RU2566724C9 - Композиции и способы модуляции smn2 сплайсинга у субъекта - Google Patents
Композиции и способы модуляции smn2 сплайсинга у субъекта Download PDFInfo
- Publication number
- RU2566724C9 RU2566724C9 RU2012101491A RU2012101491A RU2566724C9 RU 2566724 C9 RU2566724 C9 RU 2566724C9 RU 2012101491 A RU2012101491 A RU 2012101491A RU 2012101491 A RU2012101491 A RU 2012101491A RU 2566724 C9 RU2566724 C9 RU 2566724C9
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- dose
- antisense
- subject
- administration
- administered
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 64
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title description 14
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 231
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 claims abstract description 199
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 claims abstract description 114
- 208000002320 spinal muscular atrophy Diseases 0.000 claims abstract description 96
- 238000012230 antisense oligonucleotides Methods 0.000 claims abstract description 86
- 239000000074 antisense oligonucleotide Substances 0.000 claims abstract description 84
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims abstract description 46
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 claims abstract description 43
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 claims abstract description 38
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 claims abstract description 35
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 27
- 101100203485 Homo sapiens SMN2 gene Proteins 0.000 claims abstract description 25
- 102000053564 human SMN2 Human genes 0.000 claims abstract description 23
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 8
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 claims description 125
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 claims description 71
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 58
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 58
- 150000003833 nucleoside derivatives Chemical class 0.000 claims description 52
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 claims description 37
- 238000007910 systemic administration Methods 0.000 claims description 34
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 claims description 30
- 210000002161 motor neuron Anatomy 0.000 claims description 27
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 26
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 26
- 230000037396 body weight Effects 0.000 claims description 23
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 claims description 15
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 claims description 14
- 238000007913 intrathecal administration Methods 0.000 claims description 13
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 claims description 13
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 claims description 5
- RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K thiophosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=S RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 5
- LRSASMSXMSNRBT-UHFFFAOYSA-N 5-methylcytosine Chemical group CC1=CNC(=O)N=C1N LRSASMSXMSNRBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 claims description 2
- 208000003954 Spinal Muscular Atrophies of Childhood Diseases 0.000 claims 3
- 201000004815 juvenile spinal muscular atrophy Diseases 0.000 claims 1
- 208000032471 type 1 spinal muscular atrophy Diseases 0.000 claims 1
- 208000032521 type II spinal muscular atrophy Diseases 0.000 claims 1
- 208000032527 type III spinal muscular atrophy Diseases 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 66
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 10
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract description 8
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 133
- 102100021947 Survival motor neuron protein Human genes 0.000 description 111
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 93
- 125000003835 nucleoside group Chemical group 0.000 description 87
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 84
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 68
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 67
- 101000617738 Homo sapiens Survival motor neuron protein Proteins 0.000 description 54
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 53
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 53
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 53
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 40
- WWFDJIVIDXJAQR-FFWSQMGZSA-N 1-[(2R,3R,4R,5R)-4-[[(2R,3R,4R,5R)-5-(4-amino-5-methyl-2-oxopyrimidin-1-yl)-3-[[(2R,3R,4R,5R)-3-[[(2R,3R,4R,5R)-5-(4-amino-5-methyl-2-oxopyrimidin-1-yl)-3-[[(2R,3R,4R,5R)-3-[[(2R,3R,4R,5R)-3-[[(2R,3R,4R,5R)-3-[[(2R,3R,4R,5R)-5-(4-amino-5-methyl-2-oxopyrimidin-1-yl)-3-[[(2R,3R,4R,5R)-3-[[(2R,3R,4R,5R)-3-[[(2R,3R,4R,5R)-3-[[(2R,3R,4R,5R)-3-[[(2R,3R,4R,5R)-3-[[(2R,3R,4R,5R)-3-[[(2R,3R,4R,5R)-5-(4-amino-5-methyl-2-oxopyrimidin-1-yl)-3-[[(2R,3R,4R,5R)-3-[[(2R,3R,4R,5R)-5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[(2R,3R,4R,5R)-5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxy-4-(2-methoxyethoxy)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphinothioyl]oxy-4-(2-methoxyethoxy)oxolan-2-yl]methoxy-sulfanylphosphoryl]oxy-4-(2-methoxyethoxy)-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphinothioyl]oxy-4-(2-methoxyethoxy)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphinothioyl]oxy-5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-4-(2-methoxyethoxy)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphinothioyl]oxy-4-(2-methoxyethoxy)-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphinothioyl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)-4-(2-methoxyethoxy)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphinothioyl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)-4-(2-methoxyethoxy)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphinothioyl]oxy-4-(2-methoxyethoxy)-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphinothioyl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)-4-(2-methoxyethoxy)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphinothioyl]oxy-4-(2-methoxyethoxy)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphinothioyl]oxy-4-(2-methoxyethoxy)-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphinothioyl]oxy-4-(2-methoxyethoxy)-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphinothioyl]oxy-4-(2-methoxyethoxy)-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphinothioyl]oxy-4-(2-methoxyethoxy)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphinothioyl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)-4-(2-methoxyethoxy)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphinothioyl]oxy-4-(2-methoxyethoxy)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphinothioyl]oxy-5-(hydroxymethyl)-3-(2-methoxyethoxy)oxolan-2-yl]-5-methylpyrimidine-2,4-dione Chemical group COCCO[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=S)O[C@@H]2[C@@H](COP(S)(=O)O[C@@H]3[C@@H](COP(O)(=S)O[C@@H]4[C@@H](COP(O)(=S)O[C@@H]5[C@@H](COP(O)(=S)O[C@@H]6[C@@H](COP(O)(=S)O[C@@H]7[C@@H](COP(O)(=S)O[C@@H]8[C@@H](COP(O)(=S)O[C@@H]9[C@@H](COP(O)(=S)O[C@@H]%10[C@@H](COP(O)(=S)O[C@@H]%11[C@@H](COP(O)(=S)O[C@@H]%12[C@@H](COP(O)(=S)O[C@@H]%13[C@@H](COP(O)(=S)O[C@@H]%14[C@@H](COP(O)(=S)O[C@@H]%15[C@@H](COP(O)(=S)O[C@@H]%16[C@@H](COP(O)(=S)O[C@@H]%17[C@@H](COP(O)(=S)O[C@@H]%18[C@@H](CO)O[C@H]([C@@H]%18OCCOC)n%18cc(C)c(=O)[nH]c%18=O)O[C@H]([C@@H]%17OCCOC)n%17cc(C)c(N)nc%17=O)O[C@H]([C@@H]%16OCCOC)n%16cnc%17c(N)ncnc%16%17)O[C@H]([C@@H]%15OCCOC)n%15cc(C)c(N)nc%15=O)O[C@H]([C@@H]%14OCCOC)n%14cc(C)c(=O)[nH]c%14=O)O[C@H]([C@@H]%13OCCOC)n%13cc(C)c(=O)[nH]c%13=O)O[C@H]([C@@H]%12OCCOC)n%12cc(C)c(=O)[nH]c%12=O)O[C@H]([C@@H]%11OCCOC)n%11cc(C)c(N)nc%11=O)O[C@H]([C@@H]%10OCCOC)n%10cnc%11c(N)ncnc%10%11)O[C@H]([C@@H]9OCCOC)n9cc(C)c(=O)[nH]c9=O)O[C@H]([C@@H]8OCCOC)n8cnc9c(N)ncnc89)O[C@H]([C@@H]7OCCOC)n7cnc8c(N)ncnc78)O[C@H]([C@@H]6OCCOC)n6cc(C)c(=O)[nH]c6=O)O[C@H]([C@@H]5OCCOC)n5cnc6c5nc(N)[nH]c6=O)O[C@H]([C@@H]4OCCOC)n4cc(C)c(N)nc4=O)O[C@H]([C@@H]3OCCOC)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)O[C@H]([C@@H]2OCCOC)n2cnc3c2nc(N)[nH]c3=O)O[C@H]1n1cnc2c1nc(N)[nH]c2=O WWFDJIVIDXJAQR-FFWSQMGZSA-N 0.000 description 38
- 108020000948 Antisense Oligonucleotides Proteins 0.000 description 38
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 34
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 34
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 31
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 29
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 29
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 25
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 24
- 210000000278 spinal cord Anatomy 0.000 description 24
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 23
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 22
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 21
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 21
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 21
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 20
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 20
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 20
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 20
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 20
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 19
- 101150081851 SMN1 gene Proteins 0.000 description 18
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 18
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 17
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 17
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 16
- -1 Bicyclic nucleoside Chemical class 0.000 description 15
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 15
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 15
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 14
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 13
- QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N nitrogen group Chemical group [N] QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- YIMATHOGWXZHFX-WCTZXXKLSA-N (2r,3r,4r,5r)-5-(hydroxymethyl)-3-(2-methoxyethoxy)oxolane-2,4-diol Chemical compound COCCO[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@H]1O YIMATHOGWXZHFX-WCTZXXKLSA-N 0.000 description 11
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 11
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 11
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 9
- 101150069235 Snrpn gene Proteins 0.000 description 9
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 9
- 230000008499 blood brain barrier function Effects 0.000 description 9
- 210000001218 blood-brain barrier Anatomy 0.000 description 9
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 9
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 9
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 9
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 9
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 8
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 8
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 8
- 125000000956 methoxy group Chemical group [H]C([H])([H])O* 0.000 description 8
- 230000032405 negative regulation of neuron apoptotic process Effects 0.000 description 8
- 239000008177 pharmaceutical agent Substances 0.000 description 8
- 108700024394 Exon Proteins 0.000 description 7
- 108091027974 Mature messenger RNA Proteins 0.000 description 7
- 210000000663 muscle cell Anatomy 0.000 description 7
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 7
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 7
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 7
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 7
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 7
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 description 6
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 6
- 230000008859 change Effects 0.000 description 6
- 238000011161 development Methods 0.000 description 6
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 6
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 6
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 6
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 6
- 230000008175 fetal development Effects 0.000 description 6
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 6
- 210000005230 lumbar spinal cord Anatomy 0.000 description 6
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 6
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 6
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 6
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 6
- 235000021092 sugar substitutes Nutrition 0.000 description 6
- 239000003765 sweetening agent Substances 0.000 description 6
- 238000011269 treatment regimen Methods 0.000 description 6
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 5
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 5
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 5
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 5
- 230000006870 function Effects 0.000 description 5
- 108020004445 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Proteins 0.000 description 5
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 5
- 210000003140 lateral ventricle Anatomy 0.000 description 5
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 5
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 description 5
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 5
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 5
- 150000002829 nitrogen Chemical class 0.000 description 5
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 5
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 5
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 5
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 4
- 108091005461 Nucleic proteins Proteins 0.000 description 4
- ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N Uracil Chemical compound O=C1C=CNC(=O)N1 ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 4
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 4
- 230000009471 action Effects 0.000 description 4
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 description 4
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 4
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 4
- OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N cytosine Chemical compound NC=1C=CNC(=O)N=1 OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 4
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 4
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 4
- OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N folic acid Chemical compound C=1N=C2NC(N)=NC(=O)C2=NC=1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 4
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 4
- 102000006602 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Human genes 0.000 description 4
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 4
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 4
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 4
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 4
- 229920000728 polyester Polymers 0.000 description 4
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 description 4
- 230000004044 response Effects 0.000 description 4
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 4
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 4
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 4
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 4
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 4
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 4
- HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N D-ribofuranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H]1O HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N 0.000 description 3
- 208000026350 Inborn Genetic disease Diseases 0.000 description 3
- 108091092195 Intron Proteins 0.000 description 3
- 101100203487 Mus musculus Smn1 gene Proteins 0.000 description 3
- 101100148113 Mus musculus Snrpn gene Proteins 0.000 description 3
- 101150015954 SMN2 gene Proteins 0.000 description 3
- RTKIYFITIVXBLE-UHFFFAOYSA-N Trichostatin A Natural products ONC(=O)C=CC(C)=CC(C)C(=O)C1=CC=C(N(C)C)C=C1 RTKIYFITIVXBLE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000001594 aberrant effect Effects 0.000 description 3
- 125000000304 alkynyl group Chemical group 0.000 description 3
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 3
- 125000002619 bicyclic group Chemical group 0.000 description 3
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 description 3
- 210000005013 brain tissue Anatomy 0.000 description 3
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 3
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 3
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 3
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 3
- 230000001934 delay Effects 0.000 description 3
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 3
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 3
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 3
- 210000004055 fourth ventricle Anatomy 0.000 description 3
- 208000016361 genetic disease Diseases 0.000 description 3
- 125000000623 heterocyclic group Chemical group 0.000 description 3
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 3
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 3
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 3
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 3
- 238000001964 muscle biopsy Methods 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 229940002612 prodrug Drugs 0.000 description 3
- 239000000651 prodrug Substances 0.000 description 3
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 3
- 230000029058 respiratory gaseous exchange Effects 0.000 description 3
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 3
- 210000002330 subarachnoid space Anatomy 0.000 description 3
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 3
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 3
- 210000000115 thoracic cavity Anatomy 0.000 description 3
- RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N thymine Chemical compound CC1=CNC(=O)NC1=O RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 3
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 3
- RTKIYFITIVXBLE-QEQCGCAPSA-N trichostatin A Chemical compound ONC(=O)/C=C/C(/C)=C/[C@@H](C)C(=O)C1=CC=C(N(C)C)C=C1 RTKIYFITIVXBLE-QEQCGCAPSA-N 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- RHUYHJGZWVXEHW-UHFFFAOYSA-N 1,1-Dimethyhydrazine Chemical compound CN(C)N RHUYHJGZWVXEHW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ABEXEQSGABRUHS-UHFFFAOYSA-N 16-methylheptadecyl 16-methylheptadecanoate Chemical compound CC(C)CCCCCCCCCCCCCCCOC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC(C)C ABEXEQSGABRUHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000003903 2-propenyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])=C([H])[H] 0.000 description 2
- KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 7H-purine Chemical compound N1=CNC2=NC=NC2=C1 KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HBAQYPYDRFILMT-UHFFFAOYSA-N 8-[3-(1-cyclopropylpyrazol-4-yl)-1H-pyrazolo[4,3-d]pyrimidin-5-yl]-3-methyl-3,8-diazabicyclo[3.2.1]octan-2-one Chemical class C1(CC1)N1N=CC(=C1)C1=NNC2=C1N=C(N=C2)N1C2C(N(CC1CC2)C)=O HBAQYPYDRFILMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229930024421 Adenine Natural products 0.000 description 2
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N Adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1N=CN2 GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 2
- FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-M Butyrate Chemical compound CCCC([O-])=O FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N Butyric acid Natural products CCCC(O)=O FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000000824 D-ribofuranosyl group Chemical group [H]OC([H])([H])[C@@]1([H])OC([H])(*)[C@]([H])(O[H])[C@]1([H])O[H] 0.000 description 2
- 101000746373 Homo sapiens Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Proteins 0.000 description 2
- HEFNNWSXXWATRW-UHFFFAOYSA-N Ibuprofen Chemical compound CC(C)CC1=CC=C(C(C)C(O)=O)C=C1 HEFNNWSXXWATRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000764238 Isis Species 0.000 description 2
- 241000282567 Macaca fascicularis Species 0.000 description 2
- OVBPIULPVIDEAO-UHFFFAOYSA-N N-Pteroyl-L-glutaminsaeure Natural products C=1N=C2NC(N)=NC(=O)C2=NC=1CNC1=CC=C(C(=O)NC(CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OVBPIULPVIDEAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 2
- FTALBRSUTCGOEG-UHFFFAOYSA-N Riluzole Chemical compound C1=C(OC(F)(F)F)C=C2SC(N)=NC2=C1 FTALBRSUTCGOEG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101150113275 Smn gene Proteins 0.000 description 2
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101710191985 Survival factor 1 Proteins 0.000 description 2
- IBBCCCQXAHGCEX-UHFFFAOYSA-N [N].CC1=CNC(=O)NC1=O Chemical compound [N].CC1=CNC(=O)NC1=O IBBCCCQXAHGCEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 2
- DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N acridine Chemical compound C1=CC=CC2=CC3=CC=CC=C3N=C21 DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 2
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 description 2
- 125000003342 alkenyl group Chemical group 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical group C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 2
- 238000011260 co-administration Methods 0.000 description 2
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 2
- 229940104302 cytosine Drugs 0.000 description 2
- 230000002354 daily effect Effects 0.000 description 2
- 230000034994 death Effects 0.000 description 2
- NIJJYAXOARWZEE-UHFFFAOYSA-N di-n-propyl-acetic acid Natural products CCCC(C(O)=O)CCC NIJJYAXOARWZEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 2
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 2
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 2
- 239000011724 folic acid Substances 0.000 description 2
- 229960000304 folic acid Drugs 0.000 description 2
- 235000019152 folic acid Nutrition 0.000 description 2
- 150000002243 furanoses Chemical group 0.000 description 2
- UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N guanine Chemical compound O=C1NC(N)=NC2=C1N=CN2 UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 2
- 238000005417 image-selected in vivo spectroscopy Methods 0.000 description 2
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 2
- 238000012739 integrated shape imaging system Methods 0.000 description 2
- 238000000185 intracerebroventricular administration Methods 0.000 description 2
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 2
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 2
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 2
- 210000004705 lumbosacral region Anatomy 0.000 description 2
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 2
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 2
- 230000007659 motor function Effects 0.000 description 2
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 2
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 2
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 2
- 231100000915 pathological change Toxicity 0.000 description 2
- 230000036285 pathological change Effects 0.000 description 2
- 230000000737 periodic effect Effects 0.000 description 2
- 230000003285 pharmacodynamic effect Effects 0.000 description 2
- RDOWQLZANAYVLL-UHFFFAOYSA-N phenanthridine Chemical compound C1=CC=C2C3=CC=CC=C3C=NC2=C1 RDOWQLZANAYVLL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 2
- 125000004437 phosphorous atom Chemical group 0.000 description 2
- 238000000554 physical therapy Methods 0.000 description 2
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 2
- 229920000768 polyamine Polymers 0.000 description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 2
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 2
- 230000011514 reflex Effects 0.000 description 2
- 229960004181 riluzole Drugs 0.000 description 2
- 230000037432 silent mutation Effects 0.000 description 2
- 239000012064 sodium phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 210000001324 spliceosome Anatomy 0.000 description 2
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 2
- 150000003568 thioethers Chemical class 0.000 description 2
- 210000000211 third ventricle Anatomy 0.000 description 2
- 229940113082 thymine Drugs 0.000 description 2
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 2
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 2
- 229940035893 uracil Drugs 0.000 description 2
- MSRILKIQRXUYCT-UHFFFAOYSA-M valproate semisodium Chemical compound [Na+].CCCC(C(O)=O)CCC.CCCC(C([O-])=O)CCC MSRILKIQRXUYCT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 229960000604 valproic acid Drugs 0.000 description 2
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 2
- HSINOMROUCMIEA-FGVHQWLLSA-N (2s,4r)-4-[(3r,5s,6r,7r,8s,9s,10s,13r,14s,17r)-6-ethyl-3,7-dihydroxy-10,13-dimethyl-2,3,4,5,6,7,8,9,11,12,14,15,16,17-tetradecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-17-yl]-2-methylpentanoic acid Chemical group C([C@@]12C)C[C@@H](O)C[C@H]1[C@@H](CC)[C@@H](O)[C@@H]1[C@@H]2CC[C@]2(C)[C@@H]([C@H](C)C[C@H](C)C(O)=O)CC[C@H]21 HSINOMROUCMIEA-FGVHQWLLSA-N 0.000 description 1
- QGVQZRDQPDLHHV-DPAQBDIFSA-N (3s,8s,9s,10r,13r,14s,17r)-10,13-dimethyl-17-[(2r)-6-methylheptan-2-yl]-2,3,4,7,8,9,11,12,14,15,16,17-dodecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthrene-3-thiol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](S)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 QGVQZRDQPDLHHV-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 1
- LRANPJDWHYRCER-UHFFFAOYSA-N 1,2-diazepine Chemical compound N1C=CC=CC=N1 LRANPJDWHYRCER-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VSNHCAURESNICA-NJFSPNSNSA-N 1-oxidanylurea Chemical compound N[14C](=O)NO VSNHCAURESNICA-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 1
- FGRBYDKOBBBPOI-UHFFFAOYSA-N 10,10-dioxo-2-[4-(N-phenylanilino)phenyl]thioxanthen-9-one Chemical compound O=C1c2ccccc2S(=O)(=O)c2ccc(cc12)-c1ccc(cc1)N(c1ccccc1)c1ccccc1 FGRBYDKOBBBPOI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TZMSYXZUNZXBOL-UHFFFAOYSA-N 10H-phenoxazine Chemical compound C1=CC=C2NC3=CC=CC=C3OC2=C1 TZMSYXZUNZXBOL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZMZGFLUUZLELNE-UHFFFAOYSA-N 2,3,5-triiodobenzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC(I)=CC(I)=C1I ZMZGFLUUZLELNE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VEPOHXYIFQMVHW-XOZOLZJESA-N 2,3-dihydroxybutanedioic acid (2S,3S)-3,4-dimethyl-2-phenylmorpholine Chemical compound OC(C(O)C(O)=O)C(O)=O.C[C@H]1[C@@H](OCCN1C)c1ccccc1 VEPOHXYIFQMVHW-XOZOLZJESA-N 0.000 description 1
- OALHHIHQOFIMEF-UHFFFAOYSA-N 3',6'-dihydroxy-2',4',5',7'-tetraiodo-3h-spiro[2-benzofuran-1,9'-xanthene]-3-one Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC(I)=C(O)C(I)=C1OC1=C(I)C(O)=C(I)C=C21 OALHHIHQOFIMEF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- 101150053137 AIF1 gene Proteins 0.000 description 1
- 108091010877 Allograft inflammatory factor 1 Proteins 0.000 description 1
- 102100040121 Allograft inflammatory factor 1 Human genes 0.000 description 1
- 241000239290 Araneae Species 0.000 description 1
- BSYNRYMUTXBXSQ-UHFFFAOYSA-N Aspirin Chemical compound CC(=O)OC1=CC=CC=C1C(O)=O BSYNRYMUTXBXSQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000006374 C2-C10 alkenyl group Chemical group 0.000 description 1
- 229930186147 Cephalosporin Natural products 0.000 description 1
- JZUFKLXOESDKRF-UHFFFAOYSA-N Chlorothiazide Chemical compound C1=C(Cl)C(S(=O)(=O)N)=CC2=C1NCNS2(=O)=O JZUFKLXOESDKRF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 206010011224 Cough Diseases 0.000 description 1
- 108060002716 Exonuclease Proteins 0.000 description 1
- 102100031181 Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- VSNHCAURESNICA-UHFFFAOYSA-N Hydroxyurea Chemical compound NC(=O)NO VSNHCAURESNICA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010062767 Hypophysitis Diseases 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 101000746372 Mus musculus Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Proteins 0.000 description 1
- 206010028289 Muscle atrophy Diseases 0.000 description 1
- 238000000636 Northern blotting Methods 0.000 description 1
- REYJJPSVUYRZGE-UHFFFAOYSA-N Octadecylamine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCCN REYJJPSVUYRZGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PCNDJXKNXGMECE-UHFFFAOYSA-N Phenazine Natural products C1=CC=CC2=NC3=CC=CC=C3N=C21 PCNDJXKNXGMECE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091036407 Polyadenylation Proteins 0.000 description 1
- 239000004952 Polyamide Substances 0.000 description 1
- 206010036790 Productive cough Diseases 0.000 description 1
- CZPWVGJYEJSRLH-UHFFFAOYSA-N Pyrimidine Chemical compound C1=CN=CN=C1 CZPWVGJYEJSRLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010240 RT-PCR analysis Methods 0.000 description 1
- 102000006382 Ribonucleases Human genes 0.000 description 1
- 108010083644 Ribonucleases Proteins 0.000 description 1
- 102000004598 Small Nuclear Ribonucleoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108010003165 Small Nuclear Ribonucleoproteins Proteins 0.000 description 1
- 108020005038 Terminator Codon Proteins 0.000 description 1
- RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-N Thiophosphoric acid Chemical class OP(O)(S)=O RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000018936 Vitellaria paradoxa Nutrition 0.000 description 1
- FPKBIYKAYFGTKG-UHFFFAOYSA-N [5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-2-[[[2-[[[2-[[[2-[[[2-[[[2-[[[2-[[[2-[[[2-[[[2-[[[2-[[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-2-[[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-2-[[[2-[[[2-[[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl]oxy-hydroxyphosphoryl]oxymethyl]-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-3-yl]oxy-hydroxyphosphoryl]oxymethyl]-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-3-yl]oxy-hydroxyphosphoryl]oxymethyl]oxolan-3-yl]oxy-hydroxyphosphoryl]oxymethyl]oxolan-3-yl]oxy-hydroxyphosphoryl]oxymethyl]-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-3-yl]oxy-hydroxyphosphoryl]oxymethyl]-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-3-yl]oxy-hydroxyphosphoryl]oxymethyl]-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-3-yl]oxy-hydroxyphosphoryl]oxymethyl]-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-3-yl]oxy-hydroxyphosphoryl]oxymethyl]-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-3-yl]oxy-hydroxyphosphoryl]oxymethyl]-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-3-yl]oxy-hydroxyphosphoryl]oxymethyl]-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-3-yl]oxy-hydroxyphosphoryl]oxymethyl]-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-3-yl]oxy-hydroxyphosphoryl]oxymethyl]-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-3-yl]oxy-hydroxyphosphoryl]oxymethyl]-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-3-yl]oxy-hydroxyphosphoryl]oxymethyl]oxolan-3-yl] [3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methyl hydrogen phosphate Chemical compound Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O FPKBIYKAYFGTKG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JZLUWZPEJDRDEO-UHFFFAOYSA-N [N].C1=CN=CN=C1 Chemical compound [N].C1=CN=CN=C1 JZLUWZPEJDRDEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NTURXXALYKMFBQ-UHFFFAOYSA-N [N].C1=NC=C2NC=NC2=N1 Chemical compound [N].C1=NC=C2NC=NC2=N1 NTURXXALYKMFBQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZKMHLJJPNICASC-UHFFFAOYSA-N acetic acid adamantane Chemical compound C(C)(=O)O.C12CC3CC(CC(C1)C3)C2.C23CC1CC(CC(C2)C1)C3 ZKMHLJJPNICASC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001138 acetylsalicylic acid Drugs 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 1
- 125000002877 alkyl aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000005600 alkyl phosphonate group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 125000005122 aminoalkylamino group Chemical group 0.000 description 1
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 1
- PYKYMHQGRFAEBM-UHFFFAOYSA-N anthraquinone Natural products CCC(=O)c1c(O)c2C(=O)C3C(C=CC=C3O)C(=O)c2cc1CC(=O)OC PYKYMHQGRFAEBM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000004056 anthraquinones Chemical class 0.000 description 1
- 230000003178 anti-diabetic effect Effects 0.000 description 1
- 229940124350 antibacterial drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003472 antidiabetic agent Substances 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 210000000576 arachnoid Anatomy 0.000 description 1
- 125000003710 aryl alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000025341 autosomal recessive disease Diseases 0.000 description 1
- 210000003050 axon Anatomy 0.000 description 1
- 229940125717 barbiturate Drugs 0.000 description 1
- HNYOPLTXPVRDBG-UHFFFAOYSA-N barbituric acid Chemical compound O=C1CC(=O)NC(=O)N1 HNYOPLTXPVRDBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- ZYGHJZDHTFUPRJ-UHFFFAOYSA-N benzo-alpha-pyrone Natural products C1=CC=C2OC(=O)C=CC2=C1 ZYGHJZDHTFUPRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003613 bile acid Substances 0.000 description 1
- 230000008275 binding mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 230000008436 biogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 1
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 1
- 229940124587 cephalosporin Drugs 0.000 description 1
- 150000001780 cephalosporins Chemical class 0.000 description 1
- 230000002490 cerebral effect Effects 0.000 description 1
- 210000000038 chest Anatomy 0.000 description 1
- 108091006116 chimeric peptides Proteins 0.000 description 1
- 229960002155 chlorothiazide Drugs 0.000 description 1
- 150000001841 cholesterols Chemical class 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008045 co-localization Effects 0.000 description 1
- 238000011284 combination treatment Methods 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- 235000001671 coumarin Nutrition 0.000 description 1
- 150000004775 coumarins Chemical class 0.000 description 1
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 1
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 125000001995 cyclobutyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])(*)C1([H])[H] 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 239000005549 deoxyribonucleoside Substances 0.000 description 1
- KPUWHANPEXNPJT-UHFFFAOYSA-N disiloxane Chemical class [SiH3]O[SiH3] KPUWHANPEXNPJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940088679 drug related substance Drugs 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- CHNUOJQWGUIOLD-NFZZJPOKSA-N epalrestat Chemical compound C=1C=CC=CC=1\C=C(/C)\C=C1/SC(=S)N(CC(O)=O)C1=O CHNUOJQWGUIOLD-NFZZJPOKSA-N 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 102000013165 exonuclease Human genes 0.000 description 1
- 239000004744 fabric Substances 0.000 description 1
- ZPAKPRAICRBAOD-UHFFFAOYSA-N fenbufen Chemical compound C1=CC(C(=O)CCC(=O)O)=CC=C1C1=CC=CC=C1 ZPAKPRAICRBAOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001395 fenbufen Drugs 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 238000007306 functionalization reaction Methods 0.000 description 1
- 230000009395 genetic defect Effects 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 125000003827 glycol group Chemical group 0.000 description 1
- 150000004820 halides Chemical class 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 125000000592 heterocycloalkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 229960001330 hydroxycarbamide Drugs 0.000 description 1
- 229960001680 ibuprofen Drugs 0.000 description 1
- 238000002991 immunohistochemical analysis Methods 0.000 description 1
- 238000000099 in vitro assay Methods 0.000 description 1
- 238000005462 in vivo assay Methods 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 238000011221 initial treatment Methods 0.000 description 1
- 238000009434 installation Methods 0.000 description 1
- 239000000138 intercalating agent Substances 0.000 description 1
- 238000007917 intracranial administration Methods 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 230000009602 intrauterine growth Effects 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 238000007914 intraventricular administration Methods 0.000 description 1
- DKYWVDODHFEZIM-UHFFFAOYSA-N ketoprofen Chemical compound OC(=O)C(C)C1=CC=CC(C(=O)C=2C=CC=CC=2)=C1 DKYWVDODHFEZIM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000991 ketoprofen Drugs 0.000 description 1
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 1
- 230000002045 lasting effect Effects 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 210000005229 liver cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000003141 lower extremity Anatomy 0.000 description 1
- 238000009593 lumbar puncture Methods 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- PTQMMNYJKCSPET-OMHQDGTGSA-N mibolerone Chemical compound C1C[C@]2(C)[C@](O)(C)CC[C@H]2[C@@H]2[C@H](C)CC3=CC(=O)CC[C@@H]3[C@H]21 PTQMMNYJKCSPET-OMHQDGTGSA-N 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 125000004573 morpholin-4-yl group Chemical group N1(CCOCC1)* 0.000 description 1
- 150000002780 morpholines Chemical class 0.000 description 1
- 230000020763 muscle atrophy Effects 0.000 description 1
- 201000000585 muscular atrophy Diseases 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 1
- 210000001640 nerve ending Anatomy 0.000 description 1
- 210000003061 neural cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 description 1
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 description 1
- 208000018360 neuromuscular disease Diseases 0.000 description 1
- 210000000715 neuromuscular junction Anatomy 0.000 description 1
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 125000001181 organosilyl group Chemical group [SiH3]* 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 125000004430 oxygen atom Chemical group O* 0.000 description 1
- 125000000913 palmityl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- ONTNXMBMXUNDBF-UHFFFAOYSA-N pentatriacontane-17,18,19-triol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCC(O)C(O)C(O)CCCCCCCCCCCCCCCC ONTNXMBMXUNDBF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002895 phenylbutazone Drugs 0.000 description 1
- VYMDGNCVAMGZFE-UHFFFAOYSA-N phenylbutazonum Chemical compound O=C1C(CCCC)C(=O)N(C=2C=CC=CC=2)N1C1=CC=CC=C1 VYMDGNCVAMGZFE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002467 phosphate group Chemical group [H]OP(=O)(O[H])O[*] 0.000 description 1
- PTMHPRAIXMAOOB-UHFFFAOYSA-L phosphoramidate Chemical compound NP([O-])([O-])=O PTMHPRAIXMAOOB-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- XKCQASMZNPBLKI-UHFFFAOYSA-N phosphorosooxymethane Chemical compound COP=O XKCQASMZNPBLKI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 230000006461 physiological response Effects 0.000 description 1
- 230000001817 pituitary effect Effects 0.000 description 1
- 210000003635 pituitary gland Anatomy 0.000 description 1
- 229920002647 polyamide Polymers 0.000 description 1
- 235000020004 porter Nutrition 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 159000000001 potassium salts Chemical class 0.000 description 1
- 229960003101 pranoprofen Drugs 0.000 description 1
- 230000035935 pregnancy Effects 0.000 description 1
- 230000009237 prenatal development Effects 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 208000022074 proximal spinal muscular atrophy Diseases 0.000 description 1
- 210000000449 purkinje cell Anatomy 0.000 description 1
- 125000002294 quinazolinyl group Chemical class N1=C(N=CC2=CC=CC=C12)* 0.000 description 1
- 230000004202 respiratory function Effects 0.000 description 1
- 210000003019 respiratory muscle Anatomy 0.000 description 1
- 239000002342 ribonucleoside Substances 0.000 description 1
- 125000000548 ribosyl group Chemical group C1([C@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO)* 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 230000003584 silencer Effects 0.000 description 1
- 210000002027 skeletal muscle Anatomy 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 208000024794 sputum Diseases 0.000 description 1
- 210000003802 sputum Anatomy 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 238000005728 strengthening Methods 0.000 description 1
- 125000000547 substituted alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 229960005349 sulfur Drugs 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 150000007970 thio esters Chemical class 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-O triethylammonium ion Chemical compound CC[NH+](CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 210000004291 uterus Anatomy 0.000 description 1
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 238000009423 ventilation Methods 0.000 description 1
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 229920002554 vinyl polymer Polymers 0.000 description 1
- PJVWKTKQMONHTI-UHFFFAOYSA-N warfarin Chemical compound OC=1C2=CC=CC=C2OC(=O)C=1C(CC(=O)C)C1=CC=CC=C1 PJVWKTKQMONHTI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005080 warfarin Drugs 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
- A61K31/7115—Nucleic acids or oligonucleotides having modified bases, i.e. other than adenine, guanine, cytosine, uracil or thymine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
- A61K31/713—Double-stranded nucleic acids or oligonucleotides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
- A61K48/005—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'active' part of the composition delivered, i.e. the nucleic acid delivered
- A61K48/0066—Manipulation of the nucleic acid to modify its expression pattern, e.g. enhance its duration of expression, achieved by the presence of particular introns in the delivered nucleic acid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
- A61K48/0075—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the delivery route, e.g. oral, subcutaneous
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
- A61P21/02—Muscle relaxants, e.g. for tetanus or cramps
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/02—Drugs for disorders of the nervous system for peripheral neuropathies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
- A61K31/712—Nucleic acids or oligonucleotides having modified sugars, i.e. other than ribose or 2'-deoxyribose
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/10—Type of nucleic acid
- C12N2310/11—Antisense
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/31—Chemical structure of the backbone
- C12N2310/315—Phosphorothioates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/32—Chemical structure of the sugar
- C12N2310/321—2'-O-R Modification
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/35—Nature of the modification
- C12N2310/352—Nature of the modification linked to the nucleic acid via a carbon atom
- C12N2310/3525—MOE, methoxyethoxy
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2320/00—Applications; Uses
- C12N2320/30—Special therapeutic applications
- C12N2320/32—Special delivery means, e.g. tissue-specific
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2320/00—Applications; Uses
- C12N2320/30—Special therapeutic applications
- C12N2320/33—Alteration of splicing
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Neurology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
- Physical Education & Sports Medicine (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Psychiatry (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Abstract
Предложенная группа изобретений относится к области медицины. Предложен способ облегчения по меньшей мере одного симптома спинальной мышечной атрофии у субъекта, включающий введение субъекту антисмыслового соединения, содержащего антисмысловой олигонуклеотид, комплементарный интрону 7 пре-мРНК, кодирующей человеческий SMN2. Предложено применение такого антисмыслового соединения в производстве лекарственного средства для облегчения или лечения по меньшей мере одного симптома спинальной мышечной атрофии у субъекта. Предложенная группа изобретений обеспечивает эффективные средства и методы облегчения спинальной мышечной атрофии у субъекта. 2 н. и 11 з.п. ф-лы, 13 ил., 14 табл., 14 пр.
