RU2242480C2

RU2242480C2 - Ингибиторы интерлейкин-1 бета-превращающего фермента

Info

Publication number: RU2242480C2
Application number: RU97100937/04A
Authority: RU
Inventors: Гай В. БЕМИЗ (US); Гай В. БЕМИЗ; Джулиан М. С. ГОЛЕК (GB); Джулиан М. С. ГОЛЕК; Дэвид Дж. ЛАУФФЕР (US); Дэвид Дж. ЛАУФФЕР; Майкл Д. МАЛЛИКАН (US); Майкл Д. МАЛЛИКАН; Марк А. МУРКО (US); Марк А. Мурко; Дэвид Дж. ЛИВИНГСТОН (US); Дэвид Дж. ЛИВИНГСТОН
Original assignee: Вертекс Фармасьютикалз Инкорпорейтед
Priority date: 1994-06-17
Filing date: 1995-06-16
Publication date: 2004-12-20
Also published as: US5847135A

Abstract

Изобретение относится к новым соединениям, которые являются ингибиторами интерлейкин-1β-превращающего фермента (ИПФ), охарактеризованным конкретными структурными формулами; к фармацевтическим композициям, обладающим способностью ингибировать интерлейкин-1β-превращающие ферменты, способу лечения и профилактики заболеваний, выбранных из группы, состоящей из ИЛ-1-опосредованного аутоиммунного воспалительного, нейродегенеративного заболевания, а также способу выбора ингибитора ИПФ. 11 н. и 39 з.п. ф-лы, 6 табл.

Description

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее изобретение относится к новым классам соединений, которые являются ингибиторами интерлейкин-1β -превращающего фермента ("ICE", ИПФ). Инги данные соединения. Соединения и фармацевтические композиции по данному изобретению особенно хорошо подходят для ингибирования активности ИПФ и, следовательно, могут быть полезны для применения в качестве средств против интерлейкин-1(ИЛ-1)-опосредованных заболеваний, включая воспалительные заболевания, аутоиммунн биторы ИПФ по данному изобретению охарактеризованы специфическими структурными и физико-химическими признаками. Данное изобретение также относится к фармацевтическим композициям, содержащим ые заболевания и нейродегенеративные заболевания. Данное изобретение также относится к способам ингибирования активности ИПФ и способам лечения интерлейкин-1β -опосредованных заболеваний, используя соединения и композиции по данному изобретению.

ПРЕДПОСЫЛКИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Интерлейкин-1(ИЛ-1) является главным провоспалительным и иммунорегуляторным белком, который стимулирует дифференцировку и пролиферацию фибробластов, продукцию синовиальными клетками и хондроцитами простагландинов, коллагеназы и фосфолипазы, дегрануляцию базофилов и эозинофилов и активацию нейтрофилов. Oppenheim, J.H. et al., Immunology today, 7, стр.45-56 (1986). Он, как таковой, вовлечен в патогенез хронических и острых воспалительных и аутоимммунных заболеваний. ИЛ-1 преимущественно продуцируется моноцитами периферической крови в качестве части воспалительного ответа и существует в двух отдельных формах агонистов, ИЛ-1α , и ИЛ-1β . Mosely, B.S. et al., Proc. Nat. Acad,. Sci., 84, стр.4572-4576 (1987); Lonneman, G. et al., Eur. J. Immunol., 19, стр.1531-1536 (1989).

ИЛ-1β синтезируется в виде биологически неактивного предшественника, преИЛ-1β . ПреИЛ-1β не имеет традиционной лидерной последовательности и не процессируется сигнальной пептидазой. March, C.J., Nature, 315, стр.641-647 (1985). Напротив, преИЛ-1β расщепляется интерлейкин-1β -превращающим ферментом (ИПФ) между Asp-116 и Ala-117 с получением биологически активного С-концевого фрагмента, обнаруживаемого в сыворотке и синовиальной жидкости человека. Sleath, P.R., et al., J. Biol. Chem., 265, стр.14526-14528 (1992); A.D. Howard et al., J. Immunol., 147, стр.2964-2969 (1991). Процессинг с помощью ИПФ также необходим для транспорта зрелого ИЛ-1β через клеточную мембрану.

ИПФ является цистеиновой протеазой, локализованной преимущественно в моноцитах. Он превращает предшественник ИЛ-1β в зрелую форму. Black, R.A. et al., FEBS Lett., 247, стр.386-390 (1989); Kostura, M.J. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 86, стр.5227-5231 (1989). Оказывается, что ИПФ или его гомологи также вовлечены в регуляцию клеточной гибели, или апоптоза. Yuan, J. et al., Cell, 75, стр.641-652 (1993); Miura, M. et al., Cell, 75, стр.653-660 (1993); Nett-Fiordalisi, M.A. et al., J. Cell Biochem., 17 В, стр.117 (1993). В частности, считается, что ИПФ или гомологи ИПФ связаны с регуляцией апоптоза в нейродегенеративных заболеваниях, таких как болезни Альцгеймера и Паркинсона. Marx, J. and M. Baringa, Science, 259, стр.760-762 (1993); Gagliardini, V. et al., Science, 263, стр.826-828 (1994).

Ранее ИПФ описывали как гетеродимер, состоящий из двух субъединиц, р20 и р10 (молекулярная масса 20 кДа и 10 кДа соответственно). Данные субъединицы получаются из профермента 45 кДа (р45) в виде р30-формы посредством активации аутокаталитического механизма. Thornberry, N.A. et al., Nature, 356, стр.768-774 (1992). Профермент ИПФ подразделяют на несколько функциональных доменов: продомен (р14), субъединица р22/20, полипептидный линкер и субъединица р10. Thornberry et al., выше; Casano et al., Genomics, 20, стр.474-481 (1994).

р45 был охарактеризован целиком последовательностями кДНК и аминокислотной последовательностями. Заявки на патенты РСТ WO 91/15577 и WO 94/00154. Также известны кДНК- и аминокислотные последовательности р20 и р10. Thornberry et al., выше. Мышиный и крысиный ИПФ также были секвенированы и клонированы. Они обладают высокой гомологией аминокислотной последовательности и последовательности нуклеиновых кислот с человеческим ИПФ. Miller, D.K. et al., Ann. N.Y. Acad. Sci., 696, стр.133-148 (1993); Molineaux, S.M. et al., Proc. Nat. Acad. Sci., 90, стр.1809-1813 (1993). Однако знание первичной структуры ИПФ не позволяет предсказать его третичную структуру. Также не дает оно и понимания структурных, конформационных и химических взаимодействий ИПФ и его субстрата преИЛ-1β или других субстратов или ингибиторов.

Ингибиторы ИПФ представляют собой класс соединений, применяемый для подавления воспаления или апоптоза или и того, и другого. Были описаны пептидные и пептидильные ингибиторы ИПФ. Заявки на патенты РСТ WO 91/15577; WO 93/05071; WO 93/09135; WO 93/14777 и WO 93/16710; и заявка на европейский патент 547699. Однако благодаря своей пептидной природе такие ингибиторы обычно характеризуются нежелательными фармакологическими свойствами, такими как плохая всасываемость при пероральном применении, низкая устойчивость и ускоренный метаболизм. Plattner, J.J. и D.W. Norbeck, in Drug Discovery Technologies, C.R. Clark и W.H. Moos, ред. (Ellis Horwood, Chichester/England, 1990), стр.92-126. Это затрудняло разработку эффективных лекарств на их основе.

Следовательно, существует потребность в соединениях, которые могут эффективно ингибировать активность ИПФ, для применения в качестве средств для предотвращения и лечения хронических и острых форм ИЛ-1-опосредованных заболеваний, включая различные раковые заболевания, а также воспалительные, аутоиммунные и нейродегенеративные заболевания.

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее изобретение относится к новым классам соединений и к их фармацевтически приемлемым производным, которые используются в качестве ингибиторов ИПФ. Данные соединения могут использоваться как отдельно, так и в сочетании с другими терапевтическими или профилактическими средствами, такими как антибиотики, иммуномодуляторы или другие противовоспалительные средства, для лечения или профилактики заболеваний, опосредованных ИЛ-1. В соответствии с предпочтительным осуществлением соединения по данному изобретению способны связываться с активным участком ИПФ и ингибировать активность данного фермента.

Основным объектом данного изобретения являются новые классы ингибиторов ИПФ. Данные новые классы ингибиторов ИПФ характеризуются следующими структурными и физико-химическими признаками:

а) первый и второй связывающий водород радикал, каждый из указанных радикалов способен образовывать водородную связь с различным скелетным атомом ИПФ, причем указанный атом скелета выбран из группы, включающей карбонильный кислород Arg-341, амидную-NН-группу Аrg-341, карбонильный кислород Ser-339 и амидную-NH-группу Ser-339;

б) первичный и вторичный умеренно гидрофобный радикал, каждый из указанных радикалов способен связываться с отдельным связывающим "карманом" ИПФ, когда к нему присоединен ингибитор, причем указанный связывающий "карман" выбран из группы, включающей Р2-связывающий "карман", Р3-связывающий "карман", Р4-связывающий "карман" и Р’-связывающий "карман"; и

в) электроотрицательный радикал, содержащий один или несколько электроотрицательных атомов, причем указанные атомы присоединены к одному и тому же атому или к соседним атомам в радикале и указанный радикал способен образовывать одну или несколько водородных связей или солевых мостиков между остатками в P1-связывающем "кармане" ИПФ.

Объектом данного изобретения является также способ идентификации, моделирования и прогнозирования ингибиторов ИПФ, включающий стадии:

а) выбора соединения-кандидата определенной химической структуры, содержащего, по крайней мере, две связывающие водород группы, по крайней мере, два умеренно гидрофобных радикала и один электроотрицательный радикал, содержащий один или несколько электроотрицательных атомов, присоединенных или к одному и тому же атому, или к соседним атомам электроотрицательной группы;

б) установления конформации с низкой энергией для присоединения указанного соединения к активному участку ИПФ;

в) оценки способности указанного соединения в указанной конформации образовывать, по крайней мере, две водородные связи с неуглеродными атомами скелета ИПФ из Аrg-341 и Ser-339;

г) оценки способности указанного соединения в указанной конформации связываться, по крайней мере, с двумя связывающими "карманами" ИПФ, выбранными из группы, включающей Р2-связывающий "карман", Р3-связывающий "карман", Р4-связывающий "карман" и Р’-связывающий "карман";

д) оценки способности указанного соединения в указанной конформации взаимодействовать с P1-связывающим "карманом" ИПФ; и

е) принятия или отклонения указанного соединения-кандидатуры в качестве ингибитора ИПФ, основанное на установлениях и оценках, выполненных на предыдущих этапах.

Следующим объектом данного изобретения являются новые классы ингибиторов ИПФ, представленные формулами:

α

,

σ

,

π

,

γ

δ

.

СОКРАЩЕНИЯ И ОПРЕДЕЛЕНИЯ

Сокращения

Определения

Здесь используются следующие термины.

Термин "активный участок" относится к любому или ко всем из следующих участков в ИПФ: субстрат-связывающий участок, участок, где присоединяется ингибитор, и участок, где происходит расщепление субстрата. Активный участок характеризуется, по крайней мере, следующими аминокислотными остатками: 173, 176, 177, 178, 179, 180, 236, 237, 238, 239, 244, 248, 283, 284, 285, 290, 338, 339, 340, 341, 342, 343, 344, 345, 348, 352, 381, 383, используя последовательность и нумерацию в соответствии с Thornberry et al., выше.

Термины "Р-связывающий "карман"", "подучасток S", ""карман" S" и тому подобное относятся к связывающим подучасткам или частям субстрат-связывающего участка на молекуле ИПФ. Аминокислотным остаткам субстрата присваивают обозначения в соответствии с их положением относительно прерываемой связи, то есть связи, прерываемой протеазой. Остатки обозначаются как P1, P2 и т.д. в случае их направленности в сторону N-конца субстрата и как Р1’, P2’ и т.д. в случае их направленности в сторону С-конца. Части ингибитора, которые соответствуют остаткам Р или Р’ субстрата, также обозначаются Р1, Р1’ и т.д., по аналогии с субстратом. Связывающие подучастки молекулы ИПФ, которые воспринимают остатки, обозначенные Р1, Р1’ и т.д., обозначаются как S1, S1’ и т.д. или могут быть альтернативно обозначены как "Р1-связывающий "карман"" и т.д. [I. Schechter и A. Berger, "On the Size of the Active Site in Proteases", Biochem. Biophys. Res. Commun., том 27, стр.157-162 (1967)].

Термины "Р2-связывающий "карман"" или "подучасток S2" активного участка ИПФ являются эквивалентными и определяются как пространство, окруженное аминокислотными остатками Pro-290, Val-338 или Тrр-340.

Термины "Р3-связывающий "карман"" или "подучасток S3" активного участка ИПФ являются эквивалентными и определяются как пространство, окруженное аминокислотными остатками Pro-177, Arg-178, Thr-180, Аrg-341 или Pro-343.

Термины "Р4-связывающий "карман"" или "подучасток S4" активного участка ИПФ являются эквивалентными и определяются как пространство, окруженное аминокислотными остатками His-342, Met-345, Val-348, Arg-352, Asp-381, Arg-383 или Trp-340.

Термины "P1-связывающий "карман"" или "подучасток S1" активного участка ИПФ являются эквивалентными и определяются как пространство, окруженное аминокислотными остатками Arg-179, His-237, Gln-283 или Arg-341.

Термины "Р’-связывающий "карман"" или "подучасток S’" активного участка ИПФ являются эквивалентными и определяются как пространство, окруженное аминокислотными остатками Phe-173, Ile-176, His-237, Gly-238, Ile-239, Cys-244 или His-248.

Термин "гидрофобный" относится к радикалу, который имеет тенденцию не растворяться в воде и является жирорастворимым. Гидрофобные радикалы включают, но не ограничиваются ими, углеводороды, такие как алканы, алкены, алкины, циклоалканы, циклоалкены, циклоалкины и ароматические соединения, такие как арилы, определенные насыщенные и ненасыщенные гетероциклы, и радикалы, которые по существу подобны боковым цепям гидрофобных природных и не природных α -аминокислот, включая валин, лейцин, изолейцин, метионин, фенилаланин, α -аминоизобутановую кислоту, аллоизолейцин, тирозин и триптофан.

Термин "умеренно гидрофобный" относится к гидрофобному радикалу, в котором один или два атома углерода замещены более полярными атомами, такими как кислород или азот.

Термин "гетероцикл" или "гетероциклический" относится к стабильному моно- и полициклическому соединению, которое может необязательно содержать одну или две двойные связи или может необязательно содержать одно или более ароматических колец. Каждый гетероцикл состоит из атомов углерода и от одного до четырех гетероатомов, независимо выбранных из группы, включающей азот, кислород и серу. Как применяется здесь, термины "гетероатомы азота" и "гетероатомы серы" включают в себя любую окисленную форму азота или серы и кватернизированную форму любого основного азота. Гетероциклы, определенные выше, включают, например, пиримидинил, тетрагидрохинолил, тетрагидроизохинонлинил, пиринил, пиримидил, индолинил, бензимидазолил, имидазолил, имидазолиноил, имидазолидинил, хинолил, изохинолил, индолил, пиридил, пирролил, пирролинил, пиразолил, пиразинил, хиноксолил, пиперидинил, морфолинил, тиаморфолинил, фурил, тиенил, триазолил, тиазолил, β -карболинил, тетразолил, тиазолидинил, бензофураноил, тиаморфолинилсульфон, бензоксазолил, оксопиперидинил, оксопирролидинил, оксоазепинил, азепинил, изоксазолил, тетрагидропиранил, тетрагидрофуранил, тиадиазолил, бензодиоксолил, бензотиенил, тетрагидротиофенил и сульфоланил. Дальнейшие гетероциклы описаны в A.R. Katritzky и C.W. Reeds, ред., Comprehensive Heterocyclic Chemistry: The Structure, Reactions, Synthesis and Use of Heterocyclic Compounds, Том 1-8, Pergamon Press, NY (1984).

Термин "циклоалкил" относится к моно- или полициклической группе, которая содержит от 3 до 15 углеродов и может необязательно содержать одну или две двойные связи. Примеры включают циклогексил, адамантил и норборнил.

Термин "арил" относится к моно- или полициклической группе, которая содержит 6, 10, 12 или 14 углеродов, в которой, по крайней мере, одно кольцо является ароматическим. Примеры включают фенил, нафтил и бифенил.

Термин "гетероароматический" относится к моно- или полициклической группе, которая содержит от 1 до 15 атомов углерода и от 1 до 4 гетероатомов, каждый из которых независимо выбран из группы, включающей серу, азот и кислород, и которая дополнительно содержит от 1 до 3 пяти- или шестичленных колец, по крайней мере, один из которых является ароматическим.

Термин "альфа-аминокислота" (α -аминокислота) относится как к природным аминокислотам, так и к другим, "небелковым", α -аминокислотам, обычно используемым специалистами в области химии пептидов при получении синтетических аналогов природных пептидов, включая D- и L-формы. Природными аминокислотами являются глицин, аланин, валин, лейцин, изолейцин, серин, метионин, треонин, фенилаланин, тирозин, триптофан, цистеин, пролин, гистидин, аспарагиновая кислота, аспарагин, глютаминовая кислота, глютамин, γ -карбоксиглютаминовая кислота, аргинин, орнитин и лизин. Примеры "небелковых" альфа-аминокислот включают гидроксилизин, гомосерин, гомотирозин, гомофенилаланин, цитруллин, кинуренин, 4-аминофенилаланин, 3-(2-нафтил)аланин, 3-(1-нафтил)аланин, метионинсульфон, т-бутилаланин, т-бутилглицин, 4-гидроксифенилглицин, аминоаланин, фенилглицин, винилаланин, пропаргилглицин, 1,2,4-триазоло-3-аланин, 4,4,4-трифтортреонин, тиронин, 6-гидрокситриптофан, 5-гидрокситриптофан, 3-гидроксикинуренин, 3-аминотирозин, трифторметилаланин, 2-тиенилаланин, (2-(4-пиридил)этил)цистеин, 3,4-диметоксифенилаланин, 3-(2-тиазолил)аланин, иботеновая (ibotenic) кислота, 1-амино-1-циклопентанкарбоновая кислота, 1-амино-1-циклогексанкарбоновая кислота, хисквалиновая (quisqualic) кислота, 3-трифторметилфенилаланин, 4-трифторметилфенилаланин, циклогексилаланин, циклогексилглицин, тиогистидин, 3-метокситирозин, эластатиналь, норлейцин, норвалин, аллоизолейцин, гомоаргинин, тиопролин, дегидропролин, гидроксипролин, изонипекотиновая кислота, гомопролин, циклогексилглицин, α -амино-н-бутановая кислота, циклогексилаланин, аминофенилбутановая кислота, фенилаланины, замещенные в орто-, мета- или пара-положении фенильного радикала одним или двумя из следующих групп: (С₁-С₄)алкильной, (С₁-С₄)алкокси, галогеновой или нитрогруппой или замещенные метилендиоксигруппой; β -2- и 3-тиенилаланином, β -2- и 3-фуранилаланином, β -2-, 3- и 4-пиридилаланином, β -(бензотиенил-2- и 3-ил)аланином, β -(1- и 2-нафтил)аланином, O-алкилированными производными серина, треонина или тирозина, S-алкилированным цистеином, S-алкилированным гомоцистеином, O-сульфатными, O-фосфорными и O-карбоновыми эфирами тирозина, 3-сульфотирозина, 3-карбокситирозина, 3-фосфотирозина, 4-метансульфоновым эфиром тирозина, 4-метанфосфоновым эфиром тирозина, 3,5-дииодтирозина, 3-нитротирозина, ε -алкиллизина и дельта-алкилорнитина. Каждая из данных α -аминокислот может быть замещена метильной группой в альфа-положении, галогеном в любом ароматическом остатке α -аминовой боковой цепи или подходящей защитной группой атомов О, N или S остатков боковых цепей. Подходящие защитные группы описаны в "Protective Groups in Organic Synthesis", T.W. Greene и P.G.M. Wuts, J. Wiley & Sons, NY, NY, 1991.

Термин "остаток боковой цепи α -аминокислоты" относится к химическому радикалу, который присоединен к α -углероду альфа-аминокислоты.

Термин "биоизостерическое замещение –СО₂Н" относится к группе, которая может замещать карбоксильную группу в биологически активных молекулах. Примеры таких групп описаны в Christopher A. Lipinsky, "Bioisosteres in Drug Design" Annual Reports in Medical Chemistry, 21, стр. 286-88 (1986) и в C.W. Thornber, "Isosterism and Molecular Modification in Drug Design" Chemical Society Reviews, стр. 563-580 (1979).

Термин "ассоциирование" применяют в отношении условия сближения ингибитора или его частей и молекулы ИПФ или ее частей, где непосредственная близость энергетически выгодна при электростатическом или вандерваальсовом взаимодействиях.

Термин "водородная связь" относится к благоприятному взаимодействию, которое имеет место всякий раз, когда подходящий атом-донор, X, отдает протон, Н, а подходящий атом-акцептор, Y, находится на удалении между 2,5

и 3,5

и где угол X-H---Y больше 90 градусов. Подходящие атомы-доноры и акцепторы хорошо известны в медицинской химии (G.C. Pimentel и A.L. McClellan, The Hydrogen Bond, Freeman, San Francisco, 1960; R.Taylor и O.Kennard, "Hydrogen Bond Geometry in Organic Crystals", Accounts of Chemical Research, стр.320-326 (1984)).

Термин "солевой мостик" относится к нековалентному притяжению между положительно заряженным радикалом (Р) и отрицательно заряженным радикалом (N), когда расстояние между центрами масс Р и N составляет от 2 до 6 ангстрем. В расчет центра масс включаются атомы, которые могут содержать формальный заряд, и атомы, непосредственно примыкающие к ним. Например, солевой мостик может образовываться между положительно заряженной гуанидиниевой боковой цепью остатка аргинина и отрицательно заряженной карбоксилатной боковой цепью остатка глютамата. Солевые мостики хорошо известны в медицинской химии (L. Stryer, Biochemistry, Freeman, San Francisco, (1975); К.A. Dill, "Dominant Forces in Protein Folding", Biochemistry, 29, №31, стр.7133-7155, (1990)).

Термин "центр масс" относится к точке в трехмерном пространстве, которая представляет собой вывешенное среднее положение масс, составляющих объект.

Термины "скелетная цепь" и "скелет" относятся к части полипептида, которая содержит повторяющуюся единицу -СО-СН-NH-.

Термин "каркас" ("scaffold") относится к структурному строительному блоку, который образует основу ингибитора ИПФ по данному изобретению. Различные радикалы и функциональные группы имеют тенденцию присоединяться к каркасу. Каркасы по данному изобретению изображены, таким образом, имеющими открытые валентности. Различные каркасы ингибиторов ИПФ по данному изобретению включают части:

или

В данных каркасах радикалы NH и СО или SO₂ представляют собой первый и второй радикалы, образующие водородные связи, причем каждый указанный радикал способен образовывать водородную связь с скелетным атомом ИПФ, причем указанный атом скелета выбран из группы, включающей карбонильный кислород Аrg-341, амид-NH-Аrg-341, карбонильный кислород Ser-339 и амид-NH-Ser-339.

Термин "замещать" относится к замещению атома водорода в соединении замещающей группой. В данном изобретении те атомы водорода, которые образуют часть радикала, образующего водородные связи, который способен образовывать водородную связь с карбонильным кислородом Аrg-341 ИПФ или карбонильным кислородом Ser-339 ИПФ, исключаются из замещения. Данные исключенные атомы водорода включают те, которые входят в состав -NH-группы, которая является альфа-группой по отношению к Z- или -СО-группе, и обозначаются скорее как -NH-, нежели как группа Х или какое-либо другое обозначение на следующих диаграммах: от (а) до (t) включительно, от (v) до (y) включительно и от (I) до (VIID) включительно.

Термин "прямая цепь" относится к последовательной неразветвленной цепи ковалентно связанных членов, то есть атомов, которые образуют часть кольца. Неразветвленная цепь и кольцо, часть которого она образует, могут быть замещены, но данные заместители не являются частью неразветвленной цепи.

Термин "К_i" относится к числовому значению эффективности соединения для ингибирования активности фермента-мишени, такого как ИПФ, Низкие значения K_i отражают высокую эффективность. Значение K_i проставляет собой данные, полученные путем подгонки экспериментально определенной скорости к стандартным уравнениям ферментативной кинетики (смотри I.H. Segel, Enzyme Kynetics, Wiley-Interscience, 1975).

Термин "минимизировать" относится к систематическому изменению атомной геометрии молекулы или молекулярного комплекса таким образом, чтобы любое дальнейшее малейшее нарушение" атомной геометрии вызывало бы падение общей энергии системы, что измеряется посредством молекулярно-механического силового поля. Минимизация и молекулярно-механические силовые поля хорошо известны в вычислительной химии [U. Burkert и N.L. Allinger, Molecular Mechanics, ACS Monograph 177, American Chemical Society, Washington, D.C., 1982, стр.59-78].

Термин "энергия деформации" применяется в данной заявке по отношению к разнице между свободной энергией конформации соединения и связанной энергией конформации данного соединения, когда оно связывается с ИПФ. Энергия деформации может быть определена с помощью следующих стадий: оценка энергии молекулы, когда она имеет конформацию, необходимую для связывания с ИПФ. Затем минимизация и повторная оценка энергии - это есть свободная энергия конформации. Энергия деформации для присоединения потенциального ингибитора к ИПФ представляет собой разницу между свободной энергией конформации и связанной энергией конформации. В предпочтительном осуществлении энергия деформации ингибитора по настоящему изобретению составляет менее чем около 10 ккал/моль.

Термин "пациент", как используется в данной заявке, относится к любому млекопитающему, в особенности к человеку.

Термин "фармацевтически эффективное количество" относится к количеству, эффективному для лечения или уменьшения интенсивности ИЛ-1-опосредованного заболевания пациента. Термин "профилактически эффективное количество" относится к количеству, эффективному для предотвращения или существенного снижения заболеваемости пациента ИЛ-1-опосредованными заболеваниями.

Термин "фармацевтически приемлемый носитель или адъювант" относится к нетоксичному носителю или адъюванту, который может быть введен пациенту совместно с соединением по данному изобретению и который не нарушает фармакологическую активность последнего.

Термин "фармацевтически приемлемое производное" означает любую фармацевтически приемлемую соль, сложный эфир или соль такого сложного эфира соединения по данному изобретению или любого другого соединения, которые по введении реципиенту способны давать (прямо или косвенно) соединение по данному изобретению или анти-ИПФ-активный метаболит или его остаток.

Фармацевтически приемлемые соли соединений по данному изобретению включают, например, соли фармацевтически приемлемых неорганических и органических кислот и оснований. Примеры подходящих кислот включают хлористо-водородную, бромисто-водородную, серную, азотную, хлорную, фумаровую, малеиновую, фосфорную, гликолевую, молочную, салициловую, янтарную, толуол-п-сульфоновую, винную, уксусную, лимонную, метансульфоновую, муравьиную, бензойную, малоновую, нафталин-2-сульфоновую и бензосульфоновую кислоты. Другие кислоты, как например щавелевая, хотя и не являются сами по себе фармацевтически приемлемыми, могут применяться при получении солей, применяемых в качестве промежуточных продуктов для получении соединений по изобретению и их фармацевтически приемлемых солей прибавления кислот. Соли подходящих оснований включают соли щелочных металлов (например, натрия), щелочно-земельных металлов (например, магния), аммония и N-(С_1-4 aлкилa)

\binom{+}{4}

.

Данное изобретение также охватывает "квартернизацию" любой основной азотсодержащей группы соединений, описанных здесь. Основной азот может быть квартернизирован любыми агентами, известными специалистам в данной области, включая, например, низшие алкил-галогениды, такие как, например, метил, этил, пропил и бутилхлориды, бромиды и иодиды; диалкилсульфаты, включая диметил, диэтил, дибутил и диамилсульфаты; галогениды с длинными цепями, такие как, децил, лаурил, миристил и стеарилхлориды, бромиды и иодиды; и аралкилгалогениды, включая бензил и фенэтилбромиды. Посредством такой квартернизации могут быть получены водо- или маслорастворимые или диспергируемые продукты.

Ингибиторы ИПФ по данному изобретению могут содержать один или более "асимметрических" атомов углерода и, таким образом, могут существовать в виде рацематов и рацемических смесей; отдельных энантиомеров, диастереомерных смесей и отдельных диастереомеров. Все такие изомерные формы данных соединений специально включены в настоящее изобретение. Каждый стерический углерод может находиться в R- или S-конфигурации. Хотя специфические соединения и каркасы, примеры которых приводятся в данной заявке, могут быть изображены в виде конкретной стереохимической конфигурации, соединения и каркаса, имеются в виду также имеющие и противоположную стереохимию в любом данном хиральном центре соединения или их смеси.

Ингибиторы ИПФ по данному изобретению могут содержать кольцевые структуры, которые могут быть необязательно замещены по углероду, азоту или другим атомам различными заместителями. Такие кольцевые структуры могут быть замещены однократно или многократно. Предпочтительно, кольцевые структуры содержат от 0 до 3 заместителей. Когда заместителей много, каждый заместитель может быть выбран независимо от любого другого заместителя до тех пор, пока сочетание заместителей приводит к образованию устойчивого соединения.

Изобретение представляет только те сочетания заместителей и вариации, которые ведут к образованию устойчивых соединений. Термин "устойчивый", как здесь используется, относится к соединениям, которые обладают устойчивостью, достаточной для их получения и введения млекопитающему способами, известными в данной области. Обычно такие соединения устойчивы при температуре 40° С или ниже при отсутствии влаги или других химически реакционноактивных условий в течение, по крайней мере, недели.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Для более полного понимания описываемого здесь изобретения, далее следует подробное описание.

Заявители обнаружили, что соединения, обладающие следующим новым сочетанием признаков, являются неожиданно эффективными ингибиторами ИПФ:

а) первый и второй связывающий водород радикал, каждый из указанных радикалов способен образовывать водородную связь с различным атомом скелета ИПФ, причем указанный атом скелета выбран из группы, включающей карбонильный кислород Аrg-341, амидную-NН-группу Аrg-341, карбонильный кислород Ser-339 и амидную-NH-группу Ser-339;

б) первый и второй умеренно гидрофобный радикал, каждый из указанных радикалов способен связываться с отдельным связывающим "карманом" ИПФ, когда к нему присоединен ингибитор, причем указанный связывающий "карман" выбран из группы, включающей Р2-связывающий "карман", Р3-связывающий "карман", Р4-связывающий "карман" и Р’-связывающий "карман"; и

Предпочтительно любой умеренно гидрофобный радикал ассоциирован с Р2-связывающим "карманом" ИПФ, таким образом, что:

а) расстояние от центра масс умеренно гидрофобного радикала в Р2-связывающем "кармане" до карбонильного кислорода Аrg-341 ИПФ составляет от около 7,1

до около 12,5

;

б) расстояние от центра масс умеренно гидрофобного радикала в Р2-связывающем "кармане" до амидного азота Аrg-341 ИПФ составляет от около 6,0

до около 12

; и

в) расстояние от центра масс умеренно гидрофобного радикала в Р2-связывающем "кармане" до карбонильного кислорода Ser-339 ИПФ составляет от около 3,1

до около 9,5

.

Предпочтительно любой умеренно гидрофобный радикал ассоциирован с Р3-связывающим "карманом" ИПФ, таким образом, что:

а) расстояние от центра масс умеренно гидрофобного радикала в Р3-связывающем "кармане" до карбонильного кислорода Аrg-341 ИПФ составляет от около 3,9

до около 9,5

;

б) расстояние от центра масс умеренно гидрофобного радикала в Р3-связывающем "кармане" до амидного азота Аrg-341 ИПФ составляет от около 5,4

до около 11

; и

в) расстояние от центра масс умеренно гидрофобного радикала в Р3-связывающем "кармане" до карбонильного кислорода Ser-339 ИПФ составляет от около 7,0

до около 13

.

а) расстояние от центра масс умеренно гидрофобного радикала в Р4-связывающем "кармане" до карбонильного кислорода Аrg-341 ИПФ составляет от около 4,5

до около 7,5

;

б) расстояние от центра масс умеренно гидрофобного радикала в Р4-связывающем "кармане" до амидного азота Аrg-341 ИПФ составляет от около 5,5

до около 11

; и

в) расстояние от центра масс умеренно гидрофобного радикала в Р4-связывающем "кармане" до карбонильного кислорода Ser-339 ИПФ составляет от около 8

до около 11

.

Предпочтительно любой умеренно гидрофобный радикал ассоциирован с Р’-связывающим "карманом" ИПФ, таким образом, что

а) расстояние от центра масс умеренно гидрофобного радикала в Р’-связывающем "кармане" до карбонильного кислорода Аrg-341 ИПФ составляет от около 11

до около 16

;

б) расстояние от центра масс умеренно гидрофобного радикала в Р’-связывающем "кармане" до амидного азота Аrg-341 ИПФ составляет от около 10

до около 15

; и

в) расстояние от центра масс умеренно гидрофобного радикала в Р’-связывающем "кармане" до карбонильного кислорода Ser-339 ИПФ составляет от около 8

до около 12

.

Более предпочтительно все из вышеуказанных ассоциативных условий встречаются в соединениях по данному изобретению.

Специалисты в данной области высоко ценят то, что существует много способов моделирования ингибиторов по настоящему изобретению. Эти же способы могут применяться при выборе кандидатуры соединения на скрининг в качестве ингибитора ИПФ. Данное моделирование или выбор может начинаться с выбора различных радикалов, которые заполняют связывающие "карманы".

Существует ряд путей выбора радикалов, занимающих отдельные связывающие "карманы". Он включает в себя визуальную проверку физической модели активного участка и встраивания вручную моделей выбранных радикалов в различные связывающие "карманы". Может использоваться моделирующее программное обеспечение, которое хорошо известно и доступно в данной области. Оно включает в себя QUANTA [Molecular Simulations, Inc., Burlington, MA, 1992], SYBYL [Molecular Modeling Software, Tripos Associates Inc., St. Louis, МО, 1992], AMBER [S.J. Weiner, P.A. Kollman, D.A. Case, U.C. Singh, C. Ghio, G. Alagona и P. Weiner, J. Am. Chem. Soc., том 106, стр. 765-784 (1984)] или CHARMM [(B.R. Brooks, R.E. Bruccoleri, B.D. Olafson, D.J. States, S. Swaminathan и М. Karplus, J. Соmр. Chem., том 4, стр.187-217 (1983)]. После данного этапа моделирования может быть проведена минимизация энергии с помощью стандартных молекулярно-механических силовых полей, как например CHARMM и AMBER. В дополнение к этому, существует ряд более специализированных компьютерных программ, помогающих в процессе выбора связывающих радикалов по данному изобретению. Он включает:

1. GRID (Goodford, P.J. A Computational Procedure for Determining Energetically Favorable Binding Sites on Biologically Important Macromolecules. J. Med. Chem., 28, стр.849-857 (1985)). GRID можно приобрести у Oxford University, Oxford, UK.

2. MCSS (Miranker, A.; Karplus, M. Functionality Maps of Binding Sites: A Multiple Copy Simultaneous Search Method. Proteins: Structure, Function and Genetics, 11, стр.29-34 (1991)). MCSS можно приобрести у Molecular Simulations, Burlington, MA.

3. AUTODOCK (Goodsell, D.S.; Olsen, A.J. Automated Docking of Substrates by Simulated Annealing. Proteins: Structure, Function and Genetics, 8, стр.195-202 (1990)). AUTODOCK можно приобрести у Scripps Research Institute, La Jolla, CA.

4. DOCK (Kuntz, I.D.; Blaney, J.M.; Oatley, S.J.; Langridge, R.; Ferrin, Т.Е. A Geometric Approach to Macromolecule-Ligand Interactions, J. Mol. Biol., 161, стр.269-288 (1982)). DOCK можно приобрести у University of California, San Francisco, CA.

Как только выбирают подходящие связывающие радикалы, их можно свести в один ингибитор. Данная сборка может осложняться присоединением различных радикалов к центральному каркасу. Процесс сборки может, например, быть выполнен путем визуальной проверки с последующим построением модели вручную, опять же используя программное обеспечение, как например Quanta или Sybyl. Для помощи в выборе путей объединения различных радикалов также может использоваться ряд других программ. Он включает:

1. CAVEAT (Bartlett, P.A.; Shea, G.T.; Telfer, S.J.; Waterman, S. CAVEAT: A Program to Facilitate the Structure-Derived Design of Biologically Active Molecules. В "Molecular Recognition in Chemical and Biological Problems", Special Pub., Royal Chem. Soc., 78, стр. 182-196 (1989)). CAVEAT можно приобрести у University of California, Berkely, CA.

2. Системы баз данных 3D, такие как MACCS-3D (MDL Information SysteMC, San Leandro, CA). По этой области Martin недавно сделал обзор (Martin, Y.C. 3D Database Searching in Drug Design. J. Med. Chem., 35, стр.2145-2154 (1992)).

3. HOOK (можно приобрести у Molecular Simulations, Burlington, MA).

В дополнение к вышеуказанному моделированию соединений-ингибиторов с помощью компьютера ингибиторы по данному изобретению могут конструироваться "de novo", используя как пустой активный участок, так и необязательно включая некоторые части известного ингибитора. Такие методы хорошо известны в данной области. Они включают, например:

1. LUDI (Bohm, H.J. The Computer Program LUDI: A New Method for the De Novo Design of Enzyme Inhibitors. J. Comp. Aid, Molec. Design, 6, 61-78 (1992)). LUDI можно приобрести у Biosym Technologies, San Diego, CA.

2. LEGEND (Nishibata, Y., Itai, A., Tetrahedron, 47, 8985 (1991)). LEGEND можно приобрести у Molecular Simulations, Burlington, MA.

3. Leap Frog (можно приобрести у Tripos Associates, St. Louis, МО).

Может применяться ряд Методик, обычно используемых в моделировании лекарств (для ссылки смотри: Cohen, N.C.; Blaney, J.M.; Humblet, C.; Gund, P.; Barry, D.C., "Molecular Modeling Software and Methods for Medicinal Chemistry", J. Med. Chem., 33, стр.883-894 (1990)). Также в химической литературе существует ряд примеров методик, которые могут быть приложены к специфическим проектам моделирования лекарств. Для ссылки смотри: Navia, M.A. и Murcko, M.A., "The Use of Structural Information in Drug Design", Current Opinions in Structural Biology, 2, стр.202-210 (1992). Некоторые примеры данных специфических приложений включают: Baldwin, J.J. et al., "Thienothiopyran-2-sulfonamides: Novel Topically Active Carbonic Anhydrase Inhibitors for the Treatment of Glaucoma", J. Med. Chem., 32, стр.2510-2513 (1989); Appelt, К. et al., "Design of Enzyme Inhibitors Using Interative Protein Crystallographic Analysis", J. Med. Chem., 34, стр.1925-1934 (1991); и Ealick, S.E. et al., Application of Crystallographic and Modeling Methods in the Design of Purine Nucleotide Phosphorylase Inhibitors", Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 88, стр.11540-11544 (1991).

Используя новое сочетание стадий по настоящему изобретению, опытный специалист может выгодно избежать потери времени и постановки дорогих экспериментов для определения фермент-ингибирующей активности специфических соединений. Метод также применим для облегчения рационального конструирования ингибиторов ИПФ и терапевтических и профилактических средств против ИЛ-1-опосредованных заболеваний. Соответственно, настоящее изобретение относится к таким ингибиторам.

Для проведения любой из вышеуказанных оценок, равно как и оценок, необходимых в скрининге кандидатуры соединения на предмет ИПФ-ингибирующей активности, может быть использовано множество традиционных методик. Обычно данные методики включают определение местоположения и ближайшего окружения данного радикала, занимаемое пространство связанного ингибитора, энергию деформации связи данного соединения и энергии электростатического взаимодействия. Примеры традиционных методик, применяемых для получения вышеуказанных оценок, включают: квантовую механику, молекулярную механику, молекулярную динамику, отбор образцов по Monte-Carlo, систематические исследования и методы дистанционной геометрии (G.R. Marshall, Ann. Rev. Pharmacol. Toxicol., 21, стр.193 (1987)). Для применения в выполнении данных методов было разработано специфическое программное обеспечение. Примеры программ, созданных для такого применения, включают: Gaussian 92, исправленная версия Е.2 (M.J. Frisch, Gaussian, Inc., Pittsburg, PA ©1993); AMBER, версия 4.0 (P.A. Kollman, University of California в San Francisco, ©1993); QUANTA/CHARMM [Molecular Simulations, Inc., Burlington, MA ©1992]; и Insight II/Discover (Biosym Technologies, Inc., San Diego, CA ©1992). Эти программы могут быть исполнены, например, используя рабочую станцию Silicon Graphics Indigo 2 или рабочую станцию IBM RISC/6000 модели 550. Другие дисковые системы и пакеты программного обеспечения будут известны и применимы, что очевидно для специалистов.

Различные классы активных ингибиторов ИПФ в соответствии с изобретением могут взаимодействовать с различными связывающими "карманами" активного участка ИПФ подобным образом. На пространственную структуру данных важных групп часто ссылаются как на фармакофор. Понятие фармакофора хорошо описано в литературе (D. Мауеr, С.В. Naylor, I. Motoc и G.R. Marshall, J. Соmр. Aided Molec. Design том 1, стр.3-16 (1987); A. Hopfinder и B.J. Burke, в Concepts and Applications of Molecular Similarity, M.A. Johnson и G.M. Maggiora, ред., Wiley (1990)).

Различные классы ингибиторов ИПФ по данному изобретению также могут использовать различные каркасы или ядерные структуры, но все данные ядра будут позволять необходимым радикалам размещаться в активном участке, так что могут быть получены все специфические взаимодействия, необходимые для связывания. Данные соединения наилучшим образом определяются с точки зрения их способности соответствовать фармакофору, то есть их структурной идентичности по отношению к форме и свойствам активного участка ИПФ.

Ингибиторы ИПФ по одному осуществлению данного изобретения содержат первый и второй радикалы, образующие водородные связи, первый и второй умеренно гидрофобные радикалы и электроотрицательный радикал, которые входят в состав или ковалентно присоединены к одному из следующих каркасов:

;

.

Ингибиторы ИПФ другого осуществления (А) данного изобретения имеют формулу α :

,

где Х₁ является СН или N;

g равен 0 или 1;

каждый J независимо выбран из группы, включающей -Н, -ОН и -F, при условии, что, когда первый и второй J присоединены к С, и указанный первый J является -ОН, указанный второй J является -Н;

m равен 0, 1 или 2;

Т является –Аr₃, -ОН, -СF₃, -СО-СО₂Н, -СО₂Н или любым биоизостерическим заместителем –СО₂Н;

R₁ выбран из группы, включающей следующие формулы, в которых кольцо может необязательно быть однократно или многократно замещено Q₁ по любому углероду, -R₅ по любому азоту или =O, -ОН, -СО₂Н или галогеном по любому атому и в которых насыщенное кольцо может необязательно быть ненасыщенным по одной или двум связям:

;

;

;

;

;

;

R₂₀ выбран из группы, включающей:

;

и

;

где каждое кольцо С независимо выбрано из группы, включающей бензо, пиридо, тиено, пирроло, фурано, тиазоло, изотиазоло, оксазоло, изоксазоло, пиримидо, имидазоло, циклопентил и циклогексил;

R₃ является

-CN,

-CH=CH-R₉,

-CH=N-O-R₉,

-(CH₂)_1-3-T₁-R₉,

-CJ₂-R₉,

-CO-R₁₃ или

каждый R₄ независимо выбран из группы, включающей:

-Н,

-Ar₁,

-R₉,

-T₁-R₉ и

-(CH₂)_1,2,3-T₁-R₉,

каждый T₁ независимо выбран из группы, включающей:

-СН=СН-,

-О-,

-S-,

-SO-,

-SO₂-,

-NR₁₀-,

-NR₁₀-CO-,

-CO-,

-O-CO-,

-СО-O-,

-CO-NR₁₀-,

-O-CO-NR₁₀-,

-NR₁₀-CO-O-,

-NR₁₀-CO-NR₁₀-,

-SO₂-NR₁₀-,

-NR₁₀-SO₂- и

-NR₁₀-SO₂-NR₁₀-,

каждый R₅ независимо выбран из группы, включающей:

-Н,

-Ar₁,

-CO-Ar₁,

-SО₂-Аr₁,

-R₉,

-CO-R₉,

-CO-O-R₉,

-SO₂-R₉,

R₆ и R₇, взятые вместе, образуют насыщенное 4-8-членное карбоциклическое кольцо или гетероциклическое кольцо, содержащее

-О-,

-S- или

-NH-, или

R₇ является -Н и

R₆ является -Н

-Ar₁,

-R₉ или

-(CH₂)_1,2,3-T₁-R₉;

каждый R₉ является C₁-₆ неразветвленной или разветвленной алкильной группой, необязательно однократно или многократно замещенной одной или двумя Аr₁-группами;

каждый R₁₀ независимо выбран из группы, включающей -Н или C_1-6 неразветвленную или разветвленную группу;

каждый R₁₃ независимо выбран из группы, включающей –Аr₂ и R₄;

каждый Ar₁ является циклической группой, независимо выбранной из группы, включающей арильную группу, которая содержит 6, 10, 12 или 14 атомов углерода и от 1 до 3 колец, циклоалкильную группу, которая содержит от 3 до 15 атомов углерода и от 1 до 3 колец, причем циклоалкильная группа необязательно бензоконденсирована, а гетероциклическая группа содержит от 5 до 15 атомов в цикле и от 1 до 3 колец, причем указанная гетероциклическая группа содержит, по крайней мере, одну гетероатомную группу, выбранную из -О-, -S-, -SO-, -SO₂, =N- и -NH-, причем указанная гетероциклическая группа необязательно содержит одну или несколько двойных связей, причем указанная гетероциклическая группа необязательно содержит одно или несколько ароматических колец, и указанная циклическая группа необязательно однократно или многократно замещена =O, -ОН, перфтор-С_1-3-aлкилом или –Q₁;

каждый Аr₂ независимо выбран из следующей группы, в которой любое кольцо может необязательно быть замещено –Q₁:

;

и

;

Аr₃ является циклической группой, выбранной из группы, включающей фенильное кольцо, 5-членное гетероароматическое кольцо и 6-членное гетероароматическое кольцо, причем указанные гетероароматические кольца содержат 1-3 гетероатомных групп, выбранных из -О-, -S-, -SO-, -SO₂-, =N- и -NH-, причем указанная циклическая группа необязательно однократно или многократно замещена =O, -ОН, галогеном, перфтор-С_1-3-алкилом или –СО₂Н;

каждый Q₁ независимо выбран из группы, включающей:

-Ar₁,

-R₉,

-T₁-R₉ и

-(CH₂)_1,2,3-T₁-R₉,

при условии, что когда –Аr₁ замещен Q₁-группой, которая содержит одну или несколько дополнительных –Аr₁-групп, указанные дополнительные –Аr₁-группы не замещены Q₁;

каждый Х независимо выбран из группы, включающей =N- и =СН-;

каждый Х₂ независимо выбран из группы, включающей -О-, -СН₂-, -NH-, -S-, -SO- и -SO₂-;

каждый Х₄ независимо выбран из группы, включающей –СH₂- и -NH-;

каждый Х₅ независимо выбран из группы, включающей

и

;

X₆ является СН или N при условии, что, когда X₆ является N в R-группе, обозначенной как (о), и Х₅ является СН, и Х₂ является СН₂, кольцо R₁-группы, обозначенной как (о), должно быть замещено Q₁ или бензоконденсировано;

каждый Y независимо выбран из группы, включающей –О- и -S-;

каждый Z является независимо СО или SO₂;

каждый а равен независимо 0 или 1;

каждый с равен независимо 1 или 2;

каждый d равен независимо 0, 1 или 2, и

каждый е равен независимо 0, 1, 2 или 3.

Ингибиторы ИПФ другого осуществления (В) по данному изобретению имеют формулу α :

α

,

X₁ является -СН;

g равен 0 или 1;

каждый J независимо выбран из группы, включающей -Н, -ОН и -F, при условии, что, когда первый и второй J связаны с С, и указанный первый J является -ОН, указанный второй J является -Н;

m равен 0, 1 или 2;

Т является -ОН, -СО-СО₂Н, -СО₂Н или любым биоизостерическим заместителем –СО₂Н;

R₁ выбран из группы, включающей следующие формулы, в которых любое кольцо может необязательно быть однократно или многократно замещено по Q₁ любому углероду, -R₅ по любому азоту или =O, -ОН, -СО₂Н или галогеном по любому атому, любое насыщенное кольцо может необязательно быть ненасыщенным по одной или двум связям; и где R₁ (е) и R₁ (y) необязательно бензоконденсированы;

;

;

;

;

; и

;

R₂₀ выбран из группы, включающей:

;

и

;

R₃ является

-CN,

-CH=CH-R₉,

-CH=N-O-R₉,

-(CH₂)_1-3-T₁-R₉,

-CJ₂-R₉,

-СО-R₁₃ или

-Н,

-Ar₁,

-R₉,

-T₁-R₉ и

-(CH₂)_1,2,3-T₁-R₉.

-СН=СН-,

-О-,

-S-,

-SO-,

-SO₂-,

-NR₁₀-,

-NR₁₀-CO-,

-CO-,

-O-СО-,

-СО-O-,

-CO-NR₁₀-,

-O-CO-NR₁₀-,

-NR₁₀-CO-O-,

-NR₁₀-CO-NR₁₀-,

-SO₂-NR₁₀-,

-NR₁₀-SO₂- и

-NR₁₀-SO₂-NR₁₀-,

-H,

-Ar₁,

-CO-Ar₁,

-SO₂-Ar₁,

-CO-NH₂,

-SO₂-NH₂,

-R₉,

-CO-R₉,

-CO-O-R₉,

-SO₂-R₉,

-О-,

-S- или

-NH-, или

R₇ является -Н и

R₆ является –Н,

-Ar₁,

-R₉ или

(СН₂)_1,2,3-T₁-T₉ или

остаток боковой цепи α -аминокислоты;

каждый R₉ является С₁-₆ неразветвленной или разветвленной алкильной группой, необязательно однократно или многократно замещенной -ОН, -F или =O и необязательно замещенной одной или двумя Ar₁-группами;

каждый R₁₀ независимо выбран из группы, включающей -Н или С_1-6 неразветвленную или разветвленную группу;

каждый R₁₃ независимо выбран из группы, включающей –Аr и R₄ и

;

каждый Ar₁ является циклической группой, независимо выбранной из группы, включающей арильную группу, которая содержит 6, 10, 12 или 14 атомов углерода и от 1 до 3 колец, циклоалкильную группу, которая содержит от 3 до 15 атомов углерода и от 1 до 3 колец, причем циклоалкильная группа необязательно бензоконденсирована, а гетероциклическая группа содержит от 5 до 15 атомов в цикле и от 1 до 3 колец, причем указанная гетероциклическая группа содержит, по крайней мере, одну гетероатомную группу, выбранную из -О-, -S-, -SO-, -SO₂-, =N- и -NH-, причем указанная гетероциклическая группа необязательно содержит одну или несколько двойных связей, причем указанная гетероциклическая группа необязательно содержит одно или несколько ароматических колец, и указанная циклическая группа необязательно однократно или многократно замещена –NH₂, -СО₂Н, -Cl, -F, -Br, -I, -NO₂, -CN, =O, -ОН, перфтор-С_1-3-алкилом,

, или –Q₁

каждый Аr₂ независимо выбран из следующей группы, в которой любое кольцо может необязательно быть однократно или многократно замещено –Q₁ и –Q₂:

-Ar₁,

-O-Ar₁,

-R₉,

-T₁-R₉ и

-(CH₂)_1,2,3-T₁-R₉,

каждый Q₂ независимо выбран из группы, включающей -ОН, -NH₂ , -СO₂Н, -Сl, -F, -Br, -I, -NO₂, -CN, СF₃ и

,

при условии, что, когда –Ar₁ замещен Q₁-группой, которая содержит одну или несколько дополнительных –Аr₁-групп, указанные дополнительные –Аr₁-группы не замещены Q₁;

каждый Х₃ независимо выбран из группы, включающей -СН₂-, -S-, -SO- и -SO₂-;

каждый Х₄ независимо выбран из группы, включающей -СН₂-, -NH-;

и

;

каждый Y независимо выбран из группы, включающей -О, -S- и -NH-;

каждый Z является независимо СО или SO₂;

каждый а равен независимо 0 или 1;

каждый с равен независимо 1 или 2;

каждый d равен независимо 0, 1 или 2, и

каждый е равен независимо 0, 1, 2 или 3,

при условии, что, когда

R₁ является (f),

R₆ является остатком боковой цепи α -аминокислоты, и

R₇ является -Н,

тогда (аа 1) и (аа 2) должны быть замещены Q₁;

также при условии, что, когда

R₁ является (о),

g равен 0,

J является -Н,

m равен 1,

R₆ является остатком боковой цепи α -аминокислоты,

R₇ является -Н,

Х₂ является –СН₂-,

Х₅ является

,

X₆ является

, и

R₃ является

или –CO-R₁₃, когда

R₁₃ является:

-CH₂-O-CO-Ar₁,

-CH₂-S-CO-Ar₁,

-CH₂-O-Ar₁,

-CH₂-S-Ar₁ или

-R₄, когда –R₄ является -Н;

тогда кольцо R₁ (о)-группы должно быть замещено Q₁ или бензоконденсировано; и

при условии, что, когда

R₁ является (w),

g равен 0,

J является -Н,

m равен 1,

Т является -СO₂Н или -CO-NH-OH,

Х₂ является О,

R₅ является бензилоксикарбонилом, и

кольцо С является бензо,

тогда R₃ не может быть -CO-R₁₃, когда:

R₁₃ является -СН₂-O-Аr₁, и

Ar₁ является 1-фенил-3-хлор- или 3-трифторметилпиразол-5-илом;

или, когда

R₁₃ является -CH₂-O-CO-Ar₁, и

Ar₁ является 2,6-дихлорфенилом.

Предпочтительными формами R₁-группы (а) для осуществления А и В являются:

; и

Предпочтительными формами R₁-группы (b) являются:

;

; и

.

Предпочтительными формами R₁-группы (с) являются:

; и

;

при условии, что когда R₁ является (с1),

g равен 0,

J является -Н,

m равен 1,

Т является –СО₂Н,

Х является N,

R₅ является бензилоксикарбонилом, и

R₆ является -Н,

тогда R₃ не может быть -CO-R₁₃, когда:

R₁₃ является –СH₂-О-Аr₁, и

Ar₁ является хлорзамещенным 1-фенил-3-трифторметилпиразол-5-илом или, когда

R₁₃ является –СН₂-О-СО-Аr₁, и

Аr₁ является 2,6-дихлорфенилом

и когда 2-положение кольца каркаса замещено пара-фторфенилом.

