), 2,75-3,20 (m, 8H), 3,45-3,75 (m, 2H), 4,05-4,20 (m, 0,5H), 4,30-4,80 (m, 3,5H), 4,80-4,95 (m, 1,5H), 5,52 (d, H), 5,75-6,00 (m, 0,5H), 6,60-6,90 (m, 3H), 7,10-7,50 (m, 4H), 7,50-7,80 (m, 2H); tiempo de retención en HPLC analítica: 10,46 min; LC-MS: m/z = 523 (M+H^{+}).
111
{2R-[1H-(2S-Isopropil-5R-metil-ciclohexiloxi)]-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il}-amida del ácido 1-[2-(4-amino-3-cloro-benzoilamino)-propionil]-pirrolidina-2-carboxílico (98am)
Se preparó a partir de éster terc-butílico del ácido 1-[2-(4-amino-3-cloro-benzoilamino)-propionil]-pirrolidina-2-carboxílico (97a) y éster alílico del ácido syn-{2-[1R-(2S-isopropil-5R-metil-ciclohexiloxi)]-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il}-carbámico de acuerdo con el procedimiento utilizado para preparar 98a, a fin de proporcionar 103 mg (rendimiento 67%) del compuesto del título. ^{1}H-NMR (500 MHz, CDCl_{3}): \delta 0,70-1,10 (m, 12H), 1,20-1,50 (m, 5H), 1,50-1,85 (m, 2H), 1,90-2,30 (m, 5H), 2,75-2,85 (m, H), 3,50-3,70 (m, 2H), 3,70-3,82 (m, H), 4,20-4,65 (m, 4H), 4,80-4,95 (m, H), 5,61 (d, H), 6,70-6,73 (m, H), 6,95 (d, H), 7,15 (d, H), 7,49-7,51 (m, H), 7,73 (s, H); tiempo de retención en HPLC analítica: 12,88 min; LC-MS: m/z = 577 (M+H^{+}).
112
Éster alílico del ácido {2-[1S-(2R-isopropil-5S-ilmetil-ciclohexiloxi)]-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il}-carbámico
Se preparó a partir de éster terc-butílico del ácido 3-aliloxicarbonilamino-4-hidroxi-butírico como se describió para 40, usando (1S,2R,5S)-(+)-mentol para proporcionar 855 mg del anti diastereómero (Rf superior) del compuesto del título, 503 mg del diastereómero syn (Rf inferior) y 459 mg de la mezcla de diastereómeros anti/syn (rendimiento total 66%). ^{1}H-NMR (500 KHz, CDCl_{3}) anti diastereómero: \delta 0,74-1,00 (m, 12H), 1,20-1,45 (m, 2H), 1,58-1,72 (m, 2H), 1,98-2,12 (m, 2H), 2,18-2,40 (m, H), 2,98-3,03 (m, H), 3,49-3,54 (m, H), 4,17 (br, H), 4,59 (br, 2H), 4,97 (br, H), 5,22-5,33 (m, 2H), 5,58 (s, H), 5,87-5,93 (m, H); para el diastereómero syn 0,75-1,02 (m, 12H), 1,25-1,45 (m, 2H), 1,57-1,70 (m, 2H), 2,00-2,16 (m, 2H), 2,40-2,52 (m, H), 2,78-2,90 (m, H), 3,40-3,50 (m, H), 4,58 (br, 2H), 5,24-5,35 (m, 2H), 5,51-5,52 (d, H), 5,85-5,98 (m, H); LC-MS: m/z = 340 (M+H^{+}) para ambos diastereómeros.
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{2R-[1S-(2R-Isopropil-5S-metil-ciclohexiloxi)]-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il}-amida del ácido 1-[2-{4-amino-3-cloro-benzoilamino)-propionil]-pirrolidina-2-carboxílico (98an)
Se preparó a partir de 97a y éster alílico del ácido syn-{2-[1S-(2R-isopropil-5S-metil-ciclohexiloxi)]-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il}-carbámico de acuerdo con el procedimiento utilizado para preparar 98a a fin de obtener 88 mg (50% de rendimiento) del compuesto del título. ^{1}H-NMR (500 MHz, CDCl_{3}): \delta 0,70-1,10 (m, 12H), 1,20-1,50 (m, 14H), 1,50-1,70 (br, 2H), 1,90-2,25 (m, 4H), 2,27-2,37 (m, H), 2,40-2,50 (m, H), 2,75-2,79 (m, H), 3,35-3,80 (m, 3H), 4,20-4,57 (m, 3H), 4,60-4,70 (m, H), 4,88-4,92 (m, H), 5,53 (d, H), 6,71-6,75 (m, H), 6,90 (d, H), 7,20 (d, H), 7,50-7,53 (m, H), 7,75 (d, H); tiempo de retención en HPLC analítica: 13,20 min; LC-MS: m/z = 577 (M+H^{+}).
113
Éster alílico del ácido (2-ciclohexilmetoxi-5-oxo-tetrahidro- furan-3-il)-carbámico
Se preparó a partir de éster terc-butílico del ácido 3-aliloxicarbonilamino-4-hidroxi-butírico como se describió para 40, usando ciclohexilmetanol para proporcionar 1,04 g (RF superior) (35% de rendimiento) del anti diastereómero del compuesto del título y 1,295 g (Rf inferior) (44% de rendimiento) del diastereómero syn. ^{1}H-NMR (500 MHz, CDCl_{3}) para el anti diastereómero: \delta 0,90-0,96 (m, 2H), 1,10-1,30 (m, 3H), 1,55-1,85 (m, 6H), 2,37-2,41 (d, H), 2,97-3,03 (m, H), 3,34-3,38 (m, H), 3,58-3,62 (m, H), 4,55-4,70 (m, 2H), 4,70-4,73 (m, H), 5,03 (bs, H), 5,22-5,37 (m, 3H), 5,87-5,93 (m, H); para el diastereómero syn 0,91-0,97 (m, 2H), 1,10-1,31 (m, 3H), 1,56-1,90 (m, 7H), 2,44-2,48 (m, H), 2,81-2,87 (m, H), 3,35-3,39 (m, H), 3,63-3,67 (m, H), 4,53-4,70 (m, 3H), 5,20-5,50 (m, 3H), 5,89-5,95 (m, H); LC-MS: m/z = 298 (M+H^{+}) para ambos diastereómeros.
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(2-Ciclohexil]metoxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il)-amida del ácido 1-[2-(4-acetilamino-3-cloro-benzoilamino)-propionil]-pirrolidina-2-carboxílico (98ao)
Se preparó a partir de 97b y éster alílico del ácido syn-(2-ciclohexilmetoxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il)-carbámico de acuerdo con el procedimiento utilizado para preparar 98a, a fin de proveer 212 mg (64% de rendimiento) del compuesto del título. ^{1}H-NMR (500 MHZ, CDCl_{3}): \delta 0,70-1,30 (m, 5H), 1,30-1,85 (m, 9H), 1,85-2,60 (m, 8H), 2,75-3,00 (m, H), 3,10-3,80 (m, 4H), 4,30-4,95 (m, 3H), 5,42 (d, 0,85H), 5,62 (d, 0,15H), 6,87 (d, 0,15H), 7,08 (d, 0,85H), 7,25 (d, H), 7,60-7,90 (m, 3H), 8,08 (d, 0,15H), 8,50 (d, 0,85H); tiempo de retención en HPLC analítica: 11,81 min; LC-MS: m/z = 577 (M+H^{+}).
114
{2R-[1S-(2R-Isopropil-5S-metil-ciclohexiloxi)]-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il}-amida del ácido 1-[2-(4-Acetilamino-3-cloro-benzoilamino)-propionil]-pirrolidina-2-carboxílico (98ap)
Se preparó a partir de 97b y éster alílico del ácido syn-{2-[1S-{2R-isopropil-5S-metil-ciclohexiloxi)3-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il}-carbámico de acuerdo con el procedimiento utilizado para preparar 98a, a fin de obtener 223 mg (63% de rendimiento) del compuesto del título. ^{1}H-NMR (500 MHz, CDCl_{3}): \delta 0,70-1,15 (m, 12H), 1,20-1,85 (m, 8H), 1,85-2,60 (m, 9H), 2,74-2,88 (m, H), 3,35-3,85 (m, 3H), 4,40-4,55 (m, H), 4,65-4,78 (m, H), 4,88-4,91 (m, H), 5,53 (d, H), 7,00-7,25 (m, 2H), 7,60-7,90 (m, 3H), 8,50 (d, H); tiempo de retención en HPLC analítica: 13,31 min; LC-MS: m/z = 619 (M+H^{+}).
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115 
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(2-Ciclohexilmetoxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il)-amida del ácido 1-[2-(4-amino-3-cloro-benzoilamino)-propionil]-pirrolidina-2-carboxílico (98aq)
Se preparó a partir de 97a y éster alílico del ácido syn-(2-ciclohexilmetoxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il)-carbámico de acuerdo con el procedimiento utilizado para preparar 98a, a fin de proporcionar 113 mg (56% de rendimiento) del compuesto del título. ^{1}H-NMR (500 MHz, CDCl_{3}): \delta 0,70-1,35 (m, 5H), 1,35-1,90 (m, 8H), 1,90-2,20 (m, 3H), 2,30-2,60 (m, H), 2,80-3,00 (m, H), 3,15-3,80 (m, 4H), 4,28-4,75 (m, 4H), 4,89-4,93 (m, H), 5,42 (d, H), 6,74 (d, H), 6,87 (d, H), 7,30 (d, H), 7,51-7,53 (m, H), 7,74 (d, H); tiempo de retención en HPLC analítica: 12,02 min; LC-MS: m/z = 535 (M+H^{+}).
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116 
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Éster alílico del ácido (2-butoxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il)-carbámico
Se preparó a partir de éster terc-butílico del ácido 3-aliloxicarbonilamino-4-hidroxi-butírico como se describió para 40, usando n-butanol para proveer 878 mg (29% de rendimiento) del compuesto del título (313 mg del anti diastereómero, 260 mg del diastereómero syn y 305 mg de la mezcla). ^{1}H-NMR (500 MHz, CDCl_{3}) para el anti diastereómero: \delta (Rf superior) 0,89-0,96 (t, 3H), 1,32-1,40 (m, 2H), 1,54-1,63 (m, 2H), 2,37-2,41 (d, H), 2,98-3,04 (q, H), 3,55-3,60 (m, H), 3,77-3,82 (m, H), 4,19-4,22 (m, H), 4,58 (br, 2H), 5,03 (br, H), 5,23-5,40 (m, 3H), 5,87-5,93 (M, H), para el diastereómero syn (Rf inferior) 0,91-0,95 (t, 3H), 1,34-1,39 (m, 2H), 1,56-1,63 (m, 2H), 2,42-2,50 (m, H), 2,83-2,87 (m, H), 4,07-4,11 (t, H), 4,45-4,50 (m, 0,5H), 4,51-4,70 (m, 2,5H), 5,23-5,35 (m, 2H), 5,42-5,43 (d, H), 5,80-5,95 (m, H); LC-MS: m/z = 258 (M+H^{+}) para ambos diastereómeros.
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(2-Butoxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il)-amida del ácido 1-[2-(4-amino-3-cloro-benzoilamino)-propionil]-pirrolidina-2-carboxílico (98ar)
Se preparó a partir de 97a y éster alílico del ácido syn-(2-butoxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il)-carbámico de acuerdo con el procedimiento utilizado para preparar 98a, a fin de proveer 118 mg (48% de rendimiento) del compuesto del título como un diastereómero syn. ^{1}H-HMR (500 MHz, CDCl_{3}): \delta 0,80-1,02 (m, 2H), 1,35-1,51 (m, 5H), 1,51-1,70 (m, 2H), 1,90-2,27 (m, 3H), 2,30-2,46 (m, H), 2,80-2,90 (m, H), 3,55-3,94 (m, 4H), 4,30-4,75 (m, 4H), 4,90-5,00 (m, H), 5,44-5,46 (m, H), 6,73-6,80 (m, H), 6,80-6,93 (m, H), 7,16-7,25 (m, H), 7,49-7,60 (m, H), 7,70-7,84 (m, H); tiempo de retención en HPLC analítica: 9,71 min; LC-MS: m/z = 495 (M+H^{+}).
117
Éster alílico del ácido (2-isobutoxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il)-carbámico
Se preparó a partir de éster terc-butílico del ácido 3-aliloxicarbonilamino-4-hidroxi-butírico como se describió para 40, usando isobutanol a fin de proveer 190 mg (rendimiento 7,3%) del compuesto del título como un anti diastereómero y 290 mg (rendimiento 11%) del diastereómero syn. ^{1}H-NMR (500 MHz, CDCl_{3}) para el anti diastereómero: \delta (Rf superior) 0,85-1,05 (m, 6H), 1,82-1,98 (m, H), 2,37-2,42 (d, H), 2,98-3,04 (m, H), 3,31-3,35 (m, H), 3,55-3,58 (m, H), 4,20-4,30 (t, H), 4,58 (br, 2H), 5,07 (br, H), 5,22-5,43 (m, 3H), 5,84-5,96 (m, H), para el diastereómero syn (Rf inferior) 0,85-1,05 (m, 6H), 1,88-1,95 (m, H), 2,40-2,51 (m, H), 2,83-2,90 (m, H), 3,33-3,36 (m, H), 3,61-3,65 (m, H), 3,87-3,88 (d, H), 4,40-4,68 (m, 3H), 5,20-5,40 (m, 2H), 5,42-5,43 (d, H), 5,80-5,97 (m, H); LC-MS: m/z = 258 (M+H^{+}) para ambos diastereómeros.
