RU2120795C1

RU2120795C1 - Гетеровезикулярные липосомы и способ их получения

Info

Publication number: RU2120795C1
Application number: SU5053129A
Authority: RU
Inventors: Ким Синил
Original assignee: Депо Тех Корпорейшн
Priority date: 1990-03-21
Filing date: 1991-03-21
Publication date: 1998-10-27
Also published as: CN1055663A; WO1991014445A1; FI104464B; ATE123412T1; JP3461000B2; ES2073164T3; NZ237464A; PT97101A; EP0524968A4; DK0524968T3; NO923624L; EP0524968A1; KR100203223B1; NO923624D0; DE69110281D1; JPH05507680A; CA2078666C; DE69110281T2; AU655177B2; FI924193A

Abstract

Изобретение относится к области медицины и биотехнологии и касается гетеровезикулярных липосом и способа их получения. Настоящее изобретение решает задачу введения лекарственных средств с использованием липосом, в разные камеры которых введены два различных препарата, при этом сущность изобретения заключается в получении гетеровезикулярных липидных везикул, полученных диспергированием двух водно-масляных эмульсий и содержащих два гидрофильных биологически активных вещества разного состава в разных камерах одной и той же липосомы. Способ заключается в получении двух водно-масляных эмульсий, каждая из которых содержит отличающийся лекарственный препарат, объединении их в химерную эмульсию и диспергировании для получения растворяющих сферул. Технический результат предложения заключается в повышении эффективности лекарственных препаратов. 2 с. и 20 з.п.ф-лы, 8 ил.

Description

Изобретение относится к синтетическим гетеровезикулярным пузырькам или липосомам, способам их получения и включения в них различных материалов и к лечению больных этими препаратами.

Мультивезикулярные липосомы представляют собой один из трех основных типов липосом, который был впервые получен Kim et al. (1983, Biochem, Biophys. Acta. - 782, 339 - 348) и коренным образом отличается от однослойных (Huang, 1969, Biochemistry, 1 - 10), и многослойных (Bangham et al, 1965, J. Mol. Biol. 13, 238 - 252) липосом наличием нескольких неконцентрических внутренних водных камер. Ранее описанные способы получения липосом касаются негетеровезикулярных структур (см., например, Патенты США 4310506. Baldeschwieler, 4522803 - Lenk 4235871 - Papahadjopoulos, 4224179 - 4078052 - Papahadjopoulos, 4394372 - Taylor 4308166 - Mar cheffi 4485054 - Mezei и 4508703 - Pedziniak). Исчерпывающий обзор различных способов получения липосом опубликован Szoka et al. в Ann. Rev. Biophys. Bioeng., 1980, 9: 467 - 508.

Гетеровезикулярные липосомы - это липидные пузырьки или липосомы с несколькими внутренними водными камерами, в которые заключены по меньшей мере два соединения разного состава (каждое в разных камерах одной липосомы). Липидные пузырьки или липосомы с несколькими внутренними водными камерами могут существовать в форме многослойных липосом, стабильных липосом с малым количеством пластин или мультивезикулярных липосом, хотя их разнообразие не ограничивается этим перечнем. Весьма перспективным является получение системы введения лекарственных средств с использованием липосом, в разные камеры которых заключены два или более различных препаратов (в отличие от липосом, в которых эти соединения содержатся вместе в каждой камере).

Предметом настоящего изобретения служат гетеровезикулярные липосомы, т. е. липидные пузырьки или липосомы с несколькими внутренними водными камерами, причем в разные камеры внутри одной липосомы заключены два или более соединений разного состава.