Предпочтительными формами R₁-группы (d) являются:

;

; и

.

Предпочтительными формами R₁-группы (е) являются:

;

;

;

которые необязательно бензоконденсированы;

и

;

при условии, что, когда R₁ является (е4),

g равен 0,

J является -Н,

m равен 1,

Т является –СО₂Н,

R₅ является бензилоксикарбонилом, и

с равен 1,

тогда R₃ не может быть -CO-R₁₃, когда:

R₁₃ является –СН₂-О-Аr₁, и

Ar₁ является 1-фенил-3-трифторметилпиразол-5-илом, где фенил необязательно замещен атомом хлора; или когда

R₁₃ является –СН₂-О-СО-Аr₁, и

Ar₁ является 2,6-дихлорфенилом

и когда 2-положение кольца каркаса замещено пара-фторфенилом; и

также при условии, что, когда

R₁ является (е7),

g равен 0,

J является -Н,

m равен 1,

Т является –СО₂Н или -CO-NH-OH,

R₅ является защитной группой атома N остатка боковой цепи аминокислоты, и

каждый с равен 1,

тогда R₃ не может быть -СО-R₁₃, когда

R₁₃ является:

-CH₂-O-CO-Ar₁,

-CH₂-S-CO-Ar₁,

-CH₂-O-Ar₁ или

-CH₂-S-Ar₁.

Предпочтительными формами R₁-группы (g) являются:

и

.

Предпочтительными формами R₁-группы (h) являются:

;

;

Предпочтительными формами R₁-группы (i) являются:

;

и

.

Предпочтительными формами R₁-группы (j) являются:

;

;

и

Предпочтительными формами R₁-группы (k) являются:

;

;

;

и

.

Предпочтительными формами R₁-группы (1) являются:

;

;

;

;

Предпочтительными формами R₁-группы (m) являются:

;

;

;

;

и

Предпочтительными формами R₁-группы (n) являются:

;

и

Предпочтительными формами R₁-группы (о) являются:

;

;

;

и

Предпочтительной формой R₁-группы (о) осуществления В является:

где Х₂ является -О-, -S-, -SO₂ или -NH-.

Для осуществлении А и В предпочтительными формами R₁-группы (р) являются:

;

;

и

Предпочтительными формами R₁-группы (q) являются:

;

;

;

;

и

.

Предпочтительными формами R₁-группы (r) являются:

;

и

.

Предпочтительными формами R₁-группы (s) являются:

;

;

и

.

Предпочтительными формами R₁-группы (t) являются:

;

и

.

Предпочтительными формами R₁-группы (v) являются:

;

;

и

.

Предпочтительной формой R₁-группы (w) осуществления В является:

где Х₂ является -О-, -S-, -SO₂ или -NH-.

Предпочтительными соединениями осуществлении А и В данного изобретения являются те, которые имеют формулу α , где

Х₁ является СН;

g равен 0;

J является -Н;

m равен 0 или 1, и Т является –Аr₃, -СО-СО₂Н, -СО₂Н или любым биоизостерическим заместителем –СО₂Н, или m равен 1 или 2, и Т является -ОН, -СF₃ или СО₂Н;

бoлее предпочтительное m равен 1, а Т является –СО₂Н;

R₁ является

;

;

или

;

R₂₀ является

;

или

где кольцо С является бензо;

R₃ является

-CO-R₁₃ или

;

более предпочтительным R₃ является любой из следующих 1), 2) или 3): 1)-CO-Ar₂, 2) -CO-R₉, где R₉ является С_3-6-алкилом с двумя Аr₁-группами или одной Аr₁-группой, которая сама по себе замещена Аr₁-группой, -C_1-2-Ar₁, -Cl, -СН₃ или –СF₃ или 3) -(CH₂)_1,2-T₁-R₉, где T₁ является –О- или -S-, и R₉ является С_1-2-алкилом, замещенным двумя Аr₁-группами или одной Аr₁-группой, которая сама по себе замещена Аr₁-группой, C_1-2-Ar₁, -Cl, -CH₃ или –СF₃;

R₄ является -Н или -R₉;

Т₁ является

-O-

-S-

-СО-

-O-СО-

-SO₂-;

когда R₁ является (а), (b), (k) или (m), R₅ предпочтительно является –Ar₁ или C_1-4-Ar₁;

когда R₁ является (с), (е), (f), (о) или (r), R₅ является предпочтительно –SO₂-Ar₁, -SО₂-R₉ или -CO-C_1-4-Ar₁;

R₇ является -Н, и R₆ является C_1-4-Ar₁;

R₁₀ является -Н или С_1-3 неразветвленной или разветвленной алкильной группой;

R₁₃ является –Аr₂;

Ar₁ является фенилом, нафтилом, пиридилом, бензотиазолилом, тиенилом, бензотиенилом, бензоксазолилом, 2-инданилом или индолилом;

Аr₂ предпочтительно замещен –Ar₁ или –С_1-4-Аr₁;

Аr₃ является фенилом, тиофеном, тиазолом, пиридином или оксазолом; и

Q₁ является -R₉ или -(СН₂)_1,2-Т₁-(СН₂)_1,3-Ar₁, где T₁ является –О- или -S-.

В связи с данным частным случаем мы предпочитаем соединения осуществления В данного изобретения, которые имеют формулу α , где:

X₁ является -СН;

g равен 0;

J является -Н;

m равен 0 или 1, и Т является -СО-СО₂Н или любым биоизостерическим заместителем –СО₂Н; или

m равен 1, и Т является –СО₂Н.

R₁ выбран из группы, включающей следующие формулы, в которых любое кольцо может необязательно быть однократно или многократно замещено Q₁ по любому углероду, -R₅ по любому азоту или =O, -ОН, -СО₂Н или галогеном по любому атому, и где (е) необязательно бензоконденсировано:

;

;

;

или

;

R₂₀ является

или

и с равен 1;

кольцо С является бензo, необязательно замещенным –С_1-3 алкилом, -O-С_1-3 алкилом, -Cl, -F или –СF₃;

R₃ является:

-CO-R₁₃ или

;

более предпочтительным R₃ является любой из следующих 1), 2) или 3): 1)-CO-Ar₂, 2) -CO-R₉, где R₉ является С_1-5-алкилом, замещенным Ar₁; или 3) CH₂-T₁-R₉, где T₁ является –О- или -S-, и R₉ является С_1-2-алкилом, замещенным одной Ar₁-группой;

R₄ является -Н или -R₉;

T₁ является

-O-

-S-

-CO-

-O-СО- или

-SO₂-;

когда R₁ является (а) и (b), R₅ предпочтительно является -Н, и

когда R₁ является (с), (е), (f), (о), (r), (w), (x) или (y), R₅ является предпочтительно

-CO-Ar₁,

-SO₂-Ar₁,

-CO-NH₂,

-CO-NH-Ar₁,

-CO-R₉,

-CO-O-R₉,

-SO₂-R₉ или

-CO-NH-R₉,

R₇ является -Н, и R₆ является

-Н,

-R₉ или

Ar₁;

R₉ является С_1-6 неразветвленной или разветвленной алкильной группой, необязательно замещенные =O и необязательно замещенные –Ar₁;

R₁₃ является

-Н,

-R₉,

-Аr₂ или

-CH₂-T₁-R₉,

более предпочтительно, когда –Аr₂ является (hh) и где (hh) необязательно однократно или многократно замещен –С_1-6 алкилом, -О-С_1-6 алкилом, -NH-C_1-6 алкилом, -N-(С_1-6алкилом)₂, -S-C_1-6 алкилом, -Cl, -F, -СF₃ или

,

Ar₁ является фенилом, нафтилом, пиридилом, бензотиазолилом, тиенилом, бензотиенилом, бензоксазолилом, 2-инданилом или индолилом, необязательно однократно или многократно замещенным -О-С_1-3 алкилом, -NH-C_1-3 алкилом, -N-(C_1-3алкилом)₂, -Cl, -F, -CF₃, -C_1-3 алкилом или

,

предпочтительно, когда Аr₂ является:

,

, или

,

каждый X независимо выбран из группы, включающей =N- и =СН-;

каждый Х₂ независимо выбран из группы, включающей -О-, -СН₂-, -NH-, -S-; -SO- и -SO₂-;

и

;

X₆ является

или

; и

Z является С=0;

при условии, что, когда

R₁ является (f),

R₇ является -Н,

тогда (аа1) и (аа2) должны быть замещены Q₁;

также при условии, что, когда

R₁ является (о),

g равен 0,

J является -Н,

m равен 1,

R₇ является -Н,

Х₂ является –СН₂-,

Х₅ является

,

X₆ является

и

R₃ является

, или

-CO-R_13,когда

R₁₃ является:

-CH₂-O-CO-Ar₁,

-CH₂-S-CO-Ar₁,

-СН₂-O-Аr₁,

-CH₂-S-Ar₁ или

-R₄, когда -R₄ является -Н;

тогда кольцо R₁(о)-группы должно быть замещено Q₁ или бензоконденсировано; и

при условии, что, когда

R₁ является (w),

g равен 0,

J является -Н,

m равен 1,

Т является -СO₂Н,

Х₂ является О,

R₅ является бензилоксикарбонилом и кольцо С является бензо,

тогда R₃ не может быть -СО-R₁₃, когда:

R₁₃ является -CH₂-O-Ar₁ и

Аr₁ является 1-фенил-3-трифторметилпиразол-5-илом, где фенил необязательно замещен атомом хлора;

или, когда R₁₃ является –СН₂-О-СО-Аr₁, тогда Аr₁ является 2,6-дихлорфенилом.

Предпочтительной формой R₁₃ является -CH₂-O-R₉, где R₉ является С_1-6 неразветвленная или разветвленная алкильная группа, необязательно замещенная =O и необязательно замещенная Ar₁;

другой предпочтительной формой R₁₃ является –CH₂-S-R₉, где R₉ является C_1-6 неразветвленной или разветвленной алкильной группой, необязательно замещенной Ar₁;

другой предпочтительной формой R₁₃ является -CH₂-O-R₉, где R₉ является С_1-6 неразветвленной или разветвленной алкильной группой, необязательно замещенной Аr₁;

другой предпочтительной формой R₁₃ является Н.

Более предпочтительной формой R₁-группы (а) является:

необязательно замещенная Q₁, где

R₅ является -Н;

R₇ является -Н; и

Z является С=O;

более предпочтительной формой R₁-группы (b) является

необязательно замещенная Q₁, где

R₅ является -Н;

R₇ является -Н; и

Z является С=O;

более предпочтительными формами R₁-группы (с) являются:

и

;

при условии, что когда R₁ является (с1),

g равен 0,

J является -Н,

m равен 1,

Т является –СО₂H,

Х является N,

R₅ является бензилоксикарбонилом, и

R₆ является -Н,

тогда R₃ не может быть -CO-R₁₃, когда:

R₁₃ является –CH₂-O-Ar₁ и

R₁₃ является –CH₂-O-CO-Ar₁, где

Ar₁ является 2,6-дихлорфенилом,

и где 2-положение кольца каркаса замещено пара-фторфенилом;

более предпочтительными формами R₁-группы (е) являются:

и

;

где с равен 2; и

и

которые необязательно бензоконденсированы,

где с равен 1 или 2;

при условии, что, когда R₁ является (е4),

g равен 0,

J является -Н,

m равен 1,

Т является –СО₂Н,

R₅ является бензилоксикарбонилом и

с равен 1,

тогда R₃ не может быть -СО-R₁₃, когда:

R₁₃ является –CH₂-O-Ar₁ и

Ar₁ является 1-фенил-3-трифторметилпиразол-5-илом, где фенил необязательно замещен атомом хлора; или, когда

R₁₃ является –CH₂-O-CO-Ar₁, где

Ar₁ является 2,6-дихлорфенилом,

и где 2-положение кольца каркаса замещено пара-фторфенилом; и

также при условии, что, когда

R₁ является (е7)

g равен 0,

J является -Н,

m равен 1,

Т является –СО₂Н, -CO-NH-OH или биоизостерическим заместителем –СО₂Н,

R₅ является защитной группой для атома N остатка боковой цепи α -аминокислоты, и

каждый с равен 1,

тогда R₃ не может быть -СО-R₁₃, когда

R₁₃ является:

-CH₂-O-CO-Ar₁,

-CH₂-S-CO-Ar₁,

-CH₂-O-Ar₁ или

-CH₂-S-Ar₁.

Более предпочтительной формой R₁-группы (f) является:

;

более предпочтительной формой R₁-группы (g) является:

где R₂₀ является (аа1), необязательно однократно или многократно замещенной Q₁; и

Z является С=O;

наиболее предпочтительной формой R₁-группы (h) является:

где R₂₀ является (аа1), необязательно однократно или многократно замещен Q₁; и

Z является С=O;

более предпочтительными формами R₁-группы (о) являются:

;

где d равен 1 или 2; и

;

более предпочтительными формами R₁-группы (r) являются:

;

и

необязательно замещенные Q₁;

более предпочтительной формой R₁-группы (w) является:

;

где

Х₂ является

-NH-,

-S-,

-О- или

-SO₂-;

необязательно замещенная R₅ или Q₁ по X₂, когда X₂ является -N-; и

кольцо С является бензо, замещенным –С_1-3 алкилом, -O-C_1-3 алкилом, -Cl, -F или –СF₃.

Когда R₁ является:

предпочтительные соединения по данному изобретению включают, но не ограничиваются:

; и

.

Предпочтительное соединение осуществления В данного изобретения включает формулу α , где R₁ является:

Предпочтительные соединения данного осуществления включают, но не ограничиваются:

;

;

;

;

;

;

;

;

;

;

;

;

;

;

.

Когда R₁ является:

предпочтительные соединения по данному изобретению включают, но не ограничиваются ими:

;

;

;

и

.

Предпочтительное соединение осуществления В по данному изобретению включает формулу α ,

где R₁ является:

и с равен 2;

m равен 1;

Т является –СО₂Н; и

R₃ является -СО-R₁₃.

Предпочтительные соединения данного осуществления включают, но не ограничиваются ими:

;

;

;

;

;

;

;

и

.

Когда R₁ является:

;

;

и

.

Когда R₁ является:

;

;

;

и

.

Когда R₁ является:

;

.

Предпочтительное соединение осуществления В данного изобретения включает формулу α , где

R₁ является:

X₂ является -NH-;

m равен 1;

Т является –СО₂Н;

R₃ является -СО-R₁₃.

;

;

и

.

Когда R₁ является:

;

или

необязательно замещенными Q₁;

предпочтительные соединения по осуществлению В данного изобретения включают, но не ограничиваются ими:

;

;

; и

.

Когда R₁ является:

;

;

;

;

; и

Ингибиторы ИПФ по другому осуществлению (С) данного изобретения представлены формулой σ :

σ

где кольцо необязательно замещено одной или более R-группами, предпочтительно 0, 1 или 2; и где

R₁ является R₅-(A)_p-;

R₅ выбран из группы, включающей

-Н,

-Ar₁,

-СО-Аr₁,

-SO₂-Ar₁,

-R₉,

-CO-R₉,

-CO-O-R₉,

-SO₂-R₉,

и

,

и

,

каждый А независимо выбран из группы, включающей любую α -аминокислоту;

р равен 0, 1, 2, 3 или 4;

Y является

-O-

-S- или

-NH-;

R является:

-Н,

-О-С_1-6 алкилом,

-NH(C_1-6 алкилом),

-N(C_1-6 алкилом)₂,

-S-С_1-6 алкилом,

-С_1-6 алкилом или

-Q₂,

каждый R₉ является C_1-6 неразветвленной или разветвленной алкильной группой, необязательно однократно или многократно замещенной одной или двумя Аr₁-группами;

каждый R₁₀ независимо выбран из группы, включающей -Н или С_1-6 неразветвленную или разветвленную алкильную группу;

-СН=СН-,

-О-,

-S-,

-SO-,

-SO₂-,

-NR₁₀-,

-NR₁₀-СО-,

-CO-,

-O-СО-,

-СО-O-,

-CO-NR₁₀-,

-O-CO-NR₁₀-,

-NR₁₀-CO-O-,

-NR₁₀-CO-NR₁₀-,

-SO₂-NR₁₀-,

-NR₁₀-SO₂- и

-NR₁₀-SO₂-NR₁₀-,

каждый Аr₁ является циклической группой, независимо выбранной из группы, включающей арильную группу, которая содержит 6, 10, 12 или 14 атомов углерода и от 1 до 3 колец, циклоалкильную группу, которая содержит от 3 до 15 атомов углерода и от 1 до 3 колец, указанная циклоалкильная группа необязательно бензоконденсирована, и гетероциклическая группа содержит от 5 до 15 атомов в цикле и от 1 до 3 колец, причем указанная гетероциклическая группа содержит, по крайней мере, одну гетероатомную группу, выбранную из -О-, -S-, -SO-, -SO₂-, =N- и –NH-, указанная гетероциклическая группа необязательно содержит одну или несколько двойных связей, указанная гетероциклическая группа необязательно содержит одно или несколько ароматических колец, и указанная циклическая группа необязательно однократно или многократно замещена –NH₂, -СО₂Н, -Cl, -F, -Br, -I, -NO₂,

-CN, =O, -ОН, перфтор-С_1-3-алкилом или

, или –Q₁;

-Ar₁,

-R₉,

-T₁-R₉ и

-(CH₂)_1,2,3-T₁-R₉,

каждый Q₂ независимо выбран из группы, включающей -ОН,

-NH₂, -CO₂H, -Cl, -F, -Br, -I, -NO₂, -CN, СF₃ и

;

при условии, что когда –Ar₁ замещен Q₁-группой, которая содержит одну или несколько дополнительных –Аr₁-групп, указанные дополнительные группы –Аr₁ не замещены Q₁.

Предпочтительные соединения осуществления С данного изобретения включают, но не ограничиваются ими:

;

;

;

; и

.

Предпочтительными соединениями по осуществлению С данного изобретения являются также те, в которых каждый А независимо выбран из группы, включающей α -аминокислоты:

аланин,

гистидин,

лизин,

фенилаланин,

пролин,

тирозин,

валин,

лейцин,

изолейцин,

глютамин,

метионин,

гомопролин,

3-(2-тиенил)аланин и 3-(3-тиенил)аланин.

Ингибиторы ИПФ по другому осуществлению (D) данного изобретения имеют формулу π :

π

где R₁ является R₅-(A_p)-;

-сн=сн-,

-O-,

-S-,

-SO-,

-SO₂-,

-NR₁₀-,

-NR₁₀-CO-,

-CO-,

-O-СО-,

-СО-O-,

-CO-NR₁₀-,

-O-CO-NR₁₀-,

-NR₁₀-CO-O-,

-NR₁₀-CO-NR₁₀-,

-SO₂-NR₁₀-,

-NR₁₀-SO₂- и

-NR₁₀-SO₂-NR₁₀-,

R₅ независимо выбран из группы, включающей:

-Н,

-Ar₁,

-CO-Ar₁,

-SO₂-Ar₁,

-R₉,

-CO-R₉,

-CO-O-R₉,

-SO₂-R₉,

,

и

р равен 0, 1, 2, 3 или 4;

каждый R₉ является С_1-6 неразветвленной или разветвленной алкильной группой, необязательно однократно или многократко замещенной -ОН, -F и необязательно замещенной группой Ar₁;

Аr₁ является циклической группой, независимо выбранной из группы, включающей арильную группу, которая содержит 6, 10, 12 или 14 атомов углерода и от 1 до 3 колец циклоалкильную группу, которая содержит от 3 до 15 атомов углерода и от 1 до 3 колец, причем циклоалкильная группа необязательно бензоконденсирована, и гетероциклическая группа содержит от 5 до 15 атомов в цикле и от 1 до 3 колец причем указанная гетероциклическая группа содержит, по крайней мере, одну гетероатомную группу, выбранную из -O-, -S-, -SO-, -SO₂-, =N- и -NH-, указанная гетероциклическая группа необязательно содержит одну или несколько двойных связей, причем указанная гетероциклическая группа необязательно содержит одно или несколько ароматических колец и указанная циклическая группа необязательно однократно или многократно замещена –NH₂, -CO₂H, -Cl, -F, -Br, -I, -NO₂, -CN, =O, -ОН, перфтор-С_1-3-алкилом или

, -R₉, или –T₁-R₉.

Предпочтительными соединениями по осуществлению D данного изобретения являются те соединения, в которых R₉ является С_1-4 неразветвленным или разветвленным алкилом, замещенным Аr₁, где Ar₁ является фенилом.

Предпочтительные соединения по осуществлению D данного изобретения включают, но не ограничиваются ими:

;

;

;

; и

Предпочтительными соединениями по осуществлению D данного изобретения являются также те, в которых каждый А независимо выбран из группы, включающей α -аминокислоты:

аланин,

гистидин,

лизин,

фенилаланин,

пролин,

тирозин,

валин,

лейцин,

изолейцин,

глютамин,

метионин,

гомопролин,

3-(2-тиенил)аланин и

3-(3-тиенил)аланин.

Ингибиторы ИПФ по другому осуществлению (Е) данного изобретения представлены формулой γ :

где m равен 0, 1 или 2;

Т является –СО₂Н или другим биоизостерическим заместителем у -СО₂Н,

R₃ является

-CN,

-CO-R₁₃ или

,

R₅ выбран из группы, включающей

-Н,

-Ar₁,

-CO-Ar₁,

-SO₂-Ar₁,

-R₉,

-CO-R₉,

-CO-O-R₉,

-SO₂-R₉,

и

р равен 2 или 3;

каждый R₉ является C_1-6 неразветвленной или разветвленной алкильной группой, необязательно однократно или многократно замещенной -ОН, -F или =O и необязательно замещенной группой Ar₁;

-СН=СН-,

-О-,

-S-,

-SO-,

-SO₂-,

-NR₁₀-,

-NR₁₀-CO-,

-CO-,

-O-СО-,

-СО-O-,

-CO-NR₁₀-,

-O-CO-NR₁₀-,

-NR₁₀-CO-O-,

-NR₁₀-CO-NR₁₀-,

-SO₂-NR₁₀-,

-NR₁₀-SO₂- и

-NR₁₀-SO₂-NR₁₀-;

каждый R₁₀ независимо выбран из группы, включающей -Н или C_1-6 неразветвленную или разветвленную алкильную группу;

каждый R₁₃ независимо выбран из группы, включающей Н, R₉, Аr₂ и CH₂T₁R₉;

каждый Ar₁ является циклической группой, независимо выбранной из группы, включающей арильную группу, которая содержит 6, 10, 12 или 14 атомов углерода и от 1 до 3 колец, циклоалкильную группу, которая содержит от 3 до 15 атомов углерода и от 1 до 3 колец, указанная циклоалкильная группа необязательно бензоконденсирована, и гетероциклическая группа содержит от 5 до 15 атомов в цикле и от 1 до 3 колец, указанная гетероциклическая группа содержит, по крайней мере, одну гетероатомную группу, выбранную из -О-, -S-, -SO-, -SO₂-, =N- и -NH-, указанная гетероциклическая группа необязательно содержит одну или несколько двойных связей, причем указанная гетероциклическая группа необязательно содержит одно или несколько ароматических колец, и указанная циклическая группа необязательно однократно или многократно замещена –NH₂, -CO₂H, -Cl, -F, -Br, -I, -NO₂, -CN, =O, -ОН, перфтор-С_1-3-алкилом,

, или –Q₁; и

каждый Аr₂ независимо выбран из следующей группы, в которой любое кольцо может необязательно быть замещено –Q₁ и –Q₂:

Х представляет N или СН; Y представляет О или S;

-Ar₁,

-O-Ar₁

-R₉,

-T₁-R₉ и

-(CH₂)_1,2,3-T₁-R₉,

каждый Q₂ независимо выбран из группы, включающей -ОН, -NH₂, -CO₂H, -Cl, -F, -Br, -I, -NO₂, -CN, СF₃ и

;

при условии, что когда –Ar₁ замещен Q₁-группой, которая содержит одну или несколько дополнительных –Аr₁-групп, указанные дополнительные –Ar₁-группы не замещены Q₁.

Предпочтительные соединения осуществления Е данного изобретения включают, но не ограничиваются ими:

;

;

;

;

;

; и

.

Предпочтительными соединениями по осуществлению Е данного изобретения являются также те, в которых каждый А независимо выбран из группы, включающей α -аминокислоты:

аланин,

гистидин,

лизин,

фенилаланин,

пролин,

тирозин,

валин,

лейцин,

изолейцин,

глютамин,

метионин,

гомопролин,

3-(2-тиенил)аланин и

3-(3-тиенил)аланин.

Ингибиторы ИПФ по другому осуществлению (F) данного изобретения имеют формулу δ :

δ

где R₁ является R₅-(A)_p-;

-Н,

-Ar₁,

-CO-Ar₁,

-SO₂-Ar₁,

-R₉,

-CO-R₉,

-CO-O-R₉,

-SO₂-R₉,

;

р равен 0, 1, 2, 3 или 4;

-сн=сн-,

-O-,

-S-,

-SO-,

каждый Ar₁, является циклической группой, независимо выбранной из группы, включающей арильную группу, которая содержит 6, 10, 12 или 14 атомов углерода и от 1 до 3 колец, циклоалкильную группу, которая содержит от 3 до 15 атомов углерода и от 1 до 3 колец, указанная циклоалкильная группа необязательно бензоконденсирована, и гетероциклическая группа содержит от 5 до 15 атомов в цикле и от 1 до 3 колец, указанная гетероциклическая группа содержит, по крайней мере, одну гетероатомную группу, выбранную из -О-, -S-, -SO-, -SO₂-, =N- и -NH-, указанная гетероциклическая группа необязательно содержит одну или несколько двойных связей, указанная гетероциклическая группа необязательно содержит одно или несколько ароматических колец, и указанная циклическая группа необязательно однократно или многократно замещена -NH₂, -СО₂Н, -Сl, -F, -Br, -I, -NO₂, -CN, =O, -ОН, перфтор-С_1-3-алкилом,

, или –Q₁; и

;

-Ar₁,

-O-Ar₁,

-R₉,

-T₁-R₉ и

-(CH₂)_1,2,3-T₁-R₉;

каждый Q₂ независимо выбран из группы, включающей –ОН, -NH₂, -CO₂H, -Cl, -F, -Br, -I, -NO₂, -CN, СF₃ и

;

при условии, что, когда –Аr₁ замещен Q₁-группой, которая содержит одну или несколько дополнительных групп –Ar₁, указанные дополнительные группы –Аr₁ не замещены Q₁;

каждый Х независимо выбран из группы, включающей =N- и =СН-; и

каждый Y независимо выбран из группы, включающей –О-, -S- и -NH-.

Предпочтительные соединения по осуществлению F данного изобретения включают, но не ограничиваются ими:

;

;

;

;

;

;

;

;

;

;

;

; и

.

Предпочтительными соединениями по осуществлению F данного изобретения являются также те, в которых каждый А независимо выбран из группы, включающей α -аминокислоты:

аланин,

гистидин,

лизин,

фенилаланин,

пролин,

тирозин,

валин,

лейцин,

изолейцин,

глютамин,

метионин,

гомопролин,

3-(2-тиенил)аланин и

3-(3-тиенил)аланин.

Предпочтительными являются соединения по данному изобретению, имеющие молекулярную массу меньшую или равную около 700 Дальтонам и более предпочтительно от 400 до 600 Дальтон. Данные предпочтительные соединения могут легко всасываться в кровоток пациентов при пероральном введении. Данная биодоступность при пероральном применении делает такие соединения превосходными средствами при лечении путем перорального введения и средствами для профилактики ИЛ-1-опосредованных заболеваний.

Ингибиторы ИПФ по данному изобретению могут быть синтезированы обычными методами. Преимущественно данные соединения можно без труда синтезировать из легкодоступных исходных продуктов.

Соединения по данному изобретению относятся к наиболее легко синтезируемым известным ингибиторам ИПФ. Ранее описанные ингибиторы ИПФ часто содержат четыре или более хиральных центров и множество пептидных связей. Относительная легкость, с которой соединения по данному изобретению могут быть синтезированы, представляет собой огромное преимущество для широкомасштабного производства данных соединений.

Следует учесть, что соединения по данному изобретению могут существовать в различных равновесных формах, в зависимости от условий, включая выбор растворителя, рН и другие, известные специалистам в данной области. Все такие формы данных соединений обязательно включены в настоящее изобретение. В частности, многие соединения по данному изобретению, в особенности те, которые содержат альдегидные или кетонные группы в R₃ и группы карбоновых кислот в Т, могут принимать как полукетальную (полуацетальную), так и гидратированную форму, как показано ниже:

В зависимости от выбора растворителя и других условий, известных специалистам в данной области, соединения по данному изобретению могут также принимать ацилоксикетальную, ацилоксиацетальную, кетальную или ацетальную формы:

Кроме того, следует учесть, что равновесные формы соединений по данному изобретению могут включать гаутомерные формы. Все такие формы данных соединений определенно включены в настоящее изобретение.

Следует учесть, что соединения по данному изобретению могут быть модифицированы подходящими функциональными группами для улучшения избирательных биологических свойств. Такие модифицирования известны в данной области и включают те из них, которые повышают биологическое проникновение в данную биологическую систему (например, кровь, лимфатическую систему, центральную нервную систему), повышают доступность при пероральном применении, повышают растворимость для введения путем инъекции, изменяют метаболизм и изменяют скорость выведения. Кроме того, соединения могут быть переделаны в пролекарственную форму, так что желаемое соединение образуется в организме пациента как результат воздействия метаболических и других биохимических процессов на пролекарство. Некоторые примеры пролекарственных форм включают формы производных кеталя, ацеталя, оксима и гидразона, которые содержат кетонные или альдегидные группы, особенно, когда они находятся в группе R₃ соединений по данному изобретению.

Соединения по данному изобретению являются превосходными лигандами ИПФ. Соответственно, данные соединения способны избирать мишенью и ингибировать стадии ИЛ-1-опосредованных заболеваний, таких как превращение предшественника ИЛ-1β в зрелый ИЛ-1β , и, таким образом, основную активность данного белка в воспалительных заболеваниях, аутоиммунных заболеваниях и нейродегенеративных заболеваниях. Например, соединения по данному изобретению ингибируют превращение предшественника ИЛ-1β в зрелый ИЛ-1β путем ингибирования ИПФ. Поскольку ИПФ необходим для продуцирования зрелого ИЛ-1, ингибирование данного фермента эффективно блокирует стимулирование ИЛ-1-опосредованных физиологических эффектов и симптомов, таких как воспаление, путем ингибирования продуцирования зрелого ИЛ-1. Таким образом, посредством ингибирования активности предшественника ИЛ-1β соединения по данному изобретению эффективно действуют как ингибиторы ИЛ-1.

Соединения по данному изобретению могут применяться обычным способом для лечения заболеваний, которые опосредованы ИЛ-1. Такие способы лечения, их уровни дозировок и требования могут быть выбраны специалистами в данной области из доступных способов и методик. Например, соединение по данному изобретению может быть объединено с фармацевтически приемлемым адъювантом для введения пациенту, страдающему ИЛ-1-опосредованным заболеванием, фармацевтически приемлемым способом и в количестве, эффективном для уменьшения тяжести данного заболевания.

Альтернативно, соединения по данному изобретению могут применяться в композициях и способах для лечения и профилактики ИЛ-1-опосредованных заболеваний у индивидуумов в течение продолжительных периодов времени. В таких композициях соединения могут быть использованы как по отдельности, так и вместе с другими соединениями по данному изобретению по способу, состоящему в традиционном применении ингибиторов ИПФ в фармацевтических композициях. Например, соединение по данному изобретению может быть объединено с фармацевтически поиемлемыми адъювантами, традиционно применяемыми в вакцинах, и введено в профилактически эффективных количествах для предупреждения ИЛ-1-опосредованных заболеваний у индивидуумов в течение продолжительного периода времени.

Соединения по данному изобретению могут также вводиться совместно с другими ингибиторами ИПФ для усиления эффекта терапии или профилактики различных ИЛ-1-опосредованных заболеваний.

В дополнение к этому, соединения по данному изобретению могут применяться в сочетании как с традиционными противовоспалительными средствами, так и с ингибиторами металлопротеаз матрикса, ингибиторами липоксигеназ и антагонистами цитокинов, отличных от ИЛ-1β .

Соединенния по данному изобретению могут также вводиться в сочетании с иммуномодуляторами (например, бропиримином, антителами на альфа-интерферон человека, ИЛ-2, ГМ-КСФ, метионинэнкефалином, интерфероном-альфа, диэтилдитиокарбаматом, фактором некроза опухолей, налтрексоном или rЕРО) или с простагландинами для предотвращения или борьбы с симптомами ИЛ-1-опосредованных заболеваний, как например воспаление.

Когда соединения по данному изобретению вводят в сочетании с другими средствами, их можно вводить пациенту последовательно или совместно. Альтернативно, фармацевтические или профилактические композиции по данному изобретению могут состоять из сочетания ингибитора ИПФ по данному изобретению и другого терапевтического или профилактического средства.

Фармацевтические композиции по данному изобретению состоят из любого соединения по настоящему изобретению и их фармацевтически приемлемых солей с любым фармацевтически приемлемым носителем адъювантом или наполнителем. Фармацевтически приемлемые носители, адъюванты и наполнители, которые могут применяться в композициях по данному изобретению, включают, но не ограничиваются ими, ионообменники, оксид алюминия, стеарат алюминия, лецитин, белки сыворотки, такие как сывороточный альбумин человека, буферные вещества, такие как фосфаты, глицин, сорбиновую кислоту, сорбат калия, смеси частичных глицеридов насыщенных растительных жирных кислот, воду, соли электролитов, такие как протаминсульфат, однозамещенный фосфат натрия, двузамещенный фосфат калия, хлорид натрия, соли цинка, коллоидный кремнезем, трисиликат магния, поливинилпирролидон, вещества на основе целлюлозы, натрийкарбоксиметилцеллюлозу, полиакрилаты, воски, полиэтиленполипропиленоксид блок-сополимеры, полиэтиленгликоль и ланолин.

Фармацевтические композиции по данному изобретению могут вводиться перорально, парентерально, с помощью ингаляций, местно, ректально, назально, трансбуккально, вагинально или посредством имплантированного резервуара. Заявители предпочитают пероральное введение. Фармацевтические композиции по данному изобретению могут содержать любые традиционные нетоксичные фармацевтически приемлемые носители, адъюванты или наполнители. Термин "парентеральный", как здесь используется, включает подкожный, внутрикожный, внутривенный, внутримышечный, интраартикулярный, внутрисуставный, внутригрудинный, подоболочечный, внутриочаговый и внутричерепной способы инъекции или инфузии.

Фармацевтические композиции могут находиться в форме стерильного препарата для инъекций, например, в виде стерильной водной или масляной суспензии для инъекций. Данная суспензия может быть приготовлена в соответствии с методиками, известными в данной области, используя подходящие диспергирующие и увлажняющие средства (такие как, например, Tween 80) и суспендирующие средства. Стерильный препарат для инъекций также может являться стерильным раствором или суспензией для инъекций в нетоксичном парентерально-приемлемом разбавителе или растворителе, таком как раствор в 1,3-бутандиоле. Из числа подходящих наполнителей и растворителей могут применяться маннитол, вода, раствор Рингера, изотонический раствор хлорида натрия. В дополнение к этому, стерильные нелетучие масла традиционно применяются в качестве растворителя или суспендирующей среды. Для данной цели может применяться любое жидкое нелетучее масло, включая синтетические моноили диглицериды. Для получения препаратов для инъекций применимы жирные кислоты, такие как олеиновая кислота и ее глицеридные производные, коими являются природные фармацевтически приемлемые масла, такие как оливковое масло или касторовое масло, особенно в их полиоксиэтилированных формах. Данные масляные растворы или суспензии могут также содержать в качестве разбавителя или диспергатора длинноцепочечный спирт, описанный в Pharmacopeia Helvetica или подобный ему спирт.

Фармацевтические композиции по данному изобретению могут вводиться перорально в виде перорально приемлемой лекарственной формы, включающей, но не ограничивающейся ими, капсулы, таблетки и водные суспензии и растворы. В случае таблеток для перорального применения носители, которые обычно применяются, включают лактозу и кукурузный крахмал. Также обычно добавляют смазывающие средства, такие как стеарат магния. Для перорального введения в виде капсулы приемлемые разбавители включают лактозу и высушенный кукурузный крахмал. Когда перорально вводят водные суспензии, активный ингредиент объединяют с эмульсифицирующими и суспендирующими средствами. По желанию могут быть добавлены некоторые подсластители и/или ароматизаторы и/или красители.

Фармацевтические композиции по данному изобретению также могут применяться в виде суппозиториев для ректального применения. Данные композиции могут быть получены путем смешивания соединения по данному изобретению с подходящим нераздражающим наполнителем, который является твердым при комнатной температуре, но жидким при ректальной температуре, и, таким образом, будет плавиться в прямой кишке с высвобождением активных компонентов. Такие вещества включают, но не ограничиваются ими, кокосовое масло, пчелиный воск и полиэтиленгликоли.

Местное введение фармацевтических композиций по данному изобретению особенно применимо, когда желаемое лечение охватывает области и органы, легкодоступные для местного применения. Для местного нанесения на кожу фармацевтические композиции следует готовить в виде мази, включающей активные компоненты, суспендированные или растворенные в носителе. Носители для местного применения соединений по данному изобретению включают, но не ограничиваются ими, минеральное масло, жидкую нефть, белую нефть, пропиленгликоль, полиэтиленоксидполипропиленоксидные соединения, эмульсифицирующий воск и воду. Альтернативно, фармацевтическая композиция может быть приготовлена в виде подходящей примочки или крема, содержащего активное соединение, суспендированное или растворенное в носителе. Подходящие носители включают, но не ограничиваются ими, минеральное масло, моностеарат сорбитана, полисорбат 60, воск цетиловых эфиров, цетеариловый спирт, 2-октилдодеканол, бензиловый спирт и воду. Фармацевтические композиции по данному изобретению могут также применяться местно в нижних отделах кишечного тракта с помощью ректальных суппозиториев или подходящих клизм. Местно-чрескожное введение также включается в данное изобретение.

Фармацевтические композиции по данному изобретению могут вводиться с помощью назального аэрозоля или ингаляции. Такие композиции получают в соответствии с методиками, хорошо известными в области фармацевтической технологии, и они могут быть получены в виде раствора в физиологическом растворе с применением бензилового спирта или других подходящих консервантов, стимуляторов всасывания для повышения биодоступности, фторуглеродов и/или других солюбилизирующих или диспергирующих средств, известных в данной области.

ИЛ-1-опосредованные заболевания, которые могут быть излечены или предотвращены с помощью соединений по данному изобретению включают, но не ограничиваются ими, воспалительные заболевания, аутоиммунные заболевания и нейродегенеративные заболевания.

Воспалительные заболевания, которые могут быть излечены или предотвращены, включают, например, септический шок, септицемию и респираторный дистресс-синдром у взрослых. Аутоиммунные заболевания-мишени включают, например, ревматоидный артрит, системную красную волчанку, склеродермию, хронический тиреоидит, диффузный токсический зоб, аутоиммунный гастрит, инсулин-зависимый сахарный диабет, аутоиммунную гемолитическую анемию, аутоиммунную нейротропению, тромбоцитопению, хронический активный гепатит, миастению гравис и рассеянный склероз. И нейродегенеративные заболевания-мишени включают, например, боковой амиотрофический склероз, болезнь Альцгеймера, болезнь Паркинсона и первичный боковой склероз. Ингибиторы ИПФ по данному изобретению могут также применяться для ускорения заживления ран. И ингибиторы ИПФ по данному изобретению могут применяться для лечения инфекционных заболеваний.

Хотя данное изобретение сосредоточено на применении соединений, описанных здесь для предотвращения и лечения ИЛ-1-опосредованных заболеваний, соединения по данному изобретению могут также применяться в качестве ингибирующих агентов по отношению к другим цистеиновым протеазам.

Соединения по данному изобретению также применимы в качестве коммерческих реактивов, которые эффективно связываются с ИПФ или другими цистеиновыми протеазами. В качестве коммерческих реактивов соединения по данному изобретению и их производные могут применяться для блокирования протеолиза пептида-мишени или в виде производных могут применяться для присоединения к устойчивым смолам в качестве неподвижного субстрата для использования в афинной хроматографии. Эти и другие применения, которые характеризуют коммерческие ингибиторы цистеиновых протеаз будут очевидны для специалистов в данной области.

Для того чтобы данное изобретение было понято глубже, следующие примеры излагаются ниже. Целью данных примеров является лишь иллюстрация, и их не следует так или иначе понимать как ограничение объема изобретения.

Пример 1.

Следующий пример демонстрирует способ моделирования лекарства, воплощающего настоящее изобретение:

Стадия 1) Выбрать 2 связывающие водород группы у ИПФ, здесь скелетный С=O и N-H у Аrg-341.

Стадия 2) Выбрать каркас, здесь производное пиридона, и подтвердить, что связывающие водород группы каркаса способны образовывать удовлетворительные водородные связи со связывающими водород группами, выбранными на стадии 1. Данное подтверждение проводится с помощью применения молекулярно механических методов для минимизации фрагмента каркаса в контексте активного участка ИПФ.

Стадия 3) Выбрать гидрофобный карман, здесь S2, в качестве следующей цели и гидрофобный радикал, здесь бензол. Минимизировать бензольную группу внутри кармана S2, чтобы убедиться, что получено существенное гидрофобное перекрывание.

Стадия 4) Выбрать другой гидрофобный карман, здесь S4, в качестве следующей цели и гидрофобный радикал, здесь бензол. Минимизировать бензольную группу внутри кармана S4, чтобы убедиться, что получено существенное гидрофобное перекрывание.

Стадия 5) Заполнить полярный "карман" S1 электроотрицательным радикалом, здесь карбоксилатной боковой цепью, предоставленной аспарагиновой кислотой, у которой С-конец восстановлен до альдегида. Минимизировать, чтобы убедиться, что карбоксилатная боковая цепь сохраняет благоприятное электростатическое взаимодействие с полярным "карманом" S1.

Стадия 6) Связать каркас с группами со стадий 3, 4 и 5, предпочтительно применяя минимальное число связей, согласующихся с химически приемлемой структурой. Минимизировать целую составную молекулу в активном участке ИПФ.

Стадия 7) Оценить энергию молекулы, находящейся в конформации, необходимой для связывания с ИПФ. Затем минимизировать и вновь оценить энергию - это есть свободная энергия конформации. Энергия деформации для связывания потенциального ингибитора с ИПФ представляет собой разницу между свободной энергией конформации и связанной энергией конформации. Энергия деформации должна быть менее чем около 10 ккал/моль. В данном случае связанная энергия конформации равна - 1,6 ккал/моль, а свободная энергия конформации равна - 11,7 ккал/моль, что дает энергию деформации 10,1 ккал/моль.

Стадия 8) Получить ингибитор, смоделированный с применением вышеуказанных этапов, и показать, что он имеет К_i 150 нМ.

Пример 2.

Получены значения константы ингибирования (K_i) и КИ₅₀ для нескольких соединений по данному изобретению с использованием трех методов, описанных ниже:

1. Ферментный анализ с помощью УФ-видимого субстрата.

Данный анализ проводят, применяя сукцинил-Tyr-Val-Ala-Аsр-п-нитроанилидный субстрат. Синтез аналогичных субстратов описан L.A. Reiter (Int. J. Peptide Protein Res. 43, 87-96 (1994)). Анализируемая смесь содержит:

65 мкл буфера (10 мМ Трис, 1 мМ DTT, 0,1% CHAPS @ pH 8,1),

10 мкл ИПФ (конечная концентрация 50 нМ, что дает скорость ~ 10^-3 о.е./мин (~1 mOD)),

5 мкл смеси ДМСО/ингибитор,

20 мкл 400 мкМ субстрата (конечная концентрация 80 мкМ),

100 мкл общего реакционного объема.

Анализ ИПФ в видимой области проводят на 96-луночном планшете для микротитрования. Буфер, ИПФ и ДМСО (если присутствует ингибитор) добавляют в лунки в том порядке, как перечислено. Компоненты оставляют инкубироваться при комнатной температуре в течение 15 минут, начиная с того момента, когда все компоненты присутствуют во всех лунках. Ридер планшетов для микротитрования устанавливают на инкубацию при 37° С. После 15 минут инкубации субстрат добавляют непосредственно в лунки и реакцию контролируют путем слежения за высвобождением хромофора (п-НА) при 405-603 нм при 37° С в течение 20 минут. Данные представляют в линейном виде и вычисляют скорость в о.е./мин. ДМСО присутствует только при проведении экспериментов, задействующих ингибиторы, буфер используют для доведения объема до 100 мкл в других экспериментах.

2. Ферментный анализ с помощью флюоресцентного субстрата.

Данный анализ проводят по существу в соответствии с Thornberry et al. (Nature 356: 768-774 (1992)) с применением субстрата 17, на который ссылаются в статье.

Субстрат представляет собой: ацетил-Tyr-Val-Ala-Asp-амино-4-метилкумарин (АМК). Смешивают следующие компоненты:

65 мкл буфера (10 мМ Трис, 1 мМ DTT, 0,1% CHAPS @ pH 8,1),

10 мкл ИПФ (конечная концентрация 2-10 нМ),

5 мкл раствора ДМСО/ингибитор,

20 мкл 150 мкМ субстрата (конечная концентрация 30 мкМ),

100 мкл общего реакционного объема.

Анализ проводят на 96-луночном планшете для микротитрования. В лунки добавляют буфер и ИПФ. Компоненты оставляют инкубироваться при 37° С в течение 15 мин в луночном планшете с контролируемой температурой. После 15-минутной инкубации запускают реакцию путем добавления субстрата непосредственно в лунки и реакцию контролируют @ 37° С в течение 30 мин путем слежения за высвобождением флюорофора АМК, используя длину волны возбуждения 380 нм и длину волны испускания 460 нм. Данные по каждой лунке приводят к линейному виду и определяют скорость в единицах флюоресценции в секунду.

Для определения констант ингибирования фермента (K_i) или вида ингибирования (конкурентный, неконкурентный или бесконкурентный) данные по скорости, определенные в ферментативных анализах при различных концентрациях ингибитора, приводят с помощью компьютера к стандартным уравнениям ферментативной кинетики (смотри I.H. Segel, Enzyme Kinetics, Wiley-Interscience, 1975).

3. Клеточный анализ

Анализ ИЛ-1β с помощью смешанной популяции мононуклеарных клеток периферической крови человека (РВМС) или обогащенных прилипанием мононуклеарных клеток.

Переработку пре-ИЛ-1β ИПФ можно измерить в клеточной культуре, используя множество источников клеток. РВМС человека, полученные от здоровых доноров, дают смешанную популяцию подтипов лимфоцитов и мононуклеарных клеток, которые продуцируют спектр интерлейкинов и цитокинов в ответ на многие классы физиологических стимуляторов. Прилипшие мононуклеарные клетки из РВМС представляют обогащенный источник нормальных моноцитов для селективных исследований продукции цитокинов активированными клетками.

Методика проведения эксперимента:

Готовят исходную серию разведений исследуемого соединения в ДМСО или этаноле с последующим разбавлением в среде RPMI-10% FBS (включающей 2 мМ L-глютамин, 10 мМ HEPES, 50 Ед. и 50 ug/мл pen/strep) соответственно, что дает выход препаратов в концентрации, в 4 раза превышающей конечную тестируемую концентрацию, содержащей 0,4% ДМСО или 0,4% этанола. Конечная концентрация ДМСО равна 0,1% для всех разведений препарата. В общем случае для первичного скрининга соединения используют концентрационное титрование, которое дает кажущуюся K_i для тестируемого соединения, определяемую в анализе ингибирования ИПФ.

Как правило, тестируется 5-6 разведений соединения и выполняется клеточный компонент анализа дважды с двойной постановкой ELISA супернатанта каждой клеточной культуры.

Выделение РВМС и анализ ИД-1:

Клетки лейкоцитной пленки, выделенные из одной пинты (~ 0,473 л) крови человека (с выходом конечного объема 40-45 мл плазмы плюс клеток), разводят средой до 80 мл, и каждую разделительную пробирку LeukoPREP (Becton Dickinson) покрывают 10 мл клеточной суспензии. После 15 мин центрифугирования при (1500÷ 1800)g слой плазма/среда аспирируют и затем собирают слой мононуклеарных клеток пастеровской пипеткой и переносят в 15 мл коническую центрифужную пробирку (Corning). Среду добавляют, чтобы довести объем до 15 мл, аккуратно перемешивают клетки путем переворачивания и центрифугируют при 300 g в течение 15 мин. Ресуспендируют осадок РВМС в малом объеме среды, считают клетки и доводят до 6× 10⁶ клеток/мл.

Для клеточного анализа добавляют 1,0 мл клеточной суспензии в каждую лунку 24-луночного плоскодонного планшета для культивирования тканей (Corning), 0,5 мл разведения тестируемого соединения и 0,5 мл раствора ЛПС (Sigma № L-3012; 20 нг/мл раствор, приготовленный в полной среде RPMI; конечная концентрация ЛПС 5 нг/мл). Добавлений по 0,5 мл тестируемого соединения и ЛПС обычно достаточно для перемешивания содержимого лунок. За один эксперимент исследуют три контрольные смеси, с использованием одного только ЛПС, контроля растворителя и/или дополнительной среды для доведения конечного объема культуры до 2,0 мл. Клеточные культуры инкубируют в течение 16-18 ч при 37° С в присутствии 5% СO₂.

По окончании инкубационного периода клетки собирают и переносят в 15 мл конические центрифужные пробирки. После центифугирования в течение 10 мин при 200 g супернатанты собирают и переносят в 1,5 мл пробирки Eppendorf. Можно заметить, что осадок клеток может быть использован для оценки содержания пре-ИЛ-1β и зрелого ИЛ-1β в экстрактах цитозоля методами western blotting или ELISA с помощью пре-ИЛ-1β -специфичной антисыворотки.

Выделение прилипших мононуклеарных клеток:

РВМС выделяют и готовят, как описано выше. Сначала в лунки добавляют среду (1,0 мл) с последующим добавлением 0,5 мл суспензии РВМС. После одного часа инкубации планшеты аккуратно встряхивают и неприлипшие клетки аспирируют из каждой лунки. Лунки затем трижды аккуратно промывают 1,0 мл среды, а оставшееся ресуспендируют в 1,0 мл среды. Обогащение прилипших клеток обычно приводит к выходу 2,5-3,0× 10⁵ клеток в лунке. Добавление тестируемых соединений, ЛПС, условия инкубации клеток и обработка супернатантов протекает, как описано выше.

ELISA:

Для измерения содержания зрелого ИЛ-1β использованы наборы Quantikine (R&D SysteMC). Анализы проводят, следуя инструкциям производителя. Уровни зрелого ИЛ-1β около 1-3 нг/мл наблюдаются как в РВМС-положительном контроле, так и в контроле с прилипшими мононуклеарными клетками. Проводились анализы ELISA разведений супернатантов из ЛПС-положительных контролей 1:5, 1:10 и 1:20 для выбора оптимального разведения супернатантов на панели для тестов.

Ингибирующая способность соединений может быть представлена значением КИ₅₀, которое представляет собой концентрацию ингибитора, при которой в супернатанте определяется 50% зрелого ИЛ-1β по сравнению с положительными контролями. Для соединений от А до N с применением означенных анализов были определены следующие значения K_i и КИ₅₀. Структура соединений от А до N следует за данной таблицей.

Структура соединений от А до N:

Пример 3.

Соединения по примеру 2 были получены следующим образом:

Н. N-(N-Ацетилтирозинил-валинил-пипеколил)-3-амино-4-

оксобутановая кислота.

Стадия А. N-(N-третбутоксикарбонилпипеколил)-4-амино-5-

бензил-окси-2-оксотетрагидрофуран.

Взаимодействие N-трет-бутоксикарбонилпипеколиновой кислоты (460 мг, 2,0 ммоль) и N-аллилоксикарбонил-4-амино-5-бензилокси-2-оксотетрагидрофурана (530 мг, 1,82 ммоль) проводили по способу, аналогичному описанному Chapman (Bioorg. & Med. Chem. Lett. 1992, 2, 613-618), что давало 654 мг соединения, указанного в заголовке.

¹H ЯМР (500 МГц, СDСl₃ (существующий в виде ротамеров)) δ 7,35 (м, 5Н), 6,88 (ушир. с, 1Н), 4,9-4,45 (м, 4Н), 3,95 (ушир.м., 2Н), 3,06 (м, 1Н), 2,9 (м, 1Н), 2,7 (ушир.м., 1Н), 2,45 (м, 1Н), 2,2 (м, 1Н), 1,7-1,5 (м, 3Н), 1,45 (два с, 9Н).

Стадия В. N-пипеколил-4-амино-5-бензилокси-2-оксотетрагидрофуран.

N-(N-трет-бутоксикарбонилпипеколил)-4-амино-5-бензил-окси-2-оксотетрагидрофуран (654 мг) растворяли в 15 мл 25% трифторуксусной кислоты в дихлорметане и перемешивали при комнатной температуре. Смесь концентрировали, что давало клейкий остаток. Остаток растворяли в дихлорметане и промывали 10% бикарбонатом натрия. Органический слой сушили над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали, что давало 422 мг соединения заголовка в виде бежевого твердого вещества.

¹H ЯМР (500 МГц, CDCl₃) δ 7,38 (м, 5Н), 7,15 (д, 1Н), 5,55 (д, 1Н), 4,95-4,8 (м, 1Н), 4,78 (м, 1Н), 4,65 (д, 1Н), 4,45 (м, 1Н), 3,2 (м, 0,5Н), 3,05 (м, 0,5Н), 2,95 (м, 0,5Н), 2,85 (м, 0,5Н), 2,65 (м, 1Н), 2,55-2,38 (м, 1Н), 1,95 (м, 1Н), 1,8 (м, 1Н), 1,6 (м, 2Н), 1,38 (м, 2Н).

Стадия С. N-(N-Ацетилтирозинил-валинил-пипеколил)-4-амино-5-бензилокси-2-оксотетрагидрофуран.

N-Ацетилтирозинил-валин (464 мг, 1,44 ммоль) и N-пипеколил-4-амино-5-бензилокси-2-оксотетрагидрофуран (412 мг, 1,3 ммоль) растворяли в 5 мл диметилформамида и 5 мл дихлорметана и охлаждали до 0° С. К охлажденному раствору добавляли 1-гидроксибензотриазол (ГОБТ; 210 мг, 1,56 ммоль) с последующим добавлением гидрохлорида 1-(3-диметил-аминопропил)-3-этилкарбодиимида. После перемешивания в течение 18 часов смесь разбавляли этилацетатом и промывали водой, 10% однозамещенным сульфатом натрия, 10% бикарбонатом натрия и водой. Органический слой концентрировали, что давало неочищенное твердое вещество, которое очищали методом флэш-хроматографии (SiO₂), элюируя 94:6:1 (дихлорметан:изопропанол:пиридин), что давало 370 мг соединения заголовка.

