SK13822000A3 - Inhibítory kaspázy, farmaceutická kompozícia, ktorá ich obsahuje, a ich použitie - Google Patents

Inhibítory kaspázy, farmaceutická kompozícia, ktorá ich obsahuje, a ich použitie Download PDF

Info

Publication number
SK13822000A3
SK13822000A3 SK1382-2000A SK13822000A SK13822000A3 SK 13822000 A3 SK13822000 A3 SK 13822000A3 SK 13822000 A SK13822000 A SK 13822000A SK 13822000 A3 SK13822000 A3 SK 13822000A3
Authority
SK
Slovakia
Prior art keywords
alkyl
group
aryl
hydrogen
optionally replaced
Prior art date
Application number
SK1382-2000A
Other languages
English (en)
Other versions
SK286736B6 (sk
Inventor
Marion W. Wannamaker
Guy W. Bemis
Paul S. Charifson
David J. Lauffer
Michael D. Mullican
Mark A. Murcko
Keith P. Wilson
James W. Janetka
Robert J. Davies
Anne-Laure Grillot
Zhan Shi
Cornelia J. Forster
Original Assignee
Vertex Pharmaceuticals Incorporated
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Vertex Pharmaceuticals Incorporated filed Critical Vertex Pharmaceuticals Incorporated
Publication of SK13822000A3 publication Critical patent/SK13822000A3/sk
Publication of SK286736B6 publication Critical patent/SK286736B6/sk

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/02—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link
    • C07K5/0202—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link containing the structure -NH-X-X-C(=0)-, X being an optionally substituted carbon atom or a heteroatom, e.g. beta-amino acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/02—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/18—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for pancreatic disorders, e.g. pancreatic enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/16—Central respiratory analeptics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/14—Drugs for dermatological disorders for baldness or alopecia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A61P19/10—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease for osteoporosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A61P21/02—Muscle relaxants, e.g. for tetanus or cramps
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A61P21/04—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system for myasthenia gravis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/08—Antiepileptics; Anticonvulsants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A61P25/16—Anti-Parkinson drugs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/30—Drugs for disorders of the nervous system for treating abuse or dependence
    • A61P25/32—Alcohol-abuse
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/14—Drugs for disorders of the endocrine system of the thyroid hormones, e.g. T3, T4
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/48—Drugs for disorders of the endocrine system of the pancreatic hormones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/48—Drugs for disorders of the endocrine system of the pancreatic hormones
    • A61P5/50—Drugs for disorders of the endocrine system of the pancreatic hormones for increasing or potentiating the activity of insulin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/06—Antianaemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Description

