CZ300171B6 - N-Acylaminoslouceniny jako inhibitory enzymu konvertujícího interleukin-1beta, zpusob jejich prípravy a farmaceutické prostredky, které je obsahují - Google Patents

N-Acylaminoslouceniny jako inhibitory enzymu konvertujícího interleukin-1beta, zpusob jejich prípravy a farmaceutické prostredky, které je obsahují Download PDF

Info

Publication number
CZ300171B6
CZ300171B6 CZ20030411A CZ2003411A CZ300171B6 CZ 300171 B6 CZ300171 B6 CZ 300171B6 CZ 20030411 A CZ20030411 A CZ 20030411A CZ 2003411 A CZ2003411 A CZ 2003411A CZ 300171 B6 CZ300171 B6 CZ 300171B6
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
group
compound
ice
mixture
disease
Prior art date
Application number
CZ20030411A
Other languages
English (en)
Inventor
J. Batchelor@Mark
Bebbington@David
W. Bemis@Guy
Herman Fridman@Wolf
J. Gillespie@Roger
M. C. Golec@Julian
Gu@Yong
J. Lauffer@David
J. Livingston@David
S. Matharu@Saroop
D. Mullican@Michael
A. Murcko@Mark
Murdoch@Robert
L. Nyce@Philip
L. C. Robidoux@Andrea
Su@Michael
Woods Wannamaker@M.
P. Wilson@Keith
E. Zelle@Robert
Original Assignee
Vertex Pharmaceuticals Incorporated
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=27534345&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=CZ300171(B6) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Priority claimed from US08/575,641 external-priority patent/US6008217A/en
Priority claimed from US08/598,332 external-priority patent/US5874424A/en
Priority claimed from US08/712,878 external-priority patent/US5985863A/en
Application filed by Vertex Pharmaceuticals Incorporated filed Critical Vertex Pharmaceuticals Incorporated
Publication of CZ300171B6 publication Critical patent/CZ300171B6/cs

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D243/00—Heterocyclic compounds containing seven-membered rings having two nitrogen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D243/06—Heterocyclic compounds containing seven-membered rings having two nitrogen atoms as the only ring hetero atoms having the nitrogen atoms in positions 1 and 4
    • C07D243/10—Heterocyclic compounds containing seven-membered rings having two nitrogen atoms as the only ring hetero atoms having the nitrogen atoms in positions 1 and 4 condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D243/12—1,5-Benzodiazepines; Hydrogenated 1,5-benzodiazepines
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/02—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/55—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/18—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for pancreatic disorders, e.g. pancreatic enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/04—Antipruritics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/14—Drugs for dermatological disorders for baldness or alopecia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A61P19/10—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease for osteoporosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A61P21/04—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system for myasthenia gravis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A61P25/16—Anti-Parkinson drugs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/14—Drugs for disorders of the endocrine system of the thyroid hormones, e.g. T3, T4
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/06—Antianaemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/06—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a carbon chain containing only aliphatic carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings
    • C07D403/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/02—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings
    • C07D405/12—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/14—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D409/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D409/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings
    • C07D409/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D413/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D413/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings
    • C07D413/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D417/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00
    • C07D417/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing two hetero rings
    • C07D417/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
    • C07D471/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D471/04—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D487/04—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D498/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D498/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D498/04—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/02—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link
    • C07K5/0202—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link containing the structure -NH-X-X-C(=0)-, X being an optionally substituted carbon atom or a heteroatom, e.g. beta-amino acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06139—Dipeptides with the first amino acid being heterocyclic
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C07K5/0821—Tripeptides with the first amino acid being heterocyclic, e.g. His, Pro, Trp
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Virology (AREA)

Abstract

N-Acylaminoslouceniny obecného vzorce V, které jsou inhibitory enzymu konvertujícího interleukin-1.beta., zpusob jejich prípravy, pri nemž se a) smísí karboxylová kyselina s N-alloc-chráneným aminem v prítomnosti inertního rozpouštedla, trifenylfosfinu, nukleofilního lapace a tetrakistrifenylfosfinpalladia (0) pri teplote místnosti pod inertní atmosférou; a b) ke smesi ze stupne a) se pridá 1-hydroxybenzotriazol a 1-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimid-hydrochlorid; a poprípade se v dalším stupni c) smes ze stupne b) hydrolyzuje v prítomnosti roztoku obsahujícího kyselinu a vodu, pricemž se smes z kroku b) poprípade zahustí, a farmaceutické prostredky s jejich obsahem a jejich použitíjako cinidel proti onemocnením zprostredkovaným IL-1, apoptózou, IGIF a IFN-.gama., zánetlivých onemocnení, autoimunních onemocnení, rozkladných onemocnení kosti, proliferativních poruch, nakažlivýchonemocnení, degenerativních onemocnení a nekrotických onemocnení.

