CN102065893A - Lfa-1拮抗剂向胃肠系统的递送 - Google Patents

Lfa-1拮抗剂向胃肠系统的递送 Download PDF

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Abstract

本发明提供了通过将LFA-1拮抗剂递送至胃肠系统来治疗疾病和病症的组合物和方法。所述方法包括递送LFA-1拮抗剂以实现局部治疗。

Description

LFA-1拮抗剂向胃肠系统的递送
引用
本申请要求2008年4月15日申请的、序列号为61/045,165的美国临时申请的权益，该临时申请以引用方式并入本文。
交叉引用
交叉引用的文献有：2008年10月17日申请的序列号为12/288,330的共同未决美国申请；2009年4月15日申请的代理人案号WSGR32411-708.201；2009年4月15日申请的代理人案号WSGR-32411-709.201；以及2009年4月15日申请的代理人案号WSGR32411-712.201，因此上述申请以引用方式全部合并入本文。
背景技术
(CD11/CD18)粘附受体分子家族含有四种高度相关的细胞表面糖蛋白：LFA-1(CD11a/CD18)、Mac-1(CD11b/CD18)、p150.95(CD11c/CD18)和(CD11d/CD18)。(CD11/CD18)家族在结构上和遗传学上与调节细胞粘附相互作用的较大整联蛋白家族受体有关，所述相互作用包括：胚形成、粘附至细胞外的底物、以及细胞分化(Hynes，R.O.，Cell 48：549-554(1987)；Kishimoto et al.，Adv.Immunol.46：149-182(1989)；Kishimoto etal.，Cell 48：681-690(1987)；Ruoslahti et al.，Science 238：491-497(1987))。LFA-1是一种异二聚体粘附分子，其存在于除巨噬细胞子集外的所有成熟白细胞的表面上，并被认为是主要的淋巴整联蛋白。Mac-1、p150.95和CD11d/CD18的表达主要限于骨髓谱系的细胞(包括嗜中性粒细胞、单核细胞、巨噬细胞和肥大细胞)。已知LFA-1和Mac-1(CD11b/CD18)对白细胞的功能尤为重要(Li et al.(2006)Am J Pathology169：1590-1600)。LFA-1特别与白细胞迁移至炎症部位有关(Green et al.(2006)Blood 107：2101-11)。
功能研究提示，LFA-1与几种配体相互作用，包括ICAM-1(Rothleinet al.，J.Immunol.137：1270-1274(1986)、ICAM-2(Staunton et al.，Nature339：361-364(1989))、ICAM-3(Fawcett et al.，Nature 360：481-484(1992)；Vezeux et al.，Nature 360：485-488，(1992)；de Fougerolles and Springer，J.Exp.Med.175：185-190(1990))和端脑蛋白(Telencephalin)(Tian et al.，J.Immunol.158：928-936(1997))。LFA-1与ICAM的正常相互作用在肽-MHC复合物中起到共刺激分子的作用(Grakoui et al.(1999)Science285：221-7；Malissen(1999)Science 285：207-8)。已知ICAM 1-3调节淋巴细胞和T细胞活化(Perez et al.(2007)BMC Immunol.8：2)。ICAM-4是红细胞特异性配体，并且已知ICAM-5将白细胞补充到中枢神经系统中的神经元(Ihanus et al.(2007)Blood 109：802-10；Tian et al.(2000)Eur J.Immunol.30：810-8)。一旦结合，LFA-1发生构象变化，其导致较高亲和力结合和受体群集(Hogg et al.(2003)J Cell Sci.116：4695-705；Takagi etal.(2002)Cell 110：599-611)。
在炎性反应期间，外周血白细胞通过一系列特定的细胞相互作用被补充至炎症或损伤部位。淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1)已被确定为主要的整联蛋白，其介导引起正常免疫应答以及几种病理状态的淋巴细胞粘附和活化(Springer，T.A.，Nature 346：425-434(1990))。LFA-1与ICAM的结合介导一系列淋巴细胞功能，包括辅助T细胞响应抗原呈递细胞产生淋巴因子、T-淋巴细胞介导的靶细胞裂解、自然杀死肿瘤细胞、和经由T-细胞-B细胞相互作用产生免疫球蛋白。因此，淋巴细胞功能的许多方面涉及LFA-1整联蛋白和其ICAM配体的相互作用。这些LFA-1:ICAM介导的相互作用直接涉及许多炎性疾病状态，包括：许多肠胃炎性病症，例如：炎性肠病综合征、结肠炎、乳糜泻、胃炎。
因此，现在需要开发通过拮抗LFA-1来减少、预防或治疗肠胃系统的炎性疾病的方法。本发明满足了这些需要，并且也提供相关的优点。
发明内容
一方面，提供一种药物制剂，含有LFA-1拮抗剂或其药用可接受的盐或酯，和适于口服给药的赋形剂，其中当给药于受试者时，LFA-1拮抗剂的全身清除率大于约2mL/min/kg。在一种实施方式中，LFA-1拮抗剂在给药于受试者后大约4小时内可以达到大于约1μM的局部组织浓度。在另一实施方式中，在给药于受试者后至少约8小时内，LFA-1拮抗剂的局部组织浓度保持在大于约10nM的浓度。
在另一方面，提供一种用于治疗受试者肠胃系统一种或多种组织的炎性或免疫相关疾病的方法，包括将含有LFA-1拮抗剂或其药用可接受的盐或酯和药用可接受的赋形剂的制剂给药于需要的受试者，其中当给药于受试者时，LFA-1拮抗剂的全身清除率大于约2mL/min/kg。在一种实施方式中，给药后，在给药后大约4小时内，LFA-1拮抗剂以治疗有效浓度存在于施用有该制剂的上皮表面的约1mm内，并且以低于治疗有效水平存在于血浆中。在另一个实施方式中，在给药于受试者后大约4小时内，LFA-1拮抗剂的局部组织浓度大于约10nM。在其他一些实施方式中，在给药于受试者后约4小时内，LFA-1拮抗剂的局部组织浓度大于约1μM，且血浆中测得的全身浓度小于约100nM。在其他的实施方式中，在给药于受试者后至少大约8小时内，LFA-1拮抗剂的局部组织浓度保持在大于约10nM。在各个实施方式中，LFA-1拮抗剂的局部组织浓度在施用有该制剂的上皮表面的约1mm内。
在一些实施方式中，LFA-1拮抗剂是直接竞争性拮抗剂。在其他实施方式中，LFA-1拮抗剂在约100nM的浓度时可以抑制大约50％或以上的T-细胞向ICAM-1的粘附。
在各种实施方式中，LFA-1拮抗剂是式I或II的化合物和/或其药用可接受的盐或酯，具有以下结构：
Figure BPA00001275903500031
其中R1和R2各自独立为氢、氨基酸侧链、-(CH2)mOH、-(CH2)m芳基、-(CH2)m杂芳基(其中m是0-6)、-CH(R1A)(OR1B)、-CH(R1A)(NHR1B)、U-T-Q，或任选由U-T-Q取代的脂肪族、脂环族、杂脂肪族或杂脂环族部分，
其中U是不存在、-O-、-S(O)0-2-、-SO2N(R1A)、-N(R1A)-、-N(R1A)C(＝O)-、-N(R1A)C(＝O)-O-、-N(R1A)C(＝O)-N(R1B)-、-N(R1A)-SO2-、-C(＝O)-、-C(＝O)-O-、-O-C(＝O)-、芳基、杂芳基、烷基芳基、烷基杂芳基、-C(＝O)-N(R1A)-、-OC(＝O)N(R1A)-、-C(＝N-R1E)-、-C(＝N-R1E)-O-、-C(＝N-R1E)-N(R1A)-、-O-C(＝N-R1E)-N(R1A)-、-N(R1A)C(＝N-R1E)-、-N(R1A)C(＝N-R1E)-O-、-N(R1A)C(＝N-R1E)-N(R1B)-、-P(＝O)(OR1A)-O-或-P(＝O)(R1A)-O-；
T是不存在、脂肪族、杂脂肪族、芳基、杂芳基、烷基芳基或烷基杂芳基部分；以及
Q是氢、卤素、氰基、异氰酸酯、-OR1B、-SR1B、-N(R1B)2、-NHC(＝O)OR1B、-NHC(＝O)N(R1B)2、-NHC(＝O)R1B、-NHSO2R1B、-NHSO2N(R1B)2、-NHSO2NHC(＝O)OR1B、-NHC(＝O)NHSO2R1B、-C(＝O)NHC(＝O)OR1B、C(＝O)NHC(＝O)R1B、-C(＝O)NHC(＝O)N(R1B)2、-C(＝O)NHSO2R1B、-C(＝O)NHSO2N(R1B)2、C(＝S)N(R1B)2、-SO2R1B、-SO2OR1B、-SO2N(R1B)2，-SO2-NHC(＝O)OR1B、-OC(＝O)-N(R1B)2、-OC(＝O)R1B、-OC(＝O)NHC(＝O)R1B、-OC(＝O)NHSO2R1B、-OSO2R1B或脂肪族、杂脂肪族、芳基或杂芳基部分，或其中R1和R2合起来可以是脂环族或杂环部分，或者合起来可以是
Figure BPA00001275903500041
其中每次出现的R1A和R1B各自独立是氢、脂肪族、脂环族、杂脂肪族、杂环、芳基、杂芳基、烷基芳基或烷基杂芳基部分、-C(＝O)R1C或-C(＝O)NR1CR1D；其中每次出现的R1C和R1D各自独立是氢、羟基、或脂肪族、杂脂肪族、芳基、杂芳基、烷基芳基或烷基杂芳基部分；以及R1E是氢、脂肪族、脂环族、杂脂肪族、杂环、芳基、杂芳基、烷基芳基或烷基杂芳基部分、-CN、-OR1C、-NR1CR1D或-SO2R1C；
R3是-C(＝O)OR3A、-C(＝O)H、-CH2OR3A、-CH2OC(＝O)-烷基、-C(＝O)NH(R3A)、-CH2X0；其中每次出现的R3A独立是氢、保护基、脂肪族、脂环族、杂脂肪族、杂脂环族、芳基、杂芳基、烷基芳基、烷基杂芳基、杂烷基芳基、杂烷基杂芳基部分，或其药用可接受的盐或酯，或者R3A和R1与R2合起来形成杂环部分；其中X0是选自F、Br或I的卤素。
其中R4A和R4B独立代表选自F、Cl、Br或I的卤素；且RB1、RB2和RE独立为氢或取代或未取代的低级烷基；
AR1是单环或多环芳基、杂芳基、烷基芳基、烷基杂芳基、脂环族或杂环部分；以及
L不存在或者是V-W-X-Y-Z，其中每次出现的V、W、X、Y和Z独立代表不存在、C＝O、NRL1、-O-、-C(RL1)＝、＝C(RL1)-、-C(RL1)(RL2)、C(＝N-O RL1)、C(＝NRL1)、-N＝、S(O)0-2；取代或未取代的C1-6亚烯基或C2-6亚烯基(alkenylidine)链，其中最多达两个非相邻亚甲基单元任选独立被-C(＝O)-、-CO2-、-C(＝O)C(＝O)-、-C(C＝O)NRL3-、-OC(＝O)-、-OC(＝O)NRL3-、-NRL3NRL4-、-NRL3NRL4C(＝O)-、-NR L3C(＝O)-、-NRL3CO2-、NR L3C(＝O)NR L4-、-S(＝O)-、-SO2-、-NRL3SO2-、-SO2NR L3、-NRL3SO2NRL4、-O-、-S-或NRL3-代替，其中每次出现的RL3和RL4独立代表氢、烷基、杂烷基、芳基、杂芳基或酰基；或脂肪族、脂环族、杂脂肪族、杂脂环族、芳基、杂芳基、烷基芳基或烷基杂芳基部分；以及每次出现的RL1和RL2独立代表氢、羟基、保护羟基、氨基、保护氨基、硫代、保护硫代、卤素、氰基、异氰酸酯、羧基、羧基烷基、甲酰基、甲酰氧基、叠氮基、硝基、脲基、硫脲基、硫氰酸基、烷氧基、芳基氧基、巯基、亚磺酰氨基、苯酰胺基、甲苯磺酰基、或脂肪族、脂环族、杂脂肪族、杂脂环族、芳基、杂芳基、烷基芳基或烷基杂芳基部分，或其中一个或多个RL1和RL2合起来，或一个或多个RL1和RL2与V、W、X、Y或Z之一合起来形成脂环族或杂环部分或形成芳基或杂芳基部分。
在另一实施方式中，LFA-1拮抗剂具有下式之一：
Figure BPA00001275903500051
Figure BPA00001275903500061
在一些实施方式中，LFA-1拮抗剂是下式化合物：
Figure BPA00001275903500062
在另一实施方式中，LFA-1拮抗剂是下式化合物的结晶形式A型、B型、C型、D型、或E型、无定型中的任一种、或其组合：
在一个实施方式中，LFA-1拮抗剂是下式化合物的形式A型：
Figure BPA00001275903500072
在其他实施方式中，LFA-1拮抗剂是钠、钾、锂、镁、锌或钙盐。
在一些实施方式中，所述制剂为片剂、胶囊、混悬剂、粉剂、结晶形式、栓剂、微粒或纳米颗粒的形式。在其他实施方式中，赋形剂是水、缓冲水溶液、表面活性剂、挥发性液体、淀粉、多元醇、成粒剂、微晶纤维素、稀释剂、润滑剂、酸、碱、盐、乳剂、油、润湿剂、螯合剂、抗氧化剂、无菌溶液、络合剂或者崩解剂。在各种实施方式中，该表面活性剂是油酸、氯化十六烷基吡啶、大豆卵磷脂、聚氧乙烯去水山梨醇单月桂酸酯、聚氧乙烯去水山梨醇单硬脂酸酯、聚氧乙烯去水山梨醇单油酸酯、聚氧乙烯硬脂酰乙醚、聚氧乙烯油基醚、聚氧乙烯-聚氧丙烯-乙二胺嵌段共聚物、聚氧丙烯-聚氧乙烯嵌段共聚物或蓖麻油乙氧基化物。
本发明也提供了还包含局部渗透增强剂的制剂。在一种实施方式中，该局部渗透增强剂是：亚砜、醚、表面活性剂、醇、脂肪酸、脂肪酸酯、多元醇、酰胺、萜烯、烷酮或有机酸。在其他实施方式中，制剂可包含至少一种另外的治疗剂：5-氨基水杨酸酯(5-ASA)类化合物、皮质类固醇、抗生素、钙调磷酸酶抑制剂或免疫调节剂。在一种实施方式中，5-ASA化合物是柳氮磺胺吡啶(sulfasalzine)、奥沙拉嗪(osalazine)或美沙拉明(mesalamine)。在其他实施方式中，皮质类固醇是波尼松或布地奈德(budesonide)。在其他实施方式中，抗生素是甲硝唑(metronidazole)或环丙沙星(ciprofloxacin)。在一种实施方式中，免疫调节剂是6-巯基嘌呤、硫唑嘌呤、甲氨蝶呤、英夫利昔单抗或阿达木单抗。在其他实施方式中，钙调磷酸酶抑制剂是环孢霉素、他克莫司、吡美莫司、或西罗莫司。
在其他实施方式中，该方法包括给予受试者另外的治疗剂。在多种实施方式中，在给药LFA-1拮抗治疗剂或其可药用盐或酯的同时、之前或之后给予受试者其他的治疗剂。在又一些其他的实施方式中，另外的治疗剂是抗氧化剂、抗炎药、抗微生物剂、抗血管生成剂、或抗细胞凋亡剂。在一些实施方式中，另外的治疗剂是：5-氨基水杨酸酯(5-ASA)类化合物、皮质类固醇、抗生素、钙调磷酸酶抑制剂或免疫调节剂。在一些实施方式中，5-ASA化合物是柳氮磺胺吡啶、奥沙拉嗪或美沙拉明。在一些其他实施方式中，皮质类固醇是波尼松或布地奈德。在又一些其他实施方式中，抗生素是甲硝唑或环丙沙星。在其他的实施方式中，免疫调节剂是6-巯基嘌呤、硫唑嘌呤、甲氨蝶呤、英夫利昔单抗或阿达木单抗。在其他实施方式中，钙调磷酸酶抑制剂是环孢霉素、他克莫司、吡美莫司、或西罗莫司。
在多种实施方式中，局部炎性或免疫相关的疾病是炎性肠病、克罗恩氏病(Crohn′s disease)、溃疡性结肠炎或口腔扁平苔癣。
以引用方式合并
所有本说明书提到的出版物和专利申请通过相同程度的引用方式合并入本发明，如同特定且独立地指定各单个出版物或者专利申请以引用方式合并。
附图说明
本发明的新特征在附加的权利要求书中特别列出。通过参考以下阐述举例性的具体实施方式的详细说明和附图，将更好地理解本发明的特征与优点，所述具体实施方式利用了本发明的原理，其附图为：
图1显示淋巴细胞粘附抑制试验和IL-2释放试验的结果。对于抑制试验，对HuT78或Jurkat T细胞和固定ICAM-1之间的结合的抑制计算EC50值。对于IL-2释放试验，对添加葡萄球菌肠毒素B抗原后外周血单核细胞产生IL-2的抑制计算EC50值。该试验在存在10％人血清下进行。
图2是用化合物12处理狗眼前后获得的活检组织的组织病理学评价的图示。
图3说明了用化合物12处理狗眼的第2、4、8和12周Schirmer试验得分的平均变化。
图4说明了用1％化合物12的制剂(TID；每天三次)处理第2、4、8和12周Schirmer试验得分大于10mm的狗眼百分数。
图5说明了用1％化合物12的制剂(TID)治疗受试者的第2、4、12、16和26周，与用2％CsA(BID；每天两次)治疗的文献结果相比，Schirmer试验得分提高大于4mm的眼睛百分数。
图6说明用5％化合物12治疗(人)的化合物12平均血浆水平的时间变化过程。
图7说明用1％化合物12QD(一天一次)治疗人受试者的泪液Cmin水平。
图8说明给药于人的化合物12(QD和TID)的剂量/药物Cmax泪液水平关系。
图9说明用化合物12QD治疗人受试者的剂量/AUC(浓度-时间曲线下面积)和剂量/平均Cmax(最大观测浓度)泪液水平关系。
图10是以[14C]-化合物12(1mg/眼睛)单次局部眼睛给药至雄性Sprague Dawley动物0.5小时后的全身放射自显影照片图示。
图11是以[14C]-化合物12(1mg/眼睛)单次局部眼睛给药至雄性Sprague Dawley动物2小时后的全身放射自显影照片图示。
图12是以[14C]-化合物12(1mg/眼睛)单次局部眼睛给药至雄性Sprague Dawley动物8小时后的全身放射自显影照片图示。
图13是以[14C]-化合物12(1mg/眼睛)单次局部眼睛给药至雄性Sprague Dawley动物12小时后的全身放射自显影照片图示。
图14是以[14C]-化合物12(1mg/眼睛)单次局部眼睛给药至雄性Sprague Dawley动物24小时后的全身放射自显影照片图示。
图15说明[14C]-化合物12的大鼠眼睛的药代动力学。
图16说明[14C]-化合物12的狗眼睛的药代动力学。
图17是化合物12单次IV剂量给药于大鼠后的血浆药物水平的时间变化过程的图示。
图18是化合物12单次IV剂量给药于狗后的血浆药物水平的时间变化过程的图示。
图19说明给药于狗的化合物12的剂量/药物AUC(泪液中)关系。
图20说明化合物12 TID眼睛给药于兔子后13周测得的泪液药物浓度分布。
图21说明化合物12 TID剂量眼睛给药于狗后13周测得的泪液药物浓度分布。
图22说明化合物12单次剂量局部滴注给药后，兔子左右眼内的平均泪液药物浓度。
图23说明化合物12多次局部施用后，大鼠的血浆药物水平。
发明详述
除非另有说明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明领域技术人员通常理解相同的意思。本发明引用的所有专利和出版物通过引用方式合并在此。
如同用于说明书和权利要求书中，单数形式“一”、“一个”或“该”包括复数形式，除非上下文另有明确说明。
本发明使用的“剂”或“生物活性剂”指生物、药物或化学化合物或者其他部分。非限定性例子包括简单或复合有机或无机分子、肽、蛋白质、寡核苷酸、抗体、抗体衍生物、抗体片段、维生素衍生物、碳水化合物、毒素或化学治疗用化合物。各种化合物可以被合成，例如，小分子和低聚物(例如，寡肽和寡核苷酸)，和基于各种核心结构的合成的有机化合物。另外，各种天然源可以提供化合物用于筛选，例如植物或动物提取物等。熟练技术人员可以容易地意识到本发明试剂的结构性质没有限制。
本发明使用的术语“激动剂”指能够启动或者增强靶蛋白的生物功能的化合物，不管是通过抑制靶蛋白的活性还是表达。因此，术语“激动剂”在靶多肽的生物学作用的上下文中定义。尽管本发明优选的激动剂特异性地与靶标相互作用(例如结合)，但是通过与信号转导途径的其他成员(靶多肽是该信号转导途径的一个成员)相互作用从而启动或增强靶多肽的生物活性的化合物也特别包括在该定义中。
术语“拮抗剂”和“抑制剂”可互换使用，它们指能够抑制靶蛋白的生物功能的化合物，不管是通过抑制靶蛋白的活性还是表达。因此，术语“拮抗剂”和“抑制剂”在靶蛋白的生物学作用的上下文中定义。尽管本发明优选的拮抗剂特异性地与靶标相互作用(例如结合)，但是通过与信号转导途径的其他成员(靶多肽是该信号转导途径的一个成员)相互作用从而抑制靶蛋白的生物活性的化合物也特别包括在该定义中。被LFA-1拮抗剂抑制的优选的生物活性例如与分别如炎性或者自身免疫性疾病中表现的不想要的炎症或者免疫应答有关。
“直接竞争性抑制剂”或“直接竞争性拮抗剂”指一种配体，其包括生物分子、肽以及合成的有机小分子，其直接与生物靶分子的活性位点结合，并直接阻止底物与其结合。例如，LFA-1和ICAM-1的相互作用的直接竞争性抑制剂结合至LFA-1上的ICAM-1结合位点，因此直接阻止ICAM-1结合。
本发明使用的“变构抑制剂”指一种配体，其包括生物分子、肽、以及合成的有机小分子，其结合至生物靶分子上除被抑制的相互作用结合位点以外的位点上。所述相互作用改变了生物靶分子的形状，从而破坏了生物靶分子和其底物之间的常规复合物。这导致这种复合物形成的正常活性的抑制。例如，LFA-1和ICAM-1的相互作用的变构抑制剂结合在LFA-1上除了ICAM-1结合位点以外的位点上，但它破坏了ICAM-1的结合部位，从而减少LFA-1和ICAM-1的相互作用。
应用于生物活性剂的术语“选择性抑制”指与脱靶信号活性相比而言，试剂经由直接或间接与靶标相互作用从而选择性降低靶信号活性的通力。
本发明使用的“Th1”和“Th2”指在两个截然不同的细胞类型-Th1和Th2中发现的辅助T细胞，以它们产生和响应的细胞因子以及它们涉及的免疫应答而区分。Th1细胞产生促炎性的细胞因子如IFN-g、TNF-b和IL-2，而Th2细胞产生细胞因子IL-4、IL-5、IL-6和IL-13。
“抗癌剂”、“抗肿瘤剂”或“化疗剂”指用于治疗肿瘤病症的任何试剂。一类抗癌剂包括化疗剂。“化疗”指通过各种方法给药于癌症患者一种或多种化疗药物和/或其他药剂，包括静脉内、口服、肌内、腹膜内、膀胱内、皮下、透皮、口腔或者吸入或以栓剂形式。
术语”细胞增殖”指由于分裂引起的细胞数目变化的现象。该术语也包括导致与增殖信号一致的细胞形态的变化(例如，尺寸增加)的细胞生长。
本发明使用的术语“联合给药”、“共同给药”及其语法上的等同物，包括给药于动物两种或更多种试剂从而两种试剂和/或其代谢物同时存在于动物内。共同给药包括在单独的组合物中同时给药，在单独的组合物中在不同时间给药，或者在存在两种试剂的一种组合物中给药。
术语“有效量”或者“治疗有效量”指足以实现预定应用的本发明描述的化合物的量，包括但不限于疾病治疗，如同下文所定义。治疗有效量可以根据预定应用(体外或者体内)、或要治疗的受试者和疾病症状，例如受试者的体重和年龄、疾病症状的严重性、给药方式等而变化，本领域技术人员可以容易地决定。该术语也应用于将诱导靶细胞的特定反应例如血小板粘附和/或细胞迁移的减少的剂量。特定剂量将根据所选的特定化合物、要遵循的给药方案、是否是与其他化合物联合给药，给药时间、给药组织、以及携带它的物理输送系统而变化。
如本发明所使用，“治疗”或“缓和”或“改善“可在本发明互换使用。这些术语指的是获得有益的或者需要的结果的方法，包括但不限于治疗学益处和/或预防性益处。对于治疗学益处，指的是所治疗的基础疾病的根除或改善。治疗学益处也以一种或多种生理学症状的根除或改善而实现，所述生理学病症与基础疾病有联系，以至于在患者中观察到改善，尽管该患者可能仍然受基础疾病的折磨。对于预防性益处，可能将组合物给药于有发展特定疾病风险的患者，或者给药于报告有疾病的一种或多种生理学症状的患者，即使可能还没有诊断为该疾病。组合物可以给药于受试者，以预防生理学症状的发展或者预防基础疾病的发展。
本发明使用的术语“治疗学效果”包括如上面描述的治疗学益处和/或预防性益处。预防性效果包括延迟或消除疾病或病症的出现，延迟或消除疾病或病症的症状发作，减缓、停止或逆转疾病或病症的发展，或其任何组合。
本发明使用的术语“药用可接受的盐”指的是那些适于药用的盐，优选用于人和低等动物的组织，无过度刺激、变态反应等的盐。化合物的胺、羧酸及其他类型的药用可接受的盐是本领域所熟知的。例如，S.M.Berge等人在J Pharmaceutical Sciences，66：1-19(1977)中详细描述了药用可接受的盐，该文献以引用方式合并在此。盐可以在本发明化合物最后的分离与提纯期间就地制备，或者单独使游离碱或游离酸官能团与适当的试剂(如同下文描述)反应而制备。例如，游离碱官能团可以与适当的酸反应。而且，当本发明化合物携带酸式部分时，其合适的药用可接受盐可以包括金属盐例如碱金属盐，如钠或钾盐；和碱土金属盐，如钙或镁盐。药用可接受的、无毒的酸加成盐的例子是氨基与无机酸或与有机酸形成的盐，所述无机酸例如盐酸、氢溴酸、磷酸、硫酸和高氯酸，所述有机酸例如乙酸、草酸、马来酸、酒石酸、柠檬酸、琥珀酸或丙二酸，或者使用本领域使用的其他方法例如离子交换作用形成的盐。其他药用可接受的盐包括己二酸盐、海藻酸盐、抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡萄糖酸盐、十二烷基硫酸盐、甲酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、甘油磷酸盐、葡萄糖酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、氢碘酸盐、2-羟基-乙烷磺酸盐、乳糖醛酸盐、乳酸盐、月桂酸盐、月桂基硫酸盐、苹果酸盐、顺丁烯二酸盐、丙二酸盐、甲烷磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、磷酸盐、苦味酸盐、新戊酸酯、丙酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、对甲苯磺酸盐、十一酸盐、戊酸盐等等。典型的碱金属或碱土金属盐包括钠、锂、钾、钙、镁盐等等。其他药用可接受的盐包括，适当的无毒的铵盐、季铵盐、通过与药物羧酸直接反应或通过使用反离子例如卤素、氢氧根、羧酸根、硫酸根、磷酸根、硝酸根、磺酸根和芳基磺酸根形成的胺阳离子。
“药用可接受的载体”或者“药用可接受的赋形剂”包括任何和所有溶剂、分散介质、包衣、抗细菌剂和抗真菌剂、等渗和延迟吸收剂等。将这种介质和试剂用于药学活性物质是本领域所熟知的。除了与活性成分不相容的传统介质和试剂，其用于本发明治疗组合物中是可预期的。也可将补充的活性成分加入组合物中。
“前药”指的是可以在生理条件下或通过溶剂分解作用转换成本发明描述的生物学活性物质的化合物。因此，术语“前药”指的是药用可接受的生物学活性物质的前体。当给药于受试者时，前药可能是无活性的，即酯，但是在体内转换成活性物质，例如，水解成游离羧酸。前药化合物通常在哺乳动物有机体中具有可溶性、组织兼容性或者延迟释放的优点(参考例如Bundgard，H.，Design of Prodrugs(1985)，pp.7-9，21-24(Elsevier，Amsterdam)。Higuchi，T.，等人的″Pro-drugs as Novel DeliverySystems，″A.C.S.Symposium Series，Vol.14，和Bioreversible Carriers inDrug Design，ed.Edward B.Roche，American Pharmaceutical Associationand Pergamon Press，1987提供了前药的讨论，两者均以引用方式全文合并在此。术语“前药”也包括任何共价结合的载体，当这种前药给药于哺乳动物受试者时，其在体内释放活性物质。如本发明描述的活性化合物的前药可以通过修饰存在于活性化合物中的官能团来制备，如此使所述修饰在常规处理中或在体内切割，成为母体活性化合物。前药包括其中羟基、氨基或巯基键合至任何基团上的化合物，当活性化合物的前药给药于哺乳动物受试者时，所述基团分别切割以形成游离羟基、游离氨基或游离巯基。前药的例子包括但不局限于：活性化合物的醇或乙酰胺的醋酸盐、甲酸盐和苯甲酸盐衍生物；胺官能团的甲酰胺和苯甲酰胺衍生物等。
本发明使用的“局部治疗”指的是免疫或炎性疾病的治疗，其中药物是局部递送，而不是经由全身性输送而递送。这可以包括例如胃肠道内的许多不同的局部区域或一些不同的局部区域，药物从胃肠道的腔递送至胃肠道粘膜。另一个例子是皮肤的治疗，其中药物可以施用于皮肤上的许多不同位置或者几个不同位置，并且其中药物是通过皮肤吸收被递送至皮肤内和与皮肤相邻的组织。或者，药物可以经由栓剂递送至肛门粘膜以及通过上皮表面吸收至下胃肠道粘膜内和与下胃肠道粘膜相邻的组织。
本发明使用的“局部递送”指的是药物化合物被携带至治疗应用部位。它包括，例如，将制剂直接施用在需要治疗的皮肤区域、将制剂喷在需要治疗的皮肤区域、将制剂喷在或者吸入鼻内以将药物给药至鼻部通道、或将滴眼剂滴到眼睛中以治疗眼睛。在本发明中，“局部递送”也包括经口或经鼻给药制剂，所述制剂被携带至胃肠道，其中药物与胃肠道粘膜接触，药物被吸收入周围组织并发挥治疗学效果，而没有直接从血液循环系统递送至该部位。
本发明使用的“局部组织浓度”指的是LFA-1拮抗剂在组织区域内的浓度，LFA-1拮抗剂递送至该区域并被吸收。
“受试者”指的是动物，例如哺乳动物，例如人类。本发明描述的方法可以用于治疗人类和兽医学应用。在一些实施方式中，患者是哺乳动物，在一些实施方式中，患者是人类。
术语“体内”指的是事件发生在受试者的身体内。
术语“体外”指的是事件发生在受试者的身体外。例如，体外试验包括任何在受试者身体外进行的试验。体外试验包括基于细胞的试验，其中使用生存或死亡的细胞。体外试验也包括无细胞试验，其中不使用完整细胞。
