SK287195B6 - Inhibítory enzýmu konvertujúceho interleukín-1ß, farmaceutický prostriedok s ich obsahom a spôsob prípravy - Google Patents

Inhibítory enzýmu konvertujúceho interleukín-1ß, farmaceutický prostriedok s ich obsahom a spôsob prípravy Download PDF

Info

Publication number
SK287195B6
SK287195B6 SK842-98A SK84298A SK287195B6 SK 287195 B6 SK287195 B6 SK 287195B6 SK 84298 A SK84298 A SK 84298A SK 287195 B6 SK287195 B6 SK 287195B6
Authority
SK
Slovakia
Prior art keywords
group
compound
ice
igif
compounds
Prior art date
Application number
SK842-98A
Other languages
English (en)
Other versions
SK84298A3 (en
Inventor
Mark J. Batchelor
David Bebbington
Guy W. Bemis
Wolf Herman Fridman
Roger J. Gillespie
Julian M. C. Golec
Yong Gu
David J. Lauffer
David J. Livingston
Saroop S. Matharu
Michael D. Mullican
Mark A. Murcko
Robert Murdoch
Philip L. Nyce
Andrea L. C. Robidoux
Michael Su
M. Woods Wannamaker
Keith P. Wilson
Robert E. Zelle
Original Assignee
Vertex Pharmaceuticals Incorporated
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=27534345&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=SK287195(B6) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Priority claimed from US08/575,641 external-priority patent/US6008217A/en
Priority claimed from US08/598,332 external-priority patent/US5874424A/en
Priority claimed from US08/712,878 external-priority patent/US5985863A/en
Application filed by Vertex Pharmaceuticals Incorporated filed Critical Vertex Pharmaceuticals Incorporated
Publication of SK84298A3 publication Critical patent/SK84298A3/sk
Publication of SK287195B6 publication Critical patent/SK287195B6/sk

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D243/00—Heterocyclic compounds containing seven-membered rings having two nitrogen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D243/06—Heterocyclic compounds containing seven-membered rings having two nitrogen atoms as the only ring hetero atoms having the nitrogen atoms in positions 1 and 4
    • C07D243/10—Heterocyclic compounds containing seven-membered rings having two nitrogen atoms as the only ring hetero atoms having the nitrogen atoms in positions 1 and 4 condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D243/12—1,5-Benzodiazepines; Hydrogenated 1,5-benzodiazepines
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/02—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/55—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/18—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for pancreatic disorders, e.g. pancreatic enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/04—Antipruritics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/14—Drugs for dermatological disorders for baldness or alopecia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A61P19/10—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease for osteoporosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A61P21/04—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system for myasthenia gravis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A61P25/16—Anti-Parkinson drugs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/14—Drugs for disorders of the endocrine system of the thyroid hormones, e.g. T3, T4
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/06—Antianaemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/06—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a carbon chain containing only aliphatic carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings
    • C07D403/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/02—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings
    • C07D405/12—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/14—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D409/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D409/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings
    • C07D409/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D413/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D413/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings
    • C07D413/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D417/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00
    • C07D417/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing two hetero rings
    • C07D417/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
    • C07D471/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D471/04—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D487/04—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D498/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D498/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D498/04—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/02—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link
    • C07K5/0202—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link containing the structure -NH-X-X-C(=0)-, X being an optionally substituted carbon atom or a heteroatom, e.g. beta-amino acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06139—Dipeptides with the first amino acid being heterocyclic
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C07K5/0821—Tripeptides with the first amino acid being heterocyclic, e.g. His, Pro, Trp
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Virology (AREA)

Abstract

Opisuje sa nová trieda zlúčenín, ktoré sú inhibítormi enzýmu konvertujúceho interleukín-1 beta (ICE), spôsob ich prípravy a farmaceutické prostriedky s ich obsahom. ICE inhibítory sú charakterizované špecifickými štrukturálnymi a fyzikálno-chemickými vlastnosťami. Ďalej je opísané použitie uvedených zlúčenín na výrobu liečiva na liečenie alebo prevenciu ochorení sprostredkovaných IL-1, apoptózou, IGIF a IFN-gama, zápalových ochorení, autoimúnnych ochorení, deštruktívnych ochorení kostí, proliferatívnych porúch, infekčných ochorení, degeneratívnych ochorení a nekrotických ochorení.

