JPH07278093A - 抗血栓物質 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【構成】 式Ｉ： 【化１】 ［式中、Ｒ、ＸおよびＹは明細書中と同義である］で示
される新規Ｌ−アルギニンアルデヒド誘導体およびその
製法ならびにこれらの化合物を含む医薬製剤が提供され
る。 【効果】 本発明の化合物はトロンビン阻害物質、凝固
阻害物質および血栓塞栓症用物質として有用である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は哺乳類における有用な抗
凝固薬であるトロンビン阻害物質に関する。さらに具体
的には、高い抗血栓活性、抗凝固活性および経口の生体
利用性を持つＬ−アルギニンアルデヒド誘導体に関す
る。

【０００２】

【従来の技術】血液凝固の過程である血栓症はトロンビ
ンの形成に至る複雑な蛋白質分解的過程が引き金とな
る。トロンビンは、血漿に可溶性であるフィブリノーゲ
ンのＡα−鎖およびＢβ−鎖から活性化ペプチドを蛋白
質分解的に除去して不溶性のフィブリン形成を開始させ
る。

【０００３】抗凝固は現在ではヘパリン類とクマリン類
の投与により達成されている。

【０００４】凝固と血栓症の非経口的薬理学的コントロ
ールはヘパリン類の使用によるトロンビンの阻害に基づ
いている。ヘパリンは内因性抗トロンビンIII（トロン
ビンの主要な生理学的阻害物質）の阻害作用を促進する
ことによって間接的にトロンビンに作用する。抗トロン
ビンIII濃度が血漿中で変化するためおよび表面−結合
トロンビンがこの間接的機構に対して抵抗性であると思
われるため、ヘパリン類が無効な処置になることもあ
る。凝固検定は有効性と安全性とに関連すると考えられ
るので、凝固検定（殊に、活性化部分トロンボプラスチ
ン時間（ＡＰＴＴ）検定）でヘパリン濃度を監視しなけ
ればならない。クマリンは、プロトロンビンおよび他の
この型の蛋白質の合成における翻訳後のガンマカルボキ
シル化を阻害することによって、トロンビンの生成を妨
害する。その作用機構のために、クマリン類の効果は投
与の６〜２４時間後に徐々にしか現れることができな
い。さらに、これらは選択的な抗凝固剤ではない。ま
た、クマリン類も凝固検定（殊にプロトロンビン時間
（ＰＴ）検定）で監視する必要がある。

【０００５】最近、天然基質と類似の様式で蛋白質分解
酵素によって認識される小さな合成ペプチドに興味が持
たれている。Ｂajuszら［J.Med.Chem.，33，1729-1735
(1990年)］は、Ｄ−Ｐhe−Ｐro−Ａrg−Ｈ、Ｂoc−Ｄ−
Ｐhe−Ｐro−Ａrg−ＨおよびＤ−ＭeＰhe−Ｐro−Ａrg
−Ｈのようなトリペプチドアルデヒドにおいて強力で直
接的なトロンビン阻害を証明した。多数の研究者、例え
ば、Ｓhumanら［J.Med.Chem.，36，314-319 (1993年)］
ならびに欧州特許出願公開第４７９４８９号および第５
４２５２５号が、医薬物質を開発する努力において類似
体を合成している。

【０００６】

【発明が解決しようとする課題】ヘパリン類およびクマ
リン類は効果的な抗凝固薬であり、既知のトリペプチド
アルデヒドからの薬物は未だ現れておらず、この類の化
合物が継続して有望視されているにも関わらず、選択的
にトロンビンに作用し、抗トロンビンIIIに非依存的で
あり、好ましくは経口経路による投与の直後に阻害作用
を示し、さらに止血を維持するために必要な血餅の分解
を阻害しない抗凝固薬への需要が存在する。

【０００７】

【課題を解決するための手段】本発明は、以下に定義し
た本発明の化合物が経口投与後の高い生体利用率をもち
得る強力なトロンビン阻害物質であることを発見したこ
とに関する。

【０００８】従って、強力なトロンビン阻害物質であ
り、抗凝固薬として有用な新規Ｌ−アルギニンアルデヒ
ド誘導体を提供することが本発明の第一の目的である。

【０００９】他の目的、特徴および利点は以下の記載と
特許請求の範囲から当業者にとっては明白になるであろ
う。

【００１０】本発明は、式Ｉ：

【化４】 ［式中、Ｘは式：

【化５】 で示される基であり；Ｑは−ＯＨ、Ｃ₁〜Ｃ₄アルコキ
シ、または−ＮＨ−Ａであり；Ａは水素、Ｃ₁〜Ｃ₄アル
キル、アセチル、ＣＦ₃Ｃ(Ｏ)−、ＣＦ₃ＣＦ₂Ｃ(Ｏ)
−、Ｒ"ＳＯ₂−、ベンジルオキシカルボニル、またはｔ
−ブチルオキシカルボニルであり；Ｒ'は水素、Ｃ₁〜Ｃ
₄アルキル、フェニル、またはベンジルであり；Ｒ"はＣ
₁〜Ｃ₄アルキル、−(ＣＨ₂)_d−ＣＯＯＨ、または未置換
もしくは置換されたアリール（Ａr）(ここに、アリール
はフェニル、ナフチル、硫黄、酸素および窒素から選択
される同一もしくは異なる１もしくは２個のヘテロ原子
をもつ５もしくは６員の未置換もしくは置換された芳香
族複素環、または硫黄、酸素および窒素から選択される
同一もしくは異なる１もしくは２個のヘテロ原子をもつ
９もしくは１０員の未置換もしくは置換された縮合二環
式芳香族複素環である）であり；ｄは１、２、または３
であり；ｍは０、１、または２であり；ｎは０、１、ま
たは２であり；Ｙは式：

【化６】 で示される基であり；Ｒはメチルまたはエチルであり；
そしてＺは水素、Ｃ₁〜Ｃ₄アルキル、Ｃ₁〜Ｃ₄アルコキ
シ、ヒドロキシ、ハロ、またはＲaＳＯ₂ＮＨ−（ここ
に、ＲaはＣ₁〜Ｃ₄アルキルである）である］で示され
るトロンビン阻害化合物またはその薬学的に許容し得る
塩、または該化合物もしくはその塩の薬学的に許容し得
る溶媒和物を提供する。

【００１１】式Ｉで示される化合物に加え、本発明は式
Ｉで示される化合物を薬学的に許容しうる担体、希釈剤
または添加剤とともに含む医薬製剤を提供する。

【００１２】また本発明は、式Ｉで示される化合物の抗
血栓用量を処置を要する哺乳類に投与することからな
る、哺乳類の血栓症を阻害する方法も提供する。

【００１３】さらに本発明は、式Ｉで示される化合物の
トロンビン阻害用量を処置を必要とする哺乳類に投与す
ることからなる、トロンビンを阻害する方法を提供す
る。

【００１４】本発明はトロンビンの新規阻害物質、この
化合物を活性成分として含む医薬組成物、ならびに静脈
血栓症、肺塞栓症、動脈血栓症、殊に心筋虚血、心筋梗
塞および脳血栓症のような血栓塞栓症、血管形成術およ
び冠状動脈バイパス手術後に現れるような全般的過凝固
状態および局所的過凝固状態、および炎症過程に関連す
る全般的組織損傷の予防および処置のための抗凝固薬と
してのこの化合物の使用に関する。

【００１５】用語「アルキル」はそれ自体が、または他
の置換基の一部として、メチル、エチル、n−プロピ
ル、イソプロピル、n−ブチル、t−ブチル、イソブチル
およびsec−ブチルのような指定する数の炭素原子を持
つ直線状または分枝状鎖のアルキル基を意味する。

【００１６】用語「アルコキシ」は酸素原子によって親
基に結合している指定する数の炭素原子を持つ直線状ま
たは分枝状鎖のアルキル基を意味する。用語「ハロ」は
クロロ、フルオロ、ブロモまたはヨードを意味する。用
語「アセチル」はＣＨ₃−Ｃ(Ｏ)−を意味する。用語「t
−ブチルオキシカルボニル」は(ＣＨ₃)₃Ｃ−Ｏ−Ｃ(Ｏ)
−を意味し、「Ｂoc」と省略される。用語「ベンジルオ
キシカルボニル」はＣ₆Ｈ₅ＣＨ₂−Ｏ−Ｃ(Ｏ)−を意味
し、「Ｃbz」と省略される。

【００１７】用語「５員または６員の複素環」は窒素原
子１個または２個、硫黄原子１個、酸素原子１個、窒素
原子１個と硫黄原子１個、または窒素原子１個と酸素原
子１個を含む安定な構造を与える５員または６員環のど
れかを意味する。５員環は二重結合１個または２個を持
ち、６員環は二重結合２個または３個を持つ。このよう
な複素環系にはフリル、チエニル、ピロリル、ピラゾリ
ル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、チアゾリル、イ
ソチアゾリル、ピラニル、ピリジニル、ピリミジニル、
ピラジニル、オキサジニルおよびチアジニルが含まれ
る。

【００１８】用語「９員または１０員の複素環」は前記
５員または６員環のどれかがベンゼン環または安定な構
造を与える上記定義の他の６員複素環に縮合した二環式
基のどれかを意味する。これらの複素環系にはインドリ
ル、ベンゾチエニル、ベンゾフリル、ベンズオキサゾリ
ル、ベンゾイソオキサゾリル、ベンゾピラゾリル、キノ
リニル、イソキノリニル、ベンズイミダゾリルおよびベ
ンゾチアゾリルが含まれる。

【００１９】前記複素環の多くが互変異形態で存在しう
ることは認識されるであろう。これらの形態はすべて本
発明の範囲内に含まれる。

【００２０】Ａrの定義のために挙げたアリール基はす
べて未置換であるか、またはハロ、ヒドロキシル、Ｃ₁
〜Ｃ₄アルキル、Ｃ₁〜Ｃ₄アルコキシ、アミノ（−Ｎ
Ｈ₂）、置換アミノ（−ＮＨＲ¹）、−(ＣＨ₂)_kＣＯＯ
Ｈ、メルカプト、および置換チオ（−Ｓ(Ｏ)_hＲ¹）［Ｒ
¹はＣ₁〜Ｃ₄アルキル、Ｃ₁〜Ｃ₄アルコキシ、(Ｃ₁〜Ｃ₄
アルキル)Ｓ(Ｏ)_h−、アミノ、Ｃ₁〜Ｃ₄アルキルアミ
ノ、(Ｃ₁〜Ｃ₄アルキル)−Ｃ(Ｏ)−または(Ｃ₁〜Ｃ₄ア
ルキル)ＳＯ₂ＮＨ−であり、ｈは０、１または２であ
り、そしてｋは０、１、２、３、または４である］から
独立して選択される安定な構造を与える置換基１個また
は２個で置換されている。

【００２１】式Ｉにおいて、Ｘ基のカルボニル官能基は
Ｙ基のアミン官能基に結合している。次に、Ｙのカルボ
ニル官能基が、式Ｉに示したアミノ基に結合している。

【００２２】式：

【化７】 ［式中、ＺおよびＡは両方とも水素である］で示される
基は、本明細書中、フェニルグリシルと言及することも
あり、Ｐhgと省略する。Ａが、例えば、メチルである化
合物はＮ(α)メチル−フェニルグリシル基と言及し、Ｍ
eＰhgと省略する。Ｚが水素以外である置換化合物は、
置換基の種類および位置によって言及する［例えば、
３'−クロロフェニルグリシルまたはＰhg(３−Ｃl)］。

