ES2932304T3 - Composiciones y métodos para la modulación del empalme de SMN2 en un sujeto - Google Patents

Abstract

En el presente documento se describen compuestos, composiciones y métodos para modular el corte y empalme del ARNm de SMN2 en un sujeto. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN

Composiciones y métodos para la modulación del empalme de SMN2 en un sujeto

Campo

En el presente documentos se describen métodos, compuestos y composiciones para modular el empalme de SMN2 en un sujeto.

Antecedentes

Las moléculas de ARNm eucariota recientemente sintetizadas, conocidas como transcripciones primarias o pre-ARNm, se procesan antes de la traducción. El procesamiento de pre-ARNm incluye la adición de un terminación metilado 5' y una cola poli(A) de aproximadamente 200-250 bases al extremo 3' de la transcripción. También, el procesamiento de ARNm a partir de pre-ARNm a menudo implica el empalme del pre-ARNm, que ocurre en la maduración del 90-95% de los ARNm de mamífero. Los intrones (o secuencias intervinientes) son regiones de un pre-ARNm (o el ADN que lo codifica) que no están incluidas en la secuencia de codificación del ARNm maduro. Los exones son regiones de una transcripción primaria que permanecen en el ARNm maduro. Los exones se empalman para formar la secuencia de ARNm maduro. Las uniones de empalme también se conocen como sitios de empalme con el lado 5' de la unión a menudo llamado "sitio de empalme 5' " o "sitio donante de empalme" y el lado 3' el "sitio de empalme 3' " o "sitio aceptor de empalme". En el empalme, el extremo 3' de un exón corriente arriba se une al extremo 5' del exón corriente abajo. Por lo tanto, el pre-ARNm no sometido a empalme tiene un enlace de exón/intrón en el extremo 5' de un intrón y un enlace intrón/exón en el extremo 3' de un intrón. Después de que se retira el intrón, los exones son contiguos a lo que a veces se denomina límite o enlace de exón/intrón en el ARNm maduro. Los sitios de empalme crípticos son los que se utilizan con menor frecuencia pero se pueden utilizar cuando el sitio de empalme habitual está bloqueado o no disponible. El empalme alternativo, definido como el empalme de diferentes combinaciones de exones, a menudo da como resultado múltiples transcripciones de ARNm de un solo gen.

Hasta el 50% de las enfermedades genéticas humanas generadas por una mutación puntual provocan el procesamiento de pre-ARNm aberrante. Tales mutaciones puntuales pueden interrumpir un sitio de empalme actual o crear un nuevo sitio de empalme, lo que genera transcripciones de ARNm comprendidas por una combinación distinta de exones o con eliminaciones de exones. Además, las mutaciones puntuales pueden generar la activación de un sitio de empalme críptico o interrumpir los elementos cis reguladores (es decir, potenciadores o silenciadores de empalme) (Cartegni et al., Nat. Rev. Genet., 2002, 3, 285-298; Drawczak et al., Hum. Genet., 1992, 90, 41-54). Los oligonucleótidos antisentido se han utilizado para dirigirse a mutaciones que conllevan empalme aberrante en varias enfermedades genéticas para redirigir el empalme para proporcionar un producto de empalme deseado (Kole, Acta Biochimica Polonica, 1997, 44, 231-238).

Los compuestos antisentido también se han utilizado para alterar la relación de variantes de empalme alternos de origen natural, tales como las formas largas y cortas de Bcl-x pre-ARNm (Patente de EE. UU. 6,172,216; Patente de EE. UU. 6,214,986; Taylor et al., Nat. Biotechnol. 1999, 17, 1097-1100) o para forzar la omisión de exones específicos que contienen codones de terminación prematura (Wilton et al., Neuromuscul. Disord., 1999, 9, 330-338). La patente de EE. UU. 5,627,274 y el documento WO 94/26887 describe composiciones y métodos para combatir el empalme aberrante en una molécula de pre-ARNm que contiene una mutación que usa oligonucleótidos antisentido que no activan ARNasa H.

La atrofia muscular espinal proximal (SMA, por sus siglas en inglés) es un trastorno neurodegenerativo genético caracterizado por la pérdida de neuronas motoras de la médula espinal. La SMA es una enfermedad autosómica recesiva de inicio temprano y, actualmente, es la principal causa de muerte entre los niños pequeños. La gravedad de la SMA varía entre pacientes y, por lo tanto, se ha clasificado en tres tipos. La SMA tipo I es la forma más grave con inicio en el nacimiento o durante los primeros 6 meses y, comúnmente, produce la muerte durante los primeros 2 años. Los niños con SMA tipo I no pueden sentarse ni caminar. La SMA tipo II es la forma intermedia y los pacientes pueden sentarse, pero no pueden pararse ni caminar. Los pacientes con SMA tipo III, una forma crónica de la enfermedad, comúnmente desarrollan SMA después de los 18 meses de edad (Lefebvre et al., Hum. Mol. Genet., 1998, 7, 1531-1536).

La base molecular de SMA es causada por la pérdida de ambas copias del gen de neuronas motoras de supervivencia 1 (SMN1), que también puede denominarse SMN telomérico, una proteína que forma parte de un complejo de múltiples proteínas que se cree que están implicadas en la biogénesis y el reciclado de snRNP. Existe un gen casi idéntico, SMN2, que también puede denominarse SMN centromérico, en una región duplicada en el cromosoma 5q13 y modula la gravedad de la enfermedad. La expresión del gen SMN1 normal genera solamente la expresión de la proteína de neuronas motoras de supervivencia (SMN). Aunque SMN1 y SMN2 tienen el potencial de codificar la misma proteína, SMN2 contiene una mutación traduccionalmente silenciosa en la posición 6 del exón 7, que genera la inclusión ineficaz del exón 7 en transcripciones de SMN2. Por lo tanto, la forma predominante de SMN2 es una versión truncada, que carece del exón 7, que es inestable e inactiva (Cartegni y Krainer, Nat. Genet., 2002, 30, 377-384). La expresión del gen SMN2 genera aproximadamente el 10-20% de la proteína SMN y 80-90% de la proteína SMNdelta7 inestable/no funcional. La proteína SMN cumple una función bien establecida en el montaje del espliceosoma y también puede actuar como mediador en el tráfico de ARNm en el axón y el nervio terminal de las neuronas.

La tecnología antisentido es un medio eficaz para modular la expresión de uno o más productos génicos específicos que incluyen productos de empalme alternativos, y es útil de manera específica en una cantidad de aplicaciones terapéuticas, de diagnóstico e investigación. El principio detrás de la tecnología antisentido es que un compuesto antisentido, que se hibrida con un ácido nucleico diana, modula las actividades de expresión génica como la transcripción, el empalme o la traducción a través de uno de varios mecanismos antisentido. La especificidad de la secuencia de los compuestos antisentido hace que sean extremadamente atractivos como herramientas para la validación de dianas y la funcionalización de genes, así como productos terapéuticos para modular selectivamente la expresión de los genes involucrados en la enfermedad.

Determinados compuestos antisentido complementarios a SMN2 son conocidos en la técnica. Véase, por ejemplo, el documento WO 2007/002390 ; el documento WO 2010/120820 ; el documento US 61/168,885 ; Hua et al., American J. of Human Genetics (abril de 2008) 82, 1-15 ; Singh et al., RNA Bio. 6:3, 1-10 (2009). Determinados compuestos antisentido y métodos descritos en este documento poseen características deseables en comparación con dichos compuestos y métodos conocidos en la técnica. Se han descrito moléculas de ácido nucleico peptídico quimérico diseñadas para modular el empalme de SMN2 (documento WO 02/38738; Cartegni y Krainer, Nat. Estructura. Biol., 2003, 10, 120-125).

Sumario

La presente invención proporciona un oligonucleótido antisentido que consiste en la secuencia de ácido nucleico de SEQ ID NO: 7, en donde todos los residuos de citosina de la secuencia de ácido nucleico son 5-metilcitosinas, en donde cada nucleósido de la secuencia de ácido nucleico comprende un 2'-O-metoxietilo modificación de azúcar, y en donde la secuencia de ácido nucleico tiene la siguiente estructura química: sossssossssossssoss, en donde "s" indica un enlace fosforotioato y "o" indica un enlace fosfodiéster.

La invención también proporciona una composición farmacéutica que comprende el oligonucleótido antisentido de la invención, y al menos uno de un vehículo farmacéuticamente aceptable.

La presente invención también proporciona el oligonucleótido antisentido de la invención, para su uso en el tratamiento de la atrofia muscular espinal (SMA) en un sujeto.

Otros aspectos y realizaciones de la invención se definen en las reivindicaciones.

En determinados casos, la presente descripción proporciona métodos que comprenden la administración a un sujeto de un compuesto antisentido que comprende un oligonucleótido antisentido complementario de intrón 7 de un ácido nucleico que codifica pre-ARNm SMN2 humano, en donde el compuesto antisentido se administra en el fluido cerebroespinal. En determinados casos, la administración se realiza en el espacio intratecal. En determinados casos, la administración se realiza en el fluido cerebroespinal en el cerebro. En determinados casos, la administración comprende una inyección en bolo. En determinados casos, la administración comprende infusión con una bomba de administración.

En determinados casos, el compuesto antisentido se administra a una dosis de 0,01 a 10 miligramos de compuesto antisentido por kilogramo de peso corporal del sujeto. En determinados casos, la dosis es de 0,01 a 10 miligramos de compuesto antisentido por kilogramo de peso corporal del sujeto. En determinados casos, la dosis es de 0,01 a 5 miligramos de compuesto antisentido por kilogramo de peso corporal del sujeto. En determinados casos, la dosis es de 0,05 a 1 miligramos de compuesto antisentido por kilogramo de peso corporal del sujeto. En determinados casos, la dosis es de 0,01 a 0,5 miligramos de compuesto antisentido por kilogramo de peso corporal del sujeto. En determinados casos, la dosis es de 0,05 a 0,5 miligramos de compuesto antisentido por kilogramo de peso corporal del sujeto.

En determinados casos, la dosis se administra diariamente. En determinados casos, la dosis se administra semanalmente. En determinados casos, el compuesto antisentido se administra de forma continua y la dosis es la cantidad administrada por día. En determinados casos, el método comprende administrar al menos una dosis de inducción durante una fase de inducción y administrar al menos una dosis de mantenimiento durante una fase de mantenimiento. En determinados casos, la dosis de inducción es de 0,05 a 5,0 miligramos de compuesto antisentido por kilogramo de peso corporal del sujeto. En determinados casos, la dosis de mantenimiento es de 0,01 a 1,0 miligramos de compuesto antisentido por kilogramo de peso corporal del sujeto. En Determinados, la duración de la fase de inducción es de al menos 1 semana. En Determinados, la duración de la fase de mantenimiento es de al menos 1 semana. En determinados casos, cada dosis de inducción y cada dosis de mantenimiento comprende una sola inyección. En determinados casos, cada dosis de inducción y cada dosis de mantenimiento comprenden independientemente dos o más inyecciones. En determinados casos, el compuesto antisentido se administra al menos 2 veces durante un período de tratamiento de al menos 1 semana. En determinados casos, el período de tratamiento es de al menos un mes. En determinados casos, el período de tratamiento es de al menos 2 meses. En determinados casos, el período de tratamiento es de al menos 4 meses. En determinados casos, la dosis de inducción se administra mediante una o más inyecciones en bolo y la dosis de mantenimiento se administra mediante una bomba de infusión.

En determinados casos, el método comprende evaluar la tolerabilidad y/o eficacia del compuesto antisentido. En determinados casos, la cantidad de la dosis o la frecuencia del compuesto antisentido se reduce después de una indicación de que no se tolera la administración del compuesto antisentido. En determinados casos, la cantidad de la dosis o la frecuencia del compuesto antisentido se mantiene o se reduce después de una indicación de que la administración del compuesto antisentido es eficaz. En determinados casos, la dosis del compuesto antisentido se aumenta siguiendo una indicación de que la administración del compuesto antisentido no es eficaz. En determinados casos, la frecuencia de administración del compuesto antisentido se reduce siguiendo una indicación de que la administración del compuesto antisentido es eficaz. En determinados casos, la cantidad de la dosis o la frecuencia del compuesto antisentido se reduce después de una indicación de que la administración del compuesto antisentido no es eficaz.

En determinados casos, los métodos comprenden la administración conjunta del compuesto antisentido y al menos otra terapia. En determinados casos, se coadministran al mismo tiempo un compuesto antisentido y al menos otra terapia al mismo tiempo. En determinados casos, se administra un compuesto antisentido antes de la administración de al menos otra terapia. En determinados casos, se administra un compuesto antisentido después de la administración de al menos otra terapia. En determinados casos, la al menos otra terapia comprende la administración de uno o más de ácido valproico, riluzol, hidroxiurea y butirato. En determinados casos, al menos otra terapia comprende la administración de tricostatina-A. En determinados casos, la al menos otra terapia comprende la administración de células madre. En determinados casos, al menos otra terapia es la terapia génica. En determinados casos, la terapia génica se administra al CSF y un compuesto antisentido se administra sistémicamente. En determinados casos, la terapia génica se administra al CSF y un compuesto antisentido se administra sistémicamente y al CSF. En determinados casos, la descripción proporciona regímenes de tratamiento en los que inicialmente se administra un compuesto antisentido al CSF y sistémicamente, seguido de la administración de terapia génica al CSF y la administración sistémica del compuesto antisentido. En determinados casos de este tipo, el sujeto es un bebé en el momento del tratamiento inicial. En determinados casos de este tipo, el sujeto tiene menos de 2 años. En determinados casos, el compuesto antisentido se administra al CNS de un sujeto hasta que el sujeto tiene la edad suficiente para la terapia génica. En determinados casos de este tipo, el compuesto antisentido se administra sistémicamente en todo momento.

En determinados casos, el compuesto antisentido se administra a una concentración de aproximadamente 0,01 mg/ml, aproximadamente 0,05 mg/ml, aproximadamente 0,1 mg/ml, aproximadamente 0,5 mg/ml, aproximadamente 1 mg/ml, aproximadamente 5 mg/ml, aproximadamente 10 mg/ml, aproximadamente 50 mg/ml, o aproximadamente 100 mg/ml.

En determinados casos, aumenta la inclusión del exón 7 del ARNm de SMN2 en una motoneurona del sujeto. En determinados casos, se incrementa la inclusión de aminoácidos del exón 7 en el polipéptido SMN2 en una motoneurona del sujeto.

En determinados casos, la descripción proporciona métodos para aumentar la inclusión del exón 7 del ARNm de SMN2 en una motoneurona en un sujeto que comprende administrar al sujeto un compuesto antisentido que comprende un oligonucleótido antisentido complementario al intrón 7 de un ácido nucleico que codifica SMN2 humano y, por lo tanto, aumentar la inclusión del exón 7 del ARNm de SMN2 en la motoneurona del sujeto.

En determinados casos, la descripción proporciona métodos para aumentar la inclusión del exón 7 del polipéptido de SMN2 en una motoneurona en un sujeto que comprende administrar al sujeto un compuesto antisentido que comprende un oligonucleótido antisentido complementario al intrón 7 de un ácido nucleico que codifica SMN2 humano y, por lo tanto, aumentar la inclusión del exón 7 del polipéptido de SMN2 en la motoneurona del sujeto.

En determinados casos, el sujeto tiene SMA. En determinados casos, el sujeto tiene SMA tipo I. En determinados casos, el sujeto tiene SMA tipo II. En determinados casos, el sujeto tiene SMA tipo III.

En determinados casos, se administra una primera dosis en el útero. En determinados casos, la primera dosis se administra en el útero antes de completar la formación de la barrera hematoencefálica. En determinados casos, se administra una primera dosis dentro de 1 semana del nacimiento del sujeto. En determinados casos, se administra una primera dosis dentro de 1 mes del nacimiento del sujeto. En determinados casos, se administra una primera dosis dentro de 3 meses del nacimiento del sujeto. En determinados casos, se administra una primera dosis dentro de 6 meses del nacimiento del sujeto. En determinados casos, se administra una primera dosis cuando el sujeto tiene de 1 a 2 años de edad. En determinados casos, se administra una primera dosis cuando el sujeto tiene de 1 a 15 años de edad. En determinados casos, se administra una primera dosis cuando el sujeto tiene más de 15 años de edad.

En determinados casos, el sujeto es un mamífero. En determinados casos, el sujeto es un humano.

En determinados casos, los métodos comprenden la identificación de un sujeto que tiene SMA. En determinados casos, el sujeto se identifica midiendo la actividad eléctrica de uno o más músculos del sujeto. En determinados casos, el sujeto se identifica mediante una prueba genética para determinar si el sujeto tiene una mutación en el gen SMN1 del sujeto. En determinados casos, el sujeto es identificado mediante biopsia muscular.

En determinados casos, la administración del compuesto antisentido da como resultado un aumento en la cantidad de ARNm de SMN2 que tiene el exón 7 de al menos 10%. En determinados casos, el aumento en la cantidad de ARNm de SMN2 que tiene el exón 7 es al menos 20%. En determinados casos, el aumento en la cantidad de ARNm de SMN2 que tiene el exón 7 es al menos 50%. En determinados casos, el aumento en la cantidad de ARNm de SMN2 que tiene el exón 7 es al menos 70%.

En determinados casos, la administración del compuesto antisentido da como resultado un aumento en la cantidad del polipéptido de SMN2 que tiene el exón 7 de al menos 10%. En determinados casos, en donde el aumento en la cantidad de polipéptido SMN2 que tiene los aminoácidos del exón 7 es al menos 20%. En determinados casos, el aumento en la cantidad del polipéptido de SMN2 que tiene el exón 7 es al menos 50%. En determinados casos, el aumento en la cantidad del polipéptido de SMN2 que tiene el exón 7 es al menos 70%.

En determinados casos, la administración del compuesto antisentido mejora al menos un síntoma de SMA en el sujeto. En determinados casos, la administración del compuesto antisentido da como resultado una función motora mejorada en el sujeto. En determinados casos, la administración del compuesto antisentido da como resultado una función motora retrasada o reducida en el sujeto. En determinados casos, la administración del compuesto antisentido da como resultado una función respiratoria mejorada. En determinados casos, la administración del compuesto antisentido da como resultado una supervivencia mejorada.

En determinados casos, al menos un nucleósido del oligonucleótido modificado comprende un azúcar modificado. En determinados casos, al menos un resto de azúcar modificado comprende un resto de azúcar 2'-metoxietilo. En determinados casos, esencialmente cada nucleósido del oligonucleótido antisentido comprende un resto de azúcar modificado. En determinados casos, los nucleósidos que comprenden un resto de azúcar modificado comprenden todos la misma modificación de azúcar. En determinados casos, en donde cada resto de azúcar modificado comprende un resto de azúcar 2'-metoxietilo. En determinados casos, cada nucleósido del oligonucleótido antisentido comprende un resto de azúcar modificado. En determinados casos, todos los nucleósidos comprenden la misma modificación de azúcar. En determinados casos, cada resto de azúcar modificado comprende un resto de azúcar 2'-metoxietilo. En determinados casos, al menos un enlace internucleosídico modificado es un enlace internucleosídico de fosforotioato. En determinados casos, cada enlace internucleosídico es un enlace internucleosídico de fosforotioato.

En determinados casos, el oligonucleótido antisentido consiste en 10 a 25 nucleósidos enlazados. En determinados casos, el oligonucleótido modificado consiste en 12 a 22 nucleósidos enlazados. En determinados casos, el oligonucleótido modificado consiste en 15 a 20 nucleósidos enlazados. En determinados casos, el oligonucleótido antisentido consiste en 18 nucleósidos enlazados.

En determinados casos, el oligonucleótido antisentido es al menos 90% complementario al ácido nucleico que codifica SMN2 humano. En determinados casos, el oligonucleótido antisentido es totalmente complementario al ácido nucleico que codifica SMN2 humano. En determinados casos, el oligonucleótido tiene una secuencia de nucleobase que comprende al menos 10 nucleobases contiguas de la secuencia de nucleobase SEQ ID NO: 1. En determinados casos, el oligonucleótido tiene una secuencia de nucleobase que comprende al menos 15 nucleobases contiguas de la secuencia de nucleobase SEQ ID NO: 1. En determinados casos, el oligonucleótido tiene una secuencia de nucleobase que comprende la secuencia de nucleobase SEQ ID NO: 1. En determinados casos, el oligonucleótido tiene una secuencia de nucleobase que consiste en la secuencia de nucleobase SEQ ID NO: 1.

En determinados casos, el compuesto antisentido comprende un grupo conjugado o un grupo terminal.

En determinados casos, el compuesto antisentido consiste en el oligonucleótido antisentido.

En determinados casos, el compuesto antisentido también se administra sistémicamente. En determinados casos, la administración sistémica es por inyección intravenosa o intraperitoneal. En determinados casos, la administración sistémica y la administración en el sistema nervioso central se realizan al mismo tiempo. En determinados casos, la administración sistémica y la administración en el sistema nervioso central se realizan a tiempos diferentes.

En determinados casos, la descripción proporciona la administración sistémica de compuestos antisentido, ya sea solos o en combinación con la administración en el CSF. En determinados casos, dichas composiciones farmacéuticas se administran sistémicamente. En determinados casos, las composiciones farmacéuticas se administran por vía subcutánea. En determinados casos, las composiciones farmacéuticas se administran por vía intravenosa. En determinados casos, las composiciones farmacéuticas se administran mediante inyección intramuscular.

En determinados casos, las composiciones farmacéuticas se administran directamente en el CSF (p. ej., inyección y/o infusión IT y/o ICV) y sistémicamente.