Oblasť techniky
Predložený vynález sa týka novej triedy zlúčenín, ktoré sú inhibítormi kaspázy, najmä enzýmu konvertujúceho interleukín-1β(ΙΟΕ). Tento vynález sa týka tiež farmaceutických prostriedkov obsahujúcich tieto zlúčeniny. Zlúčeniny a farmaceutické prostriedky podľa predloženého vynálezu sú veľmi vhodné najmä na inhibíciu aktivity kaspázy a v dôsledku toho je ich možné výhodne použiť ako činidlá proti ochoreniam sprostredkovaným interleukínom-1 („IL-1), apoptózou, faktorom vyvolávajúcim interferón gama („GIF) a interferónom-γ („IFN), vrátane zápalových ochorení, autoimúnnych ochorení, rozkladných ochorení kostí, proliferatívnych porúch, nákazlivých ochorení a degeneratívnych ochorení. Predložený vynález sa týka tiež spôsobu inhibície aktivity kaspázy a potlačenia produkcie IGIF a IFN-γ a spôsobu liečby ochorení spôsobených interleukínom-1-, apoptózou, IGIF a IFN-γ s použitím zlúčenín a prostriedkov podľa predloženého vynálezu. Predložený vynález sa týka tiež spôsobu prípravy zlúčenín podľa vynálezu.
Doterajší stav techniky
Interleukín 1 („IL-1) je dôležitým prezápalovým a imunoregulačným proteínom, ktorý stimuluje diferenciáciu a proliferáciu fibroblastov, produkciu prostaglandínov, kolagenázy a fosfolipázy synoviálnymi bunkami a chondrocytmi, degranuláciu bazofilov a eozinofilov a aktiváciu neutrofilov (Oppenheim, J.H. a kol., Immunology Today, 7, str. 45 - 56 (1986)). Samotný sa podieľa na patogenézii chronických a akútnych zápalových a autoimunitných ochorení. Napríklad pri reumatoidnej artritíde je IL-1 ako mediátorom zápalových symptómov, tak mediátorom rozpadu chrupavkového proteoglykánu v postihnutom mieste. Wood, D.D. a kol.,
Arthritis Rheum. 26, 975, (1983); Pettipher, E.J. a kol., Proc.
Natl. Acad. Sci. USA 71, 295 (1986); Arend, W.P. a Dayer, J.M., Arthritis Rheum. 38, 151 (1995). IL-1 je tiež velmi účinným činidlom vstrebávania kostného tkaniva. Jandiski, J.J., J. Oral. Path. 17, 145 (1988); Dewhirst, F.E. a kol., J. Immunol. 8,
2562, 1985). Alternatívne sa nazýva ako „aktivačný faktor osteoklastu pri deštruktívnych ochoreniach kostí ako je osteoartritída a viacnásobný myelóm. Bataille, R. a kol., Int. J. Clin. Lab. Res. 21(4), 283 (1992). Pri určitých proliferačných poruchách, ako je akútna myelogénna leukémia a viacnásobný myelóm, môže IL-1 podporiť rast a adhéziu nádorových buniek. Bani, M.R., J. Natl. Cancer Inst. 83, 123 (1991); Vidal-Vanaclocha, F., Cancer Res. 54, 2667 (1994). Pri týchto poruchách IL-1 stimuluje tiež vylučovanie iných cytokínov, ako je IL-6, ktoré môžu regulovať vývoj nádoru. (Tartour a kol., Cancer Res. 54, 6243 (1994). IL-1 je produkovaný prevažne periférnymi krvnými monocytmi ako súčasť zápalovej odpovede a vyskytuje sa v dvoch odlišných agonistických formách, IL-Ία a IL-Ιβ (Mosely, B.S. a kol., Proc. Nat. Acad. Sci., 84 str. 4572-4576 (1987); Lonnemann, G. a kol., Eur. J. Immunol., 19, str. 1531-1536 (1989)).
IL-Ιβ je syntetizovaný ako biologicky neaktívny prekurzor , pIL-Ιβ. pIL-Ιβ nemá konvenčnú vedúcu sekvenciu (leader sequence) a nie je upravovaný signálnou peptidázou (March. C.J., Náture, 315, str. 641 - 647 (1985). Namiesto toho je pIL-Ιβ štiepený enzýmom konvertujúcim interleukín-ΐβ (ICE) medzi Asp-116 a Ala-117, čím vzniká biologicky aktívny C-koncový fragment nachádzajúci sa v ľudskom sére a synoviálnej kvapaline (Sleath, P.R. a kol., J. Biol. Chem., 265, str. 14526 - 14528 (1992); A.D. Howard a kol., J. Immunol., 147, str. 2964 - 2969 (1991)). ICE je cysteínová proteáza primárne umiestnená v monocytoch. Prevádza prekurzor IL-Ιβ na maturovanú formu. Black, R.A. a kol., FEBS Lett., 247, str. 386 - 390 (1989); Kostura, M. J. a kol., Proc. Natl. Acad. Sci. United States of America, 86, str. 5227 - 5231 (1989). Úprava účinkom ICE je tiež potrebná na transport maturovaného IL-Ιβ cez bunkovú membránu.
ICE (alebo kaspáza-1) je členom skupiny homológnych enzýmov nazývaných kaspázy. Tieto homológy vykazujú sekvenčné podobnosti v oblastiach aktívneho miesta enzýmov. Tieto homológy (kaspázy) zahŕňajú TX (alebo ICErei-n alebo ICH-2) (kaspáza-4) (Faucheu, a kol. EMBO J., 14, strana 1914 (1995); Kamens J., a kol., J. Biol. Chem., 270, str. 15250 (1995); Nicholson a kol., J. Biol. Chem., 270 15870 (1995)), TY (alebo ICErei-m) (kaspáza-5) (Nicholson a kol., J. Biol. Chem., 270, strana 15870 (1995); ICH-1 (alebo Nedd-2) (kaspáza-2) (Wang, L. a kol., Celí, 78, str. 739 (1994)), MCH-2 (kaspáza-6), (Fernandes-Alnemri, T. a kol., Cancer Res., 55, str. 2737 (1995), CPP32 (alebo YAMA alebo apopaín) (kaspáza-3) (Fernandes-Alnemri, T. a kol., J. Biol. Chem., 269, str. 30761 (1994); Nicholson, D.W. a kol., Náture, 376, str. 37 (1995)), CMH-1 (alebo MCH-3) (kaspáza-7) (Lippke, a kol., J. Biol. Chem. 271(4), str. 1825-1828 (1996)); Fernandes-Alnemri,
T. a kol., Cancer Res., (1995)), MCH-5 (kaspáza-8) (Muzio, M. a kol., Celí 85(6), 817-827, (1996)), MCH-6 (kaspáza-9) (Duan, H. a kol., J. Biol. Chem., 271(34), str. 16720-16724 (1996)), MCH-4 (kaspáza-10) (Vincenz, C. a kol., J. Biol. Chem., 272, str. 6578-6583 (1997); Fernandes-Alnemri, T. a kol., Proc. Natl. Acad. Sci. 93, str. 7464-7469 (1996)), ICH-3 (kaspáza-11) (Wang, S. a kol., J. Biol. Chem., 271, str. 20580-20587 (1996)), mCASP-12 (kaspáza-12) , (Van de Craen, M. a kol., FEBS Lett. 403, str. 61-69 (1997); Yuan, Y. a Miura, M. PCT prihláška WO 95/00160 (1995)), ERICE (kaspáza-13), (Humke, E.W., a kol., J. Biol. Chem., 273(25), str. 15702-15707 (1998)), a MICE (kaspáza-14) (Hu, S. a kol., J. Biol. Chem., 273(45), str. 29648-29653 (1998)).
Každý z týchto homológov a tiež ICE samotný sú schopné vyvolať apoptózu, ak sa nadmerne exprimujú v transfekovaných bunkách. Inhibícia jedného alebo viacerých týchto homológov inhibítorom peptidyl ICE Tyr-Val-Ala-Asp-chlórmetylketónom vedie k inhibícii apoptózy u primárnych buniek alebo bunkových kmeňov.
Lazebnik a kol., Náture, 371, str. 346 (1994).
Ukázalo sa tiež, že kaspáza je zapojená do riadenia programovanej bunkovej smrti alebo apoptózy. Yuan, J. a kol., Celí, 75, str. 641-652 (1993); Miura, M. a kol., Celí, 75, str. 653— 660 (1993); Nett-Fiordalisi, M.A. a kol., J. Celí. Biochem., 17B, str. 117 (1993) . Najmä sa má za to, že ICE alebo homológy ICE súvisia s reguláciou apoptózy pri neurodegeneratívnych ochoreniach, ako je Alzheimerova a Parkinsonova choroba (Marx, J. a M. Baringa, Science, 259, str. 760-762 (1993); Gagliardini, V. a kol., Science, 263, str. 826-828 (1994)). Liečebné aplikácie na inhibíciu apoptózy môžu zahŕňať liečbu Alzheimerovej choroby, Parkinsonovej choroby, mŕtvice, infarktu myokardu, atrofie chrbtice a starnutie.
Ukázalo sa, že ICE sprostredkuje apoptózu (programovaná bunková smrť) pri určitých typoch tkaniva. Steller, H., Science, 267, str. 1445 (1995); Whyte, M. a Evan, G., Náture, 376, str.17 (1995); Martin, S. J. a Green, D.R., Celí, 82, str. 349 (1995); Alnemri, E.S., a kol., J. Biol. Chem., 270, str. 4312 (1995); Yuan, J. Curr. Opin, Celí Biol., 7, str. 211 (1995). Transgénna myš s prerušeným ICE génom je deficientná pri apoptóze sprostredkovanej Fas (Kuida, K. a kol., Science 267, 2000 (1995)). Táto aktivita ICE je odlišná od aktivity ako enzýmu na spracovanie pro-IL-Ιβ. Je možné, že pri určitých typoch tkaniva nemusí inhibícia ICE ovplyvňovať sekréciu maturovaného IL-Ιβ, ale môže inhibovať apoptózu.
Enzymaticky aktívny ICE je už skôr opísaný ako heterodimér zložený z dvoch podjednotiek, p20 a plO (s molekulovou hmotnosťou 20 kDa alebo 10 kDa). Tieto podjednotky sú odvodené od proenzýmu s hmotnosťou 45 kDa (p45) cez formu p30, pomocou aktivačného mechanizmu, ktorý je autokatalytický (Thornberry, N.A. a kol., Náture, 356, str. 768-774 (1992)). Proenzým ICE je rozdelený na niekoľko funkčných domén: prodoménu (pl4), podjednotku p22/20, polypeptidovú spojku a podjednotku plO (Thornberry a kol., pozri skôr; Casano a kol., Genomics, 20, str. 474-481 (1994)) .
p45 s plnou dĺžkou sa charakterizoval pomocou svojej cDNA-sekvencie a aminokyselinovej sekvencie (medzinárodné patentové prihlášky PCT č. WO 91/15577 a WO 94/00154) . Známe sú aj cDNA-sekvencie a amínokyselinové sekvencie p20 a plO (Thornberry a kol., pozri skôr). Sekvenované a klonované boli tiež myšie a krysie ICE. Vykazujú vysokú homológiu aminokyselinovej sekvencie a sekvencie nukleovej kyseliny s ľudským ICE (Miller, D.K. a kol., Ann. N.Y. Acad. Sci., 696, str. 133-148 (1993); Molineaux, S.M. a kol., Proc. Nat. Acad. Sci., 90, str. 1809-1813 (1993). Pomocou rozlíšenia atómov s použitím rentgenovej kryštalografie sa určila trojrozmerná štruktúra ICE. Wilson, K. P., a kol., Náture, 370, str. 270-275 (1994). Aktívny enzým sa vyskytuje ako tetramér dvoch p20 a dvoch plO podjednotiek.
Nedávno sa do konverzie pro-IGIF na IGIF do produkcie IFN-γ in vivo zapojili ICE a ďalšie členy skupiny ICE/CED-3 (PCT patentová prihláška PCT/US96/20843, prihláška WO 97/22619, ktoré sú tu uvedené ako odkaz) . IGIF sa syntetizuje in vivo ako prekurzor proteinu pro-IGIF.
Faktor vyvolávajúci interferón gama (IGIF) je asi 18-kDa polypeptid, ktorý stimuluje vylučovanie interferónu gama (IFNy) T-bunkami. IGIF je vylučovaný aktivovanými Kupfferovými bunkami a makrofágmi in vivo a z týchto buniek je prenášaný za stimulácie endotoxínu. Teda, zlúčeniny, ktoré potláčajú vylučovanie IGIF, môžu byť užitočné ako inhibítory takej stimulácie buniek T, čo môže znížiť hladinu vylučovania IFN-γ týmito bunkami.
IFN-γ je cytokín s imunomodulačnými účinkami na rôzne imúnne bunky. IFN-γ je zapojený najmä do aktivácie makrofágu a výberu
Thl buniek (F. Belardelli, APMIS, 103, str. 161 (1995)). IFN-Y uplatňuje svoj účinok najmä pomocou modulácie vylučovania génov cez STAT a IRF dráhy (C. Schindler a J. E. Darnell, Ann. Rev.
Biochem., 64, str. 621 (1995); T. Taniguchi, J. Cancer Res. Clin. Oncol., 121, str. 516 (1995)).
Myši, ktoré majú nedostatok IFN-γ alebo jeho receptora, majú mnohonásobné poruchy funkcie imúnnych buniek a sú odolné k endotoxickému šoku (S. Huang a kol., Science, 259, str. 1742 (2993);
D. Dalton a kol., Science, 259, str. 1739 (1993); B.D. Car a kol., J. Exp. Med., 179, str. 1437 (1994)). Ukazuje sa, že rovnako ako IL-12, aj IGIF vykazuje schopnosť vyvolať produkciu IFN-γ bunkami T (H. Okamura a kol., Infection and Immunity, 63, str. 3966 (1995); H. Okamura a kol., Náture, 378, str. 88 (1995); S. Ushio a kol., J. Immunol., 156, str. 4274 (1996)).
Ukázalo sa, že IFN-γ prispieva k patológii spojenej s rôznymi zápalovými, nákazlivými a autoimúnnymi poruchami a ochoreniami. Zlúčeniny schopné potlačiť vylučovanie IFN-γ by sa mohli využiť na zmiernenie vplyvov ochorení spojených s IFN-γ.
Preto prostriedky a spôsoby schopné regulovať prevedenie pro-IGIF na IGIF sa môžu využiť na potlačenie vylučovania IGIF a IFN-γ in vivo a teda na zmiernenie škodlivého vplyvu týchto proteínov, ktoré prispievajú k poruchám a ochoreniam človeka.
Inhibítory kaspázy predstavujú triedu zlúčenín vhodných na kontrolu zápalov alebo apoptózy alebo obidvoch. Opísané sú peptidové a peptidylové inhibítory ICE (PCT patentové prihlášky WO 91/15577, WO 93/05071, WO 93/09135, WO 93/12076, WO 93/14777, WO 93/16710,WO 95/35308, WO 96/30395, WO 96/33209 a WO 98/01133; Európske patentové prihlášky 503 561, 547 699, 618 223, 623 592 a 623 606; a US patenty číslo 5 434 248, 5 710 153, 5 716 929 a 5 744 451). Ukázalo sa, že tieto peptidylové inhibítory ICE blokujú vylučovanie maturovaného IL-Ιβ na myšom modely zápalu (pozri skôr) a potláčajú rast leukemických buniek in vitro (Estrov a kol., Blood, 84, 380a (1994)). Avšak vďaka svojej peptidickej povahe sa tieto inhibítory vyznačujú nežiaducimi farmakologickými vlastnosťami, ako je zlá penetrácia do buniek a bunková akti7 víta, zlá absorpcia pri orálnom podávaní a rýchly metabolizmus. (Plattner, J.J. a D.W. Norbeck, Drug Discovery Technologies,
C.R. Clark a W.H. Moos (Ellis Horwood, Chichester, Anglicko, 1990) str. 92-126. Tieto vlastnosti zabraňujú ich využitiu ako účinných liečiv.
Je tiež známe, že ICE inhibujú in vitro tiež nepeptidylové zlúčeniny. PCT patentová prihláška WO 95/26958; US patent 5 552 400; Dolle a kol., J. Med. Chem., 39, str. 2438-2440 (1996).
Nie je však jasné, či tieto zlúčeniny majú vhodný farmakologický profil na terapeutické využitie.
Existuje teda potreba zlúčenín, ktoré budú účinne inhibovať kaspázu a ktoré budú mať výhodnú in vivo aktivitu na použitie ako činidiel na prevenciu a liečbu chronických a akútnych foriem ochorení sprostredkovaných IL-1, apoptózou, IGIF a IFN-γ, a tiež zápalových ochorení, autoimúnnych ochorení, rozkladných ochorení kosti, proliferatívnych porúch, nákazlivých ochorení a degeneratívnych ochorení.
Podstata vynálezu
Predložený vynález poskytuje novú triedu zlúčenín a ich farmaceutický prijateľných derivátov, ktoré sa môžu využiť ako inhibítory kaspázy, najmä inhibítory ICE. Tieto zlúčeniny sa môžu použiť samotné alebo v spojení s inými liečebnými alebo profylaktickými činidlami ako sú antibiotiká, imunomodulátory alebo iné protizápalové činidlá, na liečbu alebo profylaxiu ochorení sprostredkovaných IL-1, apoptózou, IGIF alebo IFN-γ. V súlade s výhodným uskutočnením sú zlúčeniny podľa predloženého vynálezu schopné viazať sa na aktívne miesto kaspázy a inhibovať aktivitu tohto enzýmu.
Predmetom podľa predloženého vynálezu je poskytnúť novú triedu zlúčenín všeobecného vzorca I, ktoré majú výhodné in vivo profily:
kde sú rôzne substituenty opísané podľa predloženého vynálezu.
Ďalším predmetom podlá predloženého vynálezu je poskytnúť farmaceutické kompozície, vrátane viaczložkových kompozícií.
Predložený vynález poskytuje tiež spôsoby použitia a prípravy zlúčenín podľa predloženého vynálezu a podobných zlúčenín. Podrobný opis vynálezu
Aby sa vynález lepšie pochopil, nasleduje podrobný opis.
V predloženom vynáleze sa používajú nasledujúce skratky a definície.
Skratky:
AC2O anhydrid kyseliny octovej
MeCn acetonitril
AMC aminometylkumarín n-Bu normálna butylová skupina
DMF dimetylformamid
DIEA N,N-diizopropyletylamín
DMA N,N-dimetylacetamid
EDC hydrochlorid 1-(3-dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimidu
Et2O dietyléter
EtOAc etylacetát
Fmoc
9-fluorenylmetoxykarbonyl
HBTU
O-benzotriazol-l-yl-N, N, N', N'-tetrametylurónium hexafluórfosfát
HOBT hydrát 1-hydroxybenzotriazolu
MeOH metanol
NMP
N-metylpyrolidón
TFA kyselina trifluóroctová pNA p-nitroanilin
Definície
Termín kaspáza znamená enzým, ktorý je členom skupiny enzýmov, ktoré zahŕňajú ICE (pozri H. Hara, Ntl. Acad. Sci., 94, str. 2007-2012 (1997)).
Termíny HBV, HCV a HGV znamenajú vírus hepatitídy-B, vírus hepatitídy-C a vírus hepatitídy-G.
Termín Kx znamená číselnú mieru účinnosti zlúčeniny inhibujúcej aktivitu výsledného enzýmu, ako je ICE. Nižšie hodnoty KL znamenajú vyššiu účinnosť. Hodnota ΚΣ je odvodená pomocou úpravy experimentálne zistených údajov podľa štandardných rovníc pre kinetiku enzýmov (pozri I.H. Segel, Enzýme Kinetics, Wiley Interscience, 1975) .
Termín faktor indukujúci interferón gama alebo IGIF znamená faktor, ktorý je schopný vyvolať endogénnu produkciu IFN-γ.
Termín inhibítor kaspázy znamená zlúčeninu, ktorá je schopná vykázať detekovatelnú inhibíciu jednej alebo viacerých kaspáz. Termín inhibítor ICE znamená zlúčeninu, ktorá je schopná inhibovať enzým ICE a prípadne ďalej jednu alebo viac ďalších kaspáz. Inhibícia ICE môže byť určená s použitím postupov opísaných a uvedených ako odkazy.
Odborníci zistili, že in vivo inhibítor enzýmu nie je nutne in vitro inhibítorom enzýmu. Napríklad prelieková forma zlúčeniny typicky vykazuje nízku alebo žiadnu aktivitu pri in vitro testoch. Také preliekové formy môžu byť premenené pomocou metabolického alebo iného biochemického postupu v tele pacienta, čím sa získa in vivo inhibítor ICE.
Termín cytokín znamená molekulu, ktorá sprostredkuje interakcie medzi bunkami.
Termín stav znamená akékoľvek ochorenie, poruchu alebo účinok, ktorý spôsobuje škodlivé biologické následky pre subjekt .
Termín subjekt znamená živočícha alebo jednu alebo viac buniek živočíšneho pôvodu. Výhodne je živočíchom cicavec, výhodnejšie človek. Bunky môžu byť v akejkoľvek forme, vrátane, ale bez obmedzenia, buniek ponechaných v tkanivách, zhlukov buniek, imortalizovaných buniek, transfektovaných buniek alebo transformovaných buniek a buniek odvodených od živočíchov, ktoré sú fyzikálne alebo fenotypicky pozmenené.
Termín pacient, ako je podľa vynálezu používaný, označuje ľubovoľného cicavca, najmä človeka.
Termín alkylová skupina je priamy alebo rozvetvený, nasýtený alifatický uhľovodík obsahujúci 1 až 6 atómov uhlíka.
Termín alkenylová skupina znamená priamy alebo rozvetvený nenasýtený uhľovodík obsahujúci 2 až 6 atómov uhlíka a najmenej jednu dvojitú väzbu.
Termín alkinylová skupina znamená priamy alebo rozvetvený nenasýtený uhľovodík obsahujúci 2 až 6 atómov uhlíka a najmenej jednu trojitú väzbu.
Termín cykloalkylová skupina znamená mono- alebo polycyklický, nearomatický uhľovodíkový kruhový systém, ktorý môže prípadne obsahovať nenasýtené väzby v kruhovom systéme. Medzi pri11 klady patrí cyklohexylová skupina, adamantylová skupina, norbornylová skupina a spirocyklopentylová skupina.
Termín arylová skupina znamená mono- alebo polycyklický kruhový systém, ktorý obsahuje 6, 10, 12 alebo 14 atómov uhlíka, v ktorom je aspoň jeden kruh aromatický. Arylové skupiny podlá predloženého vynálezu sú prípadne raz alebo viackrát substituované skupinou R11. Medzi príklady patrí fenylová skupina, naftylová skupina a tetrahydronaftylová skupina.
Termín heteroarylová skupina znamená mono- alebo polycyklický kruhový systém, ktorý obsahuje 1 až 15 atómov uhlíka a 1 až 4 heteroatómy, pričom je aspoň jeden z kruhov aromatický. Heteroatómy sú atóm síry, dusíka alebo kyslíka. Heteroarylové skupiny podlá predloženého vynálezu sú prípadne raz alebo viackrát substituované skupinou R11.
Termín heterocyklická skupina znamená mono- alebo polycyklický kruhový systém, ktorý obsahuje 1 až 15 atómov uhlíka a 1 až 4 heteroatómy, kde mono- alebo polycyklický kruhový systém môže prípadne obsahovať nenasýtené väzby, ale nie je aromatický. Heteroatómy sú nezávisle od seba atóm síry, dusíka a kyslíka.
Termín alkylarylová skupina znamená alkylovú skupinu, kde atóm vodíka alkylovéj skupiny je nahradený arylovou skupinou.
Termín alkylheteroarylová skupina znamená alkylovú skupinu, kde atóm vodíka alkylovej skupiny je nahradený heteroarylovou skupinou.
Termín aminokyselinový postranný reťazec znamená akúkoľvek skupinu pripojenú k a uhlíku prírodnej alebo neprírodnej aminokyseliny .
Termín substituovaný znamená nahradenie atómu vodíka v zlúčenine substitujúcou skupinou.
Termín priamy reťazec znamená postupne nerozvetvený reťa12 zec kovalentne viazaných atómov. Priamy reťazec môže byť substituovaný, ale tieto substituenty netvoria súčasť priameho reťazca .
V chemických vzorcoch znamenajú okrúhle zátvorky spôsob väzby v molekulách alebo skupinách. Zátvorky sa používajú najmä na vyznačenie: 1) že k príslušnému atómu je viazaný viac ako jeden atóm alebo skupina; 2) miesta rozvetvenia (to znamená atóm tesne pred otvorením zátvorky je viazaný ako k atómu alebo skupine v zátvorkách, tak aj k atómu alebo skupine tesne za ukončením zátvorky). Príkladom prvého použitia je skupina -N(alkyl)2, ktorá znamená, že sú dve alkylové skupiny viazané na atóm dusíka. Príkladom druhého použitia je skupina -C(O)NH2, ktorá znamená, že karbonylová skupina a aminoskupina (NH2) sú obidve viazané k vyznačenému atómu uhlíka. Skupina -C(O)NH2 môže byť znázornená inými spôsobmi, vrátane nasledujúcej štruktúry:
nh2
Substituenty môžu byť znázornené v rôznych formách. Tieto rôzne formy sú odborníkom pracujúcim v tejto oblasti známe a môžu sa používať zameniteľným spôsobom. Napríklad metylový substituent na fenylovom kruhu môže byť znázornený v nasledujúcich formách:
Me
Rôzne formy substituentov, ako je metylová skupina, sa podľa vynálezu používajú zameniteľným spôsobom.
Ak je to potrebné, ďalšie definície sú uvedené v opise.
Zlúčeniny podľa predloženého vynálezu
Zlúčeninami podľa uskutočnenia A podľa predloženého vynálezu (I) sú zlúčeniny všeobecného vzorca I:
kde:
Y je (3) c* R7
O s podmienkou, že ak R7 je hydroxylová skupina, potom Y môže byť tiež:
(b)
X je skupina -C(R3)2- alebo skupina -N (R3)-;
m je 0 alebo 1;
R1 je atóm vodíka, skupina -C (O) R8, skupina -C (O) C (O) R8, skupina -S(O)2R8/ skupina -S(O)R8, skupina -C (O) OR8, skupina -C (O) N (H) R8, skupina -S (0) 2N (H)-R8, skupina -S (0) N (H)-R8, skupina -C (0) C (0) N (H) R8, skupina -C (O) CH=CHR8, skupina -C(O)CH2OR8, skupina -C(O)CH2N(H)R8, skupina -C(O)N(R8)2, skupina -S (O) 2N (R8) 2, skupina -S(O)N(R8)2, skupina -C (O) C (O) N (R8) 2, skupina -C (O) CH2N (R8) 2, skupina -CH2R8, skupina -CH2-alkenyl-R8, alebo skupina -CH2-alkinyl-R8;
R2 je skupina -H a každá skupina R3 je nezávisle skupina -H, aminokyselinový postranný reťazec, skupina -R8, skupina alkenyl-R9, alebo skupina alkinyl-R9, alebo R2 jedna skupina R3 spolu s atómami, na ktoré sú viazané, tvoria trojčlenný až sedemčlenný cyklický alebo heterocyklický kruhový systém, kde atóm vodíka viazaný k akémukolvek atóm uhlíka na alkylovej alebo cykloalkylovej skupine je prípadne nahradený skupinou -R10, atóm vodíka viazaný k akémukoľvek uhlíku arylovej alebo heteroarylovej skupiny je prípadne nahradený skupinou -R11, atóm vodíka viazaný k akémukoľvek atómu dusíka kruhového systému je prípadne nahradený skupinou -R1;
R4 je skupina -H a každá skupina R5 je nezávisle skupina -H, aminokyselinový postranný reťazec, skupina -R8, skupina -alkenyl-R9, alebo skupina -alkinyl-R9, alebo skupina R4 a jedna skupina R5 spolu s atómami, na ktoré sú viazané, tvoria trojčlenný až sedemčlenný cyklický alebo heterocyklický kruhový systém, kde atóm vodíka viazaný k akémukolvek atómu uhlíka na alkylovej alebo cykloalkylovej skupine je prípadne nahradený skupinou -R10, atóm vodíka viazaný k akémukoľvek uhlíku arylovej alebo heteroarylovej skupiny je prípadne nahradený skupinou -R11, a atóm vodíka viazaný k akémukoľvek atómu dusíka kruhového systému je prípadne nahradený skupinou -R1;
R6 je skupina -H;
R7 je skupina -OH, skupina -OR3, alebo skupina -N(H)OH;
každá skupina R8 je nezávisle -alkylová skupina, -cykloalkylová skupina, -arylová skupina, -heteroarylová skupina, -heterocyklylová skupina, -alkylcykloalkylová skupina, -alkylarylová skupina, -alkylheteroarylová skupina alebo -alkylheterocyklylová skupina, kde atóm vodíka viazaný k akémukoľvek atómu uhlíka na alkylovej alebo cykloalkylovej skupine je prípadne nahradený skupinou -R10, atóm vodíka viazaný k akémukoľvek uhlíku arylovej alebo heteroarylovej skupiny je prípadne nahradený skupinou -R11, a atóm vodíka viazaný k akémukoľvek atómu dusíka kruhového systému je prípadne nahradený skupinou -R1;
každá skupina R9 je nezávisle -arylová skupina, -heteroarylová skupina, cykloalkylová skupina, alebo -heterocyklylová skupina, kde atóm vodíka viazaný k akémukoľvek atómu uhlíka na alkylovej alebo cykloalkylovej skupine je prípadne nahradený skupinou -R10, atóm vodíka viazaný k akémukoľvek uhlíku arylovej alebo heteroarylovej skupiny je prípadne nahradený skupinou -R11, a atóm vodíka viazaný k akémukoľvek atómu dusíka kruhového systému je prípadne nahradený skupinou -R1;
každá skupina R10 je nezávisle skupina -OH, skupina -SH, skupina -F, skupina -Cl, skupina -Br, skupina -I, skupina -NO2, skupina -CN, skupina -NH2, skupina -CO2H, skupina -C(O)NH2, skupina -N(H)C(O)H, skupina -N(H)C(0)NH2, -perfluóralkylová skupina, -O-alkylová skupina, -0-arylová skupina, -O-alkylarylová skupina, -N(H)alkylová skupina, -N(H)arylová skupina, -N(H)-alkylarylová skupina, skupina -N(alkyl)2, -C(0)N(H)alkylová skupina, skupina -C(0)N(alkyl)2, -N(H)C(0)alkylová skupina, -N (H) C (0) N (H) -alkylová skupina, skupina -N(H)C(0)N(alkyl)2, -S-alkylová skupina, -S-arylová skupina, -S-alkylarylová skupina, -S (0)2alkylová skupina, -S(0)alkylová skupina, -C(0)alkylová skupina, skupina -CH2NH2, -CH2N(H)alkylová skupina, alebo skupina -CH2N (alkyl) 2, -alkylová skupina, -cykloalkylová skupina, -arylová skupina, -heteroarylová skupina, -heterocyklylová skupina, -alkylcykloalkylová skupina, -alkylarylová skupina, -alkylheteroarylová skupina, alebo -alkylheterocyklylová skupina, kde atóm vodíka viazaný k akémukoľvek atómu uhlíka -arylovej skupiny alebo -heteroarylovej skupiny je prípadne nahradený skupinou R11 a atóm vodíka viazaný k akémukoľvek atómu dusíka je prípadne nahradený skupinou R1; a každá skupina R11 je nezávisle skupina -OH, skupina -SH, skupina -F, skupina -Cl, skupina -Br, skupina -I, skupina -N02, skupina -CN, skupina -NH2, skupina -CO2H, skupina -C(0)NH2, skupina -N(H)C(O)H, skupina -N(H)C(0)NH2, -alkylová skupina, -cykloalkylová skupina, -perfluóralkylová skupina, -O-alkylová skupina, -0-arylová skupina, -O-alkylarylová skupina, -N(H)-alkylová sku16 pina, -N(H)-arylová skupina, -N (H)-alkylarylová skupina, skupina -N(alkyl)2, -C(0)N(H)alkylová skupina, skupina -C(O)N(alkyl)2/ -N(H)C(0)alkylová skupina, -N(H)C(0)N(H)alkylová skupina, skupina -N(H)C(0)N(alkyl)2, -S-alkylová skupina, -S-arylová skupina, -S-alkylarylová skupina, -S (0) 2alkylová skupina, -S(0)alkylová skupina, -C(0)alkylová skupina, skupina -CH2NH2, -CH2N(H)alkylová skupina, alebo skupina -CH2N(alkyl)2.
V alternatívnej forme uskutočnenia A:
R1 je H, skupina -R8, skupina -C(O)R8, skupina -C(O)C(O)R8, skupina -S(O)2R8, skupina -S(O)R8, skupina -C(O)OR8, skupina -C(O)N(H)R8, skupina -S (0) 2N (H)-R8, skupina -S (0) N (H)-R8, skupina -C (0) C (0) N (H) R8, skupina -C (0) CH=CHR8, skupina -C(O)CH2OR8, skupina -C(O)CH2N(H)R8, skupina -C(O)N(R8)2, skupina -S (0) 2N (R8) 2, skupina -S(O)N(R8)2, skupina -C (0) C (0) N (R8) 2, skupina -C (0) CH2N (R8) 2, skupina -CH2R8, skupina -CH2~alkenyl-R8, alebo skupina -CH2-alkinyl-R8;
R2 je skupina -H a každá skupina R3 je nezávisle skupina -H, aminokyselinový postranný reťazec, skupina -R8, skupina alkenyl-R9, alebo skupina alkinyl-R9, alebo každá skupina R3, spolu s atómom, na ktorý je viazaná, tvorí trojčlenný až sedemčlenný cyklický alebo heterocyklický kruhový systém, alebo R2 a jedna skupina R3, spolu s atómami, na ktoré sú viazané, tvoria trojčlenný až sedemčlenný cyklický alebo heterocyklický kruhový systém, kde atóm vodíka viazaný k akémukoľvek atómu uhlíka alkylovej skupiny alebo cykloalkylovej skupiny je prípadne nahradený skupinou -R10, atóm vodíka viazaný k akémukoľvek atómu uhlíka arylovej alebo heteroarylovej skupiny je prípadne nahradený skupinou -R11, atóm vodíka viazaný k akémukoľvek atómu dusíka kruhového systému je prípadne nahradený skupinou -R1;
každá skupina R10 je nezávisle skupina -OH, skupina -SH, skupina
-F, skupina -Cl, skupina -Br, skupina -I, skupina -NO2, -CN, skupina -NH2, skupina -CO2H, skupina -C(0)NH2, skupina
-N(H)C(O)H, skupina -N(H)C(0)NH2, -perfluóralkylová skupina,
-O-alkylová skupina, -O-arylová skupina, -O-alkylarylová skupina, -N(H)alkylová skupina, -N(H)arylová skupina, -N(H)-alkylarylová skupina, skupina -N(alkyi)2, -C(0)N(H)alkylová skupina, skupina -C(0)N(alkyi)2/ -N(H)C(0)alkylová skupina, -N(H)C(0)O-alkylová skupina, -N(H)C(0)O-arylová skupina, -N(H)C(0)O-alkylarylová skupina, -N(H)C(0)O-heteroarylová skupina, -N(H)C(0)O-alkylheteroarylová skupina, -N(H)C(0)O-cykloalkylová skupina, -N(H)C(O)N(H)alkylová skupina, skupina -N (H) C (O) N (alkyi) 2, -N(H)C(0)N(H)arylová skupina, -N(H)C(0)N(H)alkylarylová skupina, -N(H)C(0)N(H)heteroarylová skupina, -N(H)C(0)N(H)alkylheteroarylová skupina, -N(H)C(0)N(H)cykloalkylová skupina, -S-alkylová skupina, -S-arylová skupina, -S-alkylarylová skupina, -S(O)2alkylová skupina, -S(0)alkylová skupina, -C(0)alkylová skupina, skupina -CH2NH2, -CH2N(H)alkylová skupina, alebo skupina -CH2N-(alkyi)2, -alkylová skupina, -cykloalkylová skupina, -arylová skupina, -heteroarylová skupina, -heterocyklylová skupina, -alkylcykloalkylová skupina, -alkylarylová skupina, -alkylheteroarylová skupina, alebo -alkylheterocyklylová skupina, kde atóm vodíka viazaný k akémukoľvek atómu uhlíka arylovej alebo heteroarylovej skupiny je prípadne nahradený skupinou -R11- a atóm vodíka viazaný k akémukoľvek atómu dusíka je prípadne nahradený skupinou -R1; a ďalšie substituenty sú definované skôr.
Výhodne v skôr uvedených uskutočneniach:
m je 0;
R2 je -H; jedna skupina R3 je -H druhá skupina R3 je skupina -R8, skupina -alkenyl-R9, alebo skupina -alkinyl-R9; alebo
R4 a jedna skupina R5 spolu s atómami, na ktoré sú viazané, tvoria trojčlenný až sedemčlenný cyklický alebo heterocyklický kruhový systém, kde atóm vodíka viazaný k akémukoľvek atómu uhlíka alkylovej alebo cykloalkylovej skupiny je prípadne nahradený skupinou -R10, atóm vodíka viazaný k akémukoľvek atómu uhlíka arylovej alebo heteroarylovej skupiny je nahradený skupinou
R11 a atóm vodíka viazaný k akémukoľvek atómu dusíka kruhového systému je prípadne nahradený skupinou R1, kde kruhovým systémom je:
V alternatívne výhodnom uskutočnení X je skupina C(R3) 2 alebo R3 je aminokyselinový postranný reťazec, skupina -R8, skupina alkenyl-R9, alebo skupina alkinyl-R9.
Výhodnejšie jedna skupina R3 je -H a druhá skupina R3 je aikylová skupina; alebo
R4 jedna skupina R5 spolu s atómami, na ktoré sú viazané, tvoria trojčlenný až sedemčlenný cyklický heterocyklický kruhový systém, kde akýkoľvek atóm vodíka viazaný na atóm uhlíka kruhového systému je prípadne nahradený skupinou R10 a akýkoľvek atóm vodíka viazaný na atóm dusíka kruhového systému je prípadne nahradený skupinou R1, vybranou zo skupiny, ktorú tvorí:
Najvýhodnejšie je jedna skupina R3 atóm vodíka a druhá skupina R3 je skupina -C(H)(CH3)2 alebo -C(CH3)3; a
R4 a jedna skupina R5 spolu s atómami, na ktoré sú viazané, tvoria trojčlenný až sedemčlenný cyklický alebo heterocyklický kruhový systém, kde akýkoľvek atóm vodíka viazaný na atóm uhlíka kruhového systému je prípadne nahradený skupinou R10 a akýkoľvek atóm vodíka viazaný na atóm dusíka kruhového systému je prípadne nahradený skupinou R1 vybranou zo skupiny, ktorú tvorí:
V alternatívnom najvýhodnejšom uskutočnení jedna skupina R3 je atóm vodíka a druhá skupina R3 je metylová skupina, skupina -C(H)(CH3)2 alebo skupina -C(CH3)3 a R4 a R5 sú priamo definované skôr.
Podľa ďalšieho uskutočnenia B zlúčeninu všeobecného vzorca I, kde predložený Y je:
vynález poskytuje
s podmienkou, že ak R6 nie je atóm vodíka, R6 a Y, dusíka, na ktorý sú viazané, tvoria kruh (g) :
spolu s atómom
(s)
R12 je -C(O)alkylová skupina, -C(O)cykloalkylová skupina, -C(0)alkenylová skupina, -C(0)alkylarylová skupina, -C(0)alkylheteroarylová skupina, -C(0)heterocyklylová skupina, alebo -C(O)alkylheterocyklylová skupina;
R13 je -H, -alkylová skupina, -arylová skupina, -alkylarylová skupina alebo -alkylheteroarylová skupina; a ostatné substituenty sú opísané skôr.
Výhodne v (c) , (d) , (e) alebo (f) , R8 je metylová skupina, etylová skupina, n-propylová skupina, izopropylová skupina, cyklopentylová skupina, fenetylová skupina alebo benzylová skupina.
Výhodné definície pre ďalšie jednotlivé zložky uskutočnenia B sú rovnaké, ako je uvedené skôr pre A.
Výhodné uskutočnenie C podlá zlúčeninu všeobecného vzorca I:
predloženého vynálezu poskytuje kde Y je:
alebo
(a) (b) m je 0 alebo 1;
X je skupina -C (R3) 2
R1 je H, skupina -R8, skupina -C(O)R8, skupina -C(O)C(O)R8, skupina -S(O)2R8, skupina -S(O)R8, skupina -C(O)OR8, skupina -C(O)N(H)R8, skupina -S(0)2N(H)-R8, -S (0) N (H)-R8, skupina -C (0) C (0) N (H) R8, skupina -C (0) CH=CHR8, skupina -C(O)CH2OR8, skupina -C (0) CH2N (H) R8, skupina -C(O)N(R8)2, skupina -S (0) 2N (R8) 2, skupina -S(O)N(R8)2, skupina -C (0) C (0) N (R8) 2, skupina -C (0) CH2N (R8) 2, skupina -CH2R8, skupina -CH2-alkenyl-R8, alebo skupina -CH2-alkinyl-R8;
R2 je -H a každá skupina R3 je nezávisle -H, aminokyselinový postranný reťazec, skupina -R8, skupina alkenyl-R9, alebo skupina alkinyl-R9, alebo každá skupina R3 spolu s atómami, na ktoré sú viazané, tvoria trojčlenný až sedemčlenný cyklický alebo heterocyklický kruhový systém, kde atóm vodíka viazaný k akémukoľvek atómu uhlíka alkylovej alebo cykloalkylovej skupiny je prípadne nahradený skupinou -R10, atóm vodíka viazaný k akémukoľvek atómu uhlíka arylovej alebo heteroarylovej skupiny je prípadne nahradený skupinou -R11, atóm vodíka viazaný k akémukoľvek atómu dusíka kruhového systému je prípadne nahradený skupinou -R1;
R4 je -H každá skupina R5 je nezávisle -H, aminokyselinový postranný reťazec, skupina -R8, skupina -alkenyl-R9, alebo skupina -alkinyl-R9, alebo R4 jedna skupina R5 spolu s atómami, na ktoré sú viazané, tvoria trojčlenný až sedemčlenný cyklický alebo heterocyklický kruhový systém, kde atóm vodíka viazaný k akémukoľvek atómu uhlíka alkylovej alebo cykloalkylovej skupiny je prípadne nahradený skupinou -R10, atóm vodíka viazaný k akémukoľvek atómu uhlíka arylovej alebo heteroarylovej skupiny je prípadne nahradený skupinou -R11, atóm vodíka viazaný k akémukoľvek atómu dusíka kruhového systému je prípadne nahradený skupinou -R1;
R6 je -H.
R7 je skupina -OH, skupina -OR8, skupina -N(H)OH, alebo sku-pina -N (H) S (O) 2R8;
každá skupina R8 je nezávisle -alkylová skupina, -cykloalkylová skupina, -arylová skupina, -heteroarylová skupina, -heterocyklylová skupina, -alkylcykloalkylová skupina, -alkylarylová skupina, -alkylheteroarylová skupina alebo -alkylheterocyklylová skupina, kde atóm vodíka viazaný k akémukoľvek atómu uhlíka alkylovej alebo cykloalkylovej skupiny je prípadne nahradený skupinou -R10, atóm vodíka viazaný k akémukoľvek atómu uhlíka arylovej alebo heteroarylovej skupiny je prípadne nahradený skupinou -R11, atóm vodíka viazaný k akémukoľvek atómu dusíka kruhového systému je prípadne nahradený skupinou -R1;
každá skupina R9 je nezávisle -arylová skupina, -heteroarylová skupina, cykloalkylová skupina alebo -heterocyklylová skupina, kde atóm vodíka viazaný k akémukoľvek atómu uhlíka alkylovej alebo cykloalkylovej skupiny je prípadne nahradený skupinou -R10, atóm vodíka viazaný k akémukoľvek atómu uhlíka arylovej alebo heteroarylovej skupiny je prípadne nahradený skupinou -R11, atóm vodíka viazaný k akémukoľvek atómu dusíka kruhového systému je prípadne nahradený skupinou -R1;
každá skupina R10 je nezávisle skupina -OH, skupina -SH, skupina -F, skupina -Cl, skupina -Br, skupina -I, skupina -N02, skupina -CN, skupina -NH2 , skupina -CO2H, skupina -C(O)NH2, skupina -N(H)C(O)H, skupina -N(H)C(0)NH2, -perfluóralkylová skupina, -O-alkylová skupina, -0-arylová skupina, -O-alkylarylová skupina, -N(H)alkylová skupina, -N(H)arylová skupina, -N(H)-alkylarylová skupina, skupina -N(alkyl)2, -C(0)N(H)alkylová skupina, skupina -C(0)N(alkyl)2, -N(H)C(0)alkylová skupina, -N(H)C(0)Oalkylová skupina, -N(H)C(0)Oarylová skupina, -N(H)C(0)Oalkylarylová skupina, -N(H)C(0)Oheteroarylová skupina, -N(H)C(0)Oalkylheteroarylová skupina, -N(H)C(0)Ocykloalkylová skupina, -N(H)C(0)N(H)alkylová skupina, skupina -N(H)C(0)N(alkyl)2, -N(H)C(0)N(H)arylová skupina, -N(H)C(0)N(H)alkylarylová skupina, -N(H)C(0)N(H)heteroarylová skupina, -N(H)C(0)N(H)alkylheteroarylová skupina, -N(H)C(O)N(H)cykloalkylová skupina, -S-alkylová skupina, -S-arylová skupina, -S-alkylarylová skupina, -S (0) 2alkylová skupina, -S (0)alkylová skupina, -C(0)alkylová skupina, skupina -CH2NH2, -CH2N(H)alkylová skupina, alebo skupina -CH2N(alkyl)2, -alkylová skupina, -cykloalkylová skupina, -arylová skupina, -heteroarylová skupina, -heterocyklylová skupina, -alkylcykloalkylová skupina, -alkylarylová skupina, -alkylheteroarylová skupina, alebo -alkylheterocyklylová skupina, kde atóm vodíka viazaný k akémukoľvek atómu uhlíka arylovej alebo heteroarylovej skupiny je prípadne nahradený skupinou R11 a atóm vodíka viazaný k akémukoľvek atómu dusíka je prípadne nahradený skupinou R1; a každá skupina R11 je nezávisle skupina -OH, skupina -SH, skupina -F, skupina -Cl, skupina -Br, skupina -I, skupina -N02, -CN, sku24 pina -NH2 , skupina -CO2H, skupina -C(O)NH2, skupina -N(H)C(O)H, skupina -N(H)C(O)NH2, -aikylová skupina, -cykloalkylová skupina, -perfluóralkylová skupina, -O-alkylová skupina, -O-arylová skupina -O-alkylarylová skupina, -N(H)aikylová skupina, -N(H)arylová skupina, -N(H)-alkylarylová skupina, skupina -N(alkyl)2, -C(0)N(H)aikylová skupina, skupina -C(0)N(alkyl)2, -N(H)C(0)alkylová skupina, -N(H)C(0)N(H)aikylová skupina, skupina -N(H)C(O)N-(alkyl)2, ' -S-alkylová skupina, -S-arylová skupina, -S-alkylarylová skupina, -S (0) 2alkylová skupina, -S(0)aikylová skupina, -C(0)aikylová skupina, skupina -CH2NH2, -CH2N(H)aikylová skupina, alebo skupina -CH2N(alkyl) 2;
s podmienkou, že ak jedna skupina R3 je skupina -H, potom druhá skupina R3 nie je skupina -H.
Ďalšie výhodné uskutočnenie D podľa predloženého vynálezu poskytuje zlúčeninu všeobecného vzorca I, kde Y je:
R12 je -C(0)aikylová skupina, -C(0)cykloalkylová skupina, -C(0)alkyenylová skupina, -C(0)alkylarylová skupina, -C(O)alkylheteroarylová skupina, -C(0)heterocyklylová skupina, alebo -C(0)alkylheterocyklylová skupina; a ostatné substituenty sú opísané skôr okrem toho, že obidve skupiny R3 môžu byť skupina -H.
Vo všetkých uskutočneniach A-D sú výhodné zlúčeniny, kde:
R1 je skupina -C(O)R8 alebo skupina -C(0) (0)R8;
R2 a jedna skupina R3 sú skupina -H a druhá skupina R3 je aminokyselinový postranný reťazec, skupina -R8, skupina alke nyl-R9, alebo skupina alkinyl-R9; alebo
R4 a jedna skupina R5 spolu s atómami, na ktoré sú viazané tvoria kruhový systém vybraný zo skupiny, ktorú tvorí:
R*> A t ry Ί t ry A t
Rio ľ'7 A t ry A t A z
RIO Y -Y R40 p(CH2)n 4 f Q.· A /
0 L- Γ \ RIO W z RIO N^/y ΛΡ r
R5 R® 'rY/S 1 / RIO G° /'y t RIO Y Ύ Z
RIO -9 z R-IO A ! RIO n Yy> t
-γ f T f t
s podmienkou, že všetky kruhové systémy sú prípadne substituované jednou alebo viacerými skupinami R10.
Alternatívne sú výhodnými zlúčeninami uskutočnenia A-D zlúčeniny, kde R3 je atóm vodíka a ďalšia skupina R3 je metylová skupina, izopropylová skupina, terc-butylová skupina, skupina -CH2SR8, skupina -CH2SO2R8, skupina -CH2CH2SR8, skupina -CH2CH2SOR8.
Ďalej sú výhodnými zlúčeninami uskutočnenia A-D zlúčeniny, kde R4 a jedna skupina R5 spolu s atómami, na ktoré sú viazané, tvoria kruhový systém:
a druhá skupina R5 je atóm vodíka; alebo jedna skupina R3 je atóm vodíka a druhá skupina R3 je metylová skupina.
Alternatívne sú výhodnými zlúčeninami uskutočnenia A-D zlúčeniny, kde R4 a jedna skupina R5 spolu s atómami, na ktoré sú viazané, tvoria kruhový systém:
a druhá skupina R5 je atóm vodíka.
V skôr uvedenom alternatívnom uskutočnení je R10 výhodne 4-fluorová skupina alebo 4,4-difluorová skupina.
Najvýhodnejšími zlúčeninami podľa predloženého vynálezu sú zlúčeniny, kde R3 je metylová skupina; a
R4 a jedna skupina R5 spolu s atómami, na ktoré sú viazané, tvoria kruhový systém:
a druhá skupina R5 je atóm vodíka.
Alternatívne sú najvýhodnej sírni zlúčeninami uskutočnenia A-D zlúčeniny, kde R3 je metylová skupina; a R4 a jedna skupina R5 spolu s atómami, na ktoré sú viazané, tvoria kruhový systém:
/ΝΎ
R10 a druhá skupina R5 je atóm vodíka; a
R10 je 4-fluoroskupina alebo 4,4-difluoroskupina.
Výhodnými zlúčeninami uskutočnenia (B) alebo (D) sú zlúčeniny, kde Y je:
kde Z je skupina -OR8 a Z je skupina: CH3O,
Špecifické zlúčeniny podlá predloženého vynálezu zahŕňajú príklady 5a-5bd, 7a-7at, 9a-9g, 15a-15f, 16a-16b, 17a-17e, 18a-18f, 20a-20t, 23a-23i, 24a-24e, 25a-25e, 26a-26h, 27a-27n, 28a-28c, 29a-29s, 32a-32e, 34, Gl, G2, 41, 42, 45, 46, 51, 52, 56, 57, 60, 61, 64, 65, 68, 69, 72, 73, 76-93, 98a-z, aa-az, aba-bb, 101, 102a, 102b, 108a-d, 110, 111, 116a-h, 120a a b, 121, 122 a-v, a 123 a-c, vynález sa však neobmedzuje len na tieto príklady.
Zlúčeniny podľa predloženého vynálezu môžu obsahovať jeden alebo viac asymetrických atómov uhlíka a môžu sa vyskytovať vo forme racemátov alebo racemických zmesí, jednotlivých enantiomérov, diastereomérnych zmesí a jednotlivých diastereomérov. Všetky stereogénne atómy uhlíka môžu mať R alebo S konfiguráciu. Aj keď môžu byť špecifické zlúčeniny a štruktúry uvedené ako príklady podľa predloženého vynálezu znázornené v určitej stereochemickej konfigurácii, vynález zahŕňa tiež zlúčeniny a štruktúry, ktoré majú tiež opačnú stereochémiu na danom chirálnom centre a ďalej tiež ich zmesi.
Všetky tieto izomérne formy týchto zlúčenín sú zámerne súčasťou podľa predloženého vynálezu, rovnako ako ich farmaceutický prijateľné deriváty.
Termín farmaceutický prijateľný derivát znamená farmaceutický prijateľné soli, estery alebo soli týchto esterov zlúčenín podľa predloženého vynálezu alebo akékoľvek iné zlúčeniny, ktoré sú po podávaní pacientovi schopné poskytnúť (priamo alebo nepriamo) zlúčeninu podľa predloženého vynálezu alebo jej aktívny metabolit alebo zvyšok.
Farmaceutický prijateľné soli zlúčenín podľa predloženého vynálezu zahŕňajú napríklad soli odvodené od farmaceutický prijateľných anorganických a organických kyselín a zásad. Príklady vhodných kyselín zahŕňajú kyselinu chlorovodíkovú, kyselinu bromovodíkovú, kyselinu sírovú, kyselinu dusičnú, kyselinu chloristú, kyselinu fumarovú, kyselinu maleínovú, kyselinu fosforečnú, kyselinu glykolovú, kyselinu mliečnu, kyselinu salicylovú, kyselinu jantárovú, kyselinu p-toluénsulfónovú, kyselinu vínnu, kyselinu octovú, kyselinu citrónovú, kyselinu metánsulfónovú, kyselinu mravčiu, kyselinu benzoovú, kyselinu malónovú, kyselinu naftalén-2-sulfónovú a kyselinu benzénsulfónovú. Ďalšie kyseliny, ako je kyselina šťaveľová, aj keď nie sú samotné farmaceutický prijateľné, môžu sa použiť pri príprave solí vhodných ako medziprodukty pri príprave zlúčenín podľa vynálezu a ich farmaceutický prijateľných kyslých adičných solí. Soli odvodené od príslušných zásad zahŕňajú soli alkalických kovov (napríklad sodíka), soli kovov alkalických zemín (napríklad horčíka), amóniové soli a soli N-(alkyl)4 + obsahujúce v každej alkylovej časti 1 až 4 atómy uhlíka.
Predložený vynález tiež predpokladá kvarternizáciu skupín obsahujúcich zásadité atómy dusíka zlúčenín podľa vynálezu. Zásadité atómy dusíka sa môžu kvarternizovať akýmkoľvek činidlom známym odborníkov pracujúcim v tejto oblasti, pričom medzi tieto činidlá patria napríklad nižšie alkylhalogenidy, ako sú metyl, etyl, propyl a butylchloridy, bromidy a jodidy; dialkylsulfáty, vrátane dimetyl, dietyl, dibutyl a diamylsulfátov; halogenidy s dlhým reťazcom, ako sú decyl, lauryl, myristyl a stearylchloridy, bromidy a jodidy a arylalkylhalogenidy vrátane benzyl a fenetylbromidov. Pomocou takejto kvarternizácie sa môžu získať produkty rozpustné alebo dispergovateľné v oleji alebo vo vode.
Ak sú zlúčeniny viackrát substituované, každý substituent môže byť vybraný nezávisle na ostatných substituentoch, ak taká kombinácia poskytne stabilnú zlúčeninu.
Kombináciami substituentov a premenných podľa predloženého vynálezu sú len tie, ktoré vedú k vzniku stabilných zlúčenín. Termín stabilný znamená zlúčeniny, ktoré majú dostatočnú stabilitu, aby umožňovala výrobu a podávanie cicavcom pomocou spôsobov známych v tejto oblasti. Typicky sú tieto zlúčeniny stabilné pri teplote 40°C alebo nižšej, v neprítomnosti vlhkosti alebo iných chemicky reaktívnych podmienok, aspoň jeden týždeň.
Výhodné zlúčeniny podľa predloženého vynálezu sa môžu po orálnom podaní lahko absorbovať do krvného riečiska pacienta. Táto orálna využitelnosť umožňuje použitie týchto zlúčenín ako vynikajúcich činidiel na liečenie a prevenciu ochorení sprostredkovaných IL-1-, apoptózou, IGIF alebo IFN-γ orálnym podávaním.
Je treba poznamenať, že zlúčeniny podľa predloženého vynálezu môžu existovať v rôznych rovnovážnych formách, v závislosti od podmienok, medzi ktoré patrí výber rozpúšťadla, pH, a ďalšie podmienky, ktoré sú odborníkom pracujúcim v tejto oblasti známe. Predložený vynález výslovne zahŕňa všetky také formy. Najmä sa môže vela zlúčenín podľa predloženého vynálezu (zvlášť zlúčeniny obsahujúce aldehydovú alebo ketónovú skupinu a karboxylovú kyselinovú skupinu v Y) vyskytovať vo forme poloacetálu alebo hydrátu. Napríklad zlúčeniny podľa uskutočnenia A sú vo forme poloacetálu, keď Y je:
V závislosti od výberu rozpúšťadla a ďalších podmienok, ktoré sú odborníkom v tejto oblasti známe, môžu byť zlúčeniny tiež vo forme hydrátov, acyloxyacetálov, acetálov alebo enolov. Zlúčeniny podľa predloženého vynálezu sú v hydrátovanej forme, keď Y je:
a R8 je atóm vodíka;
vo forme acyloxyacetálu, keď Y je:
a R8 je iné, ako atóm vodíka; a vo forme enolov, keď Y je:
Ďalej je potrebné poznamenať, že rovnovážne formy zlúčenín podlá predloženého vynálezu môžu zahŕňať tautomérne formy. Všetky také formy sú výslovne súčasťou podlá predloženého vynálezu.
Zlúčeniny všeobecného vzorca I sa môžu syntetizovať s použitím bežných spôsobov. Výhodne sa tieto zlúčeniny bežne syntetizujú z lahko dostupných východiskových látok.
Zlúčeniny podľa predloženého vynálezu sa môžu pripraviť s použitím spôsobov opísaných podľa predloženého vynálezu. Ako je odborníkom pracujúcim v tejto oblasti zrejmé, tieto spôsoby samotné neznamenajú, že je zlúčeniny opísané a nárokované podľa predloženého vynálezu možné syntetizovať len týmto spôsobom. Ďalšie spôsoby sú odborníkom pracujúcim v tejto oblasti zrejmé. Ďalej sa môžu rôzne syntetické kroky vedúce k požadovaným zlúčeninám opísané podľa vynálezu, uskutočňovať v zamenenom poradí.
Je treba poznamenať, že zlúčeniny podľa predloženého vynálezu sa môžu modifikovať príslušnými funkčnými skupinami s cieľom zlepšiť ich určité biologické vlastnosti. Tieto modifikácie sú odborníkom pracujúcim v tejto oblasti známe a patria medzi ne úpravy zvyšujúce biologickú penetráciu do daného biologického systému (napríklad krvného, lymfatického systému, centrálneho nervového systému), zvyšujúce orálnu biologickú využiteľnosť, zvyšujúce rozpustnosť, aby bolo možné injekčné podávanie, zmenia metabolizmus alebo zmenia rýchlosť vylučovania. Ďalej sa môžu zlúčeniny zmeniť do foriem preliečiva tak, že požadovaná zlúčenina vznikne v tele pacienta ako dôsledok pôsobenia metabolických alebo biochemických procesov na preliečivo. Také formy preliečiv typicky vykazujú malú alebo žiadnu aktivitu pri in vitro testoch. Medzi niektoré príklady preliečiv patria ketálové, acetálové, oxímové, imínové a hydrazónové formy zlúčenín, ktoré obsahujú ketónové alebo aldehydové skupiny, najmä ak sa vyskytujú v skupine Y zlúčenín podľa predloženého vynálezu. Medzi ďalšie príklady preliečiv patria poloketálové, poloacetálové, acyloxyketálové, acyloxyacetálové, ketálové, acetálové a enolové formy, ktoré sú opísané podľa predloženého vynálezu. Kompozície a spôsoby
Zlúčeniny podľa predloženého vynálezu sú inhibítormi kaspázy a najmä inhibítormi ICE. Zlúčeniny podľa predloženého vynálezu sú teda schopné zasiahnuť a inhibovať ochorenie sprostredkované IL-1, apoptózou, IGIF a IFN-γ, a teda obmedzovať aktivitu tohto proteínu pri zápalových ochoreniach, autoimúnnych ochoreniach, deštruktívnych kostných ochoreniach, proliferatívnych ochoreniach, infekčných ochoreniach a degeneratívnych ochoreniach. Zlúčeniny podľa predloženého vynálezu napríklad inhibujú konverziu prekurzora IL-Ιβ na maturovaný IL-Ιβ pomocou inhibície ICE. Pretože je ICE esenciálne na vznik maturovaného IL-1, inhibícia tohto enzýmu účinne blokuje iniciáciu fyziologických účinkov a symptómov sprostredkovaných IL-1, ako sú zápaly, pomocou inhibície vzniku maturovaného IL-1. Pomocou inhibície aktivity prekurzora IL-Ιβ zlúčeniny podľa predloženého vynálezu účinne fungujú ako inhibítory IL-1.
Zlúčeniny podía predloženého vynálezu tiež inhibujú konverziu pro-IGIF na aktívny, maturovaný IGIF pomocou inhibície ICE. Pretože je ICE esenciálna na vznik maturovaného IGIF, inhibícia ICE účinne blokuje vznik fyziologických účinkov a symptómov sprostredkovaných IGIF, pomocou inhibície vzniku maturovaného IGIF. IGIF je teda esenciálny na vznik IFN-γ. ICE účinne blokuje vznik fyziologických účinkov a symptómov sprostredkovaných IFN-γ pomocou inhibície vzniku maturovaného IGIF a teda produkcie IFN-γ.
Zlúčeniny podľa predloženého vynálezu sú prekvapujúco biologicky využiteľné v porovnaní s peptidylovými inhibítormi, ktoré sú opísané napríklad v EP 618 223, EP 623 592, WO 93/09135, WO 93/16710, US patente číslo 5 434 248, WO 95/35308 alebo WO 96/33209.
Farmaceutické kompozície a spôsoby podľa predloženého vynálezu budú teda vhodné na kontrolu aktivity kaspázy in vivo. Kompozície a spôsoby podía predloženého vynálezu budú teda vhodné na kontrolu hladiny IL-1, IGIF alebo IFN-γ in vivo na liečenie alebo spomalenie postupu, závažnosti alebo účinku ochorení sprostredkovaných IL-1, apoptózou, IGIF alebo IFN-γ, vrátane ochorení, porúch alebo účinkov.
Farmaceutické kompozície podľa predloženého vynálezu obsahujú zlúčeninu všeobecného vzorca I alebo jej farmaceutický prijateľnú sol a farmaceutický prijateľný nosič. Tieto kompozície môžu prípadne obsahovať ďalšie terapeutické činidlo. Tieto činidlá zahŕňajú protizápalové činidlá, inhibítor matricovej metaloproteázy, inhibítor lipoxygenázy, antagonistu cytokínu, imunosupresívum, protirakovinové činidlo, antivírusové činidlo, cytokín, rastový faktor, imunomodulátor, prostaglandín alebo zlúčeninu proti hyperproliferácii ciev, vynález sa však neobmedzuje len na tieto príklady.
Termín farmaceutický prijateľný nosič zahŕňa netoxický nosič, ktorý sa môže podávať pacientovi spolu so zlúčeninou podlá predloženého vynálezu a ktorý neruší jej farmakologickú aktivitu .
Farmaceutický prijateľné nosiče, ktoré sa môžu použiť vo farmaceutických kompozíciách podlá predloženého vynálezu, zahŕňajú iónomeniče, alumínu, stearát hlinitý, lecitín, sérové proteíny, ako je ľudský sérový albumín, pufrovacie látky, ako sú fosfáty, glycín, kyselinu sorbovú, sorban draselný, čiastočné zmesi glyceridu nasýtených rastlinných mastných kyselín, vodu, soli alebo elektrolyty, ako je protamínsulfát, hydrogénfosforečnan sodný, hydrogénfosforečnan draselný, chlorid sodný, soli zinku, koloidný oxid kremičitý, trikremičitan horečnatý, polyvinylpyrolidón, látky založené na celulóze, polyetylénglykol, sodnú sol karboxymetylcelulózy, polyakryláty, vosky, blokové polyméry polyetylénpolyoxypropylén, lanolín a samoemulgačné systémy na dodávanie lieku (SEEDS), ako sú α-tokoferol, polyetylénglykol 1000 sukcinát, alebo ďalšie podobné polymérne doručovacie matrice.
Vo farmaceutických kompozíciách obsahujúcich len zlúčeninu z uskutočnenia A-D ako aktívnu zložku, môžu spôsoby podávania týchto kompozícií ďalej zahŕňať krok podávania ďalšieho činidla tomuto pacientovi. Tieto činidlá zahŕňajú protizápalové činidlá, inhibítor matricovej metaloproteázy, inhibítor lipoxygenázy, antagonistu cytokínu, imunosupresívum, protirakovinové činidlo, antivírusové činidlo , cytokín, rastový faktor, imunomodulátor, prostaglandín alebo zlúčeninu proti cievnej hyperproliferácii, vynález sa však neobmedzuje len na tieto príklady.
Termín farmaceutický prijateľné množstvo znamená množstvo účinné pri liečení alebo zlepšení ochorení sprostredkovaných IL-1, apoptózou, IGIF alebo IFN-γ u pacienta. Termín profylaktický účinné množstvo znamená množstvo účinné pri prevencii alebo zmiernení ochorení sprostredkovaných IL-1, apoptózou, IGIF alebo IFN-γ u pacienta.
Zlúčeniny podľa predloženého vynálezu sa môžu použiť bežným spôsobom pri kontrole hladiny IGIF a IFN-γ in vivo a na liečenie ochorení alebo zníženie postupu alebo závažnosti účinkov, ktoré sú sprostredkované IL-1, apoptózou, IGIF alebo IFN-γ. Tieto spôsoby liečenia, ich dávkovacie hladiny a režimy môžu byť vybrané odborníkom pracujúcim v tejto oblasti z dostupných spôsobov a techník.
Napríklad sa môže zlúčenina podlá predloženého vynálezu kombinovať s farmaceutický prijateľnými prísadami na podávanie pacientovi trpiacemu ochorením sprostredkovaným IL-1, apoptózou, IGIF alebo IFN-γ farmaceutický prijateľným spôsobom a v množstve účinnom na zníženie závažnosti tohto ochorenia.
Alternatívne sa môžu zlúčeniny podlá predloženého vynálezu použiť v kompozíciách a spôsoboch na liečenie a ochranu pacientov proti ochoreniam sprostredkovaným IL-1, apoptózou, IGIF alebo IFN-γ dlhší čas. Zlúčeniny sa môžu v týchto prostriedkoch použiť buď samotné alebo spolu s inými zlúčeninami podía predlo37 ženého vynálezu spôsobom, ktorý zodpovedá bežnému použitiu inhibítorov enzýmov vo farmaceutických kompozíciách. Napríklad sa môže zlúčenina podlá predloženého vynálezu kombinovať s farmaceutický prijateľnými prísadami, ktoré sú bežné na použitie vo vakcínach a môžu sa podávať v profylaktický účinných množstvách na ochranu pacientov po dlhší časový úsek proti ochoreniam sprostredkovaným IL-1, apoptózou, IGIF alebo IFN-γ.
Zlúčeniny všeobecného vzorca I sa môžu tiež podávať spolu s inými inhibítormi kaspázy alebo ICE, čím sa zvýši účinok liečenia alebo profylaxie proti rôznym ochoreniam sprostredkovaným IL-1, apoptózou, IGIF alebo IFN-γ.
Zlúčeniny podlá predloženého vynálezu sa môžu ďalej použiť v kombinácii buď s bežnými protizápalovými činidlami alebo s inhibítormi matricovej metaloproteázy, inhibítormi lipogenázy a antagonistami cytokínov inými ako IL-Ιβ.
Zlúčeniny podlá predloženého vynálezu sa môžu tiež podávať v kombinácii s imunomodulátormi (napríklad ako je bropirimín, antihumánna protilátka interferónu a, IL-2, GM-CSF, metioninenkefalín, interferón a, dietylditiokarbamát, nádorový nekrózny faktor, naltrexon a EPO), s prostaglandínmi alebo protivírusovými činidlami (napríklad ako je 3TC, polysulfátované polysacharidy, ganiclovir, ribavirin, acyclovir, interferón a, trimetotrexate a fancyclovir) alebo preliečivá týchto alebo podobných zlúčenín na prevenciu alebo liečbu symptómov ochorení sprostredkovaných IL-1, ako sú zápaly.
Ak sa zlúčeniny podľa predloženého vynálezu podávajú pri kombinovanej terapii s inými činidlami, môžu sa pacientovi podávať postupne alebo súčasne. Alternatívne môžu farmaceutické alebo profylaktické kompozície podlá predloženého vynálezu obsahovať kombináciu zlúčeniny všeobecného vzorca I a ďalšieho terapeutického alebo profylaktického činidla.
Farmaceutické kompozície podľa predloženého vynálezu sa môžu podávať perorálne, parenterálne, pomocou inhalačného spreja, miestne, rektálne, nazálne, bukálne, vaginálne alebo pomocou implantovaného zásobníka. Výhodné je perorálne podávanie. Farmaceutické kompozície podľa vynálezu môžu obsahovať akékoľvek bežné netoxické farmaceutický prijateľné nosiče, prísady alebo vehikulá. V niektorých prípadoch sa môže pH kompozície upraviť pomocou farmaceutický prijateľných kyselín, zásad alebo pufrov, čím sa zvýši stabilita formulovanej zlúčeniny alebo jej dodávacej formy. Termín parenterálny zahŕňa podľa predloženého vynálezu subkutánne, intrakutánne, vnútrožilové, intramuskulárne, intraartikulárne, intrasynoviálne, intrasternálne, intratekálne, intralezionálne a intrakraniálne injekčné alebo infúzne techniky.
Farmaceutické kompozície môžu byť buď vo forme sterilných injikovateľných prípravkov, napríklad sterilných injikovateľných vodných alebo olejových suspenzií. Tieto suspenzie môžu byť formulované pomocou techník, ktoré sú odborníkom pracujúcim v tejto oblasti známe, s použitím vhodných dispergujúcich alebo zvlhčujúcich činidiel (ako je napríklad Tween 80) a suspendujúcich činidiel. Sterilné injikovatelné prípravky môžu byť tiež sterilné injikovatelné roztoky alebo suspenzie v netoxických parenterálne prijateľných riedidlách alebo rozpúšťadlách, ako je napríklad roztok v 1,3-butándiole. Medzi prijateľné vehikulá a rozpúšťadlá, ktoré sa môžu použiť, patrí manitol, voda, Ringerov roztok a izotonický roztok chloridu sodného. Ďalej sa ako rozpúšťadlo alebo suspendujúce médium používajú sterilné, fixované oleje. Na tento účel sa môžu použiť akékoľvek zmesi fixovaných olejov, vrátane syntetických mono- alebo diglyceridov. Pri príprave injekčných prostriedkov sú vhodné mastné kyseliny, ako je kyselina olejová a jej glyceridové deriváty, ako sú prírodné, farmaceutický prijateľné oleje, ako je olivový olej alebo ricínový olej, najmä ich polyetoxylované formy. Tieto olejové roztoky alebo suspenzie môžu tiež obsahovať riedidlá alebo dispergač39 né činidlá na báze alkoholov s dlhým reťazcom, ktoré sú opísané napríklad v Pharmacopoeia Helvetica, alebo podobné alkoholy.
Farmaceutické kompozície podľa predloženého vynálezu sa môžu podávať perorálne v akejkoľvek perorálne prijateľnej dávkovacej forme vrátane toboliek, tabliet a vodných suspenzií a roztokov, vynález sa však neobmedzuje len na tieto príklady. V prípade tabliet na perorálne použitie sa obvykle používajú laktóza a kukuričný škrob. Typicky sa tiež pridávajú lubrikačné činidlá, ako je stearát horečnatý. Na perorálne podávanie vo forme toboliek sú vhodnými riedidlami laktóza a sušený kukuričný škrob. Ak sa perorálne podávajú vodné suspenzie a roztoky a propylénglykol, aktívne činidlo sa zmieša s emulgačným alebo suspendujúcim činidlom. Ak je to potrebné, môžu sa pridať určité sladidlá a/alebo príchute a/alebo farbivá.
Farmaceutické kompozície podľa predloženého vynálezu sa môžu tiež podávať vo forme čapíkov na rektálne podávanie. Tieto kompozície sa môžu pripraviť zmiešaním zlúčeniny podľa predloženého vynálezu s vhodnou nedráždivou prísadou, ktorá je pevná pri teplote miestnosti, ale kvapalná pri rektálnej teplote, a preto sa topí v rekte za uvoľnenia aktívnych zložiek. Medzi také látky patrí kakaové maslo, včelí vosk a polyetylénglykoly.
Miestne podávanie farmaceutických kompozícií podlá predloženého vynálezu je zvlášť vhodné, ak sa liečia miesta alebo orgány, ktoré sú ľahko dostupné na miestnu aplikáciu. Na miestnu aplikáciu na pokožku sa môžu farmaceutické kompozície formulovať do formy vhodných mastí obsahujúcich aktívne zlúčeniny suspendované alebo rozpustené v nosiči. Nosiče na miestne podávanie zlúčenín podľa predloženého vynálezu zahŕňajú minerálne oleje, kvapalná vazelína, biela vazelína, propylénglykol, zlúčenina polyoxyetylén polyoxypropylén, emulgačný vosk a voda, vynález sa však neobmedzuje len na tieto príklady. Alternatívne môže byť farmaceutická kompozícia formulovaná do formy mlieka alebo krému obsahujúceho aktívnu zlúčeninu suspendovanú alebo rozpustenú v nosiči. Medzi vhodné nosiče patria minerálne oleje, sorbitanmonostearát, polysorbát 60, cetylestery voskov, cetearylalkohol, 2-oktyldodekanol, benzylalkohol a voda, vynález sa však neobmedzuje len na tieto príklady. Farmaceutické kompozície podía predloženého vynálezu sa môžu tiež miestne aplikovať do dolnej časti intestinálneho traktu pomocou rektálnych čapíkových prostriedkov alebo vhodného klystýrového prostriedku. Predmetom podľa predloženého vynálezu sú tiež miestne aplikované transdermálne náplaste.
Farmaceutické kompozície podľa predloženého vynálezu sa môžu podávať tiež pomocou nosného aerosólu alebo inhalačné. Tieto kompozície sa pripravia podľa postupov, ktoré sú odborníkom v oblasti farmaceutických prostriedkov známe a môžu sa pripraviť ako roztoky vo fyziologickom roztoku, s použitím benzylalkoholu alebo inej vhodnej konzervačnej látky, látky podporujúcej absorpciu na zvýšenie biologickej využiteľnosti, fluorovaných uhľovodíkov a/alebo iných solubilizačných alebo dispergačných činidiel, ktoré sú odborníkom pracujúcim v tejto oblasti známe.
