JPH11511463A

JPH11511463A - インターロイキン変換酵素およびアポプトーシス

Info

Publication number: JPH11511463A
Application number: JP9510590A
Authority: JP
Inventors: レビー，マーク・アラン; リー，デニス; グリーソン，ジョン・ジェラルド; テイラー，アンドリュー・ウィリアム; コーバート，デイビッド・フランシス
Original assignee: SmithKline Beecham Corp
Current assignee: SmithKline Beecham Corp
Priority date: 1995-08-31
Filing date: 1996-08-29
Publication date: 1999-10-05
Also published as: WO1997008174A1; EP0859779A1; EP0859779A4

Abstract

(57)【要約】本発明は、式（Ｉ）の新規化合物、それらの医薬組成物、ならびにアポプトーシスおよび過剰または不適当な細胞死により引き起こされる疾病状態の治療に用いる、ＩＣＥおよびＩＣＥ様蛋白の新規阻害に関する。

Description

【発明の詳細な説明】インターロイキン変換酵素およびアポプトーシス発明の分野本発明は、過剰または不適切なアポプトーシスの新たな遮断方法を見出したことに関する。背景種々の形態の細胞死があることが１世紀にわたり認識されてきた。細胞死の１つの形態である壊死は、通常には、重度の外傷の結果であり、膜の完全性の喪失および細胞内容物の制御されない放出に関与しており、しばしば、炎症応答を引き起こす。対照的に、アポプトーシスは制御された様式で起こる、より生理学的なプロセスであり、一般的には、本質的に非炎症性である。このため、アポプトーシスは、しばしば、プログラムされた細胞死といわれる。その名称自体（アポプトーシス：「脱落」、例えば、木から葉が落ちることのギリシャ語）は、正常な生理学的プロセスの一部である細胞死を意味する（Kerr et.al.，Br．J．Canc er，26:239-257(1972)）。アポプトーシスは、最終的には細胞死を招く、注意深く制御された一連の細胞の出来事であると思われる。望ましくない細胞を除去する、このプロセスは活性であり、細胞エネルギーの浪費を必要とする。アポプトーシスの形態学的特徴は、細胞収縮および細胞−細胞接触の消失、核クロマチンの縮合、ついで、断片化、膜のしわ、膜の水泡、およびアポプトーシス小体の出現を包含する。プロセスの終了時に、隣接細胞およびマクロファージはアポプトーシス細胞由来のフラグメントを食作用により取り込む。該プロセスは非常に迅速であり、２−３時間程度で起こる(Bright et al.，Biosci．Rep.，14:67-82(1994))。アポプトーシスのうち最も良く定義された生化学的出来事は、核ＤＮＡの順序付けられた破壊である。アポプトーシスのシグナルは、ヌクレオソーム間のリンカー領域において２本鎖ＤＮＡを開裂する特異的カルシウム−およびマグネシウム−依存性エンドヌクレアーゼの活性化を促進する。これにより、１８０−２００塩基対のフラグメントであるＤＮＡフラグメントが多数生じる(Bergamaschi e t al.,Haematologia,79:86-93(1994);Stewart JNCI,，86:1286-1296(1994))。アガロースゲル電気泳動により試験すると、これらの多数のフラグメントは、アポプトーシス中の大部分の細胞に特徴的なはしご状（ラダー）パターンを形成する。細胞にシグナルを与えて細胞のアポプトーシスを開始または促進しうる多くの刺激があり、これらは細胞ごとに異なる可能性がある。これらの刺激は、グルココルチコイド、ＴＮＦα、成長因子誘導、いくつかのウイルス蛋白、放射線照射および抗癌剤を包含しうる。これらの刺激のいくつかは、種々の細胞表面受容体、例えば、受容体のＴＮＦ／神経増殖因子ファミリー（ＣＤ４０およびＦａｓ／Ａｐｏ−１を包含）を介して、それらのシグナルを誘導しうる（Brightらの上記文献）。アポプトーシスを引き起こす、このような刺激の多様性により、アポプトーシスに関与するシグナル伝達経路および分子的因子を明らかにすることは困難であった。アポプトーシスに必須の特定分子に関する最良の証拠は、線虫C.elegansの研究から得られた。この系において、アポプトーシスの誘導に必要と思われる遺伝子はＣｅｄ−３およびＣｅｄ−４である。これらの遺伝子は死につつある細胞中で機能しているにちがいなく、いずれかの遺伝子が不活性化された場合、細胞死は起こらない（Yuan et al.，Devel．Biol．138:33-41(1990)）。哺乳動物においては、アポプトーシスに関連している遺伝子は、プロト−オンコジーンｃ−ｍｙｃおよび腫瘍抑制遺伝子ｐ５３を包含する(Bright et al.,上記；Symonds et al.,Cell,78:703-711(1994))。アポプトーシスを受けるか受けないかというこの重要な決定において、これらの遺伝子はアポプトーシスを阻害する蛋白をプログラムする遺伝子であるということは驚くべきことではない。C．elegans における例はＣｅｄ−９である。その遺伝子が異常に活性化された場合、細胞は本来死ぬところを生き残り、逆にＣｅｄ−９が不活性化された場合、細胞は本来生存するところを死滅する(Stewa rt,B.W の上記文献)。哺乳動物の同等遺伝子はｂｃ１−２であり、それは発癌性腫瘍遺伝子として同定されている。その産物が種々の哺乳動物細胞中で過剰発現された場合に、この遺伝子はアポプトーシスを阻害し、細胞を放射線照射、細胞毒性薬剤およびｃ−ｍｙｃのごときアポプトーシスシグナルに対して感受性でなくする(Bright らの上記文献)。いくつかのウイルス蛋白は、類似機能を有する相同的ウイルス蛋白を生成することにより、この特定の蛋白がアポプトーシスを遮断する能力を利用する。かかる状況の一例は、エププステイン・バールウイルスにより産生される蛋白であり、それはｂｃ１−２に類似であり、細胞死を防止してウイルス産生を促進する(Wells et．al.，J．Reprod．Fertil.，101:385-39 1(1994))。対照的に、いくつかの蛋白はｂｃ１−２蛋白に結合し、その機能を阻害する可能性があり、一例は蛋白ｂａｘである（Stewart，B.W.の上記文献）。描かれた俯瞰像は、アポプトーシスへの導入は、アポプトーシスを促進または阻害する特定の遺伝子産物間の注意深いバランス作用により調節されているというものである（Barinaga，Science，263：754-756((1994)）。アポプトーシスは正常な生理の重要な一部分である。このことについて最もよく引用される２つの例は、胎児の発達および免疫細胞の発達である。胎児の神経系の発達においては、成熟脳を形成のための発達の間においてンがアポプトーシスにより失われる(Bergamaschi et al.，Haematologia，79:86-93(1994))。免疫成分であるＴ細胞（およびＢ細胞についても弱い証拠がある）においては、自己を認識し、自己に対して反応する細胞を除去する選択プロセスが生じる。この選択プロセスは、免疫細胞成熟領域においてアポプトーシス的様式で起こると考えられている(Williams,G.T.，J.Pathol.，173:1-4(1994);Krammer et al.，Curr ．Opin．Immunol.，6:2279-289(1994))。アポプトーシスの調節不全は疾病状態において重要な役割を果たす可能性があり、疾病は、アポプトーシス過剰または過少により引き起こされる可能性がある。過少なアポプトーシスに関連した疾病の一例はある種の癌であろう。機能的なｂｃｌ−２の異常な発現および当該細胞におけるアポプトーシスの阻害に関連した卵胞Ｂ細胞リンパ腫がある（Bregamaschi et al 上記）。アポプトーシスの阻害および癌細胞の産生に関するｐ５３の欠失または変異に関連した多くの報告がある(Kerr et al.，Cancer 73:2013-2026(1994))。対照的に、過剰または不適当なアポプトーシスの一例は、アルツハイマー病を引き起こす、ニューロン細胞の消失であり、おそらく、β−アミロイドペプチドにより誘導されるのであろう（ Barr et al.，BioTechnology, 12:487-493(1994))）。他の例は、ＨＩＶ感染を引き起こすＣＤ４⁺Ｔ細胞の過剰なアポプトーシス、心筋梗塞または再灌流の間における心筋細胞の過剰なアポプトーシス、および虚血の間のニューロン細胞の過剰なアポプトーシスを包含する(Bergamaschiet らの上記文献；Barret らの上記文献)。癌において観察されるアポプトーシスの欠損に対抗するようないくつかの医薬がある。例は、エピポドフィロトキシンのごときトポイソメラーゼII阻害剤、およびａｒａ−ｃのごとき抗代謝剤を包含し、それらは癌細胞中のアポプトーシスを促進することが報告されている(Ashwellらの上記文献)。多くの場合、これらの抗がん剤については、アポプトーシス誘導の正確な機構は解明途中である。最近数年間で、ＩＣＥおよびＩＣＥ相同的蛋白がアポプトーシスにおいて重要な役割を果たしているという証拠が挙げられた。この研究領域は、C．elegansのアポプトーシスにとり重要であることが知られている遺伝子Ｃｅｄ−３によりコードされる蛋白間の相同性の観察により刺激された。これらの２つの蛋白は２９％のアミノ酸同一性を有し、５個のアミノ酸（ＱＡＣＲＧ）における完全な同一性はプロテアーゼ活性に関与していると考えられている（Yuan et al.，Cell，7 5:641-652(1993)）。マウスにおいて、ＩＣＥおよびｎｅｄｄ−２遺伝子（発達中の脳におけるアポプトーシスに関与している可能性がある）の産物の間(Kumar et al.，Genes Dev.,8:1613-1626(1994))、ならびにヒト・脳ｃＤＮＡライブラリーから単離されたｎｅｄｄ−２のヒト・同等物Ｉｃｈ−１およびＣＰＰ３２の間（ＩＣＥおよびCed-3相同体−１）（Wang et al.，Cell，78:739-750(1994)； Fernandes-Alnemiri et al.，J．Biol．Chem.，269:30761-30764(1994)）にさらなる相同性が観察された。アポプトーシスにおけるこれらの蛋白の役割についてのさらなる証明はトランスフェクションによる研究により得られる。一時的トランスフェクションアッセイにおいてプログラムされた死を被る繊維芽細胞により引き起こされるネズミ・ＩＣＥの過剰発現である（Miura et al.，Cell，75:653-660(1993)）。ＩＣＥおよびＣｅｄ−３間の最高の相同性領域においてトランスフェクション遺伝子を点突然変異させることにより、細胞死を防止することができた。アポプトーシスにおけるＩＣＥの役割についての非常に強い根拠として、その著者らは、ＩＣＥトランスフェクションにより誘導されるアポプトーシスは、プログラムされた細胞死を防止できる哺乳動物腫瘍遺伝子ｂｃｌ−２の過剰発現によって拮抗されうることを示した(Miuraらの上記文献)。