En determinados casos, la descripción proporciona métodos para administrar a un sujeto que tiene al menos un síntoma asociado con SMA, al menos una dosis de un compuesto antisentido que comprende un oligonucleótido que consta de 15 a 20 nucleósidos enlazados y que tiene una secuencia de nucleobase que es 100% complementario a SEQ ID NO. 7 en toda su longitud, y en donde cada nucleósido es un nucleósido modificado en 2'-MOE; y en donde al menos una dosis está entre 0,1 mg/kg y 5 mg/kg administrado al CSF. En determinados casos, la dosis está entre 0,5 mg/kg y 2 mg/kg. En determinados casos, al menos una dosis se administra mediante inyección en bolo. En Determinados tales casos, la dosis se administra mediante inyección intratecal en bolo. En determinados casos, se administra al menos una segunda dosis. En Determinados tales casos, la segunda dosis se administra al menos 2 semanas después de la primera dosis. En determinados casos, la segunda dosis se administra al menos 4 semanas después de la primera dosis. En determinados casos, la segunda dosis se administra al menos 8 semanas después de la primera dosis. En determinados casos, la segunda dosis se administra al menos 12 semanas después de la primera dosis. En determinados casos, la segunda dosis se administra al menos 16 semanas después de la primera dosis. En determinados casos, la segunda dosis se administra al menos 20 semanas después de la primera dosis. En determinados casos, el sujeto tiene menos de 2 años en el momento de la primera dosis. En determinados casos, el sujeto tiene entre 2 y 15 años. En determinados casos, el sujeto tiene entre 15 y 30 años. En determinados casos, el sujeto es mayor de 30 años. En determinados casos, al menos un síntoma asociado con SMA se reduce, su progresión se ha ralentizado. En determinados casos, el oligonucleótido es ISIS396443.

En determinados casos, la descripción proporciona métodos para administrar a un sujeto que tiene al menos un síntoma asociado con SMA, al menos una dosis de un compuesto antisentido que comprende un oligonucleótido que consta de 15 a 20 nucleósidos enlazados y que tiene una secuencia de nucleobase que es 100% complementario a SEQ ID NO. 7 en toda su longitud, y en donde cada nucleósido es un nucleósido modificado en 2'-MOE; y en donde al menos una dosis se administra sistémicamente. En determinados tales casos, al menos una dosis se administra mediante inyección en bolo. En Determinados tales casos, al menos una dosis se administra mediante inyección subcutánea en bolo. En determinados casos, la dosis administrada está entre 0,5mg/kg y 50mg/kg. En determinados casos, la dosis es entre 1 mg/kg y 10mg/kg. En determinados casos, la dosis está entre 1 mg/kg y 5 mg/kg. En determinados casos, la dosis está entre 0,5 mg/kg y 1 mg/kg. En determinados casos, se administra al menos una segunda dosis. En determinados tales casos, la segunda dosis se administra al menos 2 semanas después de la primera dosis. En determinados casos, la segunda dosis se administra al menos 4 semanas después de la primera dosis. En determinados casos, la segunda dosis se administra al menos 8 semanas después de la primera dosis. En determinados casos, la segunda dosis se administra al menos 12 semanas después de la primera dosis. En determinados casos, la segunda dosis se administra al menos 16 semanas después de la primera dosis. En determinados casos, la segunda dosis se administra al menos 20 semanas después de la primera dosis. En determinados casos, el sujeto tiene menos de 2 años en el momento de la primera dosis. En determinados casos, el sujeto tiene entre 2 y 15 años. En determinados casos, el sujeto tiene entre 15 y 30 años. En determinados casos, el sujeto es mayor de 30 años. En determinados casos, al menos un síntoma asociado con SMA se reduce, su progresión se ha ralentizado. En determinados casos, el oligonucleótido es ISIS396443.

En determinados casos, la descripción proporciona métodos para administrar a un sujeto que tiene al menos un síntoma asociado con SMA, al menos una dosis al CSF y al menos una dosis sistémica de un compuesto antisentido que comprende un oligonucleótido que consta de 15 a 20 nucleósidos unidos y que tiene una secuencia de nucleobases que es 100% complementaria a SEQ ID NO. 7 en toda su longitud, y en donde cada nucleósido es un nucleósido modificado en 2'-MOE. En determinados casos, la dosis de CSF está entre 0,1 mg/kg y 5 mg/kg. En determinados casos, la dosis está entre 0,5 mg/kg y 50 mg/kg. En determinados casos, al menos una dosis de CSF se administra mediante inyección en bolo. En determinados casos, al menos una dosis de CSF se administra mediante inyección intratecal en bolo. En determinados casos, al menos una dosis sistémica se administra mediante inyección en bolo. En determinados tales casos, al menos una dosis sistémica se administra mediante inyección subcutánea. En determinados casos, la dosis de CSF y la dosis sistémica se administran al mismo tiempo. En determinados casos, la dosis de CSF y la dosis sistémica se administran a diferentes tiempos. En determinados casos, el sujeto tiene menos de 2 años en el momento de la primera dosis. En determinados casos, el sujeto tiene entre 2 y 15 años. En determinados casos, el sujeto tiene entre 15 y 30 años. En determinados casos, el sujeto es mayor de 30 años. En determinados casos, al menos un síntoma asociado con SMA se reduce, su progresión se ha ralentizado. En determinados casos, el oligonucleótido es ISIS396443.

En determinados casos, la descripción proporciona métodos para administrar a un sujeto que tiene al menos un síntoma asociado con SMA, al menos una dosis sistémica de un compuesto antisentido que comprende un oligonucleótido que consta de 15 a 20 nucleósidos unidos y que tiene una secuencia de nucleobase que es 100% complementario a SEQ ID NO. 7 en toda su longitud, y en donde cada nucleósido es un nucleósido modificado en 2'-MOE; y al menos una dosis de un agente de terapia génica. En determinados casos, la dosis sistémica está entre 0,5 mg/kg y 50 mg/kg. En determinados casos, al menos una dosis sistémica se administra mediante inyección en bolo. En Determinados tales casos, al menos una dosis sistémica se administra mediante inyección subcutánea. En determinados casos, la dosis sistémica y el agente de terapia génica se administran al mismo tiempo. En determinados casos, la dosis sistémica y el agente de terapia génica se administran a diferentes tiempos. En determinados casos, el agente de terapia génica se administra al CSF. En Determinados tales casos, el agente de terapia génica se administra mediante inyección intratecal y/o infusión. En Determinados de tales casos, el agente de terapia génica se administra mediante inyección y/o infusión intracerebroventricular. En determinados casos, el sujeto tiene menos de 2 años en el momento de la primera dosis. En determinados casos, el sujeto tiene entre 2 y 15 años. En determinados casos, el sujeto tiene entre 15 y 30 años. En determinados casos, el sujeto es mayor de 30 años. En determinados casos, al menos un síntoma asociado con SMA se reduce o su progresión se ha ralentizado. En determinados casos, el oligonucleótido es ISIS396443.

En determinados casos, la descripción proporciona métodos para seleccionar un sujeto que tenga al menos un síntoma asociado con SMA y administrar un compuesto antisentido de acuerdo con cualquiera de los métodos anteriores. En Determinados tales casos, se evalúa al menos un síntoma de SMA después de la administración. En determinados casos, se mejora al menos un síntoma de SMA. En Determinados tales casos, al menos un síntoma de SMA no progresa o progresa más lentamente en comparación con un sujeto que no ha recibido la administración del compuesto antisentido.

En determinados casos, la descripción proporciona un compuesto antisentido que comprende un oligonucleótido antisentido complementario al intrón 7 de un ácido nucleico que codifica SMN2 humano, para su uso en cualquiera de los métodos anteriores. En determinados casos, la descripción proporciona dicho compuesto para su uso en el tratamiento de una enfermedad o afección asociada con la supervivencia de la neurona motora 1 (SMN1).

En determinados casos, la descripción proporciona el uso de un compuesto antisentido que comprende un oligonucleótido antisentido complementario al intrón 7 de un ácido nucleico que codifica s MN2 humano en la fabricación de un medicamento para usar en cualquiera de los métodos anteriores. En determinados casos, el medicamento es para uso en el tratamiento de una enfermedad o afección asociada con la supervivencia de la neurona motora 1 (SMN1).

En determinados casos, la presente descripción proporciona métodos que comprenden administrar a un sujeto un compuesto antisentido que comprende un oligonucleótido antisentido complementario al intrón 7 de un ácido nucleico que codifica el pre-ARNm de SMN2 humano, en donde el compuesto antisentido se administra en el fluido cerebroespinal. En determinados casos, la administración se realiza en el espacio intratecal. En determinados casos, la administración se realiza en el fluido cerebroespinal en el cerebro. En determinados casos, la administración comprende una inyección en bolo. En determinados casos, la administración comprende infusión con una bomba de administración.

En algunas realizaciones, los oligonucleótidos antisentido proporcionados y/o las composiciones farmacéuticas son para uso en un método de tratamiento de la Atrofia Muscular Espinal Tipo I, que comprende administrar el compuesto de la invención o la composición de la invención a un paciente que lo necesite. En algunos casos, los oligonucleótidos antisentido proporcionados y/o las composiciones farmacéuticas se utilizan en un método para tratar la atrofia muscular espinal de tipo II, que comprende administrar el compuesto de la invención o la composición de la invención a un paciente que lo necesite. En algunos casos, los oligonucleótidos antisentido proporcionados y/o las composiciones farmacéuticas se utilizan en un método para tratar la atrofia muscular espinal de tipo III, que comprende administrar el compuesto de la invención o la composición de la invención a un paciente que lo necesite. En algunos casos, los oligonucleótidos antisentido proporcionados y/o las composiciones farmacéuticas se utilizan en un método para tratar la atrofia muscular espinal de tipo IV, que comprende administrar el compuesto de la invención o la composición de la invención a un paciente que lo necesite.

Descripción detallada

En este documento, el uso del singular incluye el plural, a menos que se indique específicamente lo contrario. Como se usa en este documento, el uso de "o" significa "y/o" a menos que se indique lo contrario. Además, el uso del término "que incluye", así como otras formas, tales como "incluye" e "incluido", no es limitante. También, términos tales como "elemento" o "componente" abarcan ambos elementos y componentes que comprenden una unidad y elementos y componentes que comprenden más de una subunidad, a menos que se indique específicamente lo contrario.

Los encabezados de sección utilizados en esta invención son solo para fines organizativos y no deben interpretarse como limitantes de la materia objeto descrita.

I. Definiciones

A menos que se proporcionen definiciones específicas, la nomenclatura utilizada en relación con, y los procedimientos y técnicas de, química analítica, química orgánica sintética y química medicinal y farmacéutica descritas en esta invención, son las que se conocen y se utilizan comúnmente en la técnica. Se pueden usar técnicas estándar para la síntesis química y el análisis químico. Ciertas tales técnicas y procedimientos pueden encontrarse en, por ejemplo, “Carbohydrate Modifications in Antisense Research” editado por Sangvi y Cook, American Chemical Society, Washington D.C., 1994; "Remington's Pharmaceutical Sciences," Mack Publishing Co., Easton, Pa., 18a edición, 1990; y “Antisense Drug Technology, Principles, Strategies, and Applications” editado por Stanley T. Crooke, CRC Press, Boca Raton, Florida; y Sambrook et ál., “Molecular Cloning, A laboratory Manual,” 2a edición, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989.

A menos que se indique lo contrario, los siguientes términos tienen los siguientes significados:

“Nucleósido” significa un compuesto que comprende un resto de base heterocíclica y un resto de azúcar. Los nucleósidos incluyen, pero no se limitan a, nucleósidos de origen natural, nucleósidos modificados y nucleósidos con bases miméticas y/o grupos de azúcar. Los nucleósidos pueden ser modificados con cualquiera de una variedad de sustituyentes.

"Resto de azúcar' significa un azúcar natural o modificado o sustituido de azúcar.

"Azúcar natural" significa un resto de ribofuranosa de ADN (2'-H) o ARN (2'-OH).

"Azúcar modificado" significa un resto de ribofuranosa que comprende al menos un sustituyente distinto del de un azúcar natural.

"Sustituto de azúcar" significa una estructura distinta de un anillo de ribofuranosa que puede sustituir el azúcar de un nucleósido. Ejemplos de sustitutos de azúcar incluyen, pero no se limitan a, sistemas anulares abiertos, anillos de 6 miembros, azúcares en los cuales el oxígeno se reemplaza con, por ejemplo, azufre o nitrógeno. Por ejemplo, los sustitutos de azúcar incluyen, pero no se limitan a, morfolinos y azúcares que contienen 4'-tio. "Nucleobase" significa la parte de base heterocíclica de un nucleósido. Las nucleobases pueden ser de origen natural o pueden estar modificadas. En determinados casos, una nucleobase puede comprender cualquier átomo o grupo de átomos que permitan la unión de hidrógeno con una nucleobase de otro ácido nucleico. "Nucleótido" significa un nucleósido que comprende un grupo de enlace fosfato. Tal como se usa en este documento, los nucleósidos incluyen nucleótidos.

"Nucleósido modificado" significa un nucleósido que comprende al menos una modificación en comparación con nucleósidos de ARN o ADN de origen natural. Tal modificación puede estar en el resto azúcar y/o en la nucleobase.

“Nucleósido bicíclico” o "BNA" significa un nucleósido, en donde el resto azúcar del nucleósido comprende un puente que conecta dos átomos de carbono del anillo de azúcar y forma así un sistema de azúcar bicíclico. “Nucleósido bicíclico 4'-2'” significa un nucleósido bicíclico que comprende un anillo de furanosa que comprende un puente que conecta dos átomos de carbono del anillo de furanosa que conecta el átomo de carbono en la posición 2' y el átomo de carbono en la posición 4' del anillo de azúcar.

"Modificado en 2'" o "sustituido en 2'" significa un nucleósido que comprende un azúcar que comprende un sustituyente en la posición 2' que no es H u OH.

Cada uno de “2'-OMe” o “2'-OCH3” o “2'-O-metilo” significa un nucleósido que comprende un azúcar que comprende un grupo -OCH³ en la posición 2' del anillo de azúcar.

Cada uno de “MOE”, “2'-MOE”, “2'-OCH2CH2OCH3” o “2'-O-metoxietilo” significa un nucleósido que comprende un azúcar que comprende un grupo -OCH²CH²OCH³ en la posición 2' del anillo de azúcar.

“Oligonudeótido” significa un compuesto que comprende múltiples nucleósidos unidos. En determinados casos, uno o más de la pluralidad de nucleósidos está modificado. En determinados casos, un oligonucleótido comprende uno o más ribonucleósidos (ARN) y/o desoxirribonucleósidos (ADN).

“Oligonucleósido” significa un oligonucleótido en el cual ninguno de los enlaces internucleosídicos contiene un átomo de fósforo. Como se usa en este documento, los oligonucleótidos incluyen oligonucleósidos.

"Oligonucleótido modificado" significa un oligonucleótido que comprende al menos un nucleósido modificado y/o al menos un enlace internucleosídico modificado.

"Enlace internucleosídico" significa un enlace covalente entre nucleósidos adyacentes de un oligonucleótido. "Enlace internucleosídico de origen natural" significa un enlace fosfodiéster 3' a 5'.

"Enlace internucleosídico modificado" significa cualquier enlace internucleosídico diferente a un enlace internucleosídico de origen natural.

"Compuesto oligomérico" significa un compuesto que comprende un oligonucleótido. En determinados casos, un compuesto oligomérico consiste en un oligonucleótido. En determinados casos, un compuesto oligomérico comprende además uno o más grupos conjugados y/o terminales.

"Compuesto antisentido" se refiere a un compuesto oligomérico, al menos una parte del cual es al menos parcialmente complementario a un ácido nucleico diana con el cual se hibrida, en donde dicha hibridación genera al menos una actividad antisentido.

"Oligonucleótido antisentido" significa un compuesto antisentido donde el compuesto oligomérico consiste en un oligonucleótido.

"Actividad antisentido" se refiere a cualquier efecto detectable y/o medible que se puede atribuir a la hibridación de un compuesto antisentido con su ácido nucleico diana. En determinados casos, tal actividad antisentido es un aumento o una disminución en una cantidad de un ácido nucleico o proteína. En determinados casos, tal actividad antisentido es un cambio en la relación de variantes de empalme de un ácido nucleico o proteína. En determinados casos, tal actividad antisentido es un cambio fenotípico en una célula y/o sujeto.

La "detección" o "medición" de la actividad antisentido puede ser directa o indirecta. Por ejemplo, En determinados casos, la actividad antisentido se evalúa mediante la detección y/o medición de la cantidad de ácido nucleico o proteína diana o las cantidades relativas de variantes de empalme de un ácido nucleico o proteína diana. En determinados casos, la actividad antisentido se detecta observando un cambio fenotípico en una célula o animal. En relación con cualquier actividad, respuesta o efecto, los términos "detectar" y "medir" indican que se realiza una prueba para detectar o medir. Tal detección y/o medición puede incluir valores de cero. Por lo tanto, si una prueba de detección o medición da como resultado un hallazgo de ausencia de actividad (actividad cero), no obstante se ha realizado la etapa de detección o medición de la actividad. "Ácido nucleico diana" se refiere a cualquier molécula de ácido nucleico cuya expresión, cantidad o actividad puede modularse mediante un compuesto antisentido.

"ARNm diana" significa una molécula de ARN previamente seleccionado que codifica una proteína.

"pre-ARNm diana" significa una transcripción de ARN previamente seleccionado que no se ha procesado completamente en ARNm. Cabe destacar que pre-ARNm incluye uno o más intrones.

"Proteína diana" significa una proteína codificada por un ácido nucleico diana.

"Modulación" significa una perturbación de la función o actividad. En determinados casos, la modulación significa un aumento de la expresión génica. En determinados casos, la modulación significa una disminución de la expresión génica.

“Expresión” significa todas las funciones y etapas mediante las cuales la información codificada de un gen se convierte en estructuras presentes y que funcionan en una célula.

“Secuencia de nucleobases” significa al orden de nucleobases contiguas, en una orientación 5' a 3', independientes de cualquier azúcar, enlace y/o modificación de nucleobase.

"Nucleobases contiguas" significa nucleobases inmediatamente adyacentes entre sí en un ácido nucleico. "Complementariedad de nucleobases" significa la capacidad de dos nucleobases de emparejarse de forma no covalente mediante enlace de hidrógeno.

"Complementario" significa que un primer ácido nucleico puede hibridarse con un segundo ácido nucleico en condiciones de hibridación rigurosas. Por ejemplo, un compuesto antisentido es complementario a su ácido nucleico diana si puede hibridarse con el ácido nucleico diana en condiciones de hibridación rigurosas.

"Completamente complementario" significa que cada nucleobase de un primer ácido nucleico puede emparejarse con una nucleobase en cada posición contigua correspondiente en un segundo ácido nucleico.

"Porcentaje de complementariedad" de un compuesto antisentido significa el porcentaje de nucleobases del compuesto antisentido que son complementarias a una parte de igual longitud de un ácido nucleico diana. El porcentaje de complementariedad se calcula mediante la división de la cantidad de nucleobases del oligonucleótido antisentido que son complementarias a las nucleobases en posiciones contiguas correspondientes en el ácido nucleico diana entre la longitud total del compuesto antisentido.

"Porcentaje de identidad" significa la cantidad de nucleobases en un primer ácido nucleico que son idénticas a las nucleobases en posiciones correspondientes en un segundo ácido nucleico, dividida entre la cantidad total de nucleobases en el primer ácido nucleico.

"Hibridación" significa el templado de los ácidos nucleicos complementarios que tiene lugar mediante complementariedad de nucleobases.

"Mal apareamiento" significa que una nucleobase de un primer ácido nucleico no puede emparejarse con una nucleobase en una posición correspondiente de un segundo ácido nucleico.

"Secuencia de nucleobases idéntica" significa que tiene la misma secuencia de nucleobases, independientemente de cualquier modificación química de los nucleósidos.

"Modificaciones distintas" o "modificado de forma distinta" se refieren a nucleósidos o enlaces internucleosídicos que presentan distintas modificaciones de nucleósido o enlaces internucleosídicos entre sí, incluida la ausencia de modificaciones. Por lo tanto, por ejemplo, un nucleósido MOE y un nucleósido de ADN no modificado están "modificados de forma distinta", a pesar de que el nucleósido de ADN no esté modificado. De manera similar, el ADN y ARN están "modificados de forma distinta", a pesar de que ambos son nucleósidos no modificados de origen natural. Los nucleósidos que sean iguales, salvo por el hecho de que comprenden nucleobases diferentes, no están modificados de forma distinta, a menos que se indique lo contrario. Por ejemplo, un nucleósido que comprende un azúcar modificado 2'-OMe y una nucleobase de adenina y un nucleósido que comprende un azúcar modificado 2'-OMe y una nucleobase de timina no están modificados de forma distinta.

"La misma modificación" se refiere a nucleósidos y enlaces internucleosídicos (que incluyen nucleósidos y enlaces internucleosídicos no modificados) que son iguales entre sí. Por lo tanto, por ejemplo, dos nucleósidos de ADN no modificados tienen la "misma modificación", a pesar de que el nucleósido de ADN no esté modificado.

“Tipo de modificación” o nucleósido de un “tipo” se refiere a la modificación de un nucleósido e incluye nucleósidos modificados y no modificados. En consecuencia, a menos que se indique lo contrario, un "nucleósido que tiene una modificación de un primer tipo" puede ser un nucleósido no modificado.

