JPH05507680A - ヘテロベシキュラー・リポゾーム - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 発明の名称　へテロベシキュラー・リボゾーム発明の分野 本発明は合成へテロベシキュラー脂質小嚢あるいはりボゾーム、それらを製造し 、その内部に種々の物質をカプセル化するためのプロセス、そしてそれらによる 患者の措置に関するものである。

発明の背景 多小嚢性リボゾームは、キム等（＋９８３、Ｂｉｏｃｈｉｍ、　Ｂｉｏｐｈｙｓ 。

Ａｃｔａ　７８２．３３９−３４８）が最初につくった３つの主要なタイプのり ボゾームのひとつであり、内部に複数の非同心的含水室が存在している点で、単 薄片性（ファン、１９６９、Ｂｉｏｃｈｅ＋＋＋１ｓｔｒｙ８．３４４−３５２ 　；キム等、＋９８１．　Ｂｉｏｃｈｉｍ、　Ｂｉｏｐｈｙｓ、　Ａｃｔａ　６ ４６゜１−１０）および多薄片性（パンハム等、１９６５、Ｊ、　Ｍｏｌ、　Ｂ ｉｏ。

１３、２３８−２５２　）リボゾームとは明確に異なっている。上に述べたりボ ゾームをつくるための手法は非多小嚢性リボゾームに関するものであり、例えば 、米国特許４４．５２２．８０３−レンダ、患４，３１０，５０６−バルデシユ ウイーラー、走４，２３５，８７１−パパハジョプーロス、ｋ４．２２４．１７ ９−４．０７８．０５２−パパハジョブーロス、Ｎｎ４，３９４，３７２−ティ ラー患４．３０８．１６ローマルチエツテイ、患４．４８５．０５４−メゼイ、 および気４．５０８．７０３−レジニヤツク参照。

リポゾーム調製の種々の方法についての包括的な検討については、スゾカ等（１ ９８０、Ａｎｎ、　Ｒｅｖ、　Ｂｉｏｐｈｙｓ、　Ｂｉｏｅｎｇ、９　：４６７ −５０８）参照。

ヘテロベシキュラー・リボゾームは、少なくとも２つの異なった組成の物質がひ とつのりボゾーム内の別の室にそれぞれカプセル化されている複数の内部含水室 を持った脂質小嚢あるいはりポゾームである。複数の内部含水室を持った脂質小 嚢あるいはりポゾームは多薄片性リボゾーム、安定した少薄片性リボゾーム、お よび多小嚢性リポゾームなどが含まれているが、これらだけに限られるものでは ない。２つ異常の異なった物質がリボゾームの各室に一緒にカプセル化されてい るのではなく、ひとつのりボゾームの別の室にそれぞれカプセル化されているリ ボゾーム伝達システムを提供するのが非常に有利である。

発明の要約 本発明による組成物はへテロベシキュラー・リボゾーム、例えば、２つ以上の異 なった物質がひとつのりボゾーム内の異なった室にそれぞれ別々にカプセル化さ れている複数の内部含水室を持った脂質小のうあるいはりボゾームで構成されて いる。簡単に言うと、本発明による方法は第一の脂質成分のためにひとつあるい は複数の有機溶剤に両親媒性脂質を溶かし、カプセル化される物質を含んでいる まざらない第一の水性成分を、好ましくは塩酸の存在の下で加え、そしてその混 合物を機械的に乳化することにより、「水中脂質」乳化を行うことにより構成さ れる。

この乳濁液において、有機溶剤中に懸濁された水滴が内部含水室を形成し、含水 室をおおっている両親媒性脂質の単層は最終的な生成物においては、二層膜のひ とつの葉状体となる。次に、第二の脂質成分は両親媒性脂質を揮発性有機溶剤に 溶かし、カプセル化される第二の物質を含んでいるかざらない第二の水性成分を 好ましくは塩酸の存在下で加えることによって形成する。そうすると、第二の乳 濁液がつくられる。

次に、第一と第二の乳濁液を結合して、キメラ性乳濁液を形成する。このキメラ 性乳濁液は２つの異なった組成の物質がそれぞれ別の水滴内に溶解されている有 機溶剤中に懸濁されている複数の水滴で構成されている。このキメラ性乳濁液は 次に、好ましくはひとつ、あるいは複数の非イオン性浸透性作用物質と低イオン 力の酸中性他作用物質を含んだ第三の水性の混ざらない成分に浸し、機械的に分 割して、第三の水性成分に懸濁された溶剤小球を形成する。この溶剤小球は、２ つの異なった組成の物質が、ひとつの溶剤小球内の異なった水滴内に別々の溶け ている複数の水滴を含んでいる。揮発性有機溶剤は好ましくはその懸濁液状にガ ス流を通過させることによって、小球から蒸発される。溶剤が完全に蒸発される と、これら小球は、異なった組成の２つの物質がひとつのりボゾーム内の異なっ た室にそれぞれ別にカプセル化されている複数の内部含水室を有するヘテロベシ キュラー・リボゾームに変わる。

