CN109983013A - 美洛昔康锌复合物微粒多囊脂质体制剂及其制备方法 - Google Patents

美洛昔康锌复合物微粒多囊脂质体制剂及其制备方法 Download PDF

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Abstract

本公开的实施方案涉及包封美洛昔康锌复合物微粒的多囊脂质体制剂。还提供了制备所述美洛昔康锌复合物微粒和施用包封在多囊脂质体制剂中的所述美洛昔康锌复合物微粒的方法及其作为药物的用途。

Description

美洛昔康锌复合物微粒多囊脂质体制剂及其制备方法
通过引用并入任何优先权申请
本申请要求2016年11月18日提交的第62/424,274号美国临时申请的优先权，其内容通过引用整体明确地并入本文。
背景
领域
口服施用的非甾体类抗炎药(NSAID)是各种治疗处置中疼痛和炎症的有效缓解剂。然而，口服NSAID治疗与各种严重的胃肠道并发症有关，包括消化性溃疡、消化道穿孔、出血、结肠溃疡和结肠炎(Hollenz等人,Dig Dis.,24(1-2):189-94(2006)；Yamagata等人,Nippon Rinsho,65(10):1749-53(2007)；Shibuya等人,Colorectal Dis.(2009))。胃肠道(GI)症状可在治疗的前两周内出现。因此，患有急性和慢性病况的患者都会受到影响(Peris等人,Pharmacoeconomics,19(7):779-90(2001))。GI毒性以及由此引起的发病率增加，占与NSAID治疗相关的成本的大部分(Id)。它威胁用于治疗疼痛和炎症的NSAID疗法的效用和经济可行性(Bjorkman,Am.J.Med.,107(6A):3S-10S(1999))。正在探索胃保护联合治疗作为胃肠道毒性问题的解决方案；然而，这种方法目前被认为是成本过高的。通常，GI毒性归因于在作用部位达到有效药物水平所需的药物暴露的程度和持续时间，例如在滑膜作用部位。
术后疼痛是最常见的急性疼痛形式之一(Schug等人,PharmacoEconomics 1993；(4):260-267；Carr等人，Lancet.1999；353:2051-8)。包括前列腺素在内的炎症介质由于手术创伤而释放。这些介质通过改变激发阈值或通过直接刺激伤害感受器来影响疼痛的发展(Kurukahvecioglu等人,West Indian Med J.2007Dec；56(6):530-33)。使用药剂(例如，类阿片、局部麻醉药、NSAID)和递送技术(患者自控镇痛、硬膜外和区域性阻滞)的组合的多模式术后镇痛方法，目前被认为是疼痛管理的最佳实践(Breivik等人,Bailliére’s ClinAnaesthesiol.1995；9:423–60；Breivik等人,Baillière’s Clin Anaesthesiol.1995；9:403–22；ASA Task Force,Anesthesiology.1995；82:1071–81；Dahl等人,ActaAnaesthesiol Scand.2000；44:1191–203)。
美洛昔康(MLX)是表现出抗炎、镇痛和解热活性的NSAID。它具有以下结构：
认为MLX通过阻断环氧酶(COX)发挥其抗炎作用，所述环氧酶是负责将花生四烯酸转化为前列腺素H2的酶，前列腺素H2是产生炎症的前列腺素的前体。MLX被认为是一种有效且比环氧酶1(COX-1)更具选择性的环氧酶-2的抑制剂(COX-2)，所述环氧酶-2是负责介导炎症相关的前列腺素的酶，所述环氧酶1在保护胃粘膜中发挥作用。MLX被批准用于各种临床病况，包括炎性病况中的疼痛管理，例如骨关节炎、类风湿性关节炎和幼年型类风湿性关节炎。MLX被批准为以7.5mg或15mg片剂、或以7.5mg/5mL的口服混悬液每日一次口服施用。这种相对高的副作用诱导剂量通常是达到有效药物水平所必需的。例如，可能需要副作用诱导剂量以在滑膜腔中实现有效药物水平。已显示系统性MLX施用后在滑膜腔中达到的药物水平显著低于血浆的药物水平(Bannwart等人,Int.J.Clin.Pharmacol.Therapy,39(1):33-36(2001)；Hundal等人,Scand.J.Rheumatol.,22(4):183-187(1993))。通常，MLX可以施用于身体的许多腔和组织。
药物在滑膜腔中的局部停留时间与药物功效密切相关(Foong等人,J.Pharm.Pharmacol.,40(7):464-468(1988)；Foong等人,J.Pharm.Pharmacol.,45(3):204-209(1993))。然而，药物通常在几小时内从滑液中清除(Neander等人,Eur.J.Clin.Pharmacol.,42(3):301-305(1992)；Larsen等人,J.Pharm.Sci.,97(11):4622-4654(2008))。因此，未包封的NSAID药物无论是关节内施用还是口服施用，其获得治疗效果的机会都有限。
美洛昔康在生理pH下具有有限的溶解度，并且其溶解度高度依赖于pH。早期的MVL配制工作表明，需要非常高的内部pH(约9.5)以实现期望的溶解度和效力。在一些情况下，在降低的pH环境中中和后，MLX在MVL的制造期间容易溶于有机相中，并且容易通过DepoFoam(MVL)颗粒膜。因此，之前尝试将MLX包封在MVL中的成功率有限或包封产率低。因此，仍然需要开发具有高包封产率和持续释放性质的新的美洛昔康脂质体制剂。
概述
本申请涉及包封美洛昔康二价金属复合物的多囊脂质体(MVL)。特别地，本发明的实施方案涉及多囊脂质体组合物，其包含美洛昔康锌复合物微粒以及在MVL的第一水相中的一种或多种pH调节剂。还提供了制备含有美洛昔康锌复合物微粒的美洛昔康锌复合物微粒MVL制剂和非MVL制剂的方法，及其作为药物的用途。一些实施方式提供了改进的美洛昔康的脂质体包封，并且可以在保持或改善功效的同时使美洛昔康的副作用最小化。另外的实施方式提供了美洛昔康的延长释放制剂。此外，在一些实施方式中，制剂可以在存在炎症的部位达到有效的药物水平，而不会使全身暴露于高浓度的美洛昔康。
本公开的实施方案涉及改进的美洛昔康多囊脂质体制剂，特别是包封美洛昔康锌复合物微粒的多囊脂质体制剂；包含美洛昔康锌复合物微粒的制剂；其制备方法；以及使用其治疗疼痛和炎症的方法。
本文公开的一些实施方案涉及MVL制剂，其包含美洛昔康锌复合物微粒、包封在MVL的第一水相中的一种或多种pH调节剂以及脂质组分，所述脂质组分包含至少一种选自磷脂酰胆碱或其盐、磷脂酰甘油或其盐、或它们的组合的两亲性脂质，或至少一种中性脂质，或其组合。在一些实施方案中，MVL颗粒悬浮在悬浮溶液中。
在本文所述的美洛昔康MVL制剂的一些实施方案中，通过使美洛昔康与锌盐(例如，氯化锌)反应形成美洛昔康锌复合物。在一些此类实施方案中，美洛昔康锌复合物包括摩尔比为约1:4至4:1、约1:3至3:1、约1:2至2:1、或约1:1的锌与美洛昔康。在一个具体实施方案中，锌与美洛昔康的比例为1:2，并且这种美洛昔康锌复合物的化学式为Zn(MLX)2。在一些进一步的实施方案中，美洛昔康锌复合物可以以其水合物或溶剂化物形式存在。在一个实例中，美洛昔康锌复合物是Zn(MLX)2.4H2O。在一些实施方案中，美洛昔康锌复合物部分或基本不溶于第一水相。在一些实施方案中，美洛昔康锌复合物不溶于第一水相。在一些实施方案中，美洛昔康锌复合物为微粒形式，其中值粒径小于约50μm。在一些另外的实施方案中，美洛昔康锌复合物的中值粒径小于约5μm、约2μm、约1μm，小于约1μm、约0.5μm或小于约0.2μm。在一些另外的实施方案中，中值粒径为约50μm、约45μm、约40μm、约35μm、约30μm、约25μm、约20μm、约15μm、约10μm、约5μm、约3μm、约2μm、约1μm、约0.5μm、或约0.2μm，或在由任意两个前述值限定的范围内。
在本文所述的美洛昔康MVL制剂的一些实施方案中，pH调节剂包含一种或多种有机酸、一种或多种有机碱、或其组合。在一些实施方案中，一种或多种有机酸包括酒石酸。在一些实施方案中，一种或多种有机碱包括赖氨酸或组氨酸或其组合。在一些实施方案中，多囊脂质体的第一水相的pH为约4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8.0、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9或9.0，或在由任意两个前述pH值限定的范围内。在一些实施方案中，多囊脂质体的第一水相的pH为约5.6至约6.6。在一个实施方案中，多囊脂质体的第一水相的pH为约5.8。
在本文所述的美洛昔康锌复合物微粒MVL制剂的一些实施方案中，多囊脂质体的第一水相还包含一种或多种张度剂。在一些实施方案中，一种或多种张度剂包括氨基酸、糖或其组合。在一些实施方案中，一种或多种张度剂包括山梨糖醇、蔗糖、赖氨酸或其组合。在一些实施方案中，MVL的第一水相的重量摩尔渗透压浓度为约150、200、230、240、250、260、270、280、290、300、310、320、330、340、350、360或370mOsm/kg，或在由任意两个前述值限定的范围内。在一些实施方案中，MVL的第一水相的重量摩尔渗透压浓度为约250mOsm/kg至约350mOsm/kg。在一些另外的实施方案中，MVL的第一水相的重量摩尔渗透压浓度为约280mOsm/kg至约320mOsm/kg。在一个实施方案中，MVL的第一水相的重量摩尔渗透压浓度为约290mOsm/kg至约300mOsm/kg。在另外的实施方案中，第一水性悬浮液可以具有约370至约1000mOsm/kg的重量摩尔渗透压浓度，例如，约650至约800mOsm/kg。
