PL190736B1 - Inhibitory enzymu konwertującego interleukinę-1beta, kompozycje farmaceutyczne i zastosowanie związków inhibitorów - Google Patents

Inhibitory enzymu konwertującego interleukinę-1beta, kompozycje farmaceutyczne i zastosowanie związków inhibitorów

Info

Publication number
PL190736B1
PL190736B1 PL96328527A PL32852796A PL190736B1 PL 190736 B1 PL190736 B1 PL 190736B1 PL 96328527 A PL96328527 A PL 96328527A PL 32852796 A PL32852796 A PL 32852796A PL 190736 B1 PL190736 B1 PL 190736B1
Authority
PL
Poland
Prior art keywords
disease
compound
active ingredient
group
branched
Prior art date
Application number
PL96328527A
Other languages
English (en)
Other versions
PL328527A1 (en
Inventor
Mark J. Batchelor
David Bebbington
Guy W. Bemis
Wolf Herman Fridman
Roger J. Gillespie
Julian M.C. Golec
Yong Gu
David J. Lauffer
David J. Livingston
Saroop S. Matharu
Michael D. Mullican
Mark A. Murcko
Robert Murdoch
Philip L. Nyce
Andrea L.C. Robidoux
Michael Su
Marion Woods Wannamaker
Keith P. Wilson
Robert E. Zelle
Original Assignee
Vertex Pharma
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=27534345&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=PL190736(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Priority claimed from US08/575,641 external-priority patent/US6008217A/en
Priority claimed from US08/598,332 external-priority patent/US5874424A/en
Priority claimed from US08/712,878 external-priority patent/US5985863A/en
Application filed by Vertex Pharma filed Critical Vertex Pharma
Publication of PL328527A1 publication Critical patent/PL328527A1/xx
Publication of PL190736B1 publication Critical patent/PL190736B1/pl

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D243/00—Heterocyclic compounds containing seven-membered rings having two nitrogen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D243/06—Heterocyclic compounds containing seven-membered rings having two nitrogen atoms as the only ring hetero atoms having the nitrogen atoms in positions 1 and 4
    • C07D243/10—Heterocyclic compounds containing seven-membered rings having two nitrogen atoms as the only ring hetero atoms having the nitrogen atoms in positions 1 and 4 condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D243/12—1,5-Benzodiazepines; Hydrogenated 1,5-benzodiazepines
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/02—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/55—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/18—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for pancreatic disorders, e.g. pancreatic enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/04—Antipruritics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/14—Drugs for dermatological disorders for baldness or alopecia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A61P19/10—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease for osteoporosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A61P21/04—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system for myasthenia gravis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A61P25/16—Anti-Parkinson drugs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/14—Drugs for disorders of the endocrine system of the thyroid hormones, e.g. T3, T4
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/06—Antianaemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/06—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a carbon chain containing only aliphatic carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings
    • C07D403/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/02—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings
    • C07D405/12—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/14—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D409/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D409/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings
    • C07D409/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D413/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D413/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings
    • C07D413/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D417/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00
    • C07D417/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing two hetero rings
    • C07D417/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
    • C07D471/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D471/04—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D487/04—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D498/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D498/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D498/04—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/02—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link
    • C07K5/0202—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link containing the structure -NH-X-X-C(=0)-, X being an optionally substituted carbon atom or a heteroatom, e.g. beta-amino acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06139—Dipeptides with the first amino acid being heterocyclic
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C07K5/0821—Tripeptides with the first amino acid being heterocyclic, e.g. His, Pro, Trp
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)

Abstract

1, 100), 387 (17), 386 (79), 285 (20), 229 (85), 211 (26), 185 (15), 183 I Z w iazek p rz e d sta w io n y w zo rem (VI) w którym R 1 o z n a c z a R2 o zn acz a kazd y R 5 ozn acza - C ( O )- R 10, w k tó ry m R 1 0 o z n acz a fenyl, ew en tu aln ie p o d sta w io n y je d e n r a z lub w ie lo k ro tn ie p rzez Q 1 , in d o lil, naftyl, izo ch in o lil, p ro sty lub ro zg alezio n y C1-6 a lk il, e w en tu aln ie p o d sta w io n y p rz e z fenyl, d im e ty lo tia z o l, b enzo- triazol alb o im id a z o lid io n , -C (O )-N (R 10)(R 10), w którym R 10 o znacza H lub fenyl, e w e n tu a ln ie p o d sta w io n y p rzez prosty lub ro zg alezio n y - O C 1 -6 a lk il, -S (O )2-R 9, w którym R9 o z n acz a fenyl lu b n afty l, -C (O )C (O )-R 10, w k tó ry m R 1 0 o zn acz a fenyl, ew en tu aln ie p o d sta w io n y p rzez p ro sty lub ro zg alezio n y -O C 1 -6 a lk il, X 5 o z n a c z a C H lu b N , Y 2 o z n a c z a H 3 lu b O, R 1 3 o z n a c z a p ro sta lu b ro z g a le z io n a g ru p e -C 1 -6 alk ilo w a, kazdy R 5 n ie z a le z n ie o z n a c z a p ro sty lub ro z g a le z io n y -C 1 -6 alk il, p ro sty lub ro z g a le z io n y - C 1 -6 alk ilo fe n y l, w którym fenyl jest e w e n tu a ln ie p o d sta w io n y p rzez - C 1 , p ro sty lub ro zg a- lezio n y -C (O )-C 1-6 alk il a lb o n asy co n y 4 -8 -c z lo n o w y pierscien k arb o c y k lic z n y , k tó ry e w e n tu a ln ie jest sk o n d e n so w a n y z b en zen e m , kazdy R 21 n ie z a le z n ie o z n a c z a H lub p ro sta a lb o ro zg a le z io n a g ru p e - C 1-6 a lk ilo w a , PL PL PL PL PL PL PL