除非另有说明，本发明描写的结构也包括仅在存在一个或多个同位素富集原子方面不同的化合物。例如，具有本发明结构的化合物，除了由氘或氚代替氢，或者由13C-或14C-富集的碳代替碳，均在本发明的范围之内。
本发明化合物也可以在一个或多个组成这种化合物的原子上包含反常比例的原子同位素。例如，该化合物可以是用放射性同位素放射标记的，例如氚(3H)、碘-125(125I)或碳-14(14C)。本发明化合物所有的同位素变化，不管是否是有放射活性的，均包含在本发明范围内。
当本发明对物理性质例如分子量或者化学性质例如化学通式使用范围时，应包括范围的所有组合和亚组合以及具体的实施方式。术语“约”当指数量或数值范围时，意思是所指数量或者数值范围是试验变异性内(或统计学实验误差内)的近似值，因此该数量或者数值范围可以在所述数量或数值范围的例如1％至15％之间变化。术语“包含”(以及相关术语例如“含有”或“含”或“具有”或“包括”)包括那些具体实施方式，例如，物质、组合物、方法或过程等的任何组成的具体实施方式，其“由所描述的特征组成”或者“基本上由所描述的特征组成”。
本发明使用的缩写具有在化学和生物学领域的通常含义。
本发明使用的术语“脂肪族”包括饱和或不饱和的、直链(无支链的)或者支链的脂肪族烃，其任选被一种或多种官能团取代。如本领域技术人员所理解的，“脂肪族”在本发明中旨在包括但不限于：烷基、烯基、炔基部分。因此，如本发明所使用，术语“烷基”包括直链和支链烷基。类似的惯例适用于其他通用术语例如“烯基”、“炔基”等等。
而且，如本发明所使用，术语“烷基”、“烯基”、“炔基”等包括取代与未取代的基团两者。在某些实施方式中，如本发明所使用，“低级烷基”用于指代那些含有大约1-6个碳原子的烷基(取代、未取代、支链或无支链)。
在某些实施方式中，用于本发明的烷基、烯基和炔基包含大约1-20个脂肪族碳原子。在某些其他实施方式中，用于本发明的烷基、烯基和炔基包含大约1-10个脂肪族碳原子。在其他实施方式中，用于本发明的烷基、烯基和炔基包含大约1-8个脂肪族碳原子。在其他实施方式中，用于本发明的烷基、烯基和炔基包含大约1-6个脂肪族碳原子。在其他实施方式中，用于本发明的烷基、烯基和炔基包含大约1-4个碳原子。因此举例性的脂肪族基团包括但不限于，例如，甲基、乙基、正丙基、异丙基、烯丙基、正丁基、仲丁基、异丁基、叔丁基、正戊基、仲戊基、异戊基、叔戊基、正己基、仲己基部分等等，其也可以携带一个或多个取代基。
烯基包括但不限于，例如，乙烯基、丙烯基、丁烯基等等。典型的炔基包括但不限于乙炔基、2-丙炔基等等。
本发明所使用的术语“低级亚烷基”指的是将两个其他基团连接在一起的烃链，即在任一端键合至另一个基团，例如亚甲基、亚乙基、亚丁基等等。这样的取代基优选含有1到10个碳，更优选含有1到5个碳。这样的基团可以被取代，优选被氨基、乙酰氨基(经由氮原子键合的低级烷基羰基)、或环低级烷基取代。对于后者，指的是饱和烃环，优选总共带有3到10个亚甲基(包括连接碳在内)，更优选3到6个。
本发明所使用的术语“脂环族”指的是结合脂肪族和环状化合物的性质的化合物，包括但不限于单环或多环脂肪族烃以及桥连的环烷基化合物，其任选用一个或多个官能团取代。
如本领域技术人员所了解的，“脂环族”在本发明中旨在包括但不限于：环烷基、环烯基和环炔基部分，其任选由一个或多个官能团取代。
因此举例性的脂环基包括但不限于，例如，环丙基、-CH2-环丙基、环丁基、-CH2-环丁基、环戊基、-CH2-环戊基、环己基、-CH2-环己基、环己烯乙基、环己烷乙基、降冰片基部分等等，其也可以携带一个或多个取代基。
本发明所使用的术语“烷氧基”或“烷基氧基”指的是通过氧原子的饱和或不饱和母体分子部分。在某些实施方式中，烷基包含约1-20个脂肪族碳原子。在某些其他实施方式中，烷基包含约1-10个脂肪族碳原子。在其他实施方式中，本发明使用的烷基包含约1-8个脂肪族碳原子。在其他实施方式中，烷基包含约1-6个脂肪族碳原子。在其他实施方式中，烷基包含约1-4个脂肪族碳原子。烷氧基的例子包括但不限于，甲氧基、乙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、新戊氧基、正己氧基等等。
本发明使用的术语“低级烷氧基”指的是通过氧和另一个基团(即烷基醚)键合的如上定义的低级烷基，其可以是同样如上定义的支链或无支链的。
术语“烷基氨基”指的是具有结构-NHR′的基团，其中R′是如本发明所定义的烷基。术语“氨基烷基”指的是具有结构NH2R′-的基团，其中R′如本发明定义。在某些实施方式中，烷基含有约1-20个脂肪族碳原子。在某些其他实施方式中，烷基含有约1-10个脂肪族碳原子。在其他实施方式中，用于本发明的烷基含有约个脂肪族碳原子。在其他实施方式中，烷基含有约1-6个脂肪族碳原子。在其他实施方式中，烷基含有约1-4个脂肪族碳原子。烷基氨基的例子包括但不限于：甲基氨基等。
本发明化合物的以上所述的脂肪族(及其他)部分的一些取代基例子包括但不限于：脂肪族；脂环族；杂脂肪族；杂环；芳香族；杂芳香族；芳基；杂芳基；烷基芳基；杂烷基芳基；烷基杂芳基；杂烷基杂芳基；烷氧基；芳氧基；杂烷氧基；杂芳氧基；烷基硫基；芳基硫基；杂烷基硫基；Rx独立地包括但不限于：脂肪族、脂环族、杂脂肪族、杂环、芳基、杂芳基、烷基芳基、烷基杂芳基、杂烷基芳基或杂烷基杂芳基，其中上文和这里描述的任何脂肪族、脂环族、杂脂肪族、杂环、烷基芳基或烷基杂芳基取代基可以是取代的或未取代的、支链或无支链的、饱和或不饱和的、且其中上文和此处描述的任何芳基或杂芳基取代基可以是取代或未取代的。通常可应用的取代基的其他例子由此处描述的实施例中的具体实施方式说明。
通常，此处使用的术语“芳香族部分”指的是稳定的单环或者多环不饱和部分，其优选含有3-14个碳原子，每个碳原子可以被取代或未取代。在某些实施方式中，术语“芳香族部分”指在每个环原子上具有垂直于环平面的p-轨道并且满足Huckel规则(其中环中的π电子数为(4n+2)，其中n为整数)的平面环。不满足这些芳香性标准的一个或全部的单环或多环、不饱和部分在此处被定义为“非芳香族”，并由术语“脂环族”包括。
通常，本发明所使用的术语“杂芳香族部分”指的是稳定的单环或多环的不饱和基团，其优选含有3-14个碳原子，每个碳原子可以被取代或未取代；且环中含有至少一个选自O、S和N的杂原子代替环碳原子。在某些实施方式中，术语“杂芳香族部分”指包括至少一个杂原子、在每个环原子上具有垂直于环平面的p-轨道并且满足Huckel规则(其中环中的π电子数为(4n+2)，其中n为整数)的平面环。
还将理解，本文定义的芳香族和杂芳香族部分可以经由烷基或杂烷基部分连接，因此也包括-(烷基)芳香族、-(杂烷基)芳香族、-(杂烷基)杂芳香族和-(杂烷基)杂芳香族部分。因此，如本发明所使用，短语“芳香族或杂芳香族部分”与“芳香族、(杂烷基)芳香族、-(杂烷基)杂芳香族、和(杂烷基)杂芳香族”是可互换的。取代基包括但不限于前文提到的任何取代基，例如，脂肪族部分中所列举的取代基，或用于本文公开的其他基团的取代基，导致形成稳定化合物。
本文使用的术语“芳基”与本领域中该术语的公认含义没有明显的差别，指的是不饱和环部分，其含有至少一个芳环。在某些实施方式中，“芳基”指的是具有一个或两个芳环的单环或二环的碳环体系，包括但不限于：苯基、萘基、四氢萘基、茚满基、茚基等。
本文使用的术语“杂芳基”与本领域中该术语的公认含义没有明显的差别，指的是含有五到十个环原子的环状芳基，其中一个环原子选自S和N；零、一或两个环原子是独立地选自S和N的其他杂原子；剩下的环原子是碳，该基团通过任何环原子连接到分子的其余部分上，例如，吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、噻唑基、噁唑基、异噁唑基、噻二唑基、噁二唑基、苯硫基、呋喃基、喹啉基、异喹啉基等。
将理解，芳基和杂芳基(包括二环的芳基)可以是未取代的或是取代的，其中取代包括一个或多个氢原子独立地被任何一个或多个以下基团替换，包括但不限于：脂肪族；脂环；杂脂肪族；杂环；芳香族；杂芳香族；芳基；杂芳基；烷基芳基；杂烷基芳基；烷基杂芳基；杂烷基杂芳基；烷氧基；芳氧基；杂烷氧基；杂芳氧基；烷基硫基；芳基硫基；杂烷基硫基；杂芳基硫基；F；Cl；Br；I；-OH；-NO2；-CN；-CF3；-CH2CF3；-CHCl2；-CH2OH；-CH2CH2OH；-CH2NH2；-CH2SO2CH3；-C(＝O)Rx；-C(＝O)N(Rx)2；-OC(＝O)Rx；-OCO2Rx；-OC(＝O)N(Rx)2；-N(Rx)2；-S(O)2Rx；-NRx(CO)Rx；其中每个Rx独立地包括但不限于：脂肪族、脂环、杂脂肪族、杂环、芳香族、杂芳香族、芳基、杂芳基、烷基芳基、烷基杂芳基、杂烷基芳基或杂烷基杂芳基，其中上文和此处描述的任何脂肪族、脂环、杂脂肪族、杂环、烷基芳基或烷基杂芳基取代基可以是取代或未取代的、支链或无支链的、饱和或不饱和的，且上文和此处描述的任何芳香族、杂芳香族、芳基、杂芳基、-(烷基)芳基或-(烷基)杂芳基取代基可以是取代的或未取代的。另外，将理解，任何合在一起的两个相邻基团可以表示4、5、6或7-元取代或未取代脂环或杂环基团。通常可应用的取代基的其他例子由本文描述的实施例显示的具体实施方式说明。
本文描述的术语“环烷基”特别指含有三到七个、优选三到十个碳原子的基团。合适的环烷基包括但不限于：环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基等，在脂肪族、脂环、杂脂肪族或杂环基团的情况下，所述环烷基可以任选由取代基取代，所述取代基包括但不限于：脂肪族；脂环；杂脂肪族；杂环；芳香族；杂芳香族；芳基；杂芳基；烷基芳基；杂烷基芳基；烷基杂芳基；杂烷基杂芳基；烷氧基；芳氧基；杂烷氧基；杂芳氧基；烷基硫基；杂芳基硫基；F；Cl；Br；I；-OH；-NO2；-CN；-CF3；-CH2CF3；-CHCl2；-CH2OH；-CH2CH2OH；-CH2NH2；-CH2SO2CH3；-C(＝O)Rx；-C(＝O)N(Rx)2；-OC(＝O)Rx；-OCO2Rx；-OC(＝O)N(Rx)2；-N(Rx)2；-S(O)2Rx；-NRx(CO)Rx；其中每个Rx独立地包括但不限于：脂肪族、脂环、杂脂肪族、杂环、芳香族、杂芳香族、芳基、杂芳基、烷基芳基、烷基杂芳基、杂烷基芳基或杂烷基杂芳基，其中上文和此处描述的任何脂肪族、脂环、杂脂肪族、杂环、烷基芳基或烷基杂芳基取代基可以是取代或未取代的、支链或无支链的、饱和或不饱和的，且上文和此处描述的任何芳香族、杂芳香族、芳基、杂芳基取代基可以是取代的或未取代的。通常可应用的取代基的其他例子由本文描述的实施例显示的具体实施方式说明。
本文使用的术语“杂脂肪族”指的是主链上的一个或多个碳原子被杂原子取代的脂肪族基团。因此，杂脂肪族基团指的是例如含有一个或多个氧、硫、氮、磷或硅原子代替碳原子的脂肪链。杂脂肪族基团可以是直链或支链的、饱和或不饱和的。在某些实施方式中，杂脂肪族基团通过其上的一个或多个氢原子被以下一个或多个基团独立替换而取代，所述基团包括但不限于：脂肪族；脂环；杂脂肪族；杂环；芳香族；杂芳香族；芳基；杂芳基；烷基芳基；烷基杂芳基；烷氧基；芳氧基；杂烷氧基；杂芳氧基；烷基硫基；芳基硫基；杂芳基硫基；F；Cl；Br；I；-OH；-NO2；-CN；-CF3；-CH2CF3；-CHCl2；-CH2OH；-CH2CH2OH；-CH2NH2；-CH2SO2CH3；-C(＝O)Rx；-C(＝O)N(Rx)2；-OC(＝O)Rx；-OCO2Rx；-OC(＝O)N(Rx)2；-N(Rx)2；-S(O)2Rx；-NRx(CO)Rx；其中每个Rx独立地包括但不限于：脂肪族、脂环、杂脂肪族、杂环、芳香族、杂芳香族、芳基、杂芳基、烷基芳基、烷基杂芳基、杂烷基芳基或杂烷基杂芳基，其中上文和此处描述的任何脂肪族、脂环、杂脂肪族、杂环、烷基芳基或烷基杂芳基取代基可以是取代或未取代的、支链或无支链的、饱和或不饱和的，且上文和此处描述的任何芳香族、杂芳香族、芳基、或杂芳基取代基可以是取代的或未取代的。通常可应用的取代基的其他例子由本文描述的实施例显示的具体实施方式说明。
本文所使用的“杂环烷基”、“杂环”或“杂环的”指的是结合了杂脂肪族和环状化合物的性质的化合物，其包括但不限于饱和和不饱和的、单环或多环的环状体系，含有5-16个原子，其中至少一个环原子是选自S和N的杂原子(其中氮和硫杂原子可任选被氧化)，其中该环体系任选被一个或多个如本文所述的官能团取代。在某些实施方式中，术语“杂环烷基”、“杂环”或“杂环的”指的是非芳香族5-、6-或7-元环或多环基团，其中至少一个环原子杂原子选自S和N(其中氮和硫杂原子可任选被氧化)，包括但不限于：二或三环基团，包括具有1-3个独立地选自氧、硫和氮的杂原子的稠合六元环，其中(i)每个5-元环具有0到2个双键，每个6-元环具有0到2个双键以及每个7-元环具有0到3个双键，(ii)氮和硫杂原子可以任选被氧化，(iii)氮杂原子可以任选被季铵化，以及(iv)以上所述任何杂环可以与芳基或杂芳基环稠合。典型的杂环包括但不限于：杂环例如呋喃基、吡喃基、吡咯基、噻吩基、吡咯烷基、吡唑啉基、吡唑烷基、咪唑啉基、咪唑烷基、哌啶基、哌嗪基、噁唑基、噁唑烷基、异噁唑基、异噁唑烷基、二噁唑基、噻二唑基、噁二唑基、四唑基、三唑基、噻三唑基、噻二唑基、噁二唑基、吗啉基、噻唑基、噻唑烷基、异噻唑基、异噻唑烷基、二噻唑基、二噻唑烷基、四氢呋喃基、及其苯并稠合的衍生物。在某些实施方式中，本文使用的“取代杂环或杂环烷基或杂环”基团指的是如上定义的杂环、或杂环烷基或杂环基团，其通过独立地用以下基团替换其上的一个、两个或三个氢原子而被取代，该基团包括但不限于：脂肪族；脂环；杂脂肪族；杂环；芳香族；杂芳香族；芳基；杂芳基；烷基芳基；杂烷基芳基；烷基杂芳基；杂烷基杂芳基；烷氧基；芳氧基；杂烷氧基；杂芳氧基；烷基硫基；芳基硫基；杂烷基硫基；杂芳基硫基；F；Cl；Br；I；-OH；-NO2；-CN；-CF3；-CH2CF3；-CHCl2；-CH2OH；-CH2CH2OH；-CH2NH2；-CH2SO2CH3；-C(＝O)Rx；-C(＝O)N(Rx)2；-OC(＝O)Rx；-OCO2Rx；-OC(＝O)N(Rx)2；-N(Rx)2；-S(O)2Rx；-NRx(CO)Rx；其中每个Rx独立地包括但不限于：脂肪族、脂环、杂脂肪族、杂环、芳香族、杂芳香族、芳基、杂芳基、烷基芳基、烷基杂芳基、杂烷基芳基或杂烷基杂芳基，其中上文和此处描述的任何脂肪族、脂环、杂脂肪族、杂环、烷基芳基或烷基杂芳基取代基可以是取代或未取代的、支链或无支链的、饱和或不饱和的，且上文和此处描述的任何芳香族、杂芳香族、芳基、杂芳基可以是取代的或未取代的。另外，将理解，上文或此处描述的任何脂环或杂环基团可以包含与其稠合的芳基或杂芳基基团。
本文所使用的术语“卤代”和“卤素”指的是选自氟、氯、溴和碘的原子。
术语“卤代烷基”表示含有一、二或三个与之连接的卤素原子的如上定义的烷基，这种基团的例子如氯甲基、溴乙基、三氟甲基等。
本文使用的术语“氨基”指的是伯胺(-NH2)、仲胺(-NHRx)、叔胺(-NRxRy)或季胺(-N+RxRyRz)，其中Ry和Rz独立代表此处定义的脂肪族、脂环、杂脂肪族、杂环、芳香族或杂原子基团。氨基的例子包括但不限于：甲基氨基、二甲基氨基、乙基氨基、二乙基氨基、二乙基氨基羰基，异丙基氨基、哌啶基、三甲基氨基和丙基氨基。
本文使用的术语“酰基”指的是具有通式-C(＝O)R的基团，其中R是如本文定义的脂肪族、脂环、杂脂肪族、杂环、芳香族或杂芳香族基团。
本文使用的术语“磺酰胺基”指的是具有通式-SO2NRxRy的基团，其中Rx和Ry独立代表如本文定义的氢、或脂肪族、脂环、杂脂肪族、杂环、芳香族、杂芳香族或酰基基团。
本文使用的术语“苯酰胺基”指的是具有通式PhNRx的基团，其中Rx是如本文定义的氢、或脂肪族、脂环、杂脂肪族、杂环、芳香族、杂芳香族或酰基基团。
本文使用的术语“脂肪族”、“杂脂肪族”、“烷基”、“烯基”、“炔基”、“杂烷基”、“杂烯基”、“杂炔基”等包括取代和未取代的、饱和和不饱和的、直链和支链基团。类似地，术语“脂环”、“杂环”、“杂环烷基”等包括取代和未取代的、饱和和不饱和的基团。另外，术语“环烷基”、“环烯基”、“环炔基”、“杂环烷基”、“杂环烯基”、“杂环炔基”、“芳香族”、“杂芳香族”、“芳基”、“杂芳基”等包括取代和未取代的基团两者。
本文使用的术语“天然氨基酸”指的是在自然存在的蛋白质中发现的任何一种普遍的、自然存在的L-氨基酸：甘氨酸(Gly)、丙氨酸(Ala)、缬氨酸(Val)、亮氨酸(Leu)、异亮氨酸(Ile)、赖氨酸(Lys)、精氨酸(Arg)、组氨酸(His)、脯氨酸(Pro)、丝氨酸(Ser)、苏氨酸(Thr)、苯丙氨酸(Phe)、酪氨酸(Tyr)、色氨酸(Trp)、天冬氨酸(Asp)、谷氨酸(Glu)、天冬酰胺(Asn)、谷氨酰胺(Gln)、半胱氨酸(Cys)和甲硫氨酸(Met)。
本文使用的术语“非天然氨基酸”指的是不是天然氨基酸的所有氨基酸。例如，其包括α-、β-、D-、L-氨基酸残基，和如下通式的化合物：
Figure BPA00001275903500231
其中侧链R不是天然存在的氨基酸侧链。
更具体地，本文使用的术语“氨基酸”包括天然氨基酸和非天然氨基酸。
本发明提供配制的LFA-1拮抗剂或其药用可接受的盐，以及利用递送至肠胃系统治疗炎性疾病和病症的方法。例如，因其具有快速的全身清除率，该制剂可以适合局部治疗胃肠粘膜。本发明制剂将治疗有效量的LFA-1拮抗剂局部递送至肠胃组织，但是由于LFA-1拮抗剂的全身消除率高，LFA-1拮抗剂的系统浓度仍然低于治疗有效浓度。局部递送局部LFA-1拮抗剂疗法的优点包括将较高浓度的活性化合物递送至所需部位，快速递送活性化合物并由于较低全身循环水平而减少全身效应。
LFA-1拮抗剂向胃肠组织的递送
本发明提供了含有用作治疗剂的LFA-1拮抗剂的制剂。本发明的LFA-1拮抗剂的制剂用于治疗炎性或免疫相关的疾病和病症。这些制剂向胃肠(GI)系统-例如口、咽喉、舌、胃、食道、小肠(包括十二指肠、空肠或回肠)或大肠(包括盲肠或结肠)等器官和组织-的递送，由于具有快速的系统清除率而提供了局部治疗。
LFA-1与ICAM的相互作用在全身发挥各种全身效应。由于LFA-1拮抗剂在不需要的部位(例如除了给药位点以外的位点)的活性，使用LFA-1拮抗剂治疗疾病可能导致不需要的效果。本发明利用从系统循环中快速清除的LFA-1拮抗剂。通过使用胃肠递送至炎性或免疫疾病部位，将最小化不需要的全身效应。本发明LFA-1拮抗剂典型地具有最小的全身LFA-1拮抗剂活性。在一些实施方式中，LFA-1拮抗剂可能具有不可检测的全身LFA-1拮抗剂活性。
全身清除率可以通过本领域已知的各种方法计算。例如，可以通过分析药物浓度时间图中制剂给药后(例如在单次静脉注射或口服后)药物从血浆中消失的速率来计算药物清除率。消失率可以通过分析放射性标记的药物形式的吸收、分布、代谢和排泄来测量，或通过其他测量药物在血浆中的水平的方法来测量，所述方法例如液相色谱-质谱法(LCMS)或气相色谱法或HPLC(Sapirstein et al.，1955，Am.Jour.Physiol.，Vol.181，pp.330；美国专利No.4,908,202)。作为一个例子，可以通过将制剂引入受试者来计算清除率，所述制剂通过连续静脉注入直到达到平衡，这时物质的血浆水平(由分析血浆样品测定)是稳定的，在该点注入率等于血浆清除率(Earle et al.，1946，Proc.Soc.Exp.Biol.Med.，Vol.62，pp.262 ff.)。
快速的全身清除可能通过肝脏、肾脏或其他器官清除或代谢。图1给出了大鼠肝脏对所选化合物的清除率数据(参见实施例10)。当清除发生在特定器官中时，该清除率与流到所述特定器官的血流量有关。通过了解特定物种清除化合物的机制，其他动物的清除率可以通过异速生长缩放来计算。例如，本发明的化合物，化合物12，已知通过大鼠肝脏清除。基于在大鼠中计算得到的清除率，该化合物在各种动物中的清除率可以根据已知的大鼠血流量与其他动物相比较从而按比例缩放(参见Davies and Morris，“Physiological Parameters in Laboratory Animals andHumans”Pharmaceutical Research(1993)10：1093-5)。当对人按比例缩放时，本发明的LFA-1拮抗剂的全身清除率接近心排血量、肝血流量或肾血流量。该缩放可以基于心排血量、肝血流量或肾血流量的百分比。例如，100％大鼠肝血流量约为55mL/min/Kg，而100％人肝血流量约为20mL/min/kg。在一些实施方式中，本发明组合物的清除率为肝血流量的至少5％。对于人，这意味着清除率为1mL/min/kg。在其他实施方式中，LFA-1拮抗剂的清除率为人肝血流速率的至少大约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％(人肝脏清除率是20mL/min/kg)。在其他实施方式中，LFA-1拮抗剂的清除率为人肝血流速率的至少大约110％、120％、130％、140％、150％、175％、200％、220％、240％、260％、280％、300％、320％、340％、360％、380％、400％、420％、440％、460％、480％或500％。
本发明的清除率可以包括对人按比例缩放的清除率，为约1-500mL/min/kg。在一些实施方式中，LFA-1拮抗剂的全身清除率可以是约1mL/min/kg或更大。在其他实施方式中，LFA-1拮抗剂的全身清除率可以是约2mL/min/kg或更大。在其他实施方式中，LFA-1拮抗剂的全身清除率可以是约3mL/min/kg或更大。在其他实施方式中，LFA-1拮抗剂的全身清除率可以是约5mL/min/kg或更大。在其他实施方式中，LFA-1拮抗剂的全身清除率可以是约7mL/mim/kg或更大。在一些实施方式中，LFA-1拮抗剂的全身清除率可以是约10mL/min/kg或更大。在其他实施方式中，LFA-1拮抗剂的全身清除率可以是约15mL/min/kg或更大。在其他实施方式中，LFA-1拮抗剂的全身清除率可以是约20mL/min/kg或更大。在其他实施方式中，LFA-1拮抗剂的全身清除率可以是约25mL/min/kg或更大。在其他实施方式中，LFA-1拮抗剂的全身清除率可以是约30mL/min/kg或更大。在其他实施方式中，LFA-1拮抗剂的全身清除率可以是约40mL/min/kg或更大。在其他实施方式中，LFA-1拮抗剂的全身清除率可以是约50mL/min/kg或更大。在其他实施方式中，LFA-1拮抗剂的全身清除率可以是至少约60、65、70、75、80、85、90、95、或100mL/min/kg。
在本发明的另一个方面，本发明LFA-1拮抗剂对于LFA-1结合至ICAM-1具有抑制效果。本发明LFA-1拮抗剂的抑制效果可以使用本领域任何各种已知的结合试验来测试，包括直接将细胞结合至包被有ICAM-1的平板、酶联免疫吸附测定(ELISA)、放射免疫测定(RIA)或使用生物传感器。典型地，药物的抑制效果作为IC50值来测量，所述IC50值测量抑制50％的生物过程需要多少化合物。例如，本发明的LFA-1拮抗剂可抑制50％或更高的例如T-细胞粘附到ICAM-1的生物过程。或者，抑制效果可作为EC50值计算，所述EC50值测量药物能达到50％的预期效果所需的有效浓度。例如，可以测量EC50值来计算表达LFA-1的T细胞与ICAM-1的结合的抑制。例如，T细胞系HuT78(ATCCTIB-161)可以在浓度增加的LFA-1拮抗剂的存在下与包被有ICAM-1的平板结合。在一些实施方式中，LFA-1拮抗剂是LFA-1和ICAM-1之间的相互作用的直接竞争性抑制剂。现有技术描述了用于LFA-1拮抗剂的竞争性结合实验的例子，例如，美国专利申请No.2005/0148588和美国临时申请No.60/999,571；其内容引入本文作为参考(另请参见Gadek etal.Science 295，1086-1089，2002，和Keating et al Protein Science，15，290-303，(2006))。EC50或IC50可用于如下所述的实施方式中。这些试验可用于鉴定作为直接竞争性抑制剂的抑制剂。
LFA-1拮抗剂可以抑制HuT78细胞向包被有ICAM-1的平板上的结合，其EC50约为10μM或更低。在一些实施方式中，LFA-1拮抗剂抑制HuT78细胞向包被有ICAM-1的平板上的结合，其EC50约为1μM或更低。在其他实施方式中，LFA-1拮抗剂抑制HuT78细胞向包被有ICAM-1的平板上的结合，其EC50约为100nM或更低。在其他实施方式中，LFA-1拮抗剂抑制HuT78细胞向包被有ICAM-1的平板上的结合，其EC50约为10、5或1nM或更低。通式I和通式II的选定的LFA-1拮抗剂抑制HuT78细胞结合至ICAM-1的数据在图1中显示。
另外，本发明LFA-1拮抗剂的抑制效果也可以使用LFA-1结合至ICAM-1后的已知下游事件来测定。例如，已知用超抗原葡萄球菌肠毒素B(SEB)或其他炎性刺激物刺激后，初级培养物中的人T细胞释放IL-2。
例如，LFA-1拮抗剂可以抑制用SEB刺激的初级培养物中的外周血单核细胞(PBMC)释放IL-2，其IC50或EC50为10mM或更小。在其他实施方式中，LFA-1拮抗剂抑制用SEB刺激的初级培养物中的外周血单核细胞(PBMC)释放IL-2，其IC50或EC50为1mM或更小。在另一实施方式中，LFA-1拮抗剂抑制用SEB刺激的初级培养物中的外周血单核细胞(PBMC)释放IL-2，其IC50或EC50为100μM或更小。LFA-1拮抗剂可抑制用SEB刺激的初级培养物中的外周血单核细胞(PBMC)释放IL-2，其IC50或EC50为10μM或更小。在一些实施方式中，LFA-1拮抗剂抑制用SEB刺激的初级培养物中的外周血单核细胞(PBMC)释放IL-2，其IC50或EC50约为1μM、100nM、10nM、1nM或更小。
在一些实施方式中，当PBMC用SEB刺激时，LFA-1拮抗剂同时抑制两种或更多种炎性细胞因子的释放，其IC50或EC50约为1μM或更小。在另一个实施方式中，当PBMC用SEB刺激时，LFA-1拮抗剂同时抑制两种或更多种细胞因子的释放，其IC50或EC50约为100nM或更小。例如，当PBMC用SEB刺激时，LFA-1拮抗剂可以同时抑制IL-2和IL-4的释放，其IC50或EC50约为500nM或更小。不受理论的约束，这可能是重要的，因为IL-2和IL-4的释放在Th1和Th2淋巴细胞介导的炎性疾病中起重要作用。在另一个实施方式中，当PBMC用SEB刺激时，LFA-1拮抗剂可同时抑制IL-1(α)、IL-1(β)、IL-2、IL-4、IL-5、IL-10、IL-13、干扰素γ、MIP1(α)、MCP-1、TNF(α)和GM-CSF的释放，其IC50或EC50约为1μM或更小。
递送LFA-1拮抗剂以使达到局部治疗的有效浓度。例如，LFA-1的局部组织浓度为大于约1nM时，可以达到治疗有效浓度。在另一个实施方式中，LFA-1的局部组织浓度为大于约10nM时，可以达到局部治疗的有效浓度。在一些其他实施方式中，LFA-1的局部组织浓度为大于约100nM时，可以达到局部治疗的有效浓度。在其他实施方式中，LFA-1的局部组织浓度为大于约1μM时，可以达到局部治疗的有效浓度。在其他实施方式中，LFA-1的局部组织浓度为大于约10μM时，可以达到局部治疗的有效浓度。在另一个实施方式中，当保持低的全身水平时，可达到局部治疗的有效浓度。例如，在一些实施方式中，当保持全身药物浓度小于1μM时，达到局部治疗的有效浓度-约1nM、约10nM、约100nM、约1μM、或约10μM。在其他实施方式中，当保持全身药物浓度小于100nM时，达到局部治疗的有效浓度-约1nM、约10nM、约100nM、约1μM、或约10μM。在其他实施方式中，当保持全身药物浓度小于10nM时，达到局部治疗的有效浓度-约1nM、约10nM、约100nM、约1μM、或约10μM。本发明提供其他实施方式，其中当保持全身药物浓度小于1nM时，达到局部治疗的有效浓度-约1nM、约10nM、约100nM、约1μM、或约10μM。全身药物浓度可以由本领域已知以及上文公开的的任何各种方法通过血浆浓度来测量。
在本发明的另一方面，使LFA-1拮抗剂的局部组织浓度在一段延长的时间内保持在治疗有效水平。在一些实施方式中，人们希望的是，LFA-1拮抗剂的局部组织浓度在一定量时间或剂量之间保持在治疗有效水平。通过选择可以在延长时间内保持局部治疗有效水平的LFA-1拮抗剂，受试者能达到治疗学效果，而无需每天多剂量给药。在一些实施方案中，本发明LFA-1拮抗剂在递送到肠胃组织并吸收入肠胃组织中时，在给药后长达约1、2、3、5、8、10、12、14、15、16、18、20、22或24小时中，其浓度保持在高于至少约10nM、约50nM、约100nM、约150nM、约200nM、约300nM、约400nM、约500nM、约600nm、约700nM、约800nM、约900nM、约1M、约2M、约3M、约4M、约5M、约8M、约10M、约12M、约15M、约18M、约20M、约30M、约40M或约50M。例如，当给药至受试者时，LFA-1拮抗剂在递送后可保持高于1M的局部组织浓度至少2小时。浓度和时间可根据胃肠器官或组织而变化。局部治疗水平可以通过本领域已知的多种方法中的任一种来测量，例如放射性标记分析。