Способ получения таких липосом согласно данному изобретению состоит в приготовлении эмульсии типа "вода в липидах" посредством разведения амфипатических липидов в одном или нескольких органических растворителях (первый липидный компонент), добавлении несмешивающегося первого водного компонента к подлежащему инкапсулированию соединению (предпочтительно в присутствии хлористоводородной кислоты) с последующим механическим эмульгированием смеси. Капли воды, суспендированные в органическом растворителе в составе эмульсии, образуют внутренние водные камеры, а монослой амфипатических липидов, выстилающих водные камеры, служит одним из слоев двуслойной мембраны полученной конечной структуры. После этого формируют второй липидный компонент, разводя амфипатические липиды в летучем органическом растворителе и добавляя несмешивающийся второй водный компонент ко второму подлежащему инкапсулированию соединений, предпочтительно в присутствии хлористоводородной кислоты. Таким образом, получают вторую эмульсию. После этого, объединяя первую и вторую эмульсии, готовят химерную эмульсию. Последняя состоит из многочисленных водных капель, суспендированных в органическом растворителе, причем каждое из двух отличающихся по составу соединений присутствует в растворенной форме в разных водных каплях. Химерную эмульсию погружают в третий водный несмешивающийся компонент, предпочтительно содержащий один или несколько неионных осмотических агентов, и в нейтрализующий кислоту агент низкой ионной силы. Полученную таким образом смесь разделяют, получая растворяющие сферулы, которые содержат многочисленные капли воды, где каждое из двух отличающихся по составу соединений разведено в разных водных каплях одной и той же растворяющей сферулы. Пропуская над суспензией струю газа, из сферул полностью упаривают летучий растворитель. После полного упаривания органического растворителя, сферулы превращаются в мультивезикулярные липосомы с множественными внутренними водными камерами, каждая из которых заключает одно из двух соединений разного состава.

Применение хлористоводородной кислоты вместе с нейтрализующим агентом или других гидрохлоридов, замедляющих утечку, повышает эффективность инкапсуляции и снижает скорость утечки инкапсулированных молекул в биологических жидкостях и in vivo. Предпочтительно использовать нейтрализующий агент низкой ионной силы, чтобы предотвратить склеивание растворяющих сферул между собой.

Таким образом, целью настоящего изобретения является получение гетеровезикулярных липидных пузырьков или липосом, в которых по крайней мере два соединения разного состава заключены отдельно в разные камеры одного пузырька (липосомы).

Предметом изобретения служит также получение гетеровезикулярных липосом, содержащих по меньшей мере два биологически активных соединения разного состава, каждое из которых заключено в разные камеры липосомы в присутствии хлористоводородной кислоты или других гидрохлоридов, замедляющих утечку этих соединений.

Еще одной целью изобретения является получение гетеровезикулярных липосом, содержащих по меньшей мере два биологически активных соединения разного состава, каждое из которых заключено в разные камеры липосомы в присутствии хлористоводородной кислоты или другого гидрохлорида и нейтрализующего агента.

Следующая цель изобретения - создание способов получения описанных гетеровезикулярных липидных пузырьков или липосом.

Еще одна задача настоящего изобретения состоит в разработке процессов получения описанных гетеровезикулярных липидных пузырьков или липосом с использованием первого липидного компонента, разведенного в одном или нескольких органических растворителях; добавлении к липидному компоненту несмешивающегося первого водного компонента с первым подлежащим инкапсулированию соединением; образовании первой водно-масляной эмульсии из первых двух несмешивающихся компонентов; получении второго липидного компонента, разведенного в одном или нескольких органических растворителях и добавлении во второй липидный компонент несмешивающегося второго водного компонента со вторым подлежащим энкапсулированию соединением; образовании второй водно-масляной эмульсии из вторых двух несмешивающихся компонентов; формировании химерной эмульсии посредством объединения первой водно-масляной эмульсии и второй водно-масляной эмульсии; переносе и погружении химерной эмульсии в третий несмешивающийся водный компонент; диспергировании химерной эмульсии для формирования растворяющих сферул, содержащих многочисленные капли первого водного компонента с первым соединением и второго водного компонента со вторым соединением; упаривании органического растворителя из растворяющих сферул для получения гетеровезикулярных липидных пузырьков или липосом.

Еще одним предметом изобретения служит процесс, с помощью которого разнообразные гидрофильные биологически активные материалы можно раздельно заключить в камеры гетеровезикулярных липидных пузырьков или липосом.