Description

Przedmiotem wynalazku są nowe związki, które są inhibitorami enzymu konwertującego interleukinę-1 p („ICE”), kompozycje farmaceutyczne zawierające takie związki oraz zastosowanie tych związków Związki i kompozycje według wynalazku są szczególnie odpowiednie do hamowania aktywności „ICE” i w konsekwencji mogą być korzystnie stosowane jako środki przeciwko chorobom zależnym od interleukiny-1 („IL-1”), apoptozy, czynnika indukującego interferon gamma („IGIF”) i interferonu-γ („IFN-γ), obejmującym choroby zapalne, choroby autoimmunizacyjne, choroby niszczące kości, zaburzenia proliferacji, choroby zakaźne i choroby zwyrodnieniowe.
Interleukina-1 („IL-1”) jest głównym białkiem prozapalnym i immunoregulacyjnym, które stymuluje różnicowanie i proliferację fibroblastów, wytwarzanie prostaglandyn, kolagenazy i fosfolipazy przez komórki maziówkowe i chondrocyty, degranulację komórek zasadochłonnych i eozynochłonnych oraz aktywację komórek neutrofilowych J. H. Oppenheim i in., Immunology Today, 7, str. 45-56 (1986). Jako taka, jest więc związana z patogenezą przewlekłych i ostrych zapaleń oraz chorób autoagresyjnych. Przykładowo, w reumatoidalnym zapaleniu stawów, IL-1 jest związana zarówno z objawami zapalnymi, jak i z destrukcją proteoglikanu w chrząstkach dotkniętych zmianami stawów. D. D. Wood i in , Arthritis Rheum. 26, 975 (1983); E. J. Pettipher i in.. Proc. Natl. Acad Sci. USA, 71,295 (1986); W. P. Arend i J. M. Dayer, Arthiritis Rheum 38, 151 (1995). IL-1 jest również bardzo silnym czynnikiem resorpcji kości. J. J. Jadiski, J. Oral Path 17, 145 (1988), F. E. Dewhirst i in., J. Immunol. 8, 2562 (1985). Alternatywnie jest ona również uważana za „czynnik aktywujący osteoklast” w chorobach zwyrodnieniowych kości, takich jak zapalenie kostno-stawowe i szpiczak mnogi R. Bataille i in., Int. Glin. Lab. Res., 21(4), 283 (1992). W niektórych zaburzeniach proliferacji, takich jak białaczka pochodzenia szpikowego i szpiczak mnogi, IL-1 może promować wzrost i adhezję komórek nowotworowych. M R. Bani, J, Natl Cancer Inst 83, 123 (1991); F. Vidal-Vanaclocha, Cancer Res. 54, 2667 (1994). W takich zaburzeniach IL-1 stymuluje również wytwarzanie innych cytokin, takich jak IL-6, które mogą modulować rozwój nowotworów (Tartour i in., Cancer Res. 54, 6243 (1994)).
IL-1 jest wytwarzana głównie przez monocyty krwi obwodowej jako część odpowiedzi zapalnej i występuje w dwóch odmiennych agonistycznych postaciach, IL-1a i IL-1 β, B. S Mosely i in., Proc. Nat. Acad. Sci., 84, str. 4572-4576 (1987); G. Lonnemann i in., Eur J. Immunol.. 19, str. 1531-1536 (1989).
IL-1P jest syntetyzowana jako biologicznie nieaktywny prekursor, pIL-1p, pIL-1b nie ma konwencjonalnej sekwencji liderowej i nie jest obrabiana przez peptydazę sygnałową
C. J. March, Naturę, 315, str. 641-647 (1985). pl IL-ip ulega natomiast rozszczepieniu przez enzym konwertujący interleukinę-13 („ICE”) pomiędzy Asp-116 i Ala-117, z wytworzeniem aktywnego biologicznie C-końcowego fragmentu, obecnego w surowicy i płynie maziówkowym człowieka. P. R. Sleat i in., J_ Biol. Chem , 265, str 14526-14528 (1992); A. D Howard i in., J. Immunol., 147 str. 2964-2969 (1991). ICE jest proteazą cysteinową zlokalizowaną głównie w monocytach Przekształca ona prekursor IL-1P w dojrzałą postać RA. Black i in., FEBS Lett., 247, str. 386-390 (1989); M. J Kostura i in., Proc Natl Acad Sci USA, 86, str. 5227-5231. Obróbka enzymem ICE jest również konieczna do transportowania dojrzałej IL-1P przez błonę komórkową.
ICE lub jej homologi, biorą również udział w regulowaniu śmierci komórek lub apoptozy; J. Yuan i in, Celi, 75, str. 641-652 (1993); M. Miura i in , Celi, 75, str 653-660 (1993), M A. Nett-Fiordalisi i in., J. Cell Biochem , 17B, str 117 (1993). Uważa się zwłaszcza,
190 736 ze ICE lub homologi ICE są związane z regulowaniem apoptozy w chorobach neurodegeneracyjnych, takich jak choroba Alzheimera i choroba Parkinsona; J. Marx i M Baringa, Science, 259, str 760-762 (1993); V. Gagliardim i in., Science, 263, str 826-828 (1994). Terapeutyczne zastosowanie do hamowania apoptozy może obejmować leczenie choroby Alzheimera, choroby Parkinsona, udaru, zawału serca, zaniku rdzenia i starzenia.
Jak wykazano, ICE jest związana z apoptozą (programowana śmierć komórek) w pewnych typach tkanek; H. Steller, Science, 2ó7, str. 1445 (1995); M. Whyte i G. Evan, Nature, 376, str. 17 (1995); S. J. Martin i D. R Greene, Cell, 82, str. 349 (1995); E. S. Alnemri i in., J. Biol. Chem., 270, str. 4312 (1995); J. Yuan, J. Cuir. Opm. Cell Biol. 7, str. 211 (1995) Transgeniczna mysz z rozerwanym genem ICE nie wykazuje apoptozy związanej z Fas (K. Kuida i in., Science 267, 2000 (1995)). Ta aktywność ICE wyróżniają ze względu na rolę jako enzymu przetwarzającego dla pro- lL-1p. Wiadomo jest, ze w niektórych typach tkanek hamowanie iCE może nie wpływać na wydzielanie dojrzałej IL-1P, ale może zahamować apoptozę.
Enzymatycznie aktywny ICE opisano juz uprzednio jako heterodimer złożony z dwóch podjednostek, p20 i p10 (o ciężarze cząsteczkowym 20 kDa i 10 kDa, odpowiednio). Podjednostki te uzyskane są z proenzymu 45 kDa (p45) zamiast formy p30, poprzez mechanizm aktywacji, który jest autokatalityczny, N A. Thornbeny i in, Nature, 356, str 768-774 (1992) Proenzym ICE podzielono na kilka funkcjonalnych domen: prodomena (p 14), podjednostka p22/20, linker polipeptydowy i podjednostka p10; Thomberry i in., powyżej, Casano i in., Genomics, 20, str. 474-481 (1994).
p45 o pełnej długości scharakteryzowano przez cDNA i sekwencję aminokwasową (zgłoszenia patentowe PCT WO 91/15577 i WO 94/00154). cDNA i sekwencje aminokwasów p20 i p10 są również znane; Thombeny i in., powyżej. Sekwencjonowano i klonowano również ICE mysi i szczurzy. Wykazują one wysoki stopień homologii sekwencji aminokwasów i kwasów nukleinowych z ludzkim ICE. D K. Miller i in., Ann. N. Y Acad Sci.. 696, str. 133-148 (1993); S.M. Molineaux, Proc. Nat Acad. Sei., 90, str. 1809-18813 (1993) Trójwymiarową strukturę ICE określono przy rozszczepianiu atomowym metodą krystalografii promieni X. K. P. Wilson i in., Nature, 370, str. 270-275 (1994). Aktywny enzym występuje jako tetramer podjednostek dwóch p 20 i dwóch p10.
Ponadto, występują homologi ludzkiego ICE o podobieństwach sekwencji w regionach miejsc aktywnych enzymów. Homologi takie obejmują TX (lub ICrel_ll lub ICH-2) (Faucheu i in., EMBO J., 14 str. 1 *914 (1995); J. Kamens i in., J. Biol. Chem., 270, str. 15250 (1995), Nicholson i in., J. Biol. Chem., 270 15870 (1995)), TY (lub ICEIeι-lιι( (Nicholson i in., J_ Biol. Chem.. 270 15870 (1995)); ICH-1 (lub Nedd-2) (L. Wang i in., Cell, 78, str. 739 (1994), MCH-2 (T Fernandes-Al^mn i in Cancer Res., 55, str 2737 (1995); CPP32 (lub YaMa lub apopaina) (T Femandes-Alnemri i in. J. Biol. Res., 269, str 30761 (1994); D W Nicholson i in., Nature, 376, str. 37 (1995)) oraz CMH-1 (lub MCH-3) (Lippke i in., J Biol. Chem (1996); T. Fernandes-Alnemri i in , Cancer Res , (1995)). Każdy z tych homologów ICE, jak również sam ICE, jest zdolny do indukowania apoptozy, gdy ulega nadekspresji w transfekowanych liniach komórkowych. Zahamowanie jednego lub więcej z tych homologów peptydylowym inhibitorem ICE Tyi--Vrdl^.Aki-Asp-chloiOmetyloketonem powoduje zahamowanie apoptozy w pierwszorzędowych komórkach lub ścieżkach komórkowych Lazebnik i in., Nature, 371, str. 346 (1994). Opisane tu związki są również zdolne do hamowania jednego lub więcej homologów ICE (patrz przykład 5). Tak więc, związki te mogą być stosowane do hamowania apoptozy w typach tkanek, które zawierają homologi ICE, ale które nie zawierają aktywnego ICE lub produkują dojrzałą IL-1 β.
Czynnik indukujący interferon-gamma (IGIF) jest polipeptydem o wielkości około 18 kDA, który stymuluje produkcję (IFN-γ) pn^^ie^z hmfocyty T IGIF jest wytwarzany przez aktywowane komórki Kupffera i makrofagi w vivo i jest wydalany na zewnątrz takich komórek po stymulacji endotoksyny. Tak więc związek, który zmniejsza wytwarzanie IGIF, będzie użyteczny jako inhibitor takiej stymulacji limfocytów T, co z kolei zimniejszy poziom wytwarzania IFN-γ przez te komórki.
IFN-γ jest cytokiną o działaniu immunomodulacyjnym na różne komórki układu odpornościowego Szczególnie IFN-γ uczestniczy w aktywowaniu makrofagów i selekcji komórek
190 736
Thl (F. Belardelli, APMIS, 103, str. 161 (1995). IFN-γ wywiera wpływ częściowo przez modulowanie ekspresji genów poprzez szlaki STAT i IRF (C. Schindler i J. E. Darnell, Ann Rev. Biochem., 64, str. 621 (1995); T. Taniguschi, J. Cancer Res. Clin. Oncol.. 121, str 516 (1995)).
Myszy pozbawione IFN-γ lub jego receptora mają różne defekty w funkcjach komórek układu odpornościowego i są odporne na wstrząs endotoksyczny (S. Huang i in., Science. 259, str. 1742 (1993); D. Dalton i in., Science. 259, str 1739 (1993); B. D Car i in . J. Exp. Med.. 179, str. 1437 (1994)). Obok IL-12 IGIF wydaje się być silnym czynnikiem wywołującym wytwarzanie IFN-γ przez limfocyty T (H. Okamura i in , Infection and Immunity. 63, str 3966 (1995); H. Okamura i in., Nature. 378, p. 88 (1995); S. Ushio i in., J. Immunol, 156, str 4274 (1996)).
Wykazano, ze IFN-γ przyczynia się do patologii związanych z różnymi stanami zapalnymi, zakażeniami i zaburzeniami i chorobami autoimmunizacyjnymi. Tak więc, związki zdolne do zmniejszania wytwarzania IFN-γ będą użyteczne do łagodzenia skutków związanych z IFN-γ patologii.
Regulacja biologiczna IGIF, a zatem i IFN-y, nie została wyjaśniona. Wiadomo, ze IGIF jest syntetyzowany jako prekursor białka, zwanego „pro-IGIF” Jednakże nie jest jasne, w jaki sposób pro-IGIF jest rozszczepiany i czyjego obróbka ma znaczenie biologiczne
Zgodnie z powyższym, kompozycje i sposoby zdolne do regulowania konwersji pro-IGIF w IGIF będą użyteczne do zmniejszania wytwarzania IGIF i IFN-γ in vivo, a tym samym do łagodzenia szkodliwego działania tych białek, powodującego choroby i zaburzenia u ludzi.
Jednakże ICE i inni członkowie rodziny ICE/CED-3 nie były wcześniej związane z konwersją pro-IGIF w IGIF i wytwarzaniem IFN-γ in vivo.
Inhibitory ICE stanowią klasę związków użytecznych w zwalczaniu zapalenia lub apoptozy lub obydwu tych chorób. Opisano peptydowe i peptydylowe inhibitory ICE (zgłoszenia patentowe PCT WO 91/15577; WO 93/05071, WO 93/09135; WO 93/14777 i WO 93/16710; oraz europejskie zgłoszenie patentowe 0 547 699). Zaobserwowano, ze takie peptydylowe inhibitory ICE blokują wytwarzanie dojrzałej IL-1P w mysim modelu zapalenia (patrz powyżej) i hamują wzrost komórek białaczki in vitro (Estrov i in., Blood 84, 380a (1994)) Jednakże, ze względu na swój peptydowy charakter inhibitory takie charakteryzują się zwykle niepożądanymi własnościami farmakologicznymi, takimi jak słaba penetracja i aktywność w komórkach, słaba absorpcja przy podawaniu doustnym, słaba stabilność i szybki metabolizm, J. J. Plattner i D. W. Norbeck, Drug Discovery Technologies. C R. Clark i W. H. Moos, wyd. (Ellis Horwood, Chichester, Anglia, 1990), str 92-126. Stanowi to przeszkodę w wykorzystaniu ich jako skutecznych leków.
Opisano również związki nie peptydylowe jako hamujące ICE in vitro (zgłoszenie patentowe PCT WO 95/26958; patenty USA 5 552 400; Dolle i in., J, Med. Chem., 39, str. 2438-2440 (1996)). Jednakże, nie jest całkowicie jasne, czy profile farmakologiczne tych związków są odpowiednie, aby były one terapeutycznie użyteczne.
Ponadto, znane sposoby wytwarzania takich związków nie są korzystne. W sposobach tych stosuje się wodorek tributylocyny, który jest toksycznym, wrażliwym na wilgoć reagentem. Tak więc, sposoby te nie są wygodne do prowadzenia, są ryzykowne dla zdrowia i stwarzają problemy związane z pozostawaniem toksycznych odpadów. Ponadto trudność stanowi oczyszczenie związków wytworzonych takimi sposobami.
Z publikacji WO 95/33751 znane są inhibitory ICE, które są laktamami pirydazyno-[1.2-a][1.2]-diazepmy. Nie ujawniono jednak żadnych informacji odnośnie do modyfikacji układów pierścieniowych tych związków, która mogłaby poprawić ich aktywność jako inhibitorów.
Zgodnie z powyższym, istnieje zapotrzebowanie na związki, które mogą skutecznie hamować działanie ICE in vivo i nadają się do stosowania jako środki do zapobiegania i leczenia przewlekłych i ostrych postaci chorób związanych z IL-1, apoptozą, IGIF lub IFN-γ, jak również chorób zapalnych, autoimmunizacyjnych, chorób niszczących kości, zaburzeń proliferacyjnych, zakazeń lub chorób zwyrodnieniowych Nadal również istnieje potrzeba opracowania sposobów wytwarzania takich związków
190 736
Wynalazek niniejszy dostarcza nowej klasy związków oraz ich farmaceutycznie dopuszczalnych pochodnych, które są użyteczne jako inhibitory ICE. Związki te mogą być stosowane same lub w kombinacji z innymi środkami leczniczymi i profilaktycznymi, takimi jak antybiotyki, immunomodulatory lub inne środki przeciwzapalne, do leczenia lub profilaktyki chorób zależnych od IL-1, apoptozy, IGIF lub IFN-γ. Związki według wynalazku są zdolne do wiązania się z centrum aktywnym ICE i hamowania aktywności tego enzymu. Ponadto, wykazują one zwiększone działanie w komórkach, lepszą farmakokinetykę i/lub poprawioną biodostępność przy podawaniu doustnym w porównaniu z peptydylowymi inhibitorami ICE
Krótki opis rysunków
Figura IA. ICE rozszczepia pro-IGIF in νινο. Lizaty komórkowe z komórek Cos transfekowanych różnymi wskazanymi plazmidami ekspresyjnymi lub komórki kontrolne badano na obecność IGIF przez rozdzielenie białek metodą SDS-PAGE i immunoblottingu z surowicą odpornościową przeciw-IGIF (ścieżka 1, pozornie transfekowane komórki, ścieżka 2 sam pro-IGIF; ścieżki 3-12, pro-IGIF w kombinacji z ICE, ICE-C285S, CPP32, CPP322-C163S, CMH-1, CMH-1-C186S, Tx, Tx-C258S, odpowiednio). Z prawej strony wskazano ruchliwość pro-IGIF i dojrzałego IGIF o wielkości 18 kDA). Markery ciężarów cząsteczkowych w kDA wskazano po lewej stronie (przykład 23).
Figura IB. ICE rozszczepia pro-IGIF w miejscu faktycznym obróbki in v//ro, jak wykazano metodą wybarwiema błękitem Coomassie produktów reakcji proteolitycznej rozdzielonych metodą SDS-PAGE (przykład 23). Jako proteazy i inhibitory stosowano, ścieżka 1 bufor kontrolny, ścieżka 2’ 0,1 nM ICE; ścieżka 3, 1 nM ICE, ścieżki 4 i 5 1 nM ICE z 10 nM Cbz-Val-Ala-Asp-[keton (2,6-dichlorobenzoilo)oksy]metylowy i 100 nM Ac-Tyr-Val-Ala-Asp-aldehyd, odpowiednio; ścieżki 6 i 7· 15 nM CPP32 z lub bez 400 nM Ac-Asp-Glu-Val-Asp-aldehyd (D W. Nicholson i in , Nature, 376, str. 37 (1996)), odpowiednio; ścieżka 8: 100 nM CMH-1; ścieżka 9: 10 jednostek/ml granzymu B; i M, markery ciężarów cząsteczkowych w kDa.
Figura 1C. Rozszczepienie za pomocą ICE konwertuje nieaktywny pro-IGIF w aktywny IGIF, który indukuje wytwarzanie IFN-γ w komórkach pomocniczych Thl Nie rozszczepiony (Pro-IGIF), rozszczepiony ICE (Pro-IGIF/ICE), rozszczepiony CPP32 (Pro-IGIF/CPP32) i rekombinantowy dojrzały IGIF (rlGIF) inkubowano z komórkami A. E7 Thl przy 12 ng/ml (puste słupki) i 120 ng/ml (zamalowane słupki) przez 18 godzin, a poziomy uwolnionego IFN-γ do pożywki hodowlanej badano metodą ELISA (przykład 23) Komórki A. E7 hodowano z buforem, samym ICE (ICE) lub samym CPP32 (CPP32) i badano podobnie jak dla kontroli negatywnych. Liczby oznaczają średnie z trzech oznaczeń
Figura 2A. Dojrzały IGIF (18 kDa) jest wytwarzany przez komórki Cos kotransfekowane plazmidami wyrażającymi pro-IGIF i ICE Lizaty komórkowe (po lewej) i kondycjonowaną pożywkę (po prawej) pochodząca z hodowli komórek Cos transfekowanych plazmidem wyrażającym pro-IGIF w nieobecności (-) lub w obecności plazmidu ekspresyjnego kodującego typ dziki (ICE) lub nieaktywny mutant (ICE-C285S) ICE Transfekowane komórki znakowano metabolicznie 35S-metioniną, białka z lizatów komórkowych i kondycjonowaną pożywkę poddano immunoprecypitacj i surowicą odpornościową przeciw-IGIF i rozdzielono metodą SDS-PAGE (przykład 24) Ruchliwość pro-IGIF i dojrzałego IGIF o wielkości 18 kDa wskazano po prawej stronie. Markery ciężarów cząsteczkowych w kDa wskazano po lewej stronie
Figura 2B. W komórkach Cos kotransfekowanych plazmidami wyrażającymi pro-IGIF ICE wykryto aktywność indukującą IFN-γ Lizaty komórkowe (zamalowane słupki) i kondycjonowaną pożywkę (puste słupki) pochodzącą z hodowli komórek Cos transfekowanych plazmidem ekspresyjnym pro-IGIF w nieobecności (Pro-IGIF) lub w obecności (Pro-IGIF/ICE) plazmidu ekspresyjnego kodującego typ dziki (ICE) badano na poziom IFN-γ (ng/ml) metodą ELISA. Jako kontrole negatywne służyły komórki Cos transfekowane buforem (pozornie) lub samym plazmidem wyrażającym ICE (ICE).
Figura 3A Komórki Kupffera pochodzące od myszy bez ICE są niezdolne do transportu IGIF Wyizolowano komórki Kupffera od myszy typu dzikiego (ICE +/+) lub od myszy pozbawionych ICE homozygotycznych pod względem mutacji ICE (ICE-/-) i pobudzano je LPS przez 3 godziny. Metodą ELISA zmierzono poziomy immunoreaktywnych polipeptydów IGIF
190 736 w kondycjonowanej pożywce (ng/ml) komórek typu dzikiego (przykład 25) N D (niewykrywalny) oznacza, ze stężenie IGIF było mniejsze niż 0,1 ng/ml.
Figura 3B. Komórki Kupffera pochodzące od myszy bez ICE są niezdolne do transportu IGIF. Wyizolowano komórki Kupffera od myszy typu dzikiego (ICE +/+) lub od myszy pozbawionych ICE homozygotycznych pod względem mutacji ICE (ICE-/-) i pobudzano je LPS przez 3 godziny. Uczulone komórki znakowano metaboliczne 35S-metionmą, białka lizatów komórkowych i kondycjonowanej pożywki poddano immunoprecypitacji surowicą odpornościową przeciw-IGIF i rozdzielono metodą SDS-PAGE (przykład 25) Ruchliwość pro-IGIF i dojrzałego IGIF o wielkości 18 kDa wskazano po prawej stronie Markery ciężarów cząsteczkowych w kDa wskazano po stronie lewej.
Figura 3C. Surowica pochodząca od myszy z niedoborem ICE zawiera zmniejszone poziomy IGIF. Próbki surowicy pochodzącej od myszy typu dzikiego (ICE +/+) lub myszy z niedoborem ICE homozygotycznych pod względem mutacji ICE (ICE -/-) badano na poziom IGIF (ng/ml) metodą ELISA (przykład 25).
Figura 3D. Surowica pochodząca od myszy z niedoborem ICE zawiera zmniejszone poziomy IFN-γ. Próbki surowicy pochodzącej od myszy typu dzikiego (ICE +/+) lub myszy z niedoborem ICE homozygotycznych pod względem mutacji ICE (ICE -/-) badano na poziom IFN-γ (ng/ml) metodą ELISA (przykład 25)
Figura 4. Poziomy IFN-γ w surowicy są znacząco zmniejszone u myszy z niedoborem ICE po ostrej ekspozycji na LPS (przykład 26). Próbki surowicy pochodzące od myszy typu dzikiego (zamalowane kwadraty) lub od myszy z niedoborem ICE (zamalowane koła) badano na poziom IFN-γ (ng/ml) metodą ELISA w funkcji czasu (godziny) po prowokacji LPS Wskazano temperatury zwierząt w czasie badania w stopniach Celsjusza: dla myszy typu dzikiego (puste kwadraty) lub dla myszy z niedoborem ICE (puste koła)
Figura 5 Inhibitor ICE, AcYVAD-aldehyd (AcYVAD-CHO), hamuje stymulowaną LPS syntezę IL-1P i IFN-γ przez ludzkie jednojądrzaste komórki krwi obwodowej (PBMC). Dla syntezy IL-1p (puste kwadraty) i IFN-γ (puste romby) wskazano procent (%) hamowania w funkcji stężenia inhibitora (pM).
Figura 6. Związek 214e hamuje wytwarzanie IL-1P u myszy po prowokacji LPS. Próbki surowicy od myszy CDI badano na poziom IL-1P (pg/ml) metodą ELISA po prowokacji LPS Związek 214e podawano przez śródotrzewnowe (IP) wstrzyknięcie po 1 godzinie od prowokacji LPS Krew pobrano po siedmiu godzinach po prowokacji LPS (patrz przykład 7)
Figura 7. Związek 217e hamuje wytwarzanie IL-1P u myszy po prowokacji LPS Próbki surowicy od myszy CD1 badano na poziom IL-1P (pg/ml) metodą ELISA po prowokacji LPS Związek 217e podawano przez śródotrzewnowe (IP) wstrzyknięcie po 1 godzinie od prowokacji LPS. Krew pobrano po siedmiu godzinach po prowokacji LPS (patrz przykład 7)
Figura 8. Związek 214e hamuje, a związek 217e nie hamuje wytwarzania IL-1P u myszy po prowokacji LPS przy podawaniu doustnym za pomocą zgłębnika. W badaniu tym mierzono absorpcję przy podawaniu doustnym w warunkach podobnych do opisanych dla fig 6 i 7. Wyniki te wskazują, że związek 214e jest silnie aktywnym inhibitorem ICE przy podawaniu doustnym (patrz przykład 7).
Figura 9 Związek 214e i jego analogi również hamują wytwarzanie IL-1p po podaniu IP. Wyniki otrzymane w badaniu opisano na fig. 6 i 7 oraz w przykładzie 7
Figura 10 Związek 214e i jego analogi również hamują wytwarzanie IL-Ιβ po podaniu doustnym (PO). Wyniki otrzymane w badaniu opisano na fig 6 i 7 oraz w przykładzie 7
Figura 11 A/B. Związki 302 i 304a wykazują wykrywalne poziomy we krwi przy podawaniu doustnym myszom (50 mg/kg, w 0,5% karboksymetylocelulozie) Próbki krwi pobrano po 1 godzinie i po 7 godzinach po podaniu Związki 302 i 304a są prolekami związku 214e i są metabolizowane do 214e in vivo. Związek 214e nie wykazuje poziomu we krwi powyżej 0,10 pg/ml przy podawaniu doustnym (przykład 8).
Figura 12. Związek 412f blokuje postęp zapalenia stawów wywołanego kolagenem typu II u samców myszy DBA/1J (P H. Wooley, Methods in Enzymology. 162, str 361-373 (1988) i T Geiger, Clinical and Experimental Rheumatology, 11, str 515-522 (1993)). Związek 412f podawano dwa razy dziennie (10, 25 i 50 mg/kg) co około 7 godzin, doustnie za pomocą zgłębnika Zapalenie mierzono w skali wzrastającego zaawansowania od 1 do 4 według Ar190 736 thritis Severity Score. Wyniki dla dwóch przednich łap dodano i otrzymano wynik końcowy (patrz przykład 21).
Figura 13. Związek 412d blokuje progresję zapalenia stawów wywołanego kolagenem typu II u samców myszy DBA/U Uzyskane wyniki opisano na fig. 12 i w przykładzie 21
Figura 14. Związek 696a blokuje progresję zapalenia stawów wywołanego kolagenem typu II u samców myszy DBA/U. Uzyskane wyniki opisano na fig. 12 i w przykładzie 21.
SKRÓTY I DEFINICJE
Skróty
Oznaczenie Reagent lub fragment
Ala alanina
Arg argi^na
Asn aep6Z6gina
ASP kwas asparaginowy
Cys cysteina
Gln glutamina
Glu kwas glutaminowy
Gly glicyna
His hietzdzna
Ile izoleucyna
Leu leucyna
Lys lizyna
Met metionina
Phe feny^^nina
Pro pralina
Ser seryna
Thr treonina
Trp tryptofan
Tyr tyrozyna
Val walina
AC2O bezwodnik octowy
n-Bu n-butyl
DMF dimetyloformamid
DIEA N,N-dii8opzopzleetzlo6mina
EDC chlorowodorek 1-(3-dimetzlo6mlnoprepzlo)-3-etzlokazbodllmidu
Et2O eter dietylowy
EtOAc octan etylu
Fmoc 9-fluozenzlometokeyk6rbenzl
HBTU heksafluezofesfozan O-benzotriazol-1 -ile-N,N,N',N'-tetz6metzleuronlewz
HOBT hydrat 1 -hzdrokeyben8otziazolu
MeOH metanol
TFA kwas tzifluoreectowy
Alloc 6llllokeykarbenzl
Definicje
W opisie stosuje się następujące terminy
Określenie „czynnik indukujący interferon gamma” lub „IGIF” odnosi się do czynnika, który jest zdolny do stymulowania endogennego wytwarzania IFN-γ
Określenie „inhibitor ICE” odnosi się do związku, który jest zdolny do hamowania enzymu ICE. Hamowanie ICE można oznaczyć stosując sposoby opisane w podanej tu literaturze Specjalista w tej dziedzinie będzie wiedział, ze inhibitor ICE in vivo nie koniecznie jest inhibitorem ICE in vitro Przykładowo, związek w postaci proleku zazwyczaj wykazuje niewielką lub nie wykazuje wcale aktywności w badaniach in vitro. Takie proleki mogą być zmienione w procesach metabolicznych lub innych procesach biochemicznych w organizmie pacjenta, dostarczające inhibitora ICE in vivo.
-90 73-kreślenie „yytzyiao” zSnzri riy So cząsteczki, któro uzśteSaiyoa w interakcjoch uomiedza yzmótyomi.
-kreślenie „rtoa” zdazri riy do kozdej choroba, oonytoenio lr( dziołonio, które uzazdrje nizlzoicoaie rokzdliwe konsekwencjo r pocjento.
-kreślenie „podmiot” zdazri riy do owietoecio, lr( do jednej olbo wiycej komórek, uochzSoącach od zwierzecio. Kotoyrtnle zwlerzyclem jert rrok, o aojkzroartaiej człowiek. Komórki mogą ayrtępzwoć w dowol-ej portoci, obejmującej, ole nie ayłacoaie, yzmótyi wartypyjące w tkoace, rk-plsko komórek, komórki unieśmiertelnione, komórki ΙιιπΙζΙκο-, lub troarfofmzwoae oraz komórki uochzdoace od owietoycio, które ozrtoły omlealzae fisayoale lub fenotyuzwz.
—kreślenie „miejsce aktywne” zSazsi riy do dzwzlneoz lub wrzyrtkich z nortyurjayayh miejrc w 1CE: miejrco wiążącego rrbrtrat, miejrco wiązo-io riy lahibltzto i miejrco, odzie aystapić może roosocoeuienie ι-ΙιΙιοΙ-.
—kreślenie „heterocykl” lub „heteroyayllyona” zo-ocoo trwała mono- lub uzllyayliyo-a saiaoek, która ewentrolaie może oowleroć jedno lub Sao uzSwój-e wiązo-io lub eweatrolaie może oowietoć jeden lub wiycej pierścieni oromotyco-ayh. Każda heterocakl rkłodo siy z atomów wyglo i od jednego do czterech heteroatomów -ieoolez-le aybtonayh z 0π·Φ( obejmującej ozot, tle- i siorky. Storowony tr termin „heterootoma ozotr” i „heteroatomy ιιο,ΙΙ” obejmuje dzazlna -tlenio-ą pzstoć azot- lrb ιιο,ΙΙ i cowortotzeSzwoaą postać Szwzl-egz zosoSzwegz οπΙ-. —kreślone poważej heterocakle obejmują, -o utzayłoS, uitymiSa-al, tetrohydrochinzlil, tettohadroiozchinolinal, p-rynyl, uitymidal, lnSzllnal, be-zlmiSoozlll, lmlSoszlil, imiSoozll-zll, lmiSazoliSa-al, chl—olil, iozyhi-zlil, i—dolil, pitySyl, pIuoIII, ultzll-yl, ultoszlil, uitooaaal, chi-okrolil, pipetySa-al, mzrfoil—yl, tiomztfoli-al, f-ryl, tie—al, ttlooolll, tloozlll, n-yotbzli-al, tettooolil, tiozoliSa—al, be—szryto—zil, tiamztfoll—alzrrlfo—, ne—ozysoszlll, zkrzpipeιyda—al, zkropiroliSa—yl, zkszooepi—al, azepi—al, izzksaoolil, tettohaSroulto—yl, tettohaSroftita—al, tlaSiaoolil, be-ooSlzkszlil, nenoztle—al, tetrahadrotiofe—al i srlfolo—al. 1——e heterocykle są zuiroae w publikacji A R Kotritoya i C. W. Reer, wad., Czmptehe—rlve Heterocaclic Chemistra, The Strrctrre, Reoctlo—s, Sa-thesis and Use of Heterocaclic CzmuzraSs. Vol. --8, Ρζιοοο— Press, OU (-984).
—kreślenie „cakloolkil” zd—zsi siy do mono- lrb uzliyakliconach ο,-^ które ooaletoja 3 do -5 otomóa wyglo i ewe—trol—ie jeS—o lrb Swo uzSwójne wiązo—io. Przykłady znejmrJa yaklzheksyl, oSomo—tal i nztnztnal.
—kreśleaie „oryl” zonoyoo οπφι mo—o- lrb policakliczaą, któro oowieto 6, 10, 12 lrb 14 atomów wyglo i w której ptsa—ajm—ieJ jeSea pierścień jest oromotayo—a Przykłady obejmują fe—yl, noftyl i tetrahydronoftole—.
—kreślenie „heteroaromotyco—y” zo—oyso kropy mo—o- lrb uzllcakllyo-a, któro soaιeto - do -5 otomóa wygla i oS - do 4 heteroatomów, utoa czym kożSa z —ich jest —ieoolez—le aybto—a z Ο,-π obejmującej ιϊοιΙ|, ozot i tle— i któro soaiero poroSto - So 3 5- lrb 6-ysłznzwayh pierście-i, z któtach ptoa—ojmaiej jede— jest oromotayo—y.
—kreślenie „olfo-amlnzyaos” (a-omi—okwos) zSazri siy ootów—z So aotrtol—ie aastypującayh omi—zywosów, jok i So in-ach „niebiołkoaych” a-omlaokwasów ooowyyooj stosowo—ach utzeo ruecjolirtów w doieSoinle chemii peptaSóa puza aytwotoomr ιυ—ΙζΙυ^—υ^ι o—ologóa aotrtolnie wyrteurjacayh peptaSóa, łącznie z portociomi D i L. Ootrtolaie dastyuyjącymi α-amin-kwasami rą klicy—o, olanioo, wolino, lercy—o, izolercy—o, rera—o, metio-iao, tteo—ino, fe—al-olanlna, tatosa—a, tuaptofo—, cartei—a, utzli—o, hirtaSa—o, kaor iiporagi-ody, oruotogiao, kaos glutaminowy, gl-tami-o, kwos γ-yotbzksaglrtomi—oay, otgi—i—o, otaita-o i lizyna.
Przykłady „nieniołkowach” olfo-omi—zywosów obejmują haStoysylιsare, homzsetyae, hzmotarooane, hzmzfeoaloola—ine, cytroli—y, ki—yreaiay, 4-omino-fe—aioolonl—e, 3-<2-aoftylz>olo—iae, 3-(1-—oftalo>oio—l—e, srlfoa metio—i—y, t-brtaloaloaιre, t-brtyloolιyare, 4-hySroysafe—alooiicyae, οοι-οΙι—Ι-ι, fe—alzoliyyae, winyloola-iay, utzpotOilooliya—e, 1,2,4-tnooolz-3-olo—iae, 4,4,4-triflyoto-tteoal—y, taro-iny, 6-haStoyrattaptofoa, 5-haStoyratrautzror, 3-hydtoysaki—rte—i—y, 3-oml—otytooa—y, ttiflrotometaloalonl—e, 2-tie—alzolo—l-e, <2-<4-pirySalz>etalz>castel—y, 3,4-Simetokry-fe—aloolo—lay, 3-<2-tiooolllo>olo—l—e, kwos lbztenzay, kwor 1 -oml—o-1 -caklzpentanokatb-)ksyloay', kwos 1 -amlao-1 -yaylzhekra—zyarbzysylzaγ,
190 736 kwas kwiskwalowy, 3-trifluorzmetylzfenylzalaninę, 4-trifluorzmetylofenylzαlaninę, cykloheksykoalaninę, cykloheksyloglicynę, tiohistydynę, 3-metzksytyroaynę, elastatinal, norleucynę, norwalinę, a^izo^cy-ię, homoargininę, tioprolinę, dehydroprolinę, hydroksyprolinę, kwas izotope^o-owy, homoprolinę, cykloheksyloglicynę, kwas n-amino-n-masłowy, cykloheksyloalaninę, kwas ammofenylomaslowy, fenyloalaniny podstawione w pozycji orto, meta lub para reszty fenylowej jedną lub dwoma z następujących grup: (C1-C4) alkil, (C1-C4) alkoksyl, atom chlorowca lub grupy nitrowe, lub podstawione grupą metylenodioksy; β-2- i 3-tienyloalaninę, β-2- i 3-furanyloalaninę, β-2- 3- i 4-pirydyk)alaninę, e-(bemzotienylo-2 i 3)alaninę, β-(1- i 2-naftylo)alaninę, O-alkilowane pochodne seryny, treoniny lub tyrozyny, S-alkilowaną cysteinę, S-alkilowaną homocysteinę, O-siarczan, O-fosforan i O-karboksylan tyrozyny, 3-sulfotyrzaynę, 3-karboksytyrozynę, 3-fosfztyrozynę, ester kwasu 4-metanosulfonowego tyrozyny, ester kwasu 4-metanzfosfznowdgz tyrozyny, 3,5-dijzdztyrozynę, 3-nitrotyrozynę, s-alkilolizynę i delta-alkiloornitynę. Wszystkie te n-aminokwasy mogą być podstawione grupą metylową w pozycji alfa, chlorowcem przy dowolnej reszcie aromatycznej w bocznym łańcuchu n-aminowym lub odpowiednią grupą ochronną przy atomach O, N lub S w bocznym łańcuchu. Odpowiednie grupy ochronne ujawniono w „Protectwe Groups In Organie Synthesis”, T. W. Greene i β. G. M. Wuts, J. Wiley & Sons, NY, NY, 1991
Określenie „podstawiony” odnosi się do zastąpienia atomu wodoru w związku grupą podstawnika. W niniejszym wynalazku, podstawieniu nie podlegają te atomy wodoru, które tworzą część reszty tworzącej wiązanie wodorowe, zdolnej do tworzenia wiązania wodorowego z tlenem karbonylowym w Arg-341 ICE lub tlenem karbonylowym w Ser-339 ICE. Takie wykluczone z podstawienia atomy wodoru obejmują te atomy, które są zawarte w grupie -NH-, występującej w pozycji alfa w stosunku do grupy -CO-, i przedstawionej jako -NH, a niejako grupa X lub inne oznaczenie we wzorach: (a) do (t), (v) do (z).
Określenie „łańcuch prosty” oznacza ciągły nidrozgałęziony sznur kowalencyjnie związanych atomów. Łańcuch prosty może być podstawiony, ale podstawniki te nie są częścią łańcucha prostego.
Symbol „K,” odnosi się do liczbowego pomiaru efektywności związku w hamowaniu aktywności docelowego enzymu, takiego jak ICE. Niższe wartości K oznaczają wyższą efektywność. Wartość K, wyprowadza się przez dopasowanie wyznaczonych eksperymentalnie wartości szybkości do standardowych równań kinetyki enzymu (patrz I. H Segel, Enzyme Kinetics, Wiley-Interscidncd, 1975).
Stosowane tu określenie „pacjent” odnosi się do każdego ssaka, a zwłaszcza do ludzi.
Określenie „farmaceutycznie skuteczna ilość” oznacza ilość skuteczną w leczeniu lub łagodzeniu chorób związanych z IL-1, apoptozą, IGIF lub IFN-γ u pacjenta.
Określenie „profilaktycznie skuteczna ilość” oznacza ilość skuteczną w zapobieganiu lub zasadniczemu zmniejszeniu objawów chorób związanych z IL-1, apoptozą, IGIF lub IFN-γ u pacjenta.
Określenie „farmaceutycznie dopuszczalny nośnik lub substancja pomocnicza” odnosi się do nietoksycznego nośnika lub substancji pomocniczej, które mogą być podawane pacjentowi razem ze związkiem według wynalazku, nie znosząc jego aktywności farmakologicznej.
Określenie „farmaceutycznie dopuszczalna pochodna” oznacza dowolną farmaceutycznie dopuszczalną sól, ester, lub sól takiego estru związku według wynalazku, lub inny dowolny związek, który po podaniu pacjentowi, jest zdolny do dostarczenia mu (bezpośrednio lub pośrednio) związku według wynalazku lub metabolitu o aktywności przeciwko ICE lub jego reszty.
Farmaceutycznie dopuszczalne sole związków według wynalazku obejmują na przykład sole utworzone z farmaceutycznie dopuszczalnymi kwasami nieorganicznymi i organicznymi oraz z zasadami. Przykłady odpowiednich kwasów obejmują kwas solny, bromowodorowy, siarkowy, azotowy, nadchlorowy, fumarowy, maleinowy, fosforowy, glikolowy, mlekowy, salicylowy, bursztynowy, tolueno-p-sulfonowy, winowy, octowy, cytrynowy, metanosulfonowy, mrówkowy, benzoesowy, malonowy, naftaleno^-sulfonowy i benzenosulfonowy Inne kwasy, takie jak szczawiowy, aczkolwiek same nie są farmaceutycznie dopuszczalne, mogą być stosowane do wytwarzania soli użytecznych jako produkty przejściowe w wytwarzaniu związków według wynalazku oraz ich farmaceutycznie dopuszczalnych soli addycyjnych z kwasami Sole utworzone
190 736 z odpowiednimi zasadami obejmują sole z metalami alkalicznymi (np sodowe), z metalami ziem alkalicznych (np. z magnezem), sole amonowe i sole N-(C|.4 alkil)4+.
Wynalazek przewiduje również „czwartorzędowanie” dowolnych grup zawierających zasadowy atom azotu w związkach według wynalazku. Zasadowy azot można czwartorzędować za pomocą środków znanych fachowcom w tej dziedzinie, obejmujących, na przykład, halogenki niższego alkilu, takie jak chlorek, bromki i jodki metylu, etylu, propylu i butylu, siarczany dialkilu obejmujące siarczan dimetylu, dietylu, dibutylu i diamylu; długołańcuchowe halogenki, takie jak chlorki, bromki i jodki decylu, laurylu, mirystylu i stearylu; oraz halogenki aralkilu, obejmujące bromki benzylu i fenetylu. Dzięki takiemu czwartorzędowaniu otrzymać możną produkty rozpuszczalne w wodzie lub w oleju albo zdolne do tworzenia dyspersji. Inhibitory ICE według wynalazku mogą zawierać jeden lub więcej „asymetrycznych” atomów węgla, tak więc mogą występować w postaci racematów lub mieszanin racemicznych, pojedynczych enancjomerów; mieszanin distereomerycznych i pojedynczych diastereomerów. W zakres wynalazku wchodzą wszystkie postaci izomeryczne związków według wynalazku. Każdy stereogenny atom węgla może występować w konfiguracji R lub S. Aczkolwiek konkretne związki i rusztowania podane przykładowo w niniejszym zgłoszeniu mogą być przedstawione w konkretnej konfiguracji stereochemicznej, uwzględnia się również związki i rusztowania oraz ich mieszaniny o przeciwległej stereochemii przy danym centrum chiralnym.
Inhibitory ICE według wynalazku mogą obejmować struktury pierścieniowe, które mogą być ewentualnie podstawione przy atomach węgla, azotu lub innych atomach, rozmaitymi podstawnikami. Takie struktury pierścieniowe mogą być pojedynczo lub wielokrotnie podstawione. Korzystnie struktury pierścieniowe zawierają od 0 do 3 podstawników. Przy wielokrotnym podstawieniu każdy podstawnik może być wybrany niezależnie od innych podstawników, pod warunkiem, że ich kombinacja prowadzi do wytworzenia stabilnego związku
Wynalazkiem objęte są tylko takie kombinacje podstawników i zmiennych, które powodują wytworzenie stabilnego związku. Stosowane tutaj określenie „stabilny” odnosi się do związków, które mają stabilność pozwalającą na ich wytwarzanie i poddawanie ssakom sposobami znanymi w technice Zazwyczaj, związki takie są trwałe przynajmniej przez tydzień w temperaturze 40°C lub niższej, w nieobecności wilgoci lub innych reaktywnych chemicznie warunkó w.
Podstawniki mogą być przedstawione w różnych formach, co jest znane specjalistom w tej dziedzinie techniki i można je stosować zamiennie Przykładowo, podstawnik metylowy w pierścieniu fenylowym może być przedstawiony jako każda z następujących form:
W niniejszym opisie stosuje się zamiennie różne formy określania podstawników, takich jak metyl.
Inhibitory ICE według niniejszego wynalazku przedstawione są wzorem:
(VI) rx-n-r2
I
H w którym R| oznacza.
190 736
R.2 oznacza: (a)
każdy R5 oznacza:
-((0)^,0, w którym R10 oznacza fenyl, ewentualnie podstawiony jeden raz lub wielokrotnie przez Q>, indolil, naftyl, izochinolil, prosty lub rozgałęziony Cm alkil, ewentualnie podstawiony przez fenyl, dimetylotiazol, benzotriazol, albo imidazolidion;
-C(0(rN(Rιo((R1o(, w którym Rjo oznacza H lub fenyl, ewentualnie podstawiony przez prosty lub rozgałęziony -OCm alkil;
-S(O)2-R9, w którym R9 oznacza fenyl lub naftyl;
-C(0)C(0)-R1o, w którym R10 oznacza fenyl, ewentualnie podstawiony przez prosty lub rozgałęziony -OC1-6 alkil;
Χ5 oznacza CH lub N;
Y 2 oznacza H 2 lub O;
R13 oznacza prostą lub rozgałęzioną grupę -Cm alkilową;
każdy R 51 niezależnie oznacza prosty lub rozgałęziony -Cm alkil, prosty lub rozgałęziony -Cm alkilofenyl, w którym fenyl jest ewentualnie podstawiony przez -Cl, prosty lub rozgałęziony -C(O)-C|.6 alkil, albo nasycony 4-8-członowy pierścień karbocykliczny, który ewentualnie jest skondensowany z benzenem, każdy R 21 niezależnie oznacza H lub prostą albo rozgałęzioną grupę -C1.6alkilową, każdy Q1 oznacza -N(prosty lub rozgałęziony C1-6 alkil^, -Nfy, -C1, prosty lub rozgałęziony -OCm alkil, ewentualnie podstawiony przez N-morfolinyl, -OH, prosty lub rozgałęziony -OC(O)Cm alkil, prosty lub rozgałęziony -Cm alkil, prosty lub rozgałęziony rN(H(C(0(Cl-6 alkil, prosty lub rozgałęziony -N(H)C(O(C|-6 alkilofenyl lub
O / \
X z*2'' o pod warunkiem, ze gdy R2 oznacza:
P ‘0
R 21 oznacza H; a
Y2 oznacza O, wówczas R5 nie może oznaczać -C(O)R|0, w którym R10 oznacza -CH2CH2Ar3, a Ar3 oznacza niepodstawiony fenyl; albo SO2R9, gdzie R9 oznacza metyl, oraz gdy
Y2 oznacza H2, wówczas R5 nie może oznaczać -C^Rio, w którym R10 oznacza -CH2CH2A13, a Ar3 oznacza niepodstawiony fenyl
Korzystne są te związki o wzorze VI, w którym R13 oznacza prostą lub rozgałęzioną grupę C1-4 alkilową, R21 oznacza -H lub -CH.; R 51 oznacza prostą lub rozgałęzioną grupę Cm alkilową lub prosty lub rozgałęziony C 1.6 alkilofenyl, ewentualnie podstawiony przez -Cl,
190 736 a Qi oznacza -NH2, -Cl, prosty lub rozgałęziony -OCi^alkil, prosty lub rozgałęziony -C|.6 alkil, -N(H)C(O)C1_6 alkil, prosty lub rozgałęziony -N(H)C(O)C1_6 alkilofenyl lub
O / \ o
ewentualnie podstawiony przez Qo
Korzystnie R1 oznacza (e10), w którym Χ5 oznacza CH, natomiast inne podstawniki mają znaczenia jak określone powyżej.
Alternatywnie w tym korzystnym wykonaniu R1 oznacza (e10), a Χ5 oznacza CN, natomiast inne podstawniki mają znaczenia jak określone powyżej
Korzystnie w powyższych związkach o wzorze VI R5 oznacza -C(O)-Ri0 lub -C(O)-C-(O)-Rio, inne podstawniki mają znaczenia jak określone powyżej.
Bardziej korzystnie Ro oznacza -Ar3, a inne podstawniki mają znaczenia jak określone powyżej.
Bardziej korzystnie w tych bardziej korzystnych związkach R 5 oznacza -C(O)-Rio, a Ro oznacza Ar3, którą stanowi fenyl, ewentualnie podstawiony jeden raz lub wielokrotnie przez Qi, indolil, naftyl, izochinolil lub dimetylotiazol.
Q1 w tych związkach oznacza -N(prosty lub rozgałęziony C1- alkil^, -NH2, -C1, prosty lub rozgałęziony -OC 1.4 alkil, -OH, prosty lub rozgałęziony -Cm alkil, -N(H)C(O)C1_6 alkil lub prosty lub rozgałęziony -N(H)C(O)Cm alkilofenyl.
Gdy R10 oznacza fenyl podstawiony, korzystnie jest to fenyl raz lub wielokrotnie podstawiony w pozycji 3 lub 5 przez -C1 lub w pozycji 4 przez -N(prosty lub rozgałęziony Ci-, alkil)2, -NH2, prosty lub rozgałęziony -OC 1.4 alkil, -OH, -N(H)C(O)Co6 alkil lub prosty lub rozgałęziony -N(H)C(O)Co6 alkilofenyl.
Inne korzystne związki obejmują, ale nie wyłącznie:
SSOra
a.
CHjOH
H O~Z *
190 736
Alternatywnie R10 oznacza fenyl, jeden raz lub wielokrotnie podstawiony w pozycji 3 lub 5 grupą prostą lub rozgałęzioną grupą C14 alkilową, a w pozycji 4 grupą -O-R5, w której R 5 oznacza H lub grupą prostą lub rozgałęzioną grupę C- alkilową.
Korzystne związki o wzorze VI obejmują, ale nie wyłącznie:
214W-3
214w-2
214W-4
214W-5
214W-7
190 736
Alternatywnie w bardziej korzystnym wykonaniu R 5 oznacza grupę -C(O)-R|0, w której Rio oznacza indolil lub izochinolil.
Najkorzystniej R10 stanowi izochinolil.
Inne korzystne związki o wzorze VI obejmują, ale nie wyłącznie:
O
190 736
Alternatywnie w tym bardziej korzystnym wykonaniu R5 oznacza grupę -((0)-1^10, w której Rio stanowi fenyl podstawiony grupą o wzorze
O / \ ch2 \ / o .
190 736
Korzystne związki według tego bardziej korzystnego wykonania obejmują, ale nie wyłącznie.
415c
190 736
Inne związki o wzorze VI obejmują ale nie wyłącznie'
213h
O
H
190 736
Ο
Η
190 736
213q
213r
O
190 736
213s
213t
213u
213v
213w
O
190 736
213Χ
245
245b
256
190 736
Ο
264C
264d
190 736
264i
ΜθΟ'
Ο
264k
190 736
190 736
190 736
2001
2100a
2100b
190 736
213C
2100C
21OOd
2I00e
190 736
2100g
2l00h
2l00k
190 736
Ο
190 736
Inhibitory ICE według wynalazku obejmują tez związki o wzorze (IV) · w których m oznacza 1 lub 2; R1 oznacza:
R3 jest wybrany z grupy obejmującej: CN, -C(O)-H, -C(O)-CH2-T1-R11, -C(O)-CH2-F, -C=N-O-R9 i -CO-Ar2;
każdy R5 jest niezaleznie wybrany z grupy obejmującej· -C(O)-Rio, -C(O)O-R9, -C(O)-N(R,o)(Rio), -S(O)2-R9, -S(O)2-NH-R,o, -C(O)-CH2-O-R9, -C(O)C(O)-Rio, -R9, -H, C(O)C(O)-OR10, -C(O)-C(O)-N(R9)(R,o),
Y2 oznacza H2 lub O;
każdy T,jest niezależnie wybrany z grupy obejmującej -O-, -S-, -S(O)- i -S(O)2-; każdy R9 jest niezależnie wybrany z grupy obejmującej Ar3 i prostą lub rozgałęzioną grupę -C16 alkilową, ewentualnie podstawioną przez -Ar3, przy czym grupa -Ci- alkilowa jest ewentualnie nienasycona;
każdy R^jest niezależnie wybrany z grupy obejmującej -H, -Ar3, grupę -C3-6 cykloalkilową i prostą lub rozgałęzioną grupę -C|_6 alkilową, ewentualnie podstawioną przez -Ar3, przy czym grupa -Ci- alkilowa jest ewentualnie nienasycona;
każdy R,, jest niezależnie wybrany z grupy obejmującej. -Ar4, -(CH2)i-3-Ar4. -H 1 -C(O)-Ar4;
R15 jest wybrany z grupy obejmującej -OH, -OAr3, -N(H)-OH 1 -OCi-, w której C1-6 oznacza prostą lub rozgałęzioną grupę C1-6 alkilową, ewentualnie podstawioną przez -Ar3, -CONH2, -OR5, -OH, -OR9 lub -CO2H;
każdy R21 jest niezależnie wybrany z grupy obejmującej H lub prostą lub rozgałęzioną grupę -C i— alkilową;
Ar2 jest niezależnie wybrany spośród następujących grup, w których dowolny pierścień ewentualnie może być raz lub wielokrotnie podstawiony przez -Q, lub fenyl, ewentualnie podstawiony przez -Q,:
(hh) (ii)
w których każdy Y jest niezależnie wybrany z grupy obejmującej O i S;
każdy Ar3 oznacza grupę cykliczną niezależnie wybraną spośród grup obejmujących grupę arylową zawierającą 6, 10, 12 lub l4 atomów węgla i od ido 3 pierścieni i aromatyczną
190 736 grupę heterocykliczną zawierającą od 5 do 15 atomów w pierścieniu i od 1 do 3 pierścieni, która zawiera co najmniej jeden heteroatom wybrany spośród -O-, -S-, -SO-, -SO2-, =N-, -NH-, N(Rs)- i -N(R9)- i ewentualnie zawiera jedno lub więcej podwójnych wiązań oraz ewentualnie zawiera jeden lub więcej pierścieni aromatycznych, przy czym grupa cykliczna jest ewentualnie raz lub wielokrotnie podstawiona przez -Qi;
każdy Q1 jest niezależnie wybrany z grupy obejmującej -NH2, -CO2H, -Cl, -F, -Br, -I, -NO2, -CN, =O, -OH, perfluoro-CM alkil, R5, -OR5, -NHR5, -OR9, -N(R9)( Rio), -R9, -C(O)- Rio i
O / \ o
pod warunkiem, ze gdy -Ar3 jest podstawiony przez grupę Qi, która zawiera jedną lub więcej dodatkowych grup -Ar3, wówczas te dodatkowe grupy -Ar3 nie są podstawione innymi grupami -Ar3.
Korzystne związki o wzorze IV stanowią te, w których R 3 oznacza -CO-Ar2.
Najkorzystniej R3 oznacza -CO-Ar2, Y2 oznacza O
Inne bardziej korzystne związki stanowią te, w których R 3 oznacza -C(O)-CH 2-T1-R11, a Rn oznacza -(CH2)1-3-Ar4.
Najkorzystniej, gdy R3 oznacza -C(O)-CH2-T|-Rn, a Rn oznacza -(CH2)1_3-Ar4, T1 oznacza O.
Inne bardziej korzystne związki obejmują te, w których R3 oznacza -C(O)-CH 2-T1-R11, T1 oznacza O, a R11 oznacza -C(O)-Ar4.
Inne bardziej korzystne związki obejmują te, w których R3 oznacza -C(O)-H.
Inne bardziej korzystne związki obejmują te, w których R3 oznacza -CO-CH2-T1-R11, a R| 1 oznacza -Ar4.
Bardziej korzystnie, R3 oznacza -CO-CH2-T1-R11, a R| 1 oznacza -Ar4, T| oznacza O lub S
Bardziej korzystnie, R5 jest wybrany z grupy obejmującej -C(O)-Rio, -C(O)O-Rm 1 -C(O)-NH-R10.
Alternatywnie, R5 jest wybrany z grupy obejmującej -S(O)2-R9, -S(O)2-NH-Rio, -C(O)-C(O)-R10, -R9, -C(O)-C (O)-OR,0 i -C(O)-C(O)-N(R9)(Rio).
Bardziej korzystnie, R5 oznacza -C(O)-C(O)-Rm lub -C(O)-Rm, w których R10 oznacza Ar3.
Korzystnie, gdy R5 oznacza -C(O)-Rio, a R10 oznacza Ar3, grupą cykliczną Ar3 jest fenyl, ewentualnie raz lub wielokrotnie podstawiony przez
-R9, który oznacza prostą lub rozgałęzioną grupę Ci- alklilową;
-F,
-Cl;
-N(H)-R5, w której R5 oznacza -H lub -C(O)-Rio, w którym R10 oznacza prostą lub rozgałęzioną grupę Ci- alkilową, ewentualnie podstawioną przez -Ar3, przy czym Ar3 oznacza fenyl;
-N(R9)(Rio), w którym R9 i R10 niezależnie oznaczają prostą lub rozgałęzioną grupę Cialkilową; albo
-O-R5, w której R5 oznacza H lub prostą lub rozgałęzioną grupę C|- alkilową.
Korzystnie Ar3 oznacza fenyl raz lub wielokrotnie podstawiony w pozycji 3 lub w pozycji 5 przez -Cl lub w pozycji 4 przez -NH-R5, -N(R9)(Ri0) lub -O-R5
Korzystnie również Ar3 oznacza fenyl raz lub wielokrotnie podstawiony w pozycji 3 lub w pozycji 5 przez -R9, przy czym R9 oznacza prosta lub rozgałęziona grupę C|- alkilową; oraz w pozycji 4 przez -O-R 5.
Korzystne są związki o wzorze IV, w którym R5 oznacza -C(O)-Rio, w którym R|() oznacza Ar3, zaś grupa cykliczna Ar3 jest wybrana z grupy obejmującej indolil, benzimidazolil, tienyl, chinolil, izochinolil 1 benzo[b]tio-fenyl i ewentualnie jest raz lub wielokrotnie pod76
190 736 stawiona przez -Q,. Wśród tych związków korzystne są te, w których grupą cykliczną Ar3 jest izochinolil, który ewentualnie jest raz lub wielokrotnie podstawiony przez -Q,.
W korzystnych związkach o wzorze IV, w którym R 5 oznacza -C(O)-Rio, w którym R10 oznacza Ar3, grupą cykliczną Ar3 jest fenyl podstawiony przez
O / \ ch2, \ / o
Alternatywnie R 5 oznacza -C(O)-C (O)-ORm.
Najkorzystniej m oznacza 1; R2, oznacza -H lub -CH3.
Każda cykliczna grupa Az3 jest niezależnie wybrana z zestawu obejmującego fenyl, naftyl, tienyl, chinolinyl, izochinolinyl, pirozolil, tiazolil, lzoks68elll, benzetriazelil, benzimidazolil, tienotienyl, imidazolil, ti6di68elil, ben8o[b]tiofenzl, pirydyl, benzo^myl i indolil, przy czym taka grupa cykliczna jest ewentualnie podstawiona jednym lub kilkoma podstawnikami -Qi;
każdy Q1 jest niezależnie wybrany z grupy obejmującej -NH2, -Cl, -F, -Br, -OH, -R9, -NH-R5, gdzie R5 oznacza -C(O)-Ri lub -S(O)2-R9; oraz -OR5, gdzie R5 oznacza -C(O)-Rio, -OR9, -N(R9)(R,o) i
O / \
CH2, \ /
O przy czym każdy R9 i R10 oznaczają niezależnie prostą lub rozgałęzioną grupę -C,- alkilową, ewentualnie podstawioną Ar3, który oznacza fenyl, ewentualnie podstawiony jeden raz lub wielokrotnie grupą -Q,; pod warunkiem, ze gdy -Ar3 jest podstawiony grupą Q|, która zawiera jedną lub więcej dodatkowych grup -Ar3, te dodatkowe grupy -Ar3 nie są podstawione inną grupą -Az3.
Bardziej korzystnie w tych bardziej korzystnych związkach Ar3 jest grupą cykliczną wybraną z zestawu grup obejmującego fenyl, naftyl, tienyl, chinolinyl, izochinoliny^ pirazolil, tiazolil, izoksazolil, ben8etzi68elil, benzimid68elil, tienetienzl, imidazolil, tiadiazolil, benzo[b]tiofenzl, benzo^myl i indolil i ewentualnie podstawioną jeden raz lub wielokrotnie grupą -Qi
Korzystne związki o wzorze IV obejmują te, w których R2i oznacza H, a inne podstawniki mają znaczenie jak określone powyżej.
Inne korzystne związki o wzorze IV obejmują te, w których R21 oznacza CH3, a inne podstawniki mają znaczenie jak określone powyżej.
Korzystnym związkiem o wzorze IV jest
412
190 736
Inhibitory ICE według wynalazku obejmują tez związki o wzorze (V) (V) w którym m oznacza 1 lub 2; R1 oznacza
(elO-B)
R3 oznacza -C(O)-H; każdy R 5 oznacza -((0)-Αρ3;
Y 2 oznacza O;
każdy R9 jest niezależnie wybrany z grupy obejmującej -Ar3 i prostą lub rozgałęzioną grupę -C1-6 alkilową ewentualnie podstawioną Ap3, przy czym grupa -Cm alkilowa jest ewentualnie nienasycona;
każdy R10 jest niezależnie wybrany z grupy obejmującej -Ar3, grupę C3.6 cykloalkilową 1 prostą lub rozgałęzioną grupę -Cm alkilową, ewentualnie podstawioną Ar 3, przy czym grupa -C 16 alkilowa jest ewentualnie nienasycona;
R15 oznacza -OH; każdy R21 oznacza -H;
każdy Ar3 oznacza izochinolil, ewentualnie raz lub wielokrotnie podstawiony przez -Q1, każdy Q1 jest niezależnie wybrany z grupy obejmującej -NH2, -CO2H, -Cl, -F, -Br, -I,
-NO2, -CN, =0, -OH, -pet-fluoro-CM alkil, R5. -OR5, -NHR5, -ORy. -N(R9)(R|o), -Ry. -C(O)-R,o i
O / \ ch2, \ / pod warunkiem, ze gdy -Ar3 jest podstawiony grupą Q1, która zawiera jedną lub więcej dodatkowych grup -Ar3, te dodatkowe grupy -Ai3 nie są juz podstawione inną grupą -Ar3
190 736
Korzystne związki o wzorze IV i V są przedstawione następującymi wzorami.
820b
823b
823β
826e
827e
907a
907b
1029
190 736
O
265
190 736
411
OH
H
814C
817C
817d
817e
880
OH ,
H
881
190 736
190 736
1004
1005
H,CO
1006
1007
looa
190 736
1009
1010
1011
1012
O 'OH
H
1023
190 736
1015
1016
1017
1018
1019
190 736
1025
190 736
1026
1030
1031
1032
1033
190 736
1034
1035
1036
1037
1038
190 736
1039
1040
1041
H,CS,
190 736
1044
1045
1046
1047
1048
190 736
1049
1050
1051
1052
Ο
1053
190 736
1054
1055
1056
1057
1058
190 736
1059
1060
1061
1062
1063
1064
190 736
1065
1066
1067
1066
1069
190 736
1070
1071
1072
1073
1074
‘Oh .H
1075
190 736
1076
1077
1078
1079
1080
190 736
1081 loais
1082
1083
L082S
O
I
190 736
1084
Λ
1085
1086
1087
WjC Η ·*Α<
Η
σ
ο
Κ,ο
η ο
Η
Η Ο
1088
190 736
1089
1090
1091
1093
1094
190 736
1095
1096
1097
1098
1099
CKjCWi-S-N' δ Η
1021
100
190 736
1027
1028
Związki według wynalazku mają ciężar cząsteczkowy mniejszy lub równy około 700 daltonów, a bardziej korzystnie 400-600 daltonów Te korzystne związki są łatwo absorbowane przez krew pacjenta po podaniu doustnym
Ta dostępność po podaniu doustnym jest cechą, która decyduje o tym, ze związki są doskonałymi środkami do leczenia i profilaktyki prowadzonej doustnie przeciwko chorobom, w których bierze udział I1-1, apoptoza, IGIF lub IFN-γ.
Należy rozumieć, ze związki według wynalazku mogą występować w rozmaitych równoważnych postaciach, w zależności od warunków, w tym od wyboru rozpuszczalnika, pH i innych znanych fachowcom w tej dziedzinie. Wszystkie takie postaci są wyraźnie objęte zakresem niniejszego wynalazku. W szczególności, wiele związków według wynalazku, a zwłaszcza te, które zawierają grupy aldehydowe lub ketonowe w R3, może przybrać postać hemiketalu (lub hemiacetalu) lub postać uwodnioną.
W zależności od doboru rozpuszczalnika i innych warunków, znanych specjaliście w tej dziedzinie, związki według wynalazku mogą również występować w postaci acyloksyketalu, acyloksyacetalu, ketalu lub acetalu.
Ponadto, należy rozumieć, ze postaci równoważne związków według wynalazku obejmować mogą postaci tautomeryczne. Wszystkie takie postaci są wyraźnie włączone w zakres niniejszego wynalazku.
Należy rozumieć, ze związki według wynalazku można modyfikować odpowiednimi grupami funkcyjnymi dla zwiększenia selektywnych własności biologicznych Takie modyfikacje są znane w technice i obejmują one sposoby zwiększania penetracji biologicznej do danego układu biologicznego (np. krwi, układu limfatycznego, ośrodkowego układu nerwowego), zwiększania dostępności przy podawaniu doustnym, zwiększania rozpuszczalności dla umożliwienia podawania na drodze iniekcji, zmianę metabolizmu lub zmianę szybkości wydalania Ponadto, związki według wynalazku można zmieniać do postaci proleków tak, ze żądany związek tworzy się w organizmie pacjenta jako wynik działania procesu metabolicznego lub innych procesów biochemicznych na ten prolek. Takie formy proleków zwykle nie wykazują lub wykazują niewielką aktywność w próbach in vitro. Przykładami takich postaci proleków jest ketal, acetal, oksym, imina i hydrazon związków, które zawierają grupy ketonowe lub aldehydowe, zwłaszcza gdy występują one w grupie R3 związków według wynalazku.
Inne przykłady form, które stanowią proleki, obejmują hemi-ketal, hemi-acetal, acyloksyketal, acyloksyacetal oraz formy ketalowe i acetalowe.
Rozszczepienie przez ICE i TX i aktywowanie w ten sposób Pro-IGIF
Proteazę ICE uprzednio identyfikowano poprzez jej zdolność do przekształcenia nieaktywnej pro-IL-1p w dojrzałą aktywną IL-1 β, prozapalną cząsteczkę, in vitro i in vivo Tutaj wykazujemy, ze ICE 1 jej bliski homolog TX (Caspase-4, C Faucheu i in., EMBO. 14, str 1914 (1955) mogą proteolitycznie rozszczepiać nieaktywny pro-IGIF Ta obróbka jest nie190 736
101 zbędna aby przekształcić pro-IGIF w jego aktywną dojrzałą formę, IGIF Rozszczepienie proIGIF przez ICE i przypuszczalnie przez TX, ułatwia także wydzielanie IGIF z komórek
Najpierw wykorzystaliśmy przejściową koekspresję plazmidów, którymi transfekowane były komórki Cos, aby określić, czy któryś ze znanych członów rodziny proteaz ICE/CED-3 może przeprowadzić pro-IGIF w IGIF w hodowanych komórkach (przykład 23) (fig. 1A).
Figura 1A demonstruje, że ICE rozszczepia pro-IGIF w komórkach Cos kotransfekowanych plazmidami, które wyrażają pro-IGIF w obecności aktywnego ICE. Komórki Cos były transfekowane samym plazmidem ekspresyjnym dla pro-IGIF (ścieżka 2) lub w kombinacji ze wskazanymi plazmidami ekspresyjnymi kodującymi typ dziki lub nieaktywne mutanty rodziny proteaz ICE/CED-3 (ścieżki 3-12). Przygotowano lizaty komórkowe i analizowano je na obecność białka IGIF metodą immunoblottingu z użyciem surowicy odpornościowej przeciw IGIF. Ścieżka 1 zawierała lizaty z pozornie transfekowanych komórek.
Koekspresja pro-IGIF z ICE lub TX dała w efekcie rozszczepienie pro-IGIF do polipeptydu podobnego wielkością do naturalnie występującego, 18 kDa, dojrzałego IGIF. Taka obróbka jest blokowana przez jednopunktową mutację, która zmienia katalityczne reszty cysteiny i w ten sposób deaktywuje ICE i TX (Y. Gu i in., EMBO, 14, str 1923 (1995)).
Koekspresja z CPP32 (Caspase-3) proteazą biorącą udział w programowanej śmierci komórki (T. Fernandes-Alnemri i in., J. Biol. Chem., 269, str. 30761 (1994); D. W. Nicholson i in., Nature 376, str.37 (1995)) daje w rezultacie rozszczepienie pro-IGIF do mniejszego polipeptydu, podczas gdy koekspresja z CMH-1 (Caspase-7) bliskim homologiem CPP32 (J. A. Lippke i in., J. Biol. Chem., 271, str. 1825 (1996)) nie prowadzi do przecięcia pro-IGN w jakimś znaczącym zakresie. Zatem wydaje się, iż ICE i TX są zdolne do rozszczepienia proIGIF do polipeptydu podobnego wielkością do naturalnie występującego 18 kDa IGIF.
Następnie zbadaliśmy zdolność tych proteaz cysternowych do rozszczepiania pro-IGIF m vitro stosując oczyszczony, rekombinantowy (His)6-znakowany pro-IGIF jako substrat (przykład 23).
Figura 1B demonstruje, ze ICE rozszczepia pro-IGIF in vitro Oczyszczony rekombinantowy (His)6-znakowany pro-IGIF (2 pg) inkubowano ze wskazaną proteazą cysteinową, w obecności lub nieobecności inhibitorów ICE lub CPP32, jak opisano w przykładzie 23. Produkty rozszczepienia analizowano metodą SDS-PAGE stosując wybarwienie błękitem Coomassie.
ICE rozszczepił 24 kDa pro-IGIF na dwa polipeptydy o wielkości około 18 kDa i 6 kDa Sekwencjonowanie N-końcowych aminokwasów produktów rozszczepienia przez ICE wykazało, ze polipeptyd o wielkości 18 kDa zawiera takie same N-końcowe reszty aminokwasów (Asn-Phe-Gly-Arg-Leu) jak naturalnie występujący IGIF. To wskazuje, ze ICE rozszczepia pro-IGIF w faktycznym miejscu obróbki (Asp35-Asn36) (H Okamura i in , Nature, 378, str. 88 (1995)). Sekwencjonowanie N-końcowych aminokwasów produktów rozszczepienia przez CPP32 wykazało, ze CPP32 rozszczepił pro-IGIF w miejscu Asp69-Ile70.
Rozszczepienie pro-IGIF przez ICE jest wysoce specyficzne i charakteryzuje się skutecznością katalityczną (kcat/KM) wielkości 1,4 x 107 M- s- (Km = 0,6 ± 0,1 μΜ; kcat = 8,6 ± 0,3 s'1) i jest hamowane przez swoiste inhibitory ICE (Ac-Tyr-Val-Ala-Asp-aldehyd) i Cbz-Val-Ala-Asp-[(2,6-dichlorobenzoilo)oksy]metyloketon (N. A. Thornberry i in., Nature, 356, str. 768 (1992); R. E. Dolle i in , J. Med. Chem.. 37 str. 563 (1994))
Figura 1C demonstruje, ze rozszczepienie przez ICE in vitro aktywuje pro-IGIF Do hodowli komórek A.E7 dodano nie rozszczepionego pro-IGIF, produktów rozszczepienia proIGIF przez ICE lub CPP32 lub rekombinantowego dojrzałego IGIF (rIGIF), każdego do końcowego stężenia 12 ng/ml lub 120 ng/ml (patrz przykład 23) Po 18 godzinach oznaczono ilościowo IFN-γ w środowisku hodowli, metodą ELISA. W próbie z nie rozszczepionym proIGIF nie wykryto w ogóle aktywności indukującej IFN-γ, natomiast pro-IGIF rozszczepiony przez ICE był aktywny w indukowaniu produkcji IFN-γ w komórkach Th1.
Podobnie jak ICE, homolog ICE, TX, również rozszczepiał pro-IGIF na polipeptydy o podobnej wielkości. Jednak jego skuteczność katalityczna była o dwa rzędy wielkości niższa niż stwierdzona dla ICE.
Zgodnie z obserwacjami poczynionymi w powyższych doświadczeniach z komórkami Cos, pro-IGIF rozszczepiony przez CPP32 w innym miejscu (Asp69-Ile 70) i wytworzone
102
190 736 polipeptydy miały niewielką aktywność indukującą IFN-γ (fig 1C). Natomiast CMI Li i granzym B nie rozszczepiały pro-IGIF w znaczącym stopniu.
Powyższe wyniki wykazują, ze zarówno w komórkach Cos jak i in vitro, ICE i TX są zdolne do obróbki nieaktywnego prekursora pro-IGIF w faktycznym miejscu dojrzewania z wytworzeniem biologicznie czynnej cząsteczki IGIF.
Obróbka pro-IGIF przez ICE ułatwia jego wydzielanie
IGIF jest produkowany przez aktywowane komórki Kupffera i makrofagi in vivo i jest wydzielany z komórek po stymulacji endotoksyną (H. Okamura i in., Infection and Immunity, 63 str. 3966 (1995); (H. Okamura i in., Nature, 378, str 88 (1995). Stosowaliśmy układ koekspresji w komórkach Cos (przykład 23) aby zbadać, czy wewnątrzkomórkowe rozszczepienie pro-IGIF przez ICE ułatwi wydzielanie dojrzałego IGIF z komórki. Jest to przypadek proIL-Ιβ, gdy jest on rozszczepiony przez ICE do aktywnej IL-Ιβ (N. A. Thornberry i in., Nature, 356, str. 768 (1992)).
Figura 2A. Komórki Cos transfekowane samym wektorem ekspresyjnym dla pro-IGIF (ścieżki 2 i 6) lub w kombinacji z plazmidem ekspresyjnym kodującym typ dziki (ścieżki 3 i 7) lub nieaktywny mutant ICE (ścieżki 4 i 8) były metabolicznie znakowane 35S-metioniną (patrz przykład 24). Lizaty komórkowe (po lewej stronie) i kondycjonowaną pożywkę (po prawej) poddano immunoprecypitacji z użyciem surowicy odpornościowej przeciw-IGIF. Strącone w ten sposób białka analizowano metodą SDS-PAGE i fluorografii (fig. 2A).
Polipeptyd o wielkości 18 kDa odpowiadającej wielkością dojrzałemu IGIF wykryto w kondycjonowanej pożywce z hodowli komórek Cos wyrażających równocześnie pro-IGIF i ICE, natomiast komórki Cos wyrażające równocześnie pro-IGIF i nieaktywnego mutanta ICE (ICE-C285S) lub wyrażające tylko pro-IGIF(-) wydzielały tylko bardzo małe ilości proIGIF i żadnej wykrywalnej ilości dojrzałego IGIF. Oceniliśmy, ze kontransfekowane komórki wydzielały około 10% dojrzałego IGIF, natomiast ponad 99% pro-IGIF pozostawało w komórkach.
Zmierzyliśmy także obecność aktywności indukującej IFN-γ w lizatach komórkowych i w kondycjonowanej pożywce powyższych transfekowanych komórek (patrz przykład 24), Aktywność indukującą IFN-γ wykryto zarówno w lizatach komórkowych, jak i w kondycjonowanej pożywce komórek Cos wyrażających równocześnie pro-IGIF i ICE ale nie wykryto w komórkach wyrażających same pro-IGIF lub sam ICE (fig. 2B).
Te wyniki wskazują, że rozszczepienie pro-IGIF przez ICE ułatwia wydzielanie dojrzałego aktywnego IGIF z komórek.
Pro-IGIF jest fizjologicznym substratem dla ICE in vivo
W celu zbadania roli ICE w proteolitycznej aktywacji i wydzielaniu IGIF w warunkach fizjologicznych, zbadaliśmy obróbkę pro-IGIF i wydzielanie dojrzałego IGIF z komórek Kupffera aktywowanych lipopolisacharydami (LPS), zebranych od myszy typu dzikiego pobudzonych Propiobacterium acnes i od myszy nie zawierających ICE (ICE-/-) (przykład 25)
Jak to widać na fig. 3A, komórki Kupffera od myszy ICE-/- są defektywne pod względem wydzielania IGIF. Lizaty komórek Kupffera typu dzikiego i od myszy ICE-/- zawierały podobne ilości IGIF jak określone metodą ELISA Jednakże IGIF można było wykryć tylko w kondycjonowanej pożywce komórek typu dzikiego, natomiast nie wykryto w pożywce komórek ICE-/- Zatem myszy defektywne pod względem ICEfICE-/-) syntetyzują pro-IGIF, ale nie wydzielają go jako zewnątrzkomórkowy pro-IGIF ani jako dojrzały IGIF.
W celu określenia, czy myszy defektywne pod względem ICE (ICE-/-) obrabiają wewnątrzkomórkowy pro-IGIF ale nie wydalają IGIF, komórki Kupffera z typu dzikiego i od myszy ICE-/-metabolicznie znakowano 35S-metioniną, a immunoprecypitację IGIF przeprowadzono z lizatami komórek i z kondycjonowanymi pożywkami, jak opisano w przykładzie 25 Te doświadczenia wykazały, ze nieobrobiony pro-IGIF był obecny zarówno w komórkach Kupffera typu dzikiego, jak i w komórkach ICE-/-. Jednakże dojrzały IGIF o wielkości 18 kDa obecny był tylko w kondycjonowanej pożywce komórek typu dzikiego, a nie było go w komórkach Kupffera ICE-/- (fig. 3B). Wykazuje to, ze aktywny ICE w komórkach jest potrzebny dla wydzielania obrobionego IGIF z komórek.
Ponadto, kondycjonowana pożywka z komórek typu dzikiego, ale nie z komórek ICE-/zawierała aktywność indukującą IFN-γ, która nie była związana z działaniem IL-12, ponieważ
190 736
103 była niewrażliwa na neutralizujące przeciwciało przeciw IL-12. Nieobecność IGIF w kondycjonowanej pożywce komórek Kupffera ICE-/- potwierdziła obserwacje z komórkami Cos, mianowicie, ze dla wydzielania aktywnego IGIF wymagana jest obróbka pro-IGIF przez ICE
Figury 3C i 3D wykazują, ze in vivo, u myszy ICE-/- zmniejszyły się poziomy IGIF i IFN-γ w surowicy, odpowiednio. Typ dziki (ICE +/+) i mysz ICE-/- (n = 3) uczulane P acnes deaktywowanym ciepłem, poddano prowokacji LPS (przykład 26) i metodą ELISA zmierzono poziomy IGIF (fig. 3C) i IFN-γ (fig. 3D) w surowicy uczulanych myszy trzy godziny po prowokacji LPS (przykład 25).
Surowica od myszy ICE-/- pobudzonych P. acnes i LPS zawierała zmniejszony poziom IGIF (fig. 3C) i nie zawierała wykrywalnej aktywności indukującej IFN-γ w obecności przeciwciała przeciw IL-12. Obniżony poziom IGIF w surowicy prawdopodobnie jest odpowiedzialny za znacząco niższe poziomy IFN-γ w surowicy myszy ICE-/- (fig. 3D), ponieważ nie zaobserwowaliśmy znaczącej różnicy w produkcji IL-12 u myszy ICE-/- w tych warunkach. Z tą interpretacją zgodne jest stwierdzenie, ze nie przylegające splenocyty z typu dzikiego i od myszy ICE-/- wytwarzały podobne ilości IFN-γ, gdy były pobudzone rekombinantowym aktywnym IGIF in vitro. Zatem uszkodzenie produkcji IFN-γ nie wynika z rzeczywistego defektu w limfocytach T myszy ICE-/-.
Wyniki te potwierdzają krytyczną rolę ICE w obróbce prekursora IGIF i w wydzielaniu aktywnego IGIF zarówno in vitro jak i in vivo.
W celu dokładniejszego zbadania zależności między poziomem IFN-γ w surowicy i aktywnością ICE in vivo, przeprowadzono badanie w czasie po prowokacji LPS myszy typu dzikiego i myszy defektywnych pod względem ICE (przykład 26) (fig. 4).
Figura 4 wykazuje, ze poziom IFN-γ w surowicy myszy typu dzikiego wzrasta w czasie utrzymuje się na wysokości > 17 ng/ml w ciągu 9-18 godzin po działaniu LPS. Jak to przewidziano na podstawie doświadczeń omówionych powyżej, poziomy IFN-y w surowicy były znacznie niższe u myszy ICE-/-, z osiągniętym w tym samym czasie maksimum na poziomie ng/ml, co stanowi w przybliżeniu 15% poziomu obserwowanego u myszy typu dzikiego (fig. 4).
Zwierzęta obserwowano także na kliniczne objawy posocznicy i co 4 godziny mierzono temperaturę ciała myszy typu dzikiego i myszy ICE-/- prowokowanych 30 mg/kg LPS lub 100 mg/kg LPS tylko myszy ICE-/-. Wyniki przedstawione na fig 4 wykazują, że temperatura ciała myszy typu dzikiego znacząco spadła (od 36°C do 26°C) w ciągu 12 godzin po działaniu LPS. Objawy klinicznego zakażenia były oczywiste i wszystkie zwierzęta padły w ciągu 24-28 godzin.
Natomiast myszy ICE-/- poddane działaniu 30 mg/kg LPS wykazywały spadek temperatury ciała tylko o 3-4°C i minimalne objawy zaburzenia; nie zaobserwowano tez śmiertelności. Jednakże myszy ICE-/- poddane działaniu LPS w dawce 100 mg/kg wykazywały kliniczne objawy, spadek temperatury ciała i śmiertelność podobne do myszy typu dzikiego prowokowanych LPS w dawce 30 mg/kg.
Inhibitor ICE Ac-YVAD-CHO jest również inhibitorem produkcji IL-1p i IFN-γ
Ponieważ w obróbce i wydzielaniu biologicznie aktywnego IGIF bierze udział ICE, porównaliśmy aktywność odwracalnego inhibitora ICE (Ac-YVAD-CHO), w odniesieniu do produkcji IL-Ιβ i IFN-γ w próbie z jednojądrzastymi komórkami krwi obwodowej (PBMC) (przykład 27).
Wyniki na fig. 5 wskazują podobną siłę działania inhibitora ICE Ac-YVAD-CHO w kierunku zmniejszenia produkcji IL-Ιβ i IFN-γ w ludzkich PBMC, z dawką IC50 2,5 pM dla każdego Podobne wyniki otrzymano w badaniach ze splenocytami myszy typu dzikiego
Dostarcza to dodatkowych dowodów na to, że pro-IGIF jest fizjologicznym substratem dla ICE 1 sugeruje, ze inhibitory ICE będą użytecznym narzędziem do regulowania fizjologicznych poziomów IGIF i IFN-γ
Podsumowując, stwierdziliśmy, ze ICE reguluje poziomy IGIF i IFN-γ in vivo i in vitro oraz, ze inhibitory ICE mogą obniżać poziomy IGIF i IFN-γ w komórkach ludzkich. Te wyniki zostały opisane w równoległym zgłoszeniu USA nr 08/712 878
Związki według wynalazku są skutecznymi ligandami dla ICE Tak więc, związki te są zdolne do działania i hamowania procesów w chorobach związanych z IL-1, apoptozą, IGIF
104
190 736 i IFN-γ i ostatecznie do hamowania aktywności tego białka w chorobach zapalnych, chorobach autoagresyjnych, chorobach zwyrodnieniowych kości, zaburzeniach proliferacji, w chorobach zakaźnych i degeneratywnych. Przykładowo, związki według wynalazku, hamując ICE hamują konwersję prekursora IL-1p w dojrzałą IL-1p. Ponieważ ICE ma zasadnicze znaczenie w wytwarzaniu dojrzałej IL-1, tak więc zahamowanie tego enzymu skutecznie blokuje zapoczątkowanie skutków i objawów fizjologicznych związanych z IL-1 takich jak zapalenie, poprzez hamowanie produkcji dojrzałej IL-1. Tak więc, przez hamowanie aktywności prekursora lL-1p, związki według wynalazku skutecznie działająjako inhibitory IL-1