ウシ・ポックスウイルスのこの遺伝子は、プロテアーゼ阻害剤蛋白のファミリーであるセプリン蛋白をコードしている（Ray et al.，Cell，69:597-604(1992)）。詳細には、ｃｒｍＡの蛋白は、ＩＣＥによるプロインターロイキン−１βのプロセッシングを阻害することが示された。Gagliardini et al.Science,263:826-828(1994)には、後根神経節ニューロン中へのｃｒｍＡ遺伝子の微量注入により、神経増殖因子誘導により誘発される細胞死が防止されたことが示されている。この結果は、ＩＣＥがニューロン細胞のアポプトーシスに関与していることを示す。より直接的なデモンストレーションは、ＩＣＥトランスフェクションをｃｒｍＡの同時発現と組み合わせた実験から得られ、ＩＣＥにより誘導されるアポプトーシス応答がｃｒｍＡにより抑制されることが示されている(Miura らの上記文献；Wang らの上記文献)。ＩＣＥのほかに、研究者は、アポプトーシスを促進するＩＣＥ様遺伝子の能力について調べている。Kumar らの上記文献には、繊維芽細胞および繊維芽細胞腫細胞におけるｎｅｄｄ−２の過剰発現はアポプトーシスによる細胞死を引き起こし、このアポプトーシスはｂｃｌ−２遺伝子の発現により抑制されうることが示された。最も最近になって、Wang らは(Wang らの上記文献)、多くの哺乳動物細胞におけるＩｃｈ−１の発現について調べた。発現は細胞アポプトーシスを引き起こし、ｂｃｌ−２との同時発現によりアポプトーシスは拮抗されることができた。ＱＡＣＲＧモチーフに含まれ、プロテアーゼ機能にとり重要であると推測されるシステイン残基のセリンへの変異により、アポプトーシス活性が消失した。アポプトーシスにおけるシステインプロテアーゼの役割についての証拠は、La zebnikによる最近の報告（Nature，371:346-347(1994)）から得られる。これらの著者は無細胞系を用いてアポプトーシスを模倣し、研究した。それらの系において、プレインターロイキン−１β中の開裂部位と同じ部位において酵素ポリ（ＡＤＰ−リボース）ポリメラーゼを開裂するプロテアーゼ活性が存在する。しかしながら、これは単離されるべきプロテアーゼであり、ＩＣＥは異なっているように思われ、異なる基質蛋白に作用するように思われる。非選択的システインプロテアーゼ阻害剤を用いる系中のプロテアーゼ活性の遮断によりアポプトーシスの阻害が引き起こされた。上記証拠を一緒にすると、哺乳動物細胞におけるアポプトーシスの誘導におけるＩＣＥおよびＩＣＥ様蛋白の顕著な関与がわかる。脳インターロイキン−１は、アルツハイマー病およびダウン症候群の発病を促進することが報告されている（Griffin et al.，Proc．Natl．Acad．Sci．USA.，86:7611-7615(1989)）。さらに、インターロイキン−１がβ−アミロイドド蛋白（アルツハイマー病の老人性プラークならびにダウン症候群および老化中のヒトの脳中の主成分）のｍＲＮＡおよび産生を増大させることも報告されている（Forloni et al.，Mol．Brain Res.，16:128-134(1992);Buxbaum et al.，Proc．Natl．Acad．Sci．USA.，89: 10075-10078(1992);Goldgaber et al.， Proc． Natl． Acad． Sci． USA.， 86:7606-7610(1989)）。これらの報告を、これらの疾病におけるＩＣＥの関与およびそれによる新規治療薬および療法の使用の必要性についてのさらなる証拠として見ることができる。現在に至るまで、過剰または不適当なアポプトーシスを遮断する有用な治療方法はない。１の特許出願ＥＰＯ０５３３２２６には新規ペプチド構造が開示されており、それはＩＣＥ活性を調べるのに有用であり、それゆえ、ＩＬ−１により媒介される疾病の診断およびモニタリングに有用であると言われている。それゆえ、哺乳動物に使用する、無毒な薬理学的および毒物学的特性を有する、よりよい治療薬を見出すことが必要である。これらの化合物は、過剰または不適当なアポプトーシス細胞を遮断し、それゆえ、この状態が出現する疾病および症状の治療を提供するものである。発明の概要本発明は、式(I)の新規化合物、それらの医薬組成物、ならびにアポプトーシスおよび過剰または不適当な細胞死により引き起こされる疾病状態の治療に使用するＩＣＥおよびＩＣＥ様蛋白の新規阻害に関する。本発明のもう１つの態様は、式（Ｉ）の化合物、またはその医薬上許容される塩、および医薬上許容される担体もしくは希釈剤を含んでなる医薬組成物に関する。本発明のもう１つの態様は、過剰なＩＬ−１β変換酵素活性に関連した疾病または障害の治療を要する哺乳動物における過剰なＩＬ−１β変換酵素活性に関連した疾病または障害の治療方法であって、該哺乳動物に有効量の式（Ｉ）の化合物またはその医薬上許容される塩を投与することを特徴とする方法に関する。本発明のもう１つの態様は、アポプトーシスを予防または抑制する治療が必要な哺乳動物、好ましくはヒトにおけるアポプトーシスの予防または抑制方法であって、該哺乳動物に有効量の式（Ｉ）の化合物またはその医薬上許容される塩を投与することを特徴とする方法に関する。本発明のもう１つの態様は、ＩＬ−１βおよび／またはＴＮＦ産生を遮断する治療を必要とする哺乳動物、好ましくはヒトにおけるＩＬ−１βおよび／またはＴＮＦ産生の遮断方法であって、該哺乳動物またはヒトに有効量の式（Ｉ）の化合物またはその医薬上許容される塩を投与することを特徴とする方法に関する。発明の詳細な説明本発明化合物は、１個またはそれ以上の不斉炭素を、詳細には６または７位に有していてもよく、ラセミ体および光学活性形態として存在してもよい。これらの化合物のすべては本発明の範囲内である。好ましくは、化合物は６Ｒ,７Ｓ立体配置である。好ましくは、式（Ｉ）の化合物またはその医薬上許容される塩は下記構造式：［式中、Ｒ¹は水素、置換されていてもよいアルコキシ、またはハロゲンであり；Ｒ₂はＯＲ_aであり；Ｒ_aはＣ_1-4アルキル、または置換されていてもよいアリールＣ_1-4アルキシであり；Ｒ₃は水素、−ＯＣ(Ｏ)Ｒ₅、Ｓ(Ｏ)ｎＲ₆、または臭素であるが；ただし、Ｒ₃ が水素である場合にはＲ₄は水素以外であり；Ｒ₄は水素であり；Ｒ₅はＣ_1-6アルキル、Ｃ_3-7シクロアルキル、置換されていてもよいアリール、または置換されていてもよいアリールアルキルであり；Ｒ₆は置換されていてもよいアリール、または置換されていてもよいヘテロアリールであり；ｍは１または２の値を有する整数であり；ｎは０であるか、または１もしくは２の値を有する整数である］で示される。適当には、式（Ｉ）の化合物については、Ｒ₁は水素、ハロゲン、または置換されていてもよいＣ_1-4アルコキシである。Ｒ₁がアルコキシである場合、炭素鎖は、ヒドロキシ、ハロゲン、アルコキシ、Ｃ(Ｏ)Ｈ、Ｃ(Ｏ)₂Ｒ_c、またはＣ(Ｏ) ＣＨ₃残基により独立して１回またはそれ以上置換されていてもよく、Ｒ_cは水素、Ｃ_1-6アルキル、アリール、またはアリールＣ_1-4アルキルである。好ましくは、Ｒ₁はメトキシである。適当には、式（Ｉ）の化合物については、Ｒ₂はＯＲ_aであり；Ｒ_aはＣ_1-4アルキル、または置換されていてもよいアリールＣ_1-4アルキルであり、好ましくはベンジルである。アリールアルキル残基中のアルキル基は、メチレンまたは置換メチレン基のごとき分枝または直鎖のものであってもよく、すなわち、−ＣＨ (ＣＨ₃)−アリールのごときものであってもよいことが認識される。Ｒ_aが置換されていてもよいアリールＣ_1-4アルキルである場合、アリール環は、ヒドロキシ、ハロゲン、アルキルまたはアルコキシにより独立して１回またはそれ以上置換されていてもよい。適当には、式（Ｉ）の化合物については、ｍは１または２である。好ましくは、ｍは２である。式（Ｉ）の化合物については、Ｒ₃は水素、−ＯＣ(Ｏ)Ｒ₅、Ｓ(Ｏ)_nＲ₆、またはブロモであるが、Ｒ₃が水素である場合Ｒ₄は水素以外のものである。Ｒ₃が− ＯＣ(Ｏ)Ｒ₅である場合、適当にはＲ₅基はＣ_1-6アルキル、Ｃ_3-7シクロアルキル、置換されていてもよいアリール、または置換されていてもよいアリールアルキルであり；好ましくは、Ｒ₅はＣ_1-6アルキルであり、より好ましくはメチルである。Ｒ₃がＳ(Ｏ)_nＲ₆である場合、適当には、Ｒ₆は置換されていてもよいアリール、または置換されていてもよいヘテロアリールであり；ｎは０、または１もしくは２の値を有する整数である。Ｒ₆が以下に定義されるようなヘテロアリールである場合、好ましくは、それはトリアゾール、オキサジアゾール、またはテトラゾール残基である。また、Ｒ₆が以下に定義するようなアリールである場合、好ましくは、それはフェニルであり；好ましくはｎの値は１または２である。Ｒ₆ がヘテロアリールである場合、好ましくはｎは０である。ヘテロアリールまたはアリール環は、ヒドロキシ、ハロゲン、アルキルまたはアルコキシにより、好ましくはアルキルにより、より好ましくはメチルにより独立して１回またはそれ以上置換されていてもよい。式（Ｉ）により示される化合物は、以下のものを包含するが、これらに限らない：３,４−ジクロロベンジル（６Ｒ,７Ｓ）−３−アセトキシメチル−７−メトキシ−３−セフェム−４−カルボキシレート−１,１−ジオキシド tert-ブチル（６Ｒ,７Ｓ）−３−アセトキシメチル−７−（２−ヒドロキシエトキシ）−３−セフェム−４−カルボキシレート−１,１−ジオキシド３,４−および２,３−ジメチルベンジル（６Ｒ,７Ｓ）−３−アセトキシメチル−７−メトキシ−３−セフェム−４−カルボキシレート−１,１−ジオキシド４−ニトロベンジル（６Ｒ,７Ｓ）−３−アセトキシメチル−７−メトキシ− ３−セフェム−４−カルボキシレート−１,１−ジオキシド３,４−ジクロロベンジル（１ＲＳ、６Ｒ,７Ｓ）−７−メトキシ−３−アセトキシメチル−３−セフェム−４−カルボキシレート−１−オキシド３,４−ジクロロベンジル−（６Ｒ,７Ｒ）−７−メトキシ−３−アセトキシメチル−３−セフェム−４−カルボキシレート−１,１−ジオキシド４−ヨードベンジル−（６Ｒ,７Ｓ）−７−メトキシ−３−アセトキシメチル −３−セフェム−４−カルボキシレート−１,１−ジオキシド３−ヨードベンジル−（６Ｒ,７Ｓ）−７−メトキシ−３−アセトキシメチル −３−セフェム−４−カルボキシレート−１,１−ジオキシド３−ヨード−４−メチルベンジル−（６Ｒ,７Ｓ）−７−メトキシ−３−アセトキシメチル−３−セフェム−４−カルボキシレート−,１−ジオキシド３,４−ジクロロベンジル−（６Ｒ,７Ｓ）−７−［２−ヒドロキシエトキシ］ −３−アセトキシメチル−３−セフェム−４−カルボキシレート−１,１−ジオキシド３,４−ジクロロベンジル−（６Ｒ,７Ｓ）−７−［ｎ−ブトキシ］−３−アセトキシメチル−３−セフェム−４−カルボキシレート−１,１−ジオキシド３,４−ジクロロベンジル−（６Ｒ,７Ｓ）−７−エトキシ−３−アセトキシメチル−３−セフェム−４−カルボキシレート−１,１−ジオキシド３,４−ジクロロベンジル−（６Ｒ,７Ｓ）−３−ブロモメチル−７−メトキシ −３−セフェム−４−カルボキシレート−１,１−ジオキシド３,４−ジクロロベンジル−（６Ｒ,７Ｓ）−３−フェニルスルホニルメチル− ７−メトキシ−３−セフェム−４−カルボキシレート−１,１−ジオキシド３,４−ジクロロベンジル−（６Ｒ,７Ｓ）−３−［５−メチル−（１,３,４− オキサジアゾール）−２−チオメチル］−７−メトキシ−３−セフェム−４−カルボキシレート−１,１−ジオキシド３,４−ジクロロベンジル−（６Ｒ,７Ｓ）−３−［（１−メチルテトラゾール）−５−チオ］メチル−７−メトキシ−３−セフェム−４−カルボキシレート− １,１−ジオキシド３,４−ジクロロベンジル−（６Ｒ,７Ｓ）−３−［（１,２,３−トリアゾール）−４−チオメチル］−７−メトキシ−３−セフェム−４−カルボキシレート− １,１−ジオキシド。