CZ298171B6 - N-Acylaminoslouceniny jako inhibitory enzymu konvertujícího interleukin-1ß, zpusob jejich prípravy a farmaceutické prostredky, které je obsahují - Google Patents

N-Acylaminoslouceniny jako inhibitory enzymu konvertujícího interleukin-1ß, zpusob jejich prípravy a farmaceutické prostredky, které je obsahují Download PDF

Info

Publication number
CZ298171B6
CZ298171B6 CZ0190698A CZ190698A CZ298171B6 CZ 298171 B6 CZ298171 B6 CZ 298171B6 CZ 0190698 A CZ0190698 A CZ 0190698A CZ 190698 A CZ190698 A CZ 190698A CZ 298171 B6 CZ298171 B6 CZ 298171B6
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
group
compound
ice
formula
hydrogen
Prior art date
Application number
CZ0190698A
Other languages
English (en)
Other versions
CZ190698A3 (cs
Inventor
J. Batchelor@Mark
Bebbington@David
W. Bemis@Guy
Herman Fridman@Wolf
J. Gillespie@Roger
M. C. Golec@Julian
Gu@Yong
J. Lauffer@David
J. Livingston@David
S. Matharu@Saroop
D. Mullican@Michael
A. Murcko@Mark
Murdoch@Robert
L. Nyce@Philip
L. C. Robidoux@Andrea
Su@Michael
Woods Wannamaker@M.
P. Wilson@Keith
E. Zelle@Robert
Original Assignee
Vertex Pharmaceuticals Incorporated
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=27534345&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=CZ298171(B6) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Priority claimed from US08/575,641 external-priority patent/US6008217A/en
Priority claimed from US08/598,332 external-priority patent/US5874424A/en
Priority claimed from US08/712,878 external-priority patent/US5985863A/en
Application filed by Vertex Pharmaceuticals Incorporated filed Critical Vertex Pharmaceuticals Incorporated
Publication of CZ190698A3 publication Critical patent/CZ190698A3/cs
Publication of CZ298171B6 publication Critical patent/CZ298171B6/cs

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D243/00—Heterocyclic compounds containing seven-membered rings having two nitrogen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D243/06—Heterocyclic compounds containing seven-membered rings having two nitrogen atoms as the only ring hetero atoms having the nitrogen atoms in positions 1 and 4
    • C07D243/10—Heterocyclic compounds containing seven-membered rings having two nitrogen atoms as the only ring hetero atoms having the nitrogen atoms in positions 1 and 4 condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D243/12—1,5-Benzodiazepines; Hydrogenated 1,5-benzodiazepines
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/02—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/55—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/18—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for pancreatic disorders, e.g. pancreatic enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/04—Antipruritics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/14—Drugs for dermatological disorders for baldness or alopecia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A61P19/10—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease for osteoporosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A61P21/04—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system for myasthenia gravis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A61P25/16—Anti-Parkinson drugs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/14—Drugs for disorders of the endocrine system of the thyroid hormones, e.g. T3, T4
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/06—Antianaemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/06—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a carbon chain containing only aliphatic carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings
    • C07D403/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/02—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings
    • C07D405/12—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/14—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D409/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D409/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings
    • C07D409/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D413/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D413/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings
    • C07D413/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D417/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00
    • C07D417/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing two hetero rings
    • C07D417/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
    • C07D471/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D471/04—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D487/04—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D498/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D498/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D498/04—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/02—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link
    • C07K5/0202—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link containing the structure -NH-X-X-C(=0)-, X being an optionally substituted carbon atom or a heteroatom, e.g. beta-amino acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06139—Dipeptides with the first amino acid being heterocyclic
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C07K5/0821—Tripeptides with the first amino acid being heterocyclic, e.g. His, Pro, Trp
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Virology (AREA)

Abstract

N-Acylaminoslouceniny obecného vzorce (VI), významy jehoz symbolu jsou definovány v patentových nárocích, které jsou inhibitory enzymu konvertujícíhointerleukin-1.beta., zpusob jejich prípravy a farmaceutické prostredky s jejich obsahem. Tyto ICE inhibitory jsou charakterizovány specifickými strukturálními a fyzikálne-chemickými rysy. Uvedené slouceniny a farmaceutické prostredky jsou zejména velmi vhodné pro inhibici aktivity ICE a v dusledku toho jich lze s výhodou pouzít jako cinidel proti onemocnením zprostredkovaným IL-1, apoptózou, IGIFa IFN-.gama., zánetlivých onemocnení, autoimunních onemocnení, rozkladných onemocnení kosti, proliferativních poruch, nakazlivých onemocnení, degenerativních onemocnení a nekrotických onemocnení.