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(2-Isobutoxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il)-amida del ácido 1-[2-(4-amino-3-cloro-benzoilamino)-propionil]-pirrolidina-2-carboxílico (98as)
Se preparó a partir de 97a y éster alílico del ácido syn-(2-isobutoxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il)-carbámico de acuerdo con el procedimiento utilizado para preparar 98a, a fin de obtener 93 mg (38% de rendimiento) del compuesto del título. ^{1}H-NMR (500 MHz, CDCl_{3}): \delta 0,74-0,76 (t, 0,6H), 0,80-1,00 (m, 5,4H), 1,40-1,50 (m, 3H), 1,90-2,22 (m, 3H), 2,33-2,45 (m, H), 2,80-2,90 (m, H), 3,32-3,38 (m, H), 3,55-3,80 (m, 3H), 4,38 (br, H), 4,50-4,60 (m, H), 4,70-4,80 (m, H), 4,90-5,00 (m, H), 5,42-5,45 (m, H), 6,74-6,76 (d, H), 6,86-6,88 (d, H), 7,31-7,33 (d, H), 7,51-7,53 (m, H), 7,74-7,75 (d, H); tiempo de retención en HPLC analítica: 9,63 y 9,80 min; LC-MS: m/z = 495 (M+H^{+}).
118
Éster alílico del ácido [2-(indan-2-il)oxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il]-carbámico
Se preparó a partir de éster terc-butílico del ácido 3-aliloxicarbonilamino-4-hidroxi-butírico (5,2 gramos, 20 mmol) como se describió para 40, usando 2-indanol (8,05 gramos, 60 mmol) para dar 4,10 gramos (65% de rendimiento) del compuesto del título como una mezcla de epímeros. La purificación proporcionó 1,76 gramos (28% de rendimiento) del epímero 4(S),5(R) como un aceite amarillo. ^{1}H NMR (500 MHz, CDCl_{3}) \delta 2,42 (dd, J = 17,2, 10,5 Hz, 1H), 2,79 (dd, J = 17,2, 8,4 Hz, 1H), 2,99 (dd, J = 16,7, 4,1 Hz, 1H), 3,04 (dd, J = 16,7, 4,1 Hz, 1H), 3,22 (dd, J = 17,2, 6,6 Hz, 1H), 3,26 (dd, J = 17,2, 6,6 Hz, 1H), 4,53 (m, 3H), 4,70 (m, 1H), 5,20 (m, 2H), 5,60 (d, J = 5,3 Hz, 1H), 5,87 (m, 1H), 7,17 (m, 4H) ppm. LC-MS (ES+): m/e = 318 (M+H). HPLC analítica (columna C18): 17,094 min.
También se aisló la muestra de epímeros (0,75 gramo, 12% de rendimiento), y el epímero 4(S),5(S) (1,59 gramos, 25%) en forma de un sólido blanco. ^{1}H-NMR (500 MHz, CDCl_{3}) \delta 2,38 (d, J = 17,9 Hz, 1H), 3,0 (m, 3H), 3,22 (m, 2H), 4,13 (m, 1H), 4,58 (m, 2H), 4,68 (m, 2H), 4,98 (br 5, 1H), 5,26 (m, 1H), 5,57 (s, 1H), 5,88 (ddt, J = 18,0, 11,1, 5,4 Hz, 1H), 7,20 (m, 4H) ppm. LC-MS (ES+): m/e = 318 (M+H). HPLC analítica (columna C18):17,025 (5,5%), 17,325 (94,5%) min.
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[2-(Indan-2-iloxi)-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il]-amida del ácido 1-[2-(4-amino-3-cloro-benzoilamino)-propionil]- pirrolidina-2-carboxílico (98at)
Se preparó a partir de 97a y éster alílico del ácido [2-(indanol-2-il]oxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il)-carbámico de acuerdo con el procedimiento utilizado para preparar 98a, a fin de obtener el compuesto del título como una mezcla 71:29 de epímeros en forma de un sólido blanquecino (0,20 g, 58% de rendimiento). ^{1}H-NMR (500 MHz, CDCl_{3}) \delta 1,0-1,5 (m, 3H), 1,6-2,3 (m, 4H), 2,42 (m, 1H), 2,6-3,4 (m, 6H), 3,5-4,1 (m, 3H), 4,2-4,9 (m, 4H), 5,65 (d, J = 5,0 Hz, 0,80H), 5,8 (m, 0,07H), 5,85 (d, J = 5,0 Hz, 0,13H), 6,8-7,3 (m, 6H), 7,4-7,9 (m, 3H) ppm. HPLC analítica (columna C18) 16,035 (71,4%), 16,476 (28,6%) min. LC-MS (ES+): m/e = 555 (M+H).
119
[2-(Indan-2-iloxi)-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il]-amida del ácido 1-[2-(4-acetilamino-3-cloro-benzoilamino)-propionil]-pirrolidina-2-carboxílico (98au)
Se preparó a partir de 97b y éster alílico del ácido (2-(indanol-2-il]oxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il)-carbámico de acuerdo con el procedimiento utilizado para preparar 98a, a fin de proporcionar el compuesto del título como una mezcla 76:24 de epímeros en forma de un sólido blanquecino (0,22 g, 57% de rendimiento). ^{1}H-NMR (500 MHz, CDCl_{3}) \delta 1,08 (d, J = 6,9 Hz, 0,4H), 1,26 (d, J = 6,9 Hz, 0,6H), 1,35 (d, J = 6,9 Hz, 2H), 1,8-2,3 (m, 3H), 2,28 (s, 2H), 2,29 (s, 1H), 2,4 (m, 1H), 2,8 (m, 1H), 3,10 (m, 2H), 3,27 (m, 2H), 3,58 (m, 2H), 3,69 (m, 1H), 4,5-4,9 (m, 4H), 5,65 (d, J = 5,3 Hz, 0,68H), 5,84 (d, J = 5,3 Hz, 0,18H), 6,38 (br, 0,14H), 6,9-7,7 (m, 6H), 7,6-7,9 (m, 3H), 8,33 (br d, J = 6,8 Hz, 0,18H), 8,51 (br d, J = 8,0 Hz, 0,82H) ppm. HPLC analítica (columna C18) 15,596 (76,2%), 15,932 (23,8%) min. LC-MS (ES+): m/e = 597 (M+H).
120
(2-Ciclopentiloxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il)-amida del ácido 1-[2-(4-amino-3-cloro-benzoilamino)-propionil]- pirrolidina-2-carboxílico (98av)
Se preparó a partir de 97a y éster alílico del ácido syn-(2-ciclopentiloxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il)-carbámico de acuerdo con el procedimiento utilizado para preparar 98a, a fin de proveer el compuesto del título como un sólido blanquecino (0,19 g, 59% de rendimiento). ^{1}H-NMR (500 MHz, CDCl_{3}) \delta 1,2-2,4 (m, 15H), 2,4-3,1 (m, 2H), 3,6-3,9 (m, 2H), 4,2-4,4 (m, 2H), 4,5-5,0 (m, 4H), 5,40 (d, J = 5,0 Hz, 0,35H), 5,55 (d, J = 5,0 Hz, 0,65H), 6,8-8,2 (m, 5H) ppm. HPLC analítica (columna C18) 14,065 min. LC-MS (ES+): m/e = 507 (M+H).
121
(2-Benciloxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il)-amida del ácido 1-[2-(3,5-Dicloro-4-hidroxi-benzoilamino)-propionil)- pirrolidina-2-carboxílico (98aw)
Se preparó a partir de éster terc-butílico del ácido 1-[2-(4-aliloxi-3,5-dimetil-benzoilamino)-propionil]-pirrolidina-2-carboxílico y syn-40 de acuerdo con el procedimiento utilizado para preparar 98a, a fin de obtener el compuesto del título en forma de un sólido amarillo pálido (1,087 g, 64% de rendimiento). ^{1}H-NMR (500 MHz, CDCl_{3}) \delta 1,09 (d, J = 6,9 Hz, 0,6H), 1,33 (d, J = 6,9 Hz, 2,4H), 1,96 (m, 1H), 2,03 (m, 1H), 2,10 (m, 1H), 2,28 (m, 0,8H), 2,40 (dd, J = 17,3, 10,2 Hz, 0,8H), 2,56 (m, 0,2H), 2,85 (dd, J = 17,3, 0,5 Hz, 0,8H), 3,09 (dd, J = 17,7, 10,2 Hz, 0,2H), 3,57 (m, 1H), 3,73 (dt, J = 9,2, 7,9 Hz, 0,8H), 4,09 (m, 0,2H), 4,21 (d, J = 7,9 Hz, 0,2H), 4,44 (d, J = 9,8 Hz, 0,2H), 4,55 (dd, J = 8,0, 3,0 Hz, 0,8H), 4,62 (d, J = 11,6 Hz, 1H), 4,70 (m, 1H), 4,80 (m, 1H), 4,89 (d, J = 11,6 Hz, 0,8H), 5,52 (d, J = 5,2 Hz, 0,8H), 5,82 (d, J = 5,2 Hz, 0,2H), 6,51 (br, 0,2H), 6,62 (br, 0,8H), 7,0-7,4 (m, 7H), 7,43 (s, 0,4H), 7,66 (d, J = 1,0 Hz, 1,6H) ppm. HPLC analítica (columna C18) 10,135 min. LC-MS (ES+): m/e = 564, 566 (6:4)
(M+H).
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122 
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(2-Ciclopentiloxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il)-amida del ácido 1-[2-(4-amino-3-cloro-benzoilamino)-propionil]- pirrolidina-2-carboxílico (98ax)
Se preparó de acuerdo con el procedimiento utilizado para preparar (98av), usando anti-2-ciclopentiloxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il)-amida para proveer el compuesto del título en forma de un sólido blanquecino (0,24 g, 74% de rendimiento). ^{1}H-NMR (500 MHz, CDCl_{3}) \delta 1,41 (d, J = 6,5 Hz, 3H), 1,7 (m, 7H), 1,98 (br, 2H), 2,13 (br, 2H), 2,27 (m, 1H), 2,69 (m, 1H), 2,86 (dd, J = 18,0, 6,8 Hz, 0,7H), 2,98 (dd, J = 18,3, 8,2 Hz, 0,3H), 3,60 (br, 1,4H), 3,77 (br, 0,6H), 4,1-4,6 (m, 5H), 4,82 (m, 1H), 5,27 (m, 0,65H), 5,51 (d, J = 5,3 Hz, 0,05H), 5,59 (br s, 0,3H), 6,76 (br, 1H), 7,00 (br, 1H), 7,49 (br, 1H), 7,74 (br, 1H), 7,89 (br, 1H) ppm. HPLC analítica (columna C18) 9,756 min. LC-MS (ES+): m/e = 507 (M+H).
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(2-Etoxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il)-amida del ácido 1-[2-(4-Acetilamino-3-cloro-benzoilamino)-propionil]-pirrolidina-2-carboxílico (98ay)
Se preparó a partir de éster alílico del ácido (2-etoxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il)-carbámico y 97b, siguiendo el método empleado para 98a. El compuesto del título se aisló en forma de un sólido blanco (51 mg, 18% de rendimiento). ^{1}H-NMR (500 MHz, 1:1 CDCl_{3}:CD3OD) \delta 1,08-1,35 (m, 3H), 1,35-1,55 (m, 3H), 1,75-2,44 (m, 4H), 2,26 (s, 3H), 2,44-3,07 (m, 2H), 3,48-3,97 (m, 2H), 4,18-4,92 (m, 5H), 5,32 (d, 0,4H), 5,47 (d, 0,1H), 5,58 (d, 0,4H), 5,64 (d, 0,1H), 7,70-8,35 (m, 3H). HPLC analítica 10,37, 10,54 min. LC-MS (ES^{+}) m/e = 509,2 (M+H^{+}).
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Éster alílico del ácido [2-(2-cloro-etoxi)-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il]-carbámico
Se preparó a partir de éster terc-butílico del ácido 3-aliloxicarbonilamino-4-hidroxi-butírico (5,2 g, 20 mmol) como se describió para 40, usando cloroetanol (4,05 mL, 60 mmol) a fin de proveer 1,84 g (35% de rendimiento) del compuesto del título como una mezcla de epímeros. Para el anti-diastereómero: ^{1}H-NMR (500 MHz, CDCl_{3}) \delta 2,42 (dd, J = 18,1 Hz, 1H), 3,00 (dd, J = 18,1, 7,8 Hz, 1H), 3,63 (m, 2H), 3,85 (m, 1H), 4,02 (m, 1H), 4,23 (m, 1H), 4,57(br s, 2H), 5,17 (br s, 1H), 5,22 (d, H = 11,5 Hz, 1H), 5,29 (d, J = 16,8 Hz, 1H), 5,44 (s, 1H), 5,89 (m, 1H) ppm; LC-MS (ES+) m/e = 264 (M+H). Para el diastereómero syn: ^{1}H-NMR (500 MHz, CDCl_{3}) 5 2,47 (dd, J = 17,3, 10,7 Hz, 1H), 2,83 (dd, J-17,3, 8,4 Hz, 1H), 3,65 (m, 2H), 3,83 (m, 1H), 4,11 (m, 1H), 4,57 (m, 3H), 5,22 (d, H-10,4 Hz, 1H), 5,30 (d, J = 17,2 Hz, 1H), 5,33, (m, 1H), 5,47 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 5,89 (ddt, J-17,1, 11,0, 5,4 Hz, 1H) ppm; LC-MS (ES+) m/e = 264 (M+H).