本発明方法に用いる式（Ｉ）の化合物は、上記化合物ならびに下記化合物を包含する： tert-ブチル(６Ｒ,７Ｓ)−３−アセトキシメチル−７−メトキシ−３−セフェム−４−カルボキシレート−１,１−ジオキシド tert-ブチル(６Ｒ,７Ｒ)−３−アセトキシメチル−７−メトキシ−３−セフェム−４−カルボキシレート−１,１−ジオキシドメチル（６Ｒ,７Ｓ）−３−アセトキシメチル−７−メトキシ−３−セフェム −４−カルボキシレート−１,１−ジオキシドベンジル（６Ｒ,７Ｓ）−３−アセトキシメチル−７−メトキシ−３−セフェム−４−カルボキシレート−１,１−ジオキシド。本明細書の用語「過剰なＩＬ−１β変換酵素活性」とは、該蛋白の過剰発現、または当該酵素の過剰な発現をいう。本明細書の用語「Ｃ_1-6アルキル」または「アルキル」は、鎖長について特記しないかぎり、１ないし６個の炭素原子からなる直鎖または分枝残基を意味し、メチル、エチル、n-プロピル、iso-プロピル、n-ブチル、sec-ブチル、iso-ブチル、tert-ブチル等を包含するが、これらに限らない。本明細書の用語「ヘテロアリール」(それ自体または「ヘテロアリールオキシ」もしくは「ヘテロアリールアルキル」のごとき組み合わせにおいて)は、１個またはそれ以上の環がＮ、ＯまたはＳからなる群より選択される１個またはそれ以上の異種原子を含んでいる５ないし１０員の芳香族環システムを意味し、例えば、ピロール、ピラゾール、フラン、チオフェン、キノリン、イソキノリン、キナゾリニル、ピリジン、ピリミジン、オキサゾール、オキサジアゾール、テトラゾール、チアゾール、チアジアゾール、トリアゾール、イミダゾール、ベンゾイミダゾール、を包含するが、これらに限らない。本明細書の用語「アリール」(それ自体または「アリールオキシ」もしくは「アリールアルキル」のごとき組み合わせにおいて)は、フェニルおよびナフチル環を意味する。本明細書の用語「シクロアルキル」は、環状残基、好ましくは３ないし７個の炭素のものを意味し、シクロプロピル、シクロペンチル、シクロヘキシル等を包含するが、これらに限らない。本明細書の用語「ハロ」または「ハロゲン」は、特記しないかぎり、クロロ、フルオロおよびヨードを包含する。本明細書において、「コア」基を下記のごとく番号付けする。本発明は、式（Ｉ）の化合物によるＩＣＥおよびＩＣＥ様プロテアーゼの阻害に関する。「ＩＣＥ様プロテアーゼ」なる用語は、ポリペプチドインターロイキン−１β変換酵素（またはコンバーターゼ）のフラグメント、相同物、アナログおよび誘導体を意味する。これらのアナログは、構造的に、ＩＣＥファミリーに関連している。一般的には、それらは、配列全体にわたってヒト・ＩＣＥに対して高い相同性を示す蛋白をコードしている。好ましくは、ペンタペプチドＱＡＣＲＧが保存されている。多くの天然の対立遺伝子変種（置換、欠失または付加のごとき）を包含してもよいＩＣＥ様プロテアーゼは、コードしているポリペプチドの機能を実質的には変化させない。すなわち、それらは、必然的に、ＩＣＥプロテアーゼと同じ生物学的機能または活性を保持しているが、生物学的機能が増強または低下した活性であってもよいことが認識される。適当な活性はＩＬ−１ β変換酵素活性ではなく、ある種の様式でアポプトーシスを誘導し、あるいはプログラムされた死に関与する能力である。本発明に含まれる適当なＩＣＥ様プロテアーゼは、１９９４年６月２３日出願のＰＣＴ／ＵＳ９４／０７１２７（代理人処理番号３２５８００−１８４）；および１９９４年１１月１日出願のＵＳＳＮ０８／３３４２５１(代理人処理番号３２５８００−２４９)に記載されており、参照によりこれらの開示を全体として本明細書に記載されているものとみなす。本明細書の用語「ＩＬ−１βおよび／またはＴＮＦの産生を遮断または阻害、あるいは減少」とは：ａ）インビボでサイトカイン放出を阻害することによる、ヒトにおけるサイトカインの過剰なレベルの、正常または正常以下のレベルまでの低下またはダウンレギュレーション；またはｂ）ヒトにおけるインビボでのサイトカイン（ＩＬ−１またはＴＮＦ）の過剰なレベルの、ゲノムレベルでの正常または正常以下のレベルまでのダウンレギュレーション；またはｃ）翻訳後の出来事としてのサイトカイン（ＩＬ−１またはＴＮＦ）の直接合成を阻害することによるダウンレギュレーション；またはｄ）ヒトにおけるインビボでのサイトカイン（ＩＬ−１またはＴＮＦ）の過剰なレベルの、翻訳レベルでの正常または正常以下のレベルまでのダウンレギュレーションをいう。ＩＬ−１βおよび／またはＴＮＦ産生の遮断もしくは阻害、または減少は、式 (Ｉ)の化合物がサイトカインであるＩＬ−１およびＴＮＦの阻害剤であるという知見であり、インビトロおよびインビボアッセイ（当該分野においてよく知られており、そのいくつかは本明細書に記載されている）におけるＩＬ−１およびＴＮＦの産生に対する式（Ｉ）の化合物の影響に基づくものである。本発明化合物を、Doherty et al.，J．Med．Chem.，1990，33，2513（参照によりその開示を本明細書に記載されているものとみなす）のごとき当該分野においてよく知られた方法により合成してもよい。別法として、式(Ｉ)の化合物を、下記スキームに従って合成してもよい。スキームＩジオキサン中で市販７−アミノセファロスポリン酸（１−スキームＩ）をイソブチレンおよび硫酸で処理することにより t-ブチルエステル（２−スキームＩ）を合成する。Doherty らの手順（J．Med．Chem.，1990，33，2513−2521）（参照によりその開示を本明細書に記載されているものとみなす））に従って、７−アルコキシ置換された３ａ−スキームＩおよび３ｂ−スキームＩを分離可能な混合物として得る。０℃においてトリフルオロ酢酸／アニソールで３−スキームＩを処理して、重炭酸ナトリウム水溶液で粉砕するすることにより、遊離酸５ −スキームＩまたはナトリウム塩４−スキームＩを得る。ＤＭＦ中での IV のハロゲン化ベンジルアルキル化により６−スキームＩを得る。ジアゾ誘導体(Braun et al.J．Am．Chem．Soc．1958，80，359-363（参照により本明細書に記載されているものとみなす））またはアルコキシイソウレア（Schmidt et al．Justus Liebigs Ann．Chem．1965，685，161-166（参照により本明細書に記載されているものとみなす））での５−スキームＩの処理により種々のアルキルエステル誘導体（６−スキームＩ）を得る。最後に、ｍ−クロロペルオキシ安息香酸またはオキソンでの６−スキームＩの酸化によりスルホンまたはスルホキシド７−スキームＩを得る。スキーム２過塩素酸中ＮａＮＯ₂およびアルコールでの処理（Alpegiani et al．米国特許第５２５４６８０号（参照により本明細書に記載されているものとみなす））により、８−スキーム２か１らアルコキシ誘導体９−スキーム２を１工程で得る。６−スキーム１について説明した手順による９−スキーム２のエステル化によりエステル１０−スキームＩを得る。ｍ−クロロペルオキシ安息香酸またはオキソンでの１０−スキームＩの酸化により１１−スキーム２を得る。Alpegiani et a l J．Med．Chem．1994，37，4003-4019(参照により本明細書に記載されているのとみなす)により概説された手順に従って以下の誘導体を合成することができる。ラジカル条件化で１１−スキーム２をＮ−ブロモサクシンイミドに曝露することにより３−ブロモメチル誘導体１２−スキーム２を得る。１３−スキーム２および１４−スキーム２は、臭素を芳香族チオールおよび酢酸水銀誘導体により置換することにより合成可能である。対応チオエーテル（１３−スキーム２）を酸化することによりスルホン１５−スキーム２を得る。合成化学さらに苦労することなく、当業者は、上記説明を用いて、本発明を最大限に利用することができると確信する。さらに下記実施例は、本発明化合物の合成を説明する。それゆえ、下記実施例は、本発明の単なる説明であり、本発明を何ら限定するものではないと解される。特記しないかぎり、温度をセ氏で表す。実施例１ tert- ブチル（６Ｒ,７Ｓ）−３−アセトキシメチル−７−メトキシ−３−セフェム−４−カルボキシレート−１,１−ジオキシド Doherty et al．Med．Chem.，1990，33，2513-2521 の手順に従って表記化合物を調製した。実施例２ tert- ブチル（６Ｒ,７Ｒ）−３−アセトキシメチル−７−メトキシ−３−セフェム−４−カルボキシレート−１,１−ジオキシド Doherty et al．Med．Chem.，1990，33，2513-2521 の手順に従って、最終混合物の少量成分として表記化合物を単離した。実施例３３,４−ジクロロベンジル（６Ｒ,７Ｓ）−３−アセトキシメチル−７−メトキシ −３−セフェム−４−カルボキシレート−１,１−ジオキシドａ）３,４−ジクロロベンジル（６Ｒ,７Ｓ）−３−アセトキシメチル−７−メトキシ−３−セフェム−４−カルボキシレート tert-ブチル(６Ｒ,７Ｓ)−７−メトキシ−３−アセトキシメチル−３−セフェム−４−カルボキシレート（Doherty et al．Med．Chem.，1990，33，2513−252 1の手順に従って調製）（１.０ｇ、２.９mmol）およびアニソール（３.２ｍｌ、２９mmol）に、アルゴン雰囲気下、０℃において、トリフルオロ酢酸（１６ｍｌ）を添加した。溶液を３０分攪拌し、ついで、減圧濃縮した。残さを塩化メチレン（５０ｍｌ）に溶解し、水、ついで、ブラインで洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ₄）し、濾過し、減圧濃縮して油状物質を得た。残さを酢酸エチル（３０ｍｌ）に溶解し、水（３０ｍｌ）を添加した。重炭酸ナトリウム飽和溶液を滴下して、水層のｐＨを７とした。水層を分離し、さらに３０ｍｌの水についてこの手順を繰り返した。水層を一緒にし、凍結乾燥して黄色固体（８７０ｍｇ）を得た。ジメチルホルムアミド（６ｍｌ）中のナトリウム塩（１８７ｍｇ）に、アルゴン雰囲気下において、塩化３,４−ジクロロベンジル（１６８μＬ）を添加し、溶液を２２時間撹拌した。この溶液にエーテルを添加し、混合物を水洗し、乾燥（ＭｇＳＯ₄）し、ついで、減圧濃縮した。フラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、２５−４５％酢酸エチル／ヘキサン）により油状物質を精製して表記化合物およびＡＥ²位置異性体の３：２の混合物（８５ｍｇ、正味の収率３０％）を得た。