在一些实施方式中，LFA-1拮抗剂的局部组织浓度在给药于受试者后的至少大约2小时、大约4小时、大约6小时、大约8小时、大约10小时、大约12小时、大约14小时、大约16小时、大约18小时、大约20小时、大约22小时或大约24小时内大于约1μM。
在其他实施方式中，LFA-1拮抗剂的局部组织浓度在给药于受试者后的至少大约2小时、大约4小时、大约6小时、大约8小时、大约10小时、大约12小时、大约14小时、大约16小时、大约18小时、大约20小时、大约22小时或大约24小时内大于约100nM。
在其他实施方式中，LFA-1拮抗剂的局部组织浓度在给药于受试者后的至少大约2小时、大约4小时、大约6小时、大约8小时、大约10小时、大约12小时、大约14小时、大约16小时、大约18小时、大约20小时、大约22小时或大约24小时内大于约10nM。在其他实施方式中，LFA-1拮抗剂的局部组织浓度水平在直到大约3小时、大约4小时、大约5小时、大约6小时、大约7小时、大约8小时、大约9小时、大约10小时、大约11小时、大约12小时、大约13小时、大约14小时、大约15小时、大约16小时、大约17小时、大约18小时、大约19小时、大约20小时、大约21小时、大约22小时、大约23小时或大约24小时保持大于约10nM。
本发明还提供实施方式，其中LFA-1拮抗剂的局部组织浓度在给药于受试者后的至少大约2小时、大约4小时、大约6小时、大约8小时、大约10小时、大约12小时、大约14小时、大约16小时、大约18小时、大约20小时、大约22小时或大约24小时内大于约1nM。
LFA-1拮抗剂
具体的LFA-1拮抗剂化合物已在现有技术中描述并可能用于本发明。例如，LFA-1拮抗剂在美国专利No.7,314,938、美国专利申请公开号No.2006/0281739、美国申请序列号No.12/288,330和共同未决美国申请WSGR案号32411-712.201、32411-708.201和32411-709.201中描述；每篇文献的内容以引用方式清楚地合并在此。该化合物可以通过这些文献描述的方法合成。
可用作LFA-1拮抗剂的示例性的分子是通式(I)或(II)的化合物：
Figure BPA00001275903500291
其中R1和R2各自独立为氢、氨基酸侧链、-(CH2)mOH、-(CH2)m芳基、-(CH2)m杂芳基(其中m是0-6)、-CH(R1A)(OR1B)、-CH(R1A)(NHR1B)、U-T-Q，或任选由U-T-Q取代的脂肪族、脂环族、杂脂肪族或杂脂环族部分，
其中U是不存在、-O-、-S(O)0-2-、-SO2N(R1A)、-N(R1A)-、-N(R1A)C(＝O)-、-N(R1A)C(＝O)-O-、-N(R1A)C(＝O)-N(R1B)-、-N(R1A)-SO2-、-C(＝O)-、-C(＝O)-O-、-O-C(＝O)-、芳基、杂芳基、烷基芳基、烷基杂芳基、-C(＝O)-N(R1A)-、-OC(＝O)N(R1A)-、-C(＝N-R1E)-、-C(＝N-R1E)-O-、-C(＝N-R1E)-N(R1A)-、-O-C(＝N-R1E)-N(R1A)-、-N(R1A)C(＝N-R1E)-、-N(R1A)C(＝N-R1E)-O-、-N(R1A)C(＝N-R1E)-N(R1B)-、-P(＝O)(OR1A)-O-或-P(＝O)(R1A)-O-；
T是不存在、脂肪族、杂脂肪族、芳基、杂芳基、烷基芳基或烷基杂芳基部分；以及
Q是氢、卤素、氰基、异氰酸酯、-OR1B、-SR1B、-N(R1B)2、-NHC(＝O)OR1B、-NHC(＝O)N(R1B)2、-NHC(＝O)R1B、-NHSO2R1B、-NHSO2N(R1B)2、-NHSO2NHC(＝O)OR1B、-NHC(＝O)NHSO2R1B、-C(＝O)NHC(＝O)OR1B、C(＝O)NHC(＝O)R1B、-C(＝O)NHC(＝O)N(R1B)2、-C(＝O)NHSO2R1B、-C(＝O)NHSO2N(R1B)2、C(＝S)N(R1B)2、-SO2R1B、-SO2OR1B、-SO2N(R1B)2，-SO2-NHC(＝O)OR1B、-OC(＝O)-N(R1B)2、-OC(＝O)R1B、-OC(＝O)NHC(＝O)R1B、-OC(＝O)NHSO2R1B、-OSO2R1B或脂肪族、杂脂肪族、芳基或杂芳基部分，或其中R1和R2合起来是脂环族或杂环部分，或者合起来是
Figure BPA00001275903500301
其中每次出现的R1A和R1B独立是氢、脂肪族、脂环族、杂脂肪族、杂环、芳基、杂芳基、烷基芳基或烷基杂芳基部分、-C(＝O)R1C或-C(＝O)NR1CR1D；其中每次出现的R1C和R1D独立是氢、羟基、或脂肪族、杂脂肪族、芳基、杂芳基、烷基芳基或烷基杂芳基部分；以及R1E是氢、脂肪族、脂环族、杂脂肪族、杂环、芳基、杂芳基、烷基芳基或烷基杂芳基部分、-CN、-OR1C、-NR1CR1D或-SO2R1C；
R3是-C(＝O)OR3A、-C(＝O)H、-CH2OR3A、-CH2OC(＝O)-烷基、-C(＝O)NH(R3A)、-CH2X0；其中每次出现的R3A独立是氢、保护基、脂肪族、脂环族、杂脂肪族、杂脂环族、芳基、杂芳基、烷基芳基、烷基杂芳基、杂烷基芳基、杂烷基杂芳基部分，或其药用可接受的盐或酯，或者R3A和R1与R2合起来形成杂环部分；其中X0是选自F、Br或I的卤素。
R4A和R4B独立代表选自F、Cl、Br或I的卤素；且RB1、RB2和RE独立代表卤素或取代或未取代的低级烷基；
AR1是单环或多环芳基、杂芳基、烷基芳基、烷基杂芳基、脂环族或杂环部分；以及
L不存在或者是V-W-X-Y-Z，其中V、W、X、Y和Z各自独立代表不存在、C＝O、NRL1、-O-、-C(RL1)＝、＝C(RL1)-、-C(RL1)(RL2)、C(＝N-ORL1)、C(＝NRL1)、-N＝、S(O)0-2；取代或未取代的C1-6亚烯基或C2-6亚烯基链，其中最多达两个非相邻亚甲基单元任选独立被-C(＝O)-、-CO2-、-C(＝O)C(＝O)-、-C(C＝O)NRL3-、-OC(＝O)-、-OC(＝O)NRL3-、-NRL3NRL4-、-NRL3NRL4C(＝O)-、-NRL3C(＝O)-、-NRL3CO2-、NRL3C(＝O)NRL4-、-S(＝O)-、-SO2-、-NRL3SO2-、-SO2NRL3、-NRL3SO2NRL4、-O-、-S-或NRL3-代替，其中每次出现的RL3和RL4独立代表氢、烷基、杂烷基、芳基、杂芳基或酰基；或脂肪族、脂环族、杂脂肪族、杂脂环族、芳基、杂芳基、烷基芳基或烷基杂芳基部分；以及每次出现的RL1和RL2独立代表氢、羟基、保护羟基、氨基、保护氨基、硫代、保护硫代、卤素、氰基、异氰酸酯、羧基、羧基烷基、甲酰基、甲酰氧基、叠氮基、硝基、脲基、硫脲基、硫氰酸基、烷氧基、芳基氧基、巯基、亚磺酰氨基、苯酰胺基、甲苯磺酰基、或脂肪族、脂环族、杂脂肪族、杂脂环族、芳基、杂芳基、烷基芳基或烷基杂芳基部分，或其中一个或多个RL1和RL2合起来，或一个或多个RL1和RL2与V、W、X、Y或Z之一合起来形成脂环族或杂环部分或形成芳基或杂芳基部分，和/或其药用可接受的盐或酯。
本发明化合物包括：
Figure BPA00001275903500321
和其药用可接受的盐和酯。
可以另外预期，LFA-1拮抗剂可以无定型使用，或LFA-1拮抗剂可以是在共同未决申请案号32411-712.101中描述的任何结晶形式。在本发明的一些实施方式中，通式(I)化合物是化合物12的A型，其具有如下的X-射线粉末衍射图，在约18.2、21.4和22.7度的反射角2θ有特征峰；化合物12的B型，其具有如下的X-射线粉末衍射图，在约12.1、17.1和18.5度的反射角2θ有特征峰；化合物12的C型，其具有如下的X-射线粉末衍射图，在约4.8、17.8和21.5度的反射角2θ有特征峰；化合物12的D型，其具有如下的X-射线粉末衍射图，在约17.6、21.7和24.8度的反射角2θ有特征峰；化合物12的E型，其具有如下的X-射线粉末衍射图，在约5.12、8.26和17.8度的反射角2θ有特征峰；化合物12的无定型，其纯度大于90％；或它们的任意组合。
在一些实施方式中，通式I或通式II的LFA-1拮抗剂是盐。典型的碱金属或碱土金属盐包括但不限于钠、锂、钾、钙和镁盐。其他药用可接受的盐包括，适当的无毒的铵、季铵盐、通过与药物羧酸直接反应或通过使用反离子例如卤素、氢氧根、羧酸根、硫酸根、磷酸根、硝酸根、磺酸根和芳基磺酸根形成的胺阳离子。在一些实施方式中，在本发明方法中使用作为游离羧酸的钠盐的LFA-1拮抗剂。
特异结合至LFA-1的抗体可能用于本发明。通过针对这些分子之一或两个的抗体阻断CAM(例如ICAM-1)或白细胞整联蛋白(例如LFA-1)可以抑制炎性应答，所述抗体直接阻止。先前的研究调查了抗-CD11a Mabs在体外对许多T细胞依赖的免疫功能和在体内对许多免疫应答的效果。在体外，抗-CD11a MAbs抑制T细胞活化(参见KuypersT.W.，Roos D.1989″Leukocyte membrane adhesion proteins LFA-1，CR3and p150，95：a review of functional and regulatory aspects″Res.Immunol.，140：461-465；Fischer A，Durandy A，Sterkers G，Griscelli C.1986“Role ofthe LFA-1 molecule in cellular interactions required for antibody productionin humans”J.Immunol.，136，3198)、细胞毒性T淋巴细胞对靶细胞的裂解(Krensky et al.，同上)、免疫偶联物的形成(Sanders VM，Snyder JM，UhrJW，Vitetta  ES.，“Characterization  of the physical interaction betweenantigen-specific B and T cells”.J.Immunol.，137：2395(1986)；Mentzer SJ，Gromkowski SH，Krensky AM，Burakoff SJ，Martz E.1985“LFA-1membrane molecule in the regulation of homotypic adhesions of human Blymphocytes”J.Immunol.，135：9)，以及T细胞粘附至血管内皮(Lo SK，Van Seventer GA，Levin SM，Wright SD.，Two leukocyte receptors(CD 11a/CD18 and CD11b/CD18)mediate transient adhesion to endotheliumby binding to different ligands.，J.Immunol.，143：3325(1989))。两种抗-CD11a MAbs，HI 111和G43-25B，可从Pharmingen/BD Biosciences获得。已经在人类疾病和疗法的小鼠模型中研究了抗鼠单克隆抗体M17对LFA-1介导的疾病的治疗(美国专利No.5,622,700)，并且可以使用。另外，包括F8.8、CBR LFA 1/9、BL5、May.035、TS1/11、TS1/12、TS1/22、TS2/14、25-3-1、MHM2和依法珠单抗(efalizumab)的研究评估了这些抗体在阻断ICAM结合与白细胞功能时占据的LFA-1上结合位点的范围。参见Lu，C；et al.2004，“The Binding Sites for CompetitiveAntagonistic，Allosteric Antagonistic，and Agonistic Antibodies to the IDomain of Integrin LFA-1”J.Immun.173：3972-3978及其参考文献。例如，已经表明多于90％的LFA-1被依法珠单抗占据导致临床试验中PASI得分的大于50％的临床改善，证明了依法珠单抗的效果(参见D.L.Mortenson et al.J Clin Pharmacol 2005；45：286-298.“Pharmacokineticsand Pharmacodynamics of Multiple Weekly Subcutaneous EfalizumabDoses in Patients With Plaque Psoriasis”)。
也研究了肽在减少LFA-1和ICAM-1之间的相互作用中的应用，肽可能用于本发明。不含有IgG的Fc区域的多肽在美国专利No.5,747,035中描述，并且可用于治疗LFA-1介导的疾病，特别是糖尿病性视网膜病。美国专利No.5,843,885描述了使用双肽，第一个是ICAM-1的调节剂，第二个是具有从LFA-1获得的序列的阻断肽，以减少LFA-1和ICAM-1之间的相互作用，其也可以使用。美国专利No.6,630,447描述了环肽作为LFA-1:ICAM-1相互作用的抑制剂，也在本发明中提供。
小分子拮抗剂也可以用于本发明，例如，可以使用与LFA-1的CD11a域结合的抑制素(statins)。参见Kallen，J.，Welzenbach，K.，Ramage，P.Geyl，D.Kriwacki，R.，Legge，G.，Cottens，S.，Weitz-Schmidt，G.，andHommel，U.1999.“Structural basis for LFA-1 inhibition upon lovastatinbinding to the CD11a I-domain”，J.Mol.Biol.，292：1-9；和Weitz-Schmidt，G.，Welzenbach，K.，Brinkmann，V.，Kamata，T.，Kallen，J.，Bruns，C.，Cottens，S.，Takada，Y.，and Hommel，U.2001。不受理论的约束，抑制素通过与新的调节整合位点结合选择性地抑制白细胞功能抗原-1(Nature Med.，7：687-692；和Frenette，P.S.2001.“Locking a leukocyteintegrin with statins”，N.Engl.J.Med.，345：1419-1421)。来源于洛伐他汀(mevinolin)/美伐他汀(compactin)基序的分子也显示抗LFA-1的活性，并可用于本发明。参见Welzenbach，K.，et al.2002.“Smallmolecule inhibitors induce conformational changes in the I domain and theI-like domain of Lymphocyte Function-Associated Antigen-1”，J.Biol.Chem.，277：10590-10598，和美国专利No.6,630,492。
另外，其他本领域已知的LFA-1拮抗剂可以用于本发明。例如，基于乙内酰脲的抑制剂家族可用作LFA-1拮抗剂。参见Kelly，T.A.，et al.1999.“Cutting edge：a small molecule antagonist of LFA-1-mediated celladhesion”，J.Immunol.，163：5173-5177。这些化合物被认为是LFA-1的变构抑制剂。作为另一个例子，新型对芳基硫基肉桂酰胺家族可以作为LFA-1的拮抗剂。参见Liu，G.et al.2000“Discovery of novel p-arylthiocinnamides as antagonists of leukocyte function-associatedantigen-1/intracellular adhesion molecule-1 interaction.1.Identification ofan additional binding pocket based on an anilino diaryl sulfide lead.”J.Med.Chem.43，4015-4030。
其他小分子抑制剂家族在Gadek，T.R.，et al.2002.“Generation ofan LFA-1 antagonist by the transfer of the ICAM-1 immunoregulatoryepitope to a small molecule”Science，295：1086-1089和在线补充材料以及美国专利No.6,872,735，美国专利No.6,667,318，美国专利No.6803384，美国专利No.6,515,124，美国专利No.6331640，以及美国专利申请20020119994、20040058968、20050080119和PCT申请WO99/49856、WO00/21920、WO01/58853、WO02/59114、WO05/044817及其他文献中公开，例如描述。所有引用文献的内容以引用方式全部合并。
LFA-1拮抗剂的制剂
本发明的LFA-1拮抗剂的制剂提供定向于胃肠的递送。本发明化合物表现出低、中或高的系统口服生物利用度，并且在胃肠组织中能到达100nM或更高的药物水平。因此，在多种实施方式中，本发明的化合物通过口服途径给药。本发明的药物组合物包括但不限于固体、溶液、乳剂和包含脂质体的制剂。这些组合物可由多种组分制备，包括但不限于：预制液体(preformed liquid)、自乳化固体和自乳化半固体。
LFA-1拮抗剂可被配制成游离羧酸、游离羧酸的盐或游离羧酸的酯。代表性的碱金属或碱土金属盐包括但不限于：钠、锂、钾、钙和镁盐。在合适时，其他药学可接受的盐包括：无毒性的铵盐、季铵盐和与药物羧酸直接反应形成的胺阳离子盐。LFA-1拮抗剂可通过已知的制备方法转变成简单的烷基酯，包括但不限于：甲基、乙基、丙基、丁基和戊基酯，从而提供LFA-1拮抗剂的前药形式。LFA-1拮抗剂的酯类前药可透过胃肠上皮容易地吸收，一旦穿过上皮表面后即转变成药物，或循环至肝并在肝中转变成药物。如此转变后，活性药物经胆汁回到胃肠道。LFA-1拮抗剂可配制在溶液中或配制成固体药物的混悬液。
可方便地以单元剂型形式呈现的本发明药物制剂可以根据药学工业公知的常规技术制备。所述技术包括将活性成分与药用载体或赋形剂结合的步骤。制剂通常通过使活性成分与液体载体或精细分散的固体载体或两者均匀紧密地结合而制备，然后在需要时使产品成型。制剂也可用于雾化给药。
本发明组合物可配制成任何可能的剂型，例如，但不限于：片剂、胶囊、液体糖浆、软凝胶、栓剂和灌肠剂。剂型可包括粉末剂或颗粒剂、微粒剂、纳米颗粒剂、栓剂、或在水性、非水性或混合介质中的溶液、胶囊(包括但不限于硬胶囊和弹性软胶囊)、囊剂或片剂。水性混悬剂还可包含提高混悬剂粘度的物质，包括，例如羧甲基纤维素钠、山梨糖醇和/或葡聚糖。混悬剂也可包含稳定剂。
本发明组合物可另外包含常规用于药物组合物中的其他助剂组分。因此，例如组合物可含有其它相容的药物活性物质，例如止痒剂、收敛剂、局部麻醉药或抗炎剂、抗病毒剂；或者可含有用于配制本发明组合物各种剂型的其他的物质，例如染料、调味剂、防腐剂、抗氧化剂、遮光剂、增稠剂、稀释剂、乳化剂、分散助剂或粘结剂、润滑剂、表面活性剂或分散剂、润湿剂、稳定剂、防结块剂、防腐剂、甜味剂、着色剂、干燥剂、增塑剂、染料、粘结剂、填料、崩解剂、抗微生物剂、包衣剂等。任何所述任选的成分应该与本发明化合物相容，以确保制剂的稳定性。制剂可以被灭菌，若需要时，可以与如下的助剂混合，例如：润滑剂、防腐剂、稳定剂、润湿剂、乳化剂、用于影响渗透压的盐、缓冲剂、着色剂、调味剂和/或芳香物质等。
组合物需要时可包含添加剂，包括例如：乳糖、葡萄糖、果糖、半乳糖、海藻糖、蔗糖、麦芽糖、棉子糖、麦芽糖醇、松三糖、水苏糖、乳糖醇、方辉玄质岩(palatinite)、淀粉、木糖醇、甘露醇、肌醇等以及其水合物；以及氨基酸，例如丙氨酸、甘氨酸和甜菜碱；以及肽和蛋白质，例如白蛋白。
用于本发明的粘结剂的实例可包括，但不限于：玉米淀粉、马铃薯淀粉、其他淀粉、明胶、天然的和合成的树胶如阿拉伯树胶、海藻酸钠、海藻酸、其它海藻酸盐、粉状黄蓍胶、瓜尔胶、纤维素及其衍生物(例如乙基纤维素、醋酸纤维素、羧甲基纤维素钙、羧甲基纤维素钠)、聚乙烯吡咯烷酮、甲基纤维素、预胶凝淀粉(例如由Colorcon，Ltd.销售的STARCH 1500TM和STARCH 1500LMTM)、羟丙基甲基纤维素、微晶纤维素(例如由FMC Corporation(Marcus Hook，Pa.，USA)销售的AVICELTM，例如AVICEL-PH-101TM、-103TM和-105TM)或其混合物。
可用的填料包括但不限于：滑石、碳酸钙(例如颗粒或粉末)、磷酸氢钙、磷酸钙、硫酸钙(例如颗粒或粉末)、微晶纤维素、粉末状纤维素、葡聚糖、高岭土、甘露醇、硅酸、山梨糖醇、淀粉、预胶凝淀粉或其混合物。
也可使用崩解剂，例如，但不限于：琼脂、海藻酸、碳酸钙、微晶纤维素、交联羧甲基纤维素钠、交联聚乙烯吡咯烷酮、聚克立林钾、羟基乙酸淀粉钠、马铃薯或木薯淀粉、其他淀粉、预胶凝淀粉、粘土、其他藻胶(algin)、其他纤维素、树胶或其混合物。
可用的润滑剂的实例包括，但不限于：硬脂酸钙、硬脂酸镁、矿物油、轻质矿物油、甘油、山梨糖醇、甘露醇、聚乙二醇、其他二醇、硬脂酸、月桂基硫酸钠、滑石、氢化植物油(例如花生油、棉子油、向日葵油、芝麻油、橄榄油、玉米油和大豆油)、硬脂酸锌、油酸乙酯、月桂酸乙酯、琼脂、Syloid硅胶(AEROSIL 200，W.R.Grace Co.，Baltimore，Md.USA)、合成二氧化硅的凝聚型气溶胶(Deaussa Co.，Plano，Tex.USA)、热解二氧化硅(CAB-O-SIL，Cabot Co.，Boston，Mass.USA)及其混合物。
也可使用抗结块剂，例如：硅酸钙、硅酸镁、二氧化硅、胶态二氧化硅、滑石或其混合物。任选地，制剂可包含抗微生物剂，例如苯扎氯铵、氯化苄乙氧铵、苯甲酸、苯甲醇、对羟基苯甲酸丁酯、氯化十六烷基吡啶、甲酚、三氯叔丁醇、脱氢醋酸、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸甲酯、苯酚、苯基乙基醇、苯氧基乙醇、乙酸苯汞、硝酸苯汞、山梨酸钾、对羟基苯甲酸丙酯、苯甲酸钠、脱氢醋酸钠、丙酸钠、山梨酸、硫柳汞(thimersol)、麝香草酚(thymo)或其混合物。
赋形剂可以是，但不限于：磷酸缓冲盐溶液、可以商品名Miglyol840(从Huls America，Inc.Piscataway，N.J.)买到的中链脂肪酸的丙二醇二酯、可以商品名Miglyol 812(从Huls)买到的中链脂肪酸的甘油三酯；可以商品名Vertrel 245(从E.I.DuPont de Nemours and Co.Inc.Wilmington，Del.)买到的全氟二甲基环丁烷；可以商品名八氟环丁烷(从PCRGainsville，Fla.)买到的全氟环丁烷；可以商品名EG 400(从BASFParsippany，N.J.)买到的聚乙二醇；(来自Pluess-Stauffer InternationalStanford，Conn.)的薄荷醇；可以商品名lauroglycol(从Gattefosse Elmsford，N.Y.)买到的丙二醇单月桂酸酯；可以商品名Transcutol(从Gattefosse)买到的二甘醇一乙醚；可以商品名Labrafac Hydro WL 1219(从Gattefosse)买到的中链脂肪酸的聚糖基化(polyglycolized)甘油酯；醇，例如乙醇、甲醇和异丙醇；可(从Pluses-Stauffer International)买到的桉叶油；及其混合物。组合物也可包含氨基酸衍生物。
制剂也可包含其他合适的水性载体，包括但不限于：林格溶液和等渗氯化钠。水性混悬液可包含悬浮剂例如纤维素衍生物、海藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮和黄蓍树胶，以及润湿试剂例如卵磷脂。用于水性混悬液的合适的防腐剂包括对羟基苯甲酸乙酯和丙酯。自乳化药物递送系统(SEDDS)，即油、表面活性剂、溶剂和助溶剂/表面活性剂的均质混合物，或自微乳化药物递送系统(SMEDDS)或相似的乳化剂(例如GelucirTM)，可用于LFA-1拮抗剂制剂。乳液制剂也是合适的，包括水包油和油包水型乳剂。
其他赋形剂可包括水、缓冲水溶液、表面活性剂、挥发性液体、淀粉、多元醇、明胶、乳糖、直链淀粉、硬脂酸镁、滑石、硅酸、成粒剂、羟甲基纤维素、环糊精、聚乙烯吡咯烷酮、微晶纤维素、稀释剂、润滑剂、酸、碱、盐、乳剂(例如油/水乳剂)、油(例如矿物油和植物油)、润湿剂、螯合剂、抗氧化剂、无菌溶液、络合剂、崩解剂等。缓冲溶液的pH通常为生理pH，并且通常缓冲调节至靶组织的pH。
表面活性剂可用于组成本发明的药物组合物和剂型。它们可包括但不限于亲水性表面活性剂、亲脂性表面活性剂、及其混合物。即，可以使用亲水性表面活性剂的混合物、亲脂性表面活性剂的混合物、或至少一种亲水性表面活性剂和至少一种亲脂性表面活性剂的混合物。
合适的亲水性表面活性剂的HLB值一般至少可以是10，合适的亲脂性表面活性剂的HLB值一般可以是约10或小于约10。用于表征非离子的两性化合物的相对亲水性和疏水性的经验参数是亲水性-亲脂性平衡(“HLB”值)。HLB值较小的表面活性剂亲脂性或疏水性更强，并在油中有较大的溶解度，而HLB值较大的表面活性剂亲水性更强，并在水溶液中有较大的溶解度。亲水性表面活性剂一般被认为是HLB值大于约10的化合物，以及HLB标准通常不适用的阴离子、阳离子或两性离子化合物。类似地，亲脂性(即疏水性的)表面活性剂是HLB值等于或者小于约10的化合物。然而，表面活性剂的HLB值仅仅是一般用于制备工业、药品和化妆品乳剂的粗略指导。
亲水性表面活性剂可以是离子型或非离子型。合适的离子型表面活性剂包括但不限于：烷基铵盐；羧链孢酸盐；氨基酸、寡肽和多肽的脂肪酸衍生物；氨基酸、寡肽和多肽的甘油酯衍生物；卵磷脂和氢化卵磷脂；溶血卵磷脂和氢化溶血卵磷脂；磷脂及其衍生物；溶血磷脂及其衍生物；肉碱脂肪酸酯盐；烷基硫酸酯的盐；脂肪酸盐；多库酯钠；酰基乳酸酯；单和二甘油酯的单和二乙酰化酒石酸酯；琥珀酰化单和二甘油酯；单和二甘油酯的柠檬酸酯；及其混合物。
在上述组中，优选的离子型表面活性剂包括例如：卵磷脂、溶血卵磷脂、磷脂、溶血磷脂及其衍生物；肉碱脂肪酸酯盐；烷基硫酸酯的盐；脂肪酸盐；多库酯钠；酰基乳酸酯，单和二甘油酯的单和二乙酰化酒石酸酯；琥珀酰化单和二甘油酯；单和二甘油酯的柠檬酸酯；及其混合物。
离子型表面活性剂可以为卵磷脂、溶血卵磷脂、磷脂酰胆碱、磷酯酰丝氨酸、磷脂酰甘油、磷脂酸、磷脂酰丝氨酸、溶血磷脂酰胆碱、溶血磷脂酰乙醇胺、溶血磷脂酰甘油、溶血磷脂酸、溶血磷脂酰丝氨酸、PEG-磷脂酰乙醇胺、聚乙烯吡咯烷酮-磷脂酰乙醇胺、脂肪酸的乳酸酯、硬脂酰-2-乳酸酯、硬脂酰乳酸酯、琥珀酸单甘油酯、单/二甘油酯的单/二乙酰化酒石酸酯、单/二甘油酯的柠檬酸酯、肌氨胆酸酯、已酸酯、辛酸酯、癸酸酯、月桂酸酯、十四烷酸酯、棕榈酸酯、油酸酯、蓖麻酸酯、亚油酸酯、亚麻酸酯、硬脂酸酯、月桂基硫酸酯、四乙酰基硫酸酯、多库酸酯、月桂酰肉碱、棕榈酰肉碱、十四酰肉碱，及其盐和混合物。
亲水性非离子型表面活性剂可以包括但不限于烷基糖苷；烷基麦芽糖苷；烷基硫代糖苷；月桂基聚乙二醇甘油酯；聚氧化烯烷基醚，例如聚乙二醇烷基醚；聚氧化烯烷基酚，例如聚乙二醇烷基酚；聚氧化烯烷基酚脂肪酸酯，例如聚乙二醇脂肪酸单酯和聚乙二醇脂肪酸二酯；聚乙二醇脂肪酸甘油酯；聚甘油脂肪酸酯；聚氧化烯去水山梨醇肪酸酯，例如聚乙二醇去水山梨醇肪酸酯；多元醇与以下物质的亲水性酯交换产物：甘油酯、植物油、氢化植物油、脂肪酸或甾醇；聚氧乙烯甾醇，其衍生物或类似物；聚氧乙烯化维生素或其衍生物；聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物；或其混合物；聚乙二醇去水山梨醇脂肪酸酯，或多元醇与以下物质的亲水性酯交换产物：甘油三酸酯、植物油或氢化植物油。多元醇可以为甘油、乙二醇、聚乙二醇、山梨糖醇、丙二醇、季戊四醇或糖类。
其他亲水性非离子型表面活性剂包括但不限于：PEG-10月桂酸酯、PEG-12月桂酸酯、PEG-20月桂酸酯、PEG-32月桂酸酯、PEG-32二月桂酸酯、PEG-12油酸酯、PEG-15油酸酯、PEG-20油酸酯、PEG-20二油酸酯、PEG-32油酸酯、PEG-200油酸酯、PEG-400油酸酯、PEG-15硬脂酸酯、PEG-32二硬脂酸酯、PEG-40硬脂酸酯、PEG-100硬脂酸酯、PEG-20二月桂酸酯、PEG-25三油酸甘油酯、PEG-32二油酸酯、PEG-20甘油基月桂酸脂、PEG-30甘油基月桂酸脂、PEG-20甘油基硬脂酸酯、PEG-20甘油基油酸酯、PEG-30甘油基油酸酯、PEG-30甘油基月桂酸脂、PEG-40甘油基月桂酸脂、PEG-40棕榈仁油、PEG-50氢化蓖麻油、PEG-40蓖麻油、PEG-35蓖麻油、PEG-60蓖麻油、PEG-40氢化蓖麻油、PEG-60氢化蓖麻油、PEG-60玉米油、PEG-6癸酸/辛酸甘油酯、PEG-8癸酸/辛酸甘油酯、聚甘油基-10月桂酸脂、PEG-30胆固醇、PEG-25植物固醇、PEG-30大豆固醇、PEG-20三油酸酯、PEG-40去水山梨糖醇油酸酯、PEG-80去水山梨糖醇月桂酸酯、聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯80、POE-9月桂基醚、POE-23月桂基醚、POE-10油基醚、POE-20油基醚、POE-20硬脂酰醚、生育酚PEG-100琥珀酸酯、PEG-24胆固醇、聚甘油基-10油酸酯、吐温40、吐温60、蔗糖单硬脂酸酯、蔗糖单月桂酸酯、蔗糖单棕榈酸酯、PEG10-100壬基酚系列、PEG15-100辛基酚系列和泊洛沙姆。
