KR970004907B1 - 하이드로클로라이드의 존재하에서 캅셀화된 생물학적 활성물질을 함유하는 다소포성 리포좀 - Google Patents

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Description

하이드로클로라이드의 존재하에서 캅셀화된 생물학적 활성물질을 함유하는 다소포성 리포좀

본 발명은 생물학적 활성물질을 캅셀화하는 합성 다소포성 지질 소포체(multivesicular lipid vesicle) 또는 리포좀(liposome), 및 이의 제조 방법에 관한 것이다.

다소포성 리포좀은 3가지 주요 리포좀 유형중의 하나이며, 김(Kim) 등에 의해 최초로 제조되었고[참조 : Kim et, al., 1983, Biochim. Biophys. Acta 782, 339-348], 이들 리포좀 내에 다수의 비동심성 수성 챔버(non-concentric aqueous chamber)가 있다는 점에서 단일층 리포좀[참조 : Huang, 1969, Biochemistry 8, 334-352; Kim et. al., 1981, Biochim. Biophys. Acta 646, 1-10] 및 다중층 리포좀[참조 : Bangham et. al., 1965, J. Mol. Bio. 13, 238-252]과는 아주 다르다. 선행 기술은 리포좀을 제조하는 여러가지 방법을 기술하고 있지만, 이들 방법 모두는 비-다소포성 리포좀의 제조방법에 관한 것이며[참조 : 렌크(Lenk)에 허여된 미합중국 특허 제4,522,803호; 발데슈비엘러(Baldeschwieler)에 허여된 특허 4,310,506호; 파파하조폴로스(Papahadjopoulos)에 허여된 특허 제4,235,871호; 슈나이더(Schneider)에 허여된 특허 제4,224,179호; 파파하조폴로스에 허여된 특허 제4,078,052호; 테일러(Taylor)에 허여된 특허 제4,394,372호; 마쳇티(Marchetti)에 허여된 특허 제4,308,166호; 메제이(Mezei)에 허여된 특허 제4,485,054호 및 레드지니악(Rediniak)에 허여된 특허 제4,508,703호], 이들 문헌 모두는 비-다소포성 소포체를 기술하고 있다. 리포좀을 제조하는 여러가지 방법을 포괄적으로 재검토하려면 하기 문헌을 참조한다[참조 : Szoka et. al., 1980, Ann. Rev. Biophys. Bio eng. 9 : 467-508].

김등의 방법[참조 : Kim et al., 1983, Biochim. Biophys. Acta 782, 339-348]은 다소포성 리포좀을 기술하고 있는 유일한 보고서이지만, ara-C와 같은 일부의 작은 분자들의 캅셀화 효율은 비교적 낮고, 캅셀화된 분자의 생체액 내에서의 방출율은 높다.

다수 약제를 사용한 최적의 치료는 장기간 동안 약제 수준이 유지되는 것을 필요로 한다. 예를 들어, 세포 주기-특이적 대사 억제물을 사용한 최적의 항암 처리는 세포 독성 수준이 장기간 유지되는 것을 필요로 한다. 사이타라빈(Cytarabine)은 스케쥴-의존성이 높은 항암제이다. 이 약제는 세포가 DNA를 만들때만 세포를 마멸시키므로, 최적의 세포 사멸을 위해 약제의 치료적 농도에서 장기간의 노출이 요구된다. 불행하게도, 정맥내(IV) 또는 피하(SC) 투여후의 사이타라빈의 반감기는 매우 짧다. 사이타라빈과 같은 세포 주기상-특이적 약제를 사용하여 최적의 암 세포 사멸을 성취하기 위해서는, 2가지의 주요 요구 조건이 맞아야 한다 : 첫째로, 암을 숙주에 비가역적인 손상을 해를 주지 않으면서 고농도의 약제에 노출시켜야 하며; 둘째로, 종양을, 암 세포의 전부 또는 대부분이 사이타라빈의 존재하에서 DNA 합성을 시도하도록 장기간 노출시켜야 한다.