Description
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
Ново синтезированные молекулы мРНК эукариот, известные также как первичные транскрипты или пре-мРНК, перед трансляцией претерпевают ряд изменений в ходе процессинга. Процессинг пре-мРНК включает в себя добавление 5’-метилированного кэпа и примерно 200-250 оснований поли (А) хвоста на 3’ конце транскрипта. Процессинг мРНК из пре-мРНК также часто включает в себя сплайсинг пре-мРНК, который происходит при образовании 90-95% мРНК млекопитающих. Интроны (или промежуточные последовательности) представляют собой области пре-мРНК (или кодирующей ее ДНК), которые не включены в кодирующую последовательность зрелой мРНК. Экзоны представляют собой области первичного транскрипта, которые сохраняются в зрелой мРНК. Экзоны соединяются друг с другом при формировании зрелой последовательности мРНК. Сплайсинговое соединение также называют сайтами сплайсинга: соединение с 5’ конца часто называют "5’ сайтом сплайсинга" или "донорным сайтом сплайсинга", а с 3’ конца - "3’ сайтом сплайсинга" или "акцепторным сайтом сплайсинга". Во время сплайсинга 3’ конец экзона слева соединяется с 5’-конца экзона справа. Таким образом, не прошедшая сплайсинг пре-мРНК содержит экзон/интронное соединения с 5’ конца интрона и интрон/экзонное соединение с 3’ конца интрона. После удаления интронов экзоны соединяются между собой, при этом такое соединение иногда называют экзон/экзонным соединением или границами экзона в зрелой мРНК. Скрытые сайты сплайсинга представляют собой сайты, которые применяются менее часто, но могут быть использованы в случае, когда обычный сайт сплайсинга заблокирован или недоступен. Альтернативный сплайсинг, определяемый как сплайсинг различных комбинаций экзонов, часто приводит к множеству транскриптов мРНК от одного гена.
До 50% генетических заболеваний человека, обусловленных наличием точечных мутаций, характеризуются аберрантным процессингом пре-мРНК. Такие точечные мутации могут либо нарушить текущий сайт, либо создать новый сайт сплайсинга, в результате чего транскрипты мРНК включают различные комбинации экзонов или содержат делеции в экзонах. Точечные мутации также могут привести к активации скрытых сайтов сплайсинга или нарушить регуляторные цис-элементы (энхансеры или сайленсеры) (Cartegni et al, Nat. Rev. Genet., 2002, 3, 285-298; Drawczak et al, Hum. Genet, 1992, 90, 41-54). Антисмысловые олигонуклеотиды были использованы для целевых мутаций, которые приводят к аберрантному сплайсингу при некоторых генетических заболеваниях для того, чтобы перенаправить сплайсинг, обеспечивая получение желаемого сплайсингового продукта (Kole, Acta Biochimica Polonica, 1997, 44, 231-238).
Антисмысловые соединения были также использованы для изменения соотношения природных вариантов альтернативного сплайсинга, таких как длинные и короткие формы Bcl-x пре-мРНК (патент США 6,172,216, патент США 6,214,986; Taylor et al, Nat. Biotechnol. 1999, 17, 1097-1100), или для усиления включения специфических экзонов, содержащих незрелые терминаторные кодоны (Wilton et al, Neuromuscul. Disord., 1999, 9, 330-338). Патент США 5,627,274 и WO 94/26887 раскрывают композиции и способы борьбы с аберрантными формами сплайсинга в мутантных пре-мРНК молекулах, используя антисмысловые олигонуклеотиды, которые не активируют РНКазу Н.
Проксимальная спинальная мышечная атрофия (СМА) является генетическим нейродегенеративным расстройством, характеризующимся потерей спинальных моторных нейронов. СМА представляет собой аутосомно-рецессивное заболевание раннего проявления и в настоящее время является основной причиной смерти среди младенцев. Тяжесть СМА варьирует среди пациентов и, таким образом, СМА была классифицирована на три типа. Тип I СМА является наиболее тяжелой формой, проявляется при рождении или в течение 6 месяцев с момента рождения и обычно приводит к смерти в течение 2 лет. Дети, страдающие СМА типа I, не способны сидеть или ходить. Тип II СМА является средней формой, при которой пациенты способны сидеть, но не могут стоять или ходить. У пациентов с III типом СМА, хронической формой заболевания, СМА обычно развивается после 18-месячного возраста (Lefebvre et al, Hum. Mol. Genet., 1998, 7, 1531-1536).
Молекулярная основа СМА заключается в потере обеих копий гена выживаемости мотонейронов 1 (SMN1), известного также как теломерный SMN, который кодирует белок, входящий в состав мультибелкового комплекса, вовлеченного в биогенез и метаболизм мяРНП. Практически идентичный ему ген, SMN2, которые также известен как центромерный SMN, расположен в двойном локусе 5q13 и модулирует тяжесть заболевания. Экспрессия нормального гена SMN1 приводит исключительно к экспрессии белка фактора выживаемости мотонейронов (SMN). Хотя SMN1 и SMN2 кодируют сходные белки, SMN2 содержит трансляционно молчащую мутацию в позиции +6 экзона 7, которая приводит к неэффективному включению экзона 7 в транскрипты SMN2. Таким образом, преобладающей формой SMN2 является усеченная версия, не содержащая экзон 7, которая является нестабильной и неактивной (Cartegni and Krainer, Nat. Genet., 2002, 30, 377-384). Экспрессия гена SMN2 обеспечивает примерно 10-20% белка SMN и 80-90% неустойчивого/ нефункционального белка SMNdelta7. Хорошо известно, SMN белок играет роль в сборке сплайсосомы, а также может участвовать в транспорте мРНК аксонов и нервных окончаний нейронов.
Антисмысловая технология является эффективным средством для модуляции экспрессии одного или нескольких специфических генных продуктов, в том числе продуктов альтернативного сплайсинга, и, несомненно, может использоваться в терапевтических, диагностических и исследовательских целях. Принцип антисмысловой технологии заключается в том, что антисмысловое соединение, которое гибридизуется с целевой нуклеиновой кислотой, модулирует процессы, отвечающие за экспрессию генов, такие как транскрипция, сплайсинг или трансляция, через один из антисмысловых механизмов. Специфичность последовательности антисмысловых соединений делает их чрезвычайно полезными как инструмент для таргетной проверки и функционализации генов, а также терапии для селективного модулирования экспрессии генов, вовлеченных в болезнь.
Некоторые антисмысловые соединения, комплементарные SMN2, известны из уровня техники. См. например, WO 2007/002390; US 61/168,885; Hua et al, American J. of Human Genetics (April 2008) 82, 1-15; Singh et al, RNA Bio. 6:3, 1-10 (2009). Некоторые антисмысловые соединения и способы, описанные здесь, обладают желательными характеристиками по сравнению с такими соединениями и способами, известными из уровня техники. Химерные молекулы пептидов и нуклеиновых кислот, предназначенные для модуляции сплайсинга SMN2, были описаны в уровне техники (WO 02/38738; Cartegni and Krainer, Nat. Struct. Biol., 2003, 10, 120-125).
СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
В некоторых вариантах воплощения настоящее изобретение обеспечивает способы, включающие введение субъекту антисмыслового соединения, содержащего антисмысловой олигонуклеотид, комплементарный интрону 7 нуклеиновой кислоты пре-мРНК, кодирующей человеческий SMN2, где антисмысловое соединение вводят в спинномозговую жидкость. В некоторых вариантах введение осуществляется в интратекальное пространство. В некоторых вариантах введение осуществляется в спинномозговую жидкость в головном мозге. В некоторых вариантах введение заключается в болюсном введении. В некоторых вариантах введение заключается во введении нагнетающим насосом.
В некоторых вариантах воплощения антисмысловое соединение вводят в дозе от 0,01 до 10 миллиграмм антисмыслового соединения на килограмм веса тела субъекта. В некоторых вариантах доза составляет от 0,01 до 10 миллиграмм антисмыслового соединения на килограмм веса тела субъекта. В некоторых вариантах доза составляет от 0,01 до 5 миллиграмм антисмыслового соединения на килограмм веса тела субъекта. В некоторых вариантах доза составляет от 0,05 до 1 мг антисмыслового соединения на килограмм веса тела субъекта. В некоторых вариантах доза составляет от 0,01 до 0,5 миллиграмма антисмыслового соединения на килограмм веса тела субъекта. В некоторых вариантах доза составляет от 0,05 до 0,5 миллиграмма антисмыслового соединения на килограмм веса тела субъекта.
В некоторых вариантах воплощения дозу вводят ежедневно. В некоторых вариантах дозу вводят еженедельно. В некоторых вариантах антисмысловое соединение вводят непрерывно, а доза представляет собой количество, вводимое в день. В некоторых вариантах способ включает введение, по меньшей мере, одной индукционной дозы в течение индукционной фазы и введение, по меньшей мере, одной поддерживающей дозы в течение поддерживающей фазы. В некоторых вариантах индукционная доза составляет от 0,05 до 5,0 миллиграмм антисмыслового соединения на килограмм веса тела субъекта. В некоторых вариантах поддерживающая доза составляет от 0,01 до 1,0 миллиграмма антисмыслового соединения на килограмм веса тела субъекта. В некоторых вариантах продолжительность индукционной фазы составляет, по меньшей мере, 1 неделю. В некоторых вариантах продолжительность поддерживающей фазы составляет, по меньшей мере, 1 неделю. В некоторых вариантах каждая индукционная доза и каждая поддерживающая доза составляет одну инъекцию. В некоторых вариантах каждая индукционная доза и каждая поддерживающая доза независимо состоят из двух или более инъекций. В некоторых вариантах антисмысловое соединение вводится, по меньшей мере, 2 раза в течение периода лечения, составляющего, по меньшей мере, 1 неделю. В некоторых вариантах период лечения составляет, по меньшей мере, один месяц. В некоторых вариантах период лечения составляет, по меньшей мере, 2 месяца. В некоторых вариантах период лечения составляет, по меньшей мере, 4 месяца. В некоторых вариантах индукционная доза вводится посредством одной или более болюсной инъекции, а поддерживающая доза вводится посредством инфузионного насоса.
В некоторых вариантах воплощения способ включает в себя оценку переносимости и/или эффективности антисмыслового соединения. В некоторых вариантах величина дозы или частота введения антисмыслового соединения уменьшается при обнаружении того, что введение антисмыслового соединения не переносится организмом. В некоторых вариантах величина дозы или частота введения антисмыслового соединения сохраняется или уменьшается при обнаружении того, что введение антисмыслового соединения является эффективным. В некоторых вариантах доза антисмыслового соединения увеличивается при обнаружении того, что введение антисмыслового соединения не является эффективным. В некоторых вариантах частота введения антисмыслового соединения уменьшается при обнаружении того, что введение антисмыслового соединения является эффективным. В некоторых вариантах частота введения антисмыслового соединения увеличивается при обнаружении того, что введение антисмыслового соединения не является эффективным.
В некоторых вариантах воплощения способы по настоящему изобретению включают совместное применение антисмыслового соединения и, по меньшей мере, одного другого вида терапии. В некоторых вариантах антисмысловое соединение и, по меньшей мере, один другой вид терапии применяются совместно в одно и то же время. В некоторых вариантах антисмысловое соединение вводят до применения, по меньшей мере, одного другого вида терапии. В некоторых вариантах антисмысловое соединение вводят после применения, по меньшей мере, одного другого вида терапии. В некоторых вариантах, по меньшей мере, один другой вид терапии включает введение одного или нескольких препаратов, выбранных из вальпроевой кислоты, рилузола, гидроксимочевины и бутирата. В некоторых вариантах, по меньшей мере, один другой вид терапии включает введение трихостатина А. В некоторых вариантах, по меньшей мере, один другой вид терапии включает введение стволовых клеток. В некоторых вариантах, по меньшей мере, один другой вид терапии представляет собой генную терапию. В некоторых вариантах генная терапия применяется к спинномозговой жидкости, а антисмысловое соединение вводят системно. В некоторых вариантах генная терапия применяется к спинномозговой жидкости, а антисмысловое соединение вводят системно и в спинномозговую жидкость. В некоторых вариантах настоящее изобретение обеспечивает схемы лечения, где на начальном этапе вводят антисмысловое соединение в спинномозговую жидкость и системно, а затем применяют генную терапию к спинномозговой жидкости и системное введение антисмыслового соединения. В некоторых таких вариантах субъект представляет собой младенца во время первичного лечения. В некоторых таких вариантах субъекту менее 2 лет. В некоторых вариантах антисмысловое соединение вводят в ЦНС субъекта, когда возраст субъекта допускает применение генной терапии. В некоторых таких вариантах антисмысловое соединение вводят системно на протяжении всего времени лечения.
В некоторых вариантах антисмысловое соединение вводят в концентрации примерно 0,01 мг/мл, примерно 0,05 мг/мл, примерно 0,1 мг/мл, примерно 0,5 мг/мл, примерно 1 мг/мл, примерно 5 мг/мл, примерно 10 мг/мл, примерно 50 мг/мл или примерно 100 мг/мл.
В некоторых вариантах воплощения включение экзона 7 SMN2 мРНК в мотонейронах субъекта усиливается. В некоторых вариантах усиливается включение аминокислотной последовательности экзона 7 в полипептид SMN2 в мотонейронах субъекта.
В некоторых вариантах настоящее изобретение обеспечивает способы усиления включения экзона 7 SMN2 мРНК в мотонейронах субъекта, включающие введение субъекту антисмыслового соединения, содержащего антисмысловой олигонуклеотид, комплементарный интрону 7 нуклеиновой кислоты, кодирующей человеческий SMN2, и тем самым усиление включения экзона 7 SMN2 мРНК в мотонейронах субъекта.
В некоторых вариантах изобретение обеспечивает способы усиления включения аминокислотной последовательности экзона 7 в полипептид SMN2 в мотонейронах субъекта, включающие введение субъекту антисмыслового соединения, содержащего антисмысловой олигонуклеотид, комплементарный интрону 7 нуклеиновой кислоты, кодирующей человеческий SMN2, и тем самым более эффективное включение аминокислотной последовательности экзона 7 в полипептид SMN2 в мотонейронах субъекта.
В некоторых вариантах воплощения субъект страдает спинальной мышечной атрофией (СМА). В некоторых вариантах субъект имеет тип I CMA. В некоторых вариантах субъект имеет тип II СМА. В некоторых вариантах субъект имеет тип III СМА.
В некоторых вариантах воплощения первую дозу вводят в период внутриутробного развития. В некоторых вариантах первая доза вводится до полного формирования гематоэнцефалического барьера. В некоторых вариантах первая доза вводится в течение 1 недели со дня рождения субъекта. В некоторых вариантах первая доза вводится в течение 1 месяца с момента рождения субъекта. В некоторых вариантах первая доза вводится в течение 3 месяцев со дня рождения субъекта. В некоторых вариантах первая доза вводится в течение 6 месяцев со дня рождения субъекта. В некоторых вариантах первая доза вводится субъекту в возрасте от 1 до 2 лет. В некоторых вариантах первая доза вводится субъекту в возрасте от 1 до 15 лет. В некоторых вариантах первая доза вводится субъекту в возрасте старше 15 лет.
В некоторых вариантах воплощения субъект является млекопитающим. В некоторых вариантах субъект является человеком.
В некоторых вариантах способы по настоящему изобретению включают определение субъекта, страдающего СМА. В некоторых вариантах субъект определяется путем измерения электрической активности одной или нескольких мышц субъекта. В некоторых вариантах субъект определяется с помощью генетического теста, показывающего, имеет ли субъект мутацию гена SMN1. В некоторых вариантах субъект идентифицируется с помощью мышечной биопсии.
В некоторых вариантах воплощения введение антисмыслового соединения приводит к увеличению количества SMN2 мРНК, содержащих экзон 7, по меньшей мере, на 10%. В некоторых вариантах увеличение количества SMN2 мРНК, содержащих экзон 7, составляет, по меньшей мере, 20%. В некоторых вариантах увеличение количества SMN2 мРНК, содержащих экзон 7, составляет, по меньшей мере, 50%. В некоторых вариантах количество SMN2 мРНК, содержащих экзон 7, составляет, по меньшей мере, 70%.
В некоторых вариантах воплощения введение антисмыслового соединения приводит к увеличению количества SMN2 полипептидов, содержащих аминокислотную последовательность экзона 7, по меньшей мере, на 10%. В некоторых вариантах увеличение количества SMN2 полипептидов, содержащих аминокислотную последовательность экзона 7, составляет, по меньшей мере, 20%. В некоторых вариантах увеличение количества SMN2 полипептидов, содержащих аминокислотную последовательность экзона 7, составляет, по меньшей мере, 50%. В некоторых вариантах увеличение количества SMN2 полипептидов содержащих аминокислотную последовательность экзона 7, составляет, по меньшей мере, 70%.
В некоторых вариантах воплощения введение антисмыслового соединения улучшает,
по меньшей мере, один из симптомов СМА у субъекта. В некоторых вариантах введение антисмыслового соединения приводит к улучшению двигательных функций у субъекта. В некоторых вариантах введение антисмыслового соединения приводит к задержке или снижению потери двигательной функции у субъекта. В некоторых вариантах введение антисмыслового соединения приводит к улучшению дыхательных функций. В некоторых вариантах введение антисмыслового соединения приводит к улучшению выживаемости.
В некоторых вариантах воплощения, по меньшей мере, один нуклеозид антисмыслового олигонуклеотида содержит модифицированный остаток сахара. В некоторых вариантах, по меньшей мере, один модифицированный остаток сахара содержит 2’-метоксиэтил остаток сахара. В некоторых вариантах практически каждый нуклеозид антисмыслового олигонуклеотида содержит модифицированный остаток сахара. В некоторых вариантах нуклеозиды, содержащие модифицированные остатки сахара, имеют одинаковые модификации сахарных групп. В некоторых вариантах каждый модифицированный остаток сахара содержит 2’-метоксиэтил остаток сахара. В некоторых вариантах каждый нуклеозид антисмыслового олигонуклеотида содержит модифицированный остаток сахара. В некоторых вариантах нуклеозиды имеют одинаковые модификации сахаров. В некоторых вариантах каждый модифицированный остаток сахара содержат 2’-метоксиэтил остаток сахара. В некоторых вариантах, по меньшей мере, одна межнуклеозидная связь является фосфоротиоатной межнуклеозидной связью. В некоторых вариантах каждая межнуклеозидная связь является фосфоротиоатной межнуклеозидной связью.
В некоторых вариантах воплощения антисмысловой олигонуклеотид состоит из от 10 до 25 связанных нуклеозидов. В некоторых вариантах антисмысловой олигонуклеотид состоит из от 12 до 22 связанных нуклеозидов. В некоторых вариантах антисмысловой олигонуклеотид состоит из от 15 до 20 связанных нуклеозидов. В некоторых вариантах антисмысловой олигонуклеотид состоит из 18 связанных нуклеозидов.
В некоторых вариантах воплощения антисмысловой олигонуклеотид комплементарен, по меньшей мере, на 90% нуклеиновой кислоте, кодирующей человеческий SMN2. В некоторых вариантах антисмысловой олигонуклеотид полностью комплементарен нуклеиновой кислоте, кодирующей человеческий SMN2. В некоторых вариантах олигонуклеотид имеет последовательность азотистых оснований, содержащую, по меньшей мере, 10 смежных азотистых оснований последовательности SEQ ID NO:1. В некоторых вариантах олигонуклеотид имеет последовательность азотистых оснований, содержащую, по меньшей мере, 15 смежных азотистых оснований последовательности SEQ ID NO:1. В некоторых вариантах олигонуклеотид имеет последовательность, включающую последовательность азотистых оснований SEQ ID NO:1. В некоторых вариантах олигонуклеотид имеет последовательность азотистых оснований, состоящую из последовательности азотистых оснований SEQ ID NO:1.
В некоторых вариантах антисмысловое соединение содержит конъюгированную или терминальную группу.
В некоторых вариантах антисмысловое соединение состоит из антисмыслового олигонуклеотида.
В некоторых вариантах воплощения антисмысловое соединение также вводится системно. В некоторых вариантах системное введение осуществляется посредством внутривенного или внутрибрюшинного введения. В некоторых вариантах системное введение и введение в центральную нервную систему осуществляются одновременно. В некоторых вариантах системное введение и введение в центральную нервную систему осуществляются в разное время.
В некоторых вариантах воплощения настоящее изобретение обеспечивает системное введение антисмысловых соединений, либо самостоятельно, либо в комбинации с введением в спинномозговую жидкость. В некоторых вариантах фармацевтические композиции вводят системно. В некоторых вариантах фармацевтические композиции вводят подкожно. В некоторых вариантах фармацевтические композиции вводят внутривенно. В некоторых вариантах фармацевтические композиции вводят внутримышечно.
В некоторых вариантах воплощения фармацевтические композиции вводят непосредственно в спинномозговую жидкость (например, путем интратекальной и/или интрасеребровентрикулярной инъекции и/или инфузии) и системно.
В некоторых вариантах воплощения настоящее изобретение обеспечивает способы введения субъекту, имеющему, по меньшей мере, один симптом, ассоциированный со СМА, по меньшей мере, одной дозы антисмыслового соединения, содержащего олигонуклеотид, состоящий из от 15 до 20 связанных нуклеозидов и имеющий последовательность азотистых оснований, которая комплементарна на 100% последовательности SEQ ID NO:7, где каждый нуклеозид представляет собой 2’-O-(2-метокси)этил нуклеозид, и где, по меньшей мере, одна доза составляет от 0,1 мг/кг до 5 мг/кг и вводится в спинномозговую жидкость. В некоторых таких вариантах доза составляет от 0,5 мг/кг до 2 мг/кг. В некоторых вариантах, по меньшей мере, одна доза вводится посредством болюсного инъекции. В некоторых таких вариантах дозу вводят путем болюсной интратекальной инъекций. В некоторых вариантах вводится, по меньшей мере, одна повторная доза. В некоторых таких вариантах вторая доза вводится, по меньшей мере, через 2 недели после введения первой дозы. В некоторых вариантах вторая доза вводится, по меньшей мере, через 4 недели после введения первой дозы. В некоторых вариантах вторая доза вводится, по меньшей мере, через 8 недель после введения первой дозы. В некоторых вариантах вторая доза вводится, по меньшей мере, через 12 недель после введения первой дозы. В некоторых вариантах вторая доза вводится, по меньшей мере, через 16 недель после введения первой дозы. В некоторых вариантах вторая доза вводится, по меньшей мере, через 20 недель после введения первой дозы. В некоторых вариантах субъект младше 2 лет на момент введения первой дозы. В некоторых вариантах субъекту от 2 до 15 лет. В некоторых вариантах субъекту от 15 до 30 лет. В некоторых вариантах субъект старше 30 лет. В некоторых вариантах прогрессирование, по меньшей мере, одного симптома, ассоциированного со СМА, замедляется. В некоторых вариантах олигонуклеотид представляет собой ISIS396443.
В некоторых вариантах воплощения настоящее изобретение обеспечивает способы введения субъекту, имеющему, по меньшей мере, один симптом, ассоциированный со СМА, по меньшей мере, одной дозы антисмыслового соединения, включающего олигонуклеотид, состоящий из от 15 до 20 связанных нуклеозидов и имеющий последовательность азотистых оснований, которая на 100% комплементарна последовательности SEQ ID NO:7, и где каждый нуклеозид представляет собой 2’-O-(2-метокси)этил нуклеозид, и где, по меньшей мере, одну дозу вводят системно. В некоторых таких вариантах, по меньшей мере, одну дозу вводят посредством болюсной инъекции. В некоторых таких вариантах дозу вводят с помощью болюсной подкожной инъекции. В некоторых вариантах доза составляет от 0,5 мг/кг до 50 мг/кг. В некоторых вариантах доза составляет от 1 мг/кг до 10 мг/кг. В некоторых вариантах доза составляет от 1 мг/кг и 5 мг/кг. В некоторых вариантах доза составляет от 0,5 мг/кг до 1 мг/кг. В некоторых вариантах вводят, по меньшей мере, одну повторную дозу. В некоторых таких вариантах вторая доза вводится, по меньшей мере, через 2 недели после введения первой дозы. В некоторых вариантах вторая доза вводится, по меньшей мере, через 4 недели после введения первой дозы. В некоторых вариантах вторая доза вводится, по меньшей мере, через 8 недель после введения первой дозы. В некоторых вариантах вторая доза вводится, по меньшей мере, через 12 недель после введения первой дозы. В некоторых вариантах вторая доза вводится, по меньшей мере, через 16 недель после введения первой дозы. В некоторых вариантах вторая доза вводится, по меньшей мере, через 20 недель после введения первой дозы. В некоторых вариантах субъект младше 2 лет на момент введения первой дозы. В некоторых вариантах субъекту от 2 до 15 лет. В некоторых вариантах субъекту от 15 до 30 лет. В некоторых вариантах субъект старше 30 лет. В некоторых вариантах прогрессирование, по меньшей мере, одного симптома, ассоциированного со СМА, замедляется. В некоторых вариантах олигонуклеотид представляет собой ISIS396443.
В некоторых вариантах воплощения настоящее изобретение обеспечивает способы введение субъекту, имеющему, по меньшей мере, один симптом, ассоциированный со СМА, по меньшей мере, одной дозы в спинномозговую жидкость и, по меньшей мере, одной системной дозы антисмыслового соединения, содержащего олигонуклеотид, состоящий из от 15 до 20 связанных нуклеозидов и имеющий последовательность азотистых оснований, которая на 100% комплементарна последовательности SEQ ID NO:7, и где каждый нуклеозид представляет собой 2’-O-(2-метокси)этил нуклеозид. В некоторых таких вариантах доза, вводимая в спинномозговую жидкость, составляет от 0,1 мг/кг до 5 мг/кг. В некоторых вариантах системная доза составляет от 0,5 мг/кг до 50 мг/кг. В некоторых вариантах, по меньшей мере, одна доза, вводимая в спинномозговую жидкость, вводится посредством болюсной инъекции. В некоторых таких вариантах, по меньшей мере, одна доза, вводимая в спинномозговую жидкость, вводится посредством болюсной интратекальной инъекции. В некоторых вариантах, по меньшей мере, одна системная доза вводится посредством болюсной инъекции. В некоторых таких вариантах, по меньшей мере, одна системная доза вводится посредством подкожной инъекции. В некоторых вариантах доза, вводимая в спинномозговую жидкость, и системная доза вводятся одновременно. В некоторых вариантах доза, вводимая в спинномозговую жидкость, и системная доза вводятся в разное время. В некоторых вариантах субъект младше 2 лет на момент введения первой дозы. В некоторых вариантах субъекту от 2 до 15 лет. В некоторых вариантах субъекту от 15 до 30 лет. В некоторых вариантах субъект старше 30 лет. В некоторых вариантах прогрессирование, по меньшей мере, одного симптома, ассоциированного со СМА, замедляется. В некоторых вариантах олигонуклеотид представляет собой ISIS396443.
В некоторых вариантах воплощения настоящее изобретение обеспечивает способы введения субъекту, имеющему, по меньшей мере, один симптом, ассоциированный со СМА, по меньшей мере, одной системной дозы антисмыслового соединения, содержащего олигонуклеотид, состоящий из от 15 до 20 связанных нуклеозидов и имеющий последовательность азотистых оснований, которая на 100% комплементарна последовательности SEQ ID NO:7, и где каждый нуклеозид представляет собой 2’-O-(2-метокси)этил нуклеозид, и, по меньшей мере, одной дозы геннотерапевтического агента. В некоторых вариантах системная доза составляет от 0,5 мг/кг до 50 мг/кг. В некоторых вариантах, по меньшей мере, одна системная доза вводится посредством болюсной инъекции. В некоторых таких вариантах, по меньшей мере, одна системная доза вводится посредством подкожной инъекции. В некоторых вариантах системная доза и геннотерапевтический агент вводятся одновременно. В некоторых вариантах системная доза и геннотерапевтический агент вводятся в разное время. В некоторых вариантах геннотерапевтический агент вводят в спинномозговую жидкость. В некоторых таких вариантах геннотерапевтический агент вводят посредством интратекальной инъекции и/или инфузии. В некоторых таких вариантах геннотерапевтический агент вводят посредством интрасеребровентрикулярной инъекции и/или инфузии. В некоторых вариантах субъект младше 2 лет на момент введения первой дозы. В некоторых вариантах субъекту от 2 до 15 лет. В некоторых вариантах субъекту от 15 до 30 лет. В некоторых вариантах субъект старше 30 лет. В некоторых вариантах прогрессирование, по меньшей мере, одного симптома, ассоциированного со СМА, замедляется. В некоторых вариантах олигонуклеотид представляет собой ISIS396443.