Следующим предметом настоящего изобретения является способ лечения больных по меньшей мере двумя биологически активными соединениями разного состава путем их введения в разных камерах одного гетеровезикулярного пузырька или липосомы.

Иные и дополнительные объекты, особенности и преимущества данного изобретения будут представлены в описании и формуле изобретения.

Краткое описание рисунков.

На фиг. 1 - 8 представлены диаграммы, схематически иллюстрирующие получение гетеровезикулярных пузырьков или липосом.

Термин "мультивезикулярные липосомы", применяемый в настоящем описании и в формуле изобретения, относится к искусственным микроскопическим липидным пузырькам, образованным двойной липидной оболочкой, в которую заключены многочисленные неконцентрические водные камеры, каждая из которых содержит один и тот же компонент. В противоположность этому, термин "гетеровезикулярные липосомы" используется в описании и формуле изобретения для обозначения микроскопических липидных пузырьков искусственного происхождения, образованных двуслойной липидной мембраной, с заключенными в ней многочисленными водными камерами, из которых по меньшей мере две содержат каждая отличающиеся по составу соединения. К числу таких микроскопических липидных пузырьков относятся многослойные липосомы, липосомы с малым количеством пластин и мультивезикулярные липосомы, хотя этим перечнем не ограничивается все возможное разнообразие их форм.

Понятие "химерная эмульсия", используемая в настоящем описании и в формуле изобретения, относится к эмульсии, состоящей из многочисленных водных капель, суспендированных в органическом растворителе, причем разные капли содержат в растворенном виде одно из двух отличающихся по составу соединений.

Термин "растворяющая сферула" применяется в описании и формуле изобретения для обозначения микроскопических сфероидных капель органического растворителя, которые содержат многочисленные более мелкие капли водного раствора. Растворяющие сферулы суспендированы в и полностью погружены во второй водный раствор.

Термин "нейтральный липид" обозначает масло или жиры, не обладающие способностью формировать мембраны, в которых отсутствует гидрофильная "головная" группа.

Понятие "амфипатические липиды" относится к молекулам, имеющим гидрофильные "головные" группировки и гидрофобные "хвостовые" группы, которые сами по себе способны формировать мембраны.

Предметом настоящего изобретения являются гетеровезикулярные липидные пузырьки или липосомы, которые содержат по меньшей мере два соединения разного состава, каждое из которых заключено в разные камеры одного и того же пузырька или липосомы.

Посредством инкапсулирования в состав мультивезикулярных липосом можно включать многочисленные и самые разнообразные биологически активные соединения.

К их числу относятся лекарственные средства и другие виды материалов, такие как ДНК, РНК, белки разного типа, белковые гормоны, получаемые с помощью технологии рекомбинантных ДНК и обладающие биологической активностью в человеческом организме, кроветворные ростовые факторы, монокины, лимфокины, фактор некроза опухолей, ингибин, альфа и бета-факторы роста опухолей, ингибирующая субстанция мюллеровых протоков, нервный фактор роста, фактор роста фибробластов, фактор роста тромбоцитов, гипоталамические и гипофизарные гормоны ( в том числе факторы, освобождающие ЛГ и другие гормоны), кальцитонин, белки, служащие иммуногенами при вакцинации, изолированные последовательности ДНК и РНК.

В таблице представлен перечень наиболее характерных биологически активных соединений, которые могут быть заключены в гетеровезикулярные липосомы в присутствии гидрохлорида и которые проявляют физиологическую активность в человеческом организме.