カプセル化の効率を高めるため、および生理液およびイン・ビボでカプセル化さ れた粒子の漏出速度を遅くするためには、中性化作用物質と塩酸を一緒に、ある いは漏出速度が低いその他の塩酸塩の使用するのが好ましい。また、溶剤小球が 互いにくっつくのを防ぐためには低イオン力の中性化作用物質を使用するのが好 ましい。

従って、それぞれが小嚢あるいはりポゾームの別の室に別々にカプセル化された 異なった組成の物質を少なくとも２つ有するヘテロベシキュラー・脂質小嚢ある いはりボゾームを提供することが本発明の目的である。

本発明のもうひとつの目的は、それぞれが、塩酸あるいはそれらの漏出を遅らせ るその他の塩酸塩の存在下でリボゾームの複数の室にそれぞれ別個にカプセル化 された、異なった組成の少なくとも２つの生物学的活性を有する物質を含んだヘ テロベシキュラー・リボゾームの提供である。

本発明のさらにもうひとつの目的は、それぞれが、塩酸あるいは他の塩酸塩と中 性化作用物質の存在下でリボゾームの複数の室にそれぞれ別個にカプセル化され た、異なった組成の少なくとも２つの生物学的活性を有する物質を含んだヘテロ ベシキュラー・リボゾームの提供である。

本発明のもうひとつの目的はこうしたヘテロベシキュラー脂・質小嚢あるいはり ポゾームを提供することである。

本発明の別の目的は、ひとつあるいは複数の有機溶剤に溶解された第一の脂質溶 剤を提供し、その脂質成分にカプセル化される第一の物質を含む混ざらない第一 の水性成分を加え、その第一の２つの混ざらない成分から第一の油中水乳濁液を 形成し、ひとつあるいは複数の有機溶剤を提供し、脂質成分にカプセル化される 第二の物質を含む混ざらない第二の水性成分を加え、第二の２つの混ざらない成 分から第二の油中水乳濁液を形成し、第一の油中水乳濁液と第二の油中水乳濁液 を組み合わせてキメラ性乳濁液を形成し、このキメラ性乳濁液を第三の混ざらな い水性成分に浸し、このキメラ性乳濁液を分散させて第一の物質を含んだ第一の 水性成分と第二の物質を含んだ第二の水性成分の複数の水滴を含んだ溶剤小球を 形成し、さらに、ヘテロベシキュラー脂質小嚢あるいはりボゾームを形成するた めにその溶剤／Ｊ％球から有機溶剤を蒸発させることによって、こうしたヘテロ ベシキュラー脂質小嚢あるいはりボゾームをつくりだすためのプロセスを提供す ることである。別の目的は、種々の親水性で生物学的活性を有する物質および・ ・・・・・がヘテロベシキュラー脂質小嚢あるいはりボゾームの室に別々にカプ セル化できるようなプロセスを提供することである。

本発明のさらに別の目的は、ヘテロベシキュラー脂質小嚢あるいはりボゾーム内 の室に別個にカプセル化された少なくとも２つの別個の生物学的活性を有する異 なった組成の物質を用いて、それらを患者に投与することにより、患者を措置す るための方法を提供することである。本発明のさらに別の目的、特徴そして利点 は仕様書および権利請求の範囲全体を通じて述べられている。

図面の簡単な説明 図１−８はへテロベシキュラー小嚢あるいはりボゾームの調製を図解する系統図 である。

好ましい実施例の説明 本明細書および特許請求の範囲全体を通じて使われている「多小嚢性すボゾーム ゴという用語は、人がつくった、すべてが同じ成分を含んだ非同心的含氷室を包 んだ脂質二層膜でできた顕微鏡的脂質小嚢を意味している。これとは対照的に、 明細書および特許請求の範囲全体で使われている「ヘテロベシキュラー・リポゾ ーム」という用語は、人がつくった、少なくとも２つの室がそれぞれ別個に異な った組成の物質を含んでいる複数の含水室を包んだ脂質二層膜を意味している。

この顕微鏡的脂質小嚢は多薄片性リポゾーム、安定した少薄片性リボゾーム、お よび多小嚢性リボゾームなどを含んでいる。

明細書および特許請求の範囲全体で使われている「キメラ性乳濁液」という用語 は、２つの異なった組成の物質がそれぞれ別の水滴中に溶は込んでいる、有機溶 剤中に懸濁された複数の水滴で構成される乳濁液を意味している。

明細書および特許請求の範囲全体で使われている「溶剤小球Ｊという用語は、そ の内部に水溶液の複数の小型水滴がある有機溶剤の顕微鏡的球状水滴を意味して いる。この溶剤小球は第二の水溶液中に懸濁させ、全体的に浸される。