В некоторых вариантах воплощения настоящее изобретение обеспечивает способы выбора субъекта, имеющего, по меньшей мере, один симптом, ассоциированный со СМА, и введения антисмыслового соединения, согласно любому из способов, описанных выше. В некоторых таких вариантах, по меньшей мере, один из симптомов СМА оценивается после введения. В некоторых таких вариантах, по меньшей мере, один из симптомов СМА улучшается. В некоторых таких вариантах, по меньшей мере, один из симптомов СМА не прогрессирует или прогрессирует более медленно по сравнению с симптомами субъекта, которому не вводили антисмысловое соединение.
В некоторых вариантах воплощения настоящее изобретение обеспечивает антисмысловое соединение, содержащее антисмысловой олигонуклеотид, комплементарный интрону 7 нуклеиновой кислоты, кодирующей человеческий SMN2, для использования в любом из вышеперечисленных способов. В некоторых вариантах изобретение обеспечивает такое соединение для использования в лечении болезни или состояния, ассоциированного с фактором выживаемости мотонейронов 1 (SMN1).
В некоторых вариантах воплощения настоящее изобретение обеспечивает использование антисмыслового соединения, содержащего антисмысловой олигонуклеотид, комплементарный интрону 7 нуклеиновой кислоты, кодирующей человеческий SMN2, в производстве лекарственного средства для использования в любом из вышеупомянутых способов. В некоторых вариантах лекарственное средство предназначено для лечения заболевания или состояния, ассоциированного с фактором выживаемости мотонейронов 1 (SMN1).
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ
На фигуре 1 показаны результаты продолжительности действия, описанные в Примере 4, где процентное содержание SMN2, содержащего экзон 7 (ось ординат), оценивалось в 0, 2, 4, 6 и 8 недель после окончания 7 дней лечения (ось абсцисс). Образец недели "0" был взят в один день после прекращения лечения. Значения CON относятся к мышам, получавшим физиологический раствор. Различий в % включения от контрольных значений мышей, получавшим физиологический раствор, между значениями, полученными в различные моменты времени от 0 до 6 месяцев, не зафиксировано.
На фигуре 2 представлены результаты продолжительности действия, описанные в Примере 4, где процентное количество SMN2, содержащего экзон 7, оценивалось в 0, 0,5, 1, 2, 5 и 6 месяцев после окончания 7 дней лечения. Образец месяца "0" был взят в один день после прекращения лечения. Значения CON относятся к мышам, получавших физиологический раствор. Различий в % включения от контрольных значений мышей, получавшим физиологический раствор, между значениями, полученными в различные моменты времени от 0 до 6 месяцев, не зафиксировано.
На фигуре 3 показаны результаты экспериментов, описанных в Примере 6, по измерению эффекта эмбрионального введения ISIS396443 на длину хвоста Тайваньской линии СМА мышей. На фиг.ЗА показан первый такой эксперимент, а на фигуре 3В - повторный эксперимент при различных концентрациях антисмысловых соединений, включающие также значения нормальных мышей для сравнения.
На фигуре 4 показаны результаты вестерн-блоттинга, описанные в Примере 7. Ось Y представляет процент SMN, включающих экзон 7, в различных образцах.
На рисунках 5 и 6 показаны результаты экспериментов, описанных в Примере 7. Ряд значений для СМА мышей (Тайваньской линии) определены после лечения антисмысловыми соединениями или контрольным олигонуклеотидом.
На фигуре 7 показана кривая выживаемости, полученная в эксперименте, описанном в Примере 7.
На фигуре 8 показаны результаты оценки количества моторных нейронов в различных участках спинного мозга после лечения антисмысловыми соединениями или контрольным олигонуклеотидом, как описано в Примере 7.
На фигуре 9 показаны результаты оценки полных SMN РНК (включающих экзон 7) у животных, получавших лечение антисмысловыми соединениями, как описано в Примере 7.
На фигуре 10 показаны кривые выживаемости, полученные в эксперименте, описанном в Примере 7, в которых животные (1) не получали лечения, (2) получали одну дозу антисмыслового соединения при рождении (День Р0), или (3) получали первую дозу в Р0 и вторую дозу в 21 день (Р21).
На фигуре 11 показаны кривые выживаемости, полученные в эксперименте, описанном в Примере 7, сравнивая животных, которые получили вторую дозу, с животными, которые получили только первую дозу.
На фигуре 12 показаны результаты эксперимента, описанного в Примере 9, в котором антисмысловые соединения вводили обезьянам с помощью интратекальной инфузии, а концентрация соединения оценивалась в различных тканях 96 часов спустя.
На фигуре 13 показаны кривые выживаемости, полученные в эксперименте, описанном в Примере 12, в котором различные дозы антисмыслового соединения вводились мышам с тяжелой формой СМА путем подкожной инъекции.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Следует понимать, что вышерассмотренное общее описание и последующее подробное описание приведены в качестве примеров и лишь поясняют, но не ограничивают изобретение в том виде, как оно заявлено. При этом использование единственного числа включает в себя множественное, если специально не оговорено иное. Использование здесь союза "или" означает "и/или", если не указано иное. Кроме того, использование термина "включая", а также других форм, таких как "включает" и "включено", является неограничивающим. Также такие термины, как "элемент" или "компонент", охватывают элементы и компоненты, содержащие одну единицу, и элементы и компоненты, которые составляют более одной субъединицы, если специально не оговорено иное.
Заголовки разделов используются здесь для организационных целей и не должны рассматриваться как ограничивающие суть изобретения. Все документы или части документов, цитированные в данной заявке, включающие, но, не ограничиваясь этим, патенты, заявки на патенты, статьи, книги и монографии, включены в настоящий документ посредством ссылки в полном объеме для любых целей.
I. Определения
Если не указаны конкретные определения, номенклатура, использованная здесь, а также процедуры и методы аналитической химии, синтетической органической химии, а также медицинской и фармацевтической химии, описанные здесь, широко используются и хорошо известны из уровня техники. Стандартные методы могут быть использованы для химического синтеза и химического анализа. Некоторые такие методы и процедуры могут быть найдены, например, в "Carbohydrate Modifications in Antisense Research" под ред. Sangvi и Cook, American Chemical Society, Washington D.C., 1994; "Remington’s Pharmaceutical Sciences," Mack Publishing Co., Easton, Pa., 18th edition, 1990; и "Antisense Drug Technology, Principles, Strategies, and Applications" под ред. Stanley Т. Crooke, CRC Press, Boca Raton, Florida; и Sambrook et al, "Molecular Cloning, A laboratory Manual," 2nd Edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989, которые включены в настоящее описание посредством ссылки для любых целей. В случаях, где это допустимо, все патенты, заявки, опубликованные заявки и другие публикации, а также другие сведения, упомянутые в настоящем документе, включены посредством ссылки в полном объеме.
Если не указано иное, следующие термины имеют следующие значения:
"Нуклеозид" означает вещество, содержащее остаток гетероциклического основания и остаток сахара. Нуклеозиды включают, но не ограничиваются этим, природные нуклеозиды, модифицированные нуклеозиды и нуклеозиды, имеющие миметические основания и/или сахарные группы. Нуклеозиды могут быть модифицированы с помощью любого из множества заместителя.
"Остаток сахара" означает природный или модифицированный сахар или заменитель сахара.
"Природный сахар" означает остаток рибофуранозы ДНК (2’-Н) или РНК (2’-ОН).
"Модифицированный сахар" означает остаток рибофуранозы, содержащий, по меньшей мере, один заместитель, отличающий его от природного сахара.
"Заменитель сахара" означает структуру, отличающуюся от кольца рибофуранозы, которая способна заменять сахар нуклеозида. Примеры заменителей Сахаров включают, но не ограничиваются этим, системы открытых колец, 6-членные кольца, сахара, в которых кислород замещен, например, на серу или азот. Например, заменители Сахаров включают, но не ограничиваются этим, морфолины и 4’-тио-содержащие сахара.
"Азотистое основание" означает остаток гетероциклического основания нуклеозида. Азотистые основания могут быть природными или модифицированными. В некоторых вариантах азотистое основание может включать любой атом или группу атомов, способных образовывать водородные связи с азотистым основанием другой нуклеиновой кислоты.
"Нуклеотид" означает нуклеозид, включающий фосфатную группу. При использовании здесь нуклеозиды включают нуклеотиды.
"Модифицированный нуклеозид" означает нуклеозид, содержащий, по меньшей мере, одну модификацию по сравнению с природными РНК или ДНК нуклеозидами. Такая модификация может приходиться на остаток сахара и/или азотистое основание.
"Бициклический нуклеозид" или "БНК" означает нуклеозид, в котором остаток сахара нуклеозида содержит мостик, соединяющий два атома углерода сахарного кольца, образуя тем самым бициклический остаток сахара.
"4’-2’ бициклический нуклеозид" означает бициклический нуклеозид, включающий фуранозное кольцо, содержащее мостик, соединяющий два атома углерода фуранозного кольца, соединяющего 2’ атом углерода и 4’ атом углерода сахарного кольца.
"2’-модифицированный" или "2’-замещенный" означает нуклеозид, включающий сахар, содержащий заместитель в положении 2’, отличающийся от Н или ОН.
"2’-ОМе" или "2’-OCH3" или "2’-O-метил" каждый означает нуклеозид, включающий сахар, содержащий -OCH3 группу в 2’ положении кольца сахара.
"МОЭ", или "2’-МОЭ", или "2’-OCH2CH2OCH3", или "2’-O-метоксиэтил", означает нуклеозид, включающий сахар, содержащий -OCH2CH2OCH3 группу в положении 2’ кольца сахара.
"Олигонуклеотид" означает соединение, содержащее множество связанных нуклеозидов. В некоторых вариантах один или несколько из множества нуклеозидов модифицированы. В некоторых вариантах олигонуклеотид содержит один или более рибонуклеозидов (РНК) и/или дезоксирибонуклеозидов (ДНК).
"Олигонуклеозид" означает олигонуклеотид, в котором ни одна из межнуклеозидных связей не содержит атом фосфора. При использовании здесь олигонуклеотиды включают олигонуклеозиды.
"Модифицированный олигонуклеотид" означает олигонуклеотид, содержащий, по меньшей мере, один модифицированный нуклеозид и/или, по меньшей мере, одну модифицированную межнуклеозидную связь.
"Межнуклеозидная связь" означает ковалентную связь между соседними нуклеозидами олигонуклеотида.
"Природная межнуклеозидная связь" означает 3’-5’ фосфодиэфирную связь.
"Модифицированная межнуклеозидная связь" означает любую межнуклеозидную связь, отличную от природной межнуклеозидной связи.
"Олигомерное соединение" означает соединение, содержащее олигонуклеотид. В некоторых вариантах олигомерное соединение состоит из олигонуклеотида. В некоторых вариантах олигомерное соединение дополнительно содержит один или несколько конъюгированных и/или терминальных групп.
"Антисмысловое соединение" означает олигомерное соединение, которое, по меньшей мере, частично комплементарно целевой нуклеиновой кислоте и гибридизуется с ней, где такая гибридизация является следствием, по меньшей мере, одной антисмысловой активности.
"Антисмысловой олигонуклеотид" означает антисмысловое соединение, где олигомерное соединение представляет собой олигонуклеотид.
"Антисмысловая активность" относится к любому детектируемому и/или измеряемому эффекту, свойственному гибридизации антисмыслового соединения с целевой нуклеиновой кислотой. В некоторых вариантах такая антисмысловая активность представляет собой увеличение или уменьшение количества нуклеиновой кислоты или белка. В некоторых вариантах такая антисмысловая активность представляет собой изменение соотношения сплайсинговых вариантов нуклеиновой кислоты или белка. В некоторых вариантах такая антисмысловая активность представляет собой фенотипическое изменение клеток и/или субъекта.
"Детектируемая" или "измеряемая" антисмысловая активность может быть прямой или косвенной. Например, в некоторых вариантах антисмысловая активность оценивается путем детектирования и/или измерения количества целевой нуклеиновой кислоты или белка либо относительного количества сплайсинговых вариантов целевой нуклеиновой кислоты или белка. В некоторых вариантах антисмысловая активность детектируется путем оценки фенотипических изменений клетки или животного. В связи с какой-либо активностью, ответом или эффектом, термины "детектируемый" и "измеряемый" показывают, что осуществлялся тест для детекции или измерения. Такое детектирование и/или измерение может включать нулевые значения. Так, если тест для детекции или измерения показывает отсутствие активности (нулевая активность), этап детектирования или измерения активности при этом, все равно, осуществлялся.
"Целевая нуклеиновая кислота" относится к любой молекуле нуклеиновой кислоты, экспрессия, количество или активность которой способна модулироваться антисмысловым соединением.
"Целевая мРНК" означает предварительно выбранную молекулу РНК, которая кодирует белок.
"Целевая пре-мРНК" означает предварительно выбранный РНК транскрипт, который не полностью процессирован в мРНК, а именно пре-мРНК включает в себя один или более интронов.
"Целевой белок" означает белок, кодируемый целевой нуклеиновой кислотой.
"Модуляция" означает изменение функции или активности. В некоторых вариантах модуляция означает увеличение экспрессии генов. В некоторых вариантах модуляция означает уменьшение экспрессии генов.
"Экспрессия" означает любые функции и этапы, посредством которых информация, кодируемая геном, преобразуется в структуры, присутствующие и используемые в клетке.
"Последовательность азотистых оснований" означает порядок последовательных азотистых оснований в направлении от 5’ конца к 3’ концу, независимо от сахаров, связей и/или модификаций азотистых оснований.
"Смежные азотистые основания " означают азотистые основания, прилегающие в нуклеиновой кислоте друг к другу.
"Комплементарность азотистых оснований" означает способность двух азотистых оснований нековалентно спариваться за счет образования водородных связей.
"Комплементарный" означает, что первая нуклеиновая кислота способна гибридизоваться со второй нуклеиновой кислотой в строгих условиях гибридизации. Например, антисмысловое соединение является комплементарным к целевой нуклеиновой кислоте, если оно способно гибридизоваться с целевой нуклеиновой кислотой в строгих условиях гибридизации.
"Полностью комплементарный" означает, что каждое азотистое основание первой нуклеиновой кислоты способно спариваться с соответствующим азотистым основанием второй нуклеиновой кислоты.
"Процентная комплементарность" антисмыслового соединения означает процентное соотношение азотистых оснований антисмыслового соединения, которое комплементарно части целевой нуклеиновой кислоты эквивалентной длины. Процентная комплементарность рассчитывается путем деления числа азотистых оснований антисмыслового олигонуклеотида, которые комплементарны азотистым основаниям в соответствующих смежных позициях целевой нуклеиновой кислоте, к общей длине антисмыслового соединения.
"Процентная идентичность" означает число азотистых оснований в первой нуклеиновой кислоте, которые идентичны азотистым основаниям в соответствующих позициях во второй нуклеиновой кислоте, деленное на общее число азотистых оснований первой нуклеиновой кислоте.
"Гибридизировать" означает отжиг комплементарных нуклеиновых кислот, который происходит за счет комплементарности азотистых оснований.
"Ошибочно спаренный" означает азотистое основание из первой нуклеиновой кислоты, которое не способно спариваться с азотистым основанием в соответствующей позиции второго нуклеиновой кислоты.
"Идентичная последовательность азотистых оснований" означает наличие аналогичной последовательности азотистых оснований, свободной от каких-либо химических модификаций нуклеозидов.
"Различные модификации" или "различно модифицированный" относятся к нуклеозидам или межнуклеозидным связям, которые имеют различные модификации нуклеозидов или межнуклеозидных связей, отличающиеся друг от друга, в том числе отсутствие модификаций. Так, например, МОЭ нуклеозид и немодифицированный ДНК нуклеозид являются "различно модифицированными", несмотря на то, что ДНК нуклеозид является немодифицированным. Более того, ДНК и РНК "различно модифицированны", хотя оба являются природными немодифицированными нуклеозидами. Сходные нуклеозиды, содержащие различные азотистые основания, не являются различно модифицированными, если не указано иное. Например, нуклеозид, содержащий 2’-ОМе сахар и азотистое основание аденин, и нуклеозид, содержащий 2’-ОМе сахар и азотистое основание тимин, не являются различно модифицированными.
"Одинаковые модификации" относятся к одинаковым нуклеозидам и межнуклеозидным связям (в том числе немодифицированным нуклеозидам и межнуклеозидным связям). Так, например, два немодифицированных нуклеозида ДНК имеют одинаковые модификации, хотя ДНК нуклеозиды являются немодифицированными.
"Тип модификации" или нуклеозид "типа" означает модификацию нуклеозида и включает в себя модифицированные и немодифицированные нуклеозиды. Соответственно, если не указано иное, "нуклеозид с модификацией первого типа" может быть немодифицированным нуклеозидом.
"Отдельные регионы" олигонуклеотида означает часть олигонуклеотида, в которой все нуклеозиды и межнуклеозидные связи внутри региона содержат одинаковые модификации, а нуклеозиды и/или межнуклеозидные связи соседних частей включают, по меньшей мере, одну различную модификацию.
"Мотив" означает характерную последовательность модифицированных и/или немодифицированных азотистых оснований, Сахаров и/или межнуклеозидных связей в олигонуклеотиде.
"Полностью модифицированный олигонуклеотид" означает, что каждое азотистое основание, каждый сахар и/или каждая межнуклеозидная связь модифицирована.
"Равномерно модифицированный олигонуклеотид" означает, что каждое азотистое основание, каждый сахар и/или каждая межнуклеозидная связь имеет одинаковую модификацию по всему модифицированному олигонуклеотиду.
"Переменный мотив" означает олигонуклеотид или его часть, имеющую, по меньшей мере, четыре отдельных региона модифицированных нуклеозидов в последовательности (AB)nAm, где А представляет регион нуклеозидов, имеющих первый тип модификаций; В представляет собой регион нуклеозидов, имеющих другой тип модификаций; n представляет собой число от 2 до 15; а m - 0 или 1. Таким образом, в некоторых вариантах, переменные мотивы включают 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 или более чередующихся регионов. В некоторых вариантах, каждый А регион и каждый В регион независимо включают от 1 до 4 нуклеозидов.
"Субъект" означает человека или животное, отличное от человека, выбранное для лечения или терапии.
"Субъект, нуждающихся в этом" означает субъекта, идентифицированного как нуждающийся в терапии или лечении. В таких вариантах субъект имеет один или более признаков наличия или развития СМА.
"Введение" означает предоставление лекарственного средства или композиции субъекту и включает, но не ограничиваясь этим, введение с помощью профессиональной медицинской помощи и самостоятельно.
"Парентеральное введение" означает введение посредством инъекции или инфузии. Парентеральное введение включает, но не ограничиваясь этим, подкожное введение, внутривенное введение или внутримышечное введение.
"Системное введение" означает введение в область, отличную от предполагаемой области активности. Примерами системного введения являются подкожное введение, внутривенное введение и внутрибрюшинное введение.
"Подкожное введение" означает введение непосредственно под кожу.
"Внутривенное введение" означает введения в вену.
"Спинномозговая жидкость" или "СМЖ" означает жидкость, заполняющую полости головного и спинного мозга.
"Введение в спинномозговую жидкость" означает любое введение, обеспечивающее доставку вещества непосредственно в спинномозговую жидкость.
"Интрацеребровентрикулярное" или "ИСВ" означает введение в систему желудочков головного мозга.
"Интратекальное" или "ИТ" означает введения в спинномозговую жидкость под паутинной мембраной, которая покрывает головной и спинной мозг. ИТ-инъекция производится через оболочки спинного мозга в субарахноидальное пространство, где фармацевтические агент вводится в оболочки, окружающие спинной мозг.
"Индукционная фаза" означает начальную фазу лечения, в течение которой равновесные концентрации активного фармацевтического агента достигают ткани-мишени. Например, индукционная фаза является фазой лечения, в течение которой равновесная концентрация антисмысловых олигонуклеотидов достигает печени.
"Поддерживающая фаза" означает последующую фазу лечения, когда равновесные концентрации препарата достигли ткани-мишени.
"Продолжительность" означает период времени, в течение которого активность или событие продолжается. Например, продолжительность индукционной фазы представляет собой период времени, в течение которого вводятся индукционные дозы.
"Поддерживающая доза" означает дозу для однократного введения в течение поддерживающей фазы. При использовании здесь "индукционная доза" означает дозу для однократного введения в течение индукционной фазы.
"Совместное введение" означает введение двух или более фармацевтических агентов субъекту. Два или более фармацевтических агента могут быть в одной фармацевтической композиции или в отдельных фармацевтических композициях. Каждый из двух или более фармацевтических агентов могут быть введены одним и тем же или различными способами. Совместное введение выполняется параллельно или последовательно.
"Терапия" означает способ лечения болезни. В некоторых вариантах терапия включает, но не ограничиваясь этим, хирургическую терапию, химическую терапию и физическое вмешательство, такие как вспомогательная искусственная вентиляция легких, питательные трубки и силовая физическая терапия.
"Лечение" означает применение одного или нескольких конкретных процедур, используемых для лечения или улучшение состояния болезни. В некоторых вариантах конкретные процедуры представляют собой введение одного или нескольких фармацевтических агентов.
"Улучшение" означает уменьшение тяжести, по меньшей мере, одного из показателей состояния или болезни. В некоторых вариантах улучшение включает задержку или замедление прогрессирования одного или нескольких показателей состояния или болезни. Показатели тяжести могут быть определены с помощью субъективных или объективных показателей, которые известны специалистам в данной области техники.
"Предупреждение наступления" означает предупреждение развития состояния или заболевания у субъекта, который имеет риск развития заболевания или состояния. В некоторых вариантах субъект, имеющий риск развития заболевания или состояния, получает лечение, похожее на лечение, которое получает субъект, имеющий заболевание или состояние.
"Задержка наступления" означает задержку развития состояния или заболевания у субъекта, который имеет риск развития заболевания или состояния.
"Замедление прогрессирования" означает, что степень тяжести, по меньшей мере, одного симптома, ассоциированного с болезнью или состоянием, ухудшается менее быстро.
"Аминокислотная последовательность экзона 7" означает часть SMN белка, которая соответствует экзону 7 из РНК SMN. Аминокислотная последовательность экзона 7 присутствуют в белке SMN, экспрессированного из РНК SMN, где экзон 7 не исключен во время сплайсинга.
"Белок SMN" означает нормальный белок фактора выживаемости мотонейронов полной длины. SMN может быть экспрессирован из SMN1 гена или SMN2 гена при условии, что экзон 7 присутствует в зрелой мРНК, а аминокислотная последовательность экзона 7 присутствует в SMN белке.
"Доза" означает определенное количество фармацевтического агента, вводимое однократно или в течение определенного отрезка времени. В некоторых вариантах доза может быть представлена в двух или более болюсах, таблетках или инъекциях. Например, в некоторых вариантах, когда предпочтительно подкожное, интертекальное или интрасеребровентрикулярное введение, однократное введение требуемого объема дозы затруднено. В таких вариантах две или более инъекций могут быть использованы для достижения требуемой дозы. В условиях непрерывной инфузии доза может быть выражена как количество лекарственного средства, доставляемого в единицу времени.
"Единица дозировки " означает форму, в которой предоставляется фармацевтический агент. В некоторых вариантах единица дозировки представляет собой флакон, содержащий лиофилизированный олигонуклеотид. В некоторых вариантах единица дозировки представляет собой флакон, содержащий восстановленный олигонуклеотид.
"Терапевтически эффективное количество" означает количество лекарственного средства, которое обеспечивает терапевтический эффект на животных.
"Фармацевтическая композиция" означает смесь веществ, пригодных для введения индивидууму, которая включает фармацевтическое средство. Например, фармацевтическая композиция может включать в себя модифицированный олигонуклеотид и стерильный водный раствор.
"Приемлемый профиль безопасности" означает совокупность побочных эффектов, которые находятся в клинически приемлемых пределах.
"Побочное действие" означает физиологическую реакцию, свойственное лечению, за исключением желаемого эффекта.
1. Некоторые варианты модифицированных олигонуклеотидов
В некоторых вариантах воплощения настоящее изобретение обеспечивает способы и композиции, включающие антисмысловые олигонуклеотиды, содержащие одну или более модификаций по сравнению с олигонуклеотидами природных олигомеров, таких как ДНК или РНК. Такие модифицированные антисмысловые олигонуклеотиды, могут обладать одним или более желаемым свойством. Некоторые такие модификации увеличивают антисмысловую активность антисмыслового олигонуклеотида, например, путем увеличения аффинности антисмыслового олигонуклеотида к целевой нуклеиновой кислоте, увеличения устойчивости к действию одной или более нуклеаз и/или в увеличении фармакокинетики или распределения олигонуклеотида в ткани. В некоторых вариантах воплощения такие модифицированные антисмысловые олигонуклеотиды содержат один или более модифицированных нуклеозидов и/или одну или более модифицированных нуклеозидных связей и/или одну или более присоединенных групп.
а. Некоторые варианты модифицированных нуклеозидов
В некоторых воплощениях антисмысловые олигонуклеотиды содержат один или более модифицированных нуклеозидов. Такие модифицированные нуклеозиды могут включать модифицированный остаток сахара и/или модифицированное азотистое основание. В некоторых воплощениях введение таких модифицированных нуклеозидов в олигонуклеотид приводит к увеличению аффинности связывания с целевой нуклеиновой кислотой и/или увеличению стабильности, включая, но не ограничиваясь этим, увеличение устойчивости к деградации нуклеазами, улучшенные показатели токсичности и/или улучшенное поглощение клетками модифицированного олигонуклеотида.
i. Некоторые варианты азотистых оснований
Природные основания нуклеозидов представляют собой гетероциклические основания, как правило, пуриновые и пиримидиновые. В дополнение к "немодифицированным" и "природным" азотистым основаниям, таким как пуриновые азотистые основания аденин (А) и гуанин (G) и пиримидиновые азотистые основания тимин (Т), цитозин (С) и урацил (U), многие модифицированные азотистые основания или миметики азотистых оснований, известные из уровня техники, подходят для введения в соединения, описанные здесь. В некоторых воплощениях модифицированное азотистое основание представляет собой азотистое основание, которое приближено по структуре к исходному азотистому основанию, такое как, например, 7-диазапурин, 5-метилцитозин или G-кламп. В некоторых воплощениях миметики азотистых оснований включают более сложные структуры, такие как, например, миметик азотистого основания трициклический феноксазин. Способы получения описанных выше азотистых оснований известны из уровня техники.
ii. Некоторые варианты модифицированных сахаров и заменителей сахаров
Антисмысловые олигонуклеотиды по настоящему изобретению могут содержать один или более нуклеозидов, в которых остаток сахара модифицирован относительно природного сахарного остатка. Олигонуклеотиды, содержащие такие модифицированные по сахарному остатку нуклеозиды, могут иметь улучшенную нуклеазную стабильность, увеличенную аффинность связывания или некоторые другие полезные биологические свойства. Такие модификации включают, но не ограничиваются этим, добавление групп заместителей, формирование связей в незародышевом атомном кольце, обеспечивая получение бициклической нуклеиновой кислоты (БНК), замещение атома кислорода рибозильного кольца на S, N(R) или C(R1)(R)2 (R=Н, C1-C12 алкил или протекторная группа) и комбинации модификаций, таких как, например, 2’-F-5’-метил замещенный нуклеозид (см. Международную заявку РСТ WO 2008/101157, опубликованную 21.08.2008, которая раскрывает другие 5’,2’-бис замещенные нуклеозиды) или замещение атома кислорода рибозильного кольца на S с дальнейшим замещением в 2’-положении (см. заявку США US2005-0130923, опубликованную 16 июля 2005) или альтернативно в 5’-положении БНК (см. Международную заявку РСТ WO 2007/134181, опубликованную 22.11.2007, где ЛНК содержит модификации с помощью замещения, например, на 5’-метил или 5’-винил группы).
Примеры нуклеозидов, имеющих модифицированный остаток сахара, включают, но без ограничений, нуклеозиды, содержащие 5’-винил, 5’-метил (R или S), 4’-S, 2’-F, 2’-ОСН3 и 2’-O(СН2)2OCH3 замещающие группы. Заместители по 2’-положению также могут быть выбраны из аллил-, амино-, азидо-, тио-, O-C1-С10 алкил-, OCF3-, O(СН2)2SCH3-, O(СН2)2-O-N(Rm)(Rn)- и O-CH2-C(=O)-N(Rm)(Rn)- групп, где каждый Rm и Rn представляют собой независимо Н или замещенный или незамещенный C1-С10 алкил.
Примеры бициклических нуклеиновых кислот (БНК) включают, но без ограничений, нуклеозиды, содержащие мостик между 4’ и 2’ атомами рибозильного кольца. В некоторых воплощениях антисмысловые соединения по настоящему изобретению включают один или более нуклеозидов БНК, где мостик представлен одной из формул: 4’-β-D-(CH2)-O-2’ (β-D-LNA); 4’-(CH2)-S-2’; 4’-α-L-(CH2)-O-2’ (α-L-LNA); 4’-(CH2)2-O-2’ (ENA); 4’-С(СН3)2-O-2’ (см. PCT/US2008/068922); 4’-СН(СН3)-O-2’ и 4’-СН(CH2OCH3)-O-2’ (см. Патент США US 7,399,845, выданный 15 июля 2008); 4’-СН2-N(ОСН3)-2’ (см. PCT/US2008/ 064591); 4’-СН2-O-N(CH3)-2’ (см. заявку США US2004-0171570, опубликованную 2 сентября 2004); 4’-СН2-N(R)-O-2’ (см. Патент США US 7,427,672, выданный 23 сентября 2008); 4’-СН2-С(СН3)-2’ и 4’-СН2-С(=СН2)-2’ (см. PCT/US2008/ 066154), где R независимо представляет собой Н, C1-C12 алкил или протекторную группу.
В некоторых воплощениях настоящее изобретение обеспечивает модифицированные нуклеозиды, содержащие модифицированные остатки сахара, которые не являются бициклическими остатками сахара. Некоторые такие модифицированные нуклеозиды известны. В некоторых воплощениях сахарное кольцо нуклеозида может быть модифицировано по любому положению. Примеры модификации сахара, использованные в настоящем изобретении, включают, но не ограничиваются этим, соединения, содержащие сахар-замещающие группы, выбранные из: ОН, F, O-алкил, S-алкил, N-алкил или О-алкил-O-алкил, где алкил, алкенил и алкинил могут быть замещенными или незамещенными C1-С10 алкил или C2-C10 алкенил и алкинил. В некоторых таких воплощениях такие заместители могут приходиться на 2’положение сахара.
В некоторых воплощениях модифицированные нуклеозиды содержат заместитель во 2’ положении сахара. В некоторых воплощениях такие заместители выбраны из числа: галогенидов (включая, но не ограничиваясь, F), аллил-, амино-, азидо-, тио-, O-аллил-, О-С1-С10 алкил-, -OCF3, O-(СН2)2-O-СН3-, 2’-O(СН2)2SCH3-, O-(CH2)2-O-N(Rm)(Rn)- или O-СН2-C(=O)-N(Rm)(Rn)- групп, где каждый Rm и Rn независимо представляют собой Н или замещенный или незамещенный C1-С10 алкил.
В некоторых вариантах воплощения модифицированные нуклеозиды, пригодные для использования в настоящем изобретении, представляют собой: 2-метоксиэтокси, 2’-O-метил (2’-O-СН3), 2’-флуоро (2’-F).