仅作为举例的形式，适当的亲脂性表面活性剂包括：脂肪醇；脂肪酸甘油酯；乙酰基化甘油脂肪酸酯；低级醇脂肪酸酯；丙二醇脂肪酸酯；去水山梨醇脂肪酸酯；聚乙二醇去水山梨醇脂肪酸酯；甾醇和甾醇衍生物；聚氧乙烯化甾醇和甾醇衍生物；聚乙二醇烷基醚；糖酯；糖醚；单和二甘油酯的乳酸衍生物；多元醇与以下物质的疏水性酯交换产物：甘油酯、植物油、氢化植物油、脂肪酸或甾醇；油溶性维生素/维生素衍生物；或其混合物。在该组中，亲脂性表面活性剂可以是脂肪酸甘油酯、脂肪酸丙二醇酯或其混合物，或者为多元醇与以下物质的疏水性酯交换产物：植物油、氢化植物油或甘油三酯。
表面活性剂可以用于本发明的任何制剂，只要它的使用不会产生矛盾。在本发明的一些实施方式中，可以不使用表面活性剂或使用有限种类的或有限量的表面活性剂。
组合物可经口服给药。口服制剂可包括胶囊化或未胶囊化的液体制剂。液体制剂可以是LFA-1拮抗剂的水溶液，并可含有缓冲剂，其中可含有或不含有防腐剂。口服制剂，例如片剂，可任选地包衣或刻痕，并且可以配制为使得其中的活性成分持续、延迟或控制释放。固体制剂的实例如在美国专利No.5,424,289中所述。口服制剂也可具有提高的生物利用度，如在美国专利No.7,097,851中所述；也可具有位置和时间依赖的递送，如在美国专利No.5,840,332中所述；或可递送到胃肠系统的特定区域，例如在美国专利No.5,849,327中所述，其中肠溶材料包衣保持完整直到该剂型到达下胃肠道。
制剂可使用肠溶衣，其可用于片剂和胶囊。肠溶衣可在胃部保持完整，但是在到达小肠时快速溶解，随后在肠的下游位置(例如回肠和结肠)释放药物，从而将LFA-1拮抗剂递送至肠粘膜。肠溶衣是本领域公知的，在例如Remington′s Pharmaceutical Sciences，Mack Publishing Co.，Easton，Pa.；以及Polymers for Controlled Drug Delivery，Chapter 3，CRCPress，1991中有所论述。肠溶衣的一些非限制性实例包括邻苯二甲酸乙酸纤维素、聚醋酸乙烯邻苯二甲酸酯、甲基丙烯酸-甲基丙烯酸酯共聚物、羧甲基乙基纤维素和羟丙基甲基纤维素乙酸酯琥珀酸酯。或者，也可使用设计为在一段预定的时间后，因而在进入回肠或结肠后，释放含有LFA-1拮抗剂的制剂的控释口服给药载体，以递送本发明的制剂。所述载体包括但不限于：CHRONSETTM递送装置(ALZA Corporation，PaloAlto，Calif.)和PulsincapTM递送装置(R.P.Scherer Co.)。其他的包衣剂可包括，但不限于：羧甲基纤维素钠、邻苯二甲酸乙酸纤维素、乙基纤维素、明胶、药用釉料、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯、甲基纤维素、聚乙二醇、聚乙烯醋酸邻苯二甲酸酯、虫胶、蔗糖、二氧化钛、巴西棕榈蜡、微晶蜡或其混合物。
也可制备LFA-1拮抗剂的控释口服制剂，其中LFA-1拮抗剂结合在生物相容的和/或可生物降解的基质中。该基质可以是亲水性的或疏水性的。活性成分从亲水性基质中释放有三种主要的机制：溶解、侵蚀和扩散。当活性成分均匀地分散在可溶性聚合物的基质网络中时，其通过溶解机制释放。该基质网络逐渐溶解在胃肠道中，从而逐渐释放其载药。基质聚合物也可逐渐从基质表面侵蚀，同时及时释放活性成分。当活性成分结合在由不可溶性聚合物制成的基质中时，其通过扩散释放：胃肠道液体渗透进入不可溶的海绵状的基质，并携带着药物扩散回来。
本发明的制剂可含有羧酸或盐形式的LFA-1拮抗剂。这些制剂可包含例如如下的聚合物来制备可以是液体、凝胶或固体的持续释放制剂：聚乳酸-乙醇酸(PLGA)、聚-(I)-乳酸-乙醇酸-酒石酸(P(I)LGT)(WO01/12233)、聚乙醇酸(美国专利No.3,773,919)、聚乳酸(美国专利No.4,767,628)、聚(M-己内酯)和聚(环氧烷)(U.S.2003/0068384)。这些制剂可用于制备在数天、数周或数月内释放LFA-1拮抗剂的植入物，释放时间取决于聚合物、聚合物的粒径以及植入物的大小(参见美国专利No.6,620,422)。在以下专利中描述了其他的持续释放制剂和使用的聚合物：EP 0 467 389 A2、WO 93/24150、美国专利No.5,612,052、WO 97/40085、WO 03/075887、WO 01/01964A2、美国专利No.5,922,356、WO94/155587、WO 02/074247A2、WO 98/25642、美国专利No.5,968,895、美国专利No.6,180,608、U.S.20030171296、U.S.20020176841、美国专利No.5,672,659、美国专利No.5,893,985、美国专利No.5,134,122、美国专利No.5,192,741、美国专利No.5,192,741、美国专利No.4,668,506、美国专利No.4,713,244、美国专利No.5,445,832美国专利No.4,931,279、美国专利No.5,980,945、WO 02/058672、WO 9726015、WO 97/04744、和US20020019446。在构成植入物的持续释放制剂中，LFA-1拮抗剂的微粒与聚合物的微粒结合。可将一个或多个持续释放植入物置于大肠或小肠或两者中。美国专利No.6,011,011和WO 94/06452说明了提供聚乙二醇(即PEG 300和PEG 400)或三醋精的持续释放制剂。
另一种制剂是在WO 03/053401中说明的制剂的变型，其不但可提高生物利用度，还可提供LFA-1拮抗剂在胃肠道中的控制释放。这种控释制剂包含渗透促进剂、LFA-1拮抗剂和表现出原位胶凝特性的载体，例如非离子表面活性剂。该制剂以液体形式在胃肠道内递送，并且至少对胃肠道粘膜表面具有一定的亲和力。一旦该液体制剂释放后，其会扩散到胃肠道粘膜的表面的一个或多个区域上，然后制剂的载体会原位转变成为生物粘附性的凝胶。作为生物粘附性凝胶，本发明制剂不但可粘附到胃肠道粘膜上，也可减少或最小化肠道液体和分泌液对包含在制剂中的渗透促进剂和LFA-1拮抗剂的稀释作用。可通过在胃肠道粘膜表面同时存在其浓度足以在一段时间内促进LFA-1拮抗剂透过胃肠道粘膜吸收的LFA-1拮抗剂和合适的渗透促进剂来提高LFA-1拮抗剂的生物利用度。
适用于这种类型的控释制剂的渗透促进剂包括，但不限于：乙二胺四乙酸(EDTA)；胆汁酸盐渗透促进剂，例如去氧胆酸钠、牛磺胆酸钠、去氧胆酸钠、牛磺二氢甾酸霉素钠、十二烷基硫酸钠、甘氨胆酸钠、牛磺胆酸盐、甘胆酸盐、牛磺鹅去氧胆酸盐、牛磺脱氧胆酸盐、脱氧胆酸盐、甘氨脱氧胆酸盐和乌索脱氧胆酸盐；脂肪酸渗透促进剂，例如癸酸钠、月桂酸钠、辛酸钠、癸酸、月桂酸和辛酸；酰基肉碱，例如棕榈酰肉碱、硬脂酰肉碱、肉豆蔻酰肉碱和月桂酰基肉碱；以及水杨酸盐(酯)，例如水杨酸钠、5-甲氧基水杨酸酯和水杨酸甲酯。渗透促进剂可用于打开胃肠道粘膜上皮细胞之间形成的紧密连接，从而使LFA-1拮抗剂扩散进入肠粘膜(即细胞周吸收)。尽管本发明制剂中含有的渗透促进剂的量可以为约10重量％至约40重量％，包含在本发明制剂中的渗透促进剂的性质和精确量根据例如待递送的LFA-1拮抗剂、渗透促进剂自身的性质以及待给药的制剂的剂量而有所不同。包含在制剂中的渗透促进剂的量应该足以在胃肠道粘膜表面或附近维持有效的渗透促进剂浓度(即，高于使用的渗透促进剂的临界浓度的浓度)一段时间，该时间足以提高LFA-1拮抗剂的生物利用度。在可能时，可选择渗透促进剂使其不但促进LFA-1拮抗剂的吸收，也能抵抗肠道液体或分泌液的稀释作用。渗透促进剂也可用于本发明的非控释制剂。
对于含有渗透促进剂、LFA-1拮抗剂和表现出原位胶凝特性的载体的控释制剂，其载体在制剂递送到受试者胃肠道内后，会允许从相对非粘性、低粘度的液体转变成为相对粘性、生物粘附性的凝胶。选择载体，使得在制剂释放到胃肠道内后，从相对非粘性、低粘度的液体转变成为相对粘性、生物粘附性的凝胶，并且有一定的机会到达胃肠道粘膜表面。因此，本发明制剂的载体使得制剂能从液体原位转变成为生物粘附性凝胶。本发明制剂形成的凝胶由于其高粘度和生物粘附性质，将渗透促进剂和LFA-1拮抗剂一起结合在胃肠道粘膜的表面，并在一段时间内保护两种组分不受到稀释和酶降解作用。合适的载体包括在吸水后会从相对非粘性、低粘度的液体转变成相对粘性的生物粘附性液体晶体状态的非离子表面活性剂。可在本发明制剂中用作载体的非离子表面活性剂的具体的实例包括，但不限于：Cremophor(例如Cremophor EL和CremophorRH)；Incordas 30；聚氧乙烯5蓖麻油；聚氧乙烯9蓖麻油、聚氧乙烯15蓖麻油；d-a-生育酚聚乙二醇琥珀酸盐(TPGS)；甘油单酯，例如Myverol；基于脂肪醇的非离子表面活性剂，例如：油醇聚醚-3、油醇聚醚-5、聚乙二醇10油基醚、油醇聚醚-20、硬脂醇聚醚-2、硬脂醇聚醚-10、硬脂醇聚醚-20、鲸蜡硬脂醇聚醚-20、聚乙二醇20十八十六醚、PPG-5鲸蜡醇聚醚-20和PEG-6辛酸/癸酸甘油三酯；Pluronic@和季酮酸嵌段共聚物型非离子表面活性剂，例如Pluronic@L10、L31、L35、L42、L43、L44、L62、L61、L63、L72、L81、L101、L121、和L122；聚氧乙烯失水山梨糖醇脂肪酸酯，例如Tween 20、Tween 40、Tween 60、Tween 65、Tween80、Tween 81、和Tween 85；以及乙氧基化甘油酯，例如PEG-20杏仁甘油酯、PEG-60杏仁甘油酯、PEG-20玉米甘油酯、和PEG-60玉米ARC-2921-PCT-11甘油酯。制剂中载体的含量可以为约35重量％至约88重量％。
当向含有用作载体的非离子表面活性剂的控释制剂中加入水时，制剂的初始粘度将变大。但是，当水含量增加时，非离子表面活性剂粘度的增加呈非线性变化。通常，当非离子表面活性剂的水含量超过某个阈值时，其会转变成凝胶状态，因此粘度会快速增加。如果需要相对较快地转换，可向包含非离子表面活性剂的制剂中加入较多的水，从而使制剂的水含量接近水含量阈值，在该阈值下制剂会快速转变成为生物粘附性凝胶。相反，若需要相对较慢的转变，制剂可含有相对较少的水或不含有水，从而使制剂水含量与胶凝阈值相差较大。
另外，含有渗透促进剂、LFA-1拮抗剂、表现出原位胶凝特性的载体的控释制剂也可包含降低制剂初始粘度的粘度降低剂。降低制剂的初始粘度可在本发明制剂递送到胃肠道内之后但在转变成生物粘附性凝胶之前，进一步促进本发明制剂穿过胃肠粘膜一个或多个区域的扩散。
可用的粘度降低剂的实例包括，但不限于：聚氧乙烯5蓖麻油、聚氧乙烯9蓖麻油、Labratil、Labrasol、capmul GMO(油酸甘油单酯)、capmul MCM(中链甘油单酯和二酯)、capmul MCM C8(辛酸甘油单酯)、capmul MCM C10(癸酸甘油单酯)、capmul GMS-50(硬脂酸甘油单酯)、caplex 100(二癸酸丙二醇酯)、caplex 200(二辛酸/二癸酸丙二醇酯)、caplex 800(2-乙基己酸丙二醇酯)、captex 300(三辛酸/癸酸甘油酯)、captex 1000(三癸酸甘油三职)、captex 822(三癸酸甘油酯)、captex 350(三辛酸/癸酸/月桂酸甘油酯)、caplex 810(三辛酸/癸酸/亚油酸甘油酯)、capmul PG8(单辛酸丙酯)、丙二醇和月桂酸丙二醇酯(PGL)。当含有粘度降低剂时，其在制剂中的含量可高达约10重量％。
另外，含有渗透促进剂、LFA-1拮抗剂和表现出原位胶凝特性的控释制剂剂型可包括硬或软明胶胶囊。在一些实施方式中，设计剂型，例如使用肠溶衣，来延缓制剂的释放，直到剂型通过胃部并至少进入了小肠。
其他的控释制剂在以下中说明：WO 02/38129、EP 326 151、美国专利No.5,236,704、WO 02/30398、WO 98/13029；U.S.20030064105、U.S.20030138488A1、U.S.20030216307A1、美国专利No.6,667,060、WO 01/49249、WO 01/49311、WO 01/49249、WO 01/49311和美国专利No.5,877,224。固体控释制剂的实例可包含亲水性聚合物，例如淀粉、纤维素类聚合物、聚丙烯酸或聚甲基丙烯酸来包封LFA-1拮抗剂；环糊精，例如α-、β-、γ-环糊精；还可包含取代的环糊精，例如硫代丁基环糊精或羟丙基β-环糊精；其与LFA-1拮抗剂络合并使LFA-1拮抗剂从固体控释制剂中更加规律地释放。
口服制剂可利用胃滞留制剂(gastroretentive formulations)来增强其从胃肠道的吸收。在胃中停留若干小时的制剂可以释放出本发明的化合物并且可在胃肠区域上端提供持续的释放，这在本发明的一些实施方案中是期望的。。在以下文献中公开了这样的胃滞留制剂：Klausner，E.A.；Lavy，E.；Barta，M.；Cserepes，E.；Friedman，M.；Hoffman，A.2003“Novelgastroretentive dosage forms；evaluation of gastroretentivity and its effect onlevodopa in humans.”Pharm.Res.20，1466-73，Hoffman，A.；Stepensky，D.；Lavy，E.；Eyal，S.Klausner，E.；Friedman，M.2004“Pharmacokineticand pharmacodynamic aspects of gastroretentive dosage forms”Int.J.Pharm.11，141-53，Streubel，A.；Siepmann，J.；Bodmeier，R.；2006“Gastroretentivedrug delivery systems”Expert Opin.Drug Deliver.3，217-3，andChavanpatil，M.D.；Jain，P.；Chaudhari，S.；Shear，R.；Vavia，P.R.“Novelsustained release，swellable and bioadhesive gastroretentive drug deliverysystem for olfoxacin”Int.J.Pharm.2006 epub March 24。可以采用扩展、浮动和生物粘附技术来使本发明化合物的吸收程度和/或持续时间最大化。可选择例如交联聚维酮(cross povidone)、欧车前果壳、壳聚糖、纤维素类聚合物等材料，并且组合它们来改变浮力滞后时间(buoyancy lagtime)、浮力持续时间、尺寸稳定性、药物含量和药物释放性质。制剂物理特性的不同也可用于改变这些药物递送参数。例如，可包含生物降解膜作为胃滞留制剂的一部分，该膜在胃中是漂浮的并且仅在预定时间后才会暴露在胃部环境中。该膜可以由仅在起始暴露期后释放LFA-1拮抗剂的材料组成，从而该膜可以与胃滞留制剂的立即释放部分结合，使LFA-1拮抗剂相对于仅含有立即释放组合物的制剂在更长的时间范围内释放。
鼻内给药制剂可利用含有LFA-1拮抗剂的可呼吸颗粒的气溶胶混悬剂，该制剂是单吸入型。本发明LFA-1拮抗剂经鼻泪管与泪腺组织接触、与鼻通道接触或与口腔接触，随后以药物有效量递送到胃肠粘膜(见图10和实施例10)。可呼吸的颗粒可以为本领域已知的吸收有效的、具有适当粒度的固体或液体。吸入或吹入组合物包括在药物可接受的、水或有机溶剂中的溶液和悬浮液或其混合物，和粉末。液体或固体组合物可以含有适当的如前所述的药物可接受的赋形剂。可以使用惰性气体对溶于药物可接受的溶剂中的组合物进行喷雾。可以从喷雾装置直接吸入喷雾溶液，或者可以将喷雾装置连接在面罩或间歇式正压呼吸机上。可以从以适当形式输送制剂的装置中经口或鼻施用溶液、悬浮液或粉末组合物。LFA-1拮抗剂的制剂可与推进剂组合(例如在定量吸入器中)，并使用任何类型的喷雾器，或干粉吸入器。气雾剂可有效地将LFA-1拮抗剂递送到胃肠系统的粘膜表面。
可选地，LFA-1拮抗剂可配制成栓剂。如上所述的包衣可用来延长药物从栓剂中的释放时间。栓剂也可包含持续释放或缓释基质、微粒或纳米颗粒。
如本领域公知的，可以调节药物的浓度，缓冲溶液的pH值，调节等渗性，从而与给药途径相容。
在一些实施方式中，制剂的pH为约4.5-约7.5、约5.0-约7.5、约5.5-约7.5、约6.0-约7.5、或约6.5-约7.5。
可以研磨本发明的LFA-1拮抗剂，以为制剂提供更合适的性质。研磨可以提供较小的粒径和较大的表面暴露面积，其可以提供体内或配制过程中更快的溶解。或者，研磨到较小的粒径可以给LFA-1拮抗剂提供在没有初始溶解的情况下直接穿透生物障碍如皮肤或肠壁的能力，允许LFA-1拮抗剂作为固体在制剂中使用，其可以提供温度稳定性、储藏寿命、容易输送和容易被受试者使用的额外好处。研磨的LFA-1拮抗剂的固体颗粒也可给制剂提供更高的生物利用度，以及更理想的或可控的药代动力学性质。研磨的颗粒大小可影响LFA-1拮抗剂在给药后的分布速率，或LFA-1拮抗剂从持续释放或缓释制剂中的释放速率。另外，可研磨LFA-1拮抗剂颗粒以在特定的制剂或一批可配制的材料中产生更窄或更对称的粒度分布。可根据本领域的公知常识来选择LFA-1拮抗剂的粒径，从而获得期望的易于配制的物理性质，或在使用条件下在预定时间内以控制的方式从制剂中分布出来的能力。粒径的大小可以以D50表示，其代表了所述批次物质的颗粒直径的中位数或50％百分位数。另一种表示一批物质的粒径的指标是D90，它是粒径分布中颗粒直径的90％百分位数。
在本发明制剂中，LFA-1拮抗剂颗粒的直径为约5nm至约100nm、约50nm至约100μm、约100nm至约100μm、约250nm至约100μm、约500nm至约100μm、约750nm至约100μm、约1μm至约100μm、或约10μm至约100μm；约5nm至约50μm、约50nm至约50μm、约100nm至约50μm、约250nm至约50μm、约500nm至约50μm、约750nm至约50μm、约1μm至约50μm、或约10μm至约50μm；约5nm至约10μm、约50nm至约10μm、约100nm至约10μm、约250nm至约10μm、约500nm至约10μm、约750nm至约10μm、或约1μm至约10μm；约5nm至约1μm、约50nm至约1μm、约100nm至约1μm、约250nm至约1μm、约500nm至约1μm、或约750nm至约1μm；约5nm至约1μm、约50nm至约1μm、约100nm至约1μm、约250nm至约1μm、约500nm至约1μm、或约750nm至约1μm；约5nm至约1μm、约50nm至约1μm、约100nm至约1μm、约250nm至约1μm、约500nm至约1μm、或约750nm至约1μm；约5nm至约900nm、约50nm至约900nm、约100nm至约900nm、约250nm至约900nm、约500nm至约900nm、或约750nm至约900nm；约5nm至约900nm、约50nm至约900nm、约100nm至约900nm、约250nm至约900nm、约500nm至约900nm、或约750nm至约900nm；约5nm至约900nm、约50nm至约900nm、约100nm至约900nm、约250nm至约900nm、约500nm至约900nm、或约750nm至约900nm；约5nm至约750nm、约50nm至约750nm、约100nm至约750nm、约250nm至约750nm、约500nm至约750nm、约750nm至约750nm、或约1μm至约750nm；约5nm至约750nm、约50nm至约750nm、约100nm至约750nm、约250nm至约750nm、或约500nm至约750nm；约5nm至约750nm、约50nm至约750nm、约100nm至约750nm、约250nm至约750nm、或约500nm至约750nm；约5nm至约500nm、约50nm至约500nm、约100nm至约500nm、或约250nm至约500nm；约5nm至约250m、约50nm至约250nm、或约100nm至约250nm；约5nm至约500nm、约10nm至约500nm、约20nm至约500nm、约30nm至约500nm、约40nm至约500nm、约50nm至约500nm、约60nm至约500nm、约70nm至约500nm、约80nm至约500nm、约90nm至约500nm、约100nm至约500nm、约200nm至约500nm、或约300nm至约500nm。
在本发明制剂中，LFA-1拮抗剂颗粒的直径的D50为约100μm、约90μm、约80μm、约70μm、约60μm、约50μm，约45μm、约40μm、约35μm、约30μm、约25μm、约20μm、约19μm、约18μm、约17μm、约16μm，约15μm、约14μm、约13μm、约12μm、约11μm、约10μm、约9μm、约8μm、约7μm、约6μm、约5μm、约4μm、约3μm、约2μm、约1μm、约950nm、约900nm、约850nm、约800nm、约750nm、约700nm、约650nm、约600nm、约550nm、约500nm、约450nm、约350nm、约300nm、约250nm、约200nm、约150nm、约100nm、约95nm、约90nm、约85nm、约80nm、约75nm、约70nm、约65nm、约60nm、约55nm、约50nm、约45nm、约40nm、约35nm、约30nm、约25nm、约20nm、约19nm、约18nm、约17nm、约16nm、约15nm、约14nm、约13nm、约12nm、约11nm、约10nm、约9nm、约8nm、约7nm、约6nm或约5nm。
在本发明制剂中，LFA-1拮抗剂颗粒的直径的D50小于约100μm、约90μm、约80μm、约70μm、约60μm、约50μm，约45μm、约40μm、约35μm、约30μm、约25μm、约20μm、约19μm、约18μm、约17μm、约16μm、约15μm、约14μm、约13μm、约12μm、约11μm、约10μm、约9μm、约8μm、约7μm、约6μm、约5μm、约4μm、约3μm、约2μm、约1μm、约950nm、约900nm、约850nm、约800nm、约750nm、约700nm、约650nm、约600nm、约550nm、约500nm、约450nm、约350nm、约300nm、约250nm、约200nm、约150nm、约100nm、约95nm、约90nm、约85nm、约80nm、约75nm、约70nm、约65nm、约60nm、约55nm、约50nm、约45nm、约40nm、约35nm、约30nm、约25nm、约20nm、约19nm、约18nm、约17nm、约16nm、约15nm、约14nm、约13nm、约12nm、约11nm、约10nm、约9nm、约8nm、约7nm、约6nm或约5nm。
在本发明制剂中，LFA-1拮抗剂颗粒的直径的D50不大于约100μm、约90μm、约80μm、约70μm、约60μm、约50μm，约45μm、约40μm、约35μm、约30μm、约25μm、约19μm、约18μm、约17μm、约16μm、约20μm、约15μm、约14μm、约13μm、约12μm、约11μm、约10μm、约9μm、约8μm、约7μm、约6μm、约5μm、约4μm、约3μm、约2μm、约1μm、约950nm、约900nm、约850nm、约800nm、约750nm、约700nm、约650nm、约600nm、约550nm、约500nm、约450nm、约350nm、约300nm、约250nm、约200nm、约150nm、约100nm、约95nm、约90nm、约85nm、约80nm、约75nm、约70nm、约65nm、约60nm、约55nm、约50nm、约45nm、约40nm、约35nm、约30nm、约25nm、约20nm、约19nm、约18nm、约17nm、约16nm、约15nm、约14nm、约13nm、约12nm、约11nm、约10nm、约9nm、约8nm、约7nm、约6nm或约5nm。
在本发明制剂中，LFA-1拮抗剂颗粒的直径的D90为约100μm、约90μm、约80μm、约70μm、约60μm、约50μm，约45μm、约40μm、约35μm、约30μm、约25μm、约20μm、约19μm、约18μm、约17μm、约16μm、约15μm、约14μm、约13μm、约12μm、约11μm、约10μm、约9μm、约8μm、约7μm、约6μm、约5μm、约4μm、约3μm、约2μm、约1μm、约950nm、约900nm、约850nm、约800nm、约750nm、约700nm、约650nm、约600nm、约550nm、约500nm、约450nm、约350nm、约300nm、约250nm、约200nm、约150nm、约100nm、约95nm、约90nm、约85nm、约80nm、约75nm、约70nm、约65nm、约60nm、约55nm、约50nm、约45nm、约40nm、约35nm、约30nm、约25nm、约20nm、约19nm、约18nm、约17nm、约16nm、约15nm、约14nm、约13nm、约12nm、约11nm、约10nm、约9nm、约8nm、约7nm、约6nm或约5nm。
在本发明制剂中，LFA-1拮抗剂颗粒的直径的D90小于约100μm、约90μm、约80μm、约70μm、约60μm、约50μm，约45μm、约40μm、约35μm、约30μm、约25μm、约20μm、约19μm、约18μm、约17μm、约16μm、约15μm、约14μm、约13μm、约12μm、约11μm、约10μm、约9μm、约8μm、约7μm、约6μm、约5μm、约4μm、约3μm、约2μm、约1μm、约950nm、约900nm、约850nm、约800nm、约750nm、约700nm、约650nm、约600nm、约550nm、约500nm、约450nm、约350nm、约300nm、约250nm、约200nm、约150nm、约100nm、约95nm、约90nm、约85nm、约80nm、约75nm、约70nm、约65nm、约60nm、约55nm、约50nm、约45nm、约40nm、约35nm、约30nm、约25nm、约20nm、约19nm、约18nm、约17nm、约16nm、约15nm、约14nm、约13nm、约12nm、约11nm、约10nm、约9nm、约8nm、约7nm、约6nm或约5nm。
在本发明制剂中，LFA-1拮抗剂颗粒的直径的D90不大于约100μm、约90μm、约80μm、约70μm、约60μm、约50μm，约45μm、约40μm、约35μm、约30μm、约25μm、约20μm、约19μm、约18μm、约17μm、约16μm、约15μm、约14μm、约13μm、约12μm、约11μm、约10μm、约9μm、约8μm、约7μm、约6μm、约5μm、约4μm、约3μm、约2μm、约1μm、约950nm、约900nm、约850nm、约800nm、约750nm、约700nm、约650nm、约600nm、约550nm、约500nm、约450nm、约350nm、约300nm、约250nm、约200nm、约150nm、约100nm、约95nm、约90nm、约85nm、约80nm、约75nm、约70nm、约65nm、约60nm、约55nm、约50nm、约45nm、约40nm、约35nm、约30nm、约25nm、约20nm、约19nm、约18nm、约17nm、约16nm、约15nm、约14nm、约13nm、约12nm、约11nm、约10nm、约9nm、约8nm、约7nm、约6nm或约5nm。
为了递送至人胃肠粘膜，包含LFA-1拮抗剂的制剂的浓度范围为约5.0至10.0W/W％的LFA-1拮抗剂。在一些其他的实施方式中，制剂包含约1.0W/W％、约2.0W/W％、约3.0W/W％、约4.0W/W％、约5.0W/W％、约6.0W/W％、约7.0W/W％、约8.0W/W％、约9.0W/W％或约10.0W/W％的LFA-1拮抗剂。在其他实施方式中，制剂包含约10.0W/W％、约12.0W/W％、约14.0W/W％、约15.0W/W％、约16.0W/W％、约17.0W/W％、约18.0W/W％、约20.0W/W％、约21.0W/W％、约22.0W/W％、约23.0W/W％、约24.0W/W％或约25.0W/W％的LFA-1拮抗剂。在本发明又一些其他的实施方式中，制剂包含约25.0W/W％、约26W/W％、约27W/W％、约28W/W％、约29W/W％、约30W/W％、约32W/W％、约34W/W％、约36W/W％、约38W/W％、约40W/W％、约42W/W％、约44W/W％、约46W/W％、约48W/W％或约50W/W％的LFA-1拮抗剂。在本发明另外的实施方案中，制剂包含约45W/W％、约50W/W％、约55W/W％、约60W/W％、约65W/W％、约70W/W％、约75W/W％、约80W/W％，或约85W/W％的LFA-1拮抗剂。
取决于正在治疗的病症的类型，LFA-1拮抗剂制剂可包含其他的治疗剂。例如，正在治疗的病症为炎性肠病时，另外的治疗剂可以是皮质类固醇或其他类型的免疫抑制剂。在下文中说明了进一步的实例。
LFA-1拮抗剂向胃肠系统的给药