Description

N-Acylaminosloučeniny jako inhibitory enzymu konvertuj ícího interleukin-ΐβ, způsob jejich přípravy a farmaceutické prostředky, které je obsahují
Oblast techniky
Předkládaný vynález se týká nové třídy sloučenin, které jsou inhibitory enzymu konvertujícího interleukin-1 β (ICE, interleukin-ΐβ converting enzyme). Tento vynález se také týká farmaceutických prostředků obsahujících tyto sloučeniny. Sloučeniny a farmaceutické prostředky podle 10 předkládaného vynálezu jsou zejména velmi vhodné pro inhibici aktivity ICE a v důsledku toho je lze s výhodou použít jako činidel proti onemocněním zprostředkovaným interleukinem-l („IL-1“), apoptózou, faktorem vyvolávajícím interferon gama („IGIF“) a interferonem-γ („IFN-γ“), včetně zánětlivých onemocnění, autoimunních onemocnění, rozkladných onemocnění kosti, proliferativních poruch, nakažlivých onemocnění a degenerativních onemocnění. 15 Předkládaný vynález se také týká způsobu inhibice aktivity ICE a potlačení produkce IGIF a IFN-γ a způsobu léčby onemocnění způsobených interleukinem-l, apoptózou, IGIF a IFN-γ za použití sloučenin a prostředků podle předkládaného vynálezu. Předkládaný vynález se také týká způsobu přípravy N-acylaminosloučenin.
Dosavadní stav techniky
Interleukin 1 (IL-1) je důležitým prozánětlivým a imunoregulačním proteinem, kteiý stimuluje diferenciaci a proliferaci fibroblastů, produkci prostaglandinů, kolagenázy a fosfolipázy 25 synoviálními buňkami a chondrocyty, degranulaci basofilů a eosinofilů a aktivaci neutrofilů (Oppenheim, J. H. a kol., Immunology Todav, 7, str. 45 - 56 (1986)). Jako takový se podílí na patogenezi chronických a akutních zánětlivých a auto imunitních onemocnění. Například u revmatoidní arthritidy je IL—1 jak mediátorem zánětlivých symptomů, tak mediátorem rozpadu chrupavkového protoeoglykanu v postiženém místě. Wood, D. D. a kol., Arthritis Rheum. 26, 30 975, (1983); Pettipher, E. J, a kol., Proč. Nati, Acad, Sci, UNITED STATES OF AMERICA 71,
295 (1986); Arend, W. P. a Dayer, J. M., Arthritis Rheum. 38, 151 (1995). IL—1 je také velmi účinným činidlem vstřebávání kostní tkáně. Jandiski, J. J., J. Oral. Path 17, 145 (1988); Dewhirst, F. E. a kol., J. Immunol. 8, 2562 1985). Alternativně se nazývá jako „aktivační faktor osteoklastu“ při destruktivních onemocněních kosti jako je osteoarthritida a mnohonásobný 35 myelom. Bataille,R. a kol., Int. J. Clin. Lab. Res. 21(4), 283 (1992), Při určitých proliferačních poruchách, jako je akutní myelogenní leukémie a mnohonásobný myelom, může IL—1 podpořit růst nádorových buněk a adhezi. Bani, M. R., J, Nati. Cancer Inst. 83, 123 (1991); Vidal-Vanaclócha, F., Cancer Res. 54, 2667 (1994). Při těchto poruchách IL—1 také stimuluje vylučování jiných cytokinů, jako je IL—6, které mohou regulovat vývoj nádoru. (Tartour a kol.), 40 Cancer Res. 54, 6243 (1994). IL—1 je produkován převážně periferními krevními monocyty jako součást zánětlivé odpovědi a vyskytuje se ve dvou odlišných agonistických formách, IL-lot a IL—1 β (Mosely, B. S. a kol., Proč. Nat. Acad. Sci., 84 str. 4572 - 4576 (1987); Lonnemann, G. a kol., EurJ. Immunol., 19, str. 1531 - 1536 (1989)).
IL—1 β je syntetizován jako biologicky neaktivní prekurzor, pIL-Ιβ. pIL-Ιβ postrádá konvenční vedoucí sekvenci (leader sequence) a není upravován signální peptidázou (March. C. J., Nátuře, 315, str. 641 - 647 (1985)). Místo toho je pIL-Ιβ štěpen enzymem konvertujícím interleukin-1 β (ICE, interleukin-1 β converting enzyme) mezi Asp-116 a Ala—117, čímž vzniká biologicky aktivní C-koncový fragment nacházející se v lidském séru a synoviální kapalině (Sleath, P. R.
a kol., J. Biol. Chem., 265, str. 14526- 14528 (1992); A. D. Howard a kol., J. Immunol., 147, str. 2964 - 2969 (1991)). Převádí prekurzor IL—I β na maturovanou formu. Black, R. A. a kol., -------ΨΕΒ8-Εε«:7-24-778ΐΓΓ·3 86=390_('l989);· Kostura,'MrJ ra kolrrProcrNatLAcádFSci? UňitědStateš of America, 86, str. 5227—5231 (1989). Úprava účinkem ICE je rovněž nutná pro transport maturovaného IL—1 β přes buněčnou membránu. Ukázalo se, že ICE a jeho homologa jsou zapojeny do řízení programované buněčné smrti nebo apoptózy. Yuan, J. a kol., Cell, 75, str. 641-652 (1993); Miura, M. a kol., Cell, 75, str. 653-660 (1993); Nett-Fiordalisi, M. A. a kok, J. Cell. Biochem., 17B, str. 117 (1993). Zejména se má zato, že ICE nebo homology ICE souvisí s regulací apoptózy u nerodegenerativních onemocnění, jako je Alzheimerova a 5 Parkinsonova choroba (Marx, J. A. M. Baringa, Science, 259, str. 760 - 762 (1993); Gagliardini,
V. a kol., Science, 263, str. 826- 828 (1994)). Léčebné aplikace pro inhibici apoptózy mohou zahrnovat léčbu Alzheimerovy nemoci, Parkinsonovy nemoci, úrazů, myokardiálního infarktu, atrofíe páteře a stárnutí.
Ukázalo se, že ICE zprostředkuje apoptózu (programovaná buněčná smrt) u určitých typů tkání. Steller, H., Science, 267, str. 1445 (1995); Whyte, M. a Evan, G., Nátuře, 376, str, 17 (1995);
Martin, S. J. a Green, D. R., Cell, 82, str. 349 (1995); Alnemri, E. S., a kol., J. Biol. Chem., 270, str. 4312 (1995); Yuan, J. Curr. Opin, Cell BioL, 7, str. 211 (1995). Transgenní myš s přerušeným ICE genem je nedostatečná při apoptóze zprostředkované Fas (Kuida, K. a kol., Science 267, 15 2000 (1995)). Tato aktivita ICE je odlišná od aktivity jako enzymu pro zpracování pro-ILl-β, Je možné, že u určitých typů tkání nemusí být inhibice ICE Způsobena vylučováním dokonalého IL-1 β, ale apoptóza může být inhibována.
Enzymaticky aktivní ICE byl již dříve popsán jako heterodimer složený ze dvou podjednotek, 20 p20 a plO (s molekulovou hmotností 20 kDa respektive 10 kDa). Tyto podjednotky vznikají z proenzymu o hmotnosti 45 kDa (p45) přes formu p30, pomocí aktivačního mechanizmu, který je autokatalytický (Thomberry, N. A. a kol., Nátuře, 356, str. 768 - 774 (1992)). Proenzym ICE byl rozdělen na několik funkčních domén: prodoménu (p 14), podjednotku p22/20, polypeptidový linker a podjednotku plO (Thomberry a kol., viz výše; Casano a kol., Genomics, 20, 25 str. 474-481 (1994)).
p45 o plné délce byl charakterizován pomocí své cDNA-sekvence a aminokyselinové sekvence (patentové přihlášky PCT WO 91/15577 a WO 94/00154). Známé jsou i cDNA-sekvence a aminokyselinové sekvence p20 a plO (Thomberry a kol., viz výše). Sekvenovány a klonovány 30 byly rovněž myší a krysí ICE. Vykazují vysokou homologii aminokyselinové sekvence a sekvence nukleové kyseliny s lidským ICE (Miller, D. K. a kol., Ann. N. Y. Acad. Sci., 696, str. 133 148 (1993). Pomocí rozlišení atomů za použití rentgenové krystalografie byla určena trojrozměrná struktura ICE. Wilson, K. P., a kol., Nátuře, 370, str. 270-275 (1994). Aktivní enzym se vyskytuje jako tetramer dvou p20 a dvou p 10 podjednotek.
Dále existují lidská homologa ICE s podobnými sekvencemi na aktivních místech enzymů. Mezi tato homologa patří TX (nebo ICErei_n nebo ICH-2) (Faucheu, a kol., EMBO J., 14, str. 1914 (1995); Kamens J., a kol., J. Biol. Chem., 270, str. 15250 (1995); Nicholson a kok, J. Biol.
Chem., 270 15870 (1995), TY (nebo ICErei_m) (Nicholson a kol., J. Biol. Chem., 270, str. 15870 40 (1995); ICH-1 (nebo Nedd-2) (Wang, L. a kol., Cell, 78, str. 739 (1994)), MCH-2, (FemandesAlnemri, T. a kol., Cancer Res., 55, str. 2737 (1995), CPP32 (nebo YAMA nebo apopain) (Femandes-Alnemri, T. a kol., J. Biol. Chem., 269, str. 30761 (1994); Nicholson, D. W. a kol., Nátuře, 376, str. 37 (1995)), a CMH-1 (nebo MCH-3) (Lippke, a kol., J. Biol. Chem., (1996); Femandes-Alnemri, T. et al., (1995)). Každý z těchto homologů, stejně jako ICE samotný, je 45 schopen vyvolat apoptózu, když se podrobí expresi na transfekovaných buněčných kmenech.
Inhibici jednoho nebo více těchto homologů peptidylovým inhibitorem ICE Tyr-Val-Ala-Aspchloromethylketon dojde k inhibici apoptózy na primárních buňkách nebo buněčných kmenech. Lazebník a kol., Nátuře, 371, str. 346 (1994). Sloučeniny popsané v předkládaném vynálezu jsou schopny inhibovat jeden nebo více homologů ICE (viz. příklad 5). Tyto sloučeniny mohou být 50 proto použity pro inhibici apoptózy na typech tkání, které obsahují homologa ICE, ale které neobsahují aktivní ICE nebo neprodukují maturovaný IL—1 β.
Faktor vyvolávající interferon gama (IGIF) je přibližně 18-kDa polypeptid, který stimuluje vylučování interferonu gama (IFN-γ) T-buňkami. IGIF je vylučován aktivovanými Kupffero55 vými buňkami a makrofágy in vivo a z těchto buněk je přenášen za stimulace endotoxinu. Tedy,
-2CZ 298171 B6 sloučeniny, které potlačují vylučování IGIF mohou být užitečné jako inhibitory takové stimulace buněk T, která což může snížit hladinu vylučování IFN-γ těmito buňkami.
IFN-γ je cytokin s imunomodulačními účinky na různé imunní buňky. IFN-γ je zapojen do 5 aktivace makrofágu a výběru Thl buněk (F. Belardelli, APMIS, 103, str. 161 (1995)). IFN-γ uplatňuje svůj účinek zejména pomocí modulace vylučování genů přes STÁT a IRF dráhy (C. Schindler a J. E. Damell, Ann. Rev. Biochem., 64, str. 621 (1995); T. Taniguchi, J. Cancer Res. Clin. Oncol., 121, str. 516(1995)).
Myši, které mají nedostatek IFN-γ nebo jeho receptoru mají mnohonásobné poruchy funkce imunních buněk a jsou odolné k endotoxickému šoku (S. Huang a kol., Science, 259, str. 1742 (2993); D. Dalton a kol., Science, 259, str. 1739 (1993); B. D. Car a kol., J. Exp. Med., 179, str. 1437 (1994)). Ukazuje se, že stejně jako IL-12, i IGIF vykazuje schopnost vyvolat produkci IFN-γ buňkami T (H. Okamura a kol., Infection and Immunity, 63, str. 3966 (1995); H. Okamura 15 a kol., Nátuře, 378, str. 88 (1995); S. Ushio a kol., J. lmmunol., 156, str. 4274 (1996)).
Ukázalo se, že IFN-γ přispívá k patologii spojené s různými zánětlivými, nakažlivými a autoimunními poruchami a onemocněními. Tedy, sloučeniny schopné potlačit vylučování IFN-γ by mohly být využitelné pro zmírnění vlivů onemocnění spojených s IFN-γ.
Biologické řízení IGIF a tedy IFN-γ nebylo vysvětleno. Je známo, že IGIF se syntetizuje jako prekurzor proteinu zvaného „pro-IGIF“. Přesto je nejasné, jak se pro-IGIF štěpí a zda je tento proces biologicky důležitý.
Proto prostředky a způsoby schopné regulovat převedení pro-IGIF na IGIF mohou být využitelné pro potlačení vylučování IGIF a IFN-γ invivo a tedy pro zmírnění škodlivého vlivu těchto proteinů, které přispívají k poruchám a onemocněním člověka.
ICE a další členy skupiny ICE/CED-3 nebyly dříve spojovány se převodem pro-IGIF na IGIF 30 nebo s vylučováním IFN-γ in vivo.
Inhibitory ICE představují skupinu sloučenin vhodných pro kontrolu zánětu nebo apoptózy nebo obojího. Byly popsány peptidové a peptidylové inhibitory ICE (patentové přihlášky PCT WO 91/15577; WO 93/05071; WO 93/09135; WO 93/14777 a WO 93/16710; a Evropská 35 patentová přihláška 0 547 699), V důsledku jejich peptidické povahy se však takovéto inhibitory typicky vyznačují nežádoucími farmakologickými vlastnostmi, jako je špatná orální absorpce, špatná stabilita a rychlý .metabolismus (Plattner, J. J. a D. W. Norbeck, v Prus Discovery Technologies, C. R. Clark a W. H. Moos, editoři (Ellis Horwood, Chichester, Velká Británie, 1990), str. 92 - 126). To brání vyvinutí účinných léčiv na jejich bázi.
Bylo popsáno, že i nepeptidické sloučeniny mohou také inhibovat ICE in vitro. PCT patentová přihláška WO 95/26958, patenty US 5 552 400; Dolle a kol., J. Med. Chem., 39, str. 2438-2440 (1996). Není však jasné, zda tyto sloučeniny mají vhodný farmakologický profil pro léčebné použití.
Dále běžné postupy pro přípravu těchto sloučenin nejsou výhodné. Tyto postupy využívají tributyIcínhydrid, jedovatou látku citlivou na vlhkost. Tyto postupy jsou tedy nevýhodné, jsou zdravotně nebezpečné a způsobují problémy se zbytky jedovatých látek. Dále je obtížné čistit sloučeniny připravené pomocí těchto postupů.
Proto existuje potřeba sloučenin, které mohou účinně inhibovat působení ICE in vivo, pro použití ----„jako- činídel-pro-prevenci- a-léčbu-chronickýclra-akutních' forem_onemOcněni zpusObehých' ΙΕ=1Τ apoptózou, IGIF nebo IFN-γ, stejně jako zánětlivých onemocnění, autoimunních onemocnění,
-3onemocnění s rozkladem kostní tkáně, proliferativních onemocnění, nakažlivých onemocnění nebo degenerativních onemocnění. Existuje také potřeba způsobu přípravy takových sloučenin.
Podstata vynálezu
Předkládaný vynález poskytuje novou třídu sloučenin a jejich farmaceuticky přijatelných derivátů, které jsou využitelné jako inhibitory ICE. Tyto sloučeniny mohou být použity samotné nebo ve spojení sjinými léčebnými nebo profy taktickým i činidly jako jsou antibiotika, imunomodulá10 tory nebo jiná protizánětlivá činidla, pro léčbu nebo profylaxi onemocnění zprostředkovaných IL-1, apoptózou, IGIF nebo IFN-γ. V souladu s výhodným provedením sloučeniny podle předkládaného vynálezu jsou schopny vázat se na aktivní místo ICE a inhibovat aktivitu tohoto enzymu. Dále mají zlepšenou buněčnou potenci, zlepšenou farmakokinetickou a/nebo zlepšenou biologickou využitelnost ve srovnání s peptidylovými inhibitory ICE.
Hlavním předmětem tohoto vynálezu je poskytnout nové třídy sloučenin, které jsou inhibitory ICE, které představují sloučeniny obecného vzorce VI (VI) RrN-R2
I
H kde různé substituenty jsou popsány v předkládaném vynálezu.
Dalším předmětem předkládaného vynálezu je poskytnout způsob přípravy N-acylaminosloučenin pomocí spojení karboxylové kyseliny s aminem chráněným skupinou alloc.
Popis obrázků
Obrázek 1A ICE štěpí pro-IGIF in vivo. Buňky lysátů z buněk Cos transfekované různými indikovanými expresními plazmidy nebo kontrolní vzorky se analyzují na přítomnost IGIF oddělením proteinů pomocí SDS-PAGE a imunopřenosu „immunoblotting“ s anti-IGIF protilátkou 30 (pruh 1, nepravě transfekované buňky; pruh 2, samotný pro-IGIF; pruh 3-12, pro-IGIF v kombinaci s ICE, ICE-C285S, CPP32, CPP32-C163S, CMH-1, CMH-1-C186S, Tx, Tx-C258S, v tomto poradí). Pohyblivost pro-IGIF a 18-kDa maturovaného IGIF je uvedena vpravo. Označení molámích hmotností v kDA je uvedeno vlevo (příklad 23).
Obrázek 1B ICE štěpí pro-IGIF na autentickém místě zpracování in vitro, jak ukazuje barva Commassie modř proteolytické reakce produktu separovaného pomocí SDS-PAGE (příklad 23). Byly použity následující proteázy a inhibitory: pruh 1, kontrolní pufr; pruh 2, 0,1 nM ICE; pruh 3, 1 nM ICE; pruhy 4 a 5, 1 nM ICE s 10 nM Cbz-Val-Ala-Asp-[(2,6-dichlorbenzoyl)oxyjmethylketonu a 100 nM Ac-Tyr-Val-Ala-Asp-aldehydu; pruhy 6 a 7,15 nM CPP32 s a bez
4 00 nM Ac-Asp-Glu-Val-Asp-aldehydu (D. W. Nicholson a kol., 376, str. 37 (1995)), v tomto pořadí; pruh 8, 100 nM CMH-1; pruh 9, 10 jednotek/ml granzym B; a M, molámí hmotnosti označené u kDa.
Obrázek 1C Štěpení ICE převádějící neaktivní pro-IGIF na aktivní IGIF, který indukuje produkci 45 IFN-γ na Thl pomocných buňkách. Neštěpeno (pro-IGIF), ICE štěpeno (pro-IGIF/lCE), CPP32-štepeno (pro-IGIF/CPP32) a rekombinant maturovaného IGIF (rIGIF) se inkubovaly s A.E7 Thl buňkami při 12 ng/ml (volná část) a 120 ng/ml (šrafovaná část) 18 hodin a hladina IFN-γ uvolněného do kultivačního média se měří pomocí ELISA (příklad 23). A.E7 buněčná --kul tura-s pufrem—IGE- samotné-(lC E)~nebo“CPP3 2’_ samotné“ (CPP3 2)’se’ testuje“ podobně pro 50 negativní kontrola. Čísla představují průměrné hodnoty ze tří stanovení.
-4CL Ζ?317Ι B6
Obrázek 2A Maturovaný IGIF (18-kDa) se vyloučí buňkami Cos transfekovaných spolu s pro-IGIF a ICE-expresními plazmidy. Buněčný lysat (vlevo) a upravené médium (vpravo) z buněk Cos transfekovaných pro-IGIF expresním plazmidem v nepřítomnosti (-) nebo v přítomnosti expresního plazmidu kódujícího přírodní typ (ICE) nebo neaktivního mutantu (ICE-C285S) 5 ICE. Transfekované buňky se metabolicky značí isS-methioninem, proteiny z buněčných lysátů a upraveného média imunosráženého protilátkou anti-IGIF a izolovaného pomocí SDS-PAGE (příklad 24). Pohyblivost pro-IGIF a 18-kDa maturovaného IGIF je uvedena vpravo. Značky molárních hmotností v kDa jsou uvedeny vlevo.
Obrázek 2B IFN-γ indukující aktivita se určí v buňkách Cos transfekovaných s pro-IGIF a ICE expresními plazmidy. Buněčné lysáty (šrafovaná část) a upravené médium (volná část) z buněk Cos transfekovaných pro-IGIF expresním plazmidem za nepřítomnosti (pro-IGIF) nebo za přítomnosti (pro-IGIF/ICE) expresního plazmidu kódujícího přírodní typ (ICE) se testují na hladinu IFN-γ (ng/ml) pomocí ELISA. Cos buňky transfekované pufrem (Mock) nebo ICE expresní 15 plazmidy samotné (ICE) slouží jako negativní kontrola (příklad 24).
Obrázek 3A Kupfferovy buňky myší s nedostatkem ICE jsou nedostatečné pro export IGIF. Kupfferovy buňky přírodního typu myší (ICE +/+) nebo myší s nedostatkem ICE homozygotních pro ICE mutaci (ICE -/-) se izolují a stimulují LPS 3 hodiny. Hladina imunoreaktivních 20 polypeptidů v upraveném médiu (ng/ml) přírodního typu buněk se měří pomocí ELISA (příklad 25). N. D. (nedetekovatelné) znamená, že koncentrace IGIF byla nižší než 0,1 ng/ml.
Obrázek 3B Kupfferovy buňky myší s nedostatkem ICE jsou nedostatečné pro export maturované IGIF. Kupfferovy buňky přírodního typu myši (ICE +/+) nebo myší s nedostatkem ICE homozy25 gotních pro ICE mutaci (ICE -/-) se izolují a stimulují LPS 3 hodiny. Stimulované buňky se metabolicky značí 35S-methioninem, proteiny z buněčných lyzátů a upraveného média se imunosráží s protilátkou anti-IGIF a oddělí pomocí SDS-PAGE (příklad 25). Pohyblivost prolGIF a 18 kDa maturované IGIF je vyznačena vpravo. Značky molekulární hmotnosti u kDa jsou uvedeny vlevo.
Obrázek 3C Sérum z myší s nedostatkem ICE obsahuje sníženou hladinu IGIF. Vzorky séra z přírodního typu myší (ICE +/+) nebo myší s nedostatkem ICE homozygotních pro ICE mutaci (ICE -/-) se testují na hladinu IGIF (ng/ml) pomocí ELISA testu (příklad 25).
Obrázek 3D Sérum z myší s nedostatkem ICE obsahuje snížené množství IFN-γ. Vzorky séra z přírodního typu myší (ICE +/+) nebo myší s nedostatkem ICE homozygotních pro ICE mutací (ICE -/-) se testují na hladinu IFN-γ (ng/ml) pomocí ELISA testu (příklad 25).
Obrázek 4 Hladiny IFN-γ v séru se významně sníží u myší s nedostatkem ICE po akutní 40 stimulaci LPS (příklad 26). Vzorky séra přírodního typu myší (vyplněné čtverečky) nebo myší s nedostatkem ICE (vyplněná kolečka) se testují na hladinu IFN-γ (ng/ml) pomocí ELISA testu jako funkce času (hodiny) po stimulaci LPS, Teploty zvířat v průběhu času ve stupních Celsia jsou uvedeny pro přírodní typ myší (prázdné čtverečky) a pro myši s nedostatkem ICE (prázdná kolečka).
Obrázek 5 Inhibitor ICE, AcYVAD-aldehyd (AcYVAD-CHO), inhibuje LPS stimulovanou IL—Ιβ a IFN-γ syntézu lidskými periferními monojademým krevními buňkami (PBMC), Procenta (%) inhibice jako funkce koncentrace inhibitoru (μΜ) jsou uvedena pro syntézu IL—1 β (prázdné čtverečky) a pro syntézu IFN-γ (otevřené kosočtverečky).
Obrázek 6 Sloučenina 214e inhibuje vylučování IL—1 β u LPS stimulovaných myší. Vzorky séra ___ZCD.L.myšúse-testovaly^na-hladinu-IL-l·β-(pg/ml)’pomocíΈtISΆ’testu’pro’tPS’Stimulaci7
Sloučenina 214e se podávala pomocí intraperitoneální injekce (IP) 1 hodinu po LPS stimulaci. Krev se odebírala 7 hodin po LPS stimulaci (viz příklad 7).
-5CL Z9BI71 B6
Obrázek 7 Sloučenina 217e ínhibuje vylučování IL—1 β u LPS stimulovaných myší. Vzorky séra zCDl myší se testovaly na hladinu 1L-1 β (pg/ml) pomocí ELISA testu pro LPS stimulaci. Sloučenina 217e se podávala pomocí intraperitoneální injekce (IP) 1 hodinu po LPS stimulaci. Krev se odebírala 7 hodin po LPS stimulaci (viz příklad 7).
Obrázek 8 Sloučenina 214e, ale ne sloučenina 217e, inhibuje vylučování IL—1β u LPS stimulovaných myší, pokud se podává orálně. Pomocí tohoto testu se měří orální absorpce za podobných podmínek jako je popsáno pro obrázek 6 a 7. Tyto výsledky ukazují, že sloučenina 214e je potenciálně orálně aktivní jako inhibitor ICE (viz. příklad 7).
Obrázek 9 Sloučenina 214e a analoga sloučeniny 214e také inhibují vylučování IL—1 β po IP podávání. Tyto výsledky byly získány v testu popsaném pro obrázek 6 a 7 a příklad 7,
Obrázek 10 Sloučenina 214e a analoga sloučeniny 214e také inhibují vylučování IL-Ιβ po orálním (PO) podávání. Tyto výsledky byly získány v testu popsaném pro obrázek 6 a 7 a příklad 7.
Obrázek 11A/B Sloučeniny 302 a 304a vykazují měřitelnou hladinu v krvi po orálním podávání (50 mg/kg), v 0,5% karboxymethylcelulóze) myším. Vzorky krve se odebraly 1 a 7 hodin po podávání. Sloučeniny 302 a 304a jsou proléčiva sloučeniny 214e a metabolizují se na sloučeninu 21,4e in vivo. Sloučenina 214e nevykazuje hladinu v krvi vyšší než 0,10 pg/ml pokud se podává orálně (příklad 8),
Obrázek 12 Sloučenina 412f brání postupu arthritidy vyvolané kolagenem typu II u samic DBA/1J myší (Wooly, P. H., Methods in Enzymology, 162, str. 361-373 (1988) a Geger T. Clinical a Experimental Rheumatology, 11, str. 515-522 (1993)). Sloučenina 412f se podávala dvakrát denně (10, 25 a 50 mg/kg), přibližně po 7 hodinách orálně. Zánět se hodnotil pomocí škály závažnosti arthritidy v rozsahu 1 až 4 podle rostoucí závažnosti. Výsledky dvou předních končetin byly pokládány za konečný výsledek (viz příklad 21).
Obrázek 13 Sloučenina 412d brání postupu arthritidy vyvolané kolagenem typu II u samic DBA/1 J myší. Výsledky byly získány pomocí postupu popsaného pro obrázek 12 a v příkladu 21.
Obrázek 14 Sloučenina 696a brání postupu arthritidy vyvolané kolagenem typu II u samic DBA/1 J myší. Výsledky byly získány pomocí postupu popsaného pro obrázek 12 a v příkladu 21.
Zkratky a definice
Zkratky
Označení Činidlo nebo fragment
Ala alanin
Arg arginin
Asn asparagin
Asp kyselina asparagová
Cys cystein
Gin glutamin
Glu kyselina glutamová
Gly glycin
His histidin
Ile izoleucin
Leu leucin
Lys lysin
Met methionin
Phe fenylalanín
-6cz. zyai /i bo
Pro
Ser
Thr
Trp
Tyr
Val
Ac2O n-Bu DMF D1EA EDC Et
Et2O EtOAc Fmoc HBTU HOBT iPr
Me
MeOH Ph
TFA Alloc prolin serin threonin tryptofan tyrosin valin anhydrid kyseliny octové normální butylová skupina dimethylformamid
N,N-diizopropylethylamin l-(3-DimethyIaminopropyl)-3-ethylkarbodiimidhydrochlorid ethylová skupina diethylether ethylacetát
9-fluorenylmethyoxykarbonyl
O-benzotriazol-l-yl-Ν,Ν,Ν',Ν -tetramethyluronium hexafluorfosfát hydrát 1-hydroxybcnzotriazolu izopropylová skupina methylová skupina methanol fenylová skupina kyselina trifluoroctová allyloxykarbonyl
Definice
Následující termíny, pokud jsou použity a není uvedeno jinak, mají v předkládaném vynálezu následující významy:
Termín „faktor indukující interferon gama“ nebo „IGIF“ znamená faktor, který je schopen 30 vyvolat endogenní produkci IFN-γ.
Termín „inhibitor ICE“ znamená sloučeninu, která je schopna inhibovat enzym ICE. Inhibice ICE může být určena za použití postupů popsaných a uvedených jako odkazy. Odborníci zjistili, že in vivo ICE inhibitor není nutně in vitro ICE inhibitor. Například proléková forma sloučeniny 35 typicky ukazuje nízkou nebo žádnou aktivitu při in vitro zkouškách. Takové prolékové formy mohou být přeměněny pomocí metabolického nebo jiného biochemického postupu v těle pacienta za získání in vivo inhibitoru ICE.
Termín „cytokin“ znamená molekulu, která zprostředkuje interakce mezi buňkami.
Termín „stav“ znamená jakékoli onemocnění, poruchu nebo účinek, který má škodlivé biologické následky pro subjekt.
Termín „subjekt“ znamená živočicha nebo jednu nebo více buněk živočišného původu, S výho45 dou je živočichem savec, výhodněji člověk. Buňky mohou být v jakékoli formě, včetně, ale bez omezení, buněk ponechaných v tkáních, shluků buněk, imortalizovaných buněk, transfektovaných buněk nebo transformovaných buněk a buněk odvozených od živočichů, které jsou fyzikálně nebo fenotypícky pozměněné.
Termín „aktivní místo“ znamená jakékoli nebo všechny následující místa na ICE: vazebné místo pro substrát, místo, kde se váže inhibitor a místo, kde probíhá štěpení substrátu.
Termín „heterocyklus“ nebo „heterocyklický“ označuje stabilní mono- nebo polycyklickou sloučeninu, která může popřípadě obsahovat jednu nebo dvě dvojné vazby nebo může popřípadě
-7CZ Z9S171 B6 obsahovat jeden nebo několik aromatických kruhů. Každý heterocyklus tvoří atomy uhlíku a jeden až čtyři heteroatomy nezávisle na sobě vybrané ze skupiny zahrnující dusík, kyslík a síru. Termín „dusíkový heteroatom“, „dusík jako heteroatom“ a „sírový heteroatom“, „síra jako heteroatom“, jak jsou zde používány, zahrnují libovolnou oxidovanou formu dusíku nebo síry nebo kvatemizovanou formu jakéhokoli bazického dusíku. Mezi heterocykly definované výše patří například pyrimidinyl, tetrahydrochinolyl, tetrahydroizochinolinyl, purinyl, pyrimidyl, indolinyl, benzimídazolyl, imidazolyl, imidazolinoyl, imidazolidinyl, chinolyl, izochinolyl, indolyl, pyridy 1, pyrrolyl, pyrrolinyl, pyrazolyl, pyrazinyl, chinoxolyl, piperidinyl, morfolinyl, thiamorfolinyl, furyl, thienyl, triazolyl, thiazolyl, β-karbolinyl, tetrazolyl, thiazolídinyl, benzofuranoyl, thiamorfolinylsulfon, benzoxazolyl, oxopiperidinyl, oxopyrrolidinyl, oxoazepinyl, azepinyl, izoxazolyl, tetrahydropyranyl, tetrahydrofuranyl, thiadiazolyl, benzodioxolyl, benzothienyl, tetrahydrothiofenyl a sulfolanyl. Další heterocykly jsou popsány v A. R. Katritzky aC. W. Rees, editoři, Comprehensive Heterocyclic Chemistry: The Structure, Reactions, Synthesis and Use of Heterocyclic Compounds, svazek 1 - 8, Pergamen Press, New York (1984).
Termín „cykloalkyl“ nebo „cykloalkylová skupina“ označuje mono- nebo polycyklickou skupinu, která obsahuje 3 až 15 atomů uhlíku a může popřípadě obsahovat jednu nebo dvě dvojné vazby. Mezi příklady patří cyklohexyl, adamantyl a norbomyl.
Termín „aryl“ nebo „arylová skupina“ označuje mono- až polycyklickou skupinu která obsahuje 6, 10, 12 nebo 14 atomů uhlíku, ve které je alespoň jeden kruh aromatický. Mezi příklady patří fenyl, nafty 1 a bifenyl.
Termín „heteroaromatický“ nebo „heteroaromatická skupina“ označuje mono- nebo polycyklickou skupinu, která obsahuje 1 až 15 atomů uhlíku a 1 až 4 heteroatomy, nezávisle na. sobě vybrané ze skupiny zahrnující síru, dusík a kyslík, a která dále obsahuje 1 až 3 pěti- nebo šestičlenné kruhy, z nichž alespoň jeden je aromatický.
Termín „α-aminokyselina“ („alfa-aminokyselina“) označuje jak v přírodě se vyskytující aminokyseliny, tak jiné „neproteinové“ α-aminokyseliny běžně používané odborníky v chemii peptidu při přípravě syntetických analogů přirozeně se vyskytujících peptidů, včetně D- a L-forem. V přírodě se vyskytujícími aminokyselinami jsou glycin, alanin, valin, leucin, izoleucin, serin, methionin, threonin, fenylalanin, tyrosin, tryptofan, cystein, prolin, histidin, kyselina asparagová, asparagin, kyselina glutamová, glutamin, kyselina γ-karboxyglutamová, arginin, omithin a lysin. Mezi příklady „neproteinových“ α-aminokyselin patří hydroxylysin, homoserin, homotyrosin, homofenylalanin, citrullin, kyanurenin, 4-aminofenylalanin, 3-(2-naftyl)alanin, 3-(1-naftyl)alanin, methioninsulfon, terc.-butylalanin, terc.butylglycin, 4-hydroxyfenylglycin, aminoalanin, fenylglycin, vinylalanin, propargylglycin, l,2,4-triazolo-3-alanin, 4,4,4-trifÍuorthreonin, thyronin, 6-hydroxytryptofan, 5-hydroxytryptofan, 3-hydroxykynurenin, 3-aminotyrosin, trifluormethylalanin, 2-thienylalanin, (2-(4-pyridy l)ethyl)cystein, 3,4-dimethoxyfenylalanin, 3—(2— thiazolyl)alanin, kyselina ibotenová, kyselina 1-amino-l-cyklopentankarboxylová, kyselina
1- amino-l-cyklohexankarboxylová, kyselina chiskvalová, 3-trifluormethylfenylalanin, 4-trifluormethylfenylalanin, cyklohexylalanin, cyklohexylglycin, thiohistidin, 3-methoxytyrosin, elastatinal, norleucin, norvalin, alloizoleucin, homoarginin, thioprolin, dehydroprolin, hydroxyprolin, kyselina izonipektotová, homoprolin, cyklohexylglycin, kyselina a-amino-n-máselná, cyklohexylalanin, kyselina aminofenylmáselná, fenylalaniny substituované v ortho-, meta- nebo para-poloze fenylového kruhu jedním nebo dvěma substituenty vybranými ze souboru zahrnujícího alkylové skupiny s 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxyskupiny s 1 až 4 atomy uhlíku, atomy halogenů a nitroskupinu, nebo substituované methylendioxyskupinou, β-2- a -3-thienylalanin, β-2a -3-furanylalanin, β-2-, -3- a -4-pyrídylaIanin, β-^εηζοΐ!^ηγ1-2- a -3-yl)alanin, β-(1- a
2- naftyl)alanin, O-alkylované deriváty šeřinu, threoninu nebo tyrosinu, S-alkylovaný cystein, Syalkyloyaný^ homocystci n. J4^sulfá^._.o=fosfáty^ a.-O^karboxvlátv^tvrosinii-.-3-sul fotyrosi n:- -
3- karboxytyrosin, 3-fosfotyrosin, ester methansulfonové kyseliny a tyrosinu, ester methanfosfonové kyseliny a tyrosinu, 3,5-dijodtyrosin, 3-nitrotyrosin, ε-alkyllysiny a δ-alkylomithiny.
-8CZ Z98171 B6
Kterákoli z těchto α-aminokyselin může být substituována methylovou skupinou v ct-poloze, halogenem na kterémkoli aromatickém zbytku na postranním řetězci cc-aminokyseliny, nebo vhodnou chránící skupinou na atomech kyslíku, dusíku nebo síry ve zbytcích postranních řetězců. Vhodné chránicí skupiny jsou uvedeny v práci „Protective Groups In Organic Synthesis“, T. W. Greene a P. G. M. Wuts, J. Wiley and Sons, New York, 1991.
Termín „substituce“ označuje nahrazení atomu vodíku ve sloučenině substituovanou skupinou. V tomto vynálezu jsou ze substituce vyloučeny ty atomy vodíku, které tvoří část zbytku vytvářejícího vodíkovou vazbu, který je schopen vytvářet vodíkovou vazbu s karbonylovým atomem kyslíku v Arg-341 v ÍCE nebo s karbonylovým atomem kyslíku v Ser-339 v ICE. Mezi tyto vyloučené atomy vodíku patří ty atomy, které tvoří skupinu -NH-, která jev poloze alfa vzhledem k symbolu Z nebo skupině -CO- a která je uvedena jako -NH- a nikoli jako skupina X nebo nějak jinak označená skupina v následujících obecných vzorcích: (a) až (t), (v) až (y) a (I) až(VIID).
Termín „přímý řetězec“ označuje souvislý nerozvětvený řetěz kovalentně vázaných členů, tj. atomů, které tvoří části řetězce. Přímý řetězec nebo kruh, kterého tvoří tento přímý řetězec součást, mohou být substituovány, ale tyto substituenty nejsou částí přímého řetězce.
Termín „K“ představuje numerické měřítko účinnosti sloučeniny při inhibici aktivity cílového enzymu, jako je ICE. Nižší hodnoty Kj odrážejí vyšší účinnost. Hodnota Kj se získá zpracováním experimentálně stanovených údajů standardními rovnicemi enzymové kinetiky (viz. I. H. Segel, Enzyme Kinetics, Wiley-Interscience, 1975).
Termín „pacient“, jak je zde používán, označuje libovolného savce, zejména člověka.
Termín „farmaceuticky účinné množství“ označuje množství účinné k léčení nebo zlepšení onemocnění zprostředkovaného IL—1 u pacienta. Termín „profylakticky účinné množství“ označuje množství účinné k prevenci nebo podstatnému snížení možnosti onemocnění zprostředkovaného IL—1 u pacienta.
Termín „farmaceuticky přijatelná nosná nebo pomocná látka“ označuje netoxickou nosnou nebo pomocnou látku, kterou lze podat pacientovi, spolu se sloučeninou podle vynálezu, a která neničí její farmakologickou účinnost.
Termín „farmaceuticky přijatelný derivát“ znamená libovolnou farmaceuticky přijatelnou sůl, ester, nebo sůl takového esteru, sloučeniny podle vynálezu, nebo jakoukoli jinou sloučeninu, která je po podání příjemci schopná poskytovat (přímo nebo nepřímo) sloučeninu podle vynálezu nebo její metabolit nebo zbytek s anti-ICF aktivitou.
Mezi farmaceuticky přijatelné soli sloučenin podle vynálezu patří například soli odvozené od farmaceuticky přijatelných anorganických a organických kyselin a bází. Mezi příklady vhodných kyselin patří kyselina chlorovodíková, bromovodíková, sírová, dusičná, chloristá, fumarová, maleínová, fosforečná, glykolová, mléčná, salicylová, jantarová, toluen-p-sulfonová, vinná, octová, citrónová, methansulfonová, mravenčí, benzoová, malonová, naftalen-2-sulfonová a benzensulfonová. Další kyseliny, jako je kyselina šťavelová, ačkoli nejsou farmaceuticky přijatelné, lze použít k přípravě solí vhodných jako meziprodukty pro získání sloučenin podle vynálezu a jejich farmaceuticky přijatelných adičních solí s kyselinami. Mezi soli odvozené od vhodných bází patří soli s alkalickými kovy (například sodíkem), soli s kovy alkalických zemin (například hořčíkem), amonné soli a tetraalkylamoniové soli s 1 až 4 atomy uhlíku v každé alkylové části.
Wynálerřovněž'6ěÍO“úváfiu7,kváténiižaci“ libovolných bazických skupin obsahujících dusík ve zde popsaných sloučeninách. Bazický dusík lze kvaternizovat libovolným z činidel, která jsou známá odborníkovi, včetně například nižších alkylhalogenidů, jako je methyl-, ethyl-, propyl- a
-9CZ 298171 B6 butylchlorid, -bromid a jodid, dialkylsulfátů včetně dimethyl-, diethyl- dibutyl a d i amyl sulfátu, halogen idů s dlouhým řetězcem, jako je decyl- lauryl- myrístyl- a stearylchlorid, -bromid a -jodid, a aralkylhalogenidů, včetně benzyl-a fenylethylbromidu. Pomocí takové kvaternizace lze získat produkty rozpustné nebo dispergovatelné ve vodě nebo v oleji.
Inhibitory ICE podle vynálezu mohou obsahovat jeden nebo několik „asymetrických“ atomů uhlíku a mohou se tedy vyskytovat jako racemáty a racemické směsi, jednotlivé enantiomery, směsi diastereomerů a jednotlivé diastereomery. Vynález výslovně zahrnuje všechny takové izomemí formy těchto sloučenin. Každý stereogenní atom uhlíku může být v R- nebo
S-konfiguraci. Ačkoli konkrétní sloučeniny a skelety zmíněné v této přihlášce jako příklady mohou být uvedeny v konkrétní stereochemické konfiguraci, jsou zahrnuty rovněž sloučeniny a skelety buď s opačnou stereochemií na libovolném z chirálních center, nebo jejich směsi.
Inhibitory ICE podle vynálezu mohou obsahovat kruhové struktury, které mohou být popřípadě substituovány na atomech uhlíku, dusíku nebo jiných atomech různými substituenty. Takovéto kruhové struktury mohou být substituovány jednou nebo vícekrát. Výhodně kruhové struktury obsahují mezi 0 a 3 substituenty. Při vícenásobných substitucích může být každý substituent vybrán nezávisle na jiných substituentech, pokud při této kombinaci substituenty vznikne stabilní sloučenina.
Kombinacemi substituentů a proměnných podle vynálezu jsou pouze ty, které mají za následek vytvoření stabilní sloučeniny. Termín „stabilní“, jak je zde používán, označuje sloučeniny, které vykazují dostatečnou stabilitu pro umožnění přípravy a podání savci pomocí způsobů známých v oboru. Typicky jsou takové sloučeniny stabilní při teplotě 40 ĎC nebo nižší, za nepřítomnosti vlhkosti nebo jiných chemicky reaktivních podmínek, po dobu alespoň jednoho týdne.
Substituenty mohou být v různých formách. Tyto různé formy jsou odborníkům známé a mohou být použity střídavě. Například methylový substituent na fenylovém kruhu může mít jakoukoli následující formy:
Různé formy substituentů jako je methylová skupina se zde používají střídavě.
Podrobný popis vynálezu
Aby mohl být předkládaný vynález lépe pochopen, následuje podrobný popis vynálezu.
Inhibitory ICE jsou podle jednoho provedení předkládaného vynálezu N-acylattiinosloučeniny obecného vzorce VI (VI)
kde:
Ri je:
(elO)
nebo (W2)
C je kruh vybraný ze sady, kterou tvoří benzoskupina, pyridoskupina, thienoskupina, pyrroloskupina, furanoskupina, thiazoloskupina, izothiazoloskupina, oxazoloskupina, izoxazoloskupina, pyrímidoskupina, imidazoloskupina, cyklopentylová skupina a cyklohexylová skupina; kruh je 5 popřípadě jednou nebo vícekrát substituovaný skupinou —Qi;
r2 je: 0
(á) A
H nebo
0
(b) (rlntOR-B
ř'0R’1 r
m je 1 nebo 2;
každá skupina R5 je nezávisle vybraná ze skupiny, kterou tvoří:
skupina -C(Oj-R10, skupina -C(O)O-R9, skupina -C(0)-N(Rio)(Rio) skupina -S(O)2-R9, skupina -S(O)2-NH-Ri0, skupina -C(O)-CH2-O-R9, skupina -C(O)C(O)-R]0, skupina -R9, atom vodíku, skupina -C(O)C(O)-OR10, a skupina -C(O)C(O)-N(R9)(R10);
Xs je skupina CH nebo atom dusíku;
Y2 je skupina H2 nebo atom kyslíku;
- 11CL 273171 B6 skupina Ré je vybrána ze sady, kterou tvoří atom vodíku a methylová skupina;
skupina Ra je vybrána ze sady, kterou tvoří:
skupina -C/Oj-R^, skupina -C(O)O-R9, skupina -C(O)~N(H)-R10, skupina -S(O)2-R9, skupina -S(O)2-NH-Ri0 skupina -C(0)-CH2-ORio, skupina 0(0)(2(0)-^ 0;
skupina -C(0)-CH2N(Rio)(Rio), skupina -C(O)-CH2C(O)-O-R9, skupina -C(O)-CH2C(O)-R9, atom vodíku, a skupina -C(0)-C(0>-OR]o;
každá skupina R9 je nezávisle vybrána ze skupiny, kterou tvoří skupina -Ar3 a přímá nebo rozvětvená alkylová, alkenylová či alkynylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, která je popřípadě substituovaná skupinou -Ar3;
každá skupina R10 je nezávisle vybraná ze skupiny, kterou tvoří atom vodíku, skupina -Ar3, a cykloalkylová skupina obsahující 3 až 6 atomů uhlíku, a přímá nebo rozvětvená alkylová, alkenylová či alkynylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, která je popřípadě substituovaná skupinou -Ar3;
skupina Rt3 je vybrána ze sady, kterou tvoří atom vodíku a přímá nebo rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku;
každá skupina R5] je nezávisle vybraná ze sady, kterou tvoří skupina R9, skupina -C(0)-R9, skupina -C(0)-N(H)-R9 a nasycený čtyř- až osmičlenný uhlíkový kruh nebo skupiny RS] společně tvoří nasycený čtyřčlenný až osmičlenný heterocyklický kruh obsahující skupinu -0-, skupinu -S-, nebo skupinu -NH-;
každá skupina R2] je nezávisle vybraná ze sady, kterou tvoří atom vodíku a přímá nebo rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku;
každá skupina Ar3 je cyklická skupina nezávisle vybraná ze sady, kterou tvoří arylová skupina obsahující 6, 10, 12, nebo 14 atomů uhlíku a 1 až 3 kruhy a aromatická heterocyklická skupina obsahující 5 až 15 atomů v kruhu a 1 až 3 kruhy, přičemž jmenovaná heterocyklická skupina obsahuje jeden až čtyři heteroatomové skupiny, vybrané ze Skupiny zahrnující skupiny -0-, skupiny -S-, skupiny -S0-, skupiny S02, skupiny =N-, a skupiny -NH-, jmenovaná heterocyklická skupina popřípadě obsahuje jednu až šest dvojných vazeb, jmenovaná heterocyklická skupina popřípadě obsahuje jeden až tři aromatické kruhy, a jmenovaná cyklická skupina je popřípadě jednou nebo vícekrát substituovaná skupinou -Qf, každá skupina Q] je nezávisle vybraná ze skupiny, kterou tvoří aminoskupina, karboxylová skupina, atom chloru, atom fluoru, atom bromu, atom jodu, nitroskupina, kyanoskupina, skupina, =0, hydroxylová skupina, -perfluoralkýlová skupina obsahující 1 až 3 atomy uhlíku, skupina R5, skupina OR3, skupina -NHR5, skupina -0R9, skupina -N(R9)(R|0), skupina -R9, skupina -C(O)-R10, a skupina
O / \ __
-------------- ’ čH2, \ /
O
- 12CL Z9317I B6 pod podmínkou, že pokud skupina -Ar3 je substituovaná skupinou Qb která obsahuje jednu nebo více dalších skupin -Ar3, jmenované další skupiny -Ar3 nejsou substituované jinou skupinou -Ar3; a s tou výhradou, že pokud
R2 je:
R21 je atom vodíku; a
Y2 je atom kyslíku, potom R5 nemůže být skupina -C(O)Ri0, kde R]0 je skupina -CH2CH2Ar3 a Ar3 je nesubstituovaná fenylová skupina; nebo skupina -SO2R9, kde R9je methylová skupina; a pokud
Y2 je skupina H2, potom R5 nemůže být skupina -C(O)Ri0, kde R10 je skupina -CH2CH2Ar3 a Ar3 je nesubstituovaná fenylová skupina.
Mezi výhodné N-acylaminosloučeniny obecného vzorce VI uvedené výše patří sloučeniny ze skupiny, kterou tvoří (vynález však na ně není omezen):
-13ολ zyei/i tjo
213e
304a
O
813e ó
904á o
- 142001 cz, zyai/i uď
2100c
2100d
2100a
2100 b
- 15CZ Z98I7I B6
2100e
677
680
- 16LZ Z93I7I B6
213f
213g
213h
213 i
213j
17CZ 298171 B6
213Ϊ
213mm
213o
213p
213q
- 18CZ 298171 B6
213r
2138
213t
213u
213v
-19CZ 298171 B6
245
245b
256
213w
213X
O
- 2Ω CZ 298171 B6
303a
550f
-21 CZ 298171 B6
5501
55ΌΊ1
ÓO
55Óp
210 Of
2100g
-22CZ 298171 B6
210011
2100k
21001
2100m
2100X1
-23CZ 298171 B6
2100ο
kde iPr je izopropylová skupina, Me je methylová skupina a Et je ethylová skupina.
Výhodné jsou výše uvedené N-acylaminosloučcniny obecného vzorce VI, kde:
m je 1;
C je kruh vybraný ze sady, kterou tvoří benzoskupina, pyridoskupina, nebo thienoskupina, kruh je popřípadě jednou nebo vícekrát substituovaný atomem halogenu, aminoskupinou, skupinou -NH-R5, skupinou -NH-R9, skupinou -OR]0, nebo skupinou -R9, kde skupina R9 je přímá nebo rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, a R(0 je atom vodíku nebo přímá nebo rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 4 atomy uhlíku;
skupina R^ je atom vodíku;
skupina Rb je atom vodíku nebo přímá nebo rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 4 atomy uhlíku;
R21 je atom vodíku nebo methylová skupina;
R5i je přímá nebo rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, která .je popřípadě substituovaná skupinou -Ar3, kde skupina Ar3 je fenylová skupina, popřípadě substituovaná skupinou -Qg každá cyklická skupina Ar3 je nezávisle vybraná ze sady, kterou tvoří fenylová skupina, naftylová skupina, thienylová skupina, chinolinylová skupina, izochinolinylová skupina, pyrazolylová skupina, thiazolylová skupina, izoxazolylová skupina, benzotriazolylová skupina, benzimidazolylová skupina, thienothienylová skupina, imidazolylová skupina, thiadiazolylová skupina, benzo[b]thiofenylová skupina, pyridylová skupina, benzofuranylová skupina a indolylová skupina, a jmenovaná cyklická skupina je popřípadě jednou nebo vícekrát substituovaná skupinou -Qt;
každá skupina Qi je nezávisle vybraná ze sady, kterou tvoří aminoskupina, atom chloru, atom fluoru, atom bromu, hydroxylová skupina, skupina -R9, skupina -NH-R5, kde R5 je skupina -C(O)-RW nebo skupina-S(O)2-R9, skupina-OR5. kde R5 je skupina-C(0)-R|o, skupina-OR9, skupina -NHR9, a skupina
O / \ ch2, \ /
-----.----—0---kde každá skupina R9 a Rl0 je nezávisle přímí nebo rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, která je popřípadě substituovaná skupinou -Ar3, kde Ar3 je fenylová skupina;
-24ZV»17I Bí) a zbývající substituenty nabývají významů definovaných výše;
pod podmínkou, že pokud skupina-Ar3 je substituovaná skupinou Qb která obsahuje jednu nebo více dalších skupin -Ar3, jmenované další skupiny -Ar3 nejsou substituované jinou skupinou -Ar3.
Výhodnější jsou výše uvedené N-acylaminosloučeniny obecného vzorce VI, kde R| je skupina (w2) a zbývající substituenty nabývají významů definovaných v výše 3.
Ještě výhodnější jsou výše uvedené N-acylaminoslouČeniny obecného vzorce VI, kde Rs je vybrána ze skupiny, kterou tvoří:
skupina -C(0)-Rio, skupina -C(O)O-R9, skupina -C(O)-CH2-R io, a skupina -C(O)-CH2C(O)-R9;
Ri je skupina (w2);
a ostatní substituenty mají významy uvedené výše.
Obzvláště výhodné jsou výše uvedené N-acylaminosloučeniny obecného vzorce VI, kde Rs je skupína-C(O)-CH2-ORiQ, Rio je atom vodíku nebo methylová skupina a zbývající substituenty nabývají významů definovaných výše.
Výhodnější jsou výše uvedené N-acylaminosloučeniny obecného vzorce VI, kde Ri je skupina (elO), X3 je skupina CH a zbývající substituenty nabývají významů definovaných výše.
Ještě výhodnější jsou výše uvedené N-acylaminosloučeniny obecného vzorce VI, kde Rj je skupina (elO), X5 je atom dusíku a zbývající substituenty nabývají významů definovaných výše.
Výhodnější jsou výše uvedené N-acylaminosloučeniny obecného vzorce VI, kde R5 je skupina -C(0)-Rio nebo skupina -C(O)C(O)-R]q;
a zbývající substituenty mají významy uvedené výše.
Obzvláště výhodné jsou výše uvedené N-acylaminosloučeniny obecného vzorce VI, kde Rt0 je skupina Ar3;
a zbývající substituenty mají významy uvedené výše.
K nej výhodnějším patří výše uvedené N-acylaminosloučeniny obecného vzorce VI, kde:
R5 je skupina -C(0)-Rio a Rt0 je skupina Ar3, kde cyklická skupina Ar3 je fenylová skupina, která je popřípadě jednou nebo vícekrát substituovaná:
skupinou -R9, kde Rg je přímá nebo rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 4 atomy uhlíku; atomem fluoru, atomem chloru, skupinou -N(H)-R5, kde -R< je atom vodíku nebo skupina -C(0)-Rio, kde Rt0 je přímá nebo rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, která je popřípadě substituovaná skupinou -Ar3, kde Ar3 je fenylová skupjna,_______________________________ skupinou -N(R9)(R10), kde R9 a R10 jsou nezávisle přímá nebo rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, nebo
-25ϋΖΤ198ϊ7ΠΒ^ skupjnou χΟ^-R? hdeRsjc atom .vodíku nebo přímá nebo rozvětvená alkyjová skupí naobsahuj ící '^^^býyájíčfšuWituenty^nabýyají^ýznamů definovaných ^^M^i^^Sw^cn^yhodncTOcylaminosloučeninýÓbéČného^^SciyilXřífslSumiinyTc ·%> j ΤΖ’.Τ!“ .' . :.’Ww 'swjk./' k; . íTWii-.TTK Wf;?. . : ..í;t·^-;ngÍ^Jg1 tvtWTOSa^^ai^qálMWnPiB1^^· rlFS díýwWwr ^'‘·'' ' skupiny? kterou ^014 sl°uceniny.(vynalez vsak na ne není omezen):; ξι;
-26CZ 298171 B6
Výhodnější jsou výše uvedené N-acylaminosloučeniny obecného vzorce VI, kde Ar3 je fenylová skupinarkterá-je-jednou-nebo-vícekrát-substÍtuovaná-vpoloze-3-nebo-v-poloze-5-atomem-chloru nebo v poloze 4 skupinou -NH-R5, skupinou -N(R9)(R10), nebo skupinou -O-R5; nebo kde
-27CZ 298171 B6
Ar3 je fenylová skupina, která jednou nebo vícekrát substituovaná v poloze 3 nebo v poloze 5 skupinou -R9, kde R9 je přímá nebo rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 4 atomy uhlíku; a v poloze 4 skupinou -O-R5;
a zbývající substituenty nabývají významů uvedených výše.
Mezi výše uvedené výhodné N-acylaminosloučeniny obecného vzorce VI patří sloučeniny vybrané ze skupiny, kterou tvoří (vynález však ne ně není omezen):
-28CZ 298171 B6
-29CZ 298171 B6
213m
5 Ok
550m
688b
-30CZ 298171 B6
690á
-31CZ 298171 B6
kde Me znamená methylovou skupinu.
Výhodné jsou zejména výše uvedené N-acylaminoslouČeniny obecného vzorce VI, kde:
R5 je skupina -C(O)-Rjq. kde R10 je skupina Ar3 a cyklická skupina Ar3 je vybrána ze sady, kterou tvoří indolylová skupina, benzimtdazolylová skupina, thienylová skupina, chinolylová skupina, izochinolylová skupina a benzo[b]thiofenylová skupina, a jmenovaná cyklická skupina je popřípadě jednou nebo vícekrát substituovaná skupinou -Qi;
a zbývající substituenty nabývají významů uvedených výše.
Výhodnější jsou výše uvedené N-acylaminosloučeniny obecného vzorce VI, kde cyklická skupina Ar3 je izochinolylová skupina, a jmenovaná cyklická skupina je popřípadě jednou nebo vícekrát substituovaná skupinou -Qt;
a'zbývajícísubstituenty mají významy“uvedené výše.
-32CZ 298171 B6
Mezi výše uvedené výhodné N-acylaminosloučeniny obecného vzorce VI patří sloučeniny vybrané ze skupiny, kterou tvoří (vynález však na ně není omezen):
-33CL 295171 B6 íl
696C
-34CZ 298171 B6
-35CZ 298171 B6
Jednou z nejvýhodnějších N-acylaminosIoučenin obecného vzorce VI uvedených výše je sloučenina .412 f
Výhodnější skupinu sloučenin podle vynálezu představují N-acylaminoslouČeniny obecného ___ vzorce Vl, kde R5 ie skLÍpina ~C(C)y-Ri(1>..kde_Riň_iC-skupina^Ar^a-cyklická-.skiipinn-Arr-je lehy lová skupina, která je substituovaná skupinou
-36CZ 298171 B6 / \ CHZ;
\ / o
a zbývající substituenty nabývají významů definovaných výše.
Mezi výše uvedené výhodné N-acylaminosloučeniny obecného vzorce VI patří sloučeniny vybrané ze skupiny, kterou tvoří (vynález však na ně není omezen):
O
t
O
4Í5b
415c
Nej výhodnější jsou výše uvedené sloučeniny, kde cyklická skupina Ar3 je izochinolinylová Skupina.
-37CZ 298171 B6
Sloučeniny v souladu s předkládaným vynálezem jsou popsány v přihláškách US 08/575 641 a US 08/598 332, které zde uvádíme jako odkaz.
Sloučeniny v souladu s předkládaným vynálezem mají molámí hmotnost menší nebo rovnou
700 Daltonů, výhodněji 400 až 600 Daitonů. Tyto výhodné sloučeniny se po perorálním podání snadno vstřebávají krevním řečištěm pacientů. Tato perorální vhodnost činí z těchto sloučenin výborná činidla pro perorální léčení a prevenci proti chorobám souvisejícím s IL-1, apoptózou, IGIF nebo lFN-γ.
Je třeba vzít v úvahu, že sloučeniny podle vynálezu se mohou vyskytovat v různých rovnovážných formách, v závislosti na podmínkách včetně výběru rozpouštědla, pH a dalších, jak je známo odborníkovi v oboru. Všechny takové formy těchto sloučenin jsou výslovně zahrnuty v rozsahu vynálezu. Zejména se mohou mnohé sloučeniny podle vynálezu, obzvláště ty, které obsahují aldehydické skupiny nebo ketoskupíny ve zbytku Rj a karboxylové skupiny ve zbytku
T, vyskytovat v hemiketalových (nebo hemiacetalových) nebo hydratovaných formách.
V závislosti na výběru rozpouštědla a dalších podmínkách známých odborníkovi v oboru se mohou sloučeniny podle vynálezu vyskytovat rovněž v acyloxyketalové, acyloxyacetalové, ketalové nebo acetalové formě.
Kromě toho je třeba vzít v úvahu, že rovnovážné formy sloučenin podle vynálezu mohou zahrnovat tautomemí formy. Všechny takové formy těchto sloučenin jsou výslovně zahrnuty v rozsahu vynálezu.
Je třeba vzít v úvahu, že sloučeniny podle vynálezu lze modifikovat vhodnými funkčními skupinami pro rozšíření selektivních biologických vlastností. Takové modifikace jsou v oboru známé a patří mezi ně modifikace, které zvyšují biologickou penetraci do daného biologického systému (například krve, lymfatického systému, centrálního nervového systému), zvyšují orální dostupnost, zvyšují rozpustnost pro umožnění injekčního podání, mění metabolismus a mění rychlost vylučování. Kromě toho lze sloučeniny podle vynálezu měnit do formy prekurzorů, takže se požadovaná sloučenina vytváří v těle pacienta jako výsledek působení metabolických nebo jiných biochemických procesů na prekurzor. Mezi několik příkladů prekurzorových forem patří ketalové, acetalové, oximové a hydrazonové formy sloučenin, které obsahují ketoskupiny nebo aldehydové skupiny, zejména pokud se vyskytují ve skupině R3 sloučenin podle vynálezu. Dalšími příklady proforem jsou hemiketal, hémiacetal, acyloxyketal, acyloxyacetal, ketal a acetal formy.
ICE a TX štěpí a tím aktivují pro-IGIF
ICE-proteáza byla předtím identifikována podle schopnosti zpracovat inaktivní pro-IL-1 β na účinný IL-1 β, což je in vitro a in vivo protizánětlivá látka. Zde ukazujeme, že ICE a jeho blízký homolog TX (Caspasa-4, C. Faucheu a další., EMBO 14, str. 1914 (1995)) mohou proteolyticky štěpit inaktivní pro-IGIF. Tento krok je nutný pro konverzi pro-IGIF na svou aktivní maturovanou formu IGIF. Štěpení pro-IGIF látkou ICE a pravděpodobně látkou TX rovněž napomáhá exportu IGIF ven z buněk.
Pro stanovení, zda nějací známí členové skupiny ICE/CED-3 proteas mohou v kultivovaných buňkách zpracovat pro-IGIF na IGIF (příklad 23) (obr. 1 A), jsme nejdřív použili přechodnou koexpresi plazmidů zavedených prostřednictvím transfekce do Cos buněk.
Obrázek 1A ukazuje, že ICE štěpí pro-IGIF v Cos buňkách podrobených kontransfekci plazmidy, které vykazují expresi pro-IGIF v přítomnosti aktivní ICE. Cos buňky byly podrobeny transfekci expresními plazmidy pro pro-IGIF izolovaně (pás 2) nebo v kombinaci s. indikován v-______________ nii-expresními^plazmidy^kódujícími přírodní typ nebo inaktivní mutanty proteas skupiny ICE/CED-3 (pásy 3-12). Z buněk byly připraveny roztoky, které byly analyzovány na
-38CZ 293171 B6 přítomnost IGIF proteinu imunopřenosem „immunoblotting“ pomocí anti-IGIF protilátky. Pás 1 zahrnuje roztoky z buněk podrobených srovnávací transfekci.
Koexprese pro-IGIF prostřednictvím ICE nebo TX vedla ke štěpení pro-IGIF na polypeptid velikostí podobný přírodnímu 18-kDa maturovanému IGIF. Tento bod procesu je blokován jednobodovými mutacemi, které změní katalytické cysteinové zbytky, a tak inaktivují ICE a TX (Y. Gu a další, EMBO 14,1923 (1995)).
Koexprese CPP32 (Caspase-3), což je proteáza účastnící se odumírání programovaných buněk (T. Femaes-Alnemri a další, J, Biol. Chem. 269, 30761 (1994); D. W. Nicholson a další, Nátuře 376, 37 (1995)), vedla ke štěpení pro-IGIF na menší polypeptid, zatímco koexprese CMH-1 (Caspase-7), což je blízký homolog CPP32 (J. A. Lippke a další, J. Biol. Chem. 271, 1825 (1996)), pro štěpení pro-IGIF selhala. Proto se ICE a TX jeví jako schopné štěpit pro-IGIF na polypeptid velikostí podobný přírodnímu 18-kDa IGIF.
Dále jsme testovali schopnost těchto cysteinových proteas štěpit pro-IGIF in vitro za použití čištěného pro-IGIF spojeného s rekombinovaným (His)6 jako substrátu (příklad 23).
Obr. 1B ukazuje, že ICE štěpí in vitro pro-IGIF. Čištěný rekombinovaný pro-IGIF (2 pg) s navázaným (His)6 byl inkubován s indikovanou cysteinovou proteázou v přítomnosti nebo nepřítomnosti inhibitorů ICE nebo CPP32, jak je popsáno v příkladu 23. Produkty štěpení byly analyzovány pomocí SDS-PAGE a barvy Coomassie Blue.
ICE štěpil 24 kDa pro-IGIF na dva polypeptidy s přibližně 18-kDa a 6-kDa. Sekvencování N-koncových aminokyselin štěpných produktů ICE ukázalo, že 18-kDa polypeptid obsahuje stejné N-koncové aminokyselinové zbytky (Asn-Fe-Gly-Arg-Leu) jako přírodní IGIF. To ukazuje, že ICE štěpí pro-IGIF v autentickém bodě zpracování (Asp35-Asn-36) (H. Okamura a další, Infection and Immunity 63, 3966 (1995); H. Okamura a další, Nátuře 378, 88 (1995)). Sekvencování N-koncových aminokyselin štěpných produktů CPP32 ukázalo, že CPP32 štěpil pro-IGIF v pozici Asp69-Ile70.
Štěpení pro-IGIF působením ICE je vysoce specifické s katalytickou účinností (kcat/KM)
1,4 x 107 M“'s 1 (Km = 0,6 ± 0,1 μΜ; k^ = 8,6 ± 0,3 s ’) a podléhá inhibici specifickými ICE inhibitory (Ac-Tyr-Val-Ala-Asp-aldehyd) a Cbz-Val-Ala-Asp-[:2,6-dichlorbenzoyl)oxy]methylketon (N. A. Thomberry a další, Nátuře 356, 768 (1992); R. E. Dolle a další, J. Med. Chem. 37, 563 (1994)).
Obr. 1C ukazuje, že pro-IGIF aktivuje in vitro štěpení ICE. Nerozštěpený pro-IGIF, produkty štěpení pro-IGIF působením ICE nebo CPP32, nebo rekombinovaný maturovaný IGIF (RIGIF) byly každý přidán do kultury buněk A.E7 při konečné koncentraci 12 ng/ml nebo 120 ng/ml (viz. příklad 23). Po osmnácti hodinách bylo za použití ELISA sady provedeno v kultivačním médiu stanovení množství IFN-γ. Zatímco nerozštěpený pro-IGIF neměl žádnou detekovatelnou IFN-γ indukční aktivitu, pro-IGIF rozštěpený působením ICE byl při indukci produkce IFN-γ vThl buňkách.
Stejně jako ICE i jeho homolog TX štěpil pro-IGIF na polypeptidy s podobnou velikostí. Jeho katalytická účinnost ale byla o dva řády nižší než u ICE.
V souladu s pozorováním u Cos buněk v předešlých experimentech CPP32 štěpil pro-IGIF na jiném místě (Asp69-Ile70) a výsledné polypeptidy měly nízkou IFN-γ indukční aktivitu (Fig. 1C). CMH-1 a granzym B ve znatelné míře pro-IGIF neštěpily.
Dohromady tyto výsledky ukazují, že v Cos buňkách i in vitro jsou ICE a TX schopné zpracovat inaktivní prekurzor pro-IGIF v autentickém bodě přeměny za vzniku biologicky aktivní IGIF molekuly.
-39CZ 298171 B6
Zpracování pro-IGIF působením ICE napomáhá jeho exportu
IGIF je produkován in vivo aktivovanými Kupfferovými buňkami a makrofágy a je exportován 5 ven z buňky po stimulaci endotoxiny (H. Okamura a další, Infection and Immunity 63, 3966 (1995); H. Okamura a další, Nátuře 378, 88 (1995). Pro zjištění, zda vnitrobuněčné štěpení proIGIF působením ICE napomáhá exportu IGIF z buňky, jsme použili koexpresní systém Cos buněk (příklad 23). To je případ pro-IL-Ιβ, když je tento štěpen působením ICE na aktivní IL-18 (N. A. Thomberry a další, Nátuře 356, 768 (1,992)).
io
Na obr. 2A jsou Cos buňky podrobené transfekci expresním plazmidem pro-IGIF izolovaně (pásy 2 a 6) nebo v kombinaci s expresním plazmidem kódujícím přírodní typ (pásy 3 a 7) nebo inaktivním mutantem ICE (pásy 4 a 8), které byly metabolicky označeny 35S-methioninem (viz. příklad 24). Buněčný roztok (vlevo) a upravené médium (vpravo) byly imunologicky vysráženy 15 působením anti-lGIF antiséra. Imunologicky vysrážené proteiny byly analyzovány pomocí SDSPAGE a fluorografie (obr. 2A).
V upraveném médiu Cos buněk skoexpresí pro-IGIF a ICE byl nalezen 18-kDa polypeptid odpovídající velikostí maturovanému IGIF, zatímco Cos buňky s koexpresí pro-IGIF a inaktiv20 ního ICE mutantu (ICE-C285S) nebo pouze pro-IGIF (-) exportovaly pouze velmi malé množství pro-IGIF a žádné detekovatelné množství maturovaného IGIF. Domníváme se, že z buněk podrobených kontransfekci bylo exportováno asi 10 % aktivního maturovaného IGIF, zatímco v buňkách zůstalo více než 99 % pro-IGIF.
Dále jsme v buněčném roztoku a upraveném médiu výše uvedených buněk podrobených transfekci stanovili i přítomnost IFN-γ, který indukuje aktivitu (viz. příklad 24). IFN-γ indukující aktivitu byl nalezen v buněčném roztoku i upraveném médiu Cos buněk s koexpresí pro-IGIF a ICE, ale nebyl nalezen u buněk s expresí pro-IGIF nebo pouze ICE (obr. 2B).
Tyto výsledky naznačují, že ICE štěpení pro-IGIF usnadňuje export aktivního IGIF z buňky.
Pro-IGIF je in vivo fyziologický substrát ICE
Pro studii role ICE v proteolytické aktivaci a exportu IGIF za fyziologických podmínek jsme 35 studovali zpracování pro-IGIF a export IGIF z lipopolysacharidem (LPS)-aktivovaných Kupfferových buněk získaných z Propiobacterium acnes-odvožených od přírodního typu a ICE deficitních (ICE—/—) myší (příklad 25).
Jak ukazuje obr. 3A, vykazují Kupfferovy buňky ICE-/- myší defektní export IGIF. Roztoky 40 Kupfferových buněk přírodního typu a ICE-/- myší obsahovaly podobné množství IGIF, což bylo stanoveno pomocí ELISA sady. IGIF lze ale nalézt pouze v upraveném médiu přírodního typu ale ne u ICE-/- buněk. Proto ICE—deficitní (ICE—/—) myši syntetizují pro-IGIF, ale nejsou schopné jeho exportu jako extracelulámího pro-IGIF nebo aktivní maturované formy IGIF.
Za účelem stanovení, zda ICE-deficitní (ICE-/-) myši zpracovávají vnitrobuněčný pro-IGIF, ale nejsou schopné exportu IGIF, byly Kupfferovy buňky přírodního typu a ICE-/- myší metabolicky označeny 35S-methioninem a byly provedeny IGIF imunologické srážecí pokusy (u buněčného roztoku a upraveného média - viz. příklad 25). Tyto pokusy dokázaly, že byl v přírodním typu i a ICE-/- Kupfferových buňkách přítomen nezpracovaný pro-IGIF. Aktivní 18-kDa maturova50 ný IGIF byl ale přítomen pouze v upraveném médiu přírodního typu a nikoliv v ICE-/Kupfferových buňkách (obrázek 3B), To ukazuje, že pro export zpracovaného IGIF ven z buňky je nutný aktivní ICE. _____________
Kromě toho upravené médium přírodního typu (nikoliv ale ICE-/- Kupfferovy buňky) obsahova55 lo aktivitu indukující IFN-γ, který nebyl přisuzován působení IL—12, protože nebyl necitlivý na
-40CZ 29Ϊ5171 B6 neutralizující anti-IL-12 protilátku. Nepřítomnost IGIF v upraveném médiu ICE-/- Kupfferových buněk je v souladu s objevem u Cos buněk, že zpracování pro-IGIF působením ICE je nutné pro export aktivního IGIF.
Obrázek 3C a 3D ukazují, že in vivo ICE—/— myší mají sníženou hladinu IGIF respektive IFN-γ v séru. Přírodní typ (ICE-+/+) a ICE-/- myši (n=3) s teplem deaktivovaným P, acnes byly naočkovány LPS (příklad 26) a pomocí ELISA testu byly v séru očkovaných myší po třech hodinách po LPS očkování (příklad 25) stanoveny hladiny IGIF (obrázek 3C) a IFN-γ (obrázek 3D).
Séra ICE-/- myší stimulovaných P. acnes a LPS obsahovala v přítomnosti anti-IL-12 protilátky snížené hladiny IGIF (obr. 3C) a neobsahovala žádný detekovatelný IFN-γ indukující aktivitu. Snížené hladiny IGIF v séru pravděpodobně odpovídají za značné snížení hladiny IFN-γ v séru ICE-/- myší (obr. 3D), protože jsme za těchto podmínek nepozorovali žádný znatelný rozdíl 15 v produkci IL-12 u ICE-/- myší. V souladu s touto interpretací je pozorování, že neadherentní splenocyty přírodního typu a ICE-/- myši produkovaly při stimulaci recombinantem aktivního IGIF in vitro podobné množství IFN-γ. Proto zhoršená produkce IFN-γ není důsledkem žádného zjevného defektu T buněk ICE—/— myší.
Dohromady tyto výsledky potvrzují kritickou roli ICE při zpracování prekurzoru IGIF a při exportu aktivního IGIF in vivo a zároveň in vitro.
Pro podrobnější objasnění vztahu mezi IFN-γ hladinou v séru a ICE aktivitou in vivo, byl zjištěn časový průběh po stimulaci přírodního typu a ICE-deficitních myší působením LPS (příklad. 26) 25 (obr. 4).
Obrázek 4 ukazuje časový průběh zvýšení hladiny IFN-γ v séru u přírodního typu myší s udržovanými hladinami > 17 mg/ml v době od 9-18 hodin po stimulaci LPS. Jak bylo předpovězeno podle výše uvedených pokusů, hladina IFN-γ v séru byla značně nižší u ICE-/- myší. Maximál30 ně byly za stejnou dobu dosaženy 2 ng/ml, což je asi 15 % hladiny pozorované u myší přírodního typu (obr. 4).
U zvířat byly rovněž sledovány klinické znaky otravy krve a každé 4 hodiny byla měřena u přírodního typu myší a ICE-/- myší stimulovaných 30 mg/kg nebo 100 mg/kg LPS 35 (ICE-/-pouze) tělesná teplota. Výsledky na obr. 4 ukazují, že myší přírodního typu vykazují do hodin po stimulaci LPS značné snížení tělesné teploty (z 36 na 26 °C). U všech zvířat se projevila otrava krve a všechna uhynula do 24 až 28 hodin.
Na rozdíl od toho ICE-/- myši stimulované 30 mg/kg LPS vykázaly snížení tělesné teploty jen 40 o 3 až 4 °C a minimální znaky obtíží s nulovou úmrtností. ICE-/- myši stimulované 100 mg/kg
LPS vykázaly klinické příznaky, snížení tělesné teploty a úmrtnost podobnou přírodnímu typu myší, které byly stimulovány dávkou 30 mg/kg LPS.
ICE inhibitor AC-YVAD-CHO je ekvipotentní inhibitor produkce IL-1 β a IFN-γ
Protože zpracování a vylučování biologicky aktivního IGIF je ovlivněno ICE, srovnali jsme aktivitu reverzibilního ICE inhibitoru (Ac-YVAD-CHO) vůči IL-Ιβ a IFN-γ produkci, a to zkouškou na monojademých periferních krevních buňkách (PBMC) (příklad 27).
Výsledky na obr. 5 ukazují podobnou schopnost AC-YVAD-CHO ICE inhibitoru snížit produkci IL-Ιβ a IFN-Y v lidských PBMCS sIC50 2,5 μΜ (u obou). Podobné výsledky byly --získány-při-studíi-se-splenocyty- přírodního- typu’ myšírTýtopožnátl<y^škytuj'í”dálší''ďůĚazrze pro-IGIF je fyziologickým substrátem ICE, a naznačují, že ICE inhibitory budou vhodné nástroje pro regulaci fyziologické hladiny IGIF a IFN-γ.
-41LZ Z9M7I B6
V souhrnu jsme zjistili, že ICE reguluje hladiny IGIF a IFN-γ in vivo a in vitro a že ICE inhibitory mohou snížit v lidských buňkách hladinu IGIF a IFN-γ. Tyto výsledky byly popsány v přihlášce, která je v řízení; US Application 08/712 878, kterou zde uvádíme jako odkaz.
Prostředky a způsoby
Farmaceutické prostředky a způsoby v souladu s předkládaným vynálezem jsou vhodné pro in vivo regulaci hladin IL-1, IGIF a IFN-γ. Prostředky a způsoby v souladu s předkládaným vynálezem jsou tak vhodné pro léčení nebo omezení rozvoje a závažnosti příznaků vyvolaných IL-1, IGIF a IFN-γ.
Sloučeniny podle vynálezu jsou výbornými ligandy pro ICE. V souladu s tím jsou tyto sloučeniny schopné zaměřit se na určité procesy související s onemocněními zprostředkovanými IL—1 inhibovat je, jako je tomu v případě konverze prekurzoru IL—I β na maturovaný IL-Ιβ, a tím inhibovat rozhodující aktivitu tohoto proteinu při zánětlivých onemocněních, autoimunitních onemocněních a neurodegenerativních onemocněních. Sloučeniny podle vynálezu například inhibují konverzi prekurzoru IL-Ιβ na maturovaný IL—1 β v důsledku inhibice ICE. Jelikož má ICE zásadní význam pro produkci maturovaného IL—1, blokuje inhibice tohoto enzymu účinně zahájení fyziologických účinků a symptomů zprostředkovaných IL-1, jako jsou záněty, pomocí inhibice produkce maturovaného IL-1. Inhibicí aktivity prekurzoru IL-Ιβ tedy sloučeniny podle vynálezu účinně fungují jako inhibitory IL-1.
Podobně sloučeniny v souladu s předkládaným vynálezem inhibují konverzi prekurzoru IGIF na aktivní formu IGIF. Proto inhibicí produkce IGIF sloučeniny v souladu s předkládaným vynálezem účinně působí jako inhibitory produkce IFN-γ.
Proto jedno z provedení předkládaného vynálezu poskytuje způsob omezení produkce IGIF u pacientů, který zahrnuje krok podání farmaceutického prostředku obsahujícího terapeuticky účinné množství inhibitoru ICE a farmaceuticky vhodného nosiče těmto pacientům.
Další provedení předkládaného vynálezu poskytuje způsob omezení produkce IFN-γ u pácientů, který zahrnuje krok podání farmaceutického prostředku obsahujícího terapeuticky účinné množství inhibitoru ICE a farmaceuticky vhodného nosiče těmto pacientům.
V dalším provedení způsoby v souladu s předkládaným vynálezem zahrnují krok podání farmaceutického prostředku obsahujícího inhibitor ICE-příbuzné proteázy, který je schopen štěpit pro-IGIF na aktivní IGIF, a farmaceuticky vhodný nosič. Jednou takovou ICE-příbuznou proteázou je TX, jak je popsáno výše. Tento vynález tak poskytuje způsoby a farmaceutické prostředky pro regulaci hladin IGIF a IFN-γ podáváním inhibitoru TX.
Lze nalézt i jiné ICE-příbuzné proteázy schopné zpracovat pro-IGIF na aktivní formu IGIF. Proto je zřejmé, že inhibitory těchto enzymů odborníci v této oblasti poznají a že tyto také spadají do rámce tohoto vynálezu.
Sloučeniny podle vynálezu lze použít běžným způsobem pro léčení onemocnění, která jsou zprostředkována IL-1, apoptózy, IGIF nebo IFN-γ. Takovéto způsoby léčení, dávkování při nich a podmínky léčení může odborník v oboru vybrat z dostupných způsobů a technik. Například lze sloučeninu podle vynálezu kombinovat s farmaceuticky přijatelnou nosnou nebo/a pomocnou látkou pro podání pacientovi postiženému onemocněním zprostředkovaným IL-1, apoptózou, IGIF nebo IFN-γ, farmaceuticky přijatelným způsobem a v množství účinném pro snížení závažnosti tohoto onemocnění. ___________ ____
Alternativně lze sloučeniny podle vynálezu použít v prostředcích a způsobech léčení nebo ochrany jedinců proti onemocněním zprostředkovaným IL-1, apoptózou, IGIF nebo IFN-γ po delší
-42CZ Z9817I B6 časová období. Tyto sloučeniny lze použít v takových prostředcích buďto samotné, nebo spolu s jinými sloučeninami podle vynálezu, způsobem, který je v souladu s běžným využitím inhibitorů ICE ve farmaceutických prostředcích. Například lze sloučeninu podle vynálezu míchat s farmaceuticky přijatelnými nosnými nebo/a pomocnými látkami běžně používanými ve vakcí5 nách a podávat v proíylakticky účinných množstvích pro ochranu jedinců po delší dobu proti onemocněním zprostředkovaným IL-1, apoptózou, IGIF nebo IFN-γ,
Sloučeniny podle vynálezu lze rovněž podávat společně s jinými inhibitory ICE pro zvýšení účinku terapie nebo profylaxe proti různým onemocněním zprostředkovaným IL-1, apoptózou, 10 IGIF nebo IFN-γ.
Kromě toho lze sloučeniny podle vynálezu použít v kombinaci buď s běžnými protizánětlivými činidly, nebo s matricovými metaloproteázovými inhibitory, lipoxygenasovými inhibitory a antagonisty cytokínů jiných než IL-Ιβ.
Sloučeniny podle vynálezu lze rovněž podávat v kombinaci s imunomodulátory (například bropiriminem, protilátkou proti lidskému alfainterferonu, IL-2, GM-CSF. methioninenkefalinem, interferonem alfa, diethyldithiokarbamáty, faktorem nekrózy tumorů (tumor necrosis factor), naltrexonem a rEPO) nebo s prostaglandiny, pro prevenci nebo potírání symptomů onemocnění 20 zprostředkovaných 1L— 1, j ako j e zánět.
Pokud se sloučeniny podle vynálezu podávají v kombinačních terapiích s jinými činidly, lze je pacientovi podávat postupně nebo současně. Alternativně mohou být farmaceutické nebo profylaktické prostředky podle vynálezu tvořeny kombinací inhibitorů ICE podle vynálezu a 25 j iného terapeutického nebo profylaktického činidla.
Farmaceutické prostředky podle vynálezu obsahují libovolné ze sloučenin podle vynálezu a jejich farmaceuticky přijatelných solí, s libovolným farmaceuticky přijatelným nosičem, pomocnou látkou nebo vehikulem. Mezi farmaceuticky přijatelné nosiče, pomocné látky a vehikulá, které 30 lze použít ve farmaceutických prostředcích podle vynálezu patří, aniž by však šlo o omezující výčet, iontoměniče, alumina, alumíniumstearát, lecithin, sérové proteiny, jako je albumin lidského séra, pufrovací látky, jako jsou fosfáty, glycin, kyseliny sorbová, sorbát draselný, směsi částečných glyceridů nasycených rostlinných mastných kyselin, voda, soli nebo elektrolyty, jako je protamínsulfát, hydrogenfosforečnan sodný, hydrogenfosforečnan draselný, chlorid sodný, soli 35 zinku, koloidní oxid křemičitý, magneziumtrisilikát, polyvinylpyrrolidon, látky na bázi celulózy, polyethylenglykol, natriumkarboxymethylcelulóza, polyakryláty, vosky, polyethylenpolyoxypropylenové blokové polymery, polyethylenglykol a lanolín, K usnadnění podávání sloučenin v souladu s předkládaným vynálezem lze rovněž s výhodou použít cyklodextriny jako α-, β- a γ-cyklodextrin nebo chemicky modifikované deriváty jako hydroxyalkylcyklodextriny, včetně 40 2- a 3-hydroxypropyl-5-cyklodextrinů nebo j iné solubi 1 izované deriváty.
Farmaceutické prostředky podle vynálezu lze podávat orálně, parenterálně, inhalačním sprayem, místně, rektálně, nasálně, bukálně, vaginálně nebo pomocí implantovaného zásobníku. Výhodné je orální podání. Farmaceutické prostředky podle vynálezu mohou obsahovat libovolné běžné ne45 toxické farmaceuticky přijatelné nosiče, pomocné látky nebo vehikulá. Termín „parenterální“, jak je zde používán, zahrnuje subkutánní, intrakutánní, intravenózní, intramuskulámí, intraartikulární, intrasynoviální, intrastemální, intrathekální, intralezionální a intrakraniální injekce nebo infuze.
Farmaceutické prostředky mohou být ve formě sterilního injikovatelného přípravku, například ve formě sterilní injikovatelné vodné nebo olejové suspenze. Tuto suspenzi lze formulovat podle postupů známých v oboru za použití vhodných disp.ergátorů_nebo-smáčedel-(Jako-ie-napříkladTween 80) a suspendujících činidel. Sterilním injikovatelným přípravkem může být rovněž sterilní injikovatelný roztok nebo suspenze v netoxickém parenterálně přijatelném ředidle nebo rozpouštědle, například roztok v 1,3-butandiolu. Mezi přijatelná vehikulá a rozpouštědla, která
-43CZ 298171 B6 lze použít patří mannitol, voda, Ringerův roztok a izotonický roztok chloridu sodného. Kromě toho se jako rozpouštědlo nebo suspendující prostředí běžně používají sterilní nevysychavé oleje. Pro tento účel lze použít libovolný nedráždivý nevysychavý olej včetně syntetických mono- a diglyceridu. Pro přípravu injekovatelných prostředků jsou vhodné mastné kyseliny, jako je kyselina olejová a její glyceridové deriváty, stejně jako v přírodě se vyskytující farmaceuticky přijatelné oleje, jako je olivový olej nebo ricinový olej, zejména v jejich polyoxyethylovaných formách. Tyto olejové roztoky nebo suspenze mohou rovněž obsahovat alkohol s dlouhým řetězcem jako ředidlo nebo dispergátor, popsaný v Pharmacopoeia Helvetica nebo podobný alkohol.
Farmaceutické prostředky podle vynálezu mohou být orálně podávány v libovolné orálně přijatelné dávkovači formě, včetně, aniž by však šlo o omezující výčet, kapslí, tablet a vodných suspenzí a roztoků. V případě tablet pro orální použití patří mezi běžně používané nosiče laktóza a kukuřičný škrob. Typicky se přidávají rovněž lubrikační činidla, jako je stearát horečnatý. Pro orální podání ve formě kapslí patří mezi vhodná ředidla laktóza a sušený kukuřičný škrob. Pokud se orálně podávají vodné suspenze, kombinuje se účinná látka s emulgátory a suspendujícími činidly. Pokud je to žádoucí, lze přidávat některá sladidla nebo/a chuťové přísady nebo/a barviva.
Farmaceutické prostředky podle vynálezu lze rovněž podávat ve formě čípků pro rektální podání. Tyto prostředky lze připravit smícháním sloučeniny podle vynálezu s vhodným nedráždivým vehikulem, které je pevné při teplotě místnosti, ale kapalné při teplotě rekta a tudíž v rektu taje, čím se uvolní účinné složky. Mezi takové materiály patří, aniž by však šlo o vyčerpávající výčet, kakaové máslo, včelí vosk a polyethyíenglykoly.
Místní podání farmaceutických prostředků podle vynálezu je zejména vhodné pokud požadované ošetření zahrnuje oblasti nebo orgány snadno dostupné místním podáním. Pro místní podání na kůži by měl být farmaceutický prostředek formulován jako vhodná mast obsahující účinné složky suspendované nebo rozpuštěné v nosiči. Mezi nosiče pro místní podání sloučenin podle vynálezu patří, aniž by však šlo o vyčerpávající výčet, minerální oleje, vazelínový olej, albolen, propylenglykol, polyoxyethylenpolyoxypropylenové sloučeniny, emulgační vosk a voda. Alternativně lze farmaceutický prostředek formulovat jako vhodný lotion nebo krém obsahující účinnou sloučeninu suspendovanou nebo rozpuštěnou v nosiči. Mezi vhodné nosiče patří, aniž by však šlo o vyčerpávající výčet, minerální oleje, sorbitan-monostearát, polysorbat 60, cetylesterový vosk, cetearylalkohol, 2-oktyldodekanoI, benzylalkohol a voda. Farmaceutické prostředky podle vynálezu lze rovněž místně aplikovat na spodní část intestinálního traktu pomocí rektálních čípků nebo ve vhodném klystýru. Vynález rovněž zahrnuje místně transdermální náplasti.
Farmaceutické prostředky podle vynálezu lze podávat nasálním aerosolem nebo inhalací. Takovéto prostředky se připraví pomocí způsobů dobře známých v oboru vytváření farmaceutických prostředků a lze je připravit jako roztoky ve fyziologickém roztoku, za použití benzylalkoholu. nebo jiných vhodných konzervačních přísad, látek podporujících absorpci pro zvýšení biologické dostupnosti, fluorovaných uhlovodíků nebo/a jiných solubiltzačních nebo dispergačních činidel známých v oboru.
Při léčení a prevenci jsou vhodné dávky 0,01 až 100 mg/kg tělesné hmotnosti a den, s výhodou 1 až 50 mg/kg tělesné hmotnosti a den aktivní složky, a to chorob spojených $ IL-1, apoptózou, IGIF a IFN-γ, včetně zánětů, autoimunních poruch, kostních chorob, proliferativních chorob, infekčních chorob, degenerativních chorob, nekrotických chorob, osteoartritidy, akutní pankreatitidy, chronické pankreatitidy, astmatu, syndrom respirační úzkosti, glomeralonefritida, revmatická artritida, systemická lupus erythematóza, skleroderma, chronická thyroiditida, Graveova choroba, autoimunní gastritida, na inzulínu závislá diabetes mellitus (Type I), autoimunní hemolytická anemie, autoimunní neutropenie, thrombocytopenie, chronická aktivní hepatitida, myasthenia gravis, zánětlivé choroby vnitřností, Crohnova choroba, psoriasis. choroby transplantát _ys.. hostitel“osteďpořóza, víčěňášób_né_mýéloma-kostní choroby, akutní myelogenní leukemie, chronická myelogení leukemie, metastatické melanomy, Kaposiho sarkom, vícenásobné myeloma sepse, septický Šok, Shigellosa, Alzheimerova choroba, Parkinsonova choroba, mozková
-44CZ 298171 B6 ischemie, ischemie myokardu, míšní muskulámí atrofie, roztroušená skleróza, s AIDS spojená encefalitida, s HIV spojená encefalitida, stárnutí, alopecie a neurologické poškození následkem úderu. Farmaceutické prostředky v souladu s předkládaným vynálezem se typicky podávají 1 až 5krát denně nebo alternativně continuální infuzí. Takové podávání lze použít jako chronickou nebo akutní léčbu. Množství aktivní složky kombinované s nosičem za vzniku jednotkové dávkové formy se liší podle léčeného pacienta a konkrétního způsobu podávání. Typický prostředek obsahuje 5 až 95 % hmotnostních aktivní sloučeniny, s výhodou 20 až 80% hmotnostních aktivní sloučeniny.
Po zlepšení pacientova stavu lze v případě potřeby podávat udržovací dávku sloučeniny, prostředku nebo kombinace v souladu s předkládaným vynálezem. Následně lze dávku nebo frekvenci podávání nebo oboje snížit, a to jako funkci symptomů, na úroveň, při které dochází k trvání zlepšení stavu, nebo když byly symptomy omezeny na požadovanou úroveň, lze léčení ukončit. Pacienti ale mohou dlouhodobě vyžadovat občasné léčení (při opětovném výskytu příznaků choroby).
Odborníkům v této oblasti je zřejmé, že mohou být žádoucí i nižší nebo vyšší dávky než jsou uvedené výše. Specifické dávkování a léčba u každého jednotlivého pacienta závisí na různých faktorech včetně aktivity konkrétní použité sloučeniny, věku, tělesné hmotnosti, celkovém zdravotním stavu, pohlaví, dietě, době podávání, frekvenci vyměšování, kombinaci léků, závažnosti a průběhu choroby a pacientových dispozicích k chorobě a úsudku ošetřujícího lékaře.
Choroby související šIL-1, které lze léčit nebo preventivně ovlivnit sloučeninami v souladu s předkládaným vynálezem jsou (ale nejen) zánětlivá onemocnění, autoimunní poruchy, zhoubné kostní choroby, proliferativní choroby, infekční choroby a degenerativní choroby. Choroby spojené s apoptózou, které lze léčit nebo preventivně ovlivnit sloučeninami v souladu s předkládaným vynálezem jsou degenerativní choroby.
Zánětlivá onemocnění, která lze léčit nebo preventivně ovlivnit sloučeninami v souladu s předkládaným vynálezem jsou (ale nejen) osteoarthritida, akutní pankreatitida, chronická pankreatitida, astma a syndrom respirační úzkosti dospělých, zejména osteoarthritida nebo akutní pankreatitida.
Autoimunní poruchy, které lze léčit nebo preventivně ovlivnit jsou (ale ne jen) glomeralonefritida, revmatická artritida, systemická lupus erythematóza, scieroderma, chronická thyroiditida, Gravesova choroba, autoimunní gastritida, na inzulínu závislá diabetes mellitus (typ I), autoimunní hemolytic anemia, autoimunní neutropenie, thrombocytopenie, chronická aktivní hepatitida, myasthenia gravis, roztroušená skleróza, zánětlivá onemocnění vnitřností, Crohnova choroba, psoriáza a transplantát vs. hostitel reakce. Autoimunní choroby jsou v této souvislosti zejména revmatická arthritida, zánětlivá onemocnění vnitřností, Crohnova choroba nebo psoriáza.
Zhoubné kostní choroby, které lze léčit nebo preventivně ovlivnit jsou (ale nejen) osteoporóza a násobný myelom.
Proliferativní choroby, které lze léčit nebo preventivně ovlivnit jsou (ale ne jen) akutní myelogenní leukemie, chronická myelogenní leukemie, metastatický melanom, Kaposiho sarkom a násobný myelom.
Infekční choroby, které lze léčit nebo preventivně ovlivnit jsou (ale nejen) sepse, septický šok a Shigellosa.
Degenerativní nebo nekrotické choroby, které lze léčit nebo preventivně ovlivnit sloučeninami v souladu_s předkládaným^výifálezem jsou (álc ne jen) Alzheimerova choroba, Parkinsonova choroba, mozková ischemie a ischemie myokardu a z nich zejména degenerativní Alzheimerova choroba.
-45CZ 298171 B6
S apoptózou související degenerativní choroby, které lze léčit nebo preventivné ovlivnit sloučeninami v souladu s předkládaným vynálezem jsou (ale nejen) Alzheimerova choroba, Parkinsonova choroba, mozková ischemie, ischemie myokardu, míšní muskulámí atrofie, roztroušená skleróza, s AIDS spojená encefalitida, s HIV spojená encefalitida, stárnutí, alopecie a neurologic5 ké poškození následkem úrazu.
Způsoby v souladu s předkládaným vynálezem lze použít pro léčení nebo omezení rozvoje, závažnosti nebo účinků s IGIF nebo s IFN-γ spojených zánětů, autoimunních, infekčních, proliferativních, zhoubných kostních, nekrotických a degenerativních chorob, poruch a účinků, 10 které se vyznačují zvýšením produkce IGIF nebo IFŇ-γ.
Příklady takových zánětů zahrnují (ale nejen) choroby jako jsou osteoarthritida, akutní pankreatitida, chronická pankreatitida, astma, revmatická artritida, záněty vnitřností, Crohnova choroba, hnisavá kolitida, mozková ischemie, ischemie myokardu a syndrom respirační úzkosti dospělých, 15 Zejména se ale jedná o revmatickou arthritidu, hnisavou kolitidu, Crohnovu chorobu, hepatitidu a syndrom respirační úzkosti dospělých.
Příklady takových infekčních chorob jsou (ale ne jen) infekční hepatitida, sepse, septický šok a Shigellosa,
Příklady takových autoimunních chorob jsou (ale ne jen) glomerulonefritida, systemická lupus erythematóza, skleroderma, chronická thyroiditida, Gravesova choroba, autoimunní gastritida, na inzulínu závislá diabetes mellitus (typ I), juvenilní diabetes, autoimunní hemolytické anemia, autoimunní neutropenie, trombocytopenie, myasthenia gravis, roztroušená skleróza, psoriáza, 25 lichenplanus, reakce transplantát vs. hostitel, akutní dermatomyositida, ekzémy, primární cirhóza, hepatitida, uveitida, Behcetova choroba, akutní dermatomyositida, atopické kožní choroby, aplazie pure red cell, aplastická anemie, amyotrofická laterální skleróza a nefrotický syndrom.
Z autoimunních chorob sě jedná zejména o glomerulonefritidu, na inzulínu závislý diabetes 30 mellitus (typ I), juvenilní diabetes, psoriasu, transplantát vs. hostitel reakci včetně odmítnutí transplantátu a hepatitida.
Příklady zhoubných kostních chorob jsou (ale nejen) osteoporóza a násobný kostní myelom.
Příklady proliferativních chorob jsou (ale ne jen) akutní myelogenní leukemie, chronická myelogení leukemie, metastatický melanom, Kaposiho sarkom a násobný myelom.
Příklady neurodegenerativních chorob jsou (ale ne jen) Alzheimerova choroba, Parkinsonova choroba a Huntingtonova choroba.
Ačkoli se vynález zaměřuje na použití zde popsaných sloučenin na prevenci a léčení onemocnění zprostředkovaných IL-1, apoptózy, IGIF a IFN-γ, lze sloučeniny podle vynálezu použít rovněž jako inhibiční činidla pro další cysteinové proteázy.
Sloučeniny podle vynálezu jsou rovněž vhodné jako komerční reakční činidla, která se účinně vážou na ICE nebo jiné cysteinové proteázy. Jako komerční reakční činidla lze sloučeniny podle vynálezu a jejich deriváty použít pro blokování proteolýzy cílového peptidu nebo z nich lze tvořit deriváty vázající se na stabilní pryskyřici jako imobilizovaný substrát pro afinitní chromatografie. Tato a další použití, která charakterizují komerční inhibitory cysteinových proteas, jsou odborníkovi v oboru zřejmá.
Postup přípravy N-acylaminosloučenin______________
ICE inhibitory v souladu s předkládaným vynálezem lze syntetizovat pomocí běžných technik, S výhodou se tyto sloučeniny obyčejně připravují ze snadno dostupných výchozích látek.
-46CZ 298171 B6
Sloučeniny v souladu s předkládaným vynálezem patří mezi nesnadněji připravitelné ICE inhibitory. Výše popsané ICE inhibitory často obsahují čtyři nebo více chirálních center a řadu peptidických spojení. Relativní snadnost, se kterou lze sloučeniny v souladu s předkládaným vynálezem syntetizovat, znamená velkou výhodu při jejich produkci ve velkých objemech.
Sloučeniny v souladu s předkládaným vynálezem lze například dále popsanými způsoby. Zkušený praktik ale ví, že tyto postupy nejsou jedinou cestou přípravy, kterou lze zde popsané a nárokované sloučeniny syntetizovat. Odborníkům jsou další způsoby zřejmé. Kromě toho lze řadu zde popsaných syntetických kroků provést v jiném pořadí rovněž za získání požadovaných sloučenin.
Předkládaný vynález také poskytuje výhodný způsob přípravy sloučenin v souladu s předkládaným vynálezem. Proto je v jiném provedení poskytnout způsob přípravy N-acylaminosloučenin obecného vzorce VI (VI)
Rl-Ň-R, I H
R] je (ělO) kde
C je kruh vybraný ze sady, kterou tvoří benzoskupina, pyridoskupina, thienoskupina, pyrroloskupina, fiiranoskupina, thiazoloskupina, izothiazoloskupina, oxazoloskupina, izoxazoloskupina, pyrimidoskupina, imidazoloskupina, cyklopentylová skupina a cyklohexylová skupina; kruh je popřípadě jednou nebo vícekrát substituovaný skupinou -Qt;
R2 je:
(a) (b)
nebo
-47CZ 298171 B6 m je 1 nebo 2;
každá skupina R3 je nezávisle vybraná ze skupiny, kterou tvoří:
skupina -C(0)-Rio, skupina -C(O)O-R9, skupina -C(O>N(R10)(R10), skupina -S(O)2-R9, skupina -S(O)2-NH-R10) skupina -S(O)-CH2-O-R9, skupina -C(0)C(0)-Rio, skupina -R?, atom vodíku, skupina -C(0)C(0)-ORio, a skupina -C(O)C(O)-N(R9)(R10);
Xí je skupina CH nebo atom dusíku;
Y2 je skupina H2 nebo atom kyslíku;
skupina Rů je vybrána ze sady, kterou tvoří atom vodíku a methylová skupina;
skupina R8 je vybrána ze sady, kterou tvoří:
skupina -C(0)-Rio, skupina -C(O)O-R9, skupina-C(O)-N(H)-R| o, skupina -S(O)2-R9, skupina -S(0)2-NH-R]o, skupina -S(OpCH2-OR]0.
skupina -C(0)C(0)^Rlo;
skupina-C(OpCH2N(R|0)(R10), skupina -C(O)-CH2C(O)-O-R9, skupina -C(O)-CH2C(O)-R9, atom vodíku, a skupina -C(0)-C(0)-ORio;
každá skupina R9 je nezávisle vybrána ze skupiny, kterou tvoří skupina -Ar3 a přímá nebo rozvětvená alkylová, alkenylová či alkynylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, která je popřípadě substituovaná skupinou -Ár3;
každá skupina Ri0 je nezávisle vybraná ze skupiny, kterou tvoří atom vodíku, skupina -Ar3, a cykloalkylová skupina obsahující 3 až 6 atomů uhlíku, a přímá nebo rozvětvená alkylová, alkenylová či alkynylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, která je popřípadě substituovaná skupinou -Ar3;
skupina RB je vybrána ze sady, kterou tvoří atom vodíku a přímá nebo rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku;
každá skupina R5j je nezávisle vybraná ze sady, kterou tvoří skupina R9, skupina -C(O)-R9, skupina -C(O)-N(H)-R9 a nasycený čtyř- a osmičlenný uhlíkový kruh nebo skupiny R5i společně tvoří nasycený čtyřčlenný až osmičlenný heterocyklický kruh obsahující skupinu -O-, skupinu -S-, nebo skupinu -NH-;
každá skupina R2l je nezávisle vybraná ze sady, kterou tvoří atom vodíku a přímá nebo rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku;
-48CZ 298171 B6 každá skupina Ar3 je cyklická skupina nezávisle vybraná ze sady, kterou tvoří arylová skupina obsahující 6, 10, 12, nebo 14 atomů uhlíku a 1 až 3 kruhy a aromatická heterocyklická skupina obsahující 5 až 15 atomů v kruhu a 1 až 3 kruhy, přičemž jmenovaná heterocyklická skupina 5 obsahuje jeden až čtyři heteroatomové skupiny, vybrané ze skupiny zahrnující skupiny -0-, skupiny -S-, skupiny -SO-, skupiny SO2, skupiny =N-, a skupiny -NH-, jmenovaná heterocyklická skupina popřípadě obsahuje jednu až šest dvojných vazeb, jmenovaná heterocyklická skupina popřípadě obsahuje jeden až tri aromatické kruhy, a jmenovaná cyklická skupina je popřípadě jednou nebo vícekrát substituovaná skupinou —Qj;
každá skupina Qi je nezávisle vybraná ze skupiny, kterou tvoří aminoskupina, karboxylová skupina, atom chloru, atom fluoru, atom bromu, atom jodu, nitroskupina, kyanoskupina, skupina =0, hydroxylová skupina, -perfluoralkylová skupina obsahující l až 3 atomy uhlíku, skupina R5, skupina -OR3, skupina -NHR5, skupina -OR9, skupina -N(R9)(Rio), skupina -R9, skupina 15 -C(0)-Rio, a skupina
O / \
ČH2ř \ / O .
pod podmínkou, že pokud skupina -Ar3 je substituovaná skupinou Qb která obsahuje jednu nebo více dalších skupin -Ar3, jmenované další skupiny -Ar3 nejsou substituované jinou skupinou -Ar3; který zahrnuje následující kroky:
a) smíchání karboxylové kyseliny $ N-alloc-ch raněným aminem v přítomnosti inertního rozpouštědla, trifenylfosfinu a pohlcovače nukleofilů a tetrakis-trifenylfosfinpalladia (0) při teplotě místnosti v inertní atmosféře
b) ke směsi z bodu a) se přidá směs HOBT a EDC;
a volitelně zahrnuje ještě další krok:
c) hydrolýza směsi z bodu b) v přítomnosti roztoku obsahujícího kyselinu a H2O, přičemž se 30 směs z bodu b) před hydrolýzou volitelně zahustí.
Tento způsob přípravy lze výhodně použít pro libovolnou z výhodných sloučenin uvedených výše.
N-Alloc-chráněným aminem je výhodně sloučenina obecného vzorce
f kde
R5i nabývá významů uvedených výše.
, Inertní rozp.Quštěd lo_je.s_výhodou.dichlorm ethan -dimethy 1 formám id- nebo-směs-d i chlormethanu a-” dimethylformamidu. Výhodný pohlcovač nukleofilů je dimedon, morfolin, trimethylsilyl
-49CZ 298171 B6 dimethylamin nebo kyselina dimethylbarbiturová. Výhodnější pohlcovače nukleofilů jsou trimethylsilyldimethylamin nebo kyselina dimethylbarbiturová.
Roztok s výhodou obsahuje 1 až 90 % hmotnostních kyseliny trifluoroctové, výhodněji 20 až 50 % hmotnostních kyseliny trifluoroctové.
Alternativně roztok obsahuje 0,1 až 30 % hmotnostních kyseliny chlorovodíkové, výhodněji 5 až 15 % hmotnostních kyseliny chlorovodíkové.
Ve výše uvedeném postupuje výhodněji inertní rozpouštědlo dichlormethan, dimethylformamid nebo směs dichiormethanu a dimethylformamidu a pohlcovačem nukleofilů je dimedon, morfolin, trimethylsilyldimethylamin nebo dimethylbarbiturová kyselina.
Ve výše uvedeném postupuje nej výhodněji inertní rozpouštědlo dichlormethan, dimethylformamid nebo směs dichiormethanu a pohlcovačem nukleofilů je trimethylsilyldimethylamin nebo dimethylbarbiturová kyselina.
Za účelem lepšího porozumění vynálezu jsou připojeny následující příklady. Příklady jsou připojeny pouze za účelem ilustrace ale v žádném případě ne za účelem vymezení rozsahu vynálezu. Příklady týkající se sloučenin, které netvoří součást vynálezu, slouží pro srovnání.
Příklady provedení vynálezu
Příklad 1
Byly získány inhibiční konstanty (K,) a hodnoty ICSo pro několik sloučenin podle vynálezu za použití tří níže popsaných metod:
1. Enzymový test se substrátem viditelným v UV-světle
Tento test se provádí za použití sukcinyl-Tyr-Val-Ala-Asp-p-nitroanílidového substrátu. Syntézu analogických substrátů popsal L. A. Reiter (Int. J. Peptide Protein Res. 43, 87 - 96 (1994)), Testovaná směs obsahuje:
μΐ pufru (10 mM Tris, 1 mM DTT (dithiothreitolu), 0,1 % CHAPS (3-[(3-cholamidopropyl)dimethylamonio]-l-propan-sulfonátu), pH 8,1), .
μΐ ICE (konečná koncentrace 50 nM, pro dosažení rychlosti zhruba 1 mOD/min), μΐ směsi dimethylsulfoxidu a inhibitoru, til 400μΜ substrátu (konečná koncentrace 80 μΜ)
100 μΐ = celkový reakční objem
Vizuálně vyhodnocovaný test ICE se provádí na mikrotitrační desce s 96 jamkami. Pufr, ICE a dimethylsulfoxid (pokud je přítomen inhibitor) se dají do jamek v uvedeném pořadí. Složky se nechají inkubovat při teplotě místnosti po dobu 15 minut, počítáno od doby, kdy jsou všechny složky přítomné ve všech jamkách. Inkubace se provádí při teplotě 37 °C. Po 15 minutách inkubace se do jamek přímo přidá substrát a reakce se monitoruje pomocí následujícího uvolňování chromoforu (pNA) při 405 až 603 nm při teplotě 37 °C po dobu 20 minut. Provede se lineární vyhodnocení údajů a vypočítá se rychlost v mOD/min. Dimethylsulfoxid je přítomen pouze při experimentech za použití inhibitorů, při ostatních experimentech se na doplnění_obiemu-na ‘riOOyřpoužijěpuff
-50CZ 298171 B6
2. Enzymový test s fluorescentním substrátem
Tento test se provádí v podstatě jak popsali Thombeny a kol. (Nátuře 356: 768 - 774 (1992)), za použití substrátu 17 popsaného ve výše uvedeném článku. Substrátem je acetvl-Tyr-Val-AIaAsp-amino-4-methylkumarin (AMC). Smíchají se následující složky:
65 μΐ pufru (10 mM Tris, 1 mM DTT (dithiothreitolu), 0,1 % CHAPS (3-[(3-cholamidopropyl)dimethylamonio]-l-propansulfonátu), pH 8,1), μΐ ICE (konečná koncentrace 2 až 10 nM), μΐ roztoku inhibitoru v dimethylsulfbxidu, a ul 150 μΜ substrátu (konečná koncentrace 30 μΜ) ίο 100 μΐ - celkový reakční objem
Test se provádí na mikrotitrační desce s 96 jamkami. Do jamek se dá pufr a ICE. Složky se nechají inkubovat při teplotě 37 °C po dobu 15 minut v desce s řízenou teplotou. Po 15 minutách inkubace se zahájí reakce přidáním substrátu přímo do jamek a reakce se monitoruje při teplotě 15 37 °C po dobu 30 minut pomocí sledování uvolňování AMC-fluoroforu za použití excitační vlnové délky 380 nm a emisní vlnové délky 460 nm. Provede se lineární vyhodnocení údajů pro každou jamku a stanoví se rychlost v jednotkách fluorescence za sekundu.
Pro stanovení enzymových inhibičních konstant (Kg) nebo způsobu inhibice (kompetitivní, 20 akompetitivní, nekompetitivní) se údaje o rychlosti stanovené v enzymových testech s různými koncentracemi inhibitoru počítačově zpracují standardními rovnicemi enzymové kinetiky (viz. I. H. Segel, Enzyme Kinetics, Wiley-Interscience, 1975).
Stanovení rychlostních konstant druhého řádu pro irreversibilní inhibitory bylo provedeno vyne25 sením fluorescenčních údajů proti časovým údajům za vyvinutí Morrisonovy rovnice. Morrison,
J. F., Mol. Cell. Biophys, 2, 347-368 (1985). Thomberry a další publikovali popis těchto metod měření rychlostních konstant pro irreversibilní inhibitory ICE. Thomberry, N. A. a další, Biochemistry 33, 3923-3940 (1994). Pro sloučeniny, u kterých nelze kineticky sledovat tvorbu přednostního komplexu, se rychlostní konstanty druhého řádu (kinact) odvodí přímo ze sklonu linie 30 kobs vs. [I]. U sloučenin, u kterých lze detekovat tvorbu přednostního komplex s enzymem, se rovnici kinetiky nasycení upraví hyperbola kobs vs. [I], čímž se nejdřív generují Kj a k'. Rychlostní konstanta druhého řáduje pak dána podílem k7Kj.
3. PBMC Buněčný test
Test IL-1 β se smíšenou populací lidských periferních krevních monojaderných buněk (peripheral blood mononuclear cells, PBMC) nebo obohacenými adherentními monojadernými buňkami.
Úpravu (processing) pre-IL-Ιβ působením ICE lze měřit v buněčné kultuře za použití řady zdrojů buněk. Lidské PBMC získané ze zdravých donorů poskytují smíšenou populaci subtypů 40 lymfocytů a mononukleámích buněk, která produkuje řadu interleukinů a cytokinů jako odpověď na mnoho druhů fyziologických stimulací. Adherentní mononukleámí buňky z PBMC jsou obohaceným zdrojem normálních monocytů pro selektivní studie produkce cytokinů aktivovanými buňkami.
Postup experimentu:
Připraví se počáteční série ředění testované sloučeniny v dimethylsulfoxidu nebo ethanolu s následujícím naředěním do média RPMl-10% FBS (obsahujícího 2 mM L-glutaminu, 10 mM _ HEPES (4-(2-hydroxyethyl)-l-piperazinethansulfono.vé-kyseliny.),-50^Ua-50-pg/ml-pen/strep) 50 pro dosažení koncentrace léčiv, která je čtyřnásobkem konečné testové koncentrace, tedy koncentrace 0,4 % dimethylsulfoxidu nebo 0,4 % ethanolu. Konečná koncentrace dimethylsulfoxidu činí 0,1 % pro všechna ředění léčiv. Pro počáteční orientační testování sloučeniny se
-51 CZ 298171 B6 obecně použije titrace koncentrace, která vymezuje zjevnou K, pro testovanou sloučeninu stanovenou v testu inhibice ICE.
Obecně se testuje 5-6 ředění sloučeniny a celulámí část testu se provádí ve dvou opakováních, se dvojím stanovením ELlSA-testem na každém supematantu buněčné kultury.
Izolace PBMC a test IL-1
Vysrážené buňky (buffy coat cells) izolované ze zhruba 0,5 1 lidské krve (ze které se získá 40 až 45 ml konečného objemu plazmy + buňky) se naředí médiem na 80 ml a separační kyvety LeukoPREP (Becton Dickinson) se naplní 10 ml suspenze buněk. Po 15 minutách odstřeďování při 1500 až 1800 g se vrstva plazmy a média odsaje a vrstva mononukleámích buněk se poté izoluje Pasteurovou pipetou a přenese se do kónické odstřeďovací kyvety (Corning) o objemu 15 ml. Přidá se médium pro upravení objemu na 15 ml, buňky se jemně promíchají převrácením kyvety a provádí se odstředění při 300 g po dobu 15 minut. Peleta PBMC se resuspenduje v malém objemu média, buňky se spočítají a koncentrace se upraví na 6 x 106 buněk/ml.
Pro buněčný test se do každé jamky desky pro tkáňovou kultivaci s 24 jamkami s rovným dnem (Corning) vnese 1,0 ml buněčné suspenze, 0,5 ml ředění testované sloučeniny a 0,5 ml roztoku LPS (Sigma Č. L—3012, roztok o koncentraci 20 ng/ml připravený v kompletním médiu RPMI, konečná koncentrace LPS činí 5 ng/ml). Přidáváním 0,5 ml testované sloučeniny a LPS se obsahy jamek obvykle dostatečně promíchají. Pro každý experiment se provádí tři kontroly, a to buď kontrola se samotným LPS, kontrola s rozpouštědlem, nebo/a kontrola s dalším médiem, pro úpravu konečného kultivačního objemu na 2,0 ml. Buněčné kultury se inkubují po dobu 16 až 18 hodin při teplotě 37 °C za přítomnosti 5 % oxidu uhličitého.
Na konci inkubační doby se buňky izolují a přenesou do kónických odstřeďovacích kyvet o objemu 15 ml. Po odstředění po dobu 10 minut pří 200 g se supematanty izolují a přenesou do Eppendorfových zkumavek. Buněčné pelety lze využít pro biochemické zhodnocení obsahu pre-IL-Ιβ nebo/a maturovaného IL-1 β v cytosolových extraktech pomocí „western blottingu“ nebo ELISA-testu s antisérem specifickým pro pre-IL-Ιβ.
Izolace adherentních mononukleámích buněk:
Jak je popsáno výše, izolují a preparují se PBMC. Do jamek se vnese nejprve 1,0 ml média a poté 0,5 ml suspenze PBMC. Po jednohodinové inkubaci se deskami mírně zatřese a neadherentní buňky se z každé jamky odsají. Jamky se poté opatrně promyjí třikrát 1,0 ml média a nakonec se resuspendují v 1,0 ml média. Obohacením adherentních buněk se obecně získá 2,5 až 3,0 xlO5 buněk na jamku. Přidání testovaných sloučenin a LPS, podmínky inkubace buněk a zpracování supematantu se provádí jak je popsáno výše.
ELISA-test:
Pro měření maturované IL-Ιβ se použijí soupravy Quantikine (R&D Systems). Testy se provádějí podle pokynů výrobce. V pozitivních kontrolách jak s PBMC, tak s adherentními mononukleámími buňkami jsou pozorovány hladiny maturovaného IL-1 β přibližně 1 až 3 ng/ml. Provedou se ELISA-testy na ředěních 1 : 5, 1 ; 10 a 1 :20 supematantů z LPS-pozitívních kontrol pro výběr optimálního ředění pro supematanty v testovaném souboru.
Inhibiční účinnost sloučenin může být reprezentována hodnotou IC50, což je koncentrace inhibitoru, při které je v supematantu detekováno 50 % maturovaného IL-1 β ve srovnání s pozitivními kontrolami.
Zkušený odborník si je vědom, že hodnoty získané zde popsanými buněčnými testy mohou být závislé na řadě faktorů, jako je typ buněk, jejich zdroj, podmínky růstu a podobně.
-52CZ 298171 B6
Příklad 2
Farmakokinetické studie na myších
Peptidové ICE inhibitory jsou rychle odbourávány s rychlostí odbourání větší než 100 μ/min/kg. Sloučeniny s nižší rychlostí odbourání mají vůči peptidovým ICE inhibitorům lepší farmakokinetické vlastnosti.
S použitím níže popsaných metod jsme získali pro několik sloučenin v souladu s předkládaným vynálezem rychlost odbourání u myší (μ/min/kg):
Příprava vzorku a dávkování
Sloučeniny se rozpustí ve sterilním roztoku TRIS (0,02 M nebo 0,05 M) při koncentraci
2,5 mg/ml. V případě potřeby zajištění úplného rozpuštění se vzorek nejdříve rozpustí v malém množství dimethylacetamidu (maximálně 5 % celkového objemu roztoku), a pak se rozpustí v roztoku TRIS. Roztok léku se podává CD-1 myším (Charles River Laboratories - 26 až 31 g) 20 do ocasní žíly v množství 10 ml/kg, což odpovídá dávce 25 mg/kg. Dávkování se myším podává ve skupinách po pěti pro každý časový interval (obecně od 2 minut do 2 hodin). Zvířata se pak uvedou po příslušné době do anestéze za použití halotanu, a pak se jim odeberou vzorky krve do oddělených heparinovaných zkumavek oddělením krční žíly. Vzorky krve se ochladí na 0 °C, a pak se oddělí plazma, která se před testem skladuje při -20 °C.
Biologický test
Stanovení léku ve vzorcích plazmy se provede pomocí HPLC s UV nebo MS (ESP) detekcí.
Použije se chromatografie na reverzní fázi za použití různých fází od Cl do Cl8 seluentem 30 složeným ze směsi vodného pufru a acetonitrilu za izokratických podmínek.
Kvantifikace se provede pomocí metody externího standardu s kalibrační křivku vynesenou pomocí analýzy plazmy s roztokem látky za získání koncentrací v rozsahu 0,5 až 50 μg/ml. Před analýzou se vzorky plazmy zbaví proteinů přidáním acetonitrilu, methanolu, trichloroctové kyse35 líny nebo kyseliny chloristé a následným odstředěním pří 10 000 g po dobu 10 minut. Analyzují se vzorky o objemu 20 μΐ až 50 μΐ.
Sloučenina 214e
Dávkování a vzorkování
Látka se rozpustí ve sterilním 0,02 M roztoku Tris za získání roztoku s koncentrací 2,5 mg/ml, který se podá 11 skupinám po 5 samcích CD-1 myší do ocasní žíly při dávce 25 mg/kg. Po 2, 5, 10, 15, 20, 30, 45, 60, 90 a 120 minutách se uvede skupina myší do anestéze a krev se odebere do heparinovaných zkumavek. Po oddělení se plazma skladuje do začátku testu při -20 °C.
Test
Alikvotní podíly plazmy (150 μΐ) se smísí s 5% kyselinou chloristou (5 μΐ), a pak se promíchá kroužením a před odstředěním ponechá stát 90 minut. Výsledný roztok se oddělí a 20 μΐ se nastříkne na HPLC.
__HPLC podmínky___________________
Kolona 100 x 4.6 mm Kromasil KR 100 5C4
Mobilní fáze 0,1 m Tris pH 7,5 86%
-53CZ 298171 B6
Průtok
Detekce
Retenční čas acetonitril ml/min
UV při 210 nm
3,4 minuty
14%
Výsledky analýz ukázaly snížení střední hladiny látky v plazmě od 70 pg/ml ve 2 minutách do < 2 pg/ml po 90 a 120 minutách.
Sloučenina 217e
Dávkování a vzorkování
Látka se rozpustí ve sterilním 0,02 M roztoku Tris za získání roztoku s koncentrací 2,5 mg/ml, který se podá 11 skupinách po 5 samcích CD-1 myší do ocasní žíly při dávce 25 mg/kg. Po 2, 5, 10, 15,20, 30, 45, 60, 90 a 120 minutách se uvede skupina myší do anestéze a krev se odebere do heparinovaných zkumavek. Po oddělení se plazma skladuje do začátku testu při -20 °C.
Test
Alikvotní podíly plazmy (100 μΐ) se zředí acetonitrilem (100 μΐ), a pak se 20 sekund před 10 minutovým odstředěním promíchají kroužením. Výsledný roztok se oddělí a 20 μΐ se nastříkne na HPLC.
HPLC podmínky
Kolona Mobilní fáze
Průtok
Detekce
Retenční čas
150 x 4.6 mm Zorbax SBC8
0,05 M fosfátový pufr pH 7,1 72 % acetonitril 28 %
1,4 ml/min
UVpři210nm
3,0 a 3,6 minuty (diastereomery)
Výsledky analýz ukázaly snížení střední hladiny látky v plazmě od 55 pg/ml ve 2 minutách do < 0,2 pg/ml po 60 až 120 minutách.
Příklad 3
Peptidové ICE inhibitory jsou rychle odbourávány s rychlostí odbourání větší než 100 ml/min/kg. Sloučeniny s nižší rychlostí odbourání mají vůči peptidovým ICE inhibitorům lepší farmakokinetické vlastnosti.
S použitím níže popsaných metod jsme získali pro několik sloučenin v souladu s předkládaným vynálezem rychlost odbourání u krys (ml/min/kg):
In vivo test odbourání u krys
Jeden den před farmakokinetickou studií byla za anestéze provedena kanylace krční cévy a tepny.
M. J. Free, R. A. Jaffee; „Cannulation techniques for the collection blood a other bodily fluids“; Animal Models; 480-495; N. J. Alexaer, Ed.; Academie Press; (1978). Látka (10 mg/ml) se podá krční cévou v nosiči, který obvykle tvoří směs propylenglykol/salin v poměru 1:1 obsahující 100 mM hydrogenuhličitanu sodného. Zvířatům se podá 10 až 20 mg látky/kg a krevní vzorky se odeberou po 0,2, 5, 7, 10, 15,20, 30,60 a 90 minutách od podání karotidovým katetrem. Krev se odstředí na plazmu a až do analýzy se skladuje při -20_lC..F.armakokinetická.analvza.se-provede nelineární regresí za použití standardního softwaru - například RStrip (MicroMath Software, UT) a/nebo Pcnonlin (SCI Software, NC).
-54CZ 298171 B6
Zorbax SB-CN (4,6 x 150 mm, velikost částic 5μ) 50 °C
1,0 ml/min μΐ
A=0,l% TFA ve vodě a B= 100% acetonitril
100% A až 30% A do 15,5 min % A po 16 min
100 % A po 19,2 min
214 nm
Analytika:
Krysí plazma se extrahuje ekvivalentní objemem acetonitrilu (obsahujícím 0,1 % TFA). Vzorky se pak odstředí při asi 1000 g a roztok se analyzuje pomocí HPLC. Typický postup testu je popsán níže.