"Regiones separadas" de un oligonucleótido se refiere a una parte de un oligonucleótido, en donde los nucleósidos y enlaces internucleosídicos dentro de la región comprenden las mismas modificaciones; y los nucleósidos y/o enlaces internucleosídicos de cualquier parte cercana incluyen al menos una modificación distinta.

"Motivo" significa un patrón de nucleobases, azúcares y/o enlaces internucleosídicos modificados y/o no modificados en un oligonucleótido.

"Oligonucleótido completamente modificado" se refiere a que cada nucleobase, cada azúcar y/o cada enlace internucleosídico está modificado.

"Oligonucleótido modificado de manera uniforme" se refiere a que cada nucleobase, cada azúcar y/o cada enlace internucleosídico tiene la misma modificación a través del oligonucleótido modificado.

“Motivo alterno” significa un oligonucleótido o una parte de este, que tiene al menos cuatro regiones separadas de nucleósidos modificados en un patrón (AB)nAm , donde A representa una región de nucleósidos con un primer tipo de modificación; B representa una región de nucleósidos con un tipo distinto de modificación; n es 2-15; y m es 0 o 1. Así, En determinados casos, los motivos alternantes incluyen 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 o 20 o más regiones alternas. En determinados casos, cada región A y cada región B comprende de manera independiente 1-4 nucleósidos.

"Sujeto" significa un animal humano o no humano seleccionado para el tratamiento o la terapia.

"Sujeto que lo necesita" significa un sujeto que se identifica como que necesita terapia o tratamiento. En tales casos, un sujeto presenta una o más indicaciones de tener o desarrollar SMA.

"Administrar" significa proporcionar un agente o composición farmacéuticos a un sujeto, e incluye, pero no se limita a, la administración por parte de un profesional médico y la autoadministración.

«Administración parenteral» significa la administración mediante inyección o infusión. La administración parenteral incluye, pero no se limita a, la administración subcutánea, la administración intravenosa o la administración intramuscular.

"Administración sistémica" significa la administración en un área distinta del lugar de actividad previsto. Ejemplos de administración sistémica son la administración subcutánea, la administración intravenosa y la administración intraperitoneal.

«Administración subcutánea» significa la administración inmediatamente por debajo de la piel.

«Administración intravenosa» significa la administración en una vena.

"Fluido cerebroespinal" o "CSF" significa el fluido que llena el espacio aproximadamente el cerebro y la médula espinal.

"Administración en el fluido cerebroespinal" significa cualquier administración que suministra una sustancia directamente en el CSF.

“ Intracerebroventricular” o “ ICV” significa la administración en el sistema ventricular del cerebro.

"Intratecal" o "IT" significa la administración en el CSF debajo de la membrana aracnoidea que cubre el cerebro y la médula espinal. La inyección IT se realiza a través de la membrana tecal de la médula espinal en el espacio subaracnoideo, donde se inyecta un agente farmacéutico en el recubrimiento que rodea la médula espinal. "Fase de inducción" significa una fase de dosificación durante la cual se inicia la administración y se logran concentraciones de estado estacionario del agente farmacéutico activo en un tejido diana. Por ejemplo, una fase de inducción es una fase de dosificación durante la cual se logran concentraciones de estado estacionario del oligonucleótido antisentido en el hígado.

"Fase de mantenimiento" significa una fase de dosificación después de haber logrado las concentraciones de estado estacionario del fármaco en el tejido diana.

"Duración" significa el período de tiempo durante el cual continúa una actividad o evento. Por ejemplo, la duración de una fase de inducción es el período de tiempo durante el cual se administran dosis de inducción. "Dosis de mantenimiento" significa una dosis que se administra en una administración única durante la fase de mantenimiento. Como se usa en este documento, "dosis de inducción" se refiere a una dosis que se administra en una administración única durante la fase de inducción.

“Administración conjunta” significa la administración de dos o más agentes farmacéuticos a un sujeto. Los dos o más agentes farmacéuticos pueden estar en una única composición farmacéutica o pueden estar en composiciones farmacéuticas separadas. Cada uno de los dos o más agentes farmacéuticos puede administrarse mediante la misma o diferentes vías de administración. La administración conjunta abarca la administración secuencial o en paralelo.

"Terapia" significa un método de tratamiento de la enfermedad. En determinados casos, la terapia incluye, pero no se limita a, terapias quirúrgicas, terapias químicas, e intervenciones físicas, tales como respiración asistida, tubos de alimentación, y terapia física con el objetivo de aumentar la potencia.

"Tratamiento" se refiere a la aplicación de uno o más procedimientos específicos utilizados para la cura o mejora de una enfermedad. En determinados casos, el procedimiento específico es la administración de uno o más agentes farmacéuticos.

"Mejora" significa una disminución de la gravedad de al menos un indicador de una afección o enfermedad. En determinados casos, la mejora incluye un retraso o enlentecimiento del avance de uno o más indicadores de una afección o enfermedad. La gravedad de los indicadores puede determinarse a través de medidas subjetivas u objetivas que conocen los expertos en la materia.

"Evitar el inicio de" significa evitar el desarrollo de una afección o enfermedad en un sujeto que tiene riesgo de desarrollar la enfermedad o afección. En determinados casos, un sujeto que tiene riesgo de desarrollar la enfermedad o afección recibe un tratamiento similar al tratamiento recibido por un sujeto que ya padece la enfermedad o afección.

"Retrasar el inicio de" significa retrasar el desarrollo de una afección o enfermedad en un sujeto que tiene riesgo de desarrollar la enfermedad o afección.

"Enlentecer el avance de" significa que la gravedad de al menos un síntoma relacionado con una enfermedad o afección empeora menos rápidamente.

"Aminoácidos de exón 7" se refiere a la parte de una proteína SMN que corresponde al exón 7 del ARN SMN. Los aminoácidos de exón 7 están presentes en la proteína SMN expresada a partir de ARN SMN, donde el exón 7 no se excluyó durante el empalme.

"Proteína SMN" significa la proteína de neuronas motoras de supervivencia de longitud completa normal. SMN se puede expresar a partir de un gen SMN1 o de un gen SMN2, siempre que el exón 7 esté presente en el ARNm maduro y los aminoácidos del exón 7 estén presentes en la proteína SMN.

"Dosis" se refiere a una cantidad determinada de un agente farmacéutico que se proporciona en una única administración o en un período de tiempo determinado. En determinados casos, se puede administrar una dosis en uno, dos o más bolos, comprimidos o inyecciones. Por ejemplo, En determinados casos, cuando se desee la administración subcutánea, intratecal o ICV, la dosis deseada requiere un volumen no fácilmente adaptable en una sola inyección. En tales casos, se pueden utilizar dos o más inyecciones para alcanzar la dosis deseada. En la configuración de infusión continua, la dosis puede estar expresada como la cantidad de un agente farmacéutico que se administra por unidad de tiempo.

"Unidad de dosificación" significa la forma en la que se administra un agente farmacéutico. En determinados casos, una unidad de dosificación es un recipiente que contiene oligonucleótido liofilizado. En determinados casos, una unidad de dosificación es un recipiente que contiene oligonucleótido reconstituido.

“Cantidad terapéuticamente eficaz” significa una cantidad de un agente farmacéutico que proporciona un beneficio terapéutico a un animal.

“Composición farmacéutica” significa una mezcla de sustancias adecuadas para su administración a un individuo que incluye un agente farmacéutico. Por ejemplo, una composición farmacéutica puede comprender un oligonucleótido modificado y una solución acuosa estéril.

"Perfil de seguridad aceptable" significa un patrón de efectos secundarios que está dentro de los límites clínicamente aceptables.

“Efecto secundario” significa una respuesta fisiológica atribuible a un tratamiento que difiere de los efectos deseados.

1. Determinados oligonucleótidos modificados

En determinados casos, la presente descripción proporciona métodos y composiciones que involucran oligonucleótidos antisentido que comprenden una o más modificaciones en comparación con los oligonucleótidos de oligómeros de origen natural, tales como ADN o ARN. Tales oligonucleótidos antisentido modificados pueden poseer una o más propiedades deseables. Ciertas tales modificaciones afectan la actividad antisentido del oligonucleótido antisentido, por ejemplo, al aumentar la afinidad del oligonucleótido antisentido por su ácido nucleico diana, aumentar su resistencia a una o más nucleasas, y/o alterar la farmacocinética o distribución de tejido del oligonucleótido. En determinados casos, tales oligonucleótidos antisentido modificados comprenden uno o más nucleósidos modificados y/o uno o más enlaces nucleósido modificados y/o uno o más grupos conjugados.

a. Determinados nucleósidos modificados

En determinados casos, los oligonucleótidos antisentido comprenden uno o más nucleósidos modificados. Tales nucleósidos modificados pueden incluir un azúcar modificado y/o una nucleobase modificada. En determinados casos, la incorporación de tales nucleósidos modificados en un oligonucleótido genera un aumento de la afinidad por un ácido nucleico diana y/o un aumento de la estabilidad, que incluye, pero no se limita a, un aumento de la resistencia a la degradación de nucleasa, y/o una mejora de las propiedades de toxicidad y/o absorción del oligonucleótido modificado.

i. Ciertas nucleobases

La parte de base de origen natural de nucleósidos tienen base heterocíclica, típicamente purinas y pirimidinas. Además de las nucleobases "no modificadas" o "naturales", tales como las nucleobases de purina adenina (A) y guanina (G), y las nucleobases de pirimidina timina (T), citosina (C) y uracilo (U), muchas nucleobases modificadas o miméticos de nucleobase conocidos por los expertos en la técnica son susceptibles de incorporarse en los compuestos descritos en este documento. En determinados casos, una nucleobase modificada es una nucleobase que es bastante similar en estructura a la nucleobase original, tal como, por ejemplo, una 7-deaza purina, una 5-metil citosina o una abrazadera G. En determinados casos, el mimético de nucleobase incluye estructuras más complicadas, tales como, por ejemplo, un mimético de nucleobase de fenoxazina tricíclica. Los métodos para la preparación de las nucleobases modificadas mencionadas anteriormente son conocidos por los expertos en la técnica.

ii. Determinados azúcares modificados y sustitutos de azúcar

Los oligonucleótidos antisentido de la presente invención pueden contener opcionalmente uno o más nucleósidos, en donde el resto azúcar está modificado, en comparación con un azúcar natural. Los oligonucleótidos que comprenden tales nucleósidos de azúcar modificados pueden impartirle mejor estabilidad de nucleasas, mayor afinidad de unión o alguna otra propiedad biológica beneficiosa. Tales modificaciones incluyen, pero no se limitan a, la adición de grupos sustituyentes, puenteo de átomos anulares no germinales para formar un ácido nucleico bicíclico (BNA), reemplazo del átomo de oxígeno de anillo ribosilo con S, N(R), o C(R-i)(R⁾² (R = H, alquilo C¹-C¹² o un grupo protector) y combinaciones de estos, tales como, por ejemplo, un nucleósido sustituido con metilo 2'-F-5' (véase la solicitud internacional PCT WO 2008/101157 publicada el 21/08/08 para otros nucleósidos bis sustituidos con 5',2' descritos) o reemplazo del átomo de oxígeno de anillo ribosilo con S con sustitución adicional en la posición 2' (véase la solicitud de patente EE. UU . US2005-0130923, publicada el 16 de junio de 2005) o, alternativamente, sustitución 5' de un BNA (véase la solicitud internacional PCT WO 2007/134181 publicada el 22/11/07 en donde LNA se sustituye, por ejemplo, con un grupo metilo 5' o vinilo 5').

Ejemplos de nucleósidos que tienen restos de azúcar modificados incluyen, de modo no taxativo, nucleósidos que comprenden grupos sustituyentes 5'-vinilo, 5'-metilo (R o S), 4'-S, 2'-F, ² -OCH³ y 2'-O(CH2)2OCH3 . El sustituyente en la posición 2' puede también seleccionarse de alilo, amino, azido, tio, O-alilo, alquilo O-C¹-C¹⁰ , OCF3, O(CH2)2SCH3, O(CH²)²-O-N(Rm)(Rn) y O-CH²-C(=O)-N(Rm)(Rn), donde cada Rm y Rn es, independientemente, H o alquilo C¹-C¹⁰ sustituido o no sustituido.

Los ejemplos de ácidos nucleicos bicíclicos (BNA) incluyen, sin limitación, nucleósidos que comprenden un puente entre los átomos del anillo ribosilo 4' y 2'. En Determinados casos, los compuestos antisentido proporcionados incluyen uno o más nucleósidos de BNA en donde el puente comprende una de las fórmulas: 4'-p-D-(CH2)-O-2' (P-D-LNA); 4'-(CH2)-S-2'; 4'-a-L-(CH2)-O-2' (a-L-LNA); 4'-(CH2)2-O-2' (ENA); 4'-C(CH3)2-O-2' (véase PCT/US2008/068922); 4'-CH(CH3)-O-2' y 4'-C-H(CH2OCH3)-O-2' (véase la patente de EE. UU.

7,399,845, emitida el 15 de julio de 2008); 4'-CH2-N(OCH3)-2' (véase el documento PCT/US2008/ 064591); 4'-CH2-O-N(CH3)-2' (véase la solicitud de patente de EE. U^u . publicada US2004-0171570, publicada el 2 de setiembre de 2004); 4'-CH2-N(R)-O-2' (véase la patente de e E. UU. 7,427,672, emitida el 23 de setiembre de 2008); 4'-CH2-C(CH3)-2' y 4'-CH2-C(=CH2)-2' (véase el documento PCT/US2008/ 066154); y en donde R es, independientemente, H, alquilo C¹-C¹² , o un grupo protector.

En determinados casos, la presente invención proporciona nucleósidos modificados que comprenden restos azúcar modificados que no son restos azúcar bicíclicos. Determinados tales nucleósidos modificados son conocidos. En determinados casos, el anillo azúcar de un nucleósido puede ser modificado en cualquier posición. Los ejemplos de modificaciones de azúcar útiles en esta descripción incluyen, pero no se limitan a, compuestos que comprenden un grupo sustituyente de azúcar seleccionado entre: OH, F, O-alquilo, S-alquilo, N-alquilo u O-alquil-O-alquilo, en donde el alquilo, alquenilo y alquinilo pueden ser alquilo C¹ a C¹⁰ sustituido o no sustituido o alquenilo y alquinilo C² a C¹⁰. En Determinados tales casos, dichos sustituyentes están en la posición 2' del azúcar.

En determinados casos, los nucleósidos modificados comprenden un sustituyente en la posición 2' del azúcar. En determinados casos, tales sustituyentes se seleccionan entre: un haluro (que incluye, pero no se limitan a, F), alilo, amino, azido, tio, O-alilo, alquilo O-C¹-C¹⁰ , -OCF³, O-(CH2)2-O-CH3, 2'-O(CH2)2SCH3, O-(CH²)²-O-N(Rm)(Rn) u O-CH2-C(=O)-N(Rm)(Rn), donde cada Rm y Rn es , independientemente, H o alquilo C¹-C¹⁰ sustituido o no sustituido.

En determinados casos, los nucleósidos modificados adecuados para su uso en la presente descripción son: 2-metoxietoxi, 2'-O-metilo (2'-O- CH³), 2'-fluoro (2'-F).

En determinados casos, los nucleósidos modificados que tienen un grupo sustituyente en la posición 2' seleccionado de: O[(CH²)nO]mCH3, O(CH²)nNH² , O(CH²)nCH3, O(CH²)nONH² , OCH²C(=O)N(H)CH3 y O(CH²)nON[(CH²)nCH3]² , donde n y m son de 1 a aproximadamente 10. Otros grupos sustituyentes de azúcar 2' incluyen: alquilo C¹ a C¹⁰ , alquilo sustituido, alquenilo, alquinilo, alcarilo, aralquilo, O-alcarilo u O-aralquilo, SH, SCH³ , OCN, Cl, Br, CN, CF³ , OCF³ , SOCH³ , SO²CH³ , ONO² , NO² , N³ , NH² , heterocicloalquilo, heterocicloalcarilo, aminoalquilamino, polialquilamino, sililo sustituido, un grupo de escisión de ARN, un grupo informador, un intercalador, un grupo para mejorar las propiedades farmacocinéticas o un grupo para mejorar las propiedades farmacodinámicas de un compuesto oligomérico y otros sustituyentes que tienen propiedades similares.

En determinados casos, los nucleósidos modificados comprenden una cadena lateral 2'-MOE (Baker et al, J. Biol.Chem., 1997, 272, 11944-12000). Se ha descrito que tal sustitución 2'-MOE tiene una afinidad de unión mejorada en comparación con nucleósidos no modificados y con otros nucleósidos modificados, tales como 2'- O-metilo, O-propilo, y O-aminopropilo. También se demostró que los oligonucleótidos que tienen el sustituyente de 2'-MOE son inhibidores antisentido de la expresión génica con características prometedoras para su uso in vivo (Martin, P., Helv. Chim. Acta, 1995, 78,486-504; Altmann etal., Chimia, 1996, 50, 168­ 176; Altmann et al., Biochem. Soc. Trans., 1996, 24, 630-637; and Altmann et al., Nucleosides Nucleotides, 1997, 16, 917-926).

En determinados casos, los grupos sustituyentes de azúcar en la posición 2' están en la posición arabino (superior) o en la posición ribo (inferior). En Determinados tales casos, una modificación 2'-arabino es 2'-F arabino (FANA). También pueden realizarse modificaciones similares en otras posiciones en el azúcar, particularmente en la posición 3' del azúcar en un nucleótido de extremo 3' o en los oligonucleótidos unidos en la posición 2'-5' y en la posición 5' del nucleótido de extremo 5'.

En determinados casos, los nucleósidos adecuados para su uso en la presente invención tienen sustitutos de azúcar, tal como ciclobutilo en lugar del azúcar ribofuranosilo. Las patentes representativas de los Estados Unidos que enseñan la preparación de dichas estructuras de azúcar modificadas comprenden, pero sin limitarse a, las patentes de EE. UU.: 4,981,957; 5,118,800; 5,319,080; 5,359,044; 5,393,878; 5,446,137; 5,466,786; 5,514,785; 5,519,134; 5,567,8 11; 5,576,427; 5,591,722; 5,597,909; 5,610,300; 5,627,053; 5,639,873; 5,646,265; 5,658,873; 5,670,633; 5,79 2,747; y 5,700,920.

En determinados casos, la presente descripción proporciona nucleósidos que comprenden una modificación en la posición 2' del azúcar. En determinados casos, la descripción proporciona nucleósidos que comprenden una modificación en la posición 5' del azúcar. En determinados casos, la descripción proporciona nucleósidos que comprenden modificaciones en la posición 2' y en la posición 5' del azúcar. En determinados casos, los nucleósidos modificados pueden ser útiles para la incorporación en oligonucleótidos. En determinados casos, los nucleósidos modificados se incorporan en los oligonucleótidos en el extremo 5' del oligonucleótido.

b. Determinados enlaces internucleosídicos

Los oligonucleótidos antisentido de la presente invención pueden contener opcionalmente uno o más enlaces internucleosídicos modificados. Las dos clases principales de grupos de enlace se definen mediante la presencia o ausencia de un átomo de fósforo. Los enlaces representativos que contienen fósforo incluyen, pero no se limitan a, fosfodiésteres (P=O), fosfotriésteres, metilfosfonatos, fosforamidato y fosforotioatos (P=S). Los grupos de enlace representativos que no contienen fósforo incluyen, pero no se limitan a, metilenmetilimino (-CH2-N(CH3)-O-CH2-), tiodiéster (-O-C(O)-S-), tionocarbamato (-O-C(O)(NH)-S-); siloxano (-O-Si(H)2-O-); y N,N'-dimetilhidrazina (-CH2-N(CH3)-N(CH3)-). Los oligonucleótidos que tienen grupos de enlace distintos de fósforo se denominan oligonucleósidos. Los enlaces modificados, en comparación con enlaces fosfodiéster naturales, pueden utilizarse para modificar, típicamente aumentar, la resistencia a nucleasas de los oligonucleótidos. En determinados casos, los enlaces con un átomo quiral pueden prepararse como mezclas racémicas, como enantiómeros separados. Los enlaces quirales representativos incluyen, pero no se limitan a, alquilfosfonatos y fosforotioatos. Son bien conocidos para el experto en la técnica los métodos de preparación de enlaces que contienen fósforo y que no contienen fósforo.

Los oligonucleótidos antisentido descritos en este documento contienen uno o más centros asimétricos y, por lo tanto, dan lugar a enantiómeros, diastereómeros y otras configuraciones estereoisómeras que pueden definirse, en términos de estereoquímica absoluta, como (R) o (S), tales como para anómeros de azúcar, o como (D) o (L) tal como para aminoácidos et al. Incluidos en los compuestos antisentido proporcionados están todos los posibles isómeros, así como sus formas racémicas y ópticamente puras.

En determinados casos, los oligonucleótidos antisentido tienen al menos un enlace internucleosídico modificado. En determinados casos, los oligonucleótidos antisentido tienen al menos 2 enlaces internucleosídicos modificados. En determinados casos, los oligonucleótidos antisentido tienen al menos 3 enlaces internucleosídicos modificados. En determinados casos, los oligonucleótidos antisentido tienen al menos 10 enlaces internucleosídicos modificados. En determinados casos, cada enlace intemucleosídico de un oligonucleótido antisentido es un enlace intemucleosídico modificado. En determinados casos, los enlaces internucleosídicos modificados son enlaces fosforotioato.

c. Motivos de uniones internucleósido determinados

En determinados casos, los oligonucleótidos comprenden uniones internucleósido modificadas dispuestas a lo largo del oligonucleótido o región de este en un patrón definido o motivo de enlace intemucleosídico modificada.