Description

N-Acylaminosloučcniny jako inhibitory' enzymu konvertujícího interleukin-Ιβ, způsob jejich přípravy a farmaceutické prostředky, které je obsahují
Oblast techniky
Předkládaný vynález se týká nové třídy sloučenin, které jsou inhibitory enzymu konvertujícího interleukin-1 β (ICE, interleukin-1 β convertíng enzyme). Tento vynález se také týká farmaceutických prostředků obsahujících tyto sloučeniny. Sloučeniny a farmaceutické prostředky podle předkládaného vynálezu jsou zejména velmi vhodné pro inhibiei aktivity ICE a v důsledku toho je lze s výhodou použít jako činidel proti onemocněním zprostředkovaným interleukinem- 1 („IL-l)· apoplózou, faktorem vyvolávajícím interferon gama („IGIE) a interfcronem-γ („IFN-γ). včetně zánětlivých onemocnění, autoiinunních onemocnění, rozkladných onemocnění kosti, proliferativních poruch, nakažlivých onemocnění a degenerativních onemocnění. Předklá15 daný vynález se také týká způsobu inliibice aktivity ICE a potlačení produkce IG1F a ΙΓΝ-γ a způsobu léčby onemocnění způsobených interleukinem-1 -, apoplózou, IG1F a IFN γ za použití sloučenin a prostředků podle předkládaného vynálezu. Předkládaný vynález se také týká způsobu přípravy N-acylaminosloučenin.
Dosavadní stav techniky
Interleukin í (IL 1) je důležitým prozánětlivým a imunoregulačním proteinem, který stimuluje diferenciaci a prolifcraci fibroblastů, produkci prostaglandinů, kolagenasy a fosfolipasy synovi25 álními buňkami a chondrocyty, degranulaci hasofilů a eosinofilň a aktivaci neutrofilů (Oppenheim, J. H. a kol., Immunology Today. 7. str. 45 - 56 (1986)). Jako takový se podílí na patogenezi chronických a akutních zánět li vých a autoim unitu íeh onemocnění, Například u revmatoidní arthrilidy je IL--1 jak mediátorem zánět li vých symptomů, tak mediátorem rozpadu chrupavkového proteoglykanu v postiženém místě. Wood. D. D. a kol.. Arthritis Rheum. 26. 975. (1983); Pettipher, E. J. a kol.. Proč. Nati. Acad, Sci. UNITED STATES ΟΓ AMERICA 71, 295 (1986); Arend, W. P. a Dayer. J. M., Arthritis Rheum. 38. 151 (1995). 1E-1 je také velmi účinným činidlem vstřebávání kostní tkáně. Jandiski. J. J.. J. Oral. Patli 17. 145 (1988); Dewhirst. F. F. a kok, J. Immunol. 8, 2562 1985), Alternativně se nazývá jako ..aktivační faktor osteoklastu” při destruktivních onemocněních kosti jako je osteoarthritida a mnohonásobný myelom. Bataille.
R. a kol., Int. J. Clin. Lab. Res. 21(4). 283 (1992). Pří určitých proliferačních poruchách, jako je akutní myelogenní leukémie a mnohonásobný myelom, může IE-1 podpořit růst nádorových buněk a adliezi. Bani, M. R., J. Nati. Cancer Inst. 83, 123 (1991); Vídal-Vanaelocha, F., Cancer Res. 54, 2667 (1994). Při těchto poruchách JL—1 také stimuluje vylučování jiných cytokinů. jako je IL-6. které mohou regulovat vývoj nádoru. (Tarlour a kol., Cancer Res. 54, 6243 (1994). IL 1 je produkován převážné periferními krevními monocyty jako součást zánětlivé odpovědi a vyskytuje se ve dvou odlišných agonistíckýeh formách, ΙΕ Ια a IL Ιβ (Mosely, B. S. a kol., Proe, Nat, Acad, Sci.. 84 str. 4572 - 4576 (1987); Eonnemann, G. a kol., Eur. J. Immunol., 19, str. 1531 - 1536 (1989)).
IL—1 β je syntetizován jako biologicky neaktivní prekurzor, plE-1 β. plE-Ιβ postrádá konvenční vedoucí sekvenci (leader sequence) a není upravován signální peplidasou (March. C. J„ Nátuře, 315. str. 641 - 647 (1985)). Místo toho je plE-Ιβ štěpen enzymem konvertujícím interleukin ·1β (ICE. interleukin Ιβ eonverling enzyme) mezi Asp-116 a Ala—117, čímž vzniká biologicky aktivní C--koncový fragment nacházející se v lidském séru a synoviální kapalině (Selath, P. R.
a kol., J. Biol. Chem., 265, str. 14526 - 14528 (1992); A. D. Howard a kok. J. immunol., 147. str. 2964 2969 (1991)). ICE je cysteinová proteáza primárné umístěná v tnonocytech. Převádí prekurzor 11,-Ιβ na maturovanou formu. Black, R. A. a kol., ELBS Eett., 247, str. 386-390 (1989); Kostura. M. J. a kol., Proč. Nati. Acad. Sci. United States of America, 86. sir. 5227-523 1 (1989). Úprava účinkem ICL je rovněž nutná pro transport maturovaného IL -Ιβ přes buněčnou membránu. Ukázalo se, že 1CE a jeho homologa jsou zapojeny do řízení programované buněčné smrti nebo apoptózy. Yuan. J. a kol.. Cell. 75, str. 641 -652 (1993); Miura. M. a kol.. Cell. 75. str. 653-660 (1993); Nett-Fiordalisi. M. A. a kol.. J. Cell. Biochem.. 17B. str. 117 (1993). Zejména se má za to, že ICE nebo homology ICE souv isí s regulací apoptózy u neurodegenerativních onemocnění, jako je Alzheimerova a Parkinsonova choroba (Marx. J. A M. Baringa. Science, 259, str, 760 762 (1993); Gagliardini. V. a kol,, Science. 263, str. 826 828 (1994)). Léčebné aplikace pro inhibici apoptózy mohou zahrnovat léčbu Alzheimerovy nemoci, Parkinsonovy nemoci, úrazů, myokardiálního infarktu, atrofie páteře a stárnutí.
lu Ukázalo se, že ICE zprostředkuje apoptózu (programovaná buněčná smrt) u určitých typů tkání. Steller. H„ Science. 267. str. 1445 (1995); Whyte. M. a Evan. G., Nátuře. 376, str, 17 (1995); Martin, S. J. a Green, D. R., Cell, 82, str. 349 (1995); Alnernri, Γ. S.. a kol.. .1. Biol. Chem.. 270, str. 4312 (1995); Yuan, J.Curr. Opiu, Cell Biol.. 7, str. 211 (1995). Transgenní myš s přerušeným ICE genem je nedostatečná při apoptóze zprostředkované Fas (Kuida. K, a kol.. Science 267,
2000 (1995)). Tato aktivita ICE jc odlišná od aktivity jako enzymu pro zpracování pro-ILl-β. Je možné, že u určitých typů tkání nemusí být inhibiee ICE způsobena vylučováním dokonalého 1L-1 β. ale apoptóza může být inhibována.
Enzymaticky aktivní ICE byl již dříve popsán jako heterodimer složený ze dvou pod jednotek,
2o p2() a plO (s molekulovou hmotností 20 kDa respektive 1 kDa). lyto podjednotky vznikají z proenzyniu o hmotnosti 45 kDa (p45) přes formu p30, pomocí aktivačního mechanismu, který je autokatalytieký (Thornberry, N. A. a kol., Nátuře, 356, str. 768 - 774 (1992)). Proenzym ICE bvl rozdělen na několik funkčních domén: prodoménu (pl4). podjednotku p22/20, polypeptidový linker a podjednotku p 10 (Thornberrv a kol., viz výše; Casano a kol.. Genomies. 20, str. 474-481 (1994)).
p45 o plné délce byl charakterizován pomocí své eDNA-sekvenee a aminokyselinové sekvence (přihlášky PCT WO 91/15577 a WO 94/00154). Známé jsou i cDNA-sekvence a aminokyselinové sekvence p20 a plO (Thornberry a kol., viz výše). Sckvcnovány a klonovány byly rovněž myší a krysí ICE. Vykazují vysokou hoinologii aminokyselinové sekvence a sekvence nukleové kyseliny s lidským ICE (Miller, D. K. a kol., Ann. N. Y. Aead. Sei.. 696, str. 133 148 (1993).
Pomocí rozlišení atomu za použití rentgenové krystalografie byla určena trojrozměrná struktura ICE. Wilson, K. P., a kok. Nátuře, 370, str. 270 275 (1994). Aktivní enzym se vyskytuje jako tetramer dvou p20 a dvou plO podjednotek.
Dále existují lidská homologa IC'E s podobnými sekvencemi na aktivních místech enzymů. Mezi tato homologa patří TX (nebo lCElct M nebo ICH-2) (Faucheu, a kol., EMBO J„ 14. str. 1914 (1995); Kamens J., a kok, J. Biol. Chem., 270. str. 15250 (1995); Nicholson a kol., J. Biol. Chem., 270 15870 (1995), TY (nebo ICEld ,„) (Nicholson a kol., J. Biol. Chem., 270, str. 15870
4o (1995); ICH-I (nebo Nedd-2) (Wang, L. a kok, Cell. 78, str. 739 (1994)). MCH-2. (1 ernandes-Alnemri, T. a kol., Cancer Res., 55, str. 2737 (1995), CPP32 (nebo YAMA nebo apopaín) (Fernandes-Alnernri, T, a kot., J. Bio!. Chem., 269, str. 30761 (1994); Nicholson. D. W. a kol.. Nátuře, 376, str. 37 (1995)), a CMH-1 (nebo MCH 3) (Eippke, a kol., J. Biol. Chem., (1996); Fernandes-Alnernri, T. et al.. (1995)). Každý z těchto homologů, stejně jako ICE saniot45 ný, je schopen vyvolat apoptózu, když se podrobí expresi na transfekovaných buněčných kmenech. Inhibici jednoho nebo více těchto homologů peplidylovým inhibitorem ICE I yr-Val-Ala-Asp-ehloromcthylketon dojde k inhibici apoptózy na primárních buňkách nebo buněčných kmenech. Lazebník a kol., Nátuře, 371, str. 346 (1994). Sloučeniny popsané v předkládaném vynálezu jsou schopny inhibovat jeden nebo více homologů ICE (viz. příklad 5).
5ii Tyto sloučeniny mohou být proto použity pro inhibici apoptózy na typech tkání, které obsahují homologa ICE. ale které neobsahují aktivní ICE nebo neprodukují maturovaný 1E-1 β.
Faktor vyvolávající interteron gama (IG1F) je přibližně 18-kDA polypeptid, který stimuluje vylučování interferonu gama (IFN-γ) T-bunkami, IG1F je vylučován aktivovanými Kupfferový55 mi buňkami a makrofágy in vivo a z těchto buněk je přenášen za stimulace endotoxinu. l edy.
sloučeniny, které potlačují vylučování (GIF mohou být užitečné jako inhibitory takové stimulace buněk T, která muže snížit hladinu vylučování IFN-γ těmito buňkami.
IFN-yje cytokin s imunomodulačními účinky na různé imunní buňky. IFN γ je zapojen do akli? vace makrofágu a výběru Thl buněk (F. Belardelli. APMIS, 103, str. 161 (1995)). IFN-Y uplatňuje svůj účinek zejména pomocí modulace vylučování genů přes STÁT a 1RF dráhy (C. Schíndler a J. E. Ďarnell, Ann. Re v. Biochem.. 64, str. 621 (1995); T. Taniguehi. J. Cancer Res. Clin. Oncol., 121, str. 516 (1995)).
κι Myši. které mají nedostatek IFN-γ nebo jeho reeeptoru mají mnohonásobné poruchy funkce imunních buněk a jsou odolné k endotoxickému šoku (S. Huang a kol., Science, 259, str. 1742 (2993); D, Dalton a kol., Science, 259. str. 1739 (1993); B. D. Car a kok, .1. Exp. Med., 179, str. 1437 (1994)). Ukazuje se, že stejně jako IL-12, i IGIF vykazuje schopnost vyvolat produkci IFN-γ buňkami T (II. Okamura a kol., Infcction and Immunity, 63, str. 3966 (1995); H, Okamura a kol.. Nátuře, 378, sir. 88 (1995); S. Ushio a kol.. J. Immunoí.. 156. str. 4274 (1996)).
Ukázalo se. že IFN-γ přispívá k patologii spojené s různými zánetlivými, nakažlivými a auloimunními poruchami a onemocněními. Tedy, sloučeniny schopné potlačit vylučování IFN-γ by mohly být využitelné pro zmírnění vlivů onemocnění spojených s IFN—γ.
Biologické řízení IG1F a tedy IFN—γ nebylo vysvětleno. Je známo, že IGIF se syntetizuje jako prekurzor proteinu zvaného „pro 1G1F“. Přesto je nejasné, jak se pro-[GIF štěpí a zda je tento proces biologicky důležitý'.
Proto prostředky a způsoby schopné regulovat převedení pro-IGIF na IGIF mohou být využitelné pro potlačení vylučování IGIF a IFN-γ in vivo a tedy pro zmírnění škodlivého vlivu těchto proteinů, které přispívají k poruchám a onemocněním člověka.
ICE a další členy skupiny 1CE/CED-3 nebyly dříve spojovány s převodem pro IGIF na 1G1E nebo s vylučováním IFN-γ in vivo.
Inhibitory ICE představují skupinu sloučenin vhodných pro kontrolu zánětu nebo apoptózy nebo obojího. Byly popsány peptidové a peplidylové inhibitory' ICE (přihláškv PCT WO 91/15577; WO 93/05071; WO 93/09135; WO 93/14777 a WO 93/16710; a Evropská přihláška vynálezu
0 547 699). V důsledku jejich peptidieké povahy se však takovéto inhibitory typicky vyznačují nežádoucími farmakologickými vlastnostmi, jako je špatná orální absorpce, špatná stabilita a rychlý metabolismus (Plallner. J. J. a D. W. Norbeck, v Drug Discovery Technologies, C. R. Clark a W. II. Moos, editoři (Ellis Horwood, Chichester. Velká Británie, 1990), str, 92 - 126). To brání vyvinutí účinných léčiv na jejich bázi.
By lo popsáno, že i nepeptidické sloučeniny mohou také inhibovat ICE in vitro. PCT přihláška WO 95/26958, US patenty 5 552 400; Dolle a kol., J. Med. Chem.. 39, str. 2438-2440 (1996). Není však jasné, zda tyto sloučeniny mají vhodný fannakologický profil pro léčebné použití.
Dále běžné postupy pro přípravu těchto sloučenin nejsou výhodné. Tyto postupy využívají tributylcínhydrid, jedovatou látku citlivou na vlhkost. Tylo postupy jsou tedy nevýhodné, jsou zdravotně nebezpečné a způsobují problémy se zbytky jedovatých látek. Dále je obtížné čistit sloučeniny připravené pomocí těchto postupů,
Proto existuje potřeba sloučenin, které mohou účinně inhibovat působení ICE in vivo, pro použití jako činidel pro prevenci a léčbu chronických a akutních forem onemocnění způsobených 1E-I, apoptózou, IGIF nebo IFN γ, stejně jako zánětlivých onemocnění, autoimunníeh onemocnění, onemocnění související s rozkladem kostní tkáně, proliferativních onemocnění, nakažlivých
C7. 300171 B6 onemocnění nebo degeneralivních onemocnění. Existuje také potřeba způsobu přípravy takových sloučenin.
Podstata vynálezu
Předkládaný vynález poskytuje novou třídu sloučenin a jejich farmaceuticky přijatelných derivátů, které jsou využitelné jako inhibitor}' ICE. Tyto sloučeniny mohou být použity samotné nebo ve spojení s jinými léčebnými nebo profvtaktickými činidly jako jsou antibiotika, Ímunomoduláio tory nebo jiná protizánětlivá činidla, pro léčbu nebo profylaxi onemocnění zprostředkovaných
1L-1. apoptózou, IGIE nebo 1ΡΝ-γ. V souladu s výhodným provedením sloučeniny podle předkládaného vynálezu jsou schopny vázat se na aktivní místo ICE a inhibovat aktivitu tohoto enzymu. Dále mají zlepšenou buněčnou potenci, zlepšenou farmakokinetiku a/nebo zlepšenou biologickou využitelnost ve srovnání s peptidy lovým i inhibitory ICE.
Hlavním předmětem tohoto vynálezu jc poskytnout novou třídu sloučenin, které jsou inhibitory
ICE, které představuje obecný vzorec V
kde různé substituenty jsou popsány v předkládaném vynálezu. Dalším předmětem předkládanc2d ho vynálezu je poskytnout způsob přípravy N-acylaminosloučcnin pomocí spojení karboxylové kyseliny s aminem chráněným skupinou alloc.
Popis obrázků
Obrázek 1A ICE, štěpí pro IGIE in vivo. Buňky lysátů z buněk Cos transfekované různými indikovanými expresními plazmidv nebo kontrolní vzorky se analyzují na přítomnost IGIE oddělením proteinů pomocí SDS-PAGE a imunopřenosu „immunoblotting santi-IGlE protilátkou (pru 1, nepravě transfekované buňky: pruh 2. samotný pro-lGIE: pruh 3-12,
5d pro-lGlF v kombinaci s ICE, ICE-C285S, CPP32, CPP32-CI63S. CM11 1. CMEI-1-C186S, Tx, l x-C258S, v tomto pořadí). Pohyblivost pro-IGlF a 18kDa maturovaného IGIE je uvedena vpravo. Označení molárních hmotností v kDA je uvedeno vlevo (příklad 23).
Obrázek IB ICE štěpí pro-lGlE na autentickém místě zpracování in vitro. jak ukazuje barva
Commassic modř proteolytické reakce produktu separovaného pomocí SDS-PAGE (příklad 23). Bvlv použity následující protcázv a inhibitor}': pruh I, kontrolní pufr: pruh 2. 0,1 nM ICE: pruh 3, 1 nM ICE: pruhy 4 a 5, 1 nM ICE s 10 nM Cbz-Val-Ala-Asp-[(2,6-diehlorbenzoyl)oxy]methylketonu a 100 nM Ac-Tyr Val Ata-Asp-aldchydu; pruhy 6 a 7, 15 nM CPP32 sa bez 400 πΜ Ae-Asp-Glu-Val-Asp^aldchydu (D. W. Nicholson a kol.. 376, str. 37 (1995)), v tomto κι pořadí; pruh 8, 100 nM CMH-1; pruh 9, 10 jcdnotek/ml granzym B; a M, inolární hmotností označené u kDa.
Obrázek 1C Štěpení ICE převádějící neaktivní pro—IGIF na aktivní KilE, který indukuje produkci ΙΕΝ-γ na Ihl pomocných buňkách. Neštěpeno (pro-IGIF). ICE štěpeno (pro-lGIEP/lCE),
CPP32-štěpcno (pro IGIF/CPP32) a rekombinant maturovaného [GIF (rlGlF) se inkubovaly s A.E7 Ihl buňkami při 12 ng/ml (volná část) a 120 ng/ml (šrafovaná část) 18 hodin a hladina ΙΕΝ-γ uvolněného do kultivačního média se měří pomocí EE1SA (příklad 23). A.E7 buněčná kultura s pufrem, ICE samotné (ICE3) nebo CPP32 samotné (CPP32) se testuje podobně pro negativní kontrolu. Čísla přestavují průměrné hodnoty ze tří stanovení.
-4 C.7. 300171 B6
Obrázek 2A Maturovaný IGIF (18-kDa) se vyloučí buňkami Cos transfekovaných spolu s pro-IGIF a ICF-expresními plazmidy. Buněčný lysat (vlevo) a upravené médium (vpravo) z buněk Cos transfekovaných prc^lGIF expresním plazmidem v nepřítomnosti (·-) nebo v přítomnosti expresního plazmidu kódujícího přírodní typ (ICE) nebo neaktivního mutantu (1CE-C285S) ICE. Transfekované buňky se metabolicky značí 'S-melhioninem, proteiny z buněčných lysátů a upraveného média imunosráženého protilátkou anti-IGIF a izolovaného pomocí SDS PAGE (příklad 24). Pohyblivost pro-IGIF a !8kDa maturovaného IGIF je uvedena vpravo. Značky molárních hmotností v kDa jsou uvedeny vlevo.
I!)
Obrázek 2B IFN γ indukující aktivita se určí v buňkách Cos transfekovaných s pro-KilF a ICE expresními plazmidy. Buněčné lysázy (šrafovaná část) a upravené médium (volná část) / buněk Cos transfekovaných pro-IGIF expresním plazmidem za nepřítomnosti (pro-IGIF) nebo za přítomnosti (pro-IGIF/ICE) expresního plazmidu kódujícího přírodní typ (ICE) sc testují na hladinu
IFN-γ (ng/ml) pomocí EEISA. Cos buňky transfekované pufrem (Mock) nebo ICE expresní plazmidy samotné (ICE) slouží jako negativní kontrola (příklad 24).
Obrázek 3A Kupfferovy buňky myší s nedostatkem ICE jsou nedostatečné pro export IGIF. Kupfferovy buňky přírodního typu myši (ICE t7t-) nebo myší s nedostatkem ICE homozygotníeh
2o pro ICE mutaci (ICE -/-) sc izolují a stimulují LPS 3 hodiny. Hladina imunoreaktivníeh polypeptidů v upraveném médiu (ng/ml) přírodního typu buněk se měří pomocí EEISA (příklad 25). N. D. (nedetckovalelné) znamená, že koncentrace IGIF byla nižší než 0.1 ng/ml.
Obrázek 3B Kupfferovy buňky myší s nedostatkem ICE jsou nedostatečné pro export muturova25 né IGIF, Kupfferovy buňky přírodního typu myši (ICE O-t-) nebo myši s nedostatkem ICE hornozygotních pro ICE mutaci (ICE -/-) se izolují a stimulují LPS 3 hodiny. Stimulované buňky se metabolicky značí ?’S -methioninem, proteiny z. buněčných lyzátů a upraveného média se imunosráží s protilátkou anti-IGIF a oddělí pomocí SDS-PAGE (příklad 25). Pohyblivost proIGlE a 18 kDa maturované IGIF je vyznačena vpravo. Značky molekulární hmotnosti u kDA jsou uve5o děny vlevo.
Obrázek 3C Sérum z myší s nedostatkem ICE obsahuje sníženou hladinu IGIF. Vzorky séra z přírodního typu myší (ICE +/+) nebo myší s nedostatkem ICE homozygotníeh pro ICE mutaci (ICE -/-) sc testují na hladinu IGIE (ng/ml) pomocí ELIS A testu (příklad 25).
Λ 5
Obrázek 3D Sérum z myší s nedostatkem ICE obsahuje snížené množství IFN γ.Vzorky séra z přírodního typu myší (ICE +/+) nebo myší s nedostatkem ICE homozygotníeh pro ICE mutaci (ICE -/-) se testují na hladinu IFN-γ (ng/ml) pomocí EEISA testu (příklad 25).
4d Obrázek 4 Hladiny 1EN γ v séru se významně sníží u myší s nedostatkem ICE po akutní stimulaci EPS (příklad 26). Vzorky séra přírodního typu myší (vyplněné čtverečky) nebo myší s nedostatkem ICE (vyplněná kolečka) se testují na hladinu IEN-γ (ng/ml) pomocí ELISA testu jako funkce času (hodiny) po stimulaci LPS. Teploty zvířat v průběhu času ve stupních Celsia jsou uvedeny pro přírodní typ myší (prázdné čtverečky) a pro myši s nedostatkem ICE (prázdná kolečka).
Obrázek 5 Inhibitor ICE, AcYVAD-aldehyd (AeYVAD-CIlO), inhibuje EPS stimulovanou ΙΕ-lp a IEN-γ syntézu lidskými periferními nionojadernými krevními buňkami (PBMC). Procenta (%) inhibice jako funkce koncentrace inhibitoru (μΜ) jsou uvedena pro syntézu II-Ιβ
5d (prázdné čtverečky) a pro syntézu IFN γ (otevřené kosočtverečkv).
Obrázek 6 Sloučenina 214e inhibuje vylučování IL-Ιβ u LPS stimulovaných myší. Vzorky séra z CD1 myší se testovaly na hladinu IL—1 p (pg/ml) pomocí ELISA testu pro EPS stimulaci. Slou-5CZ 300171 B6 cenina 2!4e se podávala pomocí intraperitoneální injekce (IP) 1 hodinu po LPS stimulaci. Krev se odebírala 7 hodin po LPS stimulaci (viz příklad 7).
Obrázek 7 Sloučenina 217e inhibuje vylučování IL-Ιβ u LPS stimulovaných myší. Vzorky séra z CD1 myší se testovaly na hladinu IL—1 β (pg/ml) pomocí ELISA testu pro LPS stimulaci. Sloučenina 217e se podávala pomocí intraperitoneální injekce (IP) 1 hodinu po LPS stimulaci. Krev sc odebírala 7 hodin po LPS stimulaci (viz příklad 7).
Obrázek 8 Sloučenina 214e, ale ne sloučenina 217e. inhibuje vylučování ΙΕ-Ιβ u LPS slimulolo váných tn\ší, pokud se podává orálně. Pomocí tohoto testu se měří orální absorpce za podobných podmínek jako je popsáno pro obrázek 6 a 7. Tyto výsledky ukazují, že sloučenina 2 Ideje potenciálně orálně aktivní jako inhibitor ICE (viz. příklad 7).
Obrázek 9 Sloučenina 214e a analoga sloučeniny 214e také inhibují vylučování ΙΕ-Ιβ po IP podávání. Tyto výsledky byly získány v testu popsaném pro obrázek 6 a 7 a příklad 7.
Obrázek 10 Sloučenina 214e a analoga sloučeniny 214e také inhibují vylučování ΙΕ-Ιβ po orálním (PO) podávání. Tyto výsledky byly získány v testu popsaném pro obrázek 6 a 7 a příklad 7,
Obrázek 11A/B Sloučeniny 302 a 304a vykazují měřitelnou hladinu v krvi po orálním podávání (50 mg/kg). v 0,5% karboxymethylcclulóze myším. Vzorky krve se odebraly 1 a 7 hodin po podávání. Sloučeniny 302 a 304a jsou pro léčiva sloučeniny 214e a metabolizují se na sloučeninu 214e in vivo. Sloučenina 214e nevykazuje hladinu v krvi vyšší než 0,10 pg/ml pokud se podává orálně (příklad 8).
Obrázek 12 Sloučenina 412f brání postupu arthritidy vyvolané kolagenem typu li u samic DBA/1J myší (Wooly. P. El.. Methods in Enzvmology. 162, str. 361-373 (1988) a Geger T. Clinieal a Experimental Rheumatology. 11. str. 515-522 (1993)). Sloučenina 412f se podávala dvakrát denně (10, 25 a 50 mg/kg). přibližně po 7 hodinách orálně. Zánět se hodnotil pomocí
Mi škály závažnosti arthritidy v rozsahu 1 až 4 podle rostoucí závažnosti. Výsledky dvou předních končetin byly pokládány za konečný výsledek (viz příklad 21).
Obrázek 13 Sloučenina 412d brání postupu arthritidy vyvolané kolagenem typu II u samic DBA/IJ myší. Výsledky byly získány pomocí postupu popsaného pro obrázek 12 a v příkladu 21.
Obrázek 14 Sloučenina 696a brání postupu arthritidy vyvolané kolagenem typu II u samic DBA/1J myší. Výsledky byly získány pomocí postupu popsaného pro obrázek 12 a v příkladu 21.
Zkratk) a definice m
Zkratky
Označení Činidlo nebo fragment
Ala alanin
Arg arginin
Asn asparagin
Asp kyselina asparagová
Cys cystein
Gin glutamin
Glu kyselina glutamová
Cly glyein
His histidin
Ile isoleucin
-óCZ 300171 B6
Leu
Lvs
Met
Phe
Pro Ser Thr Trp Tyr io Val
Ac2O n-Bu
DML
DÍLA
LDC Et
LbO
EtOAc
Lmoc
2o HBTLJ HOBT Me
MeOH
Ph
2> TFA Alloc
Definice leucin lysin methionin fenylalanin prolín šeřin threonin tryptofan tyrosin valin anhydrid kyseliny octové normální butylová skupina dimethylformarnid
N,N -diisopropylethylamin —(3—Diinethylaminopropyl)—3—ethylkarbodiimidhydrochlorid ethylová skupina diethy lether ethylacetát
9-fluorenylmethyloxykarbonyl
O benzotriazol-1-yl-N,N,N'.N -tctramcthyluroniumhexalluorfosfát hydrát l-hydroxybenzotriazolu methylová skupina methanol fenylová skupina kyselina trifluoroctová allyloxykarbonyl
Následující termíny, pokud jsou použity a není uvedeno jinak, mají v předkládaném vynálezu následující významy:
Termín „faktor indukující interferon gama” nebo „IGIF‘k znamená faktor, který je schopen vyvolat endogenní produkci ILN-γ.
Termín ..inhibitor ICL znamená sloučeninu, která je schopna inhibovat enzym ICL. Inhibice ICL může být určena za použití postupů popsaných a uvedených jako odkazy. Odborníci zjistili, že in vivo ICE inhibitor není nutně in vitro ICL inhibitor. Například pro léková forma sloučeniny typicky ukazuje nízkou nebo žádnou aktivitu při in vitro zkouškách, lakové pro lékové formy
4o mohou být přeměněny pomocí metabolického nebo jiného biochemického postupu v těle pacienta za získání in vivo inhibitoru ICE.
Termín „cytokin“ znamená molekulu, která zprostředkuje interakce mezi buňkami.
Termín „stav“ znamená jakékoli onemocnění, poruchu nebo účinek, škodlivé biologické následky pro subjekt.
Termín ..subjekt'' znamená živočicha nebo jednu nebo více buněk živočišného původu. S výhodou jc živočichem savec, výhodněji člověk. Buňky mohou být v jakékoli formě, včetně, ale bez omezení, buněk ponechaných vtkaních, shluků buněk, imorta lisovaných buněk, transťektovaných buněk nebo transformovaných buněk a buněk odvozených od živočichů, které jsou fyzikálně nebo fcnotypicky pozměněné.
Termín „aktivní místo znamená jakékoli nebo všechny následující místa na ICE: vazebné místo pro substrát, místo, kde se váže inhibitor a místo, kde probíhá štěpení substrátu.
-7CZ 300171 B6 lermín „heteroeyklus nebo „helerocyklický označuje stabilní mono- nebo polyeyklickou sloučeninu. která může popřípadě obsahovat jednu nebo dvě dvojné vazby nebo může popřípadě obsahovat jeden nebo několik aromatických kruhů. Každý heteroeyklus tvoří atomy uhlíku a jeden až čtyři heteroatomy nezávisle na sobě vybrané ze skupiny zahrnující dusík, kyslík a síru. Termín „dusíkový heteroatom, „dusík jako heteroatonT1 a „sírový heteroatonT, „síra jako heteroatom. jak jsou zde používány, zahrnují libovolnou oxidovanou formu dusíku nebo síry nebo kvaternizovanou formu jakéhokoli bazického dusíku. Mezi heteroeykly definované výše patří například pyrimidinyl, tetrahydrochinolyl, tetrahydroisoehinolinyl, purinyl, pyrimidyh indolinyl, io benzimidazolyf imidazolyl, imidazolinyl, imidazolidinyl, chinolyl. isochinolyk indolyl. pyridy 1, pyrrolyl. pyrrol inyl. pyrazolyk pyrazinyl. chinoxalyl, piperidinyl, morfolinyl, thiamorfolinyk furyl. thienyl. triazolyL thiazolyl, β-karbolinyl, lelrazolyl, thiazolidinyl benzofuranvk thiamorfol inyl sul fon. benzoxazolyl, oxop i per idinyl, oxopyrrol idinyl. oxoazepinyl. azepinyl. isoxazolyl, telrahydropyranyl, tetrahydrofuranyl, thiadiazolyl, benzodioxolyl, bcnzothienyh tetrahyd15 rothiofenvl a sulfolanyk Další heteroeykly jsou popsány v A. R. Katritzky a C. W. Rees, editoři, Coinprehen- sivé lleterocylic Chemistry: The Structure, Reactions, Synthesis and Use of Heterocyclic Compounds, svazek 1 - 8, Pergamen Press. New York (1984).
Termín „eykloalkyl nebo „cykloalkylová skupina“ označuje mono- nebo polvc> klíckou skupilo nu. která obsahuje 3 až 15 atomů uhlíku a může popřípadě obsahovat jednu nebo dvě dvojné vazby. Mezi příklady patří cyklohexyl, adamantyl a norbornvk
Tennín „aryl nebo „arvlová skupina označuje mono až polyeyklickou skupinu která obsahuje 6, 10, 12 nebo 14 atomu uhlíku, ve které je alespoň jeden kruh aromatický. Mezi příklady patří feny I. nafty] a bifenyl.
Tennín „heteroaromatický nebo „heteroaromatieká skupina označuje mono nebo polycyklíckou skupinu, která obsahuje 1 až 15 atomů uhlíku a 1 až 4 heteroatomy, nezávisle na sobě vybrané ze skupiny zahrnující síru, dusík a kyslík, a která dále obsahuje 1 až 3 pěti nebo šestičlenné ?i> kruhy, z nichž alespoň jeden je aromatický.
Termín „α-aminokyselina („alfa-aminokyselina“) označuje jak v přírodě se vyskytující aminokyseliny tak jiné „neproteinové“ α-aminokyscliny běžně používané odborníky v chemii peptidú při přípravě syntetických analogů přirozeně se vyskytujících peptidů, včetně 13- a L-forem,
V přírodě se vyskytujícími aminokyselinami jsou glyein. alanin. valin, leucin, isoleuein, serin, rnethionin, threonin, fenylalanin, tyrosin, tryptofan, cystein, prolin. histidin, kyselina asparagová, asparagin, kyselina glutamová. glutamin, kyselina γ-karboxyglutamová. arginin, ornithin a lysin. Mezi příklady „ncproteinových α-aminokyselin patří hydroxy lysin, homoserin. homotyrosin, hoinofenylalanin, citrullin. kynurenin, 4-aminofcnylalanin, 3—(2—naftyl)alanin, 3-(l naftyl)40 alanin. metli ion insul fon. terc-butylalanin. tere-butylglycin, 4-hydroxy fenylglyein. aminoalanin. fenylglyein, vinylalanin, propagylglycin, 1,2,4-iriazolo-3-alanin, 4,4.4-trifluorlhreonin, thyronin. 6-hydroxy tryptofan, 5-hydroxytryptofan, 3-hydroxykynurenin, 3-aniinotyrosin, irifiuormethy lalanin, 2-thienylalanin, (2—(4—pyridyl)elhyl)eystein, 3,4-d i methoxy feny lalanin,
3-(2-thiazolyl )alanin. kyselina i holeňová, kyselina l-amino-l -cyklopentankarboxylová. kyseli45 na l-amino-l-cyklohexankarboxylová, kyselina ehiskvalová. 3-trifluorniethylfenylalanin. 4 trifluonnethylfenylalanin, cyklohexylalanin. cyklohexylglycin, thiohistidin. 3-methoxytyrosin, elastatinal, norleucin. norvalin, alloisoleuein. homoarginin. thioprolin, dehydroprolin, hydroxyprolin, kyselina isonipektotová, homoprolin, cyklohexylglycin. kyselina a-amino-n-máselná. cyklohexylalanin, kyselina aminofenyhnáselná. fenylalaniny substituované v ortho-, meta- nebo para-poloze fenylovcho kruhu jedním nebo dvěma substituenty vybranými ze souboru zahrnujícího alkylové skupiny s 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxyskupiny s 1 až. 4 atomy uhlíku, atomy halogenů a nitroskupinu, nebo substituované methylendioxy skupinou.
β-2- a —3—thienylalanin, β 2- a -3-furanylalanin, β-2-, -3- a 4- pyridylalanin, |3-(benzothienyl 2- a —3—yl)alanin, β-( 1— a 2-naftyl)alanin, O-alkylované deriváty šeřinu, threoninu nebo
-8CZ 300171 B6 tyrosinu. S-alkylovaný cystein, S alkylovany homocystein. ()-sulfáty, O-fosíaty a O-karboxyláty tyrosinu. 3-sulfo-tyrosin. 3-karboxytyrosin, 3-fosfbtyrosin. ester methansulfonové kyseliny a tyrosinu. ester methanfosfonové kyseliny a tyrosinu, 3,5 dijodtyrosin, 3-nitrotyrosin. c alkyllysiny a δ—alkylornithiny. Kterákoli z těchto α-aminokyselin může byl substituována methylovou skupinou v α-poloze, halogenem na kterémkoli aromatickém zbytku na postranním řetězci α-aminokyseliny. nebo vhodnou chránící skupinou na atomech kyslíku, dusíku nebo síry ve zbytcích postranních řetězců. Vhodné chránící skupiny jsou uvedeny v práci „Protéct i ve Groups In Organic Synthesis. T. W. Greene a P. G. M. Wuts. J. Wiley and Sons. New York, 1991.
ίο
Termín ..substituce” označuje nahrazení atomu vodíku ve sloučenině substituentovou skupinou. V tomto vynálezu jsou ze substituce vyloučeny ty atomy vodíku, které tvoří část zbytku vytvářejícího vodíkovou vazbu, který je schopen vytvářet vodíkovou vazbu s karbonylovým atomem kyslíku vArg-341 v ICE nebo s karbony lovým atomem kyslíku v Ser-339 v 1CE. Mezi tyto is vyloučené atomy vodíku patří ty atomy, které tvoří skupinu -NI K která je v poloze alfa vzhledem k symbolu Z nebo skupině -CO- a která je uvedena jako -NI I- a nikoli jako skupina X nebo nějak jinak označená skupina v obecných vzorcích a až t, v až v a I až VIID.
Termín „přímý řetězec označuje souvislý ne rozvětvený řetěz kovalentně vázaných členů, tj.
2o atomů, které tvoří části řetězce. Přímý řetězec nebo kruh, kterého tvoří tento přímý řetězec součást, mohou být substituovány, ale tyto substituenty nejsou částí přímého řetězce.
Termín „K, představuje numerické měřítko účinnosti sloučeniny při inhibiei aktivity cílového enzymu, jako je ICE. Nižší hodnoty K, odrážejí vyšší účinnost. Hodnota K, se získá zpracováním experimentálně stanovených údajů standardními rovnicemi enzymové kinetiky (viz. I. Π. Segel, Enzyme Kinetics, Wiley-Inlerseience, 1975).
lermín „pacient“, jak je zde používán, označuje libovolného savce, zejména člověka.
5(i 'Termín „farmaceuticky účinné množství označuje množství účinné k léčení nebo zlepšení onemocnění zprostředkovaného IE-1 u pacienta. Termín „profylaktieky účinné množství označuje množství účinné k prevenci nebo podstatnému snížení možnosti onemocnění zprostředkovaného IE-1 u pacienta.
Termín „farmaceuticky přijatelná nosná nebo pomocná látka označuje netoxickou nosnou nebo pomocnou látku, kterou lze podat pacientovi, spolu se sloučeninou podle vynálezu, a která neničí její farmakologickou účinnost.
Termín „farmaceuticky přijatelný derivát znamená libovolnou farmaceuticky přijatelnou sůl, ester, nebo sůl takového esteru, sloučeniny podle vynálezu, nebo jakoukoli jinou sloučeninu, která je po podání příjemci schopná poskytovat (přímo nebo nepřímo) sloučeninu podle vynálezu nebo její metabolit nebo zbytek s anti-ICE aktivitou.
Mezi farmaceuticky přijatelné soli sloučenin podle vynálezu patří například soli odvozené od farmaceuticky přijatelných anorganických a organických kyselin a bází. Mezi příklady vhodných kyselin patří kyselina chlorovodíková, bromovodíková, sírová, dusičná, ehloristá, íůmarová, m a lei nová. fosforečná, glykolová, mléčná, salicylová, jantarová, toluen-p-sulfonová, vinná, octová, citrónová, methansulfonové, mravenčí, benzoová, malonová. naftalen 2--sulfonová a benzensulfonová. Další kyseliny, jako je kyselina šťavelová. ačkoli nejsou farmaceuticky při5(i jatelné, lze použít k přípravě solí vhodných jako meziprodukty pro získání sloučenin podle vynálezu a jejich farmaceuticky přijatelných adičních solí s kyselinami. Mezi soli odvozené od vhodných bází patří soli s alkalickými kovy (například sodíkem), soli $ kovy alkalických zemin (například hořčíkem), amonně soli a tetraalkylamoniové soli s 1 až 4 atomy uhlíku v každé alkýlové části.
- 9 CZ 300171 B6
Vynález rovněž bere v úvahu „kvatemizaci libovolných bazických skupin obsahujících dusík ve zde popsaných sloučeninách. Bazický dusík lze kvatemizovat libovolné zěinidek která jsou známa odborníkovi, včetně například nižších alkylhalogenidú, jako je methyl-, ethyl-, propyl- a butylehloríd, -bromid a jodid. dialkylsulfátů včetně dimethyl , diethyl-, dibutyl a diamylsulfátu, haiogenidů s dlouhým řetězcem, jako je decyl-, lauryl-, myristyla stcarylehlorid, -bromid a -jodid, a aralkyl haiogenidů, včetně benzyl- a fenylethylbromidu. Pomocí takové kvaternizaee lze získat produkty rozpustné nebo dispergovatclné ve vodě nebo v oleji.
to Inhibitory ICE podle vynálezu mohou obsahovat jeden nebo několik „asymetrických atomů uhlíku a mohou sc tedy vyskytovat jako raeemáty a racemické směsi, jednotlivé enantiomery, směsi diastereomerů a jednotlivé diastereomery. Vynález výslovně zahrnuje všechny takové izomerní formy těchto sloučenin. Každý stereogenní atom uhlíku může být v R- nebo S-konfiguraci. Ačkoli konkrétní sloučeniny a skelety zmíněné v léto přihlášce jako příklady i? mohou být uvedeny v konkrétní stereochemickč konfiguraci, jsou zahrnuty rovněž sloučeniny a skelety buď s opačnou stereoehemií na libovolném z chirálních center nebo jejich směsi.
Inhibitory ICE podle vynálezu mohou obsahovat kruhové struktury, které mohou být popřípadě substituovány na atomech uhlíku, dusíku nebo jiných atomech různými substituenty. Takovéto
2o kruhově struktury mohou být substituovány jednou nebo vícekrát. Výhodně kruhové struktury obsahují mezi 0 a 3 substituenty. Při vícenásobných substitucích může být každý substituční vybrán nezávisle na jiných substituentech, pokud při této kombinaci substituentů vznikne stabilní sloučenina.
Kombinacemi substituentů a proměnných podle vynálezu jsou pouze ty. které mají za následek vytvoření stabilní slouěeniny.Termín „stabilní, jak je zde používán, označuje sloučeniny, které vykazují dostatečnou stabilitu pro umožnění přípravy a podání savci pomocí způsobů známých v oboru. Typicky jsou takové sloučeniny stabilní při teplotě 40 ŮC nebo nižší, za nepřítomnosti vlhkosti nebo jiných chemicky reaktivních podmínek, po dobu alespoň jednoho týdne.
Ϊ0
Substituenty mohou být v různých formách. Tyto různé formy jsou odborníkům známé a mohou byl použity střídavě. Například methylový substituční na fenylovém kruhu může mít jakoukoli následující formu:
Různé formy substituentů jako je methy lová skupina se zde používají střídavě.
Podrobný popis vynálezu
Aby mohl být předkládaný vynález lépe pochopen, následuje podrobný popis vynálezu.
Inhibitory ICE jsou podle jednoho provedení předkládaného vynálezu N-acylaminosloučeniny obecného vzorce V
ve kterém
10CZ 300171 B6 rn znamená 1;
R] je skupina obecného vzorce elO-B
Ry je skupina -C(())-H;
Ry je skupina -C(O) Ary,
Y2 je atom kyslíku;
io každá skupina Ryje nezávisle vybrána ze skupiny, kterou tvoři skupina -An a přímé nebo rozvětvené alkylové. alkenylové či alkynylové skupiny obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, které jsou popřípadě substituované skupinou - Ary každá skupina R]0 je nezávisle vybraná ze skupiny, kterou tvoří atom vodíku, skupina -Ary, cykloalkýlové skupiny obsahující 3 až 6 atomy uhlíku a přímé nebo rozvětvené alkylové, alkenylové či alkynylové skupiny obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, které jsou popřípadě substituované skupinou -Ary;
R|S je-OH;
Rji je atom vodíku;
Ar; je isochinolylová skupina popřípadě jednou nebo vícekrát substituovaná skupinou -Qy každá skupina Qi je nezávisle vybraná ze skupiny, kterou tvoří aminoskupina, karboxylová skupina, atom chloru, atom fluoru, atom bromu, atom jodu, nitroskupina, kyanoskupina, skupina =0, hydroxylová skupina, perliuoralkýlová skupina obsahující 1 až 3 atomy uhlíku, skupina R5. skupina OR,. skupina -NHR<. skupina -OR*,. skupina -N(R»>)(R|ť)). skupina -R(>. skupina
3o —f .(())— R i o a skupina / \
Clb;
\ /
O s tou výhradou, že pokud je skupina -Ar, substituovaná skupinou Q,, která obsahuje jednu nebo více dalších skupin Ar3. nejsou uvedené další skupiny - Ar3 substituované jinou skupinou -Ar3.
Jednou z nej výhodnějších N-acylaminoslouěenin obecného vzorce V uvedených výše je sloučenina
Nej výhodnější jsou výše uvedené sloučeniny, kde cyklická skupina Ar Je isochinolinylová skupina.
Sloučeniny v souladu s předkládaným vynálezem jsou popsány v přihláškách US 08/575 641 a 08/575 641 a 08/598 332, které jsou rovněž v řízení a které zde uvádíme jako odkaz.
Sloučeniny v souladu s předkládaným vynálezem mají molární hmotnost menší nebo rovnu 700 Dal tonů. výhodněji 400 až 600 Da lionů. Tyto výhodné sloučeniny se po perorálním podání io snadno vstřebávají krevním řečištěm pacientů. Tato perorální vhodnost činí z těchto sloučenin výborná činidla pro perorální léčení a prevenci proti chorobám souvisejícím s 11-1, apoptózou.
IGlFneboIFN γ.
Je třeba vžit v úvahu, že sloučeniny podle vynálezu se mohou vyskytovat v různých rovnováž15 nýeh formách, v závislosti na podmínkách včetně výběru rozpouštědla, pil a dalších, jak je známo odborníkovi v oboru. Všechny takové formy těchto sloučenin jsou výslovně zahrnuty v rozsahu vynálezu. Zejména se mohou mnohé sloučeniny podle vynálezu, obzvláště ty. které obsahují aldehydieké skupiny nebo keloskupiny ve zbytku K a karboxylové skupiny ve zbytku T, vyskytovat v hemiketalovýeh (nebo hemiacetalovýeh) nebo liydratovaných formách.
V závislosti na výběru rozpouštědla a dalších podmínkách známých odborníkovi v oboru se mohou sloučeniny podle vynálezu vyskytovat rovněž v acyloxyketalové. acyloxyacelalové. ketalové nebo acctalové formě.
Kromě toho je třeba vzít v úvahu, že rovnovážné formy sloučenin podle vynálezu mohou zahrnovat lautomerní formy. Všechny takové formy těchto sloučenin jsou výslovně zahrnuty v rozsahu vynálezu.
Je třeba vzít v úvahu, že sloučeniny podle vynálezu lze modifikovat vhodnými funkčními skupi30 námi pro rozšíření selektivních biologických vlastností. Takové modifikace jsou v oboru známé a patří mezi ně modifikace, které zvyšují biologickou penetraci do daného biologického systému (například krve, lynifatíekého systému, centrálního nervového systému), zvyšují orální dostupnost. zvyšují rozpustnost pro umožnění injekčního podání, mění metabolismus a mění rychlost vylučování. Kromě toho lze sloučeniny podle vynálezu měnit do formy prekurzorů, takže se požadovaná sloučenina vytváří v těle pacienta jako výsledek působení mela holických nebo jiných biochemických procesů na prekurzor. Mezí několik příkladů prekurzorových forem patří ketalové, acetalové, oximové a hydrazonové formy sloučeniny, které obsahují ketoskupinv nebo aldehydovč skupiny, zejména pokud se vyskytují ve skupině Ri sloučenin podle vynálezu. Dalšími příklady pro forem jsou hemiketal, hemiaeetal, aeyloxyketal, aeyloxyacetal, ketal a aeetal formy.
1CF. a TX štěpí a tím aktivují pro- IGIF
ICF-proteáza byla předtím identifikována podle schopnosti zpracovat inaktivní pro-II-Ιβ na účinný IL-Ιβ, což je in vitro a in vivo protizánčtlivá látka. Zde ukazujeme, že ICE a jeho blízký homolog TX (Caspasa- 4, C. Faucheu a další.. EMBO 14, str. 1914 (1995)) mohou proteolylieky štěpit inaktivní pro-IGIF. Tento krok je nutný pro konverzi pro-IGIF na svou aktivní maturovanou formu IGIF. Štěpení pro-IGIF látkou ICE a pravděpodobně látkou TX rovněž napomáhá exportu IGIF ven z buněk.
- 12CZ 300171 B6
Pro stanovení, zda nějací známí členové skupiny ICE/CED-3 proteáz mohou v kultivovaných buňkách zpracovat pro-lGIE na IGIF (příklad 23) (obr. 1 A), jsme nejdříve použili přechodnou koexpresí plazmidů zavedených prostřednictvím transfekce do Cos buněk.
Obrázek 1Λ ukazuje, že ICE štěpí pro-IGIF v Cos buňkách podrobených kotransfekci plazmidy, které vykazují expresi pro-IGIE v přítomnosti aktivní ICE. Cos buňky byly podrobeny transfekci expresními plazmidy pro pro-IGIE izolované (pás 2) nebo v kombinaci s indikovanými expresními plazmidy kódujícími přírodní typ nebo inaktivní mutanty proteáz skupiny ICE/CED-3 (pásy to 3-12). Z buněk byly připraveny roztoky, které byly analyzovány na přítomnost 1G1E proteinu imunopřenosem „immunoblotting pomocí anti-IGlE protilátky. Pás 1 zahrnuje roztoky z buněk podrobených srovnávací transfekci.
Koexprese pro-IGIF prostřednictvím ICE nebo TX vedla ke štěpení pro-IGIE na polypeptid velikostí podobný přírodnímu 18-kDa maturovanému 1G1E. Tento bod procesu je blokován jednobodovými mutacemi, které změní katalytické cystě i nové zbytky, a tak inaktivují ICE a TX (Y. Gu a další, EMBO 14, 1923 (1995)).
Koexprese CPP32 (Caspasc-3). což je proteáza účastnící se odumírání programovaných buněk
2o (T. Femaes-Alnemri a další. J. Biol., Chem. 269, 30761 (1994); D. W. Nicholson a další, Nátuře 376, 37 (1995)), vedla ke štěpení pro-IGIE na menší polypeptid. zatímco koexprese CMH-1 (Caspase-7), což jc blízký homolog CPP32 (J. A. Lippke a další. J. A. Eippke a další, J. Biol. Chem. 271. 1825 (1996)), pro štěpení pro IGIF selhala. Proto se ICE a TX jeví jako schopné štěpit pro (GIF na polypeptid velikostí podobný přírodnímu 18-kDa IGIF.
Dále jsme testovali schopnost těchto cystcinových proteáz štěpit pro-IGIF in vitro za použití čištěného pro-IGIF spojeného s rekombinovaným (His)ó jako substrátu (příklad 23).
Obr 1B ukazuje, že ICE štěpí in vitro pro-IGIF. Čištěný rekombinovaný pro-IGIE (2 gg) s navázaným (His)6 byl inkubován s indikovanou cysteinovou proteázou v přítomnosti nebo nepřítomnosti inhibitorů ICE nebo CPP32, jak je popsáno v příkladu 23. Produkty štěpení byly analyzovány pomocí SDS-PAGE a barvy Coomassie Blue.
ICE štěpil 24 kDa pro-IGIF na dva polypeptidy s přibližné 18-kDa a 6-kDa. Sekvencování
N-koncových aminokyselin štěpných produktů ICE ukázalo, že 18-kDa polypeptid obsahuje stejné N-koneové aminokyselinové zbytky (Asn-Fc-Gly-Arg-Leu) jako přírodní 1G1E. To ukazuje, že ICE štěpí pro-IGIE v autentickém bodě zpracování (Asp35-Asn36) (11. Oka můra a další, Infeetion and immunity 63, 3966 (1995); EL Okainura a další. Nátuře 378, 88 (1995)). Sekvencování N-koncových aminokyselin štěpných produktu CPP32 ukázalo, že CPP32 štěpil pro-IGIE to v pozici Asp69-lle70.
Štěpení pro-IGIE působením ICE je vysoce specifické s katalytickou účinností (kc;i,/KM) 1.4 x l()7M 's 1 (Km - 0,6 ± 0,1 μΜ; kcat 8,6 ± 0,3 s l) a podléhá inhibiei specifickými ICE inhibitory (Ac-Tyr-Val Ala -Asp-aldehyd) a Cbz-Val-Ala Asp [:2,6 dichlorbenzoyl)45 oxyjmethylketon (N. A. Thornberry a další. Nátuře 356, 768 (1992); R. E. Dolle a další, .1. Med. Chem. 37. 563 (1994)).
Obr. 1C ukazuje, že pro-IGIE aktivuje in vitro štěpení ICE. Nerozštěpený pro-IGIE. produkty štěpení pro-IGIF působením ICE nebo CPP32. nebo rekombinovaný maturovaný IGIF (RIGIE) byly každý přidán do kultury buněk A.E7 při konečné koncentraci 12 ng/ml nebo 120 ng/ml (viz. příklad 23). Po osmnácti hodinách bylo za použití ELIS A sady provedeno v kultivačním médiu stanovení množství ΙΕΝ-γ. Zatímco nerozštěpený pro-IGIE neměl žádnou detekovatelnou IFN-γ indukční aktivitu, pro-IGIE rozštěpený působením ICE byl při indukci produkce IFN-γ vThl buňkách.
- 13 CZ 300171 B6
Stejně jako ICE i jeho homolog TX štěpil pro-lGlE na polypeptidv $ podobnou velikostí, jeho katalytická účinnost ale byla o dva rády nižší než u ICE.
V souladu s pozorováním u Cos buněk v předešlých experimentech CPP32 štěpil pro-IGIF na jiném místě (Asp69-Ile70) a výsledné polypeptidv měly nízkou ΙΡΝ-γ indukční aktivitu (Obr. IC). CMH-1 a granzym B ve znatelné míře pro-IGIF neštěpily.
Dohromady tyto výsledky ukazují, že v Cos buňkách i in vítr o jsou ICE a TX schopné zpracovat inaktívní prekurzor pro-IGIF v autentickém bodě přeměny za vzniku biologicky aktivní IGIE io molekuly.
Zpracování pro IGIE působením ICE napomáhá jeho exportu IGIF je produkován in vivo aktivovanému Kupffěrovými buňkami a makrofagy a je exportován ven z buňky po stimulaci endotoxinv (H. Okamura a další. Inícction and Immunity 63. 3966 (1995); II. Okamura a další.
Nátuře 378, 88 (1995). Pro zjištění, zda vnitrobuněčné štěpení pro-IGIF působením ICE napomáhá exportu IGIF z buňky, jsme použili koexpresní systém Cos buněk ( příklad 23). To je případ pro-ΙΕ-Ιβ, když je tento štěpen působením ICE. na aktivní 1E 18 (N. A, 1 honiberry a další. Nátuře 356, 768 (1992)).
2o Na obr. 2A jsou Cos buňky podrobené transfeket expresním plazmidem pro-lGIE izolovaně (pásy 2 a 6) nebo v kombinaci s expresním plazmidem kódujícím přírodní typ (pásy 3 a 7) nebo inaktivním mutantem ICE (pásy 4 a 8), které byly metabolicky označeny 'sS-mcthioninem (viz. příklad 24). Buněčný roztok (vlevo) a upravené medium (vpravo) byly imunologicky vy sráženy působením anti-IGIF antiséra. Imunologicky vy srážené proteiny byly analyzovány pomocí
SDS-PAGE a fluorografie (obr. 2A).
V upraveném médiu Cos buněk s koexpresí pro-IGIE a ICE byl nalezen 18-kDa polypeptid odpovídající velikostí maturovanému IGIE, zatímco Cos buňky s koexpresí pro-IGIF a inaktívní ho ICE mutantu (1CE-C285S) nebo pouze pro—Κί IP (-) exportovaly pouze velmi malé .mi množství pro-IGIF a žádné detekovatelné množství maturovaného IGIE. Domníváme se. že z buněk podrobených kolransfekei bylo exportováno asi 10 % aktivního maturovaného IGIE, zatímco v buňkách zůstalo více než 99 % pro-IGIF.
Dále jsme v buněčném roztoku a upraveném médiu výše uvedených buněk podrobených transi5 fěkci stanovili i přítomnost IFN-γ. který indukuje aktivitu (viz. příklad 24). IFN-γ indukující aktivitu byl nalezen v buněčném roztoku i upraveném mediu Cos buněk s koexpresí pro-lGIE a
ICE. ale nebyl nalezen u buněk s expresí pro IGIF nebo pouze ICE (obr. 2B).
Tyto výsledky naznačují, žc ICE štěpení pro-IGIE usnadňuje export aktivního IGIF z buňky.
Pro-lGlE je in vivo fyziologický substrát ICE
Pro studii role ICE v proteolytické aktivaci a exportu IGIF za fyziologických podmínek jsme studovali zpracování pro-IGIF a export IGIF z lipopolysacharidem (EPSj-aktivovanýeh Kupffe45 rových buněk získaných z Propiobacterium acnes-odvožených od přírodního typu a ICE deficitních (ICE—/—) myší (příklad 25).
Jak ukazuje obr. 3A, vykazují Kupfferovy buňky ICE—/— myší defektu i export IGIE. Roztoky Kupfferovýeh buněk přírodního typu a ICE t- myší obsahovaly podobné množství IGIF. což bylo stanoveno pomocí ELISA sady, IGIE lze ale nalézt pouze v upraveném médiu přírodního typu ale ne u ICE—/— bunčk. Proto ICE dificitni (ICE—/—) myši syntetizují pro-IGIF. ale nejsou schopné jeho exportu ja extracelulárního pro-IGIF nebo aktivní maturované formy IGIE.
Za účelem stanovení, zda ICE-deficitní (ICE-/-) myši zpracovávají vnítrobuněcný pro—Kilf\ ale nejsou schopné exportu IGIF. byla Kupfferovy buňky přírodního typu a ICE / myší metabolic- 14CZ 300171 B6 kv označeny ’’ S-methioninem a byly provedeny IGIF imunologické srážecí pokusy (u buněčného roztoku a upraveného média - viz. příklad 25). Tylo pokusy dokázaly, žc byl v přírodním typu i a ICE—/— KupfTerových buňkách přítomen nezpracovaný pro-IGIF, Aktivní 18-kDa maturovaný IGIF byl ale přítomen pouze v upraveném médiu přírodního typu a nikoliv v ICE—/— KupfTerových buňkách (obrázek 3B). To ukazuje, že pro export zpracovaného IGIF ven z buňky je nutný aktivní ICE.
Kromě toho upravené médium přírodního typu (nikoliv ale ICE-/- KupfTerovy buňky) obsahovalo aktivitu indukující lFN-γ, který nebyl přisuzován působení 1L-12, protože nebyl necitlivý na neutralizující anti-lL 12 protilátku. Nepřítomnost IGIF v upraveném médiu ICE-/- Kupfferových buněk je v souladu s objevem u Cos buněk, že zpracování pro-IGIF působením ICE je nutné pro export aktivního IGIF.
Obrázek 3C a 3D ukazují, že in vivo ICE—/— myši mají sníženou hladinu IGIF respektive IFN γ v séru. Přírodní typ (ICEi/+) a ICE—/— myši (n-3) s teplem deaktivovaným P. acnes byly naočkovány EPS (příklad 26) a pomocí ELIS A testu byly v séru očkovaných myší po třech hodinách po EPS očkování (příklad 25) stanoveny hladiny IGIF (obrázek 3C) a IFN-γ (obrázek 3D).
Séra ICE-/- myší stimulovaných P. acnes a EPS obsahovala v přítomnosti anti-lE 12 protilátky snížené hladiny IGIF (obr. 3C) a neobsahovala žádný detekovalelný IFN-γ indukující aktivitu. Snížené hladiny IGIF v séru pravděpodobně odpovídají za značné snížení hladiny IFN-γ v séru ICE—/— myší (obr. 3D). protože jsme za těchto podmínek nepozorovali žádný znatelný rozdíl v produkci IL-12 u ICE-/- myší. V souladu s touto interpretací je pozorování, že neadherentní splenoeyty přírodního typu a Κ.Έ-/- myši produkovaly při stimulaci recombinantcm aktivního IGIF in vitro podobné množství IFN-γ. Proto zhoršená produkce IFN-γ není důsledkem žádného zjevného defektu T buněk ICE-/- myší.
Dohromady tyto výsledky potvrzují kritickou roli ICE při zpracování prekurzoru IGIF a při exportu aktivního IGIF in vivo a zároveň in vitro.
Pro podrobnější objasnění vztahu mezi IFN γ hladinou v séru a ICE aktivitou in vivo. byl zjištěn časový průběh po stimulaci přírodního typu a ICE deficitních mvší působením EPS (příklad 26) (obr. 4).
Obrázek 4 ukazuje časový průběh zvýšení hladiny IFN-γ v séru u přírodního typu myší s udržovanými hladinami > 17 ng/ml v době od 9 až 18 hodin po stimulaci EPS. Jak bylo předpovězeno podle výše uvedených pokusů, hladina IFN-γ v séru byla značně nižší u ICE-/- myší. Maximálně byly za stejnou dobu dosaženy 2 ng/ml, což je asi 15 % hladiny pozorované u myší přírodního typu (obr. 4).
El zvířat byly rovněž sledovány klinické znaky otravy krve a každé 4 hodiny byla měřena přírodního typu myší a ICE—/— myší stimulovaných 30 mg/kg nebo 100 mg/kg LPS (ICE-/-pouzc) tělesná teplota. Výsledky na obr. 4 ukazují, že myši přírodního typu vykazují do hodin po stimulaci LPS značné snížení tělesné teploty (z 36 na 26 °C). U všech zvířat se projevila otrava krve a všechna uhynula do 24 až 28 hodin.
Na rozdíl od toho ICE-/- myši stimulované 30 mg/kg LPS vykázaly snížení tělesné teploty jen o 3 až 4 °C a minimální znaky obtíží s nulovou úmrtností. ICE—/— myši stimulované 100 kg/kg LPS vykázaly klinické příznaky, snížení tělesné teploty a úmrtnost podobnou přírodnímu typu myší. které byly stimulovány dávkou 30 mg/kg EPS.
ICE inhibitor AC YVAD-CHO je ekvipotentní inhibitor produkce IE-1 β a IFN—γ.
- 15 CZ 300171 36
Protože zpracování a vylučování biologicky aktivního IGIF jc ovlivněno ICE, srovnali jsme aktivitu reverzibilního ICE inhibitoru (Ac-YVAD-ClIO) vůči II-1 β a IFN γ produkci, a to zkouškou na monojaderných periferních krevních buňkách (PBMC) (příklad 27).
Výsledky na obr 5 ukazují podobnou schopnost AC-YVAD-C1 IO ICE inhibitoru snížit produkci ΙΕ— I (3 a IFN-γ v lidských PBMCS s IC?», 2.5 μΜ (u obou). Podobné výsledky byly získány při studii se splenocyly přírodního typu myší. Tyto poznatky poskytují další důkaz, že pro-IGIF je fyziologickým substrátem ICE, a naznačují, že ICE inhibitory' budou vhodné nástroje pro regulaci fyziologické hladiny IGIF a IFN—γ.
io
V souhrnu jsme zjistili, že ICE reguluje hladiny IGIF a IFN-γ in vivo a in vitro a že ICE inhibitory mohou snížit v lidských buňkách hladinu IGIF a IFN-γ. Tyto výsledky by ly popsány v přihlášce, která je v řízení; US přihláška 08/172 878. kterou zde uvádíme jako odkaz.
i? Prostředky a způsoby
Farmaceutické prostředky a způsoby v souladu s předkládaným vynálezem jsou vhodné pro in vivo regulaci hladin IE-1. IGIF a IFN -γ. Prostředky a způsoby v souladu s předkládaným vynálezem jsou tak vhodné pro léčení nebo omezení rozvoje a závažnosti příznaku vyvolaných
2o IE-1, IGIF a IFN-γ.
Sloučeniny podle vynálezu jsou výbornými ligandy pro ICE. V souladu stíní jsou tyto sloučeniny schopné zaměřit se na určité procesy související s onemocněními zprostředkovanými IL-l a inhibovat je. jako je tomu v případě konverze preknrzoru ΙΕ-Ιβ na maturovaný IE-Ιβ, a tím inhibovat rozhodující aktivitu tohoto proteinu při zánětlivých onemocněních, autoimunitních onemocněních a neurodegenerativních onemocněních. Sloučeniny podle vynálezu například inhibujt konverzi prekurzoru IL-1 β na maturovaný 1L-1 β v důsledku inhibice ICE. Jelikož má ICE zásadní význam pro produkci maturovaného IE-1, blokuje inhibice tohoto enzymu účinně zahájeni fyziologických účinků a symptomů zprostředkovaných IE-1, jako jsou záněty, pomocí .mi inhibice produkce maturovaného IE-1. Inhibieí aktivity prekurzoru IE-1 pí tedy sloučeniny podle vynálezu účinně fungují jako inhibitory 1L— 1.
Podobně sloučeniny v souladu s předkládaným vynálezem inliibují konverzi prekurzoru IGIF na aktivní formu IGIF. Proto inhibieí produkce IGIF sloučeniny v souladu s předkládaným vynále35 zem účinně působí jako inhibitory produkce IFN-γ.
Proto jedno z provedení předkládaného vynálezu poskytuje způsob omezení produkce IGIF u pacientů, který7 zahrnuje krok podání farmaceutického prostředku obsahujícího terapeuticky účinné množství inhibitoru ICE a farmaceuticky vhodného nosiče těmto pacientům.
Další provedení předkládaného vynálezu poskytuje způsob omezení produkce IFN-γ u pacientů, který zahrnuje krok podání farmaceutického prostředku obsahujícího terapeuticky účinné množství inhibitoru ICE a farmaceuticky vhodného nosiče těmto pacientům.
V dalším provedení způsoby v souladu s předkládaným vynálezem zahrnují krok podání farmaceutického prostředku obsahujícího inhibitor ICE-příbuzné proteázy, který je schopen štěpit proIGIF na aktivní IGIF, a farmaceuticky vhodný nosič. Jednou takovou ICE-příbuznou proteázou je TX, jak je popsáno výše. Tento vynález tak poskytuje způsoby a farmaceutické prostředky pro regulaci hladin IGIF a IFN—γ podáváním inhibitoru TX.
Eze nalézt i jiné ICE-příbuzné proteázy schopné zpracovat pro-IGIF na aktivní formu IGIF. Proto je zřejmé, žc inhibitory těchto enzymů odborníci v této oblasti poznají a že tyto také spadají do rámce tohoto vvnálezu.
-16CZ 300171 B6
Sloučeniny podle vynálezu lze použít běžným způsobem pro léčení onemocnění, která jsou zprostředkována IL-1, apoptózy, IGIF nebo IFN-γ. Takovéto způsoby léčení, dávkování při nich a podmínky léčení může odborník v oboru vybrat z dostupných způsobů a technik. Například lze sloučeninu podle vynálezu kombinovat s farmaceuticky přijatelnou nosnou nebo/a pomocnou látkou pro podání pacientovi postiženému onemocněním zprostředkovaným IL-1, apoptozou. IGIF nebo IFN-γ, farmaceuticky přijatelným způsobem a v množství účinném pro snížení závažnosti tohoto onemocnění.
Alternativně lze sloučeniny podle vynálezu použít v prostředcích a způsobech léčení nebo io ochrany jedinců proti onemocněním zprostředkovaných IL-1. apoptozou. IGIF nebo IFN -γ po delší časová období. Tyto sloučeniny lze použít v takových prostředcích buďto samotné nebo spolu s jinými sloučeninami podle vynálezu, způsobem, který je v souladu s běžným využitím inhibitorů ICE ve farmaceutických prostředcích. Například lze sloučeninu podle vynálezu míchat s farmaceuticky přijatelnými nosnými nebo/a pomocnými látkami běžně používanými ve vakcíI? nach a podávat v profylakticky účinných množstvích pro ochranu jedinců po delší dobu proti onemocněním zprostředkovaným II -1, apoptozou, IGIF nebo IFN-γ.
Sloučeniny podle vynálezu lze rovněž podávat společně s jiným i inhibitory ICE pro zvýšení účinku terapie nebo profylaxe proti různým onemocněním zprostředkovaným IL-1, apoptozou. IGIF nebo IFN γ.
Kromě toho lze sloučeniny podle vynálezu použít v kombinaci bud' s běžnými prolizánčtlivými činidly nebo s matricovými metaloproteázovými inhibitory; lipoxygenasovými inhibitory a antagonisty cvtokinů jiných než 1L t β.
Sloučeniny podle vynálezu lze rovněž podávat v kombinaci s imunomodulátory (například bropiriminem. protilátkou proti lidskému alfáintcrfcronu, IL-2. GM CSF, methioninenkefalinem, interferoněni alfa. diethyldithiokarbamáty; faktorem nekrosy tumorů (tumor neerosis faelor), naltrexonem a rFPO) nebo s prostaglandiny, pro prevenci nebo potírání symptomů onemocnění tn zprostředkovaných ΙΕ 1, jako je zánět.
Pokud se sloučeniny podle vynálezu podávají v kombinačních terapiích s jinými činidly; lze je pacientovi podávat postupné nebo současně. Alternativně mohou být farmaceutické nebo profylaktické prostředky podle vynálezu tvořeny kombinací inhibitoru ICE podle vynálezu a jiného terapeutického nebo profylaktiekého činidla.
farmaceutické prostředky podle vynálezu obsahují libovolné ze sloučenin podle vynálezu a jejich farmaceuticky přijatelných solí, s libovolným farmaceuticky přijatelným nosičem, pomocnou látkou nebo vehikulem. Mezi farmaceuticky přijatelné nosiče, pomocné látky a vehikula. které
4u lze použít ve farmaceutických prostředcích podle vynálezu patří, aniž by však šlo o omezující výčet, iontoměniče. alumina. aluminiumstearát, leeithín, sérové proteiny, jako je albumin lidského séra, pufrovaeí látky, jako jsou fosfáty, glycin, kyselina sorbová, sorbát draselný, směsi částečných glvceridů nasycených rostlinných mastných kyselin, voda, soli nebo elektrolyty; jako je protaminsulfál, hydrogen fosforečnan sodný; hydrogen fosforečnan draselný, chlorid sodný, soli zinku, koloidní oxid křemičitý; magncsiumtrisilikát, polyvinylpyrrolidon. látky na bázi celulózy, polyethylenglykol. natriumkarboxymethylcelulóza, polyakry laty, vosky; polyethy lenpolyoxypropylenové blokové polymery; polyethylenglykol a lanolín. K usnadnění podávání sloučenin v souladu s předkládaným vynálezem lze rovněž s výhodou použít cyklodextriny jako [3- γ-cyklodextrin nebo chemicky modifikované deriváty jako hydroxyalkylcyklodextriny. včetně
2- a 3-hydroxypropyl-5-cyklodextrinů nebo jiné solubilizované deriváty;
farmaceutické prostředky podle vynálezu lze podávat orálně, parenterálnč, inhalačním spreyem, místně, rektálně, nasálně, bukálnč. vaginálně nebo pomocí implantovaného zásobníku. Výhodné je orální podání. Farmaceutické prostředky podle vynálezu mohou obsahovat libovolné běžné
- 17CZ 300171 B6 netoxícké farmaceuticky přijatelné nosiče, pomocné látky nebo vehikula. Termín „parenterální“, jak je zde používán, zahrnuje subkutánní, intrakutánní, intravenózní. in tram usku lární, intraartiku lární, intrasynoviální, intrastemální, intrathekální. intralezionální a intrakraniální injekce nebo i n fúze.
Farmaceutické prostředky mohou byt ve formě sterilního injikovateincho přípravku, například ve formě sterilní injikovatelné vodné nebo olejové suspenze. Tuto suspenzi lze formulovat podle postupů známých v oboru za použití vhodných dispergátorů nebo smáčedel (jako je například Tween 80) a suspendujících činidel. Sterilním injikovatelným přípravkem může být rovněž stelu rilní injikovatelný roztok nebo suspenze v netoxickém parenterálně přijatelném ředidle nebo rozpouštědle. například roztok v 1.3-butandiolu. Mezi přijatelná vehikula a rozpouštědla, která lze použít, patří manuitol. voda, Ringerův roztok a isotonický roztok chloridu sodného. Kromě toho se jako rozpouštědlo nebo suspendující prostředí běžně používají sterilní nevysychavc oleje. Pro tento účel lze použít libovolný nedráždívý nevysyehavý olej včetně syntetických mono- a diglyceridú. Pro přípravu injektovatclných prostředků jsou vhodné mastné kyseliny, jako je kyselina olejová a její glyceridové deriváty, stejně jako v přírodě se vyskytující farmaceuticky přijatelné oleje, jako je olivový olej nebo ricinový olej. zejména v jejich polyoxycthylenových formách. Tyto olejové roztoky nebo suspenze mohou rovněž obsahovat alkohol s dlouhým řetězcem jako ředidlo nebo dispergátor, popsaný v Pharmacopoeia llelvetiea nebo
2n podobny alkohol.
Farmaceutické prostředky podle vynálezu mohou být orálně podávány v libovolné orálně přijatelné dávkovači formě, včetně, aniž by však šlo o omezující výčet, kapsli, tablet a vodných suspenzí a roztoků. V případě tablet pro orální použití patří mezi běžně používané nosiče laktóza a kukuřičný škrob. Typicky se přidávají rovněž lubrikační činidla, jako je stearát horečnatý. Pro orální podání ve formě kapslí patří mezi vhodná ředidla laktóza a sušený kukuřičný škrob. Pokud se orálně podávají vodné suspenze, kombinuje se účinná látka s emulgátory a suspendujícími činidly . Pokud jc to žádoucí, lze přidávat některá sladidla nebo/a chuťové přísady nebo/a barviva,
5o Farmaceutické prostředky podle vynálezu lze rovněž podávat ve formě čípků pro rektální podání, Tyto prostředky lze připravit smícháním sloučeniny podle vynálezu s vhodným nedráždivým vehikulem. které je pevné při teplotě místnosti, ale kapalné při teploté rekta a tudíž v rektu taje, čím se uvolní účinné složky. Mezi takové materiály patří, aniž by však šlo o vyčerpávající výčet, kakaové máslo, včelí vosk a pólyethy lenglykoly.
Místní podání farmaceutických prostředků podle vynálezu je zejména vhodné pokud požadované ošetření zahrnuje oblasti nebo orgány snadno dostupné místním podáním. Pro místní podání na kůži by měl být farmaceutický prostředek formulován jako vhodná mast obsahující účinné složky suspendované nebo rozpuštěné v nosiči. Mezi nosiče pro místní podání sloučenin podle vynálezu
4o patří, aniž by však šlo o vyčerpávající výčet, minerální oleje, vazelínový olej. aIbolen, propylengly kol, po lyoxyethylenpolyoxypropy lenové sloučeniny, emulgační vosk a voda. Alternativně lze farmaceutický prostředek formulovat jako vhodný lotion nebo krém obsahující účinnou sloučeninu suspendovanou nebo rozpuštěnou v nosiči. Mezi vhodné nosiče patří, aniž by však šlo o vyčerpávající výčet, minerální oleje, sorbitan-monostearát, polysorbat 60. cetylesterový vosk, i? cetearvlalkohol, 2-oktyldodekanol, benzy(alkohol a voda. Farmaceutické prostředky podle vynálezu lze rovněž místně aplikovat na spodní část intestinálního traktu pomocí rektálních čípků nebo ve vhodném klystýru. Vynález rovněž zahrnuje místně transdennální náplasti.
Farmaceutické prostředky podle vynálezu lze podávat nasálním aerosolem nebo inhalací. Takovéto prostředky se připraví pomocí způsobů dobře známých v oboru vytváření farmaceutických prostředků a lze je připravit jako roztoky ve fyziologickém roztoku, za použití benzyl alkoholu nebo jiných vhodných konzervačních přísad, látek podporujících absorpci pro zvýšení biologické dostupnosti, fluorovaných uhlovodíků nebo/a jiných solubilizačních nebo dispergačních činidel známých v oboru.
Při léčení a prevenci jsou vhodné dávky 0,01 až 100 mg/kg tělesné hmotnosti a den. s výhodou 1 až 50 mg/kg tělesné hmotnosti a den aktivní složky, a to chorob spojených s IL 1, apoptózou, KjIE a lLN-γ, včetně zánětu, autoimunních poruch, kostních chorob, proliferativních chorob, infekčních chorob, degenerativních chorob, nekrotickýeh chorob, osteoartritidy. akutní pankrea5 titidy, chronické pankreaíitidy. astmatu, syndrom respirační úzkosti, glomeralonefrítida, revmatická artritida, systemická lupus erythematosa, skleroderma, chronická thyroiditida. Graveova choroba, autoimunní gastritida, na insulinu závislá diabetes mellitus (Type I). autoimunní hcniolytická anemic, autoimunní neutropenie, thrombocytopenie. chronická aktivní hepatitida. myasthenia gravis, zánčtlivé choroby vnitřností. Crohnova choroba, psoriasis, choroby transit) plantát vs. hostitel, osteoporosa, vícenásobné myeloma-kostní choroby, akutní myelogenní leukémie. chronická myelogenní leukemie. metastatické melanomy, Kaposiho sarkom, vícenásobné myeloma sepse, seplieký šok, Shigcllosa, Alzheimerova choroba. Parkinsonova choroba, mozková ischemie. ischemie myokardu, míšní mušku lamí atrofie, roztroušená skleróza, s AIDS spojená encefalitida, s lil V spojená encefalitida, stárnutí, alopecie a neurologické poškození následkem úderu. Farmaceutické prostředky v souladu s předkládaným vynálezem se typicky podávají 1 až 5krát denně nebo alternativně eontinuální infuzí. Takové podávání lze použít jako chronickou nebo akutní léčbu. Množství aktivní složky kombinované s nosičem za vzniku jednotkové dávkové formy se liší podle léčeného pacienta a konkrétního způsobu podávání, fypický prostředek obsahuje 5 až 95 % hmotnostních aktivní sloučeniny, s výhodou 20 až 80 % hmotnostních aktivní
2o sloučeniny.
Po zlepšení pacientova stavu lze v případě potřeby podávat udržovací dávku sloučeniny, prostředku nebo kombinace v souladu s předkládaným vynálezem. Následně lze dávku nebo frekvenci podávání nebo oboje snížit, a to jako funkci symptomů, na úroveň při které dochází k trvání zlepšení stavu, nebo když byly symptomy omezeny na požadovanou úroveň, lze léčení ukončit. Pacienti ale mohou dlouhodobě vyžadovat občasné léčení (při opětovném výskytu příznaků choroby).
Odborníkům v této oblasti je zřejmé, že mohou být žádoucí i nižší nebo vyšší dávky než jsou uvedené výše. Specifické dávkování a léčba u každého jednotlivého pacienta závisí na různých faktorech včetně aktivity konkrétní použité sloučeniny, věku, tělesné hmotnosti, celkovém zdravotním stavu, pohlaví, dietě, době podávání, frekvenci vyměšování, kombinaci léků, závažnosti a průběhu choroby a pacientových dispozicích k chorobě a úsudku ošetřujícího lékaře.
Choroby související s II-1. které lze léčit nebo preventivně ovlivnit sloučeninami v souladu s předkládaným vynálezem jsou (ale ne jen) zánětlivá onemocnění, autoimunní poruchy, zhoubné kostní choroby, prolifěrativní choroby, infekční choroby a degenerativní choroby. Choroby spojené s apoptózou. které lze léčit nebo preventivně ovlivnit sloučeninami v souladu s předkládaným vynálezem jsou degenerativní choroby.
Zánětlivá onemocnění, která lze léčit nebo preventivně ovlivnit sloučeninami v souladu s předkládaným vynálezem jsou (ale ne jen) osteoarthritida, akutní pankreatitida. chronická pankreatitida. astma a syndrom respirační úzkosti dospělých, zejména osteoarthritida nebo akutní pankreatitida.
Autoimunní poruchy, které lze léčit nebo preventivně ovlivnit jsou (ale nejen) glomeraloncfritida, revmatická artritida, systemická iupus erythematosa, seieroderma. chronická thyroiditida. Gravesova choroba, autoimunní gastritida, na insulinu závislá diabetes mellitus (typ I), autoimunní hemolytic anemia, autoimunní neutropenie, thrombocytopenie. chronická aktivní hepati5i) tida. myasthenia gravis, roztroušená skleróza, zánětlivá onemocnění vnitřností, Crohnova choroba. psoriasa a transplantát vs. hostitel reakce. Autoimunní choroby jsou v této souvislosti zejména revmatická arthritida, zánětlivá onemocnění vnitřností. Crohnova choroba nebo psoriasa.
Zhoubné kostní choroby, kterc lze léčit nebo preventivně ovlivnit jsou (ale nejen) osteoporosa a násobný myclotn.
- 19C7. 30U171 B6
Proliterativní choroby, které lze léčit nebo preventivně ovlivnit jsou (ale ne jen) akutní myelogenní leukémie, chronická myelogenní leukemie, mctastatický melanom, Kaposiho sarkom a násobný myelom.
Infekční choroby, které lze léčit nebo preventivné ovlivnit jsou (ale ne jen) sepse, septieký šok a Shigcllosa.
Degenerativní nebo nekrotické choroby, které lze léčit nebo preventivně ovlivnit sloučeninami κι v souladu s předkládaným vynálezem jsou (ale ne jen) Alzheimerova choroba, Parkinsonova choroba, mozková ischemie a ischemie myokardu a z nich zejména degeneralivní Alzheimerova choroba.
S apoptózou související degenerativní choroby, které lze léčit nebo preventivně ovlivnit sloučc15 ninaini v souladu s předkládaným vynálezem jsou (ale ne jen) Alzheimerova choroba, Parkinsonova choroba, mozková ischemie, ischemie myokardu, míšní maskulární atrofie. roztroušená skleróza, s AIDS spojená encefalitida, s HIV spojená encefalitida, stárnutí, alopecie a neurologické poškození následkem úrazu.
2o Způsoby v souladu s předkládaným vynálezem lze použít pro léčení nebo omezení rozvoje, závažnosti nebo účinků s IGIF nebo IFN—γ spojených zánětů, autoimunních. infekčních, proliferativních. zhoubných kostních, nekrotických a degenerativních chorob, poruch a Účinků, které se vyznačují zvýšením produkce IGIF nebo IFN γ.
Příklady takových zánětů zahrnují (ale nejen) choroby jako jsou osteoarthritida. akutní pankrcatitida, chronická pankreatitida, astma, revmatická artritida, záněty vnitřností, Crohnova choroba, hnisavá kolitida, mozková ischemie. ischemie myokardu a syndrom respirační úzkosti dospělých. Zejména se ale jedná o revmatickou arthritída, hnisavou kol it idu. C roh novu chorobu, hepatitidu a syndrom respirační úzkosti dospělých.
Příklady takových infekčních chorob jsou (ale nejen) infekční hepalitida, sepse, septieký šok a Shigellosa.
Příklady takových autoimunních chorob jsou (ale ne jen) glomeruloneíritida. systémická lupus erytheniatosa. skleroderma, chronická thyroidilida. Gravesova choroba, auto imunní gastritida, na insulinu závislá diabetes meilitus (typ 1), juvenilní diabetes, autoimunní hcmolytické anemia, autoimunní neutropenie. trombocytopenie, myaslhenia, gravis. roztroušená skleróza, psortasa, liehenplanus. reakce transplantát vs. hostitel, akutní dermatomyositida, ekzémy, primární cirhosa, hepatilida, uveitida. Bchcctova choroba, akutní dermatomyositida, atopické kožní choroby, apla4o zic pure red cell, aplastická anemie, amyolrofická laterálni skleróza a nefrolický syndrom.
Z autoimunních chorob se jedná zejména o glomeruloncfritidu, na insulinu závislý diabetes meilitus (typ 1), juvenilní diabetes, psoriasu, transplantát vs. hostitel reakci včetně odmítnutí transplantátu a hepatitida,
Příklady zhoubných kostních chorob jsou (ale nejen) osleoporosa a násobný kostní myelom.
Příklady proliferativních chorob jsou (ale nejen) akutní myelogenní leukemie. chronická myelogenní leukemie, melastatieký melanom, Kaposiho sarkom a násobný myelom.
Příklady ncurodegenerativních chorob jsou (ale ne jen Alzheimerova choroba, Parkinsonova choroba a Huntingtonova choroba.
-20CZ 300171 Bó
Ačkoli se vynález zaměřuje na použití zde popsaných sloučenin na prevenci a léčení onemocnění zprostředkovaných IL-I, apoptózy, IGIF a IFN-γ, lze sloučeniny podle vynálezu použít rovněž jako inhibiční činidla pro další cystě i nově proteázy.
Sloučeniny podle vynálezu jsou rovněž vhodné jako komerční reakční činidla, která se účinně vážou na ICE nebo jiné cystě i nové proteázy. Jako komerční reakční činidla lze sloučeniny podle vynálezu a jejich deriváty použít pro blokování proteolýzy cílového peplidu nebo z nich lze tvořit deriváty vázající se na stabilní pryskyřici jako i mobilizovaný substrát pro afinitní chromatografle. l ato a další použití, která charakterizují komerční inhibitory cysteinových proteáz, jsou odborníio kovi v oboru zřejmá.
Postup přípravy N-acylaminosloučcnin
ICE inhibitor) v souladu s předkládaným vynálezem lze syntetizovat pomocí běžných technik, is S výhodou se tyto sloučeniny obyčejně připravují ze snadno dostupných výchozích látek.
Sloučeniny v souladu s předkládaným vynálezem patří mezi nesnadněji připravítelné ICE inhibitory. Výše popsané ICE inhibitory často obsahují čtyři nebo více ehirálníeh center a řadu peptidiekveh spojení. Relativní snadnost, se kterou lze sloučeniny v souladu s předkládaným vynálezu zem syntetizovat, znamená velkou výhodu při jejich produkci ve velkých objemech.
Sloučeniny v souladu s předkládaným vynálezem lze například dále popsanými způsoby, Zkušený praktik ale ví, že tyto postupy nejsou jedinou cestou přípravy, kterou lze zde popsaně a nárokované sloučeniny syntetizovat. Odborníkům jsou další způsoby zřejmé. Kromě toho lze řadu zde popsaných syntetických kroků provést v jiném pořadí rovněž za získání požadovaných sloučenin.
Předkládaný vynález také poskytuje výhodný způsob přípravy sloučenin v souladu s předkládaným vynálezem. Proto je v jiném provedení poskytnut způsob přípravy N-acylamino30 sloučenin, který zahrnuje následující kroky:
a) smíchání karboxylové kyseliny s N-alloe-chránčným aminem v přítomností inertního rozpouštědla. trifenyIfosfinu a pohlcovače nukleofilů a tetrakis Irifenylfosfinpalladia (0) při teplotě místnosti v inertní atmosféře η S
b) ke směsi z bodu a) se přidá směs 1IOBT a EDC: a volitelné zahrnuje ještě další krok:
io c) hydrolýza směsi z bodu b) v přítomnosti roztoku obsahujícího kyselinu a 1EO, přičemž se směs z bodu b) před hydrolýzou volitelně zahustí.
Inertní rozpouštědlo je s výhodou dichlormethan. dimethylformamid nebo směs dichlormcthanu a dimethylformamidu. Výhodný pohlcovač nukleofilů je dimedon, morfolin, trimetalsilyldi15 methylamin nebo kyselina dimelhylbarbiturová. Výhodnější pohlcovače nukleofilů jsou trimethylsilyldiincthylamin nebo kyselina dimethylbarbiturová.
Roztok s výhodou obsahuje 1 až 90 % hmotnostních kyseliny triťluoroctové. výhodněji 20 až 50 % hmotnostních kyseliny trifiuoroctovč.
Alternativně roztok obsahuje 0,1 až 30 % hmotnostních kyseliny chlorovodíkové, výhodněji 5 až 15 % hmotnostních kyseliny chlorovodíkové.
-21 CZ 30U171 B6
Ve výše uvedeném postupu je výhodněji inertní rozpouštědlo dichlorniethan. dimethylformámid nebo směs dichlormethanu a dimethylformamidu a pohlcovačem nukleofilů je dimedon. morfolin, trimethylsilyIdiinethylamin nebo dimethylbarbiturová kyselina.
Vc výše uvedeném postupu je nejvýhodněji inertní rozpouštědlo dichlorniethan. dimethylformamid nebo směs dichlormethanu a pohlcovačem nukleofilu je trimethylsilyIdinicthylamin nebo dimethylbarbiturová kyselina.
Za účelem lepšího porozumění vynálezu jsou připojeny následující příklady. Příklady jsou přito pojeny pouze za účelem ilustrace ale v žádném případě ne za účelem vymezení rozsahu vynálezu.
Příklady týkající se sloučenin, které netvoří součást vynálezu, slouží pro srovnání.
Příklady provedení vynálezu
Příklad 1
Byly získány inhibiční konstanty (Kt) a hodnoty ICjo pro několik sloučenin podle vynálezu za ?o použití tří níže popsaných metod:
1. Enzymový test se substrátem viditelným v UV-svčtle
Tento test se provádí za použití sukcinyl-Tyr-Val-Ala Asp-p-nitroanilidového substrátu. Syn25 lezu analogických substrátu popsal L. A, Reiter (lnt. J. Peptide Protein Res. 43. 87 96 (1994)). Testovaná směs obsahuje:
μΙ pufru (10 mM Tris, 1 mM Dl i (ditliioíhrcitolu), 0,1 % CHAPS (3-[(3-eholamidopropyl)dimethylanionio]-l-propan-sulfonátu), pil 8,1), μΐ ICE (konečná koncentrace 50 nM, pro dosažení rychlosti zhruba 1 mOD/min*).
μΐ směsi dimethylsulfoxidu a inhibitoru,
20 μΙ 400μΜ substrátu (konečná koncentrace 80 μΜ)
100 μΐ - celkový reakční objem * mOD/min představují milíjcdnotky optické hustotv/min, kde OD je standardní spektrofotomet4o rická zkratka pro jednotku optické hustoty při konkrétní vlnové délce.
Vizuálně vyhodnocovaný test ICF: se provádí na mikrotitračni desce s 96 jamkami. Puťr, ICE a dimethylsulfoxid (pokud je přítomen inhibitor) se dají do jamek v uvedeném pořadí. Složky se nechají ínkubovat při teplotě místnosti po dobu 15 minut, počítáno od doby. kdy jsou všechny složky přítomné ve všech jamkách. Inkubace se provádí při teplotě 37 °C. Po 15 minutách inkubace se do jamek přímo přidá substrát a reakce se monitoruje pomocí následujícího uvolňování ehromoforu (pNA) při 405 až 603 nm při teplotě 37 °C po dobu 20 minut. Provede se lineární vyhodnocení údajů a vypočítá se rychlost v mOD/min. Dimethylsulfoxid je přítomen pouze tři experimentech za použití inhibitorů, při ostatních experimentech se na doplnění objemu na
100 μΙ použije pufr.
2. Enzymový test s fiuorescentním substrátem
- 9? CZ 30U171 B6
Tento test se provádí v podstatě jak popsali Thomberry a kol. (Nátuře 356: 768 - 774 (1992)). za použití substrátu 17 popsaného ve výše uvedeném článku. Substrátem je acetyl-Tyr-Val-AlaAsp-amino-4-methylkumarin (AMC). Smíchají se následující složky:
65 μΙ pufru (10 mM Iris. 1 mM DTT (dithiothreitolu), OJ % CTI A PS (3-((3 eholamidopropyl)dimethylamonioj-l-propansulfonátu), pil 8.1).
μΙ ICE (konečná koncentrace 2 až 10 nM), io 5 μΐ roztoku inhibitoru v dimethylsulfoxidu, a μΙ 150μΜ substrátu (konečná koncentrace 30 μΜ)
100 μΐ = celkový reakční objem
Test se provádí na mikrotitrační desce s 96 jamkami. Do jamek se dá pufr a ICE. Složky se nechají inkubovat při teplotě 37 °C po dobu 15 minut v desce s řízenou teplotou. Po 15 minutách inkubace sc zahájí reakce přidáním substrátu přímo do jamek a reakce se monitoruje při teplotě 37 °C po dobu 30 minut pomocí sledování uvolňování AMC-íluoroforu za použití excitační
2o vlnové délky 380 nm a emisní vlnové délky 640 nm. Provede se lineární vyhodnocení údajů pro každou jamku a stanoví se rychlost v jednotkách fluorescence za sekundu.
Pro stanovení enzymových inhibičních konstant (K.) nebo způsobu inhibiee (kompetitivní. akompetitivní, ne kompetitivní) se údaje o rychlosti stanovené v enzymových testech s různými koncentracemi inhibitoru počítačově zpracují standardními rovnicemi enzymové kinetiky (viz. 1. H. Segel, Enzyme Kinetics, WileyMnterscience, 1975).
Stanovení rychlostních konstant druhého řádu pro irreverzibilní inhibitory bylo provedeno vynesením fluorescenčních údajů proti časovým údajům za vyvinutí Morrisonovy rovnice. Morrison,
J. f., Mol. Cell. Biophys. 2, 347 368 (1985). Thomberry a další publikovali popis těchto metod měření rychlostních konstant pro irreverzibilní inhibitory ICE. Thomberry. N. A. a 9.209další. Biochemistry 33, 3923-3940 (1994). Pro sloučeniny, u kterých nelze kineticky sledovat tvorbu přednostního komplexu, se rychlostní konstanty druhého řádu (kH,aci) odvodí přímo ze sklonu linie k()l1s vs. (1J. U sloučenin, u kterých lze detekovat tvorbu přednostního komplexu s enzymem, se rovnici kinetiky nasycení upraví hyperbola ktlb< vs. [1], čímž se nejdříve generují K, a k'. Rychlostní konstanta druhého řádu je pak dána podílem k7K(.
3. PBMC Buněčný test
Test IL-Ιβ se smíšenou populací lidských periferních krevních monojaderných buněk (pcripheral blood mononuclcar eells, PBMC) nebo obohacenými adherentními nionojadernynii buňkami Upravil (processing) pre-IL-1 β působením ICE lze měřit v buněčné kultuře za použití řady zdrojů buněk. Lidské PBMC získané ze zdravých donorů poskytují smíšenou populaci subtypů lymfocytů a mononukleárních buněk, která produkuje řadu ínterleukinů a cytokinů jako odpověd1 na mnoho druhů fyziologických stimulací. Adherentní mononukfcární buňky / PBMC jsou obohaceným zdrojem normálních monocytú pro selektivní studie produkce cytokinů aktivovanými buňkami.
Postup experimentu:
Připraví se počáteční série ředění testované sloučeniny v dimethylsulfoxidu nebo ethanolu s následujícím naředěním do média RPMl-10% PBS (obsahujícího 2 mM L-gl utam inu, lOmMUEPES (4-(2-hydroxyethyl)-l-piperazinethansulfonové kyseliny). 50 U a 50 gg/ml pen/strep) pro dosažení koncentrace léčiv, která je čtyřnásobkem konečné testované koncentrace,
-23CZ 300171 B6 tedy koncentrace 0,4 % dimethylsulfoxidu nebo 0,4 % ethanolu. Konečná koncentrace dimethylsutfoxidu činí 0,1 % pro všechna ředění léčiv. Pro počáteční orientační testování sloučeniny se obecně použije titrace koncentrace, která vymazuje zjevnou K, pro testovanou sloučeninu stanovenou v testu inhibiee ICE.
S
Obecně se testuje 5 až 6 ředění sloučeniny a celulární část testu se provádí ve dvou opakováních, se dvojím stanovením ELISA-testem na každém supernatantu buněčné kultury.
Izolace PBMC a test IL-1: ío
Vysrážené buňky (buffý coat cclls) izolované ze zhruba 0,5 1 lidské krve (ze které se získá 40 až 45 ml konečného objemu plazmy + buňky) se naředí médiem na 80 ml a separacní kyvety LeukoPREP (Becton Dickinson) se naplní 10 ml suspenze buněk. Po 15 minutách odstřeďováni při 1500 až 1800 g se vrstva plazmy a média odsaje a vrstva mononukleárníeh buněk se poté izoluje Pasteurovou pipetou a přenese se do kónické odstřed ovací kyvety (Corning) o objemu 15 ml. Přidá se médium pro upravení objemu na 15 ml, buňky se jemně promíchají převrácením kyvety a provádí se odstředění při 300 g po dobu 15 minut. Peleta PBMC se resuspenduje v malém objemu média, buňky se spočítají a koncentrace se upraví na 6 x 10° buněk/ml.
2(i Pro buněčný test se do každé jamky desky pro tkáňovou kultivaci s 24 jamkami s rovným dnem (Corning) vnese 1,0 ml buněčné suspenze, 0.5 ml ředění testované sloučeniny a 0,5 ml roztoku EPS (Sigma č. L-3012, roztok o koncentraci 20 ng/ml připravený v kompletním médiu RPMI. konečná koncentrace LPS činí 5 ng/ml). Přidáváním 0.5 ml testované sloučeniny a EPS se obsahy jamek obvykle dostatečně promíchají. Pro každý experiment se provádí tři kontroly, a to bud' kontrola se samotným LPS, kontrola s rozpouštědlem nebo/a kontrola s dalším médiem pro úpravu konečného kultivačního objemu na 2,0 ml. Buněčné kultury' se inkubují po dobu 16 až 18 hodin při teplotě 37 °C za přítomnosti 5 % oxidu uhličitého.
Na konci inkubační doby se buňky izolují a přenesou do kónických od středo vacích kyvet o objemu 15 ml. Po odstředění po dobu 10 minut při 200 g se supernatanty izolují a přenesou do Eppendorfových zkumavek. Buněčné pelety lze využít pro biochemické zhodnocení obsahu pre-II.-Ιβ nebo/a maturovaného IL-Ιβ v cytosolových extraktech pomocí „western bloltingiC nebo ELISA-testu s antisérem specifickým pro pre-IL- 1β.
Izolace adhcrentních mononukleárníeh buněk:
Jak je popsáno výše, izolují a preparují se PBMC. Do jamek se vnese nejprve 1.0 ml média a poté 0,5 ml suspenze PBMC, Po jednohodinové inkubaci se deskami mírně zatřese a neadherentní buňky se z každé jamky odsají. Jamky se poté opatrně promyjí třikrát 1.0 ml média a nakonec se resuspendují v 1,0 ml média. Obohacením adherentníeh buněk se obecně získá 2.5 až 3,0 x !0 buněk na jamku. Přidání testovaných sloučenin a EPS, podmínky inkubace buněk a zpracování supernatantu se provádí jak je popsáno výše.
ELISA-test:
Pro měření maturované II-1 β se použijí soupravy Quantikine (R&D Systems). Testy se provádějí podle pokynů výrobce. V pozitivních kontrolách jak s PBMC tak s adherenzními mononukleárními buňkami jsou pozorovány hladiny maturovaného IL-1 β přibližně 1 až 3 ng/ml. Provedou se ELISA-testy na ředěních 1 : 5, 1 : 10 a I : 20 supernatantú z EPS-požitivníeh kontrol pro výběr optimálního ředění pro supernatanty v testovaném souboru.
Inhibiční účinnost sloučenin může být reprezentována hodnotou ICN». což je koncentrace inhibitoru, při které je v supernatantu detekováno 50 % maturovaného II -I β ve srovnání s pozitivními kontrolami.
- 24 CZ 300171 B6
Zkušený odborník si jc vědom, že hodnoty získané zde popsanými buněčnými testy mohou být závislé na řadě faktorů, jako je typ buněk, jejich zdroj, podmínky růstu a podobně.
Příklad 2
Farmakokinetieké studie na myších
Pcptidové ICE inhibitory jsou rychle odbourávány s rychlostí odbourání větší než 100 ml/min/kg. io Sloučeniny s nižší rychlostí odbourání mají vůči peptidovým ICE inhibitorům lepší farmakokínctíckc vlastnosti.
S použitím níže popsaných metod jsme získali pro několik sloučenin v souladu s předkládaným vynálezem rychlost odbourání u myší (ml/min/kg);
Příprava vzorku a dávkování
Sloučeniny se rozpustí ve sterilním roztoku TRIS (0.02 M nebo 0.05 M) při koncentraci 2,5 mg/ml. V případě potřeby zajištění úplného rozpuštění se vzorek nejdříve rozpustí v malém množství dimethylacetamidu (maximálně 5 % celkového objemu roztoku), a pak se rozpustí v roztoku I RIS. Roztok léku se podává CD-I myším (Charles River Laboratories - 26 až 31 g) do ocasní žíly v množství 10 ml/kg, což odpovídá dávce 25 mg/kg. Dávkování se myším podává ve skupinách po pěti pro každý časový interval (obecně od 2 minut do 2 hodin). Zvířata se pak uvedou po příslušné době do anestéze za použití halotanu, a pak se jim odeberou vzorky krve do ?5 oddělených hepari nových zkumavek oddělením krční žíly. Vzorky krve se ochladí na 0 °C, a pak se oddělí plazma, která se před testem skladuje při -20 °C.
Biologický test to Stanovení léku ve vzorcích plazmy se provede pomocí HPLC s UV nebo MS (ESP) detekcí. Použije se ehromalografíe na reverzní fázi za použití různých fází od Cl do Cl8 s eluentem složeným ze směsi vodného pufru a acetonitrilu za isokratičkých podmínek.
Kvantifikace se provede pomocí metody externího standardu s kalibrační křivkou vynesenou pomocí analýzy plazmy s roztokem látky za získání koncentrací v rozsahu 0,5 až 50 gg/ml. Před analýzou se vzorky plazmy zbaví proleinú přidáním acetonitrilu, methanolu, trichloroctové kyseliny nebo kyseliny chloristé a následným odstředěním při 10 000 g po dobu 10 minut. Analyzují se vzorky o objemu 20 μΐ až 50 μΙ.
to Sloučenina 214e
Dá v ková n í a v zor ko v án i
Látka se rozpustí ve sterilním 0,02 M roztoku Tris za získání roztoku s koncentrací 2.5 mg/ml, který se podá 11 skupinám po 5 samcích CD-I myší do ocasní žíly při dávce 25 mg/kg. Po 2, 5, 10, 15, 20. 30, 45, 60, 90 a 120 minutách se uvede skupina myší do anestéze a krev se odebere do heparinovaných zkumavek. Po oddělení se plazma skladuje do začátku testu při 20 °C'.
Test
Alikvotní podíly plazmy (150 μΙ) se smísí s 5% kyselinou chlorislou (5 μΙ). a pak se promíchá kroužením a před odstředěním ponechá stát 90 minut. Výsledný roztok se oddělí a 20 μΐ se nastříkne na HPLC.
- 25 CZ 30U17I B6
HPLC podmínky Kolona Mobilní fáze
Průtok Detekce Retenční čas
100 x 4,6 mm 0.1 m Tris pH 7,5 aceton ítril 1 ml/min U V při 210 nm 3.4 minuty
Kromasil KR 100 5C4 86%
14%
Výsledky analýz ukázaly snížení střední hladiny látky v plazme od 70 pg/ml ve 2 minutách do io <2 gg/ml po 90 a 120 minutách.
Sloučenina 217e
Dávkování a vzorkování
Látka se rozpustí ve sterilním 0,02 M roztoku I ris za získání roztoku s koncentrací 2.5 mg/nil, který se podá 11 skupinám po 5 samcích CD-I myší do ocasní žíly při dávce 25 mg/kg. Po 2. 5, 10, 15. 20. 30, 45, 60. 90 a 120 minutách se uvede skupina myší do anestéze a krev se odebere do heparinovaných zkumavek. Po oddělení se plazma skladuje do začátku testu při -20 ŮC.
fest
Alikvotní podíly plazmy (100 μΐ) se zředí aeetonitrilcm (ΙΟΟμΙ), a pak se 20 sekund před 10 minutovým odstředěním promíchají kroužením. Výsledný roztok se oddělí a 20 μΐ se nastřík25 ne na HPLC.
HPLC podmínky
Kolona:
5i) Mobilní fáze
Průtok:
Detekce:
Retenční čas
150x4.6 mm Zorbax SBC8
0.05 M fosfátový pufr 72 % pH 7,1 acetonitril 28 %
1.4 ml/min UVpři210nm
3,0 a 3,6 minuty (diastereomery )
Výsledky analýz ukázaly snížení střední hladiny látky v plazmě od 55 pg/ml ve 2 minutách do < 2 μg/ml po 60 a 120 minutách.
Příklad 3
Peptidové ICL inhibitory jsou rychle odbourávány s rychlostí odbourání větší než 100 ml/min/kg. Sloučeniny s nižší rychlostí odbourání mají vůči peptidovým ICL inhibitorům lepší farmako4? kinetické vlastnosti.
S použitím níže popsaných metod jsme získali pro několik sloučenin v souladu s předkládaným vynálezem rychlost odbourání u krys (ml/min/kg):
In vivo test odbourání u krys
Jeden den před farmakokineliekou studií byla za anestéze provedena kanýdače krční cévy a tepny. M. J. Přec. R. A, Jaffee; „Cannulation techniques for the collection blood a other hodily fluids“;
-26 CZ 300171 B6
Animal Models; 480- 495; N. J. Alexaer, Ed.; Academie Press; (1978). Látka (10 mg/ml) se podá krční cévou v nosiči, který obvykle tvoří směs propylenglykol/salin v poměru 1:1 obsahující 100 mM hydrogenuhličitanu sodného. Zvířatům se podá 10 až 20 mg látky/kg a krevní vzorky se odeberou po 0, 2, 5, 7, 10, 15, 20, 30, 60, a 90 minutách od podání karotidovým katetrem. Krev se odstředí na plazmu a až do analýzy se skladuje při -20 °C. Farma kok i n etická analýza se provede nelineární regresí za použití standardního softwaru - například RStrip (MicroMath Software, UT) a/nebo Pcnonlin (SCI Software, NC).
Analytika:
io
Krysí plazma se extrahuje ekvivalentním objemem acctonitrilu (obsahujícím OJ % TFA). Vzorky se pak odstředí při asi 1000 g a roztok se analyzuje pomocí HPLC, Typický postup testu jc popsán níže.
200 μΙ plazmy se vysráží 200 μΐ 0,1% trifluoroctovc kyseliny (TFA) v acetonitrilu a 10 μΐ 50% vodného roztoku chloridu zinečnatého, pak se promíchá a pak se odstředí při lOOOg. Pak se oddělí roztok nad usazeninou, který sc analyzuje HPLC.
IIPLC postup:
Kolona: Zorbax SB-CN (4,6 x 150 mm, velikost částic 5μ)
teplota: 50 °C
Průtok; 1,0 ml/min
objem nástřiku: 75 μΙ
mobilní fáze: A-0.1% TFA ve vodě a B= 100% aeetonitril
použitý gradient: 100 % A až 30 % A do 15,5 min 0 % A po 16 min 100 % A po 19,2 min
Vlnová délka: 214 nm
Standardní křivka byla měřena při koncentracích 20, 10, 5. 2 a I pg/ml.
Příklad 4
Test produkce IL—1 β úplné krve
Pro několik sloučenin v souladu s předkládaným vynálezem jsme níže popsanou metodou získali hodnoty IC?»:
Účel:
Test úplné krve je jednoduchá metoda měření produkce IL—l β (nebo jiných cytokinů) a aktivity potenciálních inhibitorů, Komplexnost testovaného systému s lymfatickými i zánellivými buň15 kam i, spektrem plazmových proteinu a červených krvinek je ideální in vitro model lidských in vivo fyziologických podmínek.
Materiál:
nepyrogenní stříkačky (30 ml)
5o nepyrogenní sterilní vakuové zkumavky obsahující lyofilizovaný Na2EDTA (4,5 mg/10 ml) vzorek úplné lidské krve (30-50 ml)
F5 ml Eppendorfovy zkumavky zásobní testovací roztoky (25 mM v DMSO nebo jiném rozpouštědle)
-27CZ 300171 B6 roztok chloridu sodného zbavený endotoxinů (0,9 %) zásobní roztok HBSS lipolysacharidu (Sigma, L-3012) s koncentrací 1 mg/ml v HBSS IL-1 β ELISA sada (R & D Systems; 4 DLB50)
TNEa ELISA sada (R & D Systems; DTASO) vodní lázeň nebo inkubátor
Experimentální postup testu úplné krve;
Inkubátor nebo vodní lázeň se nastaví na 30 °C. Do 1,5 ml Eppendorfových zkumavek se odpiio petují 0,25 ml alikvoty krve. Poznámka: vzorky úplné krve je důležité ve zkumavce po každých dvou alikvotech převrátit. Rozdíly v replikátoreeh mohou vést k tvorbě usazeniny buněk a nejsou stejnoměrně suspendovány, Rozdíly mezi alikvoty replikátu lze také minimalizovat použitím pipety s pozitivním výtlakem, i? Sériovým zředěním se připraví roztoky látky ve sterilním nepyrogenním šalinu. Pro předběžné testy sloučeniny se obecně použije série roztoků, která odpovídá K, testované sloučeniny, která byla stanovena ICE inhibíěním testem, Pro silně hydrofobní sloučeniny se připraví roztoky v čerstvé plazmě získané od stejného dárce krve nebo v PBS obsahujícím pro zvýšení rozpustnosti 5 % DMSO.
Do vzorku se přidá 25 μΙ roztoku testované sloučeniny nebo kontrolního roztoku nosiče a vzorek se opatrně promíchá. Pak se přidá 5.0 μΙ roztoku LPS (250 ng/ml, čerstvě připravený zásobní roztok: konečná koncentrace LPS 5,0 ng/ml) a opět se promíchá. Zkumavky se inkubuji při 30 °C na vodní lázni po dobu 16 až 18 hodin za občasného promíchání. Alternativně lze zkumavky umístit do rotoru nastaveného na 4 ot/min (po stejnou dobu inkubace). Test se provádí dvojitě nebo trojitě s následujícími kontrolními vzorky; negativní kontrola - bez EPS; pozitivní kontrola - bez testovaného inhibitoru; kontrolní test nosiče - nej vyšší koncentrace DMSO nebo jiného roztoku použitého při pokusu. Do všech kontrolních zkumavek se přidá další šalin, aby byly normalizovány objemy kontrolního a testovaného vzorku úplné krve.
Po inkubaci se vzorky úplné krve odstředí 10 minut při 2000 ot/min v mikrofuze. plazma se převede do nové mikrofugační zkumavky a opět odstředí při 1000 g za sbalení zbytku sraženiny. Vzorky plazmy lze před ELISA testem hladiny cytokinu skladovat zmražené při -70 °C.
EElSAtest:
Pro stanovení IL-l β a TNE-A jsme použili R & D Systems (614 MeKinley Plače N. E. Minncapolis, MN 55413) Quantikin sadu. Testy byly provedeny podle pokynů výrobce. U jednotlivých vzorků byly u pozitivních kontrol zjištěny hladiny ΙΕ-1 β v rozmezí 1 až 5 ng/ml. Při našich tes40 těch bylo, aby padly výsledky ELISA experimentů do lineární oblasti ELISA standardních křivek, dostatečné zředění plazmy 1:200 pro všechny vzorky. Pokud při testu úplné krve zjistíte odchylkv, může být nezbytné standardní zředěn optimalizovat. Nerad, J. L. a další. J. Leukocvte Biol. 5T 687-682 (1992),
Příklad 5
Inhibice ICE homologů
5o 1. Izolace ICE homologů
Exprese TX v buňkách hmyzu za použití expresního systému baculoviru. Subklonovali jsme Tx cDNA (Eaucheu a další, supra 1995) od modifikovaného pVLl393 transfer vektoru a do buněk
-28CZ 300171 B6 hmyzu jsme zavedli výsledný plazmíd kotransfekci (pVL1393/TX) pomocí virové DNA a identifikovali jsme rekombinantní baculovirus. Po vytvoření zásobního roztoku viru s vysokým titrem bylo médium testováno na IX aktivitu za použití vizuálního ICL testu. Infkování buněk hmyzu Spodopterafrugiperda (Sf9) při MOI s hodnotou 5 zásobním roztokem rekombinovaného viru typicky vedlo expresi po 48 hodinách k maximální 4,7 pg/mt. ICE byl použit při pokusu jako standard.
Došlo i k expresi aminokoncové T7 připojené verze ICE nebo TX. Různé konstrukce, které byly navrženy původně pro usnadnění identifikace a izolace rekombinovaných proteinů, umožnily io také testování různých stupňů exprese a relativních stupňů homolog, které prodělaly apoptózu.
Apoptóza byla zvýšena u buněk v řade $ expresí ICE nebo TX Sf9 po infekci (testováno pomoci vyloučení Trypan modři), a to relativně k buňkám s infekcí pouze virovou DNA.
Exprese a čištění N-koncově (His)6-vázané CPP32 u E. coii cDNA kódující CPP32 (Fernaes-Alnemri a další, supra 1994) polypeptid začínající na Ser(29) byl PCR amplifíkován primery, které přidávají v řetězci Xhol místa na 5' i 3' konce cDNA a výsledný Xhol fragment byl navázán na Xho I-štěp pET-15b expresní vektor za vzniku spojení v řetězci s (his)ft na n-konci fúzního proteinu. Před povezený rekombinovaný protein začíná ami?d nokyselinovou sekvencí MGSSHHHHHHSSGLVPRGSHMLE. kde LVPRGS reprezentuje trombin štěpící místo, které je následováno CPP32 začínajícím na Ser(29). £. co/i BL2I(DE3) nesoucí plazmid byly kultivovány na pevnou fázi při 30 °C a pak byly indukovány 0,8 mM IPTG. Dvě hodiny po přidání IPTG byly buňky zpracovány. Byly připraveny lyzáty a rozpustné proteiny byly čištěny N i-agarózovou chromatografií. Všechny CPP32 proteiny byly po expresi ve zpracované formě. N-Koncová sekvenční analýza prokázala, že ke zpracování došlo na autentickém místě mezi Asp( 175) a Ser( 176). 200 ml kultury vytvoří asi 50 pg proteinu CPP32. Jak bylo stanoveno titraeí aktivního místa, byly čištěné proteiny plně aktivní. Proteázové prostředky byly rovněž velmi in vitro aktivní při štěpení PARP stejně jako při štěpení syntetického DEVD-AMC substrátu (Nicholson a další, supra 1995).
2. Inhibice ICE homologů
Selektivita skupiny reverzibiIníeh inhibitorů ICE homologů je popsána v tabulce I. Testy enzymu ICE byly provedeny podle Wilsona a dalších (supra 1994) za použití YVAD-AMC substrátu (Thornberry a další, supra 1992). Test TX aktivity byl proveden za použití ICE substrátu za stejných podmínek jako pro ICE. Test CPP32 byl proveden za použití DEVD AMC substrátu (Nicholson a další, supra 1995). Obecně je v široké škále skeletů malá selektivita mezi ICT a TC. Žádná /.testovaných syntetických ICE sloučenin není účinným inhibitorem CPP32. fest reverzibilních sloučenin ani při nejvyšší koncentraci (1 μΜ) neprokázal žádnou inhibiei.
4d Tabulka 1
Sloučenina Ki ICE (nM) Ki TX (nM) KA CPP32 (nM)
214e 5 J ± 1J. > 1000
135a 90 55 Q > 100 0
125b G0 57 ± 13 > 1000
137 40 40 + Ί > 1000
Níže v tabulce 2 jsou uvedeny rychlostní konstanty druhého řádu pro ínaklívaci ICE a ICE
homologů vybranými irreverzibilními inhibitory. Studované irreverzibilní sloučeniny jsou inhibitory s širokým spektrem ICE a jeho homologů. Při porovnání inhibice ICE a CPP32 irreverzi45 bilními sloučeninami lze ale pozoroval určitou selektivitu.
-29 CZ J0U171 B6
Tabulka 2
Sloučenina ^inact (ICE) kinact (TX) kjnact (CPP32)
138 120 000 150 000 550 000
217d 475 000 250 000 150 000
108a 100 000 25 000 nd
Příklad 6
Inhibice apoptózy m Fas-indukovaná apoplóza v buňkách IJ937.
Sloučeniny byly hodnoceny podle své schopnosti blokovat anti-Fas-indukovanou apoptózu. Při předběžných experimentech s použitím RT-PCR jsme detekovali niRNA kódující ICE, TX, ICH-1, CPP32 a CMH-l v nestimulovanýeh buňkách U937. Tuto buněčnou řadu jsme použily i pro studii apoptózy, Buňky U937 byly naočkovány v kulturách s koncentraci 1 x 1(0 bunek/ml a kultivovány do 5 x !06 bunčk/ml. Při pokusech na apoptózu bylo 2 x IO6 buněk naneseno na 24-jamkové kultivační desky v 1 ml RPMI-1640-10 % PBS a stimulovány 100 ng/ml anti-Fas-antigen protilátkou (Medical a Biological Laboratories, Lid.). Po 24 h inkubaci při 37 °C byl stanoven podíl apoptických buněk pomocí FACS analýzy za použití ApoTag činidel.
Všechny sloučeniny byly na počátku testovány při 20 μΜ a pro stanovení hodnoty IC% byla provedena titraee aktivní sloučeninou, luh i biče apoptózy (> 75% při 20 μΜ) byla pozorována li sloučenin 108a, 136 a 138, Pro 0,8 μΜ sloučeniny 217e byla stanovena hodnota 1(7 v porovnání s nulovou inhibicí anti-Fas-indukované apoptózy látkou 214e při 20 μΜ.
Příklad 7
In vivo kritický test účinnosti protizánětlivého účinku
LPS-lndukovaná produkce IL-Ι.β
Účinnost 214e a 217e byla hodnocena podle CD1 myší (pro každé podmínky n=6), kterým byl podán UPS (20 mg/kg IP), Testovaná sloučenina byla rozpuštěna ve směsi olivový olej;DMSO.ethanol (90:5:5) a podána IP injekcí jednu hodinu po LPS. Sedm hodin po podání LPS byl odebrán vzorek krve. Pomocí testu LUISA byla stanovena hladina II-1 [3 v séru. Výsledky na obr. 6 ukazují dávkovou závislost inhibicc sekrece IL 1β látkou 214e s hodnotou LD^ asi 15 mg/kg. Podobné výsledky byly získány ve druhém experimentu. Silná inhibice sekrece IL-1 β byla pozorována i u myší, kterým byla podána látka 217a (obr. 7). Jasná závislosti na dávce ale
4o nebyla zjištěna.
Sloučeniny 214c a 217a (50 mg/kg) byly rovněž perorálně podány za účelem zhodnocení vstřebávání. Výsledky na obr. 8 ukazují, že látka 214e (ale ne látka 217o) při perorálním podání inhi-30buje sekreci IL- 1β. což naznačuje potenciál ICE inhibitorů jako perorálních protizánétlivých činidel.
c/. jihu /1 bó
Účinnost analogů látky 214e byla rovněž hodnocena u myší, kterým byl podán LPS. po podání IP 5 (obr. 9) a PO (obr. 10).
Tabulka 3 o Inhibice (%) produkce 1L-β působením analogů látky 214e u myší, kterým byl podán LPS. po podání IP a PO (50 mg/kg).
Tabulka 3
Sloučenina PO% inhibice IP% inhibice
214e 75 78
265 27 30
416 52 39
434 80 74
438 n 40
442 10 o
2002 - 78
> Tabulka 4
Porovnání účinnosti pro formy 214e u myší, kterým byl podán LPS: Časový průběh inhibice produkce IL-Ιβ o Doba podání vzhledem k podání LPS, PO, 50 mg/kg
Sloučenina -2 hod. -1 hod. 0 hod. +1 hod.
214e 39 + _ * 80 + 55% 75 +
43 + 4 4 * 48 + 11 +
_ -Jr _ * 47 +
304a 30 33 68 37
2100e 49 54 94 66
2100a 8 71 67 58
213e 0 48 41 , 89
302 0 27 21 26
2100c 0 0 85 40
2100d 42 35 52 26
2100b 0 0 47 26
2001 -63 -62 -57 -54
64 + 62 + 58 + 55 +
* Hodnoty získány v následujících testech
- 31 CZ dlJUl/1 bb
Příklad 8
Měření hladiny proformy 214a v krvi
Myším byla perorálnč podána dávka sloučenin 302 a 304a {50 mg/kg) rozpuštěná v 0,5% karboxymethylcelulóze. Po 1 a 7 hodinách po podání byly odebrány vzorky krve. Sérum bylo extrahováno vysrážením stejným objemem acetonitrilu obsahujícího 2% kyselinu mravenčí a následným odstředěním. Získaný roztok byl analyzován kapalinovou chromatografií a hmotnostní spektrometrií (ESI-MS) s detekční hladinou 0,03 až 3 pg/ml. Sloučeniny 302 a 304a m vykázaly při perorálním podáváním detekovatelné hladiny, 214e nevykazuje při perorálním podáváním v krvi hladinu vyšší než 0.10gg/ml. Sloučeniny 302 a 304a jsou proformy látky 214c a jsou na látku 214e in vivo metabolizovány (viz. obr. 11).
i? Příklad 9
Pro sloučeniny v souladu s předkládaným vynálezem jsme za použití metod popsaných v příkladech 1 8 získali následující údaje. Struktury' sloučenin z příkladu 9 jsou uvedenv v příkladech 10 až 17.
Tabulka 5
Slouc. uv-vid. Ki (nM) Buňky PBMC prům, IC50 (nM) Úplná lidská krov Ko (nM) Odbourání u mys í t i. v. ml/min/kg Odbourání u krys, rr.l/min/kf.j
4 7b 27 1800 <600 338 l
47a 19 2600 5100 75 32
135a 90 2800 5000 >100
135b 320 1600 1700
125b 60 800 4500 1
10Bb 400 25000 J ? >100 <
137 1 40 1700 14000 i i t
139 350 2000 1 i ‘
213e 130 900 600 400* ! 1 i |
! 214c 1200 | 5000 1 ! 1 J
214e U5 1 1600 1300 23 ! 12 í
217c 1700 7000 70 i r ’ 1 ;