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Éster alílico del ácido [2-(2-morfolin-4-il-etoxi)-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il]-carbámico
Se preparó a partir de éster alílico del ácido [2-(2-cloro-etoxi)-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il]-carbámico por reacción con morfolina (2 eq) y KI (1 eq) en DMF.
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[2-(2-Morfolin-4-il-etoxi)-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il]-amida del ácido 1-[2-(4-amino-3-cloro-benzoilamino)-propionil]-pirrolidina-2-carboxílico (98az)
Se preparó a partir de 97a y éster alílico del ácido y syn-{2-(2-morfolin-4-il-etoxi)-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il]-carbámico, siguiendo el método empleado para 98a.
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Éster alílico del ácido [2-(4-cloro-benciloxi)-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il]-carbámico
Se preparó a partir de éster terc-butílico del ácido 3-aliloxicarbonilamino-4-hidroxi-butírico como se describió para 40, usando alcohol 4-clorobencílico a fin de proveer el compuesto del título en forma de un sólido blanco. Anti-diastereómero: HPLC (columna C18) 10,924 min; ^{1}H-HMR (500 MHz, CDCl_{3}) \delta 2,41 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 3,02 (dd, J = 18,1, 7,8 Hz, 1H), 4,25 (br, 1H), 4,56 (m, 2H), 4,58 (d, J = 11,7 Hz, 1H), 4,79 (d, J = 11,7 Hz, 1H), 4,99 (br, 1H), 5,22 (dd, J = 10,4, 1,1 Hz, 1H), 5,28 (dd, J = 17,2, 1,3 Hz, 1H), 5,44 (s, 1H), 5,86 (m, 1H), 7,25 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,32 (d, J = 8,4 Hz, 2H) ppm; LC-MS (ES+) m/e = 326 (M+H); diastereómero syn: HPLC (columna C18) 10,780 min; ^{1}H-NMR (500 MHz, CDCl_{3}) \delta 2,47 (dd, J = 17,3, 10,5 Hz, 1H), 2,85 (dd, J = 17,3, 8,4 HZ, 1H), 4,55 (m, 3H), 4,58 (d, J = 11,7 Hz, 1H), 4,84 (d, J = 11,7 Hz, 1H), 5,23 (dd, H = 10,4, 1,1 Hz, 1H), 5,30 (d, J = 16,6 Hz, 1H), 5,49 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 5,89 (ddt, J = 17,1, 11,0, 5,4 Hz, 1H), 7,23 (d, J = 8,3 Hz, 2H), 7,31 (d, J = 8,3 Hz, 2H) ppm; LC-MS (ES+) m/e = 326 (M+H).
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[2-(4-Cloro-benciloxi)-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il]-amida del ácido 1-[2-(4-amino-3-cloro-benzoilamino)-propionil]-pirrolidina-2-carboxílico (98ba)
Se preparó a partir de 97a y éster alílico del ácido syn-[2-(4-cloro-benciloxi)-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il]-carbámico, siguiendo el método empleado para 98a, a fin de obtener 154 mg (65% de rendimiento) del compuesto del título en forma de un sólido rosado pálido. HPLC (columna C18) 10,597 min; ^{1}H-NMR (500 MHz, CDCl_{3}) \delta 1,14 (d, J = 6,8 Hz, 0,75H), 1,34, (d, J = 6,8 Hz, 2,25H), 1,6 (br, 0,25H), 1,91 (m, 1H), 2,03 (m, 1H), 2,10 (m, 1H), 2,29 (m, 0,75H), 2,40 (dd, J = 17,3, 10,3 Hz, 0,75H), 2,51 (m, 0,25H), 2,82 (dd, J = 17,3, 8,5 Hz, 0,75H), 3,08 (dd, J = 17,9, 10,9 Hz, 0,25H), 3,58 (m, 1H), 3,72 (dd, J = 16,5, 8,7 Hz, 0,75H), 4,10 (m, 0,25H), 4,22 (d, J = 8,0 Hz, 0,25H), 4,39 (d, J = 10,8 Hz, 0,25H), 4,54 (dd, J = 9,1, 2,9 Hz, 0,75H), 4,60 (d, J = 11,9 Hz, 0,75H), 4,68 (m, 1H), 4,85 (d, J = 11,7 Hz, 0,75H), 4,86 (m, 1H), 5,49 (d, J = 5,2 Hz, 0,75H), 5,81 (d, J = 5,2 Hz, 0,25H), 6,2 (br, 0,25H), 6,74 (m, 2H), 7,05 (d, J-8,5 Hz, 0,5H), 7,17 (d, J = 8,4 Hz, 0,5H), 7,30 (m, 3,25H), 7,48 (dd, J = 8,4, 2,0 Hz, 0,75H), 7,56 (d, J = 1,9 Hz, 0,25H), 7,73 (d, J = 1,9 Hz, 0,75H), 8,42 (d, J = 5,7 Hz, 0,25H) ppm; LC-MS (ES+) m/e = 563, 565 (M+H).
126
[2-(4-Cloro-benciloxi)-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il]-amida del ácido 1-[2-(4-acetilamino-3-cloro-benzoilamino)-propionil]-pirrolidina-2-carboxílico (98bb)
Se preparó a partir de 97b y éster alílico del ácido syn-(2-(4-cloro-benciloxi)-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il]-carbámico de acuerdo con el procedimiento utilizado para preparar 98a, a fin de proveer 165 mg (64% de rendimiento) del compuesto del título en forma de un sólido amarillo pálido. HPLC (columna C18) 10,491 min; ^{1}H-NMR (500 MHz, CDCl_{3}) \delta 1,16 (d, J = 6,8 Hz, 0,6H), 1,35, (d, J = 6,8 Hz, 2,4H), 1,94 (m, 1H), 2,04 (m, 1H), 2,10 (m, 1H), 2,25 (s, 3H), 2,28 (m, 1H), 2,40 (dd, J = 17,3, 10,4 Hz, 0,8H), 2,53 (m, 0,2H), 2,84 (dd, J = 17,3, 8,5 Hz, 0,8H), 3,02 (dd, J = 17,5, 10,5 Hz, 0,2H), 3,58 (m, 1H), 3,72 (ddd, J = 17,2, 8,3, 8,3 Hz, 0,8H), 4,13 (m, 0,2H), 4,22 (d, J = 8,2 Hz, 0,2H), 4,40 (d, J = 10,9 Hz, 0,2H), 4,54 (dd, J = 8,1, 3,0 HZ, 0,8H), 4,60 (d, J = 11,8 Hz, 0,8H), 4,69 (m, 1H), 4,85 (d, J = 11,8 Hz, 0,8H), 4,87 (m, 1H), 5,49 (d, J = 5,2 Hz, 0,8H), 5,80 (d, J = 5,2 Hz, 0,2H), 6,47 (br, 0,2H), 6,95 (d, J = 8,3 Hz, 0,8H), 7,05 (d, J = 8,3 Hz, 0,4H), 7,18 (d, J = 8,3 Hz, 0,4H), 7,29 (m, 3,2H), 7,49 (dd, J = 8,6, 1,9 Hz, 0,2H), 7,63 (dd, J = 8,6, 1,9 Hz, 0,8H), 7,74 (d, J = 1,9 Hz, 1H), 7,85 (d, J = 1,9 Hz, 0,8H), 8,25 (d, J = 6,4 Hz, 0,2H), 8,51 (m, 0,8H) ppm; LC-MS (ES+) m/e = 605, 607 (M+H).
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Esquema XX
127
Éster terc-butílico del ácido {2-[2-(2-etoxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-ilcarbamoil)-pirrolidin-1-il]-1-metil-2-oxo-etil} carbámico (109)
Se preparó a partir del éster alílico del ácido (2-etoxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-ilo) 74, siguiendo el método empleado en la síntesis de 75 para dar el compuesto del título en forma de un sólido amarillo pálido (660 mg, 73% de rendimiento). ^{1}H-NMR (500 MHz, CD_{3}OD) \delta 1,14-1,36 (m, 6H), 1,42 (s, 9H), 1,75-2,29 (m, 4H), 2,48 (dd, 0,5H), 2,58 (dd, 0,5H), 2,72-2,85 (m, 0,5H), 2,99 (dd, 0,5H), 3,43-3,91 (m, 4H), 4,07-4,52 (m, 2,5H), 4,53-4,72 (m, 0,5H), 5,37 (s, 0,5H), 5,57 (d. 0,5H). HPLC analítica (mezcla de 2 diastereómeros) 7,92, 8,14 min. LC-MS (ES+) m/e = 414,3 (MH^{+}).
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(2-Etoxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il)-amida del ácido 1-[2-(4-aliloxi-3,5-dicloro-benzoilamino)-propionil]-pirrolidina-2-carboxílico (110)
Se preparó a partir de 109 y ácido 4-aliloxi-3/5-dicloro-benzoico, siguiendo el método utilizado en la síntesis de 82 para dar el compuesto del título en forma de un sólido blanco (228 mg, 65%). ^{1}H-NMR (500 MHz, CD_{3}OD) \delta 1,10-1,30 (m, 4H), 1,32-1,52 (m, 3H), 1,63-2,31 (m, 4H), 2,41-2,50 (d, 0,5H), 2,52-2,61 (dd, 0,5H), 2,67-2,81 (m, 0,5H), 2,94-3,05 (dd, 0,5H), 3,47-3,96 (m, 4H), 4,21-4,81 (m, 5H), 5,22-5,32 (m, 1H), 5,35-5,49 (m, 1,5H), 5,55-5,63 (m, 0,5H), 6,06-6,21 (m, 1H), 7,90 (s, 2H). HPLC analítica (mezcla de 2 diastereómeros) 12,56 min. LC-MS (ES+) m/e = 542,3 (MH^{+}).
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(2-Etoxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il)-amida del ácido 1-[2-(3,5-dicloro-4-hidroxi-benzoilamino)-propionil]-pirrolidina-2-carboxílico (111)
A una solución de 110 (194 mg, 0,36 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (5 ml) se le añadieron DMBA (70,7 mg, 0,45 mmol) y Pd(PPh3)4 (50,3 mg, 0,044 mmol) a 0ºC. La solución se calentó hasta temperatura ambiente después de 15 min, se agitó durante 2 horas, se diluyó con CH_{2}Cl_{2}, luego se lavó con agua (2x) y salmuera. La capa orgánica se secó sobre Na_{2}SO_{4} anhidro y se evaporó para dar el producto bruto. La cromatografía ultrarrápida usando CH_{2}Cl_{2}/MeOH (99/1 a 95/5%) proporcionó el compuesto del título (138,6 mg, 77% de rendimiento). ^{1}H-NMR (500 MHz, CD_{3}OD) \delta 1,13-1,31 (m, 3H), 1,35-1,49 (m, 3H), 1,84-2,35 (m, 4H), 2,43-3,05 (m, 2H), 3,48-3,93 (m, 4H), 4,22-4,80 (m, 3H), 5,38 (d, 0,4H), 5,46 (s, 0,1H), 5,55-5,61 (m, 0,5H), 7,76-7,94 (m, 2H). HPLC analítica 8,70 min. LC-MS (ES^{+}) m/e = 502,2
(MH^{+}).
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Esquema XXIX
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128 
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Éster terc-butílico del ácido 2-(2-benciloxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-ilcarbamoil)-pirrolidina-1-carboxílico (118)
Se preparó a partir de 40 (1,16, g, 4,0 mmol) y Boc-Pro-OH de acuerdo con el procedimiento utilizado para preparar 100 (Esquema XVIII) a fin de proveer 1,53 g (94% de rendimiento) del compuesto del título en forma de un sólido blanco. ^{1}H-NMR (500 MHz, CDCl_{3}): \delta 1,61 (br, 9H), 1:88 (br, 2H), 2,00-2,50 (m, 3H), 2,80-3,10 (m, H), 3,20-3,60 (m, 2H), 4,05-4,45 (m, 1,5H), 4,58-4,80 (m, 1,5H), 4,83-4,98 (m, H), 5,43-5,53 (m, H), 7,26-7,45 (m, 5H), 7,60-7,80 (d, H); HPLC analítica: 11,32 min; LC-MS: m/e = 405 (M+H^{+}).
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Ácido 2-fenilaminopropiónico (119)
Se agitó una mezcla de alanina (356 mg, 4,0 mmol), yodobenceno (816 mg, 4,0 mmol), trans-diclorobis(tri-o-tolilfosfina) paladio (II) (Pd[P(o-Tol)_{3}]_{2}Cl_{2}} (160 mg, 0,2 mmol), yoduro de cobre (I) (40 mg, 0,2 mmol), K_{2}CO_{3} (552 mg, 4,0 mmol), cloruro de benciltrietilamonio (160 mg, 0,8 mmol), trietilamina (1,6 ml) y agua (0,8 ml) en DMF (8 ml) en atmósfera de nitrógeno a 100ºC durante 20 horas. La mezcla se enfrió hasta temperatura ambiente, se diluyó con acetato de etilo (50 ml) y agua (50 ml), se acidificó con HCl 6N hasta pH = 2 a 3. La capa acuosa se extrajo con acetato de etilo (50 ml x 4). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua, salmuera, se secaron sobre Na_{2}SO_{4} anhidro, se filtraron y se evaporaron a vacío para dar un aceite rojo. La cromatografía ultrarrápida usando hexano/acetato de etilo/ácido acético (95/5/0,5 a 80/20/0,5) proporcionó 300 mg (45% de rendimiento) del compuesto del título en forma de un sólido rosado. ^{1}H-NMR (500 MHz, CDCl_{3}/CD_{3}OD = 0,5 ml/3 gotas): \delta 1,45 (d, 3H), 4,02-4,15 (m, H), 6,57-6,70 (m, 3H), 7,11-7,25 (m, 2H); HPLC analítica: 6,10 min. LC-MS: m/e = 166
(M-H^{+}).