본 발명 이전에, 혈장 세포 내에서 지속적 방출을 수득하는 유일한 방법은 연속적으로 정맥내 또는 피하 주입하는 방법이었지만, 이들 두 방법은 불편하고 비용이 많이 든다. 그러므로, 이들 약제의 데포우 제제에서 허용 가능한 서방성이 요구된다. 과거에는, 연구가들은 이러한 것을, 약제 분자를 화학적으로 변형시켜 대사를 지연시키거나 소수성 잔기를 공유적으로 결합시켜 가용화를 지연시킴으로써 달성하려고 시도하였다. 이러한 조작은 새로운 독성 작용을 일으키거나[참조 : Finkelstein et al., Cancer Treat Rep 63 : 1331-1333, 1979] 또는 허용할 수 없는 약리역학적 또는 제형화의 문제를 낳았다[참조 : Ho et. al., Cancer Res. 37 : 1640-1643, 1977].

따라서, 생물학적 활성물질의 치료적 농도에서 장기간의 지속적인 노출을 제공하는 서방형 데포우 제제가 요구되게 된다. 본 발명은 이러한 제제에 관한 것이다.

본 발명은, 최적 결과를 위해 생물학적 활성물질의 치료적 농도에서 장기간의 지속적인 노출을 제공하는 하이드로클로라이드의 존재하에 캅셀화된 생물학적 활성 물질을 함유하는 다소포성 리포좀을 제공한다. 본 발명은 또한 이러한 다소포성 리포좀을 제조하는 방법도 제공한다.

다소포성 리포좀은 캅셀화 효율이 높고, 캅셀화된 물질의 방출율이 적으며, 잘 정제되어 있고, 재현성 크기 분포를 하고 있으며, 구형이고, 용이하게 증감시킬 수 있는 조절가능한 평균 크기, 조절가능한 내부 챔버 크기 및 수를 가지고 있다.

다소포성 지질 소포체 또는 리포좀을 제조하는 방법은, 하나 또는 그 이상의 유기 용매 중에 적어도 하나의 중성 지질 및 하나 또는 그 이상의 실효 음전하를 갖는 적어도 하나의 양쪽 친화성(amphipathic) 지질을 함유하는 지질 성분을 용해시키고, 수득된 지질 성분에 하이드로클로라이드 및 캅셀화될 하나 또는 그 이상의 물질을 함유하는 비혼화성 제1수성 성분을 가하고, 2개의 비혼화성 성분들로부터 물과 오일의 유제를 형성시키며, 생성된 물과 오일의 유제를 비혼화성 제2수성 성분에 옮겨 액침시키고, 물과 오일의 유제를 분산시켜 제1수성 성분의 다수의 소적을 함유하는 용매 소구를 형성시키며, 용매 소구로부터 유기 용매를 증발시켜 다소포성 리포좀을 형성시키는 단계로 이루어짐을 특징으로 한다. 캅셀화 효율을 높게 하고 캅셀화된 분자의 생체액내 및 생체내에서의 방출율을 저하시키기 위해서는 염산과 같은 하이드로클로라이드의 사용이 필수적이다. 하이드로클로라이드가 산성인 경우, 용매 소구가 서로 점착되는 것을 방지하기 위해 저이온 강도의 중화제를 사용하는 것 또한 필수적이다.

따라서 본 발명의 목적은, 치료적 농도에서 생물학적 활성물질의 장기간의 지속적인 노출을 제공하는 서방형 데포우 제제를 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적은 어떠한 데포우 제제의 제조방법을 제공하는 것이다.

본 발명의 또다른 목적은 내부에 캅셀화된 생물학적 활성물질을 함유하며 치료적 농도에서 장기간의 지속적인 노출을 갖는 다소포성 리포좀을 제공하는 것이다.

본 발명의 또다른 목적은, 하이드로클로라이드의 존재하에서, 최적 결과를 위해 생물학적 활성물질의 치료적 농도에서 장기간의 노출을 제공하는 내부에 캅셀화된 생물학적 활성물질을 함유하는 다소포성 리포좀을 제공하는 것이다.

본 발명의 또다른 목적은 이러한 다소포성 리포좀의 제조방법을 제공하는 것이다.

본 발명의 또다른 목적, 특징 및 잇점은 본 발명에서 고유한 것이며 명세서 및 특허청구의 범위를 통해 알 수 있을 것이다.

본 명세서 및 특허청구의 범위에서 사용되는 다소포성 리포좀(multivesicular liposome)은 다수의 비동심성 수성 챔버를 포함하는, 지질 이중 막으로 이루어진 인공의 미시적인 지질-소포체를 의미한다. 대조적으로, 단일층 리포좀은 단일 수성 쳄버를 가지며; 다중층 리포좀은 다수의 양파-표피(onion-skin)형의 동심성 막을 가지며 이들 사이는 셀-형 동심성 수성 구획이 된다.