在本文所述的美洛昔康锌复合物微粒MVL制剂的一些实施方案中，多囊脂质体的脂质组分包括至少一种甘油三酯。在一些另外的实施方案中，脂质组分包括磷脂酰胆碱或其盐，以及至少一种甘油三酯。在本文所述的美洛昔康MVL制剂的一些另外的实施方案中，多囊脂质体的脂质组分包括磷脂酰胆碱或其盐、磷脂酰甘油或其盐以及至少一种甘油三酯。在一些实施方案中，磷脂酰胆碱是二芥酰基磷脂酰胆碱(DEPC)。在一些实施方案中，磷脂酰甘油是二棕榈酰基磷脂酰甘油(DPPG)。在一些实施方案中，甘油三酯是三辛酸甘油酯。在一些实施方案中，脂质组分还包含胆固醇。
在本文所述的美洛昔康锌复合物微粒MVL制剂的一些实施方案中，将MVL颗粒悬浮在悬浮液或缓冲液中。例如，可以从MVL制剂中去除第二水相，并且可以将MVL置于悬浮溶液中。悬浮溶液可以限定MVL制剂的外部pH。在一些实施方案中，悬浮溶液的pH为约4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8.0、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9、10.0、10.1、10.2、10.3、10.4或10.5，或在由任意两个前述pH值限定的范围内。在一些实施方案中，悬浮溶液的pH为约6.0至8.0、或约5至8。在一个实施方案中，悬浮溶液的pH为约6.1。
在本文所述的美洛昔康锌复合物微粒MVL制剂的一些实施方案中，包封美洛昔康的多囊脂质体的中值粒径为约5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95或100μm，或在由任意两个前述值限定的范围内。在一些另外的实施方案中，多囊脂质体的中值粒径为约10μm至约50μm。在一些另外的实施方案中，多囊脂质体的中值粒径为约25μm至约40μm。在一些另外的实施方案中，多囊脂质体的中值粒径为约15μm至约30μm。在另外的实施方案中，美洛昔康锌是结晶形式的微晶固体，在XRPD光谱中显示出2θ峰，包括约6.3°、约10.3°、约12.5°、约13.7°、约16.9°、约23.1°、约23.3°、约25.3°、约26.3°、约31.3°、约39.9°和约42.4°。
在本文所述的美洛昔康锌复合物微粒MVL制剂的一些实施方案中，美洛昔康在最终多囊脂质体制剂中的浓度或效力为约0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0、8.5、9.0、9.5、10.0、10.5、11.0、11.5、12.0、12.5、13.0、13.5、14.0、14.5、15.0、16、17、18、19、20或25mg/mL，或在由任意两个前述值限定的范围内。在一些此类实施方案中，多囊脂质体制剂中的美洛昔康的浓度为约1.0mg/mL至约10.0mg/mL。在一些另外的实施方案中，多囊脂质体制剂中的美洛昔康的浓度为约2.0mg/mL至约5.0mg/mL。在一些另外的实施方案中，多囊脂质体制剂中的美洛昔康的浓度为约3.0mg/mL至约7.0mg/mL。在一些另外的实施方案中，多囊脂质体制剂中的美洛昔康的浓度为约2.0mg/mL至约3.5mg/mL。在一些另外的实施方案中，多囊脂质体制剂中的美洛昔康的浓度为约2.4mg/mL至约3.3mg/mL。在一个实施方案中，多囊脂质体制剂中的美洛昔康的浓度为约3.0mg/mL。在另一个实施方案中，多囊脂质体制剂中的美洛昔康的浓度为约2.4mg/mL。在一些实施方案中，MVL制剂可进一步包含未包封的美洛昔康。
在本文所述的美洛昔康锌复合物微粒制剂的一些实施方案中，例如，本文所述的美洛昔康锌复合物微粒MVL制剂，所述制剂对于通过注射而施用(例如皮下注射、关节内注射、肌肉内、腹膜内、眼内、鞘内)或任何其它肠胃外施用方式(例如制药领域中已知的那些)是药物可接受的。组合物或制剂可以进一步通过药学领域已知的输注、滴注或浸润施用。在一个实施方案中，制剂适于通过局部注射施用到手术部位。在另一个实施方案中，制剂适于通过直接滴入开放性伤口或体腔进行施用。在一个另外的实施方案中，所述制剂适于伤口滴注。组合物或制剂可以进一步局部施用。
在本文所述的美洛昔康锌复合物微粒MVL制剂的所有实施方案中，制剂不含环糊精。
本申请的一些实施方案涉及治疗疼痛或炎症的方法，包括将本文所述的美洛昔康锌复合物微粒制剂，特别是包封美洛昔康锌复合物微粒的MVL制剂施用于有需要的个体。在一些实施方案中，个体患有来自手术部位的术后疼痛。在一些其它实施方案中，个体患有关节炎。在一些其它实施方案中，个体患有来自损伤的疼痛。在一些实施方案中，施用是通过注射。在另外的实施方案中，施用是通过肠胃外注射。在一些此类实施方案中，注射是肌肉内、腹膜内或皮下注射。在一些其它实施方案中，注射是关节内注射。在一些实施方案中，注射不是血管内注射。在一些替代实施方案中，美洛昔康锌复合物微粒MVL的施用是通过浸润，例如手术后浸润。在另一些替代实施方案中，美洛昔康锌复合物微粒MVL的施用是通过伤口滴注，或简单地将含有美洛昔康锌复合物微粒MVL的组合物或制剂滴注到体内的伤口、体腔或充满液体的腔室中。在一些替代实施方案中，美洛昔康锌复合物微粒MVL的施用对于皮肤是局部的。
本申请的一些实施方案涉及包封美洛昔康锌复合物微粒的MVL制剂在制备用于治疗疼痛或炎症的药物中的用途。在一些实施方案中，待治疗的疼痛或炎症是来自手术部位的术后疼痛或炎症。在一些其它实施方案中，待治疗的疼痛或炎症来自损伤。在一些其它实施方案中，疼痛或炎症由关节炎引起。在一些实施方案中，含有美洛昔康锌复合物微粒MVL的药物被配制用于通过注射而施用。在另外的实施方案中，注射是肠胃外的。在一些此类实施方案中，注射是腹膜内、肌肉内或皮下注射。在一些其它实施方案中，注射是关节内注射。在一些实施方案中，注射不是血管内注射。在一些替代的实施方案中，含有美洛昔康锌复合物微粒MVL的药物被配制用于通过浸润而施用，例如手术后浸润。在一些替代实施方案中，含有美洛昔康锌复合物微粒MVL的药物被配制用于通过伤口滴注而施用，或为简单地用于灌注到体内的伤口、体腔或充满液体的腔室中的制剂或悬浮液。在另一些替代实施方案中，含有美洛昔康锌复合物微粒MVL的药物的施用是局部的。
本申请的一些实施方案涉及制备如本文所述的包封美洛昔康锌复合物微粒的MVL制剂的方法。所述方法包括通过包括混合美洛昔康、锌盐和一种或多种pH调节剂的步骤制备第一水性悬浮液；通过将第一水性悬浮液与挥发性水不混溶的有机溶剂相混合制备第一乳液；组合所述第一乳液和第二水相以提供第二乳液；以及基本上从第二乳液中去除挥发性水不混溶的有机溶剂。在一些实施方案中，通过将第二乳液分散到循环气氛或相中，例如通过使用雾化喷嘴，基本上去除挥发性水不混溶的有机溶剂。在另外的实施方案中，通过用惰性气体对第二乳液鼓泡来去除挥发性水不混溶的有机溶剂。
在制备美洛昔康锌复合物微粒MVL制剂的方法的一些实施方案中，锌盐是氯化锌。在一些实施方案中，美洛昔康锌复合物具有式Zn(MLX)2。在一些另外的实施方案中，美洛昔康锌复合物具有式Zn(MLX)2(OH2)2。在一些另外的实施方案中，美洛昔康锌复合物为微粒形式，其中值粒径为约50μm、约45μm、约40μm、约35μm、约30μm、约25μm、约20μm、约15μm、约10μm、约5μm、约3μm、约2μm、约1μm、约0.5μm或约0.2μm。在一些另外的实施方案中，美洛昔康锌复合物是微粒的形式，其中值粒径小于约5μm、小于约2μm、小于约1μm、小于约0.5μm、或小于约0.2μm。在一些实施方案中，美洛昔康锌复合物微粒是微晶。在一些实施方案中，存在不可检测的水平的美洛昔康锌复合物微粒不是微晶。在一些实施方案中，美洛昔康锌复合物微粒是至少部分微晶的。在另外的实施方案中，微晶美洛昔康锌复合物以Zn(MLX)2.4(H2O)形式存在。
在如本文所述的制备美洛昔康锌复合物微粒MVL制剂的方法的一些实施方案中，用于制备第一水性悬浮液的pH调节剂包含一种或多种有机酸、一种或多种有机碱、或其组合。在一些实施方案中，一种或多种有机酸包括酒石酸。在一些实施方案中，一种或多种有机碱包括赖氨酸或组氨酸或其组合。在一些实施方案中，第一水性悬浮液的pH为约4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8.0、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9或9.0，或在由任意两个前述pH值限定的范围内。在一些实施方案中，第一水性悬浮液的pH为约5.6至约6.6。在一个实施方案中，多囊脂质体的第一水相的pH为约5.8。
在如本文所述的制备美洛昔康锌复合物微粒MVL制剂的方法的一些实施方案中，第二水相包含一种或多种有机酸或无机酸、一种或多种有机碱或无机碱，或其组合。在一些此类实施方案中，一种或多种有机酸包括酒石酸。在一些此类实施方案中，一种或多种有机碱包括组氨酸和/或赖氨酸。在一些实施方案中，第二水相的pH为约4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8.0、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9、10.0、10.1、10.2、10.3、10.4或10.5，或在由任意两个前述pH值限定的范围内。在一些实施方案中，第二水相的pH为约4.8至约7.2。在一些另外的实施方案中，第二水相的pH为约5.5至约7.0。在一个实施方案中，第二水相的pH为约6.1。第二水相可以含有附加组分，例如张度剂、pH调节剂、金属螯合剂或其组合。
在一些实施方案中，MVL进一步经历第二水相的交换。例如，可以通过交叉流过滤，或通过批量交换进行交换。第二水相可以部分或完全被悬浮溶液替代。悬浮溶液可以包含缓冲液。在一些实施方案中，最终MVL制剂的外部pH为约6.0至约8.0。
在如本文所述的制备美洛昔康锌复合物微粒MVL制剂的方法的任何实施方案中，所述方法的每个步骤可在灭菌或无菌条件下进行。在一些另外的实施例中，可以以连续的方式进行方法的一些或所有步骤。