Description

Oblasť techniky
Predkladaný vynález sa týka novej triedy zlúčenín, ktoré sú inhibítormi enzýmu konvertujúceho interleukín-ΐβ (ICE, interleukin-1 β converting enzýme). Tento vynález sa týka aj farmaceutických prostriedkov obsahujúcich tieto zlúčeniny. Zlúčeniny a farmaceutické prostriedky podľa predkladaného vynálezu sú veľmi vhodné najmä na inhibíciu aktivity ICE a v dôsledku toho ich možno výhodne použiť ako činidlá proti ochoreniam sprostredkovaným interleukínom-1 („IL-1“), apoptózou, faktorom indukujúcim interferón gama („IGIF“) a interferónom-γ („IFN-γ“), vrátane zápalových ochorení, autoimúnnych ochorení, ochorení s rozkladom kostného tkaniva, proliferatívnych porúch, nákazlivých ochorení a degeneratívnych ochorení. Predkladaný vynález sa týka aj spôsobu inhibície aktivity ICE a potlačenia produkcie IGIF a TFN-γ a spôsobu liečby ochorení spôsobených interleukínom-l-, apoptózou, IGIF a IFN-γ použitím zlúčenín a prostriedkov podľa predkladaného vynálezu. Predkladaný vynález sa týka aj spôsobu prípravy N-acylaminozlúčenín.
Doterajší stav techniky
Interleukin 1 (IL-1) je dôležitým prozápalovým a imunoregulačným proteínom, ktorý stimuluje diferenciáciu a proliferáciu fibroblastov, produkciu prostaglandínov, kolagenázy a fosfolipázy synoviálnymi bunkami a chondrocytmi, degranuláciu bazofilov a eozinofilov a aktiváciu neutrofilov (Oppenheim, J. H. a kol., Immunology Today, 7, str. 45 - 56 (1986)). Sám osebe sa podieľa na patogenéze chronických a akútnych zápalových a autoimunitných ochorení. Napríklad pri reumatoidnej artritíde je IL-1 tak mediátorom zápalových symptómov, ako aj mediátorom rozpadu chrupavkového proteoglykánu v postihnutom mieste. Wood, D. D. a kol., Arthritis Rheum. 26, 975 (1983); Pettipher, E. J. a kol., Proc. Natl. Acad. Sci. UNITED STATES OF AMERICA 71, 295 (1986); Arend, W. P. a Dayer, J. M., Arthritis Rheum. 38, 151 (1995). IL-1 je aj veľmi účinným činidlom vstrebávania kostného tkaniva (Jandiski, J. J., J. Oral. Path. 17, 145 (1988); Dewhirst, F. E. a kol., J. Immunol. 8, 2562 1985). Alternatívne sa nazýva ako „aktivačný faktor osteoklastu“ pri deštruktívnych ochoreniach kostí, ako je osteoartritída a mnohonásobný myelóm. Bataile, R. a kol., Int. J. Clin. Lab. Res. 21(4), 283 (1992). Pri určitých proliferačných poruchách, ako je akútna myelogénna leukémia a mnohonásobný myelóm, môže IL-1 podporiť rast nádorových buniek a adhéziu. Bani M. R., J. Natl. Cancer Inst. 83, 123 (1991); Vidal-Vanaclocha, F., Cancer Res. 54, 2667 (1994). Pri týchto poruchách IL-1 stimuluje aj vylučovanie iných cytokínov, ako je IL-6, ktoré môžu regulovať vývoj nádoru (Tartour a kol., Cancer Res. 54, 6243 (1994). IL-1 produkujú prevažne periférne krvné monocyty ako súčasť zápalovej odozvy a vyskytuje sa v dvoch odlišných agonistických formách, IL-Ια a IL-1 β (Mosely, B. S. a kol., Proc. Natl. Acad. Sci. 84, str. 4572 - 4576 (1987); Lonnemann, G. a koľ, Eur. J. Immunol. 19, str. 1531 - 1536 (1989)).
IL-Ιβ sa syntetizuje ako biologicky neaktívny prekurzor, pIL-Ιβ. pIL-Ιβ neobsahuje konvenčnú vedúcu sekvenciu (leader sequence) a nie je upravovaný signálnou peptidázou (March, C. J., Náture 315, str. 641 -
- 647 (1985)). Miesto toho sa pIL-Ιβ štiepi enzýmom konvertujúcim interleukín-ΐβ (ICE, interleukin-1 β converting enzýme) medzi Asp-116 a Ala-117, čim vzniká biologicky aktívny C-koncový fragment nachádzajúci sa v ľudskom sére a synoviálnej kvapaline (Sleath, P. R. a kol., J. Biol. Chem. 265, str. 14526 - 14528 (1992); A. D. Howard a kol., J. Immunol. 147, str. 2964 - 2969 (1991)). ICE je cysteínová proteáza primáme umiestnená v monocytoch. Prevádza prekurzor IL-1 β na maturovanú formu. (Black, R. A. a kol., FEBS Lett. 247, str. 386 - 390 (1989); Kostura, M. J. a kol., Proc. Natl. Acad. Sci. United States of America 86, str. 5227
- 5231 (1989). Úprava účinkom ICE je nutná aj na transport maturovaného IL-Ιβ cez bunkovú membránu. Ukázalo sa, že ICE a jeho homológy sa zapájajú do riadenia programovanej bunkovej smrti alebo apoptózy. Yuan, J. a kol., Celí 75, str. 641 - 652 (1993); Miura, M. a kol., Celí 75, str. 653 - 660 (1993); Nett-Fiordalisi, M. A. a kol., J. Celí. Biochem. 17B, str. 117 (1993). Najmä sa predpokladá, že ICE alebo homológy ICE súvisia s reguláciou apoptózy pri neurodegeneratívnych ochoreniach, ako je Alzheimerova a Parkinsonova choroba (Marx, J. a M. Baringa, Science 259, str. 760 - 762 (1993); Gagliardini, V. a kol., Science 263, str. 826 -
- 828 (1994)). Liečebné aplikácie na inhibíciu apoptózy môžu zahŕňať liečbu Alzheimerovej choroby, Parkinsonovej choroby, mŕtvice, myokardiálneho infarktu, atrofie chrbtice a starnutia.
Ukázalo sa, že ICE sprostredkuje apoptózu (programovaná bunková smrť) pri určitých typoch tkanív. Steller, H., Science 267, str. 1445 (1995); Whyte, M. a Evan, G., Náture 376, str. 17 (1995); Martin, S. J. a Green, D. R., Celí 82, str. 349 (1995); Alnemri, E. S. a kol., J. Biol. Chem. 270, str. 4312 (1995); Yuan, J., Curr. Opin. Celí Biol. 7, str. 211 (1995)). Transgénna myš s prerušeným ICE génom je deficientná čo sa týka apoptózy sprostredkovanej Fas (Kuida, K. a kol., Science 267, 2000 (1995)). Táto aktivita ICE sa odlišuje od aktivity ako enzýmu na spracovanie pro-ILl-β. Je možné, že pri určitých typoch tkanív nemusí byť inhibícia ICE spôsobená vylučovaním maturovaného IL-Ιβ, ale apoptóza môže byť inhibovaná.
Enzymaticky aktívny ICE sa už skôr opísal ako heterodimér zložený z dvoch podjednotiek p20 a plO (s molekulovou hmotnosťou 20 kDa respektíve 10 kDa). Tieto podjednotky vznikajú z proenzýmu s hmotnosťou 45 kDa (p45) cez formu p30 pomocou aktivačného mechanizmu, ktorý je autokatalytický (Thomber2 ry, N. A. a kol., Náture 356, str. 768 - 774 (1992)). Proenzým ICE sa rozdelil na niekoľko funkčných domén: prodoménu (pl4), podjednotku p22/20, polypeptidový linker a podjednotku plO (Thomberry a kol., pozri skôr; Casano a kol., Genomics 20, str. 474 - 481 (1994)).
p45 s úplnou dĺžkou sa charakterizoval pomocou svojej cDNA-sekvencie a aminokyselinovej sekvencie (patentové prihlášky PCT č. WO 91/15577 a WO 94/00154). Známe sú aj cDNA-sekvencie a aminokyselinové sekvencie p20 a plO (Thomberry a kol., pozri skôr). Sekvenovali a klonovali sa aj myšie a potkanie ICE. Vyznačujú sa vysokou homológiou aminokyselinovej sekvencie a sekvencie nukleovej kyseliny s ľudským ICE (Miller, D. K. a kol., Ann. N. Y. Acad. Sci. 696, str. 133 - 148 (1993)). Pomocou rozlíšenia atómov použitím rôntgenovej kryštalografie sa určila trojrozmerná štruktúra ICE. Wilson, K. P. a kol., Náture 370, 270-275 (1994). Aktívny enzým sa vyskytuje ako tetramér dvoch p20 a dvoch plO podjednotiek.
Ďalej existujú ľudské homológy ICE s podobnými sekvenciami na aktívnych miestach enzýmov. Medzi tieto homológy patria TX (alebo ICErel.n alebo ICH-2) (Faucheu, a kol., EMBO J. 14, str. 1914 (1995); Kamens, J. a kol., J. Biol. Chem. 270, str, 15250 (1995); Nicholson a kol., J. Biol. Chem. 270, 15870 (1995), TY (alebo lCEreun) (Nicholson a kol., J. Biol. Chem. 270, str. 15870 (1995); ICH-1 (alebo Nedd-2) (Wang, L. a kol., Celí 78, str. 739 (1994)), MCH-2 (Femandes-Alnemri, T. a kol., Cancer Res. 55, str. 2737 (1995), CPP32 (alebo YAMA alebo apopaín) (Femandes-Alnemri, T. a kol., J. Biol. Chem. 269, str. 30761 (1994); Nicholson, D. W. a kol., Náture 376, str. 37 (1995)) a CMH-1 (alebo MCH-3) (Lippke a kol., J. Biol. Chem. (1996); Femandes-Alnemri, T. a kol., (1995)). Každý z týchto homológov, rovnako ako ICE samotný, je schopný vyvolať apoptózu, keď sa podrobí expresii na transfekovaných bunkových kmeňoch. Inhibíciou jedného alebo viacerých týchto homológov peptidylovým inhibítorom ICE Tyr-Val-Ala-Asp-chlórmetylketón dôjde k inhibícii apoptózy na primárnych bunkách alebo bunkových kmeňoch. Lazebnik, a kol., Náture 371, str. 346 (1994). Zlúčeniny opísané v predkladanom vynáleze sú schopné inhibovať jeden alebo viacero homológov ICE (pozri príklad 5). Tieto zlúčeniny sa preto môžu použiť na inhibíciu apoptózy na typoch tkanív, ktoré obsahujú homológy ICE, ale ktoré neobsahujú aktívny ICE alebo neprodukujú maturovaný IL-1 β.
Faktor vyvolávajúci interferon gama (IGIF) je približne 18-kDa polypeptid, ktorý stimuluje vylučovanie interferónu gama (IFN-γ) T-bunkami. IGIF sa vylučuje aktivovanými Kupfferovými bunkami a makrofágmi in vivo a z týchto buniek sa prenáša stimuláciou endotoxínu. Teda zlúčeniny, ktoré potláčajú vylučovanie IGIF, môžu byť užitočné ako inhibítory takej stimulácie buniek T, čo môže znížiť hladinu vylučovania IFN-γ týmito bunkami.
IFN-γ je cytokín s imunomodulačnými účinkami na rôzne imúnne bunky. IFN-γ sa zapája do aktivácie makrofágu a výberu Thl buniek (F. Belardelli, APMIS 103, str. 161 (1995)). IFN-γ uplatňuje svoj účinok najmä pomocou modulácie vylučovania génov cez STAT a IRF dráhy (C. Schindler a J. E. Damell, J. E., Ann. Rev. Biochem. 64, str. 621 (1995); T. Taniguchi, J. Cancer Res. Clin. Oncol. 121, str. 516 (1995)).
Myši, ktoré majú nedostatok IFN-γ alebo jeho receptora majú mnohonásobné poruchy funkcie imunitných buniek a sú odolné proti endotoxickému šoku (S. Huang a kol., Science 259, str. 1742 (1993); D. Dalton a kol., Science 259, str. 1739 (1993); B. D. Car a kol., J. Exp. Med. 179, str. 1437 (1994)). Ukazuje sa, že rovnako ako IL-12, aj IGIF sa vyznačuje schopnosťou vyvolať produkciu IFN-γ bunkami T (H. Okamura a kol., Infection and Imunity 63, str. 3966 (1995); H. Okamura a kol., Náture 378, str. 88 (1995); S. Ushio a kol., J. Immunol. 156, str. 4274 (1996)).
Ukázalo sa, že IFN-γ prispieva k patológii spojenej s rôznymi zápalovými, nákazlivými a autoimunitnými poruchami a ochoreniami. Teda zlúčeniny schopné potlačiť vylučovanie IFN-γ by mohli byť využiteľné na zmiernenie vplyvu ochorení spojených s IFN-γ.
Biologické riadenie IGIF a teda IFN-γ sa nevysvetlilo. Je známe, že IGIF sa syntetizuje ako prekurzor proteínu zvaného „pro-IGIF“. Napriek tomu nie je jasné, ako sa pro-IGIF štiepi a či je tento proces biologicky dôležitý.
Preto prostriedky a spôsoby schopné regulovať prevod pro-IGIF na IGIF môžu byť využiteľné na potlačenie vylučovania IGIF a IFN-γ in vivo a teda na zmiernenie škodlivého vplyvu týchto proteínov, ktoré prispievajú k poruchám a ochoreniam človeka.
ICE a ďalšie členy skupiny ICE/CED-3 sa v minulosti nespájali s prevodom pro-IGIF na IGIF alebo s vylučovaním IFN-γ in vivo.
Inhibítory ICE predstavujú skupinu zlúčenín vhodných na kontrolu zápalu alebo apoptózy, alebo oboch. Sú opísané peptidové a peptidylové inhibítory ICE (patentové prihlášky PCT č. WO 91/15577; WO 93/05071; WO 93/09135; WO 93/14777 a WO 93/16710 a Európska patentová prihláška č. 0 547 699). Pri takýchto peptidylových inhibítoroch ICE sa pozorovalo, že blokujú tvorbu maturovaného IL-1 β v myšom modeli zápalu (vide infra) a potláčajú rast leukemických buniek in vitro (Ľstrov a kol., Blood 84, 380a (1994)). V dôsledku ich peptidického charakteru sa však takéto inhibítory typicky vyznačujú nežiaducimi farmakologickými vlastnosťami, ako je zlá bunková penetrácia a bunková aktivita, zlá orálna absorpcia, zlá stabilita a rýchly metabolizmus (Plattner, J. J. a D. W. Norbeck, „Drug Discovery Technologies“, (C. R. Clark a W. H. Moos, editori), Ellis Horwood, Chichester, Veľká Británia 1990, str. 92 - 126. To bráni vývoju účinných liečiv na ich báze.
Je opísané, že aj nepeptidické zlúčeniny môžu inhibovať ICE in vitro. PCT patentová prihláška č. WO 95/26958, US patent č. 5 552 400; Dole a kol., J. Med. Chem. 39, str. 2438 - 2440 (1996). Nie je však jasné, či tieto zlúčeniny majú vhodný farmakologický profil na liečebné použitie.
Ďalej bežné postupy na prípravu týchto zlúčenín nie sú výhodné. Tieto postupy využívajú tributylcínhydrid, jedovatú látku citlivú na vlhkosť. Tieto postupy sú teda nevýhodné, sú zdravotne nebezpečné a spôsobujú problémy so zvyškami jedovatých látok. Ďalej čistenie zlúčenín pripravených pomocou týchto postupov spôsobuje ťažkosti.
Preto existuje potreba zlúčenín, ktoré môžu účinne inhibovať pôsobenie ICE in vivo, na použitie ako činidlá na prevenciu a liečbu chronických a akútnych foriem ochorení spôsobených IL-1, apoptózou, IGIF alebo IFN-γ, rovnako ako zápalových ochorení, autoimunitných ochorení, ochorení s rozkladom kostného tkaniva, proliferatívnych ochorení, nákazlivých ochorení alebo degencratívnych ochorení. Existuje aj potreba spôsobu prípravy takýchto zlúčenín.
Podstata vynálezu
Predkladaný vynález poskytuje novú triedu zlúčenín a ich farmaceutický prijateľných derivátov, ktoré sú využiteľné ako inhibítory ICE. Tieto zlúčeniny sa môžu použiť samotné alebo v spojení s inými liečebnými alebo profylaktickými činidlami, ako sú antibiotiká, imunomodulátory alebo iné protizápalové činidlá, na liečbu alebo profylaxiu ochorení sprostredkovaných IL-1, apoptózou, IGIF alebo IFN-γ. V súlade s výhodným uskutočnením zlúčeniny podľa predkladaného vynálezu sú schopné viazať sa na aktívne miesto ICE a inhibovať aktivitu tohto enzýmu. V porovnaní s peptidylovými inhibítormi ICE majú ďalej zlepšenú bunkovú potenciu, zlepšenú farmakokinetiku a/alebo zlepšenú biologickú využiteľnosť.
Hlavným predmetom tohto vynálezu je poskytnutie novej triedy zlúčenín, ktoré sú inhibítormi ICE všeobecného vzorca (VI)
R1—N—R2
H (VI), kde: R'je:
(elO)
R2 je:
m je 1 alebo 2;
každá skupina R5 je nezávisle vybraná zo skupiny, ktorú tvorí: skupina -C(O)-R10, skupina -C(O)-OR9, skupina -C(O)-N(Rl0)(R10), skupina -S(O)2-R9, skupina -S(O)2-NH-R10, skupina -C(O)-CH2-OR9, skupina -C(O)-C(O)-R10, skupina -R9, atóm vodíka, skupina -C(O)-C(O)-OR10 a skupina -C(O)-C(O)-N(R9)(R10);
X’je skupina CH;
Y2 je kyslík;
každá skupina R9 je nezávisle vybraná zo skupiny, ktorú tvorí skupina -Ar3 a priama alebo rozvetvená alkylová skupina obsahujúca 1 až 6 atómov uhlíka, ktorá je prípadne substituovaná skupinou -Ar3, kde alkylová skupina obsahujúca 1 až 6 atómov uhlíka je prípadne nenasýtená;
každá skupina R10 je nezávisle vybraná zo skupiny, ktorú tvorí atóm vodíka, skupina -Ar3, a cykloalkylová skupina obsahujúca 3 až 6 atómov uhlíka a priama alebo rozvetvená alkylová skupina obsahujúca 1 až 6 atómov uhlíka, ktorá je prípadne substituovaná skupinou Ar3, kde alkylová skupina obsahujúca 1 až 6 atómov uhlíka je prípadne nenasýtená;
každá skupina R51 je nezávisle vybraná zo skupiny, ktorú tvorí skupina R9, skupina -C(O)-R9, skupina -C(O)-NH-R9, alebo všetky skupiny R51 spoločne tvoria štvorčlenný až osemčlenný nasýtený uhlíkový kruh alebo heterocyklický kruh obsahujúci skupinu -O-, skupinu -S- alebo skupinu -NH-;
každá skupina R21 je nezávisle vybraná zo skupiny, ktorú tvorí atóm vodíka alebo priama alebo rozvetvená alkylová skupina obsahujúca 1 až 6 atómov uhlíka;
každá skupina Ar3 je cyklická skupina nezávisle vybraná zo skupiny, ktorú tvorí arylová skupina obsahujúca 6, 10, 12 alebo 14 atómov uhlíka a 1 až 3 kruhy a aromatická heterocyklická skupina obsahujúca 5 až 15 atómov v kruhu a 1 až 3 kruhy, uvedená heterocyklická skupina obsahuje najmenej jeden heteroatóm (skupinu), vybraný zo skupiny, ktorú tvorí skupina -O-, skupina -S, skupina -SO-, skupina -SO2-, skupina =N- a skupina -NH-, uvedená heterocyklická skupina prípadne obsahuje jednu alebo viacero dvojitých väzieb, uvedená heterocyklická skupina prípadne obsahuje jeden alebo viacero aromatických kruhov, a uvedená cyklická skupina je prípadne jedenkrát alebo viackrát substituovaná skupinou -Q1;
každá skupina Q1 je nezávisle vybraná zo skupiny, ktorú tvorí aminoskupina, karboxylová skupina, atóm chlóru, atóm fluóru, atóm brómu, atóm jódu, nitroskupina, kyanoskupina, skupina =0, hydroxylová skupina, perfluóralkylová skupina obsahujúca 1 až 3 atómy uhlíka, skupina -R5, skupina -OR5, skupina -NH-Rý skupina -OR9, skupina -N(R9)(R10) skupina -R9, skupina -C(O)-R10 a skupina 'CH, ,
Ό pod podmienkou, že ak skupina -Ar3 je substituovaná skupinou Q1, ktorá obsahuje jednu alebo viacero skupín -Ar3, uvedené ďalšie skupiny Ar3 nie sú substituované inou skupinou - Ar3;
a s podmienkou, že keď R2 je
R2'je H; a
Y2 je O, potom R5 nemôže byť -C(O)R10, kde R10 je -CH2CH2Ar3 a Ar3 je nesubstituovaný fenyl; alebo -SO2R9, pričom R9 je metyl.
Ďalším predmetom predkladaného vynálezu je poskytnutie spôsobu prípravy N-acylaminozlúčenín pomocou spojenia karboxylovej kyseliny s amínom chráneným skupinou Alloc.
Skratky a definície
Skratky
Označenie Činidlo alebo fragment
Ala alanín
Arg arginín
Asn asparagín
Asp kyselina asparágová
Cys cysteín
Gin glutamín
Glu kyseliny glutámová
Gly gly c in
His histidín
íle izoleucín
Leu leucín
Lys lyzín
Met metionín
Phe fenylalanín
Pro prolín
Ser scrín
Thr treonín
Trp tryptofán
Tyr tyrozin
Val valín
Ac2O anhydrid kyseliny octovej
n-Bu normálna butylová skupina
DMF dimetylformamid
DIEA N,N-diizopropyletylamín
EDC l-(3-dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimid hydrochlorid
Et2O dietyléter
EtOAc etylacetát
Fmoc 9-fluorenylmetoxykarbonyl
HBTU O-benzotriazol-1 -yl-Ν,Ν,Ν',Ν'-tetrametylurónium hexafluórľosfát
HOBT hydrát 1 -hydroxybenzotriazolu
MeOH metanol
TFA kyselina trifluóroctová
Alloc alyloxykarbonyl
Definície
V predkladanom vynáleze sa používajú nasledovné termíny:
Termín „faktor indukujúci interferón gama“ alebo „IGIF“ znamená faktor, ktorý má schopnosť vyvolať endogénnu produkciu IFN-γ.
Termín „inhibítor ICE“ znamená zlúčeninu, ktorá má schopnosť inhibovať enzým ICE. Inhibícia ICE sa môže určiť použitím postupov opísaných a uvedených ako odkazy. Odborníci zistili, že in vivo ICE inhibítor nie je nutne in vitro ICE inhibítor. Napríklad prolieková forma zlúčeniny sa typicky vyznačuje nízkou alebo žiadnou aktivitou pri in vitro skúškach. Takéto proliekové formy sa môžu premeniť pomocou metabolického alebo iného biochemického postupu v tele pacienta, pričom sa získa in vivo inhibítor ICE.
Termín „cytokín“ znamená molekulu, ktorá sprostredkuje interakcie medzi bunkami.
Termín „stav“ znamená akékoľvek ochorenie, poruchu alebo účinok, ktoré majú pre subjekt škodlivé biologické následky.
Termín „subjekt“ znamená živočícha alebo jednu, alebo viacero buniek živočíšneho pôvodu. Výhodne je živočíchom cicavec, výhodnejšie človek. Bunky môžu byť v akejkoľvek forme, vrátane, ale bez obmedzenia, buniek ponechaných v tkanivách, zhlukov buniek, imortalizovaných buniek, transfekovaných buniek alebo transformovaných buniek a buniek odvodených od živočíchov, ktoré sú fyzikálne alebo fenotypovo pozmenené.
Termín „aktívne miesto“ znamená akékoľvek alebo všetky nasledovné miesta na ICE: väzbové miesto pre substrát, miesto, kde sa viaže inhibítor a miesto, kde prebieha štiepenie substrátu.
Termín „heterocyklus“ alebo „heterocyklický“ označuje stabilnú mono- alebo polycyklickú zlúčeninu, ktorá môže prípadne obsahovať jednu alebo dve dvojité väzby alebo môže prípadne obsahovať jeden alebo niekoľko aromatických kruhov. Každý heterocyklus tvoria atómy uhlíka a jeden až štyri heteroatómy nezávisle od seba vybrané zo skupiny zahŕňajúcej dusík, kyslík a síru. Termín „dusíkový heteroatóm“, „dusík ako heteroatóm“ a „sírový heteroatóm“, „sira ako heteroatóm“, ako sa tu používajú, zahŕňajú ľubovoľnú oxidovanú formu dusíka alebo síry alebo kvartemizovanú formu akéhokoľvek bázického dusíka. Medzi definované heterocykly patrí napríklad pyrimidinyl, tetrahydrochinolyl, tetrahydroizochinolyl, purinyl, pyrimidyl, indolinyl, benzimidazolyl, imidazolyl, imidazolinoyl, imidazolidinyl, chinolyl, izochinolyl, indolyl, pyridyl, pyrolyl, pyrolinyl, pyrazolyl, pyrazinyl, chinoxolyl, piperidinyl, morfolinyl, tiamorfolinyl, furyl, tienyl, triazolyl, tiazolyl, β-karbolmyl, tetrazolyl, tiazolidinyl, benzofuranyl, tiamorfolinylsulfón, benzoxazolyl, oxopiperidinyl, oxopyrolidinyl, oxazepinyl, azepinyl. izoxazolyl, tetrahydropyranyl, tetrahydrofuranyl, tiadiazolyl, benzodioxolyl, benzotienyl, tetrahydrotiofenyl a sulfolanyl. Ďalšie heterocykly sa opisujú v „Comprehensive Hcterocyclic Chemistry: The Structure, Reactions, Synthesis and Use of Heterocyclic Compounds“, (A. R. Katritzky a C. W. Wess, editori), zväzok 1 - 8, Pergamon Press, New York 1984.
Termín „cykloalkyl“ alebo „cykloalkylová skupina“ označuje mono- alebo polycyklickú skupinu, ktorá obsahuje 3 až 15 atómov uhlíka a môže prípadne obsahovať jednu alebo dve dvojité väzby. Medzi príklady patria cyklohexyl, adamantyl a norbornyl.
Termín „aryl“ alebo „arylové skupina“ označuje mono- až polycyklickú skupinu, ktorá obsahuje 6, 10, 12 alebo 14 atómov uhlíka, v ktorej je aspoň jeden kruh aromatický. Medzi príklady patria fenyl, naftyl a bifenyl.
Termín „heteroaromatický“ alebo „heteroaromatická skupina“ označuje mono- alebo polycyklickú skupinu, ktorá obsahuje 1 až 15 atómov uhlíka a 1 až 4 heteroatómy, nezávisle od seba vybrané zo skupiny zahŕňajúcej síru, dusík a kyslík, a ktoré ďalej obsahujú 1 až 3 päť- alebo šesťčlenné kruhy, z ktorých aspoň jeden je aromatický.
Termín „α-aminokyselina“ („alfa-aminokyselina“) označuje tak v prírode sa vyskytujúce aminokyseliny ako aj iné „neproteínové“ α-aminokyseliny bežne používané odborníkmi v chémii peptidov pri príprave syntetických analógov prirodzene sa vyskytujúcich peptidov, vrátane D- a L-foriem. V prírode sa vyskytujúcimi aminokyselinami sú glycín, alanín, valín, leucín, izoleucín, serín, metionín, treonín, fenylalanín, tyrozín, tryptofán, cysteín, prolín, histidín, kyselina asparágová, asparagín, kyselina glutámová, glutamín, kyselina γ-karboxyglutámová, arginín, omitín a lyzín. Medzi príklady „neproteínových“ α-aminokyselín patria hydroxylyzín, homoserín, homotyrozín, homofenylalanín, citrulín, kynurenín, 4-aminofenylalanín, 3-(2-naftyl)alanín, metionínsulfón, íerc-butylalanín, terc-butylglycín, 4-hydroxyfenylglycin, aminoalanín, fenylglycín, vinylalanín, propargylglycín, l,2,4-triazolo-3-alanín, 4,4,4-trifluórtreonín, tyronín, 6-hydroxytryptofán, 5-hydroxytryptofán, 3-hydroxykynurenín, 3-aminotyrozín, trifluórmetylalanín, 2-tienylalanín, [2-(4-pyridyl)etylJcysteín, 3,4-dimetoxyfenylalanín, 3-(2-tiazolyl)alanín, kyselina iboténová, kyselina 1-amino-1-cyklopentánkarboxylová, kyselina 1-amino-1-cyklohexánkarboxylová, kyselina chiskvalová, 3-trifluórmetylfenylalanín, 4-trifluórmetylfenylalanm, cyklohexylalanín, cyklohexylglycín, tiohistidín, 3-metoxytyrozín, elastatinal, norleucín, norvalín, alloizoleucín, homoarginín, tioprolín, dehydroprolín, hydroxyprolín, kyselina izonipektotová, homoprolín, cyklohexylglycín, kyselina α-amino-n-maslová, cyklohexylalanín, kyselina aminofenylmaslová, fenylalaniny substituované v orto-, metá- alebo pura-polohe fenylového kruhu jedným alebo dvoma substituentmi vybranými zo súboru zahŕňajúceho alkylové skupiny s 1 až 4 atómami uhlíka, alkoxyskupiny s 1 až 4 atómami uhlíka, atómy halogénov a nitroskupinu, alebo substituované metyléndioxyskupinou, β-2- a -3-tienylalanín, β-2- a -3-furanylalanín, β-2-, -3- a -4-pyridylalanín, p-(benzotienyl-2- a -3-yl)alanín, β-(1- a -2-naftyl)alanín, O-alkylované deriváty serínu, treoninu alebo tyrozínu, S-alkylovaný cysteín, S-alkylovaný homocysteín, O-sulfáty, O-fosfáty a O-karboxyláty tyrozínu, 3-sulfotyrozín, 3-karboxytyrozín, 3-fosfotyrozín, ester metánsulfónovej kyseliny a tyrozínu, ester metánfosfónovej kyseliny a tyrozínu, 3,5-dijódtyrozín, 3-nitrotyrozín, ε-alkyllyzíny a δ-alkylomitíny. Ktorákoľvek z týchto α-aminokyselín môže byť substituovaná metylovou skupinou v α-polohe, halogénom na ktoromkoľvek aromatickom zvyšku na postrannom reťazci α,-aminokyseliny, alebo vhodnou ochrannou skupinou na atómoch kyslíka, dusíka alebo síry vo zvyškoch postranných reťazcov. Vhodné ochranné skupiny sa uvádzajú v publikácii Greene, T. W. a Wuts, P. G. M., „Protective Groups in Organic Synthesis“, J. Wiley & Sons, New York 1991.
Termín „substitúcia“ označuje nahradenie atómu vodíka v zlúčenine substituentovou skupinou. V tomto vynáleze sa zo substitúcie vylučujú tie atómy vodíka, ktoré tvoria časť zvyšku vytvárajúceho vodíkovú väzbu, ktorý je schopný vytvárať vodíkovú väzbu s karbonylovým atómom kyslíka v Arg-341 v ICE alebo s karbonylovým atómom kyslíka v Ser-339 v ICE. Medzi tieto vylúčené atómy vodíka patria atómy, ktoré tvoria skupinu -NH-, ktorá je v polohe alfa vzhľadom na symbol Z alebo skupinu -CO- a ktorá sa uvádza ako -NH- a nie ako skupina X alebo nejako inak označená skupina v nasledovných všeobecných vzorcoch: (a) až (t), (v) až (y) a (I) až (VIID).
Termín „priamy reťazec“ označuje súvislý nerozvetvený reťazec kovalentne viazaných členov, t. j. atómov, ktoré tvoria časti reťazca. Priamy reťazec alebo kruh, ktorého súčasť tvorí tento priamy reťazec, môžu byť substituované, ale tieto substituenty nie sú časťou priameho reťazca.
Termín „K“ predstavuje numerické meradlo účinnosti zlúčeniny pri inhibícii aktivity cieľového enzýmu, ako je ICE. Nižšie hodnoty K, odrážajú vyššiu účinnosť. Hodnota Kj sa získa spracovaním experimentálne stanovených údajov štandardnými rovnicami enzýmovej kinetiky (pozri Segel, I. H., „Enzýme Kinetics“, Wiley-Interscience, New York 1975).
Termín „pacient“, ako sa tu používa, označuje ľubovoľného cicavca, najmä človeka.
Termín „farmaceutický účinné množstvo“ označuje množstvo účinné na liečenie alebo zlepšenie ochorenia sprostredkovaného IL-1 u pacienta. Termín „profylaktický účinné množstvo“ označuje množstvo účinné na prevenciu alebo podstatné zníženie možnosti ochorenia sprostredkovaného IL-1 u pacienta.
Termín „farmaceutický prijateľná nosná alebo pomocná látka“ označuje netoxickú nosnú alebo pomocnú látku, ktorú možno podať pacientovi spolu so zlúčeninou podľa vynálezu, a ktorá neničí jej farmakologickú účinnosť.
Termín „farmaceutický prijateľný derivát“ znamená ľubovoľnú farmaceutický prijateľnú soľ, ester alebo soľ takéhoto esteru, zlúčeniny podľa vynálezu, alebo akúkoľvek inú zlúčeninu, ktorá sa po podaní príjemcovi vyznačuje schopnosťou poskytovať (priamo alebo nepriamo) zlúčeninu podľa vynálezu alebo jej metabolit, alebo zvyšok s anti-ICE aktivitou.
Medzi farmaceutický prijateľné soli zlúčenín podľa vynálezu patria napríklad soli odvodené od farmaceutický prijateľných anorganických a organických kyselín a báz. Medzi príklady vhodných kyselín patrí kyselina chlorovodíková, bromovodíková, sírová, dusičná, chloristá, fumarová, maleínová, fosforečná, glykolová, mliečna, salicylová, jantárová, toluén-p-sulfónová, vínna, octová, citrónová, metánsulfónová, mravčia, benzoová, malónová, naftalén-2-sulfónová a benzénsulfónová. Ďalšie kyseliny, ako je kyselina šťaveľová, hoci nie sú farmaceutický prijateľné, možno použiť na prípravu solí vhodných ako medziprodukty na získanie zlúčenín podľa vynálezu a ich farmaceutický prijateľných adičných solí s kyselinami. Medzi soli odvodené od vhodných báz patria soli s alkalickými kovmi (napríklad sodíkom), soli s kovmi alkalických zemín (napríklad horčíkom), amónne soli a tetraalkylamóniové soli s 1 až 4 atómami uhlíka v každej alkylovej časti.
Vynález berie do úvahy aj „kvartemizáciu“ ľubovoľných bázických skupín obsahujúcich dusík v tu opísaných zlúčeninách. Bázický dusík možno kvartemizovať ľubovoľným z činidiel, ktoré sú známe odborníkovi, vrátane napríklad nižších alkylhalogenidov, ako je metyl-, etyl-, propyl- a butylchlorid, -bromid a jodid, dialkylsulfátov, vrátane dimetyl-, dietyl-, dibutyl- a diamylsulfátu, halogenidov s dlhým reťazcom, ako je decyl-, lauryl-, myristyl- a stearylchlorid, -bromid a -jodid, a arylalkylhalogenidov, vrátane benzyl- a fcnetylbromidu. Pomocou takejto kvartemizácie možno získať produkty rozpustné alebo dispergovateľné vo vode alebo v oleji.
Inhibítory ICE podľa vynálezu môžu obsahovať jeden alebo niekoľko „asymetrických“ atómov uhlíka a môžu sa teda vyskytovať ako racemáty a racemické zmesi, jednotlivé enantioméry, zmesi diastereoizomérov a jednotlivé diastereoizoméry. Vynález výslovne zahŕňa všetky takéto izoméme formy týchto zlúčenín. Každý stereogénny atóm uhlíka môže mať R- alebo S-konfiguráciu. Hoci konkrétne zlúčeniny a skelety uvedené v tejto prihláške ako príklady sa môžu uvádzať v konkrétnej stereochemickej konfigurácii, prihláška zahŕňa aj zlúčeniny a skelety buď s opačnou stereochémiou na ľubovoľnom z chirálnych centier, alebo ich zmesi.
Inhibítory ICE podľa vynálezu môžu obsahovať kruhové štruktúry, ktoré môžu byť prípadne substituované na atómoch uhlíka, dusíka alebo iných atómoch rôznymi substituentmi. Takéto kruhové štruktúry môžu byť substituované jedenkrát alebo viackrát. Výhodne kruhové štruktúry obsahujú medzi 0 a 3 substituentmi. Pri viacnásobných substitúciách sa môže každý substituent vybrať nezávisle od iných substituentov, ak pri tejto kombinácii substituentov vznikne stabilná zlúčenina.
Kombináciami substituentov a premenných podľa vynálezu sú iba kombinácie, následkom ktorých sa vytvorí stabilná zlúčenina.
Termín „stabilné“ ako sa tu používa, označuje zlúčeniny, ktoré sa vyznačujú dostatočnou stabilitou umožňujúcou prípravu a podanie cicavcovi pomocou spôsobov známych v odbore. Typicky sú takéto zlúčeniny stabilné pri teplote 40 °C alebo nižšej, v neprítomnosti vlhkosti alebo iných chemicky reaktívnych podmienok, počas aspoň jedného týždňa.
Substituenty môžu byť v rôznych formách. Tieto rôzne formy sú odborníkom známe a môžu sa použiť striedavo. Napríklad metylový substituent na fenylovom kruhu môže mať akúkoľvek z nasledovných foriem:
H
Me
Rôzne formy substituentov, ako je metylová skupina, sa tu používajú striedavo.
Podrobný opis vynálezu
Aby bolo možné predkladaný vynález lepšie pochopiť, nasleduje podrobný opis vynálezu.
Inhibítory ICE majú všeobecný vzorec (VI)
R1—N—R2 (VI), kde:
R1 je:
(elO)
ale
R2 je:
(a)
m je 1 alebo 2;
každá skupina R5 je nezávisle vybraná zo skupiny, ktorú tvorí:
skupina -C(O)-R10, skupina -C(O)-OR9, skupina -C(O)-N(R'°)(R10), skupina -S(O)2-R9, skupina -S(O)2-NH-RW, skupina -C(O)-CH2-OR9, skupina -C(O)-C(O)-R10, skupina -R9, atóm vodíka, skupina -C(O)-C(O)-OR10 a skupina -C(0)-C(O)-N(R9)(R10);
X5 je skupina CH;
Y2 je kyslík;
každá skupina R9 je nezávisle vybraná zo skupiny, ktorú tvorí skupina -Ar3 a priama alebo rozvetvená alkylová skupina obsahujúca 1 až 6 atómov uhlíka, ktorá je prípadne substituovaná skupinou -Ar’, kde alkylová skupina obsahujúca 1 až 6 atómov uhlíka je prípadne nenasýtená;
každá skupina R10 je nezávisle vybraná zo skupiny, ktorú tvorí atóm vodíka, skupina -Ar3, a cykloalkylová skupina obsahujúca 3 až 6 atómov uhlíka a priama alebo rozvetvená alkylová skupina obsahujúca 1 až 6 atómov uhlíka, ktorá je prípadne substituovaná skupinou Ar3, kde alkylová skupina obsahujúca 1 až 6 atómov uhlíka je prípadne nenasýtená;
každá skupina R51 je nezávisle vybraná zo skupiny, ktorú tvorí skupina R9, skupina -C(O)-R9, skupina -C(O)-NH-R9, alebo všetky skupiny R51 spoločne tvoria štvorčlenný až osemčlenný nasýtený uhlíkový kruh alebo heterocyklický kruh obsahujúci skupinu -0-, skupinu -S- alebo skupinu -NH-;
každá skupina R21 je nezávisle vybraná zo skupiny, ktorú tvorí atóm vodíka alebo priama, alebo rozvetvená alkylová skupina obsahujúca 1 až 6 atómov uhlíka;
každá skupina Ar3 je cyklická skupina nezávisle vybraná zo skupiny, ktorú tvorí arylová skupina obsahujúca 6, 10, 12 alebo 14 atómov uhlíka a 1 až 3 kruhy a aromatická heterocyklická skupina obsahujúca 5 až 15 atómov v kruhu a 1 až 3 kruhy, uvedená heterocyklická skupina obsahuje najmenej jeden heteroatóm (skupinu), vybraný zo skupiny, ktorú tvorí skupina -O-, skupina -S, skupina -SO-, skupina -SO2-, skupina =N- a skupina -NH-, uvedená heterocyklická skupina prípadne obsahuje jednu alebo viacero dvojitých väzieb, uvedená heterocyklická skupina prípadne obsahuje jeden alebo viacero aromatických kruhov, a uvedená cyklická skupina je prípadne jedenkrát alebo viackrát substituovaná skupinou -Q1;
každá skupina Q1 je nezávisle vybraná zo skupiny, ktorú tvorí aminoskupina, karboxylová skupina, atóm chlóru, atóm fluóru, atóm brómu, atóm jódu, nitroskupina, kyanoskupina, skupina =O, hydroxylová skupina, perfluóralkylová skupina obsahujúca 1 až 3 atómy uhlíka, skupina -R5, skupina -OR5, skupina -NH-R5, skupina -OR9, skupina -N(R9)(R10) skupina -R9, skupina -C(O)-R10 a skupina
O 'θΗ> ,
Ό pod podmienkou, že ak skupina -Ar3 je substituovaná skupinou Q1, ktorá obsahuje jednu alebo viacero skupín -Ar3, uvedené ďalšie skupiny Ar3 nie sú substituované inou skupinou -Ar3;
a s podmienkou, že keď R2 je
R21 je H; a
Y2 je O, potom R5 nemôže byť -C(O)R10, kde R10 je -CH2CH2ArJ a Ar3 je nesubstituovaný fenyl; alebo -SO2R9, pričom R9 je metyl.
Výhodné sú zlúčeniny
O
o
2100e
213c
213f
213g
O
213h
213i
O
213j
O
2131
O
213mm
O
213o
O
213p
O
213v
213w
213x
256
550f
550η
550ο
550ρ
2100f
Cl
2100g
2100m
2100η
Ďalej sú výhodné zlúčeniny vzorca (VI), kde:
mje 1;
R21 je atóm vodíka alebo metylová skupina;
R51 je priama alebo rozvetvená alkylová skupina obsahujúca 1 až 6 atómov uhlíka, ktorá je prípadne substituovaná skupinou -Ar3, kde skupina Ar3 je fenylová skupina prípadne substituovaná skupinou -Q1;
každá cyklická skupina Ar3 je nezávisle vybraná zo skupiny, ktorú tvorí fenylová skupina, naftylová skupina, tienylová skupina, chinolinylová skupina, izochinolinylová skupina, pyrazolylová skupina, tiazolylová skupina, izoxazolylová skupina, benzotriazolylová skupina, benzimidazolylová skupina, tienotienylová skupina, imidazolylová skupina, tiadiazolylová skupina, benzo[b]tiofenylová skupina, pyridylová skupina, benzofuranylová skupina alebo indolylová skupina, a uvedená cyklická skupina je prípadne jedenkrát alebo viackrát substituovaná skupinou -Q1;
každá skupina Q1 je nezávisle vybraná zo skupiny, ktorú tvorí aminoskupina, atóm chlóru, atóm fluóru, atóm brómu, hydroxylová skupina, skupina -R9, skupina -NH-R5, kde R5 je skupina -C(O)-R10 alebo skupina -S(O)2-R9, skupina -OR5, kde R5 je skupina -C(O)-R10, skupina -OR9, skupina -NH-R9 a skupina >H2 , ~^O kde každá skupina R9 a R10 je nezávisle priama alebo rozvetvená alkylová skupina obsahujúca 1 až 6 atómov uhlíka, ktorá je prípadne substituovaná skupinou Ar3, kde Ar3 je fenylová skupina;
s podmienkou, že ak skupina -Ar3 je substituovaná skupinou Q1, ktorá obsahuje jednu alebo viacero ďalších skupín -Ar3, uvedené ďalšie skupiny -Ar3 nie sú substituované inou skupinou -Ar3.
Z týchto zlúčenín je najvýhodnejšia tá, v ktorej R1 je skupina (el 0) a X5 je skupina CH.
Výhodné sú tiež zlúčeniny, v ktorých R5 je skupina -C(O)-R10 alebo skupina -C(O)-C(O)-R10, predovšetkým výhodná je zlúčenina, kde R10 je skupina Ar3.
Ďalšou výhodnou skupinou zlúčenín sú tie, kde R5 je skupina -(O)-R10 a R10 je skupina Ar3, kde cyklická skupina Ar3 je fenylová skupina, ktorá je prípadne jedenkrát alebo viackrát substituovaná: skupinou -R9, kde R9 je priama alebo rozvetvená alkylová skupina obsahujúca 1 až 4 atómy uhlíka, atómom fluóru, atómom chlóru, skupinou -NH-R5, kde R5 je atóm vodíka alebo skupina -C(O)-R10, kde Ri0 je priama alebo rozvetvená alkylová skupina obsahujúca 1 až 6 atómov uhlíka, ktorá je prípadne substituovaná skupinou -Ar3, kde Ar3 je fenylová skupina, skupinou -N(R9)(R10), kde R9 a R10 sú nezávisle priama alebo rozvetvená alkylová skupina obsahujúca 1 až 4 atómy uhlíka, alebo skupinou -OR5, kde R5 je atóm vodíka alebo priama, alebo rozvetvená alkylová skupina obsahujúca 1 až 4 atómy uhlíka.
Z týchto zlúčenín sú ešte výhodnejšie zlúčeniny, kde Ar3 je fenylová skupina, ktorá je jedenkrát alebo viackrát substituovaná v polohe 3 alebo v polohe 5 atómom chlóru alebo v polohe 4 skupinou -H-R5, skupinou -N(R9)(R10) alebo skupinou -OR5; alebo kde Ar3 je fenylová skupina, ktorá je jedenkrát alebo viackrát substituovaná v polohe 3 alebo v polohe 5 skupinou -R9, kde R9 je priama alebo rozvetvená alkylová skupina obsahujúca 1 až 4 atómy uhlíka, a v polohe 4 skupinou -OR5.
V rámci nich sú ešte výhodnejšie zlúčeniny:
213k
213m
550k
550m
214w-l
214w-2
214w-3
214w-4
214w-5
214w-6
214w-7
Výhodné sú tiež zlúčeniny, kde 5 je skupina -C(O)-R10, kde R10 je skupina Ar3 a cyklická skupina Ar3 je vybraná zo skupiny, ktorú tvorí indolylová skupina, benzimidazolylová skupina, tienylová skupina, chinolylová skupina, izochinolylová skupina, a benzo[b]tiofenylová skupina, a uvedená cyklická skupina je prípadne jedenkrát alebo viackrát substituovaná skupinou -Q1.
Ďalším výhodným uskutočnením sú zlúčeniny, kde cyklická skupina Ar3 je izochinolylová skupina, a uvedená cyklická skupina je prípadne jedenkrát alebo viackrát substituovaná skupinou -Q1.
Výhodné sú nasledovné zlúčeniny:
412c
O
H ô
412d
412e
412g
O
550q
Výhodná je taktiež zlúčenina
412f
Medzi výhodné uskutočnenia patrí aj zlúčenina, kde R5 je skupina -C(O)-R10, kde R10 je skupina Ar3 a cyklická skupina Ar3 je fenylová skupina, ktorá je substituovaná skupinou
415b
415c
Zlúčeniny v súlade s predkladaným vynálezom sú opísané v prihláškach US 08/575 641 a 08/598 332, ktoré sú takisto v konaní a ktoré sa tu uvádzajú ako odkaz.
Zlúčeniny v súlade s predkladaným vynálezom majú molekulovú hmotnosť nižšiu alebo rovnajúcu sa 700 Daltonom, výhodnejšie 400 až 600 Daltonov. Tieto výhodné zlúčeniny sa po perorálnom podaní ľahko vstrebávajú krvným riečiskom pacientov. Táto perorálna vhodnosť robí z týchto zlúčenín výborné činidlá na perorálne liečenie a prevenciu proti chorobám súvisiacim s IL-1, apoptózou, IGIF alebo IFN-y.
Je potrebné vziať do úvahy, že zlúčeniny podľa vynálezu sa môžu vyskytovať v rôznych rovnovážnych formách v závislosti od podmienok, vrátane výberu rozpúšťadla, pH a ďalších, ako je známe odborníkovi v odbore. Všetky takéto formy týchto zlúčenín sú výslovne zahrnuté v rozsahu vynálezu. Mnohé zlúčeniny podľa vynálezu, obzvlášť tie, ktoré obsahujú aldehydické skupiny alebo ketoskupiny v zvyšku R3 a karboxylové skupiny v zvyšku T, sa môžu vyskytovať najmä v hemiketálových (alebo hemiacetálových) alebo hydratovaných formách, ako sa znázorňuje:
(EQ1)
O II
O II
R1—N-X1
o II /(CJ2)m—C R1—N—X1 Q H (CH2)g— C—R13
OH
Hydratovaná forma
Hemiketálová alebo hemiacetálová forma
V závislosti od výberu rozpúšťadla a ďalších podmienok známych odborníkovi v odbore sa môžu zlúčeniny podľa vynálezu vyskytovať aj v acyloxyketálovej, acyloxyacetálovej, ketálovej alebo acetálovej forme: (EQ2)
O
II (CJ2)m-C.
R1—N—χι( i \ \ o = /
(CH2)g—C—R13
OR
R1—N—X1
I H
(CJ2)m—C—OH (CH2)g-C-Rl3
Acyloxyketálová alebo acyloxyacetálová forma
O
II (CJ2)m-c-OH R1—N—x/ OR 1 \ I
H (CH2)g—C—R13
OR
Ketálová alebo acetálová forma
Okrem toho je potrebné vziať do úvahy, že rovnovážne formy zlúčenín podľa vynálezu môžu zahŕňať tautomérne formy. Všetky takéto formy týchto zlúčenín sú výslovne zahrnuté v rozsahu vynálezu.
Je potrebné vziať do úvahy, že z dôvodu rozšírenia selektívnych biologických vlastností sa zlúčeniny podľa vynálezu môžu modifikovať vhodnými funkčnými skupinami. Takéto modifikácie sú v odbore známe a patria medzi ne modifikácie, ktoré zvyšujú biologickú penetráciu do daného biologického systému (napríklad do krvi, lymfatického systému, centrálneho nervového systému), zvyšujú orálnu dostupnosť, zvyšujú rozpustnosť na umožnenie injekčného podania, menia metabolizmus a menia rýchlosť vylučovania. Okrem toho sa zlúčeniny podľa vynálezu môžu meniť na formu prckurzorov, takže sa požadovaná zlúčenina vytvára v tele pacienta ako výsledok pôsobenia metabolických alebo iných biochemických procesov na prekurzor. Medzi niekoľko príkladov prekurzorových foriem patria ketálové, acetálové, oxímové a hydrazónové formy zlúčenín, ktoré obsahujú ketoskupiny alebo aldehydické skupiny, najmä ak sa vyskytujú v skupine R3 zlúčenín podľa vynálezu. Ďalšími príkladmi proforiem sú hemiketál, hemiacetál, acyloxyketál, acyloxyacetál, ketál a acetál formy, ktoré sú opísané v rovniciach EQ1 a EQ2.
ICE a TX štiepia a tým aktivujú pro-IGIF.
ICE proteáza sa v minulosti identifikovala na základe schopnosti spracovať inaktívny pro-IL-1 na účinný IL-1, čo je in vitro a in vivo protizápalová látka. Teraz ukazujeme, že ICE a jeho blízky homológ TX (Caspasa-4, C. Faucheau a kol., EMBO J. 14, str. 1914 (1995)) môžu proteolyticky štiepiť inaktívny pro-IGIF. Tento krok je nutný na konverziu pro-IGIF na svoju aktívnu maturovanú formu IGIF. Štiepenie pro-IGIF látkou ICE a pravdepodobne látkou TX takisto napomáha exportu IGIF von z buniek.
Na stanovenie, či nejaké známe členy skupiny ICE/CED-3 proteáz môžu v kultivovaných bunkách spracovať pro-IGIF na IGIF (príklad 23) (obrázok 1 A), sme najskôr použili prechodnú koexpresiu plazmidov zavedených prostredníctvom transfekcie do Cos buniek.
Obrázok 1A ukazuje, že ICE štiepi pro-IGIF v Cos bunkách podrobených kotransfekcii plazmidmi, ktoré sa vyznačujú expresiou pro-IGIF v prítomnosti aktívnej ICE. Cos bunky sa podrobili transfekcii expresnými plazmidmi pre pro-IGIF izolovane (pás 2) alebo v kombinácii s indikovanými expresnými plazmidmi kódujúcimi prírodný typ alebo inaktívne mutanty proteáz skupiny ICE/CED-3 (pásy 3-12). Z buniek sa pripravili roztoky, ktoré sa analyzovali na prítomnosť IGIF proteínu imunoprenosom „imunoblotting“ pomocou antiIGIF protilátky. Pás 1 zahŕňa roztoky z buniek podrobených porovnávacej transfekcii.
Koexpresia pro-IGIF prostredníctvom ICE alebo TX viedla k štiepeniu pro-IGIF na polypeptid svojou veľkosťou podobný prírodnému 18 kDa maturovanému IGIF. Tento bod procesu sa blokuje jednobodovými mutáciami, ktoré zmenia katalytické cysteínové zvyšky, a tak inaktivujú ICE a TX (Y. Gu a kol., EMBO J. 14, 1923 (1995).
Koexpresia CPP32 (Caspase-3), čo je proteáza zúčastňujúca sa odumierania programovaných buniek (T. Femandes-Alnemri a kol., J. Biol. Chem. 269, 30761 (1994); D. W. Nicholson a kol., Náture 376, 37 (1995)), viedla k štiepeniu pro-IGIF na menšie polypeptidy, kým koexpresia CMH-1 (Caspase-7), čo je blízky homológ CPP32 (J. A. Lippke a kol., J. Biol. Chem. 271, 1825 (1996)), pri štiepení pro-IGIF zlyhala. Preto sa ICE a TX javia ako schopné štiepiť pro-IGIF na polypetid svojou veľkosťou podobný prírodnému 18 kDa IGIF.
Ďalej sme testovali schopnosť týchto cysteínových proteáz štiepiť pro-IGIF in vitro použitím čisteného pro-IGIF spojeného s rekombinovaným (His)6 ako substrátu (príklad 23).
Obrázok 1B ukazuje, že ICE štiepi in vitro pro-IGIF. Čistený rekombinovaný pro-IGIF (2 pg) s naviazaným (His)(, sa inkuboval s indikovanou cysteinovou proteázou v prítomnosti alebo v neprítomnosti inhibítorov ICE alebo CPP32, ako sa opisuje v príklade 23. Produkty štiepenia sa analyzovali pomocou SDS-PAGE a farbiva Comassie modrej.
ICE štiepil 24 kDa pro-IGIF na dva polypeptidy s približne 18 kDa a 6 kDa. Sekvenovanie N-koncových aminokyselín štiepnych produktov ICE ukázalo, že 18 kDa polypeptid obsahuje rovnaké N-koncové aminokyselinové zvyšky (Asn-Phe-Gly-Arg-Leu) ako prírodný IGIF. To ukazuje, že ICE štiepi pro-IGIF v autentickom bode spracovania (Asp35-Asn36)(H. Okamura a kol., Infection and Immunity 63, 3966 (1995); H. Okamura a kol., Náture 378, 88 (1995)). Sekvenovanie N-koncových aminokyselín štiepnych produktov CPP32 ukázalo, že CPP32 štiepil pro-IGIF v pozícii Asp69-Ue70.
Štiepenie pro-IGIF pôsobením ICE je vysoko špecifické s katalytickou účinnosťou (kcílt/Km) 1,4 x 107 M'1.s’1 (Km = 0,6 ± 0,1 μΜ; k^, = 8,6 ± 0,3 s'1) a podlieha inhibícii špecifickými ICE inhibítormi (Ac-Tyr-Val-Ala-Asp-aldehyd a Cbz-Val-Ala-Asp-[(2,6-di- chlórbenzoyl)oxy]metylketón) (N. A. Thomberry a kol., Náture 356, 768 (1992); R. E. Dolle a kol., J. Med. Chem. 37, 563 (1994)).
Obrázok 1C ukazuje, že pro-IGIF aktivuje in vitro štiepenie ICE. Nerozštiepený pro-IGIF, produkty štiepenia pro-IGIF pôsobením ICE alebo CPP32, alebo rekombinovaný maturovaný IGIF (RIGIF) sa každý pridal do kultúry buniek A.E7 pri konečnej koncentrácii 12 ng/ml alebo 120 ng/ml (pozri príklad 23). Po 18 hodinách sa v kultivačnom médiu uskutočnilo stanovenie množstva IFN-γ použitím ELISA súpravy. Kým nerozštiepený pro-IGIF nemal žiadnu detegovateľnú IFN-γ indukčnú aktivitu, pro-IGIF rozštiepený pomocou ICE bol pri indukcii produkcie IFN-γ v Thl bunkách.
Rovnako ako ICE aj jeho homológ TX štiepil pro IGIF na polypeptidy s podobnou veľkosťou. Jeho katalytická účinnosť však bola o dva poriadky nižšia než v prípade ICE.
V súlade s pozorovaním pri Cos bunkách v predošlých experimentoch CPP32 štiepil pro-IGIF na inom mieste (Asp69-Ile70) a výsledné polypeptidy mali nízku IFN-γ indukčnú aktivitu (obrázok 1C). CMH-1 a granzým B vo viditeľnej miere pro-IGIF neštiepili.
Tieto výsledky spoločne ukazujú, že v Cos bunkách aj in vitro sú ICE a TX schopné spracovať inaktívny prekurzor pro-IGIF v autentickom bode premeny, pričom vznikne biologicky aktívna molekula IGIF.
Spracovanie pro-IGIF pôsobením ICE napomáha jeho exportu.
IGIF produkujú in vivo aktivované Kupfferove bunky a makrofágy a von z bunky sa exportuje po stimulácii endotoxínmi (H. Okamura a kol., Infection and Immunity 63, 3966 (1995); H. Okamura a kol., Náture 378, 88 (1995)). Na zistenie, či vnútrobunkové štiepenie pro-IGIF pôsobením ICE napomáha exportu IGIF z bunky, sme použili koexpresný systém Cos buniek (príklad 23). To je prípad pro-IL-Ιβ, keď sa tento štiepi pôsobením ICE na aktívny IL-18 (N. A. Thomberry a kol., Náture 356, 768 (1992)).
Na obrázku 2A sa Cos bunky podrobujú transfekcii expresným plazmidom pro-IGIF izolovane (pásy 2 a 6) alebo v kombinácii s expresným plazmidom kódujúcim prírodný typ (pásy 3 a 7) alebo inaktívnym mutantom ICE (pásy 4 a 8), ktoré sa metabolický označili 35S-metionínom (pozri príklad 24). Bunkový roztok (vľavo) a upravené médium (vpravo) sa imunologický vyzrážali pôsobením anti-IGIF antiséra. Imunologický vyzrážané proteíny sa analyzovali pomocou SDS-PAGE a fluorografie (obrázok 2A).
V upravenom médiu Cos buniek s koexpresiou pro-IGIF a ICE sa našiel 18 kDA polypeptid zodpovedajúci svojou veľkosťou maturovanému IGIF, kým Cos bunky s koexpresiou pro-IGIF a inaktívneho ICE mutanta (ICE-C285S) alebo iba pro-IGIF (-) exportovali len veľmi malé množstvo pro-IGIF a žiadne detegovateľné množstvo maturovaného IGIF. Domnievame sa, že z buniek podrobených kotransfekcii sa exportovalo asi 10 % aktívneho maturovaného IGIF, kým v bunkách zostalo viac než 99 % pro-IGIF.
Ďalej sme v bunkovom roztoku a upravenom médiu uvedených buniek podrobených transfekcii stanovili aj prítomnosť IFN-γ, ktorý indukuje aktivitu (pozri príklad 24). IFN-γ indukujúci aktivitu sa našiel v bunkovom roztoku i upravenom médiu Cos buniek s koexpresiou pro-IGIF a ICE, ale nenašiel sa v bunkách s expresiou pro-IGIF alebo iba ICE (obrázok 2B).
Tieto výsledky naznačujú, že ICE štiepenie pro-IGIF uľahčuje export aktívneho IGIF z bunky.
Pro-IGIF je in vivo fyziologický substrát ICE.
Na štúdium úlohy ICE v proteolytickej aktivácii a exporte IGIF pri fyziologických podmienkach sme sledovali spracovanie pro-IGIF a export IGIF z lipopolysacharidom (LPS) aktivovaných Kupfferových buniek získaných z Propiobacterium acnes odvodených od prírodného typu a ICE deficitných (ICE -/-) myší (príklad 25).
Ako ukazuje obrázok 3A, Kupfferove bunky ICE myší sa vyznačujú defektným exportom IGIF. Roztoky Kupfferových buniek prírodného typu a ICE -/- myší obsahovali podobné množstvo IGIF, čo sa stanovilo pomocou ELISA súpravy. IGIF však možno nájsť iba v upravenom médiu prírodného typu a nie v ICE -/bunkách. Preto ICE deficitné (ICE -/-) myši syntetizujú pro-IGIF, ale nie sú schopné jeho exportu či už ide o extracelulámy pro-IGIF alebo aktívnu maturovanú formu IGIF.
Na stanovenie, či ICE deficitné (ICE -/-) myši spracovávajú vnútrobunkový pro-IGIF, ale nie sú schopné exportu IGIF, sa Kupfferove bunky prírodného typu a ICE -/- myší metabolický označili 35S-metionínom a uskutočnili sa IGIF imunologické zrážacie pokusy (v bunkovom roztoku a v upravenom médiu, pozri príklad
25) . Tieto pokusy dokázali, že v prírodnom type aj v ICE -/- Kupfferových bunkách bol prítomný nespracovaný pro-IGIF. Aktívny 18 kDa maturovaný IGIF bol však prítomný iba v upravenom médiu prírodného typu a nie v ICE -/- Kupfferových bunkách (obrázok 3B). To ukazuje, že na export spracovaného IGIF von z bunky je nutný aktívny ICE.
Okrem toho upravené médium prírodného typu (nie však ICE -/- Kupfferove bunky) obsahovalo aktivitu indukujúci IFN-γ, ktorý nebol prisudzovaný pôsobeniu IL-12, pretože nebol necitlivý na neutralizujúcu anti-IL-12 protilátku. Neprítomnosť IGIF v upravenom médiu ICE -i- Kupfferových buniek je v súlade s objavom v Cos bunkách, že spracovanie pro-IGIF pôsobením ICE je nutné na export aktívneho IGIF.
Obrázok 3C a 3D ukazujú, že in vivo ICE myši majú zníženú hladinu IGIF respektíve IFN-γ v sére. Prírodný typ (ICE +/+) a ICE -/- myši (n = 3) s teplom deaktivovaným P. acnes sa naočkovali LPS (príklad
26) a pomocou ELISA testu sa v sére očkovaných myší po 3 hodinách po LPS očkovaní (príklad 25) stanovili hladiny IGIF (obrázok 3C) a IFN-γ (obrázok 3D).
Séra ICE -/- myší stimulovaných P. acnes a LPS obsahovali v prítomnosti anti-IL-12 protilátky znížené hladiny IGIF (obrázok 3C) a neobsahovali žiadny detegovateľný IFN-γ indukujúci aktivitu. Znížené hladiny IGIF v sére pravdepodobne zodpovedajú za značné zníženie hladiny IFN-γ v sére ICE -!- myší (obrázok 3D), pretože sme použitím týchto podmienok nepozorovali žiadny pozorovateľný rozdiel v produkcii IL-12 v prípade ICE myší. V súlade s touto interpretáciou je pozorovanie, že neadherentné splenocyty prírodného typu a ICE -/- myší produkovali pri stimulácii rekombinantom aktívneho IGIF in vitro podobné množstvo IFN-γ. Preto zhoršená produkcia IFN-γ nie je dôsledkom žiadneho zjavného defektu T buniek ICE -/- myší.
Spoločne tieto výsledky potvrdzujú kritickú úlohu ICE pri spracovaní prekurzora IGIF a pri exporte aktívneho IGIF in vivo a zároveň in vitro.
Na podrobnejšie objasnenie vzťahu medzi IFN-γ hladinou v sére a ICE aktivitou in vivo sa zistil časový priebeh po stimulácii prírodného typu a ICE-deficitných myši pôsobením LP S (príklad 26) (obrázok 4).
Obrázok 4 ukazuje časový priebeh zvýšenia hladiny IFN-γ v sére pri prírodnom type myší s udržiavanými hladinami > 17 ng/ml v čase od 9 - 18 hodín po stimulácii LPS. Ako sa predpovedalo na základe uvedených pokusov, hladina IFN-γν sére bola podstatne nižšia pri ICE -/- myšiach. Maximálne sa za rovnaký čas dosiahli 2 ng/ml, čo je asi 15 % hladiny pozorovanej pri myšiach prírodného typu (obrázok 4).
Pri zvieratách sa sledovali aj klinické príznaky otravy krvi a každé 4 hodiny sa merala pri prírodnom type myši a ICE myší stimulovaných 30 mg/kg alebo 100 mg/kg LPS (iba ICE -/-) telesná teplota. Výsledky na obrázku 4 ukazujú, že pri myši prírodného typu sa do 12 hodín po stimulácii pozorovalo značné zníženie telesnej teploty (z 36 °C na 26 °C). Pri všetkých zvieratách sa prejavila otrava krvi a všetky zahynuli do 24 - 28 hodín.
Na rozdiel od toho pri ICE -/- myši stimulovaných 30 mg/kg LPS sa pozorovalo zníženie telesnej teploty len o 3 - 4 °C a minimálne príznaky ťažkostí s nulovou úmrtnosťou. Pri ICE myši stimulovaných 100 mg/kg LPS sa pozorovali klinické príznaky, zníženie telesnej teploty a úmrtnosť podobná prírodnému typu myší, ktoré sa stimulovali 30 mg/kg LPS.
ICE inhibítor Ac-YVAD-CHO je ekvipotentný inhibítor produkcie IL-Ιβ a IFN-γ.
Pretože spracovanie a vylučovanie biologicky aktívneho IGIF ovplyvňuje ICE, porovnali sme aktivitu reverzibilného ICE inhibítora (Ac-YVAD-CHO) proti IL-Ιβ a IFN-γ produkciu, a to skúškou na monojadrových periférnych krvných bunkách (PBMC) (príklad 27).
Výsledky na obrázku 5 ukazujú podobnú schopnosť Ac-YVAD-CHO ICE inhibítora znížiť produkciu IL-1 β a IFN-γ v ľudských PBMC s IC50 2,5 μΜ (pri oboch). Podobné výsledky sa získali pri štúdiu so splenocytmi prírodného typu myší. Tieto poznatky poskytujú ďalší dôkaz, že pro-IGIF je fyziologickým substrátom ICE, a naznačujú, že ICE inhibítory budú vhodnými nástrojmi na reguláciu fyziologickej hladiny IGIF a IFN-γ.
V súhrne sme zistili, že ICE reguluje hladiny IGIF a IFN-γ in vivo a in vitro a že ICE inhibítory môžu znížiť v ľudských bunkách hladinu IGIF a IFN-γ. Tieto výsledky sa opísali v prihláške US 08/712 878, ktorá je v konaní a ktorú tu uvádzame ako odkaz.
Prostriedky a spôsoby
Farmaceutické prostriedky a spôsoby v súlade s predkladaným vynálezom sú vhodné na in vivo reguláciu hladín IL-1, IGIF a IFN-γ. Prostriedky a spôsoby v súlade s predkladaným vynálezom sú tak vhodné na liečenie alebo obmedzenie rozvoja a závažnosti príznakov vyvolaných IL-1, IGIF a IFN-γ.
Zlúčeniny podľa vynálezu sú výbornými ligandmi pre ICE. V súlade s tým sú tieto zlúčeniny schopné zamerať sa na určité procesy súvisiace s ochoreniami sprostredkovanými IL-1 a inhibovať ich, ako je tomu v prípade konverzie prekurzora IL-Ιβ na maturovaný IL-Ιβ, a tým inhibovať rozhodujúcu aktivitu tohto proteínu pri zápalových ochoreniach, autoimunitných ochoreniach a neurodegeneratívnych ochoreniach. Zlúčeniny podľa vynálezu napríklad inhibujú konverziu prekurzora IL-Ιβ na maturovaný IL-Ιβ v dôsledku inhibície ICE. Keďže má ICE zásadný význam pri produkcii ma túrovaného IL-1, blokuje inhibícia tohto enzýmu účinný začiatok fyziologických účinkov a symptómov sprostredkovaných IL-1, ako sú zápaly, pomocou inhibície produkcie ma túrovaného IL-1. Inhibíciou aktivity prekurzora IL-Ιβ teda zlúčeniny podľa vynálezu účinne fungujú ako inhibítory IL-1.
Podobne zlúčeniny v súlade s predkladaným vynálezom inhibujú konverziu prekurzora IGIF na aktívnu formu IGIF. Preto inhibíciou produkcie IGIF zlúčeniny v súlade s predkladaným vynálezom účinne pôsobia ako inhibítory produkcie IFN-γ.
Preto jedno z uskutočnení predkladaného vynálezu poskytuje spôsob obmedzenia produkcie IGIF u pacientov, ktorý zahŕňa krok podania farmaceutického prostriedku obsahujúceho terapeuticky účinné množstvo inhibítora ICE a farmaceutický vhodného nosiča týmto pacientom.
Ďalšie uskutočnenie predkladaného vynálezu poskytuje spôsob obmedzenia produkcie IFN-γ u pacientov, ktorý zahŕňa krok podania farmaceutického prostriedku obsahujúceho terapeuticky účinné množstvo inhibítora ICE a farmaceutický vhodného nosiča týmto pacientom.
V ďalšom uskutočnení spôsoby v súlade s predkladaným vynálezom zahŕňajú krok podania farmaceutického prostriedku obsahujúceho inhibítor ICE-pribuznej proteázy, ktorý jc schopný štiepiť pro-IGIF na aktívny IGIF, a farmaceutický vhodný nosič. Jednou takouto ICE-príbuznou proteázou je TX, ako sa opisuje. Tento vynález tak poskytuje spôsoby a farmaceutické prostriedky na reguláciu hladín IGIF a IFN-γ podávaním inhibítora TX.
Možno nájsť aj iné ICE-príbuzné proteázy schopné spracovať pro-IGIF na aktívnu formu IGIF. Preto je zrejmé, že inhibítory týchto enzýmov odborníci v tejto oblasti poznajú a že tieto takisto spadajú do rámca tohto vynálezu.
Zlúčeniny podľa vynálezu možno použiť bežným spôsobom na liečenie ochorení, ktoré sú sprostredkované IL-1, apoptózou, IGIF alebo IFN-γ. Takéto spôsoby liečenia, dávkovanie pri nich a podmienky liečby môže odborník v odbore vybrať z dostupných spôsobov a techník. Napríklad sa zlúčenina podľa vynálezu môže kombinovať s farmaceutický prijateľnou nosnou a/alebo pomocnou látkou na podanie pacientovi postihnutému ochorením sprostredkovaným IL-1, apoptózou, IGIF alebo IFN-γ, farmaceutický prijateľným spôsobom a v množstve účinnom na zníženie závažnosti tohto ochorenia.
Alternatívne sa môžu zlúčeniny podľa vynálezu použiť v prostriedkoch a spôsoboch liečby alebo ochrany jedincov proti ochoreniam sprostredkovaným IL-1, apoptózou, IGIF alebo IFN-γ počas dlhších časových období. Tieto zlúčeniny sa môžu použiť v takýchto prostriedkoch buď samotné, alebo spolu s inými zlúčeninami podľa vynálezu spôsobom, ktorý je v súlade s bežným využitím inhibítorov ICE vo farmaceutických prostriedkoch. Napríklad sa môže zlúčenina podľa vynálezu zmiešať s farmaceutický prijateľnými nosnými a/alebo pomocnými látkami bežne používanými vo vakcínach a podávať v profylaktický účinných množstvách na ochranu jedincov počas dlhších časových období proti ochoreniam sprostredkovaným IL-1, apoptózou, IGIF alebo IFN-γ.
Zlúčeniny podľa vynálezu sa môžu podávať spoločne s inými inhibítormi ICE na zvýšenie účinku terapie alebo profylaxie proti rôznym ochoreniam sprostredkovaným IL-1, apoptózou, IGIF alebo IFN-γ.
Okrem toho sa zlúčeniny podľa vynálezu môžu použiť v kombinácii buď s bežnými protizápalovými činidlami, alebo s matricovými metaloproteázovými inhibítormi, lipoxygenázovými inhibítormi a antagonistami cytokínov iných než IL-Ιβ.
Zlúčeniny podľa vynálezu sa môžu podávať aj v kombinácii s imunomodulátormi (napríklad s bropirimínom, protilátkou proti ľudskému alfa-interferónu, IL-2, GM-CSF, metionínkefalínom, interferónom alfa, dietylditiokarbamátmi, faktorom nekrózy tumorov (tumor necrosis factor), naltrexonom a rEPO) alebo s prostaglandínmi, na prevenciu alebo potláčanie symptómov ochorení sprostredkovaných IL-1, ako je zápal.
Ak sa zlúčeniny podľa vynálezu podávajú v kombinačných terapiách s inými činidlami, možno ich pacientovi podávať postupne alebo súčasne. Alternatívne sa môžu farmaceutické alebo profylaktické prostriedky podľa vynálezu tvoriť kombináciou inhibítora ICE podľa vynálezu a iného terapeutického alebo profylaktického činidla.
Farmaceutické prostriedky podľa vynálezu obsahujú ľubovoľné zo zlúčenín podľa vynálezu a ich farmaceutický prijateľných solí s ľubovoľným farmaceutický prijateľným nosičom, pomocnou látkou alebo vehikulom. Medzi farmaceutický prijateľné nosiče, pomocné látky a vehikulá, ktoré možno použiť vo farmaceutických prostriedkoch podľa vynálezu patria, bez toho, aby však išlo o obmedzujúci výpočet, ionomeniče, alumína, alumíniumstearát, lecitín, sérové proteíny, ako je albumín ľudského séra, pufrovacie látky, ako sú fosfáty, glycín, kyselina sorbová, sorbát draselný, zmesi čiastočných glyceridov nasýtených rastlinných mastných kyselín, voda, soli alebo elektrolyty, ako je protamínsulfát, hydrogénfosforečnan sodný, hydrogénfosforečnan draselný, chlorid sodný, soli zinku, koloidný oxid kremičitý, magnéziumtrisilkát, polyvinylpyrolidón, látky na báze celulózy, polyetylénglykol, natriumkarboxymetylcelulóza, polyakryláty, vosky, polyetylénpolyoxypropylénové blokové polyméry, polyetylénglykol a lanolín. Na uľahčenie podávania zlúčenín v súlade s predkladaným vynálezom sa môžu výhodne použiť aj cyklodextríny, ako je α-, β- a γ-cyklodextrín alebo chemicky modifikované deriváty, ako sú hydroxylalkylcyklodextríny, vrátane 2- a 3-hydroxypropyl-5-cyklodextrínov alebo iné solubilizované deriváty.
Farmaceutické prostriedky podľa vynálezu sa môžu podávať orálne, parenterálne, inhalačným sprejom, miestne, rektálne, nazálne, bukálne, vaginálne alebo pomocou implantovaného zásobníka. Výhodné je orálne podanie. Farmaceutické prostriedky podľa vynálezu môžu obsahovať ľubovoľné bežné netoxické farmaceutický prijateľné nosiče, pomocné látky alebo vehikulá. Termín „parenterálne“, ako sa tu používa, zahŕňa subkutánne, intrakutánne, intravenózne, intramuskuláme, intraartikuláme, intrasynoviálne, intrasternálne, intratekálne, intralezionálne a intrakraniálne injekcie alebo infúzie.
Farmaceutické prostriedky môžu byť vo forme sterilného injikovateľného prípravku, napríklad vo forme sterilnej injikovateľnej vodnej alebo olejovej suspenzie. Táto suspenzia sa môže formulovať podľa postupov známych v odbore, pričom sa použijú vhodné dispergátory alebo zmáčadlá (ako je napríklad Tween 80) a suspendujúce činidlá. Sterilným injikovateľným prípravkom môže byť aj sterilný injikovateľný roztok alebo suspenzia v netoxickom parenterálne prijateľnom riedidle alebo rozpúšťadle, napríklad roztok v 1,3-butándiole. Medzi prijateľné vehikulá a rozpúšťadlá, ktoré sa môžu použiť, patria manitol, voda, Ringerov roztok a izotonický roztok chloridu sodného. Okrem toho sa ako rozpúšťadlo alebo suspendujúce prostredie bežne používajú sterilné nevysychavé oleje. Na tento účel sa môže použiť ľubovoľný nedráždivý nevysychavý olej vrátane syntetických mono- a diglyceridov. Na prípravu injikovateľných prostriedkov sú vhodné mastné kyseliny, ako je kyselina olejová a jej glyceridové deriváty, rovnako ako v prírode sa vyskytujúce farmaceutický prijateľné oleje, ako je olivový olej alebo ricínový olej, najmä v ich polyoxyetylénových formách. Tieto olejové roztoky alebo suspenzie môžu obsahovať aj alkohol s dlhým reťazcom ako riedidlo alebo dispergátor, ako je opísané v Ph. Helv. (Pharmacopeia Helvetica) alebo podobný alkohol.
Farmaceutické prostriedky podľa vynálezu sa môžu podávať orálne v ľubovoľnej orálne prijateľnej dávkovacej forme, vrátane, bez toho, aby však išlo o obmedzujúci výpočet, kapsúl, tabliet a vodných suspenzií a roztokov. V prípade tabliet na orálne podanie patrí medzi bežné nosiče laktóza a kukuričný škrob. Typicky sa pridávajú aj lubrikačné činidlá, ako je stearát horečnatý. Na orálne podanie vo forme kapsúl patrí medzi vhodné riedidlá laktóza a sušený kukuričný škrob. Ak sa vodné suspenzie podávajú orálne, kombinuje sa účinná látka s emulgátormi a suspendujúcimi činidlami. Ak je to žiaduce, môžu sa pridávať niektoré sladidlá a/alebo chuťové prísady, a/alebo farbivá.
Farmaceutické prostriedky podľa vynálezu sa môžu podávať aj vo forme čapíkov na rektálne podanie. Tieto prostriedky sa môžu pripraviť zmiešaním zlúčeniny podľa vynálezu s vhodným nedráždivým vehikulom, ktoré je tuhé pri teplote miestnosti, ale kvapalné pri teplote rekta a teda sa v rekte topí, čím sa uvoľnia účinné zložky. Medzi takéto materiály patria, bez toho, aby išlo o vyčerpávajúci výpočet, kakaové maslo, včelí vosk a polyetylénglykoly.
Topické podanie farmaceutických prostriedkov podľa vynálezu je vhodné najmä vtedy, ak požadované ošetrenie zahŕňa oblasti alebo orgány ľahko dostupné topickým podaním. Pri topickom podaní na kožu by sa mal farmaceutický prostriedok formulovať ako vhodná masť obsahujúca účinné zložky suspendované alebo rozpustené v nosiči. Medzi nosiče na miestne podanie zlúčenín podľa vynálezu patria, bez toho, aby išlo o vyčerpávajúci výpočet, minerálne oleje, vazelínový olej, albolén, propylénglykol, polyoxyetylénpolyoxypropylénové zlúčeniny, emulgačný vosk a voda. Alternatívne sa môže farmaceutický prostriedok formulovať ako vhodný lotion alebo krém obsahujúci účinnú zlúčeninu suspendovanú alebo rozpustenú v nosiči. Medzi vhodné nosiče patria, bez toho, aby išlo o vyčerpávajúci výpočet, minerálne oleje, sorbitan-monostearát, polysorbát 60, cetylesterový vosk, cetearylalkohol, 2-oktyldodekanol, benzylalkohol a voda. Farmaceutické prostriedky podľa vynálezu sa môžu aplikovať miestne aj na spodnú časť intestinálneho traktu pomocou rektálnych čapikov alebo vo vhodnom klystíre. Vynález zahŕňa aj miestne transdermálne náplasti.
Farmaceutické prostriedky podľa vynálezu sa môžu podávať aj nazálnym aerosólom alebo inhaláciou. Takéto prostriedky sa pripravia pomocou spôsobov dobre známych v odbore vytvárania farmaceutických prostriedkov a môžu sa pripraviť ako roztoky vo fyziologickom roztoku, pričom sa použije benzylalkohol alebo iné vhodné konzervačné prísady, látky podporujúce absorpciu na zvýšenie biologickej dostupnosti, fluorované uhľovodíky a/alebo iné solubilizačné alebo dispergačné činidlá známe v odbore.
Pri liečení a prevencii sú vhodné dávky 0,01 až 100 mg/kg telesnej hmotnosti a deň, výhodne 1 až 50 mg/kg telesnej hmotnosti a deň aktívnej zložky, a to pri chorobách spojených s IL-1, apoptózou, IGIF a IFNγ, vrátane zápalov, autoimunitných porúch, kostných chorôb, proliferatívnych chorôb, infekčných chorôb, degeneratívnych chorôb, nekrotických chorôb, osteoartritídy, akútnej pankreatitídy, chronickej pankreatitídy, astmy, syndrómu respiračnej úzkosti, glomerulonefritídy, reumatickej artritídy, systémový lupus erythematosus, sklerodermy, chronickej tyroiditídy, Gravesovej choroby, autoimúnnej gastritídy, od inzulínu závislého diabetes mellitus (typ I), autoimúnnej hemolytickej anémie, autoimúnnej neutropénie, trombocytopénie, chronickej aktívnej hepatitídy, myasténie gravis, zápalovej choroby vnútorností, Crohnovej choroby, psoriázy, reakcie transplantát vs. hostiteľ, osteoporózy, viacnásobnej myeloma-kostnej choroby, akútnej myelogénnej leukémie, chronickej myelogénnej leukémie, metastatických melanómov, Kaposiho sarkómu, viacnásobnej myeloma sepsy, septického šoku, Shigellózy, Alzheimerovej choroby, Parkinsonovej choroby, mozgovej ischémie, ischémie myokardu, miešnej muskulámej atrofie, roztrúsenej sklerózy, s AIDS spojenej encefalitídy, s HIV spojenej encefalitídy, starnutia, alopécie a neurologického poškodenia následkom úrazu. Farmaceutické prostriedky v súlade s predkladaným vynálezom sa typicky podávajú 1 až 5-krát denne alebo alternatívne kontinuálnou infúziou. Takéto podávanie sa môže využiť ako chronická alebo akútna liečba. Množstvo aktívnej zložky kombinovanej s nosičom, pričom vznikne jednotková dávková forma, sa líši v závislosti od liečeného pacienta a konkrétneho spôsobu podávania. Typický prostriedok obsahuje 5 až 95 % hmotnostných aktívnej zlúčeniny, výhodne 20 až 80 % hmotnostných aktívnej zlúčeniny.
Po zlepšení pacientovho stavu sa môže v prípade potreby podávať udržiavacia dávka zlúčeniny, prostriedku alebo kombinácie v súlade s predkladaným vynálezom. Následne sa môže dávka alebo frekvencia podávania alebo oboje znížiť, a to ako funkcia symptómov, na úroveň, pri ktorom dochádza k pretrvávaniu zlepšenia stavu, alebo ak sa symptómy obmedzili na požadovanú úroveň, môže sa liečba ukončiť. Pacienti ale môžu dlhodobo vyžadovať občasnú liečbu (pri opätovnom výskyte príznakov choroby).
Odborníkom v tejto oblasti je zrejmé, že môžu byť žiaduce aj nižšie alebo vyššie dávky, než sa uvádzajú. Špecifické dávkovanie a liečba u každého jednotlivého pacienta závisí od rôznych faktorov, vrátane aktivity konkrétnej použitej zlúčeniny, veku, telesnej hmotnosti, celkového zdravotného stavu, pohlavia, diéty, času podávania, frekvencie vylučovania, kombinácie liekov, závažnosti a priebehu choroby a pacientových dispozícií k chorobe a úsudku ošetrujúceho lekára.
Chorobami súvisiacimi s IL-1, ktoré možno liečiť alebo preventívne ovplyvniť zlúčeninami v súlade s predkladaným vynálezom, sú (ale nielen) zápalové ochorenia, autoimúnne poruchy, zhubné kostné choroby, proliferatívne choroby, infekčné choroby a degeneratívne choroby. Chorobami spojenými s apoptózou, ktoré možno liečiť alebo preventívne ovplyvniť zlúčeninami v súlade s predkladaným vynálezom, sú degeneratívne choroby.
Zápalovými ochoreniami, ktoré možno liečiť alebo preventívne ovplyvniť zlúčeninami v súlade s predkladaným vynálezom, sú (ale nielen) osteoartritída, akútna pankreatitída, chronická pankreatitída, astma a syndróm respiračnej úzkosti dospelých, najmä osteoartritída alebo akútna pankreatitída.
Autoimunitnými poruchami, ktoré možno liečiť alebo preventívne ovplyvniť, sú (ale nielen) glomerulonefritída, reumatická artritída, systémový lupus erythematosus, scieroderma, chronická tyroiditída, Gravesova choroba, autoimúnna gastritída, od inzulínu závislá diabetes mellitus (typ I), autoimúnna hemolytická anémia, autoimúnna neutropénia, trombocytopénia, chronická aktívna hepatitída, myasténia gravis, roztrúsená skleróza, zápalové ochorenia vnútorností, Crohnova choroba, psoriáza a reakcia transplantát vs. hostiteľ. Autoimunitnými chorobami sú v tejto súvislosti najmä reumatická artritída, zápalové ochorenia vnútorností, Crohnova choroba alebo psoriáza.
Zhubnými kostnými chorobami, ktoré možno liečiť alebo preventívne ovplyvniť, sú (ale nielen) osteoporóza a násobný myelóm.
Proliferatívnymi chorobami, ktoré možno liečiť alebo preventívne ovplyvniť, sú (ale nielen) akútna myelogénna leukémia, chronická myelogénna leukémia, metastatický melanóm, Kaposiho sarkóm a násobný myelóm.
Infekčnými chorobami, ktoré možno liečiť alebo preventívne ovplyvniť, sú (ale nielen) sepsa, septický šok a Shigellóza.
Degeneratívnymi alebo nekrotickými chorobami, ktoré možno liečiť alebo preventívne ovplyvniť zlúčeninami v súlade s predkladaným vynálezom, sú (ale nielen) Alzheimerova choroba, Parkinsonova choroba, mozgová ischémia a ischémia myokardu a z nich najmä degeneratívna Alzheimerova choroba.
S apoptózou súvisiacimi degeneratívnymi chorobami, ktoré možno liečiť alebo preventívne ovplyvniť zlúčeninami v súlade s predkladaným vynálezom, sú (ale nielen) Alzheimerova choroba, Parkinsonova choroba, mozgová ischémia, ischémia myokardu, miechová muskulárna atrofia, roztrúsená skleróza, s AIDS spojená eneefalitída, s HIV spojená eneefalitída, starnutie, alopécia a neurologické poškodenie následkom úrazu.
Spôsoby v súlade s predkladaným vynálezom sa môžu použiť na liečenie alebo obmedzenie rozvoja, závažnosti alebo účinku s IGIF alebo IFN-γ spojených zápalov, autoimúnnych, infekčných, proliferatívnych, zhubných kostných, nekrotických a degeneratívnych chorôb, porúch a účinkov, ktoré sa vyznačujú zvýšením produkcie IGIF alebo IFN-γ.
Príklady takýchto zápalov zahŕňajú (ale nielen) choroby, ako je osteoartritída, akútna pankreatitída, chronická pankreatitída, astma, reumatická artritída, zápaly vnútorností, Crohnova choroba, hnisavá kolitída, mozgová ischémia, ischémia myokardu a syndróm respiračnej úzkosti dospelých. Ide ale najmä o reumatickú artritídu, hnisavú kolitídu, Crohnovu chorobu, hepatitídu a syndróm respiračnej úzkosti dospelých.
Príkladmi takýchto infekčných chorôb sú (ale nielen) infekčná hepatitída, sepsa, septický šok a Shigellóza.
Príkladmi takýchto autoimunitných chorôb sú (ale nielen) glomerulonefritída, systémový lupus erythematosus, skleroderma, chronická tyroiditída, Gravesova choroba, autoimúnna gastritída, od inzulínu závislá diabetes mellitus (typ I), juvenilný diabetes, autoimúnna hemolytická anémia, autoimúnna neutropénia, trombocytopénia, myasténia gravis, roztrúsená skleróza, psoriáza, lichenplanus, reakcia transplantát vs. hostiteľ, akútna dermatomyozitída, ekzémy, primárna cirhóza, hepatitída, uveitida, Behcetova choroba, atopické kožné choroby, aplázia „pure red celí“, aplastická anémia, amyotrofická laterálna skleróza a nefrotický syndróm. Z autoimunitných chorôb ide najmä o glomerulonefritídu, od inzulínu závislý diabetes mellitus (typ I), juvenilný diabetes, psoriázu, reakciu transplantát vs. hostiteľ vrátane odmietnutia transplantátu a hepatitídu.
Príkladmi zhubných kostných chorôb sú (ale nielen) osteoporóza a násobný kostný myelóm.
Príkladmi proliferatívnych chorôb sú (ale nielen) akútna myelogénna leukémia, metastatický melanóm, Kaposiho sarkóm a násobný myelóm.
Príkladmi neurodegeneratívnych chorôb sú (ale nielen) Alzheimerova choroba, Parkinsonova choroba a Huntingtonova choroba.
Hoci sa vynález zameriava na použitie tu opísaných zlúčenín na prevenciu a liečenie ochorení sprostredkovaných IL-1, apoptózou, IGIF a IFN-γ, zlúčeniny podľa vynálezu sa môžu použiť aj ako inhibičné činidlá pre ďalšie cysteínové proteázy.
Zlúčeniny podľa vynálezu sú vhodné aj ako komerčné reakčné činidlá, ktoré sa účinne viažu na ICE alebo iné cysteínové proteázy. Ako komerčné reakčné činidlá sa zlúčeniny podľa vynálezu a ich deriváty môžu použiť na blokovanie proteolýzy cieľového peptidu alebo sa z nich môžu vytvoriť deriváty viažuce sa na stabilnú živicu ako imobilizovaný substrát pre afinitne chromatografie. Tieto a ďalšie použitia, ktoré charakterizujú komerčné inhibítory cysteínových proteáz, sú odborníkovi v odbore zrejmé.
Postup prípravy N-acylaminozlúčenín
ICE inhibítory v súlade s predkladaným vynálezom sa môžu syntetizovať pomocou bežných techník. Výhodne sa tieto zlúčeniny zvyčajne pripravujú s ľahko dostupných východiskových látok.
Zlúčeniny v súlade s predkladaným vynálezom patria medzi ťažšie pripraviteľné ICE inhibítory. Opísané ICE inhibítory často obsahujú štyri alebo viacero chirálnych centier a rad peptidických väzieb. Relatívna ľahkosť, s ktorou sa môžu zlúčeniny v súlade s predkladaným vynálezom syntetizovať, znamená veľkú výhodu pri ich produkcii vo veľkých objemoch.
Zlúčeniny v súlade s predkladaným vynálezom sa môžu syntetizovať napríklad ďalej opísanými spôsobmi. Skúsený praktik ale vie, že tieto postupy nie sú jedinou cestou, ktorou sa môžu tu opísané a nárokované zlúčeniny syntetizovať. Odborníkom sú ďalšie možné spôsoby zrejmé. Okrem toho sa môže celý rad tu opísaných syntetických krokov uskutočniť v inom poradí, pričom sa takisto získajú požadované zlúčeniny.
Predkladaný vynález poskytuje aj výhodný spôsob prípravy zlúčenín v súlade s predkladaným vynálezom. Preto sa v inom uskutočnení (M) poskytuje spôsob prípravy N-acylaminozlúčenín, ktorý zahŕňa nasledovné kroky:
a) zmiešanie karboxylovej kyseliny s N-alloc-chráneným amínom v prítomnosti inertného rozpúšťadla, trifenylfosfínu a pohlcovača nukleofilov a tetrakistrifenylfosfínpaládia (0) pri teplote miestnosti v inertnej atmosfére;
b) k zmesi z bodu a) sa pridá zmes HOBt a EDC;
a podľa potreby zahŕňa ešte ďalší krok:
c) hydrolýza zmesi z bodu b) v prítomnosti roztoku obsahujúceho kyselinu a vodu, pričom sa zmes z bodu b) pred hydrolýzou podľa potreby zahustí.
Inertným rozpúšťadlom je výhodne dichlórmetán, dimetylformamid alebo zmes dichlórmetánu a dimetylformamidu. Výhodným pohlcovačom nukleofilov je dimedón, morfolín, trimetylsilyldimetylamín alebo kyselina dimetylbarbiturová. Výhodnejšími pohlcovačmi nukleofilov sú trimetylsilyldimetylamín alebo kyselina dimetylbarbiturová.
Roztok výhodne obsahuje 1 až 90 % hmotnostných kyseliny trifluóroctovej, výhodnejšie 20 až 50 % hmotnostných kyseliny trifluóroctovej.
Alternatívne roztok obsahuje 0,1 až 30 % hmotnostných kyseliny chlorovodíkovej, výhodnejšie 5 až 15 % hmotnostných kyseliny chlorovodíkovej.
V uvedenom postupe je výhodnejšie inertným rozpúšťadlom dichlórmetán, dimetylformamid alebo zmes dichlórmetánu a dimetylformamidu a pohlcovačom nukleofilov je dimedón, morfolín, trimetylsilyldimetylamín alebo dimetylbarbiturová kyselina.
V uvedenom postupe je najvýhodnejšie inertným rozpúšťadlom dichlórmetán, dimetylformamid alebo zmes dichlórmetánu a dimetylformamidu a pohlcovačom nukleofilov je trimetylsilyldimetylamín alebo dimetylbarbiturová kyselina.
N-Acylaminozlúčeninu výhodne reprezentuje vzorec (VIII) v ktorom sa R1 definuje v uskutočnení (A); R2 je:
kde R51 je definované v uskutočnení (B)
SK 287195 Β6
kde R51 sa definuje v uskutočnení (B); N-alloc-chráneným amínom je výhodne:
kde R51 sa definuje skôr.
Vo výhodnom postupe sú substituenty rovnaké ako v uskutočnení (A).
Alternatívne je N-acylaminozlúčenina reprezentovaná vzorcom (VIII), kde R1 sa definuje v uskutočnení (B) a R2 sa definuje v uskutočnení (M).
V tomto alternatívnom postupe sú substituenty rovnaké ako substituenty definované v uskutočnení (B).
Alternatívne je N-acylaminozlúčenina reprezentovaná vzorcom (VIII), kde R1 sa definuje v uskutočnení (C) a R2 sa definuje v uskutočnení (M).
V tomto alternatívnom postupe sú substituenty rovnaké ako substituenty definované v uskutočnení (C).
Alternatívne je N-acylaminozlúčenina reprezentovaná vzorcom (VIII), kde R1 sa definuje v uskutočnení (D) a R2 sa definuje v uskutočnení (M).
V tomto alternatívnom postupe sú substituenty rovnaké ako substituenty definované v uskutočnení (D).
Alternatívne je N-acylaminozlúčenina reprezentovaná vzorcom (VIII), kde R1 sa definuje v uskutočnení (E) a R2 sa definuje v uskutočnení (M).
V tomto alternatívnom postupe sú substituenty rovnaké ako substituenty definované v uskutočnení (E).
Alternatívne je N-acylaminozlúčenina reprezentovaná vzorcom (VIII), kde R1 sa definuje v uskutočnení (F) a R2 sa definuje v uskutočnení (M).
V tomto alternatívnom postupe sú substituenty rovnaké ako substituenty definované v uskutočnení (F).
Alternatívne je N-acylaminozlúčenina reprezentovaná vzorcom (VIII), kde R1 sa definuje v uskutočnení (G) a R2 sa definuje v uskutočnení (M).
V tomto alternatívnom postupe sú substituenty rovnaké ako substituenty definované v uskutočnení (G).
Alternatívne je N-acylaminozlúčenina reprezentovaná vzorcom (VIII), kde R1 sa definuje v uskutočnení (H) a R2 sa definuje v uskutočnení (M).
V tomto alternatívnom postupe sú substituenty rovnaké ako substituenty definované v uskutočnení (H).
Alternatívne je N-acylaminozlúčenina reprezentovaná vzorcom (VIII), kde R1 sa definuje v uskutočnení (I) a R2 sa definuje v uskutočnení (M).
V tomto alternatívnom postupe sú substituenty rovnaké ako substituenty definované v uskutočnení (I).
Alternatívne je N-acylaminozlúčenina reprezentovaná vzorcom (VIII), kde R1 sa definuje v uskutočnení (J) a R2 sa definuje v uskutočnení (M).
V tomto alternatívnom postupe sú substituenty rovnaké ako substituenty definované v uskutočnení (J).
Alternatívne je N-acylaminozlúčenina reprezentovaná vzorcom (VIII), kde R1 sa definuje v uskutočnení (K) a R2 sa definuje v uskutočnení (M).
V tomto alternatívnom postupe sú substituenty rovnaké ako substituenty definované v uskutočnení (K).
Alternatívne je N-acylaminozlúčenina reprezentovaná vzorcom (VIII), kde R1 sa definuje v uskutočnení (L) a R2 sa definuje v uskutočnení (M).
V tomto alternatívnom postupe sú substituenty rovnaké ako substituenty definované v uskutočnení (L).
Na lepšie pochopenie vynálezu sú pripojené nasledovné príklady. Príklady sú pripojené len s cieľom ilustrovať, ale v žiadnom prípade nie s cieľom vymedziť rozsah vynálezu.
Prehľad obrázkov na výkresoch
Obrázok 1A. ICE štiepi pro-IGIF in vivo. Bunky lyzátov z buniek Cos transfekované rôznymi indikovanými expresnými plazmidmi alebo kontrolné vzorky sa analyzujú na prítomnosť IGIF oddelením proteínov pomocou SDS-PAGE a imunoprenosu „immunoblotting“ s anti-IGIF protilátkou (pruh 1, nepravé transfekované bunky; pruh 2, samotný pro-IGIF; pruh 3-12, pro-IGIF v kombinácii s ICE, ICE-C285S, CPP32, CPP32-C163S, CMH-1, CMH-1-C186S, Tx, Tx-C258S, v tomto poradí). Pohyblivosť pro-IGIF a 18kĽ)a maturovaného IGIF sa uvádza vpravo. Označenie molámych hmotností v kDa sa uvádza vľavo (príklad 23).
Obrázok 1B. ICE štiepi pro-IGIF na autentickom mieste spracovania in vitro, ako ukazuje farbivo Comassie modrá proteolytickej reakcie produktu separovaného pomocou SDS-PAGE (príklad 23). Použili sa nasledovné proteázy a inhibítory: pruh 1, kontrolný pufer; pruh 2, 0,1 nM ICE; pruh 3, 1 nM ICE; pruhy 4 a 5, 1 nM ICE s 10 nM Cbz-Val-Ala-Asp-[(2,6-dichlórbenzoyl)oxy]metylketónu a 100 nM Ac-Tyr-Val-Ala-Asp-aldehydu; pruhy 6 a 7, 15 nM CPP32 s a bez 400 nM Ac-Asp-Glu-Val-Asp-aldehydu (Nicholson a kol., 376, str. 37 (1995)), v tomto poradí; pruh 8, 100 nM CMH-1; pruh 9, 10 jednotiek/ml granzým B; a M, moláme hmotnosti vyjadrené v kDa.
Obrázok 1C. Štiepenie ICE prevádzajúce neaktívny pro-IGIF na aktívny IGIF, ktorý indukuje produkciu IFN-γ na Thl pomocných bunkách. Neštiepené (pro-IGIF), ICE štiepené (pro-IGIF/ICE), CPP32 štiepené (pro-IGIF/CPP32) a rekombinant maturovaného IGIF (rIGIF) sa inkubovali s A.E7 Thl bunkami pri 12 ng/ml (voľná časť) a 120 ng/ml (šrafovaná časť) počas 18 hodín a hladina TFN-γ uvoľneného do kultivačného média sa meria pomocou ELISA (príklad 23). A.E7 bunková kultúra s pufrom, ICE samotné (ICE) alebo CPP32 samotné (CPP32) sa testuje podobne na negatívnu kontrolu. Čísla predstavujú priemerné hodnoty z troch stanovení.
Obrázok 2A. Maturovaný IGIF (18 kDa) sa vylúči bunkami Cos transfekovanými spolu s pro-IGIF a ICE-expresnými plazmidmi. Bunkový lyzát (vľavo) a upravené médium (vpravo) z buniek Cos tTansfekovaných pro-IGIF expresným plazmidom v neprítomnosti (-) alebo v prítomnosti expresného plazmidu kódujúceho prírodný typ (ICE) alebo neaktívneho mutanta (ICE-C285S) ICE. Transfekované bunky sa metabolický značia 35S-metionínom, proteíny z bunkových lyzátov a upraveného média imunozrážaného protilátkou anti-IGIF a izolovaného pomocou SDS-PAGE (príklad 24). Pohyblivosť pro-IGIF a 18-kDa maturovaného IGIF sa uvádza vpravo. Značky molámych hmotností v kDa sa uvádzajú vľavo.
Obrázok 2B. IFN-γ indukujúca aktivita sa určí v bunkách Cos transfekovaných s pro-IGIF a ICE expresnými plazmidmi. Bunkové lyzáty (šrafovaná časť) a upravené médium (voľná časť) z buniek Cos transfekovaných pro-IGIF expresným plazmidom v neprítomnosti (pro-IGIF) alebo v prítomnosti (pro-IGIF/ICE) expresného plazmidu kódujúceho prírodný typ (ICE) sa testujú na hladinu IFN-γ (ng/ml) pomocou ELISA. Cos bunky transfekované pufrom (Mock) alebo ICE expresné plazmidy samotné (ICE) slúžia ako negatívna kontrola (príklad 24).
Obrázok 3A. Kupfferove bunky myší s nedostatkom ICE sú nedostatočné na export IGIF. Kupfferove bunky prírodného typu myší (ICE +/+) alebo myší s nedostatkom ICE homozygotných pre ICE mutáciu (ICE -/-) sa izolujú a stimulujú LPS počas 3 hodín. Hladina imunoreaktívnych polypeptidov v upravenom médiu (ng/ml) prírodného typu buniek sa meria pomocou ELISA (príklad 25). N. D. (nedetegovateľné) znamená, že koncentrácia IGIF bola nižšia než 0,1 ng/ml.
Obrázok 3B. Kupfferove bunky myši s nedostatkom ICE sú nedostatočné na export maturovanej IGIF. Kupfferove bunky prírodného typu myší (ICE +/+) alebo myší s nedostatkom ICE homozygotných pre ICE mutáciu (ICE -/-) sa izolujú a stimulujú LPS počas 3 hodín. Stimulované bunky sa metabolický značia 35S-metionínom, proteíny z bunkových lyzátov a upraveného média sa imunozrážajú s protilátkou anti-IGIF a oddelia pomocou SDS-PAGE (príklad 25). Pohyblivosť pro-IGIF a 18 kDa maturovanej IGIF sa uvádza vpravo. Značky molekulárnej hmotnosti v kDa sa uvádzajú vľavo.
Obrázok 3C. Sérum z myší s nedostatkom ICE obsahuje zníženú hladinu IGIF. Vzorky séra z prírodného typu myší (ICE +/+) alebo myší s nedostatkom ICE homozygotných pre ICE mutáciu (ICE-/-) sa testujú na hladinu IGIF (ng/ml) pomocou ELISA testu (príklad 25).
Obrázok 3D. Sérum z myší s nedostatkom ICE obsahuje znížené množstvo IFN-γ. Vzorky séra z prírodného typu myší (ICE +/+) alebo myší s nedostatkom ICE homozygotných pre ICE mutáciu (ICE-/-) sa testujú na hladiny IFN-γ (ng/ml) pomocou ELISA testu (príklad 25).
Obrázok 4. Hladiny IFN-γ v sére sa významne znížia u myší s nedostatkom ICE po akútnej stimulácii LPS (príklad 26). Vzorky séra prírodného typu myší (vyplnené štvorčeky) alebo myší s nedostatkom ICE (vyplnené kolieska) sa testujú na hladinu IFN-γ (ng/ml) pomocou ELISA testu ako funkcia času (hodiny) po stimulácii LPS. Teploty zvierat v priebehu času v stupňoch Celzia sa uvádzajú pre prírodný typ myší (prázdne štvorčeky) a pre myši s nedostatkom ICE (prázdne kolieska).
Obrázok 5. Inhibítor ICE, Ac-YVAD-aldehyd (Ac-YVAD-CHO), inhibuje LPS stimulovanú IL-Ιβ a IFN-γ syntézu ľudskými periférnymi monojadrovými krvnými bunkami (PBMC). Percentá inhibície (%) ako funkcia koncentrácie inhibítora (μΜ) sa uvádzajú pre syntézu IL-Ιβ (prázdne štvorčeky) a pre syntézu IFN-γ (otvorené kosoštvorčeky).
Obrázok 6. Zlúčenina 214e inhibuje vylučovanie IL-Ιβ u LPS stimulovaných myší. Vzorky séra z CD1 myší sa testovali na hladinu IL-Ιβ (pg/ml) pomocou ELISA testu po LPS stimulácii. Zlúčenina 214e sa podávala pomocou intraperitoneálnej injekcie (IP) 1 hodinu po LPS stimulácii. Krv sa odoberala 7 hodín po LPS stimulácii (pozri príklad 7).
Obrázok 7. Zlúčenina 217e inhibuje vylučovanie IL-Ιβ u LPS stimulovaných myší. Vzorky séra z CD1 myší sa testovali na hladinu IL-Ιβ (pg/ml) pomocou ELISA testu po LPS stimulácii. Zlúčenina 217e sa podávala pomocou intraperitoneálnej injekcie (IP) 1 hodinu po LPS stimulácii. Krv sa odoberala 7 hodín po LPS stimulácii (pozri príklad 7).
Obrázok 8. Zlúčenina 214e, ale nie zlúčenina 217e, inhibuje vylučovanie IL-Ιβ u LPS stimulovaných myší, ak sa podáva orálne. Pomocou tohto testu sa meria orálna absorpcia použitím podobných podmienok, aké sa opisujú pre obrázok 6 a 7. Tieto výsledky ukazujú, že zlúčenina 214e je potenciálne orálne aktívna ako inhibítor ICE (pozri príklad 7).
Obrázok 9. Zlúčenina 214e a analóg zlúčeniny 214e takisto inhibujú vyučovanie IL-Ιβ po IP podávaní. Tieto výsledky sa získali v teste opísanom pre obrázok 6 a 7 a príklad 7.
Obrázok 10. Zlúčenina 214e a analóg zlúčeniny 214e takisto inhibujú vyučovanie IL-Ιβ po orálnom (PO) podávaní. Tieto výsledky sa získali v teste opísanom pre obrázok 6 a 7 a príklad 7.
Obrázok 11A/B. Zlúčeniny 302 a 304a sa vyznačujú merateľnou hladinou v krvi po orálnom podávaní (50 mg/kg v 0,5 % karboxymetylcelulóze) myšiam. Vzorky krvi sa odobrali 1 a 7 hodín po podávaní. Zlúčeniny 302 a 304a sú proliečivami zlúčeniny 214e a metabolizujú sa na zlúčeninu 214e in vivo. Zlúčenina 214e sa nevyznačuje hladinou v krvi vyššou než 0,1 pg/ml, ak sa podáva orálne (príklad 8).
Obrázok 12. Zlúčenina 412f bráni postupu artritídy vyvolanej kolagénom typu II pri samiciach DBA/1J myší (Wooly, P. H., Methods in Enzymology 162, str. 361 - 373 (1988) a Geger, T., Clinical and Experimental Rheumatology 11, str. 515 - 522 (1993)). Zlúčenina 412f sa podávala dvakrát denne (10, 25 a 50 mg/kg) približne po 7 hodinách orálne. Zápal sa hodnotil pomocou škály závažnosti artritídy v rozsahu 1 až 4 podľa rastúcej závažnosti.
Výsledky dvoch predných končatín sa pokladali za konečný výsledok (pozri príklad 21).
Obrázok 13. Zlúčenina 412d bráni postupu artritídy vyvolanej kolagénom typu II pri samiciach DBA/1 J myší. Výsledky sa získali pomocou postupu opísaného pre obrázok 12 a v príklade 21.
Obrázok 14. Zlúčenina 696a bráni postupu artritídy vyvolanej kolagénom typu II pri samiciach DBA/1 J myší. Výsledky sa získali pomocou postupu opísaného pre obrázok 12 a v príklade 21.
Príklady uskutočnenia vynálezu
Príklad 1
Získali sa inhibičné konštanty (Kj) a hodnoty IC50 pre niekoľko zlúčenín podľa vynálezu, pričom sa použili tri opísané metódy:
1. Enzýmový test so substrátom viditeľným v UV-svetle
Tento test sa uskutočňuje použitím sukcinyl-Tyr-Val-Ala-Asp-p-nitroanilidového substrátu. Syntézu analogických substrátov opísal L. A. Reiter (Int. J. Peptide Protein Res. 43, 87 - 96 (1994)). Testovaná zmes obsahuje:
μΐ pufra (10 mM Tris, 1 mM DDT (ditiotreitol), 0,1 % CHAPS (3-[(3-cholamidopropyl)dimetylamónio]-1-propánsulfonát), pH 8,1), μΐ ICE (konečná koncentrácia 50 nM na dosiahnutie rýchlosti zhruba 1 mOD/min.), μΐ zmesi dimetylsulfoxidu a inhibítora, μΐ 400 μΜ substrátu (konečná koncentrácia 80 μΜ),
100 μΐ = celkový reakčný objem.
Vizuálne vyhodnocovaný test ICE sa uskutočňuje na mikrotitračnej doske s 96 jamkami. Pufer, ICE a dimetylsulfoxid (ak je prítomný inhibítor) sa dajú do jamiek v uvedenom poradí. Zložky sa nechajú inkubovať pri teplote miestnosti počas 15 minút počítané od času, kedy sú všetky zložky prítomné vo všetkých jamkách. Inkubácia sa uskutočňuje pri teplote 37 °C. Po 15 minútach inkubácie sa do jamiek priamo pridá substrát a reakcia sa monitoruje pomocou následného uvoľňovania chromoforu (pNA) pri 405 - 603 nm pri teplote 37 °C počas 20 minút. Uskutoční sa lineárne vyhodnotenie údajov a vypočíta sa rýchlosť v mOD/min.
Dimetylsulfoxid je prítomný iba pri experimentoch, pri ktorých sa použijú inhibítory, pri ostatných experimentoch sa na doplnenie objemu na 100 μΐ použije pufer.
2. Enzýmový test s fluorescentným substrátom
Tento test sa uskutočňuje v podstate tak, ako ho opísali Thomberry a kol (Náture 356, 768 - 774 (1992)), pričom sa použije substrát 17 opísaný v uvedenom článku. Substrátom je acetyl-Tyr-Val-Ala-Asp-amino-4-metylkumarín (AMC). Zmiešajú sa nasledovné zložky:
μΐ pufra (10 mM Tris, 1 mM DDT (ditiotreitol), 0,1 % CHAPS (3-[(3-cholamidopropyl)dimetylamónioJ-1-propánsulfonát), pH 8,1), μΐ ICE (konečná koncentrácia 2-10 nM), μΐ roztoku inhibítora v dimetylsulfoxide, μΐ 400 μΜ substrátu (konečná koncentrácia 30 μΜ),
100 μΐ = celkový reakčný objem.
Test sa uskutočňuje na mikrotitračnej doske s 96 jamkami. Do jamiek sa dá pufer a ICE. Zložky sa nechajú inkubovať pri teplote 37 °C počas 15 minút v doske s riadenou teplotou. Po 15 minútach inkubácie sa začne reakcia pridaním substrátu priamo do jamiek a reakcia sa monitoruje pri teplote 37 °C počas 30 minút pomocou sledovania uvoľňovania AMC-fluoroforu, pričom sa použije excitačná vlnová dĺžka 380 nm a emisná vlnová dĺžka 460 nm. Uskutoční sa lineárne vyhodnotenie údajov pre každú jamku a stanoví sa rýchlosť v jednotkách fluorescencie za sekundu.
Na stanovenie enzýmových inhibičných konštánt (K;) alebo spôsobu inhibicie (kompetetívna, akompetetívna, nekompetetívna) sa údaje o rýchlosti stanovené v enzýmových testoch s rôznymi koncentráciami inhibítora počítačovo spracujú štandardnými rovnicami enzýmovej kinetiky (pozri I. H. Segel, „Enzýme Kinetics“, Wiley-Interscience, New York 1975).
Stanovenie rýchlostných konštánt druhého poriadku pre ireverzibilné inhibítory sa uskutočnilo vynesením fluorescenčných údajov oproti časovým údajom, pričom sa vyvinie Morrisonova rovnica. Morrison, J. F., Mol. Celí. Biophys. 2, 347 - 368 (1985). Thomberry a kol. publikovali popis týchto metód merania rýchlostných konštánt pre ireverzibilné inhibítory ICE. Thomberry N. A. a kol., Biochemistry 33, 3923 - 3940 (1994). Pre zlúčeniny, pri ktorých nemožno kinetický sledovať tvorbu prednostného komplexu, sa rýchlostné konštanty druhého poriadku (k;nact) odvodia priamo zo sklonu línie kObS vs. [I]. V prípade zlúčenín, pri ktorých možno detegovať tvorbu prednostného komplexu s enzýmom, sa rovnicou kinetiky nasýtenia upraví hyperbola kobS vs. [I], čím sa najskôr generujú K, a k'. Rýchlostná konštanta druhého poriadku je potom daná podielom k'/Kj.
3. PBMC bunkový test
Test IL-Ιβ so zmiešanou populáciou ľudských periférnych krvných monojadrových buniek (peripheral blood mononuclear cells, PBMC) alebo obohatenými adherentnými monojadrovými bunkami
Úprava (processing) pre-IL-1 pôsobením ICE sa môže merať v bunkovej kultúre, pričom sa použije rad zdrojov buniek. Ľudské PBMC získané zo zdravých donorov poskytujú zmiešanú populáciu subtypov lymfocytov a mononukleárnych buniek, ktorá produkuje rad interleukínov a cytokínov ako odozvu na veľa druhov fyziologických stimulácií. Adherentné mononukleáme bunky z PBMC sú obohatené zdrojom normálnych monocytov na selektívne štúdie produkcie cytokínov aktivovanými bunkami.
Postup experimentu:
Pripravia sa počiatočné série riedení testovanej zlúčeniny v dimetylsulfoxide alebo etanole s nasledovným nariedením do média RPMI-10 % FBS (obsahujúceho 2 mM L-glutaminu, 10 mM HEPES (4-(2-hydroxyetyl)-l-piperazínetánsulfónovej kyseliny), 50 U a 50 g/ml pen/strep) na dosiahnutie koncentrácie liečiv, ktorá je štvornásobkom konečnej testovanej koncentrácie, teda koncentrácie 0,4 % dimetylsulfoxidu alebo 0,4 % etanolu. Konečná koncentrácia dimetylsulfoxidu je 0,1 % pre všetky riedenia liečiv. Na počiatočné orientačné testovanie zlúčeniny sa vo všeobecnosti použije titrácia koncentrácie, ktorá vymedzuje zjavnú K, pre testovanú zlúčeninu stanovenú v teste inhibicie ICE.
Vo všeobecnosti sa testuje 5-6 riedení zlúčeniny a celulárna časť testu sa uskutočňuje v dvoch opakovaniach s dvojakým stanovením ELISA testom na každom supematante bunkovej kultúry.
Izolácia PBMC a test IL-1:
Vyzrážané bunky (buffy coat cells) izolované zo zhruba 0,5 1 ľudskej krvi (z ktorej sa získa 40 - 45 ml konečného objemu plazmy + bunky) sa nariedi médiom na 80 ml a separačné kyvety LeukoPREP (Becton Dickinson) sa naplnia 10 ml suspenzie buniek. Po 15 minútovom odstreďovaní pri 1 500 - 1 800 g sa vrstva plazmy a média odsaje a vrstva mononukleárnych buniek sa potom izoluje Pasteurovou pipetou a prenesie sa do kónickej odstreďovacej kyvety (Coming) s objemom 15 ml. Pridá sa médium na upravenie objemu na 15 ml, bunky sa jemne premiešajú prevrátením kyvety a uskutoční sa odstredenie pri 300 g počas 15 minút. Peleta PBMC sa resuspenduje v malom objeme média, bunky sa spočítajú a koncentrácia sa upraví na 6 x 103 * * 6 buniek/ml.
Na bunkový test sa do každej jamky dosky na tkanivovú kultiváciu s 24 jamkami s rovným dnom (Corning) vnesie 1,0 ml bunkovej suspenzie, 0,5 ml riedenej testovanej zlúčeniny a 0,5 ml roztoku LPS (Sigma, L-3012, roztok s koncentráciou 20 ng/ml pripravený v kompletnom médiu RPMI, konečná koncentrácia LPS je 5 ng/ml). Pridávaním 0,5 ml testovanej zlúčeniny a LPS sa obsahy jamiek zvyčajne dostatočne premiešajú. Pri každom experimente sa uskutočňujú tri kontroly, a to buď kontrola so samotným LPS, kontrola s rozpúšťadlom a/alebo kontrola s ďalším médiom na úpravu konečného kultivačného objemu na 2,0 ml. Bunkové kultúry sa inkubujú počas 16-18 hodín pri teplote 37 °C v prítomnosti 5 % oxidu uhličitého.
Na konci inkubačného času sa bunky izolujú a prenesú do kónických odstreďovacích kyviet s objemom 15 ml. Po odstredení pri 200 g počas 10 minút sa supematanty izolujú a prenesú do Eppendorfových skúmaviek. Bunkové pelety sa môžu využiť na biochemické vyhodnotenie obsahu pre-IL-Ιβ alebo maturovaného IL-1 β v cytozolových extraktoch pomocou „westem blottingu“ alebo ELISA testu s antisérom špecifickým pre pre-IL-Ιβ.
Izolácia adherentných mononukleámych buniek:
Ako sa opisuje, izolujú a preparujú sa PBMC. Do jamiek sa vnesie najskôr 1,0 ml média a potom 0,5 ml suspenzie PBMC. Po jednohodinovej inkubácii sa doskami mierne zatrasie a neadherentné bunky sa z každej jamky odsajú. Jamky sa potom opatrne premyjú trikrát 1,0 ml média a nakoniec sa resuspendujú v 1,0 ml média. Obohatením adherentných buniek sa vo všeobecnosti získa 2,5 - 3,0 x 105 buniek na jamku. Pridanie testovaných zlúčenín a LPS, podmienky inkubácie buniek a spracovanie supematantov sa uskutočňuje tak, ako sa opisuje.
ELISA test:
Na meranie maturovanej IL-1 sa použijú súpravy Quantikine (R & D Systems). Testy sa uskutočňujú podľa pokynov výrobcu. V pozitívnych kontrolách tak s PBMC ako aj s adherentnými mononukleámymi bunkami sa pozorujú hladiny maturovaného IL-1 približne 1-3 ng/ml. Uskutočnia sa ELISA testy na riedeniach 1 : 5, 1 : 10 a 1 : 20 supematantov z LPS-pozitívnych kontrol na výber optimálneho riedenia pre supernatanty v testovanom súbore.
Inhibičná účinnosť zlúčenín môže byť reprezentovaná hodnotou IC50, čo je koncentrácia inhibítora, pri ktorej sa v supematante deteguje 50 % maturovaného IL-1 v porovnaní s pozitívnymi kontrolami.
Skúsený odborník si je vedomý, že hodnoty získané tu opísanými bunkovými testami môžu závisieť od radu faktorov, ako je typ buniek, ich zdroj, podmienky rastu a podobne.
Príklad 2
Farmakokinetické štúdie na myšiach
Peptidové ICE inhibítory sa rýchlo odbúravajú, pričom rýchlosť odbúravania je vyššia než 100 μ/min./kg. Zlúčeniny s nižšou rýchlosťou odbúrania majú oproti peptidovým ICE inhibítorom lepšie farmakokinetické vlastnosti.
Použitím opísaných metód sme získali pre niekoľko zlúčenín v súlade s predkladaným vynálezom rýchlosť odbúrania pri myšiach (μ/min./kg).
Príprava vzorky a dávkovanie
Zlúčeniny sa rozpustia v sterilnom roztoku Tris (0,02 M alebo 0,05 M) pri koncentrácii 2,5 mg/ml. V prípade, kedy je potrebné zaistiť úplné rozpustenie, sa vzorka najskôr rozpustí v malom množstve dimetylacetamidu (maximálne 5 % celkového objemu roztoku), a potom sa rozpustí v roztoku Tris. Roztok lieku sa podáva CD-1 myšiam (Charles River Laboratories; 26 až 31 g) do chvostovej žily v množstve 10 ml/kg, čo zodpovedá dávke 25 mg/kg. Dávkovanie myšiam sa uskutočňuje v skupinách po piatich pre každý časový interval (vo všeobecnosti od 2 minút do 2 hodín). Zvieratá sa po uplynutí príslušnej doby uvedú do anestézy použitím hltanu, a potom sa im odoberú vzorky krvi do oddelených heparínových skúmaviek oddelením krčnej žily. Vzorky krvi sa ochladia na teplotu 0 °C, a potom sa oddelí plazma, ktorá sa pred testom skladuje pri teplote -20 °C.
Biologický test
Stanovenie lieku vo vzorkách plazmy sa uskutoční pomocou HPLC s UV alebo MS (ESP) detekciou. Použije sa chromatografia na reverznej fáze, pričom sa použijú rôzne fázy od C, do C]g s eluentom zloženým zo zmesi vodného pufra a acetonitrilu pri izokratických podmienkach.
Kvantifikácia sa uskutoční pomocou metódy externého štandardu s kalibračnou krivkou vynesenou pomocou analýzy plazmy s roztokom látky, pričom sa získajú koncentrácie v rozsahu 0,5 až 50 pg/ml. Pred analýzou sa vzorky plazmy zbavia proteínov pridaním acetonitrilu, metanolu, trichlóroctovej kyseliny alebo kyseliny chloristej a následným odstredením pri 10 000 g počas 10 minút. Analyzujú sa vzorky s objemom 29 μΐ až 50 μΐ.
Zlúčenina 214e
Dávkovanie a vzorkovanie
Látka sa rozpustí v sterilnom 0,02 M roztoku Tris, pričom sa získa roztok s koncentráciou 2,5 mg/ml, ktorý sa podá 11 skupinám po 5 samcoch CD-1 myší do chvostovej žily pri dávke 25 mg/kg. Po 2, 5, 10, 15, 20, 30, 45, 60, 90 a 120 minútach sa uvedie skupina myší do anestézy a krv sa odoberie do heparínových skúmaviek. Po oddelení sa plazma skladuje do začiatku testu pri teplote -20 °C.
Test
Alikvotné podiely plazmy (150 μΐ) sa zmiešajú s 5 % kyselinou chloristou (5 μΐ), a potom sa zmes premieša krúžením a pred odstredením sa nechá stáť počas 90 minút. Výsledný roztok sa oddelí a 20 μΐ sa nastrekne na HPLC.
HPLC podmienky
Kolóna 100 x 4,6 mm KromasilKR 100 5C4
Mobilná fáza 0,1 M Tris, pH 7,5 86%
acetonitril 14%
Prietok 1 ml/min.
Detekcia UV pri 210 nm
Retenčný čas 3,4 minúty
Výsledky analýz ukázali zníženie strednej hladiny látky v plazme od 70 pg/ml v 2 minútach do < 2 pg/ml po 90 a 120 minútach.
Zlúčenina 217e
Dávkovanie a vzorkovanie
Látka sa rozpustí v sterilnom 0,02 M roztoku Tris, pričom sa získa roztok s koncentráciou 2,5 mg/ml, ktorý sa podá 11 skupinám po 5 samcoch CD-1 myší do chvostovej žily pri dávke 25 mg/kg. Po 2, 5, 10,15, 20, 30, 45, 60, 90 a 120 minútach sa uvedie skupina myší do anestézy a krv sa odoberie do heparínových skúmaviek. Po oddelení sa plazma skladuje do začiatku testu pri teplote -20 °C.
Test
Alikvotné podiely plazmy (100 μΐ) sa zriedia acetonitrilom (100 μΐ), a potom sa 20 sekúnd pred 10 minútovým odstredením premiešajú krúžením. Výsledný supematant sa oddelí a 20 μΐ sa nastrekne na HPLC.
HPLC podmienky
Kolóna Mobilná fáza 150 x 4,6 mm Zorbax SBC8 0,05 M fosfátový pufer, pH 7,1 72% acetonitril 28 %
Prietok Detekcia Retenčný čas 1,4 ml/min. UV pri 210 nm 3,0 a 3,6 minúty (diastereoméry)
Výsledky analýz ukázali zníženie strednej hladiny látky v plazme od 55 pg/ml v 2 minútach do < 2 pg/ml po 60 a 120 minútach.
Príklad 3
Peptidové ICE inhibitory sa rýchlo odbúravajú, pričom rýchlosť odbúravania je väčšia než 80 ml/min/kg. Zlúčeniny s nižšou rýchlosťou odbúrania majú proti peptidovým ICE inhibítorom lepšie farmakologické vlastnosti.
Použitím ďalej opísaných metód sme získali pre niekoľko zlúčenín v súlade s predkladaným vynálezom rýchlosť odbúrania pri potkanoch (ml/min./kg).
In vivo test odbúrania pri potkanoch
Jeden deň pred farmakokinetickou štúdiou sa pri anestézii uskutočnila kanylácia krčnej cievy a tepny. M.
J. Free, R. A. Jaffee, „Cannulation Techniques for the Collection of Blood and Other Bodily Fluids. Animal Models“, N. J. Alexaer Ed., Academic Press, New York 1978, str. 480 - 495. Látka (10 mg/ml) sa podá krčnou cievou v nosiči, ktorý zvyčajne tvorí zmes propylénglykol/salin v pomere 1 : 1 obsahujúci 100 mM hydrogenuhličitanu sodného. Zvieratám sa podá 10-20 mg látky/kg a krvné vzorky sa odoberú po 0, 2, 5, 7, 10, 15, 20, 30, 60 a 90 minútach od podania karotídovým katétrom. Krv sa odstredí na plazmu a až do analýzy sa skladuje pri teplote -20 °C. Farmakokinetická analýza sa uskutoční nelineárnou regresiou, pričom sa použije štandardný softvér, napríklad RStrip (MicroMath Software, UT) a/alebo Pcnonlin (SCI Software, NC).
Analytika:
Potkania plazma sa extrahuje ekvivalentným objemom acetonitrilu (obsahujúcim 0,1 % TFA). Vzorky sa potom odstredia pri asi 1 000 g a roztok sa analyzuje pomocou HPLC. Typický postup testu sa opisuje.
200 μΐ plazmy sa vyzráža 200 μΐ 0,1 % trifluóroctovej kyseliny (TFA) v acetonitrile a 10 μΐ 50 % vodného roztoku chloridu zinočnatého, potom sa premieša a odstredí pri 1 000 g. Roztok nad usadeninou sa oddelí a analyzuje sa pomocou HPLC.
HPLC postup: kolóna: Zorbax SB-CN (4,6 x 150 mm, veľkosť častíc 5μ) teplota: 50 °C prietok: 1,0 ml/min.
objem nástreku: 75 μΐ mobilná fáza: A = 0,1 % TFA vo vode a B = 100 % acetonitril použitý gradient: 100 % A až 30 % A do 15,5 min.
% A po 16 min.
100 % A po 19,2 min.
vlnová dĺžka: 214 nm
Štandardná krivka sa merala pri koncentráciách 20, 10, 5, 2 a 1 pg/ml.
Príklad 4
Test kompletnej krvi na produkciu IL-1 β
Pre niekoľko zlúčenín v súlade s predkladaným vynálezom sme opísanou metódou získali hodnoty IC50.
Cieľ:
Test kompletnej krvi je jednoduchá metóda merania produkcie IL-ίβ (alebo iných cytokínov) a aktivity potenciálnych inhibítorov. Komplexnosť testovaného systému s lymfatickými i zápalovými bunkami, spektrom plazmových proteinov a červených krviniek je ideálny in vitro model ľudských in vivo fyziologických podmienok.
Materiál:
nepyrogénne striekačky (30 ml), nepyrogénne sterilné vákuové skúmavky obsahujúce lyofilizovaný Na2EDTA (4,5 mg/10 ml skúmavka), vzorka kompletnej ľudskej krvi (~30 - 50 ml),
1,5 ml Eppendorfove skúmavky, zásobné testovacie roztoky (-25 mM v DMSO alebo v inom rozpúšťadle), roztok chloridu sodného zbavený endotoxínov (0,9 %), zásobný roztok HBSS lipopolysacharidu (Sigma, Cat# L-3012) s koncentráciou 1 mg/ml v HBSS, IL-1 β ELISA súprava (R & D Systems, Cat# DLB50), TNF-α ELISA súprava (R & D Systems, Cat# DTA50), vodný kúpeľ alebo inkubátor.
Experimentálny postup testu kompletnej krvi:
Inkubátor alebo vodný kúpeľ sa nastaví na teplotu 30 °C. Do 1,5 ml Eppendorfových skúmaviek sa odpipetuje alikvotná časť 0,25 ml krvi. Poznámka: vzorky kompletnej krvi je dôležité v skúmavke po každých dvoch alikvotných častiach prevrátiť. Rozdiely v replikátoch môžu viesť k tvorbe usadeniny buniek a k ich nerovnomernému suspendovaniu. Rozdiely medzi replikátmi alikvotných častí sa môžu minimalizovať aj použitím pipety s pozitívnym výtlakom.
Sériovým zriedením sa pripravia roztoky látky v sterilnom nepyrogénnom fyziologickom roztoku. Na predbežné testy zlúčeniny sa vo všeobecnosti použije séria roztokov, ktorá zodpovedá zdanlivému Kj testovanej zlúčeniny, ktorá sa stanovila ICE inhibičným testom. Pre silne hydrofóbne zlúčeniny sa pripravia roztoky v čerstvej plazme získanej od rovnakého darcu krvi alebo v 5 % DMSO obsahujúcom PBS na zvýšenie rozpustnosti.
Do vzorky sa pridá 25 μΐ roztoku testovanej zlúčeniny alebo kontrolného roztoku nosiča a vzorka sa opatrne premieša. Potom sa pridá 5,0 μΐ roztoku LPS (250 ng/ml, čerstvo pripravený zásobný roztok: konečná koncentrácia LPS je 5 ng/ml) a opäť sa premieša. Skúmavky sa inkubujú na vodnom kúpeli pri teplote 30 °C počas 16-18 hodín, pričom sa občas premiešajú. Alternatívne sa skúmavky môžu umiestniť do rotora nastaveného na 4 ot./min. (pri rovnakom čase inkubácie). Test sa uskutočňuje dvojito alebo trojito s nasledovnými kontrolnými vzorkami: negatívna kontrola - bez LPS; pozitívna kontrola - bez testovaného inhibítora; kontrolný test nosiča - najvyššia koncentrácia DMSO alebo iného roztoku použitého pri pokuse. Do všetkých kontrolných skúmaviek sa pridá ďalší salin, aby sa normalizovali objemy kontrolnej a testovanej vzorky úplnej krvi.
Po inkubácii sa vzorky úplnej krvi odstredia v mikroíuge pri 2 000 oĽmm, počas 10 minút, plazma sa prevedie do novej mikrofugačnej skúmavky a opäť sa odstredí pri 1 000 g, pričom sa zvyšok zrazeniny zbalí. Vzorky plazmy sa môžu pred ELISA testom hladiny cytokinu skladovať zmrazené na teplotu -70 °C.
ELISA test:
Na stanovenie IL-1 a TNF-α sme použili R & D Systems (614 Mc Kinley Plače N. E., Minneapolis, MN 55413) Quantikin súpravu. Testy sa uskutočnili podľa pokynov výrobcu. Pri jednotlivých vzorkách sa pri pozitívnych kontrolách zistili hladiny IL-1 v rozsahu 1-5 ng/ml. Aby pri našich testoch výsledky ELISA experimentov spadali do lineárnej oblasti ELISA štandardných kriviek, všetky vzorky plazmy sa dostatočne zriedili (1 : 200). Ak sa pri teste úplnej krvi zistia odchýlky, môže byť nevyhnutná optimalizácia štandardného zriedenia. Nerád, J. L. a kol., J. Leukocyte Biol. 52, 687 - 692 (1992).
Príklad 5
Inhibícia ICE homológov
1. Izolácia ICE homológov
Expresia TX v bunkách hmyzu, pričom sa použije expresný systém baculovírusu
Subklonovali sme TX cDNA (Faucheu a kol., supra 1995) do modifikovaného pVL1393 transfer vektora a do buniek hmyzu sme zaviedli výsledný plazmid kotransfekciou (pVL1393/TX) pomocou vírusovej DNA a identifikovali sme rekombinantný baculovírus. Po vytvorení zásobného roztoku vírusu s vysokým titrom sa médium testovalo na TX aktivitu, pričom sa použil vizuálny ICE test. Infikovanie buniek hmyzu Spodoptera frugiperda (Sf9) pri MOI s hodnotou 5 zásobným roztokom rekombinovaného vírusu typicky viedlo po 48 hodinách k maximálnej expresii 4,7 pg/ml. ICE sa použil pri pokuse ako štandard.
Došlo aj k expresii aminokoncovej T7 pripojenej verzie ICE alebo TX. Rôzne konštrukty, ktoré sa pôvodne navrhli na uľahčenie identifikácie a izolácie rekombinovaných proteínov, umožnili aj testovanie rôznych stupňov expresie a relatívnych stupňov homológov, ktoré prekonali apoptózu. Apoptóza sa zvýšila pri bunkách v rade s expresiou ICE alebo TX SÍ9 po infekcii (testovanie pomocou vylúčenia Trypan modrej), a to relatívne k bunkám s infekciou iba vírusovou DNA.
Expresia a čistenie N-koncovej (IIis)6-viazanej CPP32 pri E. coli cDNA kódujúci CPP32 (Femandes-Alnemri a kol, supra 1994) polypeptid začínajúci na Ser(29) sa PCR amplifikoval primérmi, ktoré pridávajú v reťazci Xhoi miesta na 5' i 3' konce cDNA a výsledný Xhoi fragment sa naviazal na Xho I-štep pET-15b expresný vektor, pričom vzniklo spojenie v reťazci s (His)6 na N-konci fiízneho proteínu. Predpovedaný rekombinovaný proteín začína aminokyselinovou sekvenciou MGSSHHHHHHSSGLVPRGSHMLE, kde LVPRGS reprezentuje trombín štiepiace miesto, za ktorým nasleduje CPP32 začínajúce na Ser(29). E. coli BL21(DE3) nesúce plazmid sa kultivovali na tuhú fázu pri teplote 30 °C a potom sa indukovali 0,8 mM IPTG. Dve hodiny po pridaní IPTG sa bunky spracovali. Pripravili sa lyzáty a rozpustné proteíny sa čistili Ni-agarózovou chromatografiou. Všetky CPP32 proteíny boli po expresii v spracovanej forme. N-koncová sekvenčná analýza preukázala, že k spracovaniu došlo na autentickom mieste medzi Asp(175) a Ser(176). 200 ml kultúry vytvorí asi 50 pg proteínu CPP32. Ako sa stanovilo titráciou aktívneho miesta, čistené proteíny boli úplne aktívne. Proteázové prostriedky boh takisto veľmi in vitro aktívne pri štiepení PARP rovnako ako pri štiepem syntetického DEVD-AMC substrátu (Nicholson a kol., supra. 1995)
2. Inhibícia ICE homológov
Selektivita skupiny reverzibilných inhibítorov ICE homológov sa opisuje v tabuľke 1. Testy enzýmu ICE sa uskutočnili podľa Wilsona a kol (supra. 1994), pričom sa použil YVAD-AMC substrát (Thomberry a kol., supra 1992). Test TX aktivity sa uskutočnil použitím ICE substrátu, pričom sa použili rovnaké podmienky ako pre ICE. Test CPP32 sa uskutočnil použitím DEVD-AMC substrátu (Nicholson a kol., supra 1995). Vo všeobecnosti je v širokej škále skeletov malá selektivita medzi ICE a TX. Žiadna z testovaných syntetických ICE zlúčenín nie je účinným inhibítorom CPP32. Test reverzibilných zlúčenín ani pri najvyššej koncentrácii (1 μΜ) nepreukázal žiadnu inhibíciu.
Tabuľka 1
Zlúčenina K ICE (nM) K TX (nM) K CPP32 (nM)
214e 7,5 7,0 i 1,1 > 1000
135a 90 55 ±9 > 1000
125b 60 57 ± 13 > 1000
137 40 40 ±7 > 1000
V tabuľke 2 sa uvádzajú rýchlostné konštanty druhého poriadku pre inaktiváciu ICE a ICE homológov vybranými ireverzibilnými inhibítormi. Študované ireverzibilné zlúčeniny sú inhibítormi so širokým spektrom ICE a jeho homológov. Pri porovnaní inhibície ICE a CPP32 ireverzibilnými zlúčeninami však možno pozorovať určitú selektivitu.
Tabuľka 2
Zlúčenina
138 217d
108a kjriact
ICE (MV)
120 000
475 000
100 000
V.
^rnact
TX (mV)
150 000
250 000
000 kjnact
CPP32 (M-'s’1) 550 000 150 000 nd
Príklad 6
Fas-indukovaná apoptóza v bunkách U937
Zlúčeniny sa hodnotili podľa svojej schopnosti blokovať anti- Fas-indukovanú apoptózu. Pri predbežných experimentoch s použitím RT-PCR sme detegovali mRNA kódujúcu ICE, TX, ICH-1, CPP32 a CMH-1 v nestimulovaných bunkách U937. Tento bunkový rad sme použili aj na štúdium apoptózy. Bunky U937 sa naočkovali v kultúrach s koncentráciou 1 x 105 buniek/ml a kultivovali sa do 5 x 106 buniek/ml. Pri pokusoch na apoptózu sa 2 x 106 buniek nanieslo na 24 jamkové kultivačné dosky v 1 ml RPM1-1640 - 10 % FBS a stimulovali sa 100 ng/ml anti-Fas-antigén protilátkou (Medical & Biological Laboratories Ltd.). Po 24 hodinovej inkubácii pri teplote 37 °C sa stanovil podiel apoptických buniek pomocou FACS analýzy s použitím ApoTag činidiel.
Všetky zlúčeniny sa na začiatku testovali pri 20 μΜ a na stanovenie hodnoty IC50 sa uskutočnila titrácia aktívnou zlúčeninou. Inhibícia apoptózy (> 75 % pri 20 μΜ) sa pozorovala pri zlúčeninách 108a, 136 a 138. Pre 0,8 μΜ zlúčeniny 217e sa stanovila hodnota IC50 v porovnaní s nulovou inhibíciou anti-Fas-indukovanej apoptózy látkou 214e pri 20 μΜ.
Príklad 7
In vivo kritický test účinnosti protizápalového účinku
LPS indukovaná produkcia IL-Ιβ
Účinnosť zlúčenín 214e a 217e sa hodnotila podľa CD-1 myší (pre každé podmienky n = 6), ktorým sa podal LPS (20 mg/kg IP). Testovaná zlúčenina sa rozpustila v zmesi olivový olej/DMSO/etanol (90 : 5 : 5) a podala sa IP injekciou jednu hodinu po podaní LPS. Sedem hodín po podaní LPS sa odobrala vzorka krvi. Pomocou testu ELISA sa stanovila hladina IL-Ιβ v sére. Výsledky na obrázku 6 ukazujú dávkovú závislosť inhibície sekrécie IL-Ιβ látkou 214e s hodnotou ED50 asi 15 mg/kg. Podobné výsledky sa získali v druhom experimente. Signifikantná inhibícia sekrécie IL-Ιβ sa pozorovala aj pri myšiach, ktorým sa podala látka 217e (obrázok 7). Jasná závislosť od dávky sa však nezistila.
Zlúčeniny 214e a 217a (50 mg/kg) sa takisto perorálne podali s cieľom zhodnotiť vstrebávanie. Výsledky na obrázku 8 ukazujú, že látka 214e (ale nie látka 217e) pri perorálnom podaní inhibuje sekréciu IL-Ιβ, čo naznačuje potenciál ICE inhibítorov ako perorálnych protizápalových činidiel.
Účinnosť analógov látky 214e sa takisto hodnotila pri myšiach, ktorým sa podal LPS, po podaní IP (obrázok 9) a PO (obrázok 10).
Tabuľka 3 % Inhibície produkcie IL-β analógmi 214e pri myšiach ošetrených LPS po PO a IP podaní (50 mg/kg)
Zlúčenina PO% inhibície IP% inhibície
214e 75 78
265 27 30
416 52 39
434 80 74
438 13 40
442 10 0
2002 - 78
Tabuľka 4
Porovnanie účinnosti proformy 214e pri myšiach, ktorým sa podal LPS. Časový priebeh inhibície produkcie
IL-Ιβ
Čas podania vzhľadom na podanie LPS, PO, 50 mg/kg
Zlúčenina -2 hod. -1 hod. Ohod. +1 hod.
214e 39* .* 80* 55 % 75*
43* 44* 48* 11*
_* _* _* 47*
304a 30 33 68 37
2100e 49 54 94 66
2100a 8 71 67 58
213e 0 48 41 89
302 0 27 21 26
2100c 0 0 85 40
2100d 42 35 52 26
2100b 0 0 47 26
2001 ~ 63 ~ 62 ~ 57 ~ 54
64* 62* 58* 55*
* Hodnoty získané v opakovaných testoch
Príklad 8
Meranie hladiny proformy 214a v krvi
Myšiam sa perorálne podala dávka zlúčenín 302 a 304a (50 mg/kg) rozpustená v 0,5 % karboxymetylcelulóze. Po 1 a 7 hodinách od podania sa odobrali vzorky krvi. Sérum sa extrahovalo vyzrážaním rovnakým objemom acetonitrilu obsahujúceho 2 % kyseliny mravčej a následným odstredením. Získaný roztok sa analyzoval pomocou kvapalinovej chromatografie a hmotnostnej spektrometrie (ESI-MS) s detekčnou hladinou 0,03 až 3 pg/ml. Zlúčeniny 302 a 304e sa vyznačovali pri perorálnom podaní detegovateľnými hladinami, látka 214e sa nevyznačuje pri perorálnom podaní hladinou v krvi vyššou než 0,10 pg/ml. Zlúčeniny 302 a 304a sú proformami látky 214e a na látku 214e sa in vivo metabolizujú (pozri obrázok 11).
Príklad 9
Pre zlúčeniny v súlade s predkladaným vynálezom sme použitím metód opísaných v príkladoch 1-8 získali nasledovné údaje. Štruktúry zlúčenín z príkladu 9 sa uvádzajú v príkladoch 10 -17.
Tabuľka 5
Zlúčenina UV-pozri K, (nM) Bunky PBMC priem. ic50 (nM) Úplná ľudská krv IC5o (nM) Odbúranie pri myšiach i. v. ml/min./kg Odbúranie pri potkanoch i. v. ml/min./kg
47b 27 1800 <600 338
47a 19 2600 5100 79 32
135a 90 2800 5000 > 100
135b 320 1600 1700
125b 60 800 4500
108b 400 25000 > 100
137 40 1700 14000
139 350 2000
213e 130 900 600
214c 1200 500
214e 7,5 1600 1300 23 12
217c 1700 7000 70
217e 175 2000 >50
220b 600 2125
223b 99 5000 > 100
223e 1,6 3000 > 20000 89
Zlúčenina UV-pozri Kj (nM) Bunky PBMC priem. IC50 (nM) Úplná ľudská krv IC50 (nM) Odbúranie pri myšiach i. v. ml/min./kg Odbúranie pri potkanoch i. v. ml/min./kg
226e 15 1100 1800 109
227e 7 234 550
230e 325 300 67
232e 1100 4500 22 26
235e 510 4750 36
238e 500 4250
246 12 950 10000 31
257 13 11000 6600*
265 47 4300 1400 23 20
281 50 600 2500*
302 4500 > 20000 > 20000
304a 200 1,400 2400 14000*
307a 55 14500 16000
307b 165 14000
404 2,9 1650 1800* 1100 64 24
405 6,5 1700 2100
406 4 1650 2300
407 0,4 540 1700
408 0,5 1100 1000 41 23
409 3,7 2500
410 17 2000 2800 32 20
411 0,9 540 1900
412 1,3 580 660* 700 1000* 25
413 750 6200
415 2,5 990 1000* 450 3500* 26 18
416 12 1200 3400 47
417 8 2000 6000 33 22
418 2,2 1050 2200* 7800 1800* 13 5,9
419 280 > 8000
420 1200 8000 > 8000*
421 200 4300 4600*
422 50 2200 1200
423 10 2100 1800* 1500 45
424 45 2500 4000
425 0,8 650 700* 650
426 90 4500 2500*
427 180 4500 36
428 280
429 7000
430 60 >8000
431 8 >8000 8000
SK 287195 Β6
Zlúčenina UV-pozri K; (nM) Bunky PBMC priem. IC50 (nM) Úplná ľudská krv ic50 (nM) Odbúranie pri myšiach i. v. ml/min./kg Odbúranie pri potkanoch i. v. ml/min./kg
432 1,6 560 2000
433 2,9 1000 1100
434 4,9 1600 1200* 1800 1300* 20
435 8 4400
436 7,5 2700
437 12 1800 5000
438 28 1000 700 2900* 22
439 3,7 2800 3200 3400*
440 2,3 5000 2000
441 1 2500 4500
442 3,2 900 2000 54
443 3,6 2800 1500
444 15 3500 3500
445 135 4000
446 62 3000
447 5,8 2500 1500
448 130 4000
449 12 1500 3200 13000*
450 5 800 2200 1700* 18 12
451 4 1800 1500 9000*
452 4,5 600 800* 650 1600* 27,3
453 0,65 1300 1900 1600*
454 45 2500
455 1,2 400 2800 2600* 54
456 4,5 600 1300* 6000 1400* 12,7
457 6,2 2000 3500
458 20 2900
459 5 1800
460 115 400 2400
461 47
462 40
463 14 2400 2800*
464 2,5 1000 > 1000 2500*
465 3 1000 800
466 0,8 1400 600
467 11 1900
468 4,5 850 2500
470 5 500 360 500* 63
471 1 750 400 17
472 140
Zlúčenina UV-pozri Kj(nM) Bunky PBMC priem. ic50 (nM) Úplná ľudská krv IC50 (nM) Odbúranie pri myšiach i. v. mL/min./kg Odbúranie pri potkanoch i. v. ml/min./kg
473 1 1000 400 450*
474 85
475 5,5 690 650* 400 350* 31 21
476 7 1600 2500
477 60
478 380
479 15 900 700 2400*
480 25 2300
481 1,2 390 930* 600 500* 34
482 <0,2 340 380 260*
483 1,7 900 700
484 2 1550 1400* 5000 15
485 2 900 900
486 2,3 480 570* 500 37
487 2,4 650 950* 500 400* 20
488 1,5 940 750
489 6 2250 1700* 15000
490 4,3 980 1000* 700 1900*
491 5 2500
493 25 1200 800 850*
494 15 1350 1500* 7000
495 43
496 16 1550 1600* 6000
497 3,5 740 350 700*
498 1,5 560 500 400*
499 3,5 1200 800* 9000
605a 90 2600 > 20000
605b 45 10000 97
605c 615 4500 37
605d 95 5100 16000 5100* 33
605e 29 2250 >10000 24
605f 475 12500
605g 165 22500
605h 460 > 25000
605i 680 > 20000
605j 110 8750 71
Zlúčenina UV-pozri K; (nM) Bunky PBMC priem. IC50 (nM) Úplná ľudská krv IC50 (nM) Odbúranie pri myšiach i. v. ml/min./kg Odbúranie pri potkanoch i. v. ml/min./kg
605m 650 20000
605n 12 2100 > 20000 28
605o 72 18000
605p 125 3200 > 20000
605q 1000
605s 150 6000
605t 33
609a 114 > 30000
609b 27 > 20000
619 300
620 35 1000 19000
621 7,2 1300 > 20000
622 35 1300 > 20000
623 9
624 300
625 105
626 260
627 43 3250 8000
628 36 2750 > 20000
629 230
630 270
631 805
632 148
633 92 5750 20000
634 1400
635 55 1900 3400* 4000
605v 1100 > 30000
2201 9 2000 3700* 3500 60
2100e 250 800 600
2100a 100 1100 850
2002 4 810 860* 70 1400* 32
2100d >10000 > 20000 > 20000
2100c 7400 > 20000 > 20000
2100b 8000 > 20000 >20000
2001 135 1800 3500
1027 4000 > 20000 > 20000 60
1015 40 2500 1700 23
Tabuľka 6
Zlúčenina Fluorescenčný test Bunky PBMC priem. IC50 (nM) Úplná ľudská krv IC5o (nM) Odbúranie pri myšiach i. v. ml/min./kg Odbúranie pri potkanoch i. v. ml/min./kg
108a 1 x 105 17 500
136 5,4 x 105 870 2 800 93
138 1,2 x 10’ 900 2 900 116
217d 4,7 x 105 340 4 000
Zlúčenina Fluorescenčný test Bunky PBMC priem. IC50 (nM) Úplná ľudská krv ic50 (nM) Odbúranie pri myšiach i. v. ml/min./kg Odbúranie pri potkanoch i. v. ml/min./kg
280 4 x 105 650 > 1 000 187
283 1 x 105 <200 450 104
284 3,5x10’ 470 550 77 100
285 4,3 x 105 810 1 000 130 50
* Hodnoty získané pri opakovanom teste
Príklad 10
Zlúčenina 139 sa pripraví pomocou postupu, ktorý sa podobá na postup použitý na prípravu zlúčeniny
47a.
Zlúčeniny 136 a 138 sa pripravia pomocou postupu, ktorý sa podobá na postup použitý pri príprave zlú10 čeniny 57b.
136
O
138
O
Zlúčeniny 135a, 135b a 137 sa pripravia pomocou postupu, ktorý sa podobá na postup použitý na prípravu zlúčeniny 69a.
O
O
O
Zlúčeniny 813e, 814c, 814e, 817c, 817d, 817e, 820b, 823b, 823e, 626e, 827e, 830e, 832e, 835e, 838e, 846, 857, 865, 902, 904a, 907a, 907b, 1004 - 1013,1015 - 1045,1046 - 1068,1070 - 1091 a 1093 - 1099 sa pripravia pomocou postupu, ktorý sa podobá postupu použitému na prípravu zlúčeniny 264 a zodpovedajúcich zlúčenín v príkladoch 10 a 11.
Zlúčeniny 47a, 47b, 108a, 108b, 125b, 213e, 214c, 217c, 217d, 217e, 220b, 223b, 223e, 226e, 227e, 230e, 232e, 235e, 238e, 246, 257, 264, 265, 280 - 287, 302, 304a, 307a a 307b sa pripravia tak, ako sa opisuje neskôr.
H. Kyselina N-(N-acetyltyrozinylvalinylpipekolyl)-3-amino-4-oxobutánová
Krok A. N-(N-terc-Butoxykarbonylpipekolyl)-4-amino-5-benzyloxy-2-oxotetrahydrofurán
Analogickým postupom ako opísal Chapman (Bioorg. & Med. Chem. Lett. 2, 613-618 (1992)) sa uskutoční reakcia 460 mg (2,0 mmol) kyseliny N-ferc-butoxykarbonylpipekolovej a 530 mg (1,82 mmol) N-alyloxykarbonyl-4-amino-5-benzyloxy-2-oxotetrahydrofuránu, čím sa získa 654 mg zlúčeniny uvedenej v názve. 'H-NMR (500 MHz, deuterochloroform (existuje ako rotaméry)), hodnoty δ: 7,35 (m, 5H), 6,88 (široký s, 1 H), 4,9 - 4,45 (m, 4H), 3,95 (široký m, 2H), 3,06 (m, 1H), 2,7 (široký m, 1H), 2,45 (m, 1H), 2,2 (m, 1H),
I, 7 -1,5 (m, 3H), 1,45 (dva s, 9H)
Krok B. N-Pipekolyl-4-amino-5-benzyloxy-2-oxotetrahydroíurán
654 mg N-(N-terc-butoxykarbonylpipekolyl)-4-amino-5-benzyloxy-2-oxotetrahydrofuránu sa rozpustí v 15 ml 25 % kyseliny trifluóroctovej v dichlórmetáne a zmes sa mieša pri teplote miestnosti. Zmes sa zahustí, čím sa získa gumovitý zvyšok. Tento zvyšok sa rozpustí v dichlórmetáne a premyje sa 10 % hydrogenuhličitanom sodným. Organická vrstva sa vysuší nad bezvodým síranom sodným, prefiltruje sa a zahustí, čím sa získa 422 mg zlúčeniny uvedenej v názve vo forme béžovej tuhej látky.
Ή-NMR (500 MHz, deuterochloroform), hodnoty δ: 7,38 (m, 5H), 7,15 (d, 1H), 5,55 (d, 1H), 4,95 - 4,8 (m, 1H), 4,78 (m, 1H), 4,65 (d, 1H), 4,45 (m, 1H), 3,2 (m, 0,5H), 3,05 (m, 0,5H), 2,95 (m, 0,5H), 2,85 (m, 0,5H), 2,65 (m, 1H), 2,55 - 2,38 (m, 1H), 1,95 (m, 1H), 1,8 (m, 1H), 1,6 (m, 2H), 1,38 (m, 2H)
Krok C. N-(N-Acetyltyrozinylvalinylpipekolyl)-4-amino-5-benzyloxy-2-oxotetrahydrofurán
464 mg (1,44 mmol) N-acetyltyrozinylvalinu a 412 mg (1,3 mmol) N-pipekolyl-4-amino-5-benzyloxy-2-oxotetrahydrofuránu sa rozpustí v zmesi 5 ml dimetylformamidu a 5 ml dichlórmetánu a zmes sa ochladí na teplotu 0 °C. K ochladenému roztoku sa pridá 210 mg (1,56 mmol) 1-hydroxybenzotriazolu (HoBt) a potom 326 mg (1,7 mmol) l-(3-dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimid-hydrochloridu (EDC). Zmes sa mieša počas 18 hodín, potom sa zriedi etylacetátom, premyje sa vodou, 10 % hydrogénsíranom sodným, 10 % hydrogénuhličitanom sodným a znovu vodou. Organická vrstva sa zahustí, čím sa získa surová tuhá látka, ktorá sa vyčistí pomocou flash chromatografie na silikagéli, pričom sa ako elučné činidlo použije zmes dichlórmetánu, izopropanolu a pyridínu v pomere 94 : 6 : 1, čím sa získa 370 mg zlúčeniny uvedenej v názve.
'H-NMR (500 MHz, perdeuterometanol (existuje ako diastereoméry ako aj rotaméry)), hodnoty δ: 7,35 (m, 5H), 7,05 (m, 2H), 6,68 (m, 2 H), 5,65 a 5,25 (m, 1 H), 4,9 - 3,95 (m, 8H), 3,4 - 2,6 (m, H), 2,5 - 2,1 (m, 1H), 1,98 (s, 1H), 1,9 (s, 1H), 1,85 (s, 1H), 1,8 -1,6 (m, 2H), 1,55 -1,3 (m, 4H), 0,95 - 0,85 (m, 6H)
Krok D. Kyselina N-(N-acetyltyrozinylvalinylpipekolyl)-3-amino-4-oxobutánová
K roztoku 100 mg N-(N-acetyltyrozinylvalinylpipekolyl)-4-amino-5-benzyloxy-2-oxotetrahydrofuránu v 10 ml metanolu sa pridá 60 mg hydroxidu paládnatého na uhlí a zmes sa udržiava vo vodíkovej atmosfére. Zmes sa prefiltruje cez Celit a zahustí, čím sa získa biela tuhá látka. Táto surová tuhá látka sa rozpustí v 2 ml metanolu a trituruje sa dietyléterom, čím sa získa 26 mg zlúčeniny uvedenej v názve.
'H-NMR (500 MHz, perdeuterometanol (existuje ako diastereoméry ako aj rotaméry)), hodnoty δ: 7,1 (m, 2H), 6,7 (m, 2H), 5,2 (široký m, 1H), 4,8 - 3,6 (m, 6H), 3,2 - 2,5 (m, 4H), 2,5 - 2,1 (m, 1H), 1,95 (tri s, 3H), 1,9-1,3 (m, 6H), 1,1-0,7 (m, 6H)
K. Kyselina N-[N-acetyltyrozinylvalinyl-(4-benzyloxy)prolinyl]-3-amino-4-oxobutánová
Krok A. Semikarbazón íerc-butylesteru kyseliny N-(N-alyloxykarbonyl-4-benzyloxyprolinyl)-3-amino-4-oxobutánovej
Zlúčenina uvedená v názve sa pripraví reakciou N-alyloxykarbonyl-4-benzyloxyprolínu a semikarbazónu terc-butylesteru kyseliny 3-amino-4-oxobutánovej (T. L. Graybill a kol., Abstracts of papers, 206th National Meeting of the Američan Chemical Society, Abstract MEDI-235, Chicago, IL, USA (1993)), pričom sa použijú podobné podmienky kondenzácie peptidu, ako sa uvádzajú v prípade zlúčeniny H, stupeň C.
'H-NMR (500 MHz, deuterochloroform), hodnoty δ: 9,05 (široký s, 1H), 7,85 (široký m, 1H), 7,4 - 7,2 (m, 5H), 7,15 (široký s, 1H), 6,55 (široký s, 1H), 5,9 (m, 1H), 5,1 - 4,9 (široký m, 2H), 4,65 - 4,4 (m, 4H), 4,2 (široký m, 1H), 3,75 - 3,5 (m, 2H), 2,75 - 2,55 (m, 2H), 2,5 (široký m, 1H), 2,25 (široký m, 1H), 1,4 (s, 9H)
Krok B. Semikarbazón ŕerc-butylesteru kyseliny N-[N-acetyltyrozinylvalinyl-(4-benzyloxyprolinyl)]-3-amino-4-oxobutánovej
Zlúčenina uvedená v názve sa pripraví reakciou N-acetyltyrozinylvalínu a semikarbazónu íerc-butylesteru kyseliny N-[N-alyloxykarbonyl-(4-benzyloxy)prolinyl]-3-amino-4-oxobutánovej, pričom sa použijú reakčné podmienky uvedené v prípade zlúčeniny H, stupeň A.
'H-NMR (500 MHz, perdeuterometanol), hodnoty δ: 7,35 - 7,2 (m, 6H), 7,0 (d, 2H), 6,65 (d, 2H), 4,85 (m, 1H), 4,6 - 4,45 (m, 4H), 4,3 (široký m, 1H), 4,15 (m, 1H), 3,7 (m, 1H), 2,95 (m, 1H), 2,75 - 2,6 (m, 3H), 2,35 (m, 1H), 2,1 (m, 1H), 1,9 (s, 3H), 1,4 (s, 9H), 0,95 (d, 3H), 0,90 (s, 3H)
Krok C. Kyselina N-[N-acetyltyrozinylvalinyl-(4-benzyloxyprolinyl)]-3-amino-4-oxobutánová
270 mg semikarbazónu terc-butylesteru kyseliny N-[N-acetyltyrozinylvalinyl-(4-benzyloxyprolinyl)]-3-amino-4-oxobutánovej sa rozpustí v 10 ml 25 % kyseliny trifluóroctovej v dichlórmetáne a zmes sa mieša pri teplote miestnosti počas 3 hodín. Zmes sa zahustí, čím sa získa tuhý zvyšok. Tento zvyšok sa rozpustí v 10 ml zmesi metanolu, kyseliny octovej a 37 % formaldehydu v pomere 3:1:1a zmes sa mieša pri teplote miestnosti počas 1 hodiny. Zmes sa zahustí a výsledný zvyšok sa prečistí pomocou flash chromatografie na silikagéli, pričom sa ako elučné činidlo použije zmes dichlórmetánu, metanolu a kyseliny mravčej v pomere 100 : 5 : 0,5, čím sa získa 37 mg zlúčeniny uvedenej v názve.
'H-NMR (500 MHz, perdeuterometanol (existuje ako zmes diastereomérov hemiacetálu v pomere 1 : 1)), hodnoty δ: 7,4 - 7,25 (m, 5H), 7,0 (d, 2H), 6,65 (d, 2H), 4,65 - 4,05 (m, 7H), 3,75 - 3,4 (m, 2H), 3,05 - 2,3 (m, 5H), 2,2 - 1,95 (m, 2H), 1,90 (s, 3H), 1,0 (d, 3H), 0,95 (d, 3H)
(a) X = O (b) X = H2
Zlúčenina 44a. K roztoku 690 mg (2,32 mmol) (lS,9S)-/erc-butyl-9-amino-6,10-dioxooktahydro-6H-pyridazino[l,2-a][l,2]-diazepín-l-karboxylátu (GB 2 128 984) v 16 ml dioxánu a 4 ml vody sa pri teplote 0 °C pridá 292 mg (3,48 mmol) tuhého hydrogenuhličitanu sodného a potom sa po kvapkách pridá 470 mg (2,78 mmol) 3-fenylpropionylchloridu. Zmes sa mieša pri teplote miestnosti počas 2 hodín a potom sa pridá ďalších 200 mg (2,38 mmol) hydrogenuhličitanu sodného a 100 mg (0,6 mmol) 3-fenylpropionylchloridu. Zmes sa mieša pri teplote miestnosti počas ďalších 2 hodín, zriedi sa 50 ml etylacetátu, premyje sa dvakrát vždy 25 ml nasýteného roztoku hydrogenuhličitanu sodného, potom sa vysuší nad síranom horečnatým a zahustí. Zvyšok sa vyčistí flash chromatografiou, pričom sa ako elučné činidlo použije 0 - 50 % etylacetát v chloroforme a potom sa vykryštalizuje triturovaním éterom, čím sa získa 860 mg (86 %) bielej tuhej látky s teplotou topenia 137 - 138 °C.
[cc]d23 - 95,1° (c = 0,549, dichlórmetán)
Infračervené spektrum (KBr): 3327,1736,1677, 1664,1536,1422,1156 ‘H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,24 (5H, m), 6,50 (1H, d, J = 7,5), 5,24 (1H, m), 4,90 (1H, m), 4,60 (1H, m), 3,44 (1H, m), 2,93 (2H, m), 2,84 (1H, m), 2,64 (1H, m), 2,54 (2H, m), 2,26 (2H, m), 1,70 (4H, m), 1,70 (9H, m)
Hmotnostná spektrometria (FAB, m/z): 430 (M+ + 1), 374, 242, 105, 91
Zlúčenina 44b. (lS,9S)-terc-Butyloktahydro-10-oxo-9-(3-fenylpropionylamino)-6H-pyridazino[l,2-aJ[l,2]diazepín-l-karboxylát sa pripraví z (lS,19)-ŕerc-butyl-9-amino-10-oxo-6H-pyridazino[l,2-a]-[l,2]diazepín-l-karboxylátu (Atwood a kol., J. Chem. Soc. Perkin Trans. 1 1986, str. 1011 - 1019) spôsobom ako v prípade zlúčeniny 44a, čím sa získa 810 mg (81 %) bezfarebného oleja.
[a]D 23 - 33,5° (c = 0,545, dichlórmetán) Infračervené spektrum (film): 3334,2935,1737, 1728,1659,1642 'H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,24 (5H, m), 6,75 (1H, d, J = 6,7), 5,27 (1H, m), 4,92 (1H, m), 3,39 (1H, m), 3,03 (4H, m), 2,55 (311, m), 2,33 (1H, m), 2,17 (1H, m), 1,80 (5H, m), 1,47 (9H, s), 1,39 (1H, m)
Hmotnostná spektrometria (FAB, m/z): 416 (M+ + 1), 360, 211, 143, 97
Zlúčenina 45a. Kyselina(lS,9S)-6,10-dioxooktahydro-9-(3-fenylpropionylamino)-6H-pyridazino[l,2-aJ[ 1,2]diazepín-1 -karboxylová
K roztoku 800 mg (1,863 mmol) (lS,9S)-terc-butyl-6,10-dioxooktahydro-9-(3-fenylpropionylamino)-6H-pyridazino[l,2-a][l,2]-diazepín-l-karboxylátu (zlúčeniny 44a) v 5 ml suchého dichlórmetánu sa pri teplote 0 °C pridá 5 ml kyseliny trifluóroctovej. Roztok sa mieša pri teplote miestnosti počas 3 hodín a potom sa zahustí. K zvyšku sa pridá 10 ml suchého éteru a potom sa éter odstráni vo vákuu. Tento postup sa zopakuje trikrát, čím sa získa kryštalická tuhá látka. Táto tuhá látka sa trituruje éterom a prefiltruje, čím sa získa 590 mg (85 %) bielej kryštalickej tuhej látky s teplotou topenia 196 - 197,5 °C.
[a]D 23 - 129,5° (c = 0,2, metanol)
SK 287195 Β6
Infračervené spektrum (KBr): 3237, 1729, 1688, 1660, 1633, 1574, 1432, 1285, 1205 'H-NMR (perdeuterometanol), hodnoty δ: 8,28 (1H, d, J = 7,4), 7,22 (5H, m), 5,32 (1H, dd, J = 5,9 a 2,9), 4,75 (1H, m), 4,51 (1H, m), 3,50 (1H, m), 3,01 (1H, m), 2,91 (2H, m), 2,55 (2H, m), 2,29 (3H, m), 1,95 (2H, m), 1,71 (2H, m)
Analýza pre C|9H23N3O5: vypočítané: 61,12% C, 6,21 % H, 11,25% N nájdené 60,80 % C6,28 % H 10,97 % N Hmotnostná spektrometria (FAB, m/z): 374 (M+ + 1), 242, 105, 91
Zlúčenina 45b Kyselina (lS,9S)-oktahydro-10-oxo-9-(3-fenylpropionylamino)-6H-pyridazino[l,2-a][l,2]diazepín karboxylová sa pripraví z (lS,9S)-ŕerc-butyloktahydro-10-oxo-9-(3-fenylpropionylamino)-6H-pyridazino[l,2-a][l,2]diazepín-l-karboxylátu (zlúčeniny 44b) spôsobom opísaným v prípade zlúčeniny 45a, čím sa získa 657 mg (96 %) zlúčeniny 45b vo forme kryštalickej tuhej látky s teplotou topenia 198 - 202 °C. [cx]D 23 - 86,2 (c = 0,5, metanol) Infračervené spektrum (KBr): 3294, 2939, 1729, 1645, 1620, 1574, 1453, 1214 ‘H-NMR (perdeuterometanol), hodnoty δ: 7,92 (1H, d, J = 7,9), 7,20 (5H, m), 5,29 (1H, m), 4,90 (1H, m), 3,47 (1H, m), 3,08 (2H, m), 2,90 (2H, m), 2,55 (3H, m), 2,36 (1H, m), 1,81 (5H, m), 1,43 (2H, m) Hmotnostná spektrometria (FAB, m/z): 360 (M + 1), 211,143, 91
Zlúčenina 46a. [3S, 2R,S (lS,9S)]-N-(2-Benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl-6,10-dioxooktahydro-9-(3-fenylpropionylamino)-6H-pyridazino[ 1,2-a] [ 1,2]diazepín-1 -karboxamid
K roztoku 662 mg (1,773 mmol) kyseliny (lS,9S)-6,10-dioxooktahydro-9-(3-fenylpropionylamino)-6H-pyridazino[l,2-a][l,2]diazepm-l-karboxylovej (zlúčeniny 45a) v 9 ml suchého dichlórmetánu a 3 ml suchého dimetylformamidu sa pri teplote miestnosti pridá 30 mg bis(trifenylfosfm)paládiumchloridu a 568 mg (1,95 mmol) (3S,2RS)-3-alyloxykarbonylamino-2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuránu (Chapman, Bioorg. & Med. Chem. Lett. 2, str. 613 - 618 (1992)) a potom sa po kvapkách pridá 1,19 g (4,09 mmol) tri-n-butylcínhydridu. K zmesi sa pridá 479 mg (3,546 mmol) 1-hydroxybenzotriazolu, zmes sa ochladí na teplotu 0 °C a potom sa pridá 408 mg (2,128 mmol) l-(3-dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimid-hydrochloridu. Zmes sa mieša pri teplote miestnosti počas 3,25 hodiny, potom sa zriedi 50 ml etylacetátu, premyje sa dvakrát 20 ml zriedenej kyseliny chlorovodíkovej, dvakrát 20 ml nasýteného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a jedenkrát roztokom chloridu sodného, potom sa vysuší nad síranom horečnatým a zahustí. Výsledný olej sa vyčistí flash chromatografiou, pričom sa ako elučné činidlo použije 0 - 100 % etylacetát v chloroforme, čím sa získa 810 mg (81 %) zlúčeniny 46a vo forme zmesi anomérov s teplotou topenia 92 - 94 °C. Infračervené spektrum (KBr): 3311, 1791, 1659, 1651, 1536 'H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,49 a 6,56 (1H, 2d, J = 6,7 a 7,8), 7,29 (10H, m), 6,37 a 6,18 (1H, 2d, J = 7,7 a 7,6), 5,56 a 5,34 (1H, d, s, J = 5,2), 5,08 - 4,47 (6H), 3,18 - 2,80 (5H), 2,62 - 2,28 (5H), 2,04 -1,53 (511)
Hmotnostná spektrometria (FAB, m/z): 563 (M1 + 1), 328,149, 91
Zlúčenina 46b. [3S, 2RS (lS,9S)]-N-(2-Benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)oktahydro-10-oxo-9-(3-fenylpropionylamino)-6H-pyridazino-[l,2-a][l,2]diazepín-l-karboxamid sa pripraví zo zlúčeniny 45b spôsobom opísaným v prípade zlúčeniny 46a, čím sa získa 790 mg (96 %) sklovitej látky s teplotou topenia 58 - 60 °C.
Infračervené spektrum (KBr): 3316, 2940, 1793, 1678, 1641, 1523, 1453, 1120 ‘H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,28 (10H, m), 6,52 a 6,42 (1H, 2d, J = 7,2 a 7,1), 5,53 a 5,44 (1H, d, s, J = 5,2), 5,35 (1H, m), 4,6 - 4,9 a 4,34 (4H, m), 3,1 - 2,8 (6H, m), 2,6 - 2,1 (7H), 1,95 - 1,05 (5H) Hmotnostná spektrometria (FAB, m/z): 549 (M+ + 1), 400, 310, 279, 91
Zlúčenina 47a. Kyselina |3S, (lS,9S)]-3-(6,10-dioxooktahydro-9-(3-fenylpropionylamino)-6H-pyridazino[ 1,2-a] [ 1,2]diazepín-1 -karboxamido)-4-oxobutánová
Zmes 205 mg (0,364 mmol) [3S, 2RS (lS,9S)]-N-(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl-6,10-dioxooktahydro-9-(3-fenylpropionylamino)-6H-pyridazino[ 1,2-a] [ 1,2]diazepín-1 -karboxamidu (zlúčeniny 46a), 10 % paládia na uhlí (200 mg) a 20 ml metanolu sa mieša v atmosfére vodíka pri atmosférickom tlaku počas 5 hodín. Zmes sa prefiltruje a potom sa zahustí, čím sa získa 154 mg (90 %) sklovitej látky s teplotou topenia 116- 118 °C.
[a]D 23 - 140° (c = 0,1, metanol)
Infračervené spektrum (KBr): 3323 (široký signál), 1783, 1731, 1658, 1539, 1455, 1425 'H-NMR (perdeuterometanol), hodnoty δ: 7,21 (5H, m), 5,17 (1H, m), 4,73 (1H, m), 4,50 (2H, m), 4,23 (1H, m), 3,38 (1H, m), 3,06 (1H, m), 2,91 (2H, m), 2,73 - 2,18 (6H, m), 2,01 - 1,59 (5H, m)
Analýza pre C23H27N4O7.H2O: vypočítané: 56,32 % C, 6,16% H, 11,42% N nájdené: 56,29 % C 6,11% H, 11,25% N
Hmotnostná spektrometria (FAB, m/z): 473 (M+ + 1), 176, 149, 105, 91
Zlúčenina 47b. Kyselina [3S, (lS,9S)]-3-(oktahydro-10-oxo-9-(3-fenylpropionylamino)-6H-pyridazino[l,2-a][l,2]diazepín-l-karboxamido)-4-oxobutánová sa pripraví zo zlúčeniny 46b spôsobom opísaným v prípade zlúčeniny 47a. Zvyšok sa vyčistí flash chromatografiou, pričom sa ako elučné činidlo použije 0 - 10 % metanol v chloroforme, čím sa získa 65 mg (52 %) sklovitej látky s teplotou topenia 87 - 90 °C.
[ajn23 - 167,0° (c = 0,1, metanol)
Infračervené spektrum (KBr): 3329, 2936, 1786, 1727, 1637 ’H-NMR (perdeuterometanol), hodnoty δ: 7,23 (5H, m), 5,29 (1H, m), 4,83 (1H, m), 4,59 (1H, d, J = 3,6), 4,29 (1H, m), 3,3 - 3,0 (3H, m), 2,91 (2H, m), 2,70 - 2,34 (5H, m), 2,19 (2H, m), 1,75 (4H, m), 1,36 (2H, m) Analýza pre C23H3oN4Oe.O,5H20:
vypočítané: 59,09 % C, 6,68 % H, 11,98% N nájdené: 58,97 % C 6,68% H, 11,73% N
Hmotnostná spektrometria (FAB, m/z): 459 (M+ + 1), 310, 149, 105, 91
R1 R2 R3
O
(a) II Ph—ΟΗζ-0^ H
0 ľ
(b) P h—C Hz—CHj— —CHz—Ph
Zlúčenina 56a. íerc-Butyl-N-2-(3-benzyloxykarbonylamino-l,2-dihydro-2-oxo-pyridyl)acetyl-3-amino-5-(2,6-dichlórbenzoyloxy)-4-oxopentanoát
Kyselina octová 55a (WO 93/21213) v 2 ml tetrahydrofuránu sa mieša pri teplote miestnosti a pridá sa 60 mg (0,448 mmol) 1-hydroxybenzotriazolu a 47 mg (0,246 mmol) l-(3-dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimid-hydrochloridu. Po 5 minútach sa pridajú 2 kvapky vody a v miešaní sa pokračuje počas 20 minút. Pridá sa 6 mg bis(trifenylfosfm)paládium(II)chloridu a potom roztok 103 mg (0,244 mmol) íerc-butyl-3-(alyloxykarbonylamino)-4-oxo-5-(2,6-dichlórbenzoyloxy)pentanoátu (WO 93/16710) v 1 ml tetrahydrofuránu. Počas 1 hodiny sa pri teplote miestnosti pridá 0,09 ml (0,336 mmol) tributylcínhydridu. Zmes sa mieša počas ďalších 3 hodín a vyleje sa do etylacetátu, premyje sa IM kyselinou chlorovodíkovou, vodným roztokom hydrogenuhličitanu sodného a roztokom chloridu sodného, vysuší sa nad síranom horečnatým a zahustí vo vákuu. Zvyšok sa trituruje pentánom a supematant sa odstráni. Zvyšná tuhá látka sa vyčistí flash chromatografiou, pričom sa ako elučné činidlo použije 50 % etylacetát v hexáne, čím sa získa 92 mg (63 %) zlúčeniny uvedenej v názve vo forme bezfarebného oleja.
[a]D 23 - 29,6° (c = 1,1, dichlórmetán)
Infračervené spektrum (film): 3377, 3365, 3332, 3312, 1733, 1691, 1650, 1599, 1515, 1366, 1261, 1153, 1068, 747 'H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 8,09 (1H, d, J = 6,8), 7,84 (1H, s), 7,58 (1H, d, J = 8,3), 7,33 (8H, m), 7,02 (1H, dd, J = 6,9 a 1,7), 6,33 (1H, t, J = 7,2), 5,20 (2H, s), 5,12 (2H, m), 4,89 (1H, dt), 4,65 (2H, m), 2,80 (2H,m), 1,38 (9H, s)
Zlúčenina 56b. rerc-Butyl-N-2-6-benzyl-1,2-dihydro-2-oxo-3-(3-fenylpropionyl)amino-1 -pyridylacetyl-3-amino-5-(2,6-dichlórbenzoyloxy)-4-oxopentanoát sa pripraví spôsobom opísaným v prípade zlúčeniny 56a, pričom sa získa zlúčenina uvedená v názve vo výťažku 66 % vo forme bezfarebného oleja.
Infračervené spektrum (film): 3364,3313, 1738, 1688, 1648, 1600, 1566, 1514, 1433, 1369, 1254, 1152 'H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 8,40 (1H, d, J = 7,6), 8,30 (1H, s), 7,28 (13H, m), 6,20 (1H, d, J = = 7,6), 5,12 (2H, q), 4,86 (1H, m), 4,65 (2H, q), 4,06 (2H, s), 3,07 - 2,61 (6H, m), 1,39 (9H, s)
(a) (b)
R1
R2
R3
-CH2Ph
Zlúčenina 57a (O). Kyselina N-2-(3-benzyloxykarbonylamino-l,2-dihydro-2-oxo-l-pyridyl)acetyl-3-ami10 no-5-(2,6-dichlórbenzoyloxy)-4-oxopentánová
210 mg (0,356 mmol) esteru 56a v 0,5 ml dichlórmetánu sa ochladí na teplotu 0 °C a pridá sa 0,5 ml kyseliny trifluóroctovej. Zmes sa mieša počas 30 minút, počas ktorých sa zohreje na teplotu 20 °C. Roztok sa odparí dosucha pri zníženom tlaku, zvyšok sa znova rozpusti v dichlórmetáne a zahustí. Tento postup sa uskutoční trikrát. Zvyšok sa trituruje etylacetátom a zriedi éterom, čím sa získa 162 mg (85 %) zlúčeniny 15 uvedenej v názve vo forme bezfarebnej tuhej látky, ktorá sa topí za rozkladu pri teplote 165 - 168 °C.
[oc]D 23 - 38°(c = 0,1, metanol);
Infračervené spektrum (KBr): 3332, 3275, 1723, 1658, 1649, 1597, 1581, 1562, 1526, 1432, 1385, 1258, 1218, 1206;
’H-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid), hodnoty δ: 8,96 (1H, d, J = 7,3), 8,34 (1H, s), 7,85 (1H, dd, J = 7,3), 20 7,58 (3H, m), 7,35 (5H, m), 6,29 (1H, t, J = 7,3), 5,26 (2H, m), 5,15 (2H, s), 4,69 (3H, m), 2,75 (2H, m);
Analýza pre C27H23CI2N3O9:
vypočítané: 53,66% C, 3,84% H, 6,95% N nájdené: 53,36 % C, 3,90% H, 6,81% N
Hmotnostná spektrometria (+ FAB): 604 (M+ + 1), 285, 241, 195, 173, 149, 91.
Zlúčenina 57b (P). Kyselina N-2-[6-benzyl-l,2-dihydro-2-oxo-3-(3-fenylpropionyl)amino-l-pyridyl]acetyl-3-amino-5-(2,6-dichlórbenzoyloxy)-4-oxopentánová sa pripraví spôsobom opísaným v prípade zlúčeniny 57a, pričom sa získa zlúčenina uvedená v názve vo výťažku 78 % vo forme bezfarebných kryštálov, ktoré sa topia za rozkladu pri teplote 116 - 120 °C.
[a]D 26 - 41,l°(c = 0,1, metanol);
Infračervené spektrum (KBr): 3299, 1739, 1715, 1689,1666,1645, 1598, 1563, 1518, 1432, 1209, 1151; ’H-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid), hodnoty δ: 9,24 (1H, s), 8,88 (1H, d, J = 7,6), 8,18 (1H, d, J = 7,7), 7,60 (3H, m), 7,26 (10H, m), 6,06 (1H, d, J = 7,7), 5,23 (2H, ABq), 4,69 (3H, m), 3,93 (2H, s), 2,78 (6H, m); Analýza pre C^sIRiCljNsOs.^O:
vypočítané: 59,16% C, 4,68 % H, 5,91% N nájdené: 59,38 % C, 4,53% H, 5,84% N
Hmotnostná spektrometria (+ FAB): 694 (Cl = 35, 37), (M+ + 1), 692 (Cl = 35, 35), (M+ + 1).
pomer 50
O (a) R1 = OCH3, R2 = H (b) R1 = H, R2 = OCH3
Zlúčenina 65a. Zmes 2,62 g (15,5 mmol) 2-nitro-6-metoxyfenolu (EP 333 176) a 10% paládia na uhlí 10 (130 mg) v 50 ml etanolu sa mieša v atmosfére vodíka počas 75 minút. Zmes sa prefíltruje cez kremelinu a bezprostredne potom sa k nej pridá 32 mg kyseliny p-toluénsulfónovej a 6,45 ml (38,8 mmol) trietylortoformiátu. Potom sa zmes zohrieva na teplotu varu pod spätným chladičom v atmosfére dusíka. Po 20 hodinách sa pridá 30,0 mg kyseliny /J-toluénsulfónovej a 6,45 ml (38,8 mmol) trietylortoformiátu. Po celkovom čase zohrievania 44 hodín sa reakčná zmes nechá vychladnúť a zahustí sa vo vákuu. Výsledný zvyšok sa vyčistí 15 flash chromatografiou, pričom sa ako elučné činidlo použije zmes etylacetátu a hexánu v pomere 25 : 75, čím sa získa 1,97 g (85 %) zlúčeniny uvedenej v názve vo forme žltej tuhej látky s teplotou topenia 28-31 °C. Infračervené spektrum (film): 1629, 1497, 1434, 1285, 1097;
'H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 8,09 (ÍH, s), 7,40 (1H, d, J = 8,0), 7,28 (1H, t, J = 8,0), 6,89 (1H, d, J = 8,0), 4,02 (3H, s);
13H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 152,84, 145,82, 142,50, 139,99, 125,75, 113,42, 108,80, 56,97; Analýza pre 08Η7Ν02.0,1Η20:
vypočítané: 63,65 % C, 4,81% H, 9,29% N nájdené: 63,43 % C, 4,88% H, 9,05% N
Hmotnostná spektrometria (+ FAB): 150 (M+ + 1).
Zlúčenina 65b. 4-Metoxybenzoxazol
K suspenzii 2,00 g (14,8 mmol) 4-hydroxybenzoxazolu (Musser a kol., J. Med. Chem. 30, str. 62 - 67 (1987)) v 80,0 ml acetónu sa pridá 2,25 g (16,3 mmol) vysušeného uhličitanu draselného a potom 1,38 ml (22,2 mmol) jódmetánu. Reakčná zmes sa zohrieva na teplotu varu pod spätným chladičom v atmosfére dusíka počas 4,5 hodiny, potom sa prefiltruje a zahustí vo vákuu, čím sa získa surový produkt. Výsledný zvyšok sa vyčistí flash chromatografiou, pričom sa ako elučné činidlo použije zmes etylacetátu a hexánu v pomere 25 : 75, čím sa získajú 2,0 g (91 %) zlúčeniny uvedenej v názve vo forme bielej kryštalickej tuhej látky s teplotou topenia 72 - 74 °C.
Infračervené spektrum (KBr): 3089, 1619, 1610, 1503, 1496,1322, 1275, 1090, 1071, 780, 741;
'H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 8,02 (1H, s), 7,32 (1H, t, J = 8,0), 7,18 (1H, d, J = 8,0), 6,81 (1H, d, J = 8,0), 4,04 (3H, s);
Analýza pre CsH7NO2: vypočítané: 64,42 % C, 4,73 % H, 9,39% N nájdené: 64,40 % C, 4,84% H, 9,31% N
Hmotnostná spektrometria (EI, ionizácia nárazom elektrónov; m/z): 149 (M+ + 1, 100 %).
Zlúčenina 66a. (3S,4RS)-ŕerc-Butyl-N-(alyloxykarbonyl)-3-amino-4-hydroxy-4-[2-(7-metoxybenzoxazolyl)]butanoát
K miešanému roztoku 548,6 mg (3,68 mmol) 7-metoxybenzoxazolu (zlúčeniny 65a) v 18,5 ml bezvodého tetrahydrofuránu sa v atmosfére dusíka pri teplote -78 °C pridá po kvapkách 2,47 ml 1,56M roztoku n-butyllítia v hexánoch (3,86 mmol), pričom vznikne žlto sfarbený roztok. Zmes sa mieša pri teplote -78 °C počas 20 minút a potom sa pridá 1,045 g (4,05 mmol) suchého éterátu bromidu horečnatého vo forme tuhej látky. Výsledná heterogénna zmes sa zohreje na teplotu -45 °C a mieša sa počas 15 minút. Reakčná zmes sa potom znovu ochladí na teplotu -78 °C a po kvapkách sa pridá roztok 946,4 mg (3,68 mmol) (S)-alyloxykarbonyl-Asp(ŕerc-butyl)H v 18,5 ml tetrahydrofuránu. Reakčná zmes sa mieša pri teplote -78 °C počas 30 minút, zohreje sa na teplotu 0 °C a mieša sa počas 1 hodiny. Výsledná homogénna reakčná zmes sa zohreje na teplotu miestnosti a mieša sa počas 16 hodín. K reakčnej zmesi sa pridá 3,5 ml 5 % roztoku hydrogenuhličitanu sodného a potom sa vo vákuu odstráni tetrahydrofurán. Výsledný vodný zvyšok sa extrahuje šesťkrát dichlórmetánom. Spojené extrakty sa premyjú roztokom chloridu sodného, vysušia sa nad síranom horečnatým, prefiltrujú a zahustia vo vákuu, čim sa získa 1,8 g surového produktu. Flash chromatografiou, pričom sa ako elučné činidlo použije zmes etylacetátu a hexánu v pomere 40 : 60 sa získa 1,21 g (81 %) zlúčeniny uvedenej v názve vo forme oleja ako zmesi diastereomérov na atóme uhlíka C-4. Infračervené spektrum (dichlórmetán): 3425, 2983, 1725, 1504, 1290, 1157, 1101;
'H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,35 - 7,19 (2H, m), 6,89 - 6,81 (1H, m), 6,00 - 5,57 (2H, m), 5,32 - 5,05 (3H, m), 4,68 - 4,35 (3H, m), 4,01 (3H, s), 2,86 - 2,59 (2H, m), 1,45 (9H, s), 1,41 (9H, s);
13H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 171,18, 171,09, 165,80, 165,30, 156,71, 156,60, 145,65, 142,76, 142,71, 140,82, 140,72, 133,23, 125,72, 118,41, 118,21, 113,07, 112,87, 108,95, 82,16, 70,28, 69,98, 66,52, 66,39, 57,03, 52,57, 52,29, 37,83, 36,86, 28,65;
Analýza pre C2oH26N207.0,6H20: vypočítané: 57,57 % C, 6,57% H, 6,72 % N nájdené: 57,49 % C, 6,34 % H, 6,60% N
Hmotnostná spektrometria (+ FAB): 407 (M + 1), 351, 307, 154.
Zlúčenina 65b. (3S, 4RS)-terc-Butyl-N-(alyloxykarbonyl)-3-amino-4-hydroxy-4-[2-(4-metoxybenzoxazolyl)]butanoát sa pripraví spôsobom opísaným v prípade zlúčeniny 66a, čím sa získa 1,29 g (26 %, 68 % vzťahované na spätne vyizolovaný východiskový materiál) zlúčeniny uvedenej v názve vo forme oleja ako zmesi diastereomérov na atóme uhlíka C-4.
Infračervené spektrum (dichlórmetán): 3400, 1725, 1625, 1505, 1369, 1354, 1281, 1263, 1226, 1158, 1092, 1048;
'H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,34 - 7,24 (1H, m), 7,16 (1H, d, J = 8,2), 6,79 (1H, d, J = 7,9), 6,00 - 5,50 (2H, m), 5,30 - 5,05 (3H, m), 4,70 - 4,35 (4H, m), 4,02 (3H, s), 2,90 - 2,45 (2H, m), 1,45 - 1,41 (9H, 2s);
Analýza pre C20H26N2O7.0,4H2O: vypočítané: 58,07 % C, 6,53 % H, 6,77% N nájdené: 58,09 % C, 6,41 % H, 6,63 % N
Hmotnostná spektrometria (+ FAB): 407 (M+ + 1, 88 %), 351 (100).
Zlúčenina 67a. (3S,4RS)-terc-Butyl-N-[N-acetyl-(S)-(O-ŕerc-butyl)-tyrozinyl-(S)-valinyl-(S)-alaninyl]-3-amino-4-hydroxy-4-[2-(7-metoxybenzoxazolyl)]butanoát
K miešanému roztoku 481, 9 mg (1,19 mmol) benzoxazolu 66a a 586,3 mg (1,30 mmol) acetyl-Tyr(/erc-butyl)-Val-Ala-OH v 3,5 ml dichlórmetánu a 3,5 ml dimetylformamidu sa pridá 18,0 mg bis(trifenylfosfín)paládium(II)chloridu a potom po kvapkách 0,80 ml (2,96 mmol) tributylcínhydridu. Pridá sa 320,4 mg (2,37 mmol) 1-hydroxybenzotriazolu a zmes sa ochladí na teplotu 0 °C. Pridá sa 278,2 mg (1,42 mmol) l-(dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimid-hydrochloridu, zmes sa nechá zohriať na teplotu miestnosti a mieša sa počas 16,5-hodiny. Reakčná zmes sa zriedi etylacetátom a premyje sa dvakrát IM roztokom hydrogénsíranu sodného, dvakrát nasýteným roztokom hydrogenuhličitanu sodného, vodou a roztokom chloridu sodného. Organická vrstva sa vysuší nad síranom horečnatým, prefiltruje a zahustí vo vákuu, čím sa získajú 2,0 g surového produktu. Flash chromatografiou, pričom sa ako elučné činidlo použije zmes dichlórmetánu a metanolu v pomere 95 : 5, sa získa 844,0 mg (94 %) zlúčeniny uvedenej v názve vo forme bielej tuhej látky s teplotou topenia 205 °C.
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3399, 3304, 2977, 1729, 1643, 1506, 1367, 1290, 1161;
'H-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid), hodnoty δ: 8,24 - 7,78 (4H, m), 7,43 - 7,32 (2H, m), 7,23 (2H, d, J = = 8,5), 7,16 - 7,07 (1H, m), 6,93 (2H, d, J = 8,5), 6,52 a 6,40 (1H, 2d, J = 5,5 a 5,0), 5,03, 4,78 - 4,49, 4,45 -
- 4,16 (5H, široký t, 2m), 4,05 - 4,04 (3H, 2s), 3,08 - 2,35 (14H, m), 2,11 - 1,89 (1H, m), 1,83 (3H, s), 1,49 -
- 1,32, 1,15, 1,0 - 0,81 (27H, s, 2m, J = 7,0);
13H-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid), hodnoty δ: 175,55, 175,18, 173,88, 173,75, 173,05, 169,23, 157,28, 148,55, 146,16, 143,21, 136,63, 133,55, 128,87, 127,17, 115,78, 111,92, 84,02, 81,50, 71,40, 61,15, 60,05, 57,79, 53,39, 51,62, 43,76, 40,52, 34,58, 32,52, 31,60, 26,35, 23,11, 22,71, 21,76;
Analýza pre 0%Η5;Ν50|().0,5Η20·.
vypočítané: 61,40% C, 7,40% H, 9,18% N nájdené: 61,43% C, 7,31% H, 9,07% N
Hmotnostná spektrometria (+ FAB): 754 (M+ + 1), 698, 338, 267.
Zlúčenina 67b. (3S,4RS)-ŕerc-Butyl-N-[N-acetyl-(S)-(O-íerc-butyl)-tyrozinyl-(S)-valinyl-(S)-alaninyl]-3-amino-4-hydroxy-4-[2-(4-metoxybenzoxazolyl)]butanoát sa pripraví spôsobom opísaným v prípade zlúčeniny 67a, čím sa získa 1,05 g (94 %) zlúčeniny uvedenej v názve vo forme jemného bieleho prášku, ktorý sa topí za rozkladu pri teplote 210 - 213 °C.
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3284, 2977, 1736, 1691, 1632, 1536, 1505, 1452, 1392, 1367, 1258, 1236, 1161, 1091;
1II-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid), hodnoty δ: 8,20 - 7,75 (4H, m), 7,40 - 7,10 (4H, m), 7,00 - 6,80 (3H, m), 6,45 a 6,34 (1H, 2d, J = 5,3 a 5,0), 5,00 - 4,10 (5H, m), 4,00 a 3,99 (3H, 2s), 3,00 - 2,25 (4H, m), 1,95 (1H, m), 1,78 (3H, s), 1,39 - 0,80 (27H, m);
Analýza pre C39H55N5Oio.O,5H20: vypočítané: 61,40% C, 7,40 % H, 9,18% N nájdené: 61,58% C, 7,38% H, 8,91% N
Hmotnostná spektrometria (+ FAB): 754 (M+ + 1, 30 %), 72 (100).
Zlúčenina 68a. (3S)-terc-Butyl-N-[N-acetyl-(S)-(O-terc-butyl)tyroinyl-(S)-valinyl-(S)-alaninyl]-3-amino-4-hydroxy-4-[2-(7-metoxybenzoxazolyl)-4-oxobutanoát
K miešanej suspenzii 641,0 mg (0,85 mmol) alkoholu 67a v 46,0 ml dichlórmetánu sa pridá 1,082 g (2,55 mmol) Dess-Martinovho činidla (Ireland a kol., J. Org. Chem. 58, str. 2899 (1993); Dess a kol., J. Org. Chem. 48, str. 4155 - 4156 (1983)). Výsledná zmes sa mieša počas 1,5-hodiny a potom sa vytrepe medzi 86,0 ml zmesi nasýteného tiosíranu sodného a nasýteného hydrogenuhličitanu sodného v pomere 1:1, nasýteným hydrogenuhličitanom sodným a roztokom chloridu sodného. Organická fáza sa vysuší nad síranom horečnatým, prefiltruje a zahusti vo vákuu, čím sa získa 660 mg surového produktu. Flash chromatografiou, pričom sa ako elučné činidlo použije dichlórmetán a metanol v pomere 94 : 6, sa získa 636 mg (100 %) zlúčeniny uvedenej v názve vo forme bielej tuhej látky s teplotou topenia 209 °C.
[a]D 24 - 21,8°(c = 0,16, metanol); Infračervené spektrum (bromid draselný): 3395, 3294, 2977, 1722, 1641,1535, 1505, 1161; ’H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 8,43 - 8,16 (1H, m), 7,97 - 7,62 (2H, m), 7,49 - 1,14 (3H, m), 7,08 - 6,95 (3H, m), 6,89 - 6,73 (2H, m), 5,81 - 5,68 (1H, m), 5,16 - 4,86 (2H, m), 4,53 (1H, široký t), 4,03 (3H, s), 3,16 - 2,84 (4H, m), 2,11 - 1,84 (4H, m), 1,46 - 1,14 (21H, m), 0,92 - 0,78 (6H, m);
13H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 186,28, 173,39, 171,90, 171,19, 171,03, 169,89, 156,43, 154,75, 146,32, 142,88, 140,983, 132,31, 130,54, 126,98, 124,73, 114,95, 111,42, 82,44, 78,71,58,92, 57,20, 54,91, 53,47, 48,77, 39,43, 38,15, 32,79, 29,44, 28,60, 23,55, 20,27, 19,70, 19,34;
Hmotnostná spektrometria (+ FAB): 752 (M+ + 1), 696, 336, 265.
Zlúčenina 68b. (3S)-Zerc-Butyl-N-[N-acetyl-(S)-(O-/erc-butyl)yrozinyl-(S)-valinyl-(S)-alanmyl|-3-amino-4-hydroxy-4-[2-(4-metoxybenzoxazolyl)-4-oxobutanoát sa pripraví spôsobom opísaným v prípade zlúčeniny 68a, čím sa získa 420 mg (55 %) zlúčeniny uvedenej v názve vo forme bielej tuhej látky, ktorá sa topí za rozkladu pri teplote 211 - 213 °C.
[oc]D 24 - 23,9°(c = 0,82, metanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3277, 3075, 1723, 1690, 1632, 1530, 1506, 1392, 1366, 1269, 1234, 1160, 1094;
*H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 8,15 (1H, široký s), 7,7 (2H, široký s), 7,46 (1H, t, J = 8,3), 7,24 (2H, d, J = 8,3), 7,10 (1H, široký s), 7,03 (2H, d, J = 8,3), 6,83 (3H, m), 5,74 (1H, q, J = 6,9), 5,00 (2H, m), 4,51 (1H, t, J = 7,0), 4,07 (3H, s), 3,20 - 2,95 (4H, m), 2,00 (4H, m), 1,42 (3H, d, J = 6,8), 1,35 (9H, s), 1,23 (9H, s), 0,86 (6H, d, J = 6,7);
Hmotnostná spektrometria (+ FAB): 752 (M+ +1,7 %), 72 (100).
Zlúčenina 69a (R). Kyselina (3S)-N-(N-acetyl-(S)-tyrozinyl-(S)-valinyl-(S)-alaninyl)-3-amino-4-[2-(7-metoxybenzoxazolyl)-4-oxobutánová
Roztok 600,0 mg (0,80 mmol) esteru 68a v 65,0 ml zmesi dichlórmetánu a kyseliny trifluóroctovej v pomere 1 : 1 sa mieša počas 1 hodiny v atmosfére suchého dusíka. Roztok sa potom zahustí vo vákuu, vyberie sa éterom a znovu sa zahustí. Tento proces sa zopakuje šesťkrát, čím sa získa surový produkt vo forme špinavobielej tuhej látky. Flash chromatografiou, pričom sa ako elučné činidlo použije zmes dichlórmetánu a metanolu s gradientom 95 : 5 až 80 : 20, sa získa 420,8 mg (83 %) zlúčeniny uvedenej v názve vo forme hygroskopickej bielej tuhej látky. Táto zlúčenina existuje v perdeuterometanole ako zmes troch izomérov, ktorú tvorí ketoforma (koncentrácia 50 %) a jej acyloxyketoforma (dva izoméry na atóme uhlíka C-4, koncentrácia 50 %). Produkt sa topí za rozkladu pri teplote vyššej než 150 °C.
[a]D 24 - 33,2°(c = 0,17, metanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3300, 1715, 1658, 1650, 1531, 1517, 1204;
’H-NMR (perdeuterometanol), hodnoty δ: 7,46 - 7,19 (2H, m), 7,16 - 6,91 (3H, m), 6,70 - 6,59 (2H, m), 5,62 - 5,49 (1H, m), 5,00 - 4,72 (1H, nejasný m), 4,69 - 4,51 (1H, m), 4,49 - 4,08 (2H, m), 4,05 - 3,89 (3H, m), 3,16 - 2,47 (4H, m), 2,05 - 1,78 (4H, m), 1,41 - 1,11,1,05 - 0,70 (9H, 2m);
Analýza pre C3iH37N5O10.3H2O: vypočítané: 53,67 % C, 6,25% H, 10,10% N nájdené: 53,76% C, 5,56% H, 10,28% N
Hmotnostná spektrometria (+ FAB): 640 (M+ + 1), 435, 147.
Zlúčenina 69b (S). Kyselina (3S)-N-(N-acetyl-(S)-tyrozinyl-(S)-valinyl-(S)-alaninyl)-3-amino-4-[2-(4-metoxybenzoxazolyl)]-4-oxobutánová sa pripraví spôsobom opísaným v prípade zlúčeniny 69a, čím sa získa 252 mg (96 %) hygroskopickej zlúčeniny uvedenej v názve. Táto zlúčenina existuje v perdeuterometanole ako zmes troch izomérov, ktorú tvorí ketoforma a jej acyloxyketoforma (dva izoméry na atóme uhlíka C-4). V perdeuterodimetylsulfoxide existuje tento produkt ako jediný izomér. Topí sa za rozkladu pri teplote 200 - 203 °C.
[a]D 24 - 38,0°(c = 0,23, metanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3289, 2968, 1718, 1713, 1658, 1634, 1548, 1547, 1506, 1461, 1453, 1393, 1369, 1268, 1228, 1174, 1092;
'H-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid), hodnoty δ: 9,20 (1H, široký s), 8,71 (1H, d, J = 6,2), 8,10 (2H, m), 7,83 (1H, d, J = 8,7), 7,61 (1H, t, J = 8,2), 7,46 (1H, d, J = 8,2), 7,08 (3H, m), 6,65 (2H, d, J = 8,3), 5,50 (1H, q, J = 6,5), 4,50 (1H, m), 4,37 (1H, m), 4,20 (1H, m), 4,05 (3H, s), 3,09 - 2,77 (4H, m), 1,94 (1H, m), 1,79 (3H, s), 1,23 (3H, d, J = 7,0), 0,82 (6H, m);
Analýza pre C3iH37N5O1().l,5H2O: vypočítané: 55,85 % C, 6,05 % H, 10,51 %N nájdené: 55,21% C, 5,69% H, 10,13% N
Hmotnostná spektrometria (+ FAB): 640 (M+ + 1, 22 %), 107 (100).
Zlúčenina 99. Roztok 2,71 g (12,7 mmol) 5-(2,6-dichlórfenyl)oxazolu (pripraveného podobným spôsobom aký sa opisuje v Tetrahedron Lett. 23, str. 2369 (1972)) v 65 ml tetrahydrofuránu sa ochladí v atmosfére dusíka na teplotu -78 °C. K tomuto roztoku sa pridá 8,5 ml 1,5M roztoku n-butyllítia v hexánoch (13,3 mmol) a zmes sa mieša pri teplote -78 °C počas 30 minút. Pridá sa 3,6 g (13,9 mmol) éterátu bromidu horečnatého a teplota roztoku sa na 15 minút nechá vystúpiť na -45 °C. Reakčná zmes sa ochladí na -78 °C a po kvapkách sa pridá roztok 3,26 g (12,7 mmol) aldehydu 58 (Graybill a kol., Int. J. Protein Res. 44, str. 173 - 182 (1993)) v 65 ml tetrahydrofuránu. Reakčná zmes sa mieša počas 25 minút, potom sa teplota nechá vystúpiť na -40 °C a zmes sa mieša počas 3 hodín a nakoniec sa mieša počas 1 hodiny pri teplote miestnosti. K reakčnej zmesi sa prileje 12 ml 5 % roztoku hydrogenuhličitanu sodného a zmes sa mieša počas 3 hodín. Tetrahydrofurán sa odstráni vo vákuu a výsledný zvyšok sa extrahuje dichlórmetánom. Organická vrstva sa premyje nasýteným roztokom chloridu sodného a vysuší sa nad síranom horečnatým, prefiltruje a zahustí, čím sa získa 6,14 g zlúčeniny uvedenej v názve. Vyčistením sa získa 4,79 g (80 %) zlúčeniny 99.
’H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 1,45 (s, 9H), 2,7 - 2,5 (m, 2H), 2,8 (dd, 1H), 4,2 a 4,4 (2 x d, 1H), 4,7 - 4,5 (m, 3H), 5,35 - 5,1 (m, 2H), 5,6 a 5,7 (2 x d, 1H), 6,0 - 5,8 (m, 1H), 7,2 (d, 1H), 7,3 (m, 1H), 7,4 (m, 2H);
(a) R = H (b) R = COCH2CH2Ph (c) R = CH2Ph
Zlúčenina 104a. Metylester kyseliny [2-oxo-(3S)-(3-fenylpropionylamino)-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]diazepin-1 -yljoctovej
Roztokom 1 g (2,86 mmol) metylesteru kyseliny ((3S)-terc-butoxykarbonylamino-2-oxo-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]diazepin-l-yl)octovej (zlúčeniny 103) v 25 ml etylacetátu sa počas 2 minút nechá prebublávať bezvodý chlorovodík a zmes sa potom mieša počas 1 hodiny pri teplote miestnosti. Reakčná zmes sa odparí, čím sa získa hydrochlorid metylesteru (2-oxo-(3S)-amino-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]diazepin-l-yljoctovej vo forme bielej tuhej látky. Tento hydrochlorid a 0,47 g (3,15 mmol) hydroškoricovej kyseliny sa rozpustí v 20 ml dimetylformamidu a roztok sa ochladí na teplotu 0 °C. K tomuto roztoku sa pridá 1-hydroxybenzotriazol a l-(3-dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimid-hydrochlorid. Zmes sa mieša počas 18 hodín pri teplote miestnosti, potom sa zriedi 150 ml etylacetátu a premyje sa 10 % hydrogénsíranom sodným, 10 % hydrogenuhličitanom sodným a roztokom chloridu sodného. Organická vrstva sa vysuší nad bezvodým síranom sodným, prefiltruje a odparí, čím sa získa surová tuhá látka, ktorá sa vyčistí flash chromatografiou, pričom sa ako elučné činidlo použije zmes etylacetátu a dichlórmetánu v pomere 7:3. Získa sa 600 mg (55 %) zlúčeniny uvedenej v názve vo forme bielej tuhej látky.
’H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,3 - 6,85 (9H, m), 6,55 - 6,0 (1H, d), 4,88 - 4,82 (1H, m), 4,72 -
- 4,65 (1H, d), 4,28 - 4,22 (1H, m), 3,95 - 3,9 (1H, m), 3,78 (3H, s), 3,65 (1H, široký s), 3,28 - 3,2 (1H, m),
2.95 - 2,84 (2H, m), 2,55 - 2,4 (2H, m);
Zlúčenina 105a. Kyselina [(3S)-(3-fenylpropionylamino)-2-oxo2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]diazepin-l-yljoctová
Metylester kyseliny [(3S)-(3-fenylpropionylamino)-2-oxo-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][ 1,4]diazepin-1 -yl] octovej (zlúčenina 104a) sa rozpustí v 90 % metanole. K reakčnej zmesi sa pridá hydrát hydroxidu lítneho a zmes sa mieša pri teplote miestnosti počas 4 hodín. Reakčná zmes sa odparí vo vákuu, čím sa získa biela tuhá látka. Táto tuhá látka sa rozpustí v 20 ml vody, roztok sa okyslí na pH 5 a extrahuje sa etylacetátom, čím sa získa 304 mg (88 %) zlúčeniny uvedenej v názve vo forme bielej tuhej látky 'H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,5 - 6,9 (11H, m), 4,92 - 4,8 (1H, m), 4,7 - 4,58 (1H, d), 4,38 -
- 4,25 (1H, d), 3,88 - 3,78 (1H, m), 3,45 - 3,25 (1H, m), 3,05 - 2,85 (2H, m), 2,55 - 2,45 (2H, m);
Zlúčenina 106a. Kyselina 4-oxo-(3S)-{2-[2-oxo-(3S)-(3-fenylpropionylamino)-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][ 1,4]diazepin-1 -yljacetylamino} maslo vá
N-[l-(2-Benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-ylkarbamoylmetyl)-2-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-lH-benzo[b][l,4]diazepin-3-yl]-3-fenylpropionamid sa pripraví zo zlúčeniny 105a postupom opísaným v príklade 3 pre zlúčeninu H (stupeň A), čim sa získa 390 mg (93 %) produktu vo forme diastereomérov.
’H-NMR (perdeuterometanol), hodnoty δ: 7,58 - 7,22 (14H, m), 5,78 - 5,73 (0,5H, d), 5,64 (0,5H, s), 5,0 -
- 4,72 (4H, m), 4,54 - 4,42 (2H, m), 3,82 - 3,76 (0,5H, m), 3,68 - 3,62 (0,5H, m), 3,28 - 3,21 (0,5H, m), 2,78 -
- 2,48 (4H, m).
Výsledný produkt sa premení na zlúčeninu 106a spôsobom opísaným v príklade 3 v prípade zlúčeniny H (stupeň D), pričom sa získa zlúčenina uvedená v názve vo forme bielej tuhej látky s výťažkom 17 %. ’H-NMR (perdeuterometanol), hodnoty δ: 7,54 - 6,98 (9H, m), 5,58 - 5,44 (1H, m), 4,8 - 4,2 (4H, m), 3,96 -
- 3,3 (2H, m), 3,30 - 3,05 (1H, m), 2,98 - 2,25 (5H, m).
Zlúčenina 104b. Metylester kyseliny [2-oxo-5-(3-fenylpropionyl)-(3S)-(3-fenylpropionylamino)-2,3,4,5-tetrahydrobenzofb] [1,4] diazepin-1 -yl] octovej
Roztokom 1 g (2,86 mmol) metylesteru kyseliny ((3S)-Zerc-butoxykarbonylamino-2-oxo-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]diazepin-l-yl)octovej (zlúčeniny 103) v 25 ml etylacetátu sa počas 2 minút nechá prebublávať bezvodý chlorovodík a zmes sa potom mieša počas 1 hodiny pri teplote miestnosti. Reakčná zmes sa odparí, čím sa získa hydrochlorid metylesteru (2-oxo-(3S)-amino-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]diazepin-l-yl)octovej vo forme bielej tuhej látky. Tento hydrochlorid sa suspenduje v 20 ml dichlórmetánu a ochladí sa na teplotu 0 °C. K suspenzii sa pridá 1,6 ml (11,5 mmol) trietylamínu a potom sa po kvapkách pridá 0,9 ml (6 mmol) dihydrocinamoylchloridu. Zmes sa zohreje na teplotu miestnosti a mieša sa počas 18 hodín. Potom sa zmes zriedi 25 ml dichlórmetánu a premyje sa dvakrát 50 ml vody a jedenkrát 50 ml roztoku chloridu sodného. Organická vrstva sa vysuší nad bezvodým síranom sodným, prefiltruje sa a odparí, čím sa získa viskózny žltý olej, ktorý sa vyčistí flash chromatografiou, pričom sa ako elučné činidlo použije zmes etylacetátu a dichlórmetánu v pomere 1:1. Získa sa 1,35 g (92 %) zlúčeniny uvedenej v názve vo forme bielej tuhej látky.
'H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,45 - 7,02 (14H, m), 6,37 - 6,32 (1H, d), 4,78 - 4,72 (1H, m), 4,52 - 4,3 (3H, m), 3,82 - 3,77 (1H, m), 3,74 (3H, s), 3,03 - 2,87 (4H, m), 2,58 - 2,45 (2H, m), 2,45 - 2,35 (1H, m), 2,25 - 2,16 (1H, m).
Zlúčenina 105b. Kyselina [2-oxo-5-(3-fenylpropionyl)-3-((3S)-fenylpropionylamino)-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]diazepin-l-yl]-octová
680 mg (1,32 mmol) metylesteru kyseliny [2-oxo-5-(3-fenylpropionyl)-3-(3-fenylpropionylamino)-2-oxo-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]diazepin-l-yl]octovej (zlúčeniny 104b) sa hydrolyzuje postupom opísaným v príklade 105a, čím sa získa 645 mg (98 %) zlúčeniny uvedenej v názve vo forme bielej tuhej látky ’H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,58 (1H, široký s), 7,5 - 7,42 (1H, m), 7,35 - 6,95 (14H, m),
4.95 - 4,88 (1H, m), 4,64 - 4,55 (1H, d), 4,54 - 4,45 (1H, t), 4,15 - 4,05 (1H, d), 3,75 (1H, m), 3,05 - 2,75 (4H, m), 2,58 - 2,45 (2H, m), 2,45 - 2,28 (1H, m), 2,25 - 2,14 (1H, m).
Zlúčenina 106b. Kyselina 2-oxo-(3S)-{2-[2-oxo-5-(3-fenylpropionyl)-(3S)-(3-fenylpropionylamino)-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b] [1,4] diazepin-1 -yl] acetylamino} maslová
Kyselina [2-oxo-5-(3-fenylpropionyl)-3-(3-fenylpropionylamino)-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]diazepin-l-yl]octová a semikarbazón terc-butylesteru 3-amino-4-oxomaslovej kyseliny sa podrobí reakcii podľa postupu uvedeného v príklade 3 v prípade zlúčeniny K (stupeň A), čím sa získa 350 mg (85 %) bielej tuhej látky.
'H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 9,05 (1H, široký s), 7,58 - 7,55 (1H, d), 7,5 - 7,35 (1H, m), 7,35 -
- 6,95 (14H, m), 6,75 - 6,72 (1H, d), 6,25 (1H, široký s), 5,25 (1H, široký s), 4,95 - 4,88 (1H, m), 4,8 - 4,72 (1H, m), 4,55 - 4,4 (2H, m), 3,92 - 3,88 (1H, d), 3,73 - 3,68 (1H, m), 2,95 - 2,8 (4H, m), 2,8 - 2,72 (1H, m), 2,62 - 2,55 (1H, m), 2,55 - 2,45 (2H, m), 2,4 - 2,32 (1H, m), 2,2 - 2,12 (1H, m), 1,45 (9H, s).
Zo semikarbazónu ŕerc-butylesteru kyseliny 4-oxo-3-{2-[2-oxo-5-(3-fenylpropionyl)-3-(3-fenylpropionylamino)-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]diazepin-l-yl]acetylamino}maslovej sa odstráni ochranná skupina, ako sa opisuje v príklade 3 v prípade zlúčeniny K (stupeň C), čím sa získa 118 mg (47 %) zlúčeniny uvedenej v názve vo forme bielej tuhej látky ’H-NMR (perdeuterometanol), hodnoty δ: 7,48 - 6,95 (14H, m), 4,65 - 4,15 (6H, m), 3,5 - 3,4 (1H, m), 2,85 -
- 2,72 (4H, m), 2,65 - 2,5 (1H, m), 2,5 - 2,34 (3H, m), 2,34 - 2,15 (2H, m).
Zlúčenina 104c. Metylester kyseliny [5-benzyl-2-oxo-(3S)-(3-fenylpropionylamino)-2,3,4,5-tetrahydrobenzo [b] [ 1,4]diazepin-1 -yl] -octovej
Do 10 ml dimetylformamidu sa pridá 500 mg (1,31 mmol) metylesteru kyseliny 2-oxo-3-(3-fenylpropionylamino)-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]diazepin-1-yl)octovej (zlúčeniny 104a), 155 mg uhličitanu vápenatého a 170 μΐ (1,44 mmol) benzylbromidu a zmes sa zohrieva počas 8 hodín na teplotu 80 °C. Zmes sa zriedi 150 ml etylacetátu a premyje sa štyrikrát 50 ml vody. Organická vrstva sa vysuší nad bezvodým síranom sodným, pre filtruj e a odparí, čím sa získa viskózny žltý olej, ktorý sa vyčistí flash chromatografiou, pričom sa ako elučné činidlo použije zmes dichlórmetánu a etylacetátu v pomere 8 : 2. Získa sa 460 mg (75 %) zlúčeniny uvedenej v názve vo forme bielej tuhej látky.
’H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,34 - 7,05 (14H, m), 6,32 - 6,28 (1H, d), 4,84 - 4,76 (1H, d), 4,76 - 4,70 (1H, m), 4,43 - 4,37 (1H, d), 4,26 - 4,18 (1H, d), 4,06 - 4,00 (1H, d), 3,79 (3H, s), 3,45 - 3,37 (1H, m), 3,02 - 2,95 (1H, m), 2,90 - 2,82 (2H, m), 2,5 - 2,34 (2H, m).
Zlúčenina 105c. Kyselina [5-benzyl-2-oxo-(3S)-(3-fenylpropionylamino)-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]diazepin-l-yl]octová sa pripraví hydrolýzou esteru 102c postupom opásaným v prípade zlúčeniny 105a, čím sa získa 450 mg (98 %) zlúčeniny uvedenej v názve vo forme bielej tuhej látky.
’H-NMR (perdeuterometanol), hodnoty δ: 7,5 - 7,05 (14H, m), 6,4 (1H, široký s), 4,85 - 4,55 (2H, m), 4,45 -
- 4,21 (2H, m), 4,12 - 3,92 (1H, d), 3,45 - 3,3 (1H, m), 3,1 - 2,8 (3H, m), 2,55 - 2,28 (3H, m).
Zlúčenina 106c. Kyselina 3(S)-{2-[5-benzyl-2-oxo-3-(3(S)-fenylpropionylamino)-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b] [ 1,4]diazepin-1 -yljacetylamino} -4-oxomaslo vá
Kyselina [5-benzyl-2-oxo-(3S)-(3-fenylpropionylamino)-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]diazepin-l-ylJoctová a semikarbazón terc-butylesteru (3S)-amino-4-oxomaslovej kyseliny sa podrobí reakcii podľa postupu uvedeného v príklade 3 v prípade zlúčeniny K (stupeň A), čím sa získa 260 mg (85 %) bielej tuhej látky. 'H-NMR (perdeuterometanol), hodnoty δ: 7,35 - 7,0 (15H, m), 4,94 - 4,88 (1H, m), 4,68 - 4,58 (1H, d), 4,57 -
- 4,52 (1H, m), 4,41 - 4,34 (1H, d), 4,3 - 4,23 (1H, d), 4,1 - 4,04 (1H, d), 3,18 - 3,11 (1H, m), 3,09 - 2,98 (1H, m), 2,78 - 2,72 (2H, t), 2,65 - 2,57 (1H, m), 2,42 - 2,33 (3H, m).
Zo semikarbazónu terc-butylesteru kyseliny (3S)-{2-[5-benzyl-2-oxo-(3S)-(3-fenylpropionylamino)-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b]-[l,4]diazepin-l-yl]acetylamino}maslovej sa odstráni ochranná skupina, ako sa opisuje v príklade 3 v prípade zlúčeniny K (stupeň C), čím sa získa 168 mg (81 %) zlúčeniny uvedenej v názve vo forme bielej tuhej látky.
'H-NMR (perdeuterometanol), hodnoty δ: 7,37 - 7,0 (14H, m), 4,75 - 4,62 (1H, m), 4,6 - 4,45 (2H, m), 4,4 -
- 4,21 (2H, m), 4,15 - 3,95 (211, m), 3,15 - 3,0 (2H, m), 2,82 - 2,67 (2H, m), 2,65 - 2,52 (1H, m), 2,5 - 2,32 (3H, m).
Kyselina [5-benzyl-2-oxo-(3S)-(3-fenylpropionylamino)-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]diazepin-l-yljoctová a semikarbazón terc-butylesteru (3S)-amino-4-oxomaslovej kyseliny sa podrobí reakcii podľa postupu uvedeného v príklade 3 v prípade zlúčeniny K (stupeň A), čím sa získa 260 mg (85 %) bielej tuhej látky. ’H-NMR (perdeuterometanol), hodnoty δ: 7,35 - 7,0 (1511, m), 4,94 - 4,88 (III, m), 4,68 - 4,58 (1H, d), 4,57 -
- 4,52 (1H, m), 4,41 - 4,34 (1H, d), 4,3 - 4,23 (1H, d), 4,1 - 4,04 (1H, d), 3,18 - 3,11 (1H, m), 3,09 - 2,98 (1H, m), 2,78 - 2,72 (2H, t), 2,65 - 2,57 (1H, m), 2,42 - 2,33 (3H, m).
Zo semikarbazónu terc-butylesteru kyseliny (3S)-{2-[5-benzyl-2-oxo-(3S)-(3-fenylpropionylamino)-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b]-[l,4]diazepin-l-yl]acetylamino}maslovej sa odstráni ochranná skupina, ako sa opisuje v príklade 3 v prípade zlúčeniny K (stupeň C), čím sa získa 168 mg (81 %) zlúčeniny uvedenej v názve vo forme bielej tuhej látky.
'H-NMR (perdeuterometanol), hodnoty δ: 7,37 - 7,0 (14H, m), 4,75 - 4,62 (1H, m), 4,6 - 4,45 (2H, m), 4,4 -
- 4,21 (2H, m), 4,15 - 3,95 (2H, m), 3,15 - 3,0 (2H, m), 2,82 - 2,67 (2H, m), 2,65 - 2,52 (1H, m), 2,5 - 2,32 (3H, m).
Zlúčenina 107a. 4-íerc-Butoxykarbonyl-2-oxo-(3S)-{2-[2-oxo-5-(3-fenylpropionyl)-(3S)-(3-fenylpropionylamino)-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]diazepin-l-yl]acetylamino)butylester kyseliny 2,6-dichlórbenzoovej
Výsledný semikarbazón sa pripraví reakciou zlúčeniny 105b a terc-butyl-3-(alyloxykarbonylamino)-4-oxo-5-(2,6-dichlórbenzoyloxy)pentanoátu (WO 93/16710), ako sa opisuje v prípade zlúčeniny 56a, čím sa získa 256 mg (58 %) zlúčeniny uvedenej v názve vo forme bielej tuhej látky.
'H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,45 - 7,04 (17H, m), 6,45 - 6,34 (2H, m), 5,28 - 5,21 (1H, m), 5,1 - 5,0 (1H, m), 4,95 - 4,90 (1H, m), 4,75 - 4,70 (1H, m), 4,55 - 4,44 (1H, m), 4,32 - 4,22 (1H, dd), 3,99 -
- 3,85 (III, dd), 3,85 - 3,76 (1H, m), 3,06 - 2,83 (5H, m), 2,83 - 2,74 (1H, m), 2,6 - 2,44 (2H, m), 2,43 - 2,33 (1H, m), 2,24 - 2,15 (1H, m), 1,45 (9H, s).
Zlúčenina 108a. 4-Karboxy-2-oxo-(3S)-{2-[2-oxo-5-(3-fenylpropionyl)-(3S)-(3-fenylpropionylamino)-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]-diazepin-l-yl]acetylamino}butylester kyseliny 2,6-dichlórbenzoovej sa pripraví zo zlúčeniny 107a spôsobom opísaným v prípade zlúčeniny 57a, čím sa získa 156 mg (68 %) zlúčeniny uvedenej v názve vo forme bielej tuhej látky.
'H-NMR (perdeuterometanol), hodnoty δ: 7,5 - 6,9 (17H, m), 5,16 - 5,02 (1H, dd), 4,88 - 4,71 (2H, m), 4,62 -
- 4,44 (2H, m), 4,42 - 4,28 (2H, m), 4,27 - 4,18 (1H, m), 3,47 - 3,41 (1H, m), 2,90 - 2,60 (5H, m), 2,46 - 2,4 (2H,m), 2,39-2,18 (2H, m).
Zlúčenina 108b. Kyselina 4-(7-metoxybenzoxazol-2-yl)-4-oxo-(3S)-{2-[2-oxo-5-(3-fenylpropionyl)-(3S)-(3-fenylpropionylamino)-2,3,4,5-tctrahydrobenzo[b][l,4]diazepin-l-yl]acetylamino}maslová sa pripraví spôsobom opísaným v príklade 5 v prípade zlúčeniny 69a, čím sa získa zlúčenina uvedená v názve vo forme bielej tuhej látky s výťažkom 50 %.
'H-NMR (perdeuterometanol), hodnoty δ: 7,41 - 6,88 (17H, m), 5,6 - 5,55 (0,5H, t), 5,48 - 5,43 (0,5H, t), 4,64 - 4,45 (2H, m), 4,45 - 4,30 (1H, m), 3,93 (1,5H, s), 3,90 (1,5H, s), 3,47 - 3,34 (1H, m), 3,10 - 2,85 (2H, m), 2,84 - 2,63 (5H, m), 2,6 - 2,4 (2H, m), 2,3 - 2,1 (2H, m).
(a)
Zlúčenina 123. terc-Butyl-(3S)-N-(alyloxykarbonyl)-3-amino-5-(2-chlórfenylmetyltio)-4-oxopentanoát
K miešanému roztoku 749 mg (2,14 mmol) (3S)-ŕerc-butyl-N-(alyloxykarbonyl)-3-amino-5-bróm-4-oxopentanoátu (zlúčenina 122; WO 93/16710) v 20 ml dimetylformamidu sa pridá 273 mg (4,70 mmol) fluoridu draselného a potom 373 mg (2,35 mmol) 2-chlórfenylmetyltiolu. Zmes sa mieša počas 3,5-hodiny, potom sa prileje 50 ml vody a zmes sa extrahuje dvakrát vždy 50 ml etylacetátu. Spojené organické extrakty sa premyjú štyrikrát vždy 50 ml vody a potom 50 ml roztoku chloridu sodného. Vysušia sa nad síranom sodným a zahustia, čím sa získa olej, ktorý sa vyčistí pomocou veľmi rýchlej chromatografie, pričom sa ako elučnc činidlo použije 10 - 35 % etylacetát v hexáne, čím sa získa 832 mg (91 %) bezfarebnej tuhej látky s teplotou topenia 45 - 46 0C.[oc]d20 -19,0° (c = 1,0, dichlórmetán); infračervené spektrum (film): 3340, 2980, 2935, 1725, 1712, 1511, 1503, 1471, 1446, 1421, 1393, 1368, 1281, 1244, 1157, 1052, 1040, 995, 764, 739;
’H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,36 (2H, m), 7,21 (2H, m), 5,91 (2H, m), 5,27 (2H, m), 4,76 (1H, m), 4,59 (2H, d), 3,78 (2H, s), 3,36 (2H, m), 2,91 (1H, dd), 2,74 (1H, dd), 1,43 (9H, s);
Analýza pre C20H26ClNO5S: vypočítané: 56,13 % C, 6,12 % H, 3,27 % N, 7,49 % nájdené: 56,08 % C, 6,11 % H, 3,26 % N, 7,54 %
SHmotnostná spektrometria (Cl): 430/28 (M+ + 1,3 %), 374/2 (100).
Zlúčenina 124a. terc-Butyl-(3S)-3-{2-[6-benzyl-l,2-dihydro-2-oxo-3-(3-fenylpropionylamino)-l-pyridyl]acetylamino}-5-(2-chlórfenylmetyltio)-4-oxopentanoát
300 mg (0,76 mmol) kyseliny 6-benzyl-l,2-dihydro-2-oxo-3-(3-fenylpropionylamino)pyridyloctovej (zlúčeniny 52b) v 7 ml tetrahydrofuránu sa mieša s 205 mg (1,52 mmol) 1-hydroxybenzotriazolu a l-(3-dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimid-hydrochloridom. Po uplynutí 3 minút sa pridá 12 kvapiek vody, zmes sa mieša počas 10 minút a potom sa pridá 325 mg (0,76 mmol) terc-butyl-(3S)-N-(alyloxykarbonyl)-3-amino-5-(2-chlórfenylmetyltio)-4-oxopentanoátu (zlúčeniny 123), 20 mg bis(trifenylfosfín)paládium(II)chloridu a 0,6 ml (2,28 mmol) tributylcínhydridu. Zmes sa mieša počas 5 hodín pri teplote miestnosti, vyleje sa do etylacetátu, premyje sa IM kyselinou chlorovodíkovou (dvakrát), vodným roztokom hydrogenuhličitanu sodného a roztokom chloridu sodného, vysuší sa nad síranom horečnatým a zahustí. Zvyšok sa trituruje pentánom a supematant sa odstráni. Chromatografickým spracovaním, pričom sa ako elučné činidlo použije 50 % etylacetát v hexáne, sa získa 439 mg (81 %) bezfarebnej peny. [cx]|} 21 -18,3° (c = 0,5, dichlórmetán); infračervené spektrum (bromid draselný): 3356, 3311, 1722, 1689, 1646, 1599, 1567, 1513, 1367, 1154;
‘H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 8,39 (1H, d), 8,23 (1H, s), 7,24 (14H, m), 6,16 (1H, d), 4,95 (1H, m), 4,63 (2H, m), 4,02 (2H, s), 3,74 (2H, s), 3,27 (2H, s), 2,85 (6H, m), 1,40 (9H, s);
Analýza pre C39H42C1N3O6S: vypočítané: 65,39 % C, 5,91 % H, 5,87 % N nájdené: 65,51% C, 5,99% H, 5,77% N
Zlúčenina 124b. terc-Butyl-[3S(lS,9S)]-3-(6,10-dioxo-l,2,3,4,7,8,9,10-oktahydro)-9-(3-fenylpropionylamino)-6H-pyridazino [ 1,2-a] [ 1,2]diazepin-1 -karboxamido-5 -(2-chlórfenylmetyltio)-4-oxopentanoát sa pripraví podobným spôsobom ako zlúčenina 124a z tioéteru 123 a kyseliny [3S(lS,9S)]-3-(6,10-dioxo-1,2,3,4,7,8,9,10-oktahydro)-9-(3-fenylpropionylamino)-6H-pyridazino[l,2-a][l,2]diazepín-l -karboxylovej (zlúčeniny 45a), čím sa získa 452 mg (50 %) bezfarebnej penovitej látky s teplotou topenia 55 - 57 °C. [a]D 22 -94,0° (c = 0,12, dichlórmetán); infračervené spektrum (bromid draselný): 3288, 2934, 1741, 1722, 1686, 1666, 1644, 1523, 1433, 1260, 1225, 1146, 757;
'H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,35 (3H, m), 7,20 (7H, m), 6,46 (1H, d), 5,21 (1H, m), 4,97 (2H, m), 4,56 (1H, m), 3,75 (2H, s), 3,25 (3H, m), 2,93 (5H, m), 1,66 (2H, m), 1,42 (9H, s);
Analýza pre C35H43CIN4O7S: vypočítané: 59,73 % C, 6,23 % H, 5,04 % Cl, 7,96 % N 4,56 % S nájdené: 59,73 % C, 6,19 % H, 5,10 % Cl, 7,79 % N 4,58 % S
Hmotnostná spektrometria ( - FAB): 697 (M - 1, 100).
Zlúčenina 125a. Kyselina (3S)-3-{2-[6-benzyl-l,2-dihydro-2-oxo-3-(3-fenylpropionylamino)-l-pyridyl]acetylamino}-5-(2-chlórfenylmetyltio)-4-oxopentánová
K 400 mg (0,56 mmol) terc-butyl-3-{2-[6-benzyl-l,2-dihydro-2-oxo-3-(3-fenylpropionylamino)-l-pyridyl]acetylamino}-5-(2-chlórfenylmetyltio)-4-oxopentanoátu (zlúčeniny 124a) v 3 ml dichlórmetánu sa pri teplote 0 °C pridajú 3 ml kyseliny trifluóroctovej a zmes sa mieša pri 0 °C 1 hodinu a pri teplote miestnosti počas 0,5-hodiny. Roztok sa zahustí, potom sa znova rozpustí v dichlórmetáne a znova sa zahustí. Tento postup sa zopakuje trikrát. Zvyšok sa mieša v éteri počas 1 hodiny a prefiltruje sa, čím sa získa 364 mg (99 %) bezfarebnej tuhej látky s teplotou topenia 165 - 167 °C; [a]D 22 -27,7° (c = 0,2, dichlórmetán); infračervené spektrum (bromid draselný): 3289, 1712, 1682, 1657, 1645, 1593, 1562, 1527, 1497, 1416, 1203, 1182;
‘H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 8,47 (1H, d), 8,21 (1H, s), 7,70 (1H, d), 7,22 (14H, m), 6,24 (1H, d), 5,03 (1H, m), 4,65 (2H, m), 4,06 (2H, s), 3,69 (2H, m), 3,23 (2H, m), 2,88 (6H, m).
Zlúčenina 125b. Kyselina [3S(lS,9S)]-3-(6,10-dioxo-l,2,3,4,7,8,9,-10-oktahydro)-9-(3-fenylpropionylamino)-6H-pyridazino[l,2-a][I,2]-diazepm-l-karboxamido-5-(2-chlórfenylmetyltio)-4-oxopentánová sa pripraví podobným spôsobom ako zlúčenina 125a z terc-butylesteru 124b, čím sa získa 362 mg (93 %) bezfarebného prášku s teplotou topenia 76 - 80 °C. [a]D 21 -134° (c = 0,10, metanol);
infračervené spektrum (bromid draselný): 3309, 2935, 1725, 1658, 1528,1445, 1417, 1277, 1219, 1175; ’H-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid), hodnoty δ: 8,80 (1H, d), 8,19 (1H, d), 7,31 (9H, m), 5,09 (1H, m), 4,74 (1H, m), 4,63 (1H, m), 4,35 (1H, m), 3,76 (2H, m), 3,28 (3H, m), 2,80 (5H, m), 2,52 (4H, m), 2,16 (2H, m), 1,90 (3H, m);
Analýza pre C3iH35C12N4O7S.0,25H2O: vypočítané: 57,49 % C, 5,53 % H, 8,65 % N, 4,95 % S nájdené: 57,35 % C, 5,43 % H, 8,45 % N, 4,88 % N
Hmotnostná spektrometria ( - FAB): 641 (M - 1, 100).
2-Chlórfenylmetyljodid. Zmes 2-chlórfenylmetylbromidu (4 g, 19,47 mmol) a jodidu sodného (14 g, 97,33 mmol) v acetóne (40 ml) sa mieša pri teplote varu počas 1 hodiny. Reakčná zmes sa ochladí, prefiltruje a odparí vo vákuu. Zvyšok sa trituruje hexánom a prefiltruje. Roztok sa odparí vo vákuu a zvyšný olej sa čistí pomocou veľmi rýchlej chromatografie (silikagél, hexán), čím sa získa zlúčenina uvedená v názve (4,67 g, 63 %) vo forme oleja.
‘H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,34 (4H, m), 4,54 (2H, s).
Zlúčenina 201. (3S)-terc-Butyl N-(alyloxykarbonyl)-3-amino-5-hydroxy-4-oxopentanoát (Chapman a kol., Bioorg. & Med. Chem. Lett. 2, str. 613 - 618 (1992); 0,144 g, 0,5 mmol) a 2-chlórfenylmetyljodid (0,569 g, 1,5 mmol) v dichlórmetáne (4 ml) sa energicky mieša s oxidom strieborným (0,231 g, 1 mmol) a zohrieva sa na teplotu 38 °C počas 40 hodín. Reakčná zmes sa ochladí, prefiltruje a filtrát sa odparí. Zvyšok sa čistí pomocou veľmi rýchlej chromatografie (silikagél, 0-20 % etylacetátu v hexáne), čím sa získa produkt vo forme bezfarebného oleja (0,138 g, 67 %).
[a]D 24 + 3,9° (c = 1,3, dichlórmetán);
1II-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 7,37 (4H, m), 5,88 (2H, m), 5,26 (2H, m), 4,69 (2H, s), 4,57 (3H, m), 4,50 (1H, d), 4,35 (1H, d), 3,03 (1H, dd), 2,76 (1H, dd), 1,42 (9H, s).
Zlúčenina 203. Roztok 2,4-dichlór-6-nitrofenolu (zlúčenina 202; 40 g s obsahom 20 % vlhkosti) v etylacetáte (500 ml) sa vysuší pomocou síranu horečnatého, prefiltruje a filtračný koláč sa premyje malým množstvom etylacetátu. Pridá sa platina na uhlí (5 % sulfidované, 2 g) a zmes sa hydrogenuje, až kým neprestane absorpcia vodíka. Pridá sa trietylortoformiát (160 ml) a kyselina p-toluénsulfónová (160 mg) a zmes sa zohrieva na teplotu varu počas 4 hodín. Po ochladení a odstránení zvyšku katalyzátora filtráciou sa roztok premyje nasýteným roztokom hydrogenuhličitanu sodného, vodou a soľankou, vysuší sa nad síranom horečnatým a odparí dosucha. Po triturácii hexánom sa získa tuhá látka, ktorá sa odfiltruje, premyje hexánom a vysuší, čím sa získa zlúčenina uvedená v názve (25,5 g, 88 %) vo forme kryštalickej tuhej látky s teplotou topenia 98 - 99 °C.
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3119, 1610, 1590, 1510, 1452, 1393, 1296, 1067, 850; ’H-NMR (deuterochloroform), hodnoty δ: 8,16 (1H, s), 7,69 (1H, d, J = 1,9), 7,42 (1H, d, J = 1,9); Analýza pre C7H3C12NO: vypočítané: 44,72 % C, 1,61 % H, 7,45 % N, 37,70 % Cl nájdené: 44,84 % C, 1,69 % H, 7,31 % N, 37,71 % Cl
Zlúčenina 204. Bromid horečnatý sa pripraví pomocou reakcie horčíka (7,45 g, 0,30 mol) v tetrahydrofuráne (516 ml) s jódom (50 mg) a 1,2-dibrómetánom (26,3 ml, 57,3 g, 0,30 mol) pri teplote varu počas 2 hodín a potom ochladením na teplotu -40 °C. K takto získanej látke sa rýchlo pridá pomocou kanyly roztok 2-litio-5,7-dichlórbenzoxazolu pri teplote 70 °C (pripraveného z 5,7-dichlórbenzoxazolu (zlúčenina 203, 28,9 g, 0,154 mol) a butyllítia (100 ml 1,52 M roztoku v hexáne) v tetrahydrofuráne (150 ml) pri teplote 70 °C). Zmes sa mieša pri teplote -40 °C počas 1 hodiny, potom sa ochladí na teplotu -70 °C a pridá sa roztok (3S)-terc-butyl N-(alyloxykarbonyl)-3-amino-4-oxobutanoátu (Chapman a kol., Bioorg. & Med. Chem. Lett. 2, str. 613 - 618) (1992)) (20,3 g, 0,078 mol) v tetrahydrofuráne (160 ml) pri teplote nižšej než -60 °C. Reakčná zmes sa nechá zohriať na teplotu miestnosti a mieša sa počas 16 hodín pred rozložením roztokom chloridu amónneho a extrakciou 600 ml zmesi 1 : 1 hexán - etylacetát. Organický roztok sa premyje vodou a soľankou, vysuší nad síranom horečnatým a odparí, Čím sa získa sirup (52,9 g). Po veľmi rýchlej chromatografii (silikagél, 250 g - 1 1 alikvotných dielov 1 : 1 hexán - dichlórmetán x 2, dichlórmetán, 5 % etylacetát v dichlórmetáne, 10 % etylacetát v dichlórmetáne a 20 % etylacetát v dichlórmetáne) sa získa znečistený produkt (24,6 g), ktorý sa ďalej čistí chromatograficky (silikagél, 1 : 1 hexán - éter), čím sa získa zlúčenina uvedená v názve vo forme zlatohnedého skla (22,7 g, 64 %).
Infračervené spektrum (film): 3343, 2980, 1723, 1712, 1520, 1456, 1398, 1369, 1254, 1158, 993;
‘H-NMR (deuterochloroform) δ: 7,60 (1H, m), 7,37 (1H, m), 5,72 (1H, m), 5,64 (0,5H, d), 5,10 (2,5H, m), 4,7 - 4,3 (4H, m), 2,9 - 2,6 (2H, m), 1,46 a 1,42 (9H spojené, 2s);
Hmotnostná spektrometria (ES+ Da/e): 445 (M + 1)+ Cl 35, 62 %, 447 (M + 1)+ Cl 37, 40 %, 389, 100 %.
nh2 * = s * = R co2h (-BuOjC
CO,H
Aloc—NH
205a (a) (b)
205b ŕBuOjC
H
Albc—NH O
NH2
208a
208b
ABOC—NH
Zlúčenina 205a. K zmesi tetrahydrofuránu (200 ml) a vody (100 ml) obsahujúcej hydrogenuhličitan sodný (16,6 g, 0,2 mol) sa pridá íerc-butylester kyseliny glutárovej (10 g, 49,2 mmol) a potom sa počas 20 minút prikvapká alylchloroformiát (6,8 ml, 64 mmol). Zmes sa mieša počas 2 hodín, extrahuje sa etylacetátom, premyje sa nasýteným roztokom hydrogenuhličitanu, vysuší sa a odparí, čím sa získa zlúčenina 205a vo forme oleja (9,5 g, 67,2 %).
[a]D 20 - 6° (c = 1,5, metanol);
'H-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid) δ: 6,10 (1H, d), 5,96 - 5,88 (1H, m), 5,31 - 5,12 (2H, m), 4,45 (2H, m), 3,90 - 3,84 (1H, t), 2,18 (2H, m), 1,85 - 1,76 (2H, m), 1,36 (9H, s).
Zlúčenina 205b sa pripraví analogickým spôsobom ako zlúčenina 205a, pričom sa získa bezfarebný olej (6,27 g, 88 %).
[a]o20 + 16° (c = 0,095, metanol);
Infračervené spektrum (brornid draselný): 3678, 3332, 3088, 2980, 2937, 1724, 1530, 1453, 1393, 1370,
1331, 1255, 1155, 1056, 995, 935, 845, 778, 757, 636, 583;
'H-NMR (deuterochloroform) δ: 9,24 (1H, široký s), 5,94 - 5,79 (1H, m), 5,58 (1H, d), 5,33 - 5,17 (2H, m),
4.55 (2H, d), 4,38 - 4,31 (1H, m), 2,41 - 1,95 (4H, m), 1,42 (9H, s);
Analýza pre C|3II2|NC)t):
vypočítané: 54,35 % C, 7,37% H, 4,88 % N nájdené: 54,4 % C, 7,5 % H, 4,8% N
Zlúčenina 206a. K roztoku zlúčeniny 205a (3,6 g, 12,5 mmol) v tetrahydrofuráne (100 ml) sa pri teplote 0 °C pridá N-metylmorfolín (1,5 ml, 13 mmol) a izobutylchloroformiát (1,1 ml, 13 mmol). Po 15 minútach sa táto zmes pridá k suspenzii tetrahydroboritanu sodného (0,95 g, 25 mmol) v zmesi tetrahydrofuránu (100 ml) a metanolu (25 ml) pri teplote -78 °C. Po 2 hodinách pri teplote -70 °C sa zmes rozloží pomocou kyseliny octovej, zriedi sa etylacetátom, trikrát sa premyje nasýteným roztokom hydrogenuhličitanu, vodou a soľankou, vysuší sa a odparí. Po veľmi rýchlej chromatografii (2 % metanolu v dichlórmetáne) sa získa zlúčenina 206a vo forme bezfarebného oleja (2,4 g, 70 %).
[cx]D 20 -10° (c = 3,88, dichlórmetán);
'H-NMR (deuterochloroform) δ: 5,84 (1H, m), 5,34 - 5,17 (3H, m), 4,56 - 4,53 (2H, m), 3,68 - 3,59 (2H, m), 2,98 (1H, m), 2,40 - 2,30 (2H, t), 1,84 - 1,78 (2H, m), 1,43 (9H, s);
Analýza pre C13H23NO5:
vypočítané: 57,13% C, 8,48 % H, 5,12% N nájdené: 57,1 % C, 8,6 % H, 6,0 % N
Zlúčenina 206b sa pripraví analogickým spôsobom ako zlúčenina 206a, pričom sa získa svetložltý olej (3,42 g, 57 %).
[<x]D 20 + 14° (c = 0,166, metanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3341, 3083, 2976, 2936, 2880, 1724, 1533, 1454, 1419, 1369,
1332, 1251, 1156, 1062, 997, 933, 846, 777, 647;
‘H-NMR (deuterochloroform) δ: 5,98 - 5,81 (1H, m), 5,35 - 5,10 (3H, m), 4,55 (2H, d), 3,70 - 3,56 (3H, m),
2,50 - 2,47 (1H, široký s), 2,37 - 2,30 (2H, m), 1,89 - 1,74 (2H, m), 1,44 (9H, s);
Analýza pre Ci3H23NO5:
vypočítané: 57,13% C, 8,48% H, 5,12% N nájdené: 56,9% C, 8,6% H, 5,6% N
Zlúčenina 207a. K roztoku dimetylsulfoxidu (1,51 g, 19,3 mmol) v dichlórmetáne (25 ml) sa pri teplote -70 °C pridá oxalylchlorid (1,34 g, 19,3 mmol). Po 15 minútach pri teplote -70 °C sa prikvapká roztok zlúčeniny 206a (2,4 g, 8,8 mmol) v dichlórmetáne (10 ml) a zmes sa mieša pri teplote -70 °C počas 15 minút. Pridá sa diizopropyletylamín (3,4 g, 26,3 mmol) a zmes sa mieša pri teplote -25 °C počas 15 minút, potom sa zriedi etylacetátom (50 ml), premyje 2M roztokom hydrogénsíranu sodného a odparí, pričom sa získa olej, ktorý sa použije bez ďalšieho čistenia.
‘H-NMR (deuterochloroform), δ: 9,5 (1H, s), 6,0 - 5,5 (2H, m), 5,5 - 5,1 (2H, m), 4,5 (2H, m), 4,2 (1H, m), 2,4 - 2,1 (2H, m), 2,05 (2H, m), 1,36 (9H, s).
Zlúčenina 207b sa pripraví analogickým spôsobom ako zlúčenina 207a, pričom sa získa olej (2,95 g, 96 %), ktorý sa použije v nasledovnom kroku bez ďalšieho čistenia.
[a]D 20 + 21° (c = 0,942, metanol);
'H-NMR (deuterochloroform) δ: 9,58 (1H, s), 6,05 - 5,80 (1H, m), 5,57 (1H, široký s), 5,35 - 5,18 (2H, m),
4.56 (2H, d), 4,34 - 4,24 (1H, m), 2,38 - 2,16 (3H, m), 1,96 - 1,73 (1H, m), 1,43 (9H, s)
Zlúčenina 208a. K roztoku zlúčeniny 207a (2,39 g, 8,8 mmol) v metanole (20 ml) sa pridá octan sodný (0,72 g, 8,8 mmol) a semikarbazid (0,98 g, 8,8 mmol) a zmes sa mieša cez noc, odparí sa a zriedi dichlórmetánom (100 ml), premyje vodou, vysuší a odparí. Po veľmi rýchlej chromatografii (2 % metanol v dichlórmetáne) sa získa zlúčenina 208a (2,10 g, 73 %) vo forme oleja.
[cc]D 20 - 21° (c = 2,55, dichlórmetán);
'H-NMR (deuterochloroform) δ: 9,98 (1H, s), 7,27 (1H, d), 5,8 (1H, m), 5,5 (1H, d), 5,35 - 5,19 (2H, m),
4,58 (2H, m), 4,14 (1H, m), 2,37 (2H, t), 2,09 (1H, m), 2,0 - 1,75 (2H, m); Analýza pre C14H24N4O5:
vypočítané: 51,21 % C, 7,37 % H, 17,06 % N
nájdené: 50,2% C, 7,3% H, 16,1% N
Zlúčenina 208b sa pripraví analogickým spôsobom ako zlúčenina 208a, pričom sa získa sklovitý olej (2,37 g, 66 %). [oc]D 20 + 30° (c = 0,26, chloroform);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3476, 3360, 2979, 2923, 1700, 1586, 1527, 1427, 1394, 1369, 1338, 1253,1156, 1060, 997, 929, 846, 775;
’H-NMR (deuterochloroform) δ: 9,87 (1H, s), 7,09 (1H, d), 6,05 - 5,75 (3H, m), 5,58 (1H, d), 5,32 - 5,16 (2H, m), 4,54 (2H, d), 4,35 (1H, m), 2,32 - 2,26 (2H, m), 2,15 - 1,55 (2H, m), 1,41 (9H, s);
Analýza pre C14H24N4O5:
vypočítané: 51,21 % C, 7,37 % H, 17,06 % N
nájdené: 51,0% C, 7,5% H, 16,7% N
211
211 (b)R’ = MeSO2 212 (c) R1 = MeCO (d) R1 = PhCH2OCO (e) R’=PhCO (f) R1 = Fmoc (b) R1 = MeSO2 (c) R1 = MeCO (d) R1 = PhCH2OCO (e) R1 = PhCO (f) R1 = Fmoc
Zlúčenina 211b. Roztok terc-butyl-9-amino-6,10-dioxo-l,2,3,4,7,8,-9,10-oktahydro-6H-pyridazino[l,2-a][l,2]diazepín-l-karboxylátu (GB 2 128 984; 831 mg, 2,79 mmol) a diizopropyletylamínu (1,22 ml, 6,99 mmol, 2,5 ekvivalentu) v dichlórmetáne (10 ml) v atmosfére suchého dusíka sa nechá zreagovať s metánsulfonylchloridom (237 μΐ, 3,07 mmol, 1,1 ekvivalentu). Zmes sa mieša počas 1 hodiny, zriedi sa etylacetátom (75 ml) a premyje nasýteným vodným roztokom chloridu sodného (30 ml), vysuší nad síranom horečnatým a odparí. Po veľmi rýchlej chromatografii (10 - 35 % etylacetátu v dichlórmetáne) sa získa zlúčenina 211b (806 mg, 77 % vo forme bezfarebnej tuhej látky s teplotou topenia 68 - 70 °C. [a]o23 - 109° (c = 1,09, dichlórmetán);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3270, 2980, 2939, 1735, 1677, 1458, 1447, 1418, 1396, 1370, 1328, 1272, 1252, 1232, 1222, 1156, 1131,991;
’H-NMR (deuterochloroform) δ: 6,15 (1H, d), 5,31 (1H, m), 4,65-4,11 (2H, m), 3,47 (1H, m), 2,99 (3H, s), 2,89 (1H, m), 2,72 - 2,51 (2H, m), 2,34 (1H, m), 2,26 (1H, m), 2,05 - 1,62 (4H, m), 1,47 (9H, s) Analýza pre CiäH23N3O6S: vypočítané: 47,97 % C, 6,71 % H, 11,19 % N 8,54 % S nájdené: 48,28 % C, 6,68 % H, 10,86 % N 8,28 % S
Hmotnostná spektroskopia: (+ FAB) 376 (M+ + 1, 66 %), 320 (100).
Zlúčenina 211c.
Acetanhydrid (307 mg, 3,01 mmol) sa pridá k miešanému roztoku terc-butyl-9-amino-6,10-dioxo-l,2,3,4,7,8,9,10-oktahydro-6H-pyridazino[l,2-a][l,2]diazepín-l-karboxylátu (GB 2 128 984; 813,7 mg, 2,74 mmol), diizopropyletylamínu (884 mg, 6,84 mmol) a dichlórmetánu (20 ml). Zmes sa mieša počas 1 hodiny, potom sa zriedi etylacetátom, premyje roztokom hydrogenuhličitanu sodného, potom soľankou, vysuší nad síranom horečnatým a zahustí, čím sa získa bezfarebný olej. Produkt sa čistí pomocou veľmi rýchlej chromatografie (0,58 % metanol v dichlórmetáne), čím sa získa zlúčenina 211c (804 mg, 71 %) vo forme bezfarebného prášku s teplotou topenia 162 - 163 °C.
[a]D 23 - 109° (c = 1,03, dichlórmetán);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3358, 2974, 1733, 1693, 1668, 1528, 1462, 1431, 1406, 1371, 1278, 1271, 1250, 1233, 1217, 1154, 1124;
’H-NMR (deuterochloroform) δ: 6,32 (1H, d), 5,29 - 5,25 (1H, m), 4,98 - 4,85 (1H, m), 4,68 - 4,58 (1H, m),
3,55 - 3,39 (1H, m), 2,91 - 2,66 (2H, m), 2,39 - 2,18 (2H, m), 2,03 (3H, s), 1,88 - 1,64 (4H, m), 1,47 (9H, s); Analýza pre C16H25N3O5: vypočítané: 56,62 % C, 7,43 % H, 12,38% N nájdené: 56,62 % C, 7,43% H, 12,36% N
Hmotnostná spektroskopia: (+ FAB) 340 (M+ + 1, 40 %), 284 (100).
Zlúčenina 21 ld. Benzylchloroformiát (1,07 g) sa pridá po kvapkách k miešanému ľadovému roztoku (1 S,9S)-terc-butyl-9-amino-6,10-dioxo-1,2,3,4,7,8,9,10-oktahydro-6H-pyridazino[ 1,2-a] [ 1,2]diazepín-1-karboxylátu (GB 2 128 984; 1,55 g, 5,21 mmol), hydrogenuhličitanu sodného (0,66 g, 7,82 mmol), dioxánu (32 ml) a vody (8 ml). Zmes sa udržiava pri teplote 5 °C počas 15 minút a potom pri teplote miestnosti počas 2 hodín. Zmes sa zriedi etylacetátom (50 ml), dvakrát sa premyje nasýteným roztokom hydrogenuhličitanu sodného, vysuší sa nad síranom horečnatým a odparí sa. Olejovitý zvyšok sa čistí pomocou veľmi rýchlej chromatografie, čím sa získa zlúčenina 211d (1,98 g, 88 %) vo forme bezfarebného oleja.
[oc]D 24 - 56,4° (c = 1,0, dichlórmetán);
Infračervené spektrum (tenký film): 3325, 2979, 2946, 1728, 1677, 1528, 1456, 1422, 1370, 1340, 1272, 1245, 1156, 1122, 1056,916, 734, 699;
'H-NMR (deuterochloroform) δ: 7,29 (5H, m), 5,81 - 5,72 (1H, m), 5,26 - 5,20 (1H, m), 5,05 (2H, s), 4,69 - 4,51 (2H, m), 3,48 - 3,36 (1H, m), 2,81 - 2,51 (2H, m), 2,34 - 2,19 (2H, m), 1,90 - 1,54 (4H, m), 1,41 (9H, s);
Analýza pre C22H29N3O6.H2O: vypočítané: 58,79 % C, 6,92 % H, 9,35 % N nájdené: 59,10% C, 6,57 % H, 9,25% N
Hmotnostná spektroskopia: (ES + ) 454 (M+ + Na, 87 %), 432 (M+ + 1, 100).
Zlúčenina 211e. Roztok benzoylchloridu (1,61 g, 11,47 mmol) v dichlórmetáne (15 ml) sa prikvapká k ľadovej zmesi (lS,9S)-íerc-butyl-9-amino-6,10-dioxo-l,2,3,4,7,8,9,10-oktahydro-6H-pyridazino[l,2-a][l,2]diazepin-l-karboxylátu (GB 2 128 984; 3,1 g, 10,43 mmol), suchého dichlórmetánu (20 ml) a diizopropyletylamínu (4,54 ml, 26,6 mmol). Zmes sa udržiava studená počas 1 hodiny a potom sa nechá miešať pri teplote miestnosti počas 0,5 hodiny. Zmes sa zriedi dichlórmetánom, premyje sa dvakrát soľankou, vysuší nad síranom horečnatým a odparí. Zvyšok sa čistí pomocou veľmi rýchlej chromatografie na silikagéli (0 - 5 % metanol v dichlórmetáne), čím sa získa zlúčenina 21 le (4,0 g, 96 %) vo forme bezfarebného skla s teplotou topenia 74 - 76 °C.
[a]D 30 - 75,0° (c = 0,12, dichlórmetán);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3350, 2979, 2938, 1736, 1677, 1662, 1536, 1422, 1276, 1250, 1155;
'H-NMR (deuterochloroform) δ: 8,72 (2H, m), 7,53 - 7,40 (3H, m), 7,07 (1H, d, J = 7,2), 5,30 (1H, dd, J = = 3,0 a 5,8), 5,12 (1H, m), 4,66 (1H, m), 3,51 (1H, m), 2,90 (2H, m), 2,38 (1H, dd, J = 13,2 a 6,8), 2,25 (1H, m), 1,9 (2H, m), 1,70 (9H, s);
Analýza pre C21H27N3O5: vypočítané: 61,45% C, 6,88 % H, 10,24 %N nájdené: 61,69% C, 6,71% H, 10,18% N
Zlúčenina 2111’ sa pripraví podobným spôsobom ako zlúčenina 211e, miesto benzoylchloridu sa však použije 9-fluorenylmetylchloroformiát, čím sa získa biela sklovitá tuhá látka 21 lf (2,14 g, 89 %) s teplotou topenia 190 - 192 °C [a]D 25 - 81,5° (c = 0,1, dichlórmetán);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3335, 2977, 1731, 1678, 1450, 1421, 1246, 1156, 742 ‘H-NMR (deuterochloroform) δ: 7,60 (2H, m), 7,57 (2H, m), 7,50 - 7,26 (4H, m), 5,60 (1H, d, J = 7,8), 5,28 (1H, m), 4,67 (2H, m), 4,38 (2H, m), 4,23 (1H, m), 3,59 - 3,41 (1H, m), 2,92 - 2,65 (2H, m), 2,41 - 2,21 (2H, m), 1,95 - 1,58 (4H, m), 1,47 (9H, s);
Hmotnostná spektroskopia: (ES‘, m/z) 520 (M~ + 1, 97 %), 179 (100 %).
Zlúčenina 212b sa pripraví rovnakým spôsobom ako zlúčenina 212e vo forme bezfarebného prášku (635 mg, 85 %) s teplotou topenia 209 - 212 °C.
[cc]D 24 - 132° (c = 0,12, metanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3308, 2940, 1717, 1707, 1699, 1619, 1469, 1456, 1442, 1417, 1391, 1348, 1339, 1330, 1310, 1271, 1247, 1222, 1175, 1152, 1133, 993, 976;
'H-NMR (deuterochloroform) δ: 5,35 (1H, m), 4,58 - 4,48 (1H, m), 4,46 - 4,36 (1H, m), 3,60 - 3,42 (1H, m), 3,01 - 2,87 (1H, m), 2,95 (3H, s), 2,55 - 2,39 (1H, m), 2,32 - 2,20 (2H, m), 2,09 - 1,89 (2H, m), 1,78 - 1,62 (2H, m);
Analýza pre CnHi7N3O6S: vypočítané: 41,37 % C, 5,37 % H, 13,16 % N 10,04 % S nájdené: 41,59 % C, 5,32 % H, 12,75 % N 9,76 % S
Hmotnostná spektroskopia: (ES -): Presná hmotnosť vypočítaná pre CnH18N3O6S (MH+): 320,0916; nájdené:
320,0943.
Zlúčenina 212c sa pripraví zo zlúčeniny 211e rovnakým spôsobom ako zlúčenina 212e vo forme bielej sklovitej tuhej látky (595 mg, 77 %) s teplotou topenia > 250 °C.
[a],,24 - 153° (c = 0,10, metanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3280, 2942, 1742, 1697, 1675, 1650, 1616, 1548, 1470, 1443, 1281, 1249, 1202, 1187, 1171;
'H-NMR (deuterochloroform) δ: 5,35 - 5,31 (1H, m), 4,81 - 4,71 (1H, m), 4,61 - 4,46 (1H, m), 3,59 - 3,44 (2H,m), 3,11 -2,94(1H, m), 2,58 - 2,39 (1H, m), 2,36 - 2,19 (2H, m), 2,11 -1,83 (3H, m), 1,99 (3H, s), 1,78 - 1,56 (2H, m);
Analýza pre CijHI7N3O5: vypočítané: 50,88 % C, 6,05 % H, 14,83% N nájdené: 50,82 % C, 6,02% H, 14,58% N
Hmotnostná spektroskopia: (ES -): 282 (M - 1, 100 %), presná hmotnosť vypočítaná pre CI2H|8N3O5 (MH+): 284,1246; nájdené: 284,1258.
Zlúčenina 212d sa pripraví zo zlúčeniny 211d rovnakým spôsobom ako zlúčenina 212e vo forme bezfarebných kryštálov (170 mg, 97 %) s teplotou topenia 60 - 100 °C.
[a]D 22 - 103° (c = 0,10, metanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3341, 2947, 1728, 1675, 1531, 1456, 1422, 1339, 1272, 1248, 1221, 1174, 1122, 1056, 982, 699;
'H-NMR (deuterochloroform) δ: 7,35 (5H, s), 5,65 (1H, d), 5,48 - 5,40 (1H, m), 5,10 (2H, s), 4,76 - 4,57 (2H, m), 3,49 - 3,30 (2H, m), 2,92 - 2,59 (2H, m), 2,40 - 2,27 (2H, m), 1,97 - 1,67 (4H, m);
Hmotnostná spektroskopia: (ES -): 374 (M - 1, 100 %); presná hmotnosť vypočítaná pre C|8H22N3O6 (MH+): 376,1509;
nájdené: 376,1483; presná hmotnosť vypočítaná pre C]gH2iN3O6Na (MNa+): 398,1328; nájdené: 398,1315.
Zlúčenina 212c. Kyselina trifluóroctová (20 ml) sa pridá k ľadovému roztoku terc-butylesteru 211e (4,15 g, 10,34 mmol) v suchom dichlórmetáne (20 ml). Zmes sa udržiava studená počas 1,5-hodiny, potom pri teplote miestnosti počas 2,5 hodiny a odparí sa. Kyselina trifluóroctová sa odstráni opätovným zahustením roztoku zvyšku s dichlórmetánom a éterom a éterom. Trituráciou zvyšku éterom sa získa zlúčenina 212e (3,05 g, 85 %) vo forme sklovitej tuhej látky s teplotou topenia 118 - 126 °C.
[cc]D 24 - 70,5° (c = 0,1, dichlórmetán); Infračervené spektrum (bromid draselný): 3361, 2943, 1737, 1659, 1537, 1426, 1220, 1174;
'H-NMR (deuterochloroform) δ: 7,80 (2H, m), 7,54 - 7,33 (4H, m), 6,83 (široký s), 5,44 (1H, m), 5,26 - 5,13 (1H, m), 4,66 (1H, m), 3,59 - 3,41 (1H, m), 2,97 a 2,76 (2H, 2m), 2,36 (2H, m), 1,98 (2H, m), 1,75 (2H, m) Hmotnostná spektroskopia: (ES -, m/z): 344 (M - 1, 100 %).
Zlúčenina 212f sa pripraví zo zlúčeniny 211f vo výťažku 96 % rovnakým spôsobom ako zlúčenina 212e; teplota topenia 120- 126 °C.
[a]D 25 - 72,5° (c = 0,1, dichlórmetán);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3406, 2950, 1725, 1670, 1526, 1449, 1421, 1272, 1248, 1223, 1175,761,741;
lH-NMR (deuterochloroform) δ: 7,76 (2H, m), 7,62 - 7,26 (4H, m), 6,07 a 5,76 (široký s, d, d, J = 2,9), 5,46 a 5,36 (1H, 2m), 4,79 - 4,54 (2H, m), 4,77 (2H, m), 4,21 (1H, m), 3,41 (1H, m), 2,89 (1H, m), 2,69 (1H, m), 2,35 (2H, m), 1,98 a 1,73 (4H, 2m);
Hmotnostná spektroskopia: (ES -, m/z): 462 (M+ - 1, 50 %), 240 (100 %).
213
213 (c)R‘=MeCO 214 (e) R1 = PhCO
214 (c) R1 = MeCO (e) R1 = PhCO
Zlúčenina 213c sa pripraví zo zlúčeniny 212c rovnakým spôsobom ako zlúčenina 213e, pričom sa získa zmes diastereomérov (193 mg, 36 %) vo forme bezfarebných kryštálov.
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3272, 1799, 1701, 1682, 1650, 1555, 1424, 1412, 1278, 1258, 1221, 1122, 937;
Ή-NMR (deuterochloroform) δ: 7,41 - 7,28 (5H, m), 6,52 (0,5H, d), 6,38 (0,5H, d), 6,22 (0,5H, d), 5,57 (0,5H, d), 5,36 (0,5H, s), 5,10 - 5,05 (1H, m), 5,00 - 4,45 (5,5H, m), 3,19 - 2,84 (3H, m), 2,72 - 2,56 (1H, m),
2,51 - 2,25 (2H, m), 2,02 (3H, s), 1,98 - 1,70 (3H, m), 1,66 - 1,56 (3H, m);
Analýza pre C23H28N4O7:
vypočítané: 58,47 % C, 5,97% H, 11,86% N nájdené: 58,37% C, 6,09% H, 11,47% N
Hmotnostná spektroskopia: (ES -): 471 (M - 1, 100 %); presná hmotnosť vypočítaná pre C23H29N4O7 (MH+): 473,2036;
nájdené: 473,2012; presná hmotnosť vypočítaná pre C23HMN4O7Na (MNa+): 495,1856; nájdené: 495,1853.
Zlúčenina 213e. Tributylcínhydrid (2,2 ml, 8,18 mmol) sa v atmosfére suchého dusíka prikvapká k miešanému roztoku kyseliny 212e (1,95 g, 5,6 mmol), (3S,2RS)-3-alyloxykarbionylamino-2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuránu (Chapman, Bioorg. & Med. Chem. Letí. 2, str. 615 - 618 (1992); 1,80 g, 6,16 mmol) a bis(trifenylfosfín)paládium(II)chloridu (50 mg) v suchom dichlórmetáne (36 ml). Po 5 minútach sa pridá 1-hydroxybenzotriazol (1,51 g, 11,2 mmol) a po ochladení (ľad/voda) l-(dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimid-hydrochlorid (1,29 g, 6,72 mmol). Po 5 minútach sa odstráni chladiaci kúpeľ a zmes sa udržiava pri teplote miestnosti počas 4 hodín, zriedi sa etylacetátom, premyje IM kyselinou chlorovodíkovou, soľankou, nasýteným roztokom hydrogenuhličitanu sodného a soľankou, vysuší nad síranom horečnatým a zahustí. Po veľmi rýchlej chromatografii (silikagél, 0-90 % etylacetátu v dichlórmetáne) sa získa produkt vo forme bielej tuhej látky (2,34 g, 78 %).
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3499, 1792, 1658, 1536, 1421, 1279, 1257, 1123, 977, 699; ’H-NMR (deuterochloroform) δ: 7,81 (2H, m), 7,54 - 7,34 (8H, m), 7,1, 6,97, 6,89 a 6,48 (2H, m, d, J = 7,7, d, J = 7,5, d, J = 7,6), 5,57 a 5,28 (1H, d, J = 5,2, s), 5,23 - 5,07 (2H, m), 4,93 - 4,42, 3,22 - 2,70, 2,51 - 2,26, 2,08 - 1,69 a 1,22( 15H, 2m);
Analýza pre C28H3oN407.0,5H20:
vypočítané: 61,87% C, 5,75% H, 10,32% N nájdené: 62,02 % C, 5,65% H, 10,25% N
Zlúčenina 214c sa pripraví zo zlúčeniny 213c podobným spôsobom, aký sa použil na prípravu zlúčeniny 214e zo zlúčeniny 213e, pričom sa získajú bezfarebné kryštály (140 mg, 99%) s teplotou topenia 90 -
- 180°C.
[a]D 22 - 114° (c = 0,1, metanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3334, 3070, 2946, 1787, 1658, 1543, 1422, 1277, 1258;
’H-NMR (deuterochloroform) δ: 8,66 (1H, m), 6,18 (1H, d), 6,76 (1H, s), 5,08 (1H, m), 4,68 (1H, m), 4,30 (1H, m), 2,92 - 2,70 (2H, m), 2,27 - 2,06 (3H, m), 1,95 - 1,72 (4H, m), 1,85 (3H, s), 1,58 (2H, m);
Hmotnostná spektroskopia: (ES -): 381 (M - 1, 100 %); presná hmotnosť vypočítaná pre CI6H23N4O7 (MH+): 383,1567; nájdené: 383,1548.
Zlúčenina 214e. Zmes zlúčeniny 213e (2,29 g, 4,28 mmol), 10% paládia na uhlí (1,8 g) a metanolu (160 ml) sa mieša v atmosfére vodíka pod tlakom počas 6,3 hodiny. Po filtrácii a zahustení sa hydrogenácia opakuje s čerstvým katalyzátorom (1,8 g) počas 5 hodín. Po filtrácii a odparení sa zvyšok trituruje dietyléterom, prefiltruje a dôkladne premyje éterom, čím sa získa zlúčenina 214e vo forme bielej tuhej látky (1,67 g, 88 %) s teplotou topenia 143 - 147 °C.
[<x]D 23 - 125° (c = 0,2, metanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3391, 1657, 1651, 1538, 1421, 1280, 1258;
'H-NMR (deuterochloroform) δ: 7,90 (2H, m), 7,63 - 7,46 (3H, m), 5,25 (1H, m), 5,08 - 4,85 (1H, m), 4,68 -
- 4,53 (2H, m), 4,33 - 4,24 (1H, m), 3,62 - 3,44, 3,22 - 3,11,2,75 - 2,21, 2,15 - 1,92 a 1,73 - 1,66 (11H, 5m); Analýza pre C2iH24N4O7.H2O:
vypočítané: 54,54 % C, 5,67 % H, 12,11% N nájdené: 54,48 % C, 5,63 % H, 11,92% N
(c) R1 = MeCO (d) R1 = PhCH2OCO (e) R1 = PhCO
Zlúčenina 215c sa pripraví zo zlúčeniny 214c podobným spôsobom ako zlúčenina 215e, čím sa získa zmes diastereomérov vo forme bielej sklovitej tuhej látky (398 mg, 84 %).
Infračervené spektrum (bromíd draselný): 3338, 2977, 1738, 1658, 1562,1541, 1433, 1368, 1277, 1150; ‘H-NMR (deuterochloroform) δ: 7,36 - 7,32 (3H, m), 6,91 (1H, d), 5,15 - 5,09 (1H, m), 5,01 - 4,88 (1H, m), 4,61 - 4,44 (2H, m), 4,37 - 4,08 (3H, m), 3,32 - 3,18 (1H, m), 3,04 - 2,89 (1H, m), 2,82 - 2,51 (4H, m), 2,39 -
- 2,29 (1H, m), 2,08 - 1,64 (4H, m), 2,02 (3H, s);
Analýza pre C28H36C12N4O9: vypočítané: 52,26 % C, 5,64 % H, 8,71% N nájdené: 52,44 % C, 5,87% H, 8,16% N
Hmotnostná spektroskopia: (ES -): 645/3/1 (M - 1, 26 %), 189 (81), 134 (100); presná hmotnosť vypočítaná pre C28H37CI2N4O9 (MH+): 643,1938;nájdené: 643,1924; presná hmotnosť vypočítaná pre C28H36C12N4O9Na (MNa+): 665,1757; nájdené: 665,1756.
Zlúčenina 215d sa pripraví zo zlúčeniny 214d rovnakým spôsobom ako zlúčenina 215e, čím sa získa zmes diastereomérov (657 mg, 70 %) vo forme sklovitej bielej tuhej látky.
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3420, 3361, 2975, 2931, 1716, 1658, 1529, 1434, 1367, 1348, 1250, 1157, 1083, 1055;
'H-NMR (deuterochloroform) δ: 7,32 (8H, m), 7,14 (1H, d), 5,81 (1H, d), 5,15 (1H, m), 5,07 (2H, s), 4,74 -
- 4,65 (1H, m), 4,58 - 4,22 (4H, m), 4,15 - 4,06 (1H, m), 3,72 (1H, m), 3,32 - 3,21 (1H, m), 3,04 - 2,94 (1H, m), 2,69 - 2,52 (3H, m), 2,33 - 2,27 (1H, m), 1,95 - 1,59 (4H, m), 1,28 (9H, s)
Analýza pre C34H4oCl2N401o.O,5H20: vypočítané: 54,70 % C, 5,54 % H, 7,50 % N nájdené: 54,98 % C, 5,59 % H, 7,24% N
Hmotnostná spektroskopia: (ES -): 737/5/3 (M - 1, 22 %), 193/1/89 (100); presná hmotnosť vypočítaná pre C34H41Cl2N4Oio (MH+): 735,2120; nájdené: 735,2181.
Zlúčenina 215e. Tributylcínhydrid (4,6 ml, 11,4 mmol) sa pri teplote miestnosti prikvapká k miešanej zmesi (3S,4RS)-ŕerc-butyl-(N-alyloxykarbonyl)-3-amino-5-(2,6-dichlórbenzoyloxy-4-hydroxypentanoátu (pripraveného podobným postupom aký sa opisuje v Revesz a kol., Tetrahedron Lett. 35, str. 9693 - 9696 (1994)) (2,64 g, 5,7 mmol), bis(trifenylfosfín)paládium(II)chloridu (50 mg), dichlórmetánu (100 ml) a dimetylformamidu (20 ml). Zmes sa mieša počas ďalších 10 minút a pridá sa 1-hydroxybenzotriazol (1,54 g, 11,4 mmol). Zmes sa ochladí na teplotu 0 °C a pridá sa l-(dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimid-hydrochlorid (1,31 g, 6,84 mmol). Zmes sa udržiava pri tejto teplote počas 15 minút a potom pri teplote miestnosti počas 17 hodín. Zmes sa zriedi etylacetátom (300 ml), premyje sa IM kyselinou chlorovodíkovou (2 x 100 ml), nasýteným vodným roztokom hydrogenuhličitanu sodného (3 x 100 ml), vysuší sa nad síranom horečnatým a zahustí. Zvyšok sa vyčistí pomocou veľmi rýchlej chromatografie (2-5 % metanol v dichlórmetáne), čím sa získa 3,24 g (81 %) zlúčeniny 215e vo forme sklovitej tuhej látky s teplotou topenia 106 - 110 °C.
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3354, 1737, 1659, 1531, 1433, 1276, 1150;
‘H-NMR (deuterochloroform) δ: 7,80 (2H, dd, J = 7,9 a 1,5), 7,75 - 7,26 (6H, m), 7,14 - 6,76 (2H, m), 5,30 -
- 5,02 (2H, m), 4,63 - 4,11 (5H, m), 3,44 - 3,26 (2H, m), 3,10 - 2,30 (5H, m), 2,10 -1,60 (5H, m), 1,44 (9H, s); Analýza pre C33H38Cl2N4O9.0,75H2O:
vypočítané: 55,12 % C, 5,54 % H, 7,79 % N 9,86 % C1 nájdené: 55,04 % C, 5,34 % H, 7,80 % N 10,24 % C1
Hmotnostná spektroskopia: (ES +): 709/7/5 (M + 1), 378 (59), 324 (64), 322 (100).
Zlúčenina 216c sa pripraví zo zlúčeniny 215c podobným spôsobom ako zlúčenina 216e vo forme sklovitej bielej tuhej látky (300 mg, 83 %) s teplotou topenia 80 - 125 °C.
[a]D 25 - 83,4° (c = 1,01, dichlórmetán);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3338, 2933, 1736, 1670, 1525, 1433, 1417, 1368, 1258, 1151, 1056, 1031;
'H-NMR (deuterochloroform) δ: 7,33 (8H, m), 7,18 (1H, d), 5,65 (1H, d), 5,19 (1H, m), 5,09 (2H, s), 4,98 -
- 4,86 (1H, m), 4,82 - 4,49 (2H, d), 3,30 - 3,07 (1H, m), 3,05 - 2,59 (4H, m), 2,42 - 2,27 (1H, m), 2,18 - 1,59 (5H, m), 1,42 (9H, s);
Analýza pre C28H34N4Cl2Og:
vypočítané: C, 52,42; H, 5,34; N, 8,73;
nájdené: C, 52,53; H, 5,70; N, 7,85;
Hmotnostná spektroskopia(ES -) 643/41/39 (M-l, 100%); presná hmtnosť vypočítaná pre C28H34N4C12O9 (MH+): 641,1781, nájdené: 641,1735; presná hmotnosť vypočítaná pre C^^lShCbOpNa (MNa+): 663,1601, nájdené 663,1542.
Zlúčenina 216d sa pripraví podobným spôsobom ako zlúčenina 216a, pričom sa získa 16d ako biela sklovitá pevná látka (688 mg, 68 %): teplota topenia 90 - 170 °C.
[a]D 25 - 83,4° (c 1, 01, dichlórmetán);
Infračervené spektrum (KBr) 3338, 2933, 1670, 1525, 1433, 1417, 1368, 1258, 1151, 1056, 1031;
‘H NMR (deuterochloroform)5 7,33 (8H, m), 7,18 (1H, d), 5,65 (1H, d), 5,19 (1H, m), 5,09 (2H, s), 4,98-4,86 (1H, m), 4,82-4,49 (2H, d), 3,30-3,07 (lH,m), 3,05-2,59 (4H, m), 2,42-2,27 (1H, m), 2,18-1,59 (5H, m), 1,42 (9H,s);
Hmotnostná spektroskopia: (ES -): 737/5/3 (M, 13 %), 185 (100).
Zlúčenina 216e. Dess-Martinovo činidlo (3,82 g, 9,0 mmol) sa pridá k miešanému roztoku zlúčeniny 215e (3,17 g, 4,5 mmol) v dichlórmetáne (100 ml). Presná hmotnosť vypočítaná pre C24H27C12N4O9 (MH+): 585,1155; nájdené: 585,1134.
Zlúčenina 217d sa pripraví zo zlúčeniny 216d rovnakým spôsobom ako zlúčenina 217e, čím sa získa zlúčenina 217d vo forme bielej sklovitej tuhej látky (310 mg, 96 %) s teplotou topenia 85-110 °C.
[cc]D 25 - 85,9° (c = 0,13 metanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3351, 2945, 1738, 1669, 1524, 1433, 1258, 1147, 1057;
‘H-NMR (deuterochloroform) δ: 7,56 (4H, m), 7,45 (5H, m), 5,32 (2H, m), 5,20 (2H, s), 4,76 - 4,48 (3H, m), 3,65 - 3,38 (3H, m), 3,27 - 3,09 (2H, m), 3,03 - 2,89 (2H, m), 2,65 - 2,24 (3H, m), 2,19 -1,62 (5H, m);
Hmotnostná spektroskopia: (ES -): 679/7/5 (M - 1, 100 %); presná hmotnosť vypočítaná pre C3oH31Cl2N4Oio (MH+): 677,1417; nájdené: 677,1430.
Zlúčenina 217e. Kyselina trifluóroctová (25 ml) sa prikvapká k miešanému ľadovo studenému roztoku esteru 216e (2,11 g, 3,0 mmol). Zmes sa mieša pri teplote 0 °C počas 20 minút a pri teplote miestnosti počas 1 hodiny. Zmes sa odparí dosucha a potom ešte trikrát s éterom. Po pridaní suchého éteru (50 ml) a filtrácii sa získa 1,9 g (98 %) zlúčeniny 217e vo forme bezfarebnej tuhej látky s teplotou topenia 126 - 130 °C.
[a]D 30 - 122,0° (c = 0,1 metanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3322, 1740, 1658, 1651, 1532, 1433,1277,1150;
‘H-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid) δ: 8,87 (1H, d, J = 7,4), 8,61 (1H, d, J = 7,8), 7,92 - 7,86 (2H, m), 7,65
- 7,43 (6H, m), 5,25 - 5,12 (3H, m), 4,94 - 4,60 (2H, m), 4,44 - 4,22 (1H, m), 3,43 - 3,10 (1H, m), 3,00 - 2,52 (3H, m), 2,45 - 2,10 (3H, m), 2,10 -1,75 (2H, m), 1,75 - 1,50 (2H, m);
Analýza pre C29H28CI2N4O9.H2O: vypočítané: 52,34 % C, 4,54 % H, 8,42 % N 10,66 % C1 nájdené: 52,02 % C, 4,36 % H, 8,12 % N 10,36 % C1
Hmotnostná spektroskopia: (ES -): 649/7/5 (M - 1), 411 (100 %).
218b R1 =MeSOľ 219b
O
220b
Zlúčenina 218b sa pripraví z kyseliny 212b a zo zlúčeniny 99 analogickým spôsobom ako zlúčenina 215e, čím sa získa zmes diastereomérov (865 mg, 80 %) vo forme bezfarebnej tuhej látky.
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3298, 2974, 1723, 1659, 1544, 1518, 1430, 1394, 1370, 1328, 1273, 1256,1156, 1134;
'H-NMR (deuterochloroform) δ: 7,45 - 7,28 (4H, m), 7,26 - 7,15 (2H, m), 5,26 - 5,10 (2H, m), 4,80 - 4,67 (1H, m), 4,59 - 4,42 (2H, m), 3,32 - 3,17 (1H, m), 2,96 (3H, 2s), 2,93 - 2,79 (1H, m), 2,71 - 2,53 (4H, m), 2,38 - 2,28 (1H, m), 2,07 -1,81 (4H, m);
Analýza pre C28H35Cl2N5O9S.0,5H2O:
vypočítané: 48,21% C, 5,20% H, 10,03% N nájdené: 48,35 % C, 5,26% H, 9,48% N
Hmotnostná spektroskopia: (ES +): 714/2/0 (M+ + Na, 25 %), 692/90/88 (M + 1, 51), 636/4/2 (38), 246 (100); presná hmotnosť vypočítaná pre C28H36C12N5O9S (MH): 688,1611; nájdené: 688,1615.
Zlúčenina 219b sa pripraví zo zlúčeniny 218b analogickým spôsobom ako zlúčenina 216e vo forme bieleho prášku (675 mg, 81 %) s teplotou topenia 100 - 200 °C.
[ot]D 24 - 84,9° (c = 1,01 metanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3336, 2978, 2936, 1719, 1674, 1510, 1433, 1421, 1369, 1329, 1274,1257, 1155,991,789;
'H-NMR (deuterochloroform) δ: 7,47 - 7,38 (4H, m), 7,24 (1H, d), 5,61 - 5,53 (1H, m), 5,48 (1H, d), 5,38 - 5,30 (1H, m), 4,67 - 4,45 (2H, m), 3,48 - 3,18 (2H, m), 3,04 - 2,90 (2H, m), 2,97 (3H, s), 2,69 - 2,54 (1H, m), 2,42 - 2,32 (1H, m), 2,22 - 2,15 (1H, m), 2,07 - 1,93 (3H, m), 1,71 -1,65 (2H, m), 1,38 (9H, s);
Analýza pre C28H33CI2N5O9S:
vypočítané: 48,98 % C, 4,84 % H, 10,20 % N 4,67 % S nájdené: 48,73 % C, 4,95 % H, 9,65 % N 4,54 % S
Hmotnostná spektroskopia: (ES +): 692/90/88 (M+ + 1, 100%), 636/4/2 (71); presná hmotnosť vypočítaná pre C28H34C12N5O9 (MH+): 686,1454; nájdené: 686,1474.
Zlúčenina 220b sa pripraví zo zlúčeniny 219b analogickým spôsobom ako zlúčenina 217e vo forme svetlo krémového prášku (396 mg, 87 %) s teplotou topenia 100 - 200 °C [a.]D 27 - 129° (c = 0,12 metanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3310, 3153, 1713, 1667, 1557, 1510, 1432, 1421, 1329, 1273, 1258, 1221, 1193, 1153, 1134, 992, 789;
'H-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid) δ: 7,88 (1H, s), 7,81 - 7,60 (4H, m), 5,49 - 5,28 (1H, m), 5,24 - 5,14 (1H, m), 4,46 - 4,22 (2H, m), 3,30 - 3,03 (2H, m), 2,97 - 2,76 (3H, m), 2,69 (3H, m), 2,46 - 2,24 (1H, m),
2,16 - 2,05 (1H, m), 2,03 - 1,78 (3H, m), 1,68 - 1,46 (2H, m)
Hmotnostná spektroskopia: (ES -): 632/30/28 (M - 1, 68 %), 149/7/5 (100); presná hmotnosť vypočítaná pre C24H26C12N5O9S (MH+): 630,0828;nájdené:630,0852.
221e R1
222b R1 = MeSO2