200 μΐ plazmy se vysráží 200 μΐ 0,1% trifluoroctové kyseliny (TFA) v acetonitrilu a 10 μΐ 50% vodného roztoku chloridu zinečnatého, pak se promíchá a pak se odstředí při 1000 g. Pak se oddělí roztok nad usazeninou, který se analyzuje HPLC.
HPLC postup:
kolona:
teplota: průtok: objem nástřiku: 15 mobilní fáze:
použitý gradient:
vlnová délka:
Standardní křivka byla měřena při koncentracích 20, 10, 5, 2 a 1 pg/ml.
Příklad 4
Test produkce IL—1 β úplné krve
Pro několik sloučenin v souladu s předkládaným vynálezem jsme níže popsanou metodou získali hodnoty IC5o30
Účel:
Test úplné krve je jednoduchá metoda měření produkce IL—1 β (nebo jiných cytokinů) a aktivity potenciálních inhibitorů. Komplexnost testovaného systému s lymfatickými i zánětlivými buňkami, spektrem plazmových proteinů a červených krvinek je ideální in vitro model lidských in vivo 35 fyziologických podmínek.
Materiál:
nepyrogenní stříkačky (30 ml) nepyrogenní sterilní vakuové zkumavky obsahující lyofílizovaný Na2EDTA (4,5 mg/10 ml) vzorek úplné lidské krve (30 až 50 ml)
1,5 ml Eppendorfovy zkumavky zásobní testovací roztoky (25 mM v DMSO nebo jiném rozpouštědle) roztok chloridu sodného zbavený endotoxinů (0,9 %) zásobní roztok HBSS lipopolysacharidu (Sigma, L-3012) s koncentrací 1 mg/ml v HBSS
IL— 1 β ELISA sada (R & D Systems; 4 DLB50)
TNFa ELISA sada (R & D Systems; DTASO) vodní lázeň nebo inkubátor
Experimentální postup testu úplné krve:
Inkubátornebo-vo-dňí-lážěň se nastaví na 30 °C. Do 1,5 ml Eppendorfových zkumavek se odpipetují 0,25 ml alikvoty krve. Poznámka: vzorky úplné krve je důležité ve zkumavce po každých dvou alikvotech převrátit. Rozdíly v replátorech mohou vést k tvorbě usazeniny buněk a li
J
-55CZ 298171 B6 nejsou stejnoměrně suspendovány. Rozdíly mezi alikvoty replikátu lze také minimalizovat použitím pipety s pozitivním výtlakem.
Sériovým zředěním se připraví roztoky látky ve sterilním nepyrogenním šalinu. Pro předběžné testy sloučeniny se obecně použije série roztoků, která odpovídá K, testované sloučeniny, která byla stanovena ICE inhibičním testem. Pro silně hydrofobní sloučeniny se připraví roztoky v čerstvé plazmě získané od stejného dárce krve nebo vPBS obsahujícím pro zvýšení rozpustnosti 5 % DMSO.
Do vzorku se přidá 25 μΐ roztoku testované sloučeniny nebo kontrolního roztoku nosiče a vzorek se opatrně promíchá. Pak se přidá 5,0 μΐ roztoku LPS (250 ng/ml, čerstvě připravený zásobní roztok: konečná koncentrace LPS 5,0 ng/ml) a opět se promíchá. Zkumavky se inkubují při 30 °C na vodní lázni po dobu 16 až 18 hodin za občasného promíchání. Alternativně lze zkumavky umístit do rotoru nastaveného na 4 ot/min (po stejnou dobu inkubace). Test se provádí dvojitě nebo trojitě s následujícími kontrolními vzorky: negativní kontrola - bez LPS; pozitivní kontrola - bez testovaného inhibitoru; kontrolní test nosiče - nejvyšší koncentrace DMSO nebo jiného roztoku použitého při pokusu. Do všech kontrolních zkumavek se přidá další šalin, aby byly normalizovány objemy kontrolního a testovaného vzorku úplné krve.
Po inkubaci se vzorky úplné krve odstředí 10 minut při 2000 ot/min v mikrofuze, plazma se převede do nové mikrofugační zkumavky a opět odstředí při 1000 g za sbalení zbytku sraženiny. Vzorky plazmy lze před EL1SA testem hladiny cytokinu skladovat zmražené při -70 °C.
ELISA test:
Pro stanovení IL-Ιβ a TNF-A jsme použili R & D Systems (614 McKinley Plače
N. E. Minneapolis, MN 55413) Quantikin sadu. Testy byly provedeny podle pokynů výrobce. Ujednotlivých vzorků byly u pozitivních kontrol zjištěny hladiny IL-Ιβ v rozmezí 1 až 5 ng/ml. Při našich testech bylo, aby padly výsledky ELISA experimentů padly do lineární oblasti ELISA standardních křivek, dostatečné zředění plazmy 1:200 pro všechny vzorky. Pokud při testu úplné krve zjistíte odchylky, může být nezbytné standardní zředění optimalizovat,. Nerad, J. L. a další, J. Leukocyte Biol. 52, 687-692 (1992).
Příklad 5
Inhibice ICE homologů
1. Izolace ICE homologů
Exprese TX v buňkách hmyzu za použití expresního systému baculoviru. Subklonovali jsme Tx cDNA (Faucheu a další, supra 1995) do modifikovaného pVL1393 transfer vektoru a do buněk hmyzu jsme zavedli výsledný plazmid kotransfekcí (pVL1393/TX) pomocí virové DNA a identifikovali jsme rekombinantní baculovirus. Po vytvoření zásobního roztoku viru s vysokým titrem bylo médium testováno na TX aktivitu za použití vizuálního ICE testu. Infikování buněk hmyzu Spodoptera frugiperda (Sf9) při MOI s hodnotou 5 zásobním roztokem rekombinovaného viru typicky vedlo expresi po 48 hodinách k maximální 4,7 pg/mL ICE byl použit při pokusu jako standard.
Došlo i k expresi aminokoncové T7 připojené verze ICE nebo TX. Různé konstrukce, které byly navrženy původně pro usnadnění identifikace a izolace rekombinovaných proteinů, umožnily také testování různých stupňů exprese a relativních stupňů homolog, které prodělaly apoptózu. Apoptóza byla zvýšena u buněk v řadě s_expresí.ICE_nebo-TX..Sf9-po-infekci-(testování-pomocí vyloučení Trypan-modři), a to relativně k buňkám s infekcí pouze virovou DNA.
-56CZ 298171 B6
Exprese a čištění N-koncově (His)ó-vázané CPP32 u E. coli cDNA kódující CPP32 (Femaes-AInemri a další, supra 1994) polypeptid začínající na Ser(29) byl PCR amplifikován primery, které přidávají v řetězci Xhol místa na 5' i 3' konce cDNA a výsledný Xhol fragment byl navázán na Xho I-štěp pET-15b expresní vektor za vzniku spojení v řetězci s (his)& na n-konci fúzního proteinu. Předpovězený rekombinovaný protein začíná aminokyselinovou sekvencí MGSSHHHHHHSSGLVPRGSHMLE. kde LVPRGS reprezentuje trombin štěpící místo, které je následováno CPP32 začínajícím na Ser(29). E. coli BL21(DE3) nesoucí plazmid byly kultivovány na pevnou fázi při 30 °C a pak byly indukovány 0,8 mM IPTG. Dvě hodiny po přidání IPTG byly buňky zpracovány. Byly připraveny lysaty a rozpustné proteiny byly čištěny Ni-agarosovou chromatografií. Všechny CPP32 proteiny byly po expresi ve zpracované formě. N-Koncová sekvenční analýza prokázala, že ke zpracování došlo na autentickém místě mezi Asp(175) a Ser(176). 200 ml kultury vytvoří asi 50 pg proteinu CPP32. Jak bylo stanoveno titrací aktivního místa,, byly čištěné proteiny plně aktivní. Proteasové prostředky byly rovněž velmi in vitro aktivní při štěpení PARP stejně jako při štěpení syntetického DEVD-AMC substrátu (Nicholson a další, supra. 1995).
2. Inhibice ICE homologů
Selektivita skupiny reversibilních inhibitorů ICE homologů je popsána v tabulce 1. Testy enzymu ICE byly provedeny podle Wilsona a dalších (supra 1994) za použití YVAD-AMC substrátu (Thornberry a další, supra 1992). Test TX aktivity byl proveden za použití ICE substrátu za stejných podmínek jako pro ICE. Test CPP32 byl proveden za použití DEVD-AMC substrátu i (Nicholson a další, supra 1995). Obecně je v široké škále skeletů malá selektivita mezi ICE a,TX.
Žádná z testovaných syntetických ICE sloučenin není účinným inhibitorem CPP32. Test reversibilních sloučenin ani při nejvyšší koncentraci (1 μΜ) neprokázal žádnou inhibici.
Tabulka 1
Sloučenina Ki ICE (nM) Ki TX (nM) Ki CPP32 (nM)
214e 7,5 7,0 ±1,1 >1000
135a 90 55 ±9 > 1000
125b 60 57± 13 > 1000
137 40 40 ±7 > 1000
Níže v tabulce 2 jsou uvedeny rychlostní konstanty druhého řádu pro inaktivaci ICE a ICE homologů vybranými irreverzibilními inhibitory. Studované irreverzibilní sloučeniny jsou inhibitory s širokým spektrem ICE a jeho homologů. Při porovnání inhibice ICE a CPP32 irreverzibilními sloučeninami lze ale pozorovat určitou selektivitu.
Tabulka 2
Sloučenina kínact kínact (TX) Kinact
(ICE) M-1s-1 mY (CPP32) M“ls“1
138 120 000 150 000 550 000
217d 475 000 250 000 150 000
108a 100 000 25 000 nd
Příklad 6
Inhibice apoptózy
Fas-indukovaná apoptóza v buňkách U937.
-57CZ Z9517I B6
Sloučeniny byly hodnoceny podle své schopnosti blokovat anti-Fas-indukovanou apoptózou. Při předběžných experimentech s použitím RT-PCR jsme detekovali mRNA kódující ICE, TX, ICH-1, CPP32 a CMH-1 v nestimulovaných buňkách U937. Tuto buněčnou řadu jsme použili i pro studii apoptózy. Buňky U937 byly naočkovány v kulturách s koncentrací 1 x 105 buněk/ml a kultivovány do 5 x 106 buněk/ml. Při pokusech na apoptózu bylo 2x 106 buněk naneseno na 24-jamkové kultivační desky v 1 ml RPMI-1640-10 % FBS a stimulovány 100 ng/ml anti-Fasantigen protilátkou (Medical a Biological Laboratories, Ltd.). Po 24 h inkubaci při 37 °C byl stanoven podíl apoptických buněk pomocí FACS analýzy za použití ApoTax činidel.
Všechny sloučeniny byly na počátku testovány při 20 μΜ a pro stanovení hodnoty IC50 byla provedena titrace aktivní sloučeninou. Inhibice apoptózy (>75% při 20 μΜ) byla pozorována u sloučenin 108a, 136, a 138. Pro 0,8 μΜ sloučeniny 217e byla stanovena hodnota IC50 v porovnání s nulovou inhibicí anti-Fas-indukované apoptózy látkou 214e při 20 μΜ.
Příklad 7
In vivo kritický test účinnosti protizánětlivého účinku
LPS-Indukovaná produkce IL-Εβ
Účinnost 214e a 217e byla hodnocena podle CD1 myší (pro každé podmínky n=6), kterým byl podán LPS (20 mg/kg IP). Testovaná sloučenina byla rozpuštěna ve směsi olivový olej:DMSO:ethanol (90:5:5) a podána IP injekcí jednu hodinu po LPS. Sedm hodin po podání? LPS byl odebrán vzorek krve. Pomocí testu ELISA byla stanovena hladina IL-Ιβ v séru.. Výsledky na obr. 6 ukazují dávkovou závislost inhibice sekrece IL—1 β látkou 214e s hodnotou: ED50 asi 15 mg/kg. Podobné výsledky byly získány ve druhém experimentu. Silná inhibice sekrece IL-1 β byla pozorována i u myší, kterým byla podána látka 217a (obr. 7). Jasná závislost na dávce ale nebyla zjištěna.
Sloučeniny 214e a 217a (50 mg/kg) byly rovněž perorálně podány za účelem zhodnocení vstřebávání. Výsledky na obr. 8 ukazují, že látka 214e (ale ne látka 217o) při perorálním podání inhibuje sekreci IL·—1 β, což naznačuje potenciál ICE inhibitorů jako perorálních protizánětlivých činidel.
Účinnost analogů látky 214e byla rovněž hodnocena u myší, kterým byl podán LPS, po podání IP (obr. 9) a PO (obr. 10).
Tabulka 3
Inhibice (%) produkce IL—β působením analogů látky 214e u myší, kterým byl podán LPS, po podání IP a PO (50 mg/kg).
Tabulka 3
Sloučenina PO% inhibice IP% inhibice
214e 75 78
265 27 30
416 52 39
434 80 74
438 13 40
442 10 0
2002 — 78
-58CZ 298171 B6
Tabulka 4
Porovnání účinnosti proformy 214e u myší, kterým byl podán LPS: Časový průběh inhibice produkce 1L-1 β
Doba podání vzhledem k podání LPS, PO, 50 mg/kg
Sloučenina -2 h -1 h Oh +1 h
214e 39* 43* _* _* 44* _* 80* 48* _* 55% 75* 11* 47*
304a 30 33 68 37
2100e 49 54 94 66
2100a 8 71 67 58
213e 0 48 41. 89
302 0 27 21 26
2100c 0 0 85 40
2100d 42 35 52 26
2100b 0 0 47 26
2001 -63 64* -62 62* -57 58* -54 55*
* Hodnoty získány v následujících testech
Příklad 8
Měření hladiny proformy 214a v krvi
Myším byla perorálně podána dávka sloučenin 302 a 304a (50 mg/kg) rozpuštěná v 0,5% karboxymethylcelulóze. Po 1 a 7 hodinách po podání byly odebrány vzorky krve. Sérum bylo extrahováno vysrážením stejným objemem acetonitrilu obsahujícího 2% kyselinu mravenčí a následným odstředěním. Získaný roztok byl analyzován kapalinovou chromatografíí a hmotnostní spektrometrií (ESI-MS) s detekční hladinou 0,03 až 3 pg/ml. Sloučeniny 302 a 304a vykázaly při perorálním podáváním detekovatelné hladiny, 21,4e nevykazuje při perorálním podáváním v krvi hladinu vyšší než 0,10 pg/ml. Sloučeniny 302 a 304a jsou proformy látky 214e a jsou na látku 214e in vivo metabolizovány (viz. obr. 11).
Příklad 9
Pro sloučeniny v souladu s předkládaným vynálezem jsme za použití metod popsaných v příkladech 1-8 získaly následující údaje. Struktury sloučenin z příkladu 9 jsou uvedeny v příkladech 10-17.
-59CZ 298171 B6
Tabulka 5
Slouč. UV-vid. Buňky Úplná Odbourání Odbouráni u
Ki (nM) PBMC lidská u myši, krys,
prim. krev i .v. i. v.
IC50 (nMÍ ICso (nM> ml/min/kg ml/min/kg
47b 27 1800 <600 338
47a ' 19 . 2600 5100 79 .· 32
135a 90 2800 5000 >100 ___________ - - - —i—I ••rm *
135b . 320 1600 i 1’00 | i j
125b 60 800 45ŮO. • t i I
108b 400 I 25000 1 >100 i
137 40 i 1700 ' i4000 i
139. 350 2000 1 í
213e 130 900 600 40’0* i ř 1 i
214c 1200 1 500'0 ! f
214e 7.5 f 1600 1300 23 ( ř 12 !
217c 1700 7000 70 *
217e 17.5 2000 >50 1
220b 6Q0. 2125 í , !
223b 99 5000 >100
223e 1,6 1 3000 >20000 89 * *
22 6e 15 | 1100 1800 109 i i
227e 7 i 234 550 1 Ί
230e 325 300 6.7 ! i
232e 1100 4500 22 ; 26
235e 510 4750 36 !
238e 500 4250 * · *
-60CZ 298171 B6
1 Slouč. . UV-yid. Kí (nM) Buňky PBMC. prúm, icso (nM) . Úplná lidská krev IC5Q (nM) Odbouráni u myší, i. v. ihl/min/kg Odbouráni u krys, i .v, ml/min/kg
246 12. 950 10000 ! 31
257 13: íiooo 6600*
265 47 4 300 ! 1400 23 20
281 50 600 2500* 1 ) í 1 1
302 4.5.00 . >20000 í >20.000. 1 1 . ....
304 a 200: 1,400 24.00 14000* 1
307a. *'5‘5: 14500 1600.0
307b 1.65' .. 14000
404 2.9 1650 1800* 1100 64 24
4'05 515 1700 2.1 Q0
406 λ 1.6 5Ό ' 2300.
407 .. ·όγ4 : 5.40 1700
408 0,5. 1100 : looo 41 23
409 3,7 | 2500 r i j
410 17 ! 1 2000 2800 32 1 .20 J
411 0.9- 540 1.900' i : 1 1 ’
412 1.3 . ...... f. 580 , 660* 700 lóóo* í 25 í
413. 7.5Ό 62.00 í
415 2,5 990 1000* 450 35.00* -26 18
...416 | 12 i‘ 1200' 3400 47 í
417 ; . /8 . i 2000 60.00 ' 33 22 Ί
418 2,2 1050 2200* 7800 1800* .: 13 ; 5,9 '
419 280 I >800.0 j
420 r .1200 | 800.0 >8000*
421 200 4300 4600*
422 j .50 22Ό0 1200
i 423 10 | 2100 18Q0* 1500 45
424 45 2500 4000
425 0,8 ; 650 j 700* 1 650
4500
426 j 90 j. 2500*
... 427 ; 180 ’ 4500 3.6
-61 CZ 298171 B6
Slouč. υν-vid. Ki (nM) Buňky PBMC prum. IC53(nM) Úplná lidská krev IC50 (nM) Odbourání u myši, i .v. ml/min/kg Odbouráni u krys, i. v* ml/min/kg
428 280
429 7000
430 60 >80,00
431 8 >8000 8000
432 M . 560 20ÓÓ
433: 2,9 1000 11ÓÓ* .1100
434 4,3. : 1600 1200 : 1800 1300* 20
435., . 8 4 4 00
436 f5 270'0 :
437 12 1800 5000
438' 2,8 1000 700. 2900* 22
43$ ; 3,7 2800 3200 .3400*
4'40 2,3. . 5000 1 i 2000 1 1
441 1 2500 4500
442 3/2 900 ' 2000 54 .
443 3,6 2800 1500
444 15 35Ů0 3500
445 13.5 4000
i .1 446 63 1 3000 .. .. ... i 1 .. .
447 j 2500 1500 1
44 8 1.30 4 00.0
i 449 12 1500 3200 13000*
450 5 800 2200 1700* 18 12
451 4 1800 | ..... i 1500 9000*
l· 1 452 4,5 : 600 8Ó0‘ 650. j 1600* . . 1' 27 f 3
4 53; 0ř 65 1300 ; i 1900 1.600* 1
454 45 2500 ·
1' f L 455: V2 '400 1 i . 1 2800 2600* . 54
f i 1. 456 4,5 600 1300* CJX 0 0 OO 12,7
A 9 7ΠΠΠ í 3 ςηη
í t 458 I JO J 2900
-62CZ 298171 B6
Slouč. UV-vid. Ki (nM) Buňky PBMC prúm. IC50 (nM) Úplná lidská krev ICe$ (nM) Odbouráni u myší/ i. v. ml/min/kg Odbouráni u krys, i - v, ml/min/kg
459 5 1800
4 60 115 400 2400
461 47
4 62 40
463 14 24 00 2800’
464 2,5 1000 >1000 2-500*· 1
465 3. .1000. 300 --------------------------------------------------------------------------------------------------! .. 1
466 0,8 1400: 6.00
467 .11 1900
468 4/5 850 ! 2500
470 5 500 360 500* 6-3 i 1
471 1 7S.0 4 00 17 i
472 140 1
473 1 1000 400 1 450* 1 ! 1 1. i
474 Γ 85 i
475 5/5 690 650* .. 400 350* 1 31 21 : i
476 7 1600 2500 i
477 60 .. 1 1 i
478 380 i . 1
479 Ί5 900 700 2400* .
480 25 2300
481 V 390 930* 600 ...500* 34
482 <0; 2 340 - 380 2 60* I
483 .1/7 900: i 700 * i
4B4 ' 2 1550 1400* 5000 j 1'5
485 2 900 900.
486 273 480 570* 500 í 1 37
487 2,4 650 1 500 i 950* 1 400* 20
488 M 940 750 1
-63CZ 298171 B6
S10U5. uv-vid, Ki (nM) Buňky ?BMC přum. tňM) Úplná lidská krev ic5C (nM) Odbouráni ú myši^ i .v. ml/min/kg Odbouráni u krys, i .v. ml/min/kg
489 δ ! 2250 í 1700* 15000
490 j 9Š0 ’ 1ΟΌ0* ί 7ÓÓ ’ 1900* '
491 5 : 2500 :
I 493 í. 25 : 1200 800 850’ : ΐ ! 1 ! .'1.
494: 15 ” 1350 1500* 7000 1
4 95 43 J . í
496 16 1550 1600* . 6000 i' ř
1 497 3/5 740 ; . 350 i 700* 1 1
498 1/5 560 500 400* . 1 i i
499 3,5 1-20.0 ' ' 800* 9000 F i
605a ' 1 90' ' | 2600 >20000 . . J í
605b 45 .1 10000 97 | i
605c 615 4500. 37 1
605d 95 ' 5100 16000 5100* 33 i
605e 29 ... 2250 >10000 1 24
605 f 475 125.00 —— r 1 í 1
605g j 165 2.2500 .
605h | 460 | >25000
605i ,! 680 j >200001 ! .. ί
605j | ' 110 1 8750 1 71
• 60Sm 650 20000 ' i i 1
| 605n 12 2100' >2.0000 < 28 I
605ο 1 72 18000 !
605p 1 125 .320.0; >20.000 J (
60 5q 1000 1 J [ i.
605s 15° í. 6000· r í í , '
605t 33^
6.09á 114 >3.0000
609b 27 J >20000 j
619 300 í: I 1
620 j 35 .·] 1000 i 19000 ...
-64CZ 298171 B6
Sloce. uv-vid. Ki (nM) Buňky PBMC průnu ic50 (nM) Úplná lidská krev IC50 (nM) Odbourání u myší, i . v. ml/min/kg Odbouráni u krys , i 4 v. ml/min/kg
1 ζ·2í : .1.300. >20000.
Ξ22 1 -55 1300 >20000
523 ; 9. '
524’ 300 - í
i 625 105 i 1
626 2 60 1 l 1
627 4.3 3250 8000 í
628 36 . 275Ό >20000; i' 1 j
629 230 1
630 270
631 - < 30.5 1 .. 1 .
i 632 ! 148 1 . J i- 1'
i . 633 .. ; 52 5750 2:0000 |
I 634 ! . 1400 | . 1
' 635 1 ! ;i 55 i 1900 3.4 00* 4000
! 605v i 1100: : >30000
í 2201. | -....... .. '9 2000 3700* 3500' 60
: 210Óe i 250 | '80.0 i .600.
i 2100a | 100 · iioo | 850
l '200'2 í i 1 4 810 8'60'* 7.0 1400* . ---------------a--------- 32
• 2100d (: >100000.·. >20000 >20000 j.
1 2100c l 7400 | >20000 >20000 Í ] .1
? 2100b I 8CC0 I >20000 >20000 . i
2001 j 135 :! 1800 .3500· i i 1 3
’ 1027 ! 4000 í >20000 >20000 ! 60
i: 1015 j U U4 ________L_ 40. i 2500 .1700 j. í 23
-65CZ 298171 B6
Tabulka 6
Slouč. Fluorescenční test kjnact M“1 s'1 Buňky PBMC prům. !C50(nM) Úplná lidská krev IC50(nM) Odbourání u myší i. v. ml/min/kg Odbourání u krys i. v. ml/min/kg
108a íxlÓ3 17500
136 5,4x10’ 870 2800 93
138 1,2x10’ 900 2900 116
217d 1 4,7x10’ 340 4000
280 4x10’ 650 >1000 187
283 ÍxlÓ5 <200 450 104
284 3,5x10’ 470 550 77 100
285 4,3x105 810 1000 130 50
♦Hodnoty získané při opakovaném testu
Příklad 10
Sloučenina 139 se připraví pomocí postupu, který je podobný postupu použitému pro přípravu sloučeniny 47a.
O
Sloučeniny 136 a 138 se připraví pomocí postupu, který je podobný postupu použitému pro přípravu sloučeniny 57b.
Sloučeniny 135a, 135b a 137 se připraví pomocí postupu, který je podobný postupu použitému ------pro-přípravu-sloučeniny-69a;-----------------66CZ 298171 B6
Sloučeniny 813e, 814c, 814e, 817c, 817d, 817e, 820b, 823,b, 823e, 626e, 827e, 830e, 832e, 835e, 838e, 846, 857, 865, 902, 904a, 907a, 907b, 1004-1013, 1015-1045, 1046-1068, 1070-1091, a 1093-1099 se připraví pomocí postupu, který je podobný postupu použitému pro přípravu sloučeniny 264 a odpovídajících sloučenin v příkladech 10 a 11.
Sloučeniny 47a, 47b, 108a, 108b, 125b, 213e, 214c, 217c, 217d, 217e, 220b, 223b, 223e, 226e, 227e, 230e, 232e, 235e, 238e, 246, 257, 264, 265, 280-287, 302, 304a, 307a, a 307b se připraví tak, jak je popsáno níže.
H. N-(N-Acetyl-tyrosinyl-valinyl-pipekolyl)-3-amino-4—oxobutanová kyselina
Krok A. N-(N-terc.Butoxykarbonylpipekolyl)-4-amino-5-benzyloxy-2-oxotetrahydrofuran
Analogickým způsobem jako popsal Chapman (Bioorg. and Med. Chem. Lett. 1992, 2, 613 - 618) se provede reakce 460 mg (2,0 mmol) N-terc.butoxykarbonylpipekolové kyseliny a 530 mg (1,82 mmol) N-allyloxykarbonyl-4-amino-5-benzyloxy-2-oxotetrahydrofuránu, čímž se získá 654 mg sloučeniny uvedené v názvu.
'H-NMR (500 MHz, deuterochloroform (existuje jako rotameryl)), hodnoty δ: 7,35 (m, 5H), 6,88 (široký s, IH), 4,9 - 4,45 (m, 4H), 3,95 (široký m, 2H), 3,06 (m, IH), 2,9 (m, IH), 2,7 (široký m, IH), 2,45 (m, IH), 2,2 (m, IH), 1,7 - 1,5 (m, 3H), 1,45 (dva s, 9H)
Krok B. N-Pipekolyl-4-amÍno-5-benzyloxy-2-oxotetrahydrofuran
654 mg N-(N-terc.butoxykarbonylpipekolyl)-4-amino-5-benzyloxy-2-oxotetrahydrofuranu se rozpustí v 15 ml 25% kyseliny trifluoroctové v dichiormethanu a směs se míchá při teplotě místnosti-Směs-sezahustÍ7čímžsezíšlčá gumovityžbýťělCTento úbytek se rozpustí v dichiormethanu a promyje se 10% hydrogenuhličitanem sodným. Organická vrstva se vysuší nad
-67CZ 298171 B6 bezvodým síranem sodným, zfiltruje se a zahustí, čímž se získá 422 mg sloučeniny uvedené v názvu ve formě béžové pevné látky.
'H-NMR (500 MHz, deuterochloroform), hodnoty δ: 7,38 (m, 5H), 7,15 (d, 1H), 5,55 (d, 1H), 4395 - 4,8 (m, 1H), 4,78 (m, 1H), 4,65 (d, 1H), 4,45 (m, 1H), 3,2 (m, 0,5H), 3,05 (m, 0,5H), 2,95 (m, 0,5H), 2,85 (m, 0,5H), 2,65 (m, 1H), 2,55 - 2,38 (m, 1H), 1,95 (m, 1H), 1,8 (m, 1H), 1,6 (m, 2H), 1,38 (m, 2H)
KrokC. N-(N-AcetyltyrosinylvalinylpÍpekolyl)-4-amino-5-benzyloxy-2-oxotetrahydrofuran
464 mg (1,44 mmol) N-acetyltyrosinylvalinu a 412 mg (1,3 mmol) N-pipekolyM-amino-5benzyloxy-2-oxotetrahydrofuranu se rozpustí ve směsi 5 ml dimethylformamidu a 5 ml dichlormethanu a směs se ochladí na teplotu 0 °C. K ochlazenému roztoku se přidá 210 mg (1,56 mmol) 1-hydroxy-benzotriazolu (HOBT) a poté 326 mg (1,7 mmol) l-(3-dimethylamínopropyl)-3ethylkarbodiimidhydrochloridů (EDC). Směs se míchá po dobu 18 hodin, poté se naředí ethylacetátem, promyje se vodou, 10% hydrogensíranem sodným, 10% hydrogenuhličitanem sodným a znovu vodou. Organická vrstva se zahustí, čímž se získá surová pevná látka, která se vyčistí pomocí velmi rychlé chromatografie na silikagelu za použití směsi dichlormethanu, izopropanolu a pyridinu v poměru 94 : 6 : 1 jako elučního činidla, čímž se získá 370 mg sloučeniny uvedené v názvu.
'H-NMR (500 MHz, perdeuteromethanol (existuje jako diastereomery jakož i rotamery)), hodnoty δ: 7,35 (m, 5H), 7,05 (m, 2H), 6,68 (m, 2H), 5,65 a 5,25 (m, 1H), 4,9-3,95 (m, 8H),
3.4- 2,6 (m, H), 2,5-2,1 (m, 1H), 1,98 (s, 1H), 1,9 (s, 1H), 1,85 (s, 1H), 1,8- 1,6 (m,2H),
1,55 - 1,3 (m, 4H), 0,95 - 0,85 (m, 6H)
Krok D. N£N-Acetyltyrosinylvalinylpipekolyl)-3-amino-4-oxobutanová kyselina
K roztoku 100 mg N-(N-acetyltyrosinylvalmylpipekolyl)-4-amino-5-benzyloxy-2-oxotetrahydrofuranu v 10 ml methanolu se přidá 60 mg hydroxidu paladnatého na uhlí a směs se udržuje ve vodíkové atmosféře. Směs se zfiltruje přes celit a zahustí, čímž se získá bílá pevná látka. Tato surová pevná látka se rozpustí ve 2 ml methanolu a trituruje se s diethyletherem, čímž se získá 26 mg sloučeniny uvedené v názvu.
]H-NMR (500 MHz, perdeuteromethanol (existuje jako diastereomery jakož i rotamery)), hodnoty δ: 7,1 (m, 2H), 6,7 (m, 2H), 5,2 (široký m, 1H), 4,8-3,6 (m, 6H), 3,2 - 2,5 (m, 4H),
2.5- 2,1 (m, 1H), 1,95 (tri s, 3H), 1,9-1,3 (m, 6H), 1,1-0,7 (m, 6H)
K. N-[N-Acetyltyrosinylvalinyl-(4-benzyloxy)prolinyl]-3-amino-4-oxobutanová kyselina
Krok A. Semikarbazon terc.butylesteru N-(N-allyloxykarbonyl-4-bcnzyloxyprolinyl)-3amino-4-oxobutanové kyseliny
Sloučenina uvedená v názvu se připraví reakcí N-allyloxykarbonyM-benzyloxyprolinu a semikarbazonu terc.butylesteru 3-amino-4~oxobutanové kyseliny (T. L. Graybill a kol., Abstracts of papers, 206* National Meeting of the Američan Chemical Society, Abstract MEDI-235, Chicago, IL, USA (1993)) za podobných podmínek kondenzace peptidu jako jsou uvedeny výše v případě sloučeniny H, stupeň C.
'H-NMR (500 MHz, deuterochloroform) hodnoty 6: 9,05 (široký s, 1H), 7,85 (širokým, 1H),
7,4-7,2 (m, 5H), 7,15 (široký s, 1H), 6,55 (široký s, 1H), 5,9 (m, 1H), 5,1 - 4,9 (široký m, 2H),
4,65 - 4,4 (m, 4H), 4,2 (širokým, 1H), 3,75 - 3,5 (m.2HL2,7.5^.2.55,(m..2H).-2*5-(široký-m. 1Ή), 272'5 (široký m, 1H), 1,4 (s, 9H)
-68CZ 298171 B6
Krok B, Semikarbazon terc.butylesteru-N-(N-acetyltyrosinylvalinyl-(4-benzyloxyprolinyl)-3amino-4-oxobutanové kyseliny
Sloučenina uvedená v názvu se připraví reakcí N-acetyltyrosinylvalinu a semikarbazonu terc.butylesteru-N-(N-allyloxykarbonyl—4—benzyloxyprolinyl)-3-amino~4-oxobutanové kyseliny za reakčních podmínek uvedených v případě sloučeniny H, stupeň A.
lH-NMR (500 MHz, perdeuteromethanol), hodnoty 6: 7,35 - 7,2 (m, 6H), 7,0 (d, 2H), 6,65 (d, 2H), 4,85 (m, IH), 4,6 - 4,45 (m, 4H), 4,3 (široký m, 1H), 4,15 (m, IH), 3,7 (m, IH), 2,95 (m, IH), 2,75-2,6 (m,3H), 2,35 (m, IH), 2,1 (m, IH), l,9(s,3H), l,4(s,9H), 0,95 (d,3H), 0,90 (s,3H)
Krok C. N-(N-Acctyltyrosinylvalinyl~(4-benzyloxyprolinyl))-3-amino—4—oxobutanová kyselina
270 mg semikarbazonu terc.butylesteru N-(N-acetyltyrosinylvalinyl-(4-benzyloxyprolinyl))-3amino-4-oxobutanové kyseliny se rozpustí v 10 ml 25% kyseliny trifluoroctové vdichlormethanu a směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 3 hodin. Směs se zahustí, čímž se získá pevný zbytek. Tento zbytek se rozpustí v 10 ml směsi methanolu, kyseliny octové a 37% formaldehydu v poměru 3:1:1a směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 1 hodiny. Směs se zahustí a výsledný zbytek se vyčistí pomocí velmi rychlé chromatografie na silikagelu za použití směsi dichlormethanu, methanolu a kyseliny mravenčí v poměru 100:5 : 0,5 jako elučního činidla, čímž se získá 37 mg, sloučeniny uvedené v názvu.
’Η-NMR (500 MHz, perdeuteromethanol (existuje jako směs diastereomerů hemiacetalu v poměru 1:1)), hodnoty δ: 7,4 - 7,25 (m, 5H), 7,0 (d, 2H), 6,65 (d, 2H), 4,65 - 4,05 (m„ 7H),
3,75 - 3,4 (m, 2H), 3,05 - 2,3 (m, 5H), 2,2 - 1,95 (m, 2H), 1,90 (s, 3H), 1,0 (d, 3H), 0,95 (d, 3H)
(a) X = o (Η) X = ft2
Sloučemna (44a.) K roztoku 690 mg (2,32 mmol) (1S,9S)-terc.butyl-9-amino-6,10-dioxookta30---hydro=6H^pyriďážiňó[i;2=á][i;2]'diážěpiřHl-kářboxýlátu (GB 2128984) v 16 ml dioxanu a 4 ml vody se při teplotě 0 °C přidá 292 mg (3,48 mmol) pevného hydrogenuhličitanu sodného a poté se po kapkách přidá 470 mg (2,78 mmol) 3-fenylpropionylchloridu. Směs se míchá při teplotě
-69CZ 298171 B6 místnosti po dobu 2 hodin a poté se přidá dalších 200 mg (2,38 mmol) hydrogenuhličitanu sodného a 100 mg (0,6 mmol) 3-fenylpropionylchIoridu. Směs se míchá po dobu dalších 2 hodin při teplotě místnosti, naředí se 50 ml ethylacetátu, promyje se dvakrát vždy 25 ml nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného, poté se vysuší síranem hořečnatým a zahustí. Zbytek se vyčistí velmi rychlou chromatografíí za použití 0 až 50% ethylacetátu v chloroformu jako elučního činidla a poté se vykrystaluje triturováním s etherem, čímž se získá 860 mg (86 %) bílé pevné látky o teplotě tání 137 až 138 °C.
[a]D 23 -95, Γ (c = 0,549, dichlormethan)
Infračervené spektrum (KBr); 3327, 1736, 1677, 1664,1536, 1422, 1156 1 H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,24 (5H, m), 6,50 (IH, d, J = 7,5), 5,24 (IH, m), 4,90 (IH, m), 4,60 (1H, m), 3,44 (IH, m), 2,93 (2H, m), 2,84 (IH, m), 2,64 (IH, m), 2,54 (2H, m),
2,26 (2H, m), 1,70 (4H, m), 1,70 (9H, s)
Hmotová spektrometrie (FAB, m/z): 430 (M‘ + 1), 374, 242, 105, 91
Sloučenina (44b) (1 S,9S)-terc.butyloktahydro-l 0-oxo-9-(3-fenylpropionylamino)-6H-pyridazino[l,2-a][l,2]diazepin-l-karboxylát se připraví z (1 S,9S)-terc.butyl-9-amino-10~oxo-6Hpyridazino[l,2-a][l,2]diazepin-l-karboxylátu (Attwood a kol., J. Chem. Soc. Perkin 1, str. 1011 - 19 (1986)) způsobem jako v případě sloučeniny 44a, čímž se získá 810 mg (81 %) bezbarvého oleje.
[cc]D 23 -33,5° (c = 0,545, dichlormethan)
Infračervené spektrum (film): 3334,2935, 1737, 1728, 1659, 1642 'H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,24 (5H, m), 6,75 (1H, d, J = 6,7), 5,27 (1H, m), 4,92 (IH, m), 3,39 (IH, m), 3,03 (4H, m), 2,55 (3H, m), 2,33 (IH, m), 2,17 (IH, m), 1,80 (5H, m), 1,47 (9H, s), 1,39 (IH,m)
Hmotová spektrometrie (FAB, m/z): 416 (XT + 1), 360,211, 143, 97
Sloučenina (45a) (1 S,9S)-6,10-Dioxooktahydro-9-(3-fenylpropionylammo)-6H-pyridazino[ 1,2—a] [ 1,2] d i azep in-1 -karboxylová kyselina
K roztoku 800 mg (1,863 mmol) (lS,9S)-térc.butyl-6,10-dioxooktahydro~9-(3-fenylpropionyIamino)-6H-pyridazino-[l,2-a][l,2]diazepin-l-karboxylátu (sloučeniny 44a) v 5 ml kyseliny trifluoroctové. Roztok se míchá při teplotě místnosti po dobu 3 hodin a poté se zahustí. Ke zbytku se přidá 10 ml suchého etheru a poté se ether odstraní ve vakuu. Tento postup se třikrát opakuje, čímž se získá krystalická pevná látka. Tato pevná látka se trituruje s etherem a zfiltruje, čímž se získá 590 mg (85 %) bílé krystalické pevné látky o teplotě tání 196 až 197,5 °C.
Md23 -129,5° (c = 0,2, methanol)
Infračervené spektrum (KBr): 3237, 1729, 1688, 1660, 1633, 1574, 1432, 1285, 1205 ‘H-NMR (perdeuteromethanol), hodnoty δ: 8,28 (IH, d, J= 7,4), 7,22 (5H, m), 5,32 (IH, dd, J = 5,9,2,9), 4,75 (IH, m).4,51 (IH, m),3,50 (IH, m), 3,01 (1H, m), 2,91 (2H, m), 2,55 (2H, m), 2,29 (3H, m), 1,95 (2H, m), 1,71 (2H, m)
Analýza pro C ^23^()5:
vypočteno: 61,12 % C, 6,21 % Η, 11,25 % N;
-70UZ 298171 B6 nalezeno: 60,80 % C, 6,28 % H, 10,96 % N.
Hmotová spektroskopie (FAB, m/z): 374 (M+ + 1), 242,105,91
Sloučenina (45b) (1 S,9S)-Oktahydro~10-oxo~9-(3-fenylpropionylamino)-6H-pyridazino[l,2a][l,2]diazepin-l-karboxylová kyselina se připraví z (lS,9S)-terc.butyloktahydro-10-oxo-9(3-fenylpropionylamino)-6H-pyridazino[l,2-a][l,2]diazepin-l-karboxylátu (sloučeniny 44b) způsobem popsaným v případě sloučeniny 45a, čímž se získá 657 mg (96 %) sloučeniny 45b jako krystalické pevné látky o teplotě tání 198 až 202 °C.
[a]D 23 -86,2° (c = 0,5, methanol)
Infračervené spektrum (KBr): 3294,2939, 1729, 1645, 1620, 1574, 1453, 1214 ]H-NMR (perdeuteromethanol), hodnoty δ: 7,92 (IH, d, J = 7,9), 7,20 (5H, m), 5,29 (IH, m),
4,90 (IH, m), 3,47 (IH, m), 3,08 (2H, m), 2,90 (2H, m), 2,55 (3H, m), 2,36 (IH, m), 1,81 (5H, m), 1,43 (2H, m)
Hmotová spektroskopie (FAB, m/z): 360 (M+ + 1), 211143, 91
Sloučenina (46a) [3S, 2R,S, (lS,9S)]-N-(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yI)-6,10-dioxooktahydro-9-(3-fenylpropiony lamino)-6H-pyridazino[ 1,2-a] [ 1,2]diazepin-1 -karboxamid
K roztoku 662 mg (1,773 mmol) (lS,9S)-6,10-dioxooktahydro-9-(3-fenylpropionylamino·)6H-pyridazino[l,2-a][l52]diazepin-l-karboxylové kyseliny (sloučeniny 45a) v 9 ml suchého dichlormethanu a 3 ml suchého dirnethylformamidu se při teplotě místnosti přidá 30 mg bis(trifenylfosfin)palladiumchloridu a 568 mg (1,95 mmol) (3S, 2R,S)-3-allyloxykarbonylamino2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuranu (Chapman, Biorg. Med. Chem. Lett., 2, str. 613- 18 (1992)) a poté se po kapkách přidá 1,19 g (4,09 mmol) tri-n-butylcínhydridu. Ke směsi se přidá 479 mg (3,546 mmol) 1-hydroxybenzotriazolu, směs se ochladí na teplotu 0 °C a poté se přidá 408 mg (2,128 mmol) l-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimidhydrochloridu. Směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 3,25 hodiny, poté se naředí 50 ml ethylacetátu, promyje se dvakrát 20 ml zředěné kyseliny chlorovodíkové, dvakrát 20 ml nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a jednou roztokem chloridu sodného, poté se vysuší síranem hořečnatým a zahustí. Výsledný olej se vyčistí velmi rychlou chromatografií za použití 0 až 100% ethylacetátu v chloroformu jako elučního činidla, čímž se získá 810 mg (81 %) sloučeniny 46a ve formě směsi anomerů o teplotě tání 92 až 94 °C.
Infračervené Spektrum (KBr): 3311,1791, 1659, 1651, 1536 'H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,49, 6,56 (IH, 2d, J - 6,7, 7,8), 7,29 (10H, m), 6,37,
6,18 (IH, 2d, J= 7,7, 7,6), 5,56, 5,34 (IH, d, s, J = 5,2), 5,08- 4,47 (6H), 3,18-2,80 (5H), 2,62 - 2,28 (5H), 2,04 - 1,53 (5H)
Hmotová spektroskopie (FAB, m/z): 563 (M+ + 1), 328, 149, 91
Sloučenina (46b) [3S, 2R,S, (lS,9S)]-N-(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)oktahydro10-oxo-9-(3-fenylpropionylamino)-6H-pyridazino[ 1,2-a][ 1,2]diazepin-l-karboxamid se připraví ze sloučeniny 45b způsobem popsaným v případě sloučeniny 46a, čímž se získá 790 mg (96 %) sklovité látky o teplotě tání 58 až 60 °C.
Infračervené spektrum (KBr): 3316,2940, 1793,1678, 1641, 1523, 1453, 1120 'H-NMR‘(děňtěÍOČhloroforrn), hodnoty δ: 7,28 (10H, m), 6,52, 6,42 (1H, 2d, J = 7,2, 7,1), 5,53,
5,44 (IH, d, s, J= 5,2), 5,35 (IH, m), 4,6- 4,9, 4,34 (4H, m), 3,1 - 2,8 (6H,m), 2,6- 2,1 (7H), 1,95-1,05 (5H)
C£ 295171 B6
Hmotová spektroskopie (FAB, m/z): 549 (M+ + 1), 400,310,279, 91
Sloučenina (47a) [3S,(1 S,9S)]-3-(6,10-dioxooktahydro-9-(3-fenylpropionylamino)-6Hpyridazinof 1,2-a][ 1,2]diazepin-I-karboxamido)-4-oxobutanová kyselina
Směs 205 mg (0,364 mmol) [3S, 2R,S, (lS,9S)]-N“(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)-
6,10-dioxooktahydro-9-(3-fenylpropionylamino)-6H-pyridazino[ 1,2-a][ 1,2]diazepin-l-karboxamidu (sloučeniny 46a), 10% palladia na uhlí (200 mg) a 20 ml methanolu se míchá v atmosféře vodíku za atmosférického tlaku po dobu 5 hodin. Směs se zfiltruje a poté se zahustí, čímž se získá 154 mg (90 %) sklovité látky o teplotě tání 116 až 118 °C.
[<x]D 23 -140° (c = 0,1, methanol)
Infračervené spektrum (KBr): 3323 (široký signál), 1783,1731, 1658, 1539, 1455, 1425 ‘H-NMR (perdeuteromethanol), hodnoty δ: 7,21 (5H, m), 5,17 (IH, m), 4,73 (lH,m), 4,50 (2H,m), 4,23 (IH, m), 3,38 (lH,m), 3,06 (IH, m), 2,91 (2H, m), 2,73 - 2,18 (6H, m), 2,01-1,59 (5H, m)
Analýza pro C23H27N4O7 + H2O:
vypočteno: 56,32 % C, 6,16 % Η, 11,42 % N; nalezeno: 56,29 % C, 6,11 % Η, 11,25 % N.
Hmotová spektroskopie (FAB, m/z): 473 (M+ + 1), 176, 149, 105,91
Sloučenina (47b) [3S,(1 S,9S)]-3-(oktahydro-10-oxo-9-(3-fenylpropionylamino)-6H-pyridazino[l,2-a][l,2]diazepin-l-karboxamido)—4-oxobutanová kyselina se připraví ze sloučeniny 46b způsobem popsaným v případě sloučeniny 47a. Zbytek se vyčistí velmi iychlou chromatografií za použití 0 až 10% methanolu v chloroformu jako elučního činidla, čímž se získá 65 mg (52 %) sklovité látky o teplotě tání 87 až 90 °C.
[a]D 23 -167,0° (c = 0,1, methanol)
Infračervené spektrum (KBr): 3329, 2936, 1786, 1727, 1637 ’H-NMR (perdeuteromethanol), hodnoty δ: 7,23 (5H, m), 5,29 (IH, m), 4,83 (IH, m), 4,59 (IH, d, J = 3,6), 4,29 (1H, m), 3,3 - 3,0 (3H, m), 2,91 (2H, m), 2,70 - 2,34 (5H, m), 2,19 (2H, m),
1,75 (4H, m), 1,36 (2H, m)
Analýza pro C23H3oN406 + 0,5H2O:
vypočteno: 59,09 % C, 6,68 % Η, 11,98 % N; nalezeno: 58,97 % C, 6,68 % H, 11,73 % N.
Hmotová spektroskopie (FAB, m/z): 459 (M+ + 1), 310, 149, 105, 91.
-72CZ 298171 B6
R2 R3
Ri ΐ
(a) (b)
H <H2:Ph.
Sloučenina (56a), terč. butyl-N-2-(3-benzyloxy karbony lam i no-1,2-dihydro-2-oxo-l-pyridyl)acetyl-3-amino-5-(2,6-<lichlorbenzoyloxy)-4-Oxopentanoát
Octová kyselina 55a (WO 93 21213) ve 2 ml tetrahydrofuranu se míchá při teplotě místnosti a přidá se 60 mg (0,448 mmol) 1-hydroxybenzotriazolu a 47 mg (0,246 mmol) dimethy laminopropyl-3-ethylkarbodiimidu hydrochloridu. Po uplynutí 5 minut se přidají 2 kapky vody a v míchání se pokračuje po dobu 20 minut. Přidá se 6 mg bis(trifenylfosfin)palladium(II)chloridu a poté roztok 103 mg (0,224 mmol) terc.butyl-3-(allyloxykarbonylamino)-4-oxo-5-(2,6“dichlorbenzoyloxy)pentanoátu (WO 93 16710) v 1 ml tetrahydrofuranu. V průběhu 1 hodiny se při teplotě místnosti po kapkách přidá 0,09 ml (0,336 mmol) tributylcínhydridu, Směs se míchá po dobu dalších 3 hodin a vylije se do ethylacetátu, promyje se IM kyselinou chlorovodíkovou, vodným hydrogenuhličitanem sodným a roztokem chloridu sodného, vysuší se nad síranem hořečnatým a zahustí ve vakuu. Zbytek se trituruje s pentanem a supernatant se odstraní. Zbylá pevná látka se vyčistí velmi rychlou chromatografií za použití 50% ethylacetátu v hexanu jako elučního činidla, čímž se získá 92 mg (63 %) sloučeniny uvedené v názvu ve formě bezbarvého oleje.
[a]D 26 -29,6° (c - 1,1, dichlormethan)
Infračervené spektrum (film): 3377, 3365, 3332, 3312, 1733, 1691, 1650, 1599, 1515, 1366, 1261, 1153, 1068,747 'H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 8,09 (IH, d, J = 6,8), 7,84 (IH, s), 7,58 (IH, d, J = 8,3), 7,33 (8H, m), 7,02 (IH, dd, J = 6,9, 1,7), 6,33 (IH, t, J = 7,2), 5,20 (2H, s), 5,12 (2H, m), 4,89 (IH, dt), 4,65 (2H, m), 2,80 (2H, m), 1,38 (9H, s)
Sloučenina (56b), terc.butyl-N-2-(6-bcnzy[-l,2-dihydro-2-oxo-3-(3-fenylpropionyl)aminol-pyridyl)acetyl-3-amino-5-(2,6-dichlorbenzyloxy>-4-oxopentanoát se připraví způsobem popsaným v případě sloučeniny 56a, přičemž se získá sloučenina uvedená v názvu s výtěžkem 66 % ve formě bezbarvého oleje.
Infračervené spektrum (film): 3364, 3313, 1738, 1688, 1648, 1600, 1566, 1514, 1433, 1369, 1254, 1152 lH-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 8,40 (IH, d, J = 7,6), 8,30 (IH, s), 7,28 (13H, m), 6,20 (IH, d, J = 7,6), 5,12 (2H, q), 4,86 (IH, m), 4,65 (2H, q), 4,06 (2H, s), 3,07-2,61 (6H, m), 1,39 (9H-s)-----------------------------73UZ 298171 B6
. ργή* fC°2Ho Ci
Η 0 Ř? Η O c(IJj
Rl O Ř3
(4) H· H
O Ji (b) PaCHCH£'' -CHj-Ph ,H
Sloučenina (57a, O), N-2-(3-benzyloxykarbonyIamino-l,2-dihydro-2-oxo-l-pyridyI)-acetyl3-amino-5-(2,6-dichlorbenzoyloxy)-4-oxopentanová kyselina
210 mg (0,356 mmol) esteru 56a v 0,5 ml dichlormethanu se ochladí na teplotu 0 °C a přidá se 0,5 ml kyseliny trifluoroctová. Směs se míchá po dobu 30 minut, v jejichž průběhu se zahřeje na teplotu 20 °C. Roztok se odpaří do sucha za sníženého tlaku, znovu se rozpustí v dichlormethanu a zahustí. Tento postup se provádí třikrát. Zbytek se trituruje s ethylacetátem a naředí etherem, čímž se získá 162 mg (85 %) sloučeniny uvedené v názvu ve formě bezbarvé pevné látky, tající za rozkladu při teplotě 165 až 168 °C.
[a]D 23 -38,8° (c = 0,1, methanol)
Infračervené spektrum (KBr): 3332, 3275,4723, 1658, 1649, 1597, 1581, 1562, 1526, 1432, 1385, 1258, 1218, 1206 'H-NMR (deuterodimethylsulfoxid), hodnoty δ: 8,96 (IH, d, J = 7,3), 8,34 (IH, s), 7,85 (1H, dd, J= 7,3), 7,58 (3H, m), 7,35 (5H, m), 6,29 (IH, t, J = 7,3), 5,26 (2H, m), 5,15 (2H, s), 4,69 (3H, m), 2,75 (2H, m)
Analýza pro C27H23N3O9C12:
vypočteno: 53,66 % C, 3,84 % H, 6,95 % N;
nalezeno: 53,36 % C, 3,90 % H, 6,81 % N.
Hmotová spektroskopie (+ FAB): 604 (Μ* + 1), 285,241,195, 173, 149, 91
Sloučenina (57b, P) N-2-(6-benzyl-l,2-dihydro-2-oxo-3-(3-fenylpropionyl)amino-l“pyridyl)acetyl-3-amino-5-(2,6-dichIorbenzoyloxy)-4-oxopentanová kyselina se připraví způsobem popsaným v případě sloučeniny 576a, přičemž se získá sloučenina uvedená v názvu s výtěžkem 78 % ve formě bezbarvých krystalů tajících za rozkladu při teplotě 116 až 120 °C.
[a]D 36 -41, Γ (c = 0,1, methanol)
Infračervené spektrum (KBr): 3299, 1739, 1715, 1689, 1666, 1645, 1598, 1563, 1518, 1432, 1209, 1151
-H-NMR-(perdeuterodimethylsulfoxid)rho'dnoty“&:-9;2'4 (ΓΗ, s), 8ξ88 (ÍH, d, J = 7,6), 8,18 (lH,d, J = 7,7), 7,60 (3H, m), 7,26 (10H, m), 6,06 (IH, d, J= 7,7), 5,23 (2H, ABq), 4,69 (3H, m), 3,93 (2H, s), 2,78 (6H, m)
- 74CZ 298171 B6
Analýza pro Cj^HjiNjO^Cb.HjO;
vypočteno: 59,16 % C, 4,68 % H, 5,91 % N;
nalezeno: 59,38 % C, 4,53 % H, 5,84 % N.
Hmotová spektrometrie (+ FAB): 694 (Cl = 35,37), (M+ + 1), 692 (Cl = 35,35) (Μ* + 1)
o (a) R1 = och3, R2 = H (b) R1 = H, R2 = 0CH3
Sloučenina (65a). Směs 2,62 g (15,5 mmol) 2-nitro-6-methoxyfenolu (EP 333176) a 10% palladia na uhlí (130 mg) v 50,0 ml ethanolu se míchá v atmosféře vodíku po dobu 75 minut.
io Směs se zfiltruje přes křemelinu a bezprostředně poté se k ní přidá 32,0 mg p-toluensulfonové_______________ kyselinya-6;45ml(38;8mmol)-tfiětliylóřtlioformíátu. Poté se směs zahřívá k varu pod zpětným chladičem v atmosféře dusíku. Po 20 hodinách se přidá 30,0 mg o-toluensulfonové kyseliny a
6,45 ml (38,8 mmol) triethylorthoformiátu. Po celkové době zahřívání 44 hodin se reakční směs
-75CZ 298171 B6 nechá vychladnout a zahustí se ve vakuu. Výsledný zbytek se vyčistí velmi rychlou chromatografií za použití směsi ethylacetátu a hexanu v poměru 25 : 75 jako elučního činidla, čímž se získá 1,97 g (85 %) sloučeniny uvedené v názvu ve formě žluté pevné látky o teplotě tání 28 až 31 °C.
Infračervené spektrum (film); 1629, 1497, 1434, 1285, 1097 ‘H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 8,09 (IH, s), 7,40 (IH, d, J= 8,0), 7,28 (IH, t, J - 8,0), 6,89 (IH, d, J = 8,0), 4,02 (3H, s) ’3C-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 152,84, 145,82, 142,50, 139,99, 125,75, 113,42, 108,80, 56,97
Analýza pro CgfyNjC^AlHaO·.
vypočteno: 63,65 % C, 4,81 % H, 9,29 % N; nalezeno: 63,43 % C, 4,88 % H, 9,05 % N.
Hmotová spektrometrie (+ FAB): 150 (M+ 4- 1)
Sloučenina 65b, 4-methoxybenzoxazol
K suspenzi 2,00 g (14,8 mmol) 4-hydroxybenzoxazolu (Musser a kol., J. Med. Chem,, 30, str. 62-67 (1987)) v 80,0 ml acetonu se přidá 2,25 g (16,3 mmol) vysušeného uhličitanu draselného a poté 1,38 ml (22,2 mmol) jodmethanu. Reakční směs se zahřívá k varu pod zpětným chladičem v atmosféře dusíku po dobu 4,5 hodiny, poté se zfiltruje a zahustí ve vakuu, čímž se získá surový produkt. Výsledný zbytek se vyčistí velmi rychlou chromatografií za použití směsi ethylacetátu a hexanu v poměru 25 : 75 jako elučního činidla, čímž se získá 2,0 g (91 %) sloučeniny uvedené v názvu ve formě bílé kiystalické pevné látky o teplotě tání 72 až 74 °C.
Infračervené spektrum (KBr); 3089, 1619, 1610, 1503, 1496, 1322, 1275,1090, 1071, 780, 741 'H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 8,02 (IH, s), 7,32 (IH, t, J= 8,0), 7,18 (IH, d, J = 8,0), 6,81 (IH, d, J = 8,0), 4,04 (3H, s)
Analýza pro CďfNCf:
vypočteno: 64,42 % C, 4,73 % H, 9,39 % N; nalezeno: 64,40 % C, 4,84 % H, 9,31 % N.
Hmotová spektrometrie (m/z; El, ionizace nárazem elektronů): 149 (M+ + 1, 100 %)
Sloučenina 66a, (3S, 4R,S)-terc.buty]-N-(allyloxykarbonyl)-3-amino-4-hydroxy-4-(2-(7methoxybenzoxazolyl))butanoát
K míchanému roztoku 548,6 mg (3,68 mmol) 7-methoxybenzoxazolu 65a v 18,5 ml bezvodého tetrahydrofuranu se při teplotě -78 °C v atmosféře dusíku po kapkách přidá 2,47 ml 1,56M roztoku n-butyllithia v hexanech (3,86 mmol), za vzniku žlutě zbarveného roztoku. Směs se míchá při teplotě -78 °C po dobu 20 minut a poté se přidá 1,045 g (4,05 mol) suchého MgBr20ethyl2 ve formě pevné látky. Výsledná heterogenní směs se zahřeje na teplotu -45 °C a míchá se po dobu 15 minut. Reakční směs se poté znovu ochladí na teplotu -78 °C a po kapkách se přidá roztok 946,4 mg (3,68 mmol) (S)-alÍyloxykarbonyl-Asp(terc.butyl)Hlb v 18,5 ml tetrahydrofuranu. Reakční směs se míchá při teplotě -78 °C po dobu 30 minut, zahřeje se na teplotu 0 °C a míchá se po dobu 1 hodiny. Výsledná homogenní reakční směs se zahřeje na teplotu .místnosti-a-míchá-se-po-dobu-16-hodin-Krreakčnrsměsi“se“přidá_3;5“ml_5%rózťólarliyclřogěřl·7 uhličitanu sodného a poté se ve vakuu odstraní tetrahydrofuran. Výsledný vodný zbytek se extrahuje šestkrát methylenchloridem. Smíchané extrakty se promyjí roztokem chloridu sodného,
-76CZ Z98I71 B6 vysuší se síranem horečnatým, zfiltrují a zahustí ve vakuu, čímž se získá 1,8 g surového produktu. Velmi rychlou chromatografií za použití směsi ethylacetátu a hexanu v poměru 40 : 60 se získá 1,21 g (81 %) sloučeniny uvedené v názvu ve formě oleje, jako směsi diastereoizomerů na uhlíku C-4.
Infračervené spektrum (dichlormethan): 3425, 2983, 1725, 1504, 1290, 1157, 1101 'H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ; 7,35 - 7,19 (2H, m), 6,89 - 6,81 (IH, m), 6,00 - 5,57 (2H, m), 5,32- 5,05 (3H, m), 4,68- 4,35 (3H, m), 4,01 (3H, s), 2,86-2,59 (2H, m), 1,45 (9H, s), 1,41 (9H, s) ,3C-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 171,18, 171,09, 165,80, 165,30, 156,71, 156,60,145,65, 142,76, 142,71,140,82, 140,72, 133,23, 125,81, 125,72,118,41, 118,21,113,07, 112,87,108,95, 82,16,70,28,69,98,66,52,66,39, 57,03, 52,57, 52,29,37,83,36,86,28,65
Analýza pro vypočteno: 57,57 % C, 6,57 % H, 6,72 % N;
nalezeno: 57,49 % C, 6,34 % H, 6,60 % N,
Hmotová spektrometrie (+ FAB): 407 (M+ + 1), 351,307, 154
Sloučenina 66b, (3S, 4R,S)-terc.butyl-N-(allyloxykarbonyl)-3-amino-4-hydroxy-4-(2-(4methoxybenzoxazolyl))butanoát se připraví způsobem popsaným v případě sloučeniny 66a, čímž se získá 1,29 g (26 %, 68 % vztaženo na zpětně izolovaný výchozí materiál) sloučeniny uvedené v názvu ve formě oleje, jako směsi diastereoizomerů na uhlíku C-4.
Infračervené spektrum (dichlormethan): 3400, 1725, 1625, 1505, 1369, 1354, 1281, 1263, 1226, 1158, 1092,1048 ‘H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,34 - 7,24 (IH, m), 7,16 (IH, d, J = 8,2), 6,79 (1H, d, J = 7,9), 6,00 - 5,50 (2H, m), 5,30 - 5,05 (3H, m), 4,70 - 4,35 (4H, m), 4,02 (3H, s), 2,90 - 2,45 (2H, m), 1,45 - 1,41 (9H, 2 x s)
Analýza pro C2oH26N207,0,4H20:
vypočteno: 58,07 % C, 6,53 % H, 6,77 N; nalezeno: 58,09 % C, 6,41 % H, 6,63 % N.
Hmotová spektrometrie (+ FAB): 407 (M+ + 1, 88 %), 351 (100)
Sloučenina 67a, (3 S, 4R,S)-terc.butyl-N-(N-acetyHSHO-terc.butyltyrosinyHS)-valinyl-(S)alaninyl)-3-amino-4-hydroxy-4-(2-(7-methoxybenzoxazolyl))butanoát
K míchanému roztoku 481,9 mg (1,19 mmol) benzoxazolu 66a a 586,3 mg (1,30 mmol) acetylTyr(terc.butyl)-Val-Ala-OH v 3,5 ml methylenchloridu a 3,5 ml dimethylformamidu se přidá 18,0 mg bis(trifenylfosfin)palladium(ll)chloridu a poté po kapkách 0,80 ml (2,96 mmol) tributylcínhydridu. Přidá se 320,4 mg (2,37 mmol) hydroxybenzotriazolu a směs se ochladí na teplotu 0°C. Přidá se 278,2 mg (1,42 mmol) 1-ethyl-3-[3-(dimethylamino)propyl]karbodiimidhydrochloridu, směs se nechá zahřát na teplotu místnosti a míchá se po dobu 16,5 hodiny. Reakční směs se naředí ethylacetátem a promyje se dvakrát 1M roztokem hydrogensíranu sodného, dvakrát nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, vodou a roztokem chloridu sodného. Organická vrstva se vysuší síranem horečnatým, zfiltruje a zahustí ve vakuu, čímž se získá 2,0 g surového produktu. Velmi rychlou chromatografií za použití směsi methylenchloridu a methanoTu v poměru^“5 se získá 844,0 mg (94 %) sloučeniny uvedené v názvu ve formě bílé pevné látky o teplotě tání 205 °C.
-77VA 4701I1 DO
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3399, 3304, 2977, 1729, 1643, 1506, 1367, 1290, 1161 ]H-NMR (perdeuterodimethylsulfoxid), hodnoty δ: 8,24- 7,78 (4H, m), 7,43 - 7,32 (2H, m),
7,23 (2H, d, J - 8,5), 7,16-7,07 (IH, m), 6,93 (2H, d, J = 8,5), 6,52, 6,40 (IH, 2 x d, J = 5,5, J = 5,0), 5,03, 4,78-4,49, 4,45 - 4,16 (5H, široký t, 2 x m), 4,05, 4,04 (3H, 2 x s), 3,08 - 2,35 (14H, m), 2,11-1,89 (IH, m), 1,83 (3H, s), 1,49-4,32, 1,15, 1,0-0,81 (27H, s, 2 x m, J = 7,0) 13C-NMR (perdeuterodimethylsulfoxid), hodnoty δ: 175,55, 175,18, 173,88, 173,75, 173,05, 169,23, 157,28, 148,55, 146,16, 143,21, 136,63, 133,55, 128,87, 128,17, 115,78, 111,92, 84,02, 81,50, 71,40, 61,15, 60,05, 57,79, 53,39, 51,62, 43,76, 40,52, 34,58, 32,52, 31,60, 26,35, 23,11, 22,71,21,76
Analýza pro C3<jH55N50]o,0,5H20:
vypočteno: 61,40 % C, 7,40 % H, 9,18 % N; nalezeno: 61,43 % C, 7,31 % H, 9,07 %N.
Hmotová spektrometrie (+ FAB): 754 (NT + 1), 698, 338, 267
Sloučenina 67b, (3S, 4R,Sf-terc.butyl-N-(N-acctyl-(S)-(0-terc.-butyl-tyrosinyl-(S)-valinyl(S)-alaninyl)-3-amino-4-hydroxy-4-(2-(4-methoxybenzoxazolyl))butanoát se připraví způsobem popsaným v případě sloučeniny 67a, Čímž se získá 1,05 g (94 %) sloučeniny uvedené v názvu ve formě jemného bílého prášku, kteiý taje za rozkladu při teplotě 210 až 213 °C.
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3284, 2977, 1736, 1691, 1632, 1536, 1505, 1452, 1392, 1367,1258, 1236,161, 1091 lH-NMR (perdeuterodimethylsulfoxid), hodnoty δ: 8,20- 7,75 (4H, m), 7,40- 7,10 (4H, m), 7,00- 6,80 (3H, m), 6,45, 6,34 (IH, 2 x d, J= 5,3, J= 5,0), 5,00-4,10 (5H, m), 4,00, 3,99 (3H, 2 x s), 3,00 -2,25 (4H, m), 1,95 (1H, m), 1,78 (3H, s), 1,39 - 0,80 (27H, m)
Analýza pro CjqHssNsOioASHiO:
vypočteno: 61,40 % C, 7,40 % H, 9,18 % N;. nalezeno: 61,58 % C, 7,38 % H, 8,91 % N.
Hmotová spektrometrie (+ FAB): 754 (M+ + 1, 30 %), 72 (100)
Sloučenina 68a, (3S)-terc,butyl-N-(N-acetyl-(S)-(0-terc.butyltyrosinyl-(S)-valinyl-(S)alaninyl)-3-amino-4-hydroxy-4-(2-(7-methoxybenzoxazolyl))-4-oxobutanoát
K míchané suspenzi 641,0 mg (0,85 mmol) alkoholu 67a ve 46,0 ml methylenchloridu se přidá 1,082 g (2,55 mmol) Dess-Martinova činidla (Ireland a kol,, J. Org. Chem., 58, str. 2899 (1993), Dess a kol., J, Org. Chem., 48, str. 4155 až 4156 (1983)). Výsledná směs se míchá po dobu 1 hodiny a poté se roztřepe mezi 86,0 ml směsi nasyceného thiosíranu sodného a nasyceného hydrogenuhličitanu sodného v poměru 1:1a 86,0 ml ethylacetátu. Výsledná organická fáze se postupně promyje směsí nasyceného thiosíranu sodného a nasyceného hydrogenuhličitanu sodného v poměru 1:1, nasyceným hydrogenuhličitanem sodným a roztokem chloridu sodného. Organická fáze se vysuší síranem horečnatým, zfiltruje a zahustí ve vakuu, čímž se získá 660,0 mg surového produktu. Velmi rychlou chromatografií za použití směsi methylenchloridu a methanolu v poměru 94 : 6 jako elučního činidla se získá 636,0 mg (100 %) sloučeniny uvedené v názvu ve formě bílé pevné látky o teplotě tání 209 °C.
[oc]D 24 -21,8° (c = 0,16, methanol)
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3395, 3294, 2977, 1722, 1641, 1535, 1505, 1161
-78CZ. ΖΎΟ1/Ι DO ^-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 8,43 - 8,16 (1H, m), 7,97 - 7,62 (2H, m), 7,49 - 7,14 (3H, m), 7,08 - 6,95 (3H, m), 6,89 - 6,73 (2H, m), 5,81 - 5,68 (1H, m), 5,16 - 4,86 (2H, m), 4,53 (1H, široký t), 4,03 (3H, s), 3,16-2,84 (4H, m), 2,11 - 1,84 (4H, m), 1,46 - 1,14 (21H,m), 0,92-0,78 (6H, m) 13C-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ 186,28, 173,39, 171,90, 171,19, 171,03, 169,89, 156,43, 154,75, 146,32, 142,88, 140,983, 132,31, 130,54, 126,98, 124,73, 114,95, 111,42, 82,44, 78,71, 58,92, 57,20, 54,91, 53,47, 48,77, 39,43, 38,15, 32,79, 29,44, 28,60, 23,55, 20,27, 19,70,
19,34
Hmotová spektrometrie (+ FAB): 752 (XT + 1), 696, 336, 265
Sloučenina 68b, (3S)-terc.butyl-N-(N-acetyl-(S)-(O-terc.butyltyrosinyl-(S)-valinyl-(S)alaninyl)-3-amino-4-hydroxy-4-(2-(4-methoxybenzoxazolyl)}-4-oxobutanoát se připraví způsobem popsaným v případě sloučeniny 68a, čímž se získá 420 mg (55 %) sloučeniny uvedené v názvu ve formě bílé pevné látky tající za rozkladu při teplotě 211 až 213 °C.
[a]D 24 -23,9° (c = 0,82, methanol)
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3277, 3075, 1723, 1690, 1632, 1530, 1506, 1392, 1366,1269, 1234,1160, 1094 *H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 8,15 (1H, široký s), 7,7 (2H, široký s), 7,46 (1H, t, J = 8,3), 7,24 (2H, d, J = 8,3), 7,10 (1H, široký s), 7,03 (2H, d, J = 8,3), 6,83 (3H, m), 5,74 (1H, q, J = 6,9), 5,00 (2H, m), 4,51 (1H, t, J = 7,0), 4,07 (3H, s), 3,20 - 2,95 (4H, m), 2,00 (4H, m),
1,42 (3H, d, J - 6,8), 1,35 (9H, s), 1,23 (9H, s), 0,86 (6H, d, J = 6,7)
Hmotová spektrometrie (+ FAB): 752 (M+ +1,7 %), 72 (100)
Sloučenina 69a, R, (3S)-N-(N-acetyl-(S)-tyrosinyl-(S)-valinyl-(S)-alaninyl)-3-amino-4-(2(7-methoxybenzoxazolyl))-4-oxobutanoát
Roztok 600,0 mg (0,80 mmol) esteru 68a v 65,0 ml směsi methylenchloridu a kyseliny trifluoroctové v poměru 1 : 1 se míchá po dobu 1 hodiny v suché atmosféře dusíku. Roztok se poté zahustí ve vakuu, vyjme se etherem a znovu se zahustí. Tento proces se šestkrát opakuje, čímž se získá surový produkt ve formě špinavě bílé pevné látky. Velmi rychlou chromatografií za použití směsi methylenchloridu a methanolu s gradientem 95 : 5 do 80 : 20 jako elučního činidla se získá
420,8 mg (83 %) sloučeniny uvedené v názvu jako hygroskopické bílé pevné látky. Tato sloučenina existuje v perdeuteromethanolu jako směs tří izomerů, kterou tvoří ketoforma (koncentrace 50 %) a její acykloxyketoforma (dva izomery na uhlíku C-4, koncentrace 50 %). Produkt taje za rozkladu při teplotě vyšší než 150 °C.
[ct]D 24 -33,2° (c = 0,17, methanol)
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3300, 1715, 1658, 1650, 1531, 1517, 1204 ’Η-NMR (perdeuteromethanol), hodnoty δ: 7,46 - 7,19 (2H, m), 7,16-6,91 (3H, m), 6,70 - 6,59 (2H, m), 5,62 - 5,49 (1H, m), 5,00 - 4,72 (1H, nejasné m), 4,69 - 4,51 (IH, m), 4,49 - 4,08 (2H,
m), 4,05- 3,89 (3H, m), 3,16- 2,47 (4H, m), 2,05 - 1,78 (4H, m), 1,41 - 1,11, 1,05 -0,70 (9H, 2 x m)
Analýza pro C3iH37N5Oi0,3H2O:______________________ vypočteno: 53,67 % C, 6,25 % H, 10,10 % N;
nalezeno: 53,76 % C, 5,56 % H, 10,28 % N.
-79CZ 298I7I B6
Hmotová spektrometrie (+ FAB): 640 (M+ + 1), 435, 147
Sloučenina 69b, S, (3S)-terc.butyl-N-(N-acetyl-(S)-tyrosinyl-(S)-valinyl-(S)-alaninyl)-3amíno-4-(2-(4-methoxybenzoxazolyl))-4-oxobutanoát (sloučenina 69b, S) se připraví způsobem popsaným v případě sloučeniny 69a, čímž se získá 252 mg (96 %) hygroskopické sloučeniny uvedené v názvu. Tato sloučenina existuje v perdeuteromethanolu jako směs tří izomerů, kterou tvoří ketoforma a její acykloxyketoforma (dva izomery na uhlíku C-4). V perdeuterodimethylsulfoxidu existuje tento produkt jako jediný izomer. Taje za rozkladu při teplotě 200 až 203 °C.
[ot]D 24 -38,0° (c = 0,23, methanol)
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3289, 2968, 1718, 1713, 1658, 1634, 1548, 1547, 1506, 1461, 1453, 1393, 1369, 1268, 1228, 1174, 1092 ’Η-NMR (perdeuterodimethylsulfoxid), hodnoty δ: 9,20 (IH, široký s), 8,71 (IH, d, J =6,2), 8,10 (2H, m), 7,83 (IH, d, J = 8,7), 7,61 (IH, t, J = 8,2), 7,46 (IH, d, J = 8,2), 7,08 (3H, m), 6,65 (2H, d, J - 8,3), 5,50 (IH, q, J = 6,5), 4,50 (IH, m), 4,37 (IH, m), 4,20 (IH, m), 4,05 (3H, s), 3,09 - 2,77 (4H, m), 1,94 (1H m), 1,79 (3H, s), 1,23 (3H, d, J = 7,0), 0,82 (6H, m)
Analýza pro C3iH37N5Oio,l,5H20:
vypočteno: 55,85 % C, 6,05 % H, 10,51 %N; nalezeno: 55,21 % C, 5,69 % Η, 10,13 % N.
Hmotová spektrometrie (+ FAB): 640 (M+ + 1, 22 %), 107 (100) o rCO7t9u
H
5«
Sloučenina (99). Roztok 2,71 g (12,7 mmol) 5-(2,6-dichlorfenyl)oxazolu (připraveného podobným způsobem jako je popsán v Tet. Lett. 23, str. 2369 (1972)) v 65 ml tetrahydrofuranu se ochladí v atmosféře dusíku na teplotu -78 °C. K tomuto roztoku se přidá 8,5 ml 1,5M roztoku n-butyllithia v hexanech (13,3 mmol) a směs se míchá přr teplotě -78 °C po dobu 30 minut. Přidá se 3,6 g (13,9 mmol) etherátu bromidu horečnatého a teplota roztoku se na 15 minut nechá vystoupit na -45 °C. Reakční směs se ochladí na teplotu -78 °C a po kapkách se přidá roztok
3,26 g (12,7.mmol) aldehydu 58 (Graybili a kol., Int. J. Protein Res., 44, str. 173 - 182 (1993)) v 65 ml tetrahydrofuranu. Reakční směs se míchá po dobu 25 minut, poté se teplota nechá vystoupit na -40 °C a směs se míchá po dobu 3 hodin a poté se míchá po dobu 1 hodiny při teplotě místnosti. K reakční směsi se přilije 12 ml 5% roztoku hydrogenuhličitanu sodného a směs se míchá po dobu 3 hodin. Tetrahydrofuran se odstraní ve vakuu a výsledný zbytek Se extrahuje dichlormethanem. Organická vrstva se promyje nasyceným roztokem chloridu sodného a vysuší se nad síranem horečnatým, zfiltruje a zahustí, čímž se získá 6,14 g sloučeniny uvedené v názvu. Vyčištěním se získá 4,79 g (80 %) sloučeniny 99.
*H-NMR (deuterochioroform), hodnoty δ: 1,45 (s, 9H), 2,7 - 2,5 (m, 2H), 2,8 (dd, IH), 4,2, 4,4 (2 xd, IH), 4,7 - 4,5 (m, 3H), 5,35 - 5,1 (m, 2H), 5,6, 5,7 (2 x d, IH), 6,0-5,8 (m, IH), 7,2 (d,_LH),_7,^(m,_lH),_7,4_(m,_2H)__
-80CZ 298171 B6
a F = Η b R = C.OCH2.CH2 ?n c R. = CH2Ph.
Sloučenina 104a. Methylester [2-oxo-3(S)-(3-fenylpropionylamino)-2,3,4,5-tetrahydrobenzo- [b][l ,4]diazepin-1-yljoctové kyseliny
Roztokem 1 g (2,86 mmol) methylesteru (3(S)-terc.butoxykarbonylamino-2-oxo-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]diazepin-l-yl)octové kyseliny (sloučeniny 103) ve 25 ml ethylacetátu se. po dobu 2 minut nechá probublávat bezvodý chlorovodík a směs se poté míchá po dobu 1 hodiny při teplotě místnosti. Reakční směs se odpaří, čímž se získá hydrochlorid methylesteru 2-oxo-3(S)~ amino-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b]-[l,4]diazepin-l-yloctové kyseliny ve formě bílé pevné látky.
Tento hydrochlorid a 0,47 g (3,15 mmol) hydroskořicové kyseliny se rozpustí ve 20 ml dimethylformamidu a roztok se ochladí na teplotu 0 °C. K tomuto roztoku se přidá 1 ml (5,72 mmol) diizopropylethylaminu a poté se přidá N-hydroxybenzotriazol a l-(3-dimethylaminopropyl)-3ethylkarbodiimid-hydrochloríd. Směs se míchá po dobu 18 hodin při teplotě místnosti, poté se naředí 150 ml ethylacetátu a promyje se 10% hydrogensíranem sodným, 10% hydrogenuhličita15 nem sodným a roztokem chloridu sodného. Organická vrstva se vysuší nad bezvodým síranem sodným, zfiltruje a odpaří, čímž se získá surová pevná látka, která se vyčistí velmi rychlou chromatografií za použití směsi ethylacetátu a dichlormethanu v poměru 7 : 3 jako elučního činidla. Získá se 600 mg (55 %) sloučeniny uvedené v názvu ve formě bílé pevné látky.
]H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,3 - 6,85 (9H, m), 6,55 - 6,00 (IH, d), 4,88 - 4,82 (IH, m), 4,72- 4,65 (IH, d), 4,28- 4,22 (IH, m), 3,95- 3,9 (lH,m), 3,78 (3H, s), 3,65 (IH, široký s), 3,28 - 3,2 (IH, m), 2,95-2,84 (2H, m), 2,55 - 2,4 (2H, m)
Sloučenina 105a, (3(S)-(3-fenylpropiony!amino)--2-oxo-2,3,4,5-tetrahydrobenzo-[b][1,4]diaze25 pin-l-yl)octová kyselina
Methylester (3(S)-(3-fenylpropÍonylamino)-2-oxo-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]diazepin-l_____yljoctové kyseliny (sloučenina 104a) se rozpustí v 90% methanolu. K reakční směsi se přidá hydrát hydroxidu lithného a směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 4 hodin. Reakční směs 30 se odpaří ve vakuu, čímž se získá bílá pevná látka. Tato pevná látka se rozpustí ve 20 ml vody,
-81 CZ 298171 B6 roztok se okyselí na pH 5 a extrahuje se ethylacetátem, čímž se získá 304 mg (88 %) sloučeniny uvedené v názvu ve formě bílé pevné látky.
’Η-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,5- 6,9 (11H, m), 4,92 - 4,8 (IH, m), 4,7- 4,58 5 (IH, d), 4,38- 4,25 (IH, d), 3,88-3,78 (IH, m), 3,45- 3,25 (IH, m), 3,05- 2,85 (2H, m),
2,55 - 2,45 (2H, m)
Sloučenina 106a, 4-oxo-3(S)-{2-[2-oxo-3(S)-(3-fenylpropionylammo)-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b] [ l ,4]díazepin-1 -yljacetylamino} máselná kyselina io'
N-[l-(2-Beiizyloxy-5-oxotetrahydrofiiran-3-ylkarbamoylmethyl)-2-oxo-2,3,4,5-tetrahydrolH-benzo[b][l,4]diazepin-3-yl]-3-fenylpropionamid se připraví ze sloučeniny 105a postupem popsaným v příkladu 3 pro sloučeninu H (stupeň A), čímž se získá 390 mg (93 %) produktu ve formě diastereomerů.
’Η-NMR (perdeuteromethanol), hodnoty δ: 7,58- 7,22 (14H, m), 5,78- 5,73 (0,5H, d), 5,64 (0,5H, s), 5,0 - 4,72 (4H, m), 4,54 - 4,42 (2H, m), 3,82 - 3,76 (0,5H, m), 3,68 - 3,62 (0,5H, m), 3,28 - 3,21 (0,5H, m), 3,19 - 3,12 (0,5H, m), 3,07 - 2,98 (2H, m), 2,78 - 2,48 (4H, m)
Výsledný produkt se přemění na sloučeninu 106a způsobem popsaným v příkladu 3, v případě sloučeniny H (stupeň D), přičemž se získá sloučenina uvedená v názvu ve formě bílé pevné látky s výtěžkem 17 %.
*H-NMR (perdeuteromethanol), hodnoty δ: 7,54- 6,98 (9H, m), 5,58- 5,44 (IH, m), 4,8- 4,2 25 (4H, m), 3,96 - 3,3 (2H, m), 3,30 - 3,05 (lH,m), 2,98 - 2,25 (5H, m)
Sloučenina 104b. Methylester [2-oxo-5-(3-fenylpropionyl)-3(S)-(3-fenylpropionylaminoý-
2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]-diazepin-l-yl]octové kyseliny
Roztokem 1 g (2,86 mmol) methylesteru (3(S)-terc.butoxykarbonylamino-2-oxo-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]diazepin-l-yl)octové kyseliny (sloučeniny 103) ve 25 ml ethylacetátu se.po dobu 2 minut nechá probublávat bezvodý chlorovodík a směs se poté míchá po dobu 1 hodiny při teplotě místnosti, Reakční směs se odpaří, čímž se získá hydrochlorid methylesteru 2-oxo3(S)amino-2,3,4.5-tetrahydrobenzo[b]-[l,4]diazepin-l-yloctové kyseliny ve formě bílé pevné látky.
Tento hydrochlorid se suspenduje ve 20 ml dichlormethanu a ochladí se na teplotu 0 °C, K suspenzi se přidá 1,6 ml (11,5 mmol) triethylaminu a poté se po kapkách přidá 0,9 ml (6 mmol) dihydrocinnamoylchloridu. Směs se zahřeje na teplotu místnosti a míchá se po dobu 18 hodin. Poté se směs naředí 25 ml dichlormethanu a promyje se dvakrát 50 ml vody a jednou 50 ml roztoku chloridu sodného. Organická vrstva se vysuší nad bezvodým síranem sodným, zfiltruje se a odpaří, čímž se získá viskózní žlutý olej, který se vyčistí velmi rychlou chromatografií za použití směsi ethylacetátu a dichlormethanu v poměru 1 : 1 jako elučního činidla. Získá se 1,35 g (92 %) sloučeniny uvedené v názvu ve formě bílé pevné látky.
’Η-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,45 - 7,02 (14H, m), 6,37 - 6,32 (IH, d), 4,78 - 4,72 45 (IH, m), 4,52 - 4,3 (3H, m), 3,82 - 3,77 (1H, m), 3,74 (3H, s), 3,03 - 2,87 (4H, m), 2,58 - 2,45 (2H, m), 2,45-2,35 (IH, m), 2,25-2,16 (IH, m)
Sloučenina 105b, [2-oxo-5-(3-fenylpropionyl)-3-(3(S)-fenylpropionylamino)-2,3,4,5-tetrahydrobenzofb] [ 1,4]diazepin-l -yljoctová kysel ina
680 mg (1,32 mmol) methylesteru [2-oxo-5-(3-fenylpropionyl)-3-(3-fenylpropionylamino)______23,4,5-tetrahydrobenzo[b]-[1.4_]diazepin-l-yl]octové kyseliny (sloučeniny 104b) se hydrolyzuje postupem popsaným v příkladu 105a, čímž se získá 645 mg (98%) sloučeniny uvedené v názvu ve formě bílé pevné látky.
-82CZ 298171 B6 lH-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,58 (IH, široký s), 7,5 - 7,42 (IH, m), 7,35 - 6,95 (14H, m), 4,95 - 4,88 (IH, m), 4,64 - 4,55 (IH, d), 4,54-4,45 (IH, t), 4,15-4,05 (1H, d), 3,75 (lH,m), 3,05-2,75 (4H, m), 2,58-2,45 (2H, m), 2,45-2,28 (IH, m), 2,25-2,14 (IH, m)
Sloučenina 106b, 2-oxo-3(S)-{2-[2-oxo-5-(3-fenylpropÍonyl)-3(S)-(3-fenylpropionylamino)-
2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]diazepin-l-yl]acetylamino}máselná kyselina [2-Oxo-5-(3-fenylpropíonyl)-3-(3-fenylpropionylamino)-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]diazepin-l-yl]octová kyselina a semikarbazon terc.butylesteru 3-amino-4-oxomáselné kyseliny se podrobí reakci postupem uvedeným v příkladu 3 v případě sloučeniny K (stupeň A), čímž se získá 350 mg (85 %) bílé pevné látky.
'H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 9,05 (IH, široký s), 7,58- 7,55 (IH, d), 7,5- 7,35 (IH, m), 7,35 - 6,95 (14H, m), 6,75 - 6,72 (IH, d), 6,25 (IH, široký s), 5,25 (IH, široký s), 4,95 - 4,88 (IH, m), 4,8 - 4,72 (IH, m), 4,55 - 4,4 (2H, m), 3,92 - 3,88 (IH, d), 3,73 - 3,68 (IH, m),
2,95 - 2,8 (4H, m), 2,8 - 2,72 (1H, m), 2,62 - 2,55 (IH, m), 2,55 - 2,45 (2H, m), 2,4 - 2,32 (1H, m), 2,2 - 2,12 (1H, m), 1,45 (9H, s)
Ze semikarbazonu terč.butylesteru 4-oxo-3-{2-[2-oxo-5-(3-fenylpropionyl)-3-(3-fenylpropionylamino)~2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]diazepin-l-yi]acetylamino}máselné kyseliny se odstraní chránící skupina jak je popsáno v příkladu 3, v případě sloučeniny K (stupeň C), čímž se získá 118 mg (47 %) sloučeniny uvedené v názvu ve formě bílé pevné látky.
1 H-NMR (perdeuteromethanol), hodnoty δ: 7,48 - 6,95 (14H, m), 4,65 - 4,15 (6H, m), 3,5 - 3,4 (IH, m), 2,85 - 2,72 (4H, m), 2,65 - 2,5 (IH, m), 2,5 - 2,34 (3H, m), 2,34 - 2,15 (2Ή, m)
Sloučenina 104c, Methylester [5-benzyl-2-oxo-3(Sfy(3-fenylpropionylamino)-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]diazepin-l-yl]octové kyseliny
Do 10 ml dimethylformamidu se přidá 500 mg (1,31 mmol) methylesteru [2-oxo-3-(3-fenylpropionylamino)-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]diazepin-l-yl]octové kyseliny (sloučeniny 104a), 155 mg (1,58 mmol) uhličitanu vápenatého a 170 μΐ (1,44 mmol) benzylbromidu a směs, se zahřívá po dobu 8 hodin na teplotu 80 °C. Směs se naředí 150 ml ethylacetátu a promyje se čtyřikrát 50 ml vody, Organická vrstva se vysuší nad bezvodým síranem sodným, zfíltruje a odpaří, čímž se získá viskózní žlutý olej, který se vyčistí velmi rychlou chromatografií za použití směsi dichlormethanu a ethylacetátu v poměru 8 : 2 jako elučního činidla. Získá se 460 mg (75 %) sloučeniny uvedené v názvu ve formě bílé pevné látky.
1 H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,34 - 7,05 (14H, m), 6,32 - 6,28 (IH, d), 4,84 - 4,76 (IH, d), 4,76- 4,70 (IH, m), 4,43 - 4,37 (IH, d), 4,26- 4,18 (IH, d), 4,06- 4,00 (IH, d), 3,79 (3H, s), 3,45 - 3,37 (1H, m), 3,02 - 2,95 (IH, m), 2,90 - 2,82 (2H, m), 2,5 - 2,34 (2H, m)
Sloučenina 105c, [5-benzyl-2-oxo-3(S)-(3-fenyIpropionylamíno)-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[bj[l,4]diazepin-l-yl]octová kyselina se připraví hydrolýzou esteru 102c postupem popsaným v případě sloučeniny 105a, čímž se získá 450 mg (98 %) sloučeniny uvedené v názvu ve formě bílé pevné látky.
lH-NMR (perdeuteromethanol), hodnoty δ: 7,5 - 7,05 (14H, m), 6,4 (IH, široký s), 4,85-4,55 (2H, m), 4,45- 4,21 (2H, m), 4,12 - 3,92 (lH,d), 3,45- 3,3 (lH,m), 3,1- 2,8 (3H, m),
2,55 -2,28 (3H, m)
Sloučenina-l-06c,-3(Sfy{2=[5=benzyU2=oxo^3=(3(Sfyfcnylpropionylaminofy2,3,4.5-tetrahydro= benzo[b] [ 1,4] d iazep in— 1 -y ljacetylaminoj^l-oxomáselná kyselina
-83CZ 298171 B6 [5-Benzyl-2-oxo-3(S)-(3-fenylpropionylamino)-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]diazepin-lyl]octová kyselina a semikarbazon terc.butylesteru 3(S)-amino-4-oxomáselné kyseliny se podrobí reakci postupem uvedeným v příkladu 3 v případě sloučeniny K (stupeň A), čímž se získá 260 mg (85 %) bílé pevné látky:
’Η-NMR (perdeuteromethanol), hodnoty δ: 7,35 - 7,0 (15H, m), 4,94 - 4,88 (IH, m), 4,68-4,58 (lH,d), 4,57- 4,52 (IH, m), 4,41 - 4,34 (IH, d), 4,3- 4,23 (IH, d), 4,1 - 4,04 (IH, d),
3,18 - 3,11 (IH, m), 3,09-2,98 (IH, m), 2,78- 2,72 (2H, t), 2,65 - 2,57 (IH, m), 2,42 - 2,33 (3H, m)
Ze semikarbazonu terc.butylesteru 3(S)-{2-[5-benzyl-2-oxo-3(S)-(3-fenylpropionylamino)-
2.3.4.5- tetrahydrobenzo[b]-[ 1,4]diazepin-l-yl]acetylamino}^4-oxomáselné kyseliny se odstraní chránící skupina jak je popsáno v příkladu 3, v případě sloučeniny K (stupeň C), čímž se získá 168 mg (81 %) sloučeniny uvedené v názvu ve formě bíle zbarvené pevné látky.
*H-NMR (perdeuteromethanol), hodnoty δ: 7,37 - 7,0 (14H, m), 4,75 - 4,62 (IH, m), 4,6 - 4,45 (2H,m), 4,4- 4,21 (2H, m), 4,15- 3,95 (2H,m), 3,15 - 3,0 (2H, ), 2,82- 2,67 (2H, m),
2,65 - 2,52 (IH, m), 2,5 - 2,32 (3H, m) [5-Benzyl-2-oxo-3(S)-(3-fenylpropionylamino)-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]dÍazepin-lyljoctová kyselina a semikarbazon terc.butylesteru 3(S)-amino-4-oxomáselné kyseliny se podrobí reakci postupem uvedeným v příkladu 3 v případě sloučeniny K (stupeň A), čímž se získá 260 mg (85 %) bílé pevné látky.
JH-NMR (perdeuteromethanol), hodnoty δ: 7,35 - 7,0 (15H, m), 4,94 - 4,88 (IH, m), 4,68 - 4,58 (IH, d), 4,57- 4,52 (IH, m), 4,41 - 4,34 (lH,d), 4,3-4,23 (IH, d), 4,1 - 4,04 (IH; d),
3,18 -3,11 (IH, m), 3,09 - 2,98 (IH, m), 2,78 - 2,72 (2H, t), 2,65 - 2,57 (IH, m), 2,42 - 2,33 (3H, m)
Ze semikarbazonu terc.butylesteru 3(S)-{2-[5-benzyl-2-oxcr-3(S)J3-fenylpropionylamino)-
2.3.4.5- tetrahydrobenzo[b][l,4]diazepin-l-yl]acetylamino}-4—oxomáselné kyseliny se odstraní chránící skupina jak je popsáno v příkladu 3, v případě sloučeniny K (stupeň C), čímž se získá 168 mg (81 %) sloučeniny uvedené v názvu ve formě bíle zbarvené pevné látky.
’Η-NMR (perdeuteromethanol), hodnoty δ: 7,37 - 7,0 (14H, m), 4,75 - 4,62 (IH, m), 4,6 - 4,45 (2H, m), 4,4 - 4,21 (2H, m), 4,15 - 3,95 (2H, m), 3,15-3,0 (2H, m), 2,82- 2,67 (2H, m),
2,65 - 2,52 (IH, m), 2,5 - 2,32 (3H, m)
-84CZ 298171 B6 p^JUycAoH
H Ó
107
105b
108
Sloučenina 107a, 4-terc.butoxykarbonyl-2-oxo-3(S)-{2-[2-oxo-5-(3-fenyIpropionyl)-3(S)(3-fenylpropionylamino)-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b]-[l,4]diazepin-l-yl]acetylamÍno}butyl· ester 2,6-didilorbenzoové kyseliny
Výsledný semikarbazon se připraví reakcí sloučeniny 105b a terc.butyl-3-(allyloxykarbonylamino)-4-oxo-5-(2,6-dichlorbenzoyloxy)pentanoátu (WO 93 16710), jak je popsáno v případě sloučeniny 56a, čímž se získá 256 mg (58 %) sloučeniny uvedené v názvu ve formě bílé pevné látky.
'H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,45 - 7,04 (17H, m), 6,45 - 6,34 (2H, m), 5,28 - 5,21 (IH, m), 5,1-5,0 (IH, m), 4,95- 4,90 (lH,m), 4,75- 4,70 (IH, m), 4,55 - 4,44 (lH,m), 4,32 - 4,22 (IH, dd), 3,99- 3,85 (IH, dd), 3,85 - 3,76 (IH, m), 3,06- 2,83 (5H, m), 2,83 -2,74 (IH, m), 2,6-2,44 (2H, m), 2,43 - 2,33 (IH, m), 2,24-2,15 (IH, m), 1,45 (9H, s)
Sloučenina 108a, 4-karboxy-2-oxo-3(S)-{2-[2-oxo-5-(3-fenylpropionyl)-3(S)-(3-fenylpropionylamino)-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b]-[l,4]diazepin-l-yl]acetylamino}butylester-2,6dichlorbenzoové kyseliny se připraví ze sloučeniny 107a způsobem popsaným v případě sloučeniny 57a, čímž se získá 156 mg (68 %) sloučeniny uvedené v názvu ve formě bílé pevné 20 látky.
'H-NMR (perdeuteromethanol), hodnoty δ: 7,5 - 6,9 (17H, m), 5,16 - 5,02 (IH, dd), 4,88 - 4,71 (2H, m), 4,62 - 4,44 (2H, m), 4,42 - 4,28 (2H, m), 4,27 - 4,18 (IH, m), 3,47 - 3,41 (IH, m),
2,90 - 2,60 (5H, m), 2,46 - 2,4 (2H, m), 2,39 - 2,18 (2H, m)
Sloučenina 108b, 4-(7-methoxybenzoxazol-2-yl)-^l-oxo-3(S)-{2-[2-(oxo-5-(3-fenylpropionyl)-3(S)-(3-fenylpropionylamino)-2,3,4,5“tetrahydrobenzo[b][l,4]diazepin-l-yl]acetylaminojmáselná kyselina se připraví způsobem popsaným v příkladu 5 v případě sloučeniny 69a, čímž se získá sloučenina uvedená v názvu ve formě bílé pevné látky s výtěžkem 50 %.
'H-NMR (perdeuteromethanol), hodnoty δ: 7,41- 6,88 (17H, m), 5,6- 5,55 (0,5H, t), 5,48 - 5,43 (0,5H, t), 4,64 - 4,45 (2H, m), 4,45 - 4,30 (IH, m), 3,93 (1,5H, s), 3,90 (1,5H, s), -----3547—3?34-(-l-H-m)—3rl0—-2;85’(-2H?m)-2;84—-2;63-(5Hrm)r2;6^2;4-(2Hrm)r2;3^2;l· (2H, m)
-85CZ. ZVB17I BO
COj-tBu
Sloučenina 123, terč.bulyl-(3S)-N~(anyloxykarbonyl)-3-amino-5-(2-chlorfěny]-methylthio)-
4-oxopentanoát
K míchanému roztoku 749 mg (2,14 mmol) (3S)-terc,butyl-N-(allyloxykarbonyl)-3-amino-5brom^4-oxopentanoátu (sloučenina 122; WO 93 16710) ve 20 ml dimethylformamidu se přidá 273 mg (4,70 mmol) fluoridu draselného a poté 373 mg (2,35 mmol) 2-chlorfenylmethylthiolu. Směs se míchá po dobu 3,5 hodiny, poté se přilije 50 ml vody a směs se extrahuje dvakrát vždy 50 ml ethylacetátu. Smíchané organické extrakty se promyjí čtyřikrát vždy 50 ml vody a poté 50 ml roztoku chloridu sodného. Vysuší se nad síranem hořečnatým a zahustí, čímž se získá olej, který se vyčistí pomocí velmi rychlé chromatografie za použití 10 až 35% ethylacetátu v hexanu jako elučního činidla, čímž se získá. 832 mg (91 %) bezbarvé pevné látky o teplotě tání 45 až 46 °C.
[a]D 20 -19,0° (c = 1,0, dichlormethan)
Infračervené spektrum (film): 3340, 2980, 2935, 1725, 1712, 1511, 1503, 1471, 1446, 1421, 1393, 1368,1281, 1244, 1157,1052, 1040, 995, 764, 739 ’Η-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,36 (2H, m), 7,21 (2H, m), 5,91 (2H, m), 5,27 (2H, m), 4,76 (IH, m), 4,59 (2H, d), 3,78 (2H, s), 3,36 (2H, m), 2,91 (IH, dd), 2,74 (1H, dd),
1,43 (9H, s)
Analýza pro C20H26CINO5S:
vypočteno; 56,13 % C, 6,12 % H, 3,27 % N, 7,49 % S; nalezeno: 56,08 % C, 6,11 % H, 3,26 % N, 7,54 % S.
Hmotová spektrometrie (Cl): 430/28 (M+ + 1, 3 %), 374/2 (100)
Sloučenina 124a, terc.butyl-(3S)-3-(2-(6-benzyl-l ,2-dihydro-2-oxc^3-(3-fenylpropionylamino)-l-pyridyl)acetylamino-5-(2-chlorfenylmethylthio)-4-oxopentanoát__________________
300 mg (0,76 mmol) 6-benzyl-l}2-dihydro-2-oxo-3-(3-fenylpropionyIamino)pyridyloctové kyseliny (sloučeniny 52b) v 7 ml tetrahydrofuranu se míchá s 205 mg (1,52 mmol) 1-hydroxy-86benzotriazolu a l-(3-dímethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimid-hydrochloridem. Po uplynutí 3 minut se přidá 12 kapek vody, směs se míchá po dobu 10 minut a poté se přidá 325 mg (0,76 mmol) terc.butyl-(3S)-N-(allyloxykarbonyl)-3-amino-5-(2-chlorfenyl methy lthio)-4oxopentanoátu (sloučeniny 123), 20 mg bis(trifenylfosfÍn)palladium(II)chloridu a 0,6 ml (2,28 mmol) tributylcínhydridu. Směs se míchá po dobu 5 hodin při teplotě místnosti, vylije se do ethylacetátu, promyje se vodnou IM kyselinou chlorovodíkovou (dvakrát), vodným hydrogenuhlíčítaném sodným, roztokem chloridu sodného, vysuší se síranem horečnatým a zahustí. Zbytek se trituruje s pentanem a supematant se odstraní. Chromatografickým zpracováním na silikagelu za použití 50% ethylacetátu v hexanu jako elučního činidla se získá 439 mg (81 %) bezbarvé pěny.
[ct]D 21 -18,3° (c = 0,5, dichlormethan)
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3356, 3311, 1722, 1689, 1646, 1599, 1567, 1513, 1367, 1154 *H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 8,39 (IH, d), 8,23 (IH, s), 7,24 (14H, m), 6,16 (IH, d), 4,95 (IH, m), 4,63 (2H, m), 4,02 (2H, s), 3,74 (2H, s), 3,27 (2H, s), 2,85 (6H, m), 1,40 (9H, s)
Analýza pro C39H42C1N3O6S:
vypočteno: 65,39 % C, 5,91 % H, 5,87 % N; nalezeno: 65,51 % C, 5,99 % H, 5,77 % N.
Sloučenina 124b, terc.butyl-[3S(lS,9S)]-3-(6,l0-dioxo-l,2,3,4,7,8,9,10-oktahydro)-9-(3fenylpropionylamino)-6H-pyridazino[l,2-a][l,2]diazepin-l-karboxamido-5“{2-chlorfenylmethylthio)-4-oxopentanoát (sloučenina) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 124a zthioetheru 123 a 3S(lS,9S)-3-(6,10-dioxO“l,2,3,4,7,8,9,10-oktahydro)-9-(3-fenylpropionylamino)-6H-pyridazino[l}2-a][l,2]diazepin-]-karboxylové kyseliny (sloučeniny 45a), čímž se získá 452 mg (50 %) bezbarvé pěnovité látky o teplotě tání 55 až 57 °C.
[a]D 22 -94,0° (c = 0,12, dichlormethan)
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3288, 2934, 1741, 1722, 1686, 1666, 1644, 1523, 1433, 1260, 1225, 1146, 757 1H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,35 (3H, m), 7,20 (7H, m), 6,46 (IH, d), 5,21 (lH,m), 4,97 (2H, m), 4,56 (lH,m), 3,75 (2H, s), 3,25 (3H, m), 2,93 (5H/m), 2,71 (IH, dd),
2,55 (2H, m), 2,30 (IH, m), 1,92 (3H, m), 1,66 (2H, m), 1,42 (9H, s)
Analýza pro C35H43ClN4O7S,0,25H2O:
vypočteno: 59,72 % C, 6,23 % H, 5,04 % Cl, 7,96 % N, 4,56 % S; nalezeno: 59,73 % C, 6,19 % H, 5,10 % Cl, 7,79 % N, 4,58 % S.
Hmotová spektrometrie (-FAB): 697 (M-l, 100)
Sloučenina 125a, (3S)-3-(2-(6-benzyl-l,2-dihydro-2-oxo-3-(3-fenylpropiony lamino)-1pyridyl)acetylamino-5-(2-chlorfenylmethylthio)-4-oxopentanová kyselina
K 400 mg (0,56 mmol) terc.butyl-3-(2-(6-benzyl-l,2-dihydro-2-oxo-3-(3-fenylpropionylamino)-l-pyridyl)acetylamino-5-(2-chlorfenylmethylthio)-4-OXopentanoátu (sloučeniny 124a) ve 3 ml dichlormethanu se při teplotě 0 °C přidají 3 ml kyseliny trifluoroctové a směs se míchá při“těplotě“0’°'C”podóbu 1 hodiny a při teplotě místnosti po dobu 0,5 hodiny. Roztok se zahustí, poté se znovu rozpustí v dichlormethanu a znovu zahustí. Tento postup se opakuje třikrát. Zbytek
-87CZ. XV5I7I Βϋ se míchá v etheru po dobu 1 hodiny a zfiltruje, čímž se získá 364 mg (99 %) bezbarvé pevné látky o teplotě tání 165 až 167 °C.
[ct]D 22 -27,7° (c = 0,2, dichlormethan)
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3289, 1712, 1682, 1657, 1645, 1593, 1562, 1527, 1497, 1416, 1203, 1182 lH-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 8,47 (IH, d), 8,21 (IH, s), 7,70 (IH, d), 7,22 ίο (14H, m), 6,24 (1H, d), 5,03 (IH, m), 4,65 (2H, m), 4,06 (2H, s), 3,69 (2H, m), 3,23 (2H, m), 2,88 (6H, m)
Sloučenina 125b, [3S( 1 S,9S)J—3-(6,1 (Mioxo-1,2,3,4,7,8,9,10-oktahydro)-9-(3-fenylpropionylamino>-6H-pyridazino[l,2-a][lm2]diazepin-l-karboxamid&-5-(2-chlorfenylmethylthio)-415 oxopentanová kyselina se připraví podobným způsobem jako sloučenina 125a z terč,butytesteru 124b, čímž se získá 362 mg (93 %) bezbarvého prásku o teplotě tání 76 až 80 °C.
[a]D 21 -134° (c = 0,10, methanol)
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3309, 2935, 1725, 1658, 1528, 14445, 1417, 1277, 1219, 1175 1 H-NMR (perdeuterodimethylsulfoxid), hodnoty δ: 8,80 (IH, d), 8,19 (IH, d), 7,31 (9H, m)„.5,09 (IH, m), 4,74 (IH, m), 4,63 (IH, m), 4,35 (IH, m), 3,76 (2H, m), 3,28 (3H, m), 2,80 (5Η», 25 2,52 (4H, m), 2,16 (2H, m), 1,90 (3H, m)
Analýza pro C^HLsCbNfChS.O^lfO:
vypočteno: 57,49 % C, 5,53 % H, 8,65 % N, 4,95 % S; nalezeno: 57,35 % C, 5,43 % H, 8,45 % N, 4,88 % S.
Hmotová spektrometrie (-FAB): 641 (M-l, 100)
2-Chlorfenylmethyljodid. Směs 2-chlorfenylmethylbromidu (4 g, 19,47 mmol) a Nal (14 g, 97,33 mmol) v acetonu (40 ml) se míchá l hodinu za varu. Reakční směs se ochladí, filtruje a odpaří ve vakuu. Zbytek se trituruje hexanem a filtruje. Roztok se odpaří ve vakuu a zbylý olej se čistí pomocí velmi rychlé chromatografie (silikagel, hexan) za získání sloučeniny uvedené v názvu (4,67 g, 63 %) ve formě oleje:
1 H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,34 (4H, m), 4,54 (2H, s).
(201). (3S)-t-Butyl N-(alIyloxykarbonyl)-3-amino-5-hydroxy-4-oxopentanoát (81, Chapman, a kol., Bioorg. & Med. Chem. Lett, 2, str. 613-618 (1992), 0,144 g, 0,5 mmol) a 2-chlorfenylmethyljodid (0,569 g, 1,5 mmol) v dichlormethanu (4 ml) se energicky míchá s oxidem stříbrným ------(0 j2-3-l-g-l-mmol)-a-zahřívá-40-hodin- na~3 8°CrReakčn r směsse_ochladÍ7 filtruje“afiltrát-secTdpT7 45 rí. Zbytek se čistí pomocí velmi rychlé chromatografie (silikagel, 0 až 20 % ethylacetátu
-88cl zyai/i bo v hexanu) za získání produktu ve formě bezbarvého oleje (0,138 g, 67 %): [a]D 24 +3,9° (c = 1,3, dichlormethan);
‘H-NMR (deuterochloroform) δ: 7,37 (4H, m), 5,88 (2H, m), 5,26 (2H, m), 4,69 (2H, s), 4,57 5 (3H, m), 4,50 (IH, d), 4,35 (IH, d), 3,03 (IH, dd), 2,76 (IH, dd), 1,42 (9H, s).
203 204 (203) . Roztok 2,4-dichlor-6-nitrofenoIu (202, 40 g obsahující 20 % vlhkosti) v ethylacetátu (500 ml se suší za použití síranu horečnatého, filtruje a filtrační koláč se promyje malým množstvím ethylacetátu. Přidá se platina na uhlí (5 % sulfidováno-2 g) a směs se hydrogenuje ío dokud se nezastaví absorpce vodíku. Přidá se triethylorthoformiát (160 ml) a kyselina p-toluensulfonová (160 mg) a směs se zahřívá 4 hodiny kvaru. Po ochlazení a odstranění zbytku katalyzátoru filtrací se roztok promyje nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, vodou a solankou, suší nad síranem hořečnatým a odpaří do sucha. Po trituraci hexanem se získá pevná látka, která se odfiltruje, promyje hexanem a suší za získání sloučeniny uvedené v názvu (25,5 g, 15 88 %) jako kiystalické pevné látky:
teplota tání 98 až 99 °Č;
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3119, 1610, 1590, 1510, 1452, 1393, 1296, 1067, 850;
’Η-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 8,16 (IH, s), 7,69 (IH, d, J = 1,9), 7,42 (IH, d, J- U9);
Analýza pro C7H3C12NO:
vypočteno: C, 44,72; H, 1,61; N, 7,45; Cl, 37,70. nalezeno: C, 44,84; H, 1,69; N, 7,31; Cl, 37,71.
(204) . Bromid hořečnatý se připraví pomocí reakce hořčíku (7,45 g, 0,30 mol) v tetrahydrofuranu (516 ml) s jodem (50 mg) a 1,2-dibromethanem (26,3 ml, 57,3 g, 0,30 mol) za varu po 2 hodiny .a potom ochlazením na -40 °C. K takto získané látce se rychle přidá pomocí kanyly roztok· 2-lithio-5,7-dichlorbenzoxazolu při 70 °C (připraveného z 5,7-dichlorbenzoxazolu (203, 28,9 g,
0,154 mol) a butyllithia (100 ml, 1,52 M v hexanu) v tetrahydrofuranu (150 ml) při 70 °C). Směs se míchá 1 hodinu při -40 °C, potom se ochladí na -70 °C a přidá se roztok (3S) t—butyl N-(allyloxykarbonyl)-3-amino-4-oxobutanoátu (Chapman, a kol., Bioorg. & Med. Chem. Lett, 2, str. 613-618 (1992)) (20,3 g, 0,078 mol) v tetrahydrofuranu (160 ml) při teplotě nižší než -60 °C. Reakční směs se nechá ohřát na teplotu místnosti a míchá se 16 hodin před rozložením 35 roztokem chloridu amonného a extrakcí 600 ml směsi 1 : 1 hexan : ethylacetát. Organický roztok se promyje vodou a solankou, suší nad síranem hořečnatým a odpaří za vzniku sirupu (52,9 g). Po velmi rychlé chromatografii (silikagel, 250 g - 1 1 alikvotních dílů 1:1 hexan: CH2C12 x 2, CH2C12, 5% EtOAc v CH2Cl2, 10 % EtCAc v CH2C12, 20 % EtOAc vCH2Cl2) se získá znečištěný produkt 24,6 g, který se dále čistí chromatograficky (silikagel 1: l hexan:ether) za 40 získání sloučeniny uvedené v názvu ve formě zlatohnědého skla (22,7 g, 64 %);
Infračervené spektrum (film) 3343, 2980,1723, 1712, 1520,1456, 1398, 1369, 1254,1158, 993;
'H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,60 (lH.m), 7,37 (lH,m), 5,72 (IH, m), 5,64 (0,5H, d), 5,10 (2,5H, m), 4,7 - 4,3 (4H, m), 2,9 - 2,6 (2H, m), 1,46 a 1,42 (9H spojené, 2 x s).
-89CA ZVOI/I BO
Hmotová spektrometrie ES+ Da/e 445 (M + 1)+ Cl 35 62%, 447 (M + 1)+ Cl 37,40%, 389 100%.
AtlOC-NH
COjH = S = R
205a 205b ř-BuO^C *
OH
Alloo-NH
206a
206b
(205a). Ke směsi tetrahydrofuranu (200 ml) a vody (100 ml) obsahující hydrogenuhličitan sodný (16,6 g, 0,2 mol) se přidá t-butylester kyseliny glutarové (10 g, 49,2 mmol) a potom se během 20 minut přikape allylchlorformiát (6,8 ml, 64 mmol). Směs se míchá 2 hodiny, extrahuje se ethylacetátem, promyje se nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu, suší se a odpaří za získání oleje 205a (9,5 g, 67,2 %);
Md20 - 6° (c 1,5, methanol) 'H-NMR (perdeuterodimethylsulfoxid) δ 6,10 (1H, d), 5,96 - 5,88 (1H, m), 5,31 - 5,12 (2H,.m),
4,45 (2H, m), 3,90 - 3,84 (1H, t), 2,18 (2H, m), 1,85- 1,76 (2H, m), 1,36 (9H, s).
(205b), se připraví analogickým způsobem jako (205a) za získání bezbarvého oleje (6,27 g, 88 %):
[a]D 20 + 16° (c = 0,095, methanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3678, 3332, 3088, 2980, 2937, 1724, 1530, 1453, 1393, 1370, 1331, 1255, 1155, 1056,995,935, 845, 778, 757, 636,583;
'H-NMR (deuterochloroform) δ 9,24 (1H, široký s), 5,94— 5,79 (1H, m), 5,58 (1H, d), 5,33 - 5,17 (2H, m), 4,55 (2H, d), 4,38 - 4,31 (1H, m), 2,41 - 1,95 (4H, m), 1,42 (9H, s);
Analýza pro C13H21NO6: vypočteno: C, 54,35; H, 7,37; N, 4,88 nalezeno: C, 54,4; H, 7,5; N, 4,8.
(206a). K roztoku 205a (3,6 g, 12,5 mmol) v tetrahydrofuranu (100 ml) při 0 °C se přidá N-methylmorfolin (1,5 ml, 13 mmol) a izobutylchlorformiát, (1,1 ml, 13 mmol). Po 15 minutách, se tato směs přidá k suspenzi tetrahydridoboritanu sodného (0,95 g, 25 mmol) v tetrahydrofuranu (.1.0.0_ml)_a_methanolu-(25-ml)-při—7%-Q—Po-2-hodinách-při—70-0G-se-směs_rozložrpomocí kyseliny octové, zředí ethylacetátem, třikrát promyje nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu,
-90LA zvai/ι Bt) vodou a solankou, suší a odpaří. Po velmi rychlé chromatografií (2 % methanolu v dichlormethanu) se získá sloučenina 206a ve formě bezbarvého oleje (2,4 g, 70 %):
[cc]d2° -10° (c 3,88, dichlormethan);
'H-NMR (deuterochloroform) δ 5,84 (IH, m), 5,34- 5,17 (3H, m), 4,56- 4,53 (2H, m),
3,68 -3,59 (2H, m), 2,98 (IH, m), 2,40-2,30 (2H, t), 1,84- 1,78 (2H, m), 1,43 (9H, s);
Analýza pro C13H23NO5:
vypočteno: C, 57,13; H, 8,48; N, 5,12 nalezeno: C, 57,1; H, 8,6; N, 6,0 (206b), se připraví analogickým způsobem jako 206a, který poskytne sloučeninu uvedenou v názvu jako světle žlutý olej (3,42 g, 57 %):
[a]D 20 +14° (c 0,166, methanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3341, 3083, 2976, 2936, 2880, 1724, 1533, 1454, 1419, 1369, 1332,1251, 1156,1062,997,933,846, 777, 647;
'H-NMR (deuterochloroform) δ 5,98- 5,81 (IH, m), 5,35 - 5,10 (3H, m), 4,55 (2H, d),
3,70- 3,56 (3H, m), 2,50- 2,47 (IH, široký s), 2,37 - 2,30 (2H, m), 1,89-1,74 (2H, m), 1,44 (9H, s);
Analýza pro C13H23NO5:
vypočteno: C, 57,13; H, 8,48; N, 5,12 nalezeno: C, 56,9; H, 8,6; N, 5,6 (207a). K roztoku dimethyIsulfoxidu (1,51 g, 19,3 mmol) v dichlormethanu (25 ml) při -70 °C se přidá oxalylchlorid (1,34 g, 19,3 mmol). Po 10 minutách při -70 °C, se přikape roztok (206a) (2,4 g, 8,8 mmol) v dichlormethanu (10 ml) a směs se míchá 15 minut při -70 °C. Přidá se diizopropylethylamin (3,4 g, 26,3 mmol) a směs se míchá 15 minut při -25 °C, potom se zředí ethylacetátem (50 ml), promyje 2M roztokem hydrogensíranu sodného, odpaří za získání oleje, kteiý se použije bez čištění:
'H-NMR (deuterochloroform) δ 9,5 (IH, s), 6,0-5,5 (2H, m), 5,5-5,1 (2H, m), 4,5 (2H, m),
4,2 (IH, m), 2,4 - 2,10 (2H, m), 2,05 (2H, m), 1,36 (9H, s).
(207b), se připraví analogickým způsobem jako 207a, a získá se olej (2,95 g, 96 %), který se použije bez dalšího čištění v následujícím kroku:
[cc]d2° + 21° (c 0,942, methanol);
'H-NMR (deuterochloroform) δ 9,58 (lH,s), 6,05- 5,80 (IH, m), 5,57 (IH, široký s),
5,35 - 5,18 (2H, m), 4,56 (2H, d), 4,34 - 4,24 (IH, m), 2,38 - 2,16 (3H, m), 1,96 - 1,73 (IH, m),
1,43 (9H,s).
(208a). K roztoku 207a (2,39 g, 8,8 mmol), v methanolu (20 ml) se přidá octan sodný (0,72 g,
8,8 mmol) a semikarbazid (0,98 g, 8,8 mmol) a směs se míchá přes noc, odpaří a zředí dichlormethanem (100 ml), promyje vodou, suší a odpaří. Po velmi rychlé chromatografií (2% methanol v dichlormethanu) se získá 208a (2,10 g, 73 %) ve formě oleje:
[a]D 20 -21° (c 2,55, dichlormethan);
-91 ^Δ zyei /l Bt>
'H-NMR (deuterochioroform) δ 9,98 (IH, s), 7,27 (IH, d), 5,8 (IH, m), 5,5 (IH, d), 5,35 - 5,19 (2H, m), 4,58 (2H, m), 4,14 (IH, m), 2,37 (2H, t), 2,09 (IH, m), 2,0 - 1,75 (2H, m);
Analýza pro C 14^4^()5:
vypočteno: C, 51,21; H, 7,37; N, 17,06 nalezeno: C, 50,2; H, 7,3; N, 16,1 (208b), se připraví analogickým způsobem jako 208a a získá se sklovitý olej (2,37 g, 66 %):
[a] o20 +30° (c 0,26, chloroform);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3476, 3360, 2979, 2923, 1700, 1586, 1527,1427, 1394, 1369,1338, 1253,1156,1060, 997, 929, 846, 775;
]H-NMR (deuterochioroform) δ 9,87 (IH, s), 7,09 (IH, d), 6,05 - 5,75 (3H, m), 5,58 (IH, d), 5,32 - 5,16 (2H, m), 4,54 (2H, d), 4,35 (IH, m), 2,32-2,26 (2H, m), 2,15 - 1,55 (2H, m), 1,41 (9H, s);
Analýza pro C14H24N4O5:
vypočteno: C, 51,21; H, 7,3 7; N, 17,06 nalezeno: C, 51,0; H, 7,5; N, 16,7.
211 (b)R? = MeSO2 (c) R1 = MECO (d) Rl = PhCH2OCO (e) R1 = PhČO (f) R1 = Fmoč
212 (b) R1 = M.eSO2 (c) R' = MECO (d) R1 = PhCH2OCO (e) R1 = PhCO (f) R1 = Fmoc (211 b). Roztok t-butyl-9-amino-6,10-dioxo-l ,2,3,4,7,8,9,10-oktahydro-6H-pyridazino[l,2-a]30 [l,2]diazepin-l-karboxylátu (GB 2,128,984; 831 mg, 2,79 mmol) a diizopropylethylaminu (1,22 ml, 6,99 mmol, 2,5 ekvivalentu) v dichlormethanu (10 ml) pod suchou dusíkovou atmosférou se reaguje s methansulfonylchloridem (237 μΐ, 3,07 mmol 1,1 ekvivalentu). Směs se míchá 1 hodinu, zředí se ethylacetátem (75 ml) a promyje nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (50 ml) a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného (30 ml), suší nad síranem 35 horečnatým a odpaří. Po velmi rychlé chromatografii (10 až 35% ethylacetátu v dichlormethanu) se získá 211b (806 mg, 77 %) ve formě bezbarvé pevné látky: teplota tání 68 až 70 °C;
[a]D 23 -109° (c 1,09, dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3270, 2980, 2939, 1735, 1677, 1458, 1447, 1418, 1396, 1370, 1328,1272, 1252, 1232, 1222,1156, 1131,991;
'H-NMR (deuterochioroform) δ 6,15 (IH, d), 5,31 (IH, m), 4,65 - 4,11 (2H, m), 3,47 (IH, m), 2,99 (3H, s), 2,89 (IH, m), 2,72-2,51 (2H,), 2,34 (IH, m), 2,26 (IH, m), 2,05- 1.62 (4H,.m), 45--ΐ;47’(9ΗΓ5)ξ
Analýza pro Ci5H23N3O6S;
-92CL zvai/l BO vypočteno: C, 47,97; H, 6,71; N, 11,19; S, 8,54 nalezeno: C, 48,28; H, 6,68; N, 10,86; S, 8,28.
Hmotnostní spektroskopie: (+ FAB) 376 (M+ + 1, 66 %), 320 (100), (211c). Acetanhydrid (307 mg, 3,01 mmol) se přidá k míchanému roztoku t-butyl-9-amino-
6.10- dioxo-l,2,3,4,7,8,9,1 0-oktahydro-6H-pyridazino[l ,2-a][l, 2]diazepin-l -karboxy látu (GB 2,128,984; 913,7 mg, 2,74 mmol), diizopropylethylaminu (884 mg, 6,84 mmol) a dichlormethanu (20 ml). Směs se míchá 1 hodinu, potom se zředí ethylacetátem, promyje hydrogenuhličitanem sodným, potom solankou, suší síranem hořečnatým a odpaří za získání bezbarvého oleje. Produkt se čistí pomocí velmi rychlé chromatografie (0,58 % methanol/dichlormethan) za získání 211c (804 mg, 71 %) jako bezbarvého prášku: teplota tání 162-3 °C;
[cc]d23 -109° (c 1,03, dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3358, 2974, 1733, 1693, 1668, 1528, 1462, 1431, 1406, 1371, 1278,1271, 1250, 1233, 1217,1154, 1124;
1 H-NMR (deuterochloroform) δ 6,32 (IH, d), 5,29 - 5,25 (IH, m), 4,98- 4,85 (IH, m),
4,68-4,58 (IH, m), 3,55 - 3,39 (IH, m), 2,91 -2,66 (2H, m), 2,39-2,18 (2H, m), 2,03 (3H, s), 1,88- 1,64 (4H,m), 1,47 (9H, s);
Analýza pro C16H25N3O5:
vypočteno: C, 56,62; H, 7,43; N, 12,38 nalezeno: C, 56,62; H, 7,43; N, 12,36;
Hmotová spektroskopie (+ FAB) 340 (M+ + 1, 40%), 284 (100).
(21 ld). Benzylchlorformiát (1,07 g) k míchanému ledovému roztoku (1S,9S) t-butyl-9-amino-
6.10- dioxo-l ,2,3,4,7,8,9,10-oktahydro-6H-pyridazino[l ,2-a][l ,2]diazepin-l-karboxylátu (GB 2,128,984; 1,55 g, 5,21 mmol), hydrogenuhličitanu sodného (0,66 g, 7,82 mmol), dioxanu (32 ml) a vody (8 ml). Směs se udržuje při 5 °C 15 minut a potom 2 hodiny při teplotě místnosti. Směs se zředí ethylacetátem (50 ml), dvakrát promyje nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, suší nad síranem hořečnatým a odpaří. Olejovitý zbytek se čistí pomocí velmi rychlé chromatografie za získání 21 ld (1,98 g, 88 %) ve formě bezbarvého oleje:
[<x]d24 -56,4° (c 1,0, dichlormethan);
Infračervené spektrum (tenký film) 3325, 2979, 2946,1728, 1677, 1528,1456, 1422, 1370,1340, 1272, 1245, 1156, 1122,1056,916, 734, 699;
'H-NMR (deuterochloroform) δ 7,29 (5H, m), 5,81 - 5,72 (IH, m), 5,26- 5,20 (IH, m), 5,05 (2H, s), 4,69-4,51 (2H, m), 3,48- 3,36 (lH,m), 2,81 - 2,51 (2H, m), 2,34-2,19 (2H, m),
1,90- 1,54 (4H, m), 1,41 (9H, s)
Analýza pro C^HjtN^CU.KjO:
vypočteno; C, 58,79 %; H, 6,92; N, 9,35 nalezeno: C, 59,10 %; H, 6,57; N, 9,25;
Hmotová spektroskopie (ES +) 454 (M++Na, 87%), 432 (Nf+l, 100).
(2Ile). Roztok benzoylchloridu (1,61 g, 11,47 mmol) v dichlormethanu (15 ml) se přikape Flědové směsi“(TS,9S) t-butyl-9-amino-6,10-dioxo-l ,2,3,4,7,8,9,10-oktahydro-6H-pyridazino[l,2-a][l,2]diazepin-l-karboxylátu (GB 2,128,984; 3,1 g, 10,43 mmol), suchého dichlormethanu (20 ml) a diizopropylethylaminu (4,54 ml, 26,06 mmol). Směs se udržuje studená
-93CZ Z9B17I Bt>
hodinu a potom se nechá 0,5 hodiny při teplotě místnosti. Směs se zředí dichlormethanem, dvakrát promyje solankou, suší nad síranem hořečnatým a odpaří. Zbytek se čistí pomocí velmi rychlé chromatografie na silikagelu (0 až 5% methanol v dichlormethanu) za získání 21 le (4,0 g, 96 %) jako bezbarvého skla: teplota tání 74 až 76 °C;
[a]D 30 -75,0° (c 0,12, dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3350, 2979, 2938, 1736, 1677, 1662, 1536, 1422, 1276, 1250, 1155;
lH-NMR (deuterochloroform) δ 8,72 (2H, m), 7,53 - 7,40 (3H, m), 7,07 (IH, d, J = 7,2), 5,30 (lH,dd, J= 3,0, 5,8), 5,12 (IH, m), 4,66 (lH,m), 3,51 (lH,m), 2,90 (2H, m), 2,38 (IH, dd, J = 13,2, 6,8), 2,25 (1H, m), 1,9 (2H, m), 1,70 (1H, m).
Analýza pro C21H27N3O5 0,5H2O:
vypočteno: C, 61,45; H, 6,88; N, 10,24 nalezeno: C, 61,69; H, 6,71; N, 10,18.
(21 if), se připraví podobným způsobem jako 21 le, ale použije se 9-fluorenylmethylchloroformiát místo benzoylchloridu za získání bílé sklovité pevné látky 21 lf (2,14 g, 89 %); teplota tání 190 až 192 °C;
[ct]D 25 -81,5° (c 0,1, dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3335, 2977, 1731, 1678, 1450, 1421, 1246, 1156, 742;
]H-NMR (deuterochloroform) δ 7,60 (2H, m), 7,57 (2H, m), 7,50-7,26 (4H, m), 5,60 (IH, d, J = 7,8), 5,28 (1H, m), 4,67 (2H, m), 4,38 (2H, m), 4,23 (IH, m), 3,59 - 3,41 (1H, m), 2,92 - 2,65 (2H, m), 2,41 - 2,21 (2H, m), 1,95 - 1,58 (4H, m), 1,47 (9H, s).
Hmotová spektroskopie (ES“ m/z) 520 (M+ + 1, 97%), 179 (100%).
(212b), se připraví stejným způsobem jako sloučenina 212e (635 mg, 85%) jako bezbarvý prášek: teplota tání 209 až 212 °C;
[a]D 24-132° (c 0,12, methanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3308, 2940, 1717, 1707, 1699, 1619, 1469, 1456, 1442, 1417, 1.391, 1348, 1339, 1330, 1310, 1271, 1247, 1222, 1175, 1152, 1133,993, 976;
‘H-NMR (deuterochloroform) δ 5,35 (IH, m), 4,58- 4,48 (IH, m), 4,46- 4,36 (lH,m),
3,60 - 3,42 (IH, m), 3,01 - 2,87 (IH, m), 2,95 (3H, s), 2,55 - 2,39 (IH, m), 2,32 - 2,20 (2H, m), 2,09- 1,89 (2H, m), 1,78-1,62 (2H, m);
Analýza pro CuHnNjOfiS:
vypočteno: C, 41,37; H, 5,37; N, 13,16; S, 10,04 nalezeno: C, 41,59; H, 5,32; N, 12,75; S, 9,76;
Hmotová spektroskopie (ES -). Přesná hmotnost vypočtena pro Ci]Hi8N3O6S (MH): 320,0916, nalezeno: 320,0943.
(212c) se připraví ze sloučeniny 21 le stejným způsobem jako sloučenina_2.12e_jako.bílá.sklovitá pevná látka (595 mg, 77 %):
teplota tání >250 °C;
-94CZ. iVOl/l ESO [a]D 24 -153° (c 0,10, methanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3280, 2942, 1742, 1697, 1675, 1650, 1616, 1548, 1470, 1443,1281,1249,1202,1187,1171;
‘H-NMR (deuterochloroform) δ 5,35 - 5,31 (1H, m), 4,81 -4,71 (1H, m), 4,61 -4,46 (1H, m),
3,59-3,44 (2H, m), 3,11 - 2,94 (1H, m), 2,58 - 2,39 (1H, m), 2,36 - 2,19 (2H, m), 2,11 - 1,83 (3H, m), 1,99 (3H,s), 1,78 - 1,56 (2H, m);
Analýza pro C12H17N3O5:
vypočteno: C, 50,88; H, 6,05; N, 14,83 nalezeno: C, 50,82; H, 6,02; N, 14,58;
Hmotová spektroskopie (ES -) 282 (M-l, 100%); přesná hmotnost vypočtena pro CuHigNsOs (MH*): 284,1246; nalezeno: 284,1258.
(212d), se připraví z 21 Id stejným způsobem jako sloučenina 2l2e jako bezbarvé krystaly (170 mg, 97 %): teplota tání 60 až 100 °C;
[<x]D 22- 103° (c 0,10, methanol;)
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3341, 2947,1728, 1675, 1531, 1456, 1422, 1339, 1272, 1248, 1221, 1174, 1122, 1056,982, 699;
‘H-NMR (deuterochloroform) δ 7,35 (5H,s), 5,65 (1H, d), 5,48-5,40 (1H, m), 5,10 (2H, s),
4,76 - 4,57 (2H, m), 3,49 - 3,30 (2H, m), 2,92 - 2,59 (2H, m), 2,40 - 2,27 (2H, m), 1,97 - 1,67 (4H,m);
Hmotová spektroskopie (ES -) 374 (M-l, 100%); přesná hmotnost vypočtena pro Ci8H22N3O6; (MH+): 376,1509; nalezeno: 376,1483. Přesná hmotnost vypočtena pro CigFTiWANa (MNa+): 398,1328; nalezeno: 398,1315.
(212e). Kyselina trifluoroctová (20 ml) se přidá k ledovému roztoku t-butylesteru 21 le (4,15 g,
10,34 mmol) v suchém dichlormethanu (20 ml). Směs se udržuje studená 1,5 hodiny a potom
2,5 hodiny při teplotě místnosti a odpaří se. Kyselina trifluoroctová se odstraní opětovným zahuštěním roztoku zbytku s dichlormethanem/etherem a etherem. Triturací zbytku etherem se získá 212e 3,05 g (85 %) bílé sklovité pevné látky: teplota tání 118 až 126 °C;
[a]D 24 - 70,5P (c 0,1, dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3361, 2943, 1737, 1659, 1537, 1426, 1220, 1174;
1 H-NMR (deuterochloroform) δ 7,80 (2H, m), 7,54 - 7,33 (4H, m), 8,83 (široký s), 5,44 (1H, m),
5,26-5,13 (1H, m), 4,66 (1H, m), 3,59-3,41 (1H, m), 2,97, 2,76 (2H, 2m), 2,36 (2H, m), 1,98 (2H, m), 1,75 (2H, m).
Hmotová spektroskopie: (ES- m/z) 344 (M-l, 100%).
(212f), se připraví z 21 lf v 96% výtěžku stejným způsobem jako 212e: teplota tání 120 až 126 °C;
[a]D 25 -72,5° (c 0,1, dichlormethan);
-95VZ X7O1/I DO
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3406, 2950, 1725, 1670, 1526, 1449, 1421, 1272, 1248, 1223,1175, 761,741;
'H-NMR (deuterochloroform) δ 7,76 (2H, m), 7,62 - 7,26 (4H, m), 6,07, 5,76 (2H, široký s, d, d, J = 2,9), 5,46,5,36 (1H, 2m), 4,79 - 4,54 (2H, m), 4,77 (2H, m), 4,21 (1H, m), 3,41 (1H, m), 2,89 (IH, m),2,69(IH, m), 2,35 (2H, m), 1,98, 1,73 (4H, 2m).
Hmotnostní spektroskopie: (ES”, m/z) 462 (M+ - 1, 50%), 240 (100 %).
(213) (c)R‘ = MeCO (214) (c)R' = MeCO (e) R1 = PhCO (e) R1 = PhCO (213c), se připraví z 212c stejným způsobem jako sloučenina 213e za získání směsi diastereomerů (193 mg» 36 %) jako bezbarvé krystaly:
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3272, 1799, 1701, 1682, 1650, 1555, 1424, 1412, 1278, 1258, 1221, 1122, 937;
'H-NMR (deuterochloroform) δ 7,41 - 7,28 (5H,m), 6,52 (0,5H,d), 6,38 (0,5H, d), 6,22 (0,5H, d), 5,57 (0,5H, d), 5,36 (0,5H, s), 5,10 - 5,05 (1H, m), 5,00 - 4,45 (5,5H, m), 3,19 - 2,84 (3H, m), 2,72-2,56 (IH, m), 2,51 -2,25 (2H, m), 2,02 (3H, s), 1,98- 1,70 (3H, m), 1,66-1,56 (3H,m);
Analýza pro C23H28N4O7:
vypočteno: C, 58,47; H, 5,97; N, 11,86
Nalezeno: C, 58,37; H, 6,09; N, 11,47.
Hmotnostní spektroskopie (ES -) 471 (M-l, 100%); přesná hmotnost vypočtena pro C23H29N4O7 (MH4’): 473,2036, nalezeno: 473,2012; přesná hmotnost vypočtena pro €23^8^0?^ (MNa+) 495,1856, nalezeno: 495,1853, (213e). Tributylcínhydrid (2,2 ml, 8,18 mmol) se přikape k roztoku kyseliny 212e (1,95 g,
5,6 mmol), (3S,2RS) 3-allyloxykarbonylamino-2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuranu (Chapman, Bioorg. & Med. Chem. Lett, 2, str. 615-618 (1992); 1,80 g, 6,16 mmol) a (Ph3P)2PdC12 (50 mg) v suchém dichlormethanu (36 ml), za míchání, pod suchým dusíkem. Po 5 minutách se přidá 1-hydroxybenzotriazol (1,51 g, 11,2 mmol, 6,72 mmol) a po ochlazení (led/voda) hydrochlorid ethyldimethylaminopropylkarbodiimidu (1,29 g, 6,72 mmol). Po 5 minutách se odstraní chladící lázeň a směs se udržuje 4 hodiny při teplotě místnosti, zředí se ethylacetátem, promyje 1M kyselinou chlorovodíkovou, solankou, nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a solankou, suší nad síranem hořečnatým a zahustí. Po velmi rychlé chromatografii (silikagel, 0 až 90% ethylacetátu v dichlormethanu) se získá produkt ve formě bílé pevné látky (2,34 g, 78 %):
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3499, 1792, 1658, 1536, 1421, 1279, 1257, 1123, 977, 699;------------------------------------96cl zvai/ι bď ‘H-NMR (deuterochloroform) δ 7,81 (2H, m), 7,54-7,34 (8H, m), 7,1, 6,97, 6,89, 6,48 (2H, m, d, J = 7,7, d, J = 7,5, d, J - 7,6), 5,57, 5,28 (1H, d, J = 5,2, s), 5,23 - 5,07 (2H, m), 4,93 - 4,42, 3,22 - 2,70,2,51 - 2,26,2,08 - 1,69, 1,22 (15H, 5m).
Analýza pro C28H30N4O7 0,5H2O:
vypočteno: C, 61,87; H, 5,75; N, 10,32 nalezeno: C, 62,02; H, 5,65; N, 10,25.
(214c), se připraví z 213c podobným způsobem, který se použil pro přípravu 214e z 213e za W získání bezbarvých krystalů (140 mg, 99 %); teplota tání 90 až 180 °C;
[a]D 22 -114° (c 0,10, methanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3334,3070, 2946, 1787, 1658, 1543, 1422, 1277, 1258; 15 ]H-NMR (perdeuterodimethylsulfoxid) δ 8,66 (IH, m), 6,18 (IH, d), 6,76 (IH, s), 5,08 (1H, m),
4,68 (IH, m), 4,30 (1H, m), 2,92 - 2,70 (2H, m), 2,27 - 2,06 (3H, m), 1,95 - 1,72 (4H, m), 1,85 (3H, s), 1,58 (2H, m);
Hmotová spektroskopie (ES -) 381 (M-l, 100%); přesná hmotnost vypočtena pro C16H23N4O7 (MH+): 383,1567; nalezeno: 383,1548.
(214e). Směs 213e (2,29 g, 4,28 mmol), 10% palladia na uhlí (1,8 g) a methanolu (160 ml) pod vodíkovou atmosférou za tlaku 6,3 hodiny. Po filtraci a zahuštění se hydrogenace opakuje 25 s čerstvým katalyzátorem (1,8 g) 5 hodin. Po filtraci a odpaření se zbytek trituruje diethyletherem, filtruje a důkladně promyje etherem za získání 214e jako bílé pevné látky (1,67 g, 88 %): teplota tání 143 až 147 °C;
[a]D 23 - 125° (c 0,2, methanol).
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3391,1657, 1651, 1538, 1421, 1280, 1258;
1 H-NMR (deuterochloroform) δ 7,90 (2H, m), 7,63 - 7,46 (3H, m), 5,25 (lH,m), 5,08-4,85 (lH,m), 4,68-4,53 (2H, m), 4,33- 4,24 (lH,m), 3,62 - 3,44, 3,22 - 3,11, 2,75- 2,21, 35 2,15- 1,92, 1,73 - 1,66 (1 IH, 5m).
Analýza pro C21H24N4O7 H2O:
vypočteno: C, 54,54; H, 5,67; N, 12,11 nalezeno: C, 54,48; H, 5,63; N, 11,92.
-97CZ 298171 B6
(215)
(c) Rt = MeCO (217) (d) Rj. « PhCH2OCO (e) Řx = PhCO (215c), se připraví ze sloučeniny 214c podobným způsobem jako sloučenina 215e, za získání směsi diastereomerů jako bílé sklovité pevné látky (398 mg, 84 %):
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3338, 2977, 1738, 1658, 1562, 1541, 1433, 1368, 1277, 1150;
'H-NMR (deuterochloroform) δ 7,36- 7,32 (3H, m), 6,91 (IH, d), 6,30 (IH, d), 5,15- 5,09 (IH, m), 5,01-4,88 (IH, m), 4,61 -4,44 (2H, m), 4,37-4,08 (3H, m), 3,32 - 3,18 (IH, m), 3,04 - 2,89 (1H, m), 2,82 - 2,51 (4H, m), 2,39 - 2,29 (1H, m), 2,08 - 1,64 (4H, m), 2,02 (3H, s);
Analýza pro C28H34N4C12O9:
vypočteno: C, 52,26; H, 5,64; N, 8,71 nalezeno: C, 52,44; H, 5,87; N, 8,16.
Hmotová spektroskopie (ES -) 645/3/1 (M-l, 26%), 189 (81), 134 (100); přesná hmotnost vypočtena pro C28H37N4C12O9 (MH): 643,1938, nalezeno: 643,1924; přesná hmotnost vypočtena pro C28H36N4Cl2O9Na(MNa+) 665,1757, nalezeno: 665,1756.
(215d), se připraví z 214d stejným způsobem jako sloučenina 215e za získání směsi diastereomerů (657 mg, 70 %) jako sklovité bílé pevné látky:
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3420, 3361, 2975, 2931, 1716, 1658, 1529, 1434, 1367, 1348, 1250,1157, 1083,1055;
'H-NMR (deuterochloroform) δ 7,32 (8H, m), 7,14 (lH,d), 5,81 (IH, d), 5,15 (IH, m), 5,07 (2H, s), 4,74-4,65 (IH, m), 4,58-4,22 (4H, m), 4,15-4,06 (IH, m), 3,72 (IH, m), 3,32 - 3,21
-98CZ 298171 B6 (IH, m), 3,04-2,94 (IH, m), 2,69-2,52 (3H, m), 2,33-2,27 (IH, m), 1,95-1,59 (4H, m), 1,28 (9H, s);
Analýza pro C34H40N4Cl2O]0.0,5 H2O: vypočteno: C, 54,70; H, 5,54; N, 7,50, nalezeno: C, 54,98; H, 5,59; N, 7,24.
Hmotová spektroskopie (ES -) 737/5/3 (M-l, 22%), 193/1/89 (100). Přesná hmotnost vypočtena pro C34H4iN4Cl20]o (MíT) 735,2120, nalezeno: 735,2181.
(215e), Tributylcínhydrid (4,6 ml; 11,4 mmol) se přikape k míchané směsi (3S,4RS) t-butyl-(Nallyloxykarbonyl)-3-amino-5-(2,6—dichlorbenzoyloxy)-4-hydroxypentanoátu (připraveného podobným způsobem jako je popsáno v Revesz a kol., Tetrahedron. Lett., 35, str. 9693-9696 (1994)) (2,64 g; 5,7 mmol), (Ph3P)2PdCl2 (50 mg), dichlormethanu (100 ml) a dimethylformamidu (20 ml) při teplotě místnosti. Směs se míchá dalších 10 minut a potom se přidá 1-hydroxybenzotriazol (1,54 g, 11,4 mmol). Směs se ochladí na 0 °C a přidá se hydrochlorid ethyldimethylaminopropylkarbodiimidu (1,31 g; 6,84 mmol). Směs se udržuje při této teplotě 15 minut a potom 17 hodin při teplotě místnosti. Směs se zředí ethylacetátem (300 ml), promyje ÍM kyselinou chlorovodíkovou (2 x 100 ml), nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (3 x 100 ml), suší nad síranem horečnatým a zahustí. Zbytek se čistí pomocí velmi rychlé chromatografie (2 až 5% methanol/dichlormethan) za získání 3,24 g (81 %) 215e jako sklovité pevné látky: teplota tání 106 až 110 °C;
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3354, 1737, 1659, 1531, 1433, 1276, 1150;
'H-NMR (deuterochloroform) δ 7,80 (2H, dd, J = 7,9 a 1,5), 7,75 - 7,26 (6H, m), 7,14 - 6,76 (2H,m), 5,30- 5,02 (2H, m), 4,63-4,11 (5H, m), 3,44- 3,26 (2H, m), 3,10- 2,30 (5H, m),
2,10-1,60 (5H, m), 1,44 (9H, s);
Analýza pro C33H3gCl2N4O9,0,75H2O:
vypočteno: C, 55,12; H, 5,54; N, 7,79; Cl, 9,86, nalezeno: C, 55,04; H, 5,34; N, 7,80; Cl, 10,24.
Hmotová spektroskopie: (Es +) 709/7/5 (M + 1), 378 (59), 324 (64), 322 (100).
(216c), se připraví z 215c podobným způsobem jako sloučenina 216e jako sklovitá bílá pevná látka (300 mg, 83 %): teplota tání 80 až 125 ĎC;
[a]D 23 - 89,1’ (c 1,08, dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3356, 2979, 2935, 1740, 1659, 1532, 1434, 1369, 1276, 1260, 1151;
]H NMR (deuterochloroform) δ 7,39 - 7,32 (3H, m), 7,13 (lH,d), 6,34 (IH, d), 5,22- 5,17 (lH,m), 5,11 (IH, d), 5,04 (IH, d), 4,99- 4,88 (2H, m), 4,64- 4,52 (lH,m), 3,29 - 3,11 (lH,m), 3,05- 2,67 (4H, m), 2,39- 2,29 (IH, m), 2,02 (3H, s), 1,98 - 1,75 (4H, m), 1,46 (9H, s);
Analýza pro C2gH34N4Cl2O9:
vypočteno: C, 52,42; H, 5,34; N, 8,73, nalezeno: C, 52,53; H, 5,70; N, 7,85.
Hmotová spektroskopie (ES -) 643/41/39 (M-l, 100%); přesná hmotnost vypočtena pro C28H35N4C12O9 (MH+): 641,1781, nalezeno: 641,1735; přesná hmotnost vypočtena pro C2gH34N4Cl2O9Na (MNa+): 663,1601, nalezeno: 663,1542.
-99CZ ZV31/1 B&
(216d), se připraví z 215d podobným způsobem jako sloučenina 216a za získání 216d jako bílé sklovité pevné látky (688 mg, 68 %): teplota tání 90 až 170 °C;
[a]D 25 - 83,4° (c 1,01, dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3338, 2933, 1736, 1670, 1525, 1433, 1417, 1368, 1258, 1151, 1056, 1031;