本文所述的一些实施方案涉及通过本文所述的方法制备的包封美洛昔康锌复合物微粒的多囊脂质体制剂。
本文所述的一些实施方案涉及美洛昔康锌复合物微粒。在一些实施方案中，美洛昔康锌复合物微粒的中值粒径为约5μm或更小、约2μm或更小、1μm或更小、约0.5μm或更小、或约0.2μm或更小。在一些另外的实施方案中，美洛昔康锌复合物微粒的中值粒径为约50μm、约45μm、约40μm、约35μm、约30μm、约25μm、约20μm、约15μm、约10μm、约5μm、约3μm、约2μm、约1μm、约0.5μm或约0.2μm。在一个实施方案中，美洛昔康锌复合物具有式Zn(MLX)2。
本文所述的一些实施方案涉及非MVL制剂。特别地，一些实施方案涉及包含美洛昔康锌复合物微粒和药物可接受的载体的药物制剂。在一些实施方案中，美洛昔康锌复合物微粒是未包封的。在另外的实施方案中，制剂不包括脂质体颗粒。在一些其它实施方案中，制剂还包含一种或多种脂质或表面活性剂。脂质和/或表面活性剂可以至少部分地为单层或多层囊泡的形式。在一些此类实施方案中，至少一部分美洛昔康锌复合物微粒被包封在脂质或表面活性剂中，例如单层或多层囊泡。在一些此类实施方案中，至少一部分美洛昔康锌复合物微粒以多囊脂质体的形式被包封在脂质或表面活性剂中。在一个实施方案中，美洛昔康锌复合物具有式Zn(MLX)2。
本文所述的一些实施方案涉及治疗疼痛或炎症的方法，包括施用本文所述的美洛昔康锌复合物微粒制剂。例如，一些实施方案涉及治疗疼痛或炎症的方法，包括施用美洛昔康锌复合物微粒和药物可接受的载体。在一些实施方案中，制剂通过注射而施用。注射可以是肠胃外的。注射可以是例如，眼内、鞘内、关节内、肌肉内、皮下、静脉内或腹膜内注射。在一些其它实施方案中，通过伤口输注、浸润或滴注，或注射到体腔或充满液体的腔室中来施用制剂。在一些其它实施方案中，将制剂局部施用于皮肤。
本文所述的一些实施方案涉及制备如本文所述的美洛昔康锌复合物微粒的方法，包括混合包含锌盐的第一溶液和包含美洛昔康的第二溶液，其中第一溶液的pH为约4.5至约6.0，并且其中第二溶液的pH为约7.5至约10.0。在一些实施方案中，锌盐是氯化锌。在一些实施方案中，第一溶液的pH为约5.0至约5.5。在一个实施方案中，第一溶液的pH为约5.3。在另一个实施方案中，第一溶液的pH为约5.5。在一些实施方案中，第二溶液的pH为约8.0至约9.0。在一个实施方案中，第二溶液的pH为约8.2。在另一个实施方案中，第二溶液的pH为约8.5。在一些实施方案中，第一溶液和第二溶液的混合物的pH为约6.6。在一些实施方案中，美洛昔康锌复合物微粒的中值粒径为约50μm或更小，例如，约5μm或更小、约2μm或更小，1μm或更小、约0.5μm或更小，或约0.2μm或更小，或在由任意两个前述值限定的范围内。在一些实施方案中，美洛昔康锌复合物微粒是微晶。在一个实施方案中，美洛昔康锌复合物具有式Zn(MLX)2。在另一个实施方案中，美洛昔康锌复合物微粒是至少部分微晶的。
本申请的一些另外的实施方案涉及治疗疼痛或炎症的方法，包括将本文所述的美洛昔康锌复合物微粒制剂施用于有需要的个体。在一些实施方案中，个体正在经历或已经历外科手术。在一些实施方案中，个体患有来自手术部位的术后疼痛。在一些其它实施方案中，个体患有关节炎。在一些其它实施方案中，个体患有来自损伤的疼痛。在一些实施方案中，通过注射而施用。在一些此类实施方案中，注射是眼内、鞘内、静脉内、肌肉内、皮下或腹膜内注射。在一些其它实施方案中，注射是关节内注射。在一些实施方案中，美洛昔康锌复合物微粒MVL的注射不是血管内注射。在一些替代实施方案中，美洛昔康锌复合物微粒MVL的施用是通过浸润，例如围手术或手术后浸润。在另一些替代实施方案中，美洛昔康锌复合物微粒MVL的施用是通过伤口滴注，或简单地将含有美洛昔康锌复合物微粒MVL的制剂滴注到体内的伤口、体腔或充满液体的腔室中。在一些另外的实施方案中，施用对于皮肤可以是局部的。
在如本文所述的制备美洛昔康锌复合物微粒的方法的任何实施方案中，所述方法可以在灭菌或无菌条件下进行。在一些其它实施方案中，可以以连续方式进行所述方法。
附图简述
除了上述特征之外，从以下对附图和示例性实施方案的描述中，附加特征和变体将是显而易见的。应理解，这些附图描绘了典型的实施方案，并不旨在限制范围。
图1A和图1B描绘了表征美洛昔康锌复合物Zn(MLX)2微粒的微晶形式的两种不同尺度的光学显微照片。
图2是式Zn(MLX)2的美洛昔康锌复合物微粒的扫描电子显微照片(SEM)。
图3是Zn(MLX)2的能量色散X射线(EDX)分析。
图4A是美洛昔康的质子核磁共振(1H NMR)。
图4B是式Zn(MLX)2的美洛昔康锌复合物中的美洛昔康的1H NMR。
图5是用标准1微米聚苯乙烯微球作为参考的美洛昔康锌复合物微粒Zn(MLX)2微晶的光学显微照片。
图6示出游离MLX溶液、通过远程负载方法包封MLX的多囊脂质体、包封Zn(MLX)2的DepoMLX和未包封的Zn(MLX)2的血浆美洛昔康浓度。
图7示出未包封的Zn(MLX)2悬浮液和相应的包封的Zn(MLX)2作为DepoMLX的血浆美洛昔康浓度。
图8示出由两种不同浓度的MLX溶液制备的未包封的Zn(MLX)2悬浮液和相应的包封的Zn(MLX)2作为DepoMLX的血浆美洛昔康浓度。
图9示出在大鼠中单次皮下注射后，DepoMLX(圆圈-●)与未包封的美洛昔康(正方形-■)的血浆美洛昔康浓度作为时间的函数。
图10示出了在大鼠单次皮下注射后施用DepoMLX(圆圈-●)与未包封的MLX(正方形-■)后，血浆中的美洛昔康的总AUC累积百分比随时间的变化。
图11A和图11B描绘了使用40X物镜在相衬放大下的DepoMLX颗粒的悬浮液。图11B是其中物镜不是油浸透镜的样品。
图12描绘了使用100X物镜在放大倍数下的DepoMLX颗粒。图12A是具有荧光覆盖以突出美洛昔康锌微粒的明视场图像，而图12B的图像包括相衬。
图13描绘了放大1000倍的DepoMLX颗粒。图13的图像是包括相衬的明视场荧光图像。
图14A和图14B分别示出通过1:1工艺(图14A)和2:1工艺(图14B)制备的微晶Zn(MLX)2的X射线粉末衍射(XRPD)光谱。
图15示出了从DepoMLX制剂的MVL颗粒中提取的微晶Zn(MLX)2的XRPD光谱。
图16示出了代表由DepoMLX样品获得的未包封的美洛昔康锌复合物微粒的微晶Zn(MLX)2沉淀物的XRPD光谱。
图17提供了从DepoMLX制剂(实线)和通过2:1工艺(虚线)制备的微晶Zn(MLX)2的MVL颗粒提取的微晶Zn(MLX)2的比较XRPD光谱。
图18A、图18B和图18C示出了微晶Zn(MLX)2的差示扫描量热法(DSC)和热重分析(TGA)数据。
图19描绘了使用单晶X射线晶体学获得的微晶Zn(MLX)2.4(H2O)形式的Zn(MLX)2的晶体结构。
图20示出狗血浆中的美洛昔康锌复合物微粒的溶解数据(正方形-■)。图20还提供了溶解的、未复合的美洛昔康的数据(菱形-◆)以及溶解和未溶解的美洛昔康(三角形-▲)的质量平衡。
图21A、图21B和图21C示出将DepoMLX形式(菱形-◆)和未包封的悬浮液形式(正方形-■)的美洛昔康锌复合物微粒溶解于pH 7.4的各种缓冲液中的比较数据。在图21A中，缓冲液是NaHPO4，在图21B中，缓冲液是50mM HisTA，而在图21C中，缓冲液是100mM HisTA。
图22A、图22B和图22C示出根据实施例11的各种DepoMLX制剂在大鼠中皮下注射后的药代动力学数据。
图23示出了根据实施例12，在比格犬中皮下注射后各种DepoMLX制剂的药代动力学数据的数据。
详述
本发明实施方案提供了包含多囊脂质体(MVL)的制剂，所述多囊脂质体包封美洛昔康锌(MLX)复合物微粒。一些实施方式使MLX的副作用最小化，同时保持或改善功效并延长效果的持续时间。还公开了使用这些制剂治疗、改善或预防疼痛和炎症的方法，例如用于管理关节炎的炎性疼痛以及围手术和手术后疼痛。还提供了制备包封美洛昔康复合物(特别是美洛昔康锌复合物微粒)的多囊脂质体制剂的方法。
本公开的另外的实施方案涉及美洛昔康锌复合物微粒、其制备方法以及包含美洛昔康锌复合物微粒的非MVL制剂和使用这些制剂治疗的方法。
MLX的物理化学性质对通过已知方法将MLX传统包封到MVL制剂中提出了挑战。MLX是疏水性分子，并且在生理pH范围内难溶于水。尽管在高于8的pH下溶解度显著增加，但由于分子的电离，pH值大于8至8.5及以上的溶液由于脂质水解速率增加而与MVL制剂开发不相容。因此，使用传统的包封方法导致美洛昔康非常低效地包封到多囊脂质体中。
意外地发现，锌MLX复合物的形成意外地增加了美洛昔康掺入MVL制剂中的效率。因此，本文提供了以高效方式将美洛昔康包封到多囊脂质体中的改进方法。此外，本文所述的方法可以按比例放大，用于大规模连续生产包封美洛昔康锌复合物(特别是美洛昔康锌复合物微粒)的MVL制剂。锌是具有特殊生物和公共卫生重要性的重要矿物质。它具有生物相容性并且促进伤口愈合。参见例如，Sallit,J.,“Rationale for Zinc Supplementationin Older Adult with Wounds,”Annals of Long-Term Care:Clinical Care andAging.2012:20(1):39-41。因此，用于治疗疼痛和炎症的美洛昔康锌复合物提供了额外的益处。