Podobnie, związki według niniejszego wynalazku hamują konwersję prekursora IGIF do dojrzałego IGIF. Zatem, przez hamowanie produkcji IGIF związki według wynalazku działają skutecznie jako inhibitory produkcji IFN-γ.
Związki według wynalazku stosować można w konwencjonalny sposób do leczenia chorób, w których bierze udział IL-1, apoptozą, IGIF lub IFN-γ Sposoby leczenia, poziomy dawkowania i wymagania wybrać może specjalista w tej dziedzinie spośród dostępnych sposobów i technik. Związek według wynalazku można połączyć z farmaceutycznie dopuszczalną substancją pomocniczą i podawać go pacjentowi cierpiącemu na chorobę związaną z IL-1 apoptozą, IGIF lub IFN-γ, w dopuszczalny farmaceutycznie sposób i w ilości skutecznej do złagodzenia stanu tej choroby.
W zakres wynalazku wchodzą tez kompozycje farmaceutyczne zawierające związki o wzorach IV, V i VI według wynalazku jako substancje czynne i farmaceutycznie dopuszczalny nośnik.
Kompozycje według wynalazku przeznaczone są do leczenia lub zapobiegania chorobom związanym z IL-1, z apoptozą, z INN-γ oraz do hamowania funkcji, w których uczestniczy kaspaza.
Związki w takich kompozycjach mogą być stosowane same lub razem z innymi związkami według wynalazku, w sposób zgodny z konwencjonalnym stosowaniem inhibitorów ICE w kompozycjach farmaceutycznych. Przykładowo, związek według wynalazku połączyć można z farmaceutycznie dopuszczalnymi adiuwantami stosowanymi do szczepionek i podawać w profilaktycznie skutecznej ilości, aby przez dłuższy czas zabezpieczyć pacjenta przed chorobami związanymi z IL-1, apoptozą, IGIF lub IFN-γ.
W celu zwiększenia skuteczności leczenia lub profilaktyki wobec różnych chorób związanych z IL-1, apoptozą, IGIF lub IFN-y, związki według wynalazku można podawać również razem z innymi inhibitorami ICE.
Ponadto, związki według wynalazku stosować można w kombinacji z innymi konwencjonalnymi środkami przeciwzapalnymi lub z inhibitorami metaloproteazy macierzy, inhibitorami lipoksygenazy i antagonistami cytokin, innych niz IL-1p.
Dla zapobieżenia lub zwalczenia objawów chorób związanych z IL-1, takich jak zapalenie, związki według wynalazku można również podawać w kombinacji z immunomodulatorami (np bropiryminą, przeciwciałem przeciwko ludzkiemu interferonowi alfa, IL-2, GM-CSF, enkefaliną metioninową, interferonem alfa, ditiokarbaminianem dietylu, czynnikiem martwicy nowotworu, naltreksonem i rEPO) lub z prostaglandynami.
Gdy związki według wynalazku podaje się w terapii skojarzonej wraz z innymi środkami, mogą być one podawane pacjentowi kolejno lub równocześnie. Alternatywnie, farmaceutyczne lub profilaktyczne kompozycje mogą zawierać kombinację inhibitora ICE według wynalazku i innego środka terapeutycznego lub profilaktycznego
Kompozycje farmaceutyczne według wynalazku zawierają dowolny ze związków według wynalazku, ich farmaceutycznie dopuszczalne sole oraz dowolny dopuszczalny farmaceutycznie nośnik, substancję pomocniczą lub rozcieńczalnik Farmaceutycznie dopuszczalne nośniki, substancje pomocnicze i rozcieńczalniki, które mogą być stosowane w kompozycjach farmaceutycznych według wynalazku, obejmują, ale nie wyłącznie, wymieniacze jonowe, tlenek glinu, stearynian glinu, lecytynę, samoemulgujące układy dostarczania leków (SEDDS), takie jak α-tokoferol, bursztynian glikolu polietylenowego 1000 lub inne polimeryczne matryce dostarczające białka surowicy, takie jak albumina z ludzkiej surowicy, substancje buforujące, takie jak fosforany, glicyna, kwas sorbinowy, sorbinian potasu, mieszaniny częściowych glicerydów nasyconych kwasów tłuszczowych pochodzenia roślinnego, wodę, sole lub elek190 736
105 trolity, takie jak siarczan protaminy, wodorofosforan disodu, wodorofosforan potasu, chlorek sodu, sole cynku, krzemionkę koloidalną, trikrzemian magnezu, poliwinylopirolidon, substancje na bazie celulozy, glikol polietylenowy, sól sodową karboksymetylocelulozy, poliakrylany, woski, polimery blokowe polietylen-polioksypropylen i lanolinę
Korzystnie w celu poprawy dostarczania związków według wynalazku można także stosować cyklodekstryny takie jak α-, β i γ-cyklodekstryny lub chemicznie modyfikowane pochodne takie jak hydroksyalkilocyklodekstryny, w tym 2- i 3-hydroksy-e-cyklodekstryny lub inne solubilizowane pochodne.
Kompozycje farmaceutyczne według wynalazku można podawać doustnie, pozajelitowe, przez inhalację, miejscowo, doodbytniczo, donosowo, dopoliczkowo, dopochwowo i ze wszczepionych zbiorników. Korzystne jest podawanie doustne. Kompozycje farmaceutyczne według wynalazku mogą zawierać dowolne konwencjonalne nietoksyczne i dopuszczalne farmaceutycznie nośniki, substancje pomocnicze i rozcieńczalniki.
W niektórych przypadkach pH preparatu można regulować za pomocą farmaceutycznie dopuszczalnych kwasów, zasad lub buforów; w celu zwiększenia stabilności preparatu Stosowane tu określenie „pozajelitowo” obejmuje iniekcje podskórne, śródskórne, dożylne, domięśniowe, dostawowe, domaziówkowe, domostkowe, dooponowe, doogniskowe, doczaszkowe oraz podawanie na drodze infuzji.
Kompozycje farmaceutyczne według wynalazku mogą być w postaci sterylnych, nadających się do wstrzyknięć preparatów, na przykład w postaci sterylnych nadających się do wstrzykiwania wodnych lub oleistych zawiesin. Zawiesinę wytwarza się zgodnie ze sposobami znanymi w technice, stosując odpowiednie substancje dyspergujące lub zwilżające (takie jak, na przykład Tween 80) lub środki zawieszające Sterylne nadające się do wstrzyknięć preparaty mogą być również w postaci nadających się do wstrzykiwania roztworów lub zawiesin w nietoksycznym, dopuszczalnym do stosowania w podawaniu pozajelitowym, rozcieńczalniku lub rozpuszczalniku, na przykład w postaci roztworu w 1,3-butanodiolu. Spośród dopuszczalnych do stosowania rozcieńczalników i rozpuszczalników wymienić można mannitol, wodę, roztwór Ringera i izotoniczny roztwór chlorku sodu. Ponadto, korzystnie jako rozpuszczalnik lub środowisko zawieszające stosuje się sterylne, ciekłe oleje. Do tego celu stosować można dowolny łagodny ciekły olej, łącznie z syntetycznymi mono- lub diglicerydami. Do wytwarzania preparatów do wstrzyknięć odpowiednie są ,kwasy tłuszczowe, takie jak kwas oleinowy i jego pochodne glicerydowe, jak również naturalne dopuszczalne farmaceutycznie oleje, takie jak olej z oliwek lub olej rycynowy, zwłaszcza w ich polioksyetylowanych postaciach. Te roztwory lub zawiesiny olejowe mogą również zawierać jako rozcieńczalnik lub substancję dyspergującą długołańcuchowy alkohol, taki jak Ph. Helv lub podobny
Kompozycje farmaceutyczne według wynalazku mogą być podawane doustnie w dowolnej nadającej się do podawania doustnego postaci użytkowej, łącznie z, ale nie wyłącznie kapsułkami, tabletkami, zawiesinami i roztworami wodnymi. W przypadku tabletek do podawania doustnego, można stosować powszechnie stosowane nośniki, łącznie z laktozą i skrobią kukurydzianą. Zazwyczaj dodaje się również substancje smarujące, takie jak stearynian magnezu. W kapsułkach do podawania doustnego nadające się do stosowania rozcieńczalniki obejmują laktozę i suchą skrobię kukurydzianą. Gdy doustnie podaje się wodne zawiesiny, składnik aktywny łączy się z substancjami emulgującymi i zawieszającymi. W razie potrzeby dodać również można niektóre środki słodzące i/lub smakowo-zapachowe i/lub substancje barwiące.
Kompozycje farmaceutyczne według wynalazku podawać również można w postaci czopków do podawania doodbytniczego. Kompozycje takie wytwarza się przez zmieszanie związku według wynalazku z odpowiednią, nie drażniącą substancją pomocniczą, która jest stała w temperaturze pokojowej, ale ciekła w temperaturze odbytu, tak więc ulega stopieniu w odbycie, uwalniając składnik aktywny Takie substancje pomocnicze obejmują, ale nie wyłącznie, masło kakaowe, wosk pszczeli i poliglikole etylenowe.
Gdy żądane leczenie obejmuje miejsca lub narządy łatwo dostępne do nanoszenia miejscowego, szczególnie użyteczne są kompozycje według wynalazku do podawania miejscowego Do zastosowania miejscowego na skórę, kompozycje farmaceutyczne według wynalazku powinny być sporządzone w postaci odpowiedniej maści zawierającej związki aktywne za-0-90 73wierzo—e lrb toopyrzyoz—e w —oś—ikr Ooś—ikl So uoSowo—lo miejscowego według wy—olozkr obejmują, ole nie wyłącznie, olej ml-eral-y, ciekłą dozeli-y, biołą aoseli—e, glikol ptopaienzwy, związek uolioysaetylea-pzliokraurzuyiea, em-lg-jący wosk i aoSy Altematyw—le, komuzzacje formoceutycz—e mogą być ruorzaSoo—e w portaci oSu-wled—lyh lotlo—ów lrb kremów zawierających związek oktyw—y oowieroona lrb toopysoyooaa a roś—ikr. —SpoaleS-ie noś-iki obejmują, ole nie wyłącznie, olej mineralny, mo—zrteotynlo— sztnlt-, uzlyrzrnote -0, woski na bazie estrów cetylowych, alkohol ceteorylowy, 2-oktyloSoSekoaol, olkohol nenoyiowy i wody. Kompzoacje formace-tyczne wedłrg aynolaokr mogą być rów—ież rtosowa—e mlejryzwo do dolnych dróg jelitowych w portaci yzzuków SooSnat—lyoayh lub preparatów So pzdawo—io w lewatywie. W oaktes aynolooky ayhodoa również ulortty miejrczwo-przezskóme.
Kompozycje formace-tyczne według ay—alazkr uzdawoć możno w postaci oet-oolr do —oso lrb utoeo i-Ηο^|. Kompozycje tokie wytwarza riy dobrze morami w tech—ice suzso(οοι i mogą być one spztoaSoone joko tootwzry w soli, z oortorowoalem alkohol- neasalzwego lub inrych zSuzaleS—ich środków ko-serwujących, ptomotoróa onrotucjl zaleyssoJacych blzSzstyuność, rlyoropzyhzdoych wyolowodztów i/lub lonych mo—ych w tech—ice środków rzlrnlllzujacyyh lub dyspergujących.
Pzslzma Sowkzwonio aktywnego rkłoS—lko owiaoky uomlySoa około 0,0- i zyzłz -00 mg/kg ciezory cloło/Szlcń, kotzyrtoie pomiydzy - o 50 mg/kg ciezory cloło/Szleń rą skrteczae w oauobleooolr i lecze—iu apoptooa, chorób, w których dorą -Szioł 1L- -, 1G1F i lFO-γ, włączając w to choroby zauol—e, choroby oytzimmr—oloolyone, choroby kości urzedeoojaye z Sestu-kcją, sobytoenio prollfetocyj—e, choroby zokoź—e, choroby Segereracyj—e, choroby utoebiegojące z martwicą, gościec uzrteurJaca, ostre i przewlekłe zopale—le turnityi, ortmy, zespół bło— szklistych dorosłych, kłybkowe zopale—ie netek, uermotoiSalre oouoleaιe stawów, rkłoSzay toczeń u-mieniowaty, tworSziry, utzeaieyłe oouoienie tarczycy, choroby Graves'o, ortolmmrnoizoico—e zapalenie bło—y śl-mwej żołądka, crytoaye larrllrzooleora (typ 1), ortoogteryjną —iedoyralrtość hemzlltayz—a, ora—rlzyatzpenle znoJytaoyhłon—a o-tooguesyjrą, mołopłytkowość, ptzewlekłe oktyw—e oouolenle wątroby, mloste—iy gtovir, choroby souol—e jelito otrneoz, choroby Ctoho'o, ł-szczycy, reokcjy utzeszcoep przeciwko ooruzSotzowι, osteouzrzoe, zaburzenia bydowy kości suowodowooe utzez blałaczly szulkzaa, ortrą l przewlekłą (ϊο.ο^Ι| rzpikową, utoetoyta czer-ioko, οι|ιοΙο Koporl'ego, uorocoriyy suoaoSzwoną rozsiewem białaczki soulkzwej, wstrząs ιζ^υ^ου, sokooe—io pałeczką Shigelli, yhzrony Alzheimer',, chztony Porki—rono, —iedzkrwierle ośrodkowego -kłoS- —etwzweoz, aledoΙπιζ—Ιζ miyś—io retczweoz, oo—iy rSoenlzwz-miyśrizwy, rtword—le—le toorιo—e, souolerie mózg- zoleż—e oS AIDS, oouole—ie mózg- oalazo—e z infekcją HIV, rtouzeaie siy, łysienie i -szkodze-ie —errolzoicz—e zolez—e oS -dotu. Zwykle kzmuozacje farmace-tycz-e weSł-g wynalazk- bySą uzdowooe oS około - So 5 tazy dzieroie lub alteunotyw—ie w ciągłym wlewie Toki rposób uoSowonio może być stosowory w leczealr przewlekłym lrb ostrym. Ilość oktya—eoo ikłoS-iko, któro może być łączo-o z materiałom, —ś-lkowyml w cel- aytazrserlo portaci jeSnortkowej dowyzaonlo może być boiSzo tóżno zależnie od leczo—ego zronrlko i szczególnych rodzajów uzSawo—io Typowy preparat będzie zowietoł od około 5% So około 95% aktywnego rkłodniko <w/w>. Kztzart—ie takie uteuoraty zawierają od około 20% So 80% aktywnego skłoS—lko.
PoScm uzutoay rto—r zStoaio pocjeato może być poSowono, jeśli jest to yzrieyzre Sowko uzStrzymrjaco swlasyr lrb kzmuozacjl weSł-g ayaolozy-. Oosteuale zoleżale od objoaóa, Soayowo—ie lub czystość uoSoaoaio, lrb jeSno i drrgie może być sm—lejszo—e oż So poziomu, przy którym rton poprawy jest yttoymawo—a, gdy objawy zorto—ą złagodzone do uzżaSorego uzzizmy leczenie powi—oo zostać utserwone JeSaokże uocje—yι mogą wymagać utsetaaoaeoo, przewlekłego lecze—io uoSyzos —oarotóa lrb wystąpie-lo objawów chorobowych
Specjalisto zoraoza, ze mogą być wymogo-e riższe lrb wyższe Sowki aiż te uoSoae uoayżej. Swoirte dawkowa-le i schematy lecze—io dlo uzrzczeoól-eoz uocjeato bydą zależeć od różnych czaoaikóa, w tym aktyw-ości ayyzrzystyaoaych swoistych salazyóa, wieku, ciyżar- cloło, rtoru zdrowia, płci, diety, czas- uzSoaoalo, wskaźnika wydolo-io, yzmnιaocjι lekr, ciyżkoścl i przebieg- choroby, skłonności pocje—to do dorej choroby i oce—y ursez leczącego lekarza
190 736
107
Choroby wywoływane przez IL-1, które mogą być leczone i którym można zapobiegać przez podawanie związku lub kompozycji według wynalazku obejmują, lecz nie są ograniczone do chorób zapalnych, chorób autoagresyjnych, chorób powodujących destrukcję kości, chorób proliferacyjnych, chorób zakaźnych i chorób degeneracyjnych Choroby spowodowane przez apoptozę, które mogą być leczone i którym można zapobiegać przez podawanie związku lub kompozycji według wynalazku obejmują choroby degeneracyjne.
Choroby zapalne, które mogą być leczone i którym można zapobiegać przez podawanie związku lub kompozycji według wynalazku obejmują, lecz nie są ograniczone do gośćca przewlekłego postępującego, ostrego i przewlekłego zapalenia trzustki, astmy i zespołu błon szklistych dorosłych. Korzystnie chorobą zapalną jest gościec przewlekle postępujący i ostre zapalenie trzustki
Choroby autoagresyjne, które mogą być leczone i którym można zapobiegać przez podawanie związku lub kompozycji według wynalazku obejmują, lecz nie są ograniczone do kłębkowego zapalenia nerek, reumatoidalnego zapalenia stawów, tocznie, rumieniowatego układowego, twardziny, przewlekłego zapalenia tarczycy, choroby Graves'a, autoagresyjnego zapalenia błony śluzowej żołądka, cukrzycy insulinozaleznej (typ I), autoagresyjnej niedokrwistości hemolitycznej, autoagresyjnej granulocytopenii obojętnochłonnej, małopłytkowości, przewlekłego aktywnego zapalenia wątroby, miastenii gravis, choroby zapalnej jelita grubego, choroby Crohn'a, łuszczycy, reakcji przeszczepu przeciwko gospodarzowi. Korzystnie chorobą autoagresyjną jest reumatoidalne zapalenie stawów, choroba zapalna jelita grubego, choroba Crohn'a lub łuszczyca.
Choroby powodujące destrukcję kości, które mogą być leczone i którym można zapobiegać przez podawanie związku lub kompozycji według wynalazku obejmują, lecz nie są ograniczone do osteoporozy i zaburzenia budowy kości związanej z rozsiewem białaczki szpikowej.
Choroby proliferacyjne, które mogą być leczone i którym można zapobiegać przez podawanie związku lub kompozycji według wynalazku obejmują, lecz nie są ograniczone do ostrej i przewlekłej białaczki szpikowej, przerzutów czerniaka, mięsaka Kaposi'ego i szpiczaka mnogiego
Choroby zakaźne, które mogą być leczone i którym można zapobiegać przez podawanie związku według lub kompozycji wynalazku obejmują, lecz nie są ograniczone do posocznicy, wstrząsu septycznego i zakażenia pałeczką Shigelli.
Choroby degeneracyjne i przebiegające z martwicą zależne od IL-1, które mogą być leczone, i którym można zapobiegać przez podawanie związku lub kompozycji według wynalazku obejmują, lecz nie są ograniczone do choroby Alzheimer'a, choroby Parkinsona, niedokrwienia ośrodkowego układu nerwowego i niedokrwienia mięśnia sercowego. Korzystnie choroba degeneracyjnąjest choroba Alzheimer'a
Choroby degeneracyjne zależne od apoptozy, które mogą być leczone i którym można zapobiegać przez podawanie związku lub kompozycji według wynalazku obejmują lecz nie są ograniczone do choroby Alzheimer'a, choroby Parkinsona, niedokrwienia ośrodkowego układu nerwowego, niedokrwienia mięśnia sercowego, zaniku mięśniowo-rdzeniowego, stwardnienia rozsianego, zapalenia mózgu zależnego od AIDS, zapalenia mózgu związanego z infekcją HIV, starzenia się, łysienia i uszkodzenia neurologicznego zależnego od udaru.
Związki i kompozycje według niniejszego wynalazku mogą być wykorzystywane do leczenia lub zmniejszenia postępu, nasilenia lub skutków stanów zapalnych zależnych od IGIF lub IFN-γ, stanów autoagresyjnych, zakaźnych, proliferacyjnych, uszkadzających kości, martwiczych i degeneracyjnych obejmujących choroby, zaburzenia lub skutki, znamiennych tym. ze te stany charakteryzują się zwiększonymi poziomami produkcji IGIF lub IFN-γ.
Przykłady takich stanów zapalnych obejmują, lecz nie są ograniczone do gośćca przewlekłego postępującego, ostrego i przewlekłego zapalenia trzustki, astmy, reumatoidalnego zapalenia stawów, choroby zapalnej jelita grubego, choroby Crohna, wrzodziejącego zapalenia jelita grubego, niedokrwienia ośrodkowego układu nerwowego, niedokrwienia mięśnia serca i zespołu błon szklistych dorosłych.
108
190 736
Stanem zapalnym, który jest korzystnie leczony, jest reumatoidalne zapalenie stawów, wrzodziejące zapalenie jelita grubego, choroba Crohna, zapalenie wątroby i zespół błon szklistych dorosłych.
Przykłady takich stanów zakaźnych obejmują, lecz nie są ograniczone do infekcyjnego zapalenia wątroby, posocznicy, wstrząsu septycznego i zakażenia pałeczką Shigelli.
Przykłady takich stanów zakaźnych obejmują, lecz nie są ograniczone do kłębkowego zapalenia nerek, reumatoidalnego zapalenia stawów, tocznia rumieniowatego, układowego, twardziny, przewlekłego zapalenia tarczycy, choroby Graves'a, autoagresyjnego zapalenia błony śluzowej żołądka, cukrzycy insulinozaleznej (typ I), cukrzycy młodzieńczej, autoagresyjnej niedokrwistości hemolitycznej, autoagresyjnej granulocytopenii obojętnochłonnej, małopłytkowości, miastenii gravis, stwardnienia rozsianego, łuszczycy, liszaja płaskiego, choroby przeszczep przeciwko gospodarzowi, ostrego zapalenia nerwowo-mięśniowego, egzemy, pierwotnej marskości wątroby, zapalenia wątroby, zapalenia błony naczyniowej, choroby Behcet'a, przewlekłego aktywnego zapalenia wątroby, ostrego zapalenia nerwowomięśniowego, atopowego zapalenia skóry, aplazji czerwonokrwinkowej, anemii aplastycznej, stwardnienia zanikowego bocznego i zespołu nerczycowego
Korzystnie stanem autoagresyjnym jest kłębkowe zapalenie nerek, cukrzyca insulinozalezna (typ I), cukrzyca młodzieńcza, łuszczyca, choroba przeszczep przeciwko gospodarzowi, obejmująca odrzucenie przeszczepu i zapalenie wątroby.
Przykłady takich zaburzeń uszkadzających budowę kości obejmują, lecz nie są ograniczone do osteoporozy i zaburzeń budowy kości związanych ze szpiczakiem mnogim.
Przykłady takich stanów proliferacyjnych obejmują, lecz nie są ograniczone do ostrej i przewlekłej białaczki szpikowej, przerzutów czerniaka, mięsaka Kaposi'ego i szpiczaka mnogiego.
Przykłady takich stanów neurozwyrodnieniowych obejmują, lecz nie są ograniczone do choroby Alzheimera, choroby Parkinsona i choroby Huntingtona.
W zakres wynalazku wchodzi tez zastosowanie związków według wynalazku do wytwarzania leków do zapobiegania i leczenia chorób wymienionych powyżej, zależnych od IL-1, apoptozy, IGIF i INF-γ. Związek według wynalazku może być również wykorzystany jako czynnik hamujący inne proteazy cysteinowe.
Związki według wynalazku i ich pochodne mogą być stosowane do hamowania proteolizy peptydów docelowych w testach biochemicznych i komórkowych badających ICE i homologi ICE lub mogą być derywatyzowane w celu wiązania ze stałą żywicą jako związany substrat do zastosowań w chromatografii powinowactwa Te i inne zastosowania charakteryzujące komercyjne inhibitory proteazy cystynowej będą oczywiste dla specjalisty.
Sposób wytwarzania związków N-acyloaminowych
Inhibitory ICE według niniejszego wynalazku mogą być syntetyzowane konwencjonalnymi metodami Korzystnie, związki te syntetyzuje się z łatwo dostępnych materiałów wyjściowych.
Związki według wynalazku syntetyzuje się znacznie łatwiej niż znane inhibitory ICE
Uprzednio opisane inhibitory ICE często zawierają cztery lub więcej chiralnych centrów i liczne wiązania peptydowe
Stosunkowo prosty sposób syntezy związków według niniejszego wynalazku stanowi zaletę przy produkcji tych związków na dużą skalę.
Przykładowo, związki według wynalazku można wytworzyć stosując opisane tu sposoby Dla specjalisty jest to zrozumiałe, ze nie są to jedyne sposoby, którymi można zsyntetyzować opisane i zastrzezone w tym zgłoszeniu związki Inne metody są oczywiste dla przeciętnego fachowca Ponadto, różne opisane tu etapy syntezy można przeprowadzać w alternatywnej kolejności i również uzyskać żądane związki
Według jednego wykonania sposób wytwarzania związku N-acyloaminowego obejmuje następujące etapy
a) mieszanie kwasu karboksylowego z N-alloc chronioną aminą w obecności obojętnego rozpuszczalnika, trifenylofosfmy, nukleofilowego zmiatacza i tetrakistrifenylofosfino-palladu (0) w temperaturze otoczenia, w obojętnej atmosferze i
b) dodawanie do mieszaniny z etapu a) HOBT i EDC i ewentualnie dalszy etap·
190 736
109
c) hydroliza mieś zaniny z etapu b) w obecności roztworu zawi crająi^cgj) kwas i wo dę, przy czym mieszaninę z etapu b) przed hydrolizą ewentualnie zatęża się
Korzystnie, jako obojętny rozpuszczalnik stosuje się CH2Cl2, DMF lub mieszaninę CH2Cl2, DMF
Korzystnie jako zwkleofilowy zmiatacz stosuje się dimedon, morfolinę, trimetylanililo) dimetyloaminę lub kwas dimetylobarbiturowy. Bardziej korzystnym nukleofilowym zmiataczem jest trimetylosililodimetyloamma lub kwas almctylobarblturowy.
Korzystnie roztwór zawiera około 1-90% wag. kwasu trifluorooctowego, a bardziej korzystnie około 20-50% wag.
Alternatywnie, roztwór zawiera około 0,1-30% wag kwasu solnego.
Bardziej korzystnie w powyższym procesie stosuje się jako obojętny rozpuszczalnik CH2Cl2, DMF lub mieszaninę CH2Cl2 i DMF, a jako nukleofilowy zmiatacz - d^edon, morfolinę, trimctylosilikoalmetzloamizę lub kwas dimctzloOarbiturowy.
Najkorzystniej w powyższym procesie stosuje się jako obojętny rozpuszczalnik CH 2Cl2, DMF lub mieszaninę CH 2O2 i DMF, a jako nuklcafllowz zmiatacz trimetzlosllikodlmctylo) aminę lub kwas almctzloOarbiturocty.
W celu pełniejszego przedstawienia wynalazku podano następujące przykłady. Przykłady te są tylko ilustracją i w żaden sposób nie ograniczają wynalazku.
Przykład 1. Zahamowanie ICE
Uzyskano wartości stałej hamowania (K, i IC50 dla związków według wynalazku przy użyciu trzech opisanych poniżej sposobów.
1. Test enzymatyczny z substratem widzialnym w UV
Test ten przeprowadza się przy użyciu jako substratu nukcynylo-Tyr)Val-Ala, Asp)pNitrozllldu. Synteza analogicznych substratów opisana jest przez L. A. Reitera (Int. J. Peptide Protein Res. 43, 87-96 (1994)). Mieszanina testowa zawiera:
(il buforu (10 mM Tris, 1 mM DTT, 0,1% CHAPS, pH 8,1) μΐ ICE (50 nM stężenie końcowe dające szybkość ~1 mOD/min) il DMSO il 400 (iM substratu (80 (iM stężenie końcowe)
100 (il całkowita objętość mieszaniny reakcyjnej
Widzialny test ICE przeprowadza się w płytce 96)ntudziczkowcj. Bufor, ICE 1 DMSO (jeżeli obecny jest inhibitor) dodaje się do studzienek w podanej kolejności. Składniki pozostawia się do inkubacji w temperaturze pokojowej przez 15 minut począwszy od momentu, gdy wszystkie składniki są obecne we wszystkich studzienkach. Czytnik płytek do mikromiarckykowazl) ustawia się na inkubację w 37°C Po 15 minutach inkubacji, substrat dodaje się bezpośrednio do studzienek i śledzi się reakcję dzięki uwalnianiu chromoforu (pNA) przy 405-603 nm w 37°C przez 20 minut Wykonuje się liniowe dopasowanie danych i oblicza się szybkość w mOD/min. DMSO obecny jest jedynie podczas doświadczeń obejmujących inhibitory, w innych doświadczeniach w celu dopełnienia objętości do 100 il stosuje się bufor
2. Test enzymatyczny z substratem fluorescencyjnym
Test ten przeprowadza się zasadniczo według Thorz0errz i in. (Nature 356: 768-774 (1992)), stosując substrat 17 opisany w tym artykule. Substratem jest Akctzlo-Tzr)V)|)Al)) )Anp-amma)4-metylokumarzza (AMC). Zmieszano następujące składniki:
μΐ buforu (10 mM Tris, 1 mM DTT, 0,1% CHAPS, pH 8,1) il ICE (50 nM stężenie końcowe dające szybkość ~1 mOD/min) μΐ DMSO il 150 (iM substratu (30 iM stężenie końcowe)
100 il całkowita objętość mieszaniny reakcyjnej
Test przeprowadza się w 96)ntudyiezkawcj płytce do mikromiareczkowama Składniki pozostawia się do inkubacji w 37°C przez 15 minut w płytce o kontrolowanej temperaturze. Po ló-minutowej inkubacji reakcję rozpoczyna się przez dodanie nuOntratu do studzienek 1 śledzi się przy 37°C przez 30 minut w oparciu o uwalnianie nuorofbru AMC stosując długość fal pobudzenia 380 nm i długość fali emisji równą 460 nm Wykonuje się liniowe dopasowanie danych dla każdej że studzienek i określa się szybkość jako jednostki fluorenccncjl na sekundę.
110
190 736
Do określania stałej zahamowania enzymu (K,) lub sposobu zahamowania (kompetycyjny, niekompetycyjny) dane szybkości określone w testach enzymatycznych z różnymi stężeniami inhibitora dopasowywane są komputerowo do standardowych równań kinetyki enzymatycznej (patrz, I H. Segel, Enzyme Kinetics, Wiley-Interscience, 1975).
Określenie stałej drugiego rzędu dla inhibitorów nieodwracalnych wykonano przez dopasowanie danych fluorescencji do czasu, stosując równanie postępowe J. F. Morrisona (J. F Morrison, Mol. Celi. Biophys, 2, str. 347-368 (1985). Thomberry i in., opublikowali opis tych metod dla pomiaru stałej szybkości inhibitorów nieodwracalnych ICE. Thornberry i in., Biochemistry, 33, str. 3923-3940 (1994). Dla związków, dla których nie obserwuje się kinetycznie uprzedniego tworzenia kompleksów, stała drugiego rzędu (k,nact) jest wyprowadzona bezpośrednio z nachylenia wykresu liniowego kObs w stosunku do [I], Dla związków, dla których można wykryć uprzednie tworzenie się kompleksów, hiperboliczny wykres kobs w stosunku do [I] dopasowuje się do równania na kinetykę wysycenia generując najpierw K, i k'. Stała drugiego rzędu kmact podana jest jako k'/K1.
3. Test z komórkami PBMC
Test IL-1P z mieszaną populacją ludzkich komórek jednojądrzastych krwi obwodowej (PBMC) albo wzbogaconych jednojądrzastych komórek przylegających.
Przetwarzanie pre-IL-Ιβ przez ICE można zmierzyć w hodowli komórkowej stosując różne źródła komórek. Ludzkie PBMC uzyskane od zdrowych dawców zapewniają mieszaną populację podtypów limfocytów i komórek jednojądrzastych, które wytwarzają całe spektrum interleukin i cytokin w odpowiedzi na wiele klas stymulatorów fizjologicznych. Jednojądrzaste komórki przylegające z PBMC dostarczają wzbogaconego źródła normalnych monocytów do wybiórczych badań wytwarzania cytokin przez pobudzone komórki.
Procedura doświadczalna
Przygotowano początkowy szereg rozcieńczeń badanego związku w DMSO albo etanolu, z kolejnym rozcieńczaniem w pożywce RPMI-10% FBS (zawierającej 2 mM L-glutaminy, 10 mM HEPES, 50 U i 50 μg/ml, odpowiednio pen/strep), uzyskując leki w stężeniu 4-krotnie większym niż stężenie końcowe w teście, zawierające 0,4% DMSO albo 0,4% etanolu. Stężenie końcowe DMSO wynosiło 0,1% dla wszystkich rozcieńczeń leku. Wartość stężenia, ograniczającą pozorną K, dla badanego związku, określoną w teście hamowania ICE, na ogół stosuje się do początkowego skriningu związków.
Zwykle bada się 5-6 rozcieńczeń związku, zaś komórkowy składnik testu wykonuje się w podwójnym powtórzeniu, z powtórzonymi oznaczeniami ELISA na każdym z supernatantów komórek.
Izolowanie PBMC i test na IL-1
Komórki kozuszków leukocytarnych z 0,56 l krwi ludzkiej (dającej 40-45 ml końcowej objętości osocza z komórkami), rozcieńczono pożywką do 80 ml i do każdej z probówek Leuko-PREP (Becton Dickinson) wprowadzono po 10 ml zawiesiny komórek. Po 15 minutach wirowania przy 1500-1800 g, warstwę osocza/pozywki zaaspirowano, po czym zebrano warstwę komórek jednojądrzastych pipetą Pasteura i przeniesiono do 15 ml probówki stozkowodennej do wirowania (Corning). Pożywkę dodawano doprowadzając objętość do 15 ml, delikatnie mieszano z komórkami przez odwracanie i wirowano przy 300 g przez 15 minut. Osad PBMC zawieszono w małej objętości pożywki, zliczono komórki i doprowadzono do gęstości 6 x 106 koomórek/ml.
Do testu komórkowego, do każdej studzienki 24-studzienkowej płytki płaskodennej (Corning) dodano 1 ml zawiesiny komórek, 0,5 ml rozcieńczenia badanego związku i 0,5 ml roztworu LPS (Sigma, nr L-3012; roztwór 20 ng/ml wytworzony w kompletnej pożywce RPMI; stężenie końcowe LPS 5 ng/ml). Dodatek 0,5 ml badanego związku i LPS zwykle wystarcza do zmieszania zawartości studzienek W każdym doświadczeniu badano trzy mieszaniny kontrolne z samym LPS, z rozpuszczalnikiem jako nośnikiem i/lub dodatkową pożywką w celu ustalenia końcowej objętości hodowli na 2,0 ml. Hodowle komórkowe inkubowano przez 16-18 godzin w 37°C w obecności 5% CO2
Po zakończeniu inkubacji, komórki zebrano i przeniesiono do 15 ml stozkowodennych probówek wirowniczych. Po odwirowaniu przez 10 minut przy 200 g, supernatanty zebrano i przeniesiono do 1,5 ml probówek Eppencioo-f Należy zaznaczyć, ze osad komórek może być
190 736
111 wykorzystany do badań biochemicznych na zawartość pre-IL-ie i/lub dojrzałej IL-ie w ekstraktach cytozolu, metodą Western blotting albo ELISA z surowicami odpornościowymi przeciwko pre-IL-ie.
Izolowanie przylegających komórek jednojądrzastych
PBMC wyizolowano i preparowano jak to opisano wyżej. Pożywkę (1,0 ml) dodano do studzienek, a następnie po 0,5 ml zawiesiny PBMC Po 1 godzinie inkubacji, płytki delikatnie wytrząśnięto i zaaspirowano nieprzylegające komórki ze studzienek. Studzienki delikatnie przepłukano trzykrotnie 1,0 ml pożywki i zawieszono w 1,0 ml pożywki. Wzbogacanie w komórki przylegające daje zwykle 2,5-3,0 x 105 komórek/studzienkę. Dodanie badanego związku, LPS, warunki inkubacji komórek i obróbka supematantu przebiegały jak to opisano wyżej.
ELISA
Zastosowano zestaw Quantikine (R&D Systems) do zmierzenia ilości dojrzałej IL-ie Testy wykonano według wskazówek producenta. Obserwowano poziomy dojrzałej IL-ie rzędu 1-3 ng/ml w kontroli pozytywnej PBMC i przylegających komórek jednojądrzastych. Testy ELISA wykonano na rozcieńczeniach supematantów 1:5, 1:10 i 120, z LPS-pozytywnych kontroli w celu wybrania najodpowiedniejszego rozcieńczenia dla supematantów w badanym panelu.
Siła hamująca związków może być wyrażona wartością IC 50, która jest stężeniem inhibitora, przy którym wykrywa się 50% dojrzałej IL-ip w supernatancie w porównaniu z kontrolą pozytywną.
Specjalista zrozumie, ze wartości uzyskane w opisanych tu testach komórkowych zalezą od wielu czynników, takich jak rodzaj komórek, źródło komórek, warunki wzrostu itp
Przykład 2. Badania farmakokinetyczne na myszach
Peptydylowe inhibitory ICE ulegają szybkiemu usunięciu z krążenia, z wartościami klirensu wynoszącymi ponad 100 μ/min/kg. Związki o niższym klirensie mają polepszone właściwości farmakokinetyczne w stosunku do peptydylowych inhibitorów ICE.
Wartości klirensu (μ/min/kg) dla kilku związków według wynalazku uzyskano w badaniach na myszach zgodnie z opisaną metodą.
Preparatyka próbek i dawkowanie
Związki rozpuszczono w sterylnym roztworze TRIS (0,02 M albo 0,05 M) w stężeniu 2,5 mg/ml. Jeżeli było to konieczne, w celu zapewnienia całkowitego rozpuszczenia próbkę rozpuszczano najpierw w minimalnej ilości dimetyloacetamidu (maksimum 5% całkowitej objętości roztworu), a następnie rozcieńczano roztworem TRIS.
Roztwór leku podawano myszom CD-1 (Charles River Laboratories - 26-31 g) przez żyłę ogonową w objętości 10 ml/kg podając dawkę 25 mg/kg.
Myszy pod względem dawek podzielono na grupy po 5 na każdy punkt czasowy (zwykle od 2 minut do 2 godzin), po czym w odpowiednim czasie zwierzęta znieczulano halotanem i pobierano krew do osobnych heparynizowanych probówek przez rozerwanie żyły szyjnej. Próbki krwi schładzano do 0°C, po czym oddzielano osocze i przechowywano w -20°C do badań.
Test biologiczny
Stężenie leku w próbkach osocza oznaczano analizą HPLC z wykrywaniem w UV albo MS (ESP). Zastosowano chromatografię z odwróconymi fazami, stosując różne fazy związane od Ci do C18, z eluentami składającymi się z mieszanin wodnego bufora/acetonitrylu w warunkach izokratycznych.
Oznaczenie ilościowe wykonywano ze standardem zewnętrznym, z krzywymi kalibracji skonstruowanymi przez rozpuszczanie w osoczu roztworów leku, aby uzyskać stężenia w zakresie od 0,5 do 50 μg/ml.
Przed analizą próbki osocza odbiałczano przez dodanie acetonitrylu, metanolu, kwasu trichlorooctowego albo nadchlorowego, a następnie odwirowanie przy 10 000 g przez 10 minut. Objętości próbek od 20 μl do 50 μl wstrzykiwano w celu analizy
112
190 736
Związek 214e
Dawkowanie i próbkowanie
Lek rozpuszczono w sterylnym 0,02M Tris, otrzymując roztwór 2,5 mg/ml, który podawano 11 grupom po 5 samców myszy CD-1 przez żyłę ogonową w dawce 25 mg/kg Kolejne grupy myszy znieczulano i pobierano im krew do heparynizowanych probówek w następujących punktach czasowych: 2, 5, 10, 15, 20, 30, 45, 60, 90 i 120 minut. Po oddzieleniu osocza przechowywano je do testów w -20°C.
Test
Porcje osocza (150 pl) traktowano 5% kwasem nadchlorowym (5 pl), a następnie mieszano przez wytrząsanie i pozostawiano w spokoju przez 90 minut, po czym wirowano Powstały supernatant oddzielano i 20 pl wstrzykiwano do analizy HPLC.
Warunki HPLC Kolumna Faza ruchoma acetonitryl Szybkość przepływu Wykrywanie Czas retencji
100 x 4,6 mm, Kromasil KR 100 5C4 0,1 mM Tris pH 7,5, 86%
14% ml/min.
UV,210nm
3,4 mm.
Wyniki analizy wskazują na obniżanie średniego poziomu leku w osoczu od około 70 pg/ml w 2 minucie do < 2 pg/ml w 90 i 120 minucie.
Przykład 3
Peptydylowe inhibitory ICE ulegają szybkiemu usunięciu z krążenia, z wartościami kliremeu wynoszącymi ponad 80 p/min/kg. Związki o niższym klirensie mają polepszone właściwości farmakokinetyczne w porównaniu z peptydylowymi inhibitorami ICE.
Uzyskano na szczurach wartości klirensu (ml/min/kg) dla kilku związków według wynalazku stosując opisaną poniżej metodę.
Test klirensu in vivo na szczurach
W dniu poprzedzającym badanie farmakokinetyczne wykonano cewnikowanie naczyń szyjnych i podobojczykowych w znieczuleniu (M. J. Free, R. A. Jaffee, „Cannulation techniques for the collection blood and other body fluide”; w: Animal Models; str'. 480-495, NJ Alexander, wyd.; Academic Press; (1987). Lek (10 mg/ml) podawano do żyły szyjnej w nośniku składającym się zwykle z mieszaniny glikolu propylenowego/roztworu soli, zawierającym 100 mM wodorowęglan sodu w stosunku 11. Zwierzętom podawano dawkę 10-20 mg/kg i pobierano próbki krwi w 2, 5, 10, 15, 20, 30, 45, 60, 90 i 120 minut z cewnika podobojczykowego. Krew odwirowywano do osocza i przechowywano je do analizy w -20°C. Analizę danych fazm6kekinetyczmych przeprowadzano metodą regresji nieliniowej stosując standardowe oprogramowanie takie jak RStrip (MicroMath Software, UT) i/lub Pcnonlin (SCI Software, NC) w celu uzyskania wartości klirensu.
Analityka
Szczurze osocze ekstrahowano równą objętością acetonitrylu (zawierającego 0,1% TFA). Próbki odwirowano przy 1000 g i analizowano przez gradientową HPLC. Typowa procedura badania opisana jest poniżej.
200 pl osocza precypitowano 200 pl 0,1% kwasu tzifluozooctowege (TFA) w acetonitrylu i 10 pl 50% wodnego roztworu chlorku cynku, wytrząsano i odwirowano przy około 1000 g, po czym zebrano super-natant i poddano analizie
Procedura HPLC
Zorbax SB-CN (150 x 4,6 mm) (wielkość cząstek 5 p) 50°C
1,0 ud/mm μΐ
A = 0,1 % TFA w wodzie i B =100% aeetomtryl
100% A do 30% A w 15,5 min 0% A w 116 min 1000/o A w 19,2 min.
Kolumna Temperatura Szybkość przepływu Objętość wstrzykiwana Faza ruchoma Zastosowany gradient.
Długość fali 214 nmi
Krzywą standardową wyznaczono przy stężeniach 20, 10, 2 i 1 ng/ml
190 736
113
Przykład 4. Test na wytwarzanie IL-1p na krwi jj^łn^j
Otrzymano wartości IC 50 dla kilku związków według wynalazku przy użyciu opisanej poniżej metody.
Cel
Test na krwi pełnej jest prostą metodą pomiaru wytwarzania IL-ip (albo innych cytokin) oraz aktywności potencjalnych inhibitorów. Złożoność tego układu badawczego, z jego pełnym dopełnieniem komórek limfoidalnych i zapalnych, spektrum białek osocza 1 erytrocytów stanowi idealną reprezentację in vitro warunków ludzkich in vivo.
Materiały strzykawki niepirogenne (około 30 ml) probówki próżniowe niepirogenne, zawierające liofilizowany Na2EDTA (4,5 mg/10 ml strzykawkę) próbka ludzkiej krwi pełnej (około 30-50 ml)
1,5-ml probówki Eppendorf roztwór wyjściowy badanego związku (około 25 mM w DMSO albo innym rozpuszczalniku) wolny od endotoksyny roztwór chlorku sodu (0,9%) 1 HBSS
Iipopolisacharyd (Sigma; nr kat. L-3012), roztwór podstawowy 1 mg/ml w HBSS zestaw ELISA na IL-1P (R & D Systems; nr DLB50) zestaw ELISA na TNF-α (R & D Systems; nr DTA50) łaźnia wodna albo inkubator
Procedura doświadczalna testu na krwi pełnej
Ustawić inkubator albo łaźnię wodną na 30°C. Porcjować krew po 0,25 ml do 1,5-ml probówek Eppendorfa. Uwagai co dwie porcje odwrócić probówkę z krwiąi Różnice w powtórzeniach mogą być spowodowane sedymentacją komórek i ich nierównomiernym rozkładem. Zastosowanie pipety z pozytywnym wypieraniem również zmniejsza różnice pomiędzy porcjami.
Przygotować rozcieńczenia leku w sterylnym roztworze soli, wolnym od pirogenów przez kolejne rozcieńczanie. Szereg rozcieńczenia obejmujący domniemaną K, dla badanego związku określony w teście zahamowania ICE stosuje się zwykle jako pierwotny odsiew związków. W przypadku skrajnie hydrofobowych związków, wykonano rozcieńczenia w świeżym osoczu otrzymanym od tego samego dawcy krwi albo w PBS zawierającym 5% DMSO w celu zwiększenia rozpuszczalności.
Dodać 25 pl rozcieńczenia związku badanego albo kontroli nośnika i delikatnie wymieszać próbkę Następnie, dodać 5,0 pl roztworu LPS (250 ng/ml świeżo przygotowanego roztworu: 5,0 ng/ml stężenie końcowe LPS) 1 ponownie zmieszać. Inkubować probówki w 30°C w łaźni wodnej przez 16-18 godzin mieszając co pewien czas. Alternatywnie, probówki można umieścić na rotorze ustawionym na 4 obroty na minutę na ten sam okres inkubacji Test ten powinien być nastawiany w podwójnym albo potrójnym powtórzeniu z następującymi kontrolami: kontrola negatywna - bez LPS; kontrola pozytywna - bez związku badanego; kontrola nośnika - najwyzsze stężenie DMSO albo rozpuszczalnika związku zastosowanego w doświadczeniu
Do probówek kontrolnych dodaje się soli fizjologicznej w celu ujednolicenia objętości próbek kontrolnych i badanych.
Po okresie inkubacji, próbki krwi pełnej wiruje się przez 10 minut przy 2000 obrotów na minutę w wirówce, osocze przenosi się do świeżej probówki wirowniczej i wiruje przy 1000 g w celu osadzenie resztek płytek. Próbki osocza można przechowywać w zamrożeniu w -70°C do momentu wykonania testu ELISA na poziom cytokin.
ELISA
W celu zmierzenia poziomów IL-1p i TNF-α zastosowano zestaw Quantikine R & D Systems (614 McKinley Place N. E. Minneapolis, MN 55413). Testy wykonuje się według zaleceń producenta. Obserwowano poziom IL-1P równy około 1-5 ng/ml w kontroli pozytywnej u wielu osobników. Rozcieńczenie osocza 1:200 było wystarczające w niniejszych doświadczeniach do umieszczenia wyników ELISA w zakres prostoliniowy krzywej standardo114
190 736 wej. Możliwe, że będzie konieczne optymalizowanie rozcieńczeń w przypadku obserwowania różnic w teście na krwi pełnej. Nerad i in , J. Leucocyte Biol., 52. 687-692 (1992).
Przykład 5. Zahamowanie homologów ICE
1. Izolowanie homologów ICE
Ekspresja TX w komórkach owadów przy użyciu układu ekspresyjnego bakulowirusa. Tx cDNA (Faucheu i in., wyżej, 1995) klonowano do zmodyfikowanego wektora transferowego pVL1393, kotransfekowano powstały plazmid (pVL1.93/TX) do komórek owadzich z wirusowym DNA i identyfikowano rekombinowanego bakulowirusa. Po wytworzeniu roztworu podstawowego o wysokim mianie, pożywkę badano na aktywność TX z użyciem widzialnego testu ICE. Zwykle, zakażenie komórek Spodoptera frugiperda (Sf9) w MOI równej 5 rekombinowanym wirusem powoduje maksimum ekspresji po 48 godzinach w ilości 4,7 pg/ml. ICE zastosowano jako standard w tym teście
Wyrażano również znakowaną T7 na końcu aminowym wersję ICE albo TX. Zaprojektowane oryginalnie w celu ułatwienia identyfikacji i izolowania białek rekombinowanych, różne konstrukty umożliwiły również badanie różnych poziomów ekspresji i względnego poziomu apoptozy wywołanej przez różne homologi. Apoptoza w zakazonych komórkach Sf9 (badanych z użyciem testu wykluczenia z błękitem trypanu) była podwyższona w liniach komórek zakażonych samym wirusowym DNA.
Ekspresja i oczyszczanie CPP32 znakowanego na końcu N (His)6 w E. coli cDNA kodujący CPP32 (Fernandez-Alnemri i in., wyżej, 1994) polipeptyd rozpoczynający się przy Ser (29) amplifikowano przez PCR ze starterami dodającymi miejsce XhoI do obu końców (5' i 3') cDNA i powstały fragment Xhol poddano ligacji z wektorem ekspresyjnym pET-15b ciętym Xhol tworząc fuzję w ramce ze znacznikiem (his)6 na końcu aminowym białka fuzyjnego. Przewidywana sekwencja białka rekombinowanego rozpoczyna się sekwencją aminokwasową MGSSHHHHHHSSGLVPRGSHMLE, gdzie LYPRGS oznacza miejsce cięcia trombiny, po rozpoczęciu przez cPP32, z początkiem na Ser (29). E coli BL21 (DES) niosące plazmid hodowano do logarytmicznej fazy wzrostu w 30°C i indukowano 0,8 mM IPTG. Komórki zebrano po dwóch godzinach od dodania IPTG. Wytworzono lizaty i oczyszczono białka rozpuszczalne przez chromatografię na agarozie-Ni. Całe wyrażone białko CPP32 było w postaci przetworzonej. Analiza przez sekwencjonowanie końca N wykazała, ze przetwarzanie zachodziło w autentycznym miejscu pomiędzy Asp (175) i Ser (176) Około 50 pg białka CPP32 otrzymano z 200 pl hodowli. Jak określono miareczkowaniem miejsca aktywnego, oczyszczone białka były w pełni aktywne Preparaty proteazy były również niezwykle czynne in vitro pod względem cięcia PARP, jak również syntetycznego substratu DEVD-AMC (Nicholson i in , wyżej, 1995).
Zahamowanie homologów ICE
Test enzymatyczny ICE wykonano według metody Wilson i in, (wyżej, 1994) stosując substrat YVAD-AMC (Thomberry i in., wyżej, 1992). Testy aktywności TX wykonano stosując substrat ICE w warunkach identycznych jak ICE. Testy CPP32 wykonano stosując substrat DEVD-AMC (Nicholson i in., wyżej 1995). Ogólnie, występuje niska wybiórczość pomiędzy ICE i TX względem szerokiego zakresu szkieletów. Żaden z syntetycznych badanych związków ICE nie był skutecznym inhibitorem CPP32 Testy na związki odwracalne w najwyższych stężeniach (1 pM) nie wykazały hamowania
Przykład 6. Zahamowanie apoptozy
Apoptoza komórek U937 wywołana Fas Związki badano na ich zdolność do blokowania apoptozy wywołanej przeciwciałami przeciwko Fas. W początkowym doświadczeniu z użyciem RT-PCR, wykrywano mRNA kodujący ICE, TX, ICH-1, CPP32 i CMH-1 w niepobudzonych komórkach U937 Zastosowano tę linię komórkową w badaniach apoptozy Komórki U937 wysiano w gęstości 1 x 105 komórek/ml i hodowano do około 5 x 10° komórek/ml Do doświadczeń nad apoptozą, do płytki 24-studzienkowej wysiano po 2 x 106 komórek w 1 ml RPMI-1640-10% FBS i pobudzano 100 ng/ml przeciwciała przeciwko antygenowi Fas (Medical and Biological Laboratories, Ltd). Po 24-godzinnej inkubacji w 37°C, procent komórek w stanie apoptozy badano analizą FACS stosując reagent ApoTag
Wszystkie związki badano początkowo w stężeniu 20 pM i wykonano miareczkowanie związkami czynnymi w celu określenia IC 50
190 736
115
Przykład 7. Ostry test skuteczności in vivojako środka przeciwzapalnego
Wytwarzanie IL- 1β wywołane LPS
Skuteczność związków według wynalazku badano na myszach CD-1 (n = 6 dla danych warunków) eksponowanych na LPS (20 mg/kg IP). Związki badane podawano w postaci preparatu w mieszaninie oliwa:DMSO:etanol (90:5:5) i podawano przez wstrzyknięcie IP w godzinę po LPS Krew pobierano w 7 godzin po podaniu LPS. Poziom IL-1 β w surowicy badano stosując test ELISA.
Związek 265 hamuje wytwarzania IL-1 β w 27% u myszy eksponowanych na LPS po podaniu PO i w 30% po podaniu IP (50 mg/kg).
Tabela I
Przebieg czasowy zahamowania wytwarzania IL-1 β u myszy eksponowanych na LPS
Czas podania związków (względem ekspozycji na LPS, PO, 50 mg/kg)
Związek -2 h -1 h 0 h + 1 h
304a 30 33 68 37
2100e 49 54 94 66
2100a 8 71 67 58
213e 0 48 41 89
302 0 27 21 26
2100c 0 0 85 40
2100d 42 35 52 26
2100b 0 0 47 26
2001 ~63 ~62 ~57 ~54
64’ 62* 58* ΪΥ
’ wartości uzyskane w kole|nych testach
Przykład 8. Pomiar poziomu proleków 214e we krwi
Myszom podawano p.o. dawkę związku 302 i 304a (50 mg/kg) w 0,5% karboksymetylocelulozie. Próbki krwi pobrano w 1 i 7 godzin później. Surowicę ekstrahowano przez precypitację z równą objętością acetonitrylu zawierającego 2 % kwas mrówkowy a następnie odwirowano Supernatant analizowano chromatografią ciekłofazową/spektrometrią masową (ESI-MS) z poziomem wykrywania 0,03-3 pg/ml Związki 302 i 304a wykazywały wykrywalne poziomy we krwi po podaniu doustnym, sam 214e nie wykazuje poziomu we krwi powyżej 0,1 pg/ml po podaniu doustnym. Związki 302 i 304a są prolekami 214e i są metabolizowane do 214e in vivo (patrz fig. 11).
Przykład 9
Uzyskano następujące dane (patrz tabela 2) dla związków według wynalazku przy użyciu sposobów opisanych w przykładach 1-8 Budowę związków według przykładu 9 pokazano w przykładach 10-13.
Tabela 2
Związek K, (nM) w UV Średnia wartość lC50 dla PBMC IC50 (nM) dla ludzkiej krwi pełnej Klirens u myszy, ml/min/kg Klirens u szczura, iv, ml/min/kg
1 2 3 4 5 6
47b 27 1800 <600 338
47A 19 2600 5100 79 32
116
190 736 ciąg dalszy tabeli
1 2 3 4 5 6
139 350 200
213e 130 900 600 400*
214c 1200 5000
235 510 4750 36
238e 500 4250
246 12 950 10000 31
257 13 11000 6600*
265 47 4300 1400 23 20
302 4500 > 20000 > 20000
304a 200 1,400 2400 14000*
404 2,9 1650 1800* 1100 64 24
405 2,9 1700 2100
406 4 1650 2300
407 0,4 540 1700
408 0,5 1100 1000 41 23
409 3,7 2500
410 17 2000 2800 32 20
411 0,9 540 1900
412 1,3 580 660* 700 1000* 25
413 750 6200
415 2,5 990 1000* 450 3500* 26 18
416 12 120 3400 47
417 8 2000 6000 33 22
418 2,2 1050 2200* 7800 1800* 13 5,9
419 280 > 8000
420 1200 8000 > 8000*
421 200 4300 4600*
422 50 2200 1200
423 10 2100 1800* 1500 45
424 45 2500 4000
425 0,8 650 700* 650
426 90 4500 2500*
427 180 4500 36
428 280
190 736
117 ciąg dalszy tabeli
1 2 3 4 5 6
429 7000
430 60 > 8000
431 8 > 8000 8000
432 1,6 560 2000
433 2,9 1000 1100' 1100
434 4,9 1600 1200* 1800 1300* 20
435 8 4400
436 7,5 2700
437 12 1800 5000
438 28 1000 700 2900* 22
439 3,7 2800 3200 3400*
440 2,3 5000 2000
441 1 2500 4500
442 3,2 900 2000 54
443 3,6 2800 1500
444 15 3500 3500
445 135 4000
446 62 3000
447 5,8 2500 1500
448 130 4000
449 12 1500 320 13000*
450 5 800 2200 1700* 18 12
451 4 1800 2200 9000*
452 4,5 600 800* 650 1600* 27,3
453 0,65 1300 1900 1600*
454 45 2500
455 1,2 400 2800 2600* 54
456 4,5 600 1300* 600 1400* 12,7
457 6,2 2000 3500
458 20 2900
459 5 1800
460 115 400 2400
461 47
462 40
118
190 736 ciąg dalszy tabeli
1 2 3 4 5 6
463 14 2400 2800*
464 2,5 1000 > 1000 2500*
465 3 1000 800
466 0,8 1400 600
467 11 1900
468 4,5 850 2500
470 5 500 360 500* 63
471 1 750 400 17
472 140
473 1 1000 400 450*
474 85
475 5,5 690 650* 400 350* 31 21
476 7 1600 2500
477 60
478 380
479 15 900 700 2400*
480 25 2300
481 1,2 390 930* 600 500* 34
482 < 0,2 340 380 260*
483 1,7 900 700
484 2 1550 1400* 5000 15
485 2 900 900
486 2,3 480 570* 500 37
487 2,4 650 950* 500 400* 20
488 1,5 940 750
489 6 2250 1700* 15000
490 4,3 980 1000* 700 1900*
491 5 2500
493 25 1200 800 850*
494 15 1350 1500* 7000
495 43
496 16 1550 1600* 6000
497 3,5 740 350 700*
498 1,5 560 500 400*
499 3,5 1200 800* 9000
190 736
119 ciąg dalszy tabeli
1 2 3 4 5 6
605a 90 2600 > 20000
605b 45 10000 97
605c 605 4500 37
605d 95 50 00 06000 50 00* 33
2201 9 2000 3700* 3500 60
2100e 250 800 600
2100a 100 1100 850
2002 4 800 860* 70 0400* 32
20 00d > 100000 > 200000 > 200000
20 00c 7400 > 200000 >200000
2100b 8000 > 200000 > 20000
2001 0 35 0 800 3500
0027 4000 > 20000 > 20000 60
0005 40 2500 0700 23
Przykład 10.
Związek 039 8eyotety8ow6oo sposobem podobnym do stosowanego do syntezy związku 47a.
Związki 813e, 814c, 814e, 817c, 817d, 817e, 820b, 823b, 823e, 826e, 827e, 830e, 832e, 835e, 838e, 846, 857, 865, 902, 904a, 907a, 907b, 1004-1013, 1015-1020, 1022-1026, 1030-1068, 1070-1091 i 1093-1099 zsyntety8ow6oe sposobami podobnymi do stosowanych do syntezy związku 264.
Związki 47a, 47b, 213e, 214c, 246, 257, 264, 265, 302 i 304a zsyntetyzowano sposobem opisanym poniżej.
H. Kwas N-(N-6aetylo-tyze8yoyle-walmyle-plpekolilo)-3-amme-4-eksobut6oowy Etap A. N-(tert-bllteksykarbonyloplpekolile)-4-amine-5-beo8yloksy-2-okeiitetzahydrofuran
Reakcję kwasu N-tert-butoksykarbonylepipektillnowego (460 mg, 2,0 mmola) i N-alliloksykarbonylo-4-amioe-5-ben8yloksy-2-okeetetr6hySzofuranu (530 mg, 1,82 mmola) prowadzono sposobem analogicznym do opisanego przez Chapmana (Bioorg and Med Chem. Lett, 2, str, 613-618, (1992)) i otrzymano 654 mg związku tytułowego
OH NMR (500 MHz, CdCL (występuje jako zet6mezy) δ (7,35 (m, 5H), 6,88 (szeroki s, 1H), 4,9-4,45 (m, 4H), 3,95+ (szer. m, 2H), 3,06 (m, 1H), 2,9 (m, 1H), 2,7 (szer. m, 1H), 2,45 (m, 1H), 2,2 (m, 1H), 1,7-1,5 (m, 3H), 1,45 (dwa s, 9H),
120
190 736
Etap B. N-pipekolilo-4-amino-5-benz.yloksy-2-oksotctrahydi'ofuran N-(NMert-biitoksykarb(.oiylopipekolilo)-4-arnino-5-ben/.yloksy-2-oksotetrahydr(f'uran (654 mg) rozpuszczono w 15 ml 25% roztworu kwasu trifluorooctowego w dichlorometanie i mieszano w temperaturze pokojowej Mieszaninę zatężono i otrzymano gumowatą pozostałość, którą rozpuszczono w dichlorometanie i przemyto 10 % roztworem wodorowęglanu sodu. Warstwę organiczną wysuszono nad bezwodnym siarczanem sodu, przesączono i zatężono. Otrzymano 422 mg związku tytułowego w postaci beżowej substancji stałej.
’H NMR (500 MHz, CDClj) 5 7,38 (m, 5H), 7,15 (d, 1H), 5,55 (d, 1H), 4,95-4,8 (m, 1H), 4,78 (m, 1H), 4,65 (d, 1H), 4,45 (m, 1H), 3,2 (m, 0,5H), 3,05 (m, 0,5H), 2,95 (m, 0,5H), 2,85 (m, 0,5H), 2,65 (m, 1H), 2,55-2,38 (m, 1H), 1,95 (m, 1H), 1,8 (m, 1H), 1,6 (m, 2H), 1,38 (m, 2H).
Etap C. N-(N-acetylo-tyrozynylo-walinylo-pipekolilo)-4-a^mir^c^^5-^t^e^r^^yloksy-2-oksotetrahydrofuran
N-acetylo-tyrozynylo-walinę (464 mg, 1,44 mmola) 1 N-pipekolilo-4-amino-5-benzyloksy-2-oksotetrahydrofhran (412 mg, 1,3 mmola) rozpuszczono w 5 ml dimetyloformamidu 1 5 ml dichlorometanu i oziębiono do temperatury 0°C Do oziębionego roztworu dodano 1-hydroksybenzotria/olu (HOBT; 210 mg, 1,56 mmola), a następnie chlorowodorku l-(3-dimetyloaminopropylo)-3-etylokarbodiimidu (EDC, 326 mg, 1,7 mmola). Mieszaninę mieszano przez 18 godzin, po czym rozcieńczono octanem etylu i przemyto wodą, 10 % roztworem wodorosiarczanu sodu, 10% roztworem wodorowęglanu sodu i wodą. Warstwę organiczną zatężono i otrzymano surową substancję stałą, którą oczyszczono metodą szybkiej chromatografii (SiO2), eluując mieszaniną 94'6:1 dichorometan:izopropanol:pirydyna i otrzymano 370 mg związku tytułowego.
'H NMR (500 MHz, CD 3OD (występuje w postaci diastereomerów oraz rotamerów)) δ 7,35 (m, 5H), 7,05 (m, 2H), 6,68 (m, 2H), 5,65 i 5,25 (m, 1H), 4,9-3,95 (m, 8H), 3,4-2,6 (m, 4H), 2,5-2,1 (m, 1H), 1,98 (s, 1H), 1,9 (s, 1H), 1,85 (s, 1H), 1,8-1,6 (m, 2H), 1,55-1,3 (m, 4H), 0,95-0,85 (m, 6 H).
Etap D Kwas N-(N-acetylo-tyro/ynylo-walinylo-pipekolilo)-3-ammo-4-oksobutanowy
Do roztworu 100 mg N-(N-acetylo-tyro/ynylo-walinylo-pipekohlo)-4-amino-5-bcnzyloksy-2-oksotetra-hydrofuranu w 10 ml metanolu dodano 60 mg Pd(OH )2 na węglu 1 mieszaninę umies/c/ono pod balonem w atmosferze wodoru. Mieszaninę przesączono przez Celite i zatężono, otrzymując białą substancję stałą, Substancję tę rozpuszczono w 2 ml metanolu 1 roztarto z eterem dietylowym. Otrzymano 26 mg związku tytułowego.
NMR (500 MHz, CD 3OD (występuje w postaci diastereomerów oraz rotamerów)) δ 7,1 (m, 2H), 6,7 (m, 2H), 5,2 (szer. m, 1H), 4,8-3,6 (m, 6H), 3,2-2,5 (m, 4H), 2,5-2,1 (m,
1H), 1,95 (trzy s, 3H), 1,9-1,3 (m, 6 H), 1, 1 -0,7 (m, 6H).
K. Kwas N-(N-acetylo-tyro/ynylo-wahnylo)-(4-bcnzyloksy)prolinylo)-3-amino-4-oksobutanowy
Etap A. Semikarbazon estru tert-butylowego kwasu N-(N-alliloksykarbonylo-4-benzyloksyprolinylo)-3-amino-4-oksobutanowego
Związek tytułowy wytworzono przez reakcję N-allikoksy-karbonylo^-benzyloksyproliny i semikarbazonu estru tert-butylowego kwasu 3-amino-4-oksobutanowego ((T L. Graybill i in., Abstracts of Papers, 206th National Meeting of the American Chemical Society, Abstract MEDI-235, Chicago, IL, (1993)) w podobnych warunkach sprzęgania peptydów, jak opisane powyżej (związek H; etap C).
'H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 9,05 (szer. s, 1H), 7,85 (szer. m, 1H), 7,4-7,2 (m, 5H), 7,15 (szer. s, 1H), 6,55 (szer. s, 1H), 5,9 (m, 1H), 5,1-4,9 (szer m, 2H), 4,65-4,4 (m, 4H), 4,2 (szer m, 1H), 3,75-3,5 (m, 2H), 2,75-2,55 (m, 2H), 2,5 (szer. m, 1H), 2,25 (szer m, 1H) 1,4 (s, 9H)
Etap B Semikarbazon estru tert-butylowego kwasu N^N-acetylo-tyrozynylo-walinylo-(4-ben/.yloksyprolmylo))-3-amino-4-c>ksobutanowego
Związek tytułowy wytworzono przez reakcję N-acetylo-tyrozynylo-waliny i semikarbazonu estru tert-butylowego kwasu N-(N-allllcksykarbonylc-4-benzylcksyprclinylo)-3-amlnc-4-oksobutancwcgo w warunkach reakcji opisanych dla związku H, etap A
190 736
121 *H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 7,35-7,2 (m, 6H), 7,0 (d, 2H), 6,65(d, 2H), 4,85 (m, 1H), 4,6-4,45 (m, 4H), 4,3 (szer. m, 1H), 4,15 (m, 1H), 3,7 (m, 1H), 2,95 (m, 1H), 2,75-2,6 (m, 3H), 2,35 (m, 1H), 2,1 (m, 1H), 1,9 (s, 3H), 1,4 (s, 9H), 0,95 (d, 3H), 0,90 (s, 3H)
Etap C. Kwas N-(N-acctylO)tzrozznzlO)W)llnylo-(4)benrzloksz-pralinzla))3)amlnO) -4-okno0utazowz
0emlkar0ayoz estru tert-butylowego kwasu N)(N-acctzlO)tyrozznylo-wallzylo-(4)0enzzloksyprolmylo))-3-ammO)4)akno-0utanowego (270 mg) rozpuszczono w 10 ml 25% roztworu kwasu trifluorooctowego w dichlorometanie i mieszano w temperaturze pokojowej przez 3 godziny. Mieszaninę zatężono i otrzymano stalą pozostałość. Pozostałość tę rozpuszczono w 10 ml mieszaniny metanol : kwas octowy · 37% formaldehyd (3:1:1) 1 mieszano w temperaturze pokojowej przez 1 godzinę. Mieszaninę zatężono, a wytworzoną stałą pozostałość oczyszczono metodą szybkiej chromatografii (SiO2), eluując układem dlchlarome) tan/metanol/kwas mrówkowy (100:5:0,5) i otrzymano 37 mg związku tytułowego *H NMR (500 MHz, CD3OD (występuje jako mieszanina aiantcreomerów hemiacetalu 1:1)) δ 7,4-7,25 (m, 5H), 7,0 (d, 2H), 6,65 (d, 2H), 4,65-4,05 (m, 7H), 3,75-3,4 (m, 2H), 3,05-2,3 (m, 5H), 2,2-1,95 (m, 2H), 1,90 (s, 3H), 1,0 (d, 3H), 0,95 (d, 3H).
(1O,9S)-6,10-diokso-oktahydao-9((3-eenylopropionylo-amino)-6H-piyalazyno[1,2-a])['1,2]dlayepino-1-kar0oksylan t-butylu (44a) Do roztworu (1S,9S))9-amino-6,10-alaksoaktahydro-6H-piIydazyno[1,2-a][1,2j)diazepino-1-k)r0oksylazu t-butylu (690 mg; 2,32 ramola; GB 2128984) w dioksanie (16 ml) i wodzie (4 ml) w temperaturze 0°C dodano stałego wodorowęglanu sodu (292 mg; 3,48 mmola), a następnie wkroplono chlorku 3-fezztoprO) pionylu (470 mg; 2,78 mmola). Mieszaninę mieszano w temperaturze pokojowej przez 2 godziny, po czym dodano jeszcze wodorowęglanu sodu (200 mg, 2,38 mmola) i chlorku 3-&ζζlopropionylu (100 mg; 0,6 mmola). Mieszaninę mieszano jeszcze przez 2 godziny w temperaturze pokojowej, rozcieńczono octanem etylu (50 ml), przemyto nasyconym roztworem wodorowęglanu sodu (2 x 25 ml), po czym wysuszono (MgSO4) 1 zatężono. Pozostałość oczyszczono metodą szybkiej chromatografii (0-50% octan etylu/chloroform) i na koniec krystalizowano przez roztarcie z eterem Otrzymano 860 mg (86%) białej substancji stałej; temp. topn 137-138°C;
[α]230 -95,1° (c, 0,549, CH2Cl2);
IR (KBr) 3327, 1736, 1677, 1664, 1536, 1422;
’H NMR (CDCl3) δ 7,24 (5H, m), 6,50 (1H, d, J - 7,5), 5,24 (1H, m), 4,90 (1H, m), 4,60 (1H, m), 3,44 (1H, m), 2,93 (2H, m), 2,84 (1H, m), 2,64 (1H, m), 2,54 (2H, m), 2,26 (2H, m), 1,70 (4H, m), 1,70 (9H, s);
MS (FAB, m/z): 430 (M+ + 1), 374, 242, 105, 91.
(1 O,9O)-aktahzaro-10-okno-9-(3-fenytoproplazzlammo)-6H-pirzaαzyno-[ 1,2-a ] [ 1,2])dlazepmo-1)kar0okszlan t-butylu (44b) wytworzono z (10,90))9)amizo-oktahzdro-10)Okso)6H-pirydazyno[1,2-a][1,2]diazeplno-1)karbaknylazu t-butylu (Attwood i in., J. Chem. Soc Perkin 1, str. 10,1-19 (1986)) jak związek 44a. Otrzymano 810 mg (81%) bezbarwnego oleju
[α]230 - 33,5 δ (c 0,545, CH2Cl2),
IR (film) 3334, 2935, 1737, 1728, 1659, 1642, 'H NMR (CDCl 3) δ 7,24 (5H, m), 6,75 (1H, d, J = 6,7), 5,27 (1H, m), 4,92 (1H, m), 3,39 (1H, m), 3,03 (4H, m), 2,55 (3H, m), 2,33 (1H, m), 2,17 (1H, m), 1,80 (5H, m), 1,47 (9H, s), 1,39 (1H, m);
MS (FAB, m/z): 416 (M+ + 1), 360,211, 143,97.
Kwas (1S,9S)-6,10-aIiokso-oktahzdrc·-9-(3-f'enzlopropionyloamino)-6H-piry-dazyno| 1,2-a][1,2]alazcpino-1)kar0oknylowy (45a). Do roztworu (1S,9S)-6,10)diakso-oktahzdra)9-(3)fcnylo-propionyioamino))6:>H-plrzdazyzo[ 1,2-a] [ 1 ^-diazepino-1 -karboknzlanu t-butylu (44a) (800 mg; 1,863 mmola) w suchym dichlorometanie (5 ml) w temperaturze 0°C dodano kwasu trifluarooctowego (5 ml) Roztwór mieszano w temperaturze pokojowej przez 3 godziny, a następnie zatężono Do pozostałości dodano suchego eteru (10 ml), a następnie usunięto pod próżnią. Czynność tę powtarzano trzy razy i otrzymano krystaliczną substancję stałą. 0u0staZ) cję tę roztarto z eterem i przesączono i otrzymano 590 mg (85%) krystalicznej białej substancji stałej; temp. topn. 196-197,5°C,
[a]23D-129,5 (c 0,2, CH 3OH);
122
-90 73IR (KBr) 3237, -729, --88, ---0, --33, -574, -432, ^285, -205;
*H OMR (CD3—D) δ 8,28 (-H, S, J = 7,4), 7,22 (5H, m), 5,32 (-H, SS, J = 5,9, 2,9), 4,75 (-H, m), 4,5- (-H, m), 3,50 (-H, m), 3,0- (-H, m), 2,9- (2H, m), 2,55 (2H, m), 2,29 (3H, m), -,95 (2H, m), -,7- (2H, m),
A—olizo dla C19H 23O 3—5:
—bliczono: C, --,-2; H, -,2-; O, - -,25;
Znolezio—o: C, -0,80; H, -,28; O, -0,97.
MS (FAB, m/z) 374 (M+ +-), 242, 5, 9-.
Kwor <lS,9S)-zktohySro-l0-okso-9-<3-fenylopropionylo-aroino)-6H-pirydazyno[l,2-o]-[-,2]Siosepino---kornzkryloay (45b) aytazrzo—z z (-S,9S>-oytahaSro--0-oyro-9-(3-leπγlourzpioayloomi—o)-yH-ulrydazyno[l,2-a][-,2]Siazepino-l-yornzyrylo—r t-b-tyl- (44b) suzsobem opisanym dla związk- 45a i otrzymano -57 mg (9-%) krystalicznej s-brtarcji stałej temp. top—. -98-202°C;
[a]23D -8-,2 8 (c 0,5, CH3—H),
IR (KBr) 3294, 2939, -729, --45, --20, -574, -453, -2-4;
'H OMR (CD3—D) δ 7,92 (-H, S, J = 7,9), 7,20 (5H, m), 5,29 -1H , m), 4,90 -1H , m), 3,47 (-H, m), 3,08 (2H, m), 2,90 (2H, m), 2,55 (3H, m), 2,3- (IU, m), 1 -8- (5H , m,, -,43 (2H, m),
MS (FAB, m/z) 3-0 (M+ +-), 2--,-43, 9-.
[3S,2R,S,(-S,9S>]-^I-<2-Benzylokry-5-oyrztetrohySrofrroa-3-yl)-y,-0-Sizkro-oktohydro-9-(3-fe—ylpropionyloami—o)-6 H-ulrySozyno[ - ,2-a] [ - ,2]diozepino- - -korbokromlS (46a)
Do roztazry kwaru <lS,9S)--,-0-Sioyro-oytohaSrz-9-(3-feaylourzploaaloomιao>--a-UirySoza—o[-,2-o] [l,2]Sιozepino-l-yornokryloweoo (45a) (--2 mg; -773 mmolo) w rrchym Siyhlzrometo—le (9 ml) i s-chym dimetyloformamidzie (3 ml) w temperaturze uoyojzaej dodo—o chlorku nis(trifenytofosfιno)polloSr (30 mg) i (3S,2R,S>-3-allllzkrykarno—ylzomlaz-2-be—zatokry-5-oksztetrohySroryrony (Chapman, Bloorg. MeS. Chem. Lett., 2, str --3--8 (-992)) (5-8 mg; -,95 mmolo) o —ortepnle wkroulo—z woSorku trl-—-brtaloyy—y (-,-9 g, 4,9 mmolo). Do mieszooiny doSono 1 -hySrokrabe-zotrlozol- (479 mg; 3,54- mmolo) i miessonioy oziybio—z do temperatury 0°C, —ostyuaie SzSoaz chloroazSzryy --(3-Slmetytoooiiazuropyto)-3-etylokarbzSilmiSy (408 mg; 2,-28 mmolo). Całość mierzo—o w temperat-rze Uzkzjowej przes 3,25 goSzi—y, a nastyu—ie rozcieńczo-o octanem etylu (50 ml), przemyto Swo rozy rozcleńczo-ym kwarem sol—ym (20 ml), dwo rozy οοιγ^ογο roztworem azSzroaeoloar soSr (20 ml), raz rola—ką, o nasteu—ie ays-szoaz (MgS—ą) i zotyżoro Wytazrzory olej zczyszyzo—o metodą szybkiej yhromotzorafil (0-100% octor etyly/chloroform) i otrzymano 8-0 mg (8-%) saiazkr 46a w portac, mieszo—l—y aazmeróa temp topa 92-94°C,
IR (KBr) 33--, -79-, -659, -65-, -53-, 'H OMR^CDClj) δ 7,49, -,5- (-H, 2S, J = -,7, 7,8), 7,29 (-0H, m), -,37, -,-8 (-H, 2d, J = 7,7, 7,-), 5, 5-, 5, 34 ( -H, S, r, J = 5,2), 5,08-4,47 (6H), 3,-8-2,80 (5H), 2,-2-2,28 (5H), 2,04--,53 (5H);
MS (FAB, m/z), 5-3 (M+ +-), 328, -49, 9-.
[3S,2r,S, (1S,9S)]-N-(2-nenzγloksy-5-okrotetrahySrol'-raa-3-γl)-oytahySιυ-10-okso-9-(3-fenylzuroplo—ylzomioo)-yH-pirySazy—o[ - ,2-o] [ - ,2]Slazeuino- - -kornokramiS (46b) aytwzrzo—z ze zaiązky 45b suzrznem oulra—ym dlo zwlązk- 46a. —trsamoao 790 mg (9-%) szklistej srbrta—cji temp. top—. 58--0°C;
IR (KBr) 33--, 2940, -793, --78, -64-, -523, -453, --20;
*H OMR (CDCl3) δ 7,28 (-0H, m), -,52, -,42 (-H, 2d, J = 7,2, 7,-), 5,53, 5,44 (-H, S, r, J = 5,2), 5,35 (-H, m), 4,--4 9, 4,34 (4H, m), 3,--2,8 (6H, m), 2,--2- (7H), - ,95--,05 (5H);
MS (FAB, m/z), 549 (M+ +-), 400, 3-0, 279, 9-.
Kwos [3S(lS,9S>]-3-(-,-0-Sloksz-oktahaSro-9-(3-fe—atoprouloaylamino)-6H-pilySosy-o[ - ,2-a][ - ,2]dlazepino-- -yorboyramlSo)-4-okszbytoazwy (47a)
Mierza—lae [3S,2R,S(- S,9S)]-N-(2-be—zytoksa-5-zkrztetrahySrofyraa-3-al)--,-0-Sιzyszoktahydro-9-(3-fe—yto-uroulZ—ylomi—o)--H-uirySoza—o-[ - ,2-a] [ -,2]Siozeul—o- - -yarnzksamlS- (46a) (205 mg; 0,3-4 mmolo), -0% pollaS- ao wyglr (200 mg) 1 metorolr (20 ml) miesza-o pod azotem i pod ciś—le—iem atmzsferaczaam przez 5 ooSsl— Mlersoalre ursesaczo—o, o aostyurle zatyżoaz i otrzyma-o -54 mg (90%) szklistej s-bstarcji, temp t-un --6---8°C,
190 736
123
[α]23ο-140° (c 0,1, CH 3OH),
IR (KBr) 3323 (szer.), 1783, 1731, 1658, 1539, 1455, 1425, 'H NMR (CD3OD) δ 7,21 (5H, m), 5,17 (1H, m), 4,73 (1H, m), 4,50 (2H, m), 4,23 (1H, m), 3,38 (1H, m), 3,06 (1H, m), 2,91 (2H, m), 2,73-2,18 (6H, m) i 2,01-1,59 (5H, m).
Analiza dla C23H27N4O7 + H2O:
Obliczono: C, 56,32; H, 6,16; N, 11,42.
Znaleziono: C, 56,29; H, 6,11; N, 11,25.
MS (FAB, m/z) 473 (M+ +1), 176, 149, 105, 91.
Kwas [3S(1S,9S)]-3-(oktahydro-10-okso-9-(3-fenylo-propionyloamino)-6H-pirydazyno-[1,2-a][1,2]diazepino-1-karboksamido)-4-oksobutanowy (47b) wytworzono ze związku 46b sposobem opisanym dla związku 47a. Pozostałość oczyszczono metodą szybkiej chromatografii (0-10% metanol/chloroform) i otrzymano 65 mg (52%) szklistej substancji; temp topn 87-90°C;
[α]230-167,0° (c 0,1, metanol);
IR (KBr) 3329, 2936, 1786, 1727, 1637;
‘H NMR (CD3OD) 7 7,23 (5H, m), 5,29 (1H, m), 4,83 (1H, m), 4,59 (1H, d, J = 3,6), 4,29 (1H, m), 3,3-3,0 (3H, m), 2,91 (2H, m), 2,70-2,34 (5H, m), 2,19 (2H, m), 1,75 (4H, m), 1,36 (2H, m).
Analiza dla C 23¾^ 4O6 + 0,5 H2O'
Obliczono: C, 59,09; H, 6,68; N, 11,98.
Znaleziono: C, 58,97; H, 6,68; N, 11,73.
MS (FAB, m/z) 459 (M+ + 1), 310, 149, 105, 91
211 212
(b) R 1 = MsSO2 (b) R'= MsSO2
(c) R1 = MeCO (c) R^ MeCO
(d) R1 =PhCH2OCO (d) R1 =PhCH2OCO
(e) R1 =2 IhCOi (ee R' = PhCO
(f) R1 =2 Fmoc (0 R1 =2 Fmoc
(1 S,9S)-6,10-diokso-9-metylosulfonyloamino-1,2,3,4,7,8,9,10-oktahydro-6H-pirydazyno[1,2-a][1,2 ]diazepino-1-karboksylan t-butylu (211 b).
Do roztworu 9-amino-6,10-diokso-1,2,3,4,7,8,9,10-oktahydro-6H-piryda/yno[ 1,2-a]-[1,2]diazepino-1-karboksylanu t-butylu (GB 2,128,984; 831 mg, 2,79 mmola) i diizopropyloetyloaminy (1,22 ml, 6,99 mmola, 2,5 równ.) w CH2O2 (10 ml) pod suchym azotem dodano chlorku metanosulfonylu (237 ml, 3,07 mmola 1,1 równ.). Mieszaninę mieszano przez 1 godzinę, rozcieńczono EtOAc (75 ml) 1 przemyto nasyconym roztworem NaHCO3 (50 ml) i nasyconym wodnym roztworem chlorku sodu (30 ml), wysuszono (MgSO4) i zatężono. Po szybkiej chromatografii (10-35% EtOAc w CH2O2) otrzymano związek 211b (806 mg, 77%) w postaci bezbarwnej substancji stałej: temp. topn. 68-70°C,
[a]23D-109 (c 1,09, CH 2Cl2);
IR (KBr) 3270, 2980, 2939, 1735, 1677, 1458, 1447, 1418, 1396, 1370, 1328, 1272, 1252, 1232, 1222, 1156, 1131,991;
124
190 736 ‘H NMR (CDCh) δ 6,15 (1H, d), 5,31 (1H, m), 4,65-4,11 (2H, m), 3,47 (1H, m) 2,99 (3H, s), 2,89 (1H, m), 2,72-2,51 (2H, m), 2,34 (1H, m), 2,26 (1H, m), 2,05-1,62 (4H, m), 1,47 (9H, s);
Analiza dla C15H 23N 3OóS:
Obliczono: C, 47,97; H, 6,71; N, 1149^,8,54,
Znaleziono: C, 448,8; H, 6,ί>8; N, 10,88; Ss 8,28
MS (+ FAB) 376 (M+ + 1, 88%), 320 (100).
(15.95) -9-acetyloamiκo-6,i0-diok.so-i,8,3,4,7,8,9,i0-oktahydro-6H-pirydazyno[1,2-a]-[ 1,2 ]-diazepmo -1 -karboksylan t-butylu (211 c).
Do mieszaniny 9-amino-6,10-diokso-1,2,3,4,7,8,9,10-oktahydro-6H-plrydazyκo[ 1,2-a]-[i,2]-diazepino-1-kαęboks/lακu t-butylu (GB 2 128 984; 813,7 mg, 2,74 mmol), diizopropyloetyloaminy (884 mg, 6,84 mmola) 1 CH2O2 (20 ml) dodano bezwodnika octowego (307 mg, 3,01 mmola). Mieszaninę pozostawiono na 1 godzinę, po czym rozcieńczono EtOAc, przemyto roztworem NaHCO 3, a następnie solanką, wysuszono (MgSO4) i zatężono, uzyskując bezbarwny olej. Produkt ten oczyszczono metodą szybkiej chromatografii (0,5-8% MeOI l/CILCb) i otrzymano związek 211c (804 mg, 71%) w postaci bezbarwnego proszku: temp. topn. 162-3°C;
[a]23D-109 (c 1,03, CH2O2);
IR(KBr) 3358, 2974, 1733, 1693, 1668, 1528, 1462, 1431, 1406, 1371, 1278, 1271, 12501 1233 1 1217 1 1154i1124;
1 H NMR (CDCl3) δ 6,32 (1H, d), 5,29-5,25 (1H, m), 4,98-4,85 (1H, m), 4,68-4,58 (1H, m), 3,55-3,39 (1H, m), 2,91-2,66 (2H, m), 2,39-2,18 (2H, m), 2,03 (3H, s), 1,88-1,64 (4H, m), 1,47 (9H, s);
Analiza dla C1H25N3O5·
Obliczono: C, 56,62, H, 7,43; N, 12,38;
Znaleziono· C, 56,62; H, 7,43; N, 12,36.
MS (+ FAB) 340 (M+ + 1,40%), 284 (100) (1 S,9S)-9-(benzyloksykarbonyloamino)-6,10-diokso-1,12,3,4,7,8,9,10-oktahydro-6H-pirydazyno[1,2-a] [1,2 ]-diazepino-1-karboksylaK t-butylu (211d).