【００２３】式：

【化８】 ［式中、ＺおよびＡは両方とも水素である］で示される
基は、本明細書中、フェニルアラニルと言及することも
あり、Ｐheと省略する。Ａが、例えば、メチルである化
合物はＮ(α)メチル−フェニルアラニル基と言及し、Ｍ
eＰheと省略する。Ｚが水素以外である置換化合物は、
置換基の種類および位置によって言及する［例えば、
３'−クロロフェニルアラニルまたはＰhe(３−Ｃl)］。

【００２４】式：

【化９】 ［式中、Ｒ'は水素である］で示される基は、本明細書
中、各々１−および３−テトラヒドロ−イソキノリンカ
ルボキシレートと言及することもあり、各々１−Ｔiqお
よび３−Ｔiqと省略する。

【００２５】式：

【化１０】 ［式中、Ｒ'は水素である］で示される基は、本明細書
中、各々１−および３−ペルヒドロ−イソキノリンカル
ボニルと言及することもあり、各々１−Ｐiqおよび３−
Ｐiqと省略する。波線によって示すように、これら置換
基の種々の環縮合異性体が存在する。本発明はあらゆる
個々の異性体およびその組合せを意図している。

【００２６】式：

【化１１】 で示される基は、各々プロリニルおよびアゼチジン−２
−カルボキシルと言及し、各々ＰroおよびＡztと省略す
る。

【００２７】式ＩおよびＹ置換基中の星印は(Ｌ)である
キラル中心を示す。Ｘ置換基中の星印は(Ｄ)または(Ｄ
Ｌ)であるキラル中心を示す。

【００２８】さらに、アルキル置換基の分枝に依存して
ジアステレオマーが存在し得る。本発明の化合物には、
２またはそれ以上のジアステレオマーの混合物ならびに
各々個々の異性体が含まれる。

【００２９】以下の化合物は、式Ｉの範囲内に意図され
る化合物を例示するものである：Ｄ−フェニルアラニル
−Ｌ−プロリニル−Ｌ−(α−メチル)アルギニン アル
デヒド；Ｄ−フェニルグリシル−Ｌ−アゼチジン−２−
カルボニル−Ｌ−(α−メチル)アルギニン アルデヒ
ド；Ｄ−１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリニル−
３−カルボニル−Ｌ−アゼチジン−２−カルボニル−Ｌ
−(α−エチル)アルギニン アルデヒド；Ｄ−２−ナフ
チルアラニン−Ｌ−アゼチジン−２−カルボニル−Ｌ−
(α−メチル)アルギニン アルデヒド；およびＤ−ペル
ヒドロイソキノリニル−１−カルボニル−Ｌ−プロリニ
ル−Ｌ−(α−メチル)アルギニン アルデヒド。

【００３０】本発明の好ましい化合物は、Ａが水素であ
り、ＸがＭeＰhe、１−もしくは３−Ｔiq、または１−
もしくは３−Ｐiqであり、かつＹが式Ｉについて上記の
ように定義された基である、式Ｉの化合物ならびにその
薬学的に許容し得る塩および溶媒和物である。

【００３１】前記の通り、本発明は前記式Ｉで定義され
る化合物の薬学的に許容しうる塩を包含する。本発明の
特定の化合物は十分に塩基性の官能基１個またはそれ以
上を持つことができ、従って任意の多数の無機および有
機酸と反応して薬学的に許容しうる塩を形成することが
できる。酸付加塩を形成させるために通常用いる酸は塩
酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、燐酸などの無機
酸およびｐ−トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、
シュウ酸、ｐ−ブロモフェニルスルホン酸、炭酸、コハ
ク酸、クエン酸、安息香酸、酢酸などの有機酸である。
即ち、薬学的に許容しうる塩の例は硫酸塩、ピロ硫酸
塩、重硫酸塩、亜硫酸塩、重亜硫酸塩、燐酸塩、一水素
燐酸塩、二水素燐酸塩、メタ燐酸塩、ピロ燐酸塩、塩酸
塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、酢酸塩、プロピオ
ン酸塩、デカン酸塩、カプリル酸塩、アクリル酸塩、ギ
酸塩、イソ酪酸塩、カプロン酸塩、ヘプタン酸塩、プロ
ピオール酸塩、シュウ酸塩、マロン酸塩、コハク酸塩、
スベリン酸塩、セバシン酸塩、フマル酸塩、マレイン酸
塩、ブチン−１,４−二酸塩、ヘキシン−１,６−二酸
塩、安息香酸塩、クロロ安息香酸塩、メチル安息香酸
塩、ジニトロ安息香酸塩、ヒドロキシ安息香酸塩、メト
キシ安息香酸塩、フタル酸塩、スルホン酸塩、キシレン
スルホン酸塩、フェニル酢酸塩、フェニルプロピオン酸
塩、フェニル酪酸塩、クエン酸塩、乳酸塩、ガンマ−ヒ
ドロキシ酪酸塩、グリコール酸塩、酒石酸塩、メタンス
ルホン酸塩、プロパンスルホン酸塩、ナフタレン−１−
スルホン酸塩、ナフタレン−２−スルホン酸塩、マンデ
ル酸塩などである。好適な薬学的に許容しうる酸付加塩
は塩酸、臭化水素酸および硫酸のような鉱酸で形成され
る塩である。

【００３２】本発明の化合物は、適当な溶媒と水和物お
よび溶媒和物を形成することがわかっている。溶媒和物
型の調製に好ましい溶媒には、水、アルコール、テトラ
ヒドロフラン、ＤＭＦ、およびＤＭＳＯが含まれる。好
ましいアルコールはメタノールおよびエタノールであ
る。他の適当な溶媒を、溶媒分子のサイズに基づいて選
択してもよい。小さい溶媒分子は対応する溶媒和物形成
を促進するのに好ましい。溶媒和物または水和物は、再
結晶または塩形成の過程において普通形成される。溶媒
和物に関する有用な文献の１つとして、Ｓykes、Ｐeter
の「有機化学における機構の手引」第６版［1986、 John
Wiley & Sons, New York］が挙げられる。本明細書中
で用いる用語「溶媒和物」は、一水和物および二水和物
のような水和物型を包含する。

【００３３】式Ｉで示される化合物は公知のペプチド結
合法によって製造される。この方法の一つに従えば、酸
Ｐ−Ｘ'−ＣＯＯＨ［ここに、−Ｘ'−Ｃ(Ｏ)−は式Ｉの
ために定義した−Ｘ−と同義を持ち、Ｐはアミノ保護基
である］を、カルボキシ保護プロリン（またはアゼチジ
ン−２−カルボン酸）と結合させてジペプチド（ａ）を
形成させる。Ｘがカルボキシ基を含む式Ｉの化合物につ
いて、Ｐはまたカルボキシ保護基も示し、これをアミノ
保護基に追加してもよい。次にプロリンまたはアゼチジ
ン部分のカルボキシ保護エステル基を除去（脱ブロック
または脱エステル化）し、ジペプチドの遊離酸型（ｂ）
を(αＲ)アルギニンのラクタム型（ｄ）と結合させる。
上記反応順序を次の反応式１に示す：

【化１２】 ［反応式中、Ｐはアミノ保護基を示し；ｎは１または２
である］。

【００３４】結合した(αＲ)Ａrg(Ｐ)ラクタム生成物
（ｃ）を好ましくは水素化アルミニウムリチウムまたは
水素化トリ−t−ブトキシアルミニウムリチウムである
水素化物還元剤と不活性溶媒または溶媒混合物中で反応
させてラクタム環を還元して、式：

【化１３】 Ｐ−Ｘ'−(Ｃ＝Ｏ)−Ｐro(またはＡzt)−
(αＲ)Ａrg(Ｐ)−Ｈ ［式中、Ｐはアミノまたはカルボキシ保護基である］で
示されるアルギニンアルデヒド型のトリペプチドを得
る。

【００３５】保護基を、金属触媒上の水素化のような当
業者に既知の操作により、同時にまたは順に除去する。

【００３６】(αＲ)アルギニンのラクタム型はアミノ保
護αＲ−置換アルギニン［(αＲ)Ａrg−ＯＨ］の分子内
結合によって得られる。例えば、式：

【化１４】 ［式中、Ｂocはｔ−ブチルオキシカルボニルであり；Ｃ
bzはベンジルオキシカルボニルである］で示されるＢoc
−(αＲ)Ａrg(Ｃbz)ＯＨを初めに、たとえばクロロギ酸
エチルないしクロロギ酸イソブチルのようなクロロギ酸
エステルで活性混合無水物のような活性エステル型に変
換する。エステル形成はＮ−メチルモルホリンのような
三級アミンの存在下に実施する。追加のまたは別の三級
アミン塩基（例えば、トリエチルアミンまたはジイソプ
ロピルエチルアミンなど）の添加により内部アシル化さ
せて、次式：

【化１５】 に示すジ−アミノ保護アルギニンのラクタム型を得る。
上記反応式に示すＰ−Ｘ'−(Ｃ＝Ｏ)−Ｐro(またはＡz
t)−ＯＨとの結合に使用する前に、Ｂocまたは他のアミ
ン保護基をトリフルオロ酢酸またはＨＣlで選択的に除
去して、必要な遊離アミノ基を得る。

【００３７】Ｐ−Ｘ'−ＣＯＯＨ化合物とプロリンまた
はアゼチジン カルボキシエステルとの結合は初めにア
ミノ酸のアミノ基を保護することにより実施する。アミ
ノ基の一時的保護またはブロックに通常使用される通常
のアミノ保護基を用いる。

【００３８】アミノ保護基とは、化合物の他の官能基が
反応する間、アミノ官能基をブロックまたは保護するた
めに通常採用されるアミノ基の置換基を指す。そのよう
なアミノ保護基の例はホルミル基、トリチル基、フタル
イミド基、トリクロロアセチル基、クロロアセチル、ブ
ロモアセチルおよびヨードアセチル基、ベンジルオキシ
カルボニル、t−ブトキシカルボニル、４−フェニルベ
ンジルオキシカルボニル、２−メチルベンジルオキシカ
ルボニル、４−メトキシベンジルオキシカルボニル、４
−フルオロベンジルオキシカルボニル、４−クロロベン
ジルオキシカルボニル、３−クロロベンジルオキシカル
ボニル、２−クロロベンジルオキシカルボニル、２，４
−ジクロロベンジルオキシカルボニル、４−ブロモベン
ジルオキシカルボニル、３−ブロモベンジルオキシカル
ボニル、４−ニトロベンジルオキシカルボニル、４−シ
アノベンジルオキシカルボニル、２−(４−キセニル)イ
ソプロポキシカルボニル、１，１−ジフェニルエタン−
１−イルオキシカルボニル、１，１−ジフェニルプロパ
ン−１−イルオキシカルボニル、２−フェニルプロパン
−２−イルオキシカルボニル、２−(p−トルイル)プロ
パン−２−イルオキシカルボニル、シクロペンタニルオ
キシカルボニル、１−メチルシクロペンタニルオキシカ
ルボニル、シクロヘキサニルオキシカルボニル、１−メ
チルシクロヘキサニルオキシカルボニル、２−メチルシ
クロヘキサニルオキシカルボニル、２−(４−トルイル
スルホニル)エトキシカルボニル、２−(メチルスルホニ
ル)エトキシカルボニル、２−トリフェニルホスフィノ)
エトキシカルボニル、９−フルオレニルメトキシカルボ
ニル（「ＦＭＯＣ」）、２−(トリメチルシリル)エトキ
シカルボニル、アリルオキシカルボニル、１−(トリメ
チルシリルメチル)−１−プロペニルオキシカルボニ
ル、５−ベンズイソオキサリルメトキシカルボニル、４
−アセトキシベンジルオキシカルボニル、２，２，２−
トリクロロエトキシカルボニル、２−エチニル−２−プ
ロポキシカルボニル、シクロプロピルメトキシカルボニ
ル、４−(デシルオキシ)ベンジルオキシカルボニル、イ
ソボルニルオキシカルボニル、１−ピペリジルオキシカ
ルボニルなどのウレタン型ブロック基、ベンゾイルメチ
ルスルホニル基、２−(ニトロ)フェニルスルフェニル
基、ジフェニルホスフィンオキシド基などのアミノ保護
基を含む。採用するアミノ保護基の種類は誘導化された
アミノ基が分子上の他の位置における後続反応の条件に
安定であって、適当な時点で分子の残部を損なうことな
しに除去できる限り、限定的でない。好適なアミノ保護
基はベンジルオキシカルボニル、アリルオキシカルボニ
ル、t−ブトキシカルボニルおよびトリチル基である。
セファロスポリン、ペニシリンおよびペプチド分野で使
用される同様なアミノ保護基も前記用語に包含される。
前記用語により示される基の他の例はＪ.Ｗ.Ｂarton、
「有機化学における保護基（Protective Groups in Org
anic Chemistry）」、Ｊ.Ｇ.Ｗ.ＭcＯmie編、Ｐlenum
Ｐress、ニューヨーク、Ｎ.Ｙ.、１９７３年、第２章お
よびＴ.Ｗ.Ｇreene、「有機合成における保護基（Prote
ctive Groups in Organic Synthesis）」、Ｊohn Ｗile
y and Ｓons、ニューヨーク、Ｎ.Ｙ.、１９８１年、第
７章に記載されている。関連する用語「保護(された)ア
ミノ」は前記アミノ保護基で置換されたアミノ基を指
す。