본 명세서 및 특허청구의 범위에서 사용되는 용매 소구(solvent spherule)는 유기용매의 미시적인 장구(長球)형 소적을 의미하는 것으로 그 내에 더 작은 수용액의 다수 소적이 있다. 용매 소구는 현탁되어 전체적으로 제2수성 용액에 침지된다.

용어 중성 지질은 단독으로 막형성 능력이 없고 친수성 머리(head) 그룹이 결여된 오일 또는 지방을 의미한다.

용어 양쪽친화성 지질(amphipathic lipid)은 친수성 머리 그룹과 소수성 꼬리(tail) 그룹을 가지며 막-형성능(membrane-forming capability)을 갖는 분자를 의미한다.

용어 이온 강도는 이온 강도=1/2(M₁Z₁ ²+M₂Z₂ ²+M₃Z₃ ²+…)여기서(M₁,M₂,M₃,…은 용액 중의 여러 이온의 물농도를 나타내고 Z₁,Z₂,Z₃,…은 이온 각각의 전하를 나타낸다)로서 정의된다.

용어 저이온 강도는 약 0.05 미만, 및 바람직하게는 0.01 미만의 이온 강도이다.

간단히, 유중수(water-in-lipid) 유제는 먼저 양쪽 친화성 지질을 지질 성분용 휘발성 유기 용매에 용해시키고, 수득된 지질 성분에 비혼화성 제1수성성분, 캅셀화될 물질 및 하이드로클로라이드를 가한 다음, 혼합물을 기계적으로 유화시킴으로써 제조한다. 유제에서, 유기 용매에 현탁된 물 소적(droplet)은 내부 수성 챔버를 형성할 것이고, 수성 챔버의 안쪽을 차지하는 양쪽친화성 지질의 단일층은 최종 생성물에서 이중층막 중의 한 층이 될 것이다. 이어서, 모든 유제를 하나 또는 그 이상의 비이온성 삼투제 및 저이온 강도의 산-중화제를 함유하는 제2수성 성분에 침지시킨 다음 기계적 교반, 초음파 에너지(ultrasonic energy), 노즐 분무 방법(nozzle atomization) 또는 이들의 조합방법으로 격렬히 혼합시켜, 제2수성 성분에 현탁된 용매 소구(spherule)를 형성시킨다. 용매 소구는 수성 소적에 용해된 캅셀화할 물질을 갖는 다수의 수성 소적을 함유한다. 휘발성 유기 용매는 현탁액 상에 가스 기류를 통과시킴으로써 소구로부터 증발시킨다. 용매가 완전히 증발되면, 소구는 다소포성 리포좀으로 전환한다. 이용하기에 만족스러운 대표적인 가스는 질소, 헬륨, 아르곤, 산소, 수소 및 이산화탄소를 포함한다.

하이드로클로라이드의 사용은 캅셀화 효율을 높이고 캅셀화된 분자의 생물학적 유체 및 생체 내에서의 방출을 지연시키기 위해 필수적이다. 또한, 하이드로클로라이드가 산성인 경우, 용매 소구가 서로 점착하지 않도록 저이온 강도의 중화제를 사용하는 것도 필수적이다. 염산이 바람직하지만 기타의 만족스러운 하이드로클로라이드는 리신 하이드로클로라이드, 히스티딘 하이드로클로라이드, 및 이들의 혼합물을 포함한다. 사용되는 하이드로클로라이드와 중화제 둘다의 양은 약 0.1mM 내지 0.5mM 농도 및 바람직하게는 약 10mM 내지 약 200mM 농도의 범위로 존재할 수 있다.

여러 상이한 형태의 휘발성 소수성 용매(예 : 에테르, 탄화수소 또는 할로겐화 탄화수소) 또는 프레온(Freon)을 지질-상(相) 용매로서 사용할 수 있다. 예를 들면, 디에틸 에테르, 이소프로필과 기타의 에테르, 클로로포름, 테트라하이드로푸란, 할로겐화 에테르, 에스테르 및 이들의 혼합물은 만족스럽다.