Do oziębionej lodem mieszaniny 9-amino-6,10-dlokso-i,2,3,4,7,8,9,i0-oktahydro-6H-pirydazyno [1,2-a][1,2]diazepino-1-karboksylanu t-butylu (GB 2,128,984; 1,55 g, 5,21 mmola), NaHCO3 (0,66 g, 7,82 mmola), dioksanu (32 ml) i wody (8 ml) podczas mieszania wkroplono chloromrówczanu benzylu (1,07 g). Mieszaninę titr/.ymywaooo w temperatur/e 5°C przez 15 minut, po czym w temperaturze pokojowej przez 2 godziny. Miezanninę rozeieńczoko EtOAc (50 ml), przemyto dwukrotnie nasyconym roztworem NaHCO 3, wysuszono (MgSO4) i zatężono Oleistą pozostałość oczyszczono metodą szybkiej chromatografii i otrzymano związek 211d (1,98 g, 88%) w postaci bezbarwnego oleju;
[α]230 -56,4 (c 1,0, CH2Cl2>;
IR (cienka błona) 3325, 2979, 2946, 1728, 1677, 1528, 1456, 1422, 1370, 1340, 1272, 1245, 1156, 1122, 1056, 916, 734, 699;
'H NMR (CDCl3) δ 7,29 (5H, m), 5,81-5,72 (1H, m), 5,26-5,20 (1H, m), 5,05 (2H, s), 4,69-4,51 (2H, m), 3,48-3,36 (1H, m), 2,81-2,51 (2H, m), 2,34-2,19 (2H, m), 1,90-1,54 (4H, m), 1,41 (9H, s);
Analiza dla C22H29N3O6 · H2O:
Obliczono: C, 58,79; H, 6,92; N, 9,35,
Znaleziono: C, 59,10; H, 6,57; N, 9,25;
MS (ES +) 454 (M+ + Na, 87%), 432 (M+ + 1, 100).
(15.95) -9-beκzoiloamino-6,i0-diokso-i,2,3,4,7,8,9,i0-oktah/dro-6H-plęydaryno[1,2-a]-[1,2 ]-diarppino-i-karboke/laκ t-but/lu (211e)
Do oziębionej lodem mieszanin/ (1S,9S)-9-amino-640-diokso-1,2,3,4,7,8,9,10-oktah/drotol H-piry/la/yno-l 1,2-aJ| 1,2|dlαreplno-1-kαrborkey,lακu t-butylu (GB 2 128 984, 3,1 g, 10,43 mmola), suchego CH2CL (20 ml) i diiropęop/lopt/loamm/ (4,54 ml, 26,06 mmola) wkroplono roztwór chlorku benzoilu (1,61 g, 11,47 mmola) w CH2CL (15 ml). Mieszaninę utrzymywano w stanie zimnym przez 1 godzinę, po cz/m pozostawiono w temperaturze pokojowej na 0,5 godziny. Mieszaninę rozcieńczono CH 2O2, przemyto dwukrotnie solanką, wysuszono (MgSO4) i zatężono. Pozostałość oczyszczono metodą szybkiej chromatografu (0-5%
190 736
125 metanol w CH2Ch) i otrzymano związek 211 e (4,0 g, 96%) w postaci bezbarwnej szklistej substancji; temp. topn. 74-76°C;
[α ]d 30 -75,0 (c 0, 12, CH 2Ch);
IR (KBr) 3350, 2979, 2938, 1736, 1677, 1662, 1536, 1422, 1276, 1250, 1155, *H NMR (CDCl3) δ 8,72 (2H, m), 7,53-7,40 (3H, m), 7,07 (1H, d, J = 7,2), 5,30 (1H, dd, J = 3,0, 5,8), 5,12 (1H, m), 4,66 (1H, m), 3,51 (1H, m), 2,90 (2H, m), 2,38 (1H, dd, J = 13,2, 6,8), 2,25 (1H, m), 1,9 (2H, m), 1,70 (1H, m),
Analiza dla C2iH27N3O5 · 0,5H2O:
Obliczono: C , 61,45; H, 6,88; N , 10,24,
Znaleziono: C, , 61,69 ; H , <5,71; N , IO1I8.
(1S,9S)-6,10^^iolc.sc^^9^-^(nLior^^n-^97_ yimetyloksykarbonyloammo)-1,2,3,4,7,8,9,10-oktahydro-6H-pirydazyno[1,2-a][1,2]-diazepino-1-karboksylan t-butylu (211f) wytworzono w sposób podobny jak związek 211 e, ale zamiast chlorku benzoilu stosowano chloromrówczan 9-fluorenylometylu. Otrzymano związek 211f w postaci białej szklistej substancji stałej (2,14 g,
89%): temp. topn. 190-192°C;
[α]ο -81,5 (c 0,1, CH2Cl2);
IR (ΚΒγ) 3335, 22^^3^, m31i 1168, 1150, m21i 1126, 1116, 742;
'H NMR (CDC13) δ 7,60 (2H, m), Ί,5Ί (2H, m), 7.50-7.26 (4H, m), 5,60 (IH, d, J = 7,8), 5,28 (1H, m), 2,67 (2H, m), 4,38 (2H, m), 4,23 (1H, m), 3,59-3,21 (1H, m), 2,92-2,65 (2H, m), 2,41-2,21 (2H, m), 1^5-1,58 (4H, m), 1,47 (9H, s);
MS (ES, m/z) 520 (M+ + 1, 97%), 179 (100%),
Kwas (iS,9S)-6,10-diokso-9-metylosulfonyloamino-1,2,3,4,7,8,9,10-oktahydro-6H-pirydazyno-[1,2-a][ 1,2]-diazepino-1 -karboksylowy (212b) zsyntetyzowano w taki sam sposób jak związek 212e (635 mg, 85%) w postaci bezbarwnego proszku: temp. topn. 209-12°C;
[α ]d24 -132 (c 0,12, MeOH);
IR (KBr) 3308, 2940, ΠΠ, 1707, 1699, 1619, 1469, 1456, 1442, 1417, 1391, i328, 1339, 1330, 1310, 1271, 1247, 1222, 1175, 1152, 1133,993,976;
'H NMR (CD3OD) δ 5,35 (IH, m), 4.58-4,48 (IH, m), 4,46-4,36 (IH, m), 3,60-3,42 (1H, m), 3,01-2,87 (1H, m), 2,95 (3H, s), 2,55-2,39 (1H, m), 2,32-2,20 (2H, m), 2,,9-1189 (2H, m), (2H, m);
Analiza dla C11H17N3O6S
Obliczono: C, 41,37; H, 5,37; N, 11,16; S, 11),04,
Znaleziono: C,41,50-H,5,32lN, 12,73;S, 9,77
MS (ES-).
Dokładny ciężar obliczono dla C11H17N3O6S (MH+): 320,0916); znaleziono- 320,0923.
Kwas (1 S,9S)-93acetyloamino-6,10-diokso-1,2,3,4,7,8,9, i 03oktahydIΌ-6H3plrydazyno3 -[ 1 ^-ajH^-diazepino-I-karboksylowy (212c) wytworzono ze związku 211 e takim samym sposobem jak związek 212e i otrzymano białą szklistą substancję stałą (595 mg, 77%)· temp topn. > 250°C;
[α]024 -153 (c 0,10, MeOH);
IR (KBr) 3280, 2942, 1722, 1693, 1635, i000, iói,, i528, 1470, i423, 1281, i229, 1202, 1187, 1171 ;
'H NMR (CD3OD) δ 5,3535,31 (1H, m), ^Mji (1H, m), 2,01-4,20 (1H, m), 3,593 33,22 (2H, m), 3,11-2,92 (1H, m), 2,58-2,39 (1H, m), 2,30-2,19 (2H, m), 2,11-1,83 (3H, m), 1,99 (3H, s), 1,78-1,50 (2H, m);
Analiza dla C12H17N3O5:
Obliczono: C, 5^,^^; H, 6,05; Ν, 14,83;
Znaleziono: C, 550,,^^2, H, 6,02; Ν, 1IAS.
MS (ES-) 282 (M-1, 100%).
Dokładny ciężar obliczono dla C|2Hi7N3O5 (MH+ ) 284,1246, znaleziono: 284,i208
Kwas 1S S,SS)-3-benhylkkhokdrOnyyloamlno-6,0 0-diokooi 1 89,, 0 -ooktahydo--6H3pirydazyno-[1,2-a][1,2]3diazeplno-l3ka)boksylowy (212d) wytworzono ze związku 211d takim samym sposobem jak związek 212 e i otrzymano bezbarwne kryształy (170 mg, 97%). temp topn. 60-100°C;
[α ]d22 -103 (c 0,10, MeOH);
126
190 736
IR (KBr) 3341, 2947, 1728, 1675, 1531, 1456, 1422, 1339, 1272, 1248, 1221, 1174, 1122, 1056, 982, 699;
‘H NMR (CDCl3) δ 7,35 (5H, s), 5,65 (1H, d), 5,48-5,40 (1H, m), 5,10 (2H, s), 4,76-4,57 (2H, m), 3,49-3,30 (2H, m), 2,92-2,59 (2H, m), 2,40-2,27 (2H, m), 1,97-1,67 (4H, m),
MS (ES-) 374 (M - 1, 100%). Dokładny ciężar obliczony dla CisH22N3O6 (MH+)376,1509; znalezicnc: 376,1483. Dokładny ciężar obliczony dla Ci8H2‘N3O6Ńa (MNa+) 398,1328; znale/icnc: 398,1315.
Kwas (1S,9S)-9-benzoiloamino-6,10-diokso-1,2,3,4,7,8,9,1()-oktaihydro-6H-pirydazyno-[ 1,2-a] 1,2]-dia/epinc-1-karboksylowy (212e) Do oziębicnego lodem roztworu estru t-butylowego 211 e (4,15 g, 10,34 mmola) w suchym CH2G2 (20 ml) dodano TFA (20 ml) Mieszaninę utrzymywano zimną przez 1,5 godziny, a następnie przez 2,5 godziny w temperaturze pokojowej, po czym zatę/Ono. TFA usunięto przez kilkakrotne zatężanie z mieszaniną CH2Cl2\eter i rozpus/c/anie pozostałości w eterze. Po końcowym roztarciu pozostałości z eterem otrzymano 3,05 g (85%) związku 212e w postaci białej szklistej substancji stałej: temp. topn 118-126°C;
[a]D -70,5 (c 0,1, CH 2G2);
IR (KBr) 3361, 2943, 1737, 1659, 1537, 1426, 1220, 1174;
'H NMR (CDCl 3) δ 7,80 (2H, m), 7,54-7,33 (4H, m), 8,83 (szer s), 5,44 (1H, m), 5,26-5,13 (1H, m), 4,66 (1H, m), 3,59-3,41 (1H, m), 2,97, 2,76 (2H, 2m), 2,36 (2H, m), 1,98 (2H, m), 1,75 (2H, m),
MS (ES', m/z) 344 (M - 1, 100%).
Kwas (1 S,9S)-6,10-diokso-9-(fluorcn-9-ylcmetylcksykarbcnylcamino)-1,2,3,4,7,8,-9,10-oktahydro-6H-pirydazync-[ 1,2-a] [ 1,2]-dia/cplno-1 -karboksylowy (212f) wytworzono ze związku 211 f sposobem opisanym dla związku 212e z wydajnością 96%: temp. topn. 120-126°C;
[α]d25 -72,5 (c 0,1, CH2G2);
IR (KBr) 3406, 2950, 1725, 1670, 1526, 1449, 1421, 1272, 1248, 1223, 1175,761,741, 'H NMR (CDCl3) δ 7,76 (2H, m), 7,62-7,26 (4H, m), 6,07, 5,76 (2H, szer s, d, d, J = 2,9), 5,46-5,36 (1H, 2m), 4,79-4,54 (2H, m), 4,77 (2H, m), 4,21 (1H, m), 3,41 (1H, m), 2,89 (1H, m), 2,69 (1H, m), 2,35 (2H, m), 1,98-1,73 (4H, 2m).
MS (ES , m/z) 462 (M * -1, 50%), 240 (100%).
(e) R‘ = PhCO
214 (c ° R1 = MeCO ee ) R‘ = PhCO
[2RS,3S(1S,9S)]-N-(2-ben/yloksy-5-oksotetrahydrcfuran-3-ylo)-9-(acetyloaminc)-6,10-diokso-1,2,3,4,7,8,9,10-cktahydro-6H-pirydazyno[ 1,2-a][ 1,2]diazepino-1 -karboksamid (213c) /syntetyzcwanc ze związku 212c takim samym sposobem jak związek 213e 1 otrzymano mieszaninę diastereomerów (193 mg, 36%) w postaci bezbarwnych kryształów,
IR (KBr) 3272, 1799, 1701, 1682, 1650, 1555, 1424, 1412, 1278, 1258, 1221, 1122, 937;
'H NMR (CDCl3) δ 7,41-7,28 (5H, m), 6,52 (0,5H, d), 6,38 (0,5H, d), 6,22 (0,5H, d), 5,57 (0,5H, d), 5,36 (0,5H, s) 5,10-5,05 (1H, m), 5,00-4,45 (5,5H, m), 3,19-2,84 (3H, m), 2,72-2,56 (1H, m), 2,51-2,25 (2H, m), 2,02 (3H, s), 1,98-1,70 (3H, m), 1,66-1,56 (3H, m);
190 736
127
Analiza dla C23H28N 4O 7:
Obliczono: C, 58,47; H, 5,,^^; N, 11,86,
Znaleziono· Cc 58,377 H, 6,00; N, 1 1,07
MS (ES-) 471 (M-1, 100%).
Dokładny ciężar obliczono dla C 23H 29N 4O 7 (MH+): 473,2036; znaleziono: 473,2012.
Dokładny ciężar obliczono dla C23H28N4O7Na (MNa+): 795,1856; znaleziono- 795,1853
[ 1 S,9S(2RS,3S)]-9-benzoileamino-6,10-diekee-1,2,3,4,7,8,9,10-okt6hydre-N-(2-beozyleksy-5-oksotetra-hydzefuz6o-3-yle)-6H-piryd68yoo[ 1,2-a] [ 1,2]-diazepino-1 -kazbeksamld (213e). Do roztworu kwasu 212e (1,95 g, 5,6 mmola), 3-6lliloksykazbenyleamino-2-ben8yloksy-5-oksotetra-hydrefuz6ou (Chapman, Bioorg. & Med. Chem. Lett, 2, str. 615-618 (1992); 1,80 g, 6,16 mmola) i (PhjP^iPdCl^ (50 mg) w suchym CH2O2 (36 ml) podczas mieszania pod azotem wkroplono wodorku tributylocyny (2,2 ml, 8,18 mmola). Po 5 minutach dodano 1-hydroksybeo80tzia8olu (1,51 g, 11,2 mmola, 6,72 mmola), a po oziębieniu (lód/H2O) dodano chlorowodorku etyledimetyloaminopIΌpylokarbodlimidu (l,29 g, 6,72 mmola). Po 5 minutach łaźnię oziębiającą usunięto i mieszaninę pozostawiono w temperaturze pokojowej na 4 godziny, rozcieńczono EtOAc, przemyto 1M HCl, solanką, nasyconym wodnym roztworem NaHCO 3 i solanką, wysuszono (MgSO4) i zatężono. Po szybkiej chromatografii (żel krzemionkowy, 0-90% EtOAc w CH2CD otrzymano produkt w postaci białej substancji stałej (2,34 g, 78%);
IR(KBr) 3499, 1792, 1658, 1536, 1421, 1279, 1257, 1123,977, 699;
'H NMR (CDCl3) δ 7,81 (2H, m), 7,54-7,34 (8H, m), 7,1, 6,97, 6,89, 6,48 (2H, m, d, J = 7,7, d, J = 7,5, d, J = 7,6), 5,57, 5,28 (1H, d, J = 5,2, s), 5,23-5,07 (2H, m), 4,93-4,72, 3,22-2,70, 2,51-2,26, 2,08-1,69, 1,22 (15H, 5m)
Analiza dla C 28H 30N 4O 7 0,5H 20.
Obliczono: C, 61,87; H, 5,75; N, 10,32;
Znaleziono: C, 62,02; H, 5,65; N, 10,25.
Kwas [3S( 1 S,9S)]-3-(9-6aetyle6mine-6,10-diokso- 1,2,3,4,7,8,9,10-okt6hydzo-6H-plzydazyno-[ 1,2-a] [ 1,2]-di68epioe-1 -k6rbokeamlde)-7-ekeobutaoewy (214c) zsyntetyzowano ze związku 213c sposobem podobnym do stosowanego do wytworzenia związku 214e ze związku 213e i otrzymano bezbarwne kryształy (140 mg, 99%)· temp topn. 90-l80°C;
[α]022 -114 (c 0,10, MeOH);
IR (KBr) 7737, 3070, 2946, 1787, 1658, 1543, 1422, 1277, 1258, 'H NMR (d6-DMSO) δ 8,66 (1H, m), 8,18 (1H, d), 6,76 (1H, s), 5,08 (1H, m), 4,68 (1H, m), 4,30 (1H, m), 2,92-2,70 (2H, m), 2,27-2,06 (3H, m), 1,95-1,72 (4H, m), 1,85 (3H, s), 1,58 (2H, m);
MS (ES-) 381 (M-1, 100%);
Dokładny ciężar obliczono dla C16H23N4O 7 (MH+): 383,1567; znaleziono: 387,1548.
Kwas [7S(lS,9S)]-3-(9-benzoileamino-6,10-diekso-1,2,3,4,7,8,9,10-okt6hydzo-6H-piryd6zyno[1,2-6][1,2]-dia8epino-1-karbeke6mide)-7-okeebut6nowy (214e). Mieszaninę związku 213e (2,29 g, 4,28 mmola), 10% palladu na węglu (1,8 g) i MeOH (160 ml) mieszano pod H 2 i pod ciśnieniem atmosferycznym przez 6,3 godziny. Po przesączeniu i zatęzemu mieszaninę ponownie uwodorniano przy użyciu świeżego katalizatora (1,8 g) przez 5 godzin. Po przesączeniu 1 zatężeniu pozostałość roztarto z eterem dietylowym, przesączono i przemyto dokładnie eterem. Otrzymano związek 214e w postaci białej substancji stałej (1,67 g, 88%) temp, topn. 143-147°C;
[α ]d23 -125 (c 0,2, CH 3OH);
IR (KBr) 3391, 1657, 1651, 1538, 1421, 1280, 1258;
'H NMR (CD3OD) 5 7,90 (2H, m), 7,67-7,76 (3H, m), 5,25 (1H, m), 5,08-4,85 (1H, m),
7,68-4,53 (2H, m), 7,77-4,24 (1H, m), 3,62-7,44, 3,22-3,1 (11H, 5m).
Analiza dla C21H24NO7 H2O:
Obliczono· C, 54,54, H, 5,67, N, 162,11,
Znaleziono· C, 54,48; H, 5,(63; N, 11,92.
2,75-2,21, 2,15-1,92, 1,73-1,66
128
190 736
233β R »
R O n'z^^n^n'z^n H2 Η H
CO2-/-Bu
COyf-Bu
236« R =
237eR
co2h
235eR
238eR
[4S,( 1S,9S)] Semikarbazon 4-[9-(berzroilaminc)-6,10-diokso-1,2,3,4,7,8,9,10-oktahydro-6H-piryda/yno[1,2-a][1,2]-diazepino-1-karboksamido]-5-cksopcntamanu t-butylu (233e).
Do roztworu kwasu (lS,9S)-6,10-diokso-1,2,3,4,7,8,9,10-cktahydro-9-(bcn/cllcaminc)-óH-pirydazyn^ 1,2-aaJ[1,2]-diaazepino-1-kaarboksylowego (212e) (345 mg, 1,0 mmola), semikarbazonu (4S)-N-(allilcksykarbonylo)-4-amino-5-ckscpcntanianu t-butylu (208a) (361 mg, 1,1 mmola, 1,1 równ. i (Ph.P^PdCh (20 mg) w CH2G2 (5 ml) wkroplono n-Bu.SnH (0,621 ml,
2,3 mmola, 2,1 równ.). Wytworzony pomarańczowo-brązowy roztwór mieszano w temperaturze 25°C przez 10 minut, a następnie dodano 1 -hydroksybenzotriaz.olu (297 mg, 2,2 mmola, 2 równ.) Mieszaninę oziębiono do temperatury 0°C i dodano etylodimetyloaminopropylokarbodiimidu (253 mg, 1,3 mmola, 1,2 równ.). Mieszaninę mieszano w temperaturze 0°C przez 10 minut, a następnie w temperaturze pokojowej przez noc, po czym rozcicń(/cnc EtOAc (50 ml) i wytworzony roztwór przemyto kolejno 1M HCl (3 x 25 ml), 10% rc/twcrcm NaHCO. (3 x 25 ml) i nasyconym wodnym roztworem NaCl, wysuszono (MgSO4) i zatę/cno Po szybkiej chromatografii na żelu krzemionkowym (2-10% metanol w CH2G2) otrzymano związek 233e (280 mg, 49%) w postaci brunatnej substancji stałej;
190 736
129
[α]d20 -95 (c 0,09, MeOH),
IR (KBr) 3477, 3333, 2968, 2932, 1633, 1580, 1535, 1423, 1378, 1335, 1259, 1156, 1085,709;
'H NMR (CDCh) 7 9,32 (1H, s), 7,83-7,39 (6H, m), 7,11-7,09 (1H, m), 6,30-5,30 (2H, szer. s), 5,17-5,05 (2H, m), 4,62-4,38 (2H, m), 3,30-3,15 (1H, m), 3,13-2,65 (2H, m), 2,462,19 (3H, m), 2,15-1,54 (8H, m), 1,42 (9H, s).
Semikarbazon [4R( 1 S,9S)]-4-[9-(benzoiloammo)-6,10-diokso-1 ,:2,3,4,7,8,9,10-oktahydro-6H-pirydazyno-[1,2-a][1,2]-diazepino-1-karboksamido]-5-oksopentanianu t-butylu (236e) wytworzono sposobem analogicznym do stosowanego przy wytwarzaniu związku 233e, stosując semikarbazon (4R)-N-alliloksykarbonylo-4-amino-5-okso-pentanianu t-butylu (208b, 435 mg, 1,33 mmola). Otrzymano produkt w postaci piany (542 mg, 71%);
[α ]d20 -99 (c 0,19, CHCh);
IR (KBr) 3473, 3331, 3065, 2932, 2872, 1660, 1580, 1533, 1488, 1423, 1370, 1337, 1278, 1254, 1223, 1155, 1080, 1024, 983, 925, 877, 846, 801, 770, 705;
'H NMR (CDCh) 7 9,42 (1H, s), 7,81 (2H, d), 7,51-7,40 (4H, m), 7,06 (1H, d), 6,50-5,50 (2H, szer. s), 5,25-5,00 (2H, m), 4,60-4,45 (2H, m), 3,15-2,85 (2H, m), 2,75-2,35 (1H, m), 2,30-1,23 (11H, m), 1,42 (9H, s).
[4S,( 1 S,9S)] 4-[9-(benzoiloamino)-6,10-diokso-1 ,(2,3,4,7,8,9,10-oktahydro-6H-pirydazyno[1,2-a][1,2]-diazepino-1-karboksamido]-5-oksopentanian t-butylu (234e) Roztwór semikarbazonu 233e (390 mg, 0,68 mmola) w metanol (10 ml) oziębiono do temperatury 0°C, a następnie potraktowano 38% wodnym roztworem formaldehydu (2 ml) i 1M HCl (2 ml). Mieszaninę reakcyjną mieszano w temperaturze pokojowej przez noc. Roztwór zatężono, aby usunąć metanol. Wodny roztwór ekstrahowano EtOAc (30 ml). Roztwór organiczny przemyto kolejno 10% roztworem NaHCO3 (30 ml) i nasyconym wodnym roztworem NaCl (30 ml), wysuszono (MgSO4) i zatężono. Po oczyszczeniu metodą szybkiej chromatografii na żelu krzemionkowym (2-5% metanol w CH2O2) otrzymano związek 234e (179 mg, 51%) w postaci białej piany;
[α^20- 101° (c 0,064, MeOH);
IR (KBr) 3346, 2976, 2934, 1730, 1657, 1535, 1456, 1425, 1278, 1255, 1156, 708, 'H NMR (CDCla) 7 9,56 (1H, s), 7,88-7,38 (5H, m), 7,01 i 6,92 (2H, 2d), 5,27-5,08 (2H, m), 4,69-4,46 (1H, m), 3,50-3,27 (2H, m), 3,15-2,73 (2H, m), 2,46-1,83 (10H, m), 1,45 (9H, s).
[4R, (1 S,9S)]-4-[9-(ben/oiloamino)-6,10-diokso-1,2,3,4,7,8,9,10-oktahydro-6H-pirydazyno[1,2-a][1,2]-diazepino-1-karboksamido]-5-oksopentanian t-butylu (237e) wytworzono ze związku 236e sposobem analogicznym do opisanego dla związku 234e i otrzymano białą pianę (390 mg 85%);
[α^ -113 (c 0,242, CHCfl);
IR (KBr) 3352, 3065, 2974, 1729, 1657, 1536, 1489, 1454, 1423, 1369, 1338, 1278, 1255, 1223, 1156, 1078, 1026, 981, 846, 709.
Kwas [4S(1 S,9S)]-4-[9-(benzoiloamino)-6,10-diokso-1,2,3,4,7,8,9,10-oktahydro-6H-pirydazyno[1,2-a][1,2]-dla/epino-1-karboksamido]-5-oksopentanowy (235e) Roztwór estru t-butylowego 234e (179 mg, 0,35 mmola) w suchym CH 2O2 (3 ml) oziębiono do temperatury 0°C i potraktowano kwasem trifluorooctowym (2 ml) Wytworzony roztwór mieszano w temperaturze 0°C przez 30 minut, a następnie w temperaturze pokojowej przez 2 godziny Roztwór zatężono, a pozostałość pochłonięto w suchym CIUCH (5 ml) i mieszaninę ponownie zatężono. Czynność tę powtórzono, stosując znowu CH2CĘ (5ml). Uzyskaną pozostałość krystalizowano z eteru dietylowego. Osad zebrano i oczyszczono na kolumnie z żelem krzemionkowym (5% metanol w CH2CH) i otrzymano związek 235e w postaci białej substancji stałej (111 mg, 70%) tempi topm 142°C (rozkład);
[α]d20 -85,5 (c 0,062, MeOH);
IR (KBr) 3409, 3075, 2952, 1651, 1541, 1424, 1280, 1198, 1136, 717, ‘H NMR (D6-DMSO) 7 9,40 (1H, s), 8,62 (2H, m), 7,96-7,38 (5H, m), 5,19-5,02 (1H, m), 4,98-4,79 (1H, m), 4,48-4,19 (1H, m), 3,51-3,11 (2H, m), 3,04-2,90 (2H, m), 2,38-1,46 (10H, m).
130
190 736
Kwas [4S,( 1 S,9S)]-4-[9-(benzoiloamino)-6,10-diok so-1,2,3,4,7,8,9,10-oktahydro-6H-pirydazyn^ 1,2-a] [ 1,2]-diazepino-1 -karbcksamido]-5-ckscpentanowy (238e) wytworzono ze związku 237e sposobem analogicznym jak dla związku 235e i otrzymano beżową pianę (190 mg, 60%);
[a]D20 -78 (c 0,145, MeOH);
IR (KBr) 3400, 3070, 2955, 2925, 2855, 1653, 1576, 1541, 1490, 1445, 1427, 1342, 1280, 1258, 1205, 1189, 1137, 1075, 1023, 983, 930, 878, 843, 801, 777, 722;
*H NMR (D6-DMSO) δ 9,40 (1H, s), 8,72-8,60 (2H, m), 7,89 (2H, d), 7,56-7,44 (3H, m), 5,17 (1H, m), 4,90-4,83 (1H, m), 4,46-4,36 (1H, m), 4,20-4,15 (1H, m), 3,40-3,30 (1H, m), 2,98-2,90 (2H, m), 2,50-1,60 (10H, m).
(246)
(1 S,9S)-9-benzoiloamino-oktahydro-10-ckso-6H-pirydazyno[ 1,2-a] [ 1,2|diazepino-1 -karboksylan t-butylu (243) wytworzono z (1S,9S)-9-aminc-oktahydro-l0-cksc-6H-plrydazyno[1,2-a][1,2]diazepino-1-karboksylanu t-butylu (Attwood i in., J_ Chem Soc , Perkin 1, str. 1011-19 (1986)) sposobem opisanym dla związku 211e i otrzymano 2,03 g (86%) bezbarwnej piany;
Md -15,9 (c 0,5, CH2G2);
IR (KBr) 3400, 2976, 2937, 1740, 1644, 1537, 1448, 1425, 1367, 1154;
‘H NMR (CDCl3) δ 7,88-7,82 (2H, m), 7,60-7,38 (4H, m), 5,48 (1H, m), 4,9)8 (1H, m),
3,45 (1H, m), 3,22-2,96 (2H, m), 2,64 (1H, m), 2,43-2,27 (2H, m), 1,95 (2H , m), l^UÓ (4H, m), 100 (9H, s);
Analiza dla C21H29N3O4 · 0,25H2O:
Oblic/cnc: C, 64,35; H, 7,59; N, 10,72;
Znaleziono: C, 64,57; H, 7,43; N, 10,62
MS (ES +, m/z) 388 (100%, M++1).
Kwas (1 S,9S) -9-bervΌiloŁunir.κ^-oktahydIΌ-'(0lOkso-6Il-plrγda/.ync>| 1,2-a] [ 1 ,2]diazepino-1 -karboksylowy (244) wytworzono z (1S,9S)-9-benzoiloamino-oktahydrOl10-oksc-6H-piryda/ync[1,2-a][1,2]diazcpino-1-karboksylanu t-butylu (243) sposobem opisanym dla związku 212e i otrzymano 1,52 g (89%) białego proszku: temp. topn. 166-169°C (rozkład)
[a]o -56,4 (c 0,5, CH3OH); ’
IR (KBr) 3361, 2963, 2851, 1737, 1663, 1620, 1534, 1195, 1179, 'H NMR (D6-DMSO) α 12,93 (1H, szer s), 8,44 (1H, d, J = 8,4), 7,93 (2H, m), 7,54 (3H, m), 5,46 (1H, m), 4,87 (1H, m), 3,12 (2H, m), 2,64 (1H, m), 2,64 (1H, m), 2,27 (1H, m), 1,98-1,68 (7H, m), 1,40 (1H, m).
Analiza dla C17H21N3O4 · 0,25H2O
Obliczono: C, 60,79; H, 6,45; N, 12,51,
Znaleziono C, 61,07; H, 6,35, N, 12,55
190 736
131
MS (ES+, m/z) 332 (58%, M+ + 1), 211 (100).
[30,2RS(1S,9S)])N-(2)Benyyloknz-5-aksotctrαhzdronUraz-3-ylo)-9-0enyolloamlno-oktαhydIΌ-10-okso-6H-pirydazyno[1,2-a]-[1,2]diazepma-1-kar0oknamid (245) wytworzono z kwasu (1 S,9S)-9-benzoilιaamizo-oktahzdIΌ-10-okso-6H-piiydayyzo-[ 1,2-a] [ 1 R-diazepino-1 -karboknzlowego (244) sposobem opisanym dla związku 213e i otrzymano 601 mg (76%) bezbarw) nej piany;
ER (KBr) 3401, 2945, 1794, 1685, 1638, 1521, 1451, 1120;
'H NMR (CDCla) δ 7,87-7,77 (2H, m), 7,57-7,14 (10H, m), 5,59-5,47 (2H, m), 4,97-4,32 (4H, m), 3,27-1,35 (14H, m);
Analiza dla C2sH32N4O6 · 0,5 H2O:
Obliczono: C , 63,50 ; H , 6,28; N , 10,58;
Znaleziono: C , 63,48 ; H , 6,44 ; N , 10),52.
MS (ES +, m/z) 521 (100%, M+ + 1).
Kwas [30(10,90)]-3-(9-bezzollaamiza-oktahzdIΌ-10-okso-6H-pirydazyno[1,2)a][1,2]) diazepino-1-kar0oknamlao-4)Okso-0utazowz (246) wytworzono z [3S,2RO(lS,9S)]N)(2)bcn) zylaksy-5-oksotctrahzarofuraz-3-ylo))9)0enyalloamizo-oktahyarO)10-okso-6H-pirydazyna[1,2-a][1,2]aiazepmo-1)kar0oksamiau (245) sposobem opisanym dla związku 214e i otrzymano 396 mg (84%) białego proszku temp topn. 110-115°C;
[u]d26 -126,3 (c 0.2, CH3OH); ,
IR (KBr) 3345, 2943, 1787, 1730, 1635, 1578, 1528, 1488, 1450, 1429;
'H NMR (CD3OD) δ 7,88 (2H, m), 7,48 (3H, m), 5,55 (1H, m), 4,91 (1H, m), 4,56 (1H, m), 4,29 (1H, m), 3,41-3,05 (3H, m), 2,76-2,41 (3H, m), 2,28-2,01 (3H, m), 1,86-1,65 (4H, m), 1,36 (1H, m);
Analiza dla C 21H 26N 4O6 · 1,)25H20:
Obliczono: C, , ^ί,χ^ί;; El, 6,34; N, 12,37;
Znaleziono: C, 55,68; H, 6,14, N, 12,16.
MS (ES -, m/z) 429 (100%, M+- 1)
^SRRpSllM-metoksyfenyloA-fo-Rri-dihydro-AA-dimceoksy-^H 1-metyloetylo)pirazznylo)]butaziaz 2,6-ai)tei-t-butylu (247). Do oziębionego do temperatury -75°C roztworu RRtyA-dihydroRó-dimetoksy-^-f 1)metzloetzlo)pirazzny (5,8 ml, 6,0 g, 32,4 mmola) w THF (250 ml) w ciągu 20 minut wkroplono z-0utylalltu (1,6Ś roztwór w heksanie) (22,3 ml,
132
190 736
35,7 mmola), z szybkością taką, aby utrzymać temperaturę poniżej -72°C. Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 1 godzinę w temperaturze -75°C i w ciągu 30 minut dodano roztworu 4-metoke/fenylo-2-buteκianu 2,6-di-tPrt-but/lu (Suzuck i in., Liebigs Akk. Chem. str 51-61 (1992)) (9,9 g, 32,5 mmol) w THF (60 ml), utrzymując podczas dodawania temperaturę poniżej -72°C. Mieszaninę reakcyjną utrzymywano w temperaturze -75°C przez 1,5 godzin/, po cz/m w tej temperaturze dodano roztworu lodowatego kwasu octowego (6 ml) w THF (25 ml) i roztwór ogrzano do temperatury pokojowej. Roztwór przelano do 10% roztworu NaCl (300 ml) i ekstrahowano eterem dietylowym (2 x 250 ml). Połączone fazy organiczne przemyto solanką (2 x 200 ml), wysuszono nad Na2SO4 i odparowano do suchości pod rmκipjszoκym ciśnieniem. Resztkowy olej oczyszczono metodą szybkiej chromatografii na żelu krzemionkowym (20% heptan w CH2Ó2) i otrz/mano związek tytułowy w postaci jasnozółtego oleju (13,5 g, 85%);
[a]D 20 -64 (c 0,22, MeOH);
IR (KBr) 2962, 2873, 2840, 1757, 1697, 1593, 1460, 1433, 1366, 1306, 1269, 1236, 1187, 1157, 1126, 1063, 1038, 1011, 970, 924, 892, 867, 846, 831, 797, 773, 754, 'H NMR (CDCl3) δ 6,85 (2H, s), 4,21 (1H, t, J = 3,5), 3,98 (1H, t, J = 3,5), 3,79 (3H, s), 3,71 (3H, s), 3,69 (3H, s), 3,15 (1H, dd, J 17, 8, 7,9), 2,86-2,81 (1H, m), 2,58 (1H, dd, J = 17,8, 5,9), 2,28-2,19 (1H, m), 1,33 (18H, s), 1,02 (3H, d, J = 6,8), 0,70 (6H, dd, J = 13, 6,8).
(25.35) -i-mPtylo-3-metyloglutαmiκiαn 5-[2,6-Di-t-butylo-4-metokeyfeκylu] (248)
Roztwór [3S(2R,5S)]-4-metoksyfenylo-3-[5-(2,5-dih/dro-3,6-dimetoksy-2-( 1-met/loptylo)pirazyκylo)]butaκiaκu 2,6-di-t-butylu (247) (22,4 g, 45,8 mmola) w acetonitrylu (300 ml) i 0,25N HCl (36 6ml, 2 równ.) mieszano w temperaturze pokojowej pod azotem przez 4 dni. Acetonitryl odparowano pod zmκipjszoκym ciśnieniem i do faz/ wodnej dodano eteru dietylowego (250 ml). pH fazy wodnej doprowadzono do wartości 8-9 dodatkiem stężonego roztworu amoniaku (32%) i rozdzielono faz/. Fazę wodną ekstrahowano eterem dietylowym (2 x 250 ml). Połączone faz/ organiczne wysuszono nad Na2SO4 i odparowano do suchości pod zmniejszon/m ciśnieniem Resztkowy olej oczyszczono metodą szybkiej chromatografii na żelu krzemionkowym (2% metanol w CH2CD i otrz/mano żądany produkt w postaci jasnozółtego oleju (8,2 g, 45%);
[a ]d2° +20 (c 0,26, MeOH),
IR(KBr) 3394, 3332, 3000, 2962, 2915, 2877, 2838, 1738, 1697, 1593, 1453, 1430, 1419, 1398, 1367, 1304, 1273, 1251, 1221, 1203, 1183, 1126, 1063, 1025, 996, 932, 891,866, 847, 800, 772, 745, 'H NMR (CDCl3) δ 6,85 (2H, s), 3,79 (3H, s), 3,74 (3H, s), 3,72-3,69 (1H, m), 3,05-2,85 (1H, m), 2,67-2,50 (2H, m), 1,32 (18H, s), 0,93 (3H, d, J = 7);
Analiza dla C22H35NO5
Obliczono: C, 67,15; H, 8,96; N, 3,56;
Znaleziono: C, 66,20; H, 9,20; N, 3,70 (25.35) -3-metyloglutammiaK 5-[2,6-di-t-[utylo-4-me(oks4fynylu] (fen).
Roztwór (2S,3S)-3-metyloglutamiKiaKu 5-[2,6-di-t-butylo-4-metokeyfenylu] (248) (8,0 g,
20,3 mmola) w 5N HCl (200 ml) ogrzewano do wrzenia pod chłodnicą zwrotną przez 2 godziny. Mieszaninę reakcyjną odparowano do suchości pod zmniejszonym ciśnieKiem. Pozostałość rozpuszczano w cykloheksanie (4 x) i odparowano do suchości (4 x), otrzymując białą substancje stałą (7,9 g, 93%): temp. topn. 230°C;
[a]o +22 (c 0,27, MeOH);
IR (KBr) 3423, 2964, 1755, 1593, 1514, 1456, 1421, 1371, 1303, 1259, 1201, 1179, 1138, 1106, 1060, 966, 926, 861,790,710;
'H NMR (MeOD) δ 6,76 (2H, s), 4,02 (1H, d, J = 3,7), 3,67 (3H, s), 3,05-2,85 (1H, m), 2,80-13 2,55 (2H, m), 1,22 (18H, s), 1,09 (3H, d, J = 6,3);
nC NMR (MeOD) 8 174,5, 171,4, 158,6, 145,2, 143,1, 113,2, 58,3, 56,3, 39,8, 36,9, 32,5, 16,6
Analiza dla C 21H 34CINO 5·
Obliczono: C· 60,64· H· 8,24· N· 3,37;
Znaleziono. C· 60,80· H· 8,40· N· 3,40.
190 736
133 (23,3S)-3-metylo-2-ftalimido- 1 Npentanedian 5-[2,6-Di-t-butylo-4-metoksyfenylu] (250). Do roztworu (2S,3S)-3-metyleglutamioiaou 5-[2,6-dl-t-butyle-7-meteksyfeoylu] (249) (7,8 g, 18,6 mmola ) w toluenie (300 ml) dodano diizopropyloetyloaminy (4,1 ml, 3,04 g, 23,5 mmola, 1,25 równ.) i bezwodnika ftalowego (3,5 g, 23,6 mmola, 1,25 równ.) i wytworzoną mieszaniną ogrzewano do wrzenia pod chłodnicą zwrotną przez 3 godziny. Po oziębieniu do temperatury pokojowej mieszaninę reakcyjną odparowano do suchości i otrzymany olej oczyszczono metodą szybkiej chromatografii na żelu krzemionkowym (2% metanol w CH2O2). Otrzymano żądany produkt w postaci białej piany (8,35 g, 87%);
[α]ο -20 (c 1,04, MeOH);
IR (KBr) 3480, 2968, 2880, 1753, 1721, 1594, 1462, 1422, 1388, 1303, 1263, 1216, 1183, 1148, 1062, 1003, 933, 899, 755, 723;
‘H NMR (CDCl3) δ 7,92-7,87 (2H, m), 7,78-7,73 (2H, m), 6,84 (2H, s), 4,95 (1H, d), 3,78 (3H, s), 3,30-7,0δ (2H, m), 2,85-2,65 (1H, m), 1,30 (18H, s), 1,13 (3H, d).
(257) (256)
134
190 736
-(2,6-di-t-butylo-4-metoksy)-fenylo-5-( 1 -benzylo-ksykarbonylo-3-t-butoksykarbonylo-heksahydro-piiydazyn-2-ylo)-3-metylo-4-ftalimidopentano-1,5-dioan (251)
Roztwór aminokwasu (250) (1,2 g, 2,35 mmol) w suchym eterze dietylowym (10 ml) w temperaturze pokojowej przez 2 godziny traktowano pentachlorkiem fosforu (0,52 g, 2,5 mmola). Mieszaninę zatężono, kilka razy potraktowano toluenem i ponownie odparowano do suchości. Wytworzony chlorek kwasowy rozpuszczono w suchym THF (5 ml) i CH 2 CU (5 ml) i oziębiono do temperatury 0°C. Do roztworu dodano 1-(benzyloksykarbonylo)he-ksahydro-3-pirydazynokarboksylanu t-butylu (0,753 g, 2,35 mmola, 1 równ.) i N-etylomorfoliny (3 ml). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 30 minut w temperaturze 0°C, a następnie przez noc w temperaturze pokojowej Mieszaninę odparowano, a otrzymaną pozostałość pochłonięto w CH2O2 (30 ml). Roztwór przemyto 1M HCl, wodą, 11(% roztworem NaHCO3, wysuszono (MgSCU i odparowano. Uzyskaną pianę oczyszczono na żelu krzemionkowym (0-2% metanol w CH2CI) i otrzymano żądany związek 251 w postaci bladożółtej szklistej substancji stałej (740 mg, 39%);
[α]d20 -22 (c 0,42, MeOH);
IR (KBr) 3441,2966, 1725, 1693, 1386, 1255, 1221, 1186, 1154, 1123, 1063, 724;
'H NMR (CDCI3) 7 7,94-7,89 (4H, m), 7,56-7,28 (5H, m), 6,84 (2H, 2s), 5,29-5,20 (2H, AB), 4,91-4,81 (1H, m), 4,05-3,88 (1H, m), 3,78 (3H, s), 3,75-3,80 (1H, m), 3,28-2,95 (2H, m), 2,23-1,51 (6H, m), 1,45 (9H, s), 1,31 (9H, s), 1,28 (9H, s), 1,27 (3H, d) (1 S,8S,9S)^<6,10-diokso-8-metylo-1,2,3,4,7,8,9,10-oktahydro-9-ftalimido-6H-pirydazyno[1,2-a][1,2]diazepino-1-karboksylan t-butylu (254).
Roztwór chronionego kwasu (251) (715 mg, 0,893 mmola) w acetonitrylu przez 4 godziny w temperaturze pokojowej traktowano azotanem amonowo-cerowym (IV) 1,8 g,
3,3 mmola, 3,7 równ.) w wodzie (3 ml). Do mieszaniny dodano mannitolu (600 mg,
3,3 mmola, 3,7 równ.) i mieszaninę mieszano przez 1 godzinę, a następnie dodano eteru dietylowego (50 ml) i wody (30 ml). Po zdekantowaniu fazę wodną ekstrahowano eterem dietylowym (4 x 50 ml) Połączone fazy organiczne przemyto wodą, wysuszono (MgSOU i zatężono Po chromatografii na żelu krzemionkowym (10%.metanol w CH2O2) otrzymano kwas 5-(1-ben/yloksykarbonylo-3-t-butoksykarbonyloheksahydropirydazyn-2-ylo)karbonylo-3-metylo-4-ftalimidopentanowy (252) (360 mg, 64%);
[α]ο2 -49,2 (c 0,118, MeOH).
Produkt ten (360 mg, 0,609 mmola) stosowano bez dalszego oczyszczania, poddając uwodornieniu przez 3 godziny w metanolu (30 ml), przy użyciu 10% Pd/węglu (36 mg) Mieszaninę reakcyjną przesączono i wytworzony roztwór zatężono, uzyskując aminę (253) w postaci piany (270 mg, 96%);
[α]d20 -56,1 (c 0,18 MeOH).
Aminę (253) rozpuszczono w suchym THF (10 ml) i dodano pentachlorku fosforu (305 mg, 1,47 mmola, 2,5 równ.). Mieszaninę oziębiono do temperatury -5°C 1 pod azotem dodano N-etylomorfoliny. Mieszaninę reakcyjną mieszano przez noc w temperaturze pokojowej Mieszaninę zatężono i pozostałość pochłonięto w CH2CI (20 ml), zimnej H2S (20 ml) i 1M HCl (20 ml). Po zdekantowaniu fazę wodną ponownie ekstrahowano CH UU (2 x 20 ml) Połączone fazy organiczne przemyto 10% roztworem NaHCO 3 i wodą, wysuszono (MgSS4 i zatężono. Otrzymany olej oczyszczono na żelu krzemionkowym (1% metanol w CH2^2) otrzymano bicykliczny związek (254) w postaci substancji stałej (65 mg, 25%);
[a]D20 -77 (c 0,208, MeOH);
IR (KBr) 3471, 3434, 2975,2928, 1767, 1723, 1443, 1389, 1284, 1243, 1151, 1112, 720, 'H NMR (CDCI3) 7 7,94-7,69 (4H, m), 5,34-5,27 (1H, m), 4,89-4,66 (2H, m), 3,94-3,64 (2H, m), 3,02-2,84 (1H, m), 2,34-2,19 (2H, m), 1,94-1,61 (3H, m), 1,47 (9H, s), 1,14 (3H, d),
Analiza dla C 23H 27N 3S6:
Obliczono· C, 62,57; H, 6J7; N, 9,52;
Znaleziono Ck 62,66;Hh6,44;N,9 ,10 (1S,8S,9S)-9-benzoiloamino-6,10-diokso-8-metylo-1,2,3,4,7,8,9,i 0-oktahydro-6H-pii rydazyno[1,2-a][1,2J-diazepino-1-karboksylan t-butylu (255)
Roztwór bicyklicznego związku (254) (70 mg, 0,16 mmola) w etanolu potraktowano hydratem hydrazyny (0,02 ml, 4 mmole, 2,5 równ.) Po 5 godzinach mieszania w temperatu190 736
135 rze pokojowej mieszaninę zatężono i wytworzoną pozostałość pochłonięto w toluenie i ponownie odparowano. Pozostałość przez 16 godzin traktowano 2M kwasem octowym (2 ml). Otrzymany osad przesączono i przemyto 2M kwasem octowym (10 ml). Przesącz zalkalizowano dodatkiem stałego NaHCO., po czym ekstrahowano EtOAc. Roztwór organiczny przemyto wodą, wysuszono (MgSO4) i zatężono. Po cc/ys/c/eniu metodą szybkiej chromatografii na żelu krzemionkowym (2% metanol w CH2G2) otrzymano wolną aminę w postaci piany (50 mg, 100%). Aminę tę (50 mg, 0,16 mmola) ro/pus/c/onc w dioksanie (1 ml) i wodzie (0,25 ml) i potraktowano NaHCO. (0,034 g, 0,04 mmola), a następnie chlorkiem benzoilu (0,047 ml, 0,40 mmola, 2,8 równ.). Mieszaninę mieszano przez noc w temperaturze pokojowej, a następnie rozcieńczono EtOAc (15 ml). Roztwór organiczny przemyto 10% roztworem NaHCO. i nasyconym wodnym roztworem NaCl, wysuszono (MgSO 4) i /atę/ono. Po oczyszczeniu metodą szybkiej chromatografii na żelu krzemionkowym (2% metanol w CH 2O2) otrzymano benzamid 255 w postaci piany (67 mg, 100 %);
Ή NMR (CDCl.) δ 7,89-7,39 (5H, m), 6,79 (1H, d), 5,32-5,20 (1H, m), 4,98-4,82 (1H, m), 4,75-4,64 (1H, m), 3,84-3,65 (1H, m), 3,09-2,89 (1H, m), 2,45-2,18 (2H, m), 2,00-1,61 (4H, m), 1,48 (9H, s), 1,28 (3H, d).
Kwas [3S( 1 S,8S,9S))-3-19-benzoiioaminoc6,10-diokso-S-mneyloo - 4,7,8,9,10-oktahydro-6H-piryda/yno[ 1,2-a] [ 1 ^-diazepino-1 lSarboksamidc)-4-okscbutancwy (257).
Do roztworu estru t-butylowego 255 (67 mg, 0,16 mmola) w CH 2G2 (1 ml) w temperaturze 0°C dodano kwasu trifluorooctowego (1 ml). Wytworzony roztwór mieszano w temperaturze 0°C przez 15 minut, po czym w temperaturze pokojowej przez 1 godzinę Roztwór /atę/onc, pozostałość pochłonięto w suchym CH2O2 (2 x 2 ml) i mieszaninę ponownie /atężcnc (2 x). Pozostałość krystalizowano z eteru dietylowegc Po przesączeniu osadu otrzymano wolny kwas 255 w postaci szarej substancji stałej (40 mg, 70%). Do roztworu tego kwasu (40 mg, 0,11 mmola), N-alliloSsy-karbonylo-4-aminOl5-bcnzylcSsy-2lcSsotetrahydrofuranu (Chapman, Bioorg. & Med. Chem Lett., 2, str. 615-18 (1992); 39 mg,-0,13 mmola, 1,2 równ.) i (Ph.P^PdCh (3 mg) w mieszaninie suchego CH 2G2 (1 ml) i suchego DMF (0,2 ml) wk^plono n-Bu.SnH (0,089 ml, 0,33 mmola, 3 równ.). Wytworzony roztwór mieszano w temperaturze 25°C przez 10 minut, po czym dodano 1 -hydroksybcnzctπa/olu (36 mg, 0,266 mmola, 2,4 równ.). Mieszaninę oziębiono do temperatury 0°C i dodano etylcdimetyloamincpropylokarbcdilmidu (31 mg, 0,16 mmola, 1,5 równ) Mieszaninę mieszano w temperaturze 0°C przez 10 minut, po czym w temperaturze pokojowej przez noc, a następnie rozcieńc/cnc EtOAc (20 ml) i wytworzony roztwór przemyto kolejno 1M HCl (2x5 ml), 10% roztworem NaHCO, (2 x 5 ml) i nasyconym wodnym roztworem NaCl (5 ml), wysuszono (MgSO4) i zatę/onc. Po szybkiej chromatografii na żelu ^0^^wym (2% metanol w CH2G2) otrzymano mies/aninę diastereciscmerów (256) w postaci szarej substancji stałej (50 mg, 82%). Produkt ten (256) (50 mg, 0,091 mmola) stosowano bez dalszego cc/ys/c/ania, poddając uwodornieniu przez 24 godziny w metanolu (5 ml), przy użyciu 10% Pd/węglu (30 mg). Mieszaninę reakcyjną przesączono 1 otrzymany roztwór /atę/ono. Po szybkiej chromatografii na żelu kr/cmicnkcwym (2-20% metanol w CH2^2) otrzymano związek 257 (9 mg, 21%) w postaci białej substancji stałej;
'H NMR (D4-McOH) δ 7,28l7,29 (5H, m), 5,18-4,99 (1H, m), 4,59-4,35 (3H, m), 4,26-4,11 (1H, m), 3,65-3,41 (2H, m), 3,18-2,9)1 (1H, m), 2,62-1,47 (8H, m), 1,29-1,00 (3H, 2d) (mieszanina acetalu i hemiacetalu).
MS (ES-) 457.
136
190 736 (259)
PhCONHNHj (258)
CO2Bn
PhCO-N^n
W H O CO^Z-Bu
(263)
< Π
PhCO-N'hkYNx[
Η Ο,^Χ,
OBn H Mb (264)
3-<0'-nenzzilzhySroza—z)przpa—lao be—zylr (259).
Do zaaleriny neozzilohySraoa—y (285) (-,0 g, 7,34 mmola) w izzuroua—zl- (28 ml) UoSczor mierzo—ia dodooo akryloar benzylu (-,-3 ml, 7,34 mmolo). Mlerza-i-y zorzeaaao do arze—ia pod chłoSoicą zwrotną przez 20 godzi—, oziebloao do temperatury uoyzjzaej, po czym zotyżo—. Pozostałość zyzyrzczz—o metodą chuomotzoraflI (20% Et—Ac w CH2Cl2) i ztrzymo—z związek 259 (-,098 g, 50%) w postoci olej-, który yrystollszaoł po oSitonir: temp. topn. -5°C,
IR (KBr) 3283, -723, --44, -3--, -20-, --5-;
*H OMR (CDCl3), δ 8,32-8,-8 (-H, m), 7,8--7,70 (2H, m), 7,57-7,23 (8H, m), 5,3--4,92 (-H, brm), 5,-- (2H, r), 3,2- (2H, t, J = -,5), 2,59 (2H, t, J = -,5);
nC OMR (CDCla) δ -72,-2, -67,27, -35,-5, -32,54, -3-,--, -28,45, -28,-0, -28,0-, -26,84, --,3-,47,33, 33,3-.
190 736
137
Analiza dla C17H18N 2O 3:
Obliczono: C , ; H , 6,08 1 N , ^3^^·
Znaleziono: C · 68,42; H · 6,10 ; N; 9,3^8.
MS (ES +) 321 (M + Na, 38%), 299 (M+ + 1, 100).
(3S)-2-(N'-benzoilc·-^i-(2-benzyloksyk6rbooyloetylo)-hydraz.ynokarbonylii)ljeksahγdrtipiryd6zyno-1,3-dik6zbeksyl6o l-benzylo^-t-butylu (260).
Roztwór (3S)-heke6hydzopizydazyno-1,7-dikazbokeyl6ou l-benzylo^-t-butylu (Hassall i in., J. Chem. Soc. Perkin 1, str'. 1451-1454 (1979)) (925,3 mg, 2,89 mmola) i diizopropyleetyloaminy (0,70 ml, 4,0 mmola) w 1,93M toluenowy roztworze fosgenu (17,96 ml, 34,7 mmola) mieszano w temperaturze pokojowej przez 45 minut, a następnie zatężono i otrzymano żółtą substancję stałą. Do substancji tej dodano toluenu (18 ml), hydrazydu (259) (861,5 mg, 2,89 mmola) i dii8epzepyloetyle6mioy (0,70 ml, 4,0 mmola). Mieszaninę mieszano w temperaturze pokojowej przez 2,75 godziny, a następnie zatężono. Wytworzoną pozostałość pochłonięto w EtOAc, przemyto dwa razy 1M HCl, solanką, a następnie wysuszono (MgSO4, przesączono i 86tężooe, uzyskując 2,15 g surowej substancji. Po szybkiej chromatografii (40% EtOAc w heksanie) otrzymano 1,65 g (89%) związku tytułowego w postaci białej piany temp topn. 40°C;
[α]d24 -55,78 (c 0,40, C^Cfe);
IR (KBr) 7476, 2930, 1733, 1689, 1455, 1412, 1367, 1258, 1156, 697;
'H NMR (CDCl3 ) δ 8,54-8,23 (0,5H, m), 7,97-7,09 (15, 5H), 5,16-4,80 (4H, m), 4,66-4,32 (1H, m), 4,27-7,δδ (3,3H, m), 3,50-3,26 (0,4H, m), 3,19-2,49 (2,3H, m), 2,11-1,47 (6H, m), 1,32-1,05 (7H, m).
Analiza dla C35H40N4O8 · 0, 5H2O:
Obliczono· C, 64-,31; H; 6,32; N; 8,57;
Znaleziono: C, 64,18; H, 6,27; N, 8,56.
MS (ES +) 662 (M + Na, 84%), 645 (M+ + 1, 100), 384 (77)
Kwas (6S)-3-(N’-beo8oilo-N-(6-t-butoksykarbonyloheksahydroplrydazyno-1 -karbonylo^ydrazyno) propanowi (261).
Do roztworu związku 260 (1,59 g, 2,47 mmola) w MeOH (142 ml) dodano 10% palladu na węglu (230,0 mg) i mieszano w atmosferze H 2 przez 1,5 godziny. Mieszaninę przesączono a rozpuszczalnik odparowano i otrzymano 1,04 g (100%) białej piany, którą stosowano w następnym etapie bez dalszego oczyszczania; temp. topn. < 40°C;
[α ]d26 +1,6 (c 0,26, CHzCfe);
IR (KBr) 3422, 2977, 2986, 1728, 1677, 1486, 0445, 1396, 1369, 1309, 1228, 1155, 916, 716;
‘H NMR (CDCl3) δ 10,0-9,7 (1H, szer. m), 7,86 (2H, d, J = 7,5), 7,62-7,38 (3H, m), 7,3-5,6 (2H, szer. m), 4,57 (1H, szer. d, J = 4,0), 4,05-3,77 (2H, m), 3,00-2,82 (1H, m), 2,80-2,43 (3H, m), 2,20-2,03 (1H, m), 2,00-1,47 (1H, 13 m), 1,62-1,14 (11H, m);
13c NMR (CDCI3) 5 175,00, 171,17, 167,62, 160,68, 132,39, 131,77, 128,67, 127,38, 82,27, 57,78, 48,04, 76,75, 33,62, 28,02, 25,68, 21,61
MS (ES +) 443 (M + Na, 68%), 421 (M++ 1), 100), 365 (50), 131 (61).
(4S)-7-benzamido-6,10-diokso-1,2,3,4,7,8,9,10-oktahydzo-6H-piryda8yno[ 1,2-a] [ 1,2,4]-tπa8epine-7-kazboksyl6n t-butylu (262).
Do roztworu aminokwasu 261 (1,012 g, 2,41 mmola) w suchym THF (26 ml) w temperaturze 0°C dodano N-etylomorfelioy (597 pl, 4,69 mmola), a następnie PCI5 (651,3 mg, 3,12 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano w temperaturze 0°C przez 2 godziny, po czym pozostawiono, aby ogrzała się do temperatury pokojowej i mieszano jeszcze przez 15,5 godziny Mieszaninę zatężono, a wytworzoną pozostałość pochłonięto w EtOAc, przemyto dwukrotnie 1M HCl, nasyconym roztworem NaHCO 3, solanką, a następnie wysuszono (MgSO4), przesączono i z6tężeoe. Po szybkiej chromatografii (20% EtOAc w CH2Cl2) otrzymano 727,3 mg (75%) związku tytułowego w postaci białej piany;
[α ]d26 +51,0 (c 0,20, CH 2Cl2),
IR (KBr) 3436, 2979, 1733, 1670, 1483, 0437, 1420, 1299, 1243, 1156;
138
190 736 ‘H NMR (CDCl,) δ 8,70 (1H, s), 7,78 (2H, d, J = 7,0), 7,53-7,32 (3H, m), 5,08 (1H, dd, J - 2,5, 5,5), 4,59-2,23 (1H, m), 4,0833,69 (3H, m), 3,07-2,84 (1H, m), 2,5732,35 (1H, m), 2,34-2,12 (1H, m), 13 2,07-1,43 (3H, m), 1,48 (9H, s), ‘3CNMR (CDCla) 8 mA, 169,04, 160,35, 158,35, 132,22, 132,03, 122,01, 127,31, 82,73, 55,41, 54,07, 21,57, 32,21, 28,02, 22,97, 20,37.
Analiza dla C 20H 26N 4O 5:
Obliczono: C , 59,69, H , 6,5 1, N, 13,92;
Znaleziono: C , 59,53 , H , 6,53 , N , 13,84.
MS (ES +) 425 (M + Na, 71 %). 403 (M+ + 1, 100), 145 (41).
Kwas (4S)-7-benzamido-6,10-dlokso-1,2,3,4,7,8,9,10-ok.tahydIΌ-6H-pllydazyno11,2-a|-[ 1,2,2]triazepino-4-0a)bokshlowh (263).
Roztwór estru 262 (720,0 mg, 1,80 mmola) w mieszaninie 1:1 CH 2O2 i TFA (150 ml) mieszano przez 1,3 godziny w suchej atmosferze. Następnie roztwór zatężono pod próżnią, pochłonięto w Et2O i ponownie zatężono. Czynność tę powtórzono sześć razy i otrzymano surowy produkt w postaci białawej substancji stałej. Produkt oczyszczono metodą szybkiej chromatografii (5% MeOH w CH2O2) i otrzymano 520,0 mg (83%) związku tytułowego w postaci białej piany;
[α]ο25+59,5 (c 1,82, CH2Ch);
IR (KBr) 3435, 3200, 2956, 1732, 1664, 1524, i 486, 1440, 1302;
'H NMR (CDCls) 8 9,13 (1H, s), 7,77 (2H, d, J = 7,5), 7,5737,32 (3H, m), 5,2735,16 (1H, m), 2,62-4,23 (1H, m), 4,09-2,70 (3H, m), 3,1232,89 (1H, m), 2,59-2,43 (1H, m), 2,38-2,20 (1H, m), 2,12-1,89 (1H, m), 1,82-1,59 (2H, m);
l3C NMR (CDCl3) δ 1*73,65, 172,28, 1(66,44, 15,,42, 132,44, 131,nl , 228,11 ,
54,83, 54,01,,^Π, 31,39, 22,22, 20,29;
MS (ES -) 345 (M - H+, 100%), 161 (45).
[2RS,3S(4S)]-N-(2-Benzyloksy-5-oksotetrahydrofuran-3-ylo)-6,10)-diokso-1,2,3,4,7,2,9,103oktahydro36H-pi)ydazyno3[ 1,2-a][ 1,2,4]triazepino-230arboksairild (264).
Do roztworu kwasu 263 (300,0 mg, 0,87 mmola) i (2RS,3Sj3-alllloksy0arbonh3 loamino-2-benzyloksy-53oksotetraaydrofuranu (Chapman, Bioorg. & Med Chem. Lett., 2, pp, 615-18 (1992)) (273,0 mg, 0,95 mmola) w suchym CH2O2 (2,5 ml) i w suchym DMF (2,5 ml) w temperaturze pokojowej dodano chlorku bls(t)ifenhlofosflno)palladu (13,0 mg), a następnie wodorku tri-n-butylocyny (260,0 μζ Ά mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 5 minut, po czym dodano l-aydroksybenzotπazolu mg, 1,73 mmola) i mieszaninę oziębiono do temperatury 0°C, a następnie dodano chlorowodorku 1-(3-dimetyloaminopropylo^-etylokarbodiimidu (204,5 mg, 1,04 mmola). Mieszaninę pozostawiono, aby ogrzała się do temperatury pokojowej i mieszano przez O,, godziny. Mieszaninę rozcieńczono EtOAc, przemyto 1M roztworem NaHSO,, dwa razy nasyconym roztworem NaHCO 3, a następnie H2O i solanką. Warstwę organiczna wysuszono (MgSO4), przesączono i zatężono. Pozostałość oczyszczono metodą szybkiej chromatografii (5% MeOH w CH2Cl2) i otrzymano 768,3 mg (77%) związku tytułowego w postaci białej substancji stałej;
IR (KBr) ,,,,, 1391, 1665, 1526, 1421, 1285;
'H NMR (CDCls) 2,70 i 2,49 (1H, 2 x s), 7,9237,73 (2H, m), 7,6237,24 (8,5H, m), 6,86 (0,5H, d, J = 8,0), ,,,, i 5,,3 (1H, d, J = 5,5, s), ,Ν,Α,, (5H, m), 2,04-7,54 (3H, m), ,Α32,64 (2H, m), 2,49-2,14 (2H, m), 2,11 - i ,,, (4H, m);
MS (ES +) 562 (M + Na, 100%), 536 (M+ + 1, 78), 402 (58).
Kwas f3S(z4S)j-73(33benzίπnil^(^^(6, i0-diokso-1,2,3,‘5.7,8l9l103oktahydro-6H-pl)ydazyno-[ 1,2-a] [ 1,2,2]triazepino32-karboksamido)-4-oksobutanowy (265).
Mieszaninę 264 (,50,0 mg, 0,05 mmola), 10% palladu na węglu (350 mg) i metanolu (,6 ml) mieszano w atmosferze H2 przez 6,5 godziny Mieszaninę przesączono, a rozpuszczalnik odparowano. Dodano Et2O i rozpuszczalnik znowu usunięto. Czynność tę powtarzano cztery razy i uzyskano 283 mg (97%) związku tytułowego w postaci białej krystalicznej substancji stałej, temp. topn. dekarboksylanów powyżej 140°C,
[α][) f^,, (c 0,12, MeOH);
IR (KBr) 3222, 1007, 1522, 1487, 1437, i?—,
190 736
139 'H NMR (D6-DMSO) δ 10,56 (1H, s), 8,71-8,57 (1H, m), W^ł (2H, m), 7,65-7,46 (3H, m), 4,97-4,85 (1H, m), 4,38l4,0 (3H, m), 3,22l3,52 (3H, m), 2,91-2,71 (2H, m), 2,50-2,38 (1H, m), 2,35-2,21 (1H, 13 m), 2,10-1,94 (1H, m), 1,93-1,49 (3H, m);
13C NMR (D6-DMSO) 173,66, 172,49, 169,97, 169,89, 164,96, 157,62, 132,35, 131,85, 128,39, 127,32, 53,81, 52,69, 40,90, 33,17, 31,60, 24,40, 24,13, 19,24;
MS (ES-).
+JHZ
BOC-N
H
DCHA
Phtb-N^CChH
H
(266)
1) pci5
2)
Phthfsr^Y^Y^
O COrf-Bu (267)
Kwas (2S)l3-ben/ylcksykarbonylcaminOl2-ftalimidopropionowy (266).
Roztwór soli dicykloheksyloaminy i kwasu 2(S)-bcn/y'loksy'kίlrbonyloamino-2,2-tertbutoSsy-karbonyloamincpropionowegc (3 g, 5,8 mmola) w dichlorometanie (200 ml) przemyto cztery razy 1M rc/twcrem HCl, wysuszono (MgSO4) i zatężono Otrzymany olej rc/pus/czono w dichlorometanie (35 ml), oziębiono do temperatury 0°C i potraktowano kwasem triflucrooctcwym (35 ml). Roztwór ten mieszano w temperaturze 0°C przez 1 godzinę, a następnie odparowano do suchości. Do pc/cstałości dodano dichlorometanu (50 ml), który następnie usunięto pod próżnią. Czynność tę powtarzano sześć razy i otrzymano białą substancję stałą. Substancję tę zawieszono w toluenie (50 ml), potraktowano sproszkowanym bezwodnikiem ftalowym (940 mg, 6,35 mmola) i ogrzewano do wrzenia pod chłodnicą zwrotną przez 18 godzin. Wytworzony roztwór zatężcnc, uzyskując olej. Olej ten oczys/c/cnc metodą szybkiej chromatografii (2-10% metancl/dichloromctan) i otrzymano 2,01 g (94%) związku 266 w postaci białego proszku;
IR (KBr) 3600-2500br, 1776, 1714, 1530, 1469, 1455, 1392, 1263, 1131, 722;
'H NMR (CDC1.) δ 7,83 (2H, m), 7,72 (2H, m), 7,29 (5H, m), 5,41 (1H. m), 5,03 (2H, s). 3,90 (2H, m);
MS (ES-), 367 (M - 1).
|3S(2S)]^1-bcnzΛ/loksykaI·bony'lOl2-(3-bcn/.yloksy-SarbcnyΊoamino-2lftalimidcpropiCl Irylc)pirydazyno-3-karbcksylan t-butylu (267).
Zawiesinę kwasu 266 (1,32 g, 3,58 mmola) w suchym eterze (37 ml) potraktowano pentachlorkiem fosforu (1,04 g, 5 mmoli) i mieszano w temperaturze pokojowej przez 2 godziny. Roztwór przesąc/cnc, aby usunąć nieprzereagowany pentachlorek fosforu, a następnie odparowano do suchości. Do pozostałości dodano suchego toluenu (25 ml), po czym odparowano do suchości. Czynność tę powtórzono kilka razy. Wytworzony olej rozpuszczono w suchym dichlorometanie (25 ml), oziębiono do temperatury 0°C i potraktowano roztworem (3S) Ηχ-πzyloksykarbcnylopiryda/yncl3-karboksylanu t-butylu (1,15 g, 3,58 mmola) w suchym ^^Ι^ rometanie (2 ml), a następnie 5% wodnym roztworem wodorowęglanu sodu (25 ml). Miesza140
190 736 ninę mieszano intensywnie w temperaturze pokojowej przez 20 godzin, a następnie rozciem czono octanem etylu (100 ml) i zakwaszono do pH 2 dodatkiem 1M HCl Fazę organiczną przemyto rozcieńczonym roztworem HCl, a następnie solanką, wysuszono (MgSO4) i zatężono. Otrzymany olej oczyszczono metodą szybkiej chromatografii (2-20% octan etylu/dichlorometan, a następnie 10-20% metanol/dichlorometan) i otrzymano 1,25 g (52%) związku (267) w postaci białego proszku;
IR (KBr) 3367, 2955, 1722, 1517, 1455, 1387, 1369, 1251, 1153,721;
'H NMR (CDCls) δ 7,81 (2H, m), 7,74 (2H, m), 7,63 (1H, szer. s), 7,31 (10H, m), 5,46-4,76 (5H, m), 4,07-3,54 (4H, m), 2,4 (1H, m), 2,0-1,6 (3H, m), 1,40 (9H, s);
MS (ES+), 671 (M + 1), 693 (M + Na).
(1 S,9S)-1,2,3,4,7,8,9,10-oktahydro-10-oksO)9-ftalimiao-6H-pliyaazzzo[ 1,2-a] [ 1,2,4]-triazepino-1-karboknzlaz t-butyl (268).
Roztwór estru 267 (50 mg, 0,074 mmola) w metanolu (15 ml) potraktowano 10% palladem na węglu (50 mg) i uwodorniano w temperaturze pokojowej i pod ciśnieniem αtmasne) rycznym przez 24 godziny. Mieszaninę dokładnie odpowietrzono, aby usunąć wodór, po czym potraktowano 37% wodnym roztworem formaldehydu (18 mg, 0,22 mmola) i mieszano pod azotem przez 2 godzmy. Mieszaninę przesączono, odparowano do suchości i produkt okzznz) czono metodą szybkiej chromatografii (4-100% octan etylu/dichlorometan). Otrzymano ,4,5 mg (48%) związku 268 w postaci oleju;
'H NMR (CDCI3) δ 7,85 (2H, m), 7,71 (2H, m), 5,78 (1H, dd, J- 10, 5), 4,99 (1H, dd, J = 6,1, 1,5), 4,07 (1H, d, J = 10,6), 3,49 (1H, dd, J = 14, 5), 3,39 (1H, d, J = 10,3), 3,24 (1H, dd, J = 14, 10,2), 3,17 (2H, m), 2,39 (1H, m), 1,84-1,46 (3H), 1,51 (9H, s);
MS (ES+), 415 (M + 1), 437 (M + Na)
OR (304a) R=CH3
190 736
141
Ester tert-butylowy kwasu [3S(1 S,9S)-3-(9-benzoiloamino-6,10^^80-1,2,3,4,7,8,-9,10-oktahydro-6H-pii-ydazyKo[ 1,2-a][ 1,2]diazapino-1 -karboksamidobamino^-oksobutanowego (302).
Etap A
Związek 301 wytworzono sposobem podobn/m jak związek 605a (etap A), ale zamiast związku 603a stosowano związek 212e i otrz/mano 540 mg (34%) produktu w postaci białej substancji stałej.
Etap B
Związek 302. Roztwór związku 301 (50,7 mg; 0,091 mmola) w 2,8 ml mieszanin/ MeOH/HOAc/37% wodny roztwór formaldehydu (5:1:1) mieszano w temperaturze pokojowej przez 5,5 godziny, po czym mieszaninę reakcyjną zatężono do objętości 0,7 ml pod próżnią
Pozostałość rozpuszczono w 3 ml CH3CN zatężono do objętości 0,7 ml (3 x), rozpuszczono w toluenie i zatężono do objętości 0,7 ml (2 x), a następnie zatężono pod próżnią.
Po chromatografii (szybka, SiO2, 5% izopropanolu/CI LCĘ otrz/mano związek 302 (45,5 mg, 78%) w postaci białej substancji stałej;
'H NMR(DMSO-d6) 5 1,0-1,15 (m, 2H), 1,4 (s, 9H), 1,65 (m, 2H), 1,9-2,1 (m, 2H), 2,15-2,4 (m, 3H), 2, 55 (m, 1H), 2,7-3,0 (m, 2H), 4,3-4,6 (m, 2H), 4,9 (m, 1H), 5,2 (m, 1H), 7,4-7,6 (m, 2H), 7,8-8,0 (m, 2H), 8,6 (m, 1H), 8,8 (m, 1H), 9,4 (s, 1H).
[ 1 S,9S(2RS,3S)]-9-benzoiloamino-6,10-diokso-Ó ,2,3,4,7,8,9,10-oktahydęo-N-(0-metokey-5-okso-tetrahydrofuraK-3-ylo)-6H-pirydaz/no[ 1,2-a] [ 1,2]diazapino-1 -karboksamid (304a).
Etap A
Roztwór związku 302 (90 mg; 0,18 mmola) w 10 ml MeOH potraktowano ortomrówczanem trimetylu (1 ml) i hydratem kwasu p-tolueKosulfoKowego (5 mg; 0,026 mmola) i mieszaninę reakcyjną mieszano przez 20 godzin.
Do mieszaniny ępakcyjκej dodano 3 ml nas/conego wodnego roztworu NaHCO3 i zatężono pod próżnią. Pozostałość pochłonięto w EtOAc i przemyto rozcieńczonym wodnym roztworem NaHCO3, wysuszono nad MgSO4 i zatężono pod próżnią Otrz/mano 80 mg związku 303a.
Etap B
Związek 303a rozpuszczono w 2 TFA i mieszano w temperaturze pokojowej przez 15 minut. Mieszaninę reakcyjną rozpuszczono w CH 2G2 i zatężono pod próżnią (3 x).
Po chromatografii (szybka, SiO2, 1% do 3% MeOH/C^Ch) otrz/mano 43 mg (64%) związku 304a w postaci białej substancji stałej, 'H NMR(CDCb) δ 1,55-1,8 (m, 2H), 1,9-2,15 (m, 4H), 2,25-2,5 (m, 2H), 2,7-3,3 (m, 4H), 3,45-3,6 (s, s, 3H), 4,4, 4,75 (2m, 1H), 4,6 (m, 1H), 4,95, 5,4 (t, d, 1H), 5,1-5,2 (m, 1H), 6,45, 7,05 (2d, 1H), 6, 95 (m, 1H), 7,45 (m, 2H), 7,5 (m, 1H), 7, 85 (m, 2H).
Przykład 11
Związki 214e, 404-413, 415-445, 446-468, 470-491 i 493-499 zsyntet/zowano jak opisano w prz/kładzie 11 i w tabeli 3.
-90 73-
Ο
-90 73-43
Etap A
Synteza zaiaoky 401
Żywicy OH2TeotoGel S® (0,-- mmol/g, -0,0 g) rmlerzyzzao —a lejkr ze spleko-ego szkło i przemyto DMF (3 x 50 ml), -0% (obj./obj.) DIEA w DMF (2 x 50 ml) i —a końc- DMF (4 x 50 ml). Do żywicy SoSo—o DMF w ilości aystoryzojacej, aby otrzymać zaaierine, o nortyp—ie związku 400 (-,42 g, 2,4 mmola, aytazrzo—eoo z ertrr tert-b-tylowego kwas- (3S)-3-<rirorenylometyloksyyornznyiz>-4-zksomasłzweo-, zgoSole ze ruorznem zuisonym przez A. M. M-ipha i io. w J. Am. Chem. Soc. --4, 3-5--3-57 (-992)), hySrotr --hydrokrybenzotrioooiy (H—BT · H2—; 0,3-7 g, 2,4 mmola), hekrarlyzroforforanr P-be—zotriazol-1-ιlz-0,0,0,0’-tetrometylzyrzoloaeoo (HBTU; 0,9- g, 2,4 mmola) i DIEA (0,55 ml, 3,2 mmolo) Mleszanl—y reakcyjną mieszano przez noc w temperaturze uzkojzaej rtos-jąc mieszadło ryczae. Żywicy ayzSrennio—o na lejkr ze suleka—eoo rzkła przez przerącze—ie pod próż-ią i przemyto dMf (3 x 50 ml). Oartyu—ie —ieurzereoozaone grupy aminowe rrunlyto przez reakcjy zyaicy z 20% <zbj./obj.> AC 2—/DMF (2 x 25 ml) nezuośreSniz w lejkr (-0 miO/płrkarie). Żawiye przemyto DMF (3 x 50 ml) i CH 2G2 (3 x 50 ml), po czym aysrszo—z przez -oc pod próż—ią i otrzymano związek 40- (--,0 g, wydajność ilościowa).
Etap B
Syoteza zaiazky 402
Żyalye 401 (-,0 g, 0,-- mmola/g, 0,9- mmolo) poSSa-o suecz—ionlr w lejkr ze spleko-ego szkła przez przemycie DMF (3 x 25 ml). Oartepnie grypy zchrznoa Fmoc oSrzczeploaz mierzoniną 25% <onj./znj.) ulperySyno/DMF (25 ml) uroez -0 minut (z okrerowym mlerzoniem), a -artypnie uroy użyci- świeżego reagenta uiuerySy—oweoo przez 20 mlart (25 ml) Oostypnie żywicy przemyto DMF (3 x 25 ml), a potem 0-metylzpirzliSo—em (2 x 25 ml). Po urzenierienly zyalyy So -00 ml kolby SzSanz N-metylzuiroliSo—r, aby otrzymać zoaleslay, o —artyu—le zaiaoyy 212f (0,725 g, -,57 mmola), H—BT · H2—) (0,25 g, -,- mmola), HBTU (0,-- g, -,- mmola) i DIEA (0,84 mL, 4,8 mmola). Mlerza—ioy reakcyjną miesza—o urses —oc w temperaturze pokojowej stor-jąc miersoSło ryczne —(ιοΙΙι obróbce i zSnlokoaa—le żywicy przy użyciu 20% (obj-obj.) Ac2— w DMF urzwaSzz—z jak ouiraao Sla zwlązk401 i otrzymano związek 402 (-,2- g, wydoj-ość il-ścioaa>.
Etap C
Syotezo zaiazky 403
Związek ten aytaorzzao z żywicy 402 (0,24 g, 0,038 mmolo) stos-jąc syrtetyzotor Advo—ced ChemTech 39- M-ltlple PeptiSe Zo-tomotyzowore cykle obejmowały przemycie żawicy DMF (3 x - ml), zSnlzkowaale przy -życl- 25% (obj /obj.) ulUerySyaa w DMF (- ml) urzes 3 mi—rty, a —ortyunle świeżego reage—to (- ml) przez -0 mi—rt. Ptrzamoaz żywicy 403. Zyaiye przemyto DMF (3 x - ml) i O-metylzuirollSz—em (3 x - ml).
Etop D
Suzrón Kwas [3S(-S,9S>]-3-(-,-0-Sizkro--,2,3,4,7,8,9,-0-oytahySro-9-<tiore—o-3-karboayloomi—z)-6H-piIydazyno[-,2-o][-,2]Siazepino---karbzysamiSz>-4-okronyto—owy (409).
Żyalce 403 acyizao—o 0,4 M roztworem kwor- tiofeao-3-yarnoksaloweoo i 0,4M H—BT w N-metyloplrzliSonie (- ml), rzstwzrem 0,4M HBTU w O-metyizpirollSonle (0,5 ml) i rzztaorem -,-M DIEA w 0-metylzulrzllSo—le (0,35 ml) i mleszo-l-y reakcyjną mieszaro przez 2 ozSziny w temperaturze uoyojzaej. Etop ocylowonlo uowtórzono. Oo koalec, żaalyy przemyto DMF (3 x - ml), CH2O2 (3 x - ml) i wys-rzono pod próżnią. Aldehyd zSsscseulono od zyaiya i całkowicie oSblokzwo—z działając mierzani—ą 95% tFa/5% H 2— (obj./obj., -,5 ml) przez 30 minut w temperaturze uzkzjzwej. Po przemyci- żyaicy reagentem odrzczeUlajayym (- ml) przesączy połączo-o i Sodaro do zimaej mierzo—i—y Ml Et20.-perta- (-2 ml) otrzymany orod ayzSrybnio—o przez zSalrzwanle i zSeko—towo—ie. Wytworzo-y oraS rozurszyzzno w -kłodzie -0% CH3CO/90% H2—/0,-% TFA (-5 ml) i liofilizowo—o. —trzymano rrrowy związek 409 w portfcl białego urzrsyr Związek zczyszczo—o metodą półpreparatyw—ej chromatografii RP-HPLC stosując yzlrmae Ramia Microszrb™ C-8 (5 e, -1,4 x 550 mm) i el-ując llaioaym groSie—tem CH3CN (5% - 45%) zawierającym 0,- % TFA (obj /obj.) przez 45 ml—rt ursa urzeuływie -2 ml/mia Frakcje zawierające żąSary produkt zenraaz i llofilizoaoaz, -zysk-jąc związek 409 (-0,8 mg, -3%)
144
190 736
Etap D
Sposób 1A
Synteza związku 418
Stosując procedurę podobną do opisanej w sposobie 1, żywicę 403 acylowano kwasem 4-(1-fluorenylometoksykarbonyloamino)ben/oesowym. Grupę Fmoc usunięto jak opisano w etapie C, a wolną aminę acetylowano układem 20% (obj./obj.) AC;O w DMF (1 ml) i 1,6M DIEA w N-metylopirolidonie (0,35 ml) przez 2 godziny w temperaturze pokojowej. Etap acetylowania powtórzono. Po odszczepieniu aldehydu od żywicy otrzymano związek 418 (3,2 mg).
Etap D
Sposób 1B
Synteza związku 447
Stosując procedurę podobną do opisanej w sposobie 1 A, żywicę 403 acylowano 0,4 M kwasem 4-(1-fluorenylometoksykarbonyloamino)benzoesowym. Etap acylowania powtórzono jeszcze raz. Grupę Fmoc usunięto, jak opisano uprzednio, a wolną aminę poddawano reakcji z 1M roztworem chlorku metanosulfonylu w CH2O2 (0,5 ml) i 1M roztworem pirydyny w CH 2Cl2 (0,60 ml) przez 4 godziny w temperaturze pokojowej. Po odszczepieniu aldehydu od żywicy otrzymano związek 447 (10,0 mg).
Etap D
Sposób 2
Synteza związku 214e
Stosując procedurę podobną jak w sposobie 1, żywicę 403 acylowano 0,5M roztworem chlorku benzoilu w N-metylopirolidonie (1 ml) 1 1,6M roztworem DIEA w N-metylopirolidonie (0,35 ml) przez 2 godziny w temperaturze pokojowej. Etap acylowania powtórzono. Po odszczepieniu aldehydu od żywicy otrzymano związek 214e (5,1 mg, 30%).
Etap D
Sposób 3
Synteza związku 427
Stosując procedurę podobną jak w sposobie 1, żywicę 403 poddawano reakcji z 1M roztworem chlorku benzenosulfonylu w CHjUU (0,5 ml) i 1M roztworem pirydyny w CH2O2 (0,60 ml) przez 4 godziny w temperaturze pokojowej. Reakcję powtórzono. Po odszczepieniu aldehydu od żywicy otrzymano związek 427 (7,2 mg, 40%).
Etap D
Sposób 4
Synteza związku 420
Stosując procedurę podobną jak w sposobie 1, żywicę 403 poddawano reakcji z 0,5M roztworem izocyjanianu metylu w N-metylopirolidonie (1 ml) i 1,6M roztworem DIEA w N-metylopirolidonie (0,35 ml) przez 2 godziny w temperaturze pokojowej Po odszczepieniu aldehydu od żywicy otrzymano związek 420 (8,3 mg, 55%).
Etap D
Sposób 5
Synteza związku 445
Stosując procedurę podobną jak w sposobie 1, żywicę 403 acylowano 0,27M roztworem kwasu imidazolo-2-karboksylowego (1 ml) w mieszaninie 2:1 DMF:H;O (z 1 równ. DIEA) iw 1M roztworze chlorowodorku 1-(3-dimetyloammopropylo)-3-etylokarbodiimidu (EDC) w mieszaninie 2:1 N-metylopirolidon/HhS (0,35 ml) przez 3 godziny w temperaturze pokojowej. Po odszczepieniu aldehydu od żywicy otrzymano związek 445 (9,5 mg).
Metody analizy HPLC:
(1) Kolumna Waters DeltaPak C18, 300A (5 μ, 3,9 x 150 mm), liniowy gradient CH3CN (5% - 45%) z zawartością 0,1% TFA (obj./obj.) w ciągu 14 minut przy przepływie 1 ml/min (2) Kolumna Waters DeltaPak C18, 300A (5 μ, 3,9 x 150 mm), liniowy gradient CH3CN (0% - 25%) z zawartością 0,1% TFA (obj./obj.) w ciągu 14 minut przy przepływie 1 ml/min (3) Kolumna Waters DeltaPak C18, 300A (5 μ 3,9 x 150 mm), eluowanie izokratyczne układem 0,1% TFN/woda (obj./obj.) przy przepływie 1 ml/min.
(4) Kolumna Waters DeltaPak C18, 300A (5 μ, 3,9 x 150 mm), liniowy gradient CH3CN (0% - 30%) z zawartością 0,1% TFA (obj./obj.) w ciągu 14 minut przy przepływie 1 ml/min (5) Kolumna Waters DeltaPak C18, 300A (5 μ, 3,9 x 150 mm), liniowy gradient CH3CN (0% - 35%) z zawartością 0,1% TFA (obj./obj.) w ciągu 14 minut przy przepływie 1 ml/min.
190 736
145
Tabela 3
Zw Struktura MF MW HPLC RT min MS (M+H)+ Sposób syntezy
1 2 3 4 5 6 7
214e o C2' H24N4O7 444,45 6,67 (2) 445 2
0 ( 0 98%
ί/^ΤΓ N Z^CH
U » θ Ι'ΝΤ O H I.H
0
404 0 C22H26N4O7 458,48 6,66 (2) 459 2
1 ° \ -kNY 0 97%
N* j*OH
H O YH
θ ΰ O
405 O C22H26N4O8 474,47 8,20 (1) 475 2
o 0 ζ O 98%
N*~ } OH
U « o YH
O H O
406 O CziHzaClN^ 478,89 6,33(1) 479 2
a o Z O 98%
Λοη
1 H 11 o AJ YH
θ H O
407 O C25H26N4O7 494,51 9,90 (1) 495 2
o \ n,> 1 0 98%
iTW^is i^OH
II 1 L x & n θ A, A.h
θ H ’ M o
408 O C75H26N407 494,51 9,00 (1) 495 2
ΓΊ ° ( o 98%
nU
ΙΊΤ R (OH
o Am η N ° H A^h o
409 O C27H78N4O7 520,55 11,14 (1) 521 2
o o 98%
V hlz
ίΓπ i ψο i f OH
fJU ' o A. A .H
ι 1 5
410 o Ci9H22N4O7S 450,47 4,87(1) 451 1
o f Γ) O 98%
ιγ f ^OH
V h O AmA
° H Y 0
146
190 736 ciąg dalszy tabeli
1 2 3 4 5 6 7
411 O ϋ C24H25N5O7 495,50 H0,70(1) 496 1
0 ( Ί ΐ 98%
AJ U
Cu R °O *n\h
H O
412 o C24H25N5O7 495,50 8,57 (1) 496 1
o ( k N O 98%
U 1 H r oh
0 VH
[ł 1 o H 0
413 0 u C'8H24N,4O7 408,41 7,21 (2) 409 1
o( ' K o 98%
u u o ύ
o H o
415 o C22H24N4O9 422,46 7,58 (1) 489 1
n Z 0 o 98%
Γ i 04
<°ΪΎ R o J W1
υ H o
416 o C2IH23CIN4O^7 472,29 9,66(1) 479 1
'Ί ° 98%
0 \
1 I °n
ll R o) LnJvh
Cl©' o M o
417 o C24H3ON4OI0 534,53 8,12 (1) 535 1
1 0 (NV 1 ° 535
ZoH
li I ii o Λ ,Α,ιι
-o u o 1 o
418 o C23H27N5O8 501,50 5,93(1) 502 'A
0 \ N > 0 98%
f V/ 1 f °n
fi T o >. nvh
ΗΝ%^ o
O< H o
419 0 CI6H22N4O8 392,32 6,84 (2) 399 2
i i r< λ o 98%
1 λοη
oj ‘kj'* rH
O R
H o
190 736
047 ciąg dalszy tabeli
1 2 3 4 5 6 7
420 O C‘6H,3N5O7 397,39 5,25 (2) 398 4
o ( Nx N o fOH 98%
Η H O 4 O Ύ
H o
421 o u C16H24N4O8S 432,46 7,13 (2) 777 3 _>
Γ rN o 98%
Λ λ <^0H
οθϊ YH
H
422 o z/ C2|H2eN6 O7 476,49 6,89(1) 477 1
( 0 ( 0 98%
f OH
NJJ H o J o H Ul O
423 o C20H25N5O7S 479,52 5,62 (1) 480 1
O ( O 98%o
Λγν AAH N f OH Λ^η
O
424 o CI9H23N5O8 449,42 6,28 (1) 450 1
0 V n' |\L O 450
aoh
II N YH
H o
425 O O C25H26N4O8 510,51 8,25 (1) 98%o 511 1
o \ N
' ( Otl
|i O 1 'nvh
0 H 0
426 o C21H30N4O7 450,50 8,00 (1) 451 2
o \ Nx N o 98%
(γϊί ll H f OH
<V kN' U. u
H o
427 O C2oH24N4O8S 480,50 7,87(1) 481 3
N o 98%
(W W OH M o J O H f oh YH
H o
148
190 736 ciąg dalszy tabeli
1 2 3 4 5 6 7
428 o C|6H25N5O8S 447,47 5,13 (1) 448 3
N% 0 98%
N u θλ. f OH iAzh
\ ° fi 5
429 o C14H20N4O6 340,34 3,19 (3) 341
(N \N 0 98%
H I^OH
0 *N H Ύ<η
o 0
430 0 O Co3HooN5O8 501,50 5,53(1) 502 IA
Άνη 0 C hT Ń 'Ί ° 98%
Γ | 0H
(7 N I H O J
π υ N T H o
431 o CoiHo5N5Oo 459,46 6,66 (2) 460 1
r rf Ά o 98%
o { ,nv
ifAr N< Aa h 1 1 OH
H/4 o 0 Uy H 0
432 0 ColH23NoOo 485,46 5,59(1) 486 1
r N' 98%
H o \ , N,
fsk I1 J H 1 1 °n
N O kA^H
N U «5
433 0 C24HooN5Oo 497,51 11,07(1) 498 1
0 \ Ν' Ń > 0 97%
' f OH
C-N f \ o A 0 ΐ H
H 0
434 0 C2oH24'N6θ0 484,47 4,43 (1) 485 1
H o \ Ί 0 98%
o A (OH nA<h
0
H 0
435 o C24H25N5O7 495,50 5,10(1) 496 1
0 \ N*^ O 98%
K
f OH
ii N, A H °cĄ |\H
l i *s>. >4 0
190 736
149 ciąg dalszy tabeli
1 2 3 4 5 6 7
436 0 o ? ί 1 θΗ W H 0 ify C 24H25N 5O 7 495,50 8,20 (4) 98% 496 1
437 O ι Γ^θπ I J Η οΙ.Λ,η U ΗΪ C^NjOfc 525,52 12,78 (5) 98% 526 1
438 Ο ί / °π Ρ I Τ Η ολλ η Η ° Ν J C24H25N5O7 495,50 4,85 (1) 98%ο 496 1
439 ο Γ^θΗ ęy °°vr C24H25N5O7 495,50 8,70 (5) 98% 496 1
440 0 1 ί^θ** UUL Η θο^ΛγΗ 0 Η J C25H27N5O7 509,52 9,96 (5) 98% 510 1
441 Ο Υ ι' θΒ m η ν ru θ η ” 1 UjU η ° C27H3‘N5O7 537,58 6,15(1) 98% 538 1
442 Ο ί-/^Ν ηΓ ί^ΟΗ Q-S Η ΟθΟ Η 5 Η Ο C21H22N4O7S2 506,56 10,10 (1) 98% 507 1
443 ο Χ^Β %ί4° ό C27H28N4O8 536,55 13,12 (1) 98% 537 1
150
190 330 ciąg dalszy tabeli
1 2 3 4 5 6 7
,,, 0 ϊ Γ^θΠ W 0 ν\Η ^CI θ fi 5 C2iH22Cl2'N2O7 9,90 (5) 98% 510 1
,,, 0 °Γωϊ Cnh Η °ο Ν 1ΓΗ Η 0 C1U22N6O7 ,μ,,ι 5,72 (1) 98% ,35 5
446 Ο ° (ή<Ί 2 ν η °ο*Λη Η 0 C17H26N6O7S 252,25 5,00(1) 98% ,53 1
424 ο ο ( 'Ώ θ mŹJ fi °o*hV ,s° ° o C22H27N5O9S 574,55 6,32 (1) 98% 538 IB
222 o ο^Ί ? 'NXJ H o >0 ° C^2H23N5θ2 515,53 ,,,, (1) 98% 516 1A
223 o ifNr hi I R °°VsH C25H20N^O2 510,51 13,20 (1) 98% 511 1
,50 o Pr^N1'! f^0H Y* H °O PJ YH VH ° 0 C27H27'N5θ2 501,50 6,10 (1) 98% 502 IA
451 o V ΟοΛνΛτη Α Η 0 C22H2oN45O2 242,24 8,02 (1) 98% 245 2
190 736
151 ciąg dalszy tabeli
1 2 3 4 5 6 7
452 O (-22^26^4(-)8 474,47 7,77 (1) 475 2
O ( ' N' 0 98%
Ń,
f OH
II T H O H Ah
1 O o
453 o C23 H24N4O 7 S 500,53 11,11 (1) 501 2
o \ 0 98%
| OH
θ_ s η o o KN H vH 0
454 o C(-H(3N5O7 445,44 6,24 (2) 446 2
N' O 98%
O \ Νγ
N 'OH
li J H N o λ O R VH
0
455 O C2|H(3eIN4O7 478,89 9,45 (1) 479 2
O ( rp nv 98%
XOH
(' J H o Λ yH
o ii
Cl H 0
456 o e(|H24N4O 8 460,45 5,58(1) (M+Na) 1
n' 0 98% 483
ίΖτ N ĄJ H o < o N H r °n YH 0
457 0 e28 2 28N,tO'- 580,56 10,42 (') (M+Na) 1
0 < ln. 0 98% 603
N -^OH
JUJ H ΰο H VH
°V) OH 0
458 O C2,H22F2N4O7 480,43 8,65 (1) 481,1 1
0 ( Nx 98%
P Jl X N,
f OH
H O h k z yh
O H o
459 O CdHjjCIFNąO 7 496,88 10,1 1 (1) 498,3 '
o ( 0 98%
ci^x y. Ń.
ΊιΓ N aoh
FV H 0 A O νλ H γΗ o
-90 73ciąk Solszy tobeli
1 2 3 4 5 6 7
4-0 0 C22 H26O 4—9S 522,54 -,-- (1) 523,- 1
0 i Ί 0 98%
\_χ
ys M*n Y f OH
H,C.J< ') 4 0 A νΛ^η
cA) 0 Π
4-- O C2ιa23FN4—7 4-2,44 7,4- (U 4-3,3 1
F 98%
hkJ
h I ait aoh
H OM yH
°8 0
4-2 O C2,a23FN4—7 4-2,44 7,7- (-) 4-3,3 1
98%
P ~ AJ
<Sr f OH
1 H Ol,/ YH
o W O
4-3 0 C21H23FN4O7 4-2,44 7,-4 (-) 4-4 1
N> 98%
nJ
Arr f OH
H % ° H VH O
4-4 O C^H^Cy^ .5-3,34 - -,59 (-) 4-4,5 1
0 \ N^l 98%
C,v^ λν^ N^J f OH
A. H θ A.. T.H
η N ° H O
4-5 0 C22a25ClN4—7 492,92 9,-5(-) 493,9 1
Hf 0 ( 0 98%
αΛ TN f CH
1 oKkJ VH
0 H O
4-- 0 C22a25<CIN4p7 492,92 9,-3 O 493,9 1
Hi n·) 98%
^hr ^OH
1 Cl H 0 A.J η N ° H VH O
4-7 O C23a24N4P8 484,47 7,73 O 485,8 1
0 \ N^j 0 98%
/^| r N f OH
c V0 H °JnJ ϋ H YH 0
190 736
153 ciąg dalszy tabeli
1 2 3 4 5 6 7
468 0 C26H26F 3N5O7S 609,59 14,84 (1) 609,7 1
n ! n' U 0 98%
° { N.
F z-\ s^. -4 Η H °J 1 1 0H ^ν\τη
F CHj 0 H O
470 0 C23H29N5O7 487,52 4,57(1) 489,5 1
/νΉ 98%
T N r OH
1 H 0 YH
0 H
M 0
H3C CHj
471 0 C23H29N5O7 487,52 5,74(1) 488,2 1
O ( nA 0 98%
Ν'Ρ i OH
h,c.,A H 0 A
3 0 P
H3C O
472 0 C22H25N5O7 471,47 4,00 (1) 474 1
0 L · I O 98%
f OH
M -<J H O^M- VH
θ Β O
473 0 C23H26NTO9 502,49 7,65 (1) 503,6 1
0 r Ν' f rA 1 98%
, H ° AU VH
0 ch3 ° H 0
474 O C23H26N4O8 486,49 7,16(1) 488,1 1
O UnN \ Ń_j 0 98%
YH (OH
H,cUl 1 0 Ł
0 f n
0 0
475 0 C23H25N5O7 787,79 9,77(1) 485,1 1
'ν'Ή 0 97%
/^r ''ν’ 'OH
/fyNH H 0 AMA η N ° H YH 0
476 0 C22H26N4Og 777,77 5,25(1) 475,8 1
h3C 0 0 98%
HOA | OH
1 0 AU VH
0 H O
154
190 736 ciąg dalszy tabeli
1 2 3 4 5 6 7
477 o CjóH 33N 5O9 559,58 4,76 (1) 561,8 1
nM YY 95%
'n*' A OH
hoV H °°V YH
O
O-Y
478 0 C^.HjsN^OęS 523,53 5,25(1) 524,3 1
0 ( 0 98%
IM r l\r |OH
H/iJJ (To H θ Akr- 0 H VH 0
479 0 C22H26N4IO8 474,47 5,35(1) 475,8 1
O i nM nY O 98%
f OH
ΗοΎΥ °A ° H YH O
480 0 C25H30N6O9 558,55 5,1' (1) 559,3 1A
h3cyo O l NM 0 98%
HN N, ) (OH
Ti U
HfjM O N Lh
h3c^o u H 0
481 0 C21H24CIN5O7 493,90 7,10(1) 495,1 1
0 \ N^| 98%
N*~ aoh
H θ Ay YH
H/4 η N ° H
Cl 0
482 0 C21H23G2N5O7 528,40 9,05 (1) 529,8 1
nM 0 98%
CLx\ ŃY
ΎΥ hT ( OH
.. . H ° A.,- YH
H?N Y 0 K
Cl o
483 0 C28H29N5O8 563,57 10,01 (1) 565,6 12
0 0 98%
0 MN f OH
0%v K °o%V H o
190 736
155
Prz/kład 12
Związki stanowiące szkielety (e 11), (y1), (y2), (z) i +12) można zsyntet/zowac jak opisano poniżej.
Synteza szkieletu R', gdzie R1 oznacza (p11) i gdzie Y2 oznacza =0
PhHjCOjC Cta,
HOjC locen I
OCH3
269
Synteza szkieletu R', gdzie R' oznacza (/1) i gdzie Y2 oznacza = 0
270
156
190 736
Synteza szkieletu R‘, gdzie R‘ oznacza (y2) i gdzie Y2 oznacza H2, zaś Χ7 oznacza O
Synteza szkieletu R‘, gdzie R‘ oznacza (y2) i gdzie Y2 oznacza =0, zaś Χ7 oznacza NH
HbCOjC
+
COjH
271
190 736
157
Synteza szkieletu R|, gdzie R) oznacza (y2) i gdzie Y2 oznacza H2, zaś Χ7 oznacza NH.
KjCOjC ho
h o X
Synteza szkieletu R|, gdzie R| oznacza (z) i gdzie Y2 oznacza O.
X = NHCbr X = OCHjPh
274 x7 = NH
275 χ7 „ o
158
190 736
Synteza szkieletu R‘, gdzie R‘ oznacza (e 12) i gdzie Y2 oznacza =0
-isrX'CO2CH2Ph l-BuONhfe _„ t-BuO
C^ChfePh
276
277
Przykład 13
Wytwarzanie związków 2001, 2002, 2100a-e i 2201 opisano poniżej.
2001
190 736
159
Kwas (1 S^Sj^-benzoiloform/loamino-ó, 10-diokso-1,12,3,4,7,8,9,10-oktahydro-6H-pirydazyno[ 1,2-a][ 1,2 ]diazepino -1 -karboksylowy (2000)
Do roztworu 9-amino-6,10-diokso-1 ,,2,3,4,7,8,9,10-oktah/dro-6H-pirydaz/Ko[ 1,2-a]-[1,2]diαzeplno-i-kαęboksylαnu t-butylu (GB 2 128 984; 340 mg, 1,15 mmol) w Ch2G2 dodano kwas benzoilomrówkowy (260 mg, 1,7 mmol), HOBT (230 mg, 1,7 mmol) 1 EDC (340 mg, 1,7 mmol). Powstałą mieszaninę mieszano w temperaturze otoczenia przez 16 godzin, wylano do 1N HCl i ekstrahowano CH 2G2. Następnie ekstrakty organiczne przemyto nasyconym roztworem NaHCO3, osuszono nad MgSO4 i zatężono otrzymując 1999 jako bladożółte ciało stałe Ciało stałe rozpuszczono w CH2G2 (25 ml) oraz TFA (25 ml) 1 mieszano przez noc i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem otrzymując 560 mg 2000 jako olej.
[ 1 S,9S(0RS,3S)]-9-Beκzollofoęmyloamlκo-6,10-diokso-1,2,3,4,7,8,9,10-oktah/dro-N-2(R,S)-beκzyloke/-5-okeotetrahydrofuraκ-3-ylo)-6H-plrydaz/κo[ 1,2-a] [ 1,2]-diazepmo-1 -karboksamid (2001) zsyKtetyzowano z 2000 metodami podobnymi do związku 213e, otrzymując 410 mg (63%) 2001 jako białe ciało stałe;
Ή NMR (CDCh; mieszanina diasteępomerów) δ 8,25 (1H, d), 8,23 (1H, d), 7,78 (1H, dd), 7,65 (1H, bm), 7,50 (2H, m), 7,40-7,25 (4H, m), 6,55 (1H, d), 5,57 (1H, d), 5,10 (1H, t), 5,05-4,95 (2H, m), 4,90, (1H, d), 4,80 (1H, d), 4,72 (1H, bm), 4,65 (1H, m), 4,55 (1H, m), 4,45 (1H, t), 3,25 (1H, m), 3,15 (1H, m), 3,00 (2H, bm), 2,90 (1H, dd), 2,70 (1H, m), 2,47 (1H, dd), 2,45 (1H, m), 2,35 (1H, m), 2,00-1,75 (4H, m), 1, 60 (1H, bm)
Kwas [3S( iS,9S)]-3-(9-beκzollofoęmyloamiκo-6,10-diokso-1,2,3,4,7,8,9,10-oktah/dro^H-pirydaz/KC^ 1,2-a] [ 1,2]-diazepino-1 -karboksamido^-oksobutanowy (2002).
Związek 2001 (58,6 mg, 0,10 mmol) potraktowano 15 ml TFA/MeCN/wody (12 3) i mieszano w temperaturze pokojowej przez 6,5 h. Reakcję ekstrahowano eterem Warstwę wodną zatężono przy azeotropowym usuwaniu wody przy użyciu MeCN. Produkt zawieszoKo w CH2G2, zatężono pod rmnipjsroκ/m ciśnieniem 1 strącono eterem otrzymując 46,8 mg (99%) 2002 jako białe ciało stałe;