В некоторых вариантах воплощения модифицированные нуклеозиды, содержащие замещающие группы во 2’-положении, выбраны из: O[(СН2)nO]mCH3, O(CH2)nNH2, O(СН2)nCH3, O(CH2)nONH2, OCH2C(=O)N(H)CH3 и O(СН2)nON[(СН2)nCH3]2, где n и m представляют собой от 1 до примерно 10. Другие 2’-замещающие группы сахара включают: C1-C10 алкил, замещенный алкил, алкенил, алкинил, алкарил, аралкил, O-алкарил или O-аралкил, SH, SCH3, OCN, Cl, Br, CN, CF3, OCF3, SOCH3, SO2CH3, ONO2, NO2, N3, NH2, гетероциклоалкил, гетероциклоалкарил, аминоалкиламино-, полиалкиламино, замещенный силил, РНК-отщепленная группа, репортерная группа, интеркалятор, группу для улучшения фармакинетических свойств или группу для улучшения для фармодинамических свойств олигомерного соединения и другие заместители, имеющие подобные свойства.
В некоторых воплощениях модифицированные нуклеозиды включают 2’-МОЭ боковую цепь (Baker et al, J. Biol. Chem., 1997, 272, 11944-12000). Такие 2’-МОЭ замены были описаны как улучшающие аффинность связывания по сравнению с немодифицированными нуклеозидами и другими модифицированными нуклеозидами, такими как 2’-O-метил, O-пропил и O-аминопропил нуклеозиды. Олигонуклеотиды, имеющие 2’-МОЭ заместитель, также были показаны как антисмысловые ингибиторы экспрессии генов с возможностью использования in vivo (Martin, P., Helv. Chim. Acta, 1995, 78, 486-504; Altmann et al, Chimia, 1996, 50, 168-176; Altmann et al, Biochem. Soc. Trans., 1996, 24, 630-637; and Altmann et al, Nucleosides Nucleotides, 1997, 16, 917-926).
В некоторых вариантах 2’-заместитель сахара находится либо в арабино (верхнем) положении, либо в рибо (нижнем) положении. В некоторых таких вариантах 2’-арабино модификация представляет собой 2’-F арабино (ФАНК). Подобные модификации могут быть произведены в других положениях сахара, в частности, 3’-положении сахара нуклеозида на 3’ конце или в 2’-5’связанных олигонуклеотидов и в 5’-положении нуклеотида на 5’ конце.
В некоторых вариантах, нуклеозиды, подходящие для использования в настоящем изобретении, имеют заменители Сахаров, такие как циклобутил вместо рибофуранозил сахара. В качестве примеров патенты США, которые раскрывают приготовление таких модифицированных структур Сахаров, включают, но не ограничиваются этим: US 4,981,957; 5,118,800; 5,319,080; 5,359,044; 5,393,878; 5,446,137; 5,466,786; 5,514,785; 5,519,134; 5,567,811; 5,576,427; 5,591,722; 5,597,909; 5,610,300; 5,627,053; 5,639,873; 5,646,265; 5,658,873; 5,670,633; 5,792,747 и 5,700,920, каждый из которых включен в настоящую заявку посредством ссылки в полном объеме.
В некоторых вариантах настоящее изобретение обеспечивает нуклеозиды, включающие модификацию в 2’-положении сахара. В некоторых вариантах изобретение обеспечивает нуклеозиды, включающие модификацию в 5’-положении сахара. В некоторых вариантах изобретение обеспечивает нуклеозиды, включающие модификации в 2’-положении и 5’-положении сахара. В некоторых вариантах модифицированные нуклеозиды могут быть использованы для включения в олигонуклеотиды. В некоторых вариантах модифицированные нуклеозиды включены в олигонуклеозиды с 5’-конца олигонуклеотида.
б. Некоторые варианты межнуклеозидных связей
Антисмысловые олигонуклеотиды по настоящему изобретению могут дополнительно содержать один или несколько модифицированных межнуклеозидных связей. Два основных класса линкерных групп определяются наличием или отсутствием атома фосфора. Примеры фосфорсодержащих связей включают, но не ограничиваясь этим, фофодиэфирную (Р=О), фосфотриэфирную, метилфосфанатную, фосфорамидатную и фосфоротиоатную (Р=S) связи. Примеры нефосфорсодержащих линкерных групп включают, но не ограничиваясь этим, метиленеметилимино (-СН2-N(СН3)-O-CH2-), тиодиэфир (-ОС(O)-S-), тионокарбамат (-ОС(О)(NH)-S-); силоксан (-O-Si(H)2-O-) и N,N-диметилгидразин (-СН2-N(СН3)-N(СН3)-). Олигонуклеотиды, имеющие нефосфорсодержащие линкерные группы называются олигонуклеозидами. Модифицированные относительно природных фосфодиэфирных связи могут быть использованы для изменения, как правило, увеличения, нуклеазной усточивости олигонуклеотидов. В некоторых вариантах связи, содержащие хиральный атом, могут быть приготовлены как рацемические смеси или как отдельные энантиомеры. Примеры хиральных связей включают, но не ограничиваясь этим, алкилфосфонаты и фосфоротиоаты. Способы получения фосфорсодержащих и нефосфорсодержащих связей, хорошо известны специалистам в данной области.
Антисмысловые олигонуклеотиды, описанные здесь, содержат один или несколько асимметричных центров и, тем самым, обеспечивают энантиомеры, диастереомеры и другие стереоизомерные конфигурации, которые могут быть определены в терминах абсолютной стереохимии как (R) или (S), например, сахарные аномеры, или (D) или (L), например, аминокислоты и др. Антисмысловые соединения по настоящему изобретению включают любые возможные изомеры, а также их рацемические и оптически чистые формы.
В некоторых вариантах антисмысловые олигонуклеотиды содержат, по меньшей мере, одну модифицированную межнуклеозидную связь. В некоторых вариантах антисмысловые олигонуклеотиды содержат, по меньшей мере, две модифицированные межнуклеозидные связи. В некоторых вариантах антисмысловые олигонуклеотиды содержат, по меньшей мере, три модифицированные межнуклеозидные связи. В некоторых вариантах антисмысловые олигонуклеотиды содержат, по меньшей мере, 10 модифицированных межнуклеозидных связей. В некоторых вариантах каждая межнуклеозидная связь антисмыслового олигонуклеотида является модифицированной межнуклеозидной связью. В некоторых вариантах такие модифицированные межнуклеозидные связи представляют собой фосфоротиоатные связи.
в. Варианты длины
В некоторых вариантах воплощения настоящее изобретение обеспечивает антисмысловые олигонуклеотиды любой из возможных длины. В некоторых вариантах воплощения настоящее изобретение обеспечивает антисмысловые соединения или антисмысловые олигонуклеотиды, включающие или состоящие из X-Y связанных нуклеозидов, где Х и Y каждый независимо выбран из 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49 и 50; при этом X<Y. Например, в некоторых вариантах воплощения настоящее изобретение обеспечивает антисмысловые соединения или антисмысловые олигонуклеотиды, включающие или состоящие из: 8-9, 8-10, 8-11, 8-12, 8-13, 8-14, 8-15, 8-16, 8-17, 8-18, 8-19, 8-20, 8-21, 8-22, 8-23, 8-24, 8-25, 8-26, 8-27, 8-28, 8-29, 8-30, 9-10, 9-11, 9-12, 9-13, 9-14, 9-15, 9-16, 9-17, 9-18, 9-19, 9-20, 9-21, 9-22, 9-23, 9-24, 9-25, 9-26, 9-27, 9-28, 9-29, 9-30, 10-11, 10-12, 10-13, 10-14, 10-15, 10-16, 10-17, 10-18, 10-19, 10-20, 10-21, 10-22, 10-23, 10-24, 10-25, 10-26, 10-27, 10-28, 10-29, 10-30, 11-12, 11-13, 11-14, 11-15, 11-16, 11-17, 11-18, 11-19, 11-20, 11-21, 11-22, 11-23, 11-24, 11-25, 11-26, 11-27, 11-28, 11-29, 11-30, 12-13, 12-14, 12-15, 12-16, 12-17, 12-18, 12-19, 12-20, 12-21, 12-22, 12-23, 12-24, 12-25, 12-26, 12-27, 12-28, 12-29, 12-30, 13-14, 13-15, 13-16, 13-17, 13-18, 13-19, 13-20, 13-21, 13-22, 13-23, 13-24, 13-25, 13-26, 13-27, 13-28, 13-29, 13-30, 14-15, 14-16, 14-17, 14-18, 14-19, 14-20, 14-21, 14-22, 14-23, 14-24, 14-25, 14-26, 14-27, 14-28, 14-29, 14-30, 15-16, 15-17, 15-18, 15-19, 15-20, 15-21, 15-22, 15-23, 15-24, 15-25, 15-26, 15-27, 15-28, 15-29, 15-30, 16-17, 16-18, 16-19, 16-20, 16-21, 16-22, 16-23, 16-24, 16-25, 16-26, 16-27, 16-28, 16-29, 16-30, 17-18, 17-19, 17-20, 17-21, 17-22, 17-23, 17-24, 17-25, 17-26, 17-27, 17-28, 17-29, 17-30, 18-19, 18-20, 18-21, 18-22, 18-23, 18-24, 18-25, 18-26, 18-27, 18-28, 18-29, 18-30, 19-20, 19-21, 19-22, 19-23, 19-24, 19-25, 19-26, 19-29, 19-28, 19-29, 19-30, 20-21, 20-22, 20-23, 20-24, 20-25, 20-26, 20-27, 20-28, 20-29, 20-30, 21-22, 21-23, 21-24, 21-25, 21-26, 21-27, 21-28, 21-29, 21-30, 22-23, 22-24, 22-25, 22-26, 22-27, 22-28, 22-29, 22-30, 23-24, 23-25, 23-26, 23-27, 23-28, 23-29, 23-30, 24-25, 24-26, 24-27, 24-28, 24-29, 24-30, 25-26, 25-27, 25-28, 25-29, 25-30, 26-27, 26-28, 26-29, 26-30, 27-28, 27-29, 27-30, 28-29, 28-30 или 29-30 связанных нуклеозидов.
В некоторых вариантах антисмысловые соединения или антисмысловые олигонуклеотиды по настоящему изобретению имеют длину 15 нуклеозидов. В некоторых вариантах воплощения антисмысловые соединения или антисмысловые олигонуклеотиды по настоящему изобретению имеют длину 16 нуклеозидов. В некоторых вариантах воплощения антисмысловые соединения или антисмысловые олигонуклеотиды по настоящему изобретению имеют длину 17 нуклеозидов. В некоторых вариантах воплощения антисмысловые соединения или антисмысловые олигонуклеотиды по настоящему изобретению имеют длину 18 нуклеозидов. В некоторых вариантах воплощения антисмысловые соединения или антисмысловые олигонуклеотиды по настоящему изобретению имеют длину 19 нуклеозидов. В некоторых вариантах воплощения антисмысловые соединения или антисмысловые олигонуклеотиды по настоящему изобретению имеют длину 20 нуклеозидов.
г. Некоторые варианты олигонуклеотидных мотивов
В некоторых вариантах воплощения антисмысловые олигонуклеотиды имеют химически модифицированные субъединицы, расположенных в определенных участках вдоль длины олигонуклеотида. В некоторых вариантах антисмысловые олигонуклеотиды по настоящему изобретению полностью модифицированы. В некоторых вариантах антисмысловые олигонуклеотиды изобретение равномерно модифицированы. В некоторых вариантах антисмысловые олигонуклеотиды по настоящему изобретению равномерно модифицированы и каждый нуклеозид содержит 2’-МОЭ группу сахара. В некоторых вариантах антисмысловые олигонуклеотиды по настоящему изобретению равномерно модифицированы и каждый нуклеозид содержит 2’-ОМе группу сахара. В некоторых вариантах антисмысловые олигонуклеотиды по настоящему изобретению равномерно модифицированы и каждый нуклеозид содержит морфолино сахарный остаток.
В некоторых вариантах олигонуклеотиды по настоящему изобретению содержат повторяющийся мотив. В таких вариантах типы повторяющихся модификаций выбраны из 2’-МОЭ, 2’-F, бициклический сахар-модифицированный нуклеозид и ДНК (немодифицированный 2’-дезокси). В некоторых таких вариантах воплощения каждый повторяющийся регион включает один нуклеозид.
В некоторых вариантах воплощения олигонуклеотиды по настоящему изобретению содержат один или более блоков нуклеозидов первого типа и один или более блоков нуклеозидов второго типа.
В некоторых вариантах воплощения один или более повторяющихся регионов в повторяющемся мотиве включают более одного нуклеозида одного типа. Например, олигомерные соединения по настоящему изобретению могут включать один или более регионов любого из следующих нуклеозидных мотивов:
Ну1 Ну1 Ну2 Ну2 Ну1 Ну1;
Ну1 Ну2 Ну2 Ну1 Ну2 Ну2;
Ну1 Ну1 Ну2 Ну1 Ну1 Ну2;
Ну1 Ну2 Ну2 Ну1 Ну2 Ну1 Ну1 Ну2 Ну2;
Ну1 Ну2 Ну1 Ну2 Ну1 Ну1;
Ну1 Ну1 Ну2 Ну1 Ну2 Ну1 Ну2;
Ну1 Ну2 Ну1 Ну2 Ну1 Ну1;
Ну1 Ну2 Ну2 Ну1 Ну1 Ну2 Ну2 Ну1 Ну2 Ну1 Ну2 Ну1 Ну1;
Ну2 Ну1 Ну2 Ну2 Ну1 Ну1 Ну2 Ну2 Ну1 Ну2 Ну1 Ну2 Ну1 Ну1 или
Ну1 Ну2 Ну1 Ну2 Ну2 Ну1 Ну1 Ну2 Ну2 Ну1 Ну2 Ну1 Ну2 Ну1 Ну1;
где Ну1 представляет собой нуклеозид первого типа, а Ну2 - второго типа. В некоторых вариантах один из Ну1 и Ну2 представляет собой 2’-МОЭ нуклеозид, при этом другой из Ну1 и Ну2 выбран из 2’-ОМе модифицированного нуклеозида, БНК и немодифицированного ДНК или РНК нуклеозида.
2. Олигомерные соединения
В некоторых вариантах воплощения настоящее изобретение обеспечивает олигомерные соединения. В некоторых вариантах воплощения олигомерные соединения включают в себя только олигонуклеотид. В некоторых вариантах воплощения олигомерные соединения включают в себя олигонуклеотид и одну или более конъюгированных и/или терминальных групп. Такие конъюгированные и/или терминальные группы могут быть присоединены к олигонуклеотидам, имеющим какой-либо из химических мотивов, описанных ниже. Так, например, олигомерное соединение, содержащее олигонуклеотид, имеющий регион повторяющихся нуклеозидов, может содержать терминальную группу.
а. Некоторые варианты конъюгированных групп
В некоторых вариантах воплощения олигонуклеотиды по настоящему изобретению модифицированы путем присоединения одной или нескольких конъюгированных групп. В основном сопряженные группы модифицируют одно или несколько свойств олигомерного соединения, включая, но не ограничиваясь этим, фармакодинамику, фармакокинетику, стабильность, связывание, абсорбцию, распределения в клетке, поглощение клеткой, заряд и клиренс. Конъюгированные группы обычно используются в химической технологии и связаны напрямую или через факультативные линкерные компоненты или группы с исходным соединением, таким как олигомерное соединение, в частности, олигонуклеотидом. Конъюгированные группы включают, но без ограничений, интеркаляторы, молекулы-репортеры, полиамины, полиамиды, полиэтилен гликоль, тиоэфиры, полиэфиры, холестеролы, тиохолестеролы, фрагменты желчные кислот, фолиевую кислоту, липиды, фосфолипиды, биотин, феназин, фенантридин, антрахинон, адамантан, акридин, флюоресцеины, родамины, кумарины и красители. Некоторые из конъюгированных групп были описаны ранее, например: фрагменты холестерола (Letsinger и др., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1989, 86, 6553-6556), желчные кислоты (Manoharan et al, Bioorg. Med. Chem. Let., 1994, 4, 1053-1060), тиоэфир, например, гексил-3-тритилтиол (Manoharan et al, Ann. N.Y. Acad. Sci., 1992, 660, 306-309; Manoharan et al, Bioorg. Med. Chem. Let., 1993, 3, 2765-2770), тиохолестерол (Oberhauser et al, Nucl. Acids Res., 1992, 20, 533-538), алифатическая цепь, например, додекандиол или ундецид остаток (Saison-Behmoaras et al, EMBO J., 1991, 10, 1111-1118; Kabanov et al, FEBS Lett., 1990, 259, 327-330; Svinarchuk et al, Biochimie, 1993, 75, 49-54), фосфолипиды, например, ди-гексадецил-рац-глицерин или триэтиламмоний 1,2-ди-О-гексадецил-рац-глицеро-3-Н-фосфоната (Manoharan et al, Tetrahedron Lett., 1995, 36, 3651-3654; Shea et al, Nucl. Acids Res., 1990, 18, 3777-3783), полиамины или цепь полиэтиленгликоля (Manoharan et al, Tetrahedron Lett., 1995, 36, 3651-3654) или адамантан уксусной кислоты (Manoharan et al. Tetrahedron Lett., 1995, 36, 3651-3654), пальмитил фрагмент (Mishra et al, Biochim. Biophys. Acta, 1995, 1264, 229-237) или октадециламин или гексиламно-карбонил-оксихолистерол фрагмент (Crooke et al, J. Pharmacol. Exp. Ther., 1996, 277, 923-937).
В некоторых вариантах конъюгированная группа содержит активное лекарственное вещество, например, аспирин, варфарин, фенилбутазон, ибупрофен, супрафен, фенбуфен, кетопрофен, (5)-(+)- пранопрофен, сарпрофен, дансилсаркозин, 2,3,5-трийодобензойную кислоту, флуфенамовую кислоту, фолиевую кислоту, бензотиадиазид, хлоротиазид, диазепинового, индометицин, барбитурат, цефалоспорин, серосодержащий препарат, антидиабетический, антибактериальный препарат или антибиотик. Конъюгаты олигонуклеотидов с лекарственными препаратами и их получение описаны в заявке на патент США 09/334,130.
Примеры патентов США, которые раскрывают получение конъюгатов олигонуклеотидов, включают, но не ограничиваясь этим: US 4,828,979; 4,948,882; 5,218,105; 5,525,465; 5,541,313; 5,545,730; 5,552,538; 5,578,717, 5,580,731; 5,580,731; 5,591,584; 5,109,124; 5,118,802; 5,138,045; 5,414,077; 5,486,603; 5,512,439; 5,578,718; 5,608,046; 4,587,044; 4,605,735; 4,667,025; 4,762,779; 4,789,737; 4,824,941; 4,835,263; 4,876,335; 4,904,582; 4,958,013; 5,082,830; 5,112,963; 5,214,136; 5,082,830; 5,112,963; 5,214,136; 5,245,022; 5,254,469; 5,258,506; 5,262,536; 5,272,250; 5,292,873; 5,317,098; 5,371,241, 5,391,723; 5,416,203, 5,451,463; 5,510,475; 5,512,667; 5,514,785; 5,565,552; 5,567,810; 5,574,142; 5,585,481; 5,587,371; 5,595,726; 5,597,696; 5,599,923; 5,599,928 и 5,688,941.
Конъюгированные группы могут быть присоединены к одному или обоим концам олигонуклеотида (концевые конъюгированные группы) и/или в любом положении внутри олигонуклеотида.
б. Терминальные группы
В некоторых вариантах олигомерные соединения содержат терминальные группы на одном или обоих концах. В некоторых вариантах терминальная группа может включать какую-либо конъюгированную группу, описанную выше. В некоторых вариантах терминальные группы могут содержать дополнительные нуклеозиды и/или инвертированные базовые нуклеозиды. В некоторых вариантах терминальная группа является стабилизирующей группой.
В некоторых вариантах олигомерные соединения включают одну или несколько терминальных стабилизирующих групп, которые улучшают свойства, такие как, например, устойчивость к действию нуклеаз. Стабилизирующие группы могут включать кэп-структуры. Термины «кэп-структура» или «терминальная кэп-структура», используемые здесь, относятся к химическим модификациям, которые могут быть присоединены к одному или к обоим концам олигомерного соединения. Некоторые такие модификации терминальных групп защищают олигомерные соединения, имеющие терминальные остатки нуклеиновых кислот от экзонуклеазной деградации, а также кэп может помочь в доставке и/или локализации в клетке. Кэп может присутствовать на 5’-конце (5’-кэп), на 3’-конце (3-кэп) или на обоих концах (подробнее см. Wincott et al, Международная публикация РСТ WO 97/26270; Beaucage, Tyer, 1993, Tetrahedron 49, 1925; заявка на патент США US 2005/0020525; а также WO 03/004602).
В некоторых вариантах с одного или обоих концов терминального олигонуклеотида олигомерного соединения присоединен один или несколько дополнительных нуклеозидов. Такие дополнительные терминальные нуклеозиды называются здесь терминальной группой нуклеозидов. В двухцепочечном соединении такая терминальная группа нуклеозидов служит для формирования тупых концов (3’ и/или 5’). При формировании двухцепочечных антисмысловых соединений такие терминальные группы нуклеозидов могут быть или не быть комплементарны целевой нуклеиновой кислоте. В некоторых вариантах терминальные группы являются ненуклеозидными терминальными группами. Такие ненуклеозидные терминальные группы могут представлять собой любую терминальную группу, отличную от нуклеозида.
в. Мотивы олигомерных соединений
В некоторых вариантах олигомерные соединения настоящего изобретения включают мотив:
Т1-(Ну1)n1-(Ну2)n2-(Ну1)n3-(Ну2)n4-(Ну1)n5-Т2, где:
Ну1 является нуклеозидом первого типа;
Ну2 является нуклеозидом второго типа;
каждый из n1 и n5 независимо представляют собой число от 0 до 3;
сумма n2 и n4 составляет от 10 до 25;
n3 представляет собой число от 0 до 5,
а также каждый из T1 и Т2 независимо представляет собой Н, гидроксил протекторную группу, факультативно линкерную конъюгированную группу или кэп-группу.
В некоторых таких вариантах сумма n2 и n4 составляет 13 или 14; n1 равно 2; n3 равно 2 или 3, а n5 равно 2. В некоторых таких вариантах олигомерные соединения по настоящему изобретению включают мотив, выбранный из таблицы А.
Таблица А | ||||
n1 | n2 | n3 | n4 | n5 |
2 | 16 | 0 | 0 | 2 |
2 | 2 | 3 | 11 | 2 |
2 | 5 | 3 | 8 | 2 |
2 | 8 | 3 | 5 | 2 |
2 | 11 | 3 | 2 | 2 |
2 | 9 | 3 | 4 | 2 |
2 | 10 | 3 | 3 | 2 |
2 | 3 | 3 | 10 | 2 |
2 | 4 | 3 | 9 | 2 |
2 | 6 | 3 | 7 | 2 |
2 | 7 | 3 | 6 | 2 |
2 | 8 | 6 | 2 | 2 |
2 | 2 | 2 | 12 | 2 |
2 | 3 | 2 | 11 | 2 |
2 | 4 | 2 | 10 | 2 |
2 | 5 | 2 | 9 | 2 |
2 | 6 | 2 | 8 | 2 |
2 | 7 | 2 | 7 | 2 |
2 | 8 | 2 | 6 | 2 |
2 | 9 | 2 | 5 | 2 |
2 | 10 | 2 | 4 | 2 |
2 | 11 | 2 | 3 | 2 |
2 | 12 | 2 | 2 | 2 |
Таблица А предназначена для иллюстрации и не должна ограничивать настоящее изобретение. Олигомерные соединения, описанные в Таблице А, содержат по 20 нуклеозидов. Олигомерные соединения, содержащие больше или меньше нуклеозидов, могут легко быть получены путем выбора различных чисел нуклеозидов для одного или более n1-n5. В некоторых вариантах изобретения Ну1 и Ну2 выбраны из 2’-МОЭ, 2’-ОМе, ДНК и бициклических нуклеозидов.
3. Антисмысловые соединения
В некоторых вариантах воплощения олигомерные соединения по настоящему изобретению являются антисмысловыми соединениями. Таким образом, в таких вариантах воплощения олигомерные соединения гибридизуются с целевой нуклеиновой кислотой, проявляя антисмысловую активность.
а. Гибридизация
В некоторых вариантах воплощения настоящее изобретение обеспечивает антисмысловые олигонуклеотиды, которые специфично гибридизуются с целевой нуклеиновой кислотой, когда существует достаточная степень комплементарности, обеспечивающая отсутствие неспецифического связывания антисмыслового соединения с нецелевой нуклеиновой кислотой, в условиях, при которых желательно специфическое связывание, например, в физиологических условиях при анализе in vivo или при терапевтическом лечении, и в условиях анализа in vitro.
Таким образом, "жесткие условия гибридизации" или "жесткие условия" означают условия, при которых антисмысловое соединение гибридизуется с целевой последовательностью, но с минимальным количеством других последовательностей. Жесткие условия зависят от последовательности и различаются в различных средах, а также "жесткие условия", при которых антисмысловые олигонуклеотиды гибридизуются с целевой последовательностью, определяются природой и составом антисмысловых олигонуклеотидов, а также условиями анализа, при которых они используются.
Из уровня техники известно, что введение модификаций нуклеотидов для изменения аффиности может обеспечить большее количество неспаренных олигонуклеотидов по сравнению с немодифицированным соединением. Аналогичным образом, некоторые последовательности азотистых оснований могут быть более устойчивыми к появлению неспаренных оснований, чем другие последовательности азотистых оснований. Любой специалист в данной области способен определить необходимое количество неспаренных нуклеотидов между олигонуклеотиды или между антисмысловым олигонуклеотидом и целевой нуклеиновой кислотой, например, путем определения температуры плавления (Тпл). Тпл или ΔТпл можно рассчитать с помощью методов, известных специалисту в данной области техники. В частности, методы, описанные Freier et al (Nucleic Acids Research, 1997, 25, 22:4429-4443), позволяют специалистам в данной области оценить нуклеотидные модификации на стабильность по увеличению температуры плавления РНК:ДНК-дуплекса.
б. Процессинг пре-мРНК
В некоторых вариантах воплощения антисмысловые соединения по настоящему изобретению являются комплементарными к пре-мРНК. В некоторых вариантах воплощения такие антисмысловые соединения изменяют сплайсинг пре-мРНК. В некоторых таких вариантах воплощения изменяется отношение одного варианта зрелой мРНК, отвечающей целевой пре-мРНК, к другому варианту зрелой мРНК. В некоторых таких вариантах изменяется отношение варианта белка, экспрессированного от целевой пре-мРНК, к другому варианту белка. Некоторые олигомерные соединения и последовательности азотистых оснований, которые могут быть использованы для изменения сплайсинга пре-мРНК, могут быть найдены, например, в публикациях US 6,210,892; US 5,627,274; US 5,665,593; 5,916,808; US 5,976,879; US2006/0172962; US2007/002390; US2005/0074801; US2007/0105807; US2005/0054836; WO 2007/090073; WO2007/047913, Hua и др., PLoS Biol 5(4):e73; Vickers et al, J. Immunol. 2006 Mar 15; 176(6):3652-61 и Hua et al, American J. of Human Genetics (April 2008) 82, 1-15, каждая из которых включена в настоящий документ путем ссылки в полном объеме для любых целей. В некоторых вариантах воплощения антисмысловые последовательности, которые изменяют сплайсинг, модифицированы в соответствии с мотивами по настоящему изобретению.
Антисмысловые соединения являются эффективными средствами для модуляции экспрессии одного или более специфических генетических продуктов и применяются в терапевтических, диагностических и исследовательских приложениях. Описанные здесь антисмысловые соединения могут использоваться для модуляции экспрессии генов посредством антисмысловых механизмов действия, включая антисмысловые механизмы целевого связывания. В одном аспекте антисмысловые соединения, предусмотренные настоящим изобретением, модулируют сплайсинг целевого гена. Такие модуляции включают стимулирование или ингибирование включения экзона. Дополнительно настоящим изобретением предусмотрены антисмысловые соединения, нацеленные на cis регуляторные элементы сплайсинга, существующие в пре-мРНК молекулах, включая экзонные сплайсинговые энхансеры, экзонные сплайсинговые сайленсеры, интронные сплайсинговые энхансеры и интронные сплайсинговые сайленсеры. Распределение cis регуляторных элементов сплайсинга изменяет выбор сплайсингового сайта, что может вызвать изменения композиции сплайсинговых продуктов.
Процессинг эукариотических пре-мРНК представляет собой комплекс процессов, для которых необходимо множество сигналов и белковых факторов с целью обеспечения соответствующего сплайсинга мРНК. Определение экзона с помощью сплайсосомы требует не только канонических сигналов сплайсинга, которые определяют интрон-экзонные границы. Один такой дополнительный сигнал обеспечивают cis-действующие регуляторные энхансерные и сайленсерные последовательности. Экзонные сплайсинговые энхансеры (ЭСЭ), экзонные сплайсинговые сайленсеры (ЭСС), интронные сплайсинговые энхансеры (ИСЭ) и интронные сплайсинговые сайленсеры (ИСС) были идентифицированы как подавляющие и облегчающие использование сплайсинговых донорных сайтов или сплайсинговых акцепторных сайтов, зависящих от этих сайтов и режима действия. (Yeo et al 2004, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 101(44):15700-15705). Связывание специфических белков (trans-факторов) для регуляторных последовательностей направлено на процесс сплайсинга для стимулирования или ингибирования отдельных сплайсинговых сайтов, модулируя соотношение сплайсинговых продуктов (Scamborova et al 2004, Mol. Cell. Biol. 24(5):1855-1869; Hovhannisyan и Carstens, 2005, Mol. Cell. Biol. 25(1):250-263; Minovitsky et al 2005, Nucleic Acids Res. 33(2):714-724).
4. Фармацевтические композиции
В некоторых вариантах воплощения настоящее изобретение обеспечивает фармацевтические композиции, содержащие одно или более антисмысловых соединений. В некоторых вариантах воплощения такая фармацевтическая композиция содержит стерильный физиологический раствор и одно или более антисмысловых соединений. В некоторых вариантах воплощения такая фармацевтическая композиция состоит из стерильного физиологического раствора и одного или более антисмысловых соединений.
В некоторых вариантах воплощения антисмысловые соединения могут быть смешены с фармацевтически приемлемыми активными и/или инертными веществами для приготовления фармацевтических композиций или рецептур. Композиции и способы для приготовления фармацевтических композиций зависят от множества критериев, включая, но не ограничиваясь этим, способы введения, степень заболевания или дозы введения.
В некоторых вариантах антисмысловые соединения могут быть использованы в фармацевтических композициях путем комбинирования таких олигомерных соединений с подходящим фармацевтически приемлемым разбавителем или носителем. Фармацевтически приемлемый разбавитель включает натрий-фосфатный буфер (PBS). PBS является подходящим разбавителем для использования в композициях для приема парентерально. Таким образом, в некоторых вариантах воплощения в способах по настоящему изобретению используются фармацевтические композиции, содержащие антисмысловые соединения и фармацевтически приемлемый разбавитель. В некоторых вариантах воплощения фармацевтически приемлемый разбавитель представляет собой PBS.
Фармацевтические композиции, содержащие антисмысловые соединения, могут включать какие-либо фармацевтически приемлемые соли, эфиры или соли таких эфиров. В некоторых вариантах воплощения фармацевтические композиции, содержащие антисмысловые соединения, содержат один или более олигонуклеотидов, которые при введении животному, включая человека, способны обеспечивать (напрямую или косвенно) биологически активный метаболит или его фрагмент. Таким образом, настоящий документ, в частности, также описывает фармацевтически приемлемые соли антисмысловых соединений, пролекарства, фармацевтически приемлемые соли таких пролекарств и других биологические эквиваленты. Подходящие фармацевтически приемлемые соли включают, но не ограничиваются этим, соли натрия и калия.
Пролекарство может включать в себя введение дополнительных нуклеозидов на одном или обоих концах олигомерного соединения, которые отщепляются эндогенными нуклеазами в организме, для формирования активного олигомерного антисмыслового соединения.
Векторы на основе липидов были использованы в различных методах терапии, основанных на применении нуклеиновых кислот. Например, в одном из способов нуклеиновые кислоты вводят в предварительно созданные липосомы или липоплексы, приготовленные из смеси катионных и нейтральных липидов. В другом способе комплексы ДНК с моно- или поликатионными липидами образуются без нейтральных липидов.