【００３９】結合反応を実施するに当り、アミノ保護基
が無傷のままである条件下に除去できる、プロリンのた
めのエステル保護基を採用する。即ち、アシル化する酸
Ｐ−Ｘ'−ＣＯＯＨのアミノ保護基は、後続するアルギ
ニンラクタム化合物との（ｃ）型にいたる結合反応の
間、アミノ基を保護する位置に残る。

【００４０】本明細書に使用するカルボキシ保護エステ
ル基は、化合物の他の官能基で反応が実施されている
間、カルボン酸基をブロックまたは保護するために通常
採用されるカルボン酸基のエステル誘導体の一つを指
す。このようなカルボン酸保護基の例はＣ₁〜Ｃ₃アルキ
ル、ベンジル、４−ニトロベンジル、４−メトキシベン
ジル、３,４−ジメトキシベンジル、２,４−ジメトキシ
ベンジル、２,４,６−トリメトキシベンジル、２,４,６
−トリメチルベンジル、ペンタメチルベンジル、３，４
−メチレンジオキシベンジル、ベンズヒドリル、４,４'
−ジメトキシベンズヒドリル、２,２',４,４'−テトラ
メトキシベンズヒドリル、t−ブチル、t−アミル、トリ
チル、４−メトキシトリチル、４,４'−ジメトキシトリ
チル、４,４',４"−トリメトキシトリチル、２−フェニ
ルプロパン−２−イル、トリメチルシリル、t−ブチル
ジメチルシリル、フェナシル、２,２,２−トリクロロエ
チル、β−(トリメチルシリル)エチル、β−(ジ(n−ブ
チル)メチルシリル)エチル、p−トルエンスルホニルエ
チル、４−ニトロベンジルスルホニルエチル、アリル、
シンナミル、１−(トリメチルシリルメチル)−１−プロ
ペン−３−イルなどの基を含む。採用するカルボキシ保
護基の種類は、誘導化されたカルボキシ基が後続する分
子内の他の位置における反応の条件に安定であってかつ
適当な時点で分子の残部を損なうことなしに除去できる
限り、限定的でない。殊に、カルボキシ保護分子を強い
求核塩基またはラネイニッケルのような高度に活性化さ
れた金属触媒を採用する還元条件に暴露しないことが重
要である（このような過激な除去条件は、以下に説明す
るアミノ保護基の除去時にも避けるべきである）。これ
らの基の他の例はＥ.Ｈaslam、「有機化学における保護
基（Protective Groups in Organic Chemistry）」、
Ｊ.Ｇ.Ｗ.ＭcＯmie編、Ｐlenum Ｐress、ニューヨー
ク、Ｎ.Ｙ.、１９７３年、第５章およびＴ.Ｗ.Ｇreen
e、「有機合成における保護基（Protective Groups in
Organic Synthesis）」、Ｊohn Ｗiley and Ｓons、ニ
ューヨーク、Ｎ.Ｙ.、１９８１年、第５章に記載されて
いる。

【００４１】また、式Ｉの化合物は、最初にＰro−(ま
たはＡzt)−(αＲ)Ａrgジペプチド前駆体の合成、次い
で保護Ｘ−置換基との反応によっても製造し得る。その
方法の一つに従えば、(αＲ)アルギニン（ｄ）の環状ラ
クタム型を製造し、アミノ保護プロリンまたはアゼチジ
ン−２−カルボン酸（ｇ）と次に示すように結合させて
ジペプチド（ｈ）を得る：

【化１６】 ［ここに、Ｐはベンジルオキシカルボニル（Ｃbz）基、
t−ブトキシカルボニル（Ｂoc）、p−トルエンスルホニ
ルなどのアミノ保護基を示す］。好ましくは、使用する
アミノ保護基は水素化または緩和な酸（たとえば、トリ
フルオロ酢酸）または強酸（たとえば、ＨＣl）での処
理により除去できるものである。適当な他のアミノ保護
基の例は「有機合成における保護基（Protective Group
s in Organic Synthesis）」、第２版、Ｔ.Ｗ.Ｇreene
およびＰeter Ｇ.Ｍ.Ｗuts、第７章、第３０９〜４０５
頁、（１９９１年）、Ｊohn Ｗiley and Ｓons Ｉnc.出
版に記載されている。Ｂocまたは他の適当な保護基をア
ゼチジン環窒素から除去し、次に所望のアミノ酸アシル
基でアシル化して次に示すようにトリペプチドを得る：

【化１７】 結合した(αＲ)Ａrg(Ｐ)ラクタム生成物（ｃ）を還元
し、保護基を先の記載のように除去する。

【００４２】Ｐ−Ｘ'−ＣＯＯＨ化合物の結合は、初め
にアミノ酸のアミノ基を保護して実施する。アミノ基の
一時的な保護またはブロックのために通常用いられる通
常のアミノ保護基を採用できる。この保護基の例は前に
記載した。

【００４３】前記結合反応は冷却して、好ましくは約−
２０℃〜約１５℃の温度で、ジメチルホルムアミド、ジ
メチルアセトアミド、テトラヒドロフラン、塩化メチレ
ン、クロロホルムなどの通常の溶媒またはこのような溶
媒の混合物のような不活性有機溶媒中で実施する。アシ
ル化する酸の活性エステルを結合反応において用いる時
には一般に無水条件が使用される。

【００４４】ラクタム中間体（ｄ）および（ｆ）は、以
下の反応式に要約されるような有機化学の常法によって
製造する：

【化１８】

【００４５】上記の順に従って、ベンゾフェノンイミン
を用いてアラニン（Ｒ＝メチル）または２−アミノ酪酸
（Ｒ＝エチル）を保護し、保護されたアミノ酸（ｈ）を
得ることができる。（ｈ）をα−ハロプロピオニトリル
でアルキル化することによって、アルギニン基の前駆体
を誘導し、（ｉ）を得る。アミンを脱ブロックし、Ｂoc
基のような次の反応により適した保護基で再ブロックし
た後［例えば、中間体（ｊ）］、最初にアミノ酸を脱エ
ステル化し（ｋ）、還元してオルニチン中間体（ｌ）を
得る。塩基中Ｏ−メチルイソ尿素での処理によってアル
ギニン誘導体（ｍ）を得る。第一級アミンを、例えば、
Ｃbz官能基でブロックして（ｅ）を得、次いでこれを上
記のように環化して（ｆ）を得る。Ｂoc保護基を除去す
ることによって第一級アミン（ｄ'）を得、次いでこれ
を用いてモノ−またはジ−ペプチドに結合させる。当業
者なら認識しているであろうが、次いで行なう化学反応
の間、官能基を保護する目的を果たし、また、次に行な
う変換が可能なように適当な順序でかつ適当な条件下で
除去し得る限り、他の保護基を選択してもよい。

【００４６】本発明の化合物は酸付加塩の型で単離する
のが最善である。前記のような酸とで形成させた式Ｉで
示される化合物の塩は、この抗血栓物質の投与のための
薬学的に許容しうる塩として、またこれらの物質の製剤
の製造のために有用である。他の酸付加塩を製造し、こ
のペプチドの単離および精製において使用しうる。例え
ば、メタンスルホン酸、n−ブタンスルホン酸、p−トル
エンスルホン酸およびナフタレンスルホン酸のようなス
ルホン酸とで形成させた塩をそのように使用しうる。

【００４７】式Ｉで示される化合物の精製のため、およ
び同時に所望の安定な塩型を製造するための好適な方法
は、米国特許第５２５０６６０号に記載されている。こ
の方法に従えば、水性成分がｐＨ２.５の硫酸または塩
酸からなり、アセトニトリルが有機成分であるＣ₁₈逆相
クロマトグラフィーによる分取精製により安定な硫酸塩
または塩酸塩が得られる。酸性溶出液のｐＨをヒドロキ
シル型のアニオン交換樹脂（たとえば、Ｂio−Ｒad Ａ
Ｇ−１Ｘ８）、で約pＨ４〜６に調整する。pＨの調整
後、トリペプチド硫酸塩または塩酸塩の溶液を凍結乾燥
して純粋な塩を乾燥粉末の形で得る。この工程の一例に
おいて、粗製のＤ−ＭeＰhe−Ｐro−Ａrg(αＭe)−Ｈ
スルフェートを水に溶かし、この溶液をＶydac Ｃ₁₈ Ｒ
Ｐ−ＨＰＬＣカラム（５cm×５０cm）に入れる。２〜１
０％Ｂ（Ａ＝０.０１％Ｈ₂ＳＯ₄、Ｂ＝アセトニトリ
ル）の勾配を１０時間かけて用いる。多数の分画を取
り、分析用ＰＲ−ＨＰＬＣで測定して生成物を含む分画
を集める。集めた分画のpＨをヒドロキシド型ＡＧ−１
Ｘ８樹脂（Ｂio−Ｒad、３３００ Ｒagatta Ｂlvd.，Ｒ
ichmond，ＣＡ ９４８０４）で４.０〜４.５に調整す
る。この溶液を濾過し、濾液を凍結乾燥して純粋なＤ
−,Ｌ−,Ｌ−トリペプチドを硫酸塩の形で得る。

【００４８】Ｘ置換基のジアステレオマーの光学活性異
性体も本発明の一部である。この光学活性異性体は対応
する光学活性前駆体から前記方法またはラセミ混合物の
分割により製造しうる。この分割はキラル試薬での誘導
体化およびその後のクロマトグラフィーまたは反復結晶
化によって実施することができる。常法によるキラル助
剤の除去により、本発明の化合物またはその前駆体の実
質的に光学的に純粋な異性体が得られる。分割に関する
さらなる詳細は、Ｊacquesなどの「エナンチオマー、ラ
セメートおよび分割（Enantiomers, Racemates, and Re
solutions）」、Ｊohn Ｗiley and Ｓons Ｉnc.（１９
８１年）に見られる。

【００４９】本発明の化合物の合成における最初の出発
物質として採用される化合物は良く知られており、商業
的に入手できないものは当業者により通常採用される常
法により容易に合成される。