'H NMR (CD3OD) 8 9,05 (0,25H, d), 8,15 (1H, d), 7,68 (1H, t), 7,64 (0,25H, d), 7,55 (3H, t), 7,35 (0,5H, m), 5,22 (1H, t), 4,90 (1H, m), 4,58 (1H, dd), 4,50 (1H, m), 4,28 (1H, bm), 3,45 (1H, m), 3,10 (1H, bt), 2,68 (1H, ddd), 2,60-2,45 (2H, m), 2,30 (1H, dd), 2,15-2,05 (2H, m), 1,90 (2H, bm), 1,68 (1H, bm).
[ 1 S,9S(2RS,35)]-9-Bρnzcilamlno-6,10-diokso-1,2,3,4,7,8 ,-9,10-cktah/dęo-N-(2-iropęopcksy~5-okso-tetrahydrcfuęaκ-3-ylo)-6H-pirydazyκo-[l,2-a][ i,2]diazepino-1-kaębokeamid (2100a)
Roztwór 214e (101 mg, 0,23 mmol) w ^propanolu (10 ml) mieszano w temperaturze pokojowej z katalityczną ilością kwasu p-tolupnosulfcκcwpgc (10 mg) Po 75 minutach mieszaninę reakcyjną wylano do nae/ccκpgc roztworu NaHCO3 1 ekstrahowano CH2G2 Połą160
190 736 czone ekstrakty osuszono nad Na2SO4 i zatęzono. Chromatografia rzutowa (SiO2, CH2Cl2 do EtOAc) dała 56 mg (51%) 2100a jako białe ciało stale;
‘H NMR (CDCl.; mieszanina diastereomerów) δ 7,9-7,8 (2H, m), 7,6-7,5 (iH, m), 7,5-7,4 (2H, m), 7,i (0,5H, d), 6,9 (0,5H, d), 6,4 (0,5H, d), 5,6 (0,5H, d), 5,3 (0,5H, s), 5,2-5,' (iH, m), 4,95 (0,5H, m), 4,75-4,5 (i,5H, m), 4,35 (0,5H, t), 4,i (0,5H, m), 3,98 (0,5H, m), 3,3-2,75 (4H, m), 2,5-2,4 (2H, m), 2,25 (iH, m), 2,1-1,9 (3H, m) 1,75-1,55 (2H, m)
Ester etylowy kwasu [3S(iS,9S)]-3-(9-benzoiloformyloamino-6,10-diokso-1,2,3,4,7,8.9.10- oktahydro-6H-pirydaz.yno-[ 1,2-a] [ 1,2]-diazepino-1 -karboksamido)-4,4-dietoksymasłowego (2100b).
Roztwór 214e (16 mg, 0,036 mmol) w etanolu (2 ml) mieszano w temperaturze pokojowej z katalityczną ilością kwasu p-toluenosulfonowego (2 mg). Po 5 dniach mieszaninę reakcyjną wylano do nasyconego roztworu NaHCO3 i ekstrahowano CH2Cl2. Połączone ekstrakty osuszono nad Na2SO4 i zatęzono. Chromatografia rzutowa (SiO2, CH2Cl22:EtOAc 95.5 obj.) dała 16 mg (81%) 2100b jako białe ciało stałe;
‘H NMR (CDCla) δ 7,85-7,74 (2H, m), 7,55-7,38 (3H, m), 7,04-6,95 (1H, d), 6,61-6,48 (1H, d), 5,15-5,08 (1H, m), 4,63-4,53 (1H, m), 4,52-4,45 (1H, m), 4,42-4,35 (1H, m), 4,15-4,05 (2H, m), 3,74-3,60 (2H, m), 3,57-3,42 (2H, m), 3,39-3,28 (1H, m), 3,03-2,93 (1H, m), 2,92-2,82 (1H, m), 2,65-2,52 (2H, m), 2,42-2,25 (1H, m), 2,20-1,88 (4H, m), 1,76-1,50 (2H, m), 1,35-1,10 (9H, m).
Ester metylowy kwasu [3S(1S,9S)]-3-(9-benzoiloformyloamino -6,10-^ioks<^^‘,2,3,4,7.8.9.10- oktahydro-6H-pitydazyno-[i,2-a][1,2]-diazepino-1-karboksamido)-4,4-dimetoksymasłowego (2100c).
Roztwór 214e (165 mg, 0,37 mmol) w metanolu (5 ml) mieszano w temperaturze pokojowej z katalityczną ilością kwasu p-toluenosulfonowego (17,5 mg). Po 4 dniach mieszaninę reakcyjną rozcieńczono EtOAc i przemyto 10% NaHCO3 (3 x) i solanką. Połączone ekstrakty osuszono nad Na2SO4 i zatęzono Chromatografia rzutowa (SiO2, EtOAc) dała ‘27 mg (68%) 2100c jako białe ciało stałe;
‘H NMR (CDCl.) 5 7,82 (2H, d), 7,55-7,50 (1H, m), 7,47-7,43 (2H, m), 7,02 (1H, d), 6,53 (1H, d), 5,2o-5,10 (1H, m), 4,56-4,50 (1H, m), 4,45-4,50 (po 1H, dwa m), 3,69 (3H, s), 3,41 (3H, s), 3,43 (3H, s), 3,35-3,25 (1H, m), 3,06-2,98 (1H, m), 2,94-2,83 (1H, m), 2,65-2,53 (2H, m), 2,35-2,32 (1H, m), 2,15-2,07 (1H, m), 2,00-1,89 (3H, m), 1,75-1,56 (2H, m).
Ester izopropylowy kwasu [3S(lS,9S)]-3-(9-benzoiloformyloamino-6,i0-dlokso-1,2,3,4.7.8.9.10- oktahydro-6H-pirydazyno-[ 1,2-a] [ 1,2]-diazepino-1 -karboksamido)-4,4-diizopropoksymasłowego (2100d)
Roztwór 214e (53 mg, 0,12 mmol) w izopropanolu (5 ml) mieszano w temperaturze 50°C z katalityczną ilością kwasu p-toluenosulfonowego (5 mg) Po 3 dniach mieszaninę reakcyjną wylano do nasyconego roztworu NaHCO3 i ekstrahowano CH2Cl2 Połączone ekstrakty osuszono nad Na2SO4 i zatęzono. Chromatografia rzutowa (SiO2, CH2Cl2 EtOAc (4 ‘ do 1 1 obi.)) dała 49 mg (68%) 2W0d jako białe ciało stałe;
Ή NMR (CDCl.) 8 7,85 (2H, d), 7,50-7,43 (1H, m), 7,41-7,35 (2H, m), 7,02 (1H, d), 6,47 (1H, d), 5,13-5,07 (1H, m) 5,00-4,9 (1H, m), 4,61-4,55 (2H, m), 4,37-4,30 (1H, m), 3,80-3,70 (1H, m), 3,90-3,80 (1H, m), 3,42-3,35 (1H, m), 3,03-2,93 (‘H, m), 2,91-2,81 (1H, m), 2,62-2,50 (2H, m), 2,38-2,33 (1H, m), 2,12-2,06 (1H, m), 1,97-1,81 (3H, m), 1,70-1,60 (2H, m), 1,28-1,05 (18H, m).
19( 736
161
[1S,9S(2RS,3S)]-9-Benzoiloamino-6,10-diokso-1,2,3,4,7,-8,9,10-oktahydro-N-(2-etoksy-5-okso-tetrahydrofuran-3-ylo)-6H-pirydazyno[ 1,2-a] [ 1,2]-diazepino-1 -karboksamid (2100e) zsyntetyzowano z 302 sposobami użytymi do zsyntetyzowania 304a, z tym wyjątkiem, ze zastosowano etanol i ortomrówczan trietylu zamiast metanolu i ortomrówczanu trimetylu, otrzymując 2100e. Chromatografia (SiO2, 5% etanol/ CH2O2) dała 92 mg (68%) białego ciała stałego;
*H NMR (CDCh; mieszanina diastereomerów) 7 7,90-7,80 (2H, m), 7,60-7,50 (1H, m),
7.50- 7,40 (2H, m), 7,30 (0,5H, d), 7,00 (0,5H, d), 6,50 (0,5H, d), 5,50 (0,5H, d), 5,20-5,10 (1,5H, m), 4,95 (0,5H, m), 4,75-4,65 (0,5H, m), 4,65-4,50 (1H, m), 4,38 (0,05H, t), 4,00-3,90 (0,5H, m), 3,85-3,75 (0,5H, m), 3,75-3,65 (0,5H, m), 3,65-3,55 (0,5H, m), 3,30-2,70 (4H, m),
2.50- 2,35 (2H, m), 2,30 (1H, d), 2,15-1,90 (3H, m), 1,80-1,60 (2H, m), 1,25-1,20 (3H, dwa t).
iOOb
Kwas (3S)-3-[(3S)-2-okso-3-(1-naftoilo)amino-5-metoksy-acetylo-2,3,4,5-tetrahydro-1H-1,5-benzodiazepino-1-acetyloamino]-4-oksomasłowy (2201) zsyntetyzowano z 600b sposobami zastosowanymi do zsyntetyzowania 605b, otrzymując 2201;
'H NMR (CDCh) 7 8,30-8,22 (1H, m), 8,05-7,98 (1H, d), 7,96-7,83 (1H, m), 7,77-7,68 (1H, m), 7,67-7,40 (7H, m), 5,12-5,02 (1H, m), 4,98-4,41 (5H, m), 4,38-4,24 (1H, m), 4,07-4,00 (1H, d), 3,92-3,80 (2H, m), 3,32 (3H, s), 2,75-2,60 (1H, m), 2,58-2,35 (1H, m).
Przykład 14
Dla wybranych związków według niniejszego wynalazku stosując opisane tu sposoby otrzymaliśmy następujące dane (tabela 4, patrz przykład 7; tabele 5 i 6, patrz przykłady 1-4) Struktury 1 wytwarzanie związków według niniejszego wynalazku opisano w przykładach 24-26.
Tabela 4
Czas podania związku (względem czasu prowokowania LPS, PO, 50 mg/kg)
Związek - 2h - 1h Oh + 1h
1 2 3 4 5
213f (-4) - 8 -
213h 9 - 53 -
213i (-11) - 62 -
213k 0 - 68 -
2131 (-18) - 80 -
213m 26 - 42 -
213o 4 - 8 -
213p 21 - 29 -
213q 17 - 91 -
213 r 59 - 37 -
213x 0 - 78 -
213y 29 - 50 -
162
190 330 ciąg dalszy tabeli
1 2 3 4 5
214e 39 - 70 75
43 ,, 48 11
- - - 47
214k 12 - 31 -
2141 0 - 5, -
21,πι 0 - 17 -
214w 11 - 91 -
2641 0 - 23 -
,ϋ, - - - 56
55 - 6 -
,12 0 - 0 -
11 - 37 -
- - -
25 - 52 -
,β, - - - 80
0 - 63 -
,50 0 - 35 -
,52 - - - 70
28 - 89 -
- - - 56
,1 - 69 -
240 0 - 36 -
4^1 0 - 34 -
245 0 - 15 -
481 27 - 0 -
220 19 - 15 -
224 17 - 20 -
528 25 - 67 -
550f 0 - 50 -
550h 55 - 73 -
550ι (-10) - 23 -
550k 36 - 34 -
550^1 9 - 38 -
550m ,5 - 52 -
550n 19 - 65 -
550o 19 - 64 -
550p 30 - 60 -
190 736
163 ciąg dalszy tabeli
1 2 3 4 5
1015 15 - 28 -
2001 64 62 58 55
200 la 10 - 16 -
2002 5 - 87 -
21 OOh 34 - 32 -
2100 i 19 - 74 -
2IOOk 30 50 32 72
21001 52 - 28 -
2100m 40 - 42 -
2l00n 21 9 64 73
2100o 31 44 68 64
Porównanie proleków na skuteczność u myszy prowokowanych LPS Hamowanie wytwarzania IL-lb Procent hamowania wytwarzania IL-lb po leczeniu związkiem według wynalazku pokazano jako funkcię czasu po prowokowaniu LPS wskazuje, ze w odpowiednim czasie nie otrzymano zadnei wartości)
Tabela 5
Dane dla wybranych związków według niniejszego wynalazku otrzymano stosując sposoby opisane w przykładach I -4
Związek UV-Vis Ki (nM) PBMC komórkowe średnio IC50 (nM) Krew ludzka pełna ICso (nM) Klirens mysz, dożylnie ml/min/kg Klirens szczur, dożylnie ml/min/kg
1 2 3 4 5 6
213f 3000
213g 2200
213h 1500
213i 1100
213j
213k 2000
2131 2000
213m 2500
213o 5000 3300
213p < 300
2I3q < 300
213r < 300
213v 0,5 1,100 1100 41 23
213x 4,5 2,5
213y 930
164
190 736 ciąg dalszy tabeli
1 2 3 4 5 6
214j 4,2 2500 6000
214k 0,2 500 580 22
2141 6 1900 1100 12
214m 1,5 530 2200 33,4
214w 0,6 620 370 15
246b 30000 > 30000 87
2641 3000
265a 2600 25000
265c 1100 4500 32
265d 500 1500 35
265f 1200 24
308c 3000
500 25 1800 1800
501 2,5 1800 1600
528 2200
550f 1100
550h 1800
550i 1400
550k 3000
5501 750
550m 2000
550k <300
550o 450 3000
550p 2900
550q 700
1018 170 4000 5500 9,1
1052 100 2500 16
1053 27 2000 > 20000 34
1056 170 17
1075 120 5000 5500 14,5
1095 360 6000 28
1105 250 3500 3000
1106 75 4000 1700
190 736
165 ciąg dalszy tabeli
1 2 3 4 5 6
1107 65
1108 22 1400 2600
1109 80
1110 45
1111 18 6050 4400
1112 3,5 1800 2300
1113 290
1114 125
1115 250
1116 215
1117 35 1700 1300
1118 380
1119 515
1120 95
1121 170
1122 400
1123 30 2,400 4500
1124 270
1125 55 2300 9000
200 1a 3000
2100f
2100g
2100h 2000
2100i
2100j 30000 12000
2100k 520 4000
2100l 750 2200
2100m
2100n 670 770 4000
2100o 670 1150 1500
Dla wybranych związków według niniejszego wynalazku stosując opisane tu sposoby (patrz przykłady 1-4) otrzymaliśmy następujące dane (tabela 6). Struktury i wytwarzanie związków według niniejszego wynalazku opisano w przykładach 24-26
---90 73Tabela 6
Związek OoooyocoiC fluoucsycoyyyoc kiroci m S PBMC komórkowe średnio ICW (nM) Krew ludzko pełno ICM (-M) Klireos mysz, dożylnie ml/mio/kk Klireos szczur, dożylnie ml/min/yg
28- 370000 300 -600 --9
-90000 -500 2-00 --- -9-
505, 420000 9000 -000
Przykład -5
Test ostry in vivo oo rkrtecz—ość jako środko przeciwzouolneoz
Wyniki w tobeli 7 pokazują, ze 412f, 412d i 696a homują wytworzo-le IL-Ιβ r myszy prowokowa—ych LPS po UzSaoiy Soust-ym przy użyci- etonolr/PEG/aoSy, β-cyylodeystiy-riy, labrorzlr/aoSy lub yremofory/wzSy joko nośników. Związek Saakoaano w chwili urzwzkowaolo LPS. ProceSyre zpirooz w przykładzie 7.
T o b z i o 7
Homowooiz (%) wytworzono IL--β u myszy prowoyowooyyh LPS
Związek Sowio - 0 mg/ kg Sowio 25 mg/kg Sowko 50 mg/kg
4-2f -7% 25% 32%
4-2e 5% -7% --%
Przykład -Zauole—ie otrzewnej - myszy wywoływane karageri—ą
Zapalenie i-Sukowo-o - myszy śródtrzewoową iniekcją (IP) -0 mg karage—l—y w 0,5 ml roztworu roli (GrirwolS i la., Ioflammotlor, -3, rtr. 727-739 (-989)). Leki uoSaje siy urzes zołebniy Sorst—y w nośnik- etonol/PEG/wodo, β-cayloSekstry—o, lonrorol/aoSo lub kremofor/woSa Myszy -śmierco-o 4 goSzl—y po ^^0-1- karage-i-y, -ortyprie astrzyy—leto śróStrsew—owo 2 ml roztworu soli zawierającego 5 U/ml heparyny Po łagodnym masożr otrzewnej ronio—o mołe —ociecle, zowortość zebroro i zoulsoao onjetość. Próbki trzymano w lodzie oż do oSwirowoaio (-30 x g, 8 mi—rt w 4°C) w celu -s-mycio materiał- komórkowego i otrzymany rruemoto—t przechowywano w -20°C. Poziomy IL--P w pły—le otrzewnowym os—oczo—o metodą ELISA.
Wy-iki w tabeli 8 uokozuja, że prolek 412f hamuje wytwarzanie IL--P - myszy urowokowanych korogeniną po Sorrtoym poSo—ir lekr. Związek 214e nie homowoł wytworzoalo IL--P, gdy był dowkowooy doustnie w ilości 50 mg/kg.
Tabela 8
Homowoniz (%) wytworzono IL--P uroco 412f i 4kZS u myszy puowoyowooyyh koroocnoą
Dowio (mg/kg) Związek 4- 2f Związek 4-2S
- 30% 0
-0 54% 32%
25 49% 3-%
50 73% 3-%
-00 75% 53%
190 736
167
Przykład 17
Zapalenie stawów indukowane kolagenem typu II
Zapalenie stawów indukowane kolagenem typu II wywołano u samców myszy DBA/1J, jak opisali Wooley i Geiger (Wooley, P. H., Methods in Enzymology, 162, str. 36l-373 (1988) i Geiger, T., Clmical and Expezimeot6l Rheumato^igy, 11, str. 515-522 (1993)) Kolagen typu II z mostka kurczęcia (4 mg/kg w 10 mM kwasie octowym) emulgowano z równą objętością kompletnego 6diuw6ot6 Freunda (FCA) metodą powtarzanych przejść (400) między dwiema strzykawkami szklanymi 10 ml z igłą o dwóch gniazdach rozmiar 16. Myszy immunlzow6oe przez doskómą iniekcję (50 pl; 100 ul CII na mysz) emulsji kolagenu w 21 dni później przy przeciwnej stronie podstawy ogona. Leki podawano dwa razy dziennie (10, 25 i 50 mg/kg) zgłębnikiem doustnym w przybliżeniu po 7 godz. Stosowane nośniki obejmowały etanol/PEG/wodę, β-aykledekstzyoę, labrosol/wodę lub kremofor/wodę Leczenie rozpoczynano w ciągu 2 godz. od immunizacji wspomagającej CII Zapalenie oceniano w skali 1 do 4 wzrastającego zaawansowania stanu dwóch przednich łap i oceny dodano uzyskując ocenę końcową.
Wyniki na fig. 12 i 13 pokazują, ze proleki 412f i 412d hamują zapalenie przy zapaleniu stawów indukowanym kolagenem u myszy po podaniu doustnym. Związek 214e nie hamował zapalenia, gdy był dawkowany (50 mg/kg) raz dziennie zgłębnikiem doustnym
Przykład 18
Oznaczanie biodostępności in vivo
Leki (10-100 mg/kg) dawkowano doustnie szczurom (10 ml/kg ) w etanolu/PEG/wodzie, β-aykledeketzyoie, labrosolu/wodzie lub kremefer8e/wod8ie. Próbki krwi pobierano z tętnicy szyjnej w 0,25, 0,50, 1, 1,5, 2, 3, 4, 6 i 8 godzin po dawkowaniu, odwirowywano do osocza i przechowywano w -70°C do analizy. Stężenia aldehydów oznaczano stosując oznaczenie enzymatyczne. Analizę farmakokinetyi^ną danych przeprowadzono metodą regresji nieliniowej stosując RStrip (MicroMath Software, UT). Wartości dla dostępności leku oznaczano jak następuje: (AUC leku po doustnym dawkowaniu proleku/AUC leku po dożylnym dawkowaniu leku) x (dawka dożylna/dawka doustna) x 100 %.
Wyniki w tabeli 9 pokazują, że proleki 412f i 412d dają znaczące zawartości leku we krwi i mają dobrą dostępność leku przy dawkowaniu doustnym. Zawartości 214e we krwi nie były wykrywane przy jego dawkowaniu doustnym.
Tabela 9
Biodoetępoość przy podawaniu doustnym 402f, 402d i 204e u szczura
Związek Dawka (mg/kg) Cmax (ug/ml) Dostępność leku (%)
412f 25 2,4 32
412d 25 2,6 35
214e 45 0,2 0,9%
Przykład 19
ICE tnie i aktywuje pro-IGIF
Plazmidy ekspresyjne wyrażające ICE i homolog ICE cDNA wielkości 0,6 kb kodujący mysi pro-IGIF pełnej długości (Okamura H. i in., Nature, 378:88 (1995)) poddano ligacji ze kaczym wektorem ekspresyjnym pCDLSRa (Takebe Y. i in , Mol. Celi Biol., 8· 466 (1988)).
Zwykle, plazmidy (3 pg) kodujące aktywny ICE (wyżej) albo trzy enzymy pokrewne z ICE, TX, CPP32 i CMH-1 w wektorze ekspresyjnym pCDLSRα (Faucheu C. i in , EMBO J., 14: 1914 (1995); Gu Y i in., EMBO J., 14: 1923 (1995); Lipke J. A. i in., J. Biol. Chem.. 271. 1825 (1996)) transfekew6ne do prawie zlewnych jednowarstw komórek Cos w 35 mm szalkach stosując metodę z dekstranem-DBAE (Gu Y i in., EMBO J., 14: 1923 (1995)) 24 godziny później komórki poddano lizie, zaś lizaty poddano SDS-PAGE i przeprowadzono immuoebletting stosując surowicę odpornościową skierowaną przeciwko IGIF (Okamura H. i in. Nature, 378: 88 (1995)).
168
190 736
Reakcję łańcuchową polimerazy zastosowano w celu wprowadzenia miejsc Ndel na końcu 5' i 3' mysiego cDNA dla pro-IGIF, stosując następujące startery:
GGAATTCCATATGGCTGCCATGTCAGAAGAC (lewy) i
GGTTAACCATATGCTAACTTTGATGTAAGTTAGTGAG (prawy).
Uzyskany fragment NdeI poddano ligacji do wektora ekspresyjnego E. coli pET-15B (Novagen) w miejscu Ndel w celu wytworzenia plazmidu kierującego syntezą polipeptydu o 213 am1nokwnsach,obcjmujecngo peptyp o 21 ro sz1ach (MG SMHHHHHHHSGLyPRGSHM. gdzie LVPRGS stanowi miejsce cięcia trombiny) sfu/owanego w ramce odczytu z końcem N pro-IGIF przy Ala2, co potwierdzono sekwencjoncwanicm DNA plazmidu oraz sekwcncjcnowaniem końca N wytworzonego w wyniku ekspresji białka. Szczep E. coli BL21(DE3) niosący plazmid indukowano 0,8 mM i/opropylo-1-tlc-β-D-palaktcpirano/ydcm przez 1,5 godziny w 37°C, zebrano i poddano lizie przez mikrofluidyzację (Microfluidic, Watertown, MA) w Buforze A (20 mM fosforan sodu, pH 7,0, 300 mM NaCl, 2 mM ditiotreitolu, 10% gliceryna, 1 mM fluorku fenylometylcsulfonylu i 2,5 pg/ml leupeptyny). Lizaty sklarowano przez odwirowanie przy 100000 g przez 30 minut Białko pro-IGIF znakowane (His) 6 oczyszczono z supematantu przez chromatografię na agaro/ielNi-NTA (Qiagen) w warunkach zalecanych przez producenta.
Reakcje cięcia pro-IGIF in vitro
Mieszaniny reakcyjne do cięcia in vitro (30 pl) zawierały 2 pg oc/yszczonegc pro-IGIF i różne stężenia oczyszczonych proteaz w buforze zawierającym 20 mM HEPES, pH 7,2, 0,1% Triton Χ-1001, 2 mM DTT, 1 mM PMSF i 2,5 pg/ml leupeptyny i inkubowano przez godzinę w 37°C. Warunki cięcia granzymem B były takie jak opisane uprzednio (Gu Y i in., J. Biol. Chem., 271: 10816 (1966)). Produkty cięcia analizowano przez SDS-PAGE na 16% zelu i barwiono błękitem eoomassie, poddano je sekwencjonowaniu od N końca na automatycznym sekwenatorze peptydów ABI w warunkach zalecanych przez producenta
Parametry kinetyczne cięcia IGIF przez ICE
Parametry kinetyczne (kcat/KM, Kn i kcat) dla cięcia IGIF przez ICE cznaczonc w następujący sposób. Pro-IGIF znakowany 35S-metioniną (3000 cpm, wytworzoną przez transkrypcję i translację in vitro z użyciem układu lizatu retikulocytów sprzęgniętego z TNT T7 (Promega) i cDNA pro-IGIF w wektorze pSP73 jako matrycy) inkubowano w 60 pl mieszaniny reakcyjnej zawierającej 0,1 do 1 nM rekcmbinowanego ICE i 190 nM do 12 pM me/nakcwancgo pro-IGIF przez 8-10 minut w 37°C. Stężenia produktów cięcia oznaczono przez SDS-PAGE i analizę urządzeniem Phospolmager . Parametry kinetyczne obliczono przez dopasowanie regresją nieliniową szybkości w stosunku do stężenia w równaniu MichaclisalMcntcπa stosując program En/fitter (Bicscft)
Test indukcji IFN-γ
Komórki Thl A.e7 (Quill H i Schwartz RH, J. Immunol., 138: 3704 (1987)) (1,3 x 105 komórek w 0,15 ml pożywki Click'a z dodatkiem 10% FBS, 50 pM 2-merkaptcetanolu i 50 jednostek/ml IL-2) w 96-stud/ienkohej płytce traktowano IGIF przez 18-20 godzin i badano nadsącz na obecność IFN-γ przez ELISA (Endcpen, Cambridge, Ma).
Przykład 20
Obróbka pro-IGIF przez ICE w komórkach Cos
Komórki Cos transfekowano różnymi kombinacjami plazmidów ekspresyjnych, jak to opisano w przykładzie 23. Transfekowane komórki Cos (3,5 x 105 komórek w 35 mm szalce) znakowano przez 7 godzin 1 ml pożywki DMDM bez metioniny, zawierającej 2 5% normalny DMEM, 1% dializowanej surowicy płodowej bydlęcej i 300 pCi/ml 3:’S-meticninγ (35S-Express Protein Labeling-Mix, New England Nuclear) Lizaty komórkowe (wytworzone w 20 mM HEPES, pH 7,2, 150 mM NaCl, 0,1% Triton Χ-100, 5 mM N-etylomaleimidu, mM PMSF, 2,5 pg/ml leupeptyny) albo kcndγ(jcncwaną pożywkę, immunoprc(γpitohaπc przeciwciałem przeciwko IGIF, które rczpo/nawałc zarówno prekursor, jak i postać dojrzałą IGIF (Okamura H. i in., Nature, 378 88 (1995)). Immuncpre(γpitowanc białka analizohanc przez SDS-PAGE i fluorografię (fig. 2A).
Zmier/onc również obecność aktywności indukującej IFN-γ w lizacach knmkckhwych oraz w kcndγcjoncwanych pożywkach transfekowanych komórek (fig 2B) Transfekowane komórki Cos (3,5 x 105 komórek na szalkę 35 mm) hodowano w 1 ml pożywki przez 18 go19( 736
169 dzin. Pożywkę zebrano i zastosowano w rozcieńczeniu końcowym 1:10 do testu indukcji IFN-γ (przykład 23). Osad komórek Cos z tej samej transfekcji poddano lizie w 100 μl 20 mM Hepes, pH 7,0, przez trzykrotne zamrożenie i odmrożenie. Lizaty sklarowano przez odwirowanie jak to opisano wyżej i zastosowano w teście w rozcieńczeniu 1. 10.
Przykład 21
IGIF jest fizjologicznym substratem ICE
Myszom typu dzikiego (ICE+/+) i (ICE-/-) podawano P. acne inaktywowane ciepłem, po czym izolowano komórki Kupffera w 7 dni po podaniu, poddano je ekspozycji na 1 gg/ml LPS przez 3 godziny. Ilości IGIF w kondycjonowanej pożywce zmierzono metodą ELISA.
Myszom typu dzikiego oraz z niedoborem ICE wstrzyknięto dootrzewnowo P acne zabite ciepłem, jak to opisano (Okamura H. i in., Infect. Immunity 63: 3966 (1995)). Komórki Kupffera wyizolowano w 7 dni później, zgodnie z metodą Tsutsui H. i in., Hepato-Gastroenterol.. 39: 553 (1992)) z taką różnicą, ze zamiast gradientu cf metrizamidu zastosowano gradient nycodenz. W każdym doświadczeniu, komórki Kupffera od 2-3 zwierząt łączono i hodowano w RPMI 1640 z dodatkiem 10% surowicy płodowej cielęcej i 1 gg/ml LPS. Lizaty komórek i kondycjonowaną pożywkę przygotowano 3 dni później
Komórki Kupffera od myszy typu dzikiego i ICE-/- znakowano metabolicznie 35S-metioniną jak komórki Cos (opisane w przykładzie 24) z takim wyjątkiem, ze zamiast DMEM zastosowano RPMI 1640 pozbawioną metioniny. Doświadczenia nad immunoprecypitacją wykonywano na lizatach komórkowych i kondycjonowanych pożywkach, a immunoprecypitaty analizowano metodą SDS-PAGE i fluorografii, jak opisano w przykładzie 19, patrz fig. 3.
Przykład 22
Indukowanie produkcji IFN-γ in vivo
LPS zmieszany z 0,5% karboksymetylo)elulo/ą w PBS, pH 7,4, podano myszy przez wstrzyknięcie dootrzewnowe (30 mg/kg LPS) w objętości 10 ml/kg. Krew pobierano co 3 godziny przez 24 godziny od grup po 3 myszy typu dzikiego i z niedoborem ICE. Poziom IFN-γ w surowicy określano metodą ELISA (Endogen).
Przykład 23
Testy zahamowania IGIF i IFN-γ
Zahamowanie obróbki IGIF przez inhibitory ICE mierzono w teście zahamowania ICE, jak opisano powyżej (patrz przykład 1 i tabela 10).
Test z ludzkimi PBMC
Ludzkie komórki kożuszków leukocytamych uzyskane od dawców krwi i jednojądrzaste komórki krwi obwodowej (PBMC) wyizolowano przez odwirowanie w probówkach Leuko-Prep (Becton-Dickinson, Lincoln Park, NJ). PBMC dodano (3 x 106/studzienkę) do 24-studz.ienkowej płytki do hodowli tkankowej Corning i po 1 godzinie inkubacji usunięto nieprzylegające komórki przez delikatne płukanie. Komórki przylegające pobudzano LPS (1 μg/ml) z lub bez inhibitora ICE w 2 ml RPMI-1640-10% FBS. Po 16-18 godzinach inkubacji w 37OC, IGIF i IFN-γ oznaczano ilościowo w supernatancie hodowlanym metodą ELISA.
Przykładowo, uzyskano następujące dane dla związku 412 według wynalazku stosując opisane tu sposoby. Strukturę związku 412 pokazano poniżej.
Tabela ‘0
Związek K.1 (nM) w UV-widzialnym Średnia wartość 1C5( (nM) dla PBMC
412 1,3 580
170
190 736
Przykład 24
Związki według niniejszego wynalazku można wytworzyć rozmaitymi sposobami. Poniżej przedstawiono korzystny sposób.
Do roztworu A (1,1 równowazn.) w CHCT (lub DMF, lub CH2G2 DMF (1:1)) dodano trifenylofosfinę (0-0,5 równowazn.), κuklpcfilcwy zmiatacz wolnych rodników (2-50 równowazn.) i tetęakls(trifenylofbefma)pallad(0) (0,05-0,1 równowazn.) w temperaturze otoczenia w atmosferze obojętnej (azot lub argon). Po 10 minutach powyższą mieszaninę reakcyjną ewentualnie zatęza się, następnie dodaje roztwór kwasu A-I w CH2G2 (lub DMF, lub CH2Ch:DMF (1:1)), a następnie HOBT (1,1 równoważn.) i EDC (1,1 równoważn.). Powstałą mieszaninę reakcyjną zostawia się mieszając w temperaturze otoczenia przez 1 godzinę - 48 godzin, z wytworzeniem produktów sprzężonych C-I.
W powyższym procesie można użyć rozmaitych nukleofilowych zmiataczy wolnych rodników. Merzouk i Guibe, Tetrahedron Letters, 33, str. 477-480 (1992); Guibe i Balayoine, Journal of Organie Chemistry, 52, str. 4984-4993 (1987)). Korzystne nuklpcfllcwp zmiatacze woln/ch rodników, których można uz/ć, obejmują: dimedon, morfolinę, tęimptylceilllcdimρtylcamiκn i kwas dlmptylobarbiturowy. Bardziej korzystnymi nuklρcfiłcwymi zmiataczami wolnych rodników są trlmpt/losllilcdimetyloαmlnα (2-5 równowazn.) i kwas dimetylobarbiturowy (5-50 równowazn.). Gdy nuklpcfilowym zmiataczem wolnych rodników jest trlmetylceililcdimptyloamiκa, powyższą mieszanina reakcyjna powinna zostać zatężona przed dodaniem A-I.
Ikkp związki według niniejszego wynalazku można wytworzyć metodą hydrolizy związków oznaczanych przez C-I do związków oznaczanych przez H-I, jak opisano na następującym schemacie:
Hydrolizę można prowadzić w rozmaitych warunkach, o ile te warunki obejmują kwas i H2O. Kwasy, których można uzyć obejmują kwas p-tolueKosulfonowy, metaκosulfonoyy, siarkowy, nadchlorowy, trinuorooctowy i solny. Np. można zastosować kwas trifluorooctowy (1-90% wagowo) lub kwas solny (0,1-30% wagowo) w CH3CN/H2O (1-90% H 2O wagowo) pomiędzy 0-50°C.
Przykład 25
Związki 213f, 213g, 213h, 213i, 213j, 213k, 2131, 213m, 214f, 214g, 214h, 214i, 214j, 214k, 2141, 214m, 550f, 550g, 550h, 550i, 550j, 550k, 5501 i 550m wytworzono jak następuje
190 736
171
[ 1 S,9S(21 RS,3S)]-9- [(4-dimetyloaminobenzoilo)amino]-6,10-diokso-1,2,3,4,7,8,9,10-oktahγdro-N-(2-ben/γloksγ-5-okso-tetrahydrofuran-3-ylo)-6H-plrγdazyno[ 1,2-a] [ 1 ^Jdiazepino-1-karboksamid (213f) zsyntetyzowano z 212f sposobami użytymi do wytworzenia 213e z 212e, otrzymując 504 mg 213f jako żółte ciało stałe;
*H NMR (CD3SD) 7 1,10 (br. m, 0,25H), 1,30 (br. m, 2H), 1,50 (br. m, 1H), 1,65 (br. m, 1,5H), 1,80 (br. m, 0,25H), 1,90 (br. m, 0,25H), 1,95 (br. m, 0,5H), 2,05 (br. m, 0,25H), 2,15 (m, 1H), 2,3 (m, 1H), 2,5 (br. m, 1H), 2,6 (dd, 1H), 2,8 (m, 1H), 3,1 (br. s, 3H), 3,15 (br. m, 1H), 3,32 (br. s, 3H), 3,5 (m, 1H), 4,5 (br. m, 1H), 4,62 (d, 0,25H), 4,72 (m, 3H), 4,95 (m, 1H), 5,1 (br t, 0,25H), 5,15 (br. t, 0,75H), 5,7 (d, 1H), 6,75 (d, 2H), 7,35 (br. s, 5H), 7,75 (d, 2H)
[ 1 S,9S(2Rs,3S)]-9-[(3-dimetyloammobenzoilo)amino]-6,10-diokso-1,2,3,4,7,8,9,10-oktahydro-N-(2-ben/γloksy-5-okso-tetrahydrofuran-3-ylo)-6H-pirγda/yno[ 1,2-a] [ 1,2]dia/epino-1-karboksamid (213g) zsyntetyzowano z 212g sposobami użytymi do wytworzenia 213e z 212e, otrzymując 400 mg 213g;
'H NMR (CD3SD) 8 1,5 (br. m, 1H), 1,65 (br. m, 2H), 1,70 (br. m, 0,25H), 1,90 (br m, 1H), 1,95 (br m, 1H), 2,05 (br. m, 0,25H), 2,10 (m, 1H), 2,3 (m, 1H), 2,5 (m, 2H), 2,59 (d, 1H), 2,6 (d, 1H), 2,78 (d, 1H), 2,8 (d, 1H), 2,93 (br. s, 4H), 3,05 (br. m, 1H), 3,15 (br m, 0,25H), 3,3 (br s, 3H), 3,5 (m, 2H), 4,5 (br. m, 2H), 4,65 (d, 1H), 4,7 (br. m, 2H), 4,95 (br m, 1H), 5,15 (br. t, 0,25H), 5,2 (br. t, 0,75H), 5,2 (d, 1H), 6,95 (d, 1H), 7,15 (d, 1H), 7,25 (br. s, 1H), 7,3 (br. t, 2H), 7,45 (br. s, 6H).
[1S,9S(2RS,3S)J -9-[(3-)hloro-4-aminobenzoilo)amino]-6,1O-diokso-1,2,3,4,7,8,9,10-oktabydro-N-(2-benzyloksy-5-okso-tetrahydrof'i.iran-3-ylo)-6H-pii'ydazyno[1,2-a] [ 1,2]diaze172
190 736 pino-1-karboksamid (213h) zsyntetγ/cwaπo z 212h sposobami użytymi do wytworzenia 213e z 212e, otrzymując 296 mg 213h;
*H NMR (CDCl.) δ 1,55-1,68 (m, 1H), 1,7-2,05 (m, 3H), 2,3-2,5 (m, 2H), 2,65l2,8 (m, 1H), 2,85-2,93 (m, 1H), 2,95-3,25 (m, 3H), 4,44-4,65 (m, 2H), 4,68-4,82 (m, 1H), 4,9-4,95 (d, 1H), 5,05-5,18 (m, 2H), 5,28 (s, 0,5H), 5,55-5,58 (d, 0,5H), 6,52-6,58 (d, 0,5H), 6,7-6,76 (m, 2H), 6,82-6,85 (d, 0,5H), 7,3-7,4 (m, 5H), 7,52-7,58 (m, 1H), 7,75 (s, 0,5H), 7,8 (s, 0,5H).
[ 1 S,9S(2RS,3S)]-9-[(4-metoksybcnzcilo)amino]-6,10-diokso-1 ,:2,3,4,7,8,9,10-oktahydro-N-(2-benzyloksy-5-oksotctrahydro-furan-3-ylo)-6Hlpirydazync[ 1,2-a] [ 1,2]diazepino-1 -karboksamid (213i) /syπtetγ/owano z 212i sposobami użytymi do wytworzenia 213e z 212e, otrzymując 1,1 g213i;
’H NMR (CDCl.) δ 1,55-2,05 (m, 6H), 2,26-2,5 (m, 2H), 2,62-2,82 (m, 1H), 2,85l2,92 (m, 1H), 2,95-3,25 (m, 2H), 3,82 (s, 1,5H), 3,85 (s, 1,5H), 4,4-4,65 (m, 2H), 4,7-4,78 (m, 1H), 4,88-4,95 (m, 1H), 5,05-5,23 (m, 1H), 5,28 (8, 0,5H), 5,55-5,58 (d, 0,5H), 6,6-6,65 (m, 1H),
6,8-6,24 (m, 1H), 6,9-6,95 (m, 3H), 7,3-7,45 (m, 4H), 7,78-7,85 (m, 2H).
[ 1 S,9S(2RS,3S)]-9-[(3,5-dichkcrobenzoilo)amino]-6,10-di-okso-1,2,3,4,7,8,9,10-oktahydr^-N-(i^^bi^in^;^ll^I^^^-5-okso-tetrahydrofuran-3-ylo)-6H-pirydazyno[ 1,2-a] [ 1,2]diazepino-1 lkarbcksamid (213j) zsyntetyzowano z 212j sposobami użytymi do wytworzenia 213e z 212e, otrzymując 367 mg 213j;
’H NMR (CDCl.) δ '^^^2,05 (m, 12H), 2,25 (d, 1H), 2,35 (m, 1H), 2,48 (m, 2H), 2,75 (m, 2H), 2,9 (m, 1H), 2,95-3,25 (m, 5H), 4,45 (t, 1H), 4,5-4,6 (m, 4H), 4,7 (m, 1H), 4,75(d, 1H), 4,82 (m, 1H), 5,05 (m, 2H), 5,15(q, 1H), 5,3(s, 1H), 5,58 (d, 1H), 6,5 (d, 1H), 6,9 (d, 1H), 7,05 (d, 1H), 7,25-7,35 (m, 5H), 7,6 (s, 2H), 7,7 (s, 2H).
[ 1 S,9S(2RS,3S)]-9-[(3,5-dichloro-4-hydroksybenzoilo)-amino]-6,10-diokso-1,2,3,4,7,8.9.10- oktahγdro-N-(2-bcnzyloksy-5-(cks(Ctetrahγdrofuran-3-ylo)-6H-pirydazyno[1,2-a][1,2J-dia/epino-1-karboksamid (213k) /syntctyzowanc z 212k sposobami użytymi do wytworzenia 213e z 212e, otrzymując 593 mg 213k;
'H NMR (CD.OD) δ 1,5(m, 1H), 1,6-1,7 (m, 2H), 1,75-1,95 (m, 4H), 2,15 (m, 2H), 2,3 (m, 1H), 2,6 (m, 1H), 2,7 (m, 1H), 3,05 (m, 2H), 3,15 (m, 1H), 3,5 (m, 2H), 4, 45 (m, 2H), 4,65 (d, 1H), 4,7 (m, 1H), 4,95 (m, 1H), 5,15 (m, 1H), 5,4 (s, 1H), 5,7 (d, 1H), 7,3 (m, 5H), 7,85 (s, 2H).
[1 S,9S(2RS,3S)]-9-[(3-(hloro-4-acetamidobenzoiio)amino]-6,10-diokso-1,2,n,4,7,2,l
9.10- cktahydro-N-(2-bcn/yloksy-5-oksctetrahγdrofuran-3-ylo)-6H-plrydazyno[1,2-a][1,2]-diazcpinc-1-karboksamid (2131), zsyntety/owanc z 2121 sposobami użytymi do hythOl rzenia 213e z 212e, otrzymując 133 mg 2131;
'H NMR (CDCl.) δ 1,55-1,1 (m, 1H), 1,75-2,05 (m, 3H), 2,25 (s, 1,5H), 2,21 (s, 1,5H),
2, 3-2,48 (m, 2H), 2,7-2,2n (m, 1H), 2,85-2,94 (dd, 1H), 2,95-3,25 (m, 2H), 4,42-4,65 (m, 2H), 4,68-4,85 (m, 1H), 4,88-4,95 (m, 1H), 5,05-5,18 (m, 2H), 5,32 (s, 0,5H), 5,55l5,6 (d, 0,5H), 6,48-6,55 (d, 1H), 6,88-6,92 (d, 1H), 7,0-7,04 (d, 0,5H), 7,15-7,2 (d, 0,5H), 7,3-7,4 (m, 4H), 7,64-7,78 (m, 2H), 7,88-7,94 (m, 1H), 8,45-8,56 (m, 1H)
[1S,9S(2RS,3S)]-9-[(3,5-di(hlorιc-4-metcksybenzoilo)amino]-6,10-dlokso-I,2,n,4,7,2.9.10- cktahydro-N-(2-ben/ylcksy-5-cksotetrahydrcfuran-n-ylo)-6H-piryda/yno[ 1,2-a] [ 1 ^dia/epino-1-karbcksamid (213m), zsyntetyzowano z 212m sposobami użytymi do wytworzenia 213e z 212e, otrzymując 991 mg 213m;
*H NMR (CDCl.) δ 1,5-2,15 (m, 5H), 2,2-2,55 (m, 3H), 2,6-3,3 (m, 4H), 3,95 (2s, 3H),
4,45-4,7 (m, 2H), 4,7-4,85 (m, 1H), 4,85-4,95 (m, 1H), 5,05-5,25 (m, 1H), 5,3 (s, 0,5H), 5,6 (d, 0,5H), 6,55 (d, 0,5H), 6,85 (d, 0,5H), 7,0 (d, 0,5H), 7,25-7,6 (m, 5,5H), 7,75 (s, 1H), 7,85 (s, 1H).
[ 1 S,9S(2RS,3S)]-9-[(4-dimetyloaminobenzoilo)amino]-6,10-diokso-1,20,4,7,8,9,10-oktahydro-N-(2-etoksy-5-oksotetrahydrofuran-3-yIo)-6H-pirydazyno[1,2-a] [1,2]diazepino-1l -karboksamid (550f), zsyntetyzowano z 212f sposobami użytymi do wytworzenia 213e z 212e, otrzymując 420 mg 550f jako białawe ciało stałe, *H NMR (CDCl.) δ 1,2-1,25 (br. t, 3H), 1,35 (m, 1H), 1,55 (br m, 1H), 1,88-2,02 (br m, 4H), 2,3 (d, 1H), 2,35 (m, 1H), 2,45 (m, 1H), 2,55-2,75 (m, 3H), 3,0 (s, 6H), 3,25 (m, 1H), 3,55 (m, 1H), 3,65 (m, 1H), 3,75 (m, 1H), 3,9 (m, 1H), 4,3 (t, 1H), 4,55 (m, 2H), 4,68 (br m,
190 736
173
1H), 3,9 (m, 1H), 4,3 (t, 1H), 4,55 (m, 2H), 4,68 (br. m, 1H), 4,95 0->γ. m, H IL 5,1 ś-. r. m, 2H), 5,45 (d, 1H), 6,5 (m, 2H), 7,7 (m, 2H).
[ 1 O,9O(2IRS,3O)])9-[(3)Chl(oro-4-αIamoOenzoilo)amino]-6,10--κΥ5ο-1,2,3,4,7,8,9,10-oktahzdro-N-(2-ctoknZ)5)Oksotctrahydr(n'lIrαn-3-yla)-611)piryaaz.zno( 1,2-a] [ 1 YNiazepino-1 )karOoksamla (550h), 'syntetyzowano ' 212h sposobami użytymi do wytworzenia 213e z 212e, otrzymując 195 mg 550h jako białe ciało stałe;
*R NMR (IDMSOMg) δ 1,1-1,18 (2t, 3H), ,m, 2HH) 1,88-2,05 (m, 2H), 2.1-2,35 (m, 3H), 2,48-2,56 (m, 1H), 2,75-2,8 (m, 0,755H), 2288-3,,)01 (m, 1,25H), 3,25-3,4 (m, 1H),
3.55- 3,8 (m, 2H), 4,3δ)4,45 (m, 1H), 4,55-4,62 (m, 1H), 4,8-4,88 (m, 1H), 4,98-5,03 (m, 0,25H), 5,1-5,13 (m, 0,75H), 5,33 (s, 0,25H), 5,58-5,6 (d, 0,75H), 5,9-6,0 (br. s, 2H), 6,8-6,85 (d, 1H), 7,58-7,62 (d, 1H), 7,82 (s, 1H), 8,22-8,28 (d, 1H), 8,48-8,52 (d, 0,75H), 8,52-8,76 (d, 0,25H).
[ 1 S^S^RSYS^- (4)mctokny0ezyoilo)amino]-6,10-diokso-1,2,3,4,7,8,9,10-oktahydro-N)(2)etaksy-5)Oksotctrahydraίuran-3)yla)-6H-pirydazzzo[ 1,2-a] [ 1,2]diazepino-1 -karboksamid (550i), 'syntetyzowano z 212i sposobami użytymi do wytworzenia 213e z 212e, otrzymując 135 mg 550i;
'H NMR (CDCh) δ 1,18-1,28 (2t, 3H), Ι^-Ι^ (m, 1,5H), 1,9-2,1 (m, 3,5H), 2,22-2,3 (d, 0,5H), 2,38)2,45 (m, 1,5H), 2,7-2,8 (m, 0,5H), 2,8)2,93 (m, 1H), 2,94-3,15 (m, 1,5H), 3,15-3,28 (m, 1H), 3,δδ)3,62 (q, 0,5H), 3,62)3,73 (q, 0,5H), 3,58)3,88 (q, 0,5H), 3,88 (s, 3H),
3,9-3,95 (q, 0,5H), 4,33-4,4 (m, 0,5H), 4,5-4,55 (m, 1H), 4,68-4,76 (m, 0,5H), 4,9-4,95 (m, 0,5H), 5,1-5,2 (m, 1,5H), 5,18 (s, 0,5H), 5,48-5,52 (d, 0,5H), 6,48)6,δδ (d, 0,5H), 6,85-6,9 (m, 1H), 6,9-6,95 (m, 2H), 5,34)5,38 (d, 0,5H), (m, 2H).
[ 1 O,9S(2RS,3O)])9-[(3,5)aikhk)ra-4-hzdraksybezzaila)-)izlina|-6.10-diokso-1,2,3,4,7,8.9.10- oktahzdrO)N)(2-ctoksy)5)aksotctrahydrofuraz-3-ylo))6H-piryday.zzo[ 1,2-a] [ 1,2]diazeplzo)1)karboksamia (550k), 'syntetyzowano ' 212k sposobami użytymi do wytworzenia 213e ' 212e, otrzymując 174 mg 550k jako białe ciało stałe;
'H NMR (DMOO-a-) δ '15 (2t, 3H), 1,6-1,75 (m, 2H), 1,9-2,05 (m, 2H), 2,1-2,4 (m,
5H), 2,5)2,5δ (m, 1H), 2,7-2,8 (m, 0,5h), 2,85-3,0 (m, 1H), 3,0-3,1 (m, 0,5H), 3,55-3,7 (m, 1H), 3,7-3,8 (m, 1H), 4,2 (t, 0,5H), 4,35-4,45 (m, 0,5H), 4,55)4,65 (m, 0,5H), 4,8-4,9 (m, 0,5H), 5,05 (t, 0,5H), 5,15 (t, 0,5H), 5,35 (s, 0,5H), 5,6 (d, 0,5H), 7,95 (s, 2H), 8,5 (d, 0,5H), 8,65 (d, 1H), 8,75 (d, 0,5H), 10,9 (br. s, 1H).
[ 1 S,90(2R0,30)])9-[(3-chlorO)4-αcetamidabeazoila)ammo]-6,10-diokso-1,2,3,4,7,8, 9,10)-oktahzaro-N-(2)C‘takny-5-oksatc'trahzdrofuraZ)3)ylo)-6H-plrydαyyzo[ 1,2-aJ( 1, 2 jdiazepizO)1-kar0aksamia (5501), 'syntetyzowano z 2121 sposobami użytymi do wytworzenia 213e z 212e, otrzymując 151 mg 5501;
'H NMR (CDCh) δ 1,2-1,28 (2t, 3H), 1,6-1,72 (m, 1,5H), 1,88-2,15 (m, 3,5H), 2,22-2,28 (m, 0,5H), 2,28 (s, 3H), 2,38)2,48 (m, 1,5H), 2,66)2,92 (m, 1,5H), 2,95-3,14 (m, 1,5H), 3,2-3,34 (m, 1H), 3,56-3,63 (q, 0,5H), 3,63-3,52 (q, 0,5H), 3,8-3,85 (q, 0,5H), 3,9-3,95 (q, 0,5H), 4,32-4,38 (m, 0,5H), 4,5-4,62 (m, 1H), 4,68)4,5δ (m, 0,5H), 4,88-4,92 (m, 0,5H), 5,08-5,2 (m, 1,5H), 5,18 (s, 0,5H), 5,46-5,5 (d, 0,5H), 6,5-6,55 (d, 0,5H), 6,98-7,05 (m, 1H), 7,42-7,48 (d, 0,5H), 5,63)7,78 (m, 2,5H), 7,9-7,94 (d, 0,5H), 8,44-8,52 (m, 1H)
[1O,9O(2RS,3O)]-9-[(3,5-aikhlora-4-mctaksybenzaiio)amino]-6,10-diokso-1,2,3,4,7,8, 9.10- oktahzdro-N-(2)Ctoksz-5)OknotctrahydrofuraZ)3-ylo))6H)pirzaazyno[ 1,2-a] [ 1,2]diazepino-1-karboknamld (550m), 'syntetyzowano z 212m sposobami użytymi do wytworzenia 213e z 212e, otrzymując 301 mg 550m jako białe ciało stałe;
'H NMR (CDCh) δ 1,2-1,35 (2t, 3H), 1,5-1,8 (m, 2H), 1,9-2,15 (5H), 2,25 (d, 0,5H),
2,4-2,5 (m, 2H), 2,65)2,8 (m, 0,5H), 2,8-3,0 (m, 0,5H), 3,0-3,2 (m, 1H), 3,2-3,35 (m, 0,5H),
3.55- 3,65 (m, 0,5H), 3,65-3,75 (m, 0,5H), 3,8-3,9 (m, 0,5H), 3,9-4,0 (m, 0,5H), 4,4-4,45 (m, 0,5H), 4,5δ)4,6δ (m, 0,5H), 4,7-4,8 (m, 0,5H), 4,85)4,9δ (m, 0,5H), 5,05-5,2 (m, 0,5H), 5,2 (s, 0,5H), 5,5 (d, 0,5H), 6,5 (d, 0,5H), 6,9 (d, 0,5H), 6,95 (d, 0,5H), 7,35 (d, 0,5H), 7,75 (s, 1H), 7,85 (s, 1H)
Kwas [3S( 1 S,9S)]-3-(9-(3,5-dichlarobczzolla)amlno-6, 10-diokno-1,2,3,4,7,8,9,10-oktahydro-6 H-plryaαzyno[ 1,2-a] [ 1,2]-aiayeplno-1 -karboksamido)-4-oknobutazowy (214j), 'syntetyzowano ' 213j sposobem użytym do wytworzenia 2002 z 2001, otrzymując 62 mg 214j jako białe ciało stałe;
190 330 'HNMR(CD3OD) δ 0,9 (t, 1H), 1,3 (br. s, 1H), 1,7 (br. m, 1H), 1,9 (br. m, 1H), 2,1 (br s, 1H), 2,25 (q, 1H), 2,35 (m, 1H), 2,22 (m, 2H), 2,65 (t, 1H), 3,15 (br. t, 1H), 3,5 (br. m, 1H), 4,3 (br. s, 1H), ,,,, (m, 2H), ,Α (t, 1H), 5,25 (br. s, 1H), 7,6 (br. s, 1H), 7,25 (br. s, 1H).
Kwas [3 S(1 S,9S)] 37-(93(7,5-dichk))O34-ahdroksybenzoilo)-amino-6,10-diokso-1 ,Ζ,,Α7,2,9,10- oktahodroa6H-pirydazyno-[ 1,2-a] 11 Adi ‘ζερικο-1 -karboksamidojAok^butaobwy (214k), zsyntetyzowano z 213k sposobem użytym do wytworzenia 2002 z 2001, otrzymując 80 mg. 214kjako białe ciało stałe;
Ή NMR (CD3OD) δ 1,6-1,3 (m, 1H), 1,2-2,0 (m, 2H), 2,0-2,1 (m, 2H), 2,1532,25 (m, 1H), 2,3-2,2 (m, 1H), 2,2-2,55 (m, 2H), 2,632,35 (m, 1H), 3,05-7,2 (m, 1H), ,,,-,,6 (m, 2H), ,Λ,,, (m, 1H), ,Α-,^ (m, 1H), 2,8-5,0 (m, 1H), 5,1-5,2 (m, 1H), 3,25 (s, 2H).
Kwas pS(1 S,9S)] -3-(9-(7-caloro34-acetaπidobenzoiIo)amino-6,10-diokso-1,2,3,2,7,2,3 9,103oktaahd)o-6H-pirhdazhno3[ 1,2-a] [ 1,2]diazepino-1 -karboksaπido)323oksobutanowy (2141), zsyntetyzowano z 2131 sposobem użytym do wytworzenia 2002 z 2001, otrzymując 91 mg 2141 jako białe ciało stałe;
Ή NMR (DMSO-d,) δ 1,65 (br. m, 6H), 1,9 (br. m, 6H), 2,15 (s, 3H), 2,,(m, 3H), 2,6-2,85 (m, 3H), 2,9 (m, 2H), 3,0 (m, 1H), ,Α (br. q, 1H), ,,, (m, ,H), 5,0 (m, 1H), 5,15 (m, 1H), 5A (s, 1H), (d, 2H), 7,35 (d, 1H), 2,05 (s, 1H), 8,65 (m, 2H), 9,65 (s, 1H).
Kwas [3S(1 S,3S)]37-(9-(7,53dicalorobenzoilo)aπino-6,10-diokso-1,2,3,4,7,8,9,10-oktaayd)O36H-pi)hdazhno[ 1,2-a] [ 1 A-diazepino-1 -karboksamido^-oksobutanowy (214m), zsyntetyzowano z 213m sposobem użytym do wytworzenia 2002 z 2001, otrzymując 105 mg 214m jako białe ciało stałe;
Ή NMR (CD3OD) 5 i.ó-IA (m, 1H), 1,85-1,35 (m, 1H), 2,0-2,1 (m, 2H), 2,1532,25 (m, 1H), 2,3-2,4 (m, 1H), 2,2532,55 (m, 2H), 2,6532,75 (m, 1H), ,,,-,Α (m, 2H), 3,95 (s, 3H), (m, 1H), ,Α-,,, (m, 1H), 2,935,0 (m, 1H), 5,15-5,2 (m, 1H), 7,9 (s, 2H).
Związki 2100f, 2100g, 2100h, 2100i i 2100j wytworzono jak opisano poniżej.
2101·
AilocN
H
AilocN
H KY
2101b
190 736
175 (3S,2RS)-3-aIliloksykarbeoylo6mino-2-(7-chlerobeozyle)-okey-5-oksotetzahydzofUzao (2000a) 8eyotetyzow6oo z asparag^^u alliloksyk6zbooyleamioo-p-tezt-butylu sposobami wykorzystanymi przez Chapmana (Bioorg. & Med Chem Lett., 2, str. 615-618 (1992)) do wytworzenia (3S,2RS)-3-allile^k^sy-karbonyloamloo-2-ben8yloksy-5-oksotetrahydzofuzanu stosując alkohol 4-chlorobeo8ylowy zamiast alkoholu benzylowego, otrzymując 1,84 g 2000a jako krystaliczne ciało stałe.
[ 1S,9S(2RS,7S)]-9-beo8oilo6mioe-6,10-diokso-1,2,3,4,7, 8,9,10-ekt6hydro-N-(2-(7-chlorobenzylo)oksy-δ-oksotetz6hydzofuzao-3-ylo)-6H-pir·ydazyoo[ 1 ,2-6J [ 1,2]diazepino-1 -karboke6mid (2100f), 8eyotetyzow600 z 212e sposobami użytymi do wytworzenia 213e z 212e, stosując 2101a i otrzymując 380 mg 2100f, ‘H NMR (CDCl3) δ 1,8-2,0 (m, 10H), 2,30 (d, 1H), 2,31-2,5 (m, 3H), 2,7-2,9 (m, 3H), 3,05 (m, 2H), 3,03,2 (m, 4H), 4,45 (q, 1H), 4,5-4,6 (m, 3H), 4,7 (d, 2H), 4,85 (d, 1H), 4,9 (t, 1H), 5,2 (t, 1H), 5,15 (m, 2H), 5,25 (s, 1H), 5,55 (d, 1H), 6,5 (d, 1H), 6,9 (d, 1H), 6,95 (d, 1H), 7,25 (m, 3H), 7,35 (t, 2H), 7,45 (m, 2H), 7,55 (1H), 7,8 (m, 3H).
(3S,2RS)-3-alliloksykazbonyloamloo-2-6ntlizopropoksy-δ-eksotetrahydrofuzan (2100b), zsyntetyzowano z (3S,2RS)-3-alliloksykarbeoyloamloo-2-benzyloksy-5-okeotetzahydzofuzaou sposobem użytym do wytworzenia 2100d z 214e, stosując H2SO4 zamiast pTSA i otrzymując 2101b.
[ 1 S,9S(2RS,3S)]-9-beo8oilo6mlno-6,10-diokso-1 ,:2,3,4,7,8,9,10-oktahydro-N-(2-aotil8eprepoksy-δ-oksotetz6hydrofl·lZ6n-3-ylo)-6H-piryd68yoo[ 1,2-a] [ 1,2]diazepino-1 -k6rboke6mid (2100g) zeyotety8ow6oo z 212e sposobami użytymi do wytworzenia 213e z 212e stosując 2101b i otrzymując 31 mg 2100g;
OH NMR (CDCI3) 5 1,19 (d), 1,94 (br s), 2,00-2,12 (m), 2,24 (d), 2,42 (dd), 2,71-2,83 (m), 3,02 (dd), 3,12-3,27 (nałożone m), 3,93 (m), 4,32-4,37 (m), 7,52-7,67 (m), 7,90-7,9δ (m), 5,12-5,20 (m), 5,28 (s), 6,93 (d), 7,10 (d), 7,41-7,50 (m), 7,51-7,58 (m), 7,84 (d).
[ 1S,9S(2RS,3RS)]-9-ben8olleammo-6,10-diekso-1,2,7,7,7,8,9,10-oktahydro-N-(26ceteksy-δ-oksotetzahydzofurao-3-ylo)-6H-plryd6zyoo[ 1,2-a] [ 1,2]dl6zepino-1 -karboksainid (2000h).
Roztwór 204e (287 mg, 0,65 mmol) w pirydynie (5 mL) potraktowano AC2O (0,4 mL, 3,62 mmol). Po 6 godzinach mieszaninę reakcyjną wylano do 5%NaHSO41 ekstrahowano 3 razy EtOAc. Połączone fazy organiczne przemyto solanką, osuszono nad Na2SO4 i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Chromatografia (SiO2, EtOAc) dała 119 mg 2000h;
OH NMR (CDCl3, mieszanina czterech diastezeoi8omerów) δ 1,80-2,05 (m), 2,12 (s), 2,13 (s), 2,19 (s), 2,22 (d), 2,67-2,75 (m), 2,80-2,95 (m), 3,00-3,20 (m), 3,21-3,33 (m), 3,50-3,95 (cztery oddzielne multiplety), 4,19 (m), 4,55 (m), 4,δ7-7,65 (m), 4,69 (m), 4,85-7,9δ (m), 5,04 (m), 5,10 (s), 5,10-5,22 (m), 6,46 (d), 6,03 (s), 6,50 (d), 6,58 (d), 6,75 (d), 6,95-7,05 (m), 7,22 (m), 7,30 (m), 7,71 (d), 7,75-7,83 (m).
2100b
176
190 736
Erter etylowy kwasu [3S(-S,9S)]-3-<9-be—zoiloamino-6,-0-dlokso--,2,3,4,7,8,9,-0-oktohySrz-6H-uιrySooy—o[ - ,2-o] [ l,2]-Siozepino- - -yornzkromidz>-4-zkrznrto—zweoz (2100i).
Do roztworu 2100b (-,5 g, 2,7 mmol) w CH3CO (-0 mL) SoSono -O HCl w temperaturze otoczenio. Po 6 ozSzinoch Sodono rtoły OoHC—3 i uroSukt ekstrahowano Et—Ac, zs-rzzno noS MgS—4 i zoteżono pod zmniejszo-ym ciśnie—iem. Chromatografio (Si—2, 35--55% CH 2Cl2 w Et—Ac) Soło -23 mg 2100i;
'H OMR (CDCI3) δ -,25 (t, 3H), -,6--,8 (m, -H), -,9-2,2 (m, 5H), 2,4-2,5 (m, -H), 2,75-2,9 (m, 2H), 3,0-3,- (m, 2H), 3,2-3,25 (m, -H), 4,05-4,2 (m, -H), 4,5-4,7 (m, -H), 5,--5,25 (m, -H), 7,0-7,2 (m, 2H), 7,4-7,45 (m, 2H), 7,5 (t, -H), 7,8 (t, 2H), 9,5 (s, -H).
Związki 500 i 501 zpironz w tobeli --. Związki te aytwzroono rposoboml uoSznaamι So sposobów użytych So wytworzenio związków 404-449 (patrz przykład --).
Tabela 11
Związek Strukturo Wzór cz C cz HPLC czos uet mio, (metodo) czystość MS (M+H)'
500 W C22H24CIOδO8 52-,92 - - ,448 (A) 0,99- 523, -
50- h/° C24H28O4—-0 532,5- -0,-30 0,970 533,0
Związki ouiro—e uz—iżej (213m, 213n, 213o, 213p, 213q, 213r, 213s, 213t, 213u, 213v, 213w, 213x i 214w) wytworzono iporobaml pzSonaaml do suorznów użytych do aytaorse—io związków 213b-f.
Związki 419, 415, 450, 456, 475, 404, 486, 487, 417, 408 i 418 możno rów—leż wytworzyć jok opiro— uznlżej.
417, 418, 419, 450,
456, 475, 486, 487
190 736
177
Związek R1
213ι^,419 MeOC(O)-
213η,415 <XŃ
013c, 450 ęA HN M· IT o
213p,456 X O
213q, 475
2131-, 404 M· O
213^, 486 GA-CA H
213t, 487 H
213u,417 --V OMc
213v, 408
0i3w, 0i4w Me
213x, 418 H
178
190 736
[1S,9S(2RS,3S)]-N-(2-ben/.yloksy-5-oksotetrahγdrofuran-3-ylo)-6,10-diokso-9-(3,4-metylenodioksy benzoiloam ino)-1 ,(2,3,4,7,8,9,10-oktabγdro-6H-plrγda/yno[ 1,2-a] [ 1 ^diazepino-1-karboksamid (213n) wydzielono jako mieszaninę diastereomerow (proporcja izomerów syn:anti 6:4) (1,43g, 82%) jako białe ciało stałe, t.t. 206-10°C;
IR (KBr) 3288, 1787, 1680, 1657, 1651, 1619, 1548, 1440, 1256, 1135;
‘H NMR (D6-DMSO) 7 8,75 (0,4H, d), 8,55 (0,6H, d), 8,45 i 8,43 (1H, 2 x d), 7,50 (1H,
d), 7,42 (1H, s), 7,40-7,27 (5H, m), 7,01 (1H, d), 6,11 (2H, s), 5,67 (0,6H, d), 5,43 (0,4H, s),
5.10- 5,00 (1H, m), 4,90-4,59 (3,5H, m), 4,45-4,25 (1,5H, m), 3,47-3,20 (1H, m), 3,20-2,70 (2H, m), 2,65-2,35 (1H, m), 2,35-2,00 (3H, m), 2,00-1,75 (2H, m), 1,65-1,40 (2H, m).
Analiza dla C29H30N4O9:
Obliczono: C, 60,20; H, 5,(23; N, 9,68;
Stwierdzono: C , 60,08; H, 5,32; N, 9,50.
MS (ES+) 580 (M+ + 2, 35%), 579 (M+ + 1, 100), 404 (5), 367 (5), 236 (7), 107 (5).
[ 1S,9S(2RS,3S)]-9-[(3-acetamido)ben/amido]-N-(2-benzγloksy-5-oksotetr·ahydrofuran-3-ylo)-6,10-diokso-1,2,3,4,7,8,9,10-oktahydro-6H-pirydazyno[ 1,2-a] [ 1,2]diazepino-1 -karboksamid (213o), izomer anti jako białe piankowate ciało stałe (0,73 g, 69%); t.t. 135-40°C;
[α]ο21 -37,3° (c 0,1, CH2Ch); IR (KBr) 3452, 3310, 1790, 1664, 1659, 1650, 1549,
1425, 1258,1121;
’H NMR (D6-DMSO) 7 10,11 (1H, s), 8,77 (1H, d), 8,57 (1H, d), 8,01 (1H, s), 7,76 (1H, d), 7,55 (1H, d), 7,45-7,25 (6H, m), 5,43 (1H, s), 5,08-5,00 (1H, m), 4,95-4,73 (1H, m), 4,76 i 4,68 (2H, dd), 3,40-3,20 (1H, m), 3,09 (1H, dd), 3,02-2,75 (1H, m), 2,45-2,06 (4H, m), 2,06 (3H, s), 2,00-1,75 (2H, m), 1,70-1,40 (2H, m).
Analiza dla C30H33N5S8 0,75H2O:
Obliczono- C , 59,54; H, 5,75; N, 11,57;
Stwierdzono: C 59,40; H, 5,^^^ N, 11,50.
MS (ES+) 593 (M* + 2, 33%), 592 (M+ + 1, 100), 574 (7), 487 (7), 475 (6), 385 (9), 373 (26), 318 (14), 296 (11), 266 (10), 221 (22).
[ 1 S,9S(2RS,3S)]-N-(2-benzyloksy-5-oksotetrahydrofuran-3-ylo)-6,10-diokso-9-(4-hydroksybenzoilo)amino-1,2,3,4,7,8,9,10-oktabydro-6H-pirγdazγno[ 1,2-a] [ 1,2]diaz,epino-1 -karboksamid (213p) wydzielono jako pianę (1,2 g, 77%);
[a]o -115°(c 0,20, CHzCh);
IR (KBr) 3368, 2946, 1794, 1654, 1609, 1540, 1505, 1421, 1277, 1175, 1119, 980, 'H NMR (D6-DMSO) 7 10,1 (1H, s), 8,80 (0,5H, d, J = 6,6), 8,60 (0,5H, d, J = 7,2), 8,40-8,36 (1H, 2d), 7,82 (2H, d, J = 8,0), 7,41 (5H, bs), 6,86 (2H, d, J 8,6), 5,72 (0,5H, d, J = 5,0), 5,49 (0,5H, bs), 5,13-5,07 (1H, m), 4,95-4,65 (2,5H, m), 4,49-4,38 (2,5H, m), 3,49-3,30 (2H, m), 3,21,2,79 (2H, m), 2,40-1,41 (7H, m).
MS (ES+) 551.
[ 1 S,9s(2RS,3S)]-N-(2-benzyloksy-5-oksotetrahydrofuran-3-ylo)-6, 10-diokso-9-(indol-2-oiloamino)-1,2,3,4,7,8,9,10-oktabγdro-6H-pirγdazγno[1,2-a][1,2]diazepino-1-karboksamld (213q) wydzielono jako białe szkliste ciało stałe (80%); t.t. 145-149°C;
[a]D23 -56,0° (c 0,05, CH2O2);
IR (KBr) 3399-3319, 1791, 1657, 1543, 1420, 1253, 1119;
'H NMR (CDCI3) 7 9,54 (1H, s), 7,65 (1H, d, J = 7,9), 7,51 (1H, d, J = 6,9), 7,44-7,25 (7H, m), 7,18-7,06 (3H, m), 5,30-5,20 (1H, m), 5,27 (1H, s), 4,84 (1H, m), 4,79 (1H, d, J = 11,4), 4,56 (1H, d, J = 11,3), 4,47 (2H, m), 3,28 (1H, m), 3,10-2,97 (2H, m), 2,71 (1H, m), 2,47-2,37 (1H, m), 2,26 (1H, d, J = 17,9), 2,09 (1H, m), 1,83, 1,70, 1,51 (4H, 3m).
[ 1 S,9S(2RS,3S)]-N-(2-benzyloksy-5-oksotetrahydrofuran-3-ylo)-6,10-diokso-1,2,3,4,7,8.9.10- oktahydro-9-(2-toluoiloamino)-6H-pirγda/yno[ 1,2-a] [ 1,2]diazepino-1 -karboksamid (213r) wydzielono jako mieszaninę diastereomerow (proporcja izomerów syn.anti 55:45) jako białe piankowate ciało stałe (1,46 g, 89%): 11. 106-10oe(
IR (KBr) 3306, 2947, 1791, 1659, 1650, 1535, 1421, 1256, 1122, 'H NMR (D6-DMSO) 7 8,76 (0,45H, d), 8,56 (0,55H, d), 8,49 i 8,47 (1H, 2 x d), 7,41-7,19 (9H, m), 5,67 (0,55H, d), 5,43 (0,45H, s), 5,11-5,02 (1H, m), 4,86-4,55 (3,5H, m), 4,45-4,25 (1,5H, m), 3,40-3,20 (1H, m), 3,20-2,70 (2H, m), 2,65-2,40 (1H, m), 2,34 (3H, s), 2,30-1,70 (5H, m), 1,i65-1,40 (2H, m).
190 736
179
Analiza dla C29H32N4O7.
Obliczono: C, 62,66; H, 5,95; N, 10,08;
Stwierdzono: C, 62,91; H, 6,00; N, 9,70.
MS (ES+) 550 (M+ + 2, 43%), 549 (M+ + 1, 100), 374 (3), 280 (4), 279 (20), 118 (5)
[1S,9S(0R.S,3S)J-N-(0-bpnz.yk)key-5-ιoksotPtrahydrofuran-3-ylo)-6,i()-dl(ckso-1,2,3,4,7.8.9.10- oktαhydro-9-[4-(fenyloαcptαmidc)benzαmido]-6H-piIę(dazyno[1,2-a][i,0]diαrpplno-'-karboksamid (213s), wydzielono jako izomer anti, jako białe piankowate ciało stałe (0,64 g, 77%): t.t. 137-41°C;
[α]ο21 -48,2° (c 0,05, CH 3OH);
IR (KBr) 3477, 3314, 1791, 1659, 1599, 1529, 1499, 1406, 1256, 1122, 'NMR (D6-DMSO) 5 10,45 (1H, s), 8,76 (1H, d), 8,50 (1H, ())7 8,86 (HH, d), 1,69 (2H,
d), 7,4i-0,20 (10H, m), 5,43 (1H, s), 5,08-4,98 (1H, m), 4,90-4,73 'IH, m), 4576 i 4,68 (2H, dd), 3,67 (2H, s), 3,40-3,20 (1H, m), 3,09 (1H, dd), 3,02-2,75 (1H, m), 2,39 (1H, dd), 2,30-2,00 (3H, m), 2,00-1,75 (2H, m), 1,70-1,40 (2H, m).
Analiza dla C36H37N5O8 · 0,5,^^:
Obliczono: C, 63,90; H, 5,66; N, 10,35;
Stwierdzono: C, 63,68; H, 5,67; N, 10,24.
MS (ES+) 669 (M+ + 2, 40%), 668 (M+ + 1, 100), 640 (12), 435 (18), 425 (23), 403 (33),
328 (17), 302, (32), 274 (22), 197 (16), 138 (17).
[lS,9S(2Rs,3S)]-N-(2-beκzyloks/-5-ckeotPtęah/drofuran-3-ylo)-6,10-dlokso-9-[4-(3-mptylobutan-1 -cilcamlκo)beκzamidc]-i ,2,3,4,7,8,9,10-oktahydrc-6H-pirydazync[ 1,2-a] [ 1,2]-diazepino-1 -karboksamid (213t), wydzielono jako białe piankowate ciało stałe (0,63 g, 80%)· t.t. 159-64°C;
[a ]d 21 -37,0° (c 0,05, CH 3OH);
IR (KBr) 3463, 3321, 1790, 1680, 1658, 1650, 1644, 1595, 1525, 1501, 1408, 1251,
1113, 933;
*H NMR (D6-DMSO) δ 10,13 (1H, s), 8,76 (1H, d), 8,48 (1H, d), 7,85 (2H, d), 7,68 (2H, d), 0,40-7,05 (5H, m), 5,43 (1H, s), 5,08-4,95 (1H, m), 4,92-4,73 (1H, m), 4,76 i 4,68 (2H, dd), 3,40-3,20 (1H, m), 3,09 (1H, dd), 3,02-2,75 (1H, m), 2,39 (1H, dd), 2,35-2,00 (6 H, m), 2,00-1,75 (2H, m), 1,70-1,40 (2H, m), 0,93 (6 H, d).
Analiza dla C33H39N5O8 0,5H2O:
Obliczono: C, 61,67; H, 6,27; N, 10,90;
StwierdzoKo: C, 61,49; H, 6,24, N, 10,86
MS (ES+) 635 (M+ + 2, 39%), 634 (M++ 1, 100), 484 (10), 427 (9), 274 (18), 268 (37), 204 (19), 117(13).
[ iS,9S(2RS,3S)]-N-(2-beκzylcksy-5-okectetęah/drofuran-3-ylo)-6,10-diokso-1,2,3,4,7,8.9.10- oktαh/dro-9-(3,4,5-trlmptcksybeκrcilcαminc)-6H-pirydαzyκc[ 1,2-a] [ 1,2]diazepino-1 -karboksamid (213u), wydzielono jako białe ciało stałe (81%): t.t 120-132°C;
IR (KBr) 3361-3334, 1792, 1659, 1585, 1536, 1499, 1457, 1416, 1340, 1236, 1126, 989;
'H NMR (CDCI3) δ 7,39-7,09 (6H, m), 7,12 (1H, s), 7,03 (1H, s), 6,92, 6,83, 6,48 (ok 3H, 3d, J = 8,1, 7,5, 8,1), 5,57 (d, J = 5,3), 5,27 (1H, s), 5,23-5,06, 4,91-4,71,4,64-4,43, (6H, 3m), 3,92, 3,91, 3,89, 3,88 (9H, 4s), 3,30-2,70, 2,δ2-0,08, 1,91, 1,63 (1H, 4m).
[iS,9S(2Rs,3S)]-N-(0-bpκzyloks/-δ-okeotetrahydrofuran-3-ylo)-6,iO-diokso-9-(naft-1-oiloamino)-1,2,3,4,7,8,9,10-oktαhydęc-6H-pllydαzync[ 1,2-a][ 1 ^diazepino-1 -karboksamid (213v), wydzielono jako białe ciało stałe (78%): t.t. 121 -7°C;
IR (KBr) 3534-3331, 1791, 1659, 1528, 1420, 1256, 1122;
'H NMR (CDCh) δ 8,34-8,29 (1H, m), 7,98-0,87 (2H, m), 7,68-7,45 (4H, m), 7,34-7,24 (5H, m), 7,04 (d, J = 6,8), 6,78 (d, J = 7,8), 6,66 (d, J = 7,7), 6,48 (2H, d, J = 7,5), 5,56 (d, J = 5,4), 5,15 (1H, s), 5,30-5,14, 5,0, 4,89 (d, J = 11,2), 4,71-4,41 (6H), 3,18-2,80, 2,50-2,27, 2,08-1,60 (11H, 3m)
[1S,9S(2RS,3S)]-N-(0-benzyloks/-δ-okeotetrahydrcfuęan-3-ylo)-6,10-dlokso-9-(4-h/droks/-3,5-diim etylobe nzoi lo)am ino-1,2,3,4,7,8,9,10-cktahydrc-6H-plęydaz/no[ 1,2-a] [ 1,2]diazρpino-1-kaęboksamid (213w), wydzielono jako mieszaninę dlasteępolzcmprów (65/35) jako białe ciało stałe (0,9 g, 65%); t.t. 110-115°C (rozkład);
180
190 736
IR (KBr) 3409, 2945, 1792, 1658, 1606, 1534, 1486, 1420, 1330, 1276, 1209, 1122, 980, 960;
’H NMR (CDCl.) δ 7,66 (0,35H, d, J = 6,9), 7,46-7,20 (7H, m), 6,93 (0,35H, d, J = 7,7), 6,85 (0,65H, d, J = 7,6), 6,73 (0,65H, d, J = 7,6), 5,96 (0,35H, bs), 5,85 (0,65H, bs), 5,56 (0,65H, d, J =5,2), 5,28 (0,35H, bs), 5,20-4,98 (2H, m), 4,96-4,40 (4H, m), 3,28-2,55 (3H, m), 2,53-2,32 (1H, m), 2,23 (6H, 2s), 2,03-1,40 (7H, m).
MS (ES') 577, (ES+) 579.
[1S,9s(2RS,3S)]-9-[4-(a(etyloamino)ben/oiloamino]lN-(2-benz.yloksy-5-okso-tetI'ahydrofuranln-ylo)-6,10-diokso-12,:3,4,7,8,9,10-cktahydrc-6H-pirydazyno[ 1,2-a] [ 1,2]diazcpinOl l1-karboksyimid (21nx), wydzielono jako bezbarwny proszek (691 mg, 86 %): t.t. 150-70°C,
[a]D“ -10,1° (c 0,10, MeaCO); IR (KBr) 3313, 1791, 1679, 1654, 1597, 1528, 1501, 1457, 1407, 1371, 1315, 1255, 1184, 1122, 933;
‘H NMR (d6-DMSO) δ 8,75 (1H, d), 8,47 (1H, d), 7,84 (2H, d), 7,66 (2H, d), 7,35 (5H, m), 5,43 (1H, s), 5,06-5,00 (1H, m), 4,90l4,64 (3H, m), 4,46l4,26 (2H, m), 3,16-2,86 (2H, m), 2,45-2,05 (5H, m), 2,07 (3H, s), 2,00-1,84 (2H, m), 1,68-1,56 (2H, m);
Analiza dla C30H33N5O8 · H2O:
Obliczono: C, 59,11; H, 5,79; N, 11,49;
Stwierdzono: C, 59,38; H, 5,66; N, 11,31;
M.S. (ES +) 614 (100%), 592 (M+ +1, 66).
Kwas [nS(1S,9S)]-n-[6,10-dioksOl9-(3,4-metylenodioksybenzoiloamino)-1,2,3,4,7,8,l
-9,10-oktahydro-6H-pirydazyno-[ 1,2-a] [ 1,2]diazepino-1 lkarboksamido]-4-oksobutancwγ (415), wytworzono sposobem podobnym jak związek 214e, otrzymując białe ciało stałe (297 mg, 84%): t.t. 158-62°C;
[a]D-109,5° (c 0,1, CH.OH); IR (KBr) 3700-2500 (br), 1783,1659, 1650, 1538, 1486, 1439, 1257, 1037;
*H NMR (CD.OD) 5 7,48 (1H, dd), 7,35 (1H, d), 6,88 (1H, d), 6,03 (2H, s), 5,25-5,15 (1H, m), 5,02-4,90 (1H, m), 4,63-4,45 (2H, m), 4,30-4,20 (1H, m), 3,57-3,30 (1H, m), 3,20-3,05 (1H, m), 2,75-2,10 (5H, m), 2,10-1,60 (4H, m);
MS (ES+) 488 (M+, 25%), 487 (M+ - 1 100), 443 (8), 387 (3), 315 (5), 150 (6), 127 (5), 113 (8). Dokładna masa obliczona dla C22H25N^^q (MH+): 489,1621. Stwierdzono 489,1648.
Kwas [3S(1S,9S)]-n-{9l[(3-a(etamido)benzamido]-6,1(-ldiokso-1,2,3.4,7,2,9,10-oktahγ'drCl6H-pirydazγno[ 1,2-a] [ 1,2]-diazepino-1 -karboksamido} l4-okscbutanowy (450), wytwor/cno sposobem podobnym jak związek 214e, otrzymując białe piankowate ciało stałe (-78 mg, 94%). t.t. 175-9°C;
[a]d22 -91,7° (c 0,1, CH3OH); IR (KBr) 3700-2500 (br), 3319, 1659, 1590, 1553, 1427,
1260, ’H NMR (CD .OD) δ 8,01 (1H, d), 7,74 (1H, dd), 7,58 (1H, d),7,45-7,35 (1H, m), 5,25-5,15 (1H, m), 5,05-4,90 (1H, m),4,60l4,45 (2H, m), 4,30-4,20 (1H, m), 3,55-3,30 (1H, m), n,20-n,00 (1H, m), 2,75-2,20 (5H, m), 2,14 (3H, s), 2,20-1,60 (4H).
Analiza dla C(-H(7N5O- · 1,5H2O:
Obliczono: - C, - 52,27 ; Η - 5,12 ; N , 13,25;
Stwierdzono: C, 52,31; H, 5,86; N, 12,85.
MS (ES+) 501 (M+ 26%), 500 (M+ - 1, 100), 328 (2), 149 (3), 113 (3).
Kwas [-S(1S,9S)]-3-[4-(hydroksybenzoilo)amino-6,10-diokso-1,2,3,4,7,8,9,10-cktahγdro-6 H-pirγdazγnc[ 1,2-a] [ 1,2]-diazepino-1 lkarboksamidc]-4lckscbutanowγ (456) wytworzono sposobem podobnym jak związek 214e, otrzymując białe ciało stałe (0,73g, 72%)· t.t > 260°C;
[a ]d20 -66° (c 0,34, MeOH); IR (KBr) 3401, 2946, 1651, 1609, 1584, 1506, 1426, 1277, 1257,1177;
‘H NMR (De-DMSO) δ 10,2 (1H, bardzo bs), 9,17 (1H, bs), 8,65 (1H, s), 8,37 (1H, d, J= 5,4), 7,81 (2H, d, J = 8,2), 6,87 (2H, d, J = 8,4), 5,24 (1H, m), 4,92l4,86 (1H, m), 4,41 4,32 (2H, m), 3,68-3,21 (3H, m), 3,12-2,79 (1H, m), 2,50-1,42 (7H, m).
MS (ES+) 459.
Kwas [3S( 1S ,9S))-3--6,, 0-diokso-9-1mdoll2-oliocmino-) - 9,1O-oklabydrco l6Hlpirγdazync[ 1,2-a] [ 1,2]diazepino-1-karbcksamido--4-oksobutanowy (475), wytworzono
190 736
181 sposobem podobnym do opisanego dla związku 214e, otrzymując białe ciało stałe (79%): 11 150°C (mięknie) 190-210°C;
[α]0 Λ -97,5° (c 0,1, CH3OH), IR (KBr) 3319, 1658, 1650, 1549, 1421, 1256,
OH NMR (CD3OD) δ 7,61 (1H, d, J = 8,0), 7,43 (1H, d, J = 8,1), 7,21 (2H, m), 7,05 (1H, m), 5,21 (1H, m), 5,07-4,77 (1H, m), 4,54 (2H, m), 4,23 (1H, m), 3,46 (1H, m), 3,14 (1H, m), 2,66-1,71 (9H, m).
MS (ES+, m/z), 482 (M+ - 1, 100%).
Kwas [3S( 1 S,9S)]-3-[6,10-diokeo-1,2,3,4,7,8,9,10-oktahydzo-9-(2-toluoiloamloe)-6H-piryda8yno[1,2-a][1,2]dia8epino-1-karboksamido]-7-oksobutaoowy (404), wytworzono sposobem podobnym jak związek 214e, otrzymując białe ciało stałe (0,79 g, 86 %): t.t. 156-9°C;
[a]D2^-119,7° (c 0,1, CH3OH);
IR (KBr) 3700-2500 (br), 3387, 3309, 2956, 1785, 1659, 1650, 1535, 1422, 1278, 'H NMR (CD3OD) δ 4HH , m), ,,55-5,15 'IH, m), ,,2244,00 'IH , m), 4,88-4,45 (2H, m), 7,30-7,20 (1H, m), 3,δ5-7,30 (1H, m), 3,20-7,0δ (1H, m), 2,80-2,20 (4H, m), 2,41 (3H, s), 2,205l,60 (5H, m).
MS (ES+) 458 (M+, 27%), 457 (M+-1, 100), 413 (13), 339 (8), 285 (5), 134 (6), 127 (11).
Dokładna masa obliczona dla C22H27N4O7 (MH+): 459,1880. Stwierdzono 459,184^9
Kwas [3S(1 S,9S)]-3-16,10-diokso-1,2,3,4,7,8,9, 10-oktahydro-^IA-ffenyloacetamido)-beoz6mide]-6H5piryd68yoo[ 1 1 ^diazepino-1 -karboksamido} -45eksobut6nowy (486) wytworzono sposobem podobnym jak związek 214e, otrzymując białe ciało stale (325 mg, 89%): t.t. 165-9°C;
[]]d22 -69,1° (c 0,1, CH3OH); IR (KBr) 7 7 0052δ00 (br), 3318, 1658, 1599, 1530, 1505, 1407, 1258;
'H NMR (CD3OD) 5 7,85 (2H, d), 7,69 (2H, d), 7,38-7,20 (5H, m), δ,2δ-δ,15 (1H, m), 5,0554,90 (1H, m), 7,57-7,7δ (2H, m), 7,7057,20 (1H, m), 3,70 (2H, s), 7,δδ-3,30 (1H, m), 3,20-3,00 (1H, m), (9H, m).
Analiza dla C29H31N5O8 · 1,5H2O:
Obliczono: C, 57,61; H, 5,67, N, 11,58;
Stwierdzono: C, 57,81; H, 5,77, N, 11,47.
MS (ES+) 577 (M+, 33%), 576 (M+ -1, 100), 502 (2).
Kwas [7S(1S,9S)]-3-{6,105diokee-95[45(3-metylobutan-l5oiloamino)beoz6mldo]-1,2,3,4,7,8,9,105oktahy<Sne-ÓH-pizyd68yoo[ 1,2-a] [ 1 ^Jdiazepino-1 -k6zboksamido} 57-okeobut6oewy (487), wytworzono sposobem podobnym jak związek 214e, otrzymując białe piankowate ciało stałe (335 mg, 93%). t.t. 176-80°C;
[α]d22 -88,0° (c 0,1, CH3OH); IR (KBr) 770052δ00 (br), 3321, 2960, 1781, 1660, 1597, 1529, 1407, 1258, 1187;
'H NMR (CD3OD) 5 7,86 (2H, d), 7,69 (2H, d), δ,2555,1δ (1H, m), δ,05-7,90 (1H, m), 7,60-7,45 (2H, m), 7,70-4,20 (1H, m), 7,δ7-7,70 (1H, m), 3,20-3,00 (1H, m), 2,7δ-1,60 (12H, m), 1,00 (6 H, d).
Analiza dla C26H33N5O8 · H2OObliczono: C, 55,61; H, 6,28; N, 12,45;
Stwierdzono: C, 56,00; H, 6,37, N, 12,15.
MS (ES+) 543 (M+, 31%), 542 (M+- 1, 100), 498 (2), 468 (3).
Kwas [3S(1S,9S)]-7-[6,10-diokeo-1,2,7,7,7,8,9,10-okt6hydro595(3,7,δ5tzlmetokeybrozoilo6mioo)-6H5piryda8yoo[ 1,2-a] [ 1,2]dl6zepine-15karbeksamldo]-75oksobut6oowy (417) wytworzono sposobem podobnym do opisanego dla związku 214e, otrzymując białe ciało stałe (0,63 g, 92%)' t.t. 145-155°C (przybl., nieostra);
[]]d27 -117,óo (c 0,11, CH3OH); IR (KBr) 3327, 1658, 1586, 1548, 1501, 0416, 1341, 1238, 1126;
'H NMR (CD3OD) 8 7,22 (2H, s), 5,21 (1H, m), 5,00 (1H, m), 4,δ6, 7,79 (2H, 2m), 7,2δ (1H, m), 3,88 (6H, s), 3,80 (3H, s), 3,δδ53,43 (1H, m), 3,12 (1H, m), 2,71-1,70 (9H, m).
Analiza dla C24H30N4010 · 2H2O:
Obliczono: C, 50,52; H, 6,01; N, 9,82;
Stwierdzono: C, 50,,^^^; H, 6,05; N, 9,68.
MS (ES+ m/z) 533 (M+- 1, 100%).
182
190 330
Kwas [3S( 1 S,9S)]-3-[6,10-diokso-9-(naft-1 -oiloamino)-1,2,3,4,7,8,9,10-oktahydro-6>H-pirydazynol 1,2-a] [1,2]diazepino-1-karboksamido]-4-oksobutanowy (408) wytworzono sposobem podobnym do opisanego dla związku 214e, otrzymując białe ciało stałe (73%): 11. 157-165^ (nieostra);
[q]d27 -140,5° (c 0,1, CH3OH), IR (KBr) 7325, 1658, 1531, 1420, 1278, 1257;
Ή NMR (CD3OD) 5 2,3338,22 (1H, m), 2,0l37,72 (2H, m), 7,71 (1H, d, J = 6,0), 7,593 37,52 (3H, m), 5,23 (1H, m), 5,12-5,03 (1H, m), ,Α (2H, m), ,Α (1H, m), ,Α-,Α (1H, m), ,Α-,Α (1H, m), 2,20-1,67 (9H, m).
Analiza dla C25H26N4O7 · 2H2O:
Obliczono: C, 56,60; H, 5,70; N, 10,56;
Stwierdzono- C, 56,70; H, ,,—; N, O,,,
MS (ES +, m/z), 297 (M+ - 1, 100%).
Kwas [3S( 1 S,9S)]33-[6,10-diokso-43(aydroksy-3,5-diπetylobenzoilo)aπino-1,2,7,4,7,3 8,9,103oktahydIΌ-6H-pl)hdazyno-[ 1,2-a] [ 1,2]diazepino-1 -karboksamido^-oksobutanowy (214w), wytworzono sposobem podobnym jak związek 214e, otrzymując 210 mg (62%) białego ciała stałego· t.t. > 260°C;
[α^ο -93° (c 0,20, MeOH), IR (KBr) 3401, 2942, 1651, 1602, 1559, i426, 1421, 1325, 1276, 1210;
*H NMR (D6-DMSO) δ 9,39 (1H, bs), 2,29 (1H, d, J = 5,9), 7,55 (2H, s), ,,,, (1H, d, J= 6,1), 5,79 (1H, s), 5,25-5,21 (1H, m), 1,90-1,82 (1H, m), 4,41-3,69 (2H, m), ,Α-,Α (3H, m), 2,97-2,91 (1H, m), 2,23 (6H, s), 2,25-1,00 (7H, m).
[ 1 S,9S(2RS,3S)]-N-(2-etoksy-5-oksotetrahydrofuran-3-ylo)-6, 10-dlokso-9-(lzochinolln3 -1 -oiloamino)-1,2,3,4,7,8 ^, 103oktaahdro-6-H3pl)hdazhno[ 1,2-a] [ 1,2]diazepino-1 -karboksaamid (550q), zsyntetyzowano sposobami użytymi do wytworzenia 213e, otrzymując 550q.
[ 1 S,9S(2RS,3S)]-N-(2-benzhloksy35-oksotetrahydrof-ran-3-ylo)-6,10-dlokso393(lzocainolin-13oiloaπlno)-1 ,:2,3,4,7,8,9,10-oktahhdro-6-H-pirhdazyno[ 1,2-a] [ 1,2]diazepino- i -karboksamid (213y), zsyntetyzowano sposobami użytymi do wytworzenia 213e, otrzymując 213y
z<b d
'0
-90 73-83
[lS,9S<2S,3S)]-N-<2-fenetzksa-δ-okιztetrahySrzrUra—-3-ylo)--,-5-dloyro-9-<lzochιaolir- - -oiloomino)- - ,2,3,4,7,8,9, - 5-zytohadro---H-plrySozy—o[ - ,2-o] [ - ,2]Siozeuino- - -yarnokromiS (412a) zryntetyzzwono sporznoml użytymi So aytazrzenio 550q rtzsujac 513a-l, otrzymując 412a.
[ - S,9S<2R,3 S)] -0-(2-fenetzkry-5-oyrotetrohySrofuran-ι3-ylo)-6, - 5-Slzkro-9-<izzchl—oli—- - -oiloomino)- - ,2,3,4,7,8,9, - 5-zktohySrz---H-pirySooynz[ - ,2-a] [ - ,2]Siozepino- - -korbokromlS (412b) zsyotetyozaono ruzrznomi użytymi So aytwzroenio 550q storując 513a-2, otrzymując 4-2^
[lS,9S<2S,3S>]-0-(2-cyyioueotzksa-5-zkrotetrohySrzruroo-3-ylo)--,-5-diokro-9-(lzzchinolin- - -ziioomino)- - ,2,3,4,7,8,9, - 5-oktohadro---H-ulrySozynz[ -,2-ο] [ - ,2]dloziepino- - -korbokromiS, (412c) zryotetyzowa—z sposoboml użytymi do aytwzroeoia 550q rtorując 513b-l, otrzymując 412c.
[lS,9S<2R,3S>]-0-(2-cyklouentokra-5-zysotetrohySrzrUran-3-ylo)--,l5-Siokrz-9-<lzochl—olin- - -oiloamino)- - ,2,3,4,7,8,9, - 5-zktohaSro---H-pirySozyno[ -,2-ο] [ -,2]Slozepino- - -karnokramlS, (412d) zryotetyzowanz rporobaml użytymi So wytworzenio 550q stosując 513b-2, otrzymując 412d;
'H OMR(CDCla) δ 9,5 (-H, S), 8,9 (-H, d), 8,5 (-H, d), 7,9-7,8 (2H, m), 7,8-7,-5 (2H, m), -,55 (-H, S), 5,55 (-H, S), 5,25-5,- (2H, m), 4,75-4,-5 (-H, m), 4,-5-4,- (-H, m), 4,4-4,3 (-H, m), 3,25-3,-5 (-H, m), 3,-5-3,05 (-H, m), 2,95-2,8 (2H, m), 2,55-2,4 (2H, m), 2,-5--,5 (-4H, m).
[- S,9S<2S,3S>]-0-<2-et-kry-5--k.sot.etrohydrofuraIl-3-ylo)-6, - 5-dioyrz-9-(izochlnolin- - -oiloomino)- -,2,3,4,7,8,9, - 5-zktohySro---H-uirySosyao[ - ,2-a] [ - ,2]Siozepino- - -yornzyromld (412e) zryntetazzwooz rposonomi użytymi do wytworzenia 550q stosując 513f-l, otrzymując 412e.
[lS,9S<2R,3S)]-N-<2-etzkry-δ-oks-tetrahydrzruran-3-ylo)--,-5-dlokro-9-(izzchl—oll—- - -oiloomino)- -,:2,3,4,7,8,9,- 5-oktahysllΌ-6-H-uil'ydosyno[ -,2-o] [ - ,2] diazeuino- - -karbzyromld (412f) zryntetyzowono iporobaml użytymi So wytworzenia 550q rtorując 513f-2, otrzymując 412f.
Związki 410 i 412 wytworzo-o suzroboml użytymi do aytwzrzeala 605 z 604.
Związek R-
520y, 4-0 ró
δZ0o, 4-2
184
190 736
Kwas [3S( 1 S,9S)]-3-[(6,10-diokso-1,2,3,4,7,8,9,10-oktahydro-6H-pirydazyno[ 1,2-a]-[1,2]dia/epino-9-(tiofen-3-γlo-karbonyloamino)-1-karboksamldo]-4-oksobutanowy (410), oczyszczono metodą szybkiej chromatografii (5-25% metanolu w dichlorometanie), otrzymując 296 mg (94%) bezbarwnego ciała stałego: t.t. 90-200°C;
IR (KBr) 3338, 3096, 2950, 1787, 1726, 1657, 1546, 1420, 1279, 1258, 1125, 1092, 984, 933;
'H NMR (CD3SD) 7 8,41 (1H, d), 8,13 (1H, d), 7,54-7,41 (3H, m), 7,20 'Ή d), 5,19-5,11 (1H, m), 4,54-4,30 (1H, m), 3,27 (1H, m), 3,18-3,03 (1H, m) , (2H, m), 2,56-1,59 (7H, m).
Analizadla C9H22N4O7S · 2,5H^^·
Obliczono: C, 46,05; H, 5,49; N, 11,31;
Stwierdzono: C, 46,36; H, 5,25; N, 11,10
MS (ES+) 449 (M -1, 80%), 113 (100).
Dokładna masa obliczona dla C19H23N4S7S (MH+): 451,1287. Stwierdzono: 451,1295. Kwas [3S(1S,9S)]-3-[6,10-diokso-9-(izochinolln-l-oiloamino)-1,2,3,4,7,8,9,10-oktahγl drotoH-pirydazyrn^ 1,2-a] [ 1,2]-diazepino-1 -karboksamido] -4-oksobutanowy (412) wytworzono sposobem podobnym do opisanego dla związku 605, otrzymując białe szkliste ciało stałe (69%): t.t. 138-141°C;
[a]D23 -105,5° (c 0,5, CHzClz); IR (KBr) 3375, 1787, 1659, 1515, 1421, 1278, 1256;
Ή NMR (CDCb) 7 9,32 (1H, m), 8,79 (1H, m), 8,47 (1H, m), 7,86-7,64 (4H, m), 5,31,
5,18, 4,59, 4,37 (4 lub 5H, m), 3,55-2,76, 2,49l2,39, 2,05, 1,65 (11H, 4m).
Analiza dla C 24H25N 5S 7 · 1,5 H 2O:
Obliczono: C, 55,17, H, 5,40; N, 13,40;
Stwierdzono: C, 54,87; H, 5,22; N, 13,15.
MS (ES+, m/z) 494 (M+ -1, 100%).
Semikarbazon [3S(1S,9S)]-3-[6,10“diokso-1,2,3,4,7,8,9,10lOktahydro-9-(tiofen-3-γΊo)l - 6H-piryda/yno[ 1,2-a] [ 1,2]dia/epmo-karbonγloamino)-1 lkarboksamldo]l4loksobutanlanu t-butylu (502y) zsyntetyzowano sposobami użytymi do wytworzenia 604 z 603, otrzymując bladośmietankowy proszek: t.t. 120-180°^
[a]D23 -109° (c 0,18, C^Ch), IR (KBr) 3478, 3327, 1670, 1582, 1543, 1421, 1279, 1257, 1155;
*H NMR (CDCH, CD3OD) 7 8,04 (1H, m), 7,49 (1H, m), 7733 (IH, m), 7,17 (1H- m), 5,17-5,01 (2H, m), 4,86 (1H, m), 4,61-4,50 (1H, m), 3,45-3,29 (2H, m) 3,21-3,03 (1H, m) 2,79-2,54 (3H, m), 2,43-2,33 (1H, m), 2,11-1,66 (5H, m), 1,44 (9H, s).
Analiza dla C24H33N7S7S · H2O:
Obliczono: C, 49,56; H, 6,07; N, 16,86; S, 5,51;
Stwierdzono: C, 49,51; H, 5,93; N, 16,31; S, 5,17.
MS (ES+) 586 (100%), 564 (M+ + 1, 1,59).
Dokładna masa obliczona dla C 24H34N 4S 7S (MH+): 564,2240. Stwierdzono. 564,HH67 Semikarbazon [3S(1S,9S)]l3-[6,l0-dlokso-9-(izochinolin-1lOiloamino)-1,2,3,4,7(8,9,l
10lOktahγdro-6H-plrγdazγno[ 1,2-a]-[ 1,2]diazepino-1 -karboksamido]-4-oksobutanianu t-butylu (502z), wytworzono sposobem podobnym do opisanego dla związku 604, otrzymując bladożółte ciało stałe (90%): t.t. 14Hl145oC;
[a^24 -136,5° (c 0,06, CIECk), 'H NMR (CDCh)' 7 9,51-9,46 (1H, m), 9,11 (1H, s), 8,83 (1H, d, J = 7,8), 8,53 (1H, d,
J = 5,5), 7,89-7,83 (2H, m), 7,77-7,65 (HH, m), 7,55 (1H, d, J = 7,2), 7,18 (1H, d, J = 2,7), 5,26-5,12 (2H, m), 4,87 (1H, m), 4,59 (1H, m), 3,25-3,12 (2H, m), 2,95-2,76 (2H, m), 2,59-2,38, 2,18-1,94, 1,70 (5H, 3m), 1,44 (9H, s).
-90 73-85
Związek R4 R-
4-5o <χΛ 'no
415b ,σ\
415c 'ΠΟ
214w-1 CHj
214w-2 CHj '“no
2I4w-3 no
214w-4 /''-Ό
214w-5 />^-G
214w-6 X)
214w-7 O w CH3 X?
412g %Λ 'no
412h --no
186
190 736
[ 1 S,9S(2S,3S)]-N-(2-benzyloksy-5-oksotetrahydrofuran-3-ylo)-6.10-diokso-9-(metylenodioksybenzoiloamino)-1,2,3,4,7,8,9,10-oktahydro-6-H-pirydazyno[ 1,2-a] [ 1,2]diazepmo-1 -karboksamid (415a) zsyntetyzowano sposobami użytymi do wytworzenia 550q, otrzymując 415a.
[1S,9s(2RS,3S)]-N-(23etoksh353oksotetrahydrofuran-3-hlo)-0,10-diokso-9-(metylenodl3 oksybenzoiloamino)-1,2,3,4,3,2,9,10-oktaaydro-6-H3pi)ydazyno[ 1,2-a] [ 1,2]diazepino-1 -karboksamid (415b) zsyntetyzowano sposobami użytymi do wytworzenia 550q, otrzymując ,Ι,Ρ».
[1S,9s(2R,7S)]3N-(23benzhloksy-5-oksotet)aahd)o(U)an333ylo)-6,103dlokso-93(methlenodioksybenzoiloamino)-1,2,7,4,3,2,9,103oktahyd)o-63H-pi)hdazyno[ 1,2-3] [ 1,2]diazepino-1 -karboksamid (415c) zsyntetyzowano sposobami użytymi do wytworzenia 550q, otrzymując 415c.
[1S,3S(2RS,7S)] 3N3(2-benzyloksy35-oksotetrahyd)ofuran-3-ylo)-6,10-diokso39-(3,5-dl3 metyk^-hydroksybenzoiloamino)-1,2,3,2,7,2,9,103oktaayd)O-63H3pi)hdazhno[ 1,2-a] [ 1 ^diazepino-1-ka)boksaπid (214w-1) zsyntetyzowano sposobami użytymi do wytworzenia 550q, otrzymując 214w-1.
[1S,9S(2R,7S)]3N3(23benzyloksy-5-oksotet)aahdro(u)an-7-ylo)-6,10-dlokso39-(3,5-di3 πethlo-2-hydroksybenzoiloamino)-1,2,3,2,7,2,9,10-oktaaydro-6-H-pirydazyno[1,2-a][1,2]dla3 zepino-i-karboksamid (214w-2) zsyntetyzowano sposobami użytymi do wytworzenia 550q, otrzymując 214w-2.
[1S,9S(2S,7S)]-N-(2-benzyloksy-5-oksotet)ahhd)ofuran-33ylo)-6,10-diokso-9-(3,5-dlmetylo32-hydroksybenzoiloaπlno)-1,2,7,2,7,2,9,103oktaaydro-63H-pi)hdazhno[ 1,2-a] [ 1 ^diazepino-1 -karboksamid (214w-3) zsyntetyzowano sposobami użytymi do wytworzenia 550q, otrzymując
[1S,9S(2R,7S)]3N3(2-fenetoksy-5-oksotetraahdro(u)an333ylo)30,103diokso-9-(3,5-dlπetylo-43aydIΌkshbenzoiloaπino)-1,2,3,2,3,2,9,10-oktaaydro36-H-pidhdazhno[ 1,2-a] [ 1,2]diazepino3l3karboksaπid (214w-4) zsyntetyzowano sposobami użytymi do wytworzenia 550q, otrzymując 214w-4.
[ 1 S,9S(2S,7S)]-N-(2-fenetoksh-.‘5--oksoltet)aahdrΌ(uralr-3-y1o)-6,103dlokso393(3,53dlπe3 thlo32-ahdroksybenzoiloaπino)-1,2,7,2,7,8,9,10-oktaahd)o-63H-pi)hdazyno[ 1,2-a] [ 1,2]diazepino-1 -karboksamid (214w-5) zsyntetyzowano sposobami użytymi do wytworzenia 550q, otrzymując 214w-5.
[ 1S,9S(2R,7S)]-N-(2-chklopentoksh-53oksotetrahydrofuran373ylo)36,10-diokso393(7,53 3diπethlo34-aydroksybenzoiloaπino)-1,2,7,4,7,2,9,10-oktahyd)O363H3pirhdazhno[ 1,2-a]-[1,2]diazepino-1-karboksamid (214w-6) zsyntetyzowano sposobami użytymi do wytworzenia 550q, otrzymując 214w-6.
[ 1 S,9S(2S,7S)]-N-(2-cyklopentoksy-5-oksotetrahydrofuran-3-ylo)-6,10-dlokso39-(7,53 -dlmetylo343hyd)oksybenzoiloamino)-1,2,7,4,7,2,9,10-oktahhdro36-H3pirhdazyno[ 1,2-a]3[1,2]diazepino-1-karboksamid (214w-7) zsyntetyzowano sposobami użytymi do wytworzenia 550q, otrzymując 214w-7
[ 1 S,9s(2R,3S)]3N3(2-benzyloksy-5-oksotetraahdro(uran-3-ylo)-6,103dlokso-9-(lzocai3 nolin-1 -oiloamino)-1,2,3,4,7,2,9,10-oktaahdro-6-H-pirydazyno[ 1,2-a] [ 1,2]diazepino-1 -karboksamid (412g) zsyntetyzowano sposobami użytymi do wytworzenia 550q, otrzymując 412g.