217e 1 175 ' 2000 >50 1
220b 600 ! 2125 i
223b 99 5000 >100 ; í
223e 1,6 J 3000 >20000 89 ! i
226e 15 | 1100 j 1800 109 i 1 1
227e 7 ! 234 í 550 1 1 i
! 230e 325 ! 300 67 i
232e 1100 4500 22 ; 26 ;
j 235e I 510 4750 1 36
! 238e 500 j 4250 ί
-32 CZ 300171 B6
Šiouč. UV-vid. Ki (nM) Buňky PBMC prum. IC5<> (nM) Úplná lidská krev IC55 ínM) Odbourání u myší, i, v. ml/min/kg Odbourání u krys, i .v. ml/min/kg
1 ! 1 1 1 í 246 12 950 10000 31 :
257 13 11000 6600* I
265 47 j 4300 1400 ! 23 20
281 50 600 ! 2500» i í i
302 4500 i >20000 S >20000 |
304a ! 200 i 1,400 ' 2400 ( ‘ í 14000* 1 1
307a i 55 ' 14500 16000
307b i 165 1 : 14000
404 - 2,9 . 1650 ' 1100 i < : i8oo* : 64 24
405 6,5 . 1700 ; 2100
406 4 1650 2300
407 i 0,4 : 540 ; 1700 ;
408 0,5 : 1100 : 1000 41 23
409 3,7 2500 i 1 '
410 17 2000 2800 i 32 i 20 j
j 411 0,9 540 1900 ! i j
412 i pc 580 660* 700 i i 25 í 1000* l ' !
! 413 750 6200 i ; i J 1
1 i r 415 2,5 990 1000* 450 í -26 ! 18 I 3500* ! 1 '
416 | 12 j 1200 3400 ί i 47 i
í 417 j 8 i 2000 6000 · 33 i 22
J ΐ Γ ί- ι 418 2,2 1050 2200* 13 ; 1 i V ;
419 280 >8000 ! J
420 1200 j 8000 >8000* ; ί : I i
421 1 S 200 4300 4600* 1 I I
: 422 i 50 2200 1200 : i 'i
: 423 j 10 2100 1800* 1500 ’ : 45 i i
424 45 2500 4000 ί i
425 0f8 650 i 650 700* 1
426 90 4500 i 2500* 1
427 i 180 i 4500 • 36
- 33 CZ 300171 Bó
Slouč. UV- vid. Ki (nM) Buňky PBMC prům. (nM) Úplná lidská krev ic50 (nM) Odbourání u myší, i. v. ml/min/kg Odbourání u krys, i. v. ml/min/kg
428 | 280 ! *
429 j 7000 I
430 j 60 j >8000
431 j 8 i >8000 j 8000___
432 ’ lf 6 560 2000______
433 ; 2.9 1000 1100 __; _ ' 1100* ___
434 ; 4.9 1600 1800 20 _ í_1200* i 1300+___
435 ; 8 ' 4400 ;
436 : 75 : 2700 :
437 . 12 1800 5000
438 28 1000 7 00 2900* i í 22 :
439 3,7 2800 3200 3400* 1 1 1 1
440 2f3 5000 2000 1 1
441 1 2500 4500
442 3 2 900 2000 54 ;
443 2800 1500 !
444 4-f- 15 3500 3500
I 445 135 4000 i
i 446 62 3000 1
447 5,8 2500 i 1500 i 1 i
448 130 4000 1 I i .. . 1
' 449 12 1500 3200 13000+ i
450 5 800 2200 1700* 18 12 ! .. .. i
451 4 1800 | 1500 9000* —* J.·— —*- 1 í 1
452 4,5 600 800* 650 1600* 1 27;3 :
453 0f65 o o m r-< 1900 i 1600* í I
454 45 2500 { ί J i
455 1 1 C2 400 | ř 1 2800 2600* 1 1 54
456 4 5 4,5 i 600 j 1300* | 600 ! 1400* ! i 1 Ϊ 12;7
457 6,2 ! 2000 ' 3500 ! --
Í jl58__í 2£ j 2900 i
-34CZ JUU1/1 B6
Slouč. LTV-vid. Ki {nM} Buňky PBMC prům. rc50 (nM) Úplná lidská krev IQo (nM) Odbourání u myší, i. v. mi/min/kg Odbourání u krys, i, v. ml/má n/kg
i-1 ; í 459 ! 5 i 1800
460 í 115 4 00 : 2400 :
461 i 47 I
462 i 40
463 14 : 24 00 : : 2800*
464 i 2.5 i 1000 > >1000 · * i í í , 2500* i í
465 ! 3 : 1000 ' 800 :
466 0,8 1400 600 i __í
467 1900 i
4 68 4,5 850 2500 --„-- -J
470 5 500 360 500* 63
471 1 750 400 17'
í 472 140
1 473 l 1 1 1000 400 450* 1 i
474 85
475 5,5 690 650* 400 350* 1 31 21 ‘ i
476 7 1600 2500 i
i 477 60 1 i
478 380 —j
479 1 15 900 700 2400* i
480 25 2300 !
481 lr2 390 i 600 930* [ 500* 34
482 <0,2 340 380 260* i
483 57 900 [ 700 !
464 2 1550 1400* 5000 ί 1 15
485 2 900 900
486 I 2,3 480 570* 500 1 í 37
487 i 2C 650 ! 950* ! 500 ί 400* ! 1 20
488 : 1,5 ; 940 750 5
-35CZ jIHll/I B6
SJ.DUČ. UV-vid, Ki (nM) Buňky PBMC prům. icso (nM) Úplná lidská krev IC,0 (UM) Odbourání u myší, i. v. ml./mi n/kg Odbourání u krys, i .v. ml/min/kg
489 i 1 1 6 ! 2250 ' 1700* ; ! 15000 ; j ΐ
490 ί 4,3 ί 980 ; 700 ;
•__; í íooo* : 2900* ;_____j__
491 ; _ 5~ : 2500^___'___
4 93 ί 25 1200 800 : 850*
494 15 1350 1500* 7000 - - ..—j
495 43
496 16 1550 1600* 6000
497 V 740 350 700* 1 ! ί ! 1 1
4 98 1,5 560 500 400* ί { í ! !
499 3f5 1200 800* 9000 i
605a 90 2600 >20000 1 i 1
605b 45 10000 97 ) i 1
605c 615 4500 37 1 a- .x - (
605d 95 5100 16000 5100* 33 i
605e 29 2250 >10000 24 j
605f 475 12500
605g 165 22500 ' í _1
605h 4 60 >25000
605i 680 >20000
6055 110 6750 71
! 605m 650 20000 í
605n 12 2100 >20000 ; 28 i
605o 72 18000 i
605p 125 3200 >20000 ; f 1 ------- . i
605q I 1000 1 l 1 1 1
605s ! 150 i . 4. 6000 i i
605t 33 ! j
609a ; 114 í >30000 !
~ 609b · 27 >20000 ΐ
619 ΐ 300 ΐ
620 35 1000 : 19000
-36C7. 300171 B6
Slouč. UV~vid. Ki (nM) Buňky PBMC prum. IC50 (nM) Úplná lidská krev ICso (nM) Odbourání u myší, i .v. ml/min/kg Odbourána u krys, i . v. ml/mi n/kg
621 ; 7,2 1300 ; >20000
622 35 1300 ' >20000
623
624 300
í 625 105 t í i---;- 1
626 260 í r i—,-
627 43 3250 8000 í
628 36 2750 >20000 í
629 230 i
630 270 i ---
631 805 ! ΐ
632 148 1 i
í 633 92 5750 20000 1 i i ;
Γ 634 1400 í
635 55 ! 1 ! 1900 3400* 4000 J I i
605v 1100 >30000 í
I 2201 i 9 2000 3700* 3500 ; 60 1 1 1
í 2100e 250 800 600 í
ί 2100a 100 1100 850 j
? 2002 1 i 4 810 860* 70 1400* : 32
ί 2100d >100000 >20000 >20000
2100c 7400 i >20000 >20000
2100b J 8000 | >20000 >20000 [
2001 135 ! 1800 3500 i
1027 4000 >20000 >20000 ! 60
1015 j 40 S * 2500 1700 23
-37CZ 300171 B6
Tabulka 6
S.í ouč. Flurescenční test kínacř M1 s: Buňky PBMC prům. IC5O (nM) Úplná lidská krev ic50 <nM) Odbourání u myší i. v. rríl /min/ kg Odbourání n krys i . v. ml/min/kg
108a 1x1 i 17500
13$ 5(4x10’ 870 , 2800 93 .....
138 l,2xl05 900 2900 116 - - . ( f t I
217d 4f7xl05 340 4000
280 4xl05 650 >1000 187 ;
283 lxio5 <200 450 104 j
284 3f5xl05 470 550 77 100 í
285 4,3xl05 810 1000 130 50
*1 lodnoty získané při opakovaném testu
Příklad 10
Sloučenina 139 se připraví pomocí postupu, který je podobný postupu použitému pro přípravu o sloučeniny 47a, (139) CH5-sLn, 0 H
OH .H
Sloučeniny 136 a 138 se připraví pomocí postupu, který je podobný postupu použitému pro přípravu sloučeniny 57b.
(136)
38CZ 300171 B6
Sloučeniny 135a, 135b a 137 se připraví pomocí postupu, který je podobný postupu použitému pro přípravu sloučeniny 69a.
(135a) (135b)
Sloučeniny 813a. 814c, 814e, 817c. 817d, 817e. 820b, 823b. 823e, 626e, 827e, 83Oe. 832e. 835e, 838c, m 857, 865. 902. 904a, 907a, 907b, 1004-1013, 1015-1045, 1046 1068, 1070-1091, a 1093-1099 se připraví pomocí postupu, který je podobný postupu použitému pro přípravu sloučeniny 264 a odpovídajících sloučenin v příkladech 10 a 11.
Sloučeniny 47a, 48b. 108a, 108b, 125b, 213e, 214c. 217c. 217d. 217e, 220b. 223b. 223e. 226e. 227e, 230e, 232e, 235e, 238e, 246. 257, 264, 265, 280-287, 302, 304a, 307a, a 307b se připraví tak, jak je popsáno níže.
11. N (N acetyl-tyrosinyl-valinyl-pipekolyl)-3-amino-4-oxobutanová kyselina
1Š
Krok A. N-(N-tere-butoxykarbonylpipekolyl) 4-amino 5-benzyloxy-2 oxotetrahydrofuran
Analogickým způsobem jako popsal Chapman (Bioorg. and Med. Chem. Lett. 1992, 2. 613 - 618) se provede reakce 460 mg (2.0 mmol) N-terc-butoxykarbonylpipekolové kyseliny a 530 ing (1,82 mmol) N-allyloxykarbony 1-4-arnino-5-benzy 1 oxy-2- oxotetrabydroíuranil, čímž se získá 654 mg sloučeniny uvedené v názvu.
-39CZ 300171 B6 111-NMR {500 MHz. deuterochloroform (existuje jako rotamery )), hodnoty δ: 7,35 (m, 5H), 6,88 (široký s, IH), 4,9-4,45 (m. 4H), 3,95 (širokým. 2H), 3,06 (m. IH), 2.9 (m. 111). 2,7 (široký m.
IH), 2,45 (m. 1H), 2,2 (m. IH), 1,7-1,5 (m. 3H), 1,45 (dva s. 911)
Krok B. N-pipekolyl4-amino--5--benzyloxy--2--Oxotetrahydrofuran
654 mg N-(N-terc-butoxykarbonylpipekolyl)-4-amino-5-benzyloxy-2-oxotetrahydrofuranu se rozpustí v 15 ml 25% kyseliny trifluoroctovc v dichlormethanu a směs se míchá při teplotě místnosti. Směs se zahustí, čímž se získá gumovitý zbytek. Tento zbytek se rozpustí v dichlormethaío nu a promyje se 10% hydrogenuhličitanem sodným. Organická vrstva se vysuší nad bezvodým síranem sodným, /filtruje se a zahustí, čímž se získá 422 mg sloučeniny uvedené v názvu ve formě béžové pevné látky.
'Η NMR (500 MHz, deuterochloroform). hodnoty 6: 7,38 (m. 511). 7.15 (d. IH). 5,55 (d. IH),
4395 - 4,8 (m, 111). 4,78 (m. 111), 4.65 (d, 1H), 4,45 (m. 1H). 3,2 (m, 0,5H), 3,05 (m, 0,5H), 2,95 (ni. 0,511). 2,85 (ni, 0.5H), 2.65 (m, IH). 2.55 - 2.38 (m, IH), 1.95 (m. III), 1,8 (m, 1II), 1,6 (rn. 2H). 1,38 (m,2H)
Krok C. N (N acety llyrosiny Ivalinylpipekolyl)-4-aniino-5-bcnzyloxy—2-oxotetrahydrofuran
464 mg (1.44 mmol) N-acetyItyrosinylvalinu a 412 mg (1.3 mmol) N-pipekolyM-amino-5ben/y 1 o xy-2-oxotctr a hydrofuranu se rozpustí ve směsi 5 ml d i methyl formani idu a 5 ml dichlormethanii a směs se ochladí na teplotu 0 °C. K ochlazenému roztoku se přidá 210 mg (1,56 mmol) 1-hydroxybenzotriazolu (HOBT) a poté 326 mg (t,7 mmol) l-(3-dimethylaminopropyl)-325 ethylkarbodiimidhydrochloridu (EDC). Směs se míchá po dobu 18 hodin, poté se naředí elhylaeelátem, promyje se vodou, 10% hydrogensíranem sodným, 10% hydrogenuhličitanem sodným a znovu vodou. Organická vrstva se zahustí, čímž se získá surová pevná látka, která se vyčistí pomocí velmi rychlé ehromatografie na silikagelu za použití směsi dichlormethanu, isopropanolu a pyridinu v poměru 94 ; 6 : 1 jako elučního činidla, čímž se získá 370 mg sloučeniny uvedené
3(> v názvu.
'll-NMR (500 MHz, perdeuteromethanol (existuje jako diastereomery jakož i rotamery)), hodnoty δ; 7.35 (ni, 511), 7,05 (ni, 211), 6.68 (m, 211), 5,65 a 5.25 (m. 1H), 4.9 3.95 (m. 8H). 3,42,6 (m, 11).2,5 - 2,1 (m, IH), 1,98 (s, IH), 1,9 (s, IH), 1,85 (s, IH), 1,8- 1.6 (m. 211), 1.55- 1,3 b (ni, 411),0,95 - 0,85 (ni,6H)
Krok D, N-(N-acetylty rosinylvalinylpipekolyl)“3-aniino-“4”oxobutanová kyselina
K roztoku 100 mg N-(N-acety Ityrosiny Kaliny lpipekolyl.)-4-ani ino-5-benzy loxy-2-oxotetra40 hydrofuranu v 10 ml methanolu se přidá 60 mg hydroxidu paladnalého na uhlí a směs se udržuje ve vodíkové atmosféře. Směs se /filtruje přes celit a zahustí, čímž se získá bílá pevná látka. l ato surová pevná látka se rozpustí ve 2 ml methanolu a trituruje se s diethy letherein. čímž se získá 26 mg sloučeniny uvedené v názvu.
'H NMR (500 MHz, perdeuteromethanol (existuje jako diastereomery jakož i rotamery)), hodnoty Ó: 7.1 (tn. 2H). 6,7 (m. 2H), 5.2 (široký m. 1H). 4,8 - 3.6 (m. 6H). 3.2 - 2.5 (rn. 4H). 2,5 2.Í (ni. 111), 1,95 (tři s,3H), 1,9- 1.3 (m, 611), 1,1 -0,7 (m, 611)
K. N-[N-acetyltyrosinylvalinyl(4-bcnzyloxy)prolinyf]-3-amino-4-o\obutanová kyselina
Krok A. Semikarbazon terc-butylesteru N-(N-allvloxykarbonyl 4 benzyToxyprol iny I)—3amino-4-oxobutanové kyseliny
Sloučenina uvedená v názvu se připraví reakcí N allyloxykarbonyl-4·-benzyloxyprolinu a seini55 karbazonu terc-butylesteru 3-amino-4-o\obutanové kyseliny (T. I.. Graybill a kol., Abstraets
-40CZ 300171 B6 of papers. 206Ih National Meeting of the American Chemical Society. Abstracl MED1-235. Chicago, IE. USA (1993)) za podobných podmínek kondenzace peptidu jako jsou uvedeny výše v případě sloučeniny I i, stupen C.
'll-NMR (500 MHz, deuterochloroform), hodnoty 6: 9,05 (široký s. 1H). 7,85 (široký m. 1H). 7.4 - 7,2 (m. 5H), 7,15 (široký s. IH), 6,55 (široký s, 1H), 5,9 (m, 1II), 5,1 - 4,9 (široký ni, 211). 4,65-4,4 (m. 4H). 4,2 (široký m, IH), 3,75- 3,5 (m, 2H), 2,75 - 2.55 (m, 2H), 2,5 (širokým, IH). 2,25 (široký m, lil), 1.4 (s, 9H>
io Krok B. Semikarbazon tere-butylesteru-N-(N -aeetyltyrosiny]valinyl-(4-benzyloxyprolinyl))3 -amino-4-oxobutanové kyseliny
Sloučenina uvedená v názvu se připraví reakcí N acetyltyrosinylvalinu a semikarbazonu tcrc-butylesteru-N%N-allyloxykarbonyl 4-bcnzyloxyprolinyl)-3-amino-4-oxobutanovc kyšei5 líny za reakčních podmínek uvedených v případě sloučeniny H. stupeň A.
'H-NMR (500 MHz, perdeuteromethanol), hodnoty 5: 7,35 - 7.2 (m, 6H). 7.0 (d. 2H), 6.65 (d, 211), 4,85 (m, IH). 4,6 4,45 (m, 4H), 4,3 (široký m, IH). 4,15 (in. IH), 3,7 (m, 111),2.95 (m. 111).2,75-2.6(in.3l l),2,35(m. 111),2,1 (m, 1H). 1,9 (s. 3H), 1,4 (s, 911). 0,95 (d, 3H). 0,90 (s. 311)
Krok C. N~(N-acetyltyrosinylvaliiiyl (4--benzyloxyprol inyl))_3-aniino-4-oxobuianová kyselina
270 mg semikarbazonu terc-butylesteru N-(N aeelyllyrosinylvalinyl-(4-benzyloxyprolinyI)) 3 amino-4-oxobutanové kyseliny se rozpustí v 10 ml 25% kyseliny trifluoroclovc v dichlormetlianolti a směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 3 hodin. Směs se zahustí, čímž se získá pevný zbytek. Tento zbytek se rozpustí v 10 ml směsi methanolu, kyseliny octové a 37% formaldehydu v poměru 3 : 1 ; 1 a směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 1 hodiny. Směs se zahustí a výsledný zbytek se vyčistí pomocí velmi rychlé chromatografie na sílikagelu za použití směsi
5o diehlormethanu, methanolu a kyseliny mravenčí v poměru 100: 5 : 0.5 jako eluěního činidla, čímž se získá 37 mg sloučeniny uvedené v názvu.
lli-NMR (500 MHz. perdeuteromethanol (existuje jako směs diasíereoinerú hemiacetalu v poměru 1:1)), hodnoty 8: 7,4 - 7.25 (m. 5H). 7,0 (d. 2H), 6.65 (d. 2H), 4,65 - 4,05 (m. 7H).
3,75 - 3,4 (m, 2H), 3,05 - 2,3 (m, 5H). 2,2 - 1.95(m.2H), 1,90 (s. 3H). 1.0 (d, 3H), 0,95 (d. 3H)
(a) X - O (b) W = IE
-41 CZ 300171 B6
Sloučenina 44a: «roztoku 690 mg (2,32 mmol) (lS.9S)-tere-butyí-9-amincH-6,l()~dioxooktahydro-6H-pyridazino(l,2-a|[ 1,2]diazepín—1 —karboxylátu (GB 2128984) v 16 ml dioxanu a 4 ml vody se při teplotě 0 °C přidá 292 mg (3,48 mmol) pevného hydrogenuhličitanu sodného a poté se po kapkách přidá 470 mg (2,78 mmol) 3-fenylpropionylehloridu. Směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 2 hodin a poté se přidá dalších 200 mg (2,38 mmol) hydrogenuhličitanu sodného a 100 mg (0,6 mmol) 3-fenylpropionylchloridu. Směs se míchá po dobu dalších 2 hodin při teplotě místnosti, naředí se 50 ml ethylacctátu. promyje se dvakrát vždy 25 ml nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného, poté se vysuší síranem hořečnatým a zahustí. Zbytek se vyčistí velmi rychlou chromatografií za použití 0 až 50% ethylacetátu v chloroformu jako eluěniho io činidla a poté se vykrystaluje triturováním s etherem, čímž se získá 860 mg (86 %) bílé pevné látky o teplotě tání 137 až 138 °C.
[α]ιΓ -95, Γ (c = 0,549, dichlormethan) b Infračervené spektrum (KBr): 3327, 1736, 1677, 1664, 1536, 1422, 1156 'll-NMR (deuterochloroform), hodnoty 6: 7,24 (511, m), 6.50 (114, d, J- 7.5), 5,24 (111, m), 4,90 (IH. rn), 4.60 (IH, m), 3,44 (IH, ní), 2.93 (2H, m). 2,84 (IH, m), 2,64 (lil, m), 2,54 (2H, m),
2,26 (2H, m). 1,70 (41 Lm), 1.70 (9H,s)
Hmotová spektrometrie (ΓΑΒ, m/z): 430 (M + 1), 374, 242, 105, 91
Sloučenina 44b: (1 S,9$)-terc-butyloktahydro-l0-oxo-9-(3 fenylproptonylamino)-6l 1-pyridazinof 1,2-alf 1.2Jdiazepin-1 -karboxylát se připraví z (I S„9S)—terč—buty 1—9 -amino-10-oxo-6H2^ pyridazínof 1.2-a][ 1,2]diazcpin-1-karboxylátu (Attwood a kol., J. Chem. Soc. Perkin 1, str. 1011 19 (i 986)) způsobem jako v případě sloučeniny 44a, čímž se získá 810 mg (81 %) bezbarvého oleje.
[a]/' 33,5° (e = 0,545. dichlormethan)
Infračervené spektrum (fint): 3334, 2935, 1737, 1728, 1659, 1642 ' H-NMR (deuterochloroform), hodnoty ó: 7,24 (511, m), 6,75 (1Π. d, J = 6,7), 5.27 (1 H, m), 4,92 (lil, m). 3.39 (IH, rn), 3,03 (411, m), 2.55 (311, m). 2.33 (IH. m), 2,17 (IH. ni). 1,80 (5H. m).
1,47 (911,s), 1,39(114,m) i Imotová spektrometrie (FAB, m/z): 416 (Μ + 1). 360, 211, 143. 97
Sloučenina 45a: (1 S,9S)~6,10-dioxooktahvdro 9-(3-fenylpropiony lantino)-6H-pyridazmo[ 1,2•»o a]l 1,2]d iazepin 1 karboxylová kyselina
K roztoku 800 mg (1,863 mmol) (I S,9S>-tere-butyl-6,10-dioxooktahydro-9-(3 fenylpropionylamino)-6H-pyridazino-[l,2-a][l,21diazepin-l-karboxylátu (sloučeniny 44a) v 5 ml suchého dichlormethanu se při teplotě 0 °C přidá 5 ml kyseliny trifluoroctové. Roztok se míchá při teplotě místnosti po dobu 3 hodin a poté sc zahustí. Ke zbytku se přidá 10 ml suchého etheru a poté se ether odstraní ve vakuu. Tento postup se třikrát opakuje, čímž se získá krystalická pevná látka. Tato pevná látka se trituruje s etherem a /filtruje, čímž se získá 590 mg (85 %) bílé krystalické pevné látky o teplotě tání 196 až 197,5 °C.
5o [ahí? -129,5° (c - 0,2, methanol)
Infračervené spektrum (KBr): 3237, 1729, 1688, 1660, 1633, 1574, 1432. 1285. 1205
-42 CZ 300171 B6 ’Η-NMR (perdeuterometlianol). hodnoty β: 8,28 (IH, d, J = 7,4), 7,22 (5H, rn), 5,32 (IH, dd, J = 5,9, 2,9). 4.75 (IH.m), 4.51 (1H. m). 3.50 (1H, m), 3,01 (IH. m). 2.91 (21L ni), 2,55 (2H, m), 2,29 (3H.m), 1,95 (2H, m), 1,71 (211. ní)
Analýza pro CiyH^.iNiOy vypočteno: 61,12 % C. 6,21 % Η, 11,25 % N;
nalezeno: 60,80 % C. 6,28 % Η, 10.97 % N.
Hmotová spektrometrie (FAB, m/z): 374 (M’ + 1), 242. 105, 91
Sloučenina 45b: (I S,9Sj-oktahydro-IO-oxo-9-(3“feny Ipropiony lam i no)-6I I-pyrídazino[ 1,2-a]11,2Jdiazepin-l-karboxylová kyselina se připraví z (1 S,9S)-terč blity loktahydro-10-oxo-9-(315 feny Ipropiony lam ino)-6H-pyndazinofl,2-a]f 1,2|diazepin-l-karhoxvlátu (sloučeniny 44 b) způsobem popsaným v případě sloučeniny 45a, čímž se získá 657 mg (96 %) sloučeniny 45b jako krystalické pevné látky o teplotě tání 198 až 202 °C.
fotb)2 -86.2° (c = 0,5. mcthanol)
Infračervené spektrum (KBr): 3294, 2939. 1729, 1645, 1620, 1574, 1453. 1214 ’H NMR (perdeuteromelhanol). hodnoty Ó: 7,92 (IH, d, J = 7,9), 7,20 (511. m), 5,29 (IH, m), 4,90 (lil. m). 3.47 (lil, m). 3.08 (21L m). 2,90 (211, m), 2,55 (311. ni), 2,36 (IH, ni), 1,81 (5H, m). 1.43 (2H, m)
Hmotová spektrometrie (FAB, m/z): 360 (M' + 1).211, 143.91
Sloučenina 46a: [3S, 2R.S, (lS,9S)]-N-(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-Y 1)-6.1 ()-dioxo5(i oktahy dro-9-{ 3 -feny I prop iony I am ino )-6 H-py r idazino [ 1,2-a] [ 1,2 ] d i azep i η - -1 - karboxam id
K roztoku 662 mg (1,773 mmol) (I S,9S)-6.10-dioxooktahydro-9-(3-feny Ipropionylamino)6H-pyridazino[l,2 -a][l.2]díazepin-l-karboxylové kyseliny (sloučeniny 45a) v 9 ml suchého dichlormethanu a 3 ml suchého dimethylformamidu se při teplotě místnosti přidá 30 mg bis(triíenylfosíin)palladiumehloridu a 568 mg (1,95 mmol) (3S.2R.S) 3 allyloxykarbonylamino-2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuranu (Chapman, Biorg. Med. Chem. Lett.. 2. str. 613 - 18 (1992)) a poté se po kapkách přidá 1.19 g (4.09 mmol) tri n blityleínhydridu. Ke směsi se přidá 479 mg (3,546 mmol) 1-hydroxybcnzotriazolu, směs se ochladí na teplotu 0 °C a poté se přidá 408 mg (2.128 mmol) l-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimidhydroehloridu. Směs se κι míchá při teplotě místnosti po dobu 3.25 hodiny, poté se naředí 50 ml ethylacetátu. promyje se dvakrát 20 ml zředěné kyseliny chlorovodíkové, dvakrát 20 ml nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a jednou roztokem chloridu sodného, poté se vysuší síranem horečnatým a zahustí. Výsledný olej se vyčistí velmi rychlou chromatografíí za použití 0 až 100% ethylacetátu v chloroformu jako elučního činidla, čímž se získá 810 mg (81 %) sloučeniny 46a ve formě směsi anomerú o teplotě tání 92 až. 94 °C.
Infračervené spektrum (KBr): 3311, 1791, 1659. 1651. 1536 ’Η-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,49, 6,56 (lil, 2d, J = 6,7, 7,8), 7.29 (10H, m). 6,37,
SO 6.18 (1H, 2d, J - 7,7, 7.6), 5,56, 5,34 (IH. d, s, J = 5.2), 5,08 - 4,47 (611). 3,18 - 2,80 (5H), 2.62 - 2,28 (5H), 2,04 - 1,53 (5H)
Hmotová spektrometrie (FAB, m/z): 563 (M + 1), 328. 149, 91
- 43 C7. 300171 B6
Sloučenina 46b: [3S, 2R,S,(IS,9S)|-N-(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)okiahydro 10-oxo-9-(3-fenylpropionylamino)-6H pyridazinof 1,2-a][ 1,2]diazepin-l -karboxamid se připraví ze sloučeniny 45b způsobem popsaným v případě sloučeniny 46a. čímž se získá 790 mg (96 %) sklovité látky o teplotě tání 58 až 60 °C.
Infračervené spektrum (KBr): 3316, 2940, 1793, 1678. 1678, 1641, 1523, 1453. 1120 'H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,28 (1 OH, m), 6,52, 6,42 (IH. 2d, J - 7,2, 7,1). 5.53. 5,44 (IH. d. s, J - 5.2). 5,35 (1H, m). 4.6 - 4,9, 4,34 (4H, m). 3,1 - 2.8 (6H. m), 2,6 - 2.1 (7H).
ιο 1,95 - 1,05 (511)
I Imotová spektrometrie (ΓΑΒ, m/z): 549 (M t- 1). 400, 310. 279, 91
Sloučenina 47a: f3S, (I S.9S)]—3—(6,10-dioxooktahydro-9-(3-fenyIpropionylamíno)-6H-pyrid15 azino[l.2-a][l.2]diazepín-I-karboxaniido)-4-oxobutanová kyselina
Směs 205 mg (0,364 mmol) [3S, 2R,S, (1S,9S)]-N-(2-bcnzyloxy-5-oxotctrahydrofuran-3yl) 6.10 dioxooktahydro-9-(3-fenylpropionylamino)-6II-pyndazmo| 1,2—aJl 1,2|diazepin-1karboxamidu (sloučeniny 46a). 10% palladia na uhlí (200 mg) a 20 ml methanolu se míchá
2d v atmosféře vodíku za atmosférického tlaku po dobu 5 hodin. Směs se zfíltruje a poté se zahustí, čímž se získá 154 mg (90 %) sklovité látky o teplotě tání 116 až 118 °C. fa]μ2' -140° (e - 0,1, methanol)
Infračervené spektrum (KBr): 3323 (široký signál), 1783, 1731, 1658, 1539, 1455. 1425 'H-NMR (pcrdcutcromethanol), hodnoty δ: 7,21 (5H, m). 5,17 (lil, m), 4,73(111, m), 4,50 (2H.m). 4.23 (III, m), 3,38 (IH, m), 3,06 (IH, rn), 2,91 (2H. m), 2,73 - 2,18 (6H. m), 2,01 - 1.59 (5H, ni)
Analýza pro C23H37N4O7 + H2O:
vypočteno: 56,32 % C, 6,16 % Η. 11.42 % N; nalezeno: 56,29 % C, 6,1 I % Η, 11,25 % N.
Hmotová spektrometrie (FAB, m/z): 473 (M' + 1), 176. 149, 105, 91
Sloučenina 47b: [3S. (1 S.9S)]-3-(oktahydro lO-oxo-9-(3-fenylpropionylamino)-6II-pyridazinof 1.2-a]| 1.2]diazepm 1 karboxanndo) 4 oxobutanova kyselina sc připraví ze sloučeniny 46b způsobem popsaným v případě sloučeniny 47a. Zbytek se vyčistí velmi rychlou chromatografií za použití 0 až 10% methanolu v chloroformu jako elučního činidla, čímž se získá 65 mg (52 %) sklovité látky o teplotě tání 87 až 90 °C.
[cfji/1 -167,0° (e = 0,1, methanol)
Infračervené spektrum (KBr): 3329, 2936, 1786, 1727, 1637 45 'll-NMR (perdcuteromethanol), hodnoty Ó: 7.23 (511, m), 5.29 (IH. m). 4.83(111, m). 4,59 (1H, d, J = 3,6), 4,29 (111, ni), 3,3 - 3,0 (3H, ni). 2,91 (2H, m), 2,70 2.34 (511, m). 2.19 (211, m), 1,75(411, m), 1,36 (2H.m)
Analýza pro CV.H^NiCf, + 0,5FFO:
vypočteno: 59,09 % C, 6,68 % i 1, 11,98 % N; nalezeno: 58,97 % C\ 6.68 % Η. 11,73 % N.
Hmotová spektrometrie (FAB. m/z): 459 (Μ + 1), 310. 149. 105. 91.
-44 CZ 300171 B6
OH (55)
Ri-
(56)
Ri
R2 R3 (a) PhCHZ Λ (b) Ph*CH2-CH2x -CH2’Fh H
Sloučenina 56a: terc-butyl-\-2-(3 benz\lox\karbonxlamino 1,2-dihydro-2-oxo-1-pyridyl)acetyl-3-aniino-5 (2.6 diehlorbenzoyloxy)-4-oxopentaiioát s Octová kyselina 55a (WO 93/21213) ve 2 ml tetrahydrofuranu se míchá při teplotě místnosti a přidá se 60 mg (0,448 mmol) l-hydroxybcnzotriazolu a 47 mg (0.246 mmol) dimethylaminopropyl-3-cthylkarbodiimidu hydrochloridu. Po uplynutí 5 minut se přidají 2 kapky vody a v míchání se pokračuje po dobu 20 minul. Přidá se 6 mg bis(trifenylfosfín)palladium(Il)chloritlu a poté roztok 103 mg (0,224 mmol) tere-butyl-3-(allyloxykarboiiylamino)-4-oxo-5-(2.6o dichlorbenzoyloxy)pentanoátu (WO 93/16710) v 1 ml tetrahydrofuranu. V průběhu I hodiny sc při teplotě místnosti po kapkách přidá 0,09 ml (0,336 mmol) tri buty Icínhydridu. Směs se míchá po dobu dalších 3 hodin a vylije se do ethylacctátu. promyje se 1M kyselinou chlorovodíkovou, vodným hydrogenuhličitanern sodným a roztokem chloridu sodného, vysuší se nad síranem hořecnatým a zahustí ve vakuu. Zbytek se trituruje s pentanem a supernatant se odstraní. Zbylá pevná látka se vyčistí velmi rychlou chromatografií za použití 50% ethy lacetát u v hexanu jako elučního činidla, čímž. se získá 92 mg (63 %) sloučeniny uvedené v názvu ve formě bezbarvého oleje.
fot],Λ -29,6° (c = 1,1. dichlormcthan)
Infračervené spektrum (film): 3377, 3365, 3332, 3312. 1733. 1691, 1650, 1599, 1515. 1366, 1261, 1153, 1068, 747 'H-NMR (deuterochloroform). hodnoty 6: 8,09 (lil, d. J- 6,8), 7.84 (IH. s). 7,58 (IH. d. 5 J = 8,3), 7,33 (8H. m), 7,02 (1H, dd, J -6,9, 1,7), 633 (1H, t, J - 7,2), 5,20 (2H. s), 5,12 (211, m),
4,89 (lil. dt), 4,65 (211, m), 2,80 (211, m), 1,38 (9H, s)
Sloučenina 56b: terc-butvl-N-2-(6-benz> 1-1,2-dihydro-2-oxo-3-(3-fenylpropionyl)aniino-lpyridyl)acetyl-3-amino-5-(2,6 diehlorbenzoyloxy)-4-oxopentanoát se připraví způsobem popil sáným v případe sloučeniny 56a, přičemž, se získá sloučenina uvedená v názvu s výtěžkem 66 % ve formě bezbarvého oleje.
Infračervené spektrum (film): 3364. 3313, 1738. 1688, 1648. 1600, 1566. 1514, 1433, 1369,
1254,1152 S '11-NMR (deuterochloroform), hodnoty <5: 8,40 (111, d, J ~ 7,6), 8,30 (ΠΙ. s), 7,28 (13H, m), 6.20 (IH, d. J = 7.6), 5,12 (2H,q), 4,86(111, m), 4,65 (2H. q), 4,06 (2H. s), 3,07 - 2.61 (611. m), 1.39 (9H. s)
-45 CZ 300171 B6
!56) (57)
O fC°2HO Cl O
Cl
R1 R2 R2
O
i) (a) PhCH2O^ η H
O
I!
(b) PhCHjCHj''' -CHj-Ph H
Sloučenina 57a, O; N 2- (3 -benzyloxv karbony lam i no- l,2-dihydro-2-oxo- 1 pyrídyt)—acelyl—3— amino-5-(2,6-HJichlorbenzoyloxyM-oxopentanová kyselina
210 mg (0,356 mmol) esteru 56a v 0.5 ml dichlormethanu se ochladí na teplotu 0 °C a přidá se
0,5 ml kyseliny trifluoroctové. Směs se míchá po dobu 30 minut, v jejichž průběhu se zahřeje na teplotu 20 °C. Roztok se odpaří do sucha za sníženého tlaku, znovu se rozpustí v dielilonnelhanu a zahustí. Tento postup se provádí třikrát. Zbytek se trituruje s ethylacetátem a naředí etherem, čímž se získá 162 mg (85 %) sloučeniny uvedené v názvu ve formě bezbarvé pevné látky, tající o za rozkladu při teplotě 165 až 168 °C.
-38.8° (c = OJ, methanol)
Infračervené spektrum (KBr): 3332, 3275. 1723, 1658. 1649, 1597. 1581, 1562. 1526. 1432. 5 1385, 1218, 1206 'H-NMR (perdeuterodimethylsulfoxid). hodnoty δ: 8,96 (IH. d. 7,3). 8.34 (lil. s). 7.85 (111. dd. J = 7,3), 7,58 (3H, m), 7,35 (5H. m). 6,29 (IH, t, J = 7.3). 5.26 (2H. m). 5,15 (2H. s), 4.69 (3H.m), 2,75(211, m) o
Analýza pro C^nH^TCCCCl·:
vypočteno: 53,66 % C, 3,84 % H, 6,95 % N: nalezeno: 53,36 % C, 3.90 % H, 6,81 % N.
Hmotová spektrometrie (+ ΓΑΒ): 604 (M i 1),285,241, 195, 173, 149.91 $
Sloučenina 57b, P: N-2-(6-bcnzyl-l,2-dihydro-2-oxo-3-(3-fenylpropionyl)amiiio 1 pyridyl)acctvl-3-ainino-5-(2,6-dichlorbenzoyloxy)-4-oxopentanová kyselina se připraví způsobem popsaným v případě sloučeniny 576a, přičemž se získá sloučenina uvedená v názvu s výtěžkem 78 % ve formě bezbarvých krystalů tajících za rozkladu při teplotě 116 až 120 °C.
o [ajif6 “41,1° (c “ OJ. methanol)
Infračervené spektrum (KBr): 3299, 1739, 1715, 1689, 1666, 1645, 1598. 1563. 1518. 1432, 1209,1151
-46CZ 300171 B6 'H-NMR (perdeuterodimelhylsulfoxid), hodnoty δ: 9,24 (IH, s), 8,88 (IH, d, J- 7,6), 8,18 (11-1, d, J= 7,7), 7,60 (3H, m), 7,26 (10H. m), 6.06 (IH. d. J “ 7,7), 5,23 (2H, ABq), 4,69 (3H, m), 3.93 (211, s), 2.78 (6H. m)
Analýza pro Ο^ΙΙηΝίΟ^ΟΒ.ΗΌ:
vypočteno: 59,16 % C, 4.68 % H, 5,91 % N; nalezeno: 59,38 % C. 4,53 % 11, 5,84 % N.
Hmotová spektrometrie (+ ΓΑΒ): 694 (Cl ~ 35, 37), (Μ + 1), 692 (Cl - 35. 35) (Μ + 1)
(a) R1 = OCH3, R2 = H (b) R1 = H, R2 = OCH3 io Sloučenina 65a: Směs 2,62 g (15,5 mmol) 2-nitro-ó-methoxy fenolu (EP 333176) a 10% palladia na uhlí (130 mg) v 50,0 ml ethanolu se míchá v atmosféře vodíku po dobu 75 minut. Směs se /filtruje přes křemelinu a bezprostředně poté se k ní přidá 32,0 mg p toluensulionové kyseliny a 6,45 ml (38,8 mmol) triethylorthoformiátu. Poté se směs zahřívá k varu pod zpětným chladičem
-47CZ 300171 B6 v atmosféře dusíku. Po 20 hodinách se přidá 30,0 mg o-toluensulfonové kyseliny a 6,45 ml (38.8 mmol) triethylorthoformiátu. Po celkové době zahřívaní 44 hodin se reakční směs nechá vychladnout a zahustí se ve vakuu. Výsledný zbytek se vyčistí velmi rychlou chromatografií za použití směsi ethylacetátu a hexanu v poměru 25 : 75 jako elučního činidla, čímž se získá 1,97 g ? (85 %) sloučeniny uvedené v názvu ve formě žluté pevné látky o teplotě tání 28 až 31 °C.
Infračervené spektrum (KBr): 1629, 1497, 1434, 1285, 1097 ]H-NMR (deuterochloroform). hodnoty 5: 8,09 (IH. s), 7,40 (111, d. J= 8.0). 7,28 (IH, t, in J = 8,0), 6.89 (1H. d. J = 8.0), 4.02 (3H.'s) HC-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 152.84. 145,82. 142,50, 139.99. 125,75. 113.42, 108.80.56.97
Analýza pro CxHtNiOj, 11LO:
vypočteno: 63,65 % C, 4,81 % 11, 9,29 % N; nalezeno: 63,43 % C, 4,88 % H, 9,05 % N.
Hmotová spektrometrie (+ FAB): 150 (Μ + 1) :o Sloučenina 65b: 4 methoxybenzoxazol
K suspenzi 2,00 g (14,8 mmol) 4-hydroxybenzoxazolu (Musser a kol., J. Med. Chem., 30, str. 62 - 67 (1987)) v 80,0 ml acetonu se přidá 2,25 g (16,3 mmol) vysušeného uhličitanu draselného a poté 1,38 ml (22,2 mmol) jodmethanu. Reakční směs se zahřívá k varu pod zpětným chla2? dičem v atmosféře dusíku po dobu 4,5 hodiny, poté se /Filtruje a zahustí ve vakuu. Čímž se získá surový produkt. Výsledný zbytek se vyčistí velmi rychlou chromatografií za použití směsi ethylaeetálu a hexanu v poměru 25 : 75 jako elučního činidla, čímž se získá 2.0 g (91 %) sloučeniny uvedené v názvu ve formě bíle krystalické pevné látky o teplotě tání 72 až 74 °C.
ío Infračervené spektrum (KBr): 3089, 1619, 1610, 1503, 1496, 1322. 1275, 1090. 1071,780,741
Íl-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 8,02 (111. s), 7,32 (Hl. t, J- 8,0). 7.18 (Hl. d, J - 8.0). 6.81 (1H, d, .1 - 8,0), 4,04 (311, s)
Analýza pro vypočteno: 64.42 % C, 4,73 % H, 9,39 % N; nalezeno: 64.40 % C, 4.84 % H, 9,31 % N.
Hmotová spektrometrie (m/z; El. ionizace nárazem elektronu): 149 (M t 1. 100 %)
Sloučenina 66a: (3S, 4R.S)-terč-buly 1 N (allyloxykarbonyl)-3-amino^4-hydrox\M-(2-(7methoxybenzoxazolyl))butanol
K míchanému roztoku 548,6 mg (3,68 mmol) 7 methoxybenzoxazolu 65a v 18.5 ml bezvodého tetrahydrofuranu se při teplotě -78 °C v atmosféře dusíku po kapkách přidá 2,47 ml I.56M roz45 toku n-butyIlithia v hexanech (3,86 mmol), za vzniku žlutě zbarveného roztoku. Směs se míchá při teplotě -78 °C po dobu 20 minut a poté se přidá 1,045 g (4,05 mmol) suchého MgBnOelhyh ve formě pevné látky. Výsledná heterogenní směs se zahřeje na teplotu -45 °C a míchá se po dobu 15 minut. Reakční smčs sc poté znovu ochladí na teplotu -78 ĎC a po kapkách se přidá roztok 946,4 mg (3,68 mmol) (Sj-allyloxykarbonyl-Asp(tere-buty l)Hlb v 18.5 ml tetrahydro5o furanu. Reakční směs se míchá při teplotě -78 °C po dobu 30 minut, zahřeje se na teplotu 0 °C a míchá se po dobu 1 hodiny. Výsledná homogenní reakční směs se zahřeje na teplotu místnosti a míchá se po dobu 16 hodin. K reakční směsi se přidá 3,5 ml 5% roztoku hydrogen uhličitanu sodného a poté se ve vakuu odstraní tetrahydrofuran. Výsledný vodný zbytek se extrahuje šestkrát
-48CZ 300171 B6 methylenchloridem. Smíchané extrakty se promyjí roztokem chloridu sodného, vysuší se síranem horečnatým, /filtrují a zahustí ve vakuu, čímž se získá 1,8 g surového produktu. Velmi rychlou chromatografií za použití směsi ethylacetátu a hexanu v poměru 40 : 60 se získá 1.2 i g (81 % sloučeniny uvedené v názvu ve formě oleje, jako směsi diastereoizomerů na uhlíku C—4.
Infračervené spektrum (dichlormethan): 3425, 2983, 1725. 1504, 1290, 1157, 1101 'll-NMR (deuterochloroform), hodnoty Ó: 7,35 - 7,19 (2H, m), 6.89- 6.81 (111. m). 6,00 - 5,57 (2H, m). 5,32 - 5,05 (311, m), 4,68 -4,35 (311, m), 4,01 (3H, s). 2.86 2.59 (2H, m). 1,45 κι (9H, s). 1,41 (9H, s) hC~NMR (deuterochloroform). hodnoty δ: 171.18, 171.09, 165.80. 165,30. 156,71, 156,60. 145,65, 142,76, 142.71, 140,82, 140.72. Ί 33,23. 125,81, 125.72, 118.41. 118.21, 113,07, 112.87. 108,95. 82.16, 70,28, 69,98, 66,52, 66.39, 57,03. 52,57, 52.29, 37,83, 36,86, 28,65 i?
Analýza pro C2(,I l26N2O7,0,6H2O:
vypočteno: 57.57 % C. 6.57 % I I, 6,72 % N; nalezeno: 57.49 % C, 6,34 % I I. 6,60 % N.
Hmotová spektrometrie (+FAB):407(M + 1). 351. 307, 154
Sloučenina 66b: (3$, 4R,S) -tere butyl N (allyloxykarbonyl)-3-amino-4-hydroxy-4-(2-(4methoxybenzoxazolyl))butanoát se připraví způsobem popsaným v případě sloučeniny 66a, čímž se získá 1,29 g (26 %, 68 % vztaženo na zpětně izolovaný výchozí materiál) sloučeniny uvedené v názvu ve formě oleje, jako směsi diastereoizomerů na uhlíku CM.
Infračervené spektrum (dichlormethan): 3400, 1725, 1625, 1505, 1369, 1354, 1281. 1263, 1226, 1158. 1092. 1048 '11-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,34 - 7,24 (III, m), 7.16 (IH, d, J ~ 8,2), 6,79 (1H, d, 5o J = 7.9), 6.00 5,50 (2H, m), 5,30 5.05 (3H. m). 4,70 4,35 (4H, m), 4,02 (3H, s), 2,90 - 2,45 (2H,m), 1,45- 1,41 (9H, 2 x s)
Analýza pro ChoH^NiCC.O^HiO:
vypočteno: 58.07 % C. 6.53 % H, 6,77 % N:
vs nalezeno: 58,09 % C, 6.41 % 11, 6.63 % N.
Hmotová spektrometrie (+ FAB): 407 (M + 1. 88 %). 351 (100)
Sloučenina 67a: (3S, 4R,S)-terc-butyl-N-(N-acetyl-(S)-(O-terc-butyltyrosinyl)-(S)~valinyl(S)-alaninyl)-3-aminoK-hydroxyM-(2-(7-methoxybenzoxazolyI))butanol
K míchanému roztoku 481.9 mg (1,19 mmol) benzoxazolu 66a a 586,3 mg (1,30 minol) acetyl-Tyr(terc-butyl)-Val-Ala-OH v 3,5 ml methy lench tor idu a 3,5 tni dimethylformamidu se přidá 18,0 mg bis(trifenylfosfin)palladium(ll)chloridu a poté po kapkách 0,80 ml (2,96 mmol) tributylcínhydridu. Přidá se 320,4 mg (2.37 mmol) hydroxybcnzotriazolu a směs se ochladí na teplotu 0 °C. Přidá se 278,2 mg (1,42 mmol) l-ethyl-3-[3-(dimethylamino)propyl|karbodiimidhydrochloridu, směs se nechá zahřát na teplotu místnosti a míchá se po dobu 16,5 hodiny. Reakční směs se naředí ethylacctátem a promyje se dvakrát IM roztokem hydrogensíranu sodného, dvakrát nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, vodou a roztokem chloridu sodného. Organická vrstva se vysuší síranem horečnatým, /filtruje a zahustí ve vakuu, čímž se získá 2,0 g surového produktu. Velmi rychlou chromatografií za použití směsi methy len chloridu a methanolu v poměru 95 : 5 se získá 844,0 mg (94 %) sloučeniny uvedené v názvu ve formě bílé pevné látky o teplotě tání 205 °C.
-49CZ 300171 B6
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3399, 3304, 2977. 1729. 1643. 1506, 1367, 1290, 1161 'H-NMR (perdeulerodimethylsulfoxid). hodnoty δ: 8,24 - 7,78 (411. m), 7,43 - 7,32 (211. m).
7,23 (21 i, d, J = 8,5), 7,16 - 7.07 (1H, m), 6,93 (2H. d. J - 8,5). 6,52, 6.40 (1H, 2 x d, J - 5.5.
J - 5,0), 5,03. 4,78 - 4.49, 4,45 - 4,16 (5H. široký t, 2xm). 4,05, 4,04 (311, 2 x s), 3,08-2,35 (14H, m), 2.11 - 1.89 (IH,m), 1,83 (3H, s). 1,49-4,32. 1,15, 1,0-0,81 (27H, s, 2 x m, J = 7,0) 1'C-NMR (perdeuterodimethylsulfoxid), hodnoty 8: 1 75,55, 175,18, 173,88. 173,75, 173,05, 169,23. 157,28, 148,55, 146,16, 143,21. 136.63, 133,55, 128,87, 127, 17. 115,78. 111.92, 84,02, io 81,50, 71,40. 61.15, 60,05, 57,79. 53,39. 51.62, 43.76, 40,52, 34,58, 32.52. 31,60, 26.35. 23.11.
22.71.21,76
Analýza pro C^HssNsOkj.O.SI HO:
vypočteno: 61,40 % C, 7.40 % H, 9,18 % N;
c nalezeno: 61,43 % C, 7,31 % H. 9,07 % N.
Hmotová spektrometrie (+ FAB): 754 (Μ + 1), 698, 338. 267
Sloučenina 67b: (3S, 4R,S)-terc-butyl-N-(N- acetyT-(S)-(O-terc-butyl-tyTosinyl)-(S) valinyl (S)-alaninyl)-3-amino-4 -hydroxy-4-(2-(4-methoxybenzoxazolyl))butanoát se připraví zpúso2i) bem popsaným v případe sloučeniny 67a, čímž se získá 1,05 g (94%) sloučeniny uvedené v názvu ve formě jemného bílého prášku, který taje za rozkladu při teplotě 210 až 213 °C.
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3284, 2977, 1736, 1691, 1632, 1536, 1505, 1452,
1392. 1367. 1258, 1236, 1161, 1091 'H-NMR (perdeuterodimethylsulfoxid). hodnoty Ó: 8,20 - 7,75 (411, m). 7.40 - 7.10 (4H, m),
7,00 - 6,80 (3H. m). 6,45, 6,34 (IH, 2 x d. J - 5,3, J - 5,0). 5,00 4,10 (5H. m), 4,00, 3,99 (3H. 2 x s). 3,00 - 2,25 (4H, m), 1.95 (1H, m), 1,78 (3H. s). 1,39 - 0,80 (2711, m)
Analýza pro Cv)H55NsO|o, 0,5 HA):
vypočteno: 61.40% C. 7,40 % H. 9.18 % N; nalezeno: 61,58 % C, 7,38 % 11, 8,91 % N.
I imotová spektrometrie ('+ FAB): 754 (Μ + 1, 30 %), 72 (100) *5 Sloučenina 68a: (3S) terč butyl N -(N-aeetyl-(S)-(O-terc-butyl-tyrosinyl· (S) valiny!-(S)-alaninyl) 3 -a m i no-4-hy droxy ^4-( 2-(7-methoxy benzoxazolyl ))--4 oxobutanoát
K míchané suspenzi 641,0 mg (0.85 mmol) alkoholu 67a ve 46.0 ml inelhylenchloridu se přidá 1,082 g (2,55 mmol) Dess Martinova činidla (Ireland a kol.. J. Org. Chein., 58, str. 2899 (1993),
Dess a kol., J. Org. Chem., 48, str. 4155 až 4156 (1983)), Výsledná směs se míchá po dobu I hodiny a poté se roztrepe mezi 86,0 ml směsi nasyceného thi os iránu sodného a nasyceného hydrogen uhličitanu sodného v poměru 1:1a 86.0 ml ethylaeetátu. Výsledná organická fáze se postupné promyje směsí nasyceného thiosíranu sodného a nasyceného hydrogenuhličitanu sodného v poměru 1 : 1, nasyceným hydrogenuhličitanem sodným a roztokem chloridu sodného.
Organická fáze se vysuší síranem hořcěnatým, zfiltruje a zahustí ve vakuu, čímž se získá 660,0 mg surového produktu. Velmi rychlou chromatografií za použití směsi methylenchloridu a methanolu v poměru 94 : 6 jako elučního činidla se získá 636,0 mg (100 %) sloučeniny uvedené v názvu ve formě bílé pevné látky o teplotě tání 209 °C.
[a]L)24 -21,8° (e = 0,16, methanol)
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3395, 3294, 2977, 1722. 1641, 1535, 1505. 1161
-50CZ 300171 B6 1 H-NMR (dcuterochloroform), hodnoty δ: 8,43 - 8,16 (1H, m), 7.97 - 7.62 (2H. ni), 7,49 - 7,14 (3H. m). 7,08 - 6,95 (311, m). 6,89 - 6,73 (211, m), 5,81 - 5.68 (1H. m), 5,16 - 4,86 (211. m). 4.53 (IH. široký t), 4.03 (3H, s). 3,16 - 2,84 (4H. m), 2,11 - 1,84 (411. m). 1.46 - 1.14 (21H. m). 0,92 - 0,78 (611, m) ”C-NMR (deulcrochlorolorm). hodnoty δ: 186,28, 173.39. 171.90. 171.19, 171,03, 169,89. 156.43. 154.75. 146.32. 142.88, 140,983, 132.31, 130.54. 126.98, 124,73. I 14.95. 111.42. 82.44, 78,71, 58,92, 57,20, 54,91, 53,47, 48,77, 39,43, 38.15, 32.79, 29.44. 28,60, 23.55. 20,27. 19.70. 19.34 to
Hmotová spektrometrie (+ FAB): 752 (Μ + 1), 696. 336, 265
Sloučenina 68b: (3S)-terc-buty l-N-(N-aeety l-(SHO-terc-butyl-tyiOsinyl-($)-valinyl (S) alaninyI)-3-amÍno-4-hydrox\M-(2-(4-methoxybenzoxazolyl)) 4 oxobutanoát se připraví zpú15 sobem popsaným v případě sloučeniny 68a, čímž se získá 420 mg (55 %) sloučeniny uvedené v názvu ve Formě bílé pevné látky tající za rozkladu při teplotě 211 až 213 °C.
|alo’4 -23,9° (c = 0,82, methanol) ?o infračervené spektrum (bromid draselný): 3277, 3075, 1723, 1690, 1632, 1530, 1506. 1392. 1366. 1269. 1234. 1160. 1094 lH-NMR (dcuterochloroform). hodnoty δ: 8.15 (111, široký s). 7,7 (211. široký s). 7.46 (IH. t. J = 8.3). 7,24 (2H. d. J = 8,3). 7.10 (IH. široký s), 7,03 (2H, d. .1 = 8.3), 6,83 (3H, m), 5,74 (IH. q, ,1= 6,9), 5,00 (211, m), 4,51 (IH, t, J= 7,0), 4,07 (3Π, s), 3,20 - 2,95 (411, m), 2.00 (411. m). 1.42 (3H, d. J = 6,8). 1.35 (9H, s). 1,23 (9H. s), 0,86 (6H. d, J = 6.7)
Hmotová spektrometrie (+ FAB): 752 (M‘ + 1.7%), 72 (100) sa Sloučenina 69a: R, (3S)-N-(N-acetyl-(S)-tyrosinyl-(S)-valinvl-(S)-alaninyl)-3-amino-4-{2(7-methoxybenzoxazoly 1))-4-oxobutanoát
Roztok 600.0 mg (0.80 mmol) esteru 68a v 65,0 ml směsi methylenchloridu a kyseliny trifluoroctové v poměru 1 : 1 se míchá po dobu 1 hodiny v suché atmosféře dusíku. Roztok se poté zahustí ve vakuu, vyjme se etherem a znovu se zahustí. Tento proces se šestkrát opakuje, čímž se získá surový produkt ve formě špinavě bílé pevné látky. Velmi rychlou chromatografií za použili směsi methylenchloridu a methanolu s gradientem 95 : 5 do 80 : 20 jako elučního činidla sc získá 420,8 mg (83 %) sloučeniny uvedené v názvu jako hygroskopické bílé pevné látky, l ato sloučenina existuje v perdeuleromethanolu jako směs tři izomcrů, kterou tvoří ketoforma (koncentrace
50 %) a její acykloxyketoforma (dva izomery na uhlíku C-4. koncentrace 50 %). Produkt taje za rozkladu při teplotě vyšší než 150 °C. fíxjrC1 -33.2° (c - 0,17. methanol)
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3300, 1715. 1658, 1650, 1531, 1517, 1204 1 H-NMR (perdeuteromelhanol). hodnoty δ: 7,46 - 7,19 (2H, in), 7,16 6,91 (3H, ni), 6,70- 6,59 (2H, m), 5,62 - 5,49 (111, m), 5,00 - 4,72 (lil, nejasné m), 4,69 - 4,51 (IH, rn). 4,49 - 4,08 (2H, m), 4.05 - 3,89 (3H, m), 3,16 2,47 (4H, m), 2,05 - 1,78 (411, m), 1,41 - 1,11, 1,05 - 0,70 (9H, 2 x m)
Analýza pro CXilhyNsOioJHiO:
vypočteno: 53,67 % C, 6.25 % H, 10,10 % N; nalezeno: 53,76 % C, 5.56 % H, 10,28 % N.
-51 CZ 300171 B6
Hmotová spektrometrie (+FAB): 640 (M' + 1),435, 147
Sloučenina 69b: (3S)—terč—butyl—N—fN—aeetyl—(S)—tyrosiny1—(S)—valinyl—(S)—alaninyl)-3am i n 0-4-(2-(4 -methoxybenzoxazoly 1))-4 oxobutanoat (sloučenina 69b. S) se připraví zpuso> bem popsaným v případe sloučeniny 69a, čímž se získá 252 mg (96 %) hygroskopické sloučeniny uvedené v názvu. Tato sloučenina existuje v perdeuteromethanolu jako směs tří izomerů. kterou tvoří ketoforma a její acykloxyketo forma (dva izomery na uhlíku C^t).
V perdeuterodimethylsulfoxidu existuje tento produkt jako jediný izorner. Taje za rozkladu při teplotě 200 až 203 °C.
io [ajt/1 -38,0° (c = 0.23. methanol)
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3289, 2968. 1718, 1713. 1658, 1634. 1548. 1547, 1506, 1461, 1453. 1393, 1369, 1268, 1228, 1174, 1092 'll-NMR (perdeuterodimethylsulfoxid), hodnoty δ: 9.20 (111, široký s), 8.71 (111, d. J 6,2), 8,10 (2H, m). 7,83 (IH, d. J = 8.7), 7,61 (IH. l, J = 8,2), 7,46 (1H. dj - 8.2), 7,08 (3H,m), 6.65 (2H, d, .1 = 8.3). 5,50 (lH,q, .1 - 6.5). 4,50 (IH, m). 4.37 (IH. m), 4.20 (IH. ní). 4.05 (311, s), 3,09 - 2,77 (411, m). 1.94 (111. m), 1,79 (311. s). 1.23 (311, d. J - 7.0), 0.82 (6H. m)
Anály za p ro Ct F I?N 5 O i 1,5 H 2 O:
vypočteno: 55,85 % C. 6.06 % 11, 10,51 % N: nalezeno: 55,21 % C. 5.69% 11, 10,13 %N.
Hmotová spektrometrie (+ FAB): 640 (M + 1.22 %), 107 (100)
Sloučenina 99: Roztok 2,71 g (12,7 mmol) 5 (2,6 diehlorfenyl)oxazolu (připraveného podobným způsobem jako je popsán v Tet. Tett. 23, str. 2369 (1972)) v 65 ml tetrahydroluranu se ochladí v atmosféře dusíku na teplotu -78 °C. K tomuto roztoku se přidá 8,5 ml I.5M roztoku n—blityIlithia v hexanu (13,3 mmol) a směs se míchá při teplotě -78 °C po dobu 30 minut. Přidá u se 3.6 g (13,9 mmol) etherátu bromidu hořečnatého a teplota roztoku se na 15 minut nechá vystoupit na -45 °C. Reakční směs se ochladí na teplotu -78 °C a po kapkách se přidá roztok 3.26 g (12.7 mmol) aldehydu 58 (Graybill a kol., hit. .1. Protein Res.. 44. str. 173 - 182 (1993)) v 65 ml tetra hydro fu ránu. Reakční směs se míchá po dobu 25 minul, poté se teplota nechá vystoupit na 40 °C a směs se míchá po dobu 3 hodin a poté se míchá po dobu 1 hodiny při teplotě místnosti.
*5 K reakční směsi se přilije 12 ml 5% roztoku hydrogenuhliěitanu sodného a směs se míchá po dobu 3 hodin. Tetrahydrofuran se odstraní ve vakuu a výsledný zbytek se extrahuje dichlormethaneni. Organická vrstva se pro myje nasyceným roztokem chloridu sodného a vysuší se nad síranem horečnatým, /filtruje a zahustí, čímž se získá 6,14 g sloučeniny uvedené v názvu. Vyčištěním se získá 4.79 g {80 %) sloučeniny 99.
'H NMR (deuterochloroform), hodnoty ó: 1,45 (s, 9H). 2,7 - 2,5 (ni, 2H), 2,8 (dd, lil). 4,2, 4,4 (2 x d, 1H), 4,7 4,5 (m, 3H), 5,35 - 5,1 (m, 2H), 5,6, 5,7 (2 x d, IH), 6,0 5,8 (m. 1H), 7,2 (d, lil). 7,3 (ni, 1H). 7,4 (m, 2H)
- 52 CZ 300171 B6
a R - H b R~COCH2CH2Ph e R = CH2Pb s
Sloučenina 104a: Methylester [ 2-oxo-3(S )-(3-fcnylprop iony lam i no )-2,3.4.5-tetrahydrobenzo[b]f 1„4]diazepin— 1 —y I joctové kyseliny
Roztokem 1 g (2,86 mmol) methylesteru (3(S)-terc-butoxykarbonylamino-2-oxo-2.3,4,5 tetraii) hydrobenzo[bjll,4]diazepin-l-yl)octové kyseliny (sloučeniny 103) ve 25 ml elhylaeetátu se po dobu 2 minut nechá probublávat bezvodý chlorovodík a směs se poté míchá po dobu 1 hodiny při teplotě místnosti. Reakční směs se odpaří, čímž se získá hydrochlorid methylesteru 2-oxo-3(S)amino-2.3,4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]diazepin-Tyloctové kyseliny ve formě bílé pevné látky.
Tento hydrochlorid a 0,47 g (3,15 mmol) hydroskořieové kyseliny se rozpustí ve 20 ml dimethylis formani idu a roztok se ochladí na teplotu 0 °C. K tomuto roztoku se přidá 1 ml (5,72 mmol) diisopropylelhylaminu a poté se přidá N-hydroxybenz.otriaz.ol a l-(3-dimethylaminopropyl)-3 ethylkarbodiimid-hydrochlorid. Směs se míchá po dobu 18 hodin při teplotě místnosti, poté se naředí 150 ml ethylacetátu a promyje se 10% hydrogensíranem sodným, 10% hydrogenuhličitanem sodným a roztokem chloridu sodného. Organická vrstva se vysuší nad bezvodým síranem
2o sodným, zfiltruje a odpaří, čímž se získá surová pevná látka, která se vyčistí velmi rychlou chromatografií za použití směsi ethylacetátu a dichlormethanu v poměru 7 : 3 jako elučního činidla. Získá se 600 mg (55 %) sloučeniny uvedené v názvu ve formě bílé pevné látky.
'll-NMR (deuterochloroform), hodnoty 6: 7.3 - 6,85 (9H. m). 6,55 6,0 (111, d), 4,88-4,82 (IH, ni), 4.72 - 4,65 (IH, d), 4,28-1.22 (IH. ni), 3,95 · 3,9 (III, ni), 3,78 (311, s), 3,65 (lil, široký s). 3.28 - 3,2 (1lí, m), 2.95 - 2.84 (2H, m). 2,55 - 2,4 (2H. m)
Sloučenina 105a: (3(S)-(3-fenylpropÍonylamino)-2-oxo-2.3.4.5-tetrahydrobenzo-|b]| 1,4]diazepin-l-yl)octová kyselina
Methylester (3(S)-T3-fenylpropionylaniino)-2-oxo-2,3,4,5-tetrahydiObenzo[b][ 1,4[diazepin-1 vl)octové kyseliny (sloučenina 104a) se rozpustí v 90% methanolu. K reakční směsi se přidá hydrát hydroxidu lithného a směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 4 hodin. Reakční směs se odpaří ve vakuu, čímž se získá bílá pevná látka. Tato pevná látka se rozpustí ve 20 ml vody, roz35 lok se okyselí na pil 5 a extrahuje se ethylacetátem, čímž sc získá 304 mg (88 %) sloučeniny uvedené v názvu ve formě bílé pevné látky.
- 53 CZ 300171 B6 1 H-NMR (deuteroehloroform). hodnoty Ó: 7.5 - 6.9 (1 IH, m), 4.92 - 4,8 (IH. m). 4,7 4,58 (IH, d). 4.38 - 4.25 (lil, d), 3.88 - 3.78 (III, m), 3,45 - 3,25 (lil, ni). 3,05 - 2,85 (211. m). 2.55 - 2,45 (2H, m)
Sloučenina 106a: 4-oxo-3(S)-í2-[2-oxo-3(S)-(3-fenylpropionylamino)-2,3,4,5-tetrahydrobenzo(b][ 1,4Jdiazepin 1 yl]acetylamino|máselná kyselina
N-[ 1 —(2—benzy I oxy-5-oxotetrahydrofuran-3-ylkarbamoyl methyl )-2-oxo-2,3.4.5-tetrahydro1 H-bcnzo(bl[ 1,4]dia7.cpin-3-yll-3-fenylpropionamid se připraví ze sloučeniny 105a postupem popsaným v příkladu 3 pro sloučeninu H (stupeň A), čímž se získá 390 mg (93 %) produktu ve formě diastereomerů.
'H-NMR (perdeuteromethanol), hodnoty Ó: 7,58 - 7,22 (1411, m). 5,78 - 5.73 (0,514. d), 5,64 (0.5H. s), 5,0 - 4,72 (4H. m), 4.54 4,42 (2H. m), 3,82 3,76 (0.5H. ni). 3,68 - 3,62 (0.5H, m).
3,28 - 3,21 (0.511. ni), 3,19- 3,12 (0.5H, m), 3,07 - 2.98 (2H. m), 2,78 - 2,48 (411. m)
Výsledný produkt sc přemění na sloučeninu 106a způsobem popsaným v příkladu 3, v případě sloučeniny 11 (stupeň I)), přičemž se získá sloučenina uvedená v názvu ve formě bílé pevné látky s výtěžkem 17 %.
‘fl-NMR (perdeuteromethanol). hodnoty Ó: 7,54 - 6.98 (9H, m), 5,58- 5,44 (111, ni), 4,8- 4.2 (4H. ni). 3.96 - 3.3 (2H, m), 3,30 3,05'(1H, m), 2,98 - 2,25 (5H. ni)
Sloučenina 104b: Methylester [2-oxo-5-(3-fenylpropionyl)-3(S)-(3-fenylpropionylaniino)2.3.4.5- tetrahydrobenzofb]|4,4]diazepin-l-yl]octové kyseliny
Roztokem 1 g (2,86 mmol) methylesteru (3(S)-tere-butoxykarbonylamino 2 oxo 2,3,4,5 letrahydrobenzo[b][l.4]diazepin-l-yl)octové kyseliny (sloučeniny 103) ve 25 ml ethylacetátu se po dobu 2 minut nechá probublávat bezvodý chlorovodík a směs se poté míchá po dobu 1 hodiny při teplotě místnosti. Reakční směs se odpaří, čímž se získá hydrochlorid methylesteru 2-oxo-3(S)amino 2,3,4.5 tetrahydrobenzo(bJ-[l,4Jdiazepin-l-yloctové kyseliny ve formě bílé pevné látky. Tento hydrochlorid se suspenduje ve 20 ml dichlormethanu a ochladí se na teplotu 0 °C. K suspenzi se přidá 1,6 ml (11,5 mmol) triclhylaminu a poté se po kapkách přidá 0,9 ml (6 mmol) dihydrocinnamoylchloridu. Směs se zahřeje na teplotu místnosti a míchá se po dobu 18 hodin. Poté se směs naředí 25 ml dichlormethanu a promyje se dvakrát 50 ml vody a jednou 50 ml roztoku chloridu sodného. Organická vrstva se vysuší nad bezvodým síranem sodným, zfiítruje se a odpaří, čímž. sc získá vtskózní žlutý olej, který se vyčistí velmi rychlou chromatografií za použití směsi ethylacetátu a dichlormethanu v poměru 1 : 1 jako clucního činidla. Získá se 1,35 g (92 %) sloučeniny uvedené v názvu ve formě bílé pevné látky.
'H-NMR (deuteroehloroform). hodnoty δ: 7.45 - 7,02 (1411, ni). 6,37 - 6,32 (III, d). 4,78 - 4.72 (IH, ni), 4.52-4,3 (311, ni), 3,82 - 3.77 (IH, m). 3,74 (3H, s), 3.03 2.87 (4H. m). 2.58 2,45 (2H, m), 2,45 - 2,35 (1H, m). 2.25 - 2,16 (1H. m)
Sloučenina 105b: [2-oxo-5-(3-fenylpropionyl)-3-(3(S)-fenylpropionylamino)-2.3,4.5-telrahydrobcnzofblf 1,4]diazcpín- 1 yljoctová kyselina
680 mg (1,32 mmol) methylesteru (2-oxo-5-(3-fenylpropionyl)-3-(3-fěnvlpropionvlainino)-2,3.4.5- tetrahydrobenzo[b][l,4]diazepin-l-yl]oetové kyseliny (sloučeniny 104b) se liydrolyzuje postupem popsaným v příkladu 105a, čímž se získá 645 mg (98 %) sloučeniny uvedené v názvu ve formě bílé pevné látky.
'll-NMR (deuteroehloroform), hodnoty δ: 7,58 (IH. široký s), 7,5 - 7,42 (III. m). 7,35 - 6,95 (14H, m), 4.95 - 4,88 (1H, m). 4.64 - 4,55 (lil, d), 4,54 - 4,45 (1H. t). 4.15 4.05 (1H. d), 3,75 (1H, m), 3,05 - 2,75 (4H, ni). 2,58 - 2,45 (2H, m), 2,45 - 2,28 (Ili, m). 2,25 - 2,14 (I H, m)
-54CZ 300171 B6
Sloučenina 106b; 2-oxo-3(S)-{2-l2-oxo-5-(3-fenylpropionyl)-3(SH3-fenylpropionylamino)-2.3,4,5-tetraliydrobenzo[b][1.4|diazepin-l-yljacetylaminoí máselná kyselina |2-oxo-5 (3-fenylpropionyl)-3-(3-fenylpropionylamíno>-4,3.4.5-tetrahydrobenzo[b][ 1,4]diazepin-l-yljoctová kyselina a semikarbazon terc-butylesteru 3 amino 4 -oxomáselné kyseliny se podrobí reakci postupem uvedeným v příkladu 3 v případě sloučeniny K (stupen A), čímž se získá 350 rng (85 %) bílé pevné látky.
lo 'll-NMR (deuteroehloroform). hodnoty 5: 9,05 (IH. široký s), 7,58 - 7,55 (lil, d), 7.5 7,35 (IH, m), 7,35 - 6,95 (14H, m). 6,75 * 6,72 (IH, d), 6,25 (lil. široký s). 5,25 (IH. široký s). 4,95 - 4.88 (IH. m), 4.8-4,72 (IH, m). 4,55-4,4 (2H, m). 3.92 - 3.88 (lil. d). 3.73 - 3,68 (1H. m), 2,95 - 2,45 (211, m). 2,4 - 2.32 (IH, m). 2.2 -2,12(1 H, m), 1,45 (911, s)
Ze semikarbazonu terc-butylesteru 4-oxo-3-{2-[2 oxo-5-(3-ícnylpropionyl)-3-(3-fenylpropiony lamino)-2,3,415-tetrahydrobenzo[b][1.4]diazepin-l-yl]acety lamino imáselné kyseliny se odstraní chránící skupina, jak je popsáno v příkladu 3, v případě sloučeniny K (stupeň C), čímž se získá 118 mg (47 %) sloučeniny uvedené v názvu ve formě bílé pevné látky.
2u 'll-NMR (perdeuteromethanol), hodnoty Ó: 7.48- 6,95 (1411, m), 4,65 - 4.15 (6H, ni), 3.5 - 3,4 (IH, m). 2.85 2,72 (4H, m). 2.65 - 2,5 (lil, m), 2,5 - 2,34 (3H, m). 2,34 - 2,15 (211, m)
Sloučenina 104e; Methylester [5-ben/yl-2-oxo-3(S)-(3-fěnylpropionylamino)-2,3,4.5-tetrahydrobenzofbj[ l,4jdiazepin-l-yljoetové kyseliny
Do 10 ml dimethylformamidu se přidá 500 mg (1,31 mmol) methylesteru |2-oxo-5-(3-fenylpropionylamino)-2.3,4,5-tetrahydrobenzofb][ 1,4Jdiazepin-l-yl|octové kyseliny (sloučeniny 104a), 155 mg (1,58 mmol) uhličitanu vápenatého a 170 μΙ (1,44 mmol) benzylbromídu a směs se zahřívá po dobu 8 hodin na teplotu 80 °C. Směs se nařcdí 150 ml ethylaeetátu a promyje se
5i) čtyřikrát 50 ml vody. Organická vrstva se vysuší nad bezvodým síranem sodným, /filtruje a odpaří, čímž sc získá viskózní žlutý olej, který’ se vyčistí velmi rychlou chromatografií za použití směsi dichlormethanu a ethylaeetátu v poměru 8 : 2 jako elučního činidla. Získá se 460 mg (75 %) sloučeniny uvedené v názvu ve formě bílé pevné látky.
'll-NMR (deuteroehloroform), hodnoty Ó; 7.34 - 7,05 (14H, m), 6,32 - 6,28 (111, d), 4,84 4.76 (111. d), 4.76 4,70 (1H, m). 4,43 - 4*37 (IH, d). 4.26 - 4,18 < 1H. d), 4.06 4.00 (1H. d). 3.79 (3H, s). 3,45 - 3,37 (111, m), 3,02 - 2,95 (1 H, m). 2,90 - 2,82 (2H, m). 2.5 - 2,34 (211, m)
Sloučenina 105c: [5-benzyl-2-oxo-3(Sý-(3-feny!propionylamiiK>)-2,3.4,5-tetrahydrobenzolbJH) [ K4Jdiazepin—1—yljoctová kyselina se připraví hydrolýzou esteru 102c postupem popsaným v případě sloučeniny 105a, čímž se získá 450 mg (98 %) sloučeniny uvedené v názvu ve formě bílé pevné látky.
'll-NMR (perdeuteromethanol), hodnoty δ: 7,5 7,05 (I4H, m). 6,4 (IH. široký s), 4,85 - 4.55 (211. m), 4.45 - 4,21 (2H, rn), 4.12 - 3,92 (IH, d), 3,45 - 3,3 (111, m). 3,f 2.8 (3H, m),
2.55 - 2,28 (3H.m)
Sloučenina 106c: 3(S)-{2-[5-benzyl-2-oxo-3-(3(S)-fenylpropionylamino)-2,3,4,5-tetrahydrobcnzo[b]| 1.4]diazepin-l-yl]aeetylamino}-4·-oxomásclná kyselina [5 benzyl-2-oxo-3(S)-(3-fěnylpiOpionylamino)-2,3.4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]diazepin-lyljoctová kyselina a semikarbazon tere-butylesteru 3(S)-amino-4-oxomáselné kyseliny se podrobí reakci postupem uvedeným v příkladu 3 v případě sloučeniny K (stupeň A), čímž se získá 260 mg (85 %) bílé pevné látky.
1 H-NMR (perdeuteromethanol), hodnoty ó: 7,35 -7,0(1511. m), 4,94 4,88 (IH, m). 4.68 -4,58 (1Π, d), 4.57 - 4,52 (1H, m), 4,41 - 4,34 (IH, d), 4.3 - 4.23 (IH, d). 4.1 - 4,04 (IH, d). 3,18 - 3,11 (1H, m), 3,09 - 2,98 (IH, ni). 2,78 - 2,72 (2H, t). 2.65 - 2.57 (IH. m), 2.42 - 2,33 (311, m)
Ze semikarbazonu terc-butylesteru 3(S)-{2-[5-benzyl-2- oxo -3(S)-(3-fcnylpropionylamino)2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]diazcpin-l-yl]acetylamino}^l-oxomáselné kyseliny se odstraní chránící skupina jak je popsáno v příkladu 3. v případě sloučeniny K (stupeň C), čímž se získá 168 mg (81 %) sloučeniny uvedené v názvu ve formě bíle zbarvené pevné látky.
!H NMR (perdeutcromethanol), hodnoty δ: 7,37 - 7,0 (14H, m). 4,75 4.62 (1H, ni). 4,6 - 4,45 (2H, m). 4,4 - 4.21 (211, m), 4,15- 3~95 (2H, m), 3,15 - 3,0 (2H. rn). 2,82 - 2,67 (211, ni), 2,65 - 2,52 (1H, ni), 2.5 2,32(3H,rn) [5-benzyl-2-oxo-3(S)-( 3-feny Ipropiony lam i no )-2.3,4,5 tetrahydrobenzo[b]| 1,4]diazepiη-1yljoctová kyselina a semikarbazon tere bulylesteru 3(S)-amino-4-oxoniáselné kyseliny se podrobí reakci postupem uvedeným v příkladu 3 v případě sloučeniny K (stupeň A), čímž sc získá 260 mg (85 %) bílé pevné látky.
H-NMR (perdeuteromethanol). hodnoty δ: 7,35 - 7,0 (15H, m). 4.94 4,88 (IH. ni), 4,68 -4.58 (1H, d), 4.57 - 4,52 (IH. m). 4.41 4.34 (IH, d), 4,3 - 4.23 (111, d), 4.1 - 4,04 (111, d),
3,18- 3.11 (IH, rn), 3,09- 2,98 (111. rn), 2.78 - 2.72 (211, t), 2,65 - 2.57 (IH. m), 2,42 - 2.33 (3H, m)
Ze semikarbazonu terc-butylesteru 3(S)-{2-[5-benzyl-2-oxo 3(S)(3-fěnylpropionylamino)2.3.4.5-tetrahydrobenzo[bJ[l,41diazepin-l-yl]accty'lamino}-4-oxomáselné kyseliny se odstraní chrániči skupina jak je popsáno v příkladu 3. v případě sloučeniny K. (stupeň C). čímž se získá 168 mg (81 %) sloučeniny uvedené v názvu ve formě bíle zbarvené pevné látky.
3ri Ή-NMR {perdeuteromethanol), hodnoty δ: 7,37 - 7,0 (14Π, m). 4,75 - 4,62 (1 H, m). 4,6 - 4,45 (211. m). 4,4 - 4,21 (2H. m), 4,15- 3,95 (2H. m), 3,15 3.0 (2H. m). 2.82 - 2.67 (2H, m),
2,65 - 2.52 (1H, m), 2.5 - 2.32 (3H, m) “Vy, o (“Vo
OH (105b) o
(107)
O Cl
a.
/O
Cl
\\ // ci
Sloučenina 107a: 4-terc-butoxykarbonyl-2-oxo-3(S)-{2-[2-oxo-543-fenyIpropiony 1)-3(S){3-feny Ipropionylamino )-2.3.4,5 -tetrahydrobenz.o[b][l,4]diazepin-l-yljaeety lamino íbutylester 2.6 drehtorbenzoové kyseliny
-56CZ 300171 B6
Výsledný semikarbazon se připraví reakcí sloučeniny 105b a tere-butyl-3-(allyloxykarbonylaminoHf-oxo-5--(2,6-dichlorbenzoyloxy)pentanoá(u (WO 93/16710), jak je popsáno v případě sloučeniny 56a. čímž se získá 256 mg (58 %) sloučeniny uvedené v názvu ve formě bílé pevné ? látky.
‘ll-NMR (deuterochloroform), hodnoty 5: 7,45 - 7,04 (17H, m), 6,45 - 6.34 (211, m). 5,28 - 5.21 (IH. m). 5,1 - 5,0 (lil, m). 4,95 - 4.90 (IH, m), 4,75 - 4,70 (IH, tn). 4.55 - 4,44 (111. tn), 4.32 - 4.22 (1H, dd), 3,99 - 3,85 (IH. dd), 3,85 - 3,76 (1H, m). 3,06 - 2.83 (5H, m). 2,83 - 2.74 ίο {IH. m), 2,6 - 2,44 (211, tn), 2,43 - 2,33 (IH, m). 2.24 - 2,15 (1 Η. tn). 1.45 (911, s)
Sloučenina 108a: 4-karboxy-2-oxo-3( S)-{ 2-[2-oxo-5-( 3-feny Ipropiony 1)-3( SH3-fenylpropiony lamí no)-2,3.4,5-tetrahydrobenzo[b][ 1,4 jdiazepin-l-yl jacety lamino j buty lester-2,6-dichlorbenzoové kyseliny se připraví ze sloučeniny 107a způsobem popsaným v případě slouěeni15 ny 57a. čímž se získá 156 mg (68 %) sloučeniny uvedené v názvu ve formě bílé pevné látky.
'l l-NMR (perdeuteromelhanol). hodnoty Ó: 7,5 - 6,9 (171 i, m), 5,16 - 5,02 (2H, m). 4.88 4.71 (2H. m). 4.62 - 4,44 (2H. ni), 4,42 - 4,28 (211, m), 4,27 - 4,18 (1H, m), 3,47 - 3.41 (1 H, ni), 2,90 - 2.60 (511. m), 2.46 - 2,4 (211, m). 2.39 2,18 (2H, tn)
Sloučenina 108b: 4~(7-methoxybenz.oxazol-2-yl)-4-oxo 3(S)-{2-[2-oxo-5-(3-fenylpropionyl)-3(S)-(3-fenylpropionylamino) 2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b|[ 1.4JdiazepÍn-l-yl]aeetylamino}máselná kyselina se připraví způsobem popsaným v příkladu 5 v případě sloučeniny 69a, čímž se získá sloučenina uvedená v názvu ve formě bílé pevné látky s výtěžkem 50 %.
'H-NMR (perdeuteromethanol), hodnoty (5: 7,41 - 6,88 (17H, m), 5.6- 5,55 (0.5H, t),
5.48 - 5,43 (0,511, t), 4,64 - 4,45 (2H, m), 4,45 - 4,30 (IH. ni), 3.93 (1.511. s). 3.90 (1,5H. s), 3,47 - 3,34 (IH, tn), 3,10 - 2,85 (211, m), 2,84 - 2,63 (5H, m), 2,6 2,4 (2H, tn), 2,3 - 2.1 (211. tn)
Sloučenina 123: tcre-biityI-(3S)-N-(allyloxykarbonyl)-3-amino-5-(2-ehlorfenylinethyllhio)4-oxopentanoát
-57CZ 300171 B6
K míchanému roztoku 749 mg (2,14 mmol) (3S)-terc-butyl-N-(allyloxykarbonyI)—3—am ino)-5 brom-4 -oxopentanoátu (sloučenina 122; WO 93/16710) ve 20 ml dimethyl formám idu se přidá 273 mg (4.70 mmol) fluoridu draselného a poté 373 mg (2.35 mmol) 2 chlorfenylmethylthiolu. Směs se míchá po dobu 3,5 hodiny, poté se přilije 50 ml vody a směs se extrahuje dvakrát vždy ? 50 ml ethylacetálu. Smíchané organické extrakty se promyjí čtyřikrát vždy 50 ml vody a poté ml roztoku chloridu sodného. Vysuší se nad síranem horečnatým a zahustí, čímž se získá olej. který se vyčistí pomocí velmi rychlé chromatografie za použití 10 35% ethylacetálu v hexanu jako eluěního činidla, čímž se získá 832 mg (91 %) bezbarvě pevné látky o teplotě tání 45 až 46 °C.
io [ují/’ -19.0° (c - 1,0. diehlorrnethan)
Infračervené spektrum (film); 3340, 2980, 2935, 1725, 1712, 1511. 1503. 1471, 1446. 1421, 1393. 1368, 1281, 1244. 1157. 1052. 1040, 995,764, 739 'H-NMR (deuterochloroform). hodnoty δ: 7,36 (2H. m). 7.21 (211, m), 5,91 (211, m), 5,27 (2H, m). 4.76 (IH. m), 4,59 (2H, d). 3.78 (2H, s), 3,36 (2H. m), 2,91 (lil, dd), 2,74 (1H. dd). 1.43(911, s)
Analýza pro C!(11126C1N(XS:
vypočteno: 56.13 % C. 6,12 % 11, 3,27 % N, 7,49 % S: nalezeno: 56,08 % C. 6,11 % H. 3,26 % N. 7.54 % S.
Hmotová spektrometrie (Cl): 430/28 (Μ +1.3 %), 374/2 (100)
Sloučenina 124a: terč butyl (3S)-3-(2-(6-benzyl-],2-dihydro-2-oxo-3-{3-fenylpropionylamino)-l-pyridyl)acetylamino-5-(2-ehlorfenylmethyllhio) 4 oxopenlanoát
300 mg (0,76 mmol) 6-benzyl 1,2 dihydro- 2-oxo-3-(3-fenylpropionylamino)pyridyloctové kyseliny (sloučeniny 52b) v 7 ml tetrahydrofuranu se míchá s 205 mg (1,52 mmol) l-hydroxy30 bcnzotriazolu a l—(3—dimethylaminopropyl) 3 ethylkarbodiimid-hydroehloridcm. Po uplynutí 3 minut se přidá 12 kapek vody, směs se míchá po dobu 10 minul a poté se přidá 325 mg (0,76 mmol) terč-butyl (3S) N --(ally loxy karbony l)-3-amino-5-( 2-chlorfenyl fosfínjpallad i um(Il)chloridu a 0,6 ml (2,28 mmol) tributyleínhydridu, Směs se míchá po dobu 5 hodin při teplotě místnosti, vylije se do ethylacetátu. promyje se vodnou IM kyselinou chlorovodíkovou (dvakrát), vodným hydrogenuhličitancm sodným, roztokem chloridu sodného, vysuší se síranem horečnatým a zahustí. Zbytek se trituruje s pentanem a supernatant se odstraní. Chromatografiekým zpracováním na silikagelu za použití 50% ethylaeetátu v hexanu jako eluěního činidla se získá 439 mg (81 %) bezbarvé pěny.
[aJD 2ÍI -18,3° (c = 0,5, diehlorrnethan)
Infračervené spektrum (bromid draselný); 3356, 3311, 1722, 1689, 1643, 1599, 1567. 1513, 1367, 1154 !H-NMR (deuterochloroform), hodnoty ó: 8,39 (IH, d), 8,23 (111. s), 7.24 (I4H, ni), 6,16 (III, d). 4,95 (IH, m). 4,63 (211, m), 4,02 (2H, s), 3,74 (2H, s), 3,27 (2H. s), 2.85 (611, m), 1.40 (9H, s)
Analýza pro C%1 I^CINAS:
vypočteno: 65.39 % C\ 5,91 % 11. 5.87 % N;
nalezeno: 65.51 % C, 5,99 % 11, 5,77 % N.
- 58CZ 300171 B6
Sloučenina 124b: terc-butyl-[3S(lS.9S)]-3-(6.IO-dioxo-l,2,3,4,7,8.9,IO-oktahydro)-9-(3fenylpropionylamino)-6H-pyridazino[ 1.2-a][ l ,2]diazepin-l-karboxamido-5 (2 chlorfenylmethylthio)--4-oxopentanoát (sloučenina) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 124a zthioetheru 123 a 3S( I S.9S)—3—(6J 0-dioxo-1,2,3,4.7,8,9,10-oktahydro)-9 (3 fenylpropionyl5 amino) 6H-pyridazino[l,2-a][1.2]diazepin 1-karboxylové kyseliny (sloučeniny 45a), čímž se získá 452 mg (50 %) bezbarvé pěno vité látky o teplotě tání 55 až 57 °C.
[a]d“ -94,0° (c = OJ 2, dichlormethan) io Infračervené spektrum (bromid draselný): 3288, 2934, 1741. 1722. 1686, 1666. 1644. 1523. 1433, 1260, 1225, 1146, 757 'H-NMR (deuterochloroform), hodnoty 6: 7,35 (311, m), 7,20 (711, m). 6.46 (III, d). 5,21 (lH.m), 4,97 (211, m). 4,56 (IH, m), 3.75 (2H. s). 3,25 (3H. m). 2.93 <511, m). 2,71 (IH, dd), is 2,55 (2H, m), 2,30 (IH, m), 1,92 (3H, m), 1,66 (2H, m), 1,42 (9H, s)
Analýza pro C35H45CIN4O7S, 0,25H;O:
vypočteno: 59,73 % C, 6,23 % H, 5,04 % Cl, 7,96 % N, 4,56 % S; nalezeno: 59,73 % C, 6,19 % H, 5,10 % Cl, 7,79 % N. 4,58 % S.
I Imotová spektrometrie (-FAB): 697 (M-l, 100)
Sloučenina 125a: (3S)-3-(2-(6-bcnzyl-t.2-dihydro-2-oxo-3-(3-fenylpropionylamino)-lpyridyl)acetylamino-5-(2-chlorfenylmethylthio)-4-oxopentanová kyselina
K 400 mg (0,56 mmol) terc-butyl-3-(2-(6-benzyl-l,2-dihydro-2-oxo-3-(3-fenylpropionylamino)-l-pyridyl)acetylamino-5-(2-chlorfenyImethylthio)-4-oxopentanoátu (sloučeniny 124a) ve 3 ml dichlormcthanu se při teplotě 0 °C přidají 3 ml kyseliny trifiuoroctovč a směs se míchá při teplotě 0 °C po dobu 1 hodiny a při teplotě místnosti po dobu 0,5 hodiny. Roztok se zahustí, poté se znovu rozpustí v dichlonnethanu a znovu zahustí, Tento postup se opakuje třikrát. Zbytek se míchá v etheru po dobu 1 hodiny a /filtruje, čímž se získá 364 mg (99 %) bezbarvé pevné látky o teplotě tání 165 až 167 °C.
[a]d“ -Y1J° (c = 0,2, dichlormethan)
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3289. 1712, 1682, 1657. 1645. 1593, 1562, 1527. 1497. 1416. 1203, 1182 'H-NMR (deuterochloroform), hodnoty 8: 8,47 (IH, d), 8,21 (IH, s), 7,70 (IH, d), 7,22 (14H.m). 6,24 (IH. d), 5,03 (IH. m). 4,65 (2H. m). 4.06 (2H. s). 3.69 (2H. m). 3.23 (2H, m).
2.88(611. m)
Sloučenina 125b, [3S(1S,9S)]--3-(6,10dioxo-1,2.3,4,7,8,9.10 oktahydro) 9-(3-fenylpropionylamino)-6I l-pyridazinof 1,2—a]| 1,2|diazepin-l-karboxamido-5-(2-chlorfenylinelhyllhio)-4oxopentanová kyselina se připraví podobným způsobem jako sloučenina 125a z. terc-butylesteru
124b, čímž se získá 362 mg (93 %) bezbarvého prášku o teplotě tání 76 až 80 °C.
[aln’1 -134° (c =- 0,10, methanol)
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3309, 2935, 1725. 1658, 1528, 1445. 1417, 1277.
SO 1219.1175 'H NMR (perdeuterodi methy Isulfoxid). hodnoty 5: 8,80 (111, d), 8,19 (1II, d), 7,3 I (911, m), 5,09 (IH. m). 4,74 (IH, m). 4,63 (1H. m), 4,35 (1H. m), 3.76 (2H. m). 3.28 (311. m). 2,80 (5!I. m). 2,52 (411, m), 2,16 (2H, m). 1.90 <3H, m)
- 59 CZ 300171 B6
Analýza pro C11H55O2N.4O7S. 0,25 H?O:
vypočteno: 57,49 % C, 5.53 % JI, 8,65 % N, 4.95 % S; nalezeno: 57,35 % C, 5,43 % H. 8,45 % N, 4,88 % S,
Hmotová spektrometrie (-FAB): 641 (M- ], 100)
2-ChlorfenyImcthyljodid. Směs 2-chlorfenylmethylbromidu (4 g, 19,47 mmol) a Nal (14 g. 97,33 mmol) v acetonu (40 ml) se míchá 1 hodinu za varu. Reakční směs se ochladí, filtruje a odpaří ve vakuu. Zbytek se tri turu je hexanem a filtruje. Roztok se odpaří ve vakuu a zbylý olej se čistí pomocí velmi rychlé chromatografie (silikagel. hexan) za získání sloučeniny uvedené v názvu (4.67 g, 63 %) ve formě oleje:
'H-NMR (deuterochloroform). hodnoty 6: 7.34 (411. m). 4.54 (2H, s).
(201). (3S)-t-Butyl N-(ally loxy karbony l)-3-ain i no-5-hydroxy-4-oxopentanoát (81, Chapman. a kol., Bioorg. & Med. Chem. Letí.. 2, str. 613 -618 (1992). 0.144 g, 0,5 mmol) a 2-chlorfenylmethy Ijodid (0,569 g, 1,5 mmol) v dichlormethanu (4 ml) se energicky míchá s oxidem stříbrným (0.23 1 g. 1 mmol) a zahřívá 40 hodin na 38 °C. Reakční směs se ochladí, filtruje a filtrát se odpaří. Zbytek se čistí pomocí velmi rychlé chromatografie (silikagel. 0 až 20 % ethylaeetátu v hexanu) za získání produktu ve formě bezbarvého oleje (0.138 g, 67 %):
[u][f4 + 3.9° (e 1.3, dichlormethan):
Ή-NMR (deuterochloroform) δ 7,37 (411, m), 5,88 (2H. m), 5,26 (211, m), 4,69 (2Π, s), 4,57 (3H, m), 4,50 (1H, d), 4,35 (1H. d), 3,03 (1H, dd), 2.76 (IH, dd). 1.42 (9H, s).
(203). Roztok 2,4-dichlor-6-nitroťenolu (202, 40 g obsahující 20 % vlhkosti) v ethy laeetátu (500 ml) se suší za použití síranu horečnatého, filtruje a filtrační koláč se promyje malým množstvím ethylaeetátu. Přidá sc platina na uhlí (5 % sulfid o váno-2 g) a směs se hydrogen u je dokud se nezastaví absorpce vodíku. Přidá se triethylorthoformiát (160 ml) a kyselina p loluensulfonová (I60mg) a směs se zahřívá 4 hodiny k varu. Po ochlazení a odstranění zbytku katalyzátoru filtrací se roztok promyje nasyceným roztokem hydrogenuh liči tanu sodného, vodou a solankou, suší nad síranem horečnatým a odpaří do sucha. Po trituraci hexanem se získá pevná látka, která se odfiltruje, promyje hexanem a suší za získání sloučeniny uvedené v názvu (25.5 g. 88 %) jako kry stalické pevné látky:
teplota tání 98 až 99 °C;
-60CZ 300171 B6
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3119, 1610, 1590, 1510. 1452. 1393, 1296, 1067, 850; Ίΐ NMR (deuterochloroform) ó 8,16 (lil, s), 7,69 (111, d, J “ 1,9), 7,42(111, d. J ” 1.9);
Analýza pro C?1 LCENO:
vypočteno: C, 44,72; H, 1,61; N, 7,45; C1, 37,70. nalezeno: C. 44.84; Η, 1.69; N, 7,31; CL 37,71.
(204). Bromid horečnatý se připraví pomocí reakce hořčíku (7.45 g, 0,30 mmol) v tetrahydrofuranu (516 ml) s jodem (50 mg) a 1,2 dibromethanem (26.3 ml, 57.3 g, 0,30 mol) za varu po 2 hodiny a potom ochlazením na 10 °C. K takto získané látce se rychle přidá pomocí kanyly o roztok 2-lithio-5,7-diehlorbenzoxazolu při 70 °C (připraveného z 5,7 diehlorbenzoxa/olu (203, 28.9 g. 0.154 mol) a butyllithia (100 ml, 1,52 M v hexanu) v tetrahydrofuranu (150 ml) při °C). Směs se míchá 1 hodinu při -40 °C, potom se ochladí na -70 °C a přidá se roztok (3S) t-butyl N-(allyloxykarbonv!)-3-amino-4-oxobutanoátu (Chapman, a kol.. Bioorg. & Med. Chem, Lett., 2, str, 613-618 (1992)) (20,3 g, 0,078 mol) v tetrahydrofuranu (160 ml) při teplotě nižší než -60 °C. Reakční směs se nechá ohřát na teplotu místnosti a míchá se 16 hodin před rozložením roztokem chloridu amonného a extrakcí 600 ml směsi 1 : 1 hexan : ethy lacetát. Organický roztok se promyje vodou a solankou, suší nad síranem hořec natým a odpaří za vzniku sirupu (52,9 g). Po velmi rychlé chromatografií (silikagel, 250 g - 1 I alikvotníeh dílů 1:1 hexan: CH2CI2 X 2, CH2C12. 5 % EtOAc v CH2C12. 10 % EtCAc v CH2C12. 20 % EtOAc v ClECL) se
D získá znečištěný produkt 24,6 g, který se dále čistí chromatograficky (silikagel 1:1 hexamether) za získání sloučeniny uvedené v názvu ve formě zlatohnědého skla (22.7 g. 64 %);
Infračervené spektrum (film): 3343, 2980, 1723, 1712, 1520, 1456, 1398, 1369, 1254, 1158, 993;
'11 NMR (deuterochloroform) δ 7,60 (IH, m), 7,37 (IH, m), 5,72 (lil, ni), 5,64 (0.5Π, d), 5.10 (2.5H. m), 4.7 - 4.3 (4H, m), 2.9 - 2,6 (211, ni), 1,46 a 1,42 (9H spojené. 2 x s).
Hmotová spektrometrie ES1 Da/e 445 (M + 1) Cl 35 62%, 447 (M + I)' Cl 37 40%, 389 100%.
ř-BuQzC,
TBuOjC^^COíH Alloc—NH ř-BuCbCk
Alloc-NH (a) * = S (205a) (b) * ~ R <205b)
NHs
-*· (206a) (206b)
o (205a). Ke směsi tetrahydrofuranu (200 ml) a vody (100 ml) obsahující hydrogenuhličitan sodný (16.6 g. 0,2 mmol) se přidá t bulylester kyseliny glutarové (10 g, 49,2 mmol) a potom se během 20 minut přikape allylchlorformiál (6,8 ml. 64 mmol). Směs se míchá 2 hodiny, extrahuje se ethy lacetátem, promyje se nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu, suší se a odpaří za získání oleje 205a (9.5 g. 67.2 %);
-61 CZ 300171 B6 [a]D 2íl - 6° (c 1,5. methanol) 1 NMR (perdeuterodimethylsulfoxid) δ 6,10 (IH, d), 5,96 - 5,88 (IH, m), 5.31 - 5.12 (21L m). 4.45 (211, m). 3,90 - 3,84 (IH, t), 2,18 (21 i, m), 1,85-1,76 (211, m), 1.36 (9H. s).
(205b), se připraví analogickým způsobem jako (205a) za získání bezbarvého oleje (6.27 g. 88 %).
[a]p2(t + 16° (c 0,095. methanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3678, 3332, 3088, 2980. 2937, 1724. 1530. 1453, 1393, 1331, 1255, 1155, 1056, 995. 935?845. 778. 757,636,583:
'HNMR (deuterochloroform) δ 9.24 (IH, široký s), 5.94 - 5,79 (IH. m). 5.58 (IH, d). iš 5.33 -5.17(211. m), 4,55 (211. d). 4,38-4,31 (lll/m), 2,41 - 1.95(411, m). 1.42(914, s);
Analýza pro Cjd42iNO6:
vypočteno: C, 54,35; 11, 7,37: N, 4,88 nalezeno: C, 54,4; H, 7,5; N, 4,8.
?o (206a). K roztoku 205a (3.6 g. 12.5 mmol) v tetrahydrofuranu (100 ml) při 0 °C se přidá N-methylmorfolin (1.5 ml, 13 mmol) a isobutylchlorformiát. (1.1 ml. 13 mmol). Po 15 minutách, se tato směs přidá k suspenzi tetrahydridoboritanu sodného (0,95 g, 25 mmol) v tetrahydrofuranu (100 ml) a methanolu (25 ml) při -78 °C. Po 2 hodinách při -70 °C se směs rozloží pomocí
2? kyseliny octové, zředí etliylacetátem, třikrát promyje nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu. vodou a solankou, suší a odpaří. Po velmi rychlé chromatografií (2 % methanolu v dichlormethanu) se získá sloučenina 206a ve formě bezbarvého oleje (2.4 g. 70 %):
laji)20 - 10° (c 3,88. dichlormethan); ίο 'HNMR (deuterochloroform) δ 5.84 (IH, m). 5.34 5.17 (3H, m). 4,56 4,53 (2H, ni),
3,68 - 3.59 (211, m), 2,98(111. m), 2,40 - 2,30 (211, t). 1,84 - 1,78 (211, m), 1.43(911, s):
Analýza pro C, 4I^NCů:
vypočteno: C. 57,13; Π, 8,48; N. 5,12 nalezeno: C, 57.1; H. 8,6: N, 6.0 (206b), se připraví analogickým způsobem jako 206a, který poskytne sloučeninu uvedenou v názvu jako světle žlutý olej (3,42 g, 57 %): fot]n20 + 14° (e 0,166. methanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3341, 3083, 2976. 2936, 2880, 1724, 1533, 1454, 1419. 1369, 1332, 1251. 1156, 1062,997,933,846, 777, 647;
'14 NMR (deuterochloroform) δ 5,98 - 5,81 (IH, m), 5.35 5,10 (311, m), 4.55(214, d),
3.70 - 3.56 (311, m), 2.50- 2,47 (114, široký s), 2,37 - 2,30 (2H. m), 1.89 - 1,74 (211, m). 1,44 (9H. s);
Analýza pro Cul lnN0<
vypočteno: C, 57,13; H, 8,48; N, 5,12 nalezeno: C. 56,9; 11, 8,6; N, 5,6
-62CZ 300171 B6 (207a), K roztoku dimethylsulfoxidu (1.51 g, 19,3 mmol) v dichlormethanu (25 ml) při -70 °C se přidá oxalylchlorid (1,34 g, 19.3 mmol). Po 10 minutách při -70 °C, se přikape roztok (206a) (2,4 g, 8.8 mmol) v dichlormethanu (10 ml) a směs sc míchá 15 minut při -70 °C. Přidá se diisopropylethylamin (3,4 g, 26,3 mmol) a směs se míchá 15 minut při 25 °C. potom se zředí eth\ 1? acetátem (50 ml), promyje 2M roztokem hydrogensíranu sodného, odpaří za získání oleje, který se použije bez čištění:
!H NMR (deuterochloroform) δ 9,5 (IH, s). 6.0 - 5,5 (2H, m). 5,5 5,1 (2H, m). 4.5 (2H, ni), 4.2 (1H. m), 2.4 - 2,10 (211, m), 2,05 (211, m), 1,36 (911, s).
io (207b), se připraví analogickým způsobem jako 207a, a získá se olej (2.95 g, 96 %), který se použije bez dalšího čištění v následujícím kroku:
[αΐη20 I 21° (c 0,942, methanol):
'HNMR (deuterochloroform) δ 9,58 (IH, s), 6,05 - 5,80 (1H, m), 5,57 (1H. široký s). 5,35-5,18 (2H, m), 4,56 (2H, d), 4,34 - 4,24 (1H, m), 2,38 - 2,16 (3H, m), 1,96- 1,73 (IH,m),
1.43 (9H,s).
(208a). K roztoku 207a (2,39 g, 8,8 mmol), v methanolu (20 ml) se přidá octan sodný (0,72 g,
8.8 mmol) a semikarbazid (0,98 g, 8,8 mmol) a směs se míchá přes noc, odpaří a zředí dichlormethanem (100 ml), promyje vodou, suší a odpaří. Po velmi rychlé chromatogralu (2% mcthanol v dichlormethanu) se získá 208a (2.10 g, 73 %) ve formě oleje:
fajn2<> - 21° (c 2.55, dichlormethan):
lH NMR (deuterochloroform) 5 9,98 (IH. s). 7.27 (IH. d), 5.8 (Π1. m). 5.5 (111. d). 5,35-5,19 (211. m). 4.58 (211, m), 4,14 (111. m), 2,37 (2H, t), 2,09 (1H, m), 2.0- 1,75 (2H, m):
stí Analýza pro CUI Ι?4ΝΟ5:
vypočteno: C 51,21; H. 7,37: N, 17,06 nalezeno: C. 50,2; H. 7.3; N, 16,1 (208b). se připraví analogickým způsobem jako 208a a získá sc sklovitý olej (2.37 g, 66 %):
í<x]n?° + 30° (c 0,26, ehlormelhan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3476, 3360. 2979. 2923. 1700. 1586. 1527, 1427. 1394,
1369. 1338. 1253. 1156, 1060. 997,929, 846, 775;
4(1 'HNMR (deuterochloroform) 8 9,87 (IH, s), 7,09 (IH, d), 6,05 5,75 (3H. m). 5.58 (IH, d),
5,32 5,16 (2H, m). 4,54 (2H, d), 4,35 (III, m), 2,32 - 2,26 (211, m). 2,15- 1.55 (2H, m), 1,41 (9H, s);
Analýza pro C14H24N4O5:
vypočteno: C, 51,21; H. 7,37; N, 17.06 nalezeno: C, 51,0; H, 7,5; N, 16.7.
-63CZ 300171 B6
211 (b) R -MeS()? 212 (b) R = MeSO2
(c) R1 - MECO (e) R1 - MFCO
(d) R1 = PhCH?OCO (d) R1 - PhCH2OCO
(e) R1 - PhCO (e) R1 - PhCO
(0 R1 - Fmoe (0 R] = Fmoc
(211 b). Roztok t butyl-9-amino-6.10-dioxo-1.2,3.4,7,8,9,10-oktahydro-6H-pyridazino( 1,2-aj11,2jdíazepin-1-karboxjlátu (GB 2,128,984; 832 mg. 2,79 mmol) a diisopropylethylaminu io (1,22 ml. 6,99 mmol, 2,5 ekvivalentu) v diehlormethanu (10 ml) pod suchou dusíkovou atmosférou se reaguje s niethansulfonylchloridem (237 μΙ, 3,07 mmol, 1,1 ekvivalentu). Směs se míchá hodinu, zředí se ethylaeetálem (75 ml) a promyje nasyceným roztokem hydrogen uhličitanu sodného (50 ml) a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného (30 ml), suší nad síranem horečnatým a odpaří. Po velmi rychlé chromatografií (10 až 35% ethylaeetátu v diehlormethanu) i? se získá 211b (806 mg. 77 %) ve formě bezbarvé pevné látky: teplota tání 68 až 70 °C;
(α|ιΛ - 109° (e 1,09. dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3270. 2980, 2939, 1735. 1677. 1458, 1447, 1418, 1396,
1370, 1328. 1272, 1252, 1232, 1222, 1156, 1131,991;
'll NMR (deuterochloroform) 8 6.15 (III. d), 5,31 (III, m), 4.65-4.11 (2H. m). 3.47 (IH. m). 2.99 (3H. s). 2,89 (III, m). 2,72 - 2.51 (2H. in). 2,34 (1H, m). 2.26 (III. m), 2,05 - 1,62 (4H, in), 1.47(911. s):
Analýza pro C|5H2MO(,S:
vypočteno; C, 47,97; 11. 6.71; N, 1 1,19; S, 8.54 nalezeno: C, 48,28; H. 6,68; N. 10,86: S. 8,28.
Hmotnostní spektroskopie (+ FAB) 376 (M + 1. 66 %), 320 (100).
(211c). Acetanhydrid (307 mg, 3,01 mmol) se přidá k míchanému roztoku t-butyI-9-amino-ó,10-dioxo-1,2,3.4,7,8.9,10-oktahydro-6l l-pyridazino[ 1,2- a] [ 1.2 jdíazepin-1 -karboxy látu (GB 2.128,984; 813 mg, 2,74 mmol), diisopropylethylaminu (884 mg, 6,84 mmol) adichlormethanu (20 ml). Směs se míchá 1 hodinu, potom se zředí ethylacetátem, promyje hydrogen35 uhličitanem sodným, potom solankou, suší síranem horečnatým a odpaří za získání bezbarvého oleje. Produkt se čistí pomocí velmi rychlé chromatografie (0,58 % methanol/dichlormethan) za získání 21 le (804 mg, 71 %) jako bezbarvého prášku: teplota tání 162 až 3 °C;
[a|n2' - 109° (c 1,03, dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3358. 2974, 1733, 1693, 1668, 1528, 1462, 1431. 1406,
1371, 1278, 1271, 1250, 1233, 1217, Π54. 1124;
HNMR (deuterochloroform) Ó 6.32 (IH, d), 5,29 - 5,25 (2H, m), 4.98 4.85 (111, m),
4.68 - 4,58 (1H, m), 3,55 3.39 (lil, m), 2,91 - 2,66 (2H, m), 2,39 -2,18 (211, m). 2,03 (3H, s),
1,88 - 1.64(411,111), 1,47 (9H, $);
-64CZ 300171 B6
Analýza pro CuJUTRCR:
vypočteno: C. 56,62; H. 7,43; N. 12,38 nalezeno: C, 56,62; H, 7.43: N. 12,36:
Hmotová spektroskopie (+ FAB) 340 (M + 1,40%), 284 (100).
(21 ld). Benzylehlorformiál (1.07 g) k míchanému ledovému roztoku (IS,9S) t-butyl-9-amino6,10-dioxo-l ,2,3,4,7,8,9,10-oktahydro-6H-pyridazino( 1,2-a][l ,2]díazcpin-l-karboxylátu (GB 2,128,984; 1,55 g. 5.21 mmol), hydrogenuhličitanu sodného (0,66 g. 7,82 mmol), dioxanu (32 ml) a vody (8 ml). Směs se udržuje při 5 °C 15 minut a potom 2 hodiny při teplotě místnosti.
io Směs se zředí ethylacetátem (50 ml), dvakrát promyje nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného suší nad síranem horečnatým a odpaří, Olejovitý zbytek se čistí pomocí velmi rychlé chromatografie za získání 21 ld (1,98 g, 88 %) ve formě bezbarvého oleje:
[rx][)24 - 56,4° (c 1,0. dichlormcthan):
Infračervené spektrum (tenký film) 3325, 2979. 2946. 1728. 1677, 1528, 1456. 1422. 1370, 1340, 1272, 1245, 1156. 1122, 1056,916, 734,699;
'HNMR (deuterochloroform) Ó 7.29 (511, m), 5,81 - 5,72 (III, ni), 5,26 - 5.20 (IH. m), 5,05 (211, s). 4.69-4.51 (2H, m). 3,48 - 3,36 (IH. m). 2.81 - 2.51 (2H, m). 2,34 - 2.19 (211. m),
1.90- 1,54 (411, m). 1,41 (91 i, s)
Analýza pro (\4I^NAVHiO:
vypočteno: C, 58,79; H, 6.92; N, 9,35 nalezeno; C, 59,10; H. 6,57; N, 9.25;
Hmotová spektroskopie (ES + ) 454 (M‘Na. 87%). 432 (M’ + l, 100).
(21 le). Roztok benzoylchloridu (1.61 g. 11,47 mmol) v dichlormethanu (15 ml) se přikape k ledové směsi (1 S,9S) t-butyl-9-amino-6,10-dioxo-1,2,3,4,7,8,9,10 oktahydro-6H-pyrid50 azino[ l.2-aj[ 1,2]diazepin 1 -karboxylátu (GB 2,128,984; 3,1 g, 10,43 mmol). suchého dichlormethanu (20 ml) a diisopropylethylaminu (4.54 ml, 26,06 mmol). Směs se udržuje studená I hodinu a potom se nechá 0,5 hodiny při teplotě místnosti. Směs sc zředí dichlormethanem. dvakrát promyje solankou, suší nad síranem horečnatým a odpaří. Zbytek se čistí pomocí velmi rychlé chromatografie na silikagelu (0 až 5% methanol v dichlormethanu) za získání 21 le (4,0g. 96 %) jako bezbarvého skla: teplota tání 74 až 76 °C;
[α]|/° 75.0° (e 0,12. dichlorniethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3350, 2979. 2938, 1736. 1677. 1662. 1536, 1422. 1276.
1250. 1155;
’HNMR (deuterochloroform) Ó 8.72 (2H, m), 7,53 - 7,40 (3H, m), 7,07 (111, d, J - 7,2), 5,30 (1H. dd. J- 3,0, 5,8), 5,12 (IH, m), 4,66(111, m), 3.51 (lil, m). 2,90 (2H, in), 2.38 (IH.dd, J = 13.2. 6.8), 2,25 (lil, m). 1,9 (2H, m), 1,70 (IH, m).
Analýza pro C l ΕΛ ΥΕ 0.5ΗΌ:
vypočteno: C. 61,45; H, 6,88; N. 10,24 nalezeno: C, 61,69; H, 6.71; N. 10,18.
(2 Uf). sc připraví podobným způsobem jako 21 le, ale použije se 9-lluorenylmethylchloroformiát místo benzoylchloridu za získání bílé sklovité pevné látky 21 If (2.14 g. 89 %): teplota tání 190 až 192 °C;
-65 CZ 300171 B6
Lctjr>2? - 81.5° (c 0,1, dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3335, 2977, 1731. 1678. 1450, 1421, 1246. 1156,742;
'HNMR (deuterochloroform) ó 7,60 (21L m), 7,57 (2H. m), 7,50- 7,26 (4H, m), 5,60 (lil. d, J = 7.8). 5.28 (1H. ni), 4.67 (211, m). 4.38 (2H, ni), 4.23 (1H. m). 3,59 - 3.41 (1H, m), 2.92 2,65 (211,111).2.41 -2,21 (2H, m). 1.95 - 1,58 (4H. m), 1,47 (9H, s).
io Hmotová spektroskopie (ES , m/z) 520 (M + 1,97%), 179(100%).
(212b), se připraví stejným způsobem jako sloučenina 212e (635 mg. 85 %) jako bezbarvý prášek: teplota tání 209 až 212 °C';
[ď|[)4 - 132° (c 0,12, methanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3308. 2940, 1717, 1707, 1699, 1619, 1469, 1456, 1442, 1417, 1391, 1348, 1339, 1330, 1310. 1271. 1247, 1222, 1175, 1152, 1133.993,976;
’HNMR (deuterochloroform) δ 5,35 (lil, m), 4,58- 4,48 (IH. m), 4,46 - 4.36 (IH, m), 3,60 - 3,42 (1H, ni), 3,01 2,87 (IH, m). 2.95 (3H, s), 2,55 - 2,39 (lil, m), 2,32 - 2,20 (211, m),
2,09 - 1.89 (2II,m), 1,78-1,62 (2H, m);
Analýza pro CnHplSRObS:
vypočteno: C. 41,37; H, 5,37; N, 13.16; S, 10,04 nalezeno: C, 41.59; 11, 5.32; N. 12.75; S, 9,76;
Hmotová spektroskopie (ES -). Přesná hmotnost vypočtena pro C||II|«N;O6S (Mil'): 320.0916, nalezeno: 320,0943.
(212c) se připraví ze sloučeniny 21 le stejným způsobem jako sloučenina 2l2ejako bílá sklovitá pevná látka (595 mg. 77 %):
teplota tání > 250 °C;
[α]ι/1 - 153° (e 0.10. methanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3280. 2942. 1742, 1697. 1675. 1650, 1616. 1548, 1470. 1443, 1281, 1249. 1202, 1187, 1171;
!H NMR (deuterochloroform) 8 5,35 - 5,3 1 (IH, ni), 4,81 - 4.71 (1H, m). 4.61 - 4,46 (1H, m), 3,59 - 3,44 (2H. rn), 3,11- 2,94 (1H, ni). 2.58 - 2,39 (1H. ni), 2,36 -2,19(211, m), 2,1 1 - 1,83 (3H,m). 1,99(311.s), 1,78 - 1,56 (2H, m);
Analýza pro C12H17N3O5:
vypočteno: C. 50.88: H, 6,05; N. 14.83 nalezeno: C, 50,82; H, 6,02; N, 14,58;
Hmotová spektroskopie (ES -) 282 (M-l, 100%): přesná hmotnost vypočtena pro CpH|8NiCh (MH ): 284,1246; nalezeno: 284.1258.
sa (2l2d), se připraví z 21 ld stejným způsobem jako sloučenina 212e jako bezbarvé krystaly (170 mg. 97 %): teplota láni 60 až 100 °C;
|a][)’' - 103° (c 0,10, methanol);
- 66 CZ 300171 B6
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3341,2947, 1728, 1675, 1531, 1456, 1422. 1339. 1272, 1248, 1221. 1174, 1122, 1056. 982, 699;
'HNMR (deuterochloroform) δ 7,35 (5H. s). 5,65 (IH, d), 5.48 - 5.40 (1H, m). 5.10 (2H, s), 4.76 - 4,57 (2H, m). 3,49 - 3.30 (2H. m). 2,92 - 2,59 (2H, m), 2,40 - 2,27 (2H. m). 1,97 - 1,67 (4H, m);
Hmotová spektroskopie (ES -) 374 (Μ - 1, 100%); přesná hmotnost vypočtena pro C1X1C.?N<O6; κι (ΜΠ'): 376.1509; nalezeno: 376,1483. Přesná hmotnost vypočtena pro CisH^iN.A.Na (MNa):
398.1328; nalezeno: 398.1315.
(212e). Kyselina trifluoroetová (20 ml) se přidá k ledovému roztoku t bulylesteru 21 le (4.15 g. 10,34 mmol) v suchém dichlormethanu (20 ml). Směs se udržuje studená 1,5 hodiny a potom
2.5 hodiny při teplotě místnosti a odpaří se. Kyselina trifluoroetová se odstraní opětovným zahuštěním roztoku zbytku s diehlormethanem/etherem a etherem. Triturací zbytku etherem se získá 212e 3.05 g (85 %) bílé sklovité pevné látky: teplota tání 118 až 126 °C;
[a]n 4 - 70.5° (e 0,1, diclilormethanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3361. 2943, 1737, 1659, 1537. 1426. 1220, 1174;
'i I NMR (deuterochloroform) δ 7,70 (2H. m), 7,54 - 7,33 (411. m), 8,83 (široký s). 5,44 (1H. m),
5.26 5.13 (IH. m). 4,66 (l H. tn). 3.59 - 3,41 (1H. m). 2,97. 2,76 (2H, 2m), 2.36 (2H. m). 1,98 (211, ni), 1,75 (2Hnt).
Hmotová spektroskopie (ES- m/z) 344 (Μ 1. 100%).
(212f), se připraví z 21 lf v 96% výtěžku stejným způsobem jako 212e: teplota tání 120 až si) 126°C:
(«]i72.5° (c 0,1, diclilormethanol):
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3406, 2950, 1725, 1670, 1526, 1449, 1421, 1272, 1248, .b 1223. 1175. 761, 741;
'l i NMR (deuterochloroform) δ 7.76 (2H, m). 7,62 - 7,26 (411, ní). 6,07, 5,76 (2H. široký s, d. d, J - 2,9), 5.46, 5,36 (111, 2m), 4,79 - 4,54 (2H, ni), 4,77 (2H, m), 4,21 (1 H, m), 3,41 (IH, m), 2,89 (1H. m). 2.69 (1H, m). 2,35 (2IE m), 1,98. 1.73 (411. 2m).
Hmotnostní spektroskopie (ES , m/z) 462 (M - 1, 50%), 240 (100%)
(213) (c)R1 -MeCO (e) R' - PhCO (c)R1 = MeCO (e) R1 = PhCO
-67CZ 300171 B6 (213c). sc připraví z 212c stejným způsobem jako sloučenina 213e za získání směsi diastereomerů (193 mg, 36 %) jako bezbarvé krystaly:
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3272. 1799. 1701, 1682. 1650. 1555, 1424, 1412. 1278.
1258, 1221, 1122,937;
!HNMR (deuterochloroform) δ 7.41 - 7,28 (511, m), 6,52 (0,5H. d), 6,38 (0.5H, d). 6.22 (0,5H,d). 5,57(0,511. d), 5,36 (0,5H, s), 5,10 5,05 (IH, m), 5,00 - 4,45 (5,511, m), 3,19 - 2,84 (3H, m). 2.72 - 2,56 (IH, m), 2,51 -2,25 (211. m), 2,02 (3H, s), 1,98 1.70 (3H, m). 1,66- 1.56 ni (311, m);
Analýza pro vypočteno: C, 58,47; ti. 5.97: N. 11.86 nalezeno: C. 58,37; H, 6,09; N, 11.47.
Hmotnostní spektroskopie (FS -) 471 (Ml, 100%); přesná hmotnost vypočtena pro C31H20N4O7 (MH ): 473,2036, nalezeno: 473,2012; přesná hmotnost vypočtena pro č\J I^N^Na (MNa) 495.1856, nalezeno: 495,1853.
(2t3e). Tributylcínhydrid (2,2 ml, 8.18 mmol) se přikape k roztoku kyseliny 212e (1.95 g.
5,6 mmol), (3S.2RS) 3-allyloxykarbonylamino 2 benzyloxy-5-oxotetrahydroťuranu (Chapman.
Bioorg. & Med. Chem. Lett., 2, str. 615 -618 (1992); 1,80 g, 6,16 mmol) a (PluPhPdCl· (50 mg) v suchém dichlormethanu (36 ml), za míchání, pod suchým dusíkem. Po 5 minutách se přidá l-hydroxybenzotriazol (1,51 g, I 1,2 mmol, 6.72 mmol) a po ochlazení (led/voda) hydrochlorid ethyldimethylaminopropylkarbodiimidu (1,29 g, 6,72 mmol). Po 5 minutách se odstraní chladicí lázeň a směs se udržuje 4 hodiny při teplotě místnosti, zředí se ethylacetátem, promyje ÍM kyselinou chlorovodíkovou, solankou, nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a solankou, suší nad síranem horečnatým a zahustí. Po velmi rychlé chromatografií (silikagel. 0 až 90% ethylaeetátu v dichlormethanu) sc získá produkt ve formě bílé pevné látky (2,34 g, 78 %):
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3499, 1792. 1658. 1536. 1421, 1279, 1257, 1123, 977, 699;
Π NMR (deuterochloroform) δ 7.81 (2H, m). 7,54 - 7,34 (8H, 111), 7,1,6,97, 6.89, 6.48 (2H, m,
d. J = 7,7, d, J ~ 7,5, d, .1 - 7,6), 5.57, 5.28 (1H, d, J - 5,2. s), 5,23 - 5,07 (2H, m), 4,93 - 4,42, 3.22 - 2,70.2.51 -2,26,2.08 - 1,69. 1.22 (15H. 5m).
Analýza pro 6%Ηΐ(}Ν4Ο7 0.5 IH O:
vypočteno: C1, 61,87; H. 5.75; N, 10,32 nalezeno: C, 62,02; H. 5,65; N, 10.25.
(214c), se připraví z 213c podobným způsobem, který se použil pro přípravu 214e z 213e za získání bezbarvých krystalu (140 mg, 99 %): teplota tání 90 až 180 °C;
[α]Γ,22-114°(c0J0. methanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3334, 3070, 2946, 1787, 1658, 1543. 1422, 1277, 1258;
'H NMR (perdeuterodimethylsulfoxid) δ 8,66 (IΠ, m), 6,18 (1H. d), 6,76 (1Π, s). 5,08 (1H, m),
4.68 (1H, m), 4,30 (IH, m), 2,92 - 2,70 (2H. m), 2,27 - 2,06 (3H, m), 1,95 - 1,72 (4H. m), 1,85 (3H, s), 1,58(211, m);
-68CZ 300171 Bó
Hmotová spektroskopie (ES -) 381 (M-l. 100%); přesná hmotnost vypočtena pro (%,Η22Ν4θ7 (ΜΗ ): 383.1567; nalezeno; 383,1548.
(214e). Směs 213e (2,29 g, 4,28 mmol), 10% palladia na uhlí (1,8 g) a methanolu (160 ml) pod 5 vodíkovou atmosférou za tlaku 6,3 hodiny. Po filtraci a zahuštění se hydrogenaee opakuje s čerstvým katalyzátorem (1,8 g) 5 hodin. Po filtraci a odpaření se zbytek trituruje diethyletherem, filtruje a důkladně promyje etherem za získání 214e jako bíle pevné látky (1.67 g, 88 %):
teplota tání 143 až 147 °C:
io - 125° (c 0,2, methanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3391, 1657, 1651. 1538. 1421. 1280. 1258;
‘H NMR (deuterochloroform) δ 7,90 (2H. m), 7,63 - 7,46 (3H. m). 5.25 (IH, m). 5,08 -4,85 η (ΙΗ,πι), 4,68 - 4,53 (2H, m), 4.33 - 4.24 (1H, m), 3,62 - 3.44, 3,22 - 3,11, 2.75 - 2,21,
2.15 - 1.92, 1.73 - 1.66 (11H, 5m).
Analýza pro C2|H24N4O7 ί h():
vypočteno: C. 54,54; H. 5.67; N, 12,1 I nalezeno: C. 54,48; H, 5.63; N. 11,92.
(215)
(c) Rx = MeCO (d) = PhCH2OCO (G) Rx = Phco (215c). se připraví ze sloučeniny 214c podobným způsobem jako sloučenina 215e. za získání směsi diastereomcrů jako bílé sklovité pevné látky (398 mg, 84 %):
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3338, 2977. 1738. 1658, 1562. 1541, 1433, 1368. 1277. 1150;
-69CZ 300171 B6 'Η NMR (deuterochloroform) δ 7,36 - 7,32 (3H. m), 6,91 (1H, d). 6.30 {1H. d). 5,15 - 5.09 (1H. m), 5.01 - 4.88 (IH, rn), 4,61 - 4,44 (2H, m), 4,37 4,08 (3H, rn), 3,32 - 2.29 (IH. in),
2.08-1,64 (4H, m). 2,02 (3H, s);
Analýza pro C28H34N4CI2O9:
vypočteno; C. 52.26; H, 5,64; N, 8,71 nalezeno: C, 52.44; H. 5,87; N, 8,16.
Hmotová spektroskopie (ES -) 645/3/1 (M-l, 26%), 189 (81), 134 (100); přesná hmotnost vypočtena pro CSsH^^CbCb (MH‘); 643,1938, nalezeno: 643.1924; přesná hmotnost vypočtena pro C2í!H%N4Cl?O9Na (MNa ) 665.1757, nalezeno; 665,1756.
(2! 5d). se připraví z 214d stejným způsobem jako sloučenina 215e za získání směsi diastereomerú (657 mg, 70 %)jako sklovité bílé pevné látky:
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3420. 3361, 2975, 2931. 1716. 1658, 1529, 1434, 1367. 1348. 1250, 1157. 1083. 1055;
'HNMR (deuterochloroform) δ 7.32 (811, m), 7,14 (III, d), 5.81 (lil, d), 5,15 (lil. in). 5,07 (2H, s). 4,74 -4.65 ( IH.in).4,58 4.22 (4H. m), 4,15 - 4.06 {1H. m). 3,72 (1H, m). 3,32 - 3.21 (111. m).3.04-2,94 (HI, m). 2,69 - 2.52 (3 H, in). 2,33 - 2.27 (1H, ni). 1,95 - 1,59 (4H,m). 1,28 (9H, s);
Analýza pro CuKioN^EOio. 0.5 H2O:
vypočteno: C, 54,70; H, 5,54; N, 7,50, nalezeno: C. 54,98; H. 5.59; N, 7,24.
Hmotová spektroskopie (ES -) 737/5/3 (M-l, 22%), 193/1/89 (100). Přesná hmotnost vypočtena pro C54H4|N4CI2O|0(MH ) 735,2120. nalezeno: 735,2181.
(215e), Tributylcínhydrid (4,6 ml; 11,4 mmol) se přikape k míchané směsi (3S.4RS) t-butyl-(Nallyloxykarbonyl)-3-aniino-5-(2,6-díchlorbenzoyloxyM-hydiOxypeiitanoátii (připraveného podobným způsobem jako je popsáno v Revesz a kol., Tctrahcdron. Eett., 35, str. 9693-9696 (1994)) (2.64 g; 5,7 mmol). (Phd^PdCl· (50 mg), dichlormethanu (100 ml) a dimethylformamidu (20 ml) při teplotě místnosti. Směs se míchá dalších 10 minut a potom se přidá l-hydroxybcnzotriazol (1.54 g, 11,4 mmol). Směs se ochladí na 0 °C a přidá se hydrochlorid ethyldimethylaminopropy lkarbodiimidu (1,31 g; 6,84 mmol). Směs se udržuje při této teplotě !5 minut a potom 17 hodin při teplotě místnosti. Směs se zředí ethy lacetátem (300 ml), promyje !M kyselinou chlorovodíkovou (2 x 100 ml), nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (3 x 100 ml), suší nad síranem horečnatým a zahustí. Zbytek se čistí pomocí velmi rychlé ehromatografie (2 až 5% methanol/dichlormethan) za získání 3,24 g (81 %) 215e jako sklovité pevné látky: teplota tání 106 až 110 °C;
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3354. 1737. 1659, 1531. 1433. 1276. 1150;
'IINMR (deuterochloroform) ó 7.80 (211, dd. .1 = 7,9 a 1,5), 7.75 - 7,26 (6H, ni), 7.14 - 6.76 (2H, m), 5,30 - 5.02 (2H,rn), 4,63 4,1 I (5H, ni). 3,44 3.26 (211. m), 3.10 - 2,30 (511. in),
2,20 - 1.60 (5H,m), 1,44(911, s);
Analýza pro kCENjCR, 0,75H2O:
vypočteno; C, 55.12; 11, 5,54: N. 7,79; Cl, 9,86, nalezeno: C. 55,04; 11, 5,34; N, 7.80; Cl, 10,24.
Hmotová spektroskopie (ES +) 709/7/5 (M + 1), 378 (59), 324 (64), 322 (100).
-70CZ 300171 B6 (216c), se připraví z 215c podobným způsobem jako sloučenina 216c jako sklovitá bílá pevná látka (300 mg, 83 %): teplota tání 80 až 125 °C;
[a|j/ - 89,1° (c 1.08, dichlormethan); s
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3356, 2979, 2935, 1740, 1659, 1532, 1434, 1369. 1276. 1260.1151;
Ní NMR (deuterochloroform) δ 7.39 - 7,32 (3H, m), 7,13 (IH, d), 6,34 (1IL d). 5.22 5,17 io (IH, m). 5.11 (ÍH. d). 5,04 (111. d), 4,99 - 4,88 (2H, m). 4,64 - 4,52 (IH, m), 3.29 - 3,1 i (1II, ni), 3.05 - 2.67 (4H, m), 2,39 - 2.29 (IH, m), 2,02 (3H, s), 1.98 1,75 (411, m). 1,46 (9H, s);
Analýza pro Ο,χΙΝΝΛΊΌυ.
vypočteno: C, 52,42; H, 5,34; N. 8.73.
nalezeno: C. 52,53; H, 5,70; N, 7,85.
Hmotová spektroskopie (ES-) 643/41/39 (M-l. 100%); přesná hmotnost vypočtena pro C^II^NjCbOu (MU ): 641,1781, nalezeno: 641,1735; přesná hmotnost vypočtena pro C2U hiNtCbEENa (MNa ): 663.1601, nalezeno: 663.1542.
?o (216d), se připraví z 215d podobným způsobem jako sloučenina 216a za získání 216d jako bílé sklovité pevné látky (688 mg, 68 %): teplota tání 90 až 170 °C;
[aji/ - 83,4Ů (e 1,01, dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3338, 2933. 1736, 1670. 1525. 1433. 1417, 1368, 1258, 1151, 1056, 1031;
'11 NMR (deuterochloroform) δ 7.33 (8H, m). 7,18 (IH. d). 5,65 (IH, d), 5,19 (IH. in), 5,09 (2H. s). 4.98 - 4.86 (1H. m). 4,82 - 4,49 (2H, d), 3,30 - 3.07 (IH, m). 3.05 - 2.59 (4H, m).
.«i 2.42-2,27 (IH, m), 2,18- 1,59 (511, m). 1,42 (911, s);
I Imotová spektroskopie (ES-) 737/5/3 (M, 13%), 185 (100).
(216e). Dess-Martinovo činidlo (3,82 g; 9,0 mmol) se přidá k míchanému roztoku 215a (3.17 g;
4,5 mmol) v dichlormethanu (100 ml). Přesná hmotnost vypočtena pro C74H27N4Cl?Oo (MH):
585,1155, nalezeno: 585,1134.
(217d), se připraví z 216d stejným způsobem jako sloučenina 217e za získání 217d jako bílé sklovité pevné látky (310 mg, 96 %): teplota tání 85 až 110 °C;
4(1 [oji/1 - 85.9° (e 0.13, methanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3351.2945. 1738, 1669. 1524, 1433, 1258, 1147, 1057;
'HNMR (deuterochloroform) δ 7,56 (411. m), 7.45 (511, m), 5.32 (211, m), 5.20 (2H, s), 4,76 - 4,48 (3H, m), 3,65 - 3,38 (3H, ni), 3.27 - 3.09 (2H, m), 3.03 - 2.89 (211, m). 2,65 2,24 (311, m).2,19- 1,62 (5H, m);
Hmotová spektroskopie (ES -) 679/7/5 (M-l, 100%); přesná hmotnost vypočtena pro
CW1 l^NjCEOto (Ml 1 ): 677,1417. nalezeno: 677,1430.
(2l7e). Kyselina trifluoroetová (25 ml) se přikape k míchanému ledově studenému roztoku esteru
216e (2,11 g. 3,0 mmol). Směs se míchá 20 minut při 0 °C, potom 1 hodinu při teplotě místnosti.
-71 CZ 300171 B6
Směs se odpaří do sucha a třikrát se odpaří s etherem. Po přidání suchého etheru (50 ml) a filtraci se získá 1,9 g (98 %) 217e jako bezbarvé pevné látky; teplota tání 126 až 130 °C;
[α]ι/° 122,0° (c 0.1, methanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3322, 1740, 1658, 1651. 1532, 1433. 1277. 1150:
'li NMR (perdeuterodimethylsulfoxid) δ 8.87 (IH, d, J = 7,4), 8.61 (IH, d. J = 7,8), 7,92 - 7,86 (2H, m), 7,65 - 7,43 (6H, m), 5,25 - 5,12 (3H. m), 4,94 - 4,60 (2H, ni), 4,44 - 4,22 (IH. m). ιο 3,43 - 3.10 (IH. m). 3,00- 2,52 (3H. m). 2.45 - 2,10 (3H, m). 2,10 - 1,75 (2H, in), 1,75 1,50 (2H,m);
Analýza pro C2yH28Cl2N.|O9, 1H2O;
vypočteno: C. 52,34; H, 4,54; N, 8.42; Cl, 10.66.
nalezeno: C, 52.02; II, 4,36; N, 8,12: Cl, 10,36.
Hmotová spektroskopie (ES -) 649/7/5 (Μ - 1), 411 (100%).
(218b) Ry - MeSO2 (219b)
O
(220b) (218b), se připraví z kyseliny 212b a 99 analogickým způsobem jako sloučenina 215e za získání směsi diastercomerů (865 mg. 80 %) jako bezbarvé pevné látky:
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3298, 2974, 1723. 1659, 1544. 1518, 1430, 1394. 1370, 1328, 1273, 1256, 1156, 1134;
lH NMR (deuterochloroform) δ 7,45 - 7,28 (4H, rn), 7,26 - 7.15 (211. m), 5,26- 5,10 (211, m), 25 4,80-4.67 (IH, m), 4,59 - 4,42 (2H, m), 3,32 - 3,17 (IH, m), 2,96 (3H, 2xs), 2,93 - 2,79 (1H, rn), 2,71 - 2,53 (4H, m), 2,38 - 2,28 (1H, m), 2,07 - 1,81 (4H, m)
Analýza pro t%H2sNsCl2OoS, 0,5 H2():
vypočteno: C. 48,21; H. 5.20; N, 10.03, to nalezeno: C, 48,35; H, 5,26; N. 9,48.
Hmotová spektroskopie (ES +) 714/2/0 (M + Na, 25%). 692/90/88 (M + 1, 51). 636/4/2 (38). 246 (100); přesná hmotnost vypočtena pro C^H^NýCEOyS (MH’): 688.1611, nalezeno; 688,1615.
-72CZ 300171 B6 (219b), se připraví z 218b analogickým způsobem jako sloučenina 2] 6e jako bílý prášek (675 mg. 81 %): teplota tání 100 až 200 °C;
[tx]n?4 - 84,9° (c 1.01, dichlormcthan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3336. 2978, 2936, 1719, 1674. 1510, 1433, 1421, 1369. 1329, 1274, 1257, 1155,991,789;
ío 'HNMR (deuterochloroform) δ 7,47 - 7,38 (4H. m). 7,24 (lil, d), 5,61 - 5,53 (lil. in). 5,48 (1H. d). 5,38 - 5,30 (1H. m). 4.67 - 4,45 (2H. m). 3.48 -3,18 (2H. m), 3.04 - 2.90 (211, m), 2.97 (314, s). 2,69- 2,54 (IH, m), 2,42 - 2,32 {111. m), 2,22-2,15(111. m), 2.07 - 1.93 (3H,m). 1.71 -1,65(211, m). 1.38 (914, s);
Analýza pro C^HpNiCbOgS:
vypočteno: C. 48,98; H, 4.84; N, 10.20; S, 4,67, nalezeno: C, 48,73; II, 4,95; N, 9.65; S, 4.54.
Hmotová spektroskopie (ES +) 692/90/88 (Μ + I. 100%), 636/4/2 (71); přesná hmotnost vypočtena pro C^HuNsCEOqS (MH'): 686.1454. nalezeno: 686.1474, (220b). se připraví z 219b analogickým způsobem jako sloučenina 217e jako světle krémový prášek (396 mg. 87 %): teplota tání 100 až 200 °C:
Ira.li>7 - 129 (e 0.12. methanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3310, 3 153, 1713, 1667, 1557, 1510, 1432, 1421. 1329, 1273, 1258, 1221, 1193, 1153, 1134.992. 789;
'll NMR (perdeuterodimethylsulfoxid) δ 7.88 (lil, s), 7,81 - 7,60 (4H, m). 5,49 5,28 (IH, m).
ío 5,24 5.14 (1H, m), 4,46 - 4,22 (214, m), 3,30 - 3,03 (2H. m). 2.97 - 2,76 (3Π. ní), 2.96 (3H, s),
2,46 - 2,24 (1H, m), 2,16 2,05 (114, m). 2,03 - 1,78 (3H,m), 1,68- 1,46 (2H,m);
Hmotová spektroskopie (ES—) 632/30/28 (Μ - 1.68%), 149/7/5 (100); přesná hmotnost vypočtena pro CmI1?6N<CI2O<,S (MH ): 630,0828. nalezeno: 630.0852.
-73CZ .5WH 71 Bó
223e Rz - PhCO (221b), se připraví z. kyseliny 212b a (3S.4RS) t-butyI-N-(all\Ioxykarbonyl)-3-amino-4-hydroxy 4 (5,7dichlorbenzoxazol 2-yl)butanoátu (204) analogickým způsobem jako sloučenina 215a za získání směsi diastereomerů (460 mg. 70 %) jako sklo:
Infračervené spektrum (film) 3325, 1725. 1664, 1453, 1399, 1373. 1327, 1274, 1256. 1155:
'HNMR (deuteroehloroform) <5 7,57 (IH. m), 7,36 (211, m), 6,06 (1H, l), 5,29 (211. m), 4,79 (IH, m), 4.47 (IH, m), 3,23 (114, m), 2.97 a 2.94 (3H, spojené, 2 x s). 2,9-2.4 (4H. ni), 2,30 ίο (IH, m), 1,96 (4H,m). 1.41 a 1,37 (9H spojené. 2 x s).
Hmotová spektroskopie ES Da/c 660 (Μ 1) Cl'· 100%, 662 (Μ 1) Cl'7, (221tí), se připraví z kyseliny (212e) a (3S,4RS) t-butyl-N- (allyloxykarbonyl)-3-ainino^-hyd15 roxy 4-(5,7dichlorbcnzoxazol-2-yl)butanoátu (204) analogickým způsobem jako sloučenina 215a za získání směsi diastereomerů (613 mg, 87 %) jako sklo:
Infračervené spektrum (film) 3328, 1729. 1660, 1534, 1454, 1422, 1399, 1276. 1254, 1155;
‘Η NMR (deuteroehloroform) δ 7.80 (2H, d). 7.60 - 7,35 (5H, m), 7.05 (211, m), 5,13 (3H, m), 4,74 (IH, m), 4,51 (III, m). 3,25 (IH, ni), 3,1 - 2,6 (511. m), 2.33 (IH. ni), 2,1-1,5 (511, ni),
1.43 a 1,41 (9H spojené, 2 x s).
Hmotová spektroskopie ES+ Da/e 688 (Μ + 1) Cl 55%, 690 (Μ + 1) Cl·7, 35%. 328 100%,
-74CZ J0U171 B6 (222b), se připraví z 221b analogickým způsobem jako sloučenina 216e za získání bezbarvého skla (371 mg, 86 %):
[a]o26 - 81,0 (c 0.1, dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3324, 2979, 2936, 1726. 1664, 1394. 1370, 1328. 1155,991:
'll NMR (deuterochloroform) δ 7,78 (IH, d), 7,57 (2H, rn), 6,87 (IH, d), 5.69 (IH, m), 5,47 ίο (IH. m). 4,55 (211, m), 3,24 (2H, in), 3,0 (5H, m + s), 2.59 (lil, m), 2.39 (IH. m). 2,2 - 1,7 (4H,m), 1,65 (IH. m). 1,40 (91L s).
(222c). se připraví z 22le analogickým způsobem jako sloučenina 21óe za získání bezbarvého skla (480 mg. 84 %):
' - 86,4 (e 0.1. dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3337, 2978, 2938. 1728. 1657, 1534, 1456, 1422, 1395. 1370, 1277, 1250, 1154;
'H NMR (deuterochloroform) Ó 7,80 (3H, m), 7.50 (411. ni), 7.20 (I H, d), 7,02 (IH. d). 5,60 (IH, ni), 5,28 (IH, m), 5,15 (IH, m), 4,11 (114, m), 3.34 (2H, m). 2.96 (311, ni), 2,40 (IH, m),
2,20 (lil, m). 1.92 (211, m), 1,67 (2H. ni). 1,38 (911, s),
Hmotová spektroskopie ES- Da/e 684 (Μ - 1) CE\ 47%, 686 (Μ 1) Cl 32%.
(223b). se připraví z 222b analogickým způsobem jako sloučenina 217e za získání bíle pevné látky (257 mg, 78 %):
focji)2' - 105.7° (c 0,1. dichlormellian);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3321. 1723, 1663. 1407, 1325, 1151.992;
'H NMR (perdeuterodimethylsulfoxid) δ 8.96 (IH, d), 8,18 (1II, d). 7,96 (I H. d). 5,50 (111, ni),
5,15 (111. m), 4,30 (2H, m). 3.06 (211, m), 2.87 (5H, m + s). 2,29 (lil. m). 1,99 (411, ni). 1.56 (2H. in).
(223e), se připraví z 222c analogickým způsobem jako sloučenina 217e za získání světle krémové pevné látky (311 mg. 78 %): teplota tání 167 až 180 °C;
- 88,6° (e 0.1, dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3331, 1724, 1658, 1534, 1458. 1421. 1279. 1256, 991;
H NMR (deuterochloroform) δ 7,77 (4H, m). 7,4 (5H, m), 5,57 (IH. široký s), 5.33 (IH. široký s), 5.47 (1H. kv). 4.56 (11!, široký d). 3.60 (2H, m). 3,20 (311, ni). 2.76 (1H, m). 2,36 (1H, dd), 2.0 (3H. m). 1.66 (lH,m).
I knotová spektroskopie ES Da/e 628 (M l) CT' 7%. 630 (Μ - 1) Cl37 2.3%. 584 100%
-75CZ 300171 B6
224e Rx PhCO, X = S 226e Rx - PhCO, X = S
225e Rx = PhCO, X = O 227e Rx = PhCO, X - O (224e). 1-Hydroxy benzotr i azol (0,23 g, 1,71 mmol) a hydroehlorid ethyldimethylaminopropylkarbodiimidu se přidá k míchanému roztoku kyseliny 212e (0,295 g, 0,853 mmol) v tetrahydroťuranu (5 ml). Po 5 minutách sc přidá voda (0.5 ml) a po dalších 7 minutách se přidá roztok (3S) t-bulyl -3- ally luxy karbony lamino-5-(2-ehlorfenyl)metliylthio-4-oxopentanoátu (123. 0.478 g. 1.02 mmol) a (PPlbhPdCl· (20 mg) v tetrahydrofuranu (2 ml). Během 20 minut se přikape tributvlcínhydrid (0,65 ml, 2,33 mmol). Směs se míchá 4,5 hodiny a potom se zředí ethylacetátem, promyje 1M kyselinou chlorovodíkovou, solankou, nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a potom znovu solankou. Směs se suší nad síranem hořečnatým a zahustí. Zbytek ío se trituruje několikrát hexanem, který' se dekantuje a sleje. potom se čistí pomocí velmi rychlé chromatografie (10 až 100% ethylaeetát v dichlormethanu) za získání 0,2 g (35 %) bílé sklovité pevné látky: teplota tání 70 až 72 °C;
[a]p2í’ - 82.5 (c 0,02, dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3404, 1726, 1660, 1534. 1524. 1422, 1277, 1254, 1154;
'H NMR (deuterochloroform) Ó 7,83 - 7.78 (2H, m). 7,7, 7.75 - 7,32, 7,26 7.20 (711. 3m). 7.12 (lil, d. J = 8,2), 7,01 (IH, d, J = 7.3), 5,23 - 5,08 (211, m), 5,03 - 4,94 (IH, m). 4.62 (IH. dt,
2o J = 145). 3.78 (211, m), 3,38 - 3.29 (IH. m), 3,26 (2H. s). 3.06 - 2.82 (411. m), 2.71 (IH.dd, .1- 17.2.4,5). 2,39 (1 H. dd. ,1 - 13,2,6,5), 2,15- 1,83, 1,73 - 1,63 (5H, m), ].45(9H, s).
Analýza pro CnH^CINiCfS:
vypočteno: C. 59,05; H, 5,86; N, 8,35, nalezeno: C. 59,00; H, 5,80; N, 7,92.
(225e), se připraví / kyseliny 212e a (3S) t-butyl N-(allyloxykarbonyl)-3-amiiio-5-(2-chlorfenylmethyloxyM-oxopentanoátu (201) podobným způsobem jako sloučenina 224e. za získání 40 mg (23 %) sklovité pevné látky:
'li NMR (deuterochloroform) 6 7,83 - 7,73 (2Π, rn), 7,67 -7,10 (9H. m). 5,23 - 5,09 (2H, m), 4,59 (IH, m), 4.45 - 4,22 (2Π, m), 3,7 - 3,19, 3,08 - 2,72, 2.71 - 2,47, 2,05 - 1.85, 1,72 - 1,61, 1,45 -1,26 (20H, 6m).