本发明的组合物可用于治疗和/或预防由LFA-1活性介导的疾病或病症。因此，在本发明中提供了治疗受试者例如动物的由LFA-1介导的疾病或病症的方法。受试者可涉及任何动物，包括但不限于人类和非人类动物，例如灵长类动物、绵羊、牛、反刍类动物、兔、猪、山羊、马、犬、猫、鸟类、鼠以及其他。例如，本发明提供了治疗炎性疾病的方法，该方法包括给予人类受试者以有效量的本发明化合物。
给药本文公开的制剂可治疗白细胞介导的炎症。不受理论的约束，本发明的制剂是LFA-1的强效抑制剂，可抑制Th1 T-细胞和Th2 T-细胞释放细胞因子。白细胞介导的炎症对选定的疾病例如T细胞免疫应答中炎症的引发和进展起作用。
该制剂以有效治疗、预防或诊断炎症相关疾病或病症的一种或多种免疫症状或表现的量给药，在下文中进一步说明其实例。有效量是指化合物或制剂在给予后能降低LFA-1的活性的量，或者是给药后预防、抑制或减轻任何与LFA-1介导的病症或疾病相关的症状的严重程度所需化合物的量。治疗有效量的本发明药物可以以纯形式使用，或以可药用盐、酯或前药形式存在。治疗有效量是指在适用于任何药物治疗的合理的效果/风险比时，足以获得预定治疗效果的化合物的量。可从全身循环中快速清除的LFA-1拮抗剂局部给药在局部：全身暴露比可为10至10000倍或更高的情况下是特别有利的。
但是应该理解的是本发明药物和组合物的日用总剂量将由主治医师根据合理的医学判断范围来决定。任何特定患者的具体有效剂量水平和药物取决于多种因素，包括所治疗的病症和该病症的严重度；所用的具体化合物的活性；所用的具体组合物；患者的年龄、体重、一般健康状况、性别和饮食；给药时间，给药途径和所用具体化合物的排泄率；治疗期限；与所用具体化合物联用或一起使用的药物等医学领域中已知的因素。例如，本领域技术人员熟知起始剂量低于获得期望治疗效果所需的剂量，然后逐渐增加剂量直至获得期望的效果。
本发明LFA-1拮抗剂的量可以是足以产生减轻免疫症状或炎症相关的病症或症状的治疗效果的量，并且该量平均可减轻免疫症状或炎症相关的病症或症状至少约5、10、15、20、25、30、40、50、60、70、80、或90％。在一些实施方式中，减少了高于90％的症状或完全消除了症状。
本发明制剂可通过任何合适的方法给药，例如但不限于：局部、经口(包括但不局限于舌下、含服或吸入)、鼻内(包括但不限于气雾、滴鼻剂或使用插管)、口服或经栓剂直肠给药。
本文说明的制剂可局部给药而获得局部治疗有效浓度，并且不会以药理有效浓度分布全身。此局部给药可以是口服、贮库(depot)、滴注或泵送给药。在一些实施方式中，LFA-1拮抗剂制剂经口或直肠给药，并具有缓慢释放的性质。
如果将另外的治疗试剂作为独立的组合物给药，则其可以以相同途径或不同途径给药。如果另外的治疗试剂在单一组合物中给药，则其可以以任何适当的途径给药。在一些实施方式中，药物与一种或多种LFA-1拮抗剂的组合作为单一组合物经口服给药方式给药。在一些实施方式中，治疗剂与一种或多种LFA-1拮抗剂的组合作为单一药物组合物以经皮给药方式给药。在一些实施方式中，一种或多种另外的治疗剂与一种或多种LFA-1拮抗剂的组合作为单一药物组合物以经注射方式给药。在一些实施方式中，一种或多种另外的治疗剂与一种或多种LFA-1拮抗剂的组合作为单一药物组合物以局部方式给药。
也可给予具有导致递送有效剂量的LFA-1拮抗剂的药代动力学性质的组合物。根据所用的具体药物或其组合物、配制的具体组合物、给药方式、患者的年龄、体重、病症、以及正在治疗的症状或病症的严重程度，药物的实际有效量可不同。特定患者的剂量可由本领域普通技术人员使用常规的考虑事项来确定(例如通过合适的常规的药理方案)。
给药本文公开的制剂的效果包括：局部递送治疗剂，并且由于较低的全身生物利用度而具有最小的全身副作用。例如，一旦剂量单位进入胃肠系统腔，口服制剂就递送高浓度的LFA-1拮抗剂。高局部浓度将产生渗透压梯度，并使得药物局部进入暴露于局部梯度下的胃肠道组织。药物被局部组织吸收，并摄入脉管系统再经门静脉进入肝。LFA-1拮抗剂由肝/胆汁清除并返回下胃肠腔，并在其中被吸收。
本发明的治疗剂具有快速的系统清除率，这使得任何被全身吸收的药物快速消除。已知LFA-1会与一些配体作用，从而产生一些不期望的副作用。在一些实施方案中，治疗剂的局部浓度比全身浓度高约2倍、3倍、4倍、5倍、10倍、25倍、50倍、或约100倍。在本发明另一实施方式中，LFA-1拮抗剂局部浓度比全身浓度高约1000倍。在一些实施方式中，在同一时间点时，局部浓度比全身浓度高约10000倍或更高。治疗剂的浓度可使用本领域任何已知的方法测量。例如可使用放射标记的治疗药物，并进行局部给药部位测量，与全身浓度(例如血浆浓度)比较。
该治疗受试者的方法通常包括给予一种或多种用于治疗一种或多种疾病的药物。药剂组合可以用于治疗一种疾病或多种疾病，或者用于调节组合中的一种或多种药剂的副作用。与LFA-1拮抗剂组合使用的其他药剂包括用于治疗免疫相关病症和/或对抗某些作用的试剂，例如LFA-1拮抗剂可与引起干眼副作用的药物一起给药。
当炎性症状得以消除或改善时，可获得了治疗效果。当正在治疗的潜在病症得以消除或改善时，也可获得治疗效果。或者，当与潜在病症相关的一种或多种生理症状得以消除或改善时，可获得治疗效果。例如，可以将用于治疗炎性肠病(IBD)的包含LFA-1拮抗剂的治疗有效量定义为减轻受试者的IBD症状的剂量，这涉及到IBD可检测症状的任何性质或数量上的降低，包括但不限于，对疾病恢复率(例如体重增加率)的可检测的影响，或至少一种下述症状的减轻：腹痛、腹泻、直肠出血、体重减轻、发热、食欲不振、脱水、贫血、膨胀、纤维变性、肠炎和营养不良。
用本发明组合物治疗病症或疾病可观察到受试者病情的改善，受试者或医师可以感知的改善，尽管受试者仍然会遭受潜在病症的折磨。例如，在局部给药后，疾病的全身表现仍然还存在。对于预防性有益效果而言，即使还未给出疾病的诊断结论，也可以将组合物施用于具有发生特定疾病的危险的患者，或者施用于记录具有一种或多种疾病生理症状的患者。可以将组合物施用于患者，以预防生理症状或主要病症的发展。
含有LFA-1拮抗剂的制剂或药物组合物可以以单剂量形式给药。当与另一种物质(例如，止痛药)共同给药以治疗急性症状时，也可以使用单一剂量的包含LFA-1拮抗剂的药物组合物。在一些实施方式中，包含LFA-1拮抗剂的药物组合物以多剂量形式给药。给药可以为每日约1次、2次、3次、4次、5次、6次、7次、8次、9次、10次或多于10次。给药可以是约每年一次、每年两次、每6个月一次、每4个月一次、每3个月一次、每60天一次、每月一次、每两周一次、一周一次或每隔一天一次。在另一实施方式中，给予包含LFA-1拮抗剂的药物组合物的持续时间少于约7天。在又一个实施方案中，给药持续时间大于约6天、10天、14天、28天、2个月、6个月或1年。在一些情况下，给药方式维持尽量长的时间，例如在针对慢性炎症进行剂量给药时。
在另一实施方式中，包含LFA-1拮抗剂的药物组合物与另一治疗剂联合给药，约每日一次至约每日10次。在另一实施方式中，另外的治疗剂与包含LFA-1拮抗剂的药物组合物联合给药的持续时间少于约7天。在又一个实施方案中，联合给药持时间大于约6、10、14、28天、2个月、6个月或1年。在一些情况下，联合给药方式维持尽量长的时间，例如在针对慢性炎症进行给药时。在一些实施方式中，在同一组合物中进行联合给药。
在另一实施方式中，在单独的药物组合物中进行联合给药。在一些实施方式中，以伴随方式联合给药。在一些实施方式中，第二治疗剂的给药先于包含LFA-1拮抗剂的药物组合物的给药。在一些实施方式中，第二治疗剂的给药后于包含LFA-1拮抗剂的药物组合物的给药。在一实施方案中，第二治疗剂是止痛剂。
本发明组合物的给药可以持续尽可能长的时间。在一些实施方案中，本发明的组合物给药长于1、2、3、4、5、6、7、14或28天。在一些实施方案中，本发明的组合物给药短于28、14、7、6、5、4、3、2或1天。在一些实施方案中，基于病情进展状态而长期给药本发明的化合物，例如用于治疗慢性疼痛。
用于本发明中的活性成分的给药量和给药次数根据病人的性别、年龄和体重、治疗症状、希望的治疗效果、给药途径和治疗周期而变化。本发明方法的给药可通过常规的实验建立。每日剂量可以为约1×10-10g-5000mg。每日剂量范围取决于包含LFA-1拮抗剂的剂型，例如所用的酯或盐、和/或给药途径、和/或特定剂型的溶解度(例如水性或固体)。例如，对于全身给药，典型的剂量范围例如：约1-5000mg、或约1-3000mg、或约1-2000mg、或约1-1000mg、或约1-500mg、或约1-100mg、或约10-5000mg、或约10-3000mg、或约10-2000mg、或约10-1000mg、或约10-500mg、或约10-200mg、或约10-100mg、或约20-2000mg或约20-1500mg或约20-1000mg或约20-500mg、或约20-100mg、或约50-5000mg、或约50-4000mg、或约50-3000mg、或约50-2000mg、或约50-1000mg、或约50-500mg、或约50-100mg、约100-5000mg、或约100-4000mg、或约100-3000mg、或约100-2000mg、或约100-1000mg、或约100-500mg。在一些实施方式中，本文所述的制剂日剂量为约100、200、300、400、500、600、700、800、900、或1000mg。在一些实施方式中，LFA-1拮抗剂的日剂量为0.1mg。在一些实施方式中，LFA-1拮抗剂的日剂量为1mg。在一些实施方式中，LFA-1拮抗剂的日剂量为10mg。在一些实施方式中，LFA-1拮抗剂的日剂量为100mg。在一些实施方式中，LFA-1拮抗剂的日剂量为500mg。在一些实施方式中，LFA-1拮抗剂的日剂量为1000mg。
在一些实施方案中，治疗剂以足以产生治疗效果的量存在，即该量减少平均至少约5、10、15、20、25、30、40、50、60、70、80、90、大于90％的由LFA-1介导的病症的症状或基本上消除由LFA-1介导的病症的症状。。
在一些实施方案中，LFA-1拮抗剂的有效量为日剂量约1×10-11、1×10-10、1×10-9、1×10-8、1×10-7、1×10-6、1×10-5、1×10-4、1×10-3、1×10-2、1×10-1、1×101、1×102g。
对于局部递送至胃肠器官的组织表面，典型的日剂量为例如，约1×10-10g至5.0g、或约1×10-10g至2.5g、或约1×10-10g至1.00g、或约1×10-10g至0.5g、或约1×10-10g至0.25g、或约1×10-10g至0.1g、或约1×10-10g至0.05g、或约1×10-10g至0.025g、或约1×10-10g至1×10-2g、或约1×10-10g至5×10-3g、或约1×10-10g至2.5×10-3g、或约1×10-10g至1×10-3g、或约1×10-10g至5×10-4g、或1×10-10g至2.5×10-4g、或约1×10-10g至1×10-4g、或约1×10-10g至5×10-5g、或1×10-10g至2.5×10-5g、或约1×10-10g至1×10-5g、或约1×10-10g至5×10-6g、或约1×10-9g至1.00g、或约1×10-9g至0.5g、或约1×10-9g至0.25g、或约1×10-9g至0.1g、或约1×10-9g至0.05g、或约1×10-9g至0.025g、或约1×10-9g至1×10-2g、或约1×10-9g至5×10-3g、或约1×10-9g至2.5×10-3g、或约1×10-9g至1×10-3g、或约1×10-9g至5×10-4g、或约1×10-8g至5.0g、或约1×10-8g至2.5g、或约1×10-8g至1g、或约1×10-8g至0.5g、或约1×10-8至0.25g、或约1×10-8g至0.1g、或约1×10-8g至5×10-2g、或约1×10-8至5×10-2g、或约1×10-8g至2.5×10-2g、或约1×10-8g至1×10-2g、或约1×10-8g至5×10-3g、或约1×10-8至2.5×10-3g、或约1×10-8g至1×10-3g、或约1×10-8g至5×10-4g、或约1×10-7g至5.0g、或约1×10-7g至2.5g、或约1×10-7g至1g、或约1×10-7g至0.5g、或约1×10-7g至0.25g、或约1×10-7g至0.1g、或约1×10-7g至5×10-2g、或约1×10-7至5×10-2g、或约1×10-7g至2.5×10-2g、或约1×10-7g至1×10-2g、或约1×10-7g至5×10-3g、或约1×10-7至2.5×10-3g、或约1×10-7g至1×10-3g、或约1×10-7至5×10-4g、或约1×10-6g至5.0g、或约1×10-6g至2.5g、或约1×10-6g至1g、或约1×10-6g至0.5g、或约1×10-6g至0.25g、或约1×10-6g至0.1g、或约1×10-6g至5×10-2g、或约1×10-6至5×10-2g、或约1×10-6g至2.5×10-2g、或约1×10-6g至1×10-2g、或约1×10-6g至5×10-3g、或约1×10-6至2.5×10-3g、或约1×10-6g至1×10-3g、或约1×10-6g至5×10-4g、或约1×10-5g至5g、或约1×10-5g至2.5g、或约1×10-5g至1g、或约1×10-5g至0.5g、或约1×10-5g至0.25g、或约1×10-5g至0.1g、或约1×10-5g至0.05g、或约1×10-5g至2.5×10-2g、或约1×10-5g至1×10-2g、或约1×10-5g至5×10-3g、或约1×10-5g至2.5×10-3g、或约1×10-5g至1×10-3g、或约1×10-5g至5×10-4g。
在一些实施方式中，LFA-1拮抗剂的日剂量为约1×10-10、约1×10-9、约1×10-8、约1×10-7、约1×10-6、约1×10-5、约1×10-4、约1×10-3g、约1×10-2g、约1×101g或约1g.在一些实施方案中，LFA-1拮抗剂的日剂量为1×10-10g。在一些实施方案中，LFA-1拮抗剂的日剂量为1×10-9g。在一些实施方案中，LFA-1拮抗剂的日剂量为1×10-8g。在一些实施方案中，LFA-1拮抗剂的日剂量为1×10-7g。在一些实施方案中，LFA-1拮抗剂的日剂量为1×10-5g。在一些实施方案中，LFA-1拮抗剂的日剂量为1×10-3g。在一些实施方案中，LFA-1拮抗剂的日剂量为1×10-2g。在一些实施方案中，单剂量范围为约1×10-10g至5.0g、或约1×10-10g至2.5g、或约1×10-10g至1.00g、或约1×10-10g至0.5g、或约1×10-10g至0.25g、或约1×10-10g至0.1g、或约1×10-10g至0.05g、或约1×10-10g至0.025g、或约1×10-10g至1×10-2g、或约1×10-10g至5×10-3g、或约1×10-10g至2.5×10-3g、或约1×10-10g至1×10-3g、或约1×10-10g至5×10-4g、或1×10-10g至2.5×10-4g、或约1×10-10g至1×10-4g、或约1×10-10g至5×10-5g、或1×10-10g至2.5×10-5g、或约1×10-10g至1×10-5g、或约1×10-10g至5×10-6g、或约1×10-9g至1.00g、或约1×10-9g至0.5g、或约1×10-9g至0.25g、或约1×10-9g至0.1g、或约1×10-9g至0.05g、或约1×10-9g至0.025g、或约1×10-9g至1×10-2g、或约1×10-9g至5×10-3g、或约1×10-9g至2.5×10-3g、或约1×10-9g至1×10-3g、或约1×10-9g至5×10-4g、或约1×10-8g至5.0g、或约1×10-8g至2.5g、或约1×10-8g至1g、或约1×10-8g至0.5g、或约1×10-8g至0.25g、或约1×10-8g至0.1g、或约1×10-8g至5×10-2g、或约1×10-8至5×10-2g、或约1×10-8g至2.5×10-2g、或约1×10-8g至1×10-2g、或约1×10-8g至5×10-3g、或约1×10-8至2.5×10-3g、或约1×10-8g至1×10-3g、或约1×10-8g至5×10-4g、或约1×10-7g至5.0g、或约1×10-7g至2.5g、或约1×10-7g至1g、或约1×10-7g至0.5g、或约1×10-7g至0.25g、或约1×10-7g至0.1g、或约1×10-7g至5×10-2g、或约1×10-7至5×10-2g、或约1×10-7g至2.5×10-2g、或约1×10-7g至1×10-2g、或约1×10-7g至5×10-3g、或约1×10-7至2.5×10-3g、或约1×10-7g至1×10-3g、或约1×10-7至5×10-4g、或约1×10-6g至5.0g、或约1×10-6g至2.5g、或约1×10-6g至1g、或约1×10-6g至0.5g、或约1×10-6g至0.25g、或约1×10-6g至0.1g、或约1×10-6g至5×10-2g、或约1×10-6至5×10-2g、或约1×10-6g至2.5×10-2g、或约1×10-6g至1×10-2g、或约1×10-6g至5×10-3g、或约1×10-6至2.5×10-3g、或约1×10-6g至1×10-3g、或约1×10-6g至5×10-4g、或约1×10-5g至5g、或约1×10-5g至2.5g、或约1×10-5g至1g、或约1×10-5g至0.5g、或约1×10-5g至0.25g、或约1×10-5g至0.1g、或约1×10-5g至0.05g、或约1×10-5g至2.5×10-2g、或约1×10-5g至1×10-2g、或约1×10-5g至5×10-3g、或约1×10-5g至2.5×10-3g、或约1×10-5g至1×10-3g、或约1×10-5g至5×10-4g。
在一些实施方案中，将如上所述的单一剂量每日重复1、2、3、4、5、6、7、8、9或10次。
对于其它给药形式，日剂量可以大致为所述的用于系统给药的范围，或者可以大致为所述的用于局部给药的范围。
对于持续释放或缓释装置和制剂，在一些实施方式中，在给药期间释放的LFA-1拮抗剂的典型剂量范围为约0.1mg至约100mg。在其他实施方式中，在给药期间释放约1mg至约50mg、约1至约25mg、约5mg至约100mg、约5至约50mg、约5至约25mg、约10mg至约100mg、约10mg至约50mg、约10mg至约25mg、或约15mg至约50mg。缓释装置和制剂的给药期间通常为约10天至约1年、约30天至约1年、约60天至约1年、约3月至约1年、约4月至约1年、约5月至约1年、或约6月至约1年。在一些实施方案中，缓释装置和制剂在约1月至约9月、约1月至约8月、约1月至约7月、约1月，至约6月、约1月至约5月、约1月至约4月或约1月至约3月的期间内释放LFA-1拮抗剂。在其他实施方式中，缓释制剂和装置释放LFA-1拮抗剂高达1月、2月、3月、4月、5月、6月、7月、8月、9月、10月、12月、18月、2年、30月、或3年。在一些实施方式中，缓释或持续释放装置是泵。在一些实施方式中，缓释或持续释放装置是可植入装置。在一些缓释或持续释放制剂中，其是凝胶。在一些缓释或持续释放制剂中，其是生物相容性固体。在一些缓释或持续释放制剂中，其是生物可降解固体。
在本发明的一些实施方式中，持续释放制剂和/或植入物释放足够的治疗剂以在1年内将LFA-1拮抗剂的局部水平维持在至少约10nM、约50nM、约100nM、约150nM、约200nM、约250nM、约300nM、约350nM、约500nM、约600nM、约700nM、约800nM、约900nM、约1μM、约2μM、约3μM、约5μM、约6μM、约7μM、约8μM、约9μM、约10μM、约15μM、约20μM、约25μM、约30μM、约35μM、约40μM、约45μM、约50μM、约55μM、约60μM、约65μM、约70μM、约75μM、约80μM、约85μM、约90μM、约95μM或约100μM。在本发明的一些实施方式中，持续释放制剂和/或植入物释放足够的治疗剂进入胃肠组织以在6个月内将LFA-1拮抗剂的局部水平维持在至少约10nM、约50nM、约100nM、约150nM、约200nM、约250nM、约300nM、约350nM、约500nM、约600nM、约700nM、约800nM、约900nM、约1μM、约2μM、约3μM、约5μM、约6μM、约7μM、约8μM、约9μM、约10μM、约15μM、约20μM、约25μM、约30μM、约35μM、约40μM、约45μM、约50μM、约55μM、约60μM、约65μM、约70μM、约75μM、约80μM、约85μM、约90μM、约95μM或约100μM。
本发明组合物可以包装成成多剂量形式或单剂量单元形式。在使用过程中需要采用防腐剂来防止微生物污染。可以将本发明的组合物制成不含防腐剂的无菌单元剂型。或者，可使用防腐剂。
用于本发明组合物的合适的防腐剂包括：苯扎氯铵、二硫化铁(purite)、过氧化物、过硼酸盐、硫柳汞、氯代叔丁醇、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、苯乙醇、依地酸二钠、山梨酸、Onamer M，或本领域技术人员已知的其它试剂。在本发明一些实施方式中，所述防腐剂的用量可以为约0.004％至约0.02％。在本申请的组合物中，苯扎氯铵防腐剂的用量为约0.001％至小于0.01％，例如约0.001％至约0.008％，或约0.005％重量。已经发现，约0.005％的苯扎氯铵浓度足以防止本发明的组合物受到微生物的侵袭。本领域技术人员可确定合适的组分浓度，以及用于形成合适的局部制剂的各种组分的组合。例如，滴眼液或用于皮肤的制剂可使用分别为约0.02％和约0.04％的对羟基苯甲酸甲酯和丙酯的混合物。
炎性和免疫相关病症的治疗
由于LFA-1与多种这些病症有关，本发明LFA-1拮抗剂可用于治疗多种炎性和免疫相关的疾病和病症。非意图限制作用机理，本发明的方法包括通过抑制LFA-1和ICAM-I之间的相互作用来抑制与炎症有关的疾病的产生和发展。LFA-1和ICAM-I为带有胞外受体域的分子，其参与淋巴细胞/白细胞的迁移和增殖过程，导致炎症级联反应。在其中全身给予抗LFA-1单克隆抗体已证明为有效的疾病状态中，局部给予LFA-1拮抗剂可能特别有效，例如在Raptiva临床试验中使用的或如www.clinicaltrials.gov所述。如下文所详述，本发明方法提供了抗炎作用，并且可用于治疗炎症介导的疾病，例如炎性肠疾病(IBD)。
人血包含白细胞(白血球)，其进一步分类为嗜中性粒细胞、淋巴细胞(B和T型)、单核细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性细胞。这些类型中的几种白细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性细胞和淋巴细胞与炎性疾病有关。LFA-1是表达于大部分白细胞上的一组白细胞整联蛋白中的一种，而且其被认为是与许多作为配体的ICAM发生相互作用的淋巴整联蛋白。干扰这些相互作用并因此干扰免疫/炎性反应能够用于减轻疾病或病症例如IBD的炎症。例如，ICAM-1(CD54)是免疫球蛋白超家族中的ICAM粘附受体家族(ICAM-1、ICAM-2、ICAM-3、ICAM-4)中的一员，而且其表达于被激活的白细胞、皮肤成纤维细胞和内皮细胞上。参见，Krensky，A.M.；Sanchez-Madrid，F.；Robbins，E.；Nagy，J.A.；Springer，T.A.Burakoff，SJ.“The functional significance，distribution，and structure of LFA-1，LFA-2，and LFA-3：cell surfaceantigens associated with CTL-target interactions.”1983 J.Immunol.131，611-616。其正常情况下在衬于脉管系统内的内皮细胞上进行表达，而且在免疫/炎症开始时经暴露于细胞因子或诱导细胞因子例如IL-1、LPS、SEB和TNF释放的化合物而得到正调节。
近十年来所作的研究有助于说明参与免疫系统中细胞运动和活化作用的分子事件，其集中于级联反应中的细胞-细胞间引发性相互作用。参见Springer，T.A.“Adhesion receptors of the immunesystem.”Nature，1990，346，425-434。细胞间粘附分子(ICAMs)和白细胞整联蛋白之间的相互作用在免疫系统的功能中起到一定作用。人们相信免疫过程，例如抗原呈递、T-细胞介导的细胞毒性和白细胞跨内皮迁移(血细胞渗出)，需要由ICAM与白细胞整联蛋白相互作用而介导的细胞粘附。参见Kishimoto，T.K.；Rothlein；R.R.“Integrins，ICAMs，and selectins：role and regulation of adhesionmolecules in neutrophil recruitment to inflammatory sites.”Adv.Pharmacol.1994，25，117-138和Diamond，M.；Springer，T.A.“Thedynamic regulation of integrin adhesiveness.”Current Biology，1994，4，506-532。
已经显示，ICAM-1和LFA-1(还称作αLβ2和CD11a/CD18)的相互作用参与粘附过程、白细胞跨内皮迁移、向损伤部位的迁移、淋巴细胞在激活的目标位置的增殖。例如，目前认为在白细胞跨内皮迁移之前，炎症反应的成分，细胞因子/趋化因子的存在将激活在白细胞上组成型表达的整联蛋白。血管内皮细胞也响应相同细胞因子/趋化因子的存在而正调节ICAM-1。当滚动的白细胞接近被激活的内皮细胞时，其前进首先被这些正调节的ICAM-1受体延缓。之后被表达在血管内皮细胞表面上的LFA-1和ICAM-1之间的配体/受体相互作用延缓，其阻止淋巴细胞的进一步滚动。然后淋巴细胞变平，从而发生渗透作用(transvasation)。该过程对于淋巴细胞穿过血管内皮的迁移以及淋巴细胞由外周血行至淋巴结而言都是很重要的。
LFA-1在产生和维持免疫突触中具有作用，免疫突触可以被定义为T细胞与抗原呈递细胞(APC)的相互作用表面的物理结构。LFA-1使T-细胞与APC的啮合稳定化，从而激活T细胞。LFA-1与ICAM-1的相互作用似乎还向静止T细胞提供共刺激信号。CD4+T-细胞的增殖和细胞因子的合成由作为炎症反应一部分的该相互作用来介导。
由于ICAM-1与LFA-1的相互作用在免疫/炎性反应中具有作用，希望对这些相互作用进行调节，以获得希望的治疗结果(例如，在过度活化的炎症反应情况下对该相互作用进行抑制)。ICAM和白细胞整联蛋白之间的相互作用的拮抗可以用针对组分的试剂，特别是用单克隆抗体来实现。而且，由于LFA-1具有多个属于ICAM族(ICAM-1、ICAM-2和ICAM-3)并涉及多个信号通道的配体配偶体(ligand partners)，因此在一些实施方案中，希望选择性调节这些相互作用。
本文中描述的方法和组合物可以调节本文中描述的通道中的一种或多种成分。除了抑制LFA-1和ICAM-1之间的相互作用之外，本发明的方法和组合物还可以干预炎性过程中的早期和晚期部分。例如，可以在粘连和跨内皮迁移之前，通过本文中描述的方法和组合物来调节内皮细胞或白细胞上的ICAM-1或LFA-1的正调节(活化)。本发明可以用于调节在白细胞通行过程中激活ICAM-1和LFA-1的细胞因子或趋化因子的表达、调节细胞因子或趋化因子的运输，防止停滞白细胞的渗透作用、调节通过涉及白细胞在损伤或炎症部位进行增殖的其它机理的信号传导等。
本发明的组合物和方法可用于治疗胃肠系统炎性或免疫相关的疾病和病症，包括但不限于炎性疾病，例如炎性肠病、克罗恩病或溃疡性结肠炎以及口腔扁平苔癣。本文说明的组合物和方法可用于治疗胃肠炎症，例如胃肠道粘膜层的炎症。胃肠道粘膜层包括肠(包括小肠和大肠)粘膜、直肠粘膜、胃粘膜、口腔粘膜等。可以治疗急性和慢性炎性病症。急性炎症的特征通常在于发作时间短并且有中性粒细胞的浸润和流入。慢性炎症的特征通常在于发作时间相对较长(例如数天、数周、数月或数年以及直到受试者的生命过程)，并且有单核细胞的浸润和流入。慢性炎症的特征通常也在于自行消退和自行发生的时期。因此，患有慢性胃肠道炎症的受试者预计需要长时间的监护、观察或护理。
慢性胃肠炎性病症也称为慢性胃肠炎性疾病，具有这些慢性炎症，包括但不限于：炎性肠病、环境危害所诱导的结肠炎(例如由治疗方案引起的(例如结肠炎)或与治疗方案相关的(例如副作用)胃肠炎症，该治疗方案例如化疗和放疗等)、在例如慢性肉芽肿疾病病症中的结肠炎(Schappi et al，Arch.Dis.Child.，1984：147(2001))、乳糜泻、口炎性腹泻(一种遗传性疾病，其中因为摄入了一种称为谷蛋白的蛋白质，肠粘膜因应答而发炎)、食物过敏、胃炎、感染性胃炎或小肠结肠炎(例如幽门螺杆菌感染所产生的慢性活动性胃炎)以及有感染剂引起的其他形式的胃肠炎症等。不受理论约束，急性和慢性炎症被认为是继发于促炎性细胞因子(特别是肿瘤坏死因子α)的增加和上皮细胞凋亡的增加。不受理论约束，这些因子导致的表现被认为是上皮内衬粘膜的破坏和上述中性粒细胞/单核细胞的浸润。