Предпочтительный способ получения гетеровезикулярных пузырьков или липосом иллюстрируется рисунками с соответствующими номерами. На стадии 1 (фиг. 1) первое водное соединение состава 10, подлежащее включению в липосомы, добавляют к первому липидному компоненту 12 в сосуде 14. Сосуд 14 укупоривают и на стадии 2 (фиг. 2) его содержимое смешивают встряхиванием, например в вортекс-миксере, для получения первой воды в масляной эмульсии 16, содержащей первое соединение 10. На стадии 3 (фиг. 3) второе подлежащее включению водное соединение 10а добавляют ко второму липидному компоненту 12а в сосуде 14а. На 4 стадии (фиг. 4) сосуд 14а укупоривают и перемешивают его содержимое, например на вортексном миксере, для получения второй водно-масляной эмульсии 16а, содержащей соединение состава 10а.

На стадии 5 (фиг. 5) первую (16) и вторую (16а) водно-масляные эмульсии объединяют и смешивают вручную, для получения "химерной" эмульсии 17.

На стадии 6 (фиг. 6) часть химерной эмульсии, полученной на стадии 5, отдельными порциями добавляют в сосуды, содержащие третий несмешивающийся водный компонент 18а, например, быстрым впрыскиванием через узкий конец пастеровской пипетки в две однокамерные емкости 20, показанные на фиг. как одна.

На стадии 7 (фиг. 7) сосуды по пункту 6 встряхивают на вортексном миксере для получения суспензии сферул в хлороформе (21), а на стадии 8 (фиг. 8) эту суспензию из каждого сосуда 18а переносят в эксикатор 19 для упаривания хлороформа, например в токе азота, получая таким образом гетеровезикулярные липосомы 22, которые содержат первое соединение 10 в одной или нескольких водных камерах и второе соединение 10а в остальных внутренних водных камерах одной и той же липосомы 22.

Предпочтительно, чтобы каждое из подлежащих инкапсулированию соединение заключалось в камеры в присутствии хлористоводородной кислоты или другого гидрохлорида, который замедляет их утечку из липосом или пузырьков.

Как указывалось выше, любое биологически активное соединение из числа представленных в таблице может быть отдельно заключено в камеры пузырьков или липосом.

Нижеследующие примеры иллюстрируют наиболее предпочтительные в настоящее время способы инкапсуляции двух соединений разного состава в отдельные камеры пузырьков или липосом.

Пример 1
Получение гетеровезикулярных липосом, содержащих дидезоксицитидин и глюкозу
Стадия 1.

Первое водное соединение (1 мл раствора дидезоксицитидина в воде, 20 мг/мл, с 0,1 H хлористоводородной кислотой) добавляют в однокамерный сосуд, содержащий первый липидный компонент (9,3 мкмоля диолеоил-лецитина, 2,1 мкмоля дипальмитоилфосфатидилглицерина, 15 мкмолей холестерина, 1,8 мкмоля триолеина и 1 мл хлороформа).

Стадия 2.

Первый сосуд укупоривают, помещают в вортексный миксер и встряхивают при максимальной скорости в течение 6 минут до образования первой водно-масляной эмульсии.

Стадия 3.

Второе водное соединение (1 мл водного раствора глюкозы, 30 мг/мл, с 0,1 H хлористоводородной кислотой) добавляют во второй сосуд, содержащий второй липидный компонент, идентичный первому липидному компоненту.

Стадия 4.

Второй сосуд укупоривают, помещают в вортексный миксер и встряхивают при максимальной скорости в течение 6 мин для получения второй водно-масляной эмульсии.

Стадия 5.

0,5 мл первой эмульсии добавляют во второй сосуд и вручную перемешивают для получения "химерной" эмульсии.

Стадия 6.

Половину образовавшейся химерной эмульсии быстро впрыскивают через узкий конец пастеровской пипетки в однокамерные сосуды, каждый из которых содержит третий несмешивающийся водный компонент (2,5 мл воды, 32 мг/мл глюкозы и 40 мМ свободного лизинового основания).

Стадия 7
Полученные на стадии 6 смеси в сосудах встряхивают на вортексном миксере в течение 3 секунд в положении "5" для получения растворяющих сферул, внутри которых содержатся многочисленные капли первого и второго водных соединений.