용매 소구가 서로 점착하거나 도관벽(vessel wall)에 부착하지 않도록 하기 위해서, 실효 음전하를 갖는 적어도 1% 몰비의 양쪽친화성 지질을 소구에 포함시킬 필요가 있으며, 현탁화 수용액은 이온 강도가 극히 낮을 필요가 있고, 하이드로클로라이드가 산인 경우, 하이드로클로라이드를 흡수시키기 위해서는 저이온 강도의 중화제가 필요한 반면; 그렇지 않으면 용매 소구는 합체하여 지저분한 부유물을 형성한다. 현탁된 수용액 중에서 균형을 맞춘 리포좀의 존재 또는 부재하에서 삼투압을 유지시키는데 하나 또는 그 이상의 비이온성 삼투제가 필요하다. 여러 형태의 지질을 사용하여 다소포성 리포좀을 제조할 수 있으며, 단지 2가지 요구사항은 1개의 중성 지질 및 실효 음전하를 갖는 1개의 양쪽친화성 지질을 포함해야 한다는 사실이다. 중성 지질의 예는 트리올레인, 트리옥타니온 및 식물유(예 : 대두유), 라드, 우지, 토코페롤 및 이들의 배합물이다. 실효 음전하를 갖는 양쪽친화성 지질의 예는 카디오리핀, 포스파티딜세린, 포스파티딜글리세롤 및 포스파티드산이다.

제2수성 성분은 용질[예 : 글루코즈, 슈크로즈, 락토즈 등의 탄수화물 및 리신, 유리-염기 히스티딘 및 이들의 배합물 등의 아미노산]을 함유하는 수용액이다.

여러가지의 생물학적 물질은 다소포성 리포좀 내에서 캅셀화시킴으로써 혼입시킬 수 있다. 이러한 물질은 약제, 및 기타 종류의 물질[예 : DNA, RNA, 여러 형태의 단백질, 인체에서 효과적인 재조합 DNA 기술에 의해 제조된 단백질 호르몬, 조혈성장인자, 모노카인, 림포카인, 종양괴사인자, 인히빈, 종양성장인자 α 및 β, 멀러리안(Mullerian) 억제 물질, 신경성장인자, 섬유아세포성장인자, 혈소판-유래성장인자, LH 및 기타의 방출 호르몬을 포함하는 하수체 및 뇌하수체, 칼시토닌, 백신용 면역원으로서 제공되는 단백질, 및 DNA와 RNA 서열]을 포함한다.

다음의 표 1은 하이드로클로라이드의 존재하에 다소포성 리포좀내에 캅셀화될 수 있으며 인체에서 효과적인 대표적인 생물학적 활성물질의 목록을 포함한다.

인체 사용에 적절한 투여량 범위는 체표면적 m2 당 1 내지 6000mg의 범위를 포함한다. 이러한 범위는 일부의 적용(예 : 피하투여)에서는, 필요한 투여량이 극히 소량일 수 있지만, 기타의 적용(예 : 복강내 투여)에서는 필요한 투여량은 절대적으로 거대량일 수 있을 정도로 광범위하다. 전술한 투여량 범위 이외의 투여량도 주어질 수 있는데, 이러한 범위는 모든 생물학적 활성물질의 실질적인 사용 범위를 포함한다.

다소포성 리포좀은 목적하는 경로에 의해, 예를 들면, 협막내, 복강내, 피하, 정맥내, 임파관내, 경구, 및 기관지 상피, 위장 상피, 비뇨생식기 상피, 및 신체의 각종 점막을 포함하는 많은 다른 종류의 상피하의 점막하 조직, 및 근육내로 투여할 수 있다.

하기의 실시예는 생물학적 활성물질을 캅셀화하는 이들 다소포성 리포좀을 제조하기 위한 대표적인 현행의 바람직한 방법이다.

실시예 1

단계 1) 깨끗한 1-드럼 유리 용기(외형 크기 : 직경 1.4cm×높이 4.5cm) 중에 디올레오일레시틴 9.3umole, 디팔미토일 포스파티딜글리세롤 2.1umole, 콜레스테롤 15umole, 트리올레인 1.8umole 및 클로로포름 1ml를 넣는다(지질상).

단계 2) 0.136N 염산용액 중에 용해된 수성상 시토신 아라비노사이드(20mg/ml) 1ml를 지질상을 함유하는 상기의 1-드램 용기 중에 넣는다.

단계 3) 유중수 유제를 제조하기 위해서, 용기를 밀봉한 후 와동 진탕기의 헤드에 연결하고 6분 동안 최고 속력으로 진탕한다.