(226c), se připraví z 224e analogickým způsobem jako sloučenina 217e a získá se 0.22 g (81 %) bílé pevné látky: teplota tání 95 až 100 °C;
|(x|[i2 - 95,6° (c 0.2, dichlormethan); I
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3393, 1720, 1658, 1529. 1422. 1279;
-76CZ 300171 Bó !H NMR (perdeuterodimethylsulfoxid) 5 8,80 (111, d, J = 7,5), 7,89 (2H. m), 7,7 (1 H, d, T = 7,7), 7,56 - 7.28 (7H, m), 5.10 (IH, m), 4,87 - 4,73 (2H, m), 4,39 (IH, m), 3,77 (211, m). 3,44, 3.35 (2H,+H2O, 2m). 2.97-2,56. 2.2, 1,92. 1,61 (11II. 4m).
Analýza pro C^H^CINXTS.O.j H2():
vypočteno: C. 55,02; H. 5,10; N. 8,85 nalezeno: C, 55,00; H, 5.09; N, 8,71.
(227e), se připraví z 225e analogickým způsobem jako sloučenina 217e. Produkt se dále čistí io pomocí velmi rychlé chromatografie (0 až 5% methanol/dichlormethan) za získání 19 mg (81 %) sklovité pevné látky:
NMR (deuterochloroform) δ 7.79 (2H. m), 7.66 - 7,18 (9H. m), 5,30 - 5.10 (211. m), 4.85 (1 fl, ni). 4,65 (2H, m), 4,53 (1H, m), 4,28 (2H, m), 3,28, 3,01,2,72, 2,33, 1,94, 1,60 (11H, 6m).
Hmotová spektroskopie (ES- m/z) 597 (Μ - 1, 100%).
228e X
229e X =
230e X
(228e). 1-Hydroxybenzotriazol (0.23 g, 1,68 mmol) a potom hydrochlorid ethyldimethylaminopropylkarbodiimidu (0,21 g, 1,09 mmol) se přidají k míchanému roztoku kyseliny 212e (0,29 g.
2(i 0,84 mmol) v dichlormethanu (3 ml) při teplotě místnosti. Směs se míchá 10 minut a potom se přidá roztok (3RS.4RS) t-butyl-3 amino-5 fluor-4-hydroxypentanoátu {Revesz. L. a kol. letrah. 52. str. 9693-9696 (1994); 0,29 g. 1,40 mmol) v dichlormethanu (3 ml) a polom 4 dimethylaminopyridin (10 mg). Roztok se míchá 17 hodin, zředí ethylacetátem. promyje 1M kyselinou chlorovodíkovou, solankou, nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodné- 77 CZ 300171 B6 ho a znovu solankou, suší nad síranem horečnatým a zahustí. Zbytek se čistí pomocí velmi rychle chromatografie (50 až 100% ethylaeetát/dichlormethan a 5% methanol/ethylacetát) za získání 0.25 g (56 %) bílé sklovité pevné látky:
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3343. 1726, 1658, 1536, 1426, 1279. 1257. I 157:
'H NMR (deuterochloroform) δ 7,84 - 7,79 (2H, m), 7,57- 7,40 (3H, m), 7.05 - 6,92, 6,73 (2H, 2m). 5,17 - 5,04 (2H, m), 4,56. 4,35 4,21.4,04 (5H, 3ni). 3,36, 3,09 - 2.34. 2.00 (1 H, 3m). 1.46 (911. s).
io
Analýza pro CNJE-TN/)-, 0,5 H2O:
vypočteno: C, 57,45; H, 6.65; N, 10,31, nalezeno: C, 57,64; 11. 6,56; N. 10.15.
(229c) se připraví z 228c analogickým způsobem jako sloučenina 216e. Po čištění pomocí velmi rychlé chromatografie (30 až 50% ethylaeetát/dichlormethan) se získá produkt ve formě bílé sklovité pevné látky (0.194 g, 89 %):
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3376. 1728, 1659, 1529, 1424, 1279. 1256. 1156.
(230e). se připraví / 229e analogicky jako sloučenina 217e za získání 230e jako bílé sklovité pevné látky (100 %): teplota tání 105 až 125 °C;
[txji?'- 91,4° (c 0,72, methanol).
Infračervené spektrum (bromid draselný) 33.36, 1789, 1737. 1659, 1535. 1426. 1279. 1258, 1 186;
'H NMR (deuterochloroform) δ 7,71 -7,68 (2H, m). 7,37 - 7.23 (311. m). 5,02, 4,88 - 4,63, 4.37 - 4,0 (611,3m). 3,30. 2.97, 2,68 2,60, 2,37 - 1,54 (11 H, 4m).
Hmotová spektroskopie (ES-, m/z) 475 (Μ - I, 100%).
O O
Í231e) (232e) (231a). Methylester kyseliny N-FluorenylmethyIoxykarbonyl-3-aniino 3 -kyanopropionové (EP0547699A1, 385 mg, 1 ,t mmol) se reaguje s 17 ml diethylaminu. Po 1.5 hodině míchání při teplotě místnosti se roztok zahustí. Zbytek se čistí pomocí chromatografie na silikagelu (3% methanol v diehlormethanu) a za získání volného aminu jako světle žlutého oleje. K roztoku tohoto oleje a hydroxybcnzotriazolu (297 mg, 2.19 mmol) v dimethylformamidu (5 ml), se při 0 °C přidá cthyldimethylaminopropylkarbodiimid (232 mg, 1,21 mmol, 1.1 ekvivalentu) a potom kyselina (1 S.9S) 9-(benzoylamíno)-[6,10-dioxo-1,2,3,4,7,8,9,10-oktahydro 6H-pyrídazino40 fl,2-a][l,2]diazepin-t-karboxy love (212e). Po 5 minutách míchání při 0 °C a potom při teplotě místnosti přes noc se smčs zředí dichlomictbanem (50 ml) a vzniklý roztok se postupně promyje 1M kyselinou chlorovodíkovou
-78CZ 300171 B6 (2x 30 ml), vodou (30 ml), 10% roztokem hydrogenuhličitanu sodného (2x 30 ml) a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného, suší se nad síranem horečnatým a zahustí. Po čištění pomocí velmi rychlé chromatografíe na sílikagelu (3% methanol v dichlormethanu) se získá sloučenina 23 le (404 mg, 83 %) ve formě pevné látky:
taji/’ - 121° (c 0,14, diehlormethan);
'H NMR (denterochloroform) 6 7,40- 7.83 (5H, m), 7.38 (IH, d), 6,96 (IH. d), 5,27- 5.07 (2H, m), 4.66 - 4.50 (1H, m), 3,79 (3Π, s), 3,23 - 2,73 (6H. m). 2.47 - 2.33 (1H. m), 2.15-1,82 (4H, m);
Analýza pro ÍVHjsN.-CC:
vypočteno: C', 58,0; 11, 5,53; N, 15,38, nalezeno: C, 57.6; 11. 5,6: N. 15,0.
(232e). Roztok methylesteru 231 e (400 mg, 0,88 mmol) v methanolu (30 ml) a vodě (30 ml) se ochladí na 0 °C a reaguje s diisopropylelhylaminem. Roztok se míchá 10 minut při 0 °C a potom přes noc při teplotě místnosti. Heterogenní směs se zahustí a získaná pevná látka se čistí pomocí chromatografíe na sílikagelu (5% methanol/1% kyselina mravenčí v dichlormethanu) za získání volné kyseliny 232a (170 mg, 44 %) jako bílé pevné látky: teplota tání 155 °C (za rozkladu);
[<x]if ’ - 117° (c 0,1, methanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3343, 3061.2955, 1733. 1656, 1577, 1533, 1490, 1421. 1342, 1279, 1256, 1222, 1185,708;
H NMR (perdeuteromethanol) δ 7,88 -7,28 (511. m), 5,20 - 5.03 (IH, m), 4,98 - 4,84 (2H, m).
4,75 - 4.53 (IH, m), 4,51 -4,34 (lH,m), 3,45 - 3,22 (IH. m). 3,14 - 2.94 (1H. m). 3.14-2,94 (IH. m), 2,88 - 2,61 (2H. m), 2,53 -1,50 (8H, m);
Analýza pro C?,H,,N<()6, 1,5 ICO:
vypočteno: C. 53,84; H. 5,59; N. 14,95; O, 25,61, nalezeno: C. 54,3; H. 5.4; N. 14.3.
-79CZ 300171 B6
CO2-f-Bu
COj'ř-B u
233e R =
234eR =
236e R =
CO2-í-Bu
237eR=
CO2H
235eR =
23BeR =
(233e). Roztok (1 S.9S) 6,10-dioxo-1,2.3.4,7,8,9,10-oktahydro-9-(bcnz.oylamino)~61 I pyridazinof l.2-a|[ 1,2 Jdiazepin-1-karboxylové kyseliny (212e) (345 mg. 1.0 mmol), (208a) (361 mg, 1-] mmol, 1,1 ekvivalentu) a (PlhPhPdCf (20 mg) v dicblormethanu (5 ml), se reaguje s při kapaným nBiuSnH (0,621 ml, 2,3 mmol. 2.1 ekvivalentu). Vzniklý oranžovohnědý roztok se míchá 10 mnut při 25 °C a potom se přidá ethyldimethylaminopropylkarbodiimid (253 mg. 1,3 mmol, 1,2 ekvivalentu). Po 10 minutách míchání při 0 °C a potom při teplotě místnosti přes noc se směs zředí ethylacetátem (50 ml) a vzniklý roztok se postupně promyje 1M kyselinou chlorovodíkovou (3x 25 ml), 10% roztokem hydrogenuhliěitanu sodného (3x25 ml), a nasyceným roztokem chloridu sodného, suší se nad síranem horečnatým a zahustí. Po velmi rychlé chromatografií silikagcl (2 až 10% methanol v diehlormethanu) sc získá sloučenina 233e (280 mg, 49 %) ve formě žlutohnědé pevné látky:
[rej,/ - 95“ (c 0,09. methanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3477, 3333, 2968, 2932, 1633. 1580, 1535. 1423. 1378, 1335, 1259. 1156, 1085,709;
-80CZ 300171 B6 'Η NMR (deuterochloroform) δ 9,32 (IH, s), 7,83 - 7,39 (611. m), 7,11 - 7.09 (IH, m), 6,30 - 5,30 (211, široký s), 5,17 - 5,05 (2H, m), 4,62 - 4,38 (2H. m). 3,30 - 3,15 (1H, m), 3.13-2,65 (2H. m), 2,46-2,19(311, m). 2,15 - 1,54 (8H, m), 1,42 (911, s).
(236a), se připraví analogickým způsobem jako sloučenina 233e za použití (4R) semikarbazonu t-butyl-N-allyloxykarbonyM-amino-5-oxo-pentanoátu (208b, 435 mg. 1,33 mmol). Produkt se získá jako pěna (542 mg, 71 %):
[ajj<° - 99° (c 0,19. chloroform);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3473, 3331, 3065. 2932,2872, 1660. 1580. 1533. 1488, 1423, 1370. 1337, 1278, 1254, 1223, 1155, 1080. 1024,983,925.877. 846, 801,770. 705:
'11 NMR (deuterochloroform) δ 9,42 (III. s). 7.81 (2H, d). 7.51 - 7,40 (411. ní). 7.06 (lH.d).
6,50 5.50 (2H. široký s), 5,25 - 5,00 (2H, m), 4,60 - 4,45 (211. m). 3.15 2,85 (2H, m).
2,75 - 2.35 (111, m). 2,30 - 1,23 (11H, m), 1,42 (9H, s).
(234c). Roztok semikarbazonu 233e (390 mg, 0,68 mmol) v methanolu (10 ml) se ochladí na 0 °C a potom se reaguje s 38% vodným roztokem formaldehydu (2 ml) a 1M kyselinou chloroso vodíkovou (2 ml). Reakční směs se potom míchá při teplotě místnosti přes noc. Roztok se zahustí a odstraní se tak methanol. Vodný roztok sc extrahuje ethylacetátem (30 ml). Organická vrstva se postupně promyje 10% roztokem hydrogenuhličitanu sodného (30 ml) a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného (30 ml), suší sc nad síranem horečnatým a zahustí. Po čištění pomocí velmi rychlé ehromatografie na silikagelu (2 až 5% methanol v dichlormethanu) se získá 234e
2^ (179 mg. 51 %) ve formě pěny;
fa'][/’ 1010 (c 0,064, methanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3346. 2976, 2934. 1730, 1657, 1535. 1456, 1425, 1278, .to 1255. 1156,708;
lH NMR (deuterochloroform) 6 9,56 (l H, s), 7,88 - 7,38 (5H. m), 7,01 a 6,92 (211, 2d),
5.27 5.08 (2H, m), 4,69 - 4.46 <111. m). 3,50 3,27 (2H, m). 3,15- 2,73 (211. m). 2.46 1,83 (lOH.m). 1.45 (911, s), (237e), sc připraví z 236e analogickým způsobem jako sloučenina 234e za získání bílé pěny (390 mg. 85 %);
- 113° (c 0,242, chloroform);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3352, 3065, 2974, 1729, 165 7, 1536. 1489. 1454, 1423, 1369, 1338, 1278, 1255, 1223, 1156. 1078. 1026. 981, 846, 709.
(235e). Roztok t-butylesteru 234e (179 mg, 0,35 mmol) v suchém dichlormethanu (3 ml) se
4? ochladí na 0 °C a reaguje se s kyselinou trifluoroctovou (2 ml). Vzniklý roztok se míchá 30 minut při 0 °C a potom při teplotě místnosti 2 hodiny. Roztok se zahustí, zbytek se převede do suchého dichlormethanu (5 ml) a směs se znovu odpaří. Tento postup se ještě jednou opakuje s dalším diehlormethanem (5 ml). Získaný zbytek se krystalizuje z dielhy letheru. Krystaly se oddělí a čistí se pomocí kolonové ehromatografie na silikagelu (5% methanol v dichlormethanu) a získá se sloučenina 235e jako bílá pevná látka (111 mg, 70 %): teplota tání 142 °C (za rozkladu);
|a)i>2(' 85.5° (c 0,062, methanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3409, 3075, 2952, 1651. 1541. 1424, 1280. 1198, 1136, 717:
*H NMR (perdeuterodimcthylsulfoxid) ó 9,40 (IH, s), 8.62 (2H. m), 7,96 - 7.38 (5H. m), ? 5,19-5,02(111, m), 4,98 - 4,79 (1 H, ni). 4,48 -4.19(IH, m), 3,51 -3.11 (2H. m). 3.04 - 2,90 (2H, rn), 2.38 - 1,46 (1 OH, m).
(238e), se připraví z 237e analogickým způsobem jako 235c za získání béžové pěny (190 mg, 60%):
(I [αV - 78° (c 0.145, methanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3400, 3070, 2955, 2925, 2855. 1653, 1576, 1541. 1490. 1445. 1427. 1342, 1280, 1258, 1205. 1189. 1137. 1075. 1023,983,930, 878, 843.801.777. 722;
'H NMR (perdeuterodimetliylsulfoxid) δ 9,40 (IH. s), 8.72 - 8.60 (2H, rn). 7,89 (211, d), 7,56 - 7,44 (3H, 5,17 (IH, rn), 4,90- 4,83 (IH. m). 4,46 - 4,36 3.40 3,30 (1 H, rn), 2,98 - 2,90 (2H. m), 2.50 - 1,60 (1011, m).
III, m). 4.20 4,15 (IH, ni).
°O^OH
(246) (243), se připraví z (1S.9S) t-butyl-9-aminooktahydrodiazepin-1-karboxylátu (Atlwood, a kol., J. Chem. Soc,. Perkin I. str. 1011-19 (1986)). způsobem popsaným pro sloučeninu 21 le, za získání 2,03 g (86 %) bezbarvé pěny:
[a]D’h - 15,9° (c 0.5, dichlormelhan);
?5
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3400, 2976,2937, 1740, 1644. 1537, 1448. 1425, 1367, 1154;
'H NMR (deuterochloroform) 6 7,88 7,82 (2H, m), 7,60 - 7,38 (4H. m), 5,48 (1H. m), 4,98 io (lil, m). 3,45 (IH, m), 3,22 - 2,96 (2H, m), 2,64 (lH,m). 2.43 - 2.27 (2H. rn). 1,95 (2H, m),
1,82 - 1.36 (4H, rn). 1,50 (911. s);
Analýza pro Ο2ΙΗ29Ν;,Ο.(,0,25 H2O:
vypočteno: C. 64,35; H, 7.59; N. 10,72, nalezeno: C, 64,57; 11, 7,43; N, 10.62.
-82CZ 300171 B6
Hmotová spektroskopie (ES +. m/z) 386 (100%. Μ* + 1).
(244). se připraví z (1S.9S) t-butyl-9-bcnzoylaminooktahydro-lO oxo-6H-pyridazino{ 1,2—a][1.2]diazepin-1-karboxylátu (243), způsobem, který je popsaný pro sloučeninu 212e. za získání
1,52 g (89 %) bílého prášku: teplota tání 166 až 169 °C (za rozkladu);
[ajif5 - 56,4° (c 0,5, methanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3361,2963, 2851. 1737, 1663. 1620. 1534, 1195, 1179; io 'H NMR (perdeuterodimethylsulfoxid) δ 12,93 (IH. široký s), 8,44 (1H. d. J = 8,4), 7,93 (211, m). 7,54 (3H. m), 5.46 (1H, m). 4,87 (IH. m). 3,12 (2H. m), 2,64 (IH, m), 2,64 (lil. m). 2.27 (IH, m). 1.98- 1.68(711, m), 1,40 (111, m);
Analýza pro Ci7^1^04,0,25 H2O:
vypočteno; C, 60,79; H, 6,45; N, 12,51, nalezeno: C, 61,07; H. 6,35; N, 12,55,
Hmotová spektroskopie (ES+. m/z) 332 (58%, Μ' + 1). 211 (100).
2o (245). se připraví z (1 S,9S) 9-benzoylaminooklahydro-lO-oxo-6H-pyridazino[l,2 a][1,2]diazepin-1 -karboxylové kyseliny (244), způsobem, který je popsán pro sloučeniny 213c. za získání 601 g (76 %) bezbarvé pěny:
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3401. 2945, 1794. 1685, 1638, 1521, 1451, 1120;
Ίΐ NMR (deuterochloroform) δ 7.87- 7,77 (2H, m). 7,57-7.14 (1 OH. m), 5.59 - 5.47 (2H. m), 4.97 4,32 (4H. m), 3.27- 1,35 (1411, m);
Analýza pro ί%Η2;Ν4Ο6,0,5 H2O:
5o vypočteno: C, 63,50; 11, 6,28; N, 10,58, nalezeno: C, 63,48; II. 6,14; N, 10.52.
Hmotová spektroskopie (ES+, m/z) 521 (100%, Μ + I).
(246), se připraví z [3S.2RS (1 S.9S)] N (2 benzy1oxy-5-oxotetrahydrotúran-3-yl)- 9-benzoyT aminookiahydro-IO-oxo-6H-pyridazino[t,2-aJ(J,2Jdiazepin 1 -karboxamidu (245). způsobem popsaným pro přípravu sloučenina 214e. za získání 396 mg (84 %) bílého prášku: teplota tání 110 až H5°C;
- 126.3° (c 0.2. melhanol):
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3345, 2943, 1787, 1730, 1635, 1578, 1528, 1488, 1450, 1429;
'H NMR (deuterochloroform) δ 7.88 (2H, ni). 7,48 (3H, rn), 5,55 (IH. m), 4,91 (lll.m), 4.56 (1H, m), 4,29 (IH, m), 3,41 -3,05 (311, m), 2,76- 2,41 (3H, m). 2,28 2,01 (3H, ni), 1.86- 1.65 (4H, m), 1,36(111, m);
Analýza pro C2111 v,N4Of„ 1.25112O:
vypočteno: C, 55,68; Π, 6,34; N. 12,37, nalezeno; C. 55,68; H, 6,14; N, 12,16.
Hmotová spektroskopie (ES . m/z) 429 (100%. Μ - 1).
-83CZ 300171 B6
(249) (250) (247). n-ButylHthium (1.6M v hexanu) (22,3 ml, 35,7 mmol) se během 20 minut přikape k roztoku (2R)-(-)-2,5-diliydro-3.6-dimcthoxy-2-(l-methylethyl)pyrazinu (5,8 ml, 6,0 g, 32,4 mmol) v tetraliydrofuranu (250 ml) ochlazenému na -75 °C tak rychle, aby teplota nepře5 kročila -72 °C. Reakční směs se míchá při -75 °C 1 hodinu a během 30 minut se přidá roztok 2,6-di-t-butyl-4-metlioxyfenyl-2-butenoátu (Suzuck a kol. Liebigs Ann. Chem. str. 51-61 (1992)) (9,9 g, 32,5 mmol) v tetraliydrofuranu (60 ml) tak aby teplota během přidávání nepřekročila -72 °C. Reakční směs se udržuje při teplotě 75 °C 1,5 hodiny a při -75 °C se přidá roztok ledové kyseliny octové (6 ml) v tctrahydrofuranu (25 ml) a roztok se ohřeje na teplotu io místnosti. Roztok se nalije do 10% roztoku chloridu amonného (300 ml) a extrahuje se diethyletherem (3x 250 ml). Spojené organické vrstvy se promyjí solankou (2x200 ml), suší nad síranem sodným a odpaří do sucha za sníženého tlaku. Zbylý olej se čistí pomocí velmi rychlé chromatografie na silikagelu (20% heplan v dichlormethanu) a získá se sloučenina uvedená v názvu ve formě světle žlutého oleje (13,5 g, 85 %): i?
[ajif(1 - 64° (c 0.22, methanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 2962, 2873.2840, 1757, 1697. 1593. 1460, 1433. 1366, 1306, 1269, 1236, 1187, 1157, 1126, 1063, 1038, 1011,970. 924, 892. 867. 846. 831,797. 773.
754;
'H NMR (deuteroehloroform) 6 6.85 (211, s). 4,21 (IH, t. J = 3,5). 3,98 (IH, t J - 3,5), 3.79 (311. s), 3,71 (3H. s)„ 3,6 (3H. s), 3,15 (IH, dd, J= 17,8, 7,9), 2,85 - 2,81 (lil, m). 2,58 (111. dd. J - I 7,8, 5,9), 2,28 - 2,19 (IH. m), 1,33 {1811, s). 1.02 (3 H. d ,J = 6.8). 0.70 (6H. dd. J = 13. 6.8),
-84CZ 300171 B6 (248) . Roztok (247) (22,4 g, 45,8 mmol) v acctonitrilu (300 ml) a 0.25M kyseliny chlorovodíkové (366 ml. 2 ekvivalenty) se míchá při teplotě místnosti pod dusíkem 4 dny. Aeetonitril se odpaří za sníženého tlaku a k vodné fázi se přidá diethylethcr (250 ml), pil vodné vrstvy se upraví na pH 8 až 9 pomocí koncentrovaného roztoku (32%) a vrstvy se odpaří. Vodná vrstva se extrahuje diethyletherem (2x 250 ml). Spojené organické vrstvy se suší nad síranem sodným a odpaří do sucha za sníženého tlaku. Zbylý olej se čistí pomocí velmi rychlé chromatografie na silikagelu (2% methanol v dichlormethanu) čímž se získá požadovaný produkt ve formě světle žlutého oleje (8,2 g. 45 %):
io + 20° (c 0.26. methanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3394, 3332, 3000, 2962, 2915. 2877, 2838, 1738, 1697, 1593. 1453, 1430, 1419, 1398, 1367. 1304, 1273. 1251, 1221. 1203, 1183, 1126. 1063. 1025, 996, 932, 891,866, 847, 800, 772, 745;
'11 NMR (deuterochloroform) δ 6.85 (2H, s). 3,79 (3H, s), 3,74 (3H. s), 3.72 - 3,69 (III. m). 3,05 - 2.85 (t H, m), 2.67 - 2,50 (2H, m). 1,32 (18H, s), 0,93 (311. d,.) - 7);
Analýza pro C22H15NOO vypočteno: C, 67,15; 11. 8,96; N. 3,56, nalezeno: C, 67.20; H. 9,20; N, 3,70.
(249) . Roztok (2S.3S)- 5-[2,6-di-1-buty I- 4 methoxy fcnyll-3-methylg!ulamátu (248) (8.0g. 20,3 mmol) v 5M kyselině chlorovodíkové (200 ml) se zahřívá 2 hodiny k varu. Reakční směs sc odpaří za sníženého tlaku do sucha. Zbytek se rozpustí v cyklohexanu (čtyřikrát) a odpaří do sucha, (čtyřikrát), čímž se získá bílá pevná látka (7,9 g, 93 %): teplota tání 230 °C;
[a]íf° + 22° (c 0,27, methanol);
.Mi Infračervené spektrum (bromid draselný) 3423. 2964, 1755, 1593. 1514, 1456, 1421. 1371, 1303, 1259, 1201. 1179. 1138. 1106, 1060. 966.926, 861.790,710;
'H NMR (monodculcroinethanol) δ 6.76 (211. s), 4,02 (IH. d, J = 3,7), 3,67 (3H, s), 3,05 - 2.85 (IH. m), 2.80 - 2,55 (2I I, m). 1.22 (18H, s), 1,09 (3H, d, J = 6.3):
13C NMR (monodeuteromethanol) δ 174.5, 171.4, 158,6, 145.2. 143,1, 113.2, 58,3, 56,3. 39,8, 36.9,32,5, 16.6;
Analýza pro ÍJiHoClNOs:
vypočteno: C, 60,64; 11, 8,24; N. 3.37, nalezeno: C, 60,80; 11, 8,40; N, 3,40.
(250) , Diisopropylethylamin (4,1 ml, 3,04 g. 23,5 mmol, 1,25 ekvivalentu) a anhydrid kyseliny fialové (3,5 g, 23,6 mmol, 1,25 ekvivalentu) se přidá k roztoku (2S.3S)-5-[2,ó-di-t-butyl-4 45 methoxy feny l]-3-niethylglutamátu (249) (7,8 g. 18,6 mmol) v toluenu (300 ml), a vzniklá směs se zahřívá 3 hodiny k varu. Po ochlazení na teplotu místnosti se reakční směs odpaří do sucha a vzniklý olej se čistí pomocí velmi rychlé chromatografie na silikagelu (2% methanol v diehlormelhanu) za získání požadovaného produktu ve formě bílé pěny (8.35 g, 87 %):
?o - 20° (e 1,04. methanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3480, 2968,2880, 1753, 1721, 1594. 1462, 1422, 1388, 1303, 1263, 1216, 1183, 1148, 1062, 1003,933,899,755, 723:
-85CZ 300171 B6 'H NMR (deuterochloroform) δ 7.92 - 7.87 (2H, m), 7,78 - 7.73 (2H. m), 6.84 (2H. s). 4.95 (1H. d). 3.78 (3H, s), 3,30 - 3,05 (2H, ni), 2,85 - 2.65 (1H. m). 1.30 (18H, s),1,13 (31L d).
(250) (251)
(254)
(257) (252)
(251). Roztok aminokyseliny (250) (1,2 g, 2.35 mmol) v suchém diethyletheru (10 ml) se reaguje 5 s chloridem fosforečným (0.52 g, 2.5 mmol) 2 hodiny při teplotě místnosti. Směs se zahustí a několikrát se přidá toluen a znovu se odpaří do sucha. Vzniklý chlorid kyseliny se rozpustí v suchém tetrahydrofuranu (5 ml) a dichlormethanu (5 ml) a ochladí se na 0 °C. K roztoku se přidá t-buty I- 1 (benzv loxy karbony l)hexahydro-3-pyrídaz i nkarboxy lát (0.753 g. 2,35 mmol.
ekvivalent) a N-cthylmorfolín (3 ml). Reakční směs se míchá 30 minut při 0 °C a potom přes
-86CZ 300171 B6 noc při teplotě místnosti. Směs se odpaří a zbytek se převede do dichlormethanu (30 ml). Roztok se promyje 1M kyselinou chlorovodíkovou, vodou. 10% roztokem hydrogenuhličitanu sodného, suší se nad síranem hořečnalým a odpaří. Vzniklá bílá pěna se čistí na silikagelu (0 až 2% methanol v dichlormethanu) za získání požadované sloučeniny 251 ve formě světle žluté sklovité pevné látky (740 mg, 39 %): fajn20 - 22° (c 0,42, methanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3441,2966, 1725, 1693, 1386, 1255. 1221. 1186. 1154. io 1123, 1063,724;
'H NMR (deuterochloroform) δ 7,94 - 7.89 (411. m), 7,56 - 7.28 <5H. m), 6.84 (2H, 2s), 5,29- 5,20 (2H. AB), 4,91 - 4,81 (IH. m), 4,05 - 3,88 (IH. m). 3.78 (3H. s), 3.75 - 3,80 (1H. nt). 3.28 - 2.95 (2H, m), 2,23 - 1,51 (ÓH. m), 1,45 (911, s), 1,31 (911. s). 1.28 (9H, s). 1,27 (311, d).
(254). Roztok chráněné kyseliny (251) (715 mg, 0,893 mmol) v acetonitrilu se reaguje s amoniumnitrátem eeričitým (1,8 g, 3,3 mmol, 3,7 ekvivalentu) vévodě (3 ml) 4 hodiny při teplotě místnosti. Přidá se mannitol (600 mg, 3,3 mmol, 3,7 ekvivalentu) a směs se míchá
I hodinu. Ke směsi se přidá d i ethyl ether (50 ml) a voda (30 ml). Po usazení se vodná vrstva extrahuje diethyletherein (4x 50 ml). Spojené organické vrstvy se promyjí vodou, suší nad síranem horečnatým a zahustí. Po chromatografií na silikagelu (10% methanol v dichlormethanu) se získá 5-(l-benzyloxykarbonyl-3t-butoxykarbonylhexahydropyridazin 2 yl)karbonyl 3 methyl 4-fthalimidopentanová kyselina (252) (360 mg, 64 %):
[α]υ 20 - 49.2Ů (c 0,118. methanol);
Tento produkt se použije bez dalšího čištění (360 mg, 0,609 mmol), a hydrogenuje se v methanolu (30 ml) za použití 10% Pd/uhlí (36 mg) 3 hodiny. Reakční směs se filtruje a vzniklý ΐο roztok se zahustí za získání aminu (253) jako pěny (270 mg. 96 %).
[α]η20 - 56,10 (e 0.18, methanol).
Amin (253) se rozpustí v suchém tetrahydrofuranu (10 ml) a přidá se chlorid fosforečný (305 mg. is 1.47 mmol, 2,5 ekvivalentu). Směs se ochladí na -5 °C a v dusíkové atmosféře se přidá
N-ethylmorfolin. Reakční směs se míchá přes noc při teplotě místnosti. Směs se zahustí a zbytek se zpracuje dichlormethanem (20 ml), studenou vodou (20 ml), 1M kyselinou chlorovodíkovou (20 ml). Po usazení se vodná vrstva znovu extrahuje dichlormethanem (2x 20 ml). Spojené organické vrstvy se promyjí 10% roztokem hydrogenuhličitanu sodného a vodou, suší nad síranem
4d horečnatým a zahustí. Zbylý olej se čistí na silikagelu (1% methanol v dichlormethanu) za získání bieyklieké sloučeniny (254) jako pevné látky (65 mg, 25 %):
[čiji)20 - ΊΤ (c 0,208, methanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3471,3434, 2975,2928. 1767, 1723, 1443. 1389. 1284, 1243, 1151, 1112.720;
'11 NMR (deuterochloroform) δ 7.94 - 7.69 (4H, m), 5,34 - 5,27 (1H, m). 4,89- 4.66 (211, m), 3.94 - 3,64 (2H, m), 3,02 - 2,84 (1H. m). 2,34 - 2,19 <2H, m), 1,94- 1.61 (311. m). 1.47 (9H,s), so 1,14 (311, d);
Analýza pro Ο^.^γΝ^Ο*:
vypočteno: C, 62,57; H, 6,17; N, 9,52, nalezeno: C. 62,60; H, 6,40; N, 9,10.
-87CZ 300171 B6 (255). Roztok bicyklické sloučeniny (254) (70 mg, 0.16 mmol) v ethanolu se reaguje s hydrazinhydrátem (0.02 ml, 4 mmol, 2.5 ekvivalentu). Po 5 hodinách míchání při teplotě místnosti se směs zahustí a vzniklý zbytek se převede do toluenu a znovu odpaří. Zbytek se reaguje s 2M kyselinou octovou (2 ml) 16 hodin. Vzniklá sraženina se odfiltruje a promyje 2M kyselinou octovou (10 ml), pil filtrátu se pomocí pevného hydrogenuhličitanu sodného upraví do bazické reakce a potom se extrahuje ethylaeetátem. Organický roztok se promyje vodou, suší nad síranem hořečnatým a zahustí. Po čištění velmi rychlou chromatografií na silikagelu (2% methanol v dichlormethanu) se získá volný amin jako pěna (50 mg, 100 %). Amin (50 mg, 0.16 mmol) se io rozpustí vdioxanu (1 ml) a vodě (0,25 ml) a reaguje s hydrogenuhličitanem sodným (0.034 g, 0.04 mmol) a potom benzoylchloridem (0,047 ml, 0.40 mmol, 2.8 ekvivalentu). Směs se míchá přes noc při teplotě místnosti, potom se zředí ethylaeetátem (15 ml). Organický roztok sc promyje 10% roztokem hydrogenuhličitanu sodného a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného. suší nad síranem hořečnatým a zahustí. Po čištění pomocí velmi rychlé ehromatografíe na i? silikagelu (2% methanol v dichlormethanu) se získá benzamid 255 jako pěna (67 mg, 100 %):
Ίΐ NMR (deuterochloroform) δ 7.89 - 7.39 (5H, m), 6,79 (111, d), 5.32 - 5,20 (IH,m). 4,98 - 4,82 (1H, m), 4.75 4,64 (1H. m). 3,84 - 3.65 (lil, m), 3,09 - 2.89 (III, m), 2,45 - 2,18 (2H. m). 2.00- 1,61 (4H, m), l,48(9H, s), 1,28 (3H,d), (257). Roztok t-butylesteru 255 (67 mg. 0,16 mmol) v dichlormethanu (1 ml) se při 0 °C reaguje s kyselinou trifluoroctovou (1 ml). Vzniklý roztok se míchá 15 minul při 0 °C a polom 1 hodinu při teplotě místnosti. Roztok se zahustí, zbytek se převede do suchého dichlormethanu (2x 2 ml) a směs se znovu zahustí (dvakrát). Zbytek se krystalizuje z diethyletheru. Po filtraci sraženiny se získá volná kyselina 255 jako šedá pevná látka (40 mg, 70 %). Roztok kyseliny (40 mg, 0.11 mmol), N-allyloxykarbonyM-amino-5 benzyloxy-2-oxotetrahydrofuranu (Chapman, Bíoorg. & Med. Chem. Lett, 2. str. 615 - 18 (1992); 39 mg, 0,13 mmol, 1,2 ekvivalentu) a (Ph3P)2PdCI2 (3 mg) ve směsi se suchým dichlormethanem (I ml) a suchým dinicthylformamidem (0.2 ml) se po kapkách reaguje s n-Bu3SnH (0,089 ml, 0,33 mmol, 3 ekvivalenty). Vzniklý mi roztok se míchá 10 minut při 25 °C a potom se přidá l-hydroxybenzotriazol (36 mg, 0,266 mmol. 2,4 ekvivalentu). Směs se ochladí na 0 °C a přidá se ethyld i methy lamin opropylkarbodiimid (31 mg. 0,16 mmol. 1,5 ekvivalentu). Po 10 minutách míchání při 0 °C a potom přes noc při teplotě místnosti se směs zředí ethylaeetátem (20 ml) a vzniklý roztok se postupně promyje 1M kyselinou chlorovodíkovou (2x 5 ml), 10% roztokem hydrogenuhličitanu sodného (2x
5 ml) a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného (5 ml), suší se nad síranem horečnatým a zahustí. Po velmi rychlé chromatogralli na silikagelu (2% methanol v dichlormethanu) se získá směs diastereoizomerů (256) ve formě šedé pevné látky (50 mg, 82 %). Tento produkt (256) se použije přímo bez dalšího čištění (50 mg. 0,091 mmol) a hydrogenuje se v methanolu (5 ml) za použití 10% Pd/uhlí (30 mg) 24 hodin. Reakční směs se filtruje a vzniklý roztok se zahustí. Po velmi rychlé chromatografií na silikagelu (2-20% methanol v dichlor-methanu) se získá sloučenina 257 (9 mg. 21 %) ve formě bílé pevné látky:
lll NMR (perdeuteromcthanol) δ 7.88 7.29 (5H. m), 5,18 - 4,99 (111. m), 4.59- 4.35 (3H, m),
4,26 - 4,11 (IH. m), 3,65-3,41 (211, m), 3,18-2,91 (lH,m). 2.62 - 1,47 (BII. m). 1,29- 1.00 (3H, 2d) (směs acetalu a poloacctalu).
Hmotová spektroskopie (ES ) 457.
PhCONHNH2 (258)
CO2Bn ,NH
Phco-rr
H (259)
(263)
(265)
(259). Benzylakrylál (1,13 ml, 7,34 mmol) se přidá k míchané suspenzi henzoylhydrazinu (285) (1,0 g, 7.34 mmol) v isopropanolu (28 ml). Směs se zahřívá 20 hodin k varu. ochladí se na teplotu místnosti a potom se zahustí. Zbytek se čistí pomocí velmi rychlé chromatografie (20% ethylacetát v diehlormethanu) za získání sloučeniny 259 (1,098 g, 50 %) jako oleje, který krystalizuje stáním: teplota tání 65 ”C;
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3283. 1723. 1644. 1316, 1201, 1156:
ίο 'H NMR (deuterochloroform) 5 8,32 8,18 (1H, m), 7,81 - 7,70 (2H, m), 7,57 - 7,23 (8H, m),
5,36 - 4,92 (1H, široký m), 5,1 I (2H, s), 3,26 (211, t, J - 6,5), 2,59 (2H, t, .1 - 6.5);
-89CZ 300171 B6 nC NMR (deuteroehloroform) δ 172.12. 167,27. 135,65, 132.54. 131,66, 128,45, 128.10. 128,06, 126,84, 66,3!, 47.33, 33,31;
Analýza pro Ct4 [lsN2()y vypočteno; C. 68.44; H. 6,08; N, 9,39, nalezeno; C. 68.42: II, 6,10; N, 9,38.
Hmotová spektroskopie (ES+) 321 (M + Na.38%), 299 (M + 1, 100).
(260) . Roztok (3S)-1-benzyl-3-1-butyl-hexahydropyridazin-1.3-dikarboxvlátu (Hassall a kol. κι J. Chem. Soc. Perkin 11 str. 1451 - 1454 (1979)) (925.3 mg, 2,89 mmol) a d i isopropy Iethylaminu (0.70 ml, 4,0 mmol) v 1.93M toluenovém roztoku fosgenu (17.96 ml. 34,7 mmol) se míchá 45 minut při teplotě místnosti, potom se odpaří za vzniku žluté pevné látky. K této pevné látce se přidá toluen (18 ml), hydrazid (259) (861,6 mg, 2.89 mmol) a diisopropylethylamin (0,70 ml, 4.0 mmol). Směs se míchá při teplotě místnosti 2,75 hodiny, potom se zahustí. Zbytek se převede do ethylaeetátu, dvakrát promyje 1M kyselinou chlorovodíkovou, solankou, potom sc suší nad síranem hořečnatým, filtruje a zahustí za získání 2,15 g surového látky. Po velmi rychlé chromatografii (40% ethylacetát v hexanu) se získá 1,65 g (89 %) sloučeniny uvedené v názvu ve formě bílé pěny: teplota tání 40 °C;
[otln 4 - 55.78° (e 0.40. díchlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3436, 2930, 1733, 1689, 1455, 14121. 1367, 1258. 1156, 697;
lH NMR (deuteroehloroform) δ 8,54 8,23 (0.5H. m), 7,97 7,09 (15,514), 5,16 4,80 (4H, m),
4,66 - 4,32 (IH, m), 4,24 - 3.55 (3.3H. m). 3.50 - 3.26 (0.4H. m), 3.19 - 2,49 (2,3H, m). 2,11 - 1,43 (6H, m), 1.32 - 1.05 (711, m);
Analýza pro C3sH4(lN4Ox, 0.5 ITO: so vypočteno: C, 64,31; 11. 6,32; N, 8,57, nalezeno:C. 64.18; H, 6,27; N, 8.56.
Hmotová spektroskopie (ES +) 662 (M + Na. 84%). 645 (M + 1. 100). 384 (77).
(261) . Roztok sloučeniny 260 (1,59 g, 2,47 mmol) v methanolu (142 ml) se reaguje s 10% palladiem na uhlí (230,0 mg) a míchá ve vodíkové atmosféře 1,5 hodiny. Směs se filtruje a rozpouštědlo se odpaří za získání 1,04 g (100 %) bílé pěny. Ta se použije v následujícím kroku bez dalšího čištění; teplota tání < 40 °C:
|ajn26 * 1.6° (c 0,26, díchlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3422, 2977,2986, 1728. 1677. 1486. 1445, 1396, 1369. 1309. 1228. 1155,916.716;
lH NMR (deuteroehloroform) δ 10,0- 9,7 (IH, široký m). 7,86 (2H. d, J = 7,5), 7.62 7,38 (311, m). 7,3 5.6 (211, široký m), 4.57 (IH. široký d, J - 4,0), 4,05 - 3.77 (211. m). 3,00-2,82 (lil, m), 2,80 - 2,43 (3H, m), 2,20 - 2.03 (1H. ni), 2,00 - 1,47 (1H, m), 1.62 1,14 (11H. m);
’ϊ’ NMR (deueteroehloroform) δ 175,00. 171.17, 167,62. 160.68. 132.39, 131.77, 128.67. 127,38, 82.27. 54,38, 48,04. 46,35, 33.62, 28.02. 25,68, 21,61.
Hmotová spektroskopie (ES +) 443 (M + Na, 68%), 421 (Μ' + 1), 100). 365 (50). 131 (61).
-90CZ 300171 B6 (262) . K roztoku aminokyseliny 261 (1,012 g, 2.41 mmol) v suchém tetrahydrofuranu (26 ml) se při 0 °C přidá N- ethylmorfolin (597 μΙ, 4.69 mmol). a chlorid fosforečný (651.3 mg, 3,12 mmol), Reakční směs se míchá 2 hodiny při 0 °C. potom se nechá ohřát na teplotu místnosti a míchá se dalších 15,5 hodiny. Směs se zahustí a zbytek se převede do ethylacetátu, dvakrát promyje 1M kyselinou chlorovodíkovou, nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, solankou, potom se suší nad síranem horečnatým, filtruje a zahustí. Po velmi rychlé chromatografii (20% ethvlacetát v dichlormelhanu) se získá 727,3 mg (75 %) sloučeniny uvedené v názvu ve formě bílé pěny:
io [a]D~ó + 51.0° (e 0.20, dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3436, 2979, 1733. 1670, 1483. 1437. 1420, 1299. 1243. 1156;
Ή NMR (deuterochloroform) δ 8,70 (111, s), 7.78 (211. d, J = 7,0), 7,57 - 7,32 (311, m), 5.08 (1H. dd. J 2.5. 5,5). 4,59 - 4,43 (1H. m), 4.08 - 3,69 (3H, m). 3,07 - 2,84 (1H. m), 2,57 - 2,35 (11 Lni). 2.34 - 2.14 (1H, m), 2,07 - 1,43 (3H, m), 1,48 (9H, s);
nC NMR (deuterochloroform) δ 172.41. 169.04. 166,35, 158.35, 132,24. 132.03, 128,61, 127.31,
2(i 62.77. 55,41. 54,07. 41,57, 32.21. 28,04. 24,97, 20.37;
Analýza pro C?(,l Eř,N4(\:
vypočteno: C, 59,69; i I, 6,51: N, 13,92, nalezeno: C. 59,53; II, 6,53; N. 13,84.
Hmotová spektroskopie (ES+) 425 (M +Na, 71%), 403 (M! + 1. 100). 145 (41).
(263) . Roztok esteru 262 (720,0 mg, 1,80 mmol) ve směsi 1:1 dichlormethan a kyselina trifluoroctová (150 ml) se míchá 1.3 hodiny v suché atmosféře. Roztok se potom odpaří ve vakuu, převede se diethyletheru a znovu odpaří. Tento postup se opakuje šestkrát za získání surového prosu duktu jako bílé pevné látky, Produkt se čistí pomocí velmi rychlé chromatografle (5% methanol v dichlormcthanu) za získání 520,0 mg (83 %) sloučeniny uvedené v názvu jako bílé pěny:
|u|i>' - 59,5° (e 1,82, dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3435, 3266. 2956, 1732. 1664, 1524. 1486. 1440. 1302;
!H NMR (deuterochloroform) δ 9.13 (IH, s), 7,77 (2H, d, J - 7,5), 7,57 - 7,32 (3H. m),
5,27 - 5,16 (IH, m). 4,62 -4,43 (114, m). 4,09 2,70 (3H, m). 3.14 2.89 (1H. m). 2,59 - 2.43 (IH. m), 2.38- 2.20 (111, m). 2.14-1,89(111. m), 1,82- 1.59 (2H, m);
l’C NMR (deuterochloroform) Ó 173,65, 172,28, 166,44, 158,42. 132,44. 131.31, 128,61, 127,39,
54,83, 54,0I, 42,11, 31,79, 24.42, 20,29;
Hmotová spektroskopie (ES -) 345 (Μ - H . 100%), 161 (45).
(264) . K roztoku kyseliny 263 (300,0 mg, 0,87 mmol) a (2RS.3S) J-allyloxykarbonylamino-2benzyloxy-5-oxotetrahydrofuranu (Chapman, Bioorg, & Med. Chem. Eett. 2. str. 615-18 (1992)) (277,6 mg, 0,95 mmol) v suchém dichlormethanu (2.5 ml) a suchém dimethylformamidu (2.5 ml) se při teplotě místnosti přidá bis(trifcnylfosfinjpalladiumchlond (13,0 mg), potom tri-n-bulylcínhydrid (466,0 μ], 1,73 mmol). Reakční směs se míchá 5 minut, potom se přidá l-bydroxybenzotriazol (234.1 mg, 1.73 mmol) a směs se ochladí na 0 °C a přidá se hydrochlorid I —(3—dimethylaminopropy I) 3—ethyIkarbodiimid (204,5 mg, 1.04 mmol). Směs se nechá ohřát na teplotu místnosti a míchá se 16,5 hodiny. Směs se zředí ethylacctátem. promyje se 1M roztokem hydrogensíranu sodného, dvakrát nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, potom
-91 CZ 300171 B6 vodou a solankou. Organická vrstva se suší nad síranem horečnatým, filtruje a zahustí. Zbytek se čistí pomocí velmi rychlé chromatografíe (5% methanol v dichlormethanu) za získání 358,3 mg (77 %) sloučeniny uvedené v názvu jako bílé pevné látky:
? Infračervené spektrum (bromid draselný) 3435, 1791, 1665, 1526, 1421, 1285;
'HNMR (deuterochloroform) δ 8,76 a 8,49 (IH, 2 x s), 7,92 - 7,73 (2! 1, m), 7.62 - 7.24 (8,511, m), 6.86 (0,5H, d. J = 8,0), 5,53 a 5,33 (IH, d, J - 5,5, s), 4,95 - 4,34 (5H. m). 4.04 - 3.54 (3H. m), 3,03 - 2,64 (2H, m), 2,49 - 2,14 (21 f. m), 2,11 - 1,46 (4H, m);
io
Hmotová spektroskopie (ES t) 558 (M + Na, 100%), 536 (M’ + 1. 78). 404 (58).
(265). Smés sloučeniny 264 (350.0 mg, 0.65 mmol), 10% palladia na uhlí (350 mg) a methanolu (36 ml) se 6,5 hodiny míchá ve vodíkové atmosféře. Smčs se filtruje a rozpouštědlo se odpaří. iš Přidá se diethy lether a rozpouštědlo se znovu odpaří. Tento postup se opakuje čtyřikrát a získá se
283 mg (97 %) sloučeniny uvedené v názvu jako bílé krystalické látky: teplota tání dekarboxylátu výše 140 °C;
[a] A + 33.5° (c 0,18, methanol).
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3428. 1663, 1528, 1487. 14.37. 1288;
NMR (perdeuterodimethylsulfoxid) δ 10,56 (! H, s), 8,71 - 8,57 (1 H, m), 7,88 7.81 (2H, m).
7,65 - 7,46 (31 k m), 4,97- 4,85 (1H. m), 4.38 - 4,0 (3H, m), 3.88 - 3,52 (3H, m). 2,91 - 2,71 (2H, m). 2,50 - 2,38 (1 H, rn), 2,35 -2.21 (111, m), 2,10- 1,94 (!H,m). 1,93 - 1,49 (311, m);
l'C NMR (perdeuterodimethylsulfoxid) Ó 173,66, 172.49. 169,97, 169,89, 164,96, 157,62, 132.35. 131,85. 128,39, 127,32. 53,81. 52,69, 40,90, 33,i 7, 31,60, 24,40,24,13. 19,24;
5d Hmotová spektroskopie (ES -).
.NHZ
BOC-N^XC^H DCHLA
(266). Roztok dicyklohexy lamou né soli kyseliny (2S) 3-ben zyloxy karbony lamíno-2-tcrc-butoxykarbonylaminopropionové (3 g, 5.8 mmol) v dichlormethanu (200 ml) se čtyřikrát promyje 1M roztokem kyseliny chlorovodíkové, suší se nad síranem hořečnatým a zahustí. Vzniklý olej se
-92CZ 300171 B6 rozpustí v suchém diehlormethanu (35 ml), ochladí se na 0 °C a reaguje s kyselinou trifluoroetovou (35 ml). Tento roztok se 1,5 hodiny míchá při 0 °C, potom se odpaří do sucha. Ke zbytku se přidá dichlormethan (50 ml), který se potom odstraní ve vakuu. Tento postup se opakuje šestkrát za získání bílé pevné látky. Bílá pevná látka se suspenduje v toluenu (50 ml), reaguje se s prásko? vým anhydridem kyseliny ftalové (940 mg. 6,35 mmol) a 18 hodin se zahřívá k varu. Vzniklý roztok se zahustí za získání oleje, který se čistí pomocí velmi rychlé chromatografie (2 až 10% methanol/dichlormethan) za získání sloučeniny 266, 2,01 g (94 %) jako bílého prášku:
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3600-2500 široký, 1776. 1714, 1530. 1469. 1455, io 1392, 1263, 1131,722;
'H NMR (deuterochloroform) δ 7,83 (2H. m). 7,72 (2H. m). 7.29 (5H. m). 5.41 (lil. m). 5,0.3 (2H, s). 3,90(211. m);
i? I Imotová spektroskopie (ES -). 367 (Μ - 1).
(267) . Suspenze kyseliny 266 (1,32 g, 3,58 mmol) v suchém etheru (37 ml) se reaguje s chloridem fosforečným (1,04 g, 5 mmol) a míchá se 2 hodiny při teplotě místnosti. Roztok se filtruje a odstraní se nezreagovaný chlorid fosforečný, potom se odpaří do sucha. Ke zbytku se přidá suchý toluen (25 ml) a odpaří se do sucha. Tento postup se opakuje několikrát. Vzniklý olej se rozpustí v suchém diehlormethanu (25 ml), ochladí se na 0 °C a reaguje se s roztokem (3S) tbutyl 1-benzyloxy karbony lpyridazin-3-karboxy látu (1.15 g. 3.58 mmol) v suchém diehlormethanu (2 ml) a potom v 5% vodném roztoku hydrogenuhliěitanu sodného (25 ml). Směs se rychle míchá 20 hodin při teplotě místnosti, potom se zředí ethylacetátem (100 ml) a okyselí se
2? 1M kyselinou chlorovodíkovou na pH 2, Organická vrstva se dvakrát promyje zředěným roztokem kyseliny chlorovodíkové, potom solankou, suší se nad síranem horečnatým a zahustí. Vzniklý olej se čistí pomocí velmi rychlé chromatografie (2 až. 20% ethylaeetát/dichlormethan. potom 10 až 20% methanol/dichlormethan) za získání sloučeniny (267). 1.25 g (52 %) jako bílého prášku:
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3367, 2955, 1722, 1517, 1455. 1387, 1369, 1251, 1153, 721;
'HNMR (deuterochloroform) δ 7,81 (2H. m), 7.74 (2EE m), 7,63 (lil, široký s). 7.31 (10H. ni).
3< 5.46 4,76 (5f E m), 4,07 - 3.54 (4H, m). 2.4 (11E m). 2,0 - 1.6 (3H, m). 1.40 (91E s);
Hmotová spektroskopie (ES +). 671 (M + 1), 693 (M + Na).
(268) . Roztok esteru 267 (50 mg, 0,074 mmol) v methanolu (15 ml) se reaguje s 10% palladiem io na uhlí (50 mg) a hydrogenujc se za normálního tlaku 24 hodin. Směs se evakuuje a odstraní se tak vodík, a potom se reaguje s 37% vodným formaldehydem (18 mg, 0,22 mmol) a míchá se v dusíkové atmosféře 2 hodiny. Směs se filtruje, odpaří do sucha a produkt se čistí pomocí velmi rychlé chromatografie (4 až 100% ethylaeetát/dichlormethan) za získání sloučeniny 268 14,5 mg (48 %) jako oleje:
'HNMR (deuterochloroform) δ 7,85 (2H. m), 7.71 (211, ni), 5,78 (1H, dd. J - 10.5), 4,99 (IH. dd. J- 6,1, 1,5), 4.07 (IH, d. J= 10,6), 3,49 (IH, dd, J= 14,5), 3,39 (IH, d, J= 10. 3), 3.24 (IH, dd.J = 14, 10,2), 3,17 (2H, rn), 2.39 (111, m), 1,84- 1,46 (3H). 1,51 (911. s);
Hmotová spektroskopie (ES +), 415 (Μ + 1). 437 (M + Na).
Sloučeniny 280-283 se připraví ze sloučeniny 212b podobným způsobem, jako se připraví sloučenina 226e. Sloučeniny 284-287 se připraví podobným způsobem, jako se připraví sloučenina 217e.
-93CZ 300171 B6
„94
284 *-<A
2S5
285
287
Γ H
Alloc-N-^Y O
CCyCBu h2n-or
COrř-Bu
H f H N.
Γ H
ΑΙΙΟ^Ν^Ύ
OR (306)
(306a) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 208a kromě toho, že 2.6-diehlorfenylmethoxyamin (připravený podobným způsobem jako 306b) se použije místo sem i kar baz idu za získání 870 mg (kvantitativně) čirého oleje.
-95 CZ 300171 B6 (306b) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 208a kromě toho. že 2-(fenyl)ethox>amin (US 5 346 911) se použije místo semikarbazidu za získání 395 mg (kvantitativně) čirého oleje.
(307a) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 233e kromě toho, že se použije sloučenina 306a místo sloučeniny 207a za získání 23 mg (23 %) sloučeniny 307a jako bílé pevné látky.
(307b) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 233e kromě toho, že se použije sloučenina 306b místo sloučeniny 207a za získání 43 mg (48 %) sloučeniny 307b jako bílé pevné látky.
(308a) sc připraví ze sloučeniny 307a podobným postupem jako sloučenina 235e ze sloučeniny 234e za získání 15,2 mg (74 %) bílé pevné látky.
'll NMR (perdeuterometlianol) δ 0,9 (m), 1.3 (s), 1,7 (m). 1,8 (m), 2,0 (m), 2.1 - 2,2 (m), 2.3 15 (dd). 2,4 - 2.5 (m). 2,6 (m). 2,7 - 2,8 (m), 3,1 (m), 3,3 (m). 3.4 3.5 (m). 4.5 (m), 4,9 (m), 5,1 (m). 5,3 (d). 5,4 (s). 6,8 (d), 7,2 - 7,5 (m), 7,8 (dd), 8,4 (dd).
(308b) se připraví ze sloučeniny 307b podobným způsobem jako sloučenina 235e ze sloučeniny 234e za získání 25,2 mg (68 %) bílé pevné látky.
2il 'H NMR (perdeuteromelhanol) δ 1,2 (m), 1,6 - 1,7 (rn). 2,0 - 2,1 (m). 2.2 (in). 2.3 (m), 2.5 (m). 2,6 - 2,7 (dd), 2,9 (i), 3,0 (t), 3,1 (m). 3,3 - 3,5 (m), 4,2 (t), 4,25 (ni), 4.5 (m), 5,2 (t), 5.3 (t), 6,7 (d), 7.1 - 7.2 (m). 7,35 (dd), 7,4 (in). 7.5 (m). 7.8 (dd), 8.3 (dd).
O
(304a) R=CH3
Krok A: 301 se připraví podobným způsobem jako sloučenina 605a (Step A), kromě toho, že sloučenina 212e se použije místo sloučeniny 603a za získání 540 mg (34 %) bílé pevné látky.
Krok B: 302. Roztok sloučeniny 301 (50.7 mg; 0,091 mmol) v 2.8 ml směsi methanol/kyselina octová/37% vodný formaldehvd (5:1:1) se míchá 5.5 hodiny při teplotě místnosti a reakční směs se odfiltruje a zahustí na 0,7ml ve vakuu. Zbytek se rozpustí v 3 ml aceton i tri lu a zahustí se na 0,7 ml (třikrát), rozpustí se v toluenu a zahustí na 0,7 ml ve vakuu (dvakrát) a odpaří do sucha. Po chromatografií (velmi rychlá, SiO?. 5% isopropanol/dichlormethan) se získá sloučenina 302 (45,5 tng, 78 %) jako bílá pevná látka:
]H NMR (perdeuterodimethylsulfoxid) δ 1,0- 1,15 (m, 211), 1,4 (s, 9H), 1,65 (m, 2H), 1.9 2.1 (m, 2H). 2,15 - 2,4 (m. 3H), 2.55 (m, 1H), 2,7 - 3,0 (m, 2H). 4,3 - 4.6 (m, 2H), 4,9 (m, 1H), 5,2 (m, 1 í 1). 7.4 - 7.6 (m, 2H), 7,8 8.0 (m. 21Γ). 8.6 (in, 1H). 8.8 (ni. 1H), 9,4 (s. 1H).
(304a).
Krok A: Roztok sloučeniny 302 (90 mg; OJ 8 mmol) v 10 ml methanolu se reaguje strimelalorthoťormiátem (1 ml) a hydrát kyseliny p-toluensulfonové (5 mg; 0.026 mmol) a reakční směs se míchá 20 hodin. K reakční směsi se přidají 3 mi nasyceného vodného roztoku hydrogenuhli2o čítánu sodného a zahustí se ve vakuu. Zbytek se převede do ethy lacetátu a promyje se zředěným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, suší se nad síranem hořec na tým a zahustí ve vakuu za získání 80 mg sloučeniny 303a.
Krok B: 303a se rozpustí ve 2 ml kyseliny trifluoroctové a míchá se 15 minut při teplotě míst25 nosti. Reakční směs se rozpustí v dichlormethanu a zahustí se ve vakuu (třikrát). Po velmi rychlé chromatografií (Si()2l 1% až 3% methanol/dichlormethan) se získá 43 mg (64 %) sloučeniny 304a jako bílé pevné látky:
'H NMR (deuterochloroform) Ó 1,55 1,8 (m, 2H), 1,9- 2,15 <rn. 4H), 2,25 - 2.5 (m. 211).
?>(i 2,7- 3,3 (m, 4H), 3.46,3,6 (s, s, 311). 4,4, 4.75 (2m, IH), 4,6 (m, 111). 4,95, 5.4 (t, d. IH).
5.1 5,2 (m. 111), 6,45, 7.05 (2d, IH). 6.95 (m. III). 7.45 (m. 2H), 7.5 (m, 1H), 7.85 (m, 211),
Příklad 11
Sloučeniny 214e. 404-413,415-445. 446 468. 470—491, a 495 499 se připraví tak, jak je popsáno v příkladu 11 a tabulce 7.
-97CZ 300171 B6
Krok A. Syntéza sloučeniny 401. TentaGel S* NH2 pryskyřice (0.16 mmol/g, 10,0 g) sc umístí do sintrované skleněné nálevky a promyje sc dimethylformamidem (3x 50 ml), 10% (objem/objem) N.N-diisopropylethylaminem v dimethylformaniidu (2x 50 ml) a nakonec dimethylformamidem (4x 50 ml). K pryskyřici se přidá dostatečné množství dimethylformaniidu. aby se získala sus-98CZ 300171 B6 penze a následuje sloučenina 400 (1,42 g, 2.4 mmol, připravená z t butylesteru kyseliny (3S)-3-(fluorenyImethyloxykarbonyl)-č-oxobutanové podle A. M. Murtý a kol. J. Arn. Chem. Soc.. 114, 3156-3157 (1992)), hydrátu 1-hydroxybenzotriazolu (IlOBT-fFO: 0,367 g, 2,4 mmol), O -benzotriazol-l-yl-Ν,Ν,Ν.Ν -tetramethyluroniumhexafluorfosfátu (HBTU: 0,91 g,
2,4 mmol). a Ν,Ν-diisopropylethy laminu (0,55 ml, 3,2 mmol). Reakční smčs se protřepává přes noe při teplotě místnosti za použití třepačky. Pryskyřice se izoluje na sintrované skleněné nálevce pomocí filtrace za sání a promyje sc dimethyl formám idem (3x 50 ml). Nczrcagovanc aminoskupiny sc potom ochrání reakcí pryskyřice s 20% (objem/objem) acetanhydridem/dimethylformamidem (2x 25 ml) přímo na nálevce (promývání 10 minul). Pryskyřice se promyje diio methyl formám idem (3x 50 ml) a dichlormethanem (3x 50 ml) a potom se suší přes noc ve vakuu za získání 401 (11,0 g, kvantitativní výtěžek).
Krok B. Syntéza sloučeniny 402. Pryskyřice 401 (6,0 g, 0.16 mmol/g. 0,96 mmol) nabobtná na sintrované skleněné nálevce promytím dimethyl formamidem (3 x 25 ml). Chránící skupina Fmoc se potom rozštěpí pomocí 25% (objem/objem) piperidin/dimethylforinamid (25 ml) po dobu 10 minut (občasné míchání) a potom pomocí čerstvého piperidinového činidla po dobu 20 minut (25 ml). Pryskyřice se potom promyje di methyl formám idem (3x 25 ml), potom N-melhylpyrrolidinem (2x 25 ml). Po přenesení pryskyřice do 100 ml baňky se přidá N-methylpyrrolidon, čímž se získá suspenze, potom se přidá sloučenina 212f (0,725 g, 1,57 mmol), HOBT-H2O (0.25 g.
2(i 1.6 mmol), HBTU (0,61 g. 1.6 mmol) a N.N-diisopropylcthylamin (0,84 ml, 4,8 mmol). Reakční smčs se protřepává přes noe při teplotě místnosti pomocí třepačky. Pryskyřice se zpracuje a uzavře pomocí 20% směsi (objem/objem) acetauhydrid v dimethylformamidu tak, jak je popsáno pro sloučeninu 401 a získá se sloučenina 402 (6,21 g, kvantitativní výtěžek),
Krok C. Syntéza 403. Tato sloučenina se připraví z pryskyřice 402 (0,24 g. 0.038 mmol) za použití Advanced ChemTech 396 Multiple Peptid syntetizéru. Cykly obsahující pryskyřici se promyjí d i methyl formani idem (3x 1 ml), chránící skupiny se odstraní pomocí 25% směsi (objem/objem) piperidinu v dimethylformamidu (1 ml) po dobu 3 minut, polom čerstvým činidlem (1 ml) po dobu 10 minut za získání pryskyřice 403. Tato pryskyřice se promyje dimethyl3(i formamidem (3x 1 ml) a N-methyl pyrrol idoncm (3x 1 ml).
Krok D. Způsob 1. (409). Pryskyřice 403 sc acylujc pomocí 0,4M roztoku lhiofen-3-karboxylové kyseliny a 0.4M HOB 1 v N-methylpyrrolidinu (1 ml), a roztoku 0.4M HBTU v N-methylpyrrolidonu (0,5 ml) a roztoku 1,6M N,N-diisopropylethylaminu v N-methylpyrrolidonu '5 (0.35 ml) a reakční směs se třepe 2 hodiny při teplotě místnosti. Acylační krok se opakuje.
Nakonec sc pryskyřice promyje dimethyl formám idem (3x 1 ml), dichlormethanem (3x I ml), a suší se ve vakuu. Z pry skyřice se odštěpí aldehyd a celkově sc odstraní chránící skupiny reakcí se směsí 95% kyselinu trifluoroctová/5% voda (objem/objem, 1,5 ml) 30 minut při teplotě místnosti. Po promytí pryskyřice štěpícím činidlem (1 ml) sc spojené filtráty přidají ke studené směsi 1:1 dielhylethenpentan (12 ml) a vzniklá sraženina se izoluje odstředěním a dekantací. Vzniklá kulička se rozpustí vc směsi 10% acelonitril/90% voda/0 až 1% kyselina trífluoroctová (15 ml) a lyofilizuje sc za získání surové sloučeniny 409 jako bílého prášku. Sloučenina se čistí pomocí semipraparativní RP-HPLC s kolonou Rainin Mierosorb C18 (5 μ. 21,4 x 250 mm) za eluee s lineárním gradientem acctonitrilu (5% až 45%) obsahujícího 0.1% kyseliny trifluoroctové (objem/objem) za 45 minut při průtoku 12 ml/min. Frakce obsahující požadovaný produkt se spojí a lyofilizují za získání sloučeniny 409 (10,8 mg. 63 %).
Krok D. Způsob 1Λ. Syntéza sloučeniny 418. Následující postup jc podobný způsobu 1. Pryskyřice 403 sc acyluje kyselinou 4-( l-fluorcnylmelhoxy karbony lamí no)benzoovou a postup se opa5d kuje. Skupina Fmoc se odstraní tak, jak jc popsáno v kroku C' a volný amin se acyluje směsí 20% (objem/objem) acctanhydrid v dimethylformamidu (1 ml) a 1,6M N,N-diisopropyIethylamineni v N-methylpyrrolidonu (0,35 ml) 2 hodiny při teplotě místnosti, Acylační krok se opakuje. Po odštěpení aldehydu z pryskyřice se získá sloučenina 418 (3.2 mg).
- 99 CZ 300171 Bó
Krok D. Způsob 1B. Syntéza sloučeniny 447. Následující postup je podobný způsobu 1A. Pry skyřice 403 se acyluje 0,4M kyselinou 4-( 1-fluorenylmethoxy karbony lam ino)bcnzoovou. Aeylační krok se opakuje jednou. Skupina Fmoe se odstraní stejně jako vý še a volný amin se reaguje s 1M methansulfonylchloridem v dichlormethanu (0,5 ml) a IM pyridinem v dichlormethanu (0,60 ml) 4 hodiny při teplotě místnosti. Po odštěpení aldehydu z pry skyřice se získá sloučenina 447 (10,0 mg).
Krok D. Způsob 2. Syntéza sloučeniny 214e. Následující postup je podobný způsobu I A. Pry skyřice 403 sc acyluje 0,5M benzoylchloridcm v N-methylpyrrolidonu (1 ml) a 1,6M N.N-diisopropylaminem v N-methylpyrrolidonu (0.35 ml) 2 hodiny při teplotě místnosti. Po odštěpení aldehydu z pryskyřice se získá sloučenina 214e (5,1 mg, 30 %).
Krok D. Způsob 3. Syntéza sloučeniny 427. Následující postup je podobný způsobu 1 A. Pryskyřice 403 sc reaguje s 1.0M bcnzcnsulfonylchloridcm v dichlormethanu (0,5 ml) a 1M pyridinem v dichlormethanu (0,60 ml) 4 hodiny při teplotě místnosti. Reakce se opakuje. Po odštěpení aldehydu z pryskyřice se získá sloučenina 427 (7,2 mg, 40 %).
Krok D. Způsob 4. Syntéza sloučeniny 420. Následující postup je podobný způsobu I A. Pry skyřice 403 sc reaguje s 0.5M methylisokyanátem v N-mcthylpyrrolidonu (I ml) a 1,6M N.N-diisopropylethylaminem v N-methylpyrrolidonu (0.35 ml) 2 hodiny při teplotě místnosti. Reakce se opakuje Po odštěpení aldehydu z pryskyřice se získá sloučenina 420 (8.3 mg, 55 %).
Krok D. Způsob 5. Syntéza sloučeniny 445. Následující postup je podobný způsobu 1A. Pryskyřice 403 se acyluje 0,27M imidazol-2-karboxylovou kyselinou (I ml) ve směsi 2:1 dimethylťormamid:voda (s l ekvivalentem N.N-diisopropylethylaminu) a IM hydrochloridem l-(3dimethylaniinopropyI>—3-ethylkarbodiimidu (EDC) ve směsi 2:1 N methylpyrrolidon/voda (0.35 ml) 3 hodiny při teplotě místnosti. Po odštěpení aldehydu z pryskyřice se získá sloučenina 445 (9.5 mg).
Analytické UPEC metody:
(1) Waters DeltaPak 08, 300A (5μ, 3.9 x 150). Lineární gradient acetonitrílu (5 až 45%) obsahující 0.1% kyseliny trifluoroctové (objem/objem) 14 minut při průtoku 1 ml/min.
(2) Waters DeltaPak 08, 300A (5μ. 3,9 x 150 mni). Lineární gradient acetonitri lu (0 až 25%) obsahující 0.1% kyseliny trifluoroctové (objem/objem) 14 minut při průtoku 1 ml/min.
(3) Waters DeltaPak 0 8, 300A (5μ, 3,9 x 150 mm). Izokratická eluce směsí 0.1% kyselina tri lluoroctová/voda (objem/objem) při průtoku 1 ml/min.
(4) Waters DeltaPak 0 8, 300A (5μ, 3.9 x 150 mm). Lineární gradient acetonitrílu (0 až 30%) obsahující 0,1% kyseliny trifluoroctové (objem/objem) 14 minut při průtoku 1 ml/min.
(5) Waters DeltaPak 0 8, 300A (5μ, 3.9 x 150 mm). Lineární gradient acetonitrílu (0 až 35%) obsahující 0,1% kyseliny trifluoroctové (objem/objem) 14 minut při průtoku 1 ml/min.
- 100C7. 300171 B6
Tabulka 7
Postup CN CN CN
+ CO X m σ m
W + £ <ř LQ <T Γ
>u CZ CN CN tfp <-i '— (#P
U -rl 41 čs CD 5 <* VO <* co cn σ *
(-N X V£> * vo co
lT> CO r-
Λ sř 'ď N*
N* CD i ZA TT r^-
X u J vr I
í > co
o O O *T
Φ <1 X Z LD s VD
O řs.1 CM CM
OJ > £ •-L» CM ΛΙ t-l-4 CM r\j
CN O VJ o » >< o
Ss S 5: £ δ x
°^o Q-ς5 °v? *7^r ox-c o=^o
(0 ČI o Q“S° o Q“j°
-P λ: V vr '°S
P 4-1 ω • 1« °b
« . .J tn o
r-“l CO t—1 CN w s-/ N* ___1
- 101 CZ 300171 B6
Postup fsí <\J 04 CM
íO -K 5? 4_ στ r~ iD στ Φ 1—( 04 vQ
X £ q* Xí
Ό tí r1 Cl ao r-t *“ dň ri — tfP «-Η cw
U tP M 1 Ή β s - g - CO o στ ΤΓ OD i—i στ
P-i X vo *1 στ στ T-1 f—1
στ i—< i^-< lQ
33 co tn lT) LQ
co xr •^r στ O m
X Γ* sr «C1 *5* LQ
r* O r- r- rv r' o
υ X lj VT 9^· XT
φ K( rH u MO z-* \o <\j X—< co Csl
O N cl <N C\J X γα *| X tf) X r—
> ^-í u / (N r s CM r \ CM u
<N o LJ <>
Sa X o x o-T\=o O-4“ °u° zx ί.
(ΰ κι P 4J Λ! p Ss “-S5“ o«<>=o ζ}% °c° zx o=z OQ> c>^
Ki 4-f ω °s> V7 Q =< A\Z/* v~^ /z~\
• w θ r- 00 θ στ
ω er ΓΓ
- 102CZ 300171 B6
Postup i—4 rH 1—4 1—í
*
r-4 M> CA σι fs
tú + s to sr Pi V 1 *y
>o cj rH * dP H c*P rH dí> CM cVJ
O -H Cl β ry, r- s 00 >,7 98 86 LS' £
tú k-J r-M co Γ'
Γ' o o i—t
tO (O Ό
V O /) rt\ lO 00 o
Z tO xr Ul »T *T
CO r~ r~ Γ
r- o O O j/\ o w
Ό Φ Z iO 2 ,r\ v ř z ιΠ z
ř-4 O CM CM U i CM t-r CM ♦t* CM •τ'
N > X ΟΛ X T •A «3* co — J
r-( O CM L> OJ o o
(0 p 3 +J 3 Sa O-(>O OQ*° V 231 δχ 0Ofo vX °=< o-Žj-o o> oj^’2^ O° 4Xy 0
P -P co °”b> \7 °Έρ %
__1 o -I 1—i CM n
>1 CO r“i t—t MT TI
-103CZ 300171 B6
Postup tH rH 1-1
+ w Z σ\ cn to ΓΤΊ
£ CD M* Γ ’Τ 1 J iO
Xj rH 1—í r—<
P O -r-f J fí (Ϊ, OP co ?? s V dP ό £ V0 iO _, CO m
z *» r- * 05 co
KO CA co
X ^a* CO LO «».
4 QO 00 řvo
2 CD <T L J tD
Ch r* O o i—4
o O Z o
<D tj Z γί u m «1 z
A-, O 'w C\J o ro
N > re CJ OJ z y J Z ‘tr
VN O ÍN u <N O
5 = Ss z o z
°O° /—/22: CX 0=^)=^0
(TJ u OQ> »QÍ vX οΟη/
ktu vx= \7 -Sz
2 it o=y o=c
4J to o o w-^
a -o o—
in —J \0 _í
*1 to ll <r rn <»
- 104 CZ 300171 B6
Λ 71 4-* W 0 Pí < Fl KT
+ tn K CM cn CO ΓΪΆ
X + X O LD Ol CD v i Γ0
HJ X I-f <*> CM cw CM ' c*P
?LC mi] 5 ° _ co S m s s
X uO lD
o co Ol rt*i
LQ ·> CO t 1
00 ΛΤ\ r- OA
X o Lf) Ui m m
00 co r-
ϋ O O i Λ O «4* O iD
LQ & a a
χ\ r CM λ» co r\i
o N ΓΜ X CN X 1 w X
> Λ 1 CO , —> LD
Cn u u u
II HO Sk ο=ν?° X
0^0 O X o=^ 2=0
(0 3 o,Q>
4J Λί 3 ^^*2= Vil zx u=
M 4-> o o=< O=<
tn ε-/ o z zx z
o
co σι o
H rH rd CM
w •q*
105CZ 300171 Bó
Postup η <-( rH pH
η Γ' o m O ιΛ
t/i 3ÍXj + X ΓΟ ττ Γ χτ w xr
XJ 04 ζ·*» τ-Ι —4 rH
P O -H Gt £ Π j “ <#> 2 S v σ? £ £ dP s 1£> Q “ O w £ oj 4-
X •s Γ' ο lO u?
ΙΟ cn OJ OJ
* ΧΓ tn XP
•W (Ν * \o r-^ r— cn *ST
£ ΓΠ v? t <T ό
V) r- ω to
υ φ Μ 0 Ν > 00 Ο χτ X ΧΓ Οί X ω t—< Ο í C21H28N6O' o· O tn X lQ OJ X o OJ U C19H23N5O
Struktura 1^0 »£/ «γ ΑΜ ó ο X O X o<z° M xX tB- Bx Oi=C>=o °x T S E Οι=^γ= O CX8 r> z>2 V
» __I r-f ΛΙ OJ Λ1 co r\i Csl
π ω OJ 04 XT XT
- 106CZ 300171 B6
Struktura Vzorec M. h. HPLC RČ HS Postup i—í w
r-l OJ ro
+ + s r—í ·—( 10 r-l LO 'ŠT I—1 CO sr
fí Ή rH 8 ° ·* CD t—I — Cfp co O 0Ί K CD r—4 ~ 0P ε * Γ-
lO X O «—1 LO O lO O to sr o ιΟ O CD ^7*
CD O ΓΓ Z vo Ol X IO 04 O o- O *□* Z o fO X i-4 CM o to co o vT Z OJ X o Ol u
Sx °Bí X O X o=Cčo Ο-ξ6 O 22 O° °h “1 S X °<γ° '-Γ 0 Óo - O ó
10 OJ ’ϊ \£> Ol t-~ Ol sr
- 107CZ 300171 B6
Postup cn < i-4 t-4
+
co <—í OJ J—i O vo
X + S «3* ΓΊ LD *T
«—( CM
x dP c*P
o X CLi •H £ _ ro _ co 2 <» rs ro S <» Φ S <£>
ffi σ> * n m kO
r~ o \D
Xí vr m lQ -'T
r· o i—í m O? l_Q
S n U-1 m XT
co co co r-
υ ω co O O O r /“ϊ O Lfl
<Q *3* X U J X u J X
Jq X m o r- ζ*\.1 LQ ťsi
o N CM CM X CM X k N X
> X 10 m «-4 f*\.l
i—1 U i—( O CM u V M υ
1 struktura X O X °Q° o Z Z o° t<ZZ °-cA X O X o=Qo 7,7 —θ v X O X o^^=o n< °u° IÍa X o X 0^0 O-F (Q Z ’ Z r-\O v£
°r z CM X X
t co Cň O i-4
<—1 CM CM m (Ό
ΪΌ *7 *7 ΐΓ
α Γ» Ρ co O X P Γ—í tH P
+ Φ co iA CD
ω X co cn CO cr\
χ + s •ν’ •V
>u <—4 t-H
tz fj afi c*P tfP c?c
O -H i-4 B n „ s s ,07 97 86 £b s S
M-f x * LO t-H i—i *ΐΓ ď?
c£J í—( Γ o
Xl tn •ν’ P>
·* tn r- ΓΥΊ <T co iT> cn
X CO (J 1 •V vr
r~ r- r- Γ-
υ φ o O r fA o CD O lO
2 z<*i U J 2 z 2 cn
M O P) OJ -m-* I OJ *T* CM Π7 OJ X
N > X P Um VT Mm CM rsJ -v OJ
OJ υ CM o l AJ O O
H HO
<0 °P?° ozz^o° X O X °S^^=O ο-ξ1 aJUq. h H i ϊθ LL HO^l Α/~ι jý 0 X O X o=ž v=o rw1
h 3 P λ: 3 vx ^ZX o=< p: o=Z o z'z o°
Str X) yí-\ zz” °AO
w IZ z \= z
12. .2
2
* 04 rn 0Ί ΛΡ (TJ iA n
ω Pí P J •5?
- 109CZ 300171 B6
Postup r-4 rH .-1 i—{
IO vo w vo
co X σ CN σ σ
X + £ sr in
>υ Pí G W tfP lO ÓO dP u? c#P
o Ή 03 co co m 00 o $?
Pu £5 s r~ σ S
X co 04 co
o CN o o
rC Lf> U> σ m
vr? m cO lD
* cn CN σ σ
£ ί ιΛ ’Τ
r~ CO r- r-
O O i f*A O ifA o lO
kj <u lO £ u ) £ u / £ £
Μ ΙΛ r~- CN X ď> Λ.Ι iD CJ
u N CN X CM X A N X
> iO ΛΙ ťs.1 vr CM
CN U CM u k>J υ L>
X Š x ^=o oQÝ δχ X o x
1 O X °%z=° °^° °Ňyo
Π3 čl CV-Č* o zz o° L-t;x Oi=í O G“Ž° η<
0 4-) 44 °%X o=< °O°
ČI zx
4-í ř fi \32 νΖ^”θχ
UJ vy vy \Zy
f y? Γ 00 σι
r—1 m n n n
tn n1
- 110 C7. 300171 B6
-111CZ 300171 B6
α -P to o CM e-í rH in
4- w Ϊ K + s Γ m tO O rH ďl LO n o·
tó β O -H CM ffi dP CM co 1-t ox *- n T-4 m V tíP cn i-“4 dP g - m
Λ 2 O ΙΌ *- w n tO -7 rr> i—( u·) w V. ’ςτ ΓΊ 'M'
υ 0) Η o N í> co O VT X co CM x Γ- CM u C21H22C12N4O7 r~ O co z CM CM X co r-H o
Γ Struktura X O X °<>o °U° zx °h „ °O 5x o=^^=o rwč °u° ZI o=< o ^5 I O I Qcý^ ^=Q n< °\ r°
* rH tn *7 T *7 to -7 *7
-112CZ 300171 B6
Postup □3 »-( < Ή
tn + X n lO co ro co í-í
tu + s in m
>o tH f-4 T-l
cC dfi ' 00
o P-i -.1 a 00 99 CM CO co £? X ÍZl co
ttí *· LO ·· co co
m m m
lD m
<M f- lD
£ LD vr ro lD tn
tn tn ΟΊ o
O O O o tn
0) H co Z LO Z Z <Λ
o o CM
N > CM CM 55 X ΤΓ
r- CM CM CM
u O u
X O X X δ i
o x °<ýo ο=ς^=ο ,—<. zx
(TJ i , οζχ oQtT „.φ
H 3 4-1 Λί os OcQo vC v-L °K
zx
-U tn 0= 1 p HN^ O Q = >Λ
to co
tn *7
13CZ 300171 B6
Postup rH < t-^í ΪΜ
+ r-f OJ m
r-í o 1 ZA f' ^3*
w s LT) U J
i~í rH
řtí cP <& eP
Í1 O -H *P g tO CD oo στ »· s - g s
O-i X ro i—í •k to co
r-4 o i /S Γ'
Λ iZ) UJ *K
o T-l
X cH υΊ O <n k
OD CO 03
o o O o O
X u i s X
Κ» to A, t r- /“X 1 UJ ť\]
0 N CN X X V Λί X
> tn ro <N O ÍM ť\l
(N υ u
I X
δ i °=v^° O X O X
0^0
fd h P -O λ; n^ZI O 2 2o° \r 0
P Ki -P CZ) °ý>í ZI °Cv
^K=O O-
• στ Q i-l
rH <F m tn
W ΚΓ *v
-114CZ 300171 B6
-115CZ 300171 B6 %
-μ
V)
O
Cl, co X * έ >U
O
Cu
X
rd W rH
5 r> ± co s $ fO 5 0 s f—< *v r~t 00 *r
t-M dP co S tn 1—í dP CM CD σ\ o r-1 “ dP s “ *» 00
Xí tn «% o
w
LO m
·.
o
CO in m
*.
o co <r υ
O)
O
N >
co o
T z
VJ4
CM
X i—1
CM u
o o
vr
Z co
CM
X
CD
CM
L>
O vT
Z
CM
Cu
CM
CM
X »-i
CM
O ftj
Cd
P
X>
.v p
-μ to
X
O X
Qz^ ^zQ rH
CO co tn
) z z vr zx
r* tn *3*
-116CZ 300171 136
Struktura Vzorec M. h. HPLC RČ HS Postup min (M+H)+
-117CZ 300171 B6
3 B 0 X t-H
ω x X + x CD *s- CD LD LD vr UD O t-l *sr
>o rZ tH T—( ^-»-L i-Í
ri rw-fc d* m co
HPLC mi 7,71 9£ e-rt 03 S Ο» r- W < M>Z LO Ch Γ-Κ t*4
x! TT V? CD
CM CM CD
X CO VJ-J ΚΓ lD
r- O Γ O r- O vr 52
υ o 5* a r_ ^* a r.. CM ,_I
ÍM O uu CD ϋ( CD /*<1 r 1 O
N > CM X f—1 CM r t OJ X rH OJ r i OJ X «-t
u LJ i >J υ
ra Ut O X r-y; Q-% λ Z· Z z-\ X O X „Q> X o x rwc CD Ζ’Ζ rs
3 +J 4/ 3 Uí J I <..r 21 °=<L ZX O=C ur 21 o=C
co P O O
u. M LU >=< ω υ
« ω OJ LD n *d ld
-118C’Z 300171 B6 α
O
4->
tn
O
Cu to
Z
CO
ΤΓ ·*
CQ *5* m
C0 rr >U
Z o
Oj
Z ďj tD eW=
CD
ΓΠ to
CD
CO r~ •s ύΡ
CM
CM
CM *s
CM r** vr
*.
ΚΓ
CO *3· υ
(D k
O
N >
ro 'J* Z f—t u
tn
CM
Z
CM
CM u
Γ*
O *□*
Z u
m
CM
Z
CM
CM u
co o
ζΓ
Z *<r
CM
Z
PD
CM
O nj
4-J
Λ4 tl
M
4-» to
<Ή
CO rn tn to tn tn
- 119CZ 300171 B6
3 -μ (Π i-H r-l r-t
V CU
+ co X X + S Γ' σ» o LO LD 05 CO vT CM CO CD
>o t-I i-H dP f—1 CA3
P O -H 31 β X X θ’-1 KT CO 00 05 £ S —< co ? a'
r-4 σΓ
4 xi C5 LD CM LT) CM lO
* 05 r- ΪΤ“5 Γ- ΟΟ
X O V£> UJ 'O*
u Φ w Γ' o iD r- o r- O ifA
Z m tO Z U J Z ťTi
H 0 U LO 05 íM *Y* V1 CM X ΓΩ Λ.1
N > CM X X n
LO CM o CM O SM O
Struktura z o X X O 2-2-0° C-X2;c n °o 0 X 5 X Γ>-ξ ο ZZ o XJ “fy ^=7 4, I δχ O=V=° O (-j °U ZT ω„χ X
A ω CO vo «3· O r- «—( r* m·
-120CZ 300171 B6
Struktura Vzorec M. h. HPLC RČ HS Postup min (M+H) +
- 121 CZ 300171 B6
Sl. Struktura Vzorec M. h. HPLC RČ HS Postup min (M+H)+
□ 4J ω 0 fXi ! «-( r-4 < rH
m to PQ
w K ·*, Cl
+ cm UQ Γ' to
s lT) LO
>o f— <-r i—1 ,—4
řé c &> *** et° CA°
U -H q. s CM £ “ 5 C
ffi tn m lO
n r- to
1T> «sr to
*s n ·*. <T co lO
£ í\ to Γ lO
to co Cl
υ <D ci o o O tn
m £ S < o 2 r~i
Et 0 iO W CM PO
N CM *T- 2C ú:
> i—l CM CM UQ CM
CM O u o
X
(0 M P 4J \ J δι o^>° °vr zx 5 x °w: O-? O X ο=<ζ^=ο O-řo η 2-Z n UJ ZI
rX
4J o CA H
LQ Vř° M O >=< O
t? 5^ C-U °n
? —TJ X X
e tú Cl o
H t r- co
LQ VT sř
- 123CZ 300171 B6
Postup r-i CM i—1
4- r4 CO co ·«__
w X σ’ /XI ιΟ vo
* g Ol <\í to tO
>u X r“t dC T-4 €AP r-l tfP
P O -H s s s - t-1 CO o σι
m X r· os o T-4
cn ςτ Γ
* 31 n Ch co CM ti) m
Z <T IO kD tO
Vzorec r~ O lO Z o *3* CM X 1-( r- O to Z CM »“4 O CO CM X 1 28H29N5O6
CM O »—( CM O o
X
X O X
(tí D 0 H o O X °<^° O^2-' o 0 0
P P | 1 bb 2X O=Z
+-1 λ; 21 zx
p °=f O
H 4-’ ω o-0 fA-o 21
V=< O=<
θ z b
(—j fH /Ά CM m co 00
w OJ <7 UJ 'cr
- 124CZ 300171 B6 α
d
4-i w
o
X
co X
X +
£
KJ
X d
o -H
X
Cm
X
x!
£
υ ω
<t o
N >
f0 c
d +j x
d
4J ω
CM ro
LT) co co
Γ' <N řH
LO t «—i lQ
CM v
σ>
Γ'
LQ
C*o co co m
LQ cn
CM m
co
O lQ s
i-H
ΓΟ
X
LíO u
O=^ °č
CO c*P § £ •s
ΓΓΟ lQ
LQ rH tQ co
O iq
Z cn
CM
X *T
CM
O
O«z zr '1 in co dP
CO <0 «Ti o
o
LO rΓ
IQ
CO
O
LQ z
cM
CO
X ch
CM
O
ZT <£>
co *7
- 125 CZ 300171 B6
Postup OJ OJ rH ’ζτ w f-H OJ »—4
+ r- r-í 00 co ífl ·-.
ω X LO K. rH r- Z o
X + fO i-q + XT*
u*> lD in s
>o Pd tH r™(
t—i v dP tíP dP “ cP
u A . r< ’Γ-f £ £ £ 2 Š £ - _ co K *
OS CO ďl o-
co lO OJ o
* in m lD LQ
x; *
m σι V£> r- r-q
S XT LQ OJ to V) LQ
<P co CO ΟΊ
o O O O
u Φ iD z IO Z <0 Z co tf) Z r-
V4 0 N ΓΊ n X 1“1 CO rc OJ X fO OJ X ΓΟ
> <o OJ Li í OJ OJ OJ
O U CJ o
δχ o-<y=o ^\ζχ o G^° δχ °=<^o Q-% O»z ZvO 5x o=Q=° Qtř °^C 5 X °=C> O °u:
(0 VZ
P X °C o=< °=< °=<
λ; p o o C7> o
iq \=<
+J ^zx zx Ax zx
co °5 °5 O=^X O=< o
X5 °m ζ o, nf £
X X
Γ- ω σι o
<—1 ΟΟ 00 ca cn
ω XT XT e· xr
- 126CZ 300171 B6
0, 3 4-) η 0 ÍXi t—1 i-H CM
co cn CM
ui X LD p»· CO I—1
X ± <r? O r-
£ Lf> 'M'
MJ rH i—4
X d *“* dP “ =o “ op
U -H pi e rH Ο rt m «< 00 S 01
dl CM
X r-t co €T>
CD ΟΊ
xi 'ŠT
CM ř*T\ O
X \0 tn ϋι 7 l
CT) O co O Γ' O
υ φ *7 Z co trt vr Z kO
O H CM X M f CM X
> co CM O H-H CM CM U Γ9 CM U
§x H HO X
0^0 0^0 O X °=VZ° o-% °O° ΖΣ
<ΰ H d 4-J Λ! °\jr° zx °=z ο-ζ °o° zx o=z
3 UA_ O^<
M 4+ W A-n )
CG O \z=< v
O X
Λλ <4, W
w X
f tH m <7
rH σι cn cn
cn 7 -7 -7
- 127CZ 300171 B6
Sl. struktura Vzorec M. h. HPLC RČ HS Postup min {M+H)+
- 128 CZ 300171 B6
Postup r*J
4- co W CM lfl
X ± if)
S
>u 1—1
'—
u c*P
U -H r- co
X β CM CTi
X X fO r-Η
r~
♦ iQ
.d
a
• Lfl
X Lf)
00
O
u
<D X
ti o
o r>
N X
> 00 CM
(J
X O X
/¾
(ti t °Ό°
P zx
-U o=<
Aí
P
t \^7
-P o
ω
b
Ol
i—t 01
co
-129CZ 300171 B6
Příklad 12
Slouč. č. r2 *5
600a/103 H ch3
600b H CH2Ph
600c CK3 CH2Ph
(600a/103).
Krok A. Kyselina (2S)-2-tere b»loxykarbonylamino-3-(2-nÍtrofenylainino)propionová.
Kyselina (2S)-2-terc-butoxykarbonylamino-3-aininopropionová (10 g, 49 mmol), 2-fluornitroio benzen (5,7 ml, 54 mmol), a hydrogenuhličitan sodný (8,25 g. 98 mmol) se převedou do 130 ml dimethylformamidu a zahřívají se 18 hodin na 80 °C. Reakční směs se odpaří ve vakuu za získání viskózního oranžového zbytku který se rozpustí v 300 ml vody a extrahuje se d i ethyl etherem (3x 150 ml). Vodný roztok se okyselí na pH 5 pomocí 10% roztoku hydrogcnsíranu sodného a extrahuje se ethylacetátem (3x 250 ml). Spojené extrakty se suší nad bezvodým síranem sod15 nýrn, filtrují a odpaří za získání 12.64 g (83 %) sloučeniny uvedené v názvu ve formě oranžové amorfní pevné látky:
'11 NMR (deuterochloroform) « 8,15 - 8,10 (lil, d). 7.54 - 7.48 (IH. t). 7,13 - 7.08 (IH, d). 6.73 - 6,65 (IH, t), 4,45 - 4.35 (IH, m), 3,9 3.8 (IH. dd), 3.65 - 3.55 (111. dd). 1,45 (9H. s).
2o
Krok B. Kyselina (2S) 2 -terc-butoxykarbonylamÍno-3-(2 aminofenylaminojpropionová
Směs kyseliny (2S)-2-tere-butoxykarbonylamino-3-(2-nitrofenylamino)propionové (12.65 g, 40.5 mmol) a 0,5 g 10% palladia na uhlí v 100 ml methanolu pod vodíkovou atmosférou při tlaku
100 kPa se míchá 4 hodiny. Roztok se filtruje přes křcmelinu 545 a filtrát se odpaří ve vakuu za
- 130CZ 300171 B6 získání 11.45 g sloučeniny uvedené v názvu v kvantitativním výtěžku ve formě tmavě hnědé pevné látky, která se použije bez dalšího čištění:
'H NMR (perdeuteromethanol) δ 6,75 6,70 (3H. m), 6.65 - 6.58 (IH, m). 4,35 - 4,3 (111. ni).
3.6 - 3.38 (211, m), 1,45 (9H,s).
Krok C. (3S)-2-Oxo 3 · terc-butoxy karbony lamina-1,3,4,5-tetrahydro-1 H-l,5-benzodiazepin.
Hydrochlorid 1—(3—dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimidu (8.54 g. 44,5 mmol) se přidá io k chladnému (0 °C) roztoku kyseliny (2S)-2-tere butoxykarbonylamino-3-(2-aniinofenylamino)propionové (11,95 g. 40,5 mmol) v 100 ml dimethylformamidu a míchá se 18 hodin.
Reakční směs se nalije do 700 ml ethylacetátu a čtyřikrát se promyje 100 ml vody. Organická vrstva sc suší nad bezvodým síranem sodným, filtruje a odpaří za získání hnědé pevné látky, která se čistí pomocí velmi rychlé ehromatografie za eluce směsí 3:7 ethylacctát/hexan za získání
8 g (71 %) sloučeniny uvedené v názvu:
'HNMR (deuterochloroform) ó 7.78 (IH, s), 7,02 - 6,95 (lil, m). 6.88 6.62 (IH.m),
6,82 - 6,78 (111, m), 6,75 - 6.70 (IH. m). 5.8- 5,7 (111. d), 4.55 - 4.45 (IH, m), 3,95 (111, s), 3.9 - 3.82 (1H. ni). 3.48 - 3,40 (111, m), 1.45 (9H. s).
Krok D. (ó()()a/103). 1.0M Roztok lithiuinbis(trimethylsilyl)amidu (3.4 ml. 3,4 mmol) v tetrahydrofuranu se přikape k roztoku (3S)-2-oxo-3-terč butoxykarbonylamino-2,3.4.5-teírahydrolH-l,5-benzodiazepinu (0,94 g, 3.38 mmol) v 20 ml bezvodého tetrahydrofuranu ochlazenému na -78 °C a míchá se 30 minut. K reakční směsi se potom přikape methyl bromaeetát (0,44 ml,
2? 4 mmol) a reakční směs se ohřeje na teplotu místnosti. Reakční směs se zředí 100 ml ethylacetátu a promyje se 0,3M roztokem hydrogensíranu draselného (50 ml), vodou (2x 50 ml) a solankou. Spojené organické extrakty se suší nad bezvodým síranem sodným, filtrují a odpaří za získání gumy. která se čistí pomocí velmi rychlé ehromatografie za eluce směsí 3:7 ethylacetát/hexan za získání 0,98 g (83 %) sloučeniny uvedené v názvu jako bílé pevné látky.
Ϊ0 lH NMR (deuterochloroform) δ 7.15 - 7,07 (211, m), 6,98 - 6,94 (IH. ni). 6,88 - 6,84 (111. d). 5.62 - 5.55 (IH, d), 4,71 - 4,65 (IH, d), 4,65 4,6 (IH, m), 4,33 - 4.27 (IH. d). 3.96 - 3,90 (IH. m).3.78 (311. s). 3.44 3,37 (IH, m). 1.4 (9H. s).
(600b). Sloučenina se připraví podobným způsobem jako je popsáno pro přípravu sloučeniny
600a/103 (krok D), kromě toho. že se benzyIbromacetál použije místo methylbromacetátu za získání sloučeniny 600b v kvantitativním výtěžku.
(óOOe).
Krok A, Kyselina (2S )-2-t crc-butoxy karbony lam íno-3-(2 nitro 3,5- diinethylfeny lamino)propionová.
Sloučenina se připraví podobným způsobem jako je popsáno pro přípravu sloučeniny 600a/103 (krok A), kromě toho, že se 2-fiuor-4,6-dimethylnitrobenzen použije místo 2 íluornitrobenzenu za získání požadovaně sloučeniny v 93% výtěžku.
Krok B. Kyselina (2S)-2-terc-butoxykarbonylamino-3 (2 arnino 3,5 dimethy Ifenylamino)propionová.
(2S)—2—terč- butoxv karbony lamí no-3-(2-nitro-3,5-dimethytleny lamino)propionová kyselina se převede na sloučeninu uvedenou v názvu v kvantitativním výtěžku tak, jak je popsáno pro přípravu sloučeniny 600a/l03 (krok B).
- 131 CZ 300171 B6
Krok C. 2-Oxo-(3S)-tcrc-butoxykarbonylamino-2,3,4,5-tetrahydro-7,9-diniethyl-lH-1.5benzodiazepin.
Roztok kyseliny (2S)-2-terc-butoxykarbonylamino-3-(2-amino-3.5-dimethylfenylamino)pro5 pionové (763 mg, 2,36 mmol) a N-methylmorfolinu (483 mg, 4,78 mmol) v 60 ml bezvodého tetrahydrofuranu ochlazený na 0 °C se po kapkách reaguje s isobutylchiorformiátem (352 mg.
2,5 mmol). Reakční směs se míchá 2 hodiny při 0 °C, 1 hodinu při teplotě místností a nalije se do ethylacetátu. Směs sc promyje 5% vodným roztokem hydrogensíranu sodného, nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného, ío suší se nad síranem sodným a zahustí se ve vakuu. Po chromatografíí (velmi rychlá, silikagel.
10% až 25% až 56 % ethylaeetát/diehiormethan) se získá 490 mg (68%) požadovaného produktu.
Krok D. (600c). (2S) 2 -terc-butoxykarbonylaniino-3 (2-amino-3,5-dimethylfenylamino)pro15 pionová kyselina se převede na sloučeninu 600c, 75 %, podobným způsobem, jako se připraví sloučenina 600b.
1) Krok A, HCI
2) Krok B. PhCQpH
3) Krok C. R3X
Krok D
(602a)
2o Krok Λ. Bezvodý chlorovodík se probůh lává do roztoku met hy lest eru kyseliny (3S)-2-oxo-3tere-butoxykarbonylamino-2,3.4,5-tetrahydro-1 H-l,5 -benzodiazepin-1-octové (600a/103.
4,0 g, 1 1,4 mmol) v 20 ml dichlormethanu 20 minut, potom se 1 hodinu míchá při teplotě místnosti. Reakční směs sc odpaří za získání hydroehloridu methylesteru kyseliny (3$)-2- oxo 3amino 2.3,4,5-tetrahydro-I H-l ,5 benzodiazepin-1 -octové jako bílé pevné látky,
Krok B. Bílá pevná látka se rozpustí v 70 ml dimethylformamidu a přidá se kyselina benzoová (1.5 g, 12,3 mmol). Reakční směs sc ochladí vlažni led/voda a reaguje se s hydrochloridem 1-(3-dimethylaminopropyl)-/ ethylkarbodiimidii (2,4 g, 12,5 mmol), l-hydroxybenzotriazolem (l,7g, 12,6 mmol) a diisopropylethylaminem (3,0 g, 23,2 mmol), Reakční směs se míchá
3(i 18 hodin při teplotě místnosti pod dusíkovou atmosférou a nalije se do vody. Vodná směs se extrahuje dvakrát ethylacetátem. Spojené organické vrstvy se promyjí 0,5M vodným roztokem hydrogensíranu sodného, vodou nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, vodou a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného, suší se nad síranem hořečnatým a zahustí se ve vakuu. Po velmi rychlé chromatografií (silikagel, 10 až 30% ethylaeetál/diehlor- 132C?Z 300171 B6 methan) se získá 3,4 g (85 %) methylesteru kyseliny (3 S)-2-oxo-3( benzoy lam íno )-2,3,4,5-tetrahydro-1 H-l,5benzodiazepin-l-octové jako bílé pevné látky,
Krok C. (602a). Roztok methylesteru kyseliny (3S)-2-oxo-3-(benzoylamino)-2,3.4.5-tetra5 hydro-NI-l,5-benzodiazepin-l-octové (200 mg. 0,57 mmol) v dichlormethanu (10 ml) se reaguje s triethy laminem (119 mg. 1,13 mmol) a 3-fenylpropionylchloridem (114 mg. 0.68 mmol). Reakční směs se míchá při teplotě místnosti 30 minut a zředí se dichlorniethanem. Roztok se promyje 10% vodným roztokem chlorovodíku, nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného, suší se nad síranem sodným a zahustí io ve vakuu za získání 240mg (87 %) 602a jako bílé pěny.
Krok C. Způsob B, (602 g). Roztok benzylesteru kyseliny (3S)-2-oxo-3-(benzoylamino)2,3.4,5-tctrahydro-IH-!,5-benzodiazepin-l-oetové (600b) (465 mg, 1,10 mmol) v dichlormethan u (5 ml) ochlazený na 0 °C se reaguje s kyselinou acetooctovou v I ml dichlormethanu a potom následuje pomalé přidání hydrochloridu l-(3-dímethylainínopropyl)- 3-ethylkarbodiimidu (43 I mg, 2,2 mmol) v 2 ml dichlormethanu pod dusíkovou atmosférou. Po 15 minutách se reakční směs nalije do ethylacetátu. promyje se 5% vodným roztokem hydrogensíranu sodného. suší se nad síranem sodným a zahustí se ve vakuu. Po velmi rychlé chromatografii (silikagel. 0 až 10 až 25% niethanol/dichlorniethan) se získá 580 mg benzylesteru kyseliny (3S)-2-oxo-320 (benzoylaniino)-5-aeetoacetyl-2,3,4.5 -tetrahydro-1 Η-1,5-benzodiazepin 1 octové jako bílé pevné látky.
Krok C. Způsob C. (602j). Energicky míchaný na 0 °C ochlazený roztok benzylesteru kyseliny (3S)-2-oxo-3-(henzoylamino)-2,3,4,5-tetrahydro-l 11-1,5-benzodiazep i n-l-octové (600b) (461 mg. 1.07 mmol) v tetrahydrofuranu (5 ml) a nasycený vodný roztok hydrogenuhličitanu sodného (2,5 ml) sc reaguje s tetrahydrofuranovým roztokem (0,35 ml) methy leh lorformiátu (151 mg, 1.6 mmol) a reakční směs se míchá 45 minut při teplotě místnosti. Reakční směs se nalije do dichlormelhanu a promyje se vodou, suší se nad síranem sodným a zahustí se ve vakuu. Po velmi rychlé chromatografii (silikagel, 0 až 10% niethanol/dichlorniethan) se získá 525 mg .to 602j jako bílé pevné látky.
Krok C. Způsob D. (602p). Roztok 600a/l03 (400 mg, 1.1 mmol) a benzylisokvanátu (166 mg, 1,2 mmol) v 10 ml dichlormethanu a 10 ml dimethylformamidu se zahřívá 3 dny na 80 °C. Reakční směs se ochladí na teplotu místnosti a nalije se do vody a dvakrát extrahuje ethylacetá15 tem. Spojené organické vrstvy se promyjí vodou (čtyřikrát) a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného, suší se nad síranem hořečnatým a zahustí ve vakuu. Po velmi rychlé chromatografii (silikagel. 50 až 80% ethylaeelát/hexan) se získá 440 mg (80 %) 602pjako bílé pevné látky.
Krok C. Způsob E. (602v). Roztok hydrochloridu methylesteru kyseliny (3S)-2 υχυ-3 -aminolo 5—(3—íenylpropiony I)—2,3,4,5—tetraliydro— 1 H-l ,5-benzodiazepin-1-octové (560 mg,
1,34 mmol), benzaidehydu (146 mg. 1,34 mmol) a oetanu sodného (220 mg. 2,68 mmol) v methanolu (20 ml) se reaguje 4A molekulovými síty (2 g) a NaCNBH·? (168 mg, 2,68 mmol). Reakční směs se míchá 2,5 hodiny, okyselí se 10% vodným roztokem kyseliny chlorovodíkové na pTI 2 a promyje se etherem (2x 75 ml). Organické vrstvy se zahustí ve vakuu za získání oleje.
Po velmi rychlé chromatografii (silikagel, 0, až 35% ethylacetát/dichlormethan) se získá 250 mg (40 %) 602v jako čirého oleje.
Krok D. Způsob A.
(603a). Methylester kyseliny (3S)-2-oxo-3-benzoylamino-5-(3-fenylpiOpionyl) 2.3,4,5 -tetrahydro-l H-l. 5-benzodiazepin-l-octové (602a; 1,25 g, 2,57 mmol) se rozpustí v 11 ml tetrahydrofuranu, methanolu a vodě (5:5:1), reaguje se s hydrátem hydroxidu lithného (42 mg, 0,62 mmol), míchá se při teplotě místnosti 64 hodin. Reakční směs se zahustí ve vakuu, zředí se vodou, okyselí se pomocí 1M vodného roztoku kyseliny chlorovodíkové za získání 230 mg 603a jako bílé pevné látky.
- 133 CZ 300171 Β6
Krok D. Způsob B. (603d). Směs bcnzylcsteru kyseliny (3S)-2-oxo-3-(benzoylamiiio)-5-acety!-2,3,4,5-tetrahydro- 1 H-l .5 ben/odia/epin l-octové (602d; 510 mg, 1,08 mmol) a 5% palladia na uhlí (250 mg) v methanolu (10 ml) se míchá ve vodíkové atmosféře (100 kPa) 0.5 hodiny. Reakční směs se filtruje a zahustí ve vakuu za získání 410 mg 603d jako bílé pevné látky.
Sloučeniny z tabulky 8 se připraví tak, jak je popsáno v tabulce 9 za použití způsobu z příkladu 12.
Tabulka 8
Slone. č. r2 R3 R< R5
602b H PhCH2C(O) PhC(0) CH2Ph
602c H PhC(O) PhC(Q) CH2Ph
602d H CH3C(0) PhC(O) CH2Ph
602e H CH3OCH2C(O) PhC(O) CH2Ph
602f H (CH3)2CHCH2C(O) PhC(O) CH2Ph
602g H CH3C(O)CH2C(O) PhC(O) CH2Ph
6O2h H CH30C(O)C(O) PhC(O) CH2Ph
602i H CH3C(C)C(O) PhC(O) CH2Ph
602j H CH30C(O) PhC(O) CH2Ph
602k H CH3C(O) Boc CH2Ph
6021 CH3 CH3C(0) Boc CH?Ph
602m H CH3S(02) PhC (O) ch3
602p H PhCH2NHC(Ol PhC(0) ch3
602q H PhC(O) CH2Ph
602r H PhCH2CH2C(O) PhCH2CH2C(O) CH2Ph
602s H 4-pyridylCH2C(O) PhC(O) CH2Ph
134CZ 300171 B6
Tabulka 9
No. Výchozí látka. r3x Krok C způs. / (% výt 4 Krok D způs, / (% výt. )
603b 600b PhCH2C(O)Cl A (98) B (89)
603c 600b PhC(O)Cl A ((kvant.) B (kvant.)
603d 600b CH3C(O)Cl A (kvant:.) B (kvant,)
603e 600b CH3OCH2C(O)C1 A (59) B (kvant.)
603f 600b (CH3)2CHCH2C(O)C1 A (88) B (95)
603g 600b CH3C(O)CH2CO2H B (kvant.) B (kvant.)
603h 600b CH3OC(O)C(O)C1 A (96) B (kvant,}
603i 600b CK3C(O)CO2H B (87) B (94)
603j 600b CH3OCÍO)C1 q (kvant. ), g (kvant.)
6O3k 600b CH3C(O)C1 A, pouze krok C (kvant.1 nereaguje
6031 600c CH3C(O)C1 A, pouze krok C (kvant.) nereaguje
603m 600a/103 CH3SO3CI, NRt3 místo pyridinu a THF místo CHgCL· A (76) A (92)
603p 600a/103 PhCH2C=N=O D (80) A (86)
603q 600b f^^oooct C (83) B (71)
603r 600a/103 PhCH2CH2C(O)Cl A
603s 600b 4-pyridylCH2CO2H B (90) B (98)
- 135 CZ 300171 B6
1) Krokc. R3x
2) Krok A HC1
3) Krok C r4x
Krok D
Sloučeniny z tabulky 10 se připraví tak, jak je popsáno v tabulce 11 za použití postupů z příkladu 11.
Tabulka 10
Slouč, č. r2 r4 r5
602n H CH3CÍO) naftylen -2-C (O) CH2Ph
602o ch3 CH3C(O) PhC(O) CH2Ph
602t H 3-CH3PhCH2C(0) PhC(O) CH2Ph
602u H CH3C(0) Fmoc CH2Ph
602v H PhCH2CH2CO PhCHj ch3
- 136CZ 300171 B6
Tabulka 11
č. I 1 Výchozí látka Krok C- R3X způs. (% výtěžek) 3) Krok C R4X způs.1 (%výtěžek) Krok D způs . (% výtěžek)
603n 6O2k CH3C(O)C1 A (kvant.. } naftylen e- 2-C(O)C1 A (70) B (kvant.)
6Q3o 6021 CH3C(0)Cl 1 (kvant.) PhC(O)Cl A (73) B (kvant.)
603t 602k 3- CH3PhCH2C{O)Cl (kvant.) PhC(O)Cl A (93) B (95)
eo3u 602k CH3C(0)Cl A ( (kvant..) Fnoc-Cl C (82) C (98)
603v 600a/103 ?hCK2CH2C(0)Cl A Phciio E ΐ 4 0) A <S5)
- 137CZ 300171 B6
Slučeniny z tabulky 12 se připraví způsobem popsaným níže.
Tabulka 12
Slouč. č. r2 *3 .. . R4
605a H PhCH2CH2C{0) PhC(O)
605b H PhCH2C(0) PhC(O)
605c H PhC (O) PhC (O)
605d H CK3C(O) PhC(O)
605e H CH3OCH2C(O) PhC(O)
605f H (CH3)2CHCH2C(O) PhC (0)
605g H CH3C(O)CH2C(O) PhC(O)
605h H CH3OCÍO}CÍO) PhC(O)
605i w ch5C(0)C(0) PhC(O)
605j H CH3OC (O) PhC (0)
605m H CH3SO3 PhCÍO)
605n H CH3C(O) Naftyl _-2~C(O)
605o ch3 CH3C(O) PhC(O)
605p H PhCH2NHC(O) PhCÍO)
605q H <3^*000 PhC(O)
605s H 4- pyridylCH2C(0) PhC(O)
605t H 3-CH3PhCH2C(O) PhC(O)
605v H PhCH2CH2C(O) PhCH2
(605a).
s
Krok A. Semikarbazon tere-butylesteru kyseliny (3S)—3—(1-fluorenylmethyloxykarbonylamino)-4-oxobutanové (210 mg, 0.45 mmol), připravený podobným způsobem jako benzyloxykarbonylový analog v Cray bili a kok, lni. J. Protein Res., 44, str. 173-82 (1994).) se rozpustí v 10 ml dimethylformamidu a 2 ml diethylaminu a směs se míchá 2 hodiny. Potom se odpaří ve io vakuu za získání semikarbazonu tere-butylesteru kyseliny (3S)-3-arnino--4-oxobutanovc. 0 °C studený roztok výše uvedeného zbytku 603a (200 mg, 0,42 mmol) v 5 ml dimethylformamidu a 5 ml diehlormethanu se reaguje s l-hydroxybenzotriazolem (57 mg. 0.42 mmol) a hydroehloridem l-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimidu (98 mg, 0,51 mmol). Reakční směs se míchá 18 hodin při teplotě místnosti, nalije se do ethylaeetátu (75 mi) a promyje se 0.3M vodným roztokem hydro gen síranu sodného, nasyceným vodným roztokem hydrogenuhliěitanu sodného a
- 138CZ 300171 B6 nasyceným vodným roztokem chloridu sodného, suší se nad síranem sodným a zahustí se ve vakuu. Po velmi rychlé chromatografií (silikagel, 0 až 4% methanol/0.1% hydroxid amonný/dichlormethan) se získá 240 mg (83 %) 604a.
Krok B. 604a se míchá v 10 ml 33% směsi kyselina trifluoroctová/voda 4 hodiny a odpaří se ve vakuu. Zbytek se rozpustí v 7 ml směsi methanol/kyselina octová/37% vodný roztok forma 1dehydu (5:1:1) a míchá se 18 hodin. Po chromatografií (reverzní fáze Cl8, 4.4 mm ID x 25 cm. 15 až 70% acetonitril/0,1 % kyselina triíluoroetová/voda) se získá 32 mg (16 %) 605a jako bílé pevné látky:
io 'll NMR (perdeuteromethanol, existuje jako diastereomerv hemiacetalu) ó 7,85 - 7,78 (2H, d), 7,5- 7,32 (6H, ni), 7,32 - 7,28 (lil, ni), 7,18 - 6,98 (511, m), 4.92 - 4.85 (2H. m). 4.5 4.32 (211, rn), 4,31 - 4,20 (211, m), 3,7- 3,6 <1H, m), 2,90 - 2.75 (2H, m), 2,65- 2,5 (IH. ni),
2.48 2.25 (3H. m).
Následující sloučeniny se připraví podobným způsobem:
(605b). 148 mg (33 %) jako bílá pevná látka:
lH NMR (perdeuteromethanol) δ 7,9 - 6.9 (m. 16H), 4,9 (s, 2H). 4,5 (m, 1H), 4,4 (rn, 2H), 3,75 (s. IH). 3,6 (dd, IH), 3,45 (dd. IH), 2,7 (m, IH), 2,5 (m, IH).
(605c). 319 mg (56 %) jako bílá pevná látka:
'll NMR (perdeuteromethanol) δ 7.9 - 6.9 (m. 16H), 5,1 (m, 1H). 4.9 (dd, 111). 4,7 (m. 1 H). 4.6 (dd, IH), 4,4 (ni, 2H), 4,05 (m, IH), 2.7 (m, IH), 2,5 (m, IH).
(605d). 190 mg (38 %) jako bílá pevná látka:
Mi 'll NMR (perdeuteromethanol) 8 1.9 (d. 11). 2.4 (m, IH), 2.65 (m. IH), 3,7 (m, IH), 4.25 (m. 1H), 4,45 (m, 2H), 4,8 - 5,05 (m, 3H), 7.3 - 7,7 (m, 7H). 7,9 (d, 2H).
(605c). 250 mg (78 %) is 1II NMR (perdeuteromethanol) δ 1.87 (široký s). 1,95 (s. 211). 2.1 (široký s). 2.4 (m. 211), 2,65 (ni, 211). 3.59 (široký s), 3,75 (široký s), 3,87 (široký s), 4.19 (m), 4,37 (m), 4,50 4,78 (široký ni). 4.92 (rn), 5,27 (široký s), 7,4! - 7,58 (rn. 7H), a 7,87 ppm (d. 211).
(6050. 210,5 mg (46 %) jako bílá pevná látka:
’H NMR (perdeuteroniethanol) 6 7.9- 7.4 (rn. 9H), 5.1 (m, IH), 4.9 (m, IH). 4.6 (dd, 1H), 4,4 (ni, 211), 4,1 (d, III), 3.8 (m. 111).3.5 (kv, IH), 2,7(m, IH), 2,5 (m, IH). 2.0 (rn. 3H), 1.2 (t. IH), 0,9 (d, 3H), 0,8 (d. 3H).
(605 g). 81 mg (19 %) jako bílá pevná látka:
'11 NMR (perdeuteromethanol) δ 7.9- 7.3 (m, 1 IH). 4.9 - 4,8 (ni, 2H). 4.6 4,4 (ni. 3H). 4,3 (m. IH). 3.75 (kv, IH). 3,55 (d, IH), 2,7 (m. 111), 2,5 (m. IH), 2,05 (s, 3H).
so (605h). 227 mg (54 %) jako bílá pevná látka:
H NMR (perdeuteromethanol) δ 2,5 (ni, lil), 2,7 (m, 1H), 3,55 (s, 311). 3,8 - 4.0 (m, 211), 4,4 (rn, 1H), 4,6 - 4.8 (m. 2H), 4.95 (d. 1H), 5,1 (m. IH). 7,3 - 7.7 (m. 7H), 7.9 (d, 211), 8,6 (d, 1H).
- 139 CZ 300171 B6 (605i). 150 mg (37 %)jako bílá pevná látka:
'H NMR (perdeuteromethanol) δ 7.9 7,3 (m, 12H), 5,1 (m. IH), 4,65 (t, lil), 4.55 (dd, IH),
4,35 (m. IH), 4.1 (d, IH), 3,9 (kv. 111),3,45 (kv, IH), 2,7 (rn, lH),2,5(m. 1H). 2.25 (s. 311).
(6O5j). 234 mg (44 %) jako bílá pevná látka:
'H NMR (perdeuteromethanol) δ 7.9 7.4 (m, 1211), 5,0 (m, lil). 4.8 - 4,5 (ιη, 3H). 4,4 (m, IH). 4.3 (t, 111).3.9- 3.75 (m. 211),3,6 (s. 311).2,7 (m, lH),2,5(m, IH).
io (605m). 64,5 mg (34 %) jako bílá pevná látka:
'H NMR (perdeuterodimethylsulfoxid, existuje jako diastereomery poloaeetalu & otevřená forma aldehydu) δ 9,48 (0,211, $), 8,85 - 8,72 (1H. m), 8,65 - 8.60 (0.8 11, d). 8,30 - 8,26 (0.2 H, d).
7,95 - 7,88 (2H, d). 7,6 7,45 (6H, m), 7.44 - 7,38 (IH, m), 5,78 5,75 (0,211. d), 5.48 (0.6H, s),
4,85 - 4,70 (211, m), 4,62 - 4.54 (IH, d), 4,50 - 4,40 (211, m), 4,25-4,14 (IH, m). 3.9-3,85 (IH. m).3,l6(3H. s). 3,05 -2,3 (2, m).
(605n). 103 mg (17 %) jako bílá pevná látka:
'H NMR (perdeuteromethanol) 6 1,9 (s, 3H). 2.5 (m. IH). 2.65 (m, lil). 3,75 (ni. IH), 4.3 (m. IH), 4,5-4,7 (m, 3H), 4,85 5,1 (m. 211), 7.3 - 7.65 (ni, 611). 7.85 8,05 (m. 4H). 8,45 (s, IH).
(605o). 42 mg (12 %) jako bílá pevná látka:
'Η NMR (perdeuteromethanol, existuje jako diastereomery poloaeetalu) 5 7,85 - 7,74 (211, ni),
7.5 - 7,44 (IH, m), 7,43 - 7,35 (411, m), 5,6 - 5,05 (2H, m). 4,82 - 4.42 (2Π, m), 4,40 - 3,95 (2H. rn). 3,6 - 3,5 (IH, m), 2,7 2.38 (2H. m). 2.32 (3H. s). 2,27 (3H, s). 1,92 (3i L s).
Ml (605p). 165 mg (37 %) jako bílá pevná látka:
’H NMR (perdeuteromethanol) δ 2,45 (tn, IH). 2,7 (m, 111), 3,8 (m, IH). 4,15 - 4.5 (m. 4H),
4.5 - 4,75 (m, 2Π), 4.8 - 5,0 (m, 2H). 7.1 - 7,7 (m, 12H), 7,9 (d, 2H).
(605q). 210 mg (66 %) 'H NMR (perdeuteromethanol) δ 1.95 (s, 2H). 2.4 (m, 2Π), 2,65 (ni. 2H), 3.29 (s. 3H). 3.78 (m), 3,87 (široký s). 4,0 (d, 1H), 4.32 (m), 4.50 - 4,15 (ni), 4,95 (m), 5.27 (široký s), 7,45 - 7,65 (m, 7H), a 7,89 ppm (d. 211).
(605s). 128 mg (19 %) jako bílá pevná látka:
'11 NMR (perdeuteromethanol) δ 8,05 - 7,4 (m, 13H), 5,0 (m. 111), 4.7 (m, IH). 4,5 (m. 2H),
4,45 - 4.4 (m, 314), 3,8 - 3,7 (ιη. 2H), 2,7 (ni, 111). 2,5 (m, IH).
(605t). 132 mg (24 %) jako bílá pevná látka:
'11 NMR (perdeuteromethanol) δ 7,8 - 6.7 (m, 13H), 4.9 (t, III). 4,75 (dd. JH). 4.2 (dd, 1II). 4,1 (m. 2H), 3,8 (dd, IH), 3,6 (kv. IH). 3,45 (dd. IH). 3,3 (dd, IH). 2.6 (m. 111), 2,3 (m. 111), 2,15 (s. 3H).
(605v). 88 mg (28 %) jako bílá pevná látka:
- 140CZ 300171 B6 'Η NMR (perdeuteromethanol) δ 7.63 7,51 (2H, m), 7.5 - 7.35 (7H. in), 7,25 -7,10 (3H, m),
7.1 - 7.02 (211, m). 5.04 - 4,96 (1H, m). 4,75 - 4,57 (2H, ni). 4.38 - 4,26 (211. m), 4.24 - 4,12 (2H. m), 4,10- 4,02 (IH, d), 4,88 - 4,80 (IH. m), 2,90- 2,80 (211. m). 2.78 2,63 (IH, m).
2,55 - 235 (211, m), 2,34 - 2.22 (1H, rn).
(609)
Sloučeniny z tabulky 13 jsou popsány níže.
labulka 13
4 *2 Ra Rq *6 R;
609a H PhCH2CH2C(0) PhCH2CH2C(0) Cl Cl
609b H CH3C(O) PhC(O) Cl Cl
(609a).
Krok Λ, Roztok sloučeniny 204 (223 mg, 0.5 mmol) a 603r (300 mg; 0.36 mmol) ve 4 ml dimethylformamidu a 4 ml diehlormethanu se reaguje s (PJuP)2PdCl· (10 mg), 1 -hydroxybenzotriazolein (135 mg, 1,0 mmol) a hydroehloridem l-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimidu (115 mg, 0,6 mmol). Tri-n-butylcínhydrid (219 mg, 0,75 mmol) se přikape k reakční
- 141 CZ 300171 B6 směsi a míchá se 18 hodin. Reakční směs se nalije do ethylacetátu a promyje se 10% vodným roztokem hydrogen síranu sodného, nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného, suší se nad síranem sodným a zahustí ve vakuu. Po velmi rychlé chromatografií (silikagel, 0 až 50% ethvlacetát/hexan) se získá 360 mg (86 %) sloučeniny 607a jako pěny.
Krok B. Roztok sloučeniny 607a (360 mg) v 5 ml dichlormethanu se přikape k suspenzi 1,1. ! -tr iacetoxy 1 J-dihydro- 1,2-benzodioxol-3( 1 H)-onu (362 mg, 0,85 mmol) ve 20 ml dichlormethanu. Reakční směs se míchá 4.5 hodiny, zředí se diehlormethanem a promyje se směsí 1; 1 nasycelo ný vodný roztok hydrogenuhličitanu sodného/nasycený vodný roztok disiřičitanu sodného, dvakrát nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného, suší se nad síranem sodným a zahustí ve vakuu. Po velmi rychlé chromatografii (silikagel. 20% ethylacetát/dichlormethan) se získá 340 mg (95 %) ketonu 608a.
Krok C. Sloučenina 608a (300 mg, 0,36 mmol) se rozpustí ve 25 ml směsi 25% kyselina tri fluoroctová/dichlormethan a míchá se při teplotě místnosti 5 hodin, a zahustí se ve vakuu. Po velmi rychlé ehromatografíi (silikagel, 0 až 5% rnethanol/dichlormethan) se získá 1 18 mg (42 %) 609a jako bílé pevné látky
2o 'lI NMR (perdcuteromethanol) 6 7,62 - 6,65 (16H, rn), 4.85 - 4.7 (111, m), 4,68 - 4,42 (211, m), 4.40 - 4,15 (211, m), 3,48 3.28 (IH, m), 3.0- 2.9 (IH, m), 2.9- 2.6 (411, m). 2.55 2,18 (311, m).2.16 - 1,96 (2H, m).
(609b) se připraví ze sloučeniny 603d podobným způsobem jako sloučenina 609a za získání
287 mg (43 % celkový výtěžek) jako bílé pevné látky:
II NMR (perdeuterodimethylsulfoxid) δ 1,6 (s. 3H). 2,7 - 3.1 (ni. 211), 3,45 (ni. IH). 4.4 (t. IH), 4,7 (m. 2H). 4,95 (rn, 1II), 5,2, 5,4 (2s, IH). 7,2 - 7,65 (ni. 811), 7,9 (d. 1H), 8.8 (t. IH). 8,9, 9.1 (2s. III). 12,6 (široký, IH).
- 142C7. 300171 Bó
(612) (612) se připraví analogickým způsobem jako 607a (pouze kroky A a C) za použití sloučeniny 603m (150 mg. 0,36 mmol) místo sloučeniny 603r a t-butylesteru kyseliny (3S)-3-(allyloxykarbonylamino)-4-oxo-5-(2,6-dichlorbenzoyloxy)pentanové (110; 160 mg. 0,36 mmol,
WO 93/16710) místo sloučeniny 606a za získání sloučeniny 612 (56 %) jako bílé pevnc látky:
lH NMR (deuterochloroform) δ 7.85 - 7,10 (I2H, rn). 5.4 - 4.65 (411. m). 4.6 4.15 (4H. tn).
3,10-2,72(51-1, s&m).
io
Příklad 13
Sloučeniny 619-635 se připraví tak. jak je popsáno v příkladu 13 a tabulce 14.
- 143CZ 300171 B6
Syntéza sloučenin 619 635.
Krok Λ. Syntéza sloučeniny 614. TenlaGel SM NH? pryskyřice (0,16 mmol/g. 10.0 g) se umístí na 5 sintrovanou skleněnou nálevku a promyje se dimethylfomiamidcni a (3x 50 ml), 10% (objem/objem) diisopropylethylaminem (D1EA) v dimethylformamidu <2x 50 ml) a nakonec dimethylform amidem (4x 50 ml). K pryskyřici se přidá dostatečné množství d i methyl formani i du. aby se získala suspenze, potom se přidá sloučenina 400 (1.42 g, 2,4 mmol, připravená z t-butylesteru kyseliny (3S)-3-(fluorenylmethyloxykarbonyl)-4-oxobutanové podle A. M. Murfy a kol., ío J.Am. Chem. Soe.. 114, 3156-3157 (1992)), hydrát 1-hydroxybenzotria/olu (HOBT.IEO;
0,367 g, 2,4 mmol), O-bcnzotriazol-Ν,Ν,Ν,Ν-tetramethyluroniunihcxatluorofosfát (HBTU:
- 144CZ 300171 B6
0,91 g, 2,4 mniol), a DIEA (0,55 ml. 3,2 mmol). Reakční směs se protřepává při teplotě místnosti přes noc na třepačce. Pryskyřice se izoluje na sintrované skleněné nálevce pomocí filtrace za sání a promyje se di methy 1 formám i dem (3x 50 ml). Nezreagované aminoskupinv se uzavřou pomocí reakce pryskyřice s 20% směsí acetanhv drid/d i methy (formám i d (2x25 ml) přímo na nálevce (10 minut promývání). Pryskyřice se promyje dimethylformamidem (3x 50 ml), potom se suší ve vakuu přes noc za získání sloučeniny 614 (11,0 g, kvantitativní výtěžek).
Krok B. Syntéze sloučeniny 616. Pryskyřice 614 (3.0 g, 0,16 mmol/g, 0,46 mmol) se nabobtná na sintrované skleněné nálevce pomocí promytí dimethylformamidem (3x 15 ml). Chrániči skupina io fmoe se rozštěpí pomocí 25% směsi (objem/objem) piperidin/dimethylformamid (15 ml) po dobu 10 minut (občasné míchání) a potom po dobu 20 minut s čerstvým piperidinovým činidlem (15 ml). Pryskyřice se potom promyje dimethylformamidem (3x 15 ml), potom N-methylpyrrolidonem (2x 15 ml). Po přenesení pryskyřice do 100 ml baňky se přidá N-methylpyrrolidon. aby se získala suspenze, potom se přidá sloučenina 603u (0,736 g. 0,72 mmol), 11OB 1 .EEO (0,112 g,
0,73 mmol). HBTU (0,279 g, 0,73 mmol) a D1EA (0,26 ml, 1,5 mmol). Reakční směs se protřepává přes noc pří teplotě místnosti za použití třepačky. Prysky řiče se zpracuje a uzavře 20% roztokem (objem/objem) anhydridem kyseliny octové v dimethylformamidu podle popisu uvedeného pro přípravu sloučeniny 614 za získání sloučeniny 616 (3,13 g, kvantitativní výtěžek).
2o Krok C. Syntéza sloučeniny 617. Tato sloučenina se připraví z pryskyřice 616 (0.24 g, 0.038 mmol) za použití Advanced ChemTech 396 Multiple peptidového syntetizéru. Automatické cykly zahrnují promytí pryskyřice dimethylformamidem (3x1 ml), odstranění chránící skupiny 25% roztokem (objem/objem) piperidinu v dimethylformamidu (1 ml) 3 minuty, potom čerstvým činidlem (1 ml) 10 minut za získání sloučeniny 617. Pryskyřice se promyje dimethylform25 amidem (3x 1 ml) a N-mcthylpyrrolidonem (3x 1 ml).
Krok D. Způsob E (624). Pryskyřice 617 se acyluje roztokem 0.4M thiofen-3-karboxylové kyseliny a 0,4M HORT v N-methylpyrrolidonu (1 ml), a roztokem 0,4M HBTU v N-mcthylpyrrolidonu (0,5 ml) a roztoku 1.6M DIEA v N-methylpyrrolidonu (0,35 ml) a reakční směs se
5o protřepává 2 hodiny při teplotě místnosti. Aeylaění krok sc zopakuje. Nakonec se pryskyřice promyje dimethylformamidem (3x 1 ml), dichlormethanem (3x 1 ml), a suší se ve vakuu.
Z pryskyřice se odštěpí aldehyd a celkově se odstraní chránící skupiny pomocí roztoku 95% kyseliny trifluoroetové/5% vody (objem/objem. 1.5 ml) 30 minut při teplotě místnosti. Po pro55 mytí pryskyřice štěpícím činidlem (1 ml) se spojené filtráty přidají k chladné směsi 1:1 ethan :pentan (12 ml) a vzniklá sraženina se izoluje pomocí odstředění a usazení. Vzniklá kulička se rozpustí ve směsi 10% acetonitri 1/90% voda/0,1% kyselina trifluoroetová (15 ml) a lyofllizujc se za získání surové sloučeniny 624 jako bílého prášku. Sloučenina se čistí pomocí semipreparativní RP- HPLC' s Rainin Microsorb' Cl8 kolonou (5μ, 21,4 x 250 mm) za eluce lineárním gra4d dientem acetonítrilu (5 až 45%) obsahujícího 0,1% kyseliny trifluoroctové (objem/objem) 45 minut při průtoku 12 ml/min. Frakce obsahující požadovaný produkt sc spojí a lyofilizují za získání sloučeniny 624 (10.0 mg. 54 %).
Krok D. Způsob 1 A. Syntéza sloučeniny 627, Následující postup je podobný způsobu 1. Prysky45 řiče 617 se acyluje 4 (I fliiorenylmethoxykarbonylamino)benzoovou kyselinou a reakce sc opakuje. Skupina Fmoe se odstraní tak, jak je popsáno v kroku C a volný amin se acyluje 20% (objem/objem) acelanhydridein v dimethylformamidu (1 ml) a ],6M DJEA v N-methylpyrrolidonu (0,35 ml) 2 hodiny při teplotě místnosti. Aeylaění krok se opakuje. Po štěpení aldehydu z pryskyřice vznikne sloučenina 627 (4,2 g, 20 %).
Krok D. Způsob 2. Syntéza sloučeniny 632. Následující postup je podobný způsobu 1. Pryskyřice 617 se acyluje 0,5M cinnamoylchloridem v N-methylpyrrolidonu (1 ml) a 1,6M DIEA v Nmethylpyrrolidonu (0.35 ml) 2 hodiny při teplotě místnosti. Aeylaění krok se opakuje. Po štěpení aldeh\du z pryskyřice se získá sloučenina 632 (11,1 mg, 58 %).
ss
- 145CZ 300171 B6
Krok D. Způsob 3. Syntéza sloučeniny 629. Následující postup je podobný způsobu 1. Pryskyřice 617 se aeyluje LOM benzensulfonylchloridem v dichlormethanu (0,5 ml) a 1M pyridinem v dichlormethanu (0,60 ml) 4 hodiny při teplotě místnosti. Reakce se opakuje. Po štěpení aldehydu z pryskyřice se získá sloučenina 629 (4.7 mg, 24 %).
Analytické HPLC metody;
(1) Waters DeltaPak Cl8, 300A (5μ, 3,9 x 150 mm). Lineární gradient acetonitrilu (5 až 45%) obsahující 0,1 % kyseliny trifiuoroetové (objem/objem) 14 minut při průtoku I ml/min.
- 146CZ 300171 B6
Tabulka 14
Postup . t r~S —f OJ
+
OJ 04 ίΰ n
ω n ro Z to
& + s ď) in + if) X
xj tH T—1 rH
Pd π diP třP C*P
u i—l CO <5- CD r- co
£ o os OS lq cn
řu ítí 1-d o i—4
1-1 i—1 1-1
n O) XT
m ιΟ
ť~í o
• ΓΟ cl m
z m in
r- o· r~
u CD O O i o O XT
lO Z u > z Z
uo m vc
0 N 04 X OJ X OJ w· ·—1
> r- r- 00
04 OJ OJ
O U o
Struktura X o X °<^o zx 93, 1 ,ZI o <>V o O χ °V=o 1 >o 1
í' ň ΖΓ
Z J
4 cn O H
rH τΗ Oí OJ
ω w w ω
- 147CZ 300171 B6
ro cn
a V£>
+ iO
a
Γ
CD
S|t Struktura Vzorec M. h- HPLC RČ HS Postup min (M+H} +
- 148CZ 300171 Bó
Sl. Struktura Vzorec M. h. HPLC RČ HS Postup
rH i—i < rH
kO pH Li CĎ ΓΠ
fí ď) rH lC Lf)
T—t <JP rH ctp rH df>
g s s * * ID Ol
r- r-
in rH m
LH in lD
io o Γ m
rH irt T“H lO LO
to CD CD
γ· o O O Β /\
LO z 'O' z IJ 1 z
LO CM kp CM l CM *T*
X n X tn •X* kD Λ)
cM <J CM O Cn (J
X O X o=^ ^=o ~2X 51 H” δχ
Q-Co orz^C / 2£X « <A. Λ zi QČ
N CH v Qx
x y=^ o
X X
Λ 1 ω jl » > f\J
CM \0 CJ v> vo
- 149CZ 300171 B6
- 150CZ 300171 B6
Sl. Struktura Vzorec M. h. HPLC RČ HS Postup min (M+H) +
- 151 CZ 300171 B6
Příklad 14
Sloučeniny 1605a -j, l605m, 1605n. 1605p, 16051, a 1605v se připraví tak, jak je popsáno níže
(3S) N-(2-O.xo-3-tere- butoxykarbonylamino-2,3,4,5-tetrahydro 1 H-pyrido[3,4-b]| 1,4Jdiazepin (1600).
Krok A. (2S) 2-lere-Butoxykarbonylamino--3-(3 nitropyridin-2-ylamino)propionová kyselina se připraví podobným způsobem jako (2S) 2-terc-butoxykarbony lamino 3 (2-nitroícnylamino)io propionová kyselina v kroku A syntézy 600a/103. kromě toho, že 3—chlor—3—nitropyridin se použije místo 2-fluornitrobenzenu, za získání 4.05 g (64 %) žluté pevné látky.
Krok B, (2S) 2-terc-Butoxykarbony lamino 3-(3-aminopyridin-2-ylamino)propionová kyselina se připraví podobně jako (2S) 2-tcrc-butoxykarbonylamino-3-(2-aniinofenylamino)propionová i? kyselina v kroku B syntézy 600a/103 za získání 3,68 g (kvantitativně) jako tmavá pevná látka.
Krok C. Methylester (2S) 2-terc-butoxy karbony lam ino-3-{3-am inopyridin-2-y lam ino)propionové kyseliny. Roztok (2S) 2-tcrc-butoxy karbony Iainino-3-(3-aminopyridin-2-ylamino)propionové kyseliny (360 mg, 1.21 mmol) a methanolu (59 mg, 1,82 mmol) v bezvodém dichlor20 methanu (20 ml) se reaguje s 4-diinethylaminopyridin (DMAP, 163 mg, 1,33 mmol) a hydrochloridem 1 -(3-dimethylaminopropyI)-3-ethylkarbodiimidu (280 mg. 1,45 mmol). Reakční smčs se míchá 18 hodin, zředí se ethylacetátem (150 mí), dvakrát se promyje vodou, nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného, suší se nad síranem sodným a zahustí ve vakuu. Po velmi rychlé chroinatografii (silikagel, 0 až 5% ineihanol/dichlonnethan) se získá 250 mg (67 %) sloučeniny uvedené v názvu jako světle hnědé látky.
- 152 CZ 3QQ171 B6 ίο
Krok D. (1600). Roztok methylesteru kyseliny (2S) 2-tere-butoxykarbonylamino-3-(3-aminopyridin-2-ylamino)propionové (70 mg, 0,225 mol) a 25% methoxidu sodného v methanolu (130 μΐ, 0,56 mmol) v bezvodém methanolu (4 ml) se 16 hodin zahřívá na 60 °C. Reakční směs se zahustí ve vakuu, zbytek se rozpustí ve 2 ml vody a extrahuje se ethylacetátem (třikrát). Spojené extrakty se suší nad síranem sodným a zahustí ve vakuu. Po velmi rychlé chromatografií (silikagel, 0 až 3% methanol/dichlormethan) se získá 7,5 mg (3 %) sloučeniny 1600 jako světle hnědé pevné látky:
lH NMR (perdeuteromethanol) 6 7,96- 7,92 (IH, d), 7,75 - 7,65 (111, široký s), 7,14 - 7,08 (IH.d). 6,73 - 6,65 (IH, m), 5.83 - 5,75 (IH, široký s), 5,4 - 5,25 (IH, široký s), 4.6- 4.5 (1II, m). 3,95 3,84 (1H, rn), 3,55 - 3,48 (111, m), 1.4 (914, s).
Krok E. 1601 se připraví ze sloučeniny 1600 podle postupu v kroku D přípravy 600a/103.
Syntéza sloučeniny 1603. 1603 se připraví ze sloučeniny 1601 podle postupu pro přípravu sloučeniny 603 ze sloučeniny 600.
- 153CZ 300171 B6
Syntéza sloučeniny 1605. 1605 se připraví ze sloučeniny 1603 podle postupu pro přípravu slou ceniny 605 ze sloučeniny 603.
Tabulka 15
1605 *3 r4
a PhCH2CH2CO PhCO
b PhCH2CO PhCO
c PhCO PhCO
d Cíí3CO PhCO
e ch3och2co PhCO
f (CH3)2chch2co PhCO
g ch3coch2co PhCO
h ch3ococo PhCO
i ch3coco PhCO
j CH3OCO PhCO
m CH3SO3 PhCO
n ck3co Naphthyl-2-CO
P PhCHoNHCO PhCO
t 3-CH3PhCH2CO PhCO
v PhCH?CH2CO PhCH2
Příklad 15
Sloučeniny 1610-1621 se připraví ze sloučeniny 1600 pomocí podobného postupu, jako se při praví sloučeniny 619 635 ze sloučenin 600a/103 a 600b.
154 CZ 300171 B6
kde pro sloučeniny 1610-1621, a Rs - skupina ChLC(O}b R; - skupina CH3OCH2C(O)-:
- 155
Bí
1610
1611
1612
1613
1614
1615
1616
1617
1618
1619
1620
1621
Příklad 16
Sloučeniny obsahující bloky (el 1). (ví). (yi o
). (z), a (el 2) se připraví tak. jak je definováno níže.
- 156CZ 5UU171 B6
Příprava bloku R,, kde RT je (el 1) a kde V; je -O.
BocNHHNH
COoCHPh
-157CZ 300171 B6
Příprava bloku R,, kde - Rj je (y I) a kde Y2 je -O
(267)
O
X — Cl oř 1-imitíazol
- 158
Příprava bloku Rt. kde R] je (y2) a kde Y2 je Pl· a X7 jeO.
H
-159CZ 300171 B6
Příprava bloku Rh kde Rj je (y2) a kde Y2 je -O a X7 je NH.
CO2H
H3CO2C
- 160
CZ ΜΗΠ 71 B6
Příprava bloku Rj, kde R| je (y2) a kde Y je 1C a X je \ί 1.
CbzHNL
N CO2H H
(272)
161 CZ 300171 Bó
Příprava bloku Rh kde Ri je (z) a kde Y2je O.
X ±= NHCbz X = OCH2Ph
1) PC15
2) NaHC03
PhCH2O2C
1) NH2NH2
-—--->
(271)
1) TFA
2) COC12
275 X7 = o
- 162CZ 300171 B6
Příprava bloku Ri, kde R, je (el 2) a kde Y > je -O.
^COíCHfePh t-BuONH2 ____ t-BuQ—NH (276)
(276)
1) H2, Pd/C
2) PC15
(277)
Příklad 17
Příprava sloučenin 2001,2002« 2100a-e. a 2201 je popsána níže.
- 163 C7 300171 Bó
(2000), K roztoku t-butyl-9-amino -6,10-dioxo-1.2,3.4,7.8,9.10-oktahydro-611-pyridazino[1.2-a|f l,2Jdiazcpin-1-karboxylátu (CiB 2,128.984; 340 mg, 1,15 mmol) v dichlormethanu se přidá benzoylmravcnčí kyselina (260 mg, 1,7 mmol), HOBT (230 mg. 1,7 mmol) a EDC (340 mg, 1.7 mmol). Vzniklá směs se míchá při teplotě místnosti 16 hodin, nalije se do 1M kyseliny chlorovodíkové a extrahuje se diehlormethanem. Organické extrakty se dále promyjí nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, suší se nad síranem horečnatým a odpaří za získání sloučeniny 1999 jako světle žluté pevné látky. Pevná látka se rozpustí v dichlormethanu (25 ml) a kyselině trifluoroctové (25 ml) a míchá se přes noc a zahustí sc ve vakuu za získání 560 mg slonin ceniny 2000 jako oleje.
(2001). se připraví ze sloučeniny 2000 podobným způsobem jako sloučenina 213e za získání 410 mg (63 %) sloučeniny 2001 jako bílé pevné látky:
'li NMR (deuterochloroform: směs diastercomerů) 8 8,25 (Uf d), 8,23 (IH, d), 7,78 (Uf dd), 7,65 (11f široký tn), 7,50 <2H. m), 7,40 - 7,25 (4H, m). 6,55 (1II, d). 5.57 (111. d), 5,10 (IH, t). 5.05 4.95 (21 í. m), 4.90 (IH, d), 4,80 (IH. d), 4,72 (111. široký in), 4,65 (IH, m). 4,55 (1H, m), 4.45 (Uf t). 3,25 (IH, m), 3.15 (IH. m). 3,00 (2H, široký m), 2,90 (Uf dd), 2.70 (IH, m), 2,47 (IH, dd). 2.45 (1 If m), 2.35 (I ff). 2,00 - 1,75 (41 f m), 1,60 (IH. široký m).
(2002). Sloučenina 2001 (58,6 mg, 0,10 mmol) se reaguje s 15 ml směsi kyselina octová/acelonitril/voda (1:2:3) a míchá se při teplotě místnosti 6,5 hodiny, Reakční směs se extrahuje etherem. Vodná vrstva sc zahustí pomocí azcotropického odstraněni vod> za použití acetonitrilu. Produkt sc suspenduje do dichlormethanu. zahustí ve vakuu a srazí etherem za získání 46.8 mg (99 %) sloučeniny 2002 jako bílé pevné látky:
'HNMR (perdeuteromcthanol) 6 9,05 (0.2511, d). 8.15 (1H. d). 7.68 (III, t). 7.64 (0.25 H. d). 7.55 (311. t), 7.35 (0.5H. m). 5.22 (IH. t). 4.90 (IH, m). 4.58 (IH, dd), 4,50 (IH, m). 4,28 (lil, široký m). 3.45 (IH. m). 3.10 (lil. široký t), 2.68 (IH. ddd), 2,60- 2.45 (2H, m). 2.30 (IH.dd), ro 2.15- 2.05 (2H, m), 1.90 (2H. široký m). 1,68 (IH. široký in).
-164CZ 300171 B6
(2100a). Roztok sloučeniny 214e (101 mg, 0,23 mmol) v ísopropanolu (10 ml) se míchá při teplotě místnosti s katalytickým množstvím p-loluensulfonové kyseliny (10 mg). Po 75 minutách se ς reakční směs nalije do nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a extrahuje se dichlormetíianem. Spojené extrakty se suší nad síranem sodným a zahustí. Po velmi rychlé chromalografii (silikagel, dichlormethan až ethylacetát) se získá 56 mg (51 %) sloučeniny 2100a jako bílé pevné látky:
io 'H NMR (deuterochloroform) 6 7,9- 7.8 (2H, m). 7.6- 7,5 (lil, m), 7.5 7,4 (211, m), 7,1 (0.5H, d). 6.9 (0.5H, d), 6,4 (0,5H, d), 5,6 (0,511. d), 5,3 (0,5H, s), 5.2 - 5,1 (1II, m). 4.95 (0,5H, m), 4,75- 4,5 (l,5H, m), 4,35 (0,511. t). 4,1 (0,511, ni), 3.98 (0,5H. m), 3.3 - 2,75 (4H. ni), 2,5 - 2.4 (2H. m), 2,25 (IH. m), 2,1 - 1.9 (311. m), 1.75 - 1,55 (2H, m).
(2001b). Roztok sloučeniny 214a (16 mg, 0.036 mmol) v ethanolu (2 ml) se míchá při teplotě místnosti s katalytickým množstvím p-loluensulfonové kyseliny (2 mg). Po 5 dnech se reakční směs nalije do nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a extrahuje se diehlormethanem. Spojené extrakty se suší nad síranem sodným a zahustí. Po velmi rychlé chroniatografii (silikagel. dichlomiethan:ethylaeetát 95:5 objein/objem) se získá 16 mg (81 %) sloučeniny 2100b jako
2o bílé pevné látky:
'H NMR (deuterochloroform) δ 7.85 - 7.74 (2H. m). 7.55 - 7,38 (3H, in). 7,04 - 6.95 (IH, d), 6.61 -6.48 (lil, d). 5,15 - 5,08 (IH. m), 4,63 - 4,53 (IH, m), 4.52 - 4.45 (IH, m), 4.42-4.35 (IH, m), 4,15 - 4,05 (2H, m), 3.74- 3.60 (2H. m). 3.57- 3,42 (2H, in), 3,39 - 3.28 (IH, m),
3,03 - 2.93 (III. m), 2.92 - 2.82 (IH. m). 2.65 - 2.52 (2H, m), 2,42 - 2,25 (IH, in). 2.20 - 1.88 (4H. m), 1,76 - 1,50 (2H, m), 1,35 - 1,10 (9H, m).
(2100c). Roztok sloučeniny 2l4e (165 mg, 0,37 mmol) v methanolu (5 ml) se míchá při teplotě místnosti s katalytickým množstvím p-toluensulfořtové kyseliny (17,5 mg). Po 4 dnech sc in reakční směs zředí ethylacetátem a promyje 10% roztokem hydrogenuhličitanu sodného (třikrát). a solankou. Spojené extrakty se suší nad síranem sodným a zahustí. Po velmi rychlé ehrontalografii (silikagel, ethylacetát) se získá 127 mg (68 %) sloučeniny 2100c jako bílé pevné látky:
'H NMR (deuterochloroform) δ 7.82 (2H. d). 7.55 - 7,50 (IH. m). 7,47 - 7.43 (2H, m). 7.02 b (IH, d). 6,53 (III, d), 5,20-5.10 (IH, m). 4,56 - 4,50 (IH. m). 4,45 4.50 (IH každý, dva m).