En determinados casos, los oligonucleótidos comprenden una región con un motivo alternativo de enlace entre nucleósidos. En determinados casos, los oligonucleótidos de la presente descripción comprenden una región de enlaces internucleosídicos modificadas de manera uniforme. En determinados casos, el oligonucleótido comprende una región que está enlazado de manera uniforme mediante enlaces fosforotioato entre nucleósidos. En determinados casos, el oligonucleótido está enlazado de manera uniforme mediante fosforotioato. En determinados casos, cada enlace entre nucleósidos del oligonucleótido se selecciona de fosfodiéster y fosforotioato. En determinados casos, cada enlace entre nucleósidos del oligonucleótido se selecciona de fosfodiéster y fosforotioato y al menos un enlace entre nucleósidos es fosforotioato.

En determinados casos, el oligonucleótido comprende al menos 5 enlaces fosforotioato entre nucleósidos. En determinados casos, el oligonucleótido comprende al menos 6 enlaces fosforotioato entre nucleósidos. En determinados casos, el oligonucleótido comprende al menos 7 enlaces fosforotioato entre nucleósidos. En determinados casos, el oligonucleótido comprende al menos 8 uniones internucleósido fosforotioato. En determinados casos, el oligonucleótido comprende al menos 9 enlaces fosforotioato entre nucleósidos. En determinados casos, el oligonucleótido comprende al menos 10 uniones internucleósido fosforotioato. En determinados casos, el oligonucleótido comprende al menos 11 uniones internucleósido fosforotioato. En determinados casos, el oligonucleótido comprende al menos 12 uniones internucleósido fosforotioato.

En determinados casos, el oligonucleótido comprende al menos un bloque de al menos 2 enlaces fosforotioato internucleósidos consecutivos. En determinados casos, el oligonucleótido comprende al menos un bloque de al menos 3 enlaces fosforotioato internucleósidos consecutivos. En determinados casos, el oligonucleótido comprende al menos un bloque de al menos 4 enlaces fosforotioato internucleósidos consecutivos. En determinados casos, el oligonucleótido comprende al menos un bloque de al menos 5 enlaces fosforotioato internucleósidos consecutivos. En determinados casos, el oligonucleótido comprende al menos un bloque de al menos 6 enlaces fosforotioato internucleósidos consecutivos. En determinados casos, el oligonucleótido comprende al menos un bloque de al menos 7 enlaces fosforotioato internucleósidos consecutivos. En determinados casos, el oligonucleótido comprende al menos un bloque de al menos 8 enlaces internucleosídicos fosforotioato consecutivos. En determinados tales casos, al menos uno de tales bloques está ubicado en el extremo 3' del oligonucleótido. En determinados tales casos, al menos uno de dichos bloques está ubicado a menos de 3 nucleósidos del extremo 3' del oligonucleótido.

En determinados casos, el oligonucleótido comprende al menos un bloque de al menos 2 enlaces fosfodiéster internucleósidos consecutivos. En determinados casos, el oligonucleótido comprende al menos un bloque de al menos 3 enlaces fosfodiéster internucleósidos consecutivos. En determinados casos, el oligonucleótido comprende al menos un bloque de al menos 4 enlaces fosfodiéster internucleósidos consecutivos. En determinados casos, el oligonucleótido comprende al menos un bloque de al menos 5 enlaces fosfodiéster internucleósidos consecutivos. En determinados casos, el oligonucleótido comprende al menos un bloque de al menos 6 enlaces fosforotioato internucleósidos consecutivos. En determinados casos, el oligonucleótido comprende al menos un bloque de al menos 7 enlaces fosfodiéster internucleósidos consecutivos. En determinados casos, el oligonucleótido comprende al menos un bloque de al menos 8 enlaces fosfodiéster internucleosídicos consecutivos. En determinados tales casos, al menos uno de dichos bloques está ubicado en el extremo 3' del oligonucleótido. En determinados tales casos, al menos uno de dichos bloques está ubicado a menos de 3 nucleósidos del extremo 3' del oligonucleótido.

En determinados casos, el oligonucleótido comprende al menos un bloque de al menos 2 enlaces fosforotioato internucleósidos consecutivos. En determinados casos, el oligonucleótido comprende al menos un bloque de al menos 3 enlaces fosforotioato internucleósidos consecutivos. En determinados casos, el oligonucleótido comprende al menos un bloque de al menos 4 enlaces fosforotioato internucleósidos consecutivos. En determinados casos, el oligonucleótido comprende al menos un bloque de al menos 5 enlaces fosforotioato internucleósidos consecutivos. En determinados casos, el oligonucleótido comprende al menos un bloque de al menos 6 enlaces fosforotioato internucleósidos consecutivos. En determinados casos, el oligonucleótido comprende al menos un bloque de al menos 7 enlaces fosforotioato internucleósidos consecutivos. En determinados casos, el oligonucleótido comprende al menos un bloque de al menos 8 enlaces internucleosídicos fosforotioato consecutivos. En determinados tales casos, al menos uno de dichos bloques está ubicado en el extremo 3' del oligonucleótido. En determinados tales casos, al menos uno de dichos bloques está ubicado a menos de 3 nucleósidos del extremo 3' del oligonucleótido.

En determinados casos, el oligonucleótido comprende al menos un bloque de al menos 2 enlaces intemucleosídicos fosfodiéster consecutivos, en donde el resto de los enlaces internucleosídicos en el oligonucleótido comprenden enlaces intemucleosídicos fosforotioato. En determinados casos, el oligonucleótido comprende al menos un bloque de al menos 3 enlaces internucleosídicos fosfodiéster consecutivos, en donde el resto de los enlaces internucleosídicos en el oligonucleótido comprenden enlaces internucleosídicos fosforotioato. En determinados casos, el oligonucleótido comprende al menos un bloque de al menos 4 enlaces internucleosídicos fosfodiéster consecutivos, en los que el resto de los enlaces internucleosídicos en el oligonucleótido comprenden enlaces internucleosídicos fosforotioato. En determinados casos, el oligonucleótido comprende al menos un bloque de al menos 5 enlaces internucleosídicos fosfodiéster consecutivos, en los que el resto de los enlaces internucleosídicos en el oligonucleótido comprenden enlaces internucleosídicos fosforotioato. En determinados casos, el oligonucleótido comprende al menos un bloque de al menos 6 enlaces internucleosídicos fosfodiéster consecutivos, en donde el resto de los enlaces internucleosídicos en el oligonucleótido comprenden enlaces internucleosídicos fosforotioato. En determinados casos, el oligonucleótido comprende al menos un bloque de al menos 7 enlaces internucleosídicos fosfodiéster consecutivos, en donde el resto de los enlaces internucleosídicos en el oligonucleótido comprenden enlaces internucleosídicos fosforotioato. En determinados casos, el oligonucleótido comprende al menos un bloque de al menos 8 enlaces internucleosídicos fosfodiéster consecutivos, en los que el resto de los enlaces internucleosídicos en el oligonucleótido comprenden enlaces internucleosídicos fosforotioato. En determinados tales casos, al menos uno de dichos bloques está ubicado en el extremo 3' del oligonucleótido. En determinados tales casos, al menos uno de dichos bloques está ubicado a menos de 3 nucleósidos del extremo 3' del oligonucleótido. En determinados tales casos, al menos uno de dichos bloques está ubicado en el centro del oligonucleótido.

En determinados casos, es deseable disponer la cantidad de enlaces internucleosídicos fosforotioato y enlaces internucleosídicos fosfodiéster para mantener la resistencia de nucleasa. En determinados casos, es deseable disponer la cantidad y posición de enlaces internucleosídicos fosforotioato y la cantidad y posición de enlaces internucleosídicos fosfodiéster para mantener la resistencia de nucleasa. En determinados casos, la cantidad de enlaces internucleosídicos fosforotioato puede disminuir y la cantidad de enlaces internucleosídicos fosfodiéster puede aumentar. En determinados casos, la cantidad de enlaces internucleosídicos fosforotioato puede disminuir y la cantidad de enlaces internucleosídicos fosfodiéster puede aumentar mientras se mantiene la resistencia de nucleasa. En determinados casos, es deseable reducir la cantidad de enlaces internucleosídicos fosforotioato y al mismo tiempo retener la resistencia de nucleasa. En determinados casos, es deseable aumentar la cantidad de enlaces internucleosídicos fosfodiéster mientras se retiene la resistencia de nucleasa.

En determinados casos, un compuesto oligomérico tiene un motivo de enlace internucleosídico seleccionado de la tabla que sigue, en donde cada "N" representa un nucleósido, cada subíndice "s" representa una unión internucleósido fosforotioato y cada subíndice "o" representa una unión internucleósido fosfodiéster:

Motivos de enlaces internucleosídicos

En determinados casos, la inclusión de 3, 4, 5, 6, 7, 8 o 9 enlaces intemucleosídicos fosfodiéster en un oligonucleótido modificado mejora el índice terapéutico. En determinados casos, las composiciones farmacéuticas que tienen 3, 4, 5, 6, 7, 8 o 9 enlaces internucleosídicos fosfodiéster tienen índices terapéuticos mejorados. En determinados casos, las composiciones farmacéuticas que tienen 3, 4, 5, 6, 7, 8 o 9 enlaces intemucleosídicos fosfodiéster y que tienen índices terapéuticos mejorados permiten que un experto en la técnica administre las composiciones farmacéuticas de la presente descripción poco frecuentes. En determinados casos, las composiciones farmacéuticas de la presente descripción que tienen índices terapéuticos mejorados permiten que un experto en la técnica permita intervalos más largos entre la primera dosis y la segunda dosis.

En determinados casos, la inclusión de 3, 4, 5, 6, 7, 8 o 9 enlaces internucleosídicos fosfodiéster en un oligonucleótido modificado, en donde el oligonucleótido modificado tiene la secuencia de nucleobase de SEQ ID NO.: 1, permite que un experto en la técnica administre el oligonucleótido modificado o una composición farmacéutica del mismo a intervalos poco frecuentes. En determinados casos, la inclusión de 3, 4, 5, 6, 7, 8 o 9 enlaces internucleosídicos fosfodiéster en un oligonucleótido modificado, en donde el oligonucleótido modificado tiene la secuencia de nucleobase de SEQ ID NO.: 1, permite que un experto en la técnica administre el oligonucleótido modificado o una composición farmacéutica del mismo a intervalos superiores a 3 meses. En determinados casos, la inclusión de 3, 4, 5, 6, 7, 8 o 9 enlaces internucleosídicos fosfodiéster en un oligonucleótido modificado, en el que el oligonucleótido modificado tiene la secuencia de nucleobase de SEQ ID NO.: 1, permite que un experto en la técnica administre el oligonucleótido modificado o una composición farmacéutica del mismo a intervalos superiores a 4 meses. En determinados casos, la inclusión de 3, 4, 5, 6, 7, 8 o 9 enlaces internucleosídicos fosfodiéster en un oligonucleótido modificado, en donde el oligonucleótido modificado tiene la secuencia de nucleobase de SEQ ID NO.: 1, permite que uno tenga experto en la técnica para administrar el oligonucleótido modificado o una composición farmacéutica del mismo a intervalos superiores a 5 meses. En determinados casos, la inclusión de 3, 4, 5, 6, 7, 8 o 9 enlaces internucleosídicos fosfodiéster en un oligonucleótido modificado, en donde el oligonucleótido modificado tiene la secuencia de nucleobase de SEQ ID NO.: 1, permite que uno tenga experto en la técnica para administrar el oligonucleótido modificado o una composición farmacéutica del mismo a intervalos superiores a 6 meses. En determinados casos, la inclusión de 3, 4, 5, 6, 7, 8 o 9 enlaces intemucleosídicos fosfodiéster en un oligonucleótido modificado, en donde el oligonucleótido modificado tiene la secuencia de nucleobase de SEQ ID NO.: 1, permite que uno tenga experto en la técnica para administrar el oligonucleótido modificado o una composición farmacéutica del mismo a intervalos superiores a 7 meses.

En determinados casos, la inclusión de 3, 4, 5, 6, 7, 8 o 9 enlaces intemucleosídicos fosfodiéster en un oligonucleótido modificado, en donde el oligonucleótido modificado tiene la secuencia de nucleobase de SEQ ID NO.: 2 o 7, permite que uno tenga experto en la técnica para administrar el oligonucleótido modificado o una composición farmacéutica del mismo a intervalos poco frecuentes. En determinados casos, la inclusión de 3, 4, 5, 6, 7, 8 o 9 enlaces intemucleosídicos fosfodiéster en un oligonucleótido modificado, en donde el oligonucleótido modificado tiene la secuencia de nucleobase de SEQ ID NO.: 2 o 7, permite que un experto en la técnica administre el oligonucleótido modificado o una composición farmacéutica del mismo a intervalos superiores a 3 meses. En determinados casos, la inclusión de 3, 4, 5, 6, 7, 8 o 9 enlaces intemucleosídicos fosfodiéster en un oligonucleótido modificado, en donde el oligonucleótido modificado tiene la secuencia de nucleobase de SEQ ID NO.: 2 o 7, permite que un experto en la técnica administre el oligonucleótido modificado o una composición farmacéutica del mismo a intervalos superiores a 4 meses. En determinados casos, la inclusión de 3, 4, 5, 6, 7, 8 o 9 enlaces intemucleosídicos fosfodiéster en un oligonucleótido modificado, en donde el oligonucleótido modificado tiene la secuencia de nucleobase de SEQ ID NO.: 2 o 7, permite que un experto en la técnica administre el oligonucleótido modificado o una composición farmacéutica del mismo a intervalos superiores a 5 meses. En determinados casos, la inclusión de 3, 4, 5, 6, 7, 8 o 9 enlaces intemucleosídicos fosfodiéster en un oligonucleótido modificado, en donde el oligonucleótido modificado tiene la secuencia de nucleobase de SEQ ID NO.: 2 o 7, permite que un experto en la técnica administre el oligonucleótido modificado o una composición farmacéutica del mismo a intervalos superiores a 6 meses. En determinados casos, la inclusión de 3, 4, 5, 6, 7, 8 o 9 enlaces internucleosídicos fosfodiéster en un oligonucleótido modificado, en donde el oligonucleótido modificado tiene la secuencia de nucleobase de SEQ ID NO.: 2 o 7, permite que un experto en la técnica administre el oligonucleótido modificado o una composición farmacéutica del mismo a intervalos superiores a 7 meses.

En determinados casos, la inclusión de 6 enlaces intemucleosídicos fosfodiéster en un oligonucleótido modificado, en donde el oligonucleótido modificado tiene la secuencia de nucleobase de SEQ ID NO.: 1, permite que un experto en la técnica administre el oligonucleótido modificado o una composición farmacéutica del mismo a intervalos poco frecuentes. En determinados casos, la inclusión de 6 enlaces internucleosídicos fosfodiéster en un oligonucleótido modificado, en donde el oligonucleótido modificado tiene la secuencia de nucleobase de SEQ ID NO.: 1, permite que un experto en la técnica administre el oligonucleótido modificado o una composición farmacéutica del mismo a intervalos superiores a 3 meses. En determinados casos, la inclusión de 6 enlaces internucleosídicos fosfodiéster en un oligonucleótido modificado, en donde el oligonucleótido modificado tiene la secuencia de nucleobase de SEQ ID NO.: 1, permite que un experto en la técnica administre el oligonucleótido modificado o una composición farmacéutica del mismo a intervalos superiores a 4 meses. En determinados casos, la inclusión de 6 enlaces internucleosídicos fosfodiéster en un oligonucleótido modificado, en donde el oligonucleótido modificado tiene la secuencia de nucleobase de SEQ ID NO.: 1, permite que un experto en la técnica administre el oligonucleótido modificado o una composición farmacéutica del mismo a intervalos superiores a 5 meses. En determinados casos, la inclusión de 6 enlaces intemucleosídicos fosfodiéster en un oligonucleótido modificado, en donde el oligonucleótido modificado tiene la secuencia de nucleobase de SEQ ID NO.: 1, permite que un experto en la técnica administre el oligonucleótido modificado o una composición farmacéutica del mismo a intervalos superiores a 6 meses. En determinados casos, la inclusión de 6 enlaces intemucleosídicos fosfodiéster en un oligonucleótido modificado, en donde el oligonucleótido modificado tiene la secuencia de nucleobase de SEQ ID NO.: 1, permite que un experto en la técnica administre el oligonucleótido modificado o una composición farmacéutica del mismo a intervalos superiores 7 meses.

En determinados casos, la inclusión de 7 enlaces internucleosídicos fosfodiéster en un oligonucleótido modificado, en donde el oligonucleótido modificado tiene la secuencia de nucleobase de SEQ ID NO.: 1, permite que un experto en la técnica administre el oligonucleótido modificado o una composición farmacéutica del mismo a intervalos poco frecuentes. En determinados casos, la inclusión de 7 enlaces internucleosídicos fosfodiéster en un oligonucleótido modificado, en donde el oligonucleótido modificado tiene la secuencia de nucleobase de SEQ ID NO.: 1, permite que un experto en la técnica administre el oligonucleótido modificado o una composición farmacéutica del mismo a intervalos superiores a 3 meses. En determinados casos, la inclusión de 7 enlaces internucleosídicos fosfodiéster en un oligonucleótido modificado, en donde el oligonucleótido modificado tiene la secuencia de nucleobase de SEQ ID NO.: 1, permite que un experto en la técnica administre el oligonucleótido modificado o una composición farmacéutica del mismo a intervalos superiores a 4 meses. En determinados casos, la inclusión de 7 enlaces internucleosídicos fosfodiéster en un oligonucleótido modificado, en donde el oligonucleótido modificado tiene la secuencia de nucleobase de SEQ ID NO.: 1, permite que un experto en la técnica administre el oligonucleótido modificado o una composición farmacéutica del mismo a intervalos superiores a 5 meses. En determinados casos, la inclusión de 7 enlaces intemucleosídicos fosfodiéster en un oligonucleótido modificado, en donde el oligonucleótido modificado tiene la secuencia de nucleobase de SEQ ID NO.: 1, permite que un experto en la técnica administre el oligonucleótido modificado o una composición farmacéutica del mismo a intervalos superiores a 6 meses. En determinados casos, la inclusión de 7 enlaces internucleosídicos fosfodiéster en un oligonucleótido modificado, en donde el oligonucleótido modificado tiene la secuencia de nucleobase de SEQ ID NO.: 1, permite que un experto en la técnica administre el oligonucleótido modificado o una composición farmacéutica del mismo a intervalos superiores a 7 meses.

En determinados casos, la inclusión de 8 enlaces internucleosídicos fosfodiéster en un oligonucleótido modificado, en donde el oligonucleótido modificado tiene la secuencia de nucleobase de SEQ ID NO.: 1, permite que un experto en la técnica administre el oligonucleótido modificado o una composición farmacéutica del mismo a intervalos poco frecuentes. En determinados casos, la inclusión de 8 enlaces internucleosídicos fosfodiéster en un oligonucleótido modificado, en donde el oligonucleótido modificado tiene la secuencia de nucleobase de SEQ ID NO.: 1, permite que un experto en la técnica administre el oligonucleótido modificado o una composición farmacéutica del mismo a intervalos superiores a 3 meses. En determinados casos, la inclusión de 8 enlaces internucleosídicos fosfodiéster en un oligonucleótido modificado, en donde el oligonucleótido modificado tiene la secuencia de nucleobase de SEQ ID NO.: 1, permite que un experto en la técnica administre el oligonucleótido modificado o una composición farmacéutica del mismo a intervalos superiores a 4 meses. En determinados casos, la inclusión de 8 enlaces internucleosídicos fosfodiéster en un oligonucleótido modificado, en donde el oligonucleótido modificado tiene la secuencia de nucleobase de SEQ ID NO.: 1, permite que un experto en la técnica administre el oligonucleótido modificado o una composición farmacéutica del mismo a intervalos superiores a 5 meses. En determinados casos, la inclusión de 8 enlaces internucleosídicos fosfodiéster en un oligonucleótido modificado, en donde el oligonucleótido modificado tiene la secuencia de nucleobase de SEQ ID NO.: 1, permite que un experto en la técnica administre el oligonucleótido modificado o una composición farmacéutica del mismo a intervalos superiores a 6 meses. En determinados casos, la inclusión de 8 enlaces internucleosídicos fosfodiéster en un oligonucleótido modificado, en donde el oligonucleótido modificado tiene la secuencia de nucleobase de SEQ ID NO.: 1, permite que un experto en la técnica administre el oligonucleótido modificado o una composición farmacéutica del mismo a intervalos superiores a 7 meses.