因此，如本文提供的包封美洛昔康锌复合物微粒的MVL制剂通过向具有期望释放曲线的多囊脂质体提供高包封产率的美洛昔康来解决当前美洛昔康治疗的所有上述缺点。此外，局部施用可包括例如，关节内施用、局部浸润、滴注或输注、局部、眼、眼内、鼻和耳部递送。美洛昔康锌复合物微粒MVL制剂的局部施用，例如，关节内施用，允许将美洛昔康直接递送至作用部位。因此，局部施用可以降低血浆药物浓度和浓度依赖性副作用，并且将受影响的关节的药物暴露延长数小时至数天或数周，以实现增加的治疗益处。本实施方案可用于由于损伤、急性发作或手术(围手术或手术后)的急性治疗，以及用于诸如类风湿性关节炎或骨关节炎的慢性病况。即时控释的美洛昔康锌复合物微粒MVL制剂提供疼痛缓解和减少炎症，同时避免与当前口服疗法相关的副作用。使用多囊脂质体缓释技术，可以将美洛昔康锌复合物微粒MVL制剂直接施用于受影响的关节。本申请的美洛昔康锌复合物微粒MVL制剂也可以通过其它施用途径进行施用以治疗局部炎症或疼痛。局部施用可以显著降低剂量需求，从而降低与口服美洛昔康施用相关的胃和全身毒性的可能性。本申请的美洛昔康锌复合物微粒MVL制剂释放药物至多两周，或在某些情况下至多十周，因此，患者不需要频繁给药。
本申请的美洛昔康锌复合物微粒MVL制剂的皮下、肌肉内或关节内施用也允许全身性治疗疼痛，作为口服治疗的替代方案。该方法的优点是与口服速释剂型相比，MVL制剂可以提供控释药代动力学特征。因此，皮下、关节内或肌肉内施用提供较长的持续时间和降低的血浆浓度相关的副作用。
或者，可将美洛昔康锌复合物微粒配制成不使用MVL的其它制剂。例如，美洛昔康锌复合物微粒可以配制成其它控释制剂，例如单层或多层囊泡或脂质体制剂。又例如，可以用磷脂和/或合成表面活性剂包被美洛昔康锌复合物微粒。这些非MVL制剂通常不具有多囊脂质体制剂的所有优点。
定义
如本文所用，术语“包封的”是指美洛昔康位于脂质体颗粒内，例如MVL颗粒，单层囊泡(ULV)或多层囊泡(MLV)。在一些情况下，美洛昔康还可以在MVL的内表面上或插入膜中。
如本文所用，术语“中值粒径”是指体积加权中值直径。
如本文所用，术语“未包封的美洛昔康”或“游离美洛昔康”是指位于脂质体颗粒(例如MVL、UVL或MLV颗粒)的内部水性室外部的美洛昔康。例如，未包封的美洛昔康可以存在于这些颗粒的悬浮溶液中，或者可以与外脂质膜缔合。与外脂质膜缔合的美洛昔康可粘附于膜表面。未包封的或游离的美洛昔康可以以金属美洛昔康复合物(例如，美洛昔康锌复合物微粒)的形式存在，或以未复合的形式存在。未包封的美洛昔康锌复合物微粒可以与磷脂和/或表面活性剂缔合或被其稳定。
如本文所用，“MLX-MVL”制剂是指将美洛昔康包封在MVL颗粒的第一水相中的多囊脂质体制剂。“Zn-MLX-MVL”和“美洛昔康锌复合物微粒MVL”是指将美洛昔康锌复合物微粒包封在MVL颗粒的第一水相中的多囊脂质体制剂。在一些实施方案中，这种制剂含有少于约60％、50％、45％、40％、35％、30％、25％、20％、19％、18％、17％、16％、15％、14％、13％、12％、11％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％、0.5％、0.2％或0.1％的游离美洛昔康，或由任意两个前述值限定的范围。
如本文所用，“DepoMLX”是指包封在多囊脂质体中的美洛昔康锌复合物微粒。DepoMLX的特征在于以％测量的填充颗粒体积(PPV)。在一些实施方案中，这种DepoMLX制剂含有约10％至约80％(v/v)、约10％至约60％(v/v)、或约20％至约55％(v/v)、或约30％至约50％(v/v)、或约40％至约60％(v/v)的多囊脂质体颗粒。在一个具体实施方案中，DepoMLX制剂含有约50％(v/v)多囊脂质体颗粒。在另一个实施方案中，DepoMLX制剂含有约40％(v/v)多囊脂质体颗粒。
如本文所用，“美洛昔康锌复合物”和“Zn(MLX)2”是指可以部分或完全溶剂化的美洛昔康锌复合物，例如部分或完全水合的。除非指定特定形式，否则“Zn(MLX)2”和“美洛昔康锌复合物微粒”旨在包括其所有结晶和无定形形式。例如，在一些实施方案中，Zn(MLX)2和美洛昔康锌复合物微粒包含无定形美洛昔康锌。在其它实施方案中，Zn(MLX)2和美洛昔康锌复合物微粒包含结晶美洛昔康锌。在一些实施方案中，Zn(MLX)2和美洛昔康锌复合物微粒是部分或基本上结晶的。
在所有情况下，在提供美洛昔康锌复合物和/或美洛昔康锌复合物微粒和/或MVL中的美洛昔康浓度的情况下(例如，以mg/mL计)，质量是指单独的美洛昔康的重量。
如本文所用，“pH调节剂”是指能够调节水相pH的化合物。
如本文所用，术语“张度”和“重量摩尔渗透压浓度”是两种溶液(例如，由半透膜隔开的测试样品和水)的重量摩尔渗透压浓度的量度。重量摩尔渗透压浓度是必须施加到溶液上以防止水向内流过半渗透膜的压力。重量摩尔渗透压浓度和张度仅受到不易穿过膜的溶质的影响，因为只有这些才会施加重量摩尔渗透压浓度。能够自由穿过膜的溶质不会影响张度，因为它们将在膜的两侧变成相等的浓度。本文提供的重量摩尔渗透压浓度是在标准实验室蒸气压或凝固点重量摩尔渗透压浓度计上测量的。
如本文所用，本文使用的术语“糖”表示单糖或寡糖。单糖是不能被酸水解的单体碳水化合物，包括单糖和它们的衍生物，例如氨基糖。单糖的实例包括山梨糖醇、葡萄糖、果糖、半乳糖、甘露糖、山梨糖、核糖、脱氧核糖、神经氨酸。寡糖是由多于一个单体糖单元组成的碳水化合物，所述单体糖单元通过支链或链中的糖苷键(多个)连接。寡糖中的单体糖单元可以相同或不同。取决于单体糖单元的数目，寡糖是二糖、三糖、四糖、五糖等糖。与多糖相反，单糖和寡糖是水溶性的。寡糖的实例包括蔗糖、海藻糖、乳糖、麦芽糖和棉子糖。
除非另有定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有领域中普通技术人员通常所理解的相同含义。除非另有说明，否则将本文引用的所有专利、申请、公开的申请和其它出版物通过引用整体并入。如果本文中的术语存在多个定义，除非另有说明，否则以此部分的定义为准。除非上下文另有明确指示，否则如说明书和所附的权利要求中所用，单数形式“一种/个(a/an)”和“所述(the)”包括复数指示物。除非另有指示，否则采用质谱法、NMR、HPLC、蛋白质化学、生物化学、重组DNA技术和药理学的常规方法。除非另有说明，否则“或”或者“和”的使用意为“和/或”。此外，术语“包括(including)”以及其它形式(如“包括(include)”、“包括(includes)”和“包括(included)”)的使用不是限制性的。如在本说明书中所用，无论是在过渡的短语中还是在权利要求的主体中，术语“包含(comprise)”和“包含(comprising)”应被理解为具有开放式含义。即，该术语应被理解为与短语“具有至少”或“包括至少”同义。当在方法的背景下使用时，术语“包括”意为所述方法至少包括所列的步骤，并且可以包括另外的步骤。当在化合物、组合物或装置的背景下使用时，术语“包含”意为化合物、组合物或装置至少包含所列的特征或组分，并且还可以包含另外的特征或组分。
本文使用的章节标题仅用于组织目的，不应解释为限制所描述的主题。此外，材料、方法和实施例仅是说明性的而不旨在是限制性的。
美洛昔康锌复合物微粒多囊脂质体制剂
本实施方案涉及包封MLX的MVL，在特定实施方案中，MLX的锌复合物。在Kim等人(Biochim.Biophys.Acta,728:339-348,1983)中报道的MVL为一组独特形式的合成膜囊泡，其不同于其它基于脂质的递送系统，如单层脂质体(Huang,Biochemistry,8:334-352,1969；Kim等人,Biochim.Biophys.Acta,646:1-10,1981)和多层脂质体(Bangham等人,JMol.Bio.,13:238-252,1965)。多囊脂质体与单层脂质体(也被称为单层囊泡，“ULV”)之间的主要结构差异为多囊脂质体的每个颗粒含有多个水性室。多囊脂质体与多层脂质体(也被称为多层囊泡，“MLV”)之间的主要结构差异为在多囊脂质体中，多个水性室是非同心的。多囊脂质体的每个颗粒通常具有100至1百万个室，并且所有内部室均通过使室隔开的共有脂质双层壁互相连接。单层、多层和多囊脂质体之间的结构差异在Sankaram等人，美国专利第5,766,627号和第6,132,766号中阐明。
多囊脂质体的结构和功能特征不能从单层囊泡和多层囊泡的现有知识中直接预测。多囊脂质体具有非常独特的内部形态，其可由于制备中使用的特定方法而产生。在拓扑学上，多囊脂质体被定义为在每个颗粒内具有多个非同心室，类似“泡沫样”或“蜂窝样”基质；而多层囊泡在每个脂质体颗粒中含有多个同心室，类似“洋葱层”。
遍及多囊脂质体的如网络般分布的内膜的存在可以用来赋予囊泡增加的机械强度。颗粒本身可以占据制剂总体积的非常大的比例。MVL的填充颗粒体积(PPV)(其以类似于血细胞比容的方式测量)代表颗粒所构成的制剂的体积，并且可以接近高达80％。通常，PPV为约50％。在50％的PPV，多囊脂质体制剂通常由少于5％w/w的脂质组成。因此，封装的体积为大约50％，同时具有相对低的脂质浓度。多囊脂质体的多囊性质也表明，与单层囊泡不同，多囊囊泡外膜中的单个破裂不会导致内部水性内容物的完全释放。
因此，多囊脂质体制剂由许多非同心水性室组成的微观球形颗粒组成。各个室由脂质双层膜隔开，所述脂质双层膜由天然存在的脂质的合成形式组成，产生生物相容性且可生物降解的递送载体。因此，美洛昔康锌复合物微粒MVL制剂由微观的球形颗粒组成，所述微观的球形颗粒由许多非同心水性室组成，所述非同心水性室包封二价金属美洛昔康复合物的形式的美洛昔康，例如，美洛昔康锌，用于控释药物递送。这种制剂旨在延长美洛昔康的局部递送，从而增强炎症和疼痛减轻的作用持续时间。本申请的包含美洛昔康的美洛昔康锌复合物微粒MVL制剂提供局部部位或全身性持续递送，并且可以通过多种途径施用，包括皮下、关节内到关节、肌肉内到肌肉组织、腹膜内、伤口输注、滴注或渗透，或应用于开放性伤口，或体腔，例如鼻腔。
