CN112679469B

CN112679469B - 一种四氢异喹啉类衍生物、制备方法及应用

Info

Publication number: CN112679469B
Application number: CN202011603226.2A
Authority: CN
Inventors: 徐东; 徐庆林
Original assignee: Shandong Yanfeng New Material Technology Co ltd
Current assignee: Shandong Yanfeng New Material Technology Co.,Ltd.
Priority date: 2020-12-29
Filing date: 2020-12-29
Publication date: 2021-11-16
Anticipated expiration: 2040-12-29
Also published as: CN112679469A

Abstract

本发明属于医药领域，涉及一种四氢异喹啉类衍生物、制备方法及应用。所述的四氢异喹啉类衍生物结构式如式I所示：

药理学研究表明，本发明制备的化合物能够有效改善结肠炎模型小鼠结肠长度，减轻结肠组织破坏程度从而具有治疗或预防溃疡性结肠炎相关疾病的作用。

Description

一种四氢异喹啉类衍生物、制备方法及应用

技术领域

本发明属于医药领域，涉及一种四氢异喹啉类衍生物、制备方法及其在治疗溃疡性结肠炎的应用。

背景技术

溃疡性结肠炎(UC)属于炎症性肠病的一种，是一种免疫系统攻击自身消化系统的疾病，属于自身免疫性疾病。临床上常见的IBD除UC外还包括克罗恩病(CD)。主要临床表现腹泻、腹痛、黏液便及脓血便、里急后重、甚则大便秘结、数日内不能通大便；常伴有消瘦乏力等，多反复发作。其中，慢性结肠炎包括溃疡性结肠炎(UC)、肉芽肿性结肠炎和克罗恩病等。慢性的炎症在结肠癌的发展中起到推波助澜的作用，如果能在此时进行治疗，可以有效阻断癌症的发展。结直肠癌是临床最常见恶性肿瘤之一，位列恶性肿瘤第三位，死亡率居第四位。

UC是严重影响人类健康的疾病，由于UC的发病机理至今尚不明确，因而在临床上无法进行针对病因进行有效的治疗，结肠癌的早期预防越来越受到关注，目前用于结肠癌预防的药物有阿司匹林，环氧合酶抑制剂，非甾体类抗炎药物，目的都是抑制慢性炎症，从而抑制肿瘤的发生。而从1888年至今，5-氨基水杨酸始终是UC的一线治疗药物，但其治疗效果并不理想。且这些药物的长期使用存在着明显的不足之处，现有的抗炎药物一般都会造成胃肠运动减弱，消化道出血以及肝肾损伤，同时可能还会对心血管系统产生较大的威胁，随着病情的恶化，往往不得不进行全结肠切除术，给患者带来了极大的痛苦。因此迫切需要一种能针对病因进行有效治疗的临床药物来缓解患者的痛苦。

本发明创新性的合成了一种四氢异喹啉类衍生物，以期得到治疗溃疡性结肠炎全新化合物，现有技术并未见到相关结构的报道。

发明内容

针对上述问题，本发明的目的是提供一种四氢异喹啉类衍生物的制备方法和应用，此类化合物对溃疡性结肠炎具有良好的治疗作用，可用于制备治疗溃疡性结肠炎的药物。为实现上述目的，本发明采用以下技术方案。

一种四氢异喹啉类衍生物，其结构通式I如下：

式中：R₁＝-H或者-CH₃，R₂＝-H或者-CH₃。

本发明另一目的为提供四氢异喹啉类衍生物式I的合成路线为：

进一步地，上述化合物的合成包括如下步骤：

1)以2-((苄氧基)羰基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-羧酸为原料与酰氯发生酰化反应得到 3-(氯羰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-羧酸苄基酯；

2)以3-(氯羰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-羧酸苄基酯为原料反应得到3-(5-溴-3α,7α-二氢 -1H-吲哚-3-羰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-羧酸苄酯；

3)以3-(5-溴-3α,7α-二氢-1H-吲哚-3-羰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-羧酸苄酯为原料反应得到3-((5-溴-3α,7α-二氢-1H-吲哚-3-基)甲基)-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹；

4)以3-((5-溴-3α,7α-二氢-1H-吲哚-3-基)甲基)-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹为原料反应得到 1-(5-溴-3-((2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-基)甲基)-3a,7α二氢-1H-吲哚-1-基)乙-1-酮；

5)以1-(5-溴-3-((2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-基)甲基)-3a,7α二氢-1H-吲哚-1-基)乙-1- 酮为原料与取代的苯基乙烯基砜反应得到对应的产物。