단계 4) 수중에 현탁된 클로로포름 소구를 제조하기 위해서, 유제의 반을 각각 수중 4% 덱스토로즈 및 40mM 리신 유리염기를 함유하는 1-드램 용기에 끝이 좁은 파스퇴르(Pasteur) 피펫을 통해서 신속히 붓고, 이어서 와동 진탕기상에서 할스(hals) 속력으로 3초동안 진탕시켜 클로로포름 소구를 형성시킨다.

단계 5) 2개 용기 중의 클로로포름 소구 현탁액을 물 5ml, 글루코즈(3.5g/100ml) 및 유리염기 리신(40mM)을 함유하는 250ml들이 삼각 플라스크의 바닥에 붓고 7ℓ/분의 속도로 질소 가스의 기류를 플라스크를 통해 유입시켜 클로로포름을 37℃에서 10 내지 15분에 걸쳐서 서서히 증발시킨다. 이어서 600×g에서 5분동안 원심분리하여 리포좀을 분리시킨다.

생성된 리포좀의 평균 용적-조정된 크기(±분포의 표준 편차)는 19.4±6.5um이다. 수득물의 %는 59±7%이고 수득물 용적은 사용된 지질의 총 mg당 36±4ul이다. 염산 첨가는 사람 혈장중에서 배양된 다소포성 리포좀으로부터 시토신 아라비노사이드의 방출 속도에 현저한 영향을 끼친다. 상기의 실시예에서 염산을 첨가하는 경우에는 약제의 반이 12일만에 방출되는 반면, 상기의 단계 2)중에서 염산의 첨가를 생략한 경우에는 약제의 반이 단지 12시간만에 방출된다. 동물에서 시험할 경우, 염산 첨가는 시토신 아라비노사이드의 방출속도에 영향을 끼치며; 제조하는 동안에 염산을 첨가하는 경우에는 약제가 마우스의 복막강내에 더 오랜동안 머무른다.

하기의 실시예는 다소포성 리포좀의 거대한 배치를 제조하는 대규모 제조방법을 설명한다.

실시예 2

단계 1) 스테인레스강 균질화기[Omni-Mixer 17150, Sorval Co., Newtown, CT] 중에 디올레오일 레시틴 186umole, 디팔미토일 포스파티딜글리세롤 42umle, 콜레스테롤 300umole, 트리올레인 36umole 및 클로로포름 20ml를 넣는다(지질상).

단계 2) 0.136N 염산 용액중에 용해된 수성상 시토신 아라비노사이드(20mg/ml) 20ml를 와동시키면서 지질상을 함유하는 상기의 스테인레스강 혼합기에 가한다.

단계 3) 유중수 유제를 제조하기 위해서, 균질화기를 밀봉한후 3분 동안 7에 셋팅한다.

단계 4) 이어서 수중에 현탁된 클로로포름 소구를 제조하기 위해서, 유제의 반을 각각 물중의 4% 덱스트로즈 및 40mM 리신 유리염기 200ml를 함유하는 2개의 다른 스테인레스강 균질화기 용기중에(와동시키면서) 부은 후, 3초동안 1에 셋팅하여 Omni-Mixer 상에서 균질화한다.

단계 5) 각각의 균질화기 용기중의 클로로포름 소구 현탁액을 바닥 면적이 8inch×12inch인 평저 직사각형 스틸 용기에 붓고, 14ℓ/분의 속도로 질소가스 또는 공기의 기류를 플라스크를 통해서 유입시켜 클로로포름을 10 내지 15분에 걸쳐서 서서히 증발시킨다. 이어서 600×g에서 5분동안 원심분리하여 리포좀을 분리시킨다.

하기의 실시예는 더 작거나 더 거대한 리포좀을 제조하는 방법을 설명한다.

실시예 3

실시예 1 또는 2에서 보다 더 작은 리포좀을 제조하기 위해서, 실시예 1 또는 2의 단계 4)에서의 진탕 또는 균질화의 기계적 강도 또는 지속기간을 증가시킨다. 더 큰 리포좀을 제조하기 위해서는, 실시예 1 또는 2의 단계 4)에서의 진탕 또는 균질화의 기계적 강도 또는 지속 시간을 감소시킨다.

하기에 실시예 4는 각종 지질 조성물의 리포좀을 제조한 다음 이 리포좀에 각종 물질을 혼입하는 대표적인 방법을 설명한다.