¹Н ЯМР (500 МГц, СD₃ОD (существующий как в форме диастереомеров, так и в форме ротамеров) δ 7,35 (м, 5Н), 7,05 (м, 2Н), 6,68 (м, 2Н), 5,65 и 5,25 (м, 1Н), 4,9-3,95 (м, 8Н), 3,4-2,6 (м, 4Н), 2,5-2,1 (м, 1Н), 1,98 (с, 1Н), 1,9 (с, 1Н), 1,85 (с, 1H), 1,8-1,6 (м, 2Н), 1,55-1,3 (м, 4Н), 0,95-0,85 (м, 6Н).

Стадия D. N-(N-ацетилтирозинил-валинил-пипеколил)-3-амино-4-оксобутановая кислота.

К раствору 100 мг N-(N-ацетилтирозинил-валинил-пипеколил)-4-амино-5-бензилокси-2-оксотетерагидрофурана в 10 мл метанола добавляли 60 мг Pd(OH)₂ на угле и смесь помещали в атмосферу водорода, полученную с помощью баллона. Смесь фильтровали через Celite и концентрировали с получением белого твердого вещества. Данное неочищенное твердое вещество растворяли в 2 мл метанола и растирали с диэтиловым эфиром, что давало 26 мг соединения заголовка.

¹Н ЯМР (500 МГц, СD₃ОD (существующий как в форме диастереомеров, так и в форме ротамеров)) δ 7,1 (м, 2Н), 6,7 (м, 2Н), 5,2 (ушир.м, 1Н), 4,8-3,6 (м, 6Н), 3,2-2,5 (м, 4Н), 2,5-2,1 (м, 1Н), 1,95 (три с, 3Н), 1,9-1,3 (м, 6Н), 1,1-0,7 (м, 6Н).

Следующие соединения были получены по методам, аналогичным описанным для Н:

J. N-[N-ацетилтирозинил-валинил-(4-гидроксипролинил)]-3-амино-4-оксобутановая кислота.

Заменяют N-трет-бутоксикарбонил-4-бензилоксипролином N-трет-бутоксикарбонилпипеколиновую кислоту.

L. N-[2-(N-ацетилтирозинил-валинил)-(S)-1,2,3,4-тетрагидро-изохинолин-3-карбонил]-3-аминооксобутановая кислота.

N-трет-бутоксикарбонилпипеколиновую кислоту заменяют (S)-N-трет-бутоксикарбонил-1,2,3,4-тетрагидроизохинолин-3-карбоновой кислотой.

I. N-(N-ацетилтирозинил-валинил-(4-феноксипролинил))-3-амино-4-оксобутановая кислота.

Стадия А. Метиловый эфир N-трет-бутоксикарбонил-4-феноксипролина.

К охлажденному раствору (0° С) N-трет-бутокси-цис-4-гидроксипролина (2,0 г, 8,15 ммоль), фенола (0,77 г, 8,15 ммоль) и трифенилфосфина (2,14 г, 8,15 ммоль) в 20 мл тетра-гидрофурана по каплям добавляли диэтилазодикарбоксилат (1,4 мл, 9 ммоль) в течение 30 минут. Реакцию перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. Затем концентрировали, что давало вязкий остаток. Неочищенный остаток очищали методом флэш-хроматографии (SiO₂), элюируя 3:7 (этилацетат:гексан), что давало 1,89 г соединения заголовка.

¹Н ЯМР (500 МГц, CDCl₃) δ 7,3 (м, 2Н), 6,95 (м, 1Н), 6,85 (д, 2Н), 4,9 (ушир.м, 1Н), 4,55-4,15 (м, 2Н), 3,88-3,65 (м, 1Н), 3,70 (с, 3Н), 2,58 (м, 1Н), 2,22 (м., 1Н), 1,4 (3× с, 9Н).

Стадия В. Гидрохлорид метилового эфира 4-феноксипролина.

Через охлажденный раствор (ледяная баня) метилового эфира N-трет-бутоксикарбонил-4-феноксипролина (0,6 г) в 20 мл этилацетата пропускали безводный хлороводород до насыщения. Смесь нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 3 ч. Затем концентрировали, что давало 480 мг соединения заголовка.

¹Н ЯМР (500 МГц, CDCl₃) δ 7,22 (м, 2Н), 6,95 (м, 1Н), 6,83 (д, 2Н), 5,1 (ушир., 1Н), 4,6 (ушир.м, 1Н), 4,06 (ушир.м, 1Н), 3,75 (с, 3Н), 3,55 (ушир.м, 1Н), 2,58 (м, 2Н).

Стадия С. Метиловый эфир N-ацетилтирозинил-валинил-(4-феноксипролина.

N-Ацетилтирозинил-валин (0,524 г, 1,63 ммоль) и метиловый эфир 4-феноксипролина (0,381 г, 1,48 ммоль) растворяли в 4 мл диметилформамида и 4 мл дихлорметана и охлаждали до 0° С. К охлажденному раствору добавляли диизопропилэтиламин (258 мкл, 1,86 ммоль), ГОБТ (0,24 г, 1,78 ммоль) и ЭДК (0,37 г, 1,92 ммоль) и реакцию перемешивали в течение 18 ч. Смесь разбавляли 400 мл этилацетата и промывали водой, 10% однозамещенным сульфатом натрия, 10% бикарбонатом натрия и водой. Органический слой концентрировали, что давало остаток, который очищали методом флэш-хроматографии (SiO₂), элюируя 94:6:1 (CH₂Cl₂:изопропанол:пиридин), что давало 360 мг соединения заголовка.

¹Н ЯМР (500 МГц, СDСl₃ (существующий в виде ротамеров)) δ 7,3 (м, 2Н), 7,05 (м, 1Н), 6,95 (д, 2Н), 6,9-6,2 (4× д, 4Н), 5,05 (ушир.с, 1Н), 4,7-3,94 (м, 5Н), 2,93 (м, 1Н), 2,82 (м, 1Н), 2,65 (м, 1Н), 2,2 (м, 1Н), 2,05 (м, 1Н), 1,95 (с, 3Н), 1,86 (м, 1Н), 0,98 (д, 3Н), 0,88 (д, 3Н).

Стадия D. N-ацетилтирозинил-валинил-(4-фенокси)пролин.

Гидроксид лития (57 мг, 1,37 ммоль) добавляли к раствору метилового эфира N-ацетилтирозинил-валинил-(4-фенокси)пролина (360 мг, 0,685 ммоль), растворенного в 8 мл тетрагидрофурана/воды (1:1) и перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. Смесь подкисляли 10% соляной кислотой, что давало белый осадок, который собирали, что давало 175 мг соединения заголовка.

¹Н ЯМР (500 МГц, ДМСО-d₆) δ 9,2 (ушир.с, 1Н), 8,05-7,95 (м, 2Н), 7,3 (м, 1Н), 7,0-6,9 (м, 4Н), 6,65 (д, 2Н), 4,42 (м, 1Н), 4,35 (м, 1Н), 4,05-3,95 (м, 2Н), 3,3 (ушир.с, 2Н), 2,75 (м, 1Н), 2,55-2,38 (м, 2Н), 2,2 (м, 1Н), 2,0 (м, 1Н), 1,7 (с, 3Н), 0,95 (д, 3Н), 0,85 (д, 3Н).

Стадия Е. N-[N-ацетилтирозинил-валинил-(4-фенокси)пролинил]-4-амино-5-бензилокси-2-оксотетрагидрофуран.

Соединение заголовка получали по методу, описанному для соединения Н, стадия А, путем реакции N-ацетилтирозинил-валинил-(4-фенокси)пролина и N-аллилоксикарбонил-4-амино-5-бензилокситетрагидрофурана.

¹H ЯМР (500 МГц, СDСl₃ (существующий в виде 1:1 смеси диастереомеров полуацеталя)) δ 7,8-6,3 (м, 17Н), 5,6 (д, 1Н), 5,1-4,15 (м, 5Н), 4,15-3,75 (м, 2Н), 2,95-2,15 (м, 5Н), 2,15-1,95 (м, 1Н), 1,9-1,85 (2× с, 3Н), 1,1-0,75 (м, 6Н).

Стадия F. N-[N-ацетилтирозинил-валинил-(4-фенокси)пролинил]-3-амино-4-оксобутановая кислота.

Соединение заголовка получали методом гидрогенолиза, описанным для соединения Н, стадия D.

¹Н ЯМР (500 МГц, СD₃ОD (существующий в виде 1:1 смеси диастереомеров полуацеталя)) δ 7,25 (м, 2Н), 7,10-6,85 (м, 5Н), 6,65 (д, 2Н), 5,1 (ушир.м, 1Н), 4,65-4,05 (м, 5Н), 4,0-3,40 (м, 2Н), 2,95-2,35 (м, 5Н), 2,25 (м, 1Н), 2,05 (м, 1Н), 1,85 (с, 3Н), 1,0 (д, 3Н), 0,95 (д, 3Н).

К. N-[N-ацетил-тирозинил-валинил-(4-бензилокси)пролинил]-3-амино-4-оксобутановая кислота.

Стадия А. Семикарбазон трет-бутилового эфира N-(N-алдилоксикарбонил-4-бензилоксипродинил-3-амино-4-оксобутановой кислоты.

Соединение заголовка получали путем реакции N-аллилоксикарбонил-4-бензилоксипролина и семикарбазона трет-бутилового эфира 3-амино-4-оксобутановой кислоты (Т. L. Graybill et al., Abstracts of Papers, 206th National Meeting of the American Chemical Society, Abstract MEDI-235. Chicago, IL. (1993)) в тех же условиях для пептидного связывания, как описаны выше (соединение Н; Стадия С).

¹H ЯМР (500 МГц, CDCl₃) δ 9,05 (ушир.с, 1Н), 7,85 (ушир.м, 1Н), 7,4-7,2 (м, 5Н), 7,15 (ушир.с, 1Н), 6,55 (ушир.с, 1Н), 5,9 (м, 1Н), 5,1-4,9 (ушир.м, 2Н), 4,65-4,4 (м, 4Н), 4,2 (ушир.м, 1Н), 3,75-3,5 (м, 2Н), 2,75-2,55 (м, 2Н), 2,5 (ушир.м, 1Н), 2,25 (ушир.м, 1Н), 1,4 (с, 9Н).

Стадия В. Семикарбазон трет-бутилового эфира N-(N-ацетилтирозинил-валинил-(4-бензилоксипролинил))-3-амино-4-оксобутановой кислоты.

Соединение заголовка получали путем реакции N-ацетилтирозинил-валина и семикарбазона трет-бутилового эфира N-(N-аллилоксикарбонил-4-бензилоксипролинил)-3-амино-4-оксо-бутановой кислоты в условиях реакции, описанных для соединения Н, стадия А.

¹H ЯМР (500 МГц, СD₃OD) δ 7,35-7,2 (м, 6Н), 7,0 (д, 2Н), 6,65 (д, 2Н), 4,85 (м, 1Н), 4,6-4,45 (м, 4Н), 4,3 (ушир.м, 1Н), 4,15 (м, 1Н), 3,7 (м, 1Н), 2,95 (м, 1Н), 2,75-2,6 (м, 3Н), 2,35 (м, 1Н), 2,1 (м, 1Н), 1,9 (с, 3Н), 1,4 (с, 9Н), 0,95 (д, 3Н), 0,90 (с, 3Н).

Стадия С. N-(N-ацетилтирозинил-валинил-(4-бензилоксипролинил))-3-амино-4-оксобутановая кислота.

Семикарбазон трет-бутилового эфира N-(N-ацетилтирозинил-валинил-(4-бензилоксипролинил))-3-амино-4-оксобутановой кислоты (270 мг) растворяли в 10 мл 25% трифторуксусной кислоты в дихлорметане и перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч. Смесь концентрировали, что давало твердый остаток. Остаток растворяли в 10 мл смеси метанола:уксусной кислоты:37% формальдегида (3:1:1) и перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. Смесь концентрировали и полученный остаток очищали методом флэш-хроматографии (SiO₂), элюируя дихлорметаном/метанолом/ муравьиной кислотой (100:5:0,5), что давало 37 мг соединения заголовка.

¹Н ЯМР (500 МГц, СD₃ОD (существующий в виде 1:1 смеси диастереомеров полуацеталя)) δ 7,4-7,25 (м, 5Н), 7,0 (д, 2Н), 6,65 (д, 2Н), 4,65-4,05 (м, 7Н), 3,75-3,4 (м, 2Н), 3,05-2,3 (м, 5Н), 2,2-1,95 (м, 2Н), 1,90 (с, 3Н), 1,0 (д, 3Н), 0,95 (д, 3Н).

Пример 4.

Получили значения констант ингибирования (К_i) и КИ₅₀ лля нескольких соединений по данному изобретению, применяя ферментные анализы с помощью УФ-видимого субстрата и клеточные анализы, как описано в Примере 2. Следующие значения К_i и КИ₅₀ были определены для соединений 7а, 7b, 20a-d, 21c-f, 22e, 25, 28, 33а-с, 36а, 36b, 39, 43, 47a, 47b, 54a-l, 63, 69a, 69b, 84a и 84b, применяя указанные анализы. Соответствующие буквенные обозначения соединений указаны в скобках. Структура соединений показана в Примерах 2 и 5.

Пример 5.

Соединения по примеру 4 были получены следующим образом:

Метиловый эфир 3-бензоиламино-4-оксо-4,6,7,8-тетрагидро-пирроло-[1,2-а]пиримидин-6-карбоновой кислоты (3).

Смесь гидрохлорида этилового эфира (4S)-2-амино-1-пирролин-5-карбоновой кислоты (1, 0,44 г, 2,38 ммоль; полученного аналогичным образом, что и метиловый эфир, описанный Lee и Lown, J. Org. Chem., 52, 5717-21 (1987)); 4-этоксиметилен-2-фенил-2-оксазолин-5-она (2, 0,50 г, 2,31 ммоль) и метоксида натрия (0,12 г, 2,22 ммоль) в этаноле (10 мл) кипятили в течение 2 ч. Реакции давали остыть до комнатной температуры и концентрировали под вакуумом. Остаток суспендировали в воде и добавляли 1 н. серную кислоту до тех пор, пока не была достигнута рН 1. Водную смесь экстрагировали добавлением дихлорметана, органический слой отделяли и концентрировали под вакуумом, что давало 0,6 г оранжевого твердого вещества. Хроматография (флэш, SiO₂, 60% этилацетат/гексан возрастало постепенно по градиенту до 100% этилацетата, затем 10% метанол/дихлорметан), что давало 0,5 г оранжевого твердого вещества. Смесь оранжевого твердого вещества и цианида калия (0,03 г, 0,5 ммоль) в метаноле (10 мл) кипятили в течение ночи. Охлажденную реакцию концентрировали под вакуумом, что давало желтое твердое вещество. Хроматография (флэш, SiO₂, 40% этилацетат/гексан до 100% этилацетата постепенно по градиенту) позволяло получить 0,22 г (31,6%) соединения заголовка: ¹H ЯМР (d₆-ДМСО) δ 2,25 (м, 1Н), 2,65 (м, 1Н), 3,15 (м, 2Н), 3,75 (с, 3Н), 5,15 (дд, 1Н), 7,5 (т, 2Н), 7,6 (т, 1Н), 7,95 (д, 2Н), 8,6 (с, 1Н), 9,5 (с, 1Н).

Семикарбазон трет-бутилового эфира (3S)-[(3-бензоил-амино-4-оксо-4,6,7,8-тетрагидропирроло [1,2-а]пиримидин-6-карбонил)амино]-4-оксобутановой кислоты (5а и 5b).

Смесь этилового эфира 3-бензоиламино-4-оксо-4,6,7,8-тетрагидропирроло[1,2-а]пиримидин-6-карбоновой кислоты (3, 0,22 г, 0,70 ммоль) и гидрата гидроксида лития (0,032 г, 0,76 ммоль) в метаноле (5 мл) и тетрагидрофуране (5 мл) перемешивали в течение 18 ч при комнатной температуре. Реакцию концентрировали, что давало литиевую соль 3-бензоиламино-4-оксо-4,6,7,8-тетрагидропирроло[1,2-а]пиримидин-6-карбоновой кислоты (4) в виде белого твердого вещества. Его использовали без дальнейшей очистки в последующей реакции.

Смесь семикарбазона трет-бутилового эфира (3S)-амино-4-оксобутановой кислоты (0,163 г, 0,71 ммоль); Graybill et al., Int. J. Protein Res., 44, стр.173-82 (1994)) и литиевой соли 3-бензоиламино-4-оксо-4,6,7,8-тетрагидропирроло[1,2-а]пиримидин-6-карбоновой кислоты (4) в диметилформамиде (5 мл) и дихлорметане (5 мл) обрабатывали гидроксибензотриазолом (0,104 г, 0,77 ммоль) и гидрохлоридом 1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимида (0,148 г, 0,37 ммоль). Реакции давали нагреться до комнатной температуры и перемешивали в течение 18 ч. Реакцию выливали на воду (50 мл) и экстрагировали добавлением этилацетата (2× 50 мл). Объединенные органические слои промывали водным 1 М раствором однозамещенного сульфата натрия, разбавляли водным гидрокарбонатом натрия (50 мл) и насыщенным водным хлоридом натрия. Органический слой концентрировали под вакуумом, что давало 0,43 г желтого твердого вещества. Хроматография (флэш, SiO₂, гидроксид аммония) метанол/дихлорметан (от 1:1:99 до 1:10:90 постепенно по градиенту)) давала 0,11 г (30,9%) диастереомера с более высоким Rf (5а): ¹H ЯМР (СD₃ОD) δ 1,45 (с, 9Н), 2,29-2,35 (м, 1Н), 2,6-2,7 (м, 2Н), 2,8 (дд, 1Н), 3,1-3,15 (м, 1Н), 3,2-3,3 (м, 1Н), 4,9-4,95 (м, 1Н), 5,2 (дд, 1Н), 7,25 (д, 1Н), 7,5-7,55 (м, 2Н), 7,55-7,6 (м, 1Н), 7,95 (д, 2Н), 8,9 (с, 1Н) и 0,11 г (30,9%) диастереомера с более низким Rf (5b): ¹H ЯМР (СD₃ОD) δ 1,45 (с, 9Н), 2,3-2,4 (м, 1Н), 2,6-2,7 (м, 1Н), 2,7-2,8 (м, 2Н), 3,1-3,15 (м, 1Н), 3,2-3,3 (м, 1Н), 4,85-4,95 (м, 1Н), 5,15 (дд, 1Н), 7,25 (д, 1Н), 7,55 (т, 2Н), 7,6 (т, 1Н), 7,95 (д, 2Н), 8,9 (с, 1Н). Диастереомер 5а и диастереомер 5b брали по отдельности.

(3S)-[(3-бензоиламино-4-оксо-4,6,7,8-тетрагидропирроло[1,2-а]пиримидин-6-карбонил) амино]-4-оксобутановая кислота (7а).

Суспензию семикарбазона трет-бутилового эфира (3S)-[(3-бензоиламино-4-оксо-4,6,7,8-тетрагидропирроло[1,2-а]пиримидин-6-карбонил)амино]-4-оксобутановой кислоты (5а; 0,11 г, 0,22 ммоль) в дихлорметане (7,5 мл) и трифторуксусной кислоте (2,5 мл) перемешивали в течение 5 ч. Реакцию концентрировали под вакуумом, остаток вносили в дихлорметан, концентрировали под вакуумом, суспендировали в толуоле и концентрировали под вакуумом, что давало 0,07 г семикарбазона (3S)-[(3-бензоиламино-4-оксо-4,6,7,8-тетрагидропирроло[1,2-а]пиримидин-6-карбонил) амино]-4-оксобутановой кислоты (6а) в виде белого твердого вещества. Твердое вещество суспендировали в смеси 37% водного формальдегида/уксусной кислоты/метанола (1:1:5) и перемешивали при комнатной температуре в течение 18 часов. Реакцию концентрировали под вакуумом, остаток суспендировали в ацетонитриле и концентрировали под вакуумом, что давало 0,1 г белого твердого вещества. Хроматография (ЖХВР, обращенная фаза С18, от 1% до 75% ацетонитрила/воды (буфер 0,1% трифторуксусная кислота); 20 мин элюции по градиенту); ¹Н ЯМР (CD₃OD (существующий в виде 1:1 смеси аномеров полуацилоксиацеталевой формы)) δ 2,25-2,4 (м, 1Н), 2,45-2,8 (м, 4Н), 3,05-3,15 (м, 1Н), 4,25-4,35 (м, 1Н), 4,55-4,6 (м, 1Н), 5,1-5,2 (м, 1Н), 7,45-7,65 (м, 3Н), 7,9-8,0 (м, 2Н), 8,9 (с, 1Н).

(3S)-[(3-бензоиламино-4-оксо-4,6,7,3-тетрагидропирроло[1,2-а]пиримидин-6-карбонил)амино]-4-оксобутановую кислоту (7b) получали, как это описано для диастереомера 7а, что давало 0,03 г (35%) 7b в виде белого твердого вещества: ВУ=8,1 мин (ЖХВР, обращенная фаза С18, от 1 до 100% ацетонитрила/воды (буфер - 0,1% трифторуксусная кислота); 20 мин элюции по градиенту); ¹H ЯМР (d₆-ДМСО (существующий в виде 1:1 смеси аномеров полуацилоксиацеталевой формы)) δ 2,1-2,2 (м, 1Н), 2,4 (д, 1Н), 2,7-2,8 (м, 1Н), 3,0-3,2 (м, 3Н), 5,0 (дд, 1Н), 5,1-5,2 (м, 1Н), 5,5 (с, 1Н), 5,7-5,8 (м, 1Н), 7,55 (т, 2Н), 7,67 (т, 1Н), 7,95 (д, 2Н), 8,55 (с, 1Н), 9,0-9,15 (м, 1Н), 9,4-9,5 (м, 1Н).

a R=H

b R=PhCH₂

c R=Рh(СН₂)₂

d R=Ph(CH₂)₃

e R=4МеО-Рh(СН₂)₃

f R=4HO-Ph(CH₂)₃

Имидазол-2-карбоновые кислоты 13 получали, применяя модификации описанных методик (Yamanaka et al., Chem. Pharm. Bull., 31, стр.4549-53 (1983); Suzuki et al., J. Orq. Chem., 38, стр.3571-75 (1973); и Oliver et al., J. Orq. Chem., 38, стр.1437-38 (1973)).

Имидазол-2-карбоновую кислоту (13а) получали по Curtis и Brown, J. Org. Chem., стр.4038-40 (1980).

4-бензилимидазол-2-карбоновую кислоту (13b) выделяли в виде не совсем белого твердого вещества: т.пл. 153-155° С; ИК (КВr) 3026-2624, 1630, 1515, 1498, 1438, 1405; ¹H ЯМР (d₆-ДМСО) δ 7,31 (5Н, м), 7,14 (1Н, с), 3,95 (2Н, с).

4-(2-фенилэтил)имидазол-2-карбоновую кислоту (13с) выделяли в виде бледно-желтого твердого вещества: т.пл. 151-153° С; ИК (КВr) 3054-2617, 1637, 1497, 1376; ¹H ЯМР (d₆-ДМСО) δ 7,27 (5Н, м), 7,11 (1Н, с), 2,92 (4Н, с).

4-(3-фенилпропил)имидазол-2-карбоновую кислоту (13d) выделяли в виде бледно-желтого твердого вещества: т.пл. 148-150° С; ИК (КВr) 3020-2615, 1636, 1509, 1498, 1383; ¹H ЯМР (d₆-AMCO) δ 7,35-7,22 (5Н, м), 7,01 (1H, с), 2,62 (4Н, м), 1,94 (2Н, м).

4-[3(4-метоксифенил) пропил]имидазол-2-карбоновую кислоту (13е) выделяли в виде белого кристаллического твердого вещества: т.пл. 155-156° С (с разлож.); ИК (КВr) 3300-2300, 1633, 1513, 1376, 1244; ¹H ЯМР (d₆-ДМСО) δ 9,50-7,50 (2Н, ушир.с), 7,15 (1Н, с), 7,11 (2Н, д, J=8,5), 6,84 (2Н, д, J=8,5), 3,71 (3Н, с), 2,60-2,50 (4Н, м), 1,86 (2Н, м). Анал. расч. для C₁₄H₁₆N₂O_3: С, 64,60; Н, 6,20; N, 10,76. Получ.: С, 64,45; Н, 6,21; N, 10,70.

4-[3(4-гидроксифенил)пропил]имидазол-2-карбоновая кислота (13f).

Раствор этилового эфира 13е (1,15 г, 4,0 ммоль) в сухом дихлорметане (50 мл) обрабатывали трибромидом бора (16 мл, 1,0 М раствор в СН₂Сl₂, 16,0 ммоль) при 0° С. После 15 мин при 0° С смесь нагревали до 25° С и перемешивали в течение 16 ч. Реакционную смесь охлаждали на ледяной бане и гасили капельным добавлением воды (20 мл). Полученную смесь, перемешанную в течение короткого времени при 25° С, затем фильтровали. Фильтрат осторожно нейтрализовали путем добавления твердого NаНСО₃, что давало 13f (700 мг, 71%) в виде белого твердого вещества: т.пл. 186-187° С (с разлож.) (перекристаллизованное из МеОН); ИК (КВr) 3500-2400, 2935, 1640, 1516, 1396, 1232; ¹H ЯМР (d₆-ДМСО) δ 9,83 (3Н, ушир.с), 7,16 (1Н, с), 6,98 (2Н, д, J=8,2), 6,66 (2Н, д, J=8,2), 2,60-2,40 (4Н, м), 1,84 (2Н, м). Анал. расч. для C₁₃H₁₄N₂O₃: С, 63,40; Н, 5,73; N, 11,38. Получ.: С, 62,96; Н, 5,70; N, 11,27.

(2R,S,3S)N²-трет-бутоксикарбонил-N-(тетрагидро-2-бензилокси-5-оксо-3-фуранил)-L-аланинамид (14).

Гидрид три-н-бутилолова (4,0 мл, 14,9 ммоль) добавляли по каплям к раствору (2R,S,3S)3-(N-аллилоксикарбонил)амино-2-бензилокси-5-оксотетрагидрофурана (Chapman, Biorg. Med. Chem. Lett., 2, стр.613-18 (1992); (2,91 г, 10 ммоль)), N-трет-бутоксикарбонил-L-аланина (2,08 г, 11 ммоль) и хлорида бис-(трифенилфосфин)палладия (II) (150 мг) в дихлорметане (75 мл) до тех пор, пока цвет раствора не становился темно-оранжевым. Добавляли гидроксибензотриазол (2,70 г, 20 ммоль) и смесь охлаждали до 0° С. Затем добавляли гидрохлорид 1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимида (2,30 г, 12 ммоль), смеси давали медленно нагреться до комнатной температуры в течение 4 ч. Смесь разбавляли этилацетатом (250 мл) и промывали 1 н. соляной кислотой (3× 150 мл) и соляным раствором (2× 150 мл), затем сушили (МgSO₄), фильтровали и концентрировали. Неочищенный продукт очищали методом колоночной хроматографии (50-70% этилацетат/гексан), что давало 3,17 г (84%) смеси диастереомеров. Перекристаллизация (этилацетат-гексан) давала бесцветные кристаллы: т.пл. 132-145° С; ИК (КВr) 3357, 3345, 1781, 1688, 1661, 1535, 1517, 1165; ¹H ЯМР (d₆-ДMCO) δ 8,49 (д, J=6,8), 8,23 (д, J=7,4), 7,40 (5Н, м), 7,01 (1Н, м), 5,68 (д, J=5,0), 4,75 (м), 4,31 (м), 3,97 (1Н, м), 2,82 (м), 3,11 (м), 2,82 (м), 2,59 (м), 2,45 (м), 1,40 (9Н, с), 1,20 (д, J=7,2), 1,16 (д, J=7,2). Анал. расч. для С₁₉H₂₆N₂O₆: C, 60,31; Н, 6,92; N, 7,40. Получ.: С, 60,30; Н, 6,91; N, 7,38.

(2R,S,3S)-трет-бутоксикарбонил-N-(тетрагидро-2-бензилокси-5-оксо-3-фуранил)-L-пролинамид (15) получали методом, описанным для 14, что давало 1,64 г (81%) бесцветного стекловидного вещества. ИК (КВr) 3317, 2978, 1797, 1697, 1670, 1546, 1400, 1366, 1164, 1121; ¹H ЯМР (CDCl₃) δ 7,68 (1Н, ушир.м), 7,35 (5Н, м), 5,53 (д, J=5,2), 5,43 (с), 4,93-4,61 (м), 4,44 (м), 4,25 (ушир.м), 3,39 (2Н, ушир.м), 3,10-2,81 (1Н, м), 2,44 (1H, м), 2,32 (ушир.м), 1,88 (ушир.м), 1,67 (ушир.м), 1,42 (9Н, с).

(2R,S,3S) N-(N-трет-бутоксикарбонил-(4(R)-фенокси-L-пролинил)-3-амино-2-бензилокси-5-оксотетрагидрофуран (16) получали методом, описанным для 14, что давало 530 мг (84%) бесцветного аморфного твердого вещества: ¹H ЯМР (СDСl₃) δ 7,65 (1H, м), 7,4-7,2 (7Н, м), 6,95 (1H, м), 6,85 (1H, м), 5,55 (1H, д), 4,95 (1H, д), 4,8-4,7 (1H, ушир.м), 4,65 (1H, д), 4,55-4,45 (1H, ушир.м), 4,4-4,3 (0,5Н, ушир.м), 3,95-3,85 (0,5Н, ушир.м), 3,75-3,58 (2Н, м), 2,95-2,8 (1H, м), 2,7-2,55 (1H, м), 2,54-2,4 (1H, м), 2,35-2,2 (1H, м), 1,4 (9Н, с).

(2R,S,3S) N²-[4(3-фенилпропил) имидазол-2-карбонил]-N-(тетрагидро-2-бензилокси-5-оксо-3-фуранил)-L-аланинамид (17d) добавляли к раствору (2R,S,3S) N²-трет-бутоксикарбонил-N-(тетрагидро-2-бензилокси-5-оксо-3фуранил)-L-аланинамид (14) (1,00 г, 2,64 ммоль) в дихлорметане (7 мл) при 0° С. Смесь перемешивали при 0° С в течение 75 мин. Смесь концентрировали и остаток обрабатывали диэтиловым эфиром, затем эфир удаляли под вакуумом. Данную процедуру повторяли дважды, что приводило к выходу бледно-желтого стекловидного вещества. Твердое вещество растворяли в ДМФ (20 мл). Затем к этому раствору добавляли диизопропилэтиламин (1,38 мл, 7,92 ммоль) с последующим добавлением 4-(3-фенилпропил)имидазол-2-карбоновой кислоты (13d) (0,67 г, 2,90 ммоль), гидрохлорида 1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимида (0,56 г, 2,90 ммоль) и гидрооксибензотриазола (0,71 г, 5,28 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 20 ч, затем вливали в соляной раствор. Смесь экстрагировали добавлением этилацетата (3× 50 мл). Объединенные органические экстракты промывали насыщенным водным бикарбонатом натрия (2× 100 мл), затем соляным раствором (2× 100 мл), сушили (MgSO₄), фильтровали и концентрировали. Остаток очищали методом колоночной хроматографии (этилацетат), что давало 0,99 г (76%) 17d в виде смеси диастереомеров: ИК (КВr) 3293, 3064, 2937, 1793, 1650, 1530, 1451, 1446, 1119; ¹H ЯМР (СDСl₃) δ 7,96 (ушир.м), 7,62 (ушир.д), 7,36-7,10 (10Н, м), 6,88 (с), 6,86 (с), 5,53 (д, J=5,2), 5,48 (с), 4,87-4,52 (4Н, м), 3,11-2,38 (2Н, м), 2,65 (4Н, м), 1,99 (2Н, м), 1,47 (д, J=6,9), 1,46 (д, J=7,0).

Следующие соединения получали сходным образом:

(2R,S,3S)N²-(имидазол-2-карбонил]-N-(тетрагидро-2-бензилокси-5-оксо-3-фуранил)-L-аланинамид (17а) выделяли (74%) в виде бледно-желтого вещества: ИК (КВr) 3289, 3056, 2937, 1793, 1664, 1642, 1528, 1453, 1440, 1124; ¹Н ЯМР (d₆-ДМСО) δ 13,13 (1Н, ушир.с), 8,67 (д, J=7,0), 8,48 (д, J=7,8), 8,29 (д, J=6,8), 8,25 (д, J=7,6), 7,40-7,34 (6Н, м), 7,11 (1Н, с), 5,69 (д, J=5,0), 5,49 (д, J=0,8), 4,85-4,31 (4Н, м), 3,19-2,42 (2Н, м), 1,38 (д, J=7,4), 1,34 (д, J=7,4).

(2R,S,3S) N²-(4-бензилимидазол-2-карбонил)-N-(тетрагидро-2-бензилокси-5-оксо-3-фуранил)-L-аланинамид (17b) выделяли (75%) в виде бледно-желтого стекловидного вещества: ИК (КВr) 3294, 3031, 2937, 1792, 1650, 1530, 1453, 1444, 1119; ¹Н ЯМР (СDСl₃) δ 7,99 (ушир.м), 7,75 (ушир.д), 7,36-7,11 (10Н, м), 6,81 (1Н, с), 5,51, 5,45 (д, с, J=5,3), 4,85-4,47 (4Н, м), 3,95 (2Н, с), 3,04-2,72 (1Н, м), 2,48-2,35 (1Н, м), 1,44 (д, J=6,9), 1,43 (д, J=7,1).

(2R,S,3S) N²-[4(2-фенилэтил) имидазол-2-карбонил]-N-(тетрагидро-2-бензилокси-5-оксо-3-фуранил)-L-аланинамид (17с) выделяли (79%) в виде бледно-желтого стекловидного вещества: ИК (КВr) 3292, 3029, 2936, 1793, 1650, 1530, 1453, 1444, 1119; ¹Н ЯМР (СDСl₃) δ 8,06 (ушир.м), 7,70 (ушир.с), 7,39-7,15 (10Н, м), 6,82 (с), 6,81 (c), 5,53 (д, J=5,2), 5,48 (с), 4,87-4,53 (4Н, м), 2,95 (4Н, м), 3,11-2,37 (2Н, м), 1,48 (д, J=5,6), 1,45 (д, J=6,7).

(2R,S,3S) 1-[4-(2-фенилэтил)имидазол-2-карбонил]-N-(тетрагидро-2-бензилокси-5-оксо-3-фуранил)-L-пролинамид (18с) выделяли (79%) в виде бледно-желтого стекловидного вещества: ИК (СН₂Сl₂) 3422, 2959, 1795, 1685, 1611, 1497, 1116; ¹H ЯМР (d₆-ДМСО) δ 12,78-12,59 (1Н, м), 8,61-8,34 (1Н, м), 7,39-7,22 (10Н, м), 6,99-6,61 (1Н, м), 5,71-5,26 (1Н, м), 4,85-4,02 (4Н, м), 3,63 (1Н, м), 3,18-1,74 (11Н, м).

(2R,S,3S) 1-[4(3-фенилпропил)имидазол-2-карбонил]-N-(тетрагидро-2-бензилокси-5-оксо-3-фуранил)-L-пролинамид (18d) выделяли (87%) в виде бесцветного стекловидного вещества: ИК (СН₂Сl₂) 3422, 3214, 2945, 1794, 1685, 1604, 1496, 1117; ¹H ЯМР (d₆-ДМСО) δ 12,71 (1Н, ушир.м), 8,61-8,34 (1Н, м), 7,45-7,18 (10Н, м), 7,05-6,64 (1Н, м), 5,70-5,28 (1Н, м), 4,85-4,02 (4Н, м), 3,62 (1Н, м), 3,18-1,71 (13Н, м).

(2R,S,3S) 1-{4-[3(4-метоксифенил)пропил]имидазол-2-карбонил}-N-(тетрагидро-2-бензилокси-5-оксо-3-фуранил)-L-пролинамид (18е) выделяли (72%) в виде белого стекловидного твердого вещества: т.пл. 62-65° С; ИК (КВr) 3213, 2937, 1793, 1680, 1606, 1606, 1512, 1245; ¹H ЯМР (d₆-ДMCO) δ 12,71, 12,67, 12,58 (1Н, 3× ушир.с), 8,60-8,30 (1Н, м), 7,40-7,20 (5Н, м), 7,15-6,55 (5Н, м), 5,66-5,20 (1Н, м), 4,81-4,59 (2Н, м), 4,55-4,05 (2Н, м), 3,71 (3Н, с), 3,65-3,45 (1Н, м), 3,15-1,50 (13Н, м). FABS MC m/e 547 (М⁺, 100%), 439, 412, 340, 312, 243, 177, 154.

(2R,S,3S) 1-{4-[3(4-гидроксифенил)пропил]имидазол-2-карбонил}-N-(тетрагидро-2-бензилокси-5-оксо-3-фуранил)-L-пролинамид (18f) выделяли (70%) в виде светло-желтого стекловидного твердого вещества: т.пл. 86-90° С; ИК (КВr) 3298, 1790, 1669, 1606, 1515, 1242; ¹H ЯМР (d₆-ДMCO) δ 12,66, 12,56 (1Н, 2× ушир.с), 9,14 (1Н, с), 8,57-8,30 (1Н, м), 7,36-7,30 (5Н, м), 7,02-6,83 (3Н, м), 6,70-6,57 (2Н, м), 5,65-5,28 (1Н, м), 4,80-4,49 (2Н, м), 4,50-4,05 (2Н, м), 3,65-3,45 (1Н, м), 3,15-1,55 (13Н, м). FABS MC m/e 533 (М⁺, 100%), 425, 298, 229, 176, 154.

1-{5-[3-(4-метоксифенил)пропил]-1Н-имидазол-2-карбонил}-4(R)-феноксипирролидин-2(S)-карбонил-(тетрагидро-2-(R, S)-бензилокси-5-оксофуран-3(S)-ил) амид (19е) выделяли (77%) в виде прозрачного бесцветного аморфного твердого вещества: ¹Н ЯМР (CDCl₃) δ 9,95 - 9,75 (1H, м), 7,95 (1Н, ушир.с), 7,40-7,2 (7Н, м), 7,2-6,78 (7Н, м), 5,65-5,6 (1Н, м), 5,55-5,45 (1Н, м), 5,3-5,2 (1Н, м), 5,15-5,0 (1Н, м), 4,95-4,75 (1Н, м), 4,7-4,6 (1Н, м), 4,5-4,4 (1Н, м), 4,35-4,25 (1Н, м), 3,8 (3Н, с), 3,05-1,75 (10Н, м).

(3S) 3-{N-[4-(3-фенилпропил)имидазол-2-карбонил]-L-аланинил}амино-4-оксобутановая кислота (20d).

Смесь (2R,S,3S) N²-[4-(3-фенилпропил)имидазол-2-карбонил]-N-(тетрагидро-2-бензилокси-5-оксо-3-фуранил)-L-аланинамида (0,93 г, 1,90 ммоль) и 10% палладия на активированном угле (0,93 г) в метаноле (100 мл) перемешивали в атмосфере водорода в течение 5 ч. Полученную смесь фильтровали и концентрировали, что давало бесцветное стекловидное вещество. Перекристаллизация из метанола-диэтилового эфира позволяла получить 401 мг (53%) в виде бесцветного твердого вещества: т.пл. 94-96° С; [α ]

\binom{27}{D}

+ 16,4° (с 0,5, МеОН); ИК (КВr) 3300, 3287, 1786, 1732, 1659, 1651, 1532, 1451; ¹H ЯМР (СD₃OD) δ 7,19 (5Н, м), 6,91 (1Н, с), 4,60-4,46 (2Н, м), 4,27 (1Н, м), 2,63 (4Н, м), 2,75-2,40 (2Н, м), 1,96 (2Н, м), 1,44 (3Н, д, J=7,0).

3(S)3-[N-(имидазол-2-карбонил)-L-аланинил]амино-4-оксо-бутановую кислоту (20а; Е) выделяли (83%) в виде бесцветного твердого вещества: т.пл. 115° С; [α ]

\binom{25}{D}

+ 4,4° (с 0,5, МеОН); ИК (КВr) 3303, 1782, 1658, 1650, 1563, 1521, 1454; ¹H ЯМР (CD₃OD) δ 7,18 (2Н, с), 4,55 (2Н, м), 4,27 (1Н, м), 2,56 (2Н, м), 1,45 (д, J=7,1), 1,44 (д, J=7,1).

(3S) 3-[N(4-бензилимидазол-2-карбонил)-L-аланинил]амино-4-оксобутановую кислоту (20b) выделяли (56%) в виде бесцветного твердого вещества: т.пл. 113-115° С; [α ]

\binom{29}{D}

+ 18,2° (с 0,5, МеОН); ИК (КВr) 3301, 3288, 1783, 1727, 1650, 1531, 1452; ¹H ЯМР (СD₃ОD) δ 7,25 (5Н, м), 6,90 (1Н, с), 4,59-4,45 (2Н, м), 4,26 (1Н, м), 3,95 (2Н, с), 2,74-2,39 (2Н, м), 1,42 (3Н, д, J=7,0). Анал. расч. для C₁₈H₂₀N₄O₅: C, 56,69; Н, 5,55; N, 14,69. Получ.: С, 57,06; Н, 5,54; N, 14,41.

(3S) 3-{N-[4-(2-фенилэтил)имидазол-2-карбонил]-L-аланинил} амино-4-оксобутановую кислоту (20с; N) выделяли (53%) в виде бесцветного твердого вещества: т.пл. 102-104° С; [α ]

\binom{27}{D}

+ 13,7° (с 0,5, МеОН); ИК (КВr) 3299, 3289, 1785, 1732, 1650, 1531, 1452; ¹Н ЯМР (CD₃OD) δ 7,20 (5Н, м), 6,82 (1Н, с), 4,60-4,46 (2Н, м), 4,29 (1Н, м), 2,92 (4Н, с), 2,76-2,41 (2Н, м), 1,44 (3Н, 2× д, J=7,1). Анал. расч. для C₁₉H₂₂N₄O₅· H₂O: С, 56,43; Н, 5,98; N, 13,85. Получ.: С, 56,65; Н, 5,84; N, 13,91.

(3S) 3-{N-[4-(2-фенилэтил)имидазол-2-карбонил]-L-пролинил}амино-4-оксобутановую кислоту (21с) выделяли (85%) в виде бесцветного стекловидного вещества: т.пл. 101-103° С (метанол/диэтиловый эфир); [α ]

\binom{27}{D}

- 63,8° (с 0,25, МеОН); ИК (КВr) 3275, 1784, 1728, 1664, 1606, 1498, 1429; ¹H ЯМР (CD₃OD) δ 7,24 (5Н, м), 6,83 (с), 6,79 (с), 4,58-4,14 (3Н, м), 3,69 (1Н, м), 2,93 (4Н, ушир.с), 2,75-1,99 (6Н, м). Анал. расч. для C₂₁H₂₄N₄O₅· H₂O: С, 58,60; Н, 6,09; N, 13,02. Получ.: С, 58,34; Н, 5,96; N, 12,67.

(3S) 3-{N-[4(3-фенилпропил)имидазол-2-карбонил]-L-пролинил}амино-4-оксобутановую кислоту (21d) выделяли (81%) в виде бесцветного стекловидного вещества: т.пл. 91-94° С; (метанол/диэтиловый эфир); [α ]

\binom{25}{D}

- 68° (с 0,25, МеОН); ИК (КВr) 3277, 2939, 1784, 1727, 1662, 1606, 1498, 1429; ¹H ЯМР (СD₃ОD) δ 7,29-7,16 (5Н, м), 6,92 (с), 6,86 (с), 4,58-4,16 (3Н, м), 3,71 (1Н, м), 2,75-1,92 (13Н, м). Анал. расч. для C₂₂H₂₆N₄O₅· H₂O: C, 59,45; Н, 6,35; N, 12,60. Получ.: С, 59,75; Н, 6,21; N, 12,41.

(3S) 3-{N-[4(3(4-метоксифенил) пропил]имидазол-2-карбонил]-L-пролинил}амино-4-оксобутановую кислоту (21е) выделяли (65%) в виде белого стекловидного твердого вещества: т.пл. 101-105° С; [α ]

\binom{23}{D}

- 60,6° (с 0,05, МеОН); ИК (КВr) 3231, 1784, 1726, 1611, 1512, 1245; ¹Н ЯМР (CD₃OD) δ 7,09 (2Н, д, J=8,6), 6,92-6,85 (1Н, 2× с), 6,81 (2Н, д, J=8,6), 5,45-5,30 (1Н, м), 4,64-4,46 (1Н, м), 4,28-4,10 (2Н, м), 3,75 (3Н, с), 3,74-3,66 (1Н, м), 2,67-1,84 (13Н, м). Анал. расч. для С₂₃H₂₈N₄O₆· H₂O: С, 58,22; Н, 6,37; N, 11,81. Получ.: С, 58,39; Н, 6,34; N, 11,45; FAB MC m/e 457 (М⁺), 405, 312, 243, 215, 176, 154 (100%).

(3S) 3-{N-[4-[3(4-гидроксифенил) пропил]имидазол-2-карбонил]-L-пролинил}амино-4-оксобутановую кислоту (21f) выделяли (43%) в виде белого стекловидного твердого вещества: т.пл. 114-118° С; [α ]

\binom{25}{D}

- 55,7° (с 0,05, МеОН); ИК (КВr) 3288, 2935, 1780, 1715, 1662, 1610, 1515, 1441; ¹H ЯМР (CD₃OD) δ 6,99 (2Н, д, J=8,5), 6,91, 6,85 (1H, 2× c), 6,68 (2Н, д, J=8,5), 5,45-5,30 (1H, м), 4,60-4,47 (1H, м), 4,30-4,10 (2Н, м), 3,80-3,55 (1H, м), 2,70-1,80 (13Н, м). Анал. расч. для C₂₂H₂₆N₄O₆· H₂O: C, 57,38; Н, 6,13; N, 12,17. Получ.: С, 57,68; Н, 6,25; N, 11,66; FAB MC m/e 443 (М⁺), 298, 229, 154 (100%).

3(S)-[(1-{5-[3-(4-метоксифенил)пропил]-1Н-имидазол-2-карбонил}-4(R)-феноксипирролидин-2(S)-карбонил)амино]-4-оксобутановую кислоту (22е) выделяли (43%) в виде твердого вещества: ¹H ЯМР (СD₃ОD) δ 7,35-7,2 (3Н, м), 7,15-7,0 (2Н, м), 6,98-6,85 (3Н, м), 6,83-6,77 (2Н, д), 5,4-5,1 (1H, м), 4,65-4,5 (1H, м), 4,35-4,2 (2Н, м), 4,15-3,90 (1H, м), 3,78 (3Н, м), 3,62-3,48 (1H, м), 2,78-2,25 (8Н, м), 2,02-1,9 (2Н, м).

Трет-бутиловый эфир {фенэтил-[5(3-пропил)-1Н-имидазол-2-карбонил]амино} уксусной кислоты (23).

Раствор 4-(3-фенилпропил)имидазол-2-карбоновой кислоты (13d) (150 мг, 0,65 ммоль) и трет-бутилового эфира N-(2-фенэтил) глицина (140 мг, 0,59 ммоль) в 5 мл безводного диметилформамида при 0° С обрабатывали диизопропилэтиламином (154 мкл, 0,89 ммоль), гидроксибензотриазолом (160 мг, 1,18 ммоль) и гидрохлоридом 1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимида (136 мг, 0,71 ммоль). После перемешивания в течение 36 ч реакцию выливали на насыщенный водный хлорид натрия и экстрагировали добавлением этилацетата (3× 50 мл). Объединенные органические экстракты промывали дважды насыщенным водным бикарбонатом натрия (2x) и насыщенным водным хлоридом натрия (1х), сушили (Na₂SO₄), фильтровали и концентрировали под вакуумом, что давало коричневую маслянистую жидкость. Хроматография (флэш, SiO₂, 30% этилацетат/гексан) давала 160 мг (61%) 23 в виде белого твердого вещества. ¹H ЯМР (СDСl₃) δ 7,38-7,14 (10Н, м), 6,85-6,8 (1Н, м), 4,84-4,76 (1Н, д), 4,5-4,42 (1Н, м), 4,07-4,0 (1Н, д), 3,78-3,72 (1Н, м), 3,12-2,94 (2Н, 2× м), 2,75-2,55 (4Н, м), 2,1-1,95 (2Н, м), 1,5-1,45 (9Н, 3× с).

Семикарбазон трет-бутилового эфира (3S)-(2-фенэтил-[5-(3-фенилпропил)-1Н-имидазол-2-карбонил]амино}ацетиламино)-4-оксобутановой кислоты (24).

Сложный эфир 23 (160 мг, 0,357 ммоль) обрабатывали 25% трифторуксусной кислотой/дихлорметаном (7 мл) в течение 4 ч. Реакцию концентрировали под вакуумом, что позволяло получить 180 мг кислоты. Кислоту (180 мг, 0,357 ммоль) связывали с семикарбазоном трет-бутилового эфира (3S)-3-амино-4-оксобутановой кислоты (161 мг, 0,357 ммоль), как это описано для получения 5а и 5b, что давало 86 мг (33%) 24 (один диастереомер) в виде белого твердого вещества: ¹Н ЯМР (СDСl₃) δ 10,9-10,3 (1Н, 2д), 10,08-9,78 (1H, 2д), 9,25-9,15 (1Н, м), 8,35-8,10 (1H, 2м), 7,9-7,85 (1H, 2с), 7,40-7,05 (10Н, м), 6,9-6,75 (1H, м), 6,3-5,8 (1H, ушир.с), 5,2-4,65 (2Н, м), 4,35-3,5 (3Н, м), 3,25-3,0 (2Н, м), 2,9-2,45 (6Н, м), 2,05-1,8 (2Н, м), 1,4 (9Н, с).

Трифторуксуснокислая соль (3S) (2-фенэтил-[5(3-фенилпропил)-1Н-имидазол-2-карбонил]амино}ацетиламино)-4-оксобутановой кислоты (25) получали методом, описанным для 7а, что позволяло получить 32 мг (82%) в виде белого твердого вещества: ¹H ЯМР (СD₃OD) δ 7,05-7,35 (м, 11Н), 4,65 (м, 1H), 4,4 (м, 1H), 4,3 (с, 2Н), 3,6-4,0 (м, 2Н), 2,5-2,95 (м, 8Н), 2,05 (м, 2Н).

Метиловый эфир 7-[5-(3-фенилпропил)-1Н-имидазол-2-карбонил]-1,4-дитиа-7-азаспиро[4,4]нонан-8(S)-карбоновой кислоты (26).

4-(3-фенилпропил)имидазол-2-карбоновую кислоту (13d) связывали с гидробромидом метилового эфира 1,4-дитиа-7-азаспиро[4,4]нонан-8(S)-карбоновой кислоты (Smith et al., J. Med. Chem., 31, стр.875-85 (1988)) по методу, описанному для 23, что позволяло получить 140 мг (65%) в виде желтого клейкого вещества: ¹H ЯМР (СDСl₃) δ 7,34-7,15 (5Н, м), 6,98-6,8 (1Н, 3с), 5,7-5,65 (0,5Н, м), 5,2-5,1 (1Н, м), 4,82-4,75 (0,5Н, м), 4,4-4,35 (1Н, м), 4,05 (1H, д), 3,75-3,7 (3Н, 2с), 3,4-3,3 (4Н, м), 2,95-2,45 (8Н, м), 2,05-1,95 (2Н, м).

Семикарбазон трет-бутилового эфира (3S) ({7-[5-(3-фенилпропил)-1Н-имидазол-2-карбонил]-1,4-дитиа-7-азаспиро[4,4]нонан-8(S)-карбонил}-амино)-4-оксобутановой кислоты (27).

По методике, описанной для 4, эфир 26 превращали в соответствующую кислоту, которую последовательно связывали с семикарбазоном трет-бутилового эфира (3S)-3-амино-4-оксобутановой кислоты, как это описано для 24, что давало 70 мг (33%) в виде коричневого твердого вещества: ¹Н ЯМР (CD₃OD) δ 7,28-7,10 (5Н, м), 6,90 (1H, ушир.с), 4,94 (1H, м), 3,96-3,86 (2Н, к), 3,35-3,25 (4Н, д), 3,0 (2Н, с), 2,73-2,59 (6Н, м), 2,0-1,92 (2Н, м), 1,44 (9Н, с).

(3S)-({7-[5-(3-фенилпропил)-1Н-имидазол-2-карбонил]-1,4-дитиа-7-азаспиро[4,4]нонан-8(S)-карбонил)-амино)-4-оксобутановую кислоту (28) получали методом, описанным для 7а, что позволяло получить 17 мг (26%) в виде светло-коричневого твердого вещества: ¹Н ЯМР (СD₃ОD) δ 7,4 (с, 1H), 7,1-7,25 (м, 5Н), 4,9 (м, 1H), 4,6 (м, 1H), 4,3 (м, 1H), 3,95 (с, 2Н), 3,25-3,4 (м, 4Н), 3,0 (д, 2Н), 2,6-2,8 (м, 5Н), 2,45 (м, 1Н), 2,05 (м, 2Н).

a R=Ph(CH₂)₂

b R=4CF₃-Ph(CH₂)₂

с R=РhСН₂

Эфиры 4,5-дигидроимидазол-4-карбоновых кислот (29) получали по модификации методики, описанной Jones et al., Tetrahedron Lett., 29, стр.3853-56 (1988).

(4R,S) метил-2(2-фенилэтил)-4,5-дигидроимидазол-4-карбоксилат (29а).

Сухой хлороводород пропускали через раствор гидроцин-намоиитрила (3,28 мл, 25 ммоль) в метаноле (125 мл) при 0° С в течение 45 мин. Растворители удаляли, что давало промежуточную соль, которую растворяли в метаноле (125 мл) совместно с метил-2,3-диаминопропионатом (25 ммоль) (Jones et al., выше).

Смесь держали при комнатной температуре в течение 2,5 ч, затем концентрировали до желтой маслянистой жидкости. Неочищенный продукт очищали методом колоночной хроматографии (10-20% метанол/дихлорметан), что позволяло получить 3,52 г (61%) бесцветного стекловидного вещества: ¹H ЯМР (СDСl₃) δ 7,30-7,15 (5Н, м), 4,63 (1Н, т, J=9,7), 3,96 (2Н, д, J=9,7), 3,72 (3Н, с), 3,10 (4Н, м), ¹³C ямр (СDСl₃) δ 171,3, 168,8, 138,3, 128,4, 128,2, 126,6, 57,3, 53,0, 47,7, 31,7, 27,9.