【００５０】

【実施例】以下の実施例は本発明をさらに説明するため
に提供するが、本発明を限定するものと解釈すべきでは
ない。

【００５１】以下の実施例におけるＲf値は、特段の記
載がない限り、キーゼルゲル６０Ｆ−２５４（メルク
社、ダルムシュタット）を用いる次の溶媒系によるシリ
カゲル薄層クロマトグラフィーにより測定した：（Ａ）
クロロホルム−メタノール−酢酸、１３５:１５:１、
（Ｂ）酢酸エチル−酢酸−無水アルコール、９０:１０:
１０、（Ｃ）クロロホルム−メタノール−酢酸、９０:
３０:５。

【００５２】実施例中で用いる略号は次の意味を持つ。 アミノ酸：Ａrg＝アルギニン、Ｐro＝プロリン、Ｐhe＝
フェニルアラニル、１−Ｔiq＝1−テトラヒドロイソキ
ノリンカルボキシレート Ｂoc＝t−ブチルオキシカルボニル Ｃbz＝ベンジルオキシカルボニル ＤＭＦ＝ジメチルホルムアミド ＥtＯＡc＝酢酸エチル Ｅt₂Ｏ＝ジエチルエーテル ＦＡＢ−ＭＳ＝高速原子衝撃質量スペクトル ＴＨＦ＝テトラヒドロフラン ＴＬＣ＝薄層クロマトグラフィー

【００５３】特段の記載がない限り、ｐＨ調整および後
処理は水性の酸または塩基溶液で行った。

【００５４】実施例１ Ｄ−Ｎ−メチルフェニルアラニ
ル−Ｌ−プロリニル−Ｌ−α−メチルアルギニン アル
デヒド［Ｄ−ＭeＰhe−Ｐro−Ａrg(αＭe)−Ｈ］

【化１９】 Ａ）エチル Ｎ(α)ジフェニルメチレン−Ｌ−アラニネ
ートの製造 ベンゾフェノンイミン（５３.４g、２８６mmol)を塩化
メチレン（４００ml）に溶解し、室温で撹拌した。この
溶液にＬ−アラニンエチルエーテル（４３.９g、２８６
mmol）を加え、反応液を室温で４８時間撹拌した。この
反応液を水（２００ml）で３回洗浄した。有機層を分離
し、乾燥させ（ＭgＳＯ₄）、濾液を真空下で濃縮して透
明なオイルを得た。このオイルをペンタンから結晶化さ
せ、標記化合物（７２.１g、９０％）を得た。 ＦＡＢ−ＭＳ ２８２（ＭＨ⁺） Ｃ₁₈Ｈ₁₉ＮＯ₂としての元素分析 計算値：Ｃ ７６.８４；Ｈ ６.８１；Ｎ ４.９８ 実測値：Ｃ ７６.７３；Ｈ ６.６８；Ｎ ５.２２

【００５５】Ｂ）エチルＮ(α)ジフェニルメチレン−Ｄ
Ｌ−(α−プロピオニトリル)アラニネートの製造 無水ＴＨＦ（３００ml）中のエチルＮ(α)ジフェニルメ
チレン−Ｌ−アラニネート（２０g、７１.２mmol）溶液
を１８−クラウン−６（１８.８g、７１.２mmol）、水
素化カリウム（１７.８g、１０６.８mmol）、およびＴ
ＨＦ（１００ml）に加え、不活性雰囲気下で撹拌した。
反応液を０℃に冷却し、ＴＨＦ（２０ml）に溶解したブ
ロモプロピオニトリル（８.９ml、１０６.８mmol）を滴
下した。この反応液を室温まで温め、撹拌した（２時
間）。この反応液に氷酢酸（６.５ml）、水（２５m
l）、およびＴＨＦ（２０ml）を含有する溶液を滴下し
た。この反応液を酢酸エチルおよび水で希釈した。有機
層を分離し、水で３回洗浄し、乾燥させた（ＭgＳ
Ｏ₄）。濾液を真空下で濃縮してオイルを得た。この粗
製のオイルを塩化メチレン/シクロヘキサンに溶解し、
シリカゲルクロマトグラフィーにかけた。（Ａ）ヘキサ
ンおよび（Ｂ）ＥtＯＡcから成る段階勾配系を用いて、
純粋化合物を溶離した。用いた勾配はＥtＯＡcの濃度を
０％から２５％まで増加させた。ＴＬＣプロフィールに
基づいて、分画を集めてプールした。一緒にした分画を
真空下で濃縮して、標記化合物（１５.５g、６５％）の
透明なオイルを得た。 ＦＡＢ−ＭＳ ３３５（ＭＨ⁺）

【００５６】Ｃ）エチルＤＬ−(α−プロピオニトリル)
アラニネートの製造 ジエチルエーテル（９０ml）中のエチルＮ(α)ジフェニ
ルメチレン−ＤＬ−(α−プロピオニトリル)−アラニネ
ート（１５.２g、４５.４mmol）溶液を０℃に冷却し
た。反応液に１Ｎ ＨＣl（５４ml）を滴下した。この反
応液を室温まで温めて撹拌した（２４時間）。水層を分
離し、ジエチルエーテルで３回抽出した。水層を分離
し、真空下で濃縮して標記化合物（９.７g、１００％）
の透明なオイルを得た。 ＦＡＢ−ＭＳ １７１（ＭＨ⁺）

【００５７】Ｄ）エチルＮ(α)t−ブチルオキシカルボ
ニル−ＤＬ−(α−プロピオニトリル)アラニネートの製
造 ＴＨＦ（５０ml）中のエチルＤＬ−(α−プロピオニト
リル)アラニネート（７.８g、３７.８mmol）溶液にジイ
ソプロピルエチルアミン（６.６ml、３７.８mmol）を加
え、室温で撹拌した。ジ−tert−ジ炭酸ブチル（９.６m
l、４１.６mmol）を加えて、反応液を撹拌した（２４時
間）。この反応液をＥtＯＡc/水で希釈し、有機層を分
離した。この有機溶液を０.１Ｎ ＨＣlで２回洗浄し、
乾燥させ（ＭgＳＯ₄）、濾液を真空下で濃縮してオイル
を得た。このオイルをペンタンから結晶化させて標記化
合物（７.４５g、７３％）を得た。 ＦＡＢ−ＭＳ ２７１（ＭＨ⁺） Ｃ₁₃Ｈ₂₂Ｎ₂Ｏ₄としての元素分析 計算値：Ｃ ５７.７６；Ｈ ８.００；Ｎ １０.３６ 実測値：Ｃ ５７.７６；Ｈ ８.３０；Ｎ １０.４５

【００５８】Ｅ）Ｎ(α)t−ブチルオキシカルボニル−
ＤＬ−(α−プロピオニトリル)アラニンの製造 ＴＨＦ（１００ml）および水（５８ml）中のエチルＮ
(α)t−ブチルオキシカルボニル−ＤＬ−(α−プロピオ
ニトリル)−アラニネート（１２.６g、４６.４mmol）溶
液を撹拌し、冷却した（０℃）。反応液に１Ｎ ＮaＯＨ
（４７ml、４７mmol）を加え、この溶液を０℃で３０分
間、そして室温で（４時間）撹拌した。有機溶媒を真空
下で蒸発させ、ＥtＯＡc（１００ml）および水（１００
ml）を残渣に加えた。水層を分離し、溶液を３Ｎ ＨＣl
でpＨ２.８に調節し、酢酸エチル（１５０ml）を加え
た。有機層を分離し、乾燥させ（ＭgＳＯ₄）、濾液を真
空下で濃縮して透明なオイルを得た。このオイルをＥt
ＯＡc/ペンタンから結晶化させて、標記化合物（９.７
g、８６％）を得た。 ＦＡＢ−ＭＳ ２４３（ＭＨ⁺）

【００５９】Ｆ）Ｎ(α)t−ブチルオキシカルボニル−
ＤＬ−(αＭe)オルニチンの製造 エチルアルコール（１３５ml）中のＮ(α)t−ブチルオ
キシカルボニル−ＤＬ−(α−プロピオニトリル)アラニ
ン（１０.８g、４４.４mmol）溶液を、６０℃で２４時
間、Ｐarr振盪器において４.１バール（６０psi）の酸
化白金（３g）上の水素と反応させた。反応混合物を珪
藻土パッドで濾過し、濾液を真空下で濃縮した。固体を
ＴＨＦ、ジエチルエーテル、およびペンタンの混合物で
トリチュレートした。この固体を濾過し、乾燥させて純
粋な標記化合物（８.２g、７５％）を得た。

【００６０】Ｇ）Ｎ(α)t−ブチルオキシカルボニル−
ＤＬ−(αＭe)アルギニンの製造 水（８０ml）中のＮ(α)t−ブチルオキシカルボニル−
ＤＬ−(αＭe)オルニチン（７.６g、３０.９mmol）溶液
を、２Ｎ ＮaＯＨでpＨ１０.５に調節し、硫酸水素Ｏ−
メチルイソ尿素（１０.６g、６１.７mmol）を加えた。
反応液を室温で４８時間撹拌した。この反応液を０℃に
冷却し、固体を濾過し、真空下で乾燥させて、純粋な標
記化合物（５.８g、６１％）を得た。 ＦＡＢ−ＭＳ ２８９（ＭＨ⁺）

【００６１】Ｈ）Ｂoc−ＤＬ−Ａrg(αＭe)(Ｃbz)−Ｏ
Ｈの製造 水（５０ml）中のＮ(α)t−ブチルオキシカルボニル−
ＤＬ−(αＭe)アルギニン（５.７g、１８.４mmol）溶液
を、５Ｎ ＮaＯＨでpＨ１３.４に調節した。反応液を−
５℃まで冷却し、クロロギ酸ベンジル（１１ml、７３.
５mmol）を滴下しながら、５Ｎ ＮaＯＨを用いてpＨ１
３.２〜１３.５に維持した。この反応液を−５℃でさら
に１時間撹拌し、Ｈ₂Ｏ（１００ml）およびＥt₂Ｏ（１
００ml）で希釈した。水層を分離し、Ｅt₂Ｏ（１００m
l）で抽出した。この水層を４ＮＨＣlでpＨ３.０に酸性
化し、ＥtＯＡc（２００ml）で抽出した。この水層をＥ
tＯＡcで２回抽出した。一緒にしたＥtＯＡc層を水で洗
浄し、乾燥させた（ＭgＳＯ₄）。有機溶液を真空下で濃
縮乾固させて、標記化合物（３.９g、５０％）を得た。 ＦＡＢ−ＭＳ ４２３（ＭＨ⁺） Ｃ₂₀Ｈ₃₀Ｎ₄Ｏ₆としての元素分析 計算値：Ｃ ５６.８６；Ｈ ７.１６；Ｎ １３.２６ 実測値：Ｃ ５６.７９；Ｈ ７.１８；Ｎ １３.１３

【００６２】Ｉ）Ｂoc−ＤＬ−Ａrg(αＭe)(Ｃbz)−ラ
クタムの製造 ＴＨＦ（８０ml）中のＢoc−ＤＬ−Ａrg(αＭe)(Ｃbz)
−ＯＨ（３.７６g、８.9mmol）溶液を−１０℃に冷却し
た。反応混合物にトリエチルアミン（１.３ml、９.３mm
ol）、次いでクロロギ酸イソブチル（１.２２ml、９.３
mmol）を加えた。反応液を−１０℃で５分間撹拌し、さ
らにトリエチルアミン（１.３ml、９.３mmol）を加え
た。この反応液を−１０℃で１時間および室温で２４時
間撹拌した。反応液を氷水（２００ml）中に注ぎ、得ら
れた沈殿物を濾過し、冷水で洗浄して、固体を真空下で
乾燥させた。この固体をジエチルエーテルから結晶化さ
せて、純粋な標記化合物（３.４g、９５％）を得た。 ＦＡＢ−ＭＳ ４０５（ＭＨ⁺） Ｃ₂₀Ｈ₂₈Ｎ₄Ｏ₅としての元素分析 計算値：Ｃ ５９.３９；Ｈ ６.９８；Ｎ １３.８５ 実測値：Ｃ ５９.６５；Ｈ ７.１６；Ｎ １３.１６