PhCO
223b R1 = MeSO2
223e R1 = PhCO
Zlúčenina 221b sa pripraví z kyseliny 212b a (3S,4RS)ŕerc-butyl-N-(alyloxykarbonyl)-3-amino-4-hydroxy-4-(5,7-dichlórbenzoxazol-2-yl)-butanoátu (zlúčeniny 204) analogickým spôsobom ako zlúčenina 215e, čím sa získa zmes diastereomérov (460 mg, 70 %) vo forme skla.
Infračervené spektrum (film): 3325, 1725, 1664, 1453, 1399, 1373, 1327, 1274, 1256, 1155;
'H-NMR (deuterochloroform) δ: 7,57 (1H, m), 7,36 (2H, m), 6,06 (1H, t), 5,29 (2H, m), 4,79 (1H, m), 4,47 (1H, m), 3,23 (1H, m), 2,97 a 2,94 (3H spojené, 2s), 2,9 - 2,4 (4H, m), 2,30 (1H, m) 1,96 (4H, m), 1,41 a 1,37 (9H spojené, 2s);
Hmotnostná spektroskopia: (ES, Da/e): 660 (M -1)', 35C1 (100 %), 662 (M -1)‘, 37C1.
Zlúčenina 221e sa pripraví z kyseliny 212e a (3R,4RS)-tercbutyl-N-(alyloxykarbonyl)-3-amino-4-hydroxy-4-(5,7-dichlórbenzoxazol-2-yl)butanoátu (zlúčeniny 204) analogickým spôsobom ako zlúčenina 215e, čím sa získa zmes diastereomérov (613 mg, 87 %) vo forme skla.
Infračervené spektrum (film): 3328,1729,1660, 1534,1454,1422, 1399, 1276, 1254, 1155;
'H-NMR (deuterochloroform) δ: 7,80 (2H, d), 7,60 - 7,35 (5H, m), 7,05 (2H, m), 5,13 (3H, m), 4,74 (1H, m),
4,51 (1H, m), 3,25 (1H, m), 3,1 - 2,6 (5H, m), 2,33 (1H, m), 2,1 -1,5 (5H, m) 1,43 a 1,41 (9H spojené, 2s);
Hmotnostná spektroskopia: (ES +, Da/e): 688 (M + 1)+, 35C1 (55 %), 690 (M + 1)+, 37C1 (35 %), 328 (100 %),
Zlúčenina 222b sa pripraví zo zlúčeniny 221b analogickým spôsobom ako zlúčenina 216e, čím sa získa bezfarebné sklo (371 mg, 86 %).
[a]D 27 - 81,0° (c = 0,1 metanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3324, 2979, 2936, 1726, 1664,1394, 1370, 1328, 1155, 991; 'H-NMR (deuterochloroform) δ: 7,78 (1H, d), 7,57 (2H, m), 5,87 (1H, d), 5,69 (1H, m), 5,47 (1H, m), 4,55 (2H, m), 3,24 (2H, m), 3,0 (5H, ma s), 2,59 (1H, m), 2,39 (1H, m), 2,2 - 1,7 (4H, m), 1,65 (1H, m), 1,40 (9H, s).
Zlúčenina 222e sa pripraví zo zlúčeniny 221e analogickým spôsobom ako zlúčenina 216e, čím sa získa bezfarebné sklo (480 mg, 84 %).
[a]D 27 - 86,4° (c = 0,1 dichlórmetán);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3337, 2978, 2938, 1728, 1657, 1534, 1456, 1422, 1395, 1370, 1277, 1250, 1154 'H-NMR (deuterochloroform) δ: 7,80 (3H, m), 7,50 (4H, m), 7,20 (1H, d), 7,02 (1H, d), 5,60 (1H, m), 5,28 (1H, m), 5,15 (1H, m), 4,11 (1H, m), 3,34 (2H, m), 2,96 (3H, m), 2,40 (1H, m), 2,20 (1H, m), 1,92 (2H, m), 1,67 (2H, m), 1,38 (9H, s);
Hmotnostná spektroskopia: (ES Da/e): 684 (M - 1)’, 35C1 (47 %), 686 (M - 1)’, 37C1 (32 %).
Zlúčenina 223b sa pripraví zo zlúčeniny 222b analogickým spôsobom ako zlúčenina 217e, čím sa získa biela tuhá látka (257 mg, 78 %).
[ot]D 27 - 105,7° (c = 0,1 dichlórmetán);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3321, 1723, 1663, 1407,1325, 1151,992;
’lI-NMR (perdeuterodimctylsulfoxid) δ: 8,96 (1H, d), 8,18 (1H, d), 7,96 (1H, d), 5,50 (1H, m), 5,15 (1H, m), 4,30 (2H, m), 3,06 (2H, m), 2,87 (5H, m a s), 2,29 (1H, m), 1,99 (4H, m), 1,56 (2H, m).
Zlúčenina 223e sa pripraví zo zlúčeniny 222e analogickým spôsobom ako zlúčenina 217e, čím sa získa svetlo krémová tuhá látka (311 mg, 78 %) s teplotou topenia 167 - 180 °C.
[a]D 27 - 88,6° (c = 0,1 dichlórmetán);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3331, 1724, 1658, 1534, 1458, 1421, 1279, 1256, 991;
'H-NMR (deuterochloroform) δ: 7,77 (4H, m), 7,4 (5H, m), 5,57 (1H, široký s), 5,33 (1H, široký s), 5,47 (1H, q), 4,56 (1H, široký d), 3,60 (2H, m), 3,20 (3H, m), 2,76 (1H, m), 2,36 (1H, dd), 2,0 (3H, m), 1,66 (1H, m);
Hmotnostná spektroskopia: (ES, Da/e): 628 (M - 1)’ 35C1 (7 %), 630 (M - 1)’ 37C1 (2,3 %), 584 (100 %).
224e R1 = PhCO, X = S 226e R1 = PhCO, X = S
225e R1 = PhCO, X = O 227e R1 = PhCO, X = O
Zlúčenina 224e. 1-Hydroxybenzotriazol (0,23 g, 1,71 mmol) a l-(dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimid-hydrochlorid sa pridá k miešanému roztoku kyseliny 212e (0,295 g, 0,853 mmol) v tetrahydrofuráne (5 ml). Po 5 minútach sa pridá voda (0,5 ml) a po ďalších 7 minútach roztok (3S)-íerc-butyl-3-alyloxykarbonylamino-5-(2-chlórfenyl)metyltio-4-oxopentanoátu (zlúčenina 123) (0,478 g, 1,02 mmol) a bis(trifenylfosfín)paládium(II)chlorid (20 mg) v tetTahydrofuráne (2 ml). Počas 20 minút sa prikvapká tributylcínhydrid (0,65 ml, 2,33 mmol). Zmes sa mieša počas 4,5 hodiny a potom sa zriedi etylacetátom, premyje IM kyselinou chlorovodíkovou, soľankou, nasýteným vodným roztokom hydrogenuhličitanu sodného a potom znova soľankou. Zmes sa vysuší nad síranom horečnatým a zahustí. Zvyšok sa trituruje niekoľkokrát hexánom, ktorý sa dekantuje a potom sa prečistí pomocou veľmi rýchlej chromatografie (10 - 100 % etylacetát v dichlórmetáne), čím sa získa 0,2 g (35 %) bielej sklovitej tuhej látky s teplotou topenia 70 - 72 °C.
[a]D 27 - 82,5° (c = 0,02, dichlórmetán);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3404,1726, 1660,1534, 1524,1422, 1277, 1254, 1154;
'H-NMR (deuterochloroform) δ: 7,83 - 7,78 (2H, m), 7,7, 7,75 - 7,32 a 7,26 - 7,20 (7H, 3m), 7,12 (1H, d, J = = 8,2), 7,01 (1H, d, J = 7,3), 5,23 - 5,08 (2H, m), 5,03 - 4,94 (1H, m), 4,62 (1H, dt, J = 14,5), 3,78 (2H, m), 3,38 - 3,29 (1H, m), 3,26 (2H, s), 3,06 - 2,82 (4H, m), 2,71 (1H, dd, J = 17,2 a 4,5), 2,39 (1H, dd, J - 13,2 a 6,5), 2,15 - 1,83 a 1,73 - 1,63 (5H, m), 1,45 (9H, m);
Analýza pre C33H39CIN4O7S: vypočítané: 59,05 % C, 5,86% H, 8,35% N nájdené: 59,00 % C, 5,80 % H, 7,92% N
Zlúčenina 225e sa pripraví z kyseliny 212e a (3S)-tórc-butyl-3-alyloxykarbonylamino-5-(2-chlórfenyl)metyloxy-4-oxopentanoátu (zlúčeniny 201) podobným spôsobom ako zlúčenina 224e, čím sa získa 40 mg (23 %) sklovitej tuhej látky.
‘H-NMR (deuterochloroform) δ: 7,83 - 7,73 (2H, m), 7,67 - 7,10 (9H, m), 5,23 - 5,09 (2H, m), 4,59 (1H, m), 4,45 - 4,22 (2H, m), 3,7 - 3,19, 3,08 - 2,72, 2,71 - 2,47, 2,05 - 1,85, 1,72 - 1,61 a 1,45 - 1,26 (20H, 6m).
Zlúčenina 226e sa pripraví zo zlúčeniny 224e analogickým spôsobom ako zlúčenina 217e, čím sa získa 0,22 g (81 %) bielej tuhej látky s teplotou topenia 95 - 100 °C.
[a]D 27 - 95,6° (c = 0,2, dichlórmetán);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3393, 1720, 1658, 1529,1422,1279;
‘H-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid) δ: 8,80 (1H, d, J = 7,5), 7,89 (2H, m), 7,7 (1H, d, J = 7,7), 7,56 - 7,28 (7H, m), 5,10 (1H, m), 4,87 - 4,73 (2H, m), 4,39 (1H, m), 3,77 (2H, m), 3,44 a 3,35 (2H a H2O, 2m), 2,97 -2,56, 2,2, 1,92 a 1,61 (llH,4m);
Analýza pre C29H3lClN4O7S.0,5H2O:
vypočítané: 55,02 % C, 5,10% H, 8,85% N nájdené: 55,00 % C, 5,09 % H, 8,71% N
Zlúčenina 227e sa pripraví zo zlúčeniny 225e analogickým spôsobom ako zlúčenina 217e. Produkt sa ďalej čistí pomocou veľmi rýchlej chromatografie (0 - 5 % metanol v dichlórmetáne), čím sa získa 19 mg (81 %) sklovitej tuhej látky.
'H-NMR (deuterochloroform) δ: 7,79 (2H, m), 7,66 - 7,18 (9H, m), 5,30 - 5,10 (2H, m), 4,85 (1H, m), 4,65 (2H, m), 4,53 (1H, m), 4,28 (2H, m), 3,28, 3,01, 2,72, 2,33, 1,94 a 1,60 (11Η, 6m);
Hmotnostná spektroskopia: (ES -, m/z): 597 (M+ - 1, 100 %).
228e
229e
230e
N
Zlúčenina 228e. 1-Hydroxybenzotriazol (0,23 g, 1,68 mmol) a potom l-(dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimid-hydrochlorid (0,21 g, 1,09 mmol) sa pri teplote miestnosti pridajú k miešanému roztoku kyseliny 212e (0,29 g, 0,84 mmol) v dichlórmetáne (3 ml). Zmes sa mieša počas 10 minút a potom sa pridá roztok (3RS,4RS)-rerc-butyl-3-amino-5-fluór-4-hydroxypentanoátu (Revesz L. a kol., Tetrahedron 52, str. 9693 - 9696 (1994); 0,29 g, 1,40 mmol) v dichlórmetáne (3 ml) a potom 4-dimetylaminopyridín (10 mg). Roztok sa mieša počas 17 hodín, zriedi sa etylacetátom, premyje IM kyselinou chlorovodíkovou, soľankou, nasýteným vodným roztokom hydrogenuhličitanu sodného a znovu soľankou, vysuší nad síranom horečnatým a zahustí. Zvyšok sa prečistí pomocou veľmi rýchlej chromatografie (50 - 100% etylacetát v dichlórmetáne a 5 % metanol v etylacetáte), čím sa získa 0,25 g (56 %) bielej sklovitej tuhej látky).
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3343, 1726, 1658, 1536, 1426,1279, 1257, 1157; 'H-NMR (deuterochloroform) δ: 7,84 - 7,79 (2H, m), 7,57 - 7,40 (3H, m), 7,05 - 6,92) a 6,73 (2H, 2m),
5,17 - 5,04 (2H, m), 4,56, 4,35 - 4,21 a 4,04 (5H, 3m), 3,36, 3,09 - 2,34 a 2,00 (11H, 3m), 1,46 (9H, s); Analýza pre C26H3SFN4O7.0,5H2O: vypočítané: 57,45 % C, 6,65 % H, 10,31 % N nájdené: 57,64 % C, 6,56% H, 10,15% N
Zlúčenina 229e sa pripraví zo zlúčeniny 228e analogickým spôsobom ako zlúčenina 216e. Po prečistení pomocou veľmi rýchlej chromatografie (30 - 50 % etylacetát v dichlórmetáne) sa získa produkt vo forme bielej sklovitej tuhej látky (0,194 g, 89 %).
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3376, 1728, 1659, 1529, 1424,1279, 1256, 1156;
Zlúčenina 230e sa pripraví zo zlúčeniny 229e analogicky ako zlúčenina 217e, čím sa získa produkt vo forme bielej sklovitej tuhej látky (100 %) s teplotou topenia 105 - 125 °C.
[oc]D 23 - 91,4° (c = 0,72, metanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3336, 1789, 1737, 1659, 1535, 1426, 1279, 1258, 1186;
'H-NMR (deuterochloroform) δ: 7,71 - 7,68 (2H, m), 7,37 - 7,23 (3H, m), 5,02, 4,88 - 4,63 a 4,37 - 4,0 (6H, 3m), 3,30, 2,97, 2,68 - 2,60 a 2,37 - 1,54 (11H, 4m);
Hmotnostná spektroskopia (ES m/z): 475 (M* - 1, 100 %).
231e
232e
Zlúčenina 231e. Metylester kyseliny N-fluorenylmetoxykarbonyl-3-amino-3-kyanopropiónovej (EP 0 547 699 Al; 385 mg, 1,1 mmol) sa nechá zreagovať so 17 ml dietylamínu. Po 1,5-hodinovom miešaní pri teplote miestnosti sa roztok zahustí. Zvyšok sa prečistí pomocou chromatografie na silikagéli (3 % metanol v dichlórmetáne), čím sa získa voľný amín vo forme svetložltého oleja. K roztoku tohto oleja a 1-hydroxybenzotriazolu (297 mg, 2,19 mmol) v dimetylformamide (5 ml) sa pri teplote 0 °C pridá l-(dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimid-hydrochlorid (232 mg, 1,21 mmol, 1,1 ekvivalentu) a potom kyselina (lS,9S)-9-benzoylamino-6,10-dioxo-1,2,3,4,7,8,9,10-oktahydro-6H-pyridazino[ 1,2-a] [ 1,2]diazepín-1 -karboxylová (zlúčenina 212e). Po 5 minútovom miešaní pri teplote 0 °Ca celonočnom miešaní pri teplote miestnosti sa zmes zriedi dichlórmetánom (50 ml) a vzniknutý roztok sa postupne premyje IM kyselinou chlorovodíkovou (2 x 30 ml), vodou (30 ml), 10 % roztokom hydrogenuhličitanu sodného (2 x 30 ml) a nasýteným vodným roztokom chloridu sodného, vysuší sa nad síranom horečnatým a zahustí. Po prečistení pomocou veľmi rýchlej chromatografie na silikagéli (3 % metanol v dichlórmetáne) sa získa zlúčenina 231 e (404 mg, 83 %) vo forme tuhej látky.
[oc]D 20 - 121° (c = 0,14, dichlórmetán);
'H-NMR (deuterochloroform) δ: 7,40 - 7,83 (5H, m), 7,38 (1H, d), 6,96 (1H, d), 5,27 - 5,07 (2H, m), 4,66 - 4,50 (1H, m), 3,79 (3H, s), 3,23 - 2,73 (6H, m), 2,47 - 2,33 (1H, m), 2,15 -1,82 (4H, m);
Analýza pre C2?H25N5O6: vypočítané: 58,0 % C, 5,53% H, 15,38% N nájdené: 57,6 % C, 5,6% H, 15,0% N
Zlúčenina 232e. Roztok metylesteru 231e (400 mg, 0,88 mmol) v metanole (30 ml) a vode (30 ml) sa ochladí na teplotu 0 °C a nechá sa zreagovať s diizopropyletylamínom. Roztok sa mieša počas 10 minút pri teplote 0 °C a potom cez noc pri teplote miestnosti. Heterogénna zmes sa zahustí a získaná tuhá látka sa prečistí pomocou chromatografie na silikagéli (5 % metanol a 1 % kyselina mravčia v dichlórmetáne), čím sa získa voľná kyselina 232e (170 mg, 44 %) vo forme bielej tuhej látky s teplotou topenia 155 °C (za rozkladu).
[cc]D 20 - 117° (c = 0,1, metanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3343, 3061, 2955, 1733, 1656, 1577, 1533, 1490, 1421, 1342, 1279, 1256, 1222, 1185,708;
’H-NMR (deuterochloroform) δ: 7,88 - 7,28 (5H, m), 5,20 - 5,03 (1H, m), 4,98 - 4,84 (2H, m), 4,75 - 4,53 (1H, m), 4,51 - 4,34 (1H, m), 3,45 - 3,22 (1H, m), 3,14 - 2,94 (1H, m), 3,14 - 2,94 (1H, m), 2,88 - 2,61 (2H, m), 2,53 - 1,50 (8H, m);
Analýza pre C2iH23N5O6.l,5H2O: vypočítané: 53,84 % C, 5,59% H, 14,95% N nájdené: 54,3 % C, 5,4 % H, 14,3 % N
Zlúčenina 233e. K roztoku kyseliny (lS,9S)-9-benzoylamino-6,10-dioxo-l,2,3,4,7,8,9,10-oktahydro-6H-pyridazino[l,2-a][l,2]diazepín-l-karboxylovej (zlúčeniny 212e) (345 mg, 1,0 mmol), zlúčeniny 208a (361 mg, 1,1 mmol, 1,1 ekvivalentu) a bis(trifenylfbsfín)-paládium(II)chloridu (20 mg) v dichlórmetáne (5 ml) sa prikvapká tri-n-butylcínhydrid (0,621 ml, 2,3 mmol, 2,1 ekvivalentu). Vzniknutý oranžovohnedý roztok sa mieša počas 10 minút pri teplote 25 °C a potom sa pridá l-(dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimid-hydrochlorid (235 mg, 1,3 mmol, 1,2 ekvivalentu). Po 10 minútovom miešaní pri teplote 0 °C a celonočnom miešaní pri teplote miestnosti sa zmes zriedi etylacetátom (50 ml) a vzniknutý roztok sa postupne premyje IM kyselinou chlorovodíkovou (3 x 25 ml), 10 % roztokom hydrogenuhličitanu sodného (3 x 25 ml) a nasýteným roztokom chloridu sodného, vysuší sa nad síranom horečnatým a zahustí. Po veľmi rýchlej chromatografii na silikagéli (2 - 10 % metanol v dichlórmetáne) sa získa zlúčenina 233e (280 mg, 49 %) vo forme žltohnedej tuhej látky.
[oc]D 20 - 95° (c = 0,09, metanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3477, 3333, 2968, 2932, 1633, 1580, 1535, 1423, 1378, 1335, 1259, 1156, 1085, 709;
’H-NMR (deuterochloroform) δ: 9,32 (1H, s), 7,83 - 7,39 (6H, m), 7,11 - 7,09 (1H, m), 6,30 - 5,30 (2H, široký s), 5,17 - 5,05 (2H, m), 4,62 - 4,38 (2H, m), 3,30 - 3,15 (1H, m), 3,13 - 2,65 (2H, m), 2,46 - 2,19 (3H, m), 2,15-1,54 (8H,m), 1,42 (9H, s).
Zlúčenina 236a sa pripraví analogickým spôsobom ako zlúčenina 233e, pričom sa však použije (4R)semikarbazón terc-butyl-N-alyloxykarbonyl-4-amino-5-oxopentanoátu (zlúčenina 208b) (435 mg, 1,33 mmol). Produkt sa získa vo forme peny (542 mg, 71 %).
[a]d20 - 99° (c = 0,19, chloroform);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3473, 3331, 3065, 2932, 2872, 1660, 1580, 1533, 1488, 1423, 1370, 1337, 1278, 1254, 1223,1155, 1080, 1024, 983, 925, 877, 846, 801, 770, 705;
'H-NMR (deuterochloroform) δ: 9,42 (1H, s), 7,81 (2H, d), 7,51 - 7,40 (4H, m), 7,06 (1H, d), 6,50 - 5,50 (2H, široký s), 5,25 - 5,00 (2H, m), 4,60 - 4,45 (2H, m), 3,15 - 2,85 (2H, m), 2,75 - 2,35 (1H, m), 2,30 - 1,23 (11H, m), 1,42 (9H, s).
Zlúčenina 234e. Roztok semikarbazónu 233e (390 mg, 0,68 mmol) v metanole (10 ml) sa ochladí na teplotu 0 °C a nechá sa zreagovať s 38 % vodným roztokom formaldehydu (2 ml) a IM kyselinou chlorovodíkovou (2 ml). Reakčná zmes sa potom mieša pri teplote miestnosti cez noc. Roztok sa zahustí, čím sa odstráni metanol. Vodný roztok sa extrahuje etylacetátom (30 ml). Organická vrstva sa postupne premyje 10 % roztokom hydrogenuhličitanu sodného (30 ml) a nasýteným vodným roztokom chloridu sodného (30 ml), vysuší sa nad síranom horečnatým a zahustí. Po prečistení pomocou veľmi rýchlej chromatografie na silikagéli (2 - 5 % metanol v dichlórmetáne) sa získa zlúčenina 234e (179 mg, 51 %) vo forme peny.
[a]D 20 - 101° (c = 0,064, metanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3346, 2976, 2934, 1730, 1657, 1535, 1456, 1425, 1278, 1255, 1156, 708;
‘H-NMR (deuterochloroform) δ: 9,56 (1H, s), 7,88 - 7,38 (5H, m), 7,01 a 6,92 (2H, 2d), 5,27 - 5,08 (2H, m), 4,69 - 4,46 (1H, m), 3,50 - 3,27 (2H, m), 3,15 - 2,73 (2H, m), 2,46 - 1,83 (10H, m), 1,45 (9H, s).
Zlúčenina 237e sa pripraví zo zlúčeniny 236e analogickým spôsobom ako zlúčenina 234e, čím sa získa biela pena (390 mg, 85 %).
[a]D 20 -113° (c = 0,242, chloroform);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3352, 3065, 2974, 1729, 1657, 1536, 1489, 1454, 1423, 1369, 1338, 1278, 1255, 1223, 1156, 1078, 1026, 981,846, 709.
Zlúčenina 235e. Roztok te/r-butylesteru 234e (179 mg, 0,35 mmol) v suchom dichlórmetáne (3 ml) sa ochladí na teplotu 0 °C a nechá sa zreagovať s kyselinou trifluóroctovou (2 ml). Vzniknutý roztok sa mieša pri teplote 0 °C počas 30 minút a potom pri teplote miestnosti počas 2 hodín. Roztok sa zahustí, zvyšok sa prevedie do suchého dichlórmetánu (5 ml) a zmes sa znova odparí. Tento postup sa zopakuje s ďalším množstvom dichlórmetánu (5 ml) ešte raz. Získaný zvyšok sa prekryštalizuje z dietyléteru. Kryštály sa oddelia a prečistia pomocou kolónovej chromatografie na silikagéli (5 % metanol v dichlórmetáne), čím sa získa zlúčenina 235e vo forme bielej tuhej látky (111 mg, 70 %) s teplotou topenia 142 °C (za rozkladu).
[a]D 20 - 85,5° (c = 0,062, metanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3409, 3075, 2952, 1651, 1541, 1424, 1280, 1198, 1136, 717; 'H-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid) δ: 9,40 (1H, s), 8,62 (2H, m), 7,96 - 7,38 (5H, m), 5,19 - 5,02 (1H, m), 4,98 - 4,79 (1H, m), 4,48 - 4,19 (1H, m), 3,51 - 3,11 (2H, m), 3,04 - 2,90 (2H, m), 2,38 - 1,46 (10H, m).
Zlúčenina 238e sa pripraví zo zlúčeniny 237e analogickým spôsobom ako zlúčenina 235e, čím sa získa béžová pena (190 mg, 60 %).
[cc]D 20 - 78° (c = 0,145, metanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3400, 3070, 2955, 2925, 2855, 1653, 1576, 1541, 1490, 1445, 1427, 1342, 1280, 1258, 1205,1189,1137, 1075, 1023, 983, 930, 878, 843, 801, 777, 722;
‘H-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid) δ: 9,40 (1H, s), 8,72 - 8,60 (2H, m), 7,89 (2H, d), 7,56 - 7,44 (3H, m),
5,17 (1H, m), 4,90 - 4,83 (1H, m), 4,46 - 4,36 (1H, m), 4,20 - 4,15 (1H, m), 3,40 - 3,30 (1H, m), 2,98 - 2,90 (2H, m), 2,50 - 1,60 (10H, m).
Zlúčenina 243 sa pripraví z (lS,9S)-terc-butyl-9-aminooktahydro-10-oxo-6H-pyridazino[l,2-a][l,2]diazepín-l-karboxylátu (Attwood a kol., J. Chem. Soc., Perkin Trans. 1, str. 1011 - 1019 (1986)) spôsobom opísaným pre zlúčeninu 211e, čím sa získa 2,03 g (86 %) bezfarebnej peny.
[a]D 25 - 15,9° (c = 0,5, dichlórmetán);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3400, 2976, 2937, 1740, 1644, 1537, 1448, 1425, 1367, 1154; ’H-NMR (deuterochloroform) δ: 7,88 - 7,82 (2H, m), 7,60 - 7,38 (4H, m), 5,48 (1H, m), 4,98 (1H, m), 3,45 (1H, m), 3,22 - 2,96 (2H, m), 2,64 (1H, m), 2,43 - 2,27 (2H, m), 1,95 (2H, m), 1,82 - 1,36 (4H, m), 1,50 (9H, s);
Analýza pre C2iH29N3O4.0,25H2O:
vypočítané: 64,35 % C, 7,59 % H, 10,72% N nájdené: 64,57 % C, 7,43 % H, 10,62% N
Hmotnostná spektroskopia (ES +, m/z): 386 (M+ + 1, 100 %).
Zlúčenina 244 sa pripraví z (lS,9S)-terc-butyl-9-benzoylaminooktahydro-10-oxo-6H-pyridazino[l,2-a][l,2]diazepín-l-karboxylátu (zlúčeniny 243) spôsobom opísaným pre zlúčeninu 212e, čím sa získa 1,52 g (89 %) bieleho prášku s teplotou topenia 166 - 169 °C (za rozkladu).
[oc]D 25 - 56,4° (c = 0,5, metanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3361,2963,2851, 1737, 1663, 1620, 1534, 1195, 1179;
’H-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid) δ: 12,93 (1H, široký s), 8,44 (1H, d, J = 8,4), 7,93 (2H, m), 7,54 (3H, m), 5,46 (1H, m), 4,87 (1H, m), 3,12 (2H, m), 2,64 (1H, m), 2,46 (1H, m), 2,27 (1H, m), 1,98 - 1,68 (7H, m), 1,40(1 H, m);
Analýza pre Ci7H2iN3O4.0,25H2O:
vypočítané: 60,79 % C, 6,45 % H, 12,51% N nájdené: 61,07% C, 6,35 % H, 12,55% N
Hmotnostná spektroskopia (ES +, m/z): 332 (M+ + 1, 58 %), 211 (100).
Zlúčenina 245 sa pripraví z kyseliny (lS,9S)-9-benzoylaminooktahydro-10-oxo-6H-pyridazino[l,2-aJ[l,2]diazepín-l-karboxylovej (zlúčeniny 244) spôsobom opísaným pre zlúčeninu 213e, čím sa získa 601 mg (76 %) bezfarebnej peny.
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3401, 2945, 1794, 1685, 1638, 1521, 1451, 1120;
’H-NMR (deuterochloroform) δ: 7,87 - 7,77 (2H, m), 7,57 - 7,14 (10H, m), 5,59 - 5,47 (2H, m), 4,97 - 4,32 (4H, m), 3,27 - 1,35 (14H, m);
Analýza pre C28H32N4O6.0,5H2O:
vypočítané: 63,50% C, 6,28 % H, 10,58% N nájdené: 63,48 % C, 6,14% H, 10,52% N
Hmotnostná spektroskopia (ES +, m/z): 521 (M+ + 1, 100 %).
Zlúčenina 246 sa pripraví z [3S,2RS(lS,9S)]-N-(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)-9-benzoylaminooktahydro-10-oxo-6H-pyridazino-[l,2-a][l,2]diazepín-l-karboxamidu (zlúčeniny 245) spôsobom opísaným pre prípravu zlúčeniny 214e, čim sa získa 396 mg (84%) bieleho prášku s teplotou topenia 110 - 115 °C.
[oc]D 26 - 126,3° (c = 0,2, metanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3345, 2943, 1787, 1730, 1635, 1578, 1528, 1488, 1450, 1429; ’H-NMR (deuterochloroform) δ: 7,88 (2H, m), 7,48 (3H, m), 5,55 (1H, m), 4,91 (1H, m), 4,56 (1H, m), 4,29 (1H, m), 3,41 - 3,05 (3H, m), 2,76 - 2,41 (3H, m), 2,28 - 2,01 (3H, m), 1,86 - 1,65 (4H, m), 1,36 (1H, m); Analýza pre C2iH26N4O6.l,25H2O:
vypočítané: 55,68 % C, 6,34% H, 12,37% N nájdené: 55,68 % C, 6,14% H, 12,16% N
Hmotnostná spektroskopia (ES -, m/z): 429 (M” - 1, 100 %).
SK 287195 Β6
Zlúčenina 247. n-Butyllítium (1,6M roztok v hexáne) (22,3 ml, 35,7 mmol) sa počas 20 minút prikvapká k roztoku (2R)-(-)-2,5-dihydro-3,6-dimetoxy-2-(l-metyletyl)pyrazínu (5,8 ml, 6,0 g, 32,4 mmol) v tetrahydrofuráne (250 ml) ochladenému na teplotu - 75 °C takou rýchlosťou, aby teplota neprekročila - 72 °C. Reakčná zmes sa mieša pri teplote - 75 °C počas 1 hodiny a počas 30 minút sa pridá roztok 2,6-di-/erc-butyl-4-metoxyfenyl-2-butenoátu (Suzuck a kol. Liebigs Ann. Chem. str. 51 - 61 (1992)) (9,9 g, 32,5 mmol) v tetrahydrofuráne (60 ml) tak, aby teplota počas pridávania neprekročila - 72 °C. Reakčná zmes sa udržiava pri teplote - 75 °C počas 1,5-hodiny a pri teplote - 75 °C sa pridá roztok ľadovej kyseliny octovej (6 ml) v tetrahydrofuráne (25 ml) a roztok sa zohreje na teplotu miestnosti. Roztok sa vyleje do 10 % roztoku chloridu amónneho (300 ml) a extrahuje sa dietyléterom (3 x 250 ml). Spojené organické vrstvy sa premyjú soľankou (2 x 200 ml), vysušia nad síranom sodným a odparia dosucha pri zníženom tlaku. Zvyšný olej sa prečistí pomocou veľmi rýchlej chromatografie na silikagéli (20 % heptán v dichlórmetáne), čím sa získa zlúčenina uvedená v názve vo forme svetložltého oleja (13,5 g, 85 %).
[a]o26 - 64° (c = 0,22, metanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 2962, 2873, 2840, 1757, 1697, 1593, 1460, 1433, 1366, 1306, 1269, 1236, 1187, 1157, 1126, 1063, 1038, 1011,970, 924, 892, 867, 846, 831,797,773,754;
'H-NMR (deuterochloroform) δ: 6,85 (2H, s), 4,21 (1H, t, J = 3,5), 3,98 (1H, t, J = 3,5), 3,79 (3H, s), 3,71 (3H, s), 3,69 (3H, s), 3,15 (1H, dd, J = 17,8 a 7,9), 2,86 - 2,81 (1H, m), 2,58 (1H, dd, J = 17,8 a 5,9), 2,28 - 2,19 (1H, m), 1,33 (18H, s), 1,02 (3H, d, J = 6,8), 0,70 (6H, dd, J = 13,0 a 6,8).
Zlúčenina 248. Roztok zlúčeniny 247 (22,4 g, 45,8 mmol) v acetonitrile (300 ml) a 0,25N kyseliny chlorovodíkovej (366 ml, 2 ekvivalenty) sa mieša pri teplote miestnosti pod dusíkom počas 4 dní. Acetonitril sa odparí pri zníženom tlaku a k vodnej fáze sa pridá dietyléter (250 ml). pH vodnej vrstvy sa upraví na hodnotu 8-9 pomocou koncentrovaného roztoku (32 %) a vrstvy sa oddelia. Vodná vrstva sa extrahuje dietyléterom (2 x 250 ml). Spojené organické vrstvy sa vysušia nad síranom sodným a odparia sa dosucha pri zníženom tlaku. Zvyšný olej sa prečistí pomocou veľmi rýchlej chromatografie na silikagéli (2 % metanol v dichlórmetáne), čím sa získa požadovaný produkt vo forme svetložltého oleja (8,2 g, 45 %).
|a]D 20 + 20° (c = 0,26, metanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3394, 3332, 3000, 2962, 2915, 2877, 2838, 1738, 1697, 1593, 1453, 1430, 1419, 1398, 1367, 1304, 1273, 1251, 1221, 1203, 1183, 1126, 1063, 1025, 996, 932, 891, 866, 847, 800, 772, 745;
'H-NMR (deuterochloroform) δ: 6,85 (2H, s), 3,79 (3H, s), 3,74 (3H, s), 3,72 - 3,69 (1H, m), 3,05 - 2,85 (1H, m), 2,67 - 2,50 (2H, m), 1,32 (18H, s), 0,93 (3H, d, J = 7);
Analýza pre C^H-jNO,: vypočítané: 67,15% C, 8,96% II, 3,56% N nájdené: 67,20 % C, 9,20 % H, 3,70% N
Zlúčenina 249. Roztok (2S,3S)-5-(2,6-di-terc-butyl-4-metoxyfenyl)- -3-metylglutamátu (zlúčeniny 248) (8,0 g, 20,3 mmol) v 5N kyseline chlorovodíkovej (200 ml) sa zohrieva počas 2 hodín na teplotu varu. Re akčná zmes sa odparí pri zníženom tlaku dosucha. Zvyšok sa rozpustí v cyklohexáne (štyrikrát) a odparí sa dosucha, čím sa získa biela tuhá látka (7,9 g, 93 %) s teplotou topenia 230 °C.
[a]D 20+ 22° (c = 0,27, metanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3423, 2964, 1755, 1593, 1514, 1456. 1421, 1371, 1303, 1259, 1201, 1179, 1138, 1106, 1060, 966, 926, 861, 790, 710;
'H-NMR (monodeuterometanol) δ: 6,76 (211, s), 4,02 (1H, d, J = 3,7), 3,67 (3H, s), 3,05 - 2,85 (1H, m), 2,80 - 2,55 (2H, m), 1,22 (18H, s), 1,09 (3H, d, J = 6,3);
13C-NMR (monodeuterometanol) δ: 174,5, 171,4, 158,6, 145,2, 143,1, 113,2, 58,3, 56,3, 39,8, 36,9, 32,5, 16,6
Analýza pre C21H34CINO5:
vypočítané: ” 60,64 % C, 8,24% H, 3,37% N nájdené 60,80 % C, 8,40% H, 3,40% N
Zlúčenina 250. Diizopropyletylamín (4,1 ml, 3,04 g, 23,5 mmol, 1,25 ekvivalentu) a anhydrid kyseliny ftalovej (3,5 g, 23,6 mmol, 1,25 ekvivalentu) sa pridá k roztoku (2S,3S)-5-(2,6-di-íerc-butyl-4-metoxyfenyl)-3-metylglutamátu (zlúčeniny 249) (7,8 g, 18,6 mmol) v toluéne (300 ml) a vzniknutá zmes sa zohrieva počas 3 hodín na teplotu varu. Po ochladení na teplotu miestnosti sa reakčná zmes odparí dosucha a vzniknutý olej sa prečistí pomocou veľmi rýchlej chromatografie na silikagéli (2 % metanol v dichlórmetáne), čím sa získa požadovaný produkt vo forme bielej peny (8,35 g, 87 %).
[cc]d20 - 20° (c = 1,04, metanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3480, 2968, 2880, 1753, 1721, 1594, 1462, 1422, 1388, 1303, 1263, 1216, 1183, 1148, 1062, 1003, 933, 899, 755, 723;
'H-NMR (deuterochloroform) δ: 7,92 - 7,87 (2H, m), 7,78 - 7,73 (2H, m), 6,84 (2H, s), 4,95 (1H, d), 3,78 (3H, s), 3,30 - 3,05 (2H, m), 2,85 - 2,65 (1H, m), 1,30 (18H, s), 1,13 (3H, d);
250
251
Zlúčenina 251. Roztok aminokyseliny 250 (1,2 g, 2,35 mmol) v suchom dietyléteri (10 ml) sa nechá reagovať s chloridom fosforečným (0,52 g, 2,5 mmol) počas 2 hodín pri teplote miestnosti. Zmes sa zahustí a niekoľkokrát sa pridá toluén a znova sa odparí dosucha. Vzniknutý chlorid kyseliny sa rozpustí v suchom tetrahydrofuráne (5 ml a dichlórmetáne (5 ml) a ochladí sa na teplotu 0 °C. K roztoku sa pridá rerc-butyl-1-(benzyloxykarbonyl)-hexahydro-3-pyridazínkarboxylát (0,753 g, 2,35 mmol, 1 ekvivalent) a N-etylmorfolín (3 ml). Reakčná zmes sa mieša počas 30 minút pri teplote 0 °C a potom cez noc pri teplote miestnosti. Zmes sa odparí a zvyšok sa prevedie do dichlórmetánu (30 ml). Roztok sa premyje IM kyselinou chlorovodíkovou, vodou, 10 % roztokom hydrogenuhličitanu sodného, vysuší sa nad síranom horečnatým a odparí. Vzniknutá biela pena sa prečistí chromatografiou na silikagéli (0 až 2 % metanol v dichlórmetáne), čím sa získa požadovaná zlúčenina 251 vo forme svetložltej sklovitej tuhej látky (740 mg, 39 %).
[oc]D 20 - 22° (c = 0,42, metanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3441, 2966, 1725, 1693, 1386, 1255, 1221, 1186, 1154, 1123, 1063,724;
‘H-NMR (deuterochloroform) δ: 7,94 - 7,89 (4H, m), 7,56 - 7,28 (5H, m), 6,84 (2H, 2s), 5,29 - 5,20 (2H, AB), 4,91 - 4,81 (1H, m), 4,05 - 3,88 (1H, m), 3,78 (3H, s), 3,75 - 3,30 (1H, m), 3,28 - 2,95 (2H, m), 2,23 -1,51 (6H, m), 1,45 (9H, s), 1,31 (9H, s), 1,28 (9H, s), 1,27 (3H, d).
Zlúčenina 254. Roztok chránenej kyseliny 251 (715 mg, 0,893 mmol) v acetonitrile sa nechá reagovať s amóniumnitrátom ceričitým (1,8 g, 3,3 mmol, 3,7 ekvivalentu) vo vode (3 ml) počas 4 hodín pri teplote miestnosti. Pridá sa manitol (600 mg, 3,3 mmol, 3,7 ekvivalentu) a zmes sa mieša počas 1 hodiny. K zmesi sa pridá dietyléter (50 ml) a voda (30 ml). Po rozsadení sa vodná vrstva extrahuje dietyléterom (4 x 50 ml). Spojené organické vrstvy sa premyjú vodou, vysušia nad síranom horečnatým a zahustia. Po chromatografii na silikagéli (10 % metanol v dichlórmetáne) sa získa kyselina 5-[(l-benzyloxykarbonyl-3-terc-butoxykarbonylhexahydropyridazin-2-yl)karbonyl]-3-metyl-4-ftalímidopentánová (zlúčenina 252) (360 mg, 64 %). [ot]D 20 - 49,2° (c = 0,118, metanol).
Tento produkt (360 mg, 0,609 mmol) sa použije bez ďalšieho čistenia, a hydrogenuje sa v metanole (30 ml) počas 3 hodín, pričom sa použije 10 % paládium na uhlí (36 mg). Reakčná zmes sa prefiltruje a vzniknutý roztok sa zahustí, čím sa získa amín 253 vo forme peny (270 mg, 96 %).
[a]D 20 - 56,1° (c = 0,18, metanol).
Amín 253 sa rozpustí v suchom tetrahydrofuránc (10 ml) a pridá sa chlorid fosforečný (305 mg, 1,47 mmol, 2,5 ekvivalentu). Zmes sa ochladí na teplotu - 5 °C a v atmosfére dusíka sa pridá N-etylmorfolín.
Reakčná zmes sa mieša cez noc pri teplote miestnosti. Zmes sa zahusti a zvyšok sa spracuje dichlórmetánom (20 ml) studenou vodou (20 ml) a IM kyselinou chlorovodíkovou (20 ml). Po rozsadení sa vodná vrstva opäť extrahuje dichlórmetánom (2 x 20 ml). Spojené organické vrstvy sa premyjú 10 % roztokom hydrogenuhličitanu sodného a vodou, vysušia sa nad síranom horečnatým a zahustia. Zvyšný olej sa prečistí chromatografiou na silikagéli (1 % metanol v dichlórmetáne), čím sa získa bicyklická zlúčenina 254 vo forme tuhej látky (65 mg, 25 %).
[oc]D 20 - 77° (c = 0,208, metanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3471, 3434, 2975, 2928, 1767, 1723, 1443, 1389, 1284, 1234, 1151, 1112, 720;
‘H-NMR (deuterochloroform) δ: 7,94 - 7,69 (4H, m), 5,34 - 5,27 (1H, m), 4,89 - 4,66 (2H, m), 3,94 - 3,64 (2H, m), 3,02 - 2,84 (1H, m), 2,34 - 2,19 (2H, m), 1,94 - 1,61 (3H, m), 1,47 (9H, s), 1,14 (3H, d);
Analýza pre C23H27N3O6: vypočítané: 62,57 % C, 6,17% H, 9,52 % N nájdené 62,60 % C, 6,40 % H, 9,10% N
Zlúčenina 255. Roztok bicyklickej zlúčeniny 254 (70 mg, 0,16 mmol) v etanole sa nechá reagovať s hydrazínhydrátom (0,02 ml, 4 mmol, 2,5 ekvivalentu). Po 5 hodinovom miešaní pri teplote miestnosti sa zmes zahustí a vzniknutý zvyšok sa prevedie do toluénu a znova sa odparí. Zvyšok sa nechá reagovať s 2M kyselinou octovou (2 ml) počas 16 hodín. Vzniknutá zrazenina sa odfiltruje a premyje 2M kyselinou octovou (10 ml). pH filtrátu sa pomocou tuhého hydrogenuhličitanu sodného upraví na bázickú reakciu a potom sa extrahuje etylacetátom. Organický roztok sa premyje vodou, vysuší nad síranom horečnatým a zahusti. Po prečistení veľmi rýchlou chromatografiou na silikagéli (2 % metanol v dichlórmetáne) sa získa voľný amin (50 mg, 100 %) vo forme peny. Amín (50 mg, 0,16 mmol) sa rozpustí v dioxáne (1 ml) a vode (0,25 ml) a nechá sa reagovať s hydrogenuhličitanom sodným (34 mg, 0,04 mmol)) a potom s benzoylchloridom (0,047 ml, 0,40 mmol, 2,8 ekvivalentu). Zmes sa mieša cez noc pri teplote miestnosti a potom sa zriedi etylacetátom. Organický roztok sa premyje 10 % roztokom hydrogenuhličitanu sodného a nasýteným vodným roztokom chloridu sodného, vysuší sa nad síranom horečnatým a zahustí. Po prečistení pomocou veľmi rýchlej chromatografie na silikagéli (2 % metanol v dichlórmetáne) sa získa benzamid 255 (67 mg, 100 %) vo forme peny.
'H-NMR (deuterochloroform) δ: 7,89 - 7,39 (5H, m), 6,79 (1H, d), 5,32 - 5,20 (1H, m), 4,98 - 4,82 (1H, m), 4.75 - 4,64 (1H, m), 3,84 - 3,65 (1H, m), 3,09 - 2,89 (1H, m), 2,45 - 2,18 (2H, m), 2,00 - 1,61 (4H, m), 1,48 (9H, s), 1,28 (3H, d).
Zlúčenina 257. Roztok terc-butylesteru 255 (67 mg, 0,16 mmol) v dichlórmetáne (1 ml) sa pri teplote 0 °C nechá reagovať s kyselinou trifluóroctovou (1 ml). Vzniknutý roztok sa mieša počas 15 minút pri teplote 0 °C a potom počas 1 hodiny pri teplote miestnosti. Roztok sa zahustí, zvyšok sa prevedie do suchého dichlórmetánu (2x2 ml) a zmes sa znova zahustí (dvakrát). Zvyšok sa prekryštalizuje z dietyléteru. Po odfiltrovaní zrazeniny sa získa voľná kyselina 255 (40 mg, 70 %) vo forme sivej tuhej látky. K roztoku tejto kyseliny (40 mg, 0,11 mmol), N-alyloxykarbonyl-4-amino-5- -benzyloxy-2-oxotetrahydrofuránu (Chapman, Bioorg & Med. Chem. Lett. 2, str. 615 - 618 (1992); 39 mg, 0,13 mmol, 1,2 ekvivalentu) a bis(trifenylfosfín)paládium(II)chloridu (3 mg) v zmesi suchého dichlórmetánu (1 ml) a suchého dimetylformamidu (0,2 ml) sa prikvapká tri-n-butylcínhydrid (0,089 ml, 0,33 mmol, 3 ekvivalenty). Vzniknutý roztok sa mieša počas 10 minút pri teplote 25 °C a potom sa pridá 1-hydroxybenzotriazol (36 mg, 0,266 mmol, 2,4 ekvivalentu. Zmes sa ochladí na teplotu 0 °C a pridá sa l-(dimetylaminopropyl)- -3-etylkarbodiimid-hydrochlorid (31 mg, 0,16 mmol, 1,5 ekvivalentu). Po 10 minútovom miešaní pri teplote 0 °C a potom cez noc pri teplote miestnosti sa zmes zriedi etylacetátom (20 ml) a vzniknutý roztok sa postupne premyje IM kyselinou chlorovodíkovou (2x5 ml), 10 % roztokom hydrogenuhličitanu sodného (2x5 ml) a nasýteným vodným roztokom chloridu sodného (5 ml), vysuší sa nad síranom horečnatým a zahustí. Po veľmi rýchlej chromatografii na silikagéli (2 % metanol v dichlórmetáne) sa získa zmes diastereoizomérov zlúčeniny 256 (50 mg, 82 %) vo forme sivej tuhej látky. Tento produkt (50 mg, 0,091 mmol) sa použije priamo bez ďalšieho čistenia, a hydrogenuje sa v metanole (5 ml) počas 24 hodín, pričom sa použije 10 % paládiumna uhli (30 mg). Reakčná zmes sa prefiltruje a vzniknutý roztok sa zahustí. Po veľmi rýchlej chromatografii na silikagéli (2 až 20 % metanol v dichlórmetáne) sa získa zlúčenina 257 (9 mg, 21 %) vo forme bielej tuhej látky.
’H-NMR (deuterochloroform) δ: 7,88 - 7,29 (5H, m), 5,18 - 4,99 (1H, m), 4,59 - 4,35 (3H, m), 4,26 - 4,11 (1H, m), 3,65 - 3,41 (2H, m), 3,18 - 2,91 (1H, m), 2,62 - 1,47 (8H, m), 1,29 - 1,00 (3H, 2d)(zmes acetálu a poloacetálu);
Hmotnostná spektroskopia (ES -): 457.
PhCONHNH2
258
COoBn h JMH PhCO— N H
259
PhCO-Ν'
H
T
O CC^Birí
Zlúčenina 259. Benzylakrylát (1,13 ml, 7,34 mmol) sa pridá k miešanej suspenzii benzoylhydrazínu (zlúčeniny 285) (1,0 g, 7,34 mmol) v izopropanole (28 ml). Zmes sa zohrieva počas 20 hodín na teplotu varu, ochladí sa na teplotu miestnosti a potom sa zahustí. Zvyšok sa prečistí pomocou veľmi rýchlej chromatografie (20 % etylacetát v dichlórmetáne), čím sa získa zlúčenina 259 (1,098 g, 50 %) vo forme oleja, ktorý vykryštalizuje státím. Teplota topenia 65 °C.
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3283, 1723, 1644, 1316, 1201, 1156;
'H-NMR (deuterochloroform) δ: 8,32 - 8,18 (1H, m), 7,81 - 7,70 (2H, m), 7,57 - 7,23 (8H, m), 5,36 - 54,92 (1H, široký m), 5,11 (2H, m), 3,26 (2H, t, J = 6,5), 2,59 (2H, t, J = 6,5);
l3C-NMR (deuterochloroform) δ: 172,12, 167,27, 135,65, 132,54, 131,66, 128,45, 128,10, 128,06, 126,84, 66,31,47,33,33,31;
Analýza pre CjyHijNjCh: vypočítané: 68,44 % C, 6,08 % H, 9,39 % N nájdené 68,42 % C, 6,10% H, 9,38% N
Hmotnostná spektroskopia (ES +): 321 (M + Na, 38 %), 299 (M+ + 1,100).
Zlúčenina 260. Roztok (3S)-l-benzyl-3-terc-butylhexahydropyridazín-1,3-dikarboxylátu (Hassal a kol., J. Chem. Soc., Perkin Trans. 1, str. 1451 - 1454 (1979)) (925,3 mg, 2,89 mmol) a diizopropyletylamínu (0,790 ml, 4,0 mmol) v 1,9M toluénovom roztoku fosgénu (17,96 ml, 34,7 mmol) sa mieša počas 45 minút pri teplote miestnosti a potom sa odparí, čím vznikne žltá tuhá látka. K tejto tuhej látke sa pridá toluén (18 ml), hydrazid 259 (861,6 mg, 2,89 mmol) a diizopropyletylamín (0,70 ml, 4,0 mmol). Zmes sa mieša pri teplote miestnosti počas 2,75-hodiny a potom sa zahustí. Zvyšok sa prevedie do etylacetátu, dvakrát sa premyje IM kyselinou chlorovodíkovou a soľankou, potom sa vysuší nad síranom horečnatým, prefiltruje a zahustí, čím sa získa 2,15 g surového produktu. Po veľmi rýchlej chromatografii (40 % etylacetát v hexáne) sa získa 1,65 g (89 %) zlúčeniny uvedenej v názve vo forme bielej peny s teplotou topenia 40 °C.
[oc]d24- 55,78° (c = 0,40, dichlórmetán);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3436, 2930, 1733, 1689, 1455, 1412, 1367, 1256, 697;
'H-NMR (deuterochloroform) δ: 8,54 - 8,23 (0,5H, m), 7,97 - 7,09 (15,5H, m), 5,16 - 4,80 (4H, m), 4,66 -
- 4,32 (1H, m), 4,24 - 3,55 (3,3H, m), 3,50 - 3,26 (0,4H, m), 3,19 - 2,49 (2,3H, m), 2,11 - 1,43 (6H, m), 1,32 -1,05 (7H, m);
Analýza pre C35H4oN408.0,5H20: vypočítané: 64,31% C, 6,32% H, 8,57% N nájdené 64,18% C, 6,27% H, 8,56% N
Hmotnostná spektroskopia (ES +): 662 (M + Na, 84 %), 645 (M+ + 1, 100), 384 (77).
Zlúčenina 261. Roztok zlúčeniny 260 (1,59 g, 2,47 mmol) v metanole (142 ml) reaguje nad 10 % paládiom na uhlí vo vodíkovej atmosfére počas 1,5-hodiny. Zmes sa prefiltruje a rozpúšťadlo sa odparí, čím sa získa 1,04 g (100 %) bielej peny s teplotou topenia < 40 °C. Tá sa použije v nasledovnom kroku bez ďalšieho čistenia.
[oc]d 26+ 1,6° (c = 0,26, dichlórmetán);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3422, 2977, 2986, 1728, 1677, 1486, 1445, 1396, 1369, 1309, 1228, 1155, 916,716;
'H-NMR (deuterochloroform) δ: 10,0 - 9,7 (1H, široký m), 7,86 (2H, d, J = 7,5), 7,62 - 7,38 (3H, m), 7,3 -
- 5,6 (2H, široký m), 4,57 (1H, široký d, J = 4,0), 4,05 - 3,77 (2H, m), 3,00 - 2,82 (1H, m), 2,80 - 2,43 (3H, m), 2,20 -2,03 (1H, m), 2,00 - 1,47 (1 H, m), 1,62 -1,14 (911, m);
13C-NMR (deuterochloroform) δ: 175,00, 171,17, 167,62, 160,68, 132,39. 131,77, 128,67, 127,38, 82,27, 54,38, 48,04, 46,35, 33,62, 28,02, 25,68, 21,61;
Hmotnostná spektroskopia (ES +): 443 (M + Na, 68 %), 421 (M+ + 1, 100), 365 (50), 131 (61).
Zlúčenina 262. K roztoku aminokyseliny 261 (1,012 g, 2,41 mmol) v suchom tetrahydrofuráne (26 ml) sa pri teplote 0 °C pridá N-etylmorfolín (597 μΐ, 4,69 mmol) a chlorid fosforečný (651,3 mg, 3,12 mmol). Reakčná zmes sa mieša počas 2 hodín pri teplote 0 °C, potom sa nechá zohriať na teplotu miestnosti a mieša sa počas ďalších 15,5-hodín. Zmes sa zahustí a zvyšok sa prevedie do etylacetátu, dvakrát sa premyje IM kyselinou chlorovodíkovou, nasýteným roztokom hydrogenuhličitanu sodného a soľankou, potom sa vysuší nad síranom horečnatým, prefiltruje a zahustí. Po veľmi rýchlej chromatografii (20 % etylacetát v dichlórmetáne) sa získa 727,3 mg (75 %) zlúčeniny uvedenej v názve vo forme bielej peny.
[oc]d 26+ 51,0° (c = 0,20, dichlórmetán);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3436, 2979, 1733, 1670, 1483, 1437, 1420, 1299, 1243, 1156; 'H-NMR (deuterochloroform) δ: 8,70 (1H, s), 7,78 (2H, d, J = 7,0), 7,57 - 7,32 (3H, m), 5,08 (1H, dd, J = 2,5 a 5,5), 4,59 - 4,43 (1H, m), 4,08 - 3,69 (3H, m), 3,07 - 2,84 (1H, m), 2,57 - 2,35 (1H, m), 2,34 - 2,14 (1H, m), 2,07 - 1,43 (3H, m), 1,48 (9H, s);
13C-NMR (deuterochloroform) δ: 172,41, 169,04, 166,35, 158,35, 132,24, 132,03, 128,61, 127,31, 62,77, 55,41, 54,07, 41,57, 32,21, 28,04, 24,97, 20,37;
Analýza pre C20H26N4O5: vypočítané: 59,69 % C, 6,51% H, 13,92% N nájdené 59,53 % C, 6,53 % H, 13,84% N
Hmotnostná spektroskopia (ES +): 425 (M + Na, 71 %), 403 (M+ + 1, 100), 145 (41).
Zlúčenina 263. Roztok esteru 262 (720,0 mg, 1,80 mmol) v zmesi dichlórmetánu a kyseliny trifluóroctovej v pomere 1 : 1 (150 ml) sa mieša počas 1,3-hodiny v atmosfére suchého dusíka. Roztok sa potom odparí vo vákuu, zvyšok sa prevedie do dietyléteru a znova sa odparí. Tento postup sa zopakuje šesťkrát, čím sa zís ka surový produkt vo forme bielej tuhej látky. Produkt sa prečistí pomocou veľmi rýchlej chromatografie (5 % metanol v dichlórmetáne), čím sa získa 520,0 mg (83 %) zlúčeniny uvedenej v názve vo forme bielej peny.
[a]D 25 + 59,5° (c = 1,82, dichlórmetán);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3453, 3266, 2956, 1732, 1664, 1524, 1486, 1440, 1302;
'H-NMR (deuterochloroform) δ: 9,13 (1H, s), 7,77 (2H, d, J = 7,5), 7,57 - 7,32 (3H, m), 5,27 - 5,16 (1H, m), 4,62 - 4,43 (1H, m), 4,09 - 3,70 (3H, m), 3,14 - 2,89 (1H, m), 2,59 - 2,43 (1H, m), 2,38 - 2,20 (1H, m), 2,14 -
- 1,89 (1H, m), 1,82 - 1,59 (2H, m);
l3C-NMR (deuterochloroform) δ: 173,65, 172,28, 166,44, 158,42, 132,44, 131,31, 128,61, 127,39, 54,83, 54,01, 42,11, 31,79, 24,42, 20,29;
Hmotnostná spektroskopia (ES -): 345 (M - H+, 100 %), 161 (45).
Zlúčenina 264. K roztoku kyseliny 263 (300,0 mg, 0,87 mmol) a (2RS,3S)-3-alyloxykarbonylamino-2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuránu (Chapman, Bioorg. & Med. Chem. Lett. 2, str. 615 - 618 (1992)) (277,6 mg, 0,95 mmol) v suchom dichlórmetáne (2,5 ml) a suchom dimetylformamide (2,5 ml) sa pri teplote miestnosti pridá bis(trifenylfosfín)paládium(II)chlorid (13,0 mg) a potom tri-n-butylcínhydrid (466,0 μΐ, 1,73 mmol). Reakčná zmes sa mieša počas 5 minút, potom sa pridá 1-hydroxybenzotriazol (234,1 mg, 1,73 mmol), zmes sa ochladí na 0 °C a pridá sa l-(dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimid-hydrochlorid (204,5 mg, 1,04 mmol). Zmes sa nechá zohriať na teplotu miestnosti a mieša sa počas 16,5-hodiny. Zmes sa zriedi etylacetátom, premyje sa IM roztokom hydrogénsíranu sodného, dvakrát nasýteným roztokom hydrogenuhličitanu sodného, potom vodou a soľankou. Organická vrstva sa vysuší nad síranom horečnatým, prefiltruje a zahustí. Zvyšok sa prečistí pomocou veľmi rýchlej chromatografie (5 % metanol v dichlórmetáne), čím sa získa 358,3 mg (77 %) zlúčeniny uvedenej v názve vo forme bielej tuhej látky. Infračervené spektrum (bromid draselný): 3435, 1791, 1665, 1526, 1421, 1285;
'H-NMR (deuterochloroform) δ: 8,76 a 8,49 (1H, 2s), 7,92 - 7,73 (2H, m), 7,62 - 7,24 (8,5H, m), 6,86 (0,5H, d, J = 8,0), 5,53 a 5,33 (1H, d, J = 5,5, s), 4,95 - 4,34 (5H, m), 4,04 - 3,54 (3H, m), 3,03 - 2,64 (2H, m), 2,49 -
- 2,14 (2H, m), 2,11-1,46 (4H, m);
Hmotnostná spektroskopia (ES +): 558 (M + Na, 100 %), 536 (M+ + 1, 78), 404 (58).
Zlúčenina 265. Zmes zlúčeniny 264 (350,0 mg, 0,65 mmol), 10 % paládia na uhlí (350 mg) a metanolu (36 ml) sa mieša v atmosfére vodíka počas 6,5-hodiny. Zmes sa prefiltruje a rozpúšťadlo sa odparí. Pridá sa dietyléter a rozpúšťadlo sa znova odparí. Tento postup sa zopakuje štyrikrát a získa sa 283 mg (97 %) zlúčeniny uvedenej v názve vo forme bielej kryštalickej látky s teplotou topenia dekarboxylátu > 140 °C. [cc]d26 + 33,5° (c = 0,18, metanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3428, 1663, 1528, 1487, 1437, 1288;
'H-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid) δ: 10,56 (1H, s), 8,71 - 8,57 (1H, m), 7,88 - 7,81 (2H, m), 7,65 - 7,46 (3H, m), 4,97 - 4,85 (1H, m), 4,38 - 4,0 (3H, m), 3,88 - 3,52 (3H, m), 2,91 - 2,71 (2H, m), 2,50 - 2,38 (1H, m), 2,35 - 2,21 (1H, m), 2,10 -1,94 (1H, m), 1,93 - 1,49 (3H, m);
13C-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid) δ: 173,66, 172,49, 169,97, 169,89, 164,96, 157,62, 132,35, 131,85, 128, 39, 127,32, 53,81, 52,69, 40,90, 33,17, 31,60, 24,40, 24,13, 19,24;
Hmotnostná spektroskopia (ES -).
NHZ
CO2H.DCHA
Prth— N
H
NHZ
CO2H
266
268
Zlúčenina 266. Roztok dicyklohexylamóniovej soli kyseliny (2S)-3-benzyloxykarbonylamino-2-terc-butoxykarbonylaminopropiónovej (3 g, 5,8 mmol) v dichlórmetáne (200 ml) sa štyrikrát premyje IM roztokom kyseliny chlorovodíkovej, vysuší sa nad síranom horečnatým a zahustí. Vzniknutý olej sa rozpustí v suchom dichlórmetáne (35 ml), ochladí sa na teplotu 0 °C a reaguje s kyselinou trifluóroctovou (35 ml). Tento roztok sa mieša pri teplote 0 °C počas 1,5-hodiny a potom sa odparí dosucha. K zvyšku sa pridá dichlórmetán (50 ml), ktorý sa potom odstráni vo vákuu. Tento postup sa zopakuje šesťkrát, čím sa získa biela tuhá látka. Biela tuhá látka sa suspenduje v toluéne (50 ml, pridá sa anhydrid kyseliny fialovej (940 mg, 6,35 mmol) a zmes sa zohrieva na teplotu varu počas 18 hodín. Vzniknutý roztok sa zahustí, čím sa získa olej, ktorý sa prečistí pomocou veľmi rýchlej chromatografie (2 až 10 % metanol v dichlórmetáne), čím sa získa zlúčenina 266 (2,01 g, 94 %) vo forme bieleho prášku.
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3600 - 2500 široký, 1776, 1714, 1530, 1469, 1455, 1392, 1263, 1131,722;
'H-NMR (deuterochloroform) δ: 7,83 (2H, m), 7,72 (2H, m), 7,29 (5H, m), 5,41 (1H, m), 5,03 (2H, s), 3,90 (2H, m);
Hmotnostná spektroskopia (ES -): 367 (M -1).
Zlúčenina 267. Suspenzia kyseliny 266 (1,32 g, 3,58 mmol) v suchom éteri (37 ml) reaguje s chloridom fosforečným (1,04 g, 5 mmol) a zmes sa mieša počas 2 hodín pri teplote miestnosti. Roztok sa prefiltruje, čím sa odstráni nezreagovaný chlorid fosforečný, a potom sa odparí dosucha. K zvyšku sa pridá suchý toluén (25 ml) a odparí sa dosucha. Tento postup sa opakuje niekoľkokrát. Vzniknutý olej sa rozpustí v suchom dichlórmetáne (25 ml), ochladí sa na teplotu 0 °C a pridá sa roztok (3S)-terc-butyl-l-benzyloxykarbonylpyridazín-3-karboxylátu (1,15 g, 3,58 mmol) v suchom dichlórmetáne (2 ml) a potom 5 % vodný roztok hydrogenuhličitanu sodného (25 ml). Zmes sa intenzívne mieša počas 20 hodín pri teplote miestnosti, potom sa zriedi etylacetátom (100 ml) a okyslí sa IM kyselinou chlorovodíkovou na pH 2. Organická vrstva sa dvakrát premyje zriedeným roztokom kyseliny chlorovodíkovej, potom soľankou, vysuší sa nad síranom horečnatým a zahustí. Vzniknutý olej sa prečistí pomocou veľmi rýchlej chromatografie (2 až 20 % etylacetát v dichlórmetáne, potom 10 až 20 % metanol v dichlórmetáne), čím sa získa zlúčenina 267 (1,25 g, 52 %) vo forme bieleho prášku.
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3367, 2955, 1722, 1517, 1455, 1387, 1369, 1251, 1153,721; ‘H-NMR (deuterochloroform) δ: 7,81 (2H, m), 7,74 (2H, m), 7,63 (1H, široký s), 7,31 (10H, m), 5,46 - 4,76 (5H, m), 4,07 - 3,54 (4H, m), 2,4 (1H, m), 2,0 - 1,6 (3H, m), 1,40 (9H, s);
Hmotnostná spektroskopia (ES +): 671 (M + 1), 693 (M + Na).
Zlúčenina 268. K roztoku esteru 267 (50 mg, 0,074 mmol) v metanole (15 ml) sa pridá 10 % paládium na uhli (50 mg) a hydrogenuje sa za normálneho tlaku počas 24 hodín. Zmes sa evakuuje, čím sa odstráni vodík, potom sa pridá 37 % vodný roztok formaldehydu (18 mg, 0,22 mmol) a mieša sa v atmosfére dusíka počas 2 hodín. Zmes sa prefiltruje, odparí dosucha a produkt sa prečistí pomocou veľmi rýchlej chromatografie (4 až 100 % etylacetát v dichlórmetáne), čím sa získa zlúčenina 268 (14,5 mg, 48 %) vo forme oleja.
'H-NMR (deuterochloroform) δ: 7,85 (2H, m), 7,71 (2H, m), 5,78 (1H, dd, J 10,5), 4,99 (1H, dd, J = 6,1 a 1,5), 4,07 (1H, d, J = 10,6), 3,49 (1H, dd, J = 14,5), 3,39 (1H, d, J = 10,3), 3,24 (1H, dd, J = 14,0 a 10,2), 3,17 (2H, m), 2,39 (1H, m), 1,8 - 1,46 (3H, m), 1,51 (9H, s);
Hmotnostná spektroskopia (ES +): 415 (M + 1), 437 (M + Na).
Zlúčeniny 280 - 283 sa pripravia zo zlúčeniny 212b podobným spôsobom, ako sa pripraví zlúčenina 226e. Zlúčeniny 284 - 287 sa pripravia podobným spôsobom, ako sa pripraví zlúčenina 217e
Zlúčenina 306a sa pripraví podobným spôsobom ako zlúčenina 208a, okrem toho, že sa miesto semikarbazidu použije 2,6-dichlórfenylmetoxyamín (pripravený podobným spôsobom ako zlúčenina 306b), čím sa získa 870 mg (100 %) číreho oleja.
Zlúčenina 306b sa pripraví podobným spôsobom ako zlúčenina 208a, okrem toho, že sa miesto semikarbazidu použije 2-(fenyl)etoxyamín (US 5 346 911), čím sa získa 395 mg (kvantitatívne) číreho oleja.
Zlúčenina 307a sa pripraví podobným spôsobom ako zlúčenina 233e, okrem toho, že sa miesto zlúčeniny 207a použije zlúčenina 306a, čím sa získa 23 mg (23 %) zlúčeniny 307a vo forme bielej tuhej látky.
Zlúčenina 307b sa pripraví podobným spôsobom ako zlúčenina 233e, pričom sa miesto zlúčeniny 207a použije zlúčenina 306b, čím sa získa 43 mg (48 %) zlúčeniny 307b vo forme bielej tuhej látky.
Zlúčenina 308a sa pripraví zo zlúčeniny 307a podobným postupom ako zlúčenina 235e zo zlúčeniny 234e, čím sa získa 15,2 mg (74 %) bielej tuhej látky.
'H-NMR (deuterochloroform) δ: 0,9 (m), 1,3 (s), 1,7 (m), 1,8 (m), 2,0 (m), 2,1 - 2,2 (m), 2,3 (dd), 2,4 - 2,5 (m), 2,6 (m), 2,7 - 2,8 (m), 3,1 (m), 3,3 (m), 3,4 - 3,5 (m), 4,5 (m), 4,9 (m), 5,1 (m), 5,3 (d), 5,4 (s), 6,8 (d), 7,2 - 7,5 (m), 7,8 (dd), 8,4 (dd).
Zlúčenina 308b sa pripraví zo zlúčeniny 307b podobným spôsobom ako zlúčenina 235e zo zlúčeniny 234e, čím sa získa 25,2 mg (68 %) bielej tuhej látky.
‘H-NMR (deuterochloroform) δ: 1,2 (m), 1,6 -1,7 (m), 2,0 - 2,1 (m), 2,2 (m), 2,3 (m), 2,5 (m), 2,6 - 2,7 (dd), 2,9 (t), 3,0 (t), 3,1 (m), 3,3 - 3,5 (m), 4,2 (t), 4,25 (m), 4,5 (m), 5,2 (t), 5,3 (t), 6,7 (d), 7,1 - 7,2 (m), 7,35 (dd), 7,4 (m), 7,5 (m), 7,8 (dd), 8,3 (dd).
Zlúčenina 302.
Krok A: Zlúčenina 301 sa pripraví podobným spôsobom ako zlúčenina 605a (krok A), okrem toho, že sa miesto zlúčeniny 603a použije zlúčenina 212e, čím sa získa 540 mg (34 %) bielej tuhej látky.
Krok B: Zlúčenina 302. Roztok zlúčeniny 301 (50,7 mg, 0,091 mmol) v 2,8 ml zmesi metanol/kyselina octová/37 % vodný roztok formaldehydu (5 : 1 : 1) sa mieša počas 5,5 hodiny pri teplote miestnosti a reakčná zmes sa prefiltruje a zahustí sa vo vákuu na objem 0,7 ml. Zvyšok sa rozpustí v 3 ml acetonitrilu a zahustí sa vo vákuu na objem 0,7 ml (trikrát), rozpustí sa v toluéne a zahustí sa vo vákuu na objem 0,7 ml (dvakrát) a odparí sa dosucha. Po chromatografii (silikagél, 5 % izopropanol v dichlórmetáne) sa získa zlúčenina 302 (45,5 mg, 78 %) vo forme bielej tuhej látky.
'H-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid) δ: 1,0 - 1,15 (m, 2H), 1,4 (s, 9H), 1,65 (m, 2H), 1,9 - 2,1 (m, 2H), 2,15 - 2,4 (m, 3H), 2,55 (m, 1H), 2,7 - 3,0 (m, 2H), 4,3 - 4,6 (m, 2H), 4,9 (m, 1H), 5,2 (m, 1H), 7,4 - 7,6 (m, 2H), 7,8 - 8,0 (m, 2H), 8,6 (m, 1H), 8,8 (m, 1H), 9,4 (s, 1H).
Zlúčenina 304a
Krok A: Roztok zlúčeniny 302 (90 mg, 0,18 mmol) v 10 ml metanolu reaguje s trimetylortoformiátom (1 ml) a hydrátom kyseliny p-toluénsulfónovej (5 mg, 0,026 mmol) a reakčná zmes sa mieša počas 20 hodín. K reakčnej zmesi sa pridajú 3 ml nasýteného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a zahustí sa vo vákuu. Zvyšok sa prevedie do etylacetátu a premyje sa zriedeným vodným roztokom hydrogenuhličitanu sodného, vysuší sa nad síranom horečnatým a zahustí sa vo vákuu, čím sa získa 80 mg zlúčeniny 303a.
Krok B: Zlúčenina 303a sa rozpustí v 2 ml kyseliny trifluóroctovej a mieša sa počas 15 minút pri teplote miestnosti. Reakčná zmes sa rozpustí v dichlórmetáne a zahustí sa vo vákuu (trikrát). Po veľmi rýchlej chromatografii (silikagél, 1 až 3 % metanol v dichlórmetáne) sa získa 43 mg (64 %) zlúčeniny 304a vo forme bielej tuhej látky.
‘H-NMR (deuterochloroform) δ: 1,55 - 1,8 (m, 2H), 1,9 - 2,15 (m, 4H), 2,25 - 2,5 (m, 2H), 2,7 - 3,3 (m, 4H), 3,45 a 3,6 (2s, 3H), 4,4 a 4,75 (2m. 1H), 4,6 (m, 1H), 4,95 a 5,4 (t, d, 1H), 5,1 - 5,2 (m, 1H), 6,45 a 7,05 (2d, 1H), 6,95 (m, 1H), 7,45 (m, 2H), 7,5 (m, 1H), 7,85 (m, 2H).
Príklad 11
Zlúčeniny 214e, 404 - 413, 415 - 445, 446 - 468, 470 - 491 a 493 - 499 sa pripravia tak, ako sa opisuje v príklade 11 a v tabuľke 7.
Krok A. Syntéza zlúčeniny 401. Živica TentaGel S® NII2 (0,16 mmol/g, 10,0 g) sa umiestni do sklenenej frity a premyje sa dimetylformamidom (3 x 50 ml), 10 % (v/v) Ν,Ν-diizopropyletylamínom v dimetylformamide (2 x 50 ml) a nakoniec dimetylformamidom (4 x 50 ml). K živici sa pridá dostatočné množstvo dimetylformamidu, aby sa získala suspenzia a následne zlúčenina 400 (1,42 g, 2,4 mmol) pripravená z terc-butylesteru kyseliny (3S)-3-(fluorenylmetoxykarbonyl)-4-oxobutánovej (A. M. Murfy a kol.: J. Am. Chem. Soc. 114, 3156 - 3157 (1992) hydrátu 1-hydroxybenzotriazolu (HOBt.H2O; 0367 g, 2,4 mmol), O-benzotriazol-l-yl-N,N,N,N'-tetrametyluróniumhexafluorofosfátu (HBTU; 0,91 g, 2,4 mmol). Reakčná zmes sa pretrepáva cez noc pri teplote miestnosti, pričom sa použije trepačka. Živica sa izoluje odsatím na sklenenej frite a premyje sa dimetylformamidom (3 x 50 ml). Nezreagované aminoskupiny sa potom ochránia reakciou živice s 20 % (v/v) acetanhydridom v dimetylformamide (2 x 25 ml) priamo na frite (premývanie počas 10 minút). Živica sa premyje dimetylformamidom (3 x 50 ml) a dichlórmetánom (3 x 50 ml) a potom sa vysuší cez noc vo vákuu, čím sa získa zlúčenina 401 (11,0 g, kvantitatívny výťažok).
Krok B. Syntéza zlúčeniny 402. Živica 401 (6,0 g, 0,16 mmol/g, 0,96 mmol) sa nechá napučať na sklenenej frite premytím s dimetylformamidom (3 x 25 ml). Ochranná skupina Fmoc sa potom odštiepi pomocou 25 % (v/v) piperidínu v dimetylformamide (25 ml) počas 10 minút (občasné premiešanie) a potom pomocou čerstvého piperidínového činidla (25 ml) počas 20 minút. Živica sa potom premyje dimetylformamidom (3 x x 25 ml) a potom N-metylpyrolidónom (2 x 25 ml). Po premiestnení živice do 100 ml banky sa pridá N-metylpyrolidón, čím sa získa suspenzia, potom sa pridá zlúčenina 212f (0,725 g, 1,57 mmol), HOBt.H2O (0,25 g, 1,6 mmol), HBTU (0,61 g, 1,6 mmol) a N,N-diizopropyletylamin (0,84 ml, 4,8 mmol). Reakčná zmes sa pretrepáva cez noc pri teplote miestnosti pomocou trepačky. Živica sa spracuje a uzatvorí pomocou 20 % (v/v) acetanhydridu v dimetylformamide tak, ako sa opisuje pre zlúčeninu 401, čím sa získa zlúčenina 402 (6,21 g, kvantitatívny výťažok).
Krok C. Syntéza zlúčeniny 403. Táto zlúčenina sa pripraví zo živice 402 (0,24 g, 0,038 mmol), pričom sa použije Advanced ChemTech 396 Multiple peptidový syntctizér. Cykly obsahujúce živicu sa premyjú dimetylformamidom (3x1 ml), ochranné skupiny sa odstránia pomocou 25 % (v/v) piperidínu v dimetylformamide (1 ml) počas 3 minút, potom čerstvým činidlom (1 ml) počas 10 minút, čím sa získa živica 403. Táto živica sa premyje dimetylformamidom (3 x 1 ml) a N-metylpyrolidónom (3 x 1 ml).
Krok D. Spôsob 1. Zlúčenina 409. Živica 403 sa acyluje pomocou 0,4M roztoku kyseliny tiofén-3-karboxylovej, 0,4M roztoku HOBt v N-metylpyrolidóne (1 ml), 0,4M roztoku HBTU v N-metylpyrolidóne (0,5 ml) a 1,6M roztoku Ν,Ν-diizopropyletylamínu v N-metylpyrolidóne (0,35 ml) a reakčná zmes sa pretrepáva počas 2 hodín pri teplote miestnosti. Acylačný krok sa zopakuje. Nakoniec sa živica premyje dimetylformamidom (3x1 ml), dichlórmetánom (3 x 1 ml) a vysuší sa vo vákuu. Zo živice sa odštiepi aldehyd a odstránia sa ochranné skupiny reakciou so zmesou 95 % (v/v) kyselina trifluóroctová/voda (1,5 ml) počas 30 minút pri teplote miestnosti. Po premytí živice štiepiacim činidlom (1 ml) sa spojené filtráty pridajú k studenej zmesi dietyléter/pentán 1 : 1 (12 ml) a vzniknutá zrazenina sa izoluje odstredením a dekantáciou. Vzniknutá guľôčka sa rozpusti v zmesi 10 % acetonitril/90 % voda/0 - 1 % kyselina trifluóroctová (15 ml) a lyofilizuje sa, čím sa získa surová zlúčenina 409 vo forme bieleho prášku. Zlúčenina sa prečistí pomocou semipreparatívnej RP-HPLC s kolónou Rainin Microsorb™ C)8 (5 μ, 21,4 x 250 mm), pričom elúcia sa uskutočňuje lineárnym gradientom acetonitrilu (5 až 45 %) obsahujúceho 0,1 % kyseliny trifluóroctovej (v/v) počas 45 minút pri prietoku 12 ml/min. Frakcie obsahujúce požadovaný produkt sa spoja a lyoftlizujú, čím sa získa zlúčenina 409 (10,8 mg, 63 %).
Krok D. Spôsob 1A. Syntéza zlúčeniny 418. Nasledovný postup sa podobá na spôsob 1. Živica 403 sa acyluje kyselinou 4-(l-fluorenylmetoxykarbonylamino)benzoovou a postup sa zopakuje. Skupina Fmoc sa odstráni tak, ako sa opisuje v kroku C a voľný amín sa acyluje zmesou 20 % (v/v) acetanhydridu v dimetylformamide (1 ml) a 1,6M Ν,Ν-diizopropyletylatnínom v N-metylpyrolidóne (0,35 ml) počas 2 hodín pri teplote miestnosti. Acylačný krok sa opakuje. Po odštiepení aldehydu zo živice sa získa zlúčenina 418 (3,2 mg).
Krok D. Spôsob 1B. Syntéza zlúčeniny 447. Nasledovný postup sa podobá na spôsob 1 A. Živica 403 sa acyluje 0,4M kyselinou 4-(l-fluorenylmetoxykarbonylamino)benzoovou. Acylačný krok sa ešte raz zopakuje. Skupina Fmoc sa odstráni rovnako, ako sa opisuje a voľný amín sa nechá reagovať s IM metánsulfonylchloridom v dichlórmetáne (0,5 ml) a IM pyridínom v dichlórmetáne (0,60 ml) počas 4 hodín pri teplote miestnosti. Po odštiepení aldehydu zo živice sa získa zlúčenina 447 (10,0 mg).
Krok D. Spôsob 2. Syntéza zlúčeniny 214e. Nasledovný postup sa podobá na spôsob 1A. Živica 403 sa acyluje 0,5M benzoylchloridom v N-metylpyrolidóne (1 ml) a 1,6M Ν,Ν-diizopropyletylamínom v N-metylpyrolidóne (0,35 ml) počas 2 hodín pri teplote miestnosti. Po odštiepení aldehydu zo živice sa získa zlúčenina 214e. (5,1 mg, 30 %).
Krok D. Spôsob 3. Syntéza zlúčeniny 427. Nasledovný postup sa podobá na spôsob 1A. Živica 403 sa nechá reagovať s l,0M benzénsulfonylchloridom v dichlórmetáne (0,5 ml) a IM pyridínom v dichlórmetáne (0,60 ml) počas 4 hodín pri teplote miestnosti. Reakcia sa zopakuje. Po odštiepení aldehydu zo živice sa získa zlúčenina 427 (7,2 mg, 40 %).
Krok D. Spôsob 4. Syntéza zlúčeniny 420. Nasledovný postup sa podobá na spôsob 1A. Živica 403 sa nechá reagovať s 0,5M metylizokyanátom v N-metylpyrolidóne (1 ml) a 1,6M N,N-diizopropyIetylamínom v N-metylpyrolidóne (0,35 ml) počas 2 hodín pri teplote miestnosti. Reakcia sa zopakuje. Po odštiepení aldehydu zo živice sa získa zlúčenina 420 (8,3 mg, 55 %).
Krok D. Spôsob 5. Syntéza zlúčeniny 445. Nasledovný postup sa podobá na spôsob 1A. Živica 403 sa acyluje 0,27M kyselinou imidazol-2-karboxylovou (1 ml) v zmesi dimetylformamidu a vody (2 : 1) s 1 ekvivalentom Ν,Ν-diizopropyletylamínu a IM l-(dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimid-hydrochloridom (EDC) v zmesi N-metylpyrolidónu a vody (2 : 1) (0,35 ml) počas 3 hodín pri teplote miestnosti. Po odštiepení aldehydu zo živice sa získa zlúčenina 445 (9,5 mg).
Analytické HPLC metódy (1) Waters DeltaPak C|8. 300 A (5 μ, 3,9 x 150 mm). Lineárny gradient acetonitrilu (5 až 45 %) obsahujúci 0,1 % kyseliny trifluóroctovej (v/v) počas 14 minút pri prietoku 1 ml/min.
(2) Waters DeltaPak Ci8, 300 A (5 μ, 3,9 x 150 mm). Lineárny gradient acetonitrilu (0 až 25 %) obsahujúci 0,1 % kyseliny trifluóroctovej (v/v) počas 14 minút pri prietoku 1 ml/min.
(3) Waters DeltaPak C[8, 300 A (5 μ, 3,9 x 150 mm). Izokratická elúcia zmesou 0,1 % kyseliny trifluóroctovej a vody (v/v) pri prietoku 1 ml/min.
(4) Waters DeltaPak C18, 300 A (5 μ, 3,9 x 150 mm). Lineárny gradient acetonitrilu (0 až 30 %) obsahujúci 0,1 % kyseliny trifluóroctovej (v/v) počas 14 minút pri prietoku 1 mL/mm.
(5) Waters DeltaPak C18, 300 A (5 μ, 3,9 x 150 mm). Lineárny gradient acetonitrilu (5 až 35 %) obsahujúci 0,1 % kyseliny trifluóroctovej (v/v) počas 14 minút pri prietoku 1 ml/min.
Tabuľka 7
Zl. Štruktúra Vzorec M. h. HPLC RČ rnin ΗΞ (M+H)* Postup
214c 11 0 C21H24N4O7 444.45 6.67 (2) 98Ϊ 445 2
404 0 ŕLai U 11 vp11 11 0 C221126M4O7 4 50.-1 8 6.66 (2) 97t -159 2
405 11 0 C22II26N4O0 474.47 8.2 (1) 984 475 2
40G 11 0 C21112 3C1N-107 -178.09 6.33 (1) 984 -179 2
407 11 0 C25H26N4O7 -19-1 . 51 9.90 (1) 9U4 -195 2
400 ΟλΦρ C251I26N4O7 494.51 9.o tn 98?, .495 2
-109 1 C2 7112 íiM-107 520.55 11.1-1 (11 98 4 521 2
Zl. Štruktúra Vzorec M. Ii. HPLC RČ min II s (M I II) ’ Postup
410 11 0 CL91I22N4O7S 450.47 4.87 (1) 90% 451 1
411 0 rtÝrXÄ' W o jfr C241I25N5O7 495.50 10.7 (1) 90¾ 496 1
412 0 .nJi JxΝγ Au CO 0Λ U 11 ô C24H25N5O7 495.50 8.57 (1) 98% 496 1
413 0 JNW C011 V N 0 [fV 11 0 C18H24N4O7 408.41 7.21 (2) 98?. 409 1
415 0 Ά Wr A>> <ΎΥ Π oj Ah o ffV C221I24M4O9 400.46 7.58 (1) 90% 409 1
416 0 a 0? Λ- Α N °0W 0 Π 5 C21II23C1N4O7 473.09 9.66 (1) 90% 479 1
417 0 / νΆ o 1 9 \ ň J Á XJTh o/n-v θΎ ° H o 1 χθ C24II30N4010 534.53 8.12 (1) 535 535 1
410 0 / nO o /J W A‘ n °oW lltY“' 11 o 0< C23H27N5O3 501.50 5.93 (1) 90% 502 1Λ
419 0 C M 0 x A H A Joij 0 n 0Λ 11 0 Cl 6II22N4O8 390.38 6.84 (2) 98% 399 2
420 0 / tA o o \ ň J Jl -νλΑ t f 011 N N „1 1 |. 11 11 <) oy 0 C161I23N5O7 397.39 5.25 {2) 90 V. 39B 4
Zl. Strukliúra Vzorec H. h. HPLC RČ in i n lis (Ml H) ’ >ostup
421 0 / NV 0 9 W Ai y-S-N nl 1 II Zo °οΛΥΥ 11 0 C16II24N4O0S 432.46 7.13 (2) 90% 433 3
422 0 V1nÓ?úh v 11 cAfA / 11 0 C21II20N6O7 476.49 6.09 (1) 90¾ 477 1
423 0 θ ( ň J Jl s/J~4 I J al -< í ľ! o^rAr1' rA o n Y C20H25N5O7S 479.52 5.62 (U 98% 480 1
424 0 J / N ] 0 jWA' °r 0° p / 11 0 C19II23N5O8 449.42 6.2ϋ (1) 4 50 450 1
/125 0 λ'υΥ o o \ μ J n ζχζχ Λ A Y ť ai ,xď« %Vv C25II26N4O0 510.51 8.25 (1) 98% 511 1
426 0 / νΎ o 0 \ Ň J A XX. A A Y ŕ 011 M ľí o k,JLn Ά 11 0 N Y 11 0 C211I3ON4O7 450.50 8.0 (1) 98% 451 2
427 V Λν 11 0 C201124N4OBS 480.50 7.87 (1) 90% 481 3
420 0 /Ύα o o., p V V A V θο^ν 11 0 C16II25N5O8S 447.47 5.13 ¢1) 90% 440 3
429 0 A^ 0 Vi Aoii h,n n A A n Ο Ο Ν Υ 11 0 C1 4112 0N4O6 340.34 3.19 (3) 98% 341
430 (J 0 1 / N Ύ 0 ΧΛ A Y Zoh θ' 0 (/y 11 0 C23H27N5O0 501.50 5.53 (1) 98% 502 1A
431 0 ( Ν^Ί 0 /V'A ŕ011 JU π vA Η/Γ^ 11 o C21II25N5O7 459.46 6.66 (2) 90% 4 60 1
SK 287195 Β6
Z1. Štruktúra Vzorec M. h. HPLC RČ mín HS (MIH}4 ^ostup
<143 rvÄ?“ O-U 11 ô C27II20N400 536.55 13.12 (1) 90? 537 1
444 0 / N M 0 MW A Ql 11 ony ^Cl 0 II Ä C21112 2C12N4O7 513.34 9.96 (5) 90?, 510 1
445 0 ( Ί 0 Ν-Λν'1’ 1 Z 011 Uh °oXAh 11 0 Cl Í11I22N6O7 4 J 4 4 1 5.72 (11 90?, 435 5
44 G 0 / tO o θ \ ň J A Χί,ϊ ŕ v h »0*av C17II2ON6O 15 152.15 5.00 (1) 90?, 453 1
44 7 0 l N A 0 9 \ N J X ,/χΑΙ.Η I f OH 1' 1 M θ\ιΜ X J 11 O N Y irf^ u ii ; s° >· J 0 C22II27N5O9S 537.55 6.32 (1) 90? 530 111
44U 0 f n> o AW A1 Áo C24H29M5O0 515.53 6.36 (1) 90? 516 1A
449 0 Λ ~ r M i 0 A v? A< íl I H Qr 0,1 11 ô C25II26N4O0 510.51 13.05 (1) 90?, 511 1
450 0 r-'t Γ Ό o M ΗΎ A U H AJ T h 0 V 0 C23II27N5O0 501.50 6.10 (1| 90? 502 1Λ
451 0 / nA 0 JAV M Q h °oJV J C221I2 6N4O0 474.47 0.02 (1) 90% 475 2
Zl. á Ľruktníra Vzorec M . 11. HPLC KČ mi n HS (M + H)’ 3ostup
<152 n / nA o A W A jOt Av 0 ^ ° H ä C22II2 6N4O8 474.47 7.77 (1) 901 475 2
453 0 f ľA 0 A H T A cď AA' W 0 II J C23H24N4O7S 500.53 11.11 (1) 981 501 2
454 0 / nA o A W Ah Ct fí °c) A N ° II o C20I123N5O7 445.44 6.24 (2) 98% 446 2
<155 0 A. Í/Q Ä Cj h AA 1 0 Cl C21II23C1N4O7 470.09 9.45 (1) 98% 479 2
<15G 0 „ l Ό 0 9 \ N J A i f 011 1 H ΟΚΑ,ΙΙ 11 n N Y l-D^ U H (j C2.1I124M4OB 460.45 5.511 (1) 90% (M+Na) 403 1
4 57 0 / nA o ΑΑύ A v h At 0 u ^Oll C28II28N4O10 580.56 10.42 (1) 98% (Mi-Na) 603 1
450 0 r ? \ lO Jl ľYVV'í T 1 011 fU °/„v 02 11122 F2N4O7 400.43 0.65 (1) 90% 401.1 1
459 0 o Aa 0 cW'Any f1101-1 F-U H Oo^A '* 0 C21II22C1FH4O7 496.88 10.11 (1) 90% 490.3 1
460 0 r-t- o Γ A ? rAiA i /A H *0 n TH 0 O 11 0 C22II2 6N4O95 522.54 6.16 (L) 90% 523.6 1
461 0 y F 0 C A ? A^A i A·' u H o 0AA H 0 C211I23FN4O7 462.44 7.41 (1) 98% 463.3 1
21. Štruktúra Vzorec M . 11. HIH.C KČ m i n HS (MIH)‘ Po si. Ilp
0
n ( 1 0 7.71 (1)
4 62 Ύ|Π Y 011 C 2 1 112 3111407 4 62.4 4 9 í) '1 463.3 1
11 0Λ 0 i r 0
0
o ( N )=O o 7.64 (1)
463 íiVLn^ ,NV C211123FN4O? 462.44 98% 464 1
FV 0 1 0 N II r 0
0 Λ
0 \ N' 0 A í on 11.59 (1)
464 N. C21II22C12N4O7 513.34 907. 414.5 1
11 J H Cl^ 0 i 0 'M H irH 0
0
Hf 9 0 9.65 (1)
465 aAA Hí i Λ CH C22II25C1N4O7 492.92 90% 493.9 L
h n 0 ) 11 nj II
0 íľ 0
0 -J/ _
i 1 í N ->< i 9.63 (1)
466 liT'hľ O n Cl ✓»1 C22II25C1N4O7 492.92 493.9 1
0 A 0 tí II VH 0 98¾
0
n C N 0 Jl f on 9.73 (1)
4 67 ~ Λ C2 3112 41440í) 404.47 405.8 1
/Ύ N 90%
\ / 0 ’ O'N 0 1-1 V 0
0
Ή N A o
o ( ť /«H 14.04 (1)
468 F v N C26H26F3N5O7S 609.59 98% 609.7 1
F-J-C \\_4 jl F W na II cu3 0 0 ^Νγ 0
0
0 λΆγ 9
470 rA \ Ns 2 on C23H29N5O7 407.52 4.57 (1) 409.5 1
P J II l'ŕNCH3 0 0 II Y 0 90?,
0
rl
o hT Ί 0
471 íV1 Ň J Jl 5.74 (1)
f on C23H29N5O7 407.52 408.2 1
w II C ) 0 n\h i-i JL 98%
κΊέ 11 0
Zl. Š t: rukľúra Vzorec M. h. IIPl.C RČ mín HS (MIH)' Postup
472 0 0 Αί ? U 11 °M 0 H 0 C22H25N5O7 471.47 4.00 (1) 90?, 474 1
473 0 o í «tVíPY A< < 11 ľl oLLh O^CH, 0 f'f Y C23II26N4O9 502.49 7.65 (1) 901 503,6 1
474 0 o Λ<νΖΧί θ f αι n c J! J n o^nAJ1 ILvv o ľQ 0 u C23H26N4O0 406.49 7.16 (1) 90% 400.1 1
475 0 0 ΑΊ j? «w Λ' Γ^ΝΙΙ 11 0 W1 V 0 11 0 C231I25N5O7 403.49 9.77 (1) 971 405.1 1
476 0 A . i-ĽC o / N | 9 ''Wn i í^1 0 H 0 C22IJ2 6N4OÍ) 474.47 5.25 (1) 901 475.8 1
4 77 0 o Γ*”Ί í? II \ N J J*. <Y j f ° x J II o \.\,n ιιειγ o Γ1 't Λ J 11 0 ry oj C261133N5O9 559.50 4.76 (1) 951 561.0 1
473 0 o A'A o wU H %K\H ďo 11 0 C211I25N5O9S 523.53 5.25 (1) 901 524.3 1
479 0 o Γ^Ί í? ŕÝ^AV/c, ” «M/ 11 0 C22H26N4O8 474.47 5.35 (1) 981 475.8 1
400 0 H3Cy° 0 0 HN A V Ah V'f N Í I J 011 JZJ n o AMA,rH l-IN x^ o N Y A 11 0 HaC 0 C25H30N6O9 550.55 5.11 (1) 98% 559.3 1A
Z1. Štruktúra Vzorec M. h. HPLC RČ min HS (M + H)' Postup
0
0 A n η 0
NsJ A 7.10 (1)
401 /νγ [i J ΟΙΊ C211I24C1N5O7 493.9 495. 1 1
N II o Ύ n N ° II ií 0 II 907
Η/ιγ Cl
0
0 A N H N > 0
A 9.05 (1)
402 Jh J l-l/l // Cl ’-'S Y 0 A., n N u II f OH V 0 C21H23C12N5O7 520.4 907 529.0 1
0
Y ~
0 Ί A 10.01 (1)
403 M H Y < Oll C20H29N500 563.57 565.6 1,2
J 0 II Ý1 907
U 0
0
0 X ( N 0 /□-(
4 04 0 r Py Jl 3 A λ νΉ( Ί C2 51131N5OÍ1 529.55 7.00 (1) 531 1, 2
'W . xj II oj 0 'N II Y 907
1-ljC 11 0
0
0 Ah ( N 0
405 o r Py \ Ň. •S Y /CH C24H29N5O0 515.53 7.00 (1) 517.6 1,2
1-l.cJ^l X/ 1 0 j 0 ’M Y 907
. H H 0
0
o Γ N 0
405 αγ Pr i I A \ k Po] 0 'N' /on V C291I31N5OI) 577.60 10.43 (1) 987 579.4 1, 2
H 0
0
0 r 0 foi 9.30 (1|
407 A \ C2G1I33N5OI) 543.50 54 5.7 1,2
II..C 0 /Py 907
Η3Λν 3 II Π J 1 1 o í 0 N II Ϋ1 0
0 A x
0 ( N 0 /ch 0.13 (1)
400 0 <Ρ>τ P? C25II31N5O0 529.55 907 531.1 1,2
ILC^IÍ 3 l-l 1 -1 0 0 an l-l v 0
0
0 0 Y 5.09 (1)
409 0 py λ I C23II20NCO0 516.52 907 517.0 1,4
W V >z o Λ 0 l-l
H 1-1 0
0
0 í n'x 1 0 II 7.27 (1) (M-I-Na)
490 P-f u 0 Π J C23II27N5O9 517.50 1,2
'wV H i Ί X!Z ľ IJ ' •1 Al 3 907 540.0
100
Zl. Štruktúra Vzorec M. h. HPLC RČ m j n ΗΞ (MI H) ’ Pos tup
491 0 o í? o i ?l° ,ιι | J H o ςΛ ° n s C20II20N409 564.56 12.9 (1) 90% 565.3 1
<193 0 ŕ:i'J :|Ύ l' / F U C2 2112 5FN4O0 492.46 0.31 (1) 9(1 '1. 493.9 1
<194 0 o ? αλΛΛ/1 1 Z01'1 U h %v 0 H O C23II2 6N4O7 470.49 9.34 (1) 90% 471.2 2
4 95 0 zŕX n / NU 0 θ-Χυν X' H o/n'Sí-i* 11 0 C22II2GN4O7 450.40 7.24 (1) 98% 459.9 2
496 0 íVoAn^Y / Q II ol \n 11 0 C22II26N4O0 474.47 9.47 (1) 90% 475.7 2
<197 0 0 AO íl iíVA^T ľ 011 lW Π 0 íi v Cl 0 C22II25C1N4O0 50(1.92 9.50 11) 90% 509.5 L
490 o 0 ( 0 i A1 JU n oM/1 HO V 0 [J lí Cl υ C21II23C1N4OI1 194.09 7.10 (1) 90% 495.1 1
<199 0 o Αί í? KV^N 1 /011 |i J n o J·.,A. .n QT«V 0 tlG 02 0113014401) 5 5 ĺ), 5 7 13.27 (l) 90% 552 1
Príklad 12
Zlúčeniny 605a-j, 605m-q, 605s, 605t a 605v sa pripravia tak ako sa opisuje.
101
Zlúčenina 600a/103
Krok A. Kyselina (2S)-2-ŕerc-butoxykarbonylamino-3-(2-nitrofenylainino)propiónová
Kyselina (2S)-2-terc-butoxykarbonylammo-3-aminopropiónová (10 g, 49 mmol), 2-fluómitrobenzén (5,7 ml, 54 mmol) a hydrogenuhličitan sodný (8,25 g, 98 mmol) sa prevedú do 130 ml dimetylformamidu a zohrievajú sa počas 18 hodín na teplotu 80 °C. Reakčná zmes sa odparí vo vákuu, čím sa získa viskózny oranžový zvyšok, ktorý sa rozpustí v 300 ml vody a extrahuje sa dietyléterom (3 x 150 ml). Vodný roztok sa okyslí na pH 5 pomocou 10 % roztoku hydrogénsíranu sodného a extrahuje sa etylacetátom (3 x 250 ml). Spojené extrakty sa vysušia nad bezvodým síranom sodným, prefiltrujú a odparia sa, čím sa získa 12,64 g (83 %) zlúčeniny uvedenej v názve vo forme oranžovej amorfnej tuhej látky.
‘H-NMR (deuterochloroform) δ: 8,15 - 8,10 (1H, d), 7,54 - 7,48 (1H, t), 7,13 - 7,08 (1H, d), 6,73 - 6,65 (1H, t), 4,45 - 4,35 (1H, m), 3,9 - 3,8 (1H, dd), 3,65 - 3,55 (1H, dd), 1,45 (9H, s).
Krok B. Kyselina (2S)-2-terc-butoxykarbonylamino-3-(2-aminofenylamino)propiónová
Zmes kyseliny (2S)-2-terc-butoxykarbonylamino-3-(2-nitrofenylamino)propiónovej (12,65 g, 40,5 mmol) a 0,5 g 10 % paládia na uhlí v 100 ml metanolu sa mieša v atmosfére vodíka pri tlaku 100 kPa počas 4 hodín. Roztok sa prefiltruje cez kremelinu 545 a filtrát sa odparí vo vákuu, čím sa získa 11,45 g zlúčeniny uvedenej v názve v kvantitatívnom výťažku vo forme tmavohnedej tuhej látky, ktorá sa použije bez ďalšieho čistenia. ‘H-NMR (perdeuterometanol) δ: 6,75 - 6,70 (3H, m), 6,65 - 6,58 (1H, m), 4,35 - 4,3 (1H, m), 3,6 - 3,38 (2H, m), 1,45 (9H, s).
Krok C. (3S)-2-Oxo-3-terc-butoxykarbonylamino-l,3,4,5-tetrahydro- -lH-[l,5]benzodiazepín l-(Dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimid-hydrochlorid (8,54 g, 44,5 mmol) sa pridá k chladnému (0 °C) roztoku kyseliny (2S)-2-ŕerc-butoxykarbonylamino-3-(2-aminofenylamino)propiónovej (11,95 g, 40,5 mmol) v 100 ml dimetylformamidu a mieša sa počas 18 hodín. Reakčná zmes sa vyleje do 700 ml etylacetátu a štyrikrát sa premyje 100 ml vody. Organická vrstva sa vysuší nad bezvodým síranom sodným, prefiltruje a odparí, čím sa získa hnedá tuhá látka, ktorá sa prečistí pomocou veľmi rýchlej chromatografie, pričom sa ako elučné činidlo použije zmes etylacetátu a hexánu v pomere 3 : 7, čím sa získa 8 g (71 %) zlúčeniny uvedenej v názve.
'H-NMR (deuterochloroform) δ: 7,78(1H, s), 7,02 - 6,95 (1H, m), 6,88 - 6,62 (1H, m), 6,82 - 6,78 (1H, m), 6,75 - 6,70 (1H, m), 5,8 - 5,7 (1H, d), 4.55 - 4,45 (1H, m), 3,95 (1H, s), 3,9 - 3,82 (1H, m), 3,48 - 3,40 (1H, m), 1,45 (9H, s).
Krok D. Zlúčenina 600a/103. l,0M Roztok lítium bis(trimetylsilylamidu (3,4 ml, 3,4 mmol) v tetrahydrofuráne sa prikvapká k roztoku (3S)-2-oxo-3-terc-butoxykarbonylamino-2,3,4,5-tetrahydro-lH-[l,5]benzodiazepínu (0,94 g, 3,38 mmol) v 20 ml bezvodého tetrahydrofuránu ochladenému na -78 °C a mieša sa počas 30 minút. K reakčnej zmesi sa potom prikvapká metylbromoacetát (0,44 ml, 4 mmol) a reakčná zmes sa zohreje na teplotu miestnosti. Reakčná zmes sa zriedi 100 ml etylacetátu a premyje sa 0,3N roztokom hydrogénsíranu draselného (50 ml), vodou (2 x 50 ml) a soľankou. Spojené organické extrakty sa vysušia nad bezvodým síranom sodným, prefiltrujú a odparia, čím sa získa guma, ktorá sa prečistí pomocou veľmi rýchlej chromatografie, pričom sa ako elučné činidlo použije zmes etylacetátu a hexánu v pomere 3 : 7, čím sa získa 0,98 g (83 %) zlúčeniny uvedenej v názve vo forme bielej tuhej látky.
'H-NMR (deuterochloroform) δ: 7,15 - 7,07 (2H, m), 6,98 - 6,94 (1H, m), 6,88 - 6,84 (1H, d), 5,62 - 5,55 (1H, d), 4,71 - 4,65 (1H, d), 4,65 - 4,6 (1H, m), 4,33 - 4,27 (1H, d), 3,96 - 3,9 (1H, m), 3,78 (3H, s), 3,44
102
-3,37(1 H, m), 1,4 (9H, s).
Zlúčenina 600b sa pripraví podobným spôsobom, ako sa opisuje pre prípravu zlúčeniny 600a/103 (krok D), okrem toho, že sa miesto metylbrómoacetátu použije benzylbrómoacetát, čím sa získa zlúčenina 600b v kvantitatívnom výťažku
Zlúčenina 600c
Krok A. Kyselina (2S)-2-íerc-butoxykarbonylamino-3-(2-nitro-3,5-dimetylfenylaminó)propiónová
Zlúčenina sa pripraví podobným spôsobom, ako sa opisuje pre prípravu zlúčeniny 600a/103 (krok A), okrem toho, že sa miesto 2-fluórnitrobenzénu použije 2-fluór-4,6-dimetylnitrobenzén, čím sa získa požadovaná zlúčenina v 93 % výťažku.
Krok B. Kyselina (2S)-2-íerc-butoxykarbonylamino-3-(2-amino-3,5-dimetylfenylamino)propiónová
Kyselina (2S)-2-terc-butoxykarbonylamino-3-(2-nitro-3,5-dimetylfenylamino)propiónová sa prevedie na zlúčeninu uvedenú v názve v kvantitatívnom výťažku tak, ako sa opisuje pre prípravni zlúčeniny 600a/103 (krok B).
Krok C. 2-Oxo-(3S)-3-terc-butoxykarbonylamino-2,3,4,5-tetrahydro-7,9-dimetyl-lH-l,5-benzodiazepín
K roztoku kyseliny (2S)-2-terc-butoxykarbonylamino-3-(2-amino-3,5-dimetylfenylamino)propiónovej (763 mg, 2,36 mmol) a N-metylmorfolínu (483 mg, 4,78 mmol) v 60 ml bezvodého tetrahydrofuránu ochladenému na teplotu 0 °C sa prikvapká izobutylchloroformiát (352 mg, 2,5 mmol). Reakčná zmes sa mieša počas 2 hodín pri teplote 0 °C a počas 1 hodiny pri teplote miestnosti a vyleje sa do etylacetátu. Zmes sa premyje 5 % vodným roztokom hydrogénsíranu sodného, nasýteným vodným roztokom hydrogenuhličitanu sodného a nasýteným vodným roztokom chloridu sodného, vysuší sa nad síranom sodným a zahustí sa vo vákuu. Po veľmi rýchlej chromatografii (silikagél, 10 % - 56 % etylacetát v dichlórmetáne) sa získa 490 mg (68 %) požadovaného produktu.
Krok D. Zlúčenina 600c. Kyselina (2S)-2-ŕerc-butoxykarbonylamino-3-(2-amino-3,5-dimetylfenylamino)propiónová sa prevedie na zlúčeninu 600c (75 %) podobným spôsobom, ako sa pripravuje zlúčenina 600b.
1.) Krok A, HC1 . ) Krok B, PhCO2H
---------------►
3.) Krok C, R3X
602
Zlúčenina 602a
Krok A. Bezvodý chlorovodík sa prebubláva cez roztok metylesteru kyseliny (3S)-2-oxo-3-terc-butoxykarbonylamino-2,3,4,5-tetrahydro-lH-[l,5]benzodiazepín-l-octovej (zlúčeniny 600a/103) (4,0 g, 11,4 mmol) v 20 ml dichlórmetánu počas 20 minút a potom sa mieša počas 1 hodiny pri teplote miestnosti. Reakčná zmes sa odparí, čím sa získa hydrochlorid metylesteru kyseliny (3S)-2-oxo-3-amino-2,3,4,5-tetrahydro-lH-[l,5]-benzodiazepín-l-octovej vo forme bielej tuhej látky.
103
Krok B. Biela tuhá látka sa rozpustí v 70 ml dimetylformamidu a pridá sa kyselina benzoová (1,5 g, 12,3 mmol). Reakčná zmes sa ochladí zmesou ľadu a vody a pridá sa l-(dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimid-hydrochlorid (2,4 g, 12,5 mmol), 1-hydroxybenzotriazol (1,7 g, 12,6 mmol) a diizopropyletylamín (3,0 g,
23.2 mmol). Reakčná zmes sa mieša počas 18 hodín pri teplote miestnosti v atmosfére dusíka a vyleje sa do vody. Vodná zmes sa extrahuje dvakrát etylacetátom. Spojené organické vrstvy sa premyjú 0,5N vodným roztokom hydrogénsíranu sodného, vodou, nasýteným vodným roztokom chloridu sodného, vysuší sa nad síranom horečnatým a zahustí sa vo vákuu. Po veľmi rýchlej chromatografíi (silikagél, (10 % až 30 % etylacetát v dichlórmetáne) sa získa 3,4 g (85 %) metylesteru kyseliny (3S)-2-oxo-3-(benzoylamino)-2,3,4,5-tetrahydro-lH-[l,5]benzodiazepín-l-octovej vo forme bielej tuhej látky.
Krok C. Zlúčenina 602a. Roztok metylesteru kyseliny (3S)-2-oxo-3-(benzoylamino)-2,3,4,5-tetrahydro-lH-[l,5]benzodiazepín-l-octovej (200 mg, 0,57 mmol) v dichlórmetáne (10 ml) sa nechá reagovať s trietylamínom a 3-fenylpropionylchloridom (114 mg, 0,68 mmol). Reakčná zmes sa mieša pri teplote miestnosti počas 30 minút a zriedi sa dichlórmetánom. Roztok sa premyje 10 % vodným roztokom chlorovodíka, nasýteným vodným roztokom hydrogenuhličitanu sodného a nasýteným vodným roztokom chloridu sodného, vysuší sa nad síranom sodným a zahustí vo vákuu, čim sa získa 240 mg (87 %) zlúčeniny 602a vo forme bielej peny.
Krok C. Spôsob B. Zlúčenina 602g. Roztok benzylesteru kyseliny (3S)-2-oxo-3-(benzoylamino)-2,3,4,5-tetrahydro-lH-[l,5]benzodiazepín-l-octovej (zlúčeniny 600b) (465 mg, 1,10 mmol) v dichlórmetáne (5 ml) ochladený na teplotu 0 °C sa nechá reagovať s roztokom kyseliny acetoctovej v 1 ml dichlórmetánu a potom nasleduje pomalé pridanie roztoku l-(dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimid-hydrochloridu (431 mg,
2.2 mmol) v 2 ml dichlórmetánu v atmosfére dusíka. Po 15 minútach sa reakčná zmes vyleje do etylacetátu, premyje sa 5 % vodným roztokom hydrogénsíranu sodného, vysuší sa nad síranom sodným a zahustí vo vákuu. Po veľmi rýchlej chromatografii (silikagél, 0 % až 10 % až 25 % metanol v dichlórmetáne) sa získa 580 mg benzylesteru kyseliny (3S)-2-oxo-3-(benzoylamino)-5-acetoacetyl-2,3,4,5-tetrahydro-lH-[l,5]benzodiazepín-1-octovej vo forme bielej tuhej látky.
Krok C. Spôsob C. Zlúčenina 602j. Energicky miešaný roztok benzylesteru kyseliny (3S)-2-oxo-3-(benzoylamino)-2,3,4,5-tetrahydro-lH-l,5-benzodiazepín-l-octovej (zlúčeniny 600b) (461 mg, 1,07 mmol) v tetrahydrofuráne ochladený na teplotu 0 °C a nasýtený vodný roztok hydrogenuhličitanu sodného (2,5 ml) sa nechá reagovať s tetrahydrofiiránovým roztokom (0,35 ml) metylchloroformiám (151 mg, 1,6 mmol) a reakčná zmes sa mieša počas 45 minút pri teplote miestnosti. Reakčná zmes sa vyleje do dichlórmetánu a premyje sa vodou, vysuší sa nad síranom sodným a zahustí sa vo vákuu. Po veľmi rýchlej chromatografii (silikagél, 0 % až 10 % metanol v dichlórmetáne) sa získa 525 mg zlúčeniny 602j vo forme bielej tuhej látky.
Krok C. Spôsob D. Zlúčenina 602p. Roztok zlúčeniny 600a/103 (400 mg, 1,1 mmol) a benzylizokyanátu (166 mg, 1,2 mmol) v 10 ml dichlórmetánu a 10 ml dimetylformamidu sa zohrieva počas 3 dní na teplotu 80 °C. Reakčná zmes sa ochladí na teplotu miestnosti, vyleje sa do vody a dvakrát sa extrahuje etylacetátom. Spojené organické vrstvy sa premyjú vodou (štyrikrát) a nasýteným vodným roztokom chloridu sodného, vysušia sa nad síranom horečnatým a zahustia vo vákuu. Po veľmi rýchlej chromatografii (silikagél, 50 až 80 % etylacetát v hexáne) sa získa 440 mg (80 %) zlúčeniny 602p vo forme bielej tuhej látky.
Krok C. Spôsob E. Zlúčenina 602v. Roztok hydrochloridu metylesteru kyseliny (3S)-2-oxo-3-amino-5-(3-fenylpropionyl)-2,3,4,5-tetrahydro-lII-[l,5]benzodiazepín-l-octovej (560 mg, 1,34 mmol) benzaldehydu (146 mg, 1,34 mmol) a octanu sodného (220 mg, 2,68 mmol) v metanole (20 ml) sa nechá reagovať s molekulovými sitami 4A (2 g) a kyanoborohydridom sodným (168 mg, 2,68 mmol). Reakčná zmes sa mieša počas 2,5-hodiny, okyslí sa 10 % roztokom kyseliny chlorovodíkovej na pH 2 a premyje sa éterom (2 x 75 ml). Organické vrstvy sa zahustia vo vákuu, čím sa získa olej. Po veľmi rýchlej chromatografii (silikagél, 0 až 35 etylacetát v dichlórmetáne) sa získa 250 mg (40 %) zlúčeniny 602v vo forme číreho oleja.
Krok D. Spôsob A. Zlúčenina 603a. Metylester kyseliny (3S)-2-oxo-3-(benzoylamino)-5-(3-fenylpropionyl)-2,3,4,5-tetrahydro-lH-[l,5]-benzodiazepín-l-octovej (zlúčeniny 602a) (1,25 g, 2,57 mmol) sa rozpustí v 11 ml zmesi tetrahydrofurán/metanol/voda (5:5:1), pridá sa hydrát hydroxidu lítneho (42 mg, 0,62 mmol) a zmes sa mieša pri teplote miestnosti počas 64 hodín. Reakčná zmes sa zahustí vo vákuu, zriedi sa vodou a okyslí sa pomocou IN vodného roztoku kyseliny chlorovodíkovej, čím sa získa 230 mg zlúčeniny 603a vo forme bielej tuhej látky.
Krok D. Spôsob B. Zlúčenina 603d. Zmes benzylesteru kyseliny (3S)-2-oxo-3-(benzoylamino)-5-acetyl-2,3,4,5-tetrahydro-lII-[l,5]benzodiazepín-l-octovej (zlúčeniny 602d) (510 mg, 1,08 mmol) a 5 % paládia na uhlí (250 mg) v metanole (10 ml) sa mieša v atmosfére vodíka (100 kPa) počas 0,5-hodiny. Reakčná zmes sa prefiltruje a zahustí vo vákuu, čím sa získa 410 mg zlúčeniny 603 d vo forme bielej tuhej látky.
Zlúčeniny z tabuľky 8 sa pripravia tak, ako sa opisuje v tabuľke 9, pričom sa použijú spôsoby z príkladu 12.
104
Tabuľka 8
Zlúčenina R2 R3 R4 Rs
602b H PhCH2C(O) PhC(O) CH2Ph
602c H PhC(O) PhC(O) CH2Ph
602d H CH3C(O) PhC(O) CH2Ph
602e H CH3OCH2C(O) PhC(O) CH2Ph
602f H (CH3)2CHCH2C(O) PhC(O) CH2Ph
602g H CH3C(O)CH2C(O) PhC(O) CH2Ph
602h H CH3OC(O)C(O) PhC(O) CH2Ph
602i H CH3C(O)C(O) PhC(O) CH2Ph
602j H CH3OC(O) PhC(O) CH2Ph
602k H CH3C(O) Boe CH2Ph
6021 ch3 CH3C(O) Boe CH2Ph
602m H CH3S(O)2 PhC(O) ch3
602p H PhCH2NHC(O) PhC(O) ch3
602q H r^/^OCO PhC(O) CH2Ph
602r H PhCH2CH2C(O) PhCH2CH,C(O) CH,Ph
602s H 4-pyridylCH2C(O) PhC(O) CHjPh
Tabuľka 9
Zlúčenina Východ, látka r3x Krok C spôs. (výťažok %) Krok D spôs. (výťažok %)
603b 600b PhCH2C(O)Cl A (98) B (89)
603c 600b PhC(O)Cl A (kvánt.) B (kvánt.)
603d 600b CH3C(O)C1 A (kvánt.) B (kvánt.)
603e 600b CH3OCH2C(O)C1 A (59) B (kvánt.)
603f 600b (CH3)2CHCH2C(O)C1 A (88) B (95)
603g 600b CH3C(O)CH2CO2H B (kvánt.) B (kvánt.)
603h 600b CH3OC(O)C(O)C1 A (96) B (kvánt.)
603i 600b CH3C(O)CO2H B (87) B (94)
603j 600b CH3OC(O)C1 C (kvánt.) B (kvánt.)
603k 600b CH3C(O)C1 A, iba krok C (kvánt.) nereaguje
6031 600c CH3C(O)C1 A, iba krok C (kvánt.) nereaguje
603m 600a/103 CH3SO3C1, NEt3 namiesto pyridinu a THF namiesto CH2C12 A (76) A (92)
603p 600a/103 PhCH2C=N=O D(80) A (86)
603q 600b r^-OCOCI C (83) B (71)
603r 600a/103 PhCH2CH2C(O)Cl A
603s 600b 4-pyridylCH2CO2H B (90) B (98)
105
SK 287195 Β6
1. ) Krok C, R3X
2. ) Krok B, HC1
3.) Krok C, R^x
Zlúčeniny z tabuľky 10 sa pripravia tak, ako sa opisuje v tabuľke 11, pričom sa použijú postupy z príkla5 du 11.
Tabuľka 10
Zlúčenina R2 R3 R4 R5
602n H CH3C(O) naftylén-2-C(O) CH2Ph
602o ch3 CH3C(O) PhC(O) CH2Ph
602t H 3-CH3PhCH2C(O) PhC(O) CH2Ph
602u H CH3C(O) Fmoc CH2Ph
602v H PhCH2CH2C(O) PhCH2 ch3
Tabuľka 11
Zlúčenina Východ, látka 1.) Krok C R3X spôsob (výťažok %) 3.) Krok C R4X spôsob (výťažok %) Krok D spôsob (výťažok %)
603n 602k CH3C(O)C1 A (kvánt.) 2-naftylén-C(O)Cl A (70) B (kvánt.)
603o 6021 CH3C(O)C1 A (kvánt.) PhC(O)Cl A (73) B (kvánt.)
603t 602k 3-CH3C6H4CH2C(O)Cl A (kvánt.) PhC(O)Cl A (93) B (95)
603u 602k CH3C(O)C1 A (kvánt.) Fmoc-Cl C (82) C (98)
603v 600a/103 PhCH2CH2C(O)Cl A PhCHO E (40) A (95)
106
Zlúčeniny z tabuľky 12 sa pripravia opísaným spôsobom.
Tabuľka 12
Zlúčenina R2 I? R4
605a H PhCH2CH,C(O) PhC(O)
605b H PhCH2(O) PhC(O)
605c H PhC(O) PhC(O)
605d H CH3C(O) PhC(O)
605e H CH3OCH2C(O) PhC(O)
605f H (CH3)2CHCH2C(O) PhC(O)
605g H CH3C(O)CH2C(O) PhC(O)
605h H CH3OC(O)C(O) PhC(O)
605i H CH3C.(O)C(O) PhC(O)
605j H CH3OC(O) PhC(O)
605m H ch3s(O)3 PhC(O)
605n H CH3C(O) naftyl-2-C(O)
605o ch3 CH3C(O) PhC(O)
605p H PhCH2NHC(O) PhC(O)
605q H PhC(O)
605s H 4-pyridylCH2C(O) PhC(O)
605t H 3-CH3C6H4CH2C(O) PhC(O)
605v H PhCH2CH2C(O) PhCH2
Zlúčenina 605a
Krok A. Semikarbazón terc-butylesteru kyseliny (3S)-3-(l-fluorenylmetoxykarbonylamino)-4-oxobutá10 novej (210 mg, 0,45 mmol), pripravený podobným spôsobom ako benzyloxykarbonylový analóg v Graybill a kol.: Int. J. Proteín Res. 44, str. 173 - 182 (1994), sa rozpustí v 10 ml dimetylformamidu a 2 ml dietylamínu a zmes sa mieša počas 2 hodín. Potom sa odparí vo vákuu, čím sa získa semikarbazón terc-butylesteru kyseliny (3S)-3-amino-4-oxobutánovej. Roztok uvedeného zvyšku (zlúčenina 603a) (200 mg, 0,42 mmol) v 5 ml di107 metylformamidu a 5 ml dichlórmetánu ochladený na teplotu 0 °C sa nechá reagovať s 1-hydroxybenzotriazolom (57 mg, 0,42 mmol) a l-(3-dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimid-hydrochloridom (98 mg, 0,51 mmol). Reakčná zmes sa mieša počas 18 hodín pri teplote miestnosti, vyleje sa do etylacetátu (75 ml) a premyje sa 0,3N vodným roztokom hydrogénsíranu sodného a nasýteným vodným roztokom chloridu sodného, vysuší sa nad síranom sodným a zahustí sa vo vákuu. Po veľmi rýchlej chromatografii (silikagél, 0 až 4 % metanol/0,1 % hydroxid amónny/dichlórmetán) sa získa 240 mg (83 %) zlúčeniny 604a.
Krok B. Zlúčenina 604a sa mieša s 10 ml zmesi kyselina trifluóroctová/voda počas 4 hodín a odparí sa vo vákuu. Zvyšok sa rozpustí v 7 ml zmesi metanol/kyselina octová/37 % vodný roztok formaldehydu (5:5: : 1) a mieša sa počas 18 hodín. Po chromatografii (reverzná fáza Ci8, 4,4 mm ID x 25 cm, 15 až 70 % acetonitril/0,1 % kyselina trifluóroctová/voda) sa získa 32 mg (16 %) zlúčeniny 605a vo forme bielej tuhej látky. ’H-NMR (perdeuterometanol, existuje ako diastereoméry hemiacetálu) δ: 7,85 - 7,78 (2H, d), 7,5 - 7,32 (6H, m), 7,32 - 7,28 (1H, m), 7,18 - 6,98 (5H, m), 4,92 - 4,85 (2H, m), 4,5 - 4,32 (2H, m), 4,31 - 4,20 (2H, m), 3,7 - 3,6 (1H, m), 2,90 - 2,75 (2H, m), 2,65 - 2,5 (1H, m), 2,48 - 2,25 (3H, m).
Nasledovné zlúčeniny sa pripravia podobným spôsobom. Zlúčenina 605b. 148 mg (33 %) vo forme bielej tuhej látky. 'H-NMR (perdeuterometanol) δ: 7,9 - 6,9 (m, 16H), 4,9 (s, 2H), 4,5 (m, 1H), 4,4 (m, 2H), 3,75 (s, 1H), 3,6 (dd, 1H), 3,45 (dd, 1H), 2,7 (m, 1H), 2,5 (m, 1H).
Zlúčenina 605c. 319 mg (56 %) vo forme bielej tuhej látky.
'H-NMR (perdeuterometanol) δ: 7,9 - 6,9 (m, 16H), 5,1 (m, 1H), 4,9 (dd, 1H), 4,7 (m, 1H), 4,6 (dd, 1H), 4,4 (m, 2H), 4,05 (m, 1H), 2,7 (m, 1H), 2,5 (m, 1H).
Zlúčenina 605d. 190 mg (38 %) vo forme bielej tuhej látky. 'H-NMR (perdeuterometanol) δ: 1,9 (d, H), 2,4 (m, 1H), 2,65 (m, 1H), 3,7 (m, 1H), 4,25 (m, 1H), 4,45 (m, 2H), 4,8 - 5,05 (m, 3H), 7,3 - 7,7 (m, 7H), 7,9 (d, 2H).
Zlúčenina 605e. 250 mg (78 %).
'H-NMR (perdeuterometanol) δ: 1,87 (široký s), 1,95 (s, 2H), 2,1 (široký s), 2,4 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 3,59 (široký s), 3,75 (široký s), 3,87 (široký s), 4,19 (m), 4,37 (m), 4,50 - 4,78 (široký m), 4,92 (m), 5,27 (široký s), 7,41 - 7,58 (m, 7H), 7,87 (d, 2H).
Zlúčenina 605f. 210,5 mg (46 %) vo forme bielej tuhej látky.
'H-NMR (perdeuterometanol) δ: 7,9 - 7,4 (m, 9H), 5,1 (m, 1H), 4,9 (m, 1H), 4,6 (dd, 1H), 4,4 (m, 2H), 4,1 (d, 1H), 3,8 (m, 1H), 3,5 (q, 1H), 2,7 (m, 1H), 2,5 (m, 1H), 2,0 (m, 3H), 1,2 (t, 1H), 0,9 (d, 3H), 0,8 (d, 3H). Zlúčenina 605g. 81 mg (19 %) vo forme bielej tuhej látky.
'H-NMR (perdeuterometanol) δ: 7,9 - 7,3 (m, 11H), 4,9 - 4,8 (m, 2H), 4,6 - 4,4 (m, 3H), 4,3 (m, 1H), 3,75 (q, 1H), 3,55 (d, 1H), 2,7 (m, 1H), 2,5 (m, 1H), 2,05 (s, 3H).
Zlúčenina 605h. 227 mg (54 %) vo forme bielej tuhej látky.
'H-NMR (perdeuterometanol) δ: 2,5 (m, 1H), 2,7 (m, 1H), 3,55 (s, 3H), 3,8 - 4,0 (m, 2H), 4,4 (m, 1H), 4,6 -
- 4,8 (m, 2H), 4,95 (d, 1H), 5,1 (m, 1H), 7,3 - 7,7 (m, 7H), 7,9 (d, 2H), 8,6 (d, 1H).
Zlúčenina 605i. 150 mg (37 %) vo forme bielej tuhej látky.
'H-NMR (perdeuterometanol) δ: 7,9 - 7,3 (m, 12H), 5,1 (m, 1H), 4,65 (t, 1H), 4,55 (dd, 1H), 4,35 (m, 1H), 4,1 (d, 1H), 3,9 (q, 1H), 3,45 (q, 1H), 2,7 (m, 1H), 2,5 (m, 1H), 2,25 (s, 3H).
Zlúčenina 605j. 234 mg (44 %) vo forme bielej tuhej látky.
'H-NMR (perdeuterometanol) δ: 7,9 - 7,4 (m, 12H), 5,0 (m, 1H), 4,8 - 4,5 (m, 3H), 4,4 (m, 1H), 4,3 (t, 1H), 3,9 - 3,75 (m, 2H), 3,6 (s, 3H), 2,7 (m, 1H), 2,5 (m, 1H).
Zlúčenina 605m. 64,5 mg (34 %) vo forme bielej tuhej látky.
'H-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid, existuje ako diastereoméry poloacetálu a otvorená forma aldehydu) δ: 9,48 (0,2H, s), 8,85 - 8,72 (1H, m), 8,65 - 8,60 (0,8H, d), 8,30 - 8,26 (0,2H, d), 7,95 - 7,88 (2H, d), 7,6 - 7,45 (6H, m), 7,44 - 7,38 (1H, m), 5,78 - 5,75 (0,2H, d), 5,48 (0,6H, s), 4,85 - 4,70 (2H, m), 4,62 - 4,54 (1H, d), 4,50 - 4,40 (2H, m), 4,25 - 4,14 (1H, m), 3,9 - 3,85 (1H, m), 3,16 (3H, s), 3,05 - 2,3 (2H, m).
Zlúčenina 605n. 103 mg (17 %) vo forme bielej tuhej látky.
'H-NMR (perdeuterometanol) δ: 1,9 (s, 3H), 2,5 (m, 1H), 2,65 (m, 1H), 3,75 (m, 1H), 4,3 (m, 1H), 4,5 - 4,7 (m, 3H), 4,85 - 5,1 (m, 2H), 7,3 - 7,65 (m, 6H), 7,85 - 8,05 (m, 4H), 8,45 (s, 1H).
Zlúčenina 605o. 42 mg (12 %) vo forme bielej tuhej látky.
'H-NMR (perdeuterometanol, existuje ako diastereoméry poloacetálu) δ: 7,85 - 7,74 (2H, m), 7,5 - 7,44 (1H, m), 7,43 - 7,35 (4H, m), 5,6 - 5,05 (2H, m), 4,82 - 4,42 (2H, m), 4,40 - 3,95 (2H, m), 3,6 - 3,5 (1H, m), 2,7 -
- 2,38 (2H, m), 2,32 (3H, s), 2,27 (3H, s), 1,92 (3H, s).
Zlúčenina 605p. 165 mg (37 %) vo forme bielej tuhej látky. 'H-NMR (perdeuterometanol) δ: 2,45 (m, 1H), 2,7 (m, 1H), 3,8 (m, 1H), 4,15 - 4,5 (m, 4H), 4,5 - 4,75 (m, 2H), 4,8 - 5,0 (m, 2H), 7,1 - 7,7 (m, 12H), 7,9 (d, 2H).
Zlúčenina 605q. 210 mg (66 %).
'H-NMR (perdeuterometanol) δ: 1,95 (s, 2H), 2,4 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 3,29 (s, 3H), 3,78 (m), 3,87 (široký
10S
s), 4,0 (d, 1H), 4,32 (m), 4,50 - 4,75 (m), 4,95 (m), 5,27 (široký s), 7,45 - 7,65 (m, 7H), 7,89 (d, 2H). Zlúčenina 605s. 128 mg (19 %) vo forme bielej tuhej látky.
’H-NMR (perdeuterometanol) δ: 8,5 - 7,4 (m, 13H), 5,0 (m, 1H), 4,7 (m, 1H), 4,5 (m, 2H), 4,45 - 4,4 (m, 3H), 3,8 - 3,7 (m, 2H), 2,7 (m, 1H), 2,5 (m, 1H).
Zlúčenina 605t. 132 mg (24 %) vo forme bielej tuhej látky.
'H-NMR (perdeuterometanol) δ: 7,8 - 6,7 (m, 13H), 4,9 (t, 1H), 4,75 (dd, 1H), 4,2 (dd, 1H), 4,1 (m, 2H), 3,8 (dd, 1H), 3,6 (q, 1H), 3,45 (dd, 1H), 3,3 (dd, 1H), 2,6 (m, 1H), 2,3 (m, 1H), 2,15 (s, 3H).
Zlúčenina 605v. 88 mg (28 %) vo forme bielej tuhej látky.
'H-NMR (perdeuterometanol) δ: 7,63 - 7,51 (2H, m), 7,5 - 7,35 (7H, m), 7,25 - 7,10 (3H, m), 7,1 - 7,02 (2H, m), 5,04 - 4,96 (1H, m), 4,75 - 4,57 (2H, m), 4,38 - 4,26 (2H, m), 4,24 - 4,12 (2H, m), 4,10 - 4,02 (1H, d), 3,88 - 3,80 (1H, m), 2,90 - 2,80 (2H, m), 2,78 - 2,63 (1H, m), 2,55 - 2,35 (2H, m), 2,34 - 2,22 (1H, m).
R2
Krok C
609
Zlúčeniny z tabuľky 13 sa opisujú neskôr.
Tabuľka 13
Zlúčenina R2 R3 R4 R6 R7
609a H PhCH2CH2C(O) PhCH2CH2C(O) Cl Cl
609b H CH3C(O) PhC(O) Cl Cl
Zlúčenina 609a
Krok A. Roztok zlúčeniny 204 (223 mg, 0,5 mmol) a zlúčeniny 603r (300 mg, 0,36 mmol) v 4 ml dimetylformamidu a 4 ml dichlórmetánu sa nechá reagovať s bis(trifenylfosfín)paládium(II)-chloridom (10 mg), 1 -hydroxybenzotriazolom (135 mg, 1,0 mmol) a hydrochloridom l-(3-dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodi
109 imidu (115 mg, 0,6 mmol). K reakčnej zmesi sa prikvapká tri-n-butylcínhydrid (219 mg, 0,75 mmol) a mieša sa počas 18 hodín. Reakčná zmes sa vyleje do etylacetátu a premyje sa 10 % vodným roztokom hydrogénsíranu sodného, nasýteným vodným roztokom hydrogenuhličitanu sodného a nasýteným vodným roztokom chloridu sodného, vysuší sa nad síranom sodným a zahustí vo vákuu. Po veľmi rýchlej chromatografii (silikagél, 0 až 50 % etylacetát v hexáne) sa získa 360 mg (86 %) zlúčeniny 607a vo forme peny.
Krok B. Roztok zlúčeniny 607a (360 mg) v 5 ml dichlórmetánu sa prikvapká k suspenzii 1,1,1-triacetoxy-l,l-dihydro-l,2-benzodioxol-3(lH)-ónu (362 mg, 0,85 mmol) v 20 ml dichlórmetánu. Reakčná zmes sa mieša počas 4,5-hodiny, zriedi sa dichlórmetánom a premyje sa zmesou nasýtený vodný roztok hydrogenuhličitanu sodného/nasýtený vodný roztok disiričitanu sodného (1 : 1), dvakrát nasýteným vodným roztokom hydrogenuhličitanu sodného a nasýteným vodným roztokom chloridu sodného, vysuší sa nad síranom sodným a zahustí vo vákuu. Po veľmi rýchlej chromatografii (silikagél, 20 % etylacetát v dichlórmetáne) sa získa 340 mg (95 %) ketónu 608a.
Krok C. Zlúčenina 608a (300 mg, 0,36 mmol) sa rozpustí v 25 ml zmesi 25 % kyselina trifluóroctová/dichlórmetán, mieša sa pri teplote miestnosti počas 5 hodín a zahusti sa vo vákuu. Po veľmi rýchlej chromatografii (silikagél, 0 až 5 % metanol v dichlórmetáne) sa získa 118 mg (42 %) zlúčeniny 609a vo forme bielej tuhej látky.
'H-NMR (perdeuterometanol) δ: 7,62 - 6,65 (16H, m), 4,85 - 4,7 (1H, m), 4,68 - 4,42 (2H, m), 4,40 - 4,15 (2H, m), 3,48 - 3,28 (1H, m), 3,0 - 2,9 (1H, m), 2,9 - 2,6 (4H, m), 2,55 - 2,18 (3H, m), 2,16 - 1,96 (2H, m).
Zlúčenina 609b sa pripraví zo zlúčeniny 603d podobným spôsobom ako zlúčenina 609a, pričom sa získa 287 mg (celkový výťažok 43 %) bielej tuhej látky.
'H-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid) δ: 1,6 (s, 3H), 2,7 - 3,1 (m, 2H), 3,45 (m, 1H), 4,.4 (t, 1H), 4,7 (m, 2H), 4,95 (m, 1H), 5,2 a 5,4 (2s, 1H), 7,2 - 7,65 (m, 8H), 7,9 (d, 2H), 8,8 (t, 1H), 8,9 a 9,1 (2s, 1H), 12,6 (široký s, 1H).
603
R2
611
612
110
Zlúčenina 612 sa pripraví analogickým spôsobom ako zlúčenina 607a (iba kroky A a C), pričom sa miesto zlúčeniny 603r použije zlúčenina 603m (150 mg, 0,36 mmol) a miesto zlúčeniny 606a ŕerc-butylester kyseliny (3S)-3-(alyloxykarbonylamino)-4-oxo-5-(2,6-dichlórbenzoyloxy)pentánovej (zlúčenina 610) (160 mg, 0,36 mmol) (WO 93/16710), čím sa získa zlúčenina 612 (56 %) vo forme bielej tuhej látky.
*H-NMR (deuterochloroform) δ: 7,85 - 7,10 (12H, m), 5,4 - 4,65 (4H, m), 4,6 - 4,15 (4H, m), 3,10 - 2,72 (5H, s a m).
Príklad 13
Zlúčeniny 619 - 635 sa pripravia tak, ako sa opisuje v príklade 13 a v tabuľke 14.
111
Syntéza zlúčenín 619-635
Krok A. Syntéza zlúčeniny 614. Živica TentaGel S® NH2 (0,16 mmol/g, 10,0 g) sa umiestni na sklenenú fritu a premyje sa dimetylformamidom (3 x 50 ml), 10 % (v/v) diizopropyletylamínom (DIEA) v dimetylformamide (2 x 50 ml) a nakoniec dimetylformamidom (4 x 50 ml). K živici sa pridá dostatočné množstvo dimetylformamidu, aby sa získala suspenzia, potom sa pridá zlúčenina 400 (1,42 g, 2,4 mmol) pripravená z te/'c-butylesteru kyseliny (3S)-3-(fluorenylmetoxykarbonyl)-4-oxobutánovej podľa A. M. Murfy a kol., J. Am. Chem. Soc. 114, 3156 - 3157 (1992), hydrát 1-hydroxybenzotriazolu (HOBt.H2O; 0,367 g, 2,4 mmol), 0-benzotriazol-l-yl-N,N,N,N'-tetrametyluróniumhexafluorofosfát (HBTU; 0,91 g, 2,4 mmol) a DIEA (0,55 ml, 3,2 mmol). Reakčná zmes sa pretrepáva cez noc pri teplote miestnosti pomocou trepačky. Živica sa izoluje odsatím na sklenenej frite a premyje sa dimetylformamidom (3 x 50 ml). Nezreagované aminoskupiny sa uzatvoria pomocou reakcie živice so zmesou 20 % (v/v) acetanhydrid/dimctylformamid (2 x 25 ml) priamo na frite (premývanie počas 10 minút). Živica sa premyje dimetylformamidom (3 x 50 ml) a potom sa vysuší cez noc vo vákuu, čím sa získa zlúčenina 614 (11,0 g, kvantitatívny výťažok).
Krok B. Syntéza zlúčeniny 616. Živica 614 (3,0 g, 0,16 mmol/g, 0,46 mmol) sa nechá napučať na sklenenej frite pomocou premytia dimetylformamidom (3 x 25 ml). Ochranná skupina Fmoc sa odštiepi pomocou zmesi 25 % (v/v) piperidín/dimetylformamid (15 ml) počas 10 minút (občasné premiešanie) a potom počas 20 minút s čerstvým piperidínovým činidlom (15 ml). Živica sa potom premyje dimetylformamidom (3x15 ml) a potom N-metylpyrolidónom (2 x 15 ml). Po premiestnení živice do 100 ml banky sa pridá N-metylpyrolidón, aby sa získala suspenzia, potom sa pridá zlúčenina 603u (0,736 g, 0,72 mmol), HOBt.H2O (0,112 g, 0,73 mmol), HBTU (0,279 g, 0,73 mmol) a DIEA (0,26 ml, 1,5 mmol). Reakčná zmes sa pretrepáva cez noc pri teplote miestnosti, pričom sa použije trepačka. Živica sa spracuje a uzatvorí pomocou 20 % (v/v) roztoku acetanhydridu v dimetylformamide podľa popisu uvedeného pre prípravu zlúčeniny 614, čím sa získa zlúčenina 616 (3,13 g, kvantitatívny výťažok).
Krok C. Syntéza zlúčeniny 617. Táto zlúčenina sa pripraví zo živice 616 (0,24 g, 0,038 mmol), pričom sa použije Advanced ChemTech 396 Multiple peptidový syntetizér. Automatické cykly zahŕňajú premytie živice dimetylformamidom (3 x 1 ml), odstránenie ochrannej skupiny pomocou 25 % (v/v) roztoku piperidínu v dimetylformamide (1 ml) počas 3 minút, potom čerstvým činidlom (1 ml) počas 10 minút, čím sa získa zlúčenina 617. Živica sa premyje dimetylformamidom (3 x 1 ml) a N-metylpyrolidónom (3x1 ml).
Krok D. Spôsob 1. Zlúčenina 624. Živica 617 sa acyluje 0,4M roztokom kyseliny tiofén-3-karboxylovej a 0,4M roztokom HOBt v N-metylpyrolidóne (1 ml), 0,4M roztokom HBTU v N-metylpyrolidóne (0,5 ml) a 1,6M roztokom DIEA v N-metylpyrolidóne (0,35 ml) a reakčná zmes sa pretrepáva počas 2 hodín pri teplote miestnosti. Acylačný krok sa zopakuje. Nakoniec sa živica premyje dimetylformamidom (3 x 1 ml), dichlórmetánom (3 x 1 ml) a vysuší sa vo vákuu. Zo živice sa odštiepi aldehyd a celkovo sa odstránia ochranné skupiny pomocou 95 % (v/v) roztoku kyseliny trifluóroctovej vo vode (1,5 ml) počas 30 minút pri teplote miestnosti. Po premytí živice štiepiacim činidlom (1 ml) sa spojené filtráty pridajú k studenej zmesi 1 : 1 éter/pentán (12 ml) a vzniknutá zrazenina sa izoluje pomocou odstredenia a dekantácie. Vzniknutá guľôčka sa rozpustí v zmesi 10 % acetonitril/90 % voda/0 - 1 % kyselina trifluóroctová (15 ml) a lyofilizuje sa, čím sa získa surová zlúčenina 624 vo forme bieleho prášku. Zlúčenina sa prečistí pomocou semipreparatívnej RPHPLC s kolónou Rainin Microsorb™ C[8 (5 μ, 21,4 x 250 mm), pričom elúcia sa uskutočňuje lineárnym gradientom acetonitrilu (5 - 45 %) obsahujúceho 0,1 % kyseliny trifluóroctovej (v/v) počas 45 minút pri prietoku 12 ml/min. Frakcie obsahujúce požadovaný produkt sa spoja a lyofilizujú, čím sa získa zlúčenina 624 (10,0 mg, 54 %).
Krok D. Spôsob 1A. Syntéza zlúčeniny 627. Nasledovný postup sa podobá na spôsob 1. Živica 617 sa acyluje kyselinou 4-(l-fluorenylmetoxykarbonylamino)benzoovou a reakcia sa zopakuje. Skupina Fmoc sa odstráni tak, ako sa opisuje v kroku C a voľný amín sa acyluje 20 % (v/v) acetanhydridom v dimetylformamide (1 ml) a 1,6M DIEA v N-metylpyrolidóne (0,35 ml) počas 2 hodín pri teplote miestnosti. Acylačný krok sa opakuje. Po odštiepení aldehydu zo živice sa získa zlúčenina 627 (4,2 g, 20 %).
Krok D. Spôsob 2. Syntéza zlúčeniny 632. Nasledovný postup sa podobá na spôsob 1. Živica 617 sa acyluje 0,5M cinamoylchloridom v N-metylpyrolidóne (1 ml) a 1,6M DIEA v N-metylpyrolidóne (0,35 ml) počas 2 hodín pri teplote miestnosti. Po odštiepení aldehydu zo živice sa získa zlúčenina 632. (11,1 mg, 58 %)).
Krok D. Spôsob 3. Syntéza zlúčeniny 629. Nasledovný postup sa podobá na spôsob 1. Živica 617 sa acyluje l,0M benzénsulfonylchloridom v dichlórmetáne (0,5 ml) a IM pyridínom v dichlórmetáne (0,60 ml) počas 4 hodín pri teplote miestnosti. Reakcia sa zopakuje. Po odštiepení aldehydu zo živice sa získa zlúčenina 629 (4,7 mg, 24 %).
Analytické HPLC metódy (1) Waters DeltaPak C]8, 300 A (5 μ, 3,9 x 150 mm). Lineárny gradient acetonitrilu (5 - 45 %) obsahujúci 0,1 % kyseliny trifluóroctovej (v/v) počas 14 minút pri prietoku 1 ml/min.
112
Tabuľka 14
Zl. Štruktúra Vzorec M. h. HPLC UČ in i n HS (M l H)* Postup
619 ° \ A1 pAii o Λν ľ|N C27II25N5O7 531.53 11.71 (1) 90% 532 1
620 t O 9 jW /Y u 0 u h 0 C27II25N5O7 531.53 10.44 (1) 98% 532 1
621 ~/Άο JríJ ° H ° C28H26N4O7 530.54 11.57 (1) 90% (IHNa)+ 553 2
622 ΫΧ Λ, 10 C20I126N4O0 546.54 10.19 (1) 90% (M+Na) + 569 1
623 ‘'Y í lw M H 0 J °Υθ C39H32N4010 716.71 15.0 (1) 09% (M—) 716 1
624 0 Y ŕ^l 0 ? Y í1'“ aVAW gj/ H 0 11 0 C22I122N4O7S 406.51 0.39 (1) 90% 487 1
625 A? x YYiu « jh CY C231I25N5O75 515.55 7.60 (1) 90% 516 1
62 6 Ά0 H.p 0 ? r 0 /ch ηουΥΑΑ1Λη 10) H 0 H Q C25H26N4OU 510.51 7.50 (1) 90% 511 1
627 A ? ° m Λ1 0 IÍ^N Y h/A 0 0 J II C26H27N500 537.53 7.96 (1) '90% 530 1Λ
113
Zl. Štruktúra Vzorec M. h. HPLC RČ min HS (M HD ’ Postup
620 °Π 0 0 ľ ' ? í^’1 <0U HO H 0 C25II2 4ΝΊΟ9 524.49 9.50 (1) 525 1
629 ú J? Q.ofq> A-i fvsi?Vv n\h V H 0 11 0 C23H24N4O8S 516.53 9.05 (1) 98?. 511 3
630 Hfi° (Q p ΛΟ tVj ΙΊ 0 11 0 C251126N4OT 494.51 9.25 (1) 98% 495 2
631 W-Π k Π M TII ľ αΊ II 0 11 o C24II26N4O0S 530.56 10.19 (1| 98% 531 3
632 0 Vf n o o /~θ-> II O H 0 C26II26N4O7 506.52 10.99 (1) 90?. 507 2
633 V 025112611400 510.51 11.48 (1) 98% 511 2
634 h3V° Π íl 0^1 o ľ V / CH °AwAV n o 11 o C22II26N4O9 490.47 6.07 (1) 90¾ 491 2
635 v ° n í? V 0 ľ π Γ °·' 0 H 0 H 0 C251I24N4O0 500.49 10.03 (1) 90 % 509 1
Príklad 14
Zlúčeniny 1605a-j, 1605m, 1605n, 1605p, 1605t a 1605v sa pripravia tak, ako sa opisuje.
Krok A
Krok B
114
------►
Krok D
(3S)-N-(2-oxo-3-terc-Butoxykarbonylamino-2,3,4,5-tetrahydro-lH-pyrido[3,4b][l,4]diazepín (zlúčenina 1600)
Krok A. Kyselina (2S)-2-íerc-butoxykarbonylamino-3-[(3-nitropyridin-2-yl)amino]propiónová sa pripraví podobným spôsobom ako kyselina (2S)-2-terc-butoxykarbonylamino-3-(2-nitrofenylamino)propiónová v kroku A syntézy zlúčeniny 600a/103, okrem toho, že miesto 2-fluómitrobenzénu sa použije 3-chlór-3-nitropyridín, čím sa získa 4,05 g (64 %) žltej tuhej látky.
Krok B. Kyselina (2S)-2-/erc-butoxykarbonylamino-3-(3-aminopyridin-2-yl)aminopropiónová sa pripraví podobne ako kyselina (2S)-2-terc-butoxykarbonylamino-3-(2-aminofenylamino)propiónová v kroku B syntézy zlúčeniny 600a/103, čím sa získa 3,68 g (kvantitatívne) tmavej tuhej látky.
Krok C. Metylester kyseliny (2S)-2-Zerc-butoxykarbonylamino-3-[(3-aminopyridin-2-yl)amino]propiónovej.
Roztok kyseliny (2S)-2-íerc-butoxykarbonylamino-3-[(3-aminopyridin-2-yl)amino]propiónovej (360 mg, 1,21 mmol) a metanolu (59 mg, 1,82 mmol) v bezvodom dichlórmetáne (20 ml) sa nechá reagovať so 4-dimetylaminopyridmom (DMAP; 163 mg, 1,33 mmol) a hydrochloridom l-(3-dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimidu (280 mg, 1,45 mmol). Reakčná zmes sa mieša počas 18 hodín, zriedi sa etylacetátom (150 ml), dvakrát sa premyje vodou, nasýteným vodným roztokom chloridu sodného, vysuší sa nad síranom sodným a zahustí vo vákuu. Po veľmi rýchlej chromatografii (silikagél, 0 až 5 % metanol v dichlórmetáne) sa získa 250 mg (67 %) zlúčeniny uvedenej v názve vo forme svetlohnedej látky.
Krok D. Zlúčenina 1600. Roztok metylesteru kyseliny (2S)-2-íerc-butoxykarbonylamino-3-[(3-aminopyridin-2-yl)amino]propiónovej (70 mg, 0,225 mmol) a 25 % metoxidu sodného v metanole (130 μΐ, 0,56 mmol) v bezvodom metanole (4 ml) sa zohrieva na teplotu 60 °C počas 16 hodín. Reakčná zmes sa zahustí vo vákuu, zvyšok sa rozpustí v 2 ml vody a extrahuje sa etylacetátom (trikrát). Spojené extrakty sa vysušia nad síranom sodným a zahustia vo vákuu. Po veľmi rýchlej chromatografii (silikagél, 0 až 3 % metanol v dichlórmetáne) sa získa 7,5 mg (3 %) zlúčeniny 1600 vo forme svetlohnedej tuhej látky.
‘H-NMR (perdeuterometanol) δ: 7,96 - 7,92 (IH, d), 7,75 - 7,65 (1H, široký s), 7,14 - 7,08 (1H, d), 6,73 - 6,65 (1H, m), 5,83 - 5,75 (1H, široký s), 5,4 - 5,25 (1H, široký s), 4,6 - 4,5 (1H, m), 3,95 - 3,84 (1H, m), 3,55 - 3,48 (1H, m), 1,4 (9H, s).
Krok E. Zlúčenina 1601 sa pripraví zo zlúčeniny 1600 podľa postupu v kroku D prípravy zlúčeniny 600a/103.
115
------►
Krok D
Syntéza zlúčeniny 1603. Zlúčenina 1603 sa pripraví zo zlúčeniny 1601 podľa postupu na prípravu zlúčeniny 603 zo zlúčeniny 600.
Krok B
Syntéza zlúčeniny 1605. Zlúčenina 1605 sa pripraví zo zlúčeniny 1603 podľa postupu na prípravu zlúčeniny 605 zo zlúčeniny 603.
Tabuľka 15
1605 r’ R4
a PhCH2CH2CO PhCO
b PhCH2CO PhCO
C PhCO PhCO
d CH3CO PhCO
e CH3OCH2CO PhCO
f (CH3)2CHCH2CO PhCO
g CH3COCH2CO PhCO
h CHjOCOCO PhCO
i CH3COCO PhCO
.i CHjOCO PhCO
m CH3SO3 PhCO
n ch3co Naftyl-2-CO
P PhCH2NHCO PhCO
t 3-CH3PhCH2CO PhCO
v PhCH2CH2CO PhCH2
Príklad 15
Zlúčeniny 1610 - 1621 sa pripravia zo zlúčeniny 1600 pomocou podobného postupu, ako sa pripravujú zlúčeniny 619 - 635 zo zlúčenín 600a/103 a 600b.
116
O
1610 - 1621 kde pre zlúčeniny 1610 - 1621 (a) R3 = skupina CH3C(O), (b) R3 = skupina CH3OCH2C(O),
117
CC1
cox
CrV
Príklad 16
Zlúčeniny obsahujúce bloky (el 1), (yl), (y2), (z) a (e 12) sa pripravia tak, ako sa definuje neskôr.
Príprava bloku R1, kde R1 je (el 1) a kde Y2 je =0
269
Príprava bloku R1, kde R1 je (yl) a kde Y2 je =0
nh2nh2
270
119
Príprava bloku R1, kde R1 je (y2) a kde Y2 je H2 a X7 je O
H02C\^\ • P
CO2CH3
Príprava bloku R1, kde R1 je (y2) a kde Y2 je =0 a X7 je NH
120
271
Príprava bloku R1, kde R1 je (y2) a kde Y2 je H2 a X7 je NH
Príprava bloku R1, kde R1 je (z) a kde Y2 je O
X = NHCbz
X = OCH2Ph
121
274 X7 = NH
275 X7 = O
Príprava bloku R1, kde R1 je (el2) a kde Y2 je =0 5 *^CQ>CH2Ph
Í-B11ONH2 --------------------
122
1.) H2, Pd/C
2.) PCI5
Príklad 17
Príprava zlúčenín 2001, 2002, 2100a-e a 2001 sa opisuje neskôr.
2002
Zlúčenina 2000. K roztoku íerc-butyl-9-amino-6,10-dioxo-l,2,3,4,7,-8,9,10-oktahydro-6H-pyridazino[l,2-a][l,2]diazepín-l-karboxylátu (GB 2 128 984; 340 mg, 1,15 mmol) v dichlórmetáne sa pridá kyselina 10 benzoylmravčia (260 mg, 1,7 mmol), HOBt (230 mg, 1,7 mmol) a EDC (340 mg, 1,7 mmol). Vzniknutá zmes sa mieša pri teplote miestnosti počas 16 hodín, vyleje sa do IN kyseliny chlorovodíkovej a extrahuje sa dichlórmetánom. Organické extrakty sa ďalej premyjú nasýteným roztokom hydrogenuhličitanu sodného, vysušia sa nad síranom horečnatým a odparia sa, čím sa získa zlúčenina 1999 vo forme svetložltej tuhej látky. Tuhá látka sa rozpustí v dichlórmetáne (25 ml) a kyseline trifluóroctovej (25 ml), mieša sa cez noc a zahusti 15 sa vo vákuu, čím sa získa 560 mg zlúčeniny 2000 vo forme oleja.
Zlúčenina 2001 sa pripraví zo zlúčeniny 2000 podobným spôsobom ako zlúčenina 213a, čím sa získa 410 mg (63 %) zlúčeniny 2001 vo forme bielej tuhej látky.
*H-NMR (deuterochloroform; zmes diastereomérov) δ: 8,25 (1H, d), 8,23 (1H, d), 7,78 (1H, dd), 7,65 (1H, široký m), 7,50 (2H, m), 7,40 - 7,25 (4H, m), 6,55 (1H, d), 5,57 (1H, d), 5,10 (1H, t), 5,05 - 4,95 (2H, m),
123
4,90 (1H, d), 4,80 (1H, d), 4,72 (1H, široký m), 4,65 (1H, m), 4,55 (1H, m), 4,45 (1H, t), 3,25 (1H, m), 3,15 (1H, m), 3,00 (2H, široký m), 2,90 (1H, dd), 2,70 (1H, m), 2,47 (1H, dd), 2,45 (1H, m), 2,35 (1H), 2,00 - 1,75 (4H, m), 1,60 (1H, široký m).
Zlúčenina 2002. Zlúčenina 2001 (58,6 mg, 0,10 mmol) sa nechá reagovať s 15 ml zmesi kyselina octo5 vá/acetonitril/voda (1 : 2 : 3) a mieša sa pri teplote miestnosti počas 6,5-hodiny. Reakčná zmes sa extrahuje éterom. Vodná vrstva sa zahustí pomocou azeotropického odstránenia vody, pričom sa použije acetonitril. Produkt sa suspenduje v dichlórmetáne, zahusti sa vo vákuu a vyzráža éterom, čím sa získa 46,8 mg (99 %) zlúčeniny 2002 vo forme bielej tuhej látky.
‘H-NMR (perdeuterometanol) δ: 9,05 (0,25H, d), 8,15 (1H, d), 7,68 (1H, t), 7,64 (0,25H, d), 7,55 (3H, t), 10 7,35 (0,5H, m), 5,22 (1H, t), 4,90 (1H, m), 4,58 (1H, dd), 4,50 (1H, m), 4,28 (1H, široký m), 3,45 (1H, m),
3,10 (1H, široký t), 2,68 (1H, ddd), 2,60 - 2,45 (2H, m), 2,30 (1H, dd), 2,15 - 2,05 (2H, m), 1,90 (2H, široký m), 1,68 (1H, široký m).
214e
2100
2100a R1
O
OPr-/
OMe
2100d R1
OPr-/
Zlúčenina 2100a. Roztok zlúčeniny 214e (101 mg, 0,23 mmol) v izopropanole (10 ml) sa mieša pri teplote miestnosti s katalytickým množstvom kyseliny p-toluénsulfónovej (10 mg). Po 75 minútach sa reakčná 20 zmes naleje do nasýteného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a extrahuje sa dichlórmetánom. Spojené extrakty sa vysušia nad síranom sodným a zahustia. Po veľmi rýchlej chromatografii (silikagél, dichlórmetán až etylacetát) sa získa 56 mg (51 %) zlúčeniny 2100a vo forme bielej tuhej látky.