3.69 (3H. s), 3.41 (311, s). 3,43 (3H. s), 3.35 - 3,25 (lil. ni). 3,06 - 2.98 (IH. m). 2.94 - 2.83
- 165CL 300171 B6 (IH, m). 2,65 - 2.53 (2H. m). 2.35 2,32 (IH, m), 2,15-2,07 (111, m). 2,00- 1.89 (3H, m).
1,75 - 1.56 (2H. m).
(21 OOd). Roztok sloučeniny 214e (53 mg, 0,12 mmol) v isopropanolu (5 ml) se míchá při 50 °C s katalytickým množstvím p-toluensulfonové kyseliny (5 mg). Po 3 dnech se reakční smčs nalije do nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a extrahuje dichlormcthanem. Spojené extrakty se suší nad síranem sodným a zahustí. Po velmi rychlé ehromatografii (silikagel, óichlormethan:ethy!aectát (4:1 až 1:1 objem/objem)) se získá 49 mg (68 %) sloučeniny 2) OOd jako bílé pevné látky:
'H NMR (deuterochloroform) δ 7,85 (2H. d), 7.50 - 7,43 (lil. m). 7,41 - 7,35 (2H. m), 7,02 (IH. d), 6,47(111. d), 5.13 - 5,07 (1 H, rn), 5,00 - 4,9 (IH, m), 4,61 -4.55(211. m). 4.37-4.30 (1H, tn). 3.80- 3.70 (IH, m), 3,90 - 3,80 (IH, m). 3,42 - 3,35 (IH, m), 3,03 2.93 (IH. m).
2,91 -2,81 (IH. m), 2,62 - 2,50 (2H. m), 2,38 - 2,33 (lil. m). 2.12-2.06(111, m), 1.97- 1,81 (3H.m). 1.70 -2,00 (211, m), 1,28 - 1,05 (I8H, m).
(21 OOe). se připraví ze sloučeniny 302 pomocí způsobu použitého pro přípravu sloučeniny 304a za získání sloučeniny 21 OOe, kromě toho, že se ethanol a triethylorthoformiát použijí místo methanolu a tri methyl ort hoformiálu. Po ehromatografii (silikagel. 5% ethanol/dichlormcthan) se ?i) získá 92 mg (68 %) bílé pevné látky:
‘H NMR (deuterochloroform; smčs diastereomerů) δ 7,90 - 7,80 (2H, m), 7,60 - 7.50 (IH. m). 7,50 - 7,40 (211, m). 7,30 (0,5H. d), 7,00 (0.5H. d), 6,50(0,511. d), 5,50 (0.511, d). 5,20 - 5,10 (l,5H.m), 4,95 (0.5H. m), 4.75 - 4.65 (0,5H, m), 4.65 - 4,50 (IH. m). 4,38 (0.05H, t),
4,00 - 3,90 ( 0,511, m). 3,85 - 3,75 (0.5Η.Π1). 3.75 - 3,65 (0.511, m), 3,65 - 3.55 (0,5H. m),
3,30 - 2.70 (4H, m), 2,50 - 2,35 (211. m), 2,30 (1H, d), 2,15 1,90 (3H.m). 1.80- 1,60 (211, m).
1.25 -1.20 (311, dva t)
(2201) (2201) se připraví ze sloučeniny 600b pomocí způsobu použitého pro přípravu sloučeniny 605b to za získání sloučeniny 2201:
'H NMR (deuterochloroform) δ 8.30 - 8,22 (IH, m). 8.05 - 7,98 (111, d), 7,96- 7,83 (lil, tn), 7,77 - 7,68 (IH. m), 7,67 - 7.40 (7H, m), 5,12 - 5.02 (1H, m), 4,98 4.41 (5H, m). 4,38 - 4,24 (I H, m), 4,07 - 4,00 (111, d). 3,92 - 3,80 (2H. m), 3,32 (3H, s), 2.75 - 2.60 (111, m), 2,58 - 2,35 (111, tn).
Příklad 18
Pro vybrané sloučeniny podle předkládaného vynálezu jsme získali následující údaje za použití způsobů popsaných zde (tabulka 16. viz příklad 7; tabulky 17a 18, viz příklady 1 až 4). Struktury a přípravy sloučeniny podle předkládaného vynálezu jsou popsány v příkladech 28 až 31.
- 166CZ 300171 Bó
Tabulka 16 Porovnání účinnosti proléčiv u LPS stimulovaných myší: Inhibice vylučování IL1 β. Procentuální inhibice vylučování IL 1 β po léčbě sloučeninou podle předkládaného vynálezu je uvedena jako funkce času pro LPS stimulaci znamená, že v příslušném čase nebyla získána žádná hodnota).
Čas podání sloučeniny (vzhledem k času LPS stimulace. PO, 50 mg/kg)
S toučenina 1 -2h -Ih 0h +lh
213f (-4) - 8 -
213h 9 - 53 t 1
213i ¢-11) - 62 |
213k 0 - 68 t
2131 (-18) - 80 i
213m 26 - 42
213o 4 - 8
213p 21 - 29 „ 1
213q 17 - 91
213r 59 - 37 -
213x 0 - 78 _ i
213y i 1 29 - 50 -
214e 39 - 70 75
j : 43 44 48 11
1 - - - 47
214k ! 12 - 31 -
2141 0 - 54 -
214m 1 0 - 17 -
214w ' 11 - 91 -
2641 ! 0 - 23 -
404 - • - 56
55 - 6 -
- 167CZ 300171 Bó
2100ο
GB
- 168 CZ 300171 B6
Tabulka 17 Údaje pro vybrané sloučeniny podle předkládaného vynálezu získané za použití způsobu popsaných v příkladech 1 až 4.
Slouč. UV-vid. Ki (nM) Buňky PBMC prům. 1C50 (nM) Úplná lids ká krev IC50 (nM) Odbourání u myší i . v. ml/min/kg Odbourání u krys i, v. ml/min/kg
213f ! 3000 i 1
213g 2200 1
2l3h 1500 ř 1
213i 1100 i 1 i 1
213j i 1
213k 2000 i
2131 2000 1 1
213m 2500
213o 5000 3300 i í 1-------- . '
213p <300 1
213q <300 i
213r <300 í
2l3v 0,5 1,100 1100 41 ; 23
2l3x 4500 2500 i
213y 930 i i
2l4j 4,2 2500 6000 i
214k 0,2 500 580 22
2141 6 1900 1100 12
2l4m 530 2200 33,4
214w 0,6 620 370 15
246b 30000 >30000 87
: 2641 3000
i 265a 2600 j 25000 !
ΐ 265c ί 1100 i 4500 1 32
! 265d ! ... . * 500 ! 1500 i 35
' 265f 1200 j í 24
260b >i A3000 í
260c Γ 10000 j —' 66
260d i_} _ 25000 j__: _
283b i_L 1750 j____j__ϋ
283c J * 4000 i ! 50
- 169 CZ 300171 B6
Slouč. UV-vid. Buňky PBMC Úplná Odbourání u Odbouráni u
Ki ÍnMJ prům. IC50 lidská myši krys
{nM) krev í. v. i. v.
IC50 (nM) ml/min/kg ml/min/kg
283d >8000 10000 i 5
308c 3000 ί i
308d 3000
500 25 1800 1800
501 2,5 1800 1600 i
505c 1500
505d >20000
505f 550
510a 65 200 2 67 1
510d 2300 >20000 i
í 511c 730 >20000 78 40 ;
528 2200 1 1 1 i
550f 1100 I ...... í
550h 1800 Ί f
ΐ 550i 1400
550k 3000
5501 750 |
550m 2000 1 *
j 550n <300 í j L 1
550o 450 3000 i ί
55 Op 2900 i i
550q 700 1 J
’ 640 155 2250 3900 í :
642 35 8000 2900 i
ΐ 645 150 1
650 550 4000
653 30 2300 6000
655 j i i
656 o,6 ' 2100 ! 1600 2,9
662 0,5 j 1800 j 800 2,75
668 > 9 ! 5200 ί 3700 29
669 j 14 j | 10000 i
670 ί i | 4500 i
671 ί 5 2000 j 2500 ;_33,2
677 j_j____i 610 i_
678 I 5 i 2700 j 2200 j_
680 ί =’ i ί
- 170CZ 300171 B6
Slouč. UV-vid. Ki (nM) Buňky PBMC prúm. IC5Q (nM) Úplná lidská krev IC50 (nM) Odbourání u myší i. v. ml/min/kg Odbourání u krys i. v. ml/min/kg
681 9 3000 5000
682 1300 j i
683 400 >20000 >20000 !
684 15 5000 2800
686 4 4000 9000 t
688a 3000 ! ..
688b 1300 1 í
689a 0,8 910 2500 í I f
6B9b 2,2 600 2000 ·
! 690a 1600 ’
690b
691a 2,1 2900 1200 j 9,9
691b 11,5 1,900 1400
692a i
692b 1800
693
694 3 2600 2100 Í
695a 1 1
695b i
695c 2500 j
696 4,5 2000 2900 ΐ 13
' 700 275 í
! 701 90 i
; 702 45 >5000 20000 ]
703 5 1400 20000 ;
704 30 2600 9800 i
: 705 5 2300 3200 :
706 5 2400 5800 í
707 180 » 1 ·* i ; i .· --- - f -....... - -- 1- — -
708 ; 140 * i i‘
709 : 10 2100 ; 14000 i
710 ! 110 í ------ - _ J_ 1 I i
711 ΐ 175 i i i
910 ; 10 ! 3400 ! 3800
911 ! 9 í 3500 ' 1900
912 í 10 i 4200 i 3800
913 j VLJ 2400 ' 7000
- 171 CZ 300171 B6
Slouč. uv-vid. Ki (nM) Buňky PBMC prúm. IC50 (íiM) Úplná lidská krev IC50 (nM) Odbourání u myší i. v. ml/ruin/kg Odbourání u krys i. v. ml/min/kg
914 5,2 2600 2800
915 11,5 >8000 1900
918 7 1150
919 4 2000 4300
920 16 2100 3000 l
921 8,5 1800 3000
1018 170 4000 5500 9 A j
1052 100 2500 16 i
1053 27 2000 >20000 34
1056 170 17
1075 120 5000 5500 14,5
1095 360 6000 28
1105 250 3500 3000
1106 75 4000 1700
1107 65
1108 22 1400 2600 !
1109 80
1110 45
1111 18 6050 4400
1112 3,5 1800 2300
1113 290
1114 125
1115 250
1116 215
1117 35 1700 1300
1118 380
1119 515
1120 95
1121 170
1122 400 i t 1 i
1123 30 2/400 4500 1 J i
1124 270 1 i i t
í 1125 55 ' 2300 i 9000 í I 1 t
2001a 1 3000 ! 1
2l00f - l i 1 i J
2100g i i
2100b I 2000 J i 1
- 172CZ 300171 B6
Slouč, UV-vicL Ki (nM) Buňky PBMC prum. IC50 fnM) Úplná lidská krev IC50 (nM) Odbourání u myší i. v. ml/min/kg Odbourání u krys i . v. ml/min/kg
2100Í i
2100j 30000 12000 1
2100k 520 4000 600 i
21001 750 2200
2100m -
2100n 670 770 4000 i
2100o 670 1150 1500 i 1
Pro vybrané sloučeniny podle předkládaného vynálezu jsme získali následující údaje (tabulka 18) za použití způsobů popsaných v předkládaném vynálezu (viz. příklady 1 až 4). Struktury a přípravy sloučenin podle předkládaného vynálezu jsou popsány v příkladech 28 až 31.
labulka 18
Slouč. Fluoresc. Buňky PBMC Úplná Odbourání u Odbourání u
test prům. IC50 1idská myší krys
(nM) krev i. v. i . v.
ní1 s-Í 1C50 ml/mín/kg ml/min/kg
(nM)
ί 2S6 370000 300 1600 t ! 119
í 505 b 190000 1500 2100 : 161 i 196
i 505 e 420000 9000 1000 i j
Přiklad 19
In vivo akutní zkouška na účinnost jako protizánětl i vc činidlo io Výsledky z tabulky 19 ukazují, že sloučeniny 412f, 412d a 696a inhibují vylučování IL—1 β u LPS stimulovaných myší po orálním podávání za použití ethanolu/PEG/vody, β-cyklodextrínu, labrosolu/vody nebo cremoťóni/vody jako nosičů. Sloučeniny se podávají v době LPS stimulace. Postup je popsán v příkladu 7.
labulka 19 Inhibiee (%) vylučování IL—1 β u LPS stimulovaných myší.
Sloučenina 10 mg/kg Dávka 25 mg/kg dávka 50 mg/kg dávka
412f 17% 25% 32%
412e 5% 17% 61%
696a Ó 45% 52%
-173CZ 300171 B6
Příklad 20
Peritoneální karagénový zánět u myší
Zánět byl u myší vyvolán intraperitoneální (IP) injekcí 10 mg karagénu v 0,5 ml solanky (Griswold a kol., Infiamation, 13, str. 727-739 (1989). Léčiva se podávala orálně v ethanolu/PEG/vodě. β-cyklodextrinu, labrosolu/vodě nebo cremoforu/vodě jako nosících. Myši byly usmrceny 4 hodiny po podání karagénu. potom jim byly injektovány IP 2 ml solanky obsahující κι 5U/ml heparinu. Po jemné masáži peritonca se udělal malý řez. obsah sc odebral a objem se zapsal. Vzorky byly před odstředěním (130 x g. 8 minul při 4 °C) umístěny na ledu. aby se odstranil buněčný materiál a vzniklý supernatant se skladoval při -20 °C, Hladina IL-Ιβ v peritoneální kapalině se určila pomocí ELISA.
Výsledky v tabulce 20 ukazují proléčivo 412f inhibuje vylučování ΙΕ-1 β u myší stimulovaných karagéncm po orálním podání leku. Sloučenina 214e neinhibuje vylučování IL-Ιβ. pokud se podává orálně v množství 50 mg/kg.
2o Tabulka 20 Inhibice (%) vylučování IE—lp sloučeninami 412f a 412d li myší stimulovaných karagénem.
dávka (mg/kg) Cl - · 412f Sloučenina · 4l2d Sloučenina
Ϊ 30% 0
10 54 % 32%
25 49% 31%
50 73% 36%
100 75% 53%
Příklad 21
Arthritida vyvolaná kolagenem typu II
Arthritida vyvolaná kolagenem typu 11 byla vyvolaná u samic DBA/1J myší tak. jak je popsáno v Wooley a Geigcr (Wooley, P. II.. Methods in Enzymology, 162. str. 361-373 (1988) a Geger. T.. Clinical and Experimental Rheumatology. 11. str. 515—522 (1993)). Kolagen typu ll z hrudní kosti kuřat (4 mg/kg v lOmM kyselině octové) se emulguje se stejným objemem Freundova kompletního adjuvantu (FCA) opakovaným průchodem (400) mezi dvěma 10 ml skleněnými stříkačkami s dvoj středou jehlou o velikosti 16. Myši byly imunizovány intraderrnální injekcí (50 μΐ; 100 μΙ Cli na myš) emulze kolagenu o 21 dní později na kontralaterální straně kořene ocasu. Léčivo se podávalo dvakrát denně (10, 25 a 50 mg/kg) orálně, přibližně po 7 hodinách. Jako nosíc se použil ethanoI/PEG/voda, (/evklodextrin. labrosol/voda, nebo cremofor/voda. Léčba byla zahájena za 2 hodiny po Cli opakované imunizaci. Záněty předního páru končetin byly rozděleny do škály 1 až 4 podle vzrůstající závažnosti a přiřazený stupeň byl přidán k celkovému hodnocení.
Výsledky na obrázcích 12, 13 a 14 ukazují, že proléěiva 412E 412d a 696a inhibují zánět pří kolagenem vyvolané arthritidě u myší po orálním podávání. Sloučenina 214e zánět neinhibuje, pokud se podává (50 mg/kg) jednou za den orálně.
- 174 CZ 300171 Bó
Příklad 22
In vivo určení biologické využitelnosti
Léčivo (10—100 mg/kg) se podávalo orálně krysám (lOml/kl) v ethanolu/PEG/vodě, β-cyklodextrinu. labrosolu/vodě nebo cremoforu/vodě. Vzorky krve se odebíraly z krční tepny 0.25, 0,50. 1 1.5. 2, 3, 4, 6 a 8 hodin po podávání, odstředily se na plazmu a před analýzou se skladovaly při -70 °C. Koncentrace aldehydu se určily za použití enzymatické zkoušky. Earmakokinetická analýza údajů se prováděla pomocí nelineární regrese za použití RStrip (MieroMath Softio ware. UT). Hodnoty využitelnosti léčiva se určily následovně; (AUC léčiva po orálním podání proléčiva/AUC léčiva po i. v. podání léčiva) ,\ (dávka i. v./dávka p. o.) \100%.
Výsledky v tabulce 21 ukazují, že proléčiva 412f, 4t2d a 696a poskytují významnou hladinu léčiva v krvi a mají dobrou využitelnost léčiva při orálním podávání. Hladina sloučeniny 214e v krvi nebyla při orálním podávání zjištěna.
Tabulka 21 Orální biologická využitelnost sloučenin 412f, 412d. 696a, a 214 u krys.
sloučenina dávka (mg/kg) Cmax ΐ/zg/ml) Využitelnost léku (¾)
412f 25 2,4 32
412d 25 2,6 35
696a 50 C2 10
214e 45 o»2 0r9%
Příklad 23
ICE štěpí a aktivuje pro-IGIF ?5 Expresní plazmidy ICE a homoíogu ICE
0.6 kb eDNA kódující celou délku pro—KilF myši (H. Okamura a kol.. Nátuře, 378, str. 88 (1995) se váže do expresního vektoru savců pCDESRa (V. Takebe a kol., Mol, Cell. Biol.. 8, str. 466 (1988)).
Obecně, plazmidy (3 gg) kódující aktivní ICE (výše) nebo tři enzymy TX příbuzné ICE, CPP32 aCMH-1 v pCDESRa expresním vektoru (C. Eaucheu a kol., EMBO, 14, str. 1914 (1995); Y.Gu a kol,, EMBO, 14, str. 1923 (1995); J. A. Lippke a kol.. J. Biol. Chem., 271, sir. 1825 (1996)) se transíekují do subkonflucnlnich monovrstev buněk Cos v 35 mm miskách za použití
DEAE dextranové metody (Ύ. Gu a kok, EMBO J., 14, str. 1923 (1995)). O 24 hodin později se buňky rozštěpí a rozštěpená hmota se podrobí SDS-PAGE a imunopřenosu „immunoblotting“ za použití protilátky specifické pro IGIF (H. Okamura a kok, Nátuře, 378, str. 88 {1995).
Polymerázová řetězová reakce se použije pro zavedení Nde I na 5' a 3' konce pro-IGIF eDNA
4ij myši za použití následujících základních jednotek:
GGAATTCCATATGGCTGCCATGTCAGAAGAC (přední) a GGTTAACCATATGCTAACTTTGA TGTAAGI TAGTGAG (reverzní). Vzniklý NDEI fragment se váže na E. co li expresní vektor pE l -15B (Novagen) naNdcl místo, aby se vytvořil plazmid. který řídí syntézu polypepti45 du o 213 aminokyselinách obsahující 21 zbytek peptidu (MGSSi ÍHHHHHSSGLVPRGSHM, kde EVPRGS představuje místo štěpení thrombinu) připojeného k N-konci pro-IGIF na Ala2. jak potvrzuje DNA sekvence plazmídu a N-koncová sekvence expresních proteinů. Kmen E. eoli
- 175CZ 300171 B6
BL21 (DE3) nesoucí plazmid se inkubuje s 0.8 mM isopropyl—1 —thio β-D-galaktopyranosidem
1.5 hodiny při 37 °C, izoluje a stepí pomocí mikroťluidizaee (Microtluidic, Watertown, MA) v pufru A (20 mM fosforečnanu sodného, pH 7,0, 300 mM chloridus sodného, 2 mM dithiothreitol, 10% glycerol. 1 mM feny Imethylsul fony lfluorid a 2.5 gg/ml leupeptin). Rozštěpený materiál se čistí pomocí odstředěn i při 100 000 x g 30 minut. (His)6—cílový pro-IGIF protein se potom čistí ze supernatantu pomocí Ni-NTA-agarózové (Qiagen) chromatografie za podmínek doporučených výrobcem.
In vitro reakce štěpící pro-IGIF lí)
In vitro štěpící reakce (30 μΙ) obsahuje 2 μg čistého pro-IGIF a různé koncentrace čistých proteáz v pufru obsahujícím 20 mM Hepes, pH 7,2, 0.1% 'Triton X— 100, 2 mM D l i , 1 mM PMSF a
2.5 pg/ml leupeptinu se 1 hodinu inkubuje při 37 °C. Podmínky pro štěpení granzymem B jsou popsány dříve v (Y. Gu a kok, J. Biol. Chem., 271, str, 10816 (1996)). Rozštěpený produkt se analyzovaný pomocí SDS-PAGE na 16% gelech a na Coomassie modři, byl podroben na Nkoncové aminokyselině sek věncován i za použití ABI automatického řadiče peptidu za podmínek doporučenýe li výrobcem.
Kinetické parametry štěpení IGIF pomocí ICE ?(l
Kinetické parametry (Κκ3ι/Κμ„ KiM a k^,) pro štěpení IGIF pomocí ICE se určí následujícím způsobem. S-metliioninem značený pro-IGIF (3000 epm, připravený za použití in vitro transkripce a translace pomocí IN I T7-spojeného retikulocytovčho štěpícího systému (Promega) a proIGIF cDNA v pSP73 vektoru jako templálu) se inkubuje v reakční směsi 60 μΐ obsahujících 0.1
2? až 1 nM rekombinantu ICE a 190 nM až 12 μΜ neznačeného pro-IGIF 8 až 10 minut při 37 °C. Koncentrace štěpícího produktu se určí pomocí SDS PAGE a Fosfolmager analýzy. Kinetické parametry se vypočtou pomocí nelineární regrese vhodné pro údaje rychlost proti koncentraci pro rovnici Michaelis -Mentenovč za použití programu Enzfitter (Biosofl).
IFN-γ indukční test
A.E7 1 h 1 buňky (h. Quill a R. II. Schwartz. J. lnimunol., 138, str. 3704 (1987)) (1,3 x KČ buněk v 0,15 ml Cliekova zásobního média s 10% I BS, 50 μΜ 2-merkaptoethanolu a 50 jednotkami/ml IL,—2) v 96 jamkové desce se reaguje s IGIF 18 až 20 hodin a supernatant kultury se testuje na
IFN-γ pomocí ELISA (Endogen. Cambridge, MA).
Příklad 24
Zpracování pro-IGIF pomocí ICL v buňkách Cos
Buňky Cos se transfekují různými kombinacemi expresních plaziliidů tak, jak je popsáno v příkladu 23. Transfekovanc buňky Cos (3.5 x 10' buněk v 35 mm misce) se 7 hodin značí 1 ml DMEM bez methioninu obsahujícím 2.5 % normálního DMLM, ] % dialyzovaného felálnílio hovězího séra a 300 pCi/ml ^S-methioninu ( ?S-L\press Protein Labeling Mix, New England Nuclear). Buněčný lysat (připravený v 20 mM Hepes, pil 7,2, 150 mM chloridu sodného. 0,1% Triton X-100, 5 mM N-ethylmaleimid, 1 mM PMSF. 2,5 μμ/ιηΐ leupeptinu) nebo upravené médium se imunosráží santilGIF protilátkou, která rozpozná jak prekurzor. tak konečnou formu IGIF (H. Okamura a kol., Nátuře, 378. str. 88 (1995)). Imunosrážené proteiny se analyzují pomo5o cí SDS-PAGE (polyakrylamidová gelová elektroforéza) a fluorografie obr. 2A).
Také se měřila přítomnost IFN-γ indukující aktivitu buněčného lysátu a upraveného média transfekovaných buněk (obr. 2B). Transfekované buňky Cos (3.5 x 10 buněk v 35 mm misce) se kultivovaly 18 hodin v 1 ml média. Médium se sklidilo a použilo v konečném zředění 1:10 při IFN- 176CZ 300171 B6 γ indukční zkoušce (příklad 23). Granule buněk Cos ze stejné transfekee se štěpily v 100 μΐ 20 mM Hepes. pil 7.0 pomocí mrznutí a láni třikrát. Lyzát se čistil pomocí odstředění tak, jak je popsáno výše a použil se při testu ve zředění 1:10.
Příklad 25
IGIF je fyziologickým substrátem ICE io Přírodní typ (1CEI/+) a (ICE—/—) myší se injektoval teplem inaktivovanym P. aenes a z těchto myší se izolovaly Kupfferovy buňky 7 dní po injektování a potom se imunologicky testovaly s 1 pg/ml LPS 3 hodiny. Množstv í IGIF a upraveného média se měřilo pomocí LI JSA.
Přírodní typ myší trpících nedostatkem ICL se injektoval intraperitoneálně teplem usmrcenými
p. aenes tak, jak je popsáno v H. Okamura a kol., Infection and ímmunily, 63. str. 3966 (1995). Kupfferovy buňky se připravily o sedm dní později podle Tsutsui a kol. (H. Tsutsui a kol., I lepalo-Gastroenterol., 39. str. 553 (1992)) kromě toho. že se místo metrizamidu použil nycodenz gradient. Pro všechny exper imenty, Kupfferovy buňky z 2 až 3 zvířat se spojily a kultivovaly se v RPMI 1640 zásobním roztoku s 10% fetálním hovězím sérem a I pg/ml LPS. Buněě2(i ný lyzát a upravené médium se připraví o tři hodiny později.
Kupfferovy buňky z přírodního typu a ICL-/- myší se meta holicky značily s$ -methionincm jako buňky Cos (popsáno výše v příkladu 24) kromě toho, že se místo DMEM použil RPMI 1641 bez methioninu. IGIF imunosrážceí experimenty se prováděly na buněčných lyzátech a upraveném médiu a imunosrážení se analyzovalo pomocí SDS- PAGE a fluorografie jak je popsáno v příkladu 23. Viz. obr. 3.
Příklad 26
5(1
Indukce vy lučování IFN-γ in vivo
EPS smísené s 0.5% karboxymethyleelulózou v PBS. pil 7,4 se podávalo myším pomocí intraperiíoneálni injekce (30 mg/kg LPS) při objemu dávky 10 ml/kg. Krev se odebírala každé
3 hodiny 24 hodin ze skupiny tří ICE deficitních nebo neupravených myší. Hladina séra 1 Ι·Ν--γ se určila pomocí EIJSA (Endogen).
Příklad 27
1GIE a ΙΕΝ-γ inhibiční test
Inhibice zpracování IGIF pomocí ICE inhibitoru se měřila v ICL inhibičním testu jak je popsáno zde v příkladu l a tabulce 22.
PBMC test u člověka
Lidské obalené buňky utvořené ze sražených leukoeytů se získaly od dárců krve a periferní krevní inonojadernc buňky (PBMC) se izolovaly pomocí odstředění v EeukoPrep zkumavkách (Beeton-Dickinson. Lincoln Park. NJ). PBMC se přidá (3 x 106/jainka) do 24 jamkové desky s tkáňovou kulturou Corning desek a po 1 hodině inkubace při 37 °C sc nepřilnuté buňky odstranily opatrným promylím. Přilnuté monojadernc buňky se stimulovaly EPS (1 pg/ml) s nebo bez inhibitoru ICE ve 2 ml RPMI-1640-10% EBS. Po 16 až 18 hodinách inkubace při 37 °C se množství IGIF a ΙΕΝ-γ určilo v kultivovaném supernalantu pomocí ELIS A.
-177CZ 300171 B6
Za použití postupů popsaných v předkládaném vynálezu jsme získali například následující údaje pro sloučeninu 412. Struktura sloučeniny 412 je popsána níže.
Tabulka 22
sloučenina UV-viditelné Ki (nM) Buňky P3MC prům. IC50 (nM)
412 1/3 580
Příklad 28 io
Sloučeniny podle předkládaného vynálezu mohou být připraveny různými postupy. Následující způsob je výhodný:
K roztoku A (1,1 ekvivalentu) v dichlormethanu (nebo dimethylformamidu, nebo směsi dichlor15 methan :d i methylformamid (1:1) se při teplotě místnosti v inertní atmosféře (dusík nebo argon) přidá trifenylfosfin (0 až 0,5 ekvivalentu), nukleofílní lapač (2 až 50 ekvivalentů) a tetrakistrifenylfosfin--palladium(O) (0,05-0,1 ekvivalentu). Po 10 minutách se popřípadě reakční směs zahusti, potom se přidá roztok kyseliny A-I nebo A—II v dichlormethanu (nebo dimethyl formani idu. nebo směsi dichlormethamdimethylformamid (1:1)) a následuje přidání HOBT
2o (1,1 ekvivalentu) a F.DC (1,1 ekvivalentu). Vzniklá směs se nechá míchat při teplotě místnosti 1 až 48 hodin za vzniku spojeného produktu C-l nebo C—II.
Ve výše uvedeném způsobu se mohou použít různé nukleofílní lapače. Merzouk a Guibe, Tetraliedron Letters, 33, str. 477-480 (1992); Guibe a Balavoin, Journal oť Organ ie Chemistry, 52, str.
4 9 84 - 49 93 (19 8 7)). Mezi výhodné nukleofílní lapače, které mohou být využity, patří: dimedon, morfolin. trímethylsilyldimethylamin a dimethylbarbiturová kyselina. Výhodnější nukleofílní lapače jsou trimellivlsilyldimcthylamin (2 až 5 ekvivalentů) a dimethylbarbiturová kyselina (5 až 50 ekvivalentů ). Pokud je nuklcofílním lapačem trimethylsilyldimethy lam in. výše uvedená reakční směs se musí před přidáním A-l nebo A-II zahustit.
- (78CZ 300171 B6
Jiné sloučeniny podle předkládaného vynálezu se mohou připravit pomocí hydro lýzy sloučenin vzorce Cl a C-II na sloučeniny vzorce H [ a H-L jak je popsáno v následujícím schématu:
Ilydrolýza se muže provést za různých podmínek za předpokladu, žc zahrnují kyselinu a vodu. 5 Mezi kyseliny, které mohou být použity patří p-toluensulfonová kyselina, methan sul fonová kyselina, kyselina sírová, kyselina chloristá, kyselina trifluoroctová a kyselina chlorovodíková.
Například může být použita kyselina trifluoroctová {1 až 90 % hmotnostních) nebo kyselina chlorovodíková {OJ až 30 % hmotnostních) ve směsi aeelonitril/voda (1 až 90 % H2O hmotnostně) při teplotě 0 až 50 °C.
o
-179CZ 300171 B6
Příklad 29
Sloučeniny 213f, 213 g, 213h, 213i, 213j, 2l3k, 2131, 213m, 2l4f, 214 g, 214h, 214j, 214k, 2141. 214m, 550f, 550 g. 550h, 550i, 550j. 55Ok. 5501 a 550m se připraví následujícím způsobem.
Sloučenina (2130 se připraví ze sloučeniny 212Í pomocí způsobu použitého pro přípravu sloučeniny 213a ze sloučeniny 212e za získání 504 mg sloučeniny 213f jako žluté pevné látky.
io HNMR (perdeuteromethanol) δ 1.10 (širokým, 0.25H), 1,30 (široký ιη. 2H). 1,50 (širokým, 1H). 1.65 (širokým, 1.5H), 1.80 (široký m, 0.2511), 1,90 (širokým. 0,25H), 1.95 (široký m. 0,5 H). 2,05 (široký m, 0,25H), 2.15 (m, 1H), 2,3 (ni. 111), 2,5 (široký m. 111). 2.6 (dd, 1 H). 2.8 (m, IH). 3,1 (široký s, 3H), 3,15 (široký m. 111), 3,32 (široký s. 3H). 3,5 (m, IH), 4.5 (široký ni, IH), 4,62 (d, 0.25H), 4,72 (m, 3H), 4,95 (m, 111). 5,1 (široký t, 0,2511), 5,15 (široký t, b 0J5H), 5,7 (d, 111), 6,75 (d, 211), 7,35 (široký s, 5H), 7,75 (d, 2H).
Sloučenina (213 g) se připraví ze sloučeniny 212g pomocí způsobu použitého pro přípravu sloučeniny 213e ze sloučeniny 212e za získání 400 mg sloučeniny 213 g.
H NMR (perdeuteromethanol) δ 1,5 (široký m, IH). 1,65 (široký m. 2H), 1,70 (široký m, 0,2511), 1,90 (širokým, IH). 1.95 (širokým, 111), 2,05 (širokým. 0.25H). 2,10 (m. IH), 2,3 (m. 1H), 2.5 (ni, 2H), 2.59 (d, 1H), 2,6 (d, Ί H), 2.78 (d, 111). 2,8 (d. 111), 2.93 (široký s, 4H), 3.05 (široký m, IH), 3,15 (široký ni. 0,2511), 3,3 (široký s, 3H), 3,5 (ni. 2H), 4,5 (široký m. 2H), 4.65 (d, 111), 4,7 (široký ιη, 2H). 4,95 (široký ni, 111), 5,15 (široký t. 0,25H). 5,2 (široký t, 0,75H). 5,2
2? (d. 1H). 6.95 (d, 111), 7,15 (d. IH). 7,25 (široký s, 111). 7,3 (široký t. 211). 7.45 (široký s. 611).
-180CZ 300171 B6
Sloučenina {213h) se připraví ze sloučeniny 212li za pomoci způsobu použitého pro přípravu sloučeniny 213e ze sloučeniny 212e za získání 296 mg sloučeniny 213h, 1H NMR (deuterochloroform) 5 1,55 - 1,68 (m, lil), 1,7 - 2,05 (m. 311). 2.3 - 2.5 (m. 2H),
2,65 - 2,8 (ni, 1H), 2,85 - 2,93 (m. IH), 2,95 3,25 (m, 3H), 4,44 - 4,65 (m, 2H), 4,68 - 4.82 (m, 1II), 4,9 4,95 (d, 1H), 5,05 - 5.18 (m, 2H), 5,28 (s, 0,5H). 5.55 - 5.58 <d. 0.511). 6.52 - 6,58 (d. 0,5H), 6,7 - 6.76 (m, 211). 6.82 - 6,85 (d. 0,511). 7.3 - 7,4 (m. 5H). 7.52 - 7.58 (m. 1H), 7.75 (s, 0,511), 7,8 (s, 0,511).
io Sloučenina (213i) se připraví ze sloučeniny 212i za pomoci způsobu použitého pro přípravu sloučeniny 213e ze sloučeniny 212c za získání 1.1 g sloučeniny 213i.
'11 NMR (deuterochloroform) δ 1,55 - 2,05 (m, 611), 2,26 - 2,5 (m, 211), 2,68 - 2.82 (m, IH),
2,85 - 2,92 (m, IH). 2.95 - 3,25 (in, 211).3,82 (s, 1.5H), 3,85 (s, l,5H). 4,4 - 4,65 (m, 2H),
4.7 - 4.78 (m. 111), 4,88 - 4,95 (ni. III). 5,05 - 5,23 (ni. III). 5,28 (s. 0,511). 5.55- 5,58 (d. 0.5H). 6,6 - 6,65 (ni. IH). 6,8 - 6.84 (m, IH), 6,9- 6,95 (m. 3H). 7.3 7.45 (m,4H).
7.78 - 7,85 (m,2H).
Sloučenina (213j) se připraví zc sloučeniny 212j za pomoci způsobu použitého pro přípravu slou2o ceniny 213e ze sloučeniny 212e za získání 367 mg sloučeniny 213 j, 'H NMR (deuterochloroform) ó 1.55 - 2.05 (m. 12H), 2,25 (d. IH), 2,35 (in. lil). 2.48 (in, 2H), 2,75 (m. 211). 2.9 {m, 111), 2,95 - 3.25 (tn, 511), 4,45 (t, 111). 4,5 - 4.6 (m. 411), 4,7 (m, 111), 4,75 (d, IH). 4,88 (ni, IH), 5,05 (m. 2H). 5.15 (kv. IH). 5.3 (s. IH). 5.58 (d, IH). 6.5 (d, IH), 6.9 (d. 11I). 7.05 (d, 111). 7,25 - 7.35 (m. 5H). 7,6 (s, 2H), 7,7 (s, 2H).
Sloučenina (213k) se připraví ze sloučeniny 212k za pomoci způsobu použitého pro přípravu sloučeniny 213e ze sloučeniny 212e za získání 593 mg sloučeniny 213k.
io !I1 NMR (perdeuteromethanol) Ó 1,5 (m, IH), 1,6- 1,7 (m, 2H), 1,75 1,95 (ιη, 4H), 2,15 (m, 2H). 2,3 (m. IH), 2,6 (m, III), 2,7 (m. III). 3.05 (m, 211). 3.15 (m, lil). 3.5 (m, 211), 4,44 (m,2II). 4.65 (d. 111). 4,7 (m, IH), 4,95 (m. IH). 5,15 (m, IH), 5,4 (s, IH). 5.7 (d, IH), 7.3 (m, 5H), 7,85 (s,2H).
Sloučenina (2131) se připraví ze sloučeniny 2121 za pomoci způsobu použitého pro přípravu sloučeniny 213e ze sloučeniny 212e za získání 133 mg sloučeniny 2131.
'H NMR (deuterochloroform) δ 1,55 - 1,7 (ni, lil), 1,75 - 2,05 (m, 311). 2,25 (s. 1,5H), 2,27 (s, 1.5H), 2,3 - 2,48 (in, 2H), 2,7 2,83 (m. 1H), 2,85 - 2.94 (dd, 1H), 2,95 - 3.25 (m, 211), 4,42
- 4.65 (ni, 211), 4,68 - 4,85 (m. IH), 4,88 - 4,95 (m, IH). 5,05 - 5,18 (m. 2H). 5,32 (s, 0,5H),
5,55 - 5,6 (d. 0.5H). 6.48 - 6.55 (d. 111). 6.88-6,92 (d, III), 7,0- 7,04 (d, 0,511). 7.15 - 7,2 (d. 0,511), 7,3 - 7,4 (m, 4H), 7,64 - 7.78 (m, 2H), 7,88 - 7,94 (m. 1H), 8.45 8.56 (m, 1H).
Sloučenina (213m) se připraví ze sloučeniny 212m za pomoci způsobu použitého pro přípravu sloučeniny 213e ze sloučeniny 212e za získání 991 mg sloučeniny 213m, 'H NMR (deuterochloroform) δ 1,5 2.15 (m. 5H), 2,2 - 2,55 (ni. 311), 2.6 - 3,3 (m. 411).
3,95 (2s, 3H), 4,45-4,7 (m, 211), 4,7-4,85 (m, IH), 4,85-4,95 (ni, IH). 5,05 - 5.25 (in. IH),
5.3 (s, 0.5H). 5,6 (d, 0.5H), 6.55 (d. 0.5H). 6.85 (d, 0,5H), 7,0 (d. 0,511). 7,25 - 7,6 (ni, 5.511).
7,75 (s, Hl), 7.85 (s. 111).
Sloučenina (550f) se připraví ze sloučeniny 212f za pomoci způsobu použitého pro přípravu sloučeniny 213e ze sloučeniny 212e za získání 420 mg sloučeniny 550f jako bílé pevné látky.
- 181 CZ 300171 B6 'Η NMR (deuterochloroform) δ 1.2 - 1,25 (široký t. 3H), 1.35 (m. IH). 1.55 (širokým, 111), 1.88 - 2.02 (širokým. 4H), 2.3 (d, lll), 2,35 (m, III), 2,45 (m, lil). 2.55 - 2.75 (m. 3H), 3,0 (s. 611). 3,25 (rn, IH), 3,55 (m. IH), 3.65 (m, IH). 3,75 (m. IH). 3,9 (m. IH), 4.3 (t. IH). 4,55 (m, 2H), 4,68 (široký m, IN), 3,9 (m, lll). 4,3 (t, tli). 4,55 (m, 2H). 4,68 (široký m. IH), 4,95 (široký m, IH), 5.1 (široký m, 2H). 5,45 (d. IH), 6,5 (m, 21 i), 7.7 (tn. 2H).
Sloučenina (550h) se připraví ze sloučeniny 212h za pomoci způsobu použitého pro přípravu sloučeniny 213c ze sloučeniny 212e za získání 195 mg sloučeniny 550h jako bílé pevné látky, io lH NMR (perdeuterodimethylsulfoxid) δ 1,1 - 1.18 (2t. 3H), 1,6- 1,7 (m, 211). 1.88- 2,05 (m, 211), 2,1 - 2,35 (m. 3H), 2,48 2.56 (m. 1H), 2,75 - 2.8 (m, 0,7511), 2.88 - 3.08 (m. 1,25H),
3,25 3,4 (rn. III). 3,55- 3,8 (m. 2H), 4.35 - 4,45 (m, IH), 4,55 4,62 <m, IH). 4.8 -4.88 (m. i 11), 4,98 - 5,03 (m. 0,25H). 5.1 5,13 (ni, 0,7511), 5,33 (s, 0,2511), 5,58- 5,6 (d, 0.75 H),
5,9 6,0 (široký s, 211), 6,8 - 6,85 (d. 1H). 7,58 - 7,62 (d, 1H), 7,82 (s. 1H), 8,22 - 8,28 (d, 111),
8,48 - 8.52 (d. 0,75H), 8,72 - 8,76 (d, 0,25H).
Sloučenina (550i) se připraví ze sloučeniny 212i za pomoci způsobu použitého pro přípravu sloučeniny 213e ze sloučeniny 212e za získání 135 mg sloučeniny 550i,
211 'H NMR (deuterochloroform) δ 1,18 - 1,28 (2t, 311), 1,6 - 1.75 (ni. 1,511). 1.9 2,1 (m. 3.511), 2.22-2.3 (d.0,5H), 2,38-2,47 (m. 1.514).2,7 2.8 (m, 0.511). 2,8 - 2,93 (m, 114),2,94-3,15 (m. 1.511). 3,15 - 3,28 (m, IH). 3.55 - 3.62 (kv, 0.5H). 3.62 3.73 (kv. 0.5H). 3.78- 3,88 (kv. 0.514). 3.88 (s. 311), 3.9- 3.95 (kv. 0.5H), 4,33 - 4.4 (m. 0.514). 4,5 - 4.55 (m, IH). 4.68 - 4.76 (m, 0.5H), 4,9-4.95 (ιη. 0.5H), 5.1 - 5,2 (m, 1.511). 5.18 (s. 0.5H). 5,48 - 5.52 ?? (d. 0,511), 6.48 - 6,55 (d. 0.5H), 6,85 - 6,9 (m. IH). 6,9 - 6,95 (m. 2H), 7.34 - 7.38 (d, 0.5H),
7.78 7.85 (m, 211).
Sloučenina (550k) se připraví ze sloučeniny 212k za pomoci způsobu použitého pro přípravu sloučeniny 213e ze sloučeniny 212e za získání 174 mg sloučeniny 55Ok jako bíle pevné látky.
31) 'H NMR (perdeuterodimethylsulfoxid) δ 1,15 (2t. 311), 1,6- 1,75 (m. 211). 1,9 2,05 (ni, 2H),
2.1 - 2,4 (m, 5H). 2,5 2,55 (m. 111). 2.7 - 2,8 (ni, 0.5H), 2,85 - 3.0 (ni. lll). 3.0- 3,1 (m. 0.5H). 3.55 - 3,7 (m. IH), 3.7 - 3,8 (m. 1H), 4.2 (t. 0,5H). 4,35 - 4,45 (m. 0,5H). 4.55 - 4,65 (m.0.5H), 4,8 4.9 (m, 0,511), 5.05 (t, 0,5H). 5,15 (t, 0,5H), 5,35 (s, 0.511). 5.6 (d. 0,5H). 7,95
3Š (s. 211), 8,5 (d,0,5H), 8,65 (d, 1H), 8,75 (d, 0.511), 10,9 (široký s, l H),
Sloučenina (5501) se připraví ze sloučeniny 2121 pomocí způsobu použitého pro přípravu sloučeniny 213e ze sloučeniny 212e za získání 151 mg sloučeniny 5501,
-tu 'HNMR (deuterochloroform) δ 1.2- 1.28 (2t. 3H). 1,6- 1.72 (m, 1.511), 1.88 - 2,15 (m, 3.5H), 2,22 2,28 (m. 0,511). 2,28 (s. 3H), 2.38 2,48 (m, 1,5H), 2.66- 2.92 (m. 1,5H). 2,95 - 3.14 (m. 1,511). 3,2 - 3,34 (m. IH), 3,56 - 3.63 (kv, 0.5H). 3.63 - 3.72 (kv, 0.5H), 3,8 - 3,85 (kv. 0,5H), 3.9 - 3,95 (kv, 0,5H). 4,32 - 4.38 (m,0,5H). 4,5 - 4,62 (m. IH), 4,68 - 4,75 (m,0.5H), 4,88- 4,92 (m, 0,5H), 5,08- 5,2 (m, 1,5H). 5,18 (s. 0.5H), 5,46 - 5,5 (d. 0,511),
6,5 - 6,55 (d. 0.5H), 6,98 7.05 (m. IH). 7.42 - 7,48 (d, 0,5H). 7.63 - 7,78 (m, 2.5H). 7,9-7.94 (d. 0.5H). 8.44 - 8.52 (m, IH).
Sloučenina (55()m) se připraví ze sloučeniny 2l2m pomocí způsobu použitého pro přípravu sloučeniny 213c ze sloučeniny 212c za získání 301 mg sloučeniny 550m jako bílé pevné látky, !H NMR (deuterochloroform) δ 1,2 - 1.35 (2t, 3H), 1,5 1.8 (m. 211). 1,9 - 2,15 (5H), 2,25 (d, 0.5H), 2.4 - 2,5 (ni, 2H), 2,65- 2,8 (m. 0,511), 2.8 - 3.0 (ni. 0.5H). 3,0 - 3.2 (m, lll),
3.2 - 3,35 (m, 0.5H), 3,55 - 3,65 (m, 0,5H). 3,65 3,75 (ni, 0,511). 3,8 - 3,9 (m, 0,5H). 3.9 4.0 (m. 0,511), 4,4 - 4.45 (m. 0.5H), 4.55 - 4.65 (ni, 0,5H), 4.7 - 4.8 (m, 0.5H), 4,85 - 4,95
- 182 CZ 300171 B6 (m, 0.5H). 5,05 - 5,2 (m, 0,5H). 5,2 (s, 0,5H), 5,5 (d, 0,5H), 6,5 (d. 0,5H), 6.9 (d. 0,5H), 6,95 (d, 0.5H). 7,35 (d, 0,5H), 7,75 (s. 1H), 7,85 (s, 111).
Sloučenina (214j) se připraví ze sloučeniny 213j pomocí způsobu použitého pro přípravu slouče? niny 2002 ze sloučeniny 200! za získání 62 mg sloučeniny 2! 4j jako bílé pevné látky, 'H NMR (perdeuteromethanol) δ 0,9 (t, IH), 1.3 (široký s. IH), 1.7 (široký m. IH). 1.9 (širokým, IH), 2,1 (široký s, IH), 2.25 (kv. IH). 2.35 (m, IH), 2.48 (m, 2H), 2,65 (t. IH), 3.15 (široký t, IH), 3,5 (širokým, 1H). 4,3 (široký s, IH), 4,55 (m, 2H), 4,95 (t, H i), 5.25 (široký s, 1 II), io 7.6 (široký s. 1H). 7,85 (široký s. 1H).
Sloučenina (214k) sc připraví ze sloučeniny 213k pomocí způsobu použitého pro přípravu sloučeniny 2002 ze sloučeniny 2001 za získání 80 mg sloučeniny 214k jako bílé pevné látky, 'H NMR (perdeuteromethanol) δ 1.6 - 1.7 (m. IH), 1.8 - 2,0 (m, 211), 2,0- 2.1 (m, 2H). 2,15-2,25 (rn, IH), 2,3 - 2.4 (m. IH). 2,4 - 2,55 (m, 2H), 2.6 - 2.75 (m, Π1), 3,05 - 3. (m, 111), 3.4-3,6 (m, 211), 4,2 - 4.3 (m, IH). 4,45 - 4,6 (m. IH), 4,8 - 5,0 (m, IH), 5,1 - 5, (m. IH), 7.85 (s,2H).
Sloučenina (2141) se připraví ze sloučeniny 2131 pomocí způsobu použitého pro přípravu sloučeniny 2002 ze sloučeniny 2001 za získání 91 mg sloučeniny 2141 jako bílé pevné látky.
'li NMR (perdeuterodimethylsulfoxid) δ 1,65 (široký m. 6Π), 1,9 (široký m, 611). 2.15 (s, 3H),
2,3 (m, 3Π). 2,6-2.85 (m, 3H). 2,9 (m, 2H), 3,0 (mJH), 4,15 (široký kv. IH). 4.4 (ni, 3H). 5.0 (m, IH). 5,15 (m, 1H), 5,45 (s. 1H). 7,8 (d, 2Π), 7,95 (d, 111), 8,05 (s, IH), 8,65 (rn. 2H). 9,65 (s, lil).
Sloučenina (214m) sc připraví ze sloučeniny 2l3m pomocí způsobu použitého pro přípravu sloučeniny 2002 ze sloučeniny 2001 za získání 105 mg sloučeniny 214m jako bílé pevné látky ’H NMR (perdeuteromethanol) 6 1.6 - 1.75 (m. III). 1,85 - 1,95 (m, IH), 2,0 - 2,1 (m. 2H),
2,15 - 2,25 (m, 111), 2,3 - 2,4 (m, 1H), 2,45 - 2,55 (m, 2H), 2.65 2,75 (m. 1H). 3,4 - 3.55 (m,2H), 3.95 (s, 3H). 4,2 4.3 (m, IH). 4.45 - 4.6 (m. 111). 4,9- 5,0 (m. 111), 5,15 -5,2 (m. IH). 7.9 (s. 211).
Sloučeniny 308e a 308d se připraví následujícím způsobem.
OJ OJ
Sloučenina (308c) se připraví ze sloučeniny 212e pomocí způsobu použitého pro přípravu sloučeniny 308b ze sloučeniny 212e za získání 266 mg sloučeniny 308e 'H NMR (deuterochloroform) δ 1,6 - 1.7 (ni. IH), 1,88 - 1,98 (m, 311). 2,02 - 2,15 (m. IH), 2,3-2,4 (m, IH), 2,65 - 2,95 (m, 3H), 3,04 - 3,09 (m, !H), 3,12-3,25 (m, 111). 3,84 (s, 3H),
- 183CZ 300171 B6
3,86 (s, 3H). 4.5-4.58 (m, IH), 4.88 - 4.95 (ni, IH), 5.1 - 5.25 <m.2H), 6.86-6.9 (d. 2H),
7,15 - 7,25 (rn, 2H), 7,36 - 7.4 (m. 1H). 7.75 - 7.8 (d. 2H).
Sloučenina (308d) se připraví ze sloučeniny 212e pomocí způsobu použitého pro přípravu slou~ s ceniny 308b ze sloučeniny 212e za získání 270 mg sloučeniny 308d, 'H NMR (deuteroehloroform) δ 1.55 1,65 (m, IH). 1.8- 2.1 (m. 411). 2.3 - 2.4 (m. III). 2.65 -2,88 (rn. 311). 2,9 - 3,3 (m, 314), 4,5 - 4,58 (m, IH), 4.88 - 4.95 (m, lil), 5,05 (s, 211), 5,1 - 5,2 (m. IH), 6,82 6,95 (m, 2H), 7,02 - 7,15 (m. 2H), 7,28 (m, 5H). 7,45 (m. IH), 7,72 io (d, 211).
Sloučeniny 21 OOf. 2100 g, 21 OOh. 21 OOi a 2100j se připraví tak. jak je popsáno níže.
c
ΑΙΙοοΝ^ΎθΗ H O
OtBu
f, R1=
Sloučenina (2101a) se připraví z allyloxykarbonylamino-p-terc-butylaspartátu podle postupu 15 využitého Chapmanem (Bioorg, & Med. Chem. Lett., 2, str. 615-618 (1992)) pro přípravu (3S.2RS) 3-allyloxy karbony latnino-2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofůrami za použití 4-chlorbenzylalkoholu místo benzylalkoholu za získání 1,84 g sloučeniny 2101a jako krystalické pevné látky.
2o Sloučenina (21000 se připraví ze sloučeniny 212e pomocí postupu použitého pro přípravu sloučeniny 213e ze sloučeniny 212c za použití sloučeniny 2101a za získání 380 mg sloučeniny 2100f2 'H NMR (deuteroehloroform) δ 1,8 - 2,0 (m, ΙΟΙI). 2,30 (d. IH), 2,31 - 2,5 (m. 311), 2,7-2,0 (m, 3H). 3,05 (m. 211). 3,1 - 3.2 (m, 41-1). 4.45 (kv. IH). 4,5-4,6 (nt. 3H). 4.7 (d,2H), 4.85 (d. lil), 4.0 (t. IH), 5,2 (t, IH), 5.15 (m. 2H), 5,25 (s, IH), 5.55 (d, III). 6,5 (d. IH). 6.0 (d, IH).
6,05 (d, lil). 7.25 (m. 3H), 7.35 (t, 2H), 7,45 (m, 2H), 7,55 (IH), 7.8 (m. 311).
- 184CZ 300171 Bó
Sloučenina (2101b) se připraví z (3S.2RS) 3-a lly loxy karbony lam ino-2-benzy loxv-5-oxotetrahydrofuranu pomocí způsobu použitého pro přípravu sloučeniny 21 OOd ze sloučeniny 214e za použití kyseliny sírové místo kyseliny p toluensulfonové za získání sloučeniny 2101b.
Sloučenina (2lOOg) se připraví ze sloučeniny 212e podle postupu pro přípravu sloučeniny 213e ze sloučeniny 212c za použití sloučeniny 2101b za získání 31 mg sloučeny 2100 g.
H NMR (deuterochloroform) Ó 129 (d), 1.94 (široký s), 2.00 -222 (ni), 2.24 (d), 2,42 (dd), ιο 2,71 - 2,83 (ni). 3,02 (dd), 3,12 - 3,27 (překrývající se m). 3.93 (m). 4,32 - 4.37 (ni). 4.52 - 4,63 (m), 4.90- 4,95 (m), 5,12 - 5,20 (m), 5,28 (s), 6,93 (d). 720 (d). 7.41 7.50 (m). 7.51 - 7.58 (m), 7.84 (d).
Sloučenina (2100b). Roztok sloučeniny 214e (287 mg, 0,65 mmol) v pyridinu (5 ml) se reaguje s acetanhydridem (0,4 ml, 3,62 mmol). Po 6 hodinách se reakční směs nalije do 5% roztoku hydrogen síranu sodného a třikrát se extrahuje ethy lacetátem. Spojené organické vrstvy sc promyjí solankou, suší nad síranem sodným a zahustí ve vakuu. Po velmi rychlé ehromatografíi (silikagel. ethylacelál) se získá 119 mg sloučeniny 21 OOh,
H NMR (deuterochloroform, směs čtyř diaslereomerů) 6 1,80- 2,05 (m). 2.12 (s), 2,13 (s), 2,19 (s), 2.22 (d), 2,67 - 2,75 (m). 2.80 - 2.95 (m), 3,00 - 3,20 (m), 3,21 - 3.33 (ni). 3.50 - 3,95 (čtyři oddělené multiplety), 429 (rn). 4,55 (m). 4.57 - 4,65 (rn), 4,69 (m), 4,85 4,95 (m), 5,04 (ni), 5,10 (s), 5,10 - 5,22 (m), 6,46 (d), 6,03 (s), 6,50 (d). 6.58 (d). 6,75 (d), 6.95 - 7,05 (ni). 7,22 (m). 7,30 (m), 7.71 (d), 7,75 - 7,83 (m).
Sloučenina (21 OOi). K roztoku sloučeniny 2100b (1,5 g, 2,7 mmol) v acetonitrilu (10 ml) se při teplotě místnosti přidá 1M kyselina chlorovodíková. Po 6 hodinách se přidá pevný hydrogenuhličitan sodný a produkt se extrahuje ethy lacetátem. suší nad síranem horečnatým a zahustí ve vakuu. Po ehromatografíi (silikagel, 30 až 100 % dichlormethan v ethylacetátu) se získá 123 mg
3o sloučeniny 21 OOi, 'H NMR (deuterochloroform) δ 1,25 (t. 3H), 1,6- 1,8 (m, III), 1,9-2,2 (m, 511), 2.4 - 2,5 (m. 1H). 2,75 - 2,9 (m. 2H), 3.0 - 3.1 (m. 211), 3,2 - 3,25 (m. 1H). 4,05 - 4,2 (m, 111), 4,5 - 4,7 (m. lil). 5,1 - 5,25 (m, 111), 7,0-7,2 (m, 2H), 7,4 - 7,45 (m, 211). 7,5 (t, 1H), 7,8 (t. 211), 9,5 (S, IH).
-185CZ 300171 B6 (2100Í)
Sloučenina (21 OOj) se připraví ze sloučeniny 2100i pomocí způsobu použitého pro přípravu sloučeniny 21 OOh ze sloučeniny 214e za získání 347 mg sloučeniny 21 OOj.
'H NMR (deuterochloroform) 6 1,3 (t. 311), 1,6 - 1.8 (m, 2H). 1,9 - 2,25 (m, 4H). 2,25 (s, 3H),
2,3 - 2,45 (m, 1H). 2,8 - 3.0 (m, 1H). 3.0 3.25 (ιη. 2H), 3,4 - 3,45 (m. 211). 4.1 - 4,2 (m, 211). 4.55 4.7 (m. 111),5.1 - 5,25 (m. II1), 6,8 (s, IH), 7.0 7,1 (m, 2H). 7.5 (t, 111), 7,8 (t, 2H), 9,5 (s, 111).
o Sloučeniny 500 a 501 jsou popsány v tabulce 23. Tyto sloučeniny se připraví pomocí podobných způsobů, jako byly použity pro přípravu sloučenin 404—449 (viz příklad 11).
- 186CZ 300171 B6
Tabulka 23
1-- + co 5 w 5 X t—t v co C\i lO r> o lT>
c 5 r- σι
řs ,, <0 '9 4) o
>O ° 0 «Ί θ)
'(t ” 44 u 1 O _ »U fM í£ 5 Λ T-< r-í 10,13
OJ
σ m
S *. tH CN
CN m
ua lí)
0 00 O lO Z O r—1 O *3*
ÍD M 0 w rH u z OD CN
> cn X CN CN 1 O X ^r CN O
X
o X
°<x
(tí i. °<T° .__ Z I Q-C
H λ: 3 M 4J W o QSj EX
O^yíS.0 <χ\Γ O
ΛΧ1 x
>ύ o r~f
□ □ o O
Γ-4 vn m
tn
- 187
Sloučeniny popsané níže (213mm, 213n. 213o, 213p. 213q. 213r. 213$, 213t. 213u, 213v, 213w, 213x a 214w). se připraví pomocí podobných způsobů jako sloučeniny 213b-ť.
Sloučeniny 419, 415, 450, 456. 475, 404, 486. 487. 417, 408 a 418 se mohou také připravit tak, > jak je popsáno níže.
213 mm—x
214w, 404. 408.415, 417,418,419.450, o 456,475,486,487
Sloučenína R1
2l3mm, 419 MeOC(0)’
213n, 415
213o, 450
213p, 456 o X
213q, 475 0
-188CZ 300171 B6
213r, 404 Me 0 ev
213s, 486 o H
213t, 4Θ7 xTJOF u
213u, 417 OWe
213v, 408 V
213w, 214w “•ysÁ Me
213x, 418 O „A-CC H
- 189CZ 300171 B6
Sloučenina (213n) se připraví jako směs diastereoizomeru (poměr izomeru syn;anti 6:4) (1,43 g, 82 %)jako bílá pevná látka: teplota tání: 206 - 210 °C;
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3288. 1787. 1680. 1657. 1651. 1619, 1548. 1440, 1256, 5 1135;
’H NMR (perdeuterodimethylsulfoxid) δ 8,75 (0.4H, d). 8,55 (0,6H, d). 8.45 a 8.43 (111. 2 x d). 7.50 (111. d), 7,42 (lil. s), 7,40 -7,27 (5H, m), 7,01 (IH, d). 6,11 (2H, s), 5,67 (0,6H, d). 5,43 (0.4H. s). 5,10 - 5,00 (1H, m), 4,90 4,59 (3,5H, m), 4,45 - 4,25 (1,511, m), 3,47 - 3,20 (IH, in), io 3,20 - 2.70 (2H. ni). 2,65 - 2.35 (111, ni), 2.35 - 2,00 (3H, m), 2,00 1,75 (211, m). 1.65 - 1.40 (2H. in).
Analýza pro C29H^>N4()9:
vypočteno: C, 60.20; H. 5,23; N, 9.68, nalezeno: C, 60,08; H. 5,32; N. 9,50.
Hmotová spektroskopie (ES1) 580 (M1 + 2, 35%). 579 (M’ f 1, 100). 404 (5), 367 (5) 236 (7),
107(5).
Sloučenina (213o). antiizomer jako bílá pénovitá pevná látka (0.73 g. 69 %): teplota tání: 135 20 ažl40°C;
[aj,f1 - 37.3° (e 0,1, dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3452. 3310. 1790, 1664. 1659, 1650, 1549, 1425. 1258, ?5 1121;
'li NMR (perdeuterodimethylsulfoxid) Ó 10,1 (IH. s), 8,77 (111. d). 8,57 (1 H, d), 8,01 (IH. s).
7,76 (IH. d), 7,55 (1H, d), 7.45 - 7,25 (6H. m). 5.43 (1H. s), 5.08 5,00 (III. m). 4.95 - 4,73 (lH,m), 4,76 a 4.68 (211, dd), 3,40 - 3,20 (IH, m), 3,09 (IH, dd). 3.02 2,75 (lH,m),
2.45 - 2,06 (411, ni), 2,06 (3H, s). 2.00 - 1,75 (2H, m), 1.70 1,40 (2H. ni).
Analýza pro CwH-uNsOg, 0,75 H2O:
vypočteno: C. 59,54; H. 5.75; N. 11,57. nalezeno; C. 59,40; H, 5.62; N. 11,50.
Hmotová spektroskopie (ES') 593 (M + 2, 33%). 592 (M t 1. 100), 574 (7), 487 (7) 475 (6),
385 (9). 373 (26), 318 (14), 296 (11), 266 (10), 221 (22).
Sloučenina (213p), se izoluje jako pěna (1,2 g. 77 %):
- 115° (e 0,20. dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3368, 2946, 1794, 1654, 1609, 1540. 1505, 1421. 1277, 1175, 1119,980;
i? 'll NMR (perdeuterodimethylsulfoxid) δ 10,1 (1H, s), 8,80 (0,511. d, J ” 6.6), 8,60 (0,5H, d.
.1 = 7,2), 8,40 8,36 (111, 2d), 7,82 (2H, d, ,1 - 8,0), 7,41 (5H. širokv s). 6,86 (2H, d. J = 8,6). 5.72 (0,5H. d. J - 5,0), 5,49 (0,5H, široký s). 5,13 - 5,07 (IH, m), 4,95 -4,65 (2,511, m), 4.49-4,38 (2,511. m), 3.49 - 3.30 (211, m), 3,21. 2,79 (2H, m). 2,40 - 1,41 (7H. m),
Hmotová spektroskopie (ES ) 551.
Sloučenina (213q) se izoluje jako bílá sklovitá pevná látka (80 %): teplota tání 145 až 149 °C:
- 190CZ 300171 B6 [a]D 23 - 56,0° (e 0,05, dichlormcthan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3399-3319, 1791, 1657, 1543. 1420. 1253, 1119;
'H NMR (deuterochloroform) δ 9,54 (IH, s), 7,65 (IH, d, .1- 7.9), 7.51 (III, d. J = 6.9). 7,44- 7.25 (7H.m), 7,18-7.06 (3H, m). 5,30 - 5,20 (IH, m). 5.27 (IH. s), 4,84 (111, m). 4.79 (IH, d, .1= 11.4), 4.56 (111. d. J - 11,3). 4.47 (211. m). 3,28 (111. m). 3,10 - 2,97 (2H. in), 2.71 (1 H, m). 2.47 - 2,37 (IH, ni). 2,26(lH.d,J= 17,9), 2,09 (lH,m). 1,83, 1,70, 1,51 (411, 3 ni).
io Sloučenina (213r) se izoluje jako směs diastereomerů (poměr izomeru syn:anti 55:45) jako bílá pěnovitá pevná látka (1,46 g, 89 %): teplota tání 106 až 110 °C;
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3306, 2947, 1791, 1659, 1650. 1535. 1421, 1256, 1122;
'H NMR (perdeuterodimethylsulfoxid) δ 8,76 (0,45H, d), 8,56 (0,5511, d). 8,49 a 8.47 (IH, 2xd), 7,41 7,19 (9H, m). 5,67 (0.55H, d). 5,43 (0.45H, s). 5.11 5,02 (IH. m). 4.86 4.55 (3.511, ni). 4.45 - 4.25 (1,511, ni), 3.40 - 3.20 (1 H, m). 3,20 - 2,70 (2H, m), 2,65 - 2,40 (I H. ni).
2,34 (3H. s ).2,30 1.70 (5H, m). 1,65 1.40 (2H.m).
20 Λ na lýza p ro C 2y H i2N.,O7:
vypočteno: C. 62,66; H. 5,95; N, 10,08,
nalezeno: C. 62.91; H, 6,00; N, 9.70.
Hmotová spektroskopie (ES ) 550 (M 2, 43%). 549 (Μ + I, 100).374 (3), 280 (4),279 (20), 118(5).
Sloučenina (213s) se izoluje jako anti-iz.omer jako bílá pěnovitá látka (0.64 g, 77 %): teplota tání 137 až 141 °C;
[ujif1 - 48,2° (e 0,05, methanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3477, 3314. 1791, 1659. 1599. 1529, 1499, 1406. 1256, 1122;
'li NMR (perdeuterodimethylsulfoxid) δ 10,45 (1 H, s), 8,76 (IH, d), 8,50 (IH. d), 7,86 (2H. d), 55 7,69 (2H. d), 7,41 - 7,20 (10H, ni), 5,43 (1H. s). 5.08 - 4.98 (1H, m), 4.90 - 4.73 (1H. ni), 4.76 a 4,68 (211, dd), 3.67 (211, s), 3,40 - 3,20 (IH, m). 3,09 (IH, dd), 3.02 - 2.75 (IH, ni), 2.39 (1 H.dd). 2,30 - 2,00 (311. m), 2,00 1.75 (211. m), 1,70- 1.40(211. ni).
Analýza pro C^H.vNjOg, 0,5 H2O:
4o vypočteno: C, 63,90; H, 5.66; N, 10.35.
nalezeno: C. 63,68; H, 5,67; N, 10,24.
Hmotová spektroskopie (ES ) 669 (M + 2. 40%), 668 (M! + 1, 100), 640 (12), 435 (18). 425 (23).403 (33),328 (17).302,(32),274 (22). 197 (16), 138 (17).
4? Sloučenina (213t) se izoluje jako bílá pěnovitá látka (0,63 g, 80 %): teplota tání 159 až 164 CC;
|a]L)- 37,0° (c 0.05. methanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3463. 3321, 1790, 1680, 1658, 1650, 1644, 1595, 1525, 50 1501, 1408, 1251, 1113,933;
H NMR (perdeuterodimethylsulfoxid) δ 10,13 (IH, s). 8,76 (111, d), 8.48 (IH, d), 7,85 (2H. d). 7,68 (2H, d). 7,40 - 7,25 (5H, m), 5,43 (IH, s), 5,08 - 4,95 (lil, ni), 4,92 - 4,73 (111, m), 4,76
- 191 CZ 300171 B6 a4.68 (2H. dd), 3,40 - 3,20 (111. m), 3,09 (IH, dd), 3.02 - 2,75 (III. ni). 2,39 (IH. dd). 2,35 - 2,00 (611, m), 2,00 - 1.75 (2H. rn), 1,70 - 1,40 (2H, m), 0,93 (6H. d).
Analýza pro Crdl^NsOs, 0.5 H2O:
vypočteno: C, 61,67; H. 6,27; N. 10,90, nalezeno; C, 61,49; H. 6,24; N, 10,86.
Hmotová spektroskopie (ESJ 635 (M+ + 2, 39%), 634 (M t 1. 100), 484 (10). 427 (9), 274 (18), 268(37). 204 (19). 117 (13).
ίο Sloučenina (213u) se izoluje jako bílá pevná látka (81 %): teplota tání 120 až 132 °C;
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3361-3334, 1792. 1659, 1585, 1536. 1499, 1457. 1416, 1340, 1236, 1126,989;
'H NMR (deuterochloroform) δ 7,39 - 7.29 (611, m), 7,12 (IH, s), 7,03 (1H, s), 6,92, 6,83, 6.48 (asi 311. 3d, .1 = 8,1,7.5. 8.1). 5.57 (d, J = 5.3), 5,27 (1H. s), 5,23 - 5,06, 4,91 -4.71,4,64-4,43, (6H, 3m). 3,92. 3,91.3,89, 3,88 (911, 4$), 3,32 - 2,70, 2,52-2,08. 1.91, 1,63 (IH, 4m).
Sloučenina (213v) se izoluje jako bílá pevná látka (78 %): teplota tání 121 až 127 °C;
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3534-3331. 1791, 1659. 1528, 1420, 1256, 1122;
'H NMR (deuterochloroform) δ 8,34 - 8,29 (lil, m), 7,98 - 7.87 (2H, m). 7.68- 7,45 (4H. m).
7.34 - 7,24 (5H. m), 7,04 (d, J = 6,8), 6,78 (d, J - 7,8), 6.66 (d. J = 7.7). 6.48 (211. d. .1 = 7,5),
5.56 (d. J = 5,4). 5.15 (lH,s), 5,30 5.14, 5,0, 4.89 (d, J = 11.2).4,71 -4.41 (611). 3,18 2,80,
2,50 2,27.2.08 - 1.60 (11II, 3m),
Sloučenina (2l3w) se izoluje jako směs diastercoizomerů (65/35) jako bílá pevná látka (0,9 g, 65 %): teplota tání 110 až 115 °C (za rozkladu);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3409, 2945, 1792, 1658, 1606, 1534, 1486, 1420, 1330, 1276, 1209, 1122,980,960;
'H NMR (deuterochloroform) δ 7.66 (O,35H, d, J = 6.9), 7.46 - 7.20 (711. m). 6,93 (O.35H. d,
J - 7.7), 6,85 (0.65H. d, J - 7,6), 6,73 (0.6511, d, J = 7.6), 5,95 (0.35H, široký s), 5.85 (0,6511, široký s), 5,56 (0,6511, d, J= 5,2), 5,28 (O.35H, široký s). 5,20 - 4.98 (211. m), 4.96- 4,40 (4H. tn). 3,28 - 2,55 (3H, m), 2,53 - 2,32 (III. m), 2,23 (ÓH, 2s), 2,03 1.40 (7H. m).
Hmotová spektroskopie (ES ) 577. (ES ) 579,
411
Sloučenina (213x) se izoluje jako bezbarvý prášek (691 mg, 86 %); teplota tání 150 až 170 °C; [etjn2' - 10,1° (c 0,10, aceton);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3313, 1791, 1679. 1654, 1597, 1528. 1501, 1457. 1407, 1371. 1315. 1255, 1184, 1122,933;
'll NMR (perdeuterodimethylsulfoxid) δ 8,75 (IH, d), 8,47 (IH, d). 7,84 (211, d), 7,66 (211, d),
7.35 (5H, m), 5.43 (lil, s), 5,06 - 5,00 (IH, m). 4,90 - 4.64 (3H, m), 4,46 4,26 (2H, m),
5(i 3,16-2.86(211, m),2,45 -2.05 (5H, m). 2.07 (3H, s). 2.00 - 1.84 (211. ni). 1,68 - 1.56 (211. m);
Analýza pro ί'χ,ΙΕΜΟχ 1EO:
vypočteno: C, 59,11; IE 5.79; N, ! 1,49,
- 192CZ 300171 136 nalezeno: C. 59,38; H, 5,66; N, 11,31;
I Imotová spektroskopie (ES )614(100%), 592 (Μ i1,66).
Sloučenina (415) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 214e za získání bílé pevné lát5 ky (297 mg. 84%): teplota tání 158 až 162 °C;
[α][<4 - 109,5° (c 0,1, methanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3700-2500 (br), 1783, 1659. 1650. 1538. 1486, 1439. ío 1257. 1037;
'H NMR (pcrdcuteromcthanol) δ 7,48 (lil, dd), 7,35 (1H, d), 6,88 (1H. d). 6.03 (2H, s). 5.25- 5,15 (lil. m). 5,02 -4,90 (111, m). 4.63 - 4,45 (2H. m), 4.30 - 4.20 (IEL m). 3,57 - 3.30 (IH. m).3.20 3.05 (1H, m), 2,75 - 2,10 (51E m), 2.10 - 1,60(411, m).
Hmotová spektroskopie (ES ) 488 (Mý 25%), 487 (Μ - 1, 100), 443 (8), 387 (3), 315 (5), 150 (6), 127(5), 113(8).
Přesná hmotnost vypočtena pro ί%ΙΚΝ(O<> (MH ): 489.1621, nalezeno 489,1648.
21)
Sloučenina (450) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 214e za získání bílé pěno vile pevné látky (378 mg, 94 %): teplota tání 175 až 179 °C; fajn22 - 91,7° (e 0,1, methanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3700-2500 (široký), 3319. 1659. 1590, 1553. 1427, 1260;
'H NMR (perdeuteroinelhanol) δ 8.01 (IH, d), 7.74 (111. dd). 7,58 (III, d), 7,45 - 7.35 (IH, ui),
5.25 - 5,15 (111, m), 5,05 - 4.90 (1H. m), 4,60 - 4,45 (2H. m). 4.30 4.20 (1H. m), 3.55 - 3,30 (IH, m),3,20-- 3,00 (lH.m), 2,75 - 2,20 (511, m), 2,l4(3H. s), 2,20 - l,60 (4H).
Analýza pro CidEvNZN- E5 lEO:
vypočteno; C, 52.27; 11, 5,72; N, 13,25, nalezeno: C, 52,31; H, 5,86; N. 12,85,
Hmotová spektroskopie (ES‘) 501 (M , 26%), 500 (Μ1 1, 100),328 (2), 149 (3), 113(3).
Sloučenina (456) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 214e za získání bílé pevné látky (0,73 g. 72 %): teplota tání >260 °C;
(a]if° - 66° (c 0.34, methanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3401,2946. 1651, 1609, 1584, 1506, 1426, 1277, 1257, 1177;
'll NMR (pcrdcLiterodimethylsulfoxid) δ 10,02 (lil, velmi široký s). 9.17 (IH. široký s), 8.65 (IH, s), 8,37 (lil, d, J - 5,4). 7,81 (2H. d, J- 8,2), 6,87 (2IL d. J~ 8,4), 5.24 OH. m). 4.92 - 4,86 (1H. m). 4.41 4,32 (211, m), 3,68 - 3,21 (3H, m), 3,12 2,79 (1H, in), 2,50 i,42 (71L m).
Hmotová spektroskopie (ES ) 459.
Sloučenina (475) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 214e za získání bílé pevné látky (79 %): teplota tání 150 (měknutí) 190 až 210 °C;
- 193 CZ 300171 B6 [u]d2'' 97.5° (e OJ. methanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3319, 1658, 1650. 1549, 1421. 1256;
'H NMR (deuterochloroform) δ 7,61 (lil, d. J “ 8,0), 7.43 (III, d, J - 8.1). 7.21 (2H, m). 7.05 (IH, ni), 5.21 (IH, m), 5.07 4.77 (IH, m), 4,54 (2H, m). 4,23 (IH. m), 3.46 (IH. m), 3.14 (IH. m), 2.66- 1,71 (9H, m).
io Hmotová spektroskopie (ES , m/z), 482 (M - 1, 100%).
Sloučenina (404) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 214e za získání bílé pevné látky (0.79 g, 86 %): teplota tání 156 až 159 °C';
i? [α]ιΓ - 119,7° (e 0,1, methanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3700-2500 (široký). 3387, 3309. 2956, 1785. 1659, 1650, 1535. 1422. 1278;
2o 'H NMR (deuteromethanol) δ 7.46 (4H. m), 5,25- 5,15 (IH. ni), 5,02- 4.90 (111, ni),
4,58 - 4,45 (211. m). 4,30 - 4,20 (111, m), 3,55 - 3.30 (IH, m), 3,20 - 3.05 (1H. m). 2.80-2.20 (4H. ni). 2,41 (3H, s), 2,20 1,60 (5H. m).
Hmotová spektroskopie (ES'), 458 (M . 27%), 457 (Μ' - 1. 100). 413 (13). 339 (8). 285 (5), 134 (6). 127(11).
Přesná hmotnost vypočtena pro C22H27N (Ο7 (MH ): 459,1880, nalezeno 459,1854.
Sloučenina (486) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 214e za získání bílé pevné 50 látky (325 mg, 89 %); teplota tání 165 až 169 °C:
-69.1° (e 0,1. methanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3700-2500 (široký), 3318. 1658. 1599. 1530. 1505. 55 1407, 1258;
II NMR (perdeutcromelhanol) δ 7.85 (2H. d). 7,69 (211, d). 7.38 - 7,20 (511, tn). 5,25 - 5,15 (IH. ni). 5,05 -4,90 (IH. m), 4,57 - 4,45 (2H. m), 4,30 - 4,20 (1II, m), 3.70 (2H, s). 3.55 - 3,30 (1H. m), 3.20 - 3.00 (1H, m), 2,75 - 1.60 (91E m).
Analýza pro CiyH.^N^Oe. 1,5 H2O:
vypočteno: C\ 57,61; H. 5,67; N, 11.58, nalezeno: C, 57,81; H, 5,74; N. 11.47.
imotová spektroskopie (ES‘), 577 (M ý 33%), 576 (M+ - 1. 100). 502 (2).
4ς
Sloučenina (487) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 214e za získání bílé pčnovité pevné látky (335 mg. 93 %): teplota tání 176 až 180 °C;
ία],Γ - 88,0° (c OJ, methanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3700-2500 (široký), 3321, 2960, 1781, 1660, 1597, 1529, 1407, 1258, 1187;
- 194 CZ 300171 B6 'Η NMR (perdeuteromethanol) δ 7,86 (2H, d), 7,69 (2H, d). 5,25 - 5,15 (IH, rn), 5,05 - 4,90 (1H. m), 4,60 - 4,45 (2H, m), 4,30 - 4.20 (1H, m), 3,57 - 3,30 (1II. ni). 3.20 - 3,00 (III. m), 2.75 - 1,60 (I2H. m). 1.00 (6H, d).
Analýza pro CJlr.NsOi!. H2O:
vypočteno; C, 55,61; H, 6,28; N. 12.45, nalezeno: C, 56,00:11. 6.37; N, 12.15.
Hmotová spektroskopie (ES ), 543 (M , 31%), 542 (M+- 1, 100), 498 (2), 468 (3).
ld Sloučenina (417) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 214c za získání bílé pevné látky (0.63 g, 92 %): teplota tání 145 až 155 °C (přibližně, neostře);
[otji)2, - 114.6° (c 0,11. methanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3327, 1658, 1586. 1548, 1501. 1416. 1341, 1238. 1126;
'11 NMR (perdeuteromethanol) Ó 7.22 (2H. s). 5,21 (lil, m), 5,00 (111, m). 4,56, 4,49 (2H. 2m),
4.25 (IH. m). 3,88 (611, s). 3.80 (311, s). 3,55 - 3,43 ( lH,m), 3,12( IH.m), 2,71 - 1,70 (91 Em).
2o Analýza pro C24Hi()N4On). 2 i 1,0:
vypočteno: C, 50,52; (I, 6,01; N, 9,82, nalezeno: C\ 50,49; H, 6,05; N, 9.68.
Imotová spektroskopie (ES', m/z), 533 (M‘ - 1. 100%).
Sloučenina (408) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 214e za získání bílé pevné látky (73 %): teplota tání 157 až 165 °C (neostře);
[a]D 27 - 140.5° (e 0,1, methanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3325. 1658, 1531. 1420, 1278, 1257;
Ίΐ NMR (perdeuteromethanol) ό 8.33 - 8.28 (IH, m), 8,01 - 7,78 (214. m). 7,71 (IH, d. J-6.0). 7.59-7.52 (311, m), 5,27 (IH, m). 5,12 - 5,03 (lH,m). 4.55 (2H, m), 4,25 (111. m), 3.64 - 3.43 (IH, m). 3.24 3,12 (IH. m). 2.80 - 1.67 (9H, rn),
Analýza pro C25H26N.iO7, 2 ΗΌ:
vypočteno: C, 56.60; H, 5.70; N, 10.56. nalezeno: C, 56,70; 11, 5.80; N, 10.33,
Hmotová spektroskopie (ES , m/z), 493 (M-l, 100%).
Sloučenina (214w) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 214e za získání 210 mg (62 %) bílé pevné látky: teplota tání >260 °C;
[o.]i7 ’ - 93° (c 0,20, methanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3401,2948, 1651, 1604, 1559, 1486, 1421, 1325, 1276, 1210;
'11 NMR (perdeuterodimethylsulfoxid) δ 9.32 (IH, široký s), 8,29 (IH. d. J ~ 5.9). 7.55 (211, s). 5i) 6,64(111, d.J -6.1), 5,79 (ÍH, s), 5,25 5,21 (IH, m), 1,90- 1,82 (IH, m ),4,41 -3,69(2H, m),
3.47 - 3.20 (3H, m), 2,97 - 2,91 (111, m). 2,23 (6H, s), 2.25 - 1,60 (71L m).
- 195CZ 300171 B6
Sloučenina (550q) se připraví pomocí stejného způsobu jako sloučenina 213e za získání sloučeniny 550q.
Sloučenina (2l3y) se připraví pomocí stejného způsobu jako sloučenina 213e za získání sloučeniny 213y.
''O · ·,
OS
Sloučenina (412a) se připraví pomocí stejného způsobu jako sloučenina 550q za použití sloučeniny 513a—l za získání sloučeniny 412a.
Sloučenina (412b) se připraví pomocí stejného způsobu jako sloučenina 55()q za použití sloučeniny 513a-2 za získání sloučeniny 412b.
Sloučenina (412c) se připraví pomocí stejného způsobu jako sloučenina 55()q za použití sloučeniny 5136-1 za získání sloučeniny 412c.
Sloučenina (412d) se připraví pomocí stejného způsobu jako sloučenina 550q za použití sloučeniny 5136-2 za získání sloučeniny 412d.
H NMR (deuteroehloroform) δ 9.5 (III. d), 8,9 (1H, d), 8,5 (IH, d), 7,9 7.8 (211. m). 7,8 - 7,65 (211. m), 6.55 (IH, d), 5,55 (1H, d). 5,25 - 5.1 (2H, m), 4,75 - 4,65 (lil. m). 4.65 - 4.6 (IH. in). 4,4 4,3 (111. m), 3,25 - 3,15 (IH.m), 3,15 - 3,05 (IH, m), 2,95 2.8 (211, m), 2,55 - 2.4 (2H, m), 2,15- 1,5 (14H, m).
Sloučenina (412e) se připraví pomocí stejného způsobu jako sloučenina 550q za použití sloučeniny 513f-1 za získání sloučeniny 412e.
- 196CZ 300171 B6
Sloučenina (412ť) se připraví pomocí stejného způsobu jako sloučenina 550q za použití sloučeniny 513f- 2 za získání sloučeniny 412f.
Sloučeniny 410 a 412 se připraví pomocí stejného způsobu jako sloučenina 605 ze sloučeniny 604.
Sloučenina R1
502y, 410 O
502z, 412
Sloučenina (410) se čistí pomocí velmi rychlé chromatografie (5 až 25% methanol) v dichlormethanu) za získání 296 mg (94 %) bezbarvé pevné látky: teplota tání 90 až 200 °C;
m
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3338, 3096, 2950. 1787. 1726, 1657, 1546, 1420, 1279, 1258, 1125, 1092.984.933;
'H NMR (perdeuterometlianol) δ 8,41 (IH. d), 8.13 (111, d), 7,54 - 7.41 (3H, in), 7,20 (IH, d), iš 5,19-5.11 (1H, m), 4.54 - 4,30 (lil, m), 3,27 (l H, rn), 3,18 - 3,03 (1H. m), 2.81 - 2,64 (211, m),
2,56 - 1,59 (711, m).
Analýza pro C,9H23N,O7S. 2.5H2O:
vypočteno: C, 46.05: H, 5.49: N, 11.31,
2o nalezeno: C. 46.36; H. 5,25; N. 11.10.
Hmotová spektroskopie (ES ) 449 (Μ - 1. 80%), 113 (100). Přesná hmotnost vypočtena pro C1QH22,N4(LS(MH ): 451,1287, nalezeno: 451,1295.
Sloučenina (412) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 605 bílé sklovité pevné látky 25 (69 %): teplota tání 138 až 141 °C:
Ja]j<' - 105,5° (c 0,5, dichlormethan);
- 197CZ 300171 B6 infračervené spektrum (bromid draselný) 3375. 1787. 1659, 1515. 1421, 1278. 1256;
'Η NMR (deuterochloroform) 6 9,32 (llí, m), 8.79 (IH, m). 8.47 (IH. m). 7.86 - 7,64 (4H, m).
5,31, 5.18, 4.59, 4,37 (4 nebo 5H. m), 3,55 - 2,76. 2,49 - 2,39. 2.05, 1.65 (11II, 4m).
Analýza pro C24H2JM5O7J.5 H2O:
vypočteno: C. 55,17; H, 5,40; N, 13.40. nalezeno: C\ 54,87; H, 5.22; N, 13.15.
Hmotová spektroskopie (FS . m/z) 494 (M - 1. 100%).
Sloučenina (502y) se připraví stejným způsobem jako sloučenina 604 ze sloučeniny 603 za získání světle krémového prášku: teplota tání 120 až 180 °C;
15 ίαJi/' - 109° (c 0.18, dichlormcthan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3478, 3327, 1670, 1582, 1543, 1421, 1279, 1257, 1155;
'H NMR (deuterochloroform, perdeuteromethanol) δ 8,04 (IH. m), 7,49 (111, m), 7,38 (IH, m), 20 7.17 (lil. m). 5.17 5,01 (2H. m), 4,86 (1H, in), 4,61 -4,50 (III, m), 3.45 - 3,29 (2H, m).
3,21 - 3.03 (IH, m), 2.79 - 2,54 (3H, ni). 2.43 - 2,33 (111. m), 2,11 - 1,66 (5H, m), 1,44 (9H,s)
Analýza pro C^H^NjOjS. ΗΌ:
vypočteno: C, 49,56; H, 6,07; N, 16,86; S, 5.51, nalezeno: C, 49.51; II. 5.93; N, 16.31; S. 5.17.
Hmotová spektroskopie (FS) 586 (100%), 564 (M’ + 1, 1,59).
Přesná hmotnost vypočtena pro <?2.|Η·μΝ7Ο7$ (MH): 564,2240, nalezeno: 564.2267.
Sloučenina (502z) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 604 za získání světle žluté pevné látky (90 %): teplota láni 142 až 145 °C;
136,5° (e 0,06, dichlorniethan);
'H NMR (deuterochloroform) 5 9,51 - 9,46 (lil, m), 9,11 (1H, s), 8,83 {1H, d, J = 7,8), 8.53 (1H. d. J = 5.5). 7.89 - 7.83 <2H. m), 7,77 7.65 (2H. m), 7.55 (1H. d. J - 7,2), 7.18 (IH, d. J = 2.7),
5.26 - 5.12 (211, m). 4,87 (lil, 111). 4,59 (111, m), 3,25 - 3,12 (2H. m). 2,95 2.76 (211, m),
2.59 2.38,2,18 - 1,94, 1,70 (5H, 3m). 1,44 (9H. s).
198CZ 300171 B6
Sloučenina R4 1 R*
415a oc
415b
415c 05
214w-l 0 HoV CH3 05
214w-2 0 CH3yJL HO T ch3 ΖΊ0
214w-3 0 ΟΗίγγί ΗίΓγ CHa 05
214w-4 0 CH3^JL ho γ ch3 /Oj
214W-5 HO y CHa
214w-6 0 HOV CH3 Z°O
214w-7 0 CHj^sJL HCíV ch3 ,°O
412g Ví 05
412h OO
- 199CZ 300171 B6
Sloučeniny (415a), (415b), (415c). (4l5wJ), (214w-2), (214vv-3), (214w-4). (214w-5), (214w-6). (214w-7), (412 g) a (412h) se připraví stejným způsobem jako sloučenina 550q,
Sloučenina 415 se připraví způsobem použitým pro přípravu sloučeniny 2002 ze sloučeniny 2001 5 za získání sloučeniny 415,
Sloučenina 214w se připraví způsobem použitým pro přípravu sloučeniny 2002 ze sloučeniny 2001 za získání sloučeniny 214w.
O
(2100k-o)
'Sloučenina R
2100k ''Ti
21001 °O
2100m '--CO
2100n
2100ο 'T
- 200 CZ 300171 Bó
Sloučenina (2IOOk) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 213e za získání směsi di[alD 2> - 96° (c 0,2, diehlorrnethan):
Infračervené spektrum {bromid draselný) 3328. 2935,2978, 1732. 1669. 1603, 1483, 1450. 1414, 1237. 1155. 1082,989, 755:
'11 NMR (deuterochloroform) 6 7,84 - 7,80 {21I, m), 7,54 - 7,17 {811, m), 7,06 - 6.99 (1H. m), io 6,25 (IH, d, J= 7.9H), 5,41 (0.75H, d, J 5.4H). 5.31 (0,25H, široký s). 5.23 5,09 (IH.m),
4,93 - 4.87 (IH, m). 4,68- 4.51 (2H, m). 4.40 - 4,33 (0.2511, m), 4.24 - 4.14 (0.75H. m). 3,95 - 3.70 (lil, m). 3.30-3.13 (III. m), 3,14-2,78 (5H, m). 2,47 - 2.21 (211, m). 2.05- 1,50 (5H.m).
Analýza proE2N4O7. 0,5 II2O:
vypočteno: C. 62.47; H, 5.97: N. 10,05, nalezeno: C, 62,17; H, 5,83; N. 9.97.
Hmotová spektroskopie (ES ) 549.
Sloučenina (21001) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 213e. (74 %) jako bezbarvá pevná látka: teplota tání 172 až 180 °C;
jajif'1 - 91.5° (c 0,1, diehlorrnethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3290, 1792, 1677, 1657, 1642, 1544, 1425, 1280, 1259, 1124,977;
'11 NMR (deuterochloroform) δ 7,80 (2H. m). 7.46 (3.5H, m). 7,00 (IH. d, J - 6,7), 6,48 (0,511, d. J - 7,9), 5,55 (0.5H, d, J = 5,3), 5,19 (211, s ( m). 4,93 (0.5H, m). 4,62 (1,511. in). 4.34 .to (III, m), 4.18 (0.5H, in), 3,28 - 2,70 (4H. m). 2,49 - 2.29 (21 i, m). 2,05 - 1.48 (511. m).
Sloučenina (21 OOm) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 213c, (76 %) jako bezbarvá pevná látka: teplota tání 140 °C, přetaveno 187 až 189 °C;
[eth/' - 96,9° (e 0,11, diehlorrnethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3507. 3308, 3251. 1772, 1660, 1641, 1566. 1545, 1457, 1424. 1346, 1326. 1302, 1275, 1258. 1 136, 1085, 1018,981;
411 'HNMR (deuterochloroform) δ 7,78 (2H. m). 7,53 (311, m), 7,19 (411. m), 6,91 (III. d, .1 = 7,4),
6.27 (IH. d, .1- 7,6), 5,66 (III, d. J = 5,3), 5,10 (IH, m), 4,96 (IH.m), 4,75 (2H, m), 4.52 (IH, in), 3,08 (3H, m), 3,03 - 2.71 (511. m). 2.48 - 2.31 (2H. in), 1,90 - 1,40 (4H.m). 1,22 (IH, rn).
Sloučenina (2100η) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 213e za získání bílé sklovité pevné látky (76 %): teplota tání 112 až 1 15 °C;
[α][Λ - 62,0° (c 0,1, diehlorrnethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3305, 1789, 1677, 1665, 1535, 1422, 1279, 1256. 1119, 942, 700;
Ή NMR (deuterochloroform) δ 7,84 (211, m), 7,58 - 7,27 (9H, m). 6,99 (IH, d, J - 7,8), 5,23 (lll.s), 5,23 - 5,11 (IH, m), 4,89 (1H, m), 4.76 (IH, d. J - 11.3), 4,55 (1H. d. J- 11,4).
-201 CZ 300171 B6
4,58- 4,43 (2H, m). 3,302,96. 2,81 - 2.69, 2,46 - 2,37. 2,16 - 1,66 (1011,4m). 2.27 (IH, d, J - 17.8).
Analýza pro CSJ EoN40-. 0,5 H2O:
vypočteno: C, 61.87; H, 5.75: N. 10,32.
nalezeno: C. 61,88; H. 5.70: N. 10,33.
Hmotová spektroskopie (ES', m/z) 535 (M + 1. 100%).
Sloučenina (2l00o) (obsahující asi 7 % (2S)). se připraví podobným způsobem jako sloučenina io 213e za získání bílé sklovité pevné látky (83 %): teplota tání 115 až 117 °C:
[aji)1' - 121.8° (e 0,11. díchlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3326. 1792, 1659, 1535. 1421, 1278, 1257, 1124,978;
'H NMR (deuteiochloroforin) δ 7,82 (211, m). 7.58- 7,24 (8H. in). 6.90 (lil, d, J = 7,3), 6,49 (IH. d, J - 7.7). 5,57 (III, d. .1 = 5.5), 5,11 (2H, m), 4,91 (III. d, .1 = 11,4), 4.57 (III. d. J = I l.l). 4,81 - 4.68 (III. in). 4,65 4,54 (111, m), 3.18 - 2,71,2,52 - 2,30, 2,05 - 1.62 (1111. 3m).
Analýza pro C^HwNjO?. 0,5H2():
vypočteno: C. 61.87; H, 5,75; N, 10.32, nalezeno: C. 61,70; H, 5,71; N, 10,15.
Hmotová spektroskopie (ESm/z) 535 (Μ + 1,94,3%), 557 (100%).
Sloučenina (550n) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 213e za získání směsi diastereoizomeru (65/35) jako hnědého prášku (390 mg, 28 %): teplota tání 139 až 145 °C;
[íxJi< - 104° (e 0.2. methanol);
infračervené spektrum (bromid draselný) 3318, 2405, 2369, 1792. 1660. 159!. 1549, 1484. 1422, 1257. 1117;
'li NMR (perdeuterodimethylsLilfoxid) δ 10,1 (IH, s), 8,80 (0,6511, d, ,1 - 6.6). 8.58 (0,35H, d, J - 6,6). 8.59 (1H, d, J = 7,0), 8,06 (IH, široký s), 7.83 - 7,79 (IH, m), 7,61 - 7,57 (IH, m).
7,47 - 7,39 (IH.m), 5,61 <0,35H. d. J 5,0), 5,37 (0,6511, široký s). 5,17 - 5.14 (0,3511, m),
5,08- 5,06 (0.65H, m), 4,92 - 4,86 (IH, m), 4,67 - 4,61 (0,35H, m). 4,47 - 4,41 (0.65H, m). 4.28- 4.11 (IH, 2m). 3,80 - 3,59 (2H, m), 3,23 - 2.75 (3H, ní), 2.61 - 1.48 (7H, m), 2,10 (311,s), 1.25a 1,17(311, 2t, J - 5,8).
-202 CZ 500171 B6
Hmotová spektroskopie (ES ) 528.
(550o)
Sloučenina (550o) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 213e za získání bezbarvé pevné látky (1,07 I g, 80 %): teplota tání 155 až 170 °C:
|a]n - 75.8° (e 0,26. dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3314. 2941, 1791, 1658. 1545. 1420. 1341. 1312. 1252. 1118,939,749;
'li NMR (deuterochloroform) 6 9.45 (0.5H. s). 9,34 (0,5H, s). 7,68 - 7,62 (111. ni), 7,49 7,39 (2H, m). 7.33 - 7,26 (1H, m), 7,18 - 7,03 (3H, m). 5.49 (0,511, d). 5.30 (0.5 H. s), 5,26 - 5,13 (lil, m). 4,90 - 4.83 (0,511, m). 4.76 - 4,49 (111, m), 4.42 - 4.35 (0.511, ni), 3,97 - 3,74 (1H, m), 3,72 - 3,53 (IH. m), 3.35 - 2,64 (411, m). 2,50 - 2,37 (1Π, m), 2.20 - 1,82 (5Π, m), 1,69 - 1,50 (2H,m), 1,30- 1,19 (3H. m).
Sloučenina (550p) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 213e za získání směsi diastereoÍ7omerú jako bílé pěny (820 mg. 47 %):
2o [aJ[>?J - 75° (c 0,16, dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3401, 2937, 1791, 1657, 1609, 1539, 1505, 1423. 1277, 1177, 1118;
'H NMR (deuterochloroform) δ 8,07- 8.05 (IH, m), 7,67 (2H, d, J = 7,9). 7,38 - 7,29 (211, m), 6,80 (2H, d, J - 8,5), 5,49 (0,5H, d. J = 4,6), 5,23 (0,511. široký s), 5,24 - 5,20 (III, m). 5,12 5,08 (IH, m), 4,68 - 4,29 (2H. rn). 3,92 - 3,45 (3H, m), 3.32^- 2.30 (2H, m). 2,80 - 1,56 (11H, m), 1.21 (311, t, J - 7.0H).
- 203 CZ 300171 B6
MeSQz-
(504a-e) (503a-e)
Í286, 505b^l
-204 CZ 300171 B6
Sloučenina (503a) se připraví ze sloučeniny 212b a (3S.4R) t—butyl—(N—al1yloxykarbonyl)_3— amino-4-hydroxy-5-(l-naťtoyloxy)pentanoátu pomocí postupu popsaného pro sloučeninu (213e) za získání 533 mg (81 %) bílé pény:
[a]D 22 81,4° (e 0,5. dichlormethan):
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3342, 2976,1719, 1664, 1328. 1278, 1246, 1153. 1137.
'11 NMR (deuterochloroform) 6 8,86 (IH, d, .1 - 8.4). 8,21 (IH. dd, J - 1,3, 7.3). 8.03 (III. d. io J = 8.1). 7,88 (lil. d, J = 8,6), 7,66 7.45 (311, m). 7,23 (lH,d. J - 8,6), 5,96 (11-1, d, J - 9.2).
5.30 (1H, m), 4,59 - 4,33 (51 i, m). 4.24 (1H. m), 3,96 (1H, široký d). 3,29 (11I, m). 2.95 (1H. rn).
2,93 (311,s), 2,69 -2.50 (3H, m), 2,36 (IH. m). 1,96(411, m), l.62(IH,m), 1,41 (9H, s).
Analýza pro C3iH.10N1O|()S. 0,25 ITO:
vypočteno: C, 55,97; H, 6.14; N. 8,42, nalezeno: C, 55.90; H. 6.11; N, 8,23.
Hmotová spektroskopie (ES ) 683 (M+Na. 100%), 66! (M+1,39). 605 (78).
Sloučenina (504a) se připraví ze sloučeniny 503a pomocí postupu pro přípravu sloučeniny 216e 2o ze sloučeniny 215a za získání 446 mg (9 [ %) bezbarvé pěny:
[ují/1 - 111,6° (c 0.5, dichlormethan):
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3319, 2978,2936, 1723, 1670, 1413, 1370, 1329, 1278, 2? 1246.1153.
'H NMR (deuterochloroform) δ 8,87 (IH. d. J 8.9). 8.29 (IH, dd.J - 7,2). 8.06 (IH. d, J - 8.3). 7.90 (IH, d. J = 8,2). 7.66 - 7,48 (3H. m). 7.37 (111. d. J = 8,1), 5.61 (111, d, .1 = 9,0). 5.31 (IH.m). 5.22 (111, AB, .1 = 16,9). 5.09(111, AB. J - 16,92), 4,99 (IH.m). 4.65 - 4.43 (2H, m), 3,28(111, m). 2,96 (3H, s), 2,86 (2H, m), 2.59(111, m), 2,38 (lH.dd. J = 6,8, 13,2), 2.21 - 1,70 (6H. m). 1.45 (911. s).
Analýza pro CπI bsNjOmS. 0.25 IbO:
vypočteno: C, 56,14; H. 5.85; N, 8,45, nalezeno: C, 56,11; H, 5.83; N, 8.29.
Hmotová spektroskopie (ES ) 657 (Μ E 100%).
Sloučenina (286) se připraví ze sloučeniny 504a podobným způsobem jako sloučenina 217 za získání 356 mg (93 %) bílého prášku: teplota tání 120 až 123 °C;
[txjf/1 - 121 ° (e 0,194. dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselnv) 3314. 2937, 1722. 1663. 1412. 1328, 1278, 1245, 1195. 1132.
{H NMR (perdeuterodimethylsulfoxid) Ó 12,63 (IH, široký s), 8,94 (IH, d, .1 - 7,4), 8.78 (IH, d. .1 = 8,6), 8,26 (211, ni). 8,11 (111, d, J = 8,0), 7,77 - 7,62 (4H, m), 5.28 (2H, s). 5,21 (IH, ni), 4,82 (Hl, m), 4,44 4,29 (211, m), 3,31 (111, m), 2,98 (3H, s). 2,98 - 2,86 (2H, ni). 2,72 (IH, dd,
J = 7,3, 16,9), 2,40 (1H. m), 2,24 - 1,84 (4H, ni), 1,69 (2H, ni).
Analýza pro CRvHwNjOidS.HiO;
vypočteno: C. 52,25; 11, 5,20; N. 9.03.
nalezeno: C. 52.11; H, 4,97; N. 8,89.
- 205 CZ 300171 B6
Hmotová spektroskopie (ES‘) 601 (M-k 100%).
Sloučenina (503b) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 213e za získání bílého prášku (671 mg, 88 %): teplota tání 90 až 120 °C:
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3345, 2977.1727. 1664, 1532, 1450. 1423, 1369. 1323, 1310. 1276, 1257. 1154. 1101,990, 766;
'H NMR (deuterochloroform) δ 7.61 -7,55 (2H, m), 7.51 - 7.42 (311. ni). 6.86 (IH, d), 5.69 to (111. d). 5,21 (IH, ni), 4.64 - 4,38 (2H. m). 4,15 - 4,05 (3H, m). 3.84 (lil, s), 3,31 3.14 (2H.ni), 2.97 - 2.87 (lH,m). 2.94 (311. s), 2,76 (311. s). 2,64 - 2.48 (3H. m). 2,39 - 2.29 (1H, m). 2,04- 1.61 (511. m).
Analýza pro C%1 141N50uS. H2():
vypočteno: C. 52,46; H. 6.11: N, 9.87; S, 4,52, nalezeno: C, 52,34; H, 5.92; N, 9,56; S, 4,44.
Hmotová spektroskopie (ES') 714 (47%). 692 (M +1, 84), 636 (100).
Sloučenina (504b) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 216b za získání bezbarvého prášku (601 mg, 93 %): teplota tání 75 až 115 °C:
[ajif' - 104° (c 0.26. diehlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3324, 2977.2935, 1730. 1670, 1525. 1452. 1422, 1369,
1 3 1 7, 12 76. 12 5 6, 12 22, 1155, 1107 , 990, 766;
'H NMR (deutcrochloroforoi) δ 7,68 7,61 (2H. m), 7,47 - 7.38 (311. m). 7.32 - 7.24 (IH. m).
5.56 (IH, d), 5,36 - 5.24 (IH. m). 5.04 (IH, d). 4,88 (III. d). 4,86 - 4.77 (IH. in). 4.64-4,39 (211. m). 3.32 - 3.17 (lil, m). 2,97- 2,85 (III, m). 2.93 (3H, s). 2,76 (311. s). 2,80 - 2.71 io (IH. ni).2,65 -2,49 (lH.m), 2,41 -2,30 (1H. m), 2.12 - 1.61 (6H. m). 1,42 (9H. s).
Analýza pro CNi HAECh |S. I kO:
vypočteno: C, 52.61: Π, 5,84; N, 9,90; S. 4,53. nalezeno: C, 52.94; 11. 5.69; N, 9,72; S, 4.51.
Hmotová spektroskopie (ES ) 712(31%), 707(100), 690 (M + 1.41),634 (55).
Sloučenina (505b) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 217 za získání bezbarvého prášku (499 mg. 96 %): teplota tání 95 až 145 °C;
io [otjif2 - 137° (e 0,12, methanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3323, 2936, 1732. 1665. 1529, 1452, 1421, 1312. 1275, 1256, 1221, 1183, 1153, 1135, 1101.990;
*H NMR (perdeutcromethanol) δ 7.67 - 7,56 (2H, rn), 7,49 - 7,38 (411, m), 5.23 5.12 (i Π. ni).
5,02 (111, d), 4.79 - 4,73 (1H. m), 4.52 - 4.34 {3H, m), 3,48 - 3,25 (2H, m). 3.03 - 2,85 (2H, m).
2,94 (3H, s), 2.74 (3H, s), 2,79 - 2.66 (IH, m), 2,52 - 2,38 (IH, m), 2,29 - 2.14 (IH, in). 2,04 - 1.70 (4H,m).
?o Analýza pro CAkiNsOi |S. H2O:
vypočteno: C. 49,77; H, 5,18; N, 10,75; S, 4,92, nalezeno: C, 49,8.3; H, 5,01; N. 10,27; S, 4,84.
-206 CZ 300171 B6
Hmotová spektroskopie (ES ) 746 (42%), 632 (Μ- 1, 100). 386 (60). Přesná hmotnost vypočtena pro C 17lE?N?O! ,S (MH ): 634. 1819, nalezeno 634,1807.
Sloučenina (5O3e) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 213a za získání bezbarvé pevné látky (446 mg, 84 %):
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3345, 2976, 2935, 1727, 1664. 1603. 1535, 1483. 1451, 1416, 1395. 1369, 1328, 1297, 1277. 1237, 1155. 1135. 1076,990, 755;
Ή NMR. (deuterochloroform) δ 7,98 - 7,89 (IH, m), 7,55 - 7.45 (1H. ni). 7,39 - 7,18 (3H. m), 7,14 - 7,07 (1H. m), 7,00 - 6.90 (3H. m). 6,75 (1 H, d), 5,57 - 5,50 (1H, m). 5.21 - 5,09 (1H. m). 4,64 4.42 (211, m), 4.36-4,12 (3H, m), 3,95 - 3,87 (1H, m), 3.39 - 3,18 (ΗI. m). 3,00-2.82 (1Π, m), 2,95 (311. s), 2,69 - 2.48 (311, m). 2,42 - 2.28 (IH, rn), 2.07 1.62 (611. ni), 1.42 (9H. s).
Analýza pro C^H.jjNjOhS. H2O:
vypočteno: C. 54,99; II, 6,15; N. 7.77: S. 4,45, nalezeno: C. 54,95; 1 i, 5,95; N. 7.34; S, 4.20.
Hmotová spektroskopie (ES ) 725 (26%), 720 (47), 703 (M' + 1,34).433 (100),403 (99).
Sloučenina (504c) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 2 lbe za získání bezbarvého prášku: teplota tání 85 až 100 °C:
[α|ι/? - 91.3° (c 0.52, dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3328. 2978, 2935, 1732, 1669, 1603, 1524. 1483, 1450, 1396, 1360, 1296, 1276, 1237, 1155, 1132, 1082, 989, 755;
H NMR (deuterochloroform) δ 8,03 - 7,98 (IH. m). 7,52 - 7,44 (11E m), 7.37 7,07 (5Π, m).
to 7.01 6.92 (3H, m), 5.52 (III, d), 5.28 - 5,20 (1H, m), 5.06 - 4,84 {3H. m). 4,64 - 4,39 (2H. m),
3.32-3,14(111, m). 2,99 2,88 (1H, rn). 2.94 (311, s), 2,65 2.45 (2H, rn), 2.39 - 2.29 (1H, n),
2.12- 1,58 (6H.m), 1,40 (9H,s).
Analýza pro CulhoNjOnS:
vypočteno: C, 56,56; H, 5,75; N. 8.00; S, 4,58.
nalezeno:C, 56,37; 11. 5,84; N. 7,69; S, 4,37.
Hmotová spektroskopie (ES ) 723 (30%), 718 (100), 701 (M + 1,23). 645 (59).
Sloučenina (505c) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 217 za získání bezbarvé pěny 4o (252 mg, 72 %): teplota tání 90 až 125 °C;
[«]d 1 - 133° (c 0,11, methanol); Infračervené spektrum (bromid drasclnv) 3314. 2938, 1792. 1734, 1663, 1604, 1535. 1483. 1448, 1415. 1250. 1132, 756;
'H NMR (perdeuterodimcthvlsulfoxid) 6 8.81 8,76 (IH, m). 7.92 (1Π. d), 7,68 7.54 (211, m),
7.41 7,25 (3H, rn), 7.16-6,91 (4H, m), 5,13-4,98 (21E m), 4.72 - 4,63 (IH, m). 4,37 4,21 (211, m), 2,92 (311, s), 2,90 2.60 (3H, m). 2,35 - 2.26 (1H, m). 2.17 - 2,05 (2H, m), 1,99 - 1,80 (2H.m). 1,61 - 1.50 (1H, m).
Analýza pro C29H52N4O11S, 0,5 1EO:
vypočteno: C, 53,29; H, 5,09; N, 8,57; S, 4,90, nalezeno: C. 53,57; H, 5,18; N, 8,32; S, 4,75.
- 207 CZ JUU171 B6
Hmotová spektroskopie (ES ) 643 (Μ - E 100%).
Sloučenina (5O3d) sc připraví podobným způsobem jako sloučenina 213e za získání bezbarvé pevne látky (563 mg, 90 %):
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3349, 2978,2935, 1724, 1664. 1583. 1536, 1489. 1443, 1370. 1327. 1271. 1226, 1189, 1155, 1073,990, 755;
'H NMR (deuterochloroform) 6 7,77 (IH. d). 7,67 (IH, m), 7.45- 7,10 (6H. m). 7,00 (21L d). io 5,93 5,80 (IH, m), 5,36 - 5.30 (1IL ni), 4.63 4,24 (51L m), 4,15 - 4.09 (IH. m). 3.37 - 3.22 (1H, m), 2,98 - 2.74 (1H, m). 2,94 (3H. s). 2.70 - 2.47 (3H, ni), 2,40 - 2,30 (Ί H, m), 2,15-1,60 (5H,m). 1.42 (911. s).
Analýza pro CJlrNAA,S. 1EO: i? vypočteno; C. 54,99; H, 6,15; N, 7,77; S. 4,45, nalezeno: C, 54,60; H. 5.88; N, 7.49; $. 4,50.
Hmotová spektroskopie (ES ) 725 (19%), 720 (91), 703 (Μ ι I. 74). 647 (76), 629 (100), 433 (78).
?.o Sloučenina (504ti) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 21 óe za získání bezbarvého prášku (466 mg. 85 %): teplota tání 75 až 100 °C;
[cxjn“ - 99,3° (e 0.60, dichlormethan);
?5 Infračervené spektrum (bromid draselný) 3335, 2978, 2937, 1728, 1669. 1584. 1525, 1487, 1444,
1416. 1369, 1328, 1272. 1227, 1188, 1155,989. 754;
Ή NMR (deuterochloroform) 6 7,82 - 7.77 (1H. m), 7.66- 7,65 (IH, ni). 7.46 - 7.32 (4H, m), 7,26 - 7,10 (2ll.ni), 7.04 6,98 (2H, in), 5.68 (IH, d). 5.37 - 5,31 (IH.ni), 5.11 (III. d). ni 5,02 - 4,88 (2H. ni). 4,66 - 4,42 (2H. m), 3,35 - 3,17 (IH. ni). 2.98 - 2.89 (III, ni). 2,96 (3H. s),
2.84 - 2.78 (111, iii),2,72 - 2,47 (IH. m), 2,42 - 2,32 (IH. ni). 2.14 - 1,58 (6H. ni). 1,43 (9H, s).
Analýza pro C^H^NiOnS:
vypočteno: C\ 56.56; 1 k 5,75; N, 8,00.
nalezeno: C, 56,36; H, 5,82; N, 7,71.
Hmotová spektroskopie (ES ) 723 (56%), 718 (90), 701 (M + 1. 36). 645 (100).
Sloučenina (5O5d) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 217 za získání bezbarvé penv (353 mg, 73 %): teplota tání 80 až. 115 °C:
4(1 (α]υ 2' - 138° (c 0,11, methanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3327, 2937. 1728, 1666, 1584, 1529. 1487. 1443, 1413,
1328, 1273, 1227, 1189. 1155, 1134,989, 754;
Ί-l NMR (perdeuterodimethylsulfoxid) δ 8.82 (IH, d). 7,76 7,72 (III, m). 7,61 7.53 (211. m),
7,48 7.32 (4H, tn). 7.24 - 7.17 (IH. ni). 7,11 - 7,06 (211, ni). 5.14 - 5,06 (311. ni), 4,73 4.64 (III, m). 4.38 - 4,24 (2H. m). 2,92 (3H, s), 2,89-2,61 (3H. til), 2,38 - 2,27 (IH. ni), 2,19-2,06 (2H.m), 2.02 - 1,79 (311, m), 1,63 - 1.52 (IH, m).
Analýza pro C29l I.^NjOi1. 0,5 11 A):
vypočteno: C, 53,29; H, 5,09: N, 8,57; S. 4,90, nalezeno: C. 53,24; H. 5,14; N, 8,34; S, 4,86.
-208 CZ 300171 B6
Hmotová spektroskopie (ES ) 643 (Μ - 1, 100%). 385 (62).
Sloučenina (5O3e) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 213e za získání bílé pevné látky (70 %): teplota tání 100 až 103 °C;
[α]ι< - 84.0° (c 0,05. dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3459-3359, 1722, 1664. 1514, 1368, 1328. 1278, 1247. 1155;
io
H NMR (deuterochloroform) δ 7.52 (IH, m), 7.06 - 6.99 (2H, m), 5,69 (1I-I, d, J = 9,0). 5,23 (IH. m), 4,61 - 4,16 (611, ni). 3.36 - 3,19 (IH, m), 2,96 (311, s). 2.67 - 2,49. 2,42 - 2.32. 2.06 1.89, 1,69 {10H. 4m). 1,43 (9H,s).
Sloučenina (504e) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 216a za získání bílé pevné látky (98 %): teplota tání 91 až 98 °C;
[α]ιΛ - 112,5° (e 0,06, dichlormethan);
2o Infračervené spektrum (bromid draselný) 3453-3364, 1727, 16613, 1513, 1420. 1368, 1245, 1155;
'H NMR (deuterochloroform) δ 7.54 (III. d, .1 - 5.3), 7,18 (1 El, d, J - 7,18), 7,05 (1H, d. J - 5,4). 5.42 (IH, d, J = 8,9), 5,25 (111, m), 5,02 (211, m), 4,96 - 4.87 (11E m), 4,65 - 4.42 (2H, m), 3.34- 3.17 (IH, m), 2,97 2,93 (IH. m), 2,97 (311, s). 2,87 - 2,78, 2,73 - 2,50. 2,38 - 2,32,
2 4 3 - 1.88, 1,69 - 1,60 ( 911, 5m), 1,44 (91 Es).
Sloučenina (5O5e). Roztok sloučeniny 217 (0,33 g. 0,51 mmol) v suchém diehlormethanu (3 ml) se ochladí (led/voda) bez přístupu vlhkosti. Za míchání se přidá kyselina trifluoroctová (2 ml). Roztok se odstraněním chladicí lázně udržuje 2 hodiny pří teplotě místností, potom se odpaří ve vakuu. Zbytek se třikrát odpaří z diehlormethanu, trituruje diethyletherem a filtruje. Pevná látka se čistí pomocí velmi rychlé chromatografie (silikagel. 0 6 % methanol v diehlormethanu) za získání produktu jako bílé sklovité pevné látky (0,296 g, 98 %); teplota tání 110 až 122 °C;
- 163.5° (e 0,1. methanol);
Infračervené spektrum (bromid draselně) 3514-3337, 1726, 1664, 1513, 1420, 1245, 1152. 1134. 990;
'H NMR (perdeuteromethanol) δ 7,79 (IH, d, J= 5,2), 7,12 (lil, d, .1 5,2), 5.20 (IH, rn).
4o 5,02 - 4,72 (2H, m, překryto vodou), 4,59 - 4.32 (3H. m). 3,48 - 3,29, 3.08 - 2.75, 2,50 - 2,41, 2.31 - 2.22,2,08 - 1.89, 1,72 - 1,63 (1111, 6m), 2.95 (311,s).
(5Q6a-c,g) (507a-c,g)
-209
CZ .300171 B6
Sloučenina πι
R
506a 507a PhC(Ol-
506b 507b MeS(0)2’
506c 507c MeOC(O)-
506g 507g CH3C(O)-
Sloučenina (506a). Roztok sloučeniny 212e (321 mg, 0,929 mmol) a (3S) i- butyI-3-amino 5 diazo-4-oxopcntanoátu (198 mg, 0,929 mmol) v dichlormethanu (3 ml) se ochladí na 0 °C a přidá se N,N-diisopropylethylamin (0,16 ml. 1.86 mmol) a [2-( 11 l-bcnzotriazol-l-y 1)-1,1,3.3-tetra5 methyl uroň iumtetrafluoroborát (328 mg, 1,02 mmol). Roztok se míchá přes noe při teplotě místnosti, zředí se ethylacetátem a promyje 1M roztokem hydrogensíranu sodného (dvakrát), vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (dvakrát), solankou, suší se nad síranem horečnatým a odpaří. Po chromatografií na silikagelu za clucc ethylacetátem se získá sloučenina 506a (425 mg, 85 %)jako bezbarvá pěna, io laji)'1 124.9° (c 0.2, diehlormethan);
infračervené spektrum (bromid draselný) 3332. 2111, 1728, 1658, 1532, 1421. 1392. 1367. 1279, 1256, 1155;
íl NMR (deuteroehloroform) δ 8,82 (211. m). 7.49 (311. m). 7.28 (lil. d, .1 - 9.3). 7.05 (IH. d, J - 7.3). 5.06 (IH. $). 5.18 (2H. nt), 4.78 (IH. m). 4,62 (IH, m). 3.29 (IH. tu). 3,08 - 2.79 (311. ni). 2.58 (IH. dd. J = 16,8, 5,6), 2.20 1,85 (411, m), 1,70 (III. m). 1.45 (911, s).
1 Imotová spektroskopie (ES ) 539,59 (M - 1.97,9%), 529,59 (100).
Sloučenina (506b) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 506a, 74 % jako oranžová pevná látka: teplota tání 75 °C (za rozkladu);
loji)'' - 92.0° (c 0,036, diehlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3438, 2904,2113, 1728, 1669, 1523, 1368, 1328. 1155;
'11 NMR (deuteroehloroform) 6 7,48 (1H. d, .1 - 8,1), 5,83 - 5,68 (lil, m), 5,55 5,50 (IH, m), .o 5,43 - 5,14 (1H, m). 4,83 - 4,45 (311, m), 3,40 - 3,19 (1H. m), 2,98 (3H. s), 2.92 - 2.30 (411, ní),
2,24 - 1,70 (611, m). 1.43(911, s).
Sloučenina (506c) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 506a za získání světle žluté pěny (405 mg, 82 %):
[a],/’ - 144° (c 0,2, diehlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3339, 2978, 2958, 2112, 1728, 1674, 1530, 1459, 1415. 1367, 1274, 1252. Í154, 1063;
-210/ /. JIM) 171 Bb 'li NMR (deuterochloroform) δ 7,23 (IH, d, J = 8,2), 5,51 - 5.31 (2H. m). 5,21 —5.16(1 H, m). 4,77 - 4.55 (3H. m), 3,68 (3H. s), 3.35 - 3,18 (1H. m), 3,04 - 2,51 (4H, m), 2,40 2,30 (1II. m), 2.09- 1,66 (5H, m), 1,45 (9H, s).
Hmotová spektroskopie (ES ) 493.
Sloučenina (506 g) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 506a, 81 %:
io - 146.7° (c 0,4. dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3438. 2904,2113, 1728. 1669, 1523. 1368, 1328, 1155;
Ή NMR (deuterochloroform) 6 7,32 (IH. d). 6,43 (IH. d). 5,50 (IH. s), 5,22 (111. m). 4.94 (111, m). 4.77 (IH. m), 4,60 (IH. m), 3.24 (lil, m), 3.03 - 2.52 (411. m), 2,36 (IH. m),
2.10 - 1,64 (5H. ní), 2,02 (3H, s), 1,45 (9H, s).
Analýza pro CiiH^N^O?:
vypočteno; C, 52,69; l i, 6,32; N, 17,05, nalezeno: C, 52,51; H, 6,27; N, 17,36.
Hmotová spektroskopie (ES')477 (M' - I, 100%).
Sloučenina (507a). Sloučenina 506a (3,0 g. 5.55 mmol) v suchém dichlormethanu (40 ml) se ochladí na 0 °C a během 4 minut se přikape 30 % kyselina bromovodíková v kyselině octové
2? (1,1 ml, 5.55 mmol). Směs se míchá 9 minut při 0 °C a rozloží se vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného. Produkt sc extrahuje do ethylacctálu, promyje vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, solankou, suší se nad síranem horečnatým a odpaří za získání 2,97 g (92 %) jako bezbarvé pěny;
so [«][/' - 82.3° (c 0,23, dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3333, 1726, 1659, 1530. 1458. 1447, 1422, 1395. 1368, 1279, 1256. 1222, 1155, 728;
H NMR (deuterochloroform) Ó 7.81 (2H, rn). 7,50 (311, ni), 7.11 (IH, d, .1 = 8,0), 7,01 (IH, d. J — 7.4). 5.20 (211, m), 5.00 (IH.m). 4,06 (2H. s), 3,28 (IH, ní). 3,20 - 2,70 (4H, ni). 2.42 (IH, m), 2.10- 1,85 (4H,m), 1,72 (IH.m), 1,44 (9H,s).
Analýza pro CicH^N jCbBr. 0,7 ΗΌ: to vypočteno: C\ 51,53; H, 5,72; N, 9,24.
nalezeno: C, 51,55; H. 5.52; N, 9,09.
Imotová spektroskopie (ES ) 595, 593 (M i- 1).
Sloučenina (507b) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 507a, (68 %) jako oranžová pěna:
[a]- 135° (e 0.053, dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3429, 2944, 2935. 1723. 1670. 1458. 1408. 1327, 1225,
1154.991;
-211 CZ 5UU17I B6 'H NMR (deuterochloroform) δ 7,38 (IH, d. J - 8,2). 5,69 (IH, d. J = 9.3). 5.43 - 5,34 (IH. m). 5,07 - 4,97 (1H, m), 4,70 4.42 (211. m). 4.12 (2H. s), 3.35 - 3,17 (IH, m). 3.10 2.69 (4H, m), 2,98 (3H. s). 2,43 - 2,33 (IH. m), 2,15 - 1.65 (511, m), 1.43 (9H. s).
Analýza pro CCoHíiBrNjOsS:
vypočteno: C. 42.33; II, 5,51; N. 9,87, nalezeno: C, 42,69; H. 5.52; N, 9,97.
Sloučenina (507c) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 507a za získání světle žluté pěny (320 mg. 78 %):
107° (e 0,2. dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3401.2956, 1726, 1670, 1528, 1452, 1415. 1395. 1368, 1276, 1251, 1155. 1064;
'H NMR (deuterochloroform) δ 7,07(1 H. d. J ' 7,6), 5,47 (IH. d, J -8.1). 5,21 - 5,16(111. m). 5.03 4.94 (III, ni), 4,75 - 4.56 (2H, m). 4.06 (211. s). 3.69 (3H. s), 3,31 - 3.13 (IH. m). 3.03 -2,92 (2H. m), 2,81 -2.58<211. m), 2,41 -2,31 (IH. ni), 2.10 - 1.66 (5H. m), 1,44 (9H. s).
Sloučenina (507g) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 507a za získání světle žluté pěny (84 %):
fajn - 109,6° (c 0,1, dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3324, 1727, 1659, 1535, 1458. 1444, 1423, 1369, 1279, 1256, 1223, 1155;
’H NMR (deuterochloroform) δ 7,12 (lil. d, .1 - 7,8), 6,33 (1 H, d, J - 7,5), 5,19 (IH, m), 4,97 (2H, m), 4.58 (III, m). 4,06 (2H, s), 3,20 (1H. m). 3,05 - 2,69 (4H. m), 2.35 (1H. m). 2.14 - 1.68 (511, m), 2,03 (3H. s), 1,44 (9H,s).
Analýza pro CSilluBrN^?. 0.3 H2O:
vypočteno: C, 46.99; H, 5,93; N. 10,44. nalezeno: C. 46,97; H. 5,90; N, 10,35.
-212C/. JUU171 B6
Sloučenina R
Cl
508a
284 Clz Aj
Me 1
500b A
285 Me
Sloučenina (508a). K roztoku sloučeniny 506c (547 mg, 1 mmol) v dimethylformamidu (4 ml) se přidá fluorid draselný (145 mg. 2,5 mmol, 2,5 ekvivalentu). Po 10 minutách míchání při teplotě místnosti se přidá 2,6-dichlorbenzoová kyselina (229 mg, 1,2 mmol. 1.2 ekvivalentu). Po hodinách reakce při teplotě místnosti se přidá ethylacetát (30 ml). Roztok se promyje nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (30 ml), solankou, suší se nad síranem horečnatým a zahustí ve vakuu za získání 590 mg (90 %) světle žluté pěny:
io [α]ι<· 85° (c 0,20, dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3400, 2956, 1737, 1675, 1528, 1434. 1414. 1368, 1344, 1272, 1 197. 1152, 1061;
lH NMR (deuterochloroform) δ 7,36-7.33 (3H, m), 7,04 (IH, d. J - 8,0), 5,46 (IH. d), J - 7,8),
5,19-5,16 (IH. m), 5,08 (2H, ΛΒ), 4,97-4,55 (IH, ni), 4,69^.55 (2H.m ). 3.68 (3H, ms). 3,30- 3,10 (ΙΗ,πι), 3,01-2.50 (4H. m), 2,40-2,33 (IH,m), 2.15-1,60 (5H. m). 1,44 (911. s).
Analýza pro C^H^CBN-jOh,;
vypočteno: C, 51 - 15; H. 5,21; N. 8.52.
nalezeno; C.51-35; H. 5,32; N. 8.56.
Sloučenina (284) se připraví ze sloučeniny 5()8a pomocí způsobu použitého pro přípravu sloučeniny 505 ze sloučeniny 504 za získání 330 mg (65 %) bílé pevné látky: teplota tání 115 °C (za rozkladu);
[a]if° - 107° (e 0.2, dichlormcthan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3340, 2954, 1738, 1664, 1530. 1434, 1272, 1198, 1148, io 1060;
'11 NMR (perdeuterodimethylsulfoxid) δ 8,91 (IH, d, J = 7,2H), 7,67-7,63 (311, m). 7.54 (lil. d, J - 8,0). 5.24 (2H, s), 5,20-5,15 (IH, m), 4,79-4,70 (1H, m), 4,46-4.37 (2H, m), 3,58 (3H, s). 3,33-3,20 (1H, m), 2.94-2,55 (4H, m). 2,30 1.60 (611, ni).
Analýza pro CuřHóCbNiOm. ΗΌ:
vypočteno: C, 46,54; 11, 4,56; N, 9,05, nalezeno: C, 46,36; H. 4,14; N, 8.88,
-213C7. 300171 B6
Sloučenina (508b) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 508a za získání světle žluté pěny (460 mg. 82 %):
[a]|j22 - 115° (0.20. dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný). 3413, 2960, 1729. 1675, 1526, 1514, 1461. 1421, 1368, 1265, 1116, 1096;
'HNMR (deuterochloroform) δ 7,27-7,03 (4Π, m), 5,48 (1H, d. J = 8,2), 5,20-5,14 (1H. ni). 5.04 (2H, AB). 4.93-4,86 (IH. m). 4,80-4,56 (2H. m). 3,77 (3H. s). 3,32-3.15 (1Π, m). 3,00-2.56 (4H, m), 2,37 (ÓH.s). 2.19-1,77 (5H,m), 1,45 (9H, s), 2,41 2.25 (IH.m)..
Hmotová spektroskopie (ES1) 617.
Sloučenina (285) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 284 za získání bílé pevné látky (303 mg. 78 %): teplota tání 1 10 °C (za rozkladu);
[a]i)211 - 128° (c 0,01. dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3339. 2958, 1731, 1666. 1529. 1420. 1266. 1248, 1115, 1070;
Í1 NMR (perdeuterodimethylsulfoxid) Ó 8,90 (lil, d. J ‘ 7,4), 7.54 (IH. d, J - 7.9), 7.36-7.28 (1H. m), 7.17-7.14 (211. m). 5.19 (5.15 (3H. m). 4,84-4,74 (1H, m). 4,45-4,37 (2H. m). 3,59 (311, s). 3.45-3,25 (1H, m), 2,95-2.64 (411, m). 2,35 (6H, s), 2,30-1,60 (6H, m).
Analýza pro CjoH^KjOjo . H2O:
vypočteno: C, 53,98; H, 5,92; N. 9,68, nalezeno: C, 53,50; H. 5,52: N, 9,49.
Hmotová spektroskopie (ES ) 559.
-214CZ J0U171 B6
sloučenina R
509a 510a N
509b 280 Q s—Z i| /
509c 283 u
509d 510d '0
Sloučenina (5 tOa). Roztok sloučeniny 506a (2,27 g, 4.2 mmol) v suchém dichlormethanu (50 I) se reaguje s 30% kyseliny bromovodíkovou v kyselině octové (1,84 ml 0.2 mmol, s 2,2 ekvivalentu) při 0 °C v dusíkové atmosféře. Po 10 minutách míchání při 0 °C je reakce dokončena a v médiu se vyloučí bílé krystaly. Pevná látka se odfiltruje a promyje ethylacetátem a iethyletherem za získání 2,20 g (100 %) kyseliny [3S( 1 S,9S)]-5-brom-3-(9-benzoylamino 6,10-dioxo 1,2,3.4.7,8,9,10-oktahydro-6H-pyridazino-[l,2-a][l,2]-diazepin-l-karboxamido)4-oxopentanové, která se použije bez dalšího čištění:
1 NMR (perdeuterodimethylsulfoxid) δ 8,87 (IH, d, .1 = 7,3), 8.63 (1(1, d. 7.6). 7.91-7,87 (214, m), 7.60-7,44 (3H. m), 6,92 (IH, široký s), 5,14-5,09 (IH, m), 4,92-4,65 (211, m). 4,43 (2H, AB). 4,41-4,35 (H, m), 3,33-3,22 (lH,m), 2,98-2,90 (IH, m), 2,89-2.57 (211, m). 2.35-2,15 (311, m). 1,99-1,91 (2H, m), 1,75-1,60 (2H, m).
i?
Roztok brom ketonu (535 mg. 1 mmol) v suchém dimethylformamidu (10 ml) se reaguje s fluoridem draselným (150 mg, 2,5 mmol, 2,5 ekvivalentu), pod dusíkovou atmosférou. Po 5 minutách míchání při teplotě místnosti se přidá 2-nterkaptothiazol (140 mg, 1,2 mmol. 1.2 ekvivalentu). Směs se nechá reagovat přes noc. přidá se ethylacetát (150 ml) a organický roztok se promyje
2D solankou, suší nad síranem horečnatým a odpaří ve vakuu. Zbytek se krystalizuje z diethyletheru, filtruje a čistí na silikagelu za použití gradientu methanolu (0 až 5%) v dichlormethanu. Po odpaření se získá 344 mg (60 %) bílé pevné látky: teplota tání 90 až 95 °C (za rozkladu);
[oc]i)20 - 82° (e 0,2, dichlormcthan);
-215 CZ J0017I B6
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3328. 2941, 1745, 1659, 1535, 1422. 1276. 1255. 1223, 1072;
lH NMR (perdeuterodimethylsulfoxid) 6 8,92 (1H, d, J = 7.6). 8,68 (I Hm, d, J 7.6), 7,98-7,90 (2H.ni ), 7,75 7,67 (IH, ni), 7,64-7,50 (4H. m), 5,22-5,18 (111, ni). 4,95-4,74 (211, ni), 4,58-4,38 (3H. m), 3,52-3,19 (1H. m), 3.05-2,65 (411, m). 2,40-4,50 (6H. m)
Analýza pro CisHitNJŽiSi. 1 ΙΌ: io vypočteno: C, 50,75; H, 4,94 N, 11,84, nalezeno: C. 5lm,34: H.4.70;N. I 1,58.
Hmotová spektroskopie (ES ) 572.
Sloučenina (509b), Sloučenina 507a (100 mg, 0.17 mmol) v suchém dimethylformamidu (1,5 ml) se reaguje s Tfenyl-I H-tetrazol5-thiolem (33 mg. 0.187 mmol) a fluoridem draselným (15 mg. 0,34 mmol). Směs se míchá 2 hodiny při teplotě místnosti, zředí se ethylacetátem, promyje vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (dvakrát), solankou, suší nad síranem horečnatým a odpaří. Produkt se čistí pomocí velmi rychlé chromatografie na silikagelu za eluee ethylacetátem za získání 103 mg (88 %) bezbarvé pěny:
92,2° (c 0.1. dichlorniethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný), 3334, 1726. 1660, 1528, 1501, 1417, 1394, 1368.
1279, 1253, 1155;
'HNMR (deuterochloroform) Ó 7.82 (211. m). 7,60 7,40 (8 H, ni). 7.39 (I i i, d. J - 8,1). 7.05 (1H, d, J = 7,3), 5,26 (1H. m), 5,15 (1H, m), 4.99 (1 H,m ), 4.60 (2H. m). 4.30 (1H, d. J - 17,2 II), 3.32 (IH, m), 3.10-2,75 (411, m), 2,40 (IH, m), 2.24 (1H, m). 1,90 (311, m). 1,75 (IH, m). 1,44 (911, s).
Hmotová spektroskopie (ES') 691.47 (Μ + 1).
Sloučenina (280) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 505 ze sloučeniny 504, Sloučenina 509b (98 mg, 0,1422 mmol) v dichloromethanu (1 ml) se ochladí na 0 °C a přidá se kyse35 lina trilluoroctová (I ml). Směs se míchá 15 minut při 0 °C a 30 minut při teplotě místnosti, potom se odpaří za sníženého tlaku. Zbytek se triturujc suchým toluenem a odpaří. Po chromatografii na silikagelu za clucc 10 % methanolem v dichlormethanu se získá bezbarvé sklo. které se krystalizuje ze směsi dichlormethan/diethylether za získání 62 mg (69 %) bezbarvé pevné látky: teplota tání 145 °C (za rozkladu);
[a]D 22 - 80,9° (c 0.1, dichlorniethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3400. 1727, 1658, 1530. 1501, 1460, 1445, 1416,
1280, 1254;
'H NMR (deuterochloroform) δ 8.00 (1H. m). 7,79 (2H, d. J = 6,7). 7,58-7,30 (9H, m). 5,25 (2H, m), 4,94 (111, m). 4,53 (2H, m), 4,35 (IH, m), 3,35 (IH, rn), 3,01 (3H, m), 2.73 (IH, m), 2,38 (IH. ni). 1.98(411, m). 1.64 (IH. m),
Analýza pro CjoHjoNsOyS. 0,2 TPA:
vy počteno: C, 53,71; 11, 4,63 N, 17,04, nalezeno: C. 53,97; 11. 4.92: N, 16,77.
Hmotová spektroskopie (ES’) 633,55 (Μ - 1).
-216CZ JIMJ17I B6
Sloučenina (509c) sc připraví podobným způsobem jako sloučenina 509b za získání bezbarvého skla (34 %):
- 77,10 (e 0,25, diehlorrnethan);
Infračervené spektrum (film) 3311. 1724. 1658, 1603, 1578, 1536, 1488. 1458. 1426. 1368. 1340. 1279, 1256, 1231, 1155, 707;
in ’ll NNR (deuterochloroform) δ 8,29 (2H, m). 7,84 (2H, m), 7.48 (4H. m)„ 7,22 (311, m), 5.20 (214, m), 4,90 (2H, m), 4,58 (IH. m), 3,29 (111. rn), 3,20-2.70 (4H, m), 2,38 (211. m), 1.96 (411, m), 1.68 (IH.m), 1,42 (9H,s).
I Imotová spektroskopie (ES‘) 608,54 (M t 1).
Sloučenina (283) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 280 za získání bezbarvé pěny (100 %): teplota tání 125 QC;
lojů19 - 84,1° (e 0,1.20% rnethanol/diehlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselné) 3401, 1736, 1663, 1538, 1489. 1459, 1425, 1281. 1258, 1200,1134:
'H NMR (perdeuteromethanol/deuteroehloroform) 6 8,38 (211. in), 7,84-7,40 (8H. ni), 5,16 (411,
m), 4,80 (IH, nik 4,56 (1H. m), 3,50 (111. m), 3,12 (2H. ni), 2.82 (211, m), 2,37 (IH, ni),
2,10 1,65 (5H,m).
Analýza pro C27FE9N/V 0,4 IEO:
vypočteno: C, 51,77; H, 4,61; N. 10,41, ar nalezeno; C, 52.19; H, 4,93: N. 9,99.
Sloučenina (509d) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 509b za získání bezbarvé látky (49,6 mg, 82 %):
'11 NMR (deuterochloroform) 6 8,02 (IH, s), 7.95-7,86 (lil, ni), 7,84 7,76 (211, rn), 7,62-7,35 (411. m). 7,22-7,07 (l H, rn), 6,43 (lil, d). 5,26-5.08 (2H, m), 5.03G.72 (311, m), 4,664,50 (IH, m). 3,43-3,19 (lil, 111). 3,15 2.97 (IH. ni). 2,86-2.72 (311, m), 2,48-2.31 (IH, m), 2.18-1.60 (6H, m), 1,43 (9H, s).
Sloučenina (51 Od) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 280 za získání bezbarvé pevné látky (25,7 mg, 57 %): teplota tání 140 až 180 °C;
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3391. 2945, 1733. 1664. 1530. 1422, 1363, 1277, 1259. 1204;
'H NMR (perdeuteromethanol) ó 8.23 (1Π. s) 7,94 (IH, d). 7,87 (2H. d). 7,54-7.42 (311. m). 6,48 (111, d). 5,22-5.15 (lil. m), 4,57 4.46 (IH, m), 3,62-3,41 (1H, m), 3,22-3,13 (lH. m), 3,02-2,81 (2H. m ).2.70 1,80 (611, m).
5(i Analýza pro Ck6I . 1,5 EEO:
vypočteno: C, 54,30: H. 5,35; N. 14,61, nalezeno: C, 54,14; H. 5,35; N, 13,04.
-217 Q7. 300171 B6
Hmotová spektroskopie (ES ) 551 (Μ - E 100%) přesná hmotnost vypočtena pro
C?6H29N(1Ok(MH‘); 553.2047. nalezeno: 553, 2080.
MeSO2-
MeSO2-
H ó (505f, 280b, 283b)
Sloučenina R
504f 505f o
504g 280b Q N-N -A*
504h 283b
Sloučenina (5O5f) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 508a za použití sloučeniny 5 507b a 3-ehlor-2-hydroxy 4H-pyrido(E2-aJ-pyrimidm-4-ou a ihned po hydrolýze sloučeniny
504f kyselinou trifluoroctovou za získání světle hnědého prášku (65 mg. 30 %):
[α]ι/° — 128° (e 0,10, methanol);
to Infračervené spektrum (bromid draselný) 314, 2928, 1667, 1527, 2459, 1407, 1328, 1274, 1153.
1134;
'11 NMR (deuteroinethanol) δ 9.35 (lil. d. J - 6.6H). 8,34 (IH. t. J - 7.2H), 7.99-7.95 (1H, rn),
7,76-7,69 (111, m). 5.85-5,45 (3H, m), 5,30-5,21 (lil, m), 4,93^4.66 (211, m). 3.81-3,65 (111, i? m).3,66(3H, m), 3,45-2,52 (411, m), 2.52-1.71 (6H, m). D.J. Hlasta a kol.. J. Mod. Chem. 1995,
38. 4687-4692.
Sloučenina (504g) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 509b, (83 %) jako bezbarvá pěna:
[α];,1' - 112,7° (e 0,2, dichlormethan);
-218CZ 300171 B6
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3312, 1726, 1668, 1501, 1413, 1395, 1369, 1328. 1276, 1254, 1155;
S 'li NMR (deuterochlorform) δ 7,59 (5H, m), 7,48 (IH, d. J = 8,0). 5.68 (lil, d, J = 9.0). 5.37 (IH. m), 4,95 (1H, m), 4,62^1,3 I (4H, m). 3.36 (111, m). 2,98 (311. s). 2,88 (4H, ni), 2.66 (111. rn). 2.42 (2H. m), 1,98 (111. m). 1.75 (IH. m). 1.43 (9H, s).
Sloučenina (280b) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 280 (100 %) jako bezbarvá io pěna: teplota tání 120 až 125 °C';
[α][/5 112.4° (c 0,1, díchlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3328. 1730. 1664, 1529, 1501. 1410, 1328. 1277. 1219, !5 1153, 1134,991;
'H NMR (deuteroehloroform) δ 8,07 (IH, d. J = 7,8), 7.58 (511, s). 6.41 (IH. d. J = 9.5), 5,32 (III. m), 5,04 (IH, m), 4,70 (IH. s, J= 17,5), 4.60 (3H, rn), 3,50-2,9 (3H, m), 2,98 (3Π, s). 2,45 (2H. m). 2.06 (4H.m). 1,68 (IH.m).
Sloučenina (504h) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 509b (24 %) ve formě bezbarvě pěny:
[a]i>2? - 101.0° (e 0,2 díchlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3330, 1727. 1669, 1425, 1396, 1369, 1328, 1276, 1256. 1231, 1155. 1137.991;
'H NMR (deuteroehloroform) δ 8,28 (2H, široký d, J - 9,4), 7.71 (IH, d. J - 7.9). 7.22 (211. s),
6,03 (IH, d, J - 9.4), 5,36 (IH, m), 4,95 (211, m), 4,52 (211, m). 3.29 (l H. m). 3,07 (3H. s),
3.23 2,75 (3H, m), 2,66-2.35 (2H, m), 2,30-1,60 (5H, rn). 1,42 (9H, s).
Sloučenina (283b) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 280, (100 %) ve formě bezbarvé pěny; teplota láni 120 až 125 °C;
>5 [a][)- 85,2° (c, 0,1, 10% methanol/dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3337, 1738, 1667. 1560. 1457. 1424. 1326, 1317, 1278, 1258. 1200, 1189, 1150, 1133,991;
lH NMR (deuterochloroform/deuteromethanol) 6 8,35 (2H, m), 7,54 (2H, m), 5,32 (2H, m), 4,83 (2H, m), 4,45 (2H, m). 3,43-2.77 (4H, m). 2,97 (3H, s), 2,42 (2H, m). 2,05-1.72 (5H. ni).
-219CZ 300171 B6
Sloučenina R
5O8c 511c JO
508d 280c Q- . 1 N
508e 283c \ o d
Sloučenina (508c) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 509b za získání 544 mg (97 %) světle žluté pěny:
fa]ifG- 86° (c 0,19, dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný). 3426, 2947, 1725, 1669, 1551. 1418. 1383, 1253, 1155, 1064;
io 'l 1 NMR (deuterochloroform) δ 8,49 (2H, d. J = 4,8), 7,13 (111, d. J ~ 7.9), 7.03-6,98 (1H, m).
5,47 (IH, d, J - 7.9), 5.23-5,19 (111, m). 5,09-5.01 (lH, m). 4.84 4,51 (2H. m). 4.04 (211, AB). 3,69 (311. s). 3.38-3.19 (IH, m), 3,06 2.64 (411, m). 2.40-1.76 (611, m). 1,43 (911, s).
Analýza pro C2<;HuN6OxS:
i? vypočteno: C, 51,89; 11. 5.92; N, 14.52.
nalezeno: C, 51.49; H, 6,04; N, 13,87.
Hmotová spektroskopie (ES ) 579.
Sloučenina (51 le) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 280 za získání 370 mg 2o (79 %) bílého prášku: teplota tání 105 °C (za rozkladu);
- 94° (c 0,20, dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný ) 3316, 3057, 2957, 1724, 1664, 1252, 1416, 1384, 1254, 25 1189. 1063;
ll 1 NMR (perdeuterodimethylsulfoxid) δ 8,85 {1H, d, J = 7,8), 8,62 (211, d, J ~ 4.7). 7,53 (1H, d, J - 8.0). 7.28-7,23 (11 i, m), 5,21 -5,17 (1H, m), 4,87^1,79 (1H, m), 4,47 4,35 (2H, m), 4,23 (2EE AB), 3.58 (311, s), 3.30-3,21 (IH. m), 2,95-2,50 (4H, m), 2,35-1,60 (6H. τη).
Analýza pro C?11 NftOfiS. HA):
vypočteno: C, 46.66; 11, 5,22: N. 15,55, nalezeno: C. 46.66; H, 5,13; N, 15,07.
• 220 CZ 3(10171 136
Hmotová spektroskopie (ES ) 523, (ES ) 521.
Sloučenina (508d) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 509b za získání bezbarvé pevné látky (269 mg. 87 %): teplota tání 80 až 110 °C;
[aln ' - 108° (c 0,60. dichlormethan):
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3315. 2977, 1727, 1688, 1527. 1501. 1458. 1418. 1368, 1279, 1250, 1155, 1064;
‘ll NMR (deuterochloroform) δ 7,70 (1H, d), 7,63-7.53 (5H. ni). 5,84 (IH. d). 5,34-5.27 (lil. m), 5,05-4,92 (1H, m). 4,78-4,54 (311. m), 4,38 (IH, d), 3.66 (3H. s). 3,373,19 (IH. m), 3,07-2,94 (IH, tn), 2,91-2,82 (2H, ni), 2,71-2,56 (IH, m), 2,40-2,30 (IH. m), 2.19-2.13 (IH, rn), 2,08-1,68 (4H. m), 1,42 (9H. s).
Hmotová spektroskopie (ES') 667 (31%), 645 (M’ + 1, 100), 589 (62).
Sloučenina (280c) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 280 za získání světle krémové pevné látky (203 mg. 88 %); teplota tání 105 až 130 °C;
[ají)22 - 235° (c 0.11 methanol):
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3342, 2951, 1727, 1667. 1529, 1501, 1459, 1416. 1276. 1225,1192.1062;
’H NMR (perdeuterodimethylsulfoxid) δ 8.89 (IH, d), 7,69 (511, s). 7,50 (IH. d), 5,18-5.11 (IH.m). 4.79-4,69 (IH), 4,57 (2H. s), 4.42-4.32 (IH, ), 3,54 (311. s), 2,92-2.63 (3H. ni), 2,21-1.82 (5H, m), 1,65-1.57 (111, m).
Hmotová spektroskopie (ES ) 587 (Μ - 1, 100%).
Sloučenina (5()8e) se připraví podobným způsobeni jako sloučenina 509b za získání světle oranžové pevné látky (199 mg. 25 %): teplota tání 80 až 120 °C;
[aff1 - 89° (c 0.51. dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný), 3333, 2978, 1726, 1669. 1578, 1536. 1478. 1426. 1368. 1277, 1253. 1232, 1155, 1064;
!H NMR (deuterochloroform) Ó 8,41-8,18 (2Π, m), 7,81 (IH, d) 7.26-7,20 (211, s). 5.91 (IH, d), 5,24-5,16 (IH, m), 5,07-4,86 (3H, m), 4,81-4,51 (2H, m), 3.67 (311, s). 3.34-3.16 (111, ni). 3,10-2,81 (3H. m), 2,72-2,54 (IH, m). 2,41-2,31 (111,ni), 2,07-1.62 (5H, m), 1,47(911, s).
Hmotová spektroskopie (ES ) 562 (M* + 1, 100%). 506 (38).