Стадия 8
Суспензии сферул в хлороформе из каждого сосуда переносят на дно двухлитрового стакана, содержащего 4,5 мл воды, 35 мг/мл глюкозы и 22 мМ свободного лизинового основания. Через стакан пропускают струю азота со скоростью 7 л/мин в течение 5 мин при 15^o для упаривания хлороформа.

Приведенный пример описывает способ получения гетеровезикулярных липосом, во внутренних водных камерах которых раздельно содержатся глюкоза (примерно в 5/6 всех камер) и дидезоксицитидин (в 1/6 камер). Гетеровезикулярные липосомы, содержащие раствор дидезоксицитидина в качестве одной водной субстанции и глюкозу в качестве второй водной субстанции оказались значительно более стабильными по сравнению с негетеровезикулярными липосомами.

Пример 2
Данный пример иллюстрирует синтез гетеровезикулярных липосом, содержащих интерлейкин-2 (ИЛ-2) и лизин-гидрохлорид.

Для получения каждой партии липосом 1 мл воды, содержащей 10 мг/мл человеческого сывороточного альбумина (ЧСА), 1 мкг ИЛ-2 и 200 мМ лизин-гидрохлорида pH 7,13, добавляют в однокамерный сосуд с 9,3 мкмоля диолеоил-лецитина, 2,1 мкмоля дипальмитоил фосфатидилглицерина, 15 мкмолей холестерина, 1,8 мкмоля триолеина и 1 мл хлороформа (первая водно-масляная эмульсия). Для приготовления второй водно-масляной эмульсии 1 мл лизин-гидрохлорида (без ИЛ-2) добавляют в однокамерный сосуд, содержащий 9,3 мкмоля диолеоил-лецитина, 2,1 мкмоля дипальмитоил-фисфатидилглицерина, 15 мкмолей холестерина, 1,87 мкмоля триолеина и 1 мл хлороформа. Каждый из двух таких сосудов отдельно помещают в вортексный миксер и по очереди встряхивают при максимальной скорости в течение 6 мин.

0,5 мл первой водно-масляной эмульсии добавляют к 2 мл второй эмульсии, перемешивают и получают "химерную" водно-масляную эмульсию. Половину химерной эмульсии быстро впрыскивают через узкий конец пастеровской пипетки в однокамерные сосуды, содержащие 2,5 мл 4%-ного водного раствора глюкозы и 0,1 мл свободного лизинового основания (200 мМ), встряхивают при максимальной скорости в течение 3 сек и получают хлороформные сферулы. Также поступают со второй половиной химерной эмульсии. Суспенции сферул в хлороформе переносят в колбу Эрленмейера на 250 мл, содержащую 5 мл 4%-ного раствора глюкозы в воде и 0,2 мл свободного лизинового основания в количестве 200 мМ. Через колбу пропускают струю азота со скоростью 7 л/мин в течение 5 мин при 37^o для упаривания хлороформа.

Пример 3
Настоящий пример описывает синтез гетеровезикулярных липосом, содержащих раствор ара-C в качестве первого водного соединения и дистиллированную воду в качестве второй водной субстанции.

Для получения каждой партии липосом 1 мл воды, содержащей 100 мг/мо ара-C pH 1,1, добавляют в однокамерный сосуд с 9,3 мкмоля диолеоил-лецитина, 2,1 мкмоля дипальмитоил-фосфатидилглицерина, 15 мкмолями холестерина, 1,8 мкмоля триолеина и 1 мл хлороформа. Сосуд помещают в вортексный миксер и встряхивают при максимальной скорости в течение 6 минут, получая таким образом первую водно-масляную эмульсию. Для получения второй водно-масляной эмульсии in situ половину первой эмульсии удаляют, а в оставшуюся половину добавляют 1 мл дистиллированной воды, после чего однокамерный сосуд встряхивают при максимальной скорости на протяжении 30 секунд. Это приводит к образованию "химерной" водно-масляной эмульсии. Половину химерной эмульсии быстро впрыскивают через узкий конец пастеровской пипетки в однокамерные сосуды, каждый из которых содержит 2,0 мл 4%-ного водного раствора глюкозы и 0,5 мл свободного лизинового основания (200 мМ), после чего смесь встряхивают при максимальной скорости в течение 3 секунд для формирования хлороформных сферул. Также поступают со второй половиной химерной эмульсии. Суспензию сферул в хлороформе переносят в колбу Эрленмейера на 250 мл, содержащую 4 мл 4%-ного раствора глюкозы в воде и 0,5 мл свободного лизинового основания (200 мМ). Через колбу пропускают струю азота со скоростью 7 л/мин на протяжении 5 минут при 37^o для упаривания хлороформа.