]H NMR (deuterochloroform) δ 7,33 (8H, m), 7,18 (IH, d), 5,65 (IH, d), 5,19 (IH, m), 5,09 (2H, s), 4,98 - 4,86 (IH, m), 4,82 - 4,49 (2H, d), 3,30- 3,07 (IH, m), 3,05 - 2,59 (4H, m),
2.42 - 2,27 (1H, m), 2,18-1,59 (5H,m), 1,42 (9H, s);
Hmotová spektroskopie (ES-) 737/5/3 (M, 13%), 185 (100).
(216e). Dess-Martinovo činidlo (3,82 g; 9,0 mmol) se přidá k míchanému roztoku 215a (3,17 g;
4,5 mmol) v dichlormethanu (100 ml). Přesná hmotnost vypočtena pro C24H27N4CI2O9 (MH+):
585,1 155, nalezeno: 585,1134.
(217d), se připraví z 216d stejným způsobem jako sloučenina 217e za získání 217d jako bílé sklovité pevné látky (310 mg, 96 %): teplota tání 85 až 110 °C;
[cc]D 24 - 85,9° (c 0,13, methanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3351,2945, 1738, 1669, 1524, 1433, 1258, 1147, 1057;
'H NMR (deuterochloroform) δ 7,56 (4H, m), 7,45 (5H, m), 5,32 (2H, m), 5,20 (2H, s),
4,76 - 4,48 (3H, m), 3,65 - 3,38 (3H, m), 3,27 - 3,09 (2H, m), 3,03 - 2,89 (2H, m), 2,65 - 2,24 (3H, m), 2,19-1,62 (5H, m);
Hmotová spektroskopie (ES -) 679/7/5 (M-l, 100%); přesná hmotnost vypočtena pro C3oH3]N4C120io (MET): 677,1417, nalezeno: 677,1430.
(217e), Kyselina trifluoroctová (25 ml) se přikape k míchanému ledově studenému roztoku esteru 216e (2,11 g, 3,0 mmol). Směs se míchá 20 minut při 0 °C, potom 1 hodinu při teplotě místnosti. Směs se odpaří do sucha a třikrát se odpaří s etherem. Po přidání suchého etheru (50 ml) a filtraci se získá 1,9 g (98 %) 217e jako bezbarvé pevné látky: teplota tání 126 až 130 °C;
[a]d30 - 122,0° (c 0,1, methanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3322,1740,1658, 1651, 1532,1433, 1277,1150;
'HNMR (perdeuterodimethylsulfoxid) δ 8,87 (IH, d, J = 7,4), 8,61 (IH, d, J = 7,8), 7,92 - 7,86 (2H, m), 7,65 - 7,43 (6H, m), 5,25 - 5,12 (3H, m), 4,94 - 4,60 (2H, m), 4,44 - 4,22 (1H, m),
3.43 - 3,10 (IH, m), 3,00 - 2,52 (3H, m), 2,45 - 2,10 (3H, m), 2,10 - 1,75 (2H, m), 1,75 - 1,50 (2H, m);
Analýza pro ¢29^012^09,1^0:
vypočteno: C, 52,34; H, 4,54; N, 8,42; Cl, 10,66, nalezeno: C, 52,02; H, 4,36; N, 8,12; Cl, 10,36.
Hmotová spektroskopie (ES -) 649/7/5 (M - 1\ 411 (100%)._________________________
-100CZ. ZVOl/l BO
220b (218b), se připraví z kyseliny 212b a 99 analogickým způsobem jako sloučenina 215e za získání směsi diastereomerů (865 mg, 80 %) jako bezbarvé pevné látky:
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3298, 2974, 1723, 1659, 1544, 1518, 1430, 1394, 1370^
1328, 1273,1256, 1156, 1134;
lH NMR (deuterochloroform) δ 7,45 - 7,28 (4H, m), 7,26 - 7,15 (2H, m), 5,26 - 5,10 (2H, m), 4,80 - 4,67 (1H, m), 4,59 -4,42 (2H, m), 3,32- 3,17 (lH,m), 2,96 (3H, 2xs), 2,93 - 2,79 (1H, m), 2,71 -2,53 (4H, m), 2,38-2,28 (IH, m), 2,07- 1,81 (4H, m) '
Analýza pro C28H35N5Cl2O9S,0,5 H2O:
vypočteno: C, 48,21; H, 5,20; N, 10,03, nalezeno: C, 48,35; H, 5,26; N, 9,48.
Hmotová spektroskopie (ES +) 714/2/0 (M + Na, 25%), 692/90/88 (M+ + 1, 51), 636/4/2 (38), 246 (100); přesná hmotnost vypočtena pro C2SH36N3C12O9S (MH+): 688,1611, nalezeno: 688,1615.
(219b), se připraví z 218b analogickým způsobem jako sloučenina 216e jako bílý prášek (675 mg, 81 %): teplota tání 100 až 200 °C;
[a]D 24 - 84,9° (c 1,01, dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3336, 2978, 2936, 1719, 1674,1510, 1433, 1421, 1369,
1329, 1274, 1257, 1155,991,789;
lH NMR (deuterochloroform) δ 7,47- 7,38 (4H, m), 7,24 (1H, d), 5,61 - 5,53 (1H, m), 5,48 (1H, d), 5,38 - 5,30 (1H, m), 4,67-4,45 (2H, m), 3,48-3,18 (2H, m), 3,04-2,90 (2H, m), 2,97 (3H, s), 2,69- 2,54 (1H, m), 2,42- 2,32 (1H, m), 2,22- 2,15 (1H, m), 2,07- 1,93 (3H, m),
1,71-1,65 (2H, m), 1,38 (9H, s);
Analýza pro C^^NsC^OsS: vypočteno: C, 48,98; H, 4,84; N, 10,20; S, 4,67, nalezeno: C, 48,73; H, 4,95; N, 9,65; S, 4,54.
-101 CZ. Í7OI/L DO
Hmotová spektroskopie (ES +) 692/90/88 (M* + 1, 100%), 636/4/2 (71); přesná hmotnost vypočtena pro C2UI34N5CI2O9S (MH*): 686,1454, nalezeno: 686,1474.
(220b), se připraví z 219b analogickým způsobem jako sloučenina 217e jako světle krémový 5 prášek (396 mg, 87 %): teplota tání 100 až 200 °C;
[a]D 27 - 129° (c 0,12, methanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3310,3153, 1713, 1667, 1557, 1510, 1432, 1421, 1329, ío 1273, 1258, 1221, 1193, 1153, 1134,992,789;
]H NMR (perdeuterodimethylsulfoxid) δ 7,88 (IH, s), 7,81 - 7,60 (4H, m), 5,49 - 5,28 (1H, m),
5,24 - 5,14 (IH, m), 4,46 - 4,22 (2H, m), 3,30 - 3,03 (2H, m), 2,97 - 2,76 (3H, m), 2,96 (3H, s),
2,46 - 2,24 (1H, m), 2,16 - 2,05 (1H, m), 2,03 - 1,78 (3 H, m), 1,68 - 1,46 (2H, m);
Hmotová spektroskopie (ES-) 632/30/28 (Μ - 1, 68%), 149/7/5 (100); přesná hmotnost vypočtena pro C24H26N5CI2O9S (ΜΗ*): 630,0828, nalezeno: 630,0852.
O O
223b Rx = MeSO2
223e Rx = PhC.O (221b), se připraví z kyseliny 212b a (3S,4RS) t-butyl-N-(allyloxykarbonyl)-3-amino-420 hydroxy—4-(5,7-dichlorbenzoxazol-2-yl)butanoátu (204) analogickým způsobem jako sloučenina 215e za získání směsi diastereomerů (460 mg, 70 %) jako sklo:
Infračervené spektrum (film) 3325,1725, 1664, 1453, 1399, 1373,1327, 1274,1256, 1155;
25--1H-NMR-(deuterochloroform)-5-7;57-(4H7m)7-7;36-(2Hrm),_6;06-(-HÍ7t);-5;29-(2H7m)7-4779 (IH, m), 4,47 (IH, m), 3,23 (IH, m), 2,97 a 2,94 (3H spojené, 2 x s), 2,9- 2,4 (4H, m), 2,30 (IH, m), 1,96 (4H, m), 1,41 a 1,37 (9H spojené, 2 x s).
-102LA ZVOI/1 DO
Hmotová spektroskopie ES Da/e 660 (Μ- If Cl35 100%, 662 (M - 1) Cl37.
(221 e), se připraví z kyseliny (212e) a (3S,4RS) t-butyl-N-(allyloxykarbonyl)-3-amino-4— hydroxy-4-(5,7-dichlorbenzoxazol-2-yl)butanoátu (204) analogickým způsobem jako sloučenina 215e za získání směsi diastereomerů (613 mg, 87 %)jako sklo:
Infračervené spektrum (film) 3328, 1729, 1660, 1534, 1454, 1422, 1399, 1276, 1254, 1155;
'H NMR (deuterochloroform) δ 7,80 (2H, d), 7,60- 7,35 (5H, m), 7,05 (2H, m), 5,13 (3H, m),
4,74 (IH, m), 4,51 (lH,m), 3,25 (lH,m), 3,1-2,6 (5H,m), 2,33 (IH, m), 2,1-1,5 (5H, m),
1,43 a 1,41 (9H spojené, 2 x s).
Hmotová spektroskopie ES+ Da/e 688 (M + 1)+ Cl35 5 5%, 690 (M + 1)+ Cl37 3 5%, 328 100%.
(222b), se připraví z 221b analogickým způsobem jako sloučenina 216e za získání bezbarvého skla (371 mg, 86%):
[cc]D 26 - 81,0 (c 0,1, dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3324, 2979, 2936, 1726, 1664, 1394, 1370, 1328, 1155, 991;
'H NMR (deuterochloroform) δ 7,78 (lH,d), 7,57 (2H, m), 5,87 (IH, d), 5,69 (lH,m), 5,47 (IH, m), 4,55 (2H, m), 3,24 (2H, m), 3,0 (5H, m + s), 2,59 (IH, m), 2,39 (IH, m), 2,2- 1,7 (4H, m), 1,65 (IH, m), 1,40 (9H, s).
(222e), se připraví z 221 e analogickým způsobem jako sloučenina 216e za získání bezbarvého skla (480 mg, 84%);
[<x]D 25 - 86,4° (c 0,1, dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3337, 2978, 2938, 1728, 1657, 1534, 1456, 1422, 1395, 1370, 1277, 1250,1154; .
'h NMR (deuterochloroform) δ 7,80 (3H,m), 7,50 (4H, m), 7,20 (IH, d), 7,02 (lH,d), 5,60 (IH, m), 5,28 (IH, m), 5,15 (IH, m), 4,11 (IH, m), 3,34 (2H, m), 2,96 (3H, m), 2,40 (IH, m), 2,20 (IH, m), 1,92 (2H, m), 1,67 (2H, m), 1,38 (9H, s).
Hmotová spektroskopie ES- Da/e 684 (M - 1) Cl35 47%, 686 (M - 1)‘ Cl37 3 2%.
(223b), se připraví z 222b analogickým způsobem jako sloučenina 217e za získání bílé pevné látky (257 mg, 78 %):
[ot]D 25 - 105,7° (c 0,1, dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3321, 1723, 1663, 1407, 1325, 1151, 992;
'H NMR (perdeuterodimethylsulfoxid) δ 8,96 (IH, d), 8,18 (IH, d), 7,96 (IH, d), 5,50 (IH, m), 5,15 (IH, m), 4,30 (2H, m), 3,06 (2H, m), 2,87 (5H, m + s), 2,29 (IH, m), 1,99 (4H, m), 1,56 (2H, m).
(223e), se připraví z 222e analogickým způsobem jako sloučenina 217e za získání světle krémové pevné látky (311 mg, 78 %): teplota tání 167 až 180 °C; _____________________________ [a]D 23 ~ 88,6° (c 0,1, dichlormethan);
-103CL ZV5I/I BO
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3331, 1724, 1658, 1534, 1458, 1421, 1279, 1256, 991;
*H NMR (deuterochloroform) δ 7,77 (4H, m), 7,4 (5H, m), 5,57 (IH, široký s), 5,33 (IH, široký s), 5,47 (IH, kv), 4,56 (IH, široký d), 3,60 (2H, m), 3,20 (3H, m), 2,76 (IH, m), 2,36 (IH, dd), 2,0 (3H,m), 1,66 (IH, m).
Hmotová spektroskopie ES Da/e 628 (M - 1) Cl35 7%, 630 (Μ - 1)' Cl37 2,3%, 584 100%.
224e Ri = PhCO, X = S 226e Rj = PhCO, X = S
225e Rj = PhCO, X = O 227e Ri = PhCO, X = O (224e). 1-Hydroxybenzotriazol (0,23 g, 1,71 mmol) a hydrochlorid ethyldimethylaminopropylkarbodiimidu was se přidá k míchanému roztoku kyseliny 212e (0,295 g, 0,853 mmol) v tetrahydrofuranu (5 ml). Po 5 minutách se přidá voda (0,5 ml) a po dalších 7 minutách se přidá roztok (3S) t-butyl-3-allyloxykarbonylamino-5-(2-chlorfěnyl)mcthylthio-4-oxopentanoátu (123, 0,478 g, 1,02 mmol) a (PPha^PdCh (20 mg) v tetrahydrofuranu (2 ml). Během 20 minut se přikape tributylcínhydrid (0,65 ml, 2,33 mmol). Směs se míchá 4,5 hodiny a potom se zředí ethylacetátem, promyje 1M kyselinou chlorovodíkovou, solankou, nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a potom znovu solankou. Směs se suší nad síranem hořečnatým a zahustí. Zbytek se trituruje několikrát hexanem, který se dekantuje a sleje, potom se čistí pomocí velmi rychlé chromatografie (10 až 100% ethylacetát v dichlormethanu) za získání 0,2 g (35 %) bílé sklovité pevné látky: teplota tání 70 až 72 °C;
[a]D 26 - 82,5° (c 0,02, dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3404, 1726, 1660, 1534, 1524, 1422, 1277, 1254, 1154;
*H NMR (deuterochloroform) δ 7,83 - 7,78 (2H, m), 7,7, 7,75 - 7,32, 7,26 - 7,20 (7H, 3m), 7,12 (IH, d, J = 8,2), 7,01 (IH, d, J = 7,3), 5,23 - 5,08 (2H, m), 5,03 - 4,94 (IH, m), 4,62 (IH, dt, J = 145), 3,78 (2H, m), 3,38 - 3,29 (IH, m), 3,26 (2H, s), 3,06 - 2,82 (4H, m), 2,71 (1H, dd, J= 17,2,4,5), 2,39 (IH, dd,J= 13,2, 6,5), 2,15 - 1,83,1,73 - 1,63 (5H, m), 1,45 (9H, s).
Analýza pro C33H39CIN4O7S:
vypočteno: C, 59,05; H, 5,86; N, 8,35, nalezeno: C, 59,00; H, 5,80; N, 7,92.
(225e), se připraví z kyseliny 212e a (3S) t-butyl N-(allyloxykarbonyl)-3-amino-5-(2-chlorfenylmethyloxy)-4-oxopentanoátu (201) podobným způsobem jako sloučenina 224e, za získání 40 mg (23 %) sklovité pevné látky:
*H NMR (deuterochloroform) δ 7,83 - 7,73 (2H, m), 7,67-7,10 (9H, m), 5,23 - 5,09 (2H, m), 4,59 (IH, m), 4,45 - 4,22 (2H, m), 3,7 - 3,19, 3,08 - 2,72, 2,71 - 2,47, 2,05 - 1,85, 1,72 - 1,61, 1,45- 1,26 (20H, 6m).
(226e), se připraví z 224e analogickým způsobem jako sloučenina 217e a získá se 0,22 g (81 %) bílé pevné látky: teplota tání 95 až 100 °C;
-104L·/. Í70I/I DO [a]D 23 - 95,6° (c 0,2, dichlormethan); I
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3393, 1720, 1658, 1529, 1422, 1279;
'HNMR (perdeuterodimethylsulfoxid) δ 8,80 (IH, d, J = 7,5), 7,89 (2H, m), 7,7 (1H, d, T = 7,7),
7,56- 7,28 (7H, m), 5,10 (IH, m), 4,87-4,73 (2H, m), 4,39 (IH, m), 3,77 (2H, m), 3,44, 3,35 (2H, +H2O, 2m), 2,97 - 2,56, 2,2,1,92,1,61 (11H, 4m).
Analýza pro C29H3iC1N4O7S.0,5 H2O:
vypočteno: C, 55,02; H, 5,10; N,8,85, nalezeno: C, 55,00; H, 5,09; N, 8,71.
(227e), se připraví z 225e analogickým způsobem jako sloučenina 217e. Produkt se dále čistí pomocí velmi rychlé chromatografie (0 až 5% methanol/dichlormethan) za získání 19 mg (81 %) sklovité pevné látky:
'HNMR (deuterochloroform) δ 7,79 (2H, m), 7,66- 7,18 (9H, m), 5,30 -5,10 (2H, m), 4,85 (IH, m), 4,65 (2H, m), 4,53 (IH, m), 4,28 (2H, m), 3,28, 3,01, 2,72, 2,33, 1,94, 1,60 (11H, 6m).
Hmotová spektroskopie (ES-, m/z) 597 (Μ* - 1, 100%).
Oe X =
22'8e X =
9 e X =
(228e). 1-Hydroxybenzotriazol (0,23 g, 1,68 mmol) a potom hydrochlorid ethyldimethylaminopropylkarbodiimidu-(0,21-g,-l-,09-mmol-)-se-př-idají-k-míchanému-roztoku-kyseliny-24-2e-(0?29-g? 0,84 mmol) v dichlormethanu (3 ml) při teplotě místnosti. Směs se míchá 10 minut a potom se přidá roztok (3RS,4RS) t-butvl-3-amino-5-fluor—4-hydroxypentanoátu (Revesz, L. a kol.
-105CL Ζ^δΐ /l BO ί
I
Tetrah. 52, str. 9693-9696 (1994); 0,29 g, 1,40 mmol) v dichlormethanu (3 ml) a potom 4-dimethylaminopyridin (10 mg). Roztok se míchá 17 hodin, zředí ethylacetátem, promyje 1M kyselinou chlorovodíkovou, solankou, nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a znovu solankou, suší nad síranem horečnatým a zahustí. Zbytek se čistí pomocí velmi rychlé chromatografie (50 až 100% ethylacetát/dichlormethan a 5% methanol/ethylacetát) za získání 0,25 g (56 %) bílé sklovité pevné látky:
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3343, 1726, 1658,1536, 1426, 1279, 1257, 1157;
ίο ΉNMR (deuterochloroform) δ 7,84- 7,79 (2H, m), 7,57- 7,40 (3H, m), 7,05- 6,92, 6,73 (2H,2m), 5,17 - 5,04 (2H,m), 4,56, 4,35 - 4,21, 4,04 (5H,3m), 3,36,3,09- 2,34, 2,00 (11H, 3m), 1,46 (9H, s).
Analýza pro C26H35FN4O7,0,5 H2O:
vypočteno: C, 57,45; H, 6,65; N, 10,31, nalezeno: C, 57,64; H, 6,56; N, 10,15.
(229e) se připraví z 228c analogickým způsobem jako sloučenina 216e. Po čištění pomocí velmi rychlé chromatografie (30 až 50% ethylacetát/dichlormethan) se získá produkt ve formě bílé sklovité pevné látky (0,194 g, 89 %):
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3376, 1728, 1659, 1529, 1424, 1279, 1256, 1156.
(230e), se připraví z 229e analogicky jako sloučenina 217e za získání 230e jako bílé sklovité pevné látky (100 %): teplota tání 105 až 125 °C;
[a]D 23 - 91,4° (c 0,72, methanol).
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3336,1789,1737,1659, 1535,1426, 1279, 1258, 1186;
'HNMR (deuterochloroform) δ 7,71 - 7,68 (2H, m), 7,37 - 7,23 (3H, m), 5,02, 4,88- 4,63, 4,37 - 4,0 (6H, 3m), 3,30,2,97,2,68 - 2,60,2,37 -1,54 (1 IH, 4m).
Hmotová spektroskopie (EŠ-, m/z) 475 (M+ - 1, 100%).
O O
(231e) (232e) (231a), Methylester kyseliny N-Fluorenylmethyloxykarbonyl-3-amino-3-kyanopropionové (EP0547699A1, 385 mg, 1,1 mmol) se reaguje s 17 ml diethylaminu. Po 1,5 hodině míchání při teplotě místnosti se roztok zahustí. Zbytek se čistí pomocí chromatografie na silikagelu (3% methanol v dichlormethanu) a za získání volného aminu jako světle žlutého oleje. K. roztoku 40 tohoto oleje a hydroxybenzotriazolu (297 mg, 2,19 mmol) v dimethy 1 formámidu_(5_ml),_se_při.
°C přidá ethyldimethylaminopropylkarbodiimid (232 mg, 1,21 mmol, 1,1 ekvivalentu) a potom
-106CL Λ7Ο1!I DO kyselina (1 S,9S) 9-(benzoylamino}-[6,1O-dioxo-1,2,3,4,7,8,9,10-oktahydro-6H-pyridazino[1,2-a][l ,2]diazepin-l-karboxylové.
(212e). Po 5 minutách míchání při 0 °C a potom při teplotě místnosti přes noc se směs zředí dichlormethanem (50 ml) a vzniklý roztok se postupně promyje 1M kyselinou chlorovodíkovou (2 x 30 ml), vodou (30 ml), 10% roztokem hydrogenuhličitanu sodného (2 x 30 ml) a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného, suší se nad síranem horečnatým a zahustí. Po čištění pomocí velmi rychlé chromatografie na silikagelu (3% methanol v dichlormethanu) se získá sloučenina 231 e (404 mg, 83 %) ve formě pevné látky:
[a]D 20 - 1210 (c 0,14, dichlormethan); I *HNMR (deuterochloroform) δ 7,40 - 7,83 (5H,m), 7,38 (lH,d), 6,96 (IH, d), 5,27- 5,07 (2H, m), 4,66-4,50 (IH, m), 3,79 (3H, s), 3,23 - 2,73 (6H, m), 2,47 - 2,33 (IH, m), 2,15 - 1,82 (4H,m);
Analýza pro C22H25N5O6:
vypočteno: C, 58,0; H, 5,53; N, 15,38, nalezeno: C, 57,6; H, 5,6; N, 15,0.
(232e). Roztok methylesteru 23le (400 mg, 0,88 mmol) v methanolu (30 ml) a vodě (30 ml) se ochladí na 0 °C a reaguje s diizopropylethylaminem. Roztok se míchá 10 minut při 0 °C a potom přes noc při teplotě místnosti. Heterogenní směs se zahustí a získaná pevná látka se čistí pomocí chromatografie na silikagelu (5% methanol/1% kyselina mravenčí v dichlormethanu) za získání volné kyseliny 232a (170 mg, 44 %) jako bílé pevné látky: teplota tání 155 °C (za rozkladu);
[oc]d2° - 117° (c 0,1, methanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3343,3061,2955, 1733, 1656, 1577, 1533, 1490, 1421, 1342,1279, 1256,1222, 1185, 708;
‘H NMR (perdeuteromethanol) 8 7,88 - 7,28 (5H, m), 5,20 - 5,03 (1H, m), 4,98 - 4,84 (2H, m),
4,75 - 4,53 (IH, m), 4,51 - 4,34 (1H, m), 3,45 - 3,22 (IH, m), 3,14 - 2,94 (1H, m), 3,14- 2,94 (1H, m), 2,88 - 2,61 (2H, m), 2,53 - 1,50 (8H, m);
Analýza pro C2iH23N5O6, 1,5 H2O:
vypočteno: C, 53,84; H, 5,59; N, 14,95; O, 25,61, nalezeno: C, 54,3; H, 5,4; N, 14,3.
-107CZ ZVOI/I DO
237eŘ=
COrř-Bu
36e R =
0
O i
S/V *
Ph· N H °O*N^CHO
H
CÓ2H
235eR= CO,H
23SeR=
(233e). Roztok (1S,9S) 6,10-dioxo-l,2,3,4,7,8,9,10-oktahydro-9-(benzoylamino)-6H-pyridazino[l,2-a][l,2]diazepin-l-karboxylové kyseliny (212e) (345 mg, 1,0 mmol), (208a) (361 mg, l-l mmol, 1,1 ekvivalentu) a (Ph3P)2PdCl2 (20 mg) v dichlormethanu (5 ml), se reaguje 5 s přikapaným nBu3SnH (0,621 ml, 2,3 mmol, 2,1 ekvivalentu). Vzniklý oranžovohnědý roztok se míchá 10 minut při 25 °C a potom se přidá ethyldimethylaminopropylkarbodiimid (253 mg,
1,3 mmol, 1,2 ekvivalentu). Po 10 minutách míchání při 0 °C a potom při teplotě místnosti přes noc se směs zředí ethylacetátem (50 ml) a vzniklý roztok se postupně promyje 1M kyselinou chlorovodíkovou (3 x 25 ml), 10% roztokem hydrogenuhliěitanu sodného (3 x 25 ml), a nasyce10 ným roztokem chloridu sodného, suší se nad síranem hořečnatým a zahustí. Po velmi rychlé chromatografii silikagel (2 až, 10% methanol v dichlormethanu) se získá sloučenina 233e (280 mg, 49 %) ve formě žlutohnědé pevné látky:
[a]D 20 - 95° (c 0,09, methanol);
J5______________________________________________________________________________________________________________
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3477, 3333, 2968, 2932, 1633, 1580,1535, 1423, 1378, 1335, 1259, 1156, 1085, 709;
- 108£/701 / 1 DL' ’HNMR (deuterochloroform) 5 9,32 (IH, s), 7,83- 7,39 (6H, m), 7,11- 7,09 (IH, m),
6,30- 5,30 (2H, široký s), 5,17 - 5,05 (2H, m), 4,62 - 4,38 (2H, m), 3,30 - 3,15 (IH, m),
3,13 - 2,65 (2H, m), 2,46 - 2,19 (3H, m), 2,15-1,54 (8H, m), 1,42 (9H, s).
(236a), se připraví analogickým způsobem jako sloučenina 233e za použití (4R) semikarbazonu t-buty 1-N-allyloxykarbonyM-amino-5-oxo-pentanoátu (208b, 435 mg, 1,33 mmol). Produkt se získá jako pěna (542 mg, 71 %):
io [a]D 20 - 99° (c 0,19, chloroform);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3473, 3331, 3065, 2932, 2872, 1660, 1580, 1533, 1488, 1423, 1370, 1337, 1278, 1254, 1223, 1155, 1080, 1024, 983,925,877, 846, 801,770, 705;
'HNMR (deuterochloroform) δ 9,42 (IH, s), 7,81 (2H, d), 7,51 - 7,40 (4H, m), 7,06 (IH, d),
6,50- 5,50 (2H, široký s), 5,25- 5,00 (2H, m), 4,60- 4,45 (2H, m), 3,15- 2,85 (2H, m),
2,75 - 2,35 (IH, m), 2,30 - 1,23 (11H, m), 1,42 (9H, s).
(234e). Roztok semikarbazonu 233e (390 mg, 0,68 mmol) v methanolu (10 ml) se ochladí na 20 0 °C a potom se reaguje s 38% vodným roztokem formaldehydu (2 ml) a 1M kyselinou chlorovodíkovou (2 ml). Reakční směs se potom míchá při teplotě místnosti přes noc. Roztok se zahustí a odstraní se tak methanol. Vodný roztok se extrahuje ethylacetátem (30 ml). Organická vrstva se postupně promyje 10% roztokem hydrogenuhličitanu sodného (30 ml) a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného (30 ml), suší se nad síranem horečnatým a zahustí. Po čištění 25 pomocí velmi rychlé chromatografie na silikagelu (2 až 5 % methanol v dichlormethanu) se získá
234e (179 mg, 51 %) ve formě pěny:
[a]D 20 - 101° (c 0,064, methanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3346,2976, 2934, 1730, 1657, 1535, 1456, 1425, 1278, 1255, 1156,708;
‘HNMR (deuterochloroform) δ 9,56 (IH, s), 7,88- 7,38 (5H, m), 7,01 a 6,92 (2H, 2d),
5,27 - 5,08 (2H, m), 4,69 - 4,46 (IH, m), 3,50-3,27 (2H, m), 3,15 - 2,73 (2H, m), 2,46 - 1,83 35 (10H, m), 1,45 (9H,s).
(237e), se připraví z 236e analogickým způsobem jako sloučenina 234e za získání bílé pěny (390 mg, 85 %):
[α]ο20 - 113° (c 0,242, chloroform);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3352, 3065, 2974, 1729, 165-7, 1536, 1489, 1454, 1423, 1369, 1338, 1278, 1255, 1223, 156, 1078, 1026, 981,846, 709.
(235e). Roztok t-butylesteru 234e (179 mg, 0,35 mmol) v suchém dichlormethanu (3 ml) se ochladí na 0 °C a reaguje se s kyselinou trifluoroctovou (2 ml). Vzniklý roztok se míchá 30 minut při 0 °C a potom při teplotě místnosti 2 hodiny. Roztok se zahustí, zbytek se převede do suchého dichlormethanu (5 ml) a směs se znovu odpaří. Tento postup se ještě jednou opakuje s dalším dichlormethanem (5 ml). Získaný zbytek se krystalizuje z diethyletheru. Krystaly se oddělí a čistí 50 se pomocí kolonové chromatografie na silikagelu (5% methanol v dichlormethanu) a získá se sloučenina 235e jako bílá pevná látka (111 mg, 70 %): teplota tání 142 °C (za rozkladu);
[a]D 20 - 85,5° (c 0,62, methanol);
-109UZ ZV3171 B6
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3409, 3075, 2952, 1651, 1541, 1424, 1280, 198, 1136, 717;
'HNMR (perdeuterodimethylsulfoxid) δ 9,40 (1H, s), 8,62 (2H,m), 7,96- 7,38 (5H,m), s 5,19 - 5,02 (1H, m), 4,98 - 4,79 (1H, m), 4,48 - 4,19 (1H, m), 3,51 - 3,11 (2H, m), 3,04 - 2,90 (2H, m), 2,38-1,46 (10H, m).
(23 8e), se připraví z 237e analogickým způsobem jako 235e za získání béžové pěny (190 mg, 60 %):
o [a]D 20 - 78° (c 0,145, methanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3400, 3070, 2955, 2925, 2855, 1653, 1576,1541, 1490, 1445, 1427, 1342, 1280, 1258, 1205, 1189, 1137, 1075, 1023, 983, 930, 878, 843, 801, 777, 722 ;
’HNMR (perdeuterodimethylsulfoxid) δ 9,40 (1H, s), 8,72- 8,60 (2H, m), 7,89 (2H, d),
7,56-7,44 (3H, 5,17 (lH,m), 4,90- 4,83 (1H, m), 4,46- 4,36 (lH,m), 4,20-4,15 (lH,m), 3,40 - 3,30 (1H, m), 2,98 - 2,90 (2H, m), 2,50 - 1,60 (10H, m).
(243), se připraví z (1S,9S) t-butyl-9-aminooktahydro-10-oxo-6H-pyridazino[l,2-a][l,2]diazepin-l-karboxylátu (Attwood, a kol, J. Chem. Soc., Perkin 1, str. 1011-19 (1986)), způsobem popsaným pro sloučeninu 21 le, za získání 2,03 g (86 %) bezbarvé pěny:
[cc]D 25 ” 15,9° (c 0,5, dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3400, 2976, 2937, 1740, 1644, 1537, 1448, 1425,1367, 1154;
'HNMR (deuterochloroform) δ 7,88- 7,82 (2H, m), 7,60- 7,38 (4H, m), 5,48 (1H, m), 4,98 30 (1H, m), 3,45 (1H, m), 3,22 - 2,96 (2H, m), 2,64 (1H, m), 2,43 - 2,27 (2H, m), 1,95 (2H, m),
1,82-1,36 (4H, m), 1,50 (9H, s);
Analýza pro C2]H29N3O4,0,25 H2O: vypočteno: C, 64,35; H, 7,59; N, 10,72,
-110nalezeno: C, 64,57; H, 7,43; N, 10,62.
Hmotová spektroskopie (ES +, m/z) 386 (100%, M+ + 1).
(244) , se připraví z (1 S,9S) t-butyl-9-benzoylaminooktahydro-10-oxo-6H-pyridazino[l,2-a][l,2]diazepin~l-karboxylátu (243), způsobem, který je popsaný pro sloučeninu 212e, za získání 1,52 g (89 %) bílého prášku: teplota tání 166 až 169 °C (za rozkladu);
[a]D 25 - 56,4° (c 0,5, methanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3361,2963,2851, 1737, 1663, 1620,1534, 1195, 1179;
lHNMR(perdeuterodimethylsulfoxid) δ 12,93 (IH, široký s), 8,44 (IH, d, J = 8,4), 7,93 (2H, m), 7,54 (3H,m), 5,46 (IH, m), 4,87 (IH, m), 3,12 (2H, m), 2,64 (IH, m), 2,64 (IH, m), 2,27 (IH, m), 1,98- 1,68 (7H, m), 1,40 (IH, m);
Analýza pro C|7H2]N3O4,0,25H2O:
vypočteno: C, 60,79; H, 6,45; N, 12,51, nalezeno: C, 61,07; H, 6,35; N, 12,55.
Hmotová spektroskopie (ES+, m/z) 332 (58%, M* + 1), 211 (100).
(245) , se připraví z (1S,9S) 9-benzoylaminooktahydro-10-oxo-6H-pyridazino[l,2-a][l,2]-diazepin-l-karboxylové kyseliny (244), způsobem, který je popsán pro sloučeniny 213e, za získání 601 mg (76 %) bezbarvé pěny:
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3401, 2945, 1794, 1685, 1638, 1521, 1451, 1120;
lH NMR (deuterochioroform) δ 7,87 - 7,77 (2H, m), 7,57 - 7,14 (10H, m), 5,59 - 5,47 (2H, m), 4,97-4,32 (4H, m), 3,27- 1,35 (14H, m);
Analýza pro C28H32N4O6j055 H2O:
vypočteno: C, 63,50; H, 6,28; N, 10,58, nalezeno: C, 63,48; Η, H, 6,14; N, 10,52.
Hmotová spektroskopie (ES +, m/z) 521 (100%, M+ + 1).
(246) , se připraví z [3S,2RS (lS,9S)pN-(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)-9-benzoylaminooktahydro-10-oxo-6H-pyridazino[ 1,2-a] [ 1,2]diazepin-l-karboxamidu (245), způsobem popsaným pro přípravu sloučeniny 214e, za získání 396 mg (84 %) bílého prášku: teplota tání 110 až 115 °C;
[α]ρ2δ-126,3° (c 0,2, methanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3345,2943,1787, 1730, 1635, 1578,1528,1488,1450, 1429;
'HNMR (deuterochioroform) δ 7,88 (2H, m), 7,48 (3H, m), 5,55 (1H, m), 4,91 (IH, m), 4,56 (IH, m), 4,29 (IH, m), 3,41-3,05 (3H, m), 2,76-2,41 (3H, m), 2,28-2,01 (3H, m), 1,86-1,65 (4H,m), 1,36 (lH,m);
Analýza pro C21H26N4O6,1,25H2O:
vypočteno: C, 55,68; H, 6,34; N, 12,37, nalezeno: C, 55,68; H, 6,14; N, 12,16.
-111 VZJ 4701 r I DO
Hmotová spektroskopie (ES - m/z) 429 (100%, M+ - 1),
(248) (247)
(249)
(250) (247). n-Butyllithium (1,6M v hexanu) (22,3 ml, 35,7 mmol) se během 20 minut přikape k roztoku (2R)-(-)-2,5-dÍhydro-3,6-dimethoxy-2-(l-mcthylcthyl)pyrazinu (5,8 ml, 6,0 g,
32,4 mmol) v tetrahydrofuranu (250 ml) ochlazenému na -75 °C tak rychle, aby teplota nepřekročila -72 °C. Reakční směs se míchá při -75 °C 1 hodinu a během 30 minut se přidá roztok 2,6-di-t-butyl-4-methoxyfenyl-2-butanoátu (Suzuck a kol. Liebigs Ann. Chem. str, 51-61 (1992)) (9,9 g, 32,5 mmol) v tetrahydrofuranu (60 ml) tak aby teplota během přidávání nepřekročila-72 °C. Reakční směs se udržuje při teplotě -75 °C 1,5 hodiny a při -75 °C se přidá roztok ledové kyseliny octové (6 ml) v tetrahydrofuranu (25 ml) a roztok se ohřeje na teplotu místnosti. Roztok se nalije do 10% roztoku chloridu amonného (300 ml) a extrahuje se diethyletherem (3 x 250 ml). Spojené organické vrstvy se promyjí solankou (2 x 200 ml), suší nad síranem sodným a odpaří do sucha za sníženého tlaku. Zbylý olej se čistí pomocí velmi rychlé chromatografie na silikagelu (20% heptan v dichlormethanu) a získá se sloučenina uvedená v názvu ve formě světle žlutého oleje (13,5 g, 85 %):
[a]D 26 - 64° (c 0,22, methanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 2962, 2873,2840, 1757, 1697, 1593, 1460,1433, 1366, 1306, 1269, 1236, 1187, 1157, 1126, 1063, 1038, 101, 970, 924, 892, 867, 846, 831, 797, 773, 754;
!H.NMR_(deuterochloroform)-5-6,85-(2H,.s),-4,21-(.l.H,-t,-J-^.3,5.),-3,98-(-l.H,-t,-J-=-3,5.),-3,-7-9--------------(3H, s), 3,71 (3H, s), 3,69 (3H, s), 3,15 (1H, dd, J = 17,8, 7,9), 2,86-2,81 (1H, m), 2,58 (1H, dd, J= 17,8,5,9),2,28 — 2,19 (1H,m), 1,33 (18H, s), 1,02(3H,d, J = 6,8), 0,70(6H,dd, J = 13,6,8).
-112Í7O1 ri DV (248) . Roztok (247) (22,4 g, 45,8 mmol) v acetonitrilu (300 ml) a 0,25N kyseliny chlorovodíkové (366 ml, 2 ekvivalenty) se míchá při teplotě místnosti pod dusíkem 4 dny. Acetonitril se odpaří za sníženého tlaku a k vodné fázi se přidá diethylether (250 ml). pH vodné vrstvy se upraví na pH 8-9 pomocí koncentrovaného roztoku (32%) a vrstvy se odpaří. Vodná vrstva se extrahuje diethyletherem (2 x 250 ml). Spojené organické vrstvy se suší nad síranem sodným a odpaří do sucha za sníženého tlaku. Zbylý olej se čistí pomocí velmi rychlé chromatografie na silikagelu (2% methanol v dichlormethanu), čímž se získá požadovaný produkt ve formě světle žlutého oleje (8,2 g, 45 %):
[cc]d 2Q + 20° (c 0,26, methanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3394, 3332, 3000, 2962, 2915, 2877, 2838, 1738, 1697, 1593, 1453, 1430, 1419, 1398, 1367, 1304, 1273, 1251, 1221, 1203, 1183, 1126, 1063, 1025, 15 996, 932, 891, 866, 847, 800, 772, 745;
'HNMR (deuterochloroform) δ 6,85 (2H, s), 3,79 (3H,s), 3,74 (3H,s), 3,72- 3,69 (IH, m), 3,05 - 2,85 (IH, m), 2,67 - 2,50 (2H, m), 1,32 (18H, s), 0,93 (3H, d, J == 7);
Analýza pro C22H35NO5:
vypočteno: C, 67,15; H, 8,96; N, 3,56, nalezeno: C, 67,20; H, 9,20; N, 3,70.
(249) . Roztok (2S,3S)-5-[2,6-di-t-butyM-methoxyfenyl]3_methylglutamátu (248) (8,0· g,
20,3 mmol) v 5N kyselině chlorovodíkové (200 ml) se zahřívá 2 hodiny k varu. Reakční směs se odpaří za sníženého tlaku do sucha. Zbytek se rozpustí v cyklohexanu (čtyřikrát) a odpaří do sucha (čtyřikrát), čímž se získá bílá pevná látka (7,9 g, 93 %): teplota tání 230 °C;
[a]D 20 + 22° (c 0,27, methanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3423,2964, 1755, 1593, 1514, 1456, 1421, 1371, 1303, 1259, 1201, 1179, 1138, 1106, 1060, 966, 926, 861,790,710;
'HNMR (monodeuteromethanol) δ 6,76 (2H, s), 4,02 (IH, d, J = 3,7), 3,67 (3H, s), 3,05 - 2,85 35 (IH, m), 2,80-2,55 (2H, m), 1,22 (18H, s), 1,09 (3H, d, J = 6,3);
,3C NMR (monodeuteromethanol) δ 174,5, 171,4, 158,6, 145,2, 143,1, 113,2, 58,3, 56,3, 39,8, 36,9, 32,5, 16,6;
Analýza pro C21H34C IN O5:
vypočteno: C, 60,64; H, 8,24; N, 3,37, nalezeno: C, 60,80; H, 8,40; N, 3,40.
(250) , Diizopropylethylamin (4,1 ml, 3,04 g, 23,5 mmol, 1,25 ekvivalentu) a anhydrid kyseliny 45 fialové (3,5 g, 23,6 mmol, 1,25 ekvivalentu) se přidá k roztoku (2S,3S)-5-[2,6-di-t-butyl-4- methoxyfenyl]3-methylglutamátu (249) (7,8 g, 18,6 mmol) v toluenu (300 ml), a vzniklá směs se zahřívá 3 hodiny k varu. Po ochlazení na teplotu místnosti se reakční směs odpaří do sucha a vzniklý olej se čistí pomocí velmi rychlé chromatografie na silikagelu (2% methanol v dichlormethanu) za získání požadovaného produktu ve formě bílé pěny (8,35 g, 87 %):
[oc]D 20 + 20° (c 1,04, methanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3480, 2968, 2880, 1753, 1721, 1594, 1462, 1422, 1388, 1303,1263,1216,1183, 1148,1062, 1003, 933, 899, 755, 723;
-113VZJ Λ7Ο1 /1 DO 'HNMR (deuterochloroform) δ 7,92 - 7,87 (2H, m), 7,78- 7,73 (2H, m), 6,84 (2H, s), 4,95 (IH, d), 3,78 (3H, s), 3,30-3,05 (2H, m), 2,85-2,65 (IH, m), 1,30 (18H, s), 1,13 (3H, d).
V
0'
(254)
(252)
(251). Roztok aminokyseliny (250) (1,2 g, 2,35 mmol) v suchém diethyletheru (10 ml) se reaguje s-chlor-idern-fGsforečným-(0r52-g—2T5-mm o l-)-2-hod i ny-při-teplote-místnosti—Směs-se-zahustí-a několikrát se přidá toluen a znovu se odpaří do sucha. Vzniklý chlorid kyseliny se rozpustí v suchém tetrahydrofuranu (5 ml) a dichlormethanu (5 ml) a ochladí se na 0 °C. K. roztoku se přidá t
-114CL· 470111 DO butyl-l-(benzyloxykarbonyl)hexahydro-3-pyridazinkarboxylát (0,753 g, 2,35 mmol, 1 ekvivalent) a N-ethylmorfolin (3 ml) Reakční směs se míchá 30 minut při 0 °C a potom přes noc při teplotě místnosti. Směs se odpaří a zbytek se převede do dichlormethanu (30 ml). Roztok se promyje 1M kyselinou chlorovodíkovou, vodou, 10% roztokem hydrogenuhličitanu sodného, suší se nad síranem horečnatým a odpaří. Vzniklá bílá pěna se čistí na silikagelu (0 až 2% methanol v dichlormethanu) za získání požadované sloučeniny 251 ve formě světle žluté sklovité pevné látky (740 mg, 39 %):
[a]D 20 - 22° (c 0,42, methanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3441, 2966, 1725, 1693, 1386, 1255, 1221, 1186, 1154, 1123, 1063, 724;
'HNMR (deuterochloroform) δ 7,94- 7,89 (4H,m), 7,56- 7,28 (5H,m), 6,84 (2H, 2s),
5,29-5,20 (2H, AB), 4,91 - 4,81 (IH, m), 4,05 - 3,88 (IH, m), 3,78 (3H,s), 3,75- 3,80 (1H, m), 3,28 - 2,95 (2H, m), 2,23 - 1,51 (6H, m), 1,45 (9H, s), 1,31 (9H, s), 1,28 (9H, s), 1,27 (3H,d).
(254). Roztok chráněné kyseliny (251) (715 mg, 0,893 mmol) v acetonitrilu se reaguje s amoniumnitrátem ceričitým (1,8 g, 3,3 mmol, 3,7 ekvivalentu) ve vodě (3 ml) 4 hodiny při teplotě místnosti. Přidá se mannitol (600 mg, 3,3 mmol, 3,7 ekvivalentu) a směs se míchá 1 hodinu. Ke směsi se přidá diethylether (50 ml) a voda (30 ml). Po usazení se vodná vrstva extrahuje diethyletherem (4 x 50 ml). Spojené organické vrstvy se promyjí vodou, suší nad síranem hořečnatým a zahustí. Po chromatografii na silikagelu (10% methanol v dichlormethanu) se získá 5-( 1 -benzyloxykarbony 1-3t-butoxykarbonyl-hexahydropyridazin-2-yl)karbonyl-3methyM-fthalimidopentanová kyselina (252) (360 mg, 64 %):
[a]D 20 - 49,2° (c 0,118, methanol).
Tento produkt se použije bez dalšího čištění (360 mg, 0,609 mmol), a hydrogenuje se v methanolu (30 ml) za použití 10% Pd/uhlí (36 mg) 3 hodiny. Reakční směs se filtruje a vzniklý roztok se zahustí za získání aminu (253) jako pěny (270 mg, 96 %) [ct]D 20 - 56,1° (c 0,18, methanol).
Amin (253) se rozpustí v suchém tetrahydrofuranu (10 ml) a přidá se chlorid fosforečný (305 mg,
1,47 mmol, 2,5 ekvivalentu). Směs se ochladí na -5 °C a v dusíkové atmosféře se přidá N-ethylmorfolin. Reakční směs se míchá přes noc při teplotě místnosti. Směs se zahustí a zbytek se zpracuje dichlormethanem (20 ml), studenou vodou (20 ml), 1M kyselinou chlorovodíkovou (20 ml). Po usazení se vodná vrstva znovu extrahuje dichlormethanem (2 x 20 ml). Spojené organické vrstvy se promyjí 10% roztokem hydrogenuhličitanu sodného a vodou, suší nad síranem hořečnatým a zahustí. Zbylý olej se čistí na silikagelu (1% methanol v dichlormethanu) za získání bicyklické sloučeniny (254) jako pevné látky (65 mg, 25 %):
[cx]d20 - 77° (c 0,208, methanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3471, 3434, 2975,2928, 1767, 1.723, 1443, 1389, 1284, 1243, 1151, 1112, 720;
‘HNMR (deuterochloroform) δ 7,94 - 7,69 (4H, m), 5,34- 5,27 (IH, m), 4,89-4,66 (2H, m), 3,94 -3,64 (2H, m), 3,02- 2,84 (IH, m), 2,34 - 2,19 (2H, m), 1,94 - 1,61 (3H, m), 1,47 (9H, s), U4 (3H,d);
Analýza pro C23H27N3O6:
- 115VZ. A7O1 F L DO vypočteno: C, 62,57; H, 6,17; N, 9,52, nalezeno: C, 62,60; H, 6,40; N, 9,10.
(255). Roztok bicyklické sloučeniny (254) (70 mg, 0,16 mmol) v ethanolu se reaguje s hydrazinhydrátem (0,02 ml, 4 mmol, 2,5 ekvivalentu). Po 5 hodinách míchání při teplotě místnosti se směs zahustí a vzniklý zbytek se převede do toluenu a znovu odpaří. Zbytek se reaguje s 2M kyselinou octovou (2 ml) 16 hodin. Vzniklá sraženina se odfiltruje a promyje 2M kyselinou octovou (10 ml). pH filtrátu se pomocí pevného hydrogenuhličitanu sodného upraví do bazické reakce a potom se extrahuje ethylacetátem. Organický roztok se promyje vodou, suší nad síranem hořečnatým a zahustí. Po čištění velmi rychlou chromatografií na silikagelu (2% methanol v dichlormethanu) se získá volný amin jako pěna (50 mg, 100 %). Amin (50 mg, 0,16 mmol) se rozpustí v dioxanu (1 ml) a vodě (0,25 ml) a reaguje s hydrogenuhličitanem sodným (0,034 g, 0,04 mmol) a potom benzoylchloridem (0,047 ml, 0,40 mmol, 2,8 ekvivalentu). Směs se míchá přes noc při teplotě místnosti, potom se zředí ethylacetátem (15 ml). Organický roztok se promyje 10% roztokem hydrogenuhličitanu sodného a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného, suší nad síranem hořečnatým a zahustí. Po čištění pomocí velmi iychlé chromatografie na silikagelu (2% methanol v dichlormethanu) se získá benzamid 255 jako pěna (67 mg, 100 %):
'HNMR (deuterochloroform) δ 7,89- 7,39 (5H, m), 6,79 (IH, d), 5,32-5,20 (IH, m), 4,98 - 4,82 (IH, m), 4,75 - 4,64 (1H, m), 3,84 - 3,65 (IH, m), 3,09 - 2,89 (IH, m), 2,45 - 2,18 (2H, m), 2,00-1,61 (4H, m), 1,48 (9H, s), 1,28 (3H, d).
(257) Roztok t-butylesteru 255 (67 mg, 0,16 mmol) v dichlormethanu (1 ml) se při 0 °C reaguje s kyselinou trifluoroctovou (1 ml). Vzniklý roztok se míchá 15 minut při 0 °C a potom 1 hodinu při teplotě místnosti. Roztok se zahustí, zbytek se převede do suchého dichlormethanu (2 x 2 ml) a směs se znovu zahustí (dvakrát). Zbytek se krystalizuje z diethyletheru. Po filtraci sraženiny se získá volná kyselina 255 jako šedá pevná látka (40 mg, 70 %). Roztok kyseliny (40 mg, 0,11 mmol), N-al!yloxykarbonyM-amino-5-benzyloxy-2-oxotetrahydrofuranu (Chapman, Bioorg. & Med. Chem. Lett., 2, str. 615-18 (1992); 39 mg, 0,13 mmol, 1,2 ekvivalentu) a (Ph3P)2PdCl2 (3 mg) ve směsi se suchým dichlormethanem (1 ml) a suchým dimethylformamidem (0,2 ml) se po kapkách reaguje s n-Bu3SnH (0,089 ml, 0,33 mmol, 3 ekvivalenty). Vzniklý roztok se míchá 10 minut při 25 °C a potom se přidá 1-hydroxybenzotriazol (36 mg, 0,266 mmol, 2,4 ekvivalentu). Směs se ochladí na 0 °C a přidá se ethyldimethylaminopropylkarbodiimid (31 mg, 0,16 mmol, 1,5 ekvivalentu). Po 10 minutách míchání při 0 °C a potom přes noc při teplotě místnosti se směs zředí ethylacetátem (20 ml) a vzniklý roztok se postupně promyje 1M kyselinou chlorovodíkovou (2x5 ml), 10% roztokem hydrogenuhličitanu sodného (2x5 ml) a nasyceným. vodným roztokem chloridu sodného (5 ml), suší se nad síranem hořečnatým a zahustí. Po velmi rychlé chromatografií na silikagelu (2% methanol v dichlormethanu) se získá směs diastereoizomerů (256) ve formě šedé pevné látky (50 mg, 82 %). Tento produkt (256) se použije přímo bez dalšího čištění (50 mg, 0,091 mmol) a hydrogenuje se v methanolu (5 ml) za použití 10% Pd/uhlí (30 mg) 24 hodin. Reakční směs se filtruje a vzniklý roztok se zahustí. Po velmi rychlé chromatografií na silikagelu (2 až 20% methanol v dichlormethanu) se získá sloučenina 257 (9 mg, 21 %) ve formě bílé pevné látky:
Ή NMR (perdeuteromethanol) δ 7,88 - 7,29 (5H, m), 5,18 - 4,99 (1H, m), 4,59 - 4,35 (3H, m),
4,26- 4,11 (IH, m), 3,65 - 3,41 (2H, m), 3,18- 2,91 (IH, m), 2,62 - 1,47 (BH, m), 1,29 - 1,00 (3H, 2d) (směs acetalu a poloacetalu).
Hmotová spektroskopie (ES -) 457.
-116^70111 ου (259)
PhCONHNH2 ¢258)
COjBn
Phcorr^n
H
COoH
(261)
(259). Benzylakrylát (1,13 ml, 7,34 mmol) se přidá k míchané suspenzi benzoylhydrazinu (285) (1,0 g, 7,34 mmol) v izopropanolu (28 ml). Směs se zahřívá 20 hodin kvaru, ochladí se na teplotu místnosti a potom se zahustí. Zbytek se čistí pomocí velmi rychlé chromatografie (20% ethylacetát v dichlormethanu) za získání sloučeniny 259 (1,098 g, 50 %) jako oleje, který krystalizuje stáním: teplota tání 65 °C;
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3283, 1723, 1644, 1316, 1201, 1156;
10----!H.NMR_(deuterochloroform)-6-8,32^8,-7,8.1---7,70-(2H,-m),-7,57—7,23-(8H,-m),-------------
5,36-4,92 (IH, široký m), 5,11 (2H, s), 3,26 (2H, t, J = 6,5), 2,59 (2H, t, J = 6,5);
-117- 13C NMR (deuterochloroform) δ 172,12, 167,27, 135,65, 132,54, 131,66, 128,45, 128,10, 128,06, 126,84, 66,31, 47,33,33,31;
Analýza pro CnHigN^:
vypočteno: C, 68,44; H, 6,08; N, 9,39, nalezeno: C, 88,42; H, 6,10; N, 9,38.
Hmotová spektroskopie (ES +)321 (M + Na, 38%), 299 (M+ +1,100).
(260) . Roztok (3S)-l-benzyl-3-t-butyl-hexahydropyridazin-l,3-dikarboxylátu (Hassall a kol. J. Chem. Soc. Perkin 11 str. 1451-1454 (1979)) (925,3 mg, 2,89 mmol) a diizopropylethylaminu (0,70 ml, 4,0 mmol) v 1,93M toluenovém roztoku fosgenu (17,96 ml, 34,7 mmol) se míchá 45 minut při teplotě místnosti, potom se odpaří za vzniku žluté pevné látky. K této pevné látce se přidá toluen (18 ml), hydrazid (259) (861,6 mg, 2,89 mmol) a diizopropyl ethyl amin (0,70 ml, 4,0 mmol). Směs se míchá při teplotě místnosti 2,75 hodiny, potom se zahustí. Zbytek se převede do ethylacetátu, dvakrát promyje ÍM kyselinou chlorovodíkovou, solankou, potom se suší nad síranem horečnatým, filtruje a zahustí za získaná 2,15 g surové látky. Po velmi rychlé chromatografii (40% ethylacetát v hexanu) se získá 1,65 g (89 %) sloučeniny uvedené v názvu ve formě bílé pěny: teplota tání 40 °C;
[oc]D 24 ~ 55,78° (c 0,40, dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3436,2930, 1033, 1689, 1455, 1412, 1367, 1258, 1156, 697;
*H NMR (deuterochloroform) δ 8,54 - 8,23 (0,5H, m), 7,97 - 7,09 (15, 5H), 5,16 - 4,80 (4H, m), 4,66- 4,32 (IH, m), 4,24- 3,55 (3,3H, m), 3,50 - 3,26 (0,4H, m), 3,19 - 2,49 (2,3H, m), 2,11 - 1,43 (6H, m), 1,32- 1,05 (7H, m);
Analýza pro C35H40N4O8,0,5 H2O:
vypočteno: C, 64,31; H, 6,32; N, 8,57, nalezeno: C, 64,18; H, 6,27; N, 8,56.
Hmotová spektroskopie (ES +) 662 (M + Na, 84%), 645 (M+ + 1, 100), 384 (77).
(261) . Roztok sloučeniny 260 (1,59 g, 2,47 mmol) v methanolu (142 ml) se reaguje s 10% palladiem na uhlí (230,0 mg) a míchá ve vodíkové atmosféře 1,5 hodiny. Směs se filtruje a rozpouštědlo se odpaří za získání 1,04 g (100 %) bílé pěny. Ta se použije v následujícím kroku bez dalšího čištění: teplota tání < 40 °C;
[cc]D 26 + 1,6° (c 0,26, dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3422, 2977, 2986, 1728, 1677, 1486, 1445, 1396, 1369, 1309, 1228, 1155,916, 716;
]HNMR (deuterochloroform) δ 10,0- 9,7 (IH, širokým), 7,86 (2H, d, J= 7,5), 7,62- 7,38 (3H, m), 7,3 - 5,6 (2H, široký m), 4,57 (IH, široký d, J = 4,0), 4,05-3,77 (2H,), 3,00-2,82 (1H, m), 2,80 - 2,43 (3H, m), 2,20 - 2,03 (1H, m), 2,00 - 1,47 (1H, m), 1,62 - 1,14 (11H, m);
13C NMR (deuterochloroform) δ 175,00, 171,17, 167,62, 160,68, 132,39, 131,77, 128,67, 127,38, 82,27, 54,38, 48,04,46,35, 33,62, 28,02, 25,68, 21,61.
Hmotová spektroskopie (ES +) 443 (M + Na, 68%), 421 (M+ + 1), 100), 365 (50), 131 (61).
- 118Ví. £701 n DO (262) . K roztoku aminokyseliny 261 (1,012 g, 2,41 mmol) v suchém tetrahydrofuranu (26 ml) se při 0 °C přidá N-ethylmorfolin (597 μΐ, 4,69 mmol), a chlorid fosforečný (651,3 mg, 3,12 mmol). Reakční směs se míchá 2 hodiny při 0 °C, potom se nechá ohřát na teplotu místnosti a míchá se dalších 15,5 hodiny. Směs se zahustí a zbytek se převede do ethylacetátu, dvakrát promyje 1M kyselinou chlorovodíkovou, nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, solankou, potom se suší nad síranem hořečnatým, filtruje a zahustí. Po velmi rychlé chromatografii (20% ethylacetát v dichlormethanu) se získá 727,3 mg (75 %) sloučeniny uvedené v názvu ve formě bílé pěny:
[a]D 26 - 51,0° (c 0,20, dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3436, 2979, 1733, 1670, 1483, 1437, 1420, 1299, 1243, 1156;
*HNMR(deuterochloroform) δ 8,70 (IH, s), 7,78 (2H, d, J = 7,0), 7,57- 7,32 (3H, m), 5,08 (IH, dd, J = 2,5, 5,5), 4,59- 4,43 (IH, m), 4,08 - 3,69 (3H, m), 3,07- 2,84 (IH, m), 2,57-2,35 (IH, m), 2,34 - 2,14 (IH, m), 2,07 - 1,43 (3H, m), 1,48 (9H, s);
13C NMR (deuterochloroform) δ 172,41, 169,04, 166,35, 158,35, 132,24, 132,03, 128,61, 127,31, 62,77, 55,41, 54,07,41,57, 32,21, 28,04, 24,97, 20,37;
Analýza pro C2oH26N405:
vypočteno: C, 59,69; H, 6,51; N, 13,92, nalezeno: C, 59,53; H, 6,53; N, 13,84.
Hmotová spektroskopie (ES +) 425 (M + Na, 71%), 403 (M+ + 1, 100), 145 (41).
(263) . Roztok esteru 262 (720,0 mg, 1,80 mmol) ve směsi 1:1 dichlormethan a kyselina trifluoroctová (150 ml) se míchá 1,3 hodiny v suché atmosféře. Roztok se potom odpaří ve vakuu, převede se diethyletheru a znovu odpaří. Tento postup se opakuje šestkrát za získání surového produktu jako bílé pevné látky. Produkt se čistí pomocí velmi rychlé chromatografie (5% methanol v dichlormethanu) za získání 520,0 mg (83 %) sloučeniny uvedené v názvu jako bílé pěny:
[a]D 25 + 59,5° (c 1,82, dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3435, 3266, 2956, 1732, 1664, 1524, 1486, 1440, 1302;
]HNMR (deuterochloroform) δ 9,13 (IH, s), 7,77 (2H, d, J = 7,5), 7,57- 7,32 (3H, m),
5,27-5,16 (IH, m), 4,62 - 4,43 (IH, m), 4,09 - 2,70 (3H, m), 3,14-2,89 (IH, m), 2,59 - 2,43 (IH, m), 2,38 - 2,20 (IH, m), 2,14 - 1,89 (IH, m), 1,82 - 1,59 (2H, m);
I3C NMR (deuterochloroform) δ 173,65, 172,28, 166,44, 158,42, 132,44, 131,31, 128,61, 127,39, 54,83, 54,01, 42,11, 31,79, 24,42, 20,29;
Hmotová spektroskopie (ES -) 345 (M - H+, 100%), 161 (45).
(264) . K. roztoku kyseliny 263 (300,0 mg, 0,87 mmol) a (2RS,3S)-3-allyloxykarbonylammo-2benzyloxy-5-oxotetrahydrofuranu (Chapman, Bioorg. &Med. Chem. Lett. 2, str. 615-18 (1992)) (277,6 mg, 0,95 mmol) v suchém dichlormethanu (2,5 ml) a suchém d i methyl formamidu (2,5 ml) se při teplotě místnosti přidá bis(trifenylfosfin)palladiumchlorid (13,0 mg), potom tri-n-butylcínhydrid (466,0 μΐ, 1,73 mmol). Reakční směs se míchá 5 minut, potom se přidá 1-hydroxybenzo_triazol_(23_4,.l_mg,_l .73_mmol)_a_směs_se_ochladí_na_0TC_a. přidá. se_hydrochlorid_l-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimid (204,5 mg, 1,04 mmol). Směs se nechá ohřát na teplotu místnosti a míchá se 16,5 hodiny. Směs se zředí ethylacetátem, promyje se 1M roztokem hydro
-119£701/1 DU gensíranu sodného, dvakrát nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, potom vodou a solankou. Organická vrstva se suší nad síranem hořečnatým, filtruje a zahustí. Zbytek se čistí pomocí velmi rychlé chromatografie (5% methanol v dichlormethanu) za získání 358,3 mg (77 %) sloučeniny uvedené v názvu jako bílé pevné látky:
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3435, 1791, 1665, 1526, 1421, 1285;
‘HNMR (deuterochloroform) δ 8,76a 8,49 (IH, 2x s), 7,92 - 7,73 (2H, m), 7,62 - 7,24 (8,5H, m), 6,86 (0,5H, d, J = 8,0), 5,53 a 5,33 (IH, d, J = 5,5, s), 4,95 - 4,34 (5H, m), 4,04 - 3,54 10 (3H, m), 3,03-2,64 (2H, m), 2,49 - 2,14 (2H, m), 2,11 - 1,46 (4H, m);
Hmotová spektroskopie (ES +) 558 (M 4- Na, 100%), 536 (M+ + 1, 78), 404 (58).
(265). Směs sloučeniny 264 (350,0 mg, 0,65 mmol), 10% palladia na uhlí (350 mg) a methanolu 15 (36 ml) se 6,5 hodiny míchá ve vodíkové atmosféře. Směs se filtruje a rozpouštědlo se odpaří.
Přidá se diethylether a rozpouštědlo se znovu odpaří. Tento postup se opakuje čtyřikrát a získá se 283 mg (97 %) sloučeniny uvedené v názvu jako bílé krystalické látky: teplota tání dekarboxylátu výše 140 °C;
[a]D 26 + 36,5° (c 0,18, methanol).
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3428, 1663, 1528, 1487, 1437, 1288;
‘HNMR (perdeuterodimethylsulfoxid) δ 10,56 (IH, s), 8,71 - 8,57 (IH, m), 7,88 - 7,81 (2H,.m), 25 7,65 - 7,46 (3H, m), 4,97 - 4,85 (1H, m), 4,38 - 4,0 (3H, m), 3,88 - 3,52 (3H, m), 2,91 - 2,71 (2H, m), 2,50-2,38 (IH, m), 2,35-2,21 (IH, m), 2,10-1,94 (IH, m), 1,93 - 1,49 (3H, m);
‘3C NMR (perdeuterodimethylsulfoxid) δ 173,66, 172,49, 169,97, 169,89, 164,96, 157,62,
132,35, 131,85, 128,39, 127,32,53,81,52,69, 40,90,33,17,31,60, 24,40, 24,13, 19,24;
Hmotová spektroskopie (ES -).
BOC—NT CO2H DCHA
Phth-N^CC^H
1) PCI5 (266)
2)
- 120vzl í7<h/i ου (266) . Roztok dicyklohexylamonné soli kyseliny (2S) 3-benzyl oxy karbony lam i no-2-tercbutoxykarbonylaminopropionové (3 g, 5,8 mmol) v dichlormethanu (200 ml) se čtyřikrát promyje 1M roztokem kyseliny chlorovodíkové, suší se nad síranem hořečnatým a zahustí. Vzniklý olej se rozpustí v suchém dichlormethanu (35 ml), ochladí se na 0°C a reaguje s kyselinou trifluoroctovou (35 ml). Tento roztok se 1,5 hodiny míchá při 0 °C, potom se odpaří do sucha. Ke zbytku se přidá dichlormethan (50 ml), který se potom odstraní ve vakuu. Tento postup se opakuje šestkrát za získání bílé pevné látky. Bílá pevná látka se suspenduje v toluenu (50 ml), reaguje se s práškovým anhydridem kyseliny fialové (940 mg, 6,35 mmol) a 18 hodin se zahřívá k varu. Vzniklý roztok se zahustí za získání oleje, který se čistí pomocí velmi jychlé 10 chromatografie (2 až 10% methanol/dichlormethan) za získání sloučeniny 266, 2,01 g (94 %) jako bílého prášku:
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3600-2500 široký, 1776, 1714, 1530,1469, 1455, 1392, 1263, 1131,722;
'HNMR (deuterochloroform) δ 7,83 (2H, m), 7,72 (2H, m), 7,29 (5H, m), 5,41 (IH, m), 5,03 (2H, s), 3,90 (2H, m);
Hmotová spektroskopie (ES-), 367 (Μ - 1).
(267) . Suspenze kyseliny 266 (1,32 g, 3,58 mmol) v suchém etheru (37 ml) se reaguje s chloridem fosforečným (1,04 g, 5 mmol) a míchá se 2 hodiny při teplotě místnosti. Roztok se filtruje a odstraní se nezreagovaný chlorid fosforečný, potom se odpaří do sucha. Ke zbytku se přidá suchý toluen (25 ml) a odpaří se do sucha. Tento postup se opakuje několikrát. Vzniklý olej se rozpustí v suchém dichlormethanu (25 ml), ochladí se na 0 °C a reaguje se s roztokem (3S) t-butyl l-benzyloxykarbonylpyridazin-3-karboxylátu (1,15 g, 3,58 mmol) v suchém dichlormethanu (2 ml) a potom v 5% vodném roztoku hydrogenuhličitanu sodného (25 ml). Směs se rychle míchá 20 hodin při teplotě místnosti, potom se zředí ethylacetátem (100 ml) a okyselí se 1M kyselinou chlorovodíkovou na pH 2. Organická vrstva se dvakrát promyje zředěným rozto30 kem kyseliny chlorovodíkové, potom solankou, suší se nad síranem hořečnatým a zahustí.
Vzniklý olej se čistí pomocí velmi rychlé chromatografie (2 až 20% ethylacetát/dichlormethan, potom 10 až 20% methanol/dichlormethan) za získání sloučeniny (267), 1,25 g (52 %) jako bílého prášku:
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3367, 2955, 1722, 1517, 1455, 1387, 1369, 1251, 1153, 721;
'HNMR (deuterochloroform) δ 7,81 (2H, m), 7,74 (2H, m), 7,63 (IH, široký s), 7,31 (10H, m), 5,46 - 4,76 (5H, m), 4,07 - 3,54 (4H, m), 2,4 (IH, m), 2,0 - 1,6 (3H, m), 1,40 (9H, s);
Hmotová spektroskopie (ES+), 671 (M + 1), 693 (M +Na).
(268) . Roztok esteru 267 (50 mg, 0,074 mmol) v methanolu (15 ml) se reaguje s 10% palladiem na uhlí (50 mg) a hydrogenuje se za normálního tlaku 24 hodin. Směs se evakuuje a odstraní se tak vodík, a potom se reaguje s 37% vodným formaIdehydem (18 mg, 0,22 mmol) a míchá se v dusíkové atmosféře 2 hodiny. Směs se filtruje, odpaří do sucha a produkt se čistí pomocí velmi rychlé chromatografie (4 až 100% ethyl acetát/dichlormethan) za získání sloučeniny 268 14,5 mg (48 %)jako oleje:
'HNMR (deuterochloroform) δ 7,85 (2H, m), 7,71 (2H, m), 5,78 (IH, dd, J = 10,5), 4,99 (IH, dd, J = 6,1, 1,5), 4,07 (IH, d, J = 10,6), 3,49 (IH, dd, J = 14, 5), 3,39 (IH, d, J - 10, 3), 3,24 (IH, dd, J = 14, 10,2), 3,17 (2H, m), 2,39 (IH, m), 1,84 - 1,46 (3H), 1,51 (9H, s);
Hmotová spektroskopie (ES+), 415 (M + 1), 437 (M + Na).
- 121 CZ 298171 B6
Sloučeniny 280-283 se připraví ze sloučeniny 212b podobným způsobem, jako se připraví sloučenina 226e. Sloučeniny 284-287 se připraví podobným způsobem, jako se připraví sloučenina 217e.
122CZ Z98171 B6
(306a)_se_přip.raví_pod_obnvm_způsobem_jako_sloučenina_208a_kromě_toho,_že_2,6=zdichlorfenylmethoxyamin (připravený podobným způsobem jako 306b) se použije místo semikarbazidu za získání 870 mg (kvantitativně) čirého oleje.
-123CZ 298171 B6 (306b) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 208a kromě toho, že 2-(fenyl)ethoxyamin (US 5 346 911) se použije místo semikarbazidu za získání 395 mg (kvantitativně) čirého oleje.
(307a) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 23 3e kromě toho, že se použije sloučenina 306a místo sloučeniny 207a za získání 23 mg (23 %) sloučeniny 307a jako bílé pevné látky.
(307b) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 233e kromě toho, že se použije sloučenina 306b místo sloučeniny 207a za získání 43 mg (48 %) sloučeniny 307b jako bílé pevné látky.
(308a) se připraví ze sloučeniny 307a podobným postupem jako sloučenina 23 5e ze sloučeniny 234e za získání 15,2 mg (74 %) bílé pevné látky.
*H NMR (perdeuteromethanol) δ 0,9(m), 1,3(s), l,7(m), l,8(m), 2,0(m), 2,1 - 2,2(m), 2,3(dd),
2,4- 2,5(m), 2,6(m), 2,7-2,8(m), 3,l(m), 3,3(m), 3,4- 3,5(m), 4,5(m), 4,9(m), 5,l(m), 5,3(d), 5,4(s), 6,8(d), 7,2 - 7,5(m), 7,8(dd), 8,4(dd).
(308b) se připraví ze sloučeniny 307b podobným způsobem jako sloučenina 235e ze sloučeniny 234e za získání 25,2 mg (68 %) bílé pevné látky:
]H NMR (perdeuteromethanol) δ l,2(m), 1,6- l,7(m), 2,0- 2,l(m), 2,2(m), 2,3(m), 2,5(m),
2,6-2,7(dd), 2,9(t), 3,0(t), 3,l(m), 3,3 - 3,5(m), 4,2(t), 4,25(m), 4,5(m), 5,2(t), 5,3(t), 6,7(d),
7,1 - 7,2(m), 7,35(dd), 7,4(m), 7,5(m), 7,8(d), 8,3(dd).
O O
(302) (3Ó3a) R=CH3
(304á) R=CH3
- 124CZ 298171 B6 (302).
Krok A: 301 se připraví podobným způsobem jako sloučenina 605a (Step A), kromě toho, že sloučenina 212e se použije místo sloučeniny 603a za získání 540 mg (34 %) bílé pevné látky.
Krok B; 302. Roztok sloučeniny 301 (50,7 mg; 0,091 mmol) v 2,8 ml směsi methanol/kyselina octová/37% vodný formaldehyd (5:1:1) se míchá 5,5 hodiny při teplotě místnosti a reakční směs se odfiltruje a zahustí na 0,7 ml ve vakuu. Zbytek se rozpustí v 3 ml acetonitrilu a zahustí se na 0,7 ml (třikrát), rozpustí se v toluenu a zahustí na 0,7 ml ve vakuu (dvakrát) a odpaří do sucha. Po chromatografii (velmi rychlá, SiCh, 5% izopropanol/dichlormethan) se získá sloučenina 302 (45,5 mg, 78 %) jako bílá pevná látka:
Ή NMR (perdeuterodimethylsulfoxid) δ 1,0-1,15 (m,2H), 1,4 (s, 9H), 1,65 (m,2H), 1,9-2,1 (m, 2H), 2,15 - 2,4 (m, 3H), 2,55 (m, IH), 2,7 - 3,0 (m, 2H), 4,3 - 4,6 (m, 2H), 4,9 (m, IH), 5,2 (m, 1H), 7,4 - 7,6 (m, 2H), 7,8 - 8,0 (m, 2H), 8,6 (m, IH), 8,8 (m, 1H), 9,4 (s, 1H).
(304a).
Krok A: Roztok sloučeniny 302 (90 mg; 0,18 mmol) v 10 ml methanolu se reaguje s trimethylorthoformiátem (1 ml) a hydrátem kyseliny p-toluensulfonové (5 mg; 0,026 mmol) a reakční směs se míchá 20 hodin. K reakční směsi se přidají 3 ml nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a zahustí se ve vakuu. Zbytek se převede do ethylacetátu a promyje se zředěným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, suší se nad síranem horečnatým a zahustí ve vakuu za získání 80 mg sloučeniny 303a.
Krok B: 303a se rozpustí ve 2 ml kyseliny trifluoroctové a míchá se 15 minut při teplotě místnosti. Reakční směs se rozpustí v dichlormethanu a zahustí se ve vakuu (třikrát). Po velmi rychlé chromatografii (S1O2, 1% až 3% methanol/dichlormethan) se získá 43 mg (64 %) sloučeniny 304a jako bílé pevné látky:
Ή NMR (deuterochloroform) δ 1,55 - 1,8 (m, 2H), 1,9-2,15 (m, 4H), 2,25 - 2,5 (m,2H),
2,7- 3,3 (m, 4H), 3,45, 3,6 (s, s, 3H), 4,4, 4,75 (2m, IH), 4,6 (m, IH), 4,95, 5,4 (t, d, IH),
5,1 - 5,2 (m, IH), 6,45,7,05 (2d, IH), 6,95 (m, 1H), 7,45 (m, 2H), 7,5 (m, IH), 7,85 (m, 2H).
Příklad 11
Sloučeniny 214e, 404-413, 415—445, 446—468, 470-491, a 493—499 se připraví tak, jak je popsáno v příkladu 11 a tabulce 7.
-125CZ 298171 B6
Krok A: Syntéza sloučeniny 401. TentaGel S® NH2 pryskyřice (0,16 mmol/g, 10,0 g) se umístí do šiiitrované“šklenčné nálevky a promyje se dimethylformamidem (3 x 50 ml), 10% (objem/objem) Ν,Ν-diizopropylethylaminem v dimethyIformamidu (2 x 50 ml) a nakonec dimethylformamidem (4 x 50 ml), K pryskyřici se přidá dostatečné množství dimethyIformamidu, aby se získala
-126CZ 298171 Β6 suspenze a následuje sloučenina 400 (1,42 g, 2,4 mmol, připravená z t-butylesteru kyseliny (3S)-3-(fluorenylmethyloxykarbonyl)-4-oxobutanové podle A. M. Murfy a kol. J. Am. Chem. Soc., 1 14, 3156-3157 (1992)), hydrátu 1-hydroxybenzotriazolu (HOBT-H2O; 0,367 g,
2,4 mmol), O-benzotriazol-l-yl-N,N,N,N '-tetramethyluroniumhexafluorfosfátu (HBTU; 0,91 g,
2,4 mmol), a N,N-di izopropy lethy laminu (0,55 ml, 3,2 mmol). Reakční směs se protřepává přes noc při teplotě místnosti za použití třepačky. Pryskyřice se izoluje na smiřované skleněné nálevce pomocí filtrace za sání a promyje se dimethylformamidem (3 x 50 ml). Nezreagované amino* skupiny se potom ochrání reakcí pryskyřice s 20% (objem/objem) acetanhydridem/dimethylformamídem (2x 25 ml) přímo na nálevce (promývání 10 minut). Pryskyřice se promyje dimethy 1formamidem (3 x 50 ml) a dichlormethanern (3 x 50 ml) a potom se suší přes noc ve vakuu za získání 401 (11,0 g, kvantitativní výtěžek).
Krok B: Syntéza sloučeniny 402. Pryskyřice 401 (6,0 g, 0,16 mmol/g, 0,96 mmol) nabobtná na sintrované skleněné nálevce promytím dimethylformamidem (3x25 ml). Chrániči skupina Fmoc se potom rozštěpí pomocí 25% (objem/objem) piperidin/dimethylformamíd (25 ml) po dobu 10 minut (občasné míchání) a potom pomocí čerstvého piperidinového činidla po dobu 20 minut (25 ml). Pryskyřice se potom promyje dimethylformamidem (3 x 25 ml), potom N-methylpyrrolidonem (2 x 25 ml). Po přenesení pryskyřice do 100 ml baňky se přidá N-methylpyrrolidon, čímž se získá suspenze, potom se přidá sloučenina 212f (0,725 g, 1,57 mmol), HOBT-H2O (0,25 g, 1,6 mmol), HBTU (0,61 g, 1,6 mmol) a N,THliizopropylethylamin (0,84 ml, 4,8 mmol). Reakční směs se protřepává přes noc při teplotě místnosti pomocí třepačky. Pryskyřice se zpracuje a uzavře pomocí 20% směsi (objem/objem) acetanhydrid vdimethylformamidu tak, jak je popsáno pro sloučeninu 401 a získá se sloučenina 402 (6,21 g, kvantitativní výtěžek).
Krok C, Syntéza 403. Tato sloučenina se připraví z pryskyřice 402 (0,24 g,0,038 mmol) za použití Advanced ChemTech 396 Multiple Peptid syntetizéru. Cykly obsahující pryskyřicí se promyj dimethylformamidem (3 x 1 ml), chránící skupiny se odstraní pomocí 25% směsi (objem/objem) piperidinu v dimethylformamidu (1 ml) po dobu 3 minut, potom čerstvým činidlem (1 ml) po dobu 10 minut za získání pryskyřice 403. Tato pryskyřice se promyje dimethylformamidem (3 x 1 ml) a N-methvlpyrrolidonem (3 x 1 ml).
Krok D. Způsob 1. (409). Pryskyřice 403 se acyluje pomocí 0,4M roztoku thiofen-3-karboxylové kyseliny a 0,4M HOBT vN-methylpyrrolidonu (1 ml), a roztoku 0,4M HBTU vN-methylpyrrolidonu (0,5 ml) a roztoku 1,6M Ν,Ν-diizopropylethylaminu v N-methylpyrrolidonu (0,35 ml) a reakční směs se třepe 2 hodiny při teplotě místnosti. Acylační krok se opakuje. Nakonec se pryskyřice promyje dimethylformamidem (3 x 1 ml), dichlormethanern (3 x 1 ml), a suší se ve vakuu. Z pryskyřice se odštěpí aldehyd a celkově se odstraní chrániči skupiny reakcí se směsí 95% kyselina trifluoroctová/5% voda (objem/objem, 1,5 ml) 30 minut při teplotě místnosti. Po promytí pryskyřice štěpícím činidlem (1 ml) se spojené filtráty přidají ke studené směsi 1:1 diethylether:pentan (12 ml) a vzniklá sraženina se izoluje odstředěním a dekantací. Vzniklá kulička se rozpustí ve směsi 10% acetonitril/90% voda/0-1% kyselina trifluoroctová (15 ml) a lyofilizuje se za získání surové sloučeniny 409 jako bílého prásku. Sloučenina se čistí pomocí semipraparativní RP-HPLC s kolonou Rainin Microsorb™ Cl8 (5 μ, 21,4 x 250 mm) zaeluce s lineárním gradientem acetonitrilu (5 až 45%) obsahujícího 0,1% kyseliny trifluoroctové (objem/objem) za 45 minut při průtoku 12 ml/min. Frakce obsahující požadovaný produkt se spojí a lyofilizují za získání sloučeniny 409 (10,8 mg, 63 %).
Krok D. Způsob 1A. Syntéza sloučeniny 418. Následující postup je podobný způsobu 1. Pryskyřice 403 se acyluje kyselinou 4-(l-fluorenylmethoxykarbonylamino)benzoovou a postup se opakuje. Skupina Fmoc se odstraní tak, jak je popsáno v kroku C a volný amin se acyluje směsí 20% (objem/objem) acetanhydrid v dimethylformamidu (1 ml) a 1,6M N,N-diizopropvlětliyláminem v N-metfiylpyrrolidonu (0,35 ml) 2 hodiny při teplotě místnosti. Acylační krok se opakuje. Po odštěpení aldehydu z pryskyřice se získá sloučenina 418 (3,2 mg).
-127CZ. Z98I71 B6
Krok D. Způsob 1B. Syntéza sloučeniny 447. Následující postup je podobný způsobu 1A. Pryskyřice 403 se acyluje 0,4M kyselinou 4-(l-fluorenylmethoxykarbonylamino)benzoovou. Acylační krok se opakuje jednou. Skupina Fmoc se odstraní stejně jako výše a volný amin se reaguje s 1M methansulfonylchloridem v dichlormethanu (0,5 ml) a 1M pyridinem v dichlor5 methanu (0,60 ml) 4 hodiny při teplotě místnosti. Po odštěpení aldehydu z pryskyřice se získá sloučenina 447 (10,0 mg).
Krok D. Způsob 2. Syntéza sloučeniny 214e. Následující postup je podobný způsobu 1A. Pryskyřice 403 se acyluje 0,5M benzoylchloridem v N-methylpyrrolidonu (1 ml) a 1,6M 10 Ν,Ν-diizopropylaminem v N-mcthylpyrrolidonu (0,35 ml) 2 hodiny při teplotě místnosti. Po odštěpení aldehydu z pryskyřice se získá sloučenina 214e (5,1 mg, 30 %).
Krok D. Způsob 3. Syntéza sloučeniny 427. Následující postup je podobný způsobu 1A. Pryskyřice 403 se reaguje s l,0M benzensulionylchloridem v dichlormethanu (0,5 ml) a 1M 15 pyridinem v dichlormethanu (0,60 ml) 4 hodiny při teplotě místnosti. Reakce se opakuje. Po odštěpení aldehydu z pryskyřice se získá sloučenina 427 (7,2 mg, 40 %).
Krok D. Způsob 4, Syntéza sloučeniny 420. Následující. postup je podobný způsobu 1A. Pryskyřice 403 se reaguje s 0,5M methylizokyanátem v N-methylpyrrolidonu (1 ml) a 1,6M 20 Ν,Ν-diizopropylethylaminem v N-methylpyrrolidonu (0,35 ml) 2 hodiny při teplotě místnosti.
Reakce se opakuje. Po odštěpení aldehydu z pryskyřice se získá sloučenina 420 (8,3 mg, 55 %).
Krok D. Způsob 5. Syntéza sloučeniny 445. Následující postup je podobný způsobu 1A. Pryskyřice 403 se acyluje 0,27M imidazol-2-karboxylovou kyselinou (1 ml) ve směsi 2:1 25 dímethylformamid:voda (s 1 ekvivalentem Ν,Ν-diizopropylethylaminu) a 1M hydrochloridem l-(3-dimethylaminopropy)-3-ethylkarbodiimidu (EDC) ve směsi 2:1 N-methylpyrrolidon/voda (0,35 ml) 3 hodiny při teplotě místnosti. Po odštěpení aldehydu z pryskyřice se získá sloučenina 445 (9,5 mg).
Analytické HPLC metody:
(1) Waters DeltaPak C18, 300A (5μ, 3,9 x 150). Lineární gradient acetonitrilu (5 až 45%) obsahující 0,1% kyseliny trifluoroctové (objem/objem) 14 minut při průtoku 1 ml/min.
(2) Waters DeltaPak Cl8, 300A (5μ, 3,9 x 150 mm). Lineární gradient acetonitrilu (0 až 25%) obsahující 0,1% kyseliny trifluoroctové (objem/objem) 14 minut při průtoku 1 ml/min.
(3) Waters DeltaPak C18, 300A (5μ, 3,9 x 150 mm). Izokratická eluce směsí 0,1% kyselina trifluoroctová/voda (objem/objem) při průtoku 1 ml/min.
(4) Waters DeltaPak Cl8, 300A (5μ, 3,9 x 150 mm). Lineární gradient acetonitrilu (0 až 30%) obsahující 0,1% kyseliny trifluoroctové (objem/objem) 14 minut při průtoku 1 ml/min.
(5) Waters DeltaPak Cl8, 300A (5μ, 3,9 x 150 mm). Lineární gradient acetonitrilu (0 až 35%) 45 obsahující 0,1% kyseliny trifluoroctové (objem/objem) 14 minut při průtoku 1 ml/min.
-128CZ 298171 B6
Tabulka
-129CZ 298171 B6
-130CZ 298171 B6
-131CZ 298171 B6
& -P ΐη 0 £4 r-l <“í w
+ «9 X .(* CD cn r- uí O)
* .ž m
* β γΊ r-f. r-i
(#> «*> ~ tň
O -H S? * A< s “ s s 4». AU *
Ή r* -σι CD
KP cn cn
v a> < un
CD CD ΤΓ
CO Γτ m
^?T' in
ec cn O 'T 55 O Ή -j o O £ o cn X OJ O
H 0 OJ o ΓΌ
N > X OJ OJ «
OJ o r-i OJ U
5 sc 5= §X
°=<2>O o=Qo
M oQ~é° vX ós<_ — '^zx
•9 4J Λί
3 p O“<
-P w o Q-R
-o o-
t ID ω t*
r-l r-( rH
Φ *T
-132CZ 298171 B6
Postup rH OJ
+
ω £ Μ O cn cn co <Λ
X + x ID cn cn
>o ctí
r* OJ OJ
a eo 0f> C*P
U x Ή β 5? S 00 s <* LQ S? OJ <*
<
Er; ď) to ďJ·'
Ó co cn
A ÍO <n < n **.
rd co r-
Ó cn <r>
' *4 ď> cn cn
00 CD ř>
O O O
o tn ’ζΤ ID
Ú) Z Z Z;
*4 Γτ OJ cn
O OJ OJ OJ
. M X X X
> m u> &
OJ ‘r—( !«-J.
o U u
Íii^ v4t.. X
0=0=0 5x O X
/A> o=<^>=o osQ°
<0 P Osf^O0 vC :zx OQ> vX o*=<
4-> 44 3 P -P Oe(
CO Q z zs /
X. 0
„ S3 C\ o
«—I rí t—< OJ
co W 'M!
- 133CZ 298171 B6
Postup r*r »—t rH r-~<
4-
<n r* O O
ω m r- CO »D
X 4a kr XT
£ __
04 rH rH r-t
tí <*> ύΡ CN5 ~ O
u tíl H S CO to s «Π *£ CM ”
-¼ š> *» <
Z} r* VD iH 10
VD Οϊ 04 04
<r 5Γ <n
-M *lfc *
oj «> cn σι
1 » s co r-
•5ř ^r *5*
Vzorec co co o Z <y 04 Sí \D 21Η2ΘΝ6Ο7 ω Γ O in 55 ID 04 xc p to O in X co 04 X σ> >4
r—< ϋ o 04 o u
g - § 3! Sx S e
ο=ζ>ο ο=<^ζο 0°^ o=^^o
H ' tí. . 44 44' 3 Ο·Λ·Ο °τΑ^° ^-^zx Ο.ΟΫ -í. Ó=< / óeF^°
4-> c=v M
cn k v
rH ČM ÍD *σ
«-4 04 04 04 C4
OQ
-134CZ 298171 B6
Ok 3 TJ w ó íX r-< . ój en
+ tn X W + £ rH <-4 m r-< m <Ť 1—f 00 *r
>Ú ti· O -H ' í? £ 04 X r-H £ * co <—< >- 0P CO o σι *. co w Λ= cy g CD Ul •k. is
' M. h. ir*l· in o «Η tn o m 4a O m o in o co
Vzorec 'CO' O 2; txj X ď) CM o ΓΎ O šr K O ΓΊ X tH CM U en CD O a <3* CM X O CM O
(ΰ 0 ti μ- ti M -P ω Sk °=< X7 ai. 0 ó C N J ° /s/mVy í^oh 0” θοΚ^γΚ H 0 T· δ x °<>o o z z Q° ^-^zx δγ>ο O
r~1 (Λ m CM <T CM r CM
135 CZ 298I7I B6
Postup ! < r—1 r—1
tn Ý* K cd 53* r4 5T CM O o ID
X + g 5Γ n ď> *T
O -W.
rf Γ» r—< CM
d· *“* OP <» <*0 c«
U U ÍŮ •H 2 s 2 “ Ώ. - u> X 10
*> .< W
X lf> co tn VD
Γ •9* o UJ
Á 53· en in K. 5Γ
t<' o rf cn
v 5Ť O m
5Í rn <n <!·
co U> CD F~
CO'*· Ó O o
•u ,Q 5J1 m LQ
φ V) Z X %
Z in o r- in
0 CM CM CM
N OJ x UJ X X X
> 55» m i—I
rf CM CM
w O O U u
(Ú P +J Λ s -μ O %< v /« ϋ οΤ ΙγΗ H G X O X °c/° cx °ó° Ol ο=ς^=ο n-r Q<x zVx o X ο=ζ>ο CMT V^zx °=z
cn —(Λ 2-M \^x/
z rv X o=^ V=/
•tt> σ\ o r4
rf· CM CM CO en
LQ •σ 5T 5J 5Ť
- 137UZ 298171 B6
-138 CZ 298171 B6
Postup r-í W t—1
+
R((F^V
w κ X + £ 510 co <n to ro ď)
iT> t—< r-4
ti cP cp- <*C
íá CL φ * <** Φ 2 $ .*SJ u> o co w σι *> o rH.
OJ CD KP
XJ cn m
*x ·* ·%
CD s KP
X O m o
in m lT)
CM
r> CQ
u O O Γ—
ifl tn O
.w z: 21
p r> rH Z
0 Oj cn OJ
N ffi X CM
> <n r- X
Oj' OJ r-Ί
u P CM
O
. Sx Šx X ,
°g\^B° °^>=O o X
Í0 Li rwx ο~2,ζ~ο° u„ ^=o oQlo U,
P 44
ti O«=T 2 0—/ u
Lí f/ o=<
P //. \__/ h·«
yi \^/ f
KZ ^z-
/
* O •r4 Ol
rM
co
- 139CZ 298171 B6
Postup rH t-4 tO
+ cn £ ffi + S. r tn ď> O «—< m m n
KJ x G U -H ř? * CL . Z ř*^· <#e oj co r-4 cn rj r+ í> €#> ω £ σ» m •K. th *—> •'r1 tifi £ m
í £ « s y>. to n in T fO -s (O i «—< V < ’τ m
Vzorec CD o Ό* Z co OJ Z rO»· u Γ* O .*?' Z Ol rH υ OJ OJ Z *-< 04 U rO \£> Z OJ 04 Z 00 ι-L O
P P •P X 3 M -P T οχ.. °Q° °O°. ZX b n °O δ ± o=zy=o cm? o^z-z«o° ó H o
·' *—i CO <ť <y Ό! 10 ·<? •Xf
- 140CZ 278171 B6
ÍX P 4-> W 0 : rH ca i-í < i—1
4-
ω £ x + 5 CO LTY *3* CO Γ*) to r-í
KJ t-4 <-( t4
ri c* dP ~ dP
O H CL X s to 5 z? oy co
«4 *v A.
m \O t£>
kO iTi ΓΊ
r· <r m ID
A-i *k. «V
ΓΜ r> iT)
X m rr n *n *^‘ IĎ
ώ V) CO rt'
č> cn
u o O ď>
Φ u <0 si m á X QY
o o Γ OÍ
N > OJ X r4rH 22Ή2 X *y CM O
<J O
X X
ox o±
°V° 0β^^0
(Ú - °<-z r° ^>1· o Q>
P -P ΛΓ
p· Μ Ίκ Ο=<
V ca o*< \-ω Q?o Z-ca \=7 o
V í \
1 r> cd
1—i ÁT'
ca 'S*
CZ ZV8171 B6
Λ Π -Μ' (0 .Ο (14 t—1 < r-4 OJ
4- W OJ 1Π
ω X r-4 Ο Ο-
Κ + S lD m ♦=Γ
HJ /τ—4 τ—4 ΐ4
αί CÍP
’ςί &Ρ <#ρ
ο μι -Η S W 03 co σ\ μ 2 - s_s .
X ΓΊ Γ*| ·*. CD
τ-ί ο r-
* ιΓ) ÍA;
£ »· *«
ο rH *7*
<—( Ο r·
<s ΙΓ) ιη «T
® C0 CD
Ο Ο O
ύ 'θ' ΙΌ. kt
W ‘5Ζ·
. μ· ο ω Γ
OJ OJ OJ
Ν χ. X X
> ιΗ σ> oí
Ο) Οί OJ
υ Ο O
χ ,X...
X -τ- Ο X O X
ο X Ρ=^^=Ο o=Q=o °-v°
(Ο μ Ζί -Ρ Λί1 ΓΜζ1 ο^·ζ«ο° ^ΖΧ o-r GCr
Ρ Ρ '. -Ρ O==é ο 2X
O-i \=ί/ )=o o=Z
ω \”3”°x
Γ
, Οϋ ο rH
Η r? tn in
cn ’Τ Μ· :<r'
Postup CM (NI CM (NJ
4-
OT » K s to rw r-< O to (£> *T *r O ·<□·
XJ ni ,r4 r4 CM w
d :<#> dP &> ~ «*>
U -H 00 r-i cx> 4· s cm w 5 *
ťk r-< Ok ·*'
s t-< rH <£> σι
r- to ΚΓ cn
.d *T to **· *3* •v co •t
ty o to CD
s r- o <3* r-
L xr to ' Nr
<x> to r- r* O
o O o·* O O 53<
v? to a
Φ S Na* Z «Η
Lí VO to o
:O CM M?. CM to
N X CM X CM
> cm x ΓΤΊ o X
cm 1’1 CM O CM «-í
u u CM
ox C=<A=O ΓΧ1 °or o=ť \Λ O X o«=/^y=o o X °v° δ x ο=ζ>° Ώα
Oj M Óf=t λ
-P Λ4 d k 4J ω YV° ΑΑ’ζι °<c %ο
0—
« 04 to to
rH in to to to
ω •q* *r <Ť
- 143 CZ 293171 Bb
Postup rH rH r-M
tn + £ <g « J 00 5 n 5 o «—í ·>» r-1
X + s X + A0 X CO TT
. .
O ftí I—< K i-H
r* <#P dP ** <&
ϋ P β ďl <* CM co cr cn *> s KĎ
PU ’·* o r-4 s
X m CD
ιΛ AD co
v· m cr
ΧΪ .·>» . *. v
o o O
« AD co co
s V io 'CT
Vzorec CO O sT •55 '<o·· CM X «—1 (N u o f-t o CT X co N X co CM o rO CT X CM Ím CM CM X t-< CM u
Sx X
X ox
Ol o=Q=° ‘*W°
14 •3 4-» λ: 0 °·θ°° >-^23: P=K °cc ó=^ X P q-š Vr°
Μ O Q=(
Λ> νΛ o
ω \i=-/ K7
2 /X
O U. U-
♦ <£> r- OD
ι—1 tn iň
tn M1 <3·
- 1443
ZV51/1 ΒΟ
Postup <-Η i—{ t-f
+ η CO ΓΌ
ω £ CO ,·*. co *> có
:W ± <η <N. CD
Α in
<*-·»
ίΗ r-4 r-4
& α ϋο <*> dP
ϋ ·η >4 g r-f 00 fh cn s “ . CO £
Cu , *>
ο »—1 CD :r*
C0 vr NT
Λ βλ ** in k. ΤΓ
CD CM CM
♦ ω CM CD
·, SJ <7 to V
Γ
Ο co r-
σ cn O
ο ž O >t
<υ Μ Λ Μ4 <Η NT 55 δ
υ CD n.
Ν > CM CM CM
ώ s 'JE
tu CM
rH CM CM
CM u O
υ
H HO
O=\iB-( O
δ z ο^>=ο ' *y XT zx °\_ . δ z O=^^=O
α ρ ρ U °&° ZI o=ť O“ O *Z O
4-> 0 O \=< 0 x>
[ O U- GŤ
X .
·- oi o r-t
γ-Η m· co CD
W ΚΓ
-145
CZ ZVÍ17I B6
; postup 1~4: r-4
+ uj X X + £ <n ΠΎ ’Τ : _ <r i£> M*· to •k. w
XJ X a O -rí ►4 g X X I—1 dP £ *- r-1 ~ (#> , s “ •s.. r- w dP Ώ CO in σι «< rrA rH
4 * £ OJ «>· Ky OJ V£> Μ* *T OJ ro r-< m
o 0 N > ro § m OJ X rd Ol O rO o' m Ol X ·—< OJ o r> O Z 04 <-4 o OJ OJ X t-A OJ O
Struktura OX 0-C °o° zx Llí o z V0 o-C °ϋ“ ZX LL § Z °^=° o? °o° ZI °=< o o ΰ
řH. w. oí AD [1— ad. U) <3*
- 146CZ 298171 B6
Postup r4 1—<
* σι CA co
ω x ·< cn cn m
,χ + c% CA co
xr χτ XT
L
ffí 1“l· r4 ni
p “ <%> tfP
o H β £ * 2 S c*
Qj ·*. •s_
X, cri. i ΟΪ σ
Ol OJ Γ-«
σν σ\ •šř κ··
Ol OJ XT
CA σι CD
S χτ' XT XT
Γ- Γ 00
o O
XT χτ o
u X Z xr
o ·—1 «—i z
o (J XT
o ΙΟ ď> Ol
N í O) Ol X
> •řa: X cn
Ol OJ OJ
OJ OJ o
O o
δχ Οϊ<_>Ο Sx r^'-- 31 o
<Ú M P. -P ΛΤ • ch? o o
3 Í4 4-4 ω 0=^2 á>. o< LÚ
x σ X >--f
« ÍA \o r-
f— O 10 <0
U1 ’x? XT X?
-147C£ zy»171 BĎ
a P 4-> Μ o řu r^-i r-<
A ř- m 01
tn W ά + *<,· cd ο CD CD *s, CO co
Λ AD tT *3*
>O rH rH r-1
č <#>
L> -Η CO r- 00 «< «>
Εί co cd <*
tu a κ. νΓ r-H •ώ < LQ
CD CM OJ
lf) uD m r<
CD r- Γ-
:' s O XO co 5T. ΟΟ
V)
:í> o r- (Γ
u O O
iD to UD
Φ x K X.
$4 o t»: CD CD
0 CM O)
N X X
> OJ X 1 F\ cn m
OJ OJ
UJ Ol u O O
oi X -r.
(U Í4 P -P :-c kA, ň ’Ό δ x /κ O&ZZfO zx Ol O=^ ^=o °*O° •zx o=<
4J — i n >-λ δ zT\
co γΐ^γ O-* \=z
ísJ 2-o„
X' °n r
ιχ,'Τίχ. X
U.
• CO ό rH
Ή Φ Γ' ř
ω <r rr
-148CZ 298171 B6
-149CZ 298171 B6
-150CZ 298171 B6
& 43 tn o PU 1 ! ....... r4 < «-(
tn to to
HS (M+H T 61 tn r- •k. to to
to V to
t-4 t—1
í4‘ Λ* <P
O *H í? * Qj m ® CM rt <* *-.
Ή to ÍO to
m r- to
Jd to »< <5* to <.
co to
<M Γ to
X to v to
to CD to
υ to O o ’Τ O to
OJ to z Z
k Z to O
0 to CM to
N > CM z w CM, O CM CM ffi to CŇ
O U
X
S-r δχ ó=Q=o y-^ JZX o X
Ol oí O-Q-O ý—zx
(0 H 0 a&° V -r^O °Ο° Ό“5
X 3· i* zx ^ίζχ zx
O=sf O=<
H -u.
to o >=< o
s >-z z-4 4TX x o
X xM x
v to to o
1-4 o to
to <7 *r M·
151CZ 298171 B6
Postup fH CM K i-H
+ <-4 CO Ψ
X.
ω S m <Tt irt
κ i ťT> CM
s *0 iO
>o Γ* i—4 1“i r-1
dP &> tíf>
U -H 2« S S r4 CO o σι ' Vk.
CU «b
r- o r4
CTi -0! r> tn
*š -X.
m co n
cň CM u>
s: ty U} m
C- f-
O m vJ ď) *V- co O
o QJ Cl O N '% w U 'T cm z -4 O co r\l <n & (Λ CM X
> '53'. 'r-f. CM L> IN X f-4 CM O CD CM O
•t·' X Sx
δτ oi Ol c=V>=o
rtJ s: 4-> p=Qq °o° °*cr ZX OiéZ
•ZI žx
tí o=/ ο=ζ /7^
' W \__—' \ \ /
4-J (Λ O-w zx
\=\ °=r
v S /K
X o
1 r4 N cn
<—1 ČO CO co
<5· ŤT —.
-152CZ 298171 B6
Postup ÍSI i-H CN r-C <N · f~-í
+ KD
.i-4
ω H m r- cn
X + V) r4 γ-
£ ďi ιο
o ctí J—*»· r-i <—í rA
ď e#> tíP
o 04 X H Ή β „ 00 ro co 'S- s S *s. t>* (*) co vy c\ o r-t
m ΓΊ O
4' tn tň kO
Λ *< <· <
σ> m r>
« CJ r-4 γ-
X in m ιο
> co co co
O O O
o in m m
Φ Z ž Z
U| fH σ> w
O Γ0 CN ΓΊ
N π X X
> m σ\
cn CN CN
u. O O
5 Z 51 Sx
psCWQ ο=θ=ο O=Z*=O
m: 6 C^7d ° < o_/
4J' o=ť
□ 4J ω N^) 21 OK ^zx °=K zx O=ť
M /^\
<4> X τ’
X
4 in (O
CO ω Φ
cn ’«r
153CZ 298171 B6
οι Ol vr OJ
*fc s
t—4 t~4 .t-Η ·—4
í> . rM co cb
K *- co <
LT) o- Z Ό
cn r-< +
IO ď) tn Z ϊη
__
t—I f—< :r4
C*o <flP
8 « 2 % _ CD 2 S po δ S
w v. *k
cn čp tn r-
co m Ol O
tn rtn tn
' < ·>
m O\ tO r-
*=* OJ r-4 r—1
<ň m tn v>
co co co óv
O O. Q O
tn tn *x>. tn
Z Z Z Z
n »H co o-
cn cn OJ OJ
Z X X. X
kD m cn cn
OJ OJ OJ OJ
O u o O
-154CL 298171 B6
Postup T—< i—< CM
+ cn σ> CM
uj řc m «% cn r-i
w ± yj cn t-
a m 'iS· *šr
XJ
r-( 1—< r-(
Cd «. JÍ'
Γ! tfí> &
U -H P Ě ' - S 31 98 «4 00 £ Φ
Oi w oi r-l 'S op cn
M? <0 σι
£ in x 5Γ
'T.' CM d
\o cn r-
a in <T M*
o: ’ σι O 53*' CD O <r r> O 5J*
ω X g x
n 0 CO CM m CM *T* u> CN
N K X
> CD CM ω •-U <M CM O cn CM O
H HO OH H x
0*0 0=$-x °=r>° O~Z’Z«O° ^21 o=z ox O=^^=o
ib· 3 4J < J^o Cr°
44 ZI
g o»č
M 4-J w. A-u. /
ω o \=/
°=L ó
o z
« r4 m <5*
<-4 <7ϊ cn O)
ω
-155CZ 298171 B6
-156CZ 298171 B6
Postup í—4
4-
Ul Z OJ m
z X m
ku r-í
Z
O tí tfP
•H r- co
»4 & oj σ>
tu **.
K fO
w
‘es
« x: LÍ) ·<>
ó
z tn IT)
co
O
ΰ
<D Z.
H o
O m
N Z
> 00
OJ
O
Ol
ó=^^o
tti p ο vr
$ zx
4J
A~\
M
-P
b
4 a
iH a
ω
-157CZ 298171 B6
Příklad 12
Sloučeniny 605a-j, 605m-q, 605s, 605t, a 605v se připraví tak, jak je popsáno níže.
Slouč. č. r2 r5
600a/103 H ch3
600b H CH2Ph
600c ch3 CH2Ph
(600a/103).
Krok A. Kyselina (2S)-2-terc-biitoxykarbonylamino-3-(2-nitrofčnylamino)propionová.
Kyselina (2S)-2-terc-butoxykarbonylamino-3-aminopropionová (10 g, 49 mmol), 2-fluornitrobenzen (5,7 ml, 54 mmol), a hydrogenuhličitan sodný (8,25 g, 98 mmol) se převedou do 130 ml dimethylformamidu a zahřívají se 18 hodin na 80 °C. Reakční směs se odpaří ve vakuu za získání viskózního oranžového zbytku, který se rozpustí v 300 ml vody a extrahuje se diethyletherem (3 x 150 ml). Vodný roztok se okyselí na pH 5 pomocí 10% roztoku hydrogensíranu sodného a extrahuje se ethylacetátem (3 x 250 ml). Spojené extrakty se suší nad bezvodým síranem sodným, filtrují a odpaří za získání 12,64 g (83 %) sloučeniny uvedené v názvu ve formě oranžové amorfní pevné látky:
'HNMR (deuterochloroform) δ 8,15-8,10 (IH, d), 7,54- 7,48 (IH, t), 7,13 - 7,08 (lH,d),
6,73 -6,65 (1H, t), 4,45 -4,35 (IH, m), 3,9 - 3,8 (1H, dd), 3,65 -3,55 (IH, dd), 1,45 (9H, s).
Krok B. Kyselina (2S)-2-terc-butoxykarbonylamino-3-(2-aminofenyIamino)propionová
Směs kyseliny (2S)-2-terc-butoxykarbonylamino-3-(2-nitrofenyIamino)propionové (12,65 g,
40,5 mmol) a 0,5 g 10% palladia na uhlí v 100 ml methanolu pod vodíkovou atmosférou při tlaku 100 kPa se míchá 4 hodiny. Roztok se filtruje přes křemelinu 545 a filtrát se odpaří ve vakuu za získání 11,45 g sloučeniny uvedené v názvu v kvantitativním výtěžku ve formě tmavě hnědé pevné-látky;-která-sepoužije-bez’dalšíhočištění:
-158CZ ZV3L7I B6 lHNMR (perdeuteromethanol) 5 6,75 - 6,70 (3H,m), 6,65 - 6,58 (IH, m), 4,35 - 4,3 (IH, m), 3,6-3,38 (2H, m), 1,45 (9H, s).
Krok C. (3S)-2-Oxo-3-terc-butoxykarbonylamino-l,3,4,5-tetrahydro-lH-l,5-benzodiazepin.
Hydrochlorid l-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimidu (8,54 g, 44,5 mmol) se přidá k chladnému (0 °C) roztoku kyseliny (2S)-2-terc-butoxykarbonylamino-3-(2-aminofenylamino)propionové (11,95 g, 40,5 mmol) v 100 ml dimethylformamidu a míchá se 18 hodin. Reakční směs se nalije do 700 ml ethylacetátu a čtyřikrát se promyje 100 ml vody. Organická vrstva se suší nad bezvodým síranem sodným, filtruje a odpaří za získání hnědé pevné látky, která se čistí pomocí velmi rychlé chromatografie za eluce směsí 3:7 ethylacetát/hexan za získání 8 g (71 %) sloučeniny uvedené v názvu:
'HNMR (deuterochloroform) δ 7,78 (IH, s), 7,02 - 6,95 (IH, m), 6,88- 6,62 (IH, m), 6,82 - 6,78 (IH, m), 6,75 - 6,70 (IH, m), 5,8 - 5,7 (1H, d), 4,55 - 4,45 (IH, m), 3,95 (IH, s), 3,9-3,82 (IH, m), 3,48-3,40 (IH, m), 1,45 (9H, s).
Krok D. (600a/103). l,0M Roztok lithiumbis(trimethylsilyl)amidu (3,4 ml, 3,4 mmol) v tetrahydrofuranu se přikape k roztoku (3S)-2-oxo-3-terc-butoxykarbonylamino-2,3,4,5-tetrahydrolH-l,5-benzodiazepinu (0,94 g, 3,38 mmol) v 20 ml bezvodého tetrahydrofuranu ochlazenému na -78 °C a míchá se 30 minut. K reakční směsi se potom přikape methylbromacetát (0,44 ml, 4 mmol) a reakční směs se ohřeje na teplotu místnosti. Reakční směs se zředí 100 ml ethylacetátu a promyje se 0,3N roztokem hydrogensíranu draselného (50 ml), vodou (2 x 50 ml) a solankou. Spojené organické extrakty se suší nad bezvodým síranem sodným, filtrují a odpaří za získání gumy, která se čistí pomocí velmi rychlé chromatografie za eluce směsí 3:7 ethylacetát/hexan za získání 0,98 g (83 %) sloučeniny uvedené v názvu jako bílé pevné látky.
'HNMR (deuterochloroform) δ 7,15- 7,07 (2H, m), 6,98- 6,94 (IH, m), 6,88- 6,84 (IH, d), 5,62- 5,55 (IH, d), 4,71 - 4,65 (lH,d), 4,65-4,6 (lH,m), 4,33- 4,27 (lH,d), 3,96-3,90 (IH, m), 3,78 (3H, s), 3,44-3,37 (IH, m), 1,4 (9H, s).
(600b). Sloučenina se připraví podobným způsobem jako je popsáno pro přípravu sloučeniny 600a/103 (krok D), kromě toho, že se benzylbromacetát použije místo methylbromacetátu za získání sloučeniny 600b v kvantitativním výtěžku.
(600c).
Krok A. Kyselina (2S)-2-terc.butoxykarbonylarninO“3-(2-nitro-3,5-dimethylfenylamino)propionová.
Sloučenina se připraví podobným způsobem jako je popsáno pro přípravu sloučeniny 600a/103 (krok A), kromě toho, že se 2-fluor-4,6-dimethylnitrobenzen použije místo 2-fluomitrobenzenu za získání požadované sloučeniny v 93% výtěžku.
Krok B. Kyselina (2S)-2-terc-butoxykarbonylamino-3-(2-amino-3,5-dimethylfenylamino)propionová.
(2S)-2~terc-Butoxykarbonylamino-3-(2-nitro-3,5-dimethyIfenylamino)propionová kyselina se převede na sloučeninu uvedenou v názvu v kvantitativním výtěžku tak, jak je popsáno pro přípravu sloučeniny 600a/l 03 (krok B).
Krok C. 2^0xo-(3S)-3-terc-butoxykarbonylamino-2,3,4,5-tetrahydro-7,9-dímethyl-lH-l,5benzodiazepin.
Roztok_kyseliny_(2S)=-2-těřc^bntč5xýl<ařl5oriýlámiho^3~{2::amino-3,5-dimethy]fenylamino)propionové (763 mg, 2,36 mmol) a N-methylmorfolinu (483 mg, 4,78 mmol) v 60 ml bezvodého tetrahydrofuranu ochlazený na 0 °C se po kapkách reaguje s izobutylchlorformiátem (352 mg,
-159UZ 298171 B6
2,5 mmol), Reakční směs se míchá 2 hodiny při 0 °C, 1 hodinu při teplotě místnosti a nalije se do ethylacetátu. Směs se promyje 5% vodným roztokem hydrogensíranu sodného, nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného, suší se nad síranem sodným a zahustí se ve vakuu. Po chromatografii (velmi rychlá, silikagel, 10 až 25 až 56% ethylacetát/dichlormethan) se získá 490 mg (68 %) požadovaného produktu.
Krok D. (600c). (2S)-2-terc-Butoxykarbonylamino-3-(2-amino-3,5-diniethylfenyl-amino)- I propionová kyselina se převede sloučeninu 600c, 75 %, podobným způsobem, jako se připraví ' sloučenina 600b.
600 ,1) Krok A, HC1
2) Krok B. PhCO?H
3) Krok C. R^X
Krok D
(602a).
Krok A. Bezvodý chlorovodík se probublává do roztoku methylesteru kyseliny (3S)-2-oxo-315 terc-butoxykarbonylamino-2,3,4,5-tetrahydro-l H-l ,5-benzodiazepin-l -octové (600a/103,
4,0 g, 11,4 mmol) v 20 ml dichlormethanu 20 minut, potom se 1 hodinu míchá při teplotě místnosti. Reakční směs se odpaří za získání hydrochloridu methylesteru kyseliny (3S)-2-oxo3~amino-2,3,4,5-tetrahydro-l H-l ,5-benzodiazepin-l-octové jako bílé pevné látky.
Krok B. Bílá pevná látka se rozpustí v 70 ml dimethylformamidu a přidá se kyselina benzoová (1,5 g, 12,3 mmol). Reakční směs se ochladí vlažni led/voda a reaguje se s hydrochloridem l-(3-diniethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimidu (2,4 g, 12,5 mmol), 1-hydroxybenzotriazolem (1,7 g, 12,6 mmol) a diizopropylethylaminem (3,0 g, 23,2 mmol). Reakční směs se míchá 18 hodin při teplotě místnosti pod dusíkovou atmosférou a nalije se do vody. Vodná směs se extrahuje dvakrát ethylacetátem. Spojené organické vrstvy se promyjí 0,5N vodným roztokem hydrogensíranu sodného, vodou nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, vodou a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného, suší se nad síranem hořečnatým a zahustí se ve vakuu. Po velmi rychlé chromatografii (silikagel, 10 až 30% ethylacetát/dichlormethan) se získá 3,4 g (85 %) methylesteru kyseliny (3S)-2-oxo-3(benzoylammo)-2,3,4,5-tetra30 hydro-1 H-l ,5benzodiazepin-1-octové jako bílé pevné látky.
Krok C. (602a). Roztok methylesteru kyseliny (3S)-2-oxo-3-(benzoy lamino)-2,3,4,5-tetra-----hydro^l-H-l;5-benzodiazépiti=l^očtové—(200 mg, 0?57 mmol) v dichlormethanu (10 ml) se reaguje s triethylaminem (119 mg, 1,13 mmol) a 3-fenylpropionylchloridem (114 mg, 35 0,68 mmol). Reakční směs se míchá při teplotě místnosti 30 minut a zředí se dichlormethanem.
-160CZ 298171 B6
Roztok se promyje 10% vodným roztokem chlorovodíku, nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a nasyceným vodným roztok chloridu sodného, suší se nad síranem sodným a zahustí ve vakuu za získání 240 mg (87 %) 602a jako bílé pěny.
Krok C. Způsob B. (602 g). Roztok benzylesteru kyseliny (3S)-2-oxo-3-(bcnzoylamino)-
2,3,4,5-tetrahydro-lH-l,5-benzodiazepin-l-octové (600b) (465 mg, 1,10 mmol) v dichlormethanu (5 ml) ochlazený na 0 °C se reaguje s kyselinou acetooctovou v 1 ml dichlormethanu a potom následuje pomalé přidání hydrochloridu l-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimidu (431 mg, 2,2 mmol) v 2 ml dichlormethanu pod dusíkovou atmosférou. Po 15 minutách se reakční směs nalije do ethylacetátu, promyje se 5% vodným roztokem hydrogensíranu sodného, suší se nad síranem sodným a zahustí se ve vakuu. Po velmi rychlé chromatografii (silikagel, 0 až 10 až 25% methanol/dichlormethan) se získá 580 mg benzylesteru kyseliny (3S)-2-oxo-3(benzoylamino)-5-acetoacetyl-2,3,4,5-tetrahydro-lH-l,5-benzodiazepin-l-octové jako bílé pevné látky.
Krok C. Způsob C. (602j). Energicky míchaný a 0 °C ochlazený roztok benzylesteru kyseliny (3 S)-2-oxo-3-(benzoylamino)-2,3,4,5“tetrahydrO“l H-l ,5-benzodiazepin-l-octové (600b) (461 mg, 1,07 mmol) v tetrahydrofuranu (5 ml) a nasycený vodný roztok hydrogenuhličitanu sodného (2,5 ml) se reaguje s tetrahydrofuranovým roztokem (0,35 ml) methylchlorformiátu (151 mg, 1,6 mmol) a reakční směs se míchá 45 minut při teplotě místnosti. Reakční směs se nalije do dichlormethanu a promyje se vodou, suší se nad síranem sodným a zahustí se ve vakuu. Po velmi rychlé chromatografii (silikagel, 0 až 10% methanol/dichlormethan) se získá 525 mg 602j jako bílé pevné látky.
Krok C. Způsob D. (602p). Roztok 600a/103 (400 mg, 1,1 mmol) a benzylizokyanátu (166 mg,
1,2 mmol) v 10 ml dichlormethanu a 10 ml dimethylformamidu se zahřívá 3 dny na 80 °C. Reakční směs se ochladí na teplotu místnosti a nalije se do vody a dvakrát extrahuje ethylacetátem. Spojené organické vrstvy se promyjí vodou (čtyřikrát) a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného, suší se nad síranem hořečnatým a zahustí ve vakuu. Po velmi rychlé chromatografii (silikagel, 50% až 80% ethylacetát/hexan) se získá 440 mg (80 %) 602p jako bílé pevné látky.
Krok C. Způsob E. (602v). Roztok hydrochloridu methylesteru kyseliny (3S) 2-oxo-3-amino-5(3-fenylpropionyl)-2,3,4,5-tetrahydro-lH-l,5-benzodiazepin-l-octové (560 mg, 1,34 mmol) benzaldehydu (146 mg, 1,34 mmol) a octanu sodného (220 mg, 2,68 mmol) v methanolu (20 ml) se reaguje 4A molekulovými síty (2 g) a NaCNBH3 (168 mg, 2,68 mmol). Reakční směs se míchá 2,5 hodiny, okyselí se 10% vodným roztokem kyseliny chlorovodíkové na pH 2 a promyje se etherem (2 x 75 ml). Organické vrstvy se zahustí ve vakuu za získání oleje. Po velmi rychlé chromatografii (silikagel, 0 až 35% ethylacetát/dichlormethaň) se získá 250 mg (40 %) 602v jako čirého oleje.
Krok D. Způsob A:
(603a). Methylester kyseliny (3S)-2-oxo-3-benzoylamino-5-(3-fenylpropionyI)-2,3,4,5-tetrahydro-lH-l,5-benzodiazepin-l-octové (602a; 1,25 g} 2,57 mmol) se rozpustí v 11 ml tetrahydrofuranu, methanolu a vodě (5:5:1), reaguje se s hydrátem hydroxidu lithného (42 mg, 0,62 mmol), míchá se při teplotě místnosti 64 hodin. Reakční směs se zahustí ve vakuu, zředí se vodou, okyselí se pomocí 1N vodného roztoku kyseliny chlorovodíkové za získání 230 mg 603a jako bílé pevné látky.
Krok D. Způsob B. (603d). Směs benzylesteru kyseliny (3S)-2-oxo-3-(benzoylamino)-5acetyl-2,3,4,5-tetrahydro-lH-l,5-benzodiazepin-l-octové (602d; 510 mg, 1,08 mmol) a 5% palladia na uhlí (250 mg) v methanolu_(.1.0_ml)._se-míchá-ve-vodíkové-atmosféře-í-l OO-kPa·) 0,5 hodiny. Reakční směs se filtruje a zahustí ve vakuu za získání 410 mg 603d jako bílé pevné látky.
-161 CZ 278171 B6
Sloučeniny z tabulky 8 se připraví tak, jak je popsáno v tabulce 9 za použití způsobů z příkladu 12.
Tabulka 8
Slouč. č. r2 R3 R4 r5
602b H PhCH2C(O) PhC(O) CH2Ph
602c H PhC(O) PhC(O) CH2Ph
602d H CH3C(O) PhC(O) CH2Ph
602e H CH3OCH2C(O) PhC(O) CH2Ph
602f H (CH3)2CHCH2C(O) PhC(O) CH2Ph
602g H CH3C(O)CH2C(O) PhC(O) CH2Ph
602h H CH3OC(O)C(O) PhC(O) CH2Ph
602i H CH3C(O)Č(O) PhC(O) CH2Ph
602j H CH3OC(O) PhC(O) CH2Ph
602k H CH3C(O) Boc CH2Ph
6021 ch3 CH3C(O) Boc CH2Ph
602m H CH3S(O2) PhC(O) ch3
602p H PhCH2NHC(O) PhC(O) CH3
602q H PhC(O) ČH2Ph
602r H PhCH2CH2C(O) PhCH2CH2C(O) CH2Ph
602s H 4-pyridylCH2C(O) PhC(O) CH2Ph
- 162CL 293171 B6
Tabulka 9
Č. Výcho z i látka. RjX Krok C. způsv./ (% výt.) Krok D’ způs .- / ·’(%. výt . )
603b 600b ?hCH2C(O)C1 A (98) B (89)
603c ,600b PhC(0)01 A ((kvant.)· B (kvant.)
603d 600b CHjC (0) Cl A (kvant,) B (kvant..)
603e 600b CH3OCH2C(0)Cl A (.59) B (kvant.)
603f 600b (ch3)2chc:-:2c(0)c1 A (88) 3 (95)
60 3g 600b c:-:3c (c; ch2cc2h 3 (kvant.) :B (kvant,,..)
603h 600b CH3OC(O)C('O)C1 A (96.) •B (kvant.')
6Q3x 600b CH3C(Ó)ČO-2H 3 (37) 3 (94)
603 j 6.00b -íóyči. (kvant.) 3 (kvant.).
603* 600b CH3C(O)C1 A, pouze krok C (kvant·.·.) 'nereaguje
6031 600c CH3C(O) Cl A; pouze: . krok C .(kvant..) nereaguje.
60 3m 600á/103 CHjSOtCÍ/ MEťi iúísú.0' pyridinu. á ŤHF .místo ;CH;Č'V A (76) :Á (92)
6O3p 6ÓÓa/lÓ3 .?hGH2C=N=0 D (80.) A (86)
603q 60 Qb C (831 B (71)
603r 600a/103 ?hCH2CH2CÍO)Cl A
603s 60 Ob ‘4-p.ýridylCH2CQ2-H B (90) 3 (98.)
- 163UZ Z98I7I B6
Sloučeniny z tabulky 10 se připraví tak, jak je popsáno v tabulce 11 za použití postupů z příkladu 11.
Tabulka 10
Slouč.č. r2 *3 R4 r5
602n H CH3C(O) naftylen-2-C(O) CH2Ph
602o ch3- CH3C(O) PhC(O) CH2Ph
602t H 3-CH3PhCH2C(O) PhC(O) CH2Ph '
602u H CH3C(O) Fmoc CH2Ph
602v H PhCH2CH2CO PhCH2 ch3
Tabulka 11
č. 1------------------------------ Výchozí látka 1) Krok C· R3X zpus. (% výtěžek) 3) Krok C R4X - zpús . 1 (%výtěžek) Krok 0 ZDŮS . (%výtěžek)
603n 602k CH3C(O)C1 A (kvant.) na f ty len· e- 2-C(O)Cl A (70) B (kvant.)
603o 6021 CH3C(O)C1 (kvant.) PhC (0) Cl A 03) B (kvant.)
6O3t 602k 3- CH3,?hCH2C(Ó)Cl ('kvant·.) PhC(O)Cl A (.93) 3 (9.5)
603u 602k CH3C(O)C1 A (kvant,,.) Faoc-Cl C .(82.) C (98)
603v 600a/103 PhCHřCH?C(O)Cl ?hČHO -A (.9.5.)
A Z (4.0)
•164CZ 278171 B6
Sloučeniny z tabulky 12 se připraví způsobem popsaným níže.
Tabulka 12
Slouč. č. R? Rs R4
605a H PhCH2CH2C(O) PhC(O)
605b H PhCH2C(O) PhC(O)
605c Ή PhC(O) PhC(O)
605d H CH3C(O) PhC(O)
605e H CH30CH2C(O) PhC(O)
605f H (CH3)2CHCH2C(O) PhC(O)
605g H CH3C(O)CH2C(O) PhC(O)
605h H CH3OC(O)C(O) PhC(O)
605i H CHaC(O)C(O) PhC(O)
605j H CH2OC(O) PhC(O)
605m H CH3SO3 PhC(O)
605n H CH2C(O) Nafty l-2-C(O)
605o ch3 CH3C(O) PhC(O)
605p H PhCH2NHC(O) PhC(O)
605q H PhC(O)
605s H 4-pyridylCH2C(O) PhC(O)
605t H 3-CH3PhCH2C(O) PhC(O)
605v H PhCH2CH2C(O) PhCH2
(605a).
Krok A. Semikarbazon terc.butylesteru kyseliny (3S)-3-(l-fluorenylmetliyloxykarbonylamino)-
4-oxobutanové (210 mg, 0,45 mol, připravený podobným způsobem jako benzyloxykarbonylový 10---analog-v-Graybill-a-kol—Int—J—Protein_Res“44”štr—1'73-82”( 1'99'4)1) se rozpustí v 10 ml dimethylformamidu a 2 ml diethylaminu a směs se míchá 2 hodiny. Potom se odpaří ve vakuu za získání semikarbazonu terč, butylesteru kyseliny (3S)-3-amino-4-oxobutanové. 0 °C studený
-165CZ 298171 B6 roztok výše uvedeného zbytku 603a (200 mg, 0,42 mmol) v 5 ml dimethylformamidu a 5 ml dichlormethanu se reaguje s 1-hydroxybenzotriazolem (57 mg, 0,42 mmol) a hydrochloridem l-(3-dÍmethylaminopropyl)~3-ethylkarbodiirnidu (98 mg, 0,51 mmol). Reakční směs se míchá 18 hodin při teplotě místnosti, nalije se do ethylacetátu (75 ml) a promyje se 0,3N vodným roztokem hydrogensíranu sodného, nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného, suší se nad síranem sodným a zahustí se ve vakuu. Po velmi rychlé chromatografií (silikagel, 0% až 4% methanol/0,1% hydroxid amonný/dichlormethan) se získá 240 mg (83 %) 604a.
Krok B. 604a se míchá v 10 ml 33% směsi kyselina trifluoroctová/voda 4 hodiny a odpaří se ve vakuu. Zbytek se rozpustí v 7 ml směsi methanol/kyselina octová/37% vodný roztok formaldehydu (5:1:1) a míchá se 18 hodin. Po chromatografii (reverzní fáze Cl8, 4,4 mm ID x25 cm, 15 až 70% acetonitril/0,1% kyselina trifluoroctová/voda) se získá 32 mg (16%) 605a jako bílé pevné látky:
lH NMR (perdeuteromethanol, existuje jako diastereomery hemiacetalu) δ 7,85-7,78 (2H, d),
7,5-7,32 (6H, m), 7,32-7,28 (IH, m), 7,18-6,98 (5H, m), 4,92-4,85 (2H, m), 4,5—4,32 (2H, m),
4,31-4,20 (2H, m), 3,7-3,6 (IH, m), 2,90-2,75 (2H, m), 2,65-2,5 (IH, m), 2,48-2,25 (3H, m).
Následující sloučeniny se připraví podobným způsobem:
(605b) 148 mg (33 %) jako bílá pevná látka:
'H NMR (perdeuteromethanol) δ 7,9-6,9 (m, 16H), 4,9 (s, 2H), 4,5 (m, IH), 4,4 (m, 2H), 3,75 (s, IH),3,6(dd, IH),3,45(dd, lH),2,7(m, lH),2,5(m, IH).
(605c). 319 mg (56 %) jako bílá pevná látka:
]H NMR (perdeuteromethanol) δ 7,9-6,9 (m, 16H), 5,1 (m, IH), 4,9 (dd, IH), 4,7 (m, IH), 4,6 (dd, IH), 4,4 (m, 2H), 4,05 (m, IH), 2,7 (m, IH), 2,5 (tn, IH).
(605d). 190 mg (38 %) jako bílá pevná látka.
'HNMR (perdeuteromethanol) δ 1,9 (d, H), 2,4 (m, IH), 2,65 (m, IH), 3,7 (m, IH), 4,25 (m, IH), 4,45 (m, 2H), 4,8-5,05 (m, 3H), 7,3-7,7 (m, 7H), 7,9 (s, 2H).
(605e): 250 mg (78%) 'HNMR (perdeuteromethanol) δ 1,87 (široký s), 1,95 (s, 2H), 2,1 (široký s), 2,4 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 3,59 (široký s), 3,75 (široký s), 3,87 (široký s), 4,19 (m), 4,37 (m), 4,50-4,78 (široký m), 4,92 (m), 5,27 (široký s), 7,41-7,58 (m, 7H), a 7,87 ppm (d, 2H).
(605f). 210,5 mg (46 %) jako bílá pevná látka:
'H NMR (perdeuteromethanol) δ 7,9-7,4 (m, 9H), 5,1 (m, IH), 4,9 (m, IH), 4,6 (dd, IH), 4,4 (m, 2H), 4,1 (d, IH), 3,8 (m, 1H), 3,5 (kv, IH), 2,7 (m, IH), 2,5 (m, IH), 2,0 (m, 3H), 1,2 (t, IH), 0,9 (d,3H), 0,8(d, 3H).
(605 g). 81 mg (19 %) jako bílá pevná látka:
'H NMR (perdeuteromethanol) δ 7,9-7,3 (m, 11H), 4,9-4,8 (m, 2H), 4,6-4,4 (m, 3H), 4,3 (m, IH), 3,75 (kv, IH), 3,55 (d, 1H), 2,7 (m, IH), 2,5 (m, IH), 2,05 (s, 3H).
(605h). 227 mg (54 %) jako bílá pevná látka:
1H NMR (perdeuteromethanol) δ 2,5 (m, IH), 2,7 (m,_lH),_3„5.5_(s,_3H),_3,8=4,0- (m,-2H-),-4,4 (m, ÍH), 4,6-4,8 (τη, 2H), 4,95 (d, IH), 5,1 (m, IH), 7,3-7,7 (m, 7H), 7,9 (d, 2H), 8,6 (d, IH).
(605i), 150 mg (37 %) jako bílá pevná látka.
-166 CZ 295171 B6 lH NMR (perdeuteromethanol) δ 7,9-7,3 (m, 12H), 5,1 (m, IH), 4,65 (t, IH), 4,55 (dd, IH), 4,35 (m, IH), 4,1 (d, lH),3,9(kv, IH), 3,45 (kv, IH), 2,7 (m, IH), 2,5 (m, IH), 2,25 (s,3H).
(605j). 234 mg (44 %) jako bílá pevná látka:
'H NMR (perdeuteromethanol) 8 7,9-4 (m, 12H), 5,0 (m, 1H), 4,8-4,5 (m, 3H), 4,4 (m, IH), 4,3 (t, IH), 3,9-3,75 (m, 2H), 3,6 (s, 3H), 2,7 (m, IH), 2,5 (m, 1H).
(605m). 64,5 mg (34 %) jako bílá pevná látka:
’H NMR (perdeuterodimethylsulfoxid, existuje jako diastereomery poloacetalu & otevřená forma aldehydu) δ 9,48 (0,2H, s), 8,85-8,72 (IH, m), 8,65-8,60 (0,8 H, d), 8,30-8,26 (0,2 H, d),
7,95-7,88 (2H, d), 7,6-7,45 (6H, m), 7,44-7,38 (IH, m), 5,78-5,75 (0,2H, d), 5,48 (0,6H, s),
4,85-4,70 (2H, m), 4,62-4,54 (IH, d), 4,50-4,40 (2H, m). 4,25^,14 (IH, m), 3,9-3,85 (IH, m), 3,16 (3H, s), 3,05-2,3 (2,m).
(605n). 103 mg (17 %) jako bílá pevná látka:
'HNMR (perdeuteromethanol) δ 1,9 (s, 3H), 2,5 (m, 1H), 2,65 (m, IH), 3,75 (m, IH), 4,3 (m, 1H), 4,5^,7 (m, 3H), 4,85-5,1 (m, 2H), 7,3-7,65 (m, 6H), 7,85-8,05 (m, 4H), 8,45 (s, 1H).
(605o). 42 mg (12 %) jako bílá pevná látka:
’H NMR (perdeuteromethanol, existuje jako diastereomery poloacetalu) δ 7,85-7,74 (2H, m),
4,82-4,42 (2H, m), 4,40-3,95 (2H, m), 3,6-3,5 (IH, m), 2,7-2,38 (2H, m), 2,32 (2H, s), 2,27 (3H, s), 1,92 (3H,s).
(605p). 165 mg, (37 %) jako bílá pevná látka:
‘H NMR (perdeuteromethanol) δ 2,45 (m, IH), 2,7 (m, IH), 3,8 (m, IH), 4,15-4,5 (m, 4H),
4,5-4,75 (m, 2H), 4,8-5,0 (m, 2H), 7,1-7,7 (m, 12H), 7,9 (d, 2H).
(605q). 210 mg (66%) 'H NMR (perdeuteromethanol) δ 1,95 (s, 2H), 2,4 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 3,29 (s, 3H), 3,78 (m), 3,87 (široký s), 4,0 (d, IH), 4,32 (m), 4,50-4,15 (m), 4,95 (m), 5,27 (Široký s), 7,45-7,65 (m, 7H), a 7,89 ppm (d, 2H).
(605s). 128 mg (19 %) jako bílá pevná látka:
’H NMR (perdeuteromethanol) δ 8,5-7,4 (m, 13H), 5,0 (m, IH), 4,7 (m, IH), 4,5 (m, 2H), 4,45-4,4 (m, 3H), 3,8-3,7 (m, 2H), 2,7 (m, 1H), 2,5 (m, IH), (605t). 132 mg (24 %) jako bílá pevná látka:
'H NMR (perdeuteromethanol) 8 7,8-6,7 (m, 13H), 4,9 (t, 1H), 4,75 (dd, JH), 4,2 (dd, IH), 4,1 (m, 2H), 3,8 (dd, IH), 3,6 (kv, IH), 3,45 (dd, IH), 3,3 (dd, IH), 2,6 (m, IH), 2,3 (m, IH), 2,15 (s,3H).
(605v), 88 mg (28 %) jako bílá pevná látka:
'H NMR (perdeuteromethanol) 8 7,63-7,51 (2H, m), 7,5-7,35 (7H, m), 7,25-7,10 (3H, m),
7,1-7,02 (2H, m), 5,04-4,96 (IH, m), 4,75-4,57 (2H, m), 4,38-4,26 (2H, m), 4,24-4,12 (2H, m),
4,10-4,02 (IH, d), 4,88-4,80 (IH, m), 2,90-2,80 (2H, m), 2,78-2,63 (IH, m), 2,55-2,35 (2H, m),
2,34-2,22 (IH, m).
-167CZ ZVSI/I B6
Rz
609
Sloučeniny z tabulky 13 jsou popsány níže.
Tabulka 13
# r2 Rs R4 Rí R7
609a H PhCH2CH2C(O) PhCH2CH2C(O) Cl Cl
609b | H CH3C(O) PhC(O) Cl Cl
(609a).
Krok A: Roztok sloučeniny 204 (223 mg, 0,5 mmol) a 603r (300 mg; 0,36 mmol) ve 4 ml dimethylformamidu a 4 ml dichlormethanu se reaguje s (Ph3P)2PdCl2 (10 mg), 1 -hydroxybenzoío triazolem (135 mg, 1,0 mmol) a hydrochloridem l-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimidu (115 mg, 0,6 mmol). Tri-n-butylcínhydrid (219 mg, 0,75 mmol) se přikape k reakční směsi a míchá se 18 hodin. Reakční směs se nalije do ethylacetátu a promyje se 10% vodným roztokem hydrogensíranu sodného, nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a nasyceným vodným roztokem chloridu sodné, suší se nad síranem sodným a zahustí ve vakuu. Po 15 velmi rychlé chromatografií (silikagel, 0 až 50% ethylacetát/hexan) se získá 360 mg (86%) sloučenina 607a jako pěny.
Krok B. Roztok sloučeniny 607a (360 mg) v 5 ml dichlormethanu se přikape k suspenzi 1,1,1-triacetoxy-l,l-dihydro-l,2-benziodioxol-3(lH)-onu (362 mg, 0,85 mmol) ve 20 ml dichlor
168CZ Z98I7I B6 methanu. Reakční směs se míchá 4,5 hodiny, zředí se dichlormethanem a promyje se směsí 1:1 nasycený vodný roztok hydrogenuhličitanu sodného/nasycený vodný roztok disiřičitanu sodného, dvakrát nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného, suší se nad síranem sodným a zahustí ve vakuu. Po velmi rychlé 5 chromatografii (silikagel, 20% ethylacetát/dichlormethan) se získá 340 mg (95 %) ketonu 608a.
Krok C. Sloučenina 608a (300 mg, 0,36 mmol) se rozpustí ve 25 ml směsi 25% kyselina trifluoroctová/dichlormethan a míchá se při teplotě místnosti 5 hodin, a zahustí se ve vakuu. Po velmi rychlé chromatografii (silikagel, 0 až 5% methanol/díchlormethan) se získá 118 mg (42 %) 609a 10 jako bílé pevné látky:
lH NMR (perdeuteromethanol) δ 7,62-6,65 (16H, m), 4,85-4,7 (IH, m), 4,68-4,42 (2H, m), 4,40-4,15 (2H, m), 3,48-3,28 (IH, m), 3,0-2,9 (IH, m), 2,9-2,6 (4H, m), 2,55-2,18 (3H, m), 2,16-1,96 (2H, m).
(609b) se připraví ze sloučeniny 603d podobným způsobem jako sloučenina 609a za získání
287 mg (43 % celkový výtěžek) jako bílé pevné látky:
*H NMR (perdeuterodimethylsulfoxid) δ 1,6 (s, 3H), 2,7-3,1 (m, 2H), 3,45 (m, IH), 4,4 (t, IH),
4,7 (m, 2H), 4,95 (m, IH), 5,2, 5,4 (2s, IH), 7,2-7,65 (m, 8H), 7,9 (d, 2H), 8,8 (t, IH), 8,9, 9,1 (2s, IH), 12,6(široký, IH).
612.
-169CZ 298171 B6 (612) se připraví analogickým způsobem jako 607a (pouze kroky A a C) za použití sloučeniny 603m (150 mg, 0,36 mmol) místo sloučeniny 603r a t-butylesteru kyseliny (3S)-34alyloxykarbonylamino)-4-oxo-5-(2,6-dichlorbenzoyl-oxy)pentanové (110; 160 mg, 0,36 mmol, WO 5 93/16710) místo sloučeniny 606a za získání sloučeniny 612 (56 %) jako bílé pevné látky:
‘H NMR (deuterochloroform) 7,85-7,10 (12H, m), 5,4-4,65 (4H, m), 4,6-4,15 (4H, m),
3,10-2,72 (5H, s&m).
io Příklad 13
Sloučeniny 619-635 se připraví tak, jak je popsáno v příkladu 13 a tabulce 14.
40Ó
- 170Z7OI/1 DO
Syntéza sloučenin 619-635.
Krok A: Syntéza sloučeniny 614. TentaGel S® NH2 pryskyřice (0,16 mmol/g, 10,0 g) se umístí na sintrovanou skleněnou nálevku a promyje se dimethylformamidem a (3 x 50 ml), 10% (objem/objem) diizopropylethylaminem (DIEA) v dimethy Iformamidu (2 x 50 ml) a nakonec dimethylformamidem (4 x 50 ml). K pryskyřici se přidá dostatečné množství dímethylformamidu, aby se získala suspenze, potom se přidá sloučenina 400 (1,42 g, 2,4 mmol, připravená z t-butylesteru kyseliny (3S) 3-(fluorenylmethyloxykarbonyl)-4—oxobutanové podle A.M. Murfy a kol., J. Am. Che, Soc., 114, 3156-3157 (1992)), hydrát 1-hydroxybenzotriazolu (HOBT.H2O; 0,367 g, 2,4 mmol), O-benzotriazol-N,N,N,N'-tetramethyluroniumhexafluorofosfát (HBTU; 0,91 g, 2,4 mmol),a DIEA (0,55 ml, 3,2 mmol). Reakční směs se protřepává při teplotě místnosti přes noc na třepačce. Pryskyřice se izoluje na sintrované skleněné nálevce pomocí filtrace za sání a promyje se dimethylformamidem (3 x 50 ml). Nezreagované aminoskupiny se uzavřou pomocí reakce pryskyřice s 20% směsí acetanhydrid/dimethylformamid (2 x 25 ml) přímo na nálevce (10 minut promývání). Pryskyřice se promyje dimethylformamidem (3 x 50 ml), potom se suší ve vakuu přes noc za získání sloučeniny 614 (11,0 g, kvantitativní výtěžek).
Krok B: Syntéza sloučeniny 616. Pryskyřice 614 (3,0 g, 0,16 mmol/g, 0,46 mmol) se nabobtná na sintrované skleněné nálevce pomocí promytí dimethylformamidem (3 x 15 ml). Chránící skupina Fmoc se rozštěpí pomocí 25% směsi (objem/objem) piperidin/dimethylformamid (15 ml) po dobu 10 minut (občasné míchání) a potom po dobu 20 minut s čerstvým piperidinovým činidlem (15 ml). Pryskyřice se potom promyje dimethylformamidem (3 x 15 ml), potom N-methylpyrrolidonem (2x15 ml). Po přenesení pryskyřice do 100 ml baňky se přidá N-methylpyrrolidon, aby se získala suspenze, potom se přidá sloučenina 603u (0,736 g, 0,72 mmol), HOBT.H2O (0,112 g, 0,37 mmol), HBTU (0,279, 0,73 mmol) a DIEA (0,26 ml, 0,15 mmol). Reakční směs se protřepává přes noc při teplotě místnosti za použití třepačky. Pryskyřice se zpracuje a uzavře 20% roztokem (objem/objem) anhydridem kyseliny octové v dimethylformamidu podle popisu uvedeného pro přípravu sloučeniny 614 za získání sloučeniny 616 (3,13 g, kvantitativní výtěžek).
Krok C. Syntéza sloučeniny 617. Tato sloučenina se připraví z pryskyřice 616 (0,24 g, 0,038 mmol) za použití Advanced ChemTech 396 Multiple peptidového syntetizéru. Automatické cykly zahrnují promytí pryskyřice dimethylformamidem (3 x 1 ml), odstranění chránící skupiny 25% roztokem (objem/objem) piperidinu v dimethylformarnidu (1 ml) 3 minuty, potom čerstvým činidlem (1 ml) 10 minut za získání sloučeniny 617. Pryskyřice se promyje dimethylformamidem (3x1 ml) a N-methylpyrrolidonem (3 x 1 ml).
Krok D. Způsob 1. (624). Pryskyřice 617 se acyluje roztokem 0,4M thiofen-3-karboxylové kyseliny a 0,4M HOBT v N-methylpyrrolidonu (1 ml), a roztokem 0,4M HBTU vN-methylpyrrolidonu (0,5 ml) a roztok 1,6M DIEA vN-methylpyrrolidonu (0,35 ml) a reakční směs se protřepává 2 hodiny při teplotě místnosti. Acylační krok se zopakuje. Nakonec se pryskyřice promyje dimethylformamidem (3 x 1 ml), dichlormethan (3 x 1 ml), a suší se ve vakuu.
Z pryskyřice se odštěpí aldehyd a celkově se odstraní chránící skupiny pomocí roztoku 95% kyseliny trifluoroctové/5% vody (objem/objem, 1,5 ml) 30 minut při teplotě místnosti. Po promytí pryskyřice štěpícím činidlem (1 ml) se spojené filtráty přidají k chladné směsi 1:1 ethar:pentan (12 ml) a vzniklá sraženina se izoluje pomocí odstředění a usazení. Vzniklá kulička se rozpustí ve směsi 10% acetonitril/90% voda/0,1% kyselina trifluoroctová (15 ml) a lyofilizuje se za získání surové sloučeniny 624 jako bílého prášku. Sloučenina se čisté pomocí semipreparativní RPHPLC s Rainin Microsorb(,m) Cl8 kolonou (5μ, 21,4 x 250 mm) za eluce lineárním gradientem acetonitrilu (5 až 45 %) obsahujícího 0,1% kyseliny triflurooctové (objem/objem) 5 minut při______ průtokul'2ml7miřrFrakce obsahuj íčfpožadovaný produkt se spojí a lyofilizují za získání sloučeniny 624 (10,0 mg, 54 %).
-171£701 /1 DO
Krok D. Způsob 1A. Syntéza sloučeniny 627. Následující postup je podobný způsobu 1. Pryskyřice 617 se acyluje 4-(l-fluorenylmethoxykarbonylamino)benzoovou kyselinou a reakce se opakuje. Skupina Fmoc se odstraní tak, jak je popsáno v kroku C a volný amin se acyluje 20% (objem/objem) acetanhydridem v dimethylformamidu (1 ml) a 1,6M DIEA vN-methylpyrroli5 donu (0,35 ml) 2 hodiny při teplotě místnosti. Acylační krok se opakuje. Po štěpení aldehydu z pryskyřice vznikne sloučenina 627 (4,2 g, 20 %).
Krok D. Způsob 2. Syntéza sloučeniny 632. Následující postup je podobný způsobu 1. Pryskyřice 617 se acyluje 0,5M cinnamoylchloridem v N-methypynolidonu (1 ml) a 1,6M DIEA vNio methypyrrolidonu (0,35 ml) 2 hodiny při teplotě místnosti. Acylační krok se opakuje. Po štěpení aldehydu z pryskyřice se získá sloučenina 632 (11,1 mg, 58 %).
Krok D. Způsob 3. Syntéza sloučeniny 629. Následující postup je podobný způsobu 1. Pryskyřice 617 se acyluje l,0M benzensulfonylchloridem v dichlormethanu (0,5 ml) a 1M pyridinem 15 v dichlormethanu (0,60 ml) 4 hodiny při teplotě místnosti. Reakce se opakuje. Po štěpení aldehydu z pryskyřice se získá sloučenina 629 (4,7 mg, 24 %).
Analytické HPLC metody:
(1) Waters DeltaPak Cl8, 300A (5U, 3,9 x 150 mm). Lineární gradient acetonitrilu (5 az 45%) obsahující 0,1 % kyseliny trifluoroctové (objem/objem) 14 minut při průtoku 1 ml/min.
-172VZL Λ7ΟΙ/Ι DO
Tabulka 14
Postup C i—< r-< CM
+
to £ CM CM ÁJ to
to <n z to
z + s to to + to g
<> .—
<—1 r-4 r—i
z ·—- •w*
<*> OP OP
o *H «-4 CD *3» CO r* cd
►4 e r* to 5T to to to
Cu <
Z T-4 O <-4
▼H r—f f—i
ro to
Z tn to to .*»
*-4 r4 o
.s CO to ro
to to to
,r* r-
o o O
u to to vr
o Z Z Z
k to to ID
0 CM CM CM
b) X Z Z
> Γ C CO
CM CM CM
u u O
X X
A Px o χ O <r
<0 k o zx Μ X
3 4-> 3 k .44 to 1 >o °rM 1 2X oALP) O-z °Xr T μ o<Q
// \\___ Vyj ť Γ
Xs·/
4 to o r4
«—1 W CM CM
W; \£> U> \£>
-173CL L^YIY BO
Postup i—f rH f~-l
+ +
SH £ g £ o z «> + Λ Z 7* \d š £ rCĎ <3*
KJ r-4 t-4 r-t
w fj
ÓP
(·) •H (T> CO TO £ c\ “
a •η σ> <*
04 v. ιΟ
w O ••IC ir4 co
*0· i—<, W
£ m Ki S ** ID *w
to Ό «5
ΓΤ T-4 CO
s lO r- 53*
CO o VÍ
r-4 r-
υ a> M 0 O ťť Z vo CM O <T Z (N CO O Z CM CM
N > £ 00 Z ov » CM
CM cn CM
O O O
°»<δ >o δ X
0β0θ \~ΛΡ 0=6 χθ
Ul Uzr *\_
(ti 14 P JJ °Xt° δ o2b°
3 P p<^ T j!zx
, P <* j ©=<
: tO cS /=η
4Λ
I o
4 <M cn *T
CM CM N
Ul to ω <0
- 174ΌΔ XVOI/1 ΒΟ
Postup r-í < rH
\D 1-t co
ω W r4 í-4 co
X .+ s m tn V)
XJ ftí t-f vi r-(
t* dP <w
ϋ £ -H & s * co S? tn £ -
Cu **
o- Γ* s
tn «Μ CO
• ih in iri
Jc ** **. •w
tD o γ-
♦ T—t rrl γο
š in in in
to r- co: CD
O o
u o v m
Φ. P s > lQ Z ď) CM X CO Z C£> CM X LO CM Z TCM Z kO CM
CM O U (J
X O X δ z δ i
o=^^o °=M^°
o=z
/=*\ )
<ú tí P Λ? δ P in Qz>-o °rML . °^5 V>=o £ MrO 0 7 H
W *F 5^Z Q=<,
cT x
• «' o X
X X
·' tn u> ϊ>
H CM OJ 04
ω U) vc kO
- 175CL ZVOI/I DO
ίλ
P
-p
w rH r> OJ
o
Pu
to + *t! m r- ď) I—(
r** U_ Ol rH CD cn
w tn m sr m
KJ X i-X rH **w tH
č ~ <*> dP dP dP
o PÍ n. Ή s ’ CO 8 « σι co rH CD
X «<Λ •C) <· ův O r-i
CD n rH U>
Λ tr> i/) :ιη
u? ^r· o
*57 CM r-4 CD O>
<* tn m in
Vzorec CD O *3* z OJ X ID Ol V co 00 O ·<· z *T Ol .X n Ol; u O Z A£> Ol X m OJ o to co O *5* Z. CD oi X Ol O
δχ 5z 5x = O 5x O=<7>= = O
O=č Z*X / o=< íx o=<
’.(0 z==\ J
M P -P X s -P co •Ά y o=< €MO al· o=a\ =o SX. »Ó
o Z=V /=\
\±=y v tf 4J>
ř co Λ o rH
rH Ol 01 m cn
CO 10 to w
-176cz. zvai/ι tso
Struktura Vzorec . M. h. HPLC RČ HS Postup min (M+H) +
-177Příklad 14
Sloučeniny 1605a—j, 1605m, 1605n, 1605p, 1605t, a 1605vse připraví tak, jak je popsáno níže
Krok B
Krok q
Krok O.
Krok p
(3S) N-(2-Oxo-3-terc.butoxykarbonylamino-2,3,4,5-tetrahydro-l H-pyrido-[3,4-b][l ,4]diazapin (1600).
Krok A. (2S) 2-terc.Butoxykarbonylamino-3-(3-nitropyridin-2-ylamino)propionová kyselina se připraví podobným způsobem jako (2S) 2-terc.butoxykarbonylamino-3-(2-nitrofenylamino)propionová kyselina v kroku A syntézy 600a/103, kromě toho, že 3-chlor-3-nitropyridin se použije místo 2-fluomitrobenzenu, za získání 4,05 g (64 %) žluté pevné látky.
Krok B. (2S) 2-terc.Butoxykarbonylamino-3-(3-aminopyridÍn-2-ylamino)propionová kyselina se připraví podobně jako (2S) 2-terc.butoxykarbonylamino-3-(2-aminofenylamino)propionová kyselina v kroku B syntézy 600a/103 za získání 3,68 g (kvantitativně) jako tmavá pevná látka.