本发明可用于治疗炎性肠病，或IBD。IBD是指多种疾病的任何一种，其特征在于肠的全部或部分发生炎症。炎性肠病的实例包括但不限于克罗恩氏病、溃疡性结肠炎、肠易激综合征、粘膜炎、辐射诱导的肠炎、短肠综合征、乳糜泻、结肠炎、胃溃疡、憩室炎、隐窝炎(pouchitis)、直肠炎和慢性腹泻。提及IBD是作为胃肠炎性病症的示例，并不意味着限定。
IBD症状可包括但不限于例如如下的症状：腹痛、腹泻、直肠出血、体重减轻、发热、食欲不振、以及其他更加严重的并发症，例如脱水、贫血和营养不良。对所述多个症状进行定量分析，例如体重减轻、发热、贫血等。一些症状可从血液测试直接确定(例如贫血)，或检测血的存在来确定(例如直肠出血)。用本文所述的LFA-1拮抗剂治疗IBD可减轻症状，该减轻可以是可检测症状的定量或定性的降低，包括但不限于对疾病恢复率的可检测的影响(例如体重增加率)。诊断可通过内窥镜观察粘膜以及对内窥镜活检标本进行病理学检查的方法进行确定。
本文说明的制剂也可用于治疗具有患IBD风险的人群，这类人群包括具有增加的患IBD风险(即高于平均人数)的部分人群。IBD看起来在美国、英国和北欧最为常见，并且在某些人类种群中比较常见，例如犹太人。还观察到在发展中国家，该病症的发病率增加。在患有炎性肠病的家庭成员间也具有较高的传播风险。因此，这些具有风险的人群也可以用本发明的LFA-1拮抗剂治疗。
相应地，一方面，提供了一种治疗受试者胃肠系统一种或多种组织的炎性或免疫相关病症的方法，包括给予需要的受试者以包含LFA-1拮抗剂或其可药用盐或酯和药用赋形剂的制剂，其中在给药至受试者时，LFA-1拮抗剂的全身清除率高于约2mL/min/kg。可经口服或栓剂给药。
口服给药的优点包括治疗剂的局部递送，以及因为低的全身生物利用率而最小化的全身副作用。LFA-1拮抗剂口服给药，但是只递送到胃肠道中，在其中制剂允许药物溶解在胃肠液中。LFA-1拮抗剂然后分布到胃肠粘膜表面，LFA-1拮抗剂在胃肠粘膜表面上通过肠上皮渗透到局部相邻组织。胃肠道中的含有高水平药物的液体通过正常的胃肠道运动和胃流向胃肠道下游移动并沿着胃肠道有效覆盖累及的胃肠道表面。另外，来自局部肠组织并分布到脉管系统的LFA-1拮抗剂被清除到肝脏并通过胆汁递送到下胃肠道。合适的制剂和附加载体在本文中记载，并且另外在Remington“The Science and Practice of Pharmacy”(20th Ed.，Lippincott Williams & Wilkins，Baltimore MD)中描述，该文献的教导以引用方式全部合并在此。
在一些实施方式中，本发明治疗剂具有使得全身吸收的任何药物被快速清除的快速全身清除率。在一些实施方式中，LFA-1拮抗剂的全身清除率大于约1mL/min/kg，约2mL/min/kg，约3mL/min/kg，约4mL/min/kg，约5mL/min/kg，约6mL/min/kg，约7mL/min/kg，约8mL/min/kg，约9mL/min/kg，约10mL/min/kg，约11mL/min/kg，约12mL/min/kg，约13mL/min/kg，约14mL/min/kg，约15mL/min/kg，约16mL/min/kg，约17mL/min/kg，约18mL/min/kg，约19mL/min/kg，约20mL/min/kg，约25mL/min/kg，约30mL/min/kg，约35mL/min/kg，约40mL/min/kg，约45mL/min/kg，约50mL/min/kg，约60mL/min/kg，约65mL/min/kg，约70mL/min/kg，约75mL/min/kg，约80mL/min/kg，约85mL/min/kg，约90mL/min/kg，约95mL/min/kg，或约100mL/min/kg。
已知LFA-1与可以导致几种不需要的副作用的几种配体相互作用。因此在一些实施方式中，治疗剂的局部浓度为全身浓度的约2倍、3倍、4倍、5倍、10倍、25倍、50倍或约100倍。在本发明另一个实施方式中，LFA-1拮抗剂的局部浓度为全身浓度的1000倍。在一个实施方式中，在同一个时间点，局部浓度为全身浓度的大约10,000倍或更大。可以使用本领域任何已知方法测量治疗剂的浓度。例如，可以使用放射性标记的治疗药物，以及从局部给药部位进行测定与全身水平(例如血浆水平浓度)对比。
该组合物可以以导致递送有效剂量的LFA-1拮抗剂的药代动力学曲线递送。药物的实际有效量可以根据所使用的特定的药物或其组合、配制的特定组合物、给药方式、患者的年龄、体重、病症以及所治疗的症状或病症的严重性而改变。本领域的技术人员可以使用通常的考虑(例如借助于合适的、惯用的药理学规程)来决定用于特定患者的剂量。
LFA1拮抗剂一旦释放进入胃肠粘膜环境，便会被局部吸收。在一些实施方式中，LFA-1拮抗剂在给药于受试者后的约4小时内达到大于约1μM的局部组织浓度。在其他实施方式中，LFA-1拮抗剂在给药于受试者后的约3小时内达到大于约1μM的局部组织浓度。在其他实施方式中，LFA-1拮抗剂在给药于受试者后的约2小时内达到大于约1μM的局部组织浓度。在其他实施方式中，LFA-1拮抗剂在给药于受试者后的约1小时内达到大于约1μM的局部组织浓度。在其他实施方式中，LFA-1拮抗剂在给药于受试者后的约50分钟、约40分钟、约30分钟、约20分钟、约10分钟、约5分钟或约3分钟内达到大于约1μM的局部组织浓度。
在本发明制剂如上所述口服给药后，LFA-1拮抗剂释放进入胃肠道，并以治疗有效浓度存在于从胃肠道分布LFA-1拮抗剂的上皮表面的约1mm内。在一些实施方式中，LFA-1拮抗剂以治疗有效浓度存在于从胃肠道分布LFA-1拮抗剂的上皮表面的约2mm、约3mm、约4mm、约5mm、约6mm、约7mm、约8mm、约9mm、约10mm、约12mm、约14mm、约16mm、约18mm、约20mm、约30mm、约40mm或约50mm内。在本发明制剂通过栓剂给药至胃肠道的实施方案中，LFA-1拮抗剂释放进入胃肠道，并且一旦在胃肠道中释放，便以治疗有效浓度存在于分布LFA-1拮抗剂的上皮表面的约1mm内。
在一些实施方式中，LFA-1拮抗剂在给药于受试者后的约4小时内的局部组织浓度大于约10nM。在其他实施方式中，LFA-1拮抗剂在给药于受试者的约4小时内的局部组织浓度大于约20nM、约30nM、约40nM、约50nM、约75nM、约100nM、约150nM、约200nM、约150nM、约300nM、约400nM、约500nM、约600nM、约700nM、约800nM、约900nM、约1μM、约2μM、约3μM、约4μM、约5μM、约6μM、约7μM、约8μM、约9μM或约10μM。在其他实施方式中，LFA-1拮抗剂在给药于受试者后的约5小时内的局部组织浓度大于约10nM、约20nM、约30nM、约40nM、约50nM、约75nM、约100nM、约150nM、约200nM、约150nM、约300nM、约400nM、约500nM、约600nM、约700nM、约800nM、约900nM、约1μM、约2μM、约3μM、约4μM、约5μM、约6μM、约7μM、约8μM、约9μM或约10μM。本发明也提供以下方法，其中LFA-1拮抗剂在给药于受试者后的约3小时内的局部组织浓度大于约10nM、约20nM、约30nM、约40nM、约50nM、约75nM、约100nM、约150nM、约200nM、约150nM、约300nM、约400nM、约500nM、约600nM、约700nM、约800nM、约900nM、约1μM、约2μM、约3μM、约4μM、约5μM、约6μM、约7μM、约8μM、约9μM或约10μM。LFA-1拮抗剂在给药于受试者后的约2小时内的局部组织浓度也可以大于约10nM、约20nM、约30nM、约40nM、约50nM、约75nM、约100nM、约150nM、约200nM、约150nM、约300nM、约400nM、约500nM、约600nM、约700nM、约800nM、约900nM、约1μM、约2μM、约3μM、约4μM、约5μM、约6μM、约7μM、约8μM、约9μM或约10μM。在其他实施方式中，LFA-1拮抗剂在给药于受试者后的约1小时内的局部组织浓度大于约10nM、约20nM、约30nM、约40nM、约50nM、约75nM、约100nM、约150nM、约200nM、约150nM、约300nM、约400nM、约500nM、约600nM、约700nM、约800nM、约900nM、约1μM、约2μM、约3μM、约4μM、约5μM、约6μM、约7μM、约8μM、约9μM或约10μM。在其他一些实施方式中，LFA-1拮抗剂在给药于受试者后的约50分钟、约40分钟、约30分钟、约20分钟、约10分钟、约9分钟、约8分钟、约7分钟、约6分钟、约5分钟、约4分钟、约3分钟、约2分钟或约1分钟内的局部组织浓度大于约10nM、约20nM、约30nM、约40nM、约50nM、约75nM、约100nM、约150nM、约200nM、约150nM、约300nM、约400nM、约500nM、约600nM、约700nM、约800nM、约900nM、约1μM、约2μM、约3μM、约4μM、约5μM、约6μM、约7μM、约8μM、约9μM或约10μM。
在本发明一些方法中，LFA-1拮抗剂在给药后的至少约8小时内保持局部组织浓度大于约10nM。在其他实施方式中，LFA-1拮抗剂在给药后的至少约8小时内保持局部组织浓度大于约10nM、约20nM、约30nM、约40nM、约50nM、约75nM、约100nM、约150nM、约200nM、约150nM、约300nM、约400nM、约500nM、约600nM、约700nM、约800nM、约900nM或约1μM。在其他实施方式中，LFA-1拮抗剂在给药后的至少约10小时、约9小时、约8小时、约7小时、约6小时、约5小时、约4小时、约3小时、约2小时或约1小时内保持局部组织浓度大于约10nM、约20nM、约30nM、约40nM、约50nM、约75nM、约100nM、约150nM、约200nM、约150nM、约300nM、约400nM、约500nM、约600nM、约700nM、约800nM、约900nM或约1μM。
在本发明的一些方法中，LFA-1拮抗剂在给药后的约4小时内的局部组织浓度大于约1μM并且在血浆中测量得到的全身浓度小于约100nM。在其他实施方式中，LFA-1拮抗剂在给药后的约4小时、约3小时、约2小时、约1小时、约50分钟、约40分钟、约30分钟、约20分钟、约10分钟或约5分钟内的局部组织浓度大于约1μM并且在血浆中测量得到的全身浓度小于约80nM、约70nM、约60或约50nM。
另外，在本发明的一些方法中，LFA-1拮抗剂在给药后的约4小时内以治疗有效浓度存在于施用有该制剂的上皮表面的约1mm内，并以低于治疗有效水平的浓度存在于血浆中。在其他实施方式中，LFA-1拮抗剂在给药后的约4小时内以治疗有效浓度存在于施用有该制剂的上皮表面的约2mm、约3mm、约4mm、约5mm、约6mm、约7mm、约8mm、约9mm、约10mm、约12mm、约14mm、约16mm、约18mm、约20mm、约30mm、约40mm或约50mm内，并以低于治疗有效水平的浓度存在于血浆中。或者，LFA-1拮抗剂在给药后的约6小时、约5小时、约3小时、约2小时、约1小时、约50分钟、约40分钟、约30分钟、约20分钟、约10分钟或约5分钟内可以以治疗有效浓度存在于施用有该制剂的上皮表面的约1mm内，并以低于治疗有效水平的浓度存在于血浆中。
取决于治疗病症的类型，病症的治疗可包括联合给予LFA-1拮抗剂制剂。例如，正在治疗的病症为炎性肠病时，另外的治疗剂可以是类固醇，例如皮质类固醇，或其他类型的免疫抑制剂。待联合给药的另外的药剂，例如免疫抑制剂或皮质类固醇，可以是本领任何熟知的药剂中的任一种，其包括但不限于目前正在临床使用的药剂。实例包括抗体(见例如美国专利申请No.20070224191和20050019323)或例如柠檬烯的化合物(美国专利申请No.20030199592)。所用的另外的药剂可以是5-氨基水杨酸(5-ASA)化合物，例如柳氮磺胺吡啶(Azulfidine)、奥沙拉嗪(Dipentum)和美沙拉秦(实例包括Pentasa、Asacol、Dipentum、Colazal、Rowasa灌肠剂和Canasa栓剂)。也可使用皮质类固醇(例如泼尼松)以及其他(例如全身作用剂)。例如，可使用局部用皮质类固醇，如布地奈德。也可使用抗生素，例如甲硝唑(Flagyl)和环丙沙星(Cipro)。另外的药剂的其他实例包括免疫调节剂，例如6-巯基嘌呤(6-MP)、硫唑嘌呤(Imuran)、氨甲喋呤(Rheumatrex，Trexall)、英夫利昔单抗(Remicade)和阿达木单抗(Humira)。使用的其他药剂可以是钙调磷酸酶抑制剂，例如环孢霉素、他克莫司、吡美莫司和西罗莫司。
在一些实施方式中，同时进行两种或更多种药剂或治疗的联合施用。在其他实施方式中，第一药剂/治疗先于第二药剂/治疗施用。本领域技术人员将理解的是各种药剂的制剂和/或给药途径或所用治疗可有所不同。联合给药的合适剂量可以由本领技术人员直接确定。在一些实施方式中，当联合给予药剂或治疗时，分别给予药剂或治疗的剂量比单独给予的剂量低。因此，联合给药特别适合于联合给予药剂或治疗可降低潜在有害(例如毒性)药剂的所需剂量的实施方式，和/或当两种或更多种药剂的联合给药使受试者对与其他药剂联合给药的药剂之一的有益效果敏感时。例如，药剂组合可以用于治疗LFA-1介导的病症，或者用于调节组合中的一种或多种药剂的副作用。在一些情况下，疾病状态的病理学事件的特点是并发了自身调节受损、细胞凋亡、局部缺血、新血管形成和/或炎症刺激，因此需要与其他治疗剂联合给予本发明LFA-1拮抗剂以另外或同时实施干预。不受理论约束，为实施干预，第二治疗剂可以是抗氧化剂、抗炎剂、抗微生物剂(包括抗细菌剂、抗病毒剂和抗真菌剂)、抗血管形成剂、抗凋亡剂或其组合。在本发明一些实施方式中，除了给予直接竞争结合LFA-1的化合物外，还可以给予如上所述的变构的、但不是直接竞争的LFA-1拮抗剂，这有可能得到协同的作用。这种变构拮抗剂的一个实例为乙内酰脲类LFA-1抑制剂(参见例如Keating等，Protein Science，15，290-303，(2006))。另一类可用于与本发明LFA-1拮抗剂联合给药(之前、之后或同时)的治疗剂是抑制血管内皮生长因子的一组药物，因此可针对启动新血管生成的另一途径，因为不受理论约束，炎症通常由白细胞粘附和心血管生成的过程诱导。任何VEGF抑制剂可以用于本发明的组合物，例如选自如下的抑制剂或其组合：1)针对VEGF或其受体的中和单克隆抗体，2)VEGF受体的小分子酪氨酸激酶抑制剂，3)可溶的VEGF受体，其作为VEGF的诱饵受体(decoy receptor)，和4)核酶，其特异性地针对VEGF。具有抗VEGF活性的抗体的一些实例是，例如，Lucentis(雷珠单抗)和Avastin(贝伐单抗)。寡核苷酸药的一个实例是，例如，Macugen(哌加他尼钠注射剂)。也可使用小分子酪氨酸激酶抑制剂，包括，例如帕唑帕尼、索拉非尼、舒尼替尼等。
类似地，另外的药剂可以选自钙调磷酸酶抑制剂，例如环孢霉素或环孢霉素相关的药物，包括但不限于环孢霉素类及其他相关的钙调磷酸酶拮抗剂，包括西罗莫司、他克莫司和吡美莫司。其他抗炎剂可在给予本发明LFA-1拮抗剂之前、之后或同时联合给药。抗炎剂可以选自皮质类固醇相关药物，包括但不限于：地塞米松、氟米龙、甲羟孕酮、倍他米松、去炎松、曲安缩松、强的松、去氢氢化可的松、氢化可的松、利美索龙和其药用可接受盐，泼尼卡酯、地氟可特、卤米松、巯氢可的松、泼尼立定、强的松龙戊酸酯、帕拉米松、甲强的松龙、甲基强的松、马泼尼酮、醋酸异氟泼尼松、醋酸卤泼尼松、哈西缩松、醛基缩松、氟氢缩松、氟泼尼松龙、醋酸氟泼尼定、醋酸氟培龙、氟考龙、氟考丁酯、氟轻松醋酸酯、肤轻松、氟尼缩松、二氟美松、氟氢化可的松、氟卡尼、甘草次酸、二氟泼尼酯、双氟米松、双醋酸双氟拉松、去羟米松(去氧米松)、羟泼尼缩松、地西龙、可的伐唑、皮质脂酮、可的松、氯泼尼醇、氯可托龙、去氢氯氟美松、氯倍他索、氯强的松、咖啡醇、布地缩松、倍氯米松、安西缩松、别孕烷丙酮化合物、阿氯米松、21-乙酸基孕烯醇酮、曲拉缩松、醋酸双氟拉松、脱酰可的发唑、RU-26988、布地缩松、脱酰可的发唑等。或者，抗炎剂可以是非甾体抗炎药，包括但不限于扑热息痛、阿西美辛、醋氯芬酸、阿明洛芬、氨芬酸、苄达酸、苯恶洛芬、溴芬酸、布氯酸、布替布芬、卡洛芬、塞来考昔、桂美辛、氯吡酸、双氯芬酸、依托度酸、艾托考昔、联苯乙酸、氯苯噻唑乙酸、联苯丁酮酸、非诺洛芬、芬替酸、氟诺洛芬、氟比洛芬、异丁苯乙酸、布洛芬、茚甲新、三苯唑酸、异恶噻酰胺、伊索克酸、吲哚洛芬、酮洛芬、氯那唑酸、氯索洛芬、扑湿痛、甲氯灭酸、美洛昔康、甲吩噻嗪乙酸、莫苯唑酸、咪洛芬、萘普生、尼氟酸、噁丙嗪、吡拉唑酸(pirozolac)、吡丙芬、普拉洛芬、丙替嗪酸、罗非考昔、水杨酸及其衍生物(即例如乙酰水杨酸)、舒林酸、舒洛芬、琥保松、噻洛芬酸(triaprofenic acid)、甲苯酰吡啶乙酸、伐地考昔、联苯丁酸、肟环苯丙酸、扎托洛芬、佐美酸、乙酰水杨酸、阿西美辛、丁丙二苯肼、卡洛芬(carprofenac)、环氯茚酸、二氟苯水杨酸、苯乙氨茴酸、芬多沙、氟灭酸、氟胺烟酸、龙胆酸、酮咯酸(ketorolac)、美沙拉秦、及其前药等。
由LFA-1介导的免疫疾病诱导的自身调节和局部缺血过程削弱的细胞内可能诱导氧化应激。因此，抗氧化剂可用于和本发明LFA-1拮抗剂联合用药(之前、之后或同时)。用于本发明方法的合适的抗氧化剂的例子包括但不限于：抗坏血酸、生育酚、生育三烯酚、类胡萝卜素、谷胱甘肽、α-硫辛酸、泛醇、生物类黄酮、肉碱和超氧化物歧化酶模拟物，例如，2，2，6，6-四甲基-1-哌啶氧化物(TEMPO)、DOXYL、PROXYL硝基氧化合物；4-羟基-2，2，6，6-四甲基-1-哌啶氧化物(Tempol)、M-40401、M-40403、M-40407、M-40419、M-40484、M-40587、M-40588等。
在本发明的一些实施方式中，提供抗细胞凋亡治疗剂可与本发明LFA-1拮抗剂联合用药(之前、之后或同时)的方法。合适的抗细胞凋亡剂的例子是例如胱天蛋白酶、组织蛋白酶和TNF-α的抑制剂。
可用于和本发明LFA-1拮抗剂联合用药(之前、之后或同时)的另一类治疗剂是抗微生物剂。合适的抗微生物化合物包括但不限于青霉素，例如阿莫西林、氨苄青霉素、阿洛西林、羧苄青霉素、氯唑西林、双氯西林、氟氯西林、美洛西林、萘夫西林、青霉素、哌拉西林、替卡西林等；β-内酰胺酶抑制剂；碳青霉烯类，例如，厄他培南(ertapenem)、亚胺培南、美罗培南等；头孢菌素类，例如头孢克洛、头孢孟多、头孢西丁、头孢罗齐、头孢氨呋肟、头孢克肟、头孢地尼、头孢托仑、头孢哌酮、头孢噻肟、头孢泊肟、头孢羟氨苄、头孢他啶、头孢布烯、头孢唑肟、头孢三嗪(ceffiriaxone)、头孢唑啉、头孢克肟、头孢力新、头孢吡肟等；喹诺酮类，例如环丙沙星、依诺沙星、加替沙星、左氟沙星、洛米沙星、莫西沙星(morifloxacin)、诺氟沙星、氧氟沙星、曲伐沙星等；大环内酯类，例如阿奇霉素、克拉霉素、地红霉素、红霉素、密比霉素、醋竹桃霉素等；单环β-内酰胺类(monbactams)，例如LFA-1拮抗剂等；四环素类，例如地美环素、强力霉素、米诺环素、氧四环素、四环素、等；氨基糖苷类，例如阿米卡星、庆大霉素、卡那霉素、新霉素、奈替米星、巴龙霉素、链霉素、托普霉素等；碳头孢烯，例如氯拉卡比等；链霉杀阳菌素；磺胺类，例如甲磺灭脓(mefanide)、百浪多息、磺醋酰胺、磺胺甲基硫二嗪、磺胺、柳氮磺胺吡啶、磺胺异噁唑、甲氧苄啶、甲氧苄啶-磺胺甲噁唑等；及联合药物，例如磺胺甲基异噁唑和甲氧苄氨嘧啶等；抗病毒类，例如阿昔洛韦、金刚烷胺、双汰芝、二十二醇、恩曲他滨、膦甲酸、更昔洛韦、加德西(Gardasil)、异丙肌苷(imunovir)、印地那韦、肌苷、干扰素、洛匹那韦、洛韦胺、吗啉呱、奈韦拉平、nexavir、喷昔洛韦、普来可那立、利巴韦林、金刚乙胺、利托那韦、替诺福韦、三氟尿苷、viramidine和齐多夫定；抗真菌类，例如两性霉素B、咪康唑、酮康唑、克霉唑、氟康唑、特比萘芬、布替萘芬、阿尼芬净、米卡芬净和托萘酯；以及多肽类，例如杆菌肽、粘菌素、多粘菌素等。
可在与本发明LFA-1拮抗剂联合用药之前、之后或同时给予的其他治疗剂的实例包括但不局限于：(a)抗糖尿病剂，例如胰岛素和胰岛素类似物，磺脲类(例如格列本脲、meglinatide)，双胍类，例如二甲双胍(GlucophageTM)，α-糖苷酶抑制剂(阿卡波糖)，胰岛素增敏剂，例如噻唑烷酮类化合物，罗格列酮(AvandiaTM)、曲格列酮(RezulinTM)、环格列酮、匹格列酮(ActosTM)和恩格列酮；(b)降胆固醇剂，例如HMG-CoA还原酶抑制剂(例如洛伐他汀，辛伐他汀，普伐他汀，氟伐他汀，阿托伐他汀和其他他汀类药物)，胆酸螯合剂(例如消胆胺和降脂宁)，维生素B3(也称为烟酸或烟碱酸)，维生素B6(吡哆醇)，维生素B12(氰钴维生素)，苯氧酸衍生物(例如吉非贝齐，氯贝丁酯，非诺贝特和苯扎贝特)，普罗布考，硝酸甘油及胆固醇吸收抑制剂(例如β谷固醇和酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶(ACAT)抑制剂，例如甲亚油酰胺)，HMG-CoA合成酶抑制剂，鲨烯环氧酶抑制剂和角鲨烯合成酶抑制剂；和(c)抗凝血剂，例如血栓溶解剂(例如链激酶、阿替普酶、复合纤溶酶链激酶和瑞替普酶)，肝素，水蛭素和华法林衍生物，β-阻断剂(例如阿替洛尔)，β-肾上腺素能激动剂(例如异丙肾上腺素)，ACE抑制剂和血管扩张剂(例如硝普钠，盐酸尼卡地平，硝酸甘油和依那普利拉)。
可在与LFA-1拮抗剂联合用药之前、之后或同时给予的其他治疗剂可与是抗病毒剂，其包括但不限于例如如下的治疗试剂：进入抑制剂、逆转录酶抑制剂、核苷或者核苷酸类似物、蛋白酶抑制剂和病毒从宿主细胞释放的抑制剂。一些说明性的这类治疗剂包括但不限于：阿巴卡韦、阿昔洛韦、阿德福韦、金刚胺、安普那韦、阿比朵尔、阿扎那韦、atripla、溴夫定、西多福韦、可比韦、地瑞拉韦、地拉韦啶、去羟肌苷、二十二醇、依度尿苷、依非韦伦、恩曲他滨、恩夫韦地、恩替卡韦、泛西洛维、福米韦生、膦甲酸、磷乙酸、更昔洛韦、加德西、伊巴他滨、异丙肌苷、碘苷、咪喹莫特、茚地那韦、肌甙、III型干扰素、II型干扰素、I型干扰素、干扰素、拉米夫定、洛匹那韦、洛韦胺、马拉维若、吗啉胍、奈非那韦、奈维拉平、nexavir、奥塞米韦、喷昔洛韦、帕拉米韦、普来可那立、鬼臼毒素、雷特格韦、利巴韦林、金刚烷乙胺、利托那韦、沙奎那韦、司他夫定、替诺福韦、替诺福韦双索、替拉那韦、三氟尿苷、三协唯、醋胺金刚烷、特鲁瓦达(truvada)、缬昔洛韦、缬更昔洛韦、vicriviroc、阿糖腺苷、长春米定(viramidine)、扎西他滨、扎那米韦或齐多夫定。
实施例
实施例1：人T细胞粘附试验
使用人类T淋巴细胞系HuT 78(ATCC TIB-161)进行T-细胞粘附试验。在PBS中将山羊抗-HuIgG(Fc)稀释至2μg/ml，并在37℃下将96孔板以50μl/孔包被1小时。用PBS洗板并在室温下用溶于PBS的1％BSA封闭1小时。在PBS中将5结构域的ICAM-Ig稀释至100ng/ml，并在4℃下以50μl/孔的量将其加入到板O/N中。以100g对HuT 78细胞进行离心，并在37℃下于5％CO2培养箱中用5mM EDTA处理细胞沉淀约5分钟。在0.14M NaCl，0.02M Hepes，0.2％葡萄糖和0.1mM MnCl2(测定缓冲液)中洗涤细胞并离心。将细胞重新悬浮在测定缓冲液中，达到3.0×106c.ml。在测定缓冲液中将抑制剂稀释至2×终浓度，并在室温下与HuT78细胞预温育30分钟。将100μl/孔的细胞和抑制剂加入到板中并在室温下培养1小时。加入100μl/孔的PBS并将板密封，以100g倒置离心5分钟。将未粘附的细胞从板中轻轻弹出，并将过量的PBS印迹在纸巾上。将60μl/孔的对硝基苯基N-乙酰基-β-D-氨基葡糖苷(0.257g加至100ml柠檬酸盐缓冲液)加入到板中，并在37℃下温育1.5小时。用90μl/孔的50mM甘氨酸/5mM EDTA终止酶反应，并在读板器上读取405nM处的读数。使用Langegren U.(1984).J.Immunol.Methods 57，379-388的对硝基苯基n-乙酰基-β-D-氨基葡糖苷法测量5dICAM-Ig上的HUT78细胞粘附，结果显示在图1中。
实施例2：使用正向形式试验的LFA-1:ICAM-1受体结合试验
通过添加已知量的抑制剂来测定LFA-1:ICAM-1相互作用的竞争性抑制。
将纯化的全长重组人LFA-1蛋白在0.02M Hepes、0.15M NaCl和1mM MnCl2中稀释到2.5μg/ml，96-孔平板(50μl/孔)在4℃下包被过夜。该平板用洗涤缓冲液(0.05％Tween的PBS溶液)洗涤并在室温用1％BSA的0.02M Hepes、0.15M NaCl和1mM MnCl2溶液封闭1小时。洗涤平板。加入在测定缓冲液(1％BSA的0.02M Hepes、0.15M NaCl和1mM MnCl2溶液)中适当稀释的50μl/孔抑制剂，至2X最终浓度，并在室温温育1小时。加入在测定缓冲液中稀释至50ng/ml的50μl/孔纯化重组人5结构域ICAM-Ig并在室温温育2小时。洗涤平板，在室温用山羊抗HuIgG(Fc)-HRP检测结合的ICAM-Ig 1小时。洗涤平板，并在室温用100μl/孔TMB底物显色10-30′。用100μl/孔1MH2PO4中止显色，并在平板读取器上于405nM读数。
实施例3：抗原刺激细胞因子从人外周血单核细胞(PBMC)中释放的体外抑制
评价一种形式的通式I的LFA-1拮抗剂-化合物12-抑制经葡萄球菌肠毒素B(SEB)刺激的人单核细胞(PBMC)中炎性细胞因子释放的能力。在培养液中制备化合物12、瑞巴派特(Rebamipide)(一种粘膜防护剂)和环孢霉素A(CsA)的贮存液，并通过添加培养液以达到所需浓度来制备稀释液。不使用SEB刺激以制备阴性对照。载体(0.25％DMSO/培养液)的SEB刺激用作阳性对照。
解冻在低温贮藏培养基中冷冻的人PBMC，用在生长液中含有10％FBS的RPMI培养液洗涤，并以20,000细胞/孔(含180μl培养液)接种在96孔平板上。在用SEB刺激之前，在存在化合物12、瑞巴派特或CsA下在37℃温育细胞1小时。以1ng/ml添加SEB并在6、16和48小时收获细胞上清液。用Luminex多元试验测定试验上清液中的细胞因子水平。
随着剂量增加，化合物12显示有效抑制炎性细胞因子的释放，特别是T细胞调节细胞因子IL-2和IL-4。该结果在表1、2和3中显示。另外，图1显示各种LFA-1拮抗剂体外抑制IL-2的释放。由化合物12抑制超过50％的细胞因子释放图类似于与CsA对比所见。这种相似性的例外包括IL-3、IL-6和IL-12p40。
表1、IL-2、IFNγ、MIP-1α和TNF-α抑制的EC50浓度
Figure BPA00001275903500751
表2、IL-4、IL-10、IP-10、GM-CSF和MCP-1抑制的EC50浓度
Figure BPA00001275903500761
表3、IL-1α、IL-1β、IL-3、IL-5、IL-6、IL-12p40和IL-13抑制的EC50浓度
Figure BPA00001275903500762
实施例4：LFA-1拮抗剂制剂
一种通式I化合物(化合物12)配制在几种组合物中，用于作为凝胶、洗剂、软膏和溶液给药，以通过改变给药途径给药，包括但不限于局部、经由滴注、气雾剂、透皮贴剂、经由插入、或者口服。
表4、化合物12的凝胶制剂1和2
  制剂1(％w/w)   制剂2(％w/w)
  1％化合物12的A型   1％化合物12的A型
  15％二甲基异山梨醇   15％二甲基异山梨醇
  25％Transcutol   25％Transcutol
  12％己二醇   12％己二醇
  5％丙二醇   5％丙二醇
  0.15％对羟基苯甲酸甲酯   0.15％对羟基苯甲酸甲酯
  0.05％对羟苯甲酸丙酯   0.05％对羟苯甲酸丙酯
  0.01％EDTA   0.01％EDTA
  0.5％Penmulen TR-1   1％羟乙基纤维素
  适量25％三乙醇胺至pH 6.0   适量25％三乙醇胺至pH 4.5
  适量100水   适量100水
表5、化合物12的洗剂3和4
  制剂3(％w/w)   制剂4(％w/w)
  1％A型   1％A型
  13％二甲基异山梨醇   13％二甲基异山梨醇
  20％Transcutol   20％Transcutol
  10％己二醇   10％己二醇
  4％丙二醇   4％丙二醇
  0.15％对羟基苯甲酸甲酯   0.15％对羟基苯甲酸甲酯
  0.05％对羟基苯甲酸丙酯   0.05％对羟基苯甲酸丙酯
  0.01％EDTA   0.01％EDTA
  0.5％卡波普Ultrez 10   0.3％卡波普Ultrez 10
  0.2％Penmulen TR-1   0.2％Penmulen TR-1
  3％肉豆蔻酸异丙酯   2％鲸蜡醇
  5％油醇   5.5％轻质矿物油
  5％白矿脂   5％油酸
  0.02％丁基化羟基甲苯   0.02％丁基化羟基甲苯
  适量pH 6.025％三乙醇胺   适量pH 6.025％三乙醇胺
  适量100水   适量100水
表6、化合物12的软膏剂5和6
  制剂5(％w/w)   制剂6(％w/w)
  1％A型   1％A型
  15％PEG 400   10％二甲基异山梨醇
  0.02％丁基化羟基甲苯   0.02％丁基化羟基甲苯