¹ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ,ＣＤＣｌ₃）ｄ７.１−７.６（ｍ,３Ｈ），６.４６（４.５−５.３（ｍ,６Ｈ）,３.３−３.７（ｍ,５Ｈ）,３.５５（ｍ, ３Ｈ）。ｂ）３,４−ジクロロベンジル（６Ｒ,７Ｓ）−３−アセトキシメチル−７−メトキシ−３−セフェム−４−カルボキシレート−１,１−ジオキシド塩化メチレン（３ｍｌ）中の実施例２（ａ）のエステル（８３ｍｇ、１８６μ mol）に、８５％ｍ−クロロペルオキシ安息香酸（１１４ｍｇ、５５８μmol）を添加し、溶液を４時間撹拌した。溶液に、２０％メタ量亜硫酸ナトリウム、ついで、重炭酸ナトリウム飽和溶液を添加し、混合物を塩化メチレンで抽出した。有機抽出物を乾燥(ＭｇＳＯ₄)し、減圧濃縮した。フラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、４０−５０％酢酸エチル・ヘキサン）により精製して表記化合物を得た（７５ｍｇ、８４％）。ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｅ４７８［Ｍ＋Ｈ］⁺。実施例４ tert- ブチル（６Ｒ,７Ｓ）−３−アセトキシメチル−７−（２−ヒドロキシエトキシ）−３−セフェム−４−カルボキシレート−１,１−ジオキシドａ）tert-ブチル（６Ｒ,７Ｓ）−３−アセトキシメチル−７−（２−ヒドロキシエトキシ）−３−セフェム−４−カルボキシレートメタノールのかわりにエチレングリコールを用いること以外は、Doherty et a l．Med．Chem.，1990，33，2513-2521の手順に従って表記化合物を調製した。¹ ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ,ＣＤＣｌ₃）ｄ４.９３（ｄ,Ｊ＝１３.７Ｈｚ,１Ｈ），４.７３（ｄ,Ｊ＝１３.７Ｈｚ,１Ｈ）,４.７０（ｓ,１Ｈ）,.６１（ｓ,１Ｈ），３.８１（ｂｒｓ,４Ｈ）,３.５８（ｄ,Ｊ＝１８.４Ｈｚ,１Ｈ）,２.０７（ｓ,３Ｈ）,１.５４（ｓ,９Ｈ）。ｂ）tert-ブチル（６Ｒ,７Ｓ）−３−アセトキシメチル−７−（２−ヒドロキシエチルオキシ）−３−セフェム−４−カルボキシレート−１,１−ジオキシド実施例３（ａ）のエステルのかわりに実施例４（ａ）の表記化合物を用いること以外は、実施例３（ｂ）の手順に従って表記化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳ^- ）ｍ／ｅ４０４［Ｍ−Ｈ］^-。実施例５メチル（６Ｒ,７Ｓ）−３−アセトキシメチル−７−メトキシ−３−セフェム− ４−カルボキシレート−１,１−ジオキシドａ）（６Ｒ,７Ｓ）−３−アセトキシメチル−７−メトキシ−３−セフェム− ４−カルボン酸実施例３（ａ）からの中間体ナトリウム塩（８５ｍｇ）をフラッシュクロマトグラフィー（０.５％酢酸／１０％メタノール／塩化メチレン）により精製して遊離酸（５０ｍｇ）を得た。¹ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ,２：１ＣＤＣｌ₃／ＣＤ₃ＯＤ）ｄ４.８７（ｄ,Ｊ＝１２.６Ｈｚ,１Ｈ）,４.７３（ｄ,Ｊ＝１２.６Ｈｚ,１Ｈ）,４.６１（ｓ,１Ｈ）,４.４０（ｄ,Ｊ＝１.７Ｈｚ,１Ｈ）,３.４９（ｄ,Ｊ＝１７.８Ｈｚ,１Ｈ）,３.４４（ｓ,３Ｈ）３.１７（ｄ,Ｊ＝１７.８Ｈｚ, １Ｈ）,２.０９（ｓ,３Ｈ）。ｂ）メチル（６Ｒ,７Ｓ）−３−アセトキシメチル−７−メトキシ−３−セフェム−４−カルボキシレート０℃においてテトラヒドロフラン（３ｍｌ）中の実施例５（ａ）の酸（４８ｍｇ、１６７μmol）に、０.１Ｍジアゾメタンのエーテル性溶液（１０ｍｌ）を添加した。溶液を１５分撹拌し、過剰の酢酸で反応を不活性化した。混合物を塩化メチレンで希釈し、重炭酸ナトリウム飽和溶液で洗浄し、減圧濃縮し、フラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、１５−２５％酢酸エチル／ヘキサン）により精製して標記化合物（２５ｍｇ、５２％）を得た。¹ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ ,ＣＤＣｌ₃）ｄ４.９７（ｄ,Ｊ＝１３.２Ｈｚ,１Ｈ）,４.７６（ｄ,Ｊ＝１３.２Ｈｚ１Ｈ）,４.６９（ｓ,１Ｈ）,４.５１（ｓ,１Ｈ）,３.８９（ｓ,３Ｈ），３. ５８（ｄ,Ｊ＝１８.３Ｈｚ,１Ｈ）,３.５５（ｓ,３Ｈ）,３.２２（ｄ,Ｊ＝１８. ３Ｈｚ,１Ｈ）,２.０７（ｓ,３Ｈ）。ｃ）メチル（６Ｒ,７Ｓ）−３−アセトキシメチル−７−メトキシ−３−セフェム−４−カルボキシレート−１,１−ジオキシド実施例３（ａ）のエステルのかわりに実施例５（ｂ）の標記化合物を用いること以外は、実施例３（ｂ）の手順に従って標記化合物を得た。ＭＳ（ＥＳ^-）ｍ／ｅ３３２［Ｍ−Ｈ］^-。実施例６ベンジル（６Ｒ,７Ｓ）−３−アセトキシメチル−７−メトキシ−３−セフェム −４−カルボキシレート−１,１−ジオキシド塩化３,４−ジクロロベンジルのかわりに臭化ベンジルを用いること以外は、実施例３の手順に従って標記化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳ）⁺ｍ／ｅ４１０［Ｍ＋Ｈ］⁺。実施例７３,４−および２,３−ジメチルベンジル（６Ｒ,７Ｓ）−３−アセトキシメチル −７−メトキシ−３−セフェム−４−カルボキシレート−１,１−ジオキシド塩化３,４−ジクロロベンジルのかわりに７０％塩化３,４−ジメチルベンジル（３０％塩化２,３−ジメチルベンジル）を用いること以外は、実施例３の手順に従って、標記化合物を３,４−および２,３−ジメチルベンジル（６Ｒ,７Ｓ）−３−アセトキシメチル−７−メトキシ−３−セフェム−４−カルボキシレート−１,１−ジオキシドの１：１混合物として得た。ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｅ４３８［Ｍ＋Ｈ］⁺。実施例８４−ニトロベンジル（６Ｒ,７Ｓ）−３−アセトキシメチル−７−メトキシ−３ −セフェム−４−カルボキシレート−１,１−ジオキシド塩化３,４−ジクロロベンジルのかわりに４−ニトロベンジルを用いること以外は、実施例３の手順に従って標記化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳ^-）ｍ／ｅ４５３［Ｍ−Ｈ］^-。実施例９３,４−ジクロロベンジル（１ＲＳ,６Ｒ,７Ｓ）−７−メトキシ−３−アセトキシメチル−３−セフェム−４−カルボキシレート−１−オキシド１当量のｍ−クロロペルオキシ安息香酸を用いること以外は、実施例３の手順に従った。ＭＳ（ＥＳ^-）ｍ／ｅ４６０［Ｍ−Ｈ］^-。実施例１０３,４−ジクロロベンジル−（６Ｒ,７Ｒ）−７−メトキシ−３−アセトキシメチル−３−セフェム−４−カルボキシレート−１,１−ジオキシド tert-ブチル(６Ｒ,７Ｓ)−３−アセトキシメチル−７−メトキシ−３−セフェム−４−カルボキシレート−１,１−ジオキシドのかわりに tert-ブチル（６Ｒ, ７Ｒ）−３−アセトキシメチル−７−メトキシ−３−セフェム−４−カルボキシレート−１,１−ジオキシドを用いること以外は、実施例３の手順に従って標記化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳ^-）ｍ／ｅ４７８［Ｍ−Ｈ］^-。実施例１１４−ヨードベンジル−（６Ｒ,７Ｓ）−７−メトキシ−３−アセトキシメチル− ３−セフェム−４−カルボキシレート−１,１−ジオキシド塩化３,４−ジクロロベンジルのかわりに塩化４−ヨードベンジルを用いること以外は、実施例３の手順に従って標記化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳ⁺）ｍ／ｅ５３６［Ｍ＋Ｈ］⁺。実施例１２３−ヨードベンジル−（６Ｒ,７Ｓ）−７−メトキシ−３−アセトキシメチル− ３−セフェム−４−カルボキシレート−１,１−ジオキシド塩化３,４−ジクロロベンジルのかわりに塩化３−ヨードベンジルを用いること以外は、実施例３の手順に従って標記化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳ^-）ｍ／ｅ５３４［Ｍ−Ｈ］^-。実施例１３３−ヨード−４−メチルベンジル−（６Ｒ,７Ｓ）−７−メトキシ−３−アセトキシメチル−３−セフェム−４−カルボキシレート−１,１−ジオキシド塩化３,４−ジクロロベンジルのかわりに塩化３−ヨード−４−メチルベンジルを用いること以外は、実施例３の手順に従って標記化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳ⁺）ｍ／ｅ５５０［Ｍ＋Ｈ］⁺。実施例１４３,４−ジクロロベンジル−（６Ｒ,７Ｓ）−７−［２−ヒドロキシエトキシ］− ３−アセトキシメチル−３−セフェム−４−カルボキシレート−１,１−ジオキシド tert-ブチル(６Ｒ,７Ｓ)−７−メトキシ−３−アセトキシメチル−３−セフェム−４−カルボキシレートのかわりに実施例４（ａ）の標記化合物を用いること以外は、実施例３の手順に従った。ＭＳ（ＥＳ^-）ｍ／ｅ５０６［Ｍ−Ｈ］^-。実施例１５３,４−ジクロロベンジル−（６Ｒ,７Ｓ）−７−［ｎ−ブトキシ］−３−アセトキシメチル−３−セフェム−４−カルボキシレート−１,１−ジオキシドエチレングリコールのかわりにｎ−ブタノールを用いること以外は、実施例１６の手順に従って標記化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳ^-）ｍ／ｅ５１８［Ｍ−Ｈ］^-。実施例１６３,４−ジクロロベンジル−（６Ｒ,７Ｓ）−７−エトキシ−３−アセトキシメチル−３−セフェム−４−カルボキシレート−１,１−ジオキシド塩化３,４−ジクロロベンジルのかわりにエタノールを用いること以外は、実施例１６の手順に従って標記化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳ^-）ｍ／ｅ４９０［Ｍ−Ｈ］^-。実施例１７３,４−ジクロロベンジル−（６Ｒ,７Ｓ）−３−ブロモメチル−７−メトキシ− ３−セフェム−４−カルボキシレート−１,１−ジオキシドａ）３,４−ジクロロベンジル−（６Ｒ,７Ｓ）−７−メトキシ−３−メチル− ３−セフェム−４−カルボキシレート酢酸エチル（３０ｍｌ）中の（６Ｒ,７Ｓ）−７−メトキシ−３−メチル−３ −セフェム−４−カルボン酸（１ｇ）の溶液に水（３０ｍｌ）を添加した。重炭酸ナトリウム飽和溶液を滴下して、水層のｐＨを７とする。水層を分離し、凍結乾燥して(６Ｒ,７Ｓ)−７−メトキシ−３−メチル−３−セフェム−４−カルボン酸ナトリウム（６７０ｍｇ）を得る。ジメチルホルムアミド（２ｍｌ）中の(６Ｒ,７Ｓ)−７−メトキシ−３−メチル−３−セフェム−４−カルボン酸ナトリウム（３１２ｍｇ）に塩化３,４−ジクロロベンジル（５００μＬ）を添加し、溶液を２４時間撹拌する。溶液に水を添加し、溶液をエーテルで抽出した。有機抽出物を乾燥（ＭｇＳＯ₄）し、減圧濃縮した。残さをフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、１５−２５％酢酸エチル／ヘキサン）により精製して３,４−ジクロロベンジル−（６Ｒ,７Ｓ） −７−メトキシ−３−メチル−３−セフェム−４−カルボキシレートを得た（１４８ｍｇ）。¹ＨＮＭＲ（２５０ＭＨｚ,ＣＤＣｌ₃）ｄ７.２−７.６（ｍ,３Ｈ）,５.２３（ｓ,２Ｈ）,４.６７（ｓ,１Ｈ）,４.５０（ｓ,１Ｈ）,３.４−３.６（ｍ,４Ｈ）,３.１９（ｄ,Ｊ＝１８.４Ｈｚ,１Ｈ）,２.１０（ｓ,３Ｈ）。ｂ）３,４−ジクロロベンジル−（６Ｒ,７Ｓ）−７−メトキシ−３−メチル− ３−セフェム−４−カルボキシレート−,１−ジオキシド実施例２ａのエステルのかわりに３,４−ジクロロベンジル−（６Ｒ,７Ｓ）− ７−メトキシ−３−メチル−３−セフェム−４−カルボキシレートを用いること以外は、実施例３ｂの手順に従ってスルホンを調製した。¹ＨＮＭＲ（２５０ＭＨｚ,ＣＤＣｌ₃）ｄ７.２−７.６（ｍ,３Ｈ）,５.２１（ｓ,２Ｈ）,５.１３（ｓ ,１Ｈ）,４.６２（ｓ,１Ｈ）,３.８８（ｄ,Ｊ＝１８.４Ｈｚ,１Ｈ）,３.６６（ｄ,Ｊ＝１８.４Ｈｚ,１Ｈ）,３.５６（ｓ,３Ｈ）,２.１０（ｓ,３Ｈ）。ｃ）３,４−ジクロロベンジル−（６Ｒ,７Ｓ）−３−ブロモメチル−７−メトキシ−３−セフェム−４−カルボキシレート−１,１−ジオキシド四塩化炭素（４ｍｌ）中の実施例１７（ｂ）のスルホンに、ＡＩＢＮ（５ｍｇ）およびＮ−ブロモサクシンイミド（４４ｍｇ）を添加し、溶液をアルゴン雰囲気下で３時間還流し、ついで、反応混合物を冷却し、重炭酸ナトリウム飽和溶液を添加し、ついで、混合物を塩化メチレンで抽出した。有機抽出物を乾燥（ＭｇＳＯ₄）し、減圧濃縮した。残さをフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、１５−３５％酢酸エチル／ヘキサン）により精製して標記化合物を得た（４５ｍｇ）。ＭＳ（ＥＳ^-）ｍ／ｅ４９６［Ｍ−Ｈ］^-。実施例１８３,４−ジクロロベンジル−（６Ｒ,７Ｓ）−３−フェニルスルホニルメチル−７ −メトキシ−３−セフェム−４−カルボキシレート−１,１−ジオキシドａ）３,４−ジクロロベンジル−（６Ｒ,７Ｓ）−３−フェニルチオメチル−７ −メトキシ−３−セフェム−４−カルボキシレート−１,１−ジオキシド０℃において、ジメチルホルムアミド（１５ｍｌ）中の実施例１７の臭化物（１１０ｍｇ）に、チオフェノール（２５μＬ）およびＮ,Ｎ−ジイソプロピル− Ｎ−エチルアミン（４２μＬ）を添加した。出発物質が消失するまで溶液を撹拌した。水を添加し、溶液をエーテルで抽出した。有機抽出物を減圧濃縮し、残さをフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、酢酸エチル／ヘキサン）により精製して標記化合物を得た。ＭＳ（ＥＳ⁺）ｍ／ｅ５２８［Ｍ＋Ｈ］⁺。ｂ）３,４−ジクロロベンジル−（６Ｒ,７Ｓ）−３−フェニルスルホニルメチル−７−メトキシ−３−セフェム−４−カルボキシレート−１,１−ジオキシド実施例２ａのエステルのかわりに３,４−ジクロロベンジル−（６Ｒ,７Ｓ）− ７−メトキシ−３−メチル−３−セフェム−４−カルボキシレートを用いること以外は、実施例３ｂの手順に従ってスルホンを調製した。ＭＳ（ＥＳ⁺）ｍ／ｅ５６０［Ｍ＋Ｈ］⁺。実施例１９３,４−ジクロロベンジル−（６Ｒ,７Ｓ）−３−［５−メチル−（１,３,４−オキサジアゾール）−２−チオメチル］−７−メトキシ−３−セフェム−４−カルボキシレート−１,１−ジオキシドチオフェノールのかわりに５−メチル−（１,３,４−オキサジアゾール）− ２−メルカプタンを用いること以外は、実施例１８ａの手順に従って標記化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳ⁺）ｍ／ｅ５３４［Ｍ＋Ｈ］⁺。実施例２０３,４−ジクロロベンジル−（６Ｒ,７Ｓ）−３−［（１−メチルテトラゾール） −５−チオ］メチル−７−メトキシ−３−セフェム−４−カルボキシレート−１ ,１−ジオキシドチオフェノールのかわりに（１−メチルテトラゾール）−５−メルカプタンを用いること以外は、実施例１８ａの手順に従って標記化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳ⁺）ｍ／ｅ５３４［Ｍ＋Ｈ］⁺。実施例２１３,４−ジクロロベンジル−（６Ｒ,７Ｓ）−３−［（１,２,３−トリアゾール） −４−チオメチル］−７−メトキシ−３−セフェム−４−カルボキシレート−１ ,１−ジオキシドチオフェノールのかわりに（１,２,３−トリアゾール）−４−メルカプタンを用いること以外は、実施例１８ａの手順に従って標記化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳ⁺）ｍ／ｅ５１９［Ｍ＋Ｈ］⁺。生物学的評価アッセイＩ−ＤＮＡラダー本発明は、アガロースゲル上で可視化されるＤＮＡラダーの生成を測定することによりアポプトーシスを測定するモデルを用いることができる。ＤＮＡラダーの観察は多年にわたりアポプトーシスの目印となっている。われわれの研究に用いるモデルは、抗癌性脂質１−Ｏ−オクタデシル−２−Ｏ−メチル−sn−３−ホスホコリン（ＥＴ−１８−ＯＣＨ₃）および腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ）によるヒト・単球ＨＬ−６０細胞におけるアポプトーシスの生成である。ＥＴ−１８−ＯＣＨ₃によるＤＮＡラダーの生成が報告されており（Mollinedo e t al．Biochem．Biophys．Res．Commun.，192: 603-609(1993)）、確認されている。一般的方法は、６μＭのＥＴ−１８−ＯＣＨ₃または１０ユニットのＴＮＦでＨＬ−６０細胞を２４時間処理し、低分子ＤＮＡを抽出し、蛋白およびＲＮＡを除去することである。アガロースゲル上でＤＮＡを分離し、臭化エチジウム染色で可視化する。ＤＮＡの抽出および調製の直前に内部標準を細胞に添加する。この方法により、アポプトーシスを阻害する化合物の能力を定量的に評価することができる。細胞馴化・ＨＬ−６０細胞（American Type Cell Culture）をＲＰＭＩ１６４０ｗ／L- グルタミンおよび１０％熱不活性化ウシ・胎児血清(ＲＰＭＩ完全培地)中で増殖させた。・実験の日、所望数の細胞（例えば、５ｘ１０⁶個／処理群）をＲＰＭＩ中に懸濁して最終細胞濃度約０.５ｘ１０⁶個／ｍｌとした。各処理群につき、細胞懸濁液１０ｍｌを培養フラスコ中に入れた。細胞を３７℃で２時間インキュベーションした。曝露ＥＴ−１８−ＯＣＨ₃への典型的な曝露のためには、ＣＨＣｌ₃中の１００ｍＭＥＴ−１８−ＯＣＨ₃ストック溶液を調製し、ＲＰＭＩ完全培地中に希釈して６００μＭとする。１００μｌの６００μＭＥＴ−１８−ＯＣＨ₃を１０ｍｌの処理群中に添加し、最終濃度６μＭとした。細胞懸濁液を一晩(１８時間)インキュベーションする。典型的な曝露のためには、３００ないし３０００ユニットのＴＮＦを１０ｍｌの細胞懸濁液に添加した。ＥＴ−１８−ＯＣＨ₃またはＴＮＦの添加１０分前に細胞を所望薬剤（ＩＣＥ化合物等）で処理した。ＩＣＥ化合物ストックをＤＭＳＯ中に調製した。化合物またはＤＭＳＯ担体５０μｌを１０ｍｌの処理群に添加し、化合物を最終濃度とし、ＤＭＳＯを０.５％とした。ＤＮＡ抽出：細胞を遠心分離（４００ｘｇ、５分）し、１０ｍｌのＰＢＳで２回洗浄した。細胞を２００μｌの冷滅菌界面活性剤バッファー（１０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ,ｐＨ７.５、１ｍＭＥＤＴＡ、０.２％、ＴｒｉｔｏｎＸ−１００）中に再懸濁することにより細胞を溶解させ、約２５０μＬを、氷冷滅菌１.５ｍｌ容エッペンドルフチューブに移した。ゆるやかに振盪チューブを４℃で３０分インキュベーションした。チューブをMicrofugeで１５分遠心分離し、細胞残さが入らないようにしながら上清を集めた。上清を７５μｇ／ｍｌのＲＮＡｓｅとともに３７℃で１時間インキュベーションし、ついで、２００μｇ／ｍｌのプロテイナーゼＫおよび０.５％ＳＤＳ（最終濃度）とともに３７℃で１時間インキュベーションした。３００ｂｐのＤＮＡ１０μｌのを内部標準として添加して抽出効率を観察した。上清を同体積（２００−３００μｌ）の冷フェノール飽和バッファーで２回抽出し(フェノール添加、１５秒間ボルテックス攪拌、２分間微量遠心、２層間に有機廃液が入らないようにして上部水層を集める)、２００μＬのフェノール／クロロホルム／イソアミルアルコール２５：２４：１（ｖ／ｖ）で１回抽出し、ついで、１００μＬのクロロホルムで１回抽出した（1００μＬ／試料を回収）。１０μＬの滅菌３ＭＮａＣｌ（３００ｍＭ（最終濃度））を１００μＬの試料および２００μＬの冷エタノールに添加し、十分にボルテックスし、ついで、− ２０℃で一晩放置した。試料を１５分遠心分離し(Microfuge で)、すべて(２５μL)のエタノールを注意深く除去した。ＤＮＡペレットを乾燥させ、３０μＬの１０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ,ｐＨ８.０、０.１ｍＭＥＤＴＡおよび１０μＬのゲル負荷用バッファー中に再懸濁した。ＤＮＡ標準(例えば、Sigma D5042、１２３ｂｐのラダー)を各ゲルで泳動させた。試料を、ＴＢＥバッファー含有、臭化エチジウム添加１−２％アガロースゲル上で９０−１２０分泳動させた（１００Ｖ、５０ｍＡ）。・得られたゲルをＵＶ光で可視化し、結果を捕獲イメージ(captured image)中に記録した。結果ＨＬ−６０細胞において、ＥＴ−１８−ＯＣＨ₃またはＴＮＦでの処理はアポプトーシス応答を誘導し、２４時間後に顕著となった。実施例３の化合物５０μ Ｌでの前処理は、ＥＴ−１８−ＯＣＨ₃ならびにＴＮＦの両方に対するアポプトーシス応答を完全に遮断することがわかった（表１）。実施例３の化合物５μＬでの前処理は２４時間の実験においては有効でなかった。ＩＬ−１ｂ（１０ｎＭ）の添加はアポプトーシスを遮断する実施例３の化合物の能力に影響せず、その主な作用機構がＩＬ−１産生の阻害ではないことが示唆された。これらのデータは、実施例３の化合物は、新規作用機構、すなわち、ＩＣＥまたはＩＣＥ様プロテアーゼの活性を阻害することによりアポプトーシスを遮断するということを支持するものである。アッセイII：ＩＣＥの阻害酵素源ヒト・ＩＣＥをクローン化し、ヘキサ−Ｈｉｓフラッグ(flag)をそのアミノ末端に有する不活性前駆体（ｐ４５）として E.coli 中で発現させた。収集後、細胞を溶解し、遠心分離し、ついで、ｐ４５含有ペレットをリン酸緩衝化７Ｍ尿素（ｐＨ７.５）で可溶化させた。フラッグを付したｐ４５をＮｉ-ニトロ−酢酸カラムに適用し、洗浄し、３００ｍＭイミダゾールで溶離した。これによりプロ酵素の非常に豊富な標品（ｐ４５純度９０％）が得られた。１０℃で数分間Cent ricon 限外濾過膜(Amicon)を用いてｐ４５を濃縮することによりｐ１０／ｐ２０に対する触媒的自己蛋白分解活性化を行なった。ウェスタンブロットにおけるｐ１０／ｐ２０に関するＩＣＥ活性の経時的発生および逆相ＨＰＬＣにより活性化試料中の触媒サブユニット（ｐ１０およびｐ２０）が示された。