[1S,9S(2s,3s)]-N-(2-benzhloksh35-oksotetraaydrofuran-33ylo)-6,10-dlokso-9-(lzocalnolin-1 -oiloamino)^ 1,2,3,4,7,2,9,10-oktaaydro-63H3pirhdazyno[ 1,2-a][ 1,2]diazepino- 1 -karboksamid (412h) zsyntetyzowano sposobami użytymi do wytworzenia 550q, otrzymując 412h.
OH
214w ,0
415
190 736 ‘87
Kwas [3S( 1 S,9S)]-3-(9-(40-metylenodioksybenzoilo)amino-6, 10-diokso-1,2,3,4,7,8,9,10-oktahydro-6H-pirydazyno[ 1,2-a]-[ 1,2]diazepino-1 -karboksamido)-4-ckscbutanowy (4'5) zsyntetyzowano sposobem użytym do wytworzenia 2002 z 2001, otrzymując 415.
Kwas [3S (1S,9S)--3-(9l(3,5-di(hkcrOl4-hydr(cksybenzoilo)-amino-6,10-di<ckso-1,2,3,4,l 7,8,9,10-oktahydro-6H-pirydazyno-[ 1,2-a] [ 1,2]diazepino-1 -karboksamldc)-4-oksobutanowy (214w) zsyntetγzowanc sposobem użytym do wytworzenia 2002 z 2001, otrzymując 214w
Związek R
2100k
21001
2100m
2100n
2100o
[1S,9S(2RS,3S)]-9-benzoilcamino-6,10ldicksCl02,n,4,7,8,9,10-oktahydrc-N-(2lfenetγloksy-5-oksctetrahydrcfuran-n-ylo)-6H-pirydazync[1,2-a][1,2]diazepino-1lkarboksamid (2100k) wytworzono sposobem podobnym jak związek 21-e, otrzymując mieszaninę diasterccizomerów (75/25) jako białe ciało stałe (258 mg, 8-%); t.t. 101 °C;
[ab” -96° (c 0,2, CH2Cl2); IR (KBr) --28, 29-5, 2978, 1732, 1669, 1603, 1483, 1450, 1414, 12-7, 1155, 1082, 989, 755;
’H NMR (CDCl.) δ 7,84-7,80 (2H, m), 7,54-7,17 (8H, m), 7,06-6,99 (1H, m), 6,25 (1H, d, J = 7,9 Hz), 5,41 (0,75H, d, J = 5,4 Hz), 5,-1 (0,25H, bs), 5,2--5,09 (1H, m), 4,9--4,87 (1H, m), 4,68-4,51 (2H, m), 4,40-4,-- (0,25H, m), 4,24-4,14 (0,75H, m), 3,95--,70 (1H, m), -,-0--,13 (1H, m), 3,14-2,78 (5H, m), 2,47-2,21 (2H, m), 2,05-1,50 (5H, m).
Analiza dla C29H32N4O7 0,5H2O:
Obliczono: C, 66,47; Η, N,
Stwierdzono: C, 66J7; H, 55,^^; N, 9,99.
MS (ES+ 549.
[1S,9S(2RS,3S)--9-beπ/ilmido-N-(2-cyklc>pentyloksyl5-okso-tetI'ahydIC)filIa^Πl3-ylc))l -6,10-diokso-1,2,3,4,1,2,9,10-oktahydrc-6H-piryda/γπo[ 1,2-a][ 1,2]diazepino-1 -karboksamid (21001), wytworzono sposobem podobnym jak 213e, (74%) jako bezbarwne ciało stałe' t.t. 172-80°C;
[ab -91,5° (c 0,1, CH2Cl2);
IR (KBr) -290, 1792, 1617, 1657, 1642, 1544, 1425, 1280, 1259, 1124, 977;
’H NMR (CDCl.), δ 7,80 (2H, m), 7,46 (3,5H, m), 7,00 (1H, d, J = 6,7), 6,48 0O0H, d, J = 7,9), 5,55 (0,5H, d, J = 5,3-, 5,19 (2H, s + m), 4,93 0O0H, m-, 4,62 'USH, m), 4,7-4 (1H, m), 4,18 (0,5H, m), 3,28-2,70 (4H, m), 2,49-2,29 (2H, m), 205-1,48 (15H, m).
[1 Sl9S(2RlnS)]-9-bcnzamido-6,10-dicksc-N-[2l(2-indanyloksy)-5-okso-tctrahydrofuran-3-y!o]-1,20,4,7,8,9,10-cktahydrc-6H-pirydazync[ 1,2-a] [ 1,2]diazepino-1 -karboksamid (2100m) wytworzono sposobem podobnym jak 213e, (76%) jako bezbarwne ciało stałe- 11 ~140°C, ponowne topn. 127-9oC,
[a]D2- -96,9° (c 0,11, CH^h);
IR (KBr) 3507, -308, 3251, 1772, 1660, 1641, 1566, 1545, 1457, 1424, 1-46, 1-26, 1-02, 1275, 1258, 1136, 1085, 1018, 981;
188
190 736 'H NMR (CDCl3) δ 7,78 (2H, m), 7,53 (3H, m), 7,19 (4H, m), 6,91 (1H, d, J = 7,4), 6,27 (1H, d, J = 7,6), 5,66 (1H, d, J = 5,3), 5,10 (1H, m), 4,96 (1H, m), 4,75 (2H, m), 4,52 (1H, m), 3,08 (3H, m), 3,03-2,71 (5H, m), 2,48-2,31 (2H, m), 190-1,40 (4H, m), 1,22 (1H, m)
['1S,90(2S,3S)])9)bcz'oiloaa^ino-N)(2-bezzylc)ksy)5)OksO)ΐctrahzarofuran-3-ylo))6,10-alokno)1,2,3,4,7,8,9,10)OktαhyarO)6H-plrzaαyzzo[ 1,2-a] [ 1,2]diazepino-1 )karboksamia (2100n) wytworzono sposobem podobnym do opisanego dla związku 213e, otrzymując białe szkliste ciało stałe (76%): t.t. 112-5°C;
[a]D -62,0° (c 0,1, CH2Cl2);
IR (KBr) 3305, 1789, 1677, 1665, 1535, 1422, 1279, 1256, 1119, 942,700;
‘H NMR (CDCh) 5 7,84 (2H, m), 7,58-7,27 (9H, m), 6,99 (1H, d, J = 7,8), 5,23 (1H, s), 5,23-5,11 (1H, m), 4,89 (1H, m), 4,76 (1H, d, J = 11,3), 4,55 (1H, d, J = 11,4), 4,58-4,43 (2H, m), 3,30)2,96, 2,81-2,69, 2,46-2,35, 2,16-1,66 (10H, 4 m), 2,27 (1H, d, J = 17,8)
Analiza dla C28H30N4O7 · 0,5H2O:
Obliczono: C, 61,87; H, 5,75; N, 10,32;
Stwierdzono: C, 61,88; H, 5,70; N, 10,33.
MS (ES+, m/') 535 (M+ + 1, 100%).
[ 1 O,9S(2R,3S)]-9-benzoiloamino-N-(2-benzyloksy-5-okso-tetrahzarofuraz-3-yla))6,10-diokso-1,2,3,-4,7,8,9,10-oktahyaro-6H-pirzaayzzo[ 1,2-a] [ 1,2]diazepino-1 -karboksamid (2100o) (zawierający około 7% (2S)) wytworzono sposobem podobnym do opisanego dla związku 213e, otrzymując białe szkliste ciało stałe (81%); t.t.. 115-7°C;
[a]D -121,8° (c 0,11, CH2CR;
IR (KBr) 3326, 1792, 1659, 1535, 1421, 1278, 1257, 1124, 978, ‘H NMR (CDCl) δ 7,82 (2H, m), 7,58)7,24 (8H, a), , 6,90 (1H, d, J = 7,3), 6,49 ‘HH, d, J = 7,7), 5,57 (1H, d, J = 5,5), 5,11 (2H, m), 4,91 (1H, d, J = 14,),), 4,57 (1H, d, J = 11,1), 4,81)4,6δ (1H, m), 4,65-4,54 (1H, m), 3,18)2,51 2,52-2,30, 2,05-1,62 (11H, 3 m).
Analiza dla C28H30N4O7 · 0,5H2O:
Obliczono. C, 61,87; H, 5,75; N, 10,32;
Stwierdzono: C, 61,70; H, 5,71; N, 10,15.
MS (ES+, m/z) 535 (M++ 1, 94,3%), 557 (100%).
[1S,90(2RS,3S)]-9)(3-αketamido)ben'olloammO)6,10-dl)aksa)N-(2)etokny-δ)OksO)tC) trahydrofurand-ylo)-1,2,3,4,7,δ,9,10-oktahzaro-6H)pirzdazzna[ 1,2-a] [ 1 YNiazepino-1 -karboksamid (550n) wytworzono sposobem podobnym jak związek 213e, otrzymując mieszaninę diαstercaiyomcrów (65/35) jako beżowy proszek (390 mg, 28%): t.t. 139-145°C;
[a]D23 -104° (c 0,2, MeOH);
IR (KBr) 3318, 2405, 2369, 1792, 1660, 1591, 1549, 1484, 1422, 1257, 1117;
’H NMR (D6-DMSO) δ 10,1 (1H, s), 8,80 (0,65H, d, J = 6,6), 8,58 (0,35H, d, J = 6,6), 8,59 (1H, d, J = 7,0), 8,06 (1H, Os), 7,83-7,79 (1H, m), 7,61-7,57 (1H, m), 7,47)7,39 (1H, m), 5,61 (0,35H, d, J =5,0), 5,37 (0,65H, Os), 5,17-5,14 (0,35H, m), 5,08-5,06 (0,65H, m), 4,92-4,86 (1H, m), 4,67-4,61 (0,35H, m), 4,47-4,41 (0,65H, m), 4,28-4,11 (1H, 2m), 3,80-3,59 (2H, m), 3,23-2,75 (3H, m), 2,61-1,48 (7H, m), 2,10 (3H, s), 1,25 i 1,17 (3H, 2t, J = 5,8)
MS (ES+) 528.
190 736
189
[ 1 S,9S(2RS ,3 S)']-6, 10-diokso-N-(2-etoksγ-5-oksotetra-hydrofuran-3lγlo)l9-(2-lndoloiloamino)-1 ,2,3,4,7,8,9,10lOktabydro-6H-pirγda/yno[ 1,2-a] [ 1,2]diazepino-1 -karboksamid (550o) zsyntetyzowano sposobem podobnym jak związek 213e, otrzymując bezbarwne ciało stałe (1,071 g, 80%): t.t. 155-70°C;
[a]D22 -75,8° (c 0,26, CH2Cl2);
IR (KBr) 3314, H941, 1791, 1658, 1545, 1420, 1341, 1312, 1252, 1181, 1118, 939, 749;
*H NMR (CDCI3) 7 9,45 (0,5H, s), 9,34 (0,5H, s), 7,68-7,62 (1H, m), 7,49-7,39 (2H, m), 7,33-7,26 (1H, m), 7,18-7,03 (3H, m), 5,49 (0,5H, d), 5,30 (0,5H, s), 5,26-5,13 (1H, m), 4,90-4,83 (0,5H, m), 4,76-4,49 (1H, m), 4,42-4,35 (0,5H, m), 3,97-3,74 (1H, m), 3,72-3,53 (1H, m), 3,35-2,64 (4H, m), 2,50-2,37 (1H, m), 2,20-1,82 (5H, m), 1,69-1,50 (2H, m), 1,30-1,19 (3H, m).
[1S,9S(2RS,3S)] -6,10ldiokso-N-(2-etoksγl5-oksotetrabγdrofuran-3lγlo)l9-(4-hγdroksγben/oilo)amino-1,2,3,4,7,8,9,10-oktabγdro-6H-pirγda/yno[ 1,2-a] [ 1,2]dla/epino-1 -karboksamid (550p) wytworzono sposobem podobnym jak związek 213e, otrzymując mieszaninę diastereoizomerów jako białą pianę (820 mg, 47%);
[a]D24 -75° (c 0,16, CH2Cl2);
IR (KBr) 3401,2937, 1791, 1657, 1609, 1539, 1505, 1423, 1277, 1177, 1118;
*H NMR (CDCI3) 7 8,07-8,05 (1H, m), 7,67 (HH, d, J = 7,9), 7,38-7,29 (2H, m), 6,80 (2H, d, J = 8,5), 5,49 (0,5H, d, J = 4,6), 5,H3 (0,5H, bs), 5,24-5,20 (1H, m), 5,12-5,08 (1H, m), 4,68l4,29 (2H, m), 3,92-3,45 (3H, m), 3,32-2,30 (2H, m), 2,80-1,56 (11H, m), 1,21 (3H, t, J = 7,0 H).
I*'* •N·
H ‘OH
H
245b
246b
190
190 736
[1S,9R(2RS,3S)]-9-bpnzciloαmiκo-N-(0-benz/lcksy-δ-oksc-tetrαhydrcfurαn-3-/lo)-1,2,3,4,0,8,9,10-oktahydro- i0-oksc-6H-plrydazyno[ 1,2-a] [ 1,0]diazpplno-1 -karboksamid (245b) wytworzono z kwasu (1S,9R)-9-bpnzoiloamino-i,0,3,4,7,8,9,10-oktahydro-10-okso-6H-plęydazyno[1,0-a][i,0]diazepino-i-kaęboksylowego sposobem opisan/m dla 245, otrzymując 416 mg (85%) bezbarwnej piany (~1: 1 mieszanina diastpęecizomρrów);
IR (KBr) 3392, 3302, 2942, 1792, 1642, 1529, 1520, 1454, 1119;
‘H NMR (CDCl3) 8 7,79 (2H, m), 7,51-7,09 (10H, m), 5,52 (0,5H, d, J = 5,3), 5,51 (0,5H, s), 5,36 (1H, m), 4,84 (1H, m), 4,74-4,59 (1,5H, m), 4,51 (1H, m), 4,38 (0,5H, m), 3,22-0,83 (5H, m), 2,51 (1H, m), 2,25 (2H, m), 0,0i-i,46 (6H, m).
Analiza dla C28H32N4O6 · 0,75H2O:
Obliczono: C, 62,97; H, 6,32; N, 10,49;
Stwierdzono: C, 63,10; H, 6,16; N, 10,21.
MS (ES+) 521 (M+ 1, 100%).
Kwas [3S(1 S,9R)]-3-(9-beKzoiloamino-1,2,3,4,7,8,9,10-oktahydro-10-ckeo-6H-plęydar/no[i,2-a][1,0]diazepino-i-karbokeamidc)-4-okeobutanowy (246b) wytworzono z 245b sposobem opisanym dla 246, otrzymując 104 mg (33%) białego proszku: t.t. 115-119°C;
[a]o24 -19,8° (c 0,2 MeOH);
IR (KBr) 3293,2944, 1786, 1639, 1578, 1537, 1489, 1450, 1329, 1162, 1124;
*H NMR (CD3OD) δ 7,85 (2H, d, J = 7,0), 7,49 (3H, m), 5,49 (1H, m), 4,55 (1H, m), 4,30 (2H, m), 3,40 (1H, m), 3,19-2,89 (3H, m), 2,63 (2H, m), 2,16-1,81 (5H, m), 1,60 (3H, m)
Analiza dla C21H26N4O6 · H2O:
Obliczono: C, 56,24; H, 6,29; N, 12,49;
Stwierdzono: C, 55^,^5^^ H, 6,05; N, 12,29.
MS (ES+) 429 (M-1, 100%).
Związki 513a-j wytworzono jak opisano poniżej.
Związek R
1 2
513a ΧΟ
513 a-1 'ΧΟ
513a-2
513b X
513 b-1
513 b-2 K)
513c XX
190 736
191 ciąg dalszy tabeli
I 2
513d 'AO
513e -Ί0
513f
513f-1 ,„°x/
513 f-2
513j
19H
190 736 (2RS,3S)l3l(alliloksykarbonγlo)amlno-2l(2-fenetγloksγ)-5lOksotetrahydrofuran (513a) wytworzono sposobem podobnym jak związek 513d/e, otrzymując mieszaninę diastereoizomerów (670 mg, 50%) jako olej;
IR (KBr) 3331, 2946, 1790, 1723, 1713, 1531, 1329, 1257, 1164, 1120, 1060, 977, 937, 701;
*H NMR (CDCI3) 7 7,36-7,18 (5H, m), 5,99-5,83 (1H, m), 5,41-5,34 (2H, m), 5,28-5,18 (2H, m), 4,59-4,56 (2H, m), 4,32-3,96 (2H, m), 3,85-3,73 (1H, m), 3,02-2,76 (3H, m), 2,49-2,34 (1H, m).
(2RS,3S)-3-(alliloksykarbonγlo)aminOl2-cγklopentyloksγl5lOksotetrabγdrofuran (513b) wytworzono jak 513d/e, otrzymując 8 g (51%) mieszaniny diastereoizomerów jako bezbarwny olej;
[a]D 20 -13° (c 0,25, CH2CI2);
IR (KBr) 3325, 2959, 2875, 1790, 1723, 1535, 1420, 1328, 1257, 1120, 1049, 973, 937, *H NMR (CDCI3) 7 6,02-5,80 (1H, m), 5,53-5,46 (2H, m), 5,37-5,21 (2H, m), 4,58 (HH, d, J =5,5), 4,50l4,46 (0,5H, m), 4,34-4,25 (1H, m), 4,19-4,12 (0,5H, m), 3,06-2,77 (1H, m), H^-H^ (1H, m), 1,85-1,50 (8H, m).
Analiza dla C'3H|9NO5'
Obliczono: C, 5; H, 7,H 1 N, 5,,0;
Stwierdzono C\ 56,66; H, 7,22; i-i, 4,99
MS (ES +) H70.
(2R,3S)l3-alliloksγkarbonγloamino-2-(mdanlHlyloksy)l5-oksotetrahydrofuran (513c) zsyntetyzowano sposobem podobnym jak związek 513d/e, otrzymując pojedynczy izomer (20 %) jako bladożółty olej;
[a]D24 -63,1° (c 0,2, CH2CI2);
IR (film) 3338, 2948, 1791, 1723, 1529, 1421, 1330, 1253, 11H2, 984, 9H9, 746;
'H NMR (CDCI3) 7 7,20 (4H, m), 5,87 (1H, m), 5,61 (1H, d, J = 5,4), 6,33-6,10 (HH, m), 4,70 (1H, m), 4,56 (3H, m), 3,33-3,19 (2H, m), 3,10-2,94 (2H, m), 2,81 (1H, dd, J= 8,3, 17,3), 2,43 (1H, dd, J =10,5, 17,3).
(2R,3S)l3-AlliloksγkarbonyloaminOl2lbenzyloksγ-6lOksotetI'ahydrofuran (513d) i (HS,3S)l3lAlliloksykarbonyloamino-2-benzγloksy-5-oksOltetrabydrofuran (513d/e), wytworzono sposobem opisanym przez Chapmana, Biorg. & Med. Chem. Lett., H, str. 615-618 (199H) Po przerobie metodą ekstrakcji octanem etylu i przemyciu NaHCO3, produkt osuszono (MgSOU, przesączono i odparowano, otrzymując olej, który zawierał produkt i alkohol benzylowy. Dodano heksan (200 ml) (użyto 200 ml heksanu na każde 56 g AllocAsp-(CO 2tBu)CH2SH) i mieszaninę mieszano 1 chłodzono przez noc. Dało to oleiste ciało stałe. Ciecze macierzyste zdekantowano i zachowano do chromatografii. Oleistą pozostałość rozpuszczono w octanie etylu i odparowano otrzymując olej, który krystalizowano z 10 % octanu etylu w heksanie (-500 ml). Ciało stałe przesączono, otrzymując 513d (12,2 g, 19%)-11. 108-110°C,
[a]D24 +75,72° (c 0,25, C^Cl;);
IR (KBr) 3361, 1778, 1720, 1517, 1H62, 1236, 1H22, 1135, 1121,944, 930, 760;
*H NMR (CDCh) 7 7,38 (5H, m), 5,90 (1H, m), 5,50 (1H, s), ^,3^ (0,5 H, m) 5,26 (2,5H, m), 4,87 (1H, ABq), 4,63 (3H, m), 4,31 (1H, m), 3,07 '1H, dó,, 2,46 'HH, dd)
Analiza dla C'5H|3NO5·
Obliczono. C, 61,85; H, 5,88; N, 4,81,
Stwierdzono: C, 61,86, H, 5,89; N, 4,80.
Ciecze macierzyste połączono i odparowano otrzymując olej (~200 g) zawierający alkohol benzylowy. Dodano heksan/octan etylu (9:1, 100 ml) 1 produkt oczyszczono metodą chromatografii eluując 10 % octanem etylu w heksanie dla usunięcia nadmiaru alkoholu benzylowego, 1 następnie dichlorometanem/heksanem (11 zawierającym 10% octanu etylu) Dało to 513e zawierający nieco 513d (20,5 g, 32%): t.t 45l48oc,
[a]d24 -71,26° (c 0,25, CHhCIh),
IR (KBr) 3332, 1804, 1691, 1536, 1279, 1252, 1126,976;
*H NMR (CDCh) 7 7,38 (5H, m), 5,91 (1H, m), 5,54 (1H, d, J = 5,2), 5,38 (3H, m); 4,90 (1H, ABq), 4,60 (4H, m), 2,86 (1H, dd); 2,52 (1H, dd).
-90 73-93
Anoliza dla C15H17NO5 · 0,1H2O —bllczz—o. C, , 61,47 , H , 5,91, N , 4,78;
StwierSzono: C, 61,42, H , 5,88 ; N , 4,81.
(2RS,3R)-3-(aliiU)ksykaibxniyloamino)-2-etoksy-5-oksOttetrahydrofuran (513f) zsyntetyzowano sposobem podobnym jak 513d/e, otrzymując bezbarwny olej (152 mg, 79%);
IR (film) 3334, 2983, 294-, -783, -727, -7-3, -547, -529, -422, -378, -33-, -3-3, ---4, --22, -0-0, 938;
*H OMR (CDCb) δ -,09-5,82 (2H, m), 5,55-δ,l8 (3H, m), 4,-4-4,54 (2H, m), 4,27-4,-(-H, m), 3,95-3,78 (-H, m), 3,73-3,5- (-H, m), 3,5δ-2,77 (-H, m), 2,5--2,37 (-H, m), -,35--,-7 (4H, m).
Anoliza Sla C10H ^O—5 —(liczono: C, 52,40, H, 6,60, N, 6,--;
Stwierdzono: C, 52,-6, H, 6,62, N, 5,99.
MS (ES+ ) 229 (M+ + -, -00%).
(3S,4RS)-3-(aΠiloksykarbonyloammo)-4-hydrokss-5-(2-fenoksybenzoiloksy)pentanlan t-butylu (513g).
4-Slmetyloomlozuiιyda—y (7-,0 mg, -22 mmol) SoSoro So roztworu chlorku 2-1ζ—Ιιυbenzoilu (579 mg, 2,49 mmol) i 5-7 (-00 mg, 2,07 mmol) w pirydynie (-0 ml). Mlerzo—lny mieszano w temperaturze uokojzaej przez -8 h przeS Soda-iem solanki (25 ml) i ekstrahowaniem octanem etylu (30 ml, 20 ml) Pzłacszoe ekstrakty orgo-lczne przemyto - M iwosem solnym (3 x 25 ml), ooryco—ym wodnym rostwzrem wodorowyola—r roSowego (2 x 25 ml) i solanką (25 ml), osuszono (MoSP4> i zotyzo—o. BloSopomara—czowy olej zczyrzczonz metodą szybkiej chromatografii kol-m-owej (---0% aceto-u w dichlorometanie) otrzymując 447 mg (44%) bezbarwnego oleju;
IR (film) 3375, 2980, -72-, -7-2, --02, -579, -5-4, -484, -45-, -3-8, -294, -250, -234, ----, --37, -08-, 754;
*H OMR (CDCls)' δ 7,98-7,93 (-H, m), 7,δ5-7,4l (-H, m), 7,35-7,25 (2H, m), 7,22-7,03 (3H, m), -,95 (3H, S), 5,95-5,7- (-H, m), 5,57 (-H, d), 5,35-5,l3 (2H, m), 4,5- (2H, S), 4,25 (2H, S), 4,-8-4,04 (-H, m), 3,88 (-H, m), 3,50 (-H, m), 2,5- (2H, m), -,4- (9H, s).
MS (ES+) 508 (57%), 503 (7-), 48- (M+ + -, 45), 4-8 (27), 4-2 (-00).
DokłoS—a mara znliczona dla C 26H 32O—8 (MH+): 48-,2-58. Stwierdzo-o: 48-,2-58.
<3S,4Z)-<0-aΠilzkrykorbonylo>-3-amiao-4-hySroysy-δ-(--noftzliokry)pe—tanlaa t-(-tylu (513h) wytwórz— z (3S,4R>-<0-olliloysakornz—ylo)-3-amino-4,5-SihySroksyueatoala—t-butylu rpzszbem ouiro—am dla 513g, otrzymując 5-2 mg (85%) bezbarwnego oleju;
IR (film) 34-8, 2980, -722, -7--, -5-2, -3-8, -278, -245, --98, --57, --39;
*H OMR (CDCI3) δ 8,90 (-H, d, J = 8,6), 8,2- (-H, Sd, J = -,2, 7,3), 8,04 (-H, d, J = 8,2), 7,89 (-H, dd, J = -,5, 7,9), 7,-7-7,4- (3H, m), 5,88 (-H, m), 5,49 (-H, d, J = 9,0), 5,35-5,-8 (2H, m), 4,57-4,4- (4H, m), 4,-9 (2H, m), 2,-7 (2H, m), - ,40 (9H, s).
Analizo dlo C24H29O—7:
—bliczono: C, 65,00; H, 6,59; N, 3,-6;
Stwierdzo—o: C, ó-^; H, 6,55; IN, 3,00
MS (ES+ 4-- (M + Oo, -00%), 444 (M + -, 39), 388 (44) <3S,4RS)-3-<alliloy^syyarborlyΊoaml—o)-4-hydlΌyry-δ-(3-fenzyryne—zoiloyry')ue—taaiaa t-n-tylr (513i), zryntetyzzaaao rposznem uoSzbaam jok związek 513g, otrzymując (ez(orw—a olej (5-9 mg, 85%);
IR (film) 3400, -723, -7-2, -584, -528, -489, -443, -3-7, -27-, -232, --90, ----, -098, -074, 995,755;
‘H OMR (CDCla) δ 8,-5-8,59 (-H, d), 7,84-7,-- (2H, m), 7,45-7-- (5H, m), 7,05--,97 (2H, m), -,00-5,78 (-H, m), 5,54-5,-4 (2H, m), 4,-2-4,52 (2H, m), 4,42-4,32 (2H, m), 4,08-4,22 (2H, m), 2,78-2,47 (2H, m), - ,44 (9H, s).
MS (ES+) 508 (-«“/o), 48- (M+ + -, 33)
DokłaSna mara znllczo—a dlo C26H32O—8 (MH+)' 48-,2-28. Stwlerdzo-o: 48-,2-2(3S,4ZS)-3-<aΠilzksyyarbonyloo—mlno)-4-hydr-yry-δ-(δ-metylo-3-fe—yloizzysazolzιlzisa^enta-io- t-butylu (513j) ssy—tetysoaa—z spzrznem pzSob—ym jak związek 513g, otrzymując nlaSouomoranczzwy olej (905 mg, 9-%),
194
190 736
IR (film) 3418, 3383, 2980, 1722, 1711, 1601, 1517, 1450, 1424, 1368, 1308, 1252, 1154, 1100, 994, 767, 698;
*H NMR (CDCla) 5 7,62-7,55 (2H, m), 7,δ1-7,42 (3H,m), δ,98-δ,76 (1H, m), δ,33-δ,18 (2H, m), 4,53 (2H, d), 4,18(2H, d), 3,91 (1H, m), 3,80 (1H, m), 2,76 (3H, s), 2,50 (2H, m), 1,43 (9H, s).
Analiza dla C24H30N2O8 · 0,5H2O
Obliczono: C, , 59,62 ; H , 6,46 ; N, , 579)
Stwierdzono: C , 59,46; H , 6,24 ; N, ^772.
MS (ES+) 497 (100%), 475 (M++ 1, 15), 419 (48).
(3S,4R)-3-beozylo6mioe-4,5-(dimrtylometylroodioksy)prntanian t-butylu (514) wytworzono sposobem opisanym w H. Matsunaga i in., Trtrahedzen Letters 24, str. 300953017 (1983) jako czysty diastereomer, (60%) jako olej;
[α]0 23 -36,9° (c 0,5, dichlorometan);
IR (film) 2982, 2934, 1726, 1455, 1369, 1257, 1214, 1157, 1068, 'H NMR (CDCI3) 5 7,31 (5H, m), 4,10 (1H, q, J = 6,0), 7,0δ-3,7δ (4H, m), 3,10 (1H, q, J = 6,0), 2,40 (2H, m), 1,42 (9H, s), 1,40 (3H, s), 1,34 (3H, s) (3S,7R)3-(6llilokeykarbooyloamioo)-4,5-(dimrtylometyleoodioksy)pentani6n t-butylu (516).
514 (3,02 g, 9,00 mmol) i 10% palladu na węglu (300 mg) w etanolu (30 ml) mieszano w atmosferze wodoru przez 2 h. Zawiesinę przesączono przez celit i membranę 0,7δ mm i przesącz zatężono otrzymując bezbarwny olej 515 (2,106 g, 95%) którego użyto bez oczyszczania. Olej (1,93 g, 7,88 mmol) rozpuszczono w wodzie (10 ml) i M-dioksanie i dodano wodorowęglan sodowy (695 mg, 8,27 mmol). Mieszaninę ochłodzono do 0°C i dodano kroplami chloromrówczan allilu (1,04 g, 919 ml, 8,66 mmol). Po 3 h mieszaninę ekstrahowano eterem (2 x 50 ml). Połączone ekstrakty eterowe przemyto wodą (2 x 25 ml) 1 solanką (25 ml), osuszono (MgSO4) i zatężono otrzymując bezbarwny olej. Po szybkiej chromatografii kolumnowej (10-35% octanu etylu w heksanie) uzyskano bezbarwne ciało stałe (2,69 g, 95%)· tt. 64-δoC:
[]]d^ 571° (c 1,00, CH2Cl2);
IR (KBr) 3329, 1735, 1702;
‘H NMR (CDCI3) δ 6,00-δ,82 (1H, m), δ,36-δ,17 (2H, m), 542 (1H, s), 4,56 (1H, d), 7,70-4,08 (2H, m), 4,03 (1H, m) 3,70 (1H, m), 2,52 (2H, m), 1,44 (12H, 2 x s), 1,33 (3H, s),
Analiza dla Ci6H27NO6
Obliczono: C, 58,34, H, 8,26, N, 4,25;
Stwierdzono: C, 55J2; H, 8J6; N, 4J9.
MS (+ FAB) 320 (M++ 1,41 %), 274 (70), 216 (100)
190 736
195 (nS,4R)-3-(alliloksykarbonyloamino)-4,5ldihγdroksypentanian t-butylu (517).
Roztwór 516 (2,44 g, 7,41 mmol) w 80% wodnym roztworze kwasu octowego (25 ml) mieszano w temperaturze pokojowej przez 24 h, następnie zatężono i azeotropowano z toluenem (2 x 25 ml). Pozostałość potraktowano solanką (25 ml) i ekstrahowano octanem etylu (2 x 25 ml). Frakcje organiczne osuszono (MgSO4) i zatężono otrzymując bezbarwny olej. Po szybkiej chromatografii kolumnowej (20-80% octanu etylu w dichlorometanie) uzyskano bezbarwne ciało stałe (1,99 g, 90%): t.t. 74-5°C;
[a]D” -1,3° (c 1,0, CH^h);
IR (KBr) 1723, 1691;
*H NMR (CDCl-) δ 6,02-5,72 (2H, m), 5,35-5,16 (2H, m), 4,55 (2H, d), 4,16-4,04 (2H, m), 2,76 (2H, s), 3,56 (2H, m), 2,56 (2H, m), 1,43 (9H, s);
Analiza dla C'-H(-NO6:
Obliczono: C, 53,97; H, 8,01; N, 4,84;
Stwierdzono: C, 53,79; H, 7,88; N, 4,81.
MS (+ FAB) 290 (M+ +1,44%), 234 (100).
Przykład 26
Związki 1105-1125 wytworzono jak następuje Dane fizyczne dla tych związków podano w tabeli 12.
Tabela 12
Zw Struktura Wzór cz C cz HPLC czas ret mm (metoda) czystość MS (M+H) +
1 2 n 4 5 6
1105 O C22H27N5O7 473,49 12,769 (1) 99% 496,9
1106 o / ~ ΝΆ O r il i?Ua A Ji .N-tf Y f^OH ^11 U O AnYO1 O H O N π Η δ C21H23N5O8 473,45 12,137(1) 99% 496,9
1107 O o r—\ V ' Ά I f0H O-A Aa. V S O Ho C'9H('N5^2S 479,47 11,272 (1) 97% 502,9
1108 O Q v A°h «070 B C22H23N5C^8 512,48 13,699 (1) 97% 5n6,4
1109 0 Ho C22H23N5O10 517,46 12,341 (1) 92% 541,2
196
190 736 ciąg dalszy tabeli
1 2 3 4 5 6
1110 0 'o Ho C72H25N 5O9 503,47 12,991 (1) 96% 527,9
1111 O ΟΧ UV O HO C22H25N5O9 503,47 10,951 (1) 99% 526,7
1112 o \ /Ν'Α o /7~< X W Λ°η A K O N γ \ O Ho O / C23H27N 5θ 10 533,50 11,377 (1) 98% 557,2
1113 0 O Ń J JL , °° η I* Cl· C22H26CIN5O7 507,93 16,317(1) 98% 531,5
1114 O Γ'N^| O A»' 1 I Λ Φ ηΎ C23H27N5Oo 517,50 12,902 (1) 99% 542,4
1115 o θ Cl7 C^CI^O 7 540,36 02,509 (2) 97% 563,4
1116 0 O 9. |Ά)Η /=% Η οΎΑ?1 CnH26CIN5O7 515,48 14,144 (1) 85% 538,8
1117 Ο /Χί ο ζ-/ °λ >χγ Λοη —ΧΛ θ X 1Η Η ° Ν {f C24H29N5O8 515,53 '1,55' (2) 97% 538,8
190 736
197 ciąg dalszy tabeli
1 2 3 4 5 6
1118 ολΑΫ YRRO, 465,51 13,974 (1) 96% 488,9
1119 Η O C22H33N5O7 479,54 11,079 (2) 95% 502,9
1120 Cl o λ=\ ft V_V o MY Λοη Ϊι-Υ N 0 X Αγ Ho h ° s j C21H23CIN6O 8 522,91 26,796 (1) 99% 547,3
1121 o f V Λ0Η C22H25N 5θ9 503,47 ‘1,131 (1) 99% 527,9
1122 o /nM o /7 a Wy Λοη Z“N o X λ/Η V)>-- Η 0 N ]T C74H31N 5O7 501,54 20,892 (2) 98% 525,5
1 '23 0 ’Χ'Ί ft YrW/ H£„AY h O n γ o γ no C26H24N 4O1) 552,50 15,85 > 0,98 574,0
1124 CHa Ο'* Z? ^αΑλζii Λ°η & Η C> nSY C24H29N5OH 563,53 23,3 3 6 (1) 99% 587,0
'125 ο h3c,oAJ η C2|H23Cl2N^O- 544,35 8,99 0,95 566,0
198
190 330
Etap A
Synteza 401
Żywicę TentaGel S® NH 2 (0,25 mmol/g, 5,25 g) umieszczono w naczyniu wytrząsarki ze spieku szklanego i przemyto diπetyloacetamldem (3x15 ml) Związek 400 (136 g, 2,3 mmola) rozpuszczono w DMA (10 mL) i dodano heksafluorofosforan O-benzotriazolo3N,N,N,N'-tetraπetylou)oniowh (HbTU; 0,22 g, 2,3 mmol) 1 DIEA (0,8 mL, 4,6 mmol). Roztwór przeniesiono do żywicy i dodano kolejne 5 ml DMA Mieszaninę reakcyjną wytrząsano przez 1,5 h w temperaturze pokojowej stosując wytrząsarkę z bocznym ramieniem Żywicę odsączono i przemyto diπethloacetamldeπ (4x15 ml).
190 736
199
Etap B
Synteza 1102
Żywicę 401 odbezpieczono odczynnikiem 20% (obj ) plperydyny/dlmetyloaartamidu (15 mL) przez 10 min (wytrząsanie), a następnie przez 10 min świeżym odczynnikiem piperydyny (15 ml). Następnie żywicę przemyto dimetyloacrt6midrm (6 x 15 ml), a następnie N-mrtylopizolidooem (2 x 25 mL). Związek 1101 (0,979 g, 2,11 mmol) rozpuszczono w dimrtylo6aet6mid8ir (8 mL). Dodano HBTU (0,81 g, 2,1 mmol) oraz DIEA (0,75 mL, 4,3 mmol) i roztwór, a następnie dimetyloacetamid (4 mL) dodano do żywicy. Mieszaninę reakcyjną wytrząsano przez 2 h w temperaturze pokojowej stosując wytrząsarkę z bocznym ramieniem. Przerób żywicy przeprowadzono jak opisano dla 401, otrzymując 1102.
Etap C
Synteza 1103
Ten związek wytworzono z żywicy 1102 (0,040 mmol) stosując syntetyzator Adyanced ChemTrah 396 Multiple Peptide. Automatyczne cykle polegały na przemywaniu żywicy dimetyloformamidem (2 x 1 mL), odbezpieczaniu odczynnikiem 25% (obj.) piperydyny w dimetyloformamidzie (1 mL) przez 3 min, a następnie świeżym odczynnikiem (1 mL) przez 10 min z wytworzeniem żywicy 1103. Żywicę przemywano dimetyloformamidem (3 x 1 mL) i N-metylopirolidonem (3 x 1 mL). Żywicę 1103 6aylewaoe roztworem 0,4M kwasu karboksylowego i 0,4M HOBT w N-metylopirolidonie (0,5 mL), roztworem 0,4M HBTU w N-metylopirolidonie (0,5 mL) i roztworem 1,6M DIEA w N-mrtylepizolidoole (0,7δ mL) i reakcję wytrząsano przez 2 h w temperaturze pokojowej. Etap aaylow6ol6 powtarzano. Na koniec żywicę przemywano N-metylopnolidonem (1x1 mL), dimetyloformamidem (4 x 1 mL), dichlorometanem (5 x 1 mL) i suszono pod zmniejszonym ciśnieniem. Aldehyd odszcz^^o z żywicy i odbezpieczono globalnie działaniem 95% TFA/5% ^O (obj. 1,5 mL) przez 30 min w temperaturze pokojowej. Po przemyciu żywicy odczynnikiem do ods8C8epiaoi6 (1 mL) połączone przesączę dodano do zimnego 1:1 eteru: heksanu (10 mL) i powstały osad wydzielono metodą odwirowania i dek6ot6ajl. Powstałą pastylkę rozpuszczono w 10% acrtonltzylu/90% H2O/0,1% TFA (5 mL) i liofilizowano otrzymując surowy 1105-1125 jako biały proszek Związek oczyszczono metodą semipzrpar6tywnrj RP-HPLC na kolumnie Rainin Microso^ C18 (5 m, 21,4 x 250 mm) eluowanej liniowym gradientem 6cetooitrylu (8% - 48%) zawierającego 0,1% TFA (obj.) przez 30 min z szybkością 12 mL/min Frakcje zawierające pożądany produkt zlano razem i liofilizowano otrzymując 1105-1125 (10,8 mg, 63%).
Metody analityczne HPLC·
Waters DeltaPak C18, 300A (5m, 3,9 X 150 mm) Liniowy gradient acetoniO-ylu (0%- 25%) zawierającego 0,1% TFA (obj.) przez 14 min z szybkością 1 mL/min.
Watem DeltaPak C18, 3,0A (5m, 3,9 X 150 mm). Liniowy gradient acetonki-ylu (5%- 45%) zawierającego 0,1% TFA (obj.) przez 14 min z szybkością 1 mL/min.
262b
618
200
190 736
3- (N'-t-ButyloksγkarbonyIobydrazyno)propionian benzylu (259b) zsyntetyzowano sposobem użytym do wytworzenia 259 z 258 otrzymując woskowate ciało stałe (87 g, 51%). t.t. 64l56°e;
IR (film) 3324, 2978, 1732, 1713, 1455, 1367, 1217- 1254, 1171;
'H NMR (CDCh) 7 7,35 (5H, m), 6,15 (1H, bs), 5,13 (HH, s), 3,15 (2H, t, J = 6,5), H,54 (2H, t, J = 6,5), 1,45 (9H, s).
Analiza dla C15H 22N 2O 3
Obliczono: C, 61,2; ; H , 75^3 ; N , 9.,52;
Stwierdzono: C, 6,,29 ; H , 7811 ; N , 9^1.
MS (ES+) 295 (M+ + 1).
(3S)-2-(N-H-Ben/yloksykarbonylGetylo-NI-2-butoksykarb)onylohydra/yno)karbϋłlyIobeksabydIΌpirydazynodikarboksylan '-benzylu 3-t-butylu (260b) zsyntetyzowano sposobem użytym do wytworzenia 260 z 259 otrzymując żywicę (81 g), którą użyto w dalszym etapie bez oczyszczania. Dane analityczne dla czystej próbki:
IR (film) 3318, 2976, 1733, 1451, 141H, 1393, 1366, 1256, 1161;
'H NMR (CDCI3) 7 7,34 (10H, m), 6,68 (0,5H, bs), 5,11 (4H, m), 4,63 (0,5H, bs), 4,14 (1H, m), 3,53 (2H, m), 3,08 (1H, m), 2,63 (2H, m), 2,10-1,60 (4H, m), 1,60-1,35 (19H, m + 2 x s).
(3S)l2-(N'-t-Butoksykarbonylo-N-2-karboksyetylobydra/γno)karbonγloheksahγdroplryl dazynoO-karboksylan t-butylu (261b) zsyntetyzowano sposobem użytym do wytworzenia 261 z 260 otrzymując żywicę, którą oczyszczono metodą szybkiej chromatografii (1:1 octan etylu/dichlorometan) otrzymując związek tytułowy 261 b (36,0 g, 79,4% dla 2 etapów):
IR (film) 3267, 2979, 2937, 1728, 1668, 1394, 1369, 1245, 1159;
'H NMR (CDCI3) 7 7,6 (1H, bs), 6,8 (1H, vbs), 4,47 (1H, bs), 3,73 (2H, bs), 2,98 (1H, bs), 2,66 (3H, m), 2,04 (1H, bs), 1,84 (1H, m), 1, 6-1,2 (21H, m + s) (4S)l7-t-butoksykarbonyloamino-6,10-diokso-1,2,3,4,7,8,9,10-oktabydro-6Hlplrγda/γl no[1,2-a][1,2,4]tria/epino-4-karboksylan t-butylu (262b) zsyntetyzowano sposobem użytym do wytworzenia 262 z 261 otrzymując związek tytułowy 262b, ('8,6 g, 54%) jako olej;
[a]D20 +47,7O (c 0,236, CH 2CI2);
IR (film) 3291,2978, 1738, 1727, 1690, 1678, 1439, 1243, 1164;
'H NMR (CDCI3) 7 6,59 (1H, s), 5,06 (1H, m), 4,47 (1H, m), 3,85 (3H, m), H,8H (1H, m), 2,37 (1H, m), 2,22 (1H, m), 1,92 (1H, m), 1,63 (HH, m), 1,48 1 1,46 (18H, 2 xs)
MS (ES+) 399 (M+ + 1).
(4S)-7-amino-6,10-diokso-1 ,(2,3,4,7,8,9,10lOktahγdro-6Hlplrγdazyno[ 1,2-a] [ 1,2,4]tπal zepino^-karboksylan t-butylu (518).
Związek 262b (2,43 g, 6,1 mmol) rozpuszczono w IM chlorowodorze w octanie etylu (30 ml) i mieszano w temperaturze pokojowej przez H0 h Dodano stały wodorowęglan sodowy (4 g, 46,5 mmol) 1 wodę (H0 ml), 1 mieszaninę mieszano przez 5 min przed rozdzieleniem 1 ekstrahowaniem porcji wodnej octanem etylu. Połączony roztwór organiczny przemyto wodą, nasyconą solanką, osuszono (MgSO4) i zatężono. Po oczyszczeniu metodą szybkiej chromatografii (5θ% octanu etylu w dichlorometanie - 100% octan etylu) otrzymano czysty produkt 518 (1,08 g, 59%) jako nietrwały olej;
[a]o +82° (c O^, CH2CI2);
IR (film) 3331, H977, 1731, 1680, 1664, 1439, 1420, 1315, 1158;
'H NMR (CDCI3) 7 5,08 (1H, m), 4,48 (1H, m), 3,80 (2H, Abq), 3,70 (2H, bs, wymiana z DhO), 3,53 (1H, m), H^ (1H, m), 2,30 (2H, m), 1,88 (1H, m), 1,71 (2H, m), 1,47 (9H, s).
190 330
201
(3S)-1 -benzylokshkarbonyloaeksahydropi)hdazhno-7-ka)bokshlan metylu (520).
519 (,,, g, 35,, mmol) zawieszono w metanolu (230 ml) i ochłodzono do 0°C w łaźni lodowej. Chlorek tionylu (3 ml, ,,— g, ,Ι,Ι mmol) dodawano kroplami przez 30 min i mieszaninę mieszano w temperaturze otoczenia przez 48 h Rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem w 30°C i oleistą pozostałość rozpuszczono w octanie etylu (500 ml). Roztwór organiczny przemyto nasyconym roztworem wodorowęglanu sodowego, wodą i solanką, osuszono (MgSO 4) i zatężono, otrzymując 520 PA g, 79%) jako olej;
[α]ο -25,9° (c 0,615, CH2O2);
IR (film) 2957, Π,,, 1703, 1694, 1440, 1403, 1357, 1261, 12,1, in,;
'H NMR (CDCl,) δ 7,36 (5H, s), 5,12 (2H, s), ,,— (1H, bd), ,Α (3H, s), 3,55 (1H, dd), 3,12 (1H, t), 2,06 (1H, m), 1,73 (3H, m).
Analiza dla C|4Hi7N2O4 · 0,25H2O:
Obliczono: C, 59,46; H, 639; Ν, 9,9,1
Stwierdzono C, H, 6,44; Ν, 1 ‘,00 (3S)-2-(N-23benzyloksykarbonyloetylo-NI-t-butokshkarbo3nhloayd)'azγno)karbonylohe3 ksaahd)opi)ydazynodikarboksylan 1-benzylu 7-methlu (521)
Używając sposobu podobnego do opisanego dla 260 powyżej, wytworzono 521 (96%) jako surowy olej;
[cx]d22 -22,16° (c 0,25, CH2O2),
IR (film) „i,, 2936, 2953, 1732, 1726, Pi,, 1690, 1367, 1260, 1167;
'H NMR (CDCI3) δ 7,2, (10H, m), 6,22 (1H, bs), 5,10 (,H, m), 4,80 (1H, bs), ,,,-,,, (6H, m), 3,10 (1H, m), 2,59 (2H, m), 1,9, (2H, m), Ά (10H, m + s).
(7S)32-(N’-t3butokshka)bonylo-N-2-karboksyethloayd)azyno)ka)bonyloaeksaahdroplrydazyno-3-karbokshlan metylu (522).
Używając sposobu podobnego do opisanego dla 261 powyżej, wytworzono 522 (92%) jako białe ciało stałe' t L 1263 122°C (rozkład);
[α] du +27,2° (c 0,25, CH2O2);
IR (KBr) ,,,,, ^,θ, 1710, 1626, 1497, 1290, 1250, 1206, 1179, 1159;
'H NMR (CDCI3) 8 7,60 (1H, bs), 7,9-9,9 (1H, vbs), ,,,, (1H, bs), 3,76 (5H, m + s),
3,00 (1H, m), 2,70 (3H, m), 2,16 (1H, m), 1,92 (Ι^π), 1,56 (1H,m), 1,,6 (11H, m + s).
202
190 736
Analiza dla C15H 2óN 4O 7:
Obliczono· C, 48,12; H, 7,00; N, 14,96;
Stwierdzono: C, 48,21; H, 6,96; N, 11,86.
MS (ES+) 373 (M- 1).
(4S)-7-t-butoksykarbonyloamino-6,1 0-diokso-1,2,3,4,7,8,9,1 0-oktahydro-6H-pirγda/γno[1,2-a][1,2,4]triazepino-4-karboksylan metylu (523).
522 (7,15 g, 19,1 mmol) ro/puszc/ono w dichlorometanie (100 ml) zawierającym dimetyloformamid (0,5 ml), i ochłodzono do 0°C. Dodano chlorek tionylu (1,6 ml, 2,61 g, 22 mmol) i N-etylomorfolinę (-4,86 ml, 440 mg, 38,2 mmol) i mieszaninę mieszano przez 2 h Mieszaninę organiczną przemyto 2M wodorosiarczanem sodowym (50 ml), nasyconym wodorowęglanem sodowym (50 ml) i solanką (50 ml), osuszono (MgSO4) i zatężono. Pozostałość roztarto z eterem otrzymując 523 jako białe ciało stałe (5,73 g, 84%): t.t. ;26-182°C (rozkład);
[a]D22 +65,3° (c 0,25, CHkCk);
IR (KBr) 3298, 2978, 1750, 1720, 1682, 1658, 1455, 1423, 1369, K-16, 1241, 1212, 1160;
*H NMR (CDCl.) δ 6,56 (1H, s), 5,17 (1H, dd), 4,48 (1H, bd), 3,81 (3H, m), 3,75 (3H, s), 2,83 (1H, dt), 2,40 (1H, m), 2,28 (1H, m), 1,95 (1H, m), 1,67 (1H, m), 1,47 (9H, s).
Analiza dla C15H24N4O6 · 1/6H2O:
Obliczono: C, 50,13; H, 6,82; N, 15,59;
Stwierdzono: C, 50,12; H, 6,71; N, 15,58.
MS (ES+) 357 (M+ - 1,46%), 301 (100%) (4S)-7-amino-6,1 0-diokso-1 ,2,3,4,7,8,9,10-cktahydro-6H-pirγda/ync[ 1,2-a] [ 1,2,4-triazepino-4-karboksylan metylu (524) zsyntetyzowano z 523 sposobem użytym do wytworzenia 518.
190 7-6
Związki 262a-k /syntetγ/owano sposobami użytymi do wytworzenia 211 b-f
262a-k
263a-k
Związek R
262a 263a
262b 263b Οςγ
262c 263c ęr
262d 263d CC
262e 263e OUk
262f 26-f OA H
262g 263g O
262h 263h H
2621 26-1 aA
262j 263j PhSOj-
262k 263k
(4S)-6,10ldickso-7-(2lnaftγlo)sulfonamido-1,2,3,4,7,8,9,10-oktahγdrOl6HlpirydazyπOl [;,2-a][1,2,4]-triazcpino-4-karboksγlan t-butylu (262a).
Otrzymano 44- mg (91%) związku tγtułcwegc· t.t. 56-7°C,
[ab*5+76° (c 0,15, CH^h);
204
190 736 stałe (l— mg, 53%): t.t. 53-7°C; [α]Υ +57,70 (c 0,1, CH 2Cl2);
IR (KBr) 3429, 2979, 1734, 1675, 1418, 1369, 1339, 1323, 1244, 1164, 665, 'H NMR (CDCl3) δ 8,45 (1H, s), 8,0057,59 (7H, m), 7,69-4,6δ (1H, m), 7,2δ57,17 (1H, m), 4,10-3,99 (1H, m), 3,73-3,— (2H, m), 2,7052,30 (1H, m), 1,99-1,91 (1H, m), 1,82-1,62 (2H, m), W,,, (2H, m), 1,37 (9H, s).
Anal. dla C23H28N4O,S · H2O:
Obliczono: C, 54,53; Η, 5,97; N, 11,06;
Stwierdzono: C, 54,60; H, 5,73; N, 10,,5.
MS (ES+) 489.
(45)-6, 10-diokso57-(35metoksyfeoyloureido)-1,2,3,7,7,8,9,105okt6hydro-6H5pirydazyoo-[1,2-a][1,7,4]triazepino-4-kazboksylao t-butylu (262c)
Otrzymano 120 mg (80%) bezbarwnej piany;
[]]d^+ 22,6° (c 0,1, CH 2Cl2);
IR (KBr) 3316, 1732, 1671, 1609, 1 — 1, 1495, 1455, 1432, 1316, 1288, 1245, 1218, 1158 , 1122,1023;
• H NMR (CDCl3) δ 7,16 (4H, m), 6,79 (1H, m) 6,60 (1H, m), 5,11 (1H, m), 7,δ9 (1H, m), 3,89 (2H, m), 3,77 (3H, s), 3,72 (2H, m), 2,85 (1H, m).
^)-6,105diokso-7-(2-metoksyfenyleureido)-1,7,3,4,7,8,9,105oktahydro-6H-plryd6zy5 oo[1,256][1,2,7]triazepioo-4-k6zboksyl6o t-butylu (262d) (81%) otrzymano jako bezbarwną pianę;
[α]Υ +3,7° (c 0,1, CH2^);
IR (KBr) 3468, 3446, 3269, 1734, 1698, 1667, 1609, 1—5, 1490, 0461, 0433, 0423, 1296, 1246, 1215, 1173, 1157, 1028, 756;
OH NMR (CDCI3) 5 8,23 (1H, m), 7,95 (1H, s), 6,95 (4H, m), 5,15 (1H, m), 4,60 (1H, m), 3,98-3,6δ (4H, m), 3,89 (3H, s), 2,90 (1H, m), 2,48 (1H, m), 2,25 (1H, m), 2,0δ-1,6δ (2H, m), 1,48 (9H, s).
(4S)-6, 105diokso-1 ,:2,3,4,7,8,9,10-oktahydro-7-feoyloacetylo6mino-6H-plrydazyno-[1,2-a]-[1,2,7]triazepioo-45karboksylao t-butylu (262e) otrzymano jako białe pi6okew6tr ciało
[α]Α t-,,0 (c 0,
IR (KBr) 3271 2978, 1733, 1680, 1437, 1317, 1275, 1156;
'H NMR (CDCI3) δ 7,76 (1H, s), 7,72-7,20 (5H, m), 5,03 (1H, dd), 4,52-7,40 (1H, m), 3,96-3,70 (2H, m), 3,70-3,79 (1H, m), 3,63 (2H, s), 2,97-2,75 (1H, m), 2,73-2,33 (1H, m), 2,33-2,1δ (1H, m), 2,005l,δ0 (3H, m), 1,75 (9H, s).
Analiza dla C2|H28N40l · 0,25,20:
Obliczono· (3 , 59,91 ; H, 6,82 ; N, 13,31,
Stwierdzono: (3 , 60,19 , H , 6,80; N , 1:3,30.
MS (ES+) 718 (M+ + 2, 25%), 417 (M++ 1, 100), 362 (9), 361 (75).
(4S)-6,105diokso-1,2,3,7,7,8,9,105oktahydro57-(3-frnyloureldo)56H5plryd68yoo[ 1 ^-a]-[1,2,4]tπa8rpme-4-karboksylan t-butylu (262f) otrzymano jako białe ciało stałe (273 mg, 93%): t.t. 107560C;
[α ]d 22 +7,50 (c 0,07, CH 2Cl2);
IR (KBr) 3320, 2979, 1731, 1676, 1669, 1601, 1579, 1474, 1317, 1270, 1156;
‘H NMR (CDCI3) δ 7,37-7,20 (6H, m), 7,0856,98 (1H, m), 5,12 (1H, dd), 7,67-7,(1H, m), 7,02-3,78 (2H, m), 3,75-3,65 (1H, m), 2,9752,-5 (1H, m), 7,5752,3δ (1H, m), 7,355 -7,20 (1H, m), 7,00-1,50 (3H, m), 1,48 (9H, s).
Analiza dla C20H27N5O5 · 0,4H2O:
Obliczono: C, 56,,56, H, 6,60; N,, 16,49;
Stwierdzono: C, 56,89; H, 6,58; N, 16,07.
MS (ES+) 719 (M+ + 2, 24%), 418 (M++ 1, 100), 363 (15), 362 (81), 272 (10) (7S)-6,105diokso-7-(iodolo-2-k6rboke6mido)-1,2,3,4,7,8,9,105okt6hydro56H5piryd68yno[1,2-6][1,2,4]triazepioo57-k6rbokeylan t-butylu (262g), (13 g) otrzymano jako białe ciało stałe (298 mg, 70%): t.t. 138-73°C;
[α ]D +69,8° (c 0, 1, CH 2^2);
IR (KBr) 3282,2978, 1733, 1664, 1536, 1421, 1310, 1156, 778;
190 736
Η05 'H NMR (CDCl3) 7 9,67 (1H, s), 9,53 (1H, s), 3,60 (1H, d), 7,30-7,15 (2H, m), 7,10-7,00 (1H, m), 6,93 (1H, s), 5,16-6,12 (1H, m), 4,60-4,50 (1H, m), 4,06-3,85 (2H, m), 3,85-3,70 (1H, m), 3,06-H,90 (1H, m), 2,66lH,36 (1H, m), H,35-H,20 (1H, m), 2,00-1,85 (1H, m), 1,85-1,60 (2H, m), 1,47 (9H, s)
Analiza dla C22H27N5S5 · 0,45H2O·
Obliczono: C, 68,73; H, 6,26; N, 1
Stwierdzono: C, 59,14; H, 6,24; N, 1 8.
MS (ES+) 433 (M* + 2, 26%), 44H (M++ 1, 100), 387 (17), 386 (79), 285 (20), HH9 (85), H11 (26), 185 (15), 183 (H), 139 (9).
(4S)-7-[(4-acetamido)benzamido]-6,10-diokso-1 ,(2,3,4,7,8,9,10-oktahydrotoH-pirydazyno[1,2-a][1,2,4]-tria/epmo-4-karboksyIan t-butylu (262h) otrzymano jako białe ciało stałe (325 mg, 73%); t.t. H09l12°C;
[a]d24 +62,4° (c 0,2, CH2CI2); IR (KBr) 3513, 3269, H980, 1731, 1680, 1653, 1599, 1531, 1314, 1158;
*H NMR (CDCI3) 7 9,40 (1H, s), 8,76 (1H, s), 7,7H (2Hd d), 7,47 (2H,d), U 5,0,05 (1H, m), 4,65-4,45 (1H, m), 4,06l3,70 (3H, m), (Ή, m), 5 (1H, m), 2,00-2,15 (1H, m), 2,10 (3H, s), 2,00-1,80 (1H, m), 1,80-1,60 (HH, m), 1,48 (9H, s).
Analiza dla C 22H 29N 5S 6:
Obliczono: C, 67,51; H, 6,36; N, H^;
Stwierdzono: C, H,^; H, 6,38; N, H,'-.
MS (ES+) 461 (M+ + 2, 26%), 460 (M+ + 1, 100), 405 (12), 404 (55), 354 (7), H85 (H3), H29 (5H), 183 (22).
(4S)-6,10-dioksOl3-(4lmetoksyben/oiIoamino)lOktahγdrOl6Hlpirγdazyno[ 1,2-a] [ 1,2,4]trll azepinokarboksylan t-butylu (262i) otrzymano jako białe szkliste ciało stałe (76%): t.t 86l90C;
[a]d25 +66,4° (c 0,11, CH2CI-);
IR (KBr) 1732, 1668, 1607, 1502, 1440, 1312, ^295, 1258, 1176, 1157, 1025;
*H NMR (CDCI3) 7 8,25 (1H, s), 7,77 (2H, m), 6,99 (2H, m), 5,11 -5,07 (1H, m), 4,5^55-4,48 (1H, m), 4,01-3,91 (2H, m), 3,86-3,78 (1H, m), 3,85 (3H, s), 2,98 (1H, m), 2,46-2,40 (1H, m), 2,26-2,20 (1H, m), 2,06-1,80 (1H, m), 1,30-1,64 (2H, m), 1,48 (9H, s) (4S)-6,10-diokso-1,2,3,4,7,8,9,10-oktahydro-7lfenγlosulfonyIoamino-6H-plrydazγnOl -[1,2-a][1,2,4] tria/epinol4-karboksylan t-butylu (262j) otrzymano jako białe krystaliczne ciało stałe (79%): t t 182l3°C (rozkład);
[a]d22 +92,1O (c 0,4, CH2Cl2);
IR (KBr) 3283, 1732, 1684, 1448, 1430, 1404, 1369, 1338, 1306, 1285, 1242, 1169, 1091,692;
'H NMR (CDCI3) 7 7,89 (2H, d, J = 7,4), 7,76 (1H, s), 7,64l7,49 (3H, m), 4,83 (1H, m), 4,35 (1H, brd, J = 13,0), 4,00 (1H, m), 3,74-3,63 (HH, m), 2,39-2,26 (2H, m), H,06 (1H, m), 1,504,41 (10H, m)
Analiza dla C19H 26SN 4O6.
Obliczono: C, 62,04; H, 6,98 N, 12,78;
Stwierdzono: C, 52,11; H, 5,95; N, 1H,71.
MS (ES+) 437 (M+4, 100%).
(3S)-(7-(4lben/γloksγf'enγlo)karbonyloamino-6,10ldiokso-1,2,3,4,7,8,9(10lOktahydrOl l6H-plrydazyno[1,2-a][1,2,4]tria/epinOl4lkarboksγIan t-butylu (262k) otrzymano 83%;
[a]d22 + 42,3°(c 0,11, CH2CI2);
IR (KBr) 3287, 2997, 2935, 1736, 1681, 1606, 1501, 1296, 1248, 1073,1156, 'H NMR (CDCI3) 7 9,23 (1H, s), 7,73 (2H, d), 7,38 (5H, m), 6,86 (2H, d), 6,08 (1H, m), 6,0H (2H, s), 4,48 (1H, bd), 4,16-3,65 (3H, m), 2,96 (1H, m), 2,46-2,10 (2H, m), 1,88 (1H, m), 1,63 (2H, m), 1,48 (9H, s).
MS (ES+509 (M+ +1)
Związki 263a-k zsyntetyzowano sposobami stosowanymi do wytworzenia 212b-f
Kwas (4S)-6,1 0ldiokso-7l(2-naftalenesulfonγlo)amino-1,2,3,4,7,8,9,1 (^^hydro^H-pirydazynof 1 ,H-a] [ 1,2,4]tria/epmo-4-karboksγlowγ (263a).
348 mg (94%) otrzymano jako białe piankowate ciało stałe 11;
[a]D*1 +171° (c 0,056, CH2CI2);
20-90 73IR (KBr) 342-, 3233,2953, -734, ---3, -48-, -4-5, -340, ^^-4, --67, --32, -075,--8, ’H OMR (CDCI3) δ 8,44 (-H, s), 8,55-7,-5 (7H, m), 4,85-4,83 (-H, m), 4,25-4,00 (-H, m), 4,07-3,90 (-H, m), 3,70-3,4- (2H, m), 2,38-2,30 (-H, m), 2,-2-2,0- (-H, m), -,9---,83 (-H, m), -,-46--,2- (-H, m), -,-3--,0- (-H, m), 5,95-5,77 (-H, m).
MS (ES+) 43-.
Kwos (4S>-7-<nenzo[b]tioreno-2-korbonalz)omi—o--,-5-diokso-l,2,3,4,7,8,9,-5-oytohadro-6H-plraSozy—z[ - ,2-o] [ -,2,4]-triozeplnz-4-karbokralowy (263b).
200 mg (-00%) ztroyma—z jako (iołe cloło stałe: t.t. -55°C,
[α]ο20 +-3° (c ^, CH2CI2);
IR (KBr) 343- 2935, -734, ---3, -53-, -435, -292, --77;
’H OMR (CDCI3) δ 9,73 (-H, br), 7,73-7,27 (5H, m), δ,3δ-5,25 (-H, m), 4,5--4,48 (-H, m), 4,55-3,-δ (3H, m), 3,l2-3,55 (-H, m), 2,50-2,45 (-H, m), 2,30-2,20 (-H, m), 2,-5-2,55 (-H, m), -,75--,-- (2H, m)
MS (ES+) 40-.
Kwos (4S)-6, - 5-Slokro-7-<3-metzksafenaloureido)- - ,,2,3,4,7,8,9, - 5-zytohaSr^o--H-ulιydazanz[ - ,2-a] [ - ,2,4]triozeuino-4-korbokraloay (263c).
2-- mg (100+%) otrzymano jako bezbarwną ula—y,
[α ]d23 32,5° (c 0,-, CH2Cl2);
IR (KBr) 332-, -730, ----, ---0, -555, -495, -43-, -3-4, -288, -2-7, --75, ----, ’H OMR (CDCla) δ 7,87 (-H, s), 7,58 (-H, s), 7,-9 (2H, m), -,82 (-H, m), -,-2 (-H, m), 5,2- (-H, m), 4,55 (-H, m), 3,7- (3H, r), 4,00-3,-5 (4H, m), 2,85 (-H, m), 2,35 (2H, m), -,75 (-H, m), -,7- (2H, m).
Kwos (4S)-6, - 5-Sizkro-7-<2-metoksafe—aloureido)- - ,,2,3,4,7,8,9, - 5-oktahydlΌ-6H-ulry'dazano[l,2-a][l,2,4]triozepi—z-4-yorboksalowy (263d).
(100+%) otrzymano joko bezbarwną piany;
[α]d24 +--,7° (c 0,-, CH2CI2);
IR (KBr) 3394, 3325, -6--, -603, -543, -490, -4-3, -438, -329, -3--, -292, -249, -2-4, --7-, ---9, -024, 752;
’H OMR (CDCI3) δ 8,-5 (-H, m), 7,97 (2H, m), 7,-5--,84 (3H, m), 5,29 (-H, m), 4,-2 (-H, m), 4,04-3,-5 (4H, m), 3,89 (3H, r), 2,92 (-H, m), 2,50 (-H, m), 2,30 (-H, m), 2,-0--,75 (2H, m).
Kwos (4S)--,-5-dioyso--,2,3,4,7,8,9,l5-oytohadrz-7-renaloacetalooml—o--H-uiradozy—o[-,2-a][-,2,4]tπazeuloo-4-yarboksalowa (263e) otrzymano joko białe piaokowate ciało stole (--7 mg, 98%): t.t -09--4°C;
[a]D24 +82,-° (c 0,0-, CH 2CI2);
IR (KBr) 3700-2250 (br), 3437,3274, 2959, -733, ---4, -48-, -437, -310,1177;
*H OMR (CDCI3) 5 7,99 (-H, s), 7,40-7,-5 (5H, m), 5-5555-00 -1H , m), 4,δa44,50 -BU, (s), 4,50-4,35 (-H, m), 3,9δ-3,55 (3H, m), 3,-- (2H, r), 2,93-2,78 (-H, m), 2,40-2,20 (2H, m), 2,-5-l,85 (-H, m), -,85-l,-5 (2H, m).
Anoliza dlo C'7H25N4Pδ · -H2—:
—bliczono: C, 53,9-; H, 5,8-, O, -4,8-,
Stwierdzo-o: C, 54,-2, H, 5,50; O, -4,-8.
MS (ES+) 3-0 (M+, 2-%), 359 (M+- -, -00), -9- (-4), -82 (-4), -- - (7).
Kwor (4S)-6, - 5-dlzkso- - ,,2,3,4,7,8,9, - 5-oytahadro-7-<3-rcaylorrelSo>--l l-uiry'Sas.yΊlO-[-,2-a][l,2,4]triozeulno-4-karnoksalowy (263f) otrzymano jako białe uionkowote ciało stołe (-99 mg, 92%): t.t. -49-52°C;
[o ]d24 +92,0° (c W-CH 3—H),
IR (KBr) 3755-2355 (br), 33-9, 295-, -72-, -6-4, -600, -548, -500, -444, -3-3, -238,755;
*H NMR (D6-DMSO) δ 8,90 (-H, r), 8,24 (-H, r), 7,42(2H, S), 7,30-7,20 (2H, m), 7,00--,90 (-H, m), 4,98-4,92 (-H,m), 4,32-4,22 (-H, m), 3,80-3,55 (3H, m), 2,85-2,70 (-H, m),2,35-2,25 (-H, m), 2,25-2,55 (-H, m), -,90--,35 (3H, m).
Anoliza dlo C16H19O5—5 0,75H2O:
—(llczo-o: C , 5,226 ; H , 5,5; ; N , 18,68;
Stwierdzo-o: C ,5,--;; H , 5,23; N , I8422.
'90 736
207
MS (ES+) 361 (M+, 20%), 360 (M+ - 1, 100), 241 (11), 240 (89), 196 (15), 175 (29),
111 (12).
Kwas (4S)-6,10-dioksOl7-(indolc-2-karboksamido)-1,2,3,4,7,8,9,10-oktahγdro-6HlpiΓyl da/γno[1,2-a][1,2,4]tria/.epiπo-4-karboksylohγ (263g) otrzymano jako białe ciało stałe (259 mg, 92%): t.t. 248-51°C;
[a ]d24 +94,0° (c 0,01, CH .OH);
IR (KBr) 3700-2300 (br) -341,2956, 1738, 1668, 1651, 1529, 1425, 1311, 1259, 751;
'H NMR (D6-DMSO) δ 13,29 (1H, bs), 11,72 (1H, s), 10,64 (1H, s), 7,65 (1H, d), 7,45 (1H, d), 7,26-7,15 (HH, m), 7,17 (UH, s), 7,10-7,00 (1H, m), 5,05-4,95 (UH, m), 4,40-4,25 (1H, m), 3,90-3,50 (3H, m), 2,82-2,75 (1H, m), 2,38-2,20 (1H, m), 2,20-2,00 (1H, m),
I, 90-1,35 (3H).
Analiza dla CisH 19N5O5 · 0,5H20:
Obliczono: C, 53,59; H, 5,25; N, 17,35,
Stwierdzono: C, 53,66; H, 4,88; N, 17,11.
MS (ES+) 385 (M+, 23%), 384 (M+ - 1, 100), 298 (6), 253 (8), 227 (10), 199 (23), 196 (10), '73 (9), 126 (21).
Kwas (4S)-7-|(4-acetamido)benzamidoJ-6,10-dioks(c-02,3,4,7,8,9,10-oktahγdrOl6)I I-pirydazyno[;,2-a][1,2,4-triazepino-4-karboksylcwy (26-h) otrzymano jako białe ciało stałe (282 mg, 99%): t.t. 210-5°C;
[a ]d24 +74,5° (c 0,01, CH .OH);
IR (KBr) 3700-2300 (br) 3444, 3316, 2960, 1664, 1599, 1531, 1439, 1301, 1184;
’H NMR (D6-DMSO) d 13,30 (1H, bs), 10,50 (1H, s), 10,25 (1H, s), 7,80 (2H, d), 7,68 (2H, dd 5,0004,90 (1H, m), 4,3-54425 ,ΙΗ, m), 33,003n10 (3H, m), 2,88-2,70 (1H, m), 2,35-2,25 0H, m)) 2,25--195 0H, md 2,08 ,3Η, sd l^-US (3H, m).
MS (ES+) 403 (M+, 10%), 402 (M+ - 1, 100), 358 (10), 247 (10), 227 (16), 219 1-1), 198 (12), 184(17).
Kwas (4S)-6,10-diokso-7-(4-mctoksybenzoilcamino)-oktahydro-6H-pirγda/γnc[ 1 C-a]l[1,2,4]triazepinokarboksylowy (263i) otrzymano jako białe szkliste ciało stałe (około 100%), użyte bez oczys/c/ania;
'H NMR (CDCl.) δ 9,23 (1H, s), 7,72 ^d, J = 8,8), 6,81 (2H, d, J= 8,9), 5,22 ('H, m), 4,51 (1H,m), n,97-n,75 (2H, m), 3,81 (3H, s), 3,03 (1H, m), 2,5;-5,46 (1H, m), 2,31l5,55 ('H, m),2,03 ('H, m), 1,72 (2H, m).
Kwas 15S)-6,10-dickso-1,2,3,4,7,2,9,10-oktahγdro-7-fcnylosulfonyloamino-6Hlpirydal /γno[1,2-a)[1,2,4]tria/cpino-4-karbok)γlcwy (263j) otrzymano jako białe ciało stałe (100%).
II. 73-83°(3 8^^);
[a ]d2 +104,7° (c 0,3, CH zCh),
IR (KBr) 3600-5500 (br), 3508, 1734, 1666, 1481, 1448, 1416, 1338, 1311, 1214, 1171, 1091,729, 689, 'H NMR (CDCl.) δ 7,87 (3H, m), 7,70-7,50 (-H, m), 7,16 ('H, brs), 4,99 (1H, m), 4,37 (1H, brd, J = '2,8), 3,92 (1H, m), 3,67 (d m), 2,36 ^H, m), 2,13 (1H, brd, J = 12,2), 1,56 ((Η, mm
Analiza dla C15H18SN4O6 0,25CF3CO2H.
Obliczono: Cc 455, -1 H, 4,48 N, 13,66;
Stwierdzono: C, 45,48; H, 4,711 N, 1 ',43.
MS (ES+) 383 (MH+, 100%).
Dokładna masa obliczona dla C15H19SN4O6 (MH+d 32n,102-. Stwierdzono: 383,1007
Kwas 15S)-7-(4-bcnzyloksγfenγlo)karbonyloamino-6,10-diokso-1,2,3,4,7,8,9,1 OlCktahyl drc-6H-pirydazyno[1,5-a][1,5,5]-triazepino-5lkarbok)γlowγ (263k), (100%) otrzymano· tt 130-155°C,
IR (KBr) -,,,, 2945, 1738, 1650, '611, 1501, 1445, '309, 1255, 1171;
'H NMR (CDCl.) δ 9,35 (1H, s), 7,74 (2H, d), 7,38 (5H, m), 6,85 (2H, d), 5,40 (1H, bs), 5,19 (1H, s^) 5,,^^ (2H, s^) 4,49 (1H, dd 3,92 (2H, mj, 3,68 (1H, m), 2,99 (1H, bsd 2,43 (1H, bs), 2,22 (1H, bs), 1,99 (1H, bs), 1,68 (2H, bs)
208
190 736
(2S)-6,10-(-iokso-7-(7,2-metylenodloksybenzoil(oammoj1,2,3,4,7,8,9,10-oktaah,dro30)H-pirydazyno[1,23a][1,2,2]triazepino-2-ka)boksylan metylu (5251) zsyntetyzowano sposobem użytym do wytworzenia 211 otrzymując białe krystaliczne ciało stałe (3,35 g, 83%): t.t. 2l239°C;
[α ]d20 +7,,2° (c 0,1, CH2Ch);
IR (KBr) 7232, 2959, 1747, i,,,, 1610, 1429, M,,, 1265, 1020;
'H NMR (CDCl,) δ 8,66 (1H, s), 732 (1H, dd), 7,27 (1H, d), 6,76 (1H, d), 6,02 (2H, s), 5,20 (1H, dd), ,Α-,,,, (1H, m), 2,03-3,70 (3H, m), 3,78 (3H, s), 3,09-2,88 (1H, m), 2,473 -2,35 (1H, m), 2,3532,20 (1H, m), 2,10-1,90 (1H, m), 1,85-1,50 (2H, m)
Analiza dla C 1gH20N4O7 · 0,5H2O:
Obliczono- C, 52,27; H, 5,06; N, 13,70;
Stwierdzono: C, 52,82; H, 5,00; N, i,,,,.
MS (ES+) 206 (M+ + 2, 20%), 405 (M++ 1, 100), 391 (10), 162 (6), 148 (3), 105 (2).
Kwas (,S)-^, 103diokso-3-(7,2-metylenodioksybenzoiklaminoj 1,2,3,4,7,S,,, 103oktaah3 dro-6H-pirydazyno[ Ο,2-3][ 1,2,4]-triazepino-4-karboksylowy (2631).
Zawiesinę 5251 (3,32 g, 8,2 mmol) w tetrahydrofuranie (60 ml) potraktowano roztworem LiOH 'H2O (0,63 g, 16,4 mmol, 2,0 równowazn ) w wodzie (20 ml). Powstałą mieszaninę mieszano przez 1 h, zatężono i pozostałość rozpuszczono w wodzie ,50 ml). Roztwór zakwaszono używając 2M NaHSO4 i produkt ekstrahowano EtOAc (porcje 100 m 1 i ,0 m)) . PoOączony ekstrakt przemyto raz solanką (2 x ,0 ml), osuszono (MgSO,)) i zatężono otrzymując 2631 jako białe krystaliczne ciało stałe PA g, 90%): t.t. 152-2°C;
[α]D2θ+29,6o (c 0,01, CH 3OH);
IR (KBr) 3700-2700 (br), 3242, 2942, ΠΒ, 1681, i652, i622, i,,,, 1486, 1440, 1297. ^,,, 1073;
'H NMR (D6-DMSO) δ 13,23 (1H, bs), 10,4, (1H, s), 7,45 (1H, d), 7,35 (1H, s), 7,07 (1H, d), 6,12 (2H, s), 5,00-4,93 (1H, m), ,,,,-,Α (1H, m), 3,90-3,40 (3H, m), 2,99-2,70 (1H, m), 2,2032,25 (1H, m), 2,15-2,00 (1H, m), 1,91-1,,0 (3H, m)
Analiza dla C17H 1gN4O7 · 0,2H2O:
Obliczono: C, 90,49; H, ,,—; N, Ι,Α;
Stwierdzono: C, 50,20, H, 4,95; N, i,,,,
MS (ES+) 390 (M+, 19%), 389 (M+- 1, 100), 34, (9), 204 (31), 182 (27), 111(12)
265a, c, d, f
1015, 1018, 1027,
1052, 1056, 1075, 1095
190 736
209
Związek R'
264a 265a ox
264c 265c
264d 265d OĆf
264p 1095 CLA
264f 265f CAa H
264g 1075 θψγ
264h 1018 λΑ Η
264i 1052 A
264j i000 au
264k 1056
2641 1015 <xA
[4S(2S,3S)]-N-(2-bρκrylokey-δ-oksotPtęahydIΌfuran-3-ylo)-6,10-dlckeo-7-(2-κaftalρnosulfonylo)amino-1,2,3,4,7,8,9,10-oktahydro-6H-pirydazyKo[ 1,2-a] [ 1 ^^triazepino^-karboksamid (264a) ze/ntptyzowanc sposobem podobnym jak związek 213e otrzymując białe ciało stałe (240 mg, 82%);
IR (KBr) 3380, 3066, 2947, 1789, 1750, 1691, 1454, 1417, 1368, 1298, 1262, 1235, 1193,1118, 756, 696;
'H NMR (D6-DMSO) δ 8,59 (1H, d, J = 6,8), 8,48 (1H, s), 8,25-8,09 (3H, m), 7,85-7,75 (3H, m), 7,36 (5H, m), 5,39 (1H, m), 4,21 (2H, AB, J = 14,2), 4,53-4,49 (1H, m), 4,25-4,10 (2H, m), 3,65-3,44 (3H, m), 3,13-2,99 (1H, m), 2,43-2,16 (1H, m), 1,72-0,72 (7H, m)
Analiza dla C 30H 31N 5O 8S:
Obliczono: C, , 57,96) H ) 5,03 ) N, 11 ,27,
Stwierdzono C, ) 57,28) H ) 5.,14 ) N ) 10,48.
MS (ES+) 622
210
190 736
[4S(2S,3S)] )N-(2-benrzloksy-5-okso-tctrαhydrofuraz-3-ylo)-6,10-dlokso-7-(3-mctakoznC) nyloureido)-1,2,3 ,,4,7,8,9,10)Oktahzaro-6H-piiyda'zzo[ 1,2-a] [ 1,2,4]triazepino-1 )karboksαmia (264c) wytworzono sposobem podobnym jak 213e, (55%) jako bezbarwną pianę: t.t. 135-40°C,
[a]d22 +51,6° (c 0,1, CH2Cl2);
IR (KBr) 3314, 1790, 1664, 1608, 1543, 1496, 1455, 1428, 1325, 1287, 1250, 1218, 1160,1118;
’H NMR (CDCl3) δ 8,00 (1H, d, J = 7,1), 7,66 (1H, s), 7,55 (1H, s), 7,28 (5H, m), 7,14 (2H, m), 6,87 (1H, d, J = 7,4), 6,59 (1H, m), 5,42 (1H, s), 4,66 (5H, m), 3,90)3,65 (4H, m), 3,73 (3H, s), 2,98 (2H, m), 2,38 (2H, m), 2,01-1,65 (3H, m).
[4S(20,30)]-N-(2-bez'zlokny-δ-oknotetrahydrofuran-3)Zlo)-6>,10-aioknO)7)(2)mctoksy) nezyloureido)-1 ^,^,,3,^,7,8,9,10-oktahyaro-6H-piiyaazyna[ 1,2-a] [ 1,2,4|tria'epzn^^^ 1 -ka-boksamid (264d) wytworzono sposobem podobnym jak 213e, (72%) jako bezbarwną pianę;
[a]D+21,4° (c 0,1, CH2Ch);
IR (KBr) 3302, 1791, 1689, 1678, 1664, 1602, 1536, 1489, 1461, 1437, 1420, 1249, 1119, 1023,942, 751;
'H NMR (CDCh) · δ 8,07 (1H, d, J = 7,7), 7,82 (1H, s), 7,68 (1H, d, J = 6,7), 7,49 (1H, s), 7,34 (5H, m), 6,96 (3H, m), 5,47 (1H, s), 4,82 (2H, d + m, J = 11,5), 4,63 (1H, d, J = 11,5), 4,49 (2H, m), 3,85 (4H, s + m), 3,68 (2H, m), 3,01 (2H, m), 2,46 (2H, m), 1,95 (3H, m), 1,57 (1H, m).
[4S(2RO,3S)]-N-(2-benzyloksy-δ-oksatetrahydrθnuran-3-yle)-6, 10)diokso-1,2,3,4,5,δ,9,-10)OktahzarO)7-fenyloacctyloamizo-6H-pliydayyno[ 1,2-a] [ 1,2,4]triazcplno)4-karboknamia (264e) 'syntetyzowano sposobem podobnym do użytego do wytworzenia 213e otrzymując mieszaninę diastereomerów (proporcja izomerów syn:anti 9:1) jako białe szkliste ciało stałe (128 mg, 78%): t.t. 103-8^
IR (KBr) 3419, 3302, 1793, 1664, 1535, 1421, 1327, 1256, 11^3, 973;
‘H NMR (D6-DMSO) δ 10,20 (0,9H, s), 9,35 (0,1H, s), 8,74 (0,1 H, d), 8,49 (0,9H, d), 5,36-7,1δ (10H, m), 5,67 (0,9H, d), 5,44 (0,1H, s), 4,85-4,75 (1H, m), 4,74-4,60 (1H, m), 4,77 i 4,63 (2H, dd), 4,30-4,10 (1H, m), 3,δ0)3,40 (3H, m), 3,43 (2H, s), 3,10-2,40 (3H, m), 2,25-2,15 (1H, m), 2,00-1,35 (4H, m).
Analiza dla C28H31N5O7 0,5H2O:
Obliczono C, 60,21, Η, δ,Ί'Ί; N, 1^,^^,
Stwierdzono: C, 60,38; H, 5,83; N, 12J3.
MS (ES+) 551 (M+ + 2, 33%), 550 (M++ 1, 100), 480 (7), 343 (8), 279 (4)
[40(2R0,3S)]-N-(2-bcnzyloksz-δ-oknatctrahydronuraa-3-yla)-6,10-dlokso-1,2,3,4,5,8,) -9,10-oktαhzaro-7-(3-fenyk)ureido)-6I I-pirydazyza[i,2aa]( 1,2,4]trlαz,eplzO)4-kttr^X)ksaa^ld (264f) wytworzono sposobem podobnym jak 'wiązek 213e otrzymując czysty izomer syn jako białe piankowate ciało stałe (225 mg, 82%): 11 130-5°C;
[a]D24 +10,8° (c 0,1,CH2Cl2),
IR (KBr) 3316, 1791, 1688, 1676, 1664, 1601, 1536, 1445, 1314, 1242,973, ‘H NMR (D6-DMSO) δ 8,84 (1H, s), 8,49 (1H, d), 8,19 (1H, s), 7,45-5,1δ (9H, m), 7,00-6,90 (1H, m), 5,68 (1H, d), 4,90·4,δ1 (1H, m), 4,75-4,60 (1H, m), 4,78 i 4,63 (2H, dd), 4,30-4,20 (1H, m), 3,75-3,55 (3H, m), 2,85-2,55 (3H, m), 2,25-2,15 (1H, m), 2,00-1,35 (4H, m).
Analiza dla C27H30N6O7 · 0,5H2O:
Obliczono. C, 5; H, 5»,8; N, 13,00;
Stwierdzono: C, 55,,2; Η, 5,64; N, ,2,88,
MS (ES+) 552 (M+ + 2, 30%), 551 (M++ 1, 100), 362 (19), 299 (10), 279 (4).
[4S(20,3S)]-N-(2)bezzyloknZ)5-oksotctrahyaronuran)3)ylo)-6,10)diaksO)7-(lndala)2-kar0oknamlao)-1,2,3,4,7,8,9,10-oktahyarO)6H)pirzaazyza[ 1,2-a] [ 1,2,4]trlazepmO)4-kar0a) ksamid (264g) wytworzono sposobem podobnym jak związek 213e otrzymując czysty izomer anti jako białe ciało stałe (284 mg, 80%) 11 148-53°C;
[a ]d 24 +72,0° (c 0,1, CH2O2);
IR (KBr) 3404, 3295, 1789, 1660, 1536, 1421, 1310, 1260, 1122, 749;
’H NMR (D6-DMSO) δ 11,72 (1H, s), 10,58 (1H, s), 8,73 (1H, d), 7,65 (1H, d), 7,58-7,27 (6H, m), 7,27-7,10 (1H, m), 7,17 (1H, s), 7,10-7,00 (1H, m), 5,46 (1H, s), 4,90-4,85
190 736
211 (1H, m), 7,77 i 4,68 (2H, dd), 4,3557,2δ (2H, m), 3,95-3,— (3H, m), 3,09 (1H, dd), 7,9δ52,80 (1H, m), 2,77-2,25 (2H, m), 2,10-1,3δ (7H, m).
MS (ES+) 574 (M+, 35%), 573 (M+- 1, 100), 387 (16), 383 (69), 341 (23), 327 (12), 267 (13), 200 (22).
[4S(2RS,3S)]-75[(45aaetamido)ben8amlsSo|-N-(2-benzyloksy5δ-iiksotrtrahydrc)f'uran53-ylo)-,, 105diokso-1,2,3,4,7,8,9,105okt6hydzo-6H5piryd6zyno[ 1 ^-a] [ 1,2,4]tπa8eploo-7-k6rboksamid (264h) wytworzono sposobem podobnym jak związek 213e otrzymując mieszaninę diastezromerów (proporcja izomerów syn^ti 9:1) jako białe ciało stałe (276 mg, 70%): tt
147-52°C;
IR (KBr) 3444, 3304, 1793, 1665, 1602, 1531, 1505, 1423, 1297, 1264, 1181, 1123, 966; ’H NMR ^-□MSO) δ 10,41 (1H, s), 10,22 (1H, s), 8,71 (0,1H, d), 8,48 (0,9H, d), 7,78 (2H, d), 7,67 (2H, d), 7,35-7,30 (5H, m), 5,68 (0,9H, d), 5,75 (0,1H, s), 4,88-4,80 (1H, m), 4,7δ-4,60 (1H, m), 4,77 i 4,63 (2H, dd), 4,3057,20 (1H, m), 3,90-3,δ0 (3H, m), 3,10-2,δ0 (3H, m), 7,35-2,20 (1H, m), 2,07 (3H, s), 2,0δ-1,3δ (4H, m).
Analiza dla C29H32N,O8 · OH2O:
Obliczono: C, 57,07; H, 5,61, N, 13,76;
Stwierdzono- C, 56,79, H, 5,50, N, 13,53.
MS (ES+) 594 (M+ + 2, 37%), 593 (M++ 1, 100), 387 (8), 386 (38), 358 (8), 162 (19).
[4S(2RS,3S)]5N-(25beozylokey-δ5okse-tetr6hydzofuran53-ylo)56,10-dlokso-7-(7-meteksybenzoile6mlno)-okt6hydro-6H5pirydazyno[1,2-6][1,7,4]tπazrpino57-k6zbokeamid (264i) wytworzono sposobem podobnym do opisanego dla związku 213e otrzymując białe ciało stałe (70%): t. t. 116-118°C;
IR (KBr) 3315, 2951, 1793, 1667, 1607, 1502, 1258, 1177;
’H NMR (CDCI3) δ 8,07 (1H, s), 7,77 (2H, d, J = 8,6), 7,35 (5H, m), 6,94 (2H, d, J = 8,5), 6,77 (1H)) 4,89 (1H, d, J= HJO) 4,74 (1H, m)) 4,60 (1H, d,J= 11,00) 4,48, 4,,41 (114, 2m), 3,^<^ (3H, s), 3,79, 3,71-3,53 (3H, 2m), 2,87 (2H, m), 2,47 (1H, m), 2,18, 1,91, 1,68 (5H, 3m).
|4S(2S,3S)|-N-(2-brnzylokey-5-eksO5tetIahydrofuran-3-ylo)-6,10-diokso-1,2,3,7,-,8,-9,10-oktahydro-75feoyloeulfooyloamioo-6H-plryda8yno[ 1,2-a] [ 1,2,4]trlazeplne-7-kazbeke6mid (264j) zsyntetyzowano sposobem podobnym jak związek 213e otrzymując pianę (88%),
[α]Υ +74,2° (c 0,36, CHzCfe);
IR (KBr) 3332, 3235, 1793, 1664, 1537, 1448, 1416, 1337, 1169, 118, 1092, 970, 690, ‘H NMR (CDCI3) δ 7,99 (1H, s), 7,88 (2H, d, J = 6,8), 7,64-7,48 (3H, m), 7,37 (5H, s), 7,13 (1H, d, J = 6,,9), 5,^^ (IH, s), 4,81 (2H, m), 4,^:2 (IH, d, J = 11,5), 4,48 (IH, m), 4,33 (1H, m), 3,85 (1H, m), 3,59 (2H, m), 3,03 (1H, dd, J = 7, 6, 18,2), 2,49-2,28 (3H, m), 1,94-1,40 (4H, m).
Analiza dla C26H29SNlO8:
Obliczono· C, 55,633 H, 5J1 N, 1 2,22,
Stwierdzono: C, 54,42; H, 5,,8; N, 11,66.
MS (ES+) 572 (MH+, 100%).
Dokładna masa obliczona dla C26H3oSNl08 (MH+). δ77,1815. Stwierdzono: 572,1802. [4S(2RS,3S)]7-(4-benzyloksyfenylo)kazbooylo6mloe-N-(75beozylokey-δ-oksotrtr·6hy5 drofur6n-3-ylo)-6,10-dlokee-1,2,3,7,7,8,9,10-okt6hySzo56H5plryda8yno[ 1,2-a] [ 1,2,7]tπ68rpino-7-karbokeamid (264k) wytworzono sposobem użytym dla 213e (96%);
IR (KBr) 3294, 2946, 1793, 1658, 1606, 1535, 1501, 1278, 1177, 1119;
'H NMR (CDCl3) δ 8,91 (1H, s), 7,85 (3H, m), 7,7 (10H, m), 7,02 (2H, d), 5,35 (1H, s),
5,10 (2H, s), 7,8-4,3 (5H, m), 7,00 (1H, bs), 3,78 (2H, m), 2,90 (2H, m), 2,δ5l,5 (6H, m).
[4S(2RS,3S)]5N-(2-Beozyloksy5δ5oksotrtrahydrofurao-3-ylo)-6,105dlokso-7-(3,7-mrty5 lrn(idioksybenzoiloamino)--1,2,3,4,7,8,9,10-okt6hydre56H-piryda8yoo[ 1,2-a] [ 1,7,7]tnazeploo5 57-karbokeamld (2641) wytworzono sposobem podobnym jak związek 213e, otrzymując mieszaninę di6etrrromrzów (proporcja izomerów syn 'anti 1:1) jako białe ciało stale (1,72 g,
71%) t.t. 148-60°C;
IR (KBr) 3317, 1780, 1677, 1658, 1651, 1550, 1485, 1439, 1258, 1132, 1038, 973,
0, NMR (D6-DMSO) δ 10,39 (1H, s), 8,71 (0,δH, d), 8,79 (0,5H, d), 7,44 (1H, d), 7,7257,30 (6H, m), 7,03 (1H, d), 6,12 (2H, s), 5,68 (0,5H, d), δ,7δ (0,5H, s), 4,90-4,82 (1H, m),
212
190 ,,,
4,22-2,92 (2,5H, m), 2,20-4,10 (1,5H, m), ,,—-,,,, (2H, m), ,,,,-,,,, (1H, m), 3,09 (0,5H, dd), 2,9032,59 (1,5H, m), 2,4,-2,10 (2H, m), 2,10-1,75 (4H, m)
Analiza dla C28H29N5O9 0,2H2O:
Obliczono: C 1 57,67 1 H 1 5,08i N 1 12011;
Stwierdzono' C, 1 58,011 H 1 5,331 N 1 11,51.
MS (ES+) 581 (M+ + 2, ,,Ζ), 580 (M+, 100), 374 (9), 373 (22), ,,, (12), 261 (4), 239 (7), 149 (9).
Kwas [3S(2S)373[6,103diokso373(2-naίtalenosulfRnylR)-amino-1,2,3,4,7,8,9,10-oZta3 hydro-óH-pi)hdazhnR[ 1,2-a] [ 1,2,2]-triazepino32-karboksamido]-23oksRbutanowy (265a) wytworzono sposobem podobnym jak związek 265, otrzymując białe ciało stałe (37 mg, 17%): 1.1. 12,--30°C (rozkład);
[a]D20 +30° (c 0,05, MeOH);
IR (KBr) „,Ι,293,, 1785, 1663, 1,38, ^^18, i,,,, 1164, 6,9;
*H NMR (CD3OD) δ 2,42 (1H, s), 8,06-7,50 (7H, m), 7,22 (1H, d, J = 2,2), 4,92-2,93 (1H, m), ,Α-,Α (1H, m), 4,16-4,09 (2H, m), 7,25-7,90 (3H, m), 2,24-2,78 (1H, m), 2,623 -2,,i (1H, m), 2,4232,15 (2H, m), 1,81-0,23 (,H, m).
Analiza dla C23H25N5O8S · H2O:
Obliczono 1 C, 50,27; H, 4,95; N, 12,74;
Stwierdzono: C, 50,77, H, ,,04; N, 12,60.
MS (ES+) ,30.
Kwas 33S(4S)-3-[6i 10-dlokoo37(73-me-oksffenyloureldo)-1 ^^332l,78191i 10-oktahydoo-6H-pi)ydazhno[ 1,2-a] [ 1,2,4]t)iazepino-2-Za)bRksamido]32-Rksobutanowh (265c) wytworzono sposobem podobnym jak 265, (90%) jako bezbarwne ciało stałe: 1.1 ~150°C (rozkład);
[a ]d23 +92,2° (c 0,1,20 % MeOH/CH iCk);
IR (KBr) ,,,,, 1780, 1660, 1610, 1550, 149,, 1428, 1326, Μ,, ^^51, 1223, 1160;
OH NMR (CD3OD) δ 7,16 (2H, m), 6,89 (1H, d, J = 7,8), ,Α (1H, m), 4,37 (2H, m), 3,76 (6H, s + m), 2,95 (1H, m), 2,67 (1H, m), 2,37 (1H, m), 2,20-1,25 (3H, m), 1,66 (1H, m).
Kwas [3S(4S)]-3-[6, 103diokso-7-(2-netokshfenhloureido)-1,2,3,4,7,8,9,10-Rktahhdro3 -6 H-pirydazyno[ 1,2-a] [ 1,2,4]-triazepino-4-Zarboksamido]-43oksobutanowh (265d) wytworzono sposobem podobnym jak 265, (8,%) jako bezbarwne ciało stałe: 11. ~176-29°C,
[α]ο23+11,0° (c 0,1, MeOH);
IR (KBr) 7392, 3722, 1782w, 166,, 1603, 1537, 1490, 1462, 1437, 1337, 1290, 1290, 1217,1177, 1119, 1023;
*H NMR (CD3OD) δ 8,02 (2H, m), 6,9, (4H, m), ,,0, (1H, m), 4,60 (2H, m), 3,92 (4H, s + m), 3,00 (2H, m), 2,68 (1H, m), 2,39 (1H, m), 2,00 (4H, m), 1,69 (1H, m).
Kwas [3S(4S]-3-(6,10-diokso-1 ,:2,3,4,7,8,9,10-oktahyd)R-7-fenyloacethloanino36H3pl3 )hdazynR[1,2-a][1,2,2]triazepinR-2-karboksamidRl-4-oksobutanRWh (1095) wytworzono sposobem podobnym jak związek 265, otrzymując białe ciało stałe (84 mg, 90%). 11 120-6°C,
[a]D22 +22,3° (c 0,06,, CH 3OH);
IR (KBr) 7700-2300 (br), 3287, 166,, i,,,, 1425, 1261, 1181;
*H NMR (CD3OD) 8 ,,,,-,Α (5H, m), 5,0032,90 (10^, m), 4,60-4,50 (1H, mj 4,50-4,10 (2H, m), 3,90-3,50 (3H, m), ,Α (2H, s), 3,00-2,20 0H, π) 2,80-2,80 2:^40, m), 2,352 -2,20 (1H, m), 2,20-1,50 (,H, m).
MS (ES+) 4,9 (M+ 2,%), 258 (M+ - 1, 100), 358 (27), 17, (9), 149 (,), 137 (12).
Dokładna masa obliczona dla C21H26N5O7 (MH+) 260,1272. Stwierdzono- 460,1240
Kwas [3S(4S]-3-[6,10-diRkso-1,2,3,4,7,8,9,103oktaaydrR37-(3-fenhloureido)-6H-pirhdazyno[l,2-a][1,2,4]triazepino-23karboZsamido]34-oksobutanowy (265f) wytworzono sposobem podobnym jak związek 265, otrzymując białe piankowate ciało stałe (130 ng, 88%) tt. 157-02°C;
[a]D24 +41,7° (c 0,1, CH 3OH);
IR (KBr) 770032300 (br), 332,, 1722, 1667, 1547, 1443, 1315, 12,2, 1181, 'H NMR (CD3OD) 8 7,40 (2H, dd), 7,3937,20 (2H, m), 7,06-6.9, (1H, n), 5,05-4,95 (1H, m), 4,64-2,94 (1H, m), 4,90-2,39 (1H, n), 4,79-4,15 ((0^, m\ 3,90-3,90 ,,Η, m), 2,00, -2A (1H, m), 2,20-2,29 (3H, m), 7,40-1,90 (4H, m).
MS (ES+) ,,, (M+, 24%), ,,, (M+ - 1, 100), 341 (9), 340 (5,), 296 (6), 239 (9)
190 736
213
Kwas [3S(4S)]-3-[6,10-dioksOl7l(indolOl2-karboksamldo)-1,2,3,4,7,8,9,1 (^^hydrol6H-pirγda/yno[ 1,2-(1] [ 1,2,4]triazepino-4-karboksamido]-4-oksobutanowy (1075) wytworzono sposobem podobnym jak związek 265, otrzymując białe ciało stałe (184 mg, 83%)- t t210l5°C;
[a ]d24 +43,9° (c 0,1, CH 3OH);
IR (KBr) 3700-H300 (br), 3309, 1660, 1533, 14H3, 1311, 1262, 1184;
'H NMR (CD3SD) 5 7,61 (1H, d), 3,46 (1H, d), 7,28-7,15 (1H, m), 7,15l7,00 (1H, m), 7,13 (1H, s), 5,12-4,96 (1H, m), 4,62-4,55 (1H, m), 4,50l4(25 (2H, m), 4,00-3,69 (3H, m), 3,06-2,90 (1H. m), 2,80-2,30 (3H, m), 2,H6l1,50 (4H, m).
MS (ES) 484 (M+, 26%), 483 (M+- 1, 100), 383 (25), 245 (1H), 208 (11), H00 (H1), 174 (31), 137(18).
Kwas [3 S ((S )]]3-{7-1(4-acetaanido)b)nn/mido]]0,, 0-diokso- - ,2^ 9, 10-oktahydro-6Hlpirγda/γno[1,2-a][1,2,4]-triazepmo-4-karboksamido}l4-oksobutanowγ (1018) wylworzono sposobem podobnym jak związek 265, otrzymując białe ciało stałe (177 mg, 8(%) t.t. H36l40°C;
[a ]d23 +H7,3O (c 0,1, CH 3SH);
IR (KBr) 3700-2300 (br), 3311,2957, 1662, 1599, 1531, 1318, 1266, 1182;
*H NMR (CD3SD) 5 7,83 (2H, d), 7,69 (2H, d), 5,10-4,95 (1H, m), 4,64-4,55 (1H, m), 4,60-4,35 (1H, m), 4,32-4,22 (1H, m), 4,00l3,65 (3H, m), 3,05-2,90 (1H, m), 2,80-H,30 (3H, m), 2,15 (3H, s), 2,15-1,60 (4H, m).
Analiza dla C22H 26N óO 8 1,5H20:
Obliczono: C, 49,90; H, 5,62; N, 16,87;
Stwierdzono: C, 50,21; H, 5,41; N, 16,49.
MS (ES+) 502 (M+, 28%), 501 (M+- 1, 100), 401 (8), 218 (4), 119 (2), 118 (5), 113 (16)
Kwas [3S(4S)]-3-[6, 10-dlokso-7l(4-metoksybenzoiloamino)-oStabydrOl6H-pirydazγnOl l[1,2-a][1,2,4]triazepino-4-karboksamido]-4-oSsobutanowγ (1052) zsyntetyzowano sposobem użytym do wytworzenia 265, otrzymując białe ciało stałe (0,194 g, 1θ0%). 11 138-14Hoe;
[a ]d20 +36,3° (c 0,19, CH 3OH);
IR (KBr) 3434-2962, 1782, 1660, 1607, 1637, 1504, 1441, 1424, 1313, 1293, 1258, 1177;
'H NMR (CD 3SD) 7 7,11 (2H, d, J = 8,8), 6,90 (2H, d, J = 8,9), 4,48 (1H, m), 4,34, 4,28 (1H, 2m), 4,15 (1H, m), 3,76 (3H, s), 3,75, 3,70 (3H, m), 2,88, 2,49, 2,28, 2,23, 2,00, 1,86, 1,79, 1,58 (8H, m).
Kwas [3S(^S)]^;3-(^,10ldiokso-1,(^,3,4,7,8,9,10lOktabydro-7lfenγlosulfonγIoamlnOl6Hl -piryda/yno[ 1,2-a][ 1,2,4]trlazepinOl4-karboksamido)l4lOkoobutanowy (1027) zsyntety/owal no sposobem podobnym jak związek 265 otrzymując białą pianę (88 %);
[a ]d24 +22,6° (c 0,17, MeOH);
IR (KBr) 3349, 1789, 1663, 1537, 1448, 1337, 1169, 1092, 690;
'H NMR (CD 3SD) 7 7,8H (HH, d, J = 7,8), 7,63 (3H, m), 4,74 (1H, m), 4,47 (1H, m), 4,24-4,10 (2H, m), 3,7Hl3,47 (4H, m), 2,62l2,48 (3H, m), 2,20 (1H, m), 1,94-1,35 (3H, m)
MS (ES+) 480 (M+- 1, 100%).
Dokładna masa obliczona dla C19H24SN5S8 (MH+): 482,1346. Stwierdzono 482,13H6.
Kwas [3S(4S)]-3-[6l10-diokoo-7l(4-bγdroksybenzoiloami-no)-1,2,3,4,7,8,9,10-oStabγl dro-6H-pirydazyno[ 1,2-a] [ 1 ,H,4]-tria/eplno-4-SarboSoamldo]-4-oSsobutanowγ (1056) wytworzono sposobem użytym dla 265 (95%): t.t. > 300°C;
IR (KBr) 3392, 1660, 1610, 1603, 1442, 1280, 1171, 1149, 1133;
'H NMR (CD3SD) δ 7,74 (2H, d J = 8,7), 6,84 (2H, d J = 8,7) 4,58 (1H, m), 4,41 (1H, bd, J = 12,6), 4,28 (1H, m), 3,85 (3H, m), 2,98 (1H, m), 2,8l2,3 (3H, m), 2,3-1,6 (4H, m)
Kwas [3S(4S)]3-[6,10ldioSso-7l(3,4-metylenodioksy-benzoiloamino)-1,2,3,4,7,8,9,10loStabγdrOl6Hlpiryda/γno[ 1,H-a] [ 1,2,4]tria/epinOl4lSarboksamido]l4-oSsobutanowy (1015) wytworzono sposobem podobnym jak użyto dla 265, otrzymując białe ciało stałe (14H mg, 58%). t.t. 170l6oC;
[a]d25 +3H,7O (c 0,1, CH3SH);
IR (KBr) 3700l2600 (br), 3326, H969, 1784, 166H, 1485, 1440, 1292, 1268, 1037,
214
190 736 *H NMR (CD3OD) 5 7,45 (1H, dd), 7,32 (1H, d), 6,90 (1H, d), 6,05 (2H, s), 5,10-4,90 (1H, m), 4,62-4,54 (1H, m), 4,45-4,35 (1H, m), 4,33-4,22 (1H, m), 3,95-3,65 (3H, m), 3,05-2,90 (1H, m), 0,80-0,30 (3H, m), 2,20-1,50 (4H, m).
Semikarbazon |3S(4S))]3o[[7-benzrO[ι|]toOeno-2-karboo^ykoOan^ino-6.10-dlC)kso-i ,2,o,4,-7,8,9,10-cktahydro-6H-plrydazyκo[ 1,2-a]^ ,2,4]trlazepinc]-4-oksobutanianu t-butylu (526) wytworzono sposobem podobnym jak użyto dla 502 otrzymując szkliste ciało stałe;
[a]D 20 +34° (c 0,13, CH2G2);
IR (KBr) 3437, 2929, 1670, 1530, 1428, 1288, 1156;
'H NMR (CDCh) 5 10,0 (1H, bs), 9,74 (1H, bs), 7,93 (1H, s), 7,80-7,60 (2H, m), 7,40-7,18 (3H, m), 6,15-5,30 (2H, bs), 5,00-4,85 (2H, m), 4,50-4,25 (1H, m), 3,95-3,75 (3H, m), 3,10-2,78 (2H, m), 0,03-i,60 (7H, m), 1,36 (9H, s).
Anal. dla C27H34N8O7S:
Obliczono: C, 52,76; H, 5,58; N, 18,23;
Stwierdzono: C, 5δ,20; H, 55774 N, )1,30
MS (ES+) 615.
Kwas [0S(4S)]'3-[7-(benzc[b]tiofeno-0-karbonylo)amino-6,10-dlokso-1,0,3,4,7,8,9,10-oktαhydro-6H-pii·ydazynoO[,2-a]-[1,2,4]trlαzρpmc-4-kαrbokeαmido]-4-okeobutαncw/ (1053) wytworzono sposobem podobnym jak użyto dla 214, otrzymując białe ciało stałe (106 mg,
73%); 20
[a]D20 +22° (c 0,10, MeOH);
IR (KBr) 3428, 2944, 1733, 1652, 1532, 1433, i037, 1288, 1186;
*H NMR (CD3OD) 5 7,95 (1H, s), 7,90-7,85 (2H, m), 7,43-7,05 (2H, m), 4,98 (1H, m), 4,65-4,52 (1H, m), 4,40-4,20 (2H, m), 3,85-3,70 (3H, m), 3,00-0,25 (3H, m), 3,03-2,85 (1H, m), 2,70-2,31 (3H, m), 2,10-1,55 (4H, m).
MS (ES+) 500 (jako acetal met/lowy aldeh/du).
O
528
[4S(2RS,0S)]-6,i0-dickso-N-(0-etoke/-δ-okeotetrah/drc-furan-3-/lo)-7-(0,4-mρt/lenodlcksybpnzoiloamino)-1,2,3,4,7,8,9,10-cktahydro-6H-pirydazync[ 1,2-a][ 1,0,4]tęlarpplnc-4-karboksamid (528) wytworzono sposobem podobnym jak związek 213e otrz/mując mieszaninę diaetpęρcmρrów (proporcja izomerów s/n:anti 1: 1) jako śmiptaκkcwobiałρ piankowate ciało stałe (1,05 g, 58%): t.t. 124-32°,;
IR (KBr) 3010, 2979, 1790, 1664, 1610, 1532, 1485, 1285, 1120, 1037, 932;
*H NMR (D6-DMSO) δ 10,39 (1H, s), 8,71 (0,5H, d), 8,43 (0,5H, d), 7,45 (1H, d), 7,36 (1H, s), 7,04 (1H, d), 6,12 (2H, s), 5,58 (0,5H, d), 5,34 (0,5H, s), 4,95-4,85 (1H, m), 4,70-4,52
190 7-6
215 (0,5H, m), 1',5H, m), 3,9δl3,50 (5H, m), 3,03 10,5H, dd), 2,90-5,5δ (',5H, m),
5,56l2,20 (d m), 2,'0-2,50 ^H, m), 1,16-1,13 (3H, 2 x t).
Analiza dla C2.H27N5O9 · 0,6H2O
Oblic/ono: C, 5^,2^9;; H, 5,38; N, 13,26;
Stwierdzono. C, 52,53; H, 5,35»; N, 15,72
MS (ES+) 5'9 (M+ + 2, 27%), 5'8(M+ 1, '00), 472 (7), -74 02), 373 (53), 345 (14), 149('2).
Dane z powyższych przykładów wskazują, ze związki według niniejszego wynalazku wykazują aktywność hamującą wobec enzymu przekształcającego IL-lp.
Związki według wynalazku, które są zdolne do hamowania ICE in vitro i ponadto mogą być podawane doustnie ssakom, w oczywisty sposób są przydatne klini(/nie do leczenia chorób, w których pośredniczą IL-1, apoptoza, IGIF i INF-γ. Testy te pozwalają przewidywać zdolność związków do hamowania ICE in vivo.
Aczkolwiek opisano tu wiele wykonań niniejszego wynalazku, dla specjalisty w tej dziedzinie oczywiste jest, że podstawowe konstrukcje można zmieniać uzyskując inne wykonania, w których wykorzystuje się produkty według wynalazku. Należy więc rozumieć, ze zakres obecnego wynalazku jest określony załączonymi /a)tr/ezcniami patentowymi, a nie konkretnymi wykonaniami, które przedstawiono przykładowo.