(4R,S) метил 2-[2-(4-трифторметилфенил)этил]-4,5-дигидроимидазол-4-карбоксилат (29b) получали методом, описанным для 29а, что давало выход 6,80 г (78%) в виде бесцветного твердого вещества: т.пл. 136-141° С; ¹H ЯМР (СDСl₃) δ 7,45 (4Н, с), 4,71 (1Н, дд, J=8,6, 10,8), 4,02 (2Н, м), 3,73 (3Н, с), 3,19 (4Н, м).

Эфиры имидазол-4-карбоновых кислот 30 получали по модификации методики, описанной Martin et al., J. Org. Chem., 33, стр.3758-61 (1968).

Метил 2-(2-фенилэтил)имидазол-4-карбоксилат (30а)

Смесь (4R,S)-метил-2-(2-фенилэтил)-4,5-дигидроимидазол-4-карбоксилата (29а) (3,40 г, 14,64 ммоль), хлороформа (75 мл) и оксида марганца (IV) (13,0 г, 150 ммоль) нагревали с обратньм холодильником в течение 21 ч, затем фильтровали горячей. Твердые вещества промывали хлороформом и метанолом. Объединенные фильтраты концентрировали, что давало желто-коричневое твердое вещество, которое очищали методом колоночной хроматографии (2-5% метанол/дихлорметан), что позволяло получить 1,46 г (43%) бледно-желтого твердого вещества: т.пл. 151-155° С; ИК (КВr) 3028, 2946, 1720, 1533, 1433, 1348, 1195, 1166; ¹H ЯМР (СDСl₃) δ 7,62 (1Н, с), 7,26-7,02 (5Н, м), 3,82 (3Н, с), 3,03 (4Н, ушир.с), ¹³C ямр (СDСl₃) δ 162,9, 150,2, 140,3, 128,5, 128,2, 126,3, 51,5, 34,5, 30,4. Анал. расч. для C₁₃H₁₄N₂O₂: C, 67,81; Н, 6,13; N, 12,16. Получ.: С, 67,70; Н, 6,15; N, 12,16.

Метил-2-[2(4-трифторметилфенил)этил]имидазол-4-карбоксилат (30b) получали по методу, описанному для 30а. Его перекристаллизовывали из этилацетата, что позволяло получить 1,88 г (33%) кремовых кристаллов: т.пл. 225-26° С; ИК (КВr) 3239, 2951, 1715, 1532, 1331, 1158, 1105, 1068; ¹H ЯМР (СDСl₃) δ 7,61 (1Н, с), 7,54 (2Н, д, J=8,1), 3,89 (3Н, с), 3,10 (4Н, м). Анал. расч. для C₁₄H₁₃F₃N₂O₂: С, 56,38; Н, 4,39; N, 9,39; F, 19,11. Получ.: С, 56,23; Н, 4,44; N, 9,33; F, 19,08.

2-(2-фенилэтил)имидазол-4-карбоновая кислота (31а).

Смесь метил-2-(2-фенилэтил)имидазол-4-карбоксилата (30а) (1,38 г, 6 ммоль), метанола (30 мл) и 1 М водного гидроксида натрия (30 мл) нагревали с обратным холодильником в течение 16 ч. Метанол удаляли в условиях пониженного давления и полученный водный раствор нейтрализовали 4 М соляной кислотой, причем выпадало в осадок бледно-желтое твердое вещество. Осадок собирали, промывали водой и сушили, что позволяло получить 1,18 г (91%) бледно-желтого твердого вещества: т-пл. 117-120° С; ИК (КВr) 3375, 3131, 2616, 2472, 1638, 1592, 1551, 1421, 1388, 1360; ¹Н ЯМР (d₆-ДМСО) δ 7,59 (1Н, с), 7,26 (5Н, м), 2,99 (4Н, м). Анал. расч для С₁₂Н₁₂N₂O₂· 0,25Н₂O: С, 65,29; Н, 5,71; N, 12,69. Получ.: С, 65,00; Н, 5,64; N, 12,58.

2-[2-(4-трифторметилфенил)этил]имидазол-4-карбоновую кислоту (31b) получали по методу, описанному для 31а, что позволяло получить 1,09 г (76%) бледно-желтого твердого вещества: т.пл. 126-130° С; ИК (КВr) 3339, 2640-2467, 1638, 1589, 1545, 1383, 1323; ¹H ЯМР (d₆-ДМСО) δ 7,69 (2Н, д, J=8,0), 7,59 (1Н, с), 7,47 (2Н, д, J=8,0), 3,06 (4Н, м).

(2R,S,3S)N²-[2-(2-фенилэтил)имидазол-4-карбонил]-N-(тетрагидро-2-бензилокси-5-оксо-3-фуранил)-L-аланинамид (32а).

К раствору (2R,S,3S)N²-тpeт-бутоксикарбонил-N-(тетрагидро-2-бензилокси-5-оксо-3-фуранил)-L-аланинамида (14) (1,59 г, 4,20 ммоль; Chapman, Biorg. Med. Chem. Lett., 2, стр.613-18 (1992)) в дихлорметане (15 мл), охлажденному до 0° С, добавляли трифторуксусную кислоту (15 мл). Смесь перемешивали при 0° С в течение 1 ч и затем концентрировали. Остаток обрабатывали эфиром и затем эфир удаляли под вакуумом. Данную процедуру повторяли дважды, что давало бледно-желтое стекловидное вещество. Твердое вещество растворяли в ДМФ (20 мл), затем к раствору добавляли диизопропилэтиламин (2,19 мл, 12,6 ммоль), 2-(2-фенилэтил)имидазол-4-карбоновую кислоту (31а) (1,0 г, 4,62 ммоль), гидрохлорид 1-(3-диметил-аминопропил)-3-этилкарбодиимида (0,89 г, 4,62 ммоль) и гидроксибензотриазол (1,14 г, 8,40 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 20 ч, затем вливали в соляной раствор. Смесь экстрагировали добавлением этилацетата (3× 50 мл). Объединенные органические экстракты промывали насыщенным водным бикарбонатом натрия (3× 100 мл), затем соляным раствором (3× 100 мл), сушили (MgSO₄) и концентрировали. Остаток очищали методом колоночной хроматографии (2-10% изопропанол в дихлорметане, затем 0-6% изопропанол в этилацетате), что давало выход 1,10 г (55%) 32а в виде смеси диастереомеров: ИК (КВr) 3278, 3065, 1790, 1641, 1577, 1545, 1499, 1454, 1120; ¹Н ЯМР (СDСl₃) δ 10,26 (1Н, с), 8,14 (1H, с), 7,66 (д, J=7,0), 7,56 (д, J=7,0), 7,43 (1Н, с), 7,31-7,11 (10Н, м), 5,49 (д, J=5,6), 5,48 (с), 4,83-4,41 (4Н, м), 3,04-2,41 (2Н, м), 2,99 (4Н, с), 1,45 (д, J=7,0), 1,44 (д, J=7,0).

(2R,S,3S) N²-{2-[2-(4-трифторметилфенил)этил]имидазол-4-карбонил}-N(тетрагидро-2-бензилокси-5-оксо-3-фуранил)-L-аланинамид (32b) получали методом, описанным для 32а, что позволяло получить 1,08 г (62%) бледно-желтого стекловидного вещества: ИК (КВr) 3376, 3284, 3070, 2938, 1791, 1642, 1578, 1546, 1327, 1165, 1122, 1068; ¹H ЯМР (СDСl₃) δ 7,95 (0,5Н, м), 7,55-7,25 (11,5Н, м), 5,53 (с), 5,49 (д, J=5,3), 4,88-4,48 (4Н, м), 3,11-2,96 (4Н, м), 2,91 (1H, м), 2,51 (1H, м), 1,47 (3Н, д, J=7,1).

(2R,S,3S)N²-(2-бензилимидазол-4-карбонил)-N-(тетрагидро-2-бензилокси-5-оксо-3-фуранил)-L-аланинамид (32с) получали методом, описанным для 32а из 2-бензилимидазол-4-карбоновой кислоты (Ger. Offen. DE 3427136), что позволяло получить 1,13 г (83%) желтого стекловидного вещества: ИК (CH₂Cl₂) 3433, 3062, 2990, 1803, 1693, 1584, 1504, 1429, 1285, 1258; ¹Н ЯМР (CDCl₃) δ 9,50 (с), 9,37 (с), 7,86 (0,5Н, д, J=6,1), 7,56-7,21 (10,5Н, м), 7,48 (1Н, с), 5,51 (д, J=5,2), 5,48 (с), 4,87-4,41 (4Н, м), 4,08 (с), 4,07 (с), 3,03-2,39 (2Н, м), 1,46 (3Н, д, J=7,0).

(3S) 3-{N-[2(2-фенилэтил)имидазол-4-карбонил]-L-аланинил}амино-4-оксобутановая кислота (33а; А).

Смесь (2R,S,3S) N²-[2-(2-фенилэтил)имидазол-4-карбонил]-N-(тетрагидро-2-бензилокси-5-оксо-3-фуранил)-L-аланинамида (32а) (1,0 г, 2,10 ммоль) и 10% палладия на активированном угле (1,0 г) в метаноле (50 мл) перемешивали в атмосфере водорода в течение 4,5 ч. Полученную смесь фильтровали и концентрировали, что давало бесцветное стекловидное вещество. Перекристаллизация из метанола-диэтилового эфира позволяла получить 510 мг (63%) бесцветного твердого вещества: т.пл. 127° С; ИК (КВr) 3360, 3279, 2981, 1781, 1732, 1646, 1577, 1547; ¹H ЯМР (СD₃ОD) δ 7,54 (1Н, с), 7,29-7,12 (5Н, м), 4,69-4,47 (2Н, м), 4,28 (1Н, м), 3,01 (4Н, с), 2,76-2,39 (2Н, м), 1,43 (3Н, 2× д, J=7,0, J=7,0). ¹³C ЯМР (СD₃ОD) δ 176,2, 176,0, 174,7, 174,6, 164,4, 164,3, 150,5, 141,9, 134,8, 129,5, 129,3, 127,3, 122,3, 98,8, 98,4, 52,3, 52,0, 50,3, 35,6, 31,2, 18,8, 18,7. Анал. расч. для C₁₉H₂₂N₄O₅· H₂O: C, 56,43; Н, 5,98; N, 13,85. Получ.: С, 56,78; Н, 5,70; N, 13,77.

(3S) 3-{N-[2-(2-[4-трифторметилфенил]этил)имидазол-4-карбонил]-L-аланинил}амино-4-оксобутановая кислота (33b; С) получали методом, описанным для 33а, что позволяло получить 612 мг (73%) бесцветного твердого вещества: т.пл. 120-124° С; [α ]

\binom{23}{D}

+ 14,3° (с 0,5, МеОН); ИК (КВr) 3287, 2985, 2937, 1782, 1732, 1646, 1579, 1547, 1327; ¹H ЯМР (СD₃ОD) δ 7,56 (2Н, д, J=8,0), 7,54 (1H, с), 7,36 (2Н, д, J=8,0), 4,60-4,48 (2Н, м), 4,28 (1H, м), 3,08 (4Н, м), 2,75-2,41 (2Н, м), 1,43 (3Н, д, J=7,0). Анал. расч. для C₂₀H₂₁F₃N₄O₅· 0,5 H₂O: C, 51,84; Н, 4,78; N, 12,09; F, 12,30. Получ.: С, 51,83; Н, 4,72; N, 12,14, F, 12,36.

(3S) 3-[N(2-бензилимидазол-4-карбонил]-L-аланинил]амино-4-оксобутановую кислоту (33с; В) получали методом, описанным для 33а, что позволяло получить 426 мг (64%) бесцветного твердого вещества: [α ]

\binom{23}{D}

+ 13,4° (с 0,407, МеОН); ИК (КВr) 3260, 3150, 2980, 1779, 1727, 1649, 1573, 1547; ¹H ЯМР (СD₃ОD) δ 7,58 (1H, с), 7,34-7,22 (5Н, м), 4,59-4,47 (2Н, м), 4,28 (1H, м), 4,07 (2Н, с), 2,74-2,41 (2Н, м), 1,42 (3Н, д, J=6,7). ¹³C ЯМР (СD₃ОD) δ 175,6, 175,5, 175,0, 164,6, 164,5, 150,1, 138,7, 135,3, 130,0, 129,9, 128,2, 122,9, 98,9, 98,5, 52,5, 52,2, 35,5, 35,1, 35,0, 19,0, 18,9. Анал. расч. для C₁₈H₂₀N₄O₅· H₂O: C, 55,37; Н, 5,68; N, 14,35. Получ.: С, 55,83; Н, 5,75; N, 13,96. MC (FAB, m/z): 373 (М⁺), 228, 185, 91.

R=H

(b) R=CH₂Ph

5-бензилпиррол-2-карбоновая кислота (34b).

Смесь этил-5-бензилпиррол-2-карбоксилата (0,7 г, 3,05 ммоль; Elder et al., Synthetic Comunications, 19, 763-767 (1989)), этанола (20 мл) и 1 М гидроксида натрия (9,2 мл, 9,2 ммоль) перемешивали и нагревали с обратным холодильником в течение 3 ч. Основную часть этанола удаляли и оставшуюся жидкость разбавляли водой, промывали эфиром, охлаждали на льду и подкисляли концентрированной соляной кислотой. Смесь экстрагировали добавлением эфира. Объединенные экстракты промывали соляным раствором, сушили (Na₂SO₄) и концентрировали, что позволяло получить 0,567 г (92%) не совсем белого твердого вещества: т.пл. 130-134° С; ¹Н ЯМР (СDСl₃) δ 8,87 (1Н, ушир.с), 7,37-6,95 (5Н, м), 6,97 (1Н, м), 6,07 (1H, м), 4,00 (2Н, с).

(2R,S,3S) N²-(пиррол-2-карбонил)-N-(тетрагидро-2-бензилокси-5-оксо-3-фуранил)-L-аланинамид (35а).

Раствор (2R,S,3S) N²-трет-бутоксикарбонил-N-(тетрагидро-2-бензилокси-5-оксо-3-фуранил)-L-аланинамида (14) (756 мг, 2,0 ммоль) в сухом дихлорметане (8 мл) при 0° С обрабатывали трифторуксусной кислотой (8 мл) в течение 1 ч и затем выпаривали досуха. К остатку добавляли сухой эфир и смесь концентрировали, что давало вязкую маслянистую жидкость. Маслянистую жидкость растворяли в сухом ДМФ (10 мл). Добавляли пиррол-2-карбоновую кислоту (34а) (244 мг, 2,2 ммоль) и раствор охлаждали на ледяной бане перед добавлением N,N-диизопропиламина (0,78 г, 6,0 ммоль), 1-гидроксибензотриазола (0,54 г, 4,0 ммоль) и гидрохлорида этилдиметил-аминопропилкарбодиимида (0,42 г, 2,2 ммоль). Полученную смесь перемешивали при 25° С в течение 17 ч и затем добавляли насыщенный водный хлорид натрия (30 мл). Смесь экстрагировали добавлением этилацетата (3× 20 мл) и объединенные органические экстракты промывали 5% водным бикарбонатом натрия (3× 10 мл) и соляным раствором (10 мл), сушили (MgSO₄) и концентрировали. Флэш-хроматография (25% гексан-этилацетат) позволяла получить 557 мг (75%) 1:1 смеси диастереомеров в виде белого стекловидного твердого вещества: т.пл. 85-90° С; ИК (КВr) 3288, 1789, 1665, 1629, 1557 и 1122; ¹H ЯМР (d₆-ДМСО) δ 11,46 (1Н, ушир.с), 8,55 (0,5Н, д, J=7,0), 8,30 (0,5Н, д, J=7,6), 8,06 (0,5Н, д, J=7,0), 8,04 (0,5Н, д, J=7,6), 7,36-7,30 (5Н, м), 6,88-6,85 (2Н, м), 6,10-6,07 (1Н, м), 5,63 (0,5Н, д, J=5,0), 5,42 (0,5Н, с), 4,72 (2Н, к, J=12,2), 4,74-4,25 (2Н, м), 3,14-2,35 (2Н, м), 1,29, 1,25 (3Н, 2× д, J=7,2).

(2R,S,3S) N²-(5-бензилпиррол-2-карбонил)-N-(тетрагидро-2-бензилокси-5-оксо-3-фуранил)-L-аланинамид (35b) получали из 5-бензилпиррол-2-карбоновой кислоты (34b) по методу, описанному для соединения 35а (65%). Данные приводятся для одного диастереомера. ¹H ЯМР (d₆-ДМСО) δ 11,37 (1H, ушир.с), 8,27 (1H, д, J=7,4), 7,93 (1H, д, J=7,6), 7,33-7,16 (10Н, м), 6,76 (1H, м), 5,82 (1H, м), 5,62 (1H, д, J=5,2), 4,76 (1H, д, J=12,0), 4,65 (1H, м), 4,62 (1H, д, J=12,2), 4,47 (1H, м), 3,88 (2Н, с), 2,77 (1H, дд, J=9,0, 18,0), 2,5 (дд), 1,23 (3Н, д, J=7,0).

(3S) 3-[N(пиррол-2-карбонил]-L-аланинил]амино-4-оксобутановая кислота (36а; D).

Смесь (35а) (612 мг, 1,65 ммоль), метанола (40 мл) и 10% палладия на угле (500 мг) энергично перемешивали в атмосфере водорода в течение 4 ч. Смесь фильтровали сквозь 0,2 мкМ нейлоновую мембрану, затем концентрировали. Остаток очищали методом флэш-хроматографии (5-10% метанол в метиленхлориде), что позволяло получить полугидрат (36а) (223 мг, 48%) в виде белого твердого вещества после осаждения из смеси этилацетат-эфир. В продукте были следы растворителя: т.пл. 96-100° С; ИК (КВr) 3381, 1774, 1729 (EtOAc), 1632, 1558, 1523, 1123; ¹H ЯМР (CD₃OD) δ 6,94-6,85 (2Н, м), 6,17 (1H, дд, J=3,8 и 2,6), 4,58 (0,5Н, д, J=3,94), 4,56 (0,5Н, д, J=4,24), 4,51 (1H, к, J=7,16), 4,35-4,20 (1H, м), 2,74-2,40 (2Н, м), 1,42 и 1,41 (3Н, 2× д, J=7,13).

(3S) 3-[N-(5-бензилпиррол-2-карбонил]-L-аланинил]амино-4-оксобутановую кислоту (36b) получали (41%) из 35b по методу, описанному для соединения 36а, что позволяло получить не совсем белон твердое вещество: т.пл. 109-112° С; [α ]

\binom{25}{D}

+ 6,3° (с 0,3, метанол); ИК (КВr) 3368, 1724, 1630, 1530, 1453, 1414, 1233, 1049; ¹H ЯМР (d₄-метанол) δ 7,25-7,11 (5Н, м), 6,76 (1Н, д, J=3,5), 5,84 (1Н, д, J=3,5), 4,51 (1Н, м), 4,43 (1Н, к, J=7,1), 4,23 (1Н, м), 2,5 (2Н, м), 1,35 (3Н, д, J=7,0). Анал. расч. для С₁₉Н₂₁N₃O₅· 1,75H₂O: C, 56,64; Н, 6,13; N, 10,43. Получ.: С, 56,34; Н, 5,72; N, 10,00.

(2R,S,3S)1-(индол-2-карбонил)-N-(тетрагидро-2-бензилокси-5-оксо-3-фуранил)-L-пролинамид (38).

К раствору (2R,S,3S)1-трет-бутоксикарбонил-N-(тетрагидро-2-бензилокси-5-оксо-3-фуранил)-L-пролинамида (15) (0,607 г, 1,5 ммоль) в дихлорметане (4 мл) при 0° С добавляли трифторуксусную кислоту (4 мл). Смесь перемешивали при 0° C в течение 75 мин. Смесь концентрировали и остаток обрабатывали диэтиловым эфиром, затем эфир удаляли под вакуумом. Данную процедуру повторяли дважды, что давало желтую маслянистую жидкость, которую растворяли в ДМФ (12 мл). К раствору добавляли диизопропилэтиламин (0,78 мл, 4,5 ммоль) с последующим добавлением индол-2-карбоновой кислоты (266 мг, 1,65 ммоль), гидрохлорида 1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимида (316 мг, 1,65 ммоль) и гидроксибензотриазола (405 мг, 3 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 20 ч, затем выливали в соляной раствор. Смесь экстрагировали добавлением этилацетата (3× 30 мл). Объединенные органические экстракты промывали насыщенным водным бикарбонатом натрия (2× 60 мл), затем соляным раствором (2× 60 мл), сушили (MgSO₄), фильтровали и концентрировали. Остаток очищали методом колоночной хроматографии (этилацетат), что позволяло получить 518 мг (77%) смеси диастереомеров: ИК (КВr) 3314, 1780, 1677, 1609, 1524, 1435, 1406, 1344; ¹H ЯМР (d₆-ДМСО) δ 11,58 (1Н, м), 8,81-8,41 (1Н, м), 7,71-6,67 (10Н, м), 5,70 (д, J=5,2), 5,48 (с), 4,89-4,29 (4Н, м), 3,99-3,74 (2Н, м), 3,20-2,44 (2Н, м), 2,39-1,77 (4Н, м).

(3S) 3-[1-(индол-2-карбонил]-L-пролинил]амино-4-оксобутановая кислота (39).

Смесь (2R,S,3S) 1-(индол-2-карбонил)-N-(тетрагидро-2-бензилокси-5-оксо-3-фуранил)-L-пролинамида (38) (478 мг, 1,07 ммоль) и 10% палладия на угле (475 мг) и метаноле (150 мл) перемешивали в атмосфере водорода в течение 6 ч. Полученную смесь фильтровали и концентрировали, что давало бесцветное стекловидное вещество. Перекристаллизация из смеси метанола и диэтилового эфира позволяла получить 202 мг (53%) бесцветного твердого вещества: т.пл. 135-138° С; [α ]

\binom{24}{D}

- 44° (с 0,25, СН₃ОН); ИК (КВr) 3287, 2977, 2879, 1781, 1725, 1716, 1667, 1662, 1600, 1529, 1441, 1346; ¹H ЯМР (СD₃ОD) δ 7,65 (1Н, д, J=8,0), 7,44 (1Н, д, J=8,4), 7,22 (1Н, м), 7,09-6,84 (2Н, м), 4,62 (2Н, м), 4,29 (1Н, м), 4,15-3,73 (2Н, м), 2,74-1,72 (6Н, м).

Метил-2-(3,5-дигидро-7-метил-4-оксо-4Н-пирроло[3,2-d] пиримидин-3-ил)ацетат (40).

Свежеприготовленный метилглицинат (1,25 г, 14 ммоль) добавляли к перемешиваемому раствору этил-3-[N-(диметиламино) метилен]амино-4-метилпиррол-2-карбоксилата (1,56 г, 7,0 ммоль); Lim et al., J. Org. Chem., 44, стр.3826-29 (1979)) в сухом метаноле (60 мл). Полученную смесь держали при 70° С. Две следующие порции метилглицината (1,25 г, 14,0 ммоль) добавляли через 18 ч и 42 ч нагревания. Через 24 ч после последнего добавления смесь охлаждали и фильтровали. Фильтрат концентрировали и остаток очищали методом флэш-хроматографии (2-5% метанол/хлороформ), что позволяло получить 0,54 г (35%) белого кристаллического твердого вещества: т.пл. 233-235° С (перекристаллизовано из этилацетата); ИК (КВr) 3135, 2958, 1745, 1675, 1254; ¹H ЯМР (d₆-ДМСО) δ 11,90 (1Н, с), 8,07 (1Н, с), 7,23 (1Н, с), 4,83 (2Н, с), 3,69 (3Н, с), 2,16 (3Н, с). Анал. расч. для С₁₀Н₁₁N₃О₃· 0,1H₂O: С, 53,85; Н, 5,07; N, 18,84. Получ.: С, 53,85; Н, 4,96; N, 18,81. МС (70eVE, I.) m/e 222, 221 (М⁺, 100%), 189, 162, 133, 105.

2-(3,5-дигидро-7-метил-4-оксо-4Н-пирроло[3,2-d]пиримидин-3-ил)уксусная кислота, натриевая соль (41).

Суспензию 40 (354 мг, 1,6 ммоль) в метаноле (15 мл) обрабатывали 0,5 н. гидроксидом натрия (4,8 мл) и полученную смесь перемешивали при 25° С в течение 1 ч. Реакционную смесь фильтровали, что позволяло получить полугидрат 41 (354 мг, 97%) в виде белого кристаллического вещества: т.пл. >340° С (перекристаллизовано из метанола); ИК (КВr) 3461, 3143, 1676, 1666, 1605, 1415; ¹H ЯМР (d₆-AMCO) δ 11,63 (1Н, с), 7,83 (1Н, с), 7,11 (1Н, д, J=2,0), 4,24 (2Н, с), 2,14 (3Н, с). Анал. расч. для C₉H₃N₃O₃Na· 0,5 Н₂O: С, 45,39; Н, 3,81; N, 17,64. Получ.: С, 45,57; Н, 4,05; N, 17,39.

(2R,S,3S)-2-(3,5-дигидро-7-метил-4-оксо-4Н-пирроло[3,2-d] пиримидин-3-ил)-N-(тетрагидро-2-бензилокси-5-оксо-3-фуранил) ацетамид (42).

Суспензию натриевой соли 41 (344 мг, 1,5 ммоль) в сухом ДМФ (15 мл) обрабатывали гидрохлоридом этилдиметиламино-пропилкарбодиимида (373 мг, 1,95 ммоль) и 1-гидроксибензотриазолом (405 мг, 3,0 ммоль). Смесь выдерживали при 25° С в течение 1 ч, затем добавляли (2R,S,3S)N-аллилоксикарбонил-3-амино-2-бензилокси-5-оксотетрагидрофуран (437 мг, 1,5 ммоль); Chapman, Bioorg. Med. Chem. Lett., 2, стр.613-18 (1992)) и (Ph₃P)₂ PdCl₂ (25 мг) с последующим капельным добавлением гидрида н-трибутилолова (0,6 мл, 2,25 ммоль). Полученную смесь перемешивали при 25° С в течение 1 ч, затем добавляли воду (20 мл). Смесь экстрагировали добавлением этилацетата (3× 15 мл) и объединенные органические экстракты промывали водой (5 мл), сушили (MgSO₄) и концентрировали, что позволяло получить смесь диастереомеров. Выпаривание водной фазы и очистка остатка методом флэш-хроматографии (5% метанол/хлороформ) давали дополнительное количество, позволяющее в сумме получить 182 мг 42 (31%): т.пл. 240-244° С; ИК (КВr) 3274, 1772, 1691, 1664, 1562; ¹H ЯМР (d₆-ДMCO) δ 11,81 (1Н, с), 8,85 (0,6Н, д, J=6,6), 8,72 (0,4Н, д, J=7,4), 7,98 (0,6Н, с), 7,95 (0,4Н, с), 7,40-7,30 (5Н, м), 7,20 (1Н, д, J=2,2), 5,61 (0,4Н, д, J=5,0), 5,46 (с), 4,85-4,60 (м), 4,28 (м), 3,20-2,35 (2Н, м), 2,16 (3Н, с).

(3S) 3-[2(3,5-дигидро-7-метил-4-оксо-4Н-пирроло[3,2-d] пиримидин-3-ил)-1-оксоэтиламино]-4-оксобутановая кислота (43).

Смесь 42 (131 мг, 0,33 ммоль) в метаноле (50 мл) и 10% палладия на угле (100 мг) энергично перемешивали в атмосфере водорода в течение 2 ч. Добавляли дополнительное количество катализатора (100 мг) и смесь наводороживали в течение последующих 2 ч. Смесь фильтровали сквозь 0,2 мкМ нейлоновую мембрану и концентрировали. Остаток перекристаллизовывали из метанола/диэтилового эфира, что позволяло получить 79 мг (78%) 43 в виде гигроскопичного белого твердого вещества: т.пл. 222-226° С; (с разлож.); [α ]

\binom{32}{D}

+ 0,5° (с 0,02, МеОН); ИК (КВr) 3282, 1680, 1558, 1425, 1275; ¹H ЯМР (СD₃ОD) δ 8,03 (1H, с), 7,18 (1Н, д, J=0,7), 4,79-4,74 (2Н, м), 4,63-4,59 (1H, 2× д, J=3,6), 4,36-4,25 (1H, м), 2,78-2,39 (2Н, м), 2,24 (3Н, д, J=0,7). Анал. расч. для C₁₃H₁₄N₄O₅· 1,4H₂O: C 47,10; Н, 5,12; N, 16,90. Получ.: С, 47,00; Н, 4,79; N, 16,59. FAB МС m/e 307, 306 (М⁺), 244, 207, 190, 152, 115 (100%).

(a) Х=О

(b) X=Н₂

(1S,9S)-т-бутил-6,10-диоксооктагидро-9-(3-фенил-пропиониламино)-6Н-пиридазино[1,2-а][1,2]диазепин-1-карбоксилат (44а).

К раствору (1S,9S)т-бутил-9-амино-6,10-диоксооктагидро-6Н-пиридазино [1,2-а][1,2]диазепин-1-карбоксилата (690 мг, 2,32 ммоль, GB 2128984) в диоксане (16 мл) и воде (4 мл) при 0° С добавляли твердый бикарбонат натрия (292 мг; 3,48 ммоль) с последующим капельным добавлением 3-фенилпропионилхлорида (470 мг; 2,78 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч, затем добавляли еще бикарбонат натрия (200 мг; 2,38 ммоль) и 3-фенилпропионилхлорид (100 мг; 0,6 ммоль). Смесь перемешивали в течение последующих 2 ч при комнатной температуре, разбавляли этилацетатом (50 мл), промывали насыщенным бикарбонатом натрия (2× 25 мл), затем сушили (МgSO₄) и концентрировали. Остаток очищали методом флэш-хроматографии (0-50% этилацетат/хлороформ) и, наконец, кристаллизовали путем растирания с эфиром, что позволяло получить 860 мг (86%) белого твердого вещества: т.пл. 137-138° С; [α ]

\binom{23}{D}

- 95,1° (с 0,549, СН₂Сl₂); ИК (КВr) 3327, 1736, 1677, 1664, 1536, 1422, 1156; ¹H ЯМР (СDСl₃) δ 7,24 (5Н, м), 6,50 (1Н, д, J=7,5), 5,24 (1Н, м), 4,90 (1Н, м), 4,60 (1Н, м), 3,44 (1Н, м), 2,93 (2Н, м), 2,84 (1Н, м), 2,64 (1Н, м), 2,54 (2Н, м), 2,26 (2Н, м), 1,70 (4Н, м), 1,70 (9Н, с). МС (FAB, m/z): 430 (М⁺+1), 374, 242, 105, 91.

(1S, 9S)-т-бутилоктагидро-10-оксо-9(3-фенилпропиониламино)-6-пиридазино[1,2-а][1,2]диазепин-1-карбоксилат (44b) получали из (1S,9S)-т-бутил-9-аминооктагидро-10-оксо-6Н-пиридазино[1,2-а][1,2]диазепин-1-карбоксилат (Attwood et al., J. Chem. Soc. Perkin 1, стр.1011-19 (1986)) так же, как для 44а, что позволяло получить 810 мг (81%) бесцветной маслянистой жидкости: [α ]

\binom{23}{D}

- 33,5° (с 0,545, CH₂Cl₂); ИК (пленка) 3334, 2935, 1737, 1728, 1659, 1642; ¹H ЯМР (СDСl₃) δ 7,24 (5Н, м), 6,75 (1Н, д, J=6,7), 5,27 (1Н, м), 4,92 (1Н, м), 3,39 (1Н, м), 3,03 (4Н, м), 2,55 (3Н, м), 2,33 (1Н, м), 2,17 (1Н, м), 1,80 (5Н, м), 1,47 (9Н, с), 1,39 (1Н, м). MC (FAB, m/z): 416 (M⁺+1), 360, 211, 143, 97.

(1S, 9S)-6,10-диоксооктагидро-9-(3-фенилпропиониламино)-6Н-пиридазино[1,2-а][1,2]диазепин-1-карбоновая кислота (45а).

К раствору (1S,9S)-т-бутил-6,10-диоксооктагидро-9-(3-фенилпропиониламино)-6Н-пиридазино[1,2-а][1,2]диазепин-1-карбоксилата (44а) (800 мг, 1,863 ммоль) в сухом дихлорметане (5 мл) при 0° С добавляли трифторуксусную кислоту (5 мл). Раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч, затем концентрировали. К остатку добавляли сухой эфир (10 мл), затем удаляли под вакуумом. Данный процесс повторяли три раза, что позволило получить кристаллическое твердое вещество. Твердое вещество растирали с эфиром и фильтровали, что позволило получить 590 мг (85%) белого кристаллического твердого вещества: т.пл. 196-197,5° С; [α ]D²³ – 129,5° (с 0,2, СН₃ОН); ИК (КВr) 3237, 1729, 1688, 1660, 1633, 1574, 1432, 1285, 1205; ¹H ЯМР (CD₃OD) δ 8,28 (1Н, д, J=7,4), 7,22 (5Н, м), 5,32 (1Н, дд, J=5,9, 2,9), 4,75 (1Н, м), 4,51 (1Н, м), 3,50 (1Н, м), 3,01 (1Н, м), 2,91 (2Н, м), 2,55 (2Н, м), 2,29 (3H, м), 1,95 (2Н, м), 1,71 (2Н, м). Анал. расч. для С₁₉Н₂₃N₃O₅: C, 61,12; Н, 6,21; N, 11,25. Получ.: С, 60,80; Н, 6,28; N, 10,97. МС (FAB, m/z): 374 (М⁺+1), 242, 105, 91.

(1S,9S)-октагидро-10-оксо-9-(3-фенилпропиониламино)-6Н-пиридазино[1,2-а][1,2]диазепин-1-карбоновую кислоту (45b) получали из (1S, 9S)-т-бутилоктагидро-10-оксо-9(3-фенилпропиониламино)-6Н-пиридазино[1,2-а][1,2]диазепин-1-карбоксилата (44b) по методу, описанному для соединения 45а, что позволяло получить 657 мг (96%) 45b в виде кристаллического твердого вещества: т.пл. 198-202° С; [α ]

\binom{23}{D}

- 86,2° (с 0,5, СН₃ОН); ИК (КВr) 3294, 2939, 1729, 1645, 1620, 1574, 1453, 1214; ¹H ЯМР (CD₃OD) δ 7,92 (1Н, д, J=7,9), 7,20 (5Н, м), 5,29 (1Н, м), 4,90 (1Н, м), 3,47 (1Н, м), 3,08 (2Н, м), 2,90 (2Н, м), 2,55 (3Н, м), 2,36 (1Н, м), 1,81 (5Н, м), 1,43 (2Н, м). МС (FAB, m/z): 360 (M⁺+1), 211, 143, 91.

[3S,2R,S, (1S,9S)]N-(2-бензилокси-5-оксотетрагидрофуран-3-ил)-6,10-диоксооктагидро-9-(3-фенилпропиониламино)-6Н-пиридазино[1,2-а][1,2]диазепин 1-карбоксамид (46а).

К раствору (1S,9S)6,10-диоксооктагидро-9-(3-фенилпропиониламино)-6Н-пиридазино[1,2-а][1,2]диазепин-1-карбоновой кислоты (45а) (662 мг; 1,773 ммоль) в сухом дихлорметане (9 мл) и сухом диметилформамиде (3 мл) при комнатной температуре добавляли хлорид бис-(трифенилфосфин)палладия (30 мг) и (3S,2R,S)-3-аллилоксикарбониламино-2-бензилокси-5-оксотетра-гидрофуран (Chapman, Biorg. Med. Chem. Lett., 2, стр.613-18 (1992)) (568 мг; 1,95 ммоль) с последующим капельным добавлением гидрида три-н-бутилолова (1,19 г; 4,09 ммоль). К смеси добавляли 1-гидроксибензотриазол (479 мг; 3,546 ммоль) и смесь охлаждали до 0° С перед добавлением гидрохлорида 1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимида (408 мг; 2,128 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3,25 ч, затем разбавляли этилацетатом (50 мл), дважды промывали разбавленной соляной кислотой (20 мл), дважды насыщенным бикарбонатом натрия (20 мл), один раз соляным раствором, затем сушили (MgSO₄) и концентрировали. Полученную маслянистую жидкость очищали методом флэш-хроматографии (0-100% этилацетат/хлороформ), что позволяло получить 810 мг (81%) 46а в виде смеси аномеров: т.пл. 92-94° С; ИК (КВr) 3311, 1791, 1659, 1651, 1536; ¹H ЯМР (СDСl₃) δ 7,49, 6,56 (1Н, 2д, J=6,7, 7,8), 7,29 (10Н, м), 6,37, 6,18 (1Н, 2д, J=7,7, 7,6), 5,56, 5,34 (1Н, д,с, J=5,2), 5,08-4,47 (6Н), 3,18-2,80 (5Н), 2,62-2,28 (5Н, м), 2,04-1,53 (5Н). MC (FAB, m/z): 563 (М⁺+1), 328, 149, 91.

[3S,2R,S, (1S,9S)]N-(2-бензилокси-5-оксотетрагидрофуран-3-ил)-октагидро-10-оксо-9-(3-фенилпропиониламино)-6Н-пиридазино [1,2-а][1,2]диазепин-1-карбоксамид (46b) получали из 45b по методу, описанному для 46а, что давало выход 790 мг (96%) стекловидного вещества: т.пл. 58-60° С; ИК (КВr) 3316, 2940, 1793, 1678, 1641, 1523, 1453, 1120; ¹H ЯМР (СDСl₃) δ 7,28 (10Н, м), 6,52, 6,42 (1Н, 2д, J=7,2, 7,1), 5,53, 5,44 (1Н, д,с, J=5,2), 5,35 (1Н, м), 4,6-4,9, 4,34 (4Н, м), 3,1-2,8 (6Н, м), 2,6-2,1 (7Н), 1,95-1,05 (5Н). MC (FAB, m/z): 549 (M⁺+1), 400, 310, 279, 91.

[3S,(1S,9S)]3-(6,10-диоксооктагидро-9-(3-фенилпропиониламино)-6Н-пиридазино[1,2-а][1,2]диазепии-1-карбоксамидо)-4-оксобутановая кислота (47а).

Смесь [3S,2R,S,(1S,9S)]N-(2-бензилокси-5-оксотетрагидрофуран-3-ил)-6,10-диоксооктагидро-9-(3-фенилпропиониламино)-6Н-пиридазино [1,2-а][1,2] диазепин-1-карбоксамида (46а) (205 мг; 0,364 ммоль), 10% палладия на угле (200 мг) и метанола (20 мл) перемешивали в атмосфере водорода при атмосферном давлении в течение 5 ч. Смесь фильтровали, затем концентрировали, что давало выход 154 мг (90%) стекловидного вещества: т.пл. 116-118° С; [α ]

\binom{23}{D}

- 140° (с 0,1, СН₃ОН); ИК (КВr) 3323 (ушир), 1783, 1731, 1658, 1539, 1455, 1425; ¹H ЯМР (CD₃OD) δ 7,21 (5Н, м), 5,17 (1H, м), 4,73 (1Н, м), 4,50 (2Н, м), 4,23 (1H, м), 3,38 (1H, м), 3,06 (1H, м), 2,91 (2Н, м), 2,73-2,18 (6Н, м) и 2,01-1,59 (5Н, м). Анал. расч. для С₂₃H₂₇N₄O₇· H₂O: C, 56,32; Н, 6,16; N, 11,42. Получ.: С, 56,29; Н, 6,18; N, 11,25. MC (FAB, m/z): 473 (M⁺+1), 176, 149, 105, 91.

[3S,(1S,9S)]3-(октагидро-10-оксо-9-(3-фенилпропиониламино) 6Н-пиридазино[1,2-а][1,2]диазепин 1-карбоксамидо)-4-оксобутановую кислоту (47b) получали из 46b по методу, описанному для 47а. Остаток очищали методом флэш-хроматографии (0-10% метанол/хлороформ), что позволяло получить 65 мг (52%) стекловидного вещества: т.пл. 87-90° С; [α ] D²³ - 167° (с 0,1, метанол); ИК (КВr) 3329, 2936, 1786, 1727, 1637; ¹H ЯМР (СD₃ОD) δ 7,23 (5Н, м), 5,29 (1H, м), 4,83 (1H, м), 4,59 (1Н, д, J=3,6), 4,29 (1H, м), 3,3-3,0 (3Н, м), 2,91 (2Н, м), 2,70-2,34 (5Н, м), 2,19 (2Н, м), 1,75 (4Н, м), 1,36 (2Н, м). Анал. расч. для C₂₃H₃₀N₄O₆· 0,5Н₂О: С, 59,09; Н, 6,68; N, 11,98. Получ.: С, 58,97; Н, 6,68; N, 11,73. МС (FAB, m/z): 459 (M⁺+1), 310, 149, 105, 91.

Пиридоны 48 получали по методу, описанному Damewood et al., J. Med. Chem., 37, cтр.3303-12 (1994)). Соединение 48d является новым.

3-бензилоксикарбониламино-6-бутилпирид-2-он (48d) выделяли в виде кремового твердого вещества: т.пл. 158-160° С; ИК (КВr) 3382, 2953, 2930, 2866, 1729, 1643, 1524, 1468, 1202, 1044; ¹H ЯМР (d₆-DMCO) δ 8,26 (1Н, с), 7,72 (1Н, д), 7,39 (5Н, м), 6,00 (1Н, д), 5,14 (2Н, с), 2,41 (2Н, т), 1,52 (2Н, м), 1,24 (2Н, м), 0,87 (3Н, т). Анал. расч. для C₁₇H₂₀N₂O₃: С, 67,98; Н, 6,71; N, 9,33. Получ.: С, 67,69; Н, 6,68; N, 9,20. МС (CI M⁺=300 (м)) 28%.

(2S) метил-2-[3-бензилоксикарбониламино-1,2-дигидро-2-оксо-1-пиридил]пропионат (49а).

Гидрид натрия (80% масляная дисперсия) (0,35 г, 11,64 ммоль) добавляли к перемешиваемой смеси 3(бензилоксикарбониламино)пирид-2-она (48а) (2,58 г, 10,58 ммоль) и тетрагидрофурана (100 мл) при комнатной температуре. Смесь перемешивали в течение 10 мин. Полученный раствор добавляли к раствору 2(R)-метил-2((трифторметан)сульфонилокси)пропионата (2,5 г, 10,58 ммоль; Feenstra et al., Tetrahedron Lett., 28, стр.1215-18 (1987)) в тетрагидрофуране (5 мл) при комнатной температуре в течение 10 мин. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 80 мин, затем вливали в этилацетат. Смесь промывали дважды 1 М НСl, дважды водным бикарбонатом натрия, затем соляным раствором. Ее сушили (MgSO₄) и концентрировали.

Остаток очищали методом флэш-хроматографии (30% этилацетат/гексан), что позволяло получить 2,945 г (84%) бесцветного твердого вещества: т.пл. 96-7° С; [α ]

\binom{20}{D}

- 71,36° (с 2,5, CH₂Cl₂); ИК(КВr) 3370, 1764, 1729, 1648, 1602, 1564, 1523, 1515, 1503, 1449, 1359, 1203, 1064; ¹H ЯМР (СDСl₃) δ 8,04 (1Н, д, J=7,2), 7,86 (1H, с), 7,36 (5Н, м), 6,98 (1Н, дд, J=7,1, J=1,7), 6,30 (1H, т, J=7,2), 5,46 (1H, к, J=7,4), 5,20 (2Н, с), 3,74 (3Н, с), 1,66 (3Н, д, J=7,4). Анал. расч. для C₁₇H₁₈N₂O₅: С, 61,81; Н, 5,49; N, 8,48. Получ.: С, 61,49; Н, 5,51; N, 8,41. MC (FAB, m/z): 331 (M⁺+1), 299, 223, 196, 163, 91.

Метил[6-бензил-3-бензилоксикарбониламино-1,2-дигидро-2-оксо-1-пиридил]ацетат (49b).

Гидрид натрия (80% масляная дисперсия) (0,65 г, 26,2 ммоль) добавляли к перемешиваемой смеси 6-бензил-3-(бензил-оксикарбониламино)пирид-2-она (48b) (7,3 г, 2,18 ммоль) и тетрагидрофурана (150 мл) при комнатной температуре. Смесь перемешивали в течение 10 мин, обрабатывали метилбромацетатом (2,5 мл, 26,2 ммоль) и выдерживали в течение 3 ч. Полученную смесь выливали на смесь льда и 1 М НСl. Полученное твердое вещество отфильтровывали, затем растворяли в дихлорметане. Полученный раствор сушили (MgSO₄), обесцвечивали с помощью угля и концентрировали. Остаток очищали методом хроматографии (2-5% этилацетат/дихлорметан), что позволяло получить 7,2 г (81%) бесцветного кристаллического вещества: т.пл. 117-9° С; ИК (КВr) 3375, 1753, 1730, 1651, 1605, 1513, 1384, 1223, 1185, 1071; ¹H ЯМР (СDСl₃) δ 8,02 (1H, д, J=7,5), 7,78 (1Н, с), 7,31 (8Н, м), 7,10 (2Н, м), 6,15 (1Н, д, J=7,5), 5,20 (2Н, с), 4,70 (2Н, с), 3,88 (2Н, с), 3,66 (3Н, с).

Следующие соединения были получены сходным образом:

Метил-[3-бензилоксикарбониламино-1,2-дигидро-2-оксо-6-фенэтил-1-пиридил]ацетат (49с).

Выход 97%: т.пл. 102-4° С; ИК (КВr) 3245, 3232, 1741, 1725, 1648, 1600, 1526, 1216; ¹H ЯМР (d₆-DMCO) δ 8,45 (1H, с), 7,76 (1Н, д, J=7,6), 7,35 (10Н, м), 6,15 (1H, д, J=7,6), 5,15 (2Н, с), 4,85 (2Н, с), 3,68 (3Н, с), 2,86 (4Н, с).

Метил-[3-бензилоксикарбониламино-6-бутил-1,2-дигидро-2-оксо-1-пиридил]ацетат (49d).

Выход 90%: т.пл. 111-112° С; ИК (КВr) 3393, 1738, 1731, 1645, 1598, 1517, 1225, 1208; ¹H ЯМР (d₆-DMCO) δ 8,39 (1H, с), 7,78 (1H, д, J=7,7), 7,35 (5Н, м), 6,17 (1H, д, J=7,7), 5,15 (2Н, с), 4,80 (2Н, с), 3,67 (3Н, с), 1,38 (6Н, м), 0,89 (3Н, т).

Метил-[3-бензилоксикарбониламино-1,2-дигидро-6-метил-2-оксо-1-пиридил] ацетат (49е).

Выход 84% бесцветного твердого вещества: т.пл. 115-6° С; ИК (КВr) 3246, 1740, 1725, 1649, 1598, 1573, 1535, 1417, 1365, 1259, 1219, 1193, 1090, 1068, 1006; ¹H ЯМР (d₆-DMCO) δ 8,40 (1H, с), 7,75 (1H, д, J=7,6), 7,38 (5Н, м), 6,20 (1H, д, J=7,6), 5,15 (2Н, с), 4,85 (2Н, с), 3,68 (3Н, с), 2,26 (3Н, с).

Метил-[3-бензилоксикарбониламино-1,2-дигидро-6-фенил-1-пиридил]ацетат (49f).

Выход 67% в виде бесцветной маслянистой жидкости: ИК (КВr) 3266, 1739, 1727, 1646, 1606, 1566, 1517, 1490, 1365, 1213, 1163, 1075; ¹H ЯМР (СDСl₃) δ 8,15 (1Н, д), 7,85 (1Н, с), 7,39 (10Н, м), 6,22 (1Н, д), 5,22 (2Н, с), 4,57 (2Н, с), 3,74 (3Н, с).

Метил-[3-бензилоксикарбониламино-1,2-дигидро-2-оксо-1-пиридил]ацетат (49g).

Выход 80% в виде бесцветного кристаллического твердого вещества: т.пл. 110-111° С; ИК (КВr) 3385, 1745, 1726, 1650, 1601, 1512, 1502, 1378, 1369, 1358, 1215, 1195, 1162, 1067; ¹H ЯМР (CDCl₃) δ 8,06 (1Н, д), 7,84 (1Н, с), 7,36 (5Н, м), 6,88 (1Н, дд), 6,27 (1Н, т), 5,20 (2Н, с), 4,68 (2Н, с), 3,78 (3Н, с). Анал. расч. для C₁₆H₁₆N₂O₅: С, 60,75; Н, 5,10; N, 8,85. Получ.: С, 60,65; Н, 5,15; N, 8,85. МС FAB(+) М⁺=317 (М+1).

2(S)-Метил-2-метил-[6-бензил-(3-бензилоксикарбониламино)-1,2-дигидро-2-оксо-1-пиридил]ацетат (49h) получали по методу, использованному в получении соединения 49а, что позволяло получить (58%) маслянистой жидкости; [α ]

\binom{25}{D}

- 25,0° (с 1, СН₂Сl₂); ИК (КВr) 3381, 1736, 1650, 1604, 1513, 1218, 1190, 1068; ¹H ЯМР (СDСl₃) δ 7,97 (1Н, д), 7,78 (1Н, с), 7,4-7,14 (10Н, м), 6,17 (1Н, д), 5,19 (2Н, с), 4,64 (1Н, к), 3,98 (2Н, с), 3,62 (3Н, с), 1,31 (3H, д).

Метил-[6-бензил-1,2-дигидро-2-оксо-3-(2-фенилэтокси) карбониламино-1-пиридил]ацетат (49i) выделяли (88%) в виде бесцветного твердого вещества: т.пл. 130-133° С; ИК (КВr) 3363, 1746, 1732, 1651, 1604, 1515, 1368, 1231, 1212, 1185; ¹H ЯМР (СDСl₃) δ 8,00 (1Н, д, J=7,0), 7,68 (1H, с), 7,36-7,10 (10Н, м), 6,15 (1Н, д, J=7,6), 4,7 (2Н, с), 4,38 (2Н, т, J=7,0), 3,88 (2Н, с), 3,67 (3Н, с), 2,98 (2Н, т, J=7,0).

2(S)-метил-2-[3-амино-1,2-дигидро-2-оксо-1-пиридил]пропионат (50а)

Смесь 2 (S)-метил-2-[3-бензилоксикарбониламино-1,2-дигидро-2-оксо-1-пиридил]пропионата (49а) (2,75 г, 8,33 ммоль), метанола (100 мл) и 10% палладия на угле (300 мг) перемешивали в атмосфере водорода в течение 30 мин. Смесь фильтровали и концентрировали, что позволяло получить 1,63 г (100%) бесцветного твердого вещества: ¹Н ЯМР (d₆-DMCO) δ 8,35 (1H, ушир.с), 7,46 (1H, д), 7,22 (1H, д), 6,29 (1H, т), 5,22 (1H, к), 3,63 (3Н, с), 1,55 (3Н, д).

Метил-[3-амино-6-бензил-1,2-дигидро-2-оксо-1-пиридил]ацетат (50b).

Выход 100% в виде серого твердого вещества: т.пл. 134-6° С; ИК (КВr) 3418, 3312, 1723, 1658, 1596, 1548, 1435, 1290, 1245, 1011; ¹Н ЯМР (d₆-DMCO) δ 7,25 (5Н, м), 6,45 (1H, д, J=7,4), 5,92 (1H, д, J=7,4), 5,00 (2Н, с), 4,63 (2Н, с), 3,88 (2Н, с), 3,51 (3Н, с).

Метил-[3-амино-1,2-дигидро-2-оксо-6-фенэтил-1-пиридил]ацетат (50с).

Выход 99% в виде вязкой маслянистой жидкости: ИК (КВr) 3456, 341, 2953, 1745, 1649, 1600, 1548, 1219; ¹H ЯМР (СDСl₃) δ 7,25 (5Н, м), 6,51 (1H, д, J=7,4), 5,92 (1H, д, J=7,4), 4,79 (2Н, с), 3,77 (3Н, с), 2,80 (4Н, м).

Метил-[3-амино-6-бутил-1,2-дигидро-2-оксо-1-пиридил]ацетат (50d).

97% в виде коричневого твердого вещества: т.пл. 75-7° С; ИК (КВr) 3437, 3342, 2955, 1745, 1655, 1609, 1550, 1432, 1301, 1222, 1200; ¹H ЯМР (СDСl₃) δ 6,53 (1H, д, J=6,8), 5,93 (1H, д, J=6,8), 4,81 (2Н, с), 3,77 (3Н, с), 2,44 (2Н, т), 1,45 (4Н, м), 0,93 (3Н, т).

Метил-[3-амино-1,2-дигидро-6-метил-2-оксо-1-пиридил]ацетат (50е) выделяли (100%) в виде бесцветного кристаллического твердого вещества: т.пл. 87-9° С; ИК (КВr) 3442, 3326, 1735, 1647, 1600, 1549, 1434, 1407, 1383, 1366, 1225, 1209; ¹H ЯМР (d₆-DMCO) δ 6,40 (1H, д, J=7,3), 5,93 (1H, д, J=7,3), 4,86 (2Н, с), 4,79 (2Н, с), 3,67 (3Н, с), 2,15 (3Н, с).

Метил[3-амино-1,2-дигидро-2-оксо-6-фенил-1-пиридил] ацетат (50f) выделяли (86%) в виде серого твердого вещества: т.пл. 207-9° С; ИК (КВr) 3473, 3345, 1750, 1644, 1600, 1536, 1443, 1366, 1309, 1212, 1184, 1156; ¹H ЯМР (d₆-DMCO) δ 7,30 (5Н, м), 6,54 (1H, д), 6,03 (1Н, д), 5,25 (2Н, с), 4,49 (2Н, с), 3,61 (3Н, с).

Метил-[3-амино-1,2-дигидро-2-оксо-1-пиридил]ацетат (50g) получали в виде бесцветной маслянистой жидкости и непосредственно использовали на следующей стадии.

2(S)-метил-2-метил-[3-амино-6-бензил-1,2-дигидро-2-оксо-1-пиридил] ацетат (50h) выделяли (69%) в виде бесцветной маслянистой жидкости: ИК (пленка) 3354, 1743, 1646, 1600, 1548, 1494, 1455, 1309, 1268, 1227, 113; ¹H ЯМР (C₆D₆) δ 7,29-6,76 (5Н, м), 5,86 (1H, д, J=7,2), 5,51 (1H, д, J=7,2), 4,43 (1H, к, J=6,7), 3,69 (2Н, с), 3,41 (2Н, с), 3,36 (3Н, с), 1,43 (3Н, д, J=6,7).