【００６３】Ｊ）ＤＬ−Ａrg(αＭe)(Ｃbz)−ラクタム・
ＨＣlの製造 ＨＣlガスで飽和させたＥtＯＡc（２０ml）溶液を、室
温でＣＨ₂Ｃl₂（１０ml）に溶解したＢoc−ＤＬ−Ａrg
(αＭe)(Ｃbz)−ラクタム（３.０３g、７.５mmol）溶液
に加えた。反応液を室温で３０分間撹拌した。得られた
沈殿物を濾過し、ジエチルエーテルで洗浄し、真空下で
乾燥させて、純粋な標記化合物（２.５８g、１００％）
を得た。 ＦＡＢ−ＭＳ ３０５（ＭＨ⁺）

【００６４】Ｋ）Ｃbz−Ｄ−ＭeＰhe−Ｐro−Ａrg(αＭ
e)(Ｃbz)−ラクタムの製造 ＤＭＦ（４０ml）中のＣbz−Ｄ−ＭeＰhe−Ｐro−ＯＨ
（１.６４g、３.２mmol）溶液を０℃に冷却した。この
溶液に、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（０.４４
g、３.２mmol）、ジシクロヘキシル−カルボジイミド
（０.６７g、３.２mmol）、ＤＬ−Ａrg(αＭe)(Ｃbz)−
ラクタム・ＨＣl（１.１g、３.２mmol）、およびジイソ
プロピル−エチルアミン（０.８４ml、４.８mmol）を加
えた。反応液を０℃で１時間および室温で４８時間撹拌
した。反応沈殿物を濾過し、濾液を真空下で濃縮してオ
イルを得た。このオイルをＥtＯＡc（２００ml）および
水（１００ml）に溶解した。有機層を分離し、順に１Ｎ
ＮaＨＣＯ₃、水、１.５Ｎ クエン酸、および水で洗浄
した。この有機層を乾燥させ（ＭgＳＯ₄）、濾液を蒸発
させて非結晶固体にした。この粗製の固体をクロロホル
ムに溶解し、シリカゲルクロマトグラフィーにかけた。
（Ａ）クロロホルムおよび（Ｂ）アセトニトリルから成
る段階勾配系を用いて、適正なジアステレオマーのペプ
チドを溶離した。用いた勾配はＣＨ₃ＣＮの濃度を０％
から５０％まで増加させた。ＴＬＣプロフィールに基づ
いて、分画を集めてプールした。一緒にした分画を真空
下で濃縮して、標記化合物（０.７１g、３２％）の透明
なオイルを得た。 ＦＡＢ−ＭＳ ６９７（ＭＨ⁺）

【００６５】Ｌ）Ｃbz−Ｄ−ＭeＰhe−Ｐro−Ａrg(αＭ
e)(Ｃbz)−Ｈの製造 Ｃbz−Ｄ−ＭeＰhe−Ｐro−Ａrg(αＭe)(Ｃbz)−ラクタ
ム（０.６７g、０.９６２mmol）を無水ＴＨＦ（３５m
l）に溶解し、不活性雰囲気下でフラスコ中に入れた。
反応液を−６５℃に冷却し、ＴＨＦ（１.０ml、１.０mm
ol）中の１Ｍ 水素化アルミニウムリチウムを滴下し
た。この反応液を−６５℃で３５分間撹拌した。ＴＨＦ
（５ml）および０.５Ｎ Ｈ₂ＳＯ₄（０.８ml）の溶液を
滴下し、反応液をＥtＯＡc（１００ml）および水（５０
ml）で希釈した。有機層を分離し、水で１回洗浄し、乾
燥させた（ＭgＳＯ₄）。濾液を真空下で濃縮乾燥させて
非結晶固体にして、標記化合物（０.７４g、１１５％）
を得た。 ＴＬＣ Ｒf（Ａ） ０.４５

【００６６】Ｍ）Ｄ−ＭeＰhe−Ｐro−Ａrg(αＭe)−Ｈ
の製造 Ｃbz−Ｄ−ＭeＰhe−Ｐro−Ａrg(αＭe)(Ｃbz)−Ｈ
（０.７４g、１.０５mmol）をエタノール（７５ml）、
水（２５ml）、および１Ｎ ＨＣl（１.９ml、１.９mmo
l）に溶解し、周囲温度および気圧で５％Ｐd/Ｃ触媒
（０.４５g）の存在下に水素化した。反応の完了後、触
媒を珪藻土のパッドによる濾過によって除去した。濾液
を真空下で２０mlに濃縮し、水（５０ml）を加えた。こ
の溶液を、ＢioＲad ＡＧ１−Ｘ８樹脂（水酸化物型）
でpＨ４.０に調節した。樹脂を濾過によって除去し、溶
液を凍結乾燥させて、純粋な標記化合物（０.４３６g、
９０％）を二塩酸・一水和物として得た。 ＦＡＢ−ＭＳ ４３１（ＭＨ⁺）； ［α］_D＝−１０２.９°（Ｃ＝０.５/０.０１Ｎ ＨＣ
l） Ｃ₂₂Ｈ₃₄Ｎ₆Ｏ₃・２ＨＣl・１Ｈ₂Ｏとしての元素分析 計算値：Ｃ ５０.６７；Ｈ ７.３４；Ｎ １６.１２ 実測値：Ｃ ５１.０７；Ｈ ６.９０；Ｎ １５.８８

【００６７】実施例２ Ｄ−１−(１,２,３,４−テトラ
ヒドロイソキノリニルカルボニル)−Ｌ−プロリニル−
Ｌ−α−メチルアルギニン アルデヒド［Ｄ−１−Ｔiq
−Ｐro−Ａrg(αＭe)−Ｈ］

【化２０】 上記の実施例１に記載の方法に従って、標記化合物を二
塩酸塩として製造した。 ＦＡＢ−ＭＳ ４２９（ＭＨ⁺）； ［α］_D＝−３６.１°（Ｃ＝０.５/０.０１Ｎ ＨＣl） Ｃ₂₂Ｈ₃₂Ｎ₆Ｏ₃・２ＨＣlとしての元素分析 計算値：Ｃ ５２.６９；Ｈ ６.８３；Ｎ １６.７６ 実測値：Ｃ ５２.４０；Ｈ ６.６１；Ｎ １６.５７

【００６８】本発明の化合物は自然の体内血栓分解能力
を有意に妨害することなしに（本化合物は繊維素溶解に
は低い阻害効果を持つ）、血液凝固に関する他のプロテ
イナーゼおよび非酵素蛋白質と比べてトロンビンを選択
的に阻害するするものと考えられる。さらに、この選択
性は血栓溶解および繊維素溶解の実質的な妨害なしに血
栓溶解物質の使用を可能にするものと考えられる。

【００６９】本発明の１つの態様においては、処置を必
要とする哺乳類に有効（トロンビン阻害）用量の式Ｉで
示される化合物を投与することからなる、哺乳類のトロ
ンビンを阻害する方法を提供する。

【００７０】本発明の方法が意図するトロンビン阻害は
医学的な治療および／または予防的な処置の双方を適切
なものとして包含する。

【００７１】別の態様では、本発明はヒトまたは動物に
おいて、トロンビンの阻害を必要とする状態の処置に関
する。本発明の化合物はヒトを含む動物において血液お
よび組織内の血栓症および過凝固の処置または予防にお
いて有用であることが期待される。本化合物が潜在的な
有用性を持つ疾患は血液および組織における血栓症およ
び過凝固の処置または予防にある。本化合物が処置およ
び／または予防において潜在的な有用性を持つ疾患は、
静脈血栓症および肺塞栓症、心筋虚血症のような動脈血
栓症、心筋梗塞症、不安定狭心症、血栓症由来の発作お
よび末梢動脈血栓症を含む。さらに、本化合物には冠動
脈疾患、脳動脈疾患および末梢動脈疾患のような動脈硬
化症の予防に有用性が期待される。さらに、本化合物に
は心筋梗塞における血栓溶解にも有用性が期待されてい
る。さらに、本化合物には血栓溶解、経皮管腔間血管形
成術（ＰＴＣＡ）および冠バイパス手術後の再閉塞への
処置または予防における有用性が期待されている。さら
にマイクロ外科手術後の再血栓症の予防に有用性が期待
される。さらに、本化合物には人工の臓器および心臓弁
に関する抗凝固処置に有用性が期待される。さらに、本
化合物には血液透析および播種性静脈内凝固における抗
凝固処置に有用性が期待される。さらに別の期待される
有用性はカテーテルおよび患者の生体内で使用される機
械装置の洗浄において、および血液、血漿および他の血
液製剤に対する生体外抗凝固薬として有用性が期待され
る。さらに、本化合物は転移を含む癌ならびに関節炎お
よび糖尿病を含む炎症性疾患のような血液凝固が基本的
な寄与過程であるか、第二次病理の原因であろう他の疾
病および疾患において有用性が期待される。本抗凝固化
合物は経口的にまたは非経口的、たとえば静脈内注入
（iv）、筋肉内注射（im）または皮下に（sc）に、投与
される。

【００７２】治療的および／または予防的な効果を得る
ために本発明により投与される化合物の具体的用量は勿
論、例えば、投与される化合物、投与速度、および処置
される症状を含む、症例をめぐる個々の状況により決定
される。

【００７３】前記有用性の各々のための典型的な日用量
は約０.０１mg/kgと約１０００mg/kgとの間である。投
与処法は変化してよく、たとえば予防的な使用では１日
１回で投与してよく、１日３〜５回の複数回投与が適当
であることもある。特殊な状況では、本発明の化合物は
約０.０１mg/kg/時と約２０mg/kg/時との間の速度、好
ましくは約０.１mg/kg/時と約５mg/kg/時との間の速度
のｉｖ注入で投与される。

【００７４】また、本発明の方法は血栓溶解薬と組合わ
せて、たとえば組織プラスミノーゲンアクティベータ
（ｔ−ＰＡ）、修飾ｔ−ＰＡ、ストレプトキナーゼまた
はウロキナーゼとともに実用される。血塊の形成が起
き、動脈または静脈が部分的または完全に閉鎖された時
には通常血栓溶解薬を用いる。本発明の化合物はこの溶
解薬の使用前または同時に、またはその使用後に単独で
投与され、好ましくは、さらに血栓形成の再発を予防す
るためにアスピリンと共に投与される。

【００７５】また、本発明の方法は血小板凝集を阻止す
る血小板グリコプロテイン受容体（IIb／IIIa）拮抗薬
とともに実用される。本発明の化合物はIIb／IIIa拮抗
薬の使用前または同時に、またはその使用後に血塊の発
生もしくは再発を予防するために投与することができ
る。

【００７６】本発明の方法はアスピリンとともに実用さ
れる。本発明の化合物はアスピリンの投与前または同時
に、またはその使用後に血栓再発を予防するために投与
することができる。前記のように、好ましくは本発明の
化合物は血栓溶解薬およびアスピリンとともに投与され
る。

【００７７】本発明は前記治療方法において使用するた
めの医薬製剤も提供する。本発明の医薬製剤は、式Ｉで
示される化合物のトロンビン阻害有効量を薬学的に許容
しうる担体、添加剤または希釈剤とともに含む。経口投
与のためには抗血栓化合物はゼラチンカプセル剤または
錠剤（結合剤、滑沢剤などのような添加剤を含んでいて
よい）に製剤化される。非経口的投与のためには抗血栓
薬は、たとえば生理学的食塩水（０.９％）、５％デキ
ストロース、リンゲル液などのような医薬的に許容しう
る希釈剤中に製剤化される。