「中性脂質」という用語は、それら自身では膜形成能力を有しておらず、親水性 「ヘッド」グループを欠いている油あるいは油脂類を意味している。

両親媒性脂質という用語は、「ヘッド」グループおよび親水性「テイル」グルー プを有し、膜形成能力を有している粒子を意味している。

本発明の組成物は、それぞれが小嚢あるいはりボゾームの別の室にそれぞれ別に カプセル化されている違った組成の物質を少なくとも２つ有するヘテロベシキュ ラー脂質小嚢あるいはりボゾームである。これらには薬品と、ＤＮＡ、ＲＮＡ。

種々のタイプの蛋白質、人において効果的な組み換えＤＮＡ技術によってつくり だされた蛋白質ホルモン、造血成長因子、モノキュ類、リンパキュ類、腫瘍壊死 因子、インヒビン、腫瘍成長因子アルファおよびベータ、ミュラー抑制物質、神 経成長因子、繊維芽細胞成長因子、血小板誘導成長因子、ＬＨおよびその他の放 出ホルモンを含む粘液および脳下垂体ホルモン、カルシトニン、ワクチン化のた めの免疫原として機能する蛋白質、およびＤＮＡとＲＮＡシーケンスが含まれる 。

以下の表１は人において効果的で、塩酸塩の存在下でヘテロベシキュラー・リボ ゾームにカプセル化できる代表的な生物学的活性を有する物質のリストである。

表　１ 訊」−（±３−鯉　童り五」Ｌ２二Ｍ　１ヨー」計−二般メタブロテレノール　 ブロバノロル　りロロブロマジンアミノフイリン　アテノロル　ベンゾジアゼピ ンテオフィリン　ヴニラバミル　ブチロフェノンテルブタリン　カプトプリル　 とドａキシジンテグレトル　イソソルバイト　メブロバメイトエフェドリン　フ ェノチアジン イソプロテレノール　レセルピン アドレナリン　チオキサンチン ルビネフィリン ｔ」幻μ　ホルモン　したヨ」 ジギタリス　抗瀕尿剤　プレドニゾン ディジトキシン　ニルテコステロイド類　トリ７ムシノロンラナトサイドＣテス トステロン　ヒドロコルチゾンディゴキシン　ニストロゲン　デグサメタゾン甲 状腺剤　ベータメタシン 成長　ブレドニゾＵン ＣＴＨ 鉱物性コルチコイド Ｈ ＨＲＨ ＳＨ カルシトニン 韮」Ｌ血」ミ赳　式−蟹一尿一五　Ｌ」Ｌ三叉］≦と虱アブレゾリン　ディ７ペ ニーズ　ビリベンザミンアテノロル　インシュリン　りロルフエニラミンジフエ ンヒドラミン 茗」Ｌ生」辷筬　立−二−２−赳　菖−一艶−−虱ブラジカンテル　７ザチオブ リン　モルフインメトロニダゾール　プレオマイシン　ディラウディッドペンタ ミジン　シクロフォスフアマイド　コディンアドリアマイシン　コディン状合成 剤 ダウノルビシン　デメノール ピンクリスチン　ｔキシモル７オン メトトレキサイト　フェノバルビタル ６−ＴＧ　バルビッール酸塩 ６−ＭＰ Ｕ 五−ＬＪＬＪＬ　文」コ旧り五　ニームｌ二之ペニシリン　インターフェロン　 インフルエンザテトラサイタリン　インターロイキン　−２発汗性シンシチアル エリスロマイシン　モノクロナール　抗体　ウィルスセファロチン　ガンマグロ ブリン　へモフイラス・インフルエンザ・ワクチンイミベネン セロファクサミン ＊ｈヘニシ”Ｊン’）　−１’　）ｔｔ７．−７市。

ヴアンコマイシン　７ンフオテリシンＢ　アシクロビルおよび誘導体ジェンタマ イシン　ミコナゾール トブラマイシン　ムラミル・ジベブタイド　ウィンスロブブー５１７１１ピペラ ジリン　グロトリマゾール　リバビリンアンピシリン　まζ二但【」奥、■Ｅ− ｈ１そのほかの７ミノ配糖体類 白　゛よび　白　」ΣｐΣ土１ リンパキン類　細胞表面受容体阻止斉Ｊインターロイキン−１，２，３，４，５ および６−Ｃ５Ｆ １圭立壊死因子　ＲＮＡ インヒビン　メチルフオスフオネートおよびその類似物ｌ生立成長因子 ミュラー抑制剤物質 神経成長因子 繊維芽細胞因子 血小板誘導成長因子 凝結化因子（ＶＩＩＩ、ＩＸ、ＶＩＩなど）インシュリン 組織プラスミノーゲン活性剤 組織互換性抗原 ｌ圭立形成性生成物 ミニリン基本蛋白質 コラーゲン フィブロネクチン ラミニン その他の遺伝子組換技術によりつくられた蛋白質ヘテロベシキュラー小嚢あるい はりボゾームをつくる好ましい方法をこれから説明する図に示す。ステップ１　 （図１）で、カプセル化される組成物１０の第一の水性物質が小さなビン１４で 第一の脂質成分に加えられる。ビン１４は密封され、ステップ２（図２）で、カ プセル化される組成物１０の第一の物質を含んでいる第一の油中水乳濁液１６を つくるため（こ、渦巻ミキサーの頂部に取り付けるなどの方法で、混合、揺すら れる。ステップ３　（図３）、第二の小ビン１４ａで、カプセルイヒされる第二 の水性１０ａが第二の脂質成分１２ａに加えられ、ビン１４ａが密封され、ステ ップ４（図４）で、カプセル化される組成物１０ａの物質を含んでいる第二の油 中水乳濁液１６ａをつくるために、渦巻ミキサーの頂部に取り付けるなどの方法 で、かき混ぜられる。