Pri monoterapii na prevenciu a liečenie ochorení sprostredkovaných IL-1, apoptózou, IGIF a IFN-γ, medzi ktoré patria zápalové ochorenia, autoimúnne ochorenia, deštrukčné ochorenia kostí, proliferatívne ochorenia, infekčné ochorenia, degeneratívne ochorenia, nekrotické ochorenia, zápalová peritonitída, osteoartritída, akútna pankreatitída, chronická pankreatitída, astma, syndróm dýchacieho stresu dospelých, glomerulcnefritída, reumatoidná artritída, systémový lupus erythematosus, skleroderma, chronická tyroiditída, Gravesova choroba, autoimúnna gastritída, diabetes melitus závislý na inzulíne (typ 1), autoimúnna hemolytická anémia, autoimúnna neutropénia, trombocytopénia, chronická aktívna hepatitída, myasténia gravis, zápalové črevné ochorenie, Crohnova choroba, psoriáza, atopická dermatitída, ochorenie štep versus hostiteľ, osteoporóza, ochorenie kostí spojené s mnohopočetným myelómom, leukémia a s ňou spojené ochorenia, myelodysplastický syndróm, akútna myelogénna leukémia, chronická myelogénna leukémia, metastatický melanóm, Kaposiho sarkóm, mnohopočetný myelóm, sepsa, septický šok, Shigelosa, Alzheimerova choroba, Parkinsonova choroba, mozgová ischémia, ischémia myokardu, spinálna muskulárna atrofia, mnohopočetná skleróza, encefalitída súvisiaca s AIDS, starnutie, vypadávanie vlasov, neurologické poškodenie spôsobené mŕtvicou, ulceratívna kolitída, infekčná hepatitída, mladícky diabetes, lišaj, akútna dermatomyositída, ekzém, primárna cirhóza, uveitída, Behcetova choroba, atopické kožné ochorenie, čistá aplázia červených krviniek, aplastická anémia, amyotrofná laterálna skleróza, nefrotický syndróm a systémové ochorenie alebo ochorenie s účinkom lokalizovaným na pečeni alebo iných orgánoch, ktoré majú zápalovú alebo apoptickú zložku spôsobenú prebytkom konzumovaného alkoholu v potravinách alebo vírusom, ako je HBV, HCV, HGV, vírus žltej horúčky, vírus dengue a vírus japonskej encefalitídy, sú vhodné dávkovacie hladiny v rozsahu 0,01 až 100 mg/kg telesnej hmotnosti za deň, výhodne 0,5 až 75 mg/kg telesnej hmotnosti za deň a najvýhodnejšie 1 až 50 mg/kg telesnej hmotnosti za deň, aktívnej zložky zlúčeniny podía vynálezu.
Typicky sa farmaceutické kompozície podía predloženého vynálezu podávajú 1 až 5 krát denne alebo alternatívne ako kontinuálne infúzie. Toto podávanie sa môže použiť pri chronickej aj akútnej terapii. Množstvo aktívnej zložky, ktoré sa môže kombinovať s nosičom, pričom vzniká jednotlivá dávkovacia forma, sa bude meniť podía liečeného pacienta a konkrétneho spôsobu podávania. Typický prípravok bude obsahovať 5 až 95% hmotnostných aktívnej zložky. Výhodne taký prostriedok obsahuje 20 až 80% aktívnej zložky.
Ak kompozícia podlá predloženého vynálezu obsahuje kombináciu zlúčeniny všeobecného vzorca I a jednej alebo viacerých ďalších terapeutických alebo profylaktických látok, budú ako zlúčenina, tak ďalšie činidlo prítomné v dávkovej hladine 10 až
80% dávky normálne používanej pri monoterapii.
Po zlepšení stavu pacienta sa môže, ak je to potrebné, podávať pacientovi udržiavacia dávka zlúčeniny, kompozície alebo kombinácie podlá predloženého vynálezu. Potom sa môže dávka alebo frekvencia podávania alebo oboje znížiť, ako funkcia symptómov, na hladinu, pri ktorej sa udržiava zlepšený stav a ak sa symptómy zmiernia na požadovanú hladinu, liečenie sa môže skončiť. Môže byť však potrebné pacientov občas liečiť dlhší čas pri akomkoľvek opakovaní ochorenia alebo symptómov.
Ako bude odborníkom v tejto oblasti zrejmé, je možné použiť nižšie alebo vyššie dávky, ako sa uviedlo skôr. Špecifické dávkovanie a režimy liečby pre každého konkrétneho pacienta budú závisieť na rôznych faktoroch, vrátane aktivity špecifickej použitej zlúčeniny, veku, telesnej hmotnosti, celkového zdravotného stavu, čase podávania, rýchlosti vylučovania, kombinácie liekov, závažnosti a priebehu ochorenia a dispozície pacienta k ochoreniu a úsudku ošetrujúceho lekára.
Ochorenia sprostredkované IL-1 alebo apoptózou, ktoré je možné liečiť alebo im predchádzať zlúčeninami podľa predloženého vynálezu, zahŕňajú zápalové ochorenia, autoimúnne ochorenia, poruchy proliferácie, infekčné ochorenia a degeneratívne ochorenia. Ochorenia sprostredkované apoptózou, ktoré je možné liečiť alebo im predchádzať zlúčeninami podľa predloženého vynálezu, zahŕňajú degeneratívne ochorenia, vynález sa však neobmedzuje len na tieto príklady.
Zápalové ochorenia sprostredkované IL-1 alebo apoptózou, ktoré je možné liečiť alebo im predchádzať, zahŕňajú osteoartritídu, akútnu pankreatitídu, chronickú pankreatitídu, astmu, a syndróm dýchacieho stresu dospelých, vynález sa však neobmedzuje len na tieto príklady. Zápalové ochorenia výhodne zahŕňajú osteoartritídu alebo akútnu pankreatitídu.
Autoimúnne ochorenia sprostredkované IL-1 alebo apoptózou, ktoré je možné liečiť alebo im predchádzať, zahŕňajú glomerulonefritídu, reumatoidnú artritídu, systémový lupus erythema43 tosus, sklerodermu, chronickú tyroitídu, Gravesovu chorobu, autoimúnnu gastritídu, diabetes melitus závislý na inzulíne (typu I), autoimúnnu hemolytickú anémiu, autoimúnnu neutropéniu, trombocytopéniu, chronickú aktívnu hepatitídu, myasténiu gravis, mnohopočetnú sklerózu, zápalové črevné ochorenie, Crohnovu chorobu, psoriázu, atopickú dermatitídu, a ochorenie štep versus hostiteľ, vynález sa však neobmedzuje len na tieto príklady. Výhodne autoimúnne ochorenia zahŕňajú reumatoidnú artritídu, zápalové črevné ochorenia, Crohnovu chorobu, psoriázu alebo atopickú dermatitídu.
Deštruktívne ochorenia kostí sprostredkované IL-1 alebo apoptózou, ktoré je možné liečiť alebo im predchádzať, zahŕňajú osteoporózu a kostné ochorenie spojené s mnohopočetným myelómom, vynález sa však neobmedzuje len na tieto príklady.
Proliferatívne ochorenia sprostredkované IL-1 alebo apoptózou, ktoré je možné liečiť alebo im predchádzať, zahŕňajú leukémiu a podobné ochorenia, ako je myelodysplastický syndróm, akútna myelogénna leukémia, chronická myelogénna leukémia, metastatický melanóm, Kaposiho sarkóm a mnohopočetný myelóm, vynález sa však neobmedzuje len na tieto príklady.
Infekčné ochorenia sprostredkované IL-1 alebo apoptózou, ktoré je možné liečiť alebo im predchádzať, zahŕňajú sepsu, septický šok a Shigelózu, vynález sa však neobmedzuje len na tieto príklady.
Degeneratívne alebo nekrotické ochorenia sprostredkované IL-1 alebo apoptózou, ktoré je možné liečiť alebo im predchádzať zlúčeninami podía predloženého vynálezu, zahŕňajú Alzheimerovu chorobu, Parkinsonovu chorobu, mozgovú ischémiu a ischémiu myokardu, vynález sa však neobmedzuje len na tieto príklady. Degeneratívnym ochorením je výhodne Alzheimerova choroba.
Degeneratívne ochorenia sprostredkované IL-1 alebo apoptózou, ktoré je možné liečiť alebo im predchádzať zlúčeninami pod44 la predloženého vynálezu, zahŕňajú Alzheimerovu chorobu, Parkinsonovu chorobu, mozgovú ischémiu, ischémiu myokardu, spinálnu svalovú atrofiu, mnohopočetnú sklerózu, encefalitídu súvisiacu s AIDS, encefalitídu súvisiacu s HIV, starnutie, vypadávanie vlasov, a neurologické poškodenie spôsobené mŕtvicou, vynález sa však neobmedzuje len na tieto príklady.
Pomocou zlúčenín podía predloženého vynálezu sa môžu liečiť ďalšie ochorenia, ktoré majú zápalovú alebo apoptotickú zložku. Týmito ochoreniami môžu byť systémové ochorenia alebo ochorenia s účinkom lokalizovaným v pečeni alebo iných orgánoch a môžu byť spôsobené napríklad nadmernou konzumáciou alkoholu v potravinách alebo vírusmi, ako sú HBV, HCV, HGV, vírus žltej horúčky, vírus dengue a vírus Japonskej encefalitídy.
Ochorenia sprostredkované IGIF alebo IFN-γ, ktoré sa môžu liečiť alebo im predchádzať pomocou zlúčenín podlá predloženého vynálezu, zahŕňajú zápalové ochorenia, infekčné, autoimúnne, proliferatívne, neurodegeneratívne a nekrotické stavy, vynález sa však neobmedzuje len na tieto príklady.
Zápalové ochorenia sprostredkované IGIF alebo IFN-γ, ktoré sa môžu liečiť alebo im predchádzať pomocou zlúčenín podía predloženého vynálezu, zahŕňajú osteoartritídu, akútnu pankreatitídu, chronickú pankreatitídu, astmu, reumatoidnú artritídu, zápalové črevné ochorenie, Crohnovu chorobu, ulceratívnu kolitídu, mozgovú ischémiu, ischémiu myokardu a syndróm dýchacieho stresu dospelých, vynález sa však neobmedzuje len na tieto príklady. Zápalové ochorenia výhodne zahŕňajú reumatoidnú artritídu, ulceratívnu kolitídu, Crohnovu chorobu, hepatitídu alebo syndróm dýchacieho stresu dospelých.
Infekčné ochorenia sprostredkované IGIF alebo IFN-γ, ktoré sa môžu liečiť alebo im predchádzať pomocou zlúčenín podľa predloženého vynálezu, zahŕňajú hepatitídu, sepsu, septický šok a Shigelosu, vynález sa však neobmedzuje len na tieto príklady.
Autoimúnne ochorenia sprostredkované IGIF alebo IFN-γ, ktoré sa môžu liečiť alebo im predchádzať pomocou zlúčenín podlá predloženého vynálezu, zahŕňajú glomerulonefritídu, systémový lupus erythematosus, skleroderma, chronickú tyroitídu, Gravesovu chorobu, autoimúnnu gastritídu, diabetes melitus závislý na inzulíne (typu I), mladícky diabetes, autoimúnnu hemolytickú anémiu, autoimúnnu neutropéniu, trombocytopéniu, myasténiu gravis, mnohopočetnú sklerózu, psoriázu, lichenplanus, ochorenie štep versus hostiteľ, akútnu dermatomyositídu, ekzém, primárnu cirhózu, hepatitídu, uveitídu, Behcetovu chorobu, atopické kožné ochorenie, čistú apláziu červených krviniek, aplastickú anémiu, amyotrofnú laterálnu sklerózu, a nefrotický syndróm, vynález sa však neobmedzuje len na tieto príklady. Výhodne autoimúnne ochorenia zahŕňajú glomerulonefritídu, diabetes melitus závislý na inzulíne (typu I), mladícky diabetes, psoriázu, ochorenie štep versus hostitel alebo hepatitídu.
Výhodnejšie ochorenia, ktoré je možné liečiť alebo im predchádzať, zahŕňajú reumatoidnú artritídu, zápalové črevné ochorenie, vrátane Crohnovej choroby a ulceratívnej kolitídy, zápalovú peritonitídu, septický šok, pankreatitídu, traumatickú mozgovú príhodu, odmietnutie transplantovaného orgánu, osteoartritídu, astmu, psoriázu, Alzheimerovu chorobu, atopickú dermatitídu alebo leukémiu a podobné ochorenia, ako je myelodysplastický syndróm alebo mnohopočetný myelóm.
Podlá jedného uskutočnenia predložený vynález poskytuje spôsob liečenia alebo prevenciu ochorenia sprostredkovaného IL-1 alebo apoptózou u pacienta, pričom spôsob zahŕňa krok podávania akejkoľvek zlúčeniny, farmaceutickej kompozície alebo požadovanej kombinácie opísanej podľa vynálezu a farmaceutický prijateľného nosiča pacientovi.
Ďalšie uskutočnenie podľa predloženého vynálezu poskytuje spôsob potlačenia produkcie IGIF u pacienta, keď spôsob zahŕňa krok podávania akejkoľvek zlúčeniny, farmaceutickej kompozície alebo požadovanej kombinácie opísanej podľa vynálezu a farmaceutický prijateľného nosiča pacientovi.
Ešte ďalšie uskutočnenie podľa predloženého vynálezu poskytuje spôsob zníženia produkcie IFN-γ u pacienta, keď spôsob zahŕňa krok podávania akejkoľvek zlúčeniny, farmaceutickej kompozície alebo požadovanej kombinácie opísanej podía vynálezu a farmaceutický prijateľného nosiča pacientovi.
Aj keď je predložený vynález zameraný na použitie zlúčenín podľa predloženého vynálezu na prevenciu a liečenie ochorení sprostredkovaných IL-1, apoptózou, IGIF a IFN-γ, zlúčeniny podía predloženého vynálezu sa môžu tiež použiť ako inhibičné činidlá pre ďalšie cysteínové proteázy.
Zlúčeniny podľa predloženého vynálezu sú tiež vhodné ako komerčné reagencie, ktoré sa účinne viažu na kaspázu alebo iné cysteínové proteázy, medzi ktoré patrí ICE, vynález sa však neobmedzuje len na tento príklad. Ako komerčné reagenty sa môžu zlúčeniny podľa predloženého vynálezu a ich deriváty použiť na blokovanie proteolýzy výsledného peptidu pri biochemických alebo bunkových testoch na ICE a homológa ICE alebo sa môžu derivatizovať tak, že sa viažu k stabilnej živici ako väzbovému substrátu na použitie pri afinitnej chromatografii. Tieto a ďalšie použitia, ktoré charakterizujú komerčné inhibítory cysteínových proteáz, budú odborníkom pracujúcim v tejto oblasti zrejmé.
Aby sa vynález lepšie pochopil, sú pripojené nasledujúce príklady. Tieto príklady slúžia len na ilustráciu a rozhodne ich nie je možné považovať za obmedzenie rozsahu predloženého vynálezu .
Príklady uskutočnenia vynálezu
Podmienky analytickej vysokotlakovej chromatografie (HPLC):
Kolóna: C-18, veľkosť častíc: 5 μ, veľkosť pórov: 100 A,
Veľkosť kolóny: 4,6 x 150 mm,
Rozpúšťadlo A: 0,1% TFA/1% MeCN/98,9% voda,
Rozpúšťadlo B: 0,1% TFA/99,9% MeCN,
Gradient: A k B v priebehu 20 minút pri prietoku 1 ml/min.,
Kolóna: Kyano, veľkosť častíc: 5 μ, veľkosť pórov: 100 A,
Velkosť kolóny: 4,6 x 150 mm,
Rozpúšťadlo A: 0,1% TFA/1% MeCN/98,9% voda,
Rozpúšťadlo B: 0,1% TFA/99,9% MeCN,
Gradient: A/B = 99%/l% k 50% v priebehu 20 minút pri prietoku 1 ml/min..
HPLC hmotnostná spektrálna analýza:
Hmotnostná spektrálna analýza: Všetky hmotnostné spektrálne dáta sa merajú s použitím hmotnostného spektrometra Micromass Quattro II triple quadrupole (Beverly, MA) vybaveného kvapalinokružným elektrónsprejovým ionizačným zdrojom. Hmotnostný spektrometer je spojený s HPLC systémom vyrobeným spoločnosťou Hewlett-Packard (HP1100). Automatickým samplérom systému je kvapalinový manipulátor Gilson 215 (Middleton, WI). Celé zariadenie sa kontroluje pomocou Software MassLynx od spoločnosti Micromass .
Hmotnostná spektrálna analýza sa uskutočňuje pomocou kvapalinovej chromatografie-MS na určenie čistoty za súčasného potvrdenia molekulovej hmotnosti. V prípadoch, keď sa čistota vzorky určí inými spôsobmi, sa namiesto úplnej chromatografickej analýzy použije prietoková nástreková analýza (FIA). Zhromaždia sa všetky prípady ako pozitívnych, tak aj negatívnych iónových spektier.
Podmienky získania hmotnostného spektra: Pri všetkých experimentoch sa hmotnostný spektrometer konfiguroval v elektrónsprejovom móde s kvapalinokružnou odpočítacou elektródou. Na zníženie prietoku z HPLC na 40% pôvodného prietoku sa použil separátor toku. Teplota pri vstupe sa nastavila na 140°C a prietok sučiaceho plynu sa nastavil na maximálny signál. Rozlíšenie hmotnostného spektrometra sa nastavilo na 0,65 amu FWHM a dáta sa odpočítali centroidným spôsobom. Pri pozitívnom iónovom móde sa kuželové napatie nastavilo na 25 V, kapilárne napätie na 3,8 kV. Pri negatívnom iónovom móde sa kuželové napätie nastavilo na 25 V, kapilárne napätie na 3,5 kV. Ako pri pozitívnom, tak aj pri negatívnom iónovom móde je čas získania úplného spektra 1 s pri spínacom čase 0,25 sekundy medzi skenami. Rozsah hmoty skenovaný pri očakávanej molekulovej hmotnosti nižší ako 350 amu je 70 až 500 m/z, zatiaľ čo pri molekulách s očakávanou hmotnosťou vyššou ako 350 amu je skenovaný pomer hmoty k náboju 200-1000 m/z.
Podmienky chromatografie: Kvapalinová chromatografia sa uskutočňuje s použitím YMC AQ C18 kolóny (150 mm x 3 mm pri 5 pm časticiach a veľkosti pórov 120 A). Pri analýze sa MeCN s 0,2% kyseliny mravčej zmieša s vodou, pričom vzniká elučný gradient. Profil gradientu sa skladá z východiskových 15% MeCN:voda a množstvo MeCN sa zvyšuje lineárne v priebehu 10 minút na 90%. Táto koncentrácia sa udržiava konštantná 2 minúty a potom sa nastavia východiskové podmienky. V priebehu celej analýzy je prietok 0,9 ml/min..
Podmienky prietokovej nástrekovej analýzy: Pri získavaní FIA údajov sa použije zmes 1:1 vody a acetonitrilu (pričom obidve kvapaliny obsahujú 0,2% kyseliny mravčej). Prietok sa nastaví na 0,3 ml/min..
XH-NMR
Všetky ^-NMR spektrá sa získajú s použitím NMR spektrometra Bruker Instruments AMX-500 v danom rozpúšťadle.
Spôsoby syntézy
Všeobecný postup na prípravu zlúčeniny všeobecného vzorca I, uskutočnenie C (Schémy I až VI)
Postup pri príprave analógov 5a-5bd
Schéma I
Krok 1
V schémach definovaná tak,
I-VIII znamená premenná LR pripojenie ako je opísané v schéme I skôr.
živice a je
Krok 1: 6,7 g (0,8 mmol/g vsádzky, 5,36 mmol) živice obsahujúcej hydrochlorid 4-metylbenzhydrylamínu (schéma I) sa premyje 3x50 ml dimetylformamidu, 3,50 ml 10% DIEA/DMF a 3x50 ml N-metylpyrolidinónu. K suspenzii premytej živice v 25 ml NMP sa postupne pridá 3,5 g (1,1 ekvivalentu, 5,90 mmol) zlúčeniny všeobecného vzorca I, 3,1 ml (3,33 ekvivalentu, 17,70 mmol) DIEA,
797 mg (1,1 ekvivalentu, 5,90 mmol) hydrátu 1-hydroxybenzotriazolu a 2,24 g (1,1 ekvivalentu, 5,90 mmol) O-benzotriazol-N, N, N, N'-tetrametyluróniumhexafluorofosfátu (HBTU). Zlúčenina všeobecného vzorca I sa pripraví podlá postupu opísaného v literatúre A.M. Murphy a kol., J. Am. Chem. Soc., 114, strany 3156— 3157 (1992) . Zmes sa mieša pri teplote miestnosti cez noc s použitím ramenového miešadla.
Získaná zmes sa filtruje a živica sa premyje dimetylformamidom, potom reaguje s 12 ml 20% roztoku anhydridu kyseliny octovej v dimetylformamide 30 minút pri teplote miestnosti. Zmes sa filtruje a živica sa postupne premyje 2x50 ml dimetylformamidu, 50 ml metanolu, 2x50 ml zmesi dimetylformamidu a dichlórmetánu 1:1, 50 ml metanolu a 3x50 ml dichlórmetánu. Po sušení vo vákuu sa získa 9,0 g živice 2 (0,48 mmol/g navážky).
Krok 2: K 4,5 g živice 2 (0,48 mmol/g, 2,16 mmol) sa pridá 25 ml 20% roztoku piperidínu v dimetylformamide. Suspenzia sa mieša 5 minút pri teplote miestnosti a potom sa odstráni rozpúšťadlo. Postup sa opakuje po 20 minútach. Živica sa potom postupne premyje 2x40 ml dimetylformamidu, 40 ml metanolu, 2x40 ml dichlórmetánu, 40 ml metanolu a 40 ml NMP. K suspenzii živice v 40 ml NMP sa postupne pridá 2,92 g N-Fmoc-prolínu (4 ekvivalenty, 8,64 mmol), 3,0 ml DIEA (8 ekvivalentov, 17,28 mmol), 1,17 HOBt (4 ekvivalenty, 8,64 mmol) a 3,27 g HBTU (4 ekvivalenty, 8,64 mmol). Zmes sa mieša pri teplote miestnosti cez noc a rozpúšťadlo sa odstráni. Tento kondenzačný postup sa zopakuje po 3 hodinách. Živica sa potom postupne premyje 2x40 ml dimetylformamidu, 40 ml metanolu, 2x40 ml zmesi dimetylformamidu a dichlórmetánu 1:1, 40 ml metanolu a 3x40 ml dichlórmetánu a krátko sa suší vo vákuu, pričom sa získa živica 3.
Krok 3: Suspenzia živice 3 v 25 ml 20% roztoku piperidínu v dimetylformamide sa mieša 5 minút pri teplote miestnosti. Zo suspenzie sa odstráni rozpúšťadlo. Postup sa zopakuje po 20 minútach. Živica sa postupne premyje 2x40 ml dimetylformamidu, 40 ml metanolu, 2x40 ml dichlórmetánu, 40 ml metanolu a 2x40 ml NMP.
K suspenzii živice v 40 ml NMP sa postupne pridá 2,93 g N-Fmoc— valínu (4 ekvivalenty, 8,64 mmol), 3,0 ml DIEA (8 ekvivalentov, 17,28 mmol), 1,17 g HOBt (4 ekvivalenty, 8,64 mmol), a 3,2 g HBTU (4 ekvivalenty, 8,64 mmol). Zmes sa mieša cez noc pri teplote miestnosti a rozpúšťadlo sa odstráni. Tento kondenzačný postup sa zopakuje po 3 hodinách. Živica sa potom premyje 2x40 ml dimetylformamidu, 40 ml metanolu, 2x40 ml zmesi dimetylformamidu a dichlórmetánu 1:1, 40 ml metanolu a 3x40 ml dichlórmetánu a suší sa vo vákuu, pričom sa získa živica 4 (0,45 mmol/g).
Krok 4: K 0,05 mmol podielu živice 4 sa pridajú 2 ml 20% roztoku piperidínu v dimetylformamide. Suspenzia sa mieša 5 minút pri teplote miestnosti a rozpúšťadlo sa odstráni. Postup sa zopakuje po 20 minútach. Získaná živica sa potom postupne premyje 3x5 ml dimetylformamidu, 5 ml metanolu a 3x5 ml NMP. Potom sa pridá požadovaná karboxylová kyselina (4 ekvivalenty, 0,2 mmol), potom 0,8 ml 0,25 M roztoku HOBt v NMP, 0,14 ml DIEA (8 ekvivalentov, 0,4 mmol) a 0,8 ml 0,25 M roztoku HBTU v NMP. Zmes sa mieša pri teplote miestnosti cez noc a rozpúšťadlo sa odstráni. Živica sa premyje postupne 2x5 ml dimetylformamidu, 5 ml metanolu, 2x5 ml zmesi dimetylformamidu a dichlórmetánu 1:1, 5 ml metanolu a 3x5 ml dichlórmetánu a suší sa vo vákuu. K živici sa potom pridá 2 ml časť 95% roztoku kyseliny trifluóroctovej vo vode. Zmes sa mieša 1 hodinu pri teplote miestnosti a filtruje sa. Filtrát sa odparí a zvyšok sa prevedie do zmesi acetonitrilu a vody a čistí sa pomocou preparatívnej vysokotlakovej kvapalinovej chromatografie, pričom sa získajú zlúčeniny 5a-5bd.
Ak nie je uvedené inak, získané produkty, podmienky analytickej HPLC, HPLC retenčné časy, čistota produktu a hmotnostné spektrálne dáta získané v príkladoch 5a-5bd, 7a-7at, 9a-9g, 15a-15f, 16a-16b, 17a-17e, 18a-18f, 20a-20t, 23a-23i, 24a-24e, 25a-25e, 26a-26h, 27a-27n, 28a-28c, 29a-29s, 32a-32e sú uvedené v tabuľke 1.
Tabuľka 1: Fyzikálne údaje pre vybrané príklady
Pr. Výťažok (mg) HPLC gradient/ čas (min) Retenčný čas (min) Čistota (%) Hmôt. sp. (M+H alebo M+Na)
5a 1,0 5-45%/10' 4,66 92 475,2
5b 1,0 5-45%/10' 6,86 85 457,2
5c 4,0 5-45%/10' 5, 98 85 469,2
5d 1,5 5-45%/10' 6,82 95 467,5
5e 1,0 5-45%/10' 5,52 95 418,2
5f 0, 6 5-45%/10' 4,28 93 434,2
5g 6,4 10-60%/10' 8,57 97 504,7(+Na)
5h 15,6 10-60%/10' 4,51 99 459,2
5i 6,6 5%-90%/10' 9,34 90 506,1
5j 5,1 5%-90%/10' 10,04 95 506,1
5k 10,7 5%-90%/10’ 8,64 85 520,1
51 6, 6 5%-90%/10' 8,72 85 540,1
5m 6,8 5%-90%/10' 7,89 85 502,0
5n 1,9 5%-0%/10' 6,46 85 494,1
50 3,8 5%-90%/10' 7,04 85 506,1
5p CTi 00 5%-90%/10' 11, 62 95 576, 0
5q 2,2 5%-90%/10' 9,72 90 508,1
5r 3,8 5%-90%/10' 7,27 85 462,1
5s 4,3 5%-90%/10* 6,46 90 470,1
5t 5,9 5%-60%/9’ 60%-90 %/2' 10,27 90 486,2
5u 3,1 5%-60%/9' 60%-90 %/2' 9,09 80 522,1
5v 1,0 5%-60%/9' 60%-90%/2' 11, 63 85 502,2
5w 10,3 5%-60%/9' 60%-90%/2' 8,75 95 470,2
5x OO 00 5%-60%/9' 60%-90%/2' 8,88 95 565,1
5y 6, 6 5%-60%/9' 60%-90%/2' 12,32 95 518,2
5z 10,2 5%-60%/9' 60%-90%/2' 12,63 95 502,2
5aa 2,5 5%-60%/91 60%-90%/2' 9,57 95 554,1
5ab 7,8 5%-60%/9' 60%-90%/2' 10,54 85 538,2
5ac 1,4 5%-60%/9' 60%-90%/2' 9,28 95 476,2
5ad 5,3 5%-60%/9’ 60%-90%/2' 6,51 85 469,2
5ae 4,3 5%-60%/9' 60%-90%/2' 9,81 95 551,1
5af 0,9 5%-60%/9' 60%-90%/2' 9,98 90 547,4
Pr. Výťažok (mg) HPLC gradient/ čas (min) Retenčný čas (min) Čistota (%) Hmôt. sp. (M+H alebo M+Na)
5ag 5,7 5%-60%/9' 60%-90%/2' 10,31 90 526,2
5ah 1,4 5%-60%/9' 60%-90%/2' 8,13 85 542,1
5ai 10, 9 10%-90%/10' 5,88 85 584,2
5a j 4,2 10%-90%/10' 5,89 90 556,2
5ak 7,8 10%-90%/10' 5,54 85 568,3
5al 8,4 10%-90%/10' 6,25 95 516,2
5 am 7,6 10%-90%/10' 6, 49 95 474,3
5an 6,2 10%-90%/10' 6,00 95 500,2
5ao 9,4 10%-90%/10' 6, 68 95 581,3
5ap 6,4 10%-90%/10' 4,30 90 500,3
5aq 5,2 10%-90%/10' 6,45 95 559,2
5ar 1,4 10%-90%/10' 5,38 90 561,3
5as 16,2 10%-90%/10' 4,25 95 475,2
5at 15,4 10%-90%/10' 6, 68 95 560,3
5au 5,9 10%-90%/10' 6,70 90 498,3
5av 4,1 10%-90%/10' 5,13 85 531,2
5aw 5, 5 10%-90%/10' 6,53 85 570, 3
5ax 14,0 10%-90%/10' 6,26 90 557,3
5ay 10, 4 10%-90%/10' 6,52 90 510,3
5az 9,2 10%-90%/10' 5, 96 95 522,3
5ba 8,5 10%-90%/10' 6, 69 95 562,3
5bb 4,6 10%-90%/10' 6,00 85 520,2
5bc CO 00 10%-90%/10' 4,96 90 546,2
5bd 8,2 10%-90%/10' 8,01 95 536,3
7a 2,1 5-45%/10' 5,28 86 440,2
7b 1,7 5-45%/10' 4,12 94 390,2
7c 0,5 5-45%/10' 4,04 94 434,2
7d 1,1 5-45%/10' 4,29 95 441,2
7e 1,1 5-45%/10' 3,28 98 447,2
7f 1,0 5-45%/10’ 3, 96 97 420,2
7g 11, 0 10%-90%/10' 4,00 95 483,4
7h 6, 0 10%-90%/10' 4,90 95 439,3
7i 12,0 10%-90%/10' 6, 40 95 474,3
7j 6, 6 10%-90%/10' 4,50 95 461,4
7k 4,0 10%-90%/10' 5,40 95 480,4
71 8,6 10%-90%/10' 2,61 95 435,3
7m 6, 0 10%-90%/10’ 4,29 95 438,4
7n 15,4 10%-90%/10' 2,00 85 433,4
70 8,4 10%-90%/10' 4,01 90 470,0
7p 3,0 10%-90%/10' 4,61 95 434,4
7q 5,7 10%-90%/10' 3,89 95 434,3
7r 8,8 10%-90%/10' 2,94 95 425,3
7s 10,5 10%-90%/10' 3,89 90 433,4
Pr. Výťažok (mg) HPLC gradient/ čas (min) Retenčný čas (min) Čistota (%) Hmôt. sp. (M+H alebo M+Na)
7t 6,9 10%-90%/10' 2,45 85 419,3
7u 11, 6 10%-90%/10' 1,98 85 433,3
7v 4,6 10%-90%/10' 4,60 95 489, 4
7w 13,8 10%-90%/10' 4,20 95 453,3
7x 6, 0 10%-90%/10' 3, 90 95 483,2
7y 12,0 10%-90%/10' 5,40 95 489,2
7 z 10,0 10%-90%/10' 5,40 95 517,2
7aa 11,0 10%-90%/10’ 5,30 95 453,8
7ab 10,0 10%-90%/10' 5, 60 95 595,1
7ac 3,9 10-60%/10' 4,59 88 469,2
7ad 13,0 5-45%/10' 4,48 88 415,2
7ae 4,9 5-45%/10' 4,37 88 · 426,2
7af 20, 6 5-45%/10,0' 4,68 86 405,3
7ag 14,9 5-45%/10' 4,78 82 406,3
7ah 9,5 5-45%/10' 7,40 91 447,3 (+Na)
7ai 10,8 5—45%/10' 9,21 95 480,8(+Na)
7aj 8,3 5-45%/10' 9,14 92 481,1 (+Na)
7ak 13,6 5-45%/10' 8,05 96 464,8(+Na)
7al 8,1 5-45%/10' 7,04 91 448,8 (+Na)
7 am 7,8 5-45%/10' 8,54 90 480,4 (+Na)
7an 4,3 5-45%/10' 7,48 88 460,9(+Na)
7ao 13,5 5-45V10' 7,45 92 460,7(+Na)
7ap 2,5 5-45%/10' 6, 52 93 440,3(+Na)
7aq 1,4 5-451/10' 3,30 84 405,2
7ar 15,10 5-45%/10’ 3,79 97 413,30
7as 15,70 5-45%/10’ 5,50 88 441,30
7at 22,20 5-45%/10' 4,49 94 415,30
9a 0,5 10-60%/10' 7,08 98 527,4(+Na)
9b 1,2 10-60%/10' 8,31 93 570, 5 (+Na)
9c 2,5 10-60%/10' 8,46 97 569,6
9d 1,2 10-60%/10' 7,22 85 562,1
9e 0,4 10-60%/10' 7,86 95 543,2 (+Na)
9f 4,3 10-60%/10' 8,11 96 542,5
9g 2,1 10-60%/10' 7,18 93 526,3
15a 1,0 10%-60%/10’ 5,76 95 477,6
15b 3,9 10%-60%/10' 6, 32 91 483,8
15c 2,9 10%-90%/10' 3,30 85 463,3
15d 1,3 10%-90%/10' 4,26 95 531
15e 1,0 10%-90%/lQ' 3,10 85 482,3
15f 1,2 10%-90%/10' 3, 60 95 484,6
16a 2,5 10%-90%/10' 2,80 95 456, 3
16b 6,0 10%-90%/10' 1, 90 95 454,2
17a 1,0 10%-90%/10' 3,30 85 496,8
17b 1,1 10%-90%/10’ 3, 62 85 498,3
17c 2,3 10%-90%/10' 5,80 95 573,2
Pr. Výťažok (mg) HPLC gradient/ čas (min) Retenčný čas (min) Čistota (%) Hmôt. sp. (M+H alebo M+Na)
17d 1,6 10%-90%/10' 1,60 95 525,1
17e 1,5 10%-90%/10' 2,62 95 526,3
18a 1,0 10%-90%/10' 3,90 95 528,3
18b 1,2 10%-90%/10' 5,27 95 562,3
18c 2,2 10%-90%/10' 4,09 95 499,2
18d 1,5 10%-90%/10' 3,78 95 498,3
18e 1,2 10%-90%/10' 4,78 95 541,3
18f 7,1 10%-90%/10' 3,84 98 526,1
20a 2,0 5-45%/10* 6, 95 91 483,2
20b 1,3 5-45%/10' 7,58 99 482,2
20c 2,5 10%-90%/10' 5,89 85 483,3
20d 4,3 10%-90%/10' 4,09 90 1 471,3
20e 3,6 10%-90%/10' 4,65 95 455, 3
20f 12,2 10%-90%/10' 3,25 95 518,3
20g 12,1 10%-90%/10' 5,01 90 487,2
20h 3,3 10%-90%/10' 4,30 90 533,2
20i 5, 0 10%-90%/10' 4,16 90 485,2
20j 1,3 10%-90%/10' 3,45 85 531,2
20k 9,7 10%-90%/10* 5,41 90 516,2
201 3,8 10%-90%/10' 3,73 85 504,2
20m 6, 6 10%-90%/10' 4,52 90 488,2
20n 1,8 10%-90%/10' 2,85 90 551,2
200 7,0 10%-90%/10' 4,70 95 520,2
20p 1,2 10%-90%/10' 4,00 95 566,2
20q 2,3 10%-90%/10' 4,93 95 481,3
20r 3, 6 10%-90%/10' 4,45 95 519, 3
20s 3,0 10%-90%/10' 4,18 95 552,2
20t 6,0 10%-90%/10' 3,80 90 517,4
23a 21,0 10-60%/10' 8, 11 99 495,4
23b 25,0 10-60%/10’ 8,94 99 539, 8 (+Na)
23c 26,0 10-60%/10' 8,55 99 539,9(+Na)
23d 12, 6 10%-90%/10' 3, 90 85 453,3
23e 8,3 10%-90%/10' 5,16 85 501,3
23f 12,5 10%-90%/10' 3,41 80 425, 3
23g 1,5 10%-90%/10* 3,34 85 452,3
23h 8,4 10%-90%/10' 3,84 90 451,3
23i 9,0 10%-90%/10' 3,78 85 469,4
24a 1,1 10-60%/12' 8,76 90 480,5
24b 3,1 10-60%/10' 5,14 90 375, 4
24c 7,2 10-60%/10' 10, 33 96 531, 0
24d 3,4 10-60%/10' 6,51 95 426, 5(+Na)
24e 6,9 10-60%/10' 7,22 99 455, 5
25a 1,9 5-45%/10' 5,38 85 455,2
25b 1,5 5-45%/10' 6, 90 97 483,2
25c 1,0 5-45%/10' 8,09 94 497,2
Pr. Výťažok (mg) HPLC gradient/ čas (min) Retenčný čas (min) Čistota (%) Hmôt. sp. (M+H alebo M+Na)
25d 12,8 5-45%/10' 5,75 88% 453,3
25e 9,5 5-45%/10' 7,76 90% 495,2
26a 10,2 5-45%/10' 7,36 95 455,1(+Na)
26b 1,1 5-45%/10' 7,38 89 476,3
26c 13,8 5-45%/lQ' 8,13 98 483,2
26d 2,3 5-45%/10' 10,35 99 503,0
26e 12,8 5-45%/10' 11,11 99 523,2
26f 13,2 10-60%/10' 12,11 99 545,0
26g 0,7 10-60%/10' 10,89 87 523,2
26h 4,4 10-60%/10' 11, 62 99 545, 8
27a 5,0 10%-90%/10' 4,42 95 475, 3
27b 16, 4 10-60%/10' 5,20 92 505,1
27c 2,7 5-45%/10' 7,50 82 476, 6(+Na)
27d 1,6 5-45%/12' 8,70 90 503,2
27e 4,4 5-45%/12' 7,80 82 489,2
27f 1,2 5-45%/12’ 6,95 85 476,3
27g 2,5 5-45%/12' 6, 67 82 510,1
27h 1,1 5—45%/12' 8,49 95 524,1
27i 0,9 5-45%/12' 7,34 90 484,3
27 j 4,3 5-45%/12' 5,77 82 470,3
27k 1,3 5-45%/12' 5,33 95 551,1
271 16, 6 5-45%/10' 5, 90 91 477,2
27m 7,0 5-45%/10' 7,70 93 494,2
27n 15,1 5-45%/10' 3,99 86 466,2
28a 1,2 5-45%/10' 5, 91 86 487,1
28b 0,5 5-45%/10' 6,86 98 486,1
28c 1,5 5-45%/10’ 7,47 93 515,1
29a 4,5 5-45%/12’ 8,21 98 392
29b 28,0 5-451/12' 11,80 96 443,3
29c 1,7 5-45%/10' 3,73 97 415,2
29d 1,7 5-45%/10' 4,62 89 414,2
29e 0,6 5-45%/10’ 4,94 85 436,2
29f 1,1 5-45%/10' 6,23 97 442,2
29g 1,7 5-45%/10' 6, 39 90 457,2
29h 0,7 5-45%/10' 3, 56 92 408,2
29i 0,7 5-45%/10' 6, 50 96 431,2
29j 0,4 5-45%/10’ 7,24 89 445,2
29k 1,6 5-45%/10’ 7,07 90 456,2
291 0,9 5-45%/10' 3, 08 99 408,2
29m 1,5 10-60%/10' 6,68 90 406, 3
29n 6,4 10-60%/10' 4,27 87% 422,3
290 OO 4^ 10-60%/10* 4,42 86% 422,3
29p 13,2 10-60%/10' 5, 62 83% 450,3
29q 15,1 5-45%/10' 3,79 97% 413, 3
29r 15,7 5-45%/10' 5,50 88% 441,3
Pr. Výťažok (mg) HPLC gradient/ čas (min) Retenčný čas (min) Čistota (%) Hmôt. sp. (M+H alebo M+Na)
29s 19,9 5-45%/10' 4,30 95% 394,3
32a 7,7 5-60%/20' 14,2 90 469,3
32b 4,0 5-60%/20' 13,4 85 485,1 (+Na)
32c 2,5 5-60%/20‘ 11,1 90 459,3
32d 3,0 5—60%/20' 8,19 95 471,3
32e 4,9 5-60%/20' 14,2 90 486,2
5g
5y
.0
5am
Postup prípravy analógov 7a-7at
Schéma II
Analógy 7a-7at sa pripravia pomocou postupu opísaného skôr v schéme I, len náhradou Fmoc-valínu za Fmoc-alanín v kroku 3 (schéma II).
Krok 3: Suspenzia 3,5 g (1,75 mmol) živice 3 v 20 ml 20% roztoku piperidínu v dimetylformamide sa mieša 5 minút pri teplote miestnosti. Zo suspenzie sa odstráni rozpúšťadlo. Postup sa zopakuje po 20 minútach. Živica sa postupne premyje 2x30 ml dimetylformamidu, 30 ml metanolu, 2x30 ml dichlórmetánu, 30 ml metanolu, a 2x30 ml NMP. K suspenzii živice v 30 ml NMP sa postupne pridá 1,44 g N-Fmoc-alanínu (4 ekvivalenty, 7,0 mmol), 2,4 ml DIEA (8 ekvivalentov, 14,0 mmol), 0,95 g HOBt (4 ekvivalenty, 7,0 mmol) a 2,66 g HBTU (4 ekvivalenty, 7,0 mmol). Zmes sa mieša cez noc pri teplote miestnosti a rozpúšťadlo sa odstráni. Tento kondenzačný postup sa zopakuje po 3 hodinách. Živica sa potom premyje 2x30 ml dimetylformamidu, 30 ml metanolu, 2x30 ml zmesi dimetylformamidu a dichlórmetánu 1:1, 30 ml metanolu a 3x30 ml dichlórmetánu a suší sa vo vákuu, pričom sa získa živica 6 (0,50 mmol/g).
Krok 4: K 0,125 mmol podielu živice 6 sa pridá 5 ml 20% roztoku piperidínu v dimetylformamide. Suspenzia sa mieša 5 minút pri teplote miestnosti a rozpúšťadlo sa odstráni. Postup sa zopakuje po 20 minútach. Získaná živica sa potom postupne premyje 3x5 ml dimetylformamidu, 5 ml metanolu a 3x5 ml NMP. Potom sa pridá požadovaná karboxylová kyselina (4 ekvivalenty, 0,6 mmol), potom 2,0 ml 0,25 M roztoku HOBt v NMP, 0,35 ml DIEA (8 ekvivalentov, 1,0 mmol) a 0,8 ml 0,25 M roztoku HBTU v NMP. Zmes sa mieša pri teplote miestnosti cez noc a rozpúšťadlo sa odstráni. Živica sa premyje postupne 3x5 ml dimetylformamidu, 5 ml metanolu, 2x5 ml zmesi dimetylformamidu a dichlórmetánu 1:1, 5 ml metanolu a 3x5 ml dichlórmetánu a suší sa vo vákuu. K živici sa potom pridá 5 ml časť 95% roztoku kyseliny trifluóroctovej vo vode. Zmes sa mieša 1 hodinu pri teplote miestnosti a filtruje sa. Filtrát sa odparí a zvyšok sa prevedie do zmesi acetonitrilu a vody a čistí sa pomocou preparatívnej vysokotlakovej kvapalinovej chromatografie, pričom sa získajú zlúčeniny 7a-7at.
7g
7n
Postup pri príprave
Schéma III analógov 9a-9g
Fmoc^
.COjBu-t „NHFmoc
Eoc-Νχ^
CO2H
LR
Krok. 2
LR
Krok 1: 10,0 g (0,75 mmol/g navážky, 7,5 mmol) živice AgroPore— -aminometyl (katalógové číslo 800047) sa premyje 3x40 ml dimetylformamidu, 3x40 ml 10% DIEA/DMF, 3x40 ml dimetylformamidu a NMP. K skôr uvedenej živici sa postupne pridá 3,88 g (0,87 ekvivalentu, 6,55 mmol) zlúčeniny 1, 3,13 g (1,14 ekvivalentu, 8,25 mmol) HBTU, 1,26 g (1,14 ekvivalentu, 8,25 mmol) HOBt a 40 ml NMP. Reagenty sa potom zmiešajú prebublávaním dusíka cez dno banky 2 minúty pri teplote miestnosti. Pridá sa 4,35 ml (3,33 ekvivalentu, 25 mmol) N,N-diizopropyletylamínu a získaná suspenzia sa cez noc mieša pri teplote miestnosti, filtruje sa, potom sa postupne premyje 3x40 ml NMP a 3x40 ml dimetylformamidu. Živica potom reaguje s 50 ml 20% roztoku anhydridu kyseliny octovej v dimetylformamide 38 minút pri teplote miestnosti. Zmes sa filtruje a živica sa premyje postupne 3x40 ml NMP, 3x40 ml dichlórmetánu, 3x40 ml zmesi metanolu a dichlórmetánu 1:1 a 3x40 ml metanolu. Po sušení vo vákuu sa získa 13,76 g živice 2 (0,35 mmol/g navážky).
Krok 2: Sedem reakčných nádob (každá) sa naplní 181 g živice 2 (0,48 mmol/g, 0,063 mmol), potom sa premyjú 3x1 ml dichlórmetánu a 3x1 ml NMP. Potom každá nádoba reaguje s 1 ml 25% roztoku piperidínu v dimetylformamide a mieša sa (vír) pri teplote miestnosti 15 minút. Tento postup sa zopakuje trikrát. Každá nádoba sa potom premyje trikrát 1 ml NMP. Obsah nádob potom reaguje s 500 μΐ 0,4 M roztoku (2S, 4R)-Fmoc-4-amino-l-Boc-pyrolidín-2-karboxylovej kyseliny (0,4 M HOBT) v NMP, 500 μΐ 0,4 M roztoku HBTU/NMP a 250 μΐ 1,6 M roztoku DIEA/NMP a mieša sa potom 3 hodiny pri teplote miestnosti. Po miešaní sa z nádob odstráni rozpúšťadlo a postup sa opakuje.
Krok 3: Získaná živica sa premyje 3x1 ml NMP a potom sa spracuje 1 ml 25% roztoku piperidínu v dimetylformamide a mieša sa (vír) 15 minút pri teplote miestnosti. Postup sa zopakuje trikrát. Získaná živica sa premyje 3x1 ml NMP a potom reaguje buď s anhydridom kyseliny octovej alebo s izopropylizokyanátom alebo s metánsulfonylchloridom alebo metylchloroformiátom. Pre acetanhydrid: sa pridá 300 μΐ 1,6 M roztoku DIEA/NMP v 1 ml roztoku 0,5 M acetanhydridu/0,125 M DIEA/0,015 M HOBt v NMP. Pre izopropylizokyanát: sa pridá 300 μΐ 1,6 M roztoku DIEA/NMP a 1 ml roztoku 1 M izopropylizokyanátu v NMP. Pre metánsulfonylchlorid: sa pridá 600 μΐ roztoku 1 M pyridínu v dichlórmetáne a 600 μΐ roztoku 1 M metánsulfonylchloridu v dichlórmetáne. Pre metylchloroformiát: sa pridá 500 μΐ 1,6 M roztoku DIEA/NMP a 1 ml roztoku 0,7 M metylchloroformiátu v dichlórmetáne. Získané súspenzie sa miešajú 6 hodín pri teplote miestnosti, rozpúšťadlo sa odstráni a kondenzačný postup sa zopakuje.
Krok 4: Získaná živica sa premyje 3x1 ml NMP, potom reaguje so zmesou kyseliny trifluóroctovej a dichlórmetánu 1:1 30 minút pri teplote miestnosti. Získaná živica sa premyje 3x1 ml dichlórmetánu a 3x1 ml NMP. Živica potom reaguje s 500 μΐ roztoku 0,4 M Fmoc-valínkarboxylovej kyseliny/0,4 M HOBt/NMP, 500 μΐ roztoku 0,4 M HBTU/NMP a 250 μΐ roztoku 1,6 M DIEA/NMP a mieša sa 3 hodiny pri teplote miestnosti. Po miešaní sa z nádob odstráni rozpúšťadlo a kondenzačný postup sa zopakuje.
Krok 5: Získaná živica sa premyje 3x1 ml NMP, potom reaguje s 1 ml 25% roztoku piperidínu v dimetylformamide a mieša sa (vír) 15 minút pri teplote miestnosti. Postup sa zopakuje trikrát. Získaná živica sa premyje 3x1 ml NMP, potom buď 500 μΐ roztoku 0,4 M 1-izochinolínkarboxylovej kyseliny/0,4 M HOBt/NMP alebo 500 μΐ roztoku 0,4 M p-anízovej kyseliny/0,4 M HOBt/NMP. Získaná zmes reaguje s 500 μΐ roztoku 0,4 M HBTU/NMP a 250 μΐ roztoku 1,6 M DIEA/NMP, potom sa mieša 3 hodiny pri teplote miestnosti, rozpúšťadlo sa odstráni a postup sa zopakuje. Získaná živica reaguje s 1,5 ml 95% roztoku kyseliny trifluóroctovej vo vode a mieša sa pri teplote miestnosti jednu hodinu a filtruje sa. Filtrát sa odparí a zvyšok sa prevedie do zmesi 2:1:2 dimetylformamidu/acetonitrilu/vody a čistí sa pomocou preparatívnej vysokotlakovej chromatografie, pričom sa získajú zlúčeniny 9a-9g.
9d
Postup pri príprave analógov 15-18:
Schéma IV:
Krok 5
Príprava analógov 15 a 16 (schéma IV):
Syntéza 4-terc-butylesteru 1-(9H-fluoren-9-ylmetyl)esteru 2-(S)— -piperazín-1,2,4-trikarboxylovej kyseliny
K roztoku 3 g (15 mmol) 2-(S)-piperazínkarboxylovej kyseliny (Lonza) v 30 ml zmesi vody a dioxánu 1:1 sa pridá roztok 3,3 g (15 mmol, v 5 ml dioxánu) (Boc)20 v dioxáne, pričom sa pH udržia72 va pomocou IN roztoku hydroxidu sodného na hodnote 11. pH sa udržiava 3 hodiny pri teplote miestnosti. pH roztoku sa potom pomocou IN kyseliny chlorovodíkovej upraví na 9,5, ochladí sa na 0°C a reaguje s 3,87 g (15 mmol) Fmoc-Cl. pH sa udržiava 1 hodinu na hodnote 9,5 a zmes sa mieša cez noc pri teplote miestnosti. Získaná suspenzia sa filtruje a filtrát sa spracuje IN roztokom hydrogénsíranu draselného na pH 2 a extrahuje sa 2x75 ml etylacetátu. Organická vrstva sa premyje solankou a suší sa síranom horečnatým, filtruje sa a odparí, pričom sa získa bezfarebný olej. Olej sa rozpustí v etylacetáte a pridá sa k hexánu, pričom sa získa 3,5 g (výťažok 51%) bielej pevnej látky (po izolácii). XH NMR spektrum (500 MHz, perdeuterodimetylsulfoxid) δ 1,55 (s, 9H), 2,80-3,5 (m, 3H) , 3,8-4,9 (m, 5H) , 5,7 (šs, 1H) , 7,3 (m, 2H) , 7,3-7,9 ppm (m, 8H) , kvapalinová chromatografia/hmotnostné spektrum (ES) m/e 451,3 (M-H).
Krok 1: K 5 g živice 2 (0,375 mmol/g, 1,82 mmol) sa pridá 25 ml 20% roztoku piperidínu v dimetylformamide. Suspenzia sa mieša 5 minút pri teplote miestnosti a rozpúšťadlo sa odstráni. Po 20 minútach sa postup opakuje. Živica sa potom postupne premyje 2x50 ml dimetylformamidu, 50 ml metanolu, 2x50 ml dichlórmetánu, 50 ml metanolu a 50 ml NMP. K suspenzii živice v 25 ml NMP sa postupne pridá 3,5 g (4 ekvivalenty, 7,48 mmol) N-Fmoc-Boc-piperazínkarboxylovej kyseliny, 1,0 ml (8 ekvivalentov, 14,96 mmol) DIEA, 1,01 g (4 ekvivalenty, 7,48 mmol) HOBt a 2,83 g (4 ekvivalenty, 7,48 mmol) HBTU. Zmes sa mieša cez noc pri teplote miestnosti a rozpúšťadlo sa odstráni. Kondenzačný postup sa zopakuje po 3 hodinách. Živica sa potom postupne premyje 2x50 ml dimetylformamidu, 50 ml metanolu, 2x50 ml zmesi dimetylformamidu a dichlórmetánu, 1x50 ml metanolu a 3x50 ml dichlórmetánu a krátko sa suší vo vákuu, pričom sa získa živica 10.
Krok 2: k 5 g (0,335 mmol/g navážky, 1,675 mmol) živice 10 sa pridá 25 ml 20% roztoku piperidínu v dimetylformamide. Suspenzia sa mieša 5 minút pri teplote miestnosti a rozpúšťadlo sa odstráni. Postup sa zopakuje po 20 minútach. Živica sa potom postupne premyje 2x50 ml dimetylformamidu, 50 ml metanolu, 2x50 ml dichlórmetánu, 50 ml metanolu a 2x50 ml NMP. K suspenzii živice s 25 ml NMP sa postupne pridá 2,08 g N-Fmoc-valínu alebo N-Fmoc—alanínu (4 ekvivalenty, 6,7 mmol), 1,17 ml (4 ekvivalenty, 6,7 mmol) DIEA, 0,905 g (4 ekvivalenty, 6,7 mmol) HOBt a 1,38 g (4 ekvivalenty, 3,66 mmol) HBTU. Zmes sa mieša cez noc pri teplote miestnosti a rozpúšťadlo sa odstráni. Tento kondenzačný postup sa zopakuje po 3 hodinách. Živica sa potom postupne premyje 2x50 ml dimetylformamidu, 50 ml metanolu, 2x50 ml zmesi dimetylformamidu a dichlórmetánu 1:1, 50 ml metanolu a 3x50 ml dichlórmetánu a suší sa vo vákuu, pričom sa získa živica 11 alebo 12 (0,35 mmol/g, 5 g).
Krok 3: K 1,5 g (0,165 mmol) živice 11 alebo 12 sa pridajú 2 ml 20% roztoku piperidínu v dimetylformamide. Suspenzia sa mieša 5 minút pri teplote miestnosti a rozpúšťadlo sa odstráni. Postup sa zopakuje po 20 minútach. Získaná živica sa postupne premyje 3x15 ml dimetylformamidu, 15 ml metanolu a 3x15 ml NMP. Potom sa pridá požadovaná karboxylová kyselina (4 ekvivalenty, 0,66 mmol) potom 0,25 g (0,66 mmol) HOBT, 0,12 ml (4 ekvivalenty, 0,66mmol) DIEA a 0,89 g (0,66 mmol) HBTU v NMP. Zmes sa mieša cez noc pri teplote miestnosti a rozpúšťadlo sa odstráni. Živica sa postupne premyje 2x15 ml dimetylformamidu, 15 ml metanolu, 2x15 ml zmesi dimetylformamidu a dichlórmetánu, 15 ml metanolu a 3x15 ml dichlórmetánu a suší sa vo vákuu, pričom sa získa živica 13 alebo 14.
Krok 4: Potom sa pridajú k živici 2 ml 95% roztoku kyseliny trifluóroctovej vo vode. Zmes sa mieša pri teplote miestnosti a filtruje sa. Filtrát sa odparí a zvyšok sa prevedie do zmesi acetonitril-voda a čistí sa pomocou preparatívnej vysokotlakovej chromatografie, pričom sa získajú zlúčeniny 15 a 16.
Postup pri syntéze analógov 17 a 18 (pozri schéma IV):
Krok 5: Živica 13 alebo 14 reaguje s 2 ml 25% roztoku kyseliny trifluóroctovej v dichlórmetáne 30 minút a premyje sa 2x5 ml dimetylf ormamidu, 2x5 ml 10% DIEA v dichlórmetáne, 2x5 ml zmesi dimetylformamidu v dichlórmetáne, 5 ml metanolu a 3x5 ml dichlórmetánu a suší sa 5 minút. Získaná živica sa premyje 3x1 ml
Ί5
NMP, potom reaguje s anhydridom kyseliny octovej alebo s metoxyoctovou kyselinou, alebo 2-propánsulfonylchloridom alebo izopropylizokyanátom alebo metánsulfonylchloridom alebo metylchloroformiátom podľa postupu použitého na prípravu analógov 9 (schéma III). Zlúčeniny 17 a 18 sa získajú tak, ako je opísané v kroku 4 na prípravu zlúčeniny 15 a 16.
Zlúčenina 17a a 17b sa pripraví pomocou reduktívnej aminácie s použitím Na(0Ac)3BH a HCHO (38% vo vode, 0,2 ml) a 0,02 ml kyseliny octovej pred krokom 4 a zlúčenina 18c sa pripraví reakciou s fosgénom nasledovanej amoniakom pred krokom 4.
18a
18d
Postup pri príprave analógov 20
Zlúčeniny 20a-20t sa pripravia podľa postupu opísaného na prípravu zlúčenín 5 (schéma I), len sa zamení príslušná Fmocaminokyselina za Fmoc-valín v kroku 3 (schéma V).
Schéma V
Príprava 3-({1-[2-(4-amino-3-chlórbenzoylamino)-3-metylsulfonylpropionyl]pyrolidín-2-karbonyl}amino)-4-oxobutánovej kyseliny (20i)
Suspenzia 0,132 mmol živice 3 v 4 ml 20% roztoku piperidínu v dimetylformamide sa mieša 5 minút pri teplote miestnosti a zo zmesi sa odstráni rozpúšťadlo. Postup sa zopakuje po 20 minútach. Živica sa postupne premyje dvakrát dimetylformamidom, raz metanolom, dvakrát dichlórmetánom, raz metanolom a dvakrát NMP. K suspenzii živice v 4 ml NMP sa postupne pridá 189 mg N-Fmoc— -metylcysteínu (4 ekvivalenty, 0,528 mmol), 0,185 ml DIEA (8 ekvivalentov, 1,056 mmol), 71 mg HOBt (4 ekvivalenty, 0,528 mmol) a 200 mg HBTU (4 ekvivalenty, 0,528 mmol). Zmes sa mieša cez noc pri teplote miestnosti a rozpúšťadlo sa odparí. Tento kondenzačný postup sa zopakuje po 4 hodinách. Živica sa potom postupne premyje dvakrát dimetylformamidom, raz metanolom a dvakrát zmesou dimetylformamidu a dichlórmetánu 1:1, raz metanolom a trikrát dichlórmetánom a suší sa vo vákuu.
Suspenzia 100 mg tejto živice v 2 ml 20% roztoku piperidínu v dimetylformamide sa mieša 5 minút pri teplote miestnosti a rozpúšťadlo sa odstráni. Postup sa zopakuje po 20 minútach. Živica sa potom postupne premyje dvakrát dimetylformamidom, raz metanolom, dvakrát dichlórmetánom, raz metanolom a dvakrát NMP. K suspenzii živice v 2 ml NMP sa postupne pridá 38 mg 4-amino-3-chlórbenzoovej kyseliny (4 ekvivalenty, 0,2 mmol), 0,140 ml (8 ekvivalentov, 0,4 mmol) DIEA, 27 mg (4 ekvivalenty, 0,2 mmol) HOBt a 76 ml (4 ekvivalenty, 0,4 mmol) HBTU. Zmes sa mieša cez noc pri teplote miestnosti a rozpúšťadlo sa odstráni. Živica sa potom postupne premyje dvakrát dimetylformamidom, raz metanolom a dvakrát zmesou dimetylformamidu a dichlórmetánu 1:1, raz metanolom, trikrát dichlórmetánom a suší sa vo vákuu. Živica potom 1 hodinu reaguje s 2 ml 95% kyseliny trifluóroctovej vo vode. Suspenzia sa filtruje, filtrát sa odparí vo vákuu a čistí sa pomocou preparatívnej vysokotlakovej kvapalinovej chromatografie, pričom sa získa zlúčenina uvedená v názve (20i).
Príprava 3-({1-[2-(3,5-dichlór-4-hydroxybenzoylamino)-4-metánsulfonylbutyryl]pyrolidín-2-karbonyl}amino)-4-oxobutánovej kyseliny (20p)
Zlúčenina 20p sa pripraví podľa postupu opísaného na prípravu zlúčeniny 20i s použitím N-Fmoc-metionínu ako prvej zložky kondenzovanej k živici 3 a 3,5-dichlór-4-hydroxybenzoovej kyseliny ako druhej zložky.
Príprava 3-[(1—{2 —[(izochinolín-l-karbonyl)-5-amino]-3-metánsulfonylpropionyl}pyrolidín-2-karbonyl)amino]-4-oxobutovej kyseliny (20r)
N-Fmoc-metylcysteín sa s použitím spôsobu opísaného v B.M. Trost a D. P. Curran, Tetrahedron Lett. 22, str. 1287-190 (1981) oxiduje na zodpovedajúci sulfón. K roztoku 0,714 g (2 mmol) N-Fmoc-metylcysteínu v 24 ml zmesi metanolu a vody 1:1 sa pri 0°C pridá 3,68 g (3 ekvivalenty, 6 mmol) Oxone™. Zmes sa mieša 48 hodín pri teplote miestnosti, pomocou 6N kyseliny chlorovodíkovej sa okyslí na pH 2 a extrahuje sa trikrát 100 ml etylacetátu. Spojené organické extrakty sa sušia nad síranom horečnatým a odparia sa vo vákuu, pričom sa získa 0,700 g (výťažok 89%) sulfónu: 2Η NMR (perdeuterodimetylsulfoxid, 500 MHz) δ 2,97 (s,
3H), 3,49-3,59 (m, 2H) , 4,25 (m, 1H) , 4,30-4,38 (m, 2H) , 4,46 (m, 1H) , 7,33 (t, 2H), 7,42 (t, 2H) , 7,70-8,00 (m, 4H) ; presná hmotnosť vypočítaná pre C19Hi9NO6S m/e 389, 09, nájdené m/e 390,2.
Suspenzia 0,250 mmol živice 3 v 10 ml 20% roztoku piperidínu v dimetylformamide sa mieša 5 minút pri teplote miestnosti a zo zmesi sa odparí rozpúšťadlo. Postup sa zopakuje po 20 minútach. Živica sa postupne premyje dvakrát dimetylformamidom, raz metanolom, dvakrát dichlórmetánom, raz metanolom a dvakrát NMP. K suspenzii živice v 6 ml NMP sa postupne pridá 200 mg N-Fmoc-metylcysteínsulfónu (4 ekvivalenty, 0,50 mmol), 0,175 ml DIEA (8 ekvivalentov, 1,00 mmol), 70 mg HOBt (4 ekvivalenty, 0,50 mmol) a 188 mg HBTU (4 ekvivalenty, 0,50 mmol). Zmes sa mieša cez noc pri teplote miestnosti a rozpúšťadlo sa odstráni.
Tento kondenzačný postup sa opakuje po 3 hodinách. Živica sa postupne premyje dvakrát dimetylformamidom, raz metanolom, dvakrát zmesou dimetylformamidu a dichlórmetánu 1:1, raz metanolom a trikrát dichlórmetánom a suší sa vo vákuu.
Suspenzia 150 mg tejto živice v 4 ml 20% roztoku piperidínu v dimetylformamide sa mieša 5 minút pri teplote miestnosti a rozpúšťadlo sa odstráni. Živica sa potom postupne premyje dvakrát dimetylformamidom, raz metanolom, dvakrát dichlórmetánom, raz metanolom a dvakrát NMP. K suspenzii živice v 3 ml NMP sa postupne pridá 52 mg lizochinolínkarboxylovej kyseliny (4 ekvivalenty, 0,3 mmol), 0,104 ml DIEA (8 ekvivalentov, 0,6 mmol), 37 mg HOBt (4 ekvivalenty, 0,3 mmol) a 104 mg HBTU (4 ekvivalenty, 0,3 mmol). Zmes sa mieša pri teplote miestnosti cez noc a rozpúšťadlo sa odstráni. Živica sa postupne premyje dvakrát dimetylformamidom, raz metanolom a dvakrát zmesou dimetylformamidu a dichlórmetánu 1:1, raz metanolom a trikrát dichlórmetánom a suší sa vo vákuu. Živica potom reaguje s 2 ml 95% kyseliny trifluóroctovej vo vode 1 hodinu. Suspenzia sa filtruje, filtrát sa odparí vo vákuu a čistí sa pomocou preparatívnej vysokotlakovej kvapalinovej chromatografie, pričom sa získa zlúčenina uvedená v názve 20r.
Príprava 3- ({1- [2- (3,5-dichlór-4-hydroxybenzoylamino)-3-metánsulfonylpropionyl]pyrolidín-2-karbonyl}amino)-4-oxobutánovej kyseliny (20s)
Zlúčenina 20s sa pripraví podlá postupu použitého na prípravu zlúčeniny 20i, s použitím 3,5-dichlór-4-hydroxybenzoovej kyseliny namiesto 1-izochinolínkarboxylovej kyseliny.
SO2CH3
20t
Postup pri príprave analógov 23
Zlúčeniny 23a-23i sa pripravia podlá postupu opísaného na prípravu zlúčenín 7 (schéma II) len náhradou vhodnej Fmoc-aminokyseliny za Fmoc-prolín v kroku 2 (schéma VI).
Schéma VI
Fmock
-CO2H
Krok y
Príprava 3-({2-[2-(4-amino-3-chlórbenzoylamino)propionyl]-4-metyl-3,4-dihydro-2H-pyrazol-3-karbonyl}amino)-4-oxobutánovej kyseliny (23g)
Zlúčenina 23g sa pripraví podía postupu opísaného na prípravu zlúčeniny 7, len náhradou 1-(9H-fluoren-9-ylmetyl)esteru
4-metyl-4,5-dihydropyrazol-l,5-dikarboxylovej kyseliny za Fmoc-prolín (schéma II) v kroku 2.
Príprava 1-(9H-fluoren-9-ylmetyl)esteru 4-metyl-4,5-dihydropyrazol-1,5-dikarboxylovej kyseliny
K roztoku 650 mg (2 mmol) (10,10-dimetyl-3,3-dioxo-X6-tia-4-azatricyklo [5,2,1,0°'°] dec-4-yl) - (4-metyl-3,4-dihydro-2ŕí-pyrazol-3-yl)metanónu (J. Am. Chem. Soc., 119, str. 8379-8380(1997)) v 6 ml vody a 14 ml tetrahydrofuránu miešajúcemu sa pri 0°C sa pridá 420 mg (10 mmol, 5 ekvivalentov) hydroxidu lítneho. Zmes sa mieša 2 hodiny pri 0°C a 30 minút pri teplote miestnosti,
zriedi sa 20 ml vody a premyje sa 20 ml éteru. pH roztoku sa
upraví na 9 a pridá sa roztok 519 mg (2 mmol, 1 ekvivalent)
Fmoc-Cl v 3 ml dioxánu Zmes sa mieša cez noc pri teplote
miestnosti, premyje sa éterom, okyslí sa na pH 2-3 a extrahuje sa 3x40 ml etylacetátu. Spojené organické extrakty sa premyjú solankou, sušia sa nad síranom horečnatým a odparia sa vo vákuu, pričom sa získa 690 mg (výťažok 98%) bezfarebnej peny, ktorá sa identifikuje ako zlúčenina uvedená v názve. 1H NMR (perdeuterodimetylsulfoxid, 500 MHz) Ô 1,2 (d, 3H), 3,2 (m, 1H), 4,2-4,6 (m, 3H) , 7,1 (s, 1H) , 7,2-7,5 (m, 5H) , 7,7-8,0 (m, 4H) . Presná hmota vypočítaná pre C2oHi8N204 m/e 350, 13, nájdené m/e 351/3.
Príprava 3-({1-[2-(4-amino-3-chlórbenzoylamino)propionyl]-4-metoxypyrolidín-2-karbonylJamino)-4-oxobutánovej kyseliny (23i)
Zlúčenina 23i sa pripraví podľa postupu opísaného na prípravu zlúčeniny 7 len náhradou N-Fmoc-4-metoxyprolínu za Fmoc— -prolín (schéma II) v kroku 2.
Príprava N-Fmoc-4-metoxyprolínu
K roztoku 735 mg (3 mmol) metylesteru N-Boc-4-hydroxyprolínu v 20 ml tetrahydrofuránu miešajúcemu sa pri 0°C sa pridá 79 mg (1,1 ekvivalentu, 3,3 mmol) 60% hydridu sodného v minerálnom oleji. Zmes sa mieša pri 0°C 1 hodinu a pridá sa 0,56 ml metyljodidu (3 ekvivalenty, 9 mmol). Zmes sa mieša pri teplote miestnosti cez noc, rozloží sa pridaním nasýteného vodného roztoku chloridu amónneho, zriedi sa vodou a extrahuje sa trikrát 80 ml etylacetátu. Spojené organické extrakty sa premyjú solankou, sušia sa nad síranom horečnatým a odparia sa vo vákuu, pričom sa získa svetložltý olej. Olej sa prevedie do 9 ml metanolu a 3 ml vody a pridá sa 378 mg (3 ekvivalenty, 9 mmol) hydroxidu lítneho. Zmes sa mieša cez noc pri teplote miestnosti, zriedi sa vodou, okyslí sa na pH 3 a extrahuje sa trikrát 80 ml etylacetátu. Spojené organické extrakty sa premyjú solankou, sušia sa nad síranom horečnatým a odparia sa vo vákuu. Zvyšný olej sa prevedie do 10 ml kyseliny trifluóroctovej a roztok sa mieša 2 hodiny pri teplote miestnosti a odparí sa vo vákuu. Zvyšný olej sa zriedi 6 ml 10% vodného roztoku uhličitanu sodného a 3 ml dioxánu a pridá sa roztok 779 mg (1 ekvivalent, 3 mmol) 9-fluorenylmetylchloroformiátu v 5 ml dioxánu. Zmes sa mieša cez noc pri teplote miestnosti, zriedi sa vodou, okyslí sa na pH 3 a extrahuje sa trikrát 80 ml etylacetátu. Spojené organické extrakty sa premyjú solankou, sušia sa nad síranom horečnatým a odparia sa vo vákuu, pričom sa získa olej, ktorý sa čistí pomocou kolónovej chromatografie na silikagéli za elúcie zmesou dichlórmetánu a metanolu 20:1. Získa sa 600 mg (55%) N-Fmoc-4-metoxyprolínu: presná hmotnosť vypočítaná pre C21H21NO5 m/e 367,14, nájdené m/e 368,4.
K roztoku 0,125 mmol živice 2 sa pridajú 4 ml 20% roztoku piperidínu v dimetylformamide. Zmes sa mieša 5 minút pri teplote miestnosti a rozpúšťadlo sa odstráni. Postup sa zopakuje po 20 minútach. Živica sa postupne premyje dvakrát dimetylformamidom, raz metanolom, dvakrát dichlórmetánom, raz metanolom a dvakrát NMP. K suspenzii živice v 4 ml NMP sa postupne pridá 184 mg (4 ekvivalenty,0,50 mmol)M-Fmoc-4-metoxyprolínu, 0,175 ml (8 ekvivalentov, 1,00 mmol) DIEA, 70 mg (4 ekvivalenty, 0,50 mmol) HOBt a 188 mg (4 ekvivalenty, 0,50 mmol) HBTU. Zmes sa mieša cez noc pri teplote miestnosti a rozpúšťadlo sa odparí. Tento kondenzačný postup sa zopakuje po 3 hodinách. Živica sa postupne premyje dvakrát dimetylformamidom, raz metanolom, dvakrát zmesou dimetylformamidu a dichlórmetánu 1:1, raz metanolom a trikrát dichlórmetánom a suší sa vo vákuu.
K živici sa pridajú 4 ml 20% roztoku piperidínu v dimetylformamide. Zmes sa mieša 5 minút pri teplote miestnosti a rozpúšťadlo sa odstráni. Postup sa zopakuje po 20 minútach. Živica sa postupne premyje dvakrát dimetylformamidom, raz metanolom, dvakrát dichlórmetánom, raz metanolom a dvakrát NMP. K suspenzii živice v 4 ml NMP sa postupne pridá 156 mg (4 ekvivalenty, 0,50 mmol) N-Fmoc-alanínu, 0,175 ml (8 ekvivalentov, 1,00 mmol) DIEA, 70 mg (4 ekvivalenty, 0,50 mmol) HOBt a 188 mg (4 ekvivalenty, 0,50 mmol) HBTU. Zmes sa mieša cez noc pri teplote miestnosti a rozpúšťadlo sa odstráni. Tento kondenzačný postup sa zopakuje po 3 hodinách. Živica sa postupne premyje dvakrát dimetylformamidom, raz metanolom, dvakrát zmesou dimetylformamidu a dichlórmetánu 1:1, raz metanolom a trikrát dichlórmetánom a suší sa vo vákuu.
K živici sa pridajú 4 ml 20% roztoku piperidínu v dimetylformamide. Zmes sa mieša 5 minút pri teplote miestnosti a rozpúšťadlo sa odstráni. Postup sa zopakuje po 20 minútach. Živica sa postupne premyje dvakrát dimetylformamidom, raz metanolom, dvakrát dichlórmetánom, raz metanolom a dvakrát NMP. K suspenzii živice v 4 ml NMP sa postupne pridá 80 mg (4 ekvivalenty, 0,50 mmol) 4-amino-3-chlórbenzoovej kyseliny, 0,175 ml (8 ekvivalentov, 1,00 mmol) DIEA, 70 mg (4 ekvivalenty, 0,50 mmol) HOBt a 188 mg (4 ekvivalenty, 0,50 mmol) HBTU. Zmes sa mieša pri teplote miestnosti cez noc a rozpúšťadlo sa odstráni. Živica sa postupne premyje dvakrát dimetylformamidom, raz metanolom, dvakrát zmesou dimetylformamidu a dichlórmetánu 1:1, raz metanolom a trikrát dichlórmetánom a suší sa vo vákuu.
Živica 1 hodinu reaguje so 4 ml 95% kyseliny trifluóroctovej vo vode. Zmes sa filtruje. Filtrát sa odparí vo vákuu, pričom sa získa olej, ktorý sa čistí pomocou vysokotlakovej kvapalinovej chromatografie a získa sa zlúčenina uvedená v názve (23i).
23e
Postup pri príprave analógov 24a-e
Zlúčeniny 24a-e sa pripravia podľa postupu opísaného na prípravu zlúčenín 5 (schéma I) len náhradou buď Fmoc-azetidínkarboxylovej kyseliny alebo trans-2-fenyl-Fmoc-azetidínkarboxylovej kyseliny za Fmoc-prolín v kroku 2.
Postup pri príprave analógov 25
Zlúčenina 25a-25e sa pripraví podľa postupov opísaných na prípravu zlúčenín 5 a 7 (schéma I a schéma II) len náhradou Fmoc-2(S)-pipekolovej kyseliny za Fmoc-prolín v kroku 2 a kondenzáciou buď Fmoc-valínu alebo Fmoc-alanínu alebo Fmoc-terc-leucínu v kroku 3.
25c
Postup pri príprave analógov 26a-h
Zlúčeniny 26a-26h prípravu zlúčenín 23 Fmoc-alanín v kroku 3.
sa pripravia podľa postupu opísaného (schéma VI) len náhradou Fmoc-valínu na za
26e
Postup pri príprave analógov 27
Zlúčeniny 27a-27n sa pripravia podľa postupu opísaného na prípravu zlúčenín 7 (schéma II) len náhradou Fmoc-4,4-difluórprolínu za Fmoc-prolín v kroku 2.
Príprava dimetylesteru 4,4-difluórprolínu
K roztoku 9,63 ml (7,2 mmol) oxalylchloridu v 10,6 ml dichlórmetánu miešajúcemu sa pri -78°C sa pridá roztok 0,94 ml (13,2 mmol) metylsulfoxidu v 15 ml dichlórmetánu. Roztok sa mieša 30 minút pri teplote -78°C. Potom sa prikvapká roztok 1,47 g (6 mmol) metylesteru N-Boc-4-hydroxyprolínu v 19 ml dichlórmetánu. Zmes sa mieša 1,5 hodiny pri teplote -78°C a pridá sa 3,34 ml (24 mmol) trietylamínu. Roztok sa nechá zohriať na teplotu miestnosti a mieša sa cez noc. Zriedi sa 100 ml dichlórmetánu, postupne sa premyje 100 ml vody, 100 ml IN roztoku kyseliny chlorovodíkovej a 100 ml solanky, suší sa nad síranom horečnatým a odparí sa vo vákuu. Zvyšok sa čistí pomocou kolónovej chromatografie na silikagéli za elúcie zmesou etylacetátu a hexánu 1:3. Získa sa 1,294 g (výťažok 89%) metylesteru N-Boc-4-oxoprolínu. ľH NMR (500 MHz, deuterochloroform) δ 1,45 (m, 9H), 2,60 (m, 1H) , 2,95 (m, 1H) , 3,75 (m, 3H) , 3,90 (m, 2H) , 4,80 (m, 25 1H).
K roztoku 808 mg (3,33 mmol) metylesteru N-Boc-4-oxoprolínu v 13 ml dichlórmetánu, ktorý sa mieša pri teplote 0°C, sa pridá 0,88 ml (7,19 mmol, 2,2 ekvivalentu) DAST. Zmes sa mieša 2 hodiny pri 0°C, 16 hodín pri teplote miestnosti a naleje sa do ľadovej vody. Zmes sa mieša 2 hodiny pri teplote miestnosti. Organická vrstva sa oddelí, premyje sa vodou, suší sa nad síranom horečnatým a odparí sa vo vákuu. Zvyšok sa čistí pomocou kolónovej chromatografie na silikagéli za elúcie zmesou etylacetátu a hexánu 1:8, pričom sa získa 754 mg (výťažok 79%) difluorovaného derivátu vo forme svetložltého oleja. ΤΗ NMR (500 MHz, deuterochloroform) δ 1,50 (m, 9H) , 2,45 (m, 1H) , 2,70 (m, 1H) ,
3,75 (m, 3H), 3,80 (m, 2H), 4,50 (m, 1H).
Príprava N-Fmoc-4,4-difluórprolínu
K roztoku 754 mg (2,85 mmol) metylesteru N-Boc 4,4-difluórprolínu v 5 ml tetrahydrofuránu miešajúcemu sa pri 0°C sa pridá roztok 179 mg (4,27 mmol) hydroxidu lítneho vo vode. Roztok sa mieša 3 hodiny pri 0°C, 1 hodinu pri teplote miestnosti, zriedi sa vodou, extrahuje sa éterom, okysli sa na pH 2-3 a extrahuje sa dvakrát 30 ml etylacetátu. Spojené organické extrakty sa premyjú solankou, sušia sa nad síranom horečnatým a odparia sa vo vákuu, pričom sa získa 652 mg (91%) kyseliny vo forme svetložltej pevnej látky.
Roztok 652 mg (2 mmol) N-Boc-4,4-difluórprolínu v 10 ml zmesi kyseliny trifluóroctovej a dichlórmetánu 1:1 sa mieša 45 minút pri 0°C a odparí sa vo vákuu. Zvyšok sa prevedie do 3 ml dioxánu a pridá sa 5 ml 10% vodného roztoku uhličitanu sodného, potom 675 mg (1 ekvivalent) Fmoc-Cl v 5 ml dioxánu. Zmes sa mieša pri teplote miestnosti 16 hodín, zriedi sa 20 ml vody, extrahuje sa dvakrát 20 ml dietyléteru, okysli sa na pH 2 a extrahuje sa trikrát 30 ml etylacetátu. Spojené organické extrakty sa premyjú 50 ml solanky, sušia sa nad síranom horečnatým a odparia sa vo vákuu. Zvyšok sa čistí pomocou kolónovej chromatografie na silikagéli za elúcie zmesou dichlórmetánu a metanolu (10:1), pričom sa získa 850 mg (88%) N-Fmoc-4,4-difluórprolínu vo forme hnedastej pevnej látky. 1H NMR (500 MHz, deuterochloroform) δ 2,55 (m, 1H) , 2,95 (m, 1H) , 3,80 (m, 2H), 4,20 (m, 1H) , 4,30 (m, 2H), 4,55 (m, 1H), 7,32 (m, 2H), 7,45 (m, 2H), 7,70 (m, 2H), 7,90 (m, 2H) . Presne vypočítaná hmotnosť pre C20H17F2NO4 m/e 373,11, nájdené m/e 374,4.
27g
27η
Zlúčeniny 28a-28c sa pripravia podlá postupu opísaného pre zlúčeniny 5 a 7 (schéma I a schéma II) len náhradou Fmoc-dimetyltioprolínu za Fmoc-prolín v kroku 2.
28a, X=N 28c
28b, X=C
Všeobecné postupy na prípravu zlúčenín uskutočnenia A všeobecného vzorca I (schémy VII-VIII)
Zlúčeniny podlá uskutočnenia A všeobecného vzorca I, kde R4 je atóm vodíka a jedna skupina R5 je atóm vodíka Postup prípravy analógov 29
Zlúčeniny 29a-29s sa pripravia podlá postupu opísaného na prípravu zlúčenín 5 (schéma I) len náhradou Fmoc-alanínu za Fmoc-prolín v kroku 2 a s použitím buď Fmoc-valínu alebo Fmoc-alanínu alebo Fmoc-terc-leucínu v kroku 3.
Postup prípravy analógov 32
Zlúčeniny 32a-32e sa pripravia podlá postupu opísaného na prípravu zlúčenín 5 (schéma I) len náhradou 2-(3-terc-butoxykarbonylamino-2-oxopyrolidin-l-yl)-4-metylpentánovej kyseliny (30) (Neosystém katalógové číslo BB02101) za Fmoc-prolín v kroku 2, po ktorom nasleduje krok 4 (schéma VII).
Zlúčeniny podľa uskutočnenia A všeobecného vzorca I, kde R2 a R3 spolu s atómami, na ktoré sú viazané, tvoria päťčlenný kruh.
Schéma VII
32c
Zlúčeniny podľa uskutočnenia A všeobecného vzorca I, kde X je skupina N-CH3
Schéma VIII
Krok 3 ú 20% COCl2/Tol
2) H3C-N-NHj M
Príprava 3-({1-[N-(izochinolin-l-karbonyl)-N-metylhydrazinokarbonyl]pyrolidín-2-karbonyl}amino)-4-oxobutánovej kyseliny (34)
Suspenzia 0,250 mmol živice 3 (schéma VIII) v 10 ml 20% roztoku piperidínu v dimetylformamide sa mieša 5 minút pri teplote miestnosti a rozpúšťadlo sa odstráni. Postup sa opakuje po 20 minútach. Živica sa postupne premyje dvakrát dimetylformamidom, raz metanolom, dvakrát zmesou dimetylformamidu a dichlórmetánu 1:1, raz metanolom a trikrát dichlórmetánom a krátko sa suší. K živici sa pridá 5 ml suchého dichlórmetánu, 0,128 ml (3 ekvivalenty, 0,75 mmol) DIEA a 0,400 ml (3 ekvivalenty, 0,75 mmol) 20% roztoku fosgénu v toluéne. Suspenzia sa mieša 1,5 hodiny pri teplote miestnosti. Zmes sa zbaví rozpúšťadla a živica sa premyje niekoľkokrát dichlórmetánom. K suspenzii živice v 5 ml dichlórmetánu sa pridá 0,133 ml (10 ekvivalentov,
2,5 mmol) metylhydrazínu. Zmes sa mieša cez noc pri teplote miestnosti. Živica sa postupne premyje dvakrát dimetylformamidom, raz metanolom, dvakrát zmesou dimetylformamidu a dichlórmetánu (1:1), raz metanolom a trikrát dichlórmetánom a súši sa vo vákuu.
K 0,075 mmol živice v 3 ml NMP sa postupne pridá 52 mg (4-ekvivalenty, 0,3 mmol) 1-izochinolínkarboxylovej kyseliny, 0,19 ml (8 ekvivalentov, 0,6 mmol) DIEA, 37 mg (4 ekvivalenty, 0,3 mmol) HOBt a 104 mg (4 ekvivalenty, 0,3 mmol) HBTU. Zmes sa mieša cez noc pri teplote miestnosti a rozpúšťadlo sa odstráni. Živica sa postupne premyje dvakrát dimetylformamidom, raz metanolom, dvakrát zmesou dimetylformamidu 1:1, raz metanolom a trikrát dichlórmetánom a súši sa vo vákuu.
Živica reaguje so 4 ml 95% kyseliny trifluóroctovej vo vode 1 hodinu. Zmes sa filtruje. Filtrát sa odparí vo vákuu, pričom sa získa olej, ktorý sa čistí pomocou vysokotlakovej chromatografie a získa sa zlúčenina uvedená v názve 34.
Zlúčeniny podlá uskutočnenia A všeobecného vzorca I, kde R3 = R3 = = atóm vodíka:
3-({1-[(Amino-3-chlórbenzoylamino)acetyl]pyrolidín-2-karbonyl}amino)-4-oxobutánová kyselina (Gl)
Zlúčenina sa pripraví podľa postupu opísaného na prípravu zlúčeniny 7 len náhradou Fmoc-glycínu za Fmoc-alanín v kroku 3 (schéma II), pričom sa získa 4,3 mg zlúčeniny uvedenej v názve.
Kvapalinová chromatografia-hmotnostné spektrum (ES+) m/e = 425,2 (M+H).
3- ({1- [ (Amino-3-chlórbenzoylamino) acetyl] -4,4-difluórpyrolidín-2-karbonyl}amino)-4-oxobutánová kyselina (G2)
Zlúčenina sa pripraví podľa postupu opísaného na prípravu zlúčeniny 7 a 27 len náhradou Fmoc-glycínu za Fmoc-alanín v kroku 3 (schéma II). Získa sa 10,0 mg zlúčeniny uvedenej v názve. Kvapalinová chromatografia-hmotnostné spektrum (ES+) m/e = 461,2 (M+H).
Všeobecné postupy na prípravu zlúčenín všeobecného vzorca I podľa uskutočnenia C a podľa uskutočnenia D, kde Y = C (schémy
IX-XXII)
Schéma IX
100
Zdroje vybraných cyklických systémov
V z Štruktúra Odkaz
O Blythin, D.J., J. Orq. Chem., 59, str.
6098-6100 (1994)
N—-Í “Y co2r Ó
Decicco, C.P. a kol., Syn. Lett., str. 615-616, (1995)
ΎΎ 0 co2r
ϊΛ Bennion, C. a kol., J. Med. Chem., 34,
str. 439-447 (1991);
1 /s /X co2r Jensen, K.A. a kol., Acta Chemica
Scand., 13, str. 1097-1103 (1961)
komerčne dostupný
\ co2r
Mish, M. R., J. Am. Chem. Soc., 119
ΓΧ str. 8379-8380 (1997)
CO2R
N^| Xi, N. a kol., J. Am. Chem. Soc., 120
χψ str. 80-86 (1998)
co2r
101
Štruktúra Odkaz
ry Merour, J. Y. a kol., Tetrahedron
Lett., 32, str. 2469-2470 (1991);
1 co2h Rossen, K., Tetrahedron Lett., 36,
str. 6429-6422 (1995)
Schéma X
Fmoc^