Claims (22)

1. Związek przedstawiony wzorem (VI)
Rx-N-R2 w którym:
R1 oznacza (elO)
R2 oznacza (a) p
lub (b)
O
OR13 ,0^51
OR51
H każdy R5 oznacza:
-C(O)-Rio, w którym R10 oznacza fenyl, ewentualnie podstawiony jeden raz lub wielokrotnie przez Q1, indolil, naftyl, izochinolil, prosty lub rozgałęziony C16 alkil, ewentualnie podstawiony przez fenyl, dimetylotiazol, benzotriazol albo imidazolidion;
-C(O)-N(Rio)(Rio), w którym R10 oznacza H lub fenyl, ewentualnie podstawiony przez prosty lub rozgałęziony -OC1-6 alkil;
-S(O)2-R9, w którym R9 oznacza fenyl lub naftyl;
-C(O)C(O)-Rio, w którym R10 oznacza fenyl, ewentualnie podstawiony przez prosty lub rozgałęziony -OC 1-6 alkil;
Χ5 oznacza CH lub N;
Y 2 oznacza H 2 lub O;
R13 oznacza prostą lub rozgałęzioną grupę -C1-6 alkilową, każdy R51 niezależnie oznacza prosty lub rozgałęziony -C1.6 alkil, prosty lub rozgałęziony - C 16 alkilofenyl, w którym fenyl jest ewentualnie podstawiony przez -C1, prosty lub rozgałęziony -C(O)-C16 alkil albo nasycony 4-8-członowy pierścień karbocykliczny, który ewentualnie jest skondensowany z benzenem;
każdy R21 niezaleznie oznacza H lub prostą albo rozgałęzioną grupę - C1- alkilową, każdy Q1 oznacza -N (prosty lub rozgałęziony C|_6 alkil)2, -NH2, -Cl, prosty lub rozgałęziony -O C 16 alkil ewentualnie podstawiony przez N-morfolinyl, -OH, prosty lub rozgałęziony -OC(O)C-6 alkil, prosty lub rozgałęziony -C1- alkil, prosty lub rozgałęziony -N(H)C(O)C16 alkil, prosty lub rozgałęziony -N(H)C(O)C16 alkilofenyl lub
CH2;
190 736 pod warunkiem, ze gdy R2 oznacza
R21 oznacza H; a
Y2 oznacza O, wówczas R3 nie może oznaczać -C(O)Rio, w którym R10 oznacza -CH2CH2A13, a Ar 3 oznacza nie podstawiony fenyl; albo -SO2R9, gdzie R9 oznacza metyl; oraz gdy
Y2 oznacza H2, wówczas R5 nie może oznaczać -C(O)Ri0, w którym R10 oznacza -CIFCI-FAri, a Ar3 oznacza nie podstawiony fenyl
2. Związek według zastrz. 1, w którym
R13 oznacza prosty lub rozgałęziony C1-4 alkil,
R21 oznacza -H lub -CH3;
R51 oznacza prosty lub rozgałęziony C|.6 alkil lub prosty lub rozgałęziony C1- alkilofenyl, ewentualnie podstawiony przez -Cl; a
Q1 oznacza -NH2, -C1, prosty lub rozgałęziony -OC1-6 alkil, prosty lub rozgałęziony -Calkil, -N (H) C (O) C-6 alkil, prosty lub rozgałęziony -N(H)C(O)C1_6alkilofenyl lub ch2,
3 Związek według zastrz. 1, w którym R 1 oznacza (e 10),a X 5 oznazoz CH
4 Związek we^i^di^u; ζ^^, 1, w któiym R1 oznacza (e10), a Χ5 oznaczo N.
5. Związek według aastra. 1, w którym R 5 oznacza -C(O)-R|0 lub -C(O)-C(O)-Rio.
6. Związek według zastrz. 5, w którym R10 oznacza fenyl, ewentualnie podstawiony jeden raz lub wielokrotnie przez Q1, indolil, naftyl, iznchinolil lub diRetyloriazol.
7. Związek według zastza. 6, w którym R10 oznacza fenyl, ewentualnie podstawiony jeden raz lub wielokrotnie przez Qż Q1 oznacza -N (prosty lub rozgałęziony C1- alkil)2, -NH2, -Cl, prosty lub rozgałęziony -OC1-4 alkil, -OH, prosty lub rozgałęziony -C1-4 alkil, -N(H)C(O) Cu alkil lub prosty lub rozgałęziony -N(H)C(O) Cz6elkilofecyl.
8. Związek według zastrz. 7, w kZórymRo ozoznaa αenylrze lub zvieloorotnie podstawiony w pozycji 3 lub 5 pr/ze. -Cl lut) w ponacaj 4 ρινοζ -Ν(ργζ^υ lut? r^zgałę^n C1-, alkil)2, -NH2, prosty lub rozgałęziony -OC1-4 alkil, -OH, -N(H)C(O)C1_6 alkil lub prosty lub rozgałęziony -N(H)C(O) C 1-6 alkilofecyl.
9. Związek według ^^κ. 1, wybrany z grupy obejmującej
a.
HO'
H
190 736
10. Związek według zastrz. 7, w którym Rio oznacza fenyl jeden raz lub wielokrotnie podstawiony w pozycji 3 lub 5 przez prosty lub rozgałęziony - C© alkil; a w pozycji 4 przez -O-R5, gdzie R5 oznacza H lub prostą lub rozgałęzioną grupę - Cm alkilową.
11. Związek według zastrz 1, wybrany z grupy obejmującej:
o
O
214w-7 H3C
HO'
190 736
12. Związek według zastrz. 1, w którym Ro oznacza indolil lub izochinolil
13. Związek według zastrz 12, w którym R0 oznacza izochinolil
14. Związek według zastrz 1, wybrany z grupy obejmującej.
o
213y θΟ^Ν
412a
412b
190 736
15 Związek według zastrz. 1, którym jest związek o wzorze.
4l2f
16. Związek według zastrz 1, w którym Rm oznacza fenyl podstawiony przez O / \ ch2 \ / o ·
17 Związek według zastrz 1, którym jest związek o wzorze:
O
18. Związek według zastrz 1, wybrany z grupy obejmującej ·
O
264c
Ν’
H
190 736
264d
264e
O
190 736
Η Ο
Ο
190 736
19 Związek według zastrz 1, wybrany z grupy obejmującej
304a
2001
190 736
2100C Ο
2100d
2100e
213c
190 736
213f
213g
213h
2I3i
213j
O
Cl f %
190 736
2131
2130
213ρ
213g
213r
190 736
213s
213t
213u
213v
213w
O
HO
190 736
213χ
Ο
190 736
550f
550h
550i
5501
550n
550o
190 736
55 Op
2100f
2100g
2100h
2l00k
O
190 736
21001
2100m
2100η
5 2100ο ; and
20 Związek przedstawiony wzorem:
(IV) w którym m oznacza 1 lub 2
190 736
Ri oznacza (elO-A) Y2
R3 jest wybrany z grupy obejmującej: CN, -C(O)-H, -C(O)-CH?-T|-Ru, -C(O)-CH2-F, -C=N-O-R9 i-CO-Ar2;
każdy R5 jest niezależnie wybrany z grupy obejmującej- -C(0)-Rio, -C(O)O-R9, -C(O)-N(R10)(R|0), -S(O)2-R9, -S(O)2-NH-Ri0, -C(O)-CH2-O-R9, -C(O)C(O)-Ri0, -R9, -H, C(O)C(O)-OR10, -C(O)-C(O)-N(R9)(RI0),
Y2 oznacza H2 lub O;
każdy T| jest niezależnie wybrany z grupy obejmującej -0-, -S-, -S(O)- i -S(O)2-; każdy R9 jest niezależnie wybrany z grupy obejmującej Ar3 1 prostą lub rozgałęzioną grupę -C1-6 alkilową, ewentualnie podstawioną przez -Ar3, przy czym grupa -C|.6 alkilowa jest ewentualnie nienasycona, każdy Rio jest niezależnie wybrany z grupy obejmującej -H, -Ar3, grupę -C3-6 cykloalkilową 1 prostą lub rozgałęzioną grupę -Ci_6 alkilową, ewentualnie podstawioną przez -Ar3, przy czym grupa -C i_6 alkilowa jest ewentualnie nienasycona, każdy Rn jest niezależnie wybrany z grupy obejmującej- -Ar4, -(CH2)i-3-Ar4, -H i -C(O)-Ar4;
R15 jest wybrany z grupy obejmującej -OH, -OAr3, -N(H)-OH i -OC|_6, w której C|_6 oznacza prostą lub rozgałęzioną grupę alkilową, ewentualnie podstawioną przez -An, -C0NH2, -OR5, -OH, -OR9 lub -CO2H;
każdy R2i jest niezależnie wybrany z grupy obejmującej H lub prostą lub rozgałęzioną grupę -C1-6 alkilową;
Ar2 jest niezależnie wybrany spośród następujących grup, w których dowolny pierścień ewentualnie może być raz lub wielokrotnie podstawiony przez -Q, lub fenyl, ewentualnie podstawiony przez -Qi:
(ii) (hh) w których każdy Y jest niezależnie wybrany z grupy obejmującej O i S, każdy Ar3 oznacza grupę cykliczną niezależnie wybraną spośród grup obejmujących grupę arylową zawierającą 6, 10, 12 lub 14 atomów węgla i od 1 do 3 pierścieni i aromatyczną grupę heterocykliczną zawierającą od 5 do 15 atomów w pierścieniu i od 1 do 3 pierścieni, która zawiera co najmniej jeden heteroatom wybrany spośród -0-, -S-, -SO-, -SO2-, =N-, -NH-, N(R5)- i -N(R9)- i ewentualnie zawiera jedno lub więcej podwójnych wiązań oraz ewentualnie zawiera jeden lub więcej pierścieni aromatycznych, przy czym grupa cykliczna jest ewentualnie raz lub wielokrotnie podstawiona przez -Qi, każdy Ar4 oznacza grupę cykliczną niezależnie wybraną spośród grup obejmujących grupę arylową zawierającą 6, 10, 12 lub 14 atomów węgla 1 od 1 do 3 pierścieni, i grupę heterocykliczną zawierającą od 5 do 15 atomów w pierścieniu i od 1 do 3 pierścieni, która zawiera co najmniej jeden heteroatom wybrany spośród -0-, -S-, -SO-, SÓ2, =Ν-, -NH-, -N(Rs)190 736 i N(R<))- i ewentualnie zawiera jedno lub więcej podwójnych wiązań oraz ewentualnie zawiera jeden lub więcej pierścieni aromatycznych, przy czym grupa cykliczna jest ewentualnie raz lub wielokrotnie podstawiona przez -Qi;
każdy Qi jest niezależnie wybrany z grupy obejmującej -NH2, -CO2H, -Cl, -F, -Br, -1, -NO2, -CN, =0, -OH, perfluoro-C1-3 alkil, R-, -OR-, -NRDK5, -OR-, -N(R9)( Rio), -R9, -C(O)- R10 1
O / \ t Λ' o
pod warunkiem, ze gdy -Ap3 jest podstawiony przez grupę Qi, która zawiera jedną lub więcej dodatkowych grup -Ar3, wówczas te dodatkowe grupy -Ap3 nie są podstawione innymi grupami -Ar3.
21. Związek przedstawiony wzorem:
(V) w którym: m oznacza 1; R1 oznacza:
(elO-B)
R3 oznacza -((0(4-1, każdy R 5 oznacza -C(0)-Ar3;
Y 2 oznacza O;
każdy R9 jest niezaleznie wybrany z grupy obejmującej -Ar3 i prostą lub rozgałęziona grupę -C1-6 alkilową ewentualnie podstawioną przez -Ar3, przy czym grupa -Cm alkilowa jest ewentualnie nienasycona;
każdy Ru jest niezależnie wybrany z grupy obejmującej -Ar3, grupę -C3.6 cykloalkilową i prostą lub rozgałęzioną grupę -Cm alkilową, ewentualnie podstawioną przez -Ad. przy czym grupa -Cm alkilowa jest ewentualnie nienasycona;
R15 oznacza -OH; każdy R2i oznacza -H;
każdy Ar3 oznacza izochinolil, ewentualnie raz lub wielokrotnie podstawiony przez -Qh każdy Q1 jest niezależnie wybrany z grupy obejmującej -NH2, -CO2H, -Cl. -F, -Br, -I,
-N02, -CN, =0, -OH, perfluoro-C1-3 alkil, R5, -OR5, -NHR5, -OR9, -N(Ry)( R|0), -Rc -0(0)-R10 i
O / \
CH2;
190 736 pod warunkiem, ze gdy -Ar3 jest podstawiony przez grupę Qi, która zawiera jedną lub więcej dodatkowych grup -Ar3, wówczas te dodatkowe grupy -Ar3 nie są podstawione innymi grupami -Ar3.
22. Związek według zastrz. 20, wybrany z grupy obejmującej
82 Ob
823b
823a
826«
827a
907a
907b
O
1029 •N
190 736
881
190 736
Η
Ο •90 736
1004
1005
1000
1007
1008
190 736
1009
1010
1011
1012
1013
190 736
1015
1016
190 736
1020
1022
1023
1024
1025
190 736
1026
1030
1031
1032
Μ
Z
Ν'
Ο
ΌΗ
Η
1033
1036
1037
1038
1039
1040 »90 736
1041
Ν'
ΌΗ
Η
190 736
1044
1045
1046
1047
Ο Ο
HjC^N
Η
Ο
ĆH,
Ν
1048
190 736
1049
1050
1051
1052 'Ν'
Η
1053
190 736
1057
1054
1055
1056
Ο
1058
190 736
1059
1060
1061
1062
1063
Ο
1064
190 736
1065
1066
1067
1068
Ο
1069
1070
1072
1073
1074
190 736
1075
190 736
1076
1077
1073
1079
1080
190 736
1081
10819
1082
1083
ΌΗ
Η
1082S
190 736
1084
1085
1086
1087
Ο
1088
190 736
1089
1090
1091
1093
1094
190 736
1095
1096
1097
1098
1099
190 736
24 Związek według zastrz. 20 albo 23, wybrany z grupy obejmującej
1021
1027
OH ,H
1028
OH
H
25. Związek według zastrz. 21, w którym: każdy R9 i R10 niezależnie oznacza prostą lub rozgałęzioną grupę -C16 alkilową, ewentualnie podstawioną przez -Ar3, przy czym Ar3 oznacza fenyl; pod warunkiem, ze gdy -Ar3 jest podstawiony przez grupę Q1, która zawiera jedną lub więcej dodatkowych grup -Ar3, wówczas te dodatkowe grupy -Ar3 nie są podstawione innymi grupami -Ar3.
26. Związek według zastrz. 20, w którym R5 oznacza -C(O)-Rd lub -C(O)C(O)-Rio.
27 Związek według zastrz 26, w którym R10 oznacza Ar3.
28 Związek według zastrz. 27, w którym: R5 oznacza -C(O)-Rio. a R|() oznacza Ar3. w którym grupą cykliczną Ar3 jest fenyl ewentualnie raz lub wielokrotnie podstawiony przez-Rj- który oznacza prostą lub rozgałęzioną grupę C1-4 alkilową, -F, -Cl, -N (Hj-R.s, w której R5 oznacza -H lub -C(O)-Rio, w którym R10 oznacza prostą lub rozgałęzioną grupę C 16 alkilową ewentualnie podstawioną przez -Ar3, przy czym Ar3 oznacza fenyl,
-N(R9)(Rio), w którym R9 i R 10 niezależnie oznaczają prostą lub rozgałęzioną grupę C1alkilową, albo
-O-R5, w której R5 oznacza H lub prostą lub rozgałęzioną grupę C1.4 alkilową
29. Związek według zastrz 27, w którym Ar3 oznacza fenyl raz lub wielokrotnie podstawiony w pozycji 3 lub w pozycji 5 przez -C1 lub w pozycji 4 przez -NH-R5, -N(R9)(R|o) lub -o-r5
190 736
30 Związek według zastrz 28, w którym Ar3 oznacza fenyl raz lub wielokrotnie podstawiony w pozycji 3 lub w pozycji 5 przez -R9, przy czym R9 oznacza prostą lub rozgałęzioną grupę C 1.4 alkilową; oraz w pozycji 4 przez -O-R5.
31. Związek według zastrz. 27, w którym:
R5 oznacza -C(O)-Rk), w którym Rio oznacza Ar3, zaś grupa cykliczna Ar3 jest wybrana z grupy obejmującej indolil, benzimidazolil, tienyl, chinolil, izochinolil 1 benzo[b]tiofenyl i ewentualnie jest raz lub wielokrotnie podstawiona przez -Q1.
32. Związek według zastrz. 31, w którym grupą cykliczną Ar3 jest izochinolil, który ewentualnie jest raz lub wielokrotnie podstawiony przez -Qb
33. Związek według zastrz. 20, którym jest:
34 Związek wzdług /d^.stre.. 27, w któiym R5 o znać oz -C(0)-Cio, w którym R|0 oznacza Ar3, a grupą cykliczną Ar 3 jest fenyl podstawiony przez
O
Z \ ch2, \ z o
35, znamienna tym, ze jako substancję czynną zawiera 35, znamienna tym, ze jako substancję czynną zawiera
35 Kompozycja farmaceutyczna zawierająca substancję czynną i farmaceutycznie dopuszczalny nośnik, znamienna tym, ze jako substancję czynną zawiera inhibitor ICE określony w zastrz. 1 w ilości skutecznej do leczenia lub zapobiegania chorobom związanym z IL-1
36 Kompozycja według zastrz. 35, znamienna tym, ze jako substancję czynną zawiera inhibitor ICE określony w zastrz. 9.
37 Kompozycja według zastrz. 35, znamienna tym, ze jako substancję czynną zawiera inhibitoi ICE określony w zastrz 11
38 Kompozycja według zastrz 35, znamienna tym, ze jako substancję czynną zawiera inhibitor ICE określony w zastrz. 14
39 Kompozycja według zastrz inhibitor ICE określony w zastrz. 15.
40 Kompozycja według zastrz. inhibitor ICE określony w zastrz. 18.
41. Kompozycja według zastrz. 35, znamienna tym, ze jako substancję czynną zawiera inhibitor ICE określony w zastrz 19.
42. Kompozycja farmaceutyczna zawierająca substancję czynną 1 farmaceutycznie dopuszczalny nośnik, znamienna tym, ze jako substancję czynną zawiera inhibitor ICE określony w zastrz, 20 w ilości skutecznej do leczenia lub zapobiegania chorobom związanym z IL-1
43 Kompozycja według zastrz. 42, znamienna tym, ze jako substancję czynną zawiera inhibitor ICE określony w zastrz. 33
44 Kompozycja farmaceutyczna zawierająca substancję czynną i farmaceutycznie dopuszczalny nośnik, znamienna tym, ze jako substancję czynną zawiera inhibitor ICE określony w zastrz 21 w ilości skutecznej do leczenia lub zapobiegania chorobom związanym z IL-1.
45 Kompozycja farmaceutyczna według zastrz. 35, znamienna tym, ze chorobą związaną z IL-1 jest choroba zapalna wybrana z grupy obejmującej zapalenie kostno-stawowe, ostre zapalenie trzustki, przewlekłe zapalenie trzustki, astmę i zespół niewydolności oddechowej u dorosłych
190 736
46. Kompozycja farmaceutyczna według zastrz. 45, znamienna tym, ze chorobą zapalną jest zapalenie kostno-stawowe lub ostre zapalenie trzustki
47 Kompozycja farmaceutyczna według zastrz. 35, znamienna tym, ze choroba związana z IL-1 jest chorobą autoimmumzacyjną wybraną z grupy obejmującej kłębkowe zapalenie nerek, reumatoidalne zapalenie stawów, układowy toczeń rumieniowaty, twardzinę, przewlekłe zapalenie tarczycy, chorobę Graves'a, autoimmunizacyjne zapalenie błony śluzowej żołądka, cukrzycę insulino-zalezną (typ I), autoimmumzacyjną niedokrwistość hemolityczną, granulocytopenię obojętnochłonną autoagresyjną, małopłytkowość, przewlekłe aktywne zapalenie wątroby, miastenię gravis, choroby zapalne jelita grubego, chorobę Crohn'a, łuszczycę oraz reakcję przeszczep przeciwko gospodarzowi.
48. Kompozycja farmaceutyczna według zastrz. 47, znamienna tym, ze chorobą autoimmunizacyjnąjest reumatoidalne zapalenie stawów, choroba zapalna jelita grubego albo choroba Crohna, albo łuszczyca.
49 Kompozycja farmaceutyczna według zastrz 35, znamienna tym, ze chorobą związaną z IL-1 jest choroba kości przebiegająca z destrukcją wybrana z grupy obejmującej osteoporozę i choroby kości wywołane szpiczakiem mnogim
50. Kompozycja farmaceutyczna według zastrz. 35, znamienna tym, ze chorobą związaną z IL-1 jest zaburzenie proliferacyjne wybrane z grupy obejmującej przewlekłą białaczkę szpikową, przerzuty czerniaka, mięsak Kaposfego i szpiczak mnogi.
51. Kompozycja farmaceutyczna według zastrz. 35, znamienna tym, ze chorobą związaną z IL-1 jest choroba zakaźna wybrana z grupy obejmującej posocznicę, wstrząs septyczny i zakażenie pałeczką Shigelli
52. Kompozycja farmaceutyczna według zastrz 35, znamienna tym, ze chorobą związaną z IL-1 jest choroba degeneracyjna lub martwicza, wybrana z grupy obejmującej chorobę Alzheimera, chorobę Parkinsona, niedokrwienie ośrodkowego układu nerwowego i niedokrwienie mięśnia sercowego
53. Kompozycja farmaceutyczna według zastrz 52, znamienna tym, ze choroba degeneracyjną jest choroba Alzheimera
54. Kompozycja farmaceutyczna zawierająca substancję czynną i farmaceutycznie dopuszczalny nośnik, znamienna tym, ze jako substancję czynną zawiera inhibitor ICE określony w zastrz. 1 w ilości skutecznej do leczenia lub zapobiegania chorobom związanym z apoptozą
55. Kompozycja według zastrz. 54, znamienna tym, ze jako substancję czynną zawiera inhibitor ICE określony w zastrz. 9.
56. Kompozycja według zastrz 54, znamienna tym, inhibitor ICE określony w zastrz. 11.
57. Kompozycja według zastrz 54, znamienna tym, inhibitor ICE określony w zastrz. 14.
58. Kompozycja według zastrz. 54, znamienna tym, ze jako substancję czynną zawiera inhibitor ICE określony w zastrz. 15
59 Kompozycja według zastrz. 54, znamienna tym, ze jako substancję czynną zawiera inhibitor ICE określony w zastrz. 18.
60. Kompozycja według zastrz. 54, znamienna tym, ze jako substancję czynną zawiera inhibitor ICE określony w zastrz 19
61 Kompozycja farmaceutyczna zawierająca substancję czynną i farmaceutycznie dopuszczalny nośnik, znamienna tym, ze jako substancję czynną zawiera inhibitor ICE określony w zastrz. 20 w ilości skutecznej do leczenia lub zapobiegania chorobom związanym z apoptozą.
62 Kompozycja według zastrz. 55, znamienna tym, ze jako substancję czynną zawiera inhibitor ICE określony w zastrz 33.
ze jako substancję czynną zawiera ze jako substancję czynną zawiera
63 Kompozycja farmaceutyczna zawierająca substancję czynną i farmaceutycznie dopuszczalny nośnik, znamienna tym, ze jako substancję czynną zawiera inhibitor ICE określony w zastrz. 21 w ilości skutecznej do leczenia lub zapobiegania chorobom związanym z apoptozą
64 Kompozycja farmaceutyczna według zastrz. 54, znamienna tym, ze chorobą związaną z apoptozą jest choroba degeneracyjna wybrana z grupy obejmującej chorobę Alzheimera, chorobę Parkinsona, niedokrwienie ośrodkowego układu nerwowego, niedokrwienie mięśnia sercowego, zanik rdzemowo-mięśniowy, stwardnienie rozsiane, zapalenie mózgu zalezne
190 736 od AIDS, zapalenie mózgu związane z HIV, starzenie się, łysienie i uszkodzenie neurologiczne spowodowane udarem.
65. Kompozycja farmaceutyczna do hamowania funkcji, w których uczestniczy kaspaza, zawierająca substancję czynną oraz farmaceutycznie dopuszczalny nośnik, znamienna tym, że jako substancję czynną zawiera inhibitor określony w zastrz 1 w skutecznej ilości.
66. Kompozycja farmaceutyczna według zastrz. 47, znamienna tym, ze kaspazą jest ICE.
67. Kompozycja według zastrz. 65, znamienna tym, ze jako substancję czynną zawiera inhibitor ICE określony w zastrz. 9.
68. Kompozycja według zastrz. 65, znamienna tym, ze jako substancję czynną zawiera inhibitor ICE określony w zastrz. 11.
69. Kompozycja według zastrz 65, znamienna tym, ze jako substancję czynną zawiera inhibitor ICE określony w zastrz. 14.
70. Kompozycja według zastrz 65, znamienna tym, ze jako substancję czynną zawiera inhibitor ICE określony w zastrz 15.
71 Kompozycja według zastrz. 65, znamienna tym, ze jako substancję czynną zawiera inhibitor ICE określony w zastrz. 18.
72. Kompozycja według zastrz. 65, znamienna tym, ze jako substancję czynną zawiera inhibitor ICE określony w zastrz. 19.
73 Kompozycja farmaceutyczna do hamowania funkcji, w których uczestniczy kaspaza, zawierająca substancję czynną oraz farmaceutycznie dopuszczalny nośnik, znamienna tym, ze jako substancję czynną zawiera inhibitor określony w zastrz 20 w skutecznej ilości.
74. Kompozycja według zastrz. 73, znamienna tym, ze jako substancję czynną zawiera inhibitor ICE określony w zastrz. 9.
75. Kompozycja farmaceutyczna do hamowania funkcji, w których uczestniczy kaspaza, zawierająca substancję czynną oraz farmaceutycznie dopuszczalny nośnik, znamienna tym, ze jako substancję czynną zawiera inhibitor określony w zastrz. 21 w skutecznej ilości.
76. Kompozycja farmaceutyczna, zawierająca substancję czynną oraz farmaceutycznie dopuszczalny nośnik, znamienna tym, ze jako substancję czynną zawiera inhibitor określony w zastrz. 1 w ilości skutecznej do leczenia lub zapobiegania chorobom związanym z IFN-γ
77 Kompozycja według zastrz. 76, znamienna tym, ze jako substancję czynną zawiera inhibitor ICE określony w zastrz. 9.
78. Kompozycja według zastrz. 76, znamienna tym, ze jako substancję czynną zawiera inhibitor ICE określony w zastrz 11.
79. Kompozycja według zastrz. inhibitor ICE określony w zastrz 14.
80. Kompozycja według zastrz. inhibitor ICE określony w zastrz 15.
81. Kompozycja według zastrz inhibitor ICE określony w zastrz. 18
82. Kompozycja według zastrz. inhibitor ICE określony w zastrz. 19.
83. Kompozycja farmaceutyczna, zawierająca substancję czynną oraz farmaceutycznie dopuszczalny nośnik, znamienna tym, ze jako substancję czynną zawiera inhibitor określony w zastrz. 20 w ilości skutecznej do leczenia lub zapobiegania chorobom związanym z IFN-γ.
84. Kompozycja według zastrz. 83, znamienna tym, ze jako substancję czynną zawiera inhibitor ICE określony w zastrz. 9.
85 Kompozycja farmaceutyczna, zawierająca substancję czynną oraz farmaceutycznie dopuszczalny nośnik, znamienna tym, ze jako substancję czynną zawiera inhibitor określony w zastrz. 21 w ilości skutecznej do leczenia lub zapobiegania chorobom związanym z IFN-γ
86. Zastosowanie związków określonych w zastrz 1 do wytwarzania leku do leczenia lub zapobiegania chorobom wybranym z grupy obejmującej zapalenie kostno-stawowe, ostre zapalenie trzustki, przewlekłe zapalenie trzustki, astmę, zespół niewydolności oddechowej u dorosłych, zakaźne zapalenie wątroby, zapalenie kłębuszków nerkowych, reumatoidalne zapalenie stawów, układowy toczeń rumieniowaty, twardzinę, przewlekłe zapalenie tarczycy, chorobę Graves'a, autoimmunizacyne zapalenie błony śluzowej żołądka, cukrzycę msulino76, znamienna tym, ze jako substancję czynną zawiera 76, znamienna tym, ze jako substancję czynną zawiera 76, znamienna tym, ze jako substancję czynną zawiera 76, znamienna tym, ze jako substancję czynną zawiera
190 736 zalezną (typ I), autoimmunizacyjną niedokrwistość hemolityczną, autoimmumzacyjną neutropemę, trombocytopenię, przewlekłe aktywne zapalenie wątroby, miastenię gravis, chorobę zapalną jelita grubego, chorobę Crohn'a, wrzodziejące zapalenie okrężnicy, stwardnienie rozsiane, łuszczycę, liszaj płaski, chorobę przeszczep przeciwko gospodarzowi, ostre zapalenie skómo-mięśniowe, egzemę, pierwotną marskość wątroby, zapalenie błony naczyniowej oka, chorobę Behceta, ostrą aplazję, anemię aplastyczną, stwardnienie zanikowe boczne, zespół nerczycowy, osteoporozę, choroby kości wywołane szpiczakiem mnogim, ostrą białaczkę szpikową, przewlekłą białaczkę szpikopochodną, przerzuty czerniaka, mięsak Kaposi'ego, szpiczak mnogi, posocznicę, wstrząs septyczny, zakażenia pałeczkami Shigella, chorobę Alzheimera, chorobę Parkinsona, niedokrwienie ośrodkowego układu nerwowego lub niedokrwienie mięśnia sercowego
87. Zastosowanie według zastrz. 86, znamienne tym, ze chorobcjert wybrana z grupy obejmującej zapalenie keetno-stawewe, ostre zapalenie trzustki, reumatoidalne zapalenie stawów, chorobę zapalną jelita grubego, wrzodziejące zapalenie okrężnicy, chorobę Crohna, zapalenie wątroby, zespół niewydolności oddechowej u dorosłych, zapalenie kłębuszków nerkowych, cukrzycę ineulinozalezną (typ I), cukrzycę młodzieńczą, łuszczycę, chorobę przeszczep przeciwko gospodarzowi, zapalenie wątroby lub chorobę Alzheimera.
88 Zastosowanie związku określonego w zastrz 9 do wytwarzania leku do leczenia lub zapobiegania chorobom określonym w zastrz. 86
89. Zastosowanie związku określonego w zastrz. 11 do wytwarzania leku do leczenia lub zapobiegania chorobom określonym w zastrz. 86
90. Zastosowanie związku określonego w zastrz. 14 do wytwarzania leku do leczenia lub zapobiegania chorobom określonym w zastrz. 86.
91. Zastosowanie związku określonego w zastrz. 15 do wytwarzania leku do leczenia lub zapobiegania chorobom określonym w zastrz. 86
92 Zastosowanie związku określonego w zastrz 18 do wytwarzania leku do leczenia lub zapobiegania chorobom określonym w zastrz. 86.
93. Zastosowanie związku określonego w zastrz. 19 do wytwarzania leku do leczenia lub zapobiegania chorobom określonym w zastrz. 86
94. Zastosowanie związku określonego w zastrz. 20 do wytwarzania leku do leczenia lub zapobiegania chorobom określonym w zastrz. 86
95 Zastosowanie związku określonego w zastrz. 21 do wytwarzania leku do leczenia lub zapobiegania chorobom określonym w zastrz. 86
96. Zastosowanie związku określonego w zastrz. 33 do wytwarzania leku do leczenia lub zapobiegania chorobom określonym w zastrz. 86
97. Zastosowanie związków określonych w zastrz 1 do wytwarzania leku do stosowania do leczenia lub zapobiegania chorobie wybranej spośród choroby Alzheimera, choroby Parkinsona, niedokrwienia mózgu, niedokrwienia mięśnia sercowego, atraCh mięśni szkieletowych, stwardnienia rozsianego, zapalenia mózgu związanego z AIDS, zapalenia mózgu związanego z HIV, starzenia, łysienia lub uszkodzenia neurologicznego spowodowanego udarem.
98. Zastosowanie według zastrz. 97, znamienne tym, ze chorobąjest choroba Alzheimera.
99. Zastosowanie związku określonego w zastrz. 9 do wytwarzania leku do leczenia lub zapobiegania chorobom określonym w zastrz 97.
100 Zastosowanie związku określonego w zastrz. 11 do wytwarzania leku do leczenia lub zapobiegania chorobom określonym w zastrz 97
101. Zastosowanie związku określonego w zastrz. 14 do wytwarzania leku do leczenia lub zapobiegania chorobom określonym w zastrz. 97.
102. Zastosowanie związku określonego w zastrz 15 do wytwarzania leku do leczenia lub zapobiegania chorobom określonym w zastrz. 97
103. Zastosowanie związku określonego w zastrz 18 do wytwarzania leku do leczenia lub zapobiegania chorobom określonym w zastrz. 97
104. Zastosowanie związku określonego w zastrz 19 do wytwarzania leku do leczenia lub zapobiegania chorobom określonym w zastrz. 97
190 736
105. Zastosowanie związku określonego w zastrz 20 do wytwarzania leku do leczenia lub zapobiegania chorobom określonym w zastrz. 97
106. Zastosowanie związku określonego w zastrz. 21 do wytwarzania leku do leczenia lub zapobiegania chorobom określonym w zastrz 97.
107. Zastosowanie związku określonego w zastrz 33 do wytwarzania leku do leczenia lub zapobiegania chorobom określonym w zastrz. 97.
PL96328527A 1995-12-20 1996-12-20 Inhibitory enzymu konwertującego interleukinę-1beta, kompozycje farmaceutyczne i zastosowanie związków inhibitorów PL190736B1 (pl)