ステップ５　（図５）で、第一１６および第二１６ａの油中水乳濁液が、「キメ ラ性」乳濁液をつくるために一緒にされて、例えば手で混合される。

ステップ６　（図６）で、ステップ５で作成されたキメラ性乳濁液の一部は、図 に示すような２つの１ドラム・ビンに先のとがったパスツール・ピペットを通じ てすばやく噴出させるなどの方法で、第三の混ざらない水性成分を含んだビンに それぞれ加えられる。

ステップ７（図７）で、ステップからの小ビンを、渦巻ミキサーなどの手段を用 いて揺すり、ステップ８（図８）で、各ビンのクロロフォルム小球懸濁液がステ ップ７からの蒸発タンクに移され、クロロフォルムは窒素ガスのストリームなど により蒸発され、それによって、ひとつ、あるいは複数の内部含水室内に第一の 物質を含んでおり、ひとつのりポゾーム内部の残りの内部含氷室に第二の物質を 含んでいるヘテロベシキュラー・リボゾームを提供する。

好ましくは、カプセル化されるこれらの物質はそれぞれ、塩酸など、リボゾーム あるいは小嚢からの漏出速度を遅らせる塩酸塩の存在下で、カプセル化される。

上に述べた通り、表１に示すいずれの生物学的活性を有する物質も小嚢あるいは リボゾームの室に別個に分けてカプセル化することができる。

以下の例は異なった組成の２つの物質を小嚢あるいはりボゾームの別の室にカプ セル化する現在の段階での好ましい方法を示している。

童１１ ジデオキシシチジン／グルコース・ヘテロベシキュラー・リボゾームの調製 ステエエ上　第一の水性物質（２０ｍｇ／ｍｌのジデオキシシチジン水溶液の１ ｍｌと０．ＩＮ塩酸）を第一の脂質成分（ジオレオイル・レシチン９．３ｕｍｏ ｌｅ、ジパルミトイル・フオスファチジルグルセロル２．１ｕｍｏｌｅ、　：） レスチロール１５ｕｍｏｌｅ、トリオレイン１．８ｕｍｏｌｅ１およびクロロフ ォルム１ｍ１）を含むｌ−ドラム・ビンに加えた。

スエエヱ主　第一の小ビンを密封し、渦巻ミキサーの頂部に取り付けて、最大の 速度で６分間振動を加え、第一の油中水乳濁液をつくった。

ステップ３　第二の小ビンで、第二の水性物質（３０ｍｇ／ａｌのグルコース水 溶液１ｍｌと０．ＩＮ塩酸）を第二の脂質成分（第一の脂質成分と同じ）に加え た。

２ｉユヱ土　第二の小ビンを密封し、渦巻ミキサーの頂部に取り付けて、最大速 度で６分間振動を加え、第二の油中水乳濁液をつくった。

スヱヱヱ旦　第一の乳濁液０．５ｍｌを第二のビンに加えて、手でかき混ぜ、「 キメラ性」乳濁液をつくった。

１とテ巳仁プ」−「キメラ性」乳濁液の半分を先の細いパスツール・ピペットを 通じて、それぞれ第三の混ざらない水性成分（水２．５ｍｌ、グルコース３２ｍ ｇ／ｍｌ、遊離塩基リジン４０ｍＭ）を含んでいる１−ドラム・ビン内に急速に 噴出させた。

ステュ２７　ステップ６の小ビンを渦巻ミキサーの取り付けて、′５”セツティ ングで３秒間振動を加えて、内部に第一および第二の水性物質の水滴を複数含ん だ溶剤小球をつくった・ スエユ７８　各ビン内のクロロフォルム小球懸濁液を水、３５ｍｇ／ｍｌグルコ ース、および遊離塩基リジン２２ｍＭの混合物を４．５ｍｌを含む２Ｌビーカー の底に移した。７Ｌ／ｍｉｎの速度の窒素ガス流をビーカーに通し、１５℃の温 度で５分間、クロロフォルムを蒸発させた。