  2％Span 80   2％Span 80
  10％白蜡   10％白蜡
  71.98％白矿脂   76.98％白矿脂
表7、化合物12的溶液剂7、8和9
  制剂7(％w/w)   制剂8(％w/w)   制剂9(％w/w)
  1％A型   1％A型   1％A型
  15％二甲基异山梨醇   15％二甲基异山梨醇   99％二甲亚砜
  25％Transcutol   25％Transcutol
  12％己二醇   12％己二醇
  5％丙二醇   5％丙二醇
  适量25％三乙醇胺至pH 4.5   适量25％三乙醇胺至pH 6.0
  适量100水   适量100水
表8、化合物12的溶液剂10、11、12、13和14
Figure BPA00001275903500781
表9、化合物12的溶液剂15
  制剂
  1ml10％W/W化合物12水溶液，加0.158mmol碳酸氢钠
  9ml PBS
可以以含有0.1％、1.0％、和5.0％(w/w)的活性药物成分(API)浓度(pH7.0)的无菌、透明、无色液体溶液提供化合物12。每mL 1％溶液含有10mg活性成分。除化合物12，药物产品溶液的其他成分，它们的功能和它们的药典级可以包括对羟基苯甲酸丙酯(防腐剂；国家处方集(NF))、对羟基苯甲酸甲酯(防腐剂，NF)、EDTA(抗氧化剂，美国药典(USP))、碳酸氢钠(缓冲剂，USP)、磷酸二氢钠(缓冲剂，USP)、磷酸氢二钠(缓冲剂，USP)和无菌水(稀释剂，USP)。所有赋形剂可以是药典级和非人或者非动物来源的。
配制的药物产品溶液可以在无菌条件下包装到配备有滴嘴和保护帽的无菌7.0ml高密度聚乙烯(HDPE)瓶中，所述滴嘴以每滴体积约0.35μL递送。滴瓶的可以具有40μL的滴嘴。可以将非防腐的研究药物(制剂中没有对羟苯甲酸甲酯或者对羟苯甲酸丙酯)以0.5ml单位剂量在使用吹瓶-灌装-封口法制备的低密度聚乙烯(LDPE)容器中提供，并贮存在铝箔小袋中。
药物溶液可以在冷藏(2-8℃)贮藏。药物在5℃和25℃下的稳定性可以为9个月或更长。
实施例5：通式I化合物局部施用后的体外经皮吸收
使用体内经皮吸收试验法、使用自Skelly等人，PharmaceuticalResearch 1987 4(3)：265-276，“FDA and AAPS Report of the Workshop onPrinciples and Practices of In-Vitro Percutaneous Penetration Studies：Relevance to Bioavailability and Bioequivalence”改变的方法评价体内局部施用后的生物利用度。
制剂1-9以单一临床相应剂量5mg/cm2应用于用皮刀从单个供体切除下来的人皮肤组织，所述剂量等于30-35μg剂量。组织厚度范围为0.023到0.039英寸(0.584到0.991mm)，厚度的平均值+/-标准差为0.030+/-0.004英寸(0.773+/-0.111mm)，变异系数为14.4％。将组织样品在Bronaugh流过扩散池中固定。使用循环水浴使扩散池保持在32℃恒温。扩散池的标称扩散面积为0.64cm2。使用含有0.1％叠氮钠和4％牛血清白蛋白的pH7.4的PBS作为固定组织下的受体相。新鲜的受体相以标称1.0ml/hr的流速在组织下持续泵送，并以6小时间隔收集。收集受体相用于分析。
组织样品与制剂1-9接触24小时。通过用CuDerm D-Squame剥离盘粘带剥离除去在该时间点留在角质层上的过量制剂。丢弃剥离带。通过钝器解剖分离表皮和真皮。分析表皮、真皮和受体相的化合物12含量。结果列于表10中。
除了制剂9(其包含99％DMSO)，所有制剂的化合物12的组织渗透水平(受体相)低于定量极限-0.54ng/ml(等于施用剂量的0.013％)。相反，制剂9提供施用剂量的1.4％，在24小时的接触期间内渗透穿过所有的皮肤组织层。
化合物12在24小时的接触时期内的表皮沉积非常高，与大部分保持在表皮上层的施用剂量一致。记录在表10中的水平是从小体积样品中获得的，其不能重复测定，因此被认为是低估了存在于表皮中的药物量。
真皮的分析数据落入为化合物12建立的线性范围，并且是定量的。接触24小时后化合物12的真皮沉积为施用剂量的0.66％(制剂6，0.258μg/cm2)到4.4％(制剂7，34.3μg/cm2)。因此计算得到制剂1到9中化合物12在真皮中的浓度(633.5g/摩尔)为6.7μM(制剂6)或更大(即，制剂7提供真皮中浓度为54.1μM)。这些浓度大大超过化合物12抑制炎性细胞因子释放的半数最大效果的体外EC50浓度(如实施例3所示)。因此这些结果预示着含有1％W/W化合物12的多种制剂提供在体内抑制细胞因子释放的治疗有效水平的能力。
表10、局部接触24小时后，化合物12的累积的受体相和组织水平
Figure BPA00001275903500801
Figure BPA00001275903500811
1、标准差
2、变异系数百分比
实施例6：化合物12用于治疗干燥性角膜结膜炎(KCS)的药理学活性
满足如下标准的狗加入该研究：大于一岁、Schimer泪液试验(STT)小于10mm润湿/分钟、双侧累及、和至少一种以下临床征象：眼睑痉挛、结膜炎充血、暴露性角膜病(不规则表面)、角膜色素沉着、角膜新血管形成或旧脓性粘液溢、无先天性KCS、无外伤性KCS、毒性KCS、以及无面神经麻痹。如果狗在之前六个月内用局部CsA或藤霉素治疗，则它们不参与。
将一滴35μl的化合物12的1％溶液(制剂15，0.35mg/眼)给药于狗，每只患眼每天三次，每日剂量之间间隔约4小时(±1小时)，给药12周。在第12周停止给药化合物12后，再通过一天三次给药商业可得的0.2％软膏来给药CsA，共四周。
在初诊期间，以及在研究十六周内的五次诊视期间(第2、4、8、12和16周)，对动物进行一次眼睛检查。最后一次OE在化合物12的最后剂量给药后的约4周以及CsA治疗的一个月后。用间接检眼镜检查双眼的附件和前面部分。当需要时，用瞳孔放大剂扩大眼睛，以评估晶状体和眼底，包括视网膜。用改良的McDonald-Shaddock打分系统进行评估，连同各间隔的裂隙灯眼睛检查。
在初诊期间和在第2、4、8、12和16周的五次随访期间用STT带测量泪液。在各间隔每只眼睛使用一条STT带纸。在各收集间隔，折叠STT纸并将其置于下方盲管(inferior cul de sac)中60秒。记录该纸的凹口下的润湿长度(mm)。
在初诊和随后的每次检查中进行荧光素和玫瑰红染色。使用Tono-Pet
Figure BPA00001275903500821
连同每次OEs进行眼内压测量(IOPs)。在每次OE期间在染色(用荧光素和玫瑰红)前后获取数字眼睛图象。
在初始(预治疗)观察时和第12周进行结膜活组织检查。第二次活检组织比初始活检组织更侧向(约1mm)。适当准备后，从各眼睛的腹侧穹窿取出小的结膜活组织。
七只狗完成了研究；其中两只狗仅研究了一只眼睛。结果列于表11和12中。总的说来，在用化合物12治疗期间，观察到OD(右眼)STT平均提高3.3mm和OS(左眼)STT平均提高4.5mm。所有12只眼睛的结果显示平均提高4mm。使用1-12周内每只狗的每只眼睛的STT值的最大变化进行最大值-最小值分析，如表13所示。该计算产生全部眼睛STT的最大改变总数为72mm，其被12除(分析中KCS眼睛数)，得到6.0mm的平均提高。一些狗的其他临床征象得到改善，例如减少的脓性粘液溢或结膜红斑。给药化合物12之前和之后采集的活检组织的组织病理学评估显示淋巴细胞累积的减少。图2说明了取自狗#1的样品中的该现象。CsA给药的随后四周，没有观察到明显的额外优点。
表11、Schirmer泪液试验结果(OD)
 狗ID   第1周   第2周   第4周   第8周   第12周   第16周
 1   15   18   12   16   13   12
 2   0   2   0   8   8   8
 3   6   11   5   7   7   8
 4   5   11   10   7   13   8
 5   8   11   10   11   9   22**
 6   8   10   15   17   16   18
 7   6   2   2   1   0   12
 平均值*   5.5   7.8   7.0   8.5   8.8   11.7
*狗#1不包括在OD的平均值或最大值-最小值分析中，因为该动物的眼睛中没有KCS。
**狗#5的数据在该天是反常的，因此不包括在平均值或最大值-最小值分析中。
表12、Schirmer泪液试验结果(OS)
 狗ID   第1周   第2周   第4周   第8周   第12周   第16周
 1   0   0   0   0   3   3
 2   0   0   0   2   7   5
 3   9   14   7   17   15   16
 4   0   3   5   6   4   7
 5   7   8   14   8   8   19
 6   9   4   14   8   8   17
 7   18   NA   NA   19   18   18
 平均*   4.2   4.8   6.7   6.5   8.7   11.0
*狗#7不包括在OS的平均或最大-最小分析中，因为该动物的眼睛中没有KCS。
表13、化合物12给药第1-12周的最大值-最小值分析
Figure BPA00001275903500831
图3说明第2、4、8和12周Schirmer试验得分的平均变化。在第12周观察到相对于预治疗的Schirmer试验得分的显著提高。
图4说明了用1％化合物12(TID)治疗的第2、4、8和12周Schirmer试验得分大于10mm的眼睛的百分比。化合物12犬KCS研究结果超过人CsA数据。丽眼达(restasis)批准的依据是将Schirmer试验得分提高至大于10m。丽眼达治疗导致15％的眼睛的Schirmer试验得分大于10mm。
图5说明了用1％化合物12(tid)或2％CsA(bid)治疗的第2、4、12、16和26周Schirmer试验得分提高大于4mm的眼睛的百分比(使用历史CsA数据；Morgan et al.，J.Am.Vet.Med.Assoc.，199，1043-1046(1991))。化合物12时间过程与历史CsA数据类似。
总之，犬KCS研究显示化合物12给药导致在2-8周内Schirmer试验得分迅速提高、组织学改善和快速的抗炎效果。
实施例7：T细胞增殖试验：
该试验为由激活作用导致的淋巴细胞增殖的体外模型，其由与抗原呈递细胞相互作用后，T细胞受体和LFA-1的缔合而被诱发(Springer，Nature 346：425(1990))。
在4℃下用溶于无菌PBS中的50μl的2μg/ml山羊抗人Fc(Caltag H10700)和50μl的0.07μg/ml抗CD3单克隆抗体(Immunotech 0178)预包被微量滴定板(经认证的Nunc 96孔ELISA)过夜。第二天吸出包被溶液。然后用PBS洗板2次，在37℃下加入100μl的17ng/ml 5d-ICAM-Ig并保持4小时。在加入CD4+T细胞之前用PBS洗板2次。从取自健康献血者的肝素化全血中分离外周血淋巴细胞。一种可选方法是通过白细胞分离法(leukophoresis)从健康的献血者获得全血。用盐水将血液1∶1稀释、分层并在LSM(每100ml中含有6.2g Ficoll和9.4g泛影葡胺钠)(Organon Technica，NJ)上以2500×g离心30分钟。使用骨髓细胞消耗试剂法消耗单核细胞(Myeloclear，Labs，Hornby，Ontario，Canada)。将PBL重新悬浮在90％的热灭活胎牛血清和10％的DMSO中，等分试样并贮存在液氮中。融化后，将细胞重新悬浮在RPMI 1640培养基中(Gibco，GrandIsland，NY)，所述培养基中补充了10％的热灭活胎牛血清(Intergen，Purchase，NY)、1mM丙酮酸钠、3mM L-谷氨酰胺、1mM非必需氨基酸、500μg/ml青霉素、50μg/ml链霉素、50μg/ml庆大霉素(Gibco)。
通过负选择法对CD4+T细胞进行纯化(人CD4细胞回收柱试剂盒#CLl10-5精确的)。37℃和5％CO2下在100ml补充了10％的热灭活FBS(Intergen)、0.1mM非必需氨基酸、1nM丙酮酸钠、100单位/ml青霉素、100μg/ml链霉素、50μg/ml庆大霉素、10mM Hepes和2mM谷氨酰胺的培养基(RPMI 1640(Gibco)中对100,000个纯化的CD4+T细胞(90％纯度)/微量滴定板孔进行72小时培养。在培养开始时将抑制剂加入到板中。在收集细胞之前的最后6小时内加入1μCi/孔滴定的胸苷，用以测量这些培养物的增殖响应。通过液体闪烁计数来测量放射性标记的掺入(Packard 96孔收集器和计数器)。结果用计数/分钟(cpm)表达。
实施例8：体外混合淋巴细胞培养模型
混合淋巴细胞培养模型为体外移植模型(A.J.Cunningham，″Understanding Immunology，Transplantation Immunology″157-159页(1978))，用其考察各种LFA-1拮抗剂在人类混合淋巴细胞反应的增殖和效应方面的影响。
细胞的分离：从取自健康献血者的肝素化全血中分离出外周血单核细胞(PBMC)。用盐水将血液1∶1稀释、分层并在LSM(每100ml中含有6.2g Ficoll和9.4g泛影葡胺钠)(Organon Technica，NJ)上以×2500g离心30分钟。一种可选方法是通过白细胞分离法从健康的献血者获得全血。按照上述方式分离PBMC，将其重新悬浮在90％的热灭活胎牛血清和10％的DMSO中，等分试样并贮存在液氮中。融化后，将细胞重新悬浮在RPMI 1640培养基中(Gibco，GrandIsland，NY)，所述培养基中补充了10％的热灭活胎牛血清(Intergen，Purchase，NY)、1mM的丙酮酸钠、3mM的L-谷氨酰胺、1mM的非必需氨基酸、500μg/ml青霉素、50μg/ml链霉素、50μg/ml庆大霉素(Gibco)。
混合淋巴细胞反应(MLR)：在96孔平底微量滴定板内建立单向人混合淋巴细胞培养。在200μl的完全培养基中，1.5×105个响应PBMC和等数量的辐射的(3000拉得，3分钟，52秒)同种异体刺激PBMS进行共培养。在培养开始时加入LFA-1拮抗剂。在37℃下，在5％的CO2中将培养物培养6天，然后用1μCi/孔的3H-胸苷(6.7Ci/mmol，NEN，Boston，MA)脉冲6小时。在Packard细胞收集器(Packard，Canberra，加拿大)中收集培养物。用液体闪烁计数法测量[3H]TdR的掺入。结果表示为每分钟的计数(cpm)。
实施例9：使用Jurkat细胞的T细胞粘附试验
该研究的目的是评价化合物12对于体外接触后Jurkat细胞粘附到ICAM-1上的抗粘附性能。
在DMSO/水(1∶1)中制备化合物12和阳性对照的原液，并稀释至试验培养基中，通过添加试验培养基以达到所需浓度制得随后的稀释液。一种报导的LFA-1拮抗剂用作阳性对照。
在室温下用8μM的生长培养基中的BCECF-AM(2’，7’-二(2-羧基乙基)-5-(和-6)-羧基荧光素)溶液标记Jurkat细胞15分钟。70μL的试验培养基中的化合物12或阳性对照与标记的细胞在37℃下在96孔平板每孔70μL的试验培养基中温育30分钟，每孔中有500,000个细胞。在96孔平板的孔中存在化合物12或阳性对照的情况下在37℃下静置100μL这种荧光标记的Jurkat细胞悬液1小时，所述平板用表达为Fc嵌合体的重组人ICAM-1包被。通过洗涤和在100g离心1分钟除去非粘附细胞。在荧光读板器上确定粘附细胞的粘附荧光单位。该试验品，化合物12，随着剂量增加显示抑制Jurkat细胞的粘附。该试验中化合物12的剂量反应曲线和IC50与已知的直接竞争性LFA-1拮抗剂相当。这证明了化合物12是LFA-1/ICAM-1结合的拮抗剂。
实施例10：临床前和临床安全性和耐受性：pk(药代动力学)和全身的和局部分布结果
A：人类中的效果
1、1期临床试验化合物12
在4个组(0.1％、0.3％、1％和5％化合物12剂量强度)中，在28个健康成年人(每组7个受试者：5个接受化合物12眼用溶液，2个接受安慰剂溶液)中进行逐步升高局部化合物12眼用溶液的剂量的1期单中心随机化、预期的、双盲的、安慰剂控制的研究。该试验的目的是测量安全性和耐受性，以及泪液和血浆中的药代动力学。给药日程(OU：每眼(OculusUterque)(每眼或两眼))被分成3个周期，每个周期由72个小时冲洗间隔分隔：一次/天×1天(一只眼睛用药物；另一只眼睛用安慰剂)，两次/天×10天，和三次/天×10天，14天观察。筛选时以及在各周期的开始和结束时评价眼睛的裂隙灯检查、BCVA(最佳矫正视敏度)、STTs(Schirmer泪液试验)、TBUT(泪液破裂时间)、IOP(眼内压)。对每一组，由安全委员会审查双盲安全性数据，之后才允许下一组中剂量逐步升级。在1148个总课题研究天数(41研究天/受试者)内总共对56只眼睛给予2856个剂量(102滴/受试者)。所有组中的所有受试者完成了该研究，且没有遗漏研究药物剂量。
在任何剂量强度或任何剂量方案都没有发生被认为与化合物12眼用溶液给药有关的死亡、中止、严重或者重度的眼睛或非眼睛AE(副作用)。
血压、心率、呼吸率、体温、体重和EKG结果在整个试验中处于正常范围内。
在整个研究期间、剂量强度或日程内，所有血液学结果以及除了一项血清化学之外的所有血清化学结果在正常范围之内，没有测量到可观察到的与研究药物相关的倾向。总淋巴细胞计数、CD3、CD4和CD8细胞计数在正常范围之内，没有抑制淋巴细胞或嗜中性粒细胞的证据。整个试验中的尿分析结果不显著。
在整个研究期间、剂量强度或日程内，血清化学结果在正常范围之内，没有测量到可观察到的与研究药物相关的倾向。
在研究期间没有发生严重或重度的眼睛或非眼睛副作用：分别有38个眼睛的(N＝11个受试者)和21个非眼睛的(N＝11受试者)副作用。当按照剂量组分析或按照研究周期分析时，没有频繁眼睛副作用的倾向。在BCVA、裂隙灯活组织显微镜检查、STT、TBUT、或IOP评价中没有发现明显的安全性倾向，也不存在眼睛感染或局部免疫抑制的证据。没有局部眼睛刺激或者感染的证据。
当按照剂量组或按照研究周期分析时，没有频繁非眼睛副作用的倾向。在生命指征、EKG、实验室研究(化学、肝功能、血检查)上没有发现明显的安全性倾向；不存在CD3、CD4或CD8T细胞抑制、骨髓抑制的证据，或感染增加的临床证据。
2、泪液和血浆中的药代动力学
在各给药期的基线和预定的间隔内得到血浆和泪液样品，以表征眼睛给药后化合物12眼用溶液的药代动力学(PK)。
a.血浆PK分析
在第1、5、14、18和27天的给药前、给药后的5和30分钟、以及给药后1、4、8、24小时得到用于血浆化合物12分析的样品。也在第1、14和27天的给药后48小时得到样品，在研究结束时的随访中收集单一血样。使用验证的LC/MS/MS(液相色谱串联质谱法)法测定化合物12的血浆浓度，LLOQ(定量下限)为0.500ng/mL。
b.血浆PK结果
在单剂量和多剂量给药0.1％和0.3化合物12剂量强度后的所有时间点、以及在接受1％化合物12剂量强度的5个受试者中的3个中，化合物12血浆浓度是BLOQ(低于定量的测定下限，＜0.500ng/mL)。在接受1％化合物12的一个受试者的血浆中在第14和27天的最早时间点(给药后5分钟)观察到可测量的化合物12水平，但在随后的时间点是BLOQ。在整个试验中给药5％剂量强度后更频繁地观察到可测量水平，虽然该水平非常低(＜3ng/mL)，且在给药后的第一个小时内一般检测不到(图6)。已经观察到IC50值为2nM的体外细胞试验(细胞粘附和SEBIL-2释放)中的LFA-1水平为约0.1nM。血中LFA-1水平为约10nM。化合物12抑制SEB刺激的人全血中IL-2释放的IC50是69nM。需要化合物12水平大于LFA-1水平，以抑制白细胞功能。因此，预期化合物12眼用滴液不明显抑制全身白细胞。
在以任何剂量强度任何研究周期内给药化合物12眼用溶液后，血浆化合物12半衰期或接触参数不能精确评价，因为化合物12血浆浓度在剂量后1到4小时内不可检测或迅速衰减BLOQ。
c.泪液PK分析
在1期研究的第1、5、14、18和27天的给药前、给药后的30分钟、以及给药后1、4、8和24小时，用Schirmer泪液试纸条收集化合物12的泪液样品。在第1、14和27天后得到给药后48小时样品。使用验证的LC/MS/MS法测定泪液化合物12浓度，LLOQ为0.500ng/mL。
d.泪液PK结果
在给药第一天观察到泪液AUC(浓度-时间曲线下面积)和Cmax(观察到的最大血浆浓度)值的剂量相关增加，其一般在整个试验的评价的时间点内保持。BID(一天两次)和TID(一天三次)给药相对于单一剂量产生较高的Cmax和AUC值，但是BID和TID剂量日程之间没有显著的接触差异。有明显的证据证明化合物12接触处于预期治疗剂量范围内，且多次眼睛剂量给药后没有明显的蓄积证据。
图7说明1％化合物12的泪液Cmin水平。图8说明剂量与化合物12的Cmax泪液水平成正比。图9说明剂量与化合物12QD AUC和泪液中的Cmax成正比。
总的说来，通过局部眼睛滴注以直到5％TID的剂量强度将化合物12眼用溶液给药于健康成年人受试者似乎是安全和良好耐受的，且适合于进一步观察患有变应性结膜炎或干眼症继发的眼睛炎症的受试者。
B.非临床研究，化合物12探索性新药研究(IND)非临床程序(安全药理学和毒理学研究)
1.临床前毒理学制剂
表14
Figure BPA00001275903500891
2.安全性药理学
在稳定转染的肾HEK293细胞中进行评价化合物12对hERG通道电流(IKr的替代，快速活化、延迟的整流心脏钾电流)的影响的体外研究。化合物12的单剂量是20M、100M、200M和600M。化合物12对电流的影响是微弱的(IC50为478M)，指示局部眼睛给药后观察到低的全身接触，IKr通道抑制的风险最小。
经由静脉内团注给药化合物12后，评价其在装有遥测仪器的有意识的狗(比格犬)中的心血管效果。没有观察到对心电图或血液动力学参数的影响。
当经由静脉内团注给药单剂量化合物12后，评价其在大鼠中对CNS的影响。对于给予10.0mg/kg的动物，在给药后的1分钟到6小时内的各时间点在6个动物中的2个中观察到短暂的瞳孔缩小。没有观察到对任何其他参数的影响。
单剂静脉内团注给药化合物12后，使用头外置体积描记术(head-outplethysomograph)评价大鼠的呼吸机能(潮气量、呼吸率和分钟通气量)。在任何剂量都没有观察到呼吸机能或副作用的不利变化。
3.基因毒性研究：化合物12在体外Ames染色体畸变试验或体内大鼠小核研究中显示无影响。
a.体外Ames细菌性回复突变试验
在Ames试验中，化合物12在存在或不存在微粒体(S9)酶的情况下不引起任何试验菌株的每平板回复子平均数量增加。因此，判断化合物12不引起突变。
b.体外CHO细胞中的染色体畸变试验
在20小时共培养后，在有和没有外来代谢活化的情况下，在培养的中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中评价化合物12诱导染色体畸变的能力。认为化合物12对于在有和没有代谢活化的情况下诱导CHO细胞的结构性染色体畸变是阴性的，除非在无代谢活化的情况下给药单一毒性剂量(3小时治疗；3500μg/mL)。由于细胞毒性，该反应的生物相关性是不明确的。
c.体内小鼠骨髓小核试验
在CD-
Figure BPA00001275903500911
(ICR)BR小鼠中通过评价它们的骨髓来评估重复静脉内给药化合物12诱导体内致染色体断裂活性和/或破坏有丝分裂器的能力，所述评估通过检测多染性红细胞(PCE)中的小核进行。基于该研究的结果，认为化合物12在小鼠骨髓小核试验中是阴性的。
4.急性毒性研究：对于大鼠的单剂量静脉内注射，没有可观察到的副作用的水平(NOAEL)是10mg/kg IV。对于狗中逐步升高的单剂量静脉内注射和具有TK(毒性动力学)的7天重复剂量，NOAEL是10mg/kg IV。对于兔子的单剂量眼睛耐受性，NOAEL是3.5mg/眼睛/每天3次(10％)。
5.重复剂量毒性研究：在具有2周恢复的狗的4周静脉内毒性研究中，NOAEL是10mg/kg。在具有4周恢复的大鼠的13周静脉内毒性研究中，NOAEL是30mg/kg。在具有4周恢复的兔子的13周眼毒性研究中，NOAEL是1.05mg/眼睛/每天3次(3％)。在具有4周恢复的狗的13周眼毒性研究中，NOAEL是1.05mg/眼睛/每天3次(3％)。
6.ADME研究
化合物12的吸收、分布、代谢和排泄(ADME)通过在大鼠、兔子和狗中进行的研究进行表征，使用两种给药途径：静脉内和局部眼睛给药，临床给药途径。也进行体外肝细胞研究。
通过串联质谱法评价化合物12在血浆、泪液和玻璃体液样品中的水平。一些体内试验使用[14C]-化合物12来测定[14C]-化合物12-衍生的放射活性的PK和吸收、分布和排泄程度。另外，在血浆、尿和粪便中测定[14C]-化合物12的代谢物的代谢曲线和确认。
使用[14C]-化合物12在有色的(Long-Evans系)和白化的(SpragueDawley系)大鼠中进行单剂量眼睛和IV剂量给药ADME研究。进行定量的整体放射线照相术评价。
雄性和雌性大鼠接受单剂量1mg/眼睛或10mg/kg IV的[14C]-化合物12。眼睛或IV给药后的主要排泄途径是粪便，在给药后0到168小时内占到给药的放射性的约60％(眼睛给药)和95％(IV给药)。尿排泄占到高达给药放射性的2％。在眼睛或IV给药后的胃肠道组织中测得[14C]-化合物12的最高组织水平。对于眼睛给药，也在眼睛组织和排泄物中测得[14C]-化合物12，指示给药的剂量从眼睛经过鼻甲骨，进入食管并最后通过胃肠道排泄。这些数据显示经眼、鼻或者口服给药化合物12将导致最后通过胃肠道排泄。作为滴眼剂给药的大部分药物剂量局部分布至眼周区域，并且更有意思的是经鼻甲骨进入胃肠道。观察到药物首先积累在胃肠道的上皮中，然后经由门静脉进入肝脏，其中药物被排除出肝脏，并重新递送回到下胃肠道。在全身分布中几乎没有或没有观察到药物。因此，化合物12经由气雾剂或滴剂给药至鼻、或经由口服可以通过肝脏清除提供类似的直接局部递送至上胃肠道上皮中，和局部递送至下胃肠道。在这两种情况下，几乎没有或没有药物的全身递送。
局部眼睛给药[14C]-化合物12到雄性Sprague Dawley(白化病)大鼠后，放射性向组织内的分配在第一时间点(给药后0.5小时)受限，其通常和胃肠道、代谢相关组织和眼睛有关。图10是[14C]-化合物12(1mg/眼)单次局部眼睛给药0.5小时后雄性Sprague Dawley动物的全身放射自显影照片。最高浓度的放射性在该时间点在食道内容物、鼻甲骨和小肠内容物中确定，浓度分别为399000、352000和349000ng当量的[14C]-化合物12/g。然而，应该注意到，这些组织中的测量值超过量化的上限，因此应该慎重说明。高水平的放射性也在食道和胃内含物中确定。在该时间点检测眼睛中的放射性，浓度18100ng当量的[14C]-化合物12/g。低水平的放射性也与肝(272ng当量的[14C]-化合物12/g)、肾(151ng当量的[14C]-化合物12/g)和葡萄膜(9330ng当量的[14C]-化合物12/g)有关。
眼睛和晶状体中的放射性浓度在给药后2小时大大下降；在晶状体中的水平为BLQ。食道和食道内容物中的放射性浓度也在给药后2小时下降约50和100倍。图11是[14C]-化合物12(1mg/眼)单次局部眼睛给药2小时后雄性Sprague Dawley动物的全身放射自显影照片。给药后8小时，所有组织中的放射性水平下降；然而，高浓度与大肠内容物(133000ng当量的[14C]-化合物12/g)和盲肠内容物(57600ng当量的[14C]-化合物12/g)有关，指示放射性通过胃肠道。图12是[14C]-化合物12(1mg/眼)单次局部眼睛给药8小时后雄性Sprague Dawley动物的全身放射自显影照片。
给药后12小时放射性浓度进一步减少，最大浓度与盲肠和大肠的内容物有关。葡萄膜中测定的浓度在该时间点增加至610ng当量的[14C]-化合物12/g。图13是[14C]-化合物12(1mg/眼睛)单次局部眼睛给药13小时后雄性Sprague Dawley动物的全身放射自显影照片。
给药后24小时盲肠内容物中(5870ng当量的[14C]-化合物12/g)和大肠内容物中(18000ng当量的[14C]-化合物12/g)的放射性浓度最大；小肠和胃内容物中也存在低水平。图14是[14C]-化合物12(1mg/眼睛)单次局部眼睛给药24小时后雄性Sprague Dawley动物的全身放射自显影照片。除了非着色皮肤和肝，所有其他组织中不能检测到放射性。
在眼睛给药后的所有时间点以及直到IV剂量后2小时，在玻璃体液中检测到低水平的[14C]-化合物12(大鼠眼睛给药参见示意性图15以及表15)。
表15、化合物12浓度，ng当量的[14C]-化合物12/g组织。
 身体区域   给药后0.5小时   给药后4.0小时
 眼房水   1770   116
 结膜(眼球)   31500   4480