Sloučenina (283c) sc připraví podobným způsobem jako sloučenina 280 za získání bílého prášku (167 mg, 98 %): teplota tání 90 až 105 °C;
[u]r) 22 - 106° (c. 11 methanol);
infračervené spektrum (bromid draselný). 3325, 3070, 2956, 1669, E544. 1423, 1256. 1199. 1133, 1062;
'Η NMR {perdeuterodimethylsulfoxid) δ 8.95 (IH. d), 8,45-8,20 (2Π. m). 7,53-7.45 (3H, m). 5,19-5.08 (311, m), 4,70 -4,62 (IH, m), 4,41^4,30 (2H, m), 3,53 (3H. s). 2.92-2.68 (3H, m), 2,22-2,06 (2H, m), 1,95-1,82 (2H, m), 1.63-1,53 (111, m).
? Hmotová spektroskopie (ES ) 506 (M + 1. 100%).
Sloučenina R
512a 280d Q n-n . λ N
512b 283d 43
Sloučenina (512a) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 509b, za získání (83 %) bezbarvé pěny:
io [«In1’ 129.6° (e 0,1. dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3323, 1726, 1664. 1531. 1501. 1444. 1415. 1394. 1369, 1279, 1254, 1156;
'H NMR (deuterochloroform) δ 7,59 (5H, s). 7,37 (IH, d, J = 7,9), 6.38 (111, d. J = 7.4). 5,27 (lil. m). 4.98 (21 i, m), 4.58 (2H, d + ni). 4,28 (1H, d, J - 17,2), 3,28 (111, m), 3,10-2,65 (41 i, m), 2,31 (2H. m), 2,03 (3H. s). 2.101.72(411, m), 1.48(911, s).
Sloučenina (280d) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 280. za získání (77%) bez2o barvé pěny.
[<x]D 22 93.3° (e 0.1. dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3316, 1728. 1659, 1531, 1501. 1415. 1341, 1278, 1253,
1222,1185;
'H NMR (deuterochloroform) δ 8,05 (1 H, d, J - 7,9), 7,57 (5H, široký s), 5,30 (1H. in), 5.01 (211, m). 4,7(M.l() (411. m), 3,28-2.85 (4H. m), 2,62 (IH. m), 2,33 (IH. ni), 2.27-1.65 (511, m), 2,01 (3H. s).
Sloučenina (512b) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 509b, za získání (9 %) bezbarvé pěny:
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3333, 1727, 1661. 1542. 1427, 1369, 1279, 1257, 1232, 1156;
1H NMR (deuterochloroform) δ 8,30 (2H, m), 7.20 (311, m). 6.45 (1H, d. J - 7.4). 5,17 (111, m), 4.91 (3H. m), 4,55 (lil. m). 3,27 (111. m). 3,14 2,70 (4H, m), 2.41 (lil, m). 2.04 (3H. s), κι 2.10-1.65 (611,111), 1.44 (9H.s).
Sloučenina (283d) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 280, (100 %) ve formě bezbarvé pěny:
15 ΜιΓ - 106.0° (c 0.2. 10% methanol/dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3312. 1735. 1664, 1549. 1426, 1279. 1258, 1200, 1135;
'll NMR (deuterochloroform) δ 8.27 (2H. m), 7,46 (211. m), 5.09 (IH, m), 4,79 (3H, m), 4,47 20 (IH, m), 3,40 (IH, m), 3,30-2,70 (311. ni). 2,54 (IH, m), 2,30 (IH. m), 1,98 (311, s), 2,05-1.65 (411, ni).
(246b) (245b)
OH
H
Sloučenina (245b) se připraví z (lS,9R)-9-benz0y lamino-1.2,3.4,7.8,9.10-oktahydro 10-oxo6H pyridazino[l,2-a]fl,2]diazepin-l-karboxylové kyseliny pomocí způsobu popsaného pro přípravu sloučeniny 245 za získání 416 mg (85 %) bezbarvé pěny (směs diastereoizomerů 1:1):
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3392. 3302, 2942. 1792, 1642, 1529, 1520, 1454. 1119;
lH NMR (deuterochloroform) δ 7,79 (211. ni), 7,51-7,09 (10H. ni). 5.52 (0.5H, d, J - 5,3), 5,51 (0,511, s), 5,36 (111, m), 4,84 (IH, m), 4,74K,59 (1.5H, m), 4,51 (IH. m). 4,38 (0,511, m).
3.22 2.83 (5H. m), 2,51 (IH, m), 2,25 (2H, m), 2,01-1,46(611. m).
Analýza pro C^H^NA, 0,75 H2O:
vypočteno: C, 62,97; II, 6,32; N. 10,49, nalezeno: C, 63,10; 11, 6,16; N. 10,21.
Hmotová spektroskopie (ES ) 521 (M + 1. 100%).
Sloučenina (246b) se připraví ze sloučeniny 245b pomocí způsobu popsaného pro přípravu sloučeniny 246 za získání 104 mg (33 %) bílého prášku: teplota tání 115 až 119 °C;
4(1
- 223 CZ 300171 B6 [a]D 24 19.8° (e. 0.2. methanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3293, 2944. 1786. 1639, 1578. 1537. 1489, 1450. 1329, 1162,1124;
*Η NMR (perdeuteromethanol) δ 7.85 (211, d, J = 7.0). 7,49 (3H. m), 5,49 (1H. m). 4.55 (111. m), 4,30 (2H. m),3,40 (lil, m), 3.19-2.89 (3H. m). 2,63 (2H, m). 2,16-1,81 (5H.m). 1.60 (3H,m).
Analýza pro . ICO:
io vypočteno: C. 56-24; 11, 6,29: N. 12,49, nalezeno: C, 56,54; H. 6,05; N, 12,29.
I knotová spektroskopie (ES ) 429 (Μ - 1. 100%).
Sloučeniny 513a—j se připraví tak. jak je popsáno níže.
3 toučenina R
513a TO
513a-l
513a-2 T
513b
5l3b-l °O
-224 Q7, 300171 B6
5l3b-2 °O
513c -<X“
513d °X)
513e
513f
513f-l ,,°xX
513f-2
(513g)
225 CZ JUU171 B6
(5l3i)
Sloučenina (513a) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 513d/e za získání směsi diastereoizomerů (670 mg 50 %) ve formě oleje:
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3331.2946, 1790, 1723, 1713, 1531. 1329, 1257. 1164, 1120. 1060,977, 937, 701;
'H NMR (deuterochloroform) δ 7.36-7,18 (511, m), 5.99-5,83 (111, m). 5,41-5,34 (211. m). 5,28-5,18 (2H, m), 4,59^1.56 (2H, m), 4,32-3,96 (2H, m), 3,85 3,73 (IH, m), 3,02-2,76 io (31L m). 2.49-2.34 (111, m).
Sloučenina (513b) se připraví jako sloučenina 513b/e za získání 8 g (51 %) směsi diastereoizoínerů ve formě čirého oleje;
[u]„2n - 13° (e 0.25, dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3325, 2959,2875. 1790, 1723, 1535. 1420. 1328. 1257. 1120. 1049,973.937;
'll NMR (deuterochloroform) Ó 6,02-5,80 (IH, in), 5,53-5,46 (2H. ni). 5,37 5,21 (2H, m), 4,58 (2H, d, J = 5,5), 4.50-4,46 (0,5H, m), 4.34-1.25 <111, m), 4,19-4.12 (0,511, ni), 3,06-2.77 (IH. m). 2,53-2.35 (IH, m), 1,85-1.50 (8H, m).
Analýza pro CpHpjNOy vypočteno: C, 57,98; H. 7,11; N, 5,20, nalezeno: C,56,62, H. 7.22; N, 4,95.
Hmotová spektroskopie (ES ) 270.
Sloučenina (513c) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 513d/a za získání jednoho
3u izomeru (20 %) ve formě světle žlutého oleje:
- 226CZ 300171 B6 [a]D 24 - 63,1 ° (e é,2. dichlormethan);
Infračervené spektrum (film) 3338. 2948, 1791, 1723, 1529, 1421. 1330, 1253, 1122. 984. 929, 746;
’H NMR (deuterochlorform) δ 7.20 (4H. m), 5.87 (lil. m). 5.61 (IH. d. ,1 - 5.4), 5.33-5.10 (2H. m), 4.70 (IH. m). 4.56 (3H. m). 3.33-3.19 (2H. m), 3.10-2,94 (211, m), 2.81 (1H. dd. J = 8.3. 17.3), 2,43 (IH.dd, J = 10.5, 17.3).
io Připraví se sloučenina (513d) a (513d/e) [pomocí způsobu popsaného Chapmanem, Biorg. &
Med. Chem. Lett., 2, str. 615-618 (1992)). Následuje zpracování pomocí extrakce ethylacetátem a promytí hydrogenuhličitanem sodným, produkt se suší nad síranem hořečnatým, filtruje a odpaří za získání oleje, který obsahuje produkt a benzylalkohol. Přidá se 200 mi hexanu (použije se 200 ml hexanu na každých 56 g AlloeAsp (CCfitBiOCfLOH) a směs se míchá za chladu přes noc.
Tak se získá olejovitá pevná látka. Matečné louhy se slijí a uchovají se pro chromatografií.
Olejovitý zbytek se rozpustí v ethylacetátu a odpaří za získání oleje, který se krystalizuje z 10% ethylacetátu v hexanu (500ml). Pevná látka se filtruje za získáni sloučeniny 513d (12,2 g. 19 %): Teplota tání 108 až 110 °C;
2i) Γα1ο 4 + 75,72° (c 0,25, dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3361, 1778. 1720, 1517. 1262. 1236. 1222. 1135. 1121, 944, 930, 760;
'H NMR (deuterochloroform) δ 7.38 (511, m). 5,90 (lil, m). 5,50 (IH. s). 5.37 (0.5H. m). 5.26 (2.511, m). 4.87 (111. AB kv), 4.63 (3H. m). 4.31 (1H. m). 3.07 (1H, dd). 2.46 (lil, dd).
Analýza pro C|dli7NCk:
vypočteno: C, 61.85; H, 5,88; N, 4.81, nalezeno: C. 61,85; H, 5,89; N, 4,80.
Matečné louhy se spojí a odpaří za vzniku oleje (asi 200 g) obsahujícího benzylalkohol. Přidá se směs hexan/elhylacetát (9:1, 100 ml) a produkt se čistí pomocí chromatografie za eluee směsí 10% ethylaeetát v hexanu, čímž se odstraní přebytečný benzylalkohol, a potom směsí dichlor55 methan/hexan (1:1 obsahující 10% ethylacetátu). Takto se získá sloučenina 513e obsahující 10 % ethylacetátu). Takto se získá sloučenina 513e obsahující malé množství sloučeniny 513d (20,5 g, 32%); teplota tání 45-48 °C [«Jif1 - 71,26° (c 0,25. dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3332, 1804, 1691. 1536, 1279. 1252. 1125.976.
’H NMR (deuterochloroform) δ 7,38 (5H. m). 5,91 (III, m), 5,54 (lil. d, J - 5,2). 5,38 (3H. m). 4.90 (111. AB kv); 4,60 (411, m), 2,86 (lil, dd); 2.52(1 H. dd).
Analýza pro CisIlpNOs. 0,1 1 TO:
vypočteno: C,61,47: H, 5,9]; N. 4,78. nalezeno: C, 61,42; Η, 5.B8; N. 4,81.
Sloučenina (513f) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 513d/e za získání bezbarvého oleje (152 mg, 79 %):
- 227 Q7. 300171 B6
Infračervené spektrum (film) 3334, 2983. 2941, 1783, 1727, 1713, 1547, 1529. 1422. 1378, 1331. 1313, 1164, 1122. 1060.938;
? *H NMR (deuterochloroform) δ 6,09-5,82 (211, m), 5,50-5.18 (311. rn). 4.64-4.54 (2H. tn). 4,27-4,16 (IH, m), 3,95-3,78 (lil, m). 3.73-3,56 (IH, m). 3,05 -2,77 (IH, m). 2.56-2,37 (IH.m), 1,351,17 (4H, m).
Analýza pro CK)I fisNOs:
io vypočteno: C, 52.40: H, 6,60; N, 6,11.
nalezeno: C. 52.16; H. 6.62; N, 5,99.
Hmotová spektroskopie (ES ) 229 (Μ I 1, 100%).
Sloučenina (513g). 4-DimethyIaminopyridin (76,0 mg, 622 mmol) se přidá k roztoku 2-fenoxyb benzoylehloridu (579 g, 2,49 mmol) a sloučeniny 517 (600 mg. 2.07 mmol) v pyridinu (10 ml).
Směs se míchá při teplotě místnosti 18 hodin, potom se přidá solanka (25 ml) a extrahuje se ethylacetátem (30 ml, 20 ml). Spojené organické extrakty se promyjí IM kyselinou chlorovodíkovou (3 x 25 ml), nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (2 x 25 ml) a solankou (25 ml), suší se nad síranem hořecnatým a zahustí. Světle oranžový olej se čistí pomocí velmi rychlé kolonové ehromatografie (1 až 10% aceton v dichlormethanu) za získání 447 mg (44%) bezbarvého oleje:
Infračervené spektrum (film) 3375, 2980, 1721, 1712, 1602, 1579, 1514, 1484. 1451, 1368, 1294, 1250, 1234. 1161. 1137, 1081,754;
'H NMR (deuterochloroform) δ 7,98-7.93 (IH, m). 7,50-7,41 (IH. m), 7.35-7,25 (2H, m).
7,22 7,03 (3H, m). 6,95 (3H, d). 5,95-5,76 (1H, m), 5,57 (lil. d), 5.30-5,13 (211, m). 4,51 (2H, d). 4.25 (2H, d), 4,18-4,04 (IH, rn). 3,50 (III, m). 2,51 (2H, ni). 1.41 (9H. s).
Hmotová spektroskopie (ES') 508 (57%). 503 (76), 486 (Mf + E 45). 469 (27), 412 (100). přesná hmotnost vypočtena pro ΕΥ,ΗοΝΟχ (ΜΗ ): 486,2128. nalezeno: 486.2158.
Sloučenina (513h) se připraví z (3S.4R)-1-butyl (N-allyloxykarbonyl) 3 amino-4,5-dihydroxypentanoátu pomocí způsobu popsaného pro přípravu sloučeniny 513 g za získání 562 mg (85 %) bezbarvého oleje:
Infračervené spektrum (film) 3418, 2980, 1722, 1711, 1512, 1368, 1278, 1245. 1198, 1157. 1139;
'11 NMR (deuterocliloroform) δ 8,90 (IH, d. .1 - 8.6). 8,21 (IH. dd, J = 1.2, 7,3). 8.4 (III. d.
4ii J = 8.2). 7.89 (III, dd, J = 1,5, 7.9). 7.67-7.46 (3H, m), 5,88 (IH. ni). 5,49 (IH, d, J - 9,0), 5.35-5.18 (2H. m). 4.57 4.60 (4H. m). 4.19 (2H. ni). 2.67 (2H, m), 1,40 (9H, s).
Analýza pro C24I l2yNO7;
vypočteno; C. 65.00; H, 6,59; N, 3,16.
nalezeno: C, 64.74; H, 6,56; N. 3.09.
Hmotová spektroskopie (ES ) 466 (M+Na, 100%), 444 (M 11, 39), 388 (44).
Sloučenina (513i) sc připraví podobným způsobem jako sloučenina 5 13 g za získání bezbarvého oleje (569 mg, 85 %):
Infračervené spektrum (film) 3400, 1723, 1712, 1584, 1528, 1489, 1443, 1367, 1276. 1232. 1190, 1161, 1098, 1074,995. 755;
-228 C7. 300171 B6 'Η NMR (deuterochloroform) Ó 8.65-8,59 (IH, d), 7,84-7,66 (2H, in), 7,45-7,11 (5H. m), 7.05-6,97 (21-1, m), 6,00 5.78 (IH. ). 5.54-5.14 (2H. m ),4,62-4,52 (211. m). -1.42 -4,52 (2H, m), 4,08X22 (2H, m), 2,78-2,47 (2H, m). 1.4 (911, s).
Hmotová spektroskopie (ES') 508 (100%), 486 (M + 1, 33), přesná hmotnost vypočtena pro C26H32NO8 (MH'): 486,2128, nalezeno: 486,2121.
Sloučenina (513j) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 5 13g za získání světle oranžového oleje (905 ntg. 91 %):
II)
Infračervené spektrum (film) 3418. 3383, 2980, 1722, 1711. 1601, 151 7, 1450. 1424. 1368, 1308, 1252. 1154, 1100, 994, 767, 698;
'H NMR (deuterochloroform) δ 7,62-7,55 (211, m), 7.51-7,42 (3H. m). 5,98 5,76 (1H. m), 15 5.33-5.18 (2H, m).4,53 (2H. d). 4,18 (2H, d), 3,91 (IH, rn). 3,80( IH, m), 2.76 (311, s), 2,50 (211, tn), 1,43 (9H.s).
Analýza pro <?24Ην)Ν2Ο8. 0,5 H;O:
vypočteno: C, 59,62; II, 6,46; N, 5,79, nalezeno: C. 59.46; H, 6,24: N. 5,72.
Hmotová spektroskopie (ES ) 497 (100%), 475 (M' + 1, 15), 419 (48).
(517) (516)
Sloučenina (514) se připraví pomocí postupu popsaného v H. Matsunaga, a kol. Tctrahedron Letters 24, str. 3009-3012 (1983) jako čistý diastereomer (60 %) ve formě oleje:
fn][/' - 36,9° (e 0,5, dichlormethan);
Infračervené spektrum (film) 2982, 2934, 1726, 1455, 1369, 1257. 1214, 1157, 1068;
]H NMR (deuterochloroform) Ó 7.31 (5H, in), 4,10 (IH. kv, J - 6.0). 4,05 3,75 (4H, m), 3,10 (1H. q. J - 6.0), 2,40 (211, m), 1.42 (91 i, s), 1,40 (311, s), 1,34 (311, s).
Sloučenina (516). Sloučenina 514 (3.02 g, 9,00 mmol) a 10% palladium na uhlí (300 mg) v ethanolu (30 ml) se míchá 2 hodiny ve vodíkové atmosféře. Suspenze se filtruje přes křemelinu a 0,45 mm membránu a filtrát se odpaří za získání bezbarvého oleje 515 (2.106 g, 95 %). který se použije bez čištění. Olej (1,93 g. 7,88 mmol) se rozpustí ve vodě (10 ml) a 1,4-dioxanu a přidá se hydrogenuhličitan sodný (695 mg, 8,27 mmol). Směs se ochladí na 0 °C a přikape se ally Ichloro- 229 CZ 300171 B6 formiát (1.04 g, 919 ml 8,66 mmol). Po 3 hodinách se směs extrahuje etherem (2x 50 ml). Spojené etherové extrakty se promyjí vodou (2x 25 ml) a solankou (25 ml), suší nad síranem horečnatým a zahustí za vzniku bezbarvého oleje. Po velmi rychlé chromatografií (10 až 35% ethylacetát v hexanu) se získá bezbarvá pevná látka (2,69 g, 95 %): teplota tání 64 až 65 °C;
š [«J,>21 - 2Γ (c 1,00, dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3329, 1735, 1702;
lH NMR (deuterochloroform) 6 6,00 - 5,82 (IH, m), 5,36 - 5.14 (2H. m), 5,42 (IH, s), 4,56 (IH.d), 4,40 -4,08 (211, m), 4.03(111, m). 3,70 (IH, m), 2,52 (2H. m), 1,44 (121 i. 2 x s), 1,33 (311. s);
Analýza pro C]61I?7N()6:
vypočteno: C. 58,34; H, 8,26; N, 4,25, nalezeno: C. 58,12; H, 8,16; N. 4,19;
Hmotová spektroskopie (of'AB) 320 (M' + l, 41%), 274 (70), 216 (100).
Sloučenina (517). Roztok sloučeniny 516 (2,44 g, 7,41 mmol) v 80% vodné kyselině octové (25 ml) se míchá 24 hodin při teplotě místnosti, potom se zahustí a azeotropieky odpaří s toluenem (2x25 ml). Zbytek se zpracuje pomocí solanky (25 ml) a extrahuje ethylacetátem (2x25 ml). Organické vrstvy se suší nad síranem horečnatým a zahustí za získání bezbarvého oleje. Po velmi rychlé chroniatografii (20 až 80% ethylacetát v dichlormethanu) sc získá bezbarvá pevná látka (1.99 g, 90 %); teplota tání 74 až 75 °C;
• a]/'- 1,3° (c 1,0, dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 1723. 1691;
3(i 'fí NMR (deuterochloroform) ó 6,02 - 5.78 (2H, m). 5,35 - 5.16 (2N. m), 4,55 (211, d).
4,16 - 4,04 (211, m), 2,76 (211, s), 3,56 (211, ni), 2,56 (211, m), 1,43 (9H, s);
Analýza pro CulFiNOí,:
vypočteno: C, 53,97; H, 8,01; N, 4,84, nalezeno: C, 53,79; H, 7,88; N. 4.81;
Hmotová spektroskopie (+FAB) 290 (M +1.44%). 234 (100).
Příklad 30
41)
Sloučeniny 1105—1125 se připraví následujícím způsobem. Fyzikální údaje pro tyto sloučeniny jsou uvedeny v tabulce 24.
- 230 CZ 300171 B6 labulka 24
-231 QZ 300171 B6
-232CZ 300171 B6
-233 CZ 300171 B6
-234CZ 300171 B6
Slouč. Π Struktura Vzorec ΜΗI HPLC RČ min
- 235 CZ 300171 B6
-236 CZ 300171 B6
1 + co 1 K ? £ σ v_ OO co v σ CM O LO
cí __» ťN
Ή ε Ό Pí υ 2» fb 0 S •3 ft 11 S - £ o m 4
i—f i—í
ť—( in sr io
£ *K tn σ?~
VD f <r
Γ o Γ' O lO
U <u lO £ £ p>
M 0 N τΉ n t*rt O *τγ·
> rc w íl·· CM
CM o * >j o
S X o X
n M 3 P Λ4 3 P P co 0<C° n< o^^yO0 X*T* -T- °=cx° X S2 X 1
o
>0 3 o CD i-i σ »-í _J-
rl CO tH W r-f
- 237 CZ 300171 B6
- 238 CZ 300171 B6
Slouč. Struktura Vzorec MH HPLCRC min Hfí (způsob) (M+Wa) čistota
- 239 CZ 300171 B6
- 240 CZ 300171 B6
Krok A. Syntéza sloučeniny 401. TenlaGel S“ NH2 pryskyřice (0.25 nunol/g, 5.25 g) se umístí do sintrované skleněné protřepávací nádoby a promyje se dimethylacetamidem (3x 15 ml). Sloučenina 400 (1,36 g. 2,3 mmol) se rozpustí v DMA (10 ml) a přidá se O- benzolriazol Ν,Ν.Ν,Ν tetramethyluroniuinhexafluorfosfát (HBTLJ; 0.88 g, 2,3 mmol), a DIIA (0,8 ml, 4,6 mmol). Roztok se přidá k pryskyřici a přidá se dalších 5 ml DMA. Reakční smčs se protřepává 1,5 hodiny při teplotě místnosti za použití třepačky. Pryskyřice se filtruje a promyje se dimethylacetamidem (4x 15 ml).
io Krok B. Syntéza sloučeniny 1102. Z pryskyřice 401 se pomocí reakce se směsí 20% (objem/objem) piperidin/dimethylacetamid (15 ml) po dobu 10 minut (za třepání) a potom 10 minut
-241 CZ 300171 Bó $ čerstvým piperidinovým činidlem (15 ml) odstraní chránící skupina). Pryskyřice se potom promyje dimethylacetamidem (6x 15 ml), potom N-methylpyrrolidonem (2x 25 ml).
Sloučenina 1101 (0.979 g. 2.11 mmol) se rozpustí v dimethylacctamidu (8 ml). Přidá se HBTU (0.81 g. 2.1 mmol) a DÍRA (0.75 ml. 4,3 mmol), roztok se přidá k pryskyřici, potom se přidá dimethylacctamid (4 ml). Reakční směs se protřepává 2 hodiny při teplotě místnosti za použití třepačky. Pryskyřice se zpracuje pomocí postupu popsaného pro zpracování sloučeniny 401 za získání sloučeniny 1102.
o Krok C. Syntéza sloučeniny 1103. Tato sloučenina sc připraví z pryskyřice 1102 (0.040 mmol) za použití Advanced ChemTech 396 Multiple peptidového syntetizéru. Automatizované cykly zahrnují promytí pryskyřice dimethylíormamidcm (2x 1 tni), odstranění chránící skupiny 25% (objem/objem) piperidinem v dimethylformamidu (1 ml) 3 minuty, potom čerstvým činidlem (1 ml) 10 minut za získání pryskyřice 1103. Pryskyřice se promyje dimcthylformamidem (3x 1 ml) a N-methylpyrrolidonem (3x 1 ml).
Pryskyřice 1103 se acyluje roztokem 0.4M karboxylové kyseliny a 0,4M HOBT v N-methylpvrrolidonu (0.5 ml), roztokem 0,4M HBTU v N-methylpyrrolidonu (0.5 ml) a roztokem 1.6M DITA v N-methylpyrrolidonu (0,25 ml) a reakční směs se třepe 2 hodiny při teplotě místnosti.
2o Acylační krok se opakuje. Nakonec se pryskyřice promyje N-methylpyrrolidonem (lx 1 ml), dimcthylformamidem (4x 1 ml), dielilormethanem (5x 1 ml) a suší ve vakuu. Aldehyd se odštěpí z pry skyřice provede se celkové odstranění chránících skupin pomocí reakce se směsí 95 % kyseliny trifhioroetové/5 % vody (objem/objem, 1,5 ml) 30 minut při teplotě místnosti. Po promytí štěpícím činidlem (1 ml) se spojené filtráty přidají k chladné směsi 1:1 ether:hexan (10 ml) a vzniklá sraženina se izoluje odstředěním a slitím. Vzniklá kulička se rozpustí ve směsi 10% acetonitri 1/90 % voda/0,1 % kyselina trifluoroctová (5 ml) a lyofilizuje se za získání surových sloučenin 1105-1125 jako bílého prášku. Sloučenina se čistí pomocí semipreparatívní RP-IIPLC s Rainin Microsorb’“ C18 kolonou (5 μ, 21,4 x 250 mm) za eluce lineárním gradientem acetonitrilu (8% až 48%) obsahujícího 0,1 TFA (objem/objem) 30 minut při průtoku 12 ml/minutu. tu Frakce obsahující požadovaný produkt se slijí a lyotllizují za získání sloučenin 1105-1125 (10,8 mg, 63%).
Analytické HPLC metody:
(1) Waters DeltaPak C'l8. 300A (5μ, 3.9 x 1 50 min). Lineární gradient acetonitrilu (0% až
25%) obsahujícího 0,1% kyseliny trifluoroctové (objem/objem) 14 minut při průtoku 1 ml/minutu.
(2) Waters DeltaPak C18, 300A (5 μ, 3,9 x 150 mm). Lineární gradient acetonitrilu (5% až
45 %) obsahujícího OJ % kyseliny trifluoroctové (objem/objem) 14 minut při průtoku ml/minutu.
- 242 CZ 300171 B6
CC .OH !ΒυοΧτΝγΝΣ H »„Á
O OtBu
261b:
tBuO
Sloučenina (259b) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 259 ze sloučeniny 258 za získání voskovité pevné látky (87 g, 51 %): teplota tání 54 až 55 °C;
s Infračervené spektrum (film) 3324, 2978, 1732. 1713, 1455, 1367. 1277, 1254. 1171;
lH NMR (deuteroehloroform) δ 7,35 (511. m), 6,15 (111, široký s), 5,13 (211, s). 3.15 (2 H. t, J - 6.5). 2.54 (2 H. t. J = 6.5), 1.45 (9H. s).
io Analýza Cisl^N^Of vypočteno: C, 61.21; H, 7.53; N, 9,52. nalezeno: C, 61,29; H, 7,51; N, 9.51.
Hmotová spektroskopie (ES ) 295 (M' + 1).
Sloučenina (260b) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 260 ze sloučeniny 259 za získání gumy (81 g), která se použije v následujícím kroku bez čištění. Analytické údaje pro čistý vzorek:
Infračervené spektrum (tilm) 3318, 2976, 1733, 1433, 1451, 1412. 1393, 1366. 1256, 1161;
'11 NMR (deuteroehloroform) δ 7,34 (1011. m). 6,68 (0.5Π, široký s), 5.11 (4Π. m). 4,63 (0,511. široký s). 4,14 (111. m), 3,53 (2H. m). 3,08 (IH, m), 2,63 (2H. m), 2,10 1,60 (4H, m),
1,60 - 1,35 ( i9H, m + 2xs).
Sloučenina (261b) se připraví pomocí stejného postupu jako sloučenina 261 ze sloučeniny 260 za získání gumy, která se čistí pomocí velmi rychlé chromatografie (1:1 ethylacetát/dichlormethan) za získání sloučeniny uvedené v názvu 261b (36.0 g, 79,4 % po 2 stupních):
- 243 CZ 300171 B6 infračervené spektrum (film) 3267, 2979. 2937. 1728, 1668, 1394, 1369, 1245. 1159;
NMR (deuterochloroform) 5 7.6 (IH, široký s), 6,8 (1H, velmi široký s), 4,47 (I H. široký s ,73 (21-1, široký s), 2,98 (1H, široký s), 2,66 (3H, m). 2,04 (1H, široký s), 1.84 (i H. m). 1,6 - 1.
tj (21H. m + sk
Sloučenina (262b) se připraví stejným postupem jako sloučenina 262 ze sloučeniny 261 za získání sloučeniny uvedené v názvu 262b, (18.6 g. 54 %) ve formě oleje:
io + 47,7° (e 0,236, dichlormethan);
Infračervené spektrum (film) 3291,2978, 1738, 1727, 1690, 1678, 1439. 1243. 1164;
'11 NMR (deuterochloroform) δ 6,59 (IH, s), 5.06 (IH, m). 4.47 (lH.m), 3,85 (311, in), 2,82 15 (1H. ni), 2.37 (1H, m). 2,22 (1H, m), 1.92 (1H, m). 1,63 (2H, m), 1.48 a 1,46 (1811. 2 x s).
Hmotová spektroskopie (ES ) 399 (Μ + 1),
Sloučenina (518). Sloučenina 262b (2,43 g. 6.1 mmol) se rozpustí v IM chlorovodíku vetlivl2o acetátu (30 ml) a míchá se 20 hodin při teplotě místnosti. Přidá se hydrogenuhličitan sodný (4 g.
46,5 mmol) a voda 20 ml směs se míchá 5 minut před rozdělením a extrakcí alíkvotních dílů ethylacetátem. Spojené organické roztoky se promyjí vodou, solankou, suší se nad síranem horečnatým a zahustí. Po čištění pomocí velmi rychlé chromatografie (50% ethylaeetát v diehlormethanu až 100% ethylaeetát) se získá čistý produkt 518 (1.08 g, 59 %) ve formě nestabilního oleje:
[aJiC° + 82° (e 0,55. dichlormethan);
infračervené spektrum (film) 3331,2977, 1731, 1680, 1664, 1439. 1420. 1315, 1158;
'H NMR (deuterochloroform) δ 5,08 (III. m), 4,48 (1H, tn). 3.80 (211, Ab. kv), 3,70 (214, široký s. vyměněno D2O). 3,53 (IH, m). 2,75 (IH, m), 2,30 (2E1. m). 1.88 (1H. ni). 1.71 (2(4. m), E47(9H, s).
-244 CZ 300171 Bó
OSn
I.
Cr OH (519) >
(s2o:
(523) Í524)
Sloučenina (520). Sloučenina 519 (9,4 g, 35,6 mmol) se suspenduje v methanolu (230 ml) a ochladí se v ledové lázni na 0°C. Během 30 minut se přikape thionylehlorid (3 ml. 4,89 g, 4l.l mmol) a směs se 48 hodin míchá při teplotě místnosti. Rozpouštědlo se odstraní ve vakuu při 30 °C a olejovitý zbytek se rozpustí v ethylaeetátu (500 ml). Organický roztok se promyje nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, vodou, solankou, suší se nad síranem horečnatým odpaří za získání sloučeniny 520 (7,84 g, 79 %) ve formě oleje:
[otJif - 25,9° (e 0,615. dichlormethan);
H)
Infračervené spektrum (film) 2953, 1739, 1703, 1694, 1440, 1403, 1357, 1261, 1241, 1174;
'H NMR (deuterochloroform) δ 7,36 (5H, s), 5,18 (2H, s), 4,00 (IH. široký d), 3,73 (311. s), 3.55 (11 i, dd), 3,12 (1H, t), 2,06 (1H, rn), 1.73 (3H. rn).
Analýza pro C| iH 17N2O4. 0,25 H2O:
vypočteno; C, 59,46; H, 6,59; N, 9,91, nalezeno: C, 59,44; H, 6.46; N. 10,09.
Sloučenina (521). Za použití podobného postupu jako pro přípravu sloučeniny 260 výše, se připraví sloučenina 521 96 % jako surový olej:
[ct]r? - 22.16° (e 0.25, dichlormethan);
Infračervené spektrum (film) 3316, 2976, 2953, 1738, 1726, 1714, 1690. 1367. 1260, 1167;
- 245 CZ 300171 B6 'H NMR (deuterochloroform) δ 7,25 (Ι0Η. m), 6,82 (IH. široký s). 5.10 (4H. m), 4,80 (IH, široký s). 4,3 - 3,4 (6H, m). 3,10 (IH, m). 2,59 (2H,m), 1,95 (2H, m), 1.44 {10H. rn + s).
Sloučenina (522). Za použití podobného postupu jako pro přípravu sloučeniny 261 výše. se připraví sloučenina 522. 92 % jako bílá pevná látka: teplota tání 146 až 148 °C (za rozkladu);
[α]υ 22 + 27,8° (e 0,25, dichlormcthan);
io infračervené spektrum (bromid draselný) 3346, 1740, 1710. 1626, 1497, 1290. 1250, 1206. 1179, 1159;
'll NMR (deuterochloroform) 6 7,60 (IH. široký s), 7,5 - 5,5 (IH. velmi široký s), 4,64 (lil, široký s), 3,76 (5H, m + s), 3,00 (I H. m), 2,70 (311, m), 2,16(111. ni). 1.92 (IH.rn). 1,56 (IH. m).
iš 1,46(1111.m t s).
Analýza pro vypočteno: C, 48,12; II, 7,00; N, 14.96. nalezeno: C, 48,21; H, 6,96: N, 14,86.
2o Hmotová spektroskopie (ES ) 373 (Μ - I ).
Sloučenina (523). Sloučenina 522 (7.15 g, 19.1 mmol) se rozpustí v dichlormethanu (100 ml), obsahujícím dimethylformamid (0.5 ml), a ochladí se na 0°C. Přidá se thionyIchlorid (1,6 ml, 2,61 g. 22 mmol) a N-ethylmorfolin (4,86 ml. 440 mg, 38,2 mmol) a smčs sc míchá 2 hodiny.
Organická směs se promyje 2M disíranem sodným (50 ml), nasyceným hydrogenuh liči taném sodným (50 ml) a solankou (50 ml, suší se nad síranem horečnatým a zahustí. Zbytek se triturujc etherem za získání sloučeniny 523 jako bílé pevné látky (5,73 g. 84 %): teplota tání 186 až 188 °C (za rozkladu);
[ajif2 + 65,3° (c 0,25, dichlorniethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3298. 2978, 1750, 1720, 1682, 1658. 1455. 1423, 1369, 1316. 1241, 1212, 1160:
lH NMR (deuteroehlorofonn) δ 6,56 (IH, s), 5,17 (IH, dd), 4,48 (1 H. široký d), 3,81 (311, m), 3,75 (3H,s). 2.83 (IH.dt), 2,40(111, m), 2.28 (IH.m), 1,95(111, m), 1,67 (IH.m), 1,47 (9H. s).
Analýza pro CidEjNA 1/6 IEO:
vypočteno: C, 50,13; II, 6,82; N, 15,59, nalezeno: C, 50,12; H, 6,71; N, 15,58.
Hmotová spektroskopie (ES ) 357 (M+ - 1.46%), 301 (100%).
Sloučenina (524) se připraví ze sloučeniny 523 pomocí postupu pro přípravu sloučeniny 518.
Sloučeniny 262a-k se připraví pomocí postupu použitého pro přípravu sloučenin 211b f.
- 246 CZ 300171 B6
(262a-k)
Sloučenina R
262a 263a OOkof
262b 2 63b
262c 263c Y
262d 263d QC
262e 263e
262f 263f Q.l H
262g 263g
262h 263h xc/' M
- 247 CZ 300171 Bó
262i 2 63i
262j 263j PhSOn-
262k 263k 0
Sloučenina (262a). Získá se 443 mg (91 %) sloučeniny uvedené v názvu; teplota tání 56 až 57 °C;
+ 76° (e 0.15, diehlorrnethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3429, 2979. 1734, 1675, 1418. 1369, 1339. 1323, 1244, 1164.665;
*H NMR (deuterochloroform) δ 8,45 (IH, s), 8,00-7,59 (711, m), 4,69--4,65 (111, m), 4,25--4,12 κι (IH, m), 4,103, 99(1 H, m ), 3,73-3,55 (2H. m), 2.40-2.30 (IH, rn), 1,99-1,91 (IH, rn), 1,82-1,62 (2H. m). 1,48 1,46 (2H.m), 1.37 (9H.s).
Analýza pro CN.d LbWXS. 11>():
vypočteno: C. 54,53; Ik 5.97; N, 11,06, nalezeno: C, 54,60; H. 5.73; N. 10,95.
Hmotová spektroskopie (ES ) 489.
Sloučenina (262c), získá se 120 mg (80 %) bezbarvé pěny:
[α]|>22 + 22,6° (e, 0,1, diehlorrnethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3316, 1732, 1671, 1609, 155E 1495, 1455, 1432, 1316. 1288, 1245, 1218. 1158, 1122, 1023;
'H NMR (deuterochloroform) δ 7,16 (411. m), 6,79 (IH, ni), 6,60 (1H. m), 5,1 I (IH, m), 4,59 (1H, m), 3,89 (2H. m), 3,77 (3H, s), 3,72 (2H. m). 2,85 (1H, m).
Sloučenina (262d) (81%) se získá jako bezbarvá pěna:
[a]i)“‘ + 3.7° (e 0.1, diehlorrnethan);
Infračerveně spektrum (bromid draselný) 3468, 3446. 3269. 1734, 1698. 1667, 1609, 1555. 1490, 1461, 1433, 1423, 1296, 1246, 1215, 1173, 1157, 1028, 756;
-248 CZ 300171 B6 lH NMR (deuterochlorfonri) δ 8,23 (1H, m), 7.95 (IH. s). 6.95 (4H. ni), 5,15 (IH, m). 4,60 (IH, m). 3,98-3,65 (4H, m). 3.89 (3H, s). 2,90 (IH. m). 2,48 (IH. m). 2.25 (IH. m), 2.05-1,65 (2H, m), 1,48(911. s).
? Sloučenina (262e) se získá jako bílá pěnovitá pevná látka (155 mg, 53 %): teplota tání 53 až 57 °C [a]D 22 + 57,4° (c 0,1. dichlormethan);
to Infračervené spektrum (bromid draselný) 3271,2978, 1733. 1680, 1437, 1314, 1245, 1156;
'H NMR (deuterochloroform) δ 7,46 (IH, s), 7,42 7,20 (5H. m). 5.03 (1H, dd). 4,52-4,40 (1H. m), 3,96-3.70 (2H. m). 3,70-3,49 (1H, m), 3,63 (2H, s), 2,92-2.75 (1H. m), 2.43-2,33 (IH. m), 2,33-2.15 (1Π, ni). 2,00-1,50 (3H, m), 1,45 (911. s).
Analýza pro C?, H,„N4Os. 0,25 ILO;
vypočteno; C, 59.91; H. 6,82; N, 13.31. nalezeno: C, 60.19; H. 6.80; N, 13,30.
lmotová spektroskopie (ES ) 418(M + 2, 25%). 417 (M + 1. 100). 362 (9). 361 (45).
Sloučenina (2620, se získá jako bílá pevná látka (273 mg, 93 %): teplota tání 102 až 106Q;
[α]|·Λ + 7,5° (e 0,07, dichlormethan);
infračervené spektrum (bromid draselný) 3320, 2979. 1731. 1676, 1669. 1601. 1549. 1444. 1314,
1240, 1156;
'H NMR (deuterochloroform) Ó 7,37-7,20 (6H, m), 7,08-6,98 (IH, m), 5,12 (IH. dd), 1.64-4.55 (IH. m), 4,02-3.78 (2H. m), 3,75-3,65 (1El, m). 2,94-2,75 (IH. in), 2,57 2.35 (IH, m), .to 2.35-2,20 (IH. m), 2,00-1.50 (3H, m). 1,48 (911. s).
Analýza pro C^H^NOs . 0,4 IEO:
vypočteno: C, 56,56; 11, 6.60; N. 16.49. nalezeno: C. 56.89; H. 6.58; N. 16.07.
Hmotová spektroskopie (ES ) 419 (M‘ + 2. 24%). 418 (Μ + I. 100). 363 (15). 362 (81).
242 (10).
Sloučenina (262g), (13 g) se získá jako bílá pevná látka (298 mg. 70 %): teplota tání 138 až 143 °C [ot]n2> + 69.8° (c OJ. dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3282. 2978, 1733, 1664, 1536, 1421. 1310, 1156,748;
H NMR (deuterochloroform) δ 9,67 (1H, s), 9.53 (IH, s), 7.50 (111. d), 7,30-7,15 (2H. m),
7,10 7,00 (IH. m), 6.93 (Π1, s). 5,16-5.12 (111, m). 4.60-4,50 (1H, m), 4,05-3.85 (2H. ni), 3.85-3,70 (IH. m). 3,05 2.90 (IH. m), 2,55-2.35 (IH, m), 2.35-2,20 (IH, m), 2,00-1.85 (111, m). 1,85-1,50 (211. m), 1,47 (9H, s).
Analýza pro C22H27N5Cb. 0,45 H2O;
vypočteno: C 58,77; H, 6,26; N. 15,58, nalezeno: C, 59,14; H. 6.24; N, 15,18.
- 249 CZ 300171 B6
Hmotová spektroskopie (ES ) 433 (M + 2, 26%), 442 (M’ + 1, 100). 387 (17), 386 (79), 285 (20), 229 (85),211 (26), 185 (15), 183 (57), 139 (9).
Sloučenina (262h). se získá jako bílá pevná látka (325 mg, 73 %): teplota tání 209 až 212 °C; [<x]o2í + 62,4° (c 0,2. diehlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3513, 3269, 2980, 1731. 16GO, 1653, 1599. 1531. 1314, 1158;
io 'H NMR (deuterochloroform) δ 9,40 (IH, s) 8.75 (IH, s), 7,72 (2H. d), 7.47 (2H, d), 5,15-5,05 (III, ni). 4.55-4,45 (111,m ). 4,05-3,70 (3H. m), 3,00-2,80 (lil. m). 2,45-2.35 (IH. m), 2.30-2.15 (1H. m). 2.10 (3H. s). 2,00-1,80 (1H. m). 1,80-1,50 (214. m). 1.48(914, s).
Analýza pro C\>I Ι_Ά(% vypočteno: C. 57,51; Π, 6,36; N, 15.24, nalezeno: C, 57.41; H, 6.38; N, 15.12.
Hmotová spektroskopie (ES ) 461 (M' + 2, 269). 460 (Μ' + 1, 100). 405 (12), 404 (55), 354 (7), 285 (23), 229 (52). 183 (22).
Sloučenina (262i), se získá jako bílá sklovitá pevná látka (76 %): teplota tání 85 až 89 °C;
[α]n ' -t- 66,4° (c 0.11, diehlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 1732, 166, 1607, 1502. 1440. 1312, 1295. 1258, 1176, 1157, 1025;
II NMR (deuterochloroform) δ 8,25 (1H, s), 7,77 (2H, m). 6,90 (2H, m). 5,11-5.07 (IH. m), 4.55—4,48 (111. m), 4.01-3,91 (211. m), 3,86-3,78 (IH, m). 3.85 (311. s). 2.98 (1H. m). 2.46-2,40 mi (1H, m), 2,26-2,20 (1H, m), 2,051,80 (1H, m), 1,70-1,64 (2H. m). 1.48 (911, s).
Sloučenina (262j), se získá jako bílá krystalická pevná látka (79 %): teplota tání 182 až 183 °C (za rozkladu):
[α]υ 22 + 92. C (e 0,4. diehlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný), 3823, 1732, 1684. 1448, 1430, 1404, 1369, 1338, 1306. 1285, 1242, 1169, 1091,692;
'H NMR (deuterochloroform) δ 7,89 (2H, d. J “ 7.4), 7.76 (III, s). 7,64-7,49 (311, m), 4,83 (IH, m). 4.35 (IH. široký d, J - 13,0). 4.00 (IH, m), 3,74-3,63 (2H. m). 2.39-2.26 (2H, m), 2.06 (IH, m), 1,50-1,41 (10H, m).
Analýza pro CioHi^SNA,:
vypočteno: C. 52.04; H, 5,98 N, 12,78, nalezeno: C 52,11; H, 5.95; N, 12.71.
Hmotová spektroskopie (ES ) 437 (Μ1 - 1, 100%).
Získá se sloučenina (262k). (83 %):
[aji/2 + 42.3° (e 0,11. diehlormethan):
- 250 CZ 300171 B6
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3287. 2997, 2935. 1735. 1681. 1606, 1501. 1296, 1248. 1173, 1155.
'H NMR (deuteroehloroform) β 9,23 (1H, s), 7,73 (2H. d), 7.38 (SH. m), 6.85 (2H, d), 5.08 5 (IH, m), 5.02 (211. s), 4,48 (1II, bd). 4.15-3,65 (3!I, m). 2,95 (III, m), 2.45-2.10 (211, ni). 1.88 (lil, rn). 1.63 (2H. m). 1.48 (9H,s).
Hmotová spektroskopie (1:5 ) 509 (Μ+1).
io Sloučeniny 26?a-k se pripravi pomoci způsobů použitých pro přípravu sloučeniny 212
Sloučenina (263a), 348 mg (94 %) se získá jako bílá pěnovitá pevná látka:
[tt]D 21 + 171° (e 0.056. diehlormethan):
Infračervené spektrum (bromid draselný), 3426, 3233. 2953. 1734, 1663, 1481, 1415, 1340. 1214, 1167, 1132, 1075,668;
'11 NMR (deuteroehloroform) δ 8,44 (III, s), 8,00-7,60 (711. m), 4,85X83 (III, m), 4.25-4.00 20 (IH, m). 4,07-3,90 (IH, m), 3,70-3,46 (2H. m), 2,38 2.30 (IH. m), 2,12-2.01 < 1H. m).
1.91-1.83(111, m). 1.46-1,26 (1 H. m), 1,13-1,06 (1H, m), 0,90-0,77 (1H, ni).
I Imotová spektroskopie (ES ) 431.
Sloučenina (263b). Získá se 200 mg (100 %) bílé pevné látky: teplota tání 155 °C;
[ct]rí° + 13° (e 0,07. diehlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3431. 2935, 1734, 1663, 1531, 1435. 1292, 1177;
'11 NMR (deuteroehloroform) 6 9,73 (1H, široký s). 7,73-7,27 (5H. m). 5.35-5,25 (111. m). 4.56 4,48 (IH. m). 4,05-3.65 (311. m), 3.12 3.00 (III, m). 2.50-2,45 (IH. m). 2,30-2.20 (lil, m). 2.10-2,00(111, m), 1,75-1,61 (2H m).
Hmotová spektroskopie (15 ) 401.
Sloučenina (263e), získá se 216 mg, (100 %) bezbarvé pény:
[u]D 2, + 32.5° (c 0,1, diehlormethan):
to
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3326. 1730, 1661, 1610, 1555, 1495, 1431, 1314, 1288, 1217, 1175, 1161;
'11 NMR (deuteroehloroform) ó 7,87 (IH, s), 7,58 (IH. s), 7,19 (2H, m). 6.82 (lil, m), 6,62 45 (IH. m), 5.21 (IH. m ).4.55 (IH. m). 3.76(311, s), 4,0-3.65 (4H. m), 2,85 (IH, m). 2.35 (2H, m),
1.75 (11 Em). 1.71 (2H, m).
Sloučenina (263d), (100 %) se získá jako bezbarvá pěna:
[α]μ24 + 11,7° (e 0,1, diehlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný), 3394, 3325, 1666. 1603, 1543, 1490, 1463, 1438, 1329, 1311. 1292, 1249, 1214. 1176, 1119, 1024.752;
-251 V_ L OUUI /1 OO 'H NMR (deuterochloroform) δ 8,15 (IH, m), 7,97 (2H, m), 7.15-6,84 (311, m). 5,29 (IH, m). 4.62 (IH, m). 4,04-3,65 (4H. m). 3,89 (3H, s), 2,92 (1H. tn). 2,50 (IH, tn), 2,30 (lil, tn), 2,10-1.75(211, m).
? Sloučenina (263c), se získá jako bílá pěnovitá pevná látka (117 mg, 98 %); teplota tání 109 až 114 °C;
laji/4 + 82,6° (c 0.06, dichlormethan):
ιο Infračervené spektrum (bromid draselný) 3700-2250 (široký), 3437, 3274, 2959, 1733, 1664, 1481, 1437. 1310, 1177;
'H NMR (deuterochloroform) δ 7,99 (IH, s), 7,40 7.15 (511. m). 5.15-5,10 (IH. m), 5.25-4,70 (IH. široký s). 4,5(M,35 (IH, m), 3.95-3,50 (3H, m), 3,61 (2H. s). 2,93-2,78 (1H, m), 2,40-2,20 ís (211, tn), 2,10-1,80 (IH, m), 1,80-1,60 (2H. m).
Analýza pro CitHioN/N- 1 H2O:
vypočteno: C, 53,96: II, 5,86; N, 14,81. nalezeno: C, 54.12; H. 5,50. N, 14,68.
Hmotová spektroskopie (ES ) 360 (M . 21%), 359 (M - 1. 100). 196(14), 182 (14), 111 (7).
Sloučenina (262f), se získá jako bílá pěnovitá pevná látka (199 mg, 92 %): teplota tání 149 až 152 °C’;
[α]υ 24 + 92,0° (c 0,01, methanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3700-2300 (široký), 3319, 2956. 1726, 1664, 1600, 1548. 1500, 1444. 1313, 1238, 755;
'H NMR (perdeuterodimethylsulfoxid) δ 8,90 (1H, s). 8,24 (1H, s), 7,42 (2H, d), 7,30-7.20 (2H, m), 7,00-6,90 (lil. m). 4,98^1.92 (IH. m), 4.32-4,22 (IH. m). 3.80-3.55 (3H. m). 2,85-2,70 (1111, m). 2.30-2,20 (1H, m), 2,20-2.00 (1H, m), 1.90-1,35 (3H, tn).
Analýza pro Οκ,ΗμΝ.Λλ. 0.75 H2O;
vypočteno: C. 51.26; 11. 5,51; N, 18,68, nalezeno: C, 51,11; H. 5.23; N, 18,42.
Hmotová spektroskopie (ES ) 361 (M\ 20%) 360 (Μ’ - I. 100), 241 (11), 240 (89). 196 (15), 175 (29), 111 (12).
Sloučenina (263 g), se získá jako bílá pevná látka (259 mg, 92 %) teplota tání 248 až 251 °C;
[o]r,24 + 94,0° (c 0,01, methanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 37002300 (široký) 3341,2956. 1738. 1668, 1651, 1529.
1425, 1311, 1259,751:
'H NMR (perdeuterodimethylsulfoxid) δ 13,29 (IH, široký s). 11,72 (IH, s), 10,64 (IH, s), 7,65 (lil, d). 7.45 (IH, d), 7,26-7,15 (IH, m), 7,17 (IH, s), 7,10-7.00 (IH, m). 5.05 4.95 (111, m), 4,40^1,25 (IH. m), 3.90-3.50 (3H. m). 2.88-2,75 (IH, rn). 2,38-2,20 (111. ni). 2,20-2,00 (1H,
m), 1.90-1,35 (311).
Analýza pro (218Η,„Ν5Ο5. 0,5 IhO:
vypočteno: C. 53,59; H; 5,25; N, 17,35,
- 252 CZ 300171 B6 nalezeno: C. 53.66: H, 4,88; N, 17,11.
Hmotová spektroskopie (ES ) 385 (M , 23%), 384 (Μ - 1, 100). 298 (6).253 (8), 227 (10), 199 (23), 196(10), 173 (9), 126 (21).
Sloučenina (263h) se získá jako bílá pevná látka (282 mg, 99 %): teplota tání 210 až 215 °C;
[ajif4 t 74.5° (c 0.01, methanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný). 37002300 (široký) 3444, 3316, 2960. 1664, 1599, κι 1531. 1439, 1301, 1184;
'll NMR (perdeuterodimethylsulfoxid) δ 13.30 (IH, široký s), 10.50 (IH. s). 10,25 (IH. s), 7.80 (2H, d). 7,68 (211, d). 5,00-4.90 (IH, m), 1,35 4.25 (III, m), 3,90-3.40 (31 km ), 2,88-2,70 {IH, m), 2,35-2,25 (11-1, m). 2,25-1,95 (111, m), 2,08 (3H, s), 1.95-1,35 (3H. m).
Hmotová spektroskopie (ES ) 403 (MY 10%) 402 (Μ - I, 100), 385 (10), 247 (10), 227 (16), 219 (51). 198 (12), 184 (17).
Sloučenina (263i) se získá jako bílá sklovitá pevná látka (přibližně 100%. která se použije bez 20 čištění:
Ί·Ι NMR (deuterochloroform) δ 9,23 <111, s). 7,72 (2H, d, .1 = 8,8), 6,81 (2H, d, J = 8,9), 5,22 (IH, m). 4,51 (IH, m), 3,97-3,72 (2H, m). 3,81 (3H. s), 3,03 (IH, m), 2,51-2,46 (li-l, m), 2,31 -2,25 (1H. m), 2,03 (1H, m). I.72 (2H, m).
Sloučenina (263j) se získá jako bílá pevná látka (100 %): teplota tání 73 až 83 °C (za rozkladu); [a][X + 104.7° (c 0,3, dichlormethan).
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3600-2500 (br), 3208. 1734. 1666. 1481. 1448. 1416,
1338, 1311, 1214, 1171, 1091,729, 689;
'][ NMR (deuterochloroform) δ 7,87 (311. m). 7,70-7,50 (3H, ni), 7.16 (IH. široký s). 4.99 (1H, ni), 4,37 (1H, široký d, .1 - 12,8). 3.92 (1H, m), 3,67 (2H, m). 2.36 (2H. m). 2,13 (í H, široký d, J = 12,2), 1,56 (3H,m).
Analýza pro C,sIIixSN4Oft. 0,25 CE.,CO,I1: vypočteno: C 45,31; H, 4,48 N. 13,64, nalezeno: C, 45,4á; H, 4,71; N, 13,43.
4d Hmotová spektroskopie (ES) 383 (M1E. I00%),m přesná hmotnost vypočtena pro CmHiqSNjOí, (Mil ): 383. 1025, nalezeno: 383.1007.
Sloučenina (263k), získá se 100%: teplota tání 130 až 142 °C;
4? Infračervené spektrum (bromid draselný) 3272. 2945, 1738, 1650. 1611. 1501, 1445. 1309. 1255,
1171;
‘11 NMR (deuterochloroform) δ 9,35 (IH, s), 7,74 (211, d). 7,38 (5Η. m), 6,85 (2H, d), 5,40 (IH, široký s). 5.19 (1H, s). 5,02 (211, s), 4.49 (111. d). 3.92 (2H, m), 3,68 (1H. m), 2.99 (111, široký s).
2,43 (1H, široký s), 2,22 (1H, široký s), 1,99 (111, široký s). 1.68 (2H. široký s).
- 253 CZ 300171 B6
(5251) (2631)
Sloučenina (5251) se získá pomocí způsobil použitého pro přípravu sloučeniny 211 za získání hi l.-i L ipL o novnn ntL·,: ti ÍS π «1 w/.V tun Ir.lo t, η,· 1 ,1 -i > J S [a]n 2ft 75,2° (e OJ. dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3272, 2955, 1747, 1664, 1610, 1485, 1443, 1265, 1040;
Ί1 NMR (deuterochloroform) 6 8,66 (l H, s), 7,32 (1H. dd). 7,23 (1 H. d), 6.76 (1H, d), 6,02 (211, io s), 5.20 (IH, dd) 4,55—4.45 (lll. m), 4.03-3.70 (311, m), 3,05-2,88 (IH, m), 2.47-2,35 (IH, m),
2,35-2,20 (111, m), 2,10-1,90 (1 H, m), 1,85-1,50 (2H, m),
Analýza pro C]81 djoNjO?. 0,5 H2O:
vypočteno: C , 52,87; H. 5.06; N. 13.70.
nalezeno: C, 52,84; H, 5,00; N. 13,66.
Hmotová spektroskopie (ES ) 406 (Μ i 2, 20%). 405 (Μ' + I, 100), 391 (10). 162 (6). 148 (3). 105(2).
Sloučenina (2631). Suspenze sloučeniny 5251 (3,32 g, 8,2 mmol) v tetrahydrofuranu (601) se 2(i reaguje s roztokem EiOH-H2O (0,69 g, 16,4 mmol, 2,0 ekvivalentu) ve vodě (20 ml). Vzniklá směs se míchá 1 hodinu, zahustí a zbytek se rozpustí vc vodě (50 ml),. Roztok se okyselí za použití 2M roztoku hydrogensíranu sodného a produkt se extrahuje ethylaeetátem (100 ml a 50 ml podíly ). Spojené extrakty se promyjí solankou (2 x 50 ml), suší nad síranem hořečnatým a zahustí za získání sloučeniny 2631 jako bílé krystalické pevné látky (2,87 g, 90 %): teplota tání 154 až
158 °C:
[a]D JI t 85,6° (c 0,01. mcthanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3700-2300 (široký). 3248. 2942, 1733, 1681. 1658, 50 1648. 1538. 1486, 1440, 1297, 1255, 1037;
'H NMR (perdeuterodimethylsulfoxid) 5 13,23 (IH, široký s), 10,45 (IH, s). 7,45 (IH, d), 7,35 (III, s), 7,03 (111, d), 6J2 (2H, s). 5,00X93 (IH, m), 4.35 4,25 (IH. ni). 3,90-3.40 (3H. m). 2.95 2,70 (IH.m), 2,40-2,25 (111, m), 2,15-2.00 (IH, rn), 1,91X40 (3H. m).
Analýza pro C|J1I8N,tO7. 0,8 11,0:
vypočteno: C, 50,45; 11, 4,88; N, 13,84, nalezeno: C. 50,80; H, 4,95; N. 13,36.
Hmotová spektroskopie (ES ) 390 (M . 19%), 389 (Μ - I, 100), 345 (9), 204 (31), 182 (27), 40 lll (12).
- 254 CZ 300171 B6
265a, c, d, f
1015, 1018, 1027,
1052, 1056, 1075, 1095
S}oučenína R1
264a
2 65a
H
264c rfr
265c W 0
OUo
H
264d řW
265d
264e
1095
- 255 CZ 300171 B6
264f 265f Q H o Jí
264g 1075 Ππ H o
0 11
264h 1018 ,ÁX H 4
254i o II A
1052 1
264j 1 SO;
1027 0 1
0 II
264k A A
1056 AA
0 H
2641
1015 J
Sloučenina (264a) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 213a za získání bílé pevné látky (240 mg, 82 %):
Infračervené spektrum (bromid draselný) 33780, 3066, 2947, 1789. 1750. 1691, 1454, 1417,
1368, 1298. 1262. 1235, 1192. 1118.756,696;
'H NMR (deuterodimethylsulfoxid) δ 8,59 (111, d. J = 6,8), 8,48 (IH. s), 8,25-8.09 (3H. ni).
7.85-7,75 (3H, m), 7,36*(5H, m), 5,39 (1H, m), 4,21 (2H. AB, J = 14,2), 4,53 4.49 (Hk m), io 4.25-4,10 (2H. m), 3,65-3,44 (311, m), 3,13-2.99 (IH, m). 2.43-2.16 (1H, m), 1,72 0,72 (7H. m).
- 256 CZ 300171 B6
Analýza pro CioH^NOsS:
vypočteno: C, 57,96; H, 5,03; N, 11.27, nalezeno; C, 57,28; H. 5,14. N 10,48.
Hmotová spektroskopie (ES ) 622. s
Sloučenina (264c) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 213c, (55 %) ve formě bezbarvé pěny: teplota tání 135 až 140 °C;
[a]/'1 + 51.6° (e 0,1, dichlormethan):
Infračervené spektrum (bromid draselný), 3314, 1790, 1664. 1608. 1543, 1496, 1455. 1428, 1325, 1287. 1250. 1218, 1160, 1118;
'11 NMR (deuterochloroform) 8 8.00 (IH, d. J = 7,1), 7,66 (IH. s), 7.55 (IH, s), 7.28 (511. m), 15 7.14 (211. m). 6.97 (III, d. = 7,4), 6.59 (III. m), 5,42 (IH. s). 4,66 (5H. m). 3.90-3.65 (4H. m).
3.73 (3H. s), 2.98 (2H. m). 2.38 (2H. ni). 2.01-1,65 (3H, m).
Sloučenina (264d) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 213e. (72%) ve formě bezbarvé pěny:
[α]Γ) 22 + 21.4° (c 0.1. dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3302, 1791, 1689, 1678. 1664. 1602, 1536. 1489. 1461. 1437. 1420. 1119. 1023,942. 751;
Ή NMR (deuterochloroform) 8 8.07 (IH. d, J = 7.7), 7.82 (III. s). 7,68 (III, d, ,1 - 6,7), 7,49 (IH. s). 7.34 (5H, m), 6,96 (3H, m), 5,47 (IH, s), 4,82 (211. d + m. J = 11.5). 4,63 (IH, d. J = 11.5). 4.49 (2H, m), 3,85 (4H. s + m), 3,68 (2H, ni). 3.01 (211. m), 2.46 (2H. ni). 1,95 (311, m), 1.57(IH.m).
Sloučenina (264e) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 213c za získání směsi diestercomerň (poměr izomerů symanli 9:1) jako sklovité pevné látk\ (128 mu. 78 %): teplota tání 103 až 108°C;
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3419. 3302. 1793. 1664, 1535, 1421. 1327, 1256. 1123.
973:
'H NMR (perdeuterodimethylsulfoxid) 8 10.20 (Ό.9Η, s). 9.35 (0.ΙΗ. s), 8.74 (0.ΙΗ. d). 8,49 (0.911. d). 7,36-7.15 (10H, m). 5,67 (0.9H, d), 5.44 (0.ΙΗ, s). 4,85-1,75 (I H. m), 4,74-4.60 (IH,
m). 4,77 a 4.63 (2H. dd). 4,30-4.10 (1H. m). 3,80-3,40 (311, m), 3,43 (211. s). 3.10-2,40 (311, m).
2,25-2,15 (IH, m), 2,00-1,35 (411, m).
Analýza pro C2jU LjNsO?. 0,5 H2O:
vypočteno; C. 60,21; H, 5.77; N, 12.53, nalezeno: C, 60,8; II, 5.83; N, 12,13.
Hmotová spektroskopie (ES ) 551 (M‘ + 2. 33%), 550 (M1 t 1, 100).480(7).343 (8).279 (4),
Sloučenina (2640 se připraví podobným způsobem jako sloučenina 213a za získání čistého syn-izomerů jako bílé pěnovité pevné látky (225 mg. 82 %): teplota tání 130 až 135 °C;
[a],/1 + 10,81 (c, 0.1, dichorornethan);
-257 CZ 300171 B6
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3316, 1791, 1688. 1676. 1664, 1601, 1536. 1445. 1314. 1242,973;
]H NMR (perdeuterodimethylsulfoxid) ó 8.84 (111, s), 8.49 (IH, d), 8.19 (1IE s), 7,45-7,18 (9H, 5 m). 7,00-6.90 (1H, rn), 5,68 (IH. d). 4,90-3.81 (1H, m), 4.75-4,60 {1H, ni), 4.78 a 4,63 (211. dd).
4,30 4,20 (IH, m), 3,75-3,55 (3H, m). 2.85-2,55 (3H, m), 2,25-2,15 (IH, rn). 2,00-1,35 (4H, ni).
Analýza pro C27H30NGO7. 0.5 I I?O; io vypočteno: C. 57.95; H, 5,58: N, 15,02, nalezeno; C. 58,12; H, 5,64: N. 14,81.
Hmotová spektroskopie (F3S ) 552 (M 4 2. 30%), 551 (M' + 1, 100).362 (19), 299(10).279(4).
Sloučenina (264g) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 223e za získání čistého anti15 izomeru jako bílé pevné látky (284 mg. 80 %); teplota tání 148 až 153 °C;
+ 72.0° (e 0,1, dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný), 3404. 3295, 1789, 1660. 1536, 1421, 1310, 1260. 20 1122, 749;
'H NMR (perdeuterodimethylsulfoxid) δ 11.72 (111, s), 10.58 (IH. s), 8.73 (IH, d), 7,65 (III, d). 7.58-7.27 (6H. m), 7,27-7,10 (IH. in), 7.17 (IH, s). 7,10-7,00 (1H, m), 5,46 (111, s), 4,90-4,85 (1H, m), 4,77 a 4,68 (211, dd). 4,35-4,25 (211, m), 3,95 -3.55 (311. m). 3.09 (IH, dd). 2,95-2.80 (IH, m), 2.47-2,25 (2H, rn), 2,10-1,35 (4H, m).
Hmotová spektroskopie (ES ) 574 (M\ 35%) 573 (Μ - I. 100). 384 (16), 383 (69). 341 (23), 327 (12), 267 (13),200 (22).
Sloučenina (264h) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 213e za získání směsí diastereomeru (poměr izomeru symanti 9; 1) jako bílé pevné látky (276 mg, 70 %): teplota tání 147 až 152°C;
Infračervené spektrum (bromid draselný ) 3444, 3304, 1793, 1665. 1602, 1531. 1505, 1423. 1294. 35 1264, 1181, 1123,966;
’H NMR (perdeuterodimethylsulfoxid) ó 10,41 (111, s), 10,22 (IH.s), 8,71 (0,lil, d). 8.48 (0,9H, d), 7,78 (211, d), 7,67 (211, d), 7.35- 7,30 (511. m), 5,68 (0,9H, d), 5.45 (0,1H, s), 4,88-4,80 (1H, m), 4,75 J,60 (IH, m). 4,77 a 4.63 (2H, dd), 4,30-4,20 (IH, m), 3.90-3,50 (3H, m), 3,10-2,50 (311. ni), 2.35 2,20 (lil. ní). 2,07 (3H, s), 2,05-1.35 (4H, m).
Analýza pro C\JE?N6O8. 1 H2O:
vypočteno: C, 57,04; H. 5.61; N, 13,76, nalezeno: C, 56,79; H. 5.50; N, 13,53.
Hmotová spektroskopie (ES ) 594 (M‘ +2, 34%), 593 (M' + 1. 100). 387 (8). 386 (38), 358 (8),
162(19).
Sloučenina (264i) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 213e za získání bílé pevné látky (70 %); teplota tání 116 až 118 °C;
Infračervené spektrum (bromid draselný), 3315, 2951, 1793, 1664, 1607, 1502, 1258, 1177;
- 258 CZ 300171 B6 'Η NMR (deuteroehloroform) δ 8.07 (IH, s), 7.77 (211. d, J - 8,6). 7,35 (511. in), 6.94 (2H, d, J = 8,5). 6.74 (IH), 4,89 (IH. 2m), 3.86 <311. s). 3,79, 3,71-3.53 (3H, 2m), 2.87 <211. m). 2,44 (lH,m), 2.18, 1,91, 1,68 (511, 3m).
? Sloučenina (264j> se připraví podobným způsobem jako sloučenina 213e za získání pěny (88 %): [a]o24 + 74.2° (c 0,36, díchlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3332, 3235, 1793, 1664. 1537, 1448, 1416, 1337, 1169, io 118, 1092,940,690;
'H NMR (deuteroehloroform) δ 7,99 (IH, s). 7,88 (2H, d, J - 6.8), 7,64-7.48 (3H, m), 7,34 (5Π. s), 7,13 (IH, d, J = 6,9), 5,39 < 1H. s). 4.81 (2H. m). 4,62 (IH. d. J - 11.5). 4.48 (III, m), 4,33 (1H, m), 3,85 (1H, m), 3,59 (2H,m ). 3,03 (111, dd, .1 - 7,6, 18,2), 2.49-2,28 (3H. m). 1,94-1,40 (4H, m).
Analýza pro CiftH^oSNíO»:
vypočteno: C, 54,63; H, 5.11 N. 12,25, nalezeno: C, 54,42; H, 5.28; N. 11,62.
Hmotová spektroskopie (ES ) 572 (MH , 100%), přesná hmotnost vypočtena pro C20I I.wSNsOg (MH ) 572, 1815, nalezeno; 572, 1802.
Sloučenina (264k) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 213e (96 %):
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3294, 2946, 1793, 1658, 1606, 1535. 1501, 1248,
1174.1119.
'H NMR (deuteroehloroform) δ 8.91 (IH. s). 7.85 (3H, rn). 7,4 (1011. ni), 7.02 (2H. d), 5.35 (III. s), 5,10 (2H. s). 4,8-4,3 (5H. m). 4,00 (IH. široký s), 3.78 (211. ni). 2.90 (2H. m), 2.5-1,5 (6H. m).
Sloučenina (2641) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 213c za získání směsi diastereomerů (poměr izomerů symanti 1:1) jako bílé pevné látky (1,72 g, 71 %): teplota tání 148 až 160 °C;
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3314, 1780, 1677. 1658. 1651. 1550. 1485, 1439, 1258, 1132, 1038.943:
'H NMR (perdeuterodimethylsulfoxid) δ 10,39 (IH. s), 8,71 (0,5H. d). 8,49 (0.5H, d), 7,44 40 (IH.d), 7,42-7,30 (6H. m), 7,03 (IH, d), 6,12 (211, s), 5,68 (0,511, d), 5.45 (0,5H. s), 4.90-4,82 (1Π, m), 4.82-4,58 (2,5H, rn), 440^.10 (1,5H, m), 3,90-3.65 (2H. m), 3,65-3,43 (IH, m). 3,09 (0.5H, dd). 2 90-2,55 (1,511, m), 2,4-2,10(211, m), 2,10-1,35(411, m).
Analýza pro C28H19N5O9.0,2 ΗΌ: t? vypočteno: C, 57,67; H, 5,08; N. 12,03, nalezeno: C, 58,01; II, 5,33; N, 11,51.
Hmotová spektroskopie (ES1) 581 (M + 2, 33%), 580 (Mý 100), 374 (9), 373 (48), 345 (12). 261 (4), 239(7). 149(9).
5o Sloučenina (265a) sc připraví podobným způsobem jako sloučenina 265 za získání bílé pevné látky (37 mg. 17 %): teplota tání 126 až 130 °C (za rozkladu);
[a] t- 30° (e 0.05, methanol);
- 259 C7. 300171 B6
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3371,2935. 1785, 1663, 3 538, 1418, 1339. 1164, 669;
'H NMR (perdeuteromethanol) δ 8.44 (111. s). 8.06-7,50 (7H, m), 7,22 (Ih, d, J=8,4). 4,58-4,57 (1H, m), 4,46-4,42 (1H, rn). 4,16-4,09 (2H, m), 3,85-3,50 (3H, m), 2.842.78 (111, m). 2.64-2,51 (1H, ni). 2.44-2.15 (2H. rn). 1.81-0,89 (411, m).
Analýza pro C2'H2?NOh . ΗΌ:
vypočteno: C, 50,27; H. 4.95; N, 12.74.
io nalezeno: C, 50,33; H, 5,04; N, 12,60.
Hmotová spektroskopie (ES ) 530.
Sloučenina (265c) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 265. (90 %) jako bezbarvá pevná látka: teplota tání přibližně 150 °C (za rozkladu);
!5 [a]if ' + 94,8° (c 0,1.20 % methanol/dichlormelhan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3330. 1780, 1660. 1610, 1550. 1495, 1428, 1326, 1287, 1251,1223,1160;
'H NMR (perdeuteromethanol) δ 7,16 (2H. ni). 6,89 (IH, d, J 7.8), 4.58 (IH. m), 4,37 (2H, m). 3,76(611, s + rn). 2.95 (1II, m), 2,67 (1H. m). 2,33 (1H. rn), 2,20-1.85 (311, m). 1.66 (IH. m).
Sloučenina (265d) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 265. (85 %) ve formě bez25 barvé pevné látky: teplota tání 176 až 185 °C;
+ 11,0° (c OJ, methanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný). 3392, 3328, 1784w. 1665, 1603. 1537. 1490. 1462.
1437, 1337. 1290. 1290, 1217, 1177, 1119, 1023);
'ií NMR (perdeuteromethanol) δ 8.02 (211. m), 6,95 (411, ni). 5,05 (I H, m). 4.60 (211, tn), 3,92 (4H, s + m). 3.00 (2H, in). 2,68 (IH, ni), 2.39 (111, m), 2.00 (4H, m). 1.69 (1II, ni).
Sloučenina (1095) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 265 za získání bílé pevné látky (84 mg. 90 %): teplota tání 180 až 186 °C;
fa]u + 22,3° (c 0,065, methanol);
to Infračervené spektrum (bromid draselný) 3700-2300 (široký). 3287. 1664, 1536, 1425, 1261, 1181;
'H NMR (perdeuteromethanol) δ 7,35-7,20 (5H, m), 5,00-4,90 (III. m), 4,60 4,50 (IH, ni). 4,50-4,10 (2H, m), 3,90-3,50 (311, ni). 3,54 (2H, s), 3,00-2.80 (1 H, ni), 2,80-2,40 (2H. m).
2,35-2,20 (1H, m), 2,20-1,50 (4H, ni).
Hmotová spektroskopie (ES1 > 459 (M’ 24%), 458 (Μ 1, 100), 358 (27), 175 (9). 149 (7), 137 (12), přesná hmotnost vypočtená pro CRiH^rMCb (MH ); 460, 1832. nalezeno: 460, 1840.
Sloučenina (265 f) se připraví podobným způsobeni jako sloučenina 265 za získání bílé pěnoviíé látky (130 mg, 88 %): teplota tání 157 až 162 °C;
[ct]i)21 + 41,7° (e OJ. methanol);
- 260 CZ 300171 B6
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3700-2300 (široký); 3325, 1782, 1663, 1547. 1443.
1315,1242,1181;
lH NMR (perdeuteromethanol) 6 7,40 (211. dd), 7,35-7,20 (211, m), 7.06-6.95 (III. m), 5 5,05-4.95 (IH. m), 4,64M,54 (IH, m), 4,50M,35 (lil, m), 4,35 4.15 (IH. m). 3,90-3.69 <311.
m), 3.00 2.85 (1H, m). 2,80-2,45 (3H. m), 3,40-1,50 (4H,m ).
Hmotová spektroskopie (ES ) 460 (M . 24%), 459 (M - 1. 100) 341 (9). 340 (54), 296 (6). 239 (9).
io
Sloučenina (1075) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 265 za získání bílé pevné látky (184 mg. 83%); teplota tání 210 až 215 °C;
lezli)1 t- 43,9° (e 0.1, methanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3700-2300 (širokv), 3309. 1660, 1537, 1423, 1311, 1262,1184;
'11 NMR (perdeuteromethanol) δ 7,61 (IH, d), 7.45 (III, d), 7,28-7.15 (IH, m). 7.15-7,00 (1 H, 2o m). 7.13 (lil, s), 5,12 4,96 (IH. m), 4.62M55 (IH, m), 4.50M.23 (2H, m). 4,00-3,69 (3H,m),
3.05-2,90 (1H, m). 2.80-2,30 (311, m), 2.25-1,50 (411, m).
Hmotová spektroskopie (ES ) 484 (M , 26%), 483 (Mf - 1, 100). 383 (25). 245 (12), 208 (I 1), 200 (21). 174 (31), 137 (18).
Sloučenina (1018) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 265 za získání bílé pevné látky (177 mg, 82 %); teplota tání 235 až 240 °C;
[a]i<' + 27,3° (e 0,1. methanol);
,1Í)
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3700 2300 (široký), 3311, 2957. 1662. 1599. 1531, 1318. 1266, 1182;
'H NMR (perdeuteromethanol) δ 7,83 (2H, d), 7,69 (2H, d). 5.10-4,95 (IH, m). 4,64-4,55 35 (1H, m). 4,5(M,35 (IH, m). 4,32-422 (1H. m), 4,00-3,65 (311, m), 3,05 2.90 (IH, m). 2.80-2,30 (311. m). 2,15(311, s), 2,15-1.50 (411. m).
Analýza pro 1.5 H2O;
vypočteno; C, 49,90; H. 5.52; N, 15.87.
nalezeno; C. 50,21; H, 5,41; N, 1549.
Hmotová spektroskopie (ES ) 502 (M\ 28%), 501 (Μ - I, 100). 401 (8), 218 (4), 119 (2), 118(5). 113(16).
Sloučenina (1052) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 265 za získání bílé pevné 45 látky (0,194 g, 100 %): teplota tání 138 až 142 °C;
[α]ι?ϋ 1 36,3° (e 0,19, methanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný). 3434-2962, 1782, 1660. 1607, 1537. 1504, 1441, 50 1424, 1313. 1293. 1238, 1 177;
II NMR (perdeuteromethanol) δ 7,11 (2H. d. J=8.8), 6.90 (211, d, J = 8.9), 4,48 (IH, m). 4.34,
4.28 (III, 2m), 4,15 (111, m). 3,75 (311, s), 3,75, 3,70 (311, m), 2,88, 2.49, 2,28, 2.23, 2.00, 1.86,
1,79. 1,58(811, m).
-261 CZ 300171 Bó
Sloučenina (1027) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 265 za získání bílé pěny (88 %):
[a]p24 + 22,6° (c 0,17. melhanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3349. 1789, 1663. 1537, 1448, 1337. 1169, 1092,690;
'H NMR (perdeuteromethanol) δ 7.82 (211. d. J 7,8), 7,57 (3H, m), 4.74 (IH, m), 4,47 (IN, m), ío 4.24-l,lí)(2H,m). 3,72-3.47(411, m), 2.62 2,48 (311, m), 2.20 (1 H.m), 1.94-1.35 (3H, rn).
Hmotová spektroskopie (ES ) 480 (M' - 1. 100%), přesná hmotnost vypočtená pro CmlL^SNsO^ (MH)482, 1346, nalezeno 482. 1325.
i? Sloučenina (1056) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 265, (58%); teplota tání >300 až 175 °C;
Infračervené spektrum (bromid draselný). 3392, 1660, 1610. 1507. 1442. 1280. 1171, 1149, 1133.
'H NMR (perdeuteromethanol) δ 7,74 (2H. d .18,7) 6.84 (2H, d .1 =8,7), 4,58 (IH, m). 4,41 (IH, bd. J = 12.6). 4,28 (lil. m). 3.85 (3H, m), 2,98 (IH. m). 2,8-2,3 (3H, m). 2,3-1.6 (4H, m).
Sloučenina (1015) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 265 za získání bílé pevné 25 látky (142 mg, 58%): teplota tání 170 až 175 °C;
[α]ιΓ t 32.7° (e 0,1 methanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný), 3700-2500 (široký), 3325, 2969. 1784, 1662, 1485, 5o 1440, 1292, 1258. 1037;
'H NMR (perdeuteromethanol) δ 7,45 (111, dd) 7.32 (III, d). 6.90 (IH, d). 6.05 (2H, s). 5,10-f,90 (IH, m). -1.62-1.54 (IH, ni), 4,45-4.35 (lH,m ), 4,33-4,22 (1Π, m), 3.95-3.65 (3H, m). 3,05-2,90 (IH. m), 2,80-2,30 (3H. m). 2.20-1,50 (411,m ).
Sloučenina (526) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 502 za získání sklovité pevné látky:
[a]if° 34° (e 0,13, dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3437, 2929, 1670, 1530, 1428, 1288, 1156;
'H NMR (deuterochloroform) δ 10,0 (NI, široký s), 9,74 (IH, široký s). 7.93 (IH. s). 7.80-7.60 (211, m). 7,40-7,18 (3Π, m), 6,15-5,30 (2H, široký s), 5,00 4,85 (211, m). 4,50-4,25 (IH. in).
3,95-3,75 (3H. rn), 3,12-2,78 (2H, m), 2,73-1.60 (7H, m), 1,36 <9H, s).
- 262 CZ 300171 B6
Analýza pro CC-HuNsCbS:
vypočteno: C, 52,76; H, 5.58; N. 18.23. nalezeno: C, 52,25; II, 5,74: N. 16.30.
Hmotová spektroskopie (ES ) 615,
Sloučenina (1053) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 214 za získání bílé pevné látky (106 mg. 73 %):
io [tx]rC° + (c 0,10. methanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3428. 2944, 1733, 1652, 1532. 1433. 1337, 1288, 1186;
'11 NMR (perdeuteromethanol) δ 7.95 (111, s), 7.90 7,85 (211, ni). 7.43 7,35 (211, m), 4,98 (IH, i? m), 4.65G.52 (IH. m), 4,40-4,20 (2H, m). 3,85-3,70 (3H. m). 3.30-3,25 (3H. m), 3,03-2,85 (IH. rn). 2,70 2,31 (3H, rn), 2.10-1,55 (4H. m).
Hmotová spektroskopie (ES ) 500 (jako methylaceetaldehydu).
(528)
Sloučenina (528) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 213a za získání směsi diastereomerů (poměr izomeru syn: anti 1:1) jako krémová pěnovitá pevná látka (1.05 g, 58 %): teplota tání 124 až 132°C;
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3312, 2979, 1790, 1664, 1610 1532, 1485, 1285. 1120,
1037.932;
'H NMR (perdeuterodimethylsulfoxid) δ 10.39 (IH, s). 8,71 (0.5H, d), 8,3 (0.511). d), 7.45 (IH, d). 7,36 (IH. s), 7.04 (IH, d), 6.12 (211, s), 5,58 (0,5H. d), 5,34, (0.511, s), 4,95-4,85 (IH, m). 4,70- 4.52 (0,511. m). 4,35-4,10 (I.5H. m). 3,95-3,50 (5H, m), 3,03 (0.5H. dd). 2.90-2.55 (1,5H, ,-ω m), 2,46-2,20 (21 Lni), 2,10-2,40 (4H,m). 1.16-1,13 (3H, 2 x t).
Analýza proCJGbECh. 0.6 IEO:
vypočteno: C\ 52,29; H, 5,38; N, 13,26, nalezeno; C. 52,53; H. 5.35; N, 12.78, ?5 Hmotová spektroskopie (ES ) 519 (M ! 2. 27%), 518 (M! + 1. 100),472 (7),374 (12).373 (53),
345 (14), 149 (12),
- 263 CZ 300171 B6
Příklad 31
Sloučeniny 640. 642. 645, 650. 653, 655, 656. 662, 668, 669, 670. 671. 677, 678. 681,682. 683. 684, 686, 688a, 688b, 6891, 689b, 690a, 690b. 691a. 691b, 695a. 695b. 695e. 692a. 692b, 693 a 694 se připraví následujícím způsobem.
cu»
Sloučenina (638) se připraví ze sloučeniny 600a podobným způsobem jakou se připraví sloučenina 602ni ze sloučeniny 600a za získání 2,4 g sloučeniny 638 jako bílé pevné látky.
o Sloučenina (639). K roztoku sloučeniny 638 (630 mg. 1,76 mmol) a 2-naftyhnethylbromidu (428 mg, 1.94 mmol) v aeetonitrilu se přidá uhličitan draselný (608 mg, 4.4 mmol). Vzniklá směs se míchá při teplotě místnosti. Po 18 hodinách se reakční směs zředí dichlormethanem, promyje vodou, potom solankou, suší se nad síranem sodným, potom se odpaří ve vakuu. Po velmi rychlé chromatografií (silikagel, 20 % ethylacetát/dichlormethan) se získá 405 mg sloučeniny 639.
Sloučenina (640) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 605v ze sloučeniny 602v za získáni 205 mg sloučeniny 640 jako bílé pevné látky.
H NMR (deuterochloroform) δ 2,4-2,55 (ni, IH), 2,65-2,8 (m, III), 3,2 (s, 3H). 3,72-3,78 o (m, IH). 3.85—4.0 (ιη, 2H), 4,22—4,28 (d, lil), 4,26-4,5 (m, 4H), 4,58 4,75 (m, 1 Η), 4.78A85 (m. 111), 5.0-5,08 (t, 111),7,35 7.65 (m, 7H), 7.85-8,02 (m, 4H).
Sloučenina (642) se připraví ze sloučeniny 638 podobným způsobem jako sloučenina 605m za získání 213 mg sloučeniny 642, 'H NMR (perdcuteromethanol) δ 2,5 (m, 1H), 2,68 (ddd, IH), 3,25 (s, 2H). 3.3 (s, 3H), 3,78 (m, 2H). 4.0 (d, IH), 4,3 (m, IH), 4.6 (m. 2H), 4,85 (široký s, 2H), 7,08-7.22 (m, 2Π), 7.35 (m. III), 7,47 65 (m, 411),7,7 (dd. 111),8,1 (dd. 111).
-264 CZ 300171 B6 o o (643)
Sloučenina (643). K suspenzi N -acetylglycinu (200 mg. 1,7 mmol) v dichlormethanu (2,5 ml) obsahujícím dimethylformamid (0.005 ml) se přidá oxalylehlorid (0,450 ml, 5.1 mmol). Po 30 minutách míchání při teplotě místnosti se směs odpaří za získání sloučeniny 643 jako surového produktu.
Sloučenina (644) se připraví ze sloučeniny 600b podobným způsobem jako sloučenina 602b ze sloučeniny 600b za použití sloučeniny 643 za získání 112 mg sloučeniny 644.
Sloučenina (645) se připraví ze sloučeniny 644 podobným způsobem jako sloučenina 605d ze sloučeniny 602d za získání 43 mg sloučeniny 645 jako bílé pevné látky.
'11 NMR (perdeuteromethanol) δ 1,95 (s. 3H). 2,4 (m, IH). 2,65 (m, 1H), 3.4 (s. III). 3,55 (m, 111), 3,85 (m, IH). 4.05 (d. 1H). 4,3 (in, IH), 4.4X.6 (m, 2H), 5,0 (m. III). 7.4-7,7 (m. 611). 7.85-8,0 (m, 21 i).
- 265 CZ 300171 B6
Sloučenina (646) se připraví ze N-Fmoe sarkosinu podobným způsobem jako sloučenina 643 za získání sloučeniny 646 jako surového produktu.
Sloučenina (647) se připraví ze sloučeniny 600b podobným způsobem jako sloučenina 602d ze s sloučeniny 646 za získání 481 mg sloučeniny 647.
Sloučenina (648) se připraví zc sloučeniny 647 pomocí metody použité pro přípravu sloučeniny 604d ze sloučeniny 602d ze získání 409 mg sloučeniny 648.
io Sloučenina (649). Roztok sloučeniny 648 (409 mg, 0,465 mmol) ve směsi acetonitribdiethylamin (4:1, objem/objcm) se míchá při teplotě místnosti. Po 45 minutách s reakční směs zahustí ve vakuu. Po velmi rychlé ehromatografíí (silikagel. 5 až 20% methanol v dichlormethanu) se získá 241 mg sloučeniny 649.
i? Sloučenina (650) se připraví ze sloučeniny 649 pomocí způsobu použitého pro přípravu sloučeniny 605d ze sloučeniny 604 za získání 179 mg sloučeniny 650 jako bílé pevné látky,
TI NMR (perdeuteromethanol) 5 2,4-2,6 (m, 2H). 2,7 (s, 3H), 3.5 (kv, 1H), 3,8 (m. 211), 4,2-4.4 (m, 2H). 4.3-4.45 (m. IH), 5,0-5,1 (m, 2H), 7,4-7,7 (m. 611), 7.857,9 (m. 211). 8,2 (m, 1H).
2() (600b)
O
Sloučenina (652) se připraví ze sloučeniny 600b podobným způsobem jako sloučenina 602n ze sloučeniny 600b za použití činidla získaného reakcí dimethylforainidu se 3 ekvivalenty oxylalehloridu v roztoku dichlormethanu jako R^X, za získání 404 mg sloučeniny 652.
Sloučenina (653) se připraví ze sloučeniny 652 způsobem, který hyl použít pro přípravu sloučeniny 605d ze sloučeniny 602d za získání 84 mg sloučeniny 653 ve formě bílé pevné látky.
H NMR (perdeuteromethanol) δ 2.3 (m. IH). 2,55 (dd, 1H). 3.75 (široký s. IH), 4.25 4.6 (m.5H), 5,15 (m, IH), 7,2-7.45 (m, 6H). 7,8-7,9 (dd, 3Π). 8,1 (s, IH). 8.2 (n< 2H).
- 266CZ 300171 Bó
(656)
Sloučenina (654) se připraví ze sloučeniny 600b za použití způsobu, který byf použit pro přípravu sloučeniny 603d ze sloučeniny 600b za získání 775 mg sloučeniny 654.
Sloučenina (655) se připraví ze sloučeniny 654 za použití způsobu, který byl použit pro přípravu sloučeniny 213a za získání 304 mg sloučeniny 655, ‘11 NMR (perdeuteromethanol) fí 2,4 (d, IH). 2,6-2,75 (m, 2H), 3,0 (m, IH). 3,45 (m. IH), 3.8 (d. 111), 4,0 (l. 2H), 4,4 (m, 2H). 4.5-4,55 (in, 2H), 7,2-7,45 (ιη. 4H), 7,85 (s, 2H),
ID
Sloučenina (656) se připraví ze sloučeniny 655 pomocí způsobu, který byl použit pro přípravu sloučeniny 2002 ze sloučeniny 2001 za získání 136 mg sloučeniny 656 jako bílé pevné látky.
'li NMR (perdeuteromethanol) δ 1,85 (s, 3H), 2.5 (rn, tH), 2,65 (ιη, IH), 3,7 (m, IH), 4.3 15 (rn, IH). 4,55 (m, 2H), 7,4-7.6 (m, 4H). 7,85 (s, 2H).
- 267 CZ JUU171 B6
OBn
O
FmocO O ^^OBn (657)
Jc^— FmoeCcJÚCi (658) (€59)
Sloučenina (657). K roztoku benzylglykoiátu (6,0 g, 36,1 mino!) v dichlormethanu, ochlazeného v ledové lázni, se přidá tluorenylmelhoxychlorformiát (14 g, 1,5 ekvivalentu), potom diisoproyl5 ethylamin (9 ml, 1,5 ekvivalentu). Po 1 hodině se reakční směs nalije do nasyceného vodného roztoku chloridu amonného a extrahuje se diehlormethanem, suší se síranem sodným, potom se odpaří ve vakuu. Produkt se trituruje z methanolu za získání 2,2 g sloučeniny 657 jako bílé pevné látky.
ni Sloučenina (658). K roztoku sloučeniny 657 (2,2 g, 5,93 mmol) v tetrahydrofuranu se přidá 5% palladium na uhlí (220 mg). Vzniklá suspenze se energicky míchá ve vodíkové atmosféře. Po 90 minutách se reakční směs filtruje přes křemelinu. filtrát se nalije do nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a dvakrát promyje ethylacetátem. Vodná vrstva se okyselí a produkt se dvakrát extrahuje diehlormethanem, suší nad síranem sodným a zahustí ve vakuu za i? získání 1.46 g (88 %) sloučeniny 658 jako bílé pevné látky.
Sloučenina (659) sc připraví ze sloučeniny 658 způsobem, který byl použit pro přípravu sloučeniny 643 za získání sloučeniny 659 jako surového produktu.
Sloučenina (660) se připraví ze sloučeniny 600b, za použití sloučeniny 659. pomocí způsobu pro přípravu sloučeniny 604d ze sloučeniny 600b za použití 453 mg sloučeniny 660.
- 268CZ 300171 B6
Sloučenina (661). Roztok sloučeniny 660 (423 mg) ve směsi methanobdicethylamin (1:1, objem/objem) se míchá při teplotě místnosti. Po 10 minutách se reakční směs odpaří ve vakuu na malý objem. Po srážení přidáním etheru se získá 230 mg sloučeniny 661.
s Sloučenina (662) se připraví ze sloučeniny 661 způsobem použitým pro přípravu sloučeniny 6O5d ze sloučeniny 604 za získání 37 mg sloučeniny 662 jako bílé pevné látky.
H NMR (perdeutcromethanol) δ 2.45 (m, 1H), 2.7 (m, IH). 3.75 (m, IH). 3,0 (d. IH), 4,15 (d, 111), 4.35 (m. ΠI). 4,5 (t. 2H). 4.7 (dd, 1H), 7,4 -7.6 (m. 411), 7,85 (s, 2H).
tpsox_jvc| (665)
(668)
Sloučenina (663). K roztoku benzylglykolátu (46,91 g, 0,282 mmol) a diisopropylethylaminu (74 ml. 0,423 mol) v dichlormethanu. ochlazenému ve vodní lázni, se přidá roztok TIPSOFf (95 g, 0,31 mol) v dichlormethanu. Vzniklá směs se nechá ohřát na teplotu místnosti, potom se nalije do vody, dvakrát promyje 10% vodným roztokem hydrogensíranu sodného a zahustí ve vakuu. Po velmi rychlé chromatografií (silikagel, 0 až 5% ethylacetát v hexanu) se získá 71.6 g sloučeniny 663.
Sloučenina (664). K roztoku sloučeniny 663 (0,4 g, 1,2 mmol) v ethylacetátu se přidá 10% palladium na uhlí (33 mg). Vzniklá suspenze sc míchá ve vodíkové atmosféře. Po 15 minutách se reakční směs filtruje přes křemelinu a filtrát sc zahustí ve vakuu za získání 0,29 g oleje. K roztoku tohoto oleje v 1.4 dioxanu se přidá hydrogenuhličitan sodný (0,5M, 2.4 ml).
Vzniklý roztok se zahustí ve vakuu z toluenu za získání sloučeniny 664 jako voskovitč pevné látky.
-269 CZ JUU171 B6
Sloučenina (665) se připraví ze sloučeniny 664 podobným způsobem jako se připraví sloučenina
664 za získání sloučeniny 665 jako surového produktu.
Sloučenina (666) se připraví ze sloučeniny 600b za použití sloučeniny 665, pomocí způsobu pou5 žitého pro přípravu sloučeniny 664d ze sloučeniny 600b za získání 131 mg sloučeniny 666.
Sloučenina (667). K roztoku sloučeniny 666 (131 mg, 0,17 mmol) v tetrahydrofuranu, ochlazenému vlažni led voda, se přidá tetrabutylamoniumfluorid (1M, 0,190 ml). Po 2 hodinách se reakční směs nalije do vody, extrahuje dvakrát ethylacetátem. suší nad síranem hořečnatým (i a zahustí ve vakuu za získání 63 mg sloučeniny 667 jako bílé pevné látky.
Sloučenina (668) se připraví ze sloučeniny 667 způsobem použitým pro přípravu sloučeniny 605b ze sloučeniny 604d za získání 48 mg sloučeniny 668 jako bílé pevné látky, '11 NMR (perdeuterometlianol)δ 2,45 (m, lil), 2,67 (ddd, 111), 3,78 (d, 111), 3,85 (široký ni, IH),
4.05 (d. III), 4,28 (m, IH), 4,5 (ni. 2H). 4,65 (m, 1H), 4,95 (široký s, 211), 7.47 5 \m, 411), 7,52-7.65 (m.3H). 7.88 (d, 2H).
Sloučenina (669) se připraví ze sloučeniny 600b způsobem použitým pro přípravu sloučeniny i) 605b ze sloučeniny 600b za získání 63 mg sloučeniny 669 jako bílé pevné látky
Ή NMR (perdeuterometlianol) 6 1,9 (s, 311). 2,4-2.7 (m. 211), 3.6-3.7 (m, 2H). 3,9 ($, 3H), 4,2-4,4 (m, 211). 4,44,6 (m, 3H), 7,4-7.8 (m, 4H), 7,9 (s, 2H).
(600b)
-270 CZ 3011171 B6
Sloučenina (670) se připraví ze sloučeniny 600b způsobem použitým pro přípravu sloučeninv
655 ze sloučeniny 650b za získání 218 mg sloučeniny 670 jako bíle pevné látky.
'Η NMR (perdeuteromcthanol) δ 1,7-1,75 (2s. 3H), 2,15, 2.2 (2s. 6H), 2.4-2,5 (rn, lH)m, 5 2,6-2,75 (rn,. IH), 3.65-3.75 (m, 2H). 4.2-4,3 (m, 2H), 4.45-1,6 (rn. 3H). 7.357.6 (ιη. 4H), 7,5 (s.211).
Sloučenina (671) se připraví ze sloučeniny 670 způsobem použitým pro přípravu sloučeniny 2002 ze sloučeniny 2001 za získání 253 mg sloučeniny 671 jako pevné látky, fi ]H NMR (perdeuteromethanol) δ 1.9 (s, 311), 2,55 (s, 6H), 2,4-2,5 (m, 1H), 2,6-2,75 (m. IH), 3,65-3,75 (m, 2H). 4,2-4,3 (m. 211). 4.45-4.6 (m. 311). 7,35-7.6 (m, 411), 7,5 (s. 2H).
Sloučenina (672) se připrav í ze sloučeninv 600b pomocí postupu použitého pro přípravu sloučeniny 602n ze sloučeniny 600b za použití sloučeniny 665 za získání 1,08 g sloučeniny 672.
- 271 CZ 300171 B6
Sloučenina (673). K roztoku sloučeniny 672 (1,08 g, 1,69 mmol) v dichlormethanu se přidá 2,6-Iutadinu (0,8 ml), potom TMSOTf (1 ml. 5,1 mmol). Po 1 hodině se reakční směs nalije do hydrogenuhličitanu sodného a extrahuje dichlormethanem. suší nad síranem horečnatým a zahustí ve vakuu na malý objem, který se přímo použije při další reakci.
Sloučenina (674) se připraví ze sloučeniny 673 způsobem použitým pro přípravu sloučeniny 602b za získání 0.91 g sloučeniny 674.
Sloučenina (675). Roztok sloučeniny 674 (0,365 g. 0,5 mmol) v methanolu se míchá s 1M hydio roxidem sodným (1,2 ml. 1,2 mmol). Po 16 hodinách se reakční směs zahustí ve vakuu, potom sc rozpustí ve vodě a dvakrát promyje etherem.Vodná vrstva se rozpustí ve vodě a dvakrát promyje etherem. Vodná vrstva se okyselí 1M kyselinou chlorovodíkovou a produkt se extrahuje cthylacctátcm. suší nad síranem horečnatým a odpaří ve vakuu za získání 337 mg sloučeniny 675 jako pevné látky.
Sloučenina (676) se připraví ze sloučeniny 675 způsobem použitým pro přípravu sloučeniny 213c za získání 166 mg sloučeniny 676 jako bílé pevné látky.
Sloučenina (677). Roztok TBAP (6 ml, 3 mmol) v kyselině octové (0,46 ml, 8 mmol) se přidá ke 2d sloučenině 676 (0,213 g. 0,256 mmol). Po 16 hodinách se reakění směs nalije do ethylacetátu a dvakrát se suší nad síranem horečnatým a odpaří ve vakuu za získání 139 mg sloučeniny 677 jako pevné látky, 'H NMR (deuterochloroform) 6 2.4 (d, lil). 2,5 (dd, IH), 2.8 (dd, lH). 2,92 (dd. 111), 3,15 25 (m. 2H), 3,55-3,65 (m. 2H), 3.72 (s. 6H), 3,92 (m, 111), 4,05 (m, 1H). 4,3 (m, 1H). 4,42 (d, 111),
4,6 (dd. IH), 4,65-4.8 (m, 2H), 4,88 (d. 1H). 5,55 (d, IH), 6,55 (m, 2H). 6,75 (d. 111). 7,25-7,55 (m, 8H). 7,75 (m, 2H).
Sloučenina (678) se připraví způsobem použitým pro přípravu sloučeniny 667 ze sloučeniny 666 5(i za získání 54 mg sloučeniny 678 jako pevné látky, 'n NMR (perdeuteromethanol) δ 2,45 (m. IH). 2,7 (in. IH), 3,5 (m. 211), 3.75 (široký s, 611), 4,05 (d. IH), 4.3 (m, lil). 4,51 4.6 (ni, 211), 4.8 (široký m, 211), 6,7 (d. 2H). 7,4-7.5 (široký m, 3H). 7.6-7.65 (široký m, 2H).
HO zC (6O0b)-- o < V o
(680) H OBn
- 272 CZ 300171 B6
Sloučenina (680) se připraví ze sloučeniny 600b způsobem použitým pro přípravu sloučeniny
677 ze sloučeniny 600b za získání 140 mg sloučeniny 680 jako bílé pevné látky.
'Η NMR (deuteroehloroform) δ 2,31 (d. IH), 2.4 (ddm, 2H), 2,75 (dd. 2H). 2,85 (dd, 1H). 3.36 (široký s, 1H), 3.45 (široký s, 114). 3,6 (široký t, 2H). 3,82 (široký m, 211). 3,95 (široký d, 211). 4.35 (m. 2H), 4,42 (d. IH), 4.55 (m, 1H). 4,70 (d, 1H), 4.82 (široký s. 2H). 5,5 (d, íff), 6.91 (d, IH), 7.25 (široký m. 5H), 7.35-7,46 (široký m, 3H), 7.5-7,6 (m, 211). 8.15 (široký d. 2H.
Sloučenina (681) se připraví ze sloučeniny 680 způsobem použitým pro přípravu sloučeniny 678 ze sloučeniny 677 za získání 45 mg sloučeniny 681 jako šedé pevné látky.
'll NMR (perdeuteromethanol) δ 2,5 (m. lil), 2,7 (dt, IH). 3.65-3.85 (široký m, 314). 4,05 (nt, IH), 4,3 (m, ÍH), 4,5X7 (široký m, 3H), 4.85 (široký s, 214), 7.3 (široký m, 211), 7,4-7.7 (m. 5H). 8,15 (d.2H).
Sloučenina (682) se připraví ze sloučeniny 600b způsobem použitým pro přípravu sloučeniny 655 ze sloučeniny 600b za získání 495 mg sloučeniny 682 jako bílé pevné látky, 'HNMR (deuteroehloroform) δ 2,00 (s, 311), 2,05 (s, 3H). 2.47 (d. lil), 2.58 (dd, IH). 2,85 (dd. lil). 2.89 (dd. IH). 3,9 (m, 2H), 4,05-4,15 (m, 211), 4.19 (dd, IH), 4,45 (m, 211), 4,55-5,05 (m. 8H). 5.55 (d, 114), 6,85 (d, 1H), 7.15 (d. IH). 7,25 7,55 (m, 1011). 7,75 (d,2H).
Sloučenina (683) se připraví ze sloučeniny 682 způsobem, použitým pro přípravu sloučeniny 2002 ze sloučeniny 2001 za získání 82 mg sloučeniny 683 jako bílé pevné látky, '14 NMR (perdeuteromethanol) δ 2.1 (s. 311), 2,5 (m, IH). 2. 68 (m, 114), 3,8 (m. IH). 4,29 (dd, 111). 4,31 (m, IH). 4.45 (d, 111), 4,55 (d. IH). 4.6 (d, IH), 4,72 (d, IH). 4,95 (široký s. 214), 7,45 (široký m, 2Π), 7,52-7,65 (široký m, 511). 7.88 (d, 2H).
(664)
Sloučenina (684) se připraví ze sloučeniny 600b způsobem použitým pro přípravu sloučeniny 605d ze sloučeniny 600b za získání 72 mg sloučeniny 684 jako bílé pevné látky.
'11 NMR (perdeuteromethanol) δ 1,9 (s, 3II), 2,25 (s, 6H), 2,45 (rn. 1H), 2.6 (m, 1Π), 3.3 (s. 1H), 3,7 (s. 311), 4,25 (m. 1H), 4,45-4,6 (m. 3H), 7.4 (široký s. 2H), 7,55 (široký d, 414).
-273 CZ 300171 B6
Sloučenina (685) se připraví ze sloučeniny 600b způsobem použitým pro přípravu sloučeniny 676 ze sloučeniny 600b za získání 165 mg sloučeniny 685.
Sloučenina (686). K roztoku sloučeniny 685 (165 mg, 0,21 mmol) v tetrahydrofuranu se přidá roztok TBAF (1M, 0,21 ml). Produkt se izoluje pomocí filtrace po srážení z reakční směs i. Po chromatografii na reverzní fázi (10% až 80% acetonitril ve vodě/ 0.1% kyseliny trifluoroctové) se získá 25 mg sloučeniny 686 jako bílé pevné látky, io 'HNMR (perdeuteromethanol) 6 2,37-2.42 (ni), 2,59-2.70 (m), 3,60-3,89 (m). 4.01 (d). 4,20-4,31 (m), 4.42—4,70 (m), 4,80-5.05 (m), 6,79 (d). 7.32-7.65 (m). 7,81 (s).
Sloučenina (687a) se připraví ze sloučeniny 600b způsobem použitým pro přípravu sloučeniny
654 ze sloučeniny 600b za získání 1,6 g sloučeniny 687a,
- 274 CZ 300171 B6
Sloučenina (687b) se připraví ze sloučeniny 600b za použití podobného způsobu jako pro přípravu sloučeniny 654 ze sloučeniny 600b za získání 1.1 g sloučeniny 687b.
Sloučenina (688a). K roztoku (3S,2R,S)-3-al lyloxy karbony 1-am i no-2-benzy loxy-5-oxoletrahydrofuranu (Chaprnan, Biorg. Med. Chem. Lett., 2, str. 613-618 (1992))(1.13 g. 1.2 ekvivalentu) v diehlormethanu se přidá trifenylfosfín (423 mg, 0,5 ekvivalentu), kyselina dimethylbarbiturová (1,26 g, 2.5 ekvivalentu), a tetrakistrifenv Ifosfínpalladia (0) (373 mg. 0,1 ekvivalentu). Po 5 minutách se reakční směs ochladí v ledové lázni a potom se přidá sloučenina 687a v dimethylformamídu (!.6g. 1 ekvivalent), HOBT (480 mg, 1,1 ekvivalentu), a EDC (681 mg, 1,1 ekvivalentu). Vzniklá směs se nechá míchat při teplotě místnosti. Po 16 hodinách se reakční směs nalije do hydrogensíránu sodného a dvakrát se extrahuje ethylacetátem. Organická vrstva se promyje hydrogenuhličitanem sodným, solankou, suší se nad síranem sodným a odpaří ve vakuu. Po chromatografií (silikagel. 20 až 100% ethylaeetát v diehlormethanu) se získá 880 mg sloučeniny 688a jako bílé pevné látky,
HNMR (perdeuteromethanol)δ 2.55 (dd, IH), 2,7 (dd, IH), 3,0 (m. 111). 3,6 (m, 1H), 3,75 (d, IH), 3,9 4,0 (m, 2H), 4,3-3,45 (m, 311). 4,5-4,6 (m, 3H), 4,7 (m. 2H). 5,35 (s. IH), 5,55 (d, 111), 7,1-7,5 (m. 4H), 7,85(s,2H).
Sloučenina (688b) se připraví ze sloučeniny 687b způsobem použitým pro přípravu sloučeniny 688a ze sloučeniny 687a za získání 960 mg sloučeniny 688b jako bílé pevné látky, 'HNMR (perdeuteromethanol) δ 2.6 (dd, 1H). 2.7 (dd, 1Π). 3.0 (dd. III), 3.2 (s. 3H), 3.7 (m, 311), 3.9 (m, 2H), 4,4-4,5 (m, 2H), 4,6 (m, 3H), 5,35 (s, IH), 5,55 (d, IH). 7,25 (m, 211). 7.4 7,5 (m, 411).
Sloučenina (689a) se připraví ze sloučeniny 688a způsobem použitým pro přípravu sloučeniny 2002 ze sloučeniny 2001 za získání 184 mg sloučeniny 689a jako bílé pevné látky.
H NMR (perdeuteromethanol) δ 2,45 (m. 1H), 2,6 (m IH). 3,3 (s. 311), 3.7-3.85 (m, 2H), 4,0 (d, 111). 4.3 (m. IH). 4,5-4,6 (m, 3H), 7,3-7,6 (m, 411), 7,85 (s, 2H),
Sloučenina (689b) se připraví ze sloučeniny 688b způsobem použitým pro přípravu sloučeniny 2002 ze sloučeniny 2001 za získání 412 mg sloučeniny 689b jako bílé pevné látky,
HNMR (perdeuteromethanol) δ 2,5 (m, lil), 2,7 (m, IH), 3.3 (s, 3H), 3.7-3,85 (m, 2H), 4,05 (dd, 11 í). 4.3 (m. 111), 4,6 (m. 2H). 7,45 7.4 (m. 2H). 7,5 (s, 211), 7.55 (m, 2H).
(600b)--
-275
Sloučenina (690a) se připraví ze sloučeniny 600b způsobem použitým pro přípravu sloučeniny 676 ze sloučeniny 600b, sloučeniny 688a ze sloučeniny 687a, potom sloučeniny 677 ze sloučeniny 676 za získání 863 mg sloučeniny 690a jako bílé pevné látky, 'HNMR (perdeuteromethanol) Ó 2,2 (s. 6H). 2,45 (d. 0.5H). 2,6 2.9 (m< IH). 3.05 (dd. 0,511). 3,65-3,85 (m. 2H), 3.95-4,1 (m. IH). 4.35-5,0 (m, 711). 5.35 (s, 0,511). 5.65 (d, 0,5H), 7.2-7,4 (m. 4H). 7,4-7,7 (m, 711).
Sloučenina (690b) se připraví ze sloučeniny 600b způsobem použitým pro přípravu sloučeniny iv 677 ze sloučeniny 600b za získání 200 mg sloučeniny 690b.
HNMR (perdcuteromethanol) 5 2,49 (d. 1H), 2,65 (d, 111), 2,66 (d, IH), 2,85 (d, IH), 2,87 (d. IH), 3,05 (dd, lil), 3,35 (široký s. IH), 3,72 (široký s, 2H). 4.01 (m, 211). 4.45 (široký m. IH), 4.6 (m, IH). 4,7 (m, IH). 4,8 (m. lil), 4,95 (široký s, 2H), 5,65 <d, IH), 6.8 (d. 2H), 7.2-7,35 (široký m, 311). 7,45 (m, 2H). 7,75 (d, 2H).
Sloučenina (691a) se připraví ze sloučeniny 690a způsobem použitým pro přípravu sloučeniny 2002 ze sloučeniny 2001 za získání 560 mg sloučeniny 691a jako bílé pevné látky, ?() 'HNMR (perdcuteromethanol) δ 2.15 (s, 6H), 2,45 (m. 1H), 2,65 (rn. IH), 3,55 (m, IH), 3,7 (d, IH), 4,0 (d, lH).4,25(m. 1H), 4.5-4,6 (rn, 3H), 7.3 7.5 (m. 6H).
Sloučenina (691b) se připraví ze sloučeniny 690b způsobem použitým pro přípravu sloučeniny 2002 ze sloučeniny 2001 za získání 410 mg sloučeniny 691b jako bílé pevné látky.
'HNMR (perdeuteromethanol) Ó 2,5 (rn, IH), 2,65 (m, IH), 3.75 (m, IH), 3,8 (d, IH), 4.05 (d, III), 4,25 (m, IH). 4,5 (m, IH). 4,6 (m, 1II), 4,95 (široký s. 2H), 6.8 (d. 2H). 7.45 (m. 211). 7,6{m, 2H), 7,75 (d. 211).
so Sloučenina (695a) se připraví ze sloučeniny 600b způsobem použitým pro přípravu sloučeniny 677 ze sloučeniny 600b za získání 75 mg sloučeniny 695a, '11 NMR (perdcuteromethanol) δ 2,2 (s, 6H). 2,45 (m, IH), 2,6 (m, IH), 3,65 (m. IH), 3.75 (d. 111), 4,0 (d, Hl), 4.28 (m, IH), 4,5 (m, 3H), 7,4-7,6 (ιη, 6H).
Sloučenina (695b) se připraví ze sloučeniny 600b způsobem použitým pro přípravu sloučeniny
677 ze sloučeniny 600b za získání 880 mg sloučeniny 695b,
- 276 C7. 300171 B6 'll NMR (deuterochloroform) δ 2.1 (s, 3H). 2.25 2.5 (m. 211), 2.8-2.92 (m. 0,5H), 3.15-3,2 (m, 0.5H). 3,45-3,6 (ni, 2H), 3,75-3,95 (m, 2H), 4,15-4.25 <m. IH). 4.35 4.6 (m, 2H), 4,6-1.88 (ni, 311), 5.22 (s, 0,25H), 5,33 (s, 0.25H). 5,52-5,58 (d, 0.5H). 7,15-7.45 (ni, 9.5H), 7,5-7,75 (m. 5H). 8,3-8,35 (m, 0.5H), 9.08-9.18 (m, 1H),
Sloučenina (695c) se připraví ze sloučeniny 600b způsobem použitým pro přípravu sloučeniny 677 ze sloučeniny 600b za získání 840 mg sloučeniny 695e.
H NMR (deuterochloroform) δ 2,23 (s. 3H). 2,26 (s, 3H). 2,45-2,62 (m, 111), 2,8-2,9 (dd, 0.5H), ιο 2.9-3,05 (dd, 0,511), 3,45-3,63 (m. IH), 3.64 (s. 1,5H), 3,68 (s, 1.5H). 3.78^1.05 (m. 211). 4,2 4,33 (rn. IH), 4,4-1,63 (m. 2H), 4,65-4,94 (ni, 2H), 4,95-5,1 (ni. IH). 5,45 (s. 0,5H).
5,5-5,6 (d. 0,511), 6,9-6,95 (d, 1H), 7.25-7,7 (m, 12H).
Sloučenina (692a) se připraví ze sloučeniny 600b způsobem použitým pro přípravu sloučeniny i? 661 ze sloučeniny 600b, vyjma kroků použitých pro přípravu sloučeniny 604d ze sloučeniny
603d. místo toho za použití postupu pro přípravu sloučeniny 688a ze sloučeniny 687a za získání 854 mg sloučeniny 692a, 'H NMR (perdeuteromethanol) δ 2.45 (d, IH), 2,6 (ni, III). 2,7 (m, IH), 3,0 (m, IH), 3,5-3,7 20 (m.4H), 4.0 (kv. 2H). 4,45 (ni. 311), 4,55 (m, 4H), 5.35 (s, IH). 5,6 (d. 111). 7,2-7.5 (ni, 9H),
7,85 (s. 211),
Sloučenina (692b) se připraví ze sloučeniny 600b způsobem použitým pro přípravu sloučeniny 661 ze sloučeniny 600b, kromě kroků použitých pro přípravu sloučeniny 604d zc sloučeniny
603d. místo toho za použití postupu pro přípravu sloučeniny 688a zc sloučeniny 687a za získání
207 mg sloučeniny 692b, 'HNMR (perdeuteromethanol)δ 1.05 (t, 3H). 1,15 (t, 3Π), 2,45 (d, IH). 2,55 (ni, IH), 2,7 (rn. 1 H). 3,55 (ni, 2H). 3.6-3,75 (ni, 5H), 4,0 (dd, 2H), 4,3 (d. IH). 4,4^4.7 (ni. 511). 5.25 (s, 1 H).
5o 5,5 (d. 111). 7,25-7,6 (m, 4H), 7,85 (s, 2H),
Sloučenina (693) sc připraví zc sloučeniny 600b způsobem použitým pro přípravu sloučeniny
688a ze sloučeniny 600b za získání 30 mg sloučeniny 693,
- 277 C.7 300171 B6 'Η NMR (perdeuteromethanol) δ 1,7 (s. 3H). 1.8 (s. 3H), 2,51 (d. IH). 2.6 (m. 111), 2.85 (m, IH). 3,0 (m, IH), 3,75 (široký d. 2Π), 4,0-4.1 (dd, 2H), 4,5-5,0 (m, 6H), 5,45 (s, IH). 5,55 (s, !H), 7,15-7.85 (m, 14H).
(691c)
Sloučenina (694) se připraví ze sloučeniny 69Ic způsobem použitým pro přípravu sloučeniny 2002 ze sloučeniny 2001 za získání 380 mg sloučeniny 694 jako bílé pevné látky.
'HNMR (perdeuteromethanol)δ 2,25 (s, 6Π), 2,45 (m, IH), 2,65 (m, IH). 3,65 (m, 5H), 4,0 (d, 111), 4,28 (m, 1H), 4,55 (d, 2H), 4,95 (m, 1H). 7,4 7,6 (m, 6H).
Sloučeniny 700-711 se připraví podobným způsobem jako sloučeniny 619-635 (viz. příklad 13). Fyzikální údaje pro sloučeniny 700—711 jsou uvedeny v tabulce 25.
Sloučeniny 910-915 a 918-921 se připraví tak, jak je popsáno níže. Fyzikální údaje pro tyto sloučeniny jsou uvedeny v tabulce 26.
- 278 CZ 300171 Bó
Tabulka 25
-279 C7. 300171 B6
-280CZ 300171 B6 •ν'
—Ο
*υ *“í ’Τ tn ω
o o o o
i-4 CQ r-
-281 CZ 300171 B6
Slouč. Γ Struktura l Vzorec ΜΗ 1 HPLC RC min
- 282 CZ 300171 B6
-283 CZ 300171 Bó
Table 26
í X + X vr ΜΓ LO ΙΓ) Lf*i r- r~ io
c 6 7? ra Ό 2 0 « p Ω W U N -H μ _ ’U X CM <#o CM σ\ Γ CFi rH CO CM OP σ\ σι vr σι cn ω
32 X cn ΤΓ •>fc o *5 m CO m η m iC
Vzorec o r-1 O •ST 3 OJ Či CM O cn O ιΌ 2 Γ CM X νο CM u
kj H 0 0 tn I O x o=Q™ T YTr T <V I O X °=Q== XZ X <ž X
>υ 3 0 (—f to O iH cn H rM cn
-284 CZ 300171 B6
- 285 CZ 300171 B6
Slouč
-286CZ 300171 B6
- 287 CZ 300171 B6
- 288 CZ 300171 B6
SlouČ. Struktura Vzorec MH HPLC RČ min HS (způsob)· (M+Na) čistota να
O vo to σ
rlo
Ol as σ> cn *τ *·, to í*= r- vc oj σ co θ'
-289 CZ 300171 B6
- 290 ’
CZ 300171 Bó
Krok A. Syntéza sloučeniny 401. TentaGel S® Nil· pryskyřice (0.25 mmol/g. 6,8 g) se umístí do skleněné třepací nádoby a promyje se dimethylacetamidcm (3x 20 ml). K roztoku sloučeniny 400 (1,70 g, 2,9 mmol, připravené z t-butylesteru kyseliny (3S) 3-<fluoreny Imcthyloxy karbony l)-45 oxobutanové podle A. M. Murfy a kol., J.Am. Chem. Soe.. 114. 3 156-3 157 (1992)) v dimethylaeetamidu (15 ml) se přidá 0-benzotriazol-N.N,N.N'-tetramethyluroniumhexafluorofosfát (1IBTIJ: 1,09 g, 2,9 mmol), a DIEA (1,0 ml, 5,7 mmol). Roztok se přidá k pryskyřici, potom se přidá dimethylacetamid (5 ml). Reakční směs se protřepává 3 hodiny při teplotě místnosti za použití třepačky. Pryskyřice se izoluje filtrací za sání a promyje se dimethylacetamidcm lo (6x 20 ml). Vzorek pryskyřice (7,4 mg) se důkladně promyje 50% methanol v dichlormethanu a suší se za sání. Po odstranění chránící skupiny Finoc za použití 20% piperidinu v dimethylaeetamidu (10,0 ml) a UV analýze roztoku se zjistí substituce 0,19 mmol g
-291 CZ 300171 B6
Krok B. Syntéza sloučeniny 903. Z pry skyřice 401 se pomocí směsi 20% (objem/objem) piperidin/dimethylacetamid (20 ml) po dobu 10 minut (za třepání) a potom 10 minut s čerstvým piperidinovým činidlem (20 ml) odstraní chránící skupiny. Pryskyřice se potom promyje d i methy I5 acetamidem (6x 20 ml). Roztok sloučeniny 902 (1,52 g. 2,81 mmol) se reaguje s HBTU (1,07 g. 2,83 mmol) a DIEA (1,0 ml, 5,7 mmol) a přenese se k pryskyřici, poté následuje přidání dimcthylacetamidu (5 ml). Reakční směs se protřepává 2,5 hodiny při teplotě místnosti za použití třepačky. Pryskyřice se izoluje filtrací za sání a promyje se dimethylacelamidem (4x 20 ml) a dichlormethanem (4x20 ml), a suší se v proudu dusíku. Pryskyřice se substituuje tak. jak je popsáno pro sloučeninu 401 a zjistí se substituce 0,169 mmol g '.
Krok C. Syntéza sloučeniny 905. Pryskyřice 903 (7,54 g, 1,27 mmol) a dimedon (2.19g, 15.6 mmol) se umístí do 100 ml banky s kulatým dnem a přidá se čerstvě předestilovaný bezvodý tetrahydrofuran (60 ml). Přidá se tetrakis (trifenylfosfin)palladium (0) (0.32 g, 0.28 mmol) a dusíkem překrytá uzavřená reakční směs se protřepává 15 hodin na třepačce. Pryskyřice se filtruje. promyje dimethylacetamidem (4x 20 ml), dichlormethanem (4x 20 ml) a dimelhy lacetamidem (1x20 ml). K pryskyřici se přidá dostatečné množství dimethy laeetamidu, aby vznikla suspenze, potom se přidá pyridin (1.5 ml, 18,5 mmol) a roztok sloučeniny 904 (5.5 mmol) v dichlormethanu (10 ml). Reakční směs se třepe 8 hodin pod dusíkem, potom se filtruje. Prysky2(i řiče se promyje dimethylacetamidem (5x 20 ml) a dichlormethanem (5x 20 ml).
Krok D. Syntéze sloučeniny 906. Tato sloučenina se připraví z pryskyřice 905 (0,24 g. 0.038 mmol) za použití Advanced ChemTech 396 Multiple peptidového syntetizéru. Automatizované cykly zahrnují promytí pryskyřice dimethylformamidem (3x 1 ml), odstranění chránící ?5 skupiny 25% (objem/objem) piperidinem v dimethylformamidu (I ml) 10 minut, potom čerstvým činidlem 20 minut (1 ml) za získání pryskyřice 906. Pryskyřice se promyje dimethylformamidem (3x 1 ml) a N-methylpyrrolidonem (3x 1 ml).
Krok E. Sloučeniny (910-922). Pryskyřice 906 se acyluje roztokem 0,4M karboxy lové kyseliny a 0,4M HOBT v N-methylpyrrolidonu (0.5 ml), roztokem 0.4M HBTU v N-methylpyrrolidonu (0,5 ml) a roztokem l,6M DIEA v N-methylpyrrolidonu (0,25 ml) a reakční směs se třepe 2 hodiny při teplotě místnosti. Pryskyřice sc promyje N-methylpyrrolidonem (lx 1 ml), dimethyl forinamidem ((4x 1 ml). 50% methanolem v dichlormethanu (5x 1 ml) a suší se vzduchem. Aldehyd se odštěpí /.pryskyřice a celkově se odstraní chránící skupiny reakcí se směsí
Ϊ5 95 % kyselina trifluoroetová/ 5 % voda (objem/objem, 1,5 ml) 30 minut při štěpícím činidlem teplotě místností. Po promytí pryskyřice (2x I ml), se spojené filtráty přidají k chladné směsi 1:1 ether :hexan (35 ml) a vzniklá sraženina se izoluje odstředěním a slitím. Vzniklá kulička se rozpustí v acetonítrilu (0,5 ml) a vodě (0,5 ml) a filtruje se přes 0,45 mikronovč mikroodstředivé filtry. Sloučenina se čistí pomocí semipreparativní RP-HPEC s Rainin MicrosorbIM Cl 8 kolonou
4o (5μ, 21.4 x 250 mm) za eluce lineárním gradientem acetonítrilu (10 až 50%) obsahujícím 0.1 % kyseliny trifluoroctové (objem/objem) 30 minut při průtoku 12 ml/min. f rakce obsahující požadovaný produkt se slijí a lyofilizují za získání sloučenin 910-922.
Analytické HPLC metody:
(1) Waters DeltaPak Cl8. 300Λ(5μ, 3,9.x 150). Lineární gradient aeetonitrilu trifluoroctové (0 až 25%) obsahující 0,1 % kyseliny trifluoroctové (v/v) (objem/objem) 14 minut při průtoku 1 ml/min.
(2) Waters DeltaPak Cl8, 300A (5μ. 3.9x150). Lineární gradient aeetonitrilu (5 až 45%) obsahující 0,1 % kyseliny trifluoroctové (v/v) (objem/objem) 14 minut při průtoku 1 ml/min.
- 292 CZ 300171 B6 (600b)
Sloučenina (696) sc připraví ze sloučeniny 600b způsobem použitým pro přípravu sloučeniny 691a ze sloučeniny 600b za získání sloučeniny 696.
'11 NMR (perdeuteromethanol) δ 2.45 (m. IH), 2,7 (m, III), 3.75 (d. III), 3,95 (kv. IH). 4,05 (d. IH). 4,3 (m. lil), 4.45M65 (m, 2H), 5,05 (m, IH), 7,5-7,6 (m, 311). 7,7 (t. IH), 7,8 (t, IH), 7.98 (t, lil), 8,55 (d, IH), 9,1 (d, IIi).
Sloučenina (696a) se připraví ze sloučeniny 600b způsobem použitým pro přípravu sloučeniny io 690a ze sloučeniny 600b za získání sloučeniny 696a.
'IINMR (deuterochloroform)δ 0.95 (t. 211). 1,25 (t, IH), 1,4 (m, 211), 1.55 (m, IH), 2,55 (m. IH). 2,85 (m. III). 2.95 (dd. IH). 3,15 (m. III), 3.55 (m, IH). 3,9 (m. 2Π), 4.35 (t. IH). 4.4M.55 (m. 2H), 4,75 (m. lil), 4,8-5,05 (m. 2H), 5.45 (s, 111). 5.55 (d, IH). 6.85 (d, IH), 7,15 is (d, IH), 7,2-7,5 (m, 5H), 7,6- 7,8 (m. 3H). 8,45 (d, lil), 9,05 (d. 111), 9,35 (d. lil).
Sloučenina (696b) se připraví ze sloučeniny 600b způsobem použitým pro přípravu sloučeniny 690a ze sloučeniny 600b za získání sloučeniny 696b.
'H NMR (deuterochloroform)δ 0,9 (m. 311), 1,15 (kv, 3H), 1.15 (m. IH). 1.65 (m, III), 2.5 (m, 111), 2,8 (m. IH), 2,95-3.0 (m. 211), 3,6 (m. 2H). 3,7-3,85 (m. 4H). 4.0 (m, 211). 4.3 (m, IH), 4,55 (m. IH). 4,65 (m, lil). 4.85- 4,95 (m. IH), 5,05 (m. 111). 5,35 (s. IH). 5,45 (d, III), 6,85 (d, III). 7.25 (d. IH), 7.35-7,85 (611). 8,85 (dd, 2H). 9,05 (m, IH), 9.35 (dd. 211).
- 293 CZ 300171 B6
Sloučenina (696c) se připraví ze sloučeniny 600b způsobem použitým pro přípravu sloučeniny 690a ze sloučeniny 600b za získání sloučeniny 696e.
'HNMR (perdeuteromethanol) δ 1,25 (h IH), 1,65 (kv, IH), 1,9 (m. IH). 2,9 (m, IH). 3.05 5 (m, IH), 3.9 (d, NI), 4.2 (m, IH), 4,3 (d. IH). 4,7-5,0 (m, 3H), 5.25 (m. 1H). 5,7 (s. IH). 5,9 (d. 1H). 7.5 (d. 2H), 7,7-7.9 (m. 311), 8,0 (t, 1H), 8,2 (m. 2H), 8,75 (d, 111). 9.35 (d.l H).
Sloučenina (696d) se připraví ze sloučeniny 600b způsobem použitým pro přípravu sloučeniny 690a ze sloučeniny 600b za získání sloučeniny 696d.
Id 'li NMR (deuterochloroform)δ 0.9 (l, IH). 1,2 (t, IH), 1,3-1,45 (rn. 211), 1,6-1,8 (m. 4H). 2,45 (m. IH), 2,8 (m. 111). 3,0 (m. IH), 3,4 (kv. lil). 3,5 (d, IH), 4,0 (m. 2H). 4,2 4.3 (m, 211), 4,55 (d. IH), 4,65 (m, 1H). 4, 9 (rn, IH). 5,05 (m. IH), 5,4 (s. lil). 5.5 (d. IH), 6.8 (d, 111). 7.3-7.9 (m, 6H). 8,5 (d. I H). 9,05 (d, 1H). 9.4 (d, 1H).
Sloučenina (696e) se připraví ze sloučeniny 600b způsobem použitým pro přípravu sloučeniny 690a ze sloučeniny 600b za získání sloučeniny 696a.
'H NMR (deuterochloroform) δ 1,2 (t, IH), 2,4 (m, IH), 2.8 (m. 2H). 3,6 (d. IH). 3,7 (kv. IH), 20 4.0 (m. 2H), 4,3 (d, 211). 4,65 (m, IH), 4,85 (t, IH), 5,0 (m. IH), 5.35 (d. IH). 6,5 (d, IH).
7.15-7,85 (m, 8H). 8,45 (d, IH). 9.05 (d. IH). 9.4 (d. IH).
-294 CZ 300171 B6
Tabulka 27
Slouč. UV -vid. Ki (nM) Buňky PBMC prúm. IC50 InM) Úplná lidská krev IC50 (nM) Odbourání u myší i .v. ml/mln/kg Odbourání u krys i, v. ml/min/kg
688c 200
689b-l 3,5 2700
696-1 0,5
696-2 0,5
697 1,8 5000
698 18 13500
699
699a-2
720 2,7
721 b3 5000
722 5 5000
723 2,3 2000
724 2 1800
725 V 3000
726 300
727 50 2300
728 300
729 28 2800
730 90 8000
731 150
732 5 1800
733 5 1500
734 9 6000
735 6 10000
- 295 CZ 300171 B6
Příklad 33
Sloučeniny 684a, 688b-l. 688c. 689b-1. 690a-1.696-1,696-2. 696a-2. 696a-1.697. 697a. 698. 698a. 699. 699a. 699a-l, 699a-2. 800 a 801 se připraví tak, jak je popsáno níže.
Tabulka 28
CIP# R4 R3 R5 Ί R1
684a CHa 0 chA H 0 AotBu OAc
688b-l v CH3 0 F O OBn
688c 0 CHb II cA CH3 0 H O Aoh V C.
689b-l ' ch3 O F 0 Aoh ArH O
690a-l 0 CH3 Λ X „A ch3 0 >RA H O Aoet A^OEt oe:
- 296 CZ 300171 Bó
CIP# R4 R3 R5 R1
696-1 o ><<A F 0 H órH O
696-2 0 ÍC_X Cl 0 jA*OH ÓrH 0
696a-2 o Cl o Y° OBn
696a-l 0 0 k<.2< F 0 Y° OBn
697 Xř a κϋ< H ÁoH V
697a a o κ\χ H 0 Y° OBn
698 o o hA H 0 j-^OH ArH O
698a 0 0 A H 0 Y° Οθη
699 0 0 H 0 ^OH ΛΤΗ 0
699a 0 0 H 0 Λ
-297CZ JUU171 B6
CIP# R4 R3 R5 R1
699a-l O O r O Λ ^0,,
699a-2 0 O F 0 1^0 H 0
800 o H 0 c OBn
801 O H O órH 0
Sloučenina (690a—1) se připraví způsobem použitým pro přípravu sloučenin 690a a 2100b za získání sloučeniny 690a-l, 1H NMR (deuterochloroform) δ 1,15 (t, 611), 1,3 (t, 3H), 2,25 (s. 6H), 2.60 (d. 211), 3,50 (m, 2H),
3.70 (ni, 4H), 4,05 (m, 211), 4,15 (m, 2H), 4,30 (d, IH), 4,45 (m, 111), 4,50 (d, IH), 4,55 (d, 1H),
4.70 (t, 111), 5,05 (m, 1H), 5,30 (s. IH). 6,70 (d, 1II). 7.10 (d, 2H). 7,30-7,50 (m. 711)
Sloučenina (697a) se připraví způsobem použitým pro přípravu sloučeniny 677 za získání ío 840 mg sloučeniny 697a, 'HNMR (deuterochloroform) δ 1,78 (široký s, 211), 2,48-2,58 (d, 0.5H). 2.6-2.7 (m, 0,511), 2,8-2,9 (m, 0,51i), 2,92-3,03 (m, 0.511), 3,55-3,8 (m. 2H), 3,92-4,02 (d, 111). 4,25-4.3 (d. 0,5H). 4,37-1,42 (d, 0.511) 4.43-4,48 (m, 0.5H). 4.53-4,65 (ni, 1.511) 4.7- 5,12 5H). 5.44 (s. 0.511)
5,58-5,63 (d, 0,5H), 6.95-8,1 (rn, 1311).
Sloučenina (697) se připraví způsobem použitým pro přípravu sloučeniny 2002 ze sloučeniny 2001 za získání 140 mg sloučeniny 697, 'll NMR (perdeuteromethanol) Ó 2,38-2.5 (m, IH), 2,55-2,75 (m. III). 3,68-3,9 (m, 3H), 3,95-1,03 (m, 111), 4,2-4,3 (m. IH), 4,4-4,7 (m, 411), 7,35-7,8 (m, 611).
Sloučenina (684a) se připraví způsobem použitým pro přípravu sloučeniny 2l00j za získání sloučeniny 684a, 'HNMR (500 MHz. deuterochloroform, směs diastereomerů)Ó 1,3 (s, 914). 1.8 (s, 3H). 2.1 (s, 311). 2,15 (s, 3H), 2,3 (s, 6H), 3,3-3,5 (m, 3H), 3,65 (s, 3H). 3.9 (rn, IH). 4.1 (d, 111), 4,3 (d. IH). 4,6—4,8 (m, 3H), 5,0 (m, IH), 6,7 (s. IH). 7,0 (d. III). 7,1 (d, 111). 7,2-7.5 (m. 6H).
to Sloučenina (698a) se připraví způsobem použitým pro přípravu sloučeniny 652 za získání 795 mg sloučeniny 698a,
- 298 CZ 300171 B6 'li NMR (500 MHz. deuteroehloroform, směs diastereomerů) δ 2.8 (m, 2H). 4,0 (m. IH), 4,5 4,8 (m, 4H), 5,2 (m, IH), 5,5 (s. IH). 5.75 (d. 111) 7.3-7,85 (m, 11H). 7,9 (t. IH). 8.2 (d. 111). 8.6 (m, III), 9.3 (m. IH).
Sloučenina (698) se připraví způsobem použitým pro přípravu sloučeniny 653 za získání 225 mg sloučeniny 698, 'llNMR (perdeuteromethanol, 500 MHz) δ 2,4 (m, IH), 2,6 (m, IH). 3.9 (m, 111), 4,2 (m, IH). 4,3-4.7 (m, 411). 5,1 (m. IH), 7,3-7,5 (m, 4H), 7,6-7,8 (m, 211). 7,8 (m. 2H). 8.2 (d, 111). 8,5 io (d, 111), 9.0 (d. IH).
Sloučenina (699a) sc připraví způsobem použitým pro přípravu sloučeniny 655 za získání 820 mg sloučeniny 699a jako světle hnědé pevné látky, 'Η NMR (500 MHz, deuteroehloroform) δ 2.60 (ddd, IH), 2,90 (ddd, IH), 3,20 (s, 311). 3,25 (s, 3H), 3,70 (t. 111). 3.90 (m, 211). 4,20 (dd, 1H), 4,60 (m, 2H), 4,70-5,00 (m, 511), 5.55 (d. IH). 7.00 (d. lil), 7,20-7.50 (m. 7H), 8,45 (dd, IH), 9,0 (dd, 111), a 9,35 ppm (dd. IH).
Sloučenina (688b—1) se připraví způsobem použitým pro přípravu sloučeniny 655 za získání
600 mg sloučeniny 688b-1, 'llNMR (deuteroehloroform, směs diaslereoizomerů) Ó 2.21 (s, 311). 2.28 (s. 3H). 2,42 2,50 (m,0,5H), 2,58-2,65 (m, 0.5H). 2,83-2,91 (m. 0,511). 2,98- 3.1 (m, 0.511), 3.18 (s.l,5H), 3,22 (s, 1.5Π). 3,72-3.78 (d, IH). 3.78 3.9 (m, 2H), 4.08M.15 (d. IH). 4.5-4.69 (m. 3H), 4.7M.85 (m, IH). 4.88-5.1 (m, 2H), 5,45 (s, 0,511), 5,55-5,65 (d, 0,5H), 6.85 6,92 (m, IH), 7,02-7,13 (m, 2H) 7.24-7,55 (m, 911).
Sloučenina (689b—1) se připraví způsobem použitým pro přípravu sloučeniny 2002 ze sloučeniny 2001 za získání sloučeniny 689b-1, 'li NMR (perdeuteromethanol) δ 2,18 (s, 6H), 2,36-2,47 (rn. IH). 2.6-2.72 (m. 1Π). 3,34 (s. 3H), 3.66 3,88 (m, 2H), 3.95^,05 (m, IH), 4,2-4,78 (m, 5Π), 4,9 (m, IH), 7.3 741 (m. 2H). 7,48 (s. 211). 7.5-7.63 (m. 111).
Sloučenina (699) se připraví způsobem použitým pro přípravu sloučeniny 2002 ze sloučeniny 2001 za získání sloučeniny 699 jako bílé pevné látky, 'H NMR (500 MI Iz, perdeuteromethanol) Ó 2,50 (m. 1H), 2,70 (m. 1H), 3,25 (s. 3H). 3,80 (široký d, IH). 3,90 (široký d, IH), 4,00 (široký d, IH), 4,30 (m, 111), 4,50-1,70 (m, 3H),
4.80-4.85 (široký t, IH), 5.00 (široký m. IH), 740-7,55 (m, 5H), 7,70 (široký m, III). 7.85 (širokým. IH), 8,00 (široký m. IH), 8.55 (široký d. III). a 9,05 ppm (široký d. 111).
Sloučenina (696a—1) se připraví způsobem použitým pro přípravu sloučeniny 656 za získání sloučeniny 800 jako žluté pevné látky, 'H NMR (500 MHz, deuteroehloroform)δ 2,55 (ddd, III), 2,65 (ddd, IH), 3,70-3,80 (m, 2H), 3,95 (široký m. IH). 4.05 (d, 1 H). 4,30 (d. lil). 4.40-4,60 (m, 411), 4,70-5.05 (ιη, 4H), 5,55 (d, 111), 7,10 (d. IH). 7.20-7,35 (m. 3H), 7,40 7,50 (m. IH). 7.60-7,85 (m, 3H), 8,40 (dd, IH). 9,10 (m. IH), a 9,30 ppm (m, IH),
Sloučenina (696a-2) se připraví způsobem pro přípravu sloučeniny 677. za získání 204 mg sloučeniny 696a 2 jako bílé pevné látky, pod podmínkou, že redukce nitroskupiny se provede následujícím způsobem: K. roztoku nitrosloučeniny (7,2 g. 20 mmol) v methanolu se přidá chlorid amonný (2.1 g, 39 mmol) a zinek (17 g, 260 mmol). Vzniklá směs se zahřívá t hodinu k varu,
-299CZ 300171 B6 poté se ochladí a filtruje přes křemelinu. Filtrát se zahustí ve vakuu a reaguje se s chladným IM roztokem kyseliny chlorovodíkové za získání 3,6 g světle červené pevné látky.
'H NMR (deuterochloroform) δ 1.85 (s. 111), 2.45 (d, 0,5H), 2,50-2,65 (m, 0,5H), 2,80-2,90 (m,
0,5H), 2.90-3,00 (m. 0.5H), 3,45 (s, 0,5H), 3.55-3,75 (m, 111), 3.85-4.15 (m. 2H). 4,25 (d. 1H),
4.40-4.65 (m, 2H), 4,70-4,80 (m. 0.511), 4.85-5.15 (m. 3H), 5,40 (s, 0,5H), 5.60 (d, 0.511). 7,00 (d, 0,5H). 7,15-7,90(m. 12,511), 8.35-8,45 (m. IH). 9.00-9.10 (rn, IH), 9,25-9.40 (m, 111).
Sloučenina (696-1) se připraví způsobem pro přípravu sloučeniny 2002 ze sloučeniny 2001 za io získání 140 mg sloučeniny 696-1 jako bílé pevné látky, 'HNMR (500 MHz, perdeuteromethanol) δ 2,50 (m, IH), 2.70 (m. IH). 3,85 (d. IH), 3.95 (m, IH), 4,10 (d, III), 4,35 (m, l l i), 4,50-4.60 (m, 2H), 4,80 (široký m, IH).5,00(m, 111).7.40-7.48 (m.3H)7.65 (m. I H) 7,75 (t. IH), 7,85 (t, lil). 8,00 (d, 1II) 8,55 (d, IH) a 9,05 ppm (d, 1H),
Sloučenina (696-2) se připraví způsobem pro přípravu sloučeniny 2002 ze sloučeniny 2001 za získání 250 mg sloučeniny 696-2 jako bílé pevné látky.
H NMR (perdeuteromethanol) δ 2,40 2.55 (in, 1H), 2.60-2,75 (m. 111), 3.80-4.0() (ni, 211), 4,05 (d, 1 H), 4,20-4,35 (m, III), 4,45-4,65 (m. 311), 4,80-5,10 (m. 2H).
Sloučenina (699a-1) se připraví způsobem pro přípravu sloučeniny 655 za získání sloučeniny 699a-1 'li NMR (500 MI lz. deuterochloroform) δ 2,55 (ddd, 1H), 2,90 (ddd. 1 H). 3,25 (s, 3H), 3,2$ (s, 3H), 3,80 (široký l, 2H), 3,95 (široký ni. 2H), 4,23 (dd. 1H), 4,45-4.90 (m. 311), 5.60 (d. 111), 7,05-7,40 (m, 811), 7,50 (široký m, 111), 7.65-7.85 (m, 2H). 8,45 (d. IH), 9,1 (m, IH), a 9,35 ppm (m. 1H) so Sloučenina (699a-2) se připraví způsobem pro přípravu sloučeniny 2002 ze sloučeniny 2001 za získání sloučeniny 699a-2, '11 NMR (500 MHz, perdeuteromethanol) Ó 2,51 (m. IH), 2,70 (dt. 111).3,31 (široký s. 3H), 3.90 (široký dl, IH). 3,95 (širokým, 111),4,05 (d, 1II), 4,35 (m, ΗI), 4,50 (d, 111), 4.Ó0 (dd. IH), 4.65 (dt. líl), 4,80 (m. 111). 5.05 (m. IH). 7.35-7.48 (m. 3H). 7,65 (široký m. IH). 7,75 (t, IH). 7,82 til), 8,05 (d. IH), 8,55 (d, lH).a9,05 ppm (d, IH).
Sloučenina (688e) se připraví způsobeni pro přípravu sloučeniny 308d za získání sloučeniny 800.
4(i 'H NMR (perdeuteromethanol) δ 2,2 (s, 6H), 2,58-2,83 (m. 2H), 3,28 (s, 3H), 3,29-3,34 (m, III), 3.68-3,80 (m. 211), 3,95-4,05 (dd, Η I), 4,38-4,48 (dd, IH), 4,82-5.00 (m. 2H). 5,26 5,36 (m, 2H). 7,22-7,65 (ni, 10H).
Sloučenina (800) se připraví způsobem pro přípravu sloučeniny 696a 1 za získání 204 mg slou4? ceniny 800 jako žluté pevné látky.
'li NMR (deuterochloroform, směs diastereomerů) δ 1,70 (s, IH), 2,40 2,80 (m. 7H), 2,80-2,90 (in. 0.5H), 2,95-3.05 (m. 0,511), 3.30-3,35 (m, 0,511), 3.45-3,55 (m. 0.511). 3,55-3.65 (m. IH), 3,80-4,05 (m, 2H), 4,30-4,50 (m, 2H), 4,55 4,65 (m, IH), 4,75 4,95 (m, 3H), 5,45 (s, 0,5H),
5u 5,55 (d, 0,5H), 6.70 (d, 0,5H), 6,90 (d, 0,5H), 7,15-7,80 (m, 1011).
Sloučenina (801) se připraví způsobem pro přípravu sloučeniny 2002 ze sloučeniny 2001 za získání sloučeniny 801.
- 300 CZ 300171 B6
Příklad 34
Sloučeniny 720-773 se připraví podobným způsobem jako sloučeniny 619-635 (viz. příklad 13). Fyzikální údaje pro sloučeniny 720-773 jsou uvedeny v tabulce 29.
Tabulka 29
-301 CZ 300171 B6
- 302 C7. 300171 B6
- 303 CZ 300171 B6
- 304 C7. 300171 B6
- 305 C7. 300171 B6
- 306 CZ 300171 Bó
Slouč.StrukturaVzorecΓMH
- 307 CZ 300171 Bó
Slouč. Struktura Vzorec MK ΗΡΣ
- 308 CZ 300171 B6
Příklad 35
Sloučeniny 736-767 se připraví podobným způsobem jako sloučeniny 619-635 (viz, příklad 13), Fyzikální údaje pro sloučeniny 736-767 jsou uvedeny v tabulce 30.
Tabulka 30
Sloučenina R4 R3
736 X 0
737 O
738 H3CO o rcUý
739 cč H3C 0
74 0 0
741 0 HO^J^
- 309 CZ 300171 B6
Sloučenina R4 R3
742 tí7 0 «ΑΑ
743 0 «ΑΑ
744 af 0 «-Α
745 0 0 HO-JC
746 O »A
747 0 0 HO-JC
748 A O Ά
749 0 ^CCT^fXoCHs 0 HAA
750 „-CC 0 HOA
751 77 0 h<A
752 0 C! X u ÓCH3 0 *AA
-310CZ 300171 B6
Sloučenina R4 R3
753 HjC h3c 0
754 X O k\A
755 0-¾ 0
756 0 K<A
757 OH 0 0
758 o KMC
759 C'01 o
760 w- 0
761 0
7 62 o
763 h< ° o
-311 CZ 300171 B6
Sloučenina R4 R3
764 0
765 c O
766 H O
767 OH-. JC 0
Údaje ve výše uvedených příkladech ukazují, že sloučeniny podle předkládaného vynálezu vykazují inhibtční aktivitu vůči IL— 1 β převáděcímu enzymu.
Takže sloučeniny podle předkládaného vynálezu jsou schopny inhibovat ICE in vitro a dále mohou být savcům podávány orálně, mají zřetelnou klinickou využitelnost pro léčbu onemocnění zprostředkovaných IL—1, apoptózou, IGIF a ΙΓΝ-γ. Na základě těchto testů se předpokládá, že sloučeniny mají schopnost inhibovat ICF. in vívo.
ιο Protože jsme popsali mnoho provedení tohoto vynálezu, je zřejmé, že naše základní postupy mohou být změněny, a tak je možno získat jiná provedení, která využívají produkty a postupy podle předkládaného vynálezu. Proto bude oceněno, že rozsah předkládaného vynálezu je definován v připojených nárocích přesněji než ve specifických provedeních, které jsou uvedeny formou příkladu.