上の例はひとつのりポゾーム内の内部含水室の約５７６にグルコースを、残りの 約１／６の内部含水室にジデオキシシチジンを、それぞれ別個に含んでいるヘテ ロベシキュラー・リボゾームをつくるための方法について述べたものである。

ひとつの水性物質としてジデオキシシチジンを、そして第二の水性物質としてグ ルコースを含んでいるヘテロベシキュラー・リボゾームは、非ヘテロベシキュラ ー・リボゾームよりはるかに安定していた。

■−呈 これはｒＬ−２（インターロイキン−２）およびリジン塩酸塩を含んだヘテロベ シキュラー・リボゾームの合成に関するものである。調製されたりポゾームの各 バッチに対して、１０ｍｇ／ｍｌのＨ３Ａ　（ヒト血清アルブミン）、ＩＬ−２ をｌｕｇ、そしてｐＨ７，１３のリジン塩酸２００ｍＭを含む水１ｍｌを、ジオ レオイル・レシチン９．３ｕｍｏｌｅ、ジパルミトイル・レシチン２．１ｕｍｏ ｌｅ。

コレステロール１５ｕｍｏｌｅ、そしてトリオレイン１．８ｕｍｏｌｅ、および １ｍｌのクロロフォルム（これは第一の油中水乳濁液）を含んでいる１−ドラム ・ビンに加えた。第二の油中水乳濁液として、リジン塩酸１ｍｌ　（ＩＬ−２な し）がジオレオイル・レシチン９．３ｕｍｏｌｅ、ジパルミトイル・フオスファ チジルグリセロル２．　ｌｕｍｏｌｅ、コレステロル１５ｕｍｏｌｅ、そしてト リオレイン１．８７ｕｍｏｌｅとクロロフォルム１ｍｌを含んだｌ−ドラム・ビ ンに加えた。２つのビンのそれぞれを渦巻ミキサーの頂部に取り付けて、６分間 連続的に最大速度で振動を加えた。第一の油中水乳濁液０．５ｍｌを第二の乳濁 液２＋ａｌに加え、混ぜ合せて「キメラ性」の油中水乳濁液をつくった。「キメ ラ性」乳濁液の半分は先の細いパスツール・ピペットでそれぞれ４％グルコース ２．５ｍｌとリジン遊離塩基、２００ｍ１を０９１ｍ１含んだ複数の１−ドラム ・ビンに勢いよく噴射し、３秒間最大速度で振動を加えて、クロロフォルム小球 をつくった。このフルルフォルム懸濁液を４％グルコース水溶液５ｍｌとリジン 遊離塩基、２００ｍＭを０．２ｍｌ含んでいる２５０ｍ１エーレンメイヤー・フ ラスコに移した。？　Ｌ／ｍｉｎの流速の窒素ガス流をフラスコに通して、３７ ℃で５分間クロロフォルムを蒸発させた。

！Ｌ−１ この例は第一の水性物質としてａｒａ−Ｃ溶液を、そして第二の水性物質として 蒸留水を含んでいるヘテロベシキュラー・リボゾームの合成に関するものである 。調製されたりポゾームの各バッチに対して、ｐＨ１，１のａｒａ−Ｃ，ｌｏｏ ｍｇ／ｍｌを含む水１ｍｌをジオレオイル・レシチン９．３ｕｍｏｌｅ、ジパル ミトイル・フオスファチジルグリセロル２．ｌｕ’ｍｏｌｅ、コレステロール１ ５ｕｍｏｌｅ、そしてトリオレイン１，８ｕｍｏｌｅとクロロフォルム１ｍｌを 含んでいる１−ドラム・ビンに加え、渦巻ミキサーの頂部に取り付けて、最大速 度で６分間振動を加えた（これは第一の油中水乳濁液である）。第二の油中水乳 濁液を１ｎｓｉｔｕで発生させるために、内容物の１７２を第一の油中水乳濁液 から取り除き、次に１ｍｌの蒸留水を残りの第一の油中水乳濁液に加え、１−ド ラム・ビンに最大速度で１０秒間振動を加えた。

これにより「キメラ性」油中水乳濁液がつくられた。この「キメラ性」乳濁液の 半分を、それぞれ４％グルコース水溶液２．Ｏｍｌおよびリジン遊離塩基、２０ ０ｍ１を０．５ｍｌ含んだｌ−ドラムに、先の細いパスツール・ピペットを通じ て勢い良く噴出させ、最大速度で３秒間振動を加えて、クロロフォルム小球をつ くった。このクロロフォルム小球懸濁液を４％グルコースと、リジン遊離塩基、 ２００ｍＭを０．５ｍｌ含んだ２５０ｍ１エーレンメイヤー・フラスコに移した 。７Ｌ／ｍｉｎの流速を持つ窒素ガス流をフラスコに通して、３７℃で５分間ク ロロフォルムを蒸発させた。