Некоторые способы приготовления описаны в Akinc и др., Nature Biotechnology 26, 561-569 (01 мая 2008 г.), который включен в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме.
5. Введение субъекту
В некоторых вариантах воплощения фармацевтические композиции, содержащие один или несколько антисмысловых соединений, вводят субъекту. В некоторых вариантах такие фармацевтические композиции вводят посредством инъекции. В некоторых вариантах такие фармацевтические композиции вводят путем инфузии.
В некоторых вариантах воплощения фармацевтические композиции вводят с помощью инъекции или инфузии в спинномозговую жидкость. В некоторых таких вариантах фармацевтические композиции вводятся с помощью прямой инъекции или инфузии в позвоночник. В некоторых вариантах фармацевтические композиции вводят в виде инъекции или инфузии в головной мозг. В некоторых вариантах фармацевтические композиции введение путем интратекальной инъекции или инфузии более предпочтительно, чем введение непосредственно в ткань спинного мозга. Не ограничиваясь как теория, в некоторых вариантах антисмысловые соединения вводятся в окружающую спинномозговую жидкость и способны проникать в паренхиму спинного мозга. Дополнительным преимуществом интратекального введения является то, что интратекальный способ имитирует введение с помощью люмбальной пункции (например, спинномозговой пункции), которая широко применяется в терапии людей.
В некоторых вариантах воплощения фармацевтические композиции вводятся путем интрасеребровентрикулярной (ИСВ) инъекции или инфузии. Интрацеребровентрикулярное, или интравентрикулярное, введение фармацевтической композиции, содержащей одно или несколько антисмысловых соединений, может быть выполнена в любой один или несколько желудочков мозга, которые заполнены спинномозговой жидкостью (ликвором, СМЖ). СМЖ представляет собой прозрачную жидкость, которая заполняет желудочки, присутствует в субарахноидальном пространстве и окружает головной и спинной мозг. СМЖ производится сосудистым сплетением и путем просачивания или трансмиссии тканевой жидкости головного мозга, поступая в желудочки. Сосудистое сплетение представляет собой структуру, покрывающую стенки боковых желудочков и крышу третьего и четвертого желудочков. Некоторые исследования показали, что эти структуры способны производить 400-600 см3 жидкости в сутки в соответствии с количеством, необходимым для того, чтобы заполнять пространство центральной нервной системы четыре раза за день. У взрослых людей объем этой жидкости составляет от 125 до 150 мл (4-5 унций). СМЖ находится в непрерывном образовании, распространении и поглощении. Некоторые исследования показали, что примерно 430 до 450 мл (около 2 стаканов) СМФ может производиться ежедневно. Некоторые расчеты показывают, что продукция составляет около 0,35 мл в минуту у взрослых и 0,15 мл в минуту у детей. Сосудистое сплетение боковых желудочков производят основную часть всей СМЖ. Вначале СМЖ проходит через отверстия Монро в третий желудочек, который также дополнительно вносит СМЖ, далее она проходит вниз через Сильвиев водопровод до четвертого желудочка. Четвертый желудочек дополнительно привносит часть СМЖ, которая затем идет субарахноидальное пространство через отверстия Мажанди и Лужки. Затем она циркулирует в основании мозга, идет вниз к спинному мозгу и вверх к полушариям головного мозга. СМЖ попадает в кровь через ворсинки паутинной оболочки и внутричерепных сосудистых пазух.
В некоторых вариантах такие фармацевтические композиции вводят системно. В некоторых вариантах фармацевтические композиции вводят подкожно. В некоторых вариантах фармацевтические композиции вводят внутривенно. В некоторых вариантах фармацевтические композиции вводят внутримышечно.
В некоторых вариантах, фармацевтические композиции вводят как непосредственно СМЖ (например, ИТ и/или ИСВ инъекции и/или инфузии), так и системно.
В некоторых вариантах антисмысловые соединения, которые вводят системно, поступают к нейронам. В некоторых вариантах антисмысловые соединения, которые вводят системно, могут проникать через гематоэнцефалический барьер, особенно у молодых субъектов, у которых гематоэнцефалический барьер не сформирован полностью (например, у субъектов в период внутриутробного развития и/или у новорожденных). В некоторых вариантах некоторое количество антисмыслового соединения, которое вводится системно, может быть поглощено нервными клетками, в том числе у субъектов, гематоэнцефалический барьер которых сформирован полностью. Например, антисмысловые соединения могут поступать к нейронам в или около нервно-мышечного соединения (ретроградное поглощение). В некоторых вариантах такое ретроградное поглощение обеспечивает антисмысловую активность внутри нейрона, включая, но не ограничиваясь этим, внутри двигательного нейрона, а также обеспечивает терапевтический эффект за счет антисмысловой активности внутри нейрона.
В некоторых вариантах системное введение обеспечивает терапевтический эффект за счет антисмысловой активности, происходящей в клетках и/или тканях, за исключением нейронов. Несмотря на то, что показана необходимость функциональных SMN внутри нейронов для нормального функционирования нейронов, последствия уменьшения функционального SMN в других клетках и тканях не достаточно хорошо описаны. В некоторых вариантах антисмысловая активность в клетках, отличных от нервных, приводит к восстановлению функции SMN в этих клетках, что в свою очередь обеспечивает терапевтический эффект.
В некоторых вариантах улучшенное функционирование SMN в клетках, отличных от нервных, обеспечивает улучшение работы нервных клеток, независимо от того, улучшено или нет функционирование SMN внутри нейронов. Например, в некоторых вариантах системное введение фармацевтической композиции настоящего изобретения обеспечивает антисмысловую активность в мышечных клетках. Такая антисмысловая активность в мышечных клетках может благоприятно отразиться на моторных нейронах, связанных с этими мышечными клетками, или на нейронах в целом. В таких вариантах мышечная клетка, имеющая восстановленную функцию SMN, может обеспечить фактор, повышающий жизнеспособность нейронов и/или их функционирование. В некоторых вариантах такая антисмысловая активность не зависит от антисмысловой активности, обеспечиваемой антисмысловыми соединениями внутри нейронов. В некоторых вариантах системное введение фармацевтической композиции по настоящему изобретению обеспечивает антисмысловую активность в других клетках, отличных от нейронных, включая клетки, которые не контактируют непосредственно с нейронами. Такая антисмысловая активность в клетках, отличных от нервных, может улучшить функционирование нейронов. Например, антисмысловая активность в клетках, отличных от нервных, (например, клетках печени) может обеспечить образование этой клеткой фактора, улучшающего функционирование нейронов. Примечание: поскольку термин "антисмысловая активность" включает в себя как прямую, так и косвенную активность, нейронные клетки испытывают "антисмысловая активность" даже в том случае, когда антисмысловое соединение не вводится в сам нейрон.
В некоторых вариантах системное введение фармацевтической композиции приводит в результате к терапевтическому эффекту независимо от прямой или косвенной антисмысловой активности в нейронах. Как правило, при СМА функционирование нейронов ухудшается, что приводит к ярко выраженным симптомам. Дополнительные симптомы могут возникнуть в результате уменьшения активности SMN в других клетках. Некоторые такие симптомы могут быть незаметны на фоне проявления других более серьезных симптомов уменьшения функционирования нейронов. В некоторых вариантах системное введение приводит к восстановлению или улучшению функционирования SMN в клетках, отличных от нервных,. В некоторых таких вариантах такое восстановленное или улучшенное функционирование SMN в клетках, отличных от нервных, имеет терапевтический эффект. Например, в некоторых случаях рост субъектов, страдающих СМА, замедлялся. Такое снижение темпов роста не может быть вызвано ухудшением функционирования нервных клеток. На самом деле, снижение темпов роста может быть связано с нарушением функционирования клеток других органов, например, гипофиза, и/или может быть результатом нехватки SMN всех клеток организма. В таких вариантах системное введение может привести к повышению активности SMN в гипофизарных клетках и/или других клетках, что приводит к улучшению роста. В некоторых случаях введение в спинномозговую жидкость восстанавливает функционирование нейронов, в результате чего продолжительность жизни субъекта увеличивается. Однако в этом случае могут проявляться другие симптомы, которые не были известны ранее, поскольку пациенты, как правило, умирали до начала проявления таких симптомов. Некоторые из таких возникающих симптомов могут быть летальными. В некоторых вариантах такие возникающие симптомы лечатся при помощи системного введения. Независимо от механизма в некоторых вариантах различные симптомы СМА, включая, но не ограничиваясь этим, симптомы, ранее замаскированные более тяжелыми симптомами, связанные с нарушениями функционирования нейронов, могут излечимы посредством системного введения.
В некоторых вариантах системное введение фармацевтической композиции по настоящему изобретению приводит к увеличению активности SMN в мышечных клетках. В некоторых вариантах такое улучшение SMN активности в мышечных клетках обеспечивает терапевтический эффект. Улучшенная SMN активность только в мышцах, как известно, недостаточна для обеспечения терапевтического эффекта (например, Gravrilina et al, Hum Mol Genet 2008 17(8):1063-1075). В некоторых вариантах настоящее изобретение обеспечивает способы улучшения функционирования SMN в мышцах, которые обеспечивают терапевтический эффект. В некоторых случаях терапевтический эффект может быть связан с улучшением функционирования SMN в других клетках (отдельно или вместе с мышечными клетками). В некоторых вариантах улучшенное функционирование SMN в мышцах само по себе может принести пользу.
В некоторых вариантах системное введение приводит к улучшению выживаемости.
6. Спинальная мышечная атрофия (СМА)
СМА является генетическим заболеванием, характеризующимся дегенерацией спинальных мотонейронов. СМА вызвана гомозиготной потерей обеих копий SMN1 гена. В тоже время, ген SMN2 способен кодировать того же белок, что и SMN1, и таким образом может применяться для лечения генетического дефекта СМА пациентов. SMN2 трансляционно содержит сайлент мутацию (С→Т) в позиции + 6 экзона 7, которая приводит к неэффективному включению экзона 7 в SMN2 транскрипт. В этой связи преобладающая форма SMN2, которая лишена экзона 7, является неустойчивой и неактивной. Таким образом, терапевтические соединения, способные модулировать SMN2 сплайсинг так, что процент SMN2 транскриптов, содержащих экзон 7, увеличивается, могут найти применение в лечении СМА.
В некоторых вариантах настоящее изобретение обеспечивает антисмысловые соединения, комплементарные пре-мРНК, кодирующие SMN2. В некоторых таких вариантах антисмысловые соединения изменяют сплайсинг SMN2. Некоторые последовательности и регионы, используемые для изменения сплайсинга SMN2, могут быть найдены в PCT/US06/024469, который включен в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме для любых целей. В некоторых вариантах олигомерные соединения, обладающие каким-либо мотивом, описанным выше, имеют последовательность азотистых оснований, комплементарную интрону 7 SMN2. Некоторые такие последовательности азотистых оснований в качестве неограничивающих примеров приведены в таблице ниже.
Последовательность | Длина | SEQID |
TGCTGGCAGACTTAC | 15 | 3 |
CATAATGCTGGCAGA | 15 | 4 |
TCATAATGCTGGCAG | 15 | 5 |
TTCATAATGCTGGCA | 15 | 6 |
TTTCATAATGCTGGC | 15 | 2 |
ATTCACTTTCATAATGCTGG | 20 | 7 |
TCACTTTCATAATGCTGG | 18 | 1 |
CTTTCATAATGCTGG | 15 | 8 |
TCATAATGCTGG | 12 | 9 |
ACTTTCATAATGCTG | 15 | 10 |
TTCATAATGCTG | 12 | 11 |
CACTTTCATAATGCT | 15 | 12 |
TTTCATAATGCT | 12 | 13 |
TCACTTTCATAATGC | 15 | 14 |
CTTTCATAATGC | 12 | 15 |
TTCACTTTCATAATG | 15 | 16 |
ACTTTCATAATG | 12 | 17 |
ATTCACTTTCATAAT | 15 | 18 |
CACTTTCATAAT | 12 | 19 |
GATTCACTTTCATAA | 15 | 20 |
TCACTTTCATAA | 12 | 21 |
TTCACTTTCATA | 12 | 22 |
ATTCACTTTCAT | 12 | 23 |
AGTAAGATTCACTTT | 15 | 24 |
Антисмысловые соединения настоящего изобретения могут быть использованы для модуляции экспрессии SMN2 у субъекта, например, у человека. В некоторых вариантах субъект страдает спинальной мышечной атрофией. У некоторых таких субъектов ген SMN1 отсутствует или каким-либо иным образом не в состоянии обеспечить достаточное количество функционального белка SMN. В некоторых вариантах антисмысловые соединения по настоящему изобретению эффективно модулируют сплайсинг SMN2, что приводит к улучшению включения экзона 7 в SMN2 мРНК и в конечном счете в SMN2 белок, который включает в себя аминокислотную последовательность соответствующего экзона 7. Такой альтернативный белок SMN2 похож на белок SMN дикого типа. Антисмысловые соединения по настоящему изобретению, которые эффективно модулируют экспрессию мРНК SMN2, или белковые продукты экспрессии считаются активными антисмысловыми соединениями.
Модуляция экспрессии SMN2 может быть измерена в биологической жидкости, которая может содержать или не содержать клетки, а также в тканях или органах животного. Способы получения образцов для анализа, таких как жидкости организма (например, мокроты, сыворотки, спинномозговая жидкость), ткани (например, биопсия) или органы, а также способы подготовки образцов для анализа хорошо известны специалистам в данной области техники. Способы анализа РНК и белков были описаны выше и хорошо известны специалистам в данной области техники. Эффекты лечения можно оценить с помощью измерения биомаркеров, связанных с экспрессией гена-мишени в вышеупомянутых жидкостях, тканях или органах, полученных от животных, получавших одно или несколько соединений по настоящему изобретению, с помощью обычных клинических методов, известных из уровня техники.
Способы, согласно которым биологические жидкости, органы или ткани контактируют с эффективным количеством одного или нескольких антисмысловых соединений или композициями по настоящему изобретению, также рассмотрены. Жидкости, органы и ткани могут контактировать с одним или более из соединений по настоящему изобретению, обеспечивая модуляцию SMN2 экспрессии в клетках биологических жидкостей, органов или тканей. Эффективное количество можно определить путем мониторинга модулирующего эффекта антисмыслового соединения или соединений или композиций на целевые нуклеиновые кислоты или их продукты методами, известными из уровня техники.
Настоящее изобретение также обеспечивает антисмысловые соединения, описанные здесь, для применения в любой из способов, описанных здесь. Например, настоящее изобретение обеспечивает антисмысловое соединение, включающее антисмысловой олигонуклеотид, комплементарный нуклеиновой кислоте, кодирующей человеческий SMN2, для применения в лечении болезни или состояния, ассоциированного с белком выживаемости двигательных нейронов (SMN), например, спинальной мышечной атрофии (СМА). Как дополнительный пример, настоящее изобретение обеспечивает антисмысловое соединение, включающее антисмысловой олигонуклеотид, комплементарный нуклеиновой кислоте кодирующей человеческий SMN2, для применения в лечении болезни или состояния, ассоциированного с белком выживаемости двигательных нейронов (SMN), путем введения антисмыслового соединения непосредственно в центральную нервную систему (ЦНС) или СМЖ.
Настоящее изобретение также обеспечивает применение антисмыслового соединения, как описано здесь, в производстве лекарственного средства для применения в любом из способов, описанных здесь. Например, настоящее изобретение обеспечивает применение антисмыслового соединения, включающего антисмысловой олигонуклеотид, комплементарный нуклеиновой кислоте, кодирующей человеческий SMN2, в производстве лекарственного средства для лечения заболевания или состояния, ассоциированного с белком выживаемости двигательных нейронов (SMN), например, спинальной мышечной атрофией (СМА). Как еще один пример, настоящее изобретение обеспечивает применение антисмыслового соединения, включающего антисмысловой олигонуклеотид, комплементарный нуклеиновой кислоте, кодирующей человеческий SMN2, в производстве лекарственного средства для лечения заболевания или состояния, ассоциированного с белком выживаемости двигательных нейронов (SMN) путем введения лекарственного средства непосредственно в центральную нервную систему (ЦНС) и СМЖ.
В некоторых вариантах воплощения олигомерные соединения, содержащие какой-либо мотив, описанный выше, имеют последовательность азотистых оснований, комплементарную экзону 7 SMN2.
В некоторых вариантах воплощения олигомерные соединения, содержащие какой-либо мотив, описанный выше, имеют последовательность азотистых оснований, комплементарную интрону 6 SMN2.
В некоторых вариантах воплощения антисмысловое соединение содержит антисмысловой олигонуклеотид, имеющий последовательность азотистых оснований, содержащую не менее 10 азотистых оснований последовательности: TCACTTTCATAATGCTGG (SEQ ID NO:1). В некоторых вариантах антисмысловой олигонуклеотид имеет последовательность азотистых оснований, включающую, по меньшей мере, 11 азотистых оснований указанной последовательности. В некоторых вариантах антисмысловой олигонуклеотид имеет последовательность азотистых оснований, содержащую, по меньшей мере, 12 азотистых оснований указанной последовательности. В некоторых вариантах антисмысловой олигонуклеотид имеет последовательность азотистых оснований, содержащую, по меньшей мере, 13 азотистых оснований указанной последовательности. В некоторых вариантах антисмысловой олигонуклеотид имеет последовательность азотистых оснований, содержащую, по меньшей мере, 14 азотистых оснований указанной последовательности. В некоторых вариантах антисмысловой олигонуклеотид имеет последовательность азотистых оснований, содержащую, по меньшей мере, 15 азотистых оснований указанной последовательности. В некоторых вариантах антисмысловой олигонуклеотид имеет последовательность азотистых оснований, содержащую, по меньшей мере, 16 азотистых оснований указанной последовательности. В некоторых вариантах антисмысловой олигонуклеотид имеет последовательность азотистых оснований, содержащую, по меньшей мере, 17 азотистых оснований указанной последовательности. В некоторых вариантах антисмысловой олигонуклеотид имеет последовательность азотистых оснований, содержащую указанную последовательность. В некоторых вариантах антисмысловой олигонуклеотид имеет последовательность азотистых оснований, состоящую из указанной последовательности. В некоторых вариантах антисмысловой олигонуклеотид состоит из 10-18 связанных нуклеозидов и имеет последовательность азотистых оснований, идентичную на 100% фрагменту равной длины последовательности: TCACTTTCATAATGCTGG (SEQ ID NO:1).
7. Субъекты
В некоторых вариантах воплощения субъект имеет один или несколько индикаторов СМА. В некоторых вариантах субъект имеет уменьшенную электрическую активность одной или нескольких мышц. В некоторых вариантах субъект имеет мутантный ген SMN1. В некоторых вариантах ген SMN1 субъекта отсутствует или не может производить функциональный белок SMN. В некоторых вариантах субъект выявляется с помощью генетического теста. В некоторых вариантах субъект идентифицируется с помощью мышечной биопсии. В некоторых вариантах субъект не способен сидеть прямо. В некоторых вариантах субъект не способен стоять или ходить. В некоторых вариантах субъект нуждается в помощи дыхания и/или питания. В некоторых вариантах субъект определяется с помощью электрофизиологических измерений мышц и/или мышечной биопсии.
В некоторых вариантах субъект имеет тип I СМА. В некоторых вариантах субъект имеет тип II СМА. В некоторых вариантах субъект имеет тип III CMA. В некоторых вариантах субъект определен как имеющий СМА в период внутриутробного развития. В некоторых вариантах субъект определен как имеющий СМА в течение одной недели после рождения. В некоторых вариантах субъект определен как имеющий СМА в течение одного месяца после рождения. В некоторых вариантах субъект определен как имеющий СМА в 3-месячном возрасте. В некоторых вариантах субъект определен как имеющий СМА в 6-месячном возрасте. В некоторых вариантах субъект определен как имеющий СМА в возрасте 1 год. В некоторых вариантах субъект определен как имеющий СМА в возрасте от 1 до 2 лет. В некоторых вариантах субъект определен как имеющий СМА в возрасте от 1 до 15 лет. В некоторых вариантах субъект определен как имеющий СМА в возрасте старше 15 лет.
В некоторых вариантах воплощения первую дозу фармацевтической композиции по настоящему изобретению вводят в период внутриутробного развития. В некоторых таких вариантах первая доза вводится до окончания полного формирования гематоэнцефалического барьера. В некоторых вариантах первую дозу вводят субъекту в период внутриутробного развития системно. В некоторых вариантах первую дозу вводят в период внутриутробного развития после формирования гематоэнцефалического барьера. В некоторых вариантах первую дозу вводят в СМЖ.
В некоторых вариантах воплощения первую дозу фармацевтической композиции по настоящему изобретению вводят субъекту в возрасте менее 1 недели. В некоторых вариантах первая доза фармацевтической композиции по настоящему изобретению вводят субъекту в возрасте менее одного месяца. В некоторых вариантах первая доза фармацевтической композиции по настоящему изобретению вводят субъекту в возрасте менее 3 месяцев. В некоторых вариантах первая доза фармацевтической композиции по настоящему изобретению вводят субъекту в возрасте менее 6 месяцев. В некоторых вариантах первая доза фармацевтической композиции по настоящему изобретению вводят субъекту в возрасте менее одного года. В некоторых вариантах первая доза фармацевтической композиции по настоящему изобретению вводят субъекту в возрасте менее 2 лет. В некоторых вариантах первая доза фармацевтической композиции по настоящему изобретению вводят субъекту в возрасте менее 15 лет. В некоторых вариантах первая доза фармацевтической композиции по настоящему изобретению вводят субъекту в возрасте старше 15 лет.
8. Некоторые варианты дозы
В некоторых вариантах воплощения настоящее изобретение обеспечивает величину дозы и частоту ее введения. В некоторых вариантах фармацевтические композиции вводят в виде болюсной инъекции. В некоторых таких вариантах доза болюсного введения составляет от 0,01 до 25 мг антисмыслового соединения на килограмм веса тела субъекта. В некоторых таких вариантах доза болюсного введения составляет от 0,01 до 10 миллиграмм антисмыслового соединения на килограмм веса тела субъекта. В некоторых вариантах доза составляет от 0,05 до 5 миллиграмм антисмыслового соединения на килограмм веса тела субъекта. В некоторых вариантах доза составляет от 0,1 до 2 миллиграмм антисмыслового соединения на килограмм веса тела субъекта. В некоторых вариантах доза составляет от 0,5 до 1 миллиграмма антисмыслового соединения на килограмм веса тела субъекта. В некоторых вариантах указанные дозы вводятся два раза в месяц. В некоторых вариантах указанные дозы вводятся каждый месяц. В некоторых вариантах указанные дозы вводятся каждые 2 месяца. В некоторых вариантах указанные дозы вводятся каждые 6 месяцев. В некоторых вариантах указанные дозы вводятся путем болюсной инъекции в спинномозговую жидкость. В некоторых вариантах указанные дозы вводятся путем интратекальной болюсной инъекции. В некоторых вариантах указанные дозы вводятся путем системных болюсных инъекций (например, подкожных, внутримышечных или внутривенных инъекций). В некоторых вариантах субъекты получают болюсные инъекции в спинномозговую жидкость и системные болюсные инъекции. В таких вариантах дозы СМЖ болюсных и системных болюсных инъекций могут быть одинаковыми или различными друг от друга. В некоторых вариантах СМЖ и системные дозы вводят с разной частотой. В некоторых вариантах воплощения настоящее изобретение обеспечивает режим дозирования, включающие, по меньшей мере, одну болюсную интратекальную инъекцию и, по меньшей мере, одну болюсную подкожную инъекцию.
В некоторых вариантах воплощения фармацевтические композиции вводят путем непрерывной инфузии. Такая непрерывная инфузия может быть осуществлена путем введения фармацевтической композиции в СМЖ с помощью инфузионного насоса. В некоторых вариантах такие инфузионные насосы вводят фармацевтическую композицию ИТ или ИСВ. В некоторых таких вариантах доза составляет от 0,05 до 25 мг антисмыслового соединения на килограмм веса тела субъекта в день. В некоторых вариантах доза составляет от 0,1 до 10 миллиграмм антисмыслового соединения на килограмм веса тела субъекта в день. В некоторых вариантах доза составляет от 0,5 до 10 миллиграммов антисмыслового соединения на килограмм веса тела субъекта в день. В некоторых вариантах доза составляет от 0,5 до 5 миллиграмм антисмыслового соединения на килограмм веса тела субъекта в день. В некоторых вариантах доза составляет от 1 до 5 мг антисмыслового соединения на килограмм веса тела субъекта в день. В некоторых вариантах изобретения обеспечивает режим дозирования, включающий инфузию в центральную нервную систему и, по меньшей мере, одну болюсную системную инъекцию. В некоторых вариантах изобретение обеспечивает режим дозирования, включающий инфузию в центральную нервную систему и, по меньшей мере, одну болюсную подкожную инъекцию. В некоторых вариантах болюсная или инфузионная доза регулируется для достижения или поддержания концентрации антисмысловые соединения от 0,1 до 100 мкг на грамм ткани ЦНС. В некоторых вариантах болюсная или инфузионная доза регулируется для достижения или поддержания концентрации антисмыслового соединения от 1 до 10 мкг на грамм ткани ЦНС. В некоторых вариантах болюсная или инфузионная доза регулируется для достижения или поддержания концентрации антисмыслового соединения от 0,1 до 1 мкг на грамм ткани ЦНС.
В некоторых вариантах дозирование разделено на индукционную фазу и поддерживающую фазу. В некоторых таких вариантах доза во время индукционной фазы больше дозы во время поддерживающей фазы. В некоторых вариантах доза во время индукционной фазы меньше дозы во время поддерживающей фазы. В некоторых вариантах во время индукционной фазы осуществляется болюсное введение, а во время поддерживающей фазы - непрерывная инфузия.
В некоторых вариантах настоящее изобретение обеспечивает системное введение антисмысловых соединений, либо самостоятельно, либо в комбинации с введением в спинномозговую жидкость. В некоторых вариантах доза для системного введения составляет от 0,1 мг/кг до 200 мг/кг. В некоторых вариантах доза для системного введения составляет от 0,1 мг/кг до 100 мг/кг. В некоторых вариантах доза для системного введения составляет от 0,5 мг/кг до 100 мг/кг. В некоторых вариантах доза для системного введения составляет от 1 мг/кг до 100 мг/кг. В некоторых вариантах доза для системного введения составляет от 1 мг/кг до 50 мг/кг. В некоторых вариантах доза для системного введения составляет от 1 мг/кг до 25 мг/кг. В некоторых вариантах доза для системного введения составляет от 0,1 мг/кг до 25 мг/кг. В некоторых вариантах доза для системного введения составляет от 0,1 мг/кг до 10 мг/кг. В некоторых вариантах доза для системного введения составляет от 1 мг/кг до 10 мг/кг. В некоторых вариантах доза для системного введения составляет от 1 мг/кг до 5 мг/кг. В некоторых вариантах, включающих как системное, так и СМЖ введение, дозы для этих способов введения определяются независимо.
а. Расчет приемлемых для человека доз
В некоторых вариантах воплощения субъект представляет собой человека. В некоторых воплощениях доза для человека рассчитывается или оценивается по данным экспериментов на животных, таких как описанные здесь. В некоторых воплощениях доза для человека рассчитывается или оценивается по данным экспериментов на обезьянах и/или мышах, например, описанным здесь. В некоторых воплощениях доза для человека рассчитывается или оценивается по данным экспериментов на мышах, например, описанным в настоящем документе. В некоторых вариантах, приемлемые для человека дозы могут быть рассчитаны с использованием фармакокинетических данных для мыши, а также сведений о весе мозга и/или значений текучести спинномозговой жидкости (ликвора). Например, вес мозга мыши равен примерно 0,4 г, что составляет около 2% от массы тела мыши. У людей средний вес мозга равен 1,5 кг, что составляет примерно 2,5% массы тела. В некоторых вариантах введение в СМЖ приводит к элиминированию части соединения путем поглощения в тканях мозга и последующего метаболизма. Используя отношение веса мозга человека к весу мозга мыши как коэффициент масштабирования, можно оценить элиминирование и клиренс тканью мозга. Кроме того, скорость обновления СМЖ может быть использована для оценки элиминирования соединения из спинномозговой жидкости в кровь. Скорость обновления СМЖ мыши составляет примерно 10-12 раз в день (0,04 мл производится со скоростью 0,325 мкл/мин). Скорость обновления СМЖ человека составляет примерно 4 раза в день (100-160 мл производятся со скоростью 350-400 мкл/мин). Клиренс, а, следовательно, и условия дозирования, могут быть основаны на масштабировании веса мозга и/или масштабировании скорости обновления СМЖ. Экстраполированный клиренс СМЖ человека может быть использован для оценки эквивалентной дозы для людей на основе аппроксимированных доз для мышей. Таким образом, дозы для человека могут быть оценены, учитывая различия тканевого метаболизма в зависимости от веса мозга и скорости обновления СМЖ. Такие методы расчета и оценки известны специалистам в данной области техники.
В качестве неограничивающего примера, в некоторых вариантах эквивалентная доза для человека может быть оценена по желаемой дозе для мыши путем умножения мг/кг мышиной дозы на коэффициент, равный от 0,25 до примерно 1,25 в зависимости от определенного клиренса и элиминирования конкретного соединения. Так, например, в некоторых воплощениях доза для человека, эквивалентная дозе 0,01 мг для мыши весом 20 г, будет находиться в диапазоне от 8,75 мг до 43,75 мг общей дозы для человека весом 70 кг. Аналогично, в некоторых воплощениях доза для человека, эквивалентная дозе 0,01 мг для новорожденной мыши весом 4 г, будет находиться в диапазоне от 1,9 мг до 9,4 мг общей дозы для новорожденного человека весом 3 кг. Эти примеры доз приведены только для иллюстрации, как один из способов оценки приемлемой дозы для человека и не предназначены для ограничения настоящего изобретения.
В некоторых воплощениях человеческая доза для системного введения (для введения самостоятельно или в комбинации с введением в СМЖ) вычисляется или оценивается по данным экспериментов на животных, таких как описанные здесь. Как правило, приемлемые дозы для человека (в мг/кг) для системного введения составляют от 0,1 до 10 эффективных доз у животных. Таким образом, исключительно для примера, доза для подкожного введения 50 мкг новорожденной мыши весом 2 г равна 25 мг/кг. Соответствующая доза для человека будет составлять от 2,5 мг/кг до 250 мг/кг. Для младенца весом 3 килограмма соответствующая доза составит от 7,5 мг до 750 мг. Для ребенка весом 25 кг соответствующая доза составит с 62,5 мг до 6250 мг.
9. Режимы лечения
В некоторых вариантах воплощения описанные выше значения дозы, частота введения, способы введения, индукционная и поддерживающая фазы и сроки введения первой дозы скомбинированы так, чтобы обеспечить режимы дозирования для пациентов со СМА. Такие режимы дозирования могут быть выбраны и скорректированы для обеспечения улучшения одного или нескольких симптомов СМА и/или уменьшения или устранения токсичности или побочных эффектов, связанных с введением фармацевтической композиции. В некоторых вариантах субъекты являются субъектами в период внутриутробного развития или новорожденными. В таких вариантах введение фармацевтических композиций, в частности, путем непрерывной инфузии, представляет частный вариант воплощения. Соответственно, в некоторых вариантах настоящее изобретение обеспечивает введение фармацевтической композиции с помощью болюсной инъекции, когда субъект представляет собой субъект в период внутриутробного развития или очень молод, с последующей непрерывной инфузией с помощью имплантированного инфузионного насоса, когда субъект становится старше и установка такого насоса является наиболее практичной. Кроме того, в некоторых вариантах, по мере взросления субъекта увеличивается абсолютное значение дозы для сохранения соотношения доза: масса тела. Следующая таблица предназначена для иллюстрации схемы лечения и не должна ограничивать возможные комбинации лечения, которые могут быть легко осуществлены специалистами в данной области.