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(2-Benciloxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il)-amida del ácido 1-(2-Fenilamino-propionil)-pirrolidina-2-carboxílico (120a y 120b)
Se trató una solución de 118 (405 mg, 1,0 mmol) con TFA (2 ml) en CH_{2}Cl_{2} (2 ml) durante una hora. La solución de reacción se evaporó a vacío y se azeotropó con CH_{2}Cl_{2} cuatro veces para dar (2-benciloxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il)-amida del ácido pirrolidina-2-carboxílico en forma de un sólido amarillo pálido. ^{1}H-NMR (500 MHz, CDCl_{3}): \delta 1,87-2,15 (m, 4H), 2,30-2,70 (m, 2H), 2,80-3,08 (m, H), 3,45 (br, 2H), 4,35-4,98 (m, 3H), 5,30-5,56 (m, H), 7,10-7,60 (m, 5H); HPLC analítica: 7,78/8,20 min.; LC-MS: m/e = 305 (M+H^{+}).
Se trató ácido 2-fenilaminopropiónico (119) (300 mg, 1,8 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (10 ml) con HOBT (270 mg, 2,0 mmol) y EDC (2,1 g, 11 mmol) a 0ºC durante 10 min. Se añadió diisopropiletilamina (2 ml) seguida de una solución de (2-benciloxi-5-oxo-tetrahidro-furan-3-il)-amida del ácido pirrolidina-2-carboxílico en CH_{2}Cl_{2} (10 ml). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 4 horas, se diluyó con CH_{2}Cl_{2} (40 ml), se lavó con agua y después con salmuera. La capa orgánica se secó sobre Na_{2}SO_{4} anhidro, se filtró y se evaporó a vacío para dar un sólido amarillo pálido. La cromatografía ultrarrápida, usando CH_{2}Cl_{2}/metanol (99/1 a 98/2), proporcionó 151 mg (33% de rendimiento) del anti diastereómero del compuesto del título (120a) y 129 mg (29% de rendimiento) del diastereómero syn (120b) en forma de un sólido blanco. ^{1}H-NMR (500 MHz, CDCl_{3}) para el anti diastereómero: \delta 1,37-1,41 (m, 3H), 1,50-2,45 (m, 4H), 2,60-2,70 (m, 0,3H), 2,89-2,94 (m, 0,7H), 3,40-3,80 (m, 2H), 4,10-4,50 (m, 3H), 4,50-4,90 (m, 3H), 5,26 (s, 0,3H), 5,38 (s, 0,7H), 6,45-6,60 (m, 2,3H), 6,65-6,80 (m, H), 7,10-7,20 (m, 2,5H), 7,25-7,50 (m, 4,5H), 7,53-7,70 (m, 0,7H), 7,82 (d, H). Para el diastereómero syn: \delta 0,86-0,89 (m, H), 1,20-1,40 (m, 4H), 1,80-2,45 (m, 4H), 2,80-2,86 (m, H), 3,58-3,65 (m, 2H), 4,20-4,40 (m, H), 4,50-4,75 (m, 2H), 4,90 (d, H), 5,52 (d, H), 6,45-6,70 (m, 3H), 6,75-6,85 (m, H), 7,10-7,20 (m, 2,3H), 7,30-7,50 (m, 5,7H); HPLC analítica: 10,55 min para el anti diastereómero y 10,62 min para el diastereómero syn; LC/MS: m/e = 452 (M+H^{+}) para ambos diastereómeros.
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Ácido 4-oxo-3-{[1-(2-fenilamino-propionil)-pirrolidina-2-carbonil]-amino}-butírico (121)
Se preparó a partir de 120 (151 mg, 0,33 mmol) usando el método de hidrólisis A para proporcionar 101 mg (83% de rendimiento) del compuesto del título en forma de un sólido blanco. ^{1}H-NMR (500 MHz, CDCl_{3}/CD_{3}OD = 1/1): \delta 1,20-1,65 (m, 2H), 1,65-2,35 (m, 3H), 2,40-3,00 (m, H), 3,20-3,80 (m, 2H), 3,90-4,90 (m, 7H), 7,25-7,80 (m, SH); HPLC analítica: 6,38 min.; LC-MS: m/e = 362 <M+H^{+}).
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Procedimientos generales para la preparación de los compuestos de la realización C fórmula I (Esquemas XXIII-XXV) 
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Esquema XXIII
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129 
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Método de hidrólisis A:
Se disolvió una muestra de 0,005-50 mmol del alquilhemiacetal en HCl 2,5 N/CH_{3}CN (10/1) y se agitó a temperatura ambiente hasta completar la reacción. La capa acuosa resultante se lavó con éter dietílico (2 x 20 ml) y se liofilizó para proporcionar el producto.
Método de hidrólisis B:
Una muestra de 0,005-50 mmol de alquilhemiacetal se absorbió en ácido fórmico y se agitó durante una noche a temperatura ambiente. La mezcla se trituró con una mezcla 3:1 de hexano/éter dietílico para dar un precipitado. El disolvente se decantó y el precipitado se lavó con éter dietílico para proveer el producto.
Método de hidrólisis C:
Se disolvió una muestra de 0,005-50 mmol del alquilhemiacetal en CH_{3}OH y Pd(OH)_{2}/C al 20%, y se agitó en H_{2} hasta que se completó la reacción. La suspensión resultante se filtró y la solución se concentró a vacío, luego se trituró con una mezcla 3:1 de hexano/éter dietílico para dar un precipitado. El disolvente se decantó y el precipitado se lavó con éter dietílico para proporcionar el producto.
Método de hidrólisis D:
Se agitó una muestra de 0,005-50 mmol del alquilhemiacetal en CH_{3}CN/agua (1/2) con resina ácida (Dowex 50w x 2, tipo H^{+}) hasta que se completó la reacción. La solución se filtró y la resina se lavó con CH_{3}CN/agua (1/4). La capa acuosa resultante se lavó con éter dietílico, se concentró hasta un volumen más pequeño a vacío, luego se liofilizó para proveer el producto.
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Esquema XXIV
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130 
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Ácido 4-oxo-3-[(1-{2-[9-oxo-9H-fluoren-4-carbonil)-amino]-propionil}-pirrolidina-2-carbonil)-amino]-butírico (122a)
Se hidrolizó una muestra de 109,0 mg (0,19 mmol) de 91 de acuerdo con el método A para proporcionar 88 mg (96% de rendimiento) del compuesto del título: HPLC analítica 7,15 min. LC-MS (ES^{+}) m/e = 492,2 (M+H).
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Ácido 3-({1-[2-(4-amino-3-cloro-benzoilamino)-propionil]-pirrolidina-2-carbonil}-amino)-4-oxo-butírico (122b)
Se hidrolizó una muestra de 51,0 mg (0,096 mmol) de 76 de acuerdo con el método A para dar 43,0 mg (100% de rendimiento) del compuesto del título: ^{1}H-NMR (500 MHz, CD_{3}OD/D_{2}O: 0,5 ml/10 gotas): \delta 1,37-1,52 (m, 3H), 1,80-2,20 (m, 3H), 2,20-2,37 (m, H), 2,49-2,60 (m, H), 2,60-2,75 (m, H), 3,70-3,80 (m, H), 3,80-3,95 (m, H), 4,20-4,35 (m, H), 4,40-4,50 (m, H), 4,50-4,70 (m, H), 4,70-4,85 (m, H), 6,85-6,87 (d, H), 7,58-7,60 (m, H), 7,77 (s, H); tiempo de retención en HPLC analítica: 6,54 min; LC-MS: m/z = 439 (M+H^{+}).
132 
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Ácido 3-({1-[2-(3,5-dicloro-4-metoxi-benzoilamino)-propionil}-pirrolidina-2-carbonil}-amino)-4-oxo-butírico (122c)
Se hidrolizó una muestra de 51,0 mg (0,088 mmol) de 92 de acuerdo con el método A para proporcionar 24,0 mg (56% de rendimiento) del compuesto del título: HPLC analítica 6,41 min. LC-MS (ES^{+}) m/e = 488,3 (M+H).
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133 
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Ácido 3-({1-[2-(4-metoxi-3,5-dimetil-benzoilamino)-propionil]-pirrolidina-2-carbonil}-amino)-4-oxo-butírico (122d)
Se hidrolizó una muestra de 55,0 mg (0,102 mmol) de 77 de acuerdo con el método A para proporcionar 44,0 mg (96% de rendimiento) del compuesto del título: HPLC analítica (C18) 8,70 min, ^{1}H-NMR (CDCl_{3}, 500 Mhz): \delta 1,23-1,70 (m, 3H), 1,80-2,70 (m, 10H), 2,70-3,15 (m, 2H), 3,58-4,20 (m, 5H), 4,32-5,50 (m, 3H), 5,60-6,00 (m, H), 6,80-7,90 (m, 4H); LC-MS (ES^{+}) m/e = 448,2 (M+H).
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134 
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Ácido 4-oxo-3-[(l-{2-(piridina-2-carbonil)-amino]-propionil}-pirrolidina-2-carbonil)-amino]-butírico (122e)
Se hidrolizó una muestra de 55,0 mg (0,114 mmol) de 88 de acuerdo con el método A para proveer 30,0 mg (67% de rendimiento) del compuesto del título: HPLC analítica 4,60 min. LC-MS (ES^{+}) m/e = 391,3 (M+H).
135 
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Ácido 3-({1-[2-(4-acetilamino-3-cloro-benzoilamino)-propionil]-pirrolidina-2-carbonil}-amino)-4-oxo-butírico (122f)
Se hidrolizó una muestra de 52 mg (0,091 mmol) de 78 de acuerdo con el método A para proveer 40 mg (91% de rendimiento) del compuesto del título: ^{1}H NMR (500 MHZ, CD_{3}OD) \delta 1,08-1,61 (m, 3H), 1,77-2,41 (m, 3H), 2,21 (s, 3H), 2,41-2,77 (m, 2H), 3,43-3,63 (m, 0,3H), 3,65-3,76 (m, 1H), 3,81-3,94 (m, 1H), 4,18-4,34 (m, 1H), 4,42-4,64 (m, 1,7H), 4,77 (q, 1H), 7,79 (dd, 1H); HPLC analítica 4,97 min. LC-MS (ES^{+}) m/e = 481,3 (M+H).
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136 
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Ácido 3-({1-[2-(4-Amino-3,5-dicloro-benzoilamino)-propionil]-pirrolidina-2-carbonil}-amino)-4-oxo-butírico (122g)
Se hidrolizó una muestra de 44,3 mg (0,079 mmol) de 89 de acuerdo con el método A para proporcionar 30 mg (81% de rendimiento) del compuesto del título: HPLC analítica 5,40 min. LC-MS (ES^{+}) m/e = 473,2 (M4H).
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137 
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Ácido 3-({1-[2-(3-isopropoxi-benzoilamino)-propionil]-pirrolidina-2-carbonil}-amino)-4-oxo-butírico (122h)
Se hidrolizó una muestra de 52,0 mg (0,097 mmol) de 79 de acuerdo con el método A para proveer 30,0 mg (69% de rendimiento) del compuesto del título: HPLC analítica 8,92 min. LC-MS (ES^{+}) m/e = 448,3 (M+H).
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Ácido 3-{{1-[2-(3-benciloxi-4-metoxi-benzoilamino)-propionil]-pirrolidina-2-carbonil}-amino)-4-oxo-butírico (122i)
Se hidrolizó una muestra de 50,8 mg (0,082 mmol) de 81 de acuerdo con el método A para dar 22,4 mg (52% de rendimiento) del compuesto del título: HPLC analítica 6,72 min. LC-MS (ES^{+}) m/e = 526,3 (M+H).
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Ácido 4-oxo-3-[(1-{2-[(quinoxalina-2-carbonil)-amino]-propionil}-pirrolidina-2-carbonil)-amino)-butírico (122j)
Se hidrolizó una muestra de 38,0 mg (0,072 mmol) de 80 de acuerdo con el método A para proporcionar 32,0 mg (100% de rendimiento) del compuesto del título: HPLC analítica 5,95 min. LC-MS (ES^{+}) m/e = 442,3 (M+H).
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140 
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Ácido 3-({1-[2-(3,5-dicloro-4-hidroxi-benzoilamino)-propionil]-pirrolidina-2-carbonil}-amino)-4-oxo-butírico (122k)
Se hidrolizó una muestra de 35 mg (0,060 mmol) de 83 de acuerdo con el método A para proveer 29,4 mg (75% de rendimiento) del compuesto del título: HPLC analítica 7,91 min. ^{1}H-NMR (500 MHZ, CD_{3}OD) \delta 1,47 (m, 3H), 1,8-2,3 (m, 4H), 2,49 (m, 1H), 2,61 (m, 1H), 3,5 (br m, 0,2H), 3,69 (br m, 0,9H), 3,84 (br m, 0,9H), 4,27 (m, 1H), 4,46 (m, 1H), 4,57 (m, 1H), 4,73 (m, 1H), 7,83 (m, 2H) ppm, LC-MS (ES^{+}) m/e = 474,1 (M+H).