！ニー先 粒状マルコフアーゼ・コロニー刺激因子（ＣＭ−Ｃ５Ｆ）を含んだヘテロベシキ ュラー・リボゾームの合成Ｌ−２がＬｕｇのＧトＣ５Ｆと取り替えられたことを 除いて、例２とまったく同じ手順が用いられた。

五−１ 種々の脂質組成のへテロベシキュラー・リボゾームの合成、および種々の物質の りボゾームへの組み込みジオレオイル・レシチンを使用する代りに、ジパルミト イル・フオスファチジルグルセロル、コレステロールおよびトリオレイン（ＴＯ ）と、フォスファチジル・コリン類（ｐｃ）、カルシオリビン（ＣＬ）　、シミ リストイル・フォスファチジルグリセロル（ＤＭＰＧ）　、フォスファチジル・ エタノラミン類（ＰＥ）　、フォスファチジル・セリン類（ｐｓ）　、シミリス トイル・フォスファチジック酸（ＤＭＰＡ）　、および種々の組み合せのトリカ ブリリン（ＴＣ’）などのその他の中性脂質を用いて、同じ結果を得ることがで きる。例えば、４．５／４．５／　１　／　１モル−比のＰＣ／Ｃ／ＣＬ／Ｔｏ 、　４．５／４，５７１１１モル比のｐｏｐｃ７ｃ７ｐｓ７ｒｏ、５／４／ｌ／ １のモル比のＰＣ／Ｃ／ＤＰＰＧ／ＴＣ，５／　４　／　１　／　１のモル比の ＰＣ／Ｃ／ＰＧ／ＴＣ，４，５／４．５／　１　／　１のモル比のＰＥ／’Ｃ／ ＣＬ／ＴＯ１および５　／４．５／　１　／　１のモル比のＰＣ／Ｃ／ＤＭＰＡ ／ＴＯを使うことができる。

グルコース、サクロース、メソトレキセート、Ｐｏｎｃｅａｕ　Ｓなどその他の 水に溶ける物質を組み込むためには、単に例２で望ましい物質をＩＬ−２と取り 替えるだけでよい。また、表１に示されているようなその他の生物学的活性を有 する物質を、例２の場合のように適切な量でＩＬ−２と取り替えることができる 。

この例では、上の例の脂買成分内のトリオレインが、ひとつか、組み合せのいず れかで、他のトリグリセリド類、植物油、動物性油脂、トコフェロール類、トコ フェロール・エステル類、コレステリル・エステル類、あるいは炭化水素と置換 して、良い結果が得られる。

五−１ 上に述べた例の場合よりリボゾームを小さくするために、そして例１あるいは２ を念頭に置いて、例１あるいは２のステップ４での振動あるいは均一化の機械的 な力あるいは継続時間を増大した。また、リボゾームをより大きくするために、 例１あるいは２のステップ４の振動、あるいは均一化の機械的な力、あるいは継 続時間を減少した。

これらのへテロベシキュラー・リボゾームは、望ましい措置を行うという具体的 な目的のために、２つの別個の生物学的活性を有する化合物を患者に提供するこ とが望ましい場合、通常の形態でその患者に提供することができる。人に使用す るために適切な投与量範囲は、体の表面積に対してｌ　−６０００■７ｍの範囲 を含んでいる。この範囲が非常に大きい理由は、皮下投与などいくつかの使い方 の場合、必要となる投与量がまったく少なくてもよいのに対して、腹膜的投与の 場合のような他の使い方の場合は、望ましい使用量はまったく巨大になる可能性 があるからである。上に述べた範囲以外の投与量を用いることもできるが、この 範囲は実際的にすべての生物学的に活性のある物質の使用範囲を含んでいる。

多小嚢リボゾームは、例えば、包膜内、腹膜内、皮下、静脈内、リンパ管内、経 口および粘膜経由、気管支上皮を含む多くの異なった種類の上皮下、胃腸上皮、 そして体の種々の粘膜、筋肉内など、いずれの望ましい経路ででも投与すること ができる。

ひとつのりボゾームの複数の室に３つ以上の物質をカルセル化する場合、第三、 あるいは第四の生物学的活性を有する物質を含んでいる第三（あるいは第四の） 水性成分を作成し、混ぜあわせて第三あるいは第四の油中水乳濁液をつくり、そ の後、第一および第二の乳濁液と組み合せて、混ぜ合わせ、３つあるいはそれ以 上の生物学的活性を有する物質を含む「キメラ性」乳濁液をつくる。このプロセ スの残りの部分は２つの生物学的活性を有する化合物、あるいは物質をカプセル 化する場合に述べたのと同じである。