’H-NMR (deuterochloroform) δ: 7,9 - 7,8 (2H, m), 7,6 - 7,5 (1H, m), 7,5 - 7,4 (2H, m), 7,1 (0,5H, d), 6,9 (0,5H, d), 6,4 (0,5H, d), 5,6 (0,5H, d), 5,3 (0,5H, s), 5,2 - 5,1 (1H, m), 4,95 (0,5H, m), 4,75 - 4,5 (1,5H, m), 25 4,35 (0,5H, t), 4,1 (0,5H, m), 3,98 (0,5H, m), 3,3 - 2,75 (4H, m), 2,5 - 2,4 (2H, m), 2,25 (1H, m), 2,1 - 1,9 (3H, m), 1,75 - 1,55 (2H, m).
Zlúčenina 2100b. Roztok zlúčeniny 214e (16 mg, 0,036 mmol) v etanole (2 ml) sa mieša pri teplote miestnosti s katalytickým množstvom kyseliny p-toluénsulfónovej (2 mg). Po 5 dňoch sa reakčná zmes naleje do nasýteného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a extrahuje sa dichlórmetánom. Spojené extrakty sa vy30 sušia nad síranom sodným a zahustia sa. Po veľmi rýchlej chromatografii (silikagél, dichlórmetán/ctylacetát 95 : 5 v/v) sa získa 16 mg (81 %) zlúčeniny 2100b vo forme bielej tuhej látky.
’H-NMR (deuterochloroform) δ: 7,85 - 7,74 (2H, m), 7,55 - 7,38 (3H, m), 7,04 - 6,95 (1H, d), 6,61 - 6,48 (1H, d), 5,15 - 5,08 (1H, m), 4,63 - 4,53 (1H. m), 4,52 - 4,45 (1H, m), 4,42 - 4,35 (1H, m), 4,15 - 4,05 (2H, m), 3,74 - 3,60 (2H, m), 3,57 - 3,42 (2H, m), 3,39 - 3,28 (1H, m), 3,03 - 2,93 (1H, m), 2,92 - 2,82 (1H, m), 35 2,65 - 2,52 (2H, m), 2,42 - 2,25 (1H, m), 2,20 - 1,88 (4H, m), 1,76 - 1,50 (2H, m), 1,35 - 1,10 (9H, m).
Zlúčenina 2100c. Roztok zlúčeniny 214e (165 mg, 0,37 mmol) v metanole (5 ml) sa mieša pri teplote miestnosti s katalytickým množstvom kyseliny p-toluénsulfónovej (17,5 mg). Po 4 dňoch sa reakčná zmes zriedi etylacetátom a premyje 10 % roztokom hydrogenuhličitanu sodného (trikrát) a soľankou. Spojené extrakty sa vysušia nad síranom sodným a zahustia sa. Po veľmi rýchlej chromatografii (silikagél, etylacetát) sa
124
SK 287195 Β6 získa 127 mg (68 %) zlúčeniny 2100c vo forme bielej tuhej látky.
'H-NMR (deuterochloroform) δ: 7,82 (2H, d), 7,55 - 7,50 (1H, m), 7,47 - 7,43 (2H, m), 7,02 (1H, d), 6,53 (1H, d), 5,20 - 5,10 (1H, m), 4,56 - 4,50 (1H, m), 4,45 - 4,50 (1H každý, 2m), 3,69 (3H, s), 3,41 (3H, s), 3,43 (3H, s), 3,35 - 3,25 (1H, m), 3,06 - 2,98 (1H, m), 2,94 - 2,83 (1H, m), 2,65 - 2,53 (2H, m), 2,35 - 2,32 (1H, m), 2,15 - 2,07 (4H, m), 2,00 - 1,89 (3H, m), 1,75 - 1,56 (2H, m).
Zlúčenina 2100d. Roztok zlúčeniny 214e (53 mg, 0,12 mmol) v izopropanole (5 ml) sa mieša pri teplote 50 °C s katalytickým množstvom kyseliny μ-toluénsulfónovej (5 mg). Po 3 dňoch sa reakčná zmes naleje do nasýteného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a extrahuje sa dichlórmetánom. Spojené extrakty sa vysušia nad síranom sodným a zahustia sa. Po veľmi rýchlej chromatografii (silikagél, dichlórmetán/etylacetát 4 : 1 až 1 : 1) sa získa 49 mg (68 %) zlúčeniny 2100d vo forme bielej tuhej látky.
'H-NMR (deuterochloroform) δ: 7,85 (2H, d), 7,50 - 7,43 (1H, m), 7,41 - 7,35 (2H, m), 7,02 (1H, d), 6,47 (1H, d), 5,13 - 5,07 (1H, m), 5,00 - 4,9 (1H, m), 4,61 - 4,55 (2H, m), 4,37 - 4,30 (1H, m), 3,80 - 3,70 (1H, m), 3,90 - 3,80 (1H, m), 3,42 - 3,35 (1H, m), 3,03 - 2,93 (1H, m), 2,91 - 2,81 (1H, m), 2,62 - 2,50 (2H, m), 2,38 -
- 2,33 (1H, m), 2,12 - 2,06 (1H, m), 1,97 - 1,81 (3H, m), 1,70 - 1,60 (2H, m), 1,28 - 1,05 (18H, m).
Zlúčenina 2100e sa pripraví zo zlúčeniny 302 pomocou spôsobu použitého na prípravu zlúčeniny 304a, okrem toho, že sa miesto metanolu a trimetylortoformiátu použije etanol a trietylortoformiát. Po chromatografii (silikagél, 5 % etanol/dichlórmetán) sa získa 92 mg (68 %) bielej tuhej látky.
’H-NMR (deuterochloroform; zmes diastereomérov) δ: 7,90 - 7,80 (2H, m), 7,60 - 7,50 (1H, m), 7,50 - 7,40 (2H, m), 7,30 (0,5H, d), 7,00 (0,5H, d), 6,50 (0,5H, d), 5,50 (0,5H, d), 5,20 - 5,10 (1,5H, m), 4,95 (0,5H, m), 4,75 - 4,65 (0,5H, m), 4,65 - 4,50 (1H, m), 4,38 (0,5H, T), 4,00 - 3,90 (0,5H, m), 3,85 - 3,75 (0,5H, m), 3,75 -
- 3,65 (0,5H, m), 3,65 - 3,55 (0,5H, m), 3,30 - 2,70 (4H, m), 2,50 - 2,35 (2H, m), 2,30 (1H, d), 2,15 - 1,90 (3H, m), 1,80 - 1,60 (2H, m), 1,25 - 1,20 (3H, 2t).
600b
Zlúčenina 2201 sa pripraví zo zlúčeniny 600b pomocou spôsobu použitého na prípravu zlúčeniny 605b. 'H-NMR (deuterochloroform) δ: 8,30 - 8,22 (1H, m), 8,05 - 7,98 (1H, d), 7,96 - 7,83 (1H, m), 7,77 - 7,68 (1H, m), 7,67 - 7,40 (7H, m), 5,12 - 5,02 (1H, m), 4,98 - 4,41 (5H, m), 4,38 - 4,24 (1H, m), 4,07 - 4,00 (1H, d), 3,92 - 3,80 (2H, m), 3,32 (3H, s), 2,75 - 2,60 (1H, m), 2,58 - 2,35 (1H, m).
Príklad 18
Pre vybrané zlúčeniny podľa predkladaného vynálezu sme použitím tu opísaných spôsobov (tabuľka 16, pozri príklad 7; tabuľky 17 a 18, pozri príklady 1 až 4) získali nasledovné údaje. Štruktúry a spôsoby prípravy zlúčenín podľa predkladaného vynálezu sa opisujú v príkladoch 28 až 31.
Tabuľka 16. Porovnanie účinnosti proliečiv pri LPS stimulovaných myšiach: Inhibícia vylučovania IL-1β. Percentuálna inhibícia vylučovania IL-Ιβ po liečbe zlúčeninou podľa predkladaného vynálezu sa uvádza ako funkcia času po LPS stimulácii („-“ znamená, že v príslušnom čase sa nezískala žiadna hodnota).
Čas podania zlúčeniny (vzhľadom na čas LPS stimulácie, PO, 50 mg/kg)
Zlúčenina -2h -1 h Oh + 1 h
213f (-4) 8
213h 9 53
213i (-11) 62
213k 0 68
2131 (-18) 80
213m 26 42
213o 4 8
213p 21 29
213q 17 91
213r 59 37
125
Zlúčenina -2 h -1 h Oh + 1 h
213x 0 78 -
213y 29 50 -
214e 39 43 44 70 48 75 11 47
214k 12 31
2141 0 54
214m 0 17
214w 11 91
2641 0 23
404 55 6 56
412 0 11 0 37
418 25 52 64
434 0 63 80
450 0 35
452 28 89 70
456 41 69 56
470 0 36
471 0 36
475 0 15
481 27 0
486 19 15
487 17 20
528 25 67
550f 0 50
550h 55 73
550i (-10) 23
550k 36 34
5501 9 38
550m 45 52
550n 19 65
550o 19 64
550p 30 60
655 0 68
656 31 16
662 41 75
668 - - 53
695a 49 78
1015 15 28
2001 64 62 58 55
2001a 10 16
2002 5 87
2100h 34 32
2100i 19 74
2100j 48 41 0 33
2100k 30 50 32 72
21001 52 - 28 -
2100m 40 - 42 -
2100n 21 9 64 73
2100o 31 44 68 64
126
Tabuľka 17. Údaje pre vybrané zlúčeniny podľa predkladaného vynálezu získané použitím spôsobov opísaných v príkladoch 1 až 4
Zlúčenina UV-vid. K; (nM) Bunky PBMC priem. IC50 (nM) Úplná ľudská krv IC50 (nM) Odbúranie pri myšiach i. v. ml/min./kg Odbúranie pri potkanoch i. v. ml/min./kg
213f 3000
213g 2200
213h 1500
213i 1100
213j
213k 2000
2131 2000
213m 2500
213o 5000 3300
213p <300
213q <300
213r <300
213v 0,5 1,100 1100 41 23
213x 4500 2500
213y 930
214j 4,2 2500 6000
214k 0,2 500 580 22
2141 6 1900 1100 12
214m 1,5 530 2200 33,4
214w 0,6 620 370 15
246b 30000 > 30000 87
2641 3000
265a 2600 25000
265c 1100 4500 32
265d 500 1500 35
265f 1200 24
280b 13000
280c 10000 86
280d 25000
283b 1750 41
283c 4000 50
283d >8000 10000
308c 3000
308d 3000
500 25 1800 1800
501 2,5 1800 1600
505c 1500
505d > 20000
505f 550
510a 65 200 267
510d 2300 > 20000
511c 730 > 20000 78 40
528 2200
550f 1100
550h 1800
550i 1400
550k 3000
5501 750
550m 2000
550n <300
550o 450 3000
127
Zlúčenina UV-vid. K, (nM) Bunky PBMC priem. IC50 (nM) —/ Úplná ľudská krvIC50 (nM) Odbúranie pri myšiach i. v. ml/min./kg Odbúranie pri potkanoch i. v. ml/min./kg
550p 2900
550q 700
640 155 2250 3900
642 35 8000 2900
645 150
650 550 4000
653 30 2300 6000
655
656 0,6 2100 1600 2,9
662 0,5 1800 800 2,75
668 9 5200 3700 29
669 14 10000
670 4500
671 5 2000 2500 33,2
677 610
678 5 2700 2200
680
681 9 3000 5000
682 1300
683 400 > 20000 > 20000
684 15 5000 2800
686 4 4000 9000
688a 3000
688b 1300
689a 0,8 910 2500
689b 2,2 600 2000
690a 1600
690b
691a 2,1 2900 1200 9,9
691b 11,5 1,900 1400
692a
692b 1800
693
694 3 2600 2100
695a
695b
695c 2500
696 4,5 2000 2900 13
700 275
701 90
702 45 >5000 20000
703 5 1400 20000
704 30 2600 9800
705 5 2300 3200
706 5 2400 5800
707 180
708 140
709 10 2100 14000
710 110
711 175
910 10 3400 3800
911 9 3500 1900
912 10 4200 3800
913 4,5 2400 7000
128
SK 287195 Β6
Zlúčenina UV-vid. K (nM) Bunky PBMC priem. IC50 (nM) —T---------- Úplná ľudská krv IC50 (nM) Odbúranie pri myšiach i. v. ml/min./kg Odbúranie pri potkanoch i. v. ml/min./kg
914 5,2 2600 2800
915 11,5 > 8000 1900
918 7 1150
919 4 2000 4300
920 16 2100 3000
921 8,5 1800 3000
1018 170 4000 5500 9,1
1052 100 2500 16
1053 27 2000 > 20000 34
1056 170 17
1075 120 5000 5500 14,5
1095 360 6000 28
1105 250 3500 3000
1106 75 4000 1700
1107 65
1108 22 1400 2600
1109 80
1110 45
1111 18 6050 4400
1112 3,5 1800 2300
1113 290
1114 125
1115 250
1116 215
1117 35 1700 1300
1118 380
1119 515
1120 95
1121 170
1122 400
1123 30 2,400 4500
1124 270
1125 55 2300 9000
2001a 3000
2100f
2100g
21001i 2000
2100i
2100j 30000 12000
2100k 520 4000 600
21001 750 2200
2100m
2100n 670 770 4000
2100o 670 1150 1500
Pre vybrané zlúčeniny podľa predkladaného vynálezu sme použitím spôsobov opísaných v predkladanom vynáleze (pozri príklady 1 až 4) získali nasledovné údaje (tabuľka 18). Štruktúry a spôsoby prípravy zlúčenín podľa predkladaného vynálezu sa opisujú v príkladoch 28 až 31.
129
Tabuľka 18
Zlúčenina Fluoresc. test Kinact m^s'1 Bunky PBMC priem. IC5o (nM) Úplná ľudská krv IC50 (nM) Odbúranie pri myšiach i. v. ml/min./kg Odbúranie pri potkanoch i. v. ml/min./kg
286 370000 300 1600 119
505b 190000 1500 2100 161 196
5O5e 420000 9000 1000
Príklad 19
In vivo akútna skúška na účinnosť ako protizápalové činidlo
Výsledky z tabuľky 19 ukazujú, že zlúčeniny 412f, 412d a 696a inhibujú vylučovanie IL-1 β pri LPS stimulovaných myšiach po orálnom podávaní, pričom sa ako nosiče použijú etanol/PEG/voda, β-cyklodextrín, labrosol/voda alebo cremofor/voda.
Zlúčeniny sa podávajú počas LPS stimulácie. Postup sa opisuje v príklade 7.
Tabuľka 19. Inhibícia (%) vylučovania IL-1 β pri LPS stimulovaných myšiach.
Zlúčenina 10 mg/kg dávka 25 mg/kg dávka 50 mg/kg dávka
412f 17% 25% 32%
412e 5% 17% 61 %
696a 0 45% 52%
Príklad 20
Peritoneálny karagénový zápal pri myšiach
Zápal sa pri myšiach vyvolal intraperitoneálnou (IP) injekciou 10 mg karagénu v 0,5 ml soľanky (Griswold a kol., Inflammation 13, str. 727 - 739 (1989)). Liečivá sa podávali orálne, pričom sa ako nosiče použili etanol/PEG/voda, β-cyklodextrín, labrosol/voda alebo cremofor/voda. Myši sa usmrtili 4 hodiny po podaní karagénu, potom sa im injektovali IP 2 ml soľanky obsahujúcej 5U/ml heparínu. Po jemnej masáži peritonea sa urobil malý rez, obsah sa odobral a objem sa zapísal. Vzorky sa pred odstredením (130 x g, 8 minút pri teplote 4 °C) umiestnili na ľade, aby sa odstránil bunkový materiál a vzniknutý supematant sa skladoval pri teplote -20 °C. Hladina IL-1 β v peritoneálnej kvapaline sa určila pomocou ELISA.
Výsledky v tabuľke 20 ukazujú, že proliečivo 412f inhibuje vylučovanie IL-1 β pri myšiach stimulovaných karagénom po orálnom podaní lieku. Zlúčenina 214e neinhibuje vylučovanie IL-Ιβ, ak sa podáva orálne v množstve 50 mg/kg.
Tabuľka 20. Inhibícia (%) vylučovania IL-Ιβ zlúčeninami 412f a 412d pri myšiach stimulovaných karagénom
Dávka (mg/kg) Zlúčenina 412f Zlúčenina 412d
1 30% 0
10 54% 32%
25 49% 31 %
50 73 % 36%
100 75% 53%
Príklad 21
Artritída vyvolaná kolagénom typu II
Artritída vyvolaná kolagénom typu II sa vyvolala pri samiciach DBA/1J myší tak, ako opísali Wooley a Geiger (Wooley, P. H., Methods m Enzymology 162, str. 361 - 373 (1988) a Geiger, T., Clinical and Experimental Rheumatology 11, str. 515 - 522 (1993)). Kolagén typu II z hrudnej kosti kurčiat (4 mg/kg v lOmM kyseline octovej) sa emulguje s rovnakým objemom Freundovho kompletného adjuvans (FCA) opakovaným priechodom (400) medzi dvoma 10 ml sklenenými striekačkami s dvojstredovou ihlou s veľkosťou 16. Myši sa imunizovali intradermálnou injekciou (50 pl; 100 μΐ CII na myš) emulzie kolagénu o 21 dní neskôr na kontralaterálnej strane chvosta. Liečivo sa podávalo dvakrát denne (10, 20 a 50 mg/kg) orálne, približne po 7 hodinách. Ako nosiče sa použili etanol/PEG/voda, β-cyklodextrín, labrosol/voda alebo cremofor/voda. Lieč
130 ba sa začala 2 hodiny po CII opakovanej imunizácii. Zápaly predného páru končatín sa rozdelili do stupnice 1 až 4 podľa vzrastajúcej závažnosti a priradený stupeň sa pridal k celkovému hodnoteniu.
Výsledky na obrázkoch 12, 13 a 14 ukazujú, že proliečivá 412f, 412d a 696a inhibujú zápal pri kolagénom vyvolanej artritíde pri myšiach po orálnom podávaní. Zlúčenina 214e zápal neinhibuje, ak sa podáva (50 mg/kg) jedenkrát denne orálne.
Príklad 22
In vivo určenie biologickej využiteľnosti
Liečivo (10 - 100 mg/kg) sa podávalo orálne potkanom (10 ml/kg), pričom sa ako nosiče použili etanol/PEG/voda, β-cyklodextrín, labrosol/voda alebo cremofor/voda. Vzorky krvi sa odoberali z krčnej tepny 0,25, 0,50, 1, 1,5, 2, 3, 4, 6 a 8 hodín po podávam, odstredili sa na plazmu a pred analýzou sa skladovali pri teplote - 70 °C. Koncentrácie aldehydu sa stanovili použitím enzymatickej skúšky. Farmakokinetická analýza údajov sa uskutočňovala pomocou nelineárnej regresie použitím RStrip (MicroMath Software, UT). Hodnoty využiteľnosti liečiva sa určili nasledovne: (AUC liečiva po orálnom podaní proliečiva/AUC liečiva po i. v. podaní liečiva) x (dávka i. v./dávka p. o.) x 100 %.
Výsledky v tabuľke 21 ukazujú, že proliečivá 412f, 412d a 696a poskytujú významnú hladinu liečiva v krvi a majú dobrú využiteľnosť liečiva pri orálnom podávaní. Hladina zlúčeniny 214e v krvi sa pri orálnom podávaní nezistila.
Tabuľka 21. Orálna biologická využiteľnosť zlúčenín 412f, 412d, 696a a 214e pri potkanoch.
Zlúčenina dávka (mg/kg) r '-•max (pg/ml) Využiteľnosť lieku (%)
412f 25 2,4 32
412d 25 2,6 35
696a 50 1,2 10
214e 45 0,2 0,9
Príklad 23
ICE štiepi a aktivuje pro-IGIF
Expresné plazmidy ICE a homológu ICE
0,6 kb cDNA kódujúca celú dĺžku pro-IGIF myší (H. Okamura a kol., Náture 378, str. 88 (1995)) sa viaže do expresného vektora cicavcov pCDLSRa (Y. Takebe a kol., Mol. Celí. Biol. 8, str. 466 (1988)).
Vo všeobecnosti plazmidy (3 pg) kódujúce aktívny ICE (vyššie) alebo tri enzýmy TX príbuzné ICE, CPP 32 a CMH-1 v pCDLSRa expresnom vektore (C. Faucheu a kol., EMBO J. 14, str. 1914 (1995); Y. Gu a kol., EMBO J. 14, str 1923 (1995); J. A. Lippke a kol., J. Biol. Chem. 271, str. 1825 (1996)) sa transfekujú do subkonfluentných monovrstiev buniek Cos v 35 mm miskách, pričom sa použije DEAE dextránová metóda (Y. Gu a kol., EMBO J. 14, str. 1923 (1995)). O 24 hodín neskôr sa bunky rozštiepia a rozštiepená hmota sa podrobí SDS-PAGE a imunoprcnosu „immunoblotting“, pričom sa použije protilátka špecifická pre IGIF (H. Okamura a kol., Náture 378, str. 88 (1995)).
Na zavedenie Nde I na 5' a 3' konce pro-IGIF cDNA myší sa použije polymerázová reťazová reakcia, pričom sa použijú nasledovné základné jednotky: GGAATTCCATATGGCTGCCATGTCAGAAGAC (predná) a GGTTAACCATATGCTAACTTTGATGTAAGTTAGTGAG (reverzná).
Vzniknutý Nde I fragment sa viaže na E. coli expresný vektor pET-15B (Novagen) na Nde I miesto, aby sa vytvoril plazmid, ktorý riadi syntézu polypeptidu s 213 aminokyselinami obsahujúci 21-zvyšok peptidu ÍMGSSHHHHHHSSGLVPRGSHM. kde LVPRGS predstavuje miesto štiepenia trombínu) pripojeného na N-koniec pro-IGIF na Ala2, ako potvrdzuje DNA sekvencia plazmidu a N-koncová sekvencia expresných proteínov. Kmeň E. coli BL21 (DE3) nesúci plazmid sa inkubuje s 0,8 mM izopropyl-l-tio-p-D-galaktopyranozidom počas 1,5 hodiny pri teplote 37 °C, izoluje a štiepi pomocou mikrofluidizácie (Microfluidic Watertown, MA) v pufri A (20 mM fosforečnanu sodného, pH 7,0, 300 mM chloridu sodného, 2 mM ditio-treitolu, 10 % glycerolu, 1 mM fenylmetylsulfonylfluoridu a 2,5 pg/ml leupeptínu). Rozštiepený materiál sa čistí pomocou odstredenia pri 100 000 x g počas 30 minút. (His)ň-cieľový pro-IGIF proteín sa potom čistí zo supernatantu pomocou Ni-NTA-agarózovej (Qiagen) chromatografie, pričom sa použijú podmienky odporúčané výrobcom.
In vitro reakcia štiepiaca pro-IGIF
In vitro štiepiaca reakcia (30 μΐ) obsahuje 2 pg čistého pro-IGIF a rôzne koncentrácie čistých proteáz v pufri obsahujúcom 20 mM Hepes, pH 7,2, 0,1 % Triton X-100, 2 mM DTT, 1 mM PMSF a 2,5 pg/ml leupeptínu sa inkubuje počas 1 hodiny pri teplote 37 °C. Podmienky na štiepenie granzýmom B sa opisujú skôr
131 (Y. Gu a kol., J. Biol. Chem. 271, str. 10816 (1996)). Rozštiepený produkt analyzovaný pomocou SDS-PAGE na 16 % géloch a na Comassie modrej sa podrobí na N-koncovej aminokyseline sekvenovaniu, pričom sa použije ABI automatický radič peptidov a podmienky odporúčané výrobcom.
Kinetické parametre štiepenia IGIF pomocou ICE
Kinetické parametre (kkat/KM, KM a kkat) pre štiepenie IGIF pomocou ICE sa určia nasledovným spôsobom. 35S-metionínom onačený pro-IGIF (3000 cpm pripravený použitím in vitro transkripcie a translácie pomocou TNT T7-spojeného retikulocytového štiepiaceho systému (Promega) a pro-IGIF cDNA v pSP73 vektore ako templát) sa inkubuje v reakčnej zmesi (60 μΐ) obsahujúcej 0,1 až 1 nM rekombinantu ICE a 190 nM až 12 μΜ neznačeného pro-IGIF počas 8 až 10 minút pri teplote 37 °C. Koncentrácia štiepiaceho produktu sa určí pomocou SDS-PAGE a Fosfolmager analýzy. Kinetické parametre sa vypočítajú pomocou nelineárnej regresie vhodnej pre údaje rýchlosť oproti koncentrácii pre rovnicu Michelis-Mentenovej, pričom sa použije program Enzfitter (Biosoft).
IFN-γ indukčný test
A.E7 Thl bunky (H. Quill a R. H. Schwartz, J. Immunol. 138, str. 3704 (1987)) (1,3 x 10’ buniek v 0,15 ml Clickovho zásobného média s 10 % FBS, 50 μΜ 2-merkaptoetanolu a 50 U/ml IL-2) v 96 jamkovej doske sa nechá reagovať s IGIF počas 18 až 20 hodín a supematant kultúry sa testuje na IFN-γ pomocou ELISA (Endogen, Cambridge, MA).
Príklad 24
Spracovanie pro-IGIF pomocou ICE v bunkách Cos
Bunky Cos sa transfekujú rôznymi kombináciami expresných plazmidov tak, ako sa opisuje v príklade 23. Transfekované bunky Cos (3,5 x 105 buniek v 35 mm miske) sa značia počas 7 hodín 1 ml DMEM bez metionínu obsahujúcim 2,5 % normálneho DMEM, 1 % dialyzovaného fetálneho hovädzieho séra a 300 gCi/tnl 35S-metionínu (35S-Express Proteín Labeling-Mix, New England Nuclear). Bunkový lyzát (pripravený v 20 mM Hepes, pH 7,2, 150 mM chloridu sodného, 0,1 % Triton X-100, 5 mM N-etylmaleimidu, 1 mM PMSF a 2,5 pg/ml leupeptínu) alebo upravené médium sa imunozráža s anti-IGIF protilátkou, ktorá rozlíši tak prekurzor, ako aj konečnú formu IGIF (H. Okamura a kol., Náture 378, str. 88 (1995)). Imunozrážané proteíny sa analyzujú pomocou SDS-PAGE (polyakrylamidová gélová elektroforéza) a fluorografie (obr. 2A).
Merala sa aj prítomnosť IFN-γ indukujúca aktivitu bunkového lyzátu a upraveného média transfekovaných buniek (obr. 2B). Transfekované bunky Cos (3,5 x 105 buniek v 35 mm miske) sa kultivovali v 1 ml média počas 18 hodín. Médium sa zobralo a použilo v konečnom zriedení 1 : 10 pri IFN-γ indukčnej skúške (príklad 23). Granuly buniek Cos z rovnakej transfekcie sa štiepili v 100 μΐ 20 mM Hepes, pH 7,0 pomocou zmrazenia a roztopenia trikrát. Lyzát sa čistil pomocou odstredenia tak, ako sa opisuje a použil sa pri teste v zriedení 1:10.
Príklad 25
IGIF je fyziologickým substrátom ICE
Prírodný typ (ICE +/+) a (ICE -/-) myší sa injektoval teplom inaktivovaným P. acnes a z týchto myší sa izolovali Kupffcrove bunky 7 dní po injektovaní a následne sa imunologický testovali s 1 pg/ml LPS počas 3 hodín. Množstvo IGIF a upraveného média sa meralo pomocou ELISA.
Prírodný typ myší trpiacich nedostatkom ICE sa injektoval intraperitoneálne teplom usmrtenými P. acnes tak, ako sa opisuje v H. Okamura a kol., Infection and Immunity 63, str. 3966 (1995). Kupfferove bunky sa pripravili o 7 dní neskôr podľa Tsutsuiho a kol. (H. Tsutsui a kol., Hepato-Gastroenterol. 39, str. 553 (1992)) okrem toho, že sa miesto metrizamidu použil nycodenz gradient. Pre všetky experimenty sa Kupfferove bunky z 2 až 3 zvierat spojili a kultivovali v RPMI 1640 zásobnom roztoku s 10 % fetálnym hovädzím sérom a 1 μ g/ml LPS. Bunkový lyzát a upravené médium sa pripravili o 3 hodiny neskôr.
Kupfferove bunky z prírodného typu a (ICE -/-) myší sa metabolický značili 35S-metionínom ako bunky Cos (opísané v príklade 24) okrem toho, že sa miesto DMEM použil RPMI 1641 bez metionínu. IGIF imunozrážacie experimenty sa uskutočňovali na bunkových lyzátoch a upravenom médiu a imunozrážanie sa analyzovalo pomocou SDS-PAGE a fluorografie, ako sa opisuje v príklade 23 (pozri obr. 3).
Príklad 26
Indukcia vylučovania IFN-γ in vivo
LPS zmiešané s 0,5 % karboxymetylcelulózou v PBS, pH 7,4 sa podávalo myšiam pomocou intraperitoneálnej injekcie (30 mg/kg LPS) pri objeme dávky 10 ml/kg. Krv sa odoberala každé 3 hodiny počas 24 hodín zo skupiny troch ICE deficitných alebo neupravených myší. Hladina séra IFN-γ sa určila pomocou ELISA (Endogen).
132
Príklad 27
IGIF a IFN-γ inhibičný test
Inhibícia spracovania IGIF pomocou ICE inhibítorov sa merala v ICE inhibičnom teste, ako sa opisuje v príklade 1 a tabuľke 22.
PBMC test u človeka
Ľudské obalené bunky utvorené zo zrazených leukocytov sa získali od darcov krvi a periférne krvné monojadrové bunky (PBMC) sa izolovali pomocou odstredenia v LeukoPrep skúmavkách (Becton-Dickinson, Lincoln Park, NJ). PBMC (3 x 106 buniek/jamka) sa pridá do 24 jamkovej dosky s tkanivovou kultúrou Corning a po 1 hodinovej inkubácii pri teplote 37 °C sa nepriľnuté bunky odstránili opatrným premytím. Priľnuté monojadrové bunky sa stimulovali LPS (1 pg/ml) s inhibítorom ICE alebo bez neho v 2 ml RPMI- -1640 - 10 % FBS. Po 16 až 18 hodinovej inkubácii pri teplote 37 °C sa množstvo IGIF a IFN-γ určilo v kultivovanom supematante pomocou ELISA.
Použitím postupov opísaných v predkladanom vynáleze sme získali napríklad pre zlúčeninu 412 nasledovné údaje. Štruktúra zlúčeniny 412 sa opisuje neskôr.
Tabuľka 22
Zlúčenina UV-viditeľné Ki(nM) Bunky PBMC priem. IC5o (nM)
412 1,3 580
Príklad 28
Zlúčeniny podľa predkladaného vynálezu sa môžu pripraviť rôznymi postupmi. Výhodný je nasledovný spôsob:
A-II A
K roztoku A (1,1 ekvivalentu) v dichlórmetáne (alebo v dimetylformamide, alebo v zmesi dichlórmetán/dimetylformamid 1 : 1) sa pri teplote miestnosti v inertnej atmosfére (dusík alebo argón) pridá trifenylfosfín (0 až 0,5 ekvivalentu), nukleofilný lapač (2 až 50 ekvivalentov) a tetrakis(trifenylfosfln)paládium(0) (0,05 až 0,1 ekvivalentu). Po 10 minútach sa prípadne reakčná zmes zahustí, potom sa pridá roztok kyseliny A-I alebo A-II v dichlórmetáne (alebo v dimetylformamide, alebo v zmesi dichlórmetán/dimetylformamid 1 : : 1) a následne HOBt (1,1 ekvivalentu) a EDC (1,1 ekvivalentu). Vzniknutá zmes sa nechá miešať pri teplote miestnosti počas 1 až 48 hodín, pričom vznikne spojený produkt C-I alebo C-II.
V uvedenom spôsobe sa môžu použiť rôzne nukleofilné lapače (Merzouk a Guibe, Tetrahedron Lett. 33, str. 477 - 480 (1992); Guibe a Balavoin, J. Org. Chem. 52, str. 4984 - 4993 (1987)). Medzi výhodné nukleofilné lapače, ktoré sa môžu využiť, patria dimedón, morfolín, trimetylsilyldimetylamín a kyselina dimetylbarbiturová. Výhodnejšie nukleofilné lapače sú trimetylsilyldimetylamín (2 až 5 ekvivalentov) a kyselina dimetylbarbiturová (5 až 50 ekvivalentov). Ak je nukleofilným lapačom trimetylsilyldimetylamín, uvedená reakčná zmes sa musí pred pridaním A-I alebo A-II zahustiť.
133
Iné zlúčeniny podľa predkladaného vynálezu sa môžu pripraviť pomocou hydrolýzy zlúčenín vzorca C-I a C-II na zlúčeniny vzorca H-I a H-II, ako sa opisuje v nasledovnej schéme:
Hydrolýza sa môže uskutočniť použitím rôznych podmienok za predpokladu, že zahŕňajú kyselinu a vodu. Medzi kyseliny, ktoré sa môžu použiť, patrí kyselina p-toluénsulfónová, kyselina metánsulfónová, kyse10 lina sírová, kyselina chloristá, kyselina trifluóroctová a kyselina chlorovodíková. Môže sa použiť napríklad kyselina trifluóroctová (1 až 90 % hmotnostných) alebo kyseliny chlorovodíková (0,1 až 30 % hmotnostných) v zmesi acetonitril/voda (1 až 90 % hmotnostných vody) pri teplote 0 až 50 °C.
Príklad 29
Zlúčeniny 213f, 213g, 213h, 213i, 213j, 213k, 2131, 213m, 214f, 214g, 214h, 214i, 214j, 214k, 2141, 214m, 550f, 550g, 550h, 550i, 550j, 550k, 5501 a 550m sa pripravia nasledovným spôsobom:
134 (h) R4 (i) R4
(D R4 = (m) R4 =
Zlúčenina 213f sa pripraví zo zlúčeniny 212f pomocou spôsobu použitého na prípravu zlúčeniny 213e zo zlúčeniny 212e, čím sa získa 504 mg zlúčeniny 213f vo forme žltej tuhej látky.
'H-NMR (perdeuterometanol) δ: 1,10 (široký m, 0,25H), 1,30 (široký m, 2H), 1,50 (široký m, 1H), 1,65 (široký m, 1,5H), 1,80 (široký m, 0,25H), 1,90 (široký m, 0,25H), 1,95 (široký m, 0,5H), 2,05 (široký m, 0,25H), 2,15 (m, 1H), 2,3 (m, 1H), 2,5 (široký m, 1H), 2,6 (dd, 1H), 2,8 (m, 1H), 3,1 (širokým, 3H), 3,15 (široký m, 1H), 3,32 (široký s, 3H), 3,5 (m, 1H), 4,5 (široký m, 1H), 4,62 (d, 0,25H), 4,72 (m, 3H), 4,95 (m, 1H), 5,1 (široký t, 0,25H), 5,15 (široký t, 0,75H), 5,7 (d, 1H), 6,75 (d, 2H), 7,35 (široký s, 5H), 7,75 (d, 2H).
Zlúčenina 213g sa pripraví zo zlúčeniny 212g pomocou spôsobu použitého na prípravu zlúčeniny 213e zo zlúčeniny 212e, čím sa získa 400 mg zlúčeniny 213g.
'H-NMR (perdeuterometanol) δ: 1,5 (široký m, 1H), 1,65 (široký m, 2H), 1,70 (široký m, 0,25H), 1,90 (široký m, 1H), 1,95 (široký m, 1H), 2,05 (široký m, 0,25H), 2,10 (m, 1H), 2,3 (m, 1H), 2,5 (m, 2H), 2,59 (d, 1H), 2,6 (d, 1H), 2,78 (d, 1H), 2,8 (d, 1H), 2,93 (široký s, 4H), 3,05 (široký m, 1H), 3,15 (široký m, 0,25H), 3,3 (široký s, 3H), 3,5 (m, 2H), 4,5 (široký m, 2H), 4,65 (d, 1H), 4,7 (široký m, 2H), 4,95 (široký m, 1H), 5,15 (široký t, 0,25H), 5,2 (široký t, 0,75H), 5,2 (d, 1H), 6,95 (d, 1H), 7,15 (d, 1H), 7,25 (široký s, 1H), 7,3 (široký t, 2H), 7,45 (široký s, 6H).
Zlúčenina 213h sa pripraví zo zlúčeniny 212h pomocou spôsobu použitého na prípravu zlúčeniny 213e zo zlúčeniny 212e, čím sa získa 296 mg zlúčeniny 213h.
'H-NMR (deuterochloroform) δ: 1,55 - 1,68 (m, 1H), 1,7 - 2,05 (m, 3H), 2,3 - 2,5 (m, 2H), 2,65 - 2,8 (m, 1H), 2,85 - 2,93 (m, 1H), 2,95 - 3,25 (m, 3H), 4,44 - 4,65 (m, 2H), 4,68 - 4,82 (m, 1H), 4,9 - 4,95 (d, 1H), 5,05 - 5,18 (m, 2H), 5,28 (s, 0,5H), 5,55 - 5,58 (d, 0,5H), 6,52 - 6,58 (d, 0,5H), 6,7 - 6,76 (m, 2H), 6,82 - 6,85 (d, 0,5H), 7,3 - 7,4 (m, 5H), 7,52 - 7,58 (m, 1H), 7,75 (s, 0,5H), 7,8 (s, 0,5H).
Zlúčenina 213i sa pripraví zo zlúčeniny 212i pomocou spôsobu použitého na prípravu zlúčeniny 213e zo zlúčeniny 212e, čím sa získa 1,1 g zlúčeniny 213i.
'H-NMR (deuterochloroform) δ: 1,55 - 2,05 (m, 6H), 2,26 - 2,5 (m, 2H), 2,68 - 2,82 (m, 1H), 2,85 - 2,92 (m, 1H), 2,95 - 3,25 (m, 2H), 3,82 (s, 1,5H), 3,85 (s, 1,5H), 4,4 - 4,65 (m, 2H), 4,7 - 4,78 (m, 1H), 4,88 - 4,95 (m, 1H), 5,05 - 5,23 (m, 1H), 5,28 (s, 0,5H), 5,55 - 5,58 (d, 0,5H), 6,6 - 6,65 (m, 1H), 6,8 - 6,84 (m, 1H), 6,9 -
- 6,95 (m, 3H), 7,3 - 7,45 (m, 4H), 7,78 - 7,85 (m, 2H).
Zlúčenina 213j sa pripraví zo zlúčeniny 212j pomocou spôsobu použitého na prípravu zlúčeniny 213e zo zlúčeniny 212e, čím sa získa 367 mg zlúčeniny 213j.
'H-NMR (deuterochloroform) δ: 1,55 - 2,05 (m, 12H), 2,25 (d, 1H), 2,35 (m, 1H), 2,48 (m, 2H), 2,75 (m, 2H), 2,9 (m, 1H), 2,95 - 3,25 (m, 5H), 4,45 (t, 1ΙΊ), 4,5 - 4,6 (m, 4H), 4,7 (m, 1H), 4,75 (d, 1H), 4,88 (m, 1H), 5,05 (m, 2H), 5,15 (q, 1H), 5,3 (s, 1H), 5,58 (d, 1H), 6,5 (d, 1H), 6,9 (d, 1H), 7,05 (d, 1H), 7,25 - 7,35 (m, 5H), 7,6 (s, 2H), 7,7 (s, 2H).
Zlúčenina 213k sa pripraví zo zlúčeniny 212k pomocou spôsobu použitého na prípravu zlúčeniny 213e zo zlúčeniny 212e, čím sa získa 593 mg zlúčeniny 213k.
'H-NMR (perdeuterometanol) δ: 1,5 (m, 1H), 1,6 - 1,7 (m, 2H), 1,75 - 1,95 (m, 4H), 2,15 (m, 2H), 2,3 (m, 1H), 2,6 (m, 1H), 2,7 (m, 1H), 3,05 (m, 2H), 3,15 (m, 1H), 3,5 (m, 2H), 4,44 (m, 2H), 4,65 (d, 1H), 4,7 (m, 1H), 4,95 (m, 1H), 5,15 (m, 1H), 5,4 (s, 1H), 5,7 (d, 1H), 7,3 (m, 5H), 7,85 (s, 2H).
Zlúčenina 2131 sa pripraví zo zlúčeniny 2121 pomocou spôsobu použitého na prípravu zlúčeniny 213e zo zlúčeniny 212e, čím sa získa 133 mg zlúčeniny 2131.
'H-NMR (deuterochloroform) δ: 1,55 - 1,7 (m, 1H), 1,75 - 2,05 (m, 3H), 2,25 (s, 1,5H), 2,27 (s, 1,5H), 2,3 -
- 2,48 (m, 2H), 2,7 - 2,83 (m, 1H), 2,85 - 2,94 (dd, 1H), 2,95 - 3,25 (m, 2H), 4,42 - 4,65 (m, 2H), 4,68 - 4,85 (m, 1H), 4,88 - 4,95 (m, 1H), 5,05 - 5,18 (m, 2H), 5,32 (s, 0,5H), 5,55 - 5,6 (d, 0,5H), 6,48 - 6,55 (d, 1H), 6,88 - 6,92 (d, 1H), 7,0 - 7,04 (d, 0,5H), 7,15 - 7,2 (d, 0,5H), 7,3 - 7,4 (m, 4H), 7,64 - 7,78 (m, 2H), 7,88 -
- 7,94 (m, 1H), 8,45 - 8,56 (m, 1H).
135
Zlúčenina 213m sa pripraví zo zlúčeniny 212m pomocou spôsobu použitého na prípravu zlúčeniny 213e zo zlúčeniny 212e, čím sa získa 991 mg zlúčeniny 213m.
‘H-NMR (deuterochloroform) δ: 1,5 - 2,15 (m, 5H), 2,2 - 2,55 (m, 3H), 2,6 - 3,3 (m, 4H), 3,95 (2s, 3H),
4.45 - 4,7 (m, 211), 4,7 - 4,85 (m, 1H), 4,85 - 4,95 (m, 1H), 5,05 - 5,25 (m, 1H), 5,3 (s, 0,5H), 5,6 (d, 0,5H), 6,55 (d, 0,5H), 6,85 (d, 0,5H), 7,0 (d, 0,5H), 7,25 - 7,6 (m, 5,5H), 7,75 (s, 1H), 7,85 (s, 1H).
Zlúčenina 550f sa pripraví zo zlúčeniny 212f pomocou spôsobu použitého na prípravu zlúčeniny 213e zo zlúčeniny 212e, čím sa získa 420 mg zlúčeniny 550f vo forme bielej tuhej látky.
'H-NMR (deuterochloroform) δ: 1,2 - 1,25 (široký t, 3H), 1,35 (m, 1H), 1,55 (široký m, 1H), 1,88 - 2,02 (široký m, 4H), 2,3 (d, 1H), 2,35 (m, 1H), 2,45 (nm, 1H), 2,55 - 2,75 (m, 3H), 3,0 (s, 6H), 3,25 (m, 1H), 3,55 (m, 1H), 3,65 (m, 1H), 3,75 (m, 1H), 3,9 (m, 1H), 4,3 (t, 1H), 4,55 (m, 2H), 4,68 (širokým, 1H), 4,95 (široký m, 1H), 5,1 (široký m, 2H), 5,45 (d, 1H), 6,5 (m, 2H), 7,7 (m, 2H).
Zlúčenina 550h sa pripraví zo zlúčeniny 212h pomocou spôsobu použitého na prípravu zlúčeniny 213e zo zlúčeniny 212e, čím sa získa 195 mg zlúčeniny 550h vo forme bielej tuhej látky.
'H-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid) δ: 1,1 - 1,18 (2t, 3H), 1,6 - 1,7 (m, 2H), 1,88 - 2,05 (m, 2H), 2,1 - 2,35 (m, 3H), 2,48 - 2,56 (m, 1H), 2,75 - 2,8 (m, 0,75H), 2,88 - 3,08 (m, 1,25H), 3,25 - 3,4 (m, 1H), 3,55 - 3,8 (m, 2H), 4,35 - 4,45 (m, 1H), 4,55 - 4,62 (m, 1H), 4,8 - 4,88 (m, 1H), 4,98 - 5,03 (m, 0,25H), 5,1 - 5,13 (m, 0,75H), 5,33 (s, 0,25H), 5,58 - 5,6 (d, 0,75H) 5,9 - 6,0 (široký s, 2H), 6,8 - 6,85 (d, 1H), 7,58 - 7,62 (d, 1H), 7,82 (s, 1H), 8,22 - 8,28 (d, 1H), 8,48 - 8,52 (d, 0,75H), 8,72 - 8,76 (d, 0,25H).
Zlúčenina 550i sa pripraví zo zlúčeniny 212i pomocou spôsobu použitého na prípravu zlúčeniny 213e zo zlúčeniny 212e, čím sa získa 135 mg zlúčeniny 550i.
'H-NMR (deuterochloroform) δ: 1,18 - 1,28 (2t, 3H), 1,6 -1,75 (m, 1,5H), 1,9 - 2,1 (m, 3,5H), 2,22 - 2,3 (d, 0,5H), 2,38 - 2,47 (m, 1,5H), 2,7 - 2,8 (m, 0,5H), 2,8 - 2,93 (m, 1H), 2,94 - 3,15 (m, 1,5H), 3,15 - 3,28 (m, 1H), 3,55 - 3,62 (q, 0,5H), 3,62 - 3,73 (q, 0,5H), 3,78 - 3,88 (q, 0,5H), 3,88 (s, 3H), 3,9 - 3,95 (q, 0,5H), 4,33
- 4,4 (m, 0,5H), 4,5 - 4,55 (m, 1H), 4,68 - 4,76 (m, 0,5H), 4,9 - 4,95 (m, 0,5H), 5,1 - 5,2 (m, 1,5H), 5,18 (s, 0,5H), 5,48 - 5,52 (d, 0,5H), 6,48 - 6,55 (d, 0,5H), 6,85 - 6,9 (m, 1H), 6,9 - 6,95 (m, 2H), 7,34 - 7,38 (d, 0,5H), 7,78 - 7,85 (m, 2H).
Zlúčenina 550k sa pripraví zo zlúčeniny 212k pomocou spôsobu použitého na prípravu zlúčeniny 213e zo zlúčeniny 212e, čím sa získa 174 mg zlúčeniny 550k vo forme bielej tuhej látky.
'H-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid) δ: 1,15 (2t, 3H), 1,6 - 1,75 (m, 2H), 1,9 - 2,05 (m, 2H), 2,1 - 2,4 (m, 5H), 2,5 - 2,55 (m, 1H), 2,7 - 2,8 (m, 0,5H), 2,85 - 3,0 (m, 1H), 3,0 - 3,1 (m, 0,5H), 3,55 - 3,7 (m, 1H), 3,7 -
- 3,8 (m, 1H), 4,2 (t, 0,5H), 4,35 - 4,45 (m, 0,5H), 4,55 - 4,65 (m, 0,5H), 4,8 - 4.9 (m, 0,5H), 5,05 (t, 0,5H), 5,15 (t, 0,5H), 5,35 (s, 0,5H), 5,6 (d, 0,5H), 7,95 (s, 2H), 8,5 (d, 0,5H), 8,65 (d, 1H), 8,75 (d, 0,5H), 10,9 (široký s, 1H).
Zlúčenina 5501 sa pripraví zo zlúčeniny 2121 pomocou spôsobu použitého na prípravu zlúčeniny 213e zo zlúčeniny 212e, čím sa získa 151 mg zlúčeniny 5501.
'H-NMR (deuterochloroform) δ: 1,2 - 1,28 (2t, 3H), 1,6 - 1,72 (m, 1,5H), 1,88 - 2,15 (m, 3,5H), 2,22 - 2,28 (m, 0,5H), 2,28 (s, 3H), 2,38 - 2,48 (m, 1,5H), 2,66 - 2,92 (m, 1,5H), 2,95 - 3,14 (m, 1,5H), 3,2 - 3,34 (m, 1H), 3,56 - 3,63 (q, 0,5H), 3,63 - 3,72 (q, 0,5H), 3,8 - 3,85 (q, 0,5H), 3,9 - 3,95 (q, 0,5H), 4,32 - 4,38 (m, 0,5H), 4,5 - 4,62 (m, 1H), 4,68 - 4,75 (m, 0,5H), 4,88 - 4,92 (m, 0,5H), 5,08 - 5,2 (m, 1,5H), 5,18 (s, 0,5H),
5.46 - 5,5 (d, 0,5H), 6,5 - 6,55 (d, 0,5H), 6,98 - 7,05 (m, 1H), 7,42 - 7,48 (d, 0,5H), 7,63 - 7,78 (m, 2,5H), 7,9
- 7,94 (d, 0,5H), 8,44 - 8,52 (m, 1H).
Zlúčenina 550m sa pripraví zo zlúčeniny 212m pomocou spôsobu použitého na prípravu zlúčeniny 213e zo zlúčeniny 212e, čím sa získa 301 mg zlúčeniny 550m vo forme bielej tuhej látky.
'H-NMR (deuterochloroform) δ: 1,2 - 1,35 (2t, 3H), 1,5 - 1,8 (m, 2H), 1,9 - 2,15 (5H), 2,25 (d, 0,5H), 2,4 -
- 2,5 (m, 2H), 2,65 - 2,8 (m, 0,5H), 2,8 - 3,0 (m, 0,5H), 3,0 - 3,2 (m, 1H), 3,2 -3,35 (m, 0,5H), 3,55 - 3,65 (m, 0,5H), 3,65 - 3,75 (m, 0,5H), 3,8 - 3,9 (m, 0,5H), 3,9 - 4,0 (m, 0,5H), 4,85 - 4,95 (m, 0,5H), 5,05 - 5,2 (m, 0,5H), 5,2 (s, 0,5H), 5,5 (d, 0,5H), 6,5 (d, 0,5H), 6,9 (d, 0,5H), 6,95 (d, 0,5H), 7,35 (d, 0,5H), 7,75 (s, 1H), 7,85 (s, 1H).
Zlúčenina 214j sa pripraví zo zlúčeniny 213j pomocou spôsobu použitého na prípravu zlúčeniny 2002 zo zlúčeniny 2001, čím sa získa 62 mg zlúčeniny 214j vo forme bielej tuhej látky.
'H-NMR (perdeuterometanol) ô: 0,9 (t, 1H), 1,3 (široký s, 1H), 1,7 (široký m, 1H), 1,9 (široký m, 1H), 2,1 (široký s, 1H), 2,25 (q, 1H), 2,35 (m, 1H), 2,48 (m, 2H), 2,65 (t, 1H), 3,15 (široký t, 1H), 3,5 (široký m, 1H),
4.3 (široký s, 1H), 4,55 (m, 2H), 4,95 (t, 1H), 5,25 (široký s, 1H), 7,6 (široký s, 1H), 7,85 (široký s, 1H).
Zlúčenina 214k sa pripraví zo zlúčeniny 213k pomocou spôsobu použitého na prípravu zlúčeniny 2002 zo zlúčeniny 2001, čím sa získa 80 mg zlúčeniny 214k vo forme bielej tuhej látky.
'H-NMR (perdeuterometanol) δ: 1,6 - 1,7 (m, 1H), 1,8 - 2,0 (m, 2H), 2,0 - 2,1 (m, 2H), 2,15 - 2,25 (m, 1H),
2.3 - 2,4 (m, 1H), 2,4 - 2,55 (m, 2H), 2,6 - 2,75 (m, 1H), 3,05 - 3,2 (m, 1H), 3,4 - 3,6 (m, 2H), 4,2 - 4,3 (m, 1H), 4,45 - 4,6 (m, 1H), 4,8 - 5,0 (m, 1H), 5,1 - 5,2 (m, 1H), 7,85 (s, 2H).
Zlúčenina 2141 sa pripraví zo zlúčeniny 2131 pomocou spôsobu použitého na prípravu zlúčeniny 2002 zo zlúčeniny 2001, čím sa získa 91 mg zlúčeniny 2141 vo forme bielej tuhej látky.
136 'H-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid) δ: 1,65 (široký m, 6H), 1,9 (široký m, 6H), 2,15 (s, 3H), 2,3 (m, 3H), 2,6 - 2,85 (m, 3H), 2,9 (m, 2H), 3,0 (m, 1H), 4,15 (široký q, 1H), 4,4 (m, 3H), 5,0 (m, 1H), 5,15 (m, 1H), 5,45 (s, 1H), 7,8 (d, 2H), 7,95 (d, 1H), 8,05 (s, 1H), 8,65 (m, 2H), 9,65 (s, 1H).
Zlúčenina 214m sa pripraví zo zlúčeniny 213m pomocou spôsobu použitého na prípravu zlúčeniny 2002 zo zlúčeniny 2001, čím sa získa 105 mg zlúčeniny 214m vo forme bielej tuhej látky.
’H-NMR (perdeuterometanol) δ: 1,6 - 1,75 (m, 1H), 1,85 - 1,95 (m, 1H), 2,0 - 2,1 (m, 2H), 2,15 - 2,25 (m, 1H), 2,3 - 2,4 (m, 1H), 2,45 - 2,55 (m, 2H), 2,65 - 2,75 (m, 1H), 3,4 - 3,55 (m, 2H), 3,95 (s, 3H), 4,2 - 4,3 (m, 1H), 4,45 - 4,6 (m, 1H), 4,9 - 5,0 (m, 1H), 5,15 - 5,2 (m, 1H), 7,9 (s, 2H).
Zlúčeniny 308c a 308d sa pripravia nasledovným spôsobom:
Zlúčenina 308c sa pripraví zo zlúčeniny 212e pomocou spôsobu použitého na prípravu zlúčeniny 308b zo zlúčeniny 212e, čím sa získa 266 mg zlúčeniny 308c.
’H-NMR (deuterochloroform) δ: 1,6 - 1,7 (m, 1H), 1,88 - 1,98 (m, 3H), 2,02 - 2,15 (m, 1H), 2,3 - 2,4 (m, 1H), 2,65 - 2,95 (m, 3H), 3,09 (m, 1H), 3,12 - 3,25 (m, 1H), 3,84 (s, 3H), 3,86 (s, 3H), 4,5 - 4,58 (m, 1H), 4,88 - 4,95 (m, 1H), 5,1 - 5,25 (m, 2H), 6,86 - 6,9 (d, 2H), 7,15 - 7,25 (m, 2H), 7,36 - 7,4 (m, 1H), 7,75 - 7,8 (d, 2H).
Zlúčenina 308d sa pripraví zo zlúčeniny 212e pomocou spôsobu použitého na prípravu zlúčeniny 308b zo zlúčeniny 212e, čím sa získa 270 mg zlúčeniny 308d.
’H-NMR (deuterochloroform) δ: 1,55 - 1,65 (m, 1H), 1,8 - 2,1 (m, 4H), 2,3 - 2,4 (m, 1H), 2,65 - 2,88 (m, 3H), 2,9 - 3,3 (m, 3H), 4,5 - 4,58 (m, 1H), 4,88 - 4,95 (m, 1H), 5,05 (s, 2H), 5,1 - 5,2 (m, 1H), 6,82 - 6,95 (m, 2H), 7,02 - 7,15 (m, 2H), 7,28 (m, 5H), 7,45 (m, 1H), 7,72 (d, 2H).
Zlúčeniny 2100f, 2100g, 210011,2100i a 21 OOj sa pripravia tak, ako sa opisuje.
137
Zlúčenina 2101a sa pripraví z alyloxykarbonylamino-P-terc-butylaspartátu podľa postupu využitého Chapmanom (Bioorg. & Med. Chem. Lett. 2, str. 615 - 618 (1992)) na prípravu (3S,2RS)-3-alyloxykarbonylamino-2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuránu, pričom sa miesto benzylalkoholu použije 4-chlórbenzylalkohol, čím sa získa 1,84 g zlúčeniny 2101a vo forme kryštalickej tuhej látky.
Zlúčenina 2100f sa pripraví zo zlúčeniny 212e pomocou postupu použitého na prípravu zlúčeniny 213e zo zlúčeniny 212e, pričom sa použije zlúčenina 2101a, čím sa získa 380 mg zlúčeniny 21 OOf.
'H-NMR (deuterochloroform) δ: 1,8 - 2,0 (m, 10H), 2,30 (d, 1H), 2,31 - 2,5 (m, 3H), 2,7 - 2,9 (m, 3H), 3,05 (m, 2H), 3,1 - 3,2 (m, 4H), 4,45 (q, 1H), 4,5 - 4,6 (m, 3H), 4,7 (d, 2H), 4,85 (d, 1H), 4,9 (t, 1H), 5,2 (t, 1H), 5,15 (m, 2H), 5,25 (s, 1H), 5,55 (d, 1H), 6,5 (d, 1H), 6,9 (d, 1H), 6,95 (d, 1H), 7,25 (m, 3H), 7,35 (t, 2H), 7,45 (m, 2H), 7,55 (1H), 7,8 (m, 3H).
Zlúčenina 2101b sa pripraví z (3S,2RS)-3-alyloxykarbonylamino-2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuránu pomocou spôsobu použitého na prípravu zlúčeniny 2100d zo zlúčeniny 214e, pričom sa miesto kyseliny p-toluénsulfónovej použije kyselina sírová, čím sa získa zlúčenina 2101b.
Zlúčenina 2100g sa pripraví zo zlúčeniny 212e podľa postupu na prípravu zlúčeniny 213e zo zlúčeniny 212e, pričom sa použije zlúčenina 2101b, čím sa získa 31 mg zlúčeniny 2100g.
*H-NMR (deuterochloroform) δ: 1,19 (d), 1,94 (široký s), 2,0 - 2,12 (m), 2,24 (d), 2,42 (dd), 2,71 - 2,83 (m), 3,02 (dd), 3,12 - 3,27 (prekrývajúci sa m), 3,93 (m), 4,32 - 4,37 (m), 4,52 - 4,63 (m), 4,90 - 4,95 (m), 5.12 - 5,20 (m), 5,28 (s), 6,93 (d), 7,10 (d), 7,41 - 7,58 (m), 7,84 (d).
Zlúčenina 2100h. Roztok zlúčeniny 214e (287 mg, 0,65 mmol) v pyridíne (5 ml) sa nechá reagovať s acetanhydridom (0,4 ml, 3,62 mmol). Po 6 hodinách sa reakčná zmes naleje do 5 % roztoku hydrogénsíranu sodného a trikrát sa extrahuje etylacetátom. Spojené organické vrstvy sa premyjú soľankou, vysušia nad síranom sodným a zahustia vo vákuu. Po veľmi rýchlej chromatografii (silikagél, etylacetát) sa získa 119 mg zlúčeniny 2100h.
’H-NMR (deuterochloroform, zmes štyroch diastereomérov) δ: 1,80 - 2,05 (m), 2,12 (s), 2,13 (s), 2,19 (s), 2,22 (d), 2,67 - 2,75 (m), 2,80 - 2,95 (m), 3,00 - 3,20 (m), 3,21 - 3,33 (m), 3,50 - 3,95 (štyri oddelené m), 4,19 (m), 4,55 (m), 4,57 - 4,65 (m), 4,69 (m), 4,85 - 4,95 (m), 5,04 (m), 5,10 - 5,22 (m), 6,46 (d), 6,03 (s), 6,50 (d), 6,58 (d), 6,75 (d), 6,95 - 7,05 (m), 7,22 (m), 7,30 (m), 7,71 (d), 7,75 - 7,83 (m).
138
2100b
2100i
Zlúčenina 2100i. K roztoku zlúčeniny 2100b (1,5 g, 2,7 mmol) v acetonitrile (10 ml) sa pri teplote miestnosti pridá IN kyselina chlorovodíková. Po 6 hodinách sa pridá tuhý hydrogenuhličitan sodný a produkt sa extrahuje etylacetátom, vysuší nad síranom horečnatým a zahustí vo vákuu. Po chromatografii (silikagél, 30 až 100 % dichlórmetán v etylacetáte) sa získa 123 mg zlúčeniny 2100i.
’H-NMR (deuterochloroform) δ: 1,25 (t, 3H), 1,6 -1,8 (m, 1H), 1,9 -2,2 (m, 5H), 2,4 - 2,5 (m, 1H), 2,75 - 2,9 (m, 2H), 3,0 - 3,1 (m, 2H), 3,2 - 3,25 (m, 1H), 4,05 - 4,2 (m, 1H), 4,5 - 4,7 (m, 1H), 5,1 - 5,25 (m, 1H), 7,0 - 7,2 (m, 2H), 7,4 - 7,45 (m, 2H), 7,5 (t, 1H), 7,8 (t, 2H), 9,5 (s, 1H).
2100í
Zlúčenina 21 OOj sa pripraví zo zlúčeniny 2100i pomocou spôsobu použitého na prípravu zlúčeniny 2100h zo zlúčeniny 214e, čím sa získa 347 mg zlúčeniny 2 lOOj.
’H-NMR (deuterochloroform) δ: 1,3 (t, 3H), 1,6 - 1,8 (m, 2H), 1,9 -2,25 (m, 4H), 2,25 (s, 3H), 2,3 - 2,45 (m, 1H), 2,8 - 3,0 (m, 1H), 3,0 - 3,25 (m, 2H), 3,4 - 3,45 (m, 2H), 4,1 - 4,2 (m, 2H), 4,55 - 4,7 (m, 1H), 5,1 - 5,25 (m, 1H), 6,8 (s, 1H), 7,0 - 7,1 (m, 2H), 7,5 (t, 1H), 7,8 (t, 2H), 9,5 (s, 1H).
Zlúčeniny 500 a 501 sa opisujú v tabuľke 23. Tieto zlúčeniny sa pripravia pomocou podobných spôsobov, aké sa použili na prípravu zlúčenín 404 - 449 (pozri príklad 11).
Tabuľka 23
Zlúč. Štruktúra Vzorec MH HPLC RČ min (spôsob) čistota MS . (M+H) +
500 H II C22H24C1N508 521.92 11.448 (A) 0.991 523.1
501 O A /Ά o ΰΥ 7° h3c C24H28N4010 532.51 10.13 0.97 533
Opísané zlúčeniny (zlúčeniny 213mm, 213n, 213o, 213p, 213q, 213r, 213s, 213t, 213u, 213v, 213w, 213x a 214w) sa pripravia pomocou podobných spôsobov ako zlúčeniny 213b-f.
139
Zlúčeniny 419, 415, 450, 456, 475, 404, 486, 487, 417, 408 a 418 sa môžu takisto pripraviť, tak ako sa opisuje.
Zlúčenina R1
213mm, 419 MeOC(O)-
213n, 415
213o, 450 Q1 ΗΝχ,Μθ T O
213p, 456 A
213q, 475 OH H
213r, 404 Me 0 1X
213s, 486 H
140
Zlúčenina R1
213t, 487 H
213u, 417 O OMe
213v, 408
213w, 214w 0 Hcry OMe
213x, 418 ΛΟ1 H
Zlúčenina 213n sa pripraví ako zmes diastereoizomérov (pomer izomérov syn a anti 6 : 4) (1,43 g, 82 %) vo forme bielej tuhej látky s teplotou topenia 206 - 210 °C.
Infračervené spektrum (bromid draselný); 3288, 1787, 1680, 1657, 1651, 1619, 1548, 1440, 1256, 1135; ’H-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid) δ: 8,75 (0,4H, d), 8,55 (0,6H, d), 8,45 a 8,43 (1H, 2d), 7,50 (1H, d), 7,42 (1H, s), 7,40 - 7,27 (5H, m), 7,01 (1H, d), 6,11 (2H, s), 5,67 (0,6H, d), 5,43 (0,4H, s), 5,10 - 5,00 (1H, m), 4,90 - 4,59 (3,5H, m), 4,45 - 4,25 (1,5H, m), 3,47 - 3,20 (1H, m), 3,20 - 2,70 (2H, m), 2,65 - 2,35 (1H, m), 2,35 - 2,00 (3H, m), 2,00 - 1,75 (2H, m), 1,65 - 1,40 (2H, m);
Analýza pre C29H30N4O9:
vypočítané: 60,20 % C, 5,23 % H 9,68 % N nájdené: 60,08 % C5,32 % H 9,50 % N
Hmotnostná spektroskopia (ES +): 580 (M+ + 2, 35 %), 579 (M+ + 1,100), 404 (5), 367 (5), 236 (7), 107 (5).
Zlúčenina 213o, an/t-izomér vo forme bielej penovitej tuhej látky (0,73 g, 69 %) s teplotou topenia 135 - 140 °C.
[cc]D 21 - 37,3° (c = 0,1, dichlórmetán);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3452, 3310, 1790, 1664, 1659, 1650, 1549, 1425, 1258, 1121; ‘H-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid) δ: 10,11 (1H, s), 8,77 (1H, d), 8,57 (1H, d), 8,01 (1H, s), 7,76 (1H, d), 7,55 (1H, d), 7,45 - 7,25 (6H, m), 5,43 (1H, s), 5,08 - 5,00 (1H, m), 4,95 - 4,73 (1H, m), 4,76 a 4,68 (2H, dd),
3,40 - 3,20 (1H, m), 3,09 (1H, dd), 3,02 - 2,75 (1H, m), 2,45 - 2,06 (4H, m), 2,06 (3H, s), 2,00 - 1,75 (2H, m), 1,70- 1,40 (2H, m);
Analýza pre Ο30Η33Ν5Ο8:
vypočítané: 59,54 % C, 5,75 % H 11,57% N nájdené: 59,40 % C5,62 % H 11,50% N
Hmotnostná spektroskopia (ES l ): 593 (M+ + 2, 33 %), 592 (M+ + 1, 100), 574 (7), 487 (7), 475 (6), 385 (9), 373 (26),318 (14), 296(11), 266 (10), 221 (22).
Zlúčenina 213p sa izoluje ako pena (1,2 g, 77 %).
141 [a]D 20 - 115° (c = 0,20, dichlórmetán);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3368, 2946, 1794, 1654, 1609, 1540, 1505, 1421, 1277, 1175, 1119,980;
'H-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid) δ: 10,1 (1H, s), 8,80 (0,5H, d, J = 6,6), 8,60 (0,5H, d, J = 7,2), 8,40 a 8,36 (1H, 2d), 7,82 (2H, d, J = 8,0), 7,41 (5H, široký s), 6,86 (2H, d, J = 8,6), 5,72 (0,5H, d, J = 5,0), 5,49 (0,5H, široký s), 5,13 - 5,07 (1H, m), 4,95 - 4,65 (2,511, m), 4,49 - 4,38 (2,5H, m), 3,49 - 3,30 (2H, m), 3,21 -
- 2,79 (2H, m), 2,40 - 1,41 (7H, m);
Hmotnostná spektroskopia (ES +): 551.
Zlúčenina 213q sa izoluje vo forme bielej sklovitej tuhej látky (80 %) s teplotou topenia 145 - 149 °C. [«]d23 - 56,0° (c = 0,05, dichlórmetán);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3399 - 3319, 1791, 1657, 1543, 1420, 1253, 1119;
’H-NMR (deuterochloroform) δ: 9,54 (1H, s), 7,65 (1H, d, J = 7,9), 7,51 (1H, d, J = 6,9), 7,44 - 7,25 (7H, m), 7,18 - 7,06 (3H, m), 5,30 - 5,20 (1H, m), 5,27 (1H, s), 4,84 (1H, m), 4,79 (1H, d, J = 11,4), 4,56 (III, d, J = = 11,3), 4,47 (2H, m), 3,28 (1H, m), 3,10 - 2,97 (2H, m), 2,71 (1H, m), 2,47 - 2,37 (1H, m), 2,26 (1H, d, J = = 17,9), 2,09 (1H, m), 1,83, 1,70 a 1,51 (4H, 3m).
Zlúčenina 213r sa izoluje ako zmes diastereomérov (pomer izomérov syn a anti 55 : 45) vo forme bielej penovitej tuhej látky (1,46 g, 89 %) s teplotou topenia 106 - 110 °C.
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3306, 2947, 1791, 1659, 1650,1535, 1421, 1256, 1122;
’H-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid) δ: 8,76 (0,45H, d), 8,56 (0,55H, d), 8,49 a 8,47 (1H, 2d), 7,41 - 7,19 (9H, m), 5,67 (0,55H, d), 5,43 (0,45H, s), 5,11 - 5,02 (1H, m), 4,86 - 4,55 (3,5H, m), 4,45 - 4,25 (1,5H, m),
3.40 - 3,20 (1H, m), 3,20 - 2,70 (2H, m), 2,65 - 2,40 (1H, m), 2,34 (3H, s), 2,30 - 1,70 (5H, m), 1,65 - 1,40 (2H, m);
Analýza pre C29H32N4O7:
vypočítané: 62,66 % C, 5,95 % H 10,08% N nájdené: 62,91 % C6,00 % H 9,70 % N
Hmotnostná spektroskopia (ES +): 550 (M+ + 2, 43 %), 549 (M+ + 1, 100), 374 (3), 280 (4), 279 (20), 118 (5).
Zlúčenina 213s sa izoluje ako aníi-izomér vo forme bielej penovitej látky (0,64 g, 77 %) s teplotou topenia 137-141 °C.
[cc]D 21 - 48,2° (c = 0,05, metanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3477, 3314, 1791, 1659,1599,1529, 1499, 1406, 1256, 1122; 'H-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid) δ: 10,45 (1H, s), 8,76 (1H, d), 8,50 (1H, d), 7,86 (2H, d), 7,69 (2H, d),
7.41 - 7,20 (10H, m), 5,43 (1H, s), 5,08 - 4,98 (1H, m), 4,90 - 4,73 (1H, m), 4,76 a 4,68 (2H, dd), 3,67 (2H, S), 3,40 - 3,20 (1H, m), 3,09 (1H, dd), 3,02 - 2,75 (1H, m), 2,39 (1H, dd), 2,30 - 2,00 (3H, m), 2,00 - 1,75 (2H, m), 1,70 - 1,40 (2H, m);
Analýza pre C56H37N5O8.0,5H2O:
vypočítané: 63,90 % C, 5,66 % H 10,35% N nájdené: 63,68 % C5,67 % H 10,24% N
Hmotnostná spektroskopia (ES +): 669 (M+ + 2, 40 %), 668 (M+ + 1, 100), 640 (12), 435 (18), 425 (23), 403 (33), 328 (17), 302 (32), 274 (22), 197 (16), 138 (17).
Zlúčenina 213t sa izoluje vo forme bielej penovitej látky (0,63 g, 80 %) s teplotou topenia 159 - 164 °C. [a]D 21 - 37,0° (c = 0,05, metanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3463, 3321, 1790, 1680, 1658, 1650, 1644, 1595, 1525, 1501, 1408, 1251, 1113,933;
'H-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid) δ: 10,13 (1H, s), 8,76 (1H, d), 8,48 (1H, d), 7,85 (2H, d), 7,68 (211, d), 7,40 - 7,25 (5H, m), 5,43 (1H, s), 5,08 - 4,95 (1H, m), 4,92 - 4,73 (1H, m), 4,76 a 4,68 (2H, dd), 3,40 - 3,20 (1H, m), 3,09 (1H, dd), 3,02 - 2,75 (1H, m), 2,39 (1H, dd), 2,35 - 2,00 (6H, m), 2,00 - 1,75 (2H, m), 1,70 -
- 1,40 (2H, m), 0,93 (6H, d);
Analýza pre C33H39N5O8.0,5H2O:
vypočítané: 61,67% C, 6,27 % H 10,90% N nájdené: 61,49 % C6,24 % H 10,86% N
Hmotnostná spektroskopia (ES +): 635 (M+ + 2, 39 %), 634 (M+ + 1, 100), 484 (10), 427 (9), 274 (18), 268 (37), 204 (19), 117(13).
Zlúčenina 213u sa izoluje vo forme bielej tuhej látky (81 %) s teplotou topenia 120 - 132 °C.
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3361 - 3334, 1792, 1659, 1585, 1536, 1499, 1457, 1416, 1340, 1236, 1126, 989;
'H-NMR (deuterochloroform) δ: 7,39 - 7,29 (6H, m), 7,12 (1H, s), 7,03 (1H, s), 6,92, 6,83 a 6,48 (asi 3H, 3d, J = 8,1, 7,5 a 8,1), 5,57 (d, J = 5,3), 5,27 (1H, s), 5,23 - 5,06, 4,91 - 4,71, 4,64 - 4,43 (6H, 3m), 3,92, 3,91, 3,89 a 3,88 (9H, 4s), 3,32 - 2,70, 2,52 - 2,08, 1,91 a 1,63 (1H, 4m).
Zlúčenina 213v sa izoluje vo forme bielej tuhej látky (78 %) s teplotou topenia 121 - 127 °C.
142
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3534 - 3331, 1791, 1659, 1528, 1420, 1256, 1122;
'H-NMR (deuterochloroform) δ: 8,34 - 8,29 (1H, m), 7,98 - 7,87 (2H, m), 7,68 - 7,45 (4H, m), 7,34 - 7,24 (5H, m), 7,04 (d, J = 6,8), 6,78 (d, J = 7,8), 6,66 (d, J = 7,7), 6,48 (2H, d, J = 7,5), 5,56 (d, J = 5,4), 5,15 (1H, s), 5,30 - 5,14, 5,0 a4,89 (d, J = 11,2), 4,71 - 4,41 (6H), 3,18 - 2,80, 2,50 - 2,27 a 2,08 - 1,60 (11H, 3m).
Zlúčenina 213w sa izoluje ako zmes diastereoizomérov (pomer izomérov syn a anti 65 : 35) vo forme bielej tuhej látky (0,9 g, 65 %) s teplotou topenia 110 - 115 °C.
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3409, 2945, 1792, 1658, 1606, 1534, 1486, 1420, 1330, 1276, 1209,1122,980,960;
'H-NMR (deuterochloroform) δ: 7,66 (0,35H, d, J = 6,9), 7,46 - 7,20 (7H, m), 6,93 (0,35H, d, J = 7,7), 6,85 (0,65H, d, J = 7,6), 6,73 (0,65H, d, J = 7,6), 5,96 (0,35H, široký s), 5,85 (0,65H, široký s), 5,56 (0,65H, d, J = = 5,2), 5,28 (O,35H, široký s), 5,20 - 4,98 (2H, m), 4,96 - 4,40 (4H, m), 3,28 - 2,55 (3H, m), 2,53 - 2,32 (1H, m), 2,23 (6H, 2s), 2,03 - 1,40 (7H, m);
Hmotnostná spektroskopia (ES -): 577; (ES +): 579.
Zlúčenina 213x sa izoluje vo forme bezfarebného prášku (691 mg, 86 %) s teplotou topenia 150 - 170 °C. [ajo21 -10,1° (c = 0,10, acetón);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3313, 1791, 1679, 1654, 1597, 1528, 1501, 1457, 1407, 1371, 1315, 1255,1184, 1122,933;
'H-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid) δ: 8,75 (1H, d), 8,47 (1H, d), 7,84 (2H, d), 7,66 (2H, d), 7,35 (5H, m), 5,43 (1H, s), 5,06 - 5,00 (1H, m), 4,90 - 4,64 (3H, m), 4,46 - 4,26 (2H, m), 3,16 - 2,86 (2H, m), 2,45 - 2,05 (5H, m), 2,07 (3H, s), 2,00 - 1,84 (2H, m), 1,68 - 1,56 (211, m);
Analýza pre C3oH33N508.H20:
vypočítané: 59,11% C, 5,79% H 11,49% N nájdené: 59,38 % C 5,66% H 11,31% N
Hmotnostná spektroskopia (ES +): 614 (100 %), 592 (M+ + 1, 66).
Zlúčenina 415 sa pripraví podobným spôsobom ako zlúčenina 214e, čím sa získa biela tuhá látka (297 mg, 84 %) s teplotou topenia 158 - 162 °C.
[a]p21 - 109,5° (c = 0,1, metanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný); 3700 - 2500 (široký), 1783, 1659, 1650, 1538, 1486, 1439, 1257, 1037;
'H-NMR (perdeuterometanol) δ: 7,48 (1H, dd), 7,35 (1H, d), 6,88 (1H, d), 6,03 (2H, s), 5,25 - 5,15 (1H, m), 5,02 - 4,90 (1H, m), 4,63 - 4,45 (2H, m), 4,30 - 4,20 (1H, m), 3,57 - 3,30 (1H, m), 3,20 - 3,05 (1H, m), 2,75 - 2,10 (5H, m), 2,10 -1,60 (4H, m);
Hmotnostná spektroskopia (ES +): 488 (M+, 25 %), 487 (M+ - 1, 100), 443 (8), 387 (3), 315 (5), 150 (6), 127 (5), 113 (8). Presná hmotnosť vypočítaná pre C22H25N4O9 (MH+): 489,1621; nájdené: 489, 1648.
Zlúčenina 450 sa pripraví podobným spôsobom ako zlúčenina 214e, čím sa získa biela penovitá látka (378 mg, 94 %) s teplotou topenia 175 - 179 °C.
[ot]D 22 - 91,7° (c = 0,1, metanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3700 - 2500 (široký), 2219,1659,1590,1553, 1427, 1260;
‘H-NMR (perdeuterometanol) δ: 8,01 (1H, d), 7,74 (1H, dd), 7,58 (1H, d), 7,45 - 7,35 (1H, m), 5,25 - 5,15 (1H, m), 5,05 - 4,90 (1H, m), 4,60 - 4,45 (2H, m), 4,30 - 4,20 (1H, m), 3,55 - 3,30 (1H, m), 3,20 - 3,00 (1H, m), 2,75 - 2,20 (5H, md), 2,14 (3H, s), 2,20 - 1,60 (4H);
Analýza pre C23H27N5O8.1,5H2O:
vypočítané: 52,27 % C, 5,72% H 13,25% N nájdené: 52,31% C 5,86% H 12,85% N
Hmotnostná spektroskopia (ES +): 501 (M+’ 26 %), 500 (M+ - 1, 100), 328 (2), 149 (3), 113 (3).
Zlúčenina 456 sa pripraví podobným spôsobom ako zlúčenina 214e, čím sa získa biela tuhá látka (0,73 g, 72 %) s teplotou topenia > 260 °C.
[a]D 20 - 66° (c = 0,34, metanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3401, 2946, 1651, 1609, 1584, 1506, 1426, 1277, 1257, 1177;
'H-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid) δ: 10,2 (1H, veľmi široký s), 9,17 (1H, široký s), 8,65 (1H, s), 8,37 (1H, d, J = 5,4), 7,81 (2H, d, J = 8,2), 6,87 (2H, d, J = 8,4), 5,24 (1H, m), 4,92 - 4,86 (1H, m), 4,41 - 4,32 (2H, m), 3,68 - 3,21 (3H, m), 3,12 - 2,79 (1H, m), 2,50 - 1,42 (7H, m);
Hmotnostná spektroskopia (ES +): 459.
Zlúčenina 475 sa pripraví podobným spôsobom ako zlúčenina 214e, čím sa získa biela tuhá látka (79 %) s teplotou topenia 150 (mäknutie) 190 - 210 °C.
[a]D 23 - 97,5° (c = 0,1, metanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3319, 1658, 1650, 1549, 1421, 1256;
'H-NMR (deuterochloroform) δ: 7,61 (1H, d, J = 8,0), 7,43 (1H, d, J = 8,1), 7,21 (2H, m), 7,05 (1H, m), 5,21 (1H, m), 5,07 - 4,77 (1H, m), 4,54 (2H, m), 4,23 (1H, m), 3,46 (1H, m), 3,14 (1H, m), 2,66 - 1,71 (9H, m); Hmotnostná spektroskopia (ES +, m/z): 482 (M+ - 1, 100 %).
143
Zlúčenina 404 sa pripraví podobným spôsobom ako zlúčenina 214e, čím sa získa biela tuhá látka (0,79 g, 86 %) s teplotou topenia 156 - 159 °C.
[a]D 25 - 119,7° (c - 0,1, metanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3700 - 2500 (široký), 3387, 3309, 2956, 1785, 1659, 1650, 1535, 1422, 1278;
'H-NMR (perdeuterometanol) δ: 7,46 - 7,15 (4H, m), 5,25 - 5,15 (1H, m), 5,02 - 4,90 (1H, m), 4,58 - 4,45 (2H, m), 4,30 - 4,20 (1H, m), 3,55 - 3,30 (1H, m), 3,20 - 3,05 (1H, m), 2,80 - 2,20 (4H, m), 2,41 (3H,’s), 2,20- 1,60 (5H, m);
Hmotnostná spektroskopia (ES +): 458 (M+, 27 %), 457 (M+ - 1, 100), 413 (13), 339 (8), 285 (5), 134 (6), 127 (11). Presná hmotnosť vypočítaná pre C22H27N4O7 (MH+): 459,1880; nájdené: 459,1854.
Zlúčenina 486 sa pripraví podobným spôsobom ako zlúčenina 214e, čím sa získa biela tuhá látka (325 mg, 89 %) s teplotou topenia 165 - 169 °C.
[a]D 25 - 69,1° (c = 0,1, metanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3700 - 2500 (široký), 3318, 1658, 1599, 1530, 1505, 1407, 1258; 'H-NMR (perdeuterometanol) δ: 7,85 (2H, d), 7,69 (2H, d), 7,38 - 7,20 (5H, m), 5,25 - 5,15 (1H, m), 5,05 -
- 4,90 (1H, m), 4,57 - 4,45 (2H, m), 4,30 - 4,20 (1H, m), 3,70 (2H, s), 3,55 - 3,30 (1H, m), 3,20 - 3,00 (1H, m), 2,75 - 1,60 (9H, m);
Analýza pre C29H31N5O8.1,5H2O:
vypočítané: 57,61 % C, 5,67% H 11,58% N nájdené: 57,81% C 5,74% H 11,47% N
Hmotnostná spektroskopia (ES +): 577 (M+, 33 %), 576 (M+ - 1, 100), 502 (2).
Zlúčenina 487 sa pripraví podobným spôsobom ako zlúčenina 214e, čím sa získa biela penovitá tuhá látka (335 mg, 93 %) s teplotou topenia 176 - 180 °C.
[a]D 22 - 88,0° (c = 0,1, metanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3700 - 2500 (široký), 3321, 2960, 1781, 1660, 1597, 1529, 1407, 1258, 1187;
'H-NMR (perdeuterometanol) δ: 7,86 (2H, d), 7,69 (2H, d), 5,25 - 5,15 (1H, m), 5,05 - 4,90 (1H, m), 4,60 -
- 4,45 (2H, m), 4,30 - 4,20 (1H, m), 3,57 - 3,30 (1H, m), 3,20 - 3,00 (1H, m), 2,75 - 1,60 (12H, m), 1,00 (6H, d);
Analýza pre C26H33N5O8.H2O:
vypočítané: 55,61 % C, 6,28 % H 12,45 % N nájdené: 56,00 % C 6,37 % H 12,15% N
Hmotnostná spektroskopia (ES +): 543 (M+’ 31 %), 542 (M+ - 1, 100), 498 (2), 468 (3).
Zlúčenina 417 sa pripraví podobným spôsobom ako zlúčenina 214e, čím sa získa biela tuhá látka (0,63 g, 92 %) s teplotou topenia 145 -155 °C (približne, neostro).
[a]D 27 - 114,6° (c = 0,11, metanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3327, 1658, 1586, 1548, 1501, 1416, 1341, 1238, 1126;
'H-NMR (perdeuterometanol) δ: 7,22 (2H, s), 5,21 (1H, m), 5,00 (1H, m), 4,56 a 4,49 (2H, 2m), 4,25 (1H, m), 3,88 (6H, s), 3,80 (3H, s), 3,55 - 3,43 (1H, m), 3,12 (1H, m), 2,71 -1,70 (9H, m);
Analýza pre C24H30N4O10.2H2O:
vypočítané: 50,52 % C, 6,01 % H 9,82 % N nájdené: 50,49 % C 6,05 % II 9,68 % N
Hmotnostná spektroskopia (ES +, m/z): 533 (M* - 1, 100 %).
Zlúčenina 408 sa pripraví podobným spôsobom ako zlúčenina 214e, čím sa získa biela tuhá látka (73 %) s teplotou topenia 157 - 165 °C (neostro).
[a]D 27 - 140,5° (c — 0,1, metanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3325, 1658, 1531, 1420, 1278, 1257;
'H-NMR (perdeuterometanol) δ: 8,33 - 8,28 (1H, m), 8,01 - 7,78 (2H, m), 7,71 (1H, d, J = 6,0), 7,59 - 7,52 (3H, m), 5,27 (1H, m), 5,12 - 5,03 (1H, m), 4,55 (2H, m), 4,25 (1H, m), 3,64 - 3,43 (1H, m), 3,24 - 3,12 (1H, m), 2,80 - 1,67 (9H, m);
Analýza pre CisHjíNýCb-ŽHiO:
vypočítané: 56,60 % C, 5,70 % H 10,56% N nájdené: 56,70 % C 5,80% H 10,33% N
Hmotnostná spektroskopia (ES +, m/z): 493 (M+ - 1, 100 %).
Zlúčenina 214w sa pripraví podobným spôsobom ako zlúčenina 214e, čím sa získa 210 mg (62 %) bielej tuhej látky s teplotou topenia > 260 °C.
[a]D 20 - 93° (c = 0,20, metanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3401, 2948, 1651,1604,1559,1486, 1421, 1325, 1276, 1210; 'H-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid) δ: 9,39 (1H, široký s), 8,29 (1H, d, J = 5,9), 7,55 (2H, s), 6,64 (1H, d,
144
J = 6,1), 5,79 (1H, s), 5,25 - 5,21 (1H, m), 4,90 - 4,82 (1H, m), 4,41 - 3,69 (2H, m), 3,47 - 3,20 (3H, m), 2,97 - 2,91 (1H, m), 2,23 (6H, s), 2,25 - 1,60 (7H, m).
Zlúčenina 550q sa pripraví pomocou rovnakého spôsobu ako zlúčenina 213e, čim sa získa zlúčenina 550q.
Zlúčenina 213y sa pripraví pomocou rovnakého spôsobu ako zlúčenina 213e, čím sa získa zlúčenina 213y.
(e) R = (f) R = ’V
Zlúčenina 412a sa pripraví pomocou rovnakého spôsobu ako zlúčenina 550q, pričom sa použije zlúčenina 513a-l, čím sa získa zlúčenina 412a.
Zlúčenina 412b sa pripraví pomocou rovnakého spôsobu ako zlúčenina 550q, pričom sa použije zlúčenina 513a-2, čím sa získa zlúčenina 412b.
Zlúčenina 412c sa pripraví pomocou rovnakého spôsobu ako zlúčenina 550q, pričom sa použije zlúčenina 513b-l, čím sa získa zlúčenina 412c.
Zlúčenina 412d sa pripraví pomocou rovnakého spôsobu ako zlúčenina 550q, pričom sa použije zlúčenina 513b-2, čím sa získa zlúčenina 412d.
'H-NMR (deuterochloroform) δ: 9,5 (1H, d), 8,9 (1H, d), 8,5 (1H, d), 7,9 - 7,8 (2H, m), 7,8 - 7,65 (2H, m), 6,55 (1H, d), 5,55 (1H, d), 5,25 - 5,1 (2H, m), 4,75 - 4,65 (1H, m), 4,65 - 4,6 (1H, m), 4,4 - 4,3 (1H, m), 3,25 - 3,15 (1H, m), 3,15 - 3,05 (1H, m), 2,95 - 2,8 (2H, m), 2,55 - 2,4 (2H, m), 2,15 -1,5 (14H, m).
Zlúčenina 412e sa pripraví pomocou rovnakého spôsobu ako zlúčenina 550q, pričom sa použije zlúčenina 513f-l, čím sa získa zlúčenina 412e.
Zlúčenina 412f sa pripraví pomocou rovnakého spôsobu ako zlúčenina 550q, pričom sa použije zlúčenina 513Í-2, čím sa získa zlúčenina 412f.
145
Zlúčeniny 410 a 412 sa pripravia pomocou rovnakého spôsobu ako zlúčenina 605 zo zlúčeniny 604.
Zlúčenina R1
502y, 410 r s- 0 A
502z, 412
Zlúčenina 410 sa prečistí pomocou veľmi rýchlej chromatografie (5 - 25 % metanol v dichlórmetáne), čím sa získa 296 mg (94 %) bezfarebnej tuhej látky s teplotou topenia 90 - 200 °C.
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3338, 3096, 2950, 1787, 1726, 1657, 1546, 1420, 1279, 1258. 1125,1092,984,933;
'H-NMR (perdeuterometanol) δ: 8,41 (1H, d), 8,13 (1H, d), 7,54 - 7,41 (3H, m), 7,20 (1H, d), 5,19 - 5,11 (1H, m), 4,54 - 4,30 (1H, m), 3,27 (1H, m), 3,18 - 3,03 (1H, m), 2,81 - 2,64 (2H, m), 2,56 - 1,59 (7H, m); Analýza pre vypočítané: 46,05 % C, 5,49% H, 11,31% N nájdené: 46,36 % C, 5,25% H, 11,10% N
Hmotnostná spektroskopia (ES +): 449 (M - 1, 80 %), 113 (100). Presná hmotnosť vypočítaná pre Ci9H23N4O7S (MH+): 451,1287; nájdené: 451,1295.
Zlúčenina 412 sa pripraví podobným spôsobom ako zlúčenina 605, čím sa získa biela sklovitá tuhá látka (69 %) s teplotou topenia 138 - 141 °C.
[a]D 23 - 105,5° (c = 0,5, dichlórmetán);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3375, 1787, 1659, 1515, 1421, 1278, 1256;
'H-NMR (deuterochloroform) δ: 9,32 (1H, m), 8,79 (1H, m), 8,47 (1H, m), 7,86 - 7,64 (4H, m), 5,31 , 5,18,
4,59 a 4,37 (4 alebo 5H, m), 3,55 - 2,76, 2,49 - 2,39, 2,05 a 1,65 (11H, 4m);
Analýza pre C24H25N5O7.1,5H2O:
vypočítané: 55,17% C, 5,40% H, 13,40% N nájdené: 54,87 % C, 5,22% H, 13,15% N
Hmotnostná spektroskopia (ES +, m/z): 494 (M+ - 1, 100 %).
Zlúčenina 502y sa pripraví rovnakým spôsobom ako zlúčenina 604 zo zlúčeniny 603, čím sa získa svetlokrémový prášok s teplotou topenia 120 - 180 °C.
[a]D 23 - 109° (c = 0,18, dichlórmetán);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3478, 3327, 1670, 1582, 1543, 1421, 1279, 1257, 1155;
'H-NMR (deuterochloroform, perdeuterometanol) δ: 8,04 (1H, m), 7,49 (1H, m). 7,38 (1H, m), 7,17 (1H, m), 5,17 - 5,01 (2H, m), 4,86 (1H, m), 4,61 - 4,50 (1H, m), 3,45 - 3,29 (2H, m), 3,21 - 3,03 (1H, m), 2,79 - 2,54 (3H, m), 2,43 - 2,33 (1 H, m), 2,11 - 1,66 (5H, m), 1,44 (9H, s);
Analýza pre C24H33N7O7S.H2O:
vypočítané: 49,56 % C, 6,07 % H, 16,86 % N, 5,51 % S
146 nájdené: 49,51 % C, 5,93 % H, 16,31 %N, 5,17% S
Hmotnostná spektroskopia (ES +): 586 (100 %), 564 (M+ + 1, 1,59). Presná hmotnosť vypočítaná pre C24H34N7O7S (MH+): 564,2240; nájdené: 564,2267.
Zlúčenina 502z sa pripraví podobným spôsobom ako zlúčenina 604, čím sa získa svetložltá tuhá látka 5 (90 %) s teplotou topenia 142 - 145 °C.
136,5° (c = 0,06, dichlórmetán);
'H-NMR (deuterochloroform) δ: 9,51 - 9,46 (1H, m), 9,11 (1H, s), 8,83 (1H, d, J = 7,8), 8,53 (1H, d, J = 5,5), 7,89 - 7,83 (2H, m), 7,77 - 7,65 (2H, m), 7,55 (1H, d, J = 7,2), 7,18 (1H, d, J = 2,7), 5,26 - 5,12 (2H, m), 4,87 (1H, m), 4,59 (1H, m), 3,25 - 3,12 (2H, m), 2,95 - 2,76 (2H, m), 2,59 - 2,38, 2,18 - 1,94 a 1,70 (5H, 3m), 1,44 10 (9H, s).
Zlúčenina R4 R1
415a x/ X
415b CO1 x
415c CO1 x
214w-l 0 ch3 'X)
214w-2 0 ch3 X/)
147
Zlúčenina R4 R1
214w-3 0 H3CyXz^\ Ηθ''η^ ch3 XO
214w-4 X1 ch3
214w-5 ch3
214w-6 ch3 xO
214w-7 xX ch3 αΌ
412g A1 U)
412h A1 X
Zlúčeniny 415a, 415b, 415c, 214w-l, 214w-2,214w-3,214w-4, 214w-5, 214w-6, 214w-7, 412g a 412h sa pripravia rovnakým spôsobom ako zlúčenina 550q.
148
Zlúčenina 415 sa pripraví spôsobom použitým na prípravu zlúčeniny 2002 zo zlúčeniny 2001, čím sa získa zlúčenina 415.
Zlúčenina 214w sa pripraví spôsobom použitým na prípravu zlúčeniny 2002 zo zlúčeniny 2001, čím sa získa zlúčenina 214w.
Zlúčenina R
2100k 'X
21001
2100m
2100n X)
2100o X
Zlúčenina 2100k sa pripraví podobným spôsobom ako zlúčenina 213e, čím sa získa zmes diastereoizomérov (75 : 25) vo forme bielej tuhej látky (258 mg, 83 %) s teplotou topenia 101 °C.
[ot]D 25 - 96° (c = 0,2, dichlórmetán);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3328, 2935, 2978, 1732, 1669, 1603, 1483, 1450, 1414, 1237, 1155, 1082, 989, 755;
'H-NMR (deuterochloroform) δ: 7,84 - 7,80 (2H, m), 7,54 - 7,17 (8H, m), 7,06 - 6,99 (1H, m), 6,25 (1H, d, J = 7,9), 5,41 (0,75H, d, J = 5,4), 5,31 (0,25H, široký s), 5,23 - 5,09 (1H, m), 4,93 - 4,87 (1H, m), 4,68 - 4,51 (2H, m), 4,40 - 4,33 (0,25H, m), 4,24 - 4,14 (0,75H, m), 3,95 - 3,70 (1H, m), 3,30 - 3,13 (1H, m), 3,14 - 2,78 (5H, m), 2,47 - 2,21 (2H, m), 2,05 - 1,50 (5H, m);
Analýza pre C29H32N4O7.0,5H2O:
vypočítané: 62,47 % C, 5,97 % H, 10,05% N
149 nájdené: 62,17 % C, 5,83 % H, 9,97 % N
Hmotnostná spektroskopia (ES +): 549.
Zlúčenina 21001 sa pripraví podobným spôsobom ako zlúčenina 213e vo forme bezfarebnej tuhej látky (74 %) s teplotou topenia 172 - 180 °C.
[a]D= - 91,5° (c = 0,1, dichlórmetán);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3290, 1792, 1677, 1657, 1642, 1544, 1425, 1280, 1259, 1124, 977; ’H-NMR (deuterochloroform) δ: 7,80 (2H, m), 7,46 (3,5H, m), 7,00 (1H, d, J = 6,7), 6,48 (0,5H, d, J = 7,9), 5,55 (0,5H, d, J = 5,3), 5,19 (2H, s a m), 4,93 (0,5H, m), 4,62 (1,5H, m), 4,34 (1H, m), 4,18 (0,5H, m), 3,28 -
- 2,70 (4H, m), 2,49 - 2,29 (2H, m), 2,05 - 1,48 (1511, m).
Zlúčenina 2100m sa pripraví podobným spôsobom ako zlúčenina 213e vo forme bezfarebnej tuhej látky (76 %) s teplotou topenia 140 °C, pretavené 187 - 189 °C.
[ot]D 23 - 96,9° (c = 0,11, dichlórmetán);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3507, 3308, 3251, 1772, 1660, 1641, 1566, 1545, 1457, 1424, 1346, 1326, 1302, 1275, 1258, 1136, 1085, 1018, 981;
'H-NMR (deuterochloroform) δ: 7,78 (2H, m), 7,53 (3H, m), 7,19 (4H, m), 6,91 (1H, d, J = 7,4), 6,27 (1H, d, J = 7,6), 5,66 (1H, d, J = 5,3), 5,10 (1H, m), 4,96 (1H, m), 4,75 (2H, m), 4,52 (1H, m), 3,08 (3H, m), 3,03 -
- 2,71 (5H, m), 2,48 - 2,31 (2H, m), 1,90 - 1,40 (4H, m), 1,22 (1H, m).
Zlúčenina 2100n sa pripraví podobným spôsobom ako zlúčenina 213e, čím sa získa biela sklovitá tuhá látka (76 %) s teplotou topenia 112-115 °C.
[a]D 23 - 62,0° (c = 0,1, dichlórmetán);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3305, 1789, 1677, 1665, 1535, 1422, 1279, 1256, 1119, 942, 700; ’H-NMR (deuterochloroform) δ: 7,84 (2H, m), 7,58 - 7,27 (9H, m), 6,99 (1H, d, J = 7,8), 5,23 (1H, s), 5,23 -5,11 (1H, m), 4,89 (1H, m), 4,76 (1H, d, J = 11,3), 4,55 (1H, d, J = 11,4), 4,58 - 4,43 (2H, m), 3,30 - 2,96, 2,81 - 2,69, 2,46 - 2,37 a 2,16 - 1,66 (10H, 4m), 2,27 (1H, d, J = 17,8).
Analýza pre C/JLo^CVO.SHjO:
vypočítané: 61,87% C, 5,75 % H, 10,32% N nájdené: 61,88% C, 5,70 % H, 10,33% N
Hmotnostná spektroskopia (ES +, m/z): 535 (M+ + 1,100 %).
Zlúčenina 2100o (obsahujúca asi 7 % izoméru (2S)) sa pripraví podobným spôsobom ako zlúčenina 213e, čím sa získa biela sklovitá tuhá látka (81 %) s teplotou topenia 115 - 117 °C.
[a] n23 - 121,8° (c = 0,11, dichlórmetán);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3326, 1792, 1659, 1535, 1421, 1278, 1257, 1124, 978;
’H-NMR (deuterochloroform) δ: 7,82 (2H, m), 7,58 - 7,24 (8H, m), 6,90 (1H, d, J = 7,3), 6,49 (1H, d, J = = 7,7), 5,57 (1H, d, J = 5,5), 5,11 (2H, m), 4,91 (1H, d, J = 11,4), 4,57 (1H, d, J = 11,1), 4,81 - 4,68 (1H, m), 4,65 - 4,54 (1H, m), 3,18 - 2,71, 2,52 - 2,30 a 2,05 - 1,62 (11H, 3m);
Analýza pre C28H30N4O7.0,5^0:
vypočítané: 61,87 % C, 5,75 % H, 10,32 % N nájdené: 61,70% C, 5,71% H, 10,15% N
Hmotnostná spektroskopia (ES +, m/z): 535 (M+ + 1, 94,3 %), 557 (100 %).
Zlúčenina 550n sa pripraví podobným spôsobom ako zlúčenina 213e, čím sa získa zmes diastereoizomérov (pomer izomérov syn a anti 65 : 35) vo forme hnedého prášku (390 mg, 28 %) s teplotou topenia 139 -145 °C.
[a]D 23 - 104° (c = 0,2, metanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3318, 2405, 2369, 1792, 1660, 1591, 1549, 1484, 1422, 1257, 1117;
’H-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid) δ: 10,1 (1H, s), 8,80 (0,65H, d, J = 6,6), 8,58 (0,35H, d, J = 6,6), 8,59 (1H, d, J = 7,0), 8,06 (1H, Široký s), 7,83 - 7,79 (1H, m), 7,61 - 7,57 (1H, m), 7,47 - 7,39 (1H, m), 5,61
150 (0,35H, d, J = 5,0), 5,37 (0,65H, široký s), 5,17 - 5,14 (0,35H, m), 5,08 - 5,06 (0,65H, m), 4,92 - 4,86 (1H, m), 4,67 - 4,61 (O,35H, m), 4,47 - 4,41 (0,65H, m), 4,28 - 4,11 (1H, 2m), 3,80 - 3,59 (2H, m), 3,23 - 2,75 (3H, m), 2,61 - 2,48 (7H, m), 2,10 (3H, s), 1,25 a 1,17 (3H, 2t, J = 5,8);
Hmotnostná spektroskopia (ES +): 528.
Zlúčenina 550o sa pripraví podobným spôsobom ako zlúčenina 213a, čím sa získa bezfarebná tuhá látka (1,071 g, 80 %) s teplotou topenia 155 - 170 °C.
[a]D 22 - 75,8° (c = 0,26, dichlórmetán);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3314, 2941, 1791, 1658, 1545, 1420, 1341, 1312, 1252, 1181, 1118,939, 749;
‘H-NMR (deuterochloroform) δ: 9,45 (0,5H, s), 9,34 (0,5H, s), 7,68 - 7,62 (1H, m), 7,49 - 7,39 (2H, m), 7,33 - 7,26 (1H, m), 7,18 - 7,03 (3H, m), 5,49 (0,5H, d), 5,30 (0,5H, s), 5,26 - 5,13 (1H, m), 4,90 - 4,83 (0,5H, m), 4,76 - 4,49 (1H, m), 4,42 - 4,35 (0,5H, m), 3,97 - 3,74 (1H, m), 3,72 - 3,53 (1H, m), 3,35 - 2,64 (4H, m), 2,50 - 2,37 (1H, m), 2,20 - 1,82 (5H, m), 1,69 - 1,50 (2H, m), 1,30 -1,19 (3H, m).
Zlúčenina 550p sa pripraví podobným spôsobom ako zlúčenina 213e, čím sa získa zmes diastereoizomérov vo forme bielej peny (820 mg, 47 %).
[a]D 24 - 75° (c = 0,16, dichlórmetán);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3401, 2937, 1791, 1657, 1609, 1539, 1505, 1423, 1277, 1177, 1118;
'H-NMR (deuterochloroform) δ: 8,07 - 8,05 (1H, m), 7,67 (2H, d, J = 7,9), 7,38 - 7,29 (2H, m), 6,80 (2H, d, J = 8,5), 5,49 (0,5H, d, J = 4,6), 5,23 (0,5H, široký s), 5,24 - 5,20 (1H, m), 5,12 - 5,08 (1H, m), 4,68 - 4,29 (2H, m), 3,92 - 3,45 (3H, m), 3,32 - 2,30 (2H, m), 2,80 - 1,56 (11H, m), 1,21 (3H, t, J = 7,0).
503a-e 504a-e
286,505b-e
151
Zlúčenina R
503a 1
504a
286 ČO
503b Me
504b J
505b Po
503c OPh
504c I
505c Č)
5O3d \ /OPh
504d YY
505d U
503e s
504e
5O5e p Me
Zlúčenina 503a sa pripraví zo zlúčeniny 212b a (3S,4R)-íerc-butyl-(N-alyloxykarbonyl)-3-amino-4-hydroxy-5-(l-naftoyloxy)pentanoátu pomocou postupu opísaného pre zlúčeninu 213e, čím sa získa 533 mg (81 %) bielej peny.
[a]D 22 - 81,4° (c = 0,5, dichlórmetán);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3342, 2976, 1719, 1664, 1328,1278, 1246, 1153, 1137;
'H-NMR (deuterochloroform) δ: 8,86 (1H, d, J = 8,4), 8,21 (1H, dd, J = 1,3 a 7,3), 8,03 (1H, d, J = 8,1), 7,88 (1H, d, J = 8,6), 7,66 - 7,45 (3H, m), 7,23 (1H, d, J = 8,6), 5,96 (1H, d, J = 9,2), 5,30 (1H, m), 4,59 - 4,33 (5H, m), 4,24 (1H, m), 3,96 (IH, široký d), 3,29 (1H, m), 2,95 (1H, m), 2,93 (3H, s), 2,69 - 2,50 (3H, m), 2,36 (1H, m), 1,96 (4H, m), 1,62 (1H, m), 1,41 (9H, s);
Analýza pre C3lH4oN4010S.O,25H20:
vypočítané: 55,97 % C, 6,14% H, 8,42 % N nájdené: 55,90% C, 6,11% H, 8,23% N
Hmotnostná spektroskopia (ES +): 683 (M + Na, 100 %), 661 (M + 1, 39), 605 (78).
Zlúčenina 504a sa pripraví zo zlúčeniny 503a pomocou postupu na prípravu zlúčeniny 216e zo zlúčeniny 215e, čím sa získa 446 mg (91 %) bezfarebnej peny.
[a]D 21 - 111,6° (c = 0,5, dichlórmetán);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3319, 2978, 2936, 1723, 1670, 1413, 1370, 1329, 1278, 1246, 1153;
'H-NMR (deuterochloroform) δ: 8,87 (1H, d, J = 8,9), 8,29 (1H, d, J = 7,2), 8,06 (1H, d, J = 8,3), 7,90 (1H, d, J = 8,2), 7,66 - 7,48 (3H, m), 7,37 (1H, d, J = 8,1), 5,61 (1H, d, J = 9,0), 5,31 (1H, m), 5,22 (1H, AB, J = = 16,9), 5,09 (1H, AB, J = 16,9), 4,99 (1H, m), 4,65 - 4,43 (2H, m), 3,28 (1H, m), 2,96 (3H, s), 2,86 (2H, m), 2,59 (1H, m), 2,38 (1H, dd, J = 6,8 a 13,2), 2,21 - 1,70 (6H, m), 1,45 (9H, s);
Analýza pre C3iH38N4OioS.O,25H20:
vypočítané: 56,14% C, 5,85% H, 8,45% N nájdené: 56,11% C, 5,83 % H, 8,29% N
Hmotnostná spektroskopia (ES +): 657 (M - 1, 100 %).
Zlúčenina 286 sa pripraví zo zlúčeniny 504a podobným spôsobom ako zlúčenina 217, čím sa získa 356 mg (93 %) bieleho prášku s teplotou topenia 120 - 123 °C.
[cc]D 23 - 121° (c = 0,194, dichlórmetán);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3314, 2937, 1722, 1663, 1412, 1328, 1278, 1245, 1195, 1132; *H-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid) δ: 12,63 (1H, široký s), 8,94 (1H, d, J = 7,4), 8,78 (1H, d, J = 8,6), 8,26
152 (2H, m), 8,11 (1H, d, J = 8,0), 7,77 - 7,62 (4H, m), 5,28 (2H, s), 5,21 (1H, m), 4,82 (1H, m), 4,44 - 4,29 (2H, m), 3,31 (1H, m), 2,98 (3H, s), 2,98 - 2,86 (2H, m), 2,72 (1H, dd, J = 7,3 a 16,9), 2,40 (1H, m), 2,24 - 1,84 (4H, m), 1,69 (2H, m);
Analýza pre C27H3oN40i0S.H20·.
vypočítané: 52,25 % C, 5,20% H, 9,03% N nájdené: 52,11% C, 4,97 % H, 8,89% N
Hmotnostná spektroskopia (ES +): 601 (M - 1, 100 %).
Zlúčenina 503b sa pripraví podobným spôsobom ako zlúčenina 213e, čím sa získa biely prášok (671 mg, 88 %) s teplotou topenia 90 - 120 °C.
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3345, 2977, 1727, 1664, 1532, 1450, 1423, 1369, 1323, 1310, 1276, 1257, 1154, 1101,990, 766;
‘H-NMR (deuterochloroform) δ: 7,61 - 7,55 (2H, m), 7,51 - 7,42 (3H, m), 6,86 (1H, d), 5,69 (1H, d), 5,21 (1H, m), 4,64 - 4,38 (2H, m), 4,15 - 4,05 (3H, m), 3,84 (III, s), 3,31 - 3,14 (2H, m), 2,97 - 2,87 (1H, m), 2,94 (3H, s), 2,76 (3H, s), 2,64 - 2,48 (3H, m), 2,39 - 2,29 (1H, m), 2,04 - 1,61 (5H, m);
Analýza pre C31H4|N50uS.H2O:
vypočítané: 52,46 % C, 6,11 % H, 9,87 % N 4,52 % S nájdené: 52,34 % C, 5,92 % H, 9,56 % N 4,44 % S
Hmotnostná spektroskopia (ES +): 714 (47 %), 692 (M+ + 1, 84 %), 636 (100).
Zlúčenina 504b sa pripraví podobným spôsobom ako zlúčenina 216b, čim sa získa bezfarebný prášok (601 mg, 93 %) s teplotou topenia 75 - 115 °C.
[ot]D 23 - 104° (c = 0,26, dichlórmetán);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3324, 2977, 2935, 1730, 1670, 1525, 1452, 1422, 1369, 1317, 1276, 1256, 1222, 1155, 1107, 990, 766;
'H-NMR (deuterochloroform) δ: 7,68 - 7,61 (2H, m), 7,47 - 7,38 (3H, m), 7,32 - 7,24 (1H, m), 5,56 (1H, d), 5,36 - 5,24 (1H, m), 5,04 (1H, d), 4,88 (1H, d), 4,86 - 4,77 (1H, m), 4,64 - 4,39 (2H, m), 3,32 - 3,17 (1H, m), 2,97 - 2,85 (1H, m), 2,93 (3H, s), 2,76 (3H, s), 2,80 - 2,71 (1H, m), 2,65 - 2,49 (1H, m), 2,41 - 2,30 (1H, m), 2,12-1,61 (6H, m), 1,42 (9H, s);
Analýza pre C31H39N5O]1S.H2O·.
vypočítané: 52,61 % C, 5,84 % H, 9,90 % N 4,53 % S nájdené: 52,94 % C, 5,69 % H, 9,72 % N 4,51 % S
Hmotnostná spektroskopia (ES +): 712 (31 %), 707 (100), 690 (M + 1,41 %), 634 (55 %).
Zlúčenina 505b sa pripraví podobným spôsobom ako zlúčenina 217, čím sa získa bezfarebný prášok (499 mg, 96 %) s teplotou topenia 95 - 145 °C.
[a]D 22 - 137° (c = 0,12, metanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3323, 2936, 1732, 1665, 1529, 1452, 1421, 1312, 1275, 1256, 1221, 1183,1153,1135,1101,990;
'H-NMR (perdeuterometanol) δ: 7,67 - 7,56 (2H, m), 7,49 - 7,38 (4H, m), 5,23 - 5,12 (1H, m), 5,02 (1H, d),
4.79 - 4,73 (1H, m), 4,52 - 4,34 (3H, m), 3,48 - 3,25 (2H, m), 3,03 - 2,85 (2H, m), 2,94 (3H, s), 2,74 (3H, s),
2.79 - 2,66 (1H, m), 2,52 - 2,38 (1H, m), 2,29 - 2,14 (1H, m), 2,04 - 1,70 (4H, m);
Analýza pre C27H31N5OnS.H2O:
vypočítané: 49,77 % C, 5,18 % H, 10,75 % N 4,92 % S nájdené: 49,83 % C, 5,01 % H, 10,27 % N 4,84 % S
Hmotnostná spektroskopia (ES +): 746 (42 %), 632 (M - 1, 100), 386 (60). Presná hmotnosť vypočítaná pre C27H32N5OHS (MH+): 634,1819; nájdené: 634,1807.
Zlúčenina 503c sa pripraví podobným spôsobom ako zlúčenina 213a, čím sa získa bezfarebná tuhá látka (446 mg, 84 %).
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3345, 2976, 2935, 1727, 1664, 1603, 1535, 1483, 1451, 1416, 1395, 1369, 1328, 1297, 1277, 1237, 1155,1135, 1076, 990, 755;
'H-NMR (deuterochloroform) δ: 7,98 - 7,89 (1H, m), 7,55 - 7,45 (1H, m), 7,39 - 7,18 (3H, m), 7,14 - 7,07 (1H, m), 7,00 - 6,90 (3H, m), 6,75 (1H, d), 5,57 - 5,50 (1H, m), 5,21 - 5,09 (1H, m), 4,64 - 4,42 (2H, m), 4,36 - 4,12 (3H, m), 3,95 - 3,87 (1H, m), 3,39 - 3,18 (1H, m), 3,00 - 2,82 (1H, m), 2,95 (3H, s), 2,69 - 2,48 (3H, m), 2,42 - 2,28 (1H, m), 2,07 - 1,62, (6H, m), 1,42 (9H, s);
Analýza pre C33H42N4OnS.H2O:
vypočítané: 54,99 % C, 6,15 % H, 7,77 % N 4,45 % S nájdené: 54,95 % C, 5,95 % H, 7,34 % N 4,20 % S
Hmotnostná spektroskopia (ES +): 725 (26 %), 720 (47), 703 (M+ + 1, 34), 433 (100), 403 (89).
Zlúčenina 504c sa pripraví podobným spôsobom ako zlúčenina 216e, čím sa získa bezfarebný prášok s teplotou topenia 85 - 100 °C.
[a]D 22 - 91,3° (c = 0,52, dichlórmetán);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3328, 2978, 2935, 1732, 1669, 1603, 1524, 1483, 1450, 1396,
153
1369, 1296, 1276, 1237, 1155, 1132, 1082, 989, 755;
'H-NMR (deuterochloroform) ô: 8,03 - 7,98 (1H, m), 7,52 - 7,44 (1H, m), 7,37 - 7,07 (5H, m), 7,01 - 6,92 (3H, m), 5,52 (1H, d), 5,28 - 5,20 (1H, m), 5,06 - 4,84 (3H, m), 4,64 - 4,39 (2H, m), 3,32 - 3,14 (1H, m),
2,99 - 2,88 (1H, m), 2,94 (3H, s), 2,65 - 2,45 (2H, m), 2,39 - 2,29 (1H, m), 2,12 - 1,58 (611, m), 1,40 (9H, s);
Analýza pre CjsH^NíOhS:
vypočítané: 56,56 % C, 5,75 % H, 8,00 % N 4,58 % S nájdené: 56,37 % C, 5,84 % H, 7,69 % N 4,37 % S
Hmotnostná spektroskopia (ES +): 723 (30 %), 718 (100), 701 (M+ + 1, 23), 645 (59).
Zlúčenina 505c sa pripraví podobným spôsobom ako zlúčenina 217, čím sa získa bezfarebná pena (252 mg, 72 %) s teplotou topenia 90 - 125 °C.
[a]D 23 - 133° (c = 0,11, metanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3314, 2938, 1792, 1734, 1663, 1604, 1535, 1483, 1448, 1415, 1250,1132,756;
’H-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid) δ: 8,81 - 8,76 (1H, m), 7,92 (1H, d), 7,68 - 7,54 (2H, m), 7,41 - 7,25 (3H, m), 7,16 - 6,91 (4H, m), 5,13 - 4,98 (2H, m), 4,72 - 4,63 (1H, m), 4,37 - 4,21 (2H, m), 2,92 (3H, s), 2,90 - 2,60 (3H, m), 2,35 - 2,26 (1H, m), 2,17 - 2,05 (2H, m), 1,99 - 1,80 (2H, m), 1,61 - 1,50 (1H, m); Analýza pre C29H32N4OnS.0,5H2O:
vypočítané: 53,29 % C, 5,09 % H, 8,57 % N 4,90 % S nájdené: 53,57 % C, 5,18 % II, 8,32 % N 4,75 % S
Hmotnostná spektroskopia (ES +): 643 (M -1, 100 %).
Zlúčenina 503d sa pripraví podobným spôsobom ako zlúčenina 213e, čím sa získa bezfarebná tuhá látka (563 mg, 90 %).
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3349, 2978, 2935, 1724, 1664, 1583, 1536, 1489, 1443, 1370, 1327, 1271, 1226, 1189, 1155, 1073, 990, 755;
‘H-NMR (deuterochloroform) δ: 7,77 (ÍH, d), 7,67 (1H, m), 7,45 - 7,10 (6H, m), 7,00 (2H, d), 5,93 - 5,80 (1H, m), 5,36 - 5,30 (1H, m), 4,63 - 4,24 (5H, m), 4,15 - 4,09 (1H, m), 3,37 - 3,22 (1H, m), 2,98 - 2,74 (1H, m), 2,94 (3H, s), 2,70 - 2,47 (3H, m), 2,40 - 2,30 (1H, m), 2,15 - 1,60 (5H, m), 1,42 (9H, s);
Analýza pre C33H42N4O11S.H2O:
vypočítané: 54,99 % C, 6,15 % H, 7,77 % N 4,45 % S nájdené: 54,60 % C, 5,88 % H, 7,49 % N 4,50 % S
Hmotnostná spektroskopia (ES +); 725 (19 %), 720 (91), 703 (M+ + 1, 74), 647 (76), 629 (100), 433 (78).
Zlúčenina 504d sa pripraví podobným spôsobom ako zlúčenina 216e, čím sa získa bezfarebný prášok (466 mg, 85 %) s teplotou topenia 75 - 100 °C.
[cx]e>2z - 99,3° (c = 0,60, dichlórmetán);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3335, 2978, 2937, 1728, 1669, 1584, 1525, 1487, 1444, 1416, 1369, 1328, 1272, 1227,1188, 1155, 989, 754;
‘H-NMR (deuterochloroform) δ: 7,82 - 7,77 (1H, m), 7,66 - 7,65 (1H, m), 7,46 - 7,32 (4H, m), 7,26 - 7,10 (2H, m), 7,04 - 6,98 (2H, m), 5,68 (1H, d), 5,37 - 5,31 (1H, m), 5,11 (1H, d), 5,02 - 4,88 (2H, m), 4,66 - 4,42 (2H, m), 3,35 - 3,17 (1H, m), 2,98 - 2,89 (1H, m), 2,96 (3H, s), 2,84 - 2,78 (1H, m), 2,72 - 2,47 (1H, m), 2,42
- 2,32 (1H, m), 2,14 - 1,58 (6H, m), 1,43 (9H, s);
Analýza pre C33H40N4O11S:
vypočítané: 56,56% C, 5,75% H, 8,00% N nájdené: 56,36 % C, 5,82% H, 7,71% N
Hmotnostná spektroskopia (ES +): 723 (56 %), 718 (90), 701 (M+ + 1, 36), 645 (100).
Zlúčenina 505d sa pripraví podobným spôsobom ako zlúčenina 217, čim sa získa bezfarebná pena (353 mg, 73 %) s teplotou topenia 80 - 115 °C.
[cc]D 23 - 138° (c = 0,11, metanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3327, 2937, 1728, 1666, 1584, 1529, 1487, 1443, 1413, 1328, 1273, 1227,1189, 1155, 1134, 989, 754;
‘H-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid) δ: 8,82 (1H, d), 7,76 - 7,72 (1H, m), 7,61 - 7,53 (2H, m), 7,48 - 7,32 (4H, m), 7,24 - 7,17 (1H, m), 7,11 - 7,06 (2H, m), 5,14 - 5,06 (3H, m), 4,73 - 4,64 (1H, m), 4,38 - 4,24 (2H, m), 2,92 (3H, s), 2,89 - 2,61 (3H, m), 2,38 - 2,27 (1H, m), 2,19 - 2,06 (2H, m). 2,02 - 1,79 (3H, m), 1,63 -
- 1,52 (1H, m);
Analýza pre €29Η32Ν4Ο||.0,5Η2Ο:
vypočítané: 53,29 % C, 5,09 % H, 8,57 % N 4,90 % S nájdené: 53,24 % C, 5,14 % H, 8,34 % N 4,86 % S
Hmotnostná spektroskopia (ES +): 643 (M -1, 100 %), 385 (62).
Zlúčenina 503e sa pripraví podobným spôsobom ako zlúčenina 213e, čím sa získa biela tuhá látka (70 %) s teplotou topenia 100 - 103 °C.
[a]D 2> - 84,0° (c = 0,05, dichlórmetán);
154
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3459 - 3359, 1722, 1664, 1514, 1368,1328,1278,1247,1155; 'H-NMR (deuterochloroform) δ: 7,52 (1H, m), 7,06 - 6,99 (2H, m), 5,69 (1H, d, J = 9,0), 5,23 (1H, m), 4,61 -
- 4,16 (6H, m), 3,36 - 3,19 (1H, m), 2,96 (3H, s), 2,67 - 2,49, 2,42 - 2,32, 2,06 - 1,89 a 1,69 (10H, 4m), 1,43 (9H, s).
Zlúčenina 504e sa pripraví podobným spôsobom ako zlúčenina 216a, čím sa získa biela tuhá látka (98 %) s teplotou topenia 91-98 °C.
[cc]D 25 - 112,5° (c = 0,06, dichlórmetán);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3453 - 3364, 1727, 1668, 1513, 1420, 1368,1245,1155;
'H-NMR (deuterochloroform) δ: 7,54 (1H, d, J = 5,3), 7,18 (1H, d, J = 7,8), 7,05 (1H, d, J = 5,4), 5,42 (1H, d, J = 8,9), 5,25 (1H, m), 5,02 (2H, m), 4,96 - 4,87 (1H, m), 4,65 - 4,42 (2H, m), 3,34 - 3,17 (1H, m), 2,97 -
- 2,93 (1H, m), 2,97 (3H, s), 2,87 - 2,78, 2,73 - 2,50, 2,38 - 2,32, 2,13 - 1,88, 1,69 - 1,60 (9H, 5m), 1,44 (9H, s).
Zlúčenina 505e. Roztok zlúčeniny 217 (0,33 g, 0,51 mmol) v suchom dichlórmetáne (3 ml) sa ochladí (ľad/voda) bez prístupu vlhkosti. Za miešania sa pridá kyselina trifluóroctová (2 ml). Roztok sa po odstránení chladiaceho kúpeľa udržiava pri teplote miestnosti počas 2 hodín a odparí sa vo vákuu. Zvyšok sa trikrát odparí z dichlórmetánu, trituruje sa dietyléterom a prefiltruje. Tuhá látka sa prečistí pomocou veľmi rýchlej chromatografie (silikagél, 0 - 6 % metanol v dichlórmetáne), čim sa získa produkt vo forme bielej sklovitej tuhej látky (0,296 g, 98 %) s teplotou topenia 110 - 122 °C.
[a]D 22 - 163,5° (c = 0,1, metanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3514 - 3337, 1726, 1664, 1513, 1420, 1245, 1152, 1134, 990; 'H-NMR (perdeuterometanol) δ: 7,79 (1H, d, J = 5,2), 7,12 (1H, d, J = 5,2), 5,20 (1H, m), 5,02 - 4,72 (2H, m, prekryté vodou), 4,59 - 4,32 (3H, m), 3,48 - 3,29, 3,08 - 2,75, 2,50 - 2,41, 2,31 - 2,22, 2,08 - 1,89, 1,72 -1,63 (11H, 6m), 2,95 (3H, s).
Zlúčenina R1
506a 507a PhC(O)-
506b 507b MeS(O)2-
506c 507c MeOC(O)-
506g 507g CH3C(O)-
Zlúčenina 506a. Roztok zlúčeniny 212e (321 mg, 0,929 mmol) a (3S)-terc-butyl-3-amino-5-diazo-4-oxopentanoátu (198 mg, 0,929 mmol) v dichlórmetáne (3 ml) sa ochladí na teplotu 0 °C a pridá sa N,N-diizopropyletylamin (0,16 ml, 1,86 mmol) a 2-(lH-benzotriazol-l-yl)-l,l,3,3-tetrametyluróniumtetrafluoroborát (328 mg, 1,02 mmol). Roztok sa mieša cez noc pri teplote miestnosti, zriedi sa etylacetátom a premyje sa IM roztokom hydrogénsíranu sodného (dvakrát), vodným roztokom hydrogenuhličitanu sodného (dvakrát) a soľankou, vysuší sa nad síranom horečnatým a odparí sa. Po chromatografii na silikagéli, pričom sa ako elučné činidlo použije etylacetát, sa získa zlúčenina 506a (425 mg, 85 %) vo forme bezfarebnej peny. [cc]D 23 - 124,9° (c = 0,2, dichlórmetán);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3332, 2111, 1728, 1658, 1532, 1421, 1392, 1367, 1279, 1256, 1155;
'H-NMR (deuterochloroform) δ: 7,82 (2H, m), 7,49 (3H, m), 7,28 (1H, d, J = 9,3), 7,05 (1H, d, J = 7,3), 5,06 (1H, s), 5,18 (211, m), 4,78 (1H, m), 4,62 (1H, m), 3,29 (1H, m), 3,08 - 2,79 (3H, m), 2,58 (1H, dd, J = 16,8 a 5,6), 2,20 - 1,85 (4H, m), 1,70 (1H, m), 1,45 (9H, s);
Hmotnostná spektroskopia (ES +): 539,58 (M - 1, 97,9 %), 529,59 (100).
155
Zlúčenina 506b sa pripraví podobným spôsobom ako zlúčenina 506a (74 %) vo forme oranžovej tuhej látky s teplotou topenia 75 °C (za rozkladu).
[cc]D 20 - 92,0° (c = 0,036, dichlórmetán);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3438, 2904, 2113,1728, 1669, 1523, 1368, 1328, 1155;
'H-NMR (deuterochloroform) δ: 7,48 (1H, d, J = 8,1), 5,83 - 5,68 (1H, m), 5,55 - 5,50 (1H, m), 5,43 - 5,14 (1H, m), 4,83 - 4,45 (3H, m), 3.40 - 3,19 (1H, m), 2,98 (3H, s), 2,92 - 2,30 (411, m), 2,24 - 1,70 (6H, m), 1,43 (9H, s).
Zlúčenina 506c sa pripraví podobným spôsobom ako zlúčenina 506a, čím sa získa svetložltá pena (405 mg, 82 %).
[ct]D 20 - 144° (c = 0,2, dichlórmetán);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3339, 2978, 2958, 2112, 1728, 1674, 1530, 1459, 1415, 1367, 1274, 1252,1154, 1063;
'H-NMR (deuterochloroform) δ: 7,23 (1H, d, J = 8,2), 5,51 - 5,31 (2H, m), 5,21 - 5,16 (1H, m), 4,77 - 4,55 (3H, m), 3,68 (3H, s), 3,35 - 3,18 (1H, m), 3,04 - 2,51 (4H, m), 2,40 - 2,30 (1H, m), 2,09 - 1,66 (5H, m), 1,45 (9H, s);
Hmotnostná spektroskopia (ES +): 493.
Zlúčenina 506g sa pripraví podobným spôsobom ako zlúčenina 506a (81 %).
[α]ρ28 - 146,7° (c = 0,4, dichlórmetán);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3438, 2904, 2113, 1728, 1669, 1523, 1368, 1328, 1155;
'H-NMR (deuterochloroform) δ: 7,32 (1H, d), 6,43 (1H, d), 5,50 (1H, s), 5,22 (1H, m), 4,94 (1H, m), 4,77 (1H, m), 4,60 (1H, m), 3,24 (1H, m), 3,03 - 2,52 (4H, m), 2,36 (1H, m), 2,10 - 1,64 (5H, m), 2,02 (3H, s), 1,45 (9H, s);
Analýza pre C2iH2oN607: vypočítané: 52,69 % C, 6,32 % H, 17,05% N nájdené: 52,51% C, 6,27 % H, 17,36% N
Hmotnostná spektroskopia (ES +): 477 (M+ -1, 100 %).
Zlúčenina 507a. Zlúčenina 506a (3,0 g, 5,55 mmol) v suchom dichlórmetáne (40 ml) sa ochladí na teplotu 0 °C a počas 4 minút sa prikvapká 30 % kyselina bromovodíková v kyseline octovej (1,1 ml, 5,55 mmol). Zmes sa mieša počas 9 minút pri teplote 0 °C a rozloží sa vodným roztokom hydrogenuhličitanu sodného. Produkt sa extrahuje etylacetátom, premyje sa vodným roztokom hydrogenuhličitanu sodného a soľankou, vysuší sa nad síranom horečnatým a odparí sa, čím sa získa 2,97 g (92 %) zlúčeniny 507a vo forme bezfarebnej peny.
[cc]D 23 - 82,3° (c = 0,23, dichlórmetán);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3333, 1726, 1659, 1530, 1458, 1447, 1422, 1395, 1368, 1279, 1256, 1222, 1155,728;
'H-NMR (deuterochloroform) δ: 7,81 (2H, m), 7,50 (3H, m), 7,11 (1H, d, J = 8,0), 7,01 (1H, d, J = 7,4), 5,20 (2H, m), 5,00 (1H, m), 4,06 (2H, s), 3,28 (1H, m), 3,20 - 2,70 (4H, m), 2,42 (1H, m), 2,10 - 1,85 (4H, m), 1,72(1 H, m), 1,44 (9H, s);
Analýza pre C26H33BrN4O7.0,7H2O: vypočítané: 51,53% C, 5,72 % H, 9,24 %N nájdené: 51,55% C, 5,52% H, 9,09% N
Hmotnostná spektroskopia (ES +): 595, 593 (M+ + 1).
Zlúčenina 507b sa pripraví podobným spôsobom ako zlúčenina 507a vo forme oranžovej peny (68 %). [ct]D 20 - 135° (c = 0,053, dichlórmetán);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3429, 2944, 2935, 1723, 1670, 1458, 1408, 1327, 1225, 1154, 991; 'H-NMR (deuterochloroform) δ: 7,38 (1H, d, J = 8,2), 5,69 (1H, d, J = 9,3), 5,43 - 5,34 (1H, m), 5,07 - 4,97 (1H, m), 4,70 - 4,42 (2H, m), 4,12 (2H, s), 3,35 - 3,17 (1H, m), 3,10 - 2,69 (4H, m), 2,98 (3H, s), 2,43 - 2,33 (1H, m), 2,15 - 1,65 (5H, m), 1,43 (9H, s);
Analýza pre C2oH31BrN408S:
vypočítané: 42,33 % C, 5,51 % H, 9,87 % N nájdené: 42,69% C, 5,52 % H, 9,97% N
Zlúčenina 507c sa pripraví podobným spôsobom ako zlúčenina 507a, čím sa získa svetložltá pena (320 mg, 78 %).
107° (c = 0,2, dichlórmetán);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3401, 2956, 1726, 1670, 1528, 1452, 1415, 1395, 1368, 1276, 1251, 1155, 1064;
'H-NMR (deuterochloroform) δ: 7,07 (1H, d, J = 7,6), 5,47 (1H, d, J = 8,1), 5,21 - 5,16 (1H, m), 5,03 - 4,94 (1H, m), 4,75 - 4,56 (2H, m), 4,06 (2H, s), 3,69 (3H, s), 3,31 - 3,13 (1H, m), 3,03 - 2,92 (2H, m), 2,81 - 2,58 (2H, m), 2,41 - 2,31 (1H, m), 2,10 -1,66 (5H, m), 1,44 (9H, s).
Zlúčenina 507g sa pripraví podobným spôsobom ako zlúčenina 507a, čím sa získa svetložltá pena (84 %).
156 [a]D 22 - 109,6° (c = 0,1, dichlórmetán);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3324, 1727, 1659, 1535, 1458, 1444, 1423, 1369, 1279, 1256, 1223,1155;
'H-NMR (deuterochloroform) δ: 7,12 (1H, d, J = 7,8), 6,33 (1H, d, J = 7,5), 5,19 (1H, m), 4,97 (2H, m), 4,58 (1H, m), 4,06 (2H, s), 3,20 (1H, m), 3,05 - 2,69 (4H, m), 2,35 (1H, m), 2,14 - 1,68 (5H, m), 2,03 (3H, s), 1,44 (9H, s);
Analýza pre C2lH31BrN4O7.0,3H2O:
vypočítané: 46,99% C, 5,93% H, 10,44% N nájdené: 46,97 % C, 5,90% H, 10,35% N
O O
508a,b 284,285
Zlúčenina R
508a Cl 1
284 ύ
508b Me 1
285 Me Ó
Zlúčenina 508a. K roztoku zlúčeniny 506c (547 mg, 1 mmol) v dimetylformamide (4 ml) sa pridá fluorid draselný (145 mg, 2,5 mmol, 2,5 ekvivalentu). Po 10 minútovom miešaní pri teplote miestnosti sa pridá kyselina 2,6-dichlórbenzoová (229 mg, 1,2 mmol, 1,2 ekvivalentu). Po 3 hodinovom miešaní pri teplote miestnosti sa pridá etylacetát (30 ml). Roztok sa premyje nasýteným roztokom hydrogenuhličitanu sodného (30 ml) a soľankou, vysuší sa nad síranom horečnatým a zahustí sa vo vákuu, čím sa získa 590 mg (90 %) svetložltej peny.
[a]D 22 - 85° (c = 0,20, dichlórmetán);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3400, 2956, 1737, 1675, 1528, 1434, 1414, 1368, 1344, 1272, 1197, 1152, 1061;
'H-NMR (deuterochloroform) δ: 7,36 - 7,33 (3H, m), 7,04 (1H, d, J = 8,0), 5,46 (1H, d, J = 7,8), 5,19 - 5,16 (1H, m), 5,08 (2H, AB), 4,97 - 4,55 (1H, m), 4,69 - 4,55 (211, m), 3,68 (3H, s), 3,30 - 3,10 (1H, m), 3,01 -
- 2,50 (4H, m), 2,40 - 2,33 (1H, m), 2,15 - 1,60 (5H, m), 1,44 (9H, s);
Analýza pre C28H34Cl2N4O10:
vypočítané: 51,15% C, 5,21% H, 8,52% N nájdené: 51,35% C, 5,32% H, 8,56% N
Zlúčenina 284 sa pripraví zo zlúčeniny 508a pomocou spôsobu použitého na prípravu zlúčeniny 505 zo zlúčeniny 504, čím sa získa 330 mg (65 %) bielej tuhej látky s teplotou topenia 115 °C (za rozkladu). [cc]D 20 - 107° (c = 0,2, dichlórmetán);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3340, 2954, 1738,1664, 1530, 1434, 1272, 1198, 1148, 1060; 'H-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid) δ: 8,91 (1H, d, J = 7,2), 7,67 - 7,63 (3H, m), 7,54 (1H, d, J = 8,0), 5,24 (2H, s), 5,20 - 5,15 (1H, m), 4,79 - 4,70 (1H, m), 4,46 - 4,37 (2H, m), 3,58 (3H, s), 3,33 - 3,20 (1H, m), 2,94 -
- 2,55 (4H, m), 2,30 - 1,60 (6H, m);
Analýza pre C24H26Cl2N4Oio.H20:
vypočítané: 46,54 % C, 4,56 % H, 9,05 % N nájdené: 46,36 % C, 4,14% H, 8,88% N
157
Zlúčenina 508b sa pripraví podobným spôsobom ako zlúčenina 508a, čím sa získa svetložltá pena (460 mg, 82 %).
[a]D 22 - 115° (c = θ,2, dichlórmetán);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3413, 2960, 1729, 1675, 1526, 1514, 1461, 1421, 1368, 1265, 1116, 1096;
'H-NMR (deuterochloroform) δ: 7,27 - 7,03 (4H, m), 5,48 (1H, d, J = 8,2), 5,20 - 5,14 (1H, m), 5,04 (2H, AB), 4,93 - 4,86 (1H, m), 4,80 - 4,56 (2H, m), 3,77 (3H, s), 3,32 - 3,15 (1H, m), 3,00 - 2,56 (4H, m), 2,41 -
- 2,25 (1H, m), 2,37 (6H, s), 2,19 - 1,77 (5H, m), 1,45 (9H, s);
Hmotnostná spektroskopia (ES +): 617.
Zlúčenina 285 sa pripraví podobným spôsobom ako zlúčenina 284, čím sa získa biela tuhá látka (303 mg, 78 %) s teplotou topenia 110 °C (za rozkladu).
[a]D 20 - 128° (c = 0,10, dichlórmetán);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3339, 2958, 1731, 1666, 1529, 1420, 1266, 1248, 1115, 1070; 'H-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid) δ: 8,90 (1H, d, J = 7,4), 7,54 (1H, d, J = 7,9), 7,36 - 7,28 (1H, m), 7,17
- 7,14 (2H, m), 5,19 - 5,15 (3H, m), 4,84 - 4,74 (1H, m), 4,45 - 4,37 (2H, m), 3,59 (3H, s), 3,45 - 3,25 (1H, m), 2,95 - 2,64 (4H, m), 2,35 (6H, s), 2,30 - 1,60 (611, m);
Analýza pre C/ôIAAOio.HjO:
vypočítané: 53,98 % C, 5,92 % H, 9,68 % N nájdené: 53,50% C, 5,52% H, 9,49% N
Hmotnostná spektroskopia (ES +): 559.
O
509a-d
Zlúčenina R
509a 510a
509b 280 o N-N S—< II / VN
509c 283 X
509d 510d Ä
Zlúčenina 510a. Roztok zlúčeniny 506a (2,27 g, 4,2 mmol) v suchom dichlórmetáne (50 ml) sa nechá reagovať s 30 % kyselinou bromovodíkovou v kyseline octovej (1,84 ml, 9,2 mmol, 2,2 ekvivalentu) pri teplote 0 °C v dusíkovej atmosfére. Po 10 minútovom miešaní pri teplote 0 °C je reakcia ukončená a v médiu sa vylúčia biele kryštály. Tuhá látka sa odfiltruje a premyje etylacetátom a dietyléterom, čím sa získa 2,20 g (100 %) kyseliny [3S(lS,9S)]-5-bróm-3-(9-benzoylamino-6,10-dioxo-l,2,3,4,7,8,9,10-oktahydro-6H-pyrida
158 zino[l,2-a][l,2]diazepín-l-karboxamido)-4-oxopentánovej, ktorá sa použije bez ďalšieho čistenia.
'H-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid) δ: 8,87 (1H, d, J = 7,3), 8,63 (1H, d, J = 7,6), 7,91 - 7,87 (2H, m), 7,60 - 7,44 (3H, m), 6,92 (1H, široký s), 5,14 - 5,09 (1H, m), 4,92 - 4,65 (2H, m), 4,43 (2H, AB), 4,41 - 4,35 (1H, m), 3,33 - 3,22 (1H, m), 2,98 - 2,90 (1H, m), 2,89 - 2,57 (2H, m), 2,35 - 2,15 (3H, m), 1,99 - 1,91 (2H, m), 1,75 - 1,60 (2H, m).
Roztok brómketónu (535 mg, 1 mmol) v suchom dimetylformamide (10 ml) sa nechá reagovať s fluoridom draselným (150 mg, 2,5 mmol, 2,5 ekvivalentu) v dusíkovej atmosfére. Po 5 minútovom miešaní pri teplote miestnosti sa pridá 2-merkaptotiazol (140 mg, 1,2 mmol, 1,2 ekvivalentu). Zmes sa nechá reagovať cez noc, pridá sa etylacetát (150 ml) a organický roztok sa premyje soľankou, vysuší nad síranom horečnatým a odparí vo vákuu. Zvyšok sa prekryštalizuje z dietyléteru, odfiltruje a prečistí chromatografiou na silikagéli, pričom sa ako elučné činidlo použije gradient metanolu (0 až 5 %) v dichlórmetáne. Po odparení sa získa 344 mg (60 %) bielej tuhej látky s teplotou topenia 90 - 95 °C (za rozkladu).
[a]D 20 - 82° (c = 0,2, dichlórmetán); Infračervené spektrum (bromid draselný): 3328, 2941,1745, 1659, 1535, 1422, 1276, 1255, 1223, 1072; 'H-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid) δ: 8,92 (1H, d, J = 7,6), 8,68 (1H, d, J = 7,6), 7,98 - 7,90 (2H, m), 7,75 - 7,67 (1H, m), 7,64 - 7,50 (4H, m), 5,22 - 5,18 (1H, m), 4,95 - 4,74 (2H, m), 4,58 - 4,38 (3H, m), 3,52 -
- 3,19 (1H, m), 3,05 - 2,65 (4H, m), 2,40 - 1,50 (6H, m);
Analýza pre ¢25^7^()482.H2O: vypočítané: 50,75 % C, 4,94 % H, 11,84% N nájdené: 51,34% C, 4,70 % H, 11,58% N
Hmotnostná spektroskopia (ES +): 572.
Zlúčenina 509b. Zlúčenina 507a (100 mg, 0,17 mmol) v suchom dimetylformamide sa nechá reagovať s l-fenyl-lH-tetrazol-5-tiolom (33 mg, 0,187 mmol) a fluoridom draselným (15 mg, 0,34 mmol). Zmes sa mieša pri teplote miestnosti počas 2 hodín, zriedi sa etylacetátom, premyje sa vodným roztokom hydrogenuhličitanu sodného (dvakrát) a soľankou, vysuší nad síranom horečnatým a odparí. Produkt sa prečistí pomocou veľmi rýchlej chromatografie na silikagéli, pričom sa ako elučné činidlo použije etylacetát, čím sa získa 103 mg (88 %) bezfarebnej peny.
[ct]D 23 - 92,2° (c = 0,1, dichlórmetán);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3334, 1726, 1660, 1528, 1501, 1417, 1394, 1368, 1279, 1253, 1155;
'H-NMR (deuterochloroform) δ: 7,82 (2H, m), 7,60 - 7,40 (8H, m), 7,39 (1H, d, J = 8,1), 7,05 (1H, d, J =
- 7,3), 5,26 (1H, m), 5,15 (1H, m), 4,99 (1H, m), 4,60 (2H, m), 4,30 (1H, d, J = 17,2), 3,32 (1H, m), 3,10 -
- 2,75 (4H, m), 2,40 (1H, m), 2,24 (1H, m), 1,90 (3H, m), 1,75 (1H, m), 1,44 (9H, s);
Hmotnostná spektroskopia (ES +): 691,47 (M+ + 1).
Zlúčenina 280 sa pripraví podobným spôsobom ako zlúčenina 505 zo zlúčeniny 504. Zlúčenina 509b (98 mg, 0,142 mmol) v dichlórmetáne (1 ml) sa ochladí na teplotu 0 °C a pridá sa kyselina trifluóroctová (1 ml). Zmes sa mieša počas 15 minút pri teplote 0 °C a 30 minút pri teplote miestnosti, potom sa odparí pri zníženom tlaku. Zvyšok sa trituruje suchým toluénom a odparí sa. Po chromatografii na silikagéli, pričom sa ako elučné činidlo použije 10 % metanol v dichlórmetáne, sa získa bezfarebné sklo, ktoré sa prekryštalizuje zo zmesi dichlórmetán/dietyléter, čím sa získa 62 mg, 69 %) bezfarebnej tuhej látky s teplotou topenia 145 °C (za rozkladu).
[oc]D 22 - 80,9° (c = 0,1, dichlórmetán);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3400, 1727, 1658, 1530, 1501, 1460, 1445, 1416, 1280,1254; ‘H-NMR (deuterochloroform) δ: 8,00 (1H, m), 7,79 (2H, d, J = 6,7), 7,58 - 7,30 (9H, m), 5,25 (2H, m), 4,94 (1H, m), 4,53 (2H, m), 4,35 (1H, m), 3,35 (1H, m), 3,01 (3H, m), 2,73 (1H, m), 2,38 (1H, m), 1,98 (4H, m), 1,64 (1H, m);
Analýza pre C29H3oN807S.O,2TFA: vypočítané: 53,71 % C, 4,63 % H, 17,04% N nájdené: 53,97 % C, 4,92% H, 16,77% N
Hmotnostná spektroskopia (ES +): 633,55 (M+ - 1).
Zlúčenina 509c sa pripraví podobným spôsobom ako zlúčenina 509b, čím sa získa bezfarebné sklo (34 %).
[cc]D 22 - 77,1° (c = 0,25, dichlórmetán);
Infračervené spektrum (film): 3311, 1724, 1658, 1603, 1578, 1536, 1488, 1458, 1426, 1368, 1340, 1279, 1256, 1231, 1155, 707;
'H-NMR (deuterochloroform) δ: 8,29 (2H, m), 7,84 (2H, m), 7,48 (4H, m), 7,22 (3H, m), 5,20 (2H, m), 4,90 (2H, m), 4,58 (1H, m), 3,29 (1H, m), 3,20 - 2,70 (4H, m), 2,38 (2H, m), 1,96 (4H, m), 1,68 (1H, m), 1,42 (9H, s);
Hmotnostná spektroskopia (ES +): 608,54 (M + 1).
159
Zlúčenina 283 sa pripraví podobným spôsobom ako zlúčenina 280, čím sa získa bezfarebná pena (100 %) s teplotou topenia 125 °C.
[a] X - 84,1° (c = 0,1, 20 % metanol/dichlórmetán);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3401, 1736, 1663, 1538, 1489, 1459, 1425, 1281, 1258, 1200, 1134;
’H-NMR (perdeuterometanol/deuterochloroform) δ: 8,38 (2H, m), 7,84 - 7,40 (8H, m), 5,16 (4H, m), 4,80 (1H, m), 4,56 (1H, m), 3,50 (1H, m), 3,12 (2H, m), 2,82 (2H, m), 2,37 (1H, m), 2,10 - 1,65 (5H, m);
Analýza pre C27H29N5O8.0,4H2O:
vypočítané: 51,77 % C, 4,61 % H, 10,41 % N nájdené: 52,19% C, 4,93% H, 9,99% N
Zlúčenina 509d sa pripraví podobným spôsobom ako zlúčenina 509b, čím sa získa bezfarebná tuhá látka (49,6 mg, 82 %).
’H-NMR (deuterochloroform) δ: 8,02 (1H, s), 7,95 - 7,86 (1H, m), 7,84 - 7,76 (2H, m), 7,62 - 7,35 (4H, m),
7.22 - 7,07 (1H, m), 6,43 (1H, d), 5,26 - 5,08 (2H, m), 5,03 - 4,72 (3H, m), 4,66 - 4,50 (1H, m), 3,43 - 3,19 (1H, m), 3,15 - 2,97 (1H, m), 2,86 - 2,72 (3H, m), 2,48 - 2,31 (1H, m), 2,18 - 1,60 (6H, m), 1,43 (9H, s).
Zlúčenina 510d sa pripraví podobným spôsobom ako zlúčenina 280, čím sa získa bezfarebná tuhá látka (25,7 mg, 57 %) s teplotou topenia 140 - 180 °C.
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3391, 2945, 1733, 1664, 1530, 1422, 1363, 1277, 1259, 1204; ’H-NMR (perdeuterometanol) δ: 8,23 (1H, s), 7,94 (1H, d), 7,87 (2H, d), 7,54 - 7,42 (3H, m), 6,48 (1H, d),
5.22 - 5,15 (1H, m), 4,57 - 4,46 (1H, m), 3,62 - 3,41 (1H, m), 3,22 - 3,13 (1H, m), 3,02 - 2,81 (2H, m), 2,70 - 1,80 (6H, m);
Analýza pre C26H28N6O8.1,5H2O:
vypočítané: 54,30 % C, 5,35% H, 14,61% N nájdené: 54,14% C, 5,35% H, 13,04% N
Hmotnostná spektroskopia (ES +): 551 (M - 1, 100 %). Presná hmotnosť vypočítaná pre C26H29N6O8 (MH+): 553,2047; nájdené: 553,2080.
O O
504f-h 505f,280b,283b
Zlúčenina R
504f 505f cyS'X
504g 280b Q \ Ak X,n
504h 283b X
160
Zlúčenina 505f sa pripraví podobným spôsobom ako zlúčenina 508a, pričom sa použije zlúčenina 507b a 3-chlór-2-hydroxy-4H-pyrido-[l,2-a]pyrimidin-4-ón, a následnou hydrolýzou zlúčeniny 504f kyselinou trifluóroctovou, čím sa získa svetlohnedý prášok (65 mg, 30 %).
[a]D 20 - 128° (c = 0,1, metanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3414, 2928, 1667, 1527, 2459, 1407, 1328, 1274, 1153, 1134; 'H-NMR (perdeuterometanol) δ: 9,35 (1H, d, J = 6,6), 8,34 (1H, t, J = 7,2), 7,99 - 7,95 (1H, m), 7,76 - 7,69 (1H, m), 5,85 - 5,45 (3H, m), 5,30 - 5,21 (1H, m), 4,93 - 4,66 (2H, m), 3,81 - 3,65 (1H, m), 3,66 (3H, m),
3.45 - 2,52 (4H, m), 2,52 -1,71 (6H, m), (D. J. Hlasta a kol., J. Med. Chem. 38, 4687 - 4692 (1995)).
Zlúčenina 504g sa pripraví podobným spôsobom ako zlúčenina 509b vo forme bezfarebnej peny (83 %). [a]D 23 - 112,7° (c = 0,2, dichlórmetán);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3312, 1726, 1668, 1501, 1413, 1395, 1369, 1328, 1276, 1254, 1155;
'H-NMR (deuterochloroform) δ: 7,59 (5H, m), 7,48 (1H, d, J = 8,0), 5,68 (1H, d, J = 9,0), 5,37 (1H, m), 4,95 (1H, m), 4,62 - 4,31 (4H, m), 3,36 (1H, m), 2,98 (3H, s), 2,88 (4H, m), 2,66 (1H, m), 2,42 (2H, m), 1,98 (1H, m), 1,75(1 H, m), 1,43 (9H, s).
Zlúčenina 280b sa pripraví podobným spôsobom ako zlúčenina 280 vo forme bezfarebnej peny (100 %) s teplotou topenia 120 - 125 °C.
[ot]D 25 -112,4° (c = 0,1, dichlórmetán);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3328, 1730, 1664, 1529, 1501, 1410, 1328, 1277, 1219, 1153, 1134, 991;
'H-NMR (deuterochloroform) δ: 8,07 (1H, d, J = 7,8), 7,58 (5H, s), 6,41 (1H, d, J = 9,5), 5,32 (1H, m), 5,04 (1H, m), 4,70 (1H, d, J = 17,5), 4,60 (3H, m), 3,50 - 2,90 (3H, m), 2,98 (3H, s), 2,45 (2H, m), 2,06 (4H, m), 1,68 (1H, m).
Zlúčenina 504h sa pripraví podobným spôsobom ako zlúčenina 509b vo forme bezfarebnej peny (24 %). [a]D 23 -101,0° (c = 0,2, dichlórmetán);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3330, 1727, 1669, 1425, 1396, 1369, 1328, 1276, 1256, 1231, 1155, 1137, 991;
'H-NMR (deuterochloroform) δ: 8,28 (2H, široký d, J = 9,4), 7,71 (1H, d, J = 7,9), 7,22 (2H, s), 6,03 (1H, d, J = 9,4), 5,36 (1H, m), 4,95 (2H, m), 4,52 (2H, m), 3,29 (1H, m), 3,07 (3H, s), 3,23 - 2,75 (3H, m), 2,66 - 2,35 (2H, m), 2,30 - 1,60 (5H, m), 1,42 (9H, s).
Zlúčenina 283b sa pripraví podobným spôsobom ako zlúčenina 280 vo forme bezfarebnej peny (100 %) s teplotou topenia 120 - 125 °C.
[a]D25 - 85,2° (c = 0,1, 10 % metanol/dichlórmetán);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3337, 1738, 1667, 1560, 1457, 1424, 1326, 1317, 1278, 1258, 1200, 1189, 1150, 1133,991;
'H-NMR (perdeuterometanol/deuterochloroform) δ: 8,35 (2H, m), 7,54 (2H, m), 5,32 (2H, m), 4,83 (2H, m),
4.45 (2H, m), 3,43 - 2,77 (4H, m), 2,97 (3H, s), 2,42 (2H, m), 2,05 - 1,72 (5H, m).
O O
508c-e 511c,280c,283c
Zlúčenina R
508c 511c X
161
Zlúčenina R
508d 280c Q \ /A s A
508e 283c Ό
Zlúčenina 508c sa pripraví podobným spôsobom ako zlúčenina 509b, čím sa získa 544 mg (97 %) svetložltej peny.
[a]D 20 - 86° (c = 0,19, dichlórmetán);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3426, 2947, 1725, 1669, 1551, 1418, 1383, 1253, 1155, 1064;
’H-NMR (deuterochloroform) δ: 8,49 (2H, d, J = 4,8), 7,13 (1H, d, J = 7,9), 7,03 - 6,98 (1H, m), 5,47 (1H, d, J = 7,9), 5,23 - 5,19 (1H, m), 5,09 - 5,01 (1H, m), 4,84 - 4,51 (2H, m), 4,04 (2H, AB), 3,69 (3H, s), 3,38 -
- 3,19 (1H, m), 3,06 - 2,64 (4H, m), 2,40 - 1,76 (6H, m), 1,43 (9H, s);
Analýza pre C25H34N60gS:
vypočítané: 51,89% C, 5,92% H, 14,52% N nájdené: 51,49% C, 6,04 % H, 13,87% N
Hmotnostná spektroskopia (ES +): 579.
Zlúčenina 511c sa pripraví podobným spôsobom ako zlúčenina 280, čím sa získa 370 mg (79 %) bieleho prášku s teplotou topenia 105 °C (za rozkladu).
[a]D 22 - 94° (c = 0,20, dichlórmetán);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3316, 3057, 2957, 1724, 1664, 1252, 1416, 1384, 1254, 1189, 1063;
’H-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid) δ: 8,85 (1H, d, J = 7,8), 8,62 (2H, d, J = 4,7), 7,53 (1H, d, J = 8,0), 7,28 - 7,23 (1H, m), 5,21 - 5,17 (1H, m), 4,87 - 4,79 (1H, m), 4,47 - 4,35 (2H, m), 4,23 (2H, AB), 3,58 (3H, s), 3,30 - 3,21 (1H, m), 2,95 - 2,50 (4H, m), 2,35 - 1,60 (6H, m);
Analýza pre C2iH26NsO8S.H2O:
vypočítané: 46,66 % C, 5,22 % H, 15,55 % N nájdené: 46,66 % C, 5,13% H, 15,07% N
Hmotnostná spektroskopia (ES +); 523, (ES +): 521.
Zlúčenina 508d sa pripraví podobným spôsobom ako zlúčenina 509b, čím sa získa bezfarebná tuhá látka (269 mg, 87 %) s teplotou topenia 80 -110 °C.
[a]D 23 - 108° (c = 0,60, dichlórmetán);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3315, 2977, 1727, 1688, 1527, 1501, 1458, 1418, 1368, 1279, 1250, 1155, 1064;
’H-NMR (deuterochloroform) δ: 7,70 (1H, d), 7,63 - 7,53 (5H, m), 5,84 (1H, d), 5,34 - 5,27 (1H, m), 5,05 -
- 4,92 (1H, m), 4,78 - 4,54 (3H, m), 4,38 (1H, d), 3,66 (311, s), 3,37 - 3,19 (1H, m), 3,07 - 2,94 (1H, m), 2,91 - 2,82 (2H, m), 2,71 - 2,56 (1H, m), 2,40 - 2,30 (1H, m), 2,19 - 2,13 (1H, m), 2,08 - 1,68 (4H, m), 1,42 (9H, s);
Hmotnostná spektroskopia (ES +): 667 (31 %), 645 (M+ + 1, 100), 589 (62).
Zlúčenina 280c sa pripraví podobným spôsobom ako zlúčenina 280, čím sa získa svetlokrémová tuhá látka (203 mg, 88.%) s teplotou topenia 105 - 130 °C.
[a]D 22 - 235° (c = 0,11, metanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3342, 2951, 1727, 1667, 1529, 1501, 1459, 1416, 1276, 1252, 1225, 1192, 1062;
‘H-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid) δ: 8,89 (1H, d), 7,69 (5H, s), 7,50 (1H, d), 5,18 - 5,11 (1H, m), 4,79 -
- 4,69 (1H, m), 4,57 (2H, s), 4,42 - 4,32 (1H, m), 3,54 (3H, s), 2,92 - 2,63 (3H, m), 2,21 - 1,82 (5H, m), 1,65 -
- 1,57 (1H, m);
Hmotnostná spektroskopia (ES +): 587 (M - 1, 100 %).
Zlúčenina 508e sa pripraví podobným spôsobom ako zlúčenina 509b, čím sa získa svetlooranžová tuhá látka (199 mg, 25 %) s teplotou topenia 80 - 120 °C.
[cc]D 23 - 89° (c = 0,51, dichlórmetán);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3333, 2978, 1726, 1669, 1578, 1536, 1478, 1426, 1368, 1277,
162
1253, 1232, 1155, 1064;
'H-NMR (deuterochloroform) δ: 8,41 - 8,18 (2H, m), 7,81 (1H, d), 7,26 - 7,20 (2H, s), 5,91 (1H, d), 5,24 - 5,16 (1H, m), 5,07 - 4,86 (3H, m), 4,81 - 4,51 (2H, m), 3,67 (3H, s), 3,34 - 3,16 (1H, m), 3,10 - 2,81 (3H, m), 2,72 - 2,54 (1H, m), 2,41 - 2,31 (1H, m), 2,07 - 1,62 (5H, m), 1,47 (9H, s);
Hmotnostná spektroskopia (ES +): 562 (M+ + 1, 100 %), 506 (38).
Zlúčenina 283c sa pripraví podobným spôsobom ako zlúčenina 280, čím sa získa biely prášok (167 mg, 98 %) s teplotou topenia 90 - 105 °C.
[a]D 22 - 106° (c = 0,11, metanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3325, 3070, 2956, 1669, 1544, 1423, 1256, 1199, 1133, 1062; 'H-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid) δ: 8,95 (1H, d), 8,45 - 8,20 (2H, m), 7,53 - 7,45 (3H, m), 5,19 - 5,08 (3H, m), 4,70 - 4,62 (1H, m), 4,41 - 4,30 (2H, m), 3,53 (3H, s), 2,92 - 2,68 (3H, m), 2,22 - 2,06 (2H, m), 1,95 - 1,82 (2H, m), 1,63 - 1,53 (1 H, m);
Hmotnostná spektroskopia (ES +): 506 (M+ + 1, 100 %).
Zlúčenina 512a sa pripraví podobným spôsobom ako zlúčenina 509b, čím sa získa bezfarebná pena (83 %).
[a]D 25 - 129,6° (c = 0,1, dichlórmetán);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3323, 1726, 1664, 1531, 1501, 1444, 1415, 1394, 1369, 1279, 1254,1156;
'H-NMR (deuterochloroform) δ: 7,59 (5H, s), 7,37 (1H, d, J = 7,9), 6,38 (1H, d, J = 7,4), 5,27 (1H, m), 4,98 (2H, m), 4,58 (2H, d a m), 4,28 (1H, d, J = 17,2), 3,28 (1H, m), 3,10 - 2,65 (4H, m), 2,31 (2H, m), 2,03 (3H, s), 2,10- 1,72 (4H, m), 1,48 (9H, s).