141 
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Ácido 3-{{1-[2-(4-amino-3-trifluorometil-benzoilamino)-propionil]-pirrolidina-2-carbonil}-amino)-4-oxo-butírico (122l)
Se hidrolizó una muestra de 10 mg (0,021 mmol) de 98w de acuerdo con el método A para proporcionar 7,9 mg (94% de rendimiento) del compuesto del título: HPLC analítica 6,64 min. LC-MS (ES^{+}) m/e = 473,3 (M+H).
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Ácido 3-({1-[2-(3-cloro-4-dimetilamino-benzoilamino)-propionil]-pirrolidina-2-carbonil}-amino)-4-oxo-butírico (122m)
Se hidrolizó una muestra de 10,0 mg (0,021 mmol) de 98x de acuerdo con el método A para proporcionar 7,0 mg (84% de rendimiento) del compuesto del título: HPLC analítica 5-15 min. LC-MS (ES^{+}) m/e = 467,3 (M+H).
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Ácido 3-({1-[2-(4-dimetilamino-3,5-difluoro-benzoilamino)-propionil]-pirrolidina-2-carbonil}-amino)-4-oxo-butírico (122n)
Se hidrolizó una muestra de 20,0 mg (0,043 mmol) de 98y de acuerdo con el método A para proporcionar 16,8 mg (100% de rendimiento) del compuesto del título: HPLC analítica 5,86 min. LC-MS (ES^{+}) m/e = 469,3 (M+H).
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Ácido 3-({1-[2-(4-amino-3-cloro-benzoilamino)-propionil]-pirrolidina-2-carbonil}-amino)-4-oxo-butírico (122o)
Se hidrolizó una muestra de 20,0 mg (0,046 mmol) de 98m de acuerdo con el método A para obtener 16,7 mg (100% de rendimiento) del compuesto del título: HPLC analítica 8,47 min. LC-MS (ES^{+}) m/e = 439,2 (M+H).
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Ácido 3-({1-[2-(4-Amino-2,3,5,6-tetrafluoro-benzoilamino)-propionil]-pirrolidina-2-carbonil}-amino)-4-oxo-butírico (122p)
Se hidrolizó una muestra de 20,0 mg (0,042 mmol) de 98z de acuerdo con el método A para proveer 15,3 mg (91% de rendimiento) del compuesto del título: HPLC analítica 7,90 min. LC-MS (ES^{+}) m/e = 477,2 (M+H).
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Ácido 4-oxo-3-[(1-{2-[(quinolina-6-carbonil)-amino]-propionil}-pirrolidina-2-carbonil)-amino]-butírico (122q)
Se hidrolizó una muestra de 44 mg (0,080 mmol) de 93 de acuerdo con el método A para proveer 41 mg (100% de rendimiento) del compuesto del título: ^{1}H NMR (500 MHz, CD_{3}OD) \delta 1,24-1,69 (m, 3H), 1,75-2-37 (m, 4H), 2,39-2,87 (m, 2H), 3,46-4,04 (m, 2H), 4,11-4,77 (m, 3H), 8,19 (dd, 1H), 8,33 (d, 1H), 8,56-8,58 (m, 1H), 8,85 (s, 1H), 9,27-9,39 (m, 2H); HPLC analítica 4,91 min. LC-MS (ES^{+}) m/e = 441,2 (M+H).
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Ácido 3-({1-[2-(4-acetilamino-5-cloro-2-metoxi-benzoilamino)-propionil]-pirrolidina-2-carbonil}-amino)-4-oxo-butírico (122r)
Se hidrolizó una muestra de 44,5 mg (0,074 mmol) de 87 de acuerdo con el método A para proporcionar 34,5 mg (91% de rendimiento) del compuesto del título: HPLC analítica 6,88 min. LC-MS (ES^{+}) m/e = 511,2 (M+H).
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Ácido 3-[(1-{2-[3-cloro-4-(2,2-dimetil-propionilamino)-benzoilamino]-propionil}-pirrolidina-2-carbonil)-amino]-4-oxo-butírico (122s)
Se hidrolizó una muestra de 19,0 mg (0,036 mmol) de 98aa de acuerdo con el método A para proveer 14,5 mg (90% de rendimiento) del compuesto del título: HPLC analítica 7,28 min. LC-MS (ES^{+}) m/e = 523,3 (M+H).
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Ácido 3-({1-[2-(3-cloro-4-propionilamino-benzoilamino)-propionil]-pirrolidina-2-carbonil}-amino)-4-oxo-butírico (122t)
Se hidrolizó una muestra de 21,0 mg (0,042 mmol) de 98ab de acuerdo con el método A para proporcionar 17,5 mg (97% de rendimiento) del compuesto del título: HPLC analítica 5,72 min. LC-MS (ES^{+}) m/e = 495,2 (M+H).
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Ácido 3-({1-[2-(3-cloro-4-fenilacetilamino-benzoilamino)-propionil]-pirrolidina-2-carbonil}-amino)-4-oxo-butírico (122u)
Se hidrolizó una muestra de 10,0 mg (0,017 mmol) de 98ac de acuerdo con el método A para proveer 7,9 mg (85% de rendimiento) del compuesto del título: HPLC analítica 7,52 min. LC-MS (ES^{+}) m/e = 557,2 (M+H).
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Ácido 3-[(1-{2-[3-cloro-4-(3-metil-butirilamino)-benzoilamino]-propionil}-pirrolidina-2-carbonil}-amino]-4-oxo-butírico (122V)
Se hidrolizó una muestra de 8,0 mg (0,015 mmol) de 98ad de acuerdo con el método A para proporcionar 6,5 mg (96% de rendimiento) del compuesto del título: HPLC analítica 6,92 min. LC-MS (ES^{+}) m/e = 523,2 (M+H).
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Métodos biológicos
Se obtuvieron datos in vitro, ex vivo e in vivo para los compuestos seleccionados de la presente invención, usando los métodos anteriormente descritos. Los resultados se muestran en las Tablas 2-8. La designación "ND" indica que el compuesto no fue ensayado en el ensayo descrito.
En los ensayos de ICE Caspasa, la categoría "A" indica <10 nM inhibición. La categoría "B" indica 10-1000 nM inhibición. La categoría "C" indica >1000 nM inhibición. Véanse las Tablas 2 y 3.
En el ensayo PBMC, la categoría "A" indica <500 nM inhibición. La categoría "B" indica 500-1000 nM inhibición. La categoría "C" indica 1001-2000 nM inhibición. La categoría "D" indica >2000 nM inhibición. Véase la Tabla 4.
En el ensayo de sangre completa, la categoría "A" indica <2500 nM inhibición. La categoría "B" indica 2500-7500 nM inhibición. La categoría "C" indica >7500 nM. Véase la Tabla 5.
En el ensayo de metabolismo in situ, los valores de [f(g) X f(h)] se describen de la siguiente manera: la categoría "A" indica <0,25. La categoría "B" indica 0,25-0,49. La categoría "C" indica 0,5-0,75. La categoría "D" indica >0,75. En la medición de excreción biliar, la categoría "A" indica <5%. La categoría "B" indica 5-10%. La categoría "C" indica >10%. Véase la Tabla 6.
En el ensayo de aclaramiento i.v., los valores se indican de la siguiente manera: la categoría "A" indica <50. La categoría "B" indica 50-80. La categoría "C" indica >80. Véase la Tabla 7.
En el ensayo de biodisponibilidad, los valores Cmax (\mug/ml) se indican de la siguiente manera: la categoría "A" indica <2,5. La categoría "B" indica 2,5-5,0. La categoría "C" indica >5,0. Los valores AUC (\mug x h/ml) se indican de la siguiente manera: la categoría "A" indica <2,5. La categoría "B" indica 2,5-5,0. La categoría "C" indica >5,0. Los intervalos de semivida (horas) se indican de la siguiente manera: la categoría "A" indica <1,5. La categoría "B" indica 1,5-2,0. La categoría "C" indica >2,0. Los valores F (%) se indican de la siguiente manera: la categoría "A" indica <33. La categoría "B" indica 33-67. La categoría "C" indica >67. Véase la Tabla 8.
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Ensayos in vitro Inhibición enzimática
Los valores Ki para los compuestos de ensayos con las distintas caspasas se obtuvieron mediante el método de Margolin et al. (J. Biol. Chem., 272 pp. 7223-7228 (1997)). Los ensayos se realizaron en Tris 10 mM (Sigma Corp, St Louis MO) pH 7,5, Ditiotreitol 1 mM (DTT, Research Organic INC, Cleveland, OH) y CHAPS al 0,1% (Pierce, Rockford IL) a 37ºC. Para caspasa-3, se añadió una solución de glicerol al 8% al tampón de ensayo para mejorar la estabilidad enzimática. Se introdujeron con pipeta una alícuota de 65 \muL del tampón de ensayo y una alícuota de 5 \muL de las diluciones apropiadas del inhibidor en DMSO a una placa de 96 pocillos, se trató con 10 \muL de caspasa, luego se diluyó en tampón de ensayo (proteína activa 0,5-40 nM por valoración del sitio activo). Para cada determinación, se incluyó un control que contenía DMSO pero no contenía compuesto. Las placas se incubaron luego durante 15 minutos a 37ºC, antes de la adición del sustrato apropiado (20 \muL, concentración final 1-4 X K_{M}, volumen de ensayo final 100 \muL) para iniciar la reacción. Los índices de reacción se midieron a 37ºC, o bien siguiendo el incremento dependiente del tiempo en absorbancia a 405 nM (para los sustratos pNA) o en fluorescencia (Ex 390, Em 460) (para los sustratos AMC). Los índices obtenidos se trazaron contra la concentración del inhibidor y el ajuste de datos a la ecuación de unión firme de Morrison para inhibidores competitivos (Morrison, J.F., Biochem. Biophys. Acta, 185 pp. 269-286 (1969)). Los sustratos utilizados para los ensayos individuales fueron los siguientes:
Caspasa-1 Suc-YVAD-pNA (Bachem, King of Prussia, PA) (concentración final en el ensayo 80 \muM),
Caspasa-3 Ac-DEVD-pNA (Bachem, King of Prussia, PA) (concentración final en el ensayo, 60 \muM)
Caspasa-4 Ac-WEHD-AMC (Synpep, Dublín, CA) (concentración final en el Ensayo 20 \muM),
Caspasa-7 Ac-DEVD-AMC (Bachem, King of Prussia, PA) (concentración final en el ensayo 50 \muM),
Caspasa-8 Ac-DEVD-pNA (Bachem, King of Prussia, PA) (concentración final en el ensayo 80 \muM).
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(Tabla pasa a página siguiente)
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TABLA 2 Datos de inhibición de Caspasa-1
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TABLA 3
Caspasa-3, Caspasa-4 y Caspasa-8 Datos de inhibición
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Ensayo de células PBMC
Ensayo IL-1\beta con una población mixta de células mononucleares de sangre periférica humana (PBHC) o células mononucleares adherentes enriquecidas.
El procesamiento de -IL-1\beta por ICE se puede medir en cultivo celular, usando una diversidad de fuentes celulares. La PBMC humana obtenida de donantes sanos proporciona una población mixta de subtipos de linfocitos y células mononucleares que producen un espectro de interleucinas y citocinas en respuesta a muchas clases de estimuladores fisiológicos. Las células mononucleares adherentes de PBMC proporcionan una fuente enriquecida de monocitos normales para estudios selectivos de producción de citocinas por células activadas.
Procedimiento experimental
Se prepara una serie de diluciones iniciales del compuesto de ensayo en DMSO o etanol, con una dilución posterior en medio RPMI-10% FBS (que contiene L-glutamina 2 mM, HEPES 10 mM, 50 U y 50 ug/ml pen/estrep) respectivamente para proporcionar los fármacos a 4x la concentración de ensayo final que contiene DMSO al 0,4% o etanol al 0,4%. La concentración final de DMSO es 0,1% para todas las diluciones del fármaco. En general, se utiliza una valoración de la concentración que encuadra el K_{i} aparente para un compuesto de ensayo determinado en un ensayo de inhibición ICE para el cribado del compuesto primario.
En general, se ensayaron 5-6 diluciones del compuesto y el componente celular del ensayo se realiza por duplicado, con determinaciones ELISA por duplicado en cada sobrenadante de cultivo celular.
Aislamiento de PBMC y ensayo de IL-1
Se aíslan células de cultivo de 0,57 litros de sangre humana (produciendo un volumen final de 40-45 ml de plasma más células) se diluyen con medio hasta 80 ml y se cubren tubos de separación LeukoPREP (Becton Dickinson) con 10 ml de suspensión celular. Después de una centrifugación de 15 min a 1500-1800 xg, la capa de plasma/medio se aspira y luego la capa de células mononucleares se recoge con una pipeta Pasteur y se transfiere a un tubo centrífugo cónico de 15 ml (Corning). El medio se añade para llevar al volumen de 15 ml, se mezclan moderadamente las células por inversión y se centrifuga a 300 xg durante 15 min. El sedimento de PBMC se resuspende en un volumen pequeño de medio, las células se cuentan y se ajustan hasta 6 x 10^{6} células/ml.
Para el ensayo celular, se añade 1,0 ml de la suspensión celular a cada pocillo de una placa de cultivo de tejido de fondo plano con 24 pocillos (Corning), 0,5 ml de dilución del compuesto del ensayo y 0,5 ml de solución LPS (Sigma #L-3012; 20 ng/ml solución preparada en medio RPMI completo; concentración LPS final 5 ng/ml). Las adiciones de 0,5 ml de compuesto de ensayo y LPS usualmente son suficientes para mezclar los contenidos de los pocillos. Se realizan tres mezclas de control por experimento, o bien con LPS solo, vehículo control disolvente y/o medio adicional a fin de ajustar el volumen de cultivo final hasta 2,0 ml. Los cultivos celulares se incuban durante 16-18 h a 37ºC en presencia de 5% CO_{2}.