Claims (18)

1. N-acylaminosloučenina obecného vzorec V ve kterém m znamená 1;
Ri je skupina obecného vzorce e 10-B
-312CZ 300171 B6
Ri je skupina —C<0)—11;
R5 je skupina -C(O)-Ar;
Y2 je atom kyslíku;
každá skupina R<< je nezávisle vybrána ze skupiny, kterou tvoří skupina -Ar; a přímé nebo rozvětvené alkylové, alkenylové či alkynylové skupiny obsahující 1 až 6 atomu uhlíku, které jsou io popřípadě substituované skupinou -Aru každá skupina Rr je nezávisle vybraná ze skupiny, kterou tvoří atom vodíku, skupina -Ar. cykloalkylové skupiny obsahující 3 až 6 atomu uhlíku a přímé nebo rozvětvené alkylové, alkenylové či alkynylové skupiny obsahující 1 až 6 atomu uhlíku, které jsou popřípadě substituované skupi15 nou -Aru
R,> je-OH;
R2i je atom vodíku;
Ar je isochinolylová skupina popřípadě jednou nebo vícekrát substituovaná skupinou -Qu každá skupina Qi je nezávisle vybraná ze skupiny, kterou tvoří aminoskupina. karboxylová skupina, atom chloru, atom fluoru, atom bromu, atom jodu, nitroskupina. kyanoskupina, skupina =0.
25 hydroxylová skupina, per íl uoral kýlová skupina obsahující 1 až 3 atomy uhlíku, skupina IC. skupina -ORs, skupina -NlIRs. skupina OR% skupina -N(R<>) (Rm), skupina -R<>, skupina -C(O)-RK)a skupina / \
CH2;
\ /
20 0 s tou výhradou, žc pokud je skupina -Ar, substituovaná skupinou Qh která obsahuje jednu nebo více dalších skupin -Ar, nejsou uvedené další skupiny -Ar substituované jinou skupinou -Ar,·
2. N-acylaminosloučcnina podle nároku 1. kterou je sloučenina
3. farmaceutická kompozice, vyznačující se t í m , že obsahuje sloučeninu podle kteréhokoli z nároku 1 až 2 a farmaceuticky přijatelný nosič.
-313CZ 300171 B6
4. Použili sloučeniny podle kteréhokoli z nároků 1 až 2 pro přípravu léku pro použití pří léčbě nebo prevenci onemocnění zvolených ze skupiny zahrnující osteoartritidu, akutní pankreatitidu, chronickou pankreatitidu, astma, syndrom respirační tísně dospělých, infekční hepatitidu, glomeralonefritidu, revmatoidní artritidu, systémový lupus erythematosus, sklerodemia, chronickou
5 tbyroiditidu, Graveovu chorobu, autoimunitní gastritidu. na insulinu závislý diabetes mellitus, tj. typu I. autoimunitní hemolytickou anémii. autoimunitní neutropenii, trombocytopenii, chronickou aktivní hepatitidu, myasthenia gravis. zánět!ivá střevní onemocnění. Crohnovu chorobu, uleerativní kolitidu, mnohočetnou sklerózu, psoriázu, lichen planus. choroby transplantát vs. hostitel, akutní dermatomyositídu, ekzém, primární eirhózu. uveitidu, Beheetovu chorobu, akutní ío aplazii, aplastickou anémii, amyotrofní laterální sklerózu, nefrotický syndrom, osteoporózu, kostní poruchy v souvislosti s mnohočetným myelomem, akutní myelogenní leukémii, chronickou myelogenní leukémii, metastatický melanom, Kaposiho sarkom, mnohočetný ntyelom. sepsi, septieký šok. Shigellózu. Alzheimerovu chorobu, Parkinsonovu chorobu, mozkovou ischémii a ischémii myokardu.
5. Použití podle nároku 4, při němž se onemocnění zvolí ze skupiny zahrnující osteoartritidu, akutní pankreatitidu, revmatoidní artritidu, záněllivá střevní onemocnění, uleerativní kolitidu, Crohnovu chorobu, hepatitidu, syndrom respirační tísně dospělých, glomerulonefritidu, diabetes mellitus závislý na inzulínu, tj. typu I. juvenilní diabetes, psoriázu, choroby transplantát vs. hos2o titel, hepatitidu a Alzheimerovu chorobu.
6. Použití sloučeniny podle kteréhokoli / nároků 1 až 2 pro přípravu léku pro použití při léčbě nebo prevenci onemocnění vybraných ze skupiny zahrnující Alzheimerovu chorobu. Parkinsonovu chorobu, mozkovou ischémii, ischémii myokardu, spinální svalovou atrofii, mnohočetnou
25 sklerózu, encefalitidu související sAIDS. encefalitidu související s HIV. stárnutí, vypadávání vlasů a neurologická poškození způsobená mrtvicí.
7. Použití podle nároku 6, při němž je onemocněním Alzheimerova choroba.
8. Způsob přípravy N acylaminosloučcniny obecného vzorce V podle nároku I ve kterém ni znamená I;
Ri je skupina obecného vzorce clO-B
FG je skupina -C{O)-H; IG je skupina -C(O)-An; Y; je atom kyslíku:
-314(../ 3UU171 Bt) každá skupina 1% je nezávisle vybrána ze skupiny, kterou tvoří skupina -Ar? a přímé nebo rozvětvené alkylové, alkenylové či alkynylové skupiny obsahující I až ó atomů uhlíku, které jsou popřípadě substituované skupinou Ar?;
5 každá skupina Rm je nezávisle vybraná ze skupiny, kterou tvoří atom vodíku, skupina -Ar?, cykloalkylově skupiny obsahující 3 až 6 atomů uhlíku a přímé nebo rozvětvené alkylové. alkenylové či alkynylové skupiny obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, které jsou popřípadě substituované skupinou -Ar?:
io R]5 je-OH:
R?, je atom vodíku;
Ar? je isochinolylová skupina popřípadě jednou nebo vícekrát substituovaná skupinou -Q,;
každá skupina Q| je nezávisle vybraná ze skupiny, kterou tvoří aminoskupina. karboxylová skupina, atom chloru, atom fluoru, atom bromu, atom jodu, nitroskupina. kyanoskupina. skupina =0. hydroxylová skupina, períluoral kýlová skupina obsahující 1 až 3 atomy uhlíku, skupina R?, skupina -OR?, skupina -NHR^, skupina -OR<,, skupina —N(R<,) (Rm). skupina -1%, skupina
2o -C(O)-R|í) a skupina / \
CH2;
\ / s tou výhradou, že pokud je skupina -Ar? substituovaná skupinou Q], která obsahuje jednu nebo
25 více dalších skupin -Ar?, nejsou uvedené další skupiny -Ar? substituované jinou skupinou -Ar?;
vyznačující se t í m , že zahrnuje stupně, při kterých se:
a) smísí karboxylová kyselina s N-alloc-chraněným aminem v přítomnosti inertního rozpouští tědla, trífenyIfosfínu, nukleofilního lapače a tetrakistrifenyifosfínpalladia(O) pří teplotě místnosti pod inertní atmosférou; a
b) přidá ke směsi ze stupně a) l-hydroxybenzotriazol a l-(3-dimethylaminopropyl) 3 ethylkarbodiímid-hydrochlorid; a popřípadě se v dalším stupni;
e) směs ze stupně b) hydro lyžuje v přítomnosti roztoku obsahujícího kyselinu a vodu, přičemž se smčs z kroku b) popřípadě zahustí.
9. /působ podle nároku 8, v y z n a č u j i c i se t í m , že inertním rozpouštědlem je diehlor4(i methan, d i methyl formám id nebo směs dichlormethanu a dimethy I formám idu.
10. Způsob podle nároku 8. vyznačující sc tím, že nukleofilním lapačem je dimedon, morfolin. trimetbylsilyldimethylamin nebo kyselina dimethylbarbiturová.
45
11. Způsob podle nároku 10, vyznačující se tím, že nukleofilním lapačem je trimethylsilyldimethylamin nebo kyselina dimethylbarbiturová.
12. Způsob podle nároku 10. v y z n a č u j í c í se t í m . Že inertním rozpouštědlem je diehlormethan, dimethylformarnid nebo směs dichlormethanu a dimethylformamidu.
- 315 CZ 300171 Bó
13. Způsob podle nároku 12, v y z n a č u j í c í se t í m . že nukleofílním lapačem je kyselina dimethylbarbiturová.
14. Způsob podle nároku 13, v y z n a č uj í e í se t í m . že roztok obsahuje kyselinu trifiuor? octovou v množství 1 až 90 % hmotnostních.
15. Způsob podle nároku 14, v y z n a č u j í c í se t í ni. že roztok obsahuje kyselinu tr i fluoroctovou v množství 20 až 50 % hmotnostních.
io
16, Způsob podle nároku 13, vyznačuj ící se t í m, že roztok obsahuje kyselinu chlorovodíkovou v množství OJ až 30 % hmotnostních.
17. Způsob podle nároku 16, v y z n a č u j í c í se tím. že roztok obsahuje kyselinu chlorovodíkovou v množství 5 až 15 % hmotnostních.
18. Způsob podle nároku 8, v y z n a č u j í c í s c tím, N-aeylaminosloučeninou je sloučenina
CZ20030411A 1995-12-20 1996-12-20 N-Acylaminoslouceniny jako inhibitory enzymu konvertujícího interleukin-1beta, zpusob jejich prípravy a farmaceutické prostredky, které je obsahují CZ300171B6 (cs)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US08/575,641 US6008217A (en) 1995-12-20 1995-12-20 Inhibitors of interleukin-1β converting enzyme
US08/598,332 US5874424A (en) 1995-12-20 1996-02-08 Inhibitors of interleukin-1β converting enzyme
US08/712,878 US5985863A (en) 1996-09-12 1996-09-12 Compositions and methods for decreasing IGIF and IFN-γ production by administering an ICE inhibitor
US3149596P 1996-11-26 1996-11-26
US08/761,483 US6204261B1 (en) 1995-12-20 1996-12-06 Inhibitors of interleukin-1β Converting enzyme inhibitors