【００７８】本発明の化合物は約０.１mgと約１０００m
gとの間の用量を含む単位用量製剤として製剤化するこ
とができる。本化合物は、例えば硫酸塩、酢酸塩または
燐酸塩のような、医薬的に許容しうる塩の型であるのが
好ましい。単位用量製剤の一例は５mgの本発明の化合物
を医薬的に許容しうる塩として１０mlの無菌ガラスアン
プル内に含む。単位用量製剤の他の例は、無菌アンプル
内の等張食塩水２０ml中に、医薬的に許容しうる塩とし
ての本発明の化合物約１０mgを含む。

【００７９】本発明の化合物は経口、経直腸、経皮、皮
下、静脈内、筋肉内および鼻内を含む種々の経路で投与
することができる。本発明の化合物は投与前に製剤化す
るのが好ましい。従って、本発明の別の態様は、式Ｉで
示される化合物またはその医薬的に許容しうる塩または
溶媒和物の有効量を医薬的に許容しうる担体、希釈剤ま
たは添加剤と共に含む医薬製剤である。

【００８０】そのような製剤における活性成分は、その
製剤の０.１重量％から９９.９重量％を占める。「薬学
的(医薬的)に許容しうる」とは、担体、希釈剤または添
加剤がその製剤の他の成分に適合し、その処方に対して
有害ではないことを意味する。本発明の医薬製剤は、周
知の容易に入手しうる添加剤を用いて公知の操作により
製造する。本発明の組成物を調製するに当り、活性成分
は通常、担体と混合するか、担体で希釈するか、または
カプセル、分包包装、紙または他の容器の形でありうる
担体内に封入されよう。担体が希釈剤の役目をする時、
これは固体、半−固体または液体物質でありうるが、こ
れは活性成分のための基剤、添加剤または媒体として作
用する。そこで、本組成物は錠剤、丸剤、粉末剤、ロゼ
ンジ剤、オブラート剤、分包包装剤、エリキシール剤、
懸濁剤、乳剤、液剤、シロップ剤、エアロゾル剤（固体
としてまたは液体媒体中）、軟および硬ゼラチンカプセ
ル剤、坐剤、無菌注射液剤、無菌包装粉末などのような
形であることができる。本発明の組成物は、患者に対し
て投与後に活性成分の迅速的、持続的または遅延的な放
出をもたらすように当業界で周知の操作を採用して製剤
化しうる。

【００８１】

【製剤例】以下の製剤例は説明のためのものであって、
如何なる意味でも本発明の範囲を限定することを意図す
るものではない。「活性成分」は、もちろん、式Ｉで示
される化合物またはその医薬的に許容しうる塩または溶
媒和物を意味する。製剤例１ 下記成分を用いて硬ゼラチンカプセルを製造
する：

【００８２】製剤例２ 下記成分を用いて錠剤を製造す
る： 各成分を混合、打錠して６６５mg重の錠剤を造る。

【００８３】製剤例３ 下記成分を含むエアロゾル液剤
を製造する： 活性化合物をエタノールと混合し、混合物をプロペラン
ト２２の一部に加え、−３０℃に冷却し、充填器に移
す。次に所要量をステンレス鋼容器に充填し、残りのプ
ロペラントで希釈する。次にバルブ部品を容器に取付け
る。

【００８４】製剤例４ 活性成分６０mgを含む錠剤を以
下のようにして製造する： 活性成分 ６０ mg 澱粉 ４５ mg 微結晶セルロース ３５ mg ポリビニルピロリドン ４ mg （１０％水溶液として） ナトリウムカルボキシメチル澱粉 ４.５ mg ステアリン酸マグネシウム ０.５ mg タルク １ mg 合計 １５０ mg 活性成分、澱粉およびセルロースを米局方４５番篩で篩
過し、よく混合する。ポリビニルピロリドン含有水溶液
を得られた粉末と混合し、次に混合物を米局方１４番篩
で篩過する。得られる顆粒を５０℃で乾燥し、米局方１
８番篩で篩過する。次にあらかじめ米局方６０番篩で篩
過しておいたナトリウムカルボキシメチル澱粉、ステア
リン酸マグネシウムおよびタルクを顆粒に加え、混合
後、打錠機で打錠して各１５０mg重の錠剤を得る。

【００８５】製剤例５ 活性成分８０mgを含むカプセル
剤を以下のようにして製造する： 活性成分 ８０ mg 澱粉 ５９ mg 微結晶セルロース ５９ mg ステアリン酸マグネシウム ２ mg 合計 ２００ mg 活性成分、セルロース、澱粉およびステアリン酸マグネ
シウムを混合し、米局方４５番篩を通し、２００mg量を
硬ゼラチンカプセルに充填する。

【００８６】製剤例６ 活性成分２２５mgを含む坐剤を
以下のようにして製造する： 活性成分 ２２５ mg 飽和脂肪酸グリセリド ２０００ mg 合計 ２２２５ mg 活性成分を米局方６０番篩で篩過し、予め必要最小限の
熱量を用いて融解しておいた飽和脂肪酸グリセリドに懸
濁する。次に混合物を２g容の坐剤金型に注入し、放冷
する。

【００８７】製剤例７ ５ml用量当り活性成分５０mgを
含む懸濁剤を次のようにして製造する： 活性成分 ５０mg ナトリウムカルボキシメチルセルロース ５０mg シロップ １．２５ml 安息香酸液 ０．１０ml 矯味剤 適量 着色剤 適量 精製水を加えて合計 ５ ml 活性成分を米局方４５番篩で篩過し、ナトリウムカルボ
キシメチルセルロースおよびシロップと混合して軟らか
いペーストとする。安息香酸液、矯味剤および着色剤を
水の一部で希釈し、撹拌しながら添加する。次に十分量
の水を加え、所定容量とする。

【００８８】製剤例８ 静脈内製剤を以下のようにして
製造しうる： 活性成分 １００ mg 等張食塩水 １０００ ml 前記成分の溶液を一般的に毎分１mlの速度で対象の静脈
内に投与する。

【００８９】本発明によって提供される化合物（式Ｉ）
は経口的に活性であり、哺乳類におけるトロンビンの作
用を選択的に阻害する。

【００９０】本発明の化合物が有効で、経口的に活性な
トロンビン阻害物質であることは、次の検定１種または
それ以上で評価される。

【００９１】トロンビンの阻害は発色原基質であるＮ−
ベンゾイルーＬ−フェニルアラニル−Ｌ−バリル−Ｌ−
アルギニル−ｐ−ニトロアニリドをトロンビンに加水分
解させて検定法で測定されるトロンビンのアミダーゼ活
性の試験管内阻害により証明される。

【００９２】この検定は次のように実施する：５０μl
の緩衝液（０.０３Ｍ トリス、０.１５Ｍ ＮaＣl、pＨ
７.４）と、２５μlのウシのトロンビンまたはヒトのト
ロンビン液［０.２１mg/ml 血栓状態のウシトロンビン
（Parke-Davis）、または精製ヒトトロンビン（Enzyme
Research Laboratories、South Bend、Indiana）、約８
ＮＩＨ単位/ml（同じ緩衝液中）］および２５μＬの被
検化合物溶液（５０％メタノール中、v/v）を混合す
る。１５０μlの発色原基質の水溶液（０.２５mg/ml）
を添加し、基質の加水分解速度をp−ニトロアニリンの
放出による４０５nmの反応を監視して測定する。標準曲
線を遊離トロンビン濃度を加水分解速度に対してプロッ
トすることにより作成する。次に各検定でテスト化合物
について観測された加水分解速度を標準曲線を用いて
「遊離トロンビン」値に変換する。結合トロンビン（テ
スト化合物に結合したもの）は各検定で観測された遊離
トロンビンの量を各検定で用いたトロンビンの初期値か
ら差引くことによって算出する。各検定における遊離の
阻害物質の量は、結合トロンビンのモル数を、添加した
阻害物質（テスト化合物）のモル数から差引くことによ
って算出する。

【００９３】Ｋass値はトロンビンとテスト化合物
（Ｉ）との間の反応のための仮の平衡定数である。

【数１】トロンビン ＋ Ｉ ⇔ トロンビン−Ｉ Ｋass＝［トロンビン−Ｉ］／［（トロンビン）×
（Ｉ）］ Ｋass値をテスト化合物の全濃度範囲について算出し、
平均値をモル当りリットルの単位で報告する。

【００９４】ヒトのトロンビンについて前記した操作に
実質的に従い、ヒトの他の血液凝固系セリンプロテアー
ゼを用い、フィブリン溶解系プロテアーゼを用いて、下
記の適当な発色原基質について、本発明の化合物の凝固
因子セリンプロテアーゼおよびフィブリン溶解性セリン
プロテアーゼに関する選択性ならびにそれらがフィブリ
ン溶解系セリンプロテアーゼ阻害が実質的に存在しない
ことを評価する。トロンビン阻害物質は好ましくはウロ
キナーゼ、組織プラスミノーゲンアクティベータ（ｔ−
ＰＡ）およびストレプトキナーゼにより誘発されるフィ
ブリノシスを温存すべきである。これはストレプトキナ
ーゼ、ｔ−ＰＡまたはウロキナーゼ血栓溶解療法に対す
る補佐薬としてのこれらの薬物の治療的使用に対して、
および内因性フィブリン溶解性−温存（ｔ−ＰＡおよび
ウロキナーゼに関して）抗血栓薬としてのこれらの薬物
の使用に対して重要であろう。フィブリン溶解性プロテ
アーゼのアミダーゼ活性に関する阻害の欠如に加え、こ
のようなフィブリン溶解系の温存は、各フィブリン分解
性プラスミノーゲンアクティベータによるヒトの血漿血
塊およびそれらの分解を使用して研究することができ
る。

【００９５】ヒトのＸ、Ｘa、IＸa、ＸIaおよびＸIIa因
子はＥnzyme Ｒesearch Ｌaboratories、サウスベン
ド、インディアナから、ヒトのウロキナーゼはＬeo Ｐh
armaceuticals、デンマークから購入し、組換え活性化
プロテインＣ（aＰＣ）はイーライ・リリー社で実質的
に米国特許第４９８１９５２号に従って製造する。発色
原基質：Ｎ−ベンゾイル−Ｉle−Ｇlu−Ｇly−Ａrg−p
−ニトロアニリド（Ｘa因子用）、Ｎ−Ｃbz−Ｄ−Ａrg
−Ｇly−Ａrg−p−ニトロアニリド（Ｘa因子の基質とし
てIＸa因子検定用）、ピログルタミル−Ｐro−Ａrg−p
−ニトロアニリド（ＸIa因子用およびaＰＣ用）、Ｈ−
Ｄ−Ｐro−Ｐhe−Ａrg−p−ニトロアニリド（ＸIIa因子
用）およびピログルタミル−Ｇly−Ａrg−p−ニトロア
ニリド（ウロキナーゼ用）はＫabi Ｖitrum、ストック
ホルム、スゥエーデンまたはＭidwest Ｂiotech，Ｆish
ers、インディアナから購入する。牛トリプシンはＷort
hington Ｂiochemicals、フリーホルド、ニュージャー
ジーから、ヒトの血漿カリクレインはＫabi Ｖitrum、
ストックホルム、スゥエーデンから購入する。血漿カリ
クレイン用の発色原基質Ｈ−Ｄ−Ｐro−Ｐhe−Ａrg−p
−ニトロアニリドはＫabi Ｖitrum、ストックホルム、
スゥエーデンから購入する。ヒトのトロンビン用および
トリプシン用の基質Ｎ−ベンゾイル−Ｐhe−Ｖal−Ａrg
−p−ニトロアニリドは本発明の化合物のために前記し
た操作に従って既知のペプチド結合法を用いて商業的に
入手可能な反応物質から合成したか、またはＭidwest
Ｂiotech，Ｆishers、インディアナから購入する。