部分化合物的¹H-NMR(400MHz)和¹³C-NMR(125MHz)如下：

中间体1(结构2所示化合物)：¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ:3.32(d,1H),3.41(d,1H),4.59(d,1H),4.75(d,1H),5.02(s,2H),6.62(t,1H),7.19-7.42(m,9H).13C-NMR(125MHz,CDCl3)δ:29.41,42.05,59.49,67.17,127.57,127.92,128.16,128.19,128.94,128.98,129.01, 132.80,135.57,137.56,156.98,173.24；

中间体2(结构3所示化合物)：¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ:3.21(d,1H),3.45(d,1H),3.72(m,1H),4.60(d,1H),4.69(m,1H),4.77(d,1H),5.02(s,2H),6.15(m,1H),6.34(d,1H),6.63(d,1H),7.03(t,1H),7.19-7.42(m,10H),9.59(s,1H).¹³C-NMR(125MHz,CDCl₃)δ:29.30, 42.05,42.45,58.48,67.17,116.16,120.28,122.33,123.08,125.56,127.57,127.92,128.16, 128.19,128.94,128.98,129.01,132.80,135.57,137.56,138.07,156.98,189.64；

中间体3(结构4所示化合物)：¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ:2.22(m,2H),2.26(s,3H),2.48(m,1H),2.75-2.96(m,2H),3.06(m,1H),3.68(d,1H),3.85(d,1H),4.17(m,1H),5.98(s,1H), 6.07(m,1H),6.39(m,2H),7.19-7.42(m,4H),8.46(s,1H).¹³C-NMR(125MHz,CDCl₃)δ:31.17, 31.92,41.19,46.55,58.30,60.47,120.05,122.33,122.48,125.56,127.06,127.98,128.61, 128.66,128.73,133.67,135.10,135.38；

中间体4(结构5所示化合物)：¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ:1.92(s,3H),2.23(m,1H),2.26(s,3H),2.42(m,1H),2.48(m,1H),2.89(m,1H),2.96(m,1H),3.32(m,1H),3.68(d,1H),3.85(d,1H),5.00(m,1H),5.80(m,1H),6.44(d,1H),6.48(s,1H),6.53(d,1H),7.20(m,2H),7.30(m,1H),7.40(d,1H).¹³C-NMR(125MHz,CDCl₃)δ:24.15,31.92,32.41,41.19,46.02,58.30,59.53,60.47,123.59,124.00,127.06,127.19,127.98,128.55,128.61,128.73,129.42, 131.18,133.67,135.38,169.19；

式Ⅰ：¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ:1.92(s,3H),2.23(m,1H),2.26(s,3H),2.42(m,1H),2.48(m,1H),2.96(m,1H),3.35(m,1H),3.46(m,1H),3.69(d,1H),3.87(d,1H),4.96(m,1H),5.80(m,1H),5.91(d,1H),6.52(s,1H),6.60(d,1H),6.71(d,1H),7.16(d,1H),7.20(m,2H),7.30(m,1H),7.40(d,1H),7.61(m,2H),7.71(m,1H),7.90(d,2H).¹³C-NMR(125MHz,CDCl₃)δ:24.15,31.92,32.41,41.19,45.48,58.30,59.53,60.47,123.59,127.06,127.30,127.37,127.77, 127.98,128.61,128.62,128.73,129.00,130.93,131.18,131.71,132.62,133.67,135.38,137.02, 140.81,169.19。

本发明所述的一种四氢异喹啉类衍生物能够有效改善结肠炎模型小鼠结肠长度，减轻结肠组织破坏程度。说明本发明所述的四氢异喹啉类衍生物在治疗或预防溃疡性结肠炎中具有积极意义，可以进行更加深入的研究。

所述的预防或治疗溃疡性结肠炎的药物或其药学上可接受的盐或溶剂化物在研制治疗或预防溃疡性结肠炎中的应用，特别是提供了一种四氢异喹啉类衍生物在治疗或预防溃疡性结肠炎中的应用。

与现有技术比，本发明的有益效果如下：

本发明的化合物在溃疡性结肠炎的治疗或预防中具有很好的效果。进一步地，从本发明提供的研究结果可以看出：本发明的化合物喂药组小鼠相对体重变化较小、粪便性状较完整、便血情况较轻，DAI评分显著降低(P<0.05)；本发明的化合物喂药组小鼠结肠浆膜层充血、水肿，黏膜层出血及溃疡等现象亦有所减轻，同时组织破坏程度低。