En determinados casos, la inclusión de 9 enlaces internucleosídicos fosfodiéster en un oligonucleótido modificado, en donde el oligonucleótido modificado tiene la secuencia de nucleobase de SEQ ID NO.: 1, permite que un experto en la técnica administre el oligonucleótido modificado o una composición farmacéutica del mismo a intervalos poco frecuentes. En determinados casos, la inclusión de 9 enlaces internucleosídicos fosfodiéster en un oligonucleótido modificado, en donde el oligonucleótido modificado tiene la secuencia de nucleobase de SEQ ID NO.: 1, permite que un experto en la técnica administre el oligonucleótido modificado o una composición farmacéutica del mismo a intervalos superiores a 3 meses. En determinados casos, la inclusión de 9 enlaces internucleosídicos fosfodiéster en un oligonucleótido modificado, en donde el oligonucleótido modificado tiene la secuencia de nucleobase de SEQ ID NO.: 1, permite que un experto en la técnica administre el oligonucleótido modificado o una composición farmacéutica del mismo a intervalos superiores a 4 meses. En determinados casos, la inclusión de 9 enlaces internucleosídicos fosfodiéster en un oligonucleótido modificado, en donde el oligonucleótido modificado tiene la secuencia de nucleobase de SEQ ID NO.: 1, permite que un experto en la técnica administre el oligonucleótido modificado o una composición farmacéutica del mismo a intervalos superiores a 5 meses. En determinados casos, la inclusión de 3, 4, 5, 6, 7, 8 o 9 enlaces internucleosídicos fosfodiéster en un oligonucleótido modificado, en donde el oligonucleótido modificado tiene la secuencia de nucleobase de SEQ ID NO.: 1, permite que uno tenga experto en la técnica para administrar el oligonucleótido modificado o una composición farmacéutica del mismo a intervalos superiores a 6 meses. En determinados casos, la inclusión de 9 enlaces internucleosídicos fosfodiéster en un oligonucleótido modificado, en donde el oligonucleótido modificado tiene la secuencia de nucleobase de SEQ ID NO.: 1, permite que un experto en la técnica administre el oligonucleótido modificado o una composición farmacéutica del mismo a intervalos superiores a 7 meses.

d. Longitudes

En determinados casos, la presente descripción proporciona oligonucleótidos antisentido de cualquiera de una variedad de intervalos de longitud. En Determinados casos, la descripción proporciona compuestos antisentido u oligonucleótidos antisentido que comprenden o consisten en nucleósidos unidos por X-Y, donde X e Y se seleccionan cada uno independientemente de 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18 , 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43 ,44, 45, 46, 47, 48, 49 y 50; siempre que X<Y. Por ejemplo, en Determinados casos, la descripción proporciona compuestos antisentido u oligonucleótidos antisentido que comprenden o consisten en: 8-9, 8-10, 8-11, 8-12, 8-13, 8-14, 8-15, 8-16, 8­ 17, 8-18, 8-19, 8-20, 8-21, 8-22, 8-23, 8-24, 8-25, 8-26, 8-27, 8-28, 8-29, 8-30, 9-10, 9-11, 9-12, 9-13, 9-14, 9­ 15, 9-16, 9-17, 9-18, 9-19, 9-20, 9-21, 9-22, 9-23, 9-24, 9-25, 9-26, 9-27, 9-28, 9-29, 9-30, 10-11, 10-12, 10-13, 10- 14, 10-15, 10-16, 10-17, 10-18, 10-19, 10-20, 10-21, 10-22, 10-23, 10-24, 10-25, 10-26, 10-27, 10-28, 10­ 29, 10-30, 11-12, 11-13, 11-14, 11-15, 11-16, 11-17, 11-18, 11-19, 11-20, 11-21, 11-22, 11-23, 11-24, 11-25, 11- 26, 11-27, 11-28, 11-29, 11-30, 12-13, 12-14, 12-15, 12-16, 12-17, 12-18, 12-19, 12-20, 12-21, 12-22, 12­ 23, 12-24, 12-25, 12-26, 12-27, 12-28, 12-29, 12-30, 13-14, 13-15, 13-16, 13-17, 13-18, 13-19, 13-20, 13-21, 13-22, 13-23, 13-24, 13-25, 13-26, 13-27, 13-28, 13-29, 13-30, 14-15, 14-16, 14-17, 14-18, 14-19, 14-20, 1421, 14-22, 14-23, 14-24, 14-25, 14-26, 14-27, 14-28, 14-29, 14-30, 15-16, 15-17, 15-18, 15-19, 15-20, 15-21, 15-22, 15-23, 15-24, 15-25, 15-26, 15-27, 15-28, 15-29, 15-30, 16-17, 16-18, 16-19, 16-20, 16-21, 16-22, 16­ 23, 16-24, 16-25, 16-26, 16-27, 16-28, 16-29, 16-30, 17-18, 17-19, 17-20, 17-21, 17-22, 17-23, 17-24, 17-25, 17-26, 17-27, 17-28, 17-29, 17-30, 18-19, 18-20, 18-21, 18-22, 18-23, 18-24, 18-25, 18-26, 18-27, 18-28, 18­ 29, 18-30, 19-20, 19-21, 19-22, 19-23, 19-24, 19-25, 19-26, 19-29, 19-28, 19-29, 19-30, 20-21, 20-22, 20-23, 20-24, 20-25, 20-26, 20-27, 20-28, 20-29, 20-30, 21-22, 21-23, 21-24, 21-25, 21-26, 21-27, 21-28, 21-29, 21­ 30, 22-23, 22-24, 22-25, 22-26, 22-27, 22-28, 22-29, 22-30, 23-24, 23-25, 23-26, 23-27, 23-28, 23-29, 23-30, 24-25, 24-26, 24-27, 24-28, 24-29, 24-30, 25-26, 25-27, 25-28, 25-29, 25-30, 26-27, 26-28, 26-29, 26-30, 27­ 28, 27-29, 27-30, 28-29, 28-30 o 29-30 nucleósidos enlazados.

En determinados casos, los compuestos antisentido u oligonucleótidos antisentido de la presente invención tienen 15 nucleósidos de longitud. En determinados casos, los compuestos antisentido u oligonucleótidos antisentido de la presente invención tienen 16 nucleósidos de longitud. En determinados casos, los compuestos antisentido u oligonucleótidos antisentido de la presente invención tienen 17 nucleósidos de longitud. En determinados casos, los compuestos antisentido u oligonucleótidos antisentido de la presente invención tienen 18 nucleósidos de longitud. En determinados casos, los compuestos antisentido u oligonucleótidos antisentido de la presente invención tienen 19 nucleósidos de longitud. En determinados casos, los compuestos antisentido u oligonucleótidos antisentido de la presente invención tienen 20 nucleósidos de longitud.

e. Motivos de oligonucleótido determinados

En determinados casos, los oligonucleótidos antisentido presentan subunidades químicamente modificadas dispuestas en orientaciones específicas a lo largo de su longitud. En determinados casos, los oligonucleótidos antisentido de la descripción están totalmente modificados. En determinados casos, los oligonucleótidos antisentido de la descripción están modificados de manera uniforme. En determinados casos, los oligonucleótidos antisentido de la descripción están modificados de manera uniforme y cada nucleósido comprende un resto azúcar 2'-MOE. En determinados casos, los oligonucleótidos antisentido de la descripción están modificados de manera uniforme y cada nucleósido comprende un resto azúcar 2'-OMe. En determinados casos, los oligonucleótidos antisentido de la descripción están modificados de manera uniforme y cada nucleósido comprende un resto azúcar morfolino.

En determinados casos, los oligonucleótidos de la descripción comprenden un motivo alterno. En determinados tales casos, los tipos de modificación alterna se seleccionan de entre 2'-MOE, 2'-F, un nucleósido bicíclico modificado con azúcar, y ADN (2'-desoxi no modificado). En determinadas tales casos, cada región alterna comprende un único nucleósido.

En determinados casos, los oligonucleótidos de la descripción comprenden uno o más bloques de nucleósidos de un primer tipo y uno o más bloques de nucleósidos de un segundo tipo.

En determinados casos, una o más regiones alternas en un motivo alterno incluyen más de un único nucleósido de un tipo. Por ejemplo, los compuestos oligoméricos de la presente descripción pueden incluir una o más regiones de cualquiera de los siguientes motivos de nucleósidos:

Nu¹ Nu¹ Nu² Nu² Nu¹ Nu¹;

Nu¹ Nu² Nu² Nu¹ Nu² Nu² ;

Nu¹ Nu¹ Nu² Nu¹ Nu¹ Nu² ;

Nu¹ Nu² Nu² Nu¹ Nu² Nu¹ Nu¹ Nu² Nu² ;

Nu¹ Nu² Nu¹ Nu² Nu¹ Nu¹;

Nu¹ Nu¹ Nu² Nu¹ Nu² Nu¹ Nu² ;

Nu¹ Nu² Nu¹ Nu² Nu¹ Nu¹;

Nu¹ Nu² Nu² Nu¹ Nu¹ Nu² Nu² Nu¹ Nu² Nu¹ Nu² Nu¹ Nu¹;

Nu² Nu¹ Nu² Nu² Nu¹ Nu¹ Nu² Nu² Nu¹ Nu² Nu¹Nu² Nu¹ Nu¹; o

Nu1 Nu2Nu1 Nu2 Nu2 Nu1 Nu1 Nu2 Nu2 Nu1 Nu2 Nu1 Nu2 Nu1 Nu1;

en donde Nu¹ es un nucleósido de un primer tipo y Nu² es un nucleósido de un segundo tipo. En determinados casos, uno de Nu¹ y Nu² es un nucleósido 2'-MOE y el otro de Nu¹ y Nu² se selecciona de: un nucleósido modificado con 2'-OMe, BNA, y un nucleósido de ADN o ARN no modificado.

2. Compuestos oligoméricos

En determinados casos, la presente descripción proporciona compuestos oligoméricos. En determinados casos, los compuestos oligoméricos están comprendidos solo de un oligonucleótido. En determinados casos, un compuesto oligomérico comprende un oligonucleótido y uno o más grupos terminales y/o conjugados. Tales grupos terminales y/o conjugados pueden añadirse a oligonucleótidos que tengan cualquiera de los motivos químicos mencionados anteriormente. Por lo tanto, por ejemplo, un compuesto oligomérico que comprende un oligonucleótido con una región de nucleósidos alternos puede comprender un grupo terminal.

a. Grupos conjugados determinados

En determinados casos, los oligonucleótidos de la presente invención son modificados mediante el acoplamiento de uno o más grupos conjugados. En general, los grupos conjugados modifican una o más propiedades del compuesto oligomérico acoplado, que incluyen, pero no se limitan a, farmacodinámica, farmacocinética, estabilidad, unión, absorción, distribución celular, absorción celular, carga y aclaramiento. Los grupos conjugados se utilizan de manera rutinaria en la técnica química y se unen directamente o mediante un resto de unión conjugado opcional o grupo de unión conjugado a un compuesto principal, tal como un compuesto oligomérico, tal como un oligonucleótido. Los grupos conjugados incluyen, pero no se limitan a, intercaladores, moléculas indicadoras, poliaminas, poliamidas, polietilenglicoles, tioéteres, poliéteres, colesteroles, tiocolesteroles, restos de ácido cólico, folato, lípidos, fosfolípidos, biotina, fenazina, fenantridina, antraquinona, adamantano, acridina, fluoresceínas, rodaminas, cumarinas y tintes. Determinados grupos conjugados se han descrito previamente, por ejemplo: resto de colesterol (Letsinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1989, 86, 6553-6556), ácido cólico (Manoharan et al. ., Bioorg. Med. Chem. Let., 1994, 4, 1053­ 1060), un tioéter, p. ej., hexil-S-tritiltiol (Manoharan et al., Ann. N.Y. Acad. Sci., 1992, 660, 306-309; Manoharan et al., Bioorg. Med. Chem. Let., 1993, 3, 2765-2770), un tiocolesterol (Oberhauser et al., Nucl. Acids Res., 1992, 20, 533-538), una cadena alifática, p. ej., residuos do-decan-diol o undecilo (Saison-Behmoaras et al., EMBO J., 1991, 10, 1111-1118; Kabanov et al., FEBS Lett., 1990, 259, 327-330; Svinarchuk et al., Biochimie, 1993, 75, 49-54), un fosfolípido, p. ej., di-hexadecil-rac-glicerol o trietil-amonio 1,2-di-O-hexadecil-rac-glicero-3-H-fosfonato (Manoharan et al., Tetrahedron Lett., 1995, 36, 3651-3654;Shea et al., Nucl. Acids Res., 1990, 18, 3777-3783), una poliamina o una cadena de polietilenglicol (Manoharan et al., Nucleosides & Nucleotides, 1995, 14, 969-973), o ácido acético de adamantano (Manoharan et al., Tetrahedron Lett., 1995, 36, 3651-3654), un resto palmitilo (Mishra et al. , Biochim. Biophys. Acta, 1995, 1264, 229-237), o un resto octadecilamina o hexilamino-carbonil-oxicolesterol (Crooke et al., J. Pharmacol. Exp. Ther., 1996, 277, 923-937).

En determinados casos, un grupo conjugado comprende una sustancia farmacológica activa, por ejemplo, aspirina, warfarina, fenilbutazona, ibuprofeno, suprofeno, fenbufeno, cetoprofeno, (S)-(+)-pranoprofeno, caprofeno, dansilsarcosina, ácido 2,3,5-triyodobenzoico, ácido flufenámico, ácido folínico, una benzotiadiazida, clorotiazida, una diazepina, indometicina, un barbiturato, una cefalosporina, un fármaco sulfa, un antidiabético, un antibacteriano o un antibiótico. Los conjugados oligonucleótido-fármaco y su preparación se describen en la solicitud de patente de EE. UU. 09/334,130.

Las patentes representativas de los Estados Unidos que enseñan la preparación de dichos conjugados de oligonucleótidos comprenden, pero no se limitan a, las patentes de ^{E e .} UU.: 4,828,979; 4,948,882; 5,218,105; 5,525,465; 5,541,313; 5,545,730; 5,552,538; 5,578,717, 5,580,731; 5,580,7 31; 5,591,584; 5,109,124; 5,118,802; 5,138,045; 5,414,077; 5,486,603; 5,512,439; 5,578,718; 5,608,046; 4,58 7,044; 4,605,735; 4,667,025; 4,762,779; 4,789,737; 4,824,941; 4,835,263; 4,876,335; 4,904,582; 4,958,013; 5 ,082,830; 5,112,963; 5,214,136; 5,082,830; 5,112,963; 5,214,136; 5,245,022; 5,254,469; 5,258,506; 5,262,53 6; 5,272,250; 5,292,873; 5,317,098; 5,371,241, 5,391,723; 5,416,203, 5,451,463; 5,510,475; 5,512,667; 5,514 ,785; 5,565,552; 5,567,810; 5,574,142; 5,585,481; 5,587,371; 5,595,726; 5,597,696; 5,599,923; 5,599,928 y 5,688,941.

Los grupos conjugados pueden estar acoplados a cualquiera o a ambos extremos de un oligonucleótido (grupos conjugados terminales) y/o a cualquier posición interna.

b. Grupos terminales

En determinados casos, los compuestos oligoméricos comprenden grupos terminales en uno o ambos extremos. En determinados casos, un grupo terminal puede comprender cualquier grupo conjugado mencionado anteriormente. En determinados casos, los grupos terminales pueden comprender nucleósidos adicionales y/o nucleósidos abásicos invertidos. En determinados casos, un grupo terminal es un grupo estabilizante.

En determinados casos, los compuestos oligoméricos comprenden uno o más grupos estabilizantes terminales que potencian las propiedades tales como, por ejemplo, estabilidad de nucleasa. En los grupos estabilizadores se incluyen estructuras de casquete. Los términos "estructura de casquete" o "resto de casquete terminal", como se usan en este documento, se refieren a modificaciones químicas, que se pueden unir a uno o ambos de los extremos de un compuesto oligomérico. Determinadas tales modificaciones terminales protegen a los compuestos oligoméricos que tienen restos de ácido nucleico terminal de la degradación de exonucleasas, y pueden ayudar en la administración y/o la localización dentro de una célula. El casquete puede estar presente en el extremo 5' (casquete 5') o en el extremo 3' (casquete 3') o puede estar presente en ambos extremos. (para más detalles ver Wincott et al ., publicación internacional PCT No. WO 97/26270; Beaucage y Tyer, 1993, Tetrahedron 49, 1925; publicación de solicitud de patente de EE. UU. Nos. US 2005/0020525; y ^w O 03/004602. En determinados casos, se añaden uno o más nucleósidos adicionales a uno o ambos extremos terminales de un oligonucleótido de un compuesto oligomérico. Tales nucleósidos terminales adicionales se refieren en este documento a nucleósidos de grupo terminal. En un compuesto de cadena doble, dichos nucleósidos de grupo terminal son excedentes terminales (3' y/o 5'). En la configuración de compuestos antisentido de cadena doble, dichos nucleósidos de grupo terminal pueden ser complementarios o no con un ácido nucleico diana. En determinados casos, el grupo terminal es un grupo terminal distinto de nucleósido. Dichos grupos no terminales pueden ser cualquier grupo terminal distinto de un nucleósido.

c. Motivos de compuestos oligoméricos

En determinados casos, los compuestos oligoméricos de la presente descripción comprenden un motivo: T ¹-(Nu1)n1-(Nu2)n2-(Nu1)n3-(Nu2)n4-(Nu-i)n5-T2 , en donde:

Nu¹, es un nucleósido de un primer tipo;

Nu² , es un nucleósido de un segundo tipo;

cada uno de n1 y n5 es, independientemente de 0 a 3;

la suma de n2 más n4 está entre 10 y 25;

n3 es de 0 y 5; y

cada T¹ y T² es, independientemente, H, un grupo protector de hidroxilo, un grupo conjugado opcionalmente unido o un grupo de casquete.

En algunos de estos casos, la suma de n2 y n4 es 13 o 14; n1 es 2; n3 es 2 o 3; y n5 es 2. En determinados tales casos, los compuestos oligoméricos de la presente descripción comprenden un motivo seleccionado de la Tabla A.

La Tabla A pretende ilustrar, pero no limitar, la presente descripción. Los compuestos oligoméricos representados en la Tabla A comprenden cada uno 20 nucleósidos. Los compuestos oligoméricos que comprenden más o menos nucleósidos pueden diseñarse fácilmente seleccionando diferentes números de nucleósidos para uno o más de n1-n5. En determinados casos, Nu¹ y Nu² se seleccionan cada uno de entre: 2'-MOE, 2'-OMe, ADN y un nucleósido bicíclico.

3. Antisentido

En determinados casos, los compuestos oligoméricos de la presente descripción son compuestos antisentido. Por consiguiente, en tales casos, los compuestos oligoméricos se hibridan con un ácido nucleico diana, lo que genera actividad antisentido.

a. Hibridación

En determinados casos, la invención proporciona compuestos antisentido que se hibridan específicamente con un ácido nucleico diana donde hay un grado suficiente de complementariedad para evitar la unión no específica del compuesto antisentido a las secuencias de ácido nucleico no diana bajo condiciones en las que se desee la unión específica, es decir, en condiciones fisiológicas en el caso de tratamiento terapéutico o ensayos in vivo, y bajo condiciones en las que se realizan ensayos en el caso de ensayos in vitro.

Por lo tanto, “condiciones rigurosas de hibridación” o “condiciones rigurosas” se refiere a las condiciones bajo las cuales un compuesto antisentido se hibrida con una secuencia diana, pero con una cantidad mínima de otras secuencias. Las condiciones rigurosas dependen de la secuencia y serán distintas en distintas circunstancias, y las "condiciones rigurosas" bajo las que se hibridarán los oligonucleótidos antisentido con una secuencia diana se determinan según la naturaleza y composición de los oligonucleótidos antisentido y los ensayos en los que se estén investigando.

En la técnica se entiende que la incorporación de modificaciones de afinidad de nucleótidos puede permitir una mayor cantidad de mal apareamientos en comparación con un compuesto no modificado. De manera similar, determinadas secuencias de nucleobases pueden ser más tolerantes a los mal apareamientos que otras secuencias de nucleobases. Un experto en la técnica puede determinar una cantidad adecuada de mal apareamientos entre oligonucleótidos, o entre un oligonucleótido antisentido y un ácido nucleico diana, tal como determinar la temperatura de fusión (Tm). Tm o ATm pueden calcularse mediante técnicas que son familiares para un experto en la materia. Por ejemplo, las técnicas descritas en Freier et al. (Nucleic Acids Research, 1997, 25, 22: 4429-4443) permiten a un experto en la técnica evaluar las modificaciones de nucleótidos por su capacidad para aumentar la temperatura de fusión de un dúplex ARN:ADN.

b. Procesamiento de pre-ARNm

En determinados casos, los compuestos antisentido proporcionados en este documento son complementarios de un pre-ARNm. En determinados casos, tales compuestos antisentido modifican el empalme del pre-ARNm. En determinados tales casos, se modifica la relación de una variante de un ARNm maduro que corresponde a un pre-ARNm diana con respecto a otra variante de dicho ARNm maduro. En determinados tales casos, se modifica la relación de una variante de una proteína expresada a partir del pre-ARNm diana con respecto a otra variante de la proteína. Determinados compuestos oligoméricos y secuencias de nucleobases que se pueden utilizar para modificar el empalme de un pre-ARNm se pueden encontrar, por ejemplo, en US 6,210,892; US 5,627,274; US 5,665,593; 5,916,808; US 5,976,879; US2006/0172962; US2007/002390; US2005/0074801; US2007/0105807; US2005/0054836; WO 2007/090073; WO2007/047913, Hua et al., PLoS Biol 5(4):e73; Vickers et al., J. Immunol. 2006 Mar 15; 176(6):3652-61; y Hua et al., American J. of Human Genetics (April 2008) 82, 1-15. En determinados casos, las secuencias antisentido que modifican el empalme se modifican de acuerdo con los motivos de la presente invención.

Antisentido es un medio eficaz para modular la expresión de uno o más productos génicos específicos y es útil de manera específica en una cantidad de aplicaciones terapéuticas, de diagnóstico e investigación. En este documento se describen compuestos antisentido útiles para modular la expresión génica mediante mecanismos de acción antisentido, que incluyen mecanismos antisentido basados en la ocupación diana. En un aspecto, los compuestos antisentido descritos en este documento modulan el empalme de un gen diana. Tal modulación incluye promover o inhibir la inclusión de exones. En este documento también se describen compuestos antisentido dirigidos a elementos reguladores de empalme cis presentes en moléculas pre-ARNm, incluyendo los potenciadores de empalme exónicos, silenciadores de empalme exónicos, potenciadores de empalme intrónicos y silenciadores de empalme intrónicos. Se cree que la interrupción de elementos reguladores de empalme cis modifica la selección de sitios de empalme, lo que puede conllevar una modificación de la composición de productos de empalme.