Пример 4
Синтез гетеровезикулярных липосом, содержащих фактор, стимулирующий макрофазные колонии гранулоцитов (ФСМКГ)
Используют процедуру, описанную в примере 2, за исключением того, что ИЛ-2 заменяют на ФСМКГ (1 мкг).

Пример 5
Синтез гетеровезикулярных липосом разного липидного состава и включение в них различных материалов
Вместо диолеоил-лецитина, дипальмитоил-фосфатидилглицерина, холестерина и триолеина (ТО) с тем же результатом можно использовать другие амфипатические липиды, например фосфатидилхолины (ФХ), кардиолипин (КЛ), димиристоил-фосфатидилглицерин (ДМФГ), фосфатидил-этаноламины (ФЭ), фосфатидил-серины (ФС), димиристоил-фосфатидная кислота (ДМФК) и другие нейтральные липиды, такие как трикаприлин (ТК) в различных сочетаниях. В частности, можно использовать комбинации ФХ/Х КЛ/ТО в молярном соотношении 4,5/4,5/1/1, ДОФХ/Х/ФС/ТО в молярном соотношении 4,5/4,5/1/1, ФХ/Х/ДФФГ/ТК в молярном соотношении 5/4/1/1, ФЭ/Х/КЛ/ТО в молярном соотношении 4,5/4,5/1/1 и ФХ/Х/ДМФК/ТО в полярном соотношении 4,5/4,5/1/1. Для того, чтобы включить в липосомы другие растворимые в воде материалы, такие как глюкоза, сахароза, метотрексат, понсо-C, достаточно вводить их вместо ИЛ-2, как описано в примере 2. Точно также можно заменять ИЛ-2 другими биологически активными соединениями, перечисленными в таблице, используя соответствующие их количества и процедуры, описанные в примере 2.

Пример 6
В данном примере триолеин в составе вышеописанных липидных компонентов заменяют одним из следующих типов соединений: триглицеридами, растительными маслами, животными жирами, токоферолами, эфирами токоферолов, эфирами холестерилов и углеводородами или их сочетаниями, получая хорошие результаты.

Пример 7
Для того чтобы получить липосомы меньшего размера по сравнению с вышеописанными в примерах 1 или 2, увеличивают механическую силу или продолжительность встряхивания или гомогенизации на стадии 4 (см. примеры 1 или 2). Для увеличения размеров липосом, на стадии 4 примеров 1 или 2 уменьшают механическую силу, продолжительность встряхивания или гомогенизации.

При необходимости введения больному двух разных биологически активных соединений для лечения того или иного заболевания, гетеровезикулярные липосомы вводят общепринятыми способами.

Рекомендуемые дозировки при введении людям колеблются от 1 до 6000 мг/м поверхности тела. Столь широкий диапазон доз обусловлен тем, что при некоторых путях введения (например, подкожно) требуемая дозировка может быть очень мала, тогда как в других случаях (например, внутрибрюшинное введение) может потребоваться чрезвычайно высокая доза. Допустимы и иные дозировки, однако указанный диапазон охватывает практически все возможные случаи применения биологически активных соединений.

Мультивезикулярные липосомы можно вводить любым желаемым способом, в частности в спинномозговой канал, внутрибрюшинно, подкожно, внутривенно, в лимфатические сосуды, перорально или под слизистую, под самые разнообразные виды эпителиальной ткани, включая эпителий бронхов, желудочно-кишечного тракта, мочеполовых путей и различные слизистые оболочки, а также внутримышечно.