従って、本発明はその目的と首尾を達成し、上述の利点、およびそれに固有のそ の他の利点を有している。

本発明の事例を開示のため上に述べたが、添付権利請求の範囲で明確に述べてい るような発明の精神の範囲内で、変更を行うことは可能である。

ヘテロベシキュラー・リボゾーム 要約 それぞれがリボゾームの別の室のカプセル化されている異なった生物学的活性を 持った組成物による物質を含み、決められたサイズ分布を有し、平均サイズを調 節でき、内部室のサイズと数を調整できるヘテロベシキュラー・リボゾーム、そ れらをつくる方法、およびそれらを用いての患者の措置が開示されている。

補正書の写しく翻訳文）提出書（特許法第１８４条の８）平成４年９月１８８１

Claims (33)

【特許請求の範囲】
1. １．同じリポゾームの別の室にカプセル化された、少なくとも２つの異なった生 物学的活性をもった物質を有するヘテロベシキュラー脂質小嚢あるいはリポゾー ム。
2. ２．以下のステップで構成された、含水室にカプセル化された、少なくとも２つ の異なった生物学的活性をもった物質を有するヘテロベシキュラー脂質小嚢ある いはリポゾームをつくるためのプロセス： （ａ）ひとつあるいは複数の有機溶媒に溶かされた第一の脂質成分を提供し、該 脂質成分に、カプセル化される第一の生物学的活性をもった物質を含む混ざらな い第一の水性成分を加える； （ｂ）第一の２つの混ざらない成分から第一の油中水乳濁液をつくる； （ｃ）ひとつあるいは複数の有機溶剤に溶けた第二の脂質成分を提供し、該脂質 成分に、カプセル化される第二の物質を含んでいる混ざらない第二の成分を加え る；（ｄ）第二の２つの混ざらない成分から第二の油中水乳濁液をつくる； （ｅ）第一の油中水乳濁液と第二の油中水乳濁液を組み合わせてキメラ性乳濁液 をつくる； （ｆ）該有機溶剤と混ざらない第三の溶媒にステップ（ｅ）の生成物を移して、 浸す； （ｇ）そのキメラ性乳濁液を分散させて、第一の物質を含んでいる第一の水性成 分と第二の物質を含んでいる第二の水性成分の水滴を複数含んでいる溶剤小球を つくる、そして； （ｈ）その溶剤小球から有機溶剤を蒸発させてヘテロベシキュラー・リポゾーム をつくる。
3. ３．第一および第二の脂質成分がリン脂質、あるいはいくつかのリン脂質の混合 である特許請求第２項のプロセス。
4. ４．３つ以上の混ざらない水性成分を含んでいる３つ以上の油中水乳濁液を組み 合わせてキメラ性乳濁液がつくられる特許請求の範囲第２項のプロセス。
5. ５．第一および第二の脂質成分が同じである特許請求の範囲第２項のプロセス。
6. ６．リン脂質がホスファチジルコリン、カルジオリピン、ホスファチジルエタノ ールアミン、スフィンゴミエリン、リソホスファチジルコリン、ホスファチジル セリン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルグリセロール、およびホ スファチド酸で構成されるグループから選ばれる特許請求の範囲第３項のプロセ ス。
7. ７．ひとつあるいは複数の脂質成分が全体として負の電荷を有する脂質を含んで いる特許請求の範囲第３項のプロセス。
8. ８．少なくともリン脂質のひとつがコレステロールとの混合物として与えられて いる特許請求の範囲第３項のプロセス。
9. ９．少なくとも、リン脂質のひとつがステアリルアミンとの混合物で与えられて いる特許請求の範囲第３項のプロセス。
10. １０．第一および第二の物質のうちの少なくともひとつが親油性の生物学的活性 を持った物質である特許請求の範囲第２項のプロセス。
11. １１．第一および第二の脂質成分のうちの少なくともひとつが、単独か、あるい はトリグリセリド、植物油、動物性油脂、トコフェロール類、トコフェロール・ エステル類、コレステリル・エステル類、および炭化水素と組み合わさった中性 脂質である特許請求の範囲第２項のプロセス。
12. １２．有機溶剤がエーテル類、炭化水素、ハロゲン化炭化水素、ハロゲン化エー テル、エステル類、およびそれらの組み合わせで構成されるグループから選ばれ る特許請求の範囲第２項のプロセス。
13. １３．塩酸塩が塩酸、塩酸リジン、塩酸ビスチジン、およびそれらの組み合わせ で構成されるグループから選ばれる特許請求の範囲第２項のプロセス。
14. １４．生物学的活性をもった物質が親水性である特許請求の範囲第２項のプロセ ス。