Applications Claiming Priority (6)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US08/575,641 US6008217A (en) 1995-12-20 1995-12-20 Inhibitors of interleukin-1β converting enzyme
US08/598,332 US5874424A (en) 1995-12-20 1996-02-08 Inhibitors of interleukin-1β converting enzyme
US08/712,878 US5985863A (en) 1996-09-12 1996-09-12 Compositions and methods for decreasing IGIF and IFN-γ production by administering an ICE inhibitor
US3149596P 1996-11-26 1996-11-26
US08/761,483 US6204261B1 (en) 1995-12-20 1996-12-06 Inhibitors of interleukin-1β Converting enzyme inhibitors
PCT/US1996/020843 WO1997022619A2 (en) 1995-12-20 1996-12-20 INHIBITORS OF INTERLEUKIN-1β CONVERTING ENZYME

Publications (2)

Publication Number Publication Date
PL328527A1 PL328527A1 (en) 1999-02-01
PL190736B1 true PL190736B1 (pl) 2005-12-30

Family

ID=27534345

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL96328527A PL190736B1 (pl) 1995-12-20 1996-12-20 Inhibitory enzymu konwertującego interleukinę-1beta, kompozycje farmaceutyczne i zastosowanie związków inhibitorów

Country Status (23)

Country Link
US (7) US6204261B1 (pl)
EP (3) EP2083014A3 (pl)
JP (3) JP4205762B2 (pl)
KR (1) KR100561504B1 (pl)
CN (1) CN1229412A (pl)
AP (4) AP0202540A0 (pl)
AU (1) AU735075B2 (pl)
BG (2) BG108927A (pl)
BR (2) BRPI9612258B8 (pl)
CA (1) CA2239904C (pl)
CZ (2) CZ298171B6 (pl)
GE (1) GEP20022638B (pl)
IL (2) IL124850A0 (pl)
IN (1) IN182290B (pl)
IS (1) IS4771A (pl)
MX (1) MX9805016A (pl)
NO (1) NO326882B1 (pl)
NZ (2) NZ518094A (pl)
PL (1) PL190736B1 (pl)
SK (1) SK287195B6 (pl)
TR (3) TR200201216T2 (pl)
UA (1) UA66337C2 (pl)
WO (1) WO1997022619A2 (pl)

Families Citing this family (81)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6204261B1 (en) * 1995-12-20 2001-03-20 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of interleukin-1β Converting enzyme inhibitors
US6420522B1 (en) * 1995-06-05 2002-07-16 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of interleukin-1β converting enzyme
US6531467B2 (en) 1996-09-12 2003-03-11 Idun Pharmaceuticals, Inc. Inhibition of inflammation using interleukin-1β-converting enzyme (ICE)/CED-3 family inhibitors
US6610683B2 (en) * 1996-09-12 2003-08-26 Idun Pharmaceuticals, Inc. Treatment of infectious disease using interleukin-1β-converting enzyme (ICE)/CED-3 family inhibitors
US6200969B1 (en) 1996-09-12 2001-03-13 Idun Pharmaceuticals, Inc. Inhibition of apoptosis using interleukin-1β-converting enzyme (ICE)/CED-3 family inhibitors
US5919790A (en) * 1996-10-11 1999-07-06 Warner-Lambert Company Hydroxamate inhibitors of interleukin-1β converting enzyme
DE69735230D1 (de) * 1996-10-11 2006-04-20 Warner Lambert Company Llc Mor Sulfonamid-substituierte asparaginsäuren als inhibitoren von interleukin-1beta-konvertierenden enzymen
CA2268086A1 (en) 1996-10-11 1998-04-23 Warner-Lambert Company Sulfonamide interleukin-1.beta. converting enzyme inhibitors
JP4094066B2 (ja) * 1996-12-06 2008-06-04 バーテックス ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド インターロイキン−１β変換酵素のインヒビター
EP1466921A1 (en) * 1996-12-06 2004-10-13 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of interleukin-1 beta converting enzyme
FR2766188B1 (fr) * 1997-07-15 2000-02-11 Hoechst Marion Roussel Inc Nouveau procede de preparation de derives amines d'alkyloxy furanone, composes issus de ce procede et utilisation de ces composes
DE69925581T2 (de) 1998-03-09 2006-04-27 Vertex Pharmaceuticals Inc., Cambridge 1,2-diazepanderivate als inhibitoren des interleukin-1beta umwandelnden enzyms
BRPI9909660B8 (pt) * 1998-03-19 2021-05-25 Vertex Pharma compostos inibidores de caspases, composição farmacêutica e uso de ditos compostos
FR2777279B1 (fr) * 1998-04-08 2004-08-13 Hoechst Marion Roussel Inc Nouvelles formes cristallines du 1s-[1alpha(2s*,3r*), 9 alpha] 6,10-dioxo-n-(2-ethoxy-5-oxo-tetrahydro-3-furanyl) -9[[(1-isoquinolyl)carbonyl]amino]octohydro-6h-pyridazino [1,2-a][1,2]diazepine-1-carboxamide
FR2777889B1 (fr) * 1998-04-27 2004-07-09 Hoechst Marion Roussel Inc Nouveaux derives de l'acide octahydro-6,10-dioxo-6h- pyridazino[1,2-a][1,2]diazepine-1-carboxylique, leur procede de preparation et leur application a la preparation de composes therapeutiquement actifs
FR2777888B1 (fr) * 1998-04-27 2004-07-16 Hoechst Marion Roussel Inc Nouveaux derives de l'acide (3,4,7,8,9,10-hexahydro-6,10- dioxo-6h-pyridazino[1,2-a][1,2]diazepine-1-carboxylique, leur procede de preparation et leur application a la preparation de medicaments
US7053056B2 (en) * 1998-07-02 2006-05-30 Idun Pharmaceuticals, Inc. C-terminal modified oxamyl dipeptides as inhibitors of the ICE/ced-3 family of cysteine proteases
US6197750B1 (en) * 1998-07-02 2001-03-06 Idun Pharmaceuticals, Inc. C-terminal modified oxamyl dipeptides as inhibitors of the ICE/ced-3 family of cysteine proteases
US6544951B2 (en) 1998-07-02 2003-04-08 Idun Pharmaceuticals, Inc. C-terminal modified oxamyl dipeptides as inhibitors of the ICE/ced-3 family of cysteine proteases
US6703500B2 (en) * 1998-08-19 2004-03-09 Vertex Pharmaceuticals, Incorporated Method of preparing bicyclic intermediates from piperazic acid or an ester thereof useful in the manufacture of caspase inhibitors
US6201118B1 (en) 1998-08-19 2001-03-13 Vertex Pharmaceuticals Inc. Process for forming an N-acylated, N,N-containing bicyclic ring from piperazic acid or an ester thereof especially useful as an intermediate in the manufacture of a caspase inhibitor
US6559304B1 (en) * 1998-08-19 2003-05-06 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Method for synthesizing caspase inhibitors
US6177565B1 (en) 1998-08-19 2001-01-23 Vertex Pharmaceuticals Inc. Process for synthesizing piperazic acid
EP1159273A1 (en) 1999-03-02 2001-12-05 Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals Inc. Compounds useful as reversible inhibitors of cathepsin s
TW200404789A (en) * 1999-03-15 2004-04-01 Axys Pharm Inc Novel compounds and compositions as protease inhibitors
US6420364B1 (en) 1999-09-13 2002-07-16 Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals, Inc. Compound useful as reversible inhibitors of cysteine proteases
AR026748A1 (es) 1999-12-08 2003-02-26 Vertex Pharma Un compuesto inhibidor de caspasas, una composicion farmaceutica que lo comprende, un metodo para la sintesis del mismo y un compuesto intermediario paradicha sintesis
FR2802927B1 (fr) * 1999-12-28 2002-03-01 Hoechst Marion Roussel Inc Nouveaux derives de diazepine carboxamide, leur procede de preparation, leur application a titre de medicaments, compositions pharmaceutiques et leur nouvelle utilisation
US6515173B1 (en) 2000-01-13 2003-02-04 Idun Pharmaceuticals, Inc. Inhibitors of the ICE/ced-3 family of cysteine proteases
US6790989B2 (en) 2000-01-13 2004-09-14 Idun Pharmaceuticals, Inc. Inhibitors of the ICE/ced-3 family of cysteine proteases
US20010053764A1 (en) * 2000-05-12 2001-12-20 Sims John E. Interleukin-1 inhibitors in the treatment of diseases
PE20011350A1 (es) * 2000-05-19 2002-01-15 Vertex Pharma PROFARMACO DE UN INHIBIDOR DE ENZIMA CONVERTIDORA DE INTERLEUCINA-1ß (ICE)
ATE437234T1 (de) * 2000-06-15 2009-08-15 Smithkline Beecham Corp Verfahren zur herstellung eines physiologisch aktiven il-18 polypeptids
DE10037310A1 (de) * 2000-07-28 2002-02-07 Asta Medica Ag Neue Indolderivate und deren Verwendung als Arzneimittel
ZA200304059B (en) * 2000-12-28 2004-07-06 Daiichi Seiyaku Co VLA-4 inhibitors.
RU2290403C2 (ru) * 2000-12-28 2006-12-27 Дайити Фармасьютикал Ко., Лтд. Ингибиторы vla-4
DK1355668T3 (da) * 2001-01-29 2008-05-05 Serono Lab Anvendelse af IL-18 inhibitorer til behandling og/eller forebyggelsen af hjertesygdom
MXPA03009647A (es) 2001-04-19 2004-01-29 Vertex Pharma Heterociclildicarbamidas como inhibidores de caspasa.
EP1446127B1 (en) * 2001-10-04 2006-12-13 Ortho McNeil Pharmaceutical, Inc. Triazepine derivatives as neurotrophic agents
US6821993B1 (en) 2001-10-04 2004-11-23 Ortho-Mcneil Pharmaceutical, Inc. Triazepine derivatives as neurotrophic agents
US7115654B2 (en) * 2002-06-05 2006-10-03 Sunesis Pharmaceuticals, Inc. Caspase-1 inhibitors and methods for their use
PL374598A1 (pl) 2002-06-28 2005-10-31 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitory kaspazy i ich zastosowania
WO2004047864A1 (en) * 2002-11-26 2004-06-10 Advanced Biotherapy, Inc. Treatment of skin diseases
CN100366612C (zh) 2002-12-20 2008-02-06 沃泰克斯药物股份有限公司 4-氧代-3-(1-氧代-1h-异喹啉-2-基乙酰氨基)-戊酸酯和酰胺衍生物及其作为天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶抑制剂的用途
PE20050159A1 (es) 2003-05-27 2005-04-19 Vertex Pharma Derivados de acido 3-[2-(3-amino-2-oxo-2h-piridin-1-il)-acetilamino]-4-oxo-pentanoico como inhibidores de caspasa
CA2770493A1 (en) 2003-07-24 2005-02-03 Daiichi Pharmaceutical Co., Ltd. Cyclohexanecarboxylic acid compound
US20050124684A1 (en) * 2003-08-29 2005-06-09 Ying Du 5-(hydroxymethyl) furfural and derivatives as inhibitors of TNFalpha and IL-1beta production
KR20060088543A (ko) * 2003-09-25 2006-08-04 디엠아이 바이오사이언스 인코포레이티드 앤-아실-엘-아스파틱산을 이용하는 방법 및 제품
WO2005117846A2 (en) * 2004-05-27 2005-12-15 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Ice inhibitors for the treatment of autoinflammatory diseases
US20050233974A1 (en) * 2003-12-01 2005-10-20 John Randle Treating infectious diseases using ice inhibitors
CN100441186C (zh) * 2003-12-03 2008-12-10 和记黄埔医药企业有限公司 伪石蒜碱的医药用途
CN1946734B (zh) 2004-02-26 2012-07-18 贝勒研究院 系统性治疗关节炎的组合物和方法
EP1718639A2 (en) * 2004-02-27 2006-11-08 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Caspase inhibitors and uses thereof
CA2768700C (en) * 2004-03-12 2014-04-29 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Processes and intermediates for the preparation of aspartic acetal caspase inhibitors
JP2007534689A (ja) * 2004-04-22 2007-11-29 ザ プロクター アンド ギャンブル カンパニー サイトカイン阻害物質としての三置換尿素類
US20060128696A1 (en) * 2004-05-15 2006-06-15 Annamaria Vezzani Treating seizures using ice inhibitors
GB0411056D0 (en) 2004-05-18 2004-06-23 Novartis Ag Organic compounds
GB0515323D0 (en) * 2005-07-26 2005-08-31 Electrophoretics Ltd Mass labels
DE102005048293A1 (de) * 2005-10-08 2007-04-12 Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh Retardformulierung für Pralnacasan
EP1826199A1 (en) * 2006-02-27 2007-08-29 Technische Universität Wien Modified amino acids
WO2008034095A2 (en) * 2006-09-15 2008-03-20 University Of Utah Research Foundation Protected enantiopure trifluorothreonines and methods of making and using same
CN101772577A (zh) 2007-08-03 2010-07-07 塞诺菲-安万特股份有限公司 半胱天冬蛋白酶成像探针
CN102065893A (zh) * 2008-04-15 2011-05-18 萨可德公司 Lfa-1拮抗剂向胃肠系统的递送
WO2011094426A1 (en) 2010-01-29 2011-08-04 The United State Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health & Human Services Caspase inhibitors
JP6006908B2 (ja) 2010-11-05 2016-10-12 ブランダイス ユニバーシティＢｒａｎｄｅｉｓ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｉｃｅ阻害化合物およびその使用
US9956260B1 (en) 2011-07-22 2018-05-01 The J. David Gladstone Institutes Treatment of HIV-1 infection and AIDS
EP2848696A1 (en) 2013-09-13 2015-03-18 Sanofi-Aventis Deutschland GmbH Caspase-1 imaging probes
CA2929502A1 (en) * 2013-11-06 2015-05-14 Bristol-Myers Squibb Company Substituted pyridine derivatives useful as gsk-3 inhibitors
MA41291A (fr) 2014-12-30 2017-11-07 Forma Therapeutics Inc Dérivés de la pyrrolotriazinone et de l'imidazotriazinone en tant qu'inhibiteurs de la protéase spécifique de l'ubiquitine n° 7 (usp7) pour le traitement d'un cancer
TWI698436B (zh) 2014-12-30 2020-07-11 美商佛瑪治療公司 作為泛素特異性蛋白酶７抑制劑之吡咯并及吡唑并嘧啶
WO2016126935A1 (en) 2015-02-05 2016-08-11 Forma Therapeutics, Inc. Isothiazolopyrimidinones, pyrazolopyrimidinones, and pyrrolopyrimidinones as ubiquitin-specific protease 7 inhibitors
EP3253738A1 (en) 2015-02-05 2017-12-13 Forma Therapeutics, Inc. Quinazolinones and azaquinazolinones as ubiquitin-specific protease 7 inhibitors
US9932351B2 (en) 2015-02-05 2018-04-03 Forma Therapeutics, Inc. Thienopyrimidinones as ubiquitin-specific protease 7 inhibitors
EP3330256B1 (en) 2015-07-07 2021-06-16 Shionogi & Co., Ltd. HETEROCYCLIC DERIVATIVE HAVING TrkA-INHIBITING ACTIVITY
CN118994191A (zh) 2016-02-05 2024-11-22 戴纳立制药公司 受体相互作用蛋白激酶1的抑制剂
HRP20220636T1 (hr) 2016-12-09 2022-07-22 Denali Therapeutics Inc. Spojevi korisni kao inhibitori ripk1
AU2021289665A1 (en) 2020-06-10 2022-12-15 Aligos Therapeutics, Inc. Anti-viral compounds for treating coronavirus, picornavirus, and norovirus infections
CA3198024A1 (en) 2020-11-13 2022-05-19 Sampath Kumar Anandan Dichlorophenol hsd17b13 inhibitors and uses thereof
CA3224494A1 (en) 2021-07-09 2023-01-12 Koen Vandyck Anti-viral compounds
WO2023043816A1 (en) 2021-09-17 2023-03-23 Aligos Therapeutics, Inc. Anti-viral compounds for treating coronavirus, picornavirus, and norovirus infections
AU2023206890A1 (en) 2022-01-12 2024-08-22 Denali Therapeutics Inc. Crystalline forms of (s)-5-benzyl-n-(5-methyl-4-oxo-2, 3,4,5- tetrahydropyrido [3,2-b] [l,4]oxazepin-3-yl)-4h-l,2,4-triazole-3-carboxamide

Family Cites Families (70)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6204261B1 (en) 1995-12-20 2001-03-20 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of interleukin-1β Converting enzyme inhibitors
US5874424A (en) * 1995-12-20 1999-02-23 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of interleukin-1β converting enzyme
US5985863A (en) * 1996-09-12 1999-11-16 Vertex Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for decreasing IGIF and IFN-γ production by administering an ICE inhibitor
US6008217A (en) * 1995-12-20 1999-12-28 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of interleukin-1β converting enzyme
US4276298A (en) 1978-03-24 1981-06-30 Merck & Co., Inc. 2-Aryl-1,2-benzisothiazolinone-1,1-dioxides and their use as selective protease inhibitors
US4337346A (en) 1978-11-02 1982-06-29 Sumitomo Chemical Company, Limited α-Hydroxyaldehyde and a process for preparing the same
US4369183A (en) 1979-09-06 1983-01-18 Merck & Co., Inc. 2-Pyridyl-1,2-benzisothiazolinone-1,1-dioxides and their use as selective protease inhibitors
US4584397A (en) 1983-05-09 1986-04-22 G. D. Searle & Co. Protease inhibitors
US4499295A (en) 1983-05-09 1985-02-12 G. D. Searle & Co. Protease inhibitors
IL72523A (en) * 1983-08-12 1988-06-30 Takeda Chemical Industries Ltd 3-amino-4-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-1,5-benzoxazepine derivatives,their production and pharmaceutical compositions containing them
US4551279A (en) 1984-01-09 1985-11-05 G. D. Searle & Co. Protease inhibitors
US5055451A (en) 1986-12-22 1991-10-08 Syntex Inc. Aryloxy and arylacyloxy methyl ketones as thiol protease inhibitors
US5158936A (en) 1986-12-22 1992-10-27 Syntex (U.S.A.) Inc. Aryloxy and arylacyloxy methyl ketones as thiol protease inhibitors
NZ223148A (en) 1987-01-16 1989-10-27 Merrell Dow Pharma Peptide derivatives having peptidase inhibition activity
WO1989004838A1 (en) 1987-11-25 1989-06-01 Immunex Corporation Interleukin-1 receptors
US4968607A (en) 1987-11-25 1990-11-06 Immunex Corporation Interleukin-1 receptors
US5081228A (en) 1988-02-25 1992-01-14 Immunex Corporation Interleukin-1 receptors
US5008245A (en) 1988-10-27 1991-04-16 University Of Kentucky Research Foundation Novel peptidyl carbamate inhibitors of the enzyme elastase
WO1990013549A1 (en) 1989-05-04 1990-11-15 Sterling Winthrop Inc. Saccharin derivatives useful as proteolytic enzyme inhibitors and preparation thereof
ZA905737B (en) 1989-07-26 1991-05-29 Merrell Dow Pharma Novel peptidase inhibitors
NZ235155A (en) 1989-09-11 1993-04-28 Merrell Dow Pharma Peptidase substrates in which the carboxy terminal group has been replaced by a tricarbonyl radical
WO1991005577A1 (en) 1989-10-05 1991-05-02 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Catheter device with insertion stop means
US5416013A (en) 1990-04-04 1995-05-16 Sterling Winthrop Inc. Interleukin 1β protease and interleukin 1β protease inhibitors
WO1991015577A1 (en) 1990-04-04 1991-10-17 Black, Roy, A. INTERLEUKIN 1'beta' PROTEASE
JPH06501918A (ja) 1990-05-25 1994-03-03 藤沢薬品工業株式会社 ピロロピリダジン化合物
US5199980A (en) 1990-09-21 1993-04-06 Multicolor Specialties, Inc. Polyurethane-based water-in-water multicolor paint and method for making
IL99527A (en) 1990-09-28 1997-08-14 Lilly Co Eli Tripeptide antithrombotic agents
EP0504938A3 (en) 1991-03-22 1993-04-14 Suntory Limited Prophylactic and therapeutic agent for bone diseases comprising di- or tripeptide derivative as active ingredient
CA2071674C (en) 1991-06-21 2003-08-19 Kevin T. Chapman Peptidyl derivatives as inhibitors of interleukin-1.beta. converting enzyme
JP3190431B2 (ja) 1991-07-01 2001-07-23 三菱化学株式会社 ケトン誘導体
DE69229252T2 (de) 1991-08-16 1999-12-16 Merck & Co., Inc. DNS, welche das Interleukin-1B-Vorläufer-Converting-Enzym kodiert
US6348570B1 (en) 1991-08-16 2002-02-19 Merck & Co., Inc. Chromophore containing compounds and their use in determining interleukin-1β convertase activity
US5278061A (en) 1991-08-16 1994-01-11 Merck & Co., Inc. Affinity chromatography matrix useful in purifying interleukin-1β converting enzyme
EP0533226A3 (en) 1991-08-16 1993-08-18 Merck & Co. Inc. Novel chromophore containing compounds
DK0600880T3 (da) 1991-08-30 2004-04-13 Vertex Pharma Interleukin 1-beta-protease og interleukin 1-beta-proteasehæmmere
GB9123326D0 (en) 1991-11-04 1991-12-18 Sandoz Ltd Improvements in or relating to organic compounds
EP0547699A1 (en) 1991-12-19 1993-06-23 Merck & Co. Inc. Peptidyl derivatives as inhibitors of interleukin-1B converting enzyme
WO1993014777A1 (en) 1992-01-31 1993-08-05 Merck & Co., Inc. PEPTIDYL DERIVATIVES AS INHIBITORS OF INTERLEUKIN-1β CONVERTING ENZYME
EP0627926B1 (en) 1992-02-21 1998-08-05 Merck &amp; Co., Inc. (a New Jersey corp.) PEPTIDYL DERIVATIVES AS INHIBITORS OF INTERLEUKIN-1$g(b) CONVERTING ENZYME
WO1993025685A1 (en) 1992-06-12 1993-12-23 Massachusetts Institute Of Technology Cloning and characterization of the cell death genes ced-3 and ced-4
WO1993025683A1 (en) 1992-06-12 1993-12-23 Massachusetts Institute Of Technology A gene which prevents programmed cell death
EP0672151A1 (en) 1992-06-12 1995-09-20 Massachusetts Institute Of Technology Inhibitors of ced-3 and related proteins
AU4634993A (en) 1992-06-24 1994-01-24 Merck & Co., Inc. Dna encoding precursor interleukin 1beta converting enzyme
DK0654041T3 (da) 1992-07-31 1998-10-26 Pfizer Peptidyl-4-amino-2,2-difluor-3-oxo-1,6-hexandisyre-derivater som anto-inflammatoriske midler
US5374623A (en) 1992-08-20 1994-12-20 Prototek, Inc. Cysteine protease inhibitors effective for in vivo use
CA2109646C (en) 1992-11-24 2000-03-07 Gaston O. Daumy Para-nitroanilide peptides
EP0618223A3 (en) 1993-03-08 1996-06-12 Sandoz Ltd Peptides, the release of Interleukin 1-Bêta, useful as anti-inflammatory agents.
TW494094B (en) 1993-04-29 2002-07-11 Vertex Pharma Peptide analogs as irreversible interleukin-1β protease inhibitors and pharmaceutical compositions comprising the same
US5462939A (en) 1993-05-07 1995-10-31 Sterling Winthrop Inc. Peptidic ketones as interleukin-1β-converting enzyme inhibitors
US5411985A (en) 1993-05-17 1995-05-02 Merck & Co., Inc. Gamma-pyrone-3-acetic acid as an inhibitor or interleukin-1 β inventory enzyme
JPH0789951A (ja) 1993-06-03 1995-04-04 Sterling Winthrop Inc インターロイキン−１β転換酵素阻害剤
ATE170868T1 (de) 1993-06-04 1998-09-15 Vertex Pharma Peptid-phosphinyloxymethyl-ketonen als inhibitoren von interleukin-1 beta- konvertierenden enzymen
EP0628550B1 (en) 1993-06-08 1998-02-25 Sanofi Pyridazines as interleukin-1beta converting enzyme inhibitors
CA2165777A1 (en) 1993-06-24 1995-01-05 Junying Yuan Programmed cell death genes and proteins
US5866545A (en) 1993-08-13 1999-02-02 Merck & Co., Inc. Substituted ketone derivatives as inhibitors of interleukin-1β converting enzyme
US5486623A (en) 1993-12-08 1996-01-23 Prototek, Inc. Cysteine protease inhibitors containing heterocyclic leaving groups
US5508262A (en) 1993-12-15 1996-04-16 University Of South Florida Interleukin-1 receptor antagonist decreases severity of acute pancreatitis
DE69532113T2 (de) 1994-03-31 2004-07-29 Vertex Pharmaceuticals Inc., Cambridge Pyrimidin-derivate als interleukin inhibitoren
MX9605196A (es) 1994-04-29 1997-12-31 Sanofi Winthrop Inc Halometilamidas como inhibidores de la proteasa il-1b.
CH688319A5 (fr) 1994-06-03 1997-07-31 Marcham Trading & Investment L Procédé pour la préparation du céfixime trihydraté.
US5552400A (en) 1994-06-08 1996-09-03 Sterling Winthrop Inc. Fused-bicyclic lactams as interleukin-1β converting enzyme inhibitors
US5847135A (en) 1994-06-17 1998-12-08 Vertex Pharmaceuticals, Incorporated Inhibitors of interleukin-1β converting enzyme
US5756466A (en) 1994-06-17 1998-05-26 Vertex Pharmaceuticals, Inc. Inhibitors of interleukin-1β converting enzyme
US6420522B1 (en) 1995-06-05 2002-07-16 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of interleukin-1β converting enzyme
US5716929A (en) 1994-06-17 1998-02-10 Vertex Pharmaceuticals, Inc. Inhibitors of interleukin-1β converting enzyme
US5565430A (en) 1994-08-02 1996-10-15 Sterling Winthrop Inc. Azaaspartic acid analogs as interleukin-1β converting enzyme inhibitors
JP2882756B2 (ja) 1994-10-12 1999-04-12 昭和高分子株式会社 脂肪族ポリエステル組成物からなる延伸中空成形体
US5498616A (en) 1994-11-04 1996-03-12 Cephalon, Inc. Cysteine protease and serine protease inhibitors
TW394764B (en) 1995-02-14 2000-06-21 Mitsubishi Chemcal Corp Oxygen-containing heterocyclic derivatives
US6184244B1 (en) 1996-12-16 2001-02-06 Idun Pharmaceuticals, Inc. C-terminal modified (N-substituted)-2-indolyl dipeptides as inhibitors of the ICE/ced-3 family of cysteine proteases

Also Published As

Publication number Publication date
JP2008285493A (ja) 2008-11-27
SK287195B6 (sk) 2010-03-08
TR200201218T2 (tr) 2002-08-21
KR100561504B1 (ko) 2006-03-20
IL124850A (en) 2006-08-20
BR9612258A (pt) 1999-07-13
WO1997022619A3 (en) 1997-10-16
CA2239904C (en) 2010-01-19
US20030225269A1 (en) 2003-12-04
NZ518094A (en) 2004-01-30
US20050143436A1 (en) 2005-06-30
US6258948B1 (en) 2001-07-10
CZ298171B6 (cs) 2007-07-11
KR20040096550A (ko) 2004-11-16
NZ326610A (en) 2000-08-25
JP2003137896A (ja) 2003-05-14
WO1997022619A2 (en) 1997-06-26
EP2083014A3 (en) 2010-01-06
US6423840B1 (en) 2002-07-23
CZ300171B6 (cs) 2009-03-04
BG64465B1 (bg) 2005-03-31
NO982597L (no) 1998-08-12
US8119631B2 (en) 2012-02-21
US20110178069A1 (en) 2011-07-21
CZ190698A3 (cs) 1998-10-14
EP2083014A2 (en) 2009-07-29
TR200201217T2 (tr) 2002-12-23
BG108927A (en) 2006-06-30
AP0202538A0 (en) 1998-06-20
NO326882B1 (no) 2009-03-09
US7790713B2 (en) 2010-09-07
AP2002002540A0 (en) 2002-06-30
EP0869967A2 (en) 1998-10-14
JP2002507961A (ja) 2002-03-12
TR200201216T2 (tr) 2002-09-23
US6204261B1 (en) 2001-03-20
UA66337C2 (uk) 2004-04-15
AU735075B2 (en) 2001-06-28
BRPI9612258B1 (pl) 2011-05-31
BR9612258B1 (pt) 2011-05-31
AU1522297A (en) 1997-07-14
CA2239904A1 (en) 1997-06-26
AP0202540A0 (en) 1998-06-20
PL328527A1 (en) 1999-02-01
IL124850A0 (en) 1999-01-26
AP0202539A0 (en) 1998-06-20
NO982597D0 (no) 1998-06-05
SK84298A3 (en) 1999-03-12
US20080039449A1 (en) 2008-02-14
EP2295442A3 (en) 2011-04-06
IS4771A (is) 1998-06-12
MX9805016A (es) 1998-09-30
HK1089435A1 (zh) 2006-12-01
BG102624A (en) 1999-09-30
GEP20022638B (en) 2002-02-25
JP4205762B2 (ja) 2009-01-07
IN182290B (pl) 1999-03-06
BRPI9612258B8 (pt) 2018-04-17
CN1229412A (zh) 1999-09-22
EP2295442A2 (en) 2011-03-16

Similar Documents

Publication Publication Date Title
PL190736B1 (pl) Inhibitory enzymu konwertującego interleukinę-1beta, kompozycje farmaceutyczne i zastosowanie związków inhibitorów
US5874424A (en) Inhibitors of interleukin-1β converting enzyme
US6350741B1 (en) Inhibitors of interleukin-1β converting enzyme
PL204619B1 (pl) Pochodna peptydowa, kompozycja farmaceutyczna zawierająca taką pochodną i zastosowanie pochodnej peptydowej
BG63634B1 (bg) Инхибитори на интерлевкин 1 бета-конвертиращ ензим
US6008217A (en) Inhibitors of interleukin-1β converting enzyme
WO1999046248A1 (en) 1,2-diazepane derivatives as interleukin-1beta converting enzyme inhibitors
US20120165319A1 (en) Inhibitors of interleukin-1 beta converting enzyme
RU2249598C2 (ru) ИНГИБИТОРЫ ФЕРМЕНТА, КОНВЕРТИРУЮЩЕГО ИНТЕРЛЕЙКИН-1-β
KR100856767B1 (ko) 인터류킨-1 베타 전환효소의 억제제
AU756253B2 (en) Inhibitors of interleukin-1beta converting enzyme
AP1280A (en) Inhibitors of interleukin-1 converting enzyme.
TW541309B (en) Inhibitors of interleukin-1beta converting enzyme
TWI235157B (en) Inhibitors of interleukin-1beta converting enzyme
CZ2000877A3 (cs) Pyrrolopyrrolonové deriváty

Legal Events

Date Code Title Description
RECP Rectifications of patent specification
VDSO Invalidation of derivated patent or utility model

Ref document number: 368465

Country of ref document: PL

LAPS Decisions on the lapse of the protection rights

Effective date: 20121220