Krok C. Methylester (2S) 2-terc.butoxykarbonyIamino~3-(3-aminopyridin-2-ylamino)propionové kyseliny. Roztok (2S) 2-terc.butoxykarbonylamino-3-(3“aminopyridin-2-ylamino)propionové kyseliny (360 mg, 1,21 mmol) a methanolu (59 mg, 1,82 mmol) v bezvodém dichlormethanu (20 ml) se reaguje s 4-dimethylaminopyridin (DMAP, 163 mg, 1,33 mmol) a hydrochloridem l-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimidu (280 mg, 1,45 mmol). Reakční směs se míchá 18 hodin, zředí se ethylacetátem (150 ml), dvakrát se promyje vodou, nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného, suší se nad síranem sodným a zahustí ve vakuu. Po velmi rychlé chromatografii (silikagel, 0 až 5% methanol/dichlormethan) se získá 250 mg (67 %) sloučeniny uvedené v názvu jako světle hnědé látky.
-178CZ. ZVO1 71 BO
Krok D. (1600). Roztok methylesteru kyseliny (2S) 2-terc.butoxykarbonylamino-3-(3-aminopyridin-2-ylamino)proponové (70 mg, 0,225 mol) a 25% methoxidu sodného v methanolu (130 μΐ, 0,56 mmol) v bezvodém methanolu (4 ml) se 16 hodin zahřívá na 60 °C. Reakční směs se zahustí ve vakuu, zbytek se rozpustí ve 2 ml vody a extrahuje se ethylacetátem (třikrát). 5 Spojené extrakty se suší nad síranem sodným a zahustí ve vakuu. Po velmi rychlé chromatografií (silikagel, 0 až 3% methanol/dichlormethan) se získá 7,5 mg (3 %) sloučeniny 1600 jako světle hnědé pevné látky:
'HNMR (perdeuteromethanol) δ 7,96-7,92 (1H, d), 7,75-7,65 (IH, široký s), 7,14-7,08 (IH, d), 6,73-6,65 (IH, m), 5,83-5,75 (IH, široký s), 5,4-5,25 (IH, široký s), 4,6-4,5 (IH, m), 3,95-3,84 10 (IH, m), 3,55-3,48 (IH, m), 1,4 (9H, s).
Krok E. 1601 se připraví ze sloučeniny 1600 podle postupu v kroku D přípravy 600a/1 03.
Syntéza sloučeniny 1603. 1603 se připraví ze sloučeniny 1601 podle postupu pro přípravu 15 sloučeniny 603 ze sloučeniny 600.
-179£731/1 fcSO
Syntéza sloučeniny 1605. 1605 se připraví ze sloučeniny 1603 podle postupu pro přípravu sloučeniny 605 ze sloučeniny 603.
Tabulka 15
1605 R; R4
a PhCH2CH2CO PhCO
b PhCH2CO PhCO
c PhCO PhCO
d CH3CO PhCO
e CH3OCH2CO PhCO
f (CH3)2CHCH2CO PhCO
g ch3coch2co PhCO
h ch3ococo PhCO
i ch3coco PhCO
J ch3oco PhCO
m ch3so3 PhCO
n ch3co Nafthyl-2-CO
P PhCH2NHCO PhCO
t 3-CH3PhCH2CO PhCO
v PhCH2CH2CO ' PhCH2
Příklad 15
Sloučeniny 1610-1621 se připraví ze sloučeniny 1600 pomocí podobného postupu, jako se připraví sloučeniny 619—635 ze sloučeniny 600a/103 a 600b.
- 180 CL mm B6
H Nw<
kde pro sloučeniny 1610-1621, a R3 = skupina CH3C(O)b R3 = skupina CH3OCH2C(O)-:
-181 cz zysivi B&
182cl zvai/i bo
Příklad 16
Sloučeniny obsahující bloky (el 1), (y 1), (y2), (z), a (e 12) se připraví tak, jak je definováno níže.
Příprava bloku Rt, kde Rj je (el1)a kde Y2 je =0.
-183cl zyai/i bď
Příprava bloku Rb kde Ri je (yl) a kde Y2 je =0.
-184Příprava bloku Rb kde R( je (y2) a kde Y2 je H2 a X7 je O.
cl mm
-185cl mm B&
Příprava bloku Rb kde Ri je (y2) a kde Y2 je =0 a X7 je NH.
CbžHN
Boc
-186Příprava bloku Rb kde Ri je (y2) a kde Y2 je H2 a X7 je NH.
-187CZ, ZV317I fcSb
Příprava bloku Rb kde Rj je (z) a kde Y2 je O.
1) PC15
2). NafíC03
X = NHCbz
X = OCH2Ph
-188CZ Z78171 B6
Příprava bloku Rb kde Rj je (e 12) a kde Y2 je =0.
t-BuONH2 _________________ ^CO2CH2Ph t-BciO“NH
276
276
1) Hz, Pd/C
2) PC1S
-189-
CL 293171 B6
Příklad 17
Příprava sloučeniny 2001,2002, 2100a-e, a 2201 je popsána níže.
(2000). K roztoku t-buty 1-9-amtno-6,10-dioxo-l ,2,3,4,7,8,9,10-oktahydro-6H-pyridazino[l,2-a][l,2]diazapm-l-karboxylátu (GB 2 128 984; 340 mg, 1,15 mmol) v dichlormethanu se přidá benzoylmravenčí kyseliny (260 mg, 1,7 mmol), HOBT (230 mg, 1,7 mmol) a EDC (340 mg, 1,7 mmol). Vzniklá směs se míchá při teplotě místnosti 16 hodin, nalije se do IN kyseliny chlorovodíkové a extrahuje se dichlormethanem. Organické extrakty se dále promyjí nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, suší se nad síranem hořečnatým a odpaří za získání sloučeniny 1999 jako světle žluté pevné látky. Pevná látka se rozpustí v dichlormethanu (25 ml) a kyselině trifluoroctové (25 ml) a míchá se přes noc a zahustí se ve vakuu za získání 560 mg sloučeniny 2000 jako oleje.
(2001), se připraví ze sloučeniny 2000 podobným způsobem jako sloučenina 213e za získání 410 mg (63 %) sloučeniny 2001 jako bílé pevné látky:
'H NMR (deuterochloroform; směs diastereomerů) δ 8,25 (1H, d), 8,23 (1H, d), 7,78 (1H, dd),
7,65 (1H, široký m), 7,50 (2H, m), 7,40-7,25 (4H, m), 6,55 (1H, d), 5,57 (IH, d), 5,10 (1H, t), 5,05-4,95 (2H, m), 4,90 (1H, d), 4,80 (1H, d), 4,72 (1H, široký m), 4,65 (1H, m), 4,55 (1H, m), 4,45 (1H, t), 3,25 (1H, m), 3,15 (1H, m), 3,00 (2H, široký m), 2,90 (1H, dd), 2,70 (1H, m), 2,47 (1H, dd), 2,45 (1H, m), 2,35 (1H,), 2,00-1,75 (4H, m), 1,60 (1H, široký m).
(2002), Sloučenina 2001 (58,6 mg, 0,10 mmol) se reaguje s 15 ml směsi kyselina octová/acetonitril/voda (1:2:3) a míchá se při teplotě místnosti 6,5 hodiny. Reakční směs se extrahuje etherem. Vodná vrstva se zahustí pomocí azeotropického odstranění vody za použití acetonitrilu. Produkt se suspenduje do dichlormethanu, zahustí ve vakuu a srazí etherem za získání 46,8 mg (99 %) sloučeniny 2020 jako bílé pevné látky:
lH NMR (perdeuteromethanol) δ 9,05 (0.25H, d), 8,15 (1H, d), 7,68 (1H, t), 7,64 (0.25H, d), 7,55 (3H, t), 7,35 (0,5H, m), 5,22 (1H, t), 4,90 (1H, m), 4,58 (1H, dd), 4,50 (1H, m), 4,28 (1H, široký
-190CZ 298171 B6
m), 3,45 (IH, m), 3,10 (IH, široký t), 2,68 (IH, ddd), 2,60-2,45 (2H, m), 2,30 (IH, dd),
2,15-2,05 (2H, m), 1,90 (2H, široký m), 1,68 (IH, široký m).
2100a
O
XOOMe
2100c -OMe piPr
OMe
2100b Rl_
ÓĚt .COOiPr
2100d R1 f Λ...
κ * I QiPf
(2100a). Roztok sloučeniny 214e (101 mg, 0,23 mmol) v izopropanolu (10 ml) se míchá při teplotě místnosti s katalytickým množstvím p-toluensulfonové kyseliny (10 mg). Po 75 minutách se reakční směs nalije do nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a extrahuje se dichlormethanem. Spojené extrakty se suší nad síranem sodným a zahustí. Po velmi rychlé chromatografii (silikagel, dichlormethan až ethylacetát) se získá 56 mg (51 %) sloučeniny 2100a jako bílé pevné látky:
'H NMR (deuterochloroform) δ 7,9-7,8 (2H, m), 7,6-7,5 (1H, m), 7,5-7,4 (2H, m), 7,1 (0,5H,
d), 6,9 (0,5H, d), 6,4 (0,5H, d), 5,6 (0,5H, d), 5,3 (0,5H, s), 5,2-5,1 (IH, m), 4,95 (0,5H, m),
4,75-4,5 (1,5H, m), 4,35 (0,5H, t), 4,1 (0,5H, m), 3,98 (0,5H, m), 3,3-2,75 (4H, m), 2,5-2,4 (2H, m), 2,25 (IH, m), 2,1-1,9 (3H, m), 1,75-1,55 (2H, m).
(2100b). Roztok sloučeniny 214a (16 mg, 0,036 mmol) v ethanolu (2 ml) se míchá při teplotě místnosti s katalytickým množstvím p-toluensulfonové kyseliny (2 mg). Po 5 dnech se reakční směs nalije do nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a extrahuje se dichlormethanem. Spojené extrakty se suší nad síranem sodným a zahustí. Po velmi iychlé chromatografii (silikagel, dichlormethan:ethylacetát 95:5 objem/objem) se získá 16 mg (81 %) sloučeniny 2100b jako bílé pevné látky:
'HNMR (deuterochloroform) δ 7,85-7,74 (2H, m), 7,55-7,38 (3H m), 7,04-6,95 (IH, d), 6,61-6,48 (1H, d), 5,15-5,08 (IH, m),4,63-4,53 (IH, m), 4,52-4,45 (IH, m), 4,42-4,35 (IH, m),
4,15-4,05 (2H, m), 3,74-3,60 (2H, m), 3,57-3,42 (2H, m), 3,39-3,28 (IH, m), 3,03-2,93 (IH, m), 2,92-2,82 (IH, m), 2,65-2,52 (2H, m), 2,42-2,25 (IH, m), 2,20-1,88 (4H, m), 1,76-1,50 (2H,m), 1,35-1,10 (9H,m).
(2100c). Roztok sloučeniny 214e (165 mg, 0,37 mmol) v methanolu (5 ml) se míchá při teplotě místností s katalytickým množstvím p-toluensulfonové kyseliny (17,5 mg). Po 4 dnech se reakční směs zředí ethylacetátem a promyje 10% roztokem hydrogenuhličitanu sodného (třikrát), a solankou. Spojené extrakty se suší nad síranem sodným a zahustí. Po velmi rychlé chromatografii (silikagel, ethylacetát) se získá 127 mg (68 %) sloučeniny 2100c jako bílé pevné látky:
'HNMR (deuterochloroform) δ 7,82 (2H, d), 7,55-7,50 (IH, m), 7,47-7,43 (2H, m), 7,02 (IH, d), 6,53 (IH, d), 5,20-5,10 (IH, m), 4,56-4,50 (IH, m), 4,45-4,50 (IH každý, dva m), 3,69
-191 CL ZV3171 Bb (3H, s), 3,41 (3H, s), 3,43 (3H, s), 3,35-3,25 (IH, m), 3,06-2,98 (IH, m), 2,94-2,83 (IH, m),
2,65-2,53 (2H, m), 2,35-2,32 (IH, m), 2,15-2,07 (IH, m), 2,00-1,89 (3H, m), 1,75-1,56 (2H, m).
(21 OOd). Roztok sloučeniny 214e (53 mg, 0,12 mmol) v izopropanolu (5 ml) se míchá při 50 °C s katalytickým množstvím p-toluensulfonové kyseliny (5 mg). Po 3 dnech se reakční směs nalije do nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a extrahuje dichlormethanem. Spojené extrakty se suší nad síranem sodným a zahustí. Po velmi rychlé chromatografii (silikagel, dichlormethan:ethylacetát (4:1 až 1:1 objem/objem)) se získá 49 mg (68 %) sloučeniny 21 OOd jako bílé pevné látky:
Ή NMR (deuterochloroform) δ 7,85 (2H, d), 7,50-7,43 (1H m), 7,41-7,35 (2H, m), 7,02 (1H, d),
6,47 (IH, d), 5,13-5,07 (IH, m), 5,0(M,9 (IH, m), 4,61^1,55 (2H, m), 4,37-4,30 (IH, m), 3,80-3,70 (IH, m), 3,90-3,80 (IH, m), 3,42-3,35 (IH, m), 3,03-2,93 (IH, m), 2,91-2,81 (lH,m), 2,62-2,50 (2H, m), 2,38-2,33 (IH, tn), 2,12-2,06 (IH, m), 1,97-1,81 (3H, m), 1,70-2,60 (2H, m), 1,28-1,05 (18H, m).
(2100e), se připraví ze sloučeniny 302 pomoci způsobu použitého pro přípravu sloučeniny 304a za získání sloučeniny 2100e, kromě toho, že se ethanol a triethylorthoformiát použijí místo methanolu a trimethylorthoformiátu. Po chromatografii (silikagel, 5% ethanol/dichlormethan) se získá 92 mg (68 %) bílé pevné látky:
‘HNMR (deuterochloroform; směs diastereomerů) δ 7,90-7,80 (2H, m), 7,60-7,50 (IH, m),
7.50- 7,40 (2H, m), 7,30 (0,5H, d), 7,00 (0,5H, d), 6,50 (0,5H, d), 5,50 (0,5H, d), 5,20-5,10 (1,5H, m), 4,95 (0,5H, m), 4,75-4,65 (0,5H, m), 4,65-4,50 (IH, m), 4,38 (0.05H, t), 4,00-3,90 (0,5H, m), 3,85-3,75 (0,5H, m), 3,75-3,65 (0,5H, m), 3,65-3,55 (0,5H, m), 3,30-2,70 (4H, m),
2.50- 2,35 (2H, m), 2,30 (IH, d), 2,15-1,90 (3H, m), 1,80-1,60 (2H, m), 1,25-1,20 (3H, dvat)
(2201) se připraví ze sloučeniny 600b pomocí způsobu použitého pro přípravu sloučeniny 605b za získáni sloučeniny 2201:
‘HNMR (deuterochloroform) δ 8,30-8,22 (IH, m), 8,05-7,98 (IH, d), 7,96-7,83 (IH, m), 7,77-7,68 (IH, m), 7,67-7,40 (7H, m), 5,12-5,02 (IH, m), 4,98-4,41 (5H, m), 4,38-4,24 (lH,m), 4,07-4,00 (IH, d), 3,92-3,80 (2H, m), 3,32 (3H, s), 2,75-2,60 (IH, m), 2,58-2,35 (IH, m).
Přiklad 18
Pro vybrané sloučeniny podle předkládaného vynálezu jsme získali následující údaje za použití způsobů popsaných zde (tabulka 1.6, viz příklad 7; tabulky 17 a 18, viz příklad 1 až 4). Struktury a přípravy sloučeniny podle předkládaného vynálezu jsou popsány v příkladech 28 až 31.
-192cz zyai/i bo
Tabulka 16
Pozorování účinnosti proléčiv u LPS stimulovaných myší: Inhibice vylučování IL-Ιβ. Procentuální inhibice vylučování IL-Ιβ po léčebně sloučeninou podle předkládaného vynálezu je uvedena jako funkce času po LPS stimulaci znamená, že v příslušném čase nebyla získána 5 žádná hodnota).
Čas podání sloučeniny (vzhledem k času LPS stimulace, PO, 50 mg/kg)
Sloučenina 1 -2h , -,lh 0h +lh
213f (-4) - a
213h, 9 53 , ΐ
'2'13 i (-11) 62 - . . . i
213k. 0 - 68 ** i
:2131 J |. (-18) - 80 . i
, 2.13m | 1 26 - 42
213 o. ' : 4 6 í
213p 21 - 29 — 1
213q 17' - 91
213 ř 59: - 37
213x 1 0 - 78 _ f
213y | 29 - 50
214e j 3 9 - 707.5 l 43 4 4 4 611 _____________1 - , -___________:___________47 ! 214k ! , 12. - '31 ! 2141 ;· , Q__________54 •i 214m I Q_________-17 ; 214w ; . 11 -__________,91.
; 2 641 : ' o__________ 23í 4 04 - - -56.
!55 - . 6- 193CZ. Z93I /1 BĎ
Sloučenina 1 -2h -lh Oh *lh
412 0 - 0 -
11 - 37 -
418 - - - 64
25 - 52 -
434 - - - 80.
0. - 63 i
450 . . 0 - 35 -
452 - - - 7Q
28 - 89 * i
456 - - - 56
I 4.1 - 5’9 -
470 .0 , - 36 i. *
I 471 0 - 34
475 0 . - 15 ::
4 81 .. . 27 - 0 -
486 19: - 15 -
487 | 17 . -2 0
8 | 25 67
55:0 f | 0 50
550h I 55 -, 73
550Í | (-10)23
55Ok | 3634
5501 J ' 9 3.8
55Óxn í 4-5 . - ... 52 . -
. ,'550n [ . T9 ,, - 6'5, -
. 550o i 19 - 64 -
5S02„ ; L 3.0 - 60 -
655 . í 0 - 68 -
65.6 i 1 31 - 1.6 -
662 41.. - 75 -
66 8. . - - - 53
695a. 49 - 78
1015 | 1 15 . 28
200.1 ! 64; 62: .53 55
2001a I 10 - 16 -
2002 · 5 - .8 7
2100h ·| 34 - 32 -
! 21001 i 19 - 7.4
' 2100 j 1 4 8 '4,1 0. 33
; 2iook : 30 50 32: . . .72
! 21001 : 52 23 . -
Ϊ 2100m ’ 4 0 42 -
f 210On i 21 ” .9·.'. . 64 . .73, ”
I.1 2100o 31 44 68 . 64
-194CZ £731/1 BO
Tabulka 17 Údaje pro vybrané sloučeniny podle předkládaného vynálezu získané za použití způsobů popsaných v příkladech 1 až 4.
Slouč. UV-vid. Ki (nM) Buňky PBMC prúm. IC50 (nM) úplná lidská krev IC50 (nM) Odbourání u myší i.v. ml/min/kg odbourání u krys i-v. ml/min/kg
213f 3000
213g ... 2200 í
213h 1500
213 i 1100
213j
213k 2000 i
2131 2000
213m 2500
213o 5000 3300
213p <300
213q <300
213r <300
213v 0,5 1,100 1100 41 23
213x 4500 2500
2Í3y 930 i
214 j 4f2 2500 6000 i
214k 0,2 500 580 v 22
2141 6 1900 1100 í i 12
214m ..1,-5 530 2200 33,4
214w b/6 620 370 15
246b 30000 >30000 87 ;
2641 3000
265a . 2600 25000
265c 1100 4500 í 32.....
265d 500 1500 v 35
265f 1200 i : 24. i
280b 13000 l 1
280c 10000 t t 86
2 8 Od 25000 i
283b , 1750 i .... 41 j
283c 4000 i 50 J
-195CZ 298171 B6
Slouč. UV-vid. Ki (nM) Buňky. PBMC prum. IC.50 (nM) Úplná lidská krev . 1Č50 (nM) odbouráni ú myši i.v. ml/min/kg Odbouráni u krys i.v. ml/min/kg.
' 2B3d >8000 10Ó00 t
308c .3000 1 I
308d 3000 .... . I
500 25 1800 1800
501 ' 2.,5 18 00 1600
505d 1500
505d >20000
505f 550
510a 65 200 267
510d 2300 >20000 1 |
i 511c 730 >20000 78 ! ' 40
j.,. 528 2200
550f 1100
! 550h 1800
I 5501 1400
55Ók 3000
.. 5501 750 . i
550m 2000 '1 .. 1
, 55,On <300
5 5 Ob 450 3000 ·. 1
. 55 Op 2900 1
550q 700 |
640 155 2250 : 3900 > 1
642 35 80QÓ 2900 1 1
645 150 i
650 550 4000 t
653 30 2300 6000 i
655
656 0,6 2100' 1600 2,9 ,
662 0.5 . 180Ó 800 2,75
668 9 5200 3700 29
669 14 100Ó0
670 4500
671 5 2000 2500 33,2
677 610
67 B . 5. 2700 2200
680
-196CZ 298171 B6
Slouc. UV-viď. Ki (nM) Buňky PBMC prúm. ÍC.50 (nM) Úplná lidská křév IČ50 (nM) Odbourání u myši i ...v, ml/min/kg Odbourání u krys i. v. mi/min/kg
681 9 3000 5000
682 .1300
683 400 >20000 >20000
684 15 50.00 . 2800
686 4 4000 9000
688a 3000 Γ 1
688b 1300
689a 0,8 910 2500
689b 2,2 600. 2000
i 690a 1600
690b
691a 2:,-1 2900... 1200 .... 9,9
691b 11,5 1,900 1400
1 692a 1
692b . 1800
693
694 3 2600 ‘ .2100
695a
695b
695c 2500
696 4,5 2000 2900 13
700 ; 27 5
701 90
702 .. 45 . >5000 20000
703 5 1400 20000
704 : 30 2600 9800 :
705 5 2300 3200
706 5 2400 5θ00
707 180
708 140
709 10 i '2100 14000 .
710 110 ]
711 175
910 .. 10 1 3400 38Ό0
91.1 9 1 3500 1900
912 10 4200 3800
913 .4,5 2400 7000
-197CZ 298171 B6
Slouč. UV-vid; Ki (nM). Buňky P.BMC’ prům. IC50 (:nM) Úplná lidská krev 1050 (nM) Odbourání u myši i .v. ml/min/kg .Odbourání u krys i. v, ml/min/kg
914 5,2 2600 2800 i
915 . U,5 >8000 1900
918 7 1150
919 4 2000 4300
920 16 . 2100 3000
921 . 8,5 1800 3000
1018 . 170 4000 5500 .. 9,1 . 1
1052 100 2500 16 j
.1053 27 2000 >20000 34 J
1056 170. ' 17 i
. 1075 120 5000 i 5500 14, 5 J
1095 360 6000 28
1105 250 3500 3000
1106 75. . 4Q00 1700 .
1107 65 4
1108 22 1400 2600
1109 80 1 . i
1110 45 -7
. lili 18 .. 6050 4400
1112 3r 5 1800 2300
1113 290
1114 125
1115 250
1116 215
1117 35 1700 1300
ni e 380
1119 515
1120 9.5
1121 170 |
1122 . 400 1
1123 30 í 2,4,00 . 4500
1124 270 I ......
Γ li 25 55, i 2300 i 9000 .. f
2001a i i 3000 . i
2100f 1 1 í i
2100g ϊ. .. i i
2100h y 1 1 2000 1 i
* 198CZ 298171 B6
Slouč. UV-vid. Kx (nM) Buňky FBMC. prům. IC50 (nM) Úplná lidská krev IČ50 (nMl Odbourání u myši i.. v.. ml/min/kg Odbouráni u krys i. v. ml/min/kg
2100i i. i
210.0j 3.0000 12000 1 t
2100k 520 4000 600 1 i
21001 75Ό 2200 í-
2100m i
210.0n 670 770 4000 i
2100 ο 670 1150 1500 . 1 .. . :i'
Pro vybrané sloučeniny podle předkládaného vynálezu jsme získali následující údaje (tabulka 18) za použití způsobů popsaných v předkládaném vynálezu (viz příklady 1 až 4). Struktury a přípravy sloučenin podle předkládaného vynálezu jsou popsány v příkladech 28 až 31.
Tabulka 18
Slouč. Fluresc. test Rinact m S Buňky PBMC prům. 1C50 (nM) Úplná lidská krev IC50 (nM.) Odbourání u myší i.v. ml/min/kg Odbourání u krys i.v. ml/min/kg
286 370000 300 1600 119
505 b 190000 1500 2100 461 196
505 e 420000 9000 1000
Příklad 19
In vivo akutní zkouška na účinnost jako protizánětlivé činidlo
Výsledky z tabulky 19 ukazují, že sloučeniny 412f, 412d a 696a inhibují vylučování IL-Ιβ u LPS stimulovaných myší po orálním podávání za použití ethanolu/PEG/vody, β-cyklodextrinu, labrosolu/vody nebo cremoforu/vody jako nosičů. Sloučeniny se podávají v době LPS stimulace. Postup je popsán v příkladu 7.
Tabulka 19 Inhibice (%) vylučování IL-1 β u LPS stimulovaných myší.
Sloučenina 10 mg/kg dávka 25 mg/kg dávka 50 mg/kg dávka
412f 17% 25% 32%
412e 5% 17% 61%
696a 0 45% 52%
Příklad 20
Peritoneální karagénový zánět u myší
Zánět byl u myší vyvolán intraperitoneální (IP) injekcí 10 mg karagénu v 0,5 ml solanky (Griswold a kol., Inflammation, 13, str. 727-739 (1989), Léčiva se podávala orálně v ethanolu/PEG/vodě, β-cyklodextrinu, labrosolu/vodě nebo cremoforu/vodě jako nosičích. Myši byly usmrceny 4 hodiny po podání karagénu, potom jim byly injektovány IP 2 ml solanky obsahující
-199CZ 298171 B6
5U/ml heparinu, Po jemné masáži peritonea se udělal malý řez, obsah se odebral a objem se zapsal. Vzorky byly před odstředěním (130 x g, 8 minut při 4 °C) umístěny na ledu, aby se odstranil buněčný materiál a vzniklý suspernatant se skladoval pří -20 °C. Hladina IL-1 β v peritoneální kapalině se určila pomocí ELISA.
Výsledky v tabulce 20 ukazují proléčivo 412f inhibuje vylučování IL-Ιβ u myší stimulovaných karagénem po orálním podání léku. Sloučenina 412e neinhibuje vylučování IL-Ιβ, pokud se podává orálně v množství 50 mg/kg.
Tabulka 20 Inhibice (%) vylučování IL—1β sloučeninami 412 f a 412d u myší stimulovaných karagénem.
dávka (mg/kg) Sloučenina 412f Sloučenina 412d
1 30% 0
10 54% 32%
25 49% 31%
50 73% 36%
100 75% 53%
Příklad 21
Arthritida vyvolaná kolagenem typu II
Arthritida vyvolaná kolagenem typu II byla vyvolána u samic DBA/IJ myší tak, jak je popsáno v Wooley a Geiger (Wooley, P. H., Methods in Enzymology, 162, str. 361-373 (1988) a Geger, T., Clinical and Experimental Rheumatology, 11, str. 515-522 (1993)). Kolagen typu II z hrudní kosti kuřat (4 mg/kg v lOmM kyselině octové) se emulguje se stejným objemem Freundova kompletního adjuvantu (FCA) opakovaným průchodem (400) mezi dvěma lOm! skleněnými stříkačkami s dvoj středou jehlou o velikosti 16. Myši byly imunizovány intradermální injekcí (50 μΐ; 100 μΐ Cil na myš) emulze kolagenu o 21 dní později na kontralaterální straně kořene ocasu. Léčivo se podávalo dvakrát denně (10, 25 a 50 mg/kg) orálně, přibližně po 7 hodinách. Jako nosič se použil ethanol/PEG/voda, β-cyklodextrin, labrosol/voda, nebo cremofor/voda. Léčba byla zahájena za 2 hodiny po Cil opakované imunizaci. Záněty předního páru končetin byly rozděleny do škály 1 až 4 podle vzrůstající závažnosti a přiřazený stupeň byl přidán k celkovému hodnocení.
Výsledky na obrázcích 12, 13 a 14 ukazují, že próléČiva 412f, 412d a 696a inhibují zánět při kolagenem vyvolané arthritidě u myší po orálním podávání. Sloučenina 214e zánět neinhibuje, pokud se podává (50 mg/kg) jednou za den orálně.
Příklad 22
In vivo určení biologické využitelnosti
Léčivo (10 až 100 mg/kg) se podávalo orálně krysám (10 ml/kl) v ethanolu/PEG (vodě, β-cyklodextrínu, labrosolu/vodě nebo cremoforu/vodě. Vzorky krve se odebíraly z krční tepny 0,25, 0,50, l, 1,5, 2, 3,4, 6 a 8 hodin po podání, odstředily se na plazmu a před analýzou se skladovaly při -70 °C. Koncentrace aldehydu se určily za použití enzymatické zkoušky. Farmakokinetická analýza údajů se prováděla pomocí nelineární regrese za použití RStrip (MicroMath Software, UT). Hodnoty využitelnosti léčiva se určily následně: (AUC léčiva po orálním podání proléčiva/AUC léčiva po i.v. podání léčiva) x (dávka i.v./dávka p.o.) x 100%.
‘200CZ 298171 B6
Výsledky v tabulce 21 ukazují, že proléčiva 412f 412d a 696a poskytují významnou hladinu léčiva v krvi a mají dobrou využitelnost léčiva při orálním podávání. Hladina sloučeniny 214e v krvi nebyla při orálním podávání zjištěna.
Tabulka 21 Orální biologická využitelnost sloučenin 412f, 412d, 696a, a 214 u krys.
Sloučenina dávka (mg/kg) Cmax (pg/ml) Využitelnost léku (%)
412f 25 2,4 32
412d 25 2,6 35
696a 50 1,2 10
214e 45 0,2 0,9%
Příklad 23
ICE štěpí a aktivuje pro-IGIF
Expresní plazmidy ICE a homologu ICE
0,6 kb cDNA kódující celou délku pro-IGIF myši (H. Okamura a kol., Nátuře, 378, str. 88 (1995) se váže do expresního vektoru savců pCDLSRa (Y. Takabe a kol., Mol. Cell. Biol., 8, str. 466 (1988)).
Obecně, plazmidy (3 pg) kódující aktivní ICE (výše) nebo tři enzymy TX příbuzné ICE, CPP32 a CMH-1 v pCDLSRa expresním vektoru (C. Faucheu a kol., EMBO, 14, str. 1914 (1995); Y. Gu a kol., EMBO, 14, str. 1923 (1995); J. A. Lippke a kol., J. Biol. Chem,, 271, str. 1825 (1996)) se transfekují do subkonfluentních monovrstev buněk Cos v 35 mm miskách za použití DEAE dextranové metody (Y. Gu a kol., EMBO J. 14, str. 1923 (1995)). O 24 hodin později se buňky rozštěpí a rozštěpená hmota se podrobí SDS-PAGE a imunopřenosu „immunoblotiing“ za použití protilátky specifické pro IGIF (H. Okamura a kol. Nátuře, 378, str. 88 (1995).
Polymerázová řetězová reakce se použije pro zavedení Nde I na 5' a 3' konce pro-IGIF cDNA myši za použití následujících základních jednotek:
GGAATTCCATATGGCTGCCATGTCAGAAGAC (přední) a GGTTAACCATATGCTAACTTTGATGTAAGTTAGTGAG (reverzní). Vzniklý NDEI fragment se váze na E. coli expresní vektor pET-I5B (Novagen) na Ndel místo, aby se vytvořil plazmid, kteiý řídí syntézu polypeptidu o 213 aminokyselinách obsahující 21-zbytek peptidu fMGSSHHHHHHSSGLVPRGSHM, kde LVPRGS představuje místo štěpení thrombinu) připojeného kN-konci pro-IGIF na Ala2, jak potvrzuje DNA sekvence plazmidů a N-koncová sekvence expresních proteinů. Kmen E. coli BL21 (DE3) nesoucí plazmid se inkubuje s 0,8 mM izopropyl-l-thio-p-Dgalaktopyranosidem 1,5 hodiny při 37 °C, izoluje a štěpí pomocí mikrofluidizace (Microfluidic, Watertown, MA) v pufru A (20 mM fosforečnanu sodného, pH 7,0, 300 mM chloridu sodného, 2mM dithiothreitol, 10% glycerol, 1 mM fenylmethylsulfonylfluorid a 2,5 pg/ml leupeptin). Rozštěpený materiál se čistí pomocí odstřední při 100 000 x g 30 minut. (His)6-cílový pro-IGIF protein se potom čistí ze supematantu pomocí Ni-NTA-agarosové (Qiagen) chromatografie za podmínek doporučených výrobcem.
In vitro reakce štěpení pro-IGIF
In vitro štěpení reakce (30 μΐ) obsahuje 2 μg čitého pro-IGIF a různé koncentrace čistých proteáz v pufru obsahujícím 20 mM Hepes, pH 7,2, 0,1% Triton X-100, 2 mM DTT, 1 mM PMSF a
2,5 pg/ml leupeptinu se l hodinu inkubuje při 37 °C. Podmínky pro štěpení granzymem B jsou popsány dříve v (Y. Gu a kol., J. Biol, Chem., 271, str. 10816 (1996)). Rozštěpený produkt se analyzovaný pomocí SDS-PAGE na 16 % gelech a na Coomassie modři, byl podroben na
-201CZ 298171 B6
N-koncové aminokyselině sekvencování za použití ABI automatického řadiče peptidů za podmínek doporučených výrobcem.
Kinetické parametry štěpení ÍGIF pomocí ICE
Kinetické parametry (K^/Km, Km a kkat) pro štěpení IGIF pomocí ICE se určí následujícím způsobem. 35S-methioninem značený pro-IGIF (3000 cpm, připravený za použití in vitro transkripce a translace pomocí TNT T7-spojeného retikulocytového štěpícího systému (Promega) a pro-IGIF cDNA v pSP73 vektoru jako templátu) se inkubuje v reakční směsi 60 μΐ obsahujících 0,1 až InM rekombinantu ICE a 190 nM až 12μΜ neznačeného pro-IGIF 8 až 10 minut při io 37 °C. Koncentrace štěpícího produktu se určí pomocí SDS-PAGE a Fosfolmager analýzy. Kinetické parametry se vypočtou pomocí nelineární regrese vhodné pro údaje rychlost proti koncentraci pro rovnici Michaelis-Mentenové za použití programu Enzfitter (Biosoft).
IFN-γ indukční test
A. E7 Thl buňky (h. Quill a R. H. Schwartz, J. Immunol., 138, str, 3704 (1987)) (1,3 x 105 buněk v 0,15 ml Clickova zásobního média s 10% FBS, 50 μΜ 2-merkaptoethanolu a 50 jednotkami/ml IL-2) v 96 jamkové desce se reaguje s IGIF 18 až 20 hodin a supematant kultury se testuje na INF-γ pomocí ELISA (Endogen, Cambridge, MA).
Příklad 24
Zpracování pro-IGIF pomocí ICE v buňkách Cos
Buňky Cos se transfekují různými kombinacemi expresních plazmidů tak, jak je popsáno 25 v příkladu 23. Transfekované buňky Cos (3,5 x 105 buněk v 35 mm misce) se 7 hodin značí 1 ml DMEM bez methioninu obsahujícím 2,5 % normálního DM EM, 1 % dialyzovaného fetálního hovězího séra a 300 pCi/ml 35S-methionunu (35S-Expres$ Proterin Labeling-Μίχ, New England Nuclear). Buněčný lysát (připravený v 20 mM Hepes, pH 7,2, 150 mM chloridu sodného, 0,1= % Triton X-100, 5 mM N-ethylmaleimid. 1 mM PMSF, 2,5 μg/ml leupeptinu) nebo upravené 30 médium se imunosráží s antilGIF protilátkou, která rozpozná jak prekurzor, tak konečnou formu IGIF (H. Okamura a kol., Nátuře, 378, str. 88 (1995)). Imunosrážené proteiny se analyzují pomocí SDS-PAGE (polyakrylamidová gelová elektroforéza) a fluorografie (obr. 2A).
Tak se měřila přítomnosti INF-γ indukující aktivitu buněčného lysátu a upraveného média 35 transfekovaných buněk (obr. 2B). Transfekované buňky Cos (3,5 x 105 buněk v 35 mm misce) se kultivovaly 18 hodin v 1 ml média. Médium se sklidilo a použilo v konečném zředění 1:10 při INF-γ indukční zkoušce (příklad 23). Granule buněk Cos ze stejné transfekce se štěpily v 100 μΐ 20 mM Hepes, pH 7,0 pomocí mrznutí a tání třikrát. Lyzát se čistil pomocí odstředění tak, jak je popsáno výše a použil se při testu ve zředění 1:10.
Příklad 25
IGIF je fyziologickým substrátem ICE
Přírodní typ (ICE+/+) a (ICE-/-) myší se injektoval teplem inaktivovaným P. acnes a z těchto myší se izolovaly Kupfferovy buňky 7 dní po injektování a potom se imunologicky testovaly s 1 pg/ml LPS 3 hodiny. Množství IGIF a upraveného média se měřilo pomocí ELISA.
Přírodní typ myší trpících nedostatkem ICE se injektoval intraperitoneálně teplem usmrcenými 50 p. acnes tak, jak je popsáno v H. Okamura a kol., Infection and Immunity, 63, str. 3966 (1995).
Kupfferovy buňky se připravily o sedm dní později podle Tsutsui a kol. (H. Tsutsui a kol., Hepato-Gastroenterol., 39, str. 553 (1992)) kromě toho, že se místo metrizamidu použil
-202CZ 298171 B6 nycodenz gradient. Pro všechny experimenty, Kupfferovy buňky z 2 až 3 zvířat se spojily a kultivovaly se v RPMI 1640 zásobním roztoku s 10% fetálním hovězím sérem a 1 pg/ml LPS. Buněčný lyzát a upravené médium se připraví o tři hodiny později.
Kupfferovy buňky z přírodního typu a ICE-/- myší se metabolicky značily 35S-methioninem jako buňky Cos. (popsáno výše v příklad 24) kromě toho, že se místo DMEM použil RPMI 1641 bez methioninu. ÍGIF ímunosrážecí experimenty se prováděly na buněčných lyzátech a upraveném médiu a imunosrážení se analyzovalo pomocí SDS-PAGE a fluorografie jak je opsáno v příkladu 23. Viz. obr. 3.
Příklad 26
Indukce vylučování INF-γ in vivo
LPS smísené s 0,5% karboxymethylcelulózou v PBS, ph 7,4 se podávalo myším pomocí intraperitoneální injekce (30 mg/kg LSP) při objemu dávky lOml/kg. Krev se odebírala každé 3 hodiny 24 hodin ze skupiny tří ICE deficitních nebo neupravených myší. Hladina séra INF-γ se určila pomocí ELISA (Endogen).
Příklad 27
IGIF a INF-γ inhibiční test
Inhibice zpracování IGIF pomocí ICE inhibitorů se měřila v ICE inhibičním testu jak je popsáno zde v příkladu l a tabulce 22.
PBMC test u člověka
Lidské obalené buňky utvořené ze sražených leukocytů se získaly od dárců krve a periferní krevní monojaderní buňky (PBMC) se izolovaly pomocí odstředění v LeukoPrep zkumavkách (Becton-Dickinson, Lincoln Park, NJ). PBMC se přidá (3 x 106/jamka) do 24 jamkové desky s tkáňovou kulturou Coming desek a po 1 hodině inkubace při 37 °C se nepřilnuté buňky odstranily opatrným promytím. Přilnuté monojademé buňky se stimulovaly LPS (1 μg/ml) s nebo bez inhibitoru ICE ve 2 ml RPMI-1640-10% FBS. Po 16 až 18 hodinách inkubace při 37 °C se množství IGIF a INF-γ určilo v kultivovaném supernatantu pomocí ELISA,
Za použití postupů popsaných v předkládaném vynálezu jsme získali například následující údaje pro sloučeninu 412. Struktura sloučeniny 412 je popsána níže.
Tabulka 22
sloučenina LIV-viditelné Kj (nM) Buňky PBMC prům. IC50 (nM)
412 1,3 580
Příklad 28
Sloučeniny podle předkládaného vynálezu mohou být připraveny různými postupy. Následující způsob je výhodný:
-203 CZ 298171 B6
K roztoku A (1,1 ekvivalentu) v dichlormethanu (nebo dimethylformamidu, nebo směsi dichlormethan: dimethylformamid (1:1)) se při teplotě místnosti v inertní atmosféře (dusík nebo argon) přidá trifenylfosftn (0 až 0,5 ekvivalentu), nukleofilní lapač (2 až 50 ekvivalentů) a tetrakistrifenylfosfinpalladium(O) (0,05 až 0,1 ekvivalentu). Po 10 minutách se popřípadě reakční směs zahustí, potom se přidá roztok kyseliny A-I nebo A—II v dichlormethanu (nebo dimethylformamidu, nebo směsi dichlormethan:dimethylformamid (1:1)) a následuje přidá HOBT (1,1 ekvivalentu) a EDC (1,1 ekvivalentu). Vzniklá směs se nechá míchat při teplotě místnosti 1 až 48 hodin za vzniku spojeného produktu C-l nebo C—II.
Ve výše uvedeném způsobu se mohou použít různé nukleofilní lapače. Merzouk a Guibe, Tetrahedron Letters, 33, str. 477-480 (1992); Guibe a Balavoin, Joumal of Organic Chemistry, 52, str. 4984-4993 (1987)), Mezi výhodné nukleofilní lapače, které mohou být využity, patří; dimedon, morfolin, trimethylsilodimethylamin a dimethylbarbiturová kyselina. Výhodnější nukleofilní lapače jsou trimethylsilyldimethylamin (2 až 5 ekvivalentů) a dimethylbarbiturová kyselina (5 až 50 ekvivalentů). Pokud je nukleofilním lapačem trimethylsilyldimethylamin, výše uvedená reakční směs se musí před přidáním A-I nebo A-Π zahustit.
Jiné sloučeniny podle předkládaného vynálezu se mohou připravit pomocí hydrolýzy sloučenin vzorce C-I a C-Π na sloučeniny vzorce H-I a H-I, jak je popsáno v následujícím schématu:
Hydrolýza se může provést za různých podmínek za předpokladu, že zahrnují kyselinu a vodu. Mezi kyseliny, které mohou být použity patří p-toluensulfonová kyselina, methansulfonová kyselina, kyselina sírová, kyselina chloristá, kyselina trifluroctová a kyselina chlorovodíková.
-204CZ 298171 B6
Například může být použita kyselina trifluoroctová (1 až 90 % hmotnostních) nebo kyselina chlorovodíková (OJ až 30% hmotnostních) ve směsi acetonitril/voda (1 až 90% H2O hmotnostně) při teplotě 0 až 50 °C.
Příklad 29
Sloučeniny 213f, 213g, 213h, 213i, 213j, 213k, 2131, 213m, 214f, 214g, 214h, 21.4i, 214j, 214k, 2141, 214m, 550f, 550g, 550h, 550i, 550j, 550k, 5501 a 550m se připraví následujícím způsobem.
213rm, R1 = Bn
550f-m, R1 = Ét
O
H O
O
Sloučenina (2l3f) se připraví ze sloučeniny 213f pomocí způsobu použitého pro přípravu sloučeniny 213a ze sloučeniny 212e za získání 504 mg sloučeniny 213f jako žluté pevné látky,
NMR (perdeuteromethanol) δ 1 JO (široký m, 0,25H), 1,30 (široký m, 2H), 1,50 (široký m, 1H), 1,65 (široký m, 1,5H), 1,80 (široký m, 0,25H), 1,90 (široký m, 0,25H), 1,95 (široký m, 0,5H), 2,05 (široký m, 0,25H), 2,15 (m, 1H), 2,3 (m, 1H), 2,5 (široký m, 1H), 2,6 (dd, 1H), 2,8 (m, 1H), 3J (široký s, 3H), 3,15 (široký m, 1H), 3,32 (široký s, 3H), 3,5 (m, 1H), 4,5 (široký m, 1H), 4,62 (d, 0,25H), 4,72 (m, 3H), 4,95 (m, 1H), 5,1 (široký t, 0,25H), 5,15 (široký t, 0,75H), 5,7 (d, 1H), 6,75 (d, 2H), 7,35 (široký s, 5H), 7,75 (d, 2H).
Sloučenina (213g) se připraví za sloučeniny 212 g pomocí způsobu použitého pro přípravu sloučeniny 213e ze sloučeniny 212e za získání 40 mg sloučeniny 213 g, ’HNMR (perdeuteromethanol) δ 1,5 (široký m, 1H), 1,65 (široký, m, 2H), 1,70 (široký m, 0,25H), 1,90 (široký m, 1H), 1,95 (široký m, 1H), 2,05 (široký m, 0,25H), 2,10 (m, 1H), 2,3 (m, 1H), 2,5 (m, 2H), 2,59 (d, IH), 2,6 (d, 1H), 2,78 (d, 1H), 2,8 (d, 1H), 2,93 (široký s, 4H), 3,05
-205 CZ 298171 B6 (široký m, IH), 3,15 (široký m, 0,25H), 3,3 (široký s, 3H), 3,5 (m, 2H), 4,5 (široký m, 2H), 4,65 (d, IH), 4,7 (široký m, 2H), 4,95 (široký m, IH), 5,15 (široký t, 0,25H), 5,2 (široký t, 0,75H), 5,2 (d, IH), 6,95 (d, IH), 7,15 (d, IH), 7,25 (široký s, IH), 7,3 (široký t, 2H), 7,45 (široký s, 6H).
Sloučenina (213h) se připraví ze sloučeniny 212h za pomoci způsobu použitého pro přípravu sloučeniny 213e ze sloučeniny 212e za získání 296 mg sloučeniny 213h, ]H NMR (deuterochloroform) δ 1,55-1,68 (m, IH), 1,7-2,05 (m, 3H), 2,3-2,5 (m, 2H), 2,65-2,8 (m, IH), 2,85-2,93 (m, IH), 2,95-3,25 (m, 3H); 4,44-4,65 (m, 2H), 4,68-4,82 (m, IH), 4,9^1,95 (d, IH), 5,05-5,18 (m, 2H), 5,28 (s, 0,5H), 5,55-5,58 (d, 0,5H), 6,52-6,58 (d, 0,5H), 6,7-6,76 (m, 2H), 6,82-6,85 (d, 0,5H), 7,3-7,4 (m, 5H), 7,52-7,58 (m, IH), 7,75 (s, 0,5H), 7,8 (s, 0,5H).
Sloučenina (213i) se připraví ze sloučeniny 212i za pomoci způsobu použitého pro přípravu sloučeniny 213e ze sloučeniny 212e za získání 1,1 g sloučeniny 213i, ’HNMR (deuterochloroform) δ 1,55-2,05 (m, 6H), 2,26-2,5 (m, 2h), 2,68-2,82 (m, IH),
2,85-2,92 (m, IH), 2,95-3,25 (m, 2H), 3,82 (s, 1,5H), 3,85 (s, 1,5H), 4,4^,65 (m, 2H), 4,7-4,78 (m, IH), 4,88-4,95 (m, IH), 5,05-5,23 (m, IH), 5,28 (s, 0,5H), 5,55-5,58 (d, 0,5H), 6,6-6,65 (m, IH), 6,8-6,84 (m, IH), 6,9-6,95 (m, 3H), 7,3-7,45 (m, 4H), 7,78-7,85 (m, 2H).
Sloučenina (2l3j) se připraví ze sloučeniny 212j za pomoci způsobu použitého pro přípravu sloučeniny 213e ze sloučeniny 212e za získání 367 mg sloučeniny 213j, ‘HNMR (deuterochloroform) δ 1,55-2,05 (m, 12H), 2,25 (d, IH), 2,35 (m, IH), 2,48 (m, 2H),
2,75 (m, 2H), 2,9 (m, IH), 2,95-3,25 (m, 5H), 4,45 (t, IH), 4,5-4,6 (m, 4H), 4,7 (m, IH), 4,75 (d, IH), 4,8 (m, IH), 5,05 (m, 2H), 5,15 (kv, IH), 5,3 (s, IH), 5,58 (d, IH), 6,5 (d, IH), 6,9 (d, IH), 7,05 (d, IH), 7,25-7,35 (m, 5H), 7,6 (s, 2H), 7,7 (s, 2H).
Sloučenina (213k) se připraví ze sloučeniny 213k za pomoci způsobu použitého pro přípravu sloučeniny 213e ze sloučeniny 212 e za získání 593 mg sloučeniny 213k, ’H NMR (perdeuteromethanol) δ 1,5 (m, 1 Η), 1,6-1,7 (m, 2H), 1,75-1,95 (m, 4H), 2,15 (m, 2H),
2,3 (m, IH), 2,6 (m, IH), 2,7 (m, IH), 3,05 (m, 2H), 3,15 (m, IH), 3,5 (m, 2H), 4,44 (m, 2H),
4,65 (d, IH), 4,7 (m, IH), 4,95 (m, IH). 5,15 (m, IH), 5,4 (s, IH), 5,7 (d, IH), 7,3 (m, 5H), 7,85 (s,2H).
Sloučenina (2131) se připraví ze sloučeniny 2121 za pomoci způsobu použitého pro přípravu sloučeniny 213e ze sloučeniny 212é za získání 133 mg sloučeniny 2131, ‘HNMR (deuterochloroform) δ 1,55-1,7 (m, IH), 1,75-2,05 (m, 3H), 2,25 (s, l,5H), 2,27 (s, 1,5H), 2,3-2,48 (m, 2H), 2,7-2,83 (m, IH), 2,85-2,94 (dd, IH), 2,95-3,25 (m, 2H), 4,42-4,65 (m, 2H), 4,68-4,85 (m, IH), 4,88-4,95 (m, IH), 5,05-5,18 (m, 2H), 5,32 (s, 0,5H), 5,55-5,6 (d, 0,5H), 6,48-6,55 (d, IH), 6,88-6,92 (d, IH), 7,0-7,04 (d, 0,5H), 7,15-7,2 (d, 0,5H), 7,3-7,4 (m, 4H), 7,64-7,78 (m, 2H), 7,88-7,94 (m, IH), 8,45-8,56 (m, IH).
Sloučenina (213m) se připraví ze sloučeniny 212m za pomoci způsobu použitého pro přípravu sloučeniny 213e ze sloučeniny 212e za získání 991 mg sloučeniny 213m, ‘H NMR (deuterochloroform) δ 1,5-2,15 (τη, 5H), 2,2-2,55 (m, 3H), 2,6-3,3 (m, 4H), 3,95 (2s, 3H), 4,45-4,7 (m, 2H), 4,7-4,85 (m, IH), 4,85-4,95 (m, IH), 5,05-5,25 (m, IH), 5,3 (s, 0,5H), 5,6 (d, 0,5H), 6,55 (d, 0,5H), 6,85 (d, 0,5H), 7,0 (d, 0,5H), 7,25-7,6 (m, 5, 5H), 7,75 (s,lH), 7,85 (s, IH).
-206CZ 298171 B6
Sloučenina (550f) se připraví ze sloučeniny 212f za pomoci způsobu použitého pro přípravu sloučeniny 213e ze sloučeniny 212e za získání 420 mg sloučeniny 550f jako bílé pevné látky, 'HNMR (deuterochloroform) δ 1,2-1,25 (široký t, 3H), 1,35 (m, IH), 1,55 (široký m, IH), 1,88-2,02 (široký m, 4H), 2,3 (d, IH), 2,35 (m, IH), 2,45 (m, IH), 2,55-2,75 (m, 3H), 3,0 (s,6H), 3,25 (m, IH), 3,55 (m, IH), 3,65 (m, IH), 3,75 (m, IH), 3,9 (m, IH), 4,3 (t, IH), 4,55 (m, 2H), 4,68 (široký m, IH), 3,9 (m, IH), 4,3 (t, IH), 4,55 (m, 2H), 4,68 (široký m, 1H), 4,95 (široký m, IH), 5,1 (široký m, 2H), 5,45 (d, IH), 6,5 (m, 2H), 7,7 (m, 2H).
Sloučenina (550h) se připraví ze sloučeniny 212h za pomocí způsobu použitého pro přípravu sloučeniny 213e ze sloučeniny 212e za získání 195 mg sloučeniny 550h jako bílé pevné látky, 'HNMR (perdeterodimethylsulfoxid) δ 1,1-1,18 (2t, 3H), 1,6-1,7 (m, 2H), 1,88-2,05 (m, 2H),
2.1- 2,35 (m, 3H), 2,48-2,56 (m, IH), 2,75-2,8 (m, 0.75H), 2,88-3,08 (m, 1,25H), 3,25-3,4 (m, IH), 3,55-3,8 (m, 2H), 4,35-4,45 (tn, IH), 4,55-4,62 (m, IH), 4,8-4,88 (m, IH), 4,98-5,03 (tn, 0,25H), 5,1-5,13 (m, 0,75H), 5,33 (s, 0,25H), 5,58-5,6 (d, 0,75H), 5,9-6,0 (široký s, 2H),
6.8- 6,85 (d, IH), 7,58-7,62 (d, IH), 7,82 (s, IH), 8,22-8,28 (d, IH), 8,48-8,52 (d, 0,75H),
8,72-8,76 (d, 0,25H).
Sloučenina (550i) se připraví ze sloučeniny 212i za pomoci způsobu použitého pro přípravu sloučeniny 213e ze sloučeniny 212e za získání 135 mg sloučeniny 550i, 'HNMR (deuterochloroform) δ 1,18-1,28 (2t, 3H), 1,6-1,75 (m, 1,5H), 1,9-2,1 (m, 3,5H),
2.22- 2,3 (d, 0,5H), 2,38-2,47 (m, 1,5H), 2,7-2,8 (m, 0,5H), 2,8-2,93 (m, IH), 2,94-3,15 (m, 1,5H), 3,15-3,28 (m, IH), 3,55-3,62 (kv, 0,5h), 3,62-3,73 (kv, 0,5H), 3,78-3,88 (kv, 0,5H), 3,88 (s, 3H), 3,9-3,95 (kv, 0,5H), 4,33^1,4 (m, 0,5H), 4,5-4,55 (m, IH), 4,68-4,76 (m, 0,5H),
4.9- 4,95 (m, 0,5H), 5,1-5,2 (m, 1,5H), 5,18 (s, 0,5H), 5,48-5,52 (d, 0,5H), 6,48-6,55 (d, 0,5H),
6,85-6,9 (m, IH), 6,9-6,95 (m, 2H), 7,34-7,38 (d, 0,5H), 7,78-7,85 (tn, 2H).
Sloučenina (550k) se připraví ze sloučeniny 212k pomocí způsobu použitého pro přípravu sloučeniny 2I3e ze sloučeniny 212e za získání 174 mg sloučeniny 550k jako bílé pevné látky, ‘H NMR (perdeuterodimethylsulfoxid) δ 1,15 (2t, 3H), 1,6-1,75 (m, 2H), 1,9-2,05 (m. 2H),
2.1- 2,4 (m, 5H), 2,5-2,55 (m, IH), 2,7-2,8 (tn, 0,5H), 2,85-3,0 (m, IH), 3,0-3,1 (m, 0,5H),
3,55-3,7 (m, IH), 3,7-3,8 (m, IH), 4,2 (t, 0,5H), 4,35-4,45 (m, 0,5H), 4,55-4,65 (m, 0,5H),
4.8- 4,9 (m, 0,5H), 5,05 (t, 0,5H), 5,15 (t, 0,5H), 5,35 (s, 0,5H), 5,6 (d, 0,5H), 7,95 (s, 2H), 8,5 (d, 0,5H), 8,65 (d, IH), 8,75 (d, 0,5H), 10,9 (široký s, IH).
Sloučenina (5501) se připraví ze sloučeniny 2121 pomoct způsobu použitého pro přípravu sloučeniny 213e ze sloučeniny 212e za získání 151 mg sloučeniny 5501, 'HNMR (deuterochloroform) δ 1,2-1,28 (2t, 3H), 1,6-1,72 (m, 1,5H), 1,88-2,15 (m, 3,5H),
2.22- 2,28 (m, 0,5H), 2,28 (s, 3H), 2,38-2,48 (m, 1,5H), 2,66-2,92 (m, 1,5H), 2,95-3,14 (tn, l,5h), 3,2-3,34 (m, IH), 3,56-3,63 (kv, 0,5H), 3,63-3,72 (kv, 0,5H), 3,8-3,85 (kv, 0,5H),
3.9- 3,95 (kv, 0,5h), 4,32-4,38 (m, 0,5H), 4,5-4,62 (m, IH), 4,68-4,75 (m, 0,5H), 4,88-4,92 (m, 0,5H), 5,08-5,2 (m, 1,5H), 5,18 (s, 0,5H), 5,46-5,5 (d, 0,5H), 6,5-6,55 (d, 0,5H), 6,98-7,05 (tn, IH), 7,42-7,48 (d, 0,5H), 7,63-7,78 (tn, 2,5H), 7,9-7,94 (d, 0,5H), 8,44-8,52 (m, IH).
Sloučenina (550m) se připraví ze sloučeniny 212m pomocí způsobu použitého pro přípravu sloučeniny 213e ze sloučeniny 212e za získání 301 mg sloučeniny 550m jako bílé pevné látky, 'HNMR (deuterochloroform) δ 1,2-1,35 (2t, 3H), 1,5-1,8 (tn, 2H), 1,9-2,15 (5H), 2,25 (d, 0,5H), 2,4-2,5 (m, 2H), 2,65-2,8 (tn, 0,5H), 2,8-3,0 (m, 0,5H), 3,0-3,2 (m, IH), 3,2-3,35 (tn, 0,5H), 3,55-3,65 (m, 0,5H), 3,65-3,75 (m, 0,5H), 3,8-3,9 (tn, 0,5H), 3,9-4,0 (m, 0,5H),
-207CZ 298171 B6
4,4-4,45 (m, 0,5H), 4,55^,65 (m, 0,5H), 4,7-4,8 (m, 0,5H), 4,85^,95 (m, 0,5H), 5,05-5,2 (m, 0,5H), 5,2 (s, 0,5H), 5,5 (d, 0,5H), 6,5 (d, 0,5H), 6,9 (d, 0,5H), 6,95 (d, 0,5H), 7,35 (d, 0,5H),
7,75 (s, IH), 7,85 (s, IH).
Sloučenina (214j) se připraví ze sloučeniny 213j pomocí způsobu použitého pro přípravu sloučeniny 202 ze sloučeniny 2001 za získání 62 mg sloučeniny 214j jako bílé pevné látky, 'HNMR (perdeuteromethanol) δ 0,9 (t, IH), 1,3 (široký s, IH), 1,7 (široký m, IH), 1,9 (široký m, IH), 2,1 (široký s, IH), 2,25 (kv, IH), 2,35 (m, IH), 2,48 (m, 2H), 2,65 (t, IH), 3,15 (široký t, 1H),3,5 (široký m, IH), 4,3 (široký s, IH), 4,55 (m, 2H), 4,95 (t, IH), 5,25 (široký s, IH), 7,6 (široký s, IH), 7,85 (široký s, 1H).
Sloučenina (214k) se připraví ze sloučeniny 213k pomocí způsobu použitého pro přípravu sloučeniny 2002 ze sloučeniny 2001 za získání 80 mg sloučeniny 214k jako bílé pevné látky, ‘HNMR (perdeuteromethanol) δ 1,6-1,7 (m, IH), 1,8-2,0 (m, 2H), 2,0-2,1 (m, 2H), 2,15-2,25 (m, IH), 2,3-2,4 (m, IH), 2,4-2,55 (m, 2H), 2,6-2,75 (m, IH), 3,05-3,2 (m, IH), 3,4-3,6 (m, 2H), 4,2-4,3 (m, IH), 4,45-4,6 (m, IH), 4,8-5,0 (m, IH), 5,1-5,2 (m, IH), 7,85 (s, 2H).
Sloučenina (2141) se připravil ze sloučeniny 2131 pomocí způsobu použitého pro přípravu sloučeniny 2002 ze sloučeniny 2001 za získání 91 mg sloučeniny 2141 jako bílé pevné látky, 'HNMR (perdeuterodimethylsulfoxid) δ 1,65 (široký m, 6H), 1,9 (široký m, 6H), 2,15 (s, 3H),
2,3 (m, 3H), 2,6-2,85 (m, 3H), 2,9 (m, 2H), 3,0 (m, IH), 4,15 (široký kv, IH), 4,4 (m, 3H), 5,0 (m, IH), 5,15 (m, IH), 5,45 (s, IH), 7,8 (d, 2H), 7,95 (d, IH), 8,05 (s, IH), 8,65 (m, 2H), 9,65 (s, IH).
Sloučenina (214m) se připraví ze sloučeniny 213m pomocí způsobu použitého pro přípravu sloučeniny 2002 ze sloučeniny 2001 za získání 105 mg sloučeniny 214m jako bílé pevné látky 'HNMR (perdeuteromethanol) δ 1,6-1,75 (m, IH), 1,85-1,95 (m, IH), 2,0-2,1 (m, 2H),
2,15-2,25 (m, IH), 2,3-2,4 (m, IH), 2,45-2,55 (m, IH), 2,65-2,75 (m, IH), 3,4-3,55 (m, 2H)>
3,95 (s, 3H), 4,2-4,3 (m, IH), 4,45-4,6 (m, IH), 4,9-5,0 (m, IH), 5,15-5,2 (m IH), 7,9 (s, 2H).
Sloučeniny 308c a 308d se připraví následujícím způsobem.
Sloučenina (308c) se připraví ze sloučeniny 212e pomocí způsobu použitého pro přípravu sloučeniny 308b ze sloučeniny 212e za získání 266 mg sloučeniny 308c *H NMR (deuterochloroform) δ 1,6-1,7 (m, IH), 1,88-1,98 (m, 3H), 2,02-2,15 (m, IH), 2,3-2,4 (m, IH), 2,65-2,95 (m, 3H), 3,04-3,09 (m, IH), 3,12-3,25 (m, IH), 3,84 (s, 3H), 3,86 (s, 3H),
4,5-4,58 (m, IH), 4,88-4,95 (m, IH), 5,1-5,25 (,m, 2H), 6,86-6,9 (d, 2H), 7,15-7,25 (m, 2H),
7,36-7,4 (m, lh), 7,75-7,8 (d, 2H).
- 208 CZ 298171 B6
Sloučenina (308d) se připraví ze sloučeniny 212e pomocí způsobu použitého pro přípravu sloučeniny 308b ze sloučeniny 212e za získání 270 mg sloučeniny 308d, 'HNMR (deuterochloroform) δ 1,55-1,65 (m, IH), 1,8-2,1 (m, 4H), 2,3-2,4 (m, IH), 2,65-2,88 (m, 3H), 2,9-3,3 (m, 3H), 4,5—4,58 (m, IH), 4,88-4,95 (m, IH), 5,05 (s, 2H), 5,1-5,2 (m, IH),
6,82-6,95 (m, 2H), 7,02-7,15 (m, 2H), 7,28 (m, 5H), 7,45 (m, IH), 7,72 (d, 2H).
Sloučenina 2100f, 2100g, 2 lOOh, 21 OOi a 21 OOj se připraví tak, jak je popsáno níže.
V
2101b
Sloučenina (2101a) se připraví zallyloxykarbonylamino-p-terc.butylaspartátu podle postupu využitého Chapmanem (Bioorg. & Med. Chem. Lett, 2, str. 615-618 (1992)) pro přípravu (3S, 2RS) 3-allyloxykarbonylamino-2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuranu za použití 4-ehlorbenzyh alkoholu místo benzyl alkoholu za získání 1,84 g sloučeniny 2101 a jako krystalické pevné látky.
Sloučenina (21 OOf) se připraví ze sloučeniny 212e pomocí postupu použitého pro přípravu sloučeniny 213e ze sloučeniny 212e za použití sloučeniny 2101a za získání 380 mg sloučeniny 21 OOf, ‘HNMR (deuterochloroform) δ 1,8-2,0 (m, 10H), 2,30 (d, IH), 2,31-2,5 (m, 3H), 2,7-2,9 20 (tn,3H), 3,05 (m,2H),3,1-3,2 (m, 4H),4,45 (kv, IH), 4,5-4,6(m, 3H),4,7 (d, 2H), 4,85 (d, IH),
4,9 (t, IH), 5,2 (t, IH), 5,15 (m, 2H), 5,25 (s, IH), 5,55 (d, IH), 6,5 (d, IH), 6,9 (d, IH), 6,95 (d, IH), 7,25 (m, 3H), 7,35 (t, 2H), 7,45 (m, 2H), 7,55 (IH), 7,8 (m, 3H).
-209cz mm B6
Sloučenina (2101b) se připraví z (3S,2RS) 3-allyloxykarbonylamino-2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuranu pomocí způsobu použitého pro přípravu sloučeniny 2 lOOd ze sloučeniny 214e za použití sloučeniny sírové místo kyseliny p-toluensulfonové za získání sloučeniny 2100b.
Sloučenina (2100b) se připraví ze sloučeniny 212e podle postupu pro přípravu sloučeniny 213e ze sloučeniny 212e za použití sloučeniny 2101b za získání 31 mg sloučeniny 2100 g, 'HNMR (deuterochloroform) δ 1,19 (d), 1,94 (široký s), 2,00-2,12 (m) 2,24 (d), 2,42 (dd), 2,71-2,83 (m), 3,02 (dd), 3,12-3,27 (překrývající se m), 3,93 (m), 4,32^1,37 (m), 4,52^1,63 (m),
4,90-4,95 (m), 5,12-5,20 (m), 5,28 (s), 6,93 (d), 7,10 (d), 7,41-7,50 (m), 7,51-7,58 (m), 7,84 (d).
2l00h H OAc
Sloučenina (2lOOh). Roztok sloučeniny 214e (287 mg, 0,65 mmol) v pyridinu (5 ml) se reaguje s acetanhydridem (0,4 ml, 3,62 mmol). Po 6 hodinách se reakční směs nalije do 5% roztoku hydrogensíranu sodného a třikrát se extrahuje ethylacetátem. Spojené organické vrstvy se promyjí solankou, suší nad síranem sodným a zahustí ve vakuu. Po velmi rychlé chromatografii (silikagel, ethylacetát) se získá 119 mg sloučeniny 21 OOh, ’HNMR (deuterochloroform, směs čtyř dieteroizomerů) δ 1,80-2,05 (m), 2,12 (s), 2,13 (s), 2,19 (s), 2,22 (d), 2,67-2,75 (m), 2,80-2,95 (m), 3,00-3,20 (m), 3,21-3,33 (m), 3,50-3,95 (čtyři oddělené multiplety), 4,19 (m), 4,55 (nm), 4,57-4,65 (m) 4,69 (m), 4,85^4,95 (m), 5,04 (m), 5,10 (s), 5,10-5,22 (m), 6,46 (d), 6,03 (s), 6,50 (d), 6,58 (d), 6,75 (d), 6,95-7,05 (m), 7,22 (m), 7,30 (m), 7,71 (d), 7,75-7,83 (m).
2100b
Sloučenina (2l00i). K roztoku sloučeniny 2100b (1,5 g, 2,7 mmol) v acetonitrilu (10 ml) se při teplotě místnosti přidá 1N kyselina chlorovodíková. Po 6 hodinách se přidá pevný hydrogenuhličitan sodný a produkt se extrahuje ethylacetátem, suší nad síranem hořečnatým a zahustí ve vakuu. Po chromatografii (silikagel, 30 až 100 % dichlormethan v ethylacetátu) se získá 123 mg sloučeniny 21 OOi, 'HNMR (deuterochloroform) δ 1,25 (t, 3H), 1,6-1,8 (m, IH), 1,9-2,2 (m, 5H), 2,4-2,5 (m, IH),
2,75-2,9 (m, 2H), 3,0-3,1 (m, 2H), 3,2-3,25 (m, IH), 4,05-4,2 (m, IH), 4,5^,7 (m, IH),
5,1-5,25 (m, IH), 7,0-7,2 (m, 2H), 7,4-7,45 (m, 2H), 7,5 (t, IH), 7,8 (t, 2H), 9,5 (s, IH).
-210CZ 298171 B6
OOi
Sloučenina (210J) se připraví ze sloučeniny 2100Í pomocí způsobu použitého pro přípravu sloučeniny 21 OOh ze sloučeniny 214e za získání 347 mg sloučeniny 21 OOj, 'HNMR (deuterochloroform) δ 1,3 (t, 3H), 1,6-1,8 (m, 2H), 1,9-2,25 (m, 4H), 2,25 (s, 3H),
2,3-2,45 (m, IH), 2,8-3,0 (m, IH), 3,0-3,25 (m, 2H), 3,4-3,45 (m, 2H), 4,1-4,2 (m, 2H),
4,55-4,7 (m, IH), 5,1-5,25 (m, IH), 6,8 (s, IH), 7,0-7,1 (m, 2H), 7,5 (t, IH), 7,8 (t, 2H), 9,5 (s, IH).
Sloučenina 500 a 501 jsou popsány v tabulce 23. Tyto sloučeniny se připraví pomocí podobných způsobů jako byly použity pro přípravu sloučenin 404-449 (viz příklad 11).
-211CZ 298171 B6
Ika 23
- 212 CZ 298171 B6
Sloučeniny popsané níže (213mm, 213n, 213o, 213p, 213q, 213r, 213s, 213t. 213u, 213v, 213w,
213x, a214w), se připraví pomocí podobných způsobů jako sloučeniny 213b-f.
Sloučeniny 419,415,450,456,475,404,486,48,417,408 a 418 se mohou také připravit tak, jak 5 je popsáno níže.
213mm-x
214w, 404,408,415,
417,418,419,450,
456, 475,486, 487
Sloučenina
213mm,· 419 'MeČG (O)-
213n, 415 0
:213o, 450 o
HN Π 0
213p, 456 X O \==o 1
213q, 475 o
-213CZ 298171 B6
213 r, 4 04
213sř 486 ,H
213t, 487 ó •H
: 213u, 417 0 MeO^A CLIe
213v, 408
' 213w, 214w 0 Zle
213x, 4.18 Ó O .A-W H
-214CZ 298171 Β6
Sloučenina (213n) se připraví jako směs diastereoizomerů (poměr izomeru syn:anti 6:4) (1,43 q, 82 %) jako bílá pevná látka: teplota tání: 206 až 210 °C;
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3288, 1787, 1680, 1657, 1651, 1619, 1548, 1440, 1256, 1135;
'HNMR (perdeuterodimethylsulfoxid) δ 8,75 (0.4H, d), 8,55 (0,6H, d), 8,45 a 8,43 (1H, 2 x d), 7,50 (1H, d), 7,42 (1H, s), 7,40-7,27 (5H, m), 7,01 (1H, d), 6,11 (2H, s), 5,67 (0, 6H, d), 5,43 (0,4H, s), 5,10-5,00 (1H, m), 4,90-4,59 (3,5H, m), 4,45-4,25 (1,5H, m), 3,47-3,20 (1H, m),
3,20-2,70 (2H, m), 2,65-2,35 (1H, m), 2,35-2,00 (3H, m), 2,00-1,75 (2H, m), 1,65-1,40 (2H, m).
Analýza pro C29H30N4O9:
vypočteno: C, 60,20; H, 5,23; N, 9,68; nalezeno: C, 60,08; H, 5,32; N, 9,50.
Hmotová spektroskopie (ES+) 580 (NT + 2, 35%), 579 (M+ + 1, 100), 404 (5), 367 (5) 236 (7), 107(5).
Sloučenina (213o), antiizomer jako bílá pěnovitá pevná látka (0,73 g, 69 %): teplota tání: 135 až 140 °C;
[a]D 21 - 37,3° (c 0,1, dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3452,3310, 1790, 1664, 1659, 1650, 1549, 1425, 1258, 1121;
'HNMR (perdeuterodimethylsulfoxid) δ 10,11 (1H, s), 8,77 (1H, d), 8,57 (1H, d), 8,01 (1H, s),
7,76 (1H, d), 7,55 (lh, d), 7,45-7,25 (6H, m), 5,43 (1H, s), 5,08-5,00 (lHm, m), 4,95-4,73 (1H, m), 4,76 a 4,68 (2H, dd), 3,40-3,20 (1H, m), 3,09 (1H, dd), 3,02-2,75 (1H, m), 2,45-2,06 (4H, m), 2,06 (3H, s), 2,00-1,75 (2H, m), 1,70-1,40 (2H, m).
Analýza pro C30H33NsO8, 0,75 H2O:
vypočteno: C, 59,54; H, 5,75; N, 11,57, nalezeno: C, 59,40; H, 5,62; N, 1,50.
Hmotová spektroskopie (ES+) 593 (M+ + 2, 33%), 592 (M+ + 100), 574 (7), 487 (7), 475 (6), 385 (9), 373 (26), 318 (14), 296 (11), 266 (10), 221 (22).
Sloučenina (213p) se izoluje jako pěna (1,2 g, 77 %):
[cc]D 20 —115° (c 0,20, dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3368, 2946, 1794, 1654, 1609, 1540, 1505, 1421, 1277, 1175, 1119,980;
lHNMR (perdeuterodimethylsulfoxid) δ 10,1 (1H, s), 8,80 (0,5H, d, J = 6,6), 8,60 (0,5H, d, J = 7,2), 8,40-8,36 (1H, d), 7,82 (2h, d, J = 8,0), 7,41 (5H, široký s), 6,86 (2H, d, J = 8,6), 5,72 (0,5H, d, J=5,0), 5,49 (0,5H, široký s), 5,13-5,07 (1H, m), 4,95-4,65 (2,5H, m), 4,49-4,38 (2,5H, m), 3,49-3,30 (2H, m), 3,21,2,79 (2H, m), 2,40-1,41 (7H, m),
Hmotová spektroskopie (ES+) 551.
Sloučenina (213q) se izoluje jako bílá sklovitá pevná látka (80 %): teplota tání 145 až 149 ;C;
[a]D 23 - 56,0° (c, 0,05, dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3399-3319, 1791, 1657, 1543,1420, 1253, 1119;
‘HNMR (deuterochloroform) δ 9,54 (IH, s), 7,65 (IH, d, J = 7,9), 7,51 (IH, d, J = 6,9), 7,44-7,25 (7H, m), 7,18-7,06 (3H, m), 5,30-5,20 (IH, m), 5,27 (IH, s), 4,84 (IH, m), 4,79 (IH, d, J ~ 11,4), 4,56 (IH, d, J = 11,3), 4,47 (2H, m), 3,28 (IH, m), 3,10-2,97 (2H, m), 2,71 (IH, m),
2,47-2,37 (IH, m), 2,26 (IH, d, J = 17,9), 2,09 (IH, m), 1,83, 1,70, 1,15 (4H, 3m).
Sloučenina (213r) se izoluje jako směs diastereomerů (poměr izomeru syn:anti 55:45) jako bílá pěnovitá pevná látka (1,46 g, 89 %): teplota tání 106 až 110 °C;
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3306, 2947, 1791, 1659, 1650,1535, 1421, 1256, 1122;
lHNMR (perdeuterodimethylsulfoxid) δ 8,76 (0,45H, d), 8,56 (0,55H, d), 8,49 a 8,47 (IH, 2 x d), 7,41-7,19 (9H, m), 5,67 (0,55H, d), 5,43 (0,45H, s), 5,11-5,02 (IH, m), 4,86-4,55 (3,5H, m), 4,45-4,25 (1,5H, m), 3,40-3,20 (IH, m), 3,20-2,70 (2H, m), 2,65-2,40 (IH, m), 2,34 (3H, s), 2,30-1,70 (5H, m), 1,65-1,40 (2H, m).
Analýza pro C29H32N4O7:
vypočteno: C 62,66; H, 5,95; N, 10,08, nalezeno: C, 62,91; H, 6,00; N, 9,70.
Hmotová spektroskopie (ES+) 550 (M+ + 2, 43%), 549 (M+ + 1, 100), 374 (3), 280 (4), 279 (20), 118(5).
Sloučenina (213 s) se izoluje jako anti-izomer jako bílá pěnovitá látka (0,64 g, 77 %): teplota tání 137 až 141 °C;
[a]D 21 - 48,2° (c 0,05, methanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3477, 3314, 1791, 1659, 1599, 1529, 1499, 1406, 1256, 1122;
‘HNMR (perdeuterodimethylsulfoxid) δ 10,45 (IH, s), 8,76 (IH, d), 8,50 (IH, d), 7,86 (2H, d),
7,69 (2H, d), 7,41-7,20 (10H, m), 5,43 (IH, s), 5,08-4,98 (IH, m), 4,90-4,73 (IH, m), 4,76 a 4,68 (2H, dd), 3,67 (2H, s), 3,40-3,20 (IH, m), 3,09 (IH, dd), 3,02-2,75 (IH? m), 2,39 (IH, dd), 2,30-2,20 (3H, m), 2,00-1,75 (2H, m), 1,70-1,40 (2H, m).
Analýza pro C^H^NsOg, 0,5 H2O:
vypočteno: C, 63,90; H, 5,66; N, 10,35, nalezeno: C, 63,68; H, 5,67; N, 10,24.
Hmotová spektroskopie (ES+) 669 (M+ + 2, 40%) 668 (M+ + 1, 100), 640 (12), 435 (18), 425 (23), 403 (33), 328 (17), 302, (32), 274 (22), 197 (16), 138 (17).
Sloučenina (213t) se izoluje jako bílá pěnovitá látka (0,63 g, 80 %): teplota tání 159 až 164 °C;
[a]D 21 - 37,0° (c 0,05, methanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3463, 3321, 1790, 1680,1658, 1650, 1644, 1595, 1525, 1501, 1408, 1251, 1113,933;
'H NMR (perdeuterodimethylsulfoxid) δ 10,13 (IH, s), 8,76 (IH, d), 8,48 (IH, d), 7,85 (2H, d), 7,68 (2H, d), 7,40-7,25 (5H, m), 5,43 (IH, s), 5,08^,95 (IH, m), 4,92^,73 (IH, m), 4,76 a 4,68 (2H, dd), 3,40-3,20 (IH, m.), 3,09 (IH, dd), 3,02-2,75 (IH, m), 2,39 (IH, dd), 2,35-2,00 (6H, m), 2,00-1,75 (2H, m), 1,70-1,40 (2H, m), 0,93 (6H, d).
Analýza pro C33H39N5O8,0,5 H2O:
vypočteno: C, 61,67; H, 6,27; N, 10,90 nalezeno: C, 61,49; H, 6,24; N, 10,86.
Hmotová spektroskopie (ES+) 635 (M+ + 2, 39%), 634 (M+ + 1, 100), 484 (10), 427 (9), 274 (18), 268 (37), 204(19), 117(13).
Sloučenina (213u) se izoluje jako bílá pevná látka (81 %): teplota tání 120 až 132 °C;
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3361-3334, 1792, 1659, 1585, 1536, 1499, 1457, 1416, 1340,1340,1236,1126, 989;
’H NMR (deuterochloroform) δ 7,39-7,29 (6H, m), 7,12 (IH, s), 7,03 (IH, s), 6,92, 6,83, 6,48 (asi 3H, 3d, J = 8,1, 7,5, 8,1), 5,57 (d, J = 5,3), 5,27 (IH, s), 5,23-5,06 (4,91-4,71, 4,64-4,43 (6H, 3m), 3,92, 3,91, 3,89, 3,88 (9H, 4s), 3,32-2,70, 2,52-2,0, 1,91, 1,63 (IH, 4m).
Sloučenina (213 v) se izoluje jako bílá pevná látka (78 %): teplota tání 121 až 127 °C;
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3534-3331, 1791, 1659, 1528, 1420, 1256, 1122;
‘HNMR (deuterochloroform) δ 8,34-8,29 (IH, m), 7,98-7,87 (2H, m), 7,68-7,45 (4H, m), 7,34-
7,24 (5H, m), 7,04 (d, J=6,8), 6,78 (d, J = 7,8), 6,6 (d, J - 7,7), 6,48 (2H, d, J = 7,5), 5,56 (d, J = 5,4), 5,15 (1.H, s), 5,30-5,14, 5,0, 4,89 (d, J= 11,2), 4,71-4,41 (6H), 3,18-2,80, 2,50-2,27,2,08-
1,60 (1 IH, 3m),
Sloučenina (213w) se izoluje jako směs diastereoizomerů (65/35) jako bílá pevná látka (0,9 g, 65 %): teplota tání 110 až 115 °C (za rozkladu);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3409, 2945, 1792, 1658, 1606, 1534, 1486, 1420, 1330, 1276, 1209, 1122, 980,960;
'HNMR (deuterochloroform) 8 7,66 (O,35H, d, J = 6,9), 7,46-7,20 (7H, m), 6,93 (0,35H, d, J = 7,7), 6,85 (0,65H, d, J = 7,6), 6,73 (0,65H, d, J - 7,6), 5,96 (0,35H, široký s), 5,85 (0,65H, široký s), 5,56 (0.65H, d, J = 5,2), 5,28 (0,35H, široký s), 5,20—4,98 (2h, m), 4,96-4,40 (4H, m),
3,28-2,55 (3H, m), 2,53-2,32 (IH, m), 2,23 (6H, s), 2,03-1,40 (7Hm, m).
Hmotová spektroskopie (ES“) 577, (ES+) 579.
Sloučenina (213x) se izoluje jako bezbarvý prášek (691 mg, 86 %): teplota tání 150 až 170 °C;
[ot]D 21 - 10,1° (c 0,10, aceton);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3313, 1791, 1679, 1654, 1597, 1528, 1501, 1457, 1407, 1371,1315,1255, 1184,1122,933;
‘H NMR (perdeuterodimethylsulfoxid) δ 8,75 (IH, d), 8,47 (IH, d), 7,84 (2H, d), 7,66 (2H, d),
7,35 (5H, m), 5,43 (1H, s), 5,06-5,00 (IH, m), 4,90-4,64 (3H, m), 4,6-4,26 (2H, m), 3,16-2,86 (2H, m), 2,45-2,05 (5H, m), 2,07 (3H, s), 2,00-1,84 (2H, m), 1,68-1,56 (2H, m);
-217CZ 298171 B6
Analýza pro C30H33N5O8. H2O:
vypočteno: C, 59,11; H, 5,79; N, 11,49, nalezeno: C, 59,38; H, 5,66; N, 11,31;
Hmotová spektroskopie (ES+) 614 (100%), 592 (NT+1,66).
Sloučenina (415) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 214e za získání bílé pevné látky (297 mg, 84 %): teplota tání 158 až 162 °C;
[ct]D 24- 109,5° (c 0,1, methanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný 3700-2500 (br), 1783, 1659, 1650, 1538, 1486, 1439, 1257, 1037;
'HNMR (perdeuteromethanol) δ 7,48 (IH, dd), 7,35 (IH, d), 6,88 (IH, d), 6,03 (2H, s),
5,25-5,15 (IH, m), 5,02-4,90 (IH, m), 4,63-4,45 (2H, m), 4,30-4,20 (IH, m), 3,57-3,30 (IH, m), 3,20-3,05 (IH, m), 2,75-2,10 (5H, m), 2,10-1,60 (4H, m).
Hmotová spektroskopie (ES4) 488 (M+, 25%), 487 (Μ* - 1, 100), 443 (8), 387 (3), 315 (5), 150 (6),127(5),113(8).
Přesná hmotnost vypočtena pro C22H25N4O5 (MET): 489,1621, nalezeno 489,1648.
Sloučenina (450) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 214e za získání bílé pěnovité pevné látky (378 mg, 94%); teplota tání 175 až 179 °C;
[a]D 22 -91,7° (c 0,1, methanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3700-2500 (široký), 3319, 1659, 1590, 1553, 1427, 1260;
‘H NMR (perdeuteromethanol) δ 8,01 (IH, d), 7,74 (IH, dd), 7,58 (IH, d), 7,45-7,35 (IH, m),
5,25-5,15 (IH, m), 5,05^1,90 (IH, m), 4,60-4,45 (2H, m), 4,30-4,20 (IH, m), 3,55-3,30(IH, m), 3,20-3,00 (IH, m), 2,75-2,20 (5H, m), 2,14 (3H, s), 2,20-1,60 (4H).
Analýza pro C23H27N5O8. 1,5 H2O: vypočteno. C, 52,27; H, 5,72; N, 13,25, nalezeno: C 52,31; H, 5,86; N, 12,85.
Hmotová spektroskopie (ES+) 501 (M+, 26%), 500 (M+ -1, 100), 328 (2), 149 (3), 113 (3).
Sloučenina (456) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 214e za získání bílé pevné látky (0,73 g, 72 %): teplota tání > 260 °C;
[aje20 - 66° (c 0,34, methanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3401,2946, 1651, 1609, 1584,1506, 1426,1277, 1257, 1177;
‘HNMR (perdeuterodimethylsulfoxid) δ 10,2 (IH, velmi široký s), 9,17 (IH, široký s), 8,65 (IH, s), 8,37 (IH, d, J = 5,4), 7,81 (2H, d, J = 8,2), 6,87 (2H, d, J = 8,4), 5,24 (IH, m), 4,92-4,86 (IH, m), 4,41-4,32 (2H, m), 3,68-3,21 (3H, m), 3,12-2,79 (1H, m), 2,50-1,42 (7H, m).
Hmotová spektroskopie (ES*) 459.
-218CZ 298171 B6
Sloučenina (475) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 214e za získáni bílé pevné látky (79 %): teplota tání 150 °C (měknutí) 190 až 210 °C;
[a]D 23 - 97,5° (c 0,1, methanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3319, 1658, 1650, 1549, 1421, 1256;
Ή NMR (deuterochloroform) δ 7,61 (IH, d, J = 8,0), 7,43 (IH, d, J = 8,1), 7,21 (2H, m), 7,05 ίο (IH, m), 5,21 (IH, m), 5,07 - 4,77 (IH, m), 4,54 (2H, m), 4,23 (IH, m), 3,46 (IH, m), 3,14 (lHm), 2,66-1,71 (9H, m).
Hmotová spektroskopie (ES+, m/z), 482 (M+ - 1,100%).
Sloučenina (404) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 214e za získání bílé pevné látky (0,79 g, 86 %): teplota tání 156 až 159 °C;
[а] D 25 - 119,7° (c 0,1, methanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3700-2500 (široký), 3387, 3309, 2956, 175, 1659, 1650, 1535,1422, 1278;
‘HNMR (deuteromethanol) δ 7,46-7,15 (4H, m), 5,25-5,15 (IH, m), 5,02-4,90 (IH, m),
4,58-4,45 (2H, m), 4,30-4,20 (IH, m), 3,55-3,30 (IH, m), 3,20-3,05 (IH, m), 2,80-2,20 25 (4H, m), 2,41 (3H, s), 2,20-1,60 (5H, m).
Hmotová spektroskopie (ES+) 458 (M+, 27%), 457 (Nf - 1, 100), 413 (13), 339 (8), 285 (5), 134 (б) , 127(11).
Přesná hmotnost vypočtena pro C22H27N4O7 (MH+); 459,1880, nalezeno 459,1854.
Sloučenina (486) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 214e za získání bílé pevné látky (325 mg, 89 %): teplota tání 165 až 169 °C;
[a]c25 - 69, Γ (c 0,1, methanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3700-2500 (široký), 3318, 1658, 1599, 1530, 1505, 1407, 1258;
’HNMR (perdeuteromethanol) δ 7,85 (2H, d), 7,69 (2H, d), 7,38-7,20 (5H, m), 5,25-5,15 (lH,m), 5,05-4,90 (IH, m), 4,57-4,45 (2H, m), 4,30-4,20 (IH, m), 3,70 (2H, s), 3,55-3,30 (IH, m), 3,20-3,00 (IH, m), 2,75-1,60 (9H, m).
Analýza pro C29H31N5O8. 1,5 H2O:
vypočteno: C, 57,61; H, 5,67; N, 11,58, nalezeno: C, 57,81; H, 5,74; N, 11,47.
Hmotová spektroskopie (ES+) 577 (M+, 33%), 576 (M+ - 1, 100), 502 (2).
Sloučenina (487) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 214e za získání bílé pěnovité pevné látky (335 mg, 93 %): teplota tání 176 až 180 °C;
[a]D 22 - 88,0° (c 0,1, methanol);
- 219 (JZ 273171 BĎ
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3700—2500 (široký), 3321, 2960, 1781, 1660, 1597, 1529, 1407, 1258, 1187;
'HNMR (perdeuteromethanol) δ 7,86 (2H, d), 7,69 (2H, d), 5,25-5,15 (IH, m), 5,05-4,90 (lH,m), 4,60—4,45 (2H, m), 4,30-4,20 (IH, m), 3,57-3,30 (IH, m), 3,20-3,00 (IH, m),
2,75-1,60 (12H, m), 1,00 (6H, d).
Analýza pro C26H33N5O8. H2O:
vypočteno: C, 55,61; H, 6,28; N, 12,45, nalezeno: C 56,00; H, 6,37; N, 12,15.
Hmotová spektroskopie (ES+) 543 (M+, 31%), 542 (M+- 1, 1.00), 498 (2), 468 (3).
Sloučenina (417) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 214e za získání bílé pevné látky (0,63g, 92 %): teplota tání 145 až 155 °C (přibližně, neostře);
[a]D 27 - 114,6° (c 0,11, methanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3327, 1658, 1586, 1548, 1501, 1416, 1341, 1238, 1126;
'HNMR (perdeuteromethanol) δ 7,22 (2H, s), 5,21 (IH, m), 5,00 (IH, m), 4,56, 4,49 (2H, 2m),
4,25 (IH, m), 3,88 (6H, s), 3,80 (3H, s), 3,55-3,43 (IH, m), 3,12 (IH, m), 2,71-1,70 (9H, m).
Analýza pro C24H30N4O10.2 H2O: vypočteno: C, 50,52; H, 6,01; N, 9,82, nalezeno: C, 50,49; H, 6,05; N, 9,68.
Hmotová spektroskopie (ES+, m/z) 533 (M+ - 1, 100%).
Sloučenina (408) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 214e za získání bílé pevné látky (73 %): teplota tání 157 až 165 °C (neostře);
[ct]D 27 - 140,5° (c 0,1, methanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3325, 165, 1531, 1420, 1278, 1257;
'H NMR (perdeuteromethanol) δ 8,33-8,28 (IH, m), 8,01-7,78 (2H, m), 7,71 (IH, d, J = 6,0),
7,59-7,52 (3H, m), 5,27 (IH, m), 5,12-5,03 (IH, m), 4,55 (2H, m), 4,25 (IH, m), 3,64-3,43 (IH, m), 3,24-3,12 (IH, m), 2,80-1,67 (9H, m).
Analýza pro C25H26N4O7.2 H2O:
vypočteno: C, 56,60; H, 5,70; N, 10,56, nalezeno: C, 56,70; H, 5,80; N, 10,33.
Hmotová spektroskopie (ES+, m/z), 493 (M+- 1, 100%).
Sloučenina (214w) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 214e za získání 210 mg (62 %) bílé pevné látky: teplota tání > 260 °C;
[a]D 20 - 93° (c 0,20, methanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3401, 2948, 1651, 1604, 1559, 1486, 1421, 1325, 1276, 1210;
-220CZ 298171 B6 ’HNMR (perdeuterodimethylsulfoxid) δ 9,39 (IH, široký s), 8,29 (IH, d, J - 5,9), 7,55 (2H, s), 6,64 (IH, d, J = 6,1), 5,79 (IH, s), 5,25-5,21 (IH, m), 1,90-1,82 (IH, m), 4,41-3,69 (2H, m),
3,47-3,20 (3H, m), 2,97-2,91 (IH, m), 2,23 (6H, s), 2,25-1,60 (7H, m).
Sloučenina (550q) se připraví pomocí stejného způsobu jako sloučenina 213e za získání sloučeniny 550q.
Sloučenina (213y) se připraví pomocí stejného způsobu jako sloučenina 213e za získání sloučeniny 213y.
Sloučenina (4212a) se připraví pomocí stejného způsobu jako sloučenina 550q za použití sloučeniny 513a-l za získání sloučeniny 412a.
Sloučenina (4212b) se připraví pomocí stejného způsobu jako sloučenina 550q za použití sloučeniny 513a-2 za získání sloučeniny 412b.
Sloučenina (4212c) se připraví pomocí stejného způsobu jako sloučenina 550q za použití sloučeniny 513b-1 za získání sloučeniny 412c.
Sloučenina (4212d) se připraví pomocí stejného způsobu jako sloučenina 550q za použití sloučeniny 513b-1 za získání sloučeniny 412d:
‘HNMR (deuterochioroform) δ 9,5 (IH, d), 8,9 (IH, d), 8,5 (IH, d), 7,9-7,8 (2H, m), 7,8-7,65 (2H, m), 6,55 (IH, d), 5,55 (IH, d), 5,25-5,1 (2H, m), 4,75—1,65 (IH, m), 4,65-4,6 (IH, m),
-221 CZ 298171 B6
4,4-4,3 (IH, m), 3,25-3,15 (IH, m), 3,15-3,05 (IH, m), 2,95-2,8 (2H, m), 2,55-2,4 (2H, m),
2,15-1,5 (14H, m).
Sloučenina (4212e) se připraví pomocí stejného způsobu jako sloučenina 550q za použití sloučeniny 513f-l za získání sloučeniny 412e.
Sloučenina (4212f) se připraví pomocí stejného způsobu jako sloučenina 550q za použití sloučeniny 513f-2 za získání sloučeniny 412f.
Sloučeniny 410 a 412 se připraví pomocí stejného způsobu jako sloučenina 605 ze sloučeniny 604.
O
410/. 412
5O2.y, 502z
Sloučenina R1
O
502y, 410
502z, 412
Sloučenina (410) se čisti pomocí velmi rychlé chromatografie (5 až 25% methanol v dichlormethanu) za získání 296 mg (94 %) bezbarvé pevné látky: teplota tání 90 až 200 °C;
Infračervené spektrum (brom draselný) 3338, 3096, 2950, 1787, 1726, 1657, 1546, 1420, 1279, 1257,1125,1092, 984, 933;
‘H NMR (perdeuteromethanol) δ 8,41 (IH, d), 8,13 (IH, d), 7,54-7,41 (3H, m), 7,20 (1H, d),
5,19-5,11 (IH, m), 4,54-4,30 (IH, m), 3,27 (IH, m), 3,18-3,03 (IH m,), 2,81-2,64 (2H, m),
2,56-1,59 (7H, m).
Analýza pro C19H22N4O7S. 2,5H2O:
vypočteno: C, 46,05; H, 5,49; N, 11,31, nalezeno: C, 46,36; H, 5,25; N, 11,10.
Hmotová spektroskopie (ES+) 449 (M-l, 80%), 113 (100). Přesná hmotnost vypočtená pro
C19H23N4O7S (MtT): 451,1287, nalezeno: 451,1295.
-222CZ 298171 B6
Sloučenina (412) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 605 bílé sklovité pevné látky (69%); teplota tání 138 až 141 °C;
[a]D 23 - 105,5° (c 0,5, dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3375, 1787, 1659, 1515, 1421, 1278, 1256;
]H NMR (deuterochloroform) δ 9,32 (IH, m), 8,79 (IH, m), 8,47 (IH, m), 7,86-7,64 (4H, m), 5,31, 5,18, 4,59, 4,37 (4 nebo 5H, m), 3,55-2,76, 2,49-2,39, 2,05, 1,65 (1 IH, 4m).
Analýza pro C24H25N5O7 1,5 H2O:
vypočteno: C, 55,17; H, 5,40; N, 13,40;
nalezeno: C, 54,87; H, 5,22; N, 13,15.
Hmotová spektroskopie (ES+, m/z) 494 (Μ4 - 1,100%).
Sloučenina (502y) se připraví stejným způsobem jako sloučenina 604 ze sloučeniny 603 za získání světle krémového prášku: teplota tání 120 až 180 °C;
[cc]d23 - 109° (c 0,18, dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3478,3327,1670, 1582, 1543, 1421, 1279, 1257, 1155;
*H NMR (deuterochloroform, perdeuteromethano!) δ 8,04 (IH, m), 7,49 (IH, m), 7,38 (lH,.m), 7,17 (1H, m), 5,17-5,01 (2H, m), 4,86 (IH, m), 4,61-4,50 (IH, m), 3,45-3,29 (2H, m), 3,21-3,03 (IH, m), 2,79-2,54 (3H, m), 2,43-2,33 (IH, m), 2,11-1,66 (5H, m), 1,44 (9H, s)
Analýza pro C24H33N7O7S. H2O:
vypočteno: C, 49,56; H, 6,07; N, 16,86; S, 5,51, nalezeno: C, 49,51; H, 5,93; N, 16,31; S, 5,17.
Hmotová spektroskopie (ES+) 586 (100%), 564 (M+ + 1,1,59).
Přesná hmotnost vypočtena pro C24H34N7O7S (MH4): 564,2240, nalezeno: 564,2267.
Sloučenina (502z) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 604 za získání světle žluté pevné látky (90 %): teplota tání 142 až 145 °C;
136,5° (c 0,06, dichlormethan);
lH NMR (deuterochloroform) δ 9,51-9,46 (IH, m), 9,11 (IH, s), 8,83 (IH, d), J = 7,8), 8,53 (IH, d, J = 5,5), 7,89-7,83 (2H, m), 7,77-7,65 (2H, m), 7,55 (IH, d, J = 7,2), 7,18 (IH, d, J = 2,7), 5,26-5,12 (2H, m), 4,87 (IH, m), 4,59 (IH, m), 3,25-3,12 (2H, m), 2,95-2,76 (2H, m),
2,59-2,38,2,18-1,94, l,70(5H,3m), 1,44 (9H,s).
-223 CZ 298171 B6
Sloučenina R4 R1
415a ^0
415b
415c '’Ό
214w-l 0 HOV CHa
214w-2 CHj
214w-3 Ó C^s^jjA ηο'τ O4j
214w’4 0 CH3<sqA CH3
214w-5 0 CHjyTxX HPT
214W-.6 0 CHsyyK HCTT CHj
214w-7 0
412g '°O
-224CZ 298171 B6
Sloučenina R4 R1
412h ^0
Sloučeniny (415a), (415b), (415c), (214w-l), (214w-2), (214w-3), (214w^l), (214w-5), (214w-6), (214w-7), 412 g) a (412h) se připraví stejným způsobem jako sloučenina 550q.
415
214W
Sloučenina 415 se připraví způsobem použitým pro přípravu sloučeniny 2002 ze sloučeniny 2001 za získání sloučeniny 415.
Sloučenina 214w se připraví způsobem použitým pro přípravu sloučeniny 2002 ze sloučeniny 2001 za získání sloučeniny 214w.
Sloučenina R
2100k
21001 °O
2100m
2100n 'no
2100o
-225CZ 298171 B6
Sloučenina (21 OOk) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 213e za získání směsi diastereomerů (75/25) jako bílé pevné látky (258 mg, 83 %): teplota tání 101 °C;
[a]D 23 _ 96° (c 0,2, dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3328, 2935, 2978, 1732, 1669, 1603, 1483, 1450, 1414, 1237,1155,1082, 989, 755;
'HNMR (deuterochloroform) δ 7,84-7,80 (2H, m), 7,54-7,17 (8H, m), 7,06-6,99 (IH, m), 6,25 (IH, d, J = 7,9H), 5,41 (0,75H, d, J = 5,4H); 5,31 (0,25H, široký s), 5,23-5,09 (IH, m), 4,93^1,87 (IH, m), 4,68—4,51 (2H, m), 4,40-4,33 (0,25H, m), 4,24-4,14 (0,75H, m), 3,95-3,70 (IH, m),
3,30-3,13 (IH, m), 3,14-2,78 (5H, m), 2,47-2,21 (2H, m), 2,05-1,50 (5H, m).
Analýza pro C29H32N4O7. 0,5 H2O:
vypočteno: C 62,47; H, 5,97; N, 10,05, nalezeno: C 62,17; H, 5,83; N, 9,97.
Hmotová spektroskopie (ES+) 549.
Sloučenina (21001) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 213e, (74 %) jako bezbarvá pevná látka: teplota tání 172 až 180 °C;
[a]D 23 - 91,5° (c 0,1, dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3290, 1792, 1677, 1657, 1642, 1544, 1425, 1280, 1258, 1124, 977;
*H NMR (deuterochloroform) δ 7,80 (2H, m) 7,46 (3,5H, m), 7,00 (IH, d, J = 6,7), 6,48 (0,5H, d, J = 7,9), 5,55 (0,5H, d, J = 5,3), 5,19 (2H, s + m), 4,93 (0,5H, m), 4,62 (l,5H, m), 4,34 (1H, m),
4,18 (0,5h, m), 3,28-2,70 (4H, m), 2,49-2,29 (2H, m), 2,05-1,48 (15H, m).
Sloučenina (2100m) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 213e, (76%) jako bezbarvá pevná látka: teplota tání 140 °C, převedeno 187 až 189 °C;
[a]o23 - 96,9° (c 0,11, dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3507, 3308, 3251, 1772, 1600, 1641, 1566, 1545, 1457, 1424, 1346,1326,1302,1275,1258,1136, 1085,1018, 981;
'H NMR (deuterochloroform) δ 7,78 (2H, m), 7,53 (3H, m), 7,19 (4H, m), 6,91 (IH, d, J = 7,4),
6,27 (IH, d, J = 7,6), 5,66 (IH, d, J = 5,3), 5,10 (IH, m), 4,96 (IH, m), 4,75 (2H, m), 4,52 (IH, m), 3,08 (3H, m), 3,03-2,71 (5H, m), 2,48-2,31 (,2H, m), 1,90-1,40 (4H, m), 1,22 (IH, m).
Sloučenina (2100n) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 213e za získání bílé sklovitě pevné látky (76 %): teplota tání 112 až 115 °C;
[a]r>23 - 62,0° (c 0,1, dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3305, 1789, 1677, 1665, 1535, 1422, 127, 1256, 1119, 942, 700;
lH NMR (deuterochloroform) δ 7,84 (2H, m), 7,58-7,27 (9H, m), 6,99 (IH, d, J = 7,8), 5,23 (IH, s), 5,23-5,11 (1H, m), 4,89 (IH, m), 4,76 (IH, d, J = 11,3), 4,55 (IH, d, J = 11,4), 4,58-4,43 (2H, m), 3,3202,96,2,81-2,69, 2,46-2,37, 2,16-1,66 (1 OH, 4m), 2,27 (IH, d, J = 17,8).
-226CZ 298171 B6
Analýza pro C28H30N4O7. 0,5 H2O:
vypočteno: C 61,87; H, 5,75; N, 10,32, nalezeno: C 61,88; H, 5,70; N, 10,33.
Hmotová spektroskopie (ES+, m/z) 535 (M1 + 1, 100%).
Sloučenina (2100o), (obsahující asi 7 % (2S))> se připraví podobným způsobem jako sloučenina 213e za získání bílé sklovité pevné látky (81 %): teplota tání 115 až 117°C;
[a]D 23 - 121,8° (c 0,11, dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný), 3326, 1792, 1659, 1535, 1421, 1278, 1257, 1124, 978;
'HNMR (deuterochloroform) δ 7,82 (2H, m), 7,58-7,24 (8H, m), 6,90 (IH, d, J = 7,3), 6,49 (IH, d, J = 7,7), 5,57 (IH, d, J = 5,5), 5,11 (2H, m), 4,91 (IH, d, J = 11,4), 4,57 (IH, d, J = 11,1), 4,81-4,68 (IH, m), 4,65-4,54 (IH, m), 3,18-2,71 (2,52-2,30, 2,05-1,62 (1 IH, 3m).
Analýza pro C28H30N4O7. 0,5H2O:
vypočteno: C, 61,87; H, 5,75; N, 10,32, nalezeno: C, 61,70; H, 5,71; N, 10,15.
Hmotová spektroskopie (ES+, m/z) 535 (M+ + 1, 94,3%), 557
550n
Sloučenina (550n) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 213e za získání směsi diastereoizomerů (65/35) jako hnědého prášku (390 mg, 28 %): teplota tání 139 až 145 °C;
[a]D 23 - 104° (c 0,02, methanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3318, 2405, 2369, 1792, 1660, 1591, 1549, 1484, 1422, 1257, 1117;
'HNMR (perdeuterodimethylsulfoxid) δ 10,1 (IH, s), 8,80 (0,65H, d, J = 6,6), 8,58 (0,35H, d, J= 6,6), 8,59 (IH, d, J = 7,0), 8,06 (IH, široký s), 7,83-7,79 (IH, m), 7,61-7,57 (IH, m),
7.47-7,39 (IH, m), 5,61 (0,35H, d, J = 5,0), 5,37 (0,65H, široký s), 5,17-5,14 (0,35H, m), 5,08-5,06 (0,65H, m), 4,92—4,86 (IH, m), 4,67—4,61 (0,35H, m), 4,47—4,41 (0,65H, m),
4,28-4,11 (IH, 2m), 3,80-3,59 (2H, m), 3,23-2,75 (3H, m), 2,61-1,48 (7H, m), 2,10 (3H, s), 1,25a 1,17 (3H, 2t, J-5,8).
Hmotová spektroskopie (ES+) 528.
-227CZ Z98171 B6
Sloučenina (550o) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 213a za získání bezbarvé pevné látky (1,071 g, 80 %): teplota tání 155 až 170 °C;
[a]D 22 - 75,8° (c 0,26, dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3314, 2941, 1791, 1658, 1545, 1420, 1341, 1312, 1252, 1181, 1118,939,749;
'HNMR (deuterochloroform) δ 9,45 (0,5H, s), 9,34 (0,5H, s), 7,68-7,62 (IH, m), 7,49-7,39 (2H, m), 7,33-7,26 (IH, m), 7,18-7,03 (3H, m), 5,49 (0,5H, d), 5,30 (0,5 H, s), 5,26-5,13 (IH, m), 4,90-4,83 (0,5H, m), 4,76-4,49 (IH, m), 4,42-4,35 (0,5H, m), 3,97-3,74 (IH, m), 3,72-3,53 (IH, m), 3,35-2,64 (4H, m), 2,50-2,37 (IH, m), 2,20-1,82 (5H, m), 1,69-1,50 (2H, m),
1,30-1,19 (3H, m).
O
5 Op
Sloučenina (550p) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 213e za získání směsi diastereoizomerů jako bílé pěny (820 mg, 47 %.
[a]D 24 - 75° (c 0,16, dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3401, 2937, 1791, 1657, 1609, 1539, 1505, 1423, 1277, 1177, 1118;
'H NMR (deuterochloroform) δ 8,07-8,05 (IH, m), 7,67 (2H, d, J = 7,9), 7,38-7,29 (2H, m), 6,80 (2H, d, J = 8,5), 5,49 (0,5H, d, J = 4,6), 5,23 (0,5H, široký s), 5,24-5,20 (IH, m), 5,12-5,08 (lH,m), 4,68-4,29 (2H, m), 3,92-3,45 (3H, m), 3,32-2,30 (2H, m), 2,80-1,56 (11H, m), 1,21 (3H, t, J = 7,OH).
-228CZ 298171 B6
503a-e
MéSCV
v
Sloúčertirta Ř
503a 5.04 a .286
503b 504b 505b Me
5Ó3c •504 c 5.05c
503d 504d 505d
-229CZ 298171 B6
Sloučenina (503a) se připraví ze sloučeniny 212a a (3S,4R) t-butyl-(N-allyloxykarbonyl)-3amino-4-hydroxy-5-(l-naftoyloxy)pentanoátu pomocí postupu popsaného pro sloučeninu (213e) za získání 533 mg (81 %) bílé pěny:
[a]D 22 -81.4° (c 0,5, dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3342, 2976,1719,1664, 1328, 1278,1246, 1153, 1137.
‘HNMR (deuterochloroform) δ 8,86 (IH, d, J = 8,4), 8,21 (IH, dd, J = 1,3, 7,3), 8,03 (IH, d, J = 8,1), 7,88 (1H, d, J = 8,6), 7,66-7,45 (3H, m), 7,23 (IH, d, J = 8,6), 5,96 (IH, d, J = 9,2), 5,30 (IH, m), 4,59—4,33 (5H, m), 4,24 (IH, m), 3,96 (IH, široký d), 3,29 (IH, m), 2,95 (IH, m), 2,93 (3H, s), 2,69-2,50 (3H, m), 2,36 (IH, m), 1,96 (4H, m), 1,62 (IH, m), 1,41 (9H, s).
Analýza pro C3iH4oN40]oS. 0,25 H2O:
vypočteno: C, 55,97; H, 6,14; N, 8,42, nalezeno: C, 55,90; H, 6,11; N, 8,23.
Hmotová spektroskopie (ES+) 683 (M+Na, 100%), 661 (M+1,39), 605 (78).
Sloučenina (504a) se připraví ze sloučeniny 503a pomocí postupu pro přípravu sloučeniny 216e ze sloučeniny 215e za získání 446 mg (91 %) bezbarvé pěny:
[a]D 21 - 111,6° (c 0,5, dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3319, 2978, 2936, 1723, 1670, 1413, 1370,1329, 1278, 1246, 1153.
‘HNMR(deuterochloroform) δ 8,87 (IH, d, J = 8,9), 8,29 (1H, d, J = 7,2), 8,06 (IH, d, J = 8,3),
7,90 (IH, d, J = 8,2), 7,66-7,48 (3H, m), 7,37 (1HJ, d, J = 8,1), 5,61 (IH, d, J - 9,0), 5,31 (IH, m), 5,22 IH, m), 5,22 (IH, AB, j = 16,9), 5,09 (IH, AB, J = 16,92), 4,99 (IH, m), 4,65^,43 (2H, m), 3,28 (IH, m), 2,96 (3H, s), 2,86 (2H, m), 2,59 (IH, m), 2,38 (IH, dd, J = 6,8, 12,2),
2,21-1,70 (6H, m), 1,45 (9H, s).
Analýza pro C3iH38N4OioS, 0,25 H2O vypočteno: C, 56,14; H, 5,85; Ν, 8,45, nalezeno: C 56,11; H, 5,83; N, 8,29.
Hmotová spektroskopie (ES+) 657 (M-l, 100%).
Sloučenina (286) se připraví ze sloučeniny 504a podobným způsobem jako sloučenina 217 za získání 356 mg (93 %) bílého prášku: teplota tání 120 až 123 QC;
[a]D 23 - 1210 (c 0,194, dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3314, 2937, 1722, 1663, 1412, 1328, 178, 1245, 1195, 1132.
‘HNMR (perdeuterodimethylsulfoxid) δ 12,63 (IH, široký s), 8,94 (IH, d, J = 7,4), 8,78 (IH, d, J = 8,6), 8,26 (2H, m), 8,11 (IH, d, J = 8,0), 7,77-7,62 (4H, m), 5,28 (2H, s), 5,21 (1H, m), 4,82 (1H, m), 4,44-4,29 (2H, m), 3,31 (IH, m), 2,98 (3H, s), 2,98-2,86 (2H, m), 2,72 (1H, dd, J = 7,3, 16,9), 2,40 (1H, m), 2,24-1,84 (4H, m), 1,60 (2H, m).
Analýza pro C27H3oN4Oi0S.H20:
vypočteno: C 52,25; H, 5,20; N, 9,03, nalezeno: C, 51,11; H, 4,97; N, 8,89.
- 230 LZ. ΖΥβΓ/Ι Bb
Hmotová spektroskopie (ES+) 601 (M-l, 100%).
Sloučenina (503b) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 213e za získání bílého prášku (671 mg, 88 %): teplota tání 90 až 120 °C;
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3345, 2977, 1727, 1664, 1532, 1450, 1423, 1369, 1323, 1310,1276,1257, 1154,1101,990, 766;
]H NMR (deuterochloroform) δ 7,61-7,55 (2H, m), 7,51-7,42 (3H, m), 6,86 (1H, d), 5,69 (1H, d), 5,21 (1H, m), 4,64-4,38 (2H, m), 4,15^1,05 (3H, m), 3,84 (1H, s), 3,31-3,14 (2H, m), 2,97-2,87 (1H, m), 2,94 (3H, 2,76), 3H, s), 2,64-2,48 (3H, m), 2,93-2,29 (1H, m), 2,04-1,61 (5H, m).
Analýza pro C31H41N5OUS.H2O:
vypočteno: C, 2,46; H, 6,11; N, 9,87; S, 4,52, nalezeno: C, 52,34; H, 5,92; N, 9,56; S, 4,44.
Hmotová spektroskopie (ES+) 714 (47%), 692 (M+ + 1, 84), 636 (100).
Sloučenina (504b) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 216b za získání bezbarvého prášku (601 mg, 93 %) teplota tání 75 až 115 °C;
[a]D 23 - 104° (c 0,26, dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný), 3324, 2977, 2935, 1730, 1670, 1525, 1452, 1422, 1369, 1317, 1276, 1256, 1222, 1155, 1107, 990, 766;
'HNMR (deuterochloroform) δ 7,68-7,61 (2H, m),7,47-7,38 (3H, m), 7,32-7,24 (1H, m), 5,56 (1H, d), 5,36-5,24 (1H, m), 5,04 (IH, d), 4,88 (1H, d), 4,86-4,77 (1H, m), 4,64-4,39 (2H, m);
3,32-3,17 (1H, m), 2,97-2,85 (1H, m), 2,93 (3H, s), 2,76 (3H, s), 2,80-2,71 (1H, m), 2,65-2,49 (1H, m), 2,41-2,30 (1H, m), 2,12-1,61 (6H, m), 1,42 (9H, s).
Analýza pro C31H39N5O11S. H2O:
vypočteno C, 52,61; H, 5,84; N, 9,90; S, 4,53, nalezeno: C, 52,94; H, 5,69; N, 9,72; S, 4,51.
Hmotová spektroskopie (ES+) 712 (31%), 707 (100), 690 (M* + 1,41), 634 (55).
Sloučenina (505b) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 217 za získání bezbarvého prášku (499 mg, 96%); teplota tání 95 až 145 °C;
[a]D 22 - 137° (c 0,12, methanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný), 3323, 2936, 1732, 1665, 1529, 1452, 1421, 1312, 1275, 1256, 1221, 1183, 1153, 1135, 1101,990;
*H NMR (perdeuteromethanol) δ 7,67-7,56 (2H, m), 7,49-7,38 (4H, m), 5,23-5,12 (1H, m), 5,02 (1H, d), 4,79-4,73 (1H, m), 4,52—4,34 (3H, m), 3,48-3,25 (2H, m), 3,03-2,85 (2H, m), 2,94 (3H, s), 2,74 (3H, ms), 2,79-2,66 (1H, m), 2,52-2,38 (1H, m), 2,29-2,14 (1H, m), 2,04-1,70 (4H,m).
Analýza pro C27H3iN50i]S. H2O:
vypočteno: C, 49,77; H, 5,18; N, 10,75; S, 4,92, nalezeno: C, 49,83; H, 5,01; N, 10,27; S, 4,84.
-231 LL zvai/l BĎ
Hmotová spektroskopie (ES+) 746 (42%), 632 (Μ - 1, 100), 386 (60). Přesná hmotnost vypočtená pro C2?H32N50nS (MH+): 634, 1819, nalezeno 634, 1807.
Sloučenina (503c) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 213 za získání bezbarvé pevné látky (446 mg, 84 %):
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3345, 2976, 2935, 1727, 1664, 1603, 1535, 1483, 1451, 1416,1395,1369, 1328, 1297, 1277,1237, 1155,1135, 1076, 990, 755;
’H NMR (deuterochloroform) δ 7,98-7,89 (IH, m), 7,55-7,45 (IH, m), 7,39-7,18 (3H, m), 7,14-7,07 (IH, m), 7,00-6,90 (3H, m), 6,75 (IH, d), 5,57-5,50 (IH, m), 5,21-5,09 (IH, m), 4,64—4,42 (2H, m), 4,36-4,12 (3H, m), 3,05-3,87 (IH, m), 3,30-3,18 (IH, m), 3,00-2,82 (IH, m), 2,95 (3H, s), 2,69-2,48 (3H, m), 2,42-2,28 (IH, m), 2,07-1,62 (6H, m), 1,42 (9H, s).
Analýza pro C33H42O] ]S.H2O:
vypočteno: C, 54,99; H, 6,15; N, 7,7; S, 4,45, nalezeno: C 54,95; H, 5,95; N, 7,34; S, 4,20.
Hmotová spektroskopie (ES+) 725 (26%), 720 (47), 703 (M+ + 1, 34), 433 (100), 403 (89).
Sloučenina (504c) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 216e za získání bezbarvého prášku: teplota tání 85 až 100 ;C;
[a]D 22 - 91,3° (c 0,52, dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3328, 2978, 2935, 1732, 1669, 1603, 1524, 1483, 1450, 1396, 1369,1296, 1276,1237, 1155, 1132,1082,989, 755;
'H NMR (deuterochloroform) δ 8,03-7,98 (IH, m), 7,52-7,44 (IH, m), 7,37-7,07 (5H, m), 7,01-6,92 (3H, m), 5,52 (IH, d), 5,28-5,20 (IH, m), 5,06-4,84 (3H, m,), 4,64-4,39 (2H, m),
3,32-3,14 (IH, m), 2,99-2,88 (IH, m), 2,94 (3H, s), 2,65-2,45 (2H, m), 2,39-2,29 (1H„ n), 2,12-1,58 (6H,m), 1,40 (9H, s).
Analýza pro C33H40N4O11S:
vypočteno: C, 56,56; H, 5,75; N, 8,00; S, 4,58, nalezeno: C, 56,37; H, 5,84; N, 7,69; S, 4,37.
Hmotová spektroskopie (ES+) 723 (30%), 718 (100), 701 (M+ + 1, 23), 645 (59).
Sloučenina (505c) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 217 za získání bezbarvé pěny (252 mg, 72 %): teplota tání 90 až 125 °C;
[«]d23 - 113° (c 0,11, methanol); Infračervené spektrum (bromid draselný) 3314, 2938, 1792, 1734, 1663, 1604,1535,1483, 1448,1415, 1250,1132, 756;
'H NMR (perdeuterodimethylsulfoxid) δ 8,81-8,76 (IH, m), 7,92 (IH, d), 7,68-7,54 (2H, m), 7,41-7,25 (3H, m), 7,16-6,91 (4H, m), 5,13-4,98 (2H, m), 4,72-4,63 (IH, m), 4,37-4,21 (2H,m), 2,92 (3H, s), 2,90-2,60 (3H, m), 2,35-2,26 (IH, m), 2,17-2,05 (2H, m), 1,99-1,80 (2H, m), 1,61-1,50 (IH, m).
Analýza pro C29H32N4O11S, 0,5 H2O:
vypočteno: C, 53,29; H, 5,09; H, 8,57; S, 4,90, nalezeno: C, 53,57; H, 5,18; N, 8,32; S, 4,75.
-232cz zvai/i uo
Hmotová spektroskopie (ES+) 643 (Μ - 1,100%).
Sloučenina (503d) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 213e za získání bezbarvé pevné látky (563 mg, 90 %):
Infračervené spektrum (bromid draselný), 3349, 2978, 2935, 1724, 1664, 1583, 1536, 1489, 1443,1370, 1327,1271,1226, 1189, 1155, 1073,990,755;
‘HNMR (deuterochioroform) δ 7,77 (IH, d), 7,67 (IH, m), 7,45-7,10 (6H, m), 7,00 (2H, d), 5,93-5,80 (IH, m), 5,36-5,30 (IH, m), 4,63^,24 (5H, m), 4,15—4,09 (IH, m), 3,37-3,22 (2H, m), 2,98-2,74 (IH, m), 2,94 (3H, s), 2,70-2,47 (3H, m), 2,40-2,30 (IH, m), 2,15-1,60 (5H, m), 1,42 (9H, s).
Analýza pro C33H42N4O11S. H2O:
vypočteno: C, 54,99; H, 6,15; N, 7,77; S, 4,45, nalezeno: C, 54,60; H, 5,88; N, 7,49; S, 4,50.
Hmotová spektroskopie (ES+) 725 (19%), 720 (91), 703 (M+ + 1, 74), 647 (76), 629 (100), 433 (78).
Sloučenina (504d) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 216e ze získání bezbarvého prášku (466 mg, 85 %): teplota tání 75 až 110 °C;
[oc]d22 - 99,3° (c 0,60, dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný), 3335, 2978, 2937, 1728, 1669, 1584, 1525, 1487, 1444,1416,1369,1328, 1272, 1227,1188, 1155, 989, 754;
‘HNMR (deuterochioroform) δ 7,82-7,77 (IH, m), 7,66-7,65 (IH, m), 7,46-7,32 (4H, m),
7,26-7,10 (2H, m), 7,04-6,98 (2H, m), 5,68 (IH, d), 5,37-5,31 (IH, m), 5,11 (IH, d), 5,02^1,88 (2H, m), 4,66-4,42 (2H, m), 3,35-3,17 (IH, m), 2,98-2,89 (IH, m), 2,96 (3H, s), 2,84-2,78 (IH, m), 2,72-2.48 (IH, m), 2,42-2,32 (IH, m), 2,14-1,58 (6H, m), 1,43 (9H, s).
Analýza pro C33H40N4OiiS:
vypočteno: C, 56,56; H, 5,75; N, 8,00, nalezeno: C, 56,36; H, 5,82; N, 7,71.
Hmotová spektroskopie (ES+) 723 (56%), 718 (90), 701 (M+ + l, 36), 645 (100).
Sloučenina (505d) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 217 za získání bezbarvé pěny (353 mg, 73 %): teplota tání 80 až 115 °C;
[a]D 23 - 138 °C (c 0,11 methanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3327, 2937, 1728, 1666, 1584, 1529, 1487, 1443, 1413, 1328, 1273, 1227, 1289, 1155, 1134,989, 754;
lH NMR (perdeuterodimethylsulfoxid) δ 8,82 (1H, d), 7,76-7,72 (IH, m), 7,61-7,53 (2H, m),
7,48-7,32 (4H, m), 7,24-7,17 (IH, m), 7,11-7,06 (2H, m), 5,14-5,06 (3H, m), 4,73-4,64 (lH,m), 4,38-4,24 (2H, m), 2,92 (3H, s), 2,89-2,61 (3H, m), 2,38-2,27 (IH m), 2,19-2,06 (2H, m), 2,02-1,79 (3H, m), 1,63-1,52 (IH, m).
Analýza pro C29H32N40n. 0,5 H2O:
vypočteno: C, 53,29; H, 5,09; N, 8,57; S, 4,90, nalezeno: C, 3,24; H, 5,14; N, 8,34; S, 4,86.
-233 cl zyai/i ts&
Hmotová spektroskopie (ES+) 643 (Μ - 1, 100%), 385 (62).
Sloučenina (503e) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 213e za získání bílé pevné látky (70 %): teplota tání 100 až 103 °C;
[cc]D 25 - 84,0 °C (c, 0,05, dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3459-3359, 1722, 1664, 1514, 1368, 1328, 1278, 1247, 1155;
‘HNMR (deuterochloroform) δ 7,52 (IH, m), 7,06-6,99 (2H, m), 5,69 (IH, d, J = 9,0), 5,23 (IH, m), 4,6M,16 (6H, m), 3,36-3,19 (IH, m), 2,96 (3H, s), 2,67-2,49, 2,42-2,32, 2,06-1,89,
1,69 (10H, 4m), 1,43 (9H, s).
Sloučenina (504e) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 216a za získání bílé pevné látky (98 %): teplota tání 91 až 98 °C;
[a]D 25 - 112,5° (c 0,6, dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3453-3364,1727, 166B, 1513, 1420,136, 1245, 1155;
'H NMR (deuterochloroform) δ 7,54 (IH, d, J = 5,3), 7,18 (IH, d, J = 7,18), 7,05 (IH, d, J -5,4), 5,42 (IH, d, J = 8,9), 5,25 (IH, m), 5,02 (2H, m), 4,96-^4,87 (IH, m), 4,65-4,42 (2H, m),
3,34-3,17 (IH, m), 2,07-2,93 (IH, m), 2,97 (3H, s), 2,87-2,78,2,73-2,50,2,38-2,32,2,13-1,88,
1,69-1,60 (9H, 5m), 1,44 (9H, s).
Sloučenina (505e). Roztok sloučeniny 217 (0,33 g, 0,51 mmol) v suchém dichlorethanu (3 ml) se ochladí (led/voda) bez přístupu vlhkosti. Za míchání se přidá kyselina trifluoroctová (2 ml). Roztok se odstranění chladicí lázně udržuje 2 hodiny při teplotě místnosti, potom se odpaří ve vakuu. Zbytek se třikrát odpaří z dichlormethanu, trituruje diethyletherem a filtruje. Pevná látka se čistí pomocí velmi rychlé chromatografte (silikagel, 0-6 methanol v dichlormethanu) za získání produktu jako bílé sklovité pevné látky (0,296 g, 98 %): teplota tání 110 až 122 °C;
[ct]o22 - 163,5° (c0,l, methanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3514-3337, 1726, 1664, 1513, 1420, 1245, 1152, 1134,990;
'H NMR (perdeuteromethanol) δ 7,79 (lh, d, J = 5,2), 7,12 (IH, d, J = 5,2), 5,20 (IH, m), 5,02-4,72 (2H, m, překryto vodou), 4,59-4,32 (3H, m), 3,48-3,29 (3,08-2,75, 2,50-2,41,
2,31-2,22,2,08-1,89,1,72-1,63 (1 IH, 6m), 2,95 (3H, s).
506a-c,.g
507a-c,g
-234-
Sloučenina R1
506a PhC(O)-
507a
506b MeS(O)2-
507b
506c MeOC(O)-
507c
506g CH3C(O)-
507g
Sloučenina (506a). Roztok sloučeniny 212e (321 mg, 0,929 mmol) a (3S) t-butyl-3-amino-5diazo-4-oxopentanoátu (198 mg, 0,929 mmol) v dichlomethanu (3 ml) se ochladí na 0 °C a přidá se N,N-diizopropylethylamin (0,16 ml, 1,86 mmol) a [2-(lH-benzotriazol-l-yl)-l,l,3,3-tetra5 methyluroniumtetrafluoróborát (328 mg, 1,02 mmol). Roztok se míchá přes noc při teplotě místnosti, zředí se ethylacetátem a promyje IM roztokem hydrogensíranu sodného (dvakrát), vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (dvakrát), vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (dvakrát), solankou, suší se nad síranem horečnatým a odpařil. Po chromatografii na silikagelu za eluce ethylacetátem se získá sloučeniny 506a (425 mg, 85 %) jako bezbarvá pěna.
[a]D 23 - 124,9° (c 0,2, dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3332, 2111, 1728, 1658, 1532, 1421, 1392, 1367, 1279, 1256, 1155;
'HNMR (deuterochloroform) δ 7,82 (2H, m), 7,49 (3H, m), 7,28 (IH, d, J = 9,3), 7,05 (IH, d, J = 7,3), 5,06 (IH, s), 5,18 (2H, m), 4,78(1H, m), 4,62 (IH, m), 3,29 (IH, m), 3,08-2,79(3H, m), 2,58(IH,dd,J = 16,8,5,6),2,20-1,85(4H,m), l,70(lH,m), 1,45 (9H,s).
Hmotová spektroskopie (ES+) 539,58 (Μ - 1,97,9%), 529,59 (100).
Sloučenina (506b) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 506a, 74 % jako oranžová pevná látka: teplota tání 75 °C (za rozkladu);
25 [“Id20 - 92,0° (c 0,036, dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3438, 2904,2113, 1728, 1669, 1523, 1368, 1328, 1155;
‘H NMR (deuterochloroform) δ 7,48 (IH, d, J = 8,1), 5,83-5,68 (IH, m, 5,55-5,50 (IH, m), 30 5,43-5,14 (IH, m), 4,84-4,45 (3H, m), 3,40-3,19 (IH, m), 2,98 (3H, s), 2,92-2,30 (4H, m),
2,24-1,70 (6H, m), 1,43 (9H, s).
Sloučenina (506c) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 506a za získání světle žluté pěny (405 mg, 82 %):
[a]d20 - 144° (c, 0,02, dichlormethan);
infračervené spektrum (bromid draselný), 3339, 2978, 2958, 211.2, 1728, 1674, 1530, 1459, 1415, 1367, 1274, 1252, 1154,1063;
'H NMR (deuterochloroform) δ 7,23 (IH, d, J = 8,2), 5,51-5,31 (2H, m), 5,21-5,16 (IH, m), 4,77-4,55 (3H, m), 3,68 (3H, s), 3,35-3,18 (IH m,), 3,04-2,51 (4H, m), 2,40-2,30 (IH, m), 2,09-1,66 (5H, m), 1,45 (9H, s).
Hmotová spektroskopie (ES+) 493.
-235 VZ. ZVOI/1 tso
Sloučenina (506g) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 506a, 81 %:
[a]o28 - 146,7° (c 0,4, dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3438,2904,2113, 1729, 1669, 1523, 1368, 1328, 1155;
*H NMR (deuterochloroform) δ 7,32 (IH, d), 6,43 (IH, d), 5,50 (IH, s), 5,22 (IH, m), 4,94 (IH, m), 4,77 (IH, m), 4,60 (IH, m), 3,24 (IH, m), 3,03-2,52 (4H, m), 2,36 (IH, m), 2,10-1,64 (5H, m), 2,02 (3H, s), 1,45 (9H, s).
Analýza pro C21H20N6O7:
vypočteno: C, 52,69; H, 6,32; N, 17,05, nalezeno: C, 52,51; H, 6,27; N, 17,36.
Hmotová spektroskopie (ES+) 477 (M+ -1,100%).
Sloučenina (507a). Sloučenina 506a (3,06 g, 5,55 mmol) v suchém dichiormethanu (40 ml) se ochladí na 0 °C a během 4 minut se přikape 30% kyselina bromovodíková v kyselině octové (1,1 ml, 5,55 mmol). Směs se míchá 9 minut při 0 °C a rozloží se vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného. Produkt se extrahuje do ethylacetátu, promyje vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, solankou, suší se nad síranem horečnatým a odpaří za získání 2,97 g (92 %) jako bezbarvé pěny:
[a]D 23 - 82,3° (c 0,23, dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3333, 1726, 1659, 1530, 1458, 1447, 1422, 1395, 1368, 1279,1256,1222, 1155,728;
'H NMR (deuterochloroform) δ 7,81 (2H, m), 7,50 (3H, m), 7,11 (IH, d, J = 8,0), 7,01 (IH, d, J - 7,4), 5,20 (2H, m), 5,00 (IH, m), 4,06 (2H, s), 3,28 (IH, m), 3,20-2,70 (4H, m), 2,42 (IH, m),
2,10-1,85 (4H, m), 1,72(IH, m), 1,44 (9H, s).
Analýza pro C26H33N4O7Br. 0,7 H2O:
vypočteno: C, 51,53; H, 5,72 N, 9,24, nalezeno: C, 51,55; H, 5,52; N, 9,09.
Hmotová spektroskopie (ES+) 595, 593 (M+ + 1).
Sloučenina (507b) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 507a, (68 %) jako oranžová pěna:
[a]D 20 - 135° (c 0,053, dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3429, 2944, 2935, 1723, 1670, 1458, 1408, 1327, 1225, 1154, 991;
’H NMR (deuterochloroform) δ 7,38 (IH, d, J = 8,2), 5,69 (1H, d, J = 9,3), 5,43-5,34 (IH, m), 5,07-4,97 (IH, m), 4,70-4,42 (2H, m), 4,12 (2H, s), 3,35-3,17 (IH, m), 3,10-2,69 (4H, m), 2,98 (3H, s),2,43-2,33 (IH, m), 2,15-1,65 (5H, m), 1,43 (9H, s).
Analýza pro C2oH3iBrN408S.
vypočteno: C, 42,33; H, 5,51; N, 9,87, nalezeno: C, 42,69; H, 5,52; N, 9,97,
-236470111 DO
Sloučenina (507c) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 507a za získání světle žluté pěny (320 mg, 78%):
107° (c 0,02 dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3401,2956, 1726, 1670, 1528, 1452, 1415, 1395,1368, 1276,1251,1155,1064;
io 'HNMR (deuterochloroform) δ 7,07 (1H, d, J = 7,6), 5,47 (1H, d, J = 8,1), 5,21-5,16 (1H, m), 5,03-4,94 (1H, m), 4,75^1,56 (2H, m), 4,06 (2H, s), 3,69 (3H, s), 3,31-3,13 (1H, m), 3,03-2,92 (2H, m), 2,81-2,58 (2H, m), 2,41-2,31 (1H, m), 2,10-1,66 (5H, m), 1,44 (9H, s).
Sloučenina (507 g) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 507a za získání světle žluté 15 pěny (84 %):
[a]D 22 - 109,6° (c 0,1, dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3324, 1727, 1659, 1535, 1458, 1444, 1423, 1369, 1279, 20 125 6, 1223, 1155;
'H NMR (deuterochloroform) δ 7,12 (1H, d, J = 7,8), 6,33 (1H, d, J = 7,5), 5,19 (IH, m), 4,97 (2H, m), 4,58 (1H, m), 4,06 (2H, s), 3,20 (1H, m), 3,05-2,69 (4H, m), 2,35 (1H, m), 2,14-1,68 (5H, m), 2,03 (3H, s), 1,44 (9H,s).
Analýza pro CsibLBrN^iO?. 0,3 H2O: vypočteno: C, 46,99; H, 5,93; N, 10,44, nalezeno: C, 46,97; H, 5,90; N, 10,35,
O O
508a, b .284z 285
Sloučenina | R
Cl
508a
284 cr u
Me
508b
285 Me“
Sloučenina (508a). K roztoku sloučeniny 506c (547 mg, 1 mmol) v dimethylformamidu (4 ml) se přidá fluorid draselný (145 mg, 2,5 mmol, 2,5 ekvivalentu). Po 10 minutách míchání při teplotě místnosti se přidá 2,6-dichlorbenzoová kyselina (229 mg, 1,2 mmol, 1,2 ekvivalentu). Po 3 hodi35 nách se reakce při teplotě místnosti se přidá ethylacetát (30 ml). Roztok se promyje nasyceným
-237Λ7ΟΙ f I DO roztokem hydrogenuhličitanu sodného (30 ml), solankou, suší se nad síranem horečnatým a zahustí ve vakuu za získání 590 mg (90 %) světle žluté pěny:
[a]D 22 - 85° (c 0,20, dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3400, 28956, 1737, 1675, 1528, 1434, 1414, 1368, 1344, 1272, 1197, 1152, 1061;
'H NMR (deuterochloroform) δ 7,36-7,33 (3H, m), 7,04 (IH, d, J = 8,0), 5,46 (IH, d), J = 7,8),
5,19-5,16 (IH, m), 5,08 (2H, AB), 4,97-4,55 (IH, m), 4,69-4,55 (2H, m), 3,68 (3H, s), 3,30-3,10 (IH, m), 3,01-2,50 (4H, m), 2,40-2,33 (IH, m), 2,15-1,60 (5H, m), 1,44 (9H, s).
Analýza pro C28H34CI2N4O10:
vypočteno: C, 51-15; H, 5,21 ;N, 8,52, nalezeno: C, 51-35; H, 5,32; N, 8,56.
Sloučenina (284) se připraví ze sloučeniny 508a pomocí způsobu použitého pro přípravu sloučeniny 505 ze sloučeniny 54 za získání 330 mg (65 %) bílé pevné látky; teplota tání 115 °C (za rozkladu);
[a]D 20 - 107° (c 0,2, dichlomethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3340, 2954, 1738, 1664, 1530, 1434, 1272, 1198, 1148, 1060;
'HNMR(perdeuterodimethylsulfoxid) δ 8,91 (1H, d, J = 7,2H), 7,67-7,63 (3H, m), 7,54 (IH, d, J = 8,0), 5,24 (2H, s), 5,20-5,15 (IH, m), 4,79-4,70 (IH, m), 4,46-4,37 (2H, m), 3,58 (3H, s),
3,33-3,20 (1H, m), 2,94-2,55 (4H, m), 2,30-1,60 (6H, m).
Analýza pro C24H26CI2N4O10. H2O:
vypočteno: C, 46,54; H, 4,56; N, 9,05, nalezeno: c, 46,36; H, 4,14; N, 8,88.
Sloučenina (508b) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 508a za získání světle žluté pěny (460 mg, 82 %):
[a]D 22 - 115° (c 0,20, dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3413, 2960, 1729, 1675, 1526,1514, 1461, 1421, 1368, 1265,1116,1096;
]HNMR (deuterochloroform) δ 7,27-7,03 (4H, m), 5,48 (IH, d, J = 8,2), 5,20-5,14 (IH, m), 5,04 (2H, AB), 4,93-4,86 (IH, m), 4,80-4,56 (2H, m), 3,77 (3H, s), 3,32-3,15 (IH, m), 3,00-2,56 (4H, m), 2,37 (6H, s), 2,19-1,77 (5H, m), 1,45 (9H, s), 2,41-2,25 (IH, m).
Hmotová spektroskopie (ES+) 617.
Sloučenina (285) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 284 za získání bílé pevné látky (303 mg, 78 %): teplota tání 110 °C (za rozkladu);
[a]D 20 - 128° (c 0,10, dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3339, 2958, 1731, 1666, 1529, 1420, 1266, 1248, 1115, 1070;
-238UZ, 29» 171 B6
Ή NMR (perdeuterodimethylsulfoxid) δ 8,90 (IH, d, J = 7,4), 7,54 (IH, d, J = 7,9), 7,36-7,28 (IH, m), 7,17-7,14 (2H, m), 5,19-5,15 (3H, m), 4,84^1,74 (IH, m), 4,45^1,37 (2H, m), 3,59 (3H, s), 3,45-3,25 (IH, m), 2,95-2,64 (4H, m), 5
Analýza pro C26H32N4O10 . H2O: vypočteno: C, 53,98; H, 5,92; N, 9,68, nalezeno: C, 53,50; H, 5,52; N, 9,49.
Hmotová spektroskopie (ES+) 559.
',35 (6H, s), 2,30-1,60 (6H, m).
510a, 280/ 283, 510d
Sloučenina R
5.09a 51 Ca
jF\
509b
,280 /-N S----(x i| / v-”
509c
283
O
509d
5,1 Ód U
Sloučenina (5.10a). Roztok sloučeniny 506a (2,27 g, 4,2 mmol) v suchém dichlormethanu (50 ml) se reaguje s 30% kyselinou bromovodíkovou v kyselině octové (1,84 ml, 9,2 mmol, 2,2 ekviva15 lentu) při 0 °C v dusíkové atmosféře. Po 10 minutách míchání při 0 °C je reakce dokončena a v médiu se vyloučí bílé krystaly. Pevná látka se odfiltruje a promyje ethylacetátem a diethyletherem za získání 2,20 g (100%) kyseliny [3S(lS,9S)]-5-brom-3-(9-benzoylamino-6,10
-239CZ 298171 B6 dioxo-1,2,3,4,7,8,9,10-oktahydro-6H-pyridazino-[l,2-a][l ,2]—diazepin—1 -karboxamido)-4oxopentanové, která se použije bez dalšího čištění:
'HNMR (perdeuterodimethylsulfoxid) δ 8,87 (IH, d, J = 7,3), 8,63 (IH, d, J = 7,6), 7,91-7,87 (2H, m), 7,60-7,44 (3H, m), 6,92 (IH, široký s), 5,14-5,09 (IH, m), 4,92-4,65 (2H, m), 4,43 (2H, AB), 4,4M,35 (IH, m), 3,33-3,22 (IH, m), 2,98-2,90 (IH, m), 2,89-2,57 (2H, m),
2,35-2,15 (3H, m), 1,99-1,91 (2H, m), 1,75-1,60 (2H, m).
Roztok bromketonu (535 mg, 1 mmol) v suchém dimethylformamidu (10 ml se reaguje s fluoridem draselným (150 mg, 2,5 mmol, 2,5 ekvivalentu), pod dusíkovou atmosféru. Po 5 minutách míchání při teplotě místnosti se přidá 2-merkaptothiazol (140 mg, 1,2 mmol, 1,2 ekvivalentu). Směs se nechá reagovat přes noc, přidá se ethylacetát (150 ml) a organický roztok se promyje solankou, suší nad síranem hořečnatým a odpaří ve vakuu. Zbytek se kiystalizuje z diethyletheru, filtruje a čistí na silikagelu za použití gradientu methanolu (0 až 5 %) v dichlormethanu. Po odpaření se získá 344 mg (60 %) bílé pevné látký: teplota tání 90 až 95 °C (za rozkladu);
[a]p20 - 82° (c 0,2, dichlormethan); .
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3328, 2941, 1745, 1659, 1535, 1422, 1276, 1255, 1223, 1072;
'HNMR (perdeuterodimethylsulfoxid) δ 8,92 (IH, md, J = 7,6), 8,68 (IH, d, J = 7,6), 7,98-7,90 (2H, m), 7,75-7,67 (IH, m), 7,64-7,50 (4H, m), 5,22-5,18 (IH, m), 4,95—4,74 (2H, m),_
4,58—4,38 (3H, m), 3,52-3,19 (IH, m), 3,05-2,65 (4H, m), 2,40-1,50 (6H, m).
Analýza pro Č25H27N5O4S2. H2O:
vypočteno: C, 50,75; H, 4,94 N, 11,84, nalezeno: C, 51,34; H, 4,70; N, 11,58.
Hmotová spektroskopie (ES+) 572.
Sloučenina (509b). Sloučenina 507a (100 mg, 0,17 mmol) v suchém dimethylformamidu (1,5 ml) se reaguje s l-fenyl-lH-tetrazól-5-thiolem (33 mg, 0,187 mmol) v fluoridem draselným (15 mg, 0,34 mmol). Směs se míchá 2 hodiny při teplotě místnosti, zředí se ethylacetátem, promyje vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (dvakrát), solankou, suší nad síranem horečnatým a odpaří. Produkt se čistí pomocí velmi rychlé chromatografie na silikagelu za eluce ethylacetátem za získání 103 mg (88 %) bezbarvé pěny:
[a]D 23 - 92,2° (c 0,1, dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný), 3334, 1726, 1660, 1528, 1501, 1417, 1394, 1368, 1279,1253, 1155;
'HNMR (deuterochloroform) δ 7,82 (2H, m), 7,60-7,40 (8H, m), 7,39 (IH, d, J = 8,1), 7,05 (IH, d, J = 7,3), 5,26 (IH, m), 5,15 (IH, m), 4,99 (IH, m), 4,60 (2H, m), 4,30 (IH, d, J = 17,2H), 3,32 (lH,m), 3,10-2,75 (4H, m), 2,40 (IH, m), 2,24 (IH, m), 1,90 (3H, m), 1,75 (IH, m), 1,44 (9H, s).
Hmotová spektroskopie (ES+) 691,47 (M+ + 1).
Sloučenina (280) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 505 ze sloučeniny 504. Sloučenina 509b (98 mg, 0,142 mmol) v dichlormethanu (1 ml) se ochladí na 0 °C a přidá se kyselina trifluoroctová (1 ml). Směs se míchá 15 minut při 0 °C a 30 minut při teplotě místnosti, potom se odpaří za sníženého tlaku. Zbytek se trituruje suchým toluenem a odpaří. Po • 240CZ 298171 B6 chromatografii na silikagelu za eluce 10% methanolem v dichlormethanu se získá bezbarvé sklo, které se krystalizuje ze směsi dichlorometan/diehylether za získání 62 mg (69%) bezbarvé pevné látky: teplota tání 145 °C (za rozkladu);
[a]D 22 - 80,9° (c 0,1, dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3400, 1727, 1658, 1530, 1501, 1460, 1445, 1416, 1280, 1254;
'HNMR(deuterochloroform) δ 8,00 (IH, m), 7,79 (2H, d, J = 6,7), 7,58-7,30 (9H, m), 5,25 (2H, m), 4,94 (IH, m), 4,53 (2H, m), 4,35 (IH, m), 3,35 (IH, m), 3,01 (3H, m), 2,73 (IH, m), 1,98 (4H, m), 1,64(IH, m).
Analýza pro C29H30O7S. 0,2 TFA:
vypočteno: C, 53,71; H, 4,63 N, 17,04, nalezeno: C, 53,97; H, 4,92; N, 16,77.
Hmotová spektroskopie (ES+) 633,55 (M+ - 1).
Sloučenin (509c) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 509b za získání bezbarvého skla (34 %):
[a]D 22 - 77, Γ (c 0,25, dichlormethan);
Infračervené spektrum (film) 3311, 1724, 1658, 1603, 1578, 1536, 1488, 1458, 1426, 13'68, 1340, 1279,1256,1231,1155, 707;
lH NMR (deuterochloroform) δ 8,29 (2H, m), 7,84 (2H, m), 7,48 (4H, m), 7,22 (3H, m), 5,20 (2H, m), 4,90 (2H, m), 4,58 (IH, m), 3,29 (IH, m), 3,20-2,70 (4H, m), 2,38 (2H, m), 1,96 (4H, m), 1,68 (IH, m), 1,42 (9H, s).
Hmotová spektroskopie (ES+) 608,54 (M + 1).
Sloučenina (283) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 280 za získání bezbarvé pěny (100 %): teplota tání 125 °C;
[a]D 19 - 84,1° (c 0,1, 20% methanol/dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3401, 1736, 1663, 1538, 1489, 1459, 1425, 1281, 1258, 1200, 1134;
‘HNMR(perdeuteromethanol/deuterochloroform) δ 8,38 (2H, m), 7,84-7,40 (8H, m), 5,16 (4H, m), 4,80 (IH, m), 4,56 (IH, m), 3,50 (IH, m), 3,12 (2H, m), 2,82 (2H, m), 2,37 (IH, m),
2,10-1,65 (5H, m).
Analýza pro C27H29N5OS.0,4, H2O:
vypočteno: C, 51,77; H, 4,61; N, 10,41, nalezeno: C, 52,19; H, 4,93; N, 9,99.
Sloučenina (509d) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 509b za získání bezbarvé pevné látky (49,6 mg, 82 %):
‘HNMR (deuterochloroform) δ 8,02 (IH, s), 7,95-7,86 (IH, m), 7,84-7,76 (2H, m), 7,62-7,35 (4H, m), 7,22-7,07 (IH, m), 6,43 (IH, d), 5,26-5,08 (2H, m), 5,03^,72 (3H, m), 4,664,50
-241CZ 298171 B6 (lH,m), 3,43-3,19 (IH, m), 3,15-2,97 (IH, m), 2,86-2,72 (3H, m), 2,48-2,31 (IH, m), 2,18-1,60 (6H, m), 2,43 (9H,s).
Sloučenina (51 Od) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 280 za získání bezbarvé pevné látky (25,7 mg, 57 %): teplota tání 140 až 180 °C;
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3391, 2945, 1733, 1664, 1530, 1422, 1363, 1277, 1259, 1204;
'HNMR (perdeuteromethanol) δ 8,23 (IH, s), 7,94 (IH, d), 7,87 (2H, d), 7,54-7,42 (3H, m) 6,48 (IH, d), 5,22-5,19 (IH, m), 4,57-4,46 (IH, m), 3,62-3,41 (IH, m), 3,22-3,13 (1H, m), 3,02-2,81 (2H, m), 2,70-1,80 (6H, m).
Analýza pro C26H28N6O8. 1,5 H2O: vypočteno: C, 54,30; H, 5,35; N, 14,61, nalezeno: C 54,14; H, 5,35; N, 13,04.
Hmotová spektroskopie (ES+) 551 (Μ - 1, 100%), přesná hmotnost vypočtena pro C26H29N6O8 (MH+): 553,2047, nalezeno: 553,2080.
MéSO2—h
504f-h
MeSOj-ř
505f, 280b
sloučenina R
504f 0
505f
504g
280b M
.. JL n
504h
283b
Sloučenina (505f) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 508a za použití sloučeniny 507b a 3-chlor-2-hydroxy-4H-pyrido[l,2-a]-pyrimidin^l-onu a ihned po hydrolýze sloučeniny 504f kyselinou trifluoroctovou za získání světle hnědého prášku (65 mg, 30 %):
[a]D 20 - 128° (c 0,10, methanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3414, 2928, 1667, 1527, 2459, 1407, 1328, 1274, 1153, 1134;
‘HNMR (deuteromethanol) δ 9,35 (IH, d, J = 6,6H), 8,34 (lil, ζ J = 7,2H), 7,99-7,95 (IH, m),
7,76-7,69 (IH, m), 5,85-5,45 (3H, m), 5,30-5,21 (IH, m), 4,93-4,66 (2H, m), 3,81-3,65
-242CZ 298171 B6 (IH, m), 3,66 (3H, m), 3,45-2,52 (4H, m), 2,52-1,71 (6H, m). D.J. Hlasta a kol., J. Med. Chem. 1995,38,4687-4692.
Sloučenina (504g) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 509b, (83 %) jako bezbarvá pěna:
[a]D 23 - 112,7° (c 0,2, dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3312, 1726, 1.668, 1501, 1413, 1395, 1369, 1328, 1276, 1254,1155;
‘HNMR (deuterochloroform) δ 7,59 (5H, m), 7,48 (IH, d, J = 8,0), 5,68 (IH, d, J = 9,0), 5,37 (IH, m), 4,95 (IH, m), 4,62-4,31 (4H, m), 3,36 (IH, m), 2,98 (3H, s), 2,88 (4H, m), 2,66 (IH, m), 2,42 (2H, m), 1,98 (IH, m), 1,75 (IH, m), 1,43 (9H, s).
Sloučenina (280b) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 280, (100%) jako bezbarvá pěna: teplota tání 120 až 125 °C;
[a]D 25 - 112,4° (c 0,1, dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3328, 1730, 1664, 1529, 1501, 1410,1328, 1270, 1219, 1153, 1134,991;
‘H NMR (deuterochloroform) δ 8,07 (IH, d, J - 7,8), 7,58 (5H, s), 6,41 (IH, d, J = 9,5), 5;32 (IH, m), 5,04 (1HS m), 4,70 (IH, d, J - 17,5), 4,60 (3H, m), 3,50-2,9 (3H, m), 2,98 (3H, s), 2,45 (2H, m), 2,06 (4H, m), 1,68 (IH, m).
Sloučenina (504h) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 509b (24 %) ve formě bezbarvé pěny:
[a]d23 - 101,0° (c 0,2, dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3330, 1727, 1669, 1425, 1396, 1369, 1328, 1276, 1256, 1231, 1155, 1137,991;
'H NMR (deuterochloroform) δ 8,28 (2H, široký d, J = 9,4), 7,71 (IH, d, J = 7,9), 7,22 (2H, s), 6,03 (IH, d, J = 9,4), 5,36 (IH, m), 4,95 (2H, 4,52 (2H, m), 3,29 (IH, m), 3,07 (3H, s), 3,23-2,75 (3H, m), 2,66-2,35 (2H, m), 2,30-1,60 (5H, m), 1,42 (9H, s).