При заключении в разные капсулы липосом более двух соединений, формируют третий (четвертый) водный компонент, содержащий третье или четвертое биологически активное соединение. После этого производят смешивание для получения третьей или четвертой водно-масляной эмульсии, которую объединяют с первой и второй эмульсиями, для образования "химерной" эмульсии, которая содержит три или четыре биологически активных соединения. В остальном процесс не отличается от описанного для получения липосом с двумя биологически активными соединениями.

Таким образом, настоящее изобретение отвечает поставленным целям и задачам и обладает описанными и иными преимуществами.

Приведенные примеры предназначены для раскрытия сущности изобретения, однако возможны модификации в соответствии с существом изобретения, которые отражены в прилагаемой формуле изобретения.

Claims

1. Гетеровезикулярные липосомы, содержащие гидрофильное биологически активное соединение в многочисленных камерах этих липосом, полученные смешиванием гидрофильной фазы, содержащей биологически активное вещество с липидным компонентом, содержащим фосфолипиды, и диспергированием водно-масляной эмульсии для получения растворяющих сферул с последующим удалением растворителя, отличающиеся тем, что они являются гетеровизикулярными липидными везикулами, полученными диспергированием двух водно-масляных эмульсий и содержащих два гидрофильных биологически активных вещества разного состава в разных камерах одной и той же липосомы.

2. Гетеровезикулярные липосомы по п.1, отличающиеся тем, что содержат в разных капсулах указанной липосомы два отличительных биологически активных соединений, причем инкапсулирование по крайней мере одного из таких соединений проводят в присутствии гидрохлорида.

3. Гетеровезикулярные липосомы по п.2, отличающиеся тем, что гидрохлорид выбирают из группы, включающей хлористоводородную кислоту, лизин-гидрохлорид, гистидин-гидрохлорид или их комбинации.

4. Гетеровезикулярные липосомы по п.1, отличающиеся тем, что содержат по меньшей мере два отличающихся гидрофильных биологически активных соединения, каждое из которых заключено в разные камеры липосомы, причем по меньшей мере одно из этих соединений инкапсулируют в присутствии хлористоводородной кислоты или других кислых гидрохлоридов и нейтрализирующего агента.

5. Гетеровезикулярные липосомы по п.1, отличающиеся тем, что в разных камерах содержатся по меньшей мере два отличающихся гидрофильных биологически активных соединения, причем
биологически активные соединения выбирают из группы, включающей антиаритмические, противоастматические, противораковые, противодиабетические и противогрибковые средства, антибиотики, антигистаминовые препараты, антигиперетензивные и антигипотензивные средства, противопаразитические и противовирусные препараты, блокаторы поверхностных рецепторов клеток, глюкозу, сердечные гликозиды, гормоны, препараты для иммунотерапии, нуклеиновые кислоты и их аналоги, белки и гликопротеины, седативные и обезболивающие средства, стероиды, транквилизаторы, вакцины и воду.

6. Способ получения гетеровезикулярных липосом, содержащих гидрофильное биологически активное вещество в многочисленных камерах этих липосом, включающий смешивание гидрофильной фазы, содержащей биологически активное вещество с липидным компонентом, содержащем фосфолипиды, диспергированием водно-масляной эмульсии с образованием растворяющих сферул и последующим удалением растворителя, отличающийся тем, что две водно-масляные эмульсии, полученные таким образом, при этом первая эмульсия содержит первое гидрофильное биологически активное вещество в первом водном компоненте, а вторая - отличающееся гидрофильное биологически активное вещество во втором водном компоненте, и перед образованием растворяющих сферул, имеющих множество капель, содержащих первый водный компонент и множество капель, содержащих второй водный компонент, объединяют в химерную эмульсию.

7. Способ по п.6, отличающийся тем, что первый и второй липидные компоненты одинаковы.