逆相ＨＰＬＣにより精製された試料のＮ末端配列およびＭＡＬＤ質量スペクトル分析によりオーセンティックなｐ１０およびｐ２０の生成も確認した。活性化酵素を−８０℃で保存した。アッセイプロトコール蛍光発生テトラペプチド基質Ｎ−アセチル−Ｌ−チロシル−Ｌ−バリル−Ｌ− アラニル−Ｌ−アスパルチル−７−アミノ−４−メチルクマリン（Ａｃ−ＹＶＡＤ−ＡＭＣ）を用いてＩＣＥを２５℃でアッセイした。２５ｍＭＨｅｐｅｓ、１０％ショ糖、０.１％ＣＨＡＰＳ、および２ｍＭＤＴＴを含有するバッファー系中、ｐＨ７.５においてアッセイを行なった。基質濃度を２５μＭに固定した。遊離した７−アミノ−４−メチルクマリンの蛍光を、３３５ｎｍで励起後４６０ｎｍにおいて連続的にモニターした。化合物の試験酵素とともに３０−６０分プレインキュベーションした後、１００μＭの１回量で式（Ｉ）の化合物を試験した。２５μＭの基質（Ａｃ−ＹＶＡＤ−ＡＭＣ）を添加することによりアッセイを開始し、上記のごとく活性をモニターした。実施例１ないし７および９により示される式（Ｉ）の代表的な化合物は、このアッセイにおいて約３６％ないし約９６％の範囲の正の阻害活性を示した。アッセイIII：ＩＣＥの阻害蛍光発生テトラペプチド基質Ｎ−アセチル−Ｌ−チロシル−Ｌ−バリル−Ｌ− アラニル−Ｌ−アスパルチル−７−アミノ−４−メチルクマリン(Ａｃ−ＹＶＡＤ−ＡＭＣ)を用いて９６穴プレート中でＩＣＥを２５℃でアッセイした。２５ｍＭＨｅｐｅｓ、１０％ショ糖、０.１％ＣＨＡＰＳ、および２０−５０μＭＤＴＴを含有するバッファー系中、ｐＨ７.５においてアッセイを行なった。基質濃度を２０μＭに固定した。遊離した７−アミノ−４−メチルクマリンの蛍光を、３６０ｎｍで励起後４６０ｎｍにおいて連続的にモニターした。化合物の試験５０ないし１００μＭの１回量で化合物を試験した。基質および阻害剤を同時添加した後、３０ないし６０分間上記のごとく活性をモニターした。かくして得られた進行曲線をコンピューターにより等式１に適合させて、有効性および時間依存性を評価した。以下の典型的な式（Ｉ）の化合物は、上記アッセイにおいて正の阻害活性を示した：３,４−ジクロロベンジル−（６Ｒ,７Ｓ）−７−メトキシ−３−アセトキシメチル−３−セフェム−４−カルボキシレート−１,１−ジオキシド tert-ブチル７−アルファ−メトキシセファロスポラネートスルホン３,４−ジクロロベンジル−（６Ｒ,７Ｓ）−３−（１−メチルテトラゾール− ５−イル）チオメチル−７−メトキシ−３−セフェム−４−カルボキシレート− １,１−ジオキシド３,４−ジクロロベンジル−（６Ｒ,７Ｓ）−３−（フェニルスルホニル）メチル−７−メトキシ−３−セフェム−４−カルボキシレート−１,１−ジオキシド３,４−ジクロロベンジル−（６Ｒ,７Ｓ）−３−［２−メチル（１,３,４−オキサジアゾール−５−イル）−２−チオメチル］−７−メトキシ−３−セフェム −４−カルボキシレート−１,１−ジオキシド３,４−ジクロロベンジル（６Ｒ,７Ｓ）−３−（１,２,３−トリアゾール−５ −イル）チオメチル−７−メトキシ−３−セフェム−４−カルボキシレート−１ ,１−ジオキシド３,４−ジクロロベンジル−５,５−ジオキソ−７−アルファ−［２−ヒドロキシエチルオキシ］−セフェロスポラネート３,４−ジクロロベンジル−（６Ｒ,７Ｒ）−７−メトキシ−３−アセトキシメチル−３−セフェム−４−カルボキシレート−１,１−ジオキシドベンジル−(６Ｒ,７Ｓ)−７−メトキシ−３−アセトキシメチル−３−セフェム−４−カルボキシレート−１,１−ジオキシド［（３,４）−および（２,３）−］ジメチルベンジル−（６Ｒ,７Ｓ）−７− メトキシ−３−アセトキシメチル−３−セフェム−４−カルボキシレート−１, １−ジオキシド４−ニトロベンジル（６Ｒ,７Ｓ）−３−アセトキシメチル−７−メトキシ− ３−セフェム−４−カルボキシレート−１,１−ジオキシドＮ−３,４−ジクロロベンジル−Ｎ−メチル−（６Ｒ,７Ｓ）−７−メトキシ− ３−アセトキシメチル−３−セフェム−４−カルボキシアミド−１,１−ジオキシド（６Ｒ,７Ｓ）−４−ヨードベンジル−７−メトキシ−３−アセトキシメチル −３−セフェム−４−カルボキシレート−１,１−ジオキシド３−ヨードベンジル−（６Ｒ,７Ｓ）−７−メトキシ−３−アセトキシメチル −３−セフェム−４−カルボキシレート−１,１−ジオキシド３−ヨード−４−メチルベンジル−（６Ｒ,７Ｓ）−７−メトキシ−３−アセトキシメチル−３−セフェム−４−カルボキシレート−１,１−ジオキシド。治療方法一般的には、治療用途には、本発明化合物を、意図される投与経路および標準的な製薬慣習の点から選択された医薬担体または希釈剤と混合することにより得られる標準的な医薬組成物中に入れて投与する。例えば、本発明化合物を、デンプンまたはラクトースのごとき賦形剤を含有する錠剤の形態として、あるいは香料または着色料を含有するエリキシルまたは懸濁液の形態として経口的に投与してもよい。本発明化合物を、例えば、静脈、筋肉内または皮下注射することにより非経口的に投与してもよい。非経口的投与には、最良には、本発明化合物を、溶液を血液と等張とするに十分な塩またはグルコースのごとき他の物質を含んでいてもよい滅菌水溶液の形態として用いる。投与形態ならびに有効量の選択は、とりわけ、治療すべき症状により異なるであろう。投与経路および用量の選択は当業者により行われる。本発明化合物、詳細には、本明細書記載の化合物、ならびに経口投与した場合活性のあるそれらの医薬上許容される塩を、例えばシロップ、懸濁液またはエマルジョン錠剤のごとき液体、錠剤、カプセルおよび甘味入り錠剤として処方することができる。一般的には、液体処方は、例えば懸濁剤、保存料もしくは着色料を伴なったエタノール、グリセリン、非水溶媒(例、ポリエチレングリコール、油脂)または水のごとき適当な液体担体中の化合物または医薬上許容される塩の溶液または懸濁液からなる。固形処方の製造に通常使用される適当な医薬担体を用いて錠剤形態の組成物を製造することができる。かかる担体の例は、ステアリン酸マグネシウム、デンプン、ラクトース、ショ糖、およびセルロースを包含する。通常のカプセル封入手順を用いてカプセル形態の組成物を製造することができる。例えば、標準的な担体を用いて有効成分含有ペレットを製造し、ついで、硬ゼラチンカプセルに充填することができる。別法として、水性ガム、セルロース、シリケートまたは油脂のごとき適当な医薬担体を用いて分散物または懸濁液を製造し、ついで、軟ゼラチンカプセルに充填することもできる。好ましくは、組成物は錠剤またはカプセルのごとき１回量である。典型的な非経口組成物は、滅菌水性担体または経口的に許容される油脂(例えば、ポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン、レシチン、落花生油またはゴマ油)中の本発明化合物または医薬上許容される塩の溶液または懸濁液からなる。あるいはまた、溶液を凍結乾燥し、ついで、投与直前に適当な溶媒で復元してもよい。典型的な坐薬処方は、この経路で投与した場合に活性のある本発明化合物またはその医薬上許容される塩、ならびに結合剤および／または滑沢剤(例えば、ポリマー性グリコール、ゼラチンまたはカカオ脂)または他の低融点植物性もしくは合成のロウもしくは脂質を含んでなる。通常には、医薬上許容される本発明化合物は、毎日の投与規則に従って対象に投与されるであろう。患者に、これを、例えば約０.００１ないし約１００ｍｇ／ｋｇ(動物体重)、好ましくは約０.００１ないし約１０ｍｇ／ｋｇ(動物体重) で与える。大型動物には、好ましくは、毎日の用量は、約１ｍｇないし約１０００ｍｇ、この１ｍｇないし５００ｍｇの間の本発明化合物またはその医薬上許容される塩（遊離塩基として計算）を１日１ないし４回投与する。１回分の剤形は、約２５μｇないし約５００ｍｇの化合物を含有していてもよい。アポプトーシスの調節不良が重要な役割を果たしている多くの疾病および症状が存在する。これらの症状のすべてが病理学的結果を伴った特定の細胞の望ましくない都合の悪い損失に関与しているわけではない。骨リモデリングには破骨細胞による最初の吸収、ついで、骨芽細胞による骨形成が必要である。最近、このプロセスにおいて起こるアポプトーシスについて多くの報告がある。アポプトーシスは、骨形成細胞および骨吸収細胞の両方においてインビトロで観察されており、実施、インビボでこれらのリモデリング単位の部位においても観察されている。アポプトーシスは、吸収および形成の間の逆転部位からの破骨細胞消失についての１つの可能な機構として示唆されている。ＴＧＦ−β１は、６日間インビトロで増殖したネズミ・骨髄培養物の破骨細胞におけるアポプトーシスを誘導する（約３０％）（Hughes，et al.，J．Bone Min．Res．9，S138(1994)）。抗吸収ビスホスホネート（クロドロネート、パミドロネートまたはレシドロネート）は、インビトロおよびインビボにおいてマウスの破骨細胞におけるアポプトーシスを促進する（Hughes ら、上記 S347）。破骨細胞形成にとり必須であることがすでに示されているＭ−ＣＳＦはアポプトーシスを抑制することができ、破骨細胞集団の維持のみならずこれらの多核細胞の形成をアポプトーシスによって調べることができることが示される（Fuller,et al.,J.Bone Min.Res.8,S384(1993)；P erkins，et al.，J．Bone Min．Res．8，S390(1993)）。マウス・頭蓋冠への１日１回のＩＬ−１局所注射を３日間行なった場合、強力かつ激しいリモデリングが誘導された（Wright，et al.，J．Bone Min．Res．9，S174(1994)）。これらの研究において、破骨細胞の１％が治療１日後においてアポプトーシス性であり、３日後には１０％に増加した。高パーセンテージ（９５％）のこれらのアポプトーシス性破骨細胞は逆転部位にあった。このデータは、ＩＣＥまたはＩＣＥ様相同物は破骨細胞のアポプトーシスにおいて機能的に非常に重要であることを示唆する。それゆえ、本発明の１の態様は、本明細書で定義した式（Ｉ）の化合物を用いる、骨粗鬆症のごとき過剰な骨の損失の疾病における吸収を阻害するための新規療法としての、破骨細胞におけるアポプトーシスの促進である。非常に分化したラット・破骨細胞様細胞において、低血清によりアポプトーシスを誘導することができる(Ihbe，et al.，(1994)J．Bone Min．Res．9，S167) 。このことは、破骨細胞表現型の一時的な損失に関連しており、細胞系特異的遺伝子発現およびアポプトーシスの維持は生理学的にリンクしていることが示唆される。インビトロで増殖したラット胎児頭蓋冠由来の破骨細胞はアポプトーシスを受け、このアポプトーシスは、フラグメント化したＤＮＡのインシトウ末端標識により示されるように、節形成領域に局在化している(Lynch，et al.，(1994) J.Bone Min．Res．9，S352)。即時初期遺伝子ｃ−ｆｏｓよびｃ−ｊｕｎはアポプトーシスに先立って発現され、ｃ−ｆｏｓおよびｃ−ｊｕｎ−ＬａｃＺトランスジェニックマウスはごく限られた組織（その１つが骨である）においてこれらの転写因子の構成的発現を示すことが示されている（Smeyne，et al.