Sloučenina (283b) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 280, (100 %) ve formě bezbarvé pěny: teplota tání 120 až 125 °C [a]D 23 - 85,2° (c 0,+, 10% methanol/dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3337, 1738, 1667, 1560, 1457, 1424, 1326, 1317, 1278, 1258, 1200,1189,1150,11.33,991;
‘HNMR (deuterochloroform/deuteromethanol) δ 8,35 (2H, m), 7,54 (2H, m), 5,32 (2H, m), 4,83 (2H, m), 4,45 (2H, m), 3,43-2,77 (4H, m), 2,97 (3H, s), 2,42 (2H, m), 2,05-1,72 (5H, m).
-243 CZ 298171 B6
O O
508c-e 511c, 280cz 283c
sloučenina R
508c
511c
508d /A
280c
. Γ N
508e
283c
Sloučenina (508c) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 509b se získání 544’mg (97 %) světle žluté pěny:
[a]D 20 - 86° (c 0,19, dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3426, 2947, 1725, 1669, 1551, 1418, 1383, 1253, 1155, 1064;
'HNMR (deuterochloroform) δ 8,49 (2H, d, J = 4,8), 7,13 (IH, d, J = 7,9), 7,03-6,98 (IH, m),
5,47 (IH, d, J = 7,9), 5,23-5,19 (IH, m), 5,09-5,01 (IH, m), 4,84-4,51 (2H, m), 4,04 (2H, AB),
3,69 (3H, s), 3,38-3,19 (IH, m), 3,06-2,64 (4H, m), 2,40-1,76 (6H, m), 1,43 (9H, s).
Analýza pro C25H34N6O8S:
vypočteno: C, 51,89; H, 5,92; N, 14,52, nalezeno: C, 51,49; H, 6,04; N, 13,87.
Hmotová spektroskopie (ES+) 579.
Sloučenina (511c) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 280 za získání 370 mg (79 %) bílého prášku: teplota tání 105 °C (za rozkladu);
[cc]d22 - 94° (c 0,20, dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3316, 3057, 2957, 1724, 1664, 1252, 1416, 1384, 1254, 1189, 1063;
'H NMR (perdeuterodimethylsulfoxid) δ 8,85 (IH, d, J = 7,8), 8,62 (2H, d, J - 4,7), 7,53 (IH, d, J = 8,0), 7,28-7,23 (IH, m), 5,21-5,17 (IH, m), 4,87—4,79 (IH, m), 4,47-4,35 (2H, m), 4,23 (2H, AB), 3,58 (3H, s), 3,30-3,21 (IH, m), 2,95-2,50 (4H, m), 2,35-1,60 (6H, m).
Analýza pro C2iH26N6O8S. H2O:
-244CZ 298171 B6 vypočteno: C, 46,66; H, 5,22; N, 15,55, nalezeno: C, 46,66; H, 5,13; N, 15,07.
Hmotová spektroskopie (ES+) 523 (ES+) 521.
Sloučenina (508d) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 509b za získání bezbarvé pevné látky (269 mg, 87 %): teplota tání 80 až 110 °C;
[a]D 23 - 108° (c 0,60, dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3315, 2977, 1727, 1688, 1527, 1501, 1458, 1418, 1368, 1279, 1250, 1155, 1064;
'H NMR (deuterochloroform) δ 7,70 (IH, d), 7,63-7,53 (5H, m), 5,84 (IH, d), 5,34-5,27 (IH, m), 5,05-4,92 (IH, m), 4,78-4,54 (3H, m), 4,38 (IH, d), 3,66 (3H, s), 3,373,19 (IH, m), 3,07-2,94 (IH, m), 2,91-2,82 (2H, m), 2,71-2,56 (IH, m), 2,40-2,30 (IH, m), 2,19-2,13 (1H, m), 2,08-1,68 (4H, m), 1,42 (9H, s).
Hmotová spektroskopie (ES+) 667 (31%), 645 (M+ + 1, 100), 589 (62).
Sloučenina (280c) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 280 za získání světle krémové pevné látky (203 mg, 88 %): teplota tání 105 až 130 °C;
[a]D 22 - 235° (c 0,11 methanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3342, 2951, 1727, 1667, 1529, 1501, 1459, 1416, 1276, 1252, 1225, 1192, 1062;
*H NMR (perdeuterodimethylsulfoxid) δ 8,89 (IH, d), 7,69 (5H, s), 7,50 (IH, d), 5,18-5,11 (IH, m), 4,79-4,69 (IH, m), 4,57 (2H, s), 4,42^1,32 (IH, m), 3,54 (3H, s), 2,92-2,63 (3H, m),
2,21-1,82 (5H, m), 1,65-1,57 (IH, m).
Hmotová spektroskopie (ES+) 587 (Μ - 1, 100%).
Sloučenina (508e) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 509b za získání světle oranžové pevné látky (199 mg, 25 %): teplota tání 80 až 120 °C;
[oc]D 23 - 89° (c 0,51, dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3333, 2978, 1726, 1669, 1579, 1536, 1479, 1426, 1368, 1277, 1253, 1232, 1155, 1064;
1 HNMR (deuterochloroform) δ 8,41-8,18 (2 H, m), 7,81 (IH, d), 7,26-7,20 (2H, s), 5,91 (IH, d),
5,24-5,16 (IH, m), 5,07-4,86 (3H, m), 4,81-4,51 (2H, m), 3,67 (3H, s), 3,34-3,16 (lH,m),
3,10-2,81 (3H, m), 2,72-2,54 (IH, m), 2,41-2,31 (IH, m), 2,07-1,62 (5H, m), 1,47 (9H s).
Hmotová spektroskopie (ES+) 562 (M' + 1, 100%), 506 (38).
Sloučenina (283c) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 280 za získání bílého prášku (167 mg, 98 %): teplota tání 90 až 105 °C;
[a]D 22- 106q (c 0,11 methanol);
-245CZ 298171 B6
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3325, 3070, 2956, 1669, 1544, 1423, 1256, 1199, 1133, 1062;
'HNMR (perdeuterodimethylsulfoxid) δ 8,95 (IH, d), 8,45-8,20 (2H, m), 7,53-7,45 (3H, m),
5,19-5,08 (3H, m), 4,70-4,62 (2H, m,), 4,41—4,30 (2H, m), 3,53 (3H, s), 2,92-2,68 (3H, m),
2,22-2,06 (2H, m), 1,95-1,82 (2H, m), 1,63-1,53 (IH, m).
Hmotová spektroskopie (ES+) 506 (M+ + 1, 100%).
O o
512a, 512b 280d, 283d
Sloučenina R
512a
. 280d
jf N
512b
283d
Sloučenina (512a) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 509b, za získání (83 %) bezbarvé pěny:
[cc]d23 _ 129,6° (c 0,1, dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3323, 1726, 1664, 1531, 1501, 1444, 1415, 1394, 1369, 1279,1254, 1156;
'HNMR (deuterochloroform) δ 7,59 (5H, s), 7,37 (IH, d, J = 7,9), 6,38 (IH, d, J = 7,4), 5,27 (1H, m), 4,97 (2H, m), 4,58 (2H, d + m), 4,28 (IH, d, J = 17,2), 3,28 (1H, m), 3,10-2,65 (4H, m), 2,31 (2H, m), 2,03 (3H, s), 2,101,72 (4H, m), 1,48 (9H, s).
Sloučenina (280d) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 280, za získání (77 %) bezbarvé pěny:
[cc]D 22 - 93,31 (c 0,1, dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3316, 1728, 1659, 1531, 1501, 1415, 1341, 1278, 1253, 1222, 1185;
Ή NMR (deuterochloroform) δ 8,05 (IH, d, J = 7,9), 7,57 (5H, široký s), 5,30 (IH, m), 5,01 (2H, m), 4,70-4,10 (4H, m), 3,40-2,85 (4H, m), 2,62 (IH, m), 2,33 (IH, m), 2,27-1,65 (5H,m), 2,01 (3H, s).
Sloučenina (512b) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 509b, za získání (9%) bezbarvé pěny:
-246CZ 298171 B6
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3333, 1727, 1661, 1542, 1427, 1369, 1279, 1257, 1232, 1156;
]H NMR (deuterochloroform) δ 8,30 (2H, m), 7,20 (3H, m), 6,45 (IH, d, J = 7,4), 5,17 (1H, m),
4,91 (3H,m ), 4,55 (IH, m), 3,27 (IH, m), 3,14-2,70 (4H, m), 2,41 (IH, m), 2,04 (3H, s),
2,10-1,65 (6H, m), 1,44 (9H, s).
Sloučenina (283d) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 280, (100%) ve formě bezbarvé pěny:
[a]p22 - 106,0° (c 0,2, 10% methanol/dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3312, 1735, 1664, 1549, 1426, 1279, 1258, 1200, 1135;
'HNMR (deuterochloroform) δ 8,27 (2H, m), 7,46 (2H, m), 5,09 (IH, m), 4,79 (3H, m), 4,47 (IH, m), 3,40 (IH, m), 3,30-2,70 (3H, 2,54 (IH, m), 2,30 (IH, m), 1,98 (3H, s), 2,05-1,65 (4H,m),
245b
6b
Sloučenina (245b) se připraví z (lS,9R)-9-benzylamíno-l,2,3,4,7,8,9,10-oktahydro-10-oxo6H-pyridazino[l,2-a][l,2]diazapin-l-karboxylové kyseliny pomocí způsobu popsaného pro přípravu sloučeniny 245 za získání 416 mg (85 %) bezbarvé pěny (směs diastereo izomerů 1:1):
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3392, 3302, 2942, 1792, 1642, 1529, 1520, 1454, 1119;
‘H NMR (deuterochloroform) δ 7,79 (2H, m), 7,51-7,09 (10H, m), 5,52 (0,5H, d, J = 5,3), 5,51 (0,5H, s), 5,36 (IH, m), 4,84 (IH, m), 4,74-4,59 (1,5H, m), 4,51 (IH, m), 4,38 (0,5H, m),
3,22-2,83 (5H,), 2,51 (IH, m), 2,25 (2H, m), 2,01-1,46 (6H, m).
Analýza pro C28H32N4O6,0,75 H2O:
vypočteno: C, 62,97; H, 6,32; N, 10,49; nalezeno: C, 63,10; H, 6,16; N, 10,21.
Hmotová spektroskopie (ES+) 521 (M + 1,100%).
Sloučenina (246b) se připraví ze sloučeniny 245b pomocí způsobu popsaného pro přípravu sloučeniny 246 za získání 104 mg (33 %) bílého prášku: teplota tání 115 až 119 ;C;
[a]D 24 - 19,8° (c 0,2, methanol);
-247CZ 298171 B6
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3293, 2944, 1786, 1639, 1578, 1537, 1489, 1450, 1329, 1162,1124;
‘H NMR (perdeuteromethanol) δ 7,85 (2H, d, J = 7,0), 7,49 (3H, m), 5,49 (IH, m), 4,55 (IH, m), 5 4,30 (2H, m), 4,30 (IH, m), 3,19-2,89 (3H, m), 2,63 (2H, m), 2,16-1,81 (5H, m), 1,60 (3H, m).
Analýza pro C2iH26N4O6: H2O: vypočteno: C, 56-24; H, 6,29; N, 12,49, nalezeno: C, 56,54; H, 6,05; N, 12,29.
Hmotová spektroskopie (ES+) 429 (Μ - 1,100%).
Sloučeniny 513a-j se připraví tak, jak je popsáno níže.
O
513a-f
Sloučenina R
513 a '''O
513a-l
513a-2 '“O
513b Hd
513b-l bO
-248CZ 298171 B6
513b-2 °-0
513c
513d
513e ''O
513. f
513f~l
; 513f-2
513g
513h
-249CZ 293171 B6
513 i
Sloučenina (513a) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 513d/e za získání směsi diastereoizomerů (670 mg, 5 0%) ve formě oleje:
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3331, 2946, 1790, 1723, 1713, 1531, 1329, 1257, 1164, 1120, 1060, 977, 937, 701;
'HNMR (deuterochloroform) δ 7,36-7,18 (5H, m), 5,99-5,83 (IH, m), 5,41-5,34 (2H, m),
5,28-5,18 (2H, m), 4,59-4,56 (2H, m), 4,32-3,96 (2H, m), 3,85-3,73 (IH, m), 3,02-2,76 (3H, m), 2,49-2,34 (IH, m).
Sloučenina (513b) se připraví jako sloučenina 513d/e za získání 8 g (51 %) směsi diastereoizomerů ve formě čirého oleje:
[a]D 20-13° (c 0,25, dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3325, 2959, 2875, 1790, 1723, 1535,1420, 1328, 1257, '1120, 1049, 93,937;
'HNMR (deuterochloroform) δ 6,02-5,80 (IH, m), 5,53-5,46 (2H, m), 5,37-5,21 (2H, m), 4,58 (2H, d, J = 5,5), 4,50-4,46 (0,5H, m), 4,34—4,25 (IH, m), 4,19-4,12 (0,5H, m), 3,06-2,77 (IH, m), 2,53-2,35 (IH, m), 1,85-1,50 (8H, m).
Analýza pro C13H19NO5:
vypočteno: C, 57,98; H, 7,11; N, 5,20, nalezeno: C, 56,62; H, 7,22; N, 4,95.
Hmotová spektroskopie (ES+) 270.
Sloučenina (513c) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 513d/a za získání jednoho izomeru (20 %) ve formě světle žlutého oleje:
250CZ 298171 B6 [a]D 24 - 63,1° (c 0,2, dichlormethan);
Infračervené spektrum (film) 3338, 2948, 1791, 1723, 1529, 1421, 1330, 1253, 1122, 984, 929, 746;
‘H NMR (deuterochloroform) δ 7,20 (4H, m), 5,87 (1H, m), 5,61 (IH, d, J - 5,4), 5,33-5,10 (2H,m), 4,70 (1H, m), 4,56 (3H, m), 3,33-3,19 (2H, m), 3,10-2,94 (2H,m), 2,81 (1H, dd, J = 8,3, 17,3), 2,42 (IH, dd, J = 10,5, 17,3).
Připraví se sloučenina (513d) a (513d/e) [pomocí způsobu popsaného Chapmanem, Biorg. & Med. Chem. Lett., 2, str. 615-618 (1992)). Následuje zpracování pomocí extrakce ethylacetátem a promytí hydrogenuhličitanem sodným, produkt se suší nad síranem hořečnatým, filtruje a odpaří za získání oleje, který obsahuje produkt a benzylalkohol. Přidá se 200 ml hexanu (použije se 200 ml hexanu na každých 56 g AllocAsp (CO2tBu)CH2OH) a směs se míchá za chladu před noc. Takto se získá olejovitá pevné látka. Matečné louhy se slijí a uchovají se pro chromatografií. Olejovitý zbytek se rozpustí v ethylacetátu a odpaří za získání oleje, který se krystalizuje z 10% ethylacetátu v hexanu (500ml). Pevná látka se filtruje za získání sloučeniny 513d (12,2 g, 19 %): teplota tání 108 až 110 °C;
[a]D 24 - 75,72° (c 0,25, dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3361, 1778, 1720, 1517, 1262, 1236, 1222, 1135, 1121, 944, 930, 760;
'H NMR (deuterochloroform) δ 7,38 (5H, m), 5,90 (IH, m), 5,50 (IH, s), 5,37 (0,5H, m), 5,26 (2,5H, m),4,87 (IH, AB kv), 4,63 (3H, m), 4,31 (lH,tn ), 3,07 (IH, dd), 2,46(IH, dd).
Analýza pro C^H^NCh:
vypočteno: C, 61,85; H, 5,88; N, 4,81, nalezeno: C, 61,85; H, 5,89 N, 4,80.
Matečné louhy se spojí a odpaří za vzniku oleje (asi ,200 g) obsahujícího benzylalkohol. Přidá se směs hexan/ethylacetát (9:1, 100 ml) a produkt se čistí pomocí chromatografie za eluce směsí 10% ethylacetát v hexanu, čímž se odstraní přebytečný benzylalkohol, a potom směsí dichlormethan/hexan (1:1 obsahující 10 % ethylacetátu). Takto se získá sloučenina 513e obsahující malé množství sloučeniny 513d (20,5 g, 32 %): teplota tání 45 až 48 °C;
[a]D 21 - 71,26° (c 0,25, dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3332, 1804, 1691, 1536, 1279, 1252, 1125, 976.
*H NMR (deuterochloroform) δ 7,38 (5H, m), 5,91 (IH, m), 5,54 (IH, d, J = 5,2), 5,38 (3H, m), 4,90 (IH, AB kv); 4,60 (4H, m), 2,86 (IH, dd); 2,52 (IH, dd).
Analýza pro CI3Hi7NO5. 0,1 H2O:
vypočteno: C, 61,47; H, 5,91; N, 4,78, nalezeno: C, 61,42; Η, 5.B8; N, 4,81.
Sloučenina (513f) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 513d/e za získání bezbarvého oleje (152 mg, 79 %):
Infračervené spektrum (film) 3334, 2983,2941, 1783, 1727,1713, 1547,1529, 1422,1378, 1331,
1313, 1164, 1122, 1060, 938;
-251 CZ 298171 B6 ‘H NMR (deuterochloroform) δ 6,09-5,82 (2H, m), 5,50-5,18 (3H, m), 4,64-4,54 (2H, m),
4,27-4,13 (lH,m ), 3,95-3,78 (IH, m), 3,73-3,56 (IH, m), 3,05-2,77 (IH, m), 2,56-2,37 (IH, m), 1,351,17 (4H,m).
Analýza pro C|0H15NO5:
vypočteno: C, 52,40; H, 6,60; N, 6,11, nalezeno: C, 52,16; H, 6,62; N, 5,99.
Hmotová spektroskopie (ES+) 229 (M+ + 1, 100%).
Sloučenina (513 g). 4-Dimethylaminopyridin (76,0 mg, 622 mmol) se přidá k roztoku 2-fenoxybenzoylchloridu (579 mg, 2,49 mmol) a sloučeniny 517 (600 mg, 2,07 mmol) v pyridinu (lOml). Směs se míchá při teplotě místnosti 18 hodin, potom se přidá solanka (25 ml) a extrahuje se ethylacetátem (30 ml, 20 ml). Spojené organické extrakty se promyjí 1M kyselinou chlorovodíkovou (3 x 25 ml), nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (2 x 25 ml) a solankou (25 ml), suší se nad síranem hořečnatým a zahustí. Světle oranžový olej se čistí pomocí velmi rychlé kolonové chromatografie (1 až 10% aceton v dichlormethanu) za získání 447 mg (44 %) bezbarvého oleje:
Infračervené spektrum (film) 3375,2980, 1721, 1712,1602, 1579,1514,1484, 1451,1368,1294,
1250,1234,1161,1 137,1081,754;
‘H NMR (deuterochloroform) δ 7,98-7,93 (IH, m), 7,50-7,41 (IH, m), 7,35-7,25 (2H, m),
7,22-7,03 (3H, m), 6,95 (3H, d), 5,95-5,76 (IH, m), 5,57 (1HJ, ď), 5,30-5,13 (2H, m,), 4,51 (2H, d), 4,25 (2H, d),4,18-4,04 (IH, m), 3,88 (IH, m), 3,50(IH, m), 2,51 (2H, m), 1,41 (9H, s).
Hmotová spektroskopie (ES+) 508 (57%), 503 (76), 486 (M‘ + 1, 45), 468 (27), 412 (100), přesná hmotnost vypočtená pro C^H^NOs (MH*): 486,2128, nalezeno: 486,2158.
Sloučenina (513h) se připraví z (3S,4R)-t-butyl (N-allyloxy kar bony 1 pro přípravu sloučeniny 513 g za získání 562 mg (85 %) bezbarvého oleje:
Infračervené spektrum (film) 3418, 2980, 1722, 1711, 1512, 1368, 1278, 1245, 1198, 1157, 1139;
‘H NMR (deuterochloroform) δ 8,90 (IH, d, J = 8,6), 8,21 (IH, dd, J = 1,2, 7,3), 8,04 (IH, d, j = 8,2), 7,89 (IH, dd, J = 1,5, 7,9), 7,67-7,46 (3H, m), 5,88 (IH, m), 5,49 (IH, d, J = 9,0),
5,35-5,18 (2H, m), 4,57-4,46 (4H, m), 4,19 (2H, m), 2,67 (2H, m), 1,40 (9H, s). ’
Analýza pro C24H29NO7:
vypočteno: C, 65,00; H, 6,59; N, 3,16, nalezeno: C, 64,74; H, 6,56; H, 3,09.
Hmotová spektroskopie (ES+) 466 (M+Na, 100%), 444 (M+l, 39), 388 (44).
Sloučenina (513 i) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 513 g za získání bezbarvého oleje (569 mg, 85 %).
Infračervené spektrum (film) 3400, 1723, 1712,1584,1528,1489,1443, 1367,1276, 1232, 1190, 1161, 1098,1074,995, 755;
lHNMR (deuterochloroform) δ 8,65-8,59 (IH, d), 7,84-7,66 (2H, m), 7,45-7,11 (5H, m), 7,05-6,97 (2H, m), 6,00-5,78 (IH, m), 5,54-5,14 (2H, m), 4,62—4,52 (2H, m), 4,42-4,32 (2, m), 4,08-4,22 (2H, m), 2,78-2,47 (2H, m), 1,44 (9H, s).
252CZ 298171 B6
Hmotová spektroskopie (ES+) 508 (100%), 486 (M* + 1, 33), přesná hmotnost vypočtená pro C26H32NO8 (ΜΗ4): 486,2128, nalezeno: 486,2121.
Sloučenina (513j) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 513g za získání světle oranžového oleje (905 mg, 91 %):
Infračervené spektrum (film) 3418, 3383, 2980, 1722, 1711, 1061, 1517, 1450, 1424, 1368, 1308, 1252, 1154,1100, 994, 767, 698;
'HNMR (deuterochloroform) δ 7,62-7,55 (2H, m), 7,51-7,42 (3H, m), 5,98-5,76 (1H, m),
5,33-5,18 (2H, m), 4,53 (2H, d), 4,18 (2H, d), 3,91 (1H, m), 3,80 (1H, m), 2,76 (3H, s), 2,50 (2H, m), 1,43 (9H, s).
Analýza pro C^Hso^Og, 0,5 H2O: vypočteno: C, 59,62; H, 6,46; N, 5,79, nalezeno: C, 59,46; H, 6,24; N, 5,72.
Hmotová spektroskopie (ES+) 497 (100%), 475 (M++ 1, 15),419(48).
Sloučenina (514) se připraví pomocí postupu popsaného v H. Matsunaga, a kol. Tetrahedron Letters 24, str. 3009-3012 (1983) jako čistý diastereomer (60 %) ve formě oleje.
[a]D 23 - 36,9° (c 0,5, dichlormethan);
Infračervené spektrum (film) 2982, 2934, 1726, 1455, 1369, 1257, 1214, 1157, 1068;
'HNMR (deuterochloroform) δ 7,31 (5H, m), 4,10 (1H, kv, J = 6,0), 4,05-3,75 (4H, m), 3,10 (1H, q, J = 6,7), 2,40 (2H, m), 1,42 (9H, s), 1,40 (3H, s), 1,34 (3H, s).
Sloučenina (516). Sloučenina 514 (3,02 g, 9,00 mmol) a 10% palladium na uhlí (300 mg) v ethanolu (30 ml) se míchá 2 hodiny ve vodíkové atmosféře. Suspenze se filtruje přes křemelinu a 0,45 mm membránu a filtrát se odpaří za získání bezbarvého oleje 515 (2,106 g, 95 %), který se použije bez Čištění. Olej (1,93 g, 7,88 mmol) se rozpustí ve vodě (10 ml) a 1,4-dioxanu a přidá se hydrogenuhličitan sodný (695 mg, 8,27 mmol). Směs se ochladí na 0 °C a přikape se allylchloroformiát (1,04 g, 919 mg, 8,66 mmol). Po 3 hodinách se směs extrahuje etherem (2 x 50 ml). Spojené etherové extrakty se promyjí vodou (2 x 25 ml) a solankou (25 ml), suší nad
-253 CZ ZVM7I B6 síranem horečnatým a zahustí za vzniku bezbarvého oleje. Po velmi rychlé chromatografii (10-35% ethylacetát v hexanu) se získá bezbarvá pevná látka (2,69 g, 95 %): teplota tání 64 až 65 °C;
[a]D 23 - 210 (c 1,00, dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3329, 1736, 1702;
*HNMR(deuterochloroform) δ 6,00-5,82 (IH, m), 5,36-5,14 (2H, m), 542 (IH, s), 4,56 (IH, d), 10 4,40-4,08 (2H, m), 4,03 (IH, m) 3,70 (IH, m), 2,52 (2H, m), 1,44 (12H, 2 x s), 1,33 (3H, s);
Analýza pro CicH^NCV vypočteno: C, 58,34; H, 8,26; N, 4,25; nalezeno: C, 58,12; H, 8,16; N, 4,19;
Hmotová spektroskopie (+FAB) 320 (M+ +1,41%), 274 (70), 216 (100).
Sloučenina (517). Roztok sloučeniny 516 (2,44 g, 7,41 mmol) v 80% vodné kyselině octové (25 ml) se míchá 24 hodin při teplotě místnosti, potom se zahustí a azeotropicky odpaří 20 s toluenem (2 x 25 ml). Zbytek se zpracuje pomocí solanky (25 ml) a extrahuje ethylacetátem (2 x 25 ml). Organické vrstvy se suší nad síranem horečnatým a zahustí za získání bezbarvého oleje. Po velmi rychlé chromatografii (20 až 80% ethylacetát v dichlormethanu) se získá bezbarvá pevná látka 1,99 g 90 %): teplota tání 74 až 75 °C;
[a]D 25 - 1,3° (c 1,0, dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 1723, 1691;
]H NMR (deuterochloroform) δ 6,02-5,78 (2H,m ), 5,35-5,16 (2H, m), 4,55 (2H, d), 4,16-4,04 30 (2H, m), 2,76 (2H, s), 2,56 (2H, m), 2,56 (2H, m), 1,43 (9H, s);
Analýza pro Ci3H23NO6:
vypočteno: C 53,97; H, 8,01; N, 4,84, nalezeno; C, 53,79; H, 7,88; N, 4,81;
35
Hmotová spektroskopie (+FAB) 290 (M^+l, 44%), 234 (100).
Příklad 30
Sloučeniny 1105-1125 se připraví následujícím způsobem. Fyzikální údaje pro tyto sloučeniny jsou uvedeny v tabulce 24.
-254CZ zy»L71 B6
Tabulka 24
-255 cz zyeivi Bt>
-256 (JZ 293171 B6
-257CZ 298171 B6
-258
-259
260cz ZV3171 Bf>
261
CL Ζ?ΟΙ/Ι BO
-262LZ. 4701/1 DO
-263 CZ 298171 B6
-264
CZ ZV0I/I DD
Krok A. Syntéza sloučeniny 401. TentaGel S(R| NH2 pryskyřice (0,25 mmol/g, 5,25 g) se umístí do sintrované skleněné protřepávací nádoby a promyje se dimethylacetamidem (3 x 15 ml).
Sloučenina 400 (1,36 g, 2,3 mmol) se rozpustí v DMA (10 ml) a přidá se O-benzotriazolΝ,Ν,Ν,Ν'-tetramethyluroniumhexafluorofosfát (HBTU; 0,88 g, 2,3 mmol), a DIEA (0,8 ml,
4,6 mmol). Roztok se přidá k pryskyřici a přidá se dalších 5 ml DMA. Reakční směs se protřepává 1,5 hodiny při teplotě místnosti za použití třepačky. Pryskyřice se filtruje a promyje se dimethylacetamidem (4x15 ml).
Krok B. Syntéza sloučeniny 1102. Z pryskyřice 401 se pomocí reakce se směsí 20% (objem/objem) piperidin/dimethylacetamid (15 ml) po dobu 10 minut (za třepání) a potom 10 minut s čerstvým piperidinovým činidlem (15 ml) odstraní chránící skupina). Pryskyřice se potom promyje dimethylacetamidem (6x15 ml), potom N-methypyrrolidonem (2 x 25 ml).
-265 CZ ΖΎΟ1 / I DO
Sloučenina 1101 (0,979 g, 2,11 mmol) se rozpustí v dimethylacetamidu (8 ml). Přidá se HBTU (0,81 g, 2,1 mmol) a DIEA (0,75 ml, 4,3 mmol), roztok se přidá k pryskyřici, potom se přidá dimethylacetamid (4 ml). Reakční směs se protřepává 2 hodiny při teplotě místnosti za použití třepačky. Pryskyřice se zpracuje pomocí postupu popsaného pro zpracování sloučeniny 401 za 5 získání sloučeniny 1102.
Krok C. Syntéza sloučeniny 1103. Tato sloučenina se připraví z pryskyřice 1102 (0,040 mmol) za použití Advanced ChemTech 396 Multiple peptidového syntetizéru. Automatizované cykly zahrnují promytí pryskyřice dimethylformamidem (2 x 1 ml), odstranění chránící skupiny 25% ίο (objem/objem), piperidinem v dimethylformamidu (1 ml), 3 minuty, potom čerstvým činidlem (1 ml) 10 minut za získání pryskyřice 1103. Pryskyřice se promyje dimethylformamidem (3 x 1 ml) aN-methypyrrolidonem (3 x 1 ml).
Pryskyřice 1103 se acyluje roztokem 0,4M karboxylové kyseliny a 0,4M HOBT vN-methy15 pyrrolidonu (0,5 ml), roztokem 0,4M HBTU vN-methylpyrrolidonu (0,5 ml) a roztokem 1,6M
DIEA vN-methylpyrrolidonu (0,25 ml) a reakční směs se třepe 2 hodiny při teplotě místnosti. AcylaČní krok se opakuje. Nakonec se pryskyřice promyje N-methylpyrrolidonem (lxl ml), dimethylformamidem (4 x 1 ml), dichlormethanem (5 x 1 ml) a suší ve vakuu. Aldehyd se odštěpí z pryskyřice, provede se celkové odstranění chránících skupin pomocí reakce se směsí 20 95 % kyseliny trifluoroctové/ 5 % vody (objem/objem, 1,5 ml) 30 minut při teplotě místnosti. Po promytí štěpícím činidlem (1 ml) se spojené filtráty přidají k chladné směsi 1:1 ether:hexan (10 ml) a vzniklá sraženina se izoluje odstředěním a slitím. Vzniklá kulička se rozpustí ve směsi 10% acetonitri 1/90 % voda/0,1 % kyseliny trifluoroctová (5 ml) a lyofilizuje se za získání surových sloučenin 1105-1125 jako bílého prášku. Sloučenina se čistí pomocí semipreparativní 25 RP-HPLC s Rainin Microsorb(tm) C18 kolonou (5 μ, 21,4 x 250 mm) za eluce lineárním gradientem acetonitrilu (8 až 48 %) obsahujícího 0,1 % TFA (objem/objem) 30 minut při průtoku 12 ml/minutu. Frakce obsahující požadovaný produkt se slijí a lyofilizují za získání sloučenin 1105-1125 (10,8 mg, 63%),
Analytické HPLC metody:
(1) Waters DeltaPak Cl8, 300A (5 μ, 3,9 x 150 mm). Lineární gradient acetonitrilu (0 až 25 %) obsahujícího 0,1 % kyseliny trifluoroctové (objem/objem) 14 minut při průtoku 1 ml/minutu.
(2) Waters DeltaPak Cl, 300A (5 μ, 3,9 x 150 ml). Lineární gradient acetonitrilu (5 až 45 %) obsahujícího 0,1 % kyseliny trifluoroctové (objem/objem) 14 minut při průtoku 1 ml/minutu.
-266CZ 4701/1 tít)
O
IBucAn^
H
262b
O
518
Sloučenina (259b) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 259 ze sloučeniny 258 za získání voskovité pevné látky (87 g, 51 %): teplota tání 54 až 55 °C;
Infračervené spektrum (film) 3324, 2978, 1732, 1713, 1455, 1367, 1277, 1254, 1171;
‘HNMR (deuterochloroform) δ 7,35 (5H, m), 6,15 (IH, široký s), 5,13 (2H, s), 3,15 (2H, t, J = 6,5), 2,54 (2 H, t, J = 6,5), 1,45 (9H, s).
Analýza C15H22N2O3:
vypočteno: C, 61,21; H, 7,53; N, 9,52, nalezeno; C, 61,29; H, 7,51; N, 9,51.
Hmotová spektroskopie (ES+) 295 (M+ + 1).
Sloučenina (260b) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 260 ze sloučeniny 259 za získání gumy (81 g), která se použije v následujícím kroku bez čistění. Analytické údaje pro čistý vzorek:
Infračervené spektrum (film) 3318, 2976,1733, 1451, 1412, 1393, 1366, 1256, 1161;
‘H NMR (deuterochloroform) δ 7,34 (10H, m), 6,68 (0,5H, široký s), 5,11 (4H, m), 4,63 (0,5H, široký s), 4,14 (IH, m), 3,53 (2H, m), 3,08 (IH, m), 2,63 (2H, m), 2,10-1,60 (4H, m), 1,60-1,35 (19H, m + 2 x s).
Sloučeniny (261b) se připraví pomocí stejného postupu jako sloučenina 261 ze sloučeniny 260 za získání gumy, která se čistí pomocí velmi rychlé chromatografíe (1:1 ethylacetát/dichlormethan) za získání sloučeniny uvedené v názvu 261b (36,0 g, 79,4 % po 2 stupních):
Infračervené spektrum (film) 3267, 2979, 2937, 1727, 1668, 1394,1369, 1245, 1159;
-267Ví. Λ7Ο1 l 1 DO ]H NMR (deuterochloroform) δ 7,6 (IH, široký s), 6,8 (IH, velmi široký s), 4,47 (IH, široký s),
3,73 (2H, široký s), 2,98 (IH, široký s), 2,66 (3H, m), 2,04 (IH, široký s), 1,84 (IH, m), 1,6-1,2 (21H, m + s).
Sloučenina (262b) se připraví stejným způsobem jako sloučenina 262 ze sloučeniny 261 za získání sloučeniny uvedené v názvu 262b, (18,6 g, 54 %) ve formě oleje.
[a]D 20 + 47,7° (c 0,236, dichlormethan);
Infračervené spektrum (film) 3291, 2978, 1738, 1727, 1690, 1678, 1439, 1243, 1164;
*H NMR (deuterochloroform) δ 6,59 (IH, s), 5,06 (IH, m), 4,47 (IH, m), 3,85 (3H, m), 2,82 (IH, m),37(lH, m), 2,22 (IH, m), 1,92 (IH, m), 1,63 (2H, m), 1,48 a 1,46 (18H, 2 x s).
Hmotová spektroskopie (ES+) 399 (M+ + 1).
Sloučenina (518). Sloučenina 262b (2,43 g, 6,1 mmol) se rozpustí v 1M chlorovodíku v ethylacetátu (30 ml) a míchá se 20 hodin při teplotě místnosti. Přidá se hydrogenuhličitan sodný (4 g,
46,5 mmol) a voda 20 ml směs se míchá 5 minut před rozdělením a extrakcí alikvotních dílů ethylacetátem. Spojené organické roztoky se promyjí vodou, solankou, suší se nad síranem hořečnatým a zahustí. Po čištění pomocí velmi rychlé chromatografie (50% ethylacetát v dichlormethanu - 100% ethylacetát) se získá čistý produkt 518 (1,08 g, 59 %) ve formě nestabilního oleje:
[a]D 20- + 82° (c 0,55, dichlormethan);
Infračervené spektrum (film) 3331, 2977, 1731, 1680, 1664, 14390, 1420, 1315, 1158;
*HNMR (deuterochloroform) δ 5,08 (IHm, m), 4,48 (IH, m), 3,80 (2H, Ab kv), 3,70 (2H, široký s, vyměněno D2O), 3,53 (IH, m), 2,75 (IH, m), 2,30 (2H, m), 1,88 (IH, m), 1,71 (2H, m), 1,47 (9H, s).
-268Ví. Í7OI f 1 DU
OBn
519
Sloučenina (520). Sloučenina 519 (9,4 g, 35,6 mmol) se suspenduje v methanolu (230 ml) a ochladí se v ledové lázni na 0 °C. Během 30 minut se přikape thionylchlorid (3 ml, 4,89 g,
41,1 mmol) a směs se 48 hodin míchá při teplotě místnosti. Rozpouštědlo se odstraní ve vakuu při 30 °C a olejovitý zbytek se rozpustí v ethylacetátu (500 ml). Organický roztok se promyje nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, vodou, solankou, suší se nad síranem hořečnatým odpaří za získání sloučeniny 520 (7,84 g, 79 %) ve formě oleje:
[α]ο22 -25,9° (c 0,615, dichlormethan);
Infračervené spektrum (film) 2953, 1739, 1703, 1694, 1440,1403, 1357,1261,1241, 1174;
'HNMR (deuterochloroform) δ 7,36 (5H, s), 5,18 (2H, s), 4,00 (IH, široký d), 3,73 (3H, s), 3,55 (IH, dd), 3,12 (IH, t), 2,06 (IH, m), 1,73 (3H, m).
Analýza pro CuHnNíOj- 0,25 H2O:
vypočteno: C, 59,46; H, 6,59; N, 9,91, nalezeno: C, 59,44; H, 6,46; N, 10,09.
Sloučenina (521). Za použití podobného postupu jako pro přípravu sloučeniny 260 výše, se připraví sloučenina 521 96 % jako surový olej:
[a]D 22 - 22,16° (c 0,25, dichlormethan);
Infračervené spektrum (film) 3316, 2976, 2953, 1738, 1726, 1714, 1690, 1367, 1260, 1167;
-269Ví. 4701/1 DO *H NMR (deuterochloroform) δ 7,25 (10H, m), 6,82 (IH, široký s), 5,10 (4H, m), 4,80 (IH, široký s), 4,3-3,4 (6H, m), 3,10 (IH, m), 2,59 (2H, m), 1,95 (2H, m), 1,44 (10H, m + s).
Sloučenina (522). Za použití podobného postupu jako pro přípravu sloučeniny 261 výše, se připraví sloučenina 522,92 % jako bílá pevná látka: teplota tání 146 až 148 °C (za rozkladu);
[a]D 22 + 27,8° (c 0,25, dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3346, 1740, 1710, 1626, 1497, 1290, 1250, 1206, 1179, 1159;
*H NMR (deuterochloroform) δ 7,60 (IH, široký s), 7,5-5,5 (IH, velmi široký s), 4,64 (IH, široký s), 3,76 (5H, m + s), 3,00 (IH, m), 2,70 (3H, m), 2,16 (IH, m), 1,92 (IH, m), 1,56 (IH, m), 1,46 (11H, m + s).
Analýza pro C15H26N4O7:
vypočteno: C, 48,12; H, 7,00; N, 14,96, nalezeno: C,48,21; H, 6,96; N, 14,86.
Hmotová spektroskopie (ES+) 373 (Μ“ - 1).
Sloučenina (523). Sloučenina 522 (7,15 g, 19,1 mmol) se rozpustí v dichlormethanu (100 ml), obsahujícím dimethylformamid (0,5 ml), a ochladí se na 0 °C. Přidá se thionylchlorid (1,6 ml,
2,61 g, 22 mmol) a N-ethylmorfolin (4,86 ml, 440 mg, 38,2 mmol) a směs se míchá 2 hodiny. Organická směs se promyje 2M disíranem sodným (50 ml), nasyceným hydrogenuhličitanem sodným (50 ml) a solankou (50 ml, suší se nad síranem hořečnatým a zahustí. Zbytek se trituruje etherem za získání sloučeniny 523 jako bílé pevné látky (5,73 g, 84%): teplota tání 186 až 188 °C (za rozkladu);
[a]D 22 + 65,3° (c 0,25, dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný), 3298, 2978, 1750, 1720, 1682, 1658, 1455, 1423, 1369, 1316,1241, 1212,1160;
‘HNMR (deuterochloroform) δ 6,56 (IH, s), 5,17 (IH, dd), 4,48 (IH, široký d), 3,81 (3H, m),
3,75 (3H, s), 2,83 (IH, dt), 2,40 (IH, m), 2,28 (IH, m), 1,95 (IH, m), 1,67 (IH, m), 1,47 (9H, s).
Analýza pro C15H24N4O6. 1/6 H2O:
vypočteno: C, 50,13; H, 6,82; N, 15,59, nalezeno: C, 50,12; H, 6,71; N, 15,58.
Hmotová spektroskopie (ES+) 357 (M+ - 1, 46%), 301 (100%).
Sloučenina (524) se připraví ze sloučeniny 523 pomocí postupu pro přípravu sloučeniny 518.
Sloučeniny 262a-k se připraví pomocí postupu použitého pro přípravu sloučenin 211 b-f.
-270UZ. zvoi/l DD
262a-k 263a-k
Sloučenina· R
262 a 2 63a SOj
262b 2.63b.
262 c 263 c 9“
262d. 2:63d
262e 263e Oji
262f 263f o UA H
2'62'g 263g Qn ^ΎΥ 0
262h 263h 0. 0 fsří'^rx λατ Η
-271 \-r£j ώ7ΟΙ ! I DU
262i 2 63 i 0
262j 2 6.3 j PhSOj--
262k 263k o
Sloučenina (262a). Získá se 443 mg (91 %) sloučeniny uvedené v názvu: teplota tání 56 až 57 °C;
[a]D 23 + 76° (c 0,15, dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3429, 2979, 1734, 1675, 1418, 1369, 1339, 1323, 1244, 1164,665;
‘HNMR (deuterochloroform) δ 8,45 (IH, s), 8,00-7,59 (7H, m), 4,69-4,65 (IH, m), 4,25-4,12 (IH, m ), 4,103,99 (IH, m), 3,73-3,55 (2H, m), 2,40-2,30 (IH, m), 1,99-1,91 (IH, m), 1,82-1,62 (2H, m), 1,48-1,46 (2H, m), 1,37 (9H, s).
Analýza pro C23H28N4O6S. H2O:
vypočteno: C, 54,53; H, 5,97; N, 11,06, nalezeno: C, 54,60; H, 5,73; N, 10,95.
Hmotová spektroskopie (ES+) 489.
Sloučenina (262c), získá se 120 mg (80 %) bezbarvé pěny:
[ct]D 22 + 22,6° (c 0,1, dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3316, 1732, 1671, 1609, 1551, 1495, 1455, 1432, 1316, 1288,1245,1218,1158,1122,1023;
‘H NMR (deuterochloroform) δ 7,16 (4H, m), 6,79 (IH, m), 6,60 (IH, m), 5,11 (IH, m), 4,59 (IH, m), 3,89 (2H,m), 3,77 (3H, s), 3,72 (2H, m), 2,85 (IH, m).
Sloučenina (262d). (81%) se získá jako bezbarvá pěna:
[a]D 22 + 3,7° (c 0,1, dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3468, 3446, 3269, 1734, 1698, 1667, 1609, 1555,1490, 1461, 1433, 1423, 1296, 1246, 1215, 1173, 1157, 1028, 756;
-272 CL· 4701f1 ΌΌ ’HNMR (deuterochloroform) δ 8,23 (IH, m), 7,95 (IH, s), 6,95 (4H, m), 5,15 (IH, m), 4,60 (IH, m), 3,98-3,65 (4H, m), 3,89 (3H, s), 2,90 (IH, m), 2,48 (IH, m), 2,25 (IH, m), 2,05-1,65 (2H, m), 1,48 (9H, s).
Sloučenina (262e), se získá jako bílá pěnovitá pevná látka (155 mg, 53 %): teplota tání 53 až 57 °C;
[a]D 22 + 57,4° (c 0,1 dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3271, 2978, 1733, 1680, 1437, 1314, 1245, 1156;
‘H NMR (deuterochloroform) δ 7,46 (IH, s), 7,42-7,20 (5H, m), 5,03 (IH, dd), 4,52-4,40 (lH,m), 3,96-3,70 (2H, m), 3,70-3,49 (IH, m), 3,63 (2H, s), 2,92-2,75 (IH, m), 2,43-2,33 (IH, m), 2,33-2,15 (IH, m), 2,00-1,50 (3H, m), 1,45 (9H, s).
Analýza pro C2iH28N4O5. 0,25 H2O:
vypočteno: C, 59,91; H, 6,82; N, 13,13, nalezeno: C,60,19; H, 6,80; N, 13,30.
Hmotová spektroskopie (ES+) 418 (M+ + 2, 25%), 417 (M+ + 1, 100), 362 (9), 361 (45).
Sloučenina 262f), se získájako bílá pevná látka (273 mg, 93 %): teplota tání 102 až 106 °C [a]D 22 + 7,5° (c 0,07, dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3320, 2979, 1731, 1676, 1669, 1601, 1549, 1444, 1314, 1240, 1156;
'HNMR (deuterochloroform) δ 7,37-7,20 (6H, m), 7,08-6,98 (IH, m), 5,12 (IH, dd), 4,64-4,55 (IH, m), 4,02-3,78 (2H, m), 3,75-3,65 (IH, m), 2,94-2,75 (IH, m), 2,57-2,35 (IH,. m),
2,35-2,20 (IH, m), 2,00-1,50 (3H, m), 1,48 (9H, s).
Analýza pro C2oH27N505. 0,4 H2O:
vypočteno: C 56,56; H, 6,60; N, 16,49, nalezeno: C, 56,89; H, 6,58 N, 16,07.
Hmotová spektroskopie (ES+) 419 (M‘ + 2, 24%), 418 (M+ + 1, 100), 363 (15), 362 (81), 242 (10).
Sloučenina (262g), (13 g) se získá jako bílá pevná látka (298 mg, 70 %): teplota tání 138 až 143 °C;
[a]D 23 +69,8° (c 0,1, dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3282, 2978, 1733, 1664, 1536, 1421, 1310, 1156, 748;
'H NMR (deuterochloroform) δ 9,67 (IH, s), 9,53 (lH,s), 7,50 (IH, d), 7,30-7,15 (2H, m),
7,10-7,00 (IH, m), 6,93 (IH, s), 5,16-5,12 (IH, m), 4,60-4,50 (IH, m), 4,05-3,85 (2H, m),
3,85-3,70 (IH, m), 3,05-2,90 (IH, m), 2,55-2,35 (IH, m), 2,35-2,20 (IH, m), 2,00-1,85 (IH, m), 1,85-1,50 (2H, m), 1,47 (9H, s).
Analýza pro C22H27N5O5. 0,45 H2O: vypočteno: C, 58,77; H, 6,26; N, 15,58, nalezeno: C, 59,14; H, 6,24; N, 15,18.
-273 VZJ Λ7Ο1 ! 1 DO
Hmotová spektroskopie (ES+) 433 (M+ + 2, 26%), 442 (NT + 1, 100), 387 (17), 386 (79), 285 (20),229(85),211 (26), 185 (15), 183 (57), 139 (9).
Sloučenina (262h), se získá jako bílá pevná látka (325 mg, 73 %): teplota tání 209 až 212 °C;
[a]D 24 +62,4° (c 0,2, dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3513, 3269, 2980, 1731, 16BO, 1653, 1599, 1531, 1314, 1158;
*H NMR (deuterochloroform) δ 9,40 (1H, s), 8,75 (IH, s), 7,72 (2H, d), 7,47 (2H, d), 5,15-5,05 (IH, m), 4,55-4,45 (IH, m), 4,05-3,70 (3H, m), 3,00-2,80 (IH, m), 2,45-2,35 (IH, m), 2,30-2,15 (1H, m), 2,10 (3H, s), 2,00-1,80 (IH, m), 1,80-1,50 (2H, m), 1,48 (9H, s).
Analýza pro C22H29N5O6:
vypočteno: C, 57,51; H, 6,36; N, 15,24, nalezeno: C, 57,41; H, 6,38; N, 15,12,
Hmotová spektroskopie (ES+) 461 (M+ + 2, 269), 460 (M+ + 1, 100), 405 (12), 404 (55), 354 (7), 285 (23),229(52), 183 (22).
Sloučenina (262i) se získá jako bílá sklovitá pevná látka (76 %) teplota tání 85 až 89 °C;
[cc]D 25 + 66,4 (c 0,11, dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 1732, 1666, 1607, 1502, 1440, 1312, 1295, 1258, 1176, 1157, 1025;
]H NMR (deuterochloroform) δ 8,25 (IH, s), 7,77 (2H, m), 6,90 (2H, m), 5,11-5,07 (IH, m),
4,55-4,48 (IH, m), 4,01-3,91 (2H, m), 3,86-3,78 (IH, m), 3,85 (3H, s), 2,98 (IH, m), 2,46-2,40 (IH, m), 2,26-2,20 (IH, m), 2,051,80 (lH,m), 1,70-1,64 (2H, m), 1,48 (9H, s).
Sloučenina (262j), se získá jako bílá krystalická pevná látka (79%): teplota tání 182 až 183 °C (za rozkladu);
[a]D 22 + 92,1° (c 0,4, dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3283, 1732, 1684, 1448,1430, 1404,1369,1338, 1306, 1285, 1242, 1169, 1091,692;
'H NMR (deuterochloroform) δ 7,89 (2H, d, J = 7,4), 7,76 (IH, s), 7,64-7,49 (3H, m), 4,83 (IH, m), 4,35 (IH, široký d, J = 13,0), 4,00 (IH,m ), 3,74-3,63 (2H, m), 2,39-2,26 (2H, m), 2,06 (IH, m), 1,50-1,41 (1 OH, m).
Analýza pro C19H26SN4O6.' vypočteno: C, 52,04; H, 5,98 N, 12,78, nalezeno; C, 52,11; H, 5,95; N, 12,71.
Hmotová spektroskopie (ES+) 437 (M+ - 1, 100%).
Získá se sloučenina (262k), (83 %):
[a]D 22 + 42,3° (c 0,11, dichlormethan);
-274CL· ZVO1/I DO
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3287, 2997, 2935, 1735, 1681, 1606, 1501, 1296, 1248, 1173, 1155.
'HNMR (deuterochloroform) δ 9,23 (IH, s), 7,73 (2H, d), 7,38 (SH, m), 6,85 (2H, d), 5,08 (IH, m), 5,02 (2H, s), 4,48 (IH, bd), 4,15-3,65 (3H, m), 2,96 (IH, m), 2,45-2,10 (2H, m), 1,88 (IH, m), 1,63 (2H, m), 1,48 (9H, s).
Hmotová spektroskopie (ES+) 509 (M++I).
Sloučenina 263a-k se připraví pomocí způsobů použitých pro přípravu sloučenin 212b-f.
Sloučenina (263a), 348 mg (94 %) se získá jako bílá pěnovitá pevná látka.
[a]D 21 + 17 lů (c, 0,056, dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3426, 3233, 2953, 1734, 1663, 1481, 1415, 1340, 1214, 1167,1132, 1075,668;
lH NMR (deuterochloroform) δ 8,44 (IH, s), 8,00-7,60 (7H, m), 4,85-1,83 (IH, m), 4,25-4,00 (IH, m), 4,07-3,90 (IH, m), 3,70-3,46 (2H, m), 2,38-2,30 (IH, m), 2,12-2,01 (IH, m),
1,91-1,83 (IH, m), 1,46-1,26 (IH, m), 1,13-1,06 (IH, m), 0,90-0,77 (1H, m).
Hmotová spektroskopie (ES+) 431.
Sloučenina (263b). Získá se 200 mg (100 %) bílé pevné látky: teplota tání 155 °C;
[a]D 20 + 13ů (c 0,07, dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3431, 2935, 1734, 1663, 1531, 1435, 1292, 1177;
'HNMR (deuterochloroform) δ 9,73 (IH, široký s), 7,73-7,27 (5H, m), 5,35-5,25 (IH, m),
4,56-4,48 (IH, m), 4,05-3,65 (3H, m), 3,12-3,00 (IH, m), 2,50-2,45 (IH, m), 2,30-2,20 (IH, m), 2,10-2,00 (IH, m), 1,75-1,61 (2H, m).
Hmotová spektroskopie (ES+) 401.
Sloučenina (263c), získá se 216 mg, (100 %) bezbarvé pěny:
[<x]D 23 32,5° (c 0,1, dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný), 3326, 1730, 1661, 1610, 1555, 1495, 1431, 1314, 1288, 1217, 1175, 1161;
'H NMR (deuterochloroform) δ 7,87 (IH, s), 7,58 (IH, s), 7,19 (2H, m), 6,82 (IH, m), 6,62 (IH, m), 5,21 (lH,m), 4,55 (IH, m), 3,76 (3H, s), 4,0-3,65 (4H, m), 2,85 (IH, m), 2,35 (2H, m),
1,75 (IH, m), 1,71 (2H, m).
Sloučenina (263d), (100%) se získá jako bezbarvá pěna:
[a]D 24 +11,7° (c 0,1, dichlormethan);
-275 (JZ ZTOI71 tít)
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3394, 3325, 1666, 1600, 1543, 1490, 1463, 1438, 1329, 1311, 1292, 1249, 1214, 1176, 1119, 1024, 752;
‘H NMR (deuterochloroform) δ 8,15 (1 H, m), 7,97 (2H, m), 7,15-6,84 (3H, m), 5,29 (IH, m), 4,62 (IH, m), 4,04-3,65 (4H, m), 3,89 (3H, s), 2,92 (IH, m), 2,50 (IH, m), 2,30 (IH, m),
2,10-1,75 (2H, m).
Sloučenina (263e), se získá jako bílá pěnovitá pevná látka (117 mg, 98 %): teplota tání 109 až 114°C;
[a]D 24 + 82,6° (c 0,06, dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný), 3700-2250 (široký), 3437, 3274, 2959, 1733, 1664, 1481, 1437, 1310, 1177;
'HNMR (deuterochloroform) δ 7,99 (IH, s), 7,40-7,15 (5H, m), 5,15-5,10 (IH, m), 5,25-4,70 (IH, široký s), 4,50-4,35 (IH, m), 3,95-3,50 (3H, m), 3,61 (2H, s), 2,93-2,78 (IH, m), 2,40-2,20 (2H, m), 2,10-1,80 (IH, m), 1,80-1,60 (2H, m).
Analýza pro Ct7H2oN405. 1 H2O:
vypočteno: C 53,96; H, 5,86; N, 14,81, nalezeno: C, 54,12; H, 5,50; N, 14,68.
Hmotová spektroskopie (ES+) 360 (M+, 21%), 359 (M+- 1, 100), 196 (14), 182 (14), 111 (7):
Sloučenina (263f), se získá jako bílá pěnovitá pevná látka (199 mg, 92 %): teplota tání 149 až 152 °C;
[a]D 24 + 92,0° (c 0,01, methanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3700-2300 (široký), 3319, 2956, 1726, 1664, 1600, 1548, 1500, 1444, 1313, 1238, 755;
’H NMR (perdeuterodimethylsulfoxid) δ 8,90 (IH, s), 8,24 (IH, s), 7,42 (2H, d), 7,30-7,20 (2H, m), 7,00-6,90 (IH, m), 4,98-4,92 (lH,m), 4,32^1,22 (1H, m), 3,80-3,55 (3H, m), 2,85-2,70 (IH, m), 2,30-2,20 (lH,m), 2,20-2,00 (IH, m), 1,90-1,35 (3H, m).
Analýza pro Ci6H19N5O5. 0,75 H2O:
vypočteno: C, 51,26; H, 5,51;N, 18,68, nalezeno: C, 51,11; H, 5,23; N, 18,42.
Hmotová spektroskopie (ES+) 361 (M+, 20%), 360 (M+ - 1, 100), 241 (11), 240 (89), 196 (15), 175 (29), 111 (12).
Sloučenina (263 g), se získá jako bílá pevná látka (259 mg, 92 %) teplota tání 248 až 251 °C;
[oc]d24 + 94,0° (c 0,01, methanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 37002300 (široký) 3341, 2956, 1738, 1668, 1651, 1529, 1425, 1311, 1259,751;
'HNMR(perdeuterodimethylsulfoxid) δ 13,29 (IH, široký s), 11,71 (IH, s), 10,64 (IH, s), 7,65 (IH, d), 7,45 (IH, d), 7,26-7,15 (IH, m), 7,17 (IH, s), 7,10-7,00 (IH, m), 5,05-4,95 (IH, m),
-276CZ Z9M7I BÓ
4,40-4,25 (IH, m), 3,90-3,50 (3H, m), 2,88-2,75 (IH, m), 2,38-2,20 (IH, m), 2,20-2,00 (IH, m), 1,90-1,35 (3 H).
Analýza pro C18Hi9N5O5. 0,5 H2O:
vypočteno: C 53,59; H, 5,25; N, 17,35, nalezeno: C, 53,66; H, 4,88; N, 17,11.
Hmotová spektroskopie (ES+) 385 (M+, 23%), 384 (M+ - 1, 100), 298 (6), 253 (8), 227 (10), 199 (23), 196(10), 173 (9), 126(21).
Sloučenina (263h), se získá jako bílá pevná látka (282 mg, 99 %): teplota tání 210 až 215 °C;
[oc]D 24 + 74,5° (c 0,01 methanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 37002300 (široký) 3444, 3316, 2960, 1664, 1599, 1531, 1439, 1301, 1184;
]HNMR (perdeuterodimethylsulfoxid) δ 13,30 (IH, široký s), 10,50 (IH, s), 10,25 (IH, s), 7,80 (2H, d), 7,68 (2H, d), 5,00-4,90 (IH, m), 4,35^1,25 (IH, m), 3,90-3,40 (3H, m), 2,88-2,70 (IH, m), 2,35-2,25 (IH, m), 2,25-1,95 (IH, m), 2,08 (3H, s), 1,95-1,35 (3H, m).
Hmotová spektroskopie (ES+) 403 (M+, 10%), 402 (M+ - 1, 100), 358 (10), 247 (10), 227 (16), 219(51), 198(12), 184(17).
Sloučenina (263i) se získá jako bílá sklovitá pevná látka (přibližně 100 %, která se použije bez čištění:
]H NMR (deuterochloroform) δ 9,23 (IH, s), 7,72 (2H, d, J = 8,8), 6,81 (2H, d, J = 8,9), 5,22 (IH, m), 4,51 (IH, m), 3,97-3,72 (2H, m), 3,81 (3H, m), 3,03 (IH, m), 2,51-2,46 (IH, m),
2,31-2,25 (IH, m), 2,03 (IH, m), 1,72 (2H, m).
Sloučenina (263j) se získá jako bílá pevná látka (100 %): teplota tání 73 až 83 °C (za rozkladu);
[a]D 22 + 104,7° (c 0,3, dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3600-2500 (br), 3208, 1734, 1666, 1481, 1448, 1416, 1338, 1311, 1214, 1171, 1091,729, 689;
'H NMR (deuterochloroform) δ 7,87 (3H, m), 7,70-7,50 (3H, m), 7,16 (IH, široký s), 4,99 (IH, m), 4,37 (IH, široký d, J = 12,8), 3,92 (1H, m), 3,67 (2H, m), 2,36 (2H, m), 2,13 (IH, široký d,J= 12,2), 1,56 (3H,m).
Analýza pro C15H18SN4O6.0,25 CF3CO2H:
vypočteno: C 45,31; H, 4,48 N, 13,64, nalezeno: C, 45,48; H, 4,71; N, 13,43.
Hmotová spektroskopie (ES+) 383 (MH+, 100%), přesná hmotnost vypočtena pro C^H^SNA (MH*): 383,1025, nalezeno: 383,1007.
Sloučenina (263k), získá se 100 %: teplota tání 130 až 142 °C;
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3272,2945, 1738,1650, 1611, 1501, 1445, 1309, 1255, 1171;
-277cz zvai/i dd lH NMR (deuterochloroform) δ 9,35 (IH, s), 7,74 (2H, d), 7,38 (5H, m), 6,85 (2H, d), 5,40 (IH, široký s), 5,19 (IH, s), 5,02 (2H, s), 4,49 (1H, d), 3,92 (2H, m), 3,68 (IH, m), 2,99 (IH, široký s),
2,43 (IH, široký s), 1,99 (IH, široký s), 1,68 (2H, široký s).
5251
2631
Sloučenina (5251) se získá pomocí způsobu použitého pro přípravu sloučeniny 211 za získání bílé krystalické pevné látky (3,35 g, 83 %): teplota tání: 214 až 215 °C;
[a]D 20 75,2° (c, 0,1, dichlormethan);
Infračervené spektrům (bromid draselný), 3272, 2955, 1747, 1664, 1610, 1485, 1443, 1265, 1040;
'HNMR (deuterochloroform) δ 8,66 (1H, s), 7,32 (IH, dd), 7,23 (IH, d), 6,76 (IH, d), 6,02 (2H, s), 5,20 (IH, dd), 4,55—4,45 (IH, m), 4,03-3,70 (3H, m), 3,78 (3H, s), 3,05-2,88 (IH, m), 2,47-2,35 (IH, m), 2,35-2,20 (IH, m), 2,10-1,90 (IH, m), 1,85-1,50 (2H, m).
Analýza pro Ci8H2oN407. 0,5 H2O:
vypočteno: C, 52,87; H, 5,06; N, 13,70, nalezeno: C, 52,84; H, 5,00; N, 13,66.
Hmotová spektroskopie (ES+) 406 (M+ + 2, 20%), 405 (M+ + 1, 100), 391 (10), 162 (6), 148.(3), 105 (2).
Sloučenina (2631). Suspenze sloučeniny 5251 (3,32g, 8,2 mmol) v tetrahydrofuranu (60 ml) se reaguje s roztokem LiOH-H2O (0,69 g, 16,4 mmol, 2,0 ekvivalentu) ve vodě (20 ml). Vzniklá směs se míchá 1 hodinu, zahustí a zbytek se rozpustí ve vodě (50 ml). Roztok se okyselí za použití 2M roztoku hydrogens Íránu sodného a produkt sé extrahuje ethylacetátem (100 ml a 50 ml podíly). Spojené extrakty se promyjí solankou (2x50 ml), vysuší nad síranem hořečnatým a zahustí za získání sloučeniny 2631 jako bílé krystalické pevné látky (2,87 g, 90 %): teplota tání 154 až 158 °C;
[a]D 20 + 85,6° (c 0,01, methanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3700-2300 (široký), 3248, 2942, 1733, 1681, 1658, 1648,1536,1486, 1400, 1297, 1255,1037;
'HNMR (perdeuterodimethylsulfoxid) δ 13,23 (IH, široký s), 10,45 (IH, s), 7,45 (IH, d), 7,35 (IH, s), 7,03 (IH, d), 6,12 (2H, s), 5,00-4,93 (IH, m), 4,35-4,25 (IH, m), 3,90-3,40 (3H, m),
2,95-2,70 (IH, m), 2,40-2,25 (IH, m), 2,15-2,00 (IH, m), 1,91-1,40 (3H, m).
Analýza pro C|7Hl8N4O7. 0,8 H2O:
vypočteno: C, 50,45; H, 4,88; N, 13,84, nalezeno: C, 50,80; H, 4,95; N, 13,36.
-278CZ 298171 B6
Hmotová spektroskopie (ES+) 390 (M4, 19%), 389 (Μ4 - 1, 100), 345 (9), 204 (31), 182 (27), 111(12).
264a, αΊ
265a, c, d, f
1015·., 1018, 1027,
1052,. 1056, 1075, 1095
Sloučenina R1
264a r<iíST!^rV|l!
265a
264c H.
265c
OMe
264d H
265d
264é
1095 kAA
-279CZ 298I7I B6
264f 265f α.Α Η
264g 1075
264h 1018 0 ,αΑΙ Η
2'641 1052 Ο
264j 1027 .1. CT
264k 1056 ό
,2641 Ϊ.0Ϊ5
Sloučenina (264a) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 213a za získání bílé pevné látky (240 mg, 82 %):
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3380, 3066, 2947, 1789, 1750, 1691, 1454, 1417, 1368, 1298, 1262,1235,1193, 1118, 756, 696;
*H NMR (perdeuterodimethylsulfoxid) 6 8,59 (1H, d, J = 6,8), 8,48 (1H, s), 8,25-8,09 (3H, m),
8,85-7,75 (3H, m), 7,36 (5H, m), 5,39 (IH, m), 4,21 (2H, AB, J = 14,2), 4,53^1,49 (1H, m),
4,25-4,10 (2H, m), 3,65-3,44 (3H, m), 3,13-2,99 (1H, m), 2,43-2,16 (1H, m), 1,72-0,72 (7H, m).
-280CZ 298171 B6
Analýza pro C3oH3IN5OgC:
vypočteno: C, 57,96; H, 5,03; N, 11,27, nalezeno: C, 57,28; H, 5,14; N, 10,48.
Hmotová spektroskopie (ES+) 622.
Sloučenina (264c) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 213e, (55 %) ve formě bezbarvé pěny: teplota tání 135 až 140 °C;
[a]D 22 + 51,6° (c 0,1, dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný), 3314, 1790, 1664, 1608, 1543, 1496, 1455, 1428, 1325, 1287, 1250, 1218, 1160, 1118;
’H NMR (deuterochloroform) δ 8,00 (IH, d, J = 7,1), 7,66 (IH, s), 7,55 (IH, s), 7,28 (5H, m),
7,14 (2H, m), 6,87 (IH, d, J = 7,4), 6,59 (IH, m), 5,42 (IH, s), 4,66 (5H, m), 3,90-3,65 (4H, m),
3,73 (3H, s), 2,98 (2H, m), 2,38 (2H, m), 2,01-1,65 (3H, m).
Sloučenina (264d) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 213e, (72 %) ve formě bezbarvé pěny:
[a]D 22 + 21,4° (c 0,1, dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3302, 1791, 1689, 1678, 1664, 1602, 1536, 1489, 1461, 1437, 1420, 1249, 1119, 1023,942, 751;
'H NMR (deuterochloroform) δ 8,07 (IH, d, J = 7,7), 7,82 (IH, s), 7,68 (IH, d, J = 6,7), 7,49 (IH, s), 7,34 (5H, m), 6,96 (3H, m), 5,47 (IH, s), 4,82 (2H, d + m, J = 11,5), 4,63 (IH, d, J = 11,5), 4,49 (2H, m), 3,85 (4H, s + m), 3,68 (2H, m), 3,01 (2H m), 2,46 (2H, m), 1,95 (3H;' m), 1,57 (IH, m).
Sloučenina (264e) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 213e za získání směsi diastereomerů (poměr izomeru symanti 9:1) jako sklovité pevné látky (128 mg, 78 %): teplota tání 103 až 108 °C;
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3419, 3302, 1793, 1664, 1535, 1421, 1327, 1256, 1123,973;
'H NMR (perdeuterodimethylsulfoxid) δ 10,20 (0,9H, s), 9,35 (0,lH, s), 8,74 (0,lH, d), 8,49 (0,9H, d), 7,36-7,15 (10H, m), 5,67 (0,9H, d), 5,44 (0,lH, s), 4,85—4,75 (lH,m), 4,74—4,60 (lH,m ), 4,77 a 4,63 (2H, dd), 4,30-4,10 (IH, m), 3,80-3,40 (3H, m), 3,43 (2H, s), 3,10-2,40 (3H, m), 2,25-2,15 (IH, m), 2,00-1,35 (4H, m).
Analýza pro C2sH3tN5O7. 0,5 H2O:
vypočteno: C, 60,21; H, 5,77; N, 12,53, nalezeno: C, 60,38; H, 5,83; N, 12,13.
Hmotová spektroskopie (ES+) 551 (M+ + 2, 33%), 550 (M+ + 1, 100), 480 (7), 343 (8), 279 (4).
Sloučenina (264f) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 213a za získání čistého syn-izomeru jako bílé pěnovité pevné látky (225 mg, 82 %): teplota tání 130 až 135 °C;
[ol]d24 + 10,81° (C 0,1, dichlormethan);
-281 CZ 298171 B6
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3316, 1791, 1688, 1676,1664, 1601, 1536,1445, 1314, 1242, 973;
*HNMR (perdeuterodimethylsulfoxid) δ 8,84 (IH, s), 8,49 (IH, d), 8,19 (IH, s), 7,45-7,18 (9H, m), 7,00-6,90 (IH, m), 5,68 (IH, d), 4,90-4,81 (IH, m), 4,75-4,60 (IH, m), 4,78 a 4,63 (2H,dd), 4,30-4,20 (IH, m), 3,75-3,55 (3H, m), 2,85-2,55 (3H, m), 2,25-2,15 (IH, m), 2,00-1,35 (4H, m).
Analýza pro C27H30N6O7.0,5 H2O:
vypočteno: C, 57,95; H, 5,58; N, 15,02, nalezeno: C, 58,12; H, 5,64; N, 14,81.
Hmotová spektroskopie (ES+) 552 (M+ + 2, 30%), 551 (M+ + 1, 100), 362 (19), 299 (10), 279 (4).
Sloučenina (264 g) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 223e za získání čistého anti-izomeru jako bílé pevné látky (284 mg, 80 %): teplota tání 148 až 153 °C;
[ffl]D 24 + 72,0 °C (c, 0,1, dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3404, 3295, 1789, 1660, 1536, 1421, 1310, 1260, 1122, 749;
HNMR (perdeuterodimethylsulfoxid) δ 11,72 (IH, s), 10,58 (IH, s), 8,73 (IH, d), 7,65 (IH, d),
7,58-7,27 (6H, m), 7,27-7,10 (IH, m), 7,17 (IH, s), 7,10-7,00 (1H, m), 5,46 (IH, s), 4,90-4,85 (IH, m), 4,77 a 4,68 (2H, dd), 4,35-4,25 (2H, m), 3,95-3,55 (3H, m), 3,09 (IH, dd), 2,95-2,80 (IH, m), 2,47-2,25 (2H, m), 2,10-1,35 (4H, m).
Hmotová spektroskopie (ES+) 574 (M+, 35%), 573 (M+ - 1, 100), 384 (16), 383 (69), 341 (23), 327(12), 267(13), 200 (22).
Sloučenina (264h) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 213e za získání směsi diastereomerů (poměr izomeru syn:anti 9:1) jako bílé pevné látky (276 mg, 70 %): teplota tání 147 až 152 °C;
Infračervené spektrum (bromid draselný) 344, 3304, 1793, 1665, 1620, 1531, 1505, 1423, 1294, 1264,1181,1123,966;
lH NMR (perdeuterodimethylsulfoxid) δ 10,41 (IH, s), 10,22 (IH, s), 8,71 (0,lH, d), 8,48 (0,9H, d), 7,78 (2H, d), 7,67 (2H, d), 7,35-7,30 (5H, m), 5,68 (0,9H, d), 5,45 (0,1 H, s), 4,88-4,80 (IH, m), 4,75-4,60 (IH, m), 4,77 a 4,63 (2H, dd), 4,30-4,20 (IH, m), 3,90-3,50 (3H, m),
3,10-2,50 (3H, m), 2,35-2,20 (1H, m), 2,%7 (3H, s), 2,05-1,35 (4H, m).
Analýza pro C29H32N6Og. 1 H2O:
vypočtené: C, 57,04; H, 5,61; N, 13,76, nalezeno: C, 56,79; H, 5,50; N, 13,53.
Hmotová spektroskopie (ES+) 594 (M+ + 2, 34%) 593 (M* + 1, 100), 387 (8), 386 (38), 358 (8), 162(19).
Sloučenina (264i) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 213e za získání bílé pevné látky (70 %): teplota tání 116 až 118 °C;
Infračervené spektrum (bromid draselný) 315, 2951,1793, 1664,1607, 1502, 1258, 1177;
-282CZ 298171 B6 lH NMR (deuterochloroform) δ 8,07 (1H, s), 7,77 (2H, d, J = 8,6), 7,35 (5H, m), 6,94 (2H, d, J = 8,5), 6,74 (IH), 4,89 (IH, d, J = 11,1), 4,74 (IH, m), 4,60 (IH, d, J = 11,0), 4,48, 4,41 (IH, 2m), 3,86 (3H, s), 3,79, 3,71-3,53 (3H, 2m), 2,87 (2H, m), 2,44 (IH, m), 2,18, 1,91, 1,68 (5H, 3m).
Sloučenina (264j) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 213e za získání pěny (88 %):
[a]D 24 + 74,2° (c 0,36, dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3332, 3235, 1793, 1664, 1537, 1448, 1416, 1337, 1169, 118,1092,940, 690;
'H NMR (deuterochloroform) δ 7,99 (1H, s), 7,88 (2H, d, J = 6,8), 7,64-7,48 (3H, m), 7,34 (5H, s), 7,13 (IH, d, J = 6,9), 5,39 (1Ή, s), 4,81 (2H, m), 4,62 (IH, d, J = 11,5), 4,48 (IH, m), 4,33 (IH, m), 3,85 (IH, m), 3,59 (2H, m), 3,03 (IH, dd, J = 7,6, 18,2), 2,49-2,28 (3H, m), 1,9^1,40 (4H m).
Analýza pro C^H^SNsOs:
vypočteno: C, 54,63; H, 5,11 N, 12,25, nalezeno: C, 54,42; H, 5,28; N, 11,62.
Hmotová spektroskopie (ES+) 572 (MH*. 100%), přesná hmotnost vypočtena pro C26H30SN5O8 (MH+) 572,1815, nalezeno: 572,1802.
Sloučenina (264k) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 213e (96 %):
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3294, 2946, 1793, 1658, 1606, 1535, 1501, 1248, 1174, 1119.
Ή NMR (deuterochloroform) δ 8,91 (IH, s), 7,85 (3H, m), 7,4 (10H, m), 7,02 (2H, d), 5,35 (IH, s), 5,10 (2H, s), 4,8^1,3 (5H, m), 4,00 (IH, široký s), 3,78 (2H, m), 2,90 (2H, m), 2,5-1,5 (6H, m).
Sloučenina (2641) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 213 e za získání směsi diastereomerů (poměr izomerů syn: anti l:l)jako bílé pevné látky (1,72 g, 71 %): teplota tání 148 až 160 °C;
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3314, 1780, 1677, 1658, 1651, 1550, 1485, 1439, 1258/ 1132,1038,943;
'H NMR (perdeuterodimethylsulfoxid) δ 10,39 (IH, s), 8,71 (0,5H, d), 8,49 (0,5H, d), 7,44 (IH, d), 7,42-7,30 (6H, m), 7,03 (IH, d), 6,12 (2H, s), 5,68 (0,5H, d), 5,45 (0,5H, s), 4,90^,82 (IH, m), 4,82-4,58 (2,5H, m), 4,40-4,10 (1,5H, m), 3,90-3,65 (2H, m), 3,65-3,43 (IH, m), 3,09 (0,5H, dd), 2,90-2,55 (1,5H, m), 2,45-2,10 (2H, m), 2,10-1,35 (4H, m).
Analýza pro C28H29N5O9.0,2 H2O:
vypočteno: C, 57,67; H, 5,08; N, 12,01, nalezeno: C 58,01; H, 5,33; N, 11,51.
Hmotová spektroskopie (ES+) 581 (M+ + 2, 33%), 580 (M+, 100), 374 (9), 373 (48), 345 (12), 261 (4), 239 (7), 149 (9).
Sloučenina (265a) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 265 za získání bílé pevné látky (37 mg, 17 %): teplota tání: 126 až 130 °C (za rozkladu);
-283 CZ 298171 B6 [a]D 20 + 30° (c, 0,05, methanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3371,2935, 1785, 1663, 1538, 1418, 1339, 1164, 669;
*H NMR (perdeuteromethanol) δ 8,44 (ÍH, s), 8,06-7,50 (7H, m), 7,22 (IH, d, J = 8,4, 4,58-4,57 (IH, m), 4,46-4,42 (IH, m), 4,16-4,09 (2H, m), 3,85-3,50 (3H, m), 2,842,78 (lH,m ), 2,64-2,51 (IH, m), 2,44-2,15 (2H,m), 1,81-0,89 (4H, m).
Analýza pro C23H25N5O8S. H2O:
vypočteno: C, 50,27; H, 4,95; N, 12,74, nalezeno: C, 50,33; H, 5,04; N, 12,60.
Hmotová spektroskopie (ES+) 530.
Sloučenina (265c) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 265, (90 %) jako bezbarvá pevná látka: teplota tání přibližně 150 °C (za rozkladu);
[a]D 23 + 94,8° (c 0,1,20 % methanol/dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3330,1780, 1660, 1610, 1550, 1495,1428, 1326, 1287, 1251, 1223, 1160;
lH NMR (perdeuteromethanol) δ 7,16 (2H, m), 6,89 (IH, d, J 7,8), 4,58 (IH, m), 4,37 (2H, m),
3,76 (6H, s + m); 2,95 (IH, m), 2,67 (IH, m), 2,33 (IH, m), 2,20-1,85 (3H, m), 1,66 (IH, m)-.
Sloučenina (265d) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 265 (85 %) ve formě bezbarvé pevné látky: teplota tání 176 až 185 °C;
[a]D 23 + 11,0° (c 0,1, methanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3392, 3328, 1784w, 1665, 1603, 1537, 1490, 1462, 1437, 1337,1290, 1290, 1217,1177,1119,1023;
lH NMR (perdeuteromethanol) δ 8,02 (2H, m), 6,95 (4H, m), 5,05 (IH, m), 4,60 (2H, m), 3,92 (4H, s + m), 3,00 (2H, m), 2,68 (IH, m), 2,39 (IH, m), 2,00 (4H, m), 1,69 (IH, m).
Sloučenina (1095) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 265 za získání bílé pevné látky (84 mg, 90 %): teplota tání 180 až 186 °C;
[cc]D 22 + 22,3° (c 0,065, methanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3700-2300 (široký), 3287, 1664, 1536, 1425, 1261, 1181;
*H NMR (perdeuteromethanol) δ 7,35-7,20 (5H, m), 5,00-4,90 (IH, m), 4,60-4,50 (IH, m),
4,50-4,10 (2H, m), 3,90-3,50 (3H, m), 3,54 (2H, s), 3,00-2,80 (IH, m), 2,80-2,40 (2H, m),
2,35-2,20 (IH, m), 2,20-1,50 (4H, m).
Hmotová spektroskopie (ES+) 459 (M+ 24%), 458 (M+ 1, 100), 358 (27), 175 (9), 149 (7), 137 (12), přesná hmotnost vypočtena pro C21H26N5O7 (MH+): 460, 1832, nalezeno: 460,1840.
Sloučenina (265f) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 265 za získání bílé pěno vité pevné látky (130 mg, 88 %): teplota tání 157 až 162 °C;
-284CZ 298171 B6 [a]D 24 + 41,7 (c 0,1, methanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3700-2300 (široký), 3325, 1782, 1663, 1547, 1443, 1315, 1242, 1181;
lH NMR (perdeuteromethanol) δ 7,40 (2H, dd), 7,35-7,20 (2H, m), 7,06-6,95 (IH, m), 5,05—4,95 (IH, m), 4,64-4,54 (IH, m), 4,50-4,35 (IH, m), 4,35-4,15 (IH, m), 3,90-3,69 (3H, m), 3,00-2,85 (IH, m), 2,80-2,45 (3H, m), 3,40-1,50 (4H, m).
Hmotová spektroskopie (ES+) 460 (M+, 24%), 459 (M+ - 1, 100), 341 (9), 340 (54), 296 (6), 239 (9).
Sloučenina (1075) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 265 za získání bílé pevné látky (184 mg, 83 %): teplota tání 210 až 215 °C;
[a]D 24 + 43,9° (c 0,1, methanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3700-2300 (široký), 3309, 1660, 1537, 1423, 1311, 1262,1184;
]H NMR (perdeuteromethanol) δ 7,61 (IH, d), 7,45 (IH, d), 7,28-7,15 (IH, m), 7,15-7,00 (lH,m), 7,13 (IH, s), 5,12^1,96 (IH, m), 4,62—4,55 (IH, m), 4,50-4,25 (2H, m), 4,00-3,69 (3H, m), 3,05-2,90 (IH, m), 2,80-2,30 (3H, m), 2,25-1,50 (4H, m).
Hmotová spektroskopie (ES+) 484 (Mj 26%), 483 (M+ - 1, 100), 383 (25), 245 (12), 208 (11), 200 (21), 174(31), 137(18).
Sloučenina (1018) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 265 za získání bílé pevné látky (177 mg, 82 %): teplota tání 235 až 240 °C;
[a]D 23 + 27,3° (c 0,1, methanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3700-2300 (široký), 3311, 2957, 1662, 1599, 1531, 1328, 1266, 1182;
'HNMR (perdeuteromethanol) δ 7,83 (2H, d), 7,69 (2H, d), 5,10-4,95 (IH, m), 4,64-4,55 (IH, m), 4,50-4,35 (IH, m), 4,32^1,22 (IH, m ), 4,00-3,65 (3H, m), 3,05-2,90 (IH, m), 2,80-2,30 (3H, m),'2,15 (3H, s), 2,15-1,50 (4H, m)í
Analýza pro C22H2óN6O8. 1,5 H2O:
vypočteno: C, 49,90; H, 5,52; N, 15,87, nalezeno: C, 50,21; H, 5,41; N, 15,49.
Hmotová spektroskopie (ES+) 502 (M+, 28%), 501 (M+ - 1, 100), 401 (8), 218 (4), 119 (2), 118(5), 113(16).
Sloučenina (1052) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 265 za získání bílé pevné látky (0,194 g, 100%): teplota tání 138 až 142 °C;
[α]ο20 + 36,3° (c 0,19, methanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3434-2962, 1782, 1660, 1607, 1537, 1504, 1441, 14234, 1313, 1293, 1238, 1177;
-285 CZ 298171 B6 'Η NMR (perdeuteromethanol) δ 7,11 (2H, d, J = 8,8), 6,90 (2H, d, J = 8,9), 4,48 (IH, m), 4,34,
4,28 (IH, 2m), 4,15 (IH, m), 3,75 (3H, s), 3,75, 3,70 (3H, m), 2,88, 2,49, 2,28, 2,23, (2,00, 1,86, 1,79, 1,58 (8H, m).
Sloučenina (1027) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 265 za získání bílé pěny (88 %):
[a]D 24 + 22,6° (c 0,17, methanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3349, 1789, 1663, 1537, 1448, 1337,1169, 1092, 690;
lH NMR (perdeuteromethanol) δ 7,82 (2H, md, J 7,8), 7,57 (3H, m), 4,74 (IH, m), 4,47 (IH, m), 4,24—4,10 (2H, m), 3,72-3,47 (4H, m), 2,62-2,48 (3H, m), 2,20 (IH, m), 1,94-1,35 (3H, m).
Hmotová spektroskopie (ES+) 480 (M+ - 1, 100%), přesná hmotnost vypočtena pro C19H24SN5O8 (MH4) 482,1346, nalezeno 482,1325.
Sloučenina (1056) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 265 (95 %): teplota tání > 300 °C;
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3392, 1660, 1610, 1507, 1442, 12980, 1171, 1149, 1133.
‘HNMR (perdeuteromethanol) δ 7,74 (2HJ, d J 8,7), 6,84 (2H, d J = 8,7), 4,58 (IH, m),4,41 (IH, bd, J = 12,6), 4,28 (IH, m), 3,85 (3H, m), 2,98 (IH, m), 2,8-2,3 (3H, m), 2,3-1,6 (4H, m).
Sloučenina (1015) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 265 za získání bílé pevné látky (142 mg, 58 %): teplota tání 170 až 175 °C;
[a]D 25 + 32,7° (c 0,1, methanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3700-2500 (široký), 3325, 2969, 1784, 1662, V485, 1440,1292,1258,1037;
‘H NMR (perdeuteromethanol) δ 7,45 (IH, dd), 7,32 (IH, d), 6,90 (IH, d), 6,05 (2H, s),
5,10—4,90 (IH, ni), 4,62-4,54 (IH, m), 4,45-4,35 (IH, m), 4,33—4,22 (IH, m), 3,95-3,65 (3H, m), 3,05-2,90 (IH, m), 2,80-2,30 (3H, m), 2,20-1,50 (4H, m).
O
526
Sloučenina (526) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 502 za získání sklovité pevné látky:
Md20 + 34° (c 0,13, dichlormethan);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3437, 2929, 1670, 1530, 1428, 1288, 1156;
-286CZ 298171 B6 'HNMR (deuterochloroform) δ 10,0 (IH, široký s), 9,74 (IH, široký s), 7,93 (IH, s), 7,80-7,60 (2H, m), 7,40-7,18 (3H, m), 6,15-5,30 (2H, široký s), 5,0(M,85 (2H, m), 4,50-4,25 (IH, m),
3,95-3,75 (3H, m), 3,12-2,78 (2H, m), 2,73-1,60 (7H, m), 1,36 (9H, s).
Analýza pro C27H34N8O7S:
vypočteno: C, 52,76; H, 5,58; N, 18,23, nalezeno: C, 52,25; H, 5,74; N, 16,30.
Hmotová spektroskopie (ES+) 615.
Sloučenina (1053) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 214 za získání bílé pevné látky (106 mg, 73 %):
[α]υ 20 + 22° (c 0,10, methanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3428, 2944,1733, 1652, 1532, 1433,1337,1288, 1186;
'HNMR (perdeuteromethanol) 6 7,95 (IH, s), 7,90-7,85 (2H, m), 7,43-7,35 (2H, m), 4,98 (IH, m), 4,65^,52 (IH, m), 4,40-4,20 (2H, m), 3,85-3,70 (3H, m), 3,30-3,25 (3H, m), 3,03-2,85 (IH, m), 2,70-2,31 (3H, m), 2,10-1,55 (4H, m).
Hmotová spektroskopie (ES+) 500 (jako methylacetal aldehydu).
Sloučenina (528) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 213a za získání směsi diastereomerů (poměr izomeru syn:, anti 1:1) jako krémová pěnovitá pevná látka (1,05 g, 58 %): teplota tání 124 až 132 °C;
Infračervené spektrum (bromid draselný) 3312, 2979, 1790, 1664, 1610, 1532, 1485, 1285, 1120, 1037,932;
'HNMR (perdeuterodimethylsulfoxid) δ 10,39 (1H, s), 8,71 (0,5H, d), 8,43 (0,5, d), 7,45 (1H, d),
7,36 (IH, s), 7,04 (IH, d), 6,12 (2H, s), 5,58 (0,5H, d), 5,34 (0,5H, s), 4,95-4,85 (IH, m),
4,70-4,52 (0,5H, m), 4,35-4,10 (1,5H, m), 3,95-3,50 (5H, m), 3,03 (0,5H, dd), 2,90-2,55 (1,5H, m), 2,46-2,20 (2H, m), 2,10-2,40 (4H, m), 1,16-1,13 (3H, 2 xt).
Analýza pro C23H27N5O9.0,6 H2O:
vypočteno: C, 52,29; H, 5,38; N, 13,26, nalezeno: C, 52,53; H, 5,35; N, 12,78.
Hmotová spektroskopie (ES+) 519 (M+ + 2, 27%), 518 (Nf + 1,100), 472 (7), 374 (12), 373 (53),
345 (14), 149(12).
-287 CZ 298171 B6
Příklad 31
Sloučenina 640, 642, 645, 650, 653, 655, 656, 662, 668, 669, 670, 671, 677, 678, 681, 682, 683, 684, 686, 688a, 688b, 6891, 689b, 690a, 690b, 691a, 691b, 695a, 695b, 695c, 692a, 692b, 693 a 694 se připraví následujícím způsobem.
638
Sloučenina (638) se připraví ze sloučeniny 600a podobným způsobem jako se připraví sloučenina 602m ze sloučeniny 600a za získání 2,4 g sloučeniny 638 jako bílé pevné látky.
Sloučenina (639). K roztoku sloučeniny 638 (630 mg, 1,76 mmol) a 2-naftyl methyl bromidu (428 mg, 1,94 mmol) v acetonitrilu se přidá uhličitan draselný (608 mg, 4,4 mmol). Vzniklá směs se míchá při teplotě místnosti. Po 18 hodinách se reakční směs zředí dichlormethan, promyje vodou, potom solankou, suší se nad síranem sodným, potom se odpaří ve vakuu. Po velmi rychlé chromatografii (silikagel, 20 % ethylacetát/dichlormethan) se získá 405 mg sloučeniny 639.
Sloučenina (640) se připraví podobným způsobem jako sloučenina 605v ze sloučeniny 602v za získání 205 mg sloučeniny 640 jako bílé pevné látky, lH NMR (deuterochloroform) δ 2,4-2,55 (m, IH), 2,65-2,8 (m, IH), 3,2 (s, 3H), 3,72-3,78 (m, IH), 3,85-4,0 (m, 2H), 4,22^1,28 (d, IH), 4,26-4,5 (m, 4H), 4,58-4,75 (m, IH), 4,78-4,85 (m, IH), 5,0-5,08 (t, IH), 7,35-7,65 (m, 7H), 7,85-8,02 (m, 4H).
Sloučenina (642) se připraví ze sloučeniny 638 podobným způsobem jako sloučenina 605m za získání 213 mg of sloučeniny 642,
-288CZ Z98171 B6 'HNMR (perdeuteromethanol) δ 2,5 (m, IH), 2,68 (ddd, IH), 3,25 (s, 2H), 3,3 (s, 3H), 3,78 (m,2H), 4,0 (d, IH), 4,3 (m, IH), 4,6 (m, 2H), 4,85 (široký s, 2H), 7,08-7,22 (m, 2H), 7,35 (m, IH), 7,47,65 (m, 4H), 7,77 (dd, IH), 8,1 (dd, IH).
H u γ<Α. o
643.
Sloučenina (643). K suspenzi N-acetylglycinu (200 mg, 1,7 mmol) v dichlormethanu (2,5 ml) obsahujícím dimethyl formám id (0,005 ml) se přidá oxalylchlorid (0,450 ml, 5,1 mmol). Po 30 minutách míchání při teplotě místnosti se směs odpaří za získání sloučeniny 643 jako surového produktu.
Sloučenina (644) se připraví ze sloučeniny 600b podobným způsobem jako sloučenina 602d ze sloučeniny 600b za použití sloučeniny 643 za získání 112 mg sloučeniny 644.
Sloučenina (645) se připraví ze sloučeniny 644 podobným způsobem jako sloučenina 605d ze sloučeniny 602d za získání 43 mg sloučeniny 645 jako bílé pevné látky, lH NMR (perdeuteromethanol) δ 1,95 (s, 3H), 2,4 (m, IH), 2,65 (m, IH), 3,4 (s, IH), 3,55 (m, IH), 3,85 (m, IH), 4,05 (d, IH), 4,3 (m, IH), 4,4-4,6 (m, 2H), 5,0 (m, IH), 7,4-7,7 (m, 6H),
7,85-8,00 (m, 2H).
-289CZ 298171 B6
Sloučenina (646) se připraví ze N-Fmoc-sarkosinu podobným způsobem jako sloučenina 643 za získání sloučeniny 646 jako surového produktu.
Sloučenina (647) se připraví ze sloučeniny 600b podobným způsobem jako sloučenina 602d ze sloučeniny 600b, za použití sloučeniny 646 za získání 481 mg sloučeniny 647.
Sloučenina (648) se připraví ze sloučeniny 647 pomocí metody použité pro přípravu sloučeniny 604d ze sloučeniny 602d za získání 409 mg sloučeniny 648.
Sloučenina (649). Roztok sloučeniny 648 (409 mg, 0,465 mmol) ze směsi acetonitril: diethylamin (4:1, objem/objem) se míchá při teplotě místnosti. Po 45 minutách se reakční směs zahustí ve vakuu. Po velmi rychlé chromatografií (silikagel, 5% až 20% methanol v dichlormethanu) se získá 241 mg sloučeniny 649.
Sloučenina (650) se připraví ze sloučeniny 649 pomocí způsobu použitého pro přípravu sloučeniny 605d ze sloučeniny 604 za získání 179 mg sloučeniny 650 jako bílé pevné látky, JHNMR (perdeuteromethanol) δ 2,4-2,6 (m, 2H), 2,7 (s, 3H), 3,5 (kv, IH), 3,8 (m, 2H), 4,2-4,4 (m, 2H), 4,3-4,45 (m, IH), 5,0-5,1 (m, 2H), 7,4-7,7 (m, 6H), 7,857,9 (m, 2H), 8,2 (m, 1H).
-290CZ 298171 B6
Sloučenina (652) se připraví ze sloučeniny 600b podobným způsobem jako sloučeniny 602n ze sloučeniny 600b za použití činidla získaného reakcí dimethylformamidu se 3 ekvivalenty oxalylchloridu v roztoku dichlormethanu jako R3X, za získání 404 mg sloučeniny 652.
Sloučenina (653) se připraví ze sloučeniny 652 způsobem, který byl použit pro přípravu sloučeniny 605d ze sloučeniny 602d za získání 84 mg sloučeniny 653 ve formě bílé pevné látky, 'HNMR (perdeuteromethanol) δ 2,3 (m, IH), 2,55 (dd, IH), 3,75 (široký s, IH), 4,25-4,6 (m, 5H), 5,15 (m, 1H), 7,2-7,45 (m, 6H), 7,8-7,9 (dd, 3H), 8,1 (s, IH), 8,2 (m, 2H).
Sloučenina (654) se připraví ze sloučeniny 600b za použití způsobu, který byl použit pro přípravu sloučeniny 603d ze sloučeniny 600b za získání 775 mg sloučeniny 654.
Sloučenina (655) se připraví ze sloučeniny 654 za použití způsobu, který byl použit pro přípravu sloučeniny 213a za získání 304 mg sloučeniny 655, 'H NMR (perdeuteromethanol) δ 2,4 (d, IH), 2,6-2,75 (m, 2H), 3,0 (m, IH), 3,45 (m, IH), 3,8 (d, IH), 4,0 (t, 2H), 4,4 (m, 2H), 4,5^,55 (m, 2H), 7,2-7,5 (m, 4H), 7,85 (s, 2H).
Sloučenina (656) se připraví ze sloučeniny 655 pomocí způsobu, který byl použit pro přípravu sloučeniny 2002 ze sloučeniny 2001 za získání 136 mg sloučeniny 656 jako bílé pevné látky, 'H NMR (perdeuteromethanol) δ 1,85 (s, 3H), 2,5 (m, IH), 2,65 (m, IH), 3,7 (m, IH), 4,3 (m, IH), 4,55 (m, 2H), 7,4-7,6 (m, 4H), 7,85 (s, 2H).
-291CZ 298171 B6
O
FmocO 1 —
657 o
FmocO 1--658
O
FmocO I
65$
Sloučenina (657). K roztoku benzylglykolátu (6,0 g, 36,1 mmol) v dichiormethanu, ochlazeného v ledové lázni, se přidá fluorenylmethoxychlorformiát (14 g, 1,5 ekvivalentu), potom diizopropylethylamin (9 ml, 1,5 ekvivalentu). Po 1 hodině se reakční směs nalije do nasyceného vodného roztoku chloridu amonného a extrahuje se dichlormethanem, suší se síranem sodným, potom se odpaří ve vakuu. Produkt se trituruje z methanolu za získání 2,2 g sloučeniny 657 jako bílé pevné látky.
Sloučenina (658). K roztoku sloučeniny 657 (2,2 g, 5,93 mmol) v tetrahydrofuranu se přidá 5% palladium na uhlí (220 mg). Vzniklá suspenze se energeticky míchá ve vodíkové atmosféře. Po 90 minutách se reakční směs filtruje přes křemelinu. Filtrát se nalije do nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a dvakrát promyje ethylacetátem. Vodná vrstva se okyselí a produkt se dvakrát extrahuje dichlormethanem, suší nad síranem sodným a zahustí ve vakuu za získání 1,46 g (88 %) sloučeniny 658 jako bílé pevné látky.
Sloučenina (659) se připraví ze sloučeniny 658 způsobem, který byl použit pro přípravu sloučeniny 643 za získání sloučeniny 659 jako surového produktu.
Sloučenina (660) se připraví ze sloučeniny 600b, za použití sloučeniny 659, pomocí způsobu pro přípravu sloučeniny 604d ze sloučeniny 600b za získání 453 mg sloučeniny 660.
-292CZ 298171 BO
Sloučenina (661). Roztok sloučeniny 660 (423 mg) ve směsi methanol: diethylamin (1:1, objem/objem) se míchá při teplotě místnosti. Po 10 minutách se reakční směs odpaří ve vakuu na malý objem. Po srážení přidáním etheru se získá 230 mg sloučeniny 661.
Sloučenina (662) se připraví ze sloučeniny 661 způsobem použitým pro přípravu sloučeniny 605d ze sloučeniny 604 za získání 37 mg sloučeniny 662 jako bílé pevné látky, *H NMR (perdeuteromethanol) δ 2,45 (m, IH), 2,7 (m, IH), 3,75 (m, IH), 3,9 (d, IH), 4,15 (d, IH), 4,35 (m, IH), 4,5 (t, 2H), 4,7 (dd, IH), 7,4-7,6 (m, 4H), 7,85 (s, 2H).
653 664 665
Sloučenina (663). K roztoku benzylglykolátu (46,91 g, 0,282 mol) a diizopropylethylaminu (74 ml, 0,423 mol) v dichlormethanu, ochlazenému ve vodní lázni, se přidá roztok TIPSOTf (95 g, 0,31 mol) v dichlormethanu. Vzniklá směs se nechá ohřát na teplotu místnosti, potom se nalije do vody, dvakrát promyje 10% vodným roztokem hydrogensíranu sodného a zahustí ve vakuu. Po velmi rychlé chromatografii (silikagel, 0 až 5% ethylacetát v hexanu) se získá 71,6 g sloučeniny 663.
Sloučenina (664). K roztoku sloučeniny 663 (0,4 g, 1,2 mmol) v ethylacetátu se přidá 10% palladium na uhlí (33 mg). Vzniklá suspenze se míchá ve vodíkové atmosféře. Po 15 minutách se reakční směs filtruje přes křemelinu a filtrát se zahustí ve vakuu za získání 0,29 g oleje. K roztoku tohoto oleje v 1,4-dioxanu se přidá hydrogenuhličitan sodný (0,5M, 2,4 ml).
Vzniklý roztok se zahustí ve vakuu z toluenu a získání sloučeniny 664 jako voskovité pevné látky.
-293 CZ 298171 B6
Sloučenina (665) se připraví ze sloučeniny 664 podobným způsobem jako se připraví sloučeniny 643 za získání sloučeniny 665 jako surového produktu.
Sloučenina (666) se připraví ze sloučeniny 600b za použití sloučeniny 665, pomocí způsobu použitého pro přípravu sloučeniny 604d ze sloučeniny 600b za získání 131 mg sloučeniny 666.
Sloučenina (667). K roztoku sloučeniny 666 (131 mg, 0,17 mmol) v tetrahydrofuranu, ochlazenému v lázni led voda, se přidá tetrabutylamoniumfluorid (1M, 0,190 ml). Po 2 hodinách se reakční směs nalije do vody, extrahuje dvakrát ethylacetátem, suší nad síranem hořečnatým a zahustí ve vakuu za získání 63 mg sloučeniny 667 jako bílé pevné látky.
Sloučenina (668) se připraví ze sloučeniny 667 způsobem použitým pro přípravu sloučeniny 605d ze sloučeniny 604d za získání 48 mg sloučeniny 668 jako bílé pevné látky, 'HNMR (perdeuteromethanol) δ 2,45 (m, IH), 2,67 (dddd, IH, 3,78 (d, IH), 3,85 (široký m, IH), 4,05 (d, IH), 4,28 (m, IH), 4,5 (m, 2H), 4,65 (m, IH), 4,95 (široký s, 2H), 7,47, 5 (m, 4H), 7,52-7,65 (m, 3H), 7,88 (d, 2H).
Sloučenina (669) se připraví ze sloučeniny 600b způsobem použitým pro přípravu sloučeniny 605d ze sloučeniny 600b za získání 63 mg sloučeniny 669 jako bílé pevné látky 'HNMR (perdeuteromethanol) δ 1,9 (s, 3H), 2,4-2,7 (m, 2H), 3,6-3,7 (m, 2H), 3,9 (s, 3H),
4,2-4,4 (ni, 2H), 4,44,6 (m, 3H), 7,4-7,8 (m, 4H), 7,9 (s, 2H).
Sloučenina (670) se připraví ze sloučeniny 600b způsobem použitým pro přípravu sloučeniny
655 ze sloučeniny 600b za získání 218 mg sloučeniny 670 jako bílé pevné látky,
-294CZ 298171 B6 *H NMR (perdeuteromethanol) δ 1,7-1,75 (2s, 3H), 2,15,2,2 (2s, 6H), 2,4-2,5 (m, 1H), 2,6-2,75 (m, 1H), 3,65-3,75 (m, 2H), 4,2^3 (m, 2H), 4,45^1,6 (m, 3H), 7,357,6 (m, 4H), 7,5 (s, 2H), s Sloučenina (671) se připraví ze sloučeniny 670 způsobem použitým pro přípravu sloučeniny 2002 ze sloučeniny 2001 za získání 253 mg sloučeniny 671 jako bílé pevné látky, lH NMR (perdeuteromethanol) δ 1,9 (s, 3H), 2,25 (s, 6H), 2,4-2,5 (m, 1H), 2,6-2,75 (m, 1H),
3,65-3,75 (m, 2H), 4,2-4,3 (m, 2H), 4,45-4,6 (m, 3H), 7,35-7,6 (m, 4H), 7,5 (s, 2H).
600 b
Sloučenina (672) se připraví ze sloučeniny 600b pomocí postupu použitého pro přípravu sloučeniny 602n ze sloučeniny 600b za použití sloučeniny 665 za získání 1,08 g sloučeniny 672.
Sloučenina (673). K roztoku sloučeniny 672 (1,08 g, 1,69 mmol) v dichlormethanu se přidá
2,6-lutadinu (0,8 ml), potom TMSOTf (1 ml, 5,1 mmol). Po 1 hodině se reakční směs nalije do
-295 CZ 298171 B6 hydrogenuhličitanu sodného a extrahuje dichlormethanem, suší nad síranem horečnatým a zahustí ve vakuu na malý objem, který se přidá použije při další reakci.
Sloučenina (674) se připraví ze sloučeniny 673 způsobem použitým pro přípravu sloučeniny 602b za získání 0,91 g sloučeniny 674.
Sloučenina (675). Roztok sloučeniny 674 (0,365 g, 0,5 mmol) v methanolu se míchá s IN hydroxidem sodným (1,2 ml, 1,2 mmol). Po 16 hodinách se reakční směs zahustí ve vakuu, potom se rozpustí ve vodě a dvakrát promyje etherem. Vodná vrstva se okyselí IN kyselinou chlorovodíkovou a produkt se extrahuje ethylacetátem, suší nad síranem horečnatým a odpaří ve vakuu za získání 337 mg sloučeniny 675 jako pevné látky.
Sloučenina (676) se připraví ze sloučeniny 675 způsobem použitým pro přípravu sloučeniny 213e za získání 166 mg, sloučeniny 676 jako bílé pevné látky.
Sloučenina (677). Roztok TBAF (6 ml, 3 mmol) v kyselině octové (0,46 ml, 8 mmol) se přidá ke sloučenině 676 (0,213 g, 0,256 mmol). Po 16 hodinách se reakční směs nalije do ethylacetátu a dvakrát promyje hydrogenuhličitanem sodným, jednou solankou a potom se suší nad síranem hořečnatým a odpaří ve vakuu za získání 139 mg sloučeniny 677 jako pevné látky, 'HNMR(deuterochloroform) δ 2,4 (d, IH), 2,5 (dd, IH), 2,8 (dd, IH), 2,92 (dd, IH), 3,15 (2H),
3,55-3,65 (m, 2H), 3,72 (s, 6H), 3,92 (m, IH), 4,05 (m, IH), 4,3 (m, IH), 4,42 (d, IH), 4,6 (dd, IH), 4,65—4,8 (m, 2H), 4,88 (d, IH), 5,55 (d, IH), 6,55 (m, 2H), 6,75 (d, 1H), 7,25-7,55 (m, 8H), 7,75 (m, 2H).
Sloučenina (678) se připraví způsobem použitým pro přípravu sloučeniny 667 ze sloučeniny 666 za získání 54 mg sloučeniny 678 jako pevné látky, 'H NMR (perdeuteromethanol) δ 2,45 (m, IH), 2,7 (m, IH), 3,5 (m, 2H), 3,75 (široký s, 6H), 4,05 (d, IH), 4,3 (m, IH), 4,51-4,6 (m, 2H), 4,8 (široký m, 2H), 6,7 (d, 2H), 7,4-7,5 (široký m, 3H), 7,6-7,65 (široký m, 2H).
Sloučenina (680) se připraví ze sloučeniny 600b způsobem použitým pro přípravu sloučeniny
677 ze sloučeniny 600b za získání 140 mg sloučeniny 680 jako bílé pevné látky,
-296CZ 298171 B6 'HNMR (deuterochloroform) δ 2,31 (d, IH), 2,4 (dd, 2H), 2,75 (dd, 2H), 2,85 (dd, IH), 3,36 (široký s, IH), 3,45 (široký s, IH), 3,6 (široký t, 2H), 3,82 (široký m, 2H), 3,95 (široký d, 2H), 4,35 (m, 2H), 4,42 (d, IH), 4,55 (m, IH), 4,70 (d, IH), 4,82 (široký s, 2H), 5,5 (d, IH), 6,91 (d, IH), 7,25 (široký m, 5H), 7,35-7,46 (široký m, 3H), 7,5-7,6 (m, 2H), 8,15 (široký d, 2H).
Sloučenina (681), se připraví ze sloučeniny 680 způsobem použitým pro přípravu sloučeniny 678 ze sloučeniny 677 za získání 45 mg sloučeniny 681 jako šedé pevné látky, 'H NMR (perdeuteromethanol) δ 2,5 (m, IH), 2,7 (dt, IH), 3,65-3,85 (Široký m, 3H), 4,05 (m, IH), 4,3 (m, IH), 4,5-4,7 (široký m, 3H), 4,85 (široký s, 2H), 7,3 (široký m, 2H), 7,4-7,7 (m,5H), 8,15 (d, 2H).
Sloučenina (682) se připraví ze sloučeniny 600b způsobem použitým pro přípravu sloučeniny 655 ze sloučeniny 600b za získání 495 mg sloučeniny 682 jako bílé pevné látky, 'HNMR (deuterochloroform) δ 2,00 (s, 3H), 2,05 (s, 3H), 2,47 (d, IH), 2,58 (dd, IH), 2,85 (dd, IH), 2,89 (dd, IH), 3,9 (m, 2H), 4,05-4,15 (m, 2H), 4,19 (dd, IH), 4,45 (m, 2H), 4,55-5,05 (m, 8H), 5,55 (d, IH), 6,85 (d, IH), 7,15 (d, IH), 7,25-7,55 (m, Ι0Η), 7,75 (d, 2H).
Sloučenina (683) se připraví ze sloučeniny 682 způsobem použitým pro přípravu sloučeniny 2002 ze sloučeniny 2001 za získání 82 mg sloučeniny 683 jako bílé pevné látky, 'H NMR (perdeuteromethanol) δ 2,1 (s, 3H), 2,5 (m, IH), 2,68 (m, IH), 3,8 (m, IH), 4,29 (dd, IH), 4,31 (m, IH), 4,45 (d, IH), 4,55 (d, IH), 4,6 (d, IH), 4,72 (d, IH), 4,95 (široký s, 2H), 7,45 (široký m, 2H), 7,52-7,65 (široký m, 5H), 7,88 (d, 2H).
6S4
Sloučenina (684) se připraví ze sloučeniny 600b způsobem použitým pro přípravu sloučeniny 605d ze sloučeniny 600b za získání 72 mg sloučeniny 684 jako bílé pevné látky,
ΉNMR (perdeuteromethanol) δ 1,9 (s, 3H), 2,25 (s, 6H), 2,45 (m, IH), 2,6 (m, IH), 3,3 (s, IH),
3,7 (s, 3H), 4,25 (m, IH), 4,45^1,6 (m, 3H), 7,4 (široký s, 2H), 7,55 (široký d, 4H).
-297CZ 298171 B6
Sloučenina (685) se připraví ze sloučeniny 600b způsobem použitým pro přípravu sloučeniny 676 ze sloučeniny 600b za získání 165 mg sloučeniny 685.
Sloučenina (686). K roztoku sloučeniny 685 (165 mg, 0,21 mmol) v tetrahydrofuranu se přidá roztok TBAF (1M, 0,21 ml). Produkt se izoluje pomocí filtrace po srážení z reakční směsi. Po chromatografii se reverzní fázi (10% až 80% acetonitril ve vodě/ 0,1% kyseliny trifluoroctové) se získá 25 mg sloučeniny 686 jako bílé pevné látky, io lHNMR (perdeuteromethanol) δ 2,37-2,42 (m), 2,59-2,70 (m), 3,60-3,89 (m), 4,01 (d),
4,20—4,31 (m), 4,42^1,70 (m), 4,80-5,05 (m), 6,79 (s), 7,32-7,65 (m), 7,81 (s).
-298CZ ZV3I /I Bí>
Sloučenina (687a) se připraví ze sloučeniny 600b způsobem použitým pro přípravu sloučeniny 654 ze sloučeniny 600b za získání 1,6 g sloučeniny 687a.
Sloučenina (687b) se připraví ze sloučeniny 600b za použití podobného způsobu jako pro přípravu sloučeniny 654 ze sloučeniny 600b za získání 1,1 g sloučeniny 687b.
Sloučenina (688a). K roztoku (3S,2R,S)~3“allyloxykarbonylamino-2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuranu (Chapman, Biorg. Med. Chem. Lett, 2, str. 613-618 (1992)) (1,13 g, 1,2 ekvivalentu) v dichlormethanu se přidá trifenylfosfin (423 mg, 0,5 ekvivalentu), kyselina dimethylbarbiturová (1,26 g, 2,5 ekvivalentu), a tetrakistrifenylfosfínpalladia (0) (373 mg, 0,1 ekvivalentu). Po 5 minutách se reakční směs ochladí v ledové lázni a potom se přidá sloučenina 687a v dimethylformamamidu (1,6 g, 1 ekvivalent), HOBT (480 mg, 1,1 ekvivalentu), a EDC (681 mg, 1,1 ekvivalentu). Vzniklá směs se nechá míchat při teplotě místnosti. Po 16 hodinách se reakční směs nalije do hydrogensíranu sodného a dvakrát se extrahuje ethylacetátem. Organická vrstva se promyje hydrogenuhličitanem sodným, solankou, suší se nad síranem sodným a odpaří ve vakuu. Po chromatografii (silikagel, 20 až 100% ethylacetát v dichlormethanu) se získá 880 mg sloučeniny 688a jako bílé pevné látky, lHNMR (perdeuteromethanol) δ 2,55 (dd, IH), 2,7 (dd, IH), 3,0 (m, IH), 3,6 (m, IH), 3,75 (d, IH), 3,9-4,0 (m, 2H), 4,3-4,45 (m, 3H), 4,5-4,6 (m, 3H), 4,7 (m, 2H), 5,35 (s, IH), 5,55 (d, IH), 7,1-7,5 (m, 4H), 7,85 (s, 2H).
Sloučenina (688b) se připraví ze sloučeniny 687b způsobem použitým pro přípravu sloučeniny 688a ze sloučeniny 687a za získání 960 mg sloučeniny 688b jako bílé pevné látky, 'H NMR (perdeuteromethanol) δ 2,6 (dd, IH), 2,7 (dd, IH), 3,0 (dd, IH), 3,2 (s, 3H), 3,7 (m, 3H), 3,9 (m, 2H), 4,44,5 (m, 2H), 4,6 (m, 3H), 5,35 (s, IH), 5,55 (d, IH), 7,25 (m, 2H),
7,4-7,5 (m, 4H).
Sloučenina (689a) se připraví ze sloučeniny 688a způsobem použitým pro přípravu sloučeniny 2002 ze sloučeniny 2001 za získání 184 mg sloučeniny 689a jako bílé pevné látky, 'H NMR (perdeuteromethanol) δ 2,45 (m, IH), 2,6 (m, IH), 3,3 (s, 3H), 3,7-3,85 (m, 2H), 4,0 (d, IH), 4,3 (m, 1H), 4,5^,6 (m, 3H), 7,3-7,6 (m, 4H), 7,85 (s, 2H).
Sloučenina (689b) se připraví ze sloučeniny 688b způsobem použitým pro přípravu sloučeniny 2002 ze sloučeniny 2001 za získání 412 mg sloučeniny 689b jako bílé pevné látky, 'H NMR (perdeuteromethanol) δ 2,5 (m, IH), 2,7 (m, IH), 3,3 (s, 3H), 3,7-3,85 (m, 2H), 4,05 (dd, IH), 4,3 (m, IH), 4,6 (m, 2H), 7,45-7,4 (m, 2H), 7,5 (s, 2H), 7,55 (m, 2H).
-299cz zyoifi do
Sloučenina (690a) se připraví ze sloučeniny 600b způsobem použitým pro přípravu sloučeniny
676 ze sloučeniny 600b, sloučeniny 688a ze sloučeniny 687a, potom sloučeniny 677 ze sloučeniny 676 za získání 863 mg sloučeniny 690a jako bílé pevné látky, 'HNMR (perdeuteromethanol) δ 2,2 (s, 6H), 2,45 (d, 0,5H), 2,6-2,9 (m, 1H), 3,05 (dd, 0,5H),
3,65-3,85 (m, 2H), 3,95-4,1 (m, 1H), 4,35-5,0 (m, 7H), 5,35 (s, 0,5H), 5,65 (d, 0,5H), 7,27,4 (m, 4H), 7,4-7,7 (m, 7H).
Sloučenina (690b) se připraví ze sloučeniny 600b způsobem použitým pro přípravu sloučeniny
677 ze sloučeniny 600b za získání 200 mg sloučeniny 690b, 'HNMR (perdeuteromethanol) δ 2,49 (d, IH), 2,65 (d, IH), 2,66 (d, IH), 2,85 (d, IH), 2,87 (d, IH), 3,05 (dd, IH), 3,35 (široký s, IH), 3,72 (široký s, 2H), 4,01 (m, 2H), 4,45 (široký m, 1H),
4.6 (m, IH), 4,7 (m, IH), 4,8 (m, IH), 4,95 (široký s, 2H), 5,65 (d, IH), 6,8 (d, 2H), 7,2-7,35 (široký m, 3H), 7,45 (m, 2H), 7,75 (d, 2H).
Sloučenina (691a) se připraví ze sloučeniny 690a způsobem použitým pro přípravu sloučeniny 2002 ze sloučeniny 2001 za získání 560 mg sloučeniny 691 a jako bílé pevné látky, 'HNMR (perdeuteromethanol) δ 2,15 (s, 6H), 2,45 (m, IH), 2,65 (m, IH), 3,55 (m, IH), 3,7 (d, 1H), 4,0 (d, IH), 4,25 (m, IH), 4,5-4,6 (m, 3H), 7,37,5 (m, 6H).
Sloučenina (69Ib) se připraví ze sloučeniny 690b způsobem použitým pro přípravu sloučeniny 2002 ze sloučeniny 2001 za získání 410 mg sloučeniny 691b jako bílé pevné látky, *H NMR (perdeuteromethanol) δ 2,5 (m, IH), 2,65 (m, IH), 3,75 (m, IH), 3,8 (d, IH), 4,05 (d, IH), 4,25 (m, IH), 4,5 (m, IH), 4,6 (m, 1H), 4,95 (široký s, 2H), 6,8 (d, 2H), 7,45 (m, 2H),
7.6 (m, 2H), 7,75 (d, 2H).
-300CZ 298171 B6
Sloučenina (695a) se připraví ze sloučeniny 600b způsobem použitým pro přípravu sloučeniny 677 ze sloučeniny 600b za získání 75 mg sloučeniny 695a, ’H NMR (perdeuteromethanol) δ 2,2 (s, 6H), 2,45 (m, IH), 2,6 (m, IH), 3,65 (m, IH), 3,75 (d, IH), 4,0 (d, 1H),4,28 (m, IH), 4,5 (m, 3H), 7,4-7,6 (m, 6H).
Sloučenina (695b) se připraví ze sloučeniny 600b způsobem použitým pro přípravu sloučeniny 677 ze sloučeniny 600b za získání 880 mg sloučeniny 695b, 'HNMR (deuterochloroform) δ 2,1 (s, 3H), 2,25-2,5 (m, 2H), 2,8-2,92 (m, 0,5H), 3,15-3,2 (m, 0,5H), 3,45-3,6 (m, 2H), 3,75-3,95 (m, 2H), 4,15—4,25 (m, IH), 4,35—4,6 (m, 2H), 4,6-4,88 (m, 3H), 5,22 (s, 0,25H), 5,33 (s, 0,25H), 5,52-5,58 (d, 0,5H), 7,15-7,45 (m, 9,5H), 7,5-7,75 (m, 5H), 8,3-8,35 (m, 0,5H), 9,08-9,18 (m, IH).
Sloučenina (695c) se připraví ze sloučeniny 600b způsobem použitým pro přípravu sloučeniny 677 ze sloučeniny 600b za získání 840 mg sloučeniny 695c, ‘H NMR (deuterochloroform) δ 2,23 (s, 3H), 2,26 (s, 3H), 2,45-2,62 (m, 1H), 2,8-2,9 (dd, 0,5H),
2,9-3,05 (dd, 0,5H), 3,45-3,63 (m, IH), 3,64 (s, 1,5H), 3,68 (s, 1,5H), 3,78-4,05 (m, 2H),
4,2-4,33 (m, lH)m, 4,4—4,63 (m, 2H), 4,65-4,95 (m, 2H), 4,95-5,1 (m, IH), 5,45 (s, 0,5H),
5,5-5,6 (d, 0,5H), 6,9-6,95 (d, IH), 7,25-7,7 (m, 12H).
Sloučenina (692a) se připraví ze sloučeniny 600b způsobem použitým pro přípravu sloučeniny
661 ze sloučeniny 600b, vyjma kroků použitých pro přípravu sloučeniny 604d ze sloučeniny
-301 CZ 298171 B6
603d, místo toho za použití postupu pro přípravu sloučeniny 688a ze sloučeniny 687a za získání 685 mg sloučeniny 692a, 'HNMR (perdeuteromethanol) δ 2,45 (d, IH), 2,6 (m, IH), 2,7 (m, IH), 3,0 (m, IH), 3,53,7 (m, 4H), 4,0 (kv, 2H), 2,45 (m, 3H), 4,55 (m, 4H), 5,35 (s, IH), 5,6 (d, IH), 7,2-7,5 (m, 9H), 7,85 (s, 2H).
Sloučenina (692b) se připraví ze sloučeniny 600b způsobem použitým pro přípravu sloučeniny 661 ze sloučeniny 600b, kromě kroků použitých pro přípravu sloučeniny 604d ze sloučeniny 603d, místo toho za použití postupu pro přípravu sloučeniny 688a ze sloučeniny 687a za získání 207 mg sloučeniny 692b, 'HNMR (perdeuteromethanol) δ 1,05 (t, 3H), 1,15 (t, 3H), 2,45 (d, IH), 2,55 (m, IH), 2,7 (m, IH), 3,55 (m, 2H), 3,6-3,75 (m, 5H), 4,0 (dd, 2H), 4,3 (d, IH), 4,4-4,7 (m, 5H), 5,25 (s, IH),
5,5 (d, IH), 7,25-7,6 (m, 4H), 7,85 (s, 2H).
Sloučenina (693) se připraví ze sloučeniny 600b způsobem použitým pro přípravu sloučeniny 688a ze sloučeniny 600b za získání 30 mg sloučeniny 693, ‘HNMR(perdeuteromethanol) δ 1,7 (s, 3H), 1,8 (s, 3H), 2,51 (d, IH), 2,6 (m, IH), 2,85 (m, IH), 3,0 (m, IH), 3,75 (široký d, 2H), 4,04,1 (dd, 2H), 4,5-5,0 (m, 6H), 5,45 (s, IH), 5,55 (s, IH),
7,15-7,85 (m, 14H).
Sloučenina (694) se připraví ze sloučeniny 691c způsobem použitým pro přípravu sloučeniny 2002 ze sloučeniny 2001 za získání 380 mg sloučeniny 694 jako bílé pevné látky, 'HNMR (perdeuteromethanol) δ 2,25 (s, 6H), 2,45 (m, IH), 2,65 (m, IH), 3,65 (m, 5H), 4,0 (d, IH), 4,28 (m, 1H), 4,55 (d, 2H), 4,95 (m, IH), 7,4-7,6 (m, 6H).
Sloučeniny 700-711 se připraví podobným způsobem jako sloučeniny 619-635 (viz. příklad 13). Fyzikální údaje pro sloučeniny 700-711 jsou uvedeny v tabulce 25.
Sloučeniny 910-915 a 918-921 se připraví tak, jak je popsáno níže. Fyzikální údaje pro tyto sloučeniny jsou uvedeny v tabulce 26.
-302CZ ZV317L BÓ
Tabulka 25
-303 CL zvai/ι BO
-304CL ZWIVi BĎ
305 ZV5I/I BĎ
-306cl zyai/i uc
-307cl zyai /i bď
Tahle.,2 5
-308CL Z98I7I B6
ΤΊ
-309LZ 295171 B6
-310uz, zvai/i bo
-311
CL ZVOl/l DO
-312CZ 298171 B6
-313CZ 298171 B6
- iu.
Krok A. Syntéza sloučeniny 401. TentaGel S® NH2 pryskyřice (0,25 mmol/g, 6,8 g) se umístí do s skleněné třepací nádoby a promyje se dimethylacetamidem (3 x 20 ml), K roztoku sloučeniny
400 (1,70 g, 2,9 mmol, připravené z t-butylesteru kyseliny (3S) 3-(fluorenylmethyloxykarbonyl)-4-oxobutanové podle A.M. Murfy a kol., J. Am. Chem. Soc., 114, 3156-3157 (1992)) v dímethylacetamidu (15 ml) se přidá 0-benzotrÍazol-N,N,N,N-tetramethyluroniumhexaíluorofosfát (HBTU; 1,09 g, 2,9 mmol), a DIEA (1,0 ml, 5,7 mmol). Roztok se přidá k pryskyřici, 10 potom se přidá dimethylacetamid (5 ml). Reakční směs se protřepává 3 hodiny při teplotě místnosti za použití třepačky. Pryskyřice se izoluje filtrací za sání a promyje se dimethylacetamidem
-315CZ 298171 B6 (6 x 20 ml). Vzorek pryskyřice (7,4 mg) se důkladně promyje 50% methanol v dichlormethanu a suší se za sání. Po odstranění chránící skupiny Fmoc za použití 20% piperidinu v dimethylacetamidu (10,0 ml) a UV analýza roztoku se zjistí substituce 0,19 mmol g*1.
Krok B. Syntéza sloučeniny 903. Z pryskyřice 401 se pomocí směsi 20% (objem/objem) piperidin/dimethylacetamid (20 ml) po dobu 10 minut (za třepání) a potom 10 minut s čerstvým piperid i novým činidlem (20 ml) odstraní chránící skupiny. Pryskyřice se potom promyje d i methy 1acetamidem (6 x 20 ml). Roztok sloučeniny 902 (1,52 g, 2,81 mmol) se reaguje s HBTU (1,07 g, 2,83 mmol) a DIEA (1,0 ml, 5,7 mmol) se převede se k pryskyřici, poté následuje přidání io dimethylacetamidu (5 ml). Reakční směs se protřepává 2,5 hodiny při teplotě místnosti za použití třepačky. Pryskyřice se izoluje filtrací za sání a promyje se dimethylacetamidem (4 x 20 ml) a dichlormethan (4 x 20 ml) a suší se v proudu dusíku. Pryskyřice se substituuje tak, jak je popsáno pro sloučeninu 401 a zjistí se substituce 0,169 mmol g'\
Krok C. Syntéza sloučeniny 905. Pryskyřice 903 (7,54 g, 1,27 mmol) dimedon (2,19 g,
15,6 mmol) se umístí do 100 ml baňky s kulatým dnem a přidá se čerstvě předestilovaný bezvodý tetrahydrofuran (60 ml). Přidá se tetrakis(trifenylfosfín)palladium (0) (0,32 g, 0,28 mmol) a dusíkem překrytá uzavřená reakční směs se protřepává 15 hodin na třepačce. Pryskyřice se filtruje, promyje dimethylacetamidem (4 x 20 ml), dichlormethan (4 x 20 ml) a dimethylacetamidem (1 x
20 ml). K pryskyřici se přidá dostatečné množství dimethylacetamid, aby vznikla suspenze, potom se přidá pyridin (1,5 ml, 18,5 mmol) a roztok sloučeniny 904 (5,5 mmol) v dichlormethanu (10 ml). Reakční směs se třepe 8 hodin pod dusíkem, potom se filtruje. Pryskyřice se promyje dimethylacetamidem (5 x 20 ml) a dichlormethanem (5 x 20 ml).
Krok D. Syntéza sloučeniny 906. Tato sloučenina se připraví z pryskyřice 905 (0,24 g,_ 0,038 mmol) za použití Advanced ChemTech 396 Multiple peptidového syntetizéru. Automatizované cykly zahrnují promytí pryskyřice dimethylformamidem (3x1 ml), odstranění chránící skupiny 25% (objem/objem) piperidinem v dimethylformamidu (1 ml) 10 minut, potom čerstvým činidlem 20 minut (1 ml) za získání pryskyřice 906. Pryskyřice se promyje dimethylformamidem.
(3x1 ml) a N-methypyrrolidonem (3 x 1 ml).
Krok E. Sloučeniny (910-922). Pryskyřice 906 se acyluje roztok 0,4M karboxylové kyseliny a 0,4M HOBT v N-methypyrrolidonu (0,5 ml), roztokem 0,4M HBTU v N-methylpyrrolidonu (0,5 ml), roztokem 1,6M DIEA v N-methypyrrolidonu (0,25 ml) a reakční směs se třepe 2 ho35 diny při teplotě místnosti. Pryskyřice se promyje N-methylpyrrolidonem (1 x 1 ml), dimethyl- j formámidem (4 x 1 ml), 50% methanolem v dichlormethanu (5 x 1 ml) a suší se vzduchem.
Aldehyd se odštěpí z pryskyřice a celkově se odstraní chránící skupiny reakcí se směsí 95 % kyselina trifluoroctové/5% voda (objem/objem, 1,5 ml) 30 minut při teplotě místnosti. Po promytí pryskyřice štěpícím činidlem (2 x 1 ml), se spojené filtráty přidají k chladné směsi 1:1 40 ether:hexan (35 ml) a vzniklá sraženina se izoluje odstředěním a slitím. Vzniklá kulička se rozpustí v acetonitrilu (0,5 ml) a vodě (0,5 ml) a filtruje se přes 0,45 mikronové mikroodstředivé filtry. Sloučenina se čistí pomocí semipreparativní RP-HPLC s Rainin Microsorb™ C18 kolonou (5μ, 21,4 x 250 mm) za eluce lineárním gradientem acetonitrilu (10 až 50%) obsahujícím 0,1 % kyseliny trifluoroctové (objem/objem) 30 minut při průtoku 12ml/min. Frakce obsahující 45 požadovaný produkt se slije a lyofilizumní za získání sloučeniny 910-922.
Analytické HPLC metody:
(1) Waters DeltaPak Cl8, 300A (5μ, 3,9 x 150). Lineární gradient acetonitrilu (0 až 25%) obsahující 0,1 % kyseliny trifluorooctové (v/v) (objem/objem) 14 minut při průtoku 1 ml/min.
(2) Waters DeltaPak Cl8, 300A (5μ, 3,9 x 150). Lineární gradient acetonitrilu (5 až 45%) obsahující 0,1 % kyseliny trifluoroctové (v/v) (objem/objem) 14 minut při průtoku 1 ml/min.
-316CZ 298171 B6
600b
Sloučenina (696) se připraví ze sloučeniny 600b způsobem použitým pro přípravu sloučeniny 691a ze sloučeniny 600b za získání sloučeniny 696.
'HNMR (perdeuteromethanol) δ 2,45 (m, IH), 2,7 (m, IH), 3,75 (d, IH), 3,95 (kv, IH), 4,05 (d, IH), 4,3 (m, IH), 4,45-4,65 (m, 2H), 5,05 (m, IH), 7,5-7,6 (m, 3H), 7,7 (t, IH), 7,8 (t, IH), 7,98 (t, IH), 8,55 (d,lH), 9,1 (dd, IH).
696a Rl- -h.09n
696t>. R1 SOB
Sloučenina (696a) se připraví ze sloučeniny 600b způsobem použitým pro přípravu sloučeniny 690a ze sloučeniny 600b za získání sloučeniny 696a.
*H NMR (deuterochloroform) δ 0,95 (t, 2H), 1,25 (t, IH), 1,4 (m, 2H), 1,55 (m, IH), 2,55 (m, IH), 2,85 (m, IH), 2,95 (dd, IH), 3,15 (m, IH), 3,55 (m, IH), 3,9 (m, 2H), 4,35 (t, IH), 4,4-4,55 (m, 2H), 4,75 (m, IH), 4,8-5,05 (m, 2H), 5,45 (s, IH), 5,55 (d, IH), 6,85 (d, IH), 7,15 (d, IH),
7,2-7,5 (m, 5H), 7,6-7,8 (m, 3H), 8,45 (d, IH), 9,05 (d, IH), 9,35 (d, 1H).
Sloučenina (696b) se připraví ze sloučeniny 600b způsobeném použitým pro přípravu sloučeniny 690a ze sloučeniny 600b za získání sloučeniny 696b.
'H NMR (deuterochloroform) δ 0,9 (m, 3H), 1,15 (kv, 3H), 1,15 (m, IH), 1,65 (m, IH), 2,5 (m, IH), 2,8 (m, IH), 2,95-3,0 (m, 2H), 3,6 (m. 2H), 3,7-3,85 (m, 4H), 4,0 (m, 2H), 4,3 (m, IH), 25 4,55 (m, IH), 4,65 (m, IH), 4,85-4,95 (m, IH), 5,05 (m, IH), 5,35 (s, IH), 5,45 (d, IH), 6,85 (d, IH), 7,25 (d, IH), 7,357,85 (6H), 8,85 (dd, 2H), 9,05 (m, IH), 9,35 (dd, 2H).
Sloučenina (696c) se připraví ze sloučeniny 609b způsobem použitým pro přípravu sloučeniny
690a ze sloučeniny 600b za získání sloučeniny 696c.
-317CZ 298171 B6 *H NMR (perdeuteromethanol) δ 1,25 (t, IH), 1,65 (kv, IH), 1,9 (m, IH), 2,9 (m, IH), 3,05 (m, IH), 3,9 (d, IH), 4,2 (m, IH), 4,3 (d, IH), 4,75 (m, 3H), 5,25 (m, IH), 5,7 (s, 1H), 5,9 (d, IH), 7,5 (d, 2H), 7,7-7,9 (m, 3H), 8,0 (t, IH), 8,2 (m, 2H), 8,75 (d, IH), 9,35 (d, IH).
Sloučenina (696d) se připraví ze sloučeniny 600b způsobem použitým při přípravu sloučeniny 690a ze sloučeniny 600b za získání sloučeniny 696d.
*H NMR (deuterochloroform) δ 0,9 (t, IH), 1,2 (t, IH), 1,3-1,45 (m, 2H), 1,6-1,8 (m, 4H), 2,45 (m, IH), 2,8 (m, IH), 3,0 (m, IH), 3,4 (kv, IH), 3,5 (d, IH), 4,0 (m, 2H), 4,2-4,3 (m, 2H), 4,55 io (d, IH), 4,65 (m, IH), 4,9 (m, IH), 5,05 (m, IH), 5,4 (s, IH), 5,5 (d, IH), 6,8 (d, IH), 7,3-7,9 (m, 6H), 8,5 (d, IH), 9,05 (d, IH), 9,4 (d, IH),
Sloučeniny (696e) se připraví ze sloučeniny 600b způsobem použitým pro přípravu sloučeniny 690a ze sloučeniny 600b za získání sloučeniny 696a.
'HNMR (deuterochloroform) δ 1,2 (t, IH), 2,4 (m, IH), 2,8 (m, 2H), 3,6 (d, IH), 3,7 (kv, IH), 4,0 (m, 2H), 4,3 (d, 2H), 4,65 (m, IH), 4,85 (t, IH), 5,0 (m, 1H), 5,35 (d, IH), 6,5 (d, IH),
7,15-7,85 (m, 8H), 8,45 (d, IH), 9,05 (d, IH), 9,4 (d, IH).
-318CZ 298171 B6
Tabulka 27
Sloúč. UV-vid. Ki (nM) Buňky PBMC prům. IC50 (nM) Úplná lidská krev IC50 (nM) Odbouráni u myší i.v. ml/min/kg Odbouráni u krys i,v. ml/min/kg
6.88.c 200
689b-l 3,5 2700
696-1 0,5
696-2 °»5
697 5000
698 18 13500
699 AA
699a-2
720 2,7
721 l,3 5000
722 5 5000
723 2,3 2000
724 2 1800
725 ......3, 7 ..... 3000
726 300 -
727 50 2300
728 3ÓG
729 28 28ÓÓ
730 90 8000
731 150
732 5 1800
733 5 1500
73.4 9 60 00
735 6 10000
-319CZ 298171 B6
Příklad 33
Sloučeniny 684a, 688b-l, 688c, 689b-l, 690a-1,696-1, 696-2, 696a-2, 696a-l, 697, 697a, 698, 698a, 699, 699a, 699a-1, 699a-2, 800 a 801 se připraví tak, jak je popsáno níže.
H
Tabulka 28
' CIP# R4 R3 Ř5 R1
6.84 a CH3 O CH3A H' 0 A^OtBu OAc
688D-1 0 CH3 11 CHa o r· o OBn
688q 0 Cbh 0 MeO^j^ H Ó .A^óh Ά a
689b-I 0 CH3 . I) AA CH} 0 MeO^j^ F 0 Aoh A-h o
690a-l 0 ch3 0 H: o jAoEt OÉt
_ C>nCZ 298171 B6
CIP# R4 R3 R5 R1
696-1 0 HOJ^ F .0 Z^OH Ah 0
696-2 0· 0 Cl Xh T
/ 696a-2 (N< % 0 Cl 0 Á° OBn
69.6'3-1 0' £ 0 OSn
697 a 0 0 H Ó ^XqH
; 6S7a 0 2 O 0. .«Ms H Q A OBh
693 0 hA :H •ó ^T-H 0
' 699a .0 ó A H O Ao X OBn
;· 699 ‘ 0 MeO^j H Ó |^0H ^VH 0
6SSa 0 Ó H 0 A '^OBn
- S91 CZ 298171 B6
c:?=: R4 R3 Rw •1 R*
c99a-l O F' O Λ
699á-2 Ó O ř 0 O
δ 00 0 H' 0 4° Οθη
'o 0 1 e ° 'φ- O H Ó jAoh : /V* 0
Sloučenina (690a-l) se připraví způsobem použitým pro přípravu sloučenin 690a a 2100b za získání sloučeniny 690a-l, 'HNMR(deuterochloroform)δ 1,15 (t, 6H), 1,3 (t, 3H),2,25 (s, 6H), 2,60 (d, 2H), 3,50 (m, 2H),
3.70 (m, 4H), 4,05 (m, 2H), 4,15 (m, 2H), 4,30 (d, IH), 4,45 (m, IH), 4,50 (d, IH), 4,55 (d, IH),
4.70 (t, IH), 5,05 (m, IH), 5,30 (s, IH), 6,70 (d, IH), 7,10 (d, 2H), 7,30-7,50 (m, 7H)
Sloučenina (697a) se připraví způsobem použitým pro přípravu sloučeniny 67 za získání 840 mg sloučeniny 697a, lH NMR (deuterochloroform) δ 1,78 (široký s, 2H), 2,48-2,58 (d, 0,5H), 2,6-2,7 (m, 0,5H), 2,8-2,9 (m, 0,5H), 2,92-3,03 (m, 0,5H), 3,55-3,8 (m, 2H), 3,92—4,02 (d, IH), 4,25-4,3 (d, 0,5H),
4,37-4,42 (d, 0,5H), 4,43-4,48 (m, 0,5H), 4,53-4,65 (m, 1,5H), 4,7-5,12 5H), 5,44 (s, 0,5H),
5,58-5,63 (d, 0,5H), 6,95-8,1 (m, 13H).
Sloučenina (697) se připraví způsobem použitým pro přípravu sloučeniny 2002 ze sloučeniny 2001 za získání 140 mg sloučeniny 697, lH NMR (perdeuteromethanol) δ 2,38-2,5 (m, IH), 2,55-2,75 (m, IH), 3,68-3,9 (m, 3H),
3,95-4,03 (m, IH), 4,2^1,3 (m, IH), 4,4-4,7 (m, 4H), 7,35-7,8 (m, 6H).
Sloučenina (684a) se připraví způsobem použitým pro přípravu sloučeniny 2100j za získání sloučeniny 684a, lHNMR (500MHz, deuterochloroform, směs diastereomerů) δ 1,3 (s, 9H), 1,8 (s, 3H), 2,1 (s, 3H), 2,15 (s, 3H), 2,3 (s, 6H), 3,3-3,5 (m, 3H), 3,65 (s, 3H), 3,9 (m, IH), 4,1 (d, IH), 4,3 (d, IH), 4,6-4,8 (m, 3H), 5,0 (m, IH), 6,7 (s, IH), 7,0 (d, IH), 7,1 (d, IH), 7,27,5 (m, 6H).
Sloučenina (698a) se připraví způsobem použitým pro přípravu sloučeniny 652 za získání 795 mg sloučeniny 698a,
- 322 CZ 298171 B6 ’Η NMR (500 MHz, deuterochloroform, směs diastereomerů) δ 2,8 (m, 2H), 4,0 (m, 1H), 4,5-4,8 (m, 4H), 5,2 (m, IH), 5,5 (s, IH), 5,75 (d, IH), 7,3-7,85 (m, 1 IH), 7,9 (t, IH), 8,2 (d, IH), 8,6 (m, IH), 9,3 (m, IH).
Sloučenina (698) se připraví způsobem použitým pro přípravu sloučeniny 653 za získání 225 mg sloučeniny 698, *H NMR (perdeuteromethanol, 500 MHz), δ 2,4 (m, IH), 2,6 (m, IH), 3,9 (m, IH), 4,2 (m, IH),
4,34,7 (m, 4H), 5,1 (m, IH), 7,3-7,5 (m, 4H), 7,6-7,8 (m, 2H), 8,2 (d, IH), 8,5 (d, IH), 9,0 (d, IH).
Sloučenina (699a) se připraví způsobem použitým pro přípravu sloučeniny 655 za získání 820 mg sloučeniny 699a jako světle hnědé pevné látky, ‘HNMR (500 MHz, deuterochloroform) δ 2,60 (ddd, IH), 2,90 (ddd, IH), 3,20 (s, 3H), 3,25 (s, 3H), 3,70 (t, IH), 3,90 (m, 2H), 4,20 (dd, IH), 4,60 (m, 2H), 4,70-5,00 (m, 5H), 5,55 (d, IH), 7,00 (d, IH), 7,20-7,50 (m, 7H), 8,45 (dd, IH), 9,00 (dd, IH), a 9,35 ppm (dd, IH).
Sloučenina (688b—1) se připraví způsobem použitým pro přípravu sloučeniny 655 za získání 600 mg sloučenin 688b— 1, *H NMR (deuterochloroform, směs diastereoizomerů) δ 2,21 (s, 3H), 2,28 (s, 3H), 2,42-2,50 (m,0,5H), 2,58-2,65 (m, 0,5H), 2,83-2,91 (m, 0,5H), 2,98-3,1 (m, 0,5H), 3,18 (s, 1H),..3,22 (s, 1,5H), 3,72-3,78 (d, IH), 3,78-3,9 (m, 2H), 4,08-4,15 (d, IH), 4,5-1,69 (m, 3H), 4,7-^,85 (m, IH), 4,88-5,1 (m, 2H), 5,45 (s, 0,5H), 5,55-5,65 (d, 0,5H), 6,85-6,92 (m, IH), 7,02-7,13 (m, 2H), 7,24-7,55 (m, 9H).
Sloučenina (689b-1) se připraví způsobem použitým pro přípravu sloučeniny 2002 ze sloučeniny 2001 za získání sloučeniny 689b-1, 'HNMR(perdeuteromethanol)δ2,18 (s,6H),2,36-2,47 (m, IH),2,6-2,72(m, IH),3,34(s,3H), 3,66-3,88 (m, 2H), 3,95-4,05 (m, IH), 4,2-4,78 (m, 5H), 4,9 (m, IH), 7,3-7,41 (m, 2H), 7,48 (s, 2H), 7,5-7,63 (m, IH).
Sloučenina (699) se připraví způsobem použitým pro přípravu sloučeniny 2002 ze sloučeniny 2001 za získání sloučeniny 699 jako bílé pevné látky, lH NMR (500 MHz, perdeuteromethanol) δ 2,50 (m, IH), 2,70 (m, IH), 3,25 (s, 3H), 3,80 (široký d, IH), 3,90 (široký d, IH), 4,00 (široký d, IH), 4,30 (m, IH), 4,50-1,70 (m, 3H), 4,80-4,85 (široký t, IH), 5,00 (široký m, IH), 7,40-7,55 (m, 5H), 7,70 (široký m, IH), 7,85 (široký m, IH), 8,00 (široký m, IH), 8,55 (široký d, IH), a9,05 ppm (široký d, IH).
Sloučenina (696a-l) se připraví způsobem použitým pro přípravu sloučeniny 656 za získání sloučeniny 800 jako žluté pevné látky, 'H NMR (500 MHz, deuterochloroform) δ 2,55 (ddd, IH), 2,65 (ddd, IH), 3,70-3,80 (m, 2H),
3,95 (široký m, IH), 4,05 (d, IH), 4,30 (d, IH), 4,40-4,60 (m, 4H), 4,70-5,05 (m, 4H), 5,55 (d, IH), 7,10 (d, IH), 7,20-7,35 (m, 3H), 7,40-7,50 (m, IH), 7,60-7,85 (m, 3H), 8,40 (dd, IH),
9,10 (m, 1H), a 9,30 ppm (m, 1H).
Sloučenina (696a-2) se připraví způsobem pro přípravu, sloučeniny 677, za získání 204 mg sloučeniny 696a-2 jako bílé pevné látky, pod podmínkou, že redukce nitroskupiny se provede následujícím způsobem: K roztoku nitrosloučeniny (7,2 g, 20 mmol) v methanolu se přidá chlorid amonný (2,1 g, 39 mmol) a zinek (17 g, 260 mmol). Vzniklá směs se zahřívá l hodinu k varu,
- 323 CZ 298171 B6 poté se ochladí a filtruje přes křemelinu. Filtrát se zahustí ve vakuu a reaguje se s chladným IN roztokem kyseliny chlorovodíkové za získání 3,6 g světle červené pevné látky.
‘HNMR (deuterochloroform) δ 1,85 (s, IH), 2,45 (d, 0,5H), 2,50-2,65 (m, 0,5H), 2,80-2,90 (m,0,5H), 2,90-3,00 (m, 0,5H), 3,45 (s, 0,5H), 3,55-3,75 (m, IH), 3,85^,15 (m, 2H), 4,25 (d, IH), 4,40-4,65 (m, 2H), 4,70-4,70 (m, 0,5H), 4,85-5,15 (m, 3H), 5,40 (s, 0,5H), 5,60 (d,0,5H), 7,00 (d, 0,5H), 7,15-7,90 (m, 12,5H), 8,35-8,45 (m, IH), 9,00-9,10 (m, IH), 9,25-9,40 (m, IH).
Sloučenina (696-1) se připraví způsobem pro přípravu sloučeniny 2002 ze sloučeniny 2001 za získání 140 mg sloučeniny 969-1 jako bílé pevné látky.
lH NMR (500MHz, perdeuteromethanol) δ 2,50 (m, IH), 2,70 (m, IH), 3,85 (d, IH), 3,95 (m, IH), 4,10 (d, IH), 4,35 (m, IH), 4,50^1,60 (m, 2H), 4,80 (široký m, IH), 5,00 (m, 1H), 15 7,40-7,48 (m, 3H), 7,65 (m, IH), 7,75 (t, IH), 7,85 (t, IH), 8,00 (d, 1H), 8,55 (d, IH) a 9,05 ppm (d, IH).
Sloučenina (696-2) se připraví způsobem pro přípravu sloučeniny 2002 ze sloučeniny 2001 za získání 250 mg sloučeniny 696-2 jako bílé pevné látky, 'H NMR (perdeuteromethanol) δ 2,40-2,55 (m, IH), 2,60-2,75 (m, IH), 3,80-4,00 (m, 2H), 4,05 (d, IH), 4,20-4,3S (m, IH), 4,45^1,65 (m, 3H), 4,80-5,10 (m, 2H)
Sloučenina (699a-1) se připraví způsobem pro přípravu sloučeniny 655 za získání sloučeniny 25 699a-1 'HNMR (500 MHz, deuterochloroform) δ 2,55 (ddd, IH), 2,90 (ddd, IH), 3,25 (s, 3H), 3,28 (s, 3H), 3,80 (široký t, 2H), 3,95 (široký m, 2H), 4,23 (dd, 1H), 4,45-4,90 (m, 3H), 5,60 (d, 1H), 7,05-7,40 (m, 8H), 7,50 (široký m, IH), 7,65-7,85 (m, 2H), 8,45 (d, IH), 9,1 (m, IH), 30 a9,35 ppm(m, IH)
Sloučenina (699a-2) se připraví způsobem pro přípravu sloučeniny 2002 ze sloučeniny 2001 za získání sloučeniny 699a-2, ’H NMR (500 MHz, perdeuteromethanol) δ 2,51 (m, 1H), 2,70 (dt, 1H), 3,31 (široký s, 3H), 3,90 (široký dt, IH), 3,95 (širokým, IH), 4,05 (d, IH), 4,35 (m, IH), 4,50 (d, IH), 4,60 (dd, 1H), 4,65 (dt, IH), 4,80 (m, IH), 5,05 (m, IH), 7,35-7,48 (m, 3H), 7,65 (široký m, 1H), 7,75 (t, IH), 7,82 1H), 8,05 (d, IH), 8,55 (d, IH), a 9,05 ppm (d, 1H).
Sloučenina (688c) se připraví způsobem pro přípravu sloučeniny 308d za získání sloučeniny 800, ‘HNMR(perdeuteromethanol)δ2,2(s,6H), 2,58-2,83 (m, 2H),3,28(s,3H),3,29-3,34(m, IH), 3,68-3,80 (m, 2H), 3,95-4,05 (dd, IH), 4,38-4,48 (dd, IH), 4,82-5,00 (m, 2H), 5,26-5,36 (m, 2H), 7,22-7,65 (m, 10H).
Sloučenina (800) se připraví způsobem pro přípravu sloučeniny 696al za získání 204 mg sloučeniny 800 jako žluté pevné látky, ’H NMR (deuterochloroform, směs díastereomerů) δ 1,70 (s, IH), 2,40-2,80 (m, 8H), 2,80-2,9 50 (m, 0,5H), 2,95-3,05 (m, 0,5H), 3,30-3,35 (m, 0,5H), 3,45-3,55 (m, 0,5H), 3,553,65 (m, IH),
3,80-4,05 (m, 2H), 4,30-4,50 (m, 2H), 4,55-4,65 (m, IH), 4,75^,95 (m, 3H), 5,45 (s, 0,5H), 5,55 (d, 0,5H), 6,70 (d, 0,5H), 6,90 (d, 0,5H), 7,15-7,80 (m, 10H).
-324CZ 298I7I B6
Sloučenina (801) se připraví způsobem pro přípravu sloučeniny 2002 ze sloučeniny 2001 za získání sloučeniny 801.
Příklad 34
Sloučeniny 720-773 se připraví podobným způsobem jako sloučeniny 619-635 (viz, příklad 13). Fyzikální údaje pro sloučeniny 720-773 jsou uvedeny v tabulce 29.
to CM
-325 'i
ZV317I B6
-326\LL 273171 BO
-327
CL ZVS17I Bb
-328 CZ Z98171 B6
-329CZ 298171 B6
- 330 CZ 4701/1 tío
- 331 CZ 298171 Βθ
-332CZ ZV»I71 B6
Příklad 35
Sloučeniny 736-767 se připraví způsobem jako sloučeniny 619-635 (viz příklad 13). Fyzikální údaje pro sloučeniny 736—767 jsou uvedeny v tabulce 30.
Tabulka 3Ó
Sloučenina R4 R5
736 0
737 0
738 HjCO N 5 0 «CA
739 0 Ó
740 0 0
741 0
- 333 CZ 298171 B6
-i
Sloučenina R4 R3
742 ϋ/ 0
743 0
7 4'4 αΓ 0
745 0 0 *<A
7'4.0 o. *>A
747 οζΑ o‘cS 0 w\A
748 ůt O k>A
749 O H^CcXXcOt 0
75,0 O :o M,
751 0 a hc/V 0 *<A
752 0 Q och3 0
-334CZ 298171 B6
sloučenina A A RJ
753 h3c hOJL h3c 0 «<A
754 Ό o
755 Λ 0· ΗΟ_]ξ .
756 ΟΗΌ 0
7.5.7 o «\Α
75:8 r o «JÁ
759. Q *\A
760 aV o «Ά
ί'6Ϊ o ríN^ Όόη 0 H<A
7.62 •o kl 11 Ό 0
7 63 aJL 0
CZ 298171 B0
51 mučenina R4 R3
764 0 u Λνη 0 0
765 0 ° Fb o
7 6'6 H ó
767’ XX 0
Údaje ve výše uvedených příkladech ukazují, že sloučeniny podle předkládaného vynálezu vykazují inhibiční aktivitu vůči IL-Ιβ převáděcímu enzymu.
Takže sloučeniny podle předkládaného vynálezu jsou schopny inhibovat ICE in vitro a dále mohou být savcům podávány orálně, mají zřetelnou klinickou využitelnost pro léčbu onemocnění zprostředkovaných IL-1, apoptózou, IGIF a IFN-γ. Na základě těchto testů se předpokládá, že sloučeniny mají schopnost inhibovat ICE in vivo.
Protože jsme popsali mnoho provedení tohoto vynálezu, je zřejmé, že naše základní postupy mohou být změněny, a tak je možno získat jiná provedení, která využívají produkty a postupy podle předkládaného vynálezu. Proto bude oceněno, že rozsah předkládaného vynálezu je definován v připojených nárocích přesněji než ve specifických provedeních, které jsou uvedeny formou příkladu.