15. １５．親水性の生物学的活性をもった物質が、インターロイキン−２、シトシン ・アラビノシド、メソトレキセート、５−フルオロラシル、シスプラチン、フロ ックスウリジン、メルファラン、メルカプトプリン、チオグアニン、チオテパ、 ビンクリスチン、ビンプラスチン、ストレプトゾシン、リュープロライド、イン ターフェロン、カルシトニン、ドクソルビシン、ダウノルビシン、ミトキサスロ ン、アマクリン、アクチノミシン、およびプレノマイシンで構成されるグループ から選ばれる特許請求の範囲第１４項のプロセス。
16. １６．２つの成分の乳化が、機械的撹拌、超音波エネルギー、およびノズル微粒 化で構成されるグループから選ばれる方法を用いて行われる特許請求の範囲第２ 項のプロセス。
17. １７．第三の水性成分が少なくともひとつの酸中性化作用物質を含んでいる特許 請求の範囲第３項のプロセス。
18. １８．その酸中性化作用物質が、単独か、遊離塩基リジンおよび遊離塩基ビスチ ジンで構成されるグループから選ばれる特許請求第１７項のプロセス。
19. １９．第三の水性成分がさらに含水炭素およびアミノ酸で構成されるグループか ら選ばれる溶質を含む水溶液である特許請求の範囲第１７項のプロセス。
20. ２０．第三の水性成分が、グルコース、サクロース、ラクトース、遊離塩基リジ ン、および遊離塩基ビスチジンで構成されるグループから、単独、あるいは組み 合わせで選ばれる溶質を含んでいる水溶液である特許請求の範囲第１７項のプロ セス。
21. ２１．溶剤小球をつくるための分散が、機械的撹拌、超音波エネルギー、および ノズル微粒化で構成されるグループから選ばれる方法で行われる特許請求の範囲 第２項のプロセス。
22. ２２．有機溶剤の蒸発が第二の水性成分上を窒素ガスを通過させることにより行 われる特許請求の範囲第２項のプロセス。
23. ２３．カプセル化される生物学的活性をもった物質が表１の組成物で構成される グループから選ばれる特許請求の範囲第２項のプロセス。
24. ２４．特許請求の範囲第２項の方法でつくられるヘテロベシキュラー・リポゾー ム。
25. ２５．同じリボゾームの別個の室にカプセル化された少なくとも２つの異なった 生物学的活性をもった物質を有しており、それらの物質の少なくともひとつが塩 酸塩の存在下でカプセル化されたヘテロベシキュラー・リポゾーム。
26. ２６．該塩酸塩が塩酸、塩酸リジン、塩酸ビスチジン、およびそれらの組み合わ せで構成されるグループから選ばれる特許請求の範囲第２５項のヘテロベシキュ ラー・リポゾーム。
27. ２７．同じリポゾームの別個の室にカプセル化された少なくとも２つの異なった 生物学的活性をもった物質を有しており、それらの物質の少なくともひとつが塩 酸かその他の酸塩酸塩およびひとつの中性化作用物質の存在下でカプセル化され たヘテロベシキュラー・リポゾーム。
28. ２８．該生物学的活性をもった組成物が表１の組成物で構成されるグループから 選ばれる特許請求の範囲第２５項のヘテロベシキュラー・リポゾーム。
29. ２９．該生物学的活性をもった組成物が表１の組成物で構成されるグループから 選ばれる特許請求の範囲第２７項のヘテロベシキュラー・リポゾーム。
30. ３０．２つの異なった生物学的活性をもった物質を用いて、それぞれがひとつの ヘテロベシキュラー・リポゾームの別個の室にカプセル化されている該物質を患 者に投与することを内容とする、患者の措置方法。
31. ３１．少なくとも２つの生物学的活性をもった物質を用いて、特許請求の範囲第 ２５，２６，２７，２８，２９あるいは３０項によるヘテロベシキュラー・リポ ゾーム内の該物質を患者に投与することを内容とする、患者の措置方法。
32. ３２．該生物学的活性をもった物質が抗不整脈剤、抗ぜんそく剤、抗生物質、抗 ガン剤、抗糖尿病剤、抗菌剤、抗ヒスタミン剤、抗高血圧剤、抗低血圧剤、抗発 汗剤、抗ビールス剤、細胞表面受容体阻止剤、グルコース、強心用配糖体、ホル モン類、免疫療法薬、核酸および類似物、蛋白質および糖蛋白質、鎮静剤および 無痛剤、ステロイド、トランキライザー、ワクチンおよび水で構成されるグルー プから選ばれる、同じリポゾームの別の室にカプセル化された少なくとも２つの 異なった生物学的活性を持った物質を有するテロベシキュラー脂質小嚢あるいは リポゾーム。
33. ３３．該生物学的活性をもった物質が抗不整脈剤、抗ぜんそく剤、抗生物質、抗 ガン剤、抗糖尿病剤、抗菌剤、抗ヒスタミン剤、抗高血圧剤、抗低血圧剤、抗発 汗剤、抗ビールス剤、細胞表面受容体阻止剤、グルコース、強心用配糖体、ホル モン類、免疫療法薬、核酸および類似物、蛋白質および糖蜜白質、鎮静剤および 無痛剤、ステロイド、トランキライザー、ワクチンおよび水で構成されるグルー プから選ばれる特許請求の範囲第２項のプロセス。