，(1992) Neuron，８，１３−２３；および Morgan，J．(1993)Apoptosis Cell Death：Fu nctions and mechanisms．Cold Spring Harbor 13-15th October）。アポプトーシスは、petula 靭帯が石灰化するにつれ、これらの動物の骨端成長板および軟骨生成部位において観察される。またＰＴＨＲＰ−欠損マウスにおいて軟骨生成部位のアポプトーシスが観察されており、これらのトランスジェニック動物は異常な軟骨内骨形成を示す(Lee et al.，(1994)J．Bone Min．Res．9，S159)。ごく最近の論文において、自発的アポプトーシスを行なうヒト・骨肉腫細胞系が試験されている。この細胞系を用いてＬＡＰ−４（ＩＣＥでない）が検出され、ＬＡＰ−４の阻害または欠損によりインビトロでのアポプトーシスを遮断することができた（Nicholson，et al.，(1995)Nature 376，37-43）。よって、アポプトーシスは、骨芽細胞および軟骨細胞の損失において役割を果たしており、アポプトーシスの阻害により骨形成促進機構が提供されうる。それゆえ、本発明のもう１つの態様は、本明細書定義の式(I)の化合物を用いる、骨形成を促進する新規療法としての、アポプトーシスの阻害である。骨関節炎（ＯＡ）は、関節軟骨の進行性腐食により特徴づけられる変性的疾患である。軟骨細胞は、関節軟骨において見出される単一細胞タイプであり、これらの細胞の代謝における混乱状態はＯＡの発症に関与している可能性がある。軟骨に対する傷害は、正常なマトリックスのホメオスタシスを再構築しようとするプロテオグリカンおよびコラーゲンの産生増加に関与する特異的な補償的応答を開始させる。しかしながら、疾病の進行とともに、３次元的コラーゲン網目構造が破壊され、ＯＡ傷害部位において軟骨細胞の死が起こる（Adolpe，M．ed．Bop logical Regularion of Chondrocytes．Boca Raton： CRC Press，1992，295-3 19）。ＯＡにおいて、軟骨に隣接した軟骨細胞は高レベルのｂｃｌ−２を発現する。ことが示されている(Erlacher，et al.，(1995)J.of Rheumatology，926-93 1)。このことは、疾病プロセスにより誘導されるアポプトーシスから軟骨細胞を保護するための試みを提供する。アポプトーシスを阻害することによる、軟骨における初期の変性的変化の間の軟骨細胞の保護は、このありふれた疾病に対する新規治療法を提供する可能性がある。それゆえ、本発明のもう１つの態様は、本明細書定義の式(I)の化合物を用いる、骨関節炎を治療するための新規療法としての、アポプトーシスの阻害を提供する。最近の証拠は、肝臓の慢性で変性的な症状が肝細胞アポプトーシスに関連していることを示している。これらの症状は、化学的に、感染により、および免疫／炎症により誘導される肝細胞変性を包含する。肝細胞のアポプトーシスは、アセトアミノフェン(Ray,et al.，(1993)FASEB.J.7,453-463)、コカイン(Cascales， et al,．(1994)Hepatology 20，992-1001)およびエタノール（Baroni，et al.， (1994)J．Hepatol．20，508-513）を包含する種々の化学薬剤により誘導される肝臓の変性的状態において観察されている。アポプトーシスを誘導することが示されている感染性因子およびそれらの化学的成分は、肝炎（Hiramatsu et al.， (1994)Hepatology 19，1354-1359; Mita，et al.，(1994)Biochem．Biophys．R es.Commun．204，468-474）、腫瘍壊死因子およびエンドトキシン(Leist et al. ，(1995)J.Immunol．154，1307-1316；およびDecker,K．(1993)Gastroenterolog y 28(S4)，20-25)を包含する。同種移植片の移植および再潅流後の低酸素症のごとき機構による免疫／炎症応答の刺激は、肝細胞のアポプトーシスを誘導することが示されている（Krams，et al.，(1995)Transplant．Proc．27，466-467）。さらに、この証拠は、肝細胞アポプトーシスが変性的肝臓疾患において中心的なものであることを支持する。それゆえ、本発明のもう１つの態様は、本明細書定義の式(I)の化合物を用いる、変性的肝臓疾患を治療する新規療法としての、アポプトーシスの阻害である。アポプトーシスは、細胞死が免疫系を形成し、免疫機能に影響している免疫系における基本的なプロセスとして認識されている。またアポプトーシスは、ウイルス性疾患（例えば、ＡＩＤＳ）にも関係している。最近の報告は、ＨＩＶ感染が過剰なアポプトーシスを引き起こす可能性があり、ＣＤ４⁺Ｔ細胞の損失に関与していることを示している。ＡＰＯ−１／ＦａｓがＨＩＶ−１ｇｐ１２０に対して配列相同性を有するという観察結果はさらに興味深い。それゆえ、本発明のもう１つの態様は、本明細書定義の式(I)の化合物を用いる、ウイルス性疾患を治療する新規療法としての、アポプトーシスの阻害である。アポプトーシス性システインプロテアーゼの阻害が治療上有用である、さらなる治療指針および他の症状を、各症状におけるアポプトーシスの関与を指示する対応引用文献とともに下表１に示す。本発明化合物のＩＬ−１およびＴＮＦ阻害効果を、以下のインビトロアッセイに従って調べる。インターロイキン−１（ＩＬ−１） Colotta et al.，J．Immunol，132,936(1984)）の方法に従って、志願者ドナーまたは血液銀行のバフィーコートからヒト・末梢血単球を単離し精製する。これらの単球(１ｘ１０⁶個)を、ウェルあたり１００万−２００万個／ｍｌの濃度で２４ウェルプレートに撒く。細胞を２時間付着させ、その後、おだやかに洗浄することにより非付着細胞を除去する。ついで、リポ多糖（５０ｎｇ／ｍｌ）添加１時間前に試験化合物を細胞に添加し、３７℃でさらに２４時間培養物をインキュベーションする。このインキュベーションの終わりに、細胞およびすべての残さから培養上清を除去し、清澄化する。ついで、Simon et al.，J ．Immunol．Methods，84，85(1985)（Ａ２３１８７イオノフォアと協奏的にＩＬ −２を部分泌するインターロイキン−２産生細胞系（ＥＬ−４）を刺激するＩＬ −１の能力に基づく）あるいはLee et al.,J.ImmunolTherapy,6(1),1-12(1990) （ＥＬＩＳＡアッセイ）のいずれかによりＩＬ−１生物学的活性について培養上清を即座にアッセイする。腫瘍壊死因子（ＴＮＦ） Colotta et al.， J． Immunol， 132， 936(1984)）の方法に従って、志願者ドナーまたは血液銀行のバフィーコートからヒト・末梢血単球を単離し精製する。これらの単球を、ウェルあたり１００万個／ｍｌの濃度で２４ウェルプレートに撒く。細胞を１時間付着させ、その後、上清を吸引し、１％ウシ胎児血清ならびにペニシリンおよびストレプトマイシン（１０ユニット／ｍｌ）を含有する新鮮培地(１ｍｌ、ＲＰＭＩ１６４０、Whitaker Biochemical Products,Whita ker,CA)を添加する。１ｎＭ−１０ｍＭの用量範囲の試験化合物（化合物はジメチルスルホキシド／エタノールに可溶化し、培地中の最終溶媒濃度が０.５％ジメチルスルホキシド／０.５％エタノールとなるようにする）の存在または不存在下において細胞を４５分インキュベーションする。ついで、細菌リポ多糖（Si gma Chemicals Co．から得たE.coli 055:B5［LPS］）を添加し、５％ＣＯ₂インキュベーター中、３７℃で１６−１８時間培養物をインキュベーションする。インキュベーション時間の終わりに、培養上清を細胞から除去し、３０００ｒｐｍで遠心分離して細胞残さを除去する。ついで、ＷＯ９２／１０１９０および Bec ker et al.，J．Immunol，1991，147，4307 に記載されたようにして放射性免疫アッセイまたはＥＬＩＳＡアッセイを用いて上清をＴＮＦ活性についてアッセイする。上記説明は、好ましい具体例を含めて本発明を十分に開示する。本明細書に特に開示された具体例の修飾および改良は下記請求の範囲に含まれる。さらなる苦労をせずに、当業者は、上記説明を用いて、本発明を最大限に利用することができると確信する。それゆえ、本明細書の実施例は、単なる説明であって、本発明を何ら限定するものではないと解するべきである。排他的権利または特権が請求されている本発明の具体例を以下のように定義する。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号ＦＩＡ６１Ｋ 31/00 ６２６Ａ６１Ｋ 31/00 ６２６Ｎ６３１６３１Ｈ６４３６４３Ｂ６４３ 31/545 31/545 ６０１６０１ (72)発明者レビー，マーク・アランアメリカ合衆国19087ペンシルベニア州ウェイン、リベイル・ロード115番 (72)発明者リー，デニスアメリカ合衆国19081ペンシルベニア州スワースモア、ハバーフォード・アベニュー205番 (72)発明者グリーソン，ジョン・ジェラルドアメリカ合衆国19335ペンシルベニア州ダウニントン、ヘロン・ヒル・ドライブ８番 (72)発明者テイラー，アンドリュー・ウィリアムイギリス、シーエム23・３ジェイティ、ビショップス・ストートフォード、メイゾー・ロード64番 (72)発明者コーバート，デイビッド・フランシスイギリス、アールエイチ２・０エヌピー、サリー、レイゲイト、ウィルモッツ・クロース12番

Claims