综上所述，将本发明所述的一种四氢异喹啉类衍生物用于制备治疗或预防溃疡性结肠炎的药物具有很好的开发前景。

显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其他多种形式的修改、替换或变更。

附图说明

图1：本发明所得四氢异喹啉类衍生物对对UC小鼠体重的影响。

图2：本发明所得四氢异喹啉类衍生物对对UC小鼠DAI评分的影响。

图3：本发明所得四氢异喹啉类衍生物对对UC小鼠结肠长度的影响

图4：本发明所得四氢异喹啉类衍生物对UC小鼠结肠病理学的影响。

具体实施方式

下列合成实例、生物测试结果可用来进一步说明本发明，但不意味着限制本发明。

合成实例

实施例1、化合物6的制备

(1)中间体3-(氯羰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-羧酸苄基酯(结构式2所示化合物)的合成：

将2-((苄氧基)羰基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-羧酸(结构式1所示化合物)(12.0g，38.54mmol) 溶解在DCM(20mL)中并加入草酰氯(21mL，2mol/L，42.0mmol)。加入DMF(0.5ml)，将混合物在室温下搅拌45分钟。减压浓缩溶液，得到12.71g浅黄色油状物，产率100％。

¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ:3.32(d,1H),3.41(d,1H),4.59(d,1H),4.75(d,1H),5.02(s, 2H),6.62(t,1H),7.19-7.42(m,9H).¹³C-NMR(125MHz,CDCl₃)δ:29.41,42.05,59.49,67.17, 127.57,127.92,128.16,128.19,128.94,128.98,129.01,132.80,135.57,137.56,156.98,173.24. LC-MS(ESI,pos,ion)m/z:330.08[M+H]。

(2)1.3中间体3-(5-溴-3α,7α-二氢-1H-吲哚-3-羰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-羧酸苄酯 (结构式3所示化合物)的合成：

在5分钟内，向搅拌的5-溴吲哚(7.84g，40.00mmol)无水乙醚(36mL)溶液中滴加3mol/L 的乙基溴化镁的乙醚(12.8mL)溶液。将混合物在25-30℃下搅拌30分钟，并进一步加热回流4小时。将反应混合物冷却至-30℃，向其中滴加3-(氯羰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-羧酸苄基酯(结构式2所示化合物)(12.71g，38.54mmol)的无水乙醚(18mL)溶液。将混合物搅拌 2小时，然后加入乙醚(45mL)和饱和碳酸氢钠水溶液(50mL)。使反应混合物的温度升至 25-30℃，继续搅拌30分钟。分液，用50ml饱和食盐水洗涤有机相，然后用无水硫酸镁干燥。减压浓缩溶剂，得到油状物，将其在硅胶上进行色谱分离(用乙酸乙酯洗脱)，得到15.87g 黄色固体，产率83.8％。

¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ:3.21(d,1H),3.45(d,1H),3.72(m,1H),4.60(d,1H),4.69(m, 1H),4.77(d,1H),5.02(s,2H),6.15(m,1H),6.34(d,1H),6.63(d,1H),7.03(t,1H),7.19-7.42(m, 10H),9.59(s,1H).¹³C-NMR(125MHz,CDCl₃)δ:29.30,42.05,42.45,58.48,67.17,116.16, 120.28,122.33,123.08,125.56,127.57,127.92,128.16,128.19,128.94,128.98,129.01,132.80, 135.57,137.56,138.07,156.98,189.64.LC-MS(ESI,pos,ion)m/z:491.09[M+H]。

(3)中间体3-((5-溴-3α,7α-二氢-1H-吲哚-3-基)甲基)-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹(结构式4 所示化合物)的合成：

在25-30℃，氮气气氛下，将3-(5-溴-3α,7α-二氢-1H-吲哚-3-羰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)- 羧酸苄酯(结构式3所示化合物)(15.87g，32.30mmol)的无水四氢呋喃(20mL)溶液滴加到搅拌的氢化铝锂(2.28g，60mmol)在无水四氢呋喃(15mL)中的悬浮液中。将混合物加热至回流并搅拌18小时，然后冷却至25-30℃。向此混合物中依次加入水(15mL)和20％氢氧化钠水溶液(20g)，搅拌半小时，体系用乙酸乙酯(50ml)萃取，分液，有机相通过硅藻土过滤。滤液用水(20ml)洗涤，然后用饱和食盐水(30ml)洗涤，无水硫酸钠干燥。减压浓缩掉溶剂，得到油状物，将其在硅胶上进行色谱分离，用二氯甲烷：乙醇：浓氨水(90：10：0.5)洗脱，得到9.88g淡黄色固体，产率85.6％。

¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ:2.22(m,2H),2.26(s,3H),2.48(m,1H),2.75-2.96(m,2H), 3.06(m,1H),3.68(d,1H),3.85(d,1H),4.17(m,1H),5.98(s,1H),6.07(m,1H),6.39(m,2H), 7.19-7.42(m,4H),8.46(s,1H).¹³C-NMR(125MHz,CDCl₃)δ:31.17,31.92,41.19,46.55,58.30, 60.47,120.05,122.33,122.48,125.56,127.06,127.98,128.61,128.66,128.73,133.67,135.10, 135.38.LC-MS(ESI,pos,ion)m/z:357.09[M+H]。

(4)中间体1-(5-溴-3-((2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-基)甲基)-3a,7α二氢-1H-吲哚-1- 基)乙酮(结构式5所示化合物)的合成：

将3-((5-溴-3α,7α-二氢-1H-吲哚-3-基)甲基)-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹(结构式4所示化合物)(9.88g，27.65mmol)、三乙胺(5.54g，54.78mmol)和4-二甲基氨基吡啶(4.15g，34.00mol) 加入甲苯(50ml)中，向其中缓慢滴加乙酸酐(5.65g，55.30mmol)，然后将混合物加热至 105-115℃并搅拌5-6小时。将混合物冷却，向其中加入30ml饱和碳酸氢钠溶液，搅拌10 分钟。分液，有机相用30ml水洗涤，然后减压浓缩，得到10.32g黄色油状物，产率93.5％。不经过进一步纯化，直接进行下一步反应。

¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ:1.92(s,3H),2.23(m,1H),2.26(s,3H),2.42(m,1H),2.48(m, 1H),2.89(m,1H),2.96(m,1H),3.32(m,1H),3.68(d,1H),3.85(d,1H),5.00(m,1H),5.80(m,1H), 6.44(d,1H),6.48(s,1H),6.53(d,1H),7.20(m,2H),7.30(m,1H),7.40(d,1H).¹³C-NMR(125 MHz,CDCl₃)δ:24.15,31.92,32.41,41.19,46.02,58.30,59.53,60.47,123.59,124.00,127.06, 127.19,127.98,128.55,128.61,128.73,129.42,131.18,133.67,135.38,169.19.LC-MS(ESI, pos,ion)m/z:399.10[M+H]。

(5)1-(3-((2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-基)甲基)-5-(2-(苯基磺酰基)乙烯基)-3a,7α二氢-1H-吲哚-1-基)乙酮(结构式6所示化合物)的合成：

将油状物1-(5-溴-3-((2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-基)甲基)-3a,7α二氢-1H-吲哚-1-基) 乙酮(结构式5所示化合物)(10.32g，25.84mmol)溶于DMF(40.0mL)中。将该溶液加入到乙酸钯(2.99g，13.3mmol)，三苯基膦(15.66g，59.7mmol)，苯基乙烯基砜(12.67g，75.34mmol) 和三乙胺(5.23g，51.68mmol)在DMF(40.0mL)的溶液中，然后将混合物加热至100-120℃。保持温度搅拌6小时，冷却，过滤。向滤液中滴加80ml丙酮析晶，滴加完毕后养晶2小时。过滤，用丙酮洗涤。然后将粗品用丙酮水溶液重结晶，过滤，50℃真空干燥，得到9.38g 类白色固体，产率74.6％。

¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ:1.92(s,3H),2.23(m,1H),2.26(s,3H),2.42(m,1H),2.48(m, 1H),2.96(m,1H),3.35(m,1H),3.46(m,1H),3.69(d,1H),3.87(d,1H),4.96(m,1H),5.80(m,1H), 5.91(d,1H),6.52(s,1H),6.60(d,1H),6.71(d,1H),7.16(d,1H),7.20(m,2H),7.30(m,1H), 7.40(d,1H),7.61(m,2H),7.71(m,1H),7.90(d,2H).¹³C-NMR(125MHz,CDCl₃)δ:24.15, 31.92,32.41,41.19,45.48,58.30,59.53,60.47,123.59,127.06,127.30,127.37,127.77,127.98, 128.61,128.62,128.73,129.00,130.93,131.18,131.71,132.62,133.67,135.38,137.02,140.81, 169.19.LC-MS(ESI,pos,ion)m/z:487.20[M+H]。