8. Способ по п.6, отличающийся тем, что фосфолипиды выбирают из группы, состоящей из фосфатидилхолина, кардиолипина, фосфатидилэтаноламина, сфингомиелина, лизофосфатидилхолина, фосфатидилсерина, фосфатидилинозитола, фосфатидилглицерина и фосфатидной кислоты.

9. Способ по п.6, отличающийся тем, что один или более липидных компонентов содержат липид с отрицательным зарядом или зарядами.

10. Способ по п.6, отличающийся тем, что по крайней мере один из фосфолипидов используют в смеси с холестерином.

11. Способ по п.6, отличающийся тем, что по крайней мере один из фосфолипидов используют в смеси со стериламином.

12. Способ по п.6, отличающийся тем, что по меньшей мере один из липидов первого или второго липидных компонентов представляет собой нейтральный липид, используемый отдельно или в комбинации с другим соединением, выбранным из группы, состоящей из триглицеридов, растительных масел, животных жиров, токоферолов, эфиров токоферолов, эфиров холестерилов, углеводородов.

13. Способ по п.6, отличающийся тем, что органический растворитель выбирают из группы, состоящей из эфиров, углеводородов, галогенированных углеводородов, галогенированных эфиров, сложных эфиров или их комбинации.

14. Способ по п.6, отличающийся тем, что получение первого липидного компонента, представленного фосфолипидом или смесью нескольких фосфолипидов, растворенного в одном или нескольких органических растворителях, и добавление к этому липидному компоненту несмешивающегося первого водного компонента, содержащего первое биологически активное соединение, подлежащее инкапсулированию, осуществляют в присутствии гидрохлорида, выбранного из группы, включающей хлористоводородную кислоту, лизингидрохлорид, гистидин-гидрохлорид или их комбинации.

15. Способ по п.6, отличающийся тем, что гидрофильное биологически активное соединение выбирают из группы, включающей интерлейкин-2, цитозинарабинозид, метотрексат, 5-фтороурацил, цисплатин, флоксуридин, мелфалан, меркаптопурин, тиогуанин, тиотепа, винкристин, винбластин, стрептозоцин, лейпролид, интерферон, кальцитонин, доксорубицин, даунорубицин, митоксантрон, амакрин, актиномицин и блеомицин.

16. Способ по п.6, отличающийся тем, что эмульгирование двух компонентов осуществляют методами, выбранными из механического перемешивания, обработки ультразвуком и инжекторной атомации.

17. Способ по п.14, отличающийся тем, что нейтрализующий кислоту агент выбирают из группы, состоящей из свободного лизинового основания и свободного гистидинового основания, или их комбинации.

18. Способ по п.6, отличающийся тем, что водный компонент представляет собой водный раствор, содержащий в качестве растворенного соединения углеводороды или аминокислоты.

19. Способ по п.18, отличающийся тем, что водный компонент представляет собой водный раствор, содержащий в качестве растворенных соединений глюкозу, сахарозу, лактозу, свободное лизиновое основание и свободное гистидиновое основание, отдельно или в различных сочетаниях.

20. Способ по п.6, отличающийся тем, что диспергирование для получения растворяющих сферул осуществляют методами, выбранными из группы, включающий механическое перемешивание, ультразвуковую обработку и инжекторную атомизацию.

21. Способ по п.6, отличающийся тем, что упаривание органического растворителя осуществляют, пропуская азот через растворяющие сферулы.

22. Способ по п.6, отличающийся тем, что гидрофильные биологически активные соединения выбирают из группы, состоящей из антиаритмических и противоастматических средств, антибиотиков, противораковых, противодиабетических, противогрибковых средств, антигистаминовых препаратов, антигипертензивных и антигипотензивных средств, противопаразитических и противовирусных препаратов, блокаторов поверхностных клеточных рецепторов, глюкозы, сердечных гликозидов, гормонов, препаратов для иммунотерапии, седативных средств и анальгетиков, белков и гликопротеинов, стероидов, нуклеиновых кислот и их аналогов, транквилизаторов, вакцин и воды.