Claims (37)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY
    1. N-Acylaminosloučenina obecného vzorce VI (VI) Ri-N-Ř2
    I H kde:
    Ri je:
    -336CZ 2981/1 ΒΟ (eioj (W2j
    C je kruh vybraný ze sady, kterou tvoří benzoskupina, pyridoskupina, thienoskupina, pyrroloskupina, furanoskupina, thiazoloskupina, izothiazoloskupina, oxazolo skupin a, izoxazoloskupina, pyrimidoskupina, imidazoloskupina, cyklopentylová skupina a cyklohexylová skupina; kruh je popřípadě jednou nebo vícekrát substituovaný skupinou -Qi;
    R2 je:
    O (a)
    H nebq
    O
    OFfo
    ORei
    OR51 m je l nebo 2;
    každá skupina Rs je nezávisle vybraná ze skupiny, kterou tvoří:
    skupina -C(O)-R)Os skupina -C(O)O-R9, skupina -C(0)-N(Rio)(Rio) skupina -S(O)2-R^ skupina -S(0)2-NH~Rio, skupina-CÍOj-CHr-O-RQ, skupina -C(0)C(0)-Rio>
    skupina -R$, atom vodíku, skupina -C(0)C(0)-ORio, a skupina -C(O)C(O)-N(R9)(Rl0);
    X5 je skupina CH nebo atom dusíku;
    Y2 je skupina H2 nebo atom kyslíku;
    -337CZ 298171 B6 skupina R$ je vybrána ze sady, kterou tvoří atom vodíku a methylová skupina;
    skupina R« je vybrána ze sady, kterou tvoří:
    skupina -C(0)-R]o, skupina -C(O)O-R9, skupina -CCOj-NCHj-Rjo, skupina “S(O)2-R9, skupina -S(O)2-NH-Riq, skupina —C(O)—CH2—ORjo, skupina -C(0)C(0)-Rio;
    skupina -C(0)-CH2N(R1())(Rio)} skupina -C(O)CH2C(O>O-R9, skupina -C(O)-CH2C(O)-R9, atom vodíku, a skupina -CCOý-CíOj-OR^;
    každá skupina R9 je nezávisle vybrána ze skupiny, kterou tvoří skupina -Ar3 a přímá nebo rozvětvená alkylová, alkenylová či alkynylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, která je popřípadě substituovaná skupinou -Ar3;
    každá skupina R10 je nezávisle vybraná ze skupiny, kterou tvoří atom vodíku, skupina -Ar3, a cykloalkylová skupina obsahující 3 až 6 atomů uhlíku, a přímá nebo rozvětvená alkylová, alkenylová či alkynylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, která je popřípadě substituovaná, skupinou -Ar3;
    skupina Rt3 je vybrána ze sady, kterou tvoří atom vodíku a přímá nebo rozvětvená alkylová skupina obsahující l až 6 atomů uhlíku;
    každá skupina R51 je nezávisle vybraná ze sady, kterou tvoří skupina R9, skupina -C(O)-R9,. skupina -C(O)-N(H)-R9 a nasycený čtyř- až osmičlenný uhlíkový kruh nebo skupiny RS1 společně tvoří nasycený čtyřčlenný až osmičlenný heterocyklický kruh obsahující skupinu -0-, skupinu -S-, nebo skupinu -NH-;
    každá skupina R2i je nezávisle vybraná ze sady, kterou tvoří atom vodíku a přímá nebo rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku;
    každá skupina Ar3 je cyklická skupina nezávisle vybraná ze sady, kterou tvoří arylová skupina obsahující 6, 10, 12, nebo 14 atomů uhlíku a 1 až 3 kruhy a aromatická heterocyklická skupina obsahující 5 až 15 atomů v kruhu a l až 3 kruhy, přičemž jmenovaná heterocyklická skupina obsahuje jeden až čtyři heteroatomové skupiny, vybrané ze skupiny zahrnující skupiny -0-, skupiny -S-, skupiny -SO-, skupiny SO2, skupiny =N- a skupiny -NH-, jmenovaná heterocyklická skupina popřípadě obsahuje jednu až šest dvojných vazeb, jmenovaná heterocyklická skupina popřípadě obsahuje jeden až tři aromatické kruhy, a jmenovaná cyklická skupina je popřípadě jednou nebo vícekrát substituovaná skupinou-Qμ každá skupina Q( je nezávisle vybraná ze skupiny, kterou tvoří aminoskupina, karboxylová skupina, atom chloru, atom fluoru, atom bromu, atom jodu, nitroskupina, kyanoskupina, skupina, =0, hydroxylová skupina, -perfluoralkylová skupina obsahující 1 až 3 atomy uhlíku, skupina R5, skupina -ORS, skupina -NHR3, skupina -OR9, skupina -N(R9)(Ri0), skupina -R9, skupina -C(O)-R]q, a skupina
    -338 CZ 298171 Βϋ
    O / \ ch2, \ / o
    pod podmínkou, že pokud skupina-An je substituovaná skupinou Qb která obsahuje jednu nebo více dalších skupin -Ar3, jmenované další skupiny -Ar3 nejsou substituované jinou skupinou -Ar3; a s tou výhradou, že pokud
    R2 je:
    10 R2i je atom vodíku; a
    Y2 je atom kyslíku, potom R5 nemůže být skupina -<(0)Rio, kde R10 je skupina -CH2CH2Ar3 a Ar3 je nesubstituovaná fenylová skupina; nebo skupina -SO2R9, kde R$ je methylová skupina; a pokud
    15 Y2 je skupina H2, potom R5 nemůže být skupina -C(0)Rio, kde Rl0 je skupina -CH2CH2Ar3 a Ar3 je nesubstituovaná fenylová skupina.
    - 339 CZ 298171 B6
  2. 2. N-Acylaminosloučenina obecného vzorce VI podle nároku 1 vybrané ze skupiny, kterou tvoří:
    2i-3e
    304á
    813e
    904 a
    -340CZ 298171 Βΰ
    2001
    2100á
    2100c
    -341.2100®
    CZ ZVS1/1 BO
    677
    6.80
    213Č
    -342CZ 295171 Βϋ
    O
    -343 CZ 298171 B6
    -344213r
    2138.
    2131
    2Í3u
    213 v
    -345 zvai/i bo
    213w
    O
    213x
    O
    245
    245b
    256
    O
    -346cz. zyei/i bo
    -347CL· 4701t1 DO
    5501
    55’Ón
    5500
    5 5 Op
    210Óf
    2100g
    -348-
    21001
    2100Ú
    2100n
    -349CZ> DO
    2100O kde iPr je izopropylová skupina, Me je methylová skupina a Et je ethylová skupina.
  3. 3. N-Acylaminosloučenina obecného vzorce VI podle nároku 1, kde m je 1;
    C je kruh vybraný ze sady, kterou tvoří benzoskupina, pyridoskupina, nebo thienoskupina, kruh je popřípadě jednou nebo vícekrát substituovaný atomem halogenu, aminoskupinou, skupinou -NH-R5, skupinou -NH-R9, skupinou -OR]0j nebo skupinou -R9, kde skupina R9 je přímá nebo rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, a R)0 je atom vodíku nebo přímá nebo rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 4 atomy uhlíku;
    skupina R$ je atom vodíku;
    skupina Ri3 je atom vodíku nebo přímá nebo rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 4 atomy uhlíku;
    R21 je atom vodíku nebo methylová skupina;
    R51 je přímá nebo rozvětvená alkylová skupina obsahující 1. až 6 atomů uhlíku, která je popřípadě substituovaná skupinou -Ar3, kde skupina Ar3 je fenylová skupina, popřípadě substituovaná skupinou -Qt;
    každá cyklická skupina Ar3 je nezávisle vybraná ze sady, kterou tvoří fenylová skupina, naftylová skupina, thienylová skupina, chinolinylová skupina, izochínolinylová skupina, pyrazolylová skupina, thiazolylová skupina, izoxazolylová skupina, benzotriazolylová skupina, benzimidazolylová skupina, thienothienylová skupina, imidazolylová skupina, thiadiazolylová skupina, benzofbjthiofenylová skupina, pyridylová skupina, benzofuranylová skupina a indolylová skupina, a jmenovaná cyklická skupina je popřípadě jednou nebo vícekrát substituovaná skupinou -Qj;
    každá skupina Qi je nezávisle vybraná ze sady, kterou tvoří aminoskupina, atom chloru, atom fluoru, atom bromu, hydroxylová skupina, skupina -R9, skupina -NH-R5, kde R5 je skupina -C(O)-Riq nebo skupina -S(O)2-R9, skupina -OR5, kde R5 je skupina -C(0)-Rio, skupina-ÓR9, skupina -NHR9, a skupina
    O / X
    CH2, \ Z
    O kde každá skupina R9 a Rio je nezávisle přímá nebo rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, která je popřípadě substituovaná skupinou -Ar3, kde Ar3 je fenylová skupina;
    a zbývající substituenty nabývají významů definovaných v nároku 1;
    -350/ i DO pod podmínkou, že pokud skupina-Ar3 je substituovaná skupinou Qi, která obsahuje jednu nebo více dalších skupin -Ar3, jmenované další skupiny -Ar3 nejsou substituované jinou skupinou -Ar3.
  4. 4. N-Acylaminosloučenina obecného vzorce VI podle nároku 3, kde R| je skupina (w2) a zbývající substituenty nabývají významů definovaných v výše 3.
  5. 5. N-Acylaminosloučenina obecného vzorce VI podle nároku 4, kde je vybrána ze skupiny, kterou tvoří:
    skupina-C(O}-R io, skupina -C(O)O-R9, skupina-C(Oj-CH2-Rio, a skupina -C(O)-CH2C(O)-R9;
    Ri je skupina (w2);
    a ostatní substituenty mají významy uvedené v nároku 4.
  6. 6. N-Acylaminosloučenina obecného vzorce VI podle nároku 5, kde R8 je skupina -C(Oj-Cl l2-OR|o, Rio je atom vodíku nebo methylová skupina a zbývající substituenty nabývají významů definovaných v nároku 5.
  7. 7. N-Acylaminosloučenina obecného vzorce VI podle nároku 3, kde R( je skupina (elO), X5 je skupina CH a zbývající substituenty nabývají významů definovaných v nároku 3.
  8. 8. N-Acylaminosloučenina obecného vzorce VI podle nároku 3, kde Rj je skupina (elO), X5 je atom dusíku a zbývající substituenty nabývají významů definovaných v nároku 3.
  9. 9. N-Acylaminosloučenina obecného vzorce VI podle kteréhokoli z nároků 1, 3 až 4 nebo 5 až
    8, kde R5 je skupina -C(0)-Rio nebo skupina -C(O)C(O)-R10;
    a zbývající substituenty mají významy uvedené v kterémkoli z nároků 1, 3 až 4 nebo 5 až 8.
  10. 10. N-Acylaminosloučenina obecného vzorce VI podle nároku 9, kde R10 je skupina Ar3;
    a zbývající substituenty mají významy uvedené v nároku 9.
  11. 11. N-Acylaminosloučenina obecného vzorce VI podle nároku 10, kde:
    Rs je skupina -C(0)-Rjo a Rjq je skupina Ar3, kde cyklická skupina Ar3 je fenylová skupina, která je popřípadě jednou nebo vícekrát substituovaná:
    skupinou -R9, kde R9 je přímá nebo rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 4 atomy uhlíku; atomem fluoru, atomem chloru, skupinou -N(H)-R5, kde -R> je atom vodíku nebo skupina -C(O)-R]q, kde R[0 je přímá nebo rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, která je popřípadě substituovaná skupinou -Ar3, kde Ar3 je fenylová skupina, skupinou -N(R9)(R10), kde R9 a R10 jsou nezávisle přímá nebo rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, nebo skupinou -O-R5, kde Rs je atom vodíku nebo přímá nebo rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 4 atomy uhlíku
    -351 CZ 298171 B6 a zbývající substituenty nabývají významů definovaných v nároku 10.
  12. 12. N-Acylamínosloučenina obecného vzorce VI podle nároku 11 vybraná ze skupiny, kterou tvoří:
    -352CZ 298171 B6
  13. 13. N-Acylaminosloučenina obecného vzorce VI podle nároku 11, kde Ar3 je fenylová skupina, která jednou nebo vícekrát substituovaná v poloze 3 nebo v poloze 5 atomem chloru nebo v poloze 4 skupinou -NH-R5, skupinou -N(Rg)(R|0), nebo skupinou -O-R5; nebo kde
    Ar3 je fenylová skupina, která jednou nebo vícekrát substituovaná v poloze 3 nebo v poloze 5 5 skupinou -R9, kde R9 je přímá nebo rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 4 atomy uhlíku;
    a v poloze 4 skupinou -O-R5;
    a zbývající substituenty nabývají významu uvedených v nároku 11.
  14. 14. N-Acylaminosloučenina obecného vzorce VI podle nároku 13 vybraná ze skupiny, kterou
    10 tvoří:
    - 353 CZ 298171 B6
    -354CZ 298171 B6
    213m
    550k
    550m
    688b
    - 355 CZ 2981/1 tío
    - 356 CL 4701/1 tíO
    O
    214W-5
    214W-6 kde Me znamená methylovou skupinu.
  15. 15. N-Acylaminosloučenina obecného vzorce VI podle nároku 10, kde:
    5 R5 je skupina -C(O)-Riq, kde R]0 je skupina Ar3 a cyklická skupina Ar3 je vybrána ze sady, kterou tvoří indolylová skupina, benzimidazolylová skupina, thienylová skupina, chinolylová skupina, izochinolylová skupina a benzo[b]thiofenylová skupina, a jmenovaná cyklická skupina je popřípadě jednou nebo vícekrát substituovaná skupinou -Qij a zbývající substituenty nabývají významů uvedených v nároku 10.
    o
  16. 16. N-Acylaminosloučenina obecného vzorce VI podle nároku 15, kde cyklická skupina Ar3 je izochinolylová skupina, a jmenovaná cyklická skupina je popřípadě jednou nebo vícekrát substituovaná skupinou —Qi;
    a zbývající substituenty mají významy uvedené v nároku 15.
    - 357 CZ 2981/1 130
  17. 17. N-Acylaminosloučenina obecného vzorce VI podle nároku 16 vybraná ze skupiny, kterou tvoří:
    - 358 CZ 298171 B6
    696c
    69 6ď
    - 359 CZ 298171 B6
    Ú
    4Ί
    O
    Ó
    412 c
    -360CZ ZVBI71 Βδ
  18. 18. N-Acylaminosloučenina obecného vzorce VI podle nároku 16, kterou je:
    O
    361 CZ. ZV3171 Βϋ
  19. 19. N-Acylaminosloučenina obecného vzorce VI podle nároku 11, kde R5 je skupina -C(0)-Rio, kde R]0 je skupina Ar3 a cyklická skupina Ar3 je fenylová skupina, která je substituovaná skupinou
    O / \ ch2, \ Z o
    5 a zbývající substituenty nabývají významů definovaných v nároku 11.
  20. 20, N-Acylaminosloučenina obecného vzorce VI podle nároku 19 vybraná ze skupiny, kterou tvoří:
    415b
    415c
  21. 21. Farmaceutický prostředek, vyznačující se tím, že obsahuje sloučeninu podle kteréhokoli z nároků 1 až 20 a farmaceuticky přijatelný nosič.
    -362-
    CZ 298171 B&
  22. 22. Použití sloučeniny podle kteréhokoli z nároků 1 až 20 pro přípravu léku pro použití při léčbě nebo prevenci onemocnění, mezi které patří osteoartritida, akutní pankreatitida, chronická pankreatitida, astma, syndrom respirační úzkosti dospělých, infekční hepatitida, glomerulonefri-
    5 tida, revmatoidní artritida, systémový lupus erythematosus, skleroderma, chronická thyroiditida, Graveova choroba, autoimunitní gastritida, na inzulínu závislý diabetes mellitus, tj. typu I, autoimunitní hemolytická anemie, autoimunitní neutropenie, thrombocytopenie, chronická aktivní hepatitida, myasthenia gravis, zánětlivá onemocnění střev, Crohnova choroba, ulcerativní kolitida, mnohočetná skleróza, psoriáza, lichenplanus, choroby transplantát vs. hostitel, akutní io dermatomyositida, ekzém, primární cirhóza, uveitida, Behcetova choroba, akutní aplazie, aplastická anemie, amyotrofní laterální skleróza, nefrotický syndrom, osteoporóza, kostní poruchy ve spojitosti smnohočetným myelomem, akutní myelogenní leukemie, chronická myelogenní leukemie, metastatický melanom, Kaposiho sarkom, mnohočetný myelom, sepse, septický šok, Shigellosa, Alzheimerova choroba, Parkinsonova choroba, mozková ischemie nebo ischemie 15 myokardu.
  23. 23. Použití podle nároku 22, kde onemocnění jsou vybrána ze skupiny, kterou tvoří osteoarthritida, akutní pankreatitida, revmatoidní arthritida, zánětlivá střevní onemocnění, ulcerativní kolitida, Crohnova choroba, hepatitida, syndrom respirační úzkosti dospělých, glomerulonefri-
    20 tida, diabetes, mellitus závislý na inzulínu, tj. typu 1, juvenilní diabetes, psoriáza, choroby transplantát vs. hostitel, hepatitida, nebo Alzheimerova choroba.
  24. 24. Použití sloučeniny podle kteréhokoli z nároků 1 až 20 pro přípravu léků pro použití při léčbě nebo prevenci onemocnění vybraných ze skupiny, kterou tvoří Alzheimerova choroba, Parkinso-
  25. 25 nova choroba, mozková ischemie, myokardiální ischemie, spinální svalová atrofie, mnohočetná skleróza, encefalitida spojená s AIDS, encefalitida spojená s HIV, stárnutí vypadávání vlasů, nebo neurologická poškození způsobená mrtvicí.
    25. Použití podle nároku 24, při němž je onemocněním Alzheimerova choroba.
  26. 26. Způsob přípravy N-acylaminosloučeniny obecného vzorce VI podle nároku 1
    R1-N-R2 i H (eioj
    -363CL zvai/l BO
    C je kruh vybraný ze sady, kterou tvoří benzoskupina, pyridoskupina, thienoskupina, pyrroloskupina, furanoskupina, thiazoloskupina, izothiazoloskupina, oxazoloskupina, izoxazoloskupina, pyrimidoskupina, imidazoloskupina, cyklopentylová skupina a cyklohexylová skupina; kruh je 5 popřípadě jednou nebo vícekrát substituovaný skupinou -Qt;
    R2 je:
    ta) nebo (b)
    10 m je 1 nebo 2;
    každá skupina R5 je nezávisle vybraná ze skupiny, kterou tvoří:
    skupina -C(O)-R10, skupina -C(O)O-Ry,
    15 skupina-C(0)-N(R|o)(Rio) skupina -S(O)2-R9, skupina -S(O)2-NH-Ri0, skupina -C(Oj-CH2-O-R9, skupina -C(O)C(O)-Ri0,
    20 skupina-R9, atom vodíku, skupina-C(0)C(0}-ORío. a Skupina -C(O)C(O)-N(R9)(R]0);
    25 X5 je skupina CH nebo atom dusíku;
    Y2 je skupina H2 nebo atom kyslíku;
    skupina Ré je vybrána ze sady, kterou tvoří atom vodíku a methylová skupina;
    skupina Rg je vybrána ze sady, kterou tvoří:
    skupina-C(O)-R jo, skupina -€(0)0-R9, skupina -C(0)-N(H)-R]o,
    35 skupina -S(O)2-R9, skupina -S(O)2-NH-R]0í skupina —0(0)-43142-OR|q, skupina -C(0)C(0)-Rio;
    skupina -C(0)-CH2N(R1o)(Rio),
    40 skupina -C(O)-CH2C(O)-Ó-R9, skupina -43(0)-0 H2C(O)-R9,
    -364CZ zy»171 HO atom vodíku, a skupina -C(0)-C(0)-ORio;
    každá skupina R9 je nezávisle vybrána ze skupiny, kterou tvoří skupina -Ar3 a přímá nebo rozvětvená alkylová, alkenylová či alkynylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, která je popřípadě substituovaná skupinou -Ar3;
    každá skupina R10 je nezávisle vybraná ze skupiny, kterou tvoří atom vodíku, skupina -Ar3, a cykloalkylová skupina obsahující 3 až 6 atomů uhlíku, a přímá nebo rozvětvená alkylová, alkenylová či alkynylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, která je popřípadě substituovaná skupinou-Arb skupina R]3 je vybrána ze sady, kterou tvoří atom vodíku a přímá nebo rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku;
    každá skupina R51 je nezávisle vybraná ze sady, kterou tvoří skupina R9, skupina -QOj-R?, skupina -CfOj-NfHj-Rg a nasycený čtyř- až osmičlenný uhlíkový kruh nebo skupiny R5i společně tvoří nasycený čtyřčlenný až osmičlenný heterocyklický kruh obsahující skupinu -0-, skupinu-S-, nebo skupinu-NH-;
    každá skupina R2] je nezávisle vybraná ze sady, kterou tvoří atom vodíku a přímá nebo rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku;
    každá skupina Ar3 je cyklická skupina nezávisle vybraná ze sady, kterou tvoří arylová skupina obsahující 6, 10, 12, nebo 14 atomů uhlíku a 1 až 3 kruhy a aromatická heterocyklická skupina obsahující 5 až 15 atomů v kruhu a 1 až 3 kruhy, přičemž jmenovaná heterocyklická skupina obsahuje jeden až čtyři heteroatomové skupiny, vybrané ze skupiny zahrnující skupiny -O-, skupiny -S-, skupiny -SO-, skupiny SO2, skupiny =N-, a skupiny -NH-, jmenovaná heterocyklická skupina popřípadě obsahuje jednu až šest dvojných vazeb, jmenovaná heterocyklická skupina popřípadě obsahuje jeden až tři aromatické kruhy, a jmenovaná cyklická skupina je popřípadě jednou nebo vícekrát substituovaná skupinou -Qb každá skupina Qi je nezávisle vybraná ze skupiny, kterou tvoří aminoskupina, karboxylová Skupina, atom chloru, atom fluoru, atom bromu, atom jodu, nitroskupina, kyanoskupina, skupina, =0, hydroxylová skupina, -perfluoralkylová skupina obsahující 1 až 3 atomy uhlíku, skupina R5, skupina -ORS, skupina -NHR5, skupina -OR9, skupina -N(R9)(R10), skupina -R9, skupina -C(O)-Riq, a skupina
    O / \ ch2, \ /
    O pod podmínkou, že pokud skupina -Ar3 je substituovaná skupinou Qb která obsahuje jednu nebo více dalších skupin -Ar3, jmenované další skupiny -Ar3 nejsou substituované jinou skupinou -Ar3;
    vyznačující se tím, že se ve stupních:
    (a) smísí karboxylová kyselina s N-alloc-chráněným aminem v přítomnosti inertního rozpouštědla, trifenylfosfinu, nukleofilního lapače a tatrakistrifenylfosfinpalladia(O) při teplotě místnosti pod inertní atmosférou; a
    b) přidá ke směsi ze stupně a) 1-hydroxybenzotriazol a l-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimid-hydrochlorid; a popřípadě se v dalším stupni:
    -365 CZ Z9BI/I BŮ
    c) směs ze stupně b) hydrolyzuje v přítomnosti roztoku obsahujícího kyselinu a vodu, kde směs z kroku b) se popřípadě zahustí.
  27. 27. Způsob podle nároku 26, vyznačující se tím, že inertním rozpouštědlem je dichlormethan, di methyl formám i d nebo směs dichlormethanu a dimethylformamidu.
  28. 28. Způsob podle nároku 26, vyznačující se tím, že nukleofilním lapačem je dimedon, morfolin, trimethylsilyl-dimethylamin nebo kyselina dimethylbarbiturová.
  29. 29. Způsob podle nároku 28, vyznačující se tím, že nukleofilním lapačem je trimethylsilyl-dimethylamin nebo kyselina dimethylbarbiturová.
  30. 30. Způsob podle nároku 28, vyznačující se tím, že inertním rozpouštědlem je dichlormethan, dimethylformamid nebo směs dichlormethanu a dimethylformamidu.
  31. 31. Způsob podle nároku 30, vyznačující kyselina dimethylbarbiturová,
  32. 32. Způsob podle nároku 31, vyznačující trifluoroctovou v množství 1 až 90 % hmotnostních.
    se tím, že nukleofilním lapačem je se tím, že roztok obsahuje kyselinu
  33. 33. Způsob podle nároku 32, vyznačující se tím, trifluoroctovou v množství 20 až 50 % hmotnostních.
    že roztok obsahuje kyselinu
  34. 34. Způsob podle nároku 31, vyznačující se tím, že roztok obsahuje kyselinu chlorovodíkovou v množství 0,1 až 30 % hmotnostních.
  35. 35. Způsob podle nároku 32, vyznačující se tím, že roztok obsahuje kyselinu chlorovodíkovou v množství 5 až 15 % hmotnostních.
  36. 36. Způsob podle libovolného z nároků 26 až 35, vyznačující se tím, že N-alloc-chráněným aminem je sloučenina obecného vzorce ·,. kde
    R5i je nezávisle vybraná ze sady, kterou tvoří skupina R9, skupina -C(O)-R9, skupina -C(O)-N(H)-R9 a nasycený čtyř- až osmičlenný uhlíkový kruh nebo skupiny R5l společně tvoří nasycený čtyřčlenný až osmičlenný heterocyklický kruh obsahující skupinu -O-, skupinu -S- nebo skupinu -NH-; a zbývající substituenty mají významy uvedené v nároku 26.
  37. 37. Způsob podle nároku 26, vyznačující se tím, že se N-acylaminosloučenina obecného vzorce VI vybere ze skupiny zahrnující sloučeniny
CZ0190698A 1995-12-20 1996-12-20 N-Acylaminoslouceniny jako inhibitory enzymu konvertujícího interleukin-1ß, zpusob jejich prípravy a farmaceutické prostredky, které je obsahují CZ298171B6 (cs)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US08/575,641 US6008217A (en) 1995-12-20 1995-12-20 Inhibitors of interleukin-1β converting enzyme
US08/598,332 US5874424A (en) 1995-12-20 1996-02-08 Inhibitors of interleukin-1β converting enzyme
US08/712,878 US5985863A (en) 1996-09-12 1996-09-12 Compositions and methods for decreasing IGIF and IFN-γ production by administering an ICE inhibitor
US3149596P 1996-11-26 1996-11-26
US08/761,483 US6204261B1 (en) 1995-12-20 1996-12-06 Inhibitors of interleukin-1β Converting enzyme inhibitors