El procesamiento de pre-ARNm eucariotas es un proceso complejo que requiere varias señales y factores de proteína para lograr el empalme de ARNm adecuado. La definición de exones mediante el espliceosoma requiere más que las señales de empalme canónicas que definen los límites de intrones-exones. Una de tales señales adicionales es proporcionada por las secuencias de potenciadores y silenciadores reguladores que actúan en cis. Se han identificado potenciadores de empalme exónicos (ESE), silenciadores de empalme exónicos (ESS), potenciadores de empalme intrónicos (ISE) y silenciadores de empalme intrónicos (ISS) que reprimen o potencian el uso de sitios donantes de empalme o sitios aceptores de empalme, dependiendo de su sitio y modo de acción (Yeo et al. 2004, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 101(44):15700-15705). La unión de proteínas específicas (factores trans) a estas secuencias reguladoras dirige el proceso de empalme, lo que promueve o inhibe el uso de sitios de empalme particulares y, por lo tanto, modula la relación de productos de empalme (Scamborovaet al. 2004, Mol. Cell. Biol. 24(5):1855-1869; Hovhannisyan and Carstens, 2005, Mol. Cell. Biol. 25(1 ):250-263; Minovitsky et al. 2005, Nucleic Acids Res. 33(2):714-724).

4. Composiciones farmacéuticas

En determinados casos, la presente invención proporciona composiciones farmacéuticas que comprenden uno o más compuestos antisentido. En determinados casos, tal composición farmacéutica comprende una solución salina estéril y uno o más compuestos antisentido. En determinados casos, tal composición farmacéutica consiste en una solución salina estéril y uno o más compuestos antisentido.

En determinadas realizaciones, los compuestos antisentido pueden mezclarse con sustancias activas farmacéuticamente aceptable y/o inerte para la preparación de formulaciones o composiciones farmacéuticas. Las composiciones y los métodos para la formulación de composiciones farmacéuticas dependen de diversos criterios, que incluyen, pero no se limitan a, la vía de administración, el grado de la enfermedad o la dosis que se desea administrar.

En determinadas realizaciones, los compuestos antisentido pueden utilizarse en composiciones farmacéuticas combinando tales compuestos oligoméricos con un diluyente o vehículo farmacéuticamente aceptable adecuado. Un diluyente farmacéuticamente aceptable incluye solución salina tamponada con fosfato (PBS). PBS es un diluyente adecuado para su uso en composiciones que se suministran parenteralmente. Por consiguiente, en determinados casos, en los métodos descritos en la presente se emplea una composición farmacéutica que comprende un compuesto antisentido y un diluyente farmacéuticamente aceptable. En determinadas realizaciones, el diluyente farmacéuticamente aceptable es PBS.

Las composiciones farmacéuticas que comprenden compuestos antisentido abarcan cualquier sal, ésteres o sales de tales ésteres farmacéuticamente aceptables. En determinadas realizaciones, las composiciones farmacéuticas que comprenden compuestos antisentido comprenden uno o más oligonucleótidos que, después de la administración a un animal, incluyendo un humano, pueda proporcionar (directa o indirectamente) el metabolito biológicamente activo o un residuo de este. Por consiguiente, por ejemplo, la descripción también se dirige a sales farmacéuticamente aceptables de compuestos antisentido, profármacos, sales farmacéuticamente aceptables de tales profármacos y otros bioequivalentes. Las sales farmacéuticamente aceptables adecuadas incluyen, pero no se limitan a, sales de sodio y potasio.

Un profármaco puede incluir la incorporación de nucleósidos adicionales en uno o ambos extremos de un compuesto oligomérico que experimentan escisión de nucleasas endógenas dentro del cuerpo, para formar el compuesto oligomérico antisentido activo.

Los vectores basados en lípidos se han utilizado en terapias de ácidos nucleicos en una variedad de métodos. Por ejemplo, en un método, el ácido nucleico se introduce en liposomas o lipoplejos preformados elaborados a partir de mezclas de lípidos catiónicos y lípidos neutros. En otro método, los complejos de ADN con lípidos mono- o policatiónicos se forman sin la presencia de un lípido neutro.

Determinadas preparaciones se describen en Akinc et al., Nature Biotechnology 26, 561 - 569 (01 Mayo de 2008).

5. Administración a un sujeto

En determinados casos, se le administran composiciones farmacéuticas que comprenden uno o más compuestos antisentido al sujeto. En determinados casos, tales composiciones farmacéuticas se administran mediante inyección. En determinados casos, tales composiciones farmacéuticas se administran mediante infusión.

En determinados casos, las composiciones farmacéuticas se administran mediante inyección o infusión en el CSF. En determinados tales casos, las composiciones farmacéuticas se administran mediante inyección o infusión directa en la médula espinal. En determinados casos, las composiciones farmacéuticas se administran mediante inyección o infusión en el cerebro. En determinados casos, las composiciones farmacéuticas se administran mediante inyección o infusión intratecal en lugar de en el propio tejido de la médula espinal. Sin limitarse a la teoría, en determinados casos, el compuesto antisentido se libera hacia el CSF circundante y puede penetrar el parénquima de la médula espinal. Una ventaja adicional de la administración intratecal es que la vía intratecal imita la administración por punción lumbar (es decir, punción raquídea) que ya se usa habitualmente en humanos.

En determinados casos, las composiciones farmacéuticas se administran mediante inyección o infusión intracerebroventricular (ICV). La administración intracerebroventricular, o intraventricular, de una composición farmacéutica que comprende uno o más compuestos antisentido se puede realizar en cualesquiera uno o más de los ventrículos del cerebro, que se llenan con fluido cerebroespinal (CSF). El CSF es un líquido transparente que llena los ventrículos, está presente en el espacio subaracnoideo, y rodea el cerebro y la médula espinal. El CSF es producido por los plexos coroideos y mediante la supuración o transmisión de líquido del tejido mediante el cerebro hacia los ventrículos. El plexo coroideo es una estructura que reviste la parte inferior del ventrículo lateral y la parte superior del tercer y cuarto ventrículo. Determinados estudios han indicado que estas estructuras son capaces de producir 400-600 ccs de fluido por día, cantidad que permite llenar los espacios del sistema nervioso central cuatro veces al día. En humanos adultos, se ha calculado que el volumen de este fluido es de 125 a 150 ml (4-5 oz). El CSF se forma, circula y absorbe continuamente. Determinados estudios han indicado que se pueden producir aproximadamente 430 a 450 ml (casi 2 tazas) de CSF por día. Determinados cálculos estiman que la producción es igual a aproximadamente 0,35 ml por minuto en adultos y 0,15 por minuto en niños. Los plexos coroideos de los ventrículos laterales producen la mayor parte del CSF. Fluye a través de foramina de Monro hacia el tercer ventrículo, donde se añade a la producción del tercer ventrículo y continúa hacia el acueducto de Silvio hacia el cuarto ventrículo. El cuarto ventrículo añade más CSF; después, el líquido se desplaza hacia el espacio subaracnoideo a través de foramina de Magendie y Luschka. Después, circula a través de la base del cerebro, aproximadamente alrededor de la médula espinal y hacia los hemisferios cerebrales. El CSF se vacía hacia la sangre mediante las vellosidades aracnoideas y los senos vasculares intracraneales.

En determinados casos, tales composiciones farmacéuticas se administran sistémicamente. En determinados casos, las composiciones farmacéuticas se administran por vía subcutánea. En determinados casos, las composiciones farmacéuticas se administran por vía intravenosa. En determinados casos, las composiciones farmacéuticas se administran mediante inyección intramuscular.

En determinados casos, las composiciones farmacéuticas se administran directamente en el CSF (p. ej., inyección y/o infusión IT y/o ICV) y sistémicamente.

En determinados casos, un compuesto antisentido administrado sistémicamente ingresa en las neuronas. En determinados casos, los compuestos antisentido administrados sistémicamente pueden penetrar la barrera hematoencefálica, particularmente en sujetos jóvenes donde la barrera hematoencefálica no está completamente formada (p. ej., en sujetos en el útero y/o en sujetos recién nacidos). En determinados casos, cierta cantidad de compuesto antisentido administrada sistémicamente puede ser absorbida por las células nerviosas, incluso en sujetos en los cuales la barrera hematoencefálica está totalmente formada. Por ejemplo, los compuestos antisentido pueden ingresar en una neurona en o cerca de la unión neuromuscular (absorción retrógrada). En determinados casos, tal absorción retrógrada genera actividad antisentido dentro de la neurona, que incluye, pero no se limitan a, una neurona motora, y proporciona un beneficio terapéutico debido a la actividad antisentido dentro de la neurona.

En determinados casos, la administración sistémica proporciona un beneficio terapéutico debido a la actividad antisentido que tiene lugar en las células y/o tejidos distintos de las neuronas. Si bien las pruebas sugieren que es necesaria la SMN funcional dentro de las neuronas para el funcionamiento normal de las neuronas, la consecuencia de SMN funcional reducida en otras células y tejidos no está bien caracterizada. En determinados casos, la actividad antisentido en células no neuronales produce la restauración de la función de SMN en dichas células no neuronales, lo que, a su vez, genera un beneficio terapéutico.

En determinados casos, la mejora de la función de SMN en células no neuronales proporciona una mejora de la función celular neuronal, ya sea que mejore o no la función de SMN dentro de las neuronas. Por ejemplo, en determinados casos, la administración sistémica de las composiciones farmacéuticas de la presente descripción genera actividad antisentido en células musculares. Tal actividad antisentido en las células musculares puede proporcionar un beneficio para las neuronas motoras asociadas con tal célula motora o con las neuronas en general. En dichas modalidades, la célula muscular con función de SMN restaurada puede proporcionar un factor que mejora la viabilidad y/o función neuronal. En determinados casos, tal actividad antisentido es independiente del beneficio de una actividad antisentido que tiene lugar a partir de los compuestos antisentido dentro de las neuronas. En determinados casos, la administración sistémica de las composiciones farmacéuticas de la presente invención genera actividad antisentido en otras células no neuronales, incluyendo las células que no se encuentran en asociación inmediata con las neuronas. Tal actividad antisentido en las células no neuronales puede mejorar la función de las neuronas. Por ejemplo, la actividad antisentido en una célula no neuronal (p. ej., célula de hígado) puede hacer que la célula produzca un factor que mejore la función de las neuronas. Nota: dado que la expresión "actividad antisentido" incluye actividades directas e indirectas, un beneficio de la función neuronal es una "actividad antisentido" incluso si ningún compuesto antisentido ingresa en la neurona.

En determinados casos, la administración sistémica de una composición farmacéutica genera un beneficio terapéutico independiente de las actividades antisentido directas o indirectas en las neuronas. Típicamente, en el establecimiento del SMA, disminuye la función neuronal, lo que genera síntomas considerables. La disminución de la actividad de SMN en otras células puede generar síntomas adicionales. Determinados tales síntomas pueden estar enmascarados por la gravedad relativa de los síntomas debido a la disminución de la función neuronal. En determinados casos, la administración sistémica produce una restauración o mejora de la función de SMN en las células no neuronales. En determinadas tales casos, tal restauración o mejora de la función de SMN en las células no neuronales presenta un beneficio terapéutico. Por ejemplo, en determinados casos, los sujetos que padecen SMA presentan un menor crecimiento. Tal crecimiento reducido puede no ser el resultado de la disminución de la función en las células neuronales. De hecho, el crecimiento reducido puede estar relacionado con el deterioro de la función de las células en otro órgano, tal como la glándula pituitaria, y/o puede ser el resultado de deficiencias en la SMN a través de las células del cuerpo. En tales casos, la administración sistémica puede generar una mayor actividad de SMN en las células pituitarias y/u otras células, lo que genera un mayor crecimiento. En determinados casos, la administración al CSF restituye suficiente función neuronal para permitir que un sujeto viva más tiempo, sin embargo, aparecen uno o más síntomas previamente desconocidos debido a que los sujetos comúnmente mueren antes de la aparición de dichos síntomas, dado que el sujeto vive más tiempo. Determinados síntomas emergentes de este tipo pueden ser letales. En determinados casos, los síntomas emergentes se tratan mediante administración sistémica. Independientemente del mecanismo, en determinados casos, varios síntomas de SMA, que incluyen, pero no se limitan a, los síntomas previamente enmascarados por síntomas más graves asociados con el deterioro de la función neuronal se pueden tratar mediante administración sistémica

En determinados casos, la administración sistémica de las composiciones farmacéuticas de la presente invención genera un aumento de la actividad de SMN en las células musculares. En determinados casos, tal mejora de la actividad de SMN en las células musculares proporciona un beneficio terapéutico. Se ha registrado que la mejora de la actividad de SMN en el músculo solamente es insuficiente para proporcionar un beneficio terapéutico (p. ej., Gravrilina, et al., Hum Mol Genet 2008 17(8): 1063-1075). En determinados casos, la presente invención proporciona métodos que generan una mejora de la función de SMN en el músculo y proporcionan un beneficio terapéutico. En determinados casos, el beneficio terapéutico puede atribuirse a una mejora de la función de SMN en otras células (solas o junto con las células musculares). En determinados casos, la mejora de la función de SMN en el músculo solamente puede proporcionar un beneficio.

En determinados casos, la administración sistémica genera una mayor supervivencia.

6. Atrofia muscular espinal (SMA)

El SMA es un trastorno genético caracterizado por una degeneración de las neuronas motoras espinales. El SMA es provocado por la pérdida homocigota de ambas copias funcionales del gen SMN1. Sin embargo, el gen SMN2 tiene potencial para codificar la misma proteína que SMN1 y, por lo tanto, superar el defecto genético de pacientes con SMA. SMN2 contiene una mutación traduccionalmente silenciosa (C ^T ) en la posición 6 del exón 7, que genera inclusión ineficaz del exón 7 en transcripciones de SMN2. Por lo tanto, la forma predominante de SMN2, que carece del exón 7, es inestable e inactiva. Por lo tanto, los compuestos terapéuticos que pueden modular el empalme de SMN2, tal que aumente el porcentaje de transcripciones de SMN2 que contienen el exón 7, serían útiles para el tratamiento de SMA.

La presente invención proporciona compuestos antisentido complementarios para un pre-ARNm que codifica SMN2, como se establece en las reivindicaciones. En determinadas tales realizaciones, el compuesto antisentido altera el empalme de SMN2. Determinadas secuencias y regiones útiles para alterar el empalme de SMN2 pueden encontrarse en el documento PCT/US06/024469. Los compuestos oligoméricos que tienen algún motivo descrito en este documento puede tener una secuencia de nucleobases complementaria del intrón 7 de SMN2. Determinadas tales secuencias de nucleobases se ejemplifican en la tabla no taxativa que figura a continuación. De acuerdo con la invención, el oligonucleótido antisentido consiste en la secuencia de ácido nucleico de SEQ ID NO: 7.

Los compuestos antisentido de la presente invención se pueden utilizar para modular la expresión de SMN2 en un sujeto, tal como un humano. En determinados casos, el sujeto padece atrofia muscular espinal. En determinados tales sujetos, el gen SMN1 está ausente o, de otro modo, no puede producir una cantidad suficiente de proteína SMN funcional. En determinados casos, los compuestos antisentido de la presente invención modulan de manera eficazmente el empalme de SMN2, lo que genera un aumento de la inclusión de exón 7 en SMN2 ARNm y, en última instancia, en la proteína SMN2 que incluye los aminoácidos que corresponden al exón 7. Tal proteína SMN2 alternativa se asemeja a la proteína SMN de tipo salvaje. Los compuestos antisentido de la presente invención que modulan de manera eficaz la expresión de SMN2 ARNm o los productos proteicos de expresión se consideran compuestos antisentido activos.

La modulación de la expresión de SMN2 se puede medir en un fluido corporal, que puede contener o no células; tejido; u órgano del animal. Los métodos de obtención de muestras para análisis, tales como fluidos corporales (p. ej., esputo, suero, CSF), tejidos (p. ej., biopsia) u órganos, y los métodos de preparación de las muestras para permitir el análisis son bien conocidos por los expertos en la técnica. Los métodos para el análisis de los niveles de ARN y proteína se discuten anteriormente y son bien conocidos por los expertos en la técnica. Los efectos del tratamiento pueden evaluarse midiendo biomarcadores asociados con la expresión del gen diana en los fluidos, tejidos u órganos antes mencionados, recolectados de un animal en contacto con uno o más compuestos de la descripción, mediante métodos clínicos de rutina conocidos en la técnica.

También se contemplan los métodos mediante los cuales los fluidos corporales, órganos o tejidos entran en contacto con una cantidad eficaz de uno o más compuestos o composiciones antisentido de la invención. Los fluidos corporales, órganos o tejidos pueden entrar en contacto con uno o más de los compuestos de la invención, lo que genera la modulación de la expresión de SMN2 en las células de los fluidos corporales, órganos o tejidos. Se puede determinar una cantidad eficaz mediante el control del efecto modulador del o los compuestos o composiciones antisentido en los ácidos nucleicos diana o sus productos mediante los métodos habituales para el experto en la técnica.

La invención proporciona un compuesto antisentido como se describe en la presente, para su uso en cualquiera de los métodos que se describen en este documento. Por ejemplo, la invención proporciona un compuesto antisentido que comprende un oligonucleótido antisentido complementario de un ácido nucleico que codifica SMN2 humano, para su uso en el tratamiento de una enfermedad o afección asociada con la proteína de neuronas motoras de supervivencia (SMN), tal como atrofia muscular espinal (SMA). Como ejemplo adicional, la invención proporciona un compuesto antisentido que comprende un oligonucleótido antisentido complementario de un ácido nucleico que codifica SMN2 humano, para su uso en el tratamiento de una enfermedad o afección asociada con la proteína de neuronas motoras de supervivencia (SMN) mediante la administración del compuesto antisentido directamente en el sistema nervioso central (CNS) o CSF.

La invención también proporciona el uso de un compuesto antisentido que se describe en este documento en la fabricación de un medicamento para uso en cualquiera de los métodos que se describen en este documento. Por ejemplo, la descripción proporciona el uso de un compuesto antisentido que comprende un oligonucleótido antisentido complementario de un ácido nucleico que codifica SMN2 humano en la elaboración de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad o afección asociada con la proteína de neuronas motoras de supervivencia (SMN), tal como atrofia muscular espinal (SMA). Como ejemplo adicional, la invención proporciona el uso de un compuesto antisentido que comprende un oligonucleótido antisentido complementario de un ácido nucleico que codifica SMN2 humano en la elaboración de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad o afección asociada con la proteína de neuronas motoras de supervivencia (SMN) mediante la administración del medicamento directamente en el sistema nervioso central (CNS) o CSF.

En determinados casos, los compuestos oligoméricos que tienen algún motivo descrito en este documento ente tienen una secuencia de nucleobases complementaria del exón 7 de SMN2.

En determinados casos, los compuestos oligoméricos que tienen algún motivo descrito en este documento tienen una secuencia de nucleobases complementaria del intrón 6 de SMN2.

En determinados casos, un compuesto antisentido comprende un oligonucleótido antisentido con una secuencia de nucleobases que comprende al menos 10 nucleobases de la secuencia: TCACTTTCATAATGCTGG (SEQ ID NO: 1). En determinados casos, un oligonucleótido antisentido tiene una secuencia de nucleobases que comprende al menos 11 nucleobases de tal secuencia. En determinados casos, un oligonucleótido antisentido tiene una secuencia de nucleobases que comprende al menos 12 nucleobases de tal secuencia. En determinados casos, un oligonucleótido antisentido tiene una secuencia de nucleobases que comprende al menos 13 nucleobases de tal secuencia. En determinados casos, un oligonucleótido antisentido tiene una secuencia de nucleobases que comprende al menos 14 nucleobases de tal secuencia. En determinados casos, un oligonucleótido antisentido tiene una secuencia de nucleobases que comprende al menos 15 nucleobases de tal secuencia. En determinados casos, un oligonucleótido antisentido tiene una secuencia de nucleobases que comprende al menos 16 nucleobases de tal secuencia. En determinados casos, un oligonucleótido antisentido tiene una secuencia de nucleobases que comprende al menos 17 nucleobases de tal secuencia. En determinados casos, un oligonucleótido antisentido tiene una secuencia de nucleobases que comprende las nucleobases de tal secuencia. En determinados casos, un oligonucleótido antisentido tiene una secuencia de nucleobases que consiste en las nucleobases de tal secuencia. En determinados casos, un oligonucleótido antisentido consiste en 10-18 nucleósidos enlazados y tiene una secuencia de nucleobases 100% idéntica a una parte de igual longitud de la secuencia: TCACTTTCATAATGCTGG (SEQ ID NO: 1).