Zlúčenina 280d sa pripraví podobným spôsobom ako zlúčenina 280, čím sa získa bezfarebná pena (77 %).
[cx]d22 - 93,3° (c = 0,1, dichlórmetán);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3316, 1728, 1659, 1531, 1501, 1415, 1341, 1278, 1253, 1222, 1185;
’H-NMR (deuterochloroform) δ: 8,05 (1H, d, J = 7,9), 7,57 (5H, široký s), 5,30 (1H, m), 5,01 (2H, m), 4,70 - 4,10 (4H, m), 3,40 - 2,85 (4H, m), 2,62 (1H, m), 2,33 (1H, m), 2,27 - 1,65 (5H, m), 2,01 (3H, s).
Zlúčenina 512b sa pripraví podobným spôsobom ako zlúčenina 509b, čím sa získa bezfarebná pena (9 %).
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3333, 1727, 1661, 1542, 1427, 1369, 1279, 1257, 1232, 1156;
'H-NMR (deuterochloroform) ô: 8,30 (2H, m), 7,20 (3H, m), 6,45 (1H, d, J = 7,4), 5,17 (1H, m), 4,91 (3H, m), 4,55 (1H, m), 3,27 (1H, m), 3,14 - 2,70 (4H, m), 2,41 (1H, m), 2,04 (3H, s), 2,10 - 1,65 (6H, m), 1,44
163 (9H, s).
Zlúčenina 283d sa pripraví podobným spôsobom ako zlúčenina 280 vo forme bezfarebnej peny (100 %). [ot]D 22 - 106,0° (c = 0,2, 10 % metanol/dichlórmetán);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3312, 1735, 1664, 1549, 1426, 1279, 1258, 1200, 1135; ‘H-NMR (deuterochloroform) δ: 8,27 (2H, m), 7,46 (2H, m), 5,09 (1H, m), 4,79 (3H, m), 4,47 (1H, m), 3,40 (1H, m), 3,30 - 2,70 (3H, m), 2,54 (1H, m), 2,30 (1H, m), 1,98 (3H, s), 2,05 - 1,65 (4H, m).
Zlúčenina 245b sa pripraví z kyseliny (lS,9R)-9-benzoylamino-l,2,3,4,7,8,9,10-oktahydro-10-oxo-6H-pyridazino[l,2-a][l,2]-diazepín-l-karboxylovej pomocou spôsobu opísaného na prípravu zlúčeniny 245, čím sa získa 416 mg (85 %) bezfarebnej peny (zmes diastereoizomérov v pomere 1 : 1).
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3392, 3302, 2942, 1792, 1642, 1529, 1520, 1454, 1119;
‘H-NMR (deuterochloroform) δ: 7,79 (2H, m), 7,51 - 7,09 (10H, m), 5,52 (0,5H, d, J = 5,3), 5,51 (0,5H, s), 5,36 (1H, m), 4,84 (1H, m), 4,74 - 4,59 (1,5H, m), 4,51 (1H, m), 4,38 (0,5H, m), 3,22 - 2,83 (5H, m), 2,51 (1H, m), 2,25 (2H, m), 2,01 - 1,46 (6H, m);
Analýza pre C28H32N4O6.0,75H2O:
vypočítané: 62,97 % C, 6,32 % H, 10,49% N nájdené: 63,10% C, 6,16% H, 10,21% N
Hmotnostná spektroskopia (ES +): 521 (M + 1,100 %).
Zlúčenina 246b sa pripraví zo zlúčeniny 245b pomocou spôsobu opísaného na prípravu zlúčeniny 246, čím sa získa 104 mg (33 %) bieleho prášku s teplotou topenia 115 -119 °C.
[oc]d22 - 19,8° (c = 0,2, metanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3293, 2944, 1786, 1639, 1578, 1537, 1489, 1450, 1329, 1162, 1124;
‘H-NMR (perdeuterometanol) δ: 7,85 (2H, d, J = 7,0), 7,49 (3H, m), 5,49 (1H, m), 4,55 (1H, m), 4,30 (2H, m), 3,40 (1H, m), 3,19 - 2,89 (3H, m), 2,63 (2H, m), 2,16 - 1,81 (5H, m), 1,60 (3H, m);
Analýza pre C2iH26N4O6.H2O:
vypočítané: 56,24 % C, 6,29% H, 12,49% N nájdené: 56,54 % C, 6,05% H, 12,29% N
Hmotnostná spektroskopia (ES +): 429 (M - 1, 100 %).
Zlúčeniny 513a-j sa pripravia tak, ako sa opisuje.
Zlúčenina R
513a
164
Zlúčenina R
513a-l Mj
513a-2 M)
513b K:
513b-l
513b-2 H:
513c 'M
513d Ύ)
513e M
513f \ o
513f-l
513f-2
513g
165
Zlúčenina 513a sa pripraví podobným spôsobom ako zlúčenina 513d/e, čím sa získa zmes diastereoizomérov (670 mg, 50 %) vo forme oleja.
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3331, 2946, 1790, 1723, 1713, 1531, 1329, 1257, 1164, 1120, 1060, 977, 937, 701;
’H-NMR (deuterochloroform) δ: 7,36 - 7,18 (5H, m), 5,99 - 5,83 (1H, m), 5,41 - 5,34 (2H, m), 5,28 - 5,18 (2H, m), 4,59 - 4,56 (2H, m), 4,32 - 3,96 (2H, m), 3,85 - 3,73 (1H, m), 3,02 - 2,76 (3H, m), 2,49 - 2,34 (1H, m).
Zlúčenina 513b sa pripraví ako zlúčenina 513d/e, čím sa získa 8 g (51 %) zmesi diastereoizomérov vo forme číreho oleja.
[cc]d20 - 13° (c = 0,25, dichlórmetán);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3325, 2959, 2875, 1790, 1723, 1535, 1420, 1328, 1257, 1120, 1049, 973,937;
‘H-NMR (deuterochloroform) δ: 6,02 - 5,80 (1H, m), 5,53 - 5,46 (2H, m), 5,37 - 5,21 (2H, m), 4,58 (2H, d, J = 5,5), 4,50 - 4,46 (0,5H, m), 4,34 - 4,25 (1H, m), 4,19 - 4,12 (0,5H, m), 3,06 - 2,77 (1H, m), 2,53 - 2,35 (1H, m), 1,85 - 1,50 (8H, m);
Analýza pre C13H19NO5:
vypočítané: 57,95 % C, 7,11% H, 5,20% N nájdené: 56,62 % C, 7,22% H, 4,95% N
Hmotnostná spektroskopia (ES +): 270.
Zlúčenina 513c sa pripraví podobným spôsobom ako zlúčenina 513d/a, čím sa získa jediný izomér (20 %) vo forme svetložltého oleja.
[a]D 24 - 63,1° (c = 0,2, dichlórmetán);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3338, 2948, 1791, 1723, 1529, 1421, 1330, 1253, 1122, 984, 929, 746;
’H-NMR (deuterochloroform) δ: 7,20 (4H, m), 5,87 (1H, m), 5,61 (1H, d, J = 5,4), 5,33 - 5,10 (2H, m), 4,70 (1H, m), 4,56 (3H, m), 3,33 - 3,19 (2H, m), 3,10 - 2,94 (2H, m), 2,81 (1H, dd, J = 8,3 a 17,3), 2,43 (1H, dd, J = 10,5 a 17,3).
166
Pomocou spôsobu opísaného Chapmanom (Bioorg. & Med. Chem. Lett. 2, str. 615 - 6,18 (1992)) sa pripraví zlúčenina 513d a zlúčenina 513d/e. Po následnom spracovaní pomocou extrakcie etylacetátom a premytí roztokom hydrogenuhličitanu sodného sa produkt vysuší nad síranom horečnatým, prefiltruje a odparí, čím sa získa olej, ktorý obsahuje produkt a benzylalkohol. Pridá sa 200 ml hexánu (použije sa 200 ml hexánu na každých 56 g AllocAsp(CO2Bu-í)CH2OH) a zmes sa mieša za chladenia cez noc. Takto sa získa olejovitá tuhá látka. Materské lúhy sa zlejú a uschovajú sa na chromatograriu. Olejovitý zvyšok sa rozpustí v etylacetáte a odparí sa, čím sa získa olej, ktorý sa prekryštalizuje z 10 % etylacetátu v hexáne (500 ml). Tuhá látka sa odfiltruje, čím sa získa zlúčenina 513d (12,2 g, 19 %) s teplotou topenia 108 -110 °C.
[a]D 24 + 75,72° (c = 0,25, dichlórmetán);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3361, 1778, 1720, 1517, 1262, 1236, 1222, 1135, 1121, 944, 930, 760;
'H-NMR (deuterochloroform) δ: 7,38 (5H, m), 5,90 (1H, m), 5,50 (1H, s), 5,37 (0,5H, m), 5,26 (2,5H, m), 4,87 (1H, ABq), 4,63 (3H, m), 4,31 (1H, m), 3,07 (1H, dd), 2,46 (1H, dd);
Analýza pre Ci5H17NO5:
vypočítané: 61,85% C, 5,88% H, 4,81 %N nájdené: 61,85% C, 5,89% H, 4,80% N
Materské lúhy sa spoja a odparia sa, čím vznikne olej (asi 200 g) obsahujúci benzylalkohol. Pridá sa zmes hexán/etylacetát (9 : 1, 100 ml) a produkt sa prečistí pomocou chromatografie, pričom sa ako elučné činidlo použije 10 % etylacetát v hexáne, čím sa odstráni nadbytočný benzylalkohol, a potom zmes dichlórmetán,'hexán (1:1) obsahujúca 10 % etylacetátu. Takto sa získa zlúčenina 513e obsahujúca malé množstvo zlúčeniny 513d (20,5 g, 32 %) s teplotou topenia 45 - 48 °C.
[a]D 24 - 71,26° (c = 0,25, dichlórmetán);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3332, 1804, 1691, 1536, 1279,1252, 1125, 976;
'H-NMR (deuterochloroform) δ: 7,38 (5H, m), 5,91 (1H, m), 5,54 (1H, d, J = 5,2), 5,38 (3H, m), 4,90 (1H, ABq), 4,60 (4H, m), 2,86 (1H, dd), 2,52 (III, dd);
Analýza pre Ci5H|7NO5.0,lH2O: vypočítané: 61,47% C, 5,91% H, 4,78% N nájdené: 61,42% C, 5,88% H, 4,81% N
Zlúčenina 513f sa pripraví podobným spôsobom ako zlúčenina 513d/e, čím sa získa bezfarebný olej (152 mg, 79 %).
Infračervené spektrum (film): 3334, 2983, 2941, 1783, 1727, 1713, 1547, 1529, 1422, 1378, 1331, 1313, 1164, 1122, 1060, 938;
'H-NMR (deuterochloroform) δ: 6,09 - 5,82 (2H, m), 5,50 - 5,18 (3H, m), 4,64 - 4,54 (2H, m), 4,27 - 4,16 (1H, m), 3,95 - 3,78 (1H, m), 3,73 - 3,56 (1H, m), 3,05 - 2,77 (1H, m), 2,56 - 2,37 (1H, m), 1,35 - 1,17 (4H, m);
Analýza pre CioHlsN05: vypočítané: 52,40 % C, 6,60 % H, 6,11 % N nájdené: 52,16% C, 6,62% H, 5,99% N
Hmotnostná spektroskopia (ES +): 229 (M+ + 1, 100 %).
Zlúčenina 513g. 4-Dimetylaminopyridín (76,0 mg, 0,622 mmol) sa pridá k roztoku 2-fenoxybenzoylchloridu (579 mg, 2,49 mmol) a zlúčeniny 517 (600 mg, 2,07 mmol) v pyridíne (10 ml). Zmes sa mieša pri teplote miestnosti počas 18 hodín, potom sa pridá soľanka (25 ml) a extrahuje sa etylacetátom (30 ml a 20 ml). Spojené organické extrakty sa premyjú IM kyselinou chlorovodíkovou (3 x 25 ml), nasýteným vodným roztokom hydrogenuhličitanu sodného (2 x 25 ml) a soľankou (25 ml), vysušia sa nad síranom horečnatým a zahustia sa. Svetlooranžový olej sa prečistí pomocou veľmi rýchlej kolónovej chromatografie (1 až 10 % acetón v dichlórmetáne), čím sa získa 447 mg (44 %) bezfarebného oleja.
Infračervené spektrum (film): 3375, 2980, 1721, 1712, 1602, 1579, 1514, 1484, 1451, 1368, 1294, 1250, 1234, 1161, 1137, 1081,754;
’H-NMR (deuterochloroform) δ: 7,98 - 7,93 (1H, m), 7,50 - 7,41 (1H, m), 7,35 - 7,25 (2H, m), 7,22 - 7,03 (3H, m), 6,95 (3H, d), 5,95 - 5,76 (1H, m), 5,57 (1H, d), 5,30 - 5,13 (2H, m), 4,51 (2H, d), 4,25 (2H, d), 4,18 - 4,04 (1H, m), 3,88 (1H, m), 3,50 (1H, m), 2,51 (2H, m), 1,41 (9H, s);
Hmotnostná spektroskopia (ES +): 508 (57 %), 503 (76), 486 (M+ + 1, 45), 468 (27), 412 (100). Presná hmotnosť vypočítané pre C26H32NO8 (MH+): 486,2128; nájdené: 486,2158.
Zlúčenina 513h sa pripraví z (3S,4R)-íerc-butyl-(N-alyloxykarbonyl)-3-amino-4,5-dihydroxypentanoátu pomocou spôsobu opísaného na prípravu zlúčeniny 513g, čím sa získa 562 mg (85 %) bezfarebného oleja. Infračervené spektrum (film): 3418,2980, 1722, 1711, 1512,1368, 1278,1245, 1198, 1157, 1139;
’H-NMR (deuterochloroform) δ: 8,90 (1H, d, J = 8,6), 8,21 (1H, dd, J = 1,2 a 7,3), 8,04 (1H, d, J = 8,2), 7,89 (1H, dd, J = 1,5 a 7,9), 7,67 - 7,46 (3H, m), 5,88 (1H, m), 5,49 (III, d, J = 9,0), 5,35 - 5,18 (2H, m), 4,57 - 4,46 (4H, m), 4,19 (2H, m), 2,67 (2H, m), 1,40 (9H, s);
Analýza pre C24H29NO7:
167 vypočítané: 65,00% C, 6,59 % H, 3,16% N nájdené: 64,74 % C, 6,56 % H, 3,09% N
Hmotnostná spektroskopia (ES +): 466 (M + Na, 100 %), 444 (M * 1, 39), 388 (44).
Zlúčenina 513i sa pripraví podobným spôsobom ako zlúčenina 513g, čím sa získa bezfarebný olej (569 mg, 85 %).
Infračervené spektrum (film): 3400, 1723, 1712, 1584, 1528, 1489, 1443, 1367, 1276, 1232, 1190, 1161, 1098, 1074, 995, 755;
'H-NMR (deuterochloroform) δ: 8,65 - 8,59 (1H, d), 7,84 - 7,66 (2H, m), 7,45 - 7,11 (5H, m), 7,05 - 6,97 (2H, m), 6,00 - 5,78 (1H, m), 5,54 - 5,14 (2H, m), 4,62 - 4,52 (2H, m), 4,42 - 4,32 (2H, m), 4,28 - 4,22 (2H, m), 2,78 - 2,47 (2H, m), 1,44 (9H, s);
Hmotnostná spektroskopia (ES +): 508 (100 %), 486 (M“ + 1, 33). Presná hmotnosť vypočítaná pre C26H32NO8 (MH+): 486,2128; nájdené: 486,2121.
Zlúčenina 213j sa pripraví podobným spôsobom ako zlúčenina 513g, čím sa získa svetlooranžový olej (905 mg, 91 %).
Infračervené spektrum (film): 3418, 3383, 2980, 1722, 1711, 1601, 1517, 1450, 1424, 1368, 1308, 1252, 1154, 1100, 994, 767, 698;
'H-NMR (deuterochloroform) δ: 7,62 - 7,55 (2H, m), 7,51 - 7,42 (3H, m), 5.98 - 5,76 (1H, m), 5,33 - 5,18 (2H, m), 4,53 (2H, d), 4,18 (2H, d), 3,91 (1H, m), 3,80 (1H, m), 2,76 (3H, s), 2,50 (2H, m), 1,43 (9H, s); Analýza pre C24H3oN208.0,5H20:
vypočítané: 59,62 % C, 6,46 % H, 5,79% N nájdené: 59,46 % C, 6,24 % H, 5,72% N
Hmotnostná spektroskopia (ES +): 497 (100 %), 475 (M+ + 1, 15), 419 (48).
517
Zlúčenina 514 sa pripraví pomocou postupu opísaného v H. Matsunaga a kol., Tetrahedron Lett. 24, str. 3009 - 3012 (1983) ako čistý diastereomér (60 %) vo forme oleja.
[cc]D 23 - 36,9° (c = 0,5, dichlórmetán);
Infračervené spektrum (film): 2982, 2934, 1726, 1455, 1369, 1257, 1214, 1157, 1068;
'H-NMR (deuterochloroform) δ: 7,31 (5H, m), 4,10 (1H, q, J = 6,0), 4,05 - 3,75 (4H, m), 3,10 (1H, q, J = = 6,0), 2,40 (2H, m), 1,42 (9H, s), 1,40 (3H, s), 1,34 (3H, s).
Zlúčenina 516. Zlúčenina 514 (3,02 g, 9,00 mmol) a 10 % paládium na uhlí (300 mg) v etanole (30 ml) sa mieša 2 hodiny vo vodíkovej atmosfére. Suspenzia sa prefiltruje cez kremelinu a 0,45 mm membránu a filtrát sa odparí, čím sa získa zlúčenina 515 vo forme bezfarebného oleja, ktorý sa použije bez ďalšieho čistenia. Olej (1,93 g, 7,88 mmol) sa rozpustí vo vode (10 ml) a 1,4-dioxáne a pridá sa hydrogenuhličitan sodný (695 mg, 8,27 mmol). Zmes sa ochladí na teplotu 0 °C a prikvapká sa alylchloroformiát (1,04 g, 919 μΐ, 8,66
168 mmol). Po 3 hodinách sa zmes extrahuje éterom (2 x 50 ml). Spojené éterové extrakty sa premyjú vodou (2 x x 25 ml) a soľankou (25 ml), vysušia sa nad síranom horečnatým a zahustia, čím vznikne bezfarebný olej. Po veľmi rýchlej chromatografii (10 až 35 % etylacetát v hexáne) sa získa bezfarebná tuhá látka (2,69 g, 95 %) s teplotou topenia 64 - 65 °C.
[a]d23 - 21° (c = 1,00, dichlórmetán);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3329, 1735, 1702;
'H-NMR (deuterochloroform) δ: 6,00 - 5,82 (1H, m), 5,36 - 5,14 (2H, m), 5,42 (1H, s), 4,56 (1H, d), 4,40 -
- 4,08 (2H, m), 4,03 (1H, m), 3,70 (1H, m), 2,52 (2H, m), 1,44 (12H, 2s), 1,33 (3H, s);
Analýza pre C16H27NO6: vypočítané: 58,34% C, 8,26% H, 4,25% N nájdené: 58,12% C, 8,16% H, 4,19% N
Hmotnostná spektroskopia (+ FAB): 320 (M+ + 1,41 %), 274 (70), 216 (100).
Zlúčenina 517. Roztok zlúčeniny 516 (2,44 g, 7,41 mmol) v 80 % vodnej kyseline octovej (25 ml) sa mieša počas 24 hodín pri teplote miestnosti, potom sa zahustí a azeotropicky odparí s toluénom (2 x 25 ml). Zvyšok sa spracuje pomocou soľanky (25 ml) a extrahuje etylacetátom (2 x 25 ml). Organické vrstvy sa vysušia nad síranom horečnatým a zahustia, čím sa získa bezfarebný olej. Po veľmi rýchlej chromatografii (20 -
- 80 % etylacetát v dichlórmetáne) sa získa bezfarebná tuhá látka (1,99 g, 90 %) s teplotou topenia 74 -
- 75 °C.
[a]D 25 - 1,3° (c = 1,0, dichlórmetán);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 1723, 1691;
’H-NMR (deuterochloroform) δ: 6,02 - 5,78 (2H, m), 5,35 - 5,16 (2H, m), 4,55 (2H, d), 4,16 - 4,04 (2H, m), 3,76 (2H, s), 3,56 (2H, m), 2,56 (2H, m), 1,43 (9H, s);
Analýza pre C13H23NO6: vypočítané: 53,97 % C, 8,01% H, 4,84 % N nájdené: 53,79 % C, 7,88 % H, 4,81 % N
Hmotnostná spektroskopia (+ FAB): 290 (M+ + 1, 44 %), 234 (100).
Príklad 30
Zlúčeniny 1105 - 1125 sa pripravia nasledovným spôsobom. Fyzikálne údaje pre tieto zlúčeniny sa uvádzajú v tabuľke 24.
Tabuľka 24
Zlúč. Štruktúra Vzorec MU HPLC RČ min (spôsob) čistota lis (M+Na)‘
1105 C22H27N5O7 -173.49 12.769 (1) 99¾ 496.9
1106 H O C21II23N5O0 173.15 12.137 (1) 99'4 196.9
169
Zlúč. Štruktúra Vzorec Ml i HPLC RČ min (spôsob) čistota lis (MINa)’
0 Ii
0
1107 0 ^n' o 3 /OH zl .11 C191I21N5O0S 479.41 11.272 (1) 502.9
A H (Y %ľ 97%
H 0
0 II
O r~j< x / N ( 1 0 II
1100 f ΌΗ ÄJ4 C23II24N6O8 512.48 13.699 (1) 53 6.4
M 97%
0 H 0
0
A
< N 0
1109 0— o \1 A >1 Z^OH C22II23N5O10 517 . A G 12.3/11 (1) 92% 541.2
í >=/ Y\ H 0 Sr n
Ό o H 0
o //
0
1110 θ \l z1/ An λ° < Z^OH L >t C22H25N5O9 503.47 12.991 (1) 96% 527.9
A—/ Y H o' Y
0 H í!
0
\ <V O
1111 o /í 0 hYv κΝ· Y j (h na ^011 .41 C22I125N5O9 503.47 10.951 (1) 99% 526.7
O II 0
o
\ 0
o O k| ,NX ÄN' ^Oz II
1112 λΧ Moli Sr C23H27N5010 533.50 11.377 (1) 557.2
A H °°Z n' 98%
0 H 0
o
/
0
A
/ N o
q \, Ä Λ
1113 V H °o Yl' ZXOH C22H26C1N5O7 507.93 16.317 (1) 531.5
z=^/ ll 98%
o K 0
Cľ
170
Zlúč. Štruktúra Vzorec MH HPLC RČ min (spôsob) čistota lis (M+Na)'
1114 0 Γ0 o N-.zN T Λ011 __/-N' 'o X 1 ή /-7 h /=< H 0 rv o C23II27N5O9 517.50 12.902 (1) 99% 512.1
1115 0 v Γ N 1 0 V v i A >νΝ o X I H /=F H c/>rv C!—(f^X H 0 W Cl C221I23C12N5O7 510.36 12.529 (2) 97% 563.1
1110 o N'X 0 . K ' ~tfN Y / \ /-n 'o Λ A>1 \ )--Z H O^lTY '---7 H o C21H31N5O7 165.51 13.971 (1) 96% 100.9
1119 H 0 C22II33N5O7 479.51 11.079 (2) 95% 502.9
1120 C1. 0 /¼ i Ν^Ί 0 W °a V A'i V A 'ó X 1 .H H V H 0 N lf ” O HÓ C21U23C1NGOO 522.91 16.796 (1) 99% 517.3
1121 0 (A íi <C Χ~λ X - ~Zl A T 'A θ 1 I H \_X— h 0 N }f C22II25N5O9 503.17 11.131 (1) 99% 527.9
171
Zlúč. átĽuktóra Vzotec .....ΜΪΙ HPLC RČ min (spôsob) č i s ľ o r a IHi (MHLi) '
1122 •γίΥ Δ P 1-1 0 C24H31N5O7 501.54 10.092 (2) 901 525.5
1123 o /¥> 0 o ( i J 1 \X p T f 0,1 H °° H Ϊ C2 6112 41Ί 401 0 552.50 15.85 >0.90 574
1124 CHj ?'CH3 A άγΡ o ( Ύ ° HAO-U\Y?J f^OH δ H ďYv1' H ä C24II29M5011 56.3.53 13.336 (1) 991 507
1125 O f' nP 0 ° ( f!i J A οίγγι r pH Hapjy H ΥΥ'Υ' C21II23C12N5O0 544.35 8.99 0.95 566
172
Krok C
Krok A. Syntéza zlúčeniny 401. Živica TentaGel S® NH2 (0,25 mmol/g, 5,25 g) sa umiestni do sklenenej frity a premyje sa dimetylacetamidom (3 x 10 ml). Zlúčenina 400 (1,36 g, 2,3 mmol) sa rozpustí v DMA (10 ml) a pridá sa 0-benzotriazol-l-yl-N,N,N,N'-tetrametyluróniumhexafluorofosfát (HBTU; 0,88 g, 2,3 mmol) a DIEA (0,8 ml, 4,6 mmol). Roztok sa pridá k živici a pridá sa ďalších 5 ml DMA. Reakčná zmes sa pretrepáva pri teplote miestnosti počas 1,5 hodiny, pričom sa použije trepačka. Živica sa prefíltruje a premyje dimetylacetamidom (4 x 15 ml).
Krok B. Syntéza zlúčeniny 1102. Zo živice 401 sa pomocou reakcie so zmesou 20 % (v/v) piperidín/dimetylacetamid (15 ml) počas 10 minút (za trepania) a potom počas 10 minút s čerstvým piperidínovým činidlom (15 ml) odstráni ochranná skupina. Živica sa potom premyje dimetylacetamidom (6 x 15 ml) a potom N-metylpyrolidónom (2 x 25 ml). Zlúčenina 1101 (0,979 g, 2,11 mmol) sa rozpustí v dimetylacetamide (8 ml). Pridá sa HBTU (0,81 g, 2,1 mmol) a DIEA (0,75 ml, 4,3 mmol), roztok sa pridá k živici a potom sa pridá dimetylacetamid (4 ml). Reakčná zmes sa pretrepáva pri teplote miestnosti počas 2 hodín, pričom sa použije trepačka. Živica sa spracuje pomocou postupu opísaného pre spracovanie zlúčeniny 401, čím sa získa zlúčenina 1102.
Krok C. Syntéza zlúčeniny 1103. Táto zlúčenina sa pripraví zo živice 1102 (0,040 mmol), pričom sa použije Advanced ChemTech 396 Multiple peptidový syntetizér. Automatické cykly zahŕňajúce premytie živice dimetylformamidom (2 x 1 ml), odstránenie ochranných skupín pomocou 25 % (v/v) piperidínu v dimetylformamide (1 ml) počas 3 minút, potom čerstvým činidlom (1 ml) počas 10 minút, čim sa získa živica 1103. Živica sa premyje dimetylformamidom (3x1 ml) a N-metylpyrolidónom (3 x 1 ml).
Živica 1103 sa acyluje 0,4M roztokom karboxylovej kyseliny a 0,4M roztoku HOBt v N-metylpyrolidóne (0,5 ml), 0,4M roztokom HBTU v N-metylpyrolidóne (0,5 ml) a 1,6M roztokom DIEA v N-metylpyrolidóne (0,25 ml) a reakčná zmes sa pretrepáva počas 2 hodín pri teplote miestnosti. Acylačný krok sa zopakuje. Nakoniec sa živica premyje N-metylpyrolidónom (lxl ml), dimetylformamidom (4x1 ml) a dichlórmetánom (5x1 ml) a vysuší vo vákuu. Zo živice sa odštiepi aldehyd a uskutoční sa celkové odstránenie ochranných skupín pomocou reakcie so zmesou 95 % kyseliny trifluóroctovej/5 % vody (v/v, 1,5 ml) počas 30 minút pri teplote miestnosti. Po premytí štiepiacim činidlom (1 ml) sa spojené filtráty pridajú k studenej zmesi dietyléter/hexán (1 : 1; 10 ml) a vzniknutá zrazenina sa izoluje odstredením a dekantáciou. Vzniknutá guľôčka sa rozpustí v zmesi 10 % acetonitril/90 % voda/0,1 % kyselina trifluóroctová (5 ml) a lyofilizuje sa, čím sa získajú surové zlúčeniny 1105 - 1125 vo forme bieleho prášku. Zlúčeniny sa prečistia pomocou semipreparatívnej RP-HPLC s kolónou Rainin Microsorb™ Cig (5 μ, 21,4 x 250 mm), pričom elúcia sa uskutočňuje lineárnym gradientom acetonitrilu (8 - 48 %) obsahujúceho 0,1 % TFA (v/v) počas 30 minút pri prietoku 12
173 ml/min. Frakcie obsahujúce požadovaný produkt sa spoja a lyofilizujú, Čim sa získajú zlúčeniny 1105 - 1125 (10,8 mg, 63%).
Analytické HPLC metódy (1) Waters DeltaPak Cl8, 300 A (5 μ, 3,9 x 150 mm). Lineárny gradient acetonitrilu (0 - 25 %) obsahujúci 0,1 % kyseliny trifluóroctovej (v/v) počas 14 minút pri prietoku 1 ml/min.
(2) Waters DeltaPak C]8, 300 A (5 μ, 3,9 x 150 mm). Lineárny gradient acetonitrilu (5 - 45 %) obsahujúceho 0,1 % kyseliny trifluóroctovej (v/v) počas 14 minút pri prietoku 1 ml/min.
O
261b
260b
Zlúčenina 259b sa pripraví podobným spôsobom ako zlúčenina 259 zo zlúčeniny 258, čím sa získa voskovitá tuhá látka (87 g, 51 %) s teplotou topenia 54- 55 °C.
Infračervené spektrum (film): 3324, 2978, 1732, 1713, 1455, 1367, 1277, 1254, 1171;
’H-NMR (deuterochloroform) δ: 7,35 (5H, m), 6,15 (1H, široký s), 5,13 (2H, s), 3,15 (2H, t, J = 6,5), 2,54 (2H, t, J = 6,5), 1,45 (9H, s);
Analýza pre C15H72N2O3:
vypočítané: 61,21% C, 7,53 % H, 9,52 %N nájdené: 61,29% C, 7,51% H, 9,51% N
Hmotnostná spektroskopia (ES +): 295 (M+ + 1).
Zlúčenina 260b sa pripraví podobným spôsobom ako zlúčenina 260 zo zlúčeniny 259, čím sa získa guma (81 g), ktorá sa použije v nasledovnom kroku bez ďalšieho čistenia.
Analytické údaje pre čistú vzorku:
Infračervené spektrum (film): 3318, 2976, 1733, 1451, 1412, 1393, 1366, 1256, 1161;
174 'H-NMR (deuterochloroform) δ: 7,34 (10H, m), 6,68 (0,5H, široký s), 5,11 (4H, m), 4,63 (0,5H, široký s), 4,14 (1H, m), 3,53 (2H, m), 3,08 (lH,m), 2,63 (2H, m), 2,10 -1,60 (4H, m), 1,60- 1,35 (19H,ma2s).
Zlúčenina 261b sa pripraví pomocou rovnakého postupu ako zlúčenina 261 zo zlúčeniny 260, čím sa získa guma, ktorá sa prečistí pomocou veľmi rýchlej chromatografie (etylacetát/dichlórmetán 1 : 1), čím sa získa zlúčenina 261b (36 g, 79,4 % po dvoch stupňoch).
Infračervené spektrum (film): 3267, 2979,2937, 1728, 1668, 1394, 1369, 1245, 1159;
'ΐΙ-NMR (deuterochloroform) δ: 7,6 (1H, široký s), 6,8 (1H, veľmi široký s), 4,47 (1H, široký s), 3,73 (2H, široký s), 2,98 (1H, široký s), 2,66 (3H, m), 2,04 (1H, široký s), 1,84 (1H, m), 1,6 -1,2 (21H, ma s).
Zlúčenina 262b sa pripraví rovnakým spôsobom ako zlúčenina 262 zo zlúčeniny 261, čím sa získa zlúčenina 262b (18,6 g, 54 %) vo forme oleja.
[a]D 20 + 47,7° (c = 0,236, dichlórmetán);
Infračervené spektrum (film): 3291, 2978, 1738, 1727, 1690, 1678, 1439, 1243, 1164;
'H-NMR (deuterochloroform) δ: 6,59 (1H, s), 5,06 (1H, m), 4,47 (1H, m), 3,85 (3H, m), 2,82 (1H, m), 2,37 (1H, m), 2,22 (1H, m), 1,92 (1H, m), 1,63 (2H, m), 1,48 a 1,46 (18H, 2s);
Hmotnostná spektroskopia (ES +): 399 (M+ + 1).
Zlúčenina 518. Zlúčenina 262b (2,43 g, 6,1 mmol) sa rozpustí v IM roztoku chlorovodíka v etylacetáte (30 ml) a mieša sa počas 20 hodín pri teplote miestnosti. Pridá sa hydrogenuhličitan sodný (4 g, 46,5 mmol) a voda (20 ml) a zmes sa mieša počas 5 minút pred rozdelením a extrakciou alikvotných dielov etylacetátom. Spojené organické roztoky sa premyjú vodou a soľankou, vysušia sa nad síranom horečnatým a zahustia sa. Po prečistení pomocou veľmi rýchlej chromatografie (50 % etylacetát v dichlórmetáne - 100 % etylacetát) sa získa čistý produkt 518 (1,08 g 59 %) vo forme nestabilného oleja.
[ct]D 20 + 82° (c = 0,55, dichlórmetán);
Infračervené spektrum (film): 3331, 2977, 1731, 1680, 1664, 1439,1420, 1315, 1158;
'H-NMR (deuterochloroform) δ: 5,08 (1H, m), 4,48 (1H, m), 3,80 (2H, ABq), 3,70 (2H, široký s, vymenené D2O), 3,53 (1H, m), 2,75 (1H, m), 2,30 (2H, m), 1,88 (1H, m), 1,71 (2H, m), 1,47 (9H, s).
519
522
521
524 /
175
Zlúčenina 520. Zlúčenina 519 (9,4 g, 35,6 mmol) sa suspenduje v mctanole (230 ml) a ochladí sa v ľadovom kúpeli na teplotu 0 °C. Počas 30 minút sa prikvapká tionylchlorid (3 ml, 4,89 g, 41,1 mmol) a zmes sa mieša pri teplote miestnosti počas 48 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu pri teplote 30 °C a olejovitý zvyšok sa rozpustí v etylacetáte (500 ml). Organický roztok sa premyje nasýteným vodným roztokom hydrogenuhličitanu sodného, vodou a soľankou, vysuší sa nad síranom horečnatým a odparí sa, čím sa získa zlúčenina 520 (7,84 g, 79 %) vo forme oleja.
[a]D 22 - 25,9° (c = 0,615, dichlórmetán);
Infračervené spektrum (film): 2953, 1739, 1703, 1694, 1440, 1403, 1357, 1261, 1241, 1174;
‘H-NMR (deuterochloroform) δ: 7,36 (5H, s), 5,18 (2H, s), 4,00 (1H, široký d), 3,73 (3H, s), 3,55 (1H, dd), 3,12 (1H, t), 2,06 (1H, m), 1,73 (3H, m);
Analýza pre Ci4H17N2O4.0,25H2O:
vypočítané: 59,46 % C, 6,59% H, 9,91% N nájdené: 59,44 % C, 6,46% H, 10,09% N
Zlúčenina 521. Použitím podobného postupu ako na prípravu zlúčeniny 260 sa pripraví zlúčenina 521 (96 %) vo forme surového oleja.
[cc]D 22 - 22,16° (c = 0,25, dichlórmetán);
Infračervené spektrum (film): 3316, 2976, 2953, 1738, 1726, 1714, 1690, 1367, 1260, 1167;
’H-NMR (deuterochloroform) δ: 7,25 (10H, m), 6,82 (1H, široký s), 5,10 (4H, m), 4,80 (1H, široký s), 4,3 - 3,4 (6H, m), 3,10 (1H, m), 2,59 (2H, m), 1,95 (2H, m), 1,44 (10H, m a s).
Zlúčenina 522. Použitím podobného postupu ako na prípravu zlúčeniny 261 sa pripraví zlúčenina 522 (92 %) vo forme bielej tuhej látky s teplotou topenia 146 - 148 °C (za rozkladu).
[oc]D 22 + 27,8° (c = 0,25, dichlórmetán);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3346, 1740, 1710, 1626, 1497,1290, 1250, 1206, 1179, 1159; ’H-NMR (deuterochloroform) δ: 7,60 (1H, široký s), 7,5 - 5,5 (1H, veľmi široký s), 4,64 (1H, široký s), 3,76 (5H, ma s), 3,00 (1H, md), 2,70 (3H, m), 2,16 (1H, m), 1,92 (1H, m), 1,56 (1H, m), 1,46 (11H, ma s); Analýza pre C15H26N4O7:
vypočítané: 48,12% C, 7,00 % H, 14,96% N nájdené: 48,21% C, 6,96% H, 14,86% N
Hmotnostná spektroskopia (ES +): 373 (M‘ - 1).
Zlúčenina 523. Zlúčenina 522 (7,15 g, 19,1 mmol) sa rozpustí v dichlórmetáne (100 ml), ktorý obsahuje dimetylformamid (0,5 ml), a ochladí sa na teplotu 0 °C. Pridá sa tionylchlorid (1,6 ml, 2,61 g, 22 mmol) a N-etylmorfolín (4,86 ml, 440 mg, 38,2 mmol) a zmes sa mieša počas 2 hodín. Organická zmes sa premyje 2M disíranom sodným (50 ml), nasýteným hydrogenuhličitanom sodným (50 ml) a soľankou (50 ml), vysuší sa nad síranom horečnatým a zahusti. Zvyšok sa trituruje éterom, čím sa získa zlúčenina 523 vo forme bielej tuhej látky (5,73 g, 84 %) s teplotou topenia 186 - 188 °C (za rozkladu);
[a]D 22 + 65,3° (c = 0,25, dichlórmetán);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3298, 2978, 1750, 1720, 1682, 1658, 1455, 1423, 1369, 1316, 1241, 1212, 1160;
’H-NMR (deuterochloroform) δ: 6,56 (1H, s), 5,17 (1H, dd), 4,48 (1H, široký d), 3,81 (3H, m), 3,75 (3H, s), 2,83 (1H, dt), 2,40 (1H, m), 2,28 (1H, m), 1,95 (1H, m), 1,67 (1H, m), 1,47 (9H, s);
Analýza pre Ci5H24N4O6.l/6H2O: vypočítané: 50,13% C, 6,82% H, 15,59% N nájdené: 50,12% C, 6,71% H, 15,58% N
Hmotnostná spektroskopia (ES -): 357 (M+ -1, 46 %), 301 (100 %).
Zlúčenina 524 sa pripraví zo zlúčeniny 523 pomocou postupu na prípravu zlúčeniny 518.
Zlúčeniny 262a-k sa pripravia pomocou postupu použitého na prípravu zlúčenín 211b-f.
262a-k 263a-k
176
Zlúčenina R1
262a 263a αχ.
262b 263b 0
262c 263c ςτΥ OMe
262d 263d αϊ
262e 263e
262f 263f CIA H
262g 263g Y 0
262h 263h ΛΟ1 H
262i 263i Y
262j 263j PhSO2-
262k 263k
Zlúčenina 262a, Získa sa 443 mg (91 %) zlúčeniny uvedenej v názve s teplotou topenia 56 - 57 °C. [cc]D 22 + 76° (c = 0,15, dichlórmetán);
177
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3429, 2979, 1734, 1675, 1418, 1369, 1339, 1323, 1244, 1164, 665; ’H-NMR (deuterochloroform) δ: 8,45 (1H, s), 8,00 - 7,59 (7H, m), 4,69 - 4,65 (1H, m), 4,25 - 4,12 (1H, m), 4,10 - 3,99 (1H, m), 3,73 - 3,55 (2H, m), 2,40 - 2,30 (1H, m), 1,99 - 1,91 (1H, m), 1,82 - 1,62 (2H, m), 1,48 -
- 1,46 (2H, m), 1,37 (9H, s);
Analýza pre C23H28N4O6S.H2O:
vypočítané: 54,53 % C, 5,97 % H, 11,06% N nájdené: 54,60 % C, 5,73 % H, 10,95% N
Hmotnostná spektroskopia (ES +): 489.
Zlúčenina 262c. Získa sa 120 mg (80 %) bezfarebnej peny.
[a]D 22 + 22,6° (c = 0,1, dichlórmetán);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3316, 1732, 1671, 1609, 1551, 1495, 1455, 1432, 1316, 1288, 1245, 1218, 1158, 1122, 1023;
’H-NMR (deuterochloroform) δ: 7,16 (4H, m), 6,79 (1H, m), 6,60 (1H, m), 5,11 (1H, m), 4,59 (1H, m), 3,89 (2H, m), 3,77 (3H, s), 3,72 (2H, m), 2,85 (1H, m).
Zlúčenina 262d sa získa vo forme bezfarebnej peny (81 %).
[α]υ 22 + 3,7° (c ~ 0.1, dichlórmetán);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3468, 3446, 3269, 1734, 1698, 1667, 1609, 1555, 1490, 1461, 1433, 1423, 1296, 1246, 1215, 1173, 1157, 1028, 756;
’H-NMR (deuterochloroform) δ: 8,23 (1H, m), 7,95 (1H, s), 6,95 (4H, m), 5,15 (1H, m), 4,60 (1H, m), 3,98 -
- 3,65 (4H, m), 3,89 (3H, s), 2,90 (1H, m), 2,48 (1H, m), 2,25 (1H, m), 2,05 - 1,65 (2H, m), 1,48 (9H, s).
Zlúčenina 262e sa získa vo forme bielej penovitej tuhej látky (155 mg, 53 %) s teplotou topenia 53 -
- 57 °C.
[a]D 22 + 57,4° (c = 0,1, dichlórmetán);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3271, 2978, 1733, 1680, 1437, 1314, 1245, 1156;
’H-NMR (deuterochloroform) δ: 7,46 (1H, s), 7,42 - 7,20 (5H, m), 5,03 (1H, dd), 4,52 - 4,40 (1H, m), 3,96 -
- 3,70 (2H, m), 3,70 - 3,49 (1H, m), 3,63 (2H, s), 2,92 - 2,75 (1H, m), 2,43 - 2,33 (1H, m), 2,33 - 2,15 (1H, m), 2,00 - 1,50 (3H, m), 1,45 (9H, s);
Analýza pre CiiHjíNÚOs.0,25^0:
vypočítané: 59,91% C, 6,82 % H, 13,31% N nájdené: 60,19% C, 6,80 % H, 13,30% N
Hmotnostná spektroskopia (ES +): 418 (M+ + 2, 25 %), 417 (M~ + 1, 100), 362 (9), 361 (45).
Zlúčenina 262f sa získa vo forme bielej tuhej látky (273 mg, 93 %) s teplotou topenia 102 - 106 °C. [oc]D 22 + 7,5° (c = 0,07, dichlórmetán);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3320, 2979, 1731, 1676, 1669, 1601, 1549, 1444, 1314, 1240, 1156;
’H-NMR (deuterochloroform) δ: 7,37 - 7,20 (6H, m), 7,08 - 6,98 (1H, m), 5,12 (1H, dd), 4,64 - 4,55 (1H, m), 4,02 - 3,78 (2H, m), 3,75 - 3,65 (1H, m), 2,94 - 2,75 (1H, m), 2,57 - 2,35 (1H, m), 2,35 - 2,20 (1H, m), 2,00 -1,50 (3 H, m), 1,48 (9H, s);
Analýza pre C2oH27N505.0,4H20:
vypočítané: 56,56 % C, 6,60 % H, 16,49% N nájdené: 56,89 % C, 6,58% H, 16,07% N
Hmotnostná spektroskopia (ES +): 419 (M+ + 2, 24 %), 418 (M+ + 1, 100), 363 (15), 362 (81), 242 (10).
Zlúčenina 262 g sa získa vo forme bielej tuhej látky (298 mg, 70 %) s teplotou topenia 138 - 143 °C. [a]D 23 + 69,8° (c = 0,1, dichlórmetán);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3282, 2978, 1733, 1664, 1536, 1421, 1310, 1156, 748;
'H-NMR (deuterochloroform) δ: 9,67 (1H, s), 9,53 (1H, s), 7,50 (1H, d), 7,30 - 7,15 (2H, m), 7,10 - 7,00 (1H, m), 6,93 (1H, s), 5,16 - 5,12 (1H, m), 4,60 - 4,50 (1H, m), 4,05 - 3,85 (2H, m), 3,85 - 3,70 (1H, m), 3,05 -
- 2,90 (1H, m), 2,55 - 2,35 (1H, m), 2,35 - 2,20 (1H, m), 2,00 - 1,85 (1H, m), 1,85 - 1,50 (2H, m), 1,47 (9H, s);
Analýza pre C22H27N5O5.0,45H2O:
vypočítané: 58,77 % C, 6,26 % H, 15,58% N nájdené: 59,14% C, 6,24% H, 15,18% N
Hmotnostná spektroskopia (ES +): 433 (M+ + 2, 26 %), 442 (M+ + 1, 100), 387 (17), 386 (79), 285 (20), 229 (85), 211 (26), 185 (15), 183 (57), 139 (9).
Zlúčenina 262h sa získa vo forme bielej tuhej látky (325 mg, 73 %) s teplotou topenia 209 - 212 °C. [oc]D 22 + 62,4° (c = 0,2, dichlórmetán);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3513, 3269, 2980, 1731, 1680, 1653, 1599, 1531, 1314, 1158; ’H-NMR (deuterochloroform) δ: 9,40 (1H, s), 8,75 (1H, s), 7,72 (2H, d), 7,47 (2H, d), 5,15 - 5,05 (1H, m), 4,55 - 4,45 (1H, m), 4,05 - 3,70 (3H, m), 3,00 - 2,80 (1H, m), 2,45 - 2,35 (1H, m), 2,30 - 2,15 (1H, m), 2,10 (3H, s), 2,00 - 1,80 (1H, m), 1,80 - 1,50 (2H, m), 1,48 (9H, s);
178
Analýza pre C22H29N5O6:
vypočítané: 57,51% C, 6,36 % H, 15,24% N nájdené: 57,41% C, 6,38% H, 15,12% N
Hmotnostná spektroskopia (ES +): 461 (M+ + 2, 26 %), 460 (M+ + 1, 100), 405 (12), 404 (55), 354 (7), 285 (23),229 (52), 183 (22).
Zlúčenina 262i sa získa vo forme bielej sklovitej tuhej látky (76 %) s teplotou topenia 85 - 89 °C.
[a]D 25 + 66,4° (c = 0,11, dichlórmetán);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 1732, 1666, 1607, 1502, 1440, 1312, 1295, 1258, 1176, 1157, 1025;
'H-NMR (deuterochloroform) δ: 8,25 (1H, s), 7,77 (2H, m), 6,90 (2H, m), 5,11 - 5,07 (1H, m), 4,55 - 4,48 (1H, m), 4,01 - 3,91 (2H, m), 3,86 - 3,78 (1H, m), 3,85 (3H, s), 2,98 (1H, m), 2,46 - 2,40 (1H, m), 2,26 - 2,20 (1H, m), 2,05 - 1,80 (1H, m), 1,70 - 1,64 (2H, m), 1,48 (9H, s).
Zlúčenina 262j sa získa vo forme bielej kryštalickej tuhej látky (79 %) s teplotou topenia 182 - 183 °C (za rozkladu).
[oc]D 22 + 92,1° (c = 0,4, dichlórmetán);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3283, 1732, 1684, 1448, 1430, 1404, 1369, 1338, 1306, 1285, 1242, 1169, 1091, 692;
'H-NMR (deuterochloroform) δ: 7,89 (2H, d, J = 7,4), 7,76 (1H, s), 7,64 - 7,49 (3H, m), 4,83 (1H, m), 4,35 (1H, široký d, J = 13,0), 4,00 (1H, m), 3,74 - 3,63 (2H, m), 2,39 - 2,26 (2H, m), 2,06 (1H, m), 1,50 - 1,41 (10H, m);
Analýza pre Ci9H26N4O6S:
vypočítané: 52,04 % C, 5,98% H, 12,78% N nájdené: 52,11% C, 5,95% H, 12,71% N
Hmotnostná spektroskopia (ES +): 437 (M+ - 1, 100 %).
Získa sa zlúčenina 262k (83 %).
[ct]D 22 + 42,3° (c = 0,11, dichlórmetán);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3287, 2997, 1935, 1735, 1681, 1606, 1501, 1296, 1248, 1173, 1155.
‘H-NMR (deuterochloroform) δ: 9,23 (1H, s), 7,73 (2H, d), 7,38 (5H, m), 6,85 (2H, d), 5,08 (1H, m), 5,02 (2H, s), 4,48 (1H, široký d), 4,15 - 3,65 (3H, m), 2,96 (1H, m), 2,45 - 2,10 (2H, m), 1,88 (1H, m), 1,63 (2H, m), 1,48 (9H, s);
Hmotnostná spektroskopia (ES +): 509 (M+ + 1).
Zlúčeniny 263a-k sa pripravia pomocou spôsobov použitých na prípravu zlúčenín 212b-f.
Zlúčenina 263a sa získa vo forme bielej penovitej látky (348 mg, 94 %).
[a]D 21 + 171° (c = 0,056, dichlórmetán);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3426, 3233, 2953, 1734, 1663, 1481, 1415, 1340, 1214, 1167, 1132, 1075,668;
‘H-NMR (deuterochloroform) δ: 8,44 (1H, s), 8,00 - 7,60 (7H, m), 4,85 - 4,83 (1H, m), 4,25 - 4,00 (1H, m), 4,07 - 3,90 (1H, m), 3,70 - 3,46 (2H, m), 2,38 - 2,30 (1H, m), 2,12 - 2,01 (1H, m), 1,91 - 1,83 (1H, m), 1,46 - 1,26 (1H, m), 1,13 - 1,06 (1H, m), 0,90 - 0,77 (1H, m);
Hmotnostná spektroskopia (ES +): 431.
Zlúčenina 263b. Získa sa 200 mg (100 %) bielej tuhej látky s teplotou topenia 155 °C.
[a]D 20 + 13° (c = 0,07, dichlórmetán);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3431, 2935, 1734, 1663, 1531, 1435, 1292, 1177;
'H-NMR (deuterochloroform) δ: 9,73 (1H, široký s), 7,73 - 7,27 (5H, m), 5,33 - 5,25 (1H, m), 4,56 - 4,48 (1H, m), 4,05 - 3,65 (3H, m), 3,12 - 3,00 (1H, m), 2,50 - 2,45 (1H, m), 2,30 - 2,20 (1H, m), 2,10 - 2,00 (1H, m), 1,75 - 1,61 (2H, m);
Hmotnostná spektroskopia (ES +): 401.
Zlúčenina 263c. Získa sa 216 mg (100 %) bezfarebnej peny.
[a]D 23 + 32,5° (c = 0,1, dichlórmetán);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3326, 1730, 1661, 1610, 1555, 1495, 1431, 1314, 1288, 1217, 1175, 1161;
'H-NMR (deuterochloroform) δ: 7,87 (1H, s), 7,58 (1H, s), 7,19 (2H, m), 6,82 (1H, m), 6,62 (1H, m), 5,21 (1H, m), 4,55 (1H, m), 3,76 (3H, s), 4,0 - 3,65 (4H, m), 2,85 (1H, m), 2,35 (2H, m), 1,75 (1H, m), 1,71 (2H, m).
Zlúčenina 263d sa získa vo forme bezfarebnej peny (100 %).
[a]D 24 + 11,7° (c = 0,1, dichlórmetán);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3394, 3325, 1666, 1603, 1543, 1490, 1463, 1438, 1329, 1311, 1292, 1249, 1214, 1176, 1119, 1024, 752;
179 'H-NMR (deuterochloroform) δ: 8,15 (1H, m), 7,97 (2H, m), 7,15 - 6,84 (3H, m), 5,29 (1H, m), 4,62 (1H, m), 4,04 - 3,65 (4H, m), 3,89 (3H, s), 2,92 (1H, m), 2,50 (1H, m), 2,30 (1H, m), 2,10 - 1,75 (2H, m).
Zlúčenina 263e sa získa vo forme bielej penovitej tuhej látky (117 mg, 98 %) s teplotou topenia 109 -
- 114 °C.
[a]D 24 + 82,6° (c = 0,06, dichlórmetán);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3700 - 2250 (široký), 3437, 3274, 2959, 1733, 1664, 1481, 1437,
1310, 1177;
'H-NMR (deuterochloroform) δ: 7,99 (1H, s), 7,40 - 7,15 (5H, m), 5,15 - 5,10 (1H, m), 5,25 - 4,70 (1H, široký s), 4,50 - 4,35 (1H, m), 3,95 - 3,50 (3H, m), 3,61 (2H, s), 2,93 - 2,78 (1H, m), 2,40 - 2,20 (2H, m), 2,10 -1,80 (1H, m), 1,80 - 1,60 (2H,m);
Analýza pre C17H20N4O5.H2O:
vypočítané: 53,96% C, 5,86 % H, 14,81% N nájdené: 54,12% C, 5,50 % H, 14,68% N
Hmotnostná spektroskopia (ES +): 360 (M+, 21 %), 359 (M+ - 1, 100), 196 (14), 182 (14), 111 (7).
Zlúčenina 263f sa získa vo forme bielej penovitej tuhej látky (199 mg, 92 %) s teplotou topenia 149 -152 °C.
[cc]d24 + 92,0° (c = 0,01, metanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3700 - 2300 (široký), 3319, 2956, 1726, 1664, 1600, 1548, 1500, 1444, 1313, 1238,755;
'H-NMR (deuterochloroform) δ: 8,90 (1H, s), 8,24 (1H, s), 7,42 (2H, d), 7,30 - 7,20 (2H, m), 7,00 - 6,90 (1H, m), 4,98 - 4,92 (III, m), 4,32 - 4,22 (1H, m), 3,80 - 3,55 (3H, m), 2,85 - 2,70 (1H, m), 2,30 - 2,20 (1H, m), 2,20 - 2,00 (1H, m), 1,90 - 1,35 (3H, m);
Analýza pre C|6H19N5O5.0,75H2O:
vypočítané: 51,26% C, 5,51% H, 18,68% N nájdené: 51,11% C, 5,23% H, 18,42% N
Hmotnostná spektroskopia (ES +): 361 (M+, 20 %), 360 (M+ - 1, 100), 241 (11), 240 (89), 196 (15), 175 (29), 111 (12).
Zlúčenina 263g sa získa vo forme bielej tuhej látky (259 mg, 92 %) s teplotou topenia 248 - 251 °C.
[a]o24 + 94,0° (c = 0,01, metanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3700 - 2300 (široký), 3341, 2956, 1738, 1668, 1651, 1529, 1425, 1311,1259, 751;
'H-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid) δ: 13,29 (1H, široký s), 11,72 (1H, s), 10,64 (1H, s), 7,65 (1H, d), 7,45 (1H, d), 7,26 - 7,15 (1H, m), 7,17 (1H, s), 7,10 - 7,00 (1H, m), 5,05 - 4,95 (1H, m), 4,40 - 4,25 (1H, m), 3,90
- 3,50 (3H, m), 2,88 - 2,75 (1H, m), 2,38 - 2,20 (1H, m), 2,20 - 2,00 (1H, m), 1,90 - 1,35 (3H, m);
Analýza pre C]8H19N5O5.0,5H2O:
vypočítané: 53,59% C, 5,25 % H, 17,35% N nájdené: 53,66% C, 4,88 % H, 17,11% N
Hmotnostná spektroskopia (ES +): 385 (M+, 23 %), 384 (M+ - 1, 100), 298 (6), 253 (8), 227 (10), 199 (23), 196(10),173 (9), 126 (21).
Zlúčenina 263h sa získa vo forme bielej tuhej látky (282 mg, 99 %) s teplotou topenia 210 - 215 °C.
[a]D 24 + 74,5° (c = 0,01, metanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3700 - 2300 (široký), 3444, 3316, 2960, 1664, 1599, 1531, 1439, 1301, 1184;
'H-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid) δ: 13,30 (1H, široký s), 10,50 (1H, s), 10,25 (1H, s), 7,80 (2H, d), 7,68 (2H, d), 5,00 - 4,90 (1H, m), 4,35 - 4,25 (1H, m), 3,90 - 3,40 (3H, m), 2,88 - 2,70 (1H, m), 2,35 - 2,25 (1H, m), 2,25 - 1,95 (1H, m), 2,08 (3H, s), 1,95 - 1,35 (3H, m);
Hmotnostná spektroskopia (ES +): 403 (M+, 10 %), 402 (M+ - 1, 100), 358 (10), 247 (10), 227 (16), 219 (51), 198 (12), 184 (17).
Zlúčenina 263i sa získa vo forme bielej sklovitej tuhej látky (približne 100 %), ktorá sa použije bez ďalšieho čistenia.
'H-NMR (deuterochloroform) δ: 9,23 (1H, s), 7,72 (2H, d, J = 8,8), 6,81 (2H, d, J = 8,9), 5,22 (1H, m), 4,51 (1H, m), 3,97 - 3,72 (2H, m), 3,81 (3H, s), 3,03 (1H, m), 2,51 - 2,46 (1H, m), 2,31 - 2,25 (1H, m), 2,03 (1H, m), 1,72 (3H, m).
Zlúčenina 263j sa získa vo forme bielej tuhej látky (100 %) s teplotou topenia 73 - 83 °C (za rozkladu). [a]D 22 + 104,7° (c = 0,3, dichlórmetán);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3600 - 2500 (široký), 3208, 1734, 1666, 1481, 1448, 1416, 1338,
1311, 1214, 1171, 1091,729, 689;
'H-NMR (deuterochloroform) δ: 7,87 (3H, m), 7,70 - 7,50 (3H, m), 7,16 (1H, široký s), 4,99 (1H, m), 4,37 (1H, široký d, J = 12,8), 3,92 (1H, m), 3,67 (2H. m), 2,36 (2H, m), 2,13 (1H, široký d, J = 12,2), 1,56 (3H, m);
180
SK 287195 Β6
13,64% N
13,43% N
Analýza pre Ci5H18N4O6S.0,25CF3CO2H: vypočítané: 45,31% C, 4,48 % H, nájdené: 45,48 % C, 4,71 % II,
Hmotnostná spektroskopia (ES +): 383 (MH+, 100 %). Presná hmotnosť vypočítaná pre Ci5Hi9N4O6S (MH+): 383,1025; nájdené: 383,1007.
Zlúčenina 263k. Získa sa 100 % s teplotou topenia 130 - 142 °C.
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3272, 2945, 1738, 1650, 1611, 1501, 1445, 1309,1255, 1171; 'H-NMR (deuterochloroform) δ: 9,35 (1H, s), 7,74 (2H, d), 7,38 (5H, m), 6,85 (2H, d), 5,40 (1H, široký s), 5,19 (1H, s), 5,02 (2H, s), 4,49 (1H, d), 3,92 (2H, m), 3,68 (1H, m), 2,99 (1H, široký s), 2,43 (1H, široký s), 2,22 (1H, široký s), 1,99 (1H, široký s), 1,68 (2H, široký s).
Zlúčenina 5251 sa získa pomocou spôsobu použitého na prípravu zlúčeniny 211, čím sa získa biela kryštalická tuhá látka (3,35 g, 83 %) s teplotou topenia 214 - 215 °C.
[oc]d2° + 75,2° (c = 0,1, dichlórmetán);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3272, 2955, 1747, 1664, 1610, 1485, 1443, 1265, 1040;
'H-NMR (deuterochloroform) δ: 8,66 (1H, s), 7,32 (1H, dd), 7,23 (1H, d), 6,76 (1H, d), 6,02 (2H, s), 5,20 (1H, dd), 4,55 - 4,45 (1H, m), 4,03 - 3,70 (3H, m), 3,78 (3H, s), 3,05 - 2,88 (1H, m), 2,47 - 2,35 (1H, m), 2,35 - 2,20 (1H, m), 2,10 - 1,90 (1H, m), 1,85 - 1,50 (2H, m);
Analýza pre C|8H20N4O7.0,5H2O: vypočítané: 52,87 % C, 5,06% H, 13,70% N nájdené: 52,84 % C, 5,00 % H, 13,66 % N
Hmotnostná spektroskopia (ES +): 406 (M++ 2, 20 %), 405 (M+ + 1, 100), 391 (10), 162 (6), 148 (3), 105 (2).
Zlúčenina 2631. Suspenzia zlúčeniny 5231 (3,32 g, 8,2 mmol) v tetrahydrofuráne (60 ml) sa nechá reagovať s roztokom monohydrátu hydroxidu lítneho (0,69 g, 16,4 mmol, 2 ekvivalenty) vo vode (20 ml). Vzniknutá zmes sa mieša počas 1 hodiny, zahustí sa a zvyšok sa rozpustí vo vode (50 ml). Roztok sa okyslí pomocou 2M roztoku hydrogénsíranu sodného a produkt sa extrahuje etylacetátom (100 ml a 50 ml podiely). Spojené extrakty sa premyjú soľankou (2 x 50 ml), vysušia sa nad síranom horečnatým a zahustia sa, čím sa získa zlúčenina 2631 vo forme bielej kryštalickej tuhej látky (2,87 g, 90 %) s teplotou topenia 154 - 158 °C. [a]D 20 + 85,6° (c = 0,01, metanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3700 - 2300 (široký), 3248, 2942, 1733, 1681, 1658, 1648, 1536, 1486, 1440, 1297, 1255, 1037;
'H-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid) δ: 13,23 (1H, široký s), 10,45 (1H, s), 7,45 (1H, d), 7,35 (1H, s), 7,03 (1H, d), 6,12 (2H, s), 5,00 - 4,93 (1H, m), 4,35 - 4,25 (1H, m), 3,90 - 3,40 (3H, m), 2,95 - 2,70 (1H, m), 2,40 - 2,25 (1H, m), 2,15 - 2,00 (1H, m), 1,91 - 1,40 (3H, m);
Analýza pre C17H18N4O7.0,8H2O: vypočítané: 50,45 % C, 4,88 % H, 13,84% N nájdené: 50,80 % C, 4,95 % H, 13,36% N
Hmotnostná spektroskopia (ES +): 390 (M+, 19 %), 389 (M+ - 1, 100), 345 (9), 204 (31), 182 (27), 111 (12).
1015,1018,1027
1052,1056,1075,1095
181
Zlúčenina R1
264a 265a αχ.
264c 265a QrÄ OMe
264d 265d αϊ
264e 1095 Oa
264f 265f Aä H
264g 1075 0
264h 1018 .i# H
264i 1052 ,χ MeO'^AA
264j 1027
264k 1056 „X
2641 1015 cX
Zlúčenina 264a sa pripraví podobným spôsobom ako zlúčenina 213a, čím sa získa biela tuhá látka (240 mg, 82 %).
182
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3380, 3066, 2947, 1789, 1750, 1691, 1454, 1417, 1368, 1298, 1262, 1235, 1193, 1118, 756, 696;
‘H-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid) δ: 8,59 (1H, d, J = 6,8), 8,48 (1H, s), 8,25 - 8,09 (3H, m), 7,85 - 7,75 (3H, m), 7,36 (5H, m), 5,39 (1H, m), 4,21 (2H, AB, J = 14,2), 4,53 - 4,49 (1H, m), 4,25 - 4,10 (2H, m), 3,65 -
- 3,44 (3H, m), 3,13 - 2,99 (1H, m), 2,43 - 2,16 (1H, m), 1,72 - 0,72 (7H, m);
Analýza pre C3oH3IN308S:
vypočítané: 57,96 % C, 5,03 % H, 11,27% N nájdené: 57,28% C, 5,14% H, 10,48% N
Hmotnostná spektroskopia (ES +): 622.
Zlúčenina 264c sa pripraví podobným spôsobom ako zlúčenina 213e (55 %) vo forme bezfarebnej peny s teplotou topenia 135 - 140 °C.
[a]D 22 + 51,6° (c = 0,1, dichlórmetán);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3314, 1790, 1664, 1608, 1543, 1496, 1455, 1428, 1325, 1287, 1250,1218, 1160, 1118;
’H-NMR (deuterochloroform) δ: 8,00 (1H, d, J = 7,1), 7,66 (1H, s), 7,55 (1H, s), 7,28 (5H, m), 7,14 (2H, m), 6,87 (1H, d, J = 7,4), 6,59 (1H, m), 5,42 (1H, s), 4,66 (5H, m), 3,90 - 3,65 (4H, m), 3,73 (3H, s), 2,98 (2H, m), 2,38 (2H, m), 2,01 - 1,65 (3H, m);
Zlúčenina 264d sa pripraví podobným spôsobom ako zlúčenina 213e vo forme bezfarebnej peny (72 %). [cx]D 22 + 21,4° (c = 0,1, dichlórmetán);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3302, 1791, 1689, 1678, 1664, 1602, 1536, 1489, 1461, 1437, 1420, 1249,1119, 1023,942, 751;
'H-NMR (deuterochloroform) δ: 8,07 (1H, d, J = 7,7), 7,82 (1H, s), 7,68 (1H, d, J = 6,7), 7,49 (1H, s), 7,34 (5H, m), 6,96 (3H, m), 5,47 (1H, s), 4,82 (2H, d a m, J = 11,5), 4,63 (1H, d, J = 11,5), 4,49 (2H, m), 3,85 (4H, s a m), 3,68 (2H, m), 3,01 (2H, m), 2,46 (2H, m), 1,95 (3H, m), 1,57 (1H, m).
Zlúčenina 264e sa pripraví podobným spôsobom ako zlúčenina 213e, čím sa získa zmes diastereomérov (pomer izomérov syn a anti 9 : 1) vo forme sklovitej tuhej látky (128 mg, 78 %) s teplotou topenia 103 -
- 108 °C.
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3419, 3302,1793,1664,1535,1421,1327,1256,1123,973; ’H-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid) δ: 10,20 (0,9H, s), 9,35 (0,lH, s), 8,74 (0,lH, d), 8,49 (0,9H, d), 7,36 -
- 7,15 (10H, m), 5,67 (0,9H, d), 5,44 (0,lH, s), 4,85 - 4,75 (1H, m), 4,74 - 4,60 (1H, m), 4,77 a 4,63 (2H, dd), 4,30 - 4,10 (1H, m), 3,80 - 3,40 (3H, m), 3,43 (2H, s), 3,10 - 2,40 (3H, m), 2,25 - 2,15 (1H, m), 2,00 - 1,35 (4H, m);
Analýza pre C28H3|N3O7.0,5H2O:
vypočítané: 60,21% C, 5,77% H, 12,53% N nájdené: 60,38 % C, 5,83 % H, 12,13% N
Hmotnostná spektroskopia (ES +): 551 (M+ + 2, 33 %), 550 (M+ + 1, 100), 480 (7), 343 (8), 279 (4).
Zlúčenina 264f sa pripraví podobným spôsobom ako zlúčenina 213a, čím sa získa čistý .syn-izomér vo forme bielej penovitej látky (225 mg, 82 %) s teplotou topenia 130- 135 °C.
[a]D 24 + 10,81° (c = 0,1, dichlórmetán);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3316, 1791,1688, 1676, 1664,1601, 1536, 1445, 1314, 1242, 973; ’H-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid) δ: 8,84 (1H, s), 8,49 (1H, d), 8,19 (1H, s), 7,45 - 7,18 (9H, m), 7,00 -
- 6,90 (1H, m), 5,68 (1H, d), 4,90 - 4,81 (1H, m), 4,75 - 4,60 (1H, m), 4,78 a 4,63 (2H, dd), 4,30 - 4,20 (1H, m), 3,75 - 3,55 (3H, m), 2,85 - 2,55 (3H, m), 2,25 - 2,15 (1H, m), 2,00 - 1,35 (4H, m);
Analýza pre C27H30N6O7.0,5H2O:
vypočítané: 57,95 % C, 5,58% H, 15,02% N nájdené: 58,12% C, 5,64% H, 14,81% N
Hmotnostná spektroskopia (ES +): 552 (M+ + 2, 30 %), 551 (M+ + 1, 100), 362 (19), 299 (10), 279 (4).
Zlúčenina 264g sa pripraví podobným spôsobom ako zlúčenina 223e, čím sa získa čistý ««//-izomér vo forme bielej tuhej látky (284 mg, 80 %) s teplotou topenia 148 - 153 °C.
[a]n 24 + 72,0° (c = 0,1, dichlórmetán);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3404, 3295, 1789, 1660, 1536, 1421, 1310, 1260, 1122, 749;
’H-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid) δ: 11,72 (1H, s), 10,58 (1H, s), 8,73 (1H, d), 7,65 (1H, d), 7,58 - 7,27 (6H, m), 7,27 - 7,10 (1H, m), 7,17 (1H, s), 7,10 - 7,00 (1H, m), 5,46 (1H, s), 4,90 - 4,85 (1H, m), 4,77 a 4,68 (2H, dd), 4,35 - 4,25 (2H, m), 3,95 - 3,55 (3H, m), 3,09 (1H, dd), 2,95 - 2,80 (1H, m), 2,47 - 2,25 (2H, m), 2,10- 1,35 (4H, m);
Hmotnostná spektroskopia (ES +): 574 (M+, 35 %), 573 (M+ - 1, 100), 384 (16), 383 (69), 341 (23), 327 (12), 267 (13), 200 (22).
Zlúčenina 264h sa pripraví podobným spôsobom ako zlúčenina 213e, čím sa získa zmes diastereomérov (pomer izomérov syn a anti 9 : 1) vo forme bielej tuhej látky (276 mg, 70 %) s teplotou topenia 147 - 152 °C. Infračervené spektrum (bromid draselný): 3444, 3304, 1793, 1665, 1602, 1531, 1505, 1423, 1294, 1264,
183
1181, 1123,966;
'H-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid) δ: 10,41 (1H, s), 10,22 (1H, s), 8,71 (O,1H, d), 8,48 (0,9H, d), 7,78 (2H, d), 7,67 (2H, d), 7,35 - 7,30 (5H, m), 5,68 (0,9H, d), 5,45 (O,1H, s), 4,88 - 4,80 (1H, m), 4,75 - 4,60 (1H, m), 4,77 a 4,63 (2H, dd), 4,30 - 4,20 (1H, m), 3,90 - 3,50 (311, m), 3,10 - 2,50 (3H, m), 2,35 - 2,20 (1H, m), 2,07 (3H, s), 2,05 - 1,35 (4H, m);
Analýza pre C29H32N6O8.H2O:
vypočítané: 57,04% C, 5,61% H, 13,76% N nájdené: 56,79 % C, 5,50% H, 13,53% N
Hmotnostná spektroskopia (ES ^): 594 (M++ 2, 34 %), 593 (M+ + 1. 100), 387 (8), 386 (38), 358 (8), 162 (19).
Zlúčenina 264i sa pripraví podobným spôsobom ako zlúčenina 213e, čím sa získa biela tuhá látka (70 %) s teplotou topenia 116 - 118 °C.
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3315, 2951, 1793, 1664, 1607,1502, 1258, 1177;
'H-NMR (deuterochloroform) δ: 8,07 (1H, s), 7,77 (2H, d, J = 8,6), 7,35 (5H, m), 6,94 (2H, d, j = 8,5), 6,74 (1H, s), 4,89 (1H, d, J = 11,1), 4,74 (1H, m), 4,60 (1H, d, J = 11,0), 4,48 a 4,41 (1H, 2m), 3,86 (3H, s), 3,79, 3,71 - 3,53 (3H, 2m), 2,87 (2H, m), 2,44 (1H, m), 2,18, 1,91 a 1,68 (5H, 3m).
Zlúčenina 264j sa pripraví podobným spôsobom ako zlúčenina 213e, čím sa získa pena (88 %).
[a]D 24 + 74,2° (c = 0,36, dichlórmetán);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3332, 3235, 1793, 1664, 1537, 1448, 1416, 1337, 1169, 1180, 1092, 940, 690;
‘H-NMR (deuterochloroform) δ: 7,99 (1H, s), 7,88 (2H, d, J = 6,8), 7,64 - 7,48 (3H, m), 7,34 (5H, s), 7,13 (1H, d, J = 6,9), 5,39 (1H, s), 4,81 (2H, m), 4,62 (1H, d, J = 11,5), 4,48 (1H, m), 4,33 (1H, m), 3,85 (1H, m), 3,59 (2H, m), 3,03 (1H, dd, J = 7,6 a 18,2), 2,49 - 2,28 (3H, m), 1,94 - 1,40 (4H, m);
Analýza pre C26H29N5O8S:
vypočítané: 54,63 % C, 5,11% H, 12,25% N nájdené: 54,42% C, 5,28% H, 11,62% N
Hmotnostná spektroskopia (ES +): 572 (MH+, 100 %). Presná hmotnosť vypočítaná pre C26H3oN508S (MH+): 572,1815; nájdené: 572,1802.
Zlúčenina 264k sa pripraví podobným spôsobom ako zlúčenina 213e (96 %).
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3294, 2946, 1793, 1658, 1606, 1535, 1501,1248,1174,1119;
‘H-NMR (deuterochloroform) δ: 8,91 (1H, s), 7,85 (3H, m), 7,4 (10H, m), 7,02 (2H, d), 5,35 (1H, s), 5,10 (2H, s), 4,8 - 4,3 (5H, m), 4,00 (1H, široký s), 3,78 (2H, m), 2,90 (2H, m), 2,5 -1,5 (6H, m).
Zlúčenina 2641 sa pripraví podobným spôsobom ako zlúčenina 213e, čím sa získa zmes diastereomérov (pomer izomérov syn a ariti 1 : 1) vo forme bielej tuhej látky (1,72 g, 71 %) s teplotou topenia 148 - 160 °C. Infračervené spektrum (bromid draselný): 3314, 1780, 1677, 1658, 1651, 1550, 1485, 1439, 1258, 1132, 1038,943;
‘H-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid) δ: 10,39 (1H, s), 8,71 (0,5H, d), 8,49 (0,5H, d), 7,44 (1H, d), 7,42 -
- 7,30 (6H, m), 7,03 (1H, d), 6,12 (2H, s), 5,68 (0,5H, d), 5,45 (0,5H, s), 4,90 - 4,82 (1H, m), 4,82 - 4,58 (2,5H, m), 4,40 - 4,10 (1,5H, m), 3,90 - 3,65 (2H, m), 3,65 - 3,43 (1H, m), 3,09 (0,5H, dd), 2,90 - 2,55 (1,5H, m), 2,45 - 2,10 (2H, m), 2,10-1,35 (4H, m);
Analýza pre (3^29^09.0,2H2O vypočítané: 57,67 % C, 5,08 % H, 12,01 % N nájdené: 58,01 % C, 5,33% H, 11,51% N
Hmotnostná spektroskopia (ES +): 581 (M+ + 2, 33 %), 580 (M+, 100), 374 (9), 373 (48), 345 (12), 261 (4), 239 (7), 149 (9).
Zlúčenina 265a sa pripraví podobným spôsobom ako zlúčenina 265, čím sa získa biela tuhá látka (37 mg, 17 %) s teplotou topenia 126 - 130 °C (za rozkladu).
[oc]D 20 + 30° (c = 0,05, metanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3371, 2935, 1785, 1663, 1538, 1418, 1339, 1164, 669;
‘H-NMR (perdeuterometanol) δ 8,44 (1H, s), 8,06 - 7,50 (7H, m), 7,22 (1H, d, J = 8,4), 4,58 - 4,57 (1H, m), 4,46 - 4,42 (III, m), 4,16 - 4,09 (211, m), 3,85 - 3,50 (311, m), 2,84 - 2,78 (1H, m), 2,64 - 2,51 (1H, m), 2,44 -
- 2,15 (2H, m), 1,81 - 0,89 (4H, m);
Analýza pre C23H25N5OsS.H2O:
vypočítané: 50,27 % C, 4,95 % H, 12,74% N nájdené: 50,33 % C, 5,04 % H, 12,60% N
Hmotnostná spektroskopia (ES +): 530.
Zlúčenina 265c sa pripraví podobným spôsobom ako zlúčenina 265 vo forme bezfarebnej tuhej látky (90 %) s teplotou topenia približne 150 °C (za rozkladu).
[cc]D 23 + 94,8° (c = 0,1, 20 % metanol/dichlórmetán);
184
Infračervené spektrum (bromid draselný); 3330, 1780, 1660, 1610, 1550, 1495, 1428, 1326, 1287, 1251, 1223, 1160;
'H-NMR (perdeuterometanol) δ: 7,16 (2H, m), 6,89 (1H, d, J = 7,8), 4,58 (1H, m), 4,37 (2H, m), 3,76 (6H, s a m), 2,95 (1H, m), 2,67 (1H, m), 2,33 (1H, m), 2,20 - 1,85 (3H, m), 1,66 (1H, m).
Zlúčenina 265d sa pripraví podobným spôsobom ako zlúčenina 265 vo forme bezfarebnej tuhej látky (85 %) s teplotou topenia 176 - 185 °C.
[oc]D 23 + 11,0° (c = 0,1, metanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3392, 3328, 1784, 1665, 1603, 1537, 1490, 1462, 1437, 1337, 1290, 1217, 1177, 1119, 1023;
'H-NMR (perdeuterometanol) δ: 8,02 (2H, m), 6,95 (4H, m), 5,05 (1H, m), 4,60 (2H, m), 3,92 (4H, s a m), 3,00 (2H, m), 2,68 (1H, m), 2,39 (1H, m), 2,00 (4H, m), 1,69 (1H, m);
Zlúčenina 1095 sa pripraví podobným spôsobom ako zlúčenina 265, čím sa získa biela tuhá látka (84 mg, 90 %) s teplotou topenia 180 - 186 °C.
[oc]D 22 + 22,3° (c = 0,065, metanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3700 - 2300 (široký), 3287, 1664, 1536, 1425, 1261, 1181;
'H-NMR (perdeuterometanol) δ: 7,35 - 7,20 (5H, m), 5,00 - 4,90 (1H, m), 4,60 - 4,50 (1H, m), 4,50 - 4,10 (2H, m), 3,90 - 3,50 (3H, m), 3,54 (2H, s), 3,00 - 2,80 (1H, m), 2,80 - 2,40 (2H, m), 2,35 - 2,20 (1H, m), 2,20 -1,50 (4H, m);
Hmotnostná spektroskopia (ES +): 459 (M+, 24 %), 458 (M+ - 1, 100), 358 (27), 175 (9), 149 (7), 137 (12). Presná hmotnosť vypočítaná pre C21H26N5O7 (MH+): 460,1832; nájdené: 460,1840.
Zlúčenina 265f sa pripraví podobným spôsobom ako zlúčenina 265, čím sa získa biela penovitá tuhá látka (130 mg, 88 %) s teplotou topenia 157 - 162 °C.
[ot]D 24 + 41,7° (c = 0,1, metanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3700 - 2300 (široký), 3325, 1782, 1663, 1547, 1443, 1315, 1242, 1181;
'H-NMR (perdeuterometanol) δ: 7,40 (2H, dd), 7,35 - 7,20 (2H, m), 7,06 - 6,95 (1H, m), 5,05 - 4,95 (1H, m), 4,64 - 4,54 (1H, m), 4,50 - 4,35 (1H, m), 4,35 - 4,15 (1H, m), 3,90 - 3,69 (3H, m), 3,00 - 2,85 (1H, m), 2,80 -
- 2,45 (3H, m), 2,40 - 1,50 (4H, m);
Hmotnostná spektroskopia (ES +): 460 (M+, 24 %), 459 (M+ - 1, 100), 341 (9), 340 (54), 296 (6), 239 (9).
Zlúčenina 1075 sa pripraví podobným spôsobom ako zlúčenina 265, čím sa získa biela tuhá látka (184 mg, 83 %) s teplotou topenia 210-215 °C.
[ct]D 24 + 43,9° (c = 0,1, metanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný); 3700 - 2300 (široký), 3309, 1660,1537,1423, 1311,1262,1184; 'H-NMR (perdeuterometanol) δ: 7,61 (1H, d), 7,45 (1H, d), 7,28 - 7,15 (1H, m), 7,15 - 7,00 (1H, m), 7,13 (1H, s), 5,12 - 4,96 (1H, m), 4,62 - 4,55 (1H, m), 4,50 - 4,25 (2H, m), 4,00 - 3,69 (3H, m), 3,05 - 2,90 (1H, m), 2,80 - 2,30 (3H, m), 2,25 - 1,50 (4H, m);
Hmotnostná spektroskopia (ES +): 484 (M+, 26 %), 483 (M+ - 1, 100), 383 (25), 245 (12), 208 (11), 200 (21), 174 (31), 137 (18).
Zlúčenina 1018 sa pripraví podobným spôsobom ako zlúčenina 265, čím sa získa biela tuhá látka (177 mg, 82 %) s teplotou topenia 235 - 240 °C.
[ct]D 23 + 27,3° (c = 0,1, metanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3700 - 2300 (široký), 3311, 2957, 1662, 1599, 1531, 1318, 1266, 1182;
'H-NMR (perdeuterometanol) δ: 7,83 (2H, d), 7,69 (2H, d), 5,10 - 4,95 (1H, m), 4,64 - 4,55 (1H, m), 4,50 -
- 4,35 (1H, m), 4,32 - 4,22 (1H, m), 4,00 - 3,65 (3H, m), 3,05 - 2,90 (1H, m), 2,80 - 2,30 (3H, m), 2,15 (3H, s), 2,15 - 1,50 (4H, m);
Analýza pre C22H26N6O8.1,5H2O:
vypočítané: 49,90% C, 5,52% H, 15,87% N nájdené: 50,21 % C, 5,41 %H, 15,49%N
Hmotnostná spektroskopia (ES +): 502 (M+, 28 %), 501 (M’ - 1, 100), 401 (8), 218 (4), 119 (2), 118 (5), 113 (16).
Zlúčenina 1052 sa pripraví podobným spôsobom ako zlúčenina 265, čím sa získa biela tuhá látka (0,194 g, 100 %) s teplotou topenia 138 - 142 °C.
[a]D 20 + 36,3° (c = 0,19, metanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3434 - 2962, 1782, 1660, 1607, 1537, 1504, 1441, 1424, 1313, 1293, 1238, 1177;
'H-NMR (perdeuterometanol) δ: 7,11 (2H, d, J = 8,8), 6,90 (2H, d, J = 8,9), 4,48 (1H, m), 4,34 a 4,28 (1H, 2m), 4,15 (1H, m), 3,75 a 3,70 (3H, 2m), 2,88, 2,49, 2,28, 2,23, 2,00, 1,86, 1,79 a 1,58 (8H, 8m).
Zlúčenina 1027 sa pripraví podobným spôsobom ako zlúčenina 265, čím sa získa biela pena (88 %).
185 [o.]D 24 + 22,6° (c = 0,17, metanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3349, 1789, 1663, 1537, 1448, 1337, 1169, 1092, 690;
'H-NMR (perdeuterometanol) δ: 7,82 (2H, d, J = 7,8), 7,57 (3H, m), 4,74 (1H, m), 4,47 (1H, m), 4,24 - 4,10 (2H, m), 3,72 - 3,47 (4H, m), 2,62 - 2,48 (3H, m), 2,20 (1H, m), 1,94 - 1,35 (3H, m);
Hmotnostná spektroskopia (ES +): 480 (M' - 1, 100). Presná hmotnosť vypočítaná pre C19H24N5O8S (MH+): 482,1346; nájdené: 482,1325.
Zlúčenina 1056 (95 %) s teplotou topenia > 300 °C sa pripraví podobným spôsobom ako zlúčenina 265. Infračervené spektrum (bromid draselný): 3392, 1660, 1610, 1507, 1442, 1280, 1171, 1149, 1133; 'H-NMR (perdeuterometanol) δ: 7,74 (2H, d, J = 8,7), 6,84 (2H, d, J = 8,7), 4,58 (1H, m), 4,41 (1H, široký d, J = 12,6), 4,28 (1H, m), 3,85 (3H, m), 2,98 (1H, m), 2,8 - 2,3 (3H, m), 2,3 - 1,6 (4H, m).
Zlúčenina 1015 sa pripraví podobným spôsobom ako zlúčenina 265, čím sa získa biela tuhá látka (142 mg, 58 %) s teplotou topenia 170 - 175 °C.
[a]D 25 + 32,7° (c = 0,1, metanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3700 - 2500 (široký). 3325, 2969, 1784, 1662, 1485, 1440, 1292, 1258, 1037;
'H-NMR (perdeuterometanol) δ: 7,45 (1H, dd), 7,32 (1H, d), 6,90 (1H, d), 6,05 (2H, s), 5,10 - 4,90 (1H, m), 4,62 - 4,54 (1H, m), 4,45 - 4,35 (1H, m), 4,33 - 4,22 (1H, m), 3,95 - 3,65 (3H, m), 3,05 - 2,90 (1H, m), 2,80 - 2,30 (3H, m), 2,20 - 1,50 (4H, m).
Zlúčenina 526 sa pripraví podobným spôsobom ako zlúčenina 502, čím sa získa sklovitá tuhá látka.
[<x]d2° + 34° (c = 0,13, dichlórmetán);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3437, 2929, 1670,1530, 1428,1288, 1156;
'H-NMR (deuterochloroform) δ: 10,0 (1H, široký s), 9,74 (1H, široký s), 7,93 (1H, s), 7,80 - 7,60 (2H, m), 7,40 - 7,18 (3H, m), 6,15 - 5,30 (2H, široký s), 5,00 - 4,85 (2H, m), 4,50 - 4,25 (1H, m), 3,95 - 3,75 (3H, m), 3,12 - 2,78 (2H, m), 2,73 - 1,60 (7H, m), 1,36 (9H, s);
Analýza pre C27H34N8O7S:
vypočítané: 52,76 % C, 5,58 % H, 18,23% N nájdené: 52,25 % C, 5,74% H, 16,30% N
Hmotnostná spektroskopia (ES +): 615.
Zlúčenina 1053 sa pripraví podobným spôsobom ako zlúčenina 214, čim sa získa biela tuhá látka (106 mg, 73%).
[oc]d2° + 22° (c = 0,1, metanol);
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3428, 2944, 1733,1652, 1532, 1433, 1337,1288,1186;
'H-NMR (perdeuterometanol) δ: 7,95 (1H, s), 7,90 - 7,85 (2H, m), 7,43 - 7,35 (2H, m), 4,98 (1H, m), 4,65 - 4,52 (1H, m), 4,40 - 4,20 (2H, m), 3,85 - 3,70 (3H, m), 3,30 - 3,25 (3H, m), 3,03 - 2,85 (1H, m), 2,70 - 2,31 (3H,m), 2,10- 1,55 (4H, m);
Hmotnostná spektroskopia (ES +): 500 (ako metylacetál aldehydu).
186
Zlúčenina 528 sa pripraví podobným spôsobom ako zlúčenina 213a, čím sa získa zmes diastereomérov (pomer izomérov syn a anti 1 : 1) vo forme krémovej penovitej tuhej látky (1,05 g, 58 %) s teplotou topenia 124 - 132 °C.
Infračervené spektrum (bromid draselný): 3312, 2979,1790,1664, 1610, 1532, 1485, 1285, 1120, 1037, 932; ’H-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid) δ: 10,39 (1H, s), 8,71 (0,5H, d), 8,43 (0,5H, d), 7,45 (1H, d), 7,36 (1H, s), 7,04 (1H, d), 6,12 (2H, s), 5,58 (0,5H, d), 5,34 (0,5H, s), 4,95 - 4,85 (1H, m), 4,70 - 4,52 (0,5H, m), 4,35 - 4,10 (1,5H, m), 3,95 - 3,50 (5H, m), 3,03 (0,5H, dd), 2,90 - 2,55 (1,5H, m), 2,46 - 2,20 (2H, m), 2,10 - 2,40 (4H,m), 1,16-1,13 (3H, 2t);
Analýza pre CGjHjiNjCL.O.óHjO:
vypočítané: 52,29 % C, 5,38 % H, 13,26% N nájdené: 52,53 % C, 5,35% H, 12,78% N
Hmotnostná spektroskopia (ES +): 519 (M+ + 2, 27 %), 518 (M+ + 1, 100), 472 (7), 374 (12), 373 (53), 345 (14), 149(12).
Príklad 31
Zlúčeniny 640, 642, 645,650,653,655,656, 662,668, 669,670, 671,677, 678, 681, 682, 683,684, 686, 688a, 688b, 6891, 689b, 690a, 690b, 691a, 691b, 695a, 695b, 695c, 692a, 692b, 693 a 694 sa pripravia nasledovným spôsobom.
Zlúčenina 638 sa pripraví zo zlúčeniny 600a podobným spôsobom, ako sa pripraví zlúčenina 602m zo zlúčeniny 600a, čím sa získa 2,4 g zlúčeniny 638 vo forme bielej tuhej látky.
Zlúčenina 639. K roztoku zlúčeniny 638 (630 mg, 1,76 mmol) a 2-naftylmetylbromidu (428 mg, 1,94 mmol) v acetonitrile sa pridá uhličitan draselný (608 mg, 4,4 mmol). Vzniknutá zmes sa mieša pri teplote miestnosti. Po 18 hodinách sa reakčná zmes zriedi dichlórmetánom, premyje vodou, potom soľankou, vysuší sa nad síranom sodným a odparí sa vo vákuu. Po veľmi rýchlej chromatografii (silikagél, 20 % etylacetát/dichlórmetán) sa získa 405 mg zlúčeniny 639.
Zlúčenina 640 sa pripraví podobným spôsobom ako zlúčenina 605v zo zlúčeniny 602v, čím sa získa 205 mg zlúčeniny 640 vo forme bielej tuhej látky.
’H-NMR (deuterochloroform) δ: 2,4 - 2,55 (m, 1H), 2,65 - 2,8 (m, 1H), 3,2 (s, 3H), 3,72 - 3,78 (m, 1H), 3,85 - 4,0 (m, 2H), 4,22 - 4,28 (d, 1H), 4,26 - 4,5 (m, 4H), 4,58 - 4,75 (m, 1H), 4,78 - 4,85 (m, 1H), 5,0 - 5,08 (t, 1H), 7,35 - 7,65 (m, 7H), 7,85 - 8,02 (m, 4H).
187
638
Zlúčenina 642 sa pripraví zo zlúčeniny 638 podobným spôsobom ako zlúčenina 605m, čím sa získa 213 mg zlúčeniny 642.
'H-NMR (deuterochloroform) δ: 2,5 (m, 1H), 2,68 (ddd, 1H), 3,25 (s, 2H), 3,3 (s, 3H), 3,78 (m, 2H), 4,0 (d, 1H), 4,3 (m, 1H), 4,6 (m, 2H), 4,85 (široký s, 2H), 7,08 - 7,22 (m, 2H), 7,35 (m, 1H), 7,47 - 7,65 (m, 4H), 7,7 (dd, 1H), 8,1 (dd, 1H).
644
645
Zlúčenina 643. K suspenzii N-acetylglycínu (200 mg, 1,7 mmol) v dichlórmetáne (2,5 ml) obsahujúcom dimetylformamid (0,005 ml) sa pridá oxalylchlorid (0,450 ml, 5,1 mmol). Po 30 minútovom miešaní pri teplote miestnosti sa zmes odparí, čím sa získa zlúčenina 643 vo forme surového produktu.
Zlúčenina 644 sa pripraví zo zlúčeniny 600b podobným spôsobom ako zlúčenina 602d zo zlúčeniny 600b, pričom sa použije zlúčenina 643, čím sa získa 112 mg zlúčeniny 644.
Zlúčenina 645 sa pripraví zo zlúčeniny 644 podobným spôsobom ako zlúčenina 605d zo zlúčeniny 602d, čím sa získa 43 mg zlúčeniny 645 vo forme bielej tuhej látky.
'H-NMR (deuterochloroform) δ: 1,95 (s, 3H), 2,4 (m, 1H), 2,65 (m, III), 3,4 (s, 1H), 3,55 (m, 1H), 3,85 (m, 1H), 4,05 (d, 1H), 4,3 (m, 1H), 4,4 - 4,6 (m, 2H), 5,0 (m, 1H), 7,4 - 7,7 (m, 6H), 7,85 - 8,0 (m, 2H).
188
600b
Fmoc \
648
650 649
Zlúčenina 646 sa pripraví z N-Fmoc-sarkozínu podobným spôsobom ako zlúčenina 643, čím sa získa zlúčenina 646 vo forme surového produktu.
Zlúčenina 647 sa pripraví zo zlúčeniny 600b podobným spôsobom ako zlúčenina 602d zo zlúčeniny 600b, pričom sa použije zlúčenina 646, čím sa získa 481 mg zlúčeniny 647.
Zlúčenina 648 sa pripraví zo zlúčeniny 647 pomocou metódy použitej na prípravu zlúčeniny 604d zo zlúčeniny 602d, čím sa získa 409 mg zlúčeniny 648.
Zlúčenina 649. Roztok zlúčeniny 648 (409 mg, 0,465 mmol) v zmesi acetonitril/dietylamín 4 : 1 (v/v) sa mieša pri teplote miestnosti. Po 45 minútach sa reakčná zmes zahustí vo vákuu. Po veľmi rýchlej chromatografii (silikagél, 5 až 20 % metanol v dichlórmetáne) sa získa 241 mg zlúčeniny 649.
Zlúčenina 650 sa pripraví zo zlúčeniny 649 pomocou spôsobu použitého na prípravu zlúčeniny 605d zo zlúčeniny 604, čím sa získa 179 mg zlúčeniny 650 vo forme bielej tuhej látky.
'H-NMR (perdeuterometanol) δ: 2,4 - 2,6 (m, 2H), 2,7 (s, 3H), 3,5 (q, 1H), 3,8 (m, 2H), 4,2 - 4,4 (m, 2H), 4,3 - 4,45 (m, 1H), 5,0 - 5,1 (m, 2H), 7,4 - 7,7 (m, 6H), 7,85 - 7,9 (m, 2H), 8,2 (m, 1H).
Zlúčenina 652 sa pripraví zo zlúčeniny 600b podobným spôsobom ako zlúčenina 602n zo zlúčeniny 600b, pričom sa použije činidlo získané reakciou dimetylformamidu s tromi ekvivalentmi oxalylchloridu v roztoku dichlórmetánu ako R3X, čím sa získa 404 mg zlúčeniny 652.
Zlúčenina 653 sa pripraví zo zlúčeniny 652 spôsobom, ktorý sa použil na prípravu zlúčeniny 605d zo zlúčeniny 602d, čím sa získa 84 mg zlúčeniny 653 vo forme bielej tuhej látky.
189
SK 287195 Β6 1 H-NMR (perdeuterometanol) δ: 2,3 (m, 1H), 2,55 (dd, 1H), 3,75 (široký s, 1H), 4,25 - 4,6 (m, 5H), 5,15 (m, 1H), 7,2 - 7,45 (m, 6H), 7,8 - 7,9 (dd, 3H), 8,1 (s, 1H), 8,2 (m, 2H).
Zlúčenina 654 sa pripraví zo zlúčeniny 600b použitím spôsobu, ktorý sa použil na prípravu zlúčeniny 603d zo zlúčeniny 600b, čím sa získa 775 mg zlúčeniny 654.
Zlúčenina 655 sa pripraví zo zlúčeniny 654 použitím spôsobu, ktorý sa použil na prípravu zlúčeniny 213a, čím sa získa 304 mg zlúčeniny 655.
‘H-NMR (perdeuterometanol) δ: 2,4 (d, 1H), 2,6 - 2,75 (m, 2H), 3,0 (m, 1H), 3,45 (m, 1H), 3,8 (d, 1H), 4,0 (t, 2H), 4,4 (m, 2H), 4,5 - 4,55 (m, 2H), 7,2 - 7,45 (m, 4H), 7,85 (s, 2H).
Zlúčenina 656 sa pripraví zo zlúčeniny 655 pomocou spôsobu, ktorý sa použil na prípravu zlúčeniny 2002 zo zlúčeniny 2001, čím sa získa 136 mg zlúčeniny 656 vo forme bielej tuhej látky.
‘H-NMR (perdeuterometanol) δ: 1,85 (s, 3H), 2,5 (m, 1H), 2,65 (m, 1H), 3,7 (m, 1H), 4,3 (m, 1H), 4,55 (m, 2H), 7,4 - 7,6 (m, 4H), 7,85 (s, 2H).
190
Zlúčenina 657. K roztoku benzylglykolátu (6,0 g, 36,1 mmol) v dichlórmetáne ochladenému v ľadovom kúpeli sa pridá fluorenylmetoxychloroformiát (14 g, 1,5 ekvivalentu) a potom díizopropyletylamín (9 ml, 1,5 ekvivalentu). Po 1 hodine sa reakčná zmes vyleje do nasýteného vodného roztoku chloridu amónneho a extrahuje sa dichlórmetánom, vysuší sa nad síranom sodným a odparí sa vo vákuu. Produkt sa trituruje metanolom, čím sa získa 2,2 g zlúčeniny 657 vo forme bielej tuhej látky.
Zlúčenina 658. K roztoku zlúčeniny 657 (2,2 g, 5,93 mmol) v tetrahydrofuráne sa pridá 5 % paládium na uhlí (220 mg). Vzniknutá suspenzia sa energicky mieša vo vodíkovej atmosfére. Po 90 minútach sa reakčná zmes prefiltruje cez kremelinu. Filtrát sa vyleje do nasýteného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a dvakrát sa premyje etylacetátom. Vodná vrstva sa okyslí a produkt sa dvakrát extrahuje dichlórmetánom, vysuší sa nad síranom sodným a zahustí sa vo vákuu, čím sa získa 1,46 g (88 %) zlúčeniny 658 vo forme bie15 lej tuhej látky.
Zlúčenina 659 sa pripraví zo zlúčeniny 658 spôsobom, ktorý sa použil na prípravu zlúčeniny 643, čím sa získa zlúčenina 659 vo forme surového produktu.
Zlúčenina 660 sa pripraví zo zlúčeniny 600b podobným spôsobom ako zlúčenina 604d zo zlúčeniny 600b, pričom sa použije zlúčenina 659, čím sa získa 453 mg zlúčeniny 660.
191
Zlúčenina 661. Roztok zlúčeniny 660 (423 mg) v zmesi metanol/dietylamín 1 : 1 (v/'v) sa mieša pri teplote miestnosti. Po 10 minútach sa reakčná zmes odparí vo vákuu na malý objem. Po vyzrážaní pridaním éteru sa získa 230 mg zlúčeniny 661.
Zlúčenina 662 sa pripraví zo zlúčeniny 661 spôsobom použitým na prípravu zlúčeniny 605d zo zlúčeniny 5 604, čím sa získa 37 mg zlúčeniny 662 vo forme bielej tuhej látky.
’H-NMR (perdeuterometanol) δ: 2,45 (m, 1H), 2,7 (m, 1H), 3,75 (m, 1H), 3,9 (d, 1H), 4,15 (d, 1H), 4,35 (m, 1H), 4,5 (t, 2H), 4,7 (dd, 1H), 7,4 - 7,6 (m, 4H), 7,85 (s, 2H).
663 664 665
666
Zlúčenina 663. K roztoku benzylglykolátu (46,91 g, 0,282 mol) a diizopropyletylamínu (74 ml, 0,423 mol) v dichlóremetáne ochladenému vo vodnom kúpeli sa pridá roztok TIPSOTf (95 g, 0,31 mol) v dichlór
192 metáne. Vzniknutá zmes sa nechá zohriať na teplotu miestnosti, potom sa vyleje do vody, premyje sa dvakrát 10 % vodným roztokom hydrogénsíranu sodného a zahustí sa vo vákuu. Po veľmi rýchlej chromatografii (silikagél, 0 až 5 % etylacetát v hexáne) sa získa 71,6 g zlúčeniny 663.
Zlúčenina 664. K roztoku zlúčeniny 663 (0,4 g, 1,2 mmol) v etylacetáte sa pridá 10 % paládium na uhlí (33 mg). Vzniknutá suspenzia sa mieša vo vodíkovej atmosfére. Po 15 minútach sa reakčná zmes prefiltruje cez kremelinu a filtrát sa zahustí vo vákuu, čim sa získa 0,29 g oleja. K roztoku tohto oleja v 1,4-dioxáne sa pridá 0,5M hydrogenuhličitan sodný (2,4 ml). Vzniknutý roztok sa zahustí vo vákuu z toluénu, čím sa získa zlúčenina 664 vo forme voskovitej tuhej látky.
Zlúčenina 665 sa pripraví zo zlúčeniny 664 podobným spôsobom, ako sa pripraví zlúčenina 643, čím sa získa zlúčenina 665 vo forme surového produktu.
Zlúčenina 666 sa pripraví zo zlúčeniny 600b pomocou spôsobu použitého na prípravu zlúčeniny 604d zo zlúčeniny 600b, pričom sa použije zlúčenina 665, čím sa získa 131 mg zlúčeniny 666.
Zlúčenina 667. K roztoku zlúčeniny 666 (131 mg, 0,17 mmol) v tetrahydrofuráne ochladenému v kúpeli ľad/voda sa pridá IM tetrabutylamóniumfluorid (0,190 ml). Po 2 hodinách sa reakčná zmes vyleje do vody, extrahuje sa dvakrát etylacetátom, vysuší sa nad síranom sodným a zahustí vo vákuu, čím sa získa 63 mg zlúčeniny 667 vo forme bielej tuhej látky.
Zlúčenina 668 sa pripraví zo zlúčeniny 667 spôsobom použitým na prípravu zlúčeniny 605d zo zlúčeniny 604d, čím sa získa 48 mg zlúčeniny 668 vo forme bielej tuhej látky.
'H-NMR (perdeuterometanol) δ: 2,45 (m, 1H), 2,67 (dddd, 1H), 3,78 (d, 1H), 3,85 (široký m, 1H), 4,05 (d, 1H), 4,28 (m, 1H), 4,5 (m, 2H), 4,65 (m, 1H), 4,95 (široký s, 2H), 7,4 - 7,5 (m, 4H), 7,52 - 7,65 (m, 3H), 7,88 (d, 2H).
600b
Zlúčenina 669 sa pripraví zo zlúčeniny 600b spôsobom použitým na prípravu zlúčeniny 605d zo zlúčeniny 600b, čím sa získa 63 mg zlúčeniny 669 vo forme bielej tuhej látky.
'H-NMR (perdeuterometanol) δ: 1,9 (s, 3H), 2,4 - 2,7 (m, 2H), 3,6 - 3,7 (m, 2H), 3,9 (s, 1H), 4,2 - 4,4 (m, 2H), 4,4 - 4,6 (m, 3H), 7,4 - 7,8 (m, 4H), 7,9 (s, 2H).
193
Zlúčenina 670 sa pripraví zo zlúčeniny 600b spôsobom použitým na prípravu zlúčeniny 655 zo zlúčeniny 600b, čím sa získa 218 mg zlúčeniny 670 vo forme bielej tuhej látky.
'H-NMR (perdeuterometanol) δ: 1,7 a 1,75 (2s, 3H), 2,15 a 2,2 (2s, 6H), 2,4 - 2,5 (m, 1H), 2,6 - 2,75 (m, 5 1H), 3,65 - 3,75 (m, 2H), 4,2 - 4,3 (m, 2H), 4,45 - 4,6 (m, 3H), 7,35 - 7,6 (m, 4H), 7,5 (s, 2H).
Zlúčenina 671 sa pripraví zo zlúčeniny 670 spôsobom použitým na prípravu zlúčeniny 2002 zo zlúčeniny 2001, čim sa získa 253 mg zlúčeniny 671 vo forme bielej tuhej látky.
'H-NMR (perdeuterometanol) δ: 1,9 (s, 3H), 2,25 (s, 6H), 2,4 - 2,5 (m, 1H), 2,6 - 2,75 (m, 1H), 3,65 - 3,75 (m, 2H), 4,2 - 4,3 (m, 2H), 4,45 - 4,6 (m, 3H), 7,35 - 7,6 (m, 4H), 7,5 (s, 2H).
600b
672
673
194
Zlúčenina 672 sa pripraví zo zlúčeniny 600b pomocou postupu použitého na prípravu zlúčeniny 602n zo zlúčeniny 600b, pričom sa použije zlúčenina 665, čím sa získa 1,08 g zlúčeniny 672.
Zlúčenina 673. K roztoku zlúčeniny 672 (1,08 g, 1,69 mmol) v dichlórmetáne sa pridá 2,6-lutidín (0,8 ml) a potom TMSOTf (1 ml, 5,1 mmol). Po 1 hodine sa reakčná zmes vyleje do roztoku hydrogenuhličitanu sodného, extrahuje dichlórmetánom, vysuší nad síranom horečnatým a zahustí vo vákuu na malý objem, ktorý sa priamo použije pri ďalšej reakcii.
Zlúčenina 674 sa pripraví zo zlúčeniny 673 spôsobom použitým na prípravu zlúčeniny 602b, čím sa získa 0,91 g zlúčeniny 674.
Zlúčenina 675. Roztok zlúčeniny 674 (0,365 g, 0,5 mmol) v metanole sa mieša s IN hydroxidom sodným (1,2 ml, 1,2 mmol). Po 16 hodinách sa reakčná zmes zahustí vo vákuu, potom sa rozpustí vo vode a dvakrát sa premyje éterom. Vodná vrstva sa okyslí IN kyselinou chlorovodíkovou a produkt sa extrahuje etylacetátom, vysuší nad síranom horečnatým a odparí vo vákuu, čím sa získa 337 mg zlúčeniny 675 vo forme tuhej látky.
Zlúčenina 676 sa pripraví zo zlúčeniny 675 spôsobom použitým na prípravu zlúčeniny 213e, čím sa získa 166 mg zlúčeniny 676 vo forme bielej tuhej látky.
Zlúčenina 677. Roztok TBAF (6 ml, 3 mmol) v kyseline octovej (0,46 ml, 8 mmol) sa pridá k zlúčenina 676 (0,213 g, 0,256 mmol). Po 16 hodinách sa reakčná zmes vyleje do etylacetátu a dvakrát sa premyje roztokom hydrogenuhličitanu sodného a jedenkrát soľankou, potom sa vysuší nad síranom horečnatým a odparí vo vákuu, čim sa získa 139 mg zlúčeniny 677 vo forme tuhej látky.
'H-NMR (deuterochloroform) δ: 2,4 (d, 1H), 2,5 (dd, 1H), 2,8 (dd, 1H), 2,92 (dd, 1H), 3,15 (m, 2H), 3,55 - 3,65 (m, 2H), 3,72 (s, 6H), 3,92 (m, 1H), 4,05 (m, 1H), 4,3 (m, 1H), 4,42 (d, 1H), 4,6 (dd, 1H), 4,65 - 4,8 (m, 2H), 4,88 (d, 1H), 5,55 (d, 1H), 6,55 (m, 2H), 6,75 (d, 1H), 7,25 - 7,55 (m, 8H), 7,75 (m, 2H).
Zlúčenina 678 sa pripraví spôsobom použitým na prípravu zlúčeniny 667 zo zlúčeniny 666, čím sa získa 54 mg zlúčeniny 678 vo forme tuhej látky.
'H-NMR (perdeuterometanol) δ: 2,45 (m, 1H), 2,7 (m, 1H), 3,5 (m, 2H), 3,75 (široký s, 6H), 4,05 (d, 1H), 4,3 (m, 1H), 4,51 - 4,6 (m, 2H), 4,8 (široký m, 2H), 6,7 (d, 2H), 7,4 - 7,5 (široký m, 3H), 7,6 - 7,65 (široký m, 2H).
195
Zlúčenina 680 sa pripraví zo zlúčeniny 600b spôsobom použitým na prípravu zlúčeniny 677 zo zlúčeniny 600b, čím sa získa 140 mg zlúčeniny 680 vo forme bielej tuhej látky.
1H-NMR (deuterochloroform) δ: 2,31 (d, 1H), 2,4 (dd, 2H), 2,75 (dd, 2H), 2,85 (dd, 1H), 3,36 (široký s, 1H), 3,45 (široký s, 1H), 3,6 (široký t, 2H), 3,82 (široký m, 2H), 3,95 (široký d, 2H), 4,35 (m, 2H), 4,42 (d, 1H), 4,55 (m, 1H), 4,70 (d, 1H), 4,82 (široký s, 2H), 5,5 (d, 1H), 6,91 (d, 1H), 7,25 (široký m, 5H), 7,35 - 7,46 (široký m, 3H), 7,5 - 7,6 (m, 2H), 8,15 (široký d, 2H).
Zlúčenina 681 sa pripraví zo zlúčeniny 680 spôsobom použitým na prípravu zlúčeniny 678 zo zlúčeniny 677, čím sa získa 45 mg zlúčeniny 681 vo forme sivej tuhej látky.
'H-NMR (perdeuterometanol) Ô: 2,5 (m, 1H), 2,7 (dt, 1H), 3,65 - 3,85 (široký m, 3H), 4,05 (m, 1H), 4,3 (m, 1H), 4,5 - 4,7 (široký m, 3H), 4,85 (široký s, 2H), 7,3 (široký m, 2H), 7,4 - 7,7 (m, 5H), 8,15 (d, 2H).
600b
682
683
Zlúčenina 682 sa pripraví zo zlúčeniny 600b spôsobom použitým na prípravu zlúčeniny 655 zo zlúčeniny 600b, čím sa získa 495 mg zlúčeniny 682 vo forme bielej tuhej látky.
'H-NMR (deuterochloroform) δ: 2,00 (s, 3H), 2,05 (s, 3H), 2,47 (d, 1H), 2,58 (dd, 1H), 2,85 (dd, 1H), 2,89 (dd, 1H), 3,9 (m, 2H), 4,05 - 4,15 (m, 2H), 4,19 (dd, 1H), 4,45 (m, 2H), 4,55 - 5,05 (m, 8H), 5,55 (d, 1H), 6,85 (d, 1H), 7,15 (d, 1H), 7,25 - 7,55 (m, 10H), 7,75 (d, 2H).
Zlúčenina 683 sa pripraví zo zlúčeniny 682 spôsobom použitým na prípravu zlúčeniny 2002 zo zlúčeniny 2001, čím sa získa 82 mg zlúčeniny 683 vo forme bielej tuhej látky.
1H-NMR (perdeuterometanol) δ: 2,1 (s, 3H), 2,5 (m, 1H), 2,68 (m, 1H), 3,8 (m, 1H), 4,29 (dd, 1H), 4,31 (m, 1H), 4,45 (d, 1H), 4,55 (d, 1H), 4,6 (d, III), 4,72 (d, 1H), 4,95 (široký s, 2H), 7,45 (široký m, 2H), 7,52 - 7,65 (široký m, 5H), 7,88 (d, 2H).
196
Zlúčenina 684 sa pripraví zo zlúčeniny 600b spôsobom použitým na prípravu zlúčeniny 605d zo zlúčeniny 600b, čím sa získa 72 mg zlúčeniny 684 vo forme bielej tuhej látky.
1H-NMR (perdeuterometanol) δ: 1,9 (s, 311), 2,25 (s, 6H), 2,45 (m, 1H), 2,6 (m, 1H), 3,3 (s, 1H), 3,7 (s, 3H), 4,25 (m, 1H), 4,45 - 4,6 (m, 3H), 7,4 (široký s, 2H), 7,55 (široký d, 4H).
Zlúčenina 685 sa pripraví zo zlúčeniny 600b spôsobom použitým na prípravu zlúčeniny 676 zo zlúčeniny 600b, čím sa získa 165 mg zlúčeniny 685.
Zlúčenina 686. K roztoku zlúčeniny 685 (165 mg, 0,21 mmol) v tetrahydrofuráne sa pridá IM roztok TBAF (0,21 ml). Produkt sa izoluje pomocou filtrácie po vyzrážaní z reakčnej zmesi. Po chromatografii na reverznej fáze (10 až 80 % acetonitril vo vode/0,1 % kyseliny trifluóroctovej) sa získa 25 mg zlúčeniny 686 vo forme bielej tuhej látky.
1H-NMR (perdeuterometanol) δ: 2,37 - 2,42 (m), 2,59 - 2,70 (m), 3,60 - 3,89 (m), 4,01 (d), 4,20 - 4,31 (m), 4,42 - 4,70 (m), 4,80 - 5,05 (m), 6,79 (d), 7,32 - 7,65 (m), 7,81 (s).
600b
687a,b 688a,b
197 (a) R4 = (b) R4 =
Zlúčenina 687a sa pripraví zo zlúčeniny 600b spôsobom použitým na prípravu zlúčeniny 654 zo zlúčeniny 600b, čím sa získa 1,6 g zlúčeniny 687a.
Zlúčenina 687b sa pripraví zo zlúčeniny 600b použitím podobného spôsobu ako na prípravu zlúčeniny 654 zo zlúčeniny 600b, čím sa získa 1,1 g zlúčeniny 687b.
Zlúčenina 688a. K roztoku (3S, 2RS)-3-alyloxykarbonylamino-2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuránu (Chapman, Bioorg. Med. Chem. Lett 2, str. 613 - 618 (1992)) (1,13 g, 1,2 ekvivalentu) v dichlórmetáne sa pridá trifenylfosfín (423 mg, 0,5 ekvivalentu), kyselina dimetylbarbiturová (1,26 g, 2,5 ekvivalentu) a tetrakis(trifenylfosfín)-paládium(0) (373 mg, 0,1 ekvivalentu). Po 5 minútach sa reakčná zmes ochladí v ľadovom kúpeli a pridá sa zlúčenina 678a v dimetylformamide (1,6 g, 1 ekvivalent), HOBt (480 mg, 1,1 ekvivalentu) a EDC (681 mg, 1,1 ekvivalentu). Vzniknutá zmes sa mieša pri teplote miestnosti. Po 16 hodinách sa reakčná zmes vyleje do hydrogénsiranu sodného a dvakrát sa extrahuje etylacetátom. Organická vrstva sa premyje hydrogenuhličitanom sodným a soľankou, vysuší sa nad síranom sodným a odparí vo vákuu. Po chromatografii (silikagél, 20 až 100 % etylacetát v dichlórmetáne) sa získa 880 mg zlúčeniny 688a vo forme bielej tuhej látky.
1H-NMR (perdeuterometanol) δ: 2,55 (dd, 1H), 2,7 (dd, 1H), 3,0 (m, 1 H), 3,6 (m, 1H), 3,75 (d, 1H), 3,9 - 4,0 (m, 2H), 4,3 - 4,45 (m, 3H), 4,5 - 4,6 (m, 3H), 4,7 (m, 2H), 5,35 (s, 1H), 5,55 (d, 1H), 7,1 - 7,5 (m, 4H), 7,85 (s, 2H).
Zlúčenina 688b sa pripraví zo zlúčeniny 687b spôsobom použitým na prípravu zlúčeniny 688a zo zlúčeniny 687a, čim sa získa 960 mg zlúčeniny 688b vo forme bielej tuhej látky.
1H-NMR (perdeuterometanol) δ: 2,6 (dd, 1H), 2,7 (dd, 1H), 3,0 (dd, 1H), 3,2 (s, 3H), 3,7 (m, 3H), 3,9 (m, 2H), 4,4 - 4,5 (m, 2H), 4,6 (m, 3H), 5,35 (s, 1H), 5,55 (d, 1H), 7,25 (m, 2H), 7,4 - 7,5 (m, 4H).
Zlúčenina 689a sa pripraví zo zlúčeniny 688a spôsobom použitým na prípravu zlúčeniny 2002 zo zlúčeniny 2001, čím sa získa 184 mg zlúčeniny 689a vo forme bielej tuhej látky.
1H-NMR (perdeuterometanol) δ: 2,45 (m, 1H), 2,6 (m, 1H), 3,3 (s, 3H), 3,7 - 3,85 (m, 2H), 4,0 (d, 1H), 4,3 (m, 1H), 4,5 - 4,6 (m, 3H), 7,3 - 7,6 (m, 4H), 7,85 (s, 2H).
Zlúčenina 689b sa pripraví zo zlúčeniny 688b spôsobom použitým na prípravu zlúčeniny 2002 zo zlúčeniny 2001, čim sa získa 412 mg zlúčeniny 689b vo forme bielej tuhej látky.
1H-NMR (perdeuterometanol) δ: 2,5 (m, 1H), 2,7 (m, 1H), 3,3 (s, 3H), 3,7 - 3,85 (m, 2H), 4,05 (dd, 1H), 4,3 (m, 1H), 4,6 (m, 2H), 7,45 - 7,4 (m, 2H), 7,5 (s, 2H), 7,55 (m, 2H).
198
600b
(a) R4 =
O
Zlúčenina 690a sa pripraví zo zlúčeniny 600b spôsobom použitým na prípravu zlúčeniny 676 zo zlúčeniny 600b, zlúčeniny 688a zo zlúčeniny 687a a zlúčeniny 677 zo zlúčeniny 676, čím sa získa 863 mg zlúčeniny 690a vo forme bielej tuhej látky.
1H-NMR (perdeuterometanol) δ: 2,2 (s, 6H), 2,45 (d, 0,5H), 2,6 - 2,9 (m, 1H), 3,05 (dd, 0,5H), 3,65 - 3,85 (m, 2H), 3,95 - 4,1 (m, 1H), 4,35 - 5,0 (m, 7H), 5,35 (s, 0,5H), 5,65 (d, 0,5H), 7,2 - 7,4 (m, 4H), 7,4 - 7,7 (m, 7H).
Zlúčenina 690b sa pripraví zo zlúčeniny 600b spôsobom použitým na prípravu zlúčeniny 677 zo zlúčeniny 600b, čím sa získa 200 mg zlúčeniny 690b.
1H-NMR (perdeuterometanol) δ: 2,49 (d, 1H), 2,65 (d, 1H), 2,66 (d, 1H), 2,85 (d, 1H), 2,87 (d, 1H), 3,05 (dd, 1H), 3,35 (široký s, 1H), 3,72 (široký s, 2H), 4,01 (m, 2H), 4,45 (široký m, 1H), 4,6 (m, 1H), 4,7 (m, 1H), 4,8 (m, 1H), 4,95 (široký s, 2H), 5,65 (d, 1H), 6,8 (d, 2H), 7,2 - 7,35 (široký m, 3H), 7,45 (m, 2H), 7,75 (d, 2H).
Zlúčenina 691a sa pripraví zo zlúčeniny 690a spôsobom použitým na prípravu zlúčeniny 2002 zo zlúčeniny 2001, čím sa získa 560 mg zlúčeniny 691a vo forme bielej tuhej látky.
1H-NMR (perdeuterometanol) δ: 2,15 (s, 6H), 2,45 (m, 1H), 2,65 (m, 1H), 3,55 (m, 1H), 3,7 (d, 1H), 4,0 (d, 1H), 4,25 (m, 1H), 4,5 - 4,6 (m, 3H), 7,3 - 7,5 (m, 6H).
Zlúčenina 691b sa pripraví zo zlúčeniny 690b spôsobom použitým na prípravu zlúčeniny 2002 zo zlúčeniny 2001, čím sa získa 410 mg zlúčeniny 691b vo forme bielej tuhej látky.
1H-NMR (perdeuterometanol) δ: 2,5 (m, 1H), 2,65 (m, 1H), 3,75 (m, 1H), 3,8 (d, 1H), 4,05 (d, 1H), 4,25 (m, 1H), 4,5 (m, 1H), 4,6 (m, 1H), 4,95 (široký s, 2H), 6,8 (d, 2H), 7,45 (m, 2H), 7,6 (m, 2H), 7,75 (d, 2H).
(a) R4 = (b) R4 = (c) R4 =
CH3
199
Zlúčenina 695a sa pripraví zo zlúčeniny 600b spôsobom použitým na prípravu zlúčeniny 677 zo zlúčeniny 600b, čím sa získa 75 mg zlúčeniny 695a.
1H-NMR (perdeuterometanol) δ: 2,2 (s, 6H), 2,45 (m, 1H), 2,6 (m, 1H), 3,65 (m, 1H), 3,75 (d, 1H), 4,0 (d, 1H), 4,28 (m, 1H), 4,5 (m, 3H), 7,4 - 7,6 (m, 6H).
Zlúčenina 695b sa pripraví zo zlúčeniny 600b spôsobom použitým na prípravu zlúčeniny 677 zo zlúčeniny 600b, čím sa získa 880 mg zlúčeniny 695b.
1H-NMR (deuterochloroform) δ: 2,1 (s, 3H), 2,25 - 2,5 (m, 2H), 2,8 - 2,92 (m, 0,5H), 3,15 - 3,2 (m, 0,5H), 3,45 - 3,6 (m, 2H), 3,75 - 3,95 (m, 2H), 4,15 - 4,25 (m, 1H), 4,35 - 4,6 (m, 2H), 4,6 - 4,88 (m, 3H), 5,22 (s, 0,25H), 5,33 (s, 0,25H), 5,52 - 5,58 (d, 0,5H), 7,15 - 7,45 (m, 9,5H), 7,5 - 7,75 (m, 5H), 8,3 - 8,35 (m, 0,5H), 9,08-9,18 (m, 1H).
Zlúčenina 695c sa pripraví zo zlúčeniny 600b spôsobom použitým na prípravu zlúčeniny 677 zo zlúčeniny 600b, čím sa získa 840 mg zlúčeniny 695c.
1H-NMR (deuterochloroform) δ: 2,23 (s, 3H), 2,26 (s, 3H), 2,45 - 2,62 (m, 1H), 2,8 - 2,9 (dd, 0,5H), 2,9 - 3,05 (dd, 0,5H), 3,45 - 3,63 (m, 1H), 3,64 (s, 1,5H), 3,68 (s, 1,5H), 3,78 - 4,05 (m, 2H), 4,2 - 4,33 (m, 1H), 4,4 - 4,63 (m, 2H), 4,95 - 5,1 (m, 1H), 5,45 (s, 0,5H), 5,5 - 5,6 (d, 0,5H), 6,9 - 6,95 (d, 1H), 7,25 - 7,7 (m, 12H).
Zlúčenina 692a sa pripraví zo zlúčeniny 600b spôsobom použitým na prípravu zlúčeniny 661 zo zlúčeniny 600b, s výnimkou krokov použitých na prípravu zlúčeniny 604d zo zlúčeniny 603d, miesto ktorých sa použije postup na prípravu zlúčeniny 688a zo zlúčeniny 687a, čím sa získa 854 mg zlúčeniny 692a. 'H-NMR (perdeuterometanol) δ: 2,45 (d, 1H), 2,6 (m, 1H), 2,7 (m, 1H), 3,0 (m, 1H), 3,5 - 3,7 (m, 4H), 4,0 (q, 2H), 4,45 (m, 3H), 4,55 (m, 4H), 5,35 (s, 1H), 5,6 (d, 1H), 7,2 - 7,5 (m, 9H), 7,85 (s, 2H).
Zlúčenina 692b sa pripraví zo zlúčeniny 600b spôsobom použitým na prípravu zlúčeniny 661 zo zlúčeniny 600b, okrem krokov použitých na prípravu zlúčeniny 604d zo zlúčeniny 603d, miesto ktorých sa použije postup na prípravu zlúčeniny 688a zo zlúčeniny 687a, čím sa získa 207 mg zlúčeniny 692b.
1H-NMR (perdeuterometanol) δ: 1,05 (t, 3H), 1,15 (t, 3H), 2,45 (d, 1H), 2,55 (m, 1H), 2,7 (m, 1H), 3,55 (m, 2H), 3,6 - 3,75 (m, 5H), 4,0 (dd, 2H), 4,3 (d, 1H), 4,4 - 4,7 (m, 5H), 5,25 (s, 1H), 5,5 (d, 1H), 7,25 - 7,6 (m, 4H), 7,85 (s, 2H).
Zlúčenina 693 sa pripraví zo zlúčeniny 600b spôsobom použitým na prípravu zlúčeniny 688a zo zlúčeniny 600b, čím sa získa 30 mg zlúčeniny 693.
1H-NMR (perdeuterometanol) δ: 1,7 (s, 3H), 1,8 (s, 3H), 2,51 (d, 1H), 2,6 (m, 1H), 2,85 (m, 1H), 3,0 (m, 1H), 3,75 (široký d, 2H), 4,0 - 4,1 (dd, 2H), 4,5 - 5,0 (m, 6H), 5,45 (s, 1H), 5,55 (s, 1H), 7,15 - 7,85 (m, 14H).
200
Zlúčenina 694 sa pripraví zo zlúčeniny 691c spôsobom použitým na prípravu zlúčeniny 2002 zo zlúčeni5 ny 2001, čím sa získa 380 mg zlúčeniny 694 vo forme bielej tuhej látky.
1H-NMR (perdeuterometanol) δ: 2,25 (s, 6H), 2,45 (m, 1H), 2,65 (m, 1H), 3,65 (m, 5H), 4,0 (d, 1H), 4,28 (m, 1H), 4,55 (d, 2H), 4,95 (m, 1H), 7,4 - 7,6 (m, 6H).
Zlúčeniny 700-711 sa pripravia podobným spôsobom ako zlúčeniny 619-635 (pozri príklad 13). Fyzikálne údaje pre zlúčeniny 700-711 sa uvádzajú v tabuľke 25.
Zlúčeniny 910-915 a 918-921 sa pripravia tak, ako sa opisuje. Fyzikálne údaje pre tieto zlúčeniny sa uvádzajú v tabuľke 26.
Tabuľka 25
Zlúč . štruktúra Vzorec Mll HPLC BČ min (spôsob) čistota 1IS (M Hla)'
700 Λ C261I24C12N4O7 575.41 14.061 (2) 97% 600
701 O H O H g C23I122N4O8S 514.52 15.589 (1) 97% 538.0
702 W C26H24N4O10 552.50 15.855 (1) 98% 575.9
703 Λ 0 C27II25N5OB 547.53 10.315 (2) 97% 572.1
201
Zlúč Štruktúra Vzorec MU HPLC RČ min (spôsob) čistota H S (M+Na)’
704 v, o i XXa Ah N lľ ΑΥη O H 0 H g C26U26N409 530.52 10.175 (2) 964 562.1
705 ^AaW<Xíh ä H ó H Y C26H26N4O9 530.52 14.260 (1) 72% 562.1
706 gtS í Υ» a YYďľ ^0 0 11 θ I! g C2 7112 8N4O10 560.55 14.036 (1) 97?, 592.4
707 ./9. ,t <»AAv C271I20N409 552.55 15.952 (1) 90i 575.9
709 5γ / OX-Ýí-A· C27H26N4O9 550.53 10.731 (2) 93i 574,6
709 tt-Jy á VzArMAj1 1 O ’< O h ll 0 C20II30N400 550.57 13.192 (2) 95i 57 4
710 h j-Íjo A, ~ N K L 3 ll Γ 011 ΓΥ T N ιΓ YY' JL J H u ó h « cr^ o C25II24C1N5O0 557.95 12.406 (2) 90i 502.2
711 Y& A °ΥγνΓ ΥΑα 0 H ó h g C23II22N4O9 490.45 13.072 (1) 99¾ 521.9
202
SK 287195 Β6
Tabuľka 26
Zlúč. Štruktúra Vzorec Mlí IIPLC RČ hiin (spôsob) čistota lis (MtNa)‘
910 HO O C25II24N4010 540.49 0.172 (2) 99í 564.4
911 HO^ ^0 0 0'“ ni h3c h C26U27N5O9 553.53 6.949 (2) 99í 577.5
912 HO 0 00 IhC-Y'-7 C25H26N4O9 526.51 B.317 (2) 99% 550.7
913 HO ,0 Ύ /0 0 H\J II yQAô 0 “ 8 l-hC-i/ Cll3 C26II29N5O8 539.55 6.508 (2) 99% 563.5
914 HO ,0 Y r\ ° \0z> » o ( 0 j? f Λ/Y •J?·· ' H3C ™ Cl C26II26C1N5O9 507.90 7.015 (2) 99% 612.2
915 HO 0 ° A 0 Ύ- C26II25C12N5O9 622.42 7.490 (2) 90% 647
203
Zlúč. Štruktúra Vzorec NH HPLC RČ min (spôsob) čistota lis (M-ítta) ’
91G/691b HO .0 s q«° hT HOZ C2 4112 -1N<109 512.40 6.331 (2) 984 537
917/G91a HO ,0 “PP. A. ,A.k--JAr- H3C^< H 0 H B H° C26I12BN4O9 5-10.53 0.114 (2) 99% 564.9
910 HO P Ä“ n «J-f Cl C25H24C12N4O9 595.-10 11.017 (2) 994 619.3
919 HO O AÄŤ- /r_V'NH C26H25M5OB 535.52 9.709 (2) 914 559.7
920 HO 0 .7ää- aA’..... N H C25II21N6O8 53G.51 5.494 (2) 984 5G0.6
921 HO 0 0 HjC N ~A // II > θ O j! r °h ďX Krv •Λα/ι H 0 II g 0 C26II26N4O10 55-1.52 7.G27 (2) 96¾ 579.1
204
ZlúČ. Š Ľ ľu): tú ra Vzorec Mll IIPI.C? PČ min (spôsob) čistota HS (M+Na)’
922/694 HO 0 IftA- H 0 H o ch3 C27II30N4O9 554.56 10.024 (2) 99% 570.0
205
Krok A. Syntéza zlúčeniny 401. Živica TentaGel S® NH2 (0,25 mmol/g, 6,8 g) sa umiestni do sklenenej trepacej nádoby a premyje sa dimetylacetamidom (3 x 20 ml). K roztoku zlúčeniny 400 (1,70 g, 2,9 mmol) pripravenej z ŕerc-butylesteru kyseliny (3S)-3-(fluorenylmetoxykarbonyl)-4-oxobutánovej (A. M. Murfy a kol.: J. Am. Chem. Soc. 114, 3156 - 3157 (1992)) v dimetylacetamide (15 ml) sa pridá O-benzotriazol-l-yl-Ν,Ν,Ν,Ν'-tetrametyluróniumhexafluorofosfát (HBTU; 1,09 g, 2,9 mmol) a DIEA (1,0 ml, 5,7 mmol). Roztok sa pridá k živici a pridá sa dimetylacetamid (5 ml). Reakčná zmes sa pretrepáva počas 3 hodín pri teplote miestnosti, pričom sa použije trepačka. Živica sa izoluje odsatím a premyje sa dimetylacetamidom (6 x x 20 ml). Vzorka živice (7,4 mg) sa dôkladne premyje 50 % metanolom v dichlórmetáne a vysuší sa odsatím. Po odstránení ochrannej skupiny Fmoc použitím 20 % piperidínu v dimetylacetamide (10,0 ml) a UV analýze roztoku sa zistí substitúcia 0,19 mmol/g).
Krok B. Syntéza zlúčeniny 903. Zo živice 401 sa pomocou 20 % (v/v) piperidínu v dimetylacetamide (20 ml) počas 10 minút (za trepania) a potom počas 10 minút s čerstvým piperidínovým činidlom (20 ml) odstránia ochranné skupiny. Živica sa potom premyje dimetylacetamidom (6 x 20 ml). Roztok zlúčeniny 902 (1,52 g, 2,81 mmol) sa nechá reagovať s HBTU (1,07 g, 2,83 mmol) a DIEA (1,0 ml, 5,7 mmol), prenesie sa k živici a následne sa pridá dimetylacetamid (5 ml). Reakčná zmes sa pretrepáva počas 2,5-hodiny pri teplote miestnosti, pričom sa použije trepačka. Živica sa izoluje odsatím, premyje sa dimetylacetamidom (4 x 20 ml) a dichlórmetánom (4 x 20 ml) a vysuší sa v prúde dusíka. Živica sa substituuje tak, ako sa opisuje pre zlúčeninu 401, pričom sa zistí substitúcia 0,169 mmol/g.
Krok C. Syntéza zlúčeniny 905. Živica 903 (7,54 g, 1,27 mmol) a dimedón (2,19 g, 15,6 mmol) sa umiestni do 100 ml banky s okrúhlym dnom a pridá sa čerstvo predestilovaný bezvodý tetrahydrofurán (60 ml). Pridá sa tetrakis(trifenylfosfm)paládium(0) (0,32 g, 0,28 mmol) a dusíkom prevrstvená uzavretá reakčná zmes sa pretrepáva počas 15 hodín na trepačke. Živica sa prefiltruje, premyje dimetylacetamidom (4 x x 20 ml), dichlórmetánom (4 x 20 ml) a znovu dimetylacetamidom (1 x 20 ml). K živici sa pridá dostatočné množstvo dimetylacetamidu, aby vznikla suspenzia, potom sa pridá pyridín (1,5 ml, 18,5 mmol) a roztok zlúčeniny 904 (5,5 mmol) v dichlórmetáne (10 ml). Reakčná zmes sa pretrepáva počas 8 hodín pod dusíkom a prefiltruje sa. Živica sa premyje dimetylacetamidom (5 x 20 ml) a dichlórmetánom (5 x 20 ml).
Krok D. Syntéza zlúčeniny 906. Táto zlúčenina sa pripraví zo živice 905 (0,24 g, 0,038 mmol) použitím Advanced ChemTech 396 Multiple peptidového syntetizéra. Automatizované cykly zahŕňajú premytie živice dimetylformamidom (3 x 1 ml), odstránenie ochrannej skupiny 25 % (v/v) piperidínom v dimetylformamide (1 ml) počas 10 minút a potom čerstvým činidlom (1 ml) počas 20 minút, čím sa získa živica 906. Živica sa premyje dimetylformamidom (3x1 ml) a N-metylpyrolidónom (3 x 1 ml).
Krok E. Zlúčeniny 910-922. Živica 906 sa acyluje roztokom 0,4M karboxylovej kyseliny a 0,4M HOBt v N-metylpyrolidóne (0,5 ml), roztokom 0,4M HBTU v N-metylpyrolidóne (0,5 ml) a roztokom 1,6M DIEA v N-metylpyrolidóne (0,25) a reakčná zmes sa pretrepáva počas 2 hodín pri teplote miestnosti. Živica sa premyje N-metylpyrolidónom (lxl ml), dimetylformamidom (4x1 ml), 50 % metanolom v dichlórmetáne (5 x x 1 ml) a vysuší sa vzduchom. Zo živice sa odštiepi aldehyd a celkovo sa odstránia ochranné skupiny reakciou so zmesou 95 % kyselina trifluóroctová/5 % voda (v/v, 1,5 ml) počas 30 minút pri teplote miestnosti. Po premytí živice štiepiacim činidlom (2 x 1 ml) sa spojené filtráty pridajú k ochladenej zmesi 1 : 1 éter/hexán (35 ml) a vzniknutá zrazenina sa izoluje odstredením a dekantáciou. Vzniknutá guľôčka sa rozpustí v acetonitrile (0,5 ml) a vode (0,5 ml) a prefiltruje sa cez 0,45 μ mikroodstredivé filtre. Zlúčenina sa prečistí pomocou semipreparativnej RP-HPLC s Rainin Microsorb™ C]8 kolónou (5 μ, 21,4 x 250 mm), pričom sa elúcia uskutoční lineárnym gradientom acetonitrilu (10 - 50 %) obsahujúcim 0,1 % kyseliny trifluóroctovcj (v/v) počas 30 minút pri prietoku 12 ml/min. Frakcie obsahujúce požadovaný produkt sa spoja a lyofilizujú, čím sa získajú zlúčeniny 910-922.
Analytické HPLC metódy (1) Waters DeltaPak C|8, 300 A (5 μ, 3,9 x 150 mm). Lineárny gradient acetonitrilu (0 až 25 %) obsahujúci 0,1 % kyseliny trifluóroctovej (v/v) počas 14 minút pri prietoku 1 ml/min.
(2) Waters DeltaPak C[8, 300 A (5 μ, 3,9 x 150 mm). Lineárny gradient acetonitrilu (5 až 45 %) obsahujúci 0,1 % kyseliny trifluóroctovej (v/v) počas 14 minút pri prietoku 1 ml/min.
0 0b
ΌΗ .H
696
206
Zlúčenina 696 sa pripraví zo zlúčeniny 600b spôsobom použitým na prípravu zlúčeniny 691a zo zlúčeniny 600b, čím sa získa zlúčenina 696.
1H-NMR (perdeuterometanol) δ: 2,45 (m, 1H), 2,7 (m, 1H), 3,75 (d, 1H), 3,95 (q, 1H), 4,05 (d, 1H), 4,3 (m, 1H), 4,45 - 4,65 (m, 2H), 5,05 (m, 1H), 7,5 - 7,6 (m, 3H), 7,7 (t, 1H), 7,8 (t, 1H), 7,98 (t, 1H), 8,55 (d, 1H), 9,1 (d, 1H).
600b
Zlúčenina 696a sa pripraví zo zlúčeniny 600b spôsobom použitým na prípravu zlúčeniny 690a zo zlúčeniny 600b, čím sa získa zlúčenina 696a.
1H-NMR (deuterochloroform) δ: 0,95 (t, 2H), 1,25 (t, 1H), 1,4 (m, 2H), 1,55 (m, 1H), 2,55 (m, 1H), 2,85 (m, 1H), 2,95 (dd, 1H), 3,15 (m, 1H), 3,55 (m, 1H), 3,9 (m, 2H), 4,35 (t, 1H), 4,4 - 4,55 (m, 2H), 4,75 (m, 1H),
4.8 - 5,05 (m, 2H), 5,45 (s, 1H), 5,55 (d, 1H), 6,85 (d, 1H), 7,15 (d, 1H), 7,2 - 7,5 (m, 5H), 7,6 - 7,8 (m, 3H), 8,45 (d, 1H), 9,05 (d, 1H), 9,35 (d, 1H).
Zlúčenina 696b sa pripraví zo zlúčeniny 600b spôsobom použitým na prípravu zlúčeniny 690a zo zlúčeniny 600b, čím sa získa zlúčenina 696b.
1H-NMR (deuterochloroform) δ: 0,9 (m, 3H), 1,15 (q, 3H), 1,15 (m, 1H), 1,65 (m, 1H), 2,5 (m, 1H), 2,8 (m, 1H), 2,95 - 3,0 (m, 2H), 3,6 (m, 2H), 3,7 - 3,85 (m, 4H), 4,0 (m, 2H), 4,3 (m, 1H), 4,55 (m, 1H), 4,65 (m, 1H), 4,85 - 4,95 (m, 1H), 5,05 (m, 1H), 5,35 (s, 1H), 5,45 (d, 1H), 6,85 (d, 1H), 7,25 (d, 1H), 7,35 - 7,85 (m, ÓH), 8,85 (dd, 2H), 9,05 (m, 1H), 9,35 (dd, 2H).
Zlúčenina 696c sa pripraví zo zlúčeniny 600b spôsobom použitým na prípravu zlúčeniny 690a zo zlúčeniny 600b, čím sa získa zlúčenina 696c.
1H-NMR (perdeuterometanol) δ: 1,25 (t, 1H), 1,65 (q, 1H), 1,9 (m, 1H), 2,9 (m, 1H), 3,05 (m, 1H), 3,9 (d, 1H), 4,2 (m, 1H), 4,3 (d, 1H), 4,75 - 5,0 (m, 3H), 5,25 (m, 1H), 5,7 (s, 1H), 5,9 (d, 1H), 7,5 (d, 2H), 7,7 - 7,9 (m, 3H), 8,0 (t, 1H), 8,2 (m, 2H), 8,75 (d, 1H), 9,35 (d, 1H).
Zlúčenina 696d sa pripraví zo zlúčeniny 600b spôsobom použitým na prípravu zlúčeniny 690a zo zlúčeniny 600b, čím sa získa zlúčenina 696d.
1H-NMR (deuterochloroform) δ: 0,9 (t, 1H), 1,2 (t, 1H), 1,3 - 1,45 (m, 2H), 1,6 - 1,8 (m, 4H), 2,45 (m, 1H),
2.8 (m, 1H), 3,0 (m, 1H), 3,4 (q, 1H), 3,5 (d, 1H), 4,0 (m, 2H), 4,2 - 4,3 (m, 2H), 4,55 (d, 1H), 4,65 (m, 1H),
4.9 (m, 1H), 5,05 (m, 1H), 5,4 (s, 1H), 5,5 (d, 1H), 6,8 (d, 1H), 7,3 - 7,9 (m, 6H), 8,5 (d, 1H), 9,05 (d, 1H), 9,4 (d, 1H).
Zlúčenina 696e sa pripraví zo zlúčeniny 600b spôsobom použitým na prípravu zlúčeniny 690a zo zlúčeniny 600b, čím sa získa zlúčenina 696e.
1H-NMR (deuterochloroform) δ: 1,2 (t, 1H), 2,4 (m, 1H), 2,8 (m, 2H), 3,6 (d, 1H), 3,7 (q, 1H), 4,0 (m, 2H), 4,3 (d, 2H), 4,65 (m, 1H), 4,85 (t, 1H), 5,0 (m, 1H), 5,35 (d, 1H), 6,5 (d, 1H), 7,15 - 7,85 (m, 8H), 8,45 (d, 1H), 9,05 (d, 1H), 9,4 (d, 1H).
207
Tabuľka 27
Zlúčenina UV-pozri Kj (nM) Bunky PBMC priem. ic50 (nM) Úplná ľudská krv IC5O (nM) Odbúranie pri myšiach i.v. ml/min/kg Odbúranie pri potkanoch i.v. ml/min/kg
688c 200
689b-l 3,5 2700
696-1 0,5
696-2 0,5
697 1,8 5000
698 18 13500
699 1,1
699a-2
720 2,7
721 1,3 5000
722 5 5000
723 2,3 2000
724 2 1800
725 3,7 3000
726 300
727 50 2300
728 300
729 28 2800
730 90 8000
731 150
732 5 1800
733 5 1500
734 9 6000
735 6 10000
Príklad 33
Zlúčeniny 684a, 688b-l, 688c, 689b-l, 690a-l, 696-1, 696-2, 696a-2, 696a-l, 697, 697a, 698, 698a, 699, 699a, 699a-l, 699a-2,800 a 801 sa pripravia tak, ako sa opisuje.
Tabuľka 28
CIP# R4 R3 R5 R1
684a Η3ο(/γ CHa H O A^OBu-ŕ A OAc
208
CIP# R4 R3 R5 R1
688b-1 χ4 ch3 0 ΜθΟ^Λχ F 0 X OBn
688c ch3 0 MeO^kk H Α» Ak ? Aó
689b-1 ch3 0 MeO^Ä\ F X X 0
690a-1 ch3 0 HoX^ H UJ LlÍ O O °4_^°
696-1 ·' 0 ΗΟ\Λ F X X 0
696-2 · 0 H°Xk Cl x x 0
696a-2 ·· 0 ««Xk Cl 4 OBn
696a-1 ·· 0 HOJ\ F 0 4 OBn
209
CIP# R4 R3 R5 R1
697 O1 Η2/γ Cl 0 H0\Ax H Λv 0
697a h2n% Cl 0 H 4 OBn
698 0 A H A. V 0
698a ''' 0 A H 0 4 OBn
699 0 ΜθΟ^Αχ H 0 Aoh ΧγΗ 0
699a 0 H 0 4 OBn
699a-1 ' 0 MeO^^A-^ F 0 4 OBn
699a-2 L' 0 MeO^A\ F Aoh ArH 0
210
CIP# R4 R3 R5 R1
800 -Αχ1 O H0^k H O G OBn
801 G O H Λ. +r O
Zlúčenina 690a-l sa pripraví spôsobom použitým na prípravu zlúčenín 690a a 2100b, čím sa získa zlúčenina 690a-l.
1H-NMR (deuterochloroform) δ: 1,15 (t, 6H), 1,3 (t, 3H), 2,25 (s, 6H), 2,60 (d, 2H), 3,50 (m, 2H), 3,70 (m, 411), 4,05 (m, 2H), 4,15 (m, 2H), 4,30 (d, 1H), 4,45 (m, 1H), 4,50 (d, 1H), 4,55 (d, 1H), 4,70 (t, 1H), 5,05 (m, 1H), 5,30 (s, 1H), 6,70 (d, 1H), 7,10 (d, 2H), 7,30 - 7,50 (m, 7H).
Zlúčenina 697a sa pripraví spôsobom použitým na prípravu zlúčeniny 677, čím sa získa 840 mg zlúčeniny 697a.
1H-NMR (deuterochloroform) δ: 1,78 (široký s, 2H), 2,48 - 2,58 (d, 0,5H), 2,6 - 2,7 (m, 0,5H), 2,8 - 2,9 (m, 0,5H), 2,92 - 3,03 (m, 0,5H), 3,55 - 3,8 (m, 2H), 3,92 - 4,02 (d, 1H), 4,25 - 4,3 (d, 0,5H), 4,37 - 4,42 (d, 0,5H), 4,43 - 4,48 (m, 0,5H), 4,53 - 4,65 (m, 1,5H), 4,7 - 5,12 (m, 5H), 5,44 (s, 0,5H), 5,58 - 5,63 (d, 0,5H), 6,95 - 8,1 (m, 13H).
Zlúčenina 697 sa pripraví spôsobom použitým na prípravu zlúčeniny 2002 zo zlúčeniny 2001, čím sa získa 140 mg zlúčeniny 697.
1H-NMR (perdeuterometanol) δ: 2,38 - 2,5 (m, 1H), 2,55 - 2,75 (m, 1H), 3,68 - 3,9 (m, 3H), 3,95 - 4,03 (m, 1H), 4,2 - 4,3 (m, 1H), 4,4 - 4,7 (m, 4H), 7,35 - 7,8 (m, 6H).
Zlúčenina 684a sa pripraví spôsobom použitým na prípravu zlúčeniny 2100j, čím sa získa zlúčenina 684a.
'H-NMR (500 MHz, deuterochloroform, zmes diastereomérov) δ: 1,3 (s, 9H), 1,8 (s, 3H), 2,1 (s, 3H), 2,15 (s, 3H), 2,3 (s, 6H), 3,3 - 3,5 (m, 3H), 3,65 (s, 3H), 3,9 (m, 1H), 4,1 (d, 1H), 4,3 (d, 1H), 4,6 - 4,8 (m, 3H), 5,0 (m, 1H), 6,7 (s, 1H), 7,0 (d, 1H), 7,1 (d, 1H), 7,2 - 7,5 (m, 6H).
Zlúčenina 698a sa pripraví spôsobom použitým na prípravu zlúčeniny 652, čím sa získa 795 mg zlúčeniny 698a.
1H-NMR (500 MHz, deuterochloroform, zmes diastereomérov) δ: 2,8 (m, 2H), 4,0 (m, 1H), 4,5 - 4,8 (m, 4H), 5,2 (m, 1H), 5,5 (s, 1H), 5,75 (d, 1H), 7,3 - 7,85 (m, 11H), 7,9 (t, 1H), 8,2 (d, 1H), 8,6 (m, 1H), 9,3 (m, 1H).
Zlúčenina 698 sa pripraví spôsobom použitým na prípravu zlúčeniny 653, čím sa získa 225 mg zlúčeniny 698.
1H-NMR (500 MHz, perdeuterometanol) δ: 2,4 (m, 1H), 2,6 (m, 1H), 3,9 (m, 1H), 4,2 (m, 1H), 4,3 - 4,7 (m, 4H), 5,1 (m, 1H), 7,3 - 7,5 (m, 4H), 7,6 - 7,8 (m, 2H), 7,8 (m, 2H), 8,2 (d, 1H), 8,5 (d, 1H), 9,0 (d, 1H).
Zlúčenina 699a sa pripraví spôsobom použitým na prípravu zlúčeniny 655, čím sa získa 820 mg zlúčeniny 699a vo forme svetlohnedej tuhej látky.
1H-NMR (500 MHz, deuterochloroform) δ: 2,60 (ddd, 1H), 2,90 (ddd, 1H), 3,20 (s, 3H), 3,25 (s, 3H), 3,70 (t, 1H), 3,90 (m, 2H), 4,20 (dd, 1H), 4,60 (m, 2H), 4,70 - 5,00 (m, 5H), 5,55 (d, 1H), 7,00 (d, 1H), 7,20 - 7,50 (m, 7H), 8,45 (dd, 1H), 9,0 (dd, 1H), 9,35 (dd, 1H).
Zlúčenina 688b-l sa pripraví spôsobom použitým na prípravu zlúčeniny 655, čím sa získa 600 mg zlúčeniny 688b-l.
1H-NMR (deuterochloroform, zmes diastereomérov) δ: 2,21 (s, 3H), 2,28 (s, 3H), 2,42 - 2,50 (m, 0,5H), 2,58
- 2,65 (m, 0,5H), 2,83 - 2,91 (m, 0,5H), 2,98 - 3,1 (m, 0,5H), 3,18 (s, 1,5H), 3,22 (s, 1,5H), 3,72 - 3,78 (d, 1H), 3,78 - 3,9 (m, 2H), 4,08 - 4,15 (d, 1H), 4,5 - 4,69 (m, 3H), 4,7 - 4,85 (m, 1H), 4,88 - 5,1 (m, 2H), 5,45 (s, 0,5H), 5,55 - 5,65 (d, 0,5H), 6,85 - 6,92 (m, 1H), 7,02 - 7,13 (m, 2H), 7,24 - 7,55 (m, 9H).
Zlúčenina 689b-l sa pripraví spôsobom použitým na prípravu zlúčeniny 2002 zo zlúčeniny 2001, čím sa získa zlúčenina 689b-l.
1H-NMR (perdeuterometanol) δ: 2,18 (s, 6H), 2,36 - 2,47 (m, 1H), 2,6 - 2,72 (m, 1H), 3,34 (s, 3H), 3,66 -
- 3,88 (m, 2H), 3,95 - 4,05 (m, 1H), 4,2 - 4,78 (m, 5H), 4,9 (m, 1H), 7,3 - 7,41 (m, 2H), 7,48 (s, 2H), 7,5 211
7,63 (m, 1H).
Zlúčenina 699 sa pripraví spôsobom použitým na prípravu zlúčeniny 2002 zo zlúčeniny 2001, čím sa získa zlúčenina 699 vo forme bielej tuhej látky.
1H-NMR (500 MHz, perdeuterometanol) δ: 2,50 (m, 1H), 2,70 (m, 1H), 3,25 (s, 3H), 3,80 (široký d, 1H),
3.90 (široký d, 1H), 4,00 (široký d, 1H), 4,30 (m, 1H), 4,50 - 4,70 (m, 3H), 4,80 - 4,85 (široký t, 1H), 5,00 (široký m, 1H), 7,40 - 7,55 (m, 5H), 7,70 (široký m, 1H), 7,85 (široký m, 1H), 8,00 (široký m, 1H), 8,55 (široký d, 1H), 9,05 (široký d, 1H).
Zlúčenina 696a-l sa pripraví spôsobom použitým na prípravu zlúčeniny 656, čím sa získa zlúčenina 800 vo forme žltej tuhej látky.
1H-NMR (500 MHz, deuterochloroform) δ: 2,55 (ddd, 1H), 2,65 (ddd, 1H), 3,70 - 3,80 (m, 2H), 3,95 (široký m, 1H), 4,05 (d, 1H), 4,30 (d, 1H), 4,40 - 4,60 (m, 4H), 4,70 - 5,05 (m, 4H), 5,55 (d, 1H), 7,10 (d, 1H), 7,20 -
- 7,35 (m, 3H), 7,40 - 7,50 (m, 1H), 7,60 - 7,85 (m, 3H), 8,40 (dd, 1H), 9,10 (m, 1H), 9,30 (m, 1H).
Zlúčenina 696a-2 sa pripraví spôsobom použitým na prípravu zlúčeniny 677, čím sa získa 204 mg zlúčeniny 696a-2 vo forme bielej tuhej látky, s výnimkou toho, že redukcia nitroskupiny sa uskutoční nasledovným spôsobom: K roztoku nitrozlúčeniny (7,2 g, 20 mmol) v metanole sa pridá chlorid amónny (2,1 g, 39 mmol) a zinok (17 g, 260 mmol). Vzniknutá zmes sa zohrieva počas 1 hodiny na teplotu varu, potom sa ochladí a prefiltruje cez kremelinu. Filtrát sa zahustí vo vákuu a nechá sa reagovať s ochladeným IN roztokom kyseliny chlorovodíkovej, čím sa získa 3,6 g svetločervenej tuhej látky.
1H-NMR (deuterochloroform) δ: 1,85 (s, 1H), 2,45 (d, 0,5H), 2,50 - 2,65 (m, 0,5H), 2,80 - 2,90 (m, 0,5H),
2.90 - 3,00 (m, 0,5H), 3,45 (s, 0,5H), 3,55 - 3,75 (m, 1H), 3,85 - 4,15 (m, 2H), 4,25 (d, 1H), 4,40 - 4,65 (m, 2H), 4,70 - 4,80 (m, 0,5H), 4,85 - 5,15 (m, 1H), 5,40 (s, 0,5H), 5,60 (d, 0,5H), 7,00 (d, 0,5H), 7,15 - 7,90 (m, 12,5H), 8,35 - 8,45 (m, 1H), 9,00 - 9,10 (m, 1H), 9,25 - 9,40 (m, 1H).
Zlúčenina 696-1 sa pripraví spôsobom použitým na prípravu zlúčeniny 2002 zo zlúčeniny 2001, čím sa získa 140 mg zlúčeniny 696-1 vo forme bielej tuhej látky.
1H-NMR (500 MHz, perdeuterometanol) δ: 2,50 (m, 1H), 2,70 (m, 1H), 3,85 (d, 1H), 3,95 (m, 1H), 4,10 (d, 1H), 4,35 (m, 1H), 4,50 - 4,60 (m, 2H), 4,80 (široký m, 1H), 5,00 (m, 1H), 7,40 - 7,48 (m, 3H), 7,65 (m, 1H), 7,75 (t, 1H), 7,85 (t, 1H), 8,00 (d, 1H), 8,55 (d, 1H), 9,05 (d, 1H).
Zlúčenina 696-2 sa pripraví spôsobom použitým na prípravu zlúčeniny 2002 zo zlúčeniny 2001, čím sa získa 250 mg zlúčeniny 696-2 vo forme bielej tuhej látky.
1H-NMR (perdeuterometanol) δ: 2,40 - 2,55 (m, 1H), 2,60 - 2,75 (m, 1H), 3,80 - 4,00 (m, 2H), 4,05 (d, 1H), 4,20 - 4,35 (m, 1H), 4,45 - 4,65(m, 3), 4,80 - 5,10 (m, 2H).
Zlúčenina 699a-l sa pripraví spôsobom použitým na prípravu zlúčeniny 655, čím sa získa zlúčenina 699a-l.
1H-NMR (500 MHz, deuterochloroform) δ: 2,55 (ddd, 1H), 2,90 (ddd, 1H), 3,25 (s, 3H), 3,28 (s, 3H), 3,80 (široký t, 2H), 3,95 (široký m, 2H), 4,23 (dd, 1H), 4,45 - 4,90 (m, 3H), 5,60 (d, 1H), 7,05 - 7,40 (m, 8H), 7,50 (široký m, 1H), 7,65 - 7,85 (m, 2H), 8,45 (d, 1H), 9,1 (m, 1H), 9,35 (m, 1H).
Zlúčenina 699a-2 sa pripraví spôsobom použitým na prípravu zlúčeniny 2002 zo zlúčeniny 2001, čím sa získa zlúčenina 699a-2.
1H-NMR (500 MHz, perdeuterometanol) δ: 2,51 (m, 1H), 2,70 (dt, 1H), 3,31 (široký s, 3H), 3,90 (široký dt, 1H), 3,95 (široký m, 1H), 4,05 (d, 1H), 4,35 (m, 1H), 4,50 (d, 1H), 4,60 (dd, 1H), 4,65 (dt, 1H), 4,80 (m, 1H), 5,05 (m, 1H), 7,35 - 7,48 (m, 3H), 7,65 (široký m, 1H), 7,75 (t, 1H), 7,82 (t, 1H), 8,05 (d, 1H), 8,55 (d, 1H), 9,05 (d, 1H).
Zlúčenina 688c sa pripraví spôsobom použitým na prípravu zlúčeniny 308d, čím sa získa zlúčenina 688c. 1H-NMR (perdeuterometanol) Ó: 2,2 (s, 6H), 2,58 - 2,83 (m, 2H), 3,28 (s, 3H), 3,29 - 3,34 (m, 1H), 3,68 -
- 3,80 (m, 2H), 3,95 - 4,05 (dd, 1H), 4,38 - 4,48 (dd, 1H), 4,82 - 5,00 (m, 2H), 5,26 - 5,36 (m, 2H), 7,22 7,65 (m, 10H).
Zlúčenina 800 sa pripraví spôsobom použitým na prípravu zlúčeniny 696a-l, čím sa získa 204 mg zlúčeniny 800 vo forme žltej tuhej látky.
1H-NMR (deuterochloroform, zmes diastereomérov) δ: 1,70 (s, 1H), 2,40 - 2,80 (m, 7H), 2,80 - 2,90 (m, 0,5), 2,95 - 3,05 (m, 0,5H), 3,30 - 3,35 (m, 0,5H), 3,45 - 3,55 (m, 0,5H), 3,55 - 3,65 (m, 1H), 3,80 - 4,05 (m, 2H), 4,30 - 4,50 (m, 2H), 4,55 - 4,65 (m, 1H), 4,75 - 4,95 (m, 3H), 5,45 (s, 0,5H), 5,55 (d, 0,5H), 6,70 (d, 0,5H), 6,90 (d, 0,5H), 7,15 - 7,80 (m, 10H).
Zlúčenina 801 sa pripraví spôsobom použitým na prípravu zlúčeniny 2002 zo zlúčeniny 2001, čím sa získa 801.
Príklad 34
Zlúčeniny 720-773 sa pripravia podobným spôsobom ako zlúčeniny 619-635 (pozri príklad 13). Fyzikálne údaje pre zlúčeniny 720-773 sa uvádzajú v tabuľke 29.
212
Tabuľka 29
Zlúč. Štruktúra Vzorec MH HPLC RČ min čistota KS |M+Ua)’
720 Λ //° 1Y ,A... ..Yi.....Y HO C24II23C1M4O9 546.93 10.729 99% 568.0
721 n . /-U « ΑοΛύ u “ /j JLy hct \ ch, C32II32N4O9 616.63 13.241 99% 640.4
722 Hŕ-\ ,0 „ΊΑ λ» ..A-nAV' H0Z \ ČHj C27H30N4O9 554.56 11.761 99¾ 570.2
723 Ία λ. αΊαυ HO \ CHj C26II20N4O9 540.53 10.655 79% 564.5
724 Ία λ. „a-Ίαγ HO \ CHj C27II30N400 530.56 10.504 99% 563.1
725 2 Y. á ,τΥν CHj C201I32N4OG 552.59 11.329 99? 577.2
213
Zlúč. Štruktúra Vzorec MH HPLC RČ min čistota HS | (M+Na)*
72G HjC o .pÝ CH, C291132N4O10 596.60 10.667 99% 620.0
727 IVY/P II ° H » 1 CH] C24I126NW7 <102.50 9.085 92% 506.6
720 HjC ČW r> o 0 V <C Λ i 011 Yŕ CHj C301I34N4010 610.63 11.556 634.9
729 HjC Λχ r) ° Cu ŕ- CHj C2BH30N/1010 502.57 11.611 99% 607.3
730 JÄČ H b H II, o y011 C231I27N5011 549.50 3.939 96% 572.2
731 IIO 0 YÄč Ibcp II 0 II II r C24I129N5O11 563.53 4.290 92% 507
214
Zlúč . Štruktúra Vzorec MH UPI,C RČ min čistota HS (MHIa)f
732 no o Ίφ» A AM 0 HjC C261I2 ON 4 011 572.53 7.640 90i 595.9
733 UO 0 .'A i Άρ’·-:ΑΑ· C25II26N4O10 542.51 7.375 981 565.9
734 C32H2CN6O7 600.62 9.656 99% 630.6
735 0 H.C—SX O 0 niW’ Q-Ah o m C2DII27N5O9S 609.62 10.807 92i 632.1
Príklad 35
Zlúčeniny 736-767 sa pripraví podobným spôsobom ako zlúčeniny 619-635 (pozri príklad 13). Fyzikálne údaje pre zlúčeniny 736-767 sa uvádzajú v tabuľke 30.
215
Tabuľka 30
Zlúčenina R4 R3
736 0
737 0 HO Ak
738 H3COX 0 hoAx
739 H3C ch3 0 HO Ak
740 k 0 HO Ak
741 CC1 0 hoA\
742 a/ 0 HO Ak
743 oo1 0 HO Ak
744 a/ 0 HO Ak
216
Zlúčenina R4 R3
745 0
746 0 HO^X
747 a/ och3 0
748 οδ 0 HO^A,
749 xX H3COx^N<ŕ^OCH3 0 HO^J\
750 X hc/V 0 HOxJk
751 χ·1 0 HO^J\
752 W- Γγ OCH3 0 HO\J\
753 l_l p OCHa 0 >:X h3c 0
217
Zlúčenina R4 R3
754 rA o-YW 0 H0Ak
755 ο·Όγ 0 0 HOA\
756 OH 0 M 0 H0Ak
757 OH 0 ch3 0 ΗΟχΑ\
758 o1 0 HO\Ax
759 0 0 H0\Ax
760 0 0 0 Η°ΧχΛ.
761 o1 \Ah 0 HoAk
762 0 u 0 Η0Ά\
218
Zlúčenina R4 R3
763 X 0
764 0 /-NH O ΛΑ 0
765 í· 0
766 Xv H 0
767 x> 0
Údaje v uvedených príkladoch ukazujú, že zlúčeniny podľa vynálezu sa vyznačujú inhibičnou aktivitou proti IL-1 β prevádzaciemu enzýmu.
Takže zlúčeniny podľa vynálezu majú schopnosť inhibovať ICE m vitro a ďalej sa môžu podávať cicavcom orálne, majú zreteľnú klinickú využiteľnosť na liečbu ochorení sprostredkovaných IL-1, apoptózou, IGIF a IFN-γ. Na základe týchto testov sa predpokladá, že zlúčeniny majú schopnosť inhibovať ICE in vivo.
Pretože sme opísali množstvo uskutočnení tohto vynálezu, je zrejmé, že naše základné postupy sa môžu zmeniť, a tak možno získať iné uskutočnenia, ktoré využívajú produkty a postupy podľa predkladaného vynálezu. Rozsah predkladaného vynálezu je definovaný v pripojených nárokoch presnejšie ako v špecifických uskutočneniach, ktoré sú uvedené formou príkladu.