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CZ190698A3 CZ190698A3 (cs) 1998-10-14
CZ298171B6 true CZ298171B6 (cs) 2007-07-11

Family

ID=27534345

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ0190698A CZ298171B6 (cs) 1995-12-20 1996-12-20 N-Acylaminoslouceniny jako inhibitory enzymu konvertujícího interleukin-1ß, zpusob jejich prípravy a farmaceutické prostredky, které je obsahují
CZ20030411A CZ300171B6 (cs) 1995-12-20 1996-12-20 N-Acylaminoslouceniny jako inhibitory enzymu konvertujícího interleukin-1beta, zpusob jejich prípravy a farmaceutické prostredky, které je obsahují

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ20030411A CZ300171B6 (cs) 1995-12-20 1996-12-20 N-Acylaminoslouceniny jako inhibitory enzymu konvertujícího interleukin-1beta, zpusob jejich prípravy a farmaceutické prostredky, které je obsahují

Country Status (23)

Country Link
US (7) US6204261B1 (cs)
EP (3) EP0869967A2 (cs)
JP (3) JP4205762B2 (cs)
KR (1) KR100561504B1 (cs)
CN (1) CN1229412A (cs)
AP (4) AP2002002540A0 (cs)
AU (1) AU735075B2 (cs)
BG (2) BG64465B1 (cs)
BR (2) BRPI9612258B8 (cs)
CA (1) CA2239904C (cs)
CZ (2) CZ298171B6 (cs)
GE (1) GEP20022638B (cs)
IL (2) IL124850A0 (cs)
IN (1) IN182290B (cs)
IS (1) IS4771A (cs)
MX (1) MX9805016A (cs)
NO (1) NO326882B1 (cs)
NZ (2) NZ518094A (cs)
PL (1) PL190736B1 (cs)
SK (1) SK287195B6 (cs)
TR (3) TR200201216T2 (cs)
UA (1) UA66337C2 (cs)
WO (1) WO1997022619A2 (cs)

Families Citing this family (81)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6204261B1 (en) * 1995-12-20 2001-03-20 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of interleukin-1β Converting enzyme inhibitors
US6420522B1 (en) * 1995-06-05 2002-07-16 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of interleukin-1β converting enzyme
US6200969B1 (en) 1996-09-12 2001-03-13 Idun Pharmaceuticals, Inc. Inhibition of apoptosis using interleukin-1β-converting enzyme (ICE)/CED-3 family inhibitors
US6610683B2 (en) 1996-09-12 2003-08-26 Idun Pharmaceuticals, Inc. Treatment of infectious disease using interleukin-1β-converting enzyme (ICE)/CED-3 family inhibitors
US6531467B2 (en) 1996-09-12 2003-03-11 Idun Pharmaceuticals, Inc. Inhibition of inflammation using interleukin-1β-converting enzyme (ICE)/CED-3 family inhibitors
US5919790A (en) * 1996-10-11 1999-07-06 Warner-Lambert Company Hydroxamate inhibitors of interleukin-1β converting enzyme
PL332640A1 (en) 1996-10-11 1999-09-27 Warner Lambert Co Sulphonamide-group substituted derivatives of aspartic acid as inhibitors of an interleukin-1beta transforming enzyme
JP2001502330A (ja) * 1996-10-11 2001-02-20 ワーナー―ランバート・コンパニー スルホンアミド置換アスパラギン酸インターロイキン―１β変換酵素阻害剤
EP1466921A1 (en) * 1996-12-06 2004-10-13 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of interleukin-1 beta converting enzyme
WO1998024804A2 (en) * 1996-12-06 1998-06-11 Vertex Pharmaceuticals Incorporated INHIBITORS OF INTERLEUKIN-1β CONVERTING ENZYME
FR2766188B1 (fr) * 1997-07-15 2000-02-11 Hoechst Marion Roussel Inc Nouveau procede de preparation de derives amines d'alkyloxy furanone, composes issus de ce procede et utilisation de ces composes
JP4499917B2 (ja) 1998-03-09 2010-07-14 バーテックス ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド インターロイキン−１β変換酵素のインヒビターとしての１，２−ジアゼパン誘導体
WO1999047545A2 (en) * 1998-03-19 1999-09-23 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of caspases
FR2777279B1 (fr) * 1998-04-08 2004-08-13 Hoechst Marion Roussel Inc Nouvelles formes cristallines du 1s-[1alpha(2s*,3r*), 9 alpha] 6,10-dioxo-n-(2-ethoxy-5-oxo-tetrahydro-3-furanyl) -9[[(1-isoquinolyl)carbonyl]amino]octohydro-6h-pyridazino [1,2-a][1,2]diazepine-1-carboxamide
FR2777889B1 (fr) * 1998-04-27 2004-07-09 Hoechst Marion Roussel Inc Nouveaux derives de l'acide octahydro-6,10-dioxo-6h- pyridazino[1,2-a][1,2]diazepine-1-carboxylique, leur procede de preparation et leur application a la preparation de composes therapeutiquement actifs
FR2777888B1 (fr) 1998-04-27 2004-07-16 Hoechst Marion Roussel Inc Nouveaux derives de l'acide (3,4,7,8,9,10-hexahydro-6,10- dioxo-6h-pyridazino[1,2-a][1,2]diazepine-1-carboxylique, leur procede de preparation et leur application a la preparation de medicaments
US6197750B1 (en) * 1998-07-02 2001-03-06 Idun Pharmaceuticals, Inc. C-terminal modified oxamyl dipeptides as inhibitors of the ICE/ced-3 family of cysteine proteases
US7053056B2 (en) 1998-07-02 2006-05-30 Idun Pharmaceuticals, Inc. C-terminal modified oxamyl dipeptides as inhibitors of the ICE/ced-3 family of cysteine proteases
US6544951B2 (en) 1998-07-02 2003-04-08 Idun Pharmaceuticals, Inc. C-terminal modified oxamyl dipeptides as inhibitors of the ICE/ced-3 family of cysteine proteases
US6177565B1 (en) 1998-08-19 2001-01-23 Vertex Pharmaceuticals Inc. Process for synthesizing piperazic acid
US6703500B2 (en) * 1998-08-19 2004-03-09 Vertex Pharmaceuticals, Incorporated Method of preparing bicyclic intermediates from piperazic acid or an ester thereof useful in the manufacture of caspase inhibitors
US6201118B1 (en) 1998-08-19 2001-03-13 Vertex Pharmaceuticals Inc. Process for forming an N-acylated, N,N-containing bicyclic ring from piperazic acid or an ester thereof especially useful as an intermediate in the manufacture of a caspase inhibitor
US6559304B1 (en) * 1998-08-19 2003-05-06 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Method for synthesizing caspase inhibitors
EP1159273A1 (en) 1999-03-02 2001-12-05 Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals Inc. Compounds useful as reversible inhibitors of cathepsin s
TW200404789A (en) * 1999-03-15 2004-04-01 Axys Pharm Inc Novel compounds and compositions as protease inhibitors
US6420364B1 (en) 1999-09-13 2002-07-16 Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals, Inc. Compound useful as reversible inhibitors of cysteine proteases
AR026748A1 (es) 1999-12-08 2003-02-26 Vertex Pharma Un compuesto inhibidor de caspasas, una composicion farmaceutica que lo comprende, un metodo para la sintesis del mismo y un compuesto intermediario paradicha sintesis
FR2802927B1 (fr) * 1999-12-28 2002-03-01 Hoechst Marion Roussel Inc Nouveaux derives de diazepine carboxamide, leur procede de preparation, leur application a titre de medicaments, compositions pharmaceutiques et leur nouvelle utilisation
US6790989B2 (en) 2000-01-13 2004-09-14 Idun Pharmaceuticals, Inc. Inhibitors of the ICE/ced-3 family of cysteine proteases
US6515173B1 (en) 2000-01-13 2003-02-04 Idun Pharmaceuticals, Inc. Inhibitors of the ICE/ced-3 family of cysteine proteases
WO2001087328A2 (en) 2000-05-12 2001-11-22 Immunex Corporation Interleukin-1 inhibitors in the treatment of diseases
PE20011350A1 (es) 2000-05-19 2002-01-15 Vertex Pharma PROFARMACO DE UN INHIBIDOR DE ENZIMA CONVERTIDORA DE INTERLEUCINA-1ß (ICE)
AU2001280442B2 (en) * 2000-06-15 2005-10-27 Smithkline Beecham Corporation Method for preparing a physiologically active il-18 polypeptide
DE10037310A1 (de) * 2000-07-28 2002-02-07 Asta Medica Ag Neue Indolderivate und deren Verwendung als Arzneimittel
BR0116608A (pt) * 2000-12-28 2004-06-29 Daiichi Seiyaku Co Inibidores vla-4
CN100396680C (zh) * 2000-12-28 2008-06-25 第一制药株式会社 极迟抗原-4抑制剂
DK1355668T3 (da) * 2001-01-29 2008-05-05 Serono Lab Anvendelse af IL-18 inhibitorer til behandling og/eller forebyggelsen af hjertesygdom
EP1381602A1 (en) 2001-04-19 2004-01-21 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Heterocyclyldicarbamides as caspase inhibitors
US6821993B1 (en) 2001-10-04 2004-11-23 Ortho-Mcneil Pharmaceutical, Inc. Triazepine derivatives as neurotrophic agents
CA2462643A1 (en) * 2001-10-04 2003-04-10 Ortho-Mcneil Pharmaceutical, Inc. Triazepine derivatives as neurotrophic agents
WO2003103599A2 (en) * 2002-06-05 2003-12-18 Sunesis Pharmaceuticals, Inc. Caspase-1 inhibitors and methods for their use
RU2005102094A (ru) 2002-06-28 2006-02-27 Вертекс Фармасьютикалз Инкорпорейтед (Us) Ингибиторы каспазы и их применение
AU2003297570A1 (en) * 2002-11-26 2004-06-18 Advanced Biotherapy, Inc. Treatment of skin diseases
US7612091B2 (en) 2002-12-20 2009-11-03 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Caspase inhibitors and uses thereof
PE20050159A1 (es) 2003-05-27 2005-04-19 Vertex Pharma Derivados de acido 3-[2-(3-amino-2-oxo-2h-piridin-1-il)-acetilamino]-4-oxo-pentanoico como inhibidores de caspasa
CN1826336B (zh) 2003-07-24 2010-06-02 第一制药株式会社 环己烷羧酸类
US20050124684A1 (en) * 2003-08-29 2005-06-09 Ying Du 5-(hydroxymethyl) furfural and derivatives as inhibitors of TNFalpha and IL-1beta production
CN1886126A (zh) * 2003-09-25 2006-12-27 Dmi生物科学公司 利用n－酰基－l－天冬氨酸的方法和产品
CN101524351A (zh) * 2003-12-01 2009-09-09 沃泰克斯药物股份有限公司 使用ice抑制剂治疗感染疾病
CN100441186C (zh) * 2003-12-03 2008-12-10 和记黄埔医药企业有限公司 伪石蒜碱的医药用途
ES2523147T3 (es) * 2004-02-26 2014-11-21 Baylor Research Institute Composiciones y métodos para el tratamiento sistémico de la artritis
AR047981A1 (es) * 2004-02-27 2006-03-15 Vertex Pharma Inhibidores de caspasa y sus usos correspondientes
ES2532967T3 (es) 2004-03-12 2015-04-06 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Proceso y productos intermedios para la preparación de inhibidores de la acetal caspasa aspártica
KR100883937B1 (ko) * 2004-04-22 2009-02-18 더 프록터 앤드 갬블 캄파니 사이토카인 억제제로서의 삼치환 우레아
AU2005247409B2 (en) 2004-05-15 2011-11-10 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Treating seizures using ICE inhibitors
GB0411056D0 (en) 2004-05-18 2004-06-23 Novartis Ag Organic compounds
CN1980658A (zh) * 2004-05-27 2007-06-13 沃泰克斯药物股份有限公司 治疗自身炎性疾病的ice抑制剂
GB0515323D0 (en) * 2005-07-26 2005-08-31 Electrophoretics Ltd Mass labels
DE102005048293A1 (de) * 2005-10-08 2007-04-12 Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh Retardformulierung für Pralnacasan
EP1826199A1 (en) * 2006-02-27 2007-08-29 Technische Universität Wien Modified amino acids
US20100099845A1 (en) * 2006-09-15 2010-04-22 University Of Utah Research Foundation Protected enantiopure trifluorothreonines and methods of making and using same
WO2009019115A1 (en) 2007-08-03 2009-02-12 Sanofi-Aventis Caspase imaging probes
EP2276508A4 (en) * 2008-04-15 2011-12-28 Sarcode Bioscience Inc ADMINISTRATION OF LFA-1 ANTAGONISTS TO THE GASTROINTESTINAL SYSTEM
US9365612B2 (en) 2010-01-29 2016-06-14 United States Of America As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Caspase inhibitors
WO2012061785A2 (en) 2010-11-05 2012-05-10 Brandeis University Ice inhibiting compounds and uses thereof
US9956260B1 (en) 2011-07-22 2018-05-01 The J. David Gladstone Institutes Treatment of HIV-1 infection and AIDS
EP2848696A1 (en) 2013-09-13 2015-03-18 Sanofi-Aventis Deutschland GmbH Caspase-1 imaging probes
EA201690846A1 (ru) * 2013-11-06 2016-08-31 Бристол-Маерс Сквибб Компани Замещенные производные пиридина, пригодные в качестве ингибиторов gsk-3
AR103297A1 (es) 2014-12-30 2017-05-03 Forma Therapeutics Inc Pirrolo y pirazolopirimidinas como inhibidores de la proteasa 7 específica de ubiquitina
MA41291A (fr) 2014-12-30 2017-11-07 Forma Therapeutics Inc Dérivés de la pyrrolotriazinone et de l'imidazotriazinone en tant qu'inhibiteurs de la protéase spécifique de l'ubiquitine n° 7 (usp7) pour le traitement d'un cancer
JP2018504432A (ja) 2015-02-05 2018-02-15 フォーマ セラピューティクス，インコーポレイテッド ユビキチン特異的プロテアーゼ７阻害物質としてのイソチアゾロピリミジノン、ピラゾロピリミジノン及びピロロピリミジノン
EP3253738A1 (en) 2015-02-05 2017-12-13 Forma Therapeutics, Inc. Quinazolinones and azaquinazolinones as ubiquitin-specific protease 7 inhibitors
JP2018504431A (ja) 2015-02-05 2018-02-15 フォーマ セラピューティクス，インコーポレイテッド ユビキチン特異的プロテアーゼ７阻害物質としてのチエノピリミジノン
EP3330256B1 (en) * 2015-07-07 2021-06-16 Shionogi & Co., Ltd. HETEROCYCLIC DERIVATIVE HAVING TrkA-INHIBITING ACTIVITY
CA3012832A1 (en) 2016-02-05 2017-08-10 Denali Therapeutics Inc. N-azepinyl-carboxamide inhibitors of receptor-interacting protein kinase1
RS63203B1 (sr) 2016-12-09 2022-06-30 Denali Therapeutics Inc Jedinjenja korisna kao inhibitori ripk1
IL298324A (en) 2020-06-10 2023-01-01 Aligos Therapeutics Inc Anti-viral compounds for treating coronavirus, picornavirus, and norovirus infections
WO2022103960A1 (en) 2020-11-13 2022-05-19 Inipharm, Inc. Dichlorophenol hsd17b13 inhibitors and uses thereof
JP2024525589A (ja) 2021-07-09 2024-07-12 アリゴス セラピューティクス インコーポレイテッド 抗ウイルス化合物
US12065428B2 (en) 2021-09-17 2024-08-20 Aligos Therapeutics, Inc. Anti-viral compounds
EP4463229A1 (en) 2022-01-12 2024-11-20 Denali Therapeutics Inc. Crystalline forms of (s)-5-benzyl-n-(5-methyl-4-oxo-2, 3,4,5- tetrahydropyrido [3,2-b] [l,4]oxazepin-3-yl)-4h-l,2,4-triazole-3-carboxamide

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1995033751A1 (en) * 1994-06-08 1995-12-14 Sanofi Winthrop, Inc. Bicycling lactam inhibitor of interleukin-1-beta converting enzyme
WO1995035308A1 (en) * 1994-06-17 1995-12-28 Vertex Pharmaceuticals Incorporated INHIBITORS OF INTERLEUKIN-1β CONVERTING ENZYME
WO1997022619A2 (en) * 1995-12-20 1997-06-26 Vertex Pharmaceuticals Incorporated INHIBITORS OF INTERLEUKIN-1β CONVERTING ENZYME

Family Cites Families (67)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6008217A (en) * 1995-12-20 1999-12-28 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of interleukin-1β converting enzyme
US5874424A (en) * 1995-12-20 1999-02-23 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of interleukin-1β converting enzyme
US5985863A (en) * 1996-09-12 1999-11-16 Vertex Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for decreasing IGIF and IFN-γ production by administering an ICE inhibitor
US4276298A (en) 1978-03-24 1981-06-30 Merck & Co., Inc. 2-Aryl-1,2-benzisothiazolinone-1,1-dioxides and their use as selective protease inhibitors
US4337346A (en) 1978-11-02 1982-06-29 Sumitomo Chemical Company, Limited α-Hydroxyaldehyde and a process for preparing the same
US4369183A (en) 1979-09-06 1983-01-18 Merck & Co., Inc. 2-Pyridyl-1,2-benzisothiazolinone-1,1-dioxides and their use as selective protease inhibitors
US4584397A (en) 1983-05-09 1986-04-22 G. D. Searle & Co. Protease inhibitors
US4499295A (en) 1983-05-09 1985-02-12 G. D. Searle & Co. Protease inhibitors
IL72523A (en) * 1983-08-12 1988-06-30 Takeda Chemical Industries Ltd 3-amino-4-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-1,5-benzoxazepine derivatives,their production and pharmaceutical compositions containing them
US4551279A (en) 1984-01-09 1985-11-05 G. D. Searle & Co. Protease inhibitors
US5055451A (en) 1986-12-22 1991-10-08 Syntex Inc. Aryloxy and arylacyloxy methyl ketones as thiol protease inhibitors
US5158936A (en) 1986-12-22 1992-10-27 Syntex (U.S.A.) Inc. Aryloxy and arylacyloxy methyl ketones as thiol protease inhibitors
NZ223148A (en) 1987-01-16 1989-10-27 Merrell Dow Pharma Peptide derivatives having peptidase inhibition activity
US4968607A (en) 1987-11-25 1990-11-06 Immunex Corporation Interleukin-1 receptors
WO1989004838A1 (en) 1987-11-25 1989-06-01 Immunex Corporation Interleukin-1 receptors
US5081228A (en) 1988-02-25 1992-01-14 Immunex Corporation Interleukin-1 receptors
US5008245A (en) 1988-10-27 1991-04-16 University Of Kentucky Research Foundation Novel peptidyl carbamate inhibitors of the enzyme elastase
SG48298A1 (en) 1989-05-04 1998-04-17 Sterling Winthorp Inc Saccharin deriatives useful as proteolytic enzymeinhibitors and preparation of
CA2021660A1 (en) 1989-07-26 1991-01-27 Philippe Bey Peptidase inhibitors
NZ235155A (en) 1989-09-11 1993-04-28 Merrell Dow Pharma Peptidase substrates in which the carboxy terminal group has been replaced by a tricarbonyl radical
AU6712790A (en) 1989-10-05 1991-05-16 Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Catheter device with insertion stop means
US5416013A (en) 1990-04-04 1995-05-16 Sterling Winthrop Inc. Interleukin 1β protease and interleukin 1β protease inhibitors
WO1991015577A1 (en) 1990-04-04 1991-10-17 Black, Roy, A. INTERLEUKIN 1'beta' PROTEASE
AU7891891A (en) 1990-05-25 1991-12-31 Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd. Pyrrolopyridazine compounds
US5199980A (en) 1990-09-21 1993-04-06 Multicolor Specialties, Inc. Polyurethane-based water-in-water multicolor paint and method for making
IL99527A (en) 1990-09-28 1997-08-14 Lilly Co Eli Tripeptide antithrombotic agents
EP0504938A3 (en) 1991-03-22 1993-04-14 Suntory Limited Prophylactic and therapeutic agent for bone diseases comprising di- or tripeptide derivative as active ingredient
CA2071674C (en) 1991-06-21 2003-08-19 Kevin T. Chapman Peptidyl derivatives as inhibitors of interleukin-1.beta. converting enzyme
JP3190431B2 (ja) 1991-07-01 2001-07-23 三菱化学株式会社 ケトン誘導体
DE69229252T2 (de) 1991-08-16 1999-12-16 Merck & Co., Inc. DNS, welche das Interleukin-1B-Vorläufer-Converting-Enzym kodiert
US5278061A (en) 1991-08-16 1994-01-11 Merck & Co., Inc. Affinity chromatography matrix useful in purifying interleukin-1β converting enzyme
US6348570B1 (en) 1991-08-16 2002-02-19 Merck & Co., Inc. Chromophore containing compounds and their use in determining interleukin-1β convertase activity
EP0533226A3 (en) 1991-08-16 1993-08-18 Merck & Co. Inc. Novel chromophore containing compounds
WO1993005071A1 (en) 1991-08-30 1993-03-18 Sterling Winthrop Inc. INTERLEUKIN 1β PROTEASE AND INTERLEUKIN 1β PROTEASE INHIBITORS
GB9123326D0 (en) 1991-11-04 1991-12-18 Sandoz Ltd Improvements in or relating to organic compounds
EP0547699A1 (en) 1991-12-19 1993-06-23 Merck & Co. Inc. Peptidyl derivatives as inhibitors of interleukin-1B converting enzyme
AU3479593A (en) 1992-01-31 1993-09-01 Merck & Co., Inc. Peptidyl derivatives as inhibitors of interleukin-1beta converting enzyme
ES2118940T3 (es) 1992-02-21 1998-10-01 Merck & Co Inc Peptidil-derivados utiles como inhibidores de la enzima conversora de la interleucina-1 beta.
WO1993025683A1 (en) 1992-06-12 1993-12-23 Massachusetts Institute Of Technology A gene which prevents programmed cell death
WO1993025685A1 (en) 1992-06-12 1993-12-23 Massachusetts Institute Of Technology Cloning and characterization of the cell death genes ced-3 and ced-4
JPH08500482A (ja) 1992-06-12 1996-01-23 マサチューセッツ インスティテュート オブ テクノロジー Ｃｅｄ−３及び関連蛋白質のインヒビター
AU4634993A (en) 1992-06-24 1994-01-24 Merck & Co., Inc. Dna encoding precursor interleukin 1beta converting enzyme
WO1994003480A1 (en) 1992-07-31 1994-02-17 Pfizer Inc. Peptidyl 4-amino-2,2-difluoro-3-oxo-1,6-hexanedioic acid derivatives as antiinflammatory agents
US5374623A (en) 1992-08-20 1994-12-20 Prototek, Inc. Cysteine protease inhibitors effective for in vivo use
CA2109646C (en) 1992-11-24 2000-03-07 Gaston O. Daumy Para-nitroanilide peptides
EP0618223A3 (en) 1993-03-08 1996-06-12 Sandoz Ltd Peptides, the release of Interleukin 1-Bêta, useful as anti-inflammatory agents.
CA2122227A1 (en) 1993-04-29 1994-10-30 Roland E. Dolle Peptide analogs as irreversible interleukin-1.beta. protease inhibitors
US5462939A (en) 1993-05-07 1995-10-31 Sterling Winthrop Inc. Peptidic ketones as interleukin-1β-converting enzyme inhibitors
US5411985A (en) 1993-05-17 1995-05-02 Merck & Co., Inc. Gamma-pyrone-3-acetic acid as an inhibitor or interleukin-1 β inventory enzyme
JPH0789951A (ja) 1993-06-03 1995-04-04 Sterling Winthrop Inc インターロイキン−１β転換酵素阻害剤
DK0644197T3 (da) 1993-06-04 1999-06-07 Vertex Pharma Peptidphosphinyloxymethylketoner som inhibitorer af interleukin-1beta-konverterende enzymer
EP0628550B1 (en) 1993-06-08 1998-02-25 Sanofi Pyridazines as interleukin-1beta converting enzyme inhibitors
EP0711174A4 (en) 1993-06-24 1997-11-12 Gen Hospital Corp GENES FOR PROGRAMMED CELL DEATH AND PROTEINS
WO1995005192A1 (en) 1993-08-13 1995-02-23 Merck & Co., Inc. SUBSTITUTED KETONE DERIVATIVES AS INHIBITORS OF INTERLEUKIN-1β CONVERTING ENZYME
US5486623A (en) 1993-12-08 1996-01-23 Prototek, Inc. Cysteine protease inhibitors containing heterocyclic leaving groups
US5508262A (en) 1993-12-15 1996-04-16 University Of South Florida Interleukin-1 receptor antagonist decreases severity of acute pancreatitis
ES2210289T3 (es) 1994-03-31 2004-07-01 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Derivados de pirimidinilo como inhibidores de interleuquinas.
EP0758891A4 (en) 1994-04-29 1997-12-03 Sanofi Winthrop Inc HALOMETHYLAMIDES AS IL-1 BETA PROTEASE INHIBITORS
CH688319A5 (fr) 1994-06-03 1997-07-31 Marcham Trading & Investment L Procédé pour la préparation du céfixime trihydraté.
US5756466A (en) 1994-06-17 1998-05-26 Vertex Pharmaceuticals, Inc. Inhibitors of interleukin-1β converting enzyme
US5847135A (en) 1994-06-17 1998-12-08 Vertex Pharmaceuticals, Incorporated Inhibitors of interleukin-1β converting enzyme
US6420522B1 (en) 1995-06-05 2002-07-16 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of interleukin-1β converting enzyme
US5565430A (en) 1994-08-02 1996-10-15 Sterling Winthrop Inc. Azaaspartic acid analogs as interleukin-1β converting enzyme inhibitors
JP2882756B2 (ja) 1994-10-12 1999-04-12 昭和高分子株式会社 脂肪族ポリエステル組成物からなる延伸中空成形体
US5498616A (en) 1994-11-04 1996-03-12 Cephalon, Inc. Cysteine protease and serine protease inhibitors
TW394764B (en) 1995-02-14 2000-06-21 Mitsubishi Chemcal Corp Oxygen-containing heterocyclic derivatives
US6184244B1 (en) 1996-12-16 2001-02-06 Idun Pharmaceuticals, Inc. C-terminal modified (N-substituted)-2-indolyl dipeptides as inhibitors of the ICE/ced-3 family of cysteine proteases

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1995033751A1 (en) * 1994-06-08 1995-12-14 Sanofi Winthrop, Inc. Bicycling lactam inhibitor of interleukin-1-beta converting enzyme
WO1995035308A1 (en) * 1994-06-17 1995-12-28 Vertex Pharmaceuticals Incorporated INHIBITORS OF INTERLEUKIN-1β CONVERTING ENZYME
WO1997022619A2 (en) * 1995-12-20 1997-06-26 Vertex Pharmaceuticals Incorporated INHIBITORS OF INTERLEUKIN-1β CONVERTING ENZYME

Also Published As

Publication number Publication date
US6258948B1 (en) 2001-07-10
US6423840B1 (en) 2002-07-23
CA2239904A1 (en) 1997-06-26
BG108927A (en) 2006-06-30
SK287195B6 (sk) 2010-03-08
NO326882B1 (no) 2009-03-09
AP0202539A0 (en) 1998-06-20
CZ190698A3 (cs) 1998-10-14
IN182290B (cs) 1999-03-06
JP2003137896A (ja) 2003-05-14
EP2295442A3 (en) 2011-04-06
AP0202540A0 (en) 1998-06-20
CZ300171B6 (cs) 2009-03-04
AP0202538A0 (en) 1998-06-20
JP2008285493A (ja) 2008-11-27
JP2002507961A (ja) 2002-03-12
PL328527A1 (en) 1999-02-01
CA2239904C (en) 2010-01-19
WO1997022619A2 (en) 1997-06-26
US7790713B2 (en) 2010-09-07
TR200201218T2 (tr) 2002-08-21
EP2295442A2 (en) 2011-03-16
EP2083014A3 (en) 2010-01-06
BR9612258B1 (pt) 2011-05-31
IL124850A (en) 2006-08-20
EP0869967A2 (en) 1998-10-14
CN1229412A (zh) 1999-09-22
BRPI9612258B8 (pt) 2018-04-17
BG102624A (en) 1999-09-30
BRPI9612258B1 (cs) 2011-05-31
WO1997022619A3 (en) 1997-10-16
TR200201217T2 (tr) 2002-12-23
IL124850A0 (en) 1999-01-26
JP4205762B2 (ja) 2009-01-07
US6204261B1 (en) 2001-03-20
US8119631B2 (en) 2012-02-21
AU1522297A (en) 1997-07-14
NZ326610A (en) 2000-08-25
NO982597D0 (no) 1998-06-05
AP2002002540A0 (en) 2002-06-30
HK1089435A1 (zh) 2006-12-01
US20110178069A1 (en) 2011-07-21
NO982597L (no) 1998-08-12
BR9612258A (pt) 1999-07-13
US20030225269A1 (en) 2003-12-04
IS4771A (is) 1998-06-12
MX9805016A (es) 1998-09-30
KR100561504B1 (ko) 2006-03-20
AU735075B2 (en) 2001-06-28
SK84298A3 (en) 1999-03-12
US20080039449A1 (en) 2008-02-14
BG64465B1 (bg) 2005-03-31
PL190736B1 (pl) 2005-12-30
US20050143436A1 (en) 2005-06-30
TR200201216T2 (tr) 2002-09-23
NZ518094A (en) 2004-01-30
EP2083014A2 (en) 2009-07-29
UA66337C2 (uk) 2004-04-15
GEP20022638B (en) 2002-02-25
KR20040096550A (ko) 2004-11-16

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CZ298171B6 (cs) N-Acylaminoslouceniny jako inhibitory enzymu konvertujícího interleukin-1ß, zpusob jejich prípravy a farmaceutické prostredky, které je obsahují
US5874424A (en) Inhibitors of interleukin-1β converting enzyme
CZ302281B6 (cs) Inhibitory kaspázy a farmaceutická kompozice, která je obsahuje
BG63634B1 (bg) Инхибитори на интерлевкин 1 бета-конвертиращ ензим
EA027247B1 (ru) Новые производные пиридина
US6008217A (en) Inhibitors of interleukin-1β converting enzyme
US20120165319A1 (en) Inhibitors of interleukin-1 beta converting enzyme
RU2249598C2 (ru) ИНГИБИТОРЫ ФЕРМЕНТА, КОНВЕРТИРУЮЩЕГО ИНТЕРЛЕЙКИН-1-β
KR100856767B1 (ko) 인터류킨-1 베타 전환효소의 억제제
AP1280A (en) Inhibitors of interleukin-1 converting enzyme.
AU756253B2 (en) Inhibitors of interleukin-1beta converting enzyme
TW541309B (en) Inhibitors of interleukin-1beta converting enzyme
TWI235157B (en) Inhibitors of interleukin-1beta converting enzyme
HK1022703A (en) INHIBITORS OF INTERLEUKIN-1β CONVERTING ENZYME

Legal Events

Date Code Title Description
PD00 Pending as of 2000-06-30 in czech republic
MM4A Patent lapsed due to non-payment of fee

Effective date: 20121220