En determinados casos, un compuesto comprende un oligonucleótido modificado que tiene una secuencia de nucleobases que consiste en SEQ ID NO: 1. En determinados casos, un compuesto comprende un oligonucleótido modificado que tiene una secuencia de nucleobases que consiste en SEQ ID NO: 2. En determinados casos, un compuesto comprende un oligonucleótido modificado que tiene una secuencia de nucleobases que consiste en SEQ ID NO: 3. En determinados casos, un compuesto comprende un oligonucleótido modificado que tiene una secuencia de nucleobases que consiste en SEQ ID NO: 4. En determinados casos, un compuesto comprende un oligonucleótido modificado que tiene una secuencia de nucleobases que consiste en SEQ ID NO: 5. En determinados casos, un compuesto comprende un oligonucleótido modificado que tiene una secuencia de nucleobases que consiste en SEQ ID NO: 6. Un compuesto que comprende un oligonucleótido modificado que tiene una nucleobase la secuencia que consiste en SEQ ID NO: 7 está de acuerdo con la invención. En determinados casos, un compuesto comprende un oligonucleótido modificado que tiene una secuencia de nucleobases que consiste en SEQ ID NO: 8. En determinados casos, un compuesto comprende un oligonucleótido modificado que tiene una secuencia de nucleobases que consiste en SEQ ID NO: 9. En determinados casos, un compuesto comprende un oligonucleótido modificado que tiene una secuencia de bases nitrogenadas que consiste en SEQ ID NO: 10. En determinados casos, un compuesto comprende un oligonucleótido modificado que tiene una secuencia de nucleobase que consiste en SEQ ID NO: 11. En determinados casos, un compuesto comprende un oligonucleótido modificado que tiene una secuencia de nucleobase que consiste en SEQ ID NO: 12. En determinados casos, un compuesto comprende un oligonucleótido modificado que tiene una secuencia de nucleobase que consiste en SEQ ID NO: 13. En determinados casos, un compuesto comprende un oligonucleótido modificado que tiene una secuencia de nucleobase que consiste en SEQ ID NO: 14. En determinados casos, un compuesto comprende un oligonucleótido modificado que tiene una secuencia de nucleobase que consiste en SEQ ID NO: 15. En determinados casos, un compuesto comprende un oligonucleótido modificado que tiene una secuencia de nucleobase que consiste en SEQ ID NO: 16. En determinados casos, un compuesto comprende un oligonucleótido modificado que tiene una secuencia de nucleobase que consiste en SEQ ID NO: 17. En determinados casos, un compuesto comprende un oligonucleótido modificado que tiene una secuencia de nucleobase que consiste en SEQ ID NO: 18. En determinados casos, un compuesto comprende un oligonucleótido modificado que tiene una secuencia de nucleobase que consiste en SEQ ID NO: 19. En determinados casos, un compuesto comprende un oligonucleótido modificado que tiene una secuencia de nucleobase que consiste en SEQ ID NO: 20. En determinados casos, un compuesto comprende un oligonucleótido modificado que tiene una secuencia de nucleobase que consiste en SEQ ID NO: 21. En determinados casos, un compuesto comprende un oligonucleótido modificado que tiene una secuencia de nucleobase que consiste en SEQ ID NO: 22. En determinados casos, un compuesto comprende un oligonucleótido modificado que tiene una secuencia de nucleobase que consiste en SEQ ID NO: 23. En determinados casos, un compuesto comprende un oligonucleótido modificado que tiene una secuencia de nucleobase que consiste en SEQ ID NO: 24. En determinados casos, un compuesto comprende un oligonucleótido modificado que tiene una secuencia de nucleobase que consiste en SEQ ID NO: 26. En determinados casos, un compuesto comprende un oligonucleótido modificado que tiene una secuencia de nucleobase que consiste en SEQ ID NO: 27.

Isis 710553 está de acuerdo con la invención. La descripción también abarca: Un compuesto que comprende Isis 449320. Un compuesto que comprende Isis 449323. Un compuesto que comprende Isis 605918. Un compuesto que comprende Isis 605919. Un compuesto que comprende Isis 663006. Un compuesto que comprende Isis 663007. Un compuesto que comprende Isis 663008. Un compuesto que comprende Isis 663009. Un compuesto que comprende Isis 663010. Un compuesto que comprende Isis 663011. Un compuesto que comprende Isis 663012. Un compuesto que comprende Isis 663013. Un compuesto que comprende Isis 663014. Un compuesto que comprende Isis 663015. Un compuesto que comprende Isis 663016. Un compuesto que comprende Isis 663017. Un compuesto que comprende Isis 663018. Un compuesto que comprende Isis 663019. Un compuesto que comprende Isis 669541. Un compuesto que comprende Isis 710554. Un compuesto que comprende Isis 710555. Un compuesto que comprende Isis 710556. Un compuesto que comprende Isis 710557. Un compuesto que comprende Isis 710558. Un compuesto que comprende Isis 449321. Un compuesto que comprende Isis 449322. Un compuesto que comprende Isis 710543. Un compuesto que comprende Isis 710544. Un compuesto que comprende Isis 710548. Un compuesto que comprende Isis 710549. Un compuesto que comprende Isis 710550. Un compuesto que comprende Isis 710551. Un compuesto que comprende Isis 710552. Un compuesto que comprende Isis 710553. Un compuesto que comprende Isis 758133. Un compuesto que comprende Isis 758134. Un compuesto que comprende Isis 758135. Un compuesto que comprende Isis 758136. Un compuesto que comprende Isis 758137. Un compuesto que comprende Isis 758138. Un compuesto que comprende Isis 758139. Un compuesto que comprende Isis 758140. Un compuesto que comprende Isis 494323.

Un compuesto que consiste en Isis 449320. Un compuesto que consiste en Isis 449323. Un compuesto que consiste en Isis 605918. Un compuesto que consiste en Isis 605919. Un compuesto que consiste en Isis 663006. Un compuesto que consiste en Isis 663007. Un compuesto que consiste en Isis 663008. Un compuesto que consiste en Isis 663009. Un compuesto que consiste en Isis 663010. Un compuesto que consiste en Isis 663011. Un compuesto que consiste en Isis 663012. Un compuesto que consiste en Isis 663013. Un compuesto que consiste en Isis 663014. Un compuesto que consiste en Isis 663015. Un compuesto que consiste en Isis 663016. Un compuesto que consiste en Isis 663017. Un compuesto que consiste en Isis 663018. Un compuesto que consiste en Isis 663019. Un compuesto que consiste en Isis 669541. Un compuesto que consiste en Isis 710554. Un compuesto que consiste en Isis 710555. Un compuesto que consiste en Isis 710556. Un compuesto que consiste en Isis 710557. Un compuesto que consiste en Isis 710558. Un compuesto que consiste en Isis 449321. Un compuesto que consiste en Isis 449322. Un compuesto que consiste en Isis 710543. Un compuesto que consiste en Isis 710544. Un compuesto que consiste en Isis 710548. Un compuesto que consiste en Isis 710549. Un compuesto que consiste en Isis 710550. Un compuesto que consiste en Isis 710551. Un compuesto que consiste en Isis 710552. Un compuesto que consiste en Isis 710553. Un compuesto que consiste en Isis 758133. Un compuesto que consiste en Isis 758134. Un compuesto que consiste en Isis 758135. Un compuesto que consiste en Isis 758136. Un compuesto que consiste en Isis 758137. Un compuesto que consiste en Isis 758138. Un compuesto que consiste en Isis 758139. Un compuesto que consiste en Isis 758140. Un compuesto que consiste en Isis 494323.

7. Determinados temas

En determinados casos, un sujeto tiene uno o más indicadores de SMA. En determinados casos, el sujeto presenta menor actividad eléctrica de uno o más músculos. En determinados casos, el sujeto tiene un gen SMN1 mutante. En determinados casos, el gen SMN1 del sujeto está ausente o no puede producir proteína SMN funcional. En determinados casos, el sujeto es diagnosticado mediante una prueba genética. En determinados casos, el sujeto es identificado mediante biopsia muscular. En determinados casos, un sujeto no puede sentarse derecho. En determinados casos, un sujeto no puede pararse ni caminar. En determinados casos, un sujeto requiere ayuda para respirar y/o comer. En determinados casos, un sujeto es identificado por medición electrofisiológica del músculo y/o biopsia muscular.

En determinados casos, el sujeto padece SMA tipo I. En determinados casos, el sujeto padece SMA tipo II. En determinados casos, el sujeto padece SMA tipo III. En determinados casos, el sujeto es diagnosticado con SMA en el útero. En determinados casos, el sujeto es diagnosticado con SMA hasta una semana después del nacimiento. En determinados casos, el sujeto es diagnosticado con SMA hasta un mes después del nacimiento. En determinados casos, el sujeto es diagnosticado con SMA a los 3 meses de edad. En determinados casos, el sujeto es diagnosticado con SMA a los 6 meses de edad. En determinados casos, el sujeto es diagnosticado con SMA a 1 año de edad. En determinados casos, el sujeto es diagnosticado con SMA cuando tiene entre 1 y 2 años de edad. En determinados casos, el sujeto es diagnosticado con SMA cuando tiene entre 1 y 15 años de edad. En determinados casos, el sujeto es diagnosticado con SMA cuando tiene más de 15 años de edad.

En determinados casos, la primera dosis de una composición farmacéutica de acuerdo con la presente invención se administra en el útero. En determinados tales casos, la primera dosis se administra antes del desarrollo total de la barrera hematoencefálica. En determinados casos, la primera dosis se administra al sujeto en el útero sistémicamente. En determinados casos, la primera dosis se administra en el útero después de la formación de la barrera hematoencefálica. En determinados casos, la primera dosis se administra al CSF.

En determinados casos, la primera dosis de una composición farmacéutica de acuerdo con la presente invención se administra cuando el sujeto tiene menos de una semana de edad. En determinados casos, la primera dosis de una composición farmacéutica de acuerdo con la presente invención se administra cuando el sujeto tiene menos de un mes de edad. En determinados casos, la primera dosis de una composición farmacéutica de acuerdo con la presente invención se administra cuando el sujeto tiene menos de 3 meses de edad. En determinados casos, la primera dosis de una composición farmacéutica de acuerdo con la presente invención se administra cuando el sujeto tiene menos de 6 meses de edad. En determinados casos, la primera dosis de una composición farmacéutica de acuerdo con la presente invención se administra cuando el sujeto tiene menos de un año de edad. En determinados casos, la primera dosis de una composición farmacéutica de acuerdo con la presente invención se administra cuando el sujeto tiene menos de 2 años de edad. En determinados casos, la primera dosis de una composición farmacéutica de acuerdo con la presente invención se administra cuando el sujeto tiene menos de 15 años de edad. En determinados casos, la primera dosis de una composición farmacéutica de acuerdo con la presente invención se administra cuando el sujeto tiene más de 15 años de edad.

8. Ciertas dosis

En determinados casos, la presente descripción proporciona cantidades de dosis y frecuencias. En determinados casos, las composiciones farmacéuticas se administran como una inyección en bolo. En determinados casos, la dosis de la inyección del bolo es de 0,01 a 25 miligramos de compuesto antisentido por kilogramo de peso corporal del sujeto. En determinados casos, la dosis de la inyección del bolo es de 0,01 a 10 miligramos de compuesto antisentido por kilogramo de peso corporal del sujeto. En determinados casos, la dosis es de 0,05 a 5 miligramos de compuesto antisentido por kilogramo de peso corporal del sujeto. En determinados casos, la dosis es de 0,1 a 2 miligramos de compuesto antisentido por kilogramo de peso corporal del sujeto. En determinados casos, la dosis es de 0,5 a 1 miligramos de compuesto antisentido por kilogramo de peso corporal del sujeto. En determinados casos, tales dosis se administran dos veces al mes. En determinados casos, tales dosis se administran cada mes. En determinados casos, tales dosis se administran cada 2 meses. En determinados casos, tales dosis se administran cada 6 meses. En determinados casos, tales dosis se administran mediante inyección en bolo en el CSF. En determinados casos, tales dosis se administran mediante inyección en bolo intratecal. En determinados casos, tales dosis se administran mediante inyección sistémica en bolo (p. ej., inyección subcutánea, intramuscular o intravenosa). En determinados casos, los sujetos reciben inyecciones en bolo en el CSF e inyecciones sistémicas en bolo. En tales casos, las dosis del bolo de CSF y el bolo sistémico pueden ser iguales o diferentes entre sí. En determinados casos, las dosis sistémicas y de CSF se administran con diferentes frecuencias. En determinados casos, la descripción proporciona un régimen de dosificación que comprende al menos una inyección intratecal en bolo y al menos una inyección subcutánea en bolo.

En determinados casos, las composiciones farmacéuticas se administran mediante infusión continua. Tal infusión continua puede lograrse mediante una bomba de infusión que administre composiciones farmacéuticas al CSF. En determinados casos, tal bomba de infusión administra la composición farmacéutica IT o ICV. En determinados tales, la dosis administrada está entre 0,05 y 25 miligramos de compuesto antisentido por kilogramo de peso corporal del sujeto por día. En determinados casos, la dosis administrada es de 0,1 a 10 miligramos de compuesto antisentido por kilogramo de peso corporal del sujeto. por día En determinados casos, la dosis administrada es de 0,5 a 10 miligramos de compuesto antisentido por kilogramo de peso corporal del sujeto por día. En determinados casos, la dosis administrada es de 0,5 a 5 miligramos de compuesto antisentido por kilogramo de peso corporal del sujeto por día. En determinados casos, la dosis administrada es de 1 a 5 miligramos de compuesto antisentido por kilogramo de peso corporal del sujeto por día. En determinados casos, la descripción proporciona un régimen de dosificación que comprende la infusión en el CNS y al menos una inyección sistémica en bolo. En determinados casos, la descripción proporciona un régimen de dosificación que comprende la infusión en el CNS y al menos una inyección sistémica en bolo. En determinados casos, la dosis, ya sea por bolo o infusión, se ajusta para lograr o mantener una concentración de compuesto antisentido de 0,1 a 100 microgramos por gramo de tejido del CNS. En determinados casos, la dosis, ya sea por bolo o infusión, se ajusta para lograr o mantener una concentración de compuesto antisentido de 1 a 10 microgramos por gramo de tejido del CNS. En determinados casos, la dosis, ya sea por bolo o infusión, se ajusta para lograr o mantener una concentración de compuesto antisentido de 0,1 a 1 microgramos por gramo de tejido del CNS.

En determinados casos, la dosificación de un sujeto se divide en una fase de inducción y una fase de mantenimiento. En determinados casos, la dosis administrada durante la fase de inducción es mayor que la dosis administrada durante la fase de mantenimiento. En determinados casos, la dosis administrada durante la fase de inducción es menos que la dosis administrada durante la fase de mantenimiento. En determinados casos, la fase de inducción se logra mediante inyección en bolo y la fase de mantenimiento se logra mediante infusión continua.

En determinados casos, la descripción proporciona la administración sistémica de compuestos antisentido, ya sea solos o en combinación con la administración en el CSF. En determinados casos, la dosis para administración sistémica es de 0,1 mg/kg a 200 mg/kg. En determinados casos, la dosis para administración sistémica es de 0,1 mg/kg a 100 mg/kg. En determinados casos, la dosis para administración sistémica es de 0,5 mg/kg a 100 mg/kg. En determinados casos, la dosis para administración sistémica es de 1 mg/kg a 100 mg/kg. En determinados casos, la dosis para administración sistémica es de 1 mg/kg a 50 mg/kg. En determinados casos, la dosis para administración sistémica es de 1 mg/kg a 25 mg/kg. En determinados casos, la dosis para administración sistémica es de 0,1 mg/kg a 25 mg/kg. En determinados casos, la dosis para administración sistémica es de 0,1 mg/kg a 10 mg/kg. En determinados casos, la dosis para administración sistémica es de 1 mg/kg a 10 mg/kg. En determinados casos, la dosis para administración sistémica es de 1 mg/kg a 5 mg/kg. En determinados casos que comprenden tanto la administración sistémica como la CSF, las dosis para esas dos rutas se determinan de forma independiente.

a. Cálculo de dosis humanas apropiadas

En determinados casos, la dosis humana se calcula o estima a partir de datos de experimentos con animales, tales como los que se describen en este documento. En determinados casos, una dosis humana se calcula o estima a partir de datos de experimentos con monos y/o ratones, tales como los que se describen en este documento. En determinados casos, una dosis humana se calcula o estima a partir de datos de experimentos con ratones, tales como los que se describen en este documento. En determinados casos, las dosis humanas apropiadas se pueden calcular utilizando datos farmacocinéticos de ratones junto con el conocimiento del peso del cerebro y/o velocidades de rotación del fluido cerebroespinal (CSF). Por ejemplo, el peso del cerebro del ratón es de aproximadamente 0,4 g, que es aproximadamente 2% de su peso corporal. En los humanos, el peso medio del cerebro es de 1,5 kg, que es aproximadamente el 2,5% del peso corporal. En determinados casos, la administración en el CSF da como resultado la eliminación de una porción del compuesto a través de la absorción en el tejido cerebral y el posterior metabolismo. Utilizando la relación entre el peso del cerebro humano y el del ratón como factor de escala, se puede calcular una estimación de la eliminación y el aclaramiento a través del tejido cerebral. Además, la velocidad de renovación del CSF se puede utilizar para estimar la eliminación del compuesto del CSF a la sangre. La velocidad de renovación del CSF del ratón es de aproximadamente 10-12 veces al día (0,04 ml producidos a 0,325 pl/min). La tasa de renovación del CSF humano es de aproximadamente 4 veces al día (100-160 ml producidos a 350 - 400 pl/min). El aclaramiento y, por lo tanto, los requisitos de dosificación pueden basarse en la escala de eliminación del peso del cerebro, y/o la escala de rotación de CSF. El aclaramiento del CSF humano extrapolado se puede utilizar para estimar dosis equivalentes en humanos que se aproximan a las dosis en ratones. De esta forma, se pueden estimar las dosis humanas que explican las diferencias en el metabolismo tisular en función del peso del cerebro y las velocidad de recambio del CSF. Tales métodos resultan conocidos para los expertos en la técnica.

A modo de ejemplo no limitativo, en determinados casos, se puede estimar una dosis humana equivalente a partir de una dosis de ratón deseada multiplicando la mg/kg dosis de ratón por un factor de aproximadamente 0,25 a aproximadamente 1,25 dependiendo del aclaramiento y la eliminación determinados de un compuesto particular. Por lo tanto, por ejemplo, en determinados casos, una dosis humana equivalente a una dosis de 0,01 mg para un ratón de 20 g variará entre aproximadamente 8,75 mg y aproximadamente 43,75 mg de dosis total para un humano de 70 kg. Asimismo, en determinados casos, una dosis humana equivalente a una dosis de 0,01 mg para un ratón recién nacido de 4 g variará entre aproximadamente 1,9 mg y aproximadamente 9,4 mg de dosis total para un humano recién nacido de 3 kg. Estas dosis de ejemplo son simplemente para ilustrar cómo un experto en la materia puede determinar una dosis humana adecuada y no pretenden limitar la presente descripción.

En determinados casos, una dosis humana para administración sistémica (ya sea que se administre sola o en combinación con la administración de CSF) se calcula o estima a partir de datos de experimentos con animales, como los descritos en este documento. Típicamente, una dosis humana apropiada (en mg/kg) para la dosis sistémica está entre 0,1 y 10 veces la dosis efectiva en animales. Por lo tanto, únicamente por ejemplo, una dosis subcutánea de 50 |jg en un ratón recién nacido de 2g es una dosis de 25mg/kg. Se prevé que la dosis correspondiente para un humano esté entre 2,5mg/kg y 250mg/kg. Para un bebé de 3 kilogramos, la dosis correspondiente está entre 7,5 mg y 750 mg. Para un niño de 25 kg, la dosis correspondiente es de 62,5 mg a 6250 mg.

9. Regímenes de tratamiento

En determinados casos, las cantidades de dosis, las frecuencias de las dosis, las vías de administración, las fases de inducción y mantenimiento y el momento de la primera dosis se combinan para proporcionar regímenes de dosificación para sujetos con SMA. Tales regímenes de dosificación pueden seleccionarse y ajustarse para mejorar uno o más síntomas de SMA y/o para reducir o evitar la toxicidad o los efectos secundarios atribuibles a la administración de la composición farmacéutica. En determinados casos, los sujetos están en el útero o recién nacidos. En tales casos, la administración de composiciones farmacéuticas, particularmente por infusión continua, presenta desafíos particulares. Por consiguiente, en determinados casos, la presente descripción prevé la administración de composiciones farmacéuticas mediante administración en bolo mientras el sujeto está en el útero o es muy joven, seguido de una infusión continua a través de una bomba de infusión implantada cuando el sujeto es mayor y la colocación de dicha bomba es más práctica. Además, en determinados casos, a medida que un sujeto crece, la dosis absoluta se incrementa para lograr la misma dosis o similar: relación peso-cuerpo.

En determinados casos, las composiciones farmacéuticas de la presente descripción tienen índices terapéuticos mejorados. En determinados casos, las composiciones farmacéuticas de la presente descripción que tienen índices terapéuticos mejorados permiten que un experto en la técnica administre las composiciones farmacéuticas de la presente descripción con menos frecuencia. En determinados casos, las composiciones farmacéuticas de la presente descripción que tienen índices terapéuticos mejorados permiten que un experto en la técnica permita intervalos más largos entre la primera dosis y la segunda dosis.

La siguiente tabla está destinada a ejemplificar los regímenes de tratamiento y no pretende limitar las posibles combinaciones de tratamientos que logrará fácilmente un experto en la técnica.

En determinados casos, el régimen de dosificación comprende una administración sistémica, ya sea sola o en combinación con la administración en el CSF (por ejemplo, el régimen 3 anterior). La tabla siguiente ejemplifica adicionalmente tales regímenes.

Estos regímenes de tratamiento pretenden ejemplificar y no limitar la presente descripción. Un experto en la técnica podrá seleccionar una combinación apropiada de dosis y administración en vista de la presente descripción y en función de una variedad de factores, tales como la gravedad de la afección y la salud general y la edad del sujeto.