图11A和图11B描绘了放大400倍的DepoMLX颗粒。图11A和图11B都是颗粒悬浮液的显微镜图像。图11A是用油浸透镜获得的图像，而图11B是其中物镜不是油浸透镜的图像。图11A中的结构110是包封Zn(MLX)2的MVL颗粒，而结构112是未包封的Zn(MLX)2。在图11B中，结构114是包封Zn(MLX)2的MVL颗粒，而结构116是未包封的Zn(MLX)2。图12和图13描绘了用100X物镜拍摄的DepoMLX颗粒。图12是具有荧光覆盖的明视场图像，而图13的图像包括相衬。在图12中，结构120是包封Zn(MLX)2的MVL颗粒，而结构122是未包封的Zn(MLX)2。在图13中，结构124是包封Zn(MLX)2的MVL颗粒，而结构126是未包封的Zn(MLX)2。
本文公开的一些实施方案涉及MVL的制剂，其包含美洛昔康锌复合物微粒和包封在MVL的第一水相中的一种或多种pH调节剂。MVL还包含脂质组分。在一些实施方案中，MVL的脂质组分包含至少一种选自磷脂酰胆碱或其盐、磷脂酰甘油或其盐、或它们的组合的两亲性脂质、以及至少一种中性脂质。在一些实施方案中，MVL可以任选地包含另外的治疗剂。在一些其它实施方案中，MLX是MVL中唯一的治疗剂。在一些实施方案中，MVL颗粒悬浮在悬浮溶液中。
美洛昔康锌复合物
在本文所述的美洛昔康锌复合物微粒MVL制剂的一些优选实施方案中，锌盐用于与美洛昔康形成复合物，包括例如氯化锌。在一些此类实施方案中，美洛昔康与锌盐形成复合物以形成美洛昔康锌复合物。在一些另外的实施方案中，这种美洛昔康锌复合物是微粒的形式。在一些此类实施方案中，美洛昔康锌复合物包括摩尔比为约1:4至4:1、约1:3至3:1、约1:2至2:1、约2:1或约1:1的锌与美洛昔康。本领域普通技术人员将理解，在本说明书的上下文中，锌和美洛昔康都在美洛昔康锌复合物中带有形式电荷。锌是阳离子形式Zn2+，而美洛昔康是带负电荷的。在一些实施方案中，复合物作为整体不带有任何正电荷或负电荷。
在一个具体实施方案中，锌与美洛昔康摩尔比例为1:2，并且美洛昔康锌复合物是Zn(MLX)2。在另外的实施方案中，美洛昔康锌复合物具有式Zn(MLX)2(OH2)2。在一些其它的实施方案中，美洛昔康锌复合物可以以其水合物或溶剂化物形式作为微晶存在。在一个实例中，美洛昔康锌复合物具有式Zn(MLX)2.4H2O。制备并且分离微晶形式的Zn(MLX)2用于表征。
图1A和1B描绘了在10μm和25μm的两个不同尺度下表征微晶形式的Zn(MLX)2的光学显微照片。微晶具有不规则形状，具有一些大的薄板状颗粒。观察到大量细粉存在。图2是式Zn(MLX)2的美洛昔康锌复合物微粒的扫描电子显微照片(SEM)。图3是Zn(MLX)2的能量色散X射线分析(EDX)，其证实样品中存在Zn。图4A是游离的、未包封的美洛昔康的1H NMR并且图4B是Zn(MLX)2形式的美洛昔康的1H NMR。在DMSO-d6中以400MHz收集NMR。游离的美洛昔康是可溶的，而Zn(MLX)2难溶于DMSO-d6并且基本上不溶于CDCl3。在Zn(MLX)2的>10ppm区域中仅可见一个可交换的质子(第二个可能非常宽或完全交换)。此外，相对于游离的美洛昔康，观察到Zn(MLX)2的更宽的共振峰，并且还观察到美洛昔康的H4质子的主要屏蔽效应，如图4B所示。
在一些实施方案中，美洛昔康锌复合物在第一水相中部分或基本不溶。Zn(MLX)2在中性pH以下是不溶的，但在较高pH下容易溶解，因此锌和MLX自由解离。在从美洛昔康锌复合物微粒MVL中释放时，Zn(MLX)2解离成MLX也已在本文所述的体外和体内研究中得到证实。在产品分析测试中，在溶解于水/溶剂混合物中时，在色谱图上仅看到完全解离的MLX。
图5是从用标准聚苯乙烯微球作为参考的悬浮液获得的美洛昔康锌复合物Zn(MLX)2微粒微晶的光学显微照片。聚苯乙烯微球是杜克标准微球尺寸标准(NIST可追踪平均直径)聚苯乙烯微球，其认证的平均直径为1.030μm±0.011μm。Zn(MLX)2微晶是黑色不规则形状的颗粒，1μm标准聚苯乙烯微球是白色球形颗粒。令人惊讶地发现，根据显微照片，一些Zn(MLX)2微晶的粒径小于1μm。
pH调节剂
可用于本申请MVL制剂的pH调节剂选自有机酸、有机碱、无机酸或无机碱，或其组合。可用于本申请的合适的无机酸(也称为矿物酸)包括但不限于，盐酸(HCl)、硫酸(H2SO4)、磷酸(H3PO4)、硝酸(HNO3)等。可用于本申请的合适有机酸包括但不限于乙酸、天冬氨酸、柠檬酸、甲酸、谷氨酸、葡糖醛酸、乳酸、苹果酸、酒石酸等。可用于本申请的合适的有机碱包括但不限于组氨酸、精氨酸、赖氨酸、氨丁三醇(Tris)等。可用于本申请的合适的无机碱包括但不限于氢氧化钠、氢氧化钙、氢氧化镁、氢氧化钾等。
在本文所述的制剂的一些实施方案中，pH调节剂还包含一种或多种有机酸、一种或多种有机碱、或其组合。在一些实施方案中，一种或多种有机酸包括酒石酸。在一些实施方案中，一种或多种有机碱包括赖氨酸或组氨酸或其组合。在一些实施方案中，MVL的内部pH为约4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8.0、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9或9.0，或在由任意两个前述pH值限定的范围内。在一些实施方案中，MVL的内部pH为约5.6至约6.6。在一个实施方案中，MVL的内部pH为约5.8。
在本文所述的制剂的一些实施方案中，将MVL颗粒悬浮在悬浮液中。悬浮溶液可包含pH调节剂，和/或可进行缓冲功能。悬浮溶液限定MVL制剂的外部pH。在一些实施方案中，悬浮溶液的pH为约4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8.0、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9、10.0、10.1、10.2、10.3、10.4或10.5，或在由任意两个前述pH值限定的范围内。在一些实施方案中，悬浮溶液的pH为约5.5至8.0。在一个实施方案中，悬浮溶液的pH为约6.1。在一些实施方案中，悬浮溶液与MVL的第二水相相同。
张度剂
在本文所述的制剂的一些实施方案中，MVL的第一水相还包含一种或多种张度剂。张度剂有时也称为渗透剂。适用于本申请的MVL制剂的非限制性示例性渗透剂包括单糖(例如，葡萄糖等)、二糖(例如，蔗糖等)、多糖或多元醇(例如，山梨糖醇、甘露醇、葡聚糖等)或氨基酸。
在一些实施方案中，一种或多种张度剂可选自氨基酸、糖或其组合。在一些其它实施方案中，一种或多种张度剂选自右旋糖、山梨糖醇、蔗糖、赖氨酸或其组合。
在一些实施方案中，MVL的第一水相的重量摩尔渗透压浓度为约230、240、250、260、270、280、290、300、310、320、330、340、350、360或370mOsm/kg，或在由任意两个前述值限定的范围内。在一些实施方案中，MVL的第一水相的重量摩尔渗透压浓度为约250mOsm/kg至约350mOsm/kg。在一些另外的实施方案中，MVL的第一水相的重量摩尔渗透压浓度为约280mOsm/kg至约320mOsm/kg。在一个实施方案中，MVL的第一水相的重量摩尔渗透压浓度为约290mOsm/kg。在另外的实施方案中，第一水性悬浮液可具有约370至约1000mOsm/kg的重量摩尔渗透压浓度，例如、约650至约800mOsm/kg。
脂质组分
在本文所述的制剂的一些实施方案中，MVL的脂质组分包含至少一种两亲性脂质和至少一种中性脂质。在一些另外的实施方案中，脂质组分含有磷脂酰胆碱或其盐、磷脂酰甘油或其盐、以及至少一种甘油三酯。非限制性示例性磷脂酰胆碱包括二油酰基磷脂酰胆碱(DOPC)、二芥酰基磷脂酰胆碱或1,2-二芥酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱(DEPC)、1,2-二癸酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱(DDPC)、1,2-二亚油酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱(DLOPC)、1,2-二月桂酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱(DLPC)、1,2-二肉豆蔻酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱(DMPC)、1,2-二棕榈酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱(DPPC)、1,2-二硬脂酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱(DSPC)、1-肉豆蔻酰基-2-棕榈酰基-sn-甘油3-磷酸胆碱(MPPC)、1-肉豆蔻酰基-2-硬脂酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱(MSPC)、1-棕榈酰基-2-肉豆蔻酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱(PMPC)、1-棕榈酰基-2-油酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱(POPC)、1-棕榈酰基-2-硬脂酰基-sn-甘油基-3–磷酸胆碱(PSPC)、1-硬脂酰基-2-肉豆蔻酰基-sn-甘油基-3–磷酸胆碱(SMPC)、1-硬脂酰基-2-油酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱(SOPC)或1-硬脂酰基-2-棕榈酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱(SPPC)。磷脂酰甘油的非限制性实例包括二棕榈酰磷脂酰甘油或1,2-二棕榈酰基-sn-甘油基-3-磷酸-rac-(1-甘油)(DPPG)、1,2-二芥酰基-sn-甘油基-3-磷酸-rac-(1-甘油)(DEPG)、1,2-二月桂酰基-sn-甘油基-3-磷酸-rac-(1-甘油)(DLPG)、1,2-二肉豆蔻酰基-sn-甘油基-3-磷酸-rac-(1-甘油)(DMPG)、1,2-二油酰-sn-甘油基-3-磷酸-rac-(1-甘油)(DOPG)、1,2-二硬脂酰-sn-甘油基-3-磷酸-rac-(1-甘油)(DSPG)、1-棕榈酰基-2-油酰基-sn-甘油基-3-磷酸-rac-(1-甘油)(POPG)或其盐，例如，相应的钠盐、铵盐或其盐的组合。非限制性示例性甘油三酯包括三油精(TO)、三棕榈油精、三肉豆蔻油精、甘油三亚油酸酯、三丁酸甘油酯、三己酸甘油酯、三辛酸甘油酯和三癸酸甘油酯。甘油三酯中的脂肪链可以全部相同，或者不完全相同(混合链甘油三酯)，或者全部不同。在另外的实施方案中，磷脂酰胆碱和磷脂酰甘油以约10:1至约3:1的质量比存在于MVL中。