Claims (30)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY
    1. Zlúčenina všeobecného vzorca (VI)
    R1—N—R2
    H (VI), kde:
    R'je:
    219 (elO) (w
    R2 je:
    m je 1 alebo 2;
    každá skupina R5 je nezávisle vybraná zo skupiny, ktorú tvorí: skupina -C(O)-R10, skupina -C(O)-OR9, skupina -C(O)-N(R10)(R10), skupina -S(O)2-R9, skupina -S(O)2-NH-R10, skupina -C(O)-CH2-OR9, skupina -C(O)-C(O)-R10, skupina -R9, atóm vodíka, skupina -C(O)-C(O)-OR10 a skupina -C(O)-C(O)-N(R9)(R10);
    X5 je skupina CH;
    Y2 je kyslík;
    každá skupina R9 je nezávisle vybraná zo skupiny, ktorú tvorí skupina -Ar3 a priama alebo rozvetvená alkylová skupina obsahujúca 1 až 6 atómov uhlíka, ktorá je prípadne substituovaná skupinou -Ar3, kde alkylová skupina obsahujúca 1 až 6 atómov uhlíka je prípadne nenasýtená;
    každá skupina R10 je nezávisle vybraná zo skupiny, ktorú tvorí atóm vodíka, skupina -Ar3, a cykloalkylová skupina obsahujúca 3 až 6 atómov uhlíka a priama alebo rozvetvená alkylová skupina obsahujúca 1 až 6 atómov uhlíka, ktorá je prípadne substituovaná skupinou Ar3, kde alkylová skupina obsahujúca 1 až 6 atómov uhlíka je prípadne nenasýtená;
    každá skupina R51 je nezávisle vybraná zo skupiny, ktorú tvorí skupina R9, skupina -C(O)-R9, skupina -C(O)-NH-R9, alebo všetky skupiny R51 spoločne tvoria štvorčlenný až osemčlenný nasýtený uhlíkový kruh alebo heterocyklický kruh obsahujúci skupinu -0-, skupinu -S- alebo skupinu -NH-;
    každá skupina R21 je nezávisle vybraná zo skupiny, ktorú tvorí atóm vodíka alebo priama, alebo rozvetvená alkylová skupina obsahujúca 1 až 6 atómov uhlíka;
    každá skupina Ar3 je cyklická skupina nezávisle vybraná zo skupiny, ktorú tvorí arylová skupina obsahujúca 6, 10, 12 alebo 14 atómov uhlíka a 1 až 3 kruhy a aromatická heterocyklická skupina obsahujúca 5 až 15 atómov v kruhu a 1 až 3 kruhy, uvedená heterocyklická skupina obsahuje najmenej jeden heteroatóm (skupinu), vybraný zo skupiny, ktorú tvorí skupina -O-, skupina -S, skupina -SO-, skupina -SO2-, skupina =N- a skupina -NH-, uvedená heterocyklická skupina prípadne obsahuje jednu alebo viacero dvojitých väzieb, uve
    220 dená heterocyklická skupina prípadne obsahuje jeden alebo viacero aromatických kruhov, a uvedená cyklická skupina je prípadne jedenkrát alebo viackrát substituovaná skupinou -Q1;
    každá skupina Q1 je nezávisle vybraná zo skupiny, ktorú tvorí aminoskupina, karboxylová skupina, atóm chlóru, atóm fluóru, atóm brómu, atóm jódu, nitroskupina, kyanoskupina, skupina =O, hydroxylová skupina, perfluóralkylová skupina obsahujúca 1 až 3 atómy uhlíka, skupina -R5, skupina -OR5, skupina -NH-R5, skupina -OR9, skupina -N(R9)(R10) skupina -R9, skupina -C(O)-R10 a skupina °\
    A ,
    Ό pod podmienkou, že ak skupina -Ar3 je substituovaná skupinou Q1, ktorá obsahuje jednu alebo viacero skupín -Ar3, uvedené ďalšie skupiny Ar3 nie sú substituované inou skupinou -Ar3;
    a s podmienkou, že keď R2 je
    R21 je H; a
    Y2 je O, potom R5 nemôže byť -C(O)R10, kde R10 je -CH2CH2Ar3 a Ar3 je nesubstituovaný fenyl; alebo -SO2R9, pričom R9 je metyl.
  2. 2. Zlúčenina podľa nároku 1 vybraná zo skupiny, ktorú tvoria:
    213e
    304a
    221
    2100a
    2100e
    222
    213h
    O
    213i
    O
    213j o
    2131 o
    223
    213mm
    213o
    213p
    213q
    224
    225
    226
    550h
    550i
    550 j
    5501
    227
    550ο
    550p
    2100f
    2100g
    2100h
    228
    2100k
    2100m
    2100n
    2100ο
    229
  3. 3. Zlúčenina podľa nároku 1, kde:
    m je 1;
    R21 je atóm vodíka alebo metylová skupina;
    R51 je priama alebo rozvetvená alkylová skupina obsahujúca 1 až 6 atómov uhlíka, ktorá je prípadne substituovaná skupinou -Ar3, kde skupina Ar3 je fenylová skupina prípadne substituovaná skupinou -Q1;
    každá cyklická skupina Ar3 je nezávisle vybraná zo skupiny, ktorú tvorí fenylová skupina, naftylová skupina, tienylová skupina, chinolinylová skupina, izochinolinylová skupina, pyrazolylová skupina, tiazolylová skupina, izoxazolylová skupina, benzotriazolylová skupina, benzimidazolylová skupina, ticnotienylová skupina, imidazolylová skupina, tiadiazolylová skupina, benzo[b]tiofenylová skupina, pyridylová skupina, benzofuranylová skupina alebo indolylová skupina, a uvedená cyklická skupina je prípadne jedenkrát alebo viackrát substituovaná skupinou -Q1;
    každá skupina Q1 je nezávisle vybraná zo skupiny, ktorú tvorí aminoskupina, atóm chlóru, atóm fluóru, atóm brómu, hydroxylová skupina, skupina -R9, skupina -NH-R5, kde R5 je skupina -C(O)-R10 alebo skupina -S(O)2-R9, skupina -OR5, kde R5 je skupina -C(O)-R10, skupina -OR9, skupina -NH-R9 a skupina
    Ah, , kde každá skupina R9 a R10 je nezávisle priama alebo rozvetvená alkylová skupina obsahujúca 1 až 6 atómov uhlíka, ktorá je prípadne substituovaná skupinou ArJ, kde Ar3 je fenylová skupina;
    s podmienkou, že ak skupina -Ar3 je substituovaná skupinou Q1, ktorá obsahuje jednu alebo viacero ďalších skupín -Ar3, uvedené ďalšie skupiny -Ar3 nie sú substituované inou skupinou -Ar3.
  4. 4. Zlúčenina podľa nároku 3, kde R1 je skupina (elO) a X5 je skupina CH.
  5. 5. Zlúčenina podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1, 3 alebo 4, kde R5 je skupina -C(O)-R10 alebo skupina -C(O)-C(O)-R’°.
  6. 6. Zlúčenina podľa nároku 5, kde R10 je skupina Ar3.
  7. 7. Zlúčenina podľa nároku 6, kde:
    R5 je skupina -C(O)-R10a R10 je skupina Ar3, kde cyklická skupina Ar3 je fenylová skupina, ktorá je pripadne jedenkrát alebo viackrát substituovaná:
    skupinou -R9, kde R9 je priama alebo rozvetvená alkylová skupina obsahujúca 1 až 4 atómy uhlíka, atómom fluóru, atómom chlóru, skupinou -NH-R5, kde R5 je atóm vodíka alebo skupina -C(O)-R10, kde R10 je priania alebo rozvetvená alkylová skupina obsahujúca 1 až 6 atómov uhlíka, ktorá je prípadne substituovaná skupinou -Ar3, kde Ar3 je fenylová skupina, skupinou -N(R9)(R10), kde R9 a R10 sú nezávisle priama alebo rozvetvená alkylová skupina obsahujúca 1 až 4 atómy uhlíka, alebo skupinou -OR5, kde R5 je atóm vodíka alebo priama, alebo rozvetvená alkylová skupina obsahujúca 1 až 4 atómy uhlíka.
  8. 8. Zlúčenina podľa nároku 7, kde Ar3 je fenylová skupina, ktorá je jedenkrát alebo viackrát substituovaná v polohe 3 alebo v polohe 5 atómom chlóru alebo v polohe 4 skupinou -NH-R5, skupinou -N(R9)(R10) alebo skupinou -OR5; alebo kde Ar3 je fenylová skupina, ktorá je jedenkrát alebo viackrát substituovaná v polohe 3 alebo v polohe 5 skupinou -R9, kde R9 je priama alebo rozvetvená alkylová skupina obsahujúca 1 až 4 atómy uhlíka, a v polohe 4 skupinou -OR5.
  9. 9. Zlúčenina podľa nároku 8 vybraná zo skupiny, ktorú tvoria:
    230
    SK 287195 Β6
    213k
    213m
    O
    550k o
    550m
    214w-l
    231
    214w-2
    214w-3
    232
  10. 10. Zlúčenina podľa nároku 6, kde:
    R5 je skupina -C(O)-R10, kde R10 je skupina ArJ a cyklická skupina Ar3 je vybraná zo skupiny, ktorú tvorí indolylová skupina, benzimidazolylová skupina, tienylová skupina, chinolylová skupina, izochinolylová sku5 pina a bcnzo[b]tiofenylová skupina, a uvedená cyklická skupina je prípadne jedenkrát alebo viackrát substituovaná skupinou -Q1.
  11. 11. Zlúčenina podľa nároku 10, kde cyklická skupina Ar3 je izochinolylová skupina, a uvedená cyklická skupina j e prípadne jedenkrát alebo viackrát substituovaná skupinou -Q1.
  12. 12. Zlúčenina podľa nároku 11 vybraná zo skupiny, ktorú tvoria:
    213y
    412a
    412b
    O
    233
    412d
    412e
    412g
    412h
    550q
  13. 13. Zlúčenina podľa nároku 11, ktorou je:
    234
  14. 14. Zlúčenina podľa nároku 7, kde R5 je skupina -C(O)-R10, kde R10 je skupina Ar a cyklická skupina Ar3 je fenylová skupina, ktorá je substituovaná skupinou
    O 'ch2 o
  15. 15. Zlúčenina podľa nároku 14 vybraná zo skupiny, ktorú tvoria:
    235
  16. 16. Farmaceutický prostriedok, vyznačujúci sa tým, že obsahuje zlúčeninu podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 15 a farmaceutický prijateľný nosič.
  17. 17. Použitie zlúčeniny podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 15 na prípravu liečiva na liečenie alebo prevenciu ochorení, medzi ktoré patria osteoartritída, akútna pankreatitída, chronická pankreatitida, astma, syndróm respiračnej úzkosti, infekčná hepatitída, glomerulonefritída, reumatická artritída, systémový lupus erythematosus, skleroderma, chronická tyroiditída, Gravesova choroba, autoimúnna gastritída, diabetes mellitus (typ I) závislý od inzulínu, autoimúnna hemolytická anémia, autoimúnna neutropénia, trombocytopénia, chronická aktívna hepatitída, myasténia gravis, zápalové choroby vnútorností, Crohnova choroba, ulceratívna kolidída, skleróza multiplex, psoriáza, lichenplanus, reakcia transplantát vs. hostiteľ, akútna dermatomyozitída, ekzém, primárna cirhóza, uveitída, Bohcetova choroba, akútna aplázia, aplastická anémia, amyotrofná laterálna skleróza, nefrotický syndróm, osteoporóza, mnohonásobný myelóm súvisiaci s kostnými poruchami, akútna myelogénna leukémia, chronická myelogénna leukémia, metastatický melanóm, Kaposiho sarkóm, viacnásobný myelóm, sepsa, septický šok, Shigellóza, Alzheimerova choroba, Parkinsonova choroba, mozgová ischémia alebo ischémia myokardu.
  18. 18. Použitie podľa nároku 17, kde ochorenia sú vybrané zo skupiny, ktorú tvoria osteoartritída, akútna pankreatitida, reumatoidná artritída, zápalové choroby vnútorností, ulceratívna kolitída, Crohnova choroba, hepatitída, syndróm respiračnej úzkosti, glomerulonefritída, diabetes mellitus (typ I) závislý od inzulínu, juvenilný diabetes, psoriáza, reakcia transplantát vs. hostiteľ, hepatitída alebo Alzheimerova choroba.
  19. 19. Použitie zlúčenín podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 15 na prípravu liečiva na liečenie alebo prevenciu ochorení vybraných zo skupiny, ktorú tvoria Alzheimerova choroba, Parkinsonova choroba, mozgová ischémia, myokardiálna ischémia, svalová atrofia chrbtice, viacnásobná skleróza, encefalitída spojená s AIDS, encefalitída spojená s HIV, starnutie, vypadávanie vlasov alebo neurologické poškodenia spôsobené mŕtvicou.
  20. 20. Použitie podľa nároku 19, kde ochorením je Alzheimerova choroba.
  21. 21. Spôsob prípravy N-acylaminozlúčeniny podľa nároku 1,vyznačujúci sa tým, že zahŕňa kroky:
    a) zmiešanie karboxylovej kyseliny s N-alloc-chráncným aminom v prítomnosti inertného rozpúšťadla, trifenylfosfínu, nukleofilného lapača a tetrakis(trifenylfosfín)paládia (0) pri teplote miestnosti v inertnej atmosfére; a
    b) pridanie N-hydroxybenzotriazolu a l-etyl-3-(3-dimetylaminopropyl)karbodiimidu k zmesi z kroku a); a prípadne zahŕňa ďalší krok:
    c) hydrolýzu zmesi z kroku b) v prítomnosti roztoku obsahujúceho kyselinu a vodu, kde sa zmes z kroku b) prípadne zahustí.
  22. 22. Spôsob podľa nároku 21, vyznačujúci sa tým, že inertným rozpúšťadlom j e dichlórmetán, dimetylformamid alebo zmes dichlórmetánu a dimetylformamidu.
  23. 23. Spôsob podľa nároku 21, vyznačujúci sa tým, že nukleofílným lapačom je dimedón, morfolín, trimetylsilydimetylamín alebo kyselina dimetylbarbiturová.
  24. 24. Spôsob podľa nároku 23, vyznačujúci sa tým, že nukleofílným lapačom je trimetylsilydimetylamín alebo kyselina dimetylbarbiturová.
  25. 25. Spôsob podľa nároku 23, vyznačujúci sa tým, že inertným rozpúšťadlom j c dichlórmetán, dimetylformamid alebo zmes dichlórmetánu a dimetylformamidu.
  26. 26. Spôsob podľa nároku 25, vyznačujúci sa tým, že nukleofílným lapačom je kyselina dimetylbarbiturová.
  27. 27. Spôsob podľa nároku 26, vyznačujúci sa tým, že roztok obsahuje kyselinu trifluóroctovú v množstve 1 až 90 % hmotnostných alebo kyselinu chlorovodíkovú v množstve 0,1 až 30 % hmotnostných.
    236
  28. 28. Spôsob podľa nároku 27, vyznačujúci sa tým, že roztok obsahuje kyselinu trifluóroctovú v množstve 20 až 50 % hmotnostných alebo kyselinu chlorovodíkovú v množstve 5 až 15 % hmotnostných.
  29. 29. Spôsob podľa ktoréhokoľvek z nárokov 21 až 28, vyznačujúci sa tým, že N-alloc chráneným amínomje:
    kde:
    skupina R51 je nezávisle vybraná zo skupiny, ktorú tvorí skupina -R9, skupina -C(O)-R9, skupina -C(O)-NH-R9 alebo všetky skupiny R51 spoločne tvoria štvorčlenný až osemčlenný uhlíkový kruh alebo heterocyklický kruh obsahujúci skupinu -0-, skupinu -S- alebo skupinu -NH-.
  30. 30. Spôsob podľa ktoréhokoľvek z nárokov 21 až 28, vyznačujúci sa tým, že skupina R1 je:
    (A-el0)
SK842-98A 1995-12-20 1996-12-20 Inhibítory enzýmu konvertujúceho interleukín-1ß, farmaceutický prostriedok s ich obsahom a spôsob prípravy SK287195B6 (sk)