实施例2、化合物7的制备

(1)1-(3-((2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-基)甲基)-5-(2-(对甲苯磺酰基)乙烯基)-3a,7α二氢-1H-吲哚-1-基)乙酮(结构式7所示化合物)的合成：

将油状物1-(5-溴-3-((2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-基)甲基)-3a,7α二氢-1H-吲哚-1-基) 乙酮(结构式5所示化合物)(11.98g，30.00mmol)溶于DMF(50.0mL)中。将该溶液加入到乙酸钯(3.37g，15.00mmol)，三苯基膦(17.05g，65.00mmol)，对甲苯基乙烯基砜(15.31g， 91.00mmol)和三乙胺(6.27g，62.00mmol)在DMF(50.0mL)的溶液中，然后将混合物加热至 100-120℃。保持温度搅拌6小时，冷却，过滤。向滤液中滴加80ml丙酮析晶，滴加完毕后养晶2小时。过滤，用丙酮洗涤。然后将粗品用丙酮水溶液重结晶，过滤，50℃真空干燥，得到9.88g类白色固体，产率65.8％。

¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ:2.11(s,3H),2.32(s,3H),2.38(s,3H),2.43(d,2H),2.85(t, 2H),3.14(m,1H),3.55(m,1H),3.85(d,2H),4.88(m,1H),6.13(m,1H),6.25(m,1H),6.50(m, 1H),6.78(d,1H),6.93(m,2H),7.03(m,1H),7.14(m,2H),7.24-7.30(m,3H),7.77(m,2H). ¹³C-NMR(125MHz,CDCl₃)δ:21.53,22.17,34.17,37.4,42.33,45.51,52.01,55.27,56.73, 126.96,127.56,128.33,128.8,129.81,133.06,133.94,134.53,136.28,140.09,140.61,141.52, 143.81,169.57.LC-MS(ESI,pos,ion)m/z:501.21[M+H]。

实施例3、化合物8的制备

(1)1-(3-((2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-基)甲基)-5-(2-(邻甲基苯磺酰基)乙烯基)-3a,7α二氢-1H-吲哚-1-基)乙酮(结构式8所示化合物)的合成：

将油状物1-(5-溴-3-((2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-基)甲基)-3a,7α二氢-1H-吲哚-1-基) 乙酮(结构式5所示化合物)(11.98g，30.00mmol)溶于DMF(50.0mL)中。将该溶液加入到乙酸钯(3.37g，15.00mmol)，三苯基膦(17.05g，65.00mmol)邻甲基苯基乙烯基砜(15.31g， 91.00mmol)和三乙胺(6.27g，62.00mmol)在DMF(50.0mL)的溶液中，然后将混合物加热至 100-120℃。保持温度搅拌6小时，冷却，过滤。向滤液中滴加80ml丙酮析晶，滴加完毕后养晶2小时。过滤，用丙酮洗涤。然后将粗品用丙酮水溶液重结晶，过滤，50℃真空干燥，得到10.71g类白色固体，产率71.3％。

试验例1、本发明所得化合物喂饲对UC小鼠DAI评分的影响

50只8周龄雄性C57BL/6J小鼠饲养在控制室温22℃、相对湿度50％以下、鼠笼内的空气已过滤,12h黑暗/光明一个循环的条件下。喂食标准小鼠饮用水和食物,适应1周后，随机分为5组。分别为对照组(Control)组、DSS组(DSS)、DSS+化合物6(chem 6)、DSS+ 化合物7(chem 7)和DSS+化合物8(chem 8),每组10只。DSS组是5％的DSS饲喂5 天，治疗组是针对模型小鼠，5％DSS处理2天后，腹腔分别注射本发明所得化合物(chem 6、7和8)。

在喂饲过程中,从第2天开始基于体重丢失、粪便完整性和直肠出血三项指标，每日建立对 UC的评价体系。其中DAI评分包括3个方面：大便性状、大便隐血、体质量下降；各积分0-4 分。0分：大便性状正常,无大便隐血，无体质量下降；1分：大便性状正常，无大便隐血，体质量下降1％-5％；2分：大便松散，大便隐血阳性，体质量下降>5％-10％；3分：大便松散，大便隐血阳性，体质量下降>10％-15％；4分：稀便，肉眼血便，体质量下降>15％。正常大便：成形大便；松散大便：不黏附于肛门的糊状、半成形便；稀便：可黏附于肛门的不成形便。