在一些实施方案中，磷脂酰胆碱是二芥酰基磷脂酰胆碱(DEPC)。在一些实施方案中，磷脂酰甘油是二棕榈酰基磷脂酰甘油(DPPG)。在一些实施方案中，甘油三酯是三辛酸甘油酯。在一些实施方案中，脂质组分还包含胆固醇。在另外的实施方案中，DEPC和DPPG以约10:1至约1:1，或约10:1至约3:1的质量比的DEPC:DPPG存在于MVL中。
粒径
在本文所述的制剂的一些实施方案中，包封美洛昔康的多囊脂质体具有约5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95或100μm的中值粒径，或在由任意两个前述值限定的范围内。在一些另外的实施方案中，多囊脂质体的中值粒径为约10μm至约50μm。在一些另外的实施方案中，多囊脂质体的中值粒径为约25μm至约40μm。在一些另外的实施方案中，多囊脂质体的中值粒径为约15μm至约30μm。
效力
在本文所述的制剂的一些实施方案中，美洛昔康在最终多囊脂质体制剂中的浓度或效力为约0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0、8.5、9.0、9.5、10.0、10.5、11.0、11.5、12.0、12.5、13.0、13.5、14.0、14.5、15.0、16、17、18、19、20或25mg/mL，或在由任意两个前述值限定的范围内。在一些此类实施方案中，多囊脂质体制剂中的美洛昔康的浓度为约1.0mg/mL至约10.0mg/mL。在一些另外的实施方案中，多囊脂质体制剂中的美洛昔康的浓度为约2.0mg/mL至约5.0mg/mL。在一些另外的实施方案中，多囊脂质体制剂中的美洛昔康的浓度为约3.0mg/mL至约7.0mg/mL。在一些另外的实施方案中，多囊脂质体制剂中的美洛昔康的浓度为约2.0mg/mL至约3.5mg/mL。在一些另外的实施方案中，多囊脂质体制剂中的美洛昔康的浓度为约2.0mg/mL至约3.3mg/mL。在一个实施方案中，多囊脂质体制剂中的美洛昔康的浓度为约2.4mg/mL。在另一个实施方案中，多囊脂质体制剂中的美洛昔康的浓度为约3.0mg/mL。在另一个实施方案中，多囊脂质体制剂中的美洛昔康的浓度为约5.0mg/mL。在另一个实施方案中，多囊脂质体制剂中的美洛昔康的浓度为约7.0mg/mL。
在一些实施方案中，美洛昔康锌复合物微粒MVL制剂可进一步包含未包封的美洛昔康，例如，游离的美洛昔康、游离的美洛昔康复合物或游离的美洛昔康锌复合物微粒。在一些此类实施方案中，未包封的美洛昔康为制剂中美洛昔康的总量的小于约60wt％、小于约50wt％、小于约40wt％、小于约30wt％、或小于约25％、或小于约20％、或小于约15％、或小于约10％、或小于约5％、或小于约2％、或小于约1％，或在由任意两个前述值限定的范围内。在一些实施方案中，美洛昔康锌复合物微粒MVL制剂包括通过磷脂和/或表面活性剂稳定的未包封的美洛昔康锌微粒。在另外的实施方案中，美洛昔康锌复合物微粒MVL制剂包括与MVL颗粒表面缔合的未包封的美洛昔康锌微粒。
在本文所述制剂的任何实施方案中，MVL制剂基本上不含环糊精，例如含有少于约1％、约0.5％、约0.1％或约0.01％的环糊精。在一个实施方案中，MVL制剂不含环糊精。
美洛昔康锌复合物微粒的其它制剂
本文所述的一些替代实施方案涉及包含本文所述的美洛昔康锌复合物微粒(例如，中值粒径为约50μm或更小、约5μm或更小、约0.5μm或更小、约0.2μm或更小的美洛昔康锌复合物微粒)和药物可接受的载体的非MVL制剂。在一些实施方案中，美洛昔康锌复合物微粒是未包封的。由于美洛昔康锌复合物在水中的溶解度差，含有美洛昔康锌复合物微粒的制剂可以提供美洛昔康的控制或持续释放。在一些其它实施方案中，制剂包含一种或多种表面活性剂，例如磷脂和/或合成表面活性剂。在一些其它实施方案中，制剂是包含一种或多种脂质的脂质体制剂。在一些此类实施方案中，至少一部分美洛昔康锌复合物微粒以单层或多层囊泡的形式包封在脂质或表面活性剂中，或通过其表面上的表面活性剂稳定。各种表面活性剂可用于美洛昔康锌复合物微粒制剂的非MVL制剂中，包括磷脂、阴离子表面活性剂、阳离子表面活性剂、两性离子表面活性剂或非离子表面活性剂。阴离子表面活性剂的非限制性实例包括硫酸盐、磺酸盐、磷酸酯和羧酸盐，例如十二烷基硫酸铵、月桂基硫酸钠(十二烷基硫酸钠、SLS或SDS)，以及相关的烷基醚硫酸盐，例如月桂醇醚硫酸钠(月桂基醚硫酸钠或SLES)和肉豆蔻醇聚醚硫酸钠。阳离子表面活性剂的非限制性实例包括季铵盐，例如西曲溴铵(CTAB)、氯化十六烷基吡啶(CPC)、苯扎氯铵(BAC)、苄索氯铵(BZT)、二甲基二十八烷基氯化铵和双十八烷基二甲基溴化铵(DODAB)。两性离子表面活性剂的非限制性实例包括甜菜碱、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰胆碱和鞘磷脂。非离子表面活性剂的非限制性实例包括脂肪醇(如鲸蜡醇、硬脂醇和十六醇十八醇，和油醇)、聚亚烷基二醇烷基醚、甘油烷基酯和脱水山梨糖醇烷基酯。在一个实施方案中，美洛昔康锌复合物具有式Zn(MLX)2。
在一些实施方案中，本文所述的MLX-MVL、美洛昔康锌复合物微粒MVL或其它非MVL美洛昔康锌复合物微粒制剂任选地包含药物可接受的注射用载体。
在本文所述的各种美洛昔康锌复合物微粒制剂的一些实施方案中，所述制剂对于施用是药物可接受的，所述施用通过注射，例如皮下注射、关节内注射、肌肉内注射、腹膜内注射施用，或任何其它肠胃外施用方式，例如制药领域中已知的那些。组合物可以进一步通过药学领域已知的渗透、滴注或输注施用。在一个实施方案中，制剂适于通过局部注射施用到手术部位。在另一个实施方案中，制剂适于伤口滴注。在另一个实施方案中，制剂适于直接滴注到开放性伤口、充满液体的隔室或体腔中。非MVL制剂，例如表面活性剂稳定的制剂，可以静脉内或通过输注施用。
制备方法
一些实施方案提供了制备包封在多囊脂质体内的美洛昔康制剂的方法，其提供了美洛昔康的调节和控制释放。在一些实施方案中，如本文所述的方法是连续制备方法。在一些实施方案中，该过程的某些步骤或每个步骤可以在灭菌或无菌条件下进行。本申请的美洛昔康锌复合物微粒MVL制剂通过以下方法制备。通常，H.Hartounian等人，通过引用整体并入本文的第9,585,838号美国专利(2017)中描述的装置和方法可以用于制备MVL的任何阶段。例如，可以使用第9,585,838号美国专利的图1、2、4、5或6中任何一个所示的装置，或由这种装置进行的方法。
美洛昔康锌复合物微粒及其制剂的制备
首先，制备MLX水溶液和含有二价金属阳离子盐的水溶液。将两种溶液混合在一起以形成美洛昔康金属络合物。含有美洛昔康复合物的混合物可以是MVL的第一水相。优选地，二价阳离子盐是锌盐。锌盐的非限制性实例包括氯化锌(ZnCl2)、硝酸锌(Zn(NO3)2)、氯酸锌(Zn(ClO3)2)、硫酸锌(ZnSO4)、磷酸锌(Zn3(PO4)2)、或乙酸锌(Zn(O2CCH3)2)、或其水合物或组合。在一个特定实例中，锌盐是氯化锌。
观察到简单地将锌盐水溶液与美洛昔康溶液混合不易形成美洛昔康锌复合物。如上所述，美洛昔康是非常亲脂的并且在中性或酸性条件下具有非常低的水溶性。因此，必须将美洛昔康水溶液的pH调节至碱性以使美洛昔康能够充分溶解。相反，氯化锌在碱性pH下形成氢氧化锌沉淀。如果锌盐水溶液的pH太高，则锌阳离子将以氢氧化锌的形式从溶液中沉淀出来，因此在溶液相中留下很少或没有锌阳离子与美洛昔康反应。因此，必须优化氯化锌水溶液和美洛昔康溶液的pH，以便能够以良好的产率形成美洛昔康锌复合物微粒。在一些实施方案中，锌盐溶液的pH为约4.5至约6.0，并且美洛昔康溶液的pH为约7.5至约10.0。在一些另外的实施方案中，锌盐溶液的pH为约5.0至约5.5。在一个实施方案中，锌盐溶液的pH为约5.2。在另一个实施方案中，锌盐溶液的pH为约5.5。在一些另外的实施方案中，美洛昔康溶液的pH为约8.0至约9.0。在一个实施方案中，美洛昔康溶液的pH为约8.2。在另一个实施方案中，美洛昔康溶液的pH为约8.5。在一些实施方案中，在混合氯化锌溶液和美洛昔康溶液后，所得混合物的pH为约6.6。在一些实施方案中，美洛昔康锌复合物微粒悬浮液的pH为约6.6。
发现当控制重量摩尔渗透压浓度和浓度的条件时，美洛昔康溶液和锌盐溶液形成期望的美洛昔康锌复合物微粒。因此，美洛昔康溶液和/或锌盐溶液可包含另外的赋形剂。另外的赋形剂可以是张度剂、增溶剂、氨基酸、有机酸、有机碱中的一种或多种及其组合。另外的赋形剂可以选自酒石酸、赖氨酸、蔗糖、组氨酸及其组合。