2 (S)-метил-2-[1,2-дигидро-2-оксо-3(3-фенилпропионил)амино-1-пиридил]пропионат (51а).

3-фенилпропионилхлорид (1,5 г, 9 ммоль) добавляли по каплям к перемешиваемой смеси 2S-метил-2-[3-амино-1,2-дигидро-2-оксо-1-пиридил]пропионата (50а) (1,63 г, 8,33 ммоль), диоксана (60 мл), воды (15 мл) и бикарбоната натрия (1,54 г, 16,7 ммоль). Смесь выдерживали в течение 1 ч, затем экстрагировали добавлением этилацетата. Экстракт промывали водным бикарбонатом натрия, сушили (MgSO₄) и концентрировали. Получившуюся красную маслянистую жидкость очищали методом флэш-хроматографии, что позволяло получить 2,54 г (93%) маслянистой жидкости: [α ]

\binom{20}{D}

- 68,0° (1, CH₂Cl₂); ИК (СН₂Сl₂) 3369, 1747, 1690, 1650, 1602, 1512, 1267, 1260, 1217; ¹H ЯМР (СDСl₃) δ 8,41 (1Н, дд), 8,36 (1Н, с), 7,24 (5Н, м), 7,02 (1Н, дд), 6,32 (1Н, т), 5,44 (1Н, к), 3,75 (3Н, с), 3,03 (2Н, т), 2,70 (2Н, т), 1,66 (3Н, д). FAB M⁺=329 (M+1), 197, 165, 131, 110, 91.

Метил-[6-бензил-1,2-дигидро-2-оксо-3-(3-фенилпропионил)-амино-1-пиридил] ацетат (51b) выделяли (93%) в виде кристаллов: т.пл. 95-7° С; ИК (КВr) 3265, 1747, 1686, 1642, 1590, 1563, 1511, 1454, 1401, 1220, 1183, 1133; ¹H ЯМР (СDСl₃) δ 8,39 (1Н, д, J=7,7), 8,27 (1Н, с), 7,21 (10Н, м), 6,17 (1Н, д, J=7,7), 4,70 (2Н, с), 3,89 (2Н, с), 3,67 (3Н, с), 3,02 (2Н, м), 2,70 (2Н, м).

Метил-[1,2-дигидро-2-оксо-6-фенэтил-3(3-фенилпропионил)амино-1-пиридил]ацетат (51с) выделяли (81%) в виде бесцветных кристаллов: т.пл. 105-8° С; ИК (КВr) 3378, 1746, 1680, 1646, 1597, 1517, 1221; ¹Н ЯМР (СDСl₃) δ 8,34 (1Н, д, J=7,7), 8,25 (1Н, с), 7,23 (10Н, м), 6,11 (1Н, д, J=7,7), 4,77 (2Н, с), 3,78 (3Н, с), 2,88 (8Н, м).

Метил-[6-бутил-1,2-дигидро-2-оксо-3-(3-фенилпропионил)-амино-1-пиридил]ацетат (51d) выделяли (88%) в виде бесцветных кристаллов: т.пл. 84-5° С; ИК (КВr) 3345, 2958, 2930, 1756, 1693, 1650, 1602, 1510, 1227, 1180, 1137; ¹H ЯМР (СDСl₃) δ 8,34 (1Н, д, J=7,7), 8,22 (1Н, с), 7,26 (5Н, м), 6,12 (1Н, д, J=7,7), 4,80 (2Н, с), 3,79 (3Н, с), 3,03 (2Н, т), 2,68 (2Н, т), 2,50 (2Н, т), 1,46 (4Н, м), 0,95 (3Н, т).

Метил-[1,2-дигидро-6-метил-2-оксо-3-(3-фенилпропионил)амино-1-пиридил]ацетат (51е) выделяли (100%) в виде бледно-желтой маслянистой жидкости: ИК (пленка) 3264, 1745, 1691, 1644, 1587, 1566, 1518, 1495, 1400, 1215, 1183, 1136; ¹H ЯМР (СDСl₃) δ 8,33 (1Н, д J=7,6), 7,26 (5Н, м), 6,13 (1H, д, J=7,6), 4,83 (2Н, с), 3,79 (3Н, с), 3,03 (2Н, м), 2,69 (2Н, м), 2,28 (3Н, с).

Метил-[1,2-дигидро-2-оксо-6-фенил-3-(3-фенилпропионил) амино-1-пиридил]ацетат (51f) выделяли (99%) в виде бледно-желтой маслянистой жидкости: ИК (пленка) 3365, 3299, 1751, 1689, 1643, 1600, 1563, 1519, 1493, 1419, 1370, 1224; ¹H ЯМР (СDСl₃) δ 8,46 (1H, д J=7,7), 8,32 (1H, с), 7,32 (10Н, м), 6,24 (2Н, д, J=7,7), 4,57 (2Н, с), 3,73 (3Н, с), 3,06 (2Н, м), 2,72 (2Н, м).

Метил-[1,2-дигидро-2-оксо-3-(3-фенилпропионил) амино-1-пиридил] ацетат (51g) выделяли (81%) в виде маслянистой жидкости: ИК (пленка) 3330, 1753, 1689, 1650, 1600, 1560, 1517, 1374, 1225, 1208; ¹H ЯМР (СDСl₃) δ 8,43 (1Н, дд J=7,4, 1,7), 8,33 (1Н, с), 7,28 (5Н, м), 6,92 (1Н, дд, J=6,9, 1,7), 6,29 (1Н, т), 4,67 (2Н, с), 3,79 (3Н, с), 3,04 (2Н, м), 2,70 (2Н, м). MC FAB (+) М+=315 (М+1).

2 (S)-метил-2-метил-[6-бензил-1,2-дигидро-2-оксо-3-(3-фенилпропионил)амино-1-пиридил]ацетат (51h) выделяли (93%) в виде бесцветной маслянистой жидкости: [α ]

\binom{30}{D}

- 19° (с1, СН₂Сl₂); ИК (пленка) 3354, 3313, 3028, 2950, 1745, 1687, 1645, 1600, 1567, 1514, 1454, 1225; ¹H ЯМР (СDСl₃) δ 8,35 (1Н, д J=7,5), 8,26 (1Н, с), 7,27 (10Н, м), 6,20 (1Н, д, J=7,5), 4,65 (1Н, к, J=6,8), 3,99 (2Н, с), 3,71 (3Н, с), 3,03 (2Н, м), 2,68 (2Н, м), 1,31 (3Н, д, J=6,8).

Метил-[3-(N-ацетил-О-бензил-L-тирозин)амино-6-бензил-1,2-дигидро-2-оксопиридил] ацетат (51i).

Перемешиваемую смесь метил-[3-амино-6-бензил-1,2-дигидро-2-оксо-1-пиридил]ацетата (100 мг, 0,367 ммоль), Вос-Тyr(Вn)-ОН (136 мг, 0,367 ммоль), диметилформамида (1 мл), диизопропилэтиламина (0,25 мл, 1,468 ммоль) и гексафтор-фосфата 2-(1Н-бензотриазол-1-ил)-1,1; 3,3-тетраметилурония (118 мг, 0,367 ммоль) выдерживали в течение ночи при комнатной температуре. Смесь разбавляли этилацетатом, промывали дважды 1 М соляной кислотой, дважды водным бикарбонатом натрия, один раз соляным раствором, затем сушили (МgSO₄) и концентрировали. Остаток очищали методом флэш-хроматографии (10% этилацетат/дихлорметан), что позволяло получить 162 мг (70%) бесцветной маслянистой жидкости. Маслянистую жидкость (160 мг, 0,255 ммоль) растворяли в дихлорметане (1 мл) и обрабатывали трифторуксусной кислотой (1 мл) при 0° С. Полученному раствору давали достичь комнатной температуры в течение 40 мин, затем выпаривали досуха при 30° С. Остаток растворяли в дихлорметане, затем вновь выпаривали досуха. Данную процедуру повторяли трижды. Остаток растворяли в пиридине (0,5 мл) и обрабатывали ацетангидридом (0,03 мл, 0,3 ммоль) при 0° С. Полученной смеси давали достичь комнатной температуры и выдерживали в течение 3,5 ч. Ее разбавляли этилацетатом, промывали дважды 1 М соляной кислотой, дважды водным бикарбонатом натрия, сушили (MgSO₄) и концентрировали, что давало 128 мг (86%) бесцветной маслянистой жидкости: ИК (пленка) 3290, 1751, 1649, 1602, 1568, 1513, 1455, 1438, 1375, 1224, 1179; ¹H ЯМР (СDСl₃) δ 8,78 (1H, с), 8,33 (1Н, д, J=7,6), 7,33 (8Н, м), 7,11 (4Н, м), 6,86 (2Н, д, J=8,5), 6,47 (1H, д, J=7,6), 6,12 (1H, д, J=7,6), 4,99 (2Н, с), 4,85 (1H, м), 4,69 (2Н, с), 3,87 (2Н, с), 3,62 (3Н, с), 3,08 (2Н, м), 1,96 (3Н, с).

Метил-[6-бензил-1,2-дигидро-2-оксо-3(2-фенилэтансульфонил)амино-1-пиридил]ацетат (51j).

2-Фенилэтансульфонилхлорид (Zhong et al., J. Am. Chem. Soc., 113, стр.2259-63 (1991)) добавляли к перемешиваемой смеси метил-[3-амино-6-бензил-2-оксо-1,2-дигидро-1-пиридил] ацетата (49b) (1,0 г, 3,67 ммоль), дихлорметана (15 мл) и триэтиламина (1,0 мл, 7,34 ммоль). Смесь выдерживали в течение ночи, затем вливали в этилацетат. Полученную смесь промывали дважды водным бикарбонатом натрия, трижды 1 М соляной кислотой, затем соляным раствором. Ее сушили (MgSO₄) и концентрировали. Полученное бледно-коричневое твердое вещество очищали методом флэш-хроматографии (10% этилацетат/дихлор-метан), что позволяло получить 1,25 г (77%) бледно-желтого твердого вещества: т.пл. 92-4° С; ИК (КВr) 3181, 1737, 1646, 1595, 1565, 1454, 1241, 1220, 1150; ¹H ЯМР (СDСl₃) δ 7,53 (1Н, д, J=7,5), 7,29 (10Н, м), 6,10 (1Н, д, J=7,5), 4,75 (2Н, с), 3,89 (2Н, с), 3,67 (3Н, с), 3,34 (2Н, м), 3,14 (2Н, м).

Метил-[6-бензил-1,2-дигидро-2-оксо-3-(4-фенилбутирил)-амино-1-пиридил] ацетат (51l) выделяли (74%) в виде бесцветных кристаллов: т.пл. 93-5° С; ИК (КВr) 3285, 1747, 1683, 1642, 1591, 1563, 1512, 1455, 1220, 1181; ¹Н ЯМР (СDСl₃) δ 8,39 (1Н, д, J=7,6), 8,24 (1Н, с), 7,2 (10Н, м), 6,18 (1Н, д, J=7,6), 4,7 (2Н, с), 3,90 (2Н, с), 3,67 (3Н, с), 2,69 (2Н, т), 2,40 (2Н, т), 2,04 (2Н, м).

2(S)-2-[1,2-дигидро-2-оксо-3-(3-фенилпропионил)амино-1-пиридил]пропионовая кислота (52а).

1 М гидроксид натрия (15 мл, 15 ммоль) добавляли к перемешиваемому раствору 2(S)-метил-2-[1,2-дигидро-2-оксо-3-(3-фенилпропионил) амино-1-пиридил]пропионата (51а) (2,39 г, 7,3 ммоль), в метаноле (30 мл) при 0° С. Смесь выдерживали при данной температуре в течение 2 ч, подкисляли 1 М соляной кислотой (15,1 мл) и экстрагировали добавлением этилацетата. Экстракты промывали соляным раствором, сушили (MgSO₄) и концентрировали, что позволяло получить 1,98 г (87%) бесцветного твердого вещества: [α ]

\binom{20}{D}

- 75° (1, CH₂Cl₂); ИК (КВr) 3301, 1724, 1693, 1637, 1563, 1523, 1453, 1233, 1216, 765; ¹H ЯМР (СDCl₃) δ 8,47 (2Н, м), 7,20 (5Н, м), 7,03 (1Н, д), 6,36 (1Н, т), 5,35 (1Н, к), 3,01 (2Н, м), 2,70 (2Н, м), 1,69 (3Н, м).

[6-бензил-1,2-дигидро-2-оксо-3-(3-фенилпропионил)амино-1-пиридил]уксусную кислоту (52b) выделяли (100%) в виде бледно-янтарной маслянистой жидкости: ИК (пленка) 3291, 1738, 1686, 1644, 1591, 1554, 1519, 1496, 1454, 1403, 1215, 1182; ¹H ЯМР (СDСl₃) δ 8,44 (1Н, д, J=7,8), 8,4 (1Н, с), 7,21 (10Н, м), 6,19 (1H, д, J=7,8), 4,71 (2Н, с), 3,90 (2Н, с), 2,99 (2Н, м), 2,71 (2Н, м).

[1,2-дигидро-2-оксо-6-фенэтил-3-(3-фенилпропионил) амино-1-пиридил]уксусную кислоту (52с) выделяли (94%) в виде бежевого твердого вещества: т.пл. 214-6° С; ИК (КВr) 3289, 1740, 1680, 1640; ¹H ЯМР (d₆-DMCO) δ 9,24 (1H, с), 8,14 (1Н, д, J=7,7), 7,22 (10Н, м), 6,11 (1H, д, J=7,8), 4,78 (2Н, с), 2,81 (8Н, м).

[6-бутил-1,2-дигидро-2-оксо-3-(3-фенилпропионил)амино-1-пиридил]уксусную кислоту (52d) выделяли (99%) в виде бледно-коричневого твердого вещества: т.пл. 132-4° С; ИК (КВr) 3286, 1739, 1676, 1641, 1584, 1555, 1535, 1455, 1414, 1249, 1227, 1204; ¹Н ЯМР (CDCl₃) δ 8,42 (1H, д, J=7,8), 8,37 (1H, с), 7,24 (5Н, м), 6,19 (1H, д, J=7,8), 4,82 (2Н, с), 3,55 (1H, с), 3,00 (2Н, т), 2,67 (2Н, т), 2,53 (2Н, т), 1,48 (4Н, м), 0,94 (3Н, т).

[1,2-дигидро-6-метил-2-оксо-3-(3-фенилпропионил)амино-1-пиридил]уксусную кислоту (52е) выделяли в виде твердого вещества (100%): т.пл. 159-61° С; ИК (КВr) 3335, 1731, 1686, 1642, 1536, 1516, 1430, 1420, 1401, 1222, 1195; ¹H ЯМР (d₆-DMCO) δ 9,21 (1H, с), 8,13 (1H, д, J=7,6), 7,20 (5Н, м), 6,15 (1H, д, J=7,6), 4,77 (2Н, с), 2,87 (2Н, м), 2,70 (2Н, м), 2,25 (3Н, с).

[1,2-дигидро-2-оксо-6-фенил-3-(3-фенилпропионил)амино-1-пиридил]уксусную кислоту (52f) выделяли в виде бледно-желтой пены: ИК (КВr) 3271, 1747, 1683, 1634, 1580, 1536, 1490, 1406, 1392, 1365, 1235, 1219; ¹H ЯМР (CDCl₃) δ 8,52 (1Н, д, J=7,7), 7,31 (10Н, м), 6,48 (2Н, с), 6,30 (1Н, д, J=7,7), 4,60 (2Н, с), 3,03 (2Н, м), 2,71 (2Н, м).

[1,2-дигидро-2-оксо-3-(3-фенилпропионил)амино-1-пиридил] уксусную кислоту (52g) выделяли (94%) в виде бесцветного твердого вещества: т.пл. 195-7° С; ИК (КВr) 3324, 1724, 1693, 1644, 1569, 1555, 1512, 1427, 1370, 1240; ¹H ЯМР (d₆-DMCO) δ 9,31 (1Н, с), 8,23 (1Н, д, J=6,8), 7,36 (1Н, дд, J=6,8, 1,71), 7,25 (5Н, м), 6,25 (1H, т), 4,66 (2Н, с), 2,84 (4Н, м).

2(R,S)-2-[6-бензил-1,2-дигидро-2-оксо-3-(3-фенилпропионил) амино-1-пиридил]пропионовую кислоту (52h) получали путем гидролиза соединения 51h в водном тетрагидрофуране в течение 5 ч при 40° С, что позволяло получить (95%) в виде желтой маслянистой жидкости: ИК (пленка) 3330, 1734, 1686, 1643, 1600, 1587, 1553, 1524, 1498, 1208; ¹H ЯМР (d₆-DMCO) δ 9,29 (1H, с), 8,18 (1H, д, J=7,6), 7,21 (10Н, м), 6,22 (1H, д, J=7,6), 4,82 (1H, к, J=6,6), 4,08 (2Н, м), 2,76 (4Н, м), 1,05 (3Н, д, J=6,6).

[3-(ацетил-Тyr(Вn))амино-6-бензил-1,2-дигидро-2-оксо-1-пиридил]уксусную кислоту (52i) выделяли (93%) в виде пены: ИК (КВr) 3302, 1731, 1646, 1603, 1562, 1512, 1454, 1428, 1379, 1231, 1178; ¹H ЯМР (CDCl₃) δ 9,48 (1H, с), 8,36 (1H, д, J=7,6), 7,30 (8Н, м), 7,10 (2Н, м), 6,85 (2Н, д, J=8,3), 6,91 (2Н, д, J=8,3), 6,71 (1H, д, J=7,6), 4,95 (1H, м), 4,90 (2Н, с), 4,68 (2Н, с), 3,92 (2Н, с), 3,17-2,83 (2Н, м), 1,92 (3Н, с).

[6-бензил-1,2-дигидро-2-оксо-3-(2-фенилэтансульфонил)-амино-1-пиридил]уксусную кислоту (52 j) выделяли (100%) в виде бесцветного твердого вещества: т.пл. 165-7° С; ИК (КВr) 3174, 1760, 1646, 1593, 1567, 1497, 1453, 1424, 1326, 1225, 1140, 1127; ¹H ЯМР (d₆-ДМСО) δ 13,09 (1Н, с), 9,08 (1Н, с), 7,30 (11Н, м), 6,02 (1Н, д), 4,68 (2Н, с), 4,99 (2Н, с), 3,29 (2Н, м), 3,03 (2Н, м).

[6-бензил-1,2-дигидро-2-оксо-3-(2-фенилэтокси)карбонил-амино-1-пиридил]уксусную кислоту (52k) получали (70%) путем гидролиза соединения 49i в течение 1 ч при 60° С: ИК (СН₂Сl₂) 1797, 1689, 1649, 1601, 1512, 734; ¹H ЯМР (СDСl₃) δ 8,39 (1Н, с), 8,03 (1H, д), 7,81 (1H, с), 7,33-7,07 (10Н, м), 6,13 (1H, д, J=7,8), 4,72 (2Н, с), 4,33 (2Н, т, J=7,0), 3,86 (2Н, с), 2,93 (2Н, т, J=7,0).

[6-бензил-1,2-дигидро-2-оксо-3-(4-фенилбутирил)амино-1-пиридил]уксусную кислоту (52l) выделяли (100%) в виде белой пены: т.пл. 159-161° С; ИК (КВr) 3373-3310, 1787, 1726, 1691, 1649, 1599, 1567, 1517, 1367, 1215; ¹Н ЯМР (CDCl₃) δ 8,43 (1H, д, J=7,7), 8,25 (1H, с), 7,37-7,09 (10Н, м), 6,21 (1H, д, J=7,7), 4,73 (2Н, с), 4,15 (3Н, с), 3,91 (2Н, с), 2,67 (2Н, т), 2,39 (2Н, т), 2,02 (2Н, м).

2(S),N-3(S)-2-[1,2-дигидро-2-оксо-3(3-фенилпропионил)-амино-1-пиридил]-N-(2-бензилокси-5-оксотетрагидрофуран-3-ил)пропионамид (53а).

Гидрид три-н-бутилолова (1,7 мл, 6,3 ммоль) добавляли по каплям к перемешиваемой смеси 2(S)-2-[1,2-дигидро-2-оксо-3-(3-фенилпропиониламино-1-пиридил]пропионовой кислоты (52а) (1,1 г, 3,49 ммоль), 3(3), 2(R,S)-3-аллилоксикарбониламино-2-бензилокси-5-оксотетрагидрофуран (1,02 г, 3,49 ммоль); Chapman, Biorg. Med. Chem. Lett., 2, стр.613-18 (1992)), хлорида бис-(трифенилфосфин)палладия (II) (55 мг), дихлорметана (35 мл) и диметилформамида (1 мл). Полученную смесь перемешивали в течение 5 мин, затем добавляли 1-гидроксибензотриазол (946 мг, 7 ммоль). Перед добавлением гидрохлорида 1-(3-диметиламинопропил)-2-этилкарбодиимида (740 мг, 3,84 ммоль) смесь охлаждали до 0° С. Смесь выдерживали в течение ночи при комнатной температуре, затем вливали в этилацетат. Смесь промывали дважды 1 М соляной кислотой, дважды водным бикарбонатом натрия, затем соляным раствором. Смесь сушили (MgSO₄) и концентрировали. Остаток растирали с пентаном. Оставшееся твердое вещество очищали методом флэш-хроматографии (40-60% этилацетат/гексан), что позволяло получить 1,28 г (73%) бесцветного твердого вещества: ИК (КВr) 1796, 1692, 1647, 1595, 1557, 1512, 1119; ¹H ЯМР (d₆-DMCO) δ 9,28, 9,26 (1Н, 2× с), 8,77, 8,69 (1Н, 2× д), 8,24, 8,20 (1Н, 2× дд), 7,20 (11Н, м), 6,31, 6,26 (1Н, 2× т), 5,65 (0,5Н, д), 5,46 (0,5Н, д), 5,41, 5,28 (1Н, 2× к), 4,7 (2,5Н, м), 4,24 (0,5Н, т), 3,24 (2Н, м), 2,80 (4Н, м), 1,51, 1,46 (3Н, 2× д).

Следующие соединения получают сходным образом:

N-(3(S))-2-[6-бензил-1,2-Дигидро-2-оксо-3-(3-фенилпропионил) амино-1-пиридил]-N-(2-бензилокси-5-оксотетрагидрофуран-3-ил)ацетамид (53b) получали (86%) в виде пены: ИК (КВr) 3345, 3297, 1807, 1791, 1688, 1679, 1650, 1602, 1554, 1525, 1497, 1453, 1372, 1257, 1119; ¹H ЯМР (d₆-DMCO) δ 9,25 (0,5Н, с), 9,23 (0,5Н, с), 8,75 (0,5Н, д, J=6,5), 8,67 (0,5Н, д, J=7,4), 8,18 (1Н, 2д), 7,21 (15Н, м), 6,07 (1H, 2д), 5,65 (0,5Н, д, J=5,0), 5,38 (0,5Н, с), 4,83-4,45 (4,5Н, м), 4,19 (0,5Н, м), 3,94, 3,83 (2Н, м), 3,10-2,31 (6Н, м).

N-(3(S))-2-[1,2-дигидро-2-оксо-6-фенэтил-3(3-фенилпропионил) амино-1-пиридил]-N-(2-бензилокси-5-оксотетрагидрофуран-4-ил)ацетамид (53с) получали (74%) в виде смеси аномеров: ¹Н ЯМР (d₆-DMCO) δ 9,71 (1H, д), 9,41 (0,5Н, д), 9,25 (0,5Н, д), 8,64 (1H, д, J=7,7), 7,75 (15Н, м), 6,61 (1H, 2д), 6,11 (0,5Н, д), 5,93 (0,5Н, с), 5,17 (5Н, м), 4,77 (0,5Н, м), 3,68-2,94 (2Н, м), 3,32 (8Н, м).

N-(3(S))-2-[6-бутил-1,2-дигидро-2-оксо-3-(3-фенилпропионил) амино-1-пиридил]-N-(2-бензилокси-5-оксотетрагидрофуран-3-ил)ацетамид (53d) получали (74%) в виде смеси аномеров: ИК (КВr) 3300, 1791, 1689, 1645, 1597, 1566, 1546, 1514, 1454, 1417, 1378; ¹H ЯМР (СDСl₃) δ 8,38 (1Н, д, J=7,7), 8,13 (1Н, с), 7,30 (10Н, м), 6,18 (1Н, т), 5,47 (0,5Н, д, J=5,2), 5,43 (0,5Н, с), 4,75 (4,5Н, м), 4,38 (0,5Н, м), 3,08-2,35 (8Н, м), 1,43 (4Н, м), 0,95 (3Н, т).

N-(3(S))-2-[1,2-дигидро-6-метил-2-оксо-3-(3-фенилпропионил) амино-1-пиридил]-N-(2-бензилокси-5-оксотетрагидрофуран-3-ил)ацетамид (53е) получали (67%) в виде смеси аномеров: ИК (КВr) 3282, 1774, 1667, 1651, 1596, 1561, 1556, 1498, 1265, 1254, 1236, 1199, 1143; ¹H ЯМР (d₆-DMCO) δ 9,17 и 9,15 (1Н, 2× с), 8,89 (0,5Н, д, J=6,5), 8,73 (0,5Н, д, J=7,4) 7,25 (10Н, м), 6,13 (1Н, т), 5,64 (0,5Н, д, J=5,0), 5,45 (0,5Н, с), 4,89-4,61 (4,5Н, м), 4,26 (0,5Н, м), 3,17-2,36 (6Н, м), 2,23 и 2,15 (3Н, 2с).

N-(3(S))-2-[1,2-дигидро-2-оксо-6-фенил-3(3-фенилпропионил) амино-1-пиридил]-N(2-бензилокси-5-оксотетрагидрофуран-3-ил)ацетамид (53f) получали (73%) в виде смеси аномеров: ИК (КВr) 3296, 1792, 1691, 1643, 1595, 1561, 1514, 1489, 1453, 1420, 1373, 1230, 1118; ¹Н ЯМР (d₆-DMCO) δ 9,40, 9,36 (1Н, 2× с), 8,70 (0,5Н, д, J=7,6), 8,52 (0,5Н, д, J=7,5) 8,29 (1Н, дд), 7,25 (15Н, м), 6,20 (1Н, д, J=7,6), 5,61 (0,5Н, д, J=5,0), 5,28 (0,5Н, с), 4,78-4,20 (5Н, м), 3,12-2,24 (6Н, м).

N-(3(S))2-[1,2-дигидро-2-оксо-3-(3-фенилпропионил)амино-1-пиридил]-N-(2-бeнзилoкcи-5-oкcoтетрагидрофуран-3-ил)ацетамид (53g) получали (70%) в виде смеси аномеров: ИК (КВr) 3336, 3290, 1791, 1691, 1646, 1595, 1582, 1556, 1518, 1454, 1376, 1351, 1150, 1122; ¹Н ЯМР (d₆-DMCO) δ 9,26 (1H, 2с), 8,86 (0,5Н, д, J=6,4), 8,67 (0,5Н, д, J=7,5), 8,23 (1H, м), 7,10-7,13 (11Н, м), 6,24 (1H, 2т, J=7,2), 5,61 (0,5Н, д, J=5,0), 5,44 (0,5Н, с), 4,83-4,59 (2,5Н, м), 4,25 (0,5Н, м), 3,15-2,34 (2Н, м), 2,91-2,70 (4Н, м). Анал. расч. для C₂₇H₂₇N₃O₆· H₂O: C, 63,90; Н, 5,76; N, 8,28. Получ.: С, 63,70; Н, 5,68; N, 8,22. МС FAB M⁺=490 (M+1).

2(R,S),N-(3(S))-2-[6-бензил-1,2-дигидро-2-оксо-3-(3-фенилпропионил) амино-1-пиридил]-N-(2-бензилокси-5-оксотетрагидрофуран-3-ил)пропионамид (53h) получали (89%) в виде смеси диастереомеров. Данные приводятся для одного диастереомера: ИК (пленка) 3356, 1788, 1677, 1645, 1602, 1517, 1455, 1377, 1203, 1167, 1120; ¹H ЯМР (СDСl₃) δ 8,34 (1H, д, J=7,6), 8,19 (1H, с), 7,38-7,13 (10Н, м), 6,26 (1H, д, J=7,6), 5,58 (1H, т), 5,31, 5,24 (1H, 2× с), 4,62 (2Н, 2к), 4,60 (1H, м), 4,27 (1H, м), 2,98, 2,68 (4Н, 2м), 3,0-2,0 (2Н, м), 1,42 (3Н, д).

N(3(S))-2-[6-бензил-1,2-дигидро-2-оксо-3-(N-ацетил-O-бензилтирозинил)амино-1-пиридил]-N-(2-бензилокси-5-оксотетрагидрофуран-3-ил)ацетамид (53i) получали (76%) в виде смеси аномеров: ИК (КВr) 1794, 1698, 1651, 1612, 1514, 1454, 1374, 1247, 1177, 1126; ¹H ЯМР (d₆-DMCO) δ 9,34, 9,31 (2× 0,5Н, 2с), 8,71 (1Н, 2д), 8,38 (1Н, м), 8,17 (1Н, д), 7,48-6,88 (19Н, м), 6,08 (1Н, 2д), 5,65 (0,5Н, д, J=5,0), 5,40 (0,5Н, с), 5,04 (2Н, с), 4,68 (5,5Н, м), 4,15 (0,5Н, м), 3,95, 3,84 (2Н, c+ab к), 3,20-2,40 (4Н, м), 1,78 (3Н, с).

N(3(S))-2-[6-бензил-1,2-дигидро-2-оксо-3-(2-фенилэтансульфонил) амино-1-пиридил]-N(2-бeнзилoкcи-5-oкcoтетpaгидpoфуран-3-ил)ацетамид (53j) получали (78%) в виде смеси аномеров: ИК (КВr) 3344, 1792, 1691, 1647, 1599, 1566, 1454, 1365, 1150, 1121, 973; ¹H ЯМР (d₆-DMCO) δ 9,02, 8,99 (1Н, 2с), 8,80 (0,5Н, д, J=6,4), 8,70 (0,5Н, д, J=7,4), 7,26 (15Н, м), 6,00 (1Н, дд), 5,63 (0,5Н, д, J=5,0), 5,39 (0,5Н, с), 4,68 (4,5Н, м), 4,18 (0,5Н, м), 3,90 (2Н, м), 3,30-2,30 (6Н, м).

N-(3(S))-2-[6-Бензил-1,2-дигидро-2-оксо-3(2-фенилэтокси) карбониламино-1-пиридил]-N-(2-бензилокси-5-оксотетрагидрофуран-3-ил)ацетамид (53k) получали (78%) в виде смеси аномеров: ИК (КВr) 3386, 1794, 1726, 1650, 1603, 1518, 1366, 1214, 699; ¹H ЯМР (CDCl₃) δ 8,03 (1Н, ушир.д), 7,63, 7,61 (1Н, 2× с), 7,34-7,04 (15Н, м), 6,21, 6,18 (1Н, 2д), 5,44 (0,5Н, д, J=5,4), 5,37 (0,5Н, с), 4,85, 4,83 (1Н, 2д, J=11,6, 11,5), 4,61-4,48, 4,32 (4Н, 2м), 4,4 (2Н, т), 4,08, 4,03 (2Н, 2 ушир.с), 3,07-2,78 (3Н, м), 2,47-2,30 (1H, м).

N(3(S))-2-[6-бензил-1,2-дигидро-2-оксо-3-(4-фенилбутирил)амино-1-пиридил]-N-(2-бензилокси-5-оксотетрагидрофуран-3-ил)ацетамид (53l) получали (86%) в виде бесцветной маслянистой жидкости: ИК (CH₂Cl₂) 1797, 1689, 1649, 1601, 1512, 734; ¹H ЯМР (CDCl₃) δ 8,42, 8,40 (1Н, 2д, J=7,6), 7,35-7,07 (15Н, м), 6,21, 6,19 (1Н, 2д, J=7,6), 5,44 (0,5Н, д), 5,37 (0,5 Н, с), 4,84, 4,81 (1Н, 2д, J=11,7, 11,4), 4,73-4,48, 4,34 (4Н, 2м), 4,05 (2Н, м), 3,05-2,63, 2,46-2,30 (6Н, 2м), 2,01 (2Н, м).

3(S),N(2(S))-3-(2-(1,2-дигидро-2-оксо-3-(3-фенилпропиониламино-1-пиридил)пропиониламино)-4-оксобутановая кислота (54а, F).

Смесь 2(S),N(3(S))-2-[1,2-дигидро-2-оксо-3-(3-фенилпропионил) амино-1-пиридин]-N-(2-бензилокси-5-оксотетрагидрофуран-3-ил)пропионамида (53а) (1,28 г, 2,5 ммоль), метанола (140 мл), этилацетата (60 мл) и 10% палладия на угле (1,4 г) перемешивали в атмосфере водорода. Через 2,5 ч добавляли еще катализатор (300 мг) и наводораживание продолжали в течение 1 ч. Смесь фильтровали через Celite^TM и затем вновь фильтровали сквозь 0,2 мкМ нейлоновый фильтр и концентрировали. Оставшуюся маслянистую жидкость растирали со смесью метанола и эфира, что позволило получить 916 мг (87%) бесцветных кристаллов: т.пл. 198-200° С; [α ]

\binom{28}{D}

- 120° (0,1, СН₃ОН); ИК (КВr) 3330, 1794, 1688, 1644, 1583, 1556, 1515, 1427; ¹H ЯМР (CD₃OD) δ 8,28 (1Н, д), 7,35 (1Н, д), 7,20 (5Н, м), 6,36 (1Н, т), 5,49 (1Н, к), 4,59 (1Н, т), 4,25 (1Н, м), 2,98, 2,74 (2× 2Н, 2× м), 2,59 (2Н, м), 1,57 (3Н, д). Анал. расч. для C₂₁H₂₃N₃O₆· 0,75Н₂O: С, 59,08; Н, 5,78; N, 9,84. Получ.: С, 59,24; Н, 5,96; N, 9,84. FAB M⁺=414 (M+1), 297, 165, 91.

3(S)-3-(6-бензил-1,2-дигидро-2-оксо-3-(3-фенилпропионил)амино-1-пиридил)ацетиламино)-4-оксобутановую кислоту (54b, М) выделяли (59%) в виде бесцветных кристаллов: т.пл. 115° С (с разлож.); ИК (КВr) 3440, 3297, 1718, 1646, 1598, 1565, 1526, 1496, 1260; ¹H ЯМР (СD₃ОD) δ 8,25 (1Н, д, J=7,7), 7,25 (10Н, м), 6,15 (1Н, 2д, каждая J=7,7), 4,73 (2H, 2к), 4,59 (1Н, м), 4,30 (1Н, м), 3,95 (2Н, с), 2,98 (2Н, м), 2,75 (2Н, м), 2,8-2,42 (2Н, м). Анал. расч. для C₂₇H₂₇N₃O₆· 0,7H₂O: С, 64,58; Н, 5,70; N, 8,37. Получ.: С, 64,51; Н, 5,63; N, 8,38. МС FAB+ М⁺=490 (М+1).

3(S)-3-(1,2-дигидро-2-оксо-6-фенэтил-3-(3-фенилпропионил)амино-1-пиридил)ацетиламино)-4-оксобутановую кислоту (54с) выделяли (46%) в виде белого твердого вещества: ИК (КВr) 3375, 1694, 1643, 1586, 1561, 1515, 1377, 1254, 1188, 1070; ¹H ЯМР (CD₃OD) δ 8,18 (1Н, д, J=7,8), 7,22 (10Н, м), 6,15 (1Н, д, J=7,8), 4,75 (2Н, с), 4,58 (1Н, м), 4,30 (1Н, м), 3,01-2,28 (10Н, м). МС FAB+ М⁺=504 (М+1).

3(S)-3-(6-бутил-1,2-дигидро-2-оксо-3-(3-фенилпропионил)амино-1-пиридил)ацетиламино)-4-оксобутановую кислоту (54d) выделяли (90%) в виде бесцветных кристаллов: т.пл. 120-5° С; ИК (КВr) 3315, 1784, 1679, 1644, 1589, 1561, 1556, 1520, 1415, 1379, 1186; ¹H ЯМР (СD₃ОD) δ 8,22 (1Н, д, J=7,8), 7,24 (5Н, м), 6,22 (1Н, д, J=7,8), 4,80 (2Н, м), 4,60 (1Н, с), 4,28 (1Н, м), 2,98 (2Н, м), 2,72 (2Н, м), 2,58 (4Н, м), 1,48 (4Н, м), 0,97 (3Н, т, J=7,1). Анал. расч. для C₂₄H₂₉N₃O₆· 0,5 H₂O: C, 62,06; Н, 6,51; N, 9,05. Получ.: С, 62,08; Н, 6,43; N, 9,01. МС FAB+ M⁺=456 (М+1).

3(S)-3-(1,2-дигидро-6-метил-2-оксо-3-(3-фенилпропионил)-амино-1-пиридил)ацетиламино)-4-оксобутановую кислоту (54е) выделяли (85%) в виде бесцветного твердого вещества: т.пл. 129-138° С; ИК (КВr) 327, 3294, 1710, 1695, 1682, 1554, 1525, 1379, 1272, 1240; ¹H ЯМР (CD₃OD) δ 8,19 (1Н, д, J=7,6), 7,19 (5Н, м), 6,21 (1Н, д, J=7,6), 4,80 (2Н, м), 4,59 (1Н, м), 4,30 (1Н, м), 2,98 (2Н, м), 2,72 (2Н, м), 2,80-2,40 (2Н, м), 2,30 (3Н, с). Анал. расч. для C₂₁H₂₂N₃O₆· H₂O: С, 58,46; Н, 5,84; N, 9,74. Получ.: С, 58,82; Н, 60,5; N, 9,42.

3(S)-3-(1,2-дигидро-2-оксо-6-фенил-3-(3-фенилпропионил)-амино-1-пиридил)ацетиламино)-4-oкcoбутaнoвaя кислота (54f), 73% в виде не совсем белого твердого вещества: т.пл. 140° С (с разлож.); [α ]

\binom{24}{D}

= -8,5° (с 0,1, МеОН); ИК (КВr) 3302, 1796, 1726, 1679, 1643, 1590, 1560, 1516, 1490, 1449, 1420, 1398, 1376, 1231; ¹H ЯМР (СD₃ОD) δ 8,36 (1Н, д), 7,49-7,14 (10Н, м), 6,27 (1Н, дд), 4,54 (3Н, м), 4,30 (1Н, м), 3,0, 2,73 (2× 2Н, 2× м), 2,7-2,29 (2Н, м).

3(S)-3(1,2-дигидро-2-оксо-3-(3-фенилпропионил)амино-1-пиридил)ацетиламино)-4-оксобутановую кислоту (54g; G) выделяли (73%) в виде пены: т.пл. 140-5° С (с разлож.); ИК (КВr) 3352, 3314, 1719, 1700, 1668, 1649, 1600, 1559, 1514, 1379, 1261; ¹H ЯМР (СD₃ОD) δ 8,32 (1Н, д, J=7,5), 7,19 (6H, м), 6,34 (1Н, т), 5,1-4,6 (3Н, м), 4,32 (1Н, м), 2,7 (6Н, м). Анал. расч. для C₂₀H₂₁N₃O₆· 0,6H₂O: С, 58,50; Н, 5,45; N, 10,24. Получ.: С, 58,43; Н, 5,35; N, 9,85. МС FAB+ М⁺=400 (М+1).

3(S), N(2(R,S))-3-(2-(6-бензил-1,2-дигидро-2-оксо-3-(3-фенилпропионил)амино-1-пиридил)пропиониламино)-4-оксобутановую кислоту (54h) получали (69%) в виде бесцветной пены: т.пл. 120° С; [α ]

\binom{20}{D}

- 16,0° (с 0,11, СН₂Сl₂); ИК (КВr) 3315, 1783, 1727, 1666, 1644, 1599, 1564, 1517, 1454, 1379; ¹Н ЯМР (CD₃OD) δ 8,23 (1Н, м), 7,27 (10Н, м), 6,28 (1Н, м), 4,84 (1Н, м), 4,53 (1Н, м), 4,22 (1Н, м), 4,10 (2Н, м), 2,96 (2Н, м), 2,72 (2Н, м), 2,39 (2Н, м), 1,21 (3Н, м). Анал. расч. для C₂₈H₂₉N₃O₆· 1,25H₂O: С, 63,93; Н, 6,03; N, 7,99. Получ.: С, 63,98; Н, 5,85; N, 7,86. МС FAB+ М⁺=504 (М+1).

3(S)-3-(3-(2-ацетил-L-тирозинил)амино-6-бензил-1,2-дигидро-2-оксо-1-пиридил)ацетиламино)-4-оксобутановую кислоту (54i) выделяли (79%) в виде бесцветных кристаллов: т.пл. 193-6° С (с разлож.); ИК (КВr) 3284, 1644, 1599, 1565, 1519, 1455, 1429, 1407, 1375, 1267, 1251; ¹H ЯМР (d₆-AMCO/CDCl₃) δ 8,16 (1Н, д, J=7,7), 7,26 (5H, м), 7,03 (2Н, д, J=8,4), 6,61 (2Н, д, J=8,4), 6,03 (1Н, д, J=7,7), 4,58 (3Н, м), 4,44 (1Н, м), 4,13 (1Н, м), 3,84 (2Н, с), 3,07-2,30 (4Н, м). Анал. расч. для C₂₉H₃₀N₄O₈· 2H₂O: С, 58,19; Н, 5,72; N, 9,36. Получ.: С, 58,11; Н, 5,63; N, 9,29. МС FAB+ М⁺=563 (М+1).

3(S)-3-(6-бензил-1,2-дигидро-2-оксо-3-(2-фенилэтансульфонил)амино-1-пиридил)ацетиламино)-4-оксобутановую кислоту (54j) получали (85%) в виде бесцветного твердого вещества: т.пл. 102-5° С; [α ]

\binom{23}{D}

– 9,9° (с 0,11, МеОН); ИК (КВr) 3452, 3328, 3155, 1719, 1679, 1645, 1594, 1567, 1453, 1425, 1357, 1307, 1225, 1148, 1132; ¹H ЯМР (СD₃ОD) δ 7,52 (1Н, д, J=7,6), 7,33 (10Н, м), 6,12 (1Н, д, J=7,6), 4,73 (2H, м), 4,58 (1Н, д, J=3,7), 4,34 (1Н, м), 3,97 (2Н, с), 3,29 (2Н, м), 3,08 (2Н, м), 2,75-2,37 (2Н, м). Анал. расч. для C₂₆H₂₇N₃O₇S· 1,7N₂O: C, 56,14; Н, 5,51; N, 7,55. Получ.: С, 56,20; Н, 5,49; N, 7,29. MC FAB+ M⁺=526 (М+1).

3(S)-3-(6-бензил-1,2-дигидро-2-оксо-3-(2-фенилэтокси)-карбониламино)-1-пиридил)ацетиламино-4-оксобутановую кислоту (54k) получали (54%) в виде не совсем белого твердого вещества: т.пл. 84-86° С; ИК (КВr) 3373-3310, 1787, 1726, 1691, 1649, 1599, 1567, 1517, 1367, 1215; ¹H ЯМР (CD₃OD) δ 7,93 (1Н, ушир.д, J=7,4), 7,37-7,18 (10Н, м), 6,15 (1Н, д, J=7,4), 4,77 (1Н, д, J=3,7), 4,67 и 4,58 (2Н, 2м), 4,35 (2Н, т, J=6,9), 4,35 (1Н, м), 3,94 (2Н, с), 2,98 (2Н, т, J=6,9), 2,76-2,39 (2Н, м).

3(S)-3-(6-бензил-1,2-дигидро-2-оксо-3(4-фенилбутирил)-карбониламино-1-пиридил)ацетиламино)-4-оксобутановую кислоту (54l) выделяли (50%) в виде белого твердого вещества: т.пл. 89-93° С; ИК (КВr) 3369-3302, 1678, 1645, 1594, 1565, 1517, 1379, 1258; ¹H ЯМР (d₄-метанол) δ 8,25 (1Н, д, J=7,6), 7,37-7,18 (10Н, м), 6,15 (1Н, д, J=7,4), 4,74 (2Н, м), 4,60 (1Н, м), 4,30 (1Н, м), 3,97 (2Н, с), 2,76-2,37 (2Н, м), 2,67 (2Н, т), 2,45 (2Н, т), 1,98 (2Н, м). Анал. расч. для C₂₈H₂₉N₃O₆· 1,5H₂O: С, 63,39; Н, 6,08; N, 7,92. Получ.: С, 63,69; Н, 5,74; N, 7,83.

т-бутил-N-2-(3-бензилоксикарбониламино-1,2-дигидро-2-оксо-1-пиридил)ацетил-3-амино-5-(2,6-дихлорбензоилокси)-4-оксо-пентаноат (56а).

Уксусную кислоту (55а) (WO 93 21213) в ТГФ (2 мл) перемешивали при комнатной температуре и обрабатывали 1-гидроксибензотриазолом (60 мг, 0,448 ммоль) и гидрохлоридом диметиламинопропил-3-этилкарбодиимида (47 мг, 0,246 ммоль). Через 5 мин добавляли воду (2 капли) и перемешивание продолжали в течение 20 минут. Добавляли хлорид бис-(трифенилфосфин)палладия (II) (6 мг) с последующим добавлением раствора т-бутил-3-(аллиллоксикарбониламино)-4-оксо-5-(2,6-дихлорбензоилокси)пентаноата (WO 93 16710) (103 мг, 0,224 ммоль) в ТГФ (1 мл). Гидрид трибутилолова (0,09 мл, 0,336 ммоль) добавляли по каплям в течение 1 часа при комнатной температуре. Смесь перемешивали в течение последующих 3 часов и выливали на этилацетат, промывали 1 М НСl, водным NаНСО₃, соляным раствором, сушили над МgSO₄ и концентрировали под вакуумом. Остаток растирали с пентаном и супернатант сцеживали. Оставшееся твердое вещество очищали методом флэш-хроматографии (50% этилацетат/гексан), что позволяло получить соединение заголовка 92 мг (63%) в виде бесцветной маслянистой жидкости: [α ]

\binom{26}{D}

- 29,6° (с 1,1, CH₂Cl₂); ИК (пленка) 3377, 3365, 3332, 3312, 1733, 1691, 1650, 1599, 1515, 1366, 1261, 1153, 1068, 747; ¹H ЯМР (СDСl₃) δ 8,09 (1Н, д, J=6,8), 7,84 (1H, с), 7,58 (1Н, д, J=8,3), 7,33 (8Н, м), 7,02 (1Н, дд, J=6,9, 1,7), 6,33 (1Н, т, J=7,2), 5,20 (2Н, с), 5,12 (2Н, м), 4,89 (1Н, дт), 4,65 (2Н, м), 2,80 (2Н, м), 1,38 (9Н, с).

т-бутил-N-2-(6-бензил-1,2-дигидро-2-оксо-3-(3-фенилпропионил)амино-1-пиридил)ацетил-3-амино-5-(2,6-дихлорбензоилокси)-4-оксопентаноат (56b) получали по методу, описанному для (56а), что позволяло получить соединение заголовка (66%) в виде бесцветной маслянистой жидкости: ИК (пленка) 3364, 3313, 1738, 1688, 1648, 1600, 1566, 1514, 1433, 1369, 1254, 1152; ¹H ЯМР (CDCl₃) δ 8,40 (1Н, д, J=7,6), 8,30 (1Н, с), 7,28 (13Н, м), 6,20 (1Н, д, J=7,6), 5,12 (2Н, к), 4,86 (1Н, м), 4,65 (2Н, к), 4,06 (2Н, с), 3,07-2,61 (6Н, м), 1,39 (9Н, с).

N-2-(3-бензилоксикарбониламино-1,2-дигидро-2-оксо-1-пиридил)ацетил-3-амино-5-(2,6-дихлорбензоилокси)-4-оксо-пентановая кислота (57а; О).

Сложный эфир (56а) (210 мг, 0,356 ммоль) в дихлорметане (0,5 мл) охлаждали до 0° С и обрабатывали трифторуксусной кислотой (0,5 мл), перемешивали и нагревали до 20° С в течение 30 минут. Раствор выпаривали досуха в условиях пониженного давления, вновь растворяли в дихлорметане и концентрировали (× 3). Остаток растирали с этилацетатом и разбавляли эфиром, что позволяло получить соединение заголовка 162 мг (85%) в виде бесцветного твердого вещества: т.пл. 165-8° С (с разложением); [α ]

\binom{23}{D}

- 38,8° (с 0,1, СН₃ОН); ИК (КВr) 3332, 3275, 1723, 1658, 1649, 1597, 1581, 1562, 1526, 1432, 1385, 1258, 1218, 1206; ¹Н ЯМР (d₆-ДМСО) δ 8,96 (1Н, д, J=7,3), 8,34 (1Н, с), 7,85 (1Н, дд, J=7,3), 7,58 (3Н, м), 7,35 (5Н, м), 6,29 (1Н, т, J=7,3), 5,26 (2Н, м), 5,15 (2Н, с), 4,69 (2Н, м), 4,69 (3Н, м), 2,75 (2Н, м). Анал. расч. для C₂₇H₂₃N₃O₉Cl₂: С, 5,66; Н, 3,84; N, 6,95. Получ.: С, 53,36; Н, 3,90; N, 6,81. MC (+FAB); 604 (M⁺+1), 285, 241, 195, 173, 149, 91.

N-2-(6-бензил-1,2-дигидро-2-оксо-3-(3-фенилпропионил)-амино-1-пиридил)ацетил-3-амино-5-(2,6-дихлорбензоилокси)-4-оксопентановую кислоту (57b; P) получали по методу, описанному для 57а, что позволяло получить соединение заголовка (78%) в виде бесцветных кристаллов: т.пл. 116-120° С (с разложением); [α ]

\binom{26}{D}

- 41,1° (с 0,1, СН₃ОН); ИК (КВr) 3299, 1739, 1715, 1689, 1666, 1645, 1598, 1563, 1518, 1432, 1209, 1151; ¹H ЯМР (d₆-DMCO) δ 9,24 (1Н, с), 8,88 (1Н, д, J=7,6), 8,18 (1Н, д, J=7,7), 7,60 (3Н, м), 7,26 (10Н, м), 6,06 (1Н, д, J=7,7), 5,23 (2Н, АВк), 4,69 (3Н, м), 3,93 (2Н, с), 2,78 (6Н, м). Анал. расч. для С₃₅H₃₁N₃O₈Cl₂· H₂O: С, 59,16; Н, 4,68; N, 5,91. Получ.: С, 59,38; Н, 4,53; N, 5,84. MC (+FAB); 694, (Сl=35,37), (М⁺+1), 692 (Сl=35,35), (M⁺+1).

(3S,4R,S)-т-бутил-N-(бензилоксикарбонил)-3-амино-4-(2-бензооксазолил)-4-гидроксибутаноат (59).

К перемешиваемому раствору бензоксазола (250,2 мг, 2,1 ммоль) в безводном ТГФ (10,5 мл) при -78° С в атмосфере N₂ по каплям добавляли 2,3 М н-бутиллитий в гексанах (0,96 мл, 2,2 ммоль). После перемешивания при -78° С в течение 20 мин добавляли сухой MgBr₂OEt₂ (594,0 мг, 2,3 ммоль) в виде твердого вещества. Полученную гетерогенную смесь нагревали до -45° С и перемешивали в течение 15 мин. Реакционную смесь вновь охлаждали до -78° С и по каплям добавляли раствор альдегида 58 (Graybill et al., Int. J. Peptide Protein Res., 44, стр.173-182 (1993)) (644,6 мг, 2,1 ммоль) в ТГФ (10,5 мл). Реакцию перемешивали при -78° С в течение 30 мин, нагревали до 0° С в течение 1 ч и затем перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. Реакцию гасили добавлением 5% бикарбоната натрия (2,0 мл) и ТГФ удаляли под вакуумом. Полученный водный остаток четырежды экстрагировали добавлением метиленхлорида. Объединенные экстракты промывали соляным раствором, сушили (MgSO₄), фильтровали и концентрировали под вакуумом, что давало 880,0 мг неочищенного продукта. Флэш-хроматография (45:55 этилацетат/гексан) позволяла получить 567,2 мг (63%) соединения заголовка, маслянистую жидкость, смесь диастереомеров по С-4. ИК (пленка) 3324, 2976, 1726, 1517, 1455, 1368, 1243, 1159, 1048, 747; ¹H ЯМР (CDCl₃) δ 7,71-7, 64 (1Н, м), 7,52-7,48 (1Н, м), 7,37-7,20 (7Н, м), 5,91 (1Н, ушир.д, J=9,0), 5,79 (1Н, д, J=9,0), 5,41-4,78 (4Н, м), 4,75-4,54 (1Н, м), 2,91-2,51 (2Н, м), 1,42 (9Н, с), 1,37 (9Н, с).

(3S,4R,S)-т-бутил-3-амино-4-(2-бензоксазолил)-4-гидроксибутаноат (60).

Раствор эфира 59 (189,0 мг, 0,44 ммоль) в этаноле (5,0 мл) обрабатывали 10% палладием на угле (20,5 мг) и перемешивали в атмосфере Н₂ в течение 21 ч. Смесь фильтровали через Celite^® и растворитель выпаривали, что позволяло получить 125,0 мг (98%) неочищенного амина 60 в виде маслянистой жидкости. Его использовали без дальнейшей очистки. ¹H ЯМР (CDCl₃) δ 7,73-7,64 (1Н, м), 7, 51-7,42 (1H, м), 7,35-7,22 (2Н, м), 6,48 (3Н, ушир.с), 5,58 (1Н, д, J=3,0), 5,27 (1Н, д, J=6,5), 4,23-4,05 (1Н, м), 2,92-2,63 (2Н, м), 1,36 (9Н, с), 1,33 (9Н, с).

(3S,4R,S)-т-бутил-N-(N-бензилоксикарбонил-(S)-валинил-(S)-аланинил-3-амино-4-(2-бензоксазолил)-4-гидроксибутаноат (61).