39. R=CH3 44, R=4-MeOPh1N NaOH -«MeOH
45. R=4-MeOPh- 46t Rs4.MeOPh.
102
Etylester 5-terc-butyl-3-[2-(9H-fluoren-9-ylmetoxykarbonylamino)-3-metylbutyryl]-2,3-dihydro[1,3,4]tiadiazol-2-karboxylovej kyseliny (37)
K miešajúcej sa suspenzii 2,63 g (25 mmol) polyvinylpyridínu v roztoku 2,16 g (10 mmol) etylesteru 5-terc-butyl-2,3-dihydro-[1,3,4]tiadiazol-2-karboxylovej kyseliny (36), (J. Med. Chem.,
34, str. 439 (1991)) v suchom toluéne sa prikvapká 4,76 g (12,1 mmol) 9H-fluoren-9-ylmetylesteru (l-chlórkarbonyl-2-metylpropyl)karbámovej kyseliny v 20 ml bezvodého toluénu. Po 16 hodinách miešania sa suspenzia filtruje a filtrát sa premyje nasýteným roztokom hydrogenuhličitanu sodného. Organická vrstva sa oddelí, premyje sa vodou, suší sa nad bezvodým síranom sodným a odparí sa, pričom sa získa žltý olej. Po čistení pomocou flash chromatografie za elúcie zmesou hexánu a etylacetátu 9/1 sa získa 2,66 g (výťažok 49%) zlúčeniny uvedenej v názve 37 vo forme číreho, viskózneho oleja. NMR (500 MHz, deuterochloroform) δ 0,89 (d, 1,5H), 0,93 (d, 1,5H), 1,00 (d, 1,5H), 1,06 (d, 1,5H), 1,22 (t, 3H), 1,28 (s, 9H) , 2,12-2,22 (m, 0,5H), 2,32-2,42 (m, 0,5H), 4,18-4,28 (m, 2H), 4,31-4,45 (m, 2H), 4,96-5,01 (m, 0,5H), 5,02-5,10 (m, 0,5H), 5,52 (d, 0,5H), 5,61 (d, 0,5H), 6,10 (s, 0,5H), 6,13 (s, 0,5H), 7,27-7,34 (m, 2H) , 7,35-7,42 (m, 2H), 7,56-7,64 (m, 2H), 7,73-7,78 (m, 2H) .
Etylester 3-(2-acetylamino-3-metylbutyryl)-5-terc-butyl-2,3-dihydro- [ 1, 2 , 4 ] tiadiazol-2-karboxylove j kyseliny (38)
K roztoku 0,508 g (0,94 mmol) zlúčeniny (37) (schéma IX) v 10 ml acetonitrilu sa pridá 1 ml dietylamínu. Roztok sa mieša 2 hodiny pri teplote miestnosti, rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a získaný olej sa azeotropicky destiluje s dichlórmetánom (4x) . Surový olej sa rozpustí v 5 ml dichlórmetánu a pridá sa 0,26 ml (1,86 mmol) trietylamínu a 80 μΐ (1,1 mmol) acetylchloridu. Roztok sa mieša v dusíkovej atmosfére pri teplote miestnosti 2 hodiny. Rozpúšťadlo sa odparí, surová látka sa rozpustí v etylacetáte a premyje sa dvakrát 0,5N roztokom hydrogensíranu
103 sodného, dvakrát nasýteným roztokom hydrogenuhličitanu sodného a solankou a suší sa nad bezvodým síranom sodným, filtruje sa a odparí, pričom sa získa žltý olej. Po čistení pomocou flash kolónovej chromatografie na silikagéli s použitím zmesi hexánu a etylacetátu 95/5 až 90/10% ako eluentu sa získa 0,301 g (výťažok 89%) produktu vo forme žltého oleja. 1H NMR (500 MHz, deuterochloroform) δ 0,88 (dd, 3H) , 0,99 (dd, 3H), 1,16-1,45 (m, 12H), 2,02 (s, 3H), 2,09-2,19 (m, 0,5H), 2,30-2,40 (m, 0,5H), 4,12-4,29 (m, 2H), 5,20-5,27 (m, 0,5H), 5,30-5,36 (m, 0,5H), 6,60 (s, 0,5H), 6,90 (s, 0,5H), 6,20-6,31 (m, 1H) . Analytická HPLC (kolóna C18), (zmes diastereomérov) 7,77, 7,98 min.. Kvapalinová chromatografia-HS (ES+) m/e = 358,3 20 (M+H).
3-(2-Acetylamino-3-metylbutyryl)-5-terc-butyl-2,3-dihydro[1,2,—
-4]-tiadiazol-2-karboxylová kyselina (39)
K roztoku 0,301 g (0,84 mmol) zlúčeniny 38 v 10 ml metanolu sa pridá 1,7 ml (1,7 mmol) IN roztoku hydroxidu sodného. Reakčná zmes sa mieša 2 hodiny pri teplote miestnosti a rozpúšťadlo sa odparí. Zvyšok sa rozpustí v etylacetáte a premyje sa dvakrát 0,5N roztokom hydrogensíranu sodného a solankou a suší sa nad bezvodým síranom sodným, filtruje sa a odparí, pričom sa získa 0,277 g, kvantitatívne) zlúčeniny uvedenej v názve vo forme žltej pevnej látky.
Príprava alylesteru 2-(benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)karbámovej kyseliny (40)
Zlúčenina 40 sa pripraví z terc-butylesteru 3-alyloxykarbonylamino-4-hydroxybutánovej kyseliny pomocou modifikácie postupu opísaného v Bioorg. Med. Chem. Lett. Vol. 2, No. 6, str. 613-618 (1992).
K roztoku 27,52 g (352 mmol) dimetylsulf oxidu v 240 ml dichlórmetánu sa pri -78°C pridá 24,4 g (192 mmol) oxalylchloridu.
Po 15 minútach sa pomaly pridá roztok 41,44 g (160 mmol) terc-butylesteru 3-alyloxykarbonylamino-4-hydroxybutánovej kyseliny
104 v 100 ml dichlórmetánu a zmes sa mieša pri -78°C ďalšiu 1,5 hodinu. Pridá sa 62,0 g (480 mmol) DIEA a zmes sa nechá 15 minút zohrievať na teplotu miestnosti. Získaný roztok sa zriedi 300 ml dichlórmetánu, premyje sa dvakrát 500 ml 0,5N roztoku hydrogensíranu sodného, dvakrát 300 ml vody a dvakrát 400 ml solanky. Organická vrstva sa suší nad bezvodým síranom sodným a odparí sa vo vákuu na objem 200 ml. K tomuto roztoku sa pridá 48 g (444 mmol) benzylalkoholu, potom 30 g 3Ä molekulových sít a 0,8 g p-toluénsulfónovej kyseliny. Reakčná zmes sa nechá miešať 4 dni a pridá sa 96 ml kyseliny trifluóroctovej. Získaná suspenzia sa mieša 1 hodinu a potom sa odparí vo vákuu. Pridá sa 500 ml etylacetátu a zmes sa filtruje cez kremelinu. Filtrát sa premyje dvakrát 500 ml hydrogénuhličitanu sodného, dvakrát 400 ml vody a dvakrát 300 ml solanky. Organický roztok sa suší nad bezvodým síranom sodným, filtruje sa a odparí sa vo vákuu, pričom sa získa 90 g svetložltého oleja, ktorý sa mieša dvakrát so 400 ml hexánu, pričom sa získa 31 g surového produktu zo spodnej vrstvy zvyšku. Pomocou chromatografie s použitím zmesi etylacetátu a hexánu (4/96 až 22/78) sa získa 6,97 g alylesteru anti-2-(benzyloxy-5-oxo-tetrahydrofuran-3-yl)karbámovej kyseliny (vyššie Rf) , 4,53 g syndiastereoméru a 12,97 g zmesi diastereomérov (celkový výťažok 53%). NMR (500 MHz, deuterochloroform) pre antidiastereomér: δ 2,41-2,45 (m, H), 3,02-3,07 (m, H), 4,28 (š, H), 4,50-4,80 (m, 3H), 4,80-5,15 (m, 2H), 5,24-5,32 (m, 2H), 5,48 (s, H), 5, 88-6, 00 (m, H), 7,31-7,56 (m, 5H) ; pre syn diastereomér: 82,49-2,53 (m, H), 2,83-2,89 (m, H), 4,57-4,65 (m, 4H), 4,87-4,90 (m, H), 5,12-5,30 (m, 3H) , 5, 52-5, 53 (d, H),
5,88-6, 00 (m, H), 7,31-7,39 (m, 5H) ; retenčný čas pri analytickej HPLC: 10,49 minút pre anti diastereomér a 10,37 minút pre syn diastereomér; LC-MS: m/z = 292 (M+H+) .
(2-benzyloxy-5-oxo-tetrahydrofuran-3-yl)-amid 3-(2-acetylamino-3-metylbutyryl)-5-terc-butyl-2,3-dihydro[1,2,4]tiadiazol-2-karboxylovej kyseliny (41)
K roztoku 0,385 g (1,32 mmol) alylesteru (2-benzyloxy-5-oxo105 tetrahydrofuran-3-yl)karbámovej kyseliny (40) v 2 ml dimetylformamidu sa pridá 0,456 g (2,92 mmol) DMBA a 0,136 g (0,12 mmol) Pd(PPh3)4 a roztok sa mieša 15 minút pri teplote miestnosti. Pridá sa roztok zlúčeniny 39 v 4,5 ml dichlórmetánu a 0,5 ml dimetylformamidu, potom 0,168 g (1,24 mmol) HOBT a 0,256 g (1,33 mmol) EDC. Reakčná zmes sa mieša v dusíkovej atmosfére 18 hodín pri teplote miestnosti. Rozpúšťadlo sa odparí. Surová látka sa rozpustí v etylacetáte a premyje sa dvakrát 0,5N roztokom hydrogensíranu sodného, dvakrát nasýteným roztokom hydrogenuhličitanu sodného a solankou a suší sa nad bezvodým síranom sodným, filtruje sa a odparí, pričom sa získa žltá pevná látka. Po čistení pomocou flash kolónovej chromatografie sa získa 374 mg (výťažok 88%) zlúčeniny uvedenej v názve (41) vo forme zmesi diastereomérov. ľH NMR (500 MHz, deuterochloroform) δ
0,75-1,05 (m, 6H) , 1,19-1,34
-2,50 (m, 2H), 2,80-3,03 (m, (m, 1H), 5, 46-5,56 (m, 1H) , (m, 9H), 1, 93-2,08 (m, 3H) , 2,191H), 4,56-4, 93 (m, 3H) , 5,02-5,20
5,95-6,16 (m, 2H) , 6, 86-6, 95 (m,
1H), 7,20-7,43 (m, 5H). Analytická HPLC (kolóna C18), (zmes diastereomérov) 8,58 minúty. LC-MS (ES*) m/e = 519,2 (M+H).
Príprava 3-{[3-(2-acetylamino-3-metylbutyryl)-5-terc-butyl-2,3-dihydro-[1,3,4]tiadiazol-2-karbonyl]-amino}-4-oxobutánovej kyseliny (42)
Podlá spôsobu A (pozri schému XXIII) sa hydrolyzuje vzorka 45 mg (0, 087 mmol) zlúčeniny 41 a získa sa 17 mg (výťažok 45%) zlúčeniny uvedenej v názve. Analytická HPLC (kolóna C18) : 5,15 minúty. LC-MS (ES*) m/e = 429,3 (M+H).
Etylester 5-terc-butyl-3-[2-(4-metoxybenzoylamino)-3-metylbutyryl)-2,3-dihydro-[1,3,4]tiadiazol-2-karboxylovej kyseliny (43)
Zlúčenina sa pripraví podľa postupu uvedeného skôr pre zlúčeninu 38, s použitím anizoylchloridu. Získa sa 216 mg (50%) zlúčeniny uvedenej v názve vo forme amorfnej pevnej látky. 1H NMR (500 MHz, deuterochloroform) δ 0,92 (d, 1,5H), 0,98 (d, 1,5H),
1,03 (d, 1,5H), 1,07 (d, 1,5H), 1,21 (t, 3H) , 1,28 (s, H), 2,21106
-2,28 (m, 0,5H), 2,41-2,48 (m, (m, 2H) , 5,41-5,46 (m, 0,5H),
0,5H), 6,13 (s, 0,5H), 6,75 (d, 2H), 7,59 (d, 2H) .
0,5H), 3,83 (s, 3H),
5,48-5, 53 (m, 0,5H),
0,5H), 6,85 (d, 0,5H),
4,15-4,28 6,08 (s,
6,91 (d,
5-terc-butyl-3-[2-(4-metoxybenzoylamino)-3-metylbutyryl]-2,3-dihydro-[1,3,4]tiadiazol-2-karboxylová kyselina (44)
Zlúčenina sa pripraví pomocou postupu opísaného na prípravu zlúčeniny 39. Získa sa 180 mg (kvantitatívne) zlúčeniny uvedenej v názve vo forme bielej pevnej látky. ΧΗ NMR (500 MHz, deuterochloroform) δ 0,92 (d, 1,5H), 0,96 (d, 1,5H), 1,03 (d, 1,5H),
1,07 (d, 1,5H), 2,22-2,30 (m, 0,5H), 2,37-2,45 (m, 0,5H), 3,83 (s, 1,5H), 3,84 (s, 1,5H), 5,41-5,48 (m, 1H) , 6,14 (s, 0,5H),
6,15 (s, 0,5H), 6,87-6,95 (m, 2H), 7,75-7,83 (m, 3H).
(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amid 5-terc-butyl-3-[2-(4-metoxybenzoylamino)-3-metylbutyryl]-2,3-dihydro[1,3,4]tiadiazol-2-karboxylovej kyseliny (45a a 45b)
Zlúčenina sa pripraví podlá postupu opísaného na prípravu zlúčeniny 41. Získa sa surová zlúčenina uvedená v názve vo forme 4 diastereomérov. Surová látka sa čistí pomocou flash chromatografie za elúcie gradientom zmesi dichlórmetán až dichlórmetán/etylacetát 6/4, pričom sa získa 31 mg zložky s vyšším Rf ako jedného diastereoméru (45a). Analytická HPLC (kolóna Microsorb C18) 19,87 minúty. XH NMR (500 MHz, deuterochloroform)(jeden diastereomér) δ 1,04 (d, 3H) , 1,14 (d, 3H) , 1,28 (s, 9H) , 2,77 (d,
C,5H), 2,81 (d, 0,5H), 2,90 (d, 0,5H), 2,95 (d, 0,5H), 3,84 (s, 3H), 4,44-4,49 (m, 1H) , 4,53 (d, 1H) , 4,85 (d, 1H) , 5,02-5,08 (m, 1H), 6,37 (s, 1H), 6,41 (d, 1H), 6,93 (d, 2H), 7,26-7,40 (m, 5H), 7,75 (d, 2H), 7,92-7,96 (m, 1H).
Frakcia s nižším Rf obsahuje 185 mg pevnej látky ako zmesi diastereomérov (45b) 3:1:2. Analytická HPLC: kolóna Microsorb
C18 19,00, 19,26, 20,02 minút, 1H NMR (500 MHz, deuterochloroform) (3:1:2 zmes troch diastereomérov) δ 0,89 (d, 2,25H), 0,98
107 (d, 0,75H), 1,02 (d, 0,5H), 1,03 (d, 1,5H), 1,08 (d, 0,25H),
1,10 (d, 0,75H), 1,16 (s, 0,75H), 1,17 (s, 2,25H), 1,23 (s,
0,375H), 1,24 (s, 1,125H), 1,28 (s, 1,125H), 1,29 (s, 3,375H),
2,12-2,18 (m, 0,33H), 2,32-2,42 (m, 0,67H), 2,43-2,51 (m, 0,5H), 2,61-2,67 (m, 0,5H), 2,84-2,92 (m, 0,5H), 2,96-3,07 (m, 0,5H), 3,85 (s, 3H) , 4,58-4,71 (m, 2H) , 4,81 (d, 0,16H), 4,86 (d, 0,32H), 4,91 (d, 0,52H), 5,09-5,13 (m, 0,33H), 5,14-5,18 (m, 0,67H), 5,35 (dd, 1H), 5,46 (s, 0,16H), 5,53 (d, 0,32H),
5,58-5, 62 (d, 0,52H), 6,17 (s, 0,52H), 6,20 (s, 0,16H), 6,34 (s, 0,32H), 6,50 (d, 0,32H), 6,62 (d, 0,16H), 6,67 (d, 0,52H), 6,86 (d, 0,33H), 6,91 (d, 0,67H), 6,94 (d, l,0H), 7,24-7,43 (m, 5H), 7,61 (d, 1H), 7,70 (d, 0,33H), 7,71 (d, 0,67H), 7,76 (d, 1H).
Príprava 3-({5-terc-butyl-3-[2-(4-metoxybenzoylamino)-3-metylbutyryl] -2,3-dihydro [1,3,4] tiadiazol-2-karbonyl}arr.ino) -4-oxobutánovej kyseliny 46a mg vzorky zlúčeniny 45a sa hydrolyzuje podlá postupu B (pozri schéma XXIII) a získa sa 8 mg (30% výťažok) požadovanej látky. Analytická HPLC (kolóna Microsorb C18, acetonitril/voda s pufrom TFA) 12,85 minút, ľH NMR (500 MHz, deuterometanol) δ 0,98-1,1 (m, 6H), 1,28 (s, 9H), 2,20-2,31 (m, 1H), 2,40-2,48 (m, 1H), 2,6-2,72 (m, 1H) , 3,84 (s, 3H) , 4,18-4,26 (m, 1H) , 4,56-4,62 (m, 1H), 5,25-5,32 (m, 1H) , 6,24-6, 28 (m, 1H) , 6,98 (d,
2H), 7,85 (d, 2H).
Príprava 3-({5-terc-butyl-3-[2-(4-metoxybenzoylamino)-3-metylbutyryl]-2,3-dihydro[1,3,4]tiadiazol-2-karbonyl}amino)-4-oxobutánovej kyseliny 46b mg vzorky zlúčeniny 45b (zmes 3 diastereomérov) sa hydrolyzuje podľa spôsobu B (pozri schéma XXIII) a získa sa 22 mg (výťažok 84%) požadovaného produktu vo forme zmesi diastereomérov 3:2. Analytická HPLC (kolóna Microsorb kyano) 7,08, 7,78 minút. 1H NMR (500 MHz, deuterometanol) δ 0,98-1,08 (m, 4H), 1,09-1,12 (m, 2H), 1,29 a 1,31 (2 singlety, 9H), 2,23-2,30 (m, 0,5H), 2,36-2,55 (m, 1,5H), 2,62-2,72 (m, 1H) , 3,85 (s, 3H) ,
108
4,18-4,27 (m, 1H) , 4,58-4,65 (m, 1H) , 5,27-5, 33 (m, 1H) , 6,23-6,27 (m, 1H), 7,00 (d, 2H), 7,70-7,88 (m, 2H) .
Schéma XI
terc-butylester 1-(2-benzyloxykarbonylamino-2-metylpropionyl)pyrolidín-2-karboxylovej kyseliny (49)
K roztoku 2,00 g (12 mmol) terc-butylesteru prolínu (47) v 15 ml dichlórmetánu sa pridá 3,05 g (13 mmol) N-karbobenzyloxy-2-metylalanínu, 2,36 g (17 mmol) HOBT (2,36 g, 17 mmol) a 3,43 g (18 mmol) EDC a roztok sa mieša pri teplote miestnosti v dusíkovej atmosfére 48 hodín. Rozpúšťadlo sa odparí, surová látka sa rozpustí v etylacetáte a dvakrát sa premyje 0,5N roztokom hydrogensíranu sodného, dvakrát nasýteným roztokom hydrogenuhličitanu sodného a solankou a suší sa nad bezvodým síranom sodným, filtruje sa a odparí, pričom sa získa 4,68 g (100%) bielej pevnej látky. 1H NMR (500 MHz, deuterochloroform) δ 1,20-2,15
109 (m, 4H), 1,43 (s, 9H) , 1,59 (d, 6H) , 3,21-3,79 (m, 2H) , 4,35 (šs, 1H) , 4,82-5,19 (m, 3H) , 5,74 (šs, 1H) , 7,17-7,49 (m, 5H) . Analytická HPLC (kolóna C18) 10,66 minúty. LC-MS (ES+) m/e=391,3 (M+H).
terc-butylester 1-[2-(4-metoxybenzoylamino)-2-metylpropionyl]pyrolidín-2-karboxylovej kyseliny (50)
K roztoku 1,00 g (2,56 mmol) zlúčeniny 49 v 20 ml metanolu sa pridá 200 mg 10% paládia na uhlí a zmes sa mieša vo vodíkovej atmosfére 2 hodiny. Zmes sa filtruje cez 0,45 pm PTFE filter a rozpúšťadlo sa odparí vo vákuu, pričom sa získa bezfarebný olej. Olej sa rozpustí v 25 ml dichlórmetánu a pridá sa 660 μΐ (3,79 mmol) DIEA a 480 mg (2,8 mmol) p-anizoylchloridu. Roztok sa mieša 18 hodín pri teplote miestnosti v dusíkovej atmosfére. Rozpúšťadlo sa odparí vo vákuu a olej sa rozpustí v etylacetáte. Organická fáza sa premyje dvakrát 0,5N roztokom hydrogénsíranu sodného, vodou, dvakrát nasýteným roztokom hydrogenuhličitanu sodného a solankou. Organická fáza sa suší nad síranom sodným, filtruje sa a odparí, pričom sa získa biela pevná látka, ktorá sa čistí pomocou kolónovej chromatografie za elúcie zmesou dichlórmetánu a metanolu (99/1 až 98/2%) a získa sa 655 mg (výťažok 65%) zlúčeniny uvedenej v názve. TH NMR (500 MHz, deutero-
chloroform) δ 1,47 (s, 9H), 1,68-2,24 (m, 5H) , 1,80 (d, 6H),
3,55-3,68 (m, 1H) , 3,72-3,93 (m, 1H), 3,84 (s, 3H) , 4,43-4,55
(m, 1H) , 6,90 (d, 2H), 7,60 (šs, 1H), 7,77 (d, 2H) . Analytická
HPLC (kolóna C18) 8,98 minúty.
(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amid 1-[2-(4-metoxybenzoylamino) -2-metylpropionyl]pyrolidín-2-karboxylovej kyseliny (51)
K roztoku 325 mg (0,83 mmol) zlúčeniny 50 v 5 ml dioxánu sa pridá 463 μΐ (3,32 mmol) trietylaminu a 642 μΐ (3,32 mmol) TMStriflátu a roztok sa mieša 5 hodín pri 100°C, potom 18 hodín pri teplote miestnosti. Reakčná zmes sa zriedi vodou, pomocou nasýteného roztoku hydrogenuhličitanu sodného sa pH upraví na hodnotu 8 a extrahuje sa dietyléterom, suší sa nad bezvodým síranom
110 sodným, filtruje sa a odparí, pričom sa získa 230 mg (výťažok 83%) bielej pevnej látky, ktorá sa použije priamo v ďalšom kroku.
K roztoku 1,027 g (3,5 mmol) alylesteru (2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)karbámovej kyseliny (40) v 20 ml dichlórmetánu sa pridá 543 mg (3,48 mmol) DMBA a 280 mg (0,24 mmol) Pd(PPh3)4 a roztok sa mieša 20 minút pri teplote miestnosti v dusíkovej atmosfére. Pridá sa 818 mg (2,45 mmol) 1-[2-(4-metoxybenzoylamino)-2-metylpropionyl]pyrolidín-2-karboxylovej kyseliny v 5 ml dichlórmetánu a potom 0,534 g (3,95 mmol) HOBT a 738 mg (3,84 mmol) EDC. Reakčná zmes sa mieša v dusíkovej atmosfére 18 hodín pri teplote miestnosti. Rozpúšťadlo sa odparí, surová látka sa rozpustí v etylacetáte a dvakrát sa premyje 0,5N roztokom hydrogensíranu sodného, dvakrát nasýteným roztokom hydrogenuhličitanu sodného, filtruje sa a odparí, pričom sa získa žltá pevná látka. Po čistení pomocou flash kolónovej chromatografie za elúcie zmesou etylacetátu a hexánu 20/80 až 50/50% sa získa 760 mg (výťažok 61%) produktu vo forme svetložltej pevnej látky.
NMR (500 MHz, deuterometanol) δ 1,53 (d, 6H) , 1, 65-1,93 (m, 3H), 1,96-2,14 (m, 1H) , 2,60 (dd, 0,lH), 2,77 (dd, 0,85H), 2,94 (dd, 0,85H), 3,04-3,11 (m, 0,2H), 3, 42-3,52 (m, 1H) , 3,57-3,67 (m, 1H), 3,84 (s, 3H) , 4,38-4,76 (m, 3H) , 4,84 (d, 1H) , 5,64-5,70 (m, 1H), 6, 96-7,03 (m, 2H) , 7,23-7,43 (m, 5H) , 7,78-7,97 (m, 2H). Analytická HPLC (kolóna C18) 13,32, 14,37 minúty, LC-MS (ES+) m/e = 524,3 (M+H) .
Príprava 3-({1-[2-(4-metoxybenzoylamino)-2-metylpropionyl]pyrolidín-2-karbonyl}amino)-4-oxobutánovej kyseliny (52) mg (0,14 mmol) vzorky zlúčeniny 51 spôsobu C (pozri schéma XXIII) a získa sa zlúčeniny uvedenej v názve. Analytická 6,79 minúty. LC-MS (ES+) m/e = 434,3 (M+H).
sa hydrolyzuje podía mg (výťažok 60%) HPLC (kolóna C18) lll
Schéma XII
60, X=C1, Y=NH2 t
55, X=H, Y=MeO 59, X=CI, Y=NH2
terc-butylester 1-[2-(4-metoxybenzoalamino)-3-metylbutyryl]pyrolidín-2-karboxylovej kyseliny (54)
K suspenzii 2,011 g (7,44 mmol) H-val-pro-OtBu.HCI v 20 ml dichlórmetánu sa pridá 3,2 ml (18,4 mmol) DIEA a potom roztok 1,26 g (7,4 mmol) 4-metoxybenzoylchloridu v 5 ml dichlórmetánu. Roztok sa mieša 1 hodinu v dusíkovej atmosfére pri teplote miestnosti a potom sa odparí. Získaný olej sa rozpustí v etylacetáte a premyje sa dvakrát 0,5N roztokom hydrogensíranu draselného, dvakrát nasýteným roztokom hydrogénuhličitanu sodného a solankou, potom sa odparí vo vákuu a získa sa 2,814 g (výťažok 94%) zlúčeniny uvedenej v názve vo forme bielej pevnej látky.
112
NMR (500 MHz, deuterochloroform) δ 1,05 (dd, 6H) , 1,46 (s,
9H), 1,88-2,29 (m, 5H) , 3,65-3, 74 (m, 1H) , 3,81-3,92 (m, 1H) ,
3,85 (s, 3H), 4,32-4,42 (m, 1H) , 4,81-4,91 (m, 1H) , 6,79-6,86 (m, 1H), 6,91 (d, 2H) , 7,78 (d, 2H) . Analytická HPLC (kolóna kyano) 10,18 minúty.
(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amid 1-(2-(4-metoxybenzoylamino)-3-metylbutyryl]pyrolidín-2-karboxylovej kyseliny (56)
1,079 g (2,67 mmol) vzorky zlúčeniny 54 sa rozpustí v 40 ml 15% kyseliny trifluóroctovej v dichlormetáne a zmes sa mieša 4 hodiny pri teplote miestnosti. Rozpúšťadlo sa odparí vo vákuu a získa sa 0,93 g (100%) zlúčeniny 55 vo forme bielej pevnej látky, ktorá sa použije v ďalšom kroku.
K roztoku 1,796 g (6,17 mmol) zlúčeniny 40 v 20 ml dichlórmetánu sa pridá 1,119 g (7,17 mmol) DMBA a 0, 683 g (0,59 mmol) Pd(PPh3)4 a roztok sa mieša 20 minút pri teplote miestnosti. Pridá sa roztok 0, 928 g (2,67 mmol) zlúčeniny 55 v 17 ml dichlórmetánu a 2 ml dimetylformamidu, potom 0,811 g (6,01 mmol) HOBT a 1,16 g (6,04 mmol) EDC. Reakčná zmes sa mieša v dusíkovej atmosfére 18 hodín pri teplote miestnosti. Rozpúšťadlo sa odparí a zvyšok sa premyje dvakrát 0,5N roztokom hydrogensíranu sodného, dvakrát nasýteným roztokom hydrogenuhličitanu sodného a solankou a suší sa nad bezvodým síranom sodným, filtruje sa a odparí, pričom sa získa žltá pevná látka. Po čistení pomocou flash chromatografie za elúcie zmesou etylacetátu a dičhlórmetánu (10/90 až 40/60) sa získa 910 mg (63%) zlúčeniny uvedenej v názve vo forme svetložltej pevnej látky. :H NMR (500 MHz, deuterochloroform) δ 0,96 (dd, 6H) , 1,84-2,19 (m, 4H) , 2,25-2,38 (m,
1H), 2,45 (dd, 1H) , 2,80-2, 98 (m, 1H) , 3, 60-3,72 (m, 1H) , 3,82-3,95 (m, 1H), 3,86 (s, 3H) , 4,26-4,95 (m, 6H) , 5,41 (s, 0,2H), 5,53 (d, 0,8H), 6, 67-6, 77 (m, 1H) , 6, 88-6, 99 (d, 2H) , 7,22-7,57 (m, 5H), 7,71-7,82 (d, 2H) . Analytická HPLC (kolóna kyano) (zmes 2 diastereomérov) 9,21 minúty. LC-MS (ES+) m/e = 538,3 (M+H).
3-({1-[2-(4-Metoxybenzoylamino)-3-metylbutyryl]pyrolidín-2-kar113 bonyl}amino)-4-oxobutánová kyselina (57)
125 mg (0,23 mmol) vzorky zlúčeniny 56 sa hydrolyzuje podľa spôsobu A (pozri schéma XXIII) a získa sa 60 mg (výťažok 58%) zlúčeniny uvedenej v názve: Analytická HPLC 5,71 minúty. LC-MS (ES+) m/e = 448,2 (M+H).
Príprava 4-amino-3-chlórbenzoovej kyseliny
Suspenzia 4,82 g (31,58 mmol) 4-amino-3-chlórbenzonitrilu sa v 140 ml 6N roztoku kyseliny chlorovodíkovej zohrieva do varu pod spätným chladičom. Zrazenina sa rozpustí zohrievaním a získa sa bezfarebný roztok. Po ďalšom zohrievaní sa roztok zakalí. Po 9 hodinách sa reakčná zmes ochladí na teplotu miestnosti. Získaná zrazenina sa filtruje, potom sa rozpustí v tetrahydrofuráne a rozpúšťadlo sa odparí. Zvyšok sa opakovane odparí z toluénu a získa sa 3,18 g (59%) bielej pevnej látky. XH NMR (500 MHz, deuterometanol: deuterochloroform 1:4) δ 6,80 (d, 1H) , 7,75 (dd, 1H), 7,94 (d, 1H). Analytická HPLC (kolóna kyano) 8,73 minúty.
terc-butylester 1-[2-(4-amino-3-chlórbenzoylamino)-3-metylbutyryl]pyrolidín-2-karboxylovej kyseliny (58)
K suspenzii 1,707 g (6,31 mmol) zlúčeniny 53 v 25 ml dichlórmetánu sa pri 0°C pridá 3,2 ml (18,4 mmol) DIEA, potom roztok 1,298 g (7,56 mmol) 4-amino-3-chlórbenzoovej kyseliny, 1,005 g (7,44 mmol) HOBT a 1,456 g (7,58 mmol) EDC. Získaná zmes sa mieša 15 minút pri 0°C, potom sa nechá zohriať na teplotu miestnosti a mieša sa 18 hodín. Rozpúšťadlo sa odparí a získaný olej sa rozpustí v etylacetáte, premyje sa dvakrát 0,5N roztokom hydrogensíranu sodného, dvakrát nasýteným roztokom hydrogenuhličitanu sodného a solankou a získa sa 2,68 g bielej pevnej látky. Po čistení pomocou flash chromatografie s použitím zmesi metanolu a dichlórmetánu (1/99 až 2/98) ako eluentu sa získa 2,04 g (výťažok 76%) zlúčeniny 58 vo forme bielej pevnej látky. TH NMR (500 MHz, deuterochloroform) δ 1,05 (dd, 6H) , 1,47 (s, 9H), 1,86-2,2 (m, 5H), 3, 62-3, 76 (m, 1H) , 3, 78-3, 94 (m, 1H) , 4,39 (dd,
114
1Η), 4,79-4,89 (dd, 1H) , 6,73 (d, 1H) , 6,78 (d, 1H) , 7,52 (dd, 1H) , 7,75 (d, 1H) . Analytická HPLC (kolóna kyano) 16,18 minúty. LC-MS (ES) m/e = 424,3 (M+H).
(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amid 1-[2-(4-amino-3chlórbenzoylamino)-3-metylbutyryl]pyrolidín-2-karboxylovej kyseliny (60)
0,632 g (1,49 mmol) vzorky zlúčeniny 58 sa rozpustí v 20 ml 50% kyseliny trifluóroctovej v dichlormetáne a roztok sa mieša 2 hodiny pri teplote miestnosti. Zvyšná kyselina trifluóroctová sa odstráni opakovaným odparením z dichlórmetánu (3x) a získa sa produkt vo forme bielej pevnej látky.
385 mg (1,04 mmol) vzorky sa nechá reagovať so zlúčeninou 40 pomocou postupu opísaného na prípravu zlúčeniny 56. Izoluje sa 265 mg (45%) zlúčeniny uvedenej v názve (60) vo forme žltej pevnej látky. 1H NMR (500 MHz, deuterometanol) δ 0,89-1,12 (m, 6H) , 1,72-2,26 (m, 5H) , 2,49 (dd, 0,25H), 2,60 (dd, 0,7H), 2,80 (dd, 0,75H), 2, 96-3, 09 (m, 0,3H), 3, 64-3,77 (m, 1H) , 3,94-4,10 (m, 1H), 4,20-4,74 (m, 4H), 4,76-4,95 (m, 1H), 5,51 (s, 0,5H), 5,61-5,70 (m, 1,5H), 6,79 (dd, 1H), 7,23-7,43 (m, 5H), 7,48-7,61 (m, 1,4H), 7,68-7,81 (m, 1H), 7,99-8,12 (m, 0,6H).
Analytická HPLC (kolóna kyano) (zmes 2 diastereomérov) 14,90, 15,20 minúty. LC-MS (ES+) m/e = 557,2 (M+H).
3-((1-[2-(4-Amino-3-chlórbenzoylamino)-3-metylbutyryl]pyrolidín-2-karbonylJamino)-4-oxobutánová kyselina (61) mg (0,08 mmol) vzorky zlúčeniny 60 sa hydrolyzuje podľa spôsobu A (pozri schému XXIII) a získa sa 30 mg (výťažok 80%) zlúčeniny uvedenej v názve: XH NMR (500 MHz, deuterometanol) δ 1,06 (dd, 6H), 1,78-2,38 (m, 5H) , 2,38-2,86 (m, 2H) , 3,62-3,83 (m, 1H), 4,12-4,76 (m, 4H) , 7,04-7,21 (m, 1H) , 7,58-8,01 (m, 2H). Analytická HPLC 8,16 minúty. LC-MS (ES+) m/e = 467,3 (M+H).
115
Schéma XIII
terc-butylester 1-[2-(4-hydroxy-3,5-dimetylbenzoylamino)-3-metylbutyryl]-pyrolidín-2-karboxylovej kyseliny (63)
K roztoku 600 mg (1,22 mmol) zlúčeniny 62 (pripravenej zo zlúčeniny 53 a Fmoc-Cl) v 10 ml bezvodého dimetylformamidu sa pridajú 3 ml dietylamínu. Roztok sa mieša v dusíkovej atmosfére pri teplote miestnosti 3 hodiny a rozpúšťadlo sa odparí. Získaný olej sa rozpustí v 8 ml dichlórmetánu a pridá sa 0,302 g (1,82 mmol) 3,5-dimetyl-4-hydroxybenzoovej kyseliny, 338 mg (2,5 mmol) HOBT a 0, 456 g (2,43 mmol) EDO a roztok sa mieša 18 hodín v dusíkovej atmosfére pri teplote miestnosti. Rozpúšťadlo sa odparí vo vákuu a získaný olej sa rozpustí v etylacetáte, premyje sa dvakrát 0,5N roztokom hydrogensíranu sodného, dvakrát nasýteným roztokom hydrogenuhličitanu sodného a solankou a získa sa 0,80 g surového produktu vo forme bielej pevnej látky. Po čistení pomocou flash chromatografie za elúcie zmesou metanolu a dichlórmetánu (1/99 až 2/98%) sa získa 380 mg (výťažok 75%) zlúčeniny uvedenej v názve vo forme bielej pevnej látky. 1H NMR (500 MHz, deuterochloroform) δ 1,06 (dd, 6H), 1,47 (s, 9H), 1,90-2,32 (m, 5H) , 2,24 (s, 6H) , 3, 65-3, 75 (m, 1H) , 3,84-3,92 (m, 1H), 4,36-4,42 (m, 1H) , 4,82-4,88 (m, 1H) , 5,53-5,61
116 (m, 1H), 6,77-6,85 (m, 1H), 7,42 (s, 2H) . Analytická HPLC (kolóna kyano) 17,53 minúty. LC-MS (ES+) m/e = 419,3 (M+H).
(2-benzyloxy-5-oxo-tetrahydrofuran-3-yl)amid 1-[2-(4-hydroxy-3,5-dimetylbenzoylamino)-3-metylbutyryl]pyrolidín-2-karboxylovej kyseliny (64)
Zlúčenina sa pripraví zo zlúčeniny 63 a zlúčeniny 40 pomocou spôsobu použitého na prípravu zlúčeniny 56 a získa sa 352 mg (72%) zlúčeniny uvedenej v názve (64) vo forme svetložltej pevnej látky. 1H NMR (500 MHz, deuterochloroform) δ 0,83-1,28 (m,
6H), 1,66-2,37 (m, 3H) , 2,23 (s, 6H), 2,48-2,54 (m, 0,2H), 2,61 (ddd, 0,8H), 2,72 (ddd, 0,9H), 3,01-3,09 (m, 1H), 3,66-3,76 (m, iH), 3,95-4,07 (m, 1H) , 4,48-4,73 (m, 3H) , 4,75-4,92 (m, 1H) ,
5,45-5,48 (m, 0,lH), 5,61-5,64 (m, 0,lH), 5,64-5,70 (m, 0,8H),
7,21-7,62 (m, 6H), 7,88-8,04 (m, 1H) . Analytická HPLC (kolóna kyano)(zmes 2 diastereomérov) 17,73 minúty. LC-MS (ES+) m/e=552,3 (M+H).
3-({1-[2-(4-Hydroxy-3,5-dimetylbenzoylamino)-3-metylbutyryl]pyrolidín-2-karbonylJamino)-4-oxobutánová kyselina (65)
160 mg (0,29 mmol) vzorky spôsobu A (pozri schému XXIII) zlúčeniny uvedenej v názve. 10,28 minúty. LC-MS (ES+) m/e = zlúčeniny 64 sa hydrolyzuje podía a získa sa 13,1 mg (výťažok 10%) Analytická HPLC (kolóna kyano) 462,2 (M+H).
Schéma XIV
117 terc-butylester 1-[2-(2-9H-fluoren-9-ylacetylamino)-3,3-dimetylbutyryl]pyrolidín-2-karboxylovej kyseliny (66)
K roztoku 1,033 g (6,0 mmol), II schéma 5) H-pro-OtBu (53) v 20 ml dichlórmetánu a 5 ml dimetylformamidu sa pridá 2,337 g (6,60 mmol, I, schéma 5) Fmoc-tLeu-OH, 1,63 g (12,1 mmol) HOBT a 2,30 g (12,0 mmol) EDC a roztok sa mieša pri teplote miestnosti v dusíkovej atmosfére 18 hodín. Rozpúšťadlo sa odparí vo vákuu a zvyšok sa rozpustí v etylacetáte, potom sa premyje dvakrát 0,5N roztokom hydrogensíranu sodného, dvakrát nasýteným roztokom hydrogénuhličitanu sodného a solankou. Organická vrstva sa suší nad bezvodým síranom sodným a odparí sa, pričom sa získa 3,65 g svetložltej pevnej látky. Po čistení pomocou flash chromatografie na silikagéli za elúcie zmesou etylacetátu a hexánu (10/90 až 20/80) sa získa 2,25 g (výťažok 74%) zlúčeniny uvedenej v názve. XH NMR (500 MHz, deuterochloroform) δ 1,09 (s, 9H), 1,47 (s, 9H), 1,79-2,28 (m, 3H) , 3, 62-3,72 (m, 1H) , 3, 76-3,83 (m, 1H), 4,18-4,43 (m, 4H) , 5,48-5,67 (m, 1H) , 7,28-7,44 (m, 4H) , 7,55-7,64 (m, 2H), 7,72-7,82 (m, 2H) . Analytická HPLC (kolóna kyano) 11,95 minúty. LC-MS (ES+) m/e = 507,3 (M+H).
terc-butylester 1-[2-(4-metoxybenzoylamino)-3,3-dimetylbutyryl]pyrolidín-2-karboxylovej kyseliny (67)
K roztoku 0,503 g (0,99 mmol) zlúčeniny 66 v 8 ml dimetylformamidu sa pridá 2,5 ml dietylamínu a roztok sa mieša 1 hodinu pri teplote miestnosti a rozpúšťadlo sa odparí. Zvyšok sa trikrát odparí z dichlórmetánu. Získaný olej sa rozpustí v 9 ml dichlórmetánu a pridá sa 260 μΐ (1,49 mmol) DIEA a 190 mg (1,05 mmol) 4-metoxybenzoylchloridu. Roztok sa mieša 18 hodín v dusíkovej atmosfére a rozpúšťadlo sa odparí vo vákuu. Zvyšok sa rozpustí v etylacetáte a dvakrát sa premyje 0,5N roztokom hydrogensíranu sodného, dvakrát nasýteným roztokom hydrogenuhličitanu sodného a solankou a potom sa suší nad bezvodým síranom sodným a odparí sa, pričom sa získa 0,529 g bielej pevnej látky. Po čistení pomocou flash chromatografie na silikagéli s použitím
118 zmesi metanolu a dichlórmetánu (1/99 až 2/98%) ako eluentu sa získa 2,25 g (74%) zlúčeniny uvedenej v názve. 1H NMR (500 MHz, deuterometanol) δ 1,01 (s, 1,4H), 1,11 (s, 7,6H), 1,73-2,25 (m, 4H), 2,47-2,77 (m, 1H) , 2,81 (dd, 0,7H), 2,91-3,11 (m, 0,3H), 3,61-4,03 (m, 3H) , 3,84 (s, 3H) , 4,29-4,49 (m, 1H) , 4,49-5,00 (m, 5H), 5,46 (s, 0,15H), 5,58-5,73 (m, 0,85H), 6,94-7,04 (m, 2H) , 7,27-7,41 (m, 4H) , 7,61-7,73 (m, 1H) , 7,74-7,84 (m, 2H) .
Analytická HPLC (kolóna kyano) 13,10 minúty.
(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amid 1-[2-(4-metoxybenzoylamino)-3,3-dimetylbutyryl]pyrolidín-2-karboxylovej kyseliny (68)
K roztoku 0,90 g (1,74 mmol) zlúčeniny 67 v 25 ml dichlórmetánu sa pridá 2,1 ml (18,0 mmol) 2,6-lutidínu a 2,3 ml (11,9 mmol) TMS-triflátu a reakčná zmes sa mieša 1,5 hodiny pri teplote miestnosti v dusíkovej atmosfére. Získaná zmes sa zriedi dichlórmetánom, dvakrát sa premyje 10% roztokom hydrogenuhličitanu sodného a solankou a suší sa nad bezvodým síranom sodným, filtruje sa a odparí. Zvyšok sa rozpustí v dichlórmetáne, potom reaguje s 0,6 ml (3,5 mmol) DIEA a 0,355 g (2,09 mmol) 4-metoxybenzoylchloridu a nechá sa v dusíkovej atmosfére, pri teplote miestnosti miešať 18 hodín. Surový produkt sa čistí pomocou flash chromatografie za elúcie zmesou dichlórmetánu a metanolu 99/1, pričom sa získa 274 mg (výťažok 28%) zlúčeniny uvedenej v názve. 1H NMR (500 MHz, deuterometanol) δ 1,01 (s, 1,4H), 1,11 (s, 7,6H), 1,73-2,25 (m, 4H) , 2,47-2,77 (m, 1H), 2,81 (dd, 0,7H), 2,91-3,11 (m, 0,3H), 3,61-4,03 (m, 3H) , 3,84 (s, 3H) , 4,29-4,49 (m, 1H), 4,49-5, 00 (m, 5H), 5,46 (s, 0,15H), 5,58-5,73 (m, 0,85H), 6,94-7,04 (m, 2H), 7,27-7,41 (m, 4H), 7,61-7,73 (m, 1H) , 7,74-7,84 (m, 2H) . Analytická HPLC (kolóna kyano) (zmes 2 diastereomérov) 17,03, 17,39 minúty. LC-MS (ES+) m/e = 552,3 (M+H).
3-({1-[2-(4-Metoxybenzoylamino)-3,3-dimetylbutyryl]pyrolidín-2— -karbonyl}amino)-4-oxobutánová kyselina (69)
119
117 mg (0,21 mmol) vzorky zlúčeniny 68 sa hydrolyzuje podľa spôsobu C (pozri schému XXIII) a získa sa 40 mg (výťažok 41%) zlúčeniny uvedenej v názve. Analytická HPLC 7,16 minút, LC-MS (ES+) m/e = 462,3 (M+H) .
Schéma XV
benzylester 1-(2-terc-butoxykarbonylamino-3,3-dimetylbutyryl)pyrolidín-2-karboxylovej kyseliny (70)
K suspenzii 2,00 g (8,66 mmol) H-pro-OBzl.HC1 v 20 ml dichlórmetánu sa pridá 2,25 ml (12,92 mmol) DIEA, pričom vzniká bezfarebný roztok. Pridá sa 1,95 g (9,52 mmol) Boc-tLeu-OH,
1,76 g (13,03 mmol) HOBT a 2,49 g (12,95 mmol) EDC a roztok sa mieša v dusíkovej atmosfére pri teplote miestnosti 18 hodín. Rozpúšťadlo sa odparí vo vákuu, zvyšok sa rozpustí v etylacetáte a premyje sa vodou, dvakrát 0,5N roztokom hydrogensíranu sodného, dvakrát nasýteným roztokom hydrogénuhličitanu sodného a solankou. Organická fáza sa suší nad bezvodým síranom sodným a odparí sa, pričom sa získa 3,57 g (výťažok 99%) zlúčeniny uvedenej v názve. ΧΗ NMR (500 MHz, deuterochloroform) δ 0,99 (s,
9H), 1,40 (s, 9H) , 1,88-2,33 (m, 4H) , 3, 58-3,90 (m, 2H) , 4,21-4,35 (d, 1H), 4,53-4,66 (m, 1H) , 5,04-5,38 (m, 3H) , 7,14-7,42 (m, 5H). LC-MS (ES+) m/e = 419,4 (M+H).
terc-butylester {1-[2-(2-benzyloxy-5-oxo-tetrahydrofuran-3-yl120 terc-butylester {1-[2-(2-benzyloxy-5-oxo-tetrahydrofuran-3-ylkarbamoyl)-pyrolidín-l-karbonyl]-2,2-dimetylpropyl}karbámovej kyseliny (71)
871 mg (2,08 mmol) vzorky zlúčeniny 70 sa rozpustí v 15 ml metanolu a pridá sa 200 mg 10% paládia na uhli. Suspenzia sa mieša 1 hodinu vo vodíkovej atmosfére, potom sa filtruje cez kremelinu a rozpúšťadlo sa odparí. Získaný zvyšok reaguje so zlúčeninou 40 podľa postupu použitého na prípravu zlúčeniny 56, pričom sa získa 889 mg (výťažok 71%) zlúčeniny uvedenej v názve 71. XH NMR (500 MHz, deuterochloroform) δ 0,93 (s, 9H), 1,44 (s, 9H), 1,78-2,18 (m, 4H) , 2,29-2,49 (m, 2H) , 2,76-3, 04 (m, 1H) , 3, 50-3,70 (m, 1H) , 3,70-3,85 (m, 1H) , 4,20-4,37 (m, 1H) , 4,49-4,78 (m, 3H), 4,78-4,98 (m, 1H) , 5,12-5,26 (m, 1H) , 5,40-5,59 (m, 1H), 7,10-7,78 (m, 5H). Analytická HPLC (kolóna kyano) 11,17 minúty. LC-MS (ES+) m/e = 518,3 (M+H).
(2-benzyloxy-5-oxo-tetrahydrofuran-3-yl)amid 1-[2-(4-amino-3—
-chlórbenzoylamino)-3,3-dimetylbutyryl]pyrolidín-2-karboxylovej kyseliny (72)
Roztok 456 mg (0,088 mmol) zlúčeniny 71 v 20 ml dichlórmetánu reaguje s 5 ml bezvodej kyseliny trifluóroctovej, potom sa mieša v dusíkovej atmosfére pri teplote miestnosti 1 hodinu a odparí sa do sucha. Zvyšok sa trikrát opakovane odparí z dichlórmetánu, potom sa suší vo vákuu. Získaný zvyšok sa rozpustí v 20 ml dichlórmetánu, ochladí sa na 0°C, potom reaguje s 1,3 ml (8 ekvivalentov, 2,46 mmol) DIEA, potom s 202 mg (1,17 mmol) 4-amino-3-chlórbenzoovej kyseliny, 183 mg (1,35 mmol) HOBT a 279 mg (1,45 mmol) EDC. Získaná zmes sa nechá zohriať na teplotu miestnosti a mieša sa 18 hodín. Rozpúšťadlo sa odparí vo vákuu a zvyšok sa rozpustí v etylacetáte, potom sa premyje trikrát destilovanou vodou, dvakrát 0,5N roztokom hydrogensíranu sodného, dvakrát nasýteným roztokom hydrogenuhličitanu sodného a solankou. Organická vrstva sa suší nad síranom sodným, filtruje sa a odparí do sucha, pričom sa získa zvyšok, ktorý sa čistí porno121 cou flash chromatografie za elúcie zmesou dichlórmetánu a metanolu (99/1 až 97/3%). Získa sa 285 mg (výťažok 57%) zlúčeniny uvedenej v názve (72) vo forme žltej pevnej látky. 1H NMR (500 MHz, deuterometanol) δ 0,91-1,24 (m, 9H), 1,70-2,27 (m, 4H), 2,47-2,85 (m, 1,5H), 2,99-3,13 (m, 0,5H), 3,39-3,53 (m, 0,5H), 3,60-3,78 (m, 1,5H), 3,85-4,04 (m, 1H), 4,24-4,47 (m, 2H), 4,53-4,97 (m, 4H), 5,46 (s, 0,3H), 3,88-4,02 (m, 0, 1H) , 5,60-5,69 (m, 0,6H), 6,80 (d, 1H) , 7,22-7,77 (m, 7H) . Analytická HPLC (kolóna kyano)(zmes 2 diastereomérov) 15,90, 16,23 minúty. LC-MS (ES+) m/e = 571,2 (M+H) .
3-({1-[2-(4-Amino-3-chlórbenzoylamino)-3,3-dimetylbutyryl]pyrolidín-2-karbonyl}amino)-4-oxobutánová kyselina (73) mg (0,07 mmol) vzorky zlúčeniny 72 sa hydrolyzuje podľa spôsobu A (pozri schému XXIII) a získa sa 25 mg (výťažok 74%) zlúčeniny uvedenej v názve. Analytická HPLC (kolóna kyano) 10,66 minúty. LC-MS (ES+) m/e = 481,3 (M+H).
Schéma XVI
76-93
122 terc-butylester {2-[2-(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofurán-3-ylkarbamoyl)pyrolidin-l-yl]-l-metyl-2-oxoetyl}karbámovej kyseliny (75)
K roztoku 6,69 g (23,0 mmol) zlúčeniny 40 v bezvodom dichlórmetáne sa pridá 3,97 g (25,4 mmol) 1,3-dimetylbarbiturovej kyseliny (DMBA) a 1,12 g (0,97 mmol) Pd(PPh3)4. Roztok sa mieša 15 minút pri teplote miestnosti v dusíkovej atmosfére, ochladí sa na 0°C, potom sa pridá 5,087 g (17,8 mmol) Boc-ala-pro-OH (BaChem), 3,60 g (26,7 mmol) HOBT a 5,12 g (26,7 mmol) EDC. Získaný roztok sa nechá zohriať na teplotu miestnosti a mieša sa 18 hodín v dusíkovej atmosfére. Rozpúšťadlo sa odparí vo vákuu a zvyšok sa rozpustí v etylacetáte, potom sa dvakrát premyje 0,5N roztokom hydrogensíranu sodného, dvakrát nasýteným roztokom hydrogénuhličitanu sodného a solankou. Organická vrstva sa suší nad bezvodým síranom sodným a odparí sa, pričom sa získa 12,23 g oranžového oleja. Po čistení pomocou flash chromatografie na silikagéli s použitím zmesi dichlórmetánu a etylacetátu (80/20 až 60/40) ako eluentu sa získa 7,28 g (výťažok 86%) zlúčeniny uvedenej v názve (75) vo forme žltej pevnej látky. 1H NMR (500 MHz, deuterometanol) δ 1,19-1,31 (m, 3H) , 1,42 (s, 9H) ,
1,69-2,29 (m, 4H) , 2,45-2,67 (m, 0,9H), 2,71-2,86 (m, 0,5H),
2,99-3,10 (m, 0,6H), 3,49-3, 84 (m, 2H) , 4,24-4,45 (m, 2,5H),
4,57-4,73 (m, 1,5H), 4,76-4,92 (m, 1H), 5,45 (s, 0,45H), 5,63-5,68 (m, 0,55H), 7,25-7,40 (m, 5H) . Analytická HPLC (kolóna kyano)(zmes 2 diastereomérov) 15,99, 16,33 minúty. LC-MS (ES+) m/e = 476,3 (M+H).
(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amid 1-[2-(4-amino-3-chlórbenzoylamino)propionyl]pyrolidín-2-karboxylovej kyseliny (76)
123
1,899 g (3,99 mmol) vzorky zlúčeniny 75 v 20 ml dichlórmetánu reaguje s 5 ml bezvodej kyseliny trifluóroctovej, potom sa mieša 1 hodinu v dusíkovej atmosfére pri teplote miestnosti a odparí sa do sucha. Zvyšok sa trikrát opakovane odparí z dichlórmetánu a potom sa suší vo vákuu. Získaný zvyšok sa rozpustí v 20 ml dichlórmetánu, ochladí sa na 0°C, potom reaguje s 5,6 ml (8 ekvivalentov, 32,1 mmol) DIEA, 0,910 g (5,3 mmol) 4-amino-3— chlórbenzoovej kyseliny, 0,824 g (6,1 mmol) HOBT a 1,197 g (6,23 mmol) EDO. Získaná zmes sa zohreje na teplotu miestnosti a mieša sa 18 hodín. Rozpúšťadlo sa odparí vo vákuu a zvyšok sa rozpustí v etylacetáte, potom sa premyje trikrát destilovanou vodou, dvakrát 0,5N roztokom hydrogensíranu sodného, dvakrát nasýteným roztokom hydrogenuhličitanu sodného a solankou. Organická vrstva sa suší nad síranom sodným, filtruje sa a odparí, pričom sa získa zvyšok, ktorý sa čistí pomocou flash chromatografie s použitím zmesi dichlórmetánu a metanolu (99/1 až 97/3) ako eluentu. Získa sa 1,221 g (výťažok 58%) zlúčeniny uvedenej v názve vo forme bielej pevnej látky. 1H NMR (500 MHz, deuterochloroform) δ 1,15 (d, 0,25H), 1,29-1,60 (m, 2,75H), 2,41-2,54 (m, 0,5H), 2,55-2,70 (m, 0,5H), 2,77 (dd, 0,5H), 3,03 (ddd,
0,5H), 3,59-3,75 (m, 1H), 3,75-3,98 (m, 1H), 4,26-5,01 (m, 5H),
5,41-5,57 (m, 1H) , 5, 60-5,76 (m, 0,5H), 6, 70-6, 92 (m, 0,5H), 7,15-7,48 (m, 5H) , 7,48-7, 68 (m, 1H) , 7, 68-7,88 (m, 1H) , 8,15-8,34 (m, 1H) . Analytická HPLC (kolóna kyano) (zmes 2 diastereomérov) 14,44, 14,89 minúty. LC-MS (ES+) m/e = 529,3 (M+H).
O
(2-benzyloxy-5-oxo-tetrahydrofuran-3-yl)amid 1-[2-(4-metoxy-3,5— dimetylbenzoylamino)propionyl]pyrolidín-2-karboxylovej kyseliny (77)
Zlúčenina sa syntetizuje zo zlúčeniny 75 a 3,5-dimetyl-4-me124 toxybenzoovej kyseliny podľa postupu použitého na prípravu zlúčeniny 76. Získa sa 1,18 g (44%) zlúčeniny uvedenej v názve. XH NMR (500 MHz, deuterometanol) δ 1,40 (m, 3H) , 1,67-2,41 (m, 4H), 2,28 (s, 6H), 2,48 (ddd, 0,5H), 2,62 (dd, 0,5H), 2,78 (ddd, 0,5H), 3,04 (ddd, 0,5H), 3, 62-3,94 (m, 3H), 3,71 (s, 3H) , 4,21-4,51 (m, 2H), 4,59-4,85 (m, 4H) , 5,46 (s, 0,25H), 5,52 (s, 0,25H), 5,63 (d, 0,4H), 5,67 (d, O,1H), 7,17-7,45 (m, 5H), 7,45-7,65 (m, 2H) . Analytická HPLC (kolóna kyano) (zmes 2 diastereomérov) 15,06, 15,39 minúty. LC-MS (ES+) m/e = 538 (M+H).
Príprava 4-acetylamino-3-chlórbenzoovej kyseliny
K roztoku 4-amino-3-chlórbenzoovej kyseliny (10,0 g, 58,3 mmol) v 100 ml bezvodého tetrahydrofuránu sa pridá 20,7 ml (291,1 mmol) acetylchloridu a roztok sa mieša pri teplote miestnosti 48 hodín. Rozpúšťadlo sa odparí a produkt sa zráža v hexáne, odfiltruje sa a získa sa 11,73 g (výťažok 94%) zlúčeniny uvedenej v názve vo forme bielej pevnej látky. XH NMR (500 MHz, deuterometanol) δ 2,28 (s, 3H) , 7,92 (dd, 1H), 7,99-8,16 (m, 2H). Analytická HPLC (kolóna kyano) 7,84 minút.
(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amid 1-[2-(4-acetylamino-3-chlórbenzoylamino)propionyl]pyrolidín-2-karboxylovej kyseliny (78)
Zlúčenina sa pripraví zo zlúčeniny 75 a 4-acetylamino-3chlórbenzoovej kyseliny podľa postupu použitého na prípravu zlúčeniny 76. Získa sa 146 mg (výťažok 19%) zlúčeniny uvedenej v názve. ľH NMR (500 MHz, deuterometanol) δ 1,28-1,52 (m, 3H),
1,68-2,38 (m, 4H) , 2,20 (s, 3H), 2,41-2,88 (m, 1,5H), 2,96-3,10 (m, 0,5H), 3,43-3,75 (m, 1H), 3,80-3,96 (m, 1H), 4,25-5,00 (m, %H), 5,42-5,54 (m, 0,5H), 5,63-5,78 (m, 0,5H), 7,13-7,48 (m,
125
0,5Η), 7,79-8,14 (m, 2,5Η), 8,56-8,70 (m, 0,5Η). Analytická HPLC (kolóna kyano)(zmes 2 diastereomérov) 8,64 minúty (ES+) m/e=571,2 (M+H).
(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amid 1-[2-(3-izopropoxybenzoylamino)propionyl]pyrolidín-2-karboxylovej kyseliny (79)
Zlúčenina sa pripraví zo zlúčeniny 75 a 3-izopropoxybenzoovej kyseliny podlá postupu použitého na prípravu zlúčeniny 76. Získa sa 120 mg (výťažok 58%) zlúčeniny uvedenej v názve. 1H NMR
(500 MHz, deuterometanol) δ 1,27 (d, 6H), 1,33-1,52 (m, 3H) ,
1,69-2,31 (m, 4H), 2,49 (dd, 0,3H), 2,63 (dd, 0,7H), 2,78 (dd,
0,7H), 3, 03 (dd, 0,3H), 3, 43-3,73 (m, 1H) , 3, 78-3, 94 (m, 1H),
4,27-4,47 (m, 2H), 4,47-4 1,87 (m, 4H), 5,47 (s, 0,7H), 5,53 (d,
0,3H), 5,64 (d, 0,8H), 5,72 (d, 0,2H), 6,98-7,12 (m, 1H), 7,19-7,47 (m, 9H) . Analytická HPLC (kolóna kyano) (zmes 2 diastereomérov) 14,54, 14,85 minúty. LC-MS (ES+) m/e = 538 (M+H).
{2-[2-(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-ylkarbamoyl)pyrolidin-1-yl]-l-metyl-2-oxoetyl}amid chinoxalín-2-karboxylovej kyseliny (80)
Zlúčenina sa pripraví zo zlúčeniny 75 a 2-chinoxalínkarboxylovej kyseliny podľa postupu opísaného na prípravu zlúčeniny 76.
Získa sa 122 mg (výťažok 60%) zlúčeniny uvedenej v názve. ľH NMR (500 MHz, deuterometanol) δ 1,12-1,67 (m, 3H), 1,68-2,34 (m, 4H),
126
2,35-2,70 (m, 0,85H), 2,70-2,95 (m, 0,75H), 3,06 (dd, 0,4H),
3,41-3,49 (m, 2H) , 4,18-5,03 (m, 6H), 5,47 (d, 0,5H) , 5,55 (d,
2H), 5,67 (dd, 1H), 5,71 (dd , 0,3H), 7,03 -7,53 (m, 5H),
7,80-8,06 (m, 2H), 8,06-8,34 (m, 2H), 9,43-9,48 (m, 1H). Anály-
tická HPLC (kolóna kyano)(zmes 2 diastereomérov) 9,06 minúty. LC-MS (ES+) m/e = 532,3 (M+H).
(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amid 1-[2-(3-benzyloxy-4— metoxybenzoylamino)propionyl]pyrolidín-2-karboxylovej kyseliny (81)
Zlúčenina sa pripraví zo zlúčeniny 75 a 3-benzyloxy-4-metoxybenzoovej kyseliny podlá postupu opísaného na prípravu zlúčeniny 76. Získa sa 142 mg (výťažok 58%) zlúčeniny uvedenej v názve. XH NMR (500 MHz, deuterometanol) δ 1,14 (d, 0,3H), 1,27-1,52 (m, 2,7H), 1,66-2,30 (m, 4H) , 2,47 (dd, 0,4H), 2,59 (dd, 0,6H), 2,77 (dd, 0,6H), 3,02 (dd, 0,4H), 3,41-3,72 (m, 1H) , 3, 72-3,99 (m, 2H) , 3,86 (s, 3H) , 4,19-4,86 (m, 5H) , 4,99-5,15 (m, 2H), 5,45 (m, 0,8H), 5,65 (m, 1,2H), 6,98 (dd, 1H) , 7,11-7,63 (m, 12H). Analytická HPLC (kolóna kyano)(zmes 2 diastereomérov) 12,28, 12,44 minúty. LC-MS (ES+) m/e = 616,3 (M+H). 4-Alyloxy-3,5-dimetylbenzoová kyselina
Zmes 3,32 g (20 mmol) 4-hydroxy-3,5-dimetylbenzoovej kyseliny, 7,26 g (60 mmol) alylbromidu, 455 mg (2 mmol) benzyltrietylamóniumchloridu a 6,9 g (50 mmol) uhličitanu draselného v 50 ml dimetylformamidu sa mieša 16 hodín pri teplote miestnosti. Zmes sa zriedi 200 ml etylacetátu, premyje sa vodou a solankou. Organická vrstva sa suší nad síranom sodným, filtruje sa a odparí vo vákuu, pričom sa získa 5,3 g esteru vo forme oleja. Ester sa zohrieva do varu pod spätným chladičom s 5 g (125 mmol) hydroxi127 du sodného v zmesi vody a metanolu (50 ml/50 ml) 6 hodín. Zmes sa odparí vo vákuu, čím sa odstráni metanol a získaný roztok sa zriedi 200 ml vody, premyje sa zmesou etylacetátu a hexánu (30 ml/70 ml). Vodná vrstva sa pri 0°C okyslí pomocou koncentrovaného roztoku kyseliny chlorovodíkovej na pH 2. Získaná zrazenina sa odfiltruje a premyje sa vodou, suší sa za vysokého vákua a získa sa 3,86 g (výťažok 94%) zlúčeniny uvedenej v názve. ΤΗ NMR (500 MHz, deuterochloroform) δ 2,33 (s, 6H) , 4,35-4,37 (m, 2H), 5,28-5,30 (m, H), 5,42-5,46 (m, H), 6,07-6,15 (m, H), 7,79 (s, 2H); retenčný čas pri analytickej HPLC: 11,28 minúty; LC-MS: m/z = 205 (M-H+) .
(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amid 1-[2-(4-alyloxy-3,5-dichlórbenzoylamino)propionyl]pyrolidín-2-karboxylovej kyseliny (82)
Zlúčenina sa pripraví zo zlúčeniny 75 a 4-alyloxy-3,5-dichlórbenzoovej kyseliny podlá postupu opísaného na prípravu zlúčeniny 76. Získa sa 208 mg (47%) zlúčeniny uvedenej v názve. 1H NMR (500 MHz, deuterochloroform) δ 1,05-1,58 (m, 3H) , 1,68-3,21 (m, 7H), 3,39-3, 90 (m, 3H) , 4,05-5,01 (m, 6H) , 5,22-5,62 (m, 3H) , 6,04-6, 25 (m, 1H) , 6,94-7,63 (m, 8H) . Analytická HPLC (kolóna kyano)(zmes 2 diastereomérov) 9,69, 9,89 minúty. LC-MS (ES+) m/e = 604,2 (M+H) .
128 (2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amid 1-[2-(3,5-dichlór-4— hydroxybenzoylamino)propionyl]pyrolidín-2-karboxylovej kyseliny (83)
140 mg (0,23 mmol) vzorky zlúčeniny 82 sa rozpustí v 4 ml dichlórmetánu a reaguje s 35,4 mg (0,26 mmol) DMBA a 32 mg (0,028 mmol) Pd(PPh3)4. Roztok sa mieša 15 minút pri 0°C, 2 hodiny sa zohrieva na teplotu miestnosti, potom sa zriedi dichlórmetánom a dvakrát sa premyje vodou a solankou. Rozpúšťadlo sa odparí vo vákuu a zvyšok sa čistí pomocou flash chromatografie na silikagéli s použitím zmesi metanolu a dichlórmetánu (1/99 až 3/97) ako eluentu a získa sa 93,2 mg (výťažok 71%) zlúčeniny uvedenej v názve. XH NMR (500 MHz, deuterometanol) δ 1,16 (d, 0,25H), 1,28-1,49 (m, 2,75H), 1,63-2,33 (m, 4H), 2,48 (dd, 0,4H), 3,39-3,59 (m, 0,2H), 3,60-3,73 (m, 0,8H), 3,73-3,96 (m,
1H), 4,24-4,48 (m, 2H), 4,57-4,92 (m, 7H), 5,44 (s, 0,4H), 5,50 (d, 0,4H), 5,64 (d, 0,8H), 5,75 (d, 0,5H), 7,16-7,43 (m, 5H) ,
7,78-7,89 (m, 1,6H), 8,40-8,63 (m, 0,4H). Analytická HPLC (kolóna kyano)(zmes 2 diastereomérov) 11,57, 11,82 minúty. LC-MS (ES+) m/e = 564,1 (M+H).
(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amid 1-(2-benzoylaminopropionyl)pyrolidín-2-karboxylovej kyseliny (84)
Zlúčenina sa pripraví zo zlúčeniny 75 a benzoylchloridu podľa postupu použitého na prípravu zlúčeniny 76. Získa sa 8 mg (výťažok 38%) zlúčeniny uvedenej v názve vo forme bezfarebného oleja. XH NMR (500 MHz, deuterometanol) δ 1,35-1,54 (m, 3H) ,
1,72-2,30 (m, 4H) , 2,42-2,70 (m, 1,3H), 2,74-2,84 (m, 0,5H), 3,03 (dd, 0,2H), 3,41-3,75 (m, 2H) , 3,81-3,96 (m, 1H) , 4,22-4,86 (m, 4H), 5,46 (s, 0,3H), 5,51-5,54 (m, 0,lH), 5,66 (d, 0,5H),
129
5,72 (d, Ο,ΙΗ), 7,20-7,57 (m, 7H), 7,77-7,89 (m, 2H), 8,42-8,67 (m, 1H) . Analytická HPLC (kolóna kyano) (zmes 2 diastereomérov) 15,23, 15,67 minúty. LC-MS (ES+) m/e = 481,2 (M+H).
{2-(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-ylkarbamoyl) pyrolidin-1-yl]-l-metyl-2-oxoetyl}amid izochinolín-l-karboxylovej kyseliny (85)
Zlúčenina sa pripraví zo zlúčeniny 75 a 1-izochinolínkarboxylovej kyseliny podlá postupu opísaného na prípravu zlúčeniny 76. Získa sa 732 mg (výťažok 53%) zlúčeniny uvedenej v názve. XH NMR (500 MHz, deuterometanol) δ 1,22-1,56 (m, 3H) , 1,70-2,34 (m, 4H) , 2,43-2,7 (m, 0,9H), 2,73-2,89 (m, 0,5H), 3,06 (ddd,
0,6H), 3,42-3,81 (m, 2H), 3,84-4,01 (m, 1H), 4,29-5,00 (m, 5H),
5,47 (d, 0,65H), 5,55 (s, 0,3H), 5,67 (d, 0,8H), 5,72 (d, 0,25H), 7,21-7,43 (m, 5H) , 7,49-7,83 (m, 2,8H), 7,88-8,04 (m, 1,8H), 8,45-8,54 (m, 0,8H), 8,97-9,06 (m, 0,6H). Analytická HPLC (zmes 2 diastereomérov) 15,71, 16,04 minúty. LC-MS(ES*) m/e=531,2 (M+H) .
H2N
(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amid 1-[2-(4-Amino-5-chlór-2-metoxybenzoylamino)propionyl]pyrolidín-2-karboxylovéj kyseliny (86)
Zlúčenina sa pripraví zo zlúčeniny 75 a 4-amino-5-chlór-2-metoxybenzoovej kyseliny podľa postupu opísaného na prípravu zlúčeniny 76. Získa sa 330 mg (výťažok 61%) zlúčeniny uvedenej
130 v názve. XH NMR (500 MHz, deuterometanol) δ 1,22 (d, 0,25H),
1,29-1,50 (m, 0,75H), 1,68-2,36 (m, 4H) , 2,38-2,89 (m, 1,5H),
2,94-3,14 (m, 0,5H), 3,37-3,98 (m, 6H), 4,27-4,98 (m, 6H), 5,44-5,50 (m, 0,4H), 5,53-5,56 (s, O,1H), 5,60-5,75 (m, 0,5H), 6,50 (s, 1H) , 7,17-7,45 (m, 4H) , 7,73-7,90 (m, 1H) , 8,49-8,70 (m,
1H). Analytická HPLC (kolóna kyano)(zmes 2 diastereomérov)16,39, 16,82 minúty. LC-MS (ES+) m/e = 559,2 (M+H).
(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amid 1-[2-(4-acetylamino-5-chlór-2-metoxybenzoylamino)propionyl]pyrolidín-2-karboxylovéj kyseliny (87)
Zlúčenina sa pripraví zo zlúčeniny 75 a 4-acetylamino-5— -chlór-2-metoxybenzoovej kyseliny podía postupu opísaného na prípravu zlúčeniny 76. Získa sa 364 mg (výťažok 74%) zlúčeniny uvedenej v názve. XH NMR (500 MHz, deuterometanol) δ 1,20-1,27 (m, 0,25H), 1,35-1,49 (m, 0,75H), 1,72-2,30 (m, 4H), 2,23 (s,
3H), 2,42-2,58 (m, 0,6H), 2,59-2,68 (m, 0,5H), 2,73-2,86 (m,
0,7H), 2,99-3,11 (m, 0,7H), 3,41-4,07 (m, 5H) , 4,29-4,97 (m, 5H), 4,79-5,56 (m, 0,5H), 5,65-5,73 (m, 0,5H), 7,18-7,44 (m,
4,3H), 7,90-8,09 (m, 2H), 8,71-8,85 (m, 0,7H). Analytická HPLC (kolóna kyano)(zmes 2 diastereomérov) 15,61, 16,01 minúty. LC-MS (ES+) m/e = 601, 1 (M+H) .
131 {2-[2-(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-ylkarbamoyl)pyrolidin-1-yl]-l-metyl-2-oxoetyl}amid pyridín-2-karboxylovej kyseliny (88)
Zlúčenina sa pripraví zo zlúčeniny 75 a pyridín-2-karboxylovej kyseliny podľa postupu opísaného na prípravu zlúčeniny 76. Získa sa 233 mg (výťažok 42%) zlúčeniny uvedenej v názve. 3H NMR (500 MHz, deuterometanol) δ 1,30-1,59 (m, 3H), 1,68-2,36 (m, 4H),
2,39-2,57 (m, 0,6H), 2,57-2,69 (m, 0,35H), 2,71- 2,87 (m, 0,4H),
3,05 (dd, 0,65H), 3,39-3,93 (m , 3H), 4,24- -4,99 (m, 5H) , 5,49-
-5,55 (m, 0,8H), 5, 63-5, 77 (m, 1,2H), 7,17 -7, 46 (m, 5H), 7,49-
-7,60 (m, 1H), 7,89-7,99 (m, 1H) , 8,03-8,12 (m, 1H) , 8,58-8,67 (m, 1H) . Analytická HPLC (kolóna kyano) (zmes 2 diastereomérov)
8,63 minút. LC-MS (ES+) m/e = 481,3 (M+H).
(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amid 1-[2-(4-amino-3,5— dichlórbenzoylamino)propionyl]pyrolidín-2-karboxylovej kyseliny (89)
Zlúčenina sa pripraví zo zlúčeniny 75 a 3,5-dichlór-4-aminobenzoovej kyseliny podľa postupu opísaného na prípravu zlúčeniny 76. Získa sa 162 mg (70%) zlúčeniny uvedenej v názve. 3H NMR (500 MHz, deuterometanol) δ 1,21-1,58 (m, 3H), 1,58-2,37 (m, 4H), 2,37-3,13 (m, 2H), 3,43-3,74 (m, 1,5H), 3,77-3,94 (m, 1H), 4,28-4,51 (m, 1,5H), 4,50-5,01 (m, 3H) , 5,41-5,77 (m, 1H), 7,15-7,49 (m, 5H), 7,66-7,88 (m, 2H). Analytická HPLC (kolóna kyano)(zmes 2 diastereomérov) 8,36 minút. LC-MS (ES+) m/e = 563,2 (M+H).
132 (2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amid 1-[2-(4-metoxybenzoylamino)propionyl]pyrolidín-2-karboxylovej kyseliny (90)
Zlúčenina sa pripraví zo zlúčeniny 75 a 4-metoxybenzoylchloridu podlá postupu použitého na prípravu zlúčeniny 76. Získa sa 404 mg (50%) zlúčeniny uvedenej v názve. 1H NMR (500 MHz, deuterometanol) δ 1,19 (d, 0,3H), 1,29-1,58 (m, 2,7H), 1,58-2,38 (m, 4H), 2,43-2, 69 (m, 1H) , 2,74-2,86 (m, 0,6H), 2,99-3,11 (m,
0,4H), 3,39-3,75 (m, 1,5H), 3, 77-3, 94 (m, 1H) , 3,84 (s, 3H) ,
4,29-4,94 (m, 4,5H), 5,45-5,55 (m, 4,5H), 5,63-5,71 (m, 0,5H),
5,73 (d, 0,lH), 6,85-7,09 (m, 2H), 7,19-7,44 (m, 4H), 7,73-7,92 (m, 2H), 8,26-8,44 (m, 1H). Analytická HPLC (kolóna kyano)(zmes diastereomérov) 15,18, 15,65 minúty. LC-MS (ES+) m/e = 510,2 (M+H).
(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl) amid 1— {2— [ (9-oxo-9/í-fluorén-4-karbonyl)amino]propionyl}pyroiidín-2-karboxylovej kyseliny (91)
Zlúčenina sa pripraví zo zlúčeniny 75 a 9-oxo-9H-fluorénkarboxylovej kyseliny podľa postupu opísaného na prípravu zlúčeniny 76. Získa sa 403 mg (44%) zlúčeniny uvedenej v názve. XH NMR (500 MHz, deuterochloroform) δ 1,38-1,59 (m, 3E) , 1,75-2,37 (m, 4H), 2,43-2,59 (m, 0,65H), 2,59-2,72 (m, 0,35H), 2,79-2,89 (m,
0,35H), 3,01-3,11 (m, 0,65H), 3,68-3,86 (m, 1H), 3,92-4,09 (m,
1H), 4,35-5,03 (m, 7H) , 5,42-5,90 (m, 1H) , 7,06-8,00 (m, 12H) .
Analytická HPLC (kolóna kyano)(zmes 2 diastereomérov) 12,30 minút. LC-MS (ES+) m/e = 582,1 (M+H).
133
(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amid 1-[2-(3,5-dichlór-4-metoxybenzoylamino)propionyl]pyrolidín-2-karboxylovej kyseliny
Zlúčenina sa pripraví zo zlúčeniny 75 a 3,5-dichlór-4-metoxybenzoovej kyseliny podlá postupu opísaného na prípravu zlúčeniny 76. Získa sa 364 mg (46%) zlúčeniny uvedenej v názve. XH NMR (500 MHz, deuterometanol)δ 1,17 (d, 0,25H), 1,28-1,53 (m, 2,75H), 1, 64-2,33 (m, 4H) , 2,39-2, 94 (m, 1,5H), 2,94-3,12 (m, 0,5H), 3,41-3,74 (m, 2H) , 3,74-4,00 (m, IH) , 3,91 (s, 3H) , 4,26-5,02 (m, 5H), 5,42-5,81 (m, IH), 7,08 (d, 0,4H), 7,21-7,43 (m, 4,6H), 7,53-7,69 (m, 0,8H), 7,85-7,97 (m, 1,2H). Analytická HPLC (kolóna kyano) (zmes 2 diastereomérov)10,79 minút. LC-MS (ES+)m/e=578,2 (M+H).
{2-(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-ylkarbamoyl)pyrolidin-1-yl]-l-metyl-2-oxoetyl}amid chinolín-6-karboxylovej kyseliny (93)
Zlúčenina sa pripraví zo zlúčeniny 75 a 6-chinolínkarboxylovej kyseliny podía postupu opísaného na prípravu zlúčeniny 76. Získa sa 344 mg (71%) zlúčeniny uvedenej v názve. 1H NMR (500 MHz, deuterometanol)δ 1,11-1,58 (m, 3H) , 1, 69-2,40 (m, 4H) , 2,42-3,11 (m, 2H) , 3,80-4,01 (m, IH) , 4,29-4,99 (m, 5H) , 5,44-5,54 (m, 0,5H), 5,63-5,73 (d, 0,4H), 5,73-5,79 (d, 0,lH), 7,18-7,43 (m, 5H), 7,56-7,67 (m, IH) , 8,08 (d, IH), 8,13-8,25 (m,
134
ΙΗ), 8,40-8,56 (m, 2H) , 8,88-8,99 (m, ΙΗ) . Analytická HPLC (kolóna kyano)(zmes 2 diastereomérov) 10,27, 10,50 minúty. LC-MS (ES+) m/e = 531,2 (M+H) .
Schéma XVII
Cbz.
° COjSu-t 95 ''sV?
° CO2Bu-l
fcerc-butylester 1-(2-benzyloxykarbonylaminopropionyl)pyrolidín-2-karboxylovej kyseliny (95)
Zlúčenina sa pripraví podľa postupu opísaného v Pierre Chevallet, Patrick Garrouste, Barbara Malawaska & Jean Martinez, Tetrahedron Letters, Vol. 34, str. 7409-7412, (1993). Zmes 10,0 g (31,2 mmol) Cbz-ala-pro-OH, 180 g (1,31 mol) terc-butylbromidu, 7,11 g (31,2 mmol) benzyltrietylamóniumchloridu a 180 g (1,30 mol) uhličitanu draselného a 225 ml N,N-dimetylacetamidu (DMA) sa mieša 24 hodín pri teplote 55°C. Reakčná zmes sa ochladí na teplotu miestnosti a zriedi sa 1 litrom ladovej vody,
135 extrahuje sa trikrát 200 ml etylacetátu. Organická vrstva sa suší nad bezvodým síranom sodným, filtruje sa a odparí sa vo vákuu, pričom sa získa 14 g oleja, ktorý sa čistí pomocou flash chromatografie s použitím zmesi hexánu a etylacetátu 95/5 až 50/50. Získa sa 11,73 g (výťažok 99,7%) zlúčeniny uvedenej v názve vo forme číreho oleja. 1H NMR (500 MHz, deuterochloroform)ô 1,25-1,50 (m, 12H), 1,85-2,25 (m, 4H) , 3,42-3,70 (m, 2H) , 4,25-4,57 (m, 2H), 5,07-5,11 (m, 2H) , 5,69 (d, H), 7,28-7,38 (m, 5H); retenčný čas analytickej HPLC: 11,07 minúty; LC-MS: m/z=377 (M+H+) .
X
97a, X=CI, Y=NH2, Z=H 97b, X=CI, Y=AcNH, Z=H 97c, X=CI, Y=AcNH, Z=CH3O
96a, X=CI, Y=NH2, Z=H 96b. X=CI, Y=AcNH, Z=H 96c, X=CI, Y=AcNH, Z=CH3O terc-butylester 1-[2-(4-amino-3-chlórbenzoylamino)propionyl]pyrolidín-2-karboxylovej kyseliny (96a)
K 10,50 g (27,9 mmol) roztoku zlúčeniny 95 v 100 ml metanolu sa pridá suspenzia 5,00 g 10% paládia na uhlí v 50 ml etylacetátu. Reakčná zmes sa mieša 48 hodín vo vodíkovej atmosfére, filtruje sa cez kremelinu a rozpúšťadlo sa odparí a získa sa voskovitá pevná látka. Tá sa rozpustí v 100 ml dichlórmetánu a 50 ml dimetylformamidu a roztok sa ochladí na 0°C. Pridá sa 5,82 g (27,2 mmol) 4-amino-3-chlórbenzoovej kyseliny, 14,58 ml (83,7 mmol) DIEA, 3,77 g (27,9 mmol) HOBT a 6, 68 g (34,8 mmol) EDC a roztok sa mieša 15 minút pri 0°C, potom 24 hodín pri teplote miestnosti. Reakčná zmes sa zriedi etylacetátom, premyje sa dvakrát hydrogensíranom sodným, dvakrát 10% roztokom hydrogen136 uhličitanu sodného a solankou, potom sa suší nad síranom horečnatým, filtruje a odparí. Surový produkt sa čistí pomocou flash kolónovej chromatografie s použitím zmesi dichlórmetánu a metanolu (99/1 až 97/3%) a získa sa 7,75 g (70%) zlúčeniny uvedenej v názve. 1H NMR (500 MHz, deuterometanol)δ 1,27-1, 67 (m, 12H),
1,82-2,14 (m, 4H) , 3, 48-3,85 (m, 2H) , 4,26-4,53 (m, 3H) , 4,81-4,98 (m, 1H), 6,71 (d, 1H) , 7,15 (m, 1H) , 7,50 (dd, 1H) , 7,75 (d, 1H) . Analytická HPLC 10,83 minúty. LC-MS (ES+) m/e = 396,3 (MH+) .
1-[2-(4-Amino-3-chlórbenzoylamino)propionyl]pyrolidín-2-karboxylová kyselina (97a)
Zlúčenina sa pripraví zo zlúčeniny 96a reakciou s kyselinou trifluóroctovou v dichlórmetáne. Po skončení reakcie sa rozpúšťadlo odparí vo vákuu a zvyšok sa opakovane odparí z toluénu. Získaný zvyšok sa suší vo vákuu do konštantnej hmotnosti.
terc-butylester 1-[2-(4-acetylamino-3-chlórbenzoylamino)propionyl] pyrolidín-2-karboxylovej kyseliny (96b)
Zlúčenina sa pripraví zo zlúčeniny 95 a 4-acetylamino-3chlórbenzoovej kyseliny s použitím spôsobu opísaného na prípravu zlúčeniny 96a. Získa sa 9,18 g (77%) zlúčeniny uvedenej v názve. *H NMR (500MHz, deuterometanol)δ 1,30-1,62 (m, 12H), 1,85-2,16 (m, 3H) , 2,16-2,44 (m, 1H) , 2,27 (s, 3H) , 3,47-3,83 (m, 2H) , 4,34-4,54 (m, 1H) , 4,89 (m, 1H) , 7,27-7,39 (m, 1H) , 7,59-7,71 (m, 2H), 7,83-7,97 (m, 1H), 8,47 (d, 1H) . Analytická HPLC 9,43 minúty.
1-[2-(4-Acetylamino-3-chlórbenzoylamino)propionyl]pyrolidín-2— -karboxylová kyselina (97b)
Zlúčenina sa pripraví zo zlúčeniny 96b pomocou reakcie s kyselinou trifluóroctovou v dichlórmetáne. Po skončení reakcie sa rozpúšťadlo odparí vo vákuu a zvyšok sa opakovane odparí z toluénu. Získaný zvyšok sa suší vo vákuu do konštantnej hmotnosti.
4-Acetylamino-5-chlór-2-metoxybenzoová kyselina
137
2,09 g (8,11 mmol) metylesteru 4-acetylamino-5-chlór-2-metoxybenzoovej kyseliny sa rozpustí v 110 ml metanolu a pridá sa 25,48 mmol hydroxidu lítneho rozpusteného v 30 ml zmesi metanolu a vody 1:1 a roztok sa mieša 6 hodín pri teplote miestnosti. Rozpúšťadlo sa odparí vo vákuu, pridá sa etylacetát a organická fáza sa premyje 0,5N roztokom kyseliny chlorovodíkovej a potom sa dvakrát extrahuje nasýteným roztokom hydrogénuhličitanu sodného. Vodná fáza sa okyslí 12N roztokom kyseliny chlorovodíkovej na pH 1 a vylúčená zrazenina sa extrahuje do dichlórmetánu. Spojené extrakty sa sušia nad bezvodým síranom sodným, filtrujú sa a odparia, pričom sa získa 0,933 g (výťažok 50%) zlúčeniny uvedenej v názve. XH NMR (500 MHz, deuterochloroform) δ 2,31 (s, 3H), 4,10 (s, 3H) , 7,78-7,92 (šs, 1H) , 8,17 (s, 1H) , 8,45 (s, 1H). Analytická HPLC 5,62 minúty.
terc-butylester 1-[2-(4-acetylamino-5-chlór-2-metoxybenzoylamino)propionyl]pyrolidín-2-karboxylovej kyseliny (96c)
K roztoku 1,534 g (4,07 mmol) zlúčeniny 95 v 40 ml metanolu sa pridá 650 mg 10% paládia na uhlí a zmes sa mieša 2 hodiny vo vodíkovej atmosfére. Suspenzia sa filtruje cez kremelinu a získa sa žltý olej. Olej sa nechá reagovať so 4-acetyl-5-chlór-2-metoxybenzoovou kyselinou podľa postupu opísaného na prípravu zlúčeniny 96a a získa sa 497 mg (výťažok 52%) zlúčeniny uvedenej v názve. XH NMR (500 MHz, deuterometanol)δ 1,46 (d, 3H), 1,49 (s, 9H), 1,80-2,01 (m, 3H) , 2,19-2,40 (m, 1H) , 2,22 (s, 3H) , 3,58-3,72 (m, 1H), 3, 78-3,89 (m, 1H) , 3,98-4,09 (s, 3H) , 4,31-4,45 (s, 1H), 4,78-4,95 (m, 1H) , 7,89-8,10 (m, 2H) . Analytická HPLC 11,31 minúty.
1-[2-(4-Acetylamino-5-chlór-2-metoxybenzoylamino)propionyl]pyrolidín-2-karboxylová kyselina (97c)
Zlúčenina sa pripraví zo zlúčeniny 96c pomocou reakcie s kyselinou trifluóroctovou v dichlórmetáne. Po skončení reakcie sa rozpúšťadlo odparí vo vákuu a zvyšok sa opakovane odparí z toluénu. Získaný zvyšok sa suší vo vákuu do konštantnej hmotnosti.
138
(5-oxo-2-fenetyloxytetrahydrofuran-3-yl)amid 1-[2-(4-amino-3— -chlórbenzoylamino)propionyl]pyrolidín-2-karboxylovej kyseliny (98a)
K roztoku 194 mg (0,54 mmol) alylesteru (5-oxo-2-fenetyloxytetrahydrofuran-3-yl)karbámovej kyseliny (pripraveného podlá postupu použitého na prípravu zlúčeniny 40 s použitím fenetylalkoholu) v 5 ml dichlórmetánu sa pri 0°C pridá 196 mg (1,26 mmol) DMBA a 32 mg (0,03 mmol) Pd(PPh3)4. Roztok sa mieša 15 minút a pridá sa roztok 166 mg (0,49 mmol) zlúčeniny 97a (pripravenej zo zlúčeniny 96a reakciou s kyselinou trifluóroctovou v dichlórmetáne) a 680 μΐ (3,90 mmol) v 2 ml dichlórmetánu a potom 98 mg (0,73 mmol) HOBT a 122 mg (0,63 mmol) EDC. Roztok sa mieša 15 minút pri 0°C, potom 18 hodín pri teplote miestnosti. Rozpúšťadlo sa odparí vo vákuu a zvyšok sa rozpustí v etylacetáte a dvakrát sa premyje 0,5N roztokom hydrogensíranu sodného, dvakrát nasýteným roztokom hydrogenuhličitanu sodného a solankou. Suší sa nad bezvodým síranom sodným a odparí, pričom sa získa oranžová pevná látka, ktorá sa čistí pomocou flash kolónovej chromatografie s použitím zmesi dichlórmetánu a metanolu (99/1 až 97/3%) ako eluentu a získa sa 190 mg (73%) zlúčeniny uvedenej v názve vo forme bielej pevnej látky. NMR (500 MHz, deuterometanol) δ 1,29 (d, 0,6H), 1,41 (d, 2,4H), 1,78 (m, 1H) ,
2,08 (m, 3H), 2,56 (m, 1H) , 2,77 (dd, 1H) , 2,94 (t, 2H) , 3,53 (m, 0,3H), 3,67 (m, 0,8H), 3,85 (m, 2H), 3,96-4,08 (m, 1H) , 4,40 (m, 2H), 4,62 (m, 1H) , 4,67-4,79 (m, 1H) , 5,57 (d, 0,7H), 5,60 (d, 0,3H), 6,78 (dd, 1H) , 7,21 (m, 5H) , 7,58 (m, 1H) , 7,79 (m,
1H) , 8,26 (d, 1H) . Analytická HPLC 14,52 minúty. LC-MS (ES+) m/e=543,2 (MH+) .
139
(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amid 1-[2-(4-amino-3— -chlórbenzoylamino)propionyl]pyrolidín-2-karboxylovej kyseliny (98b)
Zlúčenina sa pripraví zo syn diastereoméru alylesteru (2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)karbámovej kyseliny (40) a zlúčeniny 97a podľa spôsobu použitého na prípravu zlúčeniny 98a. Izoluje sa 720 mg (výťažok 51%) zlúčeniny uvedenej v názve vo forme svetložltej pevnej látky. NMR (500 MHz, deuterome-
tanol)ô 1,16 (d, 0,5H), 1,40 ( :d, 2,5H), 1,64-2,25 (m, 4H) , 2,61
(dd, 1H) , 2,79 (dd, 1H) , 3,37 -3,59 (m, 1H), 3,59· -3,74 (m, 1H) ,
3, 77-3, 92 (m, 1H) , 4,29-4,47 (m, 1H), 4,47-5,02 (m, 4H) , 5,48
(s, 0,5H), 5,66 (d, 1H), 5,68 (d, 0,5H), 6,79 (d, 1H) , 7,17 -7,52
(m, 5H) , 7,48-7,62 (m, 1H) , 7,68-7,83 (m, 1H) . Analytická HPLC