结果如图1，对照组小鼠体重正常增加，模型组小鼠体重明显下降。本发明化合物处理后，小鼠的体重下降有所降低。如图2，DSS模型组DAI评分与对照组相比显著增高，本发明所得化合物治疗后，其DAI评分与模型组比较显著降低。结果证明DSS饲喂可以显著引起小鼠的 UC症状，本发明所得化合物可以缓解UC的进程。

试验例2、本发明所得化合物喂饲对UC小鼠结肠的影响

喂饲结束后处死小鼠，取结肠组织，观察各组小鼠的结肠长度。结果如图3，DSS组小鼠结肠长度明显短于CON组结肠。同时,DSS组小鼠单位长度结肠质量略低于CON组，本发明所得化合物处理后，明显改善了小鼠结肠长度的减少。

同时使用H&E染色法测定本发明所得化合物对小鼠结肠组织的影响。苏木精-伊红染色法(hematoxylin-eosin staining)，简称HE染色法，石蜡切片技术里常用的染色法之一。结肠组织投入预先配好的固定液中(10％福尔马林，Bouin氏固定液)，使用由低浓度到高浓度酒精作脱水剂，逐渐脱去组织块中的水份。再将组织块置于透明剂二甲苯中透明，以二甲苯替换出组织块的中酒精。将已透明的组织块置于已溶化的石蜡中，放入溶蜡箱保温。待石蜡完全浸入组织块后进行包埋。将包埋好的蜡块固定于切片机上，切成薄片，一般为5—8微米厚。切下的薄片往往皱折，要放到加热的水中烫平，再贴到载玻片上，放 45℃恒温箱中烘干。染色前，用二甲苯脱去切片中的石蜡，再经由高浓度到低浓度酒精，最后入蒸馏水，进行H&E染色。H&E染色过程是将已入蒸馏水后的切片放入苏木精水溶液中染色数分钟。酸水及氨水中分色，各数秒钟。流水冲洗1小时后入蒸馏水片刻。入70％和90％酒精中脱水各10分钟。入酒精伊红染色液染色2—3分钟。染色后的切片经纯酒精脱水，再经二甲苯使切片透明。将已透明的切片滴上加拿大树胶，盖上盖玻片封固。待树胶略干后，贴上标笺，显微镜下拍照观察。结果如附图4所示。结果显示，对照组小鼠细胞排列整齐，无杯装细胞减少以及淋巴细胞和中性粒细胞浸润等现象。DSS模型组细胞结构紊乱、杯状细胞消失、淋巴细胞和中性粒细胞浸润等现象。本发明所得化合物治疗后，细胞排列趋向整齐、少量杯状细胞消失及淋巴细胞和中性粒细胞浸润。说明本发明所得化合物可以显著改了结肠炎的症状。

以上说明本发明所制备的化合物在预防或治疗结肠炎中有积极意义，为预防或治疗结肠炎的药物研发提供了一条新的研究思路。

Claims

1.一种四氢异喹啉类衍生物，其化学结构通式如式I所示，

，

式中：R₁=-H或者-CH₃，R₂=-H或者-CH₃。

2.如权利要求1所述的四氢异喹啉类衍生物式I的合成路线为：

。

3.如权利要求1所述四氢异喹啉类衍生物的制备方法，包括如下步骤：

（1）以2-((苄氧基)羰基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-羧酸为原料与酰氯发生酰化反应得到3-(氯羰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-羧酸苄基酯；

（2）以3-(氯羰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-羧酸苄基酯为原料反应得到3-(5-溴-3α,7α-二氢-1H-吲哚-3-羰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-羧酸苄酯；

（3）以3-(5-溴-3α,7α-二氢-1H-吲哚-3-羰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-羧酸苄酯为原料反应得到3-((5-溴-3α,7α-二氢-1H-吲哚-3-基)甲基)-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉；

（4）以3-((5-溴-3α,7α-二氢-1H-吲哚-3-基)甲基)-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹为原料反应得到1-(5-溴-3-((2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-基)甲基)-3a,7α二氢-1H-吲哚-1-基)乙-1-酮；

（5）以1-(5-溴-3-((2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-基)甲基)-3a,7α二氢-1H-吲哚-1-基)乙-1-酮为原料与取代的苯基乙烯基砜反应得到对应的产物。

4.如权利要求3所述的制备方法，其中步骤（1）的酰氯优选草酰氯。

5.如权利要求1所述的四氢异喹啉类衍生物在制备治疗溃疡性结肠炎药物中的用途。