Период дозирования | Первый | Второй | Третий | Четвертый | Пятый |
Режим 1 | |||||
Возраст субъекта | Внутриутробное развитие, до образования гематоэнцефалического барьера | Внутриутробное развитие, после образования гематоэнцефалического барьера | >1 недели | 6 месяцев | 1,5 года |
Величина дозы | 50 мкг | 50 мкг | 100 мкг | 10 мкг/день | 50 мкг/день |
Частота | Однократное введение | Однократное введение | Ежемесячно | Непрерывно | Непрерывно |
Способ введения | Системная инъекция | ИТ инъекция | ИТ инъекции | ИТ инфузия | ИТ инфузия |
Длительность | - | - | 6 месяцев | 1 год | неограниченно |
Режим 2 | |||||
Возраст субъекта | Внутриутробное развитие, после образования гематоэнцефалического барьера | >1 недели | 6 месяцев | 1,5 года | - |
Величина дозы | 50 мкг | 100 мкг | 5 мг/день | 10 мг/день | - |
Частота | Однократное введение | Ежемесячно | Непрерывно | Непрерывно | - |
Способ введения | ИСВ инъекция | ИСВ инъекция | ИСВ инфузия | ИСВ инфузия | - |
Длительность | - | 6 месяцев | 1 год | неограниченно | - |
Режим 3 | |||||
Возраст | >1 недели | 6 месяцев | 1,5 года | 2,5 года* |
субъекта | |||||
Величина дозы | 100 мкг | 500 мкг/день | 20 мг/день | 20 мг/день | 100 мг |
Частота | 2 раза в месяц | Непрерывно | Непрерывно | Непрерывно | 2 раза в месяц |
Способ введения | ИСВ инъекция | ИСВ инфузия | ИСВ инфузия | ИСВ инфузия | Периодические инъекции |
Длительность | 6 месяцев | 1 год | 1 год | неограниченно | неограниченно |
* Примечание: 4-й период дозирования в режиме 3 иллюстрирует непрерывную СМЖ инфузию в сочетании с периодическим системным введением. Рассмотренные схемы лечения приведены для примера и не должны ограничивать настоящее изобретение. |
В некоторых вариантах режим дозирования включает системное введение, самостоятельно или в сочетании с введением в спинномозговую жидкость (например, режим 3, см. выше). Таблица, приведенная ниже, иллюстрирует такие схемы.
Системное введение | СМЖ введение | ||||
Доза | Способ введения | Частота введения | Доза | Способ введения | Частота введения |
1-5 мг/кг | подкожно | еженедельно | 5-10 мг/кг | ИТ болюс | ежемесячно |
1-5 мг/кг | подкожно | ежемесячно | 1-5 мг/кг | ИСВ болюс | 2 месяца |
10-50 мг/кг | подкожно | ежемесячно | 0,5-1 мг/кг | ИТ болюс | 6 месяцев |
0,5-25 мг/кг | подкожно | ежемесячно | 10 мг/кг/день | ИТ инфузия | в течение 7 дней каждые 6 месяцев |
0,1-10 мг/кг | подкожно | ежемесячно | - | ||
- | 0,5-1 мг/кг | ИТ болюс | 6 месяцев |
Рассмотренные схемы лечения предназначены для примера и не должны ограничивать настоящее изобретение. Специалист в данной области техники способен выбрать приемлемую комбинацию доз и способов введения с учетом настоящего раскрытия и на основе ряда факторов, таких как тяжесть состояния, общее состояние здоровья и возраста субъекта.
10. Совместное применение
В некоторых вариантах воплощения фармацевтические композиции по настоящему изобретению вводятся совместно с введением, по меньшей мере, одной другой фармацевтической композиции для лечения СМА и/или для лечения одного или нескольких симптомов, ассоциированных со СМА. В некоторых вариантах такая другая фармацевтическая композиция выбрана из трихостатина А, вальпроевой кислоты, рилузола, гидроксимочевины и бутират или его производных. В некоторых вариантах фармацевтические композиции по настоящему изобретению вводят вместе с трихостатином А. В некоторых вариантах фармацевтические композиции по настоящему изобретению вводят вместе с производным хиназолина, например, как описано в публикации Thurmond et al, J. Med Chem. 2008, 51, 449-469. В некоторых вариантах фармацевтическая композиция по настоящему изобретению и, по меньшей мере, одна другая фармацевтическая композиция вводятся одновременно. В некоторых вариантах фармацевтическая композиция по настоящему изобретению и, по меньшей мере, одна другая фармацевтическая композиция вводятся в разное время.
В некоторых вариантах фармацевтические композиции по настоящему изобретению вводятся совместно с применением геннотерапевтического агента. В некоторых таких вариантах геннотерапевтический агент вводят в СМЖ, а фармацевтическая композиция по настоящему изобретению вводится системно. В некоторых таких вариантах геннотерапевтический агент вводят в СМЖ, а фармацевтическая композиция по настоящему изобретению вводится в СМЖ и системно. В некоторых вариантах фармацевтическая композиция по настоящему изобретению и геннотерапевтический агент вводятся одновременно. В некоторых вариантах фармацевтическая композиция по настоящему изобретению и геннотерапевтический агент вводятся в разное время. Некоторые подходы генной терапии для лечения СМА были описаны в уровне техники (например, Coady et al, PLoS ONE 2008 3(10): e3468; Passini et al, J Clin Invest 2010 Apr 1, 120(4):1253-64).
В некоторых вариантах фармацевтические композиции по настоящему изобретению вводятся совместно с применением, по меньшей мере, одного другого вида терапии СМА. В некоторых вариантах таким другим видом терапии СМА является операция. В некоторых вариантах таким другим видом терапии СМА является физиотерапия, включая, но не ограничиваясь этим, упражнения, направленные на укрепление дыхательных мышц, таких как терапия кашля. В некоторых вариантах, другой вид терапии представляет собой физическое вмешательство, такое как питательная трубка для зондового питания или устройство для вспомогательного дыхания.
В некоторых вариантах фармацевтические композиции по настоящему изобретению вводятся совместно с введением одной или более фармацевтических композиций, которые снижают нежелательные побочные эффекты фармацевтических композиций по настоящему изобретению.
11. Фенотипические эффекты
В некоторых вариантах введение, по меньшей мере, одной фармацевтической композиции по настоящему изобретению обеспечивает фенотипические изменения субъекта. В некоторых вариантах такие фенотипические изменения включают, но не ограничиваясь этим: увеличение абсолютного количества мРНК SMN, которая включает экзон 7; увеличение соотношения мРНК SMN, которая включает экзон 7, к мРНК SMN, лишенной экзона 7; увеличение абсолютного количества белка SMN, который включает в себя аминокислотную последовательность, соответствующей экзону 7, увеличение соотношения белка SMN, которое включает аминокислотную последовательность, соответствующей экзону 7, к белку SMN, лишенного аминокислотной последовательности, соответствующей экзону 7, улучшение мышечной силы, повышение электрической активности, по меньшей мере, одной мышцы, улучшение дыхания, увеличение веса и выживаемости. В некоторых вариантах, по меньшей мере, одно фенотипическое изменение происходит в мотонейронах субъекта. В некоторых вариантах, введение, по меньшей мере, одной фармацевтической композиции по настоящему изобретению обеспечивает возможность субъекта сидеть прямо, стоять и/или ходить. В некоторых вариантах введение, по меньшей мере, одной фармацевтической композиции по настоящему изобретению обеспечивает возможность субъекта есть, пить и/или дышать без посторонней помощи. В некоторых вариантах эффективность лечения оценивается по электрофизиологической оценке мышцы. В некоторых вариантах введение фармацевтической композиции по настоящему изобретению улучшает, по меньшей мере, один из симптомов СМА и имеет небольшой или не имеет воспалительного эффекта. В некоторых таких воплощениях отсутствие воспалительного эффекта определяется по отсутствию значительного увеличения уровней Aif1 во время лечения.
В некоторых вариантах введение, по меньшей мере, одной фармацевтической композиции по настоящему изобретению задерживает наступление хотя бы одного симптома СМА. В некоторых вариантах введение, по меньшей мере, одной фармацевтической композиции по настоящему изобретению замедляет прогрессирование, по меньшей мере, одного из симптомов СМА. В некоторых вариантах введение, по меньшей мере, одной фармацевтической композиции по настоящему изобретению уменьшает тяжесть, по меньшей мере, одного из симптомов СМА.
В некоторых вариантах введение, по меньшей мере, одной фармацевтической композиции по настоящему изобретению приводит к нежелательным побочным эффектам. В некоторых вариантах схема лечения выбрана так, что приводит к желаемому облегчению симптомов, избегая при этом нежелательных побочных эффектов.
12. Единицы дозировки
В некоторых вариантах фармацевтические композиции по настоящему изобретению готовят в виде дозированных единиц для введения. Некоторые такие единицы дозировки составляют концентрации от 0,01 мг до 100 мг. В некоторых таких вариантах фармацевтическая композиция по настоящему изобретению содержит дозу антисмыслового соединения, выбранную из 0,01 мг, 0,1 мг, 0,5 мг, 1 мг, 5 мг, 10 мг, 20 мг, 25 мг, 50 мг, 75 мг, 100 мг, 150 мг и 200 мг. В некоторых вариантах фармацевтическая композиция включает в себя дозы олигонуклеотида, выбранные из 0,1 мг, 0,5 мг, 1 мг, 5 мг, 10 мг, 25 мг и 50 мг.
13. Наборы
В некоторых вариантах настоящее изобретение обеспечивает наборы, содержащие, по меньшей мере, одну фармацевтическую композицию. В некоторых вариантах такие наборы дополнительно содержат средства для введения, например, шприц или инфузионный насос.
Неограничивающее раскрытие и включение путем ссылки
Наряду с тем, что некоторые соединения, композиции и способы, рассмотренные выше, были описаны в соответствии с некоторыми конкретными вариантами воплощения, следующие примеры служат лишь для иллюстрации описанных соединений и не предназначены для ограничения настоящего изобретения. Каждая ссылка, номер GenBank и т.п. включены в настоящее описание путем ссылки в полном объеме.
Несмотря на то, что перечень последовательностей, сопровождающий настоящую заявку, идентифицирует каждую последовательность либо как «РНК», либо как «ДНК», в действительности, эти последовательности могут быть изменены посредством любой комбинации химических модификаций. Специалист в данной области без труда поймет, что такое обозначение как «РНК» или «ДНК» для описания модифицированных олигонуклеотидов в некоторых случаях произвольно. Например, олигонуклеотид, включающий нуклеозид, содержащий 2’-ОН остаток сахара и азотистое основание тимин, может быть описана как ДНК, имеющая модифицированный сахар (2’-ОН для природных 2’-Н ДНК) или в виде РНК, имеющих модифицированное основание (тимин (метилированный урацил) на природный урацил РНК).
Таким образом, последовательности нуклеиновых кислот, предусмотренные настоящим документом, включая, но не ограничиваясь этим, указанные в перечне последовательностей, предназначены для того, чтобы охватить нуклеиновые кислоты, содержащие любое сочетание природных или модифицированных РНК и/или ДНК, включая, но не ограничиваясь этим, такие нуклеиновые кислоты, имеющие модифицированные азотистые основания. В качестве дополнительного и неограничивающего примера, олигомерное соединение, имеющее последовательность азотистых оснований "ATCGATCG", включает в себя любое олигомерное соединение, обладающих такой последовательностью азотистых оснований, как модифицированных, так и немодифицированных, включая, но не ограничиваясь этим, например соединения, содержащие РНК основания, такие как те, которые имеют последовательность "AUCGAUCG", и те, которые имеют частично основания ДНК и частично основания РНК, такие как "AUCGATCG", и олигомерные соединения, имеющие другие модифицированные основания, такие как " ATmeCGAUCG ", где meC представляет собой азотистое основание цитозин, содержащий метальную группу в 5-позиции.
Пример 1 - Антисмысловые соединения, комплементарные SMN2
Следующие олигонуклеотиды были синтезированы, используя стандартные методы, описанные ранее.
Пример 2 -Smn-/-SMN трансгенные мыши
Терапевтическая эффективность и безопасность использования антисмысловых соединений, как описано выше, может быть протестирована в адекватной модели на животных. Например, модели на животных, которые проявляют наиболее схожий с человеческим тип заболеваний, включают виды животных, которые либо спонтанно развивают высокую частоту конкретного заболевания, либо те, заболевания которых индуцированы специально.
В частности, известны модели на животных для СМА. Как было описано выше, молекулярной основой СМА, аутосомно-рецессивного нервно-мышечного расстройства, является гомозиготная потеря гена выживаемости мотонейронов 1 (SMN1). Практически идентичная копия SMN1 гена, называемая SMN2, находится в организме человека и модулирует тяжесть заболевания. В отличие от людей, мыши имеют только один ген (Smn), эквивалентный гену SMN1. Гомозиготная потеря этого гена детальна для эмбрионов и приводит к массовой гибели клеток, что указывает на то, что экспрессия гена Smn необходима для выживания и функционирования клеток. Введение двух копий SMN2 мышам, лишенных SMN гена, спасает их от эмбриональной смертности, в результате чего мыши проявляют СМА фенотип (Monani et al, Hum. Mol. Genet. (2000) 9:333-339). Увеличенное количество копий SMN2 спасает мышей, поскольку мотонейроны продуцируют достаточное количество белка SMN. См. также публикацию Ce-Li et al, Nat. Genet. (2000) 24:66-70, описывающую получение трансгенных линий мышей, которые экспрессируют человеческий SMN2. В частности, трансгенные мыши, которые получали SMN2 при Smn-/-генотипе, показали патологические изменения спинного мозга и скелетных мышц, аналогично СМА пациентам. Тяжесть патологических изменений у этих мышейкоррелировала с количеством белка SMN, который содержал область, кодируемую экзоном 7. Гетерозиготные мыши, лишенные одной копии Smn, обозначены как Smn -/+ и представляют собой модель для менее тяжелой формы СМА, тип III.
Тяжесть СМА фенотипа является функцией от числа копий человеческого SMN2 у мыши. Так называемая Тайваньская линия имеет 4 копии человеческого SMN2, в результате мыши имеют фенотип СМА от умеренного до тяжелого, схожий с типом I или типом II.
Дельта-7 мыши (Smn-/-, hSMN2+/+, SMNΔ7+/+) также лишены мышиного гена Smn и экспрессируют человеческий SMN2. Дельта 7 мыши имеют более тяжелый фенотип и умирают вскоре после рождения, обычно примерно на 15-20 день после рождения.
Пример 3 - Системное введение антисмысловых соединений in vivo Smn -/- SMN2 мышам (Тайваньская линия)
Тайваньские мыши получали внутрибрюшинные инъекции физиологического раствора или дозу 35 мг/кг ISIS396443 или ISIS396443 или неправильно спаренного (мисматч) контрольного антисмыслового олигонуклеотида один раз в день на протяжении 5 дней и были умерщвлены через два дня, на седьмой день. РНК была выделена из печени и почек, использую стандартные методы. SMN2, содержащие и не содержащие экзон 7, были исследованы с помощью ОТ-ПЦР. Введение ISIS396443 привело к значительному увеличению включения экзона 7 в SMN2 из почек и печени по сравнению контрольными значениями.
Пример 4 - Интрасеребровентрикулярное (ИСВ) введение антисмысловых соединений in vivo Smn -/- SMN2 мышам (Тайваньская линия)
Тайваньским мышам внутрь желудочков мозга вводили физиологический раствор или 150 мкг ISIS396443 каждый день в течение 7 дней. Мышей умерщвляли на 8 день и выделяли РНК из головного и спинного мозга. Используя ОТ-ПЦР, было показано существенное увеличение включения экзона 7 в SMN2 в образцах головного и спинного мозга, полученных из животных, получавших ISIS396443. Эти результаты показывают, что применение интрасеребровентрикулярного введения антисмысловых олигонуклеотидов, нацеленных на SMN, может облегчить СМА состояние, поскольку СМА фенотип ассоциирован с исключением экзона 7.
Зависимость «доза-ответ»
Тайваньским мышам внутрь желудочков мозга вводили физиологический раствор или 10, 50, 100 или 150 мкг ISIS396443 каждый день в течение 7 дней (5 мышей в каждой группе), которые были умерщвлены на 8 день. РНК выделяли и анализированы с помощью ОТ-ПЦР. Группа, получавшая 10 мкг активного вещества, показала умеренное включение экзона 7. Группы, получавшие 50 мкг, 100 мкг и 150 мкг, показали существенное улучшение включения экзона 7.
Продолжительность ответа
Для определения продолжительности эффекта 24 мышам инъецировали внутрь желудочков мозга 50 мкг ISIS396443 каждый день в течение 7 дней. Четыре мыши были умерщвлены после получения последней дозы (время 0) и четыре мыши были умерщвлены через 1, 2, 4 и 8 недель, соответственно, после получения последней дозы. Все мыши, получавшие лечение, показали значительное улучшение включения экзона 7, при этом эффект на 8 неделю не отличался в различных группах, как показано на фиг.1.
Эти результаты показывают, что введение внутрь желудочков мозга 50 мкг в день ISIS396443 в течение 7 дней является более эффективным для 8 недель последующего лечения.
Эксперимент был проведен повторно для более длительного отрезка времени. Мыши, имеющие тип III CMA, получали ISIS396443 посредством интрасеребровентрикулярной инфузии в количестве 50 мкг/день в течение 7 дней. Мыши были умерщвлены через 0, 0,5, 1, 2, 4 и 6 месяцев после окончания 7-ми дневного периода инфузии. Из спинного мозга была выделена РНК и проанализирована с помощью нозерн-блоттинга. Как показано на фиг.2, эффект инфузии ISIS396443 продолжался в течение 6 месяцев после инфузии. Такой продолжительный эффект имеет множество возможных объяснений. Он может отражать стабильность ISIS396443, стабильность исправленного белка SMN и/или то, что доза была достаточно высокой для того, чтобы даже после распада соединения эффект его действия сохранился. Таким образом, эти данные могут поддержать введение более низких доз, а также редких доз.
Пример 5 - Введение антисмысловых соединений путем продолжительной интрасеребровентрикулярной (ИСВ) инфузии
Используя микроосмотический насос (Azlet Osmotic Pumps, Cupertino, штат Калифорния, США), ISIS396443 был введен в спинномозговую жидкость (ликвор) через правый боковой желудочек взрослым мышам СМА типа-III Smn+/- или Smn-/-, имеющих человеческий ген SMN2 (Тайваньская линия). Зависимость «доза-ответ» показала, что интрасеребровентрикулярная (ИСВ) инфузия ISIS396443 увеличивала включение экзона 7 SMN2 в спинном мозге до ~90% по сравнению с ~10% у мышей, получавших физиологический раствор. Вестерн-блоттинг и иммуногистохимический анализ показали сильное увеличение уровня человеческого трансгенного SMN белка в спинно-мозговых мотонейронах. Эти результаты показывают, что ЦНС инфузия антисмыслового олигонуклеотида ISIS396443 может облегчить СМА состояние, поскольку исключения экзона 7 ассоциировано со СМА фенотипом.
Пример 6 - Эмбриональное введение
Единичную ИСВ инъекцию 20 мкг или 10 мкг ISIS396443 вводили эмбрионам Тайваньских мышей на 15-й день беременности (Е15). Животные были умерщвлены на 7 день после рождения (Р7). РНК выделяли из спинного мозга поясничного отдела и анализированы с помощью ОТ-ПЦР. Единичное эмбриональное введение ISIS396443 привело к значительному улучшению включения экзона 7. Эти результаты показывают, что лечение с помощью антисмысловых олигонуклеотидов ISIS396443 внутриутробно может облегчить СМА состояние, поскольку исключение экзона 7 ассоциировано со СМА фенотипом.
Эксперимент, описанный выше, был проведен повторно, а животные умерщвлены на 11 неделе. Тайваньские мыши, не получавшие лечение, развивали пораженные некрозом хвосты, которые укорачивались со временем. Единичная эмбриональная инъекция 20 мкг ISIS396443 значительно отсрочила начало деградации хвоста, как показано на фиг.3А. Эти результаты показывают, что эмбриональное лечение антисмысловыми олигонуклеотидами, нацеленными на SMN, задерживает начало развития СМА.
Эти результаты были подтверждены в другом исследовании с использованием тех же условий, за исключением дозировок, которые составили 20 мкг и 10 мкг ISIS396443, при этом для сравнения в исследование были вовлечены нормальные мыши. Результаты этого эксперимента представлены на рис 3В.
Пример 7 - Введение in vivo на модели дельта-7 мыши
Гетерозиготные (SMN+/-, hSMN+/+, SMNΔ+/+) родительские пары были скрещены, и в день рождения (Р0) новорожденным детенышам вводили ISIS396443 (18-мер, SEQ ID NO:1), ISIS396449 (15-мер, SEQ ID NO:2), ISIS387954 (20-мер, SEQ ID NO:7) или контрольный аллель-специфичный скрамблед-олигонуклеотид (ISIS439273; 18-мер). Мышам вводили билатерально в боковые желудочки мозга по 8 мкг (4 мкг в каждый боковой желудочек). Все инъекции производились с помощью острой стеклянной микропипетки-иглы, как описано Passini и др., J. Virol. (2001), 75:12382-12392. После инъекции детеныши были помечены путем отрезания пальцев и генотипированы (Le et al, Hum. Mol. Genet. (2005) 14:845-857) с целью идентификации СМА (SMN-/-, hSMN2+/+, SMNΔ7+/+), гетерозиготных мышей и мышей дикого типа (SMN+/+, hSMN2+/+, SMNΔ7+/+). Из пометов были выбраны 7 детенышей для контроля численности на выживаемости. Некоторые пометы не получали инъекции в целях обеспечения контрольных групп, не подвергавшихся лечению.
Широкое распространение 18-мерного олигонуклеотида было зафиксировано в спинном мозге через 14 дней после инъекции у СМА мышей, в том числе в грудном, поясничном и шейном отделах спинного мозга. Кроме того, исследования совместной с ChAT локализацией подтвердили, что подавляющее большинство клеток, являющихся мишенями для ISIS396443 в спинном мозге, представляли собой мотонейроны. У контрольных мышей, не получавших лечение, ответ не был обнаружен.
Анализ вестерн-блот на 14 день показал, что количество SMN в головном и спинном мозге составило 40-60% от уровня дикого типа, по сравнению с 10% у СМА контролей, не получавших лечения. У контрольных мышей, получавших скрамблед-версию АСО, ответ не был обнаружен по сравнению с фоновыми значениями. Результаты вестерн-блоттинга представлены на фигуре 4.
СМА мыши, получавшие СМА АСО, также показали значительное увеличение веса, амбулаторной функции (восстановление рефлексов и силы захвата) и координации (сгибание задних конечностей), независимо от длины АСО по сравнению со СМА мышами, не получавшими лечение, или СМА мышами, получавшими скрамблед-АСО. Значительного увеличения массы тела, амбулаторной функции (восстановление рефлексов и силы захвата) или координация не наблюдалось у СМА мышей, получавших скрамблед-АСО по сравнению со СМА мышами, не получавшими лечения. Результаты приведены на фиг.5 и 6.
Следует отметить, что СМА мыши, получавших АСО лечение, независимо от длины АСО показали значительное увеличение средней продолжительности жизни, как показано на фиг.7. Продолжительность жизни с момента рождения составила 31,5 (15-мер), 27,0 (18-мер) и 28,0 (20-мер) дней, по сравнению с 16,0 днями для контрольных СМА мышей, не получавших лечение. В отличие от этого, продолжительность жизни СМА мышей, получавших 18-мерный скрамблед-контроль, не улучшилась. Эти результаты показывают, что лечение антисмысловыми олигонуклеотидами, нацеленными на SMN, увеличивает продолжительность жизни субъектов, страдающих СМА.
СМА аллель-специфичные олигонуклеотиды также увеличивали количество мотонейронов в спинном мозге, как показано на фигуре 8.
РНК SMN измерялась с помощью ОТ-ПЦР. Животные, получавшие СМА АСО, имели повышенные уровни РНК SMN по сравнению со СМА мышами, не получавшими лечение. Результаты мышей, получавших 20-мерные АСО, по сравнению со СМА мышами, не получавшими лечения, показаны на фиг.9.
Для определения того, может ли быть увеличена продолжительность жизни путем введения второй дозы, эксперимент, описанный выше, был повторен с дополнительной дозой 20 мкг на 21 день. Результаты показаны на фиг.10. Верхняя кривая показывает эффект первой дозы 8 мкг в день 0. В день Р21 половина мышей получила повторное лечение.
Эффект повторного введения по сравнению с мышами, которые получили только первое введение, показан на фигуре 11. Этот результат показывает, что второе ИСВ введение антисмысловых олигонуклеотидов увеличивает продолжительность жизни.
Пример 8 - Активность у мышей со СМА типа III
Два антисмысловых соединения и одно контрольное были протестированы в модели СМА на мышах. Соединения описаны в таблице, приведенной ниже.
Соединения, протестированные на СМА мышах Тайваньской линии
ISIS# | Последовательность | Описание | SEQ ID |
396443 | TCACTTTCATAATGCTGG | равномерно 2’-МОЭ, полностью PS; 18-мерный, комплементарен интрону 7 человеческого SMN2 | 1 |
449220 | ATTCACTTTCATAATGCTGG | равномерно 2-ОМе; полностью PS; 20-мерный, комплементарен интрону 7 человеческого SMN2 | 3 |
439272 | TTAGTTTAATCACGCTCG | равномерно 2’-МОЭ; полностью PS; 18-мерный; контрольная последовательность | 4 |
Мыши Тайваньской линии с типом III CMA были предоставлены Jackson Laboratory (Бар Харбор, Мэн). Эти мыши лишены мышиного гена SMN и являются гомозиготными по человеческому гену SMN2 (mSMN-/-; hSMN2+/+). Они были описаны в публикации Hsieh-Li HM et al, Nature Genet. 24, 66-70 2000.
Мыши получали 3, 10, 30 или 100 мкг ISIS396443 или ISIS449220 в день либо 30 или 100 мкг контрольного соединения ISIS439272 в день в натрий-фосфатном буфере (PBS). Контрольные мыши получали только PBS (доза 0). Все препараты вводились с помощью интрасеребровентрикулярной (ИСВ) инфузии, используя осмотический насос Azlet 1007D. Для каждой дозы было выбрано пять животных, однако, две мыши, получавшие максимальную дозу ISIS449220, погибли до окончания исследования. Животные были умерщвлены на 9 день (через 2 дня после получения последней дозы), из каждого животного были выделены головной мозг и люмбальный отдел спинного мозга. Каждый образец был исследован с помощью ПНР в реальном времени для определения количества человеческих SMN2, включающих экзон 7 ((+)экзон 7), и количество человеческих SMN2, лишенных экзона 7((-)экзон 7). ПЦР в реальном времени также был использован для определения уровней экспрессии фактора воспаления аллотрансплантата (AIF1) и глицеральдегид-3-фосфат дегидрогеназы (GADPH).
Уровни экспрессии (+)экзон 7 и (-)экзон 7 форм были нормированы к GADPH уровню. Такие нормированные уровни экспрессии были затем разделены на GADPH-нормированные уровни контрольных мышей, получавших PBS. Полученные значения, кратные контрольным, представлены ниже в Таблице 17. Данные представляют среднее значение от контрольного для всех пяти мышей в каждой группе, за исключением максимальной дозы ISIS449220, которые получены от трех выживших мышей.
Введение ISIS396443 привело к резкому увеличению включения экзона 7. Введение 10 мкг/день ISIS396443 привело к увеличению почти вдвое (в 1,8 раз) количества SMN2, содержащих экзон 7, в головном мозге, а в люмбальном отделе спинного мозга к увеличению более чем в два раза по сравнению с контрольными мышами, не получавшими лечения.
Способность антисмысловых соединений изменять сплайсинг у СМА мышей
Соединение | Доза (мкг/день) | Головной мозг | Люмбальный отдел спинного мозга | ||
(+)экзон 7 | (-)экзон 7 | (+)экзон 7 | (-)экзон 7 | ||
396443 (2’-МОЭ) | 0 | 1,0 | 1,0 | 1,0 | 1,0 |
3 | 1,3 | 1,0 | 1,4 | 1,0 | |
10 | 1,8 | 0,7 | 2,1 | 0,6 | |
30 | 2,4 | 0,6 | 3,4 | 0,3 | |
100 | 3,0 | 0,3 | 3,8 | 0,1 | |
449220 (2’-ОМе) | 0 | 1,0 | 1,0 | 1,0 | 1,0 |
3 | 0,9 | 1,1 | 1,0 | 1,1 | |
10 | 1,0 | 1,1 | 1,0 | 1,2 | |
30 | 1,0 | 1,2 | 1,1 | 1,2 | |
100* | 1,0 | 1,0 | 1,2 | 1,1 | |
439272 Контроль | 0 | 1,0 | 1,0 | 1,0 | 1,0 |
30 | 1,0 | 1,1 | 0,9 | 1,1 | |
100 | 1,0 | 1,0 | 1,0 | 1,0 | |
* данные от 3 мышей, получавших указанную дозу |
Экспрессия фактора воспаления аллотрансплантата (AIF1) была исследована путем оценки воспаления. После нормирования всех образцов к значениям для GADPH, отношение AIF1 для каждой группы было разделено на значение для PBS контроля. ISIS396443 не вызвал увеличение AIF1, даже в максимальной дозе. ISIS449220 вызвал увеличение AIF1 в головном мозге и люмбальном отделе спинного мозга. Данные в Таблице 18 показывают среднее значение относительно контроля для пяти мышей из каждой группы, за исключением максимальной дозы ISIS449220, полученными от трех выживших мышей.
Токсичность антисмысловых соединений для СМА мышей
Соединение | Доза (мкг/день) | AIF-1/GAPDH | |
Головной мозг | Люмбальный отдел спинного мозга | ||
396443 (2’-МОЭ) | 0 | 1,0 | 1,0 |
3 | 10 | 1,0 | |
10 | 1,1 | 1,2 | |
30 | 1,0 | 1,0 | |
100 | 0,9 | 1,0 | |
449220 (2’-ОМе) | 0 | 1,0 | 1,0 |
3 | 1,0 | 1,0 | |
10 | 1,0 | 1,8 | |
30 | 1,2 | 2,9 | |
100* | 1,8 | 3,3 | |
439272 Контроль | 0 | 0,9 | 0,9 |
30 | 0,9 | 1,0 | |
100 | 0,9 | 1,2 | |
* данные от 3 мышей, получавших указанную дозу |
Пример 9 - Введение обезьянам
Обезьяны Cynomolgus были использованы для оценки распределения ISIS3 95443 в различных дозах и при различных способах введения. ISIS396443 вводился двум обезьянам. Одна обезьяна получала дозу 3 мг путем ИСВ инфузии, а другая получала 3 мг путем ИТ инфузии. Обе инфузии применялись в течение 24 часов. Обезьяны были умерщвлены, а ткани были выделены через 96 часов после окончания периода инфузии. Концентрация ISIS396443 была измерена в образцах спинного мозга шейной, грудной и поясничной (люмбальной) областей. Результаты представлены в таблице ниже.
Животное # | Доза | Способ введения | Ткань | Концентрация ISIS396443 (мкг/г) |
1 | 3 мг в течение 24 часов | ИСВ инфузия | Шейный отдел | 21,5 |
Грудной отдел | 9,4 | |||
Поясничный отдел | 23,9 | |||
2 | 3 мг в течение 24 часов | ИТ инфузия | Шейный отдел | 12,5 |
Грудной отдел | 22,6 | |||
Поясничный отдел | 42,6 |
Поскольку обезьяны Cynomolgus имеют вес порядка 3 кг, доза составила около 1 мг/кг.
Для дальнейшей оценки распределения ISIS39644 двадцать-шесть обезьян были разделены на шесть групп, описанных в следующей таблице.
Группа | Доза | Способ введения | Концентрация соединения (мг/мл) | Продолжительность инфузии | День умерщвления | Число обезьян |
1 | 0 | ИСВ | 0 | 14 дней | 19 день | 2М/2Ж |
2 | 3 мг | ИСВ | 0,09 | 14 дней | 19 день | 2М/2Ж |
3 | 3 мг | ИТ | 1,25 | 1 день | 6 день | 3М/2Ж |
4 | 3 мг | ИТ | 0,42 | 3 дня | Вдень | 2М/2Ж |
5 | 3 мг | ИТ | 0,18 | 7 дня | 12 день | 3М/2Ж |
6 | 3 мг | ИТ | 0,09 | 14 дней | 19 день | 2М/2Ж |
Величина инфузии для всех групп составила 100 мкл/час. Все обезьяны получили в общей сложности по 3 мг ISIS39644 в физиологическом растворе, за исключением группы 1, которая получала только физиологический раствор. Обезьяны были умерщвлены, а ткани выделены через 5 дней после окончания инфузии.