【００９６】ヒトのプラスミンはＢoehringer Ｍannhei
m、インディアナポリス、インディアナから購入し、nt
−ＰＡは単鎖活性対照物としてＡmerican Ｄiagnostic
a、グリニッチ、コネチカットから購入し、修飾−t−Ｐ
Ａ６（mt−ＰＡ６）はイ−ライ・リリー社で公知方法
［Burckら、J.Biol.Chem., 265, 5120-5177 (1990年)］
の操作により製造する。プラスミンの発色原基質Ｈ−Ｄ
−Ｖal−Ｌeu−Ｌys−p−ニトロアニリドおよび組織プ
ラスミノーゲン活性化因子（t−ＰＡ）基質Ｈ−Ｄ−Ｉl
e−Ｐro−Ａrg−p−ニトロアニリドはＫabi Ｖitrum、
ストックホルム、スゥエーデンから購入する。

【００９７】前記の発色原基質で、３字の略号、Ｉle、
Ｇlu、Ｇly、Ｐro、Ａrg、Ｐhe、Ｖal、ＬeuおよびＬys
は対応するアミノ酸基イソロイシン、グルタミン酸、グ
リシン、プロリン、アルギニン、フェニルアラニン、バ
リン、ロイシンおよびリジンのそれぞれを示すために用
いる。

【００９８】次の表１は式Ｉで示される表示化合物で得
られたＫass値を挙げるものである。

【表１】 阻害性 Ｋass ｘ １０⁶（Ｌ/mol）実施例 ウシトロンビン トリプシン プラスミン Ｘa t−ＰＡ １ １.１ ０.００４ ０.０００５ ０.０００３ ０ ２ ０.２２ ０.０１４ ０.０００８ ０.００１ ０

【００９９】材料 犬の血漿は無麻酔雑種犬（両性、Ｈazelton−ＬＲＥ、
カラマズー、ミシガン、米国）から静脈穿刺により採取
し、３.８％クエン酸塩に入れる。フィブリノーゲンは
新鮮犬血漿から調製し、ヒトのフィブリノーゲンは期日
内ＡＣＤヒト血液の画分Ｉ−２から公知操作および指示
書に従って調製する。Ｓmith、Ｂiochem.Ｊ.、１８５
巻、１〜１１頁（１９８０年）およびＳmithなど、Ｂio
chemistry、１１巻、２９５８〜２９６７頁（１９７２
年）。ヒトのフィブリノーゲン（９８％純／プラスミン
不含）はＡmerican Ｄiagnostica、グリニッチ、コネチ
カットからのものである。フィブリノーゲンＩ−２製品
の放射能標識は以前に報告されたようにして行う。Ｓmi
thなど、Ｂiochemistry、１１巻、２９５８〜２９６７
頁（１９７２年）。ウロキナーゼはＬeo Ｐharmaceutic
als、デンマークから２２００プラウ単位／バイアルと
して購入する。ストレプトキナーゼはＨoechst−Ｒouss
el Ｐharmaceuticals、ソマービル、ニュージャージー
から購入する。

【０１００】方法：t−ＰＡによるヒト血漿血塊の分解に対する効果 ヒトの血漿血塊はマイクロ試験管内で５０μlトロンビ
ン（７３ＮＩＨ単位/ml）を０.０２２９uＣi−１２５ヨ
ード標識フィブリノーゲンを含むヒトの血漿（１００μ
l）に加えて形成する。血塊分解は血塊に５０μlのウロ
キナーゼまたはストレプトキナーゼ（５０、１００また
は１０００単位/ml）で重積し、室温で２０時間インキ
ュベートすることによって研究する。インキュベーショ
ン後、試験管をＢeckman Ｍicrofuge内で遠心分離す
る。２５μlの上清液を１.０ml容の０.０３Ｍ トリス/
０.１５Ｍ ＮaＣl緩衝液に添加し、ガンマ計数を行う。
計数対照である１００％分解はトロンビン（および置換
すべき緩衝液）を除外することによって得る。トロンビ
ン阻害物質である化合物を１、５および１０mg/μlの濃
度で重積溶液中に入れて予想されるフィブリン分解の阻
害について評価する。概略のIＣ₅₀値の近似値はフィブ
リン分解物質の指定濃度で５０％分解を表すであろう値
のデータ値から直線的外挿により予測する。

【０１０１】抗凝固活性 物質 犬血漿およびラット血漿は無麻酔雑種犬（両性、Ｈazel
ton−ＬＲＥ、カラマゾー、ミシガン、米国）または麻
酔したＳprague−Ｄawleyラット（Ｈarlan Ｓprague−
Ｄawley社、インディアナポリス、インディアナ、米
国）から静脈穿刺により採取し、３.８％クエン酸塩に
入れる。フィブリノーゲンは期日内ＡＣＤヒト血液の画
分Ｉ−２から公知操作および指示書に従って調製する。
Ｓmith、Ｂiochem.Ｊ.、１８５巻、１〜１１頁（１９８
０年）およびＳmithなど、Ｂiochemistry、１１巻、２
９５８〜２９６７頁（１９７２年）。ヒトのフィブリノ
ーゲンは（９８％純／プラスミン不含品として）はＡme
rican Ｄiagnostica、グリニッチ、コネチカットから購
入する。凝固試薬であるＡＣＴＩＮ、トロンボプラスチ
ンおよびヒトの血漿はＢaxter Ｈealthcare社、Ｄade
Ｄivision、マイアミ、フロリダからのものである。Ｐa
rke−Ｄavis（Ａnn Ｄetroit, ミシガン）からの牛トロ
ンビンを血漿中の凝固検定法のために用いる。

【０１０２】方法 抗凝固測定 凝固検定操作は前記の通りである。Ｓmithなど、Ｔhrom
bosis Ｒesearch、５０巻、１６３〜１７４頁（１９８
８年）。全ての凝固検定測定にはＣoＡＳｃｒｅｅｎｅ
ｒ凝固装置（Ａｍｅｒｉｃａｎ ＬＡＢor社）を用い
る。プロトロンビン時間（ＰＴ）は０.０５mlの食塩水
と０.０５mlのトロンボプラスチン−Ｃ試薬とを被検血
漿０.０５mlに添加して測定する。活性化した部分トロ
ンボプラスチン時間（ＡＰＴＴ）は０.０５mlの被検血
漿を０.０５mlのアクチン試薬と１２０秒間インキュベ
ートし、続いて０.０５mlのＣaＣl₂（０.０２Ｍ）を添
加することのよって測定する。トロンビン時間（ＴＴ）
は０.０５mlの食塩水と０.０５mlのトロンビン（１０Ｎ
ＩＨ単位/ml）とを０.０５mlの被検血漿に添加すること
によって測定する。式Ｉで示される化合物を広範囲の濃
度にわたってヒトまたは動物の血漿に添加してＡＰＴ
Ｔ、ＰＴおよびＴＴ検定について延長効果を測定する。
直線的外挿を行って各検定で凝固時間を倍加するに必要
な濃度を予測する。

【０１０３】動物 雄性のＳprague−Ｄawleyラット（３５０〜４２５ｇ、
Ｈarlan Ｓprague−Ｄawley社、インディアナポリス、
ＩＮ）をキシラジン（２０mg/kg、皮下）とケタミン
（１２０mg/kg、皮下）とで麻酔し、温水ブランケット
（３７℃）に固定した。頚動脈血管にカニューレを点滴
用に挿入した。

【０１０４】動静脈シャントモデル 左頚静脈および右頚動脈に２０cm長のポリエチレンＰＲ
６０チュービングのカニューレを挿入した。内腔内に綿
糸（５cm）を持つ大きい管（ＰＥ１９０）の６cm中央断
面を長断面間に摩擦固定して動静脈シャント回路を完成
した。血液をシャント内に１５分間にわたって循環した
後に、糸を注意深く取出して秤量した。濡れた糸の重量
を糸と血栓の合計重量から差引いた（Ｊ.Ｒ.Ｓmith、Ｂ
r.Ｊ.Ｐharmacol.、７７巻：２９頁、１９８２年参
照）。

【０１０５】動脈損傷のＦeＣl₃モデル 頚動脈を中心線腹側頚管切開により隔離する。各動脈の
下に熱電対を置き、血管温度を帯チャート記録紙上に連
続的に記録する。チューブのカフ（０.０５８ＩＤ×０.
０７７ＯＤ×４mm、Ｂaxter医術級シリコン）を長軸方
向に切断し、頚動脈の周りの熱電対の直上に置く。Ｆe
Ｃl₃６水和物を水に溶かし、濃度（２０％）をＦeＣl₃
のみの実際の重量で表示する。動脈を損傷して血栓症を
誘発するために、カフに２.８５μlをピペットで入れ
て、熱電対プローブ上の動脈を潜らせる。動脈閉塞は迅
速な温度低下で示される。閉塞までの時間を分単位で示
し、ＦeＣl₃の添加と血管温度の迅速な温度低下との間
の経過時間を表す（Ｋ.Ｄ.Ｋurz、Ｔhromb.Ｒes.、６０
巻：２６９頁、１９９０年参照）。

【０１０６】自発的血栓分解モデル 試験管内データはペプチドトロンビン阻害物質がトロン
ビンならびにプラスミンおよび組織プラスミノーゲンア
クティベータのような他のセリンプロテアーゼを阻害す
ることを示唆した。これらの化合物が生体内でフィブリ
ノリシスも阻害するかどうかを評価するため、自発的ト
ロンボリシスの速度を肺循環に標識全血血塊を移植する
ことにより、測定する。ラット血液（１ml）をウシトロ
ンビン（４ＩＵ、Ｐarke Ｄavis）および¹²⁵Ｉ−ヒトフ
ィブリノーゲン（５μＣi、ＩＣＮ）と迅速に混合し、
直ちにシリコン処理管に取り、３７℃で１時間インキュ
ベートする。熟成した血栓を管から取出し、切断して１
cm断片とし、ノルマル食塩水で３回洗浄し、各断片をガ
ンマ計数管でカウントする。カウント数の判った断片を
カテーテル内に吸引し、これを続いて頚静脈に移植す
る。カテーテルのチップを右心房の近くまで進め、血塊
を浮かせて肺循環内に入れる。移植１時間後、心臓およ
び肺臓を取出し、別々にカウントする。血栓溶解を次の
百分率で表示する：

【数２】％トロンボリシス＝［（注入cpm−肺臓cpm）］
／（注入cpm）×１００ 移植した血塊のフィブリノリシス溶解は時間依存的に発
生する（Ｊ.Ｐ.Ｃlozel、Ｃardiovas.Ｐharmacol.、１
２巻２管：５２０頁、１９８８年参照）。

【０１０７】凝固パラメータ 血漿トロンビン時間（ＴＴ）および活性化部分トロンボ
プラスチン時間（ＡＰＴＴ）をフィブロメータで測定す
る。血液を頚静脈カテーテルから採取し、クエン酸ナト
リウム（３.８％、血液９部に対して１部）を含む注射
筒に集める。ＴＴを測定するために、ラット血漿（０.
１ml）を食塩水（０.１ml）およびウシのトロンビン
（０.１ml、３０Ｕ/ml トリス緩衝液、Ｐarke Ｄavis）
と３７℃で混合する。ＡＰＴＴについては、血漿（０.
１ml）およびＡＰＴＴ溶液（０.１ml、Ｏrganon Ｔekni
ka）を５分間（３７℃）でインキュベートし、ＣaＣl₂
（０.１ml、０.０２５Ｍ）を加えて凝固を開始させる。
検定を２回行い、平均する。