Раствор амина 60 (261,4 мг, 0,89 ммоль), Z-Val-Ala-OH (286,9 мг, 0,89 ммоль) (полученного по стандартным методикам пептидного синтеза) и гидроксибензотриазола (120,3 мг, 0,89 ммоль) в ДМФ (3,0 мл) при 0° С обрабатывали гидрохлоридом 1-этил-3-[3-(диметиламино)пропил]карбодиимида (179,2 мг, 0,93 ммоль). Реакцию нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 16 ч. Реакцию разбавляли этилацетатом и промывали дважды 1 М однозамещенным сульфатом натрия, дважды насыщенным бикарбонатом натрия, затем водой и соляным раствором. Органический слой сушили (MgSO₄), фильтровали и концентрировали под вакуумом, что позволяло получить 494,8 мг неочищенного продукта. Флэш-хроматография (95:5 метилен-хлорид/метанол) давала 480,9 мг (91%) соединения заголовка в виде желтого твердого вещества: т.пл. 81-83° С; ИК (КВr) 3312, 2974, 1723, 1709, 1529, 1455, 1368, 1243, 1156, 747; ¹H ЯМР (СDСl₃) δ 7,79 (0,5Н, д, J=8,0), 7,73-7,20 (9,5Н, м), 6,15 (1Н, т, J=8,5), 5,74 (0,5H, ушир.д, J=5,5), 5,45 (1H, ушир.д, J=7,5), 5,28-5,20 (0,5Н, м), 4,82-4,11 (3,5Н, м), 4,78-4,55 (1Н, м), 4,40-4,22 (1Н, м), 2,95-2,51 (2Н, м), 2,12-1,95 (1Н, м), 1,45-1,32 (12Н, м), 1,11-0,81 (6Н, м). ¹³С ЯМР (СDСl₃) δ 173,14, 172,94, 171,82, 171,03, 170,78, 165,98, 165,45, 157,29, 157,17, 151,23, 151,10, 140,92, 140,82, 136,83, 136,79, 128,91, 128,52, 125,75, 124,97, 120,60, 120,40, 111,38, 81,82, 81,68, 70,27, 68,97, 67,44, 60,43, 50,74, 50,55, 49,18, 49,07, 36,87, 36,57, 32,37, 28,51, 19,88, 19,80, 18,53. Анал. расч. для C₃₁H₄₀N₄O₈· H₂O: С, 60,57; Н, 6,89; N, 9,11. Получ.: С, 60,84; Н, 6,64; N, 9,09. MC (+FAB); 597 (М⁺+1); 541, 91.

(3S)-т-бутил-N-(N-бензилоксикарбонил-(S)-валинил-(S)-аланинил-3-амино-4-(2-бензоксазолил)-4-оксобутаноат (62).

Спирт (61) (100,3 мг, 0,17 ммоль) растворяли в метиленхлориде (2,0 мл) и добавляли реактив Dess-Martin (142,6 мг, 0,34 ммоль) (Ireland et al., J. Org. Chem., 58, стр. 2899 (1993); Dess et al., J. Org. Chem., 48, стр.4155-4156 (1983)). Полученную смесь перемешивали в течение 22 мин и затем разделяли между насыщенным тиосульфатом натрия:насыщенным бикарбонатом натрия (1:1, 10 мл) и этилацетатом (10 мл). Полученную органическую фазу промывали насыщенным тиосульфатом натрия, насыщенным бикарбонатом натрия (1:1) и соляным раствором, органическую фазу сушили (MgSO₄), фильтровали и концентрировали под вакуумом, что давало 111,3 мг неочищенного продукта. Флэш-хроматография (95:5 метилен-хлорид: метанол) позволяла получить 97,3 мг (96%) соединения заголовка в виде маслянистой жидкости: [α ]

\binom{23}{D}

11,74° (с 0,95, СН₂Сl₂); ИК (CH₂Cl₂) 3419, 2974, 1721, 1677, 1501, 1369, 1221, 1156; ¹Н ЯМР (СDСl₃) δ 7,89-7,84 (1Н, м), 7,73-7,22 (10Н, м), 5,98 (1Н, д, J=9,0), 5,72 (1Н, м), 5,10 (2Н, к, J=12,5), 4,73 (2Н, м), 4,20 (1Н, дд, J=7,0, 8,5), 3,30 (1Н, дд, J=5,0, 16,5), 3,03 (1Н, дд, J=5,5, 16,5), 2,18-1,97 (1Н, м), 1,39 (3Н, д, J=7,0), 1,34 (9H, с), 0,93 (3Н, д, J=6,0), 0,90 (3H, д, J=6,0). ¹³C ЯМР (СDСl₃) δ 186,46, 172,73, 171,90, 170,13, 157,17, 156,28, 151,16, 140,99, 136,99, 129,39, 129,08, 128,66, 128,59, 126,49, 123,06, 112,55, 82,73, 67,60, 60,84, 53,75, 49,41, 38,58, 32,05, 28,52, 19,85, 19,32, 18,51. МС (+FAB); 595 (M⁺+1), 539, 91.

(3S)-N-(N-бензилоксикарбонил-(S)-валинил-(S)-аланинил-3-амино-4-(2-бензоксазолил)-4-гидроксибутаноат (63; О).

Раствор сложного эфира 62 (95,0 мг, 0,16 ммоль) в смеси 1:1 метиленхлорида и трифторуксусной кислоты (10,0 мл) перемешивали в течение 1 ч в атмосфере сухого N₂. Раствор затем концентрировали под вакуумом, переносили в эфир и концентрировали вновь. Данный процесс повторяли шесть раз, что позволяло получить неочищенный продукт в виде не совсем белого твердого вещества. Флэш-хроматография (95:5 метиленхлорид/метанол) давала 60,0 мг (69%) соединения заголовка в виде белого твердого вещества. В СD₃ОD продукт существовал в виде смеси трех изомеров, содержащих кетоновую форму (один изомер, с. 44%) и ее ацилоксикеталевую форму (два изомера по С-4, с. 56%): т.пл. 156-159° С; [α ]

\binom{26}{D}

- 45,6° (с 0,13, метанол); ИК (KBr) 3440, 2967, 1713, 1703, 1638, 1531, 1427; ¹H ЯМР (CD₃OD) δ 7,93-7,24 (9Н, м), 5,59 (1Н, ушир.т), 5,16-5,00 (2Н, м), 5,0-4,78 (1Н, м), 4,50-4,22 (1H, м), 3,95-3,81 (1Н, м), 3,11 (2Н, д, J=6,5), 3,05-2,92 (1H, м), 2,70-2,39 (1Н, м), 2,08-1,89 (1H, м), 1,19-0,78 (9Н, м). Анал. расч. для C₂₇H₃₀N₄O₈· 0,5H₂O: С, 59,22; Н, 5,71; N, 10,23. Получ.: С, 59,48; Н, 5,36; N, 10,17. МС (+FAB); 539 (М⁺+1), 91.

(а) R¹=ОСН₃, R²=Н

(b) R¹=Н, R²=ОСН₃

7-Метоксибензоксазол (65а).

Смесь 2-нитро-6-метоксифенола (2,62 г, 15,5 ммоль) (ЕР 333176) и 10% палладия на угле (130 мг) в этаноле (50,0 мл) перемешивали в атмосфере Н₂ в течение 75 мин. Смесь фильтровали через Celite^®, затем сразу же обрабатывали п-толуолсульфокислотой (32,0 мг) и триэтилортоформиатом (6,45 мл, 38,8 ммоль), затем нагревали с обратным холодильником в атмосфере N₂. Через 20 ч добавляли п-толуолсульфокислоту (30,0 мг) и триэтилортоформиат (6,45 мл, 38,8 ммоль). После суммарного нагревания в течение 44 ч реакции давали остыть и концентрировали под вакуумом. Полученный остаток очищали методом флэш-хроматографии (25:75 этилацетат/гексан), что давало 1,97 г (85%) соединения заголовка в виде желтого твердого вещества: т.пл. 28-31° С; ИК (пленка) 1629, 1497, 1434, 1285, 1097; ¹H ЯМР (СDСl₃) δ 8,09 (1Н, с), 7,40 (1H, д, J=8,0), 7,28 (1H, т, J=8,0), 6,89 (1H, д, J=8,0), 4,02 (3Н, с). ¹³С ЯМР (CDCl₃) δ 152,84, 145,82, 142,50, 139,99, 125,75, 113,42, 108,80, 56,97. Анал. расч. для C₈H₇N₁O₂· 0,1H₂O: С, 63,65; Н, 4,81; N, 9,29. Получ.: С, 63,43; Н, 4,88; N, 9,05. MC (+FAB); 150 (М⁺+1).

4-Метоксибензоксазол (65b).

К суспензии 4-гидроксибензоксазола (2,00 г, 14,8 ммоль) (Musser et al., J. Med. Chem., 30, стр.62-67 (1987)). в ацетоне (80,0 мл) добавляли высушенный К₂СО₃ (2,25 г, 16,3 ммоль) с последующим добавлением иодметана (1,38 мл, 22,2 ммоль). Реакцию нагревали с обратным холодильником в атмосфере N₂ в течение 4,5 ч, затем фильтровали и концентрировали под вакуумом, что позволяло получить неочищенный продукт. Полученный остаток очищали методом флэш-хроматографии (25:75 этилацетат/гексан), что давало 2,0 г (91%) соединения заголовка в виде белого кристаллического твердого вещества: т.пл. 72-74° С; ИК (КВr) 3089, 1619, 1610, 1503, 1496, 1,322, 1275, 1090, 1071, 780, 741; ¹H ЯМР (СDСl₃) δ 8,02 (1Н, с), 7,32 (1H, т, J=8,0), 7,18 (1H, д, J=8,0), 6,81 (1H, д, J=8,0), 4,04 (3Н, с). Анал. расч. для C₈H₇NO₂: С, 64,42; Н, 4,73; N, 9,39. Получ.: С, 64,40; Н, 4,84; N, 9,31. m/z (El) 149 (M⁺+1, 100%).

(3S,4R,S)-т-бутил-N-(аллилоксикарбонил)-3-амино-4-гидрокси-4-(2-(7-метоксибензоксазолил)) бутаноат; (66а).

К перемешиваемому раствору 7-метоксибензоксазола 65а (548,6 мг, 3,68 ммоль) в безводном ТГФ (18,5 мл) при -78° С в атмосфере N₂ добавляли 1,56 М н-бутиллитий в гексанах (2,47 мл, 3,86 ммоль) по каплям, что давало желтый окрашенный раствор. После перемешивания при -78° С в течение 20 мин добавляли сухой MgBr₂OEt₂ (1,045 г, 4,05 ммоль) в виде твердого вещества. Полученную гетерогенную смесь нагревали до -45° С и перемешивали в течение 15 мин. Реакционную смесь затем вновь охлаждали до -78° С и по каплям добавляли раствор (S)-Alloc-Asp (t-Bu)H^1b (946,4 мг, 3,68 ммоль) в ТГФ (18,5 мл). Реакцию перемешивали при -78° С в течение 30 мин, нагревали до 0° С и перемешивали в течение 1 ч. Полученную гомогенную реакцию нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 16 ч. Реакцию гасили добавлением 5% бикарбоната натрия (3,5 мл), затем ТГФ удаляли под вакуумом. Полученный водный остаток экстрагировали добавлением метиленхлорида (× 6). Объединенные экстракты промывали соляным раствором сушили (MgSO₄), фильтровали и концентрировали под вакуумом, что давало 1,8 г неочищенного продукта. Флэш-хроматография (40:60 этилацетат/гексан) давала 1,21 г (81%) соединения заголовка, маслянистой жидкости, в виде смеси диастереомеров по С-4: ИК (CH₂Cl₂) 3425, 2983, 1725, 1504, 1290, 1157, 1101; ¹H ЯМР (CDCl₃) δ 7,35-7,19 (2Н, м), 6,89-6,81 (1Н, м), 6,00-5,57 (2Н, м), 5,32-5,05 (3Н, м), 4,68-4,35 (3Н, м), 4,01 (3Н, с), 2,86-2,59 (2Н, м), 1,45 (9Н, с), 1,41 (9Н, с). ¹³С ЯМР (СDСl₃) δ 171,18, 171,09, 165,80, 165,30, 156,71, 156,60, 154,65, 142,76, 142,71, 140,82, 140,72, 133,23, 125,81, 125,72, 118,41, 118,21, 113,07, 112,87, 108,95, 82,16, 70,28, 69,98, 66,52, 66,39, 57,03, 52,57, 52,29, 37,83, 36,86, 28,65. Анал. расч. для С₂₀H₂₆N₂O₇· 0,6H₂O: C, 57,57; Н, 6,57; N, 6,72. Получ.: С, 57,49; Н, 6,34; N, 6,60. MC (+FAB); 407 (M⁺+1), 351, 307, 154.

(3S,4R,S)-т-бутил-N-(аллилоксикарбонил)-3-амино-4-гидрокси-4-(2-(4-метоксибензоксазолил))бутаноат (66b) получали по методу, описанному для 66а, что позволяло получить 1,29 г (26%, 68%, основываясь на регенерирующем исходном продукте) соединения заголовка в виде маслянистой жидкости и смеси диастереоизомеров по С-4: ИК (СН₂Сl₂) 3400, 1725, 1625, 1505, 1369, 1354, 1281, 1263, 1226, 1158, 1092, 1048; ¹Н ЯМР (CDCl₃) δ 7,34-7,24 (1Н, м), 7,16 (1Н, д, J=8,2), 6,79 (1H, д, J=7,9), 6,00-5,50 (2Н, м), 5,30-5,05 (3Н, м), 4,70-4,35 (4Н, м), 4,02 (3Н, с), 2,90-2,45 (2Н, м), 1,45-1,41 (9Н, 2× с). Анал. расч. для C₂₀H₂₆N₂O₇· 0,4H₂O: C, 58,07; Н, 6,53; N, 6,77. Получ.: С, 58,09; Н, 6,41; N, 6,63. МС (+FAB); 407 (M⁺+1, 88%), 351 (100).

(3S,4R,S)-т-бутил-N-(N-ацетил-(S)-(О-трет-бутилтирозинил)-(S)-валинил-(S)-аланинил)-3-амино-4-гидрокси-4-(2-(7-метоксибензоксазолил))бутаноат (67а).

К перемешиваемому раствору бензоксазола 66а (481,9 мг, 1,19 ммоль) и Ас-Тyr(t-Bu)-Val-Ala-OH (586,3 мг, 1,30 ммоль) в метиленхлориде (3,5 мл) и ДМФ (3,5 мл) добавляли хлорид бис-(трифенилфосфин) палладия (II) (18,0 мг) с последующим капельным добавлением гидрида трибутилолова (0,80 мл, 2,96 ммоль). Добавляли гидроксибензотриазол (320,4 мг, 2,37 ммоль) и смесь охлаждали до 0° С. Добавляли гидрохлорид 1-этил-3-[3-(диметиламино) пропил]карбодиимида (278,2 мг, 1,42 ммоль) и смеси давали нагреться до комнатной температуры и перемешивали в течение 16,5 ч. Реакцию разбавляли этилацетатом и промывали дважды 1 М однозамещенным сульфатом натрия, дважды насыщенным бикарбонатом натрия, водой и соляным раствором. Органический слой сушили (MgSO₄), фильтровали и концентрировали под вакуумом, что давало выход 2,0 г неочищенного продукта. Флэш-хроматорафия (95:5 метиленхлорид/метанол) давала 844,0 мг (94%) соединения заголовка в виде белого твердого вещества: т.пл. 205° С; ИК (КВr) 3399, 3304, 2977, 1729, 1643, 1506, 1367, 1290, 1161; ¹H ЯМР (d₆-ДМСО) δ 8,24-7,78 (4Н, м), 7,43-7,32 (2Н, м), 7,23 (2Н, д, J=8,5), 7,16-7,07 (1Н, м), 6,93 (2Н, д, J=8,5), 6,52, 6,40 (1Н, 2× д, J=5,5, J=5,0), 5,03, 4,78-4,49, 4,45-4,16 (5Н, ушир.т, 2× м), 4,05, 4,04 (3Н, 2× с), 3,08-2,35 (14Н, м), 2,11-1,89 (1Н, м), 1,83 (3Н, с), 1,49-1,32, 1,15, 1,0-0,81 (27Н, с, 2× м, J=7,0). ¹³C ЯМР (d₆-DMCO) δ 175,55, 175,18, 173,88, 173,75, 173,05, 169,23, 157,28, 148,55, 146,16, 143,21, 136,63, 133,55, 128,87, 127,17, 115,78, 111,92, 84,02, 81,50, 71,40, 61,15, 60,05, 57,79, 53,39, 51,62, 43,76, 40,52, 34,58, 32,52, 31,60, 26,35, 23,11, 22,71, 21,76. Анал. расч. для C₃₉H₅₅N₅O₁₀· 0,5H₂O: C, 61,40; Н, 7,40; N, 9,18. Получ.: С, 61,43; Н, 7,31; N, 9,07. МС (+FAB); 754 (M⁺+1), 698, 338, 267.

(3S,4R,S)-т-бутил-N-(N-ацетил-(S)-(О-трет-бутилтирозинил)-(S)-валинил-(S)-аланинил)-3-амино-4-гидрокси-4-(2-(4-метоксибензоксазолил))бутаноат (67b) получали по методу, описанному для 67а, что позволяло получить 1,05 г (94%) соединения заголовка в виде мелкодисперсного белого порошка: т.пл. 210-213° С (с разлож.); ИК (КВr) 3284, 2977, 1736, 1691, 1632, 1536, 1505, 1452, 1392, 1367, 1258, 1236, 1161, 1091; ¹H ЯМР (d₆-ДМСО) δ 8,20-7,75 (4Н, м), 7,40-7,10 (4Н, м), 7,00-6,80 (3Н, м), 6,45, 6,34 (1Н, 2× д, J=5,3, J=5,0), 5,00-4,10 (5Н, м), 4,00, 3,99 (3Н, 2× с), 3,00-2,25 (4Н, м), 1,95(1Н, м), 1,78 (3Н, с), 1,39-0,80 (27Н, м). Анал. расч. для C₃₉H₅₅N₅O₁₀· 0,5H₂O: C, 61,40; Н, 7,40; N, 9,18. Получ.: С, 61,58; Н, 7,38; N, 8,91. МС (+FAB); 754 (M⁺+1,30%), 72 (100).

(3S)-т-бутил-N-(N-ацетил-(S)-(О-трет-бутилтирозинил)-(S)-валинил-(S)-аланинил)-3-амино-4-(2-(7-метоксибензоксазолил))-4-оксобутаноат (68а).

К перемешиваемой суспензии спирта 67а (641,0 мг, 0,85 ммоль) в метиленхлориде (46,0 мл) добавляли реактив Dess-Martin (1,082 г, 2,55 ммоль) (Ireland et al., J. Org. Chem., 58, стр.2899 (1993); Dess et al., J. Org. Chem., 48, стр.4155-4156 (1983)). Полученную смесь перемешивали в течение 1 ч перед тем, как разделить между насыщенным тиосульфатом натрия:насыщенным бикарбонатом натрия (1:1, 86,0 мл) и этилацетатом (86,0 мл). Полученную органическую фазу промывали по очереди насыщенным тиосульфатом натрия:насыщенным бикарбонатом натрия, насыщенным бикарбонатом натрия (1:1) и соляным раствором. Органическую фазу сушили (MgSO₄), фильтровали и концентрировали под вакуумом, что давало 660,0 мг неочищенного продукта. Флэш-хроматография (94:6 метиленхлорид:метанол) давала 636,0 мг (100%) соединения заголовка в виде белого твердого вещества: т.пл. 209° С; [α ]

\binom{24}{D}

- 21,8° (с 0,16, метанол); ИК (КВr) 3395, 3294, 2977, 1722, 1641, 1535, 1505, 1161; ¹H ЯМР (CDCl₃) δ 8,43-8,16 (1Н, м), 7,97-7,62 (2Н, м), 7,49-7,14 (3Н, м), 7,08-6,95 (3Н, м), 6,89-6,73 (2Н, м), 5,81-5,68 (1Н, м), 5,16-4,86 (2Н, м), 4,53 (1Н, ушир.т), 4,03 (3Н, с), 3,16-2,84 (4Н, м), 2,11-1,84 (4Н, м), 1,46-1,14 (21Н, м), 0,92-0,78 (6Н, м). ¹³C ЯМР (СDСl₃) δ 186,28, 173,39, 171,90, 171,19, 171,03, 169,89, 156,43, 154,75, 146,32, 142,88, 140,98, 132,31, 130,54, 126,98, 124,73, 114,95, 111,42, 82,44, 78,71, 58,92, 57,20, 54,91, 53,47, 48,77, 39,43, 38,15, 32,79, 29,44, 28,60, 23,55, 20,27, 19,70, 19,34. MC (+FAB); 752 (М⁺+1), 696, 336, 265.

(3S)-т-бутил-N-(N-ацетил-(S)-(О)-трет-бутилтирозинил)-(S)-валинил-(S)-аланинил)-3-амино-4-(2-(4-метоксибензоксазолил))-4-оксобутаноат (68b) получали по методу, описанному для кетона 68а, что позволяло получить 420 мг (55%) соединения заголовка в виде белого твердого вещества: т.пл. 211-213° С (с. разлож.); [α ]

\binom{24}{D}

- 23,9° (с 0,82, метанол); ИК (КВr) 3277, 3075, 1723, 1690, 1632, 1530, 1506, 1392, 1366, 1269, 1234, 1160, 1094; ¹Н ЯМР (СDСl₃) δ 8,15 (1Н, ушир.с), 7,7 (2Н, ушир.с), 7,46 (1Н, т, J=8,3), 7,24 (2H, д, J=8,3), 7,10 (1H, ушир.с), 7,03 (2Н, д, J=8,3), 6,83 (3Н, м), 5,74 (1Н, к, J=6,9), 5,00 (2Н, м), 4,51 (1Н, т, J=7,0), 4,07 (3Н, с), 3,20-2,95 (4Н, м), 2,00 (4Н, м), 1,42 (3Н, д, J=6,8), 1,35 (9H, с), 1,23 (9Н, с), 0,86 (6Н, д, J=6,7). MC (+FAB); 752 (М⁺+1, 7%); 72 (100).

(3S)-N-(N-ацетил-(S)-тирозинил-(S)-валинил-(S)-аланинил)-3-амино-4-(2-(7-метоксибензоксазолил))-4-оксобутаноат (69а; R).

Раствор сложного эфира 68а (600,0 мг, 0,80 ммоль) в 1:1 смеси метиленхлорида и трифторуксусной кислоты (65,0 мл) перемешивали в течение 1 ч в атмосфере сухого N₂. Раствор затем концентрировали под вакуумом, переносили в эфир и концентрировали вновь. Данный процесс повторяли шесть раз, что позволяло получить неочищенный продукт в виде не совсем белого твердого вещества. Флэш-хроматография (градиент от 95:5 до 80:20 метиленхлорид/метанол) давала 420,8 мг (83%) соединения заголовка в виде гигроскопичного белого твердого вещества. Продукт находился в виде смеси трех изомеров в СD₃ОD, содержащей кетоформу (с 50%) и ее ацилоксикетоформы (два изомера по С-4, с 50%): т.пл. разлагается при более чем 150° С; [α ]

\binom{24}{D}

- 33,2° (с 0,17, метанол); ИК (КВr) 3305, 1715, 1658, 1531, 1517, 1204; ¹H ЯМР (СDСl₃) δ 7,46-7,19 (2Н, м), 7,16-6,91 (3Н, м), 6,70-6,59 (2Н, м), 5,62-5,49 (1Н, м), 5,0-4,72 (1Н, неясный м), 4,69-4,51 (1Н, м), 4,49-4,08 (2Н, м), 4,05-3,89 (3Н, м), 3,16-2,47 (4Н, м), 2,05-1,78 (4Н, м), 1,41-1,11, 1,05-0,70 (9Н, 2× м). Анал. расч. для С₃₁Н₃₇N₅O₁₀· 3Н₂O: С, 53,67; Н, 6,25; N, 10,10. Получ.: С, 53,76; Н, 5,56; N, 10,28. МС (+FAB); 640 (М⁺+1), 435, 147.

(3S)-т-бутил-N-(N-ацетил-(S)-тирозинил-(S)-валинил-(S)-аланинил)-3-амино-4-(2-(4-метоксибензоксазолил))-4-оксо-бутаноат (69b; S) получали по методу, описанному для кислоты 69А, что позволяло получить гигроскопичное соединение заголовка 252 мг (96%). Продукт находился в виде смеси трех изомеров в СD₃OD, содержащей кетоформу и ее ацилоксикеталевую форму (два изомера по С-4). Продукт находился в виде одного изомера в d-6 ДМСО: т.пл. 200-203° С (с разлож.); [α ]

\binom{24}{D}

- 38,0° (с 0,23, метанол); ИК (КВr) 3289, 2968, 1718, 1713, 1658, 1634, 1548, 1517, 1506, 1461, 1453, 1393, 1369, 1268, 1228, 1174, 1092; ¹Н ЯМР (d₆-ДМСО) δ 9,20 (1Н, ушир.с), 8,71 (1Н, д, J=6,2), 8,10 (2Н, м), 7,83 (1Н, д, J=8,7), 7,61 (1Н, т, J=8,2), 7,46 (1Н, д, J=8,2), 7,08 (3Н, м), 6,65 (2Н, д, J=8,3), 5,50 (1Н, к, J=6,5), 4,50 (1Н, м), 4,37 (1Н, м), 4,20 (1Н, м), 4,05 (3Н, с), 3,09-2,77 (4Н, м), 1,94 (1Н, м), 1,79 (3Н, с), 1,23 (3Н, д, J=7,0), 0,82 (6Н, м). Анал. расч. для С₃₁Н₃₇N₅O₁₀· 1,5Н₂O: С, 55,85; Н, 6,05; N, 10,51. Получ.: С, 55,21; Н, 5,69; N, 10,13. МС (+FAB); 640 (M⁺+1,22%), 107 (100).

(3S)-т-бутил-N-(аллилоксикарбонил)-3-амино-4-оксо-5-(1,2-диоксо-2-фенилэтокси)пентаноат (80).

К перемешиваемому раствору (3S)-т-бутил-N-(аллилоксикарбонил)-3-амино-5-бромо-4-оксопентаноата (WO 93 16710) (2,17 г, 6,20 ммоль) в диметилформамиде (30 мл) добавляли фторид калия (792 мг, 13,6 ммоль) и затем бензоилмуравьиную кислоту (1,02 мг, 6,82 ммоль). Смесь перемешивали в течение 140 мин, гасили добавлением воды (50 мл) и экстрагировали добавлением этилацетата (2× 50 мл). Объединенные органические экстракты промывали водой (4× 50 мл), затем соляным раствором (50 мл). Их сушили (MgSO₄) и концентрировали, что позволяло получить маслянистую жидкость, которую очищали методом флэш-хроматографии (20-45% этилацетат в гексане), что позволяло получить 2,44 г (94%) в виде бесцветной маслянистой жидкости: [α ]

\binom{20}{D}

- 35,0° (с 1,41, СН₂Сl₂); ИК (пленка) 3359, 2981, 2938, 1752, 1740, 1726, 1712, 1512, 1369, 1285, 1177, 1053, 991, 939, 688; ¹Н ЯМР (СDСl₃) δ 8,15 (2Н, м), 7,66 (1Н, м), 7,53 (2Н, м), 5,90 (2Н, м), 5,33 (2Н, м), 5,31 (1Н, д, J=16,9), 5,18 (1H, д, J=16,9), 4,63 (3Н, м), 3,03 (1Н, дд, J=17,3, 4,6), 2,74 (1Н, дд, J=17,3, 4,9), 1,44 (9Н, с). МС (C.I.); 420 (M⁺+1, 20%), 364 (100).

(3S)-т-бутил-N-(аллилоксикарбонил)-3-амино-5-гидрокси-4-оксопентаноат (81).

Смесь сложного эфира 80 (2,40 г, 5,71 ммоль), тетрагидрофурана (200 мл) и 1 М водного бикарбоната натрия (200 мл) энергично перемешивали при комнатной температуре в течение 18 ч. Слои разделяли и водную часть экстрагировали добавлением этилацетата (100 мл). Объединенные органические экстракты промывали соляным раствором (100 мл), сушили (MgSO₄) и концентрировали. Остаток очищали методом флэш-хроматографии (10-60% этилацетат в гексане), что позволяло получить 1,48 г (90%) бледно-желтой маслянистой жидкости: [α ]

\binom{20}{D}

- 5,9° (с 1,06, СН₂Сl₂); ИК (пленка) 3345, 2981, 2936, 1739, 1725, 1712, 1692, 1515, 1368, 1259, 1158, 1051; ¹H ЯМР (СDСl₃) δ 5,95 (2Н, м), 5,30 (2Н, м), 4,36-4,69 (5Н, м), 3,05 (1Н, дд, J=17,4, 4,3), 2,93 (1Н, т), 2,70 (1Н, дд, J=17,4, 4,9), 1,43 (9Н, с). Анал. расч. для C₁₈H₂₁NO₆· 0,25Н₂О: С, 53,51; Н, 7,43; N, 4,80. Получ.: С, 53,61; Н, 7,18; N, 4,71. МС (C.I.); 280 (M⁺+1,87%), 232 (100).

(3S)-т-бутил-N-(аллилоксикарбонил)-3-амино-5-(2,6-дихлорфенилметокси)-4-оксопентаноат (82).

Перемешиваемую смесь спирта 81 (1,44 г, 5,01 ммоль), 2,6-дихлорбензилиодида (Abraham et al., J. Chem. Soc., стр.1605-1607 (1936)) (4,31 г, 15,0 ммоль), оксида серебра (2,32 г, 10,0 ммоль) и дихлорметана (25 мл) нагревали с обратным холодильником в течение 45 ч. Смеси давали остыть до комнатной температуры, затем разбавляли водой (50 мл), затем экстрагировали добавлением этилацетата (50 мл, 25 мл). Органический слой промывали водой (50 мл), затем соляным раствором (50 мл), сушили (MgSO₄) и концентрировали. Остаток очищали методом флэш-хроматографии (10-100% этилацетат в гексане), что позволяло получить 1,65 г (74%) бесцветной маслянистой жидкости: [α ]

\binom{20}{D}

+ 8,8° (с 1,13, CH₂Cl₂); ИК (пленка) 3339, 2980, 2935, 1724, 1712, 1503, 1438, 1368, 1246, 1156, 1106, 770; ¹H ЯМР (СDСl₃) 57,33 (2Н, м), 7,22 (1Н, дд), 5,92 (2Н, м), 5,28 (2Н, м), 4,87 (2Н, м), 4,67 (1Н, м), 4,58 (2Н, ушир.д), 4,56 (1Н, д, J=16,9), 4,31 (1Н, д, J=16,9), 3,04 (1Н, дд, J=16,7, 4,5), 2,77 (1Н, дд, J=16,7, 4,9), 1,40 (9Н, с). Анал. расч. для C₂₀H₂₅Cl₂N₁O₆· 0,25H₂O: C, 53,28; Н, 5,70; N, 3,11. Получ.: С, 53,15; Н, 5,52; N, 2,98. МС (C.I.); 446 (М⁺, 27%); 390.

(3R, S)-т-бутил-N-[N-фенилметилоксикарбонилвалинилаланинил]-3-амино-5-(2,6-дихлорфенилметилокси)-4-оксопентаноат (83а).

К перемешиваемому раствору N-фенилметилоксикарбонилвалинилаланина (637 мг, 1,98 ммоль) в тетрагидрофуране (40 мл) и воде (1 мл) добавляли гидрохлорид 1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимида (379 мг, 1,98 мл) и 1-гидроксибензотриазол (486 мг, 3,60 ммоль). Смесь перемешивали в течение 15 мин и затем добавляли эфир 82 (802 мг, 1,80 ммоль) и хлорид бис-(трифенилфосфин)палладия (II) (около 5 мг). Затем в течение 20 мин по каплям добавляли гидрид три-бутилолова (785 мг, 725 мкл, 2,70 ммоль) и полученный раствор перемешивали в течение 3,75 ч и затем гасили добавлением 1 М соляной кислоты (50 мл). Смесь дважды экстрагировали добавлением этилацетата. Объединенные органические экстракты промывали 1 М соляной кислотой, дважды водным бикарбонатом натрия, водой и затем соляным раствором, сушили (МgSO₄) и концентрировали. Остаток очищали методом флэш-хроматографии (10-30% этилацетат-дихлорметан), что позволяло получить 941 мг (79%) бледно-желтого твердого вещества: т.пл. 148-52° С; ИК (КВr) 3287, 3070, 1730, 1691, 1641, 1536, 1369, 1289, 1247, 1156; ¹H ЯМР (CDCl₃) δ 7,33 (8Н, м), 7,23 (1Н, дд), 6,61 (1Н, ушир.д), 5,42 (1Н, ушир.д), 5,11 (2Н, с), 4,85 (3Н, м), 4,50 (1Н, м), 4,40 (1Н, д, J=16,9), 4,26 (1Н, д, J=16,9), 4,02 (1Н, м), 2,99 (1Н, дд, J=16,8, 4,7), 2,73 (1Н, дд, J=16,8, 5,0), 2,09 (1Н, м), 1,37 (12Н, м), 0,96 (3Н, д, J=6,9), 0,91 (3Н, д, J=6,8). Анал. расч. для С₃₂H₄₁Cl₂N₃O₈· 0,25Н₂O: С, 57,25; Н, 6,23; Сl, 10,57; N, 6,26. Получ.: С, 57,18; Н, 6,23; Сl, 10,58; N, 5,95. MC (+FAB); 667 (М⁺1, 1%); 666 (3), 159 (25), 91 (100).

(3R, S) -т-бутил-N-[(N-ацетил-О-т-бутилтирозинил)валинил-аланинил]-3-амино-5-(2,6-дихлорфенилметилокси)-4-оксопентаноат (83b) получали по методу, описанному для 83а, что позволяло получить 554 мг (64%) бесцветного твердого вещества: т.пл. 184-6° С; ИК (КВr) 3282, 3075, 1736, 1690, 1633, 1536, 1508, 1366, 1236, 1161; ¹H ЯМР (d₆-ДMCO) δ 8,49 (1Н, д), 8,14 (1Н, д), 8,08 (1Н, д), 7,84 (1Н, д), 7,43 (3Н, м), 7,14 (2Н, д), 6,83 (2Н, д), 4,71 (2Н, с), 4,51 (2Н, м), 4,36 (2Н, дд), 4,17 (2Н, м), 2,93 (1Н, м), 2,73 (1Н, м), 1,94 (1Н, м), 1,74 (3Н, с), 1,37 (9Н, с), 1,23 (12Н, м), 0,83 (6Н, м). МС (+FAB); 793 (M⁺1, 4%), 737 (5), 681 (1), 178 (40), 159 (45), 136 (100), 107 (40). MC (-FAB); 792 (20), 791 (40), 447 (100).

(R,S)-N-[N-(Фенилметилокси)карбонилвалинил-аланинил]-3-амино-5-(2,6-дихлорфенилметилокси)-4-оксопентановая кислота (84а; V).

К перемешиваемому раствору сложного эфира 83а (918 мг, 1,38 ммоль) в дихлорметане (20 мл) добавляли трифторуксусную кислоту (5 мл). Смесь перемешивали в течение 2,5 ч, затем выпаривали досуха. Остаток обрабатывали эфиром (25 мл) и выпаривали досуха. Данную процедуру повторяли трижды. Полученный продукт растирали с эфиром (10 мл) и затем сушили, что позволяло получить 730 мг (87%) светло-коричневого порошка: т.пл. 156-60° С; ИК (КВr) 3282, 2965, 1702, 1694, 1642, 1536, 1438, 1246, 1230; ¹H ЯМР (d₆-ДМСО) δ 8,48(1Н, д), 8,09 (1Н, д), 7,47 (9Н, м), 5,02 (2Н,с), 4,70 (2Н, с), 4,49 (1Н, м), 4,37 (2Н, дд), 4,27 (1Н, м), 3,88 (1Н, м), 2,75 (1Н, дд), 2,54 (1Н, дд), 1,96 (1Н, м), 1,19 (3Н, с), 0,84 (6Н, м). Анал. расч. для C₂₈H₃₃Cl₂N₃O₈· 0,5H₂O: C, 54,27; Н, 5,53; Сl, 11,45; N, 6,78. Получ.: С, 54,49; Н, 5,39; Сl, 11,33; N, 6,73. МС (+FAB); 610 (М⁺ 1, 10%), 91 (100).

(R,S)-N-[N-(Ацетил) тирозинил-валинил-аланинил]-3-амино-5-(2,6-дихлорфенилметилокси)-4-оксопентановая кислота (84b; W) получали в виде бесцветного порошка (95%) по методу, использованному в случае 84а. Т.пл. 165-8° С; ИК (КВr) 3295, 2968, 1733, 1642, 1517, 1438, 1231, 1105; ¹H ЯМР (d₆-ДМСО) δ 9,2 (1Н, ушир.с), 8,48 (1Н, ушир.д), 8,14 (1Н, ушир.д), 8,02 (1Н, ушир.д), 7,81 (1Н, ушир.д), 7,45 (3Н, м), 7,02 (2Н, д), 6,62 (2Н, д), 4,70 (2Н, с), 4,12-4,53 (3Н, м), 3,60 (3Н, м), 2,51-2,92 (4Н, м), 1,96 (1Н, м), 1,75 (3Н, с), 1,21 (3Н, д), 0,83 (6Н, м). Анал. расч. для С₃₁Н₃₈Сl₂N₄O₉· H₂O: C, 53,22; Н, 5,76; Сl, 10,14; N, 8,09. Получ.: С, 53,33; Н, 5,54; Сl, 10,02; N, 7,85. MC (+FAB); 682 (М⁺ 2, 30%), 681 (67), 158 (100). (-FAB); 680 (45), 679 (100).

Пример 6.

Получили значения констант ингибирования (К_i) и КИ₅₀ для нескольких соединений по данному изобретению, применив ферментные анализы с помощью УФ-видимого субстрата, флюоресцентного субстрата и клеточных анализов, как это описано в Примере 2. Следующие значения (K_i) и КИ₅₀ были определены для соединений 22е, 54b, 54j, 54k, 57b, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 98, 102a-c, 106a-c, 108a-c, 114a, 114b, 115, 121, 125a, 125b, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132a, 132b, 133, 135a, 135b, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156, 157, 158, 159, 160, 161, 162 и 163, используя указанные анализы. Структура соединений 22е, 54b, 54j, 54k и 57b показана в Примере 5. Структура других соединений показана в Примере 7.

Пример 7.

Соединения 126, 127, 128, 129, 135a, 135b, 137, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156, 157, 158, 159, 160, 162 и 163 синтезировали по методу, схожему с методом, использованным в синтезе 69а.

;

;

;

;

;

;

;

;

;

;

;

;

;

;

;

;

;

;

;

;

;

;

;

; и

.

Соединение 158 синтезировали по методу, схожему с методом, использованным в синтезе (К).

Соединение 130 синтезировали по методу, схожему с методом, использованным в синтезе 56b.

Соединения 131, 136, 138 и 142 синтезировали по методу, схожему с методом, использованным в синтезе 57b.

;

;

; и

.

Соединения 132а, 132b, 139, 140 и 141 синтезировали по методу, схожему с методом, использованным в синтезе 47а. Исходный продукт для соединения 140 получали, как описано в: Robl, et al., J. Am. Chem. Soc., 116, стр.2348-2355 (1994). Исходный продукт для соединения 141 получали, как описано в: Wyvratt, et al., Pept. Struct.: Funct. Proc. (8th Am. Pept. Symp.), (1983) или USP 4415496.

;

;

;

; и

.

Соединение 133 синтезировали по методу, схожему с методом, использованным в синтезе 47b.

Соединение 161 синтезировали по методу, схожему с методом, использованным в синтезе 125а.

Соединения 22е, 54b, 54j, 54k и 57 синтезировали, как описано в Примере 5.

Соединения 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 98, 102а, 102b, 102с, 106а, 106b, 106с, 108а, 108b, 108с, 114а, 114b, 115, 121, 125а и 125b были получены следующим образом.

N-(N-(ацетилтирозинил-валинил-(4(R)аллилоксипролинил))-3-(S)-амино-4-оксобутановая кислота (85).

Стадия А. N-трет-бутоксикарбонил-4(R)-аллилоксипролин.

К раствору 60% гидрида натрия (3,36 г, 84 ммоль) в 100 мл безводного тетрагидрофурана добавляли N-трет-бутоксикарбонил-4(R)-гидроксипролин (9,25 г, 40 ммоль) и перемешивали в течение 2 часов при комнатной температуре. К смеси добавляли аллилбромид (6,9 мл, 80 ммоль) и кипятили в течение 6 часов. Смесь гасили добавлением кусочков льда, затем добавляли дополнительную воду и смесь промывали гексаном. Водный слой подкисляли 10% гидросульфатом натрия и экстрагировали добавлением этилацетата (2× 150 мл). Объединенные экстракты сушили над безводным сульфатом натрия, фильтровали и выпаривали, что давало 5 г продукта заголовка без дальнейшей очистки: ¹Н ЯМР (СDСl₃, существующий в виде ротамеров) δ 5,92-5,82 (1Н, м), 5,3-5,14 (2Н, м), 4,5-4,31 (1Н, м), 4,16-4,05 (1Н, м), 4,04-3,9 (1Н, м), 3,79-3,5 (3Н, м), 2,43-2,2 (15Н, м), 2,15-2,10 (0,5Н, м), 1,45 (4,5Н, с), 1,35 (4,5Н, с).

Стадия В. Гидрохлорид метилового эфира 4-(R)-аллилоксипролина.

N-трет-бутоксикарбонил-4(R)-аллилоксипролин (5 г, 18,4 ммоль) кипятили в 50 мл насыщенного хлороводорода в метаноле в течение 6 часов. Смесь выпаривали под вакуумом, что давало 3,78 г желтого клейкого вещества в виде соединения заголовка: ¹H ЯМР (СDСl₃); δ 5,83-5,72 (1Н, м), 5,24-5,14 (1Н, д), 5,13-5,08 (1Н, д), 4,55-4,3 (3Н, м), 4,25-4,15 (1H, м), 3,9 (1,5Н, с), 3,78 (1,5Н, с), 3,7-3,28 (3Н, м), 2,45-2,32 (1H, м), 2,2-2,05 (1Н, м).

Стадия С. Метиловый эфир N-ацетилтирозинилвалинил-(4(R)-аллилоксипролина).

Гидрохлорид метилового эфира 4(R)-аллилоксипролина (1,05 г, 4,75 ммоль) и N-ацетил-Тyr-Val-ОН (1,68 г, 5,21 ммоль) растворяли в 10 мл 1:1 смеси дихлорметана и диметилформамида и охлаждали до 0° С. К охлажденной смеси добавляли диизопропилэтиламин (1 мл, 5,93 ммоль) с последующим добавлением N-гидроксибензотриазола (0,769 г, 5,69 ммоль) и гидрохлорида 1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимида (1,18 г, 6,2 ммоль). После перемешивания в течение 2 часов смесь нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 16 часов. Реакцию вливали в 150 мл этилацетата и промывали по 50 мл воды, 10% гидросульфата натрия и 10% бикарбоната натрия. Органический слой сушили над сульфатом натрия, фильтровали и выпаривали, что давало светло-желтое твердое вещество. Его очищали методом флэш-хроматографии, элюируя дихлорметаном/метанолом/пиридином (100:3:0,5), что давало 780 мг соединения заголовка. ¹H ЯМР (СD₃ОD); δ 7,02-6,96 (2Н, д), 6,67-6,63 (2Н, д), 5,95-5,85 (1Н, м), 5,34-5,27 (1Н, д), 5,16-5,13 (1Н, д), 4,53-4,38 (3Н, м), 4,28-4,22 (1Н, м), 4,12-3,97 (3Н, м), 3,82-3,73 (1Н, м), 3,72 (3Н, с), 3,04-2,88 (2Н, м), 2,85-2,72 (2Н, м), 2,45-2,34 (1Н, м), 2,08-1,95 (2Н, м), 1,92 (3Н, с), 1,00-0,92 (6Н, 2× д).

Стадия D. Семикарбазон трет-бутилового эфира N-(N-ацетилтирозинил-валинил-(4(R)-аллилоксипролинил))-3(S)-амино-4-оксобутановой кислоты.

Метиловый эфир N-ацетилтирозинил-валинил-(4-аллил-оксипролина) (770 мг, 1,57 ммоль) растворяли в 20 мл тетрагидрофурана и 4 мл метанола. Гидроксид лития (145 мг, 3,46 ммоль) добавляли к смеси и перемешивали при комнатной температуре. Через два часа добавляли 1 мл 10% хлороводорода, и смесь выпаривали под вакуумом, что давало твердый остаток, который затем разделяли между 5 мл воды и 50 мл этилацетата, и органический слой отделяли и выпаривали под вакуумом, что давало 430 мг кислоты, которую сразу использовали в следующей стадии.

N-ацетилтирозинил-валинил-4-аллилоксипролин (420 мг, 0,88 ммоль) и семикарбазон трет-бутилового эфира 3-амино-4-оксобутановой кислоты (184 мг, 0,8 ммоль), Graybill et al., Int. J. Protein Res., 44, стр.173-82 (1994)), что давало 100 мг (20%) соединения заголовка в виде белого аморфного твердого вещества: ¹H ЯМР (СD₃ОD); δ 7,24-7,2 (1Н, м), 7,04-6,97 (2Н, д), 6,73-6,65 (2Н, д), 5,98-5,86 (1Н, м), 5,35-5,24 (1H, д), 5,17-5,12 (1Н, м), 4,12-3,98 (2Н, м), 3,72-3,67 (1Н, м), 2,98-2,92 (3Н, м), 2,38-2,32 (1Н, м), 2,1-2,02 (2Н, м), 1,92 (3Н, с), 0,98-0,89 (6Н, 2× д).

Стадия Е. N-(N-ацетилтирозинил-валинил-(4(R)-аллилоксипролинил))-3(S)-амино-4-оксобутановая кислота (85).

Семикарбазон трет-бутилового эфира N-(N-ацетилтирозинилвалинил-(4-(R)-аллилоксипролинил))-3(S)-амино-4-оксобута-новой кислоты (100 мг) лишали защиты, как описано (Пример 3, соединение К, стадия С), что давало 44,2 мг (53%) соединения заголовка: ¹H ЯМР (CD₃OD); δ 7,04-6,97 (2Н, д), 6,72-6,65 (2Н, д), 5,97-5,86 (1Н, м), 5,32-5,25 (1Н, д), 5,17-5,12 (1Н, д), 4,62-4,40 (3Н, м), 4,30-4,13 (2Н, м), 4,12-3,96 (3Н, м), 3,75-3,68 (1Н, м), 2,99-2,92 (1Н, м), 2,78-2,70 (1Н, м), 2,70-2,48 (2Н, м), 2,35-2,30 (1Н, м), 2,17-1,95 (2Н, м), 1,92 (3Н, с), 0,98-0,88 (6Н, 2× д).

Соединения 86 и 87 получали по методу, схожему с описанным для синтеза 69а в примере 5.

N-ацетил-(S)-валинил-(4-(S)-фенокси)пролинил-3(S)-амино-4-(7-метоксибензоксазол-2-ил)-4-оксобутановая кислота (86).

N-ацетил-(S)-валинил-(S)-(4-(S)-фенокси)пролин превращали в 86 в виде белого порошка: ¹Н ЯМР (d₆-ДМСО); δ 8,75 (д, 1Н), 7,6-7,2 (м, 4Н), 7,0-6,8 (м, 4Н), 5,5 (м, 1Н), 5,05 (с, 1Н), 4,5 (т, 1Н), 4,29 (т, 1Н), 4,0 (с, 3Н), 4,0-3,8 (м, 2Н), 3,0-2,8 (дд, 2Н), 2,3 (м, 1Н), 2,09 (м, 1Н), 1,95-1,8 (м, 2Н), 1,78 (с, 3Н), 1-0,7 (дд, 6Н).

N-ацетил-(4-(R)-фенокси)пролинил-3(S)-амино-4-(7-метоксибензоксазол-2ил)-4-оксобутановая кислота (87).

N-ацетил-(S)-(4-(S)-фенокси)пролин превращали в 87 в виде белого порошка: ¹H ЯМР (d₆-ДМСО); δ 9,1 (д, 1Н), 8,76 (д, 1H), 7,6-7,2 (м, 4Н), 7,0-6,9 (м, 4Н), 5,55 (м, 1Н), 5,45 (м, 1Н), 5,0 (м, 2Н), 4,56 (т, 1H), 4,40 (т, 1Н), 4,0 (с, 3Н), 3,9 (дд, 1Н), 3,76 (д, 1H), 3,64 (д, 1H), 3,1-2,9 (м, 1H), 2,8 (м, 1Н), 2,50 (м, 1Н), 2,3-2,2 (м, 1Н), 2,09 (м, 1Н), 1,95 и 1,75 (2× с, 3Н, ротамеры).

N-2-(6-бензил-1,2-дигидро-2-оксо-3-(3-фенилпропионил)-амино-1-пиридил)ацетил-3-(S)-амино-5-гидрокси-4-оксопентановая кислота (88).

Трет-бутиловый эфир N-2-(6-бензил-1,2-дигидро-2-оксо-3-(3-фенилпропионил)амино-1-пиридил)ацетил-3(S)-амино-5-гидрокси-4-оксопентановой кислоты получали из 52b и 81 по методу, описанному для синтеза 83а, что давало белое твердое вещество (45%): ¹H ЯМР (СDСl₃); δ 8,40 (д, 1Н), 8,20 (с, 1Н), 7,4-7,1 (м, 11Н), 6,18 (с, 1Н), 4,72 (м, 1Н), 4,65-4,5 (к, 2Н), 4,4-4,2 (дд, 2Н), 4,0 (с, 2Н), 3,04 (т, 2Н), 2,9 (дд, 1Н), 2,76 (т, 2Н), 2,55 (дд, 1Н), 1,39 (с, 9Н).

Полученный продукт превращали в 88 по методу, описанному в примере 5, соединение 84а давало соединение заголовка (42%) в виде белого твердого вещества: ¹H ЯМР (CDCl₃); δ 8,5 (д, 1Н), 8,1 (д, 1Н), 8,0 (м, 1Н), 7,4-7,1 (м, 11Н), 6,3 (д, 1Н), 4,9-4,8 (м, 2Н), 4,6-4,4 (м, 2Н), 4,3 (дд, 1Н), 4,1 (с, 2Н), 3,3 (т, 1Н), 3,05 (т, 2Н), 2,8-2,6 (т, 3Н).

Соединения 89 и 90 получали по методу, схожему с описанным для получения 84а в примере 5.

N-ацетил-(S)-тирозинил-(S)-валинил-(S)-аланинил-3-(S)-амино-5-(2-хлорбензилокси)-4-оксопентановую кислоту (89) получали из Ac-Tyr-Val-Ala-OH и (3S)-т-бутил-N-(аллилоксикарбонил)-3-амино-5-(2-хлорфенилметоксил)-4-оксопентаноата (получали по тому же методу, что и 82), что давало белое твердое вещество: ¹H ЯМР (d₆-ДМСО); δ 9,15 (с, 1Н), 8,5 (д, 1Н), 7,98 (д, 1Н), 7,75 (д, 1Н), 7,55-7,3 (м, 4Н), 7,0 (д, 1Н), 6,6 (д, 2Н), 4,6-4,3 (м, 6Н), 4,3-4,1 (м, 2Н), 2,9 (д, 1Н), 2,76 (дд, 1Н), 2,7-2,5 (м, 2Н), 1,95 (м, 1Н), 1,75 (с, 3Н), 1,2 (д, 3Н), 0,9-0,7 (дд, 6Н).

N-2-(6-бензил-1,2-дигидро-2-оксо-3-(3-фенилпропионил)амино-1-пиридил) ацетил-3(S)-амино-5-(2-хлорбензилокси)-4-оксопентановую кислоту (90) получали из 52b и (3S)-т-бутил-N-(аллилоксикарбонил)-4-оксопентаноата (получали по тому же методу, что и 82), что давало белое твердое вещество: ¹Н ЯМР (d₆-ДМСО); δ 9,2 (с, 1Н), 8,75 (д, 1Н), 7,7-7,1 (м, 14Н), 6,4 (д, 1Н), 4,65 (д, 6Н), 4,56 (с, 1Н), 4,6-4,35 (дд, 1Н), 3,9 (с, 2Н), 2,9-2,6 (м, 6Н).

N-2-(6-бензил-1,2-дигидро-2-оксо-3-(3-фенилпропионил)-амино-1-пиридил)ацетил-3-(S)-амино-5-(5-(2,6-дихлорфенил)-триазол-2-ил)-4-оксопентановую кислоту (91) получали из 52b и трет-бутилового эфира 3-(аллилоксикарбонил)-амино-4-[(2,6-дихлорфенил)-триазол-2-ил]-4-гидроксибутановой кислоты (99) так же, как описано для получения 69а, что давало не совсем белый порошок: ¹H ЯМР (d₆-ДМСО), δ 9,32 (с, 1Н), 9,05 (д, 1Н), 8,27 (д, 1Н), 8,18 (д, 1Н), 7,78 (д, 1Н), 7,6 (т, 1Н), 7,4-7,1 (м, 11Н), 6,1 (д, 1Н), 5,64 (м, 1Н), 4,8-4,6 (дд, 2Н), 3,85 (с, 2Н), 3,02 (м, 1Н), 2,9-2,7 (м, 4Н).

3-(S)-(2-(3[3-(S)-(4-гидроксифенил)-пропиониламино]-2-оксоазепан-1-ил)-ацетиламино)-4-оксобутановую кислоту (92) получали из 2-(3[3-(S)-(4-гидроксифенил)пропиониламино]-2-оксоазепан-1-ил)уксусной кислоты и N-аллилоксикарбонил-4-амино-5-бензилокси-2-оксотетрагидрофурана (Chapman, Biorg. Med. Chem. Lett., 2, стр.613-18 (1992)) по методу, схожему с описанным для синтеза 54а, что давало соединение заголовка в виде белого твердого вещества: ¹H ЯМР (d₆-ДМСО); δ 9,10-9,20 (с, 1Н), 8,40 (с, 1Н), 7,88 (д, 1Н), 7,0 (д, 2Н), 6,64 (д, 2Н), 4,60 (т, 1Н), 4,10 (к, 2Н), 3,9-4,2 (м, 2Н), 3,6 (м, 1Н), 3,18 (д, 2Н), 2,70 (т, 2Н), 2,40 (м, 2Н), 1,85-1,40 (м, 8Н).

4-Этоксиметилен-2-стирил-4Н-оксазол-5-он (94) получали по Cornforth, The Chemistry of Penicillin, Clarke, Johnson, Robinson, (ред.) Princeton University Press, стр.804 (1949).

Этиловый эфир 4-оксо-3-(3-фенилакрилоиламино)-4,6,7,8-тетрагидропирроло[1,2-а]пиримидин-(6S)-карбоновой кислоты (95) получали из 94 по методике примера 5 для соединения 3, что давало 4,5 г (30%) соединения заголовка: ¹Н ЯМР (CD₃OD); δ 1,3 (т, 3Н), 2,35 (м, 1Н), 2,65 (м, 1Н), 3,1 (м, 1Н), 3,15 (м, 1Н), 4,25 (к, 2Н), 5,15 (дд, 1Н), 6,95 (д, 1Н), 7,4 (м, 3Н), 7,6 (м, 2Н), 7,65 (д, 1Н), 8,95 (с, 1H).