 结膜(眼睑)   26300   21830
 角膜   17150   1346
 虹膜睫状体   17550   500
 晶状体   38.8   9.69
 视神经   796   0
 视网膜和脉络膜(含有RPE)   510   46.7
 巩膜   2750   387
 玻璃体液   1330   183
有色和白化病大鼠中的[14C]-化合物12的组织分布是相当的，显示化合物12没有优先与黑色素结合。雌性和雄性大鼠的结果没有明显差异。而且，在局部眼睛或IV剂量给药[14C]-化合物12后直到168小时，在红细胞中没有观察到源于[14C]-化合物12的放射性的优先分布，也没有从所收集的混合血浆、尿和粪便匀浆中分离出代谢物。
用[14C]-化合物12使用相同给药途径在雌性和雄性狗中进行类似的单剂量研究(3mg眼或3mg/狗)，显示与大鼠相似的排泄、分布和代谢图。眼睛给药后，在眼前组织中检测到[14C]-化合物12的最高平均水平(参见图16)。在眼后组织中检测到低水平，指示发生了向眼睛内的吸收。混合血浆、尿和粪便匀浆样品的代谢图与在大鼠中观察到的代谢图相似，直到给药后168小时，没有检测到代谢物。雌性和雄性狗的结果没有观察到差异。
16小时中，结膜/角膜中的化合物12水平大于1微摩尔/100纳摩尔(狗/大鼠)。
a.单次和重复IV给药后化合物12的药代动力学
大鼠和狗的单次IV给药后随时间变化的化合物12血浆浓度分别显示于图17和18。在两种动物中单次IV团注给药后化合物12的血浆浓度以预期的指数方式下降。
在化合物12以0.2至30.0mg/kg剂量单次IV剂量给药至大鼠后，或以最高30mg/kg的单一剂量以及3或10mg/kg的7个每天剂量给药至狗后，使用标准无房室法测得的血浆PK参数显示于表16中(大鼠)。两种动物的PK结果显示化合物12的极高的清除率(大鼠和狗的肝血流量分别为～3.3L/hr/kg和1.9L/hr/kg；(Davies，1993，PharmRes)。单次IV剂量后，大鼠PK数据显示高分布体积，和中等的半衰期，而IV给药至狗后，观察到低分布体积和较短的药物半衰期。每日给药化合物12，给药7天后在血浆中没有化合物12的明显积聚，因为研究第1天测得的血浆化合物12的Cmax和AUC0-n值接近于研究第7天测得的那些值。
表16、单次IV团注给药化合物12后大鼠的血浆PK参数概要3
Figure BPA00001275903500941
1观察到的化合物12最大血浆浓度，其由平均浓度对时间的曲线估计。
2剂量间隔期间的血浆化合物12AUC0-n，其由平均浓度对时间的曲线估计。
3由化合物12平均血浆浓度对时间的曲线估计。
4来自大鼠安全性药理学研究。
在较长期的重复剂量研究中，狗和大鼠接受每天IV团注剂量3、10或30mg/kg/天，分别给药4和13周。如7天狗研究所见，化合物12血浆浓度以预期的、指数方式下降，没有化合物12在血浆中积聚的证据。在3mg/kg到30mg/kg的剂量范围内，化合物12在狗中的血浆清除率、分布容积和半衰期是剂量依赖的。在大鼠中，血浆化合物12接触数据提示每天10到30mg/kg的IV剂量给药后化合物12的非线性分布，且在第13周意外积聚(表17)。
表17：每日IV团注剂量13周后大鼠中的血浆化合物12接触参数3
Figure BPA00001275903500951
1剂量间隔期间观察到的化合物12最大血浆浓度。
2剂量间隔期间化合物12的血浆AUC0-n。
3由化合物12平均血浆浓度对时间的曲线估计，每一时间点n＝6只大鼠(3雄3雌)。
b.单次和重复眼睛给药后化合物12的药代动力学
单次局部眼睛滴注0.1、1.0或3.0％剂量强度的化合物12眼用溶液(分别为0.105、0.35和1.05mg/眼)后，化合物12的平均泪液浓度以剂量相关方式上升，在给药后的30分钟内达到最大值，并在4小时后返回基线。通常化合物12的泪液Cmax和AUC0-n随着剂量的增加而增加。图19说明化合物12的剂量与狗泪液中的PK(AUC)成正比。例如，分别以0.105、0.35和1.05mg/眼给药的兔子右眼的平均泪液Cmax值是34,014ng/mL、21460ng/mL和313,906ng/mL。对于相同剂量组，右眼中的平均泪液AUC分别是18864hr x ng/mL、18931hrx ng/mL和182978hr x ng/mL。
局部眼睛滴注后，化合物12血浆浓度升高，因为药物从眼睛施用位置移入血浆循环。局部眼睛给药后30分钟，在狗和兔子的血浆中检测到剂量相关量的化合物12。化合物12的血浆浓度在约4小时内从给药后约0.25小时测得的最大值迅速下降至基线水平，这可能由于如IV给药研究中所见的化合物12的高血浆清除率。在0.105、0.35和1.05mg/眼/剂量组中，血浆Cmax(平均值±SD)值分别是11.7±8.80ng/mL、13.1±2.12ng/mL和38.9±19.7ng/mL，以及AUC0-n(平均值±SD)值分别是5.19±5.39hr x ng/mL、7.35±1.52hr x ng/mL和22.9±10.1hr x ng/mL。
在兔子和狗中进行的重复剂量研究中，以与13周单剂量研究相同的剂量通过两侧眼睛滴注TID施用化合物12眼用溶液。在狗的实验性研究中，以3.5mg/眼(10％剂量强度)给药3天。在兔子和狗中，化合物12在泪液样品中的Cmax和AUC0-n随着升高的剂量而如期升高。Cmax和AUC0-n数据显示，在TID滴注期间，化合物12在狗泪液中积聚，但其后没有持续的积聚。兔子研究中观察到类似的模式。在兔子和狗中TID眼睛给药后13周测得的典型泪液浓度对时间的曲线分别显示在图20和21(左眼、TID，间隔约4小时)。TK(毒性动力学)分析显示当眼睛与足够的化合物12接触，整天内泪液水平超过1μM(600ng/mL)。图22是单剂量局部滴注后，兔子左右眼内的化合物12的平均泪液浓度。
在13周兔子和狗研究中，在处死动物(末期和恢复期处死)获得的样品的玻璃状液中没有检测到化合物12。在以3.5mg/眼(10％)以及从BLOQ到18ng/mL范围TID给药三天后，在狗的玻璃状液中观察到可变水平的化合物12。
非临床研究显示，大约6.9到32％的化合物12眼睛剂量从局部眼睛滴注位置吸收入体循环中，但该全身可利用性评价以有限的可用数据为基础，其包括为静脉内剂量的1/100的眼睛剂量。在眼睛滴注后，在动物内观察到低的与药物的全身血浆接触。重要的是，化合物12在这些物种中的血浆清除率高，这指示被吸收的化合物12有效地从体循环中除去，因此有助于最小化全身接触。
来自所有非临床物种的PK曲线支持高达每天三次、持续至少13周的临床剂量局部眼睛滴注方案。
c.在狗-PK中局部给药的化合物12的实验性眼睛耐受性
进行在狗-PK中局部给药的化合物12的实验性眼睛耐受性。用35μL的化合物12 TID(0、4、8小时)给药于动物。在第1-14天给药1％溶液；在第17-21天给药3％溶液，以及在第24-27天给药10％溶液。泪液/眼周组织中的化合物12谷水平比T细胞粘附/IL-2释放的IC50高1000倍。化合物12在高达10％强度给药3剂/天时是安全的和良好耐受的。眼睛滴注后在泪液(30分钟-16小时)和血浆(30分钟)中检测到化合物12浓度的剂量依赖性增加。化合物12的玻璃体浓度大于低浓度的1000倍。
C.皮肤
1.化合物12临床前皮肤研究
化合物12在水/乙二醇/卡必醇(transcutol)溶液中的溶解度为2％(w/w)，在乙醇/乙二醇/卡必醇溶液中的溶解度为10％(w/w)。溶解度研究提示乳剂制剂。已经开发原型，并以1％(w/w)的浓度在来自任选外科切下的人皮肤上试验。形式包括凝胶、软膏或者洗液。所有制剂显示稳定性和相容性。用LC/MS/MS分析进行的皮肤输送研究显示表皮和真皮中具有高化合物12水平以及在接收者中具有低水平。用2-4％剂量渗透，真皮中可以有大于10微摩尔的化合物12，如使用[14C]-化合物12测得。实验性大鼠和微型猪研究显示低的全身接触，这指示药物渗透入皮肤的血管化水平(即真皮)。
2.非临床皮肤程序
豚鼠中的皮肤敏化研究：Buehler试验
使用健康年轻成年(4到6周)、任意繁殖的白化病豚鼠(种Crl：(Ha)BR)的Buehler试验用于测定通式I化合物诱导超敏性的可能性。饮食由经证明的任意的豚鼠饮食(#5026，PMI Nutrition International LLC)组成。任意给予水。室温是18到26℃，相对湿度是30到70％，使用12小时光/12小时暗循环。动物适应至少5天。
试验设计：将34只适应的动物分为4只豚鼠的刺激筛选组、10只豚鼠的试验组(第1组)、5只豚鼠的原始(naive)对照组(第2组)、10只阳性对照豚鼠(第3组)和5只阳性原始对照豚鼠(第4组)。
刺激筛选：将4只动物的背部毛发剪去，每只动物选择四处施用位置。用0.4mL的0.1％、1％或10％w/v的化合物12和0.4g剂量的化合物12处理每处位置。选择合适的化合物12浓度，用于诱导接触(最高，以引起轻到中度皮肤刺激)和激发接触(最高非刺激剂量)。
确定阶段：在试验前，使用电动剪毛机将第1组动物的毛发除去。由含有在刺激筛选中确定的某浓度的通式I化合物的0.4mL载体溶液浸透封闭贴剂体系(Hill Top
Figure BPA00001275903500981
直径25-mm)。将该封闭贴剂施用于第1组豚鼠的胁腹6小时。使用约束以保持贴剂上的均匀压力。在初次接触后的第6-8天和13-15天重复该程序。将阳性对照材料，HCA(α-己基肉桂醛)的2.5％w/v的乙醇溶液，以类似方式施用于第3组豚鼠。原始对照动物(第2和4组)在诱导期不经处理。
最后一次诱导贴剂的两周后，用由非刺激浓度的化合物12渗透的贴剂激发动物，施用于背侧的前右四分之一，并沿着背侧前左四分之一施用激发量的水。用电动剪毛机剃去第2组动物(原始对照)的毛发并用通式I化合物处理背侧前右四分之一，并沿着前左四分之一用载体处理。HCA以5.0％和7.0％w/v的丙酮溶液以和诱导期相同的方法(0.4mL剂量体积)给药至第3组每只动物的沿着右侧的两个相应的激发位置。用两种激发应用的阳性对照物质以和第3组相同的方法处理第4组动物。
6小时后，除去贴剂并为该区域脱毛(通过使用)。在除去贴剂的24和48小时后目测评价试验位置。发生红斑反应的动物被认为是敏化的(如果刺激对照动物没有反应)。计算阳性反应的数目和反应的平均强度。对激发剂量的反应决定敏化。假如观察到原始对照动物对该相同材料的等级小于1级，则试验动物对各自材料的1级或更大等级指示敏化证据。如果原始对照动物中观察到1级或更大等级，则超过最严重的原始对照反应的试验动物的反应被认为是敏化反应。
3.化合物12实验性大鼠皮肤研究
在TID给药连续七天的大鼠内评价原型皮肤制剂(1％洗液、软膏和凝胶)的安全性和耐受性-大约为6cm2施用10mg/cm2。给出1％DMSO作为高生物利用度对照。图23说明化合物12在血清中可检测到。
4.化合物12实验性微型猪皮肤研究
将这些制剂作为多次皮肤剂量TID给药于微型猪7天，来评价各种化合物12制剂(DMSO、凝胶、软膏、1％洗液)的耐受性和全身接触，大约为50cm2施用10mg/cm2。使用一种猪/剂量制剂。完成生命内PK分析。任何制剂均没有报导毒性。血浆PK显示所有组中化合物12的低水平，低于0.5ng/ml的LLOQ。
大鼠和微型猪试验性研究显示，PK与凝胶和软膏相似，而且作为凝胶或软膏制剂，评价化合物12在人体中是安全的。
已经开发了原型1％局部皮肤制剂(洗液、凝胶和软膏)。在人皮肤Franz细胞中化合物12到表皮和真皮的递送是良好的。洗液、凝胶和软膏的实验性毒理学研究显示PK说明良好的生物利用度。
实施例11：克罗恩氏病、溃疡性结肠炎或IBD
用化合物12治疗患有克罗恩氏病、溃疡性结肠炎或IBD的受试者，最长直至12个月。以含有化合物12的适于口服的制剂(溶液、药丸或胶囊)提供药物。典型的口服溶液剂型包括溶解于PBS中的化合物12，其pH调节至7。用制剂中的不同剂量强度的化合物12或安慰剂制剂以QD、BID或TID治疗各组试验受试者。由各受试者自己口服药物。给药剂量强度包括安慰剂(载体)、制剂中的1mg/剂、5mg/剂、10mg/剂和高达100mg/剂的化合物12。
在登记时，患者必须已经诊断为克罗恩氏病、溃疡性结肠炎或IBD。提供给患者药物，并要求患者在患者日记中记录各药物剂量的给药。化合物12可以和现有的抗炎剂(例如，水杨酸盐)和免疫抑制剂(氨甲喋呤、类固醇、抗体)联合使用。
在整个研究期间，每2个星期评价患者。各患者检查包括安全性和耐受性评价。效果测定包括克罗恩氏病活性指数(CDAI)；溃疡性结肠炎疾病活性指数或类似指标。
该试验的结果将支持缓解克罗恩氏病、溃疡性结肠炎和/或IBD的治疗和维持的控制要求。
此处显示并描述了本发明的优选实施方案，对于本领域技术人员而言，很明显这样的实施方式仅是举例。本领域技术人员可以在不离开本发明的基础上对本发明进行许多变动、改变和替换。将理解，此处描述的本发明实施方式的各种替换可以用于实施本发明。意欲使以下权利要求限定本发明范围，并因此覆盖这些权利要求范围内的方法和结构及其等价物。

Claims (48)

1.含有LFA-1拮抗剂或其药用可接受的盐或酯以及适于口服给药的赋形剂的药物制剂，其中当给药于受试者时，所述LFA-1拮抗剂的全身清除率大于约2mL/min/kg。
2.如权利要求1所述的制剂，其中所述LFA-1拮抗剂在给药于受试者后大约4小时内达到大于约1μM的局部组织浓度。
3.如权利要求2所述的制剂，其中在给药于受试者后的至少约8小时内，所述LFA-1拮抗剂的局部组织浓度保持在大于约10nM的浓度。
4.如权利要求1所述的制剂，其中所述LFA-1拮抗剂是直接竞争性拮抗剂。
5.如权利要求1所述的制剂，其中所述LFA-1拮抗剂含有式I或II的化合物和/或其药用可接受的盐或酯，具有以下结构：
Figure FPA00001275903400011
其中R1和R2各自独立为氢、氨基酸侧链、-(CH2)mOH、-(CH2)m芳基、-(CH2)m杂芳基-其中m是0-6、-CH(R1A)(OR1B)、-CH(R1A)(NHR1B)、U-T-Q，或任选由U-T-Q取代的脂肪族、脂环族、杂脂肪族或杂脂环族部分，，
其中U是不存在、-O-、-S(O)0-2-、-SO2N(R1A)、-N(R1A)-、-N(R1A)C(＝O)-、-N(R1A)C(＝O)-O-、-N(R1A)C(＝O)-N(R1B)-、-N(R1A)-SO2-、-C(＝O)-、-C(＝O)-O-、-O-C(＝O)-、芳基、杂芳基、烷基芳基、烷基杂芳基、-C(＝O)-N(R1A)-、-OC(＝O)N(R1A)-、-C(＝N-R1E)-、-C(＝N-R1E)-O-、-C(＝N-R1E)-N(R1A)-、-O-C(＝N-R1E)-N(R1A)-、-N(R1A)C(＝N-R1E)-、-N(R1A)C(＝N-R1E)-O-、-N(R1A)C(＝N-R1E)-N(R1B)-、-P(＝O)(OR1A)-O-或-P(＝O)(R1A)-O-；
T是不存在、脂肪族、杂脂肪族、芳基、杂芳基、烷基芳基或烷基杂芳基部分；以及
Q是氢、卤素、氰基、异氰酸酯、-OR1B、-SR1B、-N(R1B)2、-NHC(＝O)OR1B、-NHC(＝O)N(R1B)2、-NHC(＝O)R1B、-NHSO2R1B、-NHSO2N(R1B)2、-NHSO2NHC(＝O)OR1B、-NHC(＝O)NHSO2R1B、-C(＝O)NHC(＝O)OR1B、C(＝O)NHC(＝O)R1B、-C(＝O)NHC(＝O)N(R1B)2、-C(＝O)NHSO2R1B、-C(＝O)NHSO2N(R1B)2、C(＝S)N(R1B)2、-SO2R1B、-SO2OR1B、-SO2N(R1B)2，-SO2-NHC(＝O)OR1B、-OC(＝O)-N(R1B)2、-OC(＝O)R1B、-OC(＝O)NHC(＝O)R1B、-OC(＝O)NHSO2R1B、-OSO2R1B或脂肪族、杂脂肪族、芳基或杂芳基部分，或其中R1和R2合起来是脂环族或杂环部分，或者合起来是
Figure FPA00001275903400021
其中每次出现的R1A和R1B各自独立是氢、脂肪族、脂环族、杂脂肪族、杂环、芳基、杂芳基、烷基芳基或烷基杂芳基部分、-C(＝O)R1C或-C(＝O)NR1CR1D；其中每次出现的R1C和R1D各自独立是氢、羟基、或脂肪族、杂脂肪族、芳基、杂芳基、烷基芳基或烷基杂芳基部分；以及R1E是氢、脂肪族、脂环族、杂脂肪族、杂环、芳基、杂芳基、烷基芳基或烷基杂芳基部分、-CN、-OR1C、-NR1CR1D或-SO2R1C；
R3是-C(＝O)OR3A、-C(＝O)H、-CH2OR3A、-CH2OC(＝O)-烷基、-C(＝O)NH(R3A)、-CH2X0；其中每次出现的R3A独立是氢、保护基、脂肪族、脂环族、杂脂肪族、杂脂环族、芳基、杂芳基、烷基芳基、烷基杂芳基、杂烷基芳基、杂烷基杂芳基部分，或其药用可接受的盐或酯，或者R3A和R1与R2合起来形成杂环部分；其中X0是选自F、Br或I的卤素；
其中R4A和R4B独立代表选自F、Cl、Br或I的卤素；且RB1、RB2和RE独立代表氢或取代或未取代的低级烷基；
AR1是单环或多环芳基、杂芳基、烷基芳基、烷基杂芳基、脂环族或杂环部分；以及
L不存在或者是V-W-X-Y-Z，其中V、W、X、Y和Z各自独立代表不存在、C＝O、NRL1、-O-、-C(RL1)＝、＝C(RL1)-、-C(RL1)(RL2)、C(＝N-ORL1)、C(＝NRL1)、-N＝、S(O)0-2；取代或未取代的C1-6亚烯基或C2-6亚烯基链，其中最多达两个非相邻亚甲基单元任选独立被-C(＝O)-、-CO2-、-C(＝O)C(＝O)-、-C(C＝O)NRL3-、-OC(＝O)-、-OC(＝O)NRL3-、-NRL3NRL4-、-NRL3NRL4C(＝O)-、-NRL3C(＝O)-、-NRL3CO2-、NRL3C(＝O)NRL4-、-S(＝O)-、-SO2-、-NRL3SO2-、-SO2NRL3、-NRL3SO2NRL4、-O-、-S-或NRL3-代替，其中每次出现的RL3和RL4独立代表氢、烷基、杂烷基、芳基、杂芳基或酰基；或脂肪族、脂环族、杂脂肪族、杂脂环族、芳基、杂芳基、烷基芳基或烷基杂芳基部分；以及每次出现的RL1和RL2独立代表氢、羟基、保护羟基、氨基、保护氨基、硫代、保护硫代、卤素、氰基、异氰酸酯、羧基、羧基烷基、甲酰基、甲酰氧基、叠氮基、硝基、脲基、硫脲基、硫氰酸基、烷氧基、芳基氧基、巯基、亚磺酰氨基、苯甲酰胺基、甲苯磺酰基、或脂肪族、脂环族、杂脂肪族、杂脂环族、芳基、杂芳基、烷基芳基或烷基杂芳基部分，或其中一个或多个RL1和RL2合起来，或一个或多个RL1和RL2与V、W、X、Y或Z之一合起来形成脂环族或杂环部分或形成芳基或杂芳基部分。
6.如权利要求1所述的制剂，其中所述LFA-1拮抗剂具有下式中的一种：
Figure FPA00001275903400031
Figure FPA00001275903400041
7.如权利要求5或6所述的制剂，其中所述LFA-1拮抗剂是钠、钾、锂、镁、锌或钙盐。
8.如权利要求1所述的制剂，其中所述LFA-1在浓度为约100nM时抑制大约50％或更多的T细胞向ICAM-1的粘附。
9.如权利要求1所述的制剂，其中所述制剂是片剂、胶囊、混悬剂、粉末、晶体形式、栓剂、微粒或纳米颗粒的形式。
10.如权利要求1所述的制剂，其中所述赋形剂是水、缓冲水溶液、表面活性剂、挥发性液体、淀粉、多元醇、成粒剂、微晶纤维素、稀释剂、润滑剂、酸、碱、盐、乳剂、油、润湿剂、螯合剂、抗氧化剂、无菌溶液、络合剂或者崩解剂。
11.如权利要求9所述的制剂，其中所述表面活性剂是油酸、氯化十六烷基吡啶、大豆卵磷脂、聚氧乙烯去水山梨醇单月桂酸酯、聚氧乙烯去水山梨醇单硬脂酸酯、聚氧乙烯去水山梨醇单油酸酯、聚氧乙烯硬脂酰醚、聚氧乙烯油基醚、聚氧乙烯-聚氧丙烯-乙二胺嵌段共聚物、聚氧丙烯-聚氧乙烯嵌段共聚物或蓖麻油乙氧基化物。
12.如权利要求1所述的制剂，其还含有局部渗透促进剂。
13.如权利要求11所述的制剂，其中所述局部渗透促进剂是亚砜、醚、表面活性剂、醇、脂肪酸、脂肪酸酯、多元醇、酰胺、萜烯、烷酮或有机酸。
14.如权利要求1所述的制剂，其还含有至少一种其他治疗剂，该其他治疗剂是5-氨基水杨酸(5-ASA)化合物、皮质类固醇、抗生素、钙调磷酸酶抑制剂或免疫调节剂。
15.如权利要求14所述的制剂，其中所述5-ASA化合物是柳氮磺胺吡啶、奥沙拉嗪或美沙拉明。
16.如权利要求14所述的制剂，其中所述皮质类固醇是波尼松或布地奈德。
17.如权利要求14所述的制剂，其中所述抗生素是甲硝唑或环丙沙星。
18.如权利要求14所述的制剂，其中所述免疫调节剂是6-巯基嘌呤、硫唑嘌呤、甲氨蝶呤、英夫利昔单抗或阿达木单抗。
19.如权利要求14所述的制剂，其中所述钙调磷酸酶抑制剂是环孢霉素、他克莫司、吡美莫司或西罗莫司。
20.如权利要求1所述的制剂，其中所述LFA-1拮抗剂是下式化合物：
21.如权利要求20所述的制剂，其中所述LFA-1拮抗剂是结晶式A型、B型、C型、D型、E型、无定型中的任一种、或其组合。
22.如权利要求21所述的制剂，其中所述LFA-1拮抗剂是权利要求20所述化合物的A型。
23.用于治疗受试者的胃肠系统一种或多种组织的炎性或免疫相关疾病的方法，包括将含有LFA-1拮抗剂或其药用可接受的盐或酯和药用可接受的赋形剂的制剂给药于需要的受试者，其中当给药于受试者时，所述LFA-1拮抗剂的全身清除率大于约2mL/min/kg。
24.如权利要求23所述的方法，其中给药后，在给药后大约4小时内，LFA-1拮抗剂以治疗有效浓度存在于施用有该制剂的上皮表面的约1mm内，并且以低于治疗有效水平存在于血浆中。
25.如权利要求23所述的方法，其中在给药于受试者后大约4小时内，所述LFA-1拮抗剂的局部组织浓度大于约10nM。
26.如权利要求23所述的方法，其中在给药于受试者后约4小时之内，所述LFA-1拮抗剂的局部组织浓度大于约1μM，且血浆中测得的全身浓度小于约100nM。
27.如权利要求25所述的方法，其中在给药于受试者后至少大约8小时内，所述LFA-1拮抗剂的局部组织浓度在保持在大于约10nM。
28.如权利要求25所述的方法，其中所述LFA-1拮抗剂的局部组织浓度在施用有该制剂的上皮表面的约1mm内。
29.如权利要求23所述的方法，其中所述LFA-1拮抗剂是直接竞争性拮抗剂。
30.如权利要求23所述的方法，其中所述LFA-1拮抗剂是式(I)或(II)的化合物和/或其药用可接受的盐或酯，具有以下结构：
Figure FPA00001275903400061
其中R1和R2各自独立为氢、氨基酸侧链、-(CH2)mOH、-(CH2)m芳基、-(CH2)m杂芳基-其中m是0-6、-CH(R1A)(OR1B)、-CH(R1A)(NHR1B)、U-T-Q，或任选由U-T-Q取代的脂肪族、脂环族、杂脂肪族或杂脂环族部分，
其中U是不存在、-O-、-S(O)0-2-、-SO2N(R1A)、-N(R1A)-、-N(R1A)C(＝O)-、-N(R1A)C(＝O)-O-、-N(R1A)C(＝O)-N(R1B)-、-N(R1A)-SO2-、-C(＝O)-、-C(＝O)-O-、-O-C(＝O)-、芳基、杂芳基、烷基芳基、烷基杂芳基、-C(＝O)-N(R1A)-、-OC(＝O)N(R1A)-、-C(＝N-R1E)-、-C(＝N-R1E)-O-、-C(＝N-R1E)-N(R1A)-、-O-C(＝N-R1E)-N(R1A)-、-N(R1A)C(＝N-R1E)-、-N(R1A)C(＝N-R1E)-O-、-N(R1A)C(＝N-R1E)-N(R1B)-、-P(＝O)(OR1A)-O-或-P(＝O)(R1A)-O-；
T是不存在、脂肪族、杂脂肪族、芳基、杂芳基、烷基芳基或烷基杂芳基部分；以及
Q是氢、卤素、氰基、异氰酸酯、-OR1B、-SR1B、-N(R1B)2、-NHC(＝O)OR1B、-NHC(＝O)N(R1B)2、-NHC(＝O)R1B、-NHSO2R1B、-NHSO2N(R1B)2、-NHSO2NHC(＝O)OR1B、-NHC(＝O)NHSO2R1B、-C(＝O)NHC(＝O)OR1B、C(＝O)NHC(＝O)R1B、-C(＝O)NHC(＝O)N(R1B)2、-C(＝O)NHSO2R1B、-C(＝O)NHSO2N(R1B)2、C(＝S)N(R1B)2、-SO2R1B、-SO2OR1B、-SO2N(R1B)2，-SO2-NHC(＝O)OR1B、-OC(＝O)-N(R1B)2、-OC(＝O)R1B、-OC(＝O)NHC(＝O)R1B、-OC(＝O)NHSO2R1B、-OSO2R1B或脂肪族、杂脂肪族、芳基或杂芳基部分，或其中R1和R2合起来是脂环族或杂环部分，或者合起来是
Figure FPA00001275903400071
其中每次出现的R1A和R1B各自独立是氢、脂肪族、脂环族、杂脂肪族、杂环、芳基、杂芳基、烷基芳基或烷基杂芳基部分、-C(＝O)R1C或-C(＝O)NR1CR1D；其中每次出现的R1C和R1D各自独立是氢、羟基、或脂肪族、杂脂肪族、芳基、杂芳基、烷基芳基或烷基杂芳基部分；以及R1E是氢、脂肪族、脂环族、杂脂肪族、杂环、芳基、杂芳基、烷基芳基或烷基杂芳基部分、-CN、-OR1C、-NR1CR1D或-SO2R1C；
R3是-C(＝O)OR3A、-C(＝O)H、-CH2OR3A、-CH2OC(＝O)-烷基、-C(＝O)NH(R3A)、-CH2X0；其中每次出现的R3A独立是氢、保护基、脂肪族、脂环族、杂脂肪族、杂脂环族、芳基、杂芳基、烷基芳基、烷基杂芳基、杂烷基芳基、杂烷基杂芳基部分，或其药用可接受的盐或酯，或者R3A和R1与R2合起来形成杂环部分；其中X0是选自F、Br或I的卤素。
R4A和R4B独立代表选自F、C1、Br或I的卤素；且RB1、RB2和RE独立代表氢或取代或未取代的低级烷基；
AR1是单环或多环芳基、杂芳基、烷基芳基、烷基杂芳基、脂环族或杂环部分；以及
L不存在或者是V-W-X-Y-Z，其中V、W、X、Y和Z各自独立代表不存在、C＝O、NRL1、-O-、-C(RL1)＝、＝C(RL1)-、-C(RL1)(RL2)、C(＝N-ORL1)、C(＝NRL1)、-N＝、S(O)0-2；取代或未取代的C1-6亚烯基或C2-6亚烯基链，其中最多达两个非相邻亚甲基单元任选独立被-C(＝O)-、-CO2-、-C(＝O)C(＝O)-、-C(C＝O)NRL3-、-OC(＝O)-、-OC(＝O)NRL3-、-NRL3NRL4-、-NRL3NRL4C(＝O)-、-NRL3C(＝O)-、-NRL3CO2-、NRL3C(＝O)NRL4-、-S(＝O)-、-SO2-、-NRL3SO2-、-SO2NRL3、-NRL3SO2NRL4、-O-、-S-或NRL3-代替，其中每次出现的RL3和RL4独立代表氢、烷基、杂烷基、芳基、杂芳基或酰基；或脂肪族、脂环族、杂脂肪族、杂脂环族、芳基、杂芳基、烷基芳基或烷基杂芳基部分；以及每次出现的RL1和RL2独立代表氢、羟基、保护羟基、氨基、保护氨基、硫代、保护硫代、卤素、氰基、异氰酸酯、羧基、羧基烷基、甲酰基、甲酰氧基、叠氮基、硝基、脲基、硫脲基、硫氰酸基、烷氧基、芳基氧基、巯基、亚磺酰氨基、苯甲酰胺基、甲苯磺酰基、或脂肪族、脂环族、杂脂肪族、杂脂环族、芳基、杂芳基、烷基芳基或烷基杂芳基部分，或其中一个或多个RL1和RL2合起来，或一个或多个RL1和RL2与V、W、X、Y或Z之一合起来形成脂环族或杂环部分或形成芳基或杂芳基部分。
31.如权利要求23所述的方法，其中所述LFA-1拮抗剂具有下式中的一种：
32.如权利要求23所述的方法，其中所述LFA-1拮抗剂是下式化合物：
33.如权利要求32所述的方法，其中所述LFA-1拮抗剂是权利要求32所述化合物的结晶形式A型、B型、C型、D型、E型或无定型中的任一种或其组合。
34.如权利要求33所述的方法，其中所述LFA-1拮抗剂是权利要求32所述化合物的A型。
35.如权利要求23所述的方法，其中所述LFA-1在浓度为约100nM时抑制约50％或更多的T细胞向ICAM-1的粘附。
36.如权利要求23所述的方法，其中所述制剂是片剂、胶囊、混悬剂、粉末、晶体形式、微粒或纳米颗粒。
37.如权利要求23所述的方法，其中所述制剂施用于肛门粘膜。
38.如权利要求23所述的方法，其中所述制剂以口服给药。
39.如权利要求23所述的方法，还包括给予受试者另外的治疗剂。
40.如权利要求39所述的方法，其中所述另外的治疗剂在给予所述LFA-1拮抗治疗剂或其可药用盐或酯之前、之后或同时给药。
41.如权利要求39所述的方法，其中所述其他治疗剂是抗氧化剂、抗炎药、抗微生物剂、抗血管生成剂或抗细胞凋亡剂。
42.如权利要求41所述的方法，其中所述另外的治疗剂是5-氨基水杨酸(5-ASA)化合物、皮质类固醇、抗生素、钙调磷酸酶抑制剂或免疫调节剂。
43.如权利要求41所述的方法，其中所述的5-ASA化合物是柳氮磺胺吡啶、奥沙拉嗪或美沙拉明。
44.如权利要求42所述的方法，其中所述皮质类固醇是波尼松或布地奈德。
45.如权利要求42所述的方法，其中所述抗生素是甲硝唑或环丙沙星。
46.如权利要求42所述的方法，其中所述免疫调节剂是6-巯基嘌呤、硫唑嘌呤、甲氨蝶呤、英夫利昔单抗或阿达木单抗。
47.如权利要求42所述的方法，其中所述钙调磷酸酶抑制剂是环孢霉素、他克莫司、吡美莫司或西罗莫司。
48.如权利要求23所述的方法，其中所述局部炎性或免疫相关的病症是炎性肠病、克罗恩氏病、溃疡性结肠炎或口腔扁平苔癣。
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