Концентрации ISIS39644 в образцах тканей обезьян были определены, использую стандартные методы. Результаты показаны на графиках фиг.12. Образцы также оценивались по гистологии. Гистология не показала каких-либо неблагоприятных эффектов лечения и подтвердила присутствие ISIS396443. Потеря клеток Пуркинье не нашла подтверждения.
Быстрая инфузия показала большее количество ISIS396443, чем медленная инфузия. Эти результаты позволяют предположить, что быстрая инфузия или болюсная инъекция могут быть более предпочтительными в некоторых вариантах воплощения. Поскольку болюсное введение имеет некоторые практические преимущества по сравнению с инфузией, в некоторых вариантах воплощения оно является предпочтительным способом введения в спинномозговую жидкость. В некоторых вариантах воплощения предпочтительный способ введения в спинномозговую жидкость представляет собой болюсную ИТ инъекцию.
Пример 10 - Создание модели тяжелой формы СМА на мышах и ИСВ лечение
Были получены мыши, имеющие фенотип тяжелой формы СМА. Гомозиготные мыши с тяжелой формой СМА несут 2 копии человеческого SMN2, но не имеют мышиного SMN. Средняя продолжительность жизни составляет около 10 дней. Кроме того, СМА мыши меньше по размеру и имеют более короткие хвосты. Гетерозиготы несут мышиный SMN и развиваются нормально.
Для изучения эффекта антисмысловых соединений у мышей с тяжелой формой СМА 20 мкг ISIS396443 было введено посредством ИСВ инъекции в день PL Лечение привело к увеличению средней продолжительности жизни с 9,9 дней (контрольными мыши, получавшие физиологический раствор) до 16,7 дней. Анализ с помощью ОТ-ПЦР показал увеличение РНК SMN полной длины в тканях мышей, получавших лечение.
Пример 11 - Системное введение ISIS 396443
Мыши, страдающие тяжелой формой СМА, и здоровые гетерозиготные контрольные мыши для изучения эффекта ISIS396443 с помощью болюсной ИСВ инъекции и/или болюсной подкожной инъекции были разделены на следующие группы:
Группа 1 - ИСВ + подкожно
Одна ИСВ инъекция 20 мкг в P1 или Р2 (1 или 2 день после рождения); и две подкожные инъекции 50 мкг/г введены между Р0 и Р3.
Группа 2 - подкожно + подкожно
Две подкожные инъекции 50 мкг/г вводились между Р0 и Р3; одна подкожная инъекция 50 мкг/г вводилась между Р5 и Р6; и подкожная инъекция 50 мкг/г вводилась между Р9 и Р10.
Группа 3 - подкожно
Две подкожные инъекции 50 мкг/г вводились между Р0 и Р3.
Группа 4 - СМА контроль, физиологический раствор
Одну ИСВ инъекцию физиологического раствора вводили в Р1 или Р2; и две подкожные инъекции физиологического раствора вводились между Р0 и Р3.
Группа 5 - Гетерозиготный контроль
Одна подкожная инъекция 20 мкг вводилась в Р1 или Р2; и две подкожные инъекции 50 мкг/г вводились между Р0 и Р3 гетерозиготным мышам.
Каждая группа включала от 14 до 22 мышей. Продолжительность жизни (в днях) каждой мыши из каждой группы указана в таблице ниже. Многие мыши в этом эксперименте выживали на протяжении всего исследования настоящего изобретения. Так, значение, обозначенное как ">", показывает, что продолжительность жизни мыши превышает указанное значение.
Мышь | Группа 1 ИСВ + подкожно | Группа 2 подкожно + подкожно | Группа 3 подкожно | Группа 4 Физ. раствор | Группа 5 Гет. |
1 | >141 | >130 | >103 | 8 | >146 |
2 | >141 | 127 | 94 | 8 | >146 |
3 | 22 | >114 | 61 | 8 | >146 |
4 | >140 | 73 | >103 | 8 | >146 |
5 | 117 | 27 | >103 | 8 | >145 |
6 | >124 | 27 | >103 | 8 | >145 |
7 | >111 | 18 | 34 | 8 | >145 |
8 | >111 | >102 | 26 | 8 | >145 |
9 | >111 | >98 | 31 | 8 | >145 |
10 | >111 | >98 | 69 | 9 | >144 |
11 | 29 | >102 | 69 | 9 | >144 |
12 | >110 | >102 | 67 | 9 | >144 |
13 | >110 | >102 | >91 | 9 | >144 |
14 | >110 | >102 | >90 | 9 | >143 |
15 | >110 | н.д. | >90 | 9 | >143 |
16 | >108 | н.д. | >90 | 9 | >143 |
17 | >108 | н.д. | >90 | 10 | >129 |
18 | >109 | н.д. | 86 | 10 | >129 |
19 | 18 | н.д. | >75 | 10 | >129 |
20 | н.д. | н.д. | 69 | 10 | н.д. |
21 | н.д. | н.д. | 18 | 11 | н.д. |
22 | н.д. | н.д. | >71 | 12 | н.д. |
23 | н.д. | н.д. | н.д. | 12 | н.д. |
24 | н.д. | н.д. | н.д. | 13 | н.д. |
25 | н.д. | н.д. | н.д. | 13 | н.д. |
26 | н.д. | н.д. | н.д. | 14 | н.д. |
Пример 12 - Зависимость «доза-ответ» для подкожного введения
Выживаемость мышей с тяжелой формой СМА, получавших подкожно различные дозы ISIS396443, оценивалась в следующих группах.
Группа 1-SC400 (доза составляла от 80 мг/кг до 180 мг/кг)
Две подкожные инъекции, в сумме составляющие 400 мкг на мышь, вводились между Р0 и Р3, первая доза составляла 150 мкг (объемом 3 мкл) и вводилась в Р0 или P1, a вторая - 250 мкг в Р2 или Р3 (объемом 5 мкл).
Группа 2-SC200 (доза составляла от 40 мг/кг до 90 мг/кг)
Две подкожные инъекции, в сумме составляющие 200 мкг на мышь, вводились между Р0 и Р3, первая доза составляла 75 мкг (объемом 1,5 мкл) и вводилась в Р0-Р1, а вторая -125 мкг в Р2 или Р3 (объемом 2,5 мкл).
Группа 3-SC 100 (доза составляла от 20 мг/кг до 45 мг/кг)
Две подкожные инъекции, в сумме составляющие 100 мкг на мышь, вводилась между Р0 и Р3, первая доза составляла 40 мкг в Р0 или Р1 (объемом 2 мкл), а вторая - 60 мкг (объемом 3 мкл) и вводилась в Р2 или Р3.
Группа 4 - СМА физиологический раствор (отрицательный контроль)
Две подкожные инъекции физиологического раствора между Р0 и Р3 днями, первая была сделана в день Р0 или Р1 (объемом 5 мкл), а вторая вводилась в Р2 или Р3 (объемом 5 мкл).
Группа 5 - Гетерозиготный контроль (положительный контроль)
Мыши не получали никакого лечения.
Каждая группа включала от 14 до 26 мышей. Продолжительность жизни в днях для каждой мыши из каждой группы приведена в таблице ниже. Многие мыши в этом эксперименте выживали на протяжении всего исследования настоящего изобретения. Так, значение, обозначенное как ">", показывает, что продолжительность жизни мыши превышает указанное значение.
Мышь | Группа 1 SC400 | Группа 2 SC200 | Группа 3 SC100 | Группа 4 Физ. раствор | Группа 5 Гет. |
1 | >82 | >93 | 11 | 8 | >87 |
2 | >82 | >91 | 11 | 8 | >87 |
3 | >82 | >91 | 11 | 9 | >87 |
4 | >82 | >91 | 11 | 9 | >87 |
5 | >82 | 14 | 11 | 9 | >87 |
6 | >82 | 25 | 12 | 9 | >87 |
7 | >82 | 92 | 18 | 9 | >86 |
8 | >82 | >93 | 19 | 9 | >86 |
9 | >82 | >93 | 22 | 9 | >86 |
10 | >82 | >90 | 69 | 9 | >86 |
11 | >82 | >90 | >77 | 9 | >86 |
12 | >80 | >91 | >77 | 10 | >86 |
13 | >80 | >91 | >77 | 10 | >86 |
14 | 25 | >90 | >77 | 10 | >86 |
15 | н.д. | >90 | >75 | 10 | >85 |
16 | н.д. | >90 | >74 | 11 | >85 |
17 | н.д. | 86 | >74 | 11 | >85 |
18 | н.д. | >90 | >74 | 12 | н.д. |
19 | н.д. | >52 | >74 | 12 | н.д. |
20 | н.д. | н.д. | >74 | 13 | н.д. |
21 | н.д. | н.д. | >74 | 13 | н.д. |
22 | н.д. | н.д. | >71 | 13 | н.д. |
23 | н.д. | н.д. | >49 | 13 | н.д. |
24 | н.д. | н.д. | >49 | 14 | н.д. |
25 | н.д. | н.д. | >49 | 15 | н.д. |
26 | н.д. | н.д. | 23 | н.д. | н.д. |
Пример 13 - Сравнение ИСВ инфузии и ИСВ болюса
Введение с помощью интрасеребровентрикулярной болюсной инъекции (ИСВ болюс) сравнивалось с введением с помощью продолжительной интрасеребровентрикулярной инфузии (ИСВ инфузия). Трансгенные мыши с типом III CMA дозированно получали ISIS387954. Мыши для ИСВ инфузии получали общую дозу 0 (PBS контроль), 87,5 мкг, 175 мкг, 350 мкг или 700 мкг, инфузированные в течение 7 дней, и были умерщвлены спустя 2 дня. Мыши для ИСВ болюсного введения получали такие же дозы, 0 (PBS контроль), 87,5 мкг, 175 мкг, 350 мкг или 700 мкг, в однократной ИСВ инъекции и были умерщвлены через 9 дней. Каждая группа включала 5 мышей. РНК была выделена из спинного мозга поясничного отдела и проанализирована с помощью ПЦР в реальном времени. Включение интрона 7 соотнесено с контрольными значениями от мышей, получавших физиологический раствор. Результаты представлены в следующей таблице.
Группа | Доза | Кратное увеличение включения интрона 7 относительно PBS |
1 | PBS (контроль) | 1,0 |
2 | 87,5 мкг с помощью ИСВ инфузии | 2,1 |
в течение 7 дней | ||
3 | 175 мкг с помощью ИСВ инфузии в течение 7 дней | 2,4 |
4 | 350 мкг с помощью ИСВ инфузии в течение 7 дней | 3,2 |
5 | 700 мкг с помощью ИСВ инфузии в течение 7 дней | 3,6 |
6 | PBS (контроль) | 1,0 |
7 | 87,5 мкг с помощью ИСВ болюса | 3,1 |
8 | 175 мкг с помощью ИСВ болюса | 3,7 |
9 | 350 мкг с помощью ИСВ болюса | 3,8 |
10 | 700 мкг с помощью ИСВ болюса | 3,8 |
В этом эксперименте одинаковые дозы, вводимые посредством ИСВ болюсной инъекции, вызвали увеличение активности по сравнению с введением с помощью ИСВ инфузии в течение 7 дней.
ПЦР в реальном времени также была проведена для определения уровня экспрессии фактора воспаления аллотрансплантата (AIF1) для оценки воспаления. Ни один из образцов, полученных от исследуемых мышей, не показал существенное отличие от контрольных значений.
Пример 14 - Зависимость «доза-ответ» при интрасеребровентрикулярном болюсном введении
Интрасеребровентрикулярное болюсное введение было протестировано на дополнительных дозах. Трансгенные мыши получили 0, 10,9 мкг, 21,9 мкг, 43,4 мкг, 87,5 мкг или 175 мкг ISIS3 87954 путем однократной болюсной интрасеребровентрикулярной инъекции и были умерщвлены через 9 дней, как описано в Примере 13. Были получены образцы из головного мозга и спинного мозга поясничного отдела позвоночника. РНК была подготовлена и проанализирована с помощью ОТ-ПЦР на изменения включения интрона 7 и изменения в AIF1. Ни один из образцов не показал изменение в AIF1 по сравнению с контролем. Результаты включения интрона 7 приведены в таблице ниже. ED50 находится на отметке примерно 22 мкг.
Группа | Доза | Кратное увеличение включение интрона 7 относительно контроля PBS | |
Головной мозг | Люмбальный отдел спинного мозга | ||
1 | PBS (контроль) | 1,0 | 1,0 |
2 | 10,9 мкг с помощью ИСВ болюса | 2,4 | 2,2 |
3 | 21,9 мкг с помощью ИСВ болюса | 2,8 | 2,7 |
4 | 43,4 мкг с помощью ИСВ болюса | 3,2 | 3,4 |
5 | 87,5 мкг с помощью ИСВ болюса | 3,5 | 3,4 |
6 | 175 мкг с помощью ИСВ болюса | 4,4 | 3,7 |
Claims (13)
1. Способ облегчения по меньшей мере одного симптома спинальной мышечной атрофии у субъекта, способ содержит введение субъекту, имеющему по меньшей мере один симптом, ассоциированный со спинальной мышечной атрофией, антисмыслового соединения, содержащего антисмысловой олигонуклеотид, комплементарный интрону 7 пре-мРНК, кодирующей человеческий SMN2, где антисмысловый олигонуклеотид имеет нуклеиновую последовательность, состоящую из нуклеиновой последовательности SEQ ID NO: 1, где каждый нуклеозид антисмыслового олигонуклеотида содержит модифицированный остаток сахара, где каждый модифицированный остаток сахара представляет собой 2’-O-метоксиэтил остаток сахара и где каждая межнуклеозидная связь представляет собой фосфоротиоатную связь.
2. Способ по п.1, где антисмысловое соединение вводят в цереброспинальную жидкость.
3. Способ по п.1, где антисмысловое соединение вводят в интратекальное пространство.
4. Способ по п.1, где антисмысловое соединение вводят в цереброспинальную жидкость в головном мозге.
5. Способ по п.1, где введение включает (i) болюсную инъекцию или (ii) введение с помощью нагнетающего насоса.
6. Способ по п.1, где антисмысловое соединение вводят в дозе от 0,01 до 10 миллиграммов антисмыслового соединения на килограмм веса тела субъекта.
7. Способ по п.1, где по меньшей мере один нуклеозид антисмыслового олигонуклеотида содержит модифицированное нуклеиновое основание.
8. Способ по п.7, где модифицированное нуклеиновое основание представляет собой 5-метилцитозин.
9. Способ по п.1, где антисмысловое соединение также вводят системно, необязательно путем подкожного введения, внутривенной или внутрибрюшинной инъекции; и/или необязательно где системное введение и введение в центральную нервную систему производятся в разное время.
10. Применение антисмыслового соединения, содержащего антисмысловой олигонуклеотид, комплементарный интрону 7 пре-мРНК, кодирующей человеческий SMN2, в производстве лекарственного средства для облегчения или лечения по меньшей мере одного симптома спинальной мышечной атрофии у субъекта, где антисмысловой олигонуклеотид имеет нуклеиновую последовательность, состоящую из нуклеиновой последовательности SEQ ID NO: 1, где каждый нуклеозид антисмыслового олигонуклеотида содержит модифицированный остаток сахара, где каждый модифицированный остаток сахара представляет собой 2’-O-метоксиэтил остаток сахара и где каждая межнуклеозидная связь представляет собой фосфоротиоатную связь.
11. Применение по п.10 в лечении болезни или состояния, ассоциированного с фактором выживаемости мотонейронов 1 (SMN1), где необязательно субъект имеет (i) спинальную мышечную атрофию типа I; (ii) спинальную мышечную атрофию типа II или (iii) спинальную мышечную атрофию типа III.
12. Применение по п.10, где по меньшей мере один нуклеозид антисмыслового олигонуклеотида содержит модифицированное нуклеиновое основание.
13. Применение по п.12, где модифицированное нуклеиновое основание представляет собой 5-метилцитозин.
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US21803109P | 2009-06-17 | 2009-06-17 | |
US61/218,031 | 2009-06-17 | ||
PCT/US2010/039077 WO2010148249A1 (en) | 2009-06-17 | 2010-06-17 | Compositions and methods for modulation of smn2 splicing in a subject |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2015139553A Division RU2683772C2 (ru) | 2009-06-17 | 2010-06-17 | Композиции и способы модуляции smn2 сплайсинга у субъекта |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2012101491A RU2012101491A (ru) | 2013-07-27 |
RU2566724C2 RU2566724C2 (ru) | 2015-10-27 |
RU2566724C9 true RU2566724C9 (ru) | 2019-03-12 |
Family
ID=43356760
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2012101491A RU2566724C9 (ru) | 2009-06-17 | 2010-06-17 | Композиции и способы модуляции smn2 сплайсинга у субъекта |
RU2015139553A RU2683772C2 (ru) | 2009-06-17 | 2010-06-17 | Композиции и способы модуляции smn2 сплайсинга у субъекта |
Family Applications After (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2015139553A RU2683772C2 (ru) | 2009-06-17 | 2010-06-17 | Композиции и способы модуляции smn2 сплайсинга у субъекта |
Country Status (24)
Country | Link |
---|---|
US (4) | US8980853B2 (ru) |
EP (4) | EP2442816A4 (ru) |
JP (7) | JP5707396B2 (ru) |
KR (8) | KR20200047790A (ru) |
CN (5) | CN106983768B (ru) |
AU (2) | AU2010262862C1 (ru) |
CA (1) | CA2765396C (ru) |
CY (2) | CY1120807T1 (ru) |
DK (2) | DK3305302T3 (ru) |
ES (2) | ES2761614T3 (ru) |
HK (1) | HK1246648B (ru) |
HR (2) | HRP20181712T1 (ru) |
HU (2) | HUE039741T2 (ru) |
IL (2) | IL217014A (ru) |
LT (2) | LT3449926T (ru) |
MX (3) | MX361732B (ru) |
NO (1) | NO2020008I1 (ru) |
NZ (2) | NZ624712A (ru) |
PL (2) | PL3305302T3 (ru) |
PT (2) | PT3305302T (ru) |
RU (2) | RU2566724C9 (ru) |
SI (2) | SI3449926T1 (ru) |
TR (1) | TR201816256T4 (ru) |
WO (1) | WO2010148249A1 (ru) |
Families Citing this family (107)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
AU2006213686A1 (en) | 2005-02-09 | 2006-08-17 | Avi Bio Pharma, Inc. | Antisense composition and method for treating muscle atrophy |
WO2007002390A2 (en) * | 2005-06-23 | 2007-01-04 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for modulation of smn2 splicing |
US8067571B2 (en) | 2005-07-13 | 2011-11-29 | Avi Biopharma, Inc. | Antibacterial antisense oligonucleotide and method |
CA2744987C (en) | 2008-12-02 | 2018-01-16 | Chiralgen, Ltd. | Method for the synthesis of phosphorus atom modified nucleic acids |
CN106983768B (zh) | 2009-06-17 | 2023-04-07 | 冷泉港实验室 | 用于在对象中调节smn2剪接的组合物和方法 |
BR112012000828A8 (pt) | 2009-07-06 | 2017-10-10 | Ontorii Inc | Novas pró-drogas de ácido nucleico e métodos de uso das mesmas |
US8802642B2 (en) | 2010-04-28 | 2014-08-12 | Iowa State University Research Foundation, Inc. | Spinal muscular atrophy treatment via targeting SMN2 catalytic core |
WO2011150408A2 (en) | 2010-05-28 | 2011-12-01 | Avi Biopharma, Inc. | Oligonucleotide analogues having modified intersubunit linkages and/or terminal groups |
TWI541024B (zh) | 2010-09-01 | 2016-07-11 | 日本新藥股份有限公司 | 反義核酸 |
WO2012031243A2 (en) | 2010-09-03 | 2012-03-08 | Avi Biopharma, Inc. | dsRNA MOLECULES COMPRISING OLIGONUCLEOTIDE ANALOGS HAVING MODIFIED INTERSUBUNIT LINKAGES AND/OR TERMINAL GROUPS |
WO2012039448A1 (ja) | 2010-09-24 | 2012-03-29 | 株式会社キラルジェン | 不斉補助基 |
JP6336755B2 (ja) | 2010-11-12 | 2018-06-06 | ザ ジェネラル ホスピタル コーポレイション | ポリコームに関連する非コードrna |
US9920317B2 (en) | 2010-11-12 | 2018-03-20 | The General Hospital Corporation | Polycomb-associated non-coding RNAs |
EP2704749A1 (en) | 2011-05-05 | 2014-03-12 | Sarepta Therapeutics, Inc. | Peptide oligonucleotide conjugates |
WO2012160130A1 (en) | 2011-05-25 | 2012-11-29 | Universite Paris Descartes | Erk inhibitors for use in treating spinal muscular atrophy |
US9605019B2 (en) | 2011-07-19 | 2017-03-28 | Wave Life Sciences Ltd. | Methods for the synthesis of functionalized nucleic acids |
US20130085139A1 (en) | 2011-10-04 | 2013-04-04 | Royal Holloway And Bedford New College | Oligomers |
CN103946380A (zh) | 2011-11-11 | 2014-07-23 | 桑塔瑞斯制药公司 | 用于调控smn2剪接的化合物 |
US9278987B2 (en) | 2011-11-18 | 2016-03-08 | Sarepta Therapeutics, Inc. | Functionally-modified oligonucleotides and subunits thereof |
JP6496549B2 (ja) | 2011-11-30 | 2019-04-03 | サレプタ セラピューティクス, インコーポレイテッド | 脊髄性筋萎縮症における誘発されたエクソン包含 |
EP2788087A4 (en) * | 2011-12-06 | 2015-08-26 | Ohio State Innovation Foundation | NON-IONIC LOW OSMOLARITY CONTRAST AGENTS FOR THE ADMINISTRATION OF ANTISENSE OLIGONUCLEOTIDES AND THE TREATMENT OF DISEASE |
WO2013148260A1 (en) | 2012-03-30 | 2013-10-03 | Washington University | Methods for modulating tau expression for reducing seizure and modifying a neurodegenerative syndrome |
KR20220139425A (ko) | 2012-07-13 | 2022-10-14 | 웨이브 라이프 사이언시스 리미티드 | 키랄 제어 |
AU2013288048A1 (en) | 2012-07-13 | 2015-01-22 | Wave Life Sciences Ltd. | Asymmetric auxiliary group |
WO2014110291A1 (en) * | 2013-01-09 | 2014-07-17 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for modulation of smn2 splicing in a subject |
EP2946013A1 (en) | 2013-01-16 | 2015-11-25 | Iowa State University Research Foundation, Inc. | A deep intronic target for splicing correction on spinal muscular atrophy gene |
ES2807379T3 (es) | 2013-03-14 | 2021-02-22 | Ionis Pharmaceuticals Inc | Composiciones y métodos para regular la expresión de Tau |
EP3560502A1 (en) * | 2013-04-12 | 2019-10-30 | The Curators of the University of Missouri | Smn2 element 1 antisense compositions and methods and uses thereof |
TWI657819B (zh) | 2013-07-19 | 2019-05-01 | 美商Ionis製藥公司 | 用於調節τ蛋白表現之組合物 |
CN105579582A (zh) | 2013-07-25 | 2016-05-11 | 埃克西奎雷股份有限公司 | 用于预防和治疗用途的作为免疫刺激剂的基于球形核酸的构建体 |
US10568898B2 (en) | 2013-08-13 | 2020-02-25 | Northwestern University | Lipophilic nanoparticles for drug delivery |
WO2015023941A1 (en) | 2013-08-16 | 2015-02-19 | Rana Therapeutics, Inc. | Oligonucleotides targeting euchromatin regions of genes |
EP3690048A1 (en) | 2013-09-04 | 2020-08-05 | Cold Spring Harbor Laboratory | Reducing nonsense-mediated mrna decay |
CN111235149B (zh) | 2013-09-05 | 2024-04-16 | 萨罗塔治疗公司(美国) | 酸性α-葡糖苷酶中反义诱导的外显子2纳入 |
EP3095461A4 (en) | 2014-01-15 | 2017-08-23 | Shin Nippon Biomedical Laboratories, Ltd. | Chiral nucleic acid adjuvant having immunity induction activity, and immunity induction activator |
WO2015108048A1 (ja) | 2014-01-15 | 2015-07-23 | 株式会社新日本科学 | 抗腫瘍作用を有するキラル核酸アジュバンド及び抗腫瘍剤 |
PT3094728T (pt) | 2014-01-16 | 2022-05-19 | Wave Life Sciences Ltd | Desenho quiral |
ES2932304T3 (es) | 2014-04-17 | 2023-01-17 | Biogen Ma Inc | Composiciones y métodos para la modulación del empalme de SMN2 en un sujeto |
GB201410693D0 (en) | 2014-06-16 | 2014-07-30 | Univ Southampton | Splicing modulation |
CN104163871A (zh) * | 2014-08-12 | 2014-11-26 | 大连医科大学 | 抗肿瘤的特异性剪接因子及制备方法 |
WO2016040748A1 (en) | 2014-09-12 | 2016-03-17 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for detection of smn protein in a subject and treatment of a subject |
JP6867945B2 (ja) | 2014-10-03 | 2021-05-12 | コールド スプリング ハーバー ラボラトリー | 核内遺伝子出力の標的とされた増強 |
WO2016070060A1 (en) | 2014-10-30 | 2016-05-06 | The General Hospital Corporation | Methods for modulating atrx-dependent gene repression |
US10517924B2 (en) | 2014-11-24 | 2019-12-31 | Northwestern University | High density lipoprotein nanoparticles for inflammation |
US10900036B2 (en) | 2015-03-17 | 2021-01-26 | The General Hospital Corporation | RNA interactome of polycomb repressive complex 1 (PRC1) |
MA41795A (fr) | 2015-03-18 | 2018-01-23 | Sarepta Therapeutics Inc | Exclusion d'un exon induite par des composés antisens dans la myostatine |
US10851371B2 (en) | 2015-04-10 | 2020-12-01 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Modulation of SMN expression |
MA50829A (fr) | 2015-06-01 | 2018-04-11 | Sarepta Therapeutics Inc | Exclusion d'exon induite pat technologie antisens dans le collagène de type vii |
US11020417B2 (en) | 2015-06-04 | 2021-06-01 | Sarepta Therapeutics, Inc | Methods and compounds for treatment of lymphocyte-related diseases and conditions |
JP6987041B2 (ja) * | 2015-08-28 | 2021-12-22 | サレプタ セラピューティクス,インコーポレイテッド | 脊髄性筋萎縮症におけるエクソン包含のための修飾アンチセンスオリゴマー |
WO2017060731A1 (en) | 2015-10-09 | 2017-04-13 | University Of Southampton | Modulation of gene expression and screening for deregulated protein expression |
WO2017062835A2 (en) | 2015-10-09 | 2017-04-13 | Sarepta Therapeutics, Inc. | Compositions and methods for treating duchenne muscular dystrophy and related disorders |
WO2017087486A1 (en) | 2015-11-16 | 2017-05-26 | Ohio State Innovation Foundation | Methods and compositions for treating disorders and diseases using survival motor neuron (smn) protein |
JP2019500345A (ja) | 2015-12-14 | 2019-01-10 | コールド スプリング ハーバー ラボラトリー | 肝臓病の処置のための組成物および方法 |
EP4104867A3 (en) | 2015-12-14 | 2023-03-01 | Cold Spring Harbor Laboratory | Compositions and methods for treatment of central nervous system diseases |
US11096956B2 (en) | 2015-12-14 | 2021-08-24 | Stoke Therapeutics, Inc. | Antisense oligomers and uses thereof |
EP3933041B1 (en) | 2015-12-14 | 2024-01-31 | Cold Spring Harbor Laboratory | Antisense oligomers for treatment of autosomal dominant retardation |
EP3389671A4 (en) | 2015-12-14 | 2019-07-17 | Cold Spring Harbor Laboratory | ANTISENSE OLIGOMERS FOR THE TREATMENT OF ALAGILLE'S SYNDROME |
ES2903394T3 (es) | 2015-12-14 | 2022-04-01 | Cold Spring Harbor Laboratory | Composiciones para el tratamiento de la retinitis pigmentosa 13 |
EA201892366A1 (ru) | 2016-04-18 | 2019-03-29 | Сарепта Терапьютикс, Инк. | Антисмысловые олигомеры и способы их применения для лечения заболеваний, связанных с геном кислой альфа-глюкозидазы |
JP7186094B2 (ja) | 2016-05-06 | 2022-12-08 | イグジキュア オペレーティング カンパニー | インターロイキン17受容体mRNAの特異的ノックダウンのためのアンチセンスオリゴヌクレオチド(ASO)を提示するリポソーム系球状核酸(SNA)構築物 |
CN109641928B (zh) | 2016-06-14 | 2022-08-30 | 比奥根Ma公司 | 用于寡核苷酸纯化的疏水性相互作用色谱法 |
WO2017218884A1 (en) | 2016-06-16 | 2017-12-21 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Combinations for the modulation of smn expression |
CN109689668B (zh) | 2016-06-24 | 2023-02-17 | 比奥根Ma公司 | 无加帽步骤的硫醇化寡核苷酸的合成 |
US11364304B2 (en) | 2016-08-25 | 2022-06-21 | Northwestern University | Crosslinked micellar spherical nucleic acids |
JOP20190065A1 (ar) | 2016-09-29 | 2019-03-28 | Ionis Pharmaceuticals Inc | مركبات وطرق لتقليل التعبير عن tau |
EP4035659A1 (en) | 2016-11-29 | 2022-08-03 | PureTech LYT, Inc. | Exosomes for delivery of therapeutic agents |
SG11201907714UA (en) | 2017-02-28 | 2019-09-27 | Univ Pennsylvania | Adeno-associated virus (aav) clade f vector and uses therefor |
JOP20190200A1 (ar) | 2017-02-28 | 2019-08-27 | Univ Pennsylvania | تركيبات نافعة في معالجة ضمور العضل النخاعي |
EP3594346A4 (en) * | 2017-03-10 | 2020-12-16 | National Center For Child Health And Development | ANTISENSE OLIGONUCLEOTIDE AND COMPOSITION FOR THE PREVENTION OR TREATMENT OF GLYCOGEN STORAGE DISEASE TYPE IA |
JP2020517638A (ja) | 2017-04-20 | 2020-06-18 | エータイアー ファーマ, インコーポレイテッド | 肺の炎症を治療するための組成物および方法 |
US11696954B2 (en) | 2017-04-28 | 2023-07-11 | Exicure Operating Company | Synthesis of spherical nucleic acids using lipophilic moieties |
TWI787282B (zh) | 2017-06-19 | 2022-12-21 | 日商住友金屬礦山股份有限公司 | 近紅外線硬化型油墨組成物及其製造方法、近紅外線硬化膜暨光造形法 |
CA3066968C (en) | 2017-07-10 | 2023-06-13 | Geron Corporation | Improved process for preparing imetelstat |
KR102636383B1 (ko) | 2017-08-04 | 2024-02-14 | 스카이호크 테라퓨틱스, 인코포레이티드 | 스플라이싱을 조절하는 방법 및 조성물 |
PL3673080T3 (pl) | 2017-08-25 | 2024-03-11 | Stoke Therapeutics, Inc. | Oligomery antysensowne do leczenia stanów i chorób |
EP3694530A4 (en) * | 2017-10-12 | 2021-06-30 | Wave Life Sciences Ltd. | OLIGONUCLEOTIDE COMPOSITIONS AND METHOD FOR THEREFORE |
EP3697910A4 (en) | 2017-10-18 | 2021-07-14 | Sarepta Therapeutics, Inc. | ANTISENSE OLIGOMERIC COMPOUNDS |
CA3082136A1 (en) | 2017-11-08 | 2019-05-16 | Avexis, Inc. | Means and method for preparing viral vectors and uses of same |
CA3088112A1 (en) | 2018-01-12 | 2019-07-18 | Bristol-Myers Squibb Company | Antisense oligonucleotides targeting alpha-synuclein and uses thereof |
WO2019140353A1 (en) * | 2018-01-12 | 2019-07-18 | Camena Bioscience Limited | Compositions and methods for template-free geometric enzymatic nucleic acid synthesis |
BR112020015082A2 (pt) | 2018-01-25 | 2021-01-05 | Biogen Ma, Inc. | Métodos de tratamento da atrofia muscular espinhal |
WO2019168558A1 (en) * | 2018-02-28 | 2019-09-06 | Exicure, Inc. | Liposomal spherical nucleic acid (sna) constructs for survival of motor neuron (sma) inhibitors |
WO2019169203A1 (en) * | 2018-02-28 | 2019-09-06 | Exicure, Inc. | Liposomal spherical nucleic acid (sna) constructs for survival of motor neuron (sma) inhibitors |
CN111511915A (zh) | 2018-03-09 | 2020-08-07 | 第一三共株式会社 | 糖原病Ia型治疗药 |
JP7333079B2 (ja) | 2018-03-19 | 2023-08-24 | 国立大学法人 東京医科歯科大学 | 毒性が軽減した核酸 |
JP7478675B2 (ja) | 2018-06-08 | 2024-05-07 | ノバルティス アーゲー | 薬物製品の効力を測定するための細胞ベースアッセイ |
JP7427252B2 (ja) | 2018-06-27 | 2024-02-05 | 株式会社リボルナバイオサイエンス | 脊髄性筋萎縮症の予防または治療剤 |
EP3837374A4 (en) * | 2018-08-15 | 2022-06-08 | Biogen MA Inc. | COMBINATION THERAPY FOR SPINAL MUSCLE ATROPHY |
JP2022509372A (ja) | 2018-10-29 | 2022-01-20 | バイオジェン・エムエイ・インコーポレイテッド | 血液脳関門輸送の促進のためのヒト化され安定化されたfc5バリアント |