Al final del período de incubación, las células se cosechan y transfieren a tubos centrífugos cónicos de 15 ml. Después de centrifugar durante 10 min a 200 xg, se cosechan los sobrenadantes y se transfieren a tubos Eppendorf de 1,5 ml. Se ha de observar que el sedimento celular se puede utilizar para una evaluación bioquímica de contenido de pre-IL-1\beta y/o IL-1\beta maduro en extractos de citosol por transferencia Western o ELISA con antisueros específicos de pre-IL-1\beta.
Aislamiento de células mononucleares adherentes
Se aíslan PBMC y se preparan como se describió anteriormente. El medio (1,0 ml) se añade primero a los pocillos seguido de 0,5 ml de suspensión de PBMC. Después de una incubación de una hora, las placas se agitan moderadamente y se aspiran las células no adherentes de cada pocillo. Los pocillos después se lavan moderadamente tres veces con 1,0 ml de medio y finalmente se resuspenden en 1,0 ml de medio. El enriquecimiento de células adherentes en general proporciona 2,5-3,0 x 10^{5} células por pocillo. La adición de los compuestos de ensayo, LPS, las condiciones de incubación de células y el procesamiento de los sobrenadantes se realiza como se describió anteriormente.
ELISA
Se pueden emplear kits Quantikine (R&D Systems) para la medición de IL-1\beta madura. Los ensayos se realizan de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Se observan los niveles de IL-1\beta madura de aproximadamente 1-3 ng/ml en ambos controles positivos de células mononucleares adherentes y PBMC. Los ensayos ELISA se llevan a cabo en diluciones 1:5, 1:10 y 1:20 de sobrenadantes de controles LPS-positivos para seleccionar la dilución óptima para los sobrenadantes en el panel de ensayo.
La potencia inhibidora de los compuestos se puede representar por un valor CI_{50}, que es la concentración de inhibidor a la cual se detecta 50% de IL-1\beta madura en el sobrenadante, según lo comparado con los controles positivos.
El especialista en la técnica sabrá que los valores obtenidos en los ensayos celulares pueden depender de múltiples factores. Los valores pueden no necesariamente representar resultados cuantitativos precisos.
TABLA 4 Datos del ensayo de células PBMC
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Ensayo de sangre completa para la producción de IL-1\beta
Los valores CI_{50} del ensayo de sangre completa para los compuestos de la presente invención se obtuvieron usando el método descrito a continuación:
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Propósito
El ensayo de sangre completa es un método simple para medir la producción de IL-1\beta (u otras citocinas) y la actividad de inhibidores potenciales. La complejidad de este sistema de ensayo, con su complemento total de tipos de células linfoides e inflamatorias, espectro de proteínas y glóbulos rojos en plasma, es una representación in vitro ideal de condiciones fisiológicas in vivo.
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Materiales
Jeringas libres de pirógeno (^{-} 30 cc)
Tubos de vacío estériles libres de pirógeno que contienen Na_{2}EDTA liofilizado (4,5 mg/tubo de 10 ml)
Muestra de sangre completa humana (^{-} 30-50 cc)
Tubos Eppendorf de 1,5 ml
Diluciones stock del compuesto de ensayo (^{-} 25 mM en DMSO u otro disolvente)
Solución de cloruro de sodio libre de endotoxina (0,9%) y HBSS
Solución stock de lipopolisacárido (Sigma; Cat.# L-3012) a 1 mg/ml en HBSS
Kit IL-1\beta ELISA (R & D Systems; Cat # DLB50)
Kit THF\alpha ELISA (R & D Systems; Cat # DTA50)
Baño de agua o incubador
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Procedimiento experimental del ensayo de sangre completa
Se regula el incubador o el baño de agua a 30ºC. Alícuotas de 0,25 ml de sangre en tubos Eppendorf de 1,5 ml. Nota: asegurarse de invertir los tubos de muestra de sangre completa cada dos alícuotas. Las diferencias en las réplicas pueden provocar sedimentos celulares y no suspenderse uniformemente. El uso de una pipeta de desplazamiento positivo también minimiza las diferencias entre alícuotas duplicadas. Se preparan diluciones del fármaco en solución salina sin pirógeno estéril por dilución en serie. En general se utiliza una dilución en serie que encuadra el K_{i} aparente para un compuesto de ensayo determinado en un ensayo de inhibición ICE para el cribado del compuesto primario. Para compuestos extremadamente hidrófobos, se preparan diluciones del compuesto en plasma fresco obtenido del mismo donante de sangre o en DMSO al 5% que contiene PBS para potenciar la solubilidad.
Se añaden 25 \mul de la dilución del compuesto de ensayo o vehículo control y se mezcla moderadamente la muestra. Luego se añaden 5,0 \mul de solución de LPS (250 ng/ml stock recién preparada: 5,0 ng/ml de concentración final de LPS) y se mezcla nuevamente. Se incuban los tubos a 30ºC en un baño de agua durante 16-18 horas con agitación ocasional. Alternativamente, los tubos se pueden disponer en un equipo giratorio a 4 rpm durante el mismo período de incubación. Este ensayo se debe realizar por duplicado o triplicado con los siguientes controles: control negativo - sin LPS; control positivo - sin inhibidor de ensayo; vehículo control - la concentración más alta de DMSO o compuesto disolvente utilizado en el experimento. Se añade solución salina adicional a todos los tubos de control para normalizar los volúmenes tanto para las muestras de ensayo de sangre completa experimentales como para el control.
Después del período de incubación, las muestras de sangre completa se centrifugan durante 10 minutos a ^{-} 2000 rpm en Microfuge, el plasma se transfiere a un tubo Microfuge nuevo y se centrifuga a 1000 x g para sedimentar las plaquetas residuales, si es necesario. Las muestras de plasma se pueden conservar congeladas a -70ºC antes de ensayar los niveles de citocina por ELISA.
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ELISA
R&D Systems (614 McKinley Place N.E. Minneapolis, MN 55413) Se pueden emplear kits Quantikine para medir IL-1\beta y TNF-\alpha. Los ensayos se realizan de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Se pueden observar niveles de IL-1\beta de ^{-} 1-5 ng/ml en los controles positivos entre una gama de individuos. Una dilución 1:200 de plasma para todas las muestras usualmente es suficiente para los experimentos para que los resultados de ELISA estén dentro del intervalo lineal de las curvas estándar ELISA. Puede ser necesario optimizar las diluciones estándar si se observan diferencias en el ensayo de sangre completa. Nerad, J.L. et al., J. Leukocyte Biol., 52, pp. 687-692 (1992).
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(Tabla pasa a página siguiente)
TABLA 5 Datos del ensayo de sangre completa
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Ensayos ex vivo Metabolismo y excreción
Se realizaron estudios de perfusión de una sola pasada en ratas para evaluar el metabolismo de la pared gastrointestinal (f(g)), el metabolismo del hígado (f(h)) y la excreción biliar. El método utilizado se ha descrito en Pang, C.S., J. Pharmacol. Exp. Therapeutics, 333, pp. 788-798 (1984).
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TABLA 6 Datos de metabolismo y excreción
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Ensayos in vivo Ensayo de aclaramiento de rata in vivo - Índices de aclaramiento
El índice de aclaramiento en la rata (ml/min/kg) para los compuestos de la presente invención se puede obtener usando el método descrito a continuación:
Procedimiento representativo
Se realizan canulaciones de los vasos yugulares y carótidos de ratas con anestesia un día antes del estudio de farmacocinética. M.J. Free, R.A. Jaffee; "Cannulation techniques for the collection blood and other bodily fluids"; en: Animal Models; p. 480-495; N.J. Alexander, Ed.; Academic Press; (1978). Se administra el fármaco (10 mg/ml) vía la vena yugular en un vehículo que por lo general consiste en: propilenglicol/solución salina, que contiene bicarbonato sódico 100 mM en una relación 1:1. Los animales reciben 10-20 mg fármaco/kg y se extraen muestras de sangre a 0, 2, 5, 7, 10, 15, 20, 30, 60 y 90 minutos desde una sonda permanente en la carótida. La sangre se centrifuga y se conserva a -20ºC hasta el análisis. El análisis de datos de farmacocinética se realiza mediante regresión no lineal usando un software estándar tal como RStrip (MicroMath Software, UT) y/o Pcnonlin (SCI Software, NC) para obtener los valores de aclaramiento.
Análisis representativo
Se extrae plasma de rata con un volumen equivalente de acetonitrilo (que contiene TFA al 0,1%). Las muestras luego se centrifugan a aproximadamente 1,000 x g y se analiza el sobrenadante por HPLC en gradiente. Se describe a continuación un procedimiento de ensayo típico.
Precipitan 200 \muL de plasma con 200 \muL de ácido trifluoroacético (TFA) al 0,1% en acetonitrilo y 10 \muL de una solución al 50% de cloruro de zinc acuoso, se agita en vórtex y después se centrifuga a ^{-}1000 x g, y el sobrenadante se recoge y analiza mediante HPLC.
Procedimiento HPLC:
Columna:
Zorbax SB-CN (4,6 x 150 mm)
\quad
(tamaño de partícula 5 \mu)
Temperatura de columna:
50ºC caudal: 1,0 ml/min
Volumen de inyección:
75 \muL.
Fase móvil:
A=TFA al 0,1% en agua y B=100% acetonitrilo
Gradiente empleado:
100% A a 30% A en 15,5 min
\quad
0% A a 16 min
\quad
100% A a 19,2 min
Longitud de onda:
214 nm
Se realiza una curva estándar a concentraciones de 20, 10, 5, 2 y 1 \mug/ml.
TABLA 7 Datos de aclaramiento
171
Biodisponibilidad Estudios de farmacocinética ora
Se anestesian ratas Sprague-Dawley macho (Harlan, Indianápolis, IN, 300-350 g) por inyección intramuscular de mezcla de cetamina/Rompun. Se insertó una cánula PE-50 en la arteria carótida derecha para muestras de sangre arterial. Las ratas se dejaron recuperar de la cirugía durante una noche (\geq16 horas) antes de utilizarse en el estudio. Los compuestos de ensayo se administraron oralmente en 25% Cremophor EL/agua (p/p) o 100% propilenglicol (PG) en un volumen de dosis de 10 ml/kg. Las muestras de sangre (^{-}0,30 ml) se tomaron a las 0,25, 0,50, 1,0, 1,5, 2, 3, 4, 6 y 8 horas de la dosis, se separó el plasma por centrifugación y se conservó a -20ºC para posterior análisis. La cuantificación de las muestras de plasma se realizó usando HPLC/MS/MS en gradiente o el método enzimático que se detalla a continuación:
Método HPLC/MS/MS para la cuantificación de inhibidores de ICE en plasma de rata Preparación de la muestra
\bullet Se vierten alícuotas de 50 \mul de plasma en viales centrífugos Eppendorf.
\bullet Se añade un volumen equivalente de acetonitrilo al plasma para precipitar las proteínas del plasma.
\bullet Las muestras se agitan en vórtex durante 5 minutos y se centrifugan a 14.000 rpm durante 5 minutos.
\bullet Se cargan 75 \mul de sobrenadante en viales muestreadores de líquido HPLC de 12 mm.
\bullet Se inyectan 50 \mul de muestra para análisis vía el espectrómetro de masas.
Parámetros instrumentales de HPLC
HPLC: Sistema de administración de disolvente binario Hewlett Packard HP1100.
Condiciones del gradiente de HPLC
A = H_{2}O 0,2% ácido fórmico
B = Acetonitrilo 0,2% ácido fórmico
Fase móvil
Tiempo %A %B
0 100 0
2 100 0
5 0 100
11 0 100
11,5 100 0
17 100 0
Columna analítica HPLC: Keystone Phenyl -2 Hypersil 2,0x100 mm, tamaño de poro 5 \mu 120 \ring{A}, p/N# 105-39-2
Volumen de inyección:
50 \mul
Caudal:
0,20 ml/min.
\vskip1.000000\baselineskip
Parámetros instrumentales de espectrometría de masas
Instrumento: Espectrómetro de masas en tándem P E Sciex API-365
Técnica de ionización:
Turbo-Ionspray (ESI)
Polaridad:
Positive
Tiempo de secado:
300 mseg
Tiempo de pausa:
5 mseg
Tiempo de barrido:
0,9 seg
Modo de barrido:
MRM (Monitorización de reacción múltiple)
Ensayo enzimático de ICE para la cuantiificación de inhibidores de ICE en plasma de rata
Se extrajeron 50 \muL de plasma con 150 uL de acetonitrilo, se sonicaron, se agitaron en vórtex, se centrifugaron a 10,000 xg, y se secaron 180 \muL del sobrenadante en un evaporador vórtex Sorvall a temperatura ambiente. Las muestras se reconstituyeron en 100 \muL de tampón (Tris-HCl 10 mM, pH 7,5 con CHAPS al 0,1%, DTT 1 mM) con sonicación. Se mezclaron 10 \muL de cada muestra con 10 uL de ICE (1,1 mg/ml) en una placa de microvaloración con 60 \muL de tampón. Las muestras se incubaron durante 15 min. a temperatura ambiente, luego se añadieron 20 \muL Succ YVAD-pNA (400 \muM, precalentados hasta 37ºC), y la placa se vigiló a 405 nm durante 20 min. a 37ºC usando una lectora SpectraMax. Los datos se ajustaron usando un ajuste de 4 parámetros con el software SpectraMax, usando una curva estándar extraída. El ensayo fue lineal de 0,15 a 2,0-3,0 \mug/ml aldehído.