10. Co-administración

En determinados casos, las composiciones farmacéuticas de la presente invención se administran conjuntamente con al menos otra composición farmacéutica para el tratamiento de SMA y/o para el tratamiento de uno o más síntomas asociados con SMA. En determinados casos, dicha otra composición farmacéutica se selecciona de tricostatina-A, ácido valproico, riluzol, hidroxiurea y un butirato o derivado de butirato. En determinados casos, las composiciones farmacéuticas de la presente invención se administran conjuntamente con tricostatina A. En determinados casos, las composiciones farmacéuticas de la presente invención se administran conjuntamente con un derivado de quinazolina, por ejemplo, como se describe en Thurmond, et al., J. Med Chem. 2008, 51, 449-469. En determinados casos, una composición farmacéutica de la presente invención y al menos otra composición farmacéutica se co-administran al mismo tiempo. En determinados casos, una composición farmacéutica de la presente invención y al menos otra composición farmacéutica se co-administran en distintos momentos.

En determinados casos, las composiciones farmacéuticas de la presente invención se co-administran con un agente de terapia génica. En determinadas de dichas modalidades, el agente de terapia génica se administra al CSF y la composición farmacéutica de la presente invención se administra sistémicamente. En determinados tales casos, el agente de terapia génica se administra al CSF y la composición farmacéutica de la presente invención se administra al CSF y sistémicamente. En determinados casos, una composición farmacéutica de la presente invención y un agente de terapia génica se co-administran al mismo tiempo. En determinados casos, una composición farmacéutica de la presente invención y un agente de terapia génica se co-administran en diferentes tiempos. Se han registrado determinados enfoques con respecto a la terapia génica para el tratamiento de SMA (p. ej., Coady et al., PLoS ONE 20083(10): e3468; Passini et al., J Clin Invest 2010 Abr 1, 120(4): 1253-64).

En determinados casos, las composiciones farmacéuticas de la presente invención se administran conjuntamente con al menos otra terapia para SMA. En determinados casos, tal otra terapia para SMA es cirugía. En determinados casos, tal otra terapia es terapia física, que incluye, pero no se limitan a, ejercicios diseñados para fortalecer los músculos necesarios para respirar, tal como la terapia de la tos. En determinados casos, otra terapia es una intervención física, tal como un tubo de alimentación o dispositivo de respiración asistida.

En determinados casos, las composiciones farmacéuticas de la presente invención se co-administran con una o más composiciones farmacéuticas alternativas que reducen los efectos secundarios no deseados de las composiciones farmacéuticas de la presente invención.

11. Efectos fenotípicos

En determinados casos, la administración de al menos una composición farmacéutica de la presente invención genera un cambio fenotípico en el sujeto. En determinados casos, tales cambios fenotípicos incluyen, pero no se limitan a: aumento de la cantidad absoluta de ARNm de SMN que incluye el exón 7; aumento en la proporción de ARNm de SMN que incluye el exón 7 a ARNm de SMN que carece del exón 7; aumento de la cantidad absoluta de proteína SMN que incluye el exón 7; aumento en la proporción de proteína SMN que incluye el exón 7 a proteína SMN que carece del exón 7; fuerza muscular mejorada, actividad eléctrica mejorada en al menos un músculo; respiración mejorada; aumento de peso; y supervivencia. En Determinados casos, se detecta al menos un cambio fenotípico en una motoneurona del sujeto. En determinados casos, la administración de al menos una composición farmacéutica de la presente invención hace que un sujeto pueda sentarse, pararse y/o caminar. En determinados casos, la administración de al menos una composición farmacéutica de la presente invención hace que un sujeto pueda comer, beber y/o respirar sin ayuda. En determinados casos, se evalúa la eficacia de tratamiento mediante evaluación electrofisiológica del músculo. En determinados casos, la administración de una composición farmacéutica de la presente invención mejora al menos un síntoma de SMA y no presenta efecto inflamatorio o muy poco. En determinados tales casos, la ausencia de efecto inflamatorio es determinada por la ausencia de un aumento significativo de los niveles de Aif1 luego del tratamiento.

En determinados casos, la administración de al menos una composición farmacéutica de la presente invención retrasa el inicio de al menos un síntoma de SMA. En determinados casos, la administración de al menos una composición farmacéutica de la presente invención retrasa el avance de al menos un síntoma de SMA. En determinados casos, la administración de al menos una composición farmacéutica de la presente invención reduce la gravedad de al menos un síntoma de SMA.

En determinados casos, la administración de al menos una composición farmacéutica de la presente invención genera un efecto secundario no deseado. En determinados casos, se identifica un régimen de tratamiento que genera una mejora deseada de los síntomas, a la vez que se evitan los efectos secundarios no deseados.

12. Unidades de dosificación

En determinados casos, las composiciones farmacéuticas de la presente descripción se preparan como unidades de dosificación para administración. Determinadas tales unidades de dosificación se encuentran en concentraciones que se seleccionan de 0,01 mg a 100 mg. En determinados tales casos, una composición farmacéutica de la presente descripción comprende una dosis de compuesto antisentido seleccionada entre 0,01 mg, 0,1 mg, 0,5 mg, 1 mg, 5 mg, 10 mg, 20 mg, 25 mg, 50 mg, 75 mg, 100 mg, 150 mg y 200 mg. En determinados casos, una composición farmacéutica comprende una dosis de oligonucleótido seleccionada entre 0,1 mg, 0,5 mg, 1 mg, 5 mg, 10 mg, 25 mg y 50 mg.

13. Kits

En determinados casos, la presente descripción proporciona kits que comprenden al menos una composición farmacéutica. En determinados casos, dichos kits comprenden además un medio de administración, por ejemplo, una jeringa o bomba de infusión.

Descripción no limitativa

Mientras que determinados compuestos, composiciones y procedimientos descritos en este documentos se han descrito con especificidad conforme a determinados aspectos, los siguientes ejemplos sirven solo para ilustrar los compuestos descritos en esta invención y no pretenden limitarla.

Si bien el listado de secuencias que acompaña esta presentación identifica cada secuencia como "ARN" o "ADN" según sea necesario, en realidad, esas secuencias pueden estar modificadas con cualquier combinación de modificaciones químicas. Un experto en la técnica apreciará fácilmente que tal designación como "ARN" o "ADN" para describir oligonucleótidos modificados es, en determinados casos, arbitraria. Por ejemplo, un oligonucleótido que comprende un nucleósido que comprende un resto de azúcar 2'-OH y una base de timina podría describirse como un ADN que tiene un azúcar modificado (2'-OH para el 2'-H natural del ADN) o como un ARN que tiene una base modificada (timina (uracilo metilado) por uracilo natural de ARN).

En consecuencia, las secuencias de ácidos nucleicos que se proporcionan en este documento, que incluyen, pero no se limitan a, las del listado de secuencias, pretenden abarcar los ácidos nucleicos que contienen cualquier combinación de ARN natural o modificado y/o ADN, que incluyen, pero no se limitan, los ácidos nucleicos que tienen nucleobases modificadas. A modo de ejemplo adicional y pero no se limitan a, un compuesto oligomérico con la secuencia de nucleobases "ATCGATCG" abarca cualquier compuesto oligomérico con dicha secuencia de nucleobases, ya sea modificada o no modificada, que incluye, pero no se limitan a, compuestos que comprenden bases de ARN, como los que tienen la secuencia "AUCGAUCG" y los que tienen algunas bases de ADN y algunas bases de ARN, como "AUCGATCG" y compuestos oligoméricos con otras bases modificadas, tales como «ATmeCGAUCG», en donde meC indica una base de citosina que comprende un grupo metilo en la posición 5.

Ejemplos

Los siguientes ejemplos ilustran Determinados casos de la presente descripción y no son limitativos. Además, cuando se proporcionan instancias específicas, los inventores han contemplado la aplicación genérica de esas instancias específicas. Por ejemplo, la descripción de un oligonucleótido que tiene un motivo particular proporciona un apoyo razonable para oligonucleótidos adicionales que tienen el mismo motivo o uno similar. Y, por ejemplo, cuando una modificación particular de alta afinidad aparece en una posición particular, se consideran adecuadas otras modificaciones de alta afinidad en la misma posición, a menos que se indique lo contrario.

Ejemplo de referencia 1: Efecto de los oligonucleótidos antisentido dirigidos a SMN2 humano en un modelo de ratones SMA tipo III

La cepa de Taiwán de ratones SMA tipo III se obtuvo de The Jackson Laboratory (Bar Harbor, Maine). Estos ratones carecen de SMN de ratón y son homocigotos para SMN2 humano (mSMN -/-; hSMN2 /+). Estos ratones se han descrito en Hsieh-Li HM, et al., Nature Genet. 24, 66-70 2000. Se diseñaron y probaron oligonucleótidos antisentido dirigidos a SMN2 humano en estos ratones.

Los oligonucleótidos antisentido recientemente diseñados en la siguiente tabla se diseñaron como oligonucleótidos 2'-MOE uniformes con una estructura química mixta. Cada oligonucleótido antisentido tiene una longitud de 18 nucleósidos en donde cada nucleósido tiene una modificación de azúcar 2'-MOE. Los enlaces internucleosídicos a lo largo de cada gápmero son enlaces fosfodiéster o fosforotioato. Los enlaces internucleosídicos de cada oligonucleótido se denota en la columna Química de la cadena principal, donde 'o' indica un enlace fosfodiéster y 's' indica un enlace fosforotioato. Todos los residuos de citosina en cada oligonucleótido son 5-metilcitosinas. Cada oligonucleótido antisentido enumerado en la Tabla a continuación está dirigido a la secuencia genómica SMN2 humana, designada en el presente documento como SEQ ID NO: 25 (GENBANK Access No. NT_006713.14 truncado de los nucleótidos 19939708 a 19967777) en la región diana 27062-27079.

Tabla 1

Tratamiento

A los ratones se les administraron 500 |jg de oligonucleótido ISIS mediante inyección en bolo intracerebroventricular (ICV). A los ratones de control se les administró PBS solo (dosis de 0).

Ensayo de tolerabilidad

3 horas después de la inyección, cada ratón se evaluó según 7 criterios diferentes. Los 7 criterios son (1) el ratón estaba despierto, alerta y receptivo; (2) el ratón estaba parado o encorvado sin estímulos; (3) el ratón muestra cualquier movimiento sin estímulos (4) el ratón muestra movimiento hacia adelante después de ser levantado; (5) el ratón muestra cualquier movimiento después de ser levantado; (6) el ratón responde al pellizco de la cola; (7) respiración regular. Para cada uno de los 7 criterios diferentes, a cada ratón se le asignó una puntuación secundaria de 0 si cumplía con los criterios o 1 si no lo hacía. Después de evaluar cada uno de los 7 criterios, se sumaron las puntuaciones secundarias de cada ratón y a continuación se promediaron para cada grupo. Por ejemplo, si un ratón estaba brillante, alerta y receptivo 3 horas después de la dosis ICV, y cumplía todos los demás criterios, recibiría una puntuación sumada de 0. Si otro ratón no estaba brillante, alerta y receptivo 3 horas después de la dosis ICV pero cumplía todos los demás criterios, recibiría una puntuación de 1. Los ratones tratados con solución salina generalmente reciben una puntuación de 0. Como se presenta en la tabla siguiente, los oligonucleótidos ISIS se consideraron tolerables en los ratones transgénicos.

Tabla 2

Empalme del exón 7

Los animales se sacrificaron 2 semanas después de la inyección y se recogieron secciones del cerebro y lumbares de la médula espinal de cada animal. Se realizó PCR en tiempo real en cada muestra para determinar la cantidad de mensaje SMN2 humano, incluido el exón 7 (exón 7+) y la cantidad de mensaje SMN2 humano que carece del exón 7 (exón 7-). Los niveles de expresión para el exón 7+ y el exón 7- se normalizaron a los niveles totales de SMN2. Los datos presentados en la siguiente tabla se expresan como exón 7+ y exón 7-niveles divididos por los niveles totales de SMN, y se normalizaron adicionalmente a los niveles obtenidos en el grupo de control de PBS (designado como 1).

La administración de oligonucleótidos ISIS dirigidos a SEQ ID NO: 25 en el sitio de inicio 27062, pero con diferentes químicas de cadena principal, dio como resultado un aumento sorprendente en la inclusión del exón 7.

Tabla 3

Ejemplo de referencia 2: Efecto de los oligonucleótidos antisentido dirigidos a SMN2 humano en un modelo de ratones SMA tipo III y ratones WT

Se diseñaron y probaron oligonucleótidos antisentido adicionales dirigidos a SMN2 humano en ratones SMA Tipo III o en una cepa WT (C57BL/6).

Los oligonucleótidos antisentido recientemente diseñados en la siguiente tabla se diseñaron como oligonucleótidos 2'-MOE uniformes con una estructura química mixta. Cada oligonucleótido antisentido tiene una longitud de 18 nucleósidos y cada nucleósido tiene una modificación de azúcar 2'-MOE. Los enlaces internucleosídicos a lo largo de cada gápmero son enlaces fosfodiéster o fosforotioato. Los enlaces internucleosídicos de cada oligonucleótido se denota en la columna Química de la cadena principal, donde 'o' indica un enlace fosfodiéster y 's' indica un enlace fosforotioato. Todos los residuos de citosina en cada oligonucleótido son 5-metilcitosinas. Cada oligonucleótido antisentido enumerado en la Tabla a continuación está dirigido a la secuencia genómica SMN2 humana, designada en el presente documento como SEQ ID NO: 25 (GENBANK Access No. NT_006713.14 truncado de los nucleótidos 19939708 a 19967777) en la región diana 27062-27079.

Tabla 4

Tratamiento

A los ratones SMA tipo III se les administraron 35 |jg de oligonucleótido ISIS mediante inyección en bolo intracerebroventricular (ICV). A los ratones WT se les administraron 700 |jg de oligonucleótido ISIS mediante inyección en bolo intracerebroventricular (ICV). A los ratones de control en cada cepa se les administró PBS solo (dosis de 0).

Ensayo de tolerabilidad

3 horas después de la inyección, cada ratón se evaluó según 7 criterios diferentes. Los 7 criterios son (1) el ratón estaba despierto, alerta y receptivo; (2) el ratón estaba parado o encorvado sin estímulos; (3) el ratón muestra cualquier movimiento sin estímulos (4) el ratón muestra movimiento hacia adelante después de ser levantado; (5) el ratón muestra cualquier movimiento después de ser levantado; (6) el ratón responde al pellizco de la cola; (7) respiración regular. Para cada uno de los 7 criterios diferentes, a cada ratón se le asignó una puntuación secundaria de 0 si cumplía con los criterios o 1 si no lo hacía. Después de evaluar cada uno de los 7 criterios, se sumaron las puntuaciones secundarias de cada ratón y a continuación se promediaron para cada grupo. Por ejemplo, si un ratón estaba despierto, alerta y receptivo 3 horas después de la dosis ICV, y cumplía con todos los demás criterios, obtendría una puntuación sumada de 0. Si otro ratón no estaba despierto, alerta y receptivo 3 horas después de la dosis ICV pero cumplía con todos los demás criterios, recibiría una puntuación de 1. Los ratones tratados con solución salina generalmente reciben una puntuación de 0. Como se presenta en la siguiente tabla, los oligonucleótidos ISIS se consideraron tolerables en los ratones.

Tabla 5

Tabla 6

Empalme del exón 7

Los animales se sacrificaron 2 semanas después de la inyección y se recogieron secciones del cerebro y lumbares de la médula espinal de cada animal. Se realizó PCR en tiempo real en cada muestra para determinar la cantidad de mensaje SMN2 humano, incluido el exón 7 (exón 7+) y la cantidad de mensaje SMN2 humano que carece del exón 7 (exón 7-). Los niveles de expresión para el exón 7+ y el exón 7- se normalizaron a los niveles totales de SMN2. Los datos presentados en la siguiente tabla se expresan como niveles de exón 7+ y exón 7- divididos por los niveles totales de SMN, y se normalizaron adicionalmente a los niveles obtenidos en el grupo de control de PBS (designado como 1).

La administración de muchos de los oligonucleótidos ISIS dirigidos a SEQ ID NO: 25 aproximadamente la región diana 27062-27079, pero con diferentes químicas de cadena principal, dio como resultado un aumento en la inclusión del exón 7.

Tabla 7

Ejemplo 3: Diseño de oligonucleótidos antisentido dirigidos a SMN2 humano

Se diseñaron oligonucleótidos antisentido adicionales dirigidos a SMN2 humano dirigidos a la secuencia genómica de SMN2 humano, designados en el presente documento como SEQ ID NO: 25 (GENBANK Acceso No.NT_006713.14 truncado de los nucleótidos 19939708 a 19967777) aproximadamente la región diana 27062-27079.

Los oligonucleótidos antisentido recientemente diseñados en la siguiente tabla se diseñaron como oligonucleótidos 2-MOE uniformes con una estructura química mixta. Cada oligonucleótido antisentido son 15, 18, o 20 nucleósidos de longitud en donde cada nucleósido tiene una modificación de azúcar 2'-MOE. Los enlaces internucleosídicos a lo largo de cada gápmero son enlaces fosfodiéster o fosforotioato. Los enlaces internucleosídicos de cada oligonucleótido se denota en la columna Química de la cadena principal, donde 'o' indica un enlace fosfodiéster y 's' indica un enlace fosforotioato. Todos los residuos de citosina en cada oligonucleótido son 5-metilcitosinas. El “sitio de inicio” indica el nucleósido más cercano a la posición 5', al cual se dirige el gápmero en la secuencia génica humana. El “sitio de parada” indica el nucleósido más cercano a la posición 3' al cual se dirige el gápmero en la secuencia génica humana.

Tabla 8

Ejemplo de referencia 4: Diseño de oligonucleótidos antisentido dirigidos a SMN2 humano

Se diseñaron oligonucleótidos antisentido adicionales dirigidos a SMN2 humano dirigidos a la secuencia genómica de SMN2 humano, designada en el presente documento como SEQ ID NO: 25.

Los oligonucleótidos antisentido recientemente diseñados en la siguiente tabla se diseñaron como oligonucleótidos 2-MOE uniformes con una estructura química mixta. Cada oligonucleótido antisentido son 18 nucleósidos de longitud en donde cada nucleósido tiene una modificación de azúcar 2'-MOE. Los enlaces internucleosídicos a lo largo de cada gápmero son enlaces fosfodiéster o fosforotioato. Los enlaces internucleosídicos de cada oligonucleótido se denota en la columna Química de la cadena principal, donde 'o' indica un enlace fosfodiéster y 's' indica un enlace fosforotioato. Todos los residuos de citosina en cada oligonucleótido son 5-metilcitosinas. El "sitio de inicio" indica el nucleósido más cercano a la posición 5', al cual se dirige el gápmero en la secuencia génica humana. El "sitio de parada" indica el nucleósido más cercano a la posición 3' al cual se dirige el gápmero en la secuencia génica humana.

Tabla 9

Ejemplo de referencia 5: Efecto de los oligonucleótidos antisentido dirigidos a SMN2 humano en un modelo de ratones SMA tipo III

Se trataron y analizaron grupos de 3 a 4 ratones de tipo salvaje y transgénicos SMN como se describe en el Ejemplo 2. Los oligonucleótidos antisentido que se administraron a los ratones se enumeran en las tablas a continuación. Los resultados se presentan, como se describen en el Ejemplo 2, en las Tablas a continuación.

Tabla 10

Tabla 11

Claims (14)

REIVINDICACIONES

1. Un oligonucleótido antisentido que consiste en la secuencia de ácido nucleico de SEQ ID NO: 7, en donde todos los residuos de citosina de la secuencia de ácido nucleico son 5-metilcitosinas, en donde cada nucleósido de la secuencia de ácido nucleico comprende un 2'-O-metoxietilo modificación de azúcar, y en donde la secuencia de ácido nucleico tiene la siguiente estructura química: sossssossssossssoss, en donde "s" indica un enlace fosforotioato y "o" indica un enlace fosfodiéster.

2. Una composición farmacéutica que comprende el producto de la reivindicación 1 y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

3. El oligonucleótido antisentido de la reivindicación 1, para uso en el tratamiento de la atrofia muscular espinal (SMA) en un sujeto.

4. El oligonucleótido antisentido para uso de la reivindicación 3, en donde el sujeto es un sujeto humano.

5. El oligonucleótido antisentido para el uso de la reivindicación 3 o la reivindicación 4, en donde la SMA es SMA Tipo I.

6. El oligonucleótido antisentido para el uso de la reivindicación 3 o la reivindicación 4, en donde el SMA es SMA Tipo II.

7. El oligonucleótido antisentido para el uso de la reivindicación 3 o la reivindicación 4, en donde la SMA es SMA Tipo III.

8. El oligonucleótido antisentido para el uso de la reivindicación 3 o la reivindicación 4, en donde la SMA es SMA Tipo IV.

9. La composición farmacéutica de la reivindicación 2, para uso en el tratamiento de la atrofia muscular espinal (SMA) en un sujeto.

10. La composición farmacéutica para uso de la reivindicación 9, en donde el sujeto es un sujeto humano.

11. La composición farmacéutica para uso de la reivindicación 9 o la reivindicación 10, en donde la SMA es SMA Tipo I.

12. La composición farmacéutica para uso de la reivindicación 9 o la reivindicación 10, en donde la SMA es SMA Tipo II.

13. La composición farmacéutica para uso de la reivindicación 9 o la reivindicación 10, en donde la SMA es SMA Tipo III.

14. La composición farmacéutica para uso de la reivindicación 9 o la reivindicación 10, en donde la SMA es SMA Tipo IV.