【０１０８】生物学的利用能指数 ＴＴの増加が親化合物によるトロンビン阻害のみに由来
するとの仮定に基づき、生物学的活性の一つである血漿
トロンビン時間（ＴＴ）を親化合物の測定の代わりに用
いる。該トロンビン阻害物質のＴＴに対する効果の時間
的経過を麻酔ラットへのi.v.迅速投与後および絶食無麻
酔ラットへの経口投与後に測定する。血液量および処置
時間から前処置反応値に戻るまでの時間経過を測定する
のに要する測定点の制限のため、２集団のラットを用い
る。各標本集団は交代に順番で各時点を表す。時間経過
の平均ＴＴを用いて曲線下面積（ＡＵＣ）を算出する。
生物学的利用能指数は次式により算出し、相対的活性百
分率として表示する。

【０１０９】血漿ＴＴ時間経過の曲線下面積（ＡＵＣ）
を測定し、用量について補正する。この生物学的利用能
を「％相対的活性」と命名し、次のようにして算出する

【数３】％相対的活性＝（ＡＵＣpo÷ＡＵＣiv）×（用
量iv÷用量po）×１００

【０１１０】化合物 化合物溶液は毎日新しくノルマル食塩水中に調製し、単
回注射するか、または実験の１５分前から始め、実験中
に継続的に点滴する。実験は動静脈シャントモデルでは
１５分間、動脈損傷のＦeＣl₃モデルおよび突発性血栓
溶解モデルでは６０分間である。単回注射用量はi.v.で
は１ml/kgおよび経口投与では５ml/kgであり、点滴容量
は３ml/時間である。

【０１１１】統計学 結果を平均値±ＳＥＭで表す。偏差の統計的有意差を検
出するために一元解析法を用い、次にＤunnett検定を応
用してどの平均値に差があるか検出する。等平均値の帰
無仮説を否定する有意差水準はＰ＜０.０５である。

【０１１２】動物 雄性犬（ビーグル、１８月齢〜２年、１２〜１３kg、Ｍ
arshall Ｆarms、ノースローズ、ニューヨーク１４５１
６）を一夜絶食し、ピュリナ保証処方食餌（Ｐurina Ｍ
ills、セントルイス、ミズーリ）を薬物投与２４０分前
に給餌する。水は自由摂取させる。部屋は温度６６〜７
４°Ｆ、相対湿度４５〜５０％に維持、０６００〜１８
００時まで照明する。

【０１１３】薬動力学的モデル 被検化合物を投与直前に無菌０.９％食塩水に溶解して
５mg/ml剤とする。犬に被検化合物２mg/kg用量を経口投
与により単回投与する。投与から０.２５、０.５、０.
７５、１、２、３、４および６時間後に血液標本（４.
５ml）を頭静脈から採取する。標本はクエン酸処理した
減圧式注射器内に入れ、氷上に保存し、遠心分離して血
漿を得る。血漿標本をジニトロフェニルヒドラジン誘導
体とし、ＨＰＬＣ（Ｚorbax ＳＢ−Ｃ８カラム）によ
り、燐酸でpＨ７に調整したメタノール／５００ｍＭ 酢
酸ナトリウム（６０:４０、v/v）で溶出する。被検化合
物の血漿内濃度を記録し、薬動力学的パラメータである
離脱速度定数Ｋｅ、全クリアランスＣlt、分配容積
Ｖ_D、血漿被検化合物最大濃度到達時間Ｔmax、血漿被検
化合物最大濃度時間Ｔmaxにおける濃度Ｃmax、血漿中半
減期ｔ０.５、曲線下面積ＡＵＣおよび被検化合物吸収
率Ｆを算出するために用いる。

【０１１４】イヌ冠状動脈血栓症モデル イヌの外科手術および装置はＪacksonなど、Ｃirculati
on、８２巻、９３０〜９４０頁（１９９０年）に記載の
通り。雑種イヌ（６〜７月齢、両性、Ｈａｚｅｌｔｏｎ
−ＬＲＥ、カラマズー、ＭＩ、米国）をペントバルビタ
ールナトリウム（３０ｍｇ／ｋｇ、静脈内、i.v.）で麻
酔し、挿管し、室の空気は循環する。呼吸容積と呼吸数
を調整して血液ＰＯ₂、ＰＣＯ₂およびpＨを正常限界内
に維持する。第II誘導ＥＣＧを記録するために皮下針状
電極を挿入する。

【０１１５】左頚静脈および頚動脈を左中外側頚切開に
より隔離する。動脈血圧（ＡＢＰ）を頚動脈に挿入した
補正済みＭillarトランスデューサ（ＭＰＣ−５００
型、Ｍillar Ｉnstruments、ヒューストン、Ｔx、米
国）で連続的に測定する。頚静脈にカニューレして実験
中に血液標本を採取する。さらに、両後肢の大腿静脈に
もカニューレして被検化合物を投与する。

【０１１６】第５肋間腔で左開胸術を行い、心臓を心臓
周囲クラドルに懸垂する。左旋回枝冠動脈（ＬＣＸ）を
第一主斜行心室間分枝近くで１〜２cm断片を隔離する。
２６ゲージ針装着電線陽電極（Ｔeflon^R被覆、３０ゲー
ジ銀メッキ銅線）３〜４cm長をＬＣＸに挿入し、動脈内
膜表面に接触させて（実験の終りに確認する）設置す
る。陰極を皮下（s.c.）部位に設置して刺激回路を完成
する。可変プラスチック閉塞器をＬＣＸ周囲で電極の部
分上に設置する。補正済み電磁流プローブ（Ｃarolina
Ｍedical Ｅlectronics、Ｋing、ＮＣ、米国）を冠血流
（ＣＢＦ）の測定のために陽極の近くでＬＣＸの辺に設
置する。閉塞器をＬＣＸの機械的閉塞１０秒後に観測さ
れる充血性血流反応の４０〜５０％阻害を実現するよう
に調整する。すべての血流力学およびＥＣＧ測定を記録
しデータ処理系（Ｍ３０００型、Ｍodular Ｉnstrument
s、マルバーン、ＰＡ、米国）で解析する。

【０１１７】血栓形成および化合物投与法 １００μＡの直流（ＤＣ）を陽極に流してＬＣＸの最内
部に電気分解的損傷を作製する。電流を６０分間維持し
た後に止めて、管が閉塞しているかどうか観察する。血
栓形成はＬＣＸが完全に閉塞する（ＣＢＦゼロおよびＳ
−Ｔ部分の増加として検出する）まで自然に進行させ
る。閉塞血栓形成１時間後に化合物投与を開始する。本
発明の化合物０.５および１mg/kg/時の２時間点滴を血
栓薬（たとえば、組織プラスミノーゲンアクティベー
タ、ストレプトキナーゼ、ＡＰＳＡＣ）の点滴と同時に
開始する。被検化合物の投与３時間後に再潅流を行う。
血栓溶解成功後に３０分間以上持続するＣＢＦゼロを冠
状動脈の再閉塞と定義する。

【０１１８】血液学およびテンプレート出血時間の測定 全血細胞数、ヘモグロビンおよびヘマトクリット値はク
エン酸塩化（３.８％）血液（クエン酸塩１部、血液９
部）標本４０μＬを血液分析器（Ｃell−Ｄyn ９００、
Ｓequoia-Ｔurner、モントビュー、ＣＡ、米国）を用い
て測定する。歯肉テンプレート出血時間をＳimplate II
bleding time 装置（Ｏrganon Ｔeknikaダーラム、Ｎ
Ｃ、米国）を用いて測定する。この装置を用いてイヌの
左顎の上または下顎どちらかに歯肉に水平な２個の切開
をする。各切開は３mm幅×２mm深さである。切開し、ス
トップウオッチを用いて出血する長さを測定した。切開
部から血液が泌出したら綿の塊を用いて吸取る。テンプ
レート出血時間は切開から出血停止までの時間である。
出血時間は被検化合物投与直前（０分）、点滴６０分、
被検化合物投与終了（１２０分）および実験終了時に測
定する。

【０１１９】全データは一元的偏差分析（ＡＮＯＶＡ）
により分析し、続いてスチューデント−ノイマン−クエ
ルスのポスト・ホック・ｔ−検定により有意性を測定す
る。反復測定ＡＮＯＶＡを用いて実験内時点間有意差を
測定する。最低ｐ＜０.０５の水準にある値を統計的な
差があるとする。全測定値は平均値±ＳＥＭである。全
実験は米国生理学会の指導要領に従って行う。さらに詳
細な操作の記載は、Ｊacksonなど、Ｊ.Ｃardiovasc.Ｐh
armacol.、２１巻、５８７〜５９９頁（１９９３年）に
見出される。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 ジェラルド・フロイド・スミス アメリカ合衆国46217インディアナ州イン ディアナポリス、クウィーンズウッド・コ ート825番

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 式Ｉ： 【化１】 ［式中、Ｘは式： 【化２】 で示される基であり；Ｑは−ＯＨ、Ｃ₁〜Ｃ₄アルコキ
   シ、または−ＮＨ−Ａであり；Ａは水素、Ｃ₁〜Ｃ₄アル
   キル、アセチル、ＣＦ₃Ｃ(Ｏ)−、ＣＦ₃ＣＦ₂Ｃ(Ｏ)
   −、Ｒ"ＳＯ₂−、ベンジルオキシカルボニル、またはｔ
   −ブチルオキシカルボニルであり；Ｒ'は水素、Ｃ₁〜Ｃ
   ₄アルキル、フェニル、またはベンジルであり；Ｒ"はＣ
   ₁〜Ｃ₄アルキル、−(ＣＨ₂)_d−ＣＯＯＨ、または未置換
   もしくは置換されたアリール（Ａr）(ここに、アリール
   はフェニル、ナフチル、硫黄、酸素および窒素から選択
   される同一もしくは異なる１もしくは２個のヘテロ原子
   をもつ５もしくは６員の未置換もしくは置換された芳香
   族複素環、または硫黄、酸素および窒素から選択される
   同一もしくは異なる１もしくは２個のヘテロ原子をもつ
   ９もしくは１０員の未置換もしくは置換された縮合二環
   式芳香族複素環である）であり；ｄは１、２、または３
   であり；ｍは０、１、または２であり；ｎは０、１、ま
   たは２であり；Ｙは式： 【化３】 で示される基であり；Ｒはメチルまたはエチルであり；
   そしてＺは水素、Ｃ₁〜Ｃ₄アルキル、Ｃ₁〜Ｃ₄アルコキ
   シ、ヒドロキシ、ハロ、またはＲaＳＯ₂ＮＨ−（ここ
   に、ＲaはＣ₁〜Ｃ₄アルキルである）である］で示され
   る化合物またはその薬学的に許容し得る塩、または該化
   合物もしくはその塩の薬学的に許容し得る溶媒和物。
2. 【請求項２】 化合物がＤ−Ｎ−メチルフェニルアラニ
   ル−Ｌ−プロリニル−Ｌ−α−メチルアルギニン アル
   デヒドおよびＤ−１−(１,２,３,４−テトラヒドロイソ
   キノリニルカルボニル）−Ｌ−プロリニル−α−メチル
   アルギニンアルデヒドから選択される、請求項１に記載
   の化合物またはその塩もしくは溶媒和物。
3. 【請求項３】 薬学的に許容し得る担体、希釈剤または
   賦形剤と共に、請求項１または２のいずれかに記載の式
   Ｉの化合物またはその薬学的に許容し得る塩もしくは溶
   媒和物を含有する医薬製剤。