在适当的pH和其它条件下将MLX水溶液与氯化锌水溶液混合时，由于美洛昔康锌复合物的低水溶性，形成了悬浮液形式的美洛昔康锌的复合物。美洛昔康锌复合物微粒悬浮液可用于形成MVL，作为第一水性悬浮液，或可进行进一步的处理步骤。发现重要的是确保第一水性悬浮液在适当的pH范围内用于后续过程。在一些实施方案中，在形成美洛昔康锌复合物微粒之后，美洛昔康锌复合物微粒悬浮液的pH为约5.0至约8.0、或约6.2至约7.0、或优选为约6.55至约6.75。选择合适的pH确保存在锌和美洛昔康离子以形成复合物。令人惊讶地发现，需要窄的pH范围来形成美洛昔康锌复合物才能完成。在某些条件下，氢氧化锌或美洛昔康会从溶液中形成并沉淀出来。在一个实施方案中，美洛昔康锌复合物微粒悬浮液的pH为约6.6。在一个实施方案中，第一水性悬浮液或美洛昔康锌复合物微粒悬浮液具有约6.6的pH。随后，可将第一水性悬浮液或美洛昔康锌复合物微粒悬浮液滴定至约5.8的pH。
通常，美洛昔康锌复合物可以是MLX:锌摩尔比为2:1、1:1或1:2。在一个实施方案中，美洛昔康锌复合物具有式Zn(MLX)2。在另外的实施方案中，美洛昔康锌复合物具有式Zn(MLX)2(OH2)2。在一些进一步的实施方案中，美洛昔康锌复合物可以以其水合物或溶剂化物形式作为微晶存在。在一个实例中，美洛昔康锌复合物微晶具有式Zn(MLX)2.4H2O。Zn(MLX)2在低于中性pH下是不溶性盐，但在较高的pH值下容易溶解，其中锌和MLX解离。还发现Zn(MLX)2在非常低的pH值下解离。从多囊脂质体释放后，美洛昔康锌复合物可解离以提供游离的美洛昔康。一旦络合完成，可将混合物滴定至目标pH并使其例如通过重力沉降。沉降后，可倾析混合容器以将美洛昔康锌复合物微粒悬浮液浓缩至目标美洛昔康浓度。令人惊讶地发现，控制美洛昔康锌复合物悬浮液的pH导致美洛昔康锌复合物微粒的更快速沉降，使得能够发生上清液的倾析。
令人惊讶地发现，在本文所述的方法中，美洛昔康锌复合物形成微粒，其不需要进一步研磨和/或尺寸减小处理。产生的美洛昔康锌复合物微粒具有1至几微米中值直径的尺寸，而一些微粒可以形成聚集体并且可以看作高达约50微米的板，如图1A、图1B和图2所示。在一些实施方案中，形成中值粒径为约5μm或更小、约2μm或更小、1μm或更小、约0.5μm或更小、或约0.2μm或更小的美洛昔康锌复合物微粒。这些自发形成的微粒可以在无菌条件下在灭菌容器中容易地制备并且容易地包封在MVL中。在一些实施方案中，锌盐溶液和美洛昔康溶液中的每一种在混合之前是灭菌的或无菌的。在另外的实施方案中，在合并之前，将锌盐溶液和美洛昔康溶液中的每一种进行灭菌过滤。
还令人惊讶地观察到，美洛昔康锌复合物Zn(MLX)2微粒在通常用于MVL制备方法的水溶液和挥发性有机溶剂(例如，氯仿和二氯甲烷)中具有低溶解度。这些微粒优于用于制备包封美洛昔康的多囊脂质体的现有技术方法中使用的美洛昔康水溶液。如上所述，美洛昔康相当亲脂并且一旦包封就可以容易地通过MVL的脂质膜，从而导致从MVL的内部水性室中泄漏。由于美洛昔康锌复合物微粒的水溶性低，可以避免泄漏问题。此外，由于它们在MVL的内部水性室中的实质上不溶性，美洛昔康锌复合物微粒对MVL颗粒的重量摩尔渗透压浓度没有贡献。因此，它们不会引起MVL颗粒的溶胀并且允许更高的美洛昔康负载量。最后，锌的生物相容性及其促进伤口愈合的额外益处使得美洛昔康锌复合物对于治疗疼痛是优异的，特别是来自损伤或手术后部位的疼痛。
在如本文所述的制备美洛昔康锌复合物微粒的方法的任何实施方案中，所述方法可在灭菌或无菌条件下进行。在一些其它实施方案中，可以以连续方式进行所述方法。在一些其它实施方案中，可以以间歇方式进行所述方法。
可以将另外的pH调节剂添加到水性美洛昔康锌复合物微粒悬浮液中。在本文所述的方法的一些实施方案中，pH调节剂还包含一种或多种有机酸、一种或多种有机碱、或其组合。在一些实施方案中，一种或多种有机酸包括酒石酸。在一些实施方案中，一种或多种有机碱包括赖氨酸或组氨酸或其组合。在一些实施方案中，多囊脂质体的第一水性悬浮液或第一水相的pH为约4.5至约7.0，优选为约5.6至约6.6。在一个实施方案中，多囊脂质体的第一水相的pH为约5.8。
在本文所述方法的一些实施方案中，还将一种或多种张度剂加入到MVL的第一水性悬浮液或第一水相中。在一些实施方案中，一种或多种张度剂包括氨基酸、糖或其组合。在一些实施方案中，一种或多种张度剂包括山梨糖醇、蔗糖、赖氨酸或其组合。在一些实施方案中，MVL的第一水相的重量摩尔渗透压浓度为约150mOsm/kg至约370mOsm/kg、约230mOsm/kg至约370mOsm/kg、约250mOsm/kg至约350mOsm/kg、或约280mOsm/kg至约320mOsm/kg。在一个实施方案中，MVL的第一水相的重量摩尔渗透压浓度为约290mOsm/kg。在另外的实施方案中，第一水性悬浮液可以是高渗的，具有约370至约1000mOsm/kg的重量摩尔渗透压浓度，例如，约650至约800mOsm/kg。在此类实施方案中，可将第二水相换成等渗悬浮介质。在这样的交换之后，MVL可以溶胀以提供如本文提供的美洛昔康锌复合物微粒MVL制剂。
可以进一步修饰第一水性悬浮液和/或美洛昔康锌复合物微粒悬浮液以用于制备MVL。例如，可使第一水性悬浮液和/或美洛昔康锌复合物微粒悬浮液沉降，并且使上清液倾析。可以部分或完全交换第一水性悬浮液和/或美洛昔康锌复合物微粒悬浮液的悬浮介质。悬浮介质交换可以使得调节重量摩尔渗透压浓度、一种或多种赋形剂的浓度和美洛昔康锌复合物微粒形式的美洛昔康浓度的条件。在一些实施方案中，第一水性悬浮液和/或美洛昔康锌复合物微粒悬浮液适合于制备MVL的第一水相而无需进一步处理。在另外的实施方案中，使第一水性悬浮液和/或美洛昔康锌复合物微粒悬浮液进行部分或完全悬浮介质交换。在另外的实施方案中，悬浮介质包含pH调节剂、表面活性剂、氨基酸和张度剂中的一种或多种。
在一些实施方案中，通过交换悬浮介质，从美洛昔康锌复合物微粒悬浮液中基本上去除锌盐溶液或美洛昔康溶液中的一种或多种赋形剂。在另外的实施方案中，基本上去除的赋形剂是氯化锌、赖氨酸、蔗糖、组氨酸或酒石酸。在另外的实施方案中，第一水性悬浮液基本上不含氯化锌、赖氨酸、蔗糖、组氨酸和/或酒石酸，其中基本上不含是在交换后美洛昔康复合微粒混悬液中少于20％的量。
可以将第一水性悬浮液和/或美洛昔康锌复合物微粒悬浮液倾析至选定的美洛昔康浓度水平。在各种实施方案中，第一水性悬浮液和/或美洛昔康锌复合物微粒悬浮液具有约0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0、6、7、8、9、10、12、14、16、18、20、25、30、35或40mg/mL的美洛昔康浓度(以美洛昔康锌复合物微粒的形式)，或在由任意两个前述值限定的范围内。在另外的实施方案中，第一水性悬浮液和/或美洛昔康锌复合物悬浮液具有约3至约15mg/mL的美洛昔康浓度(以美洛昔康锌复合物微粒的形式)。在某些实施方案中，脂质溶液中的脂质浓度可以与第一水性悬浮液中的美洛昔康的浓度成比例。在一些实施方案中，可以通过沉降美洛昔康锌复合物微粒，然后倾析上清液来浓缩第一水性悬浮液和/或美洛昔康锌复合物微粒悬浮液。在另外的实施方案中，可将沉降的第一水性悬浮液和/或美洛昔康锌复合物微粒悬浮液稀释至期望的美洛昔康浓度。
通过将脂质在有机溶剂(例如，氯仿或二氯甲烷)中的溶液与美洛昔康锌复合物微粒的第一水性悬浮液混合来制备“油包水”型乳液。油包水乳液由两种不混溶相、脂质相和水性MLX锌复合物微粒悬浮液形成。脂质相由在挥发性有机溶剂中包含至少一种两亲性脂质和至少一种中性脂质的脂质组分和任选的胆固醇和/或胆固醇衍生物组成。术语“两亲性脂质”是指具有亲水性“头部”基团和疏水性“尾部”基团的分子，其可以但不必具有成膜能力。如本文所用，两亲性脂质包括具有净负电荷、净正电荷和两性离子脂质(在其等电点处没有净电荷)的那些。术语“中性脂质”是指本身不具有囊泡形成能力的油或脂肪，并且缺乏带电或亲水的“头部”基团。中性脂质的实例包括但不限于甘油酯、乙二醇酯、生育酚酯，缺乏带电荷或亲水“头部”基团的甾醇酯，以及烷烃和角鲨烯。
两亲性脂质选自在同一分子中具有疏水区和亲水区的宽范围的脂质。合适的两亲性脂质是两性离子磷脂，包括磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、鞘磷脂、溶血磷脂酰胆碱和溶血磷脂酰乙醇胺。同样合适的是阴离子两亲性磷脂，例如磷脂酰甘油、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰肌醇、磷脂酸和心磷脂。同样合适的是阳离子两亲性脂质，例如酰基三甲铵丙烷、二酰基二甲铵丙烷、硬脂胺等。优选的两亲性脂质包括二油基磷脂酰胆碱(DOPC)、二芥酰基磷脂酰胆碱或1,2-二芥酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱(DEPC)、和二棕榈酰基磷脂酰甘油或1,2-二棕榈酰基-sn-甘油基-3-磷酸-rac-(1-甘油)(DPPG)。在某些实施方案中，用于本申请的美洛昔康锌复合物微粒MVL制剂的两亲性脂质包括DEPC和DPPG。
合适的中性脂质是甘油三酯、丙二醇酯、乙二醇酯和角鲨烯。可用于本申请制剂和方法的甘油三酯的实例是三油精(TO)、三棕榈油精、三肉豆蔻油精、甘油三亚油酸酯、三丁酸甘油酯、三己酸甘油酯、三辛酸甘油酯和三癸酸甘油酯。可用于本申请中的甘油三酯中的脂肪链可以全部相同，或者不完全相同(混合链甘油三酯)，包括全部不同。丙二醇酯可以是辛酸和癸酸的混合二酯。
在本文所述的方法的一些实施方案中，多囊脂质体的脂质组分包括磷脂酰胆碱或其盐、磷脂酰甘油或其盐以及至少一种甘油三酯。在一些实施方案中，磷脂酰胆碱是二芥酰基磷脂酰胆碱(DEPC)。在一些实施方案中，磷脂酰甘油是二棕榈酰基磷脂酰甘油(DPPG)。在一些实施方案中，甘油三酯是三辛酸甘油酯。
存在于用于制备MVL的水不混溶溶剂中的两亲性脂质、中性脂质和胆固醇的浓度通常分别为10-40mM、10-40mM和10-60mM。在一些实施方案中，两亲性脂质、中性脂质和胆固醇的浓度可以以约1:1:1摩尔浓度比存在。例如，两亲性脂质、中性脂质和胆固醇的浓度可分别为约23mM，约24mM和约24mM，或分别为约37mM、约40mM和约40mM。如果包含带电荷的两亲性脂质，则其通常以比两性离子脂质更低的浓度存在。