4-оксо-3-(3-фенилакрилоиламино)-4,6,7,8-тетрагидропирроло[1,2-а]пиримидин-(6S)-карбоновая кислота (96).

Смесь этилового эфира 4-оксо-3-(3-фенилакрилоиламино)-4,6,7,8-тетрагидропирроло[1,2-а] пиримидин-(6S)-карбоновой кислоты (95, 3,1 г, 8,8 ммоль) и водного 1 н. гидроксида лития (8,8 мл, 8,8 ммоль) в метаноле (10 мл) перемешивали 18 ч при комнатной температуре. Реакцию разбавляли водой и промывали этиловым эфиром (1× 20 мл). Водный слой подкисляли конц. соляной кислотой. Твердое вещество собирали путем фильтрации и промывали водой. Твердое вещество сушили в вакуумной печи при 50° С в течение 18 ч, что давало 2,2 г (75%) соединения заголовка в виде желтовато-коричневого твердого вещества: ¹Н ЯМР (СD₃ОD); δ 2,4 (м, 1Н), 2,7 (м, 1Н), 3,1 (м, 1Н), 3,2 (м, 1Н), 5,15 (дд, 1Н), 7,0 (д, 1Н), 7,4 (м, 3Н), 7,6 (м, 2Н), 7,65 (д, 1Н), 8,95 (с, 1Н).

(2-Бензилокси-5-оксотетрагидрофуран-3-ил)амид 4-оксо-3-(3-фенилакрилоиламино)-4,6,7,8-тетрагидропирроло[1,2-а] пиримидин-(6S)-карбоновой кислоты (97) получали из 96 по методу, описанному в примере 3 для соединения Н, стадия А, что давало 0,52 г (75%) соединения заголовка в виде смеси диастереомеров: ¹H ЯМР (СDСl₃); δ 2,3-2,7 (м, 3Н), 2,9 (дд, 1Н), 3,05 (м, 1Н), 3,3 (м, 1Н), 4,4-4,8 (м, 2Н), 4,9 (2× д, 1Н), 5,05 (м, 1Н), 5,55 (2× с, 1Н), 6,66 (2× д, 1Н), 7,4 (м, 6Н), 7,55 (м, 4Н), 7,65 (2× д, 1Н), 8,0 (м, 2Н), 9,2 (2× с, 1Н).

4-оксо-(3S)-{[4-оксо-3-(3-фенилпропиониламино)-4,6,7,8-тетрагидропирроло[1,2-а]пиримидин-(6S)-карбонил]амино}бутановую кислоту (98) получали по методике примера 3 для соединения Н, стадия D, что давало 0,13 г (45%) соединения заголовка: ¹H ЯМР (CD₃OD); δ 2,35 (м, 1Н), 2,45-2,75 (м, 3Н), 2,8 (т, 2Н), 3,0 (т, 2Н), 3,1 (м, 1Н), 3,25 (м, 1Н), 4,3 (м, 1Н), 6,65 (дд, 1Н), 5,15 (м, 1Н), 7,15 (м, 1Н), 7,3 (м, 4Н), 8,8 [а, 1Н).

Трет-бутиловый эфир 3(S)-аллилоксикарбонил) амино-4-[(2,6-дихлорфенил)оксазол-2-ил]-4(R,S)-гидроксибутановая кислота (99).

Раствор 5-(2,6-дихлорфенил)оксазола (2,71 г, 12,7 ммоль: полученного по методу, схожему с описанным в Tet. Lett. 23, стр.2369 (1972)) в тетрагидрофуране (65 мл) охлаждали до -78° С в атмосфере азота. К данному раствору добавляли н-бутиллитий (1,5 М раствор в гексанах, 8,5 мл, 13,3 ммоль) и перемешивали при -78° С в течение 30 мин. Эфират бромида магния (3,6 г, 13,9 ммоль) добавляли и раствору давали нагреться до -45° С в течение 15 мин. Реакцию охлаждали до -78° С и по каплям добавляли альдегид 58 (3,26 г, 12,7 ммоль; Graybill et al., Int. J. Protein Res., 44, стр.173-182 (1993)) в тетрагидрофуране (65 мл). Реакцию перемешивали в течение 25 мин, затем давали нагреться до -40° С и перемешивали в течение 3 ч и затем при комнатной температуре в течение 1 ч. Реакцию гасили добавлением 5% NaHCO₃ (12 мл) и перемешивали в течение 3 ч. Тетрагидрофуран удаляли под вакуумом и полученный остаток экстрагировали добавлением дихлорметана. Органический слой промывали насыщенным раствором хлорида натрия и сушили над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали, что давало выход 6,14 г (80%) 99: ¹Н ЯМР (CDCl₃); δ 1,45 (с, 9Н), 2,7-2,5 (м, 2Н), 2,8 (дд, 1Н), 4,2, 4,4 (2× д, 1Н), 4,7-4,5 (м, 3Н), 5,35-5,1 (м, 2Н), 5,6, 5,7 (2× д, 1Н), 6,0-5, 8 (м, 1Н), 7,2 (д, 1Н), 7,3 (м, 1Н), 7,4 (м, 2Н).

4-оксо-3-(3-фенилпропиониламино)-4,6,7,8-тетрагидропирроло[1,2-а]пиримидин(6S) -карбоновая кислота (100).

Смесь 4-оксо-3-(3-фенилакрилоиламино)-4,6,7,8-тетрагидропирроло[1, 2-а]пиримидин(6S)-карбоновой кислоты (96, 2,1 г, 6,5 ммоль) и 20% гидроксида палладия на угле (0,5 г) в метаноле (50 мл) перемешивали в атмосфере водорода в течение 4 ч. Полученную смесь фильтровали и концентрировали, что давало выход 2,1 г (100%) соединения заголовка в виде белого твердого вещества: ¹H ЯМР (CD₃OD); δ 2,35 (м, 1Н), 2,65 (м, 1Н), 2,75 (т, 2Н), 3,0 (т, 2Н), 3,1 (м, 1Н), 3,15 (м, 1Н), 5,1 (дд, 1Н), 7,15 (м, 1Н), 7,25 (м, 4Н), 8,75 (с, 1Н).

4-Трет-бутоксикарбонил-2-оксо(3S)-{[4-оксо-3-(3-фенилпропиониламино)-4,6,7,8-тетрагидропирроло[1,2-а]пиримидин(6S)-карбонил]амино}бутиловый эфир 2,6-дихлор-бензойиой кислоты (101а) получали по методике примера 5 для соединения 56а, что давало 0,16 г (20%) соединения заголовка: ¹Н ЯМР (CD₃OD); δ 1,45 (с, 9Н), 2,3 (м, 1Н), 2,6 (м, 1Н), 2,7 (м, 3Н), 2,95 (м, 3Н), 4,8 (м, 1Н), 5,1 (м, 1Н), 5,2 (к, 2Н), 7,1 (м, 1Н), 7,2 (м, 4Н), 7,4 (м, 3Н), 8,75 (с, 1Н).

Трет-бутиловый эфир 4-(7-метоксибензоксазол-2-ил)-4-оксо(3S)-{[4-оксо-3-(3-фенилпропиониламино)-4,6,7,8-тетрагидропирроло[1,2-а]пиримидин(6S)-карбонил]амино}бутановой кислоты (101b).

Трет-бутиловый эфир 4-гидрокси-4(7-метоксибензоксазол-2-ил) (3S)-{[4-оксо-3-(3-фенилпропиониламино)-4,6,7,8-тетрагидропирроло[1,2-а]пиримидин(6S)-карбонил]амино}бутановой кислоты получали из 100 и 66а по методике примера 5 для соединеия 67а, что давало 0,95 г (количественно) продукта в виде смеси диастереомеров: ¹Н ЯМР (СD₃ОD); δ 1,45 (2× с, 9Н), 2,2 (2× м, 1Н), 2,35-3,0 (м, 9Н), 4,0 (м, 3Н), 4,75 (м, 1Н), 4,85 (м, 1Н), 5,05 (2× дд, 1Н), 7,1 (2× дд, 1Н), 7,15-7,3 (м, 4Н), 7,5 (2× т, 1Н), 7,8 (2× d, 1Н), 8,55 (2× дд, 1H), 8,7 (2× с, 1Н).

Полученный продукт превращали в 101b по методике примера 5 для соединения 68а, что давало 0,36 г (50%) соединения заголовка: ¹H ЯМР (CD₃OD); δ 1,4 (с, 9Н), 2,35 (м, 1H), 2,55 (м, 1H), 2,75 (т, 2Н), 2,95 (т, 2Н), 3,0 (м, 1H), 3,1 (дд, 2Н), 3,15 (м, 1H), 5,15 (дд, 1H), 5,65 (т, 1H), 7,1 (м, 2Н), 7,2 (м, 4Н), 7,4 (м, 2Н), 8,7 (с, 1H).

Трет-бутиловый эфир 4-[5-(2,6-дихлорфенил)оксазол-2-ил]-4-оксо-(3S)-{[4-оксо-3-(3-фенилпропиониламино)-4,6,7,8-тетрагидропирроло[1,2-а]пиримидин(6S)-карбонил]амино}бутановой кислоты (101с).

Трет-бутиловый эфир 4-[5-(2,6-дихлорфенил)-2-ил]-4-гидрокси-(3S)-{[4-оксо-3-(3-фенилпропиониламино)-4,6,7,8-тетрагидропирроло[1,2-а]пиримидин-(6S)-карбонил]амино}бутановой кислоты из 100 и 99, применяя метод, описанный в примере 5, соединение 67а, что давало 0,09 г (60%) продукта в виде смеси диастереомеров: ¹H ЯМР (CD₃OD) δ 1,45 (2× с, 9Н), 2,2 (м, 1Н), 2,5 (м, 2Н), 2,7 (2× дд, 1Н), 2,75 (т, 2Н), 2,9-3,1 (м, 4Н), 4,7 (м, 1Н), 5,1 (м, 2Н), 7,1 (м, 1Н), 7,1-7,25 (м, 4Н), 7,4 (т, 1Н), 7,5 (т, 1Н), 8,55 (д, 1Н), 8,75 (с, 1Н).

Получившийся продукт превращали в 101с по методу, описанному в примере 5, соединение 68а, что давало 0,04 г (45%) соединения заголовка: ^lH ЯМР (СD₃OD) δ 1,4 (с, 9Н), 2,3 (м, 1Н), 2,6 (м, 1Н), 2,75 (т, 2Н), 2,95 (т, 2Н), 2,9-3,2 (м, 4Н), 5,2 (дд, 1Н), 5,55 (т, 1Н), 7,1 (м, 1Н), 7,25 (м, 4Н), 7,55 (м, 3Н), 8,75 (с, 1Н).

4-карбокси-2-оксо-(3S)-{[4-оксо-3-(3-фенилпропиониламино)-4,6,7,8-тетрагидропирроло[1,2-а]пиримидин-(6S)-карбонил]амино}бутиловый эфир 2,6-дихлорбензойной кислоты (102а) получали из 101а по методике примера 5 для соединения 57а, что давало 0,12 г (80%) соединения заголовка: ¹H ЯМР (СD₃ОD) δ 2,35 (м, 1Н), 2,65 (м, 1Н), 2,75 (м, 2Н), 2,85 (дд, 1Н), 2,95 (м, 2Н), 3,0 (дд, 1Н), 3,15 (м, 1Н), 3,25 (м, 1Н), 4,55 (дд, 1Н), 5,15 (м, 1Н), 5,25 (к, 2Н), 7,15 (м, 1Н), 7,25 (м, 4Н), 7, 45 (м,1Н), 8,8 (с, 1Н).

4-(7-метоксибензоксазол-2-ил)-4-оксо-(3S)-{[4-оксо-3(3-фенилпропиониламино)-4,6,7,8-тетрагидропирроло [1,2-а] пиримидин-(6S)-карбонил]амино)бутановую кислоту (102в) получали из 101b по методике, описанной в примере 5 для соединения 69а, что давало 0,12 г (35%) соединения заголовка: ¹H ЯМР (DMCO-d₆) δ 2,1 (м, 1Н), 2,55 (м, 1Н), 2,7-3,1 (м, 8Н), 4,05 (с, 3Н), 5,1 (дд, 1Н), 5,55 (т, 1Н), 7,2 (м, 1Н), 7,25 (м, 5Н), 7,5 (т, 1Н), 7,55 (д, 1Н), 8,7 (с, 1Н), 9,2 (д, 1Н), 9,4 (с, 1Н), 12,7 (ушир, 1Н).

4-[5-(2,6-дихлорфенил)-оксазол-2-ил]-4-оксо-(3S)-{[4-оксо-3-(3-фенилпропиониламино)-4,6,7,8-тетрагидропирроло [1,2-а]пиримидин-(6S)-карбонил]амино}бутановую кислоту (102с) получали из 101с, как описано в примере 5 для соединения 69а, что давало 0,01 г (40%) соединения заголовка: ¹H ЯМР (СD₃ОD) δ 2,35 (м, 1Н), 2,6 (м, 1Н), 2,75 (т, 2Н), 2,95 (м, 2Н), 3,05 (м, 1Н), 3,15 (м, 3Н), 5,15 (дд, 1Н), 5,55 (т, 1Н), 7,15 (м, 1Н), 7,2 (м, 4Н), 7,55 (м, 3Н), 8,8 (с, 1Н).

Метиловый эфир (3-трет-бутоксикарбониламино-2-оксо-2,3,4,5-тетрагидробензо[b][1,4]диазепин-1-ил)уксусной кислоты (103).

Стадия А. 2(S)-трет-бутоксикарбониламино-3-(2-нитрофениламино)пропионовая кислота. 2-трет-бутоксикарбониламино-3-аминопропионовая кислота (10 г, 49 ммоль), 2-фторнитробензол (5,7 мл, 54 ммоль) и бикарбонат натрия (8,25 г, 98 ммоль) вносили в 130 мл диметилформамида и нагревали при 80° С в течение 18 часов. Реакцию выпаривали над вакуумом, что давало вязкий оранжевый остаток, который растворяли в 300 мл воды и экстрагировали добавлением диэтилового эфира (3× 150 мл). Водный раствор подкисляли до рН 5 10% гидросульфатом натрия и экстрагировали добавлением этилацетата (3× 250 мл). Объединенные экстракты сушили над безводным сульфатом натрия, фильтровали и выпаривали, что давало 12,64 г (83%) соединения заголовка в виде оранжевого аморфного твердого вещества: ¹H ЯМР (CD₃ОD) δ 8,15-8,10 (1Н, д), 7,54-7,48 (1H, т), 7,13-7,08 (1H, д), 6,73-6,65 (1H, т), 4,45-4,35 (1H, м), 3,9-3,8 (1H, дд), 1,45 (9Н, с).

Стадия В. 2(S)-трет-бутоксикарбониламино-3-(2-аминофениламино)пропионовая кислота. Смесь 2-трет-бутоксикарбониламино-3-(2-нитрофениламино) пропионовой кислоты (12,65 г, 40,5 ммоль) и 0,5 г 10% Pd/C в 100 мл метанола в атмосфере водорода при 1 атмосфере перемешивали в течение 4 ч. Раствор фильтровали через Celite 545 и фильтрат выпаривали над вакуумом, что позволяло получить 11,95 г соединения заголовка в количественном выходе в виде темно-коричневого твердого вещества, которое использовали без очистки. ¹H ЯМР (СD₃ОD) δ 6,75-6,70 (3Н, м), 6,65-6,58 (1H, м), 4,35-4,3 (1H, м), 3,6-3,38 (2Н, м), 1,45 (9Н, с).

Стадия С. 3 (S)-трет-бутоксикарбониламино-1,3,4,5-тетрагидро-бензо[b][1,4]диазепин-2-он. К охлажденному (0° С) раствору 2-трет-бутоксикарбониламино-3-(2-аминофениламино)пропионовой кислоты (11,95 г, 40,5 ммоль) в 100 мл диметилформамида добавляли гидрохлорид 1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимида и перемешивали в течение 18 часов. Реакцию вливали в 700 мл этилацетата и промывали четырежды 100 мл воды. Органический слой сушили над безводным сульфатом натрия, фильтровали и выпаривали, что давало коричневое твердое вещество, которое очищали методом флэш-хроматографии, элюируя 3:7 этилацетатом/гексаном, что давало 8 г (71%) соединения заголовка: ¹H ЯМР (СDСl₃) δ 7,78 (1Н, с), 7,02-6,95 (1H, м), 6,88-6,82 (1H, м), 6,82-6,78 (1H, м), 6,75-6,70 (1H, м), 5,8-5,7 (1H, д), 4,55-4,45 (1H, м), 3,95 (1H, с), 3,9-3,82 (1H, м), 3,48-3,40 (1H, м), 1,45 (9Н, с).

Стадия D. Метиловый эфир 3(S)-трет-бутоксикарбониламино-2-оксо-2,3,4,5-тетрагидробензо[b][1,4]диазепин-1-ил уксусной кислоты (103). К раствору 3-трет-бутоксикарбониламино-1,3,4,5-тетрагидробензо[b][1,4]диазепин-2-она (0,94 г, 3,38 ммоль) при -78° С в 20 мл безводного тетрагидрофурана добавляли по каплям 1,0 М раствор бис(триметилсилил)амида лития (3,4 мл, 3,4 ммоль) в ТГФ и перемешивали в течение 30 минут. К реакционной смеси добавляли по каплям метилбромацетат (0,44 мл, 4 ммоль), затем нагревали до комнатной температуры. Реакцию разбавляли 100 мл этилацетата и промывали 0,3 н. гидросульфатом калия (50 мл), водой (2× 50 мл) и соляным раствором. Объединенные органические слои сушили над безводным сульфатом натрия, фильтровали и выпаривали, что позволяло получить клейкое вещество, которое очищали методом флэш-хроматографии, элюируя 3:7 EtOAc/гекс., что давало 0,98 г (83%) соединения заголовка в виде белого твердого вещества. ¹Н ЯМР (СDСl₃) δ 7,15-7,07 (2Н, м), 6,98-6,94 (1Н, м), 6,88-6,84 (1Н, д), 5,62-5,55 (1H, д), 4,71-4,65 (1Н, д), 4,65-4,6 (1H, м), 4,33-4,27 (1H, д), 3,96-3,90 (1H, м), 3,78 (3Н, с), 3,44-3,37 (1H, м), 1,4 (9Н, с).

a R=Н

b R=СОСН₂СН₂Рh

с R=CH₂Ph

Метиловый эфир[2-оксо-3(S)-(3-фенилпропиониламино)-2,3,4,5-тетрагидробензо[b][1,4]диазепин-1-ил]уксусной кислоты (104а).

Безводный хлороводород пропускали через раствор метилового эфира (3(S)-трет-бутоксикарбониламино-2-оксо-2,3,4,5-тетрагидробензо[b][1,4]диазепин-1-ил)уксусной кислоты (103,1 г, 2,86 ммоль) в 25 мл этилацетата в течение 2 мин, затем перемешивали в течение 1 часа при комнатной температуре. Реакцию выпаривали, что давало гидрохлорид метилового эфира 2-оксо-3(S)-амино-2,3,4,5-тетрагидробензо[b][1,4]диазепин-1-ил уксусной кислоты в виде белого твердого вещества. Солянокислую соль и гидроциннамовую кислоту (0,47 г, 3,15 ммоль) растворяли в 20 мл диметилформамида и охлаждали до 0° С. К раствору добавляли диизопропилэтиламин (1 мл, 5,72 ммоль) с последующим добавлением N-гидроксибензотриазола и гидрохлорида 1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимида. После перемешивания в течение 18 часов при комнатной температуре смесь разбавляли 150 мл этилацетата и промывали 10% гидросульфатом натрия, 10% бикарбонатом натрия и соляным раствором. Органический слой сушили над безводным сульфатом натрия, фильтровали и выпаривали до неочищенного твердого вещества, которое очищали методом флэш-хроматографии, элюируя 7:3 этилацетатом/дихлорметаном, что позволяло получить 600 мг (55%) соединения заголовка в виде белого твердого вещества. ¹H ЯМР (CDCl₃) δ 7,3-6,85 (9Н, м), 6,55-6,0 (1Н, д), 4,88-4,82 (1Н, м), 4,72-4,65 (1H, д), 4,28-4,22 (1Н, м), 3,95-3,9 (1H, м), 3,78 (3Н, с), 3,65 (1H, ушир с), 3,28-3,2 (1H, м), 2,95-2,84 (2Н, м), 2,55-2,4 (2Н, м).

3(S)-(3-фенилпропиониламино)-2-оксо-2,3,4,5-тетрагидробензо[b][1,4]диазепин-1-ил) уксусная кислота (105а).

Метиловый эфир (3(S)-(3-фенилпропиониламино)-2-оксо-2,3,4,5-тетрагидробензо[b][1,4]диазепин-1-ил) уксусной кислоты (104а) растворяли в 90% метаноле. К реакции добавляли гидрат гидроксида лития и реакцию перемешивали при комнатной температуре в течение 4 ч. Реакцию выпаривали над вакуумом, что давало белое твердое вещество. Его растворяли в 20 мл воды, подкисляли до рН 5 и экстрагировали добавлением этилацетата, что позволяло получить 304 мг (88%) соединения заголовка в виде белого твердого вещества: ¹H ЯМР (СDСl₃) δ 7,5-6,9 (11Н, м), 4,92-4,8 (1H, м), 4,7-4,58 (1H, д), 4,38-4,25 (1H, д), 3,88-3,78 (1H, м), 3,45-3,25 (1H, м), 3,05-2,85 (2Н, м), 2,55-2,45 (2Н, м).

4-оксо-3(S)-{2-[2-оксо-3(S)-(3-фенилпропиониламино)-2,3,4,5-тетрагидробензо [b] [1,4] диазепин-1-илацетиламино}бутановая кислота (106а).

N-[1-(2-бензилокси-5-оксотетрагидрофуран-3-илкарбамоилметил)-2-оксо-2,3,4,5-тетрагидро-1Н-бензо[b][1,4]диазепин-3-ил]-3-фенилпропионамид получали из 105а по методике примера 3, соединение Н (стадия А), что позволяло получить 390 мг (93%) продукта в виде диастереомеров. ¹H ЯМР (СD₃ОD) δ 7,58-7,22 (14Н, м), 5,78-5,73 (0,5Н, д), 5,64 (0,5Н, с), 5,0-4,72 (4Н, м), 4,54-4,42 (2Н, м), 3,82-3,76 (0,5Н, м), 3,68-3,62 (0,5Н, м), 3,28-3,21 (0,5Н, м), 3,19-3,12 (0,5Н, м), 3,07-2,98 (2Н, м), 2,78-2,48 (4Н, м).

Полученный продукт превращали в 106а по методу, описанному в примере 3, соединение Н (стадия D), что позволяло получить соединение заголовка в виде белого твердого вещества (17%): ¹H ЯМР (СD₃ОD) δ 7,54-6,98 (9Н, м), 5,58-5,44 (1Н, м), 4,8-4,2 (4Н, м), 3,96-3,3 (2Н, м), 3,30-3,05 (1Н, м), 2,98-2,25 (5Н, м).

Метиловый эфир [-2-оксо-5-(3-фенилпропионил)-3(S)-(3-фенил-пропиониламино)-2,3,4,5-тетрагидробензо[b][1,4] диазепин-1-ил]уксусной кислоты (104в).

Безводный хлороводород пропускали через раствор метилового эфира (3(S)-трет-бутоксикарбониламино-2-оксо-2,3,4,5-тетра-гидробензо[b][1,4]диазепин-1-ил)уксусной кислоты (103,1 г, 2,86 ммоль) в 25 мл этилацетата в течение 2 мин, затем перемешивали в течение 1 часа при комнатной температуре. Реакцию выпаривали, что давало гидрохлорид метилового эфира 2-оксо-3(S)-амино-2,3,4,5-тетрагидробензо [b][l,4] диазепин-1-ил уксусной кислоты в виде белого твердого вещества. Солянокислую соль суспендировали в 20 мл дихлорметана и охлаждали до 0° С. К суспензии добавляли триэтиламин (1,6 мл, 11,5 ммоль) с последующим добавлением дигидроциннамоилхлорида (0,9 мл, 6 ммоль). Смесь нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 18 часов. Смесь разбавляли 25 мл дихлорметана и промывали дважды 50 мл воды и один раз 50 мл соляного раствора. Органический слой сушили над безводным сульфатом натрия, фильтровали и выпаривали, что давало вязкую желтую маслянистую жидкость, которую очищали методом флэш-хроматографии, элюируя 1:1 этилацетатом/дихлорметаном, что позволяло получить 1,35 г (92%) продукта заголовка в виде белого твердого вещества. ¹Н ЯМР (CDCl₃) δ 7,45-7,02 (14Н, м), 6,37-6,32 (1Н, д), 4,78-4,72 (1H, м), 4,52-4,3 (3Н, м), 3,82-3,77 (1H, м), 3,74 (3Н, с), 3,03-2,87 (4Н, м), 2,58-2,45 (2Н, м), 2,45-2,35 (1H, м), 2,25-2,16 (1H, м).

[2-оксо-5-(3-фенилпропионил)-3-(3(S)-фенилпропиониламино)-2,3,4,5-тетрагидробензо[b][1,4]диазепин-1-ил] уксусная кислота (105b).

Метиловый эфир [2-оксо-5-(3-фенилпропионил)-3-(3(S)-фенилпропиониламино)-2,3,4,5-тетрагидробензо[b][1,4]-диазепин-1-ил]уксусной кислоты (104b; 680 мг, 1,32 ммоль) гидролизовали по методике примера 105а, что позволяло получить 645 мг (98%) соединения заголовка в виде белого твердого вещества. ¹H ЯМР (СDСl₃) δ 7,58 (1H, ушир с), 7,5-7,42 (1H, м), 7,35-6,95 (14Н, м), 4,95-4,88 (1H, м), 4,64-4,55 (1H, д), 4,54-4,45 (1H, т), 4,15-4,05 (1H, д), 3,75 (1Н, м), 3,05-2,75 (4Н, м), 2,58-2,45 (2Н, м), 2,45-2,28 (1H, м), 2,25-2,14 (1H, м).

2-оксо-3(S)-{2-[2-оксо-5-(3-фенилпропионил)-3(S)-(3-фенил-пропиониламино)-2,3,4,5-тетрагидробензо[b][1,4]диазепин-1-ил]ацетиламино}бутановая кислота (106b).

[2-оксо-5-(3-фенилпропионил)-3-(3-фенилпропиониламино)-2,3,4,5-тетрагидробензо[b][1,4]диазепин-1-ил]уксусная кислота и семикарбазон трет-бутилового эфира 3-амино-4-оксобутановой кислоты связывали по методике примера 3, соединение К (стадия А), что давало 350 мг (85%) белого твердого вещества. ¹H ЯМР (СDСl₃) δ 9,05 (1H, ушир с), 7,58-7,55 (1Н, д), 7,5-7,35 (1H, м), 7,35-6,95 (14Н, м), 6,75-6,72 (1H, д), 6,25 (1H, ушир с), 5,25 (1H, ушир с), 4,95-4,88 (1H, м), 4,8-4,72 (1H, м), 4,55-4,4 (2Н, м), 3,92-3,88 (1H, д), 3,73-3,68 (1H, м), 2,95-2,8 (4Н, м), 2,8-2,72 (1H, м), 2,62-2,55 (1H, м), 2,55-2,45 (2Н, м), 2,40-2,32 (1H, м), 2,2-2,12 (1H, м), 1,45 (9Н, с).

Семикарбазон трет-бутилового эфира 4-оксо-3-{2-[2-оксо-5-(3-фенилпропионил)-3-(3-фенилпропиониламино)-2,3,4,5-тетра-гидробензо[b][1,4]диазепин-1-ил]ацетиламино}бутановой кислоты лишали защиты, как описано в примере 3, соединение К (стадия С), что давало 118 мг (47%) соединения заголовка в виде белого твердого вещества. ¹H ЯМР (СD₃ОD) δ 7,48-6,95 (14Н, м), 4,65-4,15 (6Н, м), 3,5-3,4 (1H, м), 2,85-2,72 (4Н, м), 2,65-2,5 (1H, м), 2,5-2,34 (3Н, м), 2,34-2,15 (2Н, м).

Метиловый эфир [5-бензил-2-оксо-(3(S)-фенилпропиониламино)-2,3,4,5-тетрагидробензо [b] [1,4] диазепин-1-ил] уксусной кислоты (104с).

Метиловый эфир [2-оксо-3-(3-фенилпропиониламино)-2,3,4,5-тетрагидробензо[b][1,4]диазепин-1-ил] уксусной кислоты (104а; 500 мг, 1,31 ммоль), карбонат кальция (155 мг, 1,58 ммоль) и бензилбромид (170 мкл, 1,44 ммоль) переносили в 10 мл диметилформамида и нагревали до 80° С в течение 8 часов. Смесь разбавляли 150 мл этилацетата и промывали четырежды 50 мл воды. Органический слой сушили над безводным сульфатом натрия, фильтровали и выпаривали, что давало вязкую желтую маслянистую жидкость, которую очищали методом флэш-хроматографии, элюируя дихлорметаном/этилацетатом (8:2), что давало 460 мг (75%) соединения заголовка в виде белого твердого вещества. ¹H ЯМР (СDСl₃) δ 7,34-7,05 (14Н, м), 6,32-6,28 (1Н, д), 4,84-4,76 (1H, д), 4,76-4,70 (1Н, м), 4,43-4,37 (1H, д), 4,26-4,18 (1H, д), 4,06-4,00 (1H, д), 3,79 (3Н, с), 3,45-3,37 (1H, м), 3,02-2,95 (1H, м), 2,90-2,82 (2Н, м), 2,5-2,34 (2Н, м).

[5-бензил-2-оксо-3(S)-(3-фенилпропиониламино)-2,3,4,5-тетрагидробензо[b][1,4]диазепин-1-ил] уксусную кислоту (105с) получали методом гидролиза эфира (102с) по методике, изложенной в примере 105а, что давало 450 мг (98%) соединения заголовка в виде белого твердого вещества. ¹Н ЯМР (CD₃OD) δ 7,5-7,05 (14Н, м), 6,4 (1H, ушир с), 4,85-4,55 (2Н, м), 4,5-4,21 (2Н, м), 4,12-3,92 (1H, д), 3,45-3,3 (1H, м), 3,1-2,8 (3Н, м), 2,55-2,28 (3Н, м).

3(S)-{2-[5-бензил-2-оксо-3-(3(3)-фенилпропиониламино)-2,3,4,5-тетрагидробензо[b][1,4]диазепин-1-ил]ацетиламино}-4-оксобутановая кислота (106с).

[5-бензил-2-оксо-3(S)-(3-фенилпропиониламино)-2,3,4,5-тетрагидробензо[b][1,4]диазепин-1-ил] уксусная кислота и семикарбазон трет-бутилового эфира 3(S)-амино-4-оксобутановой кислоты связывали по методике примера 3, соединение К (стадия А), что позволяло получить 260 мг (85%) белого твердого вещества. ¹H ЯМР (СD₃OD) δ 7,35-7,0 (15Н, м), 4,94-4,88 (1H, м), 4,68-4,58 (1H, д), 4,57-4,52 (1H, м), 4,41-4,34 (1H, д), 4,3-4,23 (1H, д), 4,1-4,04 (1H, д), 3,18-3,11 (1H, м), 3,09-2,98 (1Н, м), 2,78-2,72 (2Н, т), 2,65-2,57 (1H, м), 2,42-2,33 (3Н, м).

Семикарбазон трет-бутилового эфира 3(S)-{2-[5-бензил-2-оксо-3(S)-(3-фенилпропиониламино)-2,3,4,5-тетрагидробензо[b][1,4]-диазепин-1-ил]ацетиламино}-4-оксобутановой кислоты лишали защиты, как описано в примере 3, соединение К (стадия С), что давало 168 мг (81%) соединения заголовка в виде белого твердого вещества. ¹H ЯМР (CD₃OD) δ 7,37-7,0 (14Н, м), 4,75-4,62 (1H, м), 4,6-4,45 (2Н, м), 4,4-4,21 (2Н, м), 4,15-3,95 (2Н, м), 3,15-3,0 (2Н, м), 2,82-2,67 (2Н, м), 2,65-2,52 (1H, м), 2,5-2,32 (3Н, м).

Бутиловый эфир 4-трет-бутоксикарбонил-2-оксо-3(S)-{2-[2-оксо-5-(3-фенилпропионил)-3(S)-(3-фенилпропиониламино)-2,3,4,5-тетрагидробензо [b] [1,4] диазепин-1-ил]ацетиламино}-2,6-дихлорбензойной кислоты (107а).

Конечный семикарбазон получали связыванием соединения 105b и т-бутил-3-(аллилоксикарбониламино)-4-оксо-5-(2,6-дихлорбензоилокси)пентаноата (WO 93 16710), как описано для соединения 56а, что давало 256 мг (58%) соединения заголовка в виде белого твердого вещества. ¹H ЯМР (СDСl₃) δ 7,45-7,04 (17Н, м), 6,45-6,34 (2Н, м), 5,28-5,21 (1Н, м), 5,1-5,0 (1Н, м), 4,95-4,9 (1Н, м), 4,75-4,70 (1Н, м), 4,55-4,44 (1Н, м), 4,32-4,22 (1Н, дд), 3,99-3,85 (1Н, дд), 3,85-3,76 (1Н, м), 3,06-2,83 (5Н, м), 2,83-2,74 (1Н, м), 2,6-2,44 (2Н, м), 2,43-2,33 (1Н, м), 2,24-2,15 (1Н, м), 1,45 (9Н, с).

Бутиловый эфир 4-карбокси-2-оксо-3(S)-{2-[2-оксо-5-(3-фенилпропионил)-3(S)-(3-фенилпропиониламино)-2,3,4,5-тетрагидробензо[b][1,4]диазепин-1-ил]ацетиламино}-2,6-дихлорбензойной кислоты (108а) получали из соединения 107а по методу, описанному для соединения 57а, что позволяло получить 156 мг (68%) соединения заголовка в виде белого твердого вещества. ¹H ЯМР (СD₃ОD) δ 7,5-6,9 (17Н, м), 5,16-5,02 (1Н, дд), 4,88-4,71 (2Н, м), 4,62-4,44 (2Н, м), 4,42-4,28 (2Н, м), 4,27-4,18 (1Н, м), 3,47-3,41 (1Н, м), 2,90-2,60 (5Н, м), 2,46-2,4 (2Н, м), 2,39-2,18 (2Н, м).

Трет-бутиловый эфир 4-(7-метоксибензоксазол-2-ил)-4-оксо-3(S)-{2-[2-оксо-5-(3-фенилпропионил)-3(S)-(3-фенилпропиониламино)-2,3,4,5-тетрагидробензо[b][1,4]диазепин-1-ил]-ацетиламино}бутановой кислоты (107b).

Трет-бутиловый эфир 4(R,S)-гидрокси-4-(7-метоксибензоксазол-2-ил)-3(S)-{2-[2-оксо-5-(3-фенилпропионил)-3(S)-(3-фенилпропиониламино)-2,3,4,5-тетрагидро[b][1,4]диазепин-1-ил]ацетиламино}бутановой кислоты (107а) получали из соединения 105b и 66а по методу, описанному в примере 5, соединение 67, что давало 56% белого твердого вещества. ¹H. ЯМР (СDСl₃) δ 7,72-6,78 (19Н, м), 6,37-6,28 (1H, м), 5,17-5,08 (0,5Н, м), 4,92-4,82 (0,5Н, м), 4,81-4,6 (1H, м), 4,6-4,35 (3Н, м), 4,05-3,90 (1H, м), 3,95 (3Н, с), 3,82-3,7 (1H, м), 2,96-2,05 (10Н, м), 1,45 (4,5Н, с), 1,38 (4,5Н, с).

Полученный продукт превращали в 107b по методу, описанному в примере 5, соединение 68а, что давало соединения заголовка (56%) в виде белого твердого вещества. ¹Н ЯМР (CD₃OD) δ 7,62-6,8 (17Н, м), 5,64-5,58 (0,5Н, т), 5,52-5,46 (0,5Н, т), 4,62-4,47 (2Н, м), 4,40-4,32 (1H, м), 3,9 (1,5Н, с), 3,88 (1,5Н, с), 3,43-3,37 (1H, м), 3,0-2,92 (1H, м), 2,90-2,62 (6Н, м), 2,5-2,4 (2Н, м), 2,28-2,15 (2Н, м), 1,32 (4,5Н, с), 1,25 (4,5Н, с).

4-(7-метоксибензоксазол-2-ил)-4-оксо-3(S)-{2-[2-оксо-5-(3-фенилпропионил)-3(S)-(3-фенилпропиониламино)-2,3,4,5-тетрагидробензо [b] [1,4] диазепин-1-ил] ацетиламино}бутановую кислоту (108b) получали по методу, описанному в примере 5, соединение 69а, что давало соединения заголовка (50%) в виде белого твердого вещества. ¹H ЯМР (СD₃ОD) δ 7,41-6,88 (17Н, м), 5,6-5,55 (0,5Н, т), 5,48-5,43 (0,5Н, т), 4,64-4,45 (2Н, м), 4,45-4,30 (1H, м), 3,93 (1,5Н, с), 3,90 (1,5Н, с), 3,47-3,34 (1H, м), 3,10-2,85 (2Н, м), 2,84-2,63 (5Н, м), 2,6-2,4 (2Н, м), 2,3-2,1 (2Н, м).

Трет-бутиловый эфир 4-[5-(2,6-дихлорфенил)оксазол-2-ил]-4-оксо-3(S)-{2-[2-оксо-5-(3-фенилпропионил)-3(S)-(3-фенилпропиониламино)-2,3,4,5-тетрагидробензо[b](1,4]диазепин-1-ил]ацетиламино}бутановой кислоты (107с).

Трет-бутиловый эфир 4-[5-(2,6-дихлорфенил)оксазол-2-ил)-4(R,S)-гидрокси-3(S)-{2-[2-оксо-5-(3-фенилпропионил)-3(S)-(3-фенилпропиониламино)-2,3,4,5-тетрагидробензо[b][1,4]диазепин-1-ил]ацетиламино}бутановой кислоты получали из соединения 106с и 99 по методу, схожему с описанным для соединения 67а примера 5, что давало 72% белого твердого вещества. ¹H ЯМР (СDСl₃) δ 7,71-7,64 (1H, м), 7,58-7,42 (2Н, м), 7,42-6,92 (15Н, м), 6,5-6,37 (2Н, м), 5,15-5,04 (1H, м), 4,88-4,68 (2Н, м), 4,57-4,37 (2Н, м), 4,28-4,13 (1H, м), 3,87-3,64 (2Н, м), 3,04-2,8 (4Н, м), 2,76-2,68 (1H, м), 2,67-2,42 (3Н, м), 2,41-2,31 (1H, м), 2,22-2,12 (1H, м), 1,45 (9Н, с).

Полученный продукт превращали в 107с по методу, схожему с описанным для соединения 68а примера 5, что давало соединение заголовка в количественном выходе в виде белого твердого вещества. ¹H ЯМР (СDСl₃) δ 7,47-6,98 (18Н, м), 6,52-6,42 (1H, д), 45,6-5,52 (1H, м), 4,78-4,71 (1H, м), 4,52-4,40 (2Н, м), 4,03-3,94 (0,67Н, м), 3,94-3,85 (0,33Н, м), 3,85-3,75 (1H, м), 3,45-3,33 (1H, м), 3,08-2,98 (1H, м), 2,97-2,84 (4Н, м), 2,55-2,43 (2Н, м), 2,43-2,32 (1H, м), 2,23-2,13 (1Н, м), 1,35 (9Н, с).

4-[5-(2,6-дихлорфенил)оксазол-2-ил]-4-оксо-3(S)-{2-[2-оксо-5-(3-фенилпропионил)-3(S)-(3-фенилпропиониламино)-2,3,4,5-тетрагидробензо[b][1,4]диазепин-1-ил]ацетиламино}-бутановую кислоту (108с) получали из 107с по методу, схожему с описанным для соединения 69а примера 5, что давало 72% соединения заголовка в виде белого твердого вещества. ¹H ЯМР (СD₃OD) δ 7,58-7,0 (18Н, м), 5,62-5,53 (0,67Н, м), 5,52-5,47 (0,33Н, м), 4,68 (3Н, м), 3,54-3,42 (1H, м), 3,1-2,92 (2Н, м), 2,88-2,68 (5Н, м), 2,63-2,45 (2Н, м), 2,40-2,22 (2Н, м).

Трифторуксуснокислая соль 3(S)-{2(R,S)-[4-бензил-7-оксо-6(S)-(N-бензилоксикарбониламино)-[1,4]диазепан-1-ил] пропиониламино}-4-оксобутановой кислоты (114а).

Стадия А: К раствору трет-бутил-2-N-бензилоксикарбонил-3-N-бензил-(S)-2,3-диаминопропионата (110; 0,85 г, 2,2 ммоль), метилового эфира 3-(N-трет-бутоксикарбонил)амино-2-метил-5-оксопентановой кислоты (109а; 0,65 г, 2,7 ммоль), уксусной кислоты (0,1 мл, 1,8 ммоль), ацетата натрия (0,36 г, 2 ммоль), 4 А молекулярного сита (1 г) в метаноле (45 мл) добавляли цианоборгидрид натрия (0,33 г, 5,3 ммоль). Смесь перемешивали в течение ночи при 25° С, затем фильтровали через Celite и концентрировали в условиях пониженного давления. Остаток растворяли в 1 н. NaOH и экстрагировали добавлением этилацетата (3× 40 мл). Органический слой сушили (MgSO₄), фильтровали и выпаривали, что давало маслянистую жидкость. Хроматография (силикагель, 4:1 гексан:этилацетат в качестве элюента) давала 0,92 г (выход 68%) 111a в виде маслянистой жидкости.

Стадия В: Вышеуказанный продукт растворяли в дихлорметане (3 мл), охлаждали до 0° С и обрабатывали 25% раствором трифторуксуной кислоты в дихлорметане (20 мл), затем давали нагреться до 25° С и перемешивали до тех пор, пока реакцию полностью не оценивали методом ТСХ (4:1 гексан:этилацетат). Растворитель удаляли в условиях пониженного давления и остаток сушили под вакуумом, затем растворяли в дихлорметане (40 мл) и обрабатывали 4-метилморфолином (1 мл, 9 ммоль), ГОБТ (0,2 т, 1,5 ммоль) и ЭДК (0,61 г, 3,2 ммоль). Полученную смесь перемешивали в течение ночи при 25° С, затем разбавляли дихлорметаном и промывали водой. Органический слой сушили (MgSO₄), фильтровали и выпаривали, что давало маслянистую жидкость. Хроматография (силикагель, 3:2 гексан:этилацетат) давала 0,49 г (выход 74%) 112а в виде вязкой маслянистой жидкости.

Стадия С: Раствор метилового эфира 2(R,S)-[4-бензил-7-оксо-6(S)-(N-бензилоксикарбониламино)-[1,4]диазепан-1-ил]пропионовой кислоты (112а; 0,15 г, 0,32 ммоль), растворяли в метаноле и обрабатывали 1 М LiOH (0,32 мл) и перемешивали 5,5 часов при 25° С, затем выпаривали досуха. Остаток азеотропировали с этанолом (2× 10 мл), ацетонитрилом (2× 10 мл), бензолом (2× 10 мл), затем сушили под вакуумом. Полученный остаток превращали в 114а по методу, схожему с описанным в примере 3, соединение К (стадии A, В и С) и очищали методом обращенно-фазовой (колонка С 18) ЖХВР, применяя 0,1% ТФА:вода/0,1% ТФА:ацетонитрил в качестве элюента, что давало 17 мг (выход 10%) вязкой маслянистой жидкости.

¹Н ЯМР (500 МГц, СD₃ОD) δ 1,15 (м, 3Н), 2,30-2,70 (м, 6Н), 2,72-2,95 (ушир. м, 6Н), 3,30-3,80 (м, 4Н), 4,10 (м, 1Н), 4,40 (м, 4Н), 4,95 (м, 1Н), 6,95-7,10 (ушир. с, 5Н) и 7,12-7,20 ppm (ушир. с, 5Н).

Трифторуксуснокислая соль 3(S)-{2-[4-бензил-7-оксо-6(S)-(N-бензилоксикарбониламино) [1,4]диазепан-1-ил] ацетиламино}-4-оксобутановой кислоты (114b) получали из 109b по методу, схожему с описанным для синтеза 114а, что давало 85 мг вязкой маслянистой жидкости. ¹H ЯМР (500 МГц, СD₃ОD) δ 1,20 (д, J=7 Гц, 3Н), 2,28 (м, 2Н), 2,60 (м, 2Н), 3,18 (ушир. с, 6Н), 3,35-3,45 (м, 2Н), 3,60-3,95 (м, 2Н), 4,15 (м, 1Н), 4,32 (м, 1Н), 4,42 (м, 1Н), 5,00 (ушир. м, 2Н), 7,20 (ушир. с, 5Н) и 7,40 м.д. (ушир. с, 5Н); ¹⁹F ЯМР (470 МГц, СD₃ОD) δ - 10,72 м.д. (с, 3F).

4-оксо-3(S)-{2(R,S)-[7-oкco-4-(3-фенилпропионил)-6(S)-(3-фенилпропиониламино) [1,4]диазепан-1-ил]пропиониламино}-бутановая кислота (115).

Стадия D: Суспезию метилового эфира 2(R,S)-[4-бензил-7-оксо-6(S)-(N-бензилоксикарбониламино)[1,4]диазепан-1-ил]пропионовой кислоты (112b; 0,22 г, 0,49 ммоль) и 20% Pd(OH)₂ на угле (50 мг) в этаноле перемешивали в атмосфере водорода в течение 7 часов. Растворитель выпаривали в условиях пониженного давления и остаток растворяли в дихлорметане (20 мл), затем обрабатывали триэтиламином (1 мл) и дигидроциннамоилхлоридом (170 мг, 1 ммоль). Полученную смесь оставляли перемешиваться в течение ночи, затем разбавляли этилацетатом и промывали 1 н. NaOH. Органический слой сушили (MgSO₄), фильтровали и выпаривали, что давало маслянистую жидкость. Хроматография (силикагель, 4:1 гексан:этилацетат) давала 0,175 г (выход 75%) 113 в виде маслянистой жидкости.

Стадия С: Образец 0,15 г 113 (0,32 ммоль) растворяли в метаноле, обрабатывали 1 М LiOH (0,32 мл) и перемешивали при 40° С в течение ночи, затем выпаривали досуха. Остаток азеотропировали с этанолом (2× 10 мл), ацетонитрилом (2× 10 мл), бензолом (2× 10 мл), затем сушили под вакуумом. Полученный остаток превращали в 115 по методу, схожему с описанным в примере 3, соединение К (стадии А, В и С).

3-{2-[2,4-дибензил-3,7-диоксо-6-(N-бензилоксикарбонил-амино)[1,4]диазепан-1-ил]ацетиламино}-4-оксобутановая кислота (121).

Стадия Е: Раствор трет-бутил-2-N-карбобензокси-3-N-бензил-(S)-2,3-диаминопропионата (110; 1,77 г, 4,6 ммоль), N-аллил-N-трет-бутоксикарбонил-(S)-фенилаланина (116; 1,04 г, 4,8 ммоль), ГОБТ (0,74 г, 5,5 ммоль) и ЭДК (1,33 г, 6,9 ммоль) в дихлорметане (50 мл) оставляли перемешиваться при 25° С в течение 16 часов, затем разбавляли дихлорметаном (100 мл) и промывали водой. Органический слой сушили (MgSO₄), фильтровали и выпаривали, что давало маслянистую жидкость. Хроматография (силикагель, 85:15 гексан:этилацетат) давала 1,34 г (выход 43%) 117 в виде бесцветной вязкой маслянистой жидкости.

Стадия F: Образец 1,34 г 117 растворяли в дихлорметане (3 мл) и обрабатывали 50% раствором трифторуксуной кислоты в дихлорметане (20 мл). Через 1,5 часа растворитель удаляли в условиях пониженного давления, и остаток сушили под вакуумом, затем растворяли в дихлорметане (50 мл) и объединяли с 4-метилморфолином (0,2 мл, 2 ммоль), ГОБТ (0,27 г, 2 ммоль) и ЭДК (0,8 г, 4 ммоль). Смесь перемешивали в течение ночи при 25° С, затем разбавляли дихлорметаном и промывали водой. Органический слой сушили (MgSO₄), фильтровали и выпаривали, что давало маслянистую жидкость. Хроматография (силикагель, 7:3 гексан:этилацетат) давала 0,8 г (выход 80%) 118 в виде вязкой маслянистой жидкости.

Стадия G: Образец 0,8 г 118 растворяли в метаноле (40 мл), охлаждали до -78° С и насыщали озоном до тех пор, пока раствор не становился голубым по цвету. Избыток озона удаляли путем продувки аргоном, затем добавляли диметилсульфид (5 мл) и смеси давали нагреться до 25° С и перемешивали в течение 3 часов. Удаление растворителя и хроматография (силикагель, 1:1 гексан:этилацетат) давала 0,74 г (выход 74%) 119 в виде белого твердого вещества.

Стадия Н: Образец (0,2 г, 0,4 ммоль) 119 растворяли в ацетоне (25 мл), охлаждали до 0° С и по каплям обрабатывали раствором реактивом Jones до тех пор, пока не устоялся оранжевый цвет. Затем к смеси добавляли 2-пропанол (5 мл) и полученный раствор фильтровали через Celite и промывали ацетоном. Удаление растворителя давало зелено-белое твердое вещество, которое сушили под вакуумом, что давало 120. Полученный остаток превращали в 121 по методу, схожему с описанным в примере 3, соединение К (стадии А, В и С). Хроматография (SiO₂, элюент 95:4,5:0,5 дихлорметан:метанол:уксусная кислота) давала 85 мг (выход 53%) кремового окрашенного твердого вещества, которое идентифицировали как 3-[2,4-дибензил-3,7-диоксо-6-(N-бензилоксикарбониламино)[1,4]диазепан-1-ил]ацетиламино-4-оксобутановую кислоту (121) на основании следующих спектральных данных:

¹H ЯМР (500 МГц, СD₃OD) δ 2,38 (м, 1Н), 2,45 (м, 1Н), 3,21 (ушир. с, 2Н), 3,32-3,39 (ушир. м, 6Н), 3,85 (м, 1Н), 4,05 (м, 1Н), 4,21 (ушир. м, 1Н), 4,31 (ушир. с, 1Н), 4,45 (дм, J=11 Гц, 1H), 4,95 (ушир. с, 4Н), 7,20 (ушир. с, 5Н) и 7,33-7,45 м.д. (м, 5Н); ¹⁹F ЯМР (470 МГц, СD₃OD) δ - 10,62 м.д. (с, 3F).

т-бутил-(3S)-N-(аллилоксикарбонил)-3-амино-5-(2-хлорфенилметилтио)-4-оксопентаноат (123).

К перемешиваемому раствору (3S)-т-бутил-N-(аллилоксикарбонил)-3-амино-5-бром-4-оксопентаноата (122, 749 мг, 2,14 ммоль, WO 93 16710) в диметилформамиде (20 мл) добавляли фторид калия (273 мг, 4,70 ммоль) и затем 2-хлорфенилметилтиол (373 мг, 2,35 ммоль). Смесь перемешивали в течение 3,5 часов, гасили добавлением воды (50 мл) и экстрагировали добавлением этилацетата (2× 50 мл). Объединенные органические экстракты промывали водой (4× 50 мл), затем соляным раствором (50 мл). Их сушили (MgSO₄) и концентрировали, что позволяло получить маслянистую жидкость, которую очищали методом флэш-хроматографии (10-35% этилацетат/гексан), что позволяло получить 832 мг (91%) бесцветного твердого вещества:

Т.пл. 45-6° С; [α ]

\binom{20}{D}

- 19,0° (с 1,0, СН₂Сl₂); ИК (пленка) 3340, 2980, 2935, 1725, 1712, 1511, 1503, 1474, 1446, 1421, 1393, 1368, 1281, 1244, 1157, 1052, 1040, 995, 764, 739; ¹H ЯМР (CDCl₃) δ 7,36 (2Н, м), 7,21 (2Н, м), 5,91 (2Н, м), 5,27 (2Н, м), 4,76 (1Н, м), 4,59 (2Н, д), 3,78 (2Н, с), 3,36 (2Н, м), 2,91 (1Н, дд), 2,74 (1Н, дд), 1,43 (9Н, с). Анал. расч. для C₂₀H₂₆ClNO₅S: С, 56,13; Н, 6,12; N, 3,27; S, 7,49. Получ.: С, 56,08; Н, 6,11; N, 3,26; S, 7,54. MC (C.I.) 430/28 (M⁺+1, 3%), 374/2 (100).

т-Бутил-(3S)-3-(2-(6-бензил-1,2-дигидро-2-оксо-3-(3-фенилпропиониламино)-1-пиридил)ацетиламино-5-(2-хлорфенилметилтио)-4-оксопентаноат (124а).

6-Бензил-1,2-дигидро-2-оксо-3-(3-фенил-пропиониламино)пиридилуксусную кислоту (52b, 300 мг, 0,76 ммоль) в ТГФ (7 мл) перемешивали с 1-гидроксибензотриазолом (205 мг, 1,52 ммоль) и гидрохлоридом 1-(3-диметиламинопропил-3-этилкарбодиимида). Через 3 мин добавляли воду (12 капель) и смесь перемешивали 10 мин, затем обрабатывали т-бутил-(3S)-N-(аллилоксикарбонил)-3-амино-5-(2-хлорфенилметилтио)-4-оксо-пентаноатом (123) (325 мг, 0,76 ммоль), хлоридом бис-(трифенилфосфин)палладия (II) (20 мг) и гидридом трибутилолова (0,6 мл, 2,28 ммоль). Смесь перемешивали в течение 5 часов при комнатной температуре, вливали в этиацетат и промывали водным 1 М НСl (× 2), водным бикарбонатом натрия, соляным раствором, сушили (MgSO₄) и концентрировали. Остаток растирали с пентаном и супернатант сцеживали. Хроматография (силикагель, 50% этилацетат/гексан) позволяла получить бесцветную пену (439 мг, 81%): [α ]

\binom{21}{D}

-18,3° (с 0,5, СН₂Сl₂); ИК (КВr) 3356, 3311, 1722, 1689, 1646, 1599, 1567, 1513, 1367, 1154; ¹H ЯМР (CDCl₃) δ 8,39 (1Н, д), 8,23 (1Н, с), 7,24 (14Н, м), 6,16 (1Н, д), 4,95 (1Н, м), 4,63 (2Н, м), 4,02 (2Н, с), 3,74 (2Н, с), 3,27 (2Н, с), 2,85 (6Н, м), 1,40 (9Н, с). Анал. расч. для C₃₉H₄₂ClN₃O₆S: С, 65,39; Н, 5,91; N, 5,87. Получ: С, 65,51; Н, 5,99; N, 5,77.