15,98 minúty. LC-MS (ES4) m/e = 529,2 (MH+) .
(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amid 1-[2-(4-amino-3— -chlórbenzoylamino)propionyl]pyrolidín-2-karboxylovej kyseliny (98c)
Zlúčenina sa pripraví z alylesteru anti-(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)karbámovej kyseliny (40) a zlúčeniny 97a podľa spôsobu použitého na prípravu zlúčeniny 98a. Izoluje sa
186,6 mg (výťažok 46%) zlúčeniny uvedenej v názve vo forme bielej pevnej látky. 1H NMR (500 MHz, deuterometanol)δ 1,30-1,52 (m,
140
3Η), 1,76-2,33 (m, 4H) , 2,41-2,59 (m, 1H) , 2,90 (dd, 0,15H),
3,04 (dd, 0,85H), 3,44-3,75 (m, 1,5H), 3,82-3,95 (m, 1H), 4,27-4,42 (m, 2H), 4,42-4,56 (m, 0,5H), 4,56-4,86 (m, 4H), 5,42-5,55 (m, 1H), 6,79 (d, 1H), 7,21-7,42 (m, 4,6H), 7,54-7,63 (m, 1,4H), 7,76-7,83 (m, 0,65H), 8,60-8,68 (m, 0,35H). Analytická HPLC
15,19 minúty. LC-MS (ES+) m/e = 529, 3 (MH+) .
alylester 2-(etoxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)karbámovej kyseliny
Zlúčenina sa pripraví z terc-butylesteru 3-alyloxykarbonylamino-4-hydroxybutánovej kyseliny tak, ako je opísané na prípravu zlúčeniny 40 s použitím etanolu. Po chromatografii s použitím zmesi hexánu a etylacetátu (95/5 až 80/20) sa získa 0,94 g alylesteru anti-2-(etoxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl) karbámovej kyseliny (vyššie Rf) , 1,96 g syn diastereoméru (nižšie Rf) a 8,08 g zmesi diastereomérov (celkový výťažok 60%). XH NMR (500 MHz, deuterochloroform) pre anti diastereomér: δ 1,13-1,31 (m, 3H), 2,31-2,45 (m, 1H) , 2,92-3,08 (m, 1H) , 3, 52-3,72 (m,
1H), 3,78-3, 92 (m, 1H) , 4,10-4,25 (m, 1H) , 4,45-4,70 (m, 2H),
5,00 (šs, 1H) , 5,12-5,45 (m, 3H) , 5,80-5, 95 (m, 1H) ; pre syn diastereomér 1,13-1,35 (m, 3H), 2,38-2,50 (m, 1H), 2,75-2,92 (m, 1H), 3,60-3, 73 (m, 1H) , 3,82-3,95 (m, 1H), 4,40-4,70 (m, 3H) ,
5,10-5,52 (m, 4H) , 5,80-5,94 (m, 1H) ; LC-MS: m/z = 230 (M+H+) pre obidva diastereoméry.
(2-etoxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amid 1-[2-(4-amino-3-chlórbenzoylamino)propionyl]pyrolidín-2-karboxylovej kyseliny (98d)
Zlúčenina sa pripraví z alylesteru (2-etoxy-5-oxo-tetrahydrofuran-3-yl)karbámovej kyseliny a zlúčeniny 97a podľa postupu použitého na prípravu zlúčeniny 98a. Izoluje sa 175 mg (77%) zlúčeniny uvedenej v názve vo forme bielej pevnej látky. NMR
141 (500 MHz, deuterometanol)δ 1,13 (t, 0,5H), 1,23 (t, 2,5H), 1,36 (d, 0,5H), 1,44 (d, 2,5H), 1, 75-2,38 (m, 4H) , 2,56 (dd, 1H) ,
2,76 (dd, 1H), 3,45-3, 97 (m, 5H) , 4,47 (dd, 1H) , 4,59-4,67 (m,
1H), 4,74 (kv, 1H) , 5,55 (d, 0,2H), 5,56 (d, 0,8H), 6,75-6,82 (m, 1H), 7,56 (dd, 1H) , 7,77 (d, 1H) , 8,39 (d, 1H) . Analytická HPLC 8,17 minúty. LC-MS (ES + ) m/e = 467,4 (MH+) .
alylester (2-cyklopentyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)karbámovej kyseliny
Zlúčenina sa pripraví z terc-butylesteru 3-alyloxykarbonylamino-4-hydroxybutánovej kyseliny podlá postupu, ktorý je opísaný na prípravu zlúčeniny 40 s použitím cyklopentanolu. Získa sa zlúčenina uvedená v názve vo forme zmesi diastereomérov. Po čistení pomocou flash kolónovej chromatografie s použitím zmesi hexánu a etylacetátu (90/10 až 80/20) sa získa syn diastereomér zlúčeniny uvedenej v názve: syn diastereomér XH NMR (500 MHz, deuterochloroform) δ 1,5-2,0 (m, 8H) , 2,45 (dd, 1H) , 2,81 (dd, 0,9H), 3,0 (dd, 0,lH), 4,31 (m, 1H), 4,59 (m, 4H) , 5,23 (m, 1H),
5, 32 (m, 1H) , 5,45 (s, 0,lH), 5,51 (s, 0,9H), 5,92 (m, 1H) ppm;
anti diastereomér XH NMR (500 MHz, deuterochloroform)δ 1,50 (m,
2H) , 1,67 (m, 6H), 2,36 (d, 1H) , 2,8 (dd, 0,08H), 2,96 (dd,
0,92H), 4,13 (m, 1H), 4,25 (m, 1H), 4,55 (š, 2H), 5,20 (d, 1H) , 5,30 (m, 2H), 5,43 (s, 0,92H), 5,5 (d, 0,08H), 5,89 (s, lH)ppm.
(2-cyklopentyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amid 1-[2-(4-amino-3-chlórbenzoylamino)propionyl]pyrolidín-2-karboxylovej kyseliny (98e)
Zlúčenina sa pripraví z alylesteru (2-cyklopentyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)karbámovej kyseliny a zlúčeniny 97a podlá spôsobu použitého na prípravu zlúčeniny 98a a získa sa 280 mg
142 (51%) zlúčeniny uvedenej v názve. 1H NMR (500 MHz, deuterometanol)ô 1,38 (d, 0,5H), 1,44 (d, 2,5H), 1,49-2,35 (m, 12H), 2,47 (dd, 0,7H), 2,56 (dd, 0,3H), 2,75 (dd, 0,3H), 2,81-2,88 (m,
0,lH), 2,97 (dd, 0,6H), 3,47-3,76 (m, 0,2H), 3,82-3,96 (m, 1H) , 4,10-4,40 (m, 2H) , 4,40-4,46 (m, 1H) , 5,44 (d, 0,5H), 5,50 (d,
0,2H), 5,65 (d, 0,3H), 6,79 (d, 1H), 7,54-7,64 (m, 1H), 7,78 (d, 1H) , 8,21-8,31 (m, 1H) . Analytická HPLC 15, 02, 15, 34 minúty.
LC-MS (ES + ) m/e = 507,3 (MH+) .
alylester (2-cyklohexyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)karbámovej kyseliny
Zlúčenina sa pripraví z terc-butylesteru 3-alyloxykarbonylamino-4-hydroxybutánovej kyseliny podľa postupu opísaného na prípravu zlúčeniny 40 s použitím cyklohexanolu. Získa sa 4,62 g (výťažok 85%) zlúčeniny uvedenej v názve ako zmesi diastereomérov vo forme svetložltého oleja. Po čistení pomocou flash kolónovej chromatografie s použitím zmesi hexánu a etylacetátu (90/10 až 80/20) ako eluentu sa získa 394 mg (výťažok 7%) syn diastereoméru zlúčeniny uvedenej v názve. 1H NMR (500 MHz, deuterochloroform)δ 1,11-2,09 (m, 10H), 2,35-2,61 (dd, 1H), 2,72-2,98 (dd, 1H), 3,60-3,83 (m, 1H), 4,32-4,72 (m, 3H), 5,06-5,43 (m, 2H), 5,60 (d, 1H), 5,82-6,03 (m, 1H).
(2-cyklohexyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amid 1-[2-(4-acetylamino-3-chlórbenzoylamino)propionyl]pyrolidín-2-karboxylovej kyseliny (98f)
Zlúčenina sa pripraví z alylesteru syn-(2-cyklohexyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)karbámovej kyseliny a zlúčeniny 97b podľa spôsobu použitého na prípravu zlúčeniny 98a. Získa sa
121 mg (výťažok 33%) zlúčeniny uvedenej v názve. XH NMR (500 MHz,
143 deuterometanol)δ 1,06-1,61 (m, 9H) , 1,61-2,37 (m, 7H), 2,22 (s,
3H), 2,52-2,81 (m, 2H) , 3,49-3, 78 (m, 2H) , 3,84-3, 97 (m, 1H) ,
4,42-4,57 (m, 1H) , 4,57-4,69 (m, 1H) , 5,67-5,81 (m, 1H) , 7,72-7,89 (m, 1H) , 7,89-8,12 (m, 2H) . Analytická HPLC 9,84 minút. LC-MS (ES+) m/e = 563, 3 (MH+) .
(2-cyklohexyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amid 1-[2-(4-amino-3— chlórbenzoylamino)propionyl]pyrolidín-2-karboxylovej kyseliny (98g)
Zlúčenina sa pripraví z alylesteru syn-(2-cyklohexyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)karbámovej kyseliny a zlúčeniny 97a podľa spôsobu použitého na prípravu zlúčeniny 98a. Získa sa 153 mg (výťažok 47%) zlúčeniny uvedenej v názve. 1H NMR (500 MHz, deuterometanol)δ 1,06-2,38 (m, 14H), 1,42 (d, 3H) , 2, 50-2,66 (m, 1H), 2,69-2,82 (dd, 1H) , 3,06-3,75 (m, 2H), 3,80-3, 94 (m, 1H) ,
4,40-4,52 (m, 1H) , 4,57-4,65 (m, 1H) , 4,70-4,80 (m, 1H) , 5,72 (d, 1H), 6,71 (m, 1H), 7,50-7,63 (m, 1H) , 7,78 (d, 0,6H), 8,42 (d, 0,4H). Analytická HPLC 10,30 minúty. LC-MS (ES+) m/e = 521,2 (MH+) .
(2-etoxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amid 1-[2-(4-amino-3-chlórbenzoylamino)propionyl]pyrolidín-2-karbámovej kyseliny (98h)
Zlúčenina sa pripraví z alylesteru(2-etoxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)karbámovej kyseliny a zlúčeniny 97a podľa postupu
144 použitého na prípravu zlúčeniny 98a. Izoluje sa 195 mg (výťažok 82%) zlúčeniny uvedenej v názve vo forme bielej pevnej látky. ςΗ NMR (500 MHz, deuterometanol)δ 1, 32-1, 55 (m, 3H) , 1,58-1,77 (m, 3H), 1,98-2,54 (m, 4H), 2,68-2,76 (d, 0,3H), 2,79-2,89 (m, 0,7H), 2,96-3,10 (m, 0,7H), 3,18-3,27 (dd, 0,3H), 3,72-4,18 (m, 4H) , 4,46-5,12 (m, 3H) , 5,60 (s, 0,4H), 5, 74-5, 84 (m, 0,6H), 7,03 (d, 0,8H), 7,75-7,86 (m, 1H) , 8,01 (d, 0,7H), 8,35 (d, 0,3H), 8,74 (d, 0,2H). Analytická HPLC 8,31 minúty. LC-MS (ES+) m/e = 467,3 (MH+) .
alylester [5-oxo-2- (tricyklo [3,3,1,1°'°] dec-2-yloxy) tetrahydrofuran-3-yl]karbámovej kyseliny
Zlúčenina sa pripraví z terc-butylesteru 3-alyloxykarbonylamino-4-hydroxybutánovej kyseliny podľa postupu opísaného na prípravu zlúčeniny 40 s použitím 6,21 g (5 ekvivalentov) 2-adamantanolu. Získa sa 1,52 g (výťažok 61%) zlúčeniny uvedenej v názve vo forme žltého oleja. 1H NMR (500 MHz, deuterochloroform)ô 1,38-2,22 (m, 14H), 2,40 (d, 0,2H), 2,53 (dd, 0,7H), 2,87 (dd, 0,7H), 2,87 (dd, 0,8H), 3,00-3,12 (m, 0,3H), 3,84-3,97 (m,
1H), 4,40-4,71 (m, 3H) , 5,18-5,44 (m, 2H) , 5, 53-5, 69 (m, 1H) ,
5,82-6,02 (m, 1H).
[5-oxo-2- (tricyklo [3,3,1,1°'°] dec-2-yloxy) tetrahydrofuran-3-yl] amid 1-[2-(4-amino-3-chlórbenzoylamino)propionyl]pyrolidín-2— -karboxylovej kyseliny (98i)
Zlúčenina sa pripraví z alylesteru [5-oxo-2-(tricyklo-[3,3,1,1°’°] dec-2-yloxy) tetrahydrofuran-3-yl] karbámovej kyseliny a zlúčeniny 97a podľa spôsobu použitého na prípravu zlúčeniny
98a. Izoluje sa 76 mg (výťažok 13%) zlúčeniny uvedenej v názve vo forme bielej pevnej látky. XH NMR (500 MHz, deuterometanol)δ
145
1,38-2,22 (m, 14H) , 2,40 (d, 0,2H), 2,53 (dd, 0,7H), 2,87 (dd,
0,8H), 3,00-3,12 (m, 0,3H), 3, 84-3, 97 (m, 1H) , 4,40-4,71 (m,
3H), 5,18-5,44 (m, 2H) , 5, 53-5,69 (m, 1H) , 5, 82-6, 02 (m, 1H) .
Analytická HPLC. 11,89 minúty. LC-MS (ES+) m/e = 573,2 (MH+) .
(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yi)amid 1-[2-(4-acetylamino-5-chlór-2-metoxybenzoylamino)propionyl]pyrolidín-2-karboxylovéj kyseliny (98j)
Zlúčenina sa pripraví z terc-butylesteru syn-{2-[2-(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofurán-3-ylkarbamoyl)pyrolidín-1-y1]-1-metyl-2-oxoetyl}karbámovej kyseliny a zlúčeniny 97c podľa postupu použitého na prípravu zlúčeniny 98a. Získa sa 222 mg (82%) zlúčeniny uvedenej v názve. 1H NMR (500 MHz, deuterometanol)δ 1,23 (d, 0,6H), 1,42 (d, 2,4H), 1,72-2,27 (m, 4H) , 2,23 (s, 3H), 2,63 (dd, 1H), 2,77-2,88 (m, 1H), 3,43-3,52 (m, 0,5K), 3,56-3,71 (m, 1,5H), 3,74-3,85 (m, 1H) , 3,98 (s, 3H) , 4,38-4,50 (m, 1,5H), 4,51-4,92 (m, 4,5H), 5, 63-5, 76 (m, 1H) , 7,23-7,40 (m, 5H), 7,97 (s, 1H), 8,45 (d, 1H), 8,69-8,80 (m, 1H). Analytická HPLC 11,63 minúty. LC-MS (ES+) m/e = 601,2 (MH+) .
Syntéza (2-etoxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amidu 1-[2-(4-amino-3-chlórbenzoylamino)propionyl]pyrolidín-2-karboxylovej kyseliny (98k)
Zlúčenina sa pripraví z alylesteru anti-(2-etoxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)karbámovej kyseliny a zlúčeniny 97a podľa postu146 pu použitého na prípravu zlúčeniny 98a. Získa sa 175 mg (59%) zlúčeniny uvedenej v názve. 1H NMR (500 MHz, 1:1 deuterochloroform: deuterometanol) δ 1,10-1,28 (m, 3H), 1,42 (d, 0,6H), 1,46 (d, 2,4H), 1,75-2,45 (m, 4H), 2,45-2,70 (m, 1H), 2,80-3,05 (m, 1H), 3,50-3, 95 (m, 4H) , 4,20-4,75 (m, 3H) , 4,75-4, 90 (m, 1H) , 5,32 (s, 0,8H), 5,38 (s, 0,2H), 6,80 (d, 1H) , 7,55-7,84 (m, 2H) . Analytická HPLC: 10,47 minúty. LC-MS (ES+) : m/e = 467,3 (M+H)+.
Syntéza (2-etoxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amidu 1-[2-(4-amino-3, 5-dichlórbenzoylamino)propionyl]pyrolidín-2-karboxylovej kyseliny (981)
Zlúčenina sa pripraví z alylesteru (2-etoxy-5-oxo-tetrahydrofuran-3-yl)karbámovej kyseliny a terc-butyl 1-[2-(4-amino-3,5— -dichlórbenzoylamino)propionyl]pyrolidín-2-karboxylovej kyseliny podľa spôsobu použitého na prípravu zlúčeniny 98a. Získa sa 158 mg (výťažok 54%) zlúčeniny uvedenej v názve. XH NMR (500 MHz, 1:1 deuterochloroform:deuterometanol)δ 1,08-1,30 (m, 3H) , 1,32-1,52 (m, 3H), 1, 72-2,44 (m, 4H) , 2,40-3,05 (m, 2H) , 3,50-3,97 (m, 4H), 4,25-4,70 (m, 3H) , 4,70-4,86 (m, 1H) , 5,33 (s, 0,4H),
5,47 (s, 0,lH), 5,56 (d, 0,4H), 5,62 (d, 0,lH), 7,50 (s, 1H) ,
7,80 (s, 1H). Analytická HPLC: 10,84 minúty. LC-MS (ES+) :
m/e=501,2 (M+H+) .
Cl
147 (2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amid 1-[2-(4-amino-3-chlórbenzoylamino)propionyl]pyrolidín-2-karboxylovej kyseliny (98m)
Zlúčenina sa pripraví podlá spôsobu použitého na prípravu zlúčeniny 98a s použitím Cbz-Ala-D-pro-OH. Získa sa 230 mg (výťažok 69%) zlúčeniny uvedenej v názve. 1H NMR (500 MHz, 1:1 deuterochloroform:deuterometanol)δ 1,30 (d, 1,2H), 1,45 (d,
1,8H), 1,62-2,40 (m, 4H), 2,40-3,10 (m, 2H), 3,30-3,97 (m, 2H),
4,33-4,95 (m, 5H) , 5,30 (s, 0,5H), 5,68 (d, 0,5H), 6,80 (d, 1H), 7,25-7,95 (m, 7H) . Analytická HPLC: 11,56, 11,91 minúty. LC-MS (ES+) : m/e = 529,2 (M+H+) .
(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amid 1-[2-(4-acetylamino-3-chlórbenzoylamino)propionyl]pyrolidín-2-karboxylovej kyseliny (98n)
Zlúčenina sa pripraví zo zlúčeniny 97b a alylesteru syn-(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)karbámovej kyseliny podlá spôsobu opísaného na prípravu zlúčeniny 98a. Získa sa 210 mg (64%) zlúčeniny uvedenej v názve. 1H NMR (500 MHz, 1:1 deuterochloroform: deuterometanol) δ 1,33 (d, 0,6H), 1,44 (d, 2,4H), 1,68-2,40 (m, 4H), 2,26 (s, 3H) , 2,55-3,05 (m, 2H) , 3,40-3,90 (m, 2H) , 4,20-4,95 (m, 5H) , 5,68 (d, 0,8H), 5,84 (d, 0,2H), 7,15-8,30 (m, 8H). Analytická HPLC: 15,67 minúty. LC-MS (ES+) :
m/e=571,l (M+H+) .
;i
980
148
Alylester (2-izopropoxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)karbámovej kyseliny
Zlúčenina sa pripraví podlá postupu použitého na prípravu zlúčeniny 40 s použitím izopropanolu. Získa sa 3,80 g (výťažok 81%) zlúčeniny uvedenej v názve vo forme bezfarebného oleja. 1H NMR (500 MHz, deuterochloroform)δ 1,10-1,35 (m, 6H) , 2,32-2,60 (m, 1H), 2,82 (dd, 0,5H), 3,02 (dd, 0,5H), 3,82-4,11 (m, 1H) ,
4,48-4,66 (m, 3H) , 5,20-5,36 (m, 2H) , 5,54 (dd, 1H) , 5,82-6,05 (m, 1H) . LC-MS (ES + ) : m/e = 244,2 (M+H+) .
(2-izopropoxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amid 1-[2-(4-amino-3chlórbenzoylamino)propionyl-3-pyrolidín-2-karboxylovej kyseliny (98o)
Zlúčenina sa pripraví zo zlúčeniny 97a a alylesteru (2-izopropoxy-5-oxo-tetrahydrofuran-3-yl)karbámovej kyseliny podlá postupu použitého na prípravu zlúčeniny 98a. Získa sa 200 mg (výťažok 66%) zlúčeniny uvedenej v názve. ΧΗ NMR (500 MHz, 1:1 deuterochloroform:deuterometanol)δ 1,05-1,35 (m, 6H) , 1,35-1,50 (m, 3H) , 1,70-2,45 (m, 4H) , 2,45-3,05 (m, 2H), 3,55-4,10 (m, 3H), 4,15-4,88 (m, 4H), 5,48 (s, 0,4H), 5,58 (s, 0,lH), 5,64 (d, 0,4H), 5,70 (d, 0,lH), 6,78 (d, 1H), 7,58 (d, 1H), 7,80 (s, 1H). Analytická HPLC: 12,19, 12,40 minúty. LC-MS (ES+) : m/e = 581,2 (M+H+) .
(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amid 1-[2-(4-acetylamino-3,5-dichlórbenzoylamino)propionyl]pyrolidín-2-karboxylovej kyseliny (98p)
Zlúčenina sa pripraví z terc-butylesteru 1-[2-(4-acetylamino-3,5-dichlórbenzoylamino)propionyl]pyrolidín-2-karboxylovéj
149 kyseliny a alylesteru syn-(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)karbámovej kyseliny podlá postupu použitého na prípravu zlúčeniny 98a. Získa sa 230 mg (výťažok 72%) zlúčeniny uvedenej v názve. XH NMR (500 MHz, 1:1 deuterochloroform:deuterometanol)δ 1,36 (d, 0,6H), 1,47 (d, 2,4H), 1,68-2, 47 (m, 4H) , 2,23 (s, 3H) , 2,60-3,15 (m, 2H) , 3,40-3,90 (m, 2H) , 4,15-4,95 (m, 5H) , 5,68 (d, 0,8H), 5,84 (d, 0,2H), 7,20-7,98
13,07 minúty. LC-MS (ES+) : m/e = 605,1 (m, 7H). Analytická HPLC:
(M+H+) .
(2-cyklopentyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amid 1-[2-(4-acetylamino-3-chlórbenzoylamino)propionyl]pyrolidín-2-karboxylovej kyseliny (98q)
Zlúčenina sa pripraví zo zlúčeniny 97b a alylesteru (2-cyklopentyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)karbámovej kyseliny podlá postupu použitého na prípravu zlúčeniny 98a. Získa sa 215 mg (69%) zlúčeniny uvedenej v názve. LH NMR (500 MHz, 1:1 deuterochloroform:deuterometanol)δ 1,35-1,90 (m, 11H), 1,90-2,35 (m,
4H), 2,24 (s, 3H), 2,40-3,10 (m, 2H) , 3,50-3, 95 (m, 3H) , 4,15-4,90 (m, 3H), 5,44 (s, 0,55H), 5,56 (s, 0,15H), 5,64 (d,
0,22H), 5,71 (d, 0,08H), 7,70-8,25 (m, 3H) . Analytická HPLC:
12,13 minúty. LC-MS (ES) : m/e = 549,2 (M+H+) .
Syntéza (2-etoxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amid 1-[2-(4-acetylamino-3-chlórbenzoylamino)propionyl]pyrolidín-2-karboxylovej kyseliny (98r)
150
Zlúčenina sa pripraví zo zlúčeniny 97b a alylesteru syn-(2— -etoxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)karbámovej kyseliny podľa postupu použitého na prípravu zlúčeniny 98a. Získa sa 68 mg (24%) zlúčeniny uvedenej v názve. XH NMR (500 MHz, 1:1 deuterochloroform: deuterometanol) δ 1,13 (t, 0,6H), 1,28 (t, 2,4H), 1,38 (d,
0,6H), 1,48 (d, 2,4H), 1,75-2,40 (m, 4H) , 2,22 (s, 3H) , 2,55-2,88 (m, 2H), 3, 50-3, 92 (m, 4H) , 4,40-4,90 (m, 3H) , 5,57 (d,
0,8H), 5,61 (d, 0,2H), 7,60-8,20 (m, 3H). Analytická HPLC: 8,64 minúty. LC-MS (ES+) : m/e = 509, 2 (M+H+) .
Príprava alylesteru (2-cyklopentylmetoxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)karbámovej kyseliny
Zlúčenina sa pripraví z terc-butylesteru 3-alyloxykarbonylamino-4-hydroxybutánovej kyseliny podľa postupu opísaného na prípravu zlúčeniny 40 s použitím 6,5 ml (60 mmol) cyklopentylmetanolu. Získa sa 2,98 g (celkový výťažok 52%) zlúčeniny uvedenej v názve vo forme zmesi epimérov. Po čistení sa získa 0,97 g (výťažok 17%) 4 (S), 5 (R) vo forme bezfarebného oleja. XH NMR (500 MHz, deuterochloroform)δ 1,19 (m, 2H), 1,54 (m, 4H) , 1,71
(m, 2H), 2,16 (m, 1H) , 2,44 (dd, J=17,2, 10, 4 Hz, 1H) , 2,82 (dd,
J=17 ,2, 8,4 Hz, 1H), 3,44 (dd, J=9,3, 7,2 Hz, 1H) , 3,71 (dd,
J=9, 3, 7,2 Hz, 1H), 4,57 (m, 3H), 5,32 (m, 3H) , 5,41 (d,
J=5, 2 Hz, 1H), 5,91 (ddt, J=17, 1, 10,4, 5 Hz, 1H) ppm. LC-MS
(ES+) : m/e = 284.
Taktiež sa izoluje 0,66 g (výťažok 11%) epimérnej zmesi a
1,35 g (výťažok 24%) 4(S),5(S) epiméru vo forme voskovitej pevnej látky. XH NMR (500 MHz, deuterochloroform) δ 1,20 (m, 2H) ,
1,54 (m, 4H), 1,69 (m, 2H) , 2,10 (m, 1H) , 2,37 (d, J=8,l Hz,
1H), 2,97 (dd, J=18,0, 7,6 Hz, 1H) , 3,42 (dd, J=7,3, 1,7 Hz,
151
IH), 3,49 (m, 2H) , 3,64 (dd, J=9,0, 7,3 Hz, IH) , 4,19 (š, IH) , 4,55 (m, 2H), 5,25 (m, 2H), 5,36 (s, IH) , 5,87 (m, IH) ppm. LC-MS (ES+) : m/e = 284 (M+H).
(2-cyklopentylmetoxy-5-oxo-tetrahydrofuran-3-yl)amid 1-[2- (4— -amino-3-chlórbenzoylamino)propionyl]pyrolidín-2-karboxylovej kyseliny (98s)
Zlúčenina sa pripraví zo zlúčeniny 97a a alylesteru syn-(2-cyklopentylmetoxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)karbámovej kyseliny podľa postupu použitého na prípravu zlúčeniny 98a. Získa sa 195 mg (výťažok 51%) zlúčeniny uvedenej v názve. XH NMR (500 MHz, 1:1 deuterochloroform:deuterometanol)δ 1,15-1,90 (m, 11H), 1,90-2,40 (m, 5H), 2, 55-2,78 (m, 2H) , 3, 50-3, 90 (m, 4H) , 4,38-4,92 (m, 3H), 5,53 (d, 0,8H), 5,57 (d, 0,2H), 6,78 (d, IH) , 7,50-8,15 (m, 2H). Analytická HPLC: 10,48 minúty. LC-MS (ES+) : m/e = 521,2 (M+H+) .
alylester (5-oxo-2-(3-fenylpropoxy)tetrahydrofuran-3-yl)karbámovej kyseliny
Zlúčenina sa pripraví z terc-butylesteru 3-alyloxykarbonylamino-4-hydroxybutánovej kyseliny podľa postupu opísaného na prípravu zlúčeniny 40 s použitím 3-fenylpropanolu. Získa sa 1,15 g (výťažok 32%) zlúčeniny uvedenej v názve vo forme bezfarebného oleja. XH NMR (500 MHz, deuterochloroform)δ 1,82-2,05 (m, 2H), 2,38 (dd, IH) , 2,68 (m, 2H) , 2,82 (dd, IH) , 3,55-3, 65 (m, IH), 3, 82-3, 92 (m, IH) , 4,48-4,72 (m, 3H), 5,12-5,59 (m, 3H) , 5,82-6,03 (m, IH), 7,11-7,45 (m, 5H). Analytická HPLC: 9,08 minúty. LC-MS (ES+) : m/e = 320,2 (M+H+) .
(5-oxo-2-(3-fenylpropoxyl)tetrahydrofuran-3-yl)amid 1-[2-(4—ami152 no-3-chlórbenzoylamino)propionyl]pyrolidín-2-karboxylovej kyseliny (98t)
Zlúčenina sa pripraví zo zlúčeniny 97b a alylesteru syn-(5-oxo-2-(3-fenylpropoxy)tetrahydrofuran-3-yl)karbámovej kyseliny podľa postupu použitého na prípravu zlúčeniny 98a. Získa sa 200 mg (výťažok 57%) zlúčeniny uvedenej v názve. 1H NMR (500 MHz, 1:1 deuterochloroform:deuterometanol)δ 1,34 (d, 0,6H), 1,44 (d, 2,4H), 1,75-2,40 (m, 6H), 2,50-2,95 (m, 4H), 3,47-3,95 (m, 4H), 4,38-4,82 (m, 3H), 5,52 (d, 0,8H), 5,56 (d, 0,2H), 6,75-8,25 (m, 8H) . Analytická HPLC: 10,79 minúty. LC-MS (ES+) : m/e = 557,2 (M+H+) .
Syntéza (2-cyklopentylmetoxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amidu
1-[2-(4-acetylamino-3-chlórbenzoylamino)propionyl]pyrolidín-2— -karboxylovej kyseliny (98u)
Zlúčenina sa pripraví zo zlúčeniny 97b a alylesteru syn-(2-cyklopentylmetoxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)karbámovej kyseliny podľa postupu opísaného na prípravu zlúčeniny 98a. Získa sa 215 mg (výťažok 67%) zlúčeniny uvedenej v názve. 1H NMR (500 MHz, 1:1 deuterochloroform:deuterometanol)δ 1,38 (d, 0,6H), 1,47 (d,
2,4H), 1,11-1,88 (m, 8H), 1,92-2,40 (m, 5H), 2,24 (s, 3H), 2,53-2,86 (m, 2H), 3, 30-3, 90 (m, 4H) , 4,38-4,89 (m, 3H) , 5,53 (d, 0,8H), 5,60 (d, 0,2H), 7,68-8,22 (m, 3H). Analytická HPLC: 9,90 minúty. LC-MS (ES+) : m/e = 563, 3 (M+H*) .
153 (5-ΟΧΟ-2-(3-fenylpropoxyl)tetrahydrofuran-3-yl)amid 1-[2-(4-acetylamino-3-chlórbenzoylamino)propionyl]pyrolidín-2-karboxylovej kyseliny (98v)
Zlúčenina sa pripraví z terc-butylesteru 1-[2-(4-acetylamino-3-chlórbenzoylamino)propionyl]pyrolidín-2-karboxylovej kyseliny a alylesteru syn-(5-oxo-2-(3-fenylpropoxyl)tetrahydrofuran-3-yl)karbámovej kyseliny podľa postupu použitého na prípravu zlúčeniny 98a. Získa sa 238 mg (výťažok 75%) zlúčeniny uvedenej v názve. 1H NMR (500 MHz, 1:1 deuterochloroform:deuterometanol)ô 1,33 (d, 0,6H), 1,56 (d, 2,4H), 1,78-2,45 (m, 6H), 2,27 (s, 3H), 2,53-2, 97 (m, 4H) , 3,53-3,94 (m, 4H) , 4,47-4,86 (m, 3H) , 5,53 (d, 0,8H), 5,62 (d, 0,2H), 7,11-8,26 (m, 8H) . Analytická HPLC:
10,27 minúty. LC-MS (ES+) : m/e = 599,2 (M+H+) .
(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amid 1-[2-(4-amino-3-trifluórmetylbenzoylamino)propionyl]pyrclidín-2-karboxylovej kyseliny (98w)
Zlúčenina sa pripraví z terc-butylesteru {2-[2-(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-ylkarbamoyl)pyrolidin-l-yl]-1-mety1-2— -oxoetyl}karbámovej kyseliny a 4-amino-3-trifluórmetylbenzoovej kyseliny podľa postupu použitého na prípravu zlúčeniny 98a. Získa sa 56 mg (výťažok 48%) zlúčeniny uvedenej v názve. XH NMR (500 MHz, 1:1 deuterochloroform:deuterometanol)δ 1,20-1,55 (m,
3H), 1,75-2,50 (m, 4H) , 2,50-3,10 (m, 2H) , 3, 50-4,00 (m, 2H),
4,30-5,00 (m, 5H) , 5,42 (s, 0,4H), 5,51 (s, 0,2H), 5,62 (d,
0,3H), 5,78 (d, 0,lH), 6,84 (d, 1H) , 7,20-8,15 (m, 7H) . Analytická HPLC: 14,90, 15,20 minúty. LC-MS (ES+) : m/e = 563,2 (M+H+) .
154
Ο
(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amid 1-[2-(3-chlór-4-dimetylaminobenzoylamino)propionyl]pyrolidín-2-karboxylovej kyseliny (98x)
Zlúčenina sa pripraví z terc-butylesteru {2-[2-(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-ylkarbamoyl)pyrolidin-l-yl]-1-mety1-2-oxoetyl}karbámovej kyseliny a 3-chlór-4-dimetylaminobenzoovej kyseliny podľa postupu na prípravu zlúčeniny 98a. Získa sa 82 mg (výťažok 44%) zlúčeniny uvedenej v názve. ΤΗ NMR (500 MHz, 1:1 deuterochloroform:deuterometanol)δ 1,18-1,53 (m, 3H) , 1,70-2,40 (m, 4H) , 2,55-3,10 (m, 2H) , 2,84 (s, 6H) , 3,45-3,94 (m, 2H) , 4,25-4,95 (m, 5H) , 5,46 (s, 0,3H), 5,51 (s, 0,2H), 5,63 (d, 0,4H), 5,73 (d, 0,lH), 7,05 (d, 1H) , 7,15-7,95 (m, 7H) . Analytická HPLC: 11,85, 12,19 minúty. LC-MS (ES+) : m/e = 557,3 (M+H+) .
98y (2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amid 1-[2-(4-dimetylamino—3,5-difluórbenzoylamino)propionyl]pyrolidín-2-karboxylovej kyseliny (98y)
Zlúčenina sa pripraví z terc-butylesteru {2-[2-(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-ylkarbamoyl)pyrolidin-l-yl]-l-metyl-2-oxoetyl}karbámovej kyseliny a 4-dimetylamino-3,5-dichlórbenzoovej kyseliny podľa postupu použitého na prípravu zlúčeniny 98a.
Získa sa 106 mg (výťažok 65%) zlúčeniny uvedenej v názve. 1H NMR
155 (500 MHz, 1:1 deuterochloroform:deuterometanol)δ 1,10-1,55 (m,
3H) , 1,75-2,30 (m, 4H) , 2,45-3,15 (m, 2H) , 2,84 (s, 6H) , 3,40-3,95 (m, 2H), 4,15-4,95 (m, 5H) , 5,47 (s, 0,35H), 5,54 (s,
0,15H), 5,67 (d, 0,4H), 5,77 (d, Ο,ΙΗ), 7,20-7,70 (m, 7H). Analytická HPLC: 12,21, 12,51 minúty. LC-MS (ES+) : m/e=559,2 (M+H+) .
(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amid 1-[2-(4-amino-2,3,5,6-tetrafluórbenzoylamino)propionyl]pyrolidín-2-karboxylovej kyseliny (98z)
Zlúčenina sa pripraví z terc-butylesteru {2-[2-(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-ylkarbamoyl)pyrolidin-l-yl]-l-metyl-2-oxoetyl}karbámovej kyseliny a 4-amino-2,3,5,6-tetrafluórbenzoovej kyseliny podlá postupu opísaného na prípravu zlúčeniny 98a. Získa sa 58 mg (výťažok 73%) zlúčeniny uvedenej v názve. NMR (500 MHz, 1:1 deuterochloroform:deuterometanol)δ 1,30-1,50 (m,
3H), 1, 62-2,35 (m, 4H) , 2,45-3,12 (m, 2H) , 3, 50-3,90 (m, 2H) ,
4,20-4,95 (m, 5H) , 5,42 (s, 0,4H), 5,52 (s, Ο,ΙΗ), 5,64 (d,
0,4H), 5,82 (d, Ο,ΙΗ), 7,25-7,65 (m, 5H). Analytická HPLC:
16,56, 16, 90 minúty. LC-MS (ES+) : m/e = 567,2 (M+H+) .
(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amid 1—{2—[3-chlór-4-(2,2-dimetylpropionylamino)benzoylamino]propionyl}pyrolidín-2-karboxylovej kyseliny (98aa)
K suspenzii 100 mg (0,19 mmol) zlúčeniny 98b a 200 mg poly156
- (4-vinylpyridínu) sa pridá 70 μΐ (0,57 mmol) pivaloylchloridu. Získaná suspenzia sa mieša cez noc pri teplote miestnosti, filtruje sa a zriedi sa 25 ml etylacetátu. Organická vrstva sa premyje dvakrát 25 ml 10% vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného, raz 25 ml nasýteného roztoku chloridu sodného, suší sa nad síranom horečnatým a odparí sa do sucha, pričom sa získa 98 mg (výťažok 85%) zlúčeniny uvedenej v názve. 1H NMR (500 MHz, 1:1 deuterochloroform:deuterometanol)δ 1,10-1,55 (m, 3H) , 1,38 (s, 9H) , 1,65-2,40 (m, 4H) , 2,60-3,10 (m, 2H), 3,46-3, 88 (m,
2H), 4,20-4,95 (m, 5H) , 5,62 (d, 0,8H), 5,78 (d, 0,2H), 7,15-8,30 (m, 8H). Analytická HPLC: 11,82 minúty. LC-MS (ES+) :
m/e=613,2 (M+H+) .
(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amid 1-[2-(3-chlór-4-propionylamino)benzoylamino)propionyl]pyrolidín-2-karboxylovej kyseliny (98ab)
Zlúčenina sa pripraví zo zlúčeniny 98b a propionylchloridu podľa postupu opísaného na prípravu zlúčeniny 98aa. Získa sa 104 mg (95%) zlúčeniny uvedenej v názve. 1H NMR (500 MHz, 1:1 deuterochloroform:deuterometanol)δ 1,16 (t, 0,6H), 1,18 (d, 0,6H), 1,27 (t, 2,4H), 1,38 (d, 2,4H), 1,72-2,35 (m, 4H), 2,45-2,58 (m, 2H), 2, 58-3,05 (m, 2H) , 3, 45-3, 85 (m, 2H) , 4,20-4,88 (m, 5H), 5,64 (d, 0,8H), 5,76 (d, 0,2H), 7,20-8,35 (m, 8H). Analytická HPLC: 5,89 minúty. LC-MS (ES+) : m/e (M+H).
157 (2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amid 1-[2-(3-chlór-4-fenylacetylamino)benzoylamino)propionyl]pyrolidín-2-karboxylovej kyseliny (98ac)
Zlúčenina sa pripraví zo zlúčeniny 98b a fenylacetylchloridu podľa postupu opísaného na prípravu zlúčeniny 98aa. Získa sa 85 mg (77%) zlúčeniny uvedenej v názve. 1H NMR (500 MHz, 1:1 deuterochloroform:deuterometanol)δ 1,18 (d, 0,6H), 1,40 (d, 2,4H),
1, 72-2,38 (m, 4H) , 2,58-3, 05 (m, 2H) , 3, 46-3, 78 (m, 2H) , 3,85 (s, 2H), 4,18-4,92 (m, 5H) , 5,63 (d, 0,8H), 5,75 (d, 0,2H),
7,15-8,34 (m, 13H). Analytická HPLC: 11,63 minúty. LC-MS (ES+) :
m/e = 647,2 (M+H+) .
(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amid 1-[2-(3-chlór-4-metylbutyrylamino)benzoylamino)propionyl]pyrolidín-2-karboxylovej kyseliny (98ad)
Zlúčenina sa pripraví zo zlúčeniny 98b a izovalerylchloridu podľa postupu opísaného na prípravu zlúčeniny 98aa. Získa sa 60 mg (58%) zlúčeniny uvedenej v názve. 1H NMR (500 MHz, 1:1 deuterochloroform:deuterometanol)δ 1,07 (d, 5H), 1,15 (d, 0,5H),
1,27 (d, 1H), 1,45 (d, 2,2H), 1,67-2,30 (m, 5H) , 2,34 (d, 2H) , 2,58-3,05 (m, 2H) , 3, 48-3,88 (m, 2H) , 4,10-4,98 (m, 5H) , 5,68 (d, 0,7H), 5,78 (m, 0,3H), 7,18-8,33 (m, 8H) . Analytická HPLC:
10,74 minúty. LC-MS (ES+) : m/e = 613,2 (M+H+) .
98ae
158 (2-etoxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amid 1-[2-(4-Metoxy-3,5-dimetylbenzoylamino)propionyl]pyrolidín-2-karboxylovej kyseliny (98ae)
Zlúčenina sa pripraví z fcerc-butylesteru 1-[2-(4-metoxy-3,5-dimetylbenzoylamino)propionyl]pyrolidín-2-karboxylovej kyseliny a alylesteru syn-(2-etoxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)karbámovej kyseliny podľa postupu použitého na prípravu zlúčeniny 98a. Získa sa 174 mg (výťažok 81%) zlúčeniny uvedenej v názve. NMR (500 MHz, deuterochloroform)δ 1,04 (t, 0,45H), 1,27 (t, 2,55H), 1,34-1, 45 (m, 3H) , 1,95-2,45 (m, 10H), 2,78-2,84 (m, H), 3,60-3,90 (m, 8H), 4,50-4,70 (m, 2H) , 4,90-4,94 (m, H), 5,45 (d, 0,85H), 5,61 (d, 0,15H), 6,99 (d, H), 7,15 (d, H), 7,45 (s, 2H); retenčný čas pri analytickej HPLC: 10,09 minúty; LC-MS: m/z=476 (M+H+) .
(2-etoxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amid 1-[2-(4-metoxy-3,5-dimetylbenzoylamino)propionyl]pyrolidín-2-karboxylovej kyseliny (98af)
Zlúčenina sa pripraví z terc-butylesteru 1-[2-(4-metoxy-3,5-dimetylbenzoylamino)propionyl]pyrolidín-2-karboxylovej kyseliny a alylesteru anti-(2-etoxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)karbámovej kyseliny podľa postupu použitého na prípravu zlúčeniny 98a. Získa sa 168 mg (výťažok 77%) zlúčeniny uvedenej v názve. XH NMR (500 MHz, deuterochloroform)δ 1,10-1,35 (m, 3H), 1,35-1, 60 (m, 3H), 1, 90-2,45 (m, 10H), 2,60-3,00 (m, H), 3,55-3, 95 (m, 8H) , 4,15-4,60 (m, 2H) , 4,83-5,00 (m, H), 5,29 (s, H), 6,95-7,06 (m, H), 7,50 (s, 2H) , 7,92 (d, H); retenčný čas pri analytickej HPLC: 10,14 minúty; LC-MS: m/z = 476 (M+H+) .
159
(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amid 1-[2-(4-metoxy-3,5-dimetylbenzoylamino)propionyl]pyrolidín-2-karboxylovej kyseliny (98ag)
Zlúčenina sa pripraví z terc-butylesteru 1-[2-(4-metoxy-3,5-dimetylbenzoylamino)propionyl]pyrolidín-2-karboxylovej kyseliny a alylesteru syn-(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)karbámovej kyseliny podlá postupu použitého na prípravu zlúčeniny 98a. Získa sa 406 mg (výťažok 71%) zlúčeniny uvedenej v názve. 1H NMR (500 MHz, deuterochloroform)δ 1,09 (d, 0,6H), 1,35 (m, 2,4H), 1,90-2,20 (m, 3H), 2,22-2,50 (m, 10H), 2,84-2,90 (m, H), 3,52-3,62 (m, 1,6H), 3,65-3,80 (m, 3,4H), 4,10-4,40 (m, H), 4,50-4,75 (m, 3H), 4,82-4,95 (m, 2H) , 5,54 (d, 0,8H), 5,80 (d, 0,2H), 6,87 (d, H), 7,10-7,40 (m, 6H) , 7,45 (s, 2H) ; retenčný čas pri analytickej HPLC: 16,71 minúty1; LC-MS: m/z = 538 (M+H+) .
(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amid 1-[2-(4-alyloxy-3,5-dimetylbenzoylamino)propionyl]pyrolidín-2-karboxylovej kyseliny (98ah)
Zlúčenina sa pripraví z terc-butylesteru 1-[2-(4-alyloxy-3,5-dimetylbenzoylamino)propionyl]pyrolidín-2-karboxylovej kyseliny a zlúčeniny 40 podľa postupu použitého na prípravu zlúčeniny 98a. Získa sa 264 mg (výťažok 46%) zlúčeniny uvedenej
160 v názve. XH NMR (500 MHz, deuterochloroform)δ 1,09-1,43 (m, 3H) , 1,90-2,20 (m, 3H) , 2,20-2,38 (m, 7H) , 2,38-2,52 (m, H), 2,80-2,95 (m, H), 3,52-3,67 (m, H), 3,70-3,80 (m, H), 4,10-4,40 (m,
2H), 4,40-4,95 (m, 5H) , 5,26-5,55 (m, 3H) , 6,00-6,14 (m, H),
6,87 (d, H), 7,10-7,70 (m, 8H) ; retenčný čas pri analytickej
HPLC: 18,56 a 18,92 minúty1; LC-MS: m/z = 564 (M+H+) .
alylester {2-[ÍR-(2S-izopropyl-5R-metylcyklohexyloxy)]-5-oxotetrahydrofuran-3-yl}karbámovej kyseliny
Zlúčenina sa pripraví z terc-butylesteru 3-alyloxykarbonylamino-4-hydroxybutánovej kyseliny podľa postupu použitého na prípravu zlúčeniny 40 s použitím (ÍR,2S,5R)-(-)mentolu. Získa sa 0,32 g syn diastereoméru (nižšie Rf) zlúčeniny uvedenej v názve a 4,25 g zmesi anti/syn diastereomérov (celkový výťažok 67%). XH NMR (500 MHz, deuterochloroform) zmes: δ 0,70-1,05 (m, 13H),
1,20-1,47 (m, 2H) , 1,60-1,80 (m, 2H) , 1, 94-2,20 (m, 2H) , 2,35-2,50 (m, H), 2,82-3,04 (m, H), 3,40-3,61 (m, H), 4,43-4,70 (m, 3H), 5,15-5,35 (m, 2H), 5,48-5,61 (m, H), 5,90-5,94 (m, H); pre syn diastereomér 0,70-1,05 (m, 13H), 1,20-1,47 (m, 2H), 1,60-1,80 (m, 2H) , 1,94-2,18 (m, 2H) , 2,40-2,50 (m, H), 2,82-2,92 (m, H), 3,54-3,61 (m, H), 4,45-4,70 (m, 3H), 5,18-5,35 (m, 2H), 5,58-5,61 (m, H), 5, 90-5, 93 (m, H); LC-MS: m/z = 340 (M+H+) pre zmes anti/syn diastereomérov.
4-Benzyloxy-3,5-dimetylbenzoová kyselina
Zlúčenina sa pripraví podľa spôsobu opísaného na prípravu
4-alyloxy-3,5-dimetylbenzoovej kyseliny. Získa sa 2,43 g (56%) zlúčeniny uvedenej v názve. XH NMR (500 MHz, deuterochloroform)δ
4,87 (s, 2H), 7,36-7,48 (m, 5H) , 7,92 (s, 2H); LC-MS: m/z = 255 (M-H+) .
161 {2-[ÍR-(2S-izopropyl-5R-metylcyklohexyloxy)]-5-oxotetrahydrofuran-3-yl}amid 1-[2-(4-benzyloxy-3,5-dimetylbenzoylamino)propionyl]pyrolidín-2-karboxylovej kyseliny (98ai)
Zlúčenina sa pripraví z terc-butylesteru 1-[2-(4-benzyloxy-3,5-dimetylbenzoylamino)propionyl]pyrolidín-2-karboxylovej kyseliny a alylesteru {2-[lR-(2S-izopropyl-5R-metylcyklohexyloxy)]-5-oxotetrahydrofuran-3-yl}karbámovej kyseliny podľa postupu opísaného na prípravu zlúčeniny 98a. Získa sa 130 mg (výťažok 39%) zlúčeniny uvedenej v názve. 1H NMR (500 MHz, deuterochloroform)ô 0,45-1,10 (m, 12H) , 1,15-1,90 (m, 8H) , 1,90-2,45 (m, 12H),
2.80- 2,84 (m, H), 3, 50-3,85 (m, 3H), 4,45-4,70 (m, 2H) ,
4.80- 4,95 (m, 3H) , 5,62 (d, H), 7,05 (d, H), 7,17 (d, H), 7,30-7,60 (m, 7H) , 7,62-7,75 (m, H); retenčný čas pri analytickej
HPLC: 15,90 a 16,08 minúty; LC-MS: m/z = 662 (M+H+) .
{2-(ÍR-(2S-izopropyl-5R-metylcyklohexyloxy)]-5-oxotetrahydrofuran-3-yl}amid 1-[2-(4-hydroxy-3,5-dimetylbenzoylamino)propionyl] pyrolidín-2-karboxylovej kyseliny (98aj)
Roztok 110 mg (0,17 mmol) {2-[ÍR-(2S-izopropyl-5R-metylcyklohexyloxy)]-5-oxotetrahydrofuran-3-yl}amidu 1-[2-(4-benzyloxy-3,5-dimetylbenzoylamino)propionyl]pyrolidín-2-karboxylovej kyseliny v 2 ml etylacetátu sa mieša s 20 mg 10% paládia na uhlí 24 hodín vo vodíkovej atmosfére, potom sa filtruje cez kremelinu a odparí sa vo vákuu. Zvyšok sa čistí pomocou chromatografie s použitím zmesi dichlórmetánu a metanolu (99/1 až 96/4) ako eluentu a získa sa 58 mg zlúčeniny uvedenej v názve 1H NMR (500 MHz, deuterochloroform)δ 0,70-1,00 (m, 10H), 1,20-1,80 (m,
10H), 1,90-2,40 (m, 11H), 2,82-2,86 (m, H), 3,57-3,78 (m, 3H),
4,55-4,67 (m, 2H) , 4,90-4,94 (m, H), 5,29 (s, H), 5,62 (d, H),
162
6,90 (d, H), 7,14 (d, H), 7,42 (s, 2H); retenčný čas pri analytickej HPLC: 12,84 a 13,05’ minúty; LC-MS: m/z = 572 (M+H+) .
(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amid 1-[2-(4-hydroxy-3,5-dimetylbenzoylamino)propionyl]pyrolidín-2-karboxylovej kyseliny (98ak)
Roztok 230 mg (0,41 mmol) zlúčeniny 98ah v 10 ml dichlórmetánu 20 hodín pri teplote miestnosti reaguje so 65 mg (0,42 mmol) DMBA a 50 mg Pd(PPh3)4. Zmes sa odparí vo vákuu do sucha a čistí sa pomocou flash chromatografie s použitím zmesi dichlórmetánu a metanolu (99,5/0,5 až 97/3) ako eluentu. Získa sa 181 mg zlúčeniny uvedenej v názve. 1H NMR (500 MHz, deuterochloroform)ô 1,08 (d, 0,75H), 1,20-1,35 (m, 2,25H), 1,70-2,50 (m, 12H), 2,80-2,90 (m, H), 3,50-3, 65 (m, H), 3,70-3,80 (m, H), 4,10-4,25 (m, H), 4,35-4,98 (m, 3H) , 5,53 (d, 0,75H), 5,85 (d, 0,25H), 6,81 (d, H), 7,13-7,60 (m, 8H); retenčný čas pri analytickej HPLC: 10,38 a 10,56 minúty; LC-MS: m/z = 524 (M+H+) .
(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amid 1-[2-(4-dimetylaminobenzoylamino)propionyl]pyrolidín-2-karboxylovej kyseliny (98al)
Zlúčenina sa pripraví z terc-butylesteru 1-[2-(4-dimetylaminobenzoylamino)propionyl]pyrolidín-2-karboxylovej kyseliny a alylesteru syn-(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)karbámovej kyseliny podlá postupu opísaného na prípravu zlúčeniny 98a.
163
Získa sa (500 MHz, 1,80-2,50 -4,20 (m, (d, H), zlúčeniny uvedenej v názve. 1H NMR 1,04 (d, 0,75H), 1,35 (d, 2,25H), (m, 8H) , 3,45-3,75 (m, 2H) , 4,053,5H), 4,80-4,95 (m, 1,5H), 5,52 6, 60-6, 90 (m, 3H) , 7,10-7,50 (m, mg (výťažok 45%) deuterochloroform)δ (m, 5H) , 2,75-3,20
0,5H), 4,30-4,80 (m, 5,75-6,00 (m, 0,5H),
4H), 7,50-7,80 (m, 2H) ; retenčný čas analytickej HPLC: 10,46 minúty; LC-MS: m/z = 523 (M+H+) .
{2R-[ÍR-(2S-izopropyl-5R-metylcyklohexyloxy)]-5-oxotetrahydrofuran-3-yl}amid 1-[2-(4-amino-3-chlórbenzoylamino)propionyl]pyrolidín-2-karboxylovej kyseliny (98am)
Zlúčenina sa pripraví z terc-butylesteru 1-[2-(4-amino-3-chlórbenzoylamino)propionyl]pyrolidín-2-karboxylovej kyseliny (97a) a alylesteru syn-{2-[ÍR-(2S-izopropyl-5R-metylcyklohexyloxy)]-5-oxotetrahydrofurán-3-yl}karbámovej kyseliny podľa postupu opísaného na prípravu zlúčeniny 98a. Získa sa 103 mg (67%) zlúčeniny uvedenej v názve. ΧΗ NMR (500 MHz, deuterochloroform)δ 0,70-1,10 (m, 12H), 1,20-1,50 (m, 5H), 1,50-1,35 (m, 2H), 1,90-2,30 (m, 5H), 2,75-2,85 (m, H), 3,50-3,70 (m, 2H) , 3,70-3,82 (m, H), 4,20-4,65 (m, 4H) , 4,80-4,95 (m, H), 5,61 (d, H), 6,70 -6,73 (m, H), 6,95 (d, H), 7,15 (d, H), 7,49-7,51 (m, H), 7,73 (s, H); retenčný čas pri analytickej HPLC: 12,88 minúty; LC-MS: m/z = 577 (M+H+) .
164 alylester {2-[IS-(2R-izopropyl-5S-metylcyklohexyloxy)]-5-oxotetrahydrofuran-3-yl}karbámovej kyseliny
Zlúčenina sa pripraví z terc-butylesteru 3-alyloxykarbonylamino-4-hydroxybutánovej kyseliny podlá postupu opísaného na prípravu zlúčeniny 40 s použitím (IS,2R,5S)-(+)-mentolu. Získa sa 855 mg anti diastereoméru (vyššie Rf) zlúčeniny uvedenej v názve, 503 mg syn diastereoméru (nižšie Rf; a 459 mg zmesi anti/syn diastereomérov (celkový výťažok 66%). 1H NMR (500 MHz, deuterochloroform) anti diastereomér: δ 0,74-1,00 (m, 12H),
1.20- 1,45 (m, 2H) , 1, 58-1,72 (m, 2H) , 1,98-2,12 (m, 2H) , 2,18-2,40 (m, H), 2,98-3,03 (m, H), 3, 49-3, 54 (m, H), 4,17 (š, H),
4,59 (š, 2H), 4,97 (š, H), 5,22-5,33 (m, 2H), 5,58 (s, H), 5,87-5,93 (m, H); pre syn diastereomér 0,75-1,02 (m, 12H), 1,25-1,45 (m, 2H), 1,57-1,70 (m, 2H), 2,00-2,16 (m, 2H), 2,40-2,52 (m, H), 2,78-2,90 (m, H), 3,40-3,50 (m, H), 4,58 (š, 2H), 5,24-5,35 (m, 2H), 5,51-5,52 (d, H), 5,85-5, 98 (m, H); LC-MS: m/z = 340 (M+H+) pre obidva diastereoméry.
{2R-[IS-(2R-izopropyl-5S-metylcyklohexyloxy)]-5-oxotetrahydrofuran-3-yl}amid 1-[2-(4-amino-3-chlórbenzoylamino)propionyl]pyrolidín-2-karboxylovej kyseliny (98an)
Zlúčenina sa pripraví zo zlúčeniny 97a a alylesteru syn-(2-[IS-(2R-izopropyl-5S-metylcyklohexyloxy)]-5-oxotetrahydrofuran-3-yl}karbámovej kyseliny podlá postupu použitého na prípravu zlúčeniny 98a. Získa sa 88 mg (výťažok 50%) zlúčeniny uvedenej v názve. XH NMR (500 MHz, deuterochloroform)δ 0,70-1,10 (m, 12H) ,
1.20- 1,50 (m, 14H), 1,50-1,70 (š, 2H), 1,90-2,25 (m, 4H), 2,27-2,37 (m, H), 2,40-2,50 (m, H), 2,75-2,79 (m, H), 3,35-3,80 (m,
3H), 4,20-4,57 (m, 3H), 4,60-4,70 (m, H), 4,88-4,92 (m, H), 5,53 (d, H), 6,71-6,75 (m, H), 6,90 (d, H), 7,20 (d, H), 7,50-7,53 (m, H), 7,75 (d, H); retenčný čas pri analytickej HPLC: 13,20 minúty; LC-MS: m/z = 577 (M+H+) .
165
alylester (2-cyklohexylmetoxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)karbámovej kyseliny
Zlúčenina sa pripraví z terc-butylesteru 3-alyloxykarbonylamino-4-hydroxybutánovej kyseliny podľa postupu opísaného na prípravu zlúčeniny 40 s použitím cyklohexylmetanolu. Získa sa 1,04 g (vyššie Rf) (výťažok 35%) anti diastereoméru zlúčeniny uvedenej v názve a 1,295 g (nižšie Rf) (výťažok 44%) syn diastereoméru. ΧΗ NMR (500 MHz, deuterochloroform) pre anti diastereomér δ 0,90-0,96 (m, 2H) , 1,10-1,30 (m, 3H) , 1,55-1,85 (m, 6H) ,
2,37-2,41 (d, H), 2,97-3,03 (m, H), 3,34-3,38 (m, H), 3,58-3,62 (m, H), 4,55-4,70 (m, 2H), 4,70-4,73 (m, H), 5,03 (šs, H), 5,22-5,37 (m, 3H) , 5, 87-5, 93 (m, H); pre syn diastereomér 0,91-0,97 (m, 2H), 1,10-1,31 (m, 3H), 1,56-1,90 (m, 7H), 2,44-2,48 (m, H),
2,81-2,87 (m, H), 3,35-3,39 (m, H), 3,63-3,67 (m, H), 4,53-4,70 (m, 3H), 5,20-5,50 (m, 3H), 5,89-5,95 (m, H); LC-MS: m/z = 298 (M+H+) pre obidva diastereoméry.
(2-cyklohexylmetoxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amid 1-[2-(4-acetylamino-3-chlórbenzoylamino)propionyl]pyrolidíη-2-karboxylovej kyseliny (98ao)
Zlúčenina sa pripraví zo zlúčeniny 97b a alylesteru syn-(2-cyklohexylmetoxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)karbámovej kyseliny podľa postupu opísaného na prípravu zlúčeniny 98a. Získa sa 212 mg (výťažok 64%) zlúčeniny uvedenej v názve. 1H NMR (500 MHz,
deuterochloroform)δ 0,70-1,30 (m, 5H), 1,30-1,85 (m, 9H) ,
1,85-2,60 (m, 8H) , 2,75-3,00 (m, H), 3,10-3,80 (m, 4H) ,
4,30-4,95 (m, 3H) , 5,42 (d, 0, 85H), 5,62 (d, 0,15H), 6, 87 (d,
0,15H), 7,08 (d, 0 ,85H), 7,25 (d, H), 7,60-7,90 (m, 3H) , 8,08
(d, 0,15H), 8,50 (d, 0,85H); retenčný čas pri analytickej HPLC:
166
11,81 minúty; LC-MS: m/z = 577 (M+H+) .
[2R-[1S-(2R-izopropyl-5S-metylcyklohexyloxy)]-5-oxotetrahydrofuran-3-yl}amid 1-[2-(4-acetylamino-3-chlórbenzoylamino)propionyl] pyrolidín-2-karboxylovej kyseliny (98ap)
Zlúčenina sa pripraví zo zlúčeniny 97b a alylesteru syn-(2-[1S-(2R-izopropyl-5S-metylcyklohexyloxy)]-5-oxotetrahydrofuran-3-yl}karbámovej kyseliny podlá postupu opísaného na prípravu zlúčeniny 98a. Získa sa 223 mg (výťažok 63%) zlúčeniny uvedenej v názve. 1H NMR (500 MHz, deuterochloroform)δ 0,70-1,15 (m, 12H) ,
1,20-1,85 (m, 8H) , 1,85-2,60 (m, 9H), 2,74-2,88 (m, H), 3,35-3,85 (m, 3H), 4,40-4,55 (m, H), 4,65-4,78 (m, H), 4,88-4,91 (m, H), 5,53 (d, H), 7,00-7,25 (m, 2H), 7,60-7,90 (m, 3H), 8,50 (d, H); retenčný čas pri analytickej HPLC: 13,31 minúty; LC-MS: m/z=619 (M+H+) .
(2-cyklohexylmetoxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amid 1-[2-(4-amino-3-chlórbenzoylamino)propionyl]pyrolidín-2-karboxylovej kyseliny (98aq)
Zlúčenina sa pripraví zo zlúčeniny 97a a alylesteru syn-(2-cyklohexylmetoxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)karbámovej kyseliny podlá postupu použitého na prípravu zlúčeniny 98a. Získa sa
113 mg (výťažok 56%) zlúčeniny uvedenej v názve. 1H NMR (500 MHz, deuterochloroform)δ 0,70-1,35 (m, 5H) , 1,35-1,90 (m, 5H) , 1,90167
-2,20 (m, 3H), 2,30-2,60 (m, H), 2,80-3,00 (m, H), 3,15-3,80 (m, 4H), 4,28-4,75 (m, 4H) , 4,89-4,93 (m, H), 5,42 (d, H), 6,74 (d, H), 6,87 (d, H), 7,30 (d, H), 7,51-7,53 (m, H), 7,74 (d, H); retenčný čas pri analytickej HPLC: 12,02 minúty; LC-MS: m/z=535 (M+H+) .
alylester (2-butoxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)karbámovej kyseliny
Zlúčenina sa pripraví z terc-butylesteru 3-alyloxykarbonylamino-4-hydroxybutánovej kyseliny podlá postupu opísaného na prípravu zlúčeniny 40 s použitím n-butanolu. Získa sa 878 mg (výťažok 29%) zlúčeniny uvedenej v názve (313 mg anti diastereoméru, 260 mg syn diastereoméru a 305 mg zmesi). 1H NMR (500 MHz, deuterochloroform) pre anti diastereomér: δ (vyššie Rf) 0,89-0,96 (t, 3H), 1, 32-1,40 (m, 2H) , 1,54-1, 63 (m, 2H), 2,37-2,41 (d, H), 2,98-3,04 (kv, H), 3,55-3,60 (m, H), 3,77-3,82 (m, H), 4,19-4,22 (m, H), 4,58 (š, 2H), 5,03 (š, H), 5,23-5,40 (m, 3H), 5,87-5,93 (m, H), pre syn diastereomér (nižšie Rf) 0,91-0,95 (t, 3H), 1,34-1,39 (m, 2H) , 1,56-1,63 (m, 2H) , 2,42-2,50 (m, H), 2,83-2,87 (m, H), 4,07-4,11 (t, H), 4,45-4,50 (m, 0,5H), 4,51-4,70 (m, 2,5H), 5,23-5,35 (m, 2H), 5,42-5,43 (d, H), 5,80-5,95 (m, H); LC-MS: m/z = 258 (M+H+) pre obidva diastereoméry.
(2-butoxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amid 1-[2-(4-amino-3-chlórbenzoylamino)propionyl]pyrolidín-2-karboxylovej kyseliny (98ar)
Zlúčenina sa pripraví zo zlúčeniny 97a a alylesteru syn-(2-butoxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)karbámovej kyseliny podlá postupu použitého na prípravu zlúčeniny 98a. Získa sa 118 mg (výťažok 48%) zlúčeniny uvedenej v názve ako syn diastereoméru.
XH NMR (500 MHz, deuterochloroform)δ 0,80-1,02 (m, 2H), 1,35-1,51
168 (m, 5H), 1,51-1,70 (m, 2H), 1,90-2,27 (m, 3H), 2,30-2,46 (m, H), 2,80-2, 90 (m, H), 3,55-3,94 (m, 4H) , 4,30-4,75 (m, 4H) , 4,90-5,00 (m, H), 5,44-5,46 (m, H), 6,73-6,80 (m, H), 6,80-6,93 (m, H), 7,16-7,25 (m, H), 7,49-7,60 (m, H), 7,70-7,84 (m, H); retenčný čas pre analytickú HPLC: 9,71 minúty; LC-MS: m/z=495 (M+H+) .
alylester (2-izobutoxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)karbámovej kyseliny
Zlúčenina sa pripraví z terc-butylesteru 3-alyloxykarbonylamino-4-hydroxybutánovej kyseliny podľa postupu opísaného na prípravu zlúčeniny s použitím izobutanolu. Získa sa 190 mg (výťažok 7,3%) zlúčeniny uvedenej v názve ako anti diastereoméru a 290 mg (výťažok 11%) syn diastereoméru. XH NMR (500 MHz, deuterochloroform) pre anti diastereomér: δ (vyššie Rf) 0,85-1,05 (m, 6H), 1,82-1,98 (m, H), 2,37-2,42 (d, H), 2,98-3,04 (m, H), 3,31-3,35 (m, H), 3, 55-3, 58 (m, H), 4,20-4,30 (t, H), 4,58 (š, 2H) , 5,07 (š, H), 5,22-5, 43 (m, 3K) , 5, 84-5, 96 (m, H), pre syn diastereomér (nižšie Rf) 0,85-1,05 (m, 6H), 1,88-1,95 (m, H), 2,40-2,51 (m, H), 2,83-2,90 (m, H), 3,33-3,36 (m, H), 3,61-3,65 (m, H), 3,87-3,88 (d, H), 4,40-4,68 (m, 3H) , 5,20-5, 40 (m, 2H) , 5, 42-5, 43 (d, H), 5,80-5,97 (m, H); LC-MS: m/z = 258 (M+H+) pre obidva diastereoméry.
(2-izobutoxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amid 1-[2-(4-amino-3chlórbenzoylamino)propionyl]pyrolidín-2-karboxylovej kyseliny (98as)
Zlúčenina sa pripraví zo zlúčeniny 97a a alylesteru syn-(2-izobutoxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)karbámovej kyseliny s použitím postupu opísaného na prípravu zlúčeniny 98a. Získa sa mg (výťažok 38%) zlúčeniny uvedenej v názve. XH NMR (500 MHz,
169 deuterochloroform)δ 0,74-0,76 (t, 0,6H), 0,80-1,00 (m, 5,4H),
1,40-1,50 (m, 3H) , 1, 90-2,22 (m, 3H) , 2, 33-2,45 (m, H), 2,80-2,90 (m, H), 3,32-3,38 (m, H), 3,55-3,80 (m, 3H), 4,38 (š, H),
4.50- 4,60 (m, H), 4,70-4,80 (m, H), 4,90-5,00 (m, H), 5,42-5,45 (m, H), 6, 74-6, 76 (d, H), 6, 86-6, 88 (d, H), 7,31-7,33 (d, H),
7.51- 7,53 (m, H), 7,74-7,75 (d, H); retenčný čas pri analytickej HPLC: 9,63 až 9,80 minúty; LC-MS: m/z = 495 (M+H+) .
alylester [2-(indan-2-yl·)oxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl]karbámovej kyseliny
Zlúčenina sa pripraví z 5,2 g (20 mmol) terc-butylesteru 3-alyloxykarbonylamino-4-hydroxybutánovej kyseliny podľa postupu opísaného na prípravu zlúčeniny vzorca 40 s použitím 8,05 g (60 mmol) 2-indanolu. Získa sa 4,10 g (výťažok 65%) zlúčeniny uvedenej v názve vo forme zmesi epimérov. Po čistení sa získa
1,76 g (výťažok 28%) 4(S), 5(R) epiméru vo forme žltého oleja.
ľH NMR (500 MHz, deuterochloroform)δ 2,42 (dd, J=17,2, 10,5 Hz,
1H), 2,79 (dd, J=17,2, 8,4 Hz, 1H) , 2,99 (dd, J=16,7, 4,1 Hz,
1H), 3,04 (dd, J=16,7, 4,1 Hz, 1H) , 3,22 (dd, J=17,2, 6, 6 Hz,
1H), 3,26 (dd, J=17,2, 6,6 Hz, 1H) , 4,53 | ;m, 3H ), 4,70 (m, 1H),
5,20 (m, 2H), 5,60 (d, J=5,3 Hz, 1H), 5,87 (m, 1H), 7,17 (m, 4H) ppm. LC-MS (ES+) : m/e = 318 (M+H) . Analytická HPLC (kolóna C18) : 17,094 minúty.
Taktiež sa izoluje 0,75 g (výťažok 12%) a 1,59 g (25%) 4(S),5(5) epiméru vo forme bielej pevnej látky. XH NMR (500 MHz, deuterochloroform)δ 2,38 (d, J=17,9 Hz, 1H), 3,0 (m, 3H) , 3,22 (m, 2H), 4,13 (m, 1H) , 4,58 (m, 2H) , 4,68 (m, 2H) , 4,98 (šs,
1H), 5,26 (m, 1H), 5,57 (s, 1H), 5,88 (ddt, J=18,0, 11,1,
5,4 Hz, 1H) , 7,20 (m, 4H) ppm. LC-MS (ES+) : m/e = 318 (M+H).
170
Analytická HPLC (kolóna C18): 17,025 (5,5%), 17,325 (94,5%) minúty.
[2-(indan-2-yloxy)-5-oxotetrahydrofuran-3-yl]amid 1-[2-(4-amino-3-chlórbenzoylamino)propionyl]pyrolidín-2-karboxylovej kyseliny (98at)
Zlúčenina sa pripraví zo zlúčeniny 97a a alylesteru [2-(indanol-2-yl)oxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl]karbámovej kyseliny podía postupu opísaného na prípravu zlúčeniny 98a. Získa sa 0,20 g (výťažok 58%) zlúčeniny uvedenej v názve vo forme zmesi epimérov 71:29 ako bielej pevnej látky. XH NMR (500 MHz, deuterochloroform)ô 1,0-1,5 (m, 3H), 1,6-2,3 (m, 4H) , 2,42 (m, 1H),
2,6-3,4 (m, 6H), 3,5-4,1 (m, 3H) , 4,2-4,9 (m, 4H) , 5,65 (d, J=5,0 Hz, 0,80H), 5,8 (m, 0,07H), 5,85 (d, J=5,0 Hz, 0,13H),
6,8-7,3 (m, 6H) , 7,4-7,9 (m, 3H) ppm. Analytická HPLC (kolóna
C18) 16, 035 (71,4%), 16,476 (28,6%) minúty. LC-MS (ES+) : m/e=555 (M+H).
[2-(indan-2-yloxy)-5-oxotetrahydrofuran-3-yl]amid 1- [2- (4-acetylamino-3-chlórbenzoylamino)propionyl]pyrolidíη-2-karboxylovej kyseliny (98au)
Zlúčenina sa pripraví zo zlúčeniny 97b a alylesteru [2-(indanol-2-yl)oxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl]karbámovej kyseliny podľa postupu opísaného na prípravu zlúčeniny 98a. Získa sa 0,22 g (výťažok 57%) zlúčeniny uvedenej v názve vo forme zmesi epimérov 76:24 ako belavej pevnej látky. TH NMR (500 MHz, deute-
rochloroform)δ 1,08 (d, J=6,9 Hz, 0,4H), 1,26 (d, J=6,9 Hz,
0,6H), 1,35 (d, J=6, 9 Hz, 2H) , 1,8-2,3 (m, 3H) , 2,28 (s, 2H),
2,29 (s, 1H), 2,4 (m , 1H), 2,8 (m, 1H), 3,10 (m, 2H) , 3,27 (m,
2H), 3,58 (m, 2H), 3, 69 (m, 1H), 4,5-4,9 (m, 4H), 5, 65 (d, J=5,3
171
Hz, 0,68H), 5,84 (d, J=5,3 Hz, 0,18H), 6,38 (š, O,14H), 6,9-7,7 (m, 6H), 7,6-7,9 (m, 3H) , 8,33 (šd, J=6,8 Hz, 0,18H), 8,51 (šd, J=8,0 Hz, 0,82H) ppm. Analytická HPLC (kolóna C18) 15,596 (76,2%), 15, 932 (23,8%) minúty. LC-MS (ES+) : m/e = 597 (M+H).
(2-cyklopentyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amid 1-[2-(4-amino-3-chlórbenzoylamino)propionyl]pyrolidín-2-karboxylovej kyseliny (98av)
Zlúčenina sa pripraví zo zlúčeniny 97a a alylesteru syn-(2-cyklopentyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)karbámovej kyseliny podľa postupu použitého na prípravu zlúčeniny 98a. Získa sa 0,19 g (výťažok 59%) zlúčeniny uvedenej v názve vo forme belavej pevnej látky. XH NMR (500 MHz, deuterochloroform)δ 1,2-2,4 (m, 15H), 2,4-3,1 (m, 2H) , 3,6-3,9 (m, 2H) , 4,2-4,4 (m, 2H) , 4,5-5,0 (m, 4H) , 5,40 (d, J=5,0 Hz, 0,35H), 5,55 (d, J=5,0 Hz, 0,65H), 6,8-8,2 (m, 5H) ppm. Analytická HPLC (kolóna C18) 14,065 minúty. LC-MS (ES+) : m/e = 507 (M+H).
(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amid 1-[2-(3,5-dichlór-4hydroxybenzoylamino)propionyl]pyrolidín-2-karboxylovej kyseliny (98aw)
Zlúčenina sa pripraví z terc-butylesteru 1-[2-(4-alyloxy-3,5-dimetylbenzoylamino)propionyl]pyrolidín-2-karboxylovej kyseliny a zlúčeniny syn-40 podľa postupu opísaného na prípravu zlúčeniny 98a. Získa sa 1,087 g (výťažok 64%) zlúčeniny uvedenej
172 v názve vo forme svetložltej pevnej látky. 1H NMR (500 MHz, deuterochloroform)δ 1,09 (d, J=6,9 Hz, 0,6H), 1,33 (d, J=6,9 Hz,
2,4H), 1,96 (m, 1H), 2,03 (m, 1H) , 2,10 (m, 1H), 2,28 (m, 0,8H),
2,40 (dd, J=17,3, 10,2 Hz, 0,8H), 2,56 (m, 0,2H), 2,85 (dd,
J=17 ,3, 8,5 Hz, 0,8H), 3,09 (dd, J=17,7, 10,2 Hz, 0,2H), 3,57
(m, 1H), 3,73 (dt, J=9,2, 7,9 Hz, 0,8H), 4,09 (m, 0,2H), 4,21
(d, J=7,9 Hz, 0,2H), 4,44 (d, J=9,5 Hz, 0, 2H), 4,55 (dd, J= :8,0,
3,0 Hz, 0,8H), 4,62 (d, J=ll,6 Hz, 1H) , 4 ,70 (m, 1H), 4,80 (m,
1H), 4,89 (d, J=U,6 Hz, 0,8H), 5,52 (d, J=5,2 Hz, 0,8H), 5,82 (d, J=5,2 Hz, 0,2H), 6,51 (š, 0,2H), 6,62 (š, 0,8H), 7,0-7,4 (m, 7H) , 7,43 (s, 0,4H), 7,66 (d, J=l,0 Hz, 1,6H) ppm. Analytická
HPLC (kolóna C18) 10,135 minúty. LC-MS (ES+) : m/e=564, 566 (6:4) (M+H).
(2-cyklopentyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amid 1-[2-(4-amino-3-chlórbenzoylamino)propionyl]pyrolidín-2-karboxylovej kyseliny (98ax)
Zlúčenina sa pripraví podľa postupu použitého na prípravu zlúčeniny (98av) s použitím anti-(2-cyklopentyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amidu. Získa sa 0,24 g (výťažok 74%) zlúčeniny uvedenej v názve vo forme belavej pevnej látky. TH NMR (500 MHz, deuterochloroform)δ 1,41 (d, J=6,5 Hz, 3H), 1,7 (m, 7H), 1,98 (š, 2H), 2,13 (š, 2H), 2,27 (m, 1H) , 2,69 (m, 1H), 2,86 (dd, J=18,0, 6,8 Hz, 0,7H), 2,98 (dd, J=18,3, 8,2 Hz, 0,3H), 3,60 (š, 1,4H),
3,77 (š, 0,6H), 4,1-4,6 (m, 5H) , 4,82 (m, 1H) , 5,27 (m, 0,65H), 5,51 (d, J=5,3 Hz, 0,05H), 5,59 (šs, 0,3H), 6,76 (š, 1H) , 7,00 (š, 1H), 7,49 (š, 1H), 7,74 (š, 1H), 7,89 (š, 1H) ppm. Analytická HPLC (kolóna C18) 9, 756 minúty. LC-MS (ES+) : m/e = 507 (M+H).
173
(2-etoxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amid 1-[2-(4-acetylamino-3— chlórbenzoylamino)propionyl]pyrolidín-2-karboxylovej kyseliny (98ay)
Zlúčenina sa pripraví z alylesteru (2-etoxy-5-oxo-tetrahydrofuran-3-yl)karbámovej kyseliny a zlúčeniny 97b podlá postupu použitého na prípravu zlúčeniny 98a. Získa sa 51 mg (výťažok 18%) zlúčeniny uvedenej v názve vo forme bielej pevnej látky. 1H NMR (500 MHz, 1:1 deuterochloroform:deuterometanol)δ 1,08-1,35 (m, 3H), 1,35-1,55 (m, 3H) , 1,75-2,44 (m, 4H) , 2,26 (s, 3H) , 2,44-3, 07 (m, 2H) , 3, 48-3,97 (m, 2H) , 4,18-4,92 (m, 5H) , 5,32 (d, 0,4H), 5,47 (d, O,1H), 5,58 (d, 0,4H), 5,64 (d, O,1H), 7,70-8,35 (m, 3H) . Analytická HPLC 10,37, 10, 54 minúty. LC-MS (ES+) m/e = 509,2 (M+H+) .
alylester [2-(2-chlóretoxy)-5-oxotetrahydrofuran-3-yl]karbámovej kyseliny
Zlúčenina sa pripraví z 5,2 g (20 mmol) terc-butylesteru 3-alyloxykarbonylamino-4-hydroxybutánovej kyseliny podlá postupu opísaného na prípravu zlúčeniny 40 s použitím 4,05 ml (60 mmol) chlóretanolu. Získa sa 1,84 g (výťažok 35%) zlúčeniny uvedenej v názve vo forme zmesi epimérov. Pre antidiastereomér: 1H NMR (500 MHz, deuterochloroform)δ 2,42 (dd, J=18,l Hz, 1H), 3,00 (dd, J=18,l, 7,8 Hz, 1H), 3,63 (m, 2H), 3,85 (m, 1H) , 4,02 (m, 1H) ,
174
4,23 (m, 1H) , 4,57 (šs, 2H) , 5,17 (šs, 1H) , 5,22 (d, H=ll,5 Hz, 1H), 5,29 (d, J=16,8 Hz, 1H) , 5,44 (s, 1H) , 5,89 (m, 1H) ppm;
LC-MS (ES+) m/e = 264 (M+H) . Pre syn-diastereomér: 1H NMR (500 MHz, deuterochloroform) δ 2,47 (dd, J=17,3, 10,7 Hz, 1H) , 2,83 (dd, J=17,3, 8,4 Hz, 1H) , 3,65 (m, 2H), 3,83 (m, 1H) , 4,11 (m, 1H), 4,57 (m, 3H), 5,22 (d, H=10,4 Hz, 1H), 5,30 (d, J=17,2 Hz, 1H), 5,33 (m, 1H) , 5,47 (d, J=5,2 Hz, 1H) , 5,89 (ddt, J=17,l, 11,0, 5,4 Hz, 1H) ppm; LC-MS (ES+) m/e = 264 (M+H).
alylester [2-(2-morfolin-4-yletoxy)-5-oxotetrahydrofuran-3-yl]karbámovej kyseliny
Zlúčenina sa pripraví z alylesteru [2-(2-chlóretoxy)-5-oxotetrahydrofuran-3-yl]karbámovej kyseliny a reakciou s 2 ekvivalentami morfolínu a 1 ekvivalentom jodidu draselného v dimetylformamide .
[2-(2-morfolin-4-yletoxy)-5-oxotetrahydrofuran-3-yl]amid 1-[2-(4-amino-3-chlórbenzoylamino)propionyl]pyrolidín-2-karboxylovéj kyseliny (98az)
Zlúčenina sa pripraví zo zlúčeniny 97a a alylesteru syn-[2-(2-morfolin-4-yletoxy)-5-oxotetrahydrofuran-3-yl]karbámovej kyseliny podľa spôsobu opísaného na prípravu zlúčeniny 98a.
alylester [2-(4-chlórbenzyloxy)-5-oxotetrahydrofuran-3-yl]karbámovej kyseliny
Zlúčenina sa pripraví z terc-butylesteru 3-alyloxykarbonylamino-4-hydroxybutánovej kyseliny podľa postupu opísaného na prípravu zlúčeniny 40 s použitím 4-chlórbenzylalkoholu. Získa sa zlúčenina uvedená v názve vo forme bielej pevnej látky. Antidiastereomér: HPLC (kolóna C18) 10, 924 minúty; XH NMR (500 MHz,
175 deuterochlorof orm) δ 2,41 (d, J=8,0 Hz, 1H), 3,02 (dd, J=18,l,
7,5 Hz, 1H), 4,25 (š, 1H) , 4,56 (m, 2H) , 4,58 (d, J=ll,7 Hz,
1H), 4,79 (d, J=ll,7 Hz, 1H) , 4,99 (š, 1H) , 5,22 (dd, J=10,4, 1,1 Hz, 1H), 5,28 (dd, J=17,2, 1,3 Hz, 1H) , 5,44 (s, 1H) , 5,86 (m, 1H), 7,25 (d, J=8,4 Hz, 2H) , 7,32 (d, J=8,4 Hz, 2H) ppm; LC-MS (ES+) m/e = 326 (M+H); Syn-diastereomér: HPLC (kolóna C18) 10,780 minúty; XH NMR (500 MHz, deuterochloroform)δ 2,47 (dd, J=17,3, 10,5 Hz, 1H), 2,85 (dd, J=17,3, 8,4 Hz, 1H) , 4,55 (m,
3H), 4,58 (d, J=ll,7 Hz, 1H) , 4,84 (d, J=ll,7 Hz, 1H), 5,23 (dd, J=10,4, 1,1 Hz, 1H), 5,30 (d, J=16,6 Hz, 1H) , 5,49 (d, J=5,0 Hz, 1H) , 5,89 (ddt, J=17,l, 11,0, 5,4 Hz, 1H) , 7,23 (d, J=8,3 Hz,
2H), 7,31 (d, J=8,3 Hz, 2H) ppm; LC-MS (ES+) m/e = 326 (M+H).
[2-(4-chlórbenzyloxy)-5-oxotetrahydrofuran-3-yl]amid 1-[2- (4-amino-3-chlórbenzoylamino)propionyl]pyrolidín-2-karboxylovéj kyseliny (98ba)
Zlúčenina sa pripraví zo zlúčeniny 97a a alylesteru syn-[2-(4-chlórbenzyloxy)-5-oxotetrahydrofuran-3-yl]karbámovej kyseliny podlá postupu opísaného na prípravu zlúčeniny 98a. Získa sa 154 mg (výťažok 65%) zlúčeniny uvedenej v názve vo forme svetlo ružovej pevnej látky. HPLC (kolóna C18) 10,597 minúty; ľH NMR (500 MHz, deuterochloroform)δ 1,14 (d, J=6,8 Hz, 0,75H), 1,34 (d, J=6,8 Hz, 2,25H), 1,6 (š, 0,25H), 1,91 (m, 1H) , 2,03 (m, 1H) ,
2,10 (m, 1H), 2,29 (m, 0,75H), 2,40 (dd, J=17,3, 10,3 Hz,
0,75H), 2,51 (m, 0,25H), 2,82 (dd, J=17,3, 8,5 Hz, 0,75H), 3,08 (dd, J=17,9, 10,9 Hz, 0,25H), 3,58 (m, 1H), 3,72 (dd, J=16,5,
8,7 Hz, 0,75H), 4,10 (m, 0,25H), 4,22 (d, J=8,0 Hz, 0,25H), 4,39 (d, J=10,8 Hz, 0,25H), 4,54 (dd, J=9,l, 2,9 Hz, 0,75H), 4,60 (d,
J=ll,9 Hz, 0,75H), 4,68 (m, 1H) , 4,85 (d, J=ll,7 Hz, 0,75H),
4,86 (m, 1H), 5,49 (d, J=5,2 Hz, 0,75H), 5,81 (d, J=5,2 Hz, 0,25H), 6,2 (š, 0,25H), 6,74 (m, 2H) , 7,05 (d, J=8,5 Hz, 0,5H),
7,17 (d, J=8,4 Hz, 0,5H), 7,30 (m, 3,25H), 7,48 (dd, J=8,4,
2,0 Hz, 0,75H), 7,56 (d, J=l,9 Hz, 0,25H), 7,73 (d, J=l,9 Hz,
0,75H), 8,42 (d, J=5,7 Hz, 0,25H) ppm; LC-MS (ES+) m/e=563, 565 (M+H).
176
[2-(4-chlórbenzyloxy)-5-oxotetrahydrofurán-3-yl]amid 1-[2-(4-acetylamino-3-chlórbenzoylamino)propionyl]pyrolidín-2-karboxylovej kyseliny (98bb)
Zlúčenina sa pripraví zo zlúčeniny 97b a alylesteru syn-[2-(4-chlórbenzyloxy)-5-oxotetrahydrofuran-3-yl]karbámovej kyseliny podlá postupu opísaného na prípravu zlúčeniny 98a. Získa sa 165 mg (výťažok 64%) zlúčeniny uvedenej v názve vo forme svetlo žltej pevnej látky. HPLC (kolóna C18) 10,491 minúty; XH NMR (500 MHz, deuterochloroform)δ 1,16 (d, J=6,8 Hz, 0,6H), 1,35 (d, J=6,8 Hz, 2,4H), 1,94 (m, 1H), 2,04 (m, 1H), 2,10 (m, 1H) , 2,25 (s, 3H), 2,28 (m, 1H) , 2,40 (dd, J=17,3, 10,4 Hz, 0,8H), 2,53 (m, 0,2H), 2,84 (dd, J=17,3, 8,5 Hz, 0,8H), 3,02 (dd, J=17,5,
10,5 Hz, 0,2H), 3,58 (m, 1H) , 3,72 (ddd, J=17,2, 8,3, 8,3 Hz,
0,8H), 4,13 (m, 0,2H), 4,22 (d, J=8,2 Hz, 0,2H), 4,40 (d,
J=10,9 Hz, 0,2H), 4,54 (dd, J=8,l, 3,0 Hz, 0,8H), 4,60 (d,
J=ll,8 Hz, 0,8H), 4,69 (m, 1H), 4,85 (d, J=ll,5 Hz, 0,8H), 4,87 (m, 1H), 5,49 (d, J=5,2 Hz, 0,8H), 5,80 (d, J=5,2 Hz, 0,2H),
6,47 (š, 0,2H), 6,95 (d, J=8,3 Hz, 0,8H), 7,05 (d, J=8,3 Hz,
0,4H), 7,18 (d, J=8,3 Hz, 0,4H), 7,29 (m, 3,2H), 7,49 (dd,
J=8,6, 1,9 Hz, 0,2H), 7,63 (dd, J=8,6, 1,9 Hz, 0,8H), 7,74 (d,
J=l,9 Hz, 1H), 7,85 (d, J=l,9 Hz, 0,8H), 8,25 (d, J=6,4 Hz,
0,2H), 8,51 (m, 0,8H) ppm; LC-MS (ES+) m/e = 605, 607 (M+H).
177
Schéma XVIII co2h
100
102a, Y=AcNH 102b, Y=NH2
terc-butylester 2-(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofurán-3-ylkarbamoyl ) piperidín-l-karboxylove j kyseliny (100)
Zlúčenina sa pripraví z 1-terc-butylesteru piperidín-1,2-dikarboxylovej kyseliny 99 a zlúčeniny 40 podlá spôsobu použitého na prípravu zlúčeniny 75. Získa sa 2,63 g (výťažok 57%) zlúčeniny uvedenej v názve. 1H NMR (500 MHz, deuterochloroform)δ 1,15-1,79 (m, 15H), 2,12-2,50 (m, 2H), 2,56-2,83 (m, 1H), 2,89 (dd, 0,5H), 3,05 (dd, 0,5H), 3,81-4,15 (šs, 1H) , 4,36-4,97 (m, 3H) , 5,37-5,61 (m, 1H), 6, 42-6, 89 (šs, 1H) , 7,17-7,51 (m, 5H) . LC-MS (ES+) m/e = 419,4 (MH+) .
terc-butylester {2- [2-(2-benzyloxy-5-oxo-tetrahydrofuran-3-ylkarbamoyl)piperidin-l-yl]-l-metyl-2-oxoetyl}karbámovej kyseliny (101) terc-Butylester 2-(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-ylkarbamoyl)piperidín-l-karboxylovej kyseliny (100) sa rozpustí v 25 ml 20% kyseliny trifluóroctovej v dichlormetáne a mieša sa 50 minút pri teplote miestnosti. Rozpúšťadlo sa odparí a zvyšok sa azeotropicky štyrikrát destiluje s dichlórmetánom. Získaný olej sa rozpustí v 20 ml dichlórmetánu a 5 ml dimetylformamidu, ochladí sa na 0°C a reaguje so 4,7 ml (27,0 mmol) DIEA, 970 mg
178 (5,1 mmol) Boc-alanínu, 924 mg (6,8 mmol) HOBT a 1,31 g (6,8 mmol) EDC a roztok sa 18 hodín mieša v dusíkovej atmosfére. Rozpúšťadlo sa odparí vo vákuu, zvyšok sa rozpustí v etylacetáte a dvakrát sa premyje 0,5N roztokom hydrogensíranu sodného, dvakrát nasýteným roztokom hydrogenuhličitanu sodného a solankou. Organická vrstva sa suší nad bezvodým síranom sodným a odparí sa. Získa sa oranžová pevná látka, ktorá sa rozpustí v dichlórmetáne a prikvapká sa k dietyléteru a získa sa biela zrazenina. Získa sa 1,21 g (výťažok 73%) zlúčeniny uvedenej v názve vo forme bielej pevnej látky. XH NMR (500 MHz, deuterochloroform)δ
1,10-1,79 (m, 18H) , 1,98-2,19 (m, 0,5H), 2,28-2,88 (m, 3H),
2,89-3,13 (m, 0,5H) , 3,78-3,95 (m, 0,5H), 4,21-5,16 (m, 5,5H),
5,38-5,59 (m, 0,3H) , 5,66 (d, 0,4H), 5,80 (d, 0,3H), 7,24-7,40
(m, 5H) . ' LC-MS (ES+) m/e = 490,3 (MH+) .
(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amid 1-[2-(4-acetylamino-3-chlórbenzoylamino)propionyl]piperidín-2-karboxylovej kyseliny (102a)
Zlúčenina sa pripraví z terc-butylesteru {2-[2-(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofurán-3-ylkarbamoyl)piperidin-l-yl]-l-metyl-2-oxoetyl}karbámovej kyseliny a 4-acetylamino-3-chlórbenzoovej kyseliny podlá postupu použitého na prípravu zlúčeniny 98a. Získa sa 71 mg (výťažok 47%) zlúčeniny uvedenej v názve. XH NMR (500 MHz, deuterochloroform)δ 1,10-1,97 (m, 10H), 2,10-2,68 (m,
5H), 2,73-3,24 (m, 2H) , 3,62-3,92 (m, 1H) , 4,24-5,27 (m, 5H) ,
5, 48-5,59 (m, 0,5H), 5,75-5,85 (m, 0,5H), 6,51-6,61 (d, 1H) , 7,05-7,45 (m, 4H), 7,52-8,12 (m, 4H). Analytická HPLC 8,30 minúty. LC-MS (ES+) m/e = 585,3 (MH+) .
(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amid 1-[2-(4-amino-3-chlórbenzoylamino)propionyl]piperidín-2-karboxylovej kyseliny (102b)
Zlúčenina sa pripraví podľa postupu opísaného skôr na prípravu zlúčeniny 102a. Získa sa 0,06 g (výťažok 27%) zlúčeniny uvedenej v názve vo forme žltej pevnej látky. XH NMR (500 MHz,