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CZ300171B6 true CZ300171B6 (cs) 2009-03-04

Family

ID=27534345

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ0190698A CZ298171B6 (cs) 1995-12-20 1996-12-20 N-Acylaminoslouceniny jako inhibitory enzymu konvertujícího interleukin-1ß, zpusob jejich prípravy a farmaceutické prostredky, které je obsahují
CZ20030411A CZ300171B6 (cs) 1995-12-20 1996-12-20 N-Acylaminoslouceniny jako inhibitory enzymu konvertujícího interleukin-1beta, zpusob jejich prípravy a farmaceutické prostredky, které je obsahují

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ0190698A CZ298171B6 (cs) 1995-12-20 1996-12-20 N-Acylaminoslouceniny jako inhibitory enzymu konvertujícího interleukin-1ß, zpusob jejich prípravy a farmaceutické prostredky, které je obsahují

Country Status (23)

Country Link
US (7) US6204261B1 (cs)
EP (3) EP0869967A2 (cs)
JP (3) JP4205762B2 (cs)
KR (1) KR100561504B1 (cs)
CN (1) CN1229412A (cs)
AP (4) AP2002002540A0 (cs)
AU (1) AU735075B2 (cs)
BG (2) BG64465B1 (cs)
BR (2) BRPI9612258B8 (cs)
CA (1) CA2239904C (cs)
CZ (2) CZ298171B6 (cs)
GE (1) GEP20022638B (cs)
IL (2) IL124850A0 (cs)
IN (1) IN182290B (cs)
IS (1) IS4771A (cs)
MX (1) MX9805016A (cs)
NO (1) NO326882B1 (cs)
NZ (2) NZ518094A (cs)
PL (1) PL190736B1 (cs)
SK (1) SK287195B6 (cs)
TR (3) TR200201216T2 (cs)
UA (1) UA66337C2 (cs)
WO (1) WO1997022619A2 (cs)

Families Citing this family (81)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6204261B1 (en) * 1995-12-20 2001-03-20 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of interleukin-1β Converting enzyme inhibitors
US6420522B1 (en) * 1995-06-05 2002-07-16 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of interleukin-1β converting enzyme
US6200969B1 (en) 1996-09-12 2001-03-13 Idun Pharmaceuticals, Inc. Inhibition of apoptosis using interleukin-1β-converting enzyme (ICE)/CED-3 family inhibitors
US6610683B2 (en) 1996-09-12 2003-08-26 Idun Pharmaceuticals, Inc. Treatment of infectious disease using interleukin-1β-converting enzyme (ICE)/CED-3 family inhibitors
US6531467B2 (en) 1996-09-12 2003-03-11 Idun Pharmaceuticals, Inc. Inhibition of inflammation using interleukin-1β-converting enzyme (ICE)/CED-3 family inhibitors
US5919790A (en) * 1996-10-11 1999-07-06 Warner-Lambert Company Hydroxamate inhibitors of interleukin-1β converting enzyme
PL332640A1 (en) 1996-10-11 1999-09-27 Warner Lambert Co Sulphonamide-group substituted derivatives of aspartic acid as inhibitors of an interleukin-1beta transforming enzyme
JP2001502330A (ja) * 1996-10-11 2001-02-20 ワーナー―ランバート・コンパニー スルホンアミド置換アスパラギン酸インターロイキン―１β変換酵素阻害剤
EP1466921A1 (en) * 1996-12-06 2004-10-13 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of interleukin-1 beta converting enzyme
WO1998024804A2 (en) * 1996-12-06 1998-06-11 Vertex Pharmaceuticals Incorporated INHIBITORS OF INTERLEUKIN-1β CONVERTING ENZYME
FR2766188B1 (fr) * 1997-07-15 2000-02-11 Hoechst Marion Roussel Inc Nouveau procede de preparation de derives amines d'alkyloxy furanone, composes issus de ce procede et utilisation de ces composes
JP4499917B2 (ja) 1998-03-09 2010-07-14 バーテックス ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド インターロイキン−１β変換酵素のインヒビターとしての１，２−ジアゼパン誘導体
WO1999047545A2 (en) * 1998-03-19 1999-09-23 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of caspases
FR2777279B1 (fr) * 1998-04-08 2004-08-13 Hoechst Marion Roussel Inc Nouvelles formes cristallines du 1s-[1alpha(2s*,3r*), 9 alpha] 6,10-dioxo-n-(2-ethoxy-5-oxo-tetrahydro-3-furanyl) -9[[(1-isoquinolyl)carbonyl]amino]octohydro-6h-pyridazino [1,2-a][1,2]diazepine-1-carboxamide
FR2777889B1 (fr) * 1998-04-27 2004-07-09 Hoechst Marion Roussel Inc Nouveaux derives de l'acide octahydro-6,10-dioxo-6h- pyridazino[1,2-a][1,2]diazepine-1-carboxylique, leur procede de preparation et leur application a la preparation de composes therapeutiquement actifs
FR2777888B1 (fr) 1998-04-27 2004-07-16 Hoechst Marion Roussel Inc Nouveaux derives de l'acide (3,4,7,8,9,10-hexahydro-6,10- dioxo-6h-pyridazino[1,2-a][1,2]diazepine-1-carboxylique, leur procede de preparation et leur application a la preparation de medicaments
US6197750B1 (en) * 1998-07-02 2001-03-06 Idun Pharmaceuticals, Inc. C-terminal modified oxamyl dipeptides as inhibitors of the ICE/ced-3 family of cysteine proteases
US7053056B2 (en) 1998-07-02 2006-05-30 Idun Pharmaceuticals, Inc. C-terminal modified oxamyl dipeptides as inhibitors of the ICE/ced-3 family of cysteine proteases
US6544951B2 (en) 1998-07-02 2003-04-08 Idun Pharmaceuticals, Inc. C-terminal modified oxamyl dipeptides as inhibitors of the ICE/ced-3 family of cysteine proteases
US6177565B1 (en) 1998-08-19 2001-01-23 Vertex Pharmaceuticals Inc. Process for synthesizing piperazic acid
US6703500B2 (en) * 1998-08-19 2004-03-09 Vertex Pharmaceuticals, Incorporated Method of preparing bicyclic intermediates from piperazic acid or an ester thereof useful in the manufacture of caspase inhibitors
US6201118B1 (en) 1998-08-19 2001-03-13 Vertex Pharmaceuticals Inc. Process for forming an N-acylated, N,N-containing bicyclic ring from piperazic acid or an ester thereof especially useful as an intermediate in the manufacture of a caspase inhibitor
US6559304B1 (en) * 1998-08-19 2003-05-06 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Method for synthesizing caspase inhibitors
EP1159273A1 (en) 1999-03-02 2001-12-05 Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals Inc. Compounds useful as reversible inhibitors of cathepsin s
TW200404789A (en) * 1999-03-15 2004-04-01 Axys Pharm Inc Novel compounds and compositions as protease inhibitors
US6420364B1 (en) 1999-09-13 2002-07-16 Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals, Inc. Compound useful as reversible inhibitors of cysteine proteases
AR026748A1 (es) 1999-12-08 2003-02-26 Vertex Pharma Un compuesto inhibidor de caspasas, una composicion farmaceutica que lo comprende, un metodo para la sintesis del mismo y un compuesto intermediario paradicha sintesis
FR2802927B1 (fr) * 1999-12-28 2002-03-01 Hoechst Marion Roussel Inc Nouveaux derives de diazepine carboxamide, leur procede de preparation, leur application a titre de medicaments, compositions pharmaceutiques et leur nouvelle utilisation
US6790989B2 (en) 2000-01-13 2004-09-14 Idun Pharmaceuticals, Inc. Inhibitors of the ICE/ced-3 family of cysteine proteases
US6515173B1 (en) 2000-01-13 2003-02-04 Idun Pharmaceuticals, Inc. Inhibitors of the ICE/ced-3 family of cysteine proteases
WO2001087328A2 (en) 2000-05-12 2001-11-22 Immunex Corporation Interleukin-1 inhibitors in the treatment of diseases
PE20011350A1 (es) 2000-05-19 2002-01-15 Vertex Pharma PROFARMACO DE UN INHIBIDOR DE ENZIMA CONVERTIDORA DE INTERLEUCINA-1ß (ICE)
AU2001280442B2 (en) * 2000-06-15 2005-10-27 Smithkline Beecham Corporation Method for preparing a physiologically active il-18 polypeptide
DE10037310A1 (de) * 2000-07-28 2002-02-07 Asta Medica Ag Neue Indolderivate und deren Verwendung als Arzneimittel
BR0116608A (pt) * 2000-12-28 2004-06-29 Daiichi Seiyaku Co Inibidores vla-4
CN100396680C (zh) * 2000-12-28 2008-06-25 第一制药株式会社 极迟抗原-4抑制剂
DK1355668T3 (da) * 2001-01-29 2008-05-05 Serono Lab Anvendelse af IL-18 inhibitorer til behandling og/eller forebyggelsen af hjertesygdom
EP1381602A1 (en) 2001-04-19 2004-01-21 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Heterocyclyldicarbamides as caspase inhibitors
US6821993B1 (en) 2001-10-04 2004-11-23 Ortho-Mcneil Pharmaceutical, Inc. Triazepine derivatives as neurotrophic agents
CA2462643A1 (en) * 2001-10-04 2003-04-10 Ortho-Mcneil Pharmaceutical, Inc. Triazepine derivatives as neurotrophic agents
WO2003103599A2 (en) * 2002-06-05 2003-12-18 Sunesis Pharmaceuticals, Inc. Caspase-1 inhibitors and methods for their use
RU2005102094A (ru) 2002-06-28 2006-02-27 Вертекс Фармасьютикалз Инкорпорейтед (Us) Ингибиторы каспазы и их применение
AU2003297570A1 (en) * 2002-11-26 2004-06-18 Advanced Biotherapy, Inc. Treatment of skin diseases
US7612091B2 (en) 2002-12-20 2009-11-03 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Caspase inhibitors and uses thereof
PE20050159A1 (es) 2003-05-27 2005-04-19 Vertex Pharma Derivados de acido 3-[2-(3-amino-2-oxo-2h-piridin-1-il)-acetilamino]-4-oxo-pentanoico como inhibidores de caspasa
CN1826336B (zh) 2003-07-24 2010-06-02 第一制药株式会社 环己烷羧酸类
US20050124684A1 (en) * 2003-08-29 2005-06-09 Ying Du 5-(hydroxymethyl) furfural and derivatives as inhibitors of TNFalpha and IL-1beta production
CN1886126A (zh) * 2003-09-25 2006-12-27 Dmi生物科学公司 利用n－酰基－l－天冬氨酸的方法和产品
CN101524351A (zh) * 2003-12-01 2009-09-09 沃泰克斯药物股份有限公司 使用ice抑制剂治疗感染疾病
CN100441186C (zh) * 2003-12-03 2008-12-10 和记黄埔医药企业有限公司 伪石蒜碱的医药用途
ES2523147T3 (es) * 2004-02-26 2014-11-21 Baylor Research Institute Composiciones y métodos para el tratamiento sistémico de la artritis
AR047981A1 (es) * 2004-02-27 2006-03-15 Vertex Pharma Inhibidores de caspasa y sus usos correspondientes
ES2532967T3 (es) 2004-03-12 2015-04-06 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Proceso y productos intermedios para la preparación de inhibidores de la acetal caspasa aspártica
KR100883937B1 (ko) * 2004-04-22 2009-02-18 더 프록터 앤드 갬블 캄파니 사이토카인 억제제로서의 삼치환 우레아
AU2005247409B2 (en) 2004-05-15 2011-11-10 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Treating seizures using ICE inhibitors
GB0411056D0 (en) 2004-05-18 2004-06-23 Novartis Ag Organic compounds
CN1980658A (zh) * 2004-05-27 2007-06-13 沃泰克斯药物股份有限公司 治疗自身炎性疾病的ice抑制剂
GB0515323D0 (en) * 2005-07-26 2005-08-31 Electrophoretics Ltd Mass labels
DE102005048293A1 (de) * 2005-10-08 2007-04-12 Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh Retardformulierung für Pralnacasan
EP1826199A1 (en) * 2006-02-27 2007-08-29 Technische Universität Wien Modified amino acids
US20100099845A1 (en) * 2006-09-15 2010-04-22 University Of Utah Research Foundation Protected enantiopure trifluorothreonines and methods of making and using same
WO2009019115A1 (en) 2007-08-03 2009-02-12 Sanofi-Aventis Caspase imaging probes
EP2276508A4 (en) * 2008-04-15 2011-12-28 Sarcode Bioscience Inc ADMINISTRATION OF LFA-1 ANTAGONISTS TO THE GASTROINTESTINAL SYSTEM
US9365612B2 (en) 2010-01-29 2016-06-14 United States Of America As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Caspase inhibitors
WO2012061785A2 (en) 2010-11-05 2012-05-10 Brandeis University Ice inhibiting compounds and uses thereof
US9956260B1 (en) 2011-07-22 2018-05-01 The J. David Gladstone Institutes Treatment of HIV-1 infection and AIDS
EP2848696A1 (en) 2013-09-13 2015-03-18 Sanofi-Aventis Deutschland GmbH Caspase-1 imaging probes
EA201690846A1 (ru) * 2013-11-06 2016-08-31 Бристол-Маерс Сквибб Компани Замещенные производные пиридина, пригодные в качестве ингибиторов gsk-3
AR103297A1 (es) 2014-12-30 2017-05-03 Forma Therapeutics Inc Pirrolo y pirazolopirimidinas como inhibidores de la proteasa 7 específica de ubiquitina
MA41291A (fr) 2014-12-30 2017-11-07 Forma Therapeutics Inc Dérivés de la pyrrolotriazinone et de l'imidazotriazinone en tant qu'inhibiteurs de la protéase spécifique de l'ubiquitine n° 7 (usp7) pour le traitement d'un cancer
JP2018504432A (ja) 2015-02-05 2018-02-15 フォーマ セラピューティクス，インコーポレイテッド ユビキチン特異的プロテアーゼ７阻害物質としてのイソチアゾロピリミジノン、ピラゾロピリミジノン及びピロロピリミジノン
EP3253738A1 (en) 2015-02-05 2017-12-13 Forma Therapeutics, Inc. Quinazolinones and azaquinazolinones as ubiquitin-specific protease 7 inhibitors
JP2018504431A (ja) 2015-02-05 2018-02-15 フォーマ セラピューティクス，インコーポレイテッド ユビキチン特異的プロテアーゼ７阻害物質としてのチエノピリミジノン
EP3330256B1 (en) * 2015-07-07 2021-06-16 Shionogi & Co., Ltd. HETEROCYCLIC DERIVATIVE HAVING TrkA-INHIBITING ACTIVITY
CA3012832A1 (en) 2016-02-05 2017-08-10 Denali Therapeutics Inc. N-azepinyl-carboxamide inhibitors of receptor-interacting protein kinase1
RS63203B1 (sr) 2016-12-09 2022-06-30 Denali Therapeutics Inc Jedinjenja korisna kao inhibitori ripk1
IL298324A (en) 2020-06-10 2023-01-01 Aligos Therapeutics Inc Anti-viral compounds for treating coronavirus, picornavirus, and norovirus infections
WO2022103960A1 (en) 2020-11-13 2022-05-19 Inipharm, Inc. Dichlorophenol hsd17b13 inhibitors and uses thereof
JP2024525589A (ja) 2021-07-09 2024-07-12 アリゴス セラピューティクス インコーポレイテッド 抗ウイルス化合物
US12065428B2 (en) 2021-09-17 2024-08-20 Aligos Therapeutics, Inc. Anti-viral compounds
EP4463229A1 (en) 2022-01-12 2024-11-20 Denali Therapeutics Inc. Crystalline forms of (s)-5-benzyl-n-(5-methyl-4-oxo-2, 3,4,5- tetrahydropyrido [3,2-b] [l,4]oxazepin-3-yl)-4h-l,2,4-triazole-3-carboxamide

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1995033751A1 (en) * 1994-06-08 1995-12-14 Sanofi Winthrop, Inc. Bicycling lactam inhibitor of interleukin-1-beta converting enzyme
WO1995035308A1 (en) * 1994-06-17 1995-12-28 Vertex Pharmaceuticals Incorporated INHIBITORS OF INTERLEUKIN-1β CONVERTING ENZYME
WO1997022619A2 (en) * 1995-12-20 1997-06-26 Vertex Pharmaceuticals Incorporated INHIBITORS OF INTERLEUKIN-1β CONVERTING ENZYME

Family Cites Families (67)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6008217A (en) * 1995-12-20 1999-12-28 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of interleukin-1β converting enzyme
US5874424A (en) * 1995-12-20 1999-02-23 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of interleukin-1β converting enzyme
US5985863A (en) * 1996-09-12 1999-11-16 Vertex Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for decreasing IGIF and IFN-γ production by administering an ICE inhibitor
US4276298A (en) 1978-03-24 1981-06-30 Merck & Co., Inc. 2-Aryl-1,2-benzisothiazolinone-1,1-dioxides and their use as selective protease inhibitors
US4337346A (en) 1978-11-02 1982-06-29 Sumitomo Chemical Company, Limited α-Hydroxyaldehyde and a process for preparing the same
US4369183A (en) 1979-09-06 1983-01-18 Merck & Co., Inc. 2-Pyridyl-1,2-benzisothiazolinone-1,1-dioxides and their use as selective protease inhibitors
US4584397A (en) 1983-05-09 1986-04-22 G. D. Searle & Co. Protease inhibitors
US4499295A (en) 1983-05-09 1985-02-12 G. D. Searle & Co. Protease inhibitors
IL72523A (en) * 1983-08-12 1988-06-30 Takeda Chemical Industries Ltd 3-amino-4-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-1,5-benzoxazepine derivatives,their production and pharmaceutical compositions containing them
US4551279A (en) 1984-01-09 1985-11-05 G. D. Searle & Co. Protease inhibitors
US5055451A (en) 1986-12-22 1991-10-08 Syntex Inc. Aryloxy and arylacyloxy methyl ketones as thiol protease inhibitors
US5158936A (en) 1986-12-22 1992-10-27 Syntex (U.S.A.) Inc. Aryloxy and arylacyloxy methyl ketones as thiol protease inhibitors
NZ223148A (en) 1987-01-16 1989-10-27 Merrell Dow Pharma Peptide derivatives having peptidase inhibition activity
US4968607A (en) 1987-11-25 1990-11-06 Immunex Corporation Interleukin-1 receptors
WO1989004838A1 (en) 1987-11-25 1989-06-01 Immunex Corporation Interleukin-1 receptors
US5081228A (en) 1988-02-25 1992-01-14 Immunex Corporation Interleukin-1 receptors
US5008245A (en) 1988-10-27 1991-04-16 University Of Kentucky Research Foundation Novel peptidyl carbamate inhibitors of the enzyme elastase
SG48298A1 (en) 1989-05-04 1998-04-17 Sterling Winthorp Inc Saccharin deriatives useful as proteolytic enzymeinhibitors and preparation of
CA2021660A1 (en) 1989-07-26 1991-01-27 Philippe Bey Peptidase inhibitors
NZ235155A (en) 1989-09-11 1993-04-28 Merrell Dow Pharma Peptidase substrates in which the carboxy terminal group has been replaced by a tricarbonyl radical
AU6712790A (en) 1989-10-05 1991-05-16 Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Catheter device with insertion stop means
US5416013A (en) 1990-04-04 1995-05-16 Sterling Winthrop Inc. Interleukin 1β protease and interleukin 1β protease inhibitors
WO1991015577A1 (en) 1990-04-04 1991-10-17 Black, Roy, A. INTERLEUKIN 1'beta' PROTEASE
AU7891891A (en) 1990-05-25 1991-12-31 Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd. Pyrrolopyridazine compounds
US5199980A (en) 1990-09-21 1993-04-06 Multicolor Specialties, Inc. Polyurethane-based water-in-water multicolor paint and method for making
IL99527A (en) 1990-09-28 1997-08-14 Lilly Co Eli Tripeptide antithrombotic agents
EP0504938A3 (en) 1991-03-22 1993-04-14 Suntory Limited Prophylactic and therapeutic agent for bone diseases comprising di- or tripeptide derivative as active ingredient
CA2071674C (en) 1991-06-21 2003-08-19 Kevin T. Chapman Peptidyl derivatives as inhibitors of interleukin-1.beta. converting enzyme
JP3190431B2 (ja) 1991-07-01 2001-07-23 三菱化学株式会社 ケトン誘導体
DE69229252T2 (de) 1991-08-16 1999-12-16 Merck & Co., Inc. DNS, welche das Interleukin-1B-Vorläufer-Converting-Enzym kodiert
US5278061A (en) 1991-08-16 1994-01-11 Merck & Co., Inc. Affinity chromatography matrix useful in purifying interleukin-1β converting enzyme
US6348570B1 (en) 1991-08-16 2002-02-19 Merck & Co., Inc. Chromophore containing compounds and their use in determining interleukin-1β convertase activity
EP0533226A3 (en) 1991-08-16 1993-08-18 Merck & Co. Inc. Novel chromophore containing compounds
WO1993005071A1 (en) 1991-08-30 1993-03-18 Sterling Winthrop Inc. INTERLEUKIN 1β PROTEASE AND INTERLEUKIN 1β PROTEASE INHIBITORS
GB9123326D0 (en) 1991-11-04 1991-12-18 Sandoz Ltd Improvements in or relating to organic compounds
EP0547699A1 (en) 1991-12-19 1993-06-23 Merck & Co. Inc. Peptidyl derivatives as inhibitors of interleukin-1B converting enzyme
AU3479593A (en) 1992-01-31 1993-09-01 Merck & Co., Inc. Peptidyl derivatives as inhibitors of interleukin-1beta converting enzyme
ES2118940T3 (es) 1992-02-21 1998-10-01 Merck & Co Inc Peptidil-derivados utiles como inhibidores de la enzima conversora de la interleucina-1 beta.
WO1993025683A1 (en) 1992-06-12 1993-12-23 Massachusetts Institute Of Technology A gene which prevents programmed cell death
WO1993025685A1 (en) 1992-06-12 1993-12-23 Massachusetts Institute Of Technology Cloning and characterization of the cell death genes ced-3 and ced-4
JPH08500482A (ja) 1992-06-12 1996-01-23 マサチューセッツ インスティテュート オブ テクノロジー Ｃｅｄ−３及び関連蛋白質のインヒビター
AU4634993A (en) 1992-06-24 1994-01-24 Merck & Co., Inc. Dna encoding precursor interleukin 1beta converting enzyme
WO1994003480A1 (en) 1992-07-31 1994-02-17 Pfizer Inc. Peptidyl 4-amino-2,2-difluoro-3-oxo-1,6-hexanedioic acid derivatives as antiinflammatory agents
US5374623A (en) 1992-08-20 1994-12-20 Prototek, Inc. Cysteine protease inhibitors effective for in vivo use
CA2109646C (en) 1992-11-24 2000-03-07 Gaston O. Daumy Para-nitroanilide peptides
EP0618223A3 (en) 1993-03-08 1996-06-12 Sandoz Ltd Peptides, the release of Interleukin 1-Bêta, useful as anti-inflammatory agents.
CA2122227A1 (en) 1993-04-29 1994-10-30 Roland E. Dolle Peptide analogs as irreversible interleukin-1.beta. protease inhibitors
US5462939A (en) 1993-05-07 1995-10-31 Sterling Winthrop Inc. Peptidic ketones as interleukin-1β-converting enzyme inhibitors
US5411985A (en) 1993-05-17 1995-05-02 Merck & Co., Inc. Gamma-pyrone-3-acetic acid as an inhibitor or interleukin-1 β inventory enzyme
JPH0789951A (ja) 1993-06-03 1995-04-04 Sterling Winthrop Inc インターロイキン−１β転換酵素阻害剤
DK0644197T3 (da) 1993-06-04 1999-06-07 Vertex Pharma Peptidphosphinyloxymethylketoner som inhibitorer af interleukin-1beta-konverterende enzymer
EP0628550B1 (en) 1993-06-08 1998-02-25 Sanofi Pyridazines as interleukin-1beta converting enzyme inhibitors
EP0711174A4 (en) 1993-06-24 1997-11-12 Gen Hospital Corp GENES FOR PROGRAMMED CELL DEATH AND PROTEINS
WO1995005192A1 (en) 1993-08-13 1995-02-23 Merck & Co., Inc. SUBSTITUTED KETONE DERIVATIVES AS INHIBITORS OF INTERLEUKIN-1β CONVERTING ENZYME
US5486623A (en) 1993-12-08 1996-01-23 Prototek, Inc. Cysteine protease inhibitors containing heterocyclic leaving groups
US5508262A (en) 1993-12-15 1996-04-16 University Of South Florida Interleukin-1 receptor antagonist decreases severity of acute pancreatitis
ES2210289T3 (es) 1994-03-31 2004-07-01 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Derivados de pirimidinilo como inhibidores de interleuquinas.
EP0758891A4 (en) 1994-04-29 1997-12-03 Sanofi Winthrop Inc HALOMETHYLAMIDES AS IL-1 BETA PROTEASE INHIBITORS
CH688319A5 (fr) 1994-06-03 1997-07-31 Marcham Trading & Investment L Procédé pour la préparation du céfixime trihydraté.
US5756466A (en) 1994-06-17 1998-05-26 Vertex Pharmaceuticals, Inc. Inhibitors of interleukin-1β converting enzyme
US5847135A (en) 1994-06-17 1998-12-08 Vertex Pharmaceuticals, Incorporated Inhibitors of interleukin-1β converting enzyme
US6420522B1 (en) 1995-06-05 2002-07-16 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of interleukin-1β converting enzyme
US5565430A (en) 1994-08-02 1996-10-15 Sterling Winthrop Inc. Azaaspartic acid analogs as interleukin-1β converting enzyme inhibitors
JP2882756B2 (ja) 1994-10-12 1999-04-12 昭和高分子株式会社 脂肪族ポリエステル組成物からなる延伸中空成形体
US5498616A (en) 1994-11-04 1996-03-12 Cephalon, Inc. Cysteine protease and serine protease inhibitors
TW394764B (en) 1995-02-14 2000-06-21 Mitsubishi Chemcal Corp Oxygen-containing heterocyclic derivatives
US6184244B1 (en) 1996-12-16 2001-02-06 Idun Pharmaceuticals, Inc. C-terminal modified (N-substituted)-2-indolyl dipeptides as inhibitors of the ICE/ced-3 family of cysteine proteases

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1995033751A1 (en) * 1994-06-08 1995-12-14 Sanofi Winthrop, Inc. Bicycling lactam inhibitor of interleukin-1-beta converting enzyme
WO1995035308A1 (en) * 1994-06-17 1995-12-28 Vertex Pharmaceuticals Incorporated INHIBITORS OF INTERLEUKIN-1β CONVERTING ENZYME
WO1997022619A2 (en) * 1995-12-20 1997-06-26 Vertex Pharmaceuticals Incorporated INHIBITORS OF INTERLEUKIN-1β CONVERTING ENZYME

Also Published As

Publication number Publication date
US6258948B1 (en) 2001-07-10
US6423840B1 (en) 2002-07-23
CA2239904A1 (en) 1997-06-26
BG108927A (en) 2006-06-30
SK287195B6 (sk) 2010-03-08
NO326882B1 (no) 2009-03-09
AP0202539A0 (en) 1998-06-20
CZ190698A3 (cs) 1998-10-14
IN182290B (cs) 1999-03-06
JP2003137896A (ja) 2003-05-14
EP2295442A3 (en) 2011-04-06
AP0202540A0 (en) 1998-06-20
AP0202538A0 (en) 1998-06-20
JP2008285493A (ja) 2008-11-27
JP2002507961A (ja) 2002-03-12
PL328527A1 (en) 1999-02-01
CA2239904C (en) 2010-01-19
CZ298171B6 (cs) 2007-07-11
WO1997022619A2 (en) 1997-06-26
US7790713B2 (en) 2010-09-07
TR200201218T2 (tr) 2002-08-21
EP2295442A2 (en) 2011-03-16
EP2083014A3 (en) 2010-01-06
BR9612258B1 (pt) 2011-05-31
IL124850A (en) 2006-08-20
EP0869967A2 (en) 1998-10-14
CN1229412A (zh) 1999-09-22
BRPI9612258B8 (pt) 2018-04-17
BG102624A (en) 1999-09-30
BRPI9612258B1 (cs) 2011-05-31
WO1997022619A3 (en) 1997-10-16
TR200201217T2 (tr) 2002-12-23
IL124850A0 (en) 1999-01-26
JP4205762B2 (ja) 2009-01-07
US6204261B1 (en) 2001-03-20
US8119631B2 (en) 2012-02-21
AU1522297A (en) 1997-07-14
NZ326610A (en) 2000-08-25
NO982597D0 (no) 1998-06-05
AP2002002540A0 (en) 2002-06-30
HK1089435A1 (zh) 2006-12-01
US20110178069A1 (en) 2011-07-21
NO982597L (no) 1998-08-12
BR9612258A (pt) 1999-07-13
US20030225269A1 (en) 2003-12-04
IS4771A (is) 1998-06-12
MX9805016A (es) 1998-09-30
KR100561504B1 (ko) 2006-03-20
AU735075B2 (en) 2001-06-28
SK84298A3 (en) 1999-03-12
US20080039449A1 (en) 2008-02-14
BG64465B1 (bg) 2005-03-31
PL190736B1 (pl) 2005-12-30
US20050143436A1 (en) 2005-06-30
TR200201216T2 (tr) 2002-09-23
NZ518094A (en) 2004-01-30
EP2083014A2 (en) 2009-07-29
UA66337C2 (uk) 2004-04-15
GEP20022638B (en) 2002-02-25
KR20040096550A (ko) 2004-11-16

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CZ300171B6 (cs) N-Acylaminoslouceniny jako inhibitory enzymu konvertujícího interleukin-1beta, zpusob jejich prípravy a farmaceutické prostredky, které je obsahují
US5874424A (en) Inhibitors of interleukin-1β converting enzyme
TW509698B (en) Inhibitors of interleukin-1β converting enzyme
PL204619B1 (pl) Pochodna peptydowa, kompozycja farmaceutyczna zawierająca taką pochodną i zastosowanie pochodnej peptydowej
DE69432573T2 (de) Inhibitoren des Endothelin konvertierenden Enzyms
US6008217A (en) Inhibitors of interleukin-1β converting enzyme
DE69610145T2 (de) Benzo-kondensierte Azepinon-und Piperidinonverbindungen, nützlich als ACE-und NEP-Inhibitoren
US20120165319A1 (en) Inhibitors of interleukin-1 beta converting enzyme
RU2249598C2 (ru) ИНГИБИТОРЫ ФЕРМЕНТА, КОНВЕРТИРУЮЩЕГО ИНТЕРЛЕЙКИН-1-β
KR100856767B1 (ko) 인터류킨-1 베타 전환효소의 억제제
AP1280A (en) Inhibitors of interleukin-1 converting enzyme.
AU756253B2 (en) Inhibitors of interleukin-1beta converting enzyme
TW541309B (en) Inhibitors of interleukin-1beta converting enzyme
TWI235157B (en) Inhibitors of interleukin-1beta converting enzyme
HK1022703A (en) INHIBITORS OF INTERLEUKIN-1β CONVERTING ENZYME

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Patent lapsed due to non-payment of fee

Effective date: 20121220