Parámetros de farmacocinética
El análisis de farmacocinética de los datos de esta concentración en plasma se llevó a cabo usando métodos no compartimentales. El área debajo de la curva (AUC_{(o-t)}) se Estimó desde el tiempo cero hasta el último punto de tiempo medido usando la regla trapezoidal lineal. El índice de eliminación (ke) se estimó por regresión lineal log a partir de la fase terminal de las curvas de concentración y tiempo en plasma. El área debajo del extremo de la curva se estimó como la relación de la última concentración medida a ke. El área debajo de la curva desde tiempo cero hasta infinidad (AUC(O-oo)) se obtuvo por adición del área debajo del extremo a AUC(O-t). La semivida de eliminación se estimó como 0,693/ke. Se registraron los valores observados para la concentración en plasma máxima (Cmax). Para estudios de profármacos: la disponibilidad del aldehído (biodisponibilidad) se calculó como: (AUC_{ald}/profármaco por vía oral)/(AUC_{ald}/ald i.v.) x (dosis ald, ald i.v./dosis profármaco, profármaco por vía oral) x (PM profármaco/PM aldehído).
TABLA 8 Datos de biodisponibilidad
173 
\vskip1.000000\baselineskip
Ensayos antivíricos
La eficacia de los compuestos de la presente invención para tratar o prevenir enfermedades, trastornos o afecciones relacionadas con antivíricos se puede evaluar in vitro e in vivo. Por ejemplo, los ensayos se pueden realizar para determinar la capacidad de estos compuestos de inhibir las respuestas inflamatorias asociadas con infecciones víricas. Los ensayos in vitro pueden emplear células enteras o componentes celulares aislados. Los ensayos in vivo incluyen modelos animales para enfermedades víricas.
Los ejemplos de dichos modelos animales incluyen, aunque sin limitarse a ellos, modelos de roedores para la infección HBV o HCV, el modelo Woodchuck para la infección HBV y el modelo de chimpancé para la infección HCV.
Los compuestos de la presente invención pueden también evaluarse en modelos animales para enfermedad inducida por alcohol.
Otros ensayos que se pueden utilizar para evaluar los compuestos de la presente invención se describen en la solicitud PCT PCT/US96/20843, publicada el 26 de junio de 1997, bajo la publicación no. WO 97/22619. Dichos ensayos incluyen estudios de farmacocinética in vivo en el ratón, inhibición de homólogos de ICE, inhibición de apoptosis, ensayo agudo in vivo para eficacia antiinflamatoria de concentraciones sanguíneas de fármaco, ensayos de IGIF, ensayo de inflamación peritoneal de carragenina en ratón y artritis inducida por colágeno de tipo II.
En cuanto a los compuestos de la presente invención, éstos son capaces de inhibir las caspasas, particularmente la ICE, in vitro y, además, se pueden administrar oralmente a mamíferos y tienen una obvia utilidad clínica en el tratamiento de enfermedades mediadas por IL-1, apoptosis, IGIF y IFN-\gamma.

Claims (25)

1. Un compuesto representado por la fórmula I:
\vskip1.000000\baselineskip
174
en la que:
A) Y es:
175 
\vskip1.000000\baselineskip
R^{2} es -H y cada R^{3} es independientemente -H, una cadena lateral de aminoácidos, -R^{8}, alquenil-R^{9} o alquinil-R^{9}, o cada R^{3}, junto con el átomo al que está unido, forma un sistema de anillos cíclico o heterocíclico de 3 a 7 miembros,
o R^{2} y un R^{3}, junto con los átomos a los que están unidos, forman un sistema de anillos cíclico o heterocíclico de 3 a 7 miembros, en donde un átomo de hidrógeno unido a cualquier átomo de carbono de alquilo o cicloalquilo está opcionalmente reemplazado con -R^{10}, un átomo de hidrógeno unido a cualquier átomo de carbono de arilo o heteroarilo está opcionalmente reemplazado con -R^{11}, un átomo de hidrógeno unido a cualquier átomo de nitrógeno del sistema de anillos está opcionalmente reemplazado con -R^{1};
R^{7} es -OH, -OR^{8} o -N(H)OH;
cada R^{10} es independientemente -OH, -SH, -F, -Cl, -Br, -I, -NO_{2}, -CN, -NH_{2}, -CO_{2}H, -C(O)NH_{2}, -N(H)C(O)H, -N(H)C(O)NH_{2}, -perfluoroalquilo, -O-alquilo, -O-arilo, -O-alquilarilo, -N(H)alquilo; -N(H)arilo, -N(H)-alquilarilo, -N(alquilo)_{2}, -C(O)N(H)alquilo, -C(O)N(alquilo)_{2}, -N(H)C(O)alquilo, -N(H)C(O)N(H)alquilo, -N(H)C(O)N(alquilo)_{2},
-S-alquilo, -S-arilo, -S-alquilarilo, -S(O)_{2}alquilo, -S(O)alquilo, -C(O)alquilo, -CH_{2}NH_{2}, -CH_{2}N(H)alquilo, -CH_{2}N(alquilo)_{2}, -alquilo, -cicloalquilo, -arilo, -heteroarilo, -heterociclilo, -alquilcicloalquilo, -alquilarilo, -alquilheteroarilo o -alquilheterociclilo, en donde un átomo de hidrógeno unido a cualquier átomo de carbono de arilo o heteroarilo está opcionalmente reemplazado con R^{11} y un átomo de hidrógeno unido a cualquier átomo de nitrógeno está opcionalmente reemplazado con R^{1}; o
B) Y es:
176
siempre que cuando R^{6} no es hidrógeno, R^{6} y Y, junto con el nitrógeno al que están unidos, forman un anillo (g):
177
R^{2} es -H y cada R^{3} es independientemente -H, una cadena lateral de aminoácidos, -R^{8}, alquenil-R^{9} o alquinil-R^{9}, o cada R^{3}, junto con el átomo al que está unido, forma un sistema de anillos cíclico o heterocíclico de 3 a 7 miembros, o R^{2} y un R^{3}, junto con los átomos a los que están unidos, forman un sistema de anillos cíclico o heterocíclico de 3 a 7 miembros, en el que un átomo de hidrógeno unido a cualquier átomo de carbono de alquilo o cicloalquilo está opcionalmente reemplazado con -R^{10}, un átomo de hidrógeno unido a cualquier arilo o heteroarilo está opcionalmente reemplazado con -R^{11}, un átomo de hidrógeno unido a cualquier átomo de nitrógeno del sistema de anillos está opcionalmente reemplazado con -R^{1};
cada R^{10} es independientemente -OH, -SH, -F, -Cl, -Br, -I, -NO_{2}, -CN, -NH_{2}, -CO_{2}H, -C(O)NH_{2}, -N(H)C(O)H, -N(H)C(O)NH_{2}, -perfluoroalquilo, -O-alquilo, -O-arilo, -Oalquilarilo, -N(H)alquilo, -N(H)arilo, -N(H)-alquilarilo, -N(alquilo)_{2}, -C(O)N(H)alquilo, -C(O)N(alquilo)_{2}, -N(H)C(O)alquilo, -N(H)C(O)Oalquilo, -N(H)C(O)Oarilo, -N(H)C(O)Oalquilarilo, -N(H)C(O)Oheteroarilo, -N(H)C(O)Oalquilheteroarilo, -N(H)C(O)Ocicloalquilo, -N(H)C(O)N(H)alquilo, -N(H)C(O)N(alquilo)_{2}, -N(H)C(O)N(H)arilo, -N(H)C(O)N(H)alquilarilo, -N(H)C(O)N(H)heteroarilo, -N(H)C(O)N(H)alquilheteroarilo, -N(H)C(O)N(H)cicloalquilo, -S-alquilo, -S-arilo, -S-alquilarilo, -S(O)_{2}alquilo, -S(O)alquilo,
-C(O)alquilo, -CH_{2}NH_{2}, -CH_{2}N(H)alquilo o -CH_{2}N(alquilo)_{2}, -alquilo, -cicloalquilo, -arilo, -heteroarilo, -heterociclilo, -alquilcicloalquilo, -alquilarilo, -alquilheteroarilo o -alquilheterociclilo, en donde un átomo de hidrógeno unido a cualquier átomo de carbono de arilo o heteroarilo está opcionalmente reemplazado con R^{11} y un átomo de hidrógeno unido a cualquier átomo de nitrógeno está opcionalmente reemplazado con R^{1}; o
C) Y es:
178
R^{2} es -H y cada R^{3} es independientemente -H, una cadena lateral de aminoácidos, -R^{8}, alquenil-R^{9} o alquinil-R^{9}, o cada R^{3}, junto con el átomo al que está unido, forma un sistema de anillos cíclico o heterocíclico de 3 a 7 miembros, en el que un átomo de hidrógeno unido a cualquier átomo de carbono de alquilo o cicloalquilo está opcionalmente reemplazado con -R^{10}, un átomo de hidrógeno unido a cualquier átomo de carbono de arilo o heteroarilo está opcionalmente reemplazado con -R^{11}, un átomo de hidrógeno unido a cualquier átomo de nitrógeno del sistema de anillos está opcionalmente reemplazado con -R^{1};
R^{7} es -OH, -OR^{8} o -N(H)OH;
cada R^{10} es independientemente -OH, -SH, -F, -Cl, -Br, -I, -NO_{2}, -CN, -NH_{2}, -CO_{2}H, -C(O)NH_{2}, -N(H)C(O)H, -N(H)C(O)NH_{2}, -perfluoroalquilo, -O-alquilo, -O-arilo, -O-alquilarilo, -N(H)alquilo, -N(H)arilo, -N(H)-alquilarilo, -N(alquilo)_{2}, -C(O)N(H)alquilo, -C(O)N(alquilo)_{2}, -N(H)C(O)alquilo, -N(H)C(O)N(H)alquilo, -N(H)C(O)N(alquilo)_{2},
-S-alquilo, -S-arilo, -S-alquilarilo, -S(O)_{2}alquilo, -S(O)alquilo, -C(O)alquilo, -CH_{2}NH_{2}, -CH_{2}N(H)alquilo, -CH_{2}N(alquilo)_{2}, -alquilo, -cicloalquilo, -arilo, -heteroarilo, -heterociclilo, -alquilcicloalquilo, -alquilarilo, -alquilheteroarilo o -alquilheterociclilo, en donde un átomo de hidrógeno unido a cualquier átomo de carbono de arilo o heteroarilo está opcionalmente reemplazado con R^{11} y un átomo de hidrógeno unido a cualquier átomo de nitrógeno está opcionalmente reemplazado con R^{1};
siempre que si un R^{3} es -H, entonces el otro R^{3} no es -H; o
D) Y es:
179
R^{2} es -H y cada R^{3} es independientemente -H, una cadena lateral de aminoácidos, -R^{8}, alquenil-R^{9} o alquinil-R^{9}, o cada R^{3}, junto con el átomo al que está unido, forman un sistema de anillos cíclico o heterocíclico de 3 a 7 miembros, en el que un átomo de hidrógeno unido a cualquier átomo de carbono de alquilo o cicloalquilo está opcionalmente reemplazado con -R^{10}, un átomo de hidrógeno unido a cualquier átomo de carbono de arilo heteroarilo está opcionalmente reemplazado con -R^{11}, un átomo de hidrógeno unido a cualquier átomo de nitrógeno del sistema de anillos está opcionalmente reemplazado con -R^{1};
cada R^{10} es independientemente -OH, -SH, -F, -Cl, -Br, -I, -NO_{2}, -CN, -NH_{2}, -CO_{2}H, -C(O)NH_{2}, -N(H)C(O)H, -N(H)C(O)NH_{2}, -perfluoroalquilo, -O-alquilo, -O-arilo, -O-alquilarilo, -N(H)alquilo, -N(H)arilo, -N(H)-alquilarilo, -N(alquilo)_{2}, -C(O)N(H)alquilo, -C(O)N(alquilo)_{2}, -N(H)C(O)alquilo, -N(H)C(O)Oalquilo, -N(H)C(O)Oarilo, -N(H)C(O)Oalquilarilo, -N(H)C(O)Oheteroarilo, -N(H)C(O)Oalquilheteroarilo, -N(H)C(O)Ocicloalquilo, -N(H)C(O)N(H)alquilo, -N(H)C(O)N(alquilo)_{2}, -N(H)C(O)N(H)arilo, -N(H)C(O)N(H)alquilarilo, -N(H)C(O)N(H)heteroarilo, -N(H)C(O)N(H)alquilheteroarilo, -N(H)C(O)N(H)cicloalquilo, -S-alquilo, -S-arilo, -S-alquilarilo, -S(O)_{2}alquilo, -S(O)alquilo, -C(O)alquilo, -CH_{2}NH_{2}, -CH_{2}N(H)alquilo, -CH_{2}N(alquilo)_{2}, -alquilo, -cicloalquilo, -arilo, -heteroarilo, -heterociclilo, -alquilcicloalquilo, -alquilarilo, -alquilheteroarilo o -alquilheterociclilo, en donde un átomo de hidrógeno unido a cualquier átomo de carbono de arilo o heteroarilo está opcionalmente reemplazado con R^{11} y un átomo de hidrógeno unido a cualquier átomo de nitrógeno está opcionalmente reemplazado con R^{1}; y en donde:
X es -C(R^{3})_{2}-;
m es 0 ó 1;
R^{1} es -H, -R^{8}, -c(O)R^{8}, -C(O)C(O)R^{8}, -S(O)_{2}R^{8}, -S(O)R^{8}, -C(O)OR^{8}, -C(O)N(H)R^{8}, -S(O)_{2}N(H)-R^{8}, -S(O)N(H)-R^{8}, -C(O)C(O)N(H)R^{8}, -C(O)CH=CHR^{8}, -C(O)CH_{2}OR^{8}, -C(O)CH_{2}N(H)R^{8}, -C(O)N(R^{8})_{2}, -S(O)_{2}N(R^{8})_{2}, -S(O)N
(R^{8})_{2}, -C(O)C(O)N(R^{8})_{2}, -C(O)CH_{2}N(R^{8})_{2}, -CH_{2}R^{8}, -CH_{2}-alquenil-R^{8} o -CH_{2}-alquinil-R^{8};
R^{4} y un R^{5}, junto con los átomos a los que están unidos, forman un sistema de anillos seleccionado entre:
180
181
y el otro R^{5} es H, en donde un átomo de hidrógeno unido a cualquier átomo de carbono de alquilo o cicloalquilo está opcionalmente reemplazado con R^{10}, o R^{4} y un R^{5}, junto con los átomos a los que están unidos, forman un sistema de anillos:
182 y el otro R^{5} es H;
R^{6} es -H;