Applications Claiming Priority (6)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US08/575,641 US6008217A (en) 1995-12-20 1995-12-20 Inhibitors of interleukin-1β converting enzyme
US08/598,332 US5874424A (en) 1995-12-20 1996-02-08 Inhibitors of interleukin-1β converting enzyme
US08/712,878 US5985863A (en) 1996-09-12 1996-09-12 Compositions and methods for decreasing IGIF and IFN-γ production by administering an ICE inhibitor
US3149596P 1996-11-26 1996-11-26
US08/761,483 US6204261B1 (en) 1995-12-20 1996-12-06 Inhibitors of interleukin-1β Converting enzyme inhibitors
PCT/US1996/020843 WO1997022619A2 (en) 1995-12-20 1996-12-20 INHIBITORS OF INTERLEUKIN-1β CONVERTING ENZYME

Publications (2)

Publication Number Publication Date
SK84298A3 SK84298A3 (en) 1999-03-12
SK287195B6 true SK287195B6 (sk) 2010-03-08

Family

ID=27534345

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SK842-98A SK287195B6 (sk) 1995-12-20 1996-12-20 Inhibítory enzýmu konvertujúceho interleukín-1ß, farmaceutický prostriedok s ich obsahom a spôsob prípravy

Country Status (24)

Country Link
US (7) US6204261B1 (sk)
EP (3) EP2083014A3 (sk)
JP (3) JP4205762B2 (sk)
KR (1) KR100561504B1 (sk)
CN (1) CN1229412A (sk)
AP (4) AP2002002540A0 (sk)
AU (1) AU735075B2 (sk)
BG (2) BG108927A (sk)
BR (2) BR9612258B1 (sk)
CA (1) CA2239904C (sk)
CZ (2) CZ300171B6 (sk)
GE (1) GEP20022638B (sk)
HK (1) HK1089435A1 (sk)
IL (2) IL124850A0 (sk)
IN (1) IN182290B (sk)
IS (1) IS4771A (sk)
MX (1) MX9805016A (sk)
NO (1) NO326882B1 (sk)
NZ (2) NZ326610A (sk)
PL (1) PL190736B1 (sk)
SK (1) SK287195B6 (sk)
TR (3) TR200201217T2 (sk)
UA (1) UA66337C2 (sk)
WO (1) WO1997022619A2 (sk)

Families Citing this family (81)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6204261B1 (en) * 1995-12-20 2001-03-20 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of interleukin-1β Converting enzyme inhibitors
US6420522B1 (en) * 1995-06-05 2002-07-16 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of interleukin-1β converting enzyme
US6531467B2 (en) 1996-09-12 2003-03-11 Idun Pharmaceuticals, Inc. Inhibition of inflammation using interleukin-1β-converting enzyme (ICE)/CED-3 family inhibitors
US6200969B1 (en) 1996-09-12 2001-03-13 Idun Pharmaceuticals, Inc. Inhibition of apoptosis using interleukin-1β-converting enzyme (ICE)/CED-3 family inhibitors
US6610683B2 (en) * 1996-09-12 2003-08-26 Idun Pharmaceuticals, Inc. Treatment of infectious disease using interleukin-1β-converting enzyme (ICE)/CED-3 family inhibitors
PL332640A1 (en) 1996-10-11 1999-09-27 Warner Lambert Co Sulphonamide-group substituted derivatives of aspartic acid as inhibitors of an interleukin-1beta transforming enzyme
ATE317381T1 (de) * 1996-10-11 2006-02-15 Warner Lambert Co Sulfonamid-substituierte asparaginsäuren als inhibitoren von interleukin-1beta-konvertierenden enzymen
US5919790A (en) * 1996-10-11 1999-07-06 Warner-Lambert Company Hydroxamate inhibitors of interleukin-1β converting enzyme
EP1466921A1 (en) * 1996-12-06 2004-10-13 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of interleukin-1 beta converting enzyme
AU7624798A (en) * 1996-12-06 1998-06-29 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of interleukin-1 beta converting enzyme
FR2766188B1 (fr) * 1997-07-15 2000-02-11 Hoechst Marion Roussel Inc Nouveau procede de preparation de derives amines d'alkyloxy furanone, composes issus de ce procede et utilisation de ces composes
WO1999046248A1 (en) 1998-03-09 1999-09-16 Vertex Pharmaceuticals Incorporated 1,2-diazepane derivatives as interleukin-1beta converting enzyme inhibitors
BR9909660A (pt) 1998-03-19 2000-11-21 Vertex Pharma Inibidores de caspases
FR2777279B1 (fr) * 1998-04-08 2004-08-13 Hoechst Marion Roussel Inc Nouvelles formes cristallines du 1s-[1alpha(2s*,3r*), 9 alpha] 6,10-dioxo-n-(2-ethoxy-5-oxo-tetrahydro-3-furanyl) -9[[(1-isoquinolyl)carbonyl]amino]octohydro-6h-pyridazino [1,2-a][1,2]diazepine-1-carboxamide
FR2777888B1 (fr) 1998-04-27 2004-07-16 Hoechst Marion Roussel Inc Nouveaux derives de l'acide (3,4,7,8,9,10-hexahydro-6,10- dioxo-6h-pyridazino[1,2-a][1,2]diazepine-1-carboxylique, leur procede de preparation et leur application a la preparation de medicaments
FR2777889B1 (fr) * 1998-04-27 2004-07-09 Hoechst Marion Roussel Inc Nouveaux derives de l'acide octahydro-6,10-dioxo-6h- pyridazino[1,2-a][1,2]diazepine-1-carboxylique, leur procede de preparation et leur application a la preparation de composes therapeutiquement actifs
US7053056B2 (en) * 1998-07-02 2006-05-30 Idun Pharmaceuticals, Inc. C-terminal modified oxamyl dipeptides as inhibitors of the ICE/ced-3 family of cysteine proteases
US6197750B1 (en) * 1998-07-02 2001-03-06 Idun Pharmaceuticals, Inc. C-terminal modified oxamyl dipeptides as inhibitors of the ICE/ced-3 family of cysteine proteases
US6544951B2 (en) 1998-07-02 2003-04-08 Idun Pharmaceuticals, Inc. C-terminal modified oxamyl dipeptides as inhibitors of the ICE/ced-3 family of cysteine proteases
US6177565B1 (en) 1998-08-19 2001-01-23 Vertex Pharmaceuticals Inc. Process for synthesizing piperazic acid
US6703500B2 (en) * 1998-08-19 2004-03-09 Vertex Pharmaceuticals, Incorporated Method of preparing bicyclic intermediates from piperazic acid or an ester thereof useful in the manufacture of caspase inhibitors
US6201118B1 (en) 1998-08-19 2001-03-13 Vertex Pharmaceuticals Inc. Process for forming an N-acylated, N,N-containing bicyclic ring from piperazic acid or an ester thereof especially useful as an intermediate in the manufacture of a caspase inhibitor
US6559304B1 (en) * 1998-08-19 2003-05-06 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Method for synthesizing caspase inhibitors
US6395897B1 (en) 1999-03-02 2002-05-28 Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals, Inc. Nitrile compounds useful as reversible inhibitors of #9 cathepsin 5
TW200404789A (en) * 1999-03-15 2004-04-01 Axys Pharm Inc Novel compounds and compositions as protease inhibitors
US6420364B1 (en) 1999-09-13 2002-07-16 Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals, Inc. Compound useful as reversible inhibitors of cysteine proteases
AR026748A1 (es) 1999-12-08 2003-02-26 Vertex Pharma Un compuesto inhibidor de caspasas, una composicion farmaceutica que lo comprende, un metodo para la sintesis del mismo y un compuesto intermediario paradicha sintesis
FR2802927B1 (fr) * 1999-12-28 2002-03-01 Hoechst Marion Roussel Inc Nouveaux derives de diazepine carboxamide, leur procede de preparation, leur application a titre de medicaments, compositions pharmaceutiques et leur nouvelle utilisation
US6790989B2 (en) 2000-01-13 2004-09-14 Idun Pharmaceuticals, Inc. Inhibitors of the ICE/ced-3 family of cysteine proteases
US6515173B1 (en) 2000-01-13 2003-02-04 Idun Pharmaceuticals, Inc. Inhibitors of the ICE/ced-3 family of cysteine proteases
EP1712239A3 (en) 2000-05-12 2007-08-22 Immunex Corporation Interleukin-1 inhibitors in the treatment of diseases
PE20011350A1 (es) 2000-05-19 2002-01-15 Vertex Pharma PROFARMACO DE UN INHIBIDOR DE ENZIMA CONVERTIDORA DE INTERLEUCINA-1ß (ICE)
CN100390281C (zh) * 2000-06-15 2008-05-28 史密丝克莱恩比彻姆公司 制备具有生理活性的il-18多肽的方法
DE10037310A1 (de) 2000-07-28 2002-02-07 Asta Medica Ag Neue Indolderivate und deren Verwendung als Arzneimittel
ZA200304059B (en) * 2000-12-28 2004-07-06 Daiichi Seiyaku Co VLA-4 inhibitors.
IL156064A0 (en) * 2000-12-28 2003-12-23 Daiichi Seiyaku Co Vla-4 inhibitors
ME00549B (me) * 2001-01-29 2011-10-10 Serono Lab Upotreba inhibitora il-18 za liječenje i/ili prevenciju srčanih oboljenja
US20030096737A1 (en) 2001-04-19 2003-05-22 Anita Diu-Hercend Caspase inhibitors and uses thereof
MXPA04003215A (es) * 2001-10-04 2005-01-25 Johnson & Johnson Derivados de triazapina como agentes neurotroficos.
US6821993B1 (en) 2001-10-04 2004-11-23 Ortho-Mcneil Pharmaceutical, Inc. Triazepine derivatives as neurotrophic agents
US7115654B2 (en) * 2002-06-05 2006-10-03 Sunesis Pharmaceuticals, Inc. Caspase-1 inhibitors and methods for their use
AU2003248758A1 (en) 2002-06-28 2004-01-19 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Caspase inhibitors and uses thereof
WO2004047864A1 (en) * 2002-11-26 2004-06-10 Advanced Biotherapy, Inc. Treatment of skin diseases
TW200500343A (en) 2002-12-20 2005-01-01 Vertex Pharma Caspase inhibitors and uses thereof
PE20050159A1 (es) 2003-05-27 2005-04-19 Vertex Pharma Derivados de acido 3-[2-(3-amino-2-oxo-2h-piridin-1-il)-acetilamino]-4-oxo-pentanoico como inhibidores de caspasa
WO2005009992A1 (ja) 2003-07-24 2005-02-03 Daiichi Pharmaceutical Co., Ltd. シクロヘキサンカルボン酸類
US20050124684A1 (en) * 2003-08-29 2005-06-09 Ying Du 5-(hydroxymethyl) furfural and derivatives as inhibitors of TNFalpha and IL-1beta production
AU2004275821A1 (en) * 2003-09-25 2005-04-07 Dmi Biosciences Inc. Methods and products which utilize N-acyl-L-aspartic acid
JP2007513092A (ja) * 2003-12-01 2007-05-24 バーテックス　ファーマシューティカルズ　インコーポレイテッド Ｉｃｅ阻害剤を使用する感染性疾患の処置
CN100441186C (zh) * 2003-12-03 2008-12-10 和记黄埔医药企业有限公司 伪石蒜碱的医药用途
EP2784090A1 (en) 2004-02-26 2014-10-01 Baylor Research Institute Compositions for the treatment of systemic onset juvenile idiopathic arthritis
JP2007525503A (ja) * 2004-02-27 2007-09-06 バーテックス　ファーマシューティカルズ　インコーポレイテッド カスパーゼインヒビターおよびそれらの使用
WO2005090334A2 (en) 2004-03-12 2005-09-29 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Processes and intermediates for the preparation of aspartic acetal caspase inhibitors
AU2005238484A1 (en) * 2004-04-22 2005-11-10 The Procter & Gamble Company Tri-substituted ureas as cytokine inhibitors
EP1750689A1 (en) * 2004-05-15 2007-02-14 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Treating seizures using ice inhibitors
GB0411056D0 (en) 2004-05-18 2004-06-23 Novartis Ag Organic compounds
US7531570B2 (en) * 2004-05-27 2009-05-12 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Treatment of diseases using ICE inhibitors
GB0515323D0 (en) * 2005-07-26 2005-08-31 Electrophoretics Ltd Mass labels
DE102005048293A1 (de) * 2005-10-08 2007-04-12 Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh Retardformulierung für Pralnacasan
EP1826199A1 (en) * 2006-02-27 2007-08-29 Technische Universität Wien Modified amino acids
US20100099845A1 (en) * 2006-09-15 2010-04-22 University Of Utah Research Foundation Protected enantiopure trifluorothreonines and methods of making and using same
CN101772577A (zh) 2007-08-03 2010-07-07 塞诺菲-安万特股份有限公司 半胱天冬蛋白酶成像探针
EP2276508A4 (en) * 2008-04-15 2011-12-28 Sarcode Bioscience Inc RELEASE OF LFA-1 ANTAGONISTS AGAINST THE GAS-DARM SYSTEM
US9365612B2 (en) 2010-01-29 2016-06-14 United States Of America As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Caspase inhibitors
WO2012061785A2 (en) 2010-11-05 2012-05-10 Brandeis University Ice inhibiting compounds and uses thereof
US9956260B1 (en) 2011-07-22 2018-05-01 The J. David Gladstone Institutes Treatment of HIV-1 infection and AIDS
EP2848696A1 (en) 2013-09-13 2015-03-18 Sanofi-Aventis Deutschland GmbH Caspase-1 imaging probes
AU2014347026A1 (en) * 2013-11-06 2016-06-23 Bristol-Myers Squibb Company Substituted pyridine derivatives useful as GSK-3 inhibitors
TWI698436B (zh) 2014-12-30 2020-07-11 美商佛瑪治療公司 作為泛素特異性蛋白酶７抑制劑之吡咯并及吡唑并嘧啶
MA41291A (fr) 2014-12-30 2017-11-07 Forma Therapeutics Inc Dérivés de la pyrrolotriazinone et de l'imidazotriazinone en tant qu'inhibiteurs de la protéase spécifique de l'ubiquitine n° 7 (usp7) pour le traitement d'un cancer
US9938300B2 (en) 2015-02-05 2018-04-10 Forma Therapeutics, Inc. Isothiazolopyrimidinones, pyrazolopyrimidinones, and pyrrolopyrimidinones as ubiquitin-specific protease 7 inhibitors
US9932351B2 (en) 2015-02-05 2018-04-03 Forma Therapeutics, Inc. Thienopyrimidinones as ubiquitin-specific protease 7 inhibitors
JP2018504430A (ja) 2015-02-05 2018-02-15 フォーマ セラピューティクス，インコーポレイテッド ユビキチン特異的プロテアーゼ７阻害物質としてのキナゾリノン及びアザキナゾリノン
US10640495B2 (en) 2015-07-07 2020-05-05 Shionogi & Co., Ltd. Heterocycle derivatives having TrkA inhibitory activity
CN109071504B (zh) 2016-02-05 2022-03-08 戴纳立制药公司 受体相互作用蛋白激酶1的抑制剂
CN110383066B (zh) 2016-12-09 2023-03-31 戴纳立制药公司 化合物、组合物和方法
KR20230038457A (ko) 2020-06-10 2023-03-20 알리고스 테라퓨틱스 인코포레이티드 코로나바이러스, 피코르나바이러스 및 노로바이러스 감염을 치료하기 위한 항바이러스 화합물
JP2023549494A (ja) 2020-11-13 2023-11-27 イニファーム，インク． ジクロロフェノールｈｓｄ１７ｂ１３阻害剤およびその使用
AU2022306289A1 (en) 2021-07-09 2024-01-18 Aligos Therapeutics, Inc. Anti-viral compounds
US12065428B2 (en) 2021-09-17 2024-08-20 Aligos Therapeutics, Inc. Anti-viral compounds
AU2023206890A1 (en) 2022-01-12 2024-08-22 Denali Therapeutics Inc. Crystalline forms of (s)-5-benzyl-n-(5-methyl-4-oxo-2, 3,4,5- tetrahydropyrido [3,2-b] [l,4]oxazepin-3-yl)-4h-l,2,4-triazole-3-carboxamide

Family Cites Families (70)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5985863A (en) * 1996-09-12 1999-11-16 Vertex Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for decreasing IGIF and IFN-γ production by administering an ICE inhibitor
US6008217A (en) * 1995-12-20 1999-12-28 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of interleukin-1β converting enzyme
US6204261B1 (en) 1995-12-20 2001-03-20 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of interleukin-1β Converting enzyme inhibitors
US5874424A (en) * 1995-12-20 1999-02-23 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of interleukin-1β converting enzyme
US4276298A (en) 1978-03-24 1981-06-30 Merck & Co., Inc. 2-Aryl-1,2-benzisothiazolinone-1,1-dioxides and their use as selective protease inhibitors
US4337346A (en) 1978-11-02 1982-06-29 Sumitomo Chemical Company, Limited α-Hydroxyaldehyde and a process for preparing the same
US4369183A (en) 1979-09-06 1983-01-18 Merck & Co., Inc. 2-Pyridyl-1,2-benzisothiazolinone-1,1-dioxides and their use as selective protease inhibitors
US4584397A (en) 1983-05-09 1986-04-22 G. D. Searle & Co. Protease inhibitors
US4499295A (en) 1983-05-09 1985-02-12 G. D. Searle & Co. Protease inhibitors
IL72523A (en) * 1983-08-12 1988-06-30 Takeda Chemical Industries Ltd 3-amino-4-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-1,5-benzoxazepine derivatives,their production and pharmaceutical compositions containing them
US4551279A (en) 1984-01-09 1985-11-05 G. D. Searle & Co. Protease inhibitors
US5055451A (en) 1986-12-22 1991-10-08 Syntex Inc. Aryloxy and arylacyloxy methyl ketones as thiol protease inhibitors
US5158936A (en) 1986-12-22 1992-10-27 Syntex (U.S.A.) Inc. Aryloxy and arylacyloxy methyl ketones as thiol protease inhibitors
NZ223148A (en) 1987-01-16 1989-10-27 Merrell Dow Pharma Peptide derivatives having peptidase inhibition activity
WO1989004838A1 (en) 1987-11-25 1989-06-01 Immunex Corporation Interleukin-1 receptors
US4968607A (en) 1987-11-25 1990-11-06 Immunex Corporation Interleukin-1 receptors
US5081228A (en) 1988-02-25 1992-01-14 Immunex Corporation Interleukin-1 receptors
US5008245A (en) 1988-10-27 1991-04-16 University Of Kentucky Research Foundation Novel peptidyl carbamate inhibitors of the enzyme elastase
ES2110414T3 (es) 1989-05-04 1998-02-16 Sanofi Sa Derivados de sacarina utiles como inhibidores de enzimas proteoliticas y su preparacion.
CA2021660A1 (en) 1989-07-26 1991-01-27 Philippe Bey Peptidase inhibitors
NZ235155A (en) 1989-09-11 1993-04-28 Merrell Dow Pharma Peptidase substrates in which the carboxy terminal group has been replaced by a tricarbonyl radical
WO1991005577A1 (en) 1989-10-05 1991-05-02 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Catheter device with insertion stop means
WO1991015577A1 (en) 1990-04-04 1991-10-17 Black, Roy, A. INTERLEUKIN 1'beta' PROTEASE
US5416013A (en) 1990-04-04 1995-05-16 Sterling Winthrop Inc. Interleukin 1β protease and interleukin 1β protease inhibitors
WO1991018903A1 (en) 1990-05-25 1991-12-12 Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd. Pyrrolopyridazine compounds
US5199980A (en) 1990-09-21 1993-04-06 Multicolor Specialties, Inc. Polyurethane-based water-in-water multicolor paint and method for making
IL99527A (en) 1990-09-28 1997-08-14 Lilly Co Eli Tripeptide antithrombotic agents
EP0504938A3 (en) 1991-03-22 1993-04-14 Suntory Limited Prophylactic and therapeutic agent for bone diseases comprising di- or tripeptide derivative as active ingredient
DE69226820T2 (de) 1991-06-21 1999-05-12 Merck & Co., Inc., Rahway, N.J. Peptidylderivate als Inhibitoren von Interleukin-1B-konvertierenden Enzymen
JP3190431B2 (ja) 1991-07-01 2001-07-23 三菱化学株式会社 ケトン誘導体
US5278061A (en) 1991-08-16 1994-01-11 Merck & Co., Inc. Affinity chromatography matrix useful in purifying interleukin-1β converting enzyme
DE69229252T2 (de) 1991-08-16 1999-12-16 Merck & Co., Inc. DNS, welche das Interleukin-1B-Vorläufer-Converting-Enzym kodiert
EP0533226A3 (en) 1991-08-16 1993-08-18 Merck & Co. Inc. Novel chromophore containing compounds
US6348570B1 (en) 1991-08-16 2002-02-19 Merck & Co., Inc. Chromophore containing compounds and their use in determining interleukin-1β convertase activity
ATE257517T1 (de) 1991-08-30 2004-01-15 Vertex Pharma Interleukin 1-beta protease und ihre inhibitoren
GB9123326D0 (en) 1991-11-04 1991-12-18 Sandoz Ltd Improvements in or relating to organic compounds
EP0547699A1 (en) 1991-12-19 1993-06-23 Merck & Co. Inc. Peptidyl derivatives as inhibitors of interleukin-1B converting enzyme
AU3479593A (en) 1992-01-31 1993-09-01 Merck & Co., Inc. Peptidyl derivatives as inhibitors of interleukin-1beta converting enzyme
EP0627926B1 (en) 1992-02-21 1998-08-05 Merck &amp; Co., Inc. (a New Jersey corp.) PEPTIDYL DERIVATIVES AS INHIBITORS OF INTERLEUKIN-1$g(b) CONVERTING ENZYME
WO1993025683A1 (en) 1992-06-12 1993-12-23 Massachusetts Institute Of Technology A gene which prevents programmed cell death
WO1993025685A1 (en) 1992-06-12 1993-12-23 Massachusetts Institute Of Technology Cloning and characterization of the cell death genes ced-3 and ced-4
WO1993025694A1 (en) 1992-06-12 1993-12-23 Massachusetts Institute Of Technology Inhibitors of ced-3 and related proteins
AU4634993A (en) 1992-06-24 1994-01-24 Merck & Co., Inc. Dna encoding precursor interleukin 1beta converting enzyme
US5739279A (en) 1992-07-31 1998-04-14 Pfizer Inc. Peptidyl 4-amino-2,2-difluoro-3-oxo-1,6-hexanedioic acid derivatives as antiinflammatory agents
US5374623A (en) 1992-08-20 1994-12-20 Prototek, Inc. Cysteine protease inhibitors effective for in vivo use
CA2109646C (en) 1992-11-24 2000-03-07 Gaston O. Daumy Para-nitroanilide peptides
EP0618223A3 (en) 1993-03-08 1996-06-12 Sandoz Ltd Peptides, the release of Interleukin 1-Bêta, useful as anti-inflammatory agents.
TW494094B (en) 1993-04-29 2002-07-11 Vertex Pharma Peptide analogs as irreversible interleukin-1β protease inhibitors and pharmaceutical compositions comprising the same
US5462939A (en) 1993-05-07 1995-10-31 Sterling Winthrop Inc. Peptidic ketones as interleukin-1β-converting enzyme inhibitors
US5411985A (en) 1993-05-17 1995-05-02 Merck & Co., Inc. Gamma-pyrone-3-acetic acid as an inhibitor or interleukin-1 β inventory enzyme
JPH0789951A (ja) 1993-06-03 1995-04-04 Sterling Winthrop Inc インターロイキン−１β転換酵素阻害剤
ATE170868T1 (de) 1993-06-04 1998-09-15 Vertex Pharma Peptid-phosphinyloxymethyl-ketonen als inhibitoren von interleukin-1 beta- konvertierenden enzymen
EP0628550B1 (en) 1993-06-08 1998-02-25 Sanofi Pyridazines as interleukin-1beta converting enzyme inhibitors
CA2165777A1 (en) 1993-06-24 1995-01-05 Junying Yuan Programmed cell death genes and proteins
AU7714594A (en) 1993-08-13 1995-03-14 Merck & Co., Inc. Substituted ketone derivatives as inhibitors of interleukin-1beta converting enzyme
US5486623A (en) 1993-12-08 1996-01-23 Prototek, Inc. Cysteine protease inhibitors containing heterocyclic leaving groups
US5508262A (en) 1993-12-15 1996-04-16 University Of South Florida Interleukin-1 receptor antagonist decreases severity of acute pancreatitis
CN1504462A (zh) 1994-03-31 2004-06-16 ������˹ҩƷ��˾ 作为白细胞介素抑制剂的嘧啶基衍生物
CA2189036A1 (en) 1994-04-29 1995-11-09 Roland E. Dolle Halomethyl amides as il-1.beta. protease inhibitors
CH688319A5 (fr) 1994-06-03 1997-07-31 Marcham Trading & Investment L Procédé pour la préparation du céfixime trihydraté.
US5552400A (en) 1994-06-08 1996-09-03 Sterling Winthrop Inc. Fused-bicyclic lactams as interleukin-1β converting enzyme inhibitors
US5847135A (en) 1994-06-17 1998-12-08 Vertex Pharmaceuticals, Incorporated Inhibitors of interleukin-1β converting enzyme
US5716929A (en) 1994-06-17 1998-02-10 Vertex Pharmaceuticals, Inc. Inhibitors of interleukin-1β converting enzyme
US5756466A (en) 1994-06-17 1998-05-26 Vertex Pharmaceuticals, Inc. Inhibitors of interleukin-1β converting enzyme
US6420522B1 (en) 1995-06-05 2002-07-16 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of interleukin-1β converting enzyme
US5565430A (en) 1994-08-02 1996-10-15 Sterling Winthrop Inc. Azaaspartic acid analogs as interleukin-1β converting enzyme inhibitors
JP2882756B2 (ja) 1994-10-12 1999-04-12 昭和高分子株式会社 脂肪族ポリエステル組成物からなる延伸中空成形体
US5498616A (en) 1994-11-04 1996-03-12 Cephalon, Inc. Cysteine protease and serine protease inhibitors
TW394764B (en) 1995-02-14 2000-06-21 Mitsubishi Chemcal Corp Oxygen-containing heterocyclic derivatives
US6184244B1 (en) * 1996-12-16 2001-02-06 Idun Pharmaceuticals, Inc. C-terminal modified (N-substituted)-2-indolyl dipeptides as inhibitors of the ICE/ced-3 family of cysteine proteases

Also Published As

Publication number Publication date
KR100561504B1 (ko) 2006-03-20
UA66337C2 (uk) 2004-04-15
CA2239904A1 (en) 1997-06-26
CZ190698A3 (cs) 1998-10-14
BRPI9612258B1 (sk) 2011-05-31
SK84298A3 (en) 1999-03-12
CN1229412A (zh) 1999-09-22
EP2295442A2 (en) 2011-03-16
PL190736B1 (pl) 2005-12-30
KR20040096550A (ko) 2004-11-16
WO1997022619A2 (en) 1997-06-26
TR200201218T2 (tr) 2002-08-21
US6204261B1 (en) 2001-03-20
EP2083014A3 (en) 2010-01-06
EP2295442A3 (en) 2011-04-06
MX9805016A (es) 1998-09-30
US20110178069A1 (en) 2011-07-21
AP2002002540A0 (en) 2002-06-30
US6423840B1 (en) 2002-07-23
AP0202539A0 (en) 1998-06-20
CZ300171B6 (cs) 2009-03-04
US20080039449A1 (en) 2008-02-14
TR200201216T2 (tr) 2002-09-23
TR200201217T2 (tr) 2002-12-23
CZ298171B6 (cs) 2007-07-11
EP0869967A2 (en) 1998-10-14
NZ518094A (en) 2004-01-30
CA2239904C (en) 2010-01-19
BRPI9612258B8 (pt) 2018-04-17
AP0202538A0 (en) 1998-06-20
BG102624A (en) 1999-09-30
US20030225269A1 (en) 2003-12-04
AP0202540A0 (en) 1998-06-20
IN182290B (sk) 1999-03-06
US6258948B1 (en) 2001-07-10
US8119631B2 (en) 2012-02-21
HK1089435A1 (en) 2006-12-01
JP4205762B2 (ja) 2009-01-07
BG108927A (en) 2006-06-30
JP2002507961A (ja) 2002-03-12
IS4771A (is) 1998-06-12
US20050143436A1 (en) 2005-06-30
JP2008285493A (ja) 2008-11-27
GEP20022638B (en) 2002-02-25
NO982597D0 (no) 1998-06-05
BR9612258A (pt) 1999-07-13
BR9612258B1 (pt) 2011-05-31
AU1522297A (en) 1997-07-14
WO1997022619A3 (en) 1997-10-16
NZ326610A (en) 2000-08-25
EP2083014A2 (en) 2009-07-29
PL328527A1 (en) 1999-02-01
IL124850A (en) 2006-08-20
JP2003137896A (ja) 2003-05-14
US7790713B2 (en) 2010-09-07
IL124850A0 (en) 1999-01-26
AU735075B2 (en) 2001-06-28
NO982597L (no) 1998-08-12
BG64465B1 (bg) 2005-03-31
NO326882B1 (no) 2009-03-09

Similar Documents

Publication Publication Date Title
SK287195B6 (sk) Inhibítory enzýmu konvertujúceho interleukín-1ß, farmaceutický prostriedok s ich obsahom a spôsob prípravy
US5874424A (en) Inhibitors of interleukin-1β converting enzyme
BG63634B1 (bg) Инхибитори на интерлевкин 1 бета-конвертиращ ензим
SK286736B6 (sk) Inhibítory kaspázy, farmaceutická kompozícia, ktorá ich obsahuje, a ich použitie
PL193391B1 (pl) Niepeptydylowe inhibitory enzymu konwertującego interlukinę-1beta i kompozycja farmaceutyczna
PT95899A (pt) Processo para a preparacao de derivados indole
US6008217A (en) Inhibitors of interleukin-1β converting enzyme
US20120165319A1 (en) Inhibitors of interleukin-1 beta converting enzyme
RU2249598C2 (ru) ИНГИБИТОРЫ ФЕРМЕНТА, КОНВЕРТИРУЮЩЕГО ИНТЕРЛЕЙКИН-1-β
KR100856767B1 (ko) 인터류킨-1 베타 전환효소의 억제제
AU756253B2 (en) Inhibitors of interleukin-1beta converting enzyme
AP1280A (en) Inhibitors of interleukin-1 converting enzyme.
TW541309B (en) Inhibitors of interleukin-1beta converting enzyme

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Patent lapsed due to non-payment of maintenance fees

Effective date: 20121220