BR112021009739A2 (pt) | 2018-11-30 | 2021-10-19 | Novartis Ag | Vetores virais aav e usos dos mesmos |
WO2020157760A1 (en) | 2019-01-31 | 2020-08-06 | Bar Ilan University | Neoantigens created by aberrant-induced splicing and uses thereof in enhancing immunotherapy |
JP2022521467A (ja) | 2019-02-05 | 2022-04-08 | スカイホーク・セラピューティクス・インコーポレーテッド | スプライシングを調節するための方法および組成物 |
KR20210135507A (ko) | 2019-02-06 | 2021-11-15 | 스카이호크 테라퓨틱스, 인코포레이티드 | 스플라이싱을 조절하는 방법 및 조성물 |
CA3162618A1 (en) | 2019-03-20 | 2020-09-24 | Peter Jungsoo PARK | Antisense oligonucleotide-based progranulin augmentation therapy in neurodegenerative diseases |
KR20220007104A (ko) | 2019-05-08 | 2022-01-18 | 바이오젠 엠에이 인코포레이티드 | 올리고뉴클레오타이드의 수렴형 액상 합성 |
CA3149906A1 (en) * | 2019-07-19 | 2021-01-28 | Biogen Ma Inc. | Methods of treating or preventing spinal muscular atrophy |
WO2021030766A1 (en) * | 2019-08-15 | 2021-02-18 | Biogen Ma Inc. | Combination therapy for spinal muscular atrophy |
RU2738093C9 (ru) * | 2019-12-23 | 2020-12-29 | Общество с ограниченной ответственностью "Гелеспон" | Способ синтеза 2'-о-(2-метоксиэтил) тиофосфатного олигонуклеотида |
CA3173034A1 (en) | 2020-02-28 | 2021-09-02 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Compounds and methods for modulating smn2 |
CN113444722A (zh) * | 2020-03-24 | 2021-09-28 | 中国科学院脑科学与智能技术卓越创新中心 | 单碱基编辑介导的剪接修复在制备治疗脊髓性肌萎缩症中的应用 |
KR20230022409A (ko) | 2020-05-11 | 2023-02-15 | 스톡 테라퓨틱스, 인크. | 병태 및 질환의 치료를 위한 opa1 안티센스 올리고머 |
US20230287416A1 (en) * | 2020-07-31 | 2023-09-14 | Ractigen Therapeutics | Combinatory treatment of sma with sarna and mrna modulators |
AR125239A1 (es) | 2021-04-02 | 2023-06-28 | Kumiai Chemical Industry Co | Compuesto heterocíclico y uso del mismo |
WO2023073526A1 (en) | 2021-10-25 | 2023-05-04 | Novartis Ag | Methods for improving adeno-associated virus (aav) delivery |
WO2023117965A1 (en) | 2021-12-20 | 2023-06-29 | Freie Universität Berlin | Methods and agents for increasing rbm3 expression |
WO2023240236A1 (en) | 2022-06-10 | 2023-12-14 | Voyager Therapeutics, Inc. | Compositions and methods for the treatment of spinal muscular atrophy related disorders |
Family Cites Families (125)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS5927900A (ja) | 1982-08-09 | 1984-02-14 | Wakunaga Seiyaku Kk | 固定化オリゴヌクレオチド |
FR2540122B1 (fr) | 1983-01-27 | 1985-11-29 | Centre Nat Rech Scient | Nouveaux composes comportant une sequence d'oligonucleotide liee a un agent d'intercalation, leur procede de synthese et leur application |
US4605735A (en) | 1983-02-14 | 1986-08-12 | Wakunaga Seiyaku Kabushiki Kaisha | Oligonucleotide derivatives |
US4948882A (en) | 1983-02-22 | 1990-08-14 | Syngene, Inc. | Single-stranded labelled oligonucleotides, reactive monomers and methods of synthesis |
US4824941A (en) | 1983-03-10 | 1989-04-25 | Julian Gordon | Specific antibody to the native form of 2'5'-oligonucleotides, the method of preparation and the use as reagents in immunoassays or for binding 2'5'-oligonucleotides in biological systems |
US4587044A (en) | 1983-09-01 | 1986-05-06 | The Johns Hopkins University | Linkage of proteins to nucleic acids |
US5118802A (en) | 1983-12-20 | 1992-06-02 | California Institute Of Technology | DNA-reporter conjugates linked via the 2' or 5'-primary amino group of the 5'-terminal nucleoside |
US5118800A (en) | 1983-12-20 | 1992-06-02 | California Institute Of Technology | Oligonucleotides possessing a primary amino group in the terminal nucleotide |
FR2567892B1 (fr) | 1984-07-19 | 1989-02-17 | Centre Nat Rech Scient | Nouveaux oligonucleotides, leur procede de preparation et leurs applications comme mediateurs dans le developpement des effets des interferons |
US5258506A (en) | 1984-10-16 | 1993-11-02 | Chiron Corporation | Photolabile reagents for incorporation into oligonucleotide chains |
US5430136A (en) | 1984-10-16 | 1995-07-04 | Chiron Corporation | Oligonucleotides having selectably cleavable and/or abasic sites |
US4828979A (en) | 1984-11-08 | 1989-05-09 | Life Technologies, Inc. | Nucleotide analogs for nucleic acid labeling and detection |
US4762779A (en) | 1985-06-13 | 1988-08-09 | Amgen Inc. | Compositions and methods for functionalizing nucleic acids |
US5317098A (en) | 1986-03-17 | 1994-05-31 | Hiroaki Shizuya | Non-radioisotope tagging of fragments |
JPS638396A (ja) | 1986-06-30 | 1988-01-14 | Wakunaga Pharmaceut Co Ltd | ポリ標識化オリゴヌクレオチド誘導体 |
US4904582A (en) | 1987-06-11 | 1990-02-27 | Synthetic Genetics | Novel amphiphilic nucleic acid conjugates |
US5585481A (en) | 1987-09-21 | 1996-12-17 | Gen-Probe Incorporated | Linking reagents for nucleotide probes |
US5525465A (en) | 1987-10-28 | 1996-06-11 | Howard Florey Institute Of Experimental Physiology And Medicine | Oligonucleotide-polyamide conjugates and methods of production and applications of the same |
DE3738460A1 (de) | 1987-11-12 | 1989-05-24 | Max Planck Gesellschaft | Modifizierte oligonukleotide |
US5082830A (en) | 1988-02-26 | 1992-01-21 | Enzo Biochem, Inc. | End labeled nucleotide probe |
US5109124A (en) | 1988-06-01 | 1992-04-28 | Biogen, Inc. | Nucleic acid probe linked to a label having a terminal cysteine |
US5262536A (en) | 1988-09-15 | 1993-11-16 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Reagents for the preparation of 5'-tagged oligonucleotides |
US5512439A (en) | 1988-11-21 | 1996-04-30 | Dynal As | Oligonucleotide-linked magnetic particles and uses thereof |
US5176996A (en) | 1988-12-20 | 1993-01-05 | Baylor College Of Medicine | Method for making synthetic oligonucleotides which bind specifically to target sites on duplex DNA molecules, by forming a colinear triplex, the synthetic oligonucleotides and methods of use |
US5457183A (en) | 1989-03-06 | 1995-10-10 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Hydroxylated texaphyrins |
US5599923A (en) | 1989-03-06 | 1997-02-04 | Board Of Regents, University Of Tx | Texaphyrin metal complexes having improved functionalization |
FR2645345A1 (fr) | 1989-03-31 | 1990-10-05 | Thomson Csf | Procede de modulation dirigee de la composition ou du dopage de semi-conducteurs, notamment pour la realisation de composants electroniques monolithiques de type planar, utilisation et produits correspondants |
US5391723A (en) | 1989-05-31 | 1995-02-21 | Neorx Corporation | Oligonucleotide conjugates |
US5256775A (en) | 1989-06-05 | 1993-10-26 | Gilead Sciences, Inc. | Exonuclease-resistant oligonucleotides |
US4958013A (en) | 1989-06-06 | 1990-09-18 | Northwestern University | Cholesteryl modified oligonucleotides |
US5451463A (en) | 1989-08-28 | 1995-09-19 | Clontech Laboratories, Inc. | Non-nucleoside 1,3-diol reagents for labeling synthetic oligonucleotides |
US5254469A (en) | 1989-09-12 | 1993-10-19 | Eastman Kodak Company | Oligonucleotide-enzyme conjugate that can be used as a probe in hybridization assays and polymerase chain reaction procedures |
US5591722A (en) | 1989-09-15 | 1997-01-07 | Southern Research Institute | 2'-deoxy-4'-thioribonucleosides and their antiviral activity |
WO1991006556A1 (en) | 1989-10-24 | 1991-05-16 | Gilead Sciences, Inc. | 2' modified oligonucleotides |
US5292873A (en) | 1989-11-29 | 1994-03-08 | The Research Foundation Of State University Of New York | Nucleic acids labeled with naphthoquinone probe |
US5486603A (en) | 1990-01-08 | 1996-01-23 | Gilead Sciences, Inc. | Oligonucleotide having enhanced binding affinity |
US6753423B1 (en) | 1990-01-11 | 2004-06-22 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for enhanced biostability and altered biodistribution of oligonucleotides in mammals |
US5646265A (en) | 1990-01-11 | 1997-07-08 | Isis Pharmceuticals, Inc. | Process for the preparation of 2'-O-alkyl purine phosphoramidites |
US5670633A (en) | 1990-01-11 | 1997-09-23 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Sugar modified oligonucleotides that detect and modulate gene expression |
US5578718A (en) | 1990-01-11 | 1996-11-26 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Thiol-derivatized nucleosides |
AU7579991A (en) | 1990-02-20 | 1991-09-18 | Gilead Sciences, Inc. | Pseudonucleosides and pseudonucleotides and their polymers |
US5214136A (en) | 1990-02-20 | 1993-05-25 | Gilead Sciences, Inc. | Anthraquinone-derivatives oligonucleotides |
GB9009980D0 (en) | 1990-05-03 | 1990-06-27 | Amersham Int Plc | Phosphoramidite derivatives,their preparation and the use thereof in the incorporation of reporter groups on synthetic oligonucleotides |
DE69032425T2 (de) | 1990-05-11 | 1998-11-26 | Microprobe Corp., Bothell, Wash. | Teststreifen zum Eintauchen für Nukleinsäure-Hybridisierungsassays und Verfahren zur kovalenten Immobilisierung von Oligonucleotiden |
US5138045A (en) | 1990-07-27 | 1992-08-11 | Isis Pharmaceuticals | Polyamine conjugated oligonucleotides |
US5218105A (en) | 1990-07-27 | 1993-06-08 | Isis Pharmaceuticals | Polyamine conjugated oligonucleotides |
US5608046A (en) | 1990-07-27 | 1997-03-04 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Conjugated 4'-desmethyl nucleoside analog compounds |
US5688941A (en) | 1990-07-27 | 1997-11-18 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Methods of making conjugated 4' desmethyl nucleoside analog compounds |
US5245022A (en) | 1990-08-03 | 1993-09-14 | Sterling Drug, Inc. | Exonuclease resistant terminally substituted oligonucleotides |
US5512667A (en) | 1990-08-28 | 1996-04-30 | Reed; Michael W. | Trifunctional intermediates for preparing 3'-tailed oligonucleotides |
WO1992008728A1 (en) | 1990-11-08 | 1992-05-29 | Hybridon, Inc. | Incorporation of multiple reporter groups on synthetic oligonucleotides |
US6582908B2 (en) | 1990-12-06 | 2003-06-24 | Affymetrix, Inc. | Oligonucleotides |
US5371241A (en) | 1991-07-19 | 1994-12-06 | Pharmacia P-L Biochemicals Inc. | Fluorescein labelled phosphoramidites |
ES2103918T3 (es) | 1991-10-17 | 1997-10-01 | Ciba Geigy Ag | Nucleosidos biciclicos, oligonucleotidos, procedimiento para su obtencion y productos intermedios. |
US5359044A (en) | 1991-12-13 | 1994-10-25 | Isis Pharmaceuticals | Cyclobutyl oligonucleotide surrogates |
US5565552A (en) | 1992-01-21 | 1996-10-15 | Pharmacyclics, Inc. | Method of expanded porphyrin-oligonucleotide conjugate synthesis |
US5595726A (en) | 1992-01-21 | 1997-01-21 | Pharmacyclics, Inc. | Chromophore probe for detection of nucleic acid |
FR2687679B1 (fr) | 1992-02-05 | 1994-10-28 | Centre Nat Rech Scient | Oligothionucleotides. |
EP0577558A2 (de) | 1992-07-01 | 1994-01-05 | Ciba-Geigy Ag | Carbocyclische Nukleoside mit bicyclischen Ringen, Oligonukleotide daraus, Verfahren zu deren Herstellung, deren Verwendung und Zwischenproduckte |
US5272250A (en) | 1992-07-10 | 1993-12-21 | Spielvogel Bernard F | Boronated phosphoramidate compounds |
US5574142A (en) | 1992-12-15 | 1996-11-12 | Microprobe Corporation | Peptide linkers for improved oligonucleotide delivery |
AU6449394A (en) | 1993-03-30 | 1994-10-24 | Sterling Winthrop Inc. | Acyclic nucleoside analogs and oligonucleotide sequences containing them |
DE4311944A1 (de) | 1993-04-10 | 1994-10-13 | Degussa | Umhüllte Natriumpercarbonatpartikel, Verfahren zu deren Herstellung und sie enthaltende Wasch-, Reinigungs- und Bleichmittelzusammensetzungen |
DE69435005T2 (de) | 1993-05-11 | 2008-04-17 | The University Of North Carolina At Chapel Hill | Antisense Oligonukleotide die anomales Splicing verhindern und deren Verwendung |
US5801154A (en) | 1993-10-18 | 1998-09-01 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense oligonucleotide modulation of multidrug resistance-associated protein |
US5446137B1 (en) | 1993-12-09 | 1998-10-06 | Behringwerke Ag | Oligonucleotides containing 4'-substituted nucleotides |
US5519134A (en) | 1994-01-11 | 1996-05-21 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Pyrrolidine-containing monomers and oligomers |
EP0804219B1 (en) | 1994-02-28 | 2002-07-17 | Agritech Technologies, Ltd. | Inhibin compositions and methods of use thereof |
US5627053A (en) | 1994-03-29 | 1997-05-06 | Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. | 2'deoxy-2'-alkylnucleotide containing nucleic acid |
US5597696A (en) | 1994-07-18 | 1997-01-28 | Becton Dickinson And Company | Covalent cyanine dye oligonucleotide conjugates |
US5580731A (en) | 1994-08-25 | 1996-12-03 | Chiron Corporation | N-4 modified pyrimidine deoxynucleotides and oligonucleotide probes synthesized therewith |
US5597909A (en) | 1994-08-25 | 1997-01-28 | Chiron Corporation | Polynucleotide reagents containing modified deoxyribose moieties, and associated methods of synthesis and use |
EP0708178A1 (en) * | 1994-10-19 | 1996-04-24 | Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) | Survival motor neuron (SMN) gene: a gene for spinal muscular atrophy |
US5792747A (en) | 1995-01-24 | 1998-08-11 | The Administrators Of The Tulane Educational Fund | Highly potent agonists of growth hormone releasing hormone |
US7034009B2 (en) | 1995-10-26 | 2006-04-25 | Sirna Therapeutics, Inc. | Enzymatic nucleic acid-mediated treatment of ocular diseases or conditions related to levels of vascular endothelial growth factor receptor (VEGF-R) |
DE69637256T2 (de) | 1996-01-16 | 2008-06-19 | Sirna Therapeutics, Inc., Boulder | Synthese von Methoxynukleoside und enzymatische Nukleisäure Moleküle |
US20030228597A1 (en) | 1998-04-13 | 2003-12-11 | Cowsert Lex M. | Identification of genetic targets for modulation by oligonucleotides and generation of oligonucleotides for gene modulation |
US6210892B1 (en) | 1998-10-07 | 2001-04-03 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Alteration of cellular behavior by antisense modulation of mRNA processing |
US6214986B1 (en) | 1998-10-07 | 2001-04-10 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense modulation of bcl-x expression |
US6172216B1 (en) | 1998-10-07 | 2001-01-09 | Isis Pharmaceuticals Inc. | Antisense modulation of BCL-X expression |
PT1178999E (pt) | 1999-05-04 | 2007-06-26 | Santaris Pharma As | Análogos de l-ribo-lna |
US6656730B1 (en) | 1999-06-15 | 2003-12-02 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Oligonucleotides conjugated to protein-binding drugs |
US6649411B2 (en) | 1999-07-30 | 2003-11-18 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Methods of inhibiting cancer cells with ADNF III antisense oligonucleotides |
US6770633B1 (en) | 1999-10-26 | 2004-08-03 | Immusol, Inc. | Ribozyme therapy for the treatment of proliferative skin and eye diseases |
US20050020525A1 (en) | 2002-02-20 | 2005-01-27 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid (siNA) |
US6962906B2 (en) | 2000-03-14 | 2005-11-08 | Active Motif | Oligonucleotide analogues, methods of synthesis and methods of use |
US20020013287A1 (en) | 2000-05-09 | 2002-01-31 | Reliable Biopharmaceuticals, Inc. St Louis Missouri | Polymeric compounds useful as prodrugs |
EP1416972B1 (en) | 2000-11-09 | 2012-02-08 | Cold Spring Harbor Laboratory | Chimeric molecules to modulate gene expression |
US6376508B1 (en) | 2000-12-13 | 2002-04-23 | Academia Sinica | Treatments for spinal muscular atrophy |
JP2005504020A (ja) | 2001-07-03 | 2005-02-10 | アイシス・ファーマシューティカルス・インコーポレーテッド | ヌクレアーゼ耐性キメラオリゴヌクレオチド |
GB0219143D0 (en) | 2002-08-16 | 2002-09-25 | Univ Leicester | Modified tailed oligonucleotides |
WO2004041889A2 (en) | 2002-11-05 | 2004-05-21 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Polycyclic sugar surrogate-containing oligomeric compounds and compositions for use in gene modulation |
JP2006507841A (ja) | 2002-11-14 | 2006-03-09 | ダーマコン, インコーポレイテッド | 機能的siRNAおよび超機能的siRNA |
JP2004344072A (ja) * | 2003-05-22 | 2004-12-09 | Japan Science & Technology Agency | Smn遺伝子のスプライシング調節エレメント |
WO2004113867A2 (en) | 2003-06-16 | 2004-12-29 | University Of Massachusetts | Exon analysis |
ATE555118T1 (de) | 2003-08-28 | 2012-05-15 | Takeshi Imanishi | Neue synthetische nukleidsäuren vom typ mit quervernetzter n-o-bindung |
US20050074801A1 (en) | 2003-09-09 | 2005-04-07 | Monia Brett P. | Chimeric oligomeric compounds comprising alternating regions of northern and southern conformational geometry |
JP5379347B2 (ja) | 2003-09-18 | 2013-12-25 | アイシス ファーマシューティカルズ, インコーポレーテッド | 4’−チオヌクレオシドおよびオリゴマー化合物 |
GB0425625D0 (en) * | 2004-11-22 | 2004-12-22 | Royal College Of Surgeons Ie | Treatment of disease |
US7838657B2 (en) | 2004-12-03 | 2010-11-23 | University Of Massachusetts | Spinal muscular atrophy (SMA) treatment via targeting of SMN2 splice site inhibitory sequences |
US7879992B2 (en) | 2005-01-31 | 2011-02-01 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Modification of MyD88 splicing using modified oligonucleotides |
WO2007002390A2 (en) * | 2005-06-23 | 2007-01-04 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for modulation of smn2 splicing |
JP4223027B2 (ja) | 2005-06-30 | 2009-02-12 | シャープ株式会社 | 画像形成装置及び秘匿データ送信方法 |
WO2007047913A2 (en) | 2005-10-20 | 2007-04-26 | Isis Pharmaceuticals, Inc | Compositions and methods for modulation of lmna expression |
AU2006315758A1 (en) | 2005-11-10 | 2007-05-24 | Ercole Biotech, Inc. | Splice switching oligomers for TNF superfamily receptors and their use in treatment of disease |
WO2007089584A2 (en) * | 2006-01-26 | 2007-08-09 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and their uses directed to huntingtin |
JP5342881B2 (ja) | 2006-01-27 | 2013-11-13 | アイシス ファーマシューティカルズ, インコーポレーテッド | 6−修飾された二環式核酸類似体 |
JP5213723B2 (ja) | 2006-01-27 | 2013-06-19 | アイシス ファーマシューティカルズ, インコーポレーテッド | マイクロrnaの調節に使用するためのオリゴマー化合物及び組成物 |
AU2007249349B2 (en) | 2006-05-11 | 2012-03-08 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | 5'-Modified bicyclic nucleic acid analogs |
US20100190837A1 (en) | 2007-02-15 | 2010-07-29 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | 5'-Substituted-2-F' Modified Nucleosides and Oligomeric Compounds Prepared Therefrom |
US8278425B2 (en) | 2007-05-30 | 2012-10-02 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | N-substituted-aminomethylene bridged bicyclic nucleic acid analogs |
EP2173760B2 (en) | 2007-06-08 | 2015-11-04 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Carbocyclic bicyclic nucleic acid analogs |
CN101796062B (zh) | 2007-07-05 | 2014-07-30 | Isis制药公司 | 6-双取代双环核酸类似物 |
WO2009120700A2 (en) | 2008-03-26 | 2009-10-01 | Families Of Spinal Muscular Atrophy | Inhibition of dcps |
EP2119783A1 (en) | 2008-05-14 | 2009-11-18 | Prosensa Technologies B.V. | Method for efficient exon (44) skipping in Duchenne Muscular Dystrophy and associated means |
WO2010123594A2 (en) | 2009-01-15 | 2010-10-28 | Children's Medical Center Corporation | Device for filtration of fluids there through and accompanying method |
WO2010091308A2 (en) * | 2009-02-06 | 2010-08-12 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Oligomeric compounds and methods |
WO2010120820A1 (en) | 2009-04-13 | 2010-10-21 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for modulation of smn2 splicing |
CN106983768B (zh) * | 2009-06-17 | 2023-04-07 | 冷泉港实验室 | 用于在对象中调节smn2剪接的组合物和方法 |
WO2011032109A1 (en) | 2009-09-11 | 2011-03-17 | Sma Foundation | Biomarkers for spinal muscular atrophy |
US8183002B2 (en) | 2009-12-03 | 2012-05-22 | Abbott Laboratories | Autoantibody enhanced immunoassays and kits |
US10653713B2 (en) | 2010-10-06 | 2020-05-19 | Medtronic, Inc. | Methods for distributing agents to areas of brain |
JP2014521089A (ja) | 2011-07-13 | 2014-08-25 | メルク・シャープ・アンド・ドーム・コーポレーション | 液体試料中のアミロイドベータオリゴマーの検出方法およびその使用 |
WO2014110291A1 (en) | 2013-01-09 | 2014-07-17 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for modulation of smn2 splicing in a subject |
US20140367278A1 (en) | 2013-06-12 | 2014-12-18 | PharmOptima, LLC | Methods for Detecting Survival Motor Neuron (SMN) Protein in Whole Blood or Cerebral Spinal Fluid |
-
2010
- 2010-06-17 CN CN201710003678.9A patent/CN106983768B/zh active Active
- 2010-06-17 KR KR1020207012412A patent/KR20200047790A/ko active Application Filing
- 2010-06-17 MX MX2015008433A patent/MX361732B/es unknown
- 2010-06-17 KR KR1020197009268A patent/KR20190037378A/ko active Application Filing
- 2010-06-17 HU HUE17203913A patent/HUE039741T2/hu unknown
- 2010-06-17 EP EP10790221.5A patent/EP2442816A4/en not_active Withdrawn
- 2010-06-17 KR KR1020217014192A patent/KR20210057223A/ko not_active Application Discontinuation
- 2010-06-17 RU RU2012101491A patent/RU2566724C9/ru active
- 2010-06-17 HU HUE18185820A patent/HUE046966T2/hu unknown
- 2010-06-17 PT PT17203913T patent/PT3305302T/pt unknown
- 2010-06-17 RU RU2015139553A patent/RU2683772C2/ru active
- 2010-06-17 JP JP2012516315A patent/JP5707396B2/ja active Active
- 2010-06-17 EP EP17203913.3A patent/EP3305302B1/en active Active
- 2010-06-17 DK DK17203913.3T patent/DK3305302T3/en active
- 2010-06-17 SI SI201031946T patent/SI3449926T1/sl unknown
- 2010-06-17 SI SI201031784T patent/SI3305302T1/sl unknown
- 2010-06-17 TR TR2018/16256T patent/TR201816256T4/tr unknown
- 2010-06-17 KR KR1020127001244A patent/KR20120093138A/ko not_active Application Discontinuation
- 2010-06-17 CN CN2010800368070A patent/CN102665731A/zh active Pending
- 2010-06-17 KR KR1020177011876A patent/KR20170054537A/ko not_active IP Right Cessation
- 2010-06-17 MX MX2011014004A patent/MX2011014004A/es active IP Right Grant
- 2010-06-17 NZ NZ624712A patent/NZ624712A/en unknown
- 2010-06-17 LT LTEP18185820.0T patent/LT3449926T/lt unknown
- 2010-06-17 WO PCT/US2010/039077 patent/WO2010148249A1/en active Application Filing
- 2010-06-17 EP EP19201392.8A patent/EP3643783A1/en active Pending
- 2010-06-17 LT LTEP17203913.3T patent/LT3305302T/lt unknown
- 2010-06-17 PL PL17203913T patent/PL3305302T3/pl unknown
- 2010-06-17 CN CN202310217516.0A patent/CN116440150A/zh active Pending
- 2010-06-17 ES ES18185820T patent/ES2761614T3/es active Active
- 2010-06-17 EP EP18185820.0A patent/EP3449926B1/en active Active
- 2010-06-17 CA CA2765396A patent/CA2765396C/en active Active
- 2010-06-17 PL PL18185820T patent/PL3449926T3/pl unknown
- 2010-06-17 CN CN202210541466.7A patent/CN115227710A/zh active Pending
- 2010-06-17 KR KR1020247007557A patent/KR20240036132A/ko active Search and Examination
- 2010-06-17 DK DK18185820T patent/DK3449926T3/da active
- 2010-06-17 ES ES17203913T patent/ES2699827T3/es active Active
- 2010-06-17 CN CN202210540428.XA patent/CN115227709A/zh active Pending
- 2010-06-17 US US13/380,021 patent/US8980853B2/en active Active
- 2010-06-17 KR KR1020197003809A patent/KR101965868B1/ko active IP Right Grant
- 2010-06-17 KR KR1020227019810A patent/KR20220084437A/ko active Application Filing
- 2010-06-17 PT PT181858200T patent/PT3449926T/pt unknown
- 2010-06-17 NZ NZ597071A patent/NZ597071A/en unknown
- 2010-06-17 AU AU2010262862A patent/AU2010262862C1/en active Active
-
2011
- 2011-12-15 IL IL217014A patent/IL217014A/en active Protection Beyond IP Right Term
- 2011-12-16 MX MX2018015635A patent/MX2018015635A/es unknown
-
2015
- 2015-02-09 US US14/617,388 patent/US9717750B2/en active Active
- 2015-03-02 JP JP2015040152A patent/JP6064139B2/ja active Active
-
2016
- 2016-01-21 AU AU2016200344A patent/AU2016200344B2/en active Active
- 2016-04-13 IL IL245096A patent/IL245096B/en active Protection Beyond IP Right Term
- 2016-11-04 JP JP2016216200A patent/JP6370860B2/ja active Active
-
2018
- 2018-02-09 US US15/892,560 patent/US20190030058A1/en not_active Abandoned
- 2018-05-10 HK HK18106100.4A patent/HK1246648B/zh unknown
- 2018-07-06 JP JP2018128926A patent/JP6637121B2/ja active Active
- 2018-10-19 HR HRP20181712TT patent/HRP20181712T1/hr unknown
- 2018-11-01 CY CY181101134T patent/CY1120807T1/el unknown
-
2019
- 2019-10-31 HR HRP20191978TT patent/HRP20191978T1/hr unknown
- 2019-12-10 US US16/708,739 patent/US20200376018A1/en not_active Abandoned
- 2019-12-18 JP JP2019227997A patent/JP2020073498A/ja active Pending
- 2019-12-19 CY CY20191101339T patent/CY1122687T1/el unknown
-
2020
- 2020-04-01 NO NO2020008C patent/NO2020008I1/no unknown
-
2021
- 2021-11-05 JP JP2021180965A patent/JP2022025131A/ja active Pending
-
2023
- 2023-10-30 JP JP2023185174A patent/JP2024012416A/ja active Pending
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
KURRECK J. Antisense technologies. Improvement through novel chemical modifications. Eur J Biochem. 2003 Apr; 270(8): 1628-1644. [Найдено 25.06.2014] [он-лайн], Найдено из Интернет: URL: http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1046/j.1432-1033.2003.03555.x/pdfUS 2008045456 A1, 21.02.2008ГЛИК Б., Пастернак Дж. Молекулярная биотехнология. Принципы и применение. Пер. с англ. М.: Мир, 2002, стр.506. * |
MIYASO H. et al. An intronic splicing enhancer element in survival motor neuron (SMN) pre-mRNA. J Biol Chem. 2003 May 2; 278(18): 15825-15831. Epub 2003 Feb 25 [Найдено 25.06.2014] [он-лайн], Найдено из Интернет: URL: http://www.jbc.org/content/278/18/15825.full.pdf+htmlUS 2007292408 A1, 20.12.2007 * |
MIYASO H. et al. An intronic splicing enhancer element in survival motor neuron (SMN) pre-mRNA. J Biol Chem. 2003 May 2; 278(18): 15825-15831. Epub 2003 Feb 25 [Найдено 25.06.2014] [он-лайн], Найдено из Интернет: URL: http://www.jbc.org/content/278/18/15825.full.pdf+htmlUS 2007292408 A1, 20.12.2007KURRECK J. Antisense technologies. Improvement through novel chemical modifications. Eur J Biochem. 2003 Apr; 270(8): 1628-1644. [Найдено 25.06.2014] [он-лайн], Найдено из Интернет: URL: http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1046/j.1432-1033.2003.03555.x/pdfUS 2008045456 A1, 21.02.2008ГЛИК Б., Пастернак Дж. Молекулярная биотехнология. Принципы и применение. Пер. с англ. М.: Мир, 2002, стр.506. * |
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
RU2566724C9 (ru) | Композиции и способы модуляции smn2 сплайсинга у субъекта | |
EP3797780B1 (en) | Compositions and methods for modulation of smn2 splicing in a subject | |
RU2793459C2 (ru) | Композиции и способы модуляции smn2 сплайсинга у субъекта |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PD4A | Correction of name of patent owner | ||
PC41 | Official registration of the transfer of exclusive right |
Effective date: 20170213 |
|
TH4A | Reissue of patent specification |