在本申请方法中可以使用许多类型的挥发性有机溶剂，包括醚、酯、卤代醚、烃、卤代烃、卤化碳或氟利昂。例如，乙醚、氯仿、二氯甲烷、四氢呋喃、乙酸乙酯及其任意组合适用于制备制剂。
任选地，脂质相中包含其它组分。其中这些是抗氧化剂、抗菌防腐剂、胆固醇或植物甾醇。
在某些实施方案中，第一水相和/或第一水性悬浮液包括美洛昔康锌复合物微粒悬浮液、有机酸和碱，例如酒石酸、组氨酸和张度剂(例如，蔗糖)。脂质相和第一水相通过机械湍流混合，例如通过使用旋转或振动叶片、转子/定子混合、摇动、通过挡板结构或多孔管挤出、或通过超声波以产生油包水乳液。
然后，可以通过上述方式将油包水乳液分散到第二水相中，以形成悬浮在第二水相中的溶剂球粒，形成水包油包水(w/o/w)乳液(“第二乳液”)。例如，可以使用如通过引用整体并入本文的美第2011/0250264号国专利公开中所述的三流体雾化喷嘴。术语“溶剂球粒”是指有机溶剂的微观球状液滴，其中悬浮有多个较小的水相液滴。第二水相可含有其它组分，例如张度剂、pH调节剂、金属螯合剂或其组合。例如，第二水相可以包含金属螯合剂(例如EDTA)、张度剂(例如山梨糖醇、右旋糖、葡萄糖和/或蔗糖)以及一种或多种pH调节剂(例如赖氨酸、组氨酸、酒石酸等)。在一些实施方案中，第二水相不包含组氨酸。
在本文所述的美洛昔康锌复合物微粒MVL制剂的一些实施方案中，用于MVL的制备、储存或施用的第二水相包含一种或多种有机或无机酸、一种或多种有机或无机碱，或其组合。在一些此类实施方案中，一种或多种有机酸包括酒石酸。在一些此类实施方案中，一种或多种有机碱包含赖氨酸或组氨酸。在一些实施方案中，第二水相pH为约4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8.0、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9或9，或在由任意两个前述pH值限定的范围内。在一些实施方案中，第二水相的pH为约4.8至约7.2。在一些另外的实施方案中，第二水相的pH为约6至约9。在一些另外的实施方案中，第二水相的pH为约5.5至约7.0。在一些另外的实施方案中，第二水相的pH为约6.4至约8.4。在另外的实施方案中，第二水相的pH为约7至约9。在一个实施方案中，第二水相的pH为约6.3。在一个实施方案中，第二水相的pH为约7.5。在一个实施方案中，第二水相的pH为约8.4。在一个实施方案中，第二水相的pH为约6.1。
然后，基本上从球粒中去除挥发性有机溶剂，例如通过悬浮液的表面蒸发或气体鼓泡。在一些实施方案中，通过喷雾法使用如通过引用整体并入本文的第2011/0250264号美国公开所述的三流体雾化喷嘴将w/o/w液滴分散或悬浮在连续气相中，从水包油包水乳液中去除挥发性水不混溶性有机溶剂。在一些实施方案中，通过将第二乳液分散到循环气氛中，例如通过雾化喷嘴或喷雾器，基本上去除挥发性水不混溶性有机溶剂。当溶剂基本上或完全蒸发时，形成MVL。可用于蒸发的气体包括空气、氮气、氩气、氦气、氧气、氢气和二氧化碳。或者，可以通过鼓泡、旋转蒸发、渗滤或使用溶剂选择性膜去除挥发性溶剂，例如通过引用整体并入本文的WO 99/25319和第2002/0039596号美国专利公开号描述的那些。
使用本文所述的方法，可以高效地制备包含美洛昔康的多囊脂质体。在一些实施方案中，多囊脂质体制剂中的美洛昔康的浓度为约0.5mg/mL至约25mg/mL、约0.5mg/mL至约15.0mg/mL、约1.0mg/mL至约10.0mg/mL、约2.0mg/mL至约5.0mg/mL、或约2.0mg/mL至约3.5mg/mL。在一些实施方案中，最终的MVL制剂中的美洛昔康的浓度为约2mg/mL至约8mg/mL。在一些优选的实施方案中，最终MVL制剂中的美洛昔康的浓度为约2.2mg/mL至约3.3mg/mL。在一个实施方案中，最终的MVL制剂中的美洛昔康的浓度为约2.4mg/mL。在另一个实施方案中，最终的MVL制剂中的美洛昔康的浓度为约3.0mg/mL。在一个实施方案中，最终的MVL制剂中的美洛昔康的浓度为约7mg/mL。在一些实施方案中，制剂还包含未包封的美洛昔康，包括但不限于游离的美洛昔康、游离的美洛昔康复合物或游离的美洛昔康锌复合物微粒。例如，最终的MVL制剂可以包含约2.4mg/mL美洛昔康并且具有约50％的PPV。又例如，最终的MVL制剂可以包含约3mg/mL美洛昔康并且具有约40％的PPV。
在本文所述的方法的一些实施方案中，包封美洛昔康的MVL的中值粒径为约5μm至约100μm、约10μm至约50μm、或约25μm至约40μm。在一些另外的实施方案中，多囊脂质体的中值粒径为约15μm至约30μm。
治疗和施用方法
本公开的一些实施方案涉及治疗疼痛或炎症的方法，包括将包封美洛昔康的MVL制剂，特别是如本文所述的美洛昔康锌复合物微粒MVL制剂施用于有需要的个体。
本公开的一些其它实施方案涉及治疗疼痛或炎症的方法，包括向有需要的个体施用含有美洛昔康锌复合物微粒的制剂。在一些实施方案中，制剂不包含MVL。在一些此类实施方案中，制剂是持续释放制剂，其中美洛昔康锌复合物微粒未被包封。在一些其它实施方案中，制剂是包封美洛昔康锌复合物微粒的脂质体制剂，例如单层脂质体或多层囊泡制剂。这种制剂还含有形成脂质体的脂质或表面活性剂。在单层脂质体和多层囊泡制剂中，也可存在游离的美洛昔康锌复合物微粒。或者，美洛昔康锌复合物微粒可与一种或多种表面活性剂缔合，例如磷脂、阳离子、阴离子或中性表面活性剂。
在一些实施方案中，个体患有来自手术部位的术后疼痛。在一些其它实施方案中，个体患有关节炎。在一些其它实施方案中，个体患有来自损伤的疼痛。本申请的美洛昔康复合物微粒MVL或非MVL美洛昔康锌复合物微粒制剂可以通过注射而施用，例如皮下注射、关节内注射、肌肉内注射、皮内注射等。本申请的美洛昔康锌复合物微粒MVL或非MVL美洛昔康锌复合物微粒制剂可以通过肠胃外注射而施用。在任何实施方案中，这些制剂可以通过推注施用，例如皮下推注、关节内推注、肌肉内推注、皮内推注等。在一些其它实施方案中，可以通过浸润而施用，例如在术后部位的局部浸润等，例如伤口滴注或输注，或简单地滴注到开放性伤口中。上述制剂还可以通过其它施用途径施用以治疗局部炎症或疼痛，包括但不限于局部、眼、眼内、鼻、鞘内、脑、耳、腹膜内或递送至体腔。非MVL制剂，例如表面活性剂稳定的制剂，可以静脉内或通过输注施用。
在一些实施方案中，美洛昔康锌复合微粒MVL或非MVL美洛昔康锌复合物微粒制剂中的MLX的剂量为每天约5mg至约20mg，例如约7.5mg至约17.5mg，或约10mg至约15mg。
在一些实施方案中，MLX的剂量为约0.01、0.05、0.10、0.15、0.20、0.25、0.30、0.35、0.40、0.45、0.5、0.55、0.60、0.65、0.70、0.75、0.80、0.85、0.90、0.95或1.00mg/kg/天，或由任意两个前述值定义的范围。在一些另外的实施方案中，MLX的剂量为约0.05mg/kg至约0.30mg/kg，或0.10mg/kg至约0.25mg/kg。
使用标准方法和装置，例如笔、注射器系统、针和注射器、皮下注射端口递送系统等，实现本申请的美洛昔康锌复合物微粒MVL或非MVL美洛昔康锌复合物微粒制剂的施用。参见，例如，Hall等人，1970年12月15日公布的第3,547,119号美国专利；Konopka等人，1988年7月5日公布的第4,755,173号美国专利；Yates，1985年7月30日公布的第4,531,937号美国专利；Gerard，1982年1月19日公布的第4,311,137号美国专利；以及Fischell等人，2000年1月25日公布的第6,017,328号美国专利，其各自通过引用整体并入本文。
在优选的实施方案中，美洛昔康锌复合物微粒MVL制剂或非MVL美洛昔康锌复合物微粒制剂通过眼内、鞘内、皮下、肌肉内或关节内施用。这种施用可以以约1天至约7天的间隔发生，全身使用约7.5mg至约200mg，关节内使用约0.1mg至约10mg。精确的剂量将根据患者因素而变化，例如如年龄、性别、一般状况等。本领域技术人员可以容易地考虑这些因素并使用它们来建立有效的治疗浓度而无需过多的实验。
对于全身施用，每天施用的MLX的量优选为约7.5mg至约15mg。
对于关节内施用，每剂量施用的MLX的量将显著低于皮下施用。例如，每天施用的MLX的量优选为约0.075mg至约0.15mg。
对于通过浸润或滴注而施用，施用的MLX的量优选为约0.1mg至约50mg。
在一些实施方案中，美洛昔康锌复合物微粒MVL或非MVL美洛昔康锌复合物微粒制剂任选地包含药物可接受的载体。含有Zn-MLX脂质体颗粒例如MVL、单层脂质体和多层囊泡的有效可注射组合物可以是悬浮液形式。美洛昔康锌复合物微粒的非MVL持续释放制剂也可以是用于注射的悬浮液形式。
含有本申请制剂的可注射悬浮液组合物需要含有或不含佐剂的液体悬浮介质作为媒介物。悬浮介质可以是例如，氯化钠、蔗糖、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇的水溶液，或上述的组合。悬浮介质还可包含一种或多种表面活性剂。
可以将合适的生理学上可接受的佐剂添加至悬浮液组合物中。佐剂可以选自增稠剂，例如羧甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、明胶和海藻酸盐。许多表面活性剂也可用作悬浮剂。卵磷脂、烷基酚聚环氧乙烷加合物、萘磺酸盐、烷基苯磺酸盐和聚氧乙烯脱水山梨糖醇酯是有用的悬浮剂。
影响液体悬浮介质的亲水性、密度和表面张力的许多物质可以有助于在个别情况下制备可注射悬浮液。例如，硅酮消泡剂、山梨糖醇和糖可以是有用的悬浮剂。
如本文所用，术语“个体”包括动物和人。在优选的实施方案中，个体是人。
在一些实施方案中，本申请的美洛昔康锌复合物微粒MVL或非MVL美洛昔康锌复合物微