т-Бутил-[3S-(1S,9S)]-3-(6,10-диоксо-1,2,3,4,7,8,9,10-октагидро)-9-(3-фенилпропиониламино)-6Н-пиридазин[1,2а] [1,2]диазепин-1-карбоксамидо-5-(2-хлорфенилметилтио)-4-оксопентаноат (124b) получали по тому же методу, что и 124а из тиоэфира 123 и 3S-(1S,9S)]-3-(6,10-диоксо-1,2,3,4,7,8,9,10-октагидро)-9-(3-фенилпропиониламино)-6H-пиридазино[1,2а]-[1,2]диазепин-1-карбоновой кислоты (45а), что позволяло получить 452 мг, 50% бесцветной пены: Т.пл. 55-7° С; [α ]

\binom{22}{D}

- 94,0° (c 0,12, CH₂Cl₂); ИК (КВr) 3288, 2934, 1741, 1722, 1686, 1666, 1644, 1523, 1433, 1260, 1225, 1146, 757; ¹H ЯMP (CDCl₃) δ 7,35 (3Н, м), 7,20 (7Н, м), 6,46 (1Н, д), 5,21 (1Н, м), 4,97 (2Н, м), 4,56 (1Н, м), 3,75 (2Н, с), 3,25 (3Н, м), 2,93 (5Н, м), 2,71 (1Н, дд), 2,55 (2Н, м), 2,30 (1Н, м), 1,92 (3Н, м), 1,66 (2Н, м), 1,42 (9Н, с). Анал. расч. для С₃₅Н₄₃СlN₄O₇S· 0,25Н₂О: С, 59,73; Н, 6,23; Сl, 5,04; N, 7,96; S, 4,56. Получ: С, 59,73; Н, 6,19; Cl, 5,10; N, 7,79; S, 4,58. MC (-FAB) 697 (М-1, 100).

(3S)-3-(2-(6-бензил-1,2-дигидро-2-оксо-3-(3-фенилпропиониламино)-1-пиридил)ацетиламино-5-(2-хлорфенилметилтио)-4-оксопентановая кислота (125а).

трет-Бутил-3-(2-(6-бензил-1,2-дигидро-2-оксо-3-(3-фенилпропиониламино)-1-пиридил)ацетиламино-5-(2-хлорфенилметилтио)-4-оксопентаноат (124а) (400 мг, 0,56 ммоль) в дихлорметане (3 мл) при 0° С обрабатывали трифторуксусной кислотой (3 мл) и перемешивали при 0° C в течение 1 часа и комнатной температуре в течение 0,5 часа. Раствор концентрировали, затем вновь растворяли в дихлорметане и вновь концентрировали. Данную процедуру повторяли трижды. Остаток перемешивали в эфире в течение 1 часа и фильтровали, что давало выход бесцветного твердого вещества (364 мг, 99%). Т.пл. 165-7° С; [α ]

\binom{22}{D}

- 27,7° (c 0,2, CH₂Cl₂); ИК (КВr) 3289, 1712, 1682, 1657, 1645, 1593, 1562, 1527, 1497, 1416, 1203, 1182; ¹H ЯМР (СDСl₃) δ 8,47 (1Н, д), 8,21 (1Н, с), 7,70 (1Н, д), 7,22 (14Н, м), 6,24 (1Н, д), 5,03 (1Н, м), 4,65 (2Н, м), 4,06 (2Н, с), 3,69 (2Н, м), 3,23 (2Н, м), 2,88 (6Н, м).

[3S-(1S,9S)]-3-(6,10-диоксо-1,2,3,4,7,8,9,10-октагидро)-9-(3-фенилпропиониламино)-6Н-пиридазин[1,2а][1,2]диазепин-1-карбоксамидо-5-(2-хлорфенилметилтио)-4-оксопентановую кислоту (125b) получали по тому же методу, что и 125а из т-бутилового эфира 124b, что позволяло получить 362 мг (50%) бесцветного порошка: Т.пл. 76-80° С; [α ]

\binom{21}{D}

- 134° (с 0,10, МеОН); ИК (КВr) 3309, 2935, 1725, 1658, 1528, 1445, 1417, 1277, 1219, 1175; ¹H ЯМР (d₆-ДМСО) δ 8,80 (1Н, д), 8,19 (1Н, д), 7,31 (9Н, м), 5,09 (1Н, м), 4,74 (1Н, м), 4,63 (1Н, м), 4,35 (1Н, м), 3,76 (2Н, м), 3,28 (3Н, м), 2,80 (5Н, м), 2,52 (4Н, м), 2,16 (2Н, м), 1,90 (3Н, м). Анал. расч. для С₃₁Н₃₅Сl₂N₄O₇S· 0,25Н₂O: С, 57,49; Н, 5,53; N, 8,65; S, 4,95. Получ.: С, 57,35; Н, 5,43; N, 8,45; S, 4,88. MC (-FAB) 641 (М-1, 100).

Данные из примеров, приведенных выше, показывают, что соединения по данному изобретению проявляют ингибирующую активность по отношению к ИЛ-1β -превращающему ферменту. Далее, поскольку соединения по данному изобретению способны ингибировать ИПФ in vitro и, более того, могут вводиться млекопитающим перорально, они могут иметь очевидное клиническое применение для лечения ИЛ-1-опосредованных заболеваний. Данные испытания позволяют предсказать способность соединений к ингибированию ИПФ in vivo.

Тогда как мы описали ряд осуществлений данного изобретения, очевидно, что наши основные положения можно варьировать в целях обеспечения других осуществлений, что включает в себя продукты и процессы по данному изобретению. Таким образом, представляется ценным, что объем данного изобретения определяется приложенной формулой предпочтительнее, чем конкретные осуществления, представленные в примерах.

Claims

1. Ингибитор ИПФ, содержащий а) первый и второй связывающие водород радикалы, каждый из указанных радикалов способен образовывать водородную связь с отличным скелетным атомом ИПФ, указанный скелетный атом выбран из группы, включающей карбонильный кислород Arg-341, амидную группу -NH-Arg-341, карбонильный кислород Ser-339 и амидную -NH-группу Ser-339;

б) первый и второй умеренно гидрофобные радикалы, каждый из указанных радикалов способен связываться с отдельным связывающим "карманом" ИПФ тогда, когда с ним связан ингибитор, указанный связывающий "карман" выбран из группы, включающей Р2-связывающий "карман", Р3-связывающий "карман", Р4-связывающий "карман" и Р’-связывающий "карман"; и

в) электроотрицательный радикал, содержащий один или несколько электроотрицательных атомов, указанные атомы присоединены к одному и тому же атому или к соседним атомам в радикале и указанный радикал способен образовывать одну или несколько водородных связей или солевых мостиков между остатками в P1-связывающем "кармане" ИПФ,

где первый и второй связывающие водород радикалы из а), первый и второй умеренно гидрофобные радикалы из б) и электроотрицательный радикал из в) способны к образованию указанных в а) водородных связей, к связыванию с отдельными связывающими "карманами" из б), к образованию одной или нескольких водородных связей или солевых мостиков из в) соответственно с указанными скелетными атомами, связывающими "карманами" или остатками ИПФ одновременно и где указанный ингибитор связан с ИПФ при соблюдении по крайней мере двух из следующих четырех условий от 1) до 4) включительно:

1) один из указанных умеренно гидрофобных радикалов ассоциирован с Р2-связывающим "карманом" ИПФ так, что а) расстояние от центра масс умеренно гидрофобного радикала в Р2-связывающем "кармане" до карбонильного кислорода Arg-341 ИПФ составляет от около 7,1 до около 12,5

; б) расстояние от центра масс умеренно гидрофобного радикала в Р2-связывающем "кармане" до амидного азота Arg-341 ИПФ составляет от около 6,0 до около 12

и в) расстояние от центра масс умеренно гидрофобного радикала в Р2-связывающем "кармане" до карбонильного кислорода Ser-339 ИПФ составляет от около 3,7 до около 9,5

;

2) один из умеренно гидрофобных радикалов ассоциирован с Р3-связывающим "карманом" ИПФ так, что а) расстояние от центра масс умеренно гидрофобного радикала в Р3-связывающем "кармане" до карбонильного кислорода Arg-341 ИПФ составляет от около 3,9 до около 9,5

; б) расстояние от центра масс умеренно гидрофобного радикала в Р3-связывающем "кармане" до амидного азота Arg-341 ИПФ составляет от около 5,4 до около 11

; и в) расстояние от центра масс умеренно гидрофобного радикала в Р3-связывающем "кармане" до карбонильного кислорода Ser-339 ИПФ составляет от около 7,0 до около 13

;

3) один из указанных умеренно гидрофобных радикалов ассоциирован с Р4-связывающим "карманом" ИПФ так, что а) расстояние от центра масс умеренно гидрофобного радикала в Р4-связывающем "кармане" до карбонильного кислорода Arg-341 ИПФ составляет от около 4,5 до около 7,5

; б) расстояние от центра масс умеренно гидрофобного радикала в Р4-связывающем "кармане" до амидного азота Arg-341 ИПФ составляет от около 5,5 до около 8,5

и в) расстояние от центра масс умеренно гидрофобного радикала в Р4-связывающем "кармане" до карбонильного кислорода Ser-339 ИПФ составляет от около 8 до около 11

;

4) один из умеренно гидрофобных радикалов ассоциирован с Р’-связывающим "карманом" ИПФ так, что а) расстояние от центра масс умеренно гидрофобного радикала в Р’-связывающем "кармане" до карбонильного кислорода Arg-341 ИПФ составляет от около 11 до около 16

; б) расстояние от центра масс умеренно гидрофобного радикала в Р’-связывающем "кармане" до амидного азота Arg-341 ИПФ составляет от около 10 до около 15

и в) расстояние от центра масс умеренно гидрофобного радикала в Р’-связывающем "кармане" до карбонильного кислорода Ser-339 ИПФ составляет от около 8 до около 12

,

где первый и второй связывающие водород радикалы содержат полизамещенную циклическую группу, имеющую от трех до семи заместителей.

2. Ингибитор ИПФ по п.1, где указанный ингибитор характеризуется нейтральным или предпочтительным энтальпическим вкладом со стороны суммы всех электростатических взаимодействий между ингибитором и ИПФ, когда ингибитор присоединен к нему.

3. Ингибитор ИПФ по п.1, где указанный ингибитор имеет молекулярную массу, меньшую или равную около 700 Дальтон.

4. Ингибитор ИПФ по п.3, где указанный ингибитор имеет молекулярную массу от около 400 до около 600 Дальтон.

5. Ингибитор ИПФ по п.1, где указанный ингибитор, кроме того, содержит менее двух вторичных амидных связей.

6. Ингибитор ИПФ по п. 1, где указанный ингибитор, кроме того, содержит менее двух групп, выбранных из группы, включающей вторичные амидные группы и карбаматные группы.

7. Ингибитор ИПФ по п.1 или 6, где указанный ингибитор характеризуется энергией деформации связи указанного ингибитора с ИПФ, меньшей или равной около 10 ккал/моль.

8. Ингибитор ИПФ по п.1, где указанный ингибитор присоединен к ИПФ, указанные умеренно гидрофобные радикалы ассоциированы по отдельности с Р’-связывающим "карманом" ИПФ и с Р2-связывающим "карманом" ИПФ и расстояние от центра масс умеренно гидрофобного радикала в Р’-связывающем "кармане" до центра масс умеренно гидрофобного радикала в Р2-связывающем "кармане" составляет от около 6,5 до около 13

.

9. Ингибитор ИПФ по п.1, где указанный ингибитор присоединен к ИПФ, указанные умеренно гидрофобные радикалы ассоциированы по отдельности с Р’-связывающим "карманом" ИПФ и с Р3-связывающим "карманом" ИПФ и расстояние от центра масс умеренно гидрофобного радикала в Р’-связывающем "кармане" до центра масс умеренно гидрофобного радикала в Р3-связывающем "кармане" составляет от около 6 до около 15

.

10. Ингибитор ИПФ по п.1, где, когда указанный ингибитор присоединен к ИПФ, указанные умеренно гидрофобные радикалы ассоциированы по отдельности с Р’-связывающим "карманом" ИПФ и с Р4-связывающим "карманом" ИПФ и расстояние от центра масс умеренно гидрофобного радикала в Р’-связывающем "кармане" до центра масс умеренно гидрофобного радикала в Р4-связывающем "кармане" составляет от около 14 до около 22

.

11. Ингибитор ИПФ по п.1, где, когда указанный ингибитор присоединен к ИПФ, указанные умеренно гидрофобные радикалы ассоциированы по отдельности с Р2-связывающим "карманом" ИПФ и с Р3-связывающим "карманом" ИПФ и расстояние от центра масс умеренно гидрофобного радикала в Р2-связывающем "кармане" до центра масс умеренно гидрофобного радикала в Р3-связывающем "кармане" составляет от около 5,5 до около 13

.

12. Ингибитор ИПФ по п.1, где, когда указанный ингибитор присоединен к ИПФ, указанные умеренно гидрофобные радикалы ассоциированы по отдельности с Р2-связывающим "карманом" ИПФ и с Р4-связывающим "карманом" ИПФ и расстояние от центра масс умеренно гидрофобного радикала в Р2-связывающем "кармане" до центра масс умеренно гидрофобного радикала в Р4-связывающем "кармане" составляет от около 9 до около 17

.

13. Ингибитор ИПФ по п.1, где, когда указанный ингибитор присоединен к ИПФ, указанные умеренно гидрофобные радикалы ассоциированы по отдельности с Р3-связывающим "карманом" ИПФ и с Р4-связывающим "карманом" ИПФ и расстояние от центра масс умеренно гидрофобного радикала в Р3-связывающем "кармане" до центра масс умеренно гидрофобного радикала в Р4-связывающем "кармане" составляет от около 7,5 до около 17

.

14. Ингибитор ИПФ по п.1, где, когда указанный ингибитор присоединен к ИПФ, указанный первый связывающий водород радикал образует водородную связь с карбонильным кислородом Ser-339 ИПФ и второй связывающий водород радикал образует водородную связь с карбонильным кислородом Arg-341 ИПФ, и где расстояние между указанными связывающими водород радикалами составляет от около 5 до около 7,5

.

15. Ингибитор ИПФ по п.1, где, когда указанный ингибитор присоединен к ИПФ, указанный первый связывающий водород радикал образует водородную связь с карбонильным кислородом Ser-339 ИПФ и указанный второй связывающий водород радикал образует водородную связь с амидной -NН-группой Arg-341 ИПФ, и где расстояние между указанными связывающими водород радикалами составляет от около 2,5 до около 5

.

16. Ингибитор ИПФ по п.1, где, когда указанный ингибитор присоединен к ИПФ, указанный первый связывающий водород радикал образует водородную связь с карбонильным кислородом Arg-341 ИПФ и указанный второй связывающий водород радикал образует водородную связь с амидной -NН-группой Arg-341 ИПФ, и где расстояние между указанными связывающими водород радикалами составляет от около 2,5 до около 4

.

17. Ингибитор ИПФ по п.1, где первый и второй связывающие водород радикалы расположены на каркасе, представленном формулой, выбранной из следующей группы формул I-VII:

и

где каждый X независимо является С или N;

Z является СО или SO₂;

каждый W₁ независимо является неразветвленной цепью, включающей 1-3 ковалентно связанных члена, независимо выбранных из группы, включающей С, N, S и О, причем указанные ковалентные связи между указанными членами независимо являются насыщенными или ненасыщенными и указанная цепь содержит два конца, которые ковалентно связаны с двумя различными атомами посредством связей r;

каждый W₂ независимо является неразветвленной цепью, включающей 3-5 ковалентно связанных члена, независимо выбранных из группы, включающей С, N, S и О, причем указанные ковалентные связи между указанными членами независимо являются насыщенными или ненасыщенными и указанная цепь содержит два конца, которые ковалентно связаны с двумя различными атомами посредством связей r;

каждый W₃ независимо является неразветвленной цепью, включающей 2-4 ковалентно связанных члена, независимо выбранных из группы, включающей С, N, S и О, причем указанные ковалентные связи между указанными членами независимо являются насыщенными или ненасыщенными и указанная цепь содержит два конца, которые ковалентно связаны с двумя различными атомами посредством связей r;

каждый W₄ независимо является неразветвленной цепью, включающей 1-2 ковалентно связанных члена, независимо выбранных из группы, включающей С, N, S и О, причем указанные ковалентные связи между указанными членами независимо являются насыщенными или ненасыщенными и указанная цепь содержит два конца, которые ковалентно связаны с двумя различными атомами посредством связей r;

каждый W₅ независимо является неразветвленной цепью, включающей 4-6 ковалентно связанных члена, независимо выбранных из группы, включающей С, N, S и О, причем указанные ковалентные связи между указанными членами независимо являются насыщенными или ненасыщенными и указанная цепь содержит два конца, которые ковалентно связаны с двумя различными атомами посредством связей r;

каждая связь, обозначенная r, независимо является одинарной или двойной связью;

Н является первым связывающим водород радикалом;

Z является вторым связывающим водород радикалом,

и где указанные первый и второй умеренно гидрофобные радикалы ковалентно связаны с указанным каркасом, а также указанный электроотрицательный радикал ковалентно связан с указанным каркасом.

18. Ингибитор ИПФ по п. 17, где указанный каркас выбран из группы, включающей

где X, W₁ и r указаны в п.17;

W_2a является неразветвленной цепью, включающей 3-4 ковалентно связанных члена, независимо выбранных из группы, включающей С, N, S и О, причем указанная цепь содержит два конца, которые ковалентно связаны с двумя различными атомами с образованием с ними арильного или гетероароматического кольца;

где X указан в п.17;

каждый X₁ независимо является С, N или О;

W_14a является неразветвленной цепью, содержащей 1-3 ковалентно связанных члена, независимо выбранных из группы, включающей С, N, S и О, причем указанные ковалентные связи между указанными членами являются насыщенными или ненасыщенными и указанная цепь содержит два конца, которые ковалентно связаны с двумя различными атомами X₁ с образованием с ними неароматического кольца;

где X, Z, W₅ и r указаны в п. 17;

где X и Z указаны в п.17;

где X, Z, W₄ и r указаны в п.17;

где X, Z, W₁, W₄и r указаны в п.17;

где X, W₁ и r указаны в п.17;

где X, Z, W₁ и r указаны в п.17;

где X и Z указаны в п.17;

где X, Z, W₁ и r указаны в п.17;

где Z, W₁ и r указаны в п.17;

W_7a является неразветвленной цепью, содержащей 3 ковалентно связанных члена, независимо выбранных из группы, включающей С, N, S и О, причем указанная цепь содержит два конца, которые ковалентно связаны с двумя различными атомами С с образованием с ними ароматического кольца;

где X и Z указаны в п.17;

где X, Z, W₁ и r указаны в п.17;

где X, Z, W₅ и r указаны в п.17;

где X, Z, W₁, W₄ и r указаны в п.17;

где X и Z указаны в п.17;

где X, Z, W₁ и r указаны в п.17;

где X, Z, W₂ и r указаны в п.17;

где X, Z, W₁ и r указаны в п.17.

19. Ингибитор по п.1, где первый и второй умеренно гидрофобные радикалы, электроотрицательный радикал ковалентно связаны с каркасом, содержащим любую моноциклическую, бициклическую или трициклическую систему, где каждое кольцо указанной системы содержит 5-7 членов, указанная система содержит С, N, О или S, указанная система является ароматической или неароматической и содержит центральное кольцо, где расстояние между центроидом указанного центрального кольца и альфа-углеродом Cys-285 ИПФ составляет от около 5,0 до около 6,0

, когда ингибитор связан с ИПФ, и расстояние между центроидом указанного центрального кольца и альфа-углеродом His-237 ИПФ составляет от около 5,5 до около 6,5

, когда ингибитор связан с ИПФ.

20. Соединение, представленное формулой:

где Х₁ является СН;

g = 0;

J является -Н;

m = 1 или 2;

Т является -СO₂Н или любым биоизостерическим заместителем для -СO₂Н;

R₁ выбран из группы, включающей следующие формулы, в которых кольцо может необязательно быть однократно или многократно замещено заместителем Q₁ по любому углероду, заместителем R₅ по любому азоту или по любому атому заместителем =О, -ОН, -СО₂Н или галогеном и в которых насыщенное кольцо может необязательно быть ненасыщенным по одной или двум связям, и где R₁ (e) необязательно является бензоконденсированным:

R²⁰ является

;

каждое кольцо С независимо выбрано из бензо или пиридо;

R₃ является -CO-R₁₃;

R₁₃ является -Ar₂ или -R₄;

R₄ является -Н, -R₉, -(CH₂)_1,2,3-T₁-Аr₁ или -(CH₂)_1,2,3-T₁-R₉;

каждый Т₁ независимо является -O-, -S- или -О-СО-;

каждый R₅ независимо является -Н, -CO-Ar₁, -SО₂-Ar₁, -CO-NН₂, -SО₂-NН₂, -R₉, -СО-R₉, -СО-О-R₉, -SО₂-R₉,

или

;

R₆ и R₇, взятые вместе, образуют насыщенное 4-8-членное карбоциклическое кольцо или гетероциклическое кольцо, содержащее -О-, -S- или -NH-, или R₇ является -Н и R₆ является -Н-, -Ar₁, -R₉, или -(CH₂)_l,2,3-T₁-R₉ или остатком боковой цепи α-аминокислоты;

каждый R₉ является C_1-6 неразветвленной или разветвленной алкильной группой, необязательно однократно или многократно замещенной -ОН, -F или =О и необязательно однократно или многократно замещенной одной или двумя группами -Аr₁;

каждый R₁₀ независимо является -Н или С_1-6 неразветвленной или разветвленной алкильной группой;

каждый Аr₁ является циклической группой, независимо выбранной из группы, включающей арильную группу, которая содержит 6, 10, 12 или 14 атомов углерода и от 1 до 3 колец, циклоалкильную группу, которая содержит от 3 до 15 атомов углерода и от 1 до 3 колец, причем указанная циклоалкильная группа необязательно бензоконденсирована, и гетероциклическую группу, которая содержит от 5 до 15 атомов в цикле и от 1 до 3 колец, указанная гетероциклическая группа содержит по крайней мере одну гетероатомную группу, выбранную из -О-, -S-, -SO-, -SО₂-, =N- и -NH-, указанная гетероциклическая группа необязательно содержит одну или несколько двойных связей, указанная гетероциклическая группа необязательно содержит одно или несколько ароматических колец и указанная циклическая группа необязательно однократно или многократно замещена –NH₂, -CO₂H, -Cl, -F, -Br, -NO₂, -CN, =O, -ОН, перфтор-С_1-3-алкилом,

или -Q₁;

каждый Аr₂ независимо выбран из следующей группы, в которой любое кольцо может необязательно однократно или многократно быть замещено -Q₁ или -Q₂:

и

;

каждый Q₁ независимо выбран из группы, включающей -Аr₁, -O-Аr₁, -R₉, -T₁-R₉ или -(CH₂)_l,2,3-T₁-R₉;

каждый –Q₂ независимо является -ОН,–NH₂, -CO₂H, -Cl, -F,

-Br, -I, -NO₂, -CN, -CF₃ и

;

при условии, что, когда -Аr₁ замещен группой Q₁, которая содержит одну или несколько дополнительных групп -Аr₁, указанные дополнительные группы -Аr₁ не замещены Q₁;

каждый X независимо является =N- или =СН-;

каждый Х₂ независимо является -О-, -СН₂-, -NH-, -S-, -SO- или -SО₂-;

каждый Х₅ независимо является

и

;

Х₆ является

и

;

каждый Y независимо является -О-, -S- или -NH-;

каждый Z независимо является СО или SO₂;

каждый а равен независимо 0 или 1;

каждый с равен независимо 1 или 2;

каждый d равен независимо 0, 1 или 2, и

каждый е равен независимо 0, 1, 2 или 3;

при условии, что когда R₁ является (f), R₆ является остатком боковой цепи α-аминокислоты и R₇ является -H, то (aal) и (aa2) должны быть замещены Q₁; также при условии, что, когда R₁ является (o), g = 0, J является -H, m = 1, R₆ является остатком боковой цепи α-аминокислоты, R₇ является -H, X₂ является -СН₂-, Х₅ является

, Х₆ является

, R₁₃ является -CH₂-O-CO-Ar₁, -CH₂-S-CO-Ar₁, -CH₂-O-Ar₁, -CH₂-S-Ar_l или -R₄, когда -R₄ является -H;

тогда цикл группы (o) должен быть замещен Q₁ или бензоконденсирован;

и при условии, что когда R₁ является (w), m = 1, T является -CО₂H, X₂ является О, R₅ является бензилоксикарбонилом и цикл C является бензо, то R₃ не может являться -CH₂-О-Ar₁, если Ar₁ является 1-фенил-3-трифторметил-пиразол-5-илом, в котором фенил необязательно замещен атомом хлора, или если R₁₃ является -CH₂-О-CO-Ar_l, в котором Ar₁ является 2,6-дихлорфенилом;

и при условии, что когда R₁ является (al) или (a2), m = 1, T является -CО₂H, то R₃ может не являться -(CH₂)-T₁-Ar₁, и когда R₁₃ является R₄ и R₄ является -H или -R₉, то (al) и (a2) должны быть замещены Q_l, где Q_l является -R₉, замещенным Ar₁.

21. Соединение по п.20, в котором R₁ является

;

.

22. Соединение по п.20, где m = 1; T является -CО₂H; R₁ выбран из группы, включающей следующие формулы, в которых любой цикл может быть необязательно однократно или многократно замещен заместителем Q₁ по любому углероду, заместителем R₅ по любому азоту или заместителем =О, -OH, -CО₂H или атомом галогена по любому атому и где (e) необязательно является бензоконденсированным:

R₂₀ является

;

c = 1;

кольцо C является бензо, необязательно замещенным -С_1-3алкилом, -O-С_1-3алкилом, -Cl, -F или -CF₃;

когда R₁ является (al), (a2), (bl), (b2) или (b3), R₅ является -H, и

когда R₁ является (с), (е), (f), (о), (r3) или (w), R₅ является предпочтительно -СO-Аr₁; -SO₂-Ar₁; -CO-NH₂; -CO-NH-Аr₁; -CO-R₉; -CO-O-R₉; -SO₂-R₉ или -CO-NH-R₉, R₇ является -Н, и R₆ является -H, -R₉ или -Аr₁; R₉ является C_1-6 неразветвленной или разветвленной алкильной группой, необязательно замещенной =О и необязательно замещенной -Аr₁; R₁₀ является -Н или -С_1-3 неразветвленной или разветвленной алкильной группой; Аr₁ является фенилом, нафтилом, пиридилом, бензотиазолилом, тиенилом, бензотиенилом, бензоксазолилом, 2-инданилом или индолилом, необязательно однократно или многократно замещенным -О-С_1-3 алкилом, -NH-C_1-3 алкилом, -N-(С_1-3 алкил)₂, -C1, -F, -CF₃ , -С_1-3 алкилом или

;

Q₁ является R₉ или -(СН₂)_0,1,2-T₁-(CH₂)_0,1,2-Ar₁, где Т₁ является -О- или -S-; каждый X независимо является =N- или =СН-; каждый Х₂ независимо является -О-, -СН₂-, -NH-, -S-; -SO- и -SО₂-; каждый Х₅ независимо является

или

;

X₆ является

или

;

при условии, что, когда R₁ является (о), Х₂ является -СН₂-, Х₅ является

X₆ является

,

тогда кольцо R₁(о)-группы должно быть замещено Q₁ или бензоконденсировано; и Z является С=О.

23. Соединение по п.22, где группа R₁ является

необязательно замещенной Q₁,

где R₅ является -Н;

R₇ является –Н;

Z является С=О;

необязательно замещенной Q₁,

где R₅ является -Н;

R₇ является -Н;

Z является С=O;

необязательно замещенной Q₁;

при условии, что, когда R₁ является (cl), g = 0, J является -Н, m = 1, Т является -СO₂Н, X является N, R₅ является бензилоксикарбонилом и R₆ является -Н, тогда R₃ не может быть -CO-R₁₃, когда R₁₃ является -СН₂-O-Аr₁ и Аr₁ является 1-фенил-3-трифторметилпиразол-5-илом, где фенил необязательно замещен атомом хлора; или когда R₁₃ является -СН₂-O-СО-Аr₁, где Аr₁ является 2,6-дихлорфенилом, и когда 2-положение кольца каркаса замещено парафторфенилом;

которая необязательно замещена Q₁;

где с = 2;

которые необязательно бензоконденсированы, и с = 1 или 2;

при условии, что, когда R₁ является (е4), g = 0, J является -Н, m = 1, Т является -СО₂Н, R₅ является бензилоксикарбонилом и с = 1, тогда R₃ не может быть -СО-R₁₃,

когда R₁₃ является -СH₂-О-Аr₁ и Аr₁ является 1-фенил-3-трифторметилпиразол-5-илом, где фенил необязательно замещен атомом хлора, или когда R₁₃ является -СН₂-O-СО-Аr₁, где Аr₁ является 2,6-дихлорфенилом, и когда 2-положение кольца каркаса замещено парафторфенилом;

и также при условии, что, когда R₁ является (е7), g = 0, J является -Н, m = 1, Т является -СO₂Н, -CO-NH-OH, R₅ является защитной группой для атома N остатка боковой цепи аминокислоты и каждый с = 1, тогда R₃ не может быть -CO-R₁₃ , когда R₁₃ является -СН₂-O-СО-Аr₁, -СН₂-S-СО-Аr₁, -СН₂-O-Аr₁ и -CH₂-S-Ar_l;

где R₂₀ является группой (аа1), необязательно однократно или многократно замещенной Q₁;

Z является С=O;

где R₂₀ является группой (aal), необязательно однократно или многократно замещенной Q₁;

Z является С=O;

где (r3) необязательно замещен Q₁;

или

где Х₂ является -O-, -S-, -SO₂- или -NH-;

необязательно замещенная R₅ или Q₁ по Х₂, когда Х₂ является -NH-;

кольцо С является бензо, замещенным -С_1-3 алкилом, -O-С_1-3 алкилом, -С1, -F или -СF₃;

или R₁ является

Х₂ является -NH-;

m = 1;

Т является -СO₂Н;

R₃ является -CO-R₁₃.

24. Соединение по п.22, где Т₁ является -O- или -S-; R₉ является C_1-6 неразветвленной или разветвленной алкильной группой, необязательно замещенной =O и необязательно замещенной Аr₁;

R₁₃ является -H, -R₉, -Аr₂ или -CH₂-T₁-R₉.

25. Соединение по п.24, где -Аr₂ является

необязательно однократно или многократно замещенной -C_1-6алкилом, -O-C_1-6 алкилом, -NH-C_1-6 алкилом,

-N-(C_1-6алкилом)₂, -S-C_1-6 алкилом, -С1, -F, -CF₃ или

или

.

26. Соединение по п.24, где a) R₁₃ является -CН₂-O-R₉, где R₉ является С_1-6 неразветвленной или разветвленной алкильной группой, необязательно замещенной =О и необязательно замещенной Ar₁; b) R₁₃ является –CH₂-S-R₉,

где R₉ является С_1-6 неразветвленной или разветвленной алкильной группой, необязательно замещенной Ar₁, или с) R₁₃ является Н.

27. Соединение по п.26, где R₁₃ является -CH₂-O-R₉,

где R₉ является C_1-6 неразветвленной или разветвленной алкильной группой, необязательно замещенной Ar₁.

28. Соединение по п. 20, выбранное из группы, включающей

.

29. Соединение по п.23, в котором R₁ является

или

с = 2;

m = 1;

Т является -CО₂H;

R₃ является -CО-R₁₃.

30. Соединение по п.20, которое является

31. Соединение, представленное формулой

где кольцо необязательно замещено одной или несколькими группами R, предпочтительно 0, 1 или 2;

R₁ является R₅-(A)_p-;

R₅ является -Н, -Ar_l, -СО-Аr₁, -SO₂-Ar₁, -R₉, -CO-R₉,

-CO-O-R₉, -SO₂-R₉,

каждый А независимо выбран из группы, включающей любую α-аминокислоту;

р = 2 или 3;

Y является -О-, -S- или -NH-;

R является -Н, -О-С_1-6 алкилом, -NH(С_1-6 алкилом), -N(C_1-6 алкилом)₂, -S-C_1-6 алкилом, -С_1-6 алкилом или -Q₂;

каждый R₉ является С_1-6 неразветвленной или разветвленной алкильной группой, необязательно однократно или многократно замещенной заместителями -ОН, -F или =О и необязательно одной группой Ar₁;

каждый R₁₀ независимо является -Н или C_1-6 неразветвленной или разветвленной алкильной группой;

каждый Т₁ независимо является -СН=СН-, -О-, -S-, -SO-, -SO₂-, -NR₁₀-, -NR₁₀-CO-, -СО-, -O-СО-, -CO-O-, -CO-NR₁₀-, -O-CO-NR₁₀-, -NR₁₀-CO-O-, -NR₁₀-CO-NR₁₀-, -SO₂-NR₁₀-, -NR₁₀-SO₂- или -NR₁₀-SO₂-NR₁₀;

каждый Аr₁ является циклической группой, независимо выбранной из группы, включающей арильную группу, которая содержит 6, 10, 12 или 14 атомов углерода; циклоалкильную группу, которая содержит от 3 до 15 атомов углерода и от 1 до 3 колец, причем циклоалкильная группа необязательно бензоконденсирована; гетероциклическую группу, которая содержит от 1 до 3 колец и от 5 до 15 атомов в цикле, указанная гетероциклическая группа содержит по крайней мере одну гетероатомную группу, выбранную из -О-, -S-, -SO-, -SО₂-, =N- и -NH-, указанная гетероциклическая группа необязательно содержит одну или несколько двойных связей,

и любой атом водорода, связанный с любым атомом цикла в любом -Ar₁ необязательно замещен -NH₂, -СО₂Н, -С1, -F, -Br, -I,

-NО₂, -CN, =О, -ОН, перфтор-С_1-3~алкилом,

или –Q₁;

каждый Q₁ независимо является -Аr₁, -R₉, -T₁-R₉ или -(CH₂)_1,2,3-T₁-R₉;

каждый Q₂ независимо является -ОН, -NH₂, -СO₂Н, -Сl, -F,

-Br, -I, -NO₂, -CN, CF₃ или

;

при условии, что, когда -Аr₁ замещен группой Q₁, которая содержит одну или несколько дополнительных групп -Аr₁, указанные дополнительные группы -Аr₁ не замещены Q₁.

32. Соединение по п.31, выбранное из группы, включающей

.

33. Соединение по п.31, где каждый А независимо выбран из группы, включающей α-аминокислоты: аланин, гистидин, лизин, фенилаланин, пролин, тирозин, валин, лейцин, изолейцин, глютамин, метионин, гомопролин, 3-(2-тиенил)аланин и 3-(3-тиенил)аланин.

34. Соединение, представленное формулой

где R₁ является R₅-(A)_p-;

каждый Т₁ независимо является -СН=СН-, -O-, -S-, -SO-, -SO₂-, -NR₁₀-, -NR₁₀-CO-, -СО-, -O-СО-, -CO-O-, -CO-NR₁₀-, -O-CO-NR₁₀-, -NR₁₀-CO-O-, -NR₁₀-CO-NR₁₀-, -SO₂-NR₁₀-, -NR₁₀-SO2- и -NR₁₀-SO₂-NR₁₀-;

R₅ независимо является -H, -Аr₁, -CO-Ar₁, -SO₂-Ar₁, -R₉, -CO-R₉,

р = 2 или 3;

каждый R₉ является С_1-6 неразветвленной или разветвленной алкильной группой, необязательно однократно или многократно замещенной -ОН или -F и необязательно замещенной группой Аr₁;

каждый Ar₁ является циклической группой, независимо выбранной из группы, включающей арильную группу, которая содержит от 1 до 3 колец и 6, 10, 12 или 14 атомов углерода; циклоалкильную группу, которая содержит от 1 до 3 колец и от 3 до 15 атомов углерода, причем циклоалкильная группа необязательно бензоконденсирована; гетероциклическую группу, которая содержит от 1 до 3 колец и от 5 до 15 атомов в цикле, указанная гетероциклическая группа содержит по крайней мере одну гетероатомную группу, выбранную из -О-, -S-, -SO-, -SО₂-, =N- и -NH-, указанная гетероциклическая группа необязательно содержит одну или несколько двойных связей, указанная гетероциклическая группа необязательно содержит одно или несколько ароматических колец и указанная циклическая группа необязательно однократно или многократно замещена -NH₂, -СО₂Н, -С1, -F, -Br, -I,

-NO₂, -CN, =О, -ОН, перфтор-С_1-3алкилом,

, -R₉ или –T₁-R₉.

35. Соединение по п. 34, выбранное из группы, включающей

36. Соединение по п.34, где каждый А независимо выбран из группы, включающей α-аминокислоты: аланин, гистидин, лизин, фенилаланин, пролин, тирозин, валин, лейцин, изолейцин, глютамин, метионин, гомопролин, 3-(2-тиенил)аланин и 3-(3-тиенил)аланин.

37. Соединение по п.34

38. Соединение, представленное формулой

где m = 0, 1 или 2;

Т является -СО₂Н или другим биоизостерическим заместителем –СО₂Н,

R₃ является -CN, -CO-R₁₃ или

R₅ выбран из -Н, -Ar_l, -CO-Ar₁, -SО₂-Ar₁, -R₉, -CO-R₉,

-CO-O-R₉, -SО₂-R₉,

р = 2;

каждый R₉ является С_1-6 неразветвленной или разветвленной алкильной группой, необязательно однократно или многократно замещенной -ОН, -F или =О и необязательно замещенной одной группой Аr₁, где алкильная группа необязательно является ненасыщенной;

каждый Т₁ независимо является -СН=СН-, -О-, -S-, -SO-, -SO₂-, -NR₁₀-, -NR₁₀-CO-, -СО-, -O-СО-, -СО-O-, -CO-NR₁₀-, -O-CO-NR₁₀-, -NR₁₀-CO-O-, -NR₁₀-CO-NR₁₀-, -SO₂-NR₁₀-, -NR₁₀-SO₂- и -NR₁₀-SO₂-NR₁₀-;

каждый R₁₀ независимо является -Н или -C_1-6 неразветвленной или разветвленной алкильной группой;

каждый R₁₃ независимо является Н, R₉, Ar₂ или -CH₂-T₁-R₉;

арильная группа содержит от 1 до 3 колец и 6, 10, 12 или 14 атомов углерода;

циклоалкильная группа содержит от 1 до 3 колец и от 3 до 15 атомов углерода, причем указанная циклоалкильная группа необязательно бензоконденсирована;

гетероциклическая группа содержит от 1 до 3 колец и от 5 до 15 атомов в цикле, указанная гетероциклическая группа содержит по крайней мере одну гетероатомную группу, выбранную из -О-, -S-, -SO-, -SО₂-, =N- и -NH-, указанная гетероциклическая группа необязательно содержит одну или несколько двойных связей;

любой из атомов водорода, связанный с любым из атомов кольца в любом Ar₁, необязательно замещен -NH₂, -СО₂Н, -С1, -F, -Br, -I, -NО₂, -CN, =О, -ОН, -перфтор-С_1-3алкилом,

или -Q_i;

каждый Аr₂ независимо выбран из следующей группы, в которой любое кольцо может необязательно однократно или многократно быть замещено –Q₁ и -Q₂:

каждый Q₁ независимо является -Ar_l, -O-Ar₁, -R₉, -T₁-R₉ или -(CH₂)_l,2,3-T_l-R₉;

каждый Q2 независимо является -ОН, -NH₂, -СO₂Н, -С1, -F, -Br, -I, -NO₂, -CN, CF₃ или

каждый Х независимо является =N- или =CH-;

каждый Y независимо является -O- или -S-.

39. Соединение по п.38, выбранное из группы

40. Соединение по п.38, где каждый А независимо выбран из группы, включающей α-аминокислоты: аланин, гистидин, лизин, фенилаланин, пролин, тирозин, валин, лейцин, изолейцин, глютамин, метионин, гомопролин, 3-(2-тиенил)аланин и 3-(3-тиенил)аланин.

41. Соединение, представленное формулой

где R₁ является R₅-(A)_p-;

R₅ выбран из -H, -Аr₁, -CO-Ar₁, -SO₂-Ar₁, -R₉, -CO-R₉,

-CO-O-R₉, -SO₂-R₉,

р = 2 или 3;

каждый R₉ является C_1-6 неразветвленной или разветвленной алкильной группой, необязательно однократно или многократно замещенной -ОН, -F или =O и необязательно замещенной одной группой Аr₁;

каждый Т₁ независимо является -СН=СН-, -О-, -S-, -SO-;

каждый Ar₁ независимо выбран из

арильной группы, которая содержит от 1 до 3 колец и 6, 10, 12 или 14 атомов углерода; циклоалкильной группы, которая содержит от 1 до 3 колец и от 3 до 15 атомов углерода, причем циклоалкильная группа необязательно бензоконденсирована; и гетероциклической группы, которая содержит от 1 до 3 колец и от 5 до 15 атомов в цикле, указанная гетероциклическая группа содержит по крайней мере одну гетероатомную группу, выбранную из -О-, -S-, -SO-, -SО₂-, =N- и -NH-, и необязательно содержит одну или несколько двойных связей;

где любой атом водорода связанный с любым атомом кольца в любом Ar₁ необязательно замещен -NH₂, -СО₂Н, -С1, -F, -Br, -I, -NО₂, -CN, =О, -ОН, перфтор-С_1-3алкилом,

, -R₉ или -T₁-R₉;

каждый Ar₂ независимо выбран из следующей группы, в которой любой цикл может быть необязательно однократно или многократно замещен -O₁ и -Q₂:

каждый Q₁ независимо является –Ar₁, -O-Ar₁, R₉, -T₁-R₉, -(CH₂)_1,2,3-T₁-R₉;

каждый Q₂ независимо является -ОН, -NH₂, -СО₂Н, -С1, -F,

-Br, -I, -NО₂, -CN, -CF₃ или

каждый Х независимо является =N- или =CH-;

каждый Y независимо является -O-, -S- или -NH-.

42. Соединение по п.41, выбранное из группы

43. Соединение по п.41, где каждый А независимо выбран из группы, включающей α-аминокислоты: аланин, гистидин, лизин, фенилаланин, пролин, тирозин, валин, лейцин, изолейцин, глютамин, метионин, гомопролин, 3-(2-тиенил)аланин и 3-(3-тиенил)аланин.

44. Соединение по п.20, выбранное из группы

45. Фармацевтическая композиция для подавления ИПФ опосредованной функции или для лечения или профилактики ИЛ-1 опосредованных заболеваний, содержащая эффективное количество ингибитора ИПФ по любому из пп.1-44 и фармацевтически приемлемый носитель.

46. Фармацевтическая композиция для лечения или профилактики заболевания, выбранного из группы, включающей аутоиммунное заболевание, воспалительное заболевание и нейродегенеративное заболевание, содержащая эффективное количество ингибитора ИПФ по любому из пп.1-44 и фармацевтически приемлемый носитель.

47. Способ лечения или профилактики заболевания, выбранного из группы, состоящей из ИЛ-1-опосредованного заболевания, аутоиммунного заболевания, воспалительного заболевания и нейродегенеративного заболевания пациента, включающий стадию введения указанному пациенту фармацевтической композиции по любому из п.45 или 46.

48. Способ выбора ингибитора ИПФ, включающий стадии а) выбора кандидатуры соединения определенной химической структуры, включающей по крайней мере два связывающих водород радикала, по крайней мере, два умеренно гидрофобных радикала и один электроотрицательный радикал, содержащий один или несколько электроотрицательных атомов, присоединенных либо к тому же атому, либо к соседним атомам электроотрицательного радикала, где химическая структура включает по крайней мере два связывающих водород радикала, которые выбраны из группы, включающей

где каждый X независимо является С или N;

Z является СО или SO₂;

W₁ является неразветвленной цепью, включающей 1-3 ковалентно связанных члена, независимо выбранных из группы, включающей С, N, S и О, причем указанные ковалентные связи между указанными членами независимо являются насыщенными или ненасыщенными и указанная цепь содержит два конца, которые ковалентно связаны с двумя различными атомами посредством связей r;

W₂ является неразветвленной цепью, включающей 3-5 ковалентно связанных члена, независимо выбранных из группы, включающей С, N, S и О, причем указанные ковалентные связи между указанными членами независимо являются насыщенными или ненасыщенными и указанная цепь содержит два конца, которые ковалентно связаны с двумя различными атомами посредством связей r;

W₁₄ является неразветвленной цепью, содержащей 1-3 ковалентно связанных члена, независимо выбранных из группы, включающей С, N, S и О, причем указанные ковалентные связи между указанными членами являются насыщенными или ненасыщенными и указанная цепь содержит два конца, которые ковалентно связаны с двумя различными C атомами посредством связей r;

W_1a является неразветвленной цепью, содержащей 1-3 ковалентно связанных члена, независимо выбранных из группы, включающей С, N, S и О, причем указанные ковалентные связи между указанными членами являются насыщенными или ненасыщенными и указанная цепь содержит два конца, которые ковалентно связаны с двумя различными атомами X посредством связей r;

каждый X₁, независимо, является С, N или О;

W₃ является неразветвленной цепью, включающей 2-4 ковалентно связанных члена, независимо выбранных из группы, включающей С, N, S и О, причем указанные ковалентные связи между указанными членами независимо являются насыщенными или ненасыщенными и указанная цепь содержит два конца, которые ковалентно связаны с двумя различными атомами X посредством связей r;

W₁₅ является неразветвленной цепью, включающей 1-2 ковалентно связанных члена, независимо выбранных из группы, включающей С, N, S и О, причем указанные ковалентные связи между указанными членами независимо являются насыщенными или ненасыщенными и указанная цепь содержит два конца, которые ковалентно связаны с двумя различными атомами X;

W₁₆ является неразветвленной цепью, включающей 1-2 ковалентно связанных члена, независимо выбранных из группы, включающей С, N, S и О, причем указанные ковалентные связи между указанными членами независимо являются насыщенными или ненасыщенными и указанная цепь содержит два конца, которые ковалентно связаны с двумя различными атомами C посредством связей r;

W₄ является неразветвленной цепью, включающей 2-4 ковалентно связанных члена, независимо выбранных из группы, включающей С, N, S и О, причем указанные ковалентные связи между указанными членами независимо являются насыщенными или ненасыщенными и указанная цепь содержит два конца, которые ковалентно связаны с двумя различными атомами посредством связей r;

каждый W₅ является непосредственной связью или неразветвленной цепью, включающей 1-2 ковалентно связанных члена, независимо, выбранных из группы, включающей С, N, S и О, причем указанные ковалентные связи между указанными членами независимо являются насыщенными или ненасыщенными и указанная цепь содержит два конца, которые ковалентно связаны с двумя различными атомами посредством связей r;

W₆ является неразветвленной цепью, включающей 3-5 ковалентно связанных члена, независимо выбранных из группы, включающей С, N, S и О, причем указанные ковалентные связи между указанными членами независимо являются насыщенными или ненасыщенными и указанная цепь содержит два конца, которые ковалентно связаны с двумя различными атомами X посредством связей r;

каждый W₁₇ является неразветвленной цепью, включающей 1-3 ковалентно связанных члена, независимо выбранных из группы, включающей С, N, S и О, причем указанные ковалентные связи между указанными членами независимо являются насыщенными или ненасыщенными и указанная цепь содержит два конца, которые ковалентно связаны с двумя различными атомами С посредством связей r;

W₇ является неразветвленной цепью, включающей 3-5 ковалентно связанных члена, независимо выбранных из группы, включающей С, N, S и О, причем указанные ковалентные связи между указанными членами независимо являются насыщенными или ненасыщенными и указанная цепь содержит два конца, которые ковалентно связаны с двумя различными атомами X посредством связей r;

W₈ является неразветвленной цепью, включающей 1-3 ковалентно связанных члена, независимо выбранных из группы, включающей С, N, S и О, причем указанные ковалентные связи между указанными членами независимо являются насыщенными или ненасыщенными и указанная цепь содержит два конца, которые ковалентно связаны с двумя различными атомами X посредством связей r;

W₁₈ является неразветвленной цепью, включающей 1-3 ковалентно связанных члена, независимо выбранных из группы, включающей С, N, S и О, причем указанные ковалентные связи между указанными членами независимо являются насыщенными или ненасыщенными и указанная цепь содержит два конца, которые ковалентно связаны с двумя различными атомами С посредством связей r;

W_8а является неразветвленной цепью, включающей 1-3 ковалентно связанных члена, независимо выбранных из группы, включающей С, N, S и О, причем указанные ковалентные связи между указанными членами независимо являются насыщенными или ненасыщенными и указанная цепь содержит два конца, которые ковалентно связаны с двумя различными атомами С;

W₁₉ является неразветвленной цепью, включающей 1-3 ковалентно связанных члена, независимо выбранных из группы, включающей С, N, S и О, причем указанные ковалентные связи между указанными членами независимо являются насыщенными или ненасыщенными и указанная цепь содержит два конца, которые ковалентно связаны с двумя различными атомами С посредством связей r;

W₉ является неразветвленной цепью, включающей 1-3 ковалентно связанных члена, независимо выбранных из группы, включающей С, N, S и О, причем указанные ковалентные связи между указанными членами независимо являются насыщенными или ненасыщенными и указанная цепь содержит два конца, которые ковалентно связаны с двумя различными атомами X посредством связей r;

W₁₀ является неразветвленной цепью, включающей 1-3 ковалентно связанных члена, независимо выбранных из группы, включающей С, N, S и О, причем указанные ковалентные связи между указанными членами независимо являются насыщенными или ненасыщенными и указанная цепь содержит два конца, которые ковалентно связаны с двумя различными атомами X посредством связей r;

W_9а является неразветвленной цепью, включающей 1-3 ковалентно связанных члена, независимо выбранных из группы, включающей С, N, S и О, причем указанные ковалентные связи между указанными членами независимо являются насыщенными или ненасыщенными и указанная цепь содержит два конца, которые ковалентно связаны с двумя различными атомами С;

W_10а является неразветвленной цепью, включающей 1-3 ковалентно связанных члена, независимо выбранных из группы, включающей С, N, S и О, причем указанные ковалентные связи между указанными членами независимо являются насыщенными или ненасыщенными и указанная цепь содержит два конца, которые ковалентно связаны с двумя различными атомами X;

W₁₁ является неразветвленной цепью, включающей 3-5 ковалентно связанных члена, независимо выбранных из группы, включающей С, N, S и О, причем указанные ковалентные связи между указанными членами независимо являются насыщенными или ненасыщенными и указанная цепь содержит два конца, которые ковалентно связаны с двумя различными атомами с образованием кольца, которое необязательно может быть бензоконденсировано или пиридиноконденсировано;

W₁₂ является неразветвленной цепью, включающей 4-6 ковалентно связанных члена, независимо выбранных из группы, включающей С, N, S и О, причем указанные ковалентные связи между указанными членами независимо являются насыщенными или ненасыщенными и указанная цепь содержит два конца, которые ковалентно связаны с указанным атомом X посредством связи r;

каждый X_b независимо является С или N;

W_12a является неразветвленной цепью, включающей 4-6 ковалентно связанных члена, независимо выбранных из группы, включающей С, N, S и О, причем указанные ковалентные связи между указанными членами независимо являются насыщенными или ненасыщенными и указанная цепь содержит два конца, которые ковалентно связаны с указанным атомом X_b посредством связи r;

W₂₀ является неразветвленной цепью, включающей 1-3 ковалентно связанных члена, независимо выбранных из группы, включающей С, N, S и О, причем указанные ковалентные связи между указанными членами независимо являются насыщенными или ненасыщенными и указанная цепь содержит два конца, которые ковалентно связаны с двумя различными атомами С посредством связей r;

W₂₁ является неразветвленной цепью, содержащей 1-2 ковалентно связанных члена, независимо выбранных из группы, включающей С, N, S и О, причем указанная цепь содержит два конца, которые ковалентно связаны с двумя различными атомами С с образованием с ними ароматического кольца;

W₁₃ является неразветвленной цепью, включающей 3-5 ковалентно связанных члена, независимо выбранных из группы, включающей С, N, S и О, причем указанные ковалентные связи между указанными членами независимо являются насыщенными или ненасыщенными и указанная цепь содержит два конца, которые ковалентно связаны с двумя различными атомами;

W₂₂ является неразветвленной цепью, включающей 1-3 ковалентно связанных члена, независимо выбранных из группы, включающей С, N, S и О, причем указанные ковалентные связи между указанными членами независимо являются насыщенными или ненасыщенными и указанная цепь содержит два конца, которые ковалентно связаны с двумя различными атомами;

W₂₃ является неразветвленной цепью, включающей 1-3 ковалентно связанных члена, независимо выбранных из группы, включающей С, N, S и О, причем указанные ковалентные связи между указанными членами независимо являются насыщенными или ненасыщенными и указанная цепь содержит два конца, которые ковалентно связаны с двумя различными атомами; и

W_22а является неразветвленной цепью, включающей 1-3 ковалентно связанных члена, независимо выбранных из группы, включающей С, N, S и О, причем указанные ковалентные связи между указанными членами независимо являются насыщенными или ненасыщенными и указанная цепь содержит два конца, которые ковалентно связаны с двумя различными атомами посредством связей r;

б) определения низкоэнергетичной конформации для связывания указанного соединения с активным участком ИПФ;

в) оценки способности указанного соединения в указанной конформации к образованию по крайней мере двух водородных связей с неуглеродными скелетными атомами Arg-341 и Ser-339 ИПФ;

г) оценки способности указанного соединения в указанной конформации к ассоциации по крайней мере с двумя из связывающих "карманов" ИПФ, выбранных из группы, включающей Р2-связывающий "карман", Р3-связывающий "карман", Р4-связывающий "карман", Р’-связывающий "карман";

д) оценки способности указанного соединения в указанной конформации к взаимодействию с P1-связывающим "карманом" ИПФ и

е) принятия или отклонения указанной кандидатуры соединения в качестве ингибитора ИПФ, основанных на определениях и оценках, проведенных на предыдущих этапах.

49. Способ по п.48, дополнительно включающий следующие этапы, которые следуют за этапом д) и предшествуют этапу е):

ж) оценка энергии деформации связывания указанного соединения с ИПФ; и

з) оценка вклада суммы всех электростатических взаимодействий между указанным соединением и ИПФ, когда указанное соединение присоединено к нему в указанной конформации.

50. Ингибитор ИПФ, выбранный по какому-либо из способов по п.48 или 49.

Приоритет по пунктам:

17.06.1994 по пп.1, 20, 45-48 и 50;

17.03.1995 по пп.31 и 34;

25.05.1995 по пп.38 и 41.