실시예 4

실시예 1 또는 2의 단계 1)에서, 포스파티딜 콜린(PC), 카르디올리핀(CL), 디미리스토일 포스파티딜글리세롤(DMPG), 포스파티딜에탄올아민(PE), 파파티딜 세린(PS), 디미리스토일 포스파티드산(DMPA)과 같은 다른 양쪽친화성 지질을 각종 배합물로 사용하여 유사한 결과를 수득할 수 있다. 예를 들어 4.5/4.5/1/1 몰비의 PC/C/CL/TO; 4.5/4.5/1/1 몰비의 DOPC/C/PS/TO; 5/4/1/1 몰비의 PC/C/DPPG/TC; 5/4/1/1 몰비의 PC/C/PG/TC; 4.5/4.5/1/1 몰비의 PE/C/CL/TO; 4.5/4.5/1/1 몰비의 PC/C/DMPA/TO를 모두 사용할 수 있다. 다른 생물원성 활성물질을 혼입시키기 위해서, 시토신 아라비노사이드 대신에 실시예 1 또는 2의 단계 2에서 간단히 표 1의 바람직한 물질 또는 물질의 배합물을 사용할 수 있다. 이들은 모두 인체에서 효과적이며 치료적 농도에서 생물학적 활성물질의 장기간의 노출을 제공하는 다소포성 리포좀을 제공한다.

따라서, 본 발명은 생물학적 활성물질이 비교적 다량의 캅셀화되고 있고, 독성일 수 있는 투여량의 고피킹을 피한 최적의 결과를 위해서 이들 물질의 치료적 농도에서 장기간의 노출을 제공하는 데포우(depot) 제제의 광범위한 적용 및 용도를 제공한다.

따라서, 본 발명은 최종 목적을 얻는데 잘 부합하며 적절하고 언급된 잇점 및 특징은 물론 그들의 또다른 고유특성을 갖는다.

현재 바람직한 본 발명의 실시 양태가 설명의 목적으로 기재되고 있으나, 첨부된 특허청구의 범위에 의해 규정되는 바와 같이 본 발명의 정신내에서 변화가 가해질 수 있다.

Claims (24)