【特許請求の範囲】１.式：［式中、Ｒ₁は水素、置換されていてもよいアルコキシ、またはハロゲンであり；Ｒ₂はＯＲ_aであり；Ｒ_aはＣ_1-4アルキル、または置換されていてもよいアリールＣ_1-4アルキシであり；Ｒ₃は水素、−ＯＣ(Ｏ)Ｒ₅、Ｓ(Ｏ)ｎＲ₆、または臭素であるが；ただし、Ｒ₃ が水素である場合にはＲ₄は水素以外であり；Ｒ₄は水素であり；Ｒ₅はＣ_1-6アルキル、Ｃ_3-7シクロアルキル、置換されていてもよいアリール、または置換されていてもよいアリールアルキルであり；Ｒ₆は置換されていてもよいアリール、または置換されていてもよいヘテロアリールであり；ｍは１または２の値を有する整数であり；ｎは０であるか、または１もしくは２の値を有する整数である］で示される化合物またはその医薬上許容される塩であって、tert-ブチル７−アルファ−メトキシメトキシセフェロスポラネートスルホン;tert-ブチル７−ベータ−メトキシセファロスポラネートスルホン；メチル（６Ｒ,７Ｓ）−７−メトキシ−３−アセトキシメチル−３−セフェム−４−カルボン酸−１,１−ジオキシド；およびベンジル−（６Ｒ,７Ｓ）−７−メトキシ−３−アセトキシメチル −３−セフェム−４−カルボキシレート−１,１−ジオキシドを除くもの。２.Ｒ_aがヒドロキシ、ハロゲン、アルキル、またはアルコキシにより独立して１回またはそれ以上置換されていてもよいベンジル残基である請求項１記載の化合物。３.Ｒ_aがメチルまたはt-ブチルである請求項１記載の化合物。４.Ｒ₁残基が置換されていてもよいアルコキシ残基である請求項１記載の化合物。５.Ｒ₁アルコキシがメトキシまたは２−ヒドロキシエトキシである請求項４記載の化合物。６.ｍが２である請求項１記載の化合物。７.Ｒ₃がＳ(Ｏ)ｎＲ₆である請求項１記載の化合物。８.Ｒ₆が置換されていてもよいテトラゾール、トリアゾール、またはオキサジアゾールであるヘテロアリールである請求項７記載の化合物。９.Ｒ₃が水素である請求項１記載の化合物。１０.tert-ブチル（６Ｒ,７Ｓ）−３−アセトキシメチル−７−メトキシ−３ −セフェム−４−カルボキシレート−１,１−ジオキシド、 tert-ブチル(６Ｒ,７Ｒ)−３−アセトキシメチル−７−メトキシ−３−セフェム−４−カルボキシレート−１,１−ジオキシド、３,４−ジクロロベンジル（６Ｒ,７Ｓ）−３−アセトキシメチル−７−メトキシ−３−セフェム−４−カルボキシレート−１,１−ジオキシド、 tetr-ブチル（６Ｒ,７Ｓ）−３−アセトキシメチル−７−（２−ヒドロキシエトキシ）−３−セフェム−４−カルボキシレート−１,１−ジオキシド、メチル（６Ｒ,７Ｓ）−３−アセトキシメチル−７−メトキシ−３−セフェム −４−カルボキシレート−１,１−ジオキシド、ベンジル（６Ｒ,７Ｓ）−３−アセトキシメチル−７−メトキシ−３−セフェム−４−カルボキシレート−１,１−ジオキシド、３,４−および２,３−ジメチルベンジル（６Ｒ,７Ｓ）−３−アセトキシメチル−７−メトキシ−３−セフェム−４−カルボキシレート−１,１−ジオキシド、４−ニトロベンジル（６Ｒ,７Ｓ）−３−アセトキシメチル−７−メトキシ− ３−セフェム−４−カルボキシレート−１,１−ジオキシド、３,４−ジクロロベンジル（１ＲＳ,６Ｒ,７Ｓ）−７−メトキシ−３−アセトキシメチル−３−セフェム−４−カルボキシレート−１−オキシド３,４−ジクロロベンジル−（６Ｒ,７Ｒ）−７−メトキシ−３−アセトキシメチル−３−セフェム−４−カルボキシレート−１,１−ジオキシド、４−ヨードベンジル−（６Ｒ,７Ｓ）−７−メトキシ−３−アセトキシメチル −３−セフェム−４−カルボキシレート−１,１−ジオキシド、３−ヨードベンジル−（６Ｒ,７Ｓ）−７−メトキシ−３−アセトキシメチル −３−セフェム−４−カルボキシレート−１,１−ジオキシド、３−ヨード−４−メチルベンジル−（６Ｒ,７Ｓ）−７−メトキシ−３−アセトキシメチル−３−セフェム−４−カルボキシレート−１,１−ジオキシド３,４−ジクロロベンジル−（６Ｒ,７Ｓ）−７−［２−ヒドロキシエトキシ］ −３−アセトキシメチル−３−セフェム−４−カルボキシレート−１,１−ジオキシド、３,４−ジクロロベンジル−（６Ｒ,７Ｓ）−７−［n-ブトキシ］−３−アセトキシメチル−３−セフェム−４−カルボキシレート−１,１−ジオキシド、３,４−ジクロロベンジル−（６Ｒ,７Ｓ）−７−エトキシ−３−アセトキシメチル−３−セフェム−４−カルボキシレート−１,１−ジオキシド、３,４−ジクロロベンジル−（６Ｒ,７Ｓ）−３−ブロモメチル−７−セフェム −４−カルボキシレート−１,１−ジオキシド、３,４−ジクロロベンジル−（６Ｒ,７Ｓ）−３−フェニルスルホニルメチル− ７−メトキシ−３−セフェム−４−カルボキシレート−１,１−ジオキシド、３,４−ジクロロベンジル−（６Ｒ,７Ｓ）−３−［５−メチル−（１,３,４− オキサジアゾール）−２−チオメチル］−７−メトキシ−３−セフェム−４−カルボキシレート−１,１−ジオキシド、３,４−ジクロロベンジル−（６Ｒ,７Ｓ）−３−［（１−メチルテトラゾール）−５−チオ］メチル−７−メトキシ−３−セフェム−４−カルボキシレート− １,１−ジオキシド、３,４−ジクロロベンジル−（６Ｒ,７Ｓ）−３−［（１,２,３−トリアゾール）−４−チオメチル］−７−メトキシ−３−セフェム−４−カルボキシレート− １,１−ジオキシドである請求項１記載の化合物。１１.請求項１記載の化合物および医薬上許容される担体または希釈剤を含んでなる医薬組成物。１２.請求項１０記載の化合物および医薬上許容される担体または希釈剤を含んでなる医薬組成物。１３.式：［式中、Ｒ₁は水素、置換されていてもよいアルコキシ、またはハロゲンであり；Ｒ₂はＯＲａであり；Ｒ_aはＣ_1-4アルキル、または置換されていてもよいアリールＣ_1-4アルキシであり；Ｒ₃は水素、−ＯＣ(Ｏ)Ｒ₅、Ｓ(Ｏ)ｎＲ₆、または臭素であるが；ただし、Ｒ₃ が水素である場合にはＲ₄は水素以外であり、Ｒ₃およびＲ₄の一方のみが臭素であってもよく；Ｒ₄は水素であり；Ｒ₅はＣ_1-6アルキル、Ｃ_3-7シクロアルキル、置換されていてもよいアリール、または置換されていてもよいアリールアルキルであり；Ｒ₆は置換されていてもよいアリール、または置換されていてもよいヘテロアリールであり；ｍは１または２の値を有する整数であり；ｎは０であるか、または１もしくは２の値を有する整数である］で示される有効量の化合物またはその医薬上許容される塩を哺乳動物またはヒトに投与することを特徴とする、治療を必要とする哺乳動物における過剰または不適当なアポプトーシスの遮断方法。１４.過剰または不適当なアポプトーシスがアルツハイマー病において起こるものである請求項１３記載の方法。１５.過剰または不適当なアポプトーシスがウイルス感染において起こるものである請求項１３記載の方法。１６.過剰または不適当なアポプトーシスが心筋梗塞または再灌流傷害において起こるものである請求項１３記載の方法。１７.過剰または不適当なアポプトーシスが虚血の間に起こるものである請求項１３記載の方法。１８.過剰または不適当なアポプトーシスが過剰な骨の喪失を引き起こすものである請求項１３記載の方法。１９.過剰または不適当なアポプトーシスが骨関節炎を引き起こすものである請求項１３記載の方法。２０.過剰または不適当な肝細胞の変性を引き起こすものである請求項１３記載の方法。２１.化合物が tert-ブチル(６Ｒ,７Ｓ)−３−アセトキシメチル−７−メトキシ−３−セフェム−４−カルボキシレート−１,１−ジオキシド、 tert-ブチル(６Ｒ,７Ｒ)−３−アセトキシメチル−７−メトキシ−３−セフェム−４−カルボキシレート−１,１−ジオキシド、３,４−ジクロロベンジル（６Ｒ,７Ｓ）−３−アセトキシメチル−７−メトキシ−３−セフェム−４−カルボキシレート−１,１−ジオキシド、 tetr-ブチル（６Ｒ,７Ｓ）−３−アセトキシメチル−７−（２−ヒドロキシエトキシ）−３−セフェム−４−カルボキシレート−１,１−ジオキシド、メチル（６Ｒ,７Ｓ）−３−アセトキシメチル−７−メトキシ−３−セフェム −４−カルボキシレート−１,１−ジオキシド、ベンジル（６Ｒ,７Ｓ）−３−アセトキシメチル−７−メトキシ−３−セフェム−４−カルボキシレート−１,１−ジオキシド、３,４−および２,３−ジメチルベンジル（６Ｒ,７Ｓ）−３−アセトキシメチル−７−メトキシ−３−セフェム−４−カルボキシレート−１,１−ジオキシド、４−ニトロベンジル（６Ｒ,７Ｓ）−３−アセトキシメチル−７−メトキシ− ３−セフェム−４−カルボキシレート−１,１−ジオキシド、３,４−ジクロロベンジル（１ＲＳ,６Ｒ,７Ｓ）−７−メトキシ−３−アセトキシメチル−３−セフェム−４−カルボキシレート−１−オキシド３,４−ジクロロベンジル−（６Ｒ,７Ｒ）−７−メトキシ−３−アセトキシメチル−３−セフェム−４−カルボキシレート−１,１−ジオキシド、４−ヨードベンジル−（６Ｒ,７Ｓ）−７−メトキシ−３−アセトキシメチル −３−セフェム−４−カルボキシレート−１,１−ジオキシド、３−ヨードベンジル−（６Ｒ,７Ｓ）−７−メトキシ−３−アセトキシメチル −３−セフェム−４−カルボキシレート−１,１−ジオキシド、３−ヨード−４−メチルベンジル−（６Ｒ,７Ｓ）−７−メトキシ−３−アセトキシメチル−３−セフェム−４−カルボキシレート−１,１−ジオキシド３,４−ジクロロベンジル−（６Ｒ,７Ｓ）−７−［２−ヒドロキシエトキシ］ −３−アセトキシメチル−３−セフェム−４−カルボキシレート−１,１−ジオキシド、３,４−ジクロロベンジル−（６Ｒ,７Ｓ）−７−［n-ブトキシ］−３−アセトキシメチル−３−セフェム−４−カルボキシレート−１,１−ジオキシド、３,４−ジクロロベンジル−（６Ｒ,７Ｓ）−７−エトキシ-３−アセトキシメチル−３−セフェム−４−カルボキシレート−１,１−ジオキシド、３,４−ジクロロベンジル−（６Ｒ,７Ｓ）−３−ブロモメチル−７−セフェム −４−カルボキシレート−１,１−ジオキシド、３,４−ジクロロベンジル−（６Ｒ,７Ｓ）−３−フェニルスルホニルメチル− ７−メトキシ−３−セフェム−４−カルボキシレート−１,１−ジオキシド、３,４−ジクロロベンジル−（６Ｒ,７Ｓ）−３−［５−メチル−（１,３,４− オキサジアゾール）−２−チオメチル］−７−メトキシ−３−セフェム−４−カルボキシレート−１,１−ジオキシド、３,４−ジクロロベンジル−（６Ｒ,７Ｓ）−３−［（１−メチルテトラゾール）−５−チオ］メチル−７−メトキシ−３−セフェム−４−カルボキシレート− １,１−ジオキシド、３,４−ジクロロベンジル−（６Ｒ,７Ｓ）−３−［（１,２,３−トリアゾール）−４−チオメチル］−７−メトキシ−３−セフェム−４−カルボキシレート− １,１−ジオキシドである請求項１３記載の方法。２２.式：［式中、Ｒ₁は水素、置換されていてもよいアルコキシ、またはハロゲンであり；Ｒ₂はＯＲａであり；Ｒ_aはＣ_1-4アルキル、または置換されていてもよいアリールＣ_1-4アルキシであり；Ｒ₃は水素、−ＯＣ(Ｏ)Ｒ₅、Ｓ(Ｏ)ｎＲ₆、または臭素であるが；ただし、Ｒ₃ が水素である場合にはＲ₄は水素以外であり、Ｒ₃およびＲ₄の一方のみが臭素であってもよく；Ｒ₄は水素であり；Ｒ₅はＣ_1-6アルキル、Ｃ_3-7シクロアルキル、置換されていてもよいアリール、または置換されていてもよいアリールアルキルであり；Ｒ₆は置換されていてもよいアリール、または置換されていてもよいヘテロアリールであり；ｍは１または２の値を有する整数であり；ｎは０であるか、または１もしくは２の値を有する整数である］で示される有効量の化合物またはその医薬上許容される塩を哺乳動物に投与することを特徴とする、治療を必要とする哺乳動物における過剰なＩＬ−１ｂ変換酵素活性に関連した疾病または障害の治療方法。２３.式：［式中、Ｒ₁は水素、置換されていてもよいアルコキシ、またはハロゲンであり；Ｒ₂はＯＲａであり；Ｒ_aはＣ_1-4アルキル、または置換されていてもよいアリールＣ_1-4アルキシであり；Ｒ₃は水素、−ＯＣ(Ｏ)Ｒ₅、Ｓ(Ｏ)ｎＲ₆、または臭素であるが；ただし、Ｒ₃ が水素である場合にはＲ₄は水素以外であり、Ｒ₃およびＲ₄の一方のみが臭素であってもよく；Ｒ₄は水素であり；Ｒ₅はＣ_1-6アルキル、Ｃ_3-7シクロアルキル、置換されていてもよいアリール、または置換されていてもよいアリールアルキルであり；Ｒ₆は置換されていてもよいアリール、または置換されていてもよいヘテロアリールであり；ｍは１または２の値を有する整数であり；ｎは０であるか、または１もしくは２の値を有する整数である］で示される有効量の化合物またはその医薬上許容される塩を哺乳動物に投与することを特徴とする、治療を必要とする哺乳動物におけるＩＬ−１ｂおよび／またはＴＮＦの産生を遮断または減少させる方法。