cada R^{8} es independientemente -alquilo, -cicloalquilo, -arilo, -heteroarilo, -heterociclilo, -alquilcicloalquilo, -alquilarilo, -alquilheteroarilo o -alquilheterociclilo, en donde un átomo de hidrógeno unido a cualquier átomo de carbono de alquilo o cicloalquilo está opcionalmente reemplazado con R^{10}, un átomo de hidrógeno unido a cualquier átomo de carbono de arilo o heteroarilo está opcionalmente reemplazado con R^{11}, y un átomo de hidrógeno unido a cualquier átomo de nitrógeno está opcionalmente reemplazado con R^{1};
cada R^{9} es independientemente -arilo, -heteroarilo, cicloalquilo o -heterociclilo, en donde un átomo de hidrógeno unido a cualquier átomo de carbono de alquilo o cicloalquilo está opcionalmente reemplazado con R^{10}, un átomo de hidrógeno unido a cualquier átomo de carbono de arilo o heteroarilo está opcionalmente reemplazado con R^{11}, y un átomo de hidrógeno unido a cualquier átomo de nitrógeno está opcionalmente reemplazado con R^{1};
cada R^{11} es independientemente -OH, -SH, -F, -Cl, -Br, -I, -NO_{2}, -CN, -NH_{2}, -CO_{2}H, -C(O)NH_{2}, -N(H)C(O)H, -N(H)C(O)NH_{2}, -alquilo, -cicloalquilo, -perfluoroalquilo, -O-alquilo, -O-arilo, -O-alquilarilo, -N(H)alquilo, -N(H)arilo, -N(H)-alquilarilo, -N(alquilo)_{2}, -C(O)N(H)alquilo, -C(O)N(alquilo)_{2}, -N(H)C(O)alquilo, -N(H)C(O)N(H)alquilo, -N(H)C(O)N(alquilo)_{2}, -S-alquilo, -S-arilo, -S-alquilarilo, -S(O)_{2}alquilo, -S(O)alquilo, -C(O)alquilo, -CH_{2}NH_{2}, -CH_{2}N(H)alquilo o -CH_{2}N(alquilo)_{2};
R^{12} es -C(O)alquilo, -C(O)cicloalquilo, -C(O)alquenilo, -C(O)alquilarilo, -C(O)alquilheteroarilo, -C(O)heterociclilo o -C(O)alquilheterociclilo;
R^{13} es -H, -alquilo, -arilo, -alquilarilo o -alquilheteroarilo; y en donde el término:
"alquilo" se refiere a un hidrocarburo alifático saturado que tiene 1 a 6 átomos de carbono,
"alquenilo" se refiere a un hidrocarburo alifático insaturado que tiene 2 a 6 átomos de carbono y por lo menos un doble enlace,
"alquinilo" se refiere a un hidrocarburo alifático insaturado que tiene 2 a 6 átomos de carbono y por lo menos un triple enlace,
"cicloalquilo" se refiere a un sistema de anillos hidrocarbonado mono o policíclico, no aromático,
"arilo" se refiere a un sistema de anillos mono o policíclico, aromático que tiene 6, 10, 12 ó 14 átomos de carbono,
"heteroarilo" se refiere a un sistema de anillos mono o policíclico, aromático que tiene 1 a 15 átomos de carbono y 1 a 4 heteroátomos seleccionados independientemente entre azufre, nitrógeno y oxígeno, y
"heterociclilo" se refiere a un sistema de anillos mono o policíclico, no aromático que tiene 1 a 15 átomos de carbono y 1 a 4 heteroátomos independientemente seleccionados entre azufre, nitrógeno y oxígeno.
2. El compuesto según la reivindicación 1, opción (B) o (D), en el que Y es:
\vskip1.000000\baselineskip
183 
\vskip1.000000\baselineskip
y V se selecciona del grupo que consiste en; CH_{3}O,
\vskip1.000000\baselineskip
184 
\hskip1cm
185 
\vskip1.000000\baselineskip
3. El compuesto según la reivindicación 1 ó 2, en el que un R^{3} es -H y el otro R^{3} es metilo, isopropilo, terc-butilo, -CH_{2}S R^{8}, -CH_{2}SO_{2}R^{8}, -CH_{2}CH_{2}SR^{8} o -CH_{2}CH_{2}SO_{2}R^{8}.
4. El compuesto según la reivindicación 3, en el que un R^{3} es -H y el otro R^{3} es metilo.
5. El compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1-4, en el que R^{1} es -C(O)R^{8} o -C(O)C(O)R^{8}.
6. El compuesto según la reivindicación 1 ó 2 en el que R^{4} y un R^{5}, junto con los átomos a los que están unidos, forman un sistema de anillos seleccionado entre:
186
y el otro R^{5} es H, en el que un átomo de hidrógeno unido a cualquier átomo de carbono de alquilo o cicloalquilo está opcionalmente reemplazado con R^{10}.
7. El compuesto según la reivindicación 6, en el que un R^{3} es -H y el otro R^{3} es metilo, isopropilo, terc-butilo, -CH_{2}SR^{8}, -CH_{2}SO_{2}R^{8}, -CH_{2}CH_{2}SR^{8} o -CH_{2}CH_{2}SO_{2}R^{8}.
8. El compuesto según la reivindicación 7, en el que un R^{3} es -H y el otro R^{3} es metilo.
9. El compuesto según la reivindicación 8, en el que R^{1} es -C(O)R^{8} o -C(O)C(O)R^{8}.
\vskip1.000000\baselineskip
187
1870 
\vskip1.000000\baselineskip
10. El compuesto según la reivindicación 1 ó 2, en el que un R^{4} y un R^{5}, junto con los átomos a los que están unidos, forman un sistema de anillos:
188, y el otro R^{5} es H.
11. El compuesto según la reivindicación 10, en el que un R^{3} es -H y el otro R^{3} es metilo, isopropilo, terc-butilo, -CH_{2}SR^{8}, -CH_{2}SO_{2}R^{8}, -CH_{2}CH_{2}SR^{8} o -CH_{2}CH_{2}SO_{2}R^{8}.
12. El compuesto según la reivindicación 11, en el que un R^{3} es -H y el otro R^{3} es metilo.
13. El compuesto según la reivindicación 12, en el que R^{1} es -C(O)R^{8} o -C(O)C(O)R^{8}.
\newpage
14. El compuesto según la reivindicación 1, opción (A) o (C), en el que dicho compuesto se selecciona del grupo que consiste en:
189
190
191
192
193
194
195
196
197
198
199
200
201
202 
\newpage
15. El compuesto según la reivindicación 1, opción (D), en el que dicho compuesto se selecciona del grupo que consiste en:
203
204
205
206
207
208 
\vskip1.000000\baselineskip
16. Un compuesto seleccionado del grupo que consiste en:
209
210
211
17. Una composición farmacéutica que comprende: a) un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1-15; y b) un vehículo o adyuvante farmacéuticamente aceptable.
18. El uso de un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1-15 o una composición farmacéutica según la reivindicación 17 en la elaboración de un medicamento para tratar o prevenir una enfermedad seleccionada entre una enfermedad mediada por IL-1, una enfermedad mediada por apoptosis, una enfermedad inflamatoria, una enfermedad autoinmunitaria, un trastorno destructivo óseo, un trastorno proliferativo, una enfermedad infecciosa, una enfermedad degenerativa, una enfermedad necrótica, una enfermedad provocada por ingesta excesiva de alcohol en la dieta, una enfermedad mediada por virus, peritonitis inflamatoria, artrosis, pancreatitis, asma, síndrome de dificultad respiratoria aguda, glomerulonefritis, artritis reumatoidea, lupus eritematoso sistémico, escleroderma, tiroiditis crónica, enfermedad de Grave, gastritis autoinmunitaria, diabetes mellitus insulinodependiente (Tipo I), anemia hemolítica autoinmunitaria, neutropenia autoinmunitaria, trombocitopenia, hepatitis activa crónica, miastenia grave, enfermedad inflamatoria de los intestinos, enfermedad de Crohn, psoriasis, dermatitis atópica, enfermedad injerto contra hospedante, osteoporosis, leucemias y trastornos asociados, síndrome mielodisplásico, trastorno óseo asociado a mieloma múltiple, leucemia mielógena aguda, leucemia mielógena crónica, melanoma metastásico, sarcoma de Kaposi, mieloma múltiple, septicemia, choque septicémico, Shigelosis, enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson, isquemia cerebral, isquemia de miocardio, atrofia muscular espinal, esclerosis múltiple, encefalitis relacionada con el sida, encefalitis relacionada con el VIH, senilidad, alopecia, daño neurológico debido a accidente cerebrovascular, colitis ulcerosa, lesión cerebral traumática, rechazo al trasplante de órganos, hepatitis B, hepatitis C, hepatitis G, fiebre amarilla, fiebre del dengue o encefalitis japonesa, en un paciente.
19. El uso de un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1-15 o una composición farmacéutica según la reivindicación 17 en la elaboración de un medicamento para inhibir una función mediada por ICE en un paciente que lo necesita.
20. El uso de un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1-15 o una composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 17 en la elaboración de un medicamento para disminuir la producción de IGIF o IFN-\gamma en un paciente que lo necesita.
21. El uso según la reivindicación 18, en el que la enfermedad es artritis reumatoidea, enfermedad inflamatoria de los intestinos, colitis ulcerosa, peritonitis inflamatoria, choque septicémico, pancreatitis, lesión cerebral traumática, rechazo al trasplante de órganos, artrosis, asma, psoriasis, enfermedad de Alzheimer, dermatitis atópica, leucemias y trastornos relacionados, síndrome mielodisplásico o mieloma múltiple.
22. Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1-15 o una composición farmacéutica según la reivindicación 17, para usar en el tratamiento prevención de una enfermedad seleccionada entre enfermedad mediada por IL-1, por apoptosis, una enfermedad inflamatoria, una enfermedad autoinmune, un trastorno destructivo óseo, un trastorno proliferativo, una enfermedad infecciosa, una enfermedad degenerativa, una enfermedad necrótica, una enfermedad por la ingesta excesiva de alcohol en la dieta, una enfermedad mediada por un virus, peritonitis inflamatoria, artrosis, pancreatitis, asma, síndrome de dificultad respiratoria aguda, glomerulonefritis, artritis reumatoidea, lupus eritematoso sistémico, escleroderma, tiroiditis crónica, enfermedad de Grave, gastritis autoinmunitaria, diabetes mellitus insulinodependiente (Tipo I), anemia hemolítica autoinmunitaria, neutropenia autoinmunitaria, trombocitopenia, hepatitis activa crónica, miastenia grave, enfermedad inflamatoria de los intestinos, enfermedad de Crohn, psoriasis, dermatitis atópica, enfermedad injerto contra hospedante, osteoporosis, leucemias y trastornos relacionados, síndrome mielodisplásico, trastorno óseo asociado con mieloma múltiple, leucemia mielógena aguda, leucemia mielógena crónica, melanoma metastásico, sarcoma de Kaposi, mieloma múltiple, septicemia, choque septicémico, Shigelosis, enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson, isquemia cerebral, isquemia de miocardio, atrofia muscular espinal, esclerosis múltiple, encefalitis relacionada con el sida, encefalitis relacionada con el VIH, senilidad, alopecia, daño neurológico debido a accidente cerebrovascular, colitis ulcerosa, daño cerebral traumático, rechazo de transplante de órganos, hepatitis B, hepatitis C, hepatitis G, fiebre amarilla, virus de la fiebre del dengue o encefalitis japonesa, en un paciente.
23. Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1-15 o una composición farmacéutica según la reivindicación 17, para usar en la inhibición de una función mediada por ICE en un paciente que lo necesita.
24. Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1-15 o una composición farmacéutica según la reivindicación 17, para usar en la disminución de la producción de IGIF o IFN-\gamma en un paciente que lo necesita.
25. El compuesto o la composición farmacéutica según la reivindicación 24, en el que la enfermedad es artritis reumatoidea, enfermedad inflamatoria de los intestinos, enfermedad de Crohn, colitis ulcerosa, peritonitis inflamatoria, choque septicémico, pancreatitis, daño cerebral traumático, rechazo de transplante de órganos, artrosis, asma, psoriasis, enfermedad de Alzheimer, dermatitis atópica, leucemias y trastornos relacionados, síndrome mielodisplásico, o mieloma múltiple.
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