1. (a) 적어도 하나의 중성 지질 및 적어도 하나의 실효 음전하를 갖는 적어도 하나의 양쪽친화성(amphipathic) 지질을 함유하는 지질 성분을 하나 또는 그 이상의 유기 용매에 용해시키고; (b) 수득된 지질 성분에 하이드로클로라이드 및 하나 이상의 캅셀화될 물질을 함유하는 비혼화성 제1수성 성분을 가하며, (c) 2개의 비혼화성 성분들로부터 유중수(water-in-oil) 유제를 형성시키며; (d) 생성된 유중수 유제를 비혼화성 제2수성 성분에 옮겨 액침시키고; (e) 유중수 유제를 분산시켜 제1수성 성분의 다수의 소적을 함유하는 용매 소구를 형성시키고; (f) 용매 소구로부터 유기 용매를 증발시켜 다소포성 리포좀을 형성시키는 단계로 이루어짐을 특징으로 하여, 다소포성 지질 소포체 또는 리포좀을 제조하는 방법.
2. 제1항에 있어서, 지질 성분이 인지질 및 인지질의 혼합물로 이루어진 그룹중에서 선택되는 방법.
3. 제2항에 있어서, 인지질이 포스파티딜콜린, 카디오리핀, 포스파티딜에탄올아민, 스핀고미엘린, 라이소포스파티딜콜린, 포스파티딜세린, 포스파티딜이노시톨, 포스파티딜글리세롤 및 포스파티드산으로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 방법.
4. 제2항에 있어서, 인지질 중의 적어도 하나가 적어도 하나의 실효 음전하를 갖는 그룹 중에서 선택되는 방법.
5. 제2항에 있어서, 인지질이 콜레스테롤과의 혼합물로 제공되는 방법.
6. 제2항에 있어서, 인지질이 스테아릴아민과의 혼합물로 제공되는 방법.
7. 제1항에 있어서, 친유성 생물학적 활성물질이 지질성분과의 혼합물로 제공되는 방법.
8. 제1항에 있어서, 중성 지질이 트리올레인, 트리옥타노인, 식물유, 라드, 우지, 토코페롤 및 이들의 배합물로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 방법.
9. 제1항에 있어서, 유기용매가 디에틸 에테르, 이소프로필 에테르, 클로로포름, 테트라하이드로푸란, 에테르, 탄화수소, 할로겐화 탄화수소, 할로겐화 에테르, 에스테르 및 이들의 배합물로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 방법.
10. 제1항에 있어서, 하이드로클로라이드가 염산, 리신 하이드로클로라이드, 히스티딘 하이드로클로라이드 및 이들의 배합물로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 방법.
11. 제1항에 있어서, 생물학적 활성 물질이 친수성인 방법.
12. 제1항에 있어서, 두가지 성분의 유화단계가 기계적 교반, 초음파 에너지 및 노즐 분무 방법으로 이루어진 그룹 중에서 선택된 방법을 사용하여 수행하는 방법.
13. 제12항에 있어서, 리포좀의 평균 크기 및 그들 내의 수성 쳄버의 수가 선택된 방법의 유형, 강도 및 지속 기간에 의해 결졍되는 방법.
14. 제1항에 있어서, 하이드로클로라이드가 산성이며 제2수성 성분이 적어도 하나의 중화제를 함유하는 방법.
15. 제14항에 있어서, 중화제가 유리-염기(free-base) 리신 및 유리-염기 히스티딘 및 이들의 배합물로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 방법.
16. 제1항에 있어서, 제2수성 성분이 낮은 이온 강도의 성분인 방법.
17. 제16항에 있어서, 제2수성 성분이 탄수화물 및 아미노산으로 이루어진 그룹 중에서 선택된 용질을 함유하는 수용액인 방법.
18. 제16항에 있어서, 제2수성 성분이 글루코즈, 슈크로즈, 락토즈, 유리-염기 리신, 유리-염기 히스티딘 및 이들의 배합물로 이루어진 그룹 중에서 선택된 용질을 함유하는 수용액인 방법.
19. 제1항에 있어서, 용매 소구의 형성단계를 기계적 교반, 초음파 에너지, 노즐 분무 및 이들의 조합 방법으로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 방법을 사용하여 수행하는 방법.
20. 제19항에 있어서, 리포좀의 평균 크기가 사용된 에너지의 유형, 강도 및 지속기간에 의해 결정되는 방법.
21. 제1항에 있어서, 유기 용매의 증발 단계를 제2수성 성분상에 가스를 통과시켜 수행하는 방법.
22. 제1항에 있어서, 캅셀화된 성분이, 천식 치료제, 부정맥 치료제, 신경 안정제, 강심성 글리코사이드, 호르몬, 스테로이드, 고혈압 치료제, 당뇨 치료제, 항히스타민제, 구충제, 항암제, 진정제 및 진통제, 항생제, 면역치료제, 백신, 항진균제, 항바이러스제, 저혈압 치료제, 단백질 및 당단백질, 핵산 및 동족체, 세포 표면 수용체 차단제 및 이들의 배합물로 구성된 그룹으로부터 선택되는 방법.
23. 하이드로클로라이드의 존재하에서 캅셀화된 생물학적 활성물질(생물학적 활성물질은, 천식 치료제, 부정맥 치료제, 신경 안정제, 강심성 글리코사이드, 호르몬, 스테로이드, 고혈압 치료제, 당뇨 치료제, 항히스타민제, 구충제, 항암제, 진정제 및 진통제, 항생제, 면역치료제, 백신, 항진균제, 항바이러스제, 저혈압 치료제, 단백질 및 당단백질, 핵산 및 동족체, 세포 표면 수용체 차단제 및 이들의 배합물로 구성된 그룹으로부터 선택된다)을 함유하는 다소포성 리포좀.
24. 산 하이드로클로라이드의 존재하에서 캅셀화되고 중화제를 사용하여 중화된 생물학적 활성물질(생물학적 활성물질은, 천식 치료제, 부정맥 치료제, 신경 안정제, 강심성 글리코사이드, 호르몬, 스테로이드, 고혈압 치료제, 당뇨 치료제, 항히스타민제, 구충제, 항암제, 진정제 및 진통제, 항생제, 면역치료제, 백신, 항진균제, 항바이러스제, 저혈압 치료제, 단백질 및 당단백질, 핵산 및 동족체, 세포 표면 수용체 차단제 및 이들의 배합물로 구성된 그룹으로부터 선택된다)을 함유하는 다소포성 리포좀.