179 deuterochloroform)δ 1,2-1,8 (m, 7H), 2,1-2,6 (m, 2H), 2,7-3,2 (m, 4H), 3,6-4,0 (m, 1H), 4,3-4,9 (m, 7H), 5,0-5,8 (m, 2H), 6,5-7,0 (m, 2H) , 7,2-7,8 (m, 8H) ppm. Analytická HPLC (kolóna kyano)
14,559 (39, 6%), 15,198 (60,4%). LC-MS (ES+) : m/e = 543 (M+H).
Schéma XIX
1-benzylester 2-terc-butylester 4-hydroxypyrolidín-l,2-dikarboxylovej kyseliny (104)
Zlúčenina 104 sa pripraví podlá postupu opísaného na prípravu zlúčeniny 95.
Suspenzia 4,854 g (18 mmol) Cbz-Hyp-OH v 135 ml DMA, 4,105 g (18 mmol) benzyltrietylamóniumchloridu, 64 g (46 mmol) uhličitanu draselného a 99 ml (859 mmol) 2-bróm-2-metylpropánu sa mieša 18 hodín pri 55°C. Zmes sa zriedi ľadovou vodou a trikrát sa extrahuje etylacetátom. Organická vrstva sa premyje vodou, 0,5N roztokom hydrogensíranu sodného a solankou a rozpúšťadlo sa od180 parí vo vákuu a získa sa 5,368 g (výťažok 98%) zlúčeniny uvedenej v názve vo forme žltého oleja. XH NMR (500 MHz, deuterochloroform)ô 1,33 (s, 5H), 1,47 (s, 4H), 2,01-2,14 (m, IH), 2,22-2,38 (m, IH), 3,50-3,72 (m, 2H) , 4,34-4,45 (m, IH) , 4,45-4,53 (m, IH), 5,04-5,20 (m, 2H) , 7,22-7,42 (m, 5H) . Analytická HPLC
10.14 minúty. LC-MS (ES+) m/e = 322,2 (MH+) .
1-benzylester 2-terc-butylester 4-fluórpyrolidín-1,2-dikarboxylovej kyseliny (105)
Roztok 4,262 g (13,96 mmol) zlúčeniny 104 v 100 ml dichlórmetánu sa pri -78°C reaguje s 1,80 ml (13,6 mmol) DAST, mieša sa 10 minút a potom sa zohreje na teplotu miestnosti a mieša sa 60 hodín v dusíkovej atmosfére. Zmes sa naleje do 350 ml 10% ľadového roztoku hydrogénuhličitanu sodného a dvakrát sa extrahuje dichlórmetánom. Organická vrstva sa premyje vodou, soľankou, suší sa nad bezvodým síranom sodným a odparí sa, pričom sa získa 4,299 g hnedého oleja, ktorý sa čistí pomocou flash kolónovej chromatografie na silikagéli s použitím zmesi hexánu a etylacetátu (90/10 až 80/20%) ako eluentu. Získa sa 2,805 g (výťažok 64%) zlúčeniny uvedenej v názve vo forme žltého oleja. XH NMR (500 MHz, deuterochloroform)δ 1,37 (s, 4,5H), 1,45 (s, 4,5H),
2,20-2,55 (m, 2H) , 3,61-3,93 (m, 2H) , 4,41 (d, 0,5H), 4,49 (d,
0,5H), 5,03-5,21 (m, 3H) , 7,23-7,44 (m, 5H) . Analytická HPLC
12.15 minúty. LC-MS (ES+) m/e = 324,2 (MH+) .
1-benzylester 2-terc-butylester 1-(2-benzyloxykarbonylaminopropionyl)-4-fluórpyrolidín-1,2-dikarboxylovej kyseliny (106)
Roztok 2,72 g (8,42 mmol) zlúčeniny 105 v 50 ml metanolu a 1,27 g 10% paládia na uhlí sa mieša 2 hodiny vo vodíkovej atmosfére, potom sa filtruje cez kremelinu a rozpúšťadlo sa odparí a získa sa 1,526 g žltého oleja. Tento olej sa rozpustí v 30 ml dichlórmetánu a reaguje pri 0°C s 1,5 ml (8,6 mmol) DIEA, 2,34 g (10,5 mmol) Cbz-ala-OH a 2,32 g (12 mmol) EDC. Zmes sa mieša ďalších 10 minút pri teplote 0°C, potom sa nechá zohriať na teplotu miestnosti a mieša sa 18 hodín. Rozpúšťadlo sa odparí vo
181 vákuu a zvyšok sa rozpustí v etylacetáte, potom sa dvakrát premyje 0,5N roztokom hydrogensíranu sodného, dvakrát nasýteným roztokom hydrogénuhličitanu sodného a solankou. Organická vrstva sa suší nad bezvodým síranom sodným a odparí sa, pričom sa získa biela pevná látka ktorá sa čistí pomocou flash kolónovej chromatografie s použitím zmesi hexánu a etylacetátu (80/20 až 60/40%) ako eluentu. Získa sa 286 g (výťažok 86% z 1-benzylesteru
2-terc-butylesteru 4-fluórpyrolidín-l,2-dikarboxylovej kyseliny). XH NMR (500 MHz, deuterochloroform)δ 1,26-1,59 (m, 12H) ,
2,20-2,67 (m, 2H) , 3,45-4,13 (m, 2H) , 4,25-4,47 (m, 1H) , 4,58-4,71 (m, 1H), 4,96-5,17 (m, 2H) , 5,19-5,45 (m, 1H) , 7,23-7,48 (m, 5H) . Analytická HPLC 16,36 minúty. LC-MS (ES+) m/e = 395,3 (MH+) .
terc-butylester 1-[2-(4-amino-3-chlórbenzoylanino)propionyl]-4-fluórpyrolidín-2-karboxylovej kyseliny (107)
Suspenzia 2,65 g (6,72 mmol) zlúčeniny 106 v 40 ml metanolu a 1,32 g 10% paládia na uhlí sa mieša 1,5 hodiny vo vodíkovej atmosfére, filtruje sa cez kremelinu a odparí sa, pričom sa získa 1,694 g voskovitej pevnej látky. Pevná látka sa rozpustí v 25 ml dichlórmetánu a reaguje pri 0°C s 3,4 ml (19,5 mmol) DIEA, 1,362 g (7,9 mmol) 4-amino-3-chlórbenzoovej kyseliny, 1,164 g (8,62 mmol) HOBT a 1, 64 5 g (8,57 mmol) EDC. Zmes sa nechá zohriať na teplotu miestnosti a mieša sa 18 hodín. Rozpúšťadlo sa odparí vo vákuu. Zvyšok sa rozpustí v etylacetáte, štyrikrát sa premyje vodou, dvakrát 0,5N roztokom hydrogensíranu sodného, dvakrát nasýteným roztokom hydrogénuhličitanu sodného a solankou. Organická vrstva sa suší nad bezvodým síranom sodným a odparí sa, pričom sa získa biela pevná látka, ktorá sa čistí pomocou flash kolónovej chromatografie s použitím zmesi dichlórmetánu a metanolu (99/1 až 98/2%) ako eluentu. Získa sa 2,705 g (výťažok 97%) produktu vo forme bielej pevnej látky. XH NMR (500 MHz, deuterometanol)δ 1,33 (s, 9H) , 1,48 (d, 3H), 2,31-2,55 (m, 2H) , 3,93 (dd, 1H) , 4,02-4,21 (m, 1H) , 4,59-4,76 (m, 1H) , 5,31 (šs, 0,5H), 5,41 (šs, 0,5H), 6,78 (d, 1H) , 7,57 (dd, 1H) ,
182
7,78 (s, 1H), 8,31 (d, 1H). Analytická HPLC 14,14 minúty. LC-MS (ES+) m/e = 414,2 (MH+) .
(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amid 1-[2-(4-amino-3-chlórbenzoylamino)propionyl]-4-fluórpyrolidín-2-karboxylovej kyseliny (108a)
Zlúčenina sa pripraví z alylesteru syn-(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)karbámovej kyseliny a zlúčeniny 107a podľa spôsobu použitého na prípravu zlúčeniny 98a. Izoluje sa 41 mg (výťažok 15%) zlúčeniny uvedenej v názve vo forme bielej pevnej látky. 1H NMR (500 MHz, deuterometanol)δ 0,94 (d, 0,3H), 1,07 (d, 1H), 1,40 (m, 1,7H), 2,21-2,65 (m, 2,2H), 2,70-2,85 (m, 1,4H), 2, 96-3,08 (m, 1,4H), 2,96-3,08 (dd, 0,4H), 3,57-4,24 (m, 3H) , 4,41-4,93 (m, 4H) , 5,14-5,45 (m, 1H) , 5, 60-5,67 (m, 0,6H), 5,77 (d, 0,4H), 6,77 (dd, 1H), 7,15-7,41 (m, 5H) , 7,51-7,62 (m, 1H),
7,77 (dd, 1H). Analytická HPLC 12,83 minúty. LC-MS (ES+) m/e = 547,1 (MH+) .
(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amid 1-[2-(4-amino-3-chlórbenzoylamino)propionyl]-4-fluórpyrolidín-2-karboxylovej kyseliny (108b)
Zlúčenina sa pripraví z alylesteru (2-benzyloxy-5-oxo-tetrahydrofuran-3-yl)karbámovej kyseliny a zlúčeniny 107a podía postupu použitého na prípravu zlúčeniny 98a. Izoluje sa 654 mg (výťažok 54%) zlúčeniny uvedenej v názve vo forme bielej pevnej
183 látky. XH NMR (500 MHz, deuterometanol)δ 1,07 (d, 0,5H), 1,25-1,56 (m, 2,5H), 2,21-2,65 (m, 2,3H), 2,68-2,89 (m, 1H) , 2,91-3,10 (m, 0,7H), 3,57-4,23 (m, 2H), 4,32-4,95 (m, 5H), 5,16-5,52 (m, 1H), 5,45-5,50 (m, 0,3H), 5,54-5,58 (m, 0,2H), 5,61-5,67 (m, 0,3H), 5,77 (d, 0,2H), 6, 72-6, 84 (m, 1H) , 7,16-7,41 (m, 5H) ,
7,50-7,65 (m, 1H) , 7,71-7,87 (m, 1H). Analytická HPLC 12,83 mi-
(2-etoxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amid 1-[2-(4-amino-3-chlórbenzoylamino)propionyl]-4-fluórpyrolidín-2-karboxylovej kyseliny (108c)
Zlúčenina sa pripraví z alylesteru syn-(2-etoxy-5-oxo-tetrahydrofuran-3-yl)karbámovej kyseliny a zlúčeniny 107a podľa postupu opísaného na prípravu zlúčeniny 98a. Získa sa 100,3 mg (výťažok 38%) zlúčeniny uvedenej v názve. XH NMR (500 MHz, deuterometanol)ô 1,09 (t, 1,2H), 1,25 (t, 1,8H), 1,40 (d, 1H) , 1,49 (d, 2H) , 2,33-2,61 (m, 2H) , 2,65-2,95 (m, 2H) , 3,44-4,30 (m,
4H), 4,47-4,79 (m, 3H), 5,18-5,25 (m, 0,2H), 5,27-5,36 (m,
0,5H), 5,39-5,46 (m, 0,3H), 5,56 (m, 1H) , 6, 72-6, 94 (m, 0,8H),
7,54-7,69 (m, 0,8H), 7,79 (d, 0,55H), 8,06 (d, 0,55H), 9,00 (d, 0,3H). Analytická HPLC 8,46 minúty. LC-MS (ZS+) m/e = 485,2
[2-(2-izopropyl-5-metylcyklohexyl)-5-oxotretrahydrofuran-3-yl]amid 1-[2-(4-amino-3-chlórbenzoylamino)propionyl]-4-fluórpyroli184 dín-2-karboxylovej kyseliny (108d)
Zlúčenina sa pripraví z alylesteru {2-(ÍR-(2S-izopropyl-5Rmetylcyklohexyloxy)]-5-oxotetrahydrofuran-3-yl}karbámovej kyseliny a zlúčeniny 107a podľa postupu opísaného na prípravu zlúčeniny 98a. Získa sa 95 mg (výťažok 31%) zlúčeniny uvedenej v názve. 3H NMR (500 MHz, deuterometanol)δ 0,42 (d, 2H), 0,57 (d, 2H), 0,60-1,10 (m, 10H), 1,22-1,76 (m, 6H) , 1,96-2,17 (m, 1H),
2,29-2,60 (m, 2H) , 2,61-2,88 (m, 1,5H), 3,02-3,23 (dd, 0,5H),
3,37-3,47 (m, 0,5H), 3,50-3,61 (m, 0,5H), 3,63-4,24 (m, 2H) ,
4,48-4,62 (m, 3H) , 5,18-5,48 (m, 1H) , 5,72 (d, 0,4H), 5,82 (d,
0,6H), 6, 77-6, 84 (m, 1H) , 7,53-7,67 (m, 1H) , 7,78 (d, 0,4H),
7,84 (d, 1H). Analytická HPLC 8,34 minúty. LC-MS (ES+) m/e = 595 (MH+) .
Schéma XX
terc-butylester {2-[2-(2-etoxy-5-oxotetrahydrofuran-3-ylkarbamoyl)pyrolidin-l-yl]-l-metyl-2-oxoetyl}karbámovej kyseliny (109)
Zlúčenina sa pripraví z alylesteru (2-etoxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)karbámovej kyseliny 74 podľa spôsobu použitého na prípravu zlúčeniny 75. Získa sa 660 mg (výťažok 73%) zlúčeniny uvedenej v názve vo forme svetložltej pevnej látky. 1H NMR
185 (500 MHz, deuterometanol)Ô 1,14-1,36 (m, 6H) , 1,42 (s, 9H), 1,75-2,29 (m, 0,5H), 2,99 (dd, 0,5H), 3,43-3,91 (m, 4H) , 4,07-4,52 (m, 2,5H), 4,53-4,72 (m, 0,5H), 5,37 (s, 0,5H), 5,57 (d, 0,5H). Analytická HPLC (zmes 2 diastereomérov) 7,92, 8,14 minúty. LC-MS (ES+) m/e = 414,3 (MH+) .
(2-etoxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amid 1-[2-(4-alyloxy-3,5-dichlórbenzoylamino)propionyl]pyrolidín-2-karboxylovej kyseliny (110)
Zlúčenina sa pripraví zo zlúčeniny 109 a 4-alyloxy-3,5-dichlórbenzoovej kyseliny podlá postupu opísaného na prípravu zlúčeniny 82. Získa sa 228 mg (65%) zlúčeniny uvedenej v názve vo forme bielej pevnej látky. 1H NMR (500 MHz, deuterometanol)δ 1,10-1,30 (m, 4H), 1,32-1,52 (m, 3H), 1,63-2,31 (m, 4H), 2,41-2,50 (d, 0,5H), 2,52-2,61 (dd, 0,5H), 2,67-2,81 (m, 0,5H),
2,94-3,05 (dd, 0,5H), 3,47-3,96 (m, 4H), 4,21-4,81 (m, 5H),
5,22-5,32 (m, 1H) , 5,35-5,49 (m, 1,5H), 5, 55-5, 63 (m, 0,5H),
6,06-6,21 (m, 1H) , 7,90 (s, 1H) . Analytická HPLC (zmes 2 diastereomérov) 12,56 minúty. LC-MS (ES+) m/e = 542,3 (MH+) .
(2-etoxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amid 1-[2-(3,5-dichlór-4-hydroxybenzoylamino)propionyl]pyrolidín-2-karboxylovej kyseliny (111)
K roztoku 194 mg (0,36 mmol) zlúčeniny 110 v 5 ml dichlórmetánu sa pri 0°C pridá 70,7 mg (0,45 mmol) DMBA a 50,3 mg (0,044 mmol) Pd(PPh3)4. Roztok sa po 15 minútach zohreje na teplotu miestnosti, mieša sa 2 hodiny, zriedi sa dichlórmetánom, potom sa dvakrát premyje vodou a solankou. Organická vrstva sa suší nad bezvodým síranom sodným a odparí sa, pričom sa získa surový produkt. Po čistení pomocou flash chromatografie s použitím zmesi dichlórmetánu a metanolu (99/1 až 95/5%) ako eluentu sa získa 138,6 mg (výťažok 77%) zlúčeniny uvedenej v názve. ςΗ NMR (500 MHz, deuterometanol)δ 1,13-1,31 (m, 3H) , 1,35-1,49 (m, 3H), 1, 84-2,35 (m, 4H) , 2, 43-3, 05 (m, 2H) , 3, 48-3, 93 (m,
4H), 4,22-4,80 (m, 3H) , 5,38 (d, 0,4H), 5,46 (s, 0,lH), 5,55186
-5,61 (m, 0,5H), 7,76-7,94 (m, 2H). Analytická HPLC 8,70 minúty. LC-MS (ES+) m/e = 502,2 (MH+) .
Schéma XXI
115b, X=CI, Y=AcNH, Z=H 115c, X=CI, Y=AcNH, Z=CH3O
Zlúčeniny 116a-116h sa pripravia podlá poscupu opísaného na prípravu zlúčeniny 98 len náhradou terc-butylesteru l-(2-benzyloxykarbonylaminopropionyl)-4,4-difluórpyrolidín-2-karboxylovej kyseliny (114) za terc-butylester 1-(2-benzyloxykarbonylaminopropionyl)pyrolidín-2-karboxylovej kyseliny (95).
Príprava terc-butylesteru 1-(2-benzyloxykarbonylaminopropionyl)-4,4-difluórpyrolidín-2-karboxylovej kyseliny (114)
Roztok 0,42 g (1,23 mmol) 1-benzylesteru 2-terc-butylesteru
4,4-difluórpyrolidín-l,2-dikarboxylovej kyseliny (113) (Karanew187 sky a kol., J. Med. Chem. 33, str. 1459-1469 (1990) a 0,22 g 10% paládia na uhlí v 6 ml metanolu sa mieša 3 hodiny pri tlaku vodíka 105 Pa. Zmes sa filtruje cez kremelinu a odparí sa. Zvyšok sa rozpustí v 4 ml dichlórmetánu a 2 ml dimetylformamidu a ochladí sa na 0°C. Pridá sa 0,30 g (1,35 mmol) 2-benzyloxykarbonylaminopropiónovej kyseliny, 0,30 g (1,54 mmol) EDC, 0,65 ml DIEA a 0,17 g (1,23 mmol)HOBt a reakčná zmes sa mieša 0,5 hodiny pri 0°C, potom 16 hodín pri teplote miestnosti v dusíkovej atmosfére. Rozpúšťadlo sa odparí vo vákuu a zvyšok sa rozpustí v etylacetáte, potom sa premyje 10% roztokom hydrogensíranu sodného, nasýteným roztokom hydrogénuhličitanu sodného, vodou a solankou, suší sa nad síranom sodným a odparí sa. Po čistení pomocou flash chromatografie na silikagéli s použitím zmesi 25:75 etylacetátu a hexánu sa získa 0,39 g (výťažok 77%) terc-butylesteru 1-(2-benzyloxykarbonylaminopropionyl)-4,4-difluórpyrolidín-2-karboxylovej kyseliny vo forme bezfarebného oleja. XH NMR (500 MHz, deuterochloroform)δ 1,3-1,6 (m, 12H), 2,5 (m, 0,8H),
2,7 (m, 1,2H), 3,9 (m, 1H) , 4,1 (m, 1H) , 4,4 (m, 1H) , 4,7 (m, 1H), 5,1 (m, 2H), 5,59 (šd, J=7,7 Hz, 0,8H), 5,7 (šd, J=7,7 Hz, 0,2H), 7,35 (m, 5H) ppm. Analytická HPLC (kolóna kyano) 17,069 minúty. LC-MS (ES+) : m/e = 413 (M+H) , 357 (M+H-terc-butyl) , 313 [m+H-(CO2terc-butyl)].
(2-benzyloxy-5-oxo-tetrahydrofuran-3-yl)amid 1-[2-(4-amino-3-chlórbenzoylamino)propionyl]-4,4-difluórpyrolidín-2-karboxylovej kyseliny (116a)
Zlúčenina sa pripraví zo zlúčeniny 115a a zlúčeniny syn-40.
Získa sa 0,14 g (výťažok 73%) zlúčeniny uvedenej v názve vo forme belavej pevnej látky. XH NMR (500 MHz, deuterometanol)δ 1,0-1,5 (m, 3H) , 2,0-3,5 (m, 4H+CH3OH) , 3,5-5,5 (M, 6H+H2O) , 5,6-5,8
188 (m, 1H), 6,7-6,8 (m, 1H) , 7,1-7,8 (m, 8H) , 8,2-8,6 (m, 1H) ppm. Analytická HPLC (kolóna kyano) 13, 744 minúty. LC-MS (ES+) : m/e=565 (M+H).
(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amid 1-[2-(4-acetylamino-3-chlórbenzoylamino)propionyl]-4,4-difluórpyrolidín-2-karboxylovej kyseliny (116b)
Zlúčenina sa pripraví zo zlúčeniny 115b a zlúčeniny syn-40. Získa sa 0,08 g (výťažok 38%) zlúčeniny uvedenej v názve vo forme belavej pevnej látky. XH NMR (500 MHz, deuterochloroform)δ 1,03 (d, J=6,9 Hz, 0,4H), 1,30 (d, J=6, 9 Hz, 0,6H), 2,25 (d,
J=2,9 Hz, 3H), 2,4-3,2 (m, 4H) , 3,6-4,4 (m, 4H) , 4,6-4,9 (m,
3H), 5,52 (d, J=5,2 Hz, 0,6H), 5,78 (d, J=5,2 Hz, 0,4H), 6,6 (šs, 1H), 6,9-7,9 (m, 8H), 8,39 (d, J=8,l Hz, 0,4H), 8,44 (d, J=8,3 Hz, 0,6H), 8,74 (d, J=6,8 Hz, 1H) ppm. Analytická HPLC (kolóna kyano) 11,830 minúty. LC-MS (ES+) : 607 (M+H).
(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amid 1-[2-(4-acetylamino-5-chlór-2-metoxybenzoylamino)propionyl]-4,4-difluórpyrolidín-2-karboxylovej kyseliny (116c)
Zlúčenina sa pripraví zo zlúčeniny 115c a zlúčeniny syn-40.
Získa sa 0,07 g (výťažok 29%) zlúčeniny uvedenej v názve vo forme belavej pevnej látky. 1H NMR (500 MHz, deuterochloroform)δ
0,99 (d, J=6,9 Hz, 1,35H), 1,32 (d, J=6,9 Hz, 1,65H), 2,25 (s,
189
1,5H), 2,26 (s, 1,5H), 2,3-3,2 (m, 4H) , 3,95 (s, 0,55H), 3, 98
(s, 0,45H), 3,7-4,1 (m, 2,5H) , 4,2-4,5 (m, 1,5H), 4,6-4,9 (m,
3H) , 5,52 (d, J=5,3 Hz, 0,55H), 5,80 (d, J=5,3 Hz, 0,45H), 7,0-
-7,4 (m, 4H), 7,7-7,9 (m, 2H) , 8,0-8 ,4 (m, 2H), 8,49 (d,
J=6,5 Hz, 1H), 8,93 (d, J=6,7 Hz , 1H) ppm. Analytická HPLC (ko-
Ióna kyano) 12,959 minúty. LC-MS (ES+) : m/e = 637 (M+H).
(2-etoxy-5-oxo-tetrahydrofuran-3-yl)amid 1-[2-(4-acetylamino-3-chlórbenzoylamino)propionyl]-4,4-difluórpyrolidín-2-karboxylovej kyseliny (116d)
Zlúčenina sa pripraví zo zlúčeniny 115b a alylesteru syn-(2-etoxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)karbámovej kyseliny. Získa sa 0,27 g (výťažok 66%) belavej pevnej látky vo forme zmesi epimérov 92:8. XH NMR (500 MHz, deuterochloroform)δ 1,0-1,5 (m,
6H), 2,25 (s, 1,8H), 2,26 (s, 1,2H), 2,3-3,1 (m, 4H) , 3,3-4,3 (m, 4H) , 4,5-4,9 (m, 3H) , 5,45 (d, J=5,3 Hz, 0,75H), 5,59 (d, J=5,2 Hz, 0,25H), 6,7-7,1 (m, 2H), 7,62 (dd, J=3,7, 2,0 Hz, 1H), 7,76 (m, 1H), 7,85 (d, J=2,0 Hz, 1H) , 8,48 (m, 1H) ppm. Analytická HPLC (kolóna C18) 13,300 (91,8%), 14,046 (8,2%) minúty.
LC-MS (ES+) : m/e 545 (M+H) .
(2-cyklohexyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amid 1-[2-(4-acetylamino-3-chlórbenzoylamino)propionyl]-4,4-difluórpyrolidín-2-karboxylovej kyseliny (116e)
Zlúčenina sa pripraví zo zlúčeniny 115b a alylesteru
190 syn-(2-cyklohexyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)karbámovej kyseliny. Získa sa zlúčenina uvedená v názve vo forme zmesi epimérov 93:7. 1H NMR (500 MHz, deuterochloroform)δ 1,0-2,0 (m, 13H) , 2,25 (s, 2H), 2,26 (s, 1H), 2,40 (dd, J=17,3, 10,1 Hz, 1H), 2,84 (dd, J=17,3, 8,5 Hz, 1H), 2,5-3,0 (m, 2H) , 3,5-4,3 (m, 3,5H), 4,5-4,9 (m, 2,5H), 5,59 (d, J=5,3 Hz, 0,75H), 5,76 (d, J=5,2 Hz, 0,25H),
6,74 (šd, J=5,7 Hz, 0,25H), 6,93 (šd, J=7,l Hz, 1H), 7,06 (šd,
J=7,8 Hz, 0,75H), 7,62 (dd, J=8,6, 2,0 Hz, 1H) , 7,78 (m, 1H),
7,85 (d, J=2,0 Hz, 1H) , 8,35 (šd, J=6,6 Hz, 0,25H), 8,50 (šd,
J=8,2 Hz, 0,75H) ppm. Analytická HPLC (kolóna C18) 17, 112 (93%),
17, 433 (7%) minúty. LC-MS (ES+) : m/e = 599 (M+H).
[2-(indanol-2-yl)oxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl]amid 1-[2-(4-acetylamino-3-chlórbenzoylamino)propionyl]-4,4-difluórpyrolidín-2-karboxylovej kyseliny (116f)
Zlúčenina sa pripraví zo zlúčeniny 115b a alylesteru [2-(indanol-2-yl)oxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl]karbámovej kyseliny.
Získa sa 0,34 g (výťažok 71%) zlúčeniny uvedenej v názve vo forme zmesi epimérov 62:38 ako belavej pevnej látky. 1H NMR (500 MHz, deuterochloroform)δ 1,09 (d, J=6,9 Hz, 0,6H), 1,21 (d,
J=6,9 Hz, 0, 9H) , 1,33 (d, J=6,9 Hz, 0,9H), 1,42 (d, J=6,9 Hz,
0,6H), 2,28 (s, 2H), 2,29 (s, 1H), 2,40 (dd, J=17,4, 10,3 Hz,
1H), 2,4-3,3 (m, 7H), 3,6-4,2 (m, 2H), 4,5-4,8 (m, 4H) , 5,66 (m,
0,6H), 5,84 (d, J=4,3 Hz, 0,2H), 6,22 (m, 0,2H), 6,7-7,0 (m,
2H), 7,2-7,3 (m, 4H), 7,5-7,7 (m, 1H), 7,8-8,0 (m, 2H), 8,52 (m,
0,6H), 8,62 (šd, J=6,5 Hz, 0,4H) ppm. Analytická HPLC (kolóna
C18) 16,556 (62,0%), 16,824 (38,0%) minúty. LC-MS (ES+) : m/e=633 (M+H).
191
(2-cyklopentylmetoxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amid 1-[2-(4-acetylamino-3-chlórbenzoylamino)propionyl]-4,4-difluórpyrolidín-2-karboxylovej kyseliny (116g)
Zlúčenina sa pripraví zo zlúčeniny 115b a alylesteru syn-(2-cyklopentylmetoxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)karbámovej kyseliny. Získa sa 0,20 g (výťažok 44%) zlúčeniny uvedenej v názve vo forme belavej pevnej látky. 1H NMR (500 MHz, deuterochloroform)δ 1,0-1,8 (m, 11H), 1,9-3,0 (m, 5H), 2,26 (s, 3H), 3,29 (m, 0,25H), 3,47 (m, 0,75H), 3,58 (m, 0,25H), 3,74 (m, 0,75H), 3,8 (m, 0,75H), 4,1 (m, 0,25H), 4,25 (m, 1H), 4,4-4,8 (m, 3H), 5,44 (d, J=5,2 Hz, 0,75H), 5,62 (d, J=5,2 Hz, 0,25H), 6,7 (š, 0,25H), 6,91 (d, J=7,l Hz, 1H), 7,1 (m, 0,75H), 7,59 (d, J=8,5 Hz,
0,25H), 7,63 (dd, J=8,5, 2,5 Hz, 0,75H), 7,75 (m, 1H), 7,86 (d, J=l,8 Hz, 1H), 8,33 (šd, J=6,5 Hz, 0,25H), 8,49 (šd, J=8,4 Hz,
0,75H) ppm. Analytická HPLC (kolóna C18) 17,705 minúty. LC-MS (ES+) : m/e = 599 (M+H) .
(2-fenyletoxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amid 1-[2-(4-acetylamino-3-chlórbenzoylamino)propionyl]-4,4-difluórpyrolidín-2-karboxylovej kyseliny (116h)
Zlúčenina sa pripraví zo zlúčeniny 115b a alylesteru syn-(5-oxo-2-fenetyloxytetrahydrofuran-3-yl)karbámovej kyseliny. Získa sa 0,15 g (výťažok 24%) zlúčeniny uvedenej v názve vo forme belavej pevnej látky. XH NMR (500 MHz, deuterochloroform)δ 1,29 (d, J=6,9 Hz, 0,75H), 1,40 (d, J=6,9 Hz, 2,25H), 2,25 (s,
192
2,25Η), 2,26 (s, 0,75Η), 2,3-3,0 (m, 6Η), 3,7-4,8 (m, 7Η), 5,38 (d, J=5,3 Hz, 0,75H), 5,67 (d, J=5,l Hz, 0,25H), 6,65 (m, 1H) ,
(d, J=7,0 Hz, 0,75H), 7,06 (d, J=7,6 Hz, 0,25H), 7,1-7,3
5H) , 7,57 (d, J=8,6 Hz, 0,25H) , 7,63 (d, J=8,6 Hz, 0,75H),
(m, 1H), 7,86 (d, J=l,8 Hz, 1H), 8,35 (d, J=6,2 Hz, 0,25H),
(d, J=8,3 Hz, 0,75H) ppm. Analytická HPLC (kolóna C18)
17,265 minúty. LC-MS (ES+) : m/e = 621 (M+H).
Schéma XXII
Boe
+
117
CO2H
AlloCs. . N H
Boe
118
OO
120b= syn terc-butylester 2-(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-ylkarbamoyl)pyrolidín-l-karboxylovej kyseliny (118)
Zlúčenina sa pripraví z 1,16 g (4,0 mmol) zlúčeniny 40 a Boc-Pro-OH podľa postupu použitého na prípravu zlúčeniny 100 (schéma XVIII). Získa sa 1,53 g (výťažok 94%) zlúčeniny uvedenej v názve vo forme bielej pevnej látky. XH NMR (500 MHz, deuterochloroform)ô 1,61 (š, 9H) , 1,88 (š, 2H) , 2,00-2,50 (m, 3H), 2,80-3,10 (m, H), 3,20-3,60 (m, 2H), 4,05-4,45 (m, 1,5H), 4,58-4,80 (m, 1,5H), 4,83-4,98 (m, H), 5,43-5,53 (m, H), 7,26-7,45 (m, 5H) , 7,60-7,80 (d, H); Analytická HPLC: 11,32 minúty; LC-MS:
m/e=405 (M+H+) .
2-Fenylaminopropiónová kyselina (119)
Zmes 356 mg (4,0 mmol) alanínu, 816 mg (4,0 mmol) jódbenzé193 nu, 160 mg (0,2 mmol) trans-dichlórbis(tri-o-tolylfosfín)paládia (II) {Pd [P (o-Tol) 3] 2C12}, 40 mg (0,2 mmol) jodidu meďného, 552 mg (4,0 mmol) uhličitanu draselného, 160 mg (0,8 mmol) benzyltrietylamóniumchloridu, 1,6 ml trietylamínu a 0,8 ml vody v 8 ml dimetylformamidu sa 20 hodín mieša pri 100°C v dusíkovej atmosfére. Zmes sa ochladí na teplotu miestnosti, zriedi sa 50 ml etylacetátu a 50 ml vody, okyslí sa pridaním 6N kyseliny chlorovodíkovej na pH = 2 až 3. Vodná vrstva sa extrahuje štyrikrát 50 ml etylacetátu. Spojené organické vrstvy sa premyjú vodou, soiankou, sušia sa nad bezvodým síranom sodným, filtrujú sa a odparia vo vákuu, pričom sa získa červený olej. Po čistení pomocou zmesi hexánu, etylacetátu a kyseliny octovej (95/5/0,5 až 80/20/0,5) sa získa 300 mg (výťažok 45%) zlúčeniny uvedenej v názve vo forme ružovej pevnej látky. XH NMR (500 MHz, deuterochloroform/deuterometanol = 0,5 ml/3 kvapky): δ 1,45 (d, 3H), 4,02-4,15 (m, H), 6, 57-6, 70 (m, 3H) , 7,11-7,25 (m, 2H) ; analytická HPLC: 6,10 minúty. LC-MS: m/e = 166 (M+H+) .
(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amid 1-(2-fenylaminopropionyl)pyrolidín-2-karboxylovej kyseliny (120a a 120b)
Roztok 405 mg (1,0 mmol) zlúčeniny 118 1 hodinu reaguje s 2 ml kyseliny trifluóroctovej v 2 ml dichlórmetánu. Reakčný roztok sa odparí vo vákuu a azeotropicky štyrikrát destiluje s dichlórmetánom a získa sa (2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amid pyrolidín-2-karboxylovej kyseliny vo forme svetlo žltej pevnej látky. XH NMR (500 MHz, deuterochloroform)δ 1,87-2,15 (m, 4H), 2,30-2,70 (m, 2H) , 2,80-3,08 (m, H), 3,45 (š, 2H) , 4,35-4,98 (m, 3H) , 5,30-5, 56 (m, H), 7,10-7,60 (m, 5H) ; analytická HPLC: 7,78/8,20 minúty; LC-MS: m/e = 305 (M+H+) .
300 mg (1,8 mmol) 2-fenylaminopropiónovej kyseliny (119) v ml dichlórmetánu pri 0°C 10 minút reaguje s 270 mg (2,0 mmol)
HOBT a 2,1 g (11 mmol) EDC. Pridajú sa 2 ml diizopropyletylamínu a potom roztok (2-benzyloxy-5-oxo-tetrahydrofuran-3-yl)amidu pyrolidín-2-karboxylovej kyseliny v 10 ml dichlórmetánu. Zmes sa
194 mieša 4 hodiny pri teplote miestnosti, zriedi sa 40 ml dichlórmetánu, premyje sa vodou a potom solankou. Organická vrstva sa suší nad bezvodým síranom sodným, filtruje sa a odparí sa vo vákuu, pričom sa získa žltá pevná látka. Po čistení pomocou flash chromatografie s použitím zmesi dichlórmetánu a metanolu (99/1 až 98/2) sa získa 151 mg (výťažok 33%) anti diastereoméru zlúčeniny uvedenej v názve 120a a 129 mg (výťažok 29%) syn diastereoméru (120b) vo forme bielej pevnej látky. 1H NMR (500 MHz, deuterochloroform)pre anti diastereomér: δ 1,37-1,41 (m, 3H) ,
1,50-2,45 (m, 4H) , 2,60-2,70 (m, 0,3H), 2,89-2, 94 (m, 0,7H),
3,40-3,80 (m, 2H) , 4,10-4,50 (m, 3H) , 4,50-4,90 (m, 3H) , 5,26 (s, 0,3H), 5,38 (s, 0,7H), 6,45-6,60 (m, 2,3H), 6,65-6,80 (m,
H), 7,10-7,20 (m, 2,5H), 7,25-7,50 (m, 4,5H), 7,53-7,70 (m,
0,7H), 7,82 (d, H). Pre syn diastereomér: 0,86-0,89 (m, H),
1,20-1,40 (m, 4H), 1,80-2,45 (m, 4H) , 2, 80-2,86 (m, H), 3,58-3,65 (m, 2H), 4,20-4,40 (m, H), 4,50-4,75 (m, 2H), 4,90 (d, H), 5,52 (d, H), 6,45-6,70 (m, 3H), 6,75-6,85 (m, H), 7,10-7,20 (m, 2,3H), 7,30-7,50 (m, 5,7H); Analytická HPLC: 10,55 minúty pre anti diastereomér a 10,62 minúty pre syn diastereomér; LC/MS: m/e = 452 (M+H+) pre obidva diastereoméry.
4-Oxo-3-{[1-(2-fenylaminopropionyl)pyrolidín-2-karbonyl]amino}butánová kyselina (121)
Zlúčenina sa pripraví zo 151 mg (0,33 mmol) zlúčeniny 120 pomocou hydrolýzy podlá spôsobu A. Získa sa 101 mg (výťažok 83%) zlúčeniny uvedenej v názve vo forme bielej pevnej látky. XH NMR (500 MHz, deuterochloroform/deuterometanol 1/1): δ 1,20-1,65 (m, 2H), 1,65-2,35 (m, 3H) , 2,40-3,00 (m, H), 3,20-3, 80 (m, 2H) ,
3,90-4,90 (m, 7H), 7,25-7,80 (m, 5H); Analytická HPLC: 6,38 minúty; LC-MS: m/e = 362 (M+H+) .
Všeobecné spôsoby na prípravu zlúčenín podľa uskutočnenia C vzorca I (schémy XXIII-XXV)
195
Schéma XXIII
Spôsob hydrolýzy A:
0,005-50 mmol vzorky alkylpoloacetálu sa rozpustí v 2,5N kyseline chlorovodíkovej v acetonitrile (10/1) a mieša sa pri teplote miestnosti pokial neskončí chemická reakcia. Vznikajúca vodná vrstva sa premyje dvakrát 20 ml dietyléteru a lycfilizuje sa, pričom sa získa produkt.
Spôsob hydrolýzy B:
0,005-50 ml vzorky alkylpoloacetálu sa prevedie do čistej kyseliny mravčej a mieša sa cez noc pri teplote miestnosti. Zmes sa trituruje zmesou hexánu a dietyléteru 3:1 a získa sa zrazenina. Rozpúšťadlo sa zleje a zrazenina sa premyje dietyléterom a získa sa produkt.
Spôsob hydrolýzy C:
0,005-50 mmol vzorky alkylpoloacetálu sa rozpustí v metanole a pridá sa 20% Pd(OH)2 na uhlí a mieša sa vo vodíkovej atmosfére, pokiaľ sa reakcia nedokončí. Získaná suspenzia sa filtruje a roztok sa odparí vo vákuu, potom sa trituruje zmesou 3:1 hexánu a dietyléteru a získa sa zrazenina. Rozpúšťadlo sa zleje a zrazenina sa premyje dietyléterom a získa sa produkt.
196
Spôsob hydrolýzy D:
0,005-50 mmol vzorky alkylpoloacetálu v zmesi acetonitrilu a vody (1/2) sa pretrepáva s kyslou živicou (Dowex 50w x 2, H+ typ), pokiaľ sa reakcia nedokončí. Roztok sa filtruje a živica sa premyje zmesou acetonitrilu a vody (1/4). Získaná vodná vrstva sa premyje dietyléterom, odparí sa do malého objemu vo vákuu, potom sa lyofilizuje a získa sa produkt.
Schéma XXIV:
4-0XO-3- [ (1- {2 - [9-oxo-9íí-fluorén-4-karbonyl) amino] propionyl }pyrolidín-2-karbonyl)amino]butánová kyselina (122a)
109,0 mg (0,19 mmol) vzorky podľa spôsobu A a získa sa 88 mg nej v názve: analytická HPLC 7,15 zlúčeniny 91 sa hydrolyzuje (výťažok 96%) zlúčeniny uvedeminúty. LC-MS (ES+) m/e=492,2 (M+H) .
3-({1-[2-(4-Amino-3-chlórbenzoylamino)propionyl]pyrolidín-2-karbonyl}amino)-4-oxobutánová kyselina (122b)
51,0 mg (0,096 mmol) vzorky zlúčeniny 76 sa hydrolyzuje
197 podľa spôsobu A a získa sa 43,0 mg (výťažok 100%) zlúčeniny uvedenej v názve: 1H NMR (500 MHz, deuterometanol/deuterovaná voda: 0,5 ml/10 kvapiek): δ 1,37-1,52 (m, 3H), 1,80-2,20 (m, 3H), 2,20-2,37 (m, H), 2,49-2,60 (m, H), 2,60-2,75 (m, H), 3,70-3,80 (m, H), 3,80-3,95 (m, H), 4,20-4,35 (m, H), 4,40-4,50 (m, H), 4,50-4,70 (m, H), 4,70-4,85 (m, H), 6,85-6,87 (d, H), 7,58-7,60 (m, H), 7,77 (s, H); retenčný čas analytickej HPLC: 6,54 minúty; LC-MS: m/z = 439 (M+H*).
3-({1-[2-(3,5-Dichlór-4-metoxybenzoylamino)propionyl]pyrolidín-2-karbonyl}amino)-4-oxobutánová kyselina (122c)
51,0 mg (0,088 mmol) vzorky zlúčeniny 92 sa hydrolyzuje podlá spôsobu A a získa sa 24,0 mg (výťažok 56%) zlúčeniny uvedenej v názve. Analytická HPLC 6,41 minúty. LC-MS (ES*) m/e=488,3 (M+H).
3-({1-[2-(4-Metoxy-3,5-dimetylbenzoylamino)propionyl]pyrolidín-2- karbonyl}amino)-4-oxobutánovej kyseliny (122d)
55,0 mg (0,102 mmol) vzorky zlúčeniny 77 sa hydrolyzuje podľa spôsobu A a získa sa 44,0 mg (výťažok 96%) zlúčeniny uvedenej v názve: analytická HPLC (C18) 8,70 minúty, ľH NMR (500 MHz, deuterochloroform): δ 1,23-1,70 (m, 3H) , 1, 80-2,70 (m, 10H), 2,70-3,15 (m, 2H) , 3, 58-4,20 (m, 5H) , 4,32-5,50 (m, 3H) ,
5, 60-6, 00 (m, H), 6,80-7,90 (m, 4H) ; LC-MS (ES*) m/e = 448,2
198 (M+H).
4-0XO-3-[(1—{2-[pyridín-2-karbonyl)amino]propionyl}pyrolidín-2-karbonyl)amino]butánová kyselina (122e)
55,0 mg (0,114 mmol) vzorky zlúčeniny 88 sa hydrolyzuje podľa spôsobu A a získa sa 30,0 mg (výťažok 67%) zlúčeniny uvedenej v názve: analytická HPLC 4,60 minúty. LC-MS (ES+) m/e=391,3 (M+H).
3-({1-[2-(4-Acetylamino-3-chlórbenzoylamino)propionyl]pyrolidín-2-karbonyl}amino)-4-oxobutánovej kyseliny (122f) mg (0,091 mmol) vzorky zlúčeniny 78 sa hydrolyzuje podľa spôsobu A a získa sa 40 mg (výťažok 91%) zlúčeniny uvedenej v názve: XH NMR (500 MHz, deuterometanol)δ 1,08-1,61 (m, 3H) ,
1,77-2,41 (m, 3H) , 2,21 (s, 3H) , 2,41-2,77 (m, 2H) , 3,43-3,63 (m, 0,3H), 3, 65-3,76 (m, 1H) , 3,81-3,94 (m, 1H), 4,18-4,34 (m,
1H), 4,42-4,64 (m, 1,7H), 4,77 (kv, 1H) , 7,79 (dd, 1H) ; analy-
tická HPLC 4,97 minúty. LC-MS (ES+) m/e = 481,3 (M+H).
O O
Tj H I -N\Z f\)H L^h
Cl 122g H O
3-({1-[2-(4-Amino-3,5-dichlórbenzoylamino)propionyl]pyrolidín-2—
199 karbonyl}amino)-4-oxobutánová kyselina (122g)
44,3 mg (0,079 mmol) vzorky zlúčeniny 89 sa hydrolyzuje podľa spôsobu A a získa sa 30 mg (výťažok 81%) zlúčeniny uvedenej v názve: analytická HPLC 5,40 minúty. LC-MS (ES+) m/e = 473,2 (M+H).
3-({1-[2-(3-Izopropoxybenzoylamino)propionyl]pyrolidín-2-karbonyl } amino) -4-oxobutánová kyselina (122h)
52,0 mg (0,097 mmol) vzorky zlúčeniny 79 sa hydrolyzuje podľa spôsobu A a získa sa 30,0 mg (výťažok 69%) zlúčeniny uvedenej v názve: analytická HPLC 8,92 minúty. LC-MS (ES+) m/e=448,3 (M+H).
3-({1-[2-(3-benzyloxy-4-metoxybenzoylamino)propionyl]pyrolidín-2-karbonyl}amino)-4-oxobutánová kyselina (122i)
50,8 mg (0,082 mmol) vzorky zlúčeniny 81 sa hydrolyzuje podlá spôsobu A a získa sa 22,4 mg (výťažok 52%) zlúčeniny uvedenej v názve: analytická HPLC 6,72 minúty. LC-MS (ES4) m/e=526,3 (M+H).
122j
200
4-Oxo-3-[(1-{2-[(chinoxalín-2-karbonyl)amino]propionylJpyrolidín-2-karbonyl)amino]butánová kyselina (122j)
38,0 mg (0,072 mmol) vzorky zlúčeniny 80 sa hydrolyzuje podľa spôsobu A a získa sa 32,0 mg (výťažok 100%) zlúčeniny uvedenej v názve: analytická HPLC 5,95 minúty. LC-MS (ES+) m/e=442,3 (M+H).
3-({1-[2-(3,5-Dichlór-4-hydroxybenzoylamino)propionyl]pyrolidín-2-karbonyl}amino)-4-oxobutánová kyseliny (122k) mg (0,060 mmol) vzorky zlúčeniny 83 sa hydrolyzuje podľa spôsobu A a získa sa 29,4 mg (výťažok 75%) zlúčeniny uvedenej v názve: analytická HPLC 7,91 minúty. 3Η NMR (500 MHz, deuterometanol)ô 1,47 (m, 3H) , 1,8-2,3 (m, 4H) , 2,49 (m, 1H), 2,61 (m, 1H), 3,5 (šm, 0,2H), 3,69 (šm, 0,9H), 3,84 (šm, 0,9H), 4,27 (m, 1H), 4,46 (m, 1H), 4,57 (m, 1H), 4,73 (m, 1H) , 7,83 (m, 2H) ppm, LC-MS (ES+) m/e = 474,1 (M+H).
3-({1-[2-(4-Amino-3-trifluórmetylbenzoylamino)propionyl]pyrolidín-2-karbonylJamino)-4-oxobutánová kyselina (1221) mg (0,021 mmol) vzorky zlúčeniny 98w sa hydrolyzuje podľa spôsobu A a získa sa 7,9 mg (výťažok 94%) zlúčeniny uvedenej v názve: analytická HPLC 6,64 minúty. LC-MS (ES+) m/e=473,3 (M+H).
201
3-({1-[2-(3-Chlór-4-dimetylaminobenzoylamino)propionyl]pyrolidín-2-karbonyl}amino)-4-oxobutánová kyselina (122m)
10,0 mg (0,021 mmol) vzorky zlúčeniny 98x sa hydrolyzuje podľa spôsobu A a získa sa 7,0 mg (výťažok 84%) zlúčeniny uvedenej v názve: analytická HPLC 5,15 minúty. LC-MS (ES+) m/e=467,3 (M+H).
3-({1-[2-(4-Dimetylamino-3,5-difluórbenzoylamino)propionyl]pyrolidín-2-karbonyl}amino)-4-oxobutánová kyselina (122n)
20,0 mg (0,043 mmol) vzorky zlúčeniny 98y sa hydrolyzuje podľa spôsobu A a získa sa 16,8 mg (výťažok 100%) zlúčeniny uvedenej v názve: analytická HPLC 5,86 minúty. LC-MS (ES4-) m/e=469,3 (M+H) .
3-({1-[2-(4-Amino-3-chlórbenzoylamino)propionyl]pyrolidín-2-karbonyl}amino)-4-oxobutánová kyselina (122o)
20,0 mg (0,046 mmol) vzorky zlúčeniny 98m sa hydrolyzuje podía spôsobu A a získa sa 16,7 mg (výťažok 100%) zlúčeniny uvedenej v názve: analytická HPLC 8,47 minúty. LC-MS (ES+) m/e=439,2
202 (M+H).
3-({l-[2-(4-Amino-2,3,5,6-tetrafluórbenzoylamino)propionyl]pyrolidín-2-karbonyl}amino)-4-oxobutánová kyselina (122p)
20,0 mg (0,042 mmol) vzorky zlúčeniny 98z sa hydrolyzuje podľa spôsobu A a získa sa 15,3 mg (výťažok 91%) zlúčeniny uvedenej v názve: analytická HPLC 7,90 minúty. LC-MS (ES+) m/e=477,2 (M+H).
4-Oxo-3-[(1—{2—[(chinolín-6-karbonyl)amino]propionylIpyrolidín-2-karbonyl)amino]butánová kyselina (122q) mg (0,080 mmol) vzorky zlúčeniny 93 sa hydrolyzuje podľa spôsobu A a získa sa 41 mg (výťažok 100%) zlúčeniny uvedenej v názve: 3H NMR (500 MHz, deuterometanol)δ 1,24-1,69 (m, 3H), 1,75-2,37 (m, 4H) , 2,39-2,87 (m, 2H) , 3, 46-4,04 (m, 2H) , 4,11-4,77 (m, 3H) , 8,19 (dd, 1H) , 8,33 (d, 1H) , 8,56-8,58 (m, 1H) ,
8,85 (s, 1H) , 9, 27-9, 39 (m, 2H) ; analytická HPLC 4,91 minúty.
LC-MS (ES+) m/e = 441,2 (M+H).
3-((1-(2-(4-Acetylamino-5-chlór-2-metoxybenzoylamino)propionyl]203 pyrolidín-2-karbonyl}amino)-4-oxobutánová kyselina (122r)
44,5 mg (0,074 mmol) vzorky zlúčeniny 87 sa hydrolyzuje podľa spôsobu A a získa sa 34,5 mg (výťažok 91%) zlúčeniny uvedenej v názve: analytická HPLC 6,88 minúty. LC-MS (ES+) m/e=511,2 (M+H).
3-[(1—{2—[3-Chlór-4-(2,2-dimetylpropionylamino)benzoylamino]propionyl }pyrolidín-2-karbonyl)amino]-4-oxobutánová kyselina (122s)
19,0 mg (0,036 mmol) vzorky zlúčeniny 98aa podlá spôsobu A a získa sa 14,5 mg (výťažok 90%) denej v názve: analytická HPLC 7,28 minúty. LC-MS sa hydrolyzuje zlúčeniny uve(ES+) m/e=523,3 (M+H).
3-({1-[2-(3-Chlór-4-propionylaminobenzoylamino)propionyl]pyrolidín-2-karbonyl}amino)-4-oxobutánová kyselina (122t)
21,0 mg (0,042 mmol) vzorky zlúčeniny 98ab sa hydrolyzuje pódia spôsobu A a získa sa 17,5 mg (výťažok 97%) zlúčeniny uvedenej v názve: analytická HPLC 5,72 minúty. LC-MS (ES+) m/e=495,2 (M+H).
122u
204
3-({1-[2-(3-Chlór-4-fenylacetylaminobenzoylamino)propionyl]pyrolidín-2-karbonyl}amino)-4-oxobutánová kyselina (122u)
10,0 mg (0,017 mmol) vzorky zlúčeniny 98ac sa hydrolyzuje podľa spôsobu A a získa sa 7,9 mg (výťažok 85%) zlúčeniny uvedenej v názve: analytická HPLC 7,52 minúty. LC-MS (ES+) m/e=557,2 (M+H).
3-[(1-{2-[3-Chlór-4-(3-metylbutyrylamino)benzoylamino]propionyl }pyrolidín-2-karbonyl) amino] -4-oxobutánová kyselina (122v) zlúčeniny 98ad sa hydrolyzuje (výťažok 96%) zlúčeniny uvedeminúty. LC-MS (ES+) m/e=523,2
8,0 mg (0,015 mmol) vzorky podľa spôsobu A a získa sa 6,5 mg nej v názve: analytická HPLC 6,92 (M+H).
Schéma XXV
116b. X=ci. Y=AcNH, 2=H, Q1 =Ql=F 116c. X=CI, Y=AcNH. Z=CH3O,q’
123a. X=CI, Y=NHí. Z=H. Q*=F. Q*=H 123b. X=d, Y=AcNH. Z=H. Q1 =Ql=F 123c. X=CI, Y=AcNH. Z=CH3O.ď =Q1=F
3-({1-[2-(4-Amino-3-chlórbenzoylamino)propionyl]-4-fluórpyrolidín-2-karbonyl}amino)-4-oxobutánová kyselina (123a)
12,4 mg (0,022 mmol) vzorky zlúčeniny 108b sa hydrolyzuje podlá spôsobu A a získa sa 9,6 mg (výťažok 93%) zlúčeniny uvedenej v názve: analytická HPLC 6,99 minúty. LC-MS (ES+) m/e=473,2
205 (M+H).
3-({1-[2-(4-Acetylamino-3-chlórbenzoylamino)propionyl]-4, 4-difluórpyrolidín-2-karbonyl}amino)-4-oxobutánová kyselina (123b)
26,2 mg (0,043 mmol) vzorky zlúčeniny 116b sa hydrolyzuje podlá spôsobu A a získa sa 10,8 mg (výťažok 49%) zlúčeniny uvedenej v názve: analytická HPLC 9,89 minúty. LC-MS (ES+) m/e=517,2.
3-({1-[2-(4-Acetylamino-3-chlór-2-metoxybenzoylamino)propionyl]-4,4-difluórpyrolidín-2-karbonyl}amino)-4-oxobutánová kyselina (123c)
23,1 mg (0,036 mmol) vzorky zlúčeniny 116c sa hydrolyzuje podlá spôsobu A a získa sa 1,8 mg (výťažok 9%) zlúčeniny uvedenej v názve: analytická HPLC 11,87 minúty. LC-MS (ES+) m/e=547,l (M+H).
Biologické spôsoby
S použitím spôsobov opísaných ďalej sa získali in vitro, ex vivo a in vivo údaje o vybraných zlúčeninách podľa predloženého vynálezu. Výsledky sú uvedené v tabuľkách 2 až 8. Označenie ND znamená, že sa zlúčenina v uvedenom teste netestovala.
V testoch ICE kaspázy znamená kategória A inhibíciu <10 nM. Kategória B znamená inhibíciu 10 až 100 nM. Kategória C znamená inhibíciu >1000 nM. Pozri tabulky 2 a 3.
Pri teste PBMC znamená kategória A inhibíciu <500 nM. Kategória B znamená inhibíciu 500 až 1000 nM. Kategória C znamená inhibíciu 1001 až 2000 nM. Kategória D znamená inhibíciu >2000 nM. Pozri tabuľka 4.
Pri teste úplnej krvi znamená kategória A inhibíciu <2500 nM. Kategória B znamená inhibíciu 2500 až 7500 nM. Kategória C znamená inhibíciu >7500 nM. Pozri tabuľka 5.
206
Pri in situ metabolickom teste sú hodnoty [f(g) x f(h)] uvedené nasledujúcim spôsobom: kategória A <0,25. Kategória B znamená 0,25 až 0,49. Kategória C znamená 0,5-0,75. Kategória D znamená >0,75. Pri meraní vylučovania žlče znamená kategória A <5%. Kategória B znamená 5-10%. Kategória C znamená >10%. Pozri tabuľku 6.
Pri i. v. clearance teste sú hodnoty uvedené nasledujúcim spôsobom: kategória A znamená <50. Kategória B znamená 50-80. Kategória C znamená >80. Pozri tabulku 7.
Pri teste biologickej využitelnosti sú hodnoty Cmax ^g/ml) uvedené nasledujúcim spôsobom: kategória A znamená <2,5. Kategória B znamená 2,5-5,0. Kategória C znamená > 5,0. Hodnoty AUC (gg x hod/ml) sú uvedené nasledujúcim spôsobom: kategória A znamená <2,5. Kategória B znamená 2,5-5,0. Kategória C znamená >5,0. Rozsah polčasov života (hodiny) je uvedený nasledujúcim spôsobom: kategória A znamená <1,5. Kategória B znamená
1,5-2,0. Kategória C znamená >2,0. Hodnoty F (%) sú uvedené nasledujúcim spôsobom: kategória A znamená <33. Kategória B znamená 33-67. Kategória C znamená >67. Pozri tabulku 8.
In vitro testy
Inhibícia enzýmu
Hodnoty Kí pre testované zlúčeniny s rôznymi kaspázami sa získajú podľa spôsobu opísaného v Margolin a kol. (J. Biol. Chem., str. 272, 7223-7228 (1997)). Testy sa uskutočňujú v 10 nM Tris (Sigma Corp., St Lous MO) pH 7,5 1 mM ditiotreitolu (DTT, Research Organic INC, Cleveland, OH) a 0,1% CHAPS (Pierce, Rockford IL) pri teplote 37°C. Pre kaspázu-3 sa na zlepšenie stability enzýmu pridá k pufru 8% glycerol. Do 96 jamkovej mikrotitračnej doštičky sa pipetujú 65 μΐ alikvóty testovaného pufra a 5 μΐ alikvóty príslušných roztokov inhibítorov v dimetylsulfoxi207 de, reagujú s 10 μΐ kaspázy, potom sa zriedia testovým pufrom (0,5-40 nM aktívneho proteinu pomocou titrácie aktívneho miesta) . Na každé stanovenie sa použije kontrolná vzorka obsahujúca dimetylsulfoxid, ale žiadnu zlúčeninu. Doštičky sa potom inkubujú 15 minút pri teplote 30°C, potom sa pridá 20 μΐ príslušného substrátu (výsledná koncentrácia 1-4 X KM, výsledný objem testu 100 μΐ) , čím sa zaháji reakcia. Reakčná rýchlosť sa meria pri 37°C buď sledovaním vzrastu absorbancie závislého na čase pri 405 nm (pre substráty pNA) alebo fluorescencie (Ex 390, EM 460) (pre substráty AMC). Získané rýchlosti sa vynesú proti koncentrácii inhibítora a upravia sa podľa Morrisonovej rovnice sily väzby pre kompetitívne inhibítory (Morrison, J.F., Biochem, Bio-
phys. Acta, str. 185, 269-286 (1969)). Na jednotlivé testy sa
použijú nasledujúce substráty:
Kaspáza-1 Suc-YVAD-pNA (Bachem, King of Prussia, PA) (výsledná
koncentrácia pri teste 80 μΜ),
Kaspáza-3 Ac-DEVD-pNA (Bachem, King of Prussia, PA) (výsledná
koncentrácia pri teste 60 μΜ),
Kapáza-4 Ac-WEHD-AMC (Synpep, Dublin, CA) (výsledná koncentrácia
pri teste 20 μΜ),
Kaspáza-7 Ac-DEVD-AMC (Bachem, King of Prussia, PA) (výsledná
koncentrácia pri teste 50 μΜ),
Kaspáza-8 Ac-DEVD-pNA (Bachem, King of Prussia, PA) (výsledná
koncentrácia pri teste 80 μΜ),
Tabulka 2: Údaje o inhibícii kaspázy-1
Príklad Kaspáza-1 Ki (nM)
5a A
5b A
5c A
5d A
5e B
Sf B
208
Príklad Kaspáza-1 Ki (nM)
sg B
5h A
5i A
5j A
5k A
51 B
5m A
5n A
5o B
5p B
5σ B
5r B
5s B
5t C
5u B
5v B
5w B
5x A
sy A
5z A
5aa A
5 ah S
5ac A
5 ad A
5ae B
5af B
5ac A
5 ah B
5ai A
Saj B
5 ak B
209
Príklad Kaspáza-1 Ki (nM)
Sal A
5 am A
5an B
Sao B
5ap B
5aq B
5ar A
Sas A
5at B
5 au B
5av B
Saw A
Sax A
Say A
Saz A
5ba A
Sbb A
5bc B
Sbd A
7a A
7b B
7c A
7d A
7e B
7f B
7σ A
7h B
7i B
7j C
7k B
71 B
210
Príklad Kaspáza-1 Ki (nM)
7m B
7n B
7o A
7p A
7q B
7r B
7s B
7t B
7u B
7v B
7w A
7x B
7y B
7z B
7aa A
7ab B
7ac B
7 ad B
7ae E
7af B
7ag B
7ah A
7ai A
7aj A
7ak A
7al B
7 am A
7an A
7ao B
7ap B
7aq B
211
Príklad Kaspáza-1 Ki (nM)
7ar A
7as A
7at A
9a B
9b A
9c A
9d A
9e A
9f A
A
15a A
15b A
15c A
15d B
15e B
15 f B
16a B
16b A
17a B
17b B
17c A
17d B
17e B
18a B
18b A
18c B
18d B
18e A
18f B
20a A
20b A
212
Príklad Kaspáza-1 Ki (nM)
20c A
20d B
20e A
20f A
20g A
20h A
20i B
20j B
20k A
201 A
20m A
20n A
20o A
20p A
20c B
20r B
20s A
20t B
23a A
23b B
23c A
23d A
23e A
23f B
23g A
23h A
23i B
24a A
24b C
24c A
24d B
213
Príklad Kaspáza-1 Ki (nM)
24e B
25a A
25b A
25c A
25d A
25e A
26a A
26b A
26C A
26d A
26e A
26f A
26g A
26h A
27a B
27b B
27c B
27d A
27e B
27f B
27g A
27h B
27i B
27j B
27k B
271 B
27m B
27n B
28a A
28b A
28c A
214
Príklad Kaspáza-1 Ki (nM)
29a A
29b A
29c A
29d A
29e A
29f A
29g A
29h A
29i A
29j A
29k A
291 B
29m A
29n B
29o B
29p A
29q A
29r A
29s E
32a C
32b C
32c c
32d c
32e ' B
34 C
Gl c
G2 B
42 B
46b A
46a C
57 A
215
Príklad Kaspáza-1 Ki (nM)
65 A
61 A
69 A
73 A
121 C
122a A
122b A
122c A
122d A
122e B
122f A
122g A
122h B
122 i A
122j B
122k A
1221 B
122m B
122n B
1220 C
122p A
122g B
122 r B
1225 B
122t B
122U A
122v B
123a B
123b B
123C B
216
Tabulka 3: Údaje o inhibícii kaspázy-3, kaspázy-4 a kaspázy-8
Príklad Kaspáza-3 Ki (nM) Kaspáza-4 Ki (nM) Kaspáza-8 Ki (nM)
7c c ND C
7d c ND B
7f c ND C
24a c ND ND
29a c ND ND
29b c ND ND
32d B ND ND
46b B ND ND
69 C ND B
122b C A B
122d C A C
122f C ND B
122k c ND B
PBMC bunkový test
Test IL-Ιβ so zmiešanou populáciou mononukleárnych buniek ludskej periférnej krvi (PBMC) alebo mononukleárnych obohatených adherentných buniek
Spracovanie pre-IL-Ιβ pomocou ICE sa môže merať v bunkovej kultúre s použitím rôznych zdrojov buniek. Ľudské PBMC získané od zdravých darcov poskytujú zmiešanú populáciu subtypov lymfocytov a monojadrových buniek, ktoré poskytujú spektrum interleukínov a cytokínov ako odozvu na mnoho tried fyziologických stimulátorov. Adherentné monojadrové bunky z PBMC ponúkajú obohatený zdroj normálnych rnonocytov pre selektívnu štúdiu produkcie cytokínov aktivovanými bunkami.
Experimentálny postup:
Pripraví sa počiatočná séria roztokov testovanej zlúčeniny v dimetylsulfoxide, potom sa zriedi do RPMI-10% FBS média (obsahujúceho 2 mM L-glutamínu, 10 mM HEPES, 50 U a 50 μg/ml
217 pen/strep) v tomto poradí a získajú sa liečivá so štvornásobnou koncentráciou, ako je výsledná koncentrácia, obsahujúce 0,4% dimetylsulfoxidu alebo 0,4% etanolu. Výsledná koncentrácia dimetylsulfoxidu je 0,1% pre všetky roztoky liečiv. Na počiatočný screening zlúčeniny sa obvykle použije titrácia koncentrácie, ktorá vymedzuje zjavné Ki pre testované zlúčeniny určené pri teste inhibície ICE.
Obvykle sa testuje 5-6 roztokov zlúčeniny a bunková zložka testov sa uskutočňuje dvojnásobne, pri dvojnásobnom ELISA stanovení pri každom supernatante bunkovej kultúry.
Izolácia PBMS a test IL-1
Bunky buffy coat izolované z jednej pinty (0,473 1) ľudskej krvi (získa sa výsledný objem 40-45 ml plazmy plus buniek) sa zriedia médiom na 80 ml a deliace skúmavky LeukoPREP (Becton Dickinson) sa prevrstvia vždy 10 ml suspenzie buniek. Po 15 minútach odstreďovania pri 1500-1800xg sa vrstva plazma/médium odsaje a potom sa Pasteurovou pipetou odoberie vrstva mononukleárnych buniek a prevedie sa do 15 ml kužeľovitej odstreďovacej skúmavky (Corning). Pridá sa médium do výsledného objemu 15 ml, bunky sa pomocou obrátenia opatrne premiešajú a odstreďujú sa 15 minút pri 300xg. PBMC peleta sa resuspenduje v malom objeme média, bunky sa spočítajú a upravia sa na 6 x 106 buniek/ml.
Pre bunkový test sa do každej jamky 24 jamkovej mikrotitračnej doštičky pre tkanivové kultúry s plochým dnom (Corning) pridá 1,0 ml suspenzie buniek, 0,5 ml roztoku testovanej zlúčeniny a 0,5 ml roztoku LPS (Sigma #L-3012; 20 ng/ml roztok pripravený v úplnom RPMI médiu; výsledná koncentrácia LPS 5 ng/ml). Pridanie 0,5 ml testovanej zlúčeniny a LPS je obvykle dostačujúce na premiešanie obsahu jamiek. Pre pokus sa použijú tri kontrolné zmesi buď s LPS samotným, kontrolným rozpúšťadlom a/alebo ďalším médiom na úpravu výsledného objemu kultúry na 2,0 ml. Bunkové kultúry sa inkubujú 16-18 hodín pri 37°C v prítomnosti 5% oxidu uhličitého.
218
Na konci času inkubácie sa bunky odoberú a prevedú sa do 15 ml kužeľovitej odstreďovacej skúmavky. Po 10 minútach odstreďovania pri 200xg sa supernatanty odoberú a prevedú sa do 1,5 ml Eppendorfových skúmaviek. Je treba poznamenať, že bunková peleta sa môže použiť pri biochemickom testovaní pre-IL-Ιβ a/alebo maturovaného IL-Ιβ v cytosolových extraktoch pomocou Westernového prenosu alebo ELISA so špecifickými protilátkami pre-IL-Ιβ. Izolácia adherentných monojadrových buniek:
PBMC sa izoluje a pripraví podľa postupu opísaného skôr. Do jamiek sa najskôr pridá 1,0 ml média, potom 0,5 ml suspenzie PBMC. Po 1 hodine inkubácie sa doštičky opatrne pretrepú a z každej jamky sa odsajú neadherentné bunky. Bunky sa potom opatrne trikrát premyjú 1,0 ml média a nakoniec sa suspendujú v 1,0 ml média. Obohatenie na adherentné bunky obvykle poskytne
2,5-3,0 x 105 buniek na jamku. Pridanie testovaných zlúčenín, LPS, podmienky inkubácie buniek a spracovanie supernatantov prebieha podľa postupu opísaného skôr.
ELISA:
Na meranie maturovaného IL-Ιβ sa môže použiť sada Quantikin (R&D Systems). Testy sa uskutočňujú podía odporučenia výrobcu. Pozorujú sa hladiny maturovaného IL-Ιβ asi 1-3 ng/ml v PBMC a pozitívnej kontrolnej vzorke monojadrových buniek. ELISA test sa uskutočňuje pri zriedeniach supernatantov 1:5, 1:10 a 1:20 z LPS pozitívnej kontroly, čím sa vyberie optimálne zriedenie supernatantov v testovom poli.
Inhibičná účinnosť zlúčenín sa môže prezentovať hodnotou IC50, čo je koncentrácia inhibítora, pri ktorej sa v supernatante detekuje 50% maturovaného IL-Ιβ v porovnaní s pozitívnou kontrolou .
Odborníkom v tejto oblasti je zrejmé, že hodnoty získané pri testoch môžu byť závislé na mnohých faktoroch. Hodnoty nemusia
219 nutne predstavovať kvantitatívne výsledky. Tabuľka 4: Údaje z PBMC bunkového testu
Príklad PBMC IC50 (nM)
5a D
5b B
5c 3
5d B
Se B
5f C
5c C
5h A
220
Príklad PBMC IC50 (nM)
5i C
5j D
5k D
51 A
5m A
5n B
5r D
5s B
5u C
5v D
5w B
5x B
sy B
5z B
5aa B
5ab B
5ac A
5ad A
5aa *< B
5ai A
5aj S
5ak B
Sal D
5 am D
5ao D
5aq D
5ar D
5as D
5at D
5au D
Sav D
221
Príklad PBMC IC50 (nM)
Saw C
5ax B
5ay B
5az B
5ba C
5bb B
5bd C
7a D
7b B
7c A
7d A
7e D
7f D
7g A
7h B
7k 3
71 3
7m 3
7n 3
7o A
7p D
7q D
7s 3
7t D
7U D
7v D
7w C
7X D
7y D
7z C
9a B
222
Príklad PBMC IC50 (nM)
9b B
9c A
9d S
9e C
9f B
9g C
15a D
15b C
15c B
15d C
15e D
15f D
16a A
16b C
17b C
17c D
17d D
17e B
18a B
18b B
18c B
18d B
18e C
18í D
20a B
20b . B
20c C
20d D
20e C
20í B
20c A
223
Príklad PBMC IC50 (nM)
20h A
20i B
20j D
20k A
201 B
20m B
20n B
20o A
2 0p A
20q B
20r B
20S C
20t B
23a C
23b B
23c C
23d B
23e B
23f C
23g C
23h C
23i A
24a B
24b D
24C A
24d B
24e C
25a A
25b B
25c B
25a C
224
Príklad PBMC IC50 (nM)
26b B
26c B
26d B
26e A
26f A
2 6g A
26h A
27a A
28a 3
28b B
28c B
29a A
29b C
29C B
29d B
29e A
29c B
29h A
29i A
29j B
29k A
291 B
29m B
42 D
46b D
57 3
65 B
61 B
69 A
73 B
122a D
225
Príklad PBMC IC50 (nM)
122b B
122c D
122d B
122e C
122f B
122g 3
122h C
122i C
122j D
122k A
1221 B .
Test úplnej krvi na produkciu IL-Ιβ
Hodnoty IC50 zlúčenín podľa predloženého vynálezu pri teste úplnej krvi sa získajú pomocou spôsobov opísaných ďalej:
Zámer:
Test úplnej krvi je jednoduchý spôsob na meranie produkcie IL-Ιβ (alebo iných cytokínov) a aktivity potenciálnych inhibítorov. Komplexnosť tohto testovacieho systému, s plným obsadením typov lymfoidných a zápalových buniek, spektrom plazmových proteínov a červených krviniek, je ideálnou in vitro simuláciou ľudských in vivo fyziologických podmienok.
Materiály:
Striekačky bez pyrogénu (asi 30 cm3) .
Sterilné vákuové skúmavky bez pyrogénu obsahujúce lyofilizovaný NazEDTA (4,5 mg/10 ml skúmavku).
Vzorka úplnej ľudskej krvi (asi 30-50 cm3) .
1,5 ml Eppendorfovej skúmavky.
Zásobné roztoky testovanej zlúčeniny (25 mM v dimetylsulfoxide alebo inom rozpúšťadle.
Roztok chloridu sodného (0,9%) a HBSS bez endotoxínu.
226
Zásobný roztok lipopolysacharidu (Sigma; kat. č. # L-3012) pri 1 mg/ml v HBSS.
IL-Ιβ ELISA (R&D) Systems; kat. č. # DLB50) .
TNEa ELISA sada (R&D Systems; kat.č. # DTA50).
Vodný kúpeľ alebo inkubátor.
Experimentálny postup testu úplnej krvi:
Inkubátor alebo vodný kúpeľ sa nastaví na teplotu 30°C. Do
1,5 ml Eppendorfových skúmaviek sa umiestni alikvót 0,25 ml krvi.
Poznámka: je treba zabezpečiť prevrátenie skúmavky so vzorkou úplnej krvi po každých dvoch alikvótoch. Ak sa bunky usadia a nie sú jednotne suspendované, môžu vzniknúť rozdiely medzi opakovanými rovnakými pokusmi. Tieto rozdiely medzi opakovanými alikvótmi je možné tiež minimalizovať použitím pipety s plastovou jednorázovou špičkou.
Pomocou série zriedenia sa pripravia roztoky liečiva v sterilnom fyziologickom roztoku bez pyrogénu. Na začiatočný screening zlúčeniny sa obvykle použije séria roztokov, ktorá vymedzuje zjavné Ki pre testovanú zlúčeninu určené pri teste inhibície ICE. Pre mimoriadne hydrofóbne zlúčeniny sa pripravia roztoky v čerstvej plazme získanej od rovnakého darcu krvi alebo v 5% dimetylsulfoxide obsahujúcom PBS, čím sa zvýši rozpustnosť.
Pridá sa 25 μΐ roztoku testovanej zlúčeniny alebo kontrolného vehikula a vzorka sa opatrne premieša. Potom sa pridá 5,0 μΐ roztoku LPS (250 ng/ml čerstvo pripraveného zásobného roztoku: výsledná koncentrácia LPS 5,0 ng/ml) a vzorka sa znova premieša. Skúmavky sa za občasného miešania inkubujú pri 30°C vo vodnom kúpeli 16-18 hodín. Alternatívne sa môžu skúmavky na rovnaký inkubačný čas umiestniť do otočnej sady pri 4 otáčkach za minútu. Tento test sa môže uskutočniť dvojnásobne až trojnásobne s nasledujúcimi kontrolnými vzorkami: negatívna kontrola -bez
227
LPS; pozitívna kontrola - bez testovaného inhibítora; kontrolné vehikulum - najvyššia koncentrácia DMSO alebo rozpúšťadla zlúčeniny použitého pri pokuse. Ku kontrolným skúmavkám sa pridá ďalší fyziologický roztok, čím sa normalizujú objemy pre kontrolné a experimentálne vzorky úplnej krvi.
Po inkubačnom čase sa vzorky úplnej krvi odstreďujú 10 minút pri 2000 otáčkach za minútu, plazma sa prevedie do čerstvej odstredovacej skúmavky a odstreďuje sa pri lOOOxg, aby sa odstránili zvyšné doštičky, ak je to nutné. Vzorky plazmy sa môžu pred testom na hladinu cytokínu pomocou testu ELISA zmraziť na -70°C.
ELISA:
Na meranie IL-Ιβ a TNF-α sa môže použiť sada Quantikin R & D Systems (614 McKinley Plače N.E. Minneapolis, MN 55413). Testy sa uskutočňujú podľa inštrukcie výrobcu. V pozitívnych kontrolných vzorkách sa pozorujú hladiny IL-Ιβ 1-5 ng/ml. Aby výsledky ELISA spadali do lineárneho rozsahu štandardných kriviek ELISA, je obvykle dostačujúce zriedenie plazmy pre všetky vzorky 1:200. Ak sa pozorujú rozdiely pri teste úplnej krvi, môže byť nutné optimalizovať štandardné zriedenie. Nerád, J.L. a kol., J. Leukocyte Biol., 52, str. 687-692 (1992).
228
Tabulka 5: Údaje z testu úplnej krvi
Príklad Úplná krv IC50 (nM)
5a A
5b A
5c A
5d B
5e A
5f B
5h A
5i C
5j C
5k B
51 C
5m A
5n B
5r C
5s C
5u A
5w A
5x A
5y B
5z C
5aa A
5ab B
5ac A
5 ad A
5aa B
5ai C
Saj C
5 ak C
5ax B
5ay B
229
Príklad Úplná krv ICS0 (nM)
5az A
5bb B
7a B
7b A
7c A
7d B
7e C
7f B
7g B
7 h A
7k A
71 A
7m 3
7n A
7o A
7p B
7q A
7s B
7t B
7u B
i 7v A
7w A
7x C
7y C
7z A
7aa B
7ab A
7ac B
7ad B
7 ah B
7ai B
230
Príklad Úplná krv ICS0(nM)
7aj C
7ak B
7 am B
7an B
7 ao B
7ap C
9a B
9b B
9c A
9d A
9e B
9f A
9° B
15a B
15b B
15c A
lSb A
18a A
18b A
18c A
18a A
18e A
18f B
20a A
20b C
20C B
20d B
20e 3
20f A
20g A
20h A
231
Príklad Úplná krv ICS0(nM)
20i A
20k A
201 A
20m A
20n A
20o A
20p A
20q C
20r B
20s A
20t A
23a B
23b B
23C 3
23d A
23e B
23f A
23g A
23Ϊ1 A
23i B
24a B
24c B
24d B
24e B
25a B
25b B
25c B
25d A
25e C
2Sc B
26d A
232
Príklad Úplná krv ICS0 (nM)
2 6e A
26f B
2 6g B
2 Gh A
27a A
27b A
2 7d A
27e A
27f B
27g B
27h B
27i B
271 B
2 7m B
27n A
28a B
28b 3
28C C
29a A
29C A
29d A
29e A
2 9g A
29h A
29i A
29j A
29k A
291 A
2 9n B
2 90 A
2 9p A
233
Príklad Úplná krv ICS0 (nM)
29σ A
29r A
29s A
G2 S
42 5
46b S
57 C
65 A
61 A
69 A
72 A
122a A
122b A
122c B
122d A
122e 3
122í A
122a A
122h A
122i A
122j 3
122k A
1221 A
122m B
122? B
122q B
122r B
122s B
123a A
123b B
234
Ex vivo testy
Metabolizmus a vylučovanie
Na testovanie metabolizmu gastrointestinálnej steny (GI), metabolizmu pečene (f(h)) a vylučovanie žlče sa uskutočňuje štúdia u krýs jednocestná perfúzna štúdia. Použitý spôsob je opísaný v Pang C. S., J. Pharmacol. Exp. Therapeutics, 333, str. 788-798 (1984).
Tabulka 6: Údaje o metabolizme a vylučovaní
Príklad f (g)Xf(h) Vylučovanie žlče
5c A C
5k B A
5m B C
7d D A
7f C A
7ac c C
18f D A
20f B C
20c B A
23b B B
24a C A
24C A C
24e A C
25d C C
25e C B
26c A C
26e B B
26f A C
27a C A
27b 3 A
29b A B
235
Príklad f(g)xf(h) Vylučovanie žlče
29g B B
29n C A
290 C A
29p B C
29q C A
29r C B
46b ‘ B C
57 B B
65 B C
69 C A
122a B A
122b C A
122c C B
122d c A
122r B A
In vivo testy
In vivo test clearance u krýs - rýchlosť clearance
Rýchlosť clearance u krýs (ml/min/kg) pre zlúčeniny podlá predloženého vynálezu sa môže určiť pomocou spôsobov opísaných ďalej:
Reprezentatívny postup
Jeden deň pred farmakokinetickou štúdiou sa kanylujú krčná žila a tepna. M. J. Free, R. A. Jaffee; Cannulation techniques for the collection blood and other bodily fluids; Animal Models; str. 480-495; N. J. Alexander; Ed.; Academic Press; (1978) . Pomocou krčnej žily sa podáva 10 mg liečiva na ml v nosiči, ktorý obvykle obsahuje: propylénglykol/fyziologický roztok obsahujúci 100 mM hydrogenuhličitanu sodného v pomere 1:1. Zvieratá sa dávkujú 10 až 20 mg liečiva/kg a vzorky krvi sa odoberajú v čase 0, 2, 5, 7, 10, 15, 20, 30, 60 a 90 minút zo zvyšného katétra v krčnej tepne. Vzorky krvi sa odstredia na plazmu a skladujú sa pred analýzou pri teplote -20°C. Farmakokinetická analýza údajov sa uskutočňuje pomocou nelineárnej regresie s použitím štandardného softwaru, ako je
236
Rstrip (MicroMath Softwar, UT) a/alebo Pcnonlin (SCI Softwar,
NC), čím sa získajú údaje o clearance.
Reprezentatívne uskutočnenie analýzy:
Plazma krýs sa extrahuje v ekvivalentnom objeme acetonitrilu (obsahujúcom 0,1% kyselinu trifluóroctovú). Vzorky sa potom odstreďujú asi pri 1 000 x g a supernatant sa analyzuje s použitím gradientnej HPLC. Typický postup testu je opísaný ďalej.
200 μΐ plazmy sa zráža s 200 μΐ 0,1% kyseliny trifluóroctovej (TFA) v acetonitrile a 10 μΐ 50% vodného roztoku chloridu zinočnatého, premieša sa a odstreďuje sa pri 1000 x g a supernatant sa odoberie a analyzuje sa pomocou HPLC.
Postup HPLC:
Kolóna: Zorbac SB-CN (4,6 x 150 mm) (veľkosť častíc 5 μτη)
Teplota na kolóne: 50°C Prietok: 1,0 ml/min
Objem nástreku: 75 μΐ
Mobilná fáza: A=0,1% TFA vo vode a B=100% acetonitril
Použitý gradient: 100% A až 30% A v 15,5 min., 0% A v 16 min., 100% A v 19,2 min.
Vlnová dĺžka: 214 nm
Štandardná krivka sa získa pri koncentrácii 20, 10, 5, 2 a 1 μg/ml.
237
Tabulka 7: Údaje o clearance
Príklad Test clearance u krýs i.v. (ml/min/kg)
7d A
7f B
20h B
20m A
65 C
122b B
122c C
122d B
122f A
Biologická využiteľnosť
Perorálna farmakokinetická štúdia
Samci krýs Sprague-Dawley (Harlan, Indiar.apolis, IN, 300-350 g) sa anestetizujú vnútrosvalovou injekciou zmesi ketamínu/rompunu. Do pravej krčnej tepny sa vloží kanyla PE-50, pomocou ktorej sa odoberajú vzorky krvi. Krysy sa pred použitím pri štúdii nechajú zotaviť z chirurgického zákroku cez noc (> 16 hodín) . Testované zlúčeniny sa perorálne podávajú v 25% Cremophor EL/voda (hmotnostné) alebo 100% propylénglykole (PG) v objeme dávky 10 ml/kg. Vzorky krvi (asi 0,30 ml) sa odoberajú v 0,25, 0,50, 1,0, 1,5, 2, 3, 4, 6 a 8 hodinách po dávkovaní, plazma sa oddelí odstredením a pred analýzou sa skladuje pri teplote -20°C. Kvantitatívne hodnotenie vzoriek plazmy sa uskutoční s použitím gradientnej HPLC/MS/MS alebo pomocou enzymatického spôsobu opísaného ďalej:
HPLC/MS/MS spôsob kvantitatívneho hodnotenia ICE inhibítorov v plazme krýs
Príprava vzorky do Eppendorfových odstreďovacích viálok sa dávkujú alikvotné diely 50 μΐ plazmy,
238 k plazme sa na vyzrážanie plazmových proteínov pridá rovnaký objem acetonitrilu, vzorky sa 5 minút miešajú a odstreďujú sa 5 minút pri 14 000 otáčkach za minútu, do 12 mm HPLC viálok na kvapalné vzorky sa umiestni 75 μΐ supernatantu, pre analýzu prostredníctvom hmotnostného spektrometra sa nastrekuje 50 μΐ vzoriek.
Inštrumentálne parametre HPLC:
HPLC: Hewlet Packard HP1100 Binary Solvent Delivery System.
Podmienky HPLC gradientu:
A = voda 0,2% kyseliny mravčej,
B = acetonitril 0,2% kyseliny mravčej.
Mobilná fáza:
Cas
11,5 % A
100
100
100
100 % B
100
100
HPLC analytická kolóna: Keystone Phenyl -2 Hypersil 2,0x100 mm, 5 μ 120 A veľkosť pórov, P/N # 105-39-2
Objem nástreku: 50 μΐ
Prietok: 0,20 ml/min.
Inštrumentálne parametre hmotnostnéj spektrometrie:
Zariadenie: P E Sciex API-365 Tandem Mass Spectrometer Spôsob ionizácie: Turbo-ionosprej (ESI)
239
Polarita: pozitívna
Kľudový čas: 300 msec
Čas prerušenia: 5 msec
Čas skenovania: 0,9 sec
Skenovací mód: MRM (Multiple Reaction Monitoring)
ICE enzymatický test na určenie množstva inhibítorov ICE v plazme krýs μΐ plazmy sa extrahuje 150 μΐ acetonitrilu, spracuje sa ultrazvukom, mieša sa, odstredí sa pri 10 000 x g a 150 μΐ supernatantu sa suší pri teplote miestnosti za miešania v odparke Sorvall. Vzorky sa rekonštruujú v 100 μΐ pufra (10 mM tris-HCl, pH 7,5 s 0,1% CHAPS, 1 mM DTT) za súčasného spracovania ultrazvukom. 10 μΐ každej vzorky sa zmieša s 10 μΐ ICE (1,1 mg/ml) v mikrotitračnej doštičke so 60 μΐ pufru. Vzorky sa inkubujú 15 minút pri teplote miestnosti, potom sa pridá 20 μΐ Succ YVAD-pNA (400 μΜ, predhriate na 37°C a doštičky sa monitorujú 20 minút pri 405 nm pri 37°C s použitím počítadla SpectraMax. Údaje sa spracujú s použitím štvorparametrovej rovnice so Software SpectraMax s použitím extrahovanej štandardnej krivky. Testy sú lineárne od 0,15 do 2,0-3,0 μg/ml aldehydu.
Farmakokinetické parametre:
Farmakokinetická analýza týchto údajov o koncentrácii v plazme sa uskutočňuje s použitím nedelených spôsobov. Plocha pod krivkou (AUCl0-t) sa určí z času 0 do posledného meraného časového okamihu s použitím lineárneho lichobežníkového pravidla. Rýchlosť eliminácie (ke) sa určí pomocou nelineárnej regresie z poslednej fázy krivky koncentrácie plazmy a času. Plocha pod koncom krivky sa určí ako pomer poslednej meranej koncentrácie ku ke. Plocha pod krivkou od času nula k afinite (AUC(O-oo)) sa získa pripočítaním plochy pod koncom k AUC(O-t). Polčas eliminácie sa určí ako 0,693/ke. Zaznamenajú sa pozorované hodnoty
240 pre pík koncentrácie plazmy (Cmax). Pre štúdiu preliečiva: využitelnosť aldehydu (biologická využiteľnosť) sa vypočíta nasledujúcim spôsobom: (AUCaid/preliečivo p. o.) / (AUCaid/ald i. v.) x (dávka ald, ald i.v./dávka preliečiva, preliečivo p.o.)x(MW preliečiva/MW aldehydu).
Tabuľka 8: Údaje o biologickej využiteľnosti
Príklad Cmax (ug/mL) AUC (ugXh/mL) t 1/2 (hod) F (%)
56 A · B A
45 A B
90 C C A C
85 A B B A
68 A C B
76 C C C
77 B B A A
78 A A B A
' ss B C c
83 A C C
241
Príklad Cmax (pg/mL) AUC (pgXh/mL) t 1/2 (hod) F (%)
98d A A B
98h A C B
98e C C B
98c 3 c C
98k 3 c B
98ae A A B
98af A A B
98b C C B
111 A A C
980 A A B
108a A A B
98ag C C B C
98a B B C
9 8am A A B
116a C C B
98an A A B
116g A A C
116h A A B
116e A A B
108b A A B
Antivírusové testy
Účinnosť zlúčenín podľa predloženého vynálezu pri liečení alebo prevencii vírusových ochorení, porúch alebo stavov sa môže určiť pomocou rôznych in vitro a in vivo testov. Môžu sa napríklad uskutočňovať testy na určenie schopnosti týchto zlúčenín inhibovať zápalové odozvy spojené s vírusovými infekciami. Pri in vitro testoch sa môžu využiť úplné bunky alebo izolované časti buniek. In vivo testy zahŕňajú zvieracie modely vírusových ochorení.
Medzi príklady týchto zvieracích modelov patria modely HBV
242 alebo HCV infekcií u hlodavcov, model HBV infekcie u svišťa lesného a model HCV infekcie u šimpanza.
Zlúčeniny podľa predloženého vynálezu sa môžu tiež hodnotiť na modeloch nadmerného príjmu alkoholu v potrave u zvierat, vynález sa však neobmedzuje len na tieto príklady.
Ďalšie testy, ktoré sa môžu použiť na hodnotenie zlúčenín podľa predloženého vynálezu, sú opísané v PCT patentovej prihláške PCT/US96/20843, zverejnenej 26. júna 1997 pod číslom WO 97/22619. Medzi tieto testy patria in vivo farmakokinetické štúdie u myší, inhibícia homológov ICE, inhibícia apoptózy, in vivo akútny test na protizápalovú účinnosť, meranie hladiny liečiva v krvi, testy IGIF, karagénový peritoneálny zápalový test u myší a artritída vyvolaná kolagénom typu II.
Pretože sú zlúčeniny podľa predloženého vynálezu schopné inhibovať kaspázu, najmä ICE, in vitro a ďalej sa môžu podávať orálne cicavcom, sú viditeľne klinicky využiteľné na liečenie ochorení sprostredkovaných IL-1, apoptózou, IGIF a IFN-γ.
Aj keď sa opísalo viac uskutočnení podľa predloženého vynálezu, je zrejmé, že sa naše základné konštrukcie môžu zmeniť, pričom sa získajú iné uskutočnenia, ktoré využívajú produkty a spôsoby podľa predloženého vynálezu.
243
PATENTOVÉ

Claims (29)

  1. NÁROKY f*V 4322-ZOW kde:
    Y je (a)
    Ck B7
    O s podmienkou, že ak R7 je hydroxylová skupina, potom Y môže byť tiež:
    X je skupina -C(R3)2- alebo skupina -N (R3)-;
    m je 0 alebo 1;
    R1 je atóm vodíka, skupina -R8, skupina -C (O) R8, skupina
    -C (O) C (O) R8, skupina -S(O)2R8, skupina -S (O) R8, skupina -C (O) OR8, skupina -C (O) N (H) R8, skupina -S (O) 2N (H)-R8, skupina -S (O) N (H)-R8, skupina -C (O) C (O) N (H) R8, skupina -C (O) CH=CHR8, skupina
    -C(O)CH2OR8, skupina -C (O) CH
  2. 2N (H) R8, skupina -C(O)N(R8)2, skupina
    244
    -S (O) 2N (R8) 2, skupina —S (O) N (R8) 2, skupina -C (O) C (O) N (R8) 2, skupina -C (O) CH2N (R8) 2, skupina -CH2R8, skupina -CH2-alkenyl-R8, alebo skupina -CH2-alkinyl-R8;
    R2 je atóm vodíka a každá skupina R3 je nezávisle atóm vodíka, aminokyselinový postranný reťazec, skupina -R8, skupina alkenyl-R9, alebo skupina alkinyl-R9, alebo každá skupina R3 spolu s atómom, na ktorý je viazaná, tvorí trojčlenný až sedemčlenný cyklický alebo heterocyklický kruhový systém, alebo R2 a jedna skupina R3 spolu s atómami, na ktoré sú viazané, tvoria trojčlenný až sedemčlenný cyklický alebo heterocyklický kruhový systém, kde atóm vodíka viazaný k akémukoľvek atómu uhlíka na alkylovej alebo cykloalkylovej skupine je prípadne nahradený skupinou -R10, atóm vodíka viazaný k akémukoľvek uhlíku arylovej alebo heteroarylovej skupiny je prípadne nahradený skupinou -R11, atóm vodíka viazaný k akémukoľvek atómu dusíka kruhového systému je prípadne nahradený skupinou -R1;
    R4 je atóm vodíka a každá skupina R5 je nezávisle atóm vodíka, aminokyselinový postranný reťazec, skupina -R8, skupina -alkenyl-R9, alebo skupina -alkinyl-R9, alebo skupina R4 a jedna skupina R5 spolu s atómami, na ktoré sú viazané, tvoria kruhový systém vybraný zo skupiny, ktorú tvorí:
    245 kde atóm vodíka viazaný k akémukolvek atómu uhlíka na alkylovej alebo cykloalkylovej skupine je prípadne nahradený skupinou -R10, atóm vodíka viazaný k akémukoľvek uhlíku arylovej alebo heteroarylovej skupiny je prípadne nahradený skupinou -R11, a atóm vodíka viazaný k akémukolvek atómu dusíka kruhového systému je prípadne nahradený skupinou -R1, alebo R4 a jedna skupina R5 spolu s atómami, na ktoré sú viazané, tvoria kruhový systém;
    R6 je atóm vodíka;
    R7 je skupina -OH, skupina -OR8, alebo skupina -N(H)OH;
    každá skupina R8 je nezávisle -alkylová skupina, -cykloalkylová skupina, -arylová skupina, -heteroarylová skupina, -heterocyklylová skupina, -alkylcykloalkylová skupina, -alkylarylová skupina, -alkylheteroarylová skupina alebo -alkylheterocyklylová skupina, kde atóm vodíka viazaný k akémukolvek atómu uhlíka na alkylovej alebo cykloalkylovej skupine je prípadne nahradený skupinou -R10, atóm vodíka viazaný k akémukoľvek uhlíku arylovej
    246 alebo heteroarylovej skupiny je prípadne nahradený skupinou -R11, a atóm vodíka viazaný k akémukoľvek atómu dusíka kruhového systému je prípadne nahradený skupinou -R1;
    každá skupina R9 je nezávisle -arylová skupina, -heteroarylová skupina, cykloalkylová skupina, alebo -heterocyklylová skupina, kde atóm vodíka viazaný k akémukoľvek atómu uhlíka na alkylovej alebo cykloalkylovej skupine je prípadne nahradený skupinou -R10, atóm vodíka viazaný k akémukoľvek uhlíku arylovej alebo heteroarylovej skupiny je prípadne nahradený skupinou -R11, a atóm vodíka viazaný k akémukoľvek atómu dusíka kruhového systému je prípadne nahradený skupinou -R1;
    každá skupina R10 je nezávisle hydroxylové skupina, tioskupina, atóm fluóru, atóm chlóru, atóm brómu, atóm jódu, nitroskupina, kyanoskupina, aminoskupina, karboxylová skupina, skupina-C(0)NH2, skupina -N(H)C(O)H, skupina -N (H) C (0) NH2, -perfluóralkylová skupina, -O-alkylová skupina, -0-arylová skupina, -O-alkylarylová skupina, -N(H)alkylová skupina, -N(H)arylová skupina, -N(H)-alkylarylová skupina, skupina -N(alkyl)2, -C(0)N(H)alkylová skupina, skupina -C(0)N(alkyl)2, -N(H)C(0)alkylová skupina, -N(H)C(0)Oalkylová skupina, -N(H)C(0)Oarylová skupina, -N(H)C(0)Oalkylarylová skupina, -N(H)C(0)Oheteroarylová skupina, -N(H)C(0)0 alkylheteroarylová skupina, -N(H)C(0)Ocykloalkylová skupina, -N(H)C(0)N(H)alkylová skupina, skupina -N(H)C(0)N(alkyl) 2, -N(H)C(0)N(H)arylová skupina -N(H)C(0)N(H)alkylarylová skupina, -N(H)C(0)N(H)heteroarylová skupina, -N(H)C(0)N(H)alkylheteroarylová skupina, -N(H)C(0)N(H)cykloalkylová skupina, -S-alkylová skupina, -S-arylová skupina, -S-alkylarylová skupina, -S (0) 2alkylová skupina, -S(0)alkylová skupina, -C(0)alkylová skupina, skupina -CH2NH2, -CH2N(H)alkylová skupina, alebo skupina -CH2N(alkyl)2, -alkylová skupina, -cykloalkylová skupina, -arylová skupina, -heteroarylová skupina, -heterocyklylová skupina, -alkylcykloalkylová skupina, -alkylarylová skupina, -alkylheteroarylová skupina, alebo -alkylheterocyklylová skupina, kde atóm vodíka viazaný k akémukoľvek atómu uhlíka -arylovej skupiny ale247 bo -heteroarylovej skupiny je prípadne nahradený skupinou R11 a atóm vodíka viazaný k akémukoľvek atómu dusíka je prípadne nahradený skupinou R1; a každá skupina R11 je nezávisle hydroxylová skupina, tioskupina, atóm fluóru, atóm chlóru, atóm brómu, atóm jódu, nitroskupina, kyanoskupina, aminoskupina, karboxylová skupina, skupina -C(O)NH2, skupina -N(H)C(O)H, skupina -N(H)C(0)NH2, -alkylová skupina, -cykloalkylová skupina, -perfluóralkylová skupina, -0-alkylová skupina, -0-arylová skupina, -O-alkylarylová skupina, -N(H)-alkylová skupina, -N(H)-arylová skupina, -N(H)-alkylarylová skupina, skupina -N(alkyl)2, -C(0)N(H)alkylová skupina, skupina -C(0)N(alkyl)2, -N(H)C(0)alkylová skupina, -N(H)C(0)N(H)alkylová skupina, skupina -N(H)C(0)N(alkyl)2, -S-alkylová skupina, -S-arylová skupina, -S-alkylarylová skupina, -S (0) 2alkylová skupina, -S(0)alkylová skupina, -C(0)alkylová skupina, skupina -CH2NH2, -CH2N(H)alkylová skupina, alebo skupina -CH2N (alkyl) 2 · kde Y je:
    s podmienkou, že ak R6 nie je atóm vodíka, R6 a Y, spolu s atómom
    248 dusíka, na ktorý sú viazané, tvoria kruh (g):
    (g)
    X je -C(r3)2 alebo -N(R3)-;
    m je 0 alebo 1
    R1 je atóm vodíka, skupina -R8, skupina -C (O) R8, skupina -C(O)C(O)R8, skupina -S(O)2R8, skupina -S (O) R8, skupina -C(O)OR8, skupina -C(O)N(H)R8, skupina -S (0) 2N (H)-R8, skupina -S (0) N (H)-R8, skupina -C (0) C (0) N (H) R8, skupina -C (0) CH=CHR8, skupina -C(O)CH2OR8, skupina -C (0) CH2N (H) R8, skupina -C(O)N(R8)2, skupina -S(O)2N(R8)2, skupina -S(O)N(R8)2, skupina -C (0) C (0) N (R8) 2, skupina -C (0) CH2N (R8) 2, skupina -CH2R8, skupina -CH2-alkenyl-R8, alebo skupina -CH2-alkinyl-R8;
    R2 je atóm vodíka a každá skupina R3 je nezávisle atóm vodíka, aminokyselinový postranný reťazec, skupina -R8, skupina alkenyl-R9, alebo skupina alkinyl-R9, alebo každá skupina R3 spolu s atómom, na ktorý je viazaná, tvorí trojčlenný až sedemčlenný cyklický alebo heterocyklický kruhový systém, alebo R2 a jedna skupina R3 spolu s atómami, na ktoré sú viazané, tvoria trojčlenný až sedemčlenný cyklický alebo heterocyklický kruhový systém, kde atóm vodíka viazaný k akémukoľvek atóm uhlíka na alkylovej alebo cykloalkylovej skupine je prípadne nahradený skupinou -R10, atóm vodíka viazaný k akémukoľvek uhlíku arylovej alebo heteroarylovej skupiny je prípadne nahradený skupinou -R11, atóm vodíka viazaný k akémukoľvek atómu dusíka kruhového systému je prípadne nahradený skupinou -R1;
    R4 je atóm vodíka a každá skupina R5 je nezávisle atóm vodíka, aminokyselinový postranný reťazec, skupina -R8, skupina -alkenyl-R9, alebo skupina -alkinyl-R9, alebo skupina R4 a jedna skupina R5 spolu s atómami, na ktoré sú viazané, tvoria kruhový
    249 .N,
    X . .N.
    alebo kde atóm vodíka viazaný k akémukoľvek atómu uhlíka na alkylovej alebo cykloalkylovej skupine je prípadne nahradený skupinou -R10, atóm vodíka viazaný k akémukoľvek uhlíku arylovej alebo heteroarylovej skupiny je prípadne nahradený skupinou -R11, a atóm vodíka viazaný k akémukoľvek atómu dusíka kruhového systému je prípadne nahradený skupinou -R1, alebo R4 a jedna skupina R5 spolu s atómami, na ktoré sú viazané, tvoria kruhový systém;
    R6 je atóm vodíka;
    250 každá skupina R8 je nezávisle -alkylová skupina, -cykloalkylová skupina, -arylová skupina, -heteroarylová skupina, -heterocyklylová skupina, -alkylcykloalkylová skupina, -alkylarylová skupina, -alkylheteroarylová skupina alebo -alkylheterocyklylová skupina, kde atóm vodíka viazaný k akémukoľvek atómu uhlíka na alkylovej alebo cykloalkylovej skupine je prípadne nahradený skupinou -R10, atóm vodíka viazaný k akémukoľvek uhlíku arylovej alebo heteroarylovej skupiny je prípadne nahradený skupinou -R11, a atóm vodíka viazaný k akémukoľvek atómu dusíka kruhového systému je prípadne nahradený skupinou -R1;
    každá skupina R9 je nezávisle -arylová skupina, -heteroarylová skupina, cykloalkylová skupina, alebo -heterocyklylová skupina, kde atóm vodíka viazaný k akémukoľvek atómu uhlíka na alkylovej alebo cykloalkylovej skupine je prípadne nahradený skupinou -R10, atóm vodíka viazaný k akémukolvek uhlíku arylovej alebo heteroarylovej skupiny je prípadne nahradený skupinou -R11, a atóm vodíka viazaný k akémukolvek atómu dusíka kruhového systému je prípadne nahradený skupinou -R1;
    každá skupina R10 je nezávisle hydroxylová skupina, tioskupina, atóm fluóru, atóm chlóru, atóm brómu, atóm jódu, nitroskupina, kyanoskupina, aminoskupina, karboxylová skupina, skupina-C (O) NH2, skupina -N(H)C(O)H, skupina -N (H) C (0) NH2, -perfluóralkylová skupina, -O-alkylová skupina, -0-arylová skupina, -O-alkylarylová skupina, -N(H)alkylová skupina, -N(H)arylová skupina, -N(H)-alkylarylová skupina, skupina -N (alkyl) 2, -C(O)N(H)alkylová skupina, skupina -C(0)N(alkyl)2, -N(H)C(0)alkylová skupina, -N(H)C(0)Oalkylová skupina, -N(H)C(0)Oarylová skupina, -N(H)C(0)Oalkylarylová skupina, -N(H)C(0)Oheteroarylová skupina, -N(H)C(0)0 alkylheteroarylová skupina, -N(H)C(0)Ocykloalkylová skupina, -N(H)C(0)N(H)alkylová skupina, skupina -N(H)C(0)N(alkyl) 2, -N(H)C(0)N(H)arylová skupina -N(H)C(0)N(H)alkylarylová skupina, -N(H)C(0)N(H)heteroarylová skupina, -N(H)C(0)N(H)alkylheteroarylová skupina, -N(H)C(0)N(H)cykloalkylová skupina, -S-alkylová skupina, -S-arylová skupina, -S-alkylarylová skúpi251 na, -S (O) 2alkylová skupina, -S(O)alkylová skupina, -C(O)alkylová skupina, skupina -CH2NH2, -CH2N(H)alkylová skupina, alebo skupina -CH2N(alkyl)2, -alkylová skupina, -cykloalkylová skupina, -arylová skupina, -heteroaryiová skupina, -heterocyklylová skupina, -alkylcykloalkylová skupina, -alkylarylová skupina, -alkylheteroarylová skupina, alebo -alkylheterocyklylová skupina, kde atóm vodíka viazaný k akémukoľvek atómu uhlíka -arylovej skupiny alebo -heteroarylovej skupiny je prípadne nahradený skupinou R11 a atóm vodíka viazaný k akémukoľvek atómu dusíka je prípadne nahradený skupinou R1; a každá skupina R11 je nezávisle hydroxylová skupina, tioskupina, atóm fluóru, atóm chlóru, atóm brómu, atóm jódu, nitroskupina, kyanoskupina, aminoskupina, karboxylová skupina, skupina -C(O)NH2, skupina -N(H)C(O)H, skupina -N (H) C (0) NH2, -alkylová skupina, -cykloalkylová skupina, -perfluóralkylová skupina, -0-alkylová skupina, -0-arylová skupina, -O-alkylarylová skupina, -N(H)-alkylová skupina, -N(H)-arylová skupina, -N(H)-alkylarylová skupina, skupina -N(alkyl)2, -C(0)N(H)alkylová skupina, skupina -C(0)N(alkyl)2, -N(H)C(0)alkylová skupina, -N(H)C(O)N(H)alkylová skupina, skupina -N(H)C(0)N(alkyl)2, -S-alkylová skupina, -S-arylová skupina, -S-alkylarylová skupina, -S (0)2alkylová skupina, -S(0)alkylová skupina, -C(0)alkylová skupina, skupina -CH2NH2, -CH2N(H)alkylová skupina, alebo skupina -CH2N (alkyl) 2.
    R12 je -C(0)alkylová skupina, -C(0)cykloalkylová skupina, -C(0)alkyenylová skupina, -C(0)alkylarylová skupina, -C(O)alkylheteroarylová skupina, -C(0)heterocyklylová skupina, alebo -C(0)alkylheterocyklylová skupina;
    R13 je atóm vodíka, -alkylová skupina, -arylová skupina, -alkylarylová skupina alebo -alkylheteroarylová skupina.
    252
  3. 3. Zlúčenina všeobecného vzorca I kde Y je (a) vR7
    A
    O alebo (b)
    HCÍ K m je 0 alebo 1;
    X je skupina -C(R3)2
    R1 je atóm vodíka, skupina -R8, skupina -C (O) R8, skupina -C (O) C (O) R8, skupina -S(O)2R8, skupina -S (O) R8, skupina -C (O) OR8, skupina -C (O) N (H) R8, skupina -S(O)2N(H)-R8, -S (O) N (H)-R8, skupina -C (O) C (O) N (H) R8, skupina -C (O) CH=CHR8, skupina -C(O)CH2OR8, skupina -C (O) CH2N (H) R8, skupina -C(O)N(R8)2, skupina -S (O) 2N (R8) 2, skupina -S(O)N(R8)2, skupina -C (O) C (O) N (R8) 2, skupina -C (O) CH2N (R8) 2, skupina -CH2R8, skupina -CH2-alkenyl-R8, alebo skupina -CH2-alkinyl-R8;
    R2 je atóm vodíka a každá skupina R3 je nezávisle atóm vodíka, aminokyselinový postranný reťazec, skupina -R8, skupina alkenyl-R9, alebo skupina alkinyl-R9, alebo každá skupina R3 spolu
    253 s atómom, na ktorý sú viazané, tvoria trojčlenný až sedemčlenný cyklický alebo heterocyklický kruhový systém, kde atóm vodíka viazaný k akémukoľvek atómu uhlíka alkylovej alebo cykloalkylovej skupiny je prípadne nahradený skupinou -R10, atóm vodíka viazaný k akémukoľvek atómu uhlíka arylovej alebo heteroarylovej skupiny je prípadne nahradený skupinou -R11, atóm vodíka viazaný k akémukoľvek atómu dusíka kruhového systému je prípadne nahradený skupinou -R1;
    R4 je atóm vodíka a každá skupina R5 je nezávisle atóm vodíka, aminokyselinový postranný reťazec, skupina -R8, skupina -alkenyl-R9, alebo skupina -alkinyl-R9, alebo R4 a jedna skupina R5 spolu s atómami, na ktoré sú viazané, tvoria kruhový systém vybraný zo skupiny, ktorú tvorí:
    'S
    N.
    N.
    alebo ľ T r
    N.
    254 kde atóm vodíka viazaný k akémukoľvek atómu uhlíka alkylovej alebo cykloalkylovej skupiny je prípadne nahradený skupinou -R10, atóm vodíka viazaný k akémukoľvek atómu uhlíka arylovej alebo heteroarylovej skupiny je prípadne nahradený skupinou -R11 a atóm vodíka viazaný k akémukoľvek atómu dusíka kruhového systému je prípadne nahradený skupinou -R1, alebo R4 a jedna skupina R5, spolu s atómami, na ktoré sú viazané, tvoria kruhový systém:
    N.
    R6 je atóm vodíka;
    R7 je hydroxylové skupina , skupina -OR8, skupina -N(H)OH, alebo skupina -N (H) S (0) 2R8;
    každá skupina R8 je nezávisle -alkylová skupina, -cykloalkylová skupina, -arylová skupina, -heteroarylová skupina, -heterocyklylová skupina, -alkylcykloalkylová skupina, -alkylarylová skupina, -alkylheteroarylová skupina alebo -alkylheterocyklylová skupina, kde atóm vodíka viazaný k akémukoľvek atómu uhlíka alkylovej alebo cykloalkylovej skupiny je prípadne nahradený skupinou -R10, atóm vodíka viazaný k akémukoľvek atómu uhlíka arylovej alebo heteroarylovej skupiny je prípadne nahradený skupinou -R11, atóm vodíka viazaný k akémukoľvek atómu dusíka kruhového systému je prípadne nahradený skupinou -R1;
    každá skupina R9 je nezávisle -arylová skupina, -heteroarylová skupina, cykloalkylová skupina alebo -heterocyklylová skupina, kde atóm vodíka viazaný k akémukoľvek atómu uhlíka alkylovej alebo cykloalkylovej skupiny je prípadne nahradený skupinou -R10, atóm vodíka viazaný k akémukoľvek atómu uhlíka arylovej alebo heteroarylovej skupiny je prípadne nahradený skupinou -R11, atóm vodíka viazaný k akémukoľvek atómu dusíka kruhového systému je prípadne nahradený skupinou -R1;
    každá skupina R10 je nezávisle hydroxylové skupina, tioskupina, atóm fluóru, atóm chlóru, atóm brómu, atóm jódu, nitroskupina,
    255 kyanoskupina, aminoskupina, karboxylová skupina, skupina -C(O)NH2, skupina -N(H)C(O)H, skupina -N (H) C (0) NH2, -perfluóralkylová skupina, -O-alkylová skupina, -0-arylová skupina, -O-alkylarylová skupina, -N(H)alkylová skupina, -N(H)arylová skupina, -N(H)-alkylarylová skupina, skupina -N (alkyl) 2, -C(0)N(H)alkylová skupina, skupina -C(0)N(alkyl)2, -N(H)C(O)alkylová skupina, -N(H)C(0)Oalkylová skupina, -N(H)C(0)Oarylová skupina, -N(H)C(0)Oalkylarylová skupina, -N(H)C(0)Oheteroarylová skupina, -N(H)C(0)Oalkylheteroarylová skupina, -N(H)C(0)Ocykloalkylová skupina, -N (H)C(0)N(H)alkylová skupina, skupina -N(H)C(0)N(alkyl)2z -N(H)C(0)N(H)arylová skupina, -N(H)C(O)N(H)alkylarylová skupina, -N(H)C(0)N(H)heteroarylová skupina, -N(H)C(0)N(H)alkylheteroarylová skupina, -N(H)C(0)N(H)cykloalkylová skupina, -S-alkylová skupina, -S-arylová skupina, -S-alkylarylová skupina, -S (0) 2alkylová skupina, -S(0)alkylová skupina, -C(0)alkylová skupina, skupina -CH2NH2, -CH2N(H)alkylová skupina, alebo skupina -CH2N(alkyl)2, -alkylová skupina, -cykloalkylová skupina, -arylová skupina, -heteroarylová skupina, -heterocyklylová skupina, -alkylcykloalkylová skupina, -alkylarylová skupina, -alkylheteroarylová skupina, alebo -alkylheterocyklylová skupina, kde atóm vodíka viazaný k akémukoľvek atómu uhlíka arylovej alebo heteroarylovej skupiny je prípadne nahradený skupinou R11 a atóm vodíka viazaný k akémukolvek atómu dusíka je prípadne nahradený skupinou R1; a každá skupina R11 je nezávisle hydroxylová skupina, tioskupina, atóm fluóru, atóm chlóru, atóm brómu, atóm jódu, nitroskupina, kyanoskupina, aminoskupina, karboxylová skupina, skupina -C(O)NH2, skupina -N(H)C(O)H, skupina -N (H) C (0) NH2, -alkylová skupina, -cykloalkylová skupina, -perfluóralkylová skupina, -O-alkylová skupina, -0-arylová skupina -O-alkylarylová skupina, -N(H)alkylová skupina, -N(H)arylová skupina, -N(H)-alkylarylová skupina, skupina -N(alkyl)2, -C(0)N(H)alkylová skupina, skupina -C(0)N(alkyl)2, -N(H)C(0)alkylová skupina, -N(H)C(0)N(H)alkylová skupina, skupina -N(H)C(0)N-(alkyl)2, -S-alkylová skupina, -S-arylová skupina, -S-alkylarylová skupina, -S(0) 2alkylová
    256 skupina, -S(O)alkylová skupina, -C(O)alkylová skupina, skupina -CH2NH2, -CH2N(H) alkylová skupina, alebo skupina -CH2N(alkyl)2;
    s podmienkou, že ak jedna skupina R3 je atóm vodíka, potom druhá skupina R3 nie je atóm vodíka.
  4. 4. Zlúčenina všeobecného vzorca I:
    kde Y je:
    m je 0 alebo 1;
    X je skupina -C (R3) 2
    R1 je atóm vodíka, skupina -R8, skupina -C(O)R8, skupina -C (O) C (O) R8, skupina -S(O)2R8, skupina -S (O) R8, skupina -C (O) OR8, skupina -C (O) N (H) R8, skupina -S (O) 2N (H)-R8, -S (O) N (H)-R8, skupina -C (O) C (O) N (H) R8, skupina -C (O) CH=CHR8, skupina -C(O)CH2OR8, skupina -C (O) CH2N (H) R8, skupina -C(O)N(R8)2, skupina -S (O) 2N (R8) 2, skupina -S (O) N (R8) 2, skupina -C (O) C (O) N (R8) 2, skupina -C (O) CH2N (R8) 2, skupina -CH2R8, skupina -CH2-alkenyl-R8, alebo skupina -CH2-alkinyl-R8;
    257
    R2 je atóm vodíka a každá skupina R3 je nezávisle atóm vodíka, aminokyselinový postranný reťazec, skupina -R8, skupina alkenyl-R9, alebo skupina alkinyl-R9, alebo každá skupina R3 spolu s atómami, na ktoré sú viazané, tvoria trojčlenný až sedemčlenný cyklický alebo heterocyklický kruhový systém, kde atóm vodíka viazaný k akémukoľvek atómu uhlíka alkylovej alebo cykloalkylovej skupiny je prípadne nahradený skupinou -R10, atóm vodíka viazaný k akémukoľvek atómu uhlíka arylovej alebo heteroarylovej skupiny je prípadne nahradený skupinou -R11, atóm vodíka viazaný k akémukoľvek atómu dusíka kruhového systému je prípadne nahradený skupinou -R1;
    R4 je atóm vodíka a každá skupina R5 je nezávisle atóm vodíka, aminokyselinový postranný reťazec, skupina -R8, skupina -alkenyl-R9, alebo skupina -alkinyl-R9, alebo R4 a jedna skupina R5 spolu s atómami, na ktoré sú viazané, tvoria kruhový systém vybraný zo skupiny, ktorú tvorí:
    -N.
    N.
    alebo
    N,
    258 kde atóm vodíka viazaný k akémukoľvek atómu uhlíka alkylovej alebo cykloalkylovej skupiny je prípadne nahradený skupinou -R10, atóm vodíka viazaný k akémukoľvek atómu uhlíka arylovej alebo heteroarylovej skupiny je prípadne nahradený skupinou -R11 a atóm vodíka viazaný k akémukoľvek atómu dusíka kruhového systému je prípadne nahradený skupinou -R1, alebo R4 a jedna skupina R5, spolu s atómami, na ktoré sú viazané, tvoria kruhový systém:
    R6 je atóm vodíka;
    každá skupina R8 je nezávisle -alkylová skupina, -cykloalkylová skupina, -arylová skupina, -heteroarylová skupina, -heterocyklylová skupina, -alkylcykloalkylová skupina, -alkylarylová skupina, -alkylheteroarylová skupina alebo -alkylheterocyklylová skupina, kde atóm vodíka viazaný k akémukoľvek atómu uhlíka alkylovej alebo cykloalkylovej skupiny je prípadne nahradený skupinou -R10, atóm vodíka viazaný k akémukoľvek atómu uhlíka arylovej alebo heteroarylovej skupiny je prípadne nahradený skupinou -R11, atóm vodíka viazaný k akémukoľvek atómu dusíka kruhového systému je prípadne nahradený skupinou -R1;
    každá skupina R9 je nezávisle -arylová skupina, -heteroarylová skupina, cykloalkylová skupina alebo -heterocyklylová skupina, kde atóm vodíka viazaný k akémukoľvek atómu uhlíka alkylovej alebo cykloalkylovej skupiny je prípadne nahradený skupinou -R10, atóm vodíka viazaný k akémukoľvek atómu uhlíka arylovej alebo heteroarylovej skupiny je prípadne nahradený skupinou -R11, atóm vodíka viazaný k akémukoľvek atómu dusíka kruhového systému je prípadne nahradený skupinou -R1;
    každá skupina R10 je nezávisle hydroxylová skupina, tioskupina, atóm fluóru, atóm chlóru, atóm brómu, atóm jódu, nitroskupina, kyanoskupina, aminoskupina, karboxylová skupina, skupina
    -C(O)NH2, skupina -N(H)C(O)H, skupina -N (H) C (0) NH2, -perfluór259 alkylová skupina, -O-alkylová skupina, -O-arylová skupina, -O-alkylarylová skupina, -N(H)alkylová skupina, -N(H)arylová skupina, -N(H)-alkylarylová skupina, skupina -N(alkyl)z, -C(0)N(H)alkylová skupina, skupina -C(0)N(alkyl)2, -N(H)C(0)alkylová skupina, -N(H)C(0)Oalkylová skupina, -N(H)C(0)Oarylová skupina, -N(H)C(0)Oalkylarylová skupina, -N(H)C(0)Oheteroarylová skupina, -N(H)C(0)Oalkylheteroarylová skupina, -N(H)C(0)Ocykloalkylová skupina, -N(H)C(O)N(H)alkylová skupina, skupina -N(H)C(0)N(alkyl)2/ -N(H)C(0)N(H)arylová skupina, -N(H)C(0)N(H)alkylarylová skupina, -N(H)C(0)N(H)heteroarylová skupina, -N(H)C(0)N(H)alkylheteroarylová skupina, -N(H)C(0)N(H)cykloalkylová skupina, -S-alkylová skupina, -S-arylová skupina, -S-alkylarylová skupina, -S(0)2alkylová skupina, -S(0)alkylová skupina, -C(0)alkylová skupina, skupina -CH2NH2, -CH2N(H)alkylová skupina, alebo skupina -CH2N(alkyl)2, -alkylová skupina, -cykloalkylová skupina, -arylová skupina, -heteroarylová skupina, -heterocyklylová skupina, -alkylcykloalkylová skupina, -alkylarylová skupina, -alkylheteroarylová skupina, alebo -alkylheterocyklylová skupina, kde atóm vodíka viazaný k akémukoľvek atómu uhlíka arylovej alebo heteroarylovej skupiny je prípadne nahradený skupinou R11 a atóm vodíka viazaný k akémukoľvek atómu dusíka je prípadne nahradený skupinou R1; a každá skupina R11 je nezávisle hydroxylová skupina, tioskupina, atóm fluóru, atóm chlóru, atóm brómu, atóm jódu, nitroskupina, kyanoskupina, aminoskupina, karboxylová skupina, skupina -C(O)NH2, skupina -N(H)C(O)H, skupina -N (H) C (0) NH2, -alkylová skupina, -cykloalkylová skupina, -perfluóralkylová skupina, -O-alkylová skupina, -O-arylová skupina -O-alkylarylová skupina, -N(H)alkylová skupina, -N(H)arylová skupina, -N(H)-alkylarylová skupina, skupina -N(alkyl)2, -C(0)N(H)alkylová skupina, skupina -C(0)N(alkyl)2, -N(H)C(0)alkylová skupina, -N(H)C(0)N(H)alkylová skupina, skupina -N(H)C(0)N-(alkyl)2, -S-alkylová skupina, -S-arylová skupina, -S-alkylarylová skupina, -S(0)2alkylová skupina, -S(0)alkylová skupina, -C(0)alkylová skupina, skupina -CH2NH2, -CH2N (H) alkylová skupina, alebo skupina -CH2N (alkyl) 2; a
    260
    R12 je -C(O)alkylová skupina, -C(O)cykloalkylová skupina, -C(O)alkyenylová skupina, -C(O)alkylarylová skupina, -C(O)alkylheteroarylová skupina, -C(O)heterocyklylová skupina, alebo -C(O)alkylheterocyklylová skupina.
  5. 5.
    Zlúčenina podlá nároku alebo 4, kde Y je:
    a V je: skupina CH3O, ,0
    261
  6. 6. Zlúčenina podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 5, kde R4 a jedna skupina R5 spolu s atómami, na ktoré sú viazané, tvoria kruhový systém vybraný zo skupiny, ktorú tvorí:
    262
    N, kde atóm vodíka viazaný k akémukoľvek atómu uhlíka -alkylovej skupiny alebo -cykloalkylovej skupiny je prípadne nahradený skupinou R10, alebo R4 a jedna skupina R5 spolu s atómami, na ktoré sú viazané, tvoria kruhový systém:
    N.
  7. 7. Zlúčenina podía nároku 6, kde jedna skupina R3 je atóm vodíka a druhá skupina R3 je metylová skupina, izopropylová skupina, fcerc-butylová skupina, skupina -CH2SR8, skupina -CH2SO2R8, skupina
    -CH2CH2SR8 alebo skupina -CH2CH2SO2R8.
    263
  8. 8. Zlúčenina podlá nároku 7, kde jedna skupina R3 je atóm vodíka a druhá skupina R3 je metylová skupina.
  9. 9. Zlúčenina podľa nároku 8, kde R1 je skupina -C(O)R8 alebo skupina -C(O)C(O)R8.
  10. 10. Zlúčenina podľa nároku 6, kde R4 a jedna skupina R5 spolu s atómami, na ktoré sú viazané, tvoria kruhový systém vybraný zo skupiny, ktorú tvorí:
    .N.
    a druhá skupina R5 je atóm vodíka, kde atóm vodíka viazaný na ktorýkoľvek atóm uhlíka -alkylovej alebo -cykloalkylovej skupiny je prípadne nahradený skupinou R10.
  11. 11. Zlúčenina podľa nároku 10, kde jedna skupina R3 je atóm vodíka a druhá skupina R3 je metylová skupina, izopropylová skupina, terc-butylová skupina, skupina -CH2SR8, skupina -CH2SO2R8, skupina -CH2CH2SR8 alebo skupina -CH2CH2SO2R8.
  12. 12. Zlúčenina podľa nároku 11, kde jedna skupina R3 je atóm vodíka a druhá skupina R3 je metylová skupina.
  13. 13. Zlúčenina podľa nároku 12, kde R1 je skupina -C(O)R8 alebo
    264 skupina -C(O)C(O)R8.
  14. 14. Zlúčenina podľa nároku 6, kde R4 a jedna skupina R5 spolu s atómami, na ktoré sú viazané, tvoria kruhový systém:
    a druhá skupina R5 je atóm vodíka.
  15. 15. Zlúčenina podľa nároku 14, kde jedna skupina R3 je atóm vodíka a druhá skupina R3 je metylová skupina, izopropylová skupina , terc-butylová skupina, skupina -CH2SR8, skupina -CH2SO2R8, skupina -CH2CH2SR8 alebo skupina -CH2CH2SO2R8.
  16. 16. Zlúčenina podľa nároku 15, kde jedna skupina R3 je atóm vodíka a druhá skupina R3 je metylová skupina.
  17. 17. Zlúčenina podľa nároku 16, kde R1 je skupina -C(O)R8 alebo skupina -C(O)C(O)R8.
  18. 18. Zlúčenina podľa nároku 1 alebo podľa nároku 3 vybraná zo skupiny, ktorú tvorí: 5a-5bd, 7a-7at, 20a-20t, 23a-23i, 24a-24e, 26d, 26e, 29a-29s, 32a-32e, 34, 42, 46, 52, 57, 61, 65, 69, 73, 121 a 122a-v.
  19. 19. Zlúčenina podľa nároku 4, vybraná zo skupiny, ktorú tvorí:
    41, 45, 51, 56, 60, 64, 68, 72, 76-93, 98a-z, 98aa-az, 98ba a
    98bb, 101, 102a, 102b, 108a-108d, 110, 111, 116a-116h, 120a a
    120b.
  20. 20. Zlúčenina vybraná zo skupiny, ktorú tvorí: 37, 38, 39, 43, 44, 49, 50, 54, 55, 58, 59, 67, 71, 75, 96a-96c, 97a-97c, 100,
    265
    115f
  21. 21. Farmaceutická kompozícia, vyznačujúca sa tým, že obsahuje
    a) zlúčeninu podlá ktoréhokoľvek z nárokov 1-19 a
    b) farmaceutický prijateľný nosič, adjuvant alebo vehikulum.
  22. 22. Spôsob liečenia alebo prevencie ochorenia vybraného zo skupiny ktorú tvorí ochorenie sprostredkované IL-1, ochorenie sprostredkované apoptózou, zápalové ochorenie, autoimúnne ochorenie, deštrukčné ochorenie kostí, proliferatívne ochorenie,
    266 infekčné ochorenie, degeneratívne ochorenie, nekrotické ochorenie, ochorenie spôsobené nadmerným príjmom alkoholu v potrave, ochorenie sprostredkované vírusom, zápalová peritonitída, osteoartritída, pankreatitída, astma, syndróm dýchacieho stresu dospelých, glomerulonefritída, reumatoidná artritída, systémový lupus erythematosus, skleroderma, chronická tyroiditída, Gravesova choroba, autoimúnna gastritída, diabetes melitus závislý na inzulíne (typ 1), autoimúnna hemolytická anémia, autoimúnna neutropénia, trombocytopénia, chronická aktívna hepatitída, myasténia gravis, zápalové črevné ochorenie, Crohnova choroba, psoriáza, atopická dermatitída, ochorenie štep versus hostiteľ, osteoporóza, leukémia a s ňou spojené ochorenia, myelodysplastický syndróm, kostné ochorenie spojené s mnohopočetným myelómom, akútna myelogénna leukémia, chronická myelogénna leukémia, metastatický melanóm, Kaposiho sarkóm, mnohopočetný myelóm, sepsa, septický šok, Shigelosa, Alzheimerova choroba, Parkinsonova choroba, mozgová ischémia, ischémia myokardu, spinálna muskulárna atrofia, mnohopočetná skleróza, encefalitída súvisiaca s AIDS, encefalitída spojená s HIV, starnutie, vypadávanie vlasov, neurologické poškodenie spôsobené mŕtvicou, ulceratívna kolitída, traumatické poškodenie mozgu, odmietnutie transplantovaného orgánu, hepatitída-B, hepatitída-C, hepatitída-G, žltá horúčka, horúčka dengue, alebo japonská encefalitída, u pacienta, vyznačujúci sa tým, že sa skladá z kroku podávania zlúčeniny podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 19 alebo farmaceutickej kompozície podľa nároku 21, tomuto pacientovi.
  23. 23. Spôsob podľa nároku 22, vyznačujúci sa tým, že ochorením je reumatoidná artritída, zápalové črevné ochorenie, Crohnova choroba, ulceratívna kolitída, zápalová peritonitída, septický šok, pankreatitída, traumatické poškodenie mozgu, odmietnutie transplantovaného orgánu, osteoartritída, astma, psoriáza, Alzheimerova choroba, atopická dermatitída, leukémia a s ňou spojené ochorenia, myelodysplastický syndróm alebo mnohopočetný myelóm.
    267
  24. 24. Spôsob inhibície funkcie sprostredkovanej ICE u pacienta, vyznačujúci sa tým, že zahŕňa krok podávania zlúčeniny podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 19 alebo farmaceutickej kompozície podľa nároku 21 tomuto pacientovi.
  25. 25. Spôsob zníženia produkcie IGIF a IFN-γ u pacienta, vyznačujúci sa tým, že zahŕňa krok podávania zlúčeniny podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 19 alebo farmaceutickej kompozície podľa nároku 21 tomuto pacientovi.
  26. 26. Použitie zlúčeniny podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 19 alebo farmaceutickej kompozície podľa nároku 21 pri výrobe liečiva na liečenie alebo prevenciu ochorenia vybraného zo skupiny, ktorú tvorí ochorenie sprostredkované IL-1, ochorenie sprostredkované apoptózou, zápalové ochorenie, autoimúnne ochorenie, deštrukčné ochorenie kosti, proliferatívne ochorenie, infekčné ochorenie, degeneratívne ochorenie, nekrotické ochorenie, ochorenie spôsobené nadmerným príjmom alkoholu v potrave, ochorenie sprostredkované vírusom, zápalová peritonitída, osteoartritída, pankreatitída, astma, syndróm dýchacieho stresu dospelých, glomerulonefritída, reumatoidná artritída, systémový lupus erythematosus, skleroderma, chronická tyroiditída, Graveova choroba, autoimúnna gastritída, diabetes melitus závislý na inzulíne (typ 1), autoimúnna hemolytická anémia, autoimúnna neutropénia, trombocytopénia, chronická aktívna hepatitída, myasténia gravis, zápalové črevné ochorenie, Crohnova choroba, psoriáza, atopická dermatitída, ochorenie štep versus hostiteľ, osteoporóza, leukémia a s ňou spojené ochorenia, myelodysplastický syndróm, kostné ochorenie spojené s mnohopočetným myelómom, akútna myelogénna leukémia, chronická myelogénna leukémia, metastatický melanóm, Kaposiho sarkóm, mnohopočetný myelóm, sepsa, septický šok, Shigellosa, Alzheimerova choroba, Parkinsonova choroba, mozgová ischémia, ischémia myokardu, spinálna muskulárna atrofia, mnohopočetná skleróza, encefalitída súvisia268 ca s AIDS, encefalitída spojená s HIV, starnutie, vypadávanie vlasov, neurologické poškodenie spôsobené mŕtvicou, ulcerativna kolitida, traumatické poškodenie mozgu, odmietnutie transplantovaného orgánu, hepatitida-B, hepatitida-C, hepatitida-G, žltá horúčka, horúčka dengue, alebo japonská encefalitída, u pacienta .
  27. 27. Použitie podía nároku 26, kde ochorením je reumatoidná artritída, zápalové črevné ochorenie, Crohnova choroba, ulceratívna kolitida, zápalová peritonitída, septický šok, pankreatitída, traumatické poškodenie mozgu, odmietnutie transplantovaného orgánu, osteoartritída, astma, psoriáza, Alzheimerova choroba, atopická dermatitída, leukémia a s ňou spojené ochorenia, myelodysplastický syndróm alebo mnohopočetný myelóm.
  28. 28. Použitie zlúčeniny podía ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 19 alebo farmaceutickej kompozície podľa nároku 21 pri výrobe liečiva na inhibíciu funkcie sprostredkovanej ICE u pacienta.
  29. 29. Použitie zlúčeniny podía ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 19 alebo farmaceutickej kompozície podľa nároku 21 pri výrobe liečiva na zníženie produkcie IGIF alebo IFN-γ u pacienta.
SK1382-2000A 1998-03-19 1999-03-19 Inhibítory kaspázy, farmaceutická kompozícia, ktorá ich obsahuje, a ich použitie SK286736B6 (sk)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US7877098P 1998-03-19 1998-03-19
PCT/US1999/005919 WO1999047545A2 (en) 1998-03-19 1999-03-19 Inhibitors of caspases

Publications (2)

Publication Number Publication Date
SK13822000A3 true SK13822000A3 (sk) 2001-04-09
SK286736B6 SK286736B6 (sk) 2009-04-06

Family

ID=22146109

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SK1382-2000A SK286736B6 (sk) 1998-03-19 1999-03-19 Inhibítory kaspázy, farmaceutická kompozícia, ktorá ich obsahuje, a ich použitie

Country Status (34)

Country Link
US (3) US6531474B1 (sk)
EP (6) EP2011800A3 (sk)
JP (3) JP4594520B2 (sk)
KR (2) KR100928878B1 (sk)
CN (1) CN1321129C (sk)
AP (1) AP2000001919A0 (sk)
AR (1) AR019011A1 (sk)
AT (1) ATE410439T1 (sk)
AU (1) AU769033B2 (sk)
BG (1) BG104863A (sk)
BR (2) BR9909660A (sk)
CA (1) CA2324226C (sk)
CZ (1) CZ302281B6 (sk)
DE (1) DE69939689D1 (sk)
DK (1) DK1064298T3 (sk)
ES (1) ES2315010T3 (sk)
GE (1) GEP20043163B (sk)
HK (1) HK1035733A1 (sk)
HU (1) HU227920B1 (sk)
ID (1) ID27002A (sk)
IL (3) IL138469A0 (sk)
IS (1) IS5622A (sk)
NO (1) NO331829B1 (sk)
NZ (2) NZ506963A (sk)
PL (1) PL204619B1 (sk)
PT (1) PT1064298E (sk)
RU (1) RU2274642C2 (sk)
SI (1) SI1064298T1 (sk)
SK (1) SK286736B6 (sk)
TR (1) TR200103406T2 (sk)
TW (1) TWI243828B (sk)
UA (2) UA74133C2 (sk)
WO (1) WO1999047545A2 (sk)
ZA (1) ZA200004652B (sk)

Families Citing this family (76)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ES2315010T3 (es) * 1998-03-19 2009-03-16 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibidores de caspasas.
US7157430B2 (en) 1998-10-22 2007-01-02 Idun Pharmaceuticals, Inc. (Substituted)acyl dipeptidyl inhibitors of the ICE/CED-3 family of cysteine proteases
US6242422B1 (en) 1998-10-22 2001-06-05 Idun Pharmacueticals, Inc. (Substituted)Acyl dipeptidyl inhibitors of the ice/ced-3 family of cysteine proteases
US7326542B2 (en) 1998-12-02 2008-02-05 Princeton University Compositions and methods for regulating bacterial pathogenesis
US6720415B2 (en) 1998-12-02 2004-04-13 Princeton University Compositions and methods for regulating bacterial pathogenesis
CA2386411A1 (en) * 1999-10-13 2001-04-19 Merck Frosst Canada & Co. Nicotinyl aspartyl ketones as inhibitors of caspase-3
US6395767B2 (en) 2000-03-10 2002-05-28 Bristol-Myers Squibb Company Cyclopropyl-fused pyrrolidine-based inhibitors of dipeptidyl peptidase IV and method
US6525024B1 (en) 2000-04-17 2003-02-25 Idun Pharmaceuticals, Inc. Inhibitors of the ICE/ced-3 family of cysteine proteases
US6559176B1 (en) 2000-05-10 2003-05-06 Princeton University Compounds and methods for regulating bacterial growth and pathogenesis
PE20011350A1 (es) * 2000-05-19 2002-01-15 Vertex Pharma PROFARMACO DE UN INHIBIDOR DE ENZIMA CONVERTIDORA DE INTERLEUCINA-1ß (ICE)
EP1317454B1 (en) * 2000-09-13 2011-05-25 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Caspase inhibitors and uses thereof
US20030039661A1 (en) * 2001-03-02 2003-02-27 Teresa Aja Methods, compositions and kits for preserving antigenicity
CN103232539B (zh) 2001-06-26 2015-06-03 安姆根弗里蒙特公司 抗opgl抗体
AU2003211052A1 (en) * 2002-02-11 2003-09-04 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Phospholipids as caspase inhibitor prodrugs
WO2003075853A2 (en) 2002-03-08 2003-09-18 Bristol-Myers Squibb Company Cyclic derivatives as modulators of chemokine receptor activity
FR2839309B1 (fr) 2002-05-03 2004-07-23 Aventis Pharma Sa Nouveaux derives de l'acide hexahydro-pyridazine-3- carboxylique, chimiotheques les contenant, leur utilisation comme medicaments, compositions pharmaceutiques les contenant et leurs procedes de preparation
US7001899B2 (en) 2002-06-10 2006-02-21 The Procter & Gamble Company Interleukin converting enzyme inhibitors
AU2003263393A1 (en) * 2002-09-04 2004-03-29 Glenmark Pharmaceuticals Limited New heterocyclic amide compounds useful for the treatment of inflammatory and allergic disorders: process for their preparation and pharmaceutical compositions containing them
EP2277543B1 (en) 2002-09-06 2015-12-16 Amgen, Inc Therapeutic anti-IL-1R1 monoclonal antibody
AU2003269317B2 (en) 2002-10-23 2009-10-29 Glenmark Pharmaceuticals Ltd. Novel tricyclic compounds useful for the treatment of inflammatory and allergic disorders: process for their preparation and pharmaceutical compositions containing them
FR2846969A1 (fr) * 2002-11-08 2004-05-14 Salles Jean Pierre Nouveaux vecteurs moleculaires amphiphiles fluorocarbones a usage biomedical et medical
EP1565150A1 (fr) * 2002-11-20 2005-08-24 L'oreal Utilisation d'un compose pyrazolcarboxamide pour stimuler la pousse des fibres keratiniques et/ou freiner leur chute
FR2847160A1 (fr) * 2002-11-20 2004-05-21 Oreal Composition capillaire contenant un compose pyrasol-carboxamide, son utilisation pour stimuler la pousse des cheveux et/ou freiner leur chute
NZ542882A (en) 2003-04-11 2007-10-26 Glenmark Pharmaceuticals Sa Novel heterocyclic compounds useful for the treatment of inflammatory and allergic disorders: process for their preparation and pharmaceutical compositions containing them
AU2003902704A0 (en) * 2003-05-29 2003-06-19 Crc For Waste Management And Pollution Control Limited Of Unsw Process for producing a nanoscale zero-valent metal
CA2547670A1 (en) * 2003-12-01 2005-06-16 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Treating infectious diseases using ice inhibitors
DE60326150D1 (de) * 2003-12-12 2009-03-26 Straetmans Chemische Produkte Anisinsäure und Glyceride enthaltende Zusammensetzungen
CA2820541A1 (en) * 2004-02-27 2005-09-15 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Caspase inhibitors and uses thereof
AU2011226946B2 (en) * 2004-02-27 2012-05-03 Vertex Pharmaceuticals Incoporated Caspase Inhibitors and Uses Thereof
WO2005085236A2 (en) 2004-02-27 2005-09-15 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Caspase inhibitors and uses thereof
CA2843066C (en) 2004-03-12 2016-06-07 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Processes and intermediates for the preparation of aspartic acetal caspase inhibitors
AU2012200214B2 (en) * 2004-05-14 2013-10-24 Emisphere Technologies, Inc. Compounds and compositions for delivering active agents
MXPA06013252A (es) * 2004-05-14 2007-02-28 Emisphere Tech Inc Compuestos y composiciones para suministrar agentes activos.
MXPA06013256A (es) 2004-05-15 2007-02-08 Vertex Pharma Tratamiento de crisis convulsivas utilizando inhibidores ice.
GB0411056D0 (en) 2004-05-18 2004-06-23 Novartis Ag Organic compounds
EP1778221A2 (en) 2004-05-27 2007-05-02 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Ice inhibitors for the treatment of autoinflammatory diseases
EA200700225A1 (ru) * 2004-07-12 2008-02-28 Айдан Фармасьютикалз, Инк. Аналоги тетрапептида
WO2006030437A2 (en) * 2004-09-17 2006-03-23 Biomas Ltd. Novel tellurium compounds and their use as immunomodulators
WO2006040652A2 (en) 2004-10-13 2006-04-20 Glenmark Pharmaceuticals S.A. Process for the preparation of n-(3,5-dichloropyrid-4-yl)-4difluoromethoxy-8-methanesulfonamido-dibenzo[b,d]furan-1-carboxamide
WO2006064355A2 (en) 2004-12-17 2006-06-22 Glenmark Pharmaceuticals S.A. Novel heterocyclic compounds useful for the treatment of inflammatory and allergic disorders
SI1831227T1 (sl) 2004-12-17 2013-09-30 Glenmark Pharmaceuticals S.A. Nove heterociklične spojine uporabne za zdravljenje vnetnih in alergijskih motenj
JP4673068B2 (ja) * 2005-01-19 2011-04-20 独立行政法人科学技術振興機構 Ｔｈ１型アレルギー疾患治療用組成物
DE102005017116A1 (de) * 2005-04-13 2006-10-26 Novartis Ag Hemmstoffe für Inhibitoren von Apoptose Proteinen (IAP)
WO2007015931A2 (en) 2005-07-28 2007-02-08 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Caspase inhibitor prodrugs
AR056806A1 (es) 2005-11-14 2007-10-24 Amgen Inc Moleculas quimericas de anticuerpo rankl- pth/ pthrp
WO2008008264A2 (en) * 2006-07-07 2008-01-17 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Selective caspase inhibitors
WO2008060621A2 (en) * 2006-11-17 2008-05-22 Abbott Laboratories Aminopyrrolidines as chemokine receptor antagonists
US8084862B2 (en) 2007-09-20 2011-12-27 International Business Machines Corporation Interconnect structures with patternable low-k dielectrics and method of fabricating same
US7709370B2 (en) * 2007-09-20 2010-05-04 International Business Machines Corporation Spin-on antireflective coating for integration of patternable dielectric materials and interconnect structures
US8618663B2 (en) 2007-09-20 2013-12-31 International Business Machines Corporation Patternable dielectric film structure with improved lithography and method of fabricating same
WO2009124265A1 (en) * 2008-04-03 2009-10-08 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Probes for in vivo targeting of active cysteine proteases
US20110144765A1 (en) * 2008-05-27 2011-06-16 Imperial Innovations Limited Process For Producing Porous Scaffolds From Sinterable Glass
US20110152343A1 (en) * 2009-12-22 2011-06-23 Functional Genetics, Inc. Protease inhibitors and broad-spectrum antiviral
GB201001070D0 (en) 2010-01-22 2010-03-10 St George's Hospital Medical School Theraputic compounds and their use
US9365612B2 (en) 2010-01-29 2016-06-14 United States Of America As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Caspase inhibitors
GB201011411D0 (en) 2010-07-06 2010-08-18 St Georges Hosp Medical School Therapeutic compounds and their use
EP2635906A4 (en) 2010-11-05 2014-04-02 Univ Brandeis ICE INHIBITING COMPOUNDS AND USES THEREOF
US9956260B1 (en) 2011-07-22 2018-05-01 The J. David Gladstone Institutes Treatment of HIV-1 infection and AIDS
ES2699226T3 (es) 2011-10-14 2019-02-08 Bristol Myers Squibb Co Compuestos de tetrahidroisoquinolina sustituidos como inhibidores del factor XIa
ES2579832T3 (es) 2011-10-14 2016-08-17 Bristol-Myers Squibb Company Compuestos de tetrahidroisoquinolina sustituida como inhibidores del factor XIa
HUE034857T2 (en) 2011-10-14 2018-03-28 Bristol Myers Squibb Co Substituted tetrahydroisoquinoline compounds are inhibitors of factor XIA
NZ704666A (en) * 2012-08-23 2018-05-25 Alios Biopharma Inc Compounds for the treatment of paramoxyvirus viral infections
TR201807316T4 (tr) 2012-10-12 2018-06-21 Squibb Bristol Myers Co Bir faktör XIa inhibitörünün kristalli formları.
EP2906552B1 (en) 2012-10-12 2017-11-22 Bristol-Myers Squibb Company Guanidine substituted tetrahydroisoquinoline compounds as factor xia inhibitors
EP2906541B1 (en) 2012-10-12 2017-11-22 Bristol-Myers Squibb Company Guanidine and amine substituted tetrahydroisoquinoline compounds as factor xia inhibitors
ES2712699T3 (es) 2013-03-25 2019-05-14 Bristol Myers Squibb Co Tetrahidroisoquinolinas que contienen azoles sustituidos como inhibidores del factor XIa
MY190429A (en) 2014-01-31 2022-04-21 Bristol Myers Squibb Co Macrocycles with hetrocyclic p2' groups as factor xia inhibitors
NO2760821T3 (sk) 2014-01-31 2018-03-10
US9737556B2 (en) 2014-06-13 2017-08-22 Trustees Of Tufts College FAP-activated therapeutic agents, and uses related thereto
JP6526796B2 (ja) 2014-09-04 2019-06-05 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニーＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏｍｐａｎｙ Ｆｘｉａ阻害剤であるジアミドマクロ環
US9453018B2 (en) 2014-10-01 2016-09-27 Bristol-Myers Squibb Company Pyrimidinones as factor XIa inhibitors
MX2018003301A (es) 2015-09-17 2019-02-07 Inhibidores de pcna.
EP3459941A4 (en) 2016-07-22 2020-02-19 Kissei Pharmaceutical Co., Ltd. pyrrolidine
DK3558335T3 (da) 2016-12-23 2023-07-24 Casp Aid Inc Caspase-1 inhibition and uses thereof for prevention and treatment of neurological conditions
US20210236599A1 (en) 2018-08-13 2021-08-05 Iltoo Pharma Combination of interleukin-2 with an interleukin 1 inhibitor, conjugates and therapeutic uses thereof
WO2022115612A1 (en) * 2020-11-25 2022-06-02 Lysosomal and Rare Disorders Research and Treatment Center, Inc. Inhibition of caspase pathway as a treatment for lysosomal storage disorders

Family Cites Families (80)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2973111A (en) * 1958-02-11 1961-02-28 Dempster Brothers Inc Compaction bodies
US5874424A (en) 1995-12-20 1999-02-23 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of interleukin-1β converting enzyme
US6204261B1 (en) * 1995-12-20 2001-03-20 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of interleukin-1β Converting enzyme inhibitors
US4465679A (en) 1983-01-31 1984-08-14 Usv Pharmaceutical Corporation 1,2-Diaza-3-one compounds, their use in treating hypertension and pharmaceutical compositions thereof
IL72523A (en) 1983-08-12 1988-06-30 Takeda Chemical Industries Ltd 3-amino-4-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-1,5-benzoxazepine derivatives,their production and pharmaceutical compositions containing them
US5055451A (en) 1986-12-22 1991-10-08 Syntex Inc. Aryloxy and arylacyloxy methyl ketones as thiol protease inhibitors
US5158936A (en) 1986-12-22 1992-10-27 Syntex (U.S.A.) Inc. Aryloxy and arylacyloxy methyl ketones as thiol protease inhibitors
US5008245A (en) 1988-10-27 1991-04-16 University Of Kentucky Research Foundation Novel peptidyl carbamate inhibitors of the enzyme elastase
ZA905737B (en) 1989-07-26 1991-05-29 Merrell Dow Pharma Novel peptidase inhibitors
NZ235155A (en) 1989-09-11 1993-04-28 Merrell Dow Pharma Peptidase substrates in which the carboxy terminal group has been replaced by a tricarbonyl radical
WO1991015577A1 (en) 1990-04-04 1991-10-17 Black, Roy, A. INTERLEUKIN 1'beta' PROTEASE
US5416013A (en) 1990-04-04 1995-05-16 Sterling Winthrop Inc. Interleukin 1β protease and interleukin 1β protease inhibitors
ES2124710T3 (es) 1991-03-15 1999-02-16 Hoechst Ag Procedimiento para el acoplamiento pinacolinico reductor diastereoselectivo de alfa-aminoaldehidos homoquirales.
CA2071674C (en) * 1991-06-21 2003-08-19 Kevin T. Chapman Peptidyl derivatives as inhibitors of interleukin-1.beta. converting enzyme
JP3190431B2 (ja) 1991-07-01 2001-07-23 三菱化学株式会社 ケトン誘導体
US5278061A (en) 1991-08-16 1994-01-11 Merck & Co., Inc. Affinity chromatography matrix useful in purifying interleukin-1β converting enzyme
DE69229252T2 (de) 1991-08-16 1999-12-16 Merck & Co Inc DNS, welche das Interleukin-1B-Vorläufer-Converting-Enzym kodiert
US6348570B1 (en) 1991-08-16 2002-02-19 Merck & Co., Inc. Chromophore containing compounds and their use in determining interleukin-1β convertase activity
EP0533226A3 (en) 1991-08-16 1993-08-18 Merck & Co. Inc. Novel chromophore containing compounds
JP2759895B2 (ja) 1991-08-30 1998-05-28 サノフィ インターロイキン１βプロテアーゼをコードするＤＮＡ配列単離体
ATE140449T1 (de) 1991-10-07 1996-08-15 Hoechst Ag Verfahren zur diastereoselektiven reduktiven pinakol-kupplung von homochiralen alpha- aminoaldehyden
GB9123326D0 (en) 1991-11-04 1991-12-18 Sandoz Ltd Improvements in or relating to organic compounds
AU1339092A (en) 1991-12-13 1993-07-19 Corvas International, Inc. Reagents for automated synthesis of peptide analogs
EP0547699A1 (en) 1991-12-19 1993-06-23 Merck & Co. Inc. Peptidyl derivatives as inhibitors of interleukin-1B converting enzyme
WO1993014777A1 (en) 1992-01-31 1993-08-05 Merck & Co., Inc. PEPTIDYL DERIVATIVES AS INHIBITORS OF INTERLEUKIN-1β CONVERTING ENZYME
CA2129976C (en) 1992-02-21 2002-09-17 Kevin T. Chapman Peptidyl derivatives as inhibitors of interleukin-1.beta. converting enzyme
JPH08500242A (ja) 1992-06-24 1996-01-16 メルク エンド カンパニー インコーポレーテッド インターロイキン１β前駆体の転換酵素をコードするＤＮＡ
CA2139854A1 (en) 1992-07-31 1994-02-17 Ralph P. Robinson Peptidyl 4-amino-2, 2-difluoro-3-oxo-1, 6-hexanedioic acid derivatives as antiinflammatory agents
CA2109646C (en) 1992-11-24 2000-03-07 Gaston O. Daumy Para-nitroanilide peptides
EP0618223A3 (en) 1993-03-08 1996-06-12 Sandoz Ltd Peptides, the release of Interleukin 1-Bêta, useful as anti-inflammatory agents.
TW494094B (en) 1993-04-29 2002-07-11 Vertex Pharma Peptide analogs as irreversible interleukin-1β protease inhibitors and pharmaceutical compositions comprising the same
US5462939A (en) 1993-05-07 1995-10-31 Sterling Winthrop Inc. Peptidic ketones as interleukin-1β-converting enzyme inhibitors
US5411985A (en) 1993-05-17 1995-05-02 Merck & Co., Inc. Gamma-pyrone-3-acetic acid as an inhibitor or interleukin-1 β inventory enzyme
JPH0789951A (ja) 1993-06-03 1995-04-04 Sterling Winthrop Inc インターロイキン−１β転換酵素阻害剤
JPH0725887A (ja) 1993-06-04 1995-01-27 Sterling Winthrop Inc インターロイキン−１β転換酵素阻害剤
CA2165777A1 (en) 1993-06-24 1995-01-05 Junying Yuan Programmed cell death genes and proteins
US5866545A (en) 1993-08-13 1999-02-02 Merck & Co., Inc. Substituted ketone derivatives as inhibitors of interleukin-1β converting enzyme
ATE163639T1 (de) * 1993-11-11 1998-03-15 Basf Ag P-hydroxyanilinderivate, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung zur bekämpfung von schadpilzen oder schädlingen
US5714484A (en) 1993-12-08 1998-02-03 Prototek, Inc. α-(1,3-dicarbonylenol ether) methyl ketones as cysteine protease inhibitors
US5486623A (en) 1993-12-08 1996-01-23 Prototek, Inc. Cysteine protease inhibitors containing heterocyclic leaving groups
MX9604420A (es) 1994-03-31 1997-12-31 Sanofi Winthrop Inc Derivados de pirimidinilo como inhibidores de la interleucina.
EP0758891A4 (en) 1994-04-29 1997-12-03 Sanofi Winthrop Inc HALOMETHYL AMIDES USED AS IL-1-g (b) PROTEASE INHIBITORS.
US5492824A (en) 1994-05-12 1996-02-20 Basf Ag Ice and ice-like compositions and methods of making same
US5552400A (en) 1994-06-08 1996-09-03 Sterling Winthrop Inc. Fused-bicyclic lactams as interleukin-1β converting enzyme inhibitors
US5756466A (en) 1994-06-17 1998-05-26 Vertex Pharmaceuticals, Inc. Inhibitors of interleukin-1β converting enzyme
US5847135A (en) 1994-06-17 1998-12-08 Vertex Pharmaceuticals, Incorporated Inhibitors of interleukin-1β converting enzyme
US5716929A (en) 1994-06-17 1998-02-10 Vertex Pharmaceuticals, Inc. Inhibitors of interleukin-1β converting enzyme
US5856116A (en) 1994-06-17 1999-01-05 Vertex Pharmaceuticals, Incorporated Crystal structure and mutants of interleukin-1 beta converting enzyme
US5565430A (en) 1994-08-02 1996-10-15 Sterling Winthrop Inc. Azaaspartic acid analogs as interleukin-1β converting enzyme inhibitors
GB2292149A (en) * 1994-08-09 1996-02-14 Ferring Res Ltd Peptide inhibitors of pro-interleukin-1beta converting enzyme
US5498616A (en) 1994-11-04 1996-03-12 Cephalon, Inc. Cysteine protease and serine protease inhibitors
TW394764B (en) 1995-02-14 2000-06-21 Mitsubishi Chemcal Corp Oxygen-containing heterocyclic derivatives
EP0820464A2 (en) 1995-03-31 1998-01-28 Takeda Chemical Industries, Ltd. Cysteine protease inhibitor
JPH09165360A (ja) * 1995-03-31 1997-06-24 Takeda Chem Ind Ltd システインプロテアーゼ阻害剤
US5798442A (en) 1995-04-21 1998-08-25 Merck Frosst Canada, Inc. Peptidyl derivatives as inhibitors of pro-apoptotic cysteine proteinases
JPH11514345A (ja) 1995-08-31 1999-12-07 スミスクライン・ビーチャム・コーポレイション インターロイキン変換酵素およびアポプトーシス
JPH11511463A (ja) 1995-08-31 1999-10-05 スミスクライン・ビーチャム・コーポレイション インターロイキン変換酵素およびアポプトーシス
US5744451A (en) 1995-09-12 1998-04-28 Warner-Lambert Company N-substituted glutamic acid derivatives with interleukin-1 β converting enzyme inhibitory activity
EP0761680A3 (en) 1995-09-12 1999-05-06 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. Tetrazole compounds having Interleukin-1beta converting enzyme inhibitory activity
US6136834A (en) * 1995-12-27 2000-10-24 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. Tetrazole compounds and pharmaceutical agents containing such derivative
WO1998001133A1 (fr) 1996-07-08 1998-01-15 Yamanouchi Pharmaceutical Co., Ltd. Inhibiteurs de la resorption osseuse
WO1998004539A1 (fr) 1996-07-29 1998-02-05 Mitsubishi Chemical Corporation Derives heterocycliques oxygenes
US5869519A (en) * 1996-12-16 1999-02-09 Idun Pharmaceuticals, Inc. C-terminal modified (n-substituted)-2-indolyl dipeptides as inhibitors of the ICE/ced-3 family of cysteine proteases
EP0874850B1 (en) 1996-09-12 2002-04-10 Idun Pharmaceuticals, Inc. Novel tricyclic compounds for the inhibition of the ice/ced-3 protease family of enzymes
ATE229973T1 (de) * 1996-09-12 2003-01-15 Idun Pharmaceuticals Inc C-terminale modifizierte (n-substituierte)-2- indolyl dipeptide als inhibitoren von der ice/ced-3 cysteinprotease familie
IL125190A (en) 1996-09-12 2003-01-12 Idun Pharmaceuticals Inc Tricyclic compounds for the inhibition of the ice/ced-3 protease family of enzymes and pharmaceutical compositions containing the same
US5968927A (en) * 1996-09-20 1999-10-19 Idun Pharmaceuticals, Inc. Tricyclic compounds for the inhibition of the ICE/ced-3 protease family of enzymes
US6184244B1 (en) * 1996-12-16 2001-02-06 Idun Pharmaceuticals, Inc. C-terminal modified (N-substituted)-2-indolyl dipeptides as inhibitors of the ICE/ced-3 family of cysteine proteases
US5877197A (en) * 1996-12-16 1999-03-02 Karanewsky; Donald S. C-terminal modified (N-substituted)-2-indolyl dipeptides as inhibitors of the ICE/ced-3 family of cysteine proteases
US6054487A (en) * 1997-03-18 2000-04-25 Basf Aktiengesellschaft Methods and compositions for modulating responsiveness to corticosteroids
HUP9700816A3 (en) 1997-04-28 1999-06-28 Gyogyszerkutato Intezet 3(r)-3-amino-4-carboxy-butiraldehyde derivatives inhibiting release of interleukin-1-beta
US6184210B1 (en) * 1997-10-10 2001-02-06 Cytovia, Inc. Dipeptide apoptosis inhibitors and the use thereof
CN1198527C (zh) * 1997-10-31 2005-04-27 金伯利-克拉克环球有限公司 起绉非织造布材料和衬垫
ES2315010T3 (es) * 1998-03-19 2009-03-16 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibidores de caspasas.
US6197750B1 (en) * 1998-07-02 2001-03-06 Idun Pharmaceuticals, Inc. C-terminal modified oxamyl dipeptides as inhibitors of the ICE/ced-3 family of cysteine proteases
US6242422B1 (en) * 1998-10-22 2001-06-05 Idun Pharmacueticals, Inc. (Substituted)Acyl dipeptidyl inhibitors of the ice/ced-3 family of cysteine proteases
PE20011350A1 (es) 2000-05-19 2002-01-15 Vertex Pharma PROFARMACO DE UN INHIBIDOR DE ENZIMA CONVERTIDORA DE INTERLEUCINA-1ß (ICE)
US20050209162A1 (en) * 2003-11-10 2005-09-22 Amit Roy Methods for monitoring IL-18
WO2005085236A2 (en) * 2004-02-27 2005-09-15 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Caspase inhibitors and uses thereof
EP1778221A2 (en) * 2004-05-27 2007-05-02 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Ice inhibitors for the treatment of autoinflammatory diseases

Also Published As

Publication number Publication date
TR200103406T2 (tr) 2002-06-21
DK1064298T3 (da) 2009-01-19
US6531474B1 (en) 2003-03-11
TWI243828B (en) 2005-11-21
KR20010042038A (ko) 2001-05-25
AP2000001919A0 (en) 2000-09-30
HK1035733A1 (en) 2001-12-07
IL206621A0 (en) 2010-12-30
JP2006206600A (ja) 2006-08-10
EP2261234A2 (en) 2010-12-15
DE69939689D1 (de) 2008-11-20
UA74133C2 (uk) 2005-11-15
SI1064298T1 (sl) 2009-02-28
CA2324226A1 (en) 1999-09-23
EP2261235A3 (en) 2011-04-20
CA2324226C (en) 2012-06-05
WO1999047545A3 (en) 1999-11-25
CZ20003409A3 (cs) 2001-01-17
GEP20043163B (en) 2004-01-26
AR019011A1 (es) 2001-12-26
KR100898094B1 (ko) 2009-05-18
US7358273B2 (en) 2008-04-15
IL138469A0 (en) 2001-10-31
AU3098699A (en) 1999-10-11
BRPI9909660B1 (pt) 2018-09-18
EP2261233A3 (en) 2011-04-20
PT1064298E (pt) 2009-01-02
JP4594520B2 (ja) 2010-12-08
HU227920B1 (en) 2012-06-28
ID27002A (id) 2001-02-22
ZA200004652B (en) 2002-04-24
KR20080020703A (ko) 2008-03-05
ATE410439T1 (de) 2008-10-15
BG104863A (en) 2001-04-30
CZ302281B6 (cs) 2011-01-26
JP2010241822A (ja) 2010-10-28
US8691848B2 (en) 2014-04-08
CN1323314A (zh) 2001-11-21
US20030232986A1 (en) 2003-12-18
EP2261235A2 (en) 2010-12-15
EP2261232A3 (en) 2011-04-20
ES2315010T3 (es) 2009-03-16
EP2261234A3 (en) 2011-04-20
NO331829B1 (no) 2012-04-16
NZ506963A (en) 2003-10-31
US20090048226A1 (en) 2009-02-19
KR100928878B1 (ko) 2009-11-30
EP2261232A2 (en) 2010-12-15
NZ528282A (en) 2005-05-27
PL204619B1 (pl) 2010-01-29
WO1999047545A2 (en) 1999-09-23
PL343611A1 (en) 2001-08-27
CN1321129C (zh) 2007-06-13
NO20004546D0 (no) 2000-09-12
EP2011800A3 (en) 2009-06-24
EP2261233A2 (en) 2010-12-15
EP1064298B1 (en) 2008-10-08
UA96113C2 (en) 2011-10-10
EP2011800A2 (en) 2009-01-07
SK286736B6 (sk) 2009-04-06
HUP0103575A3 (en) 2002-10-28
HUP0103575A2 (hu) 2002-02-28
IS5622A (is) 2000-09-08
AU769033B2 (en) 2004-01-15
EP1064298A2 (en) 2001-01-03
BR9909660A (pt) 2000-11-21
BRPI9909660B8 (pt) 2021-05-25
IL138469A (en) 2010-11-30
NO20004546L (no) 2000-11-09
JP2002506878A (ja) 2002-03-05
RU2274642C2 (ru) 2006-04-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2274642C2 (ru) Ингибиторы каспаз
EP0942925B1 (en) Inhibitors of interleukin-1 beta converting enzyme
US6426413B1 (en) Inhibitors of caspases
BRPI9917881B1 (pt) compostos inibidores de caspases, composição farmacêutica e uso de ditos compostos
MXPA00009162A (en) Inhibitors of caspases
AU2007200251A1 (en) Inhibitors of Caspases
AU2003255217A1 (en) Inhibitors of Caspases
EP1466921A1 (en) Inhibitors of interleukin-1 beta converting enzyme

Legal Events

Date Code Title Description
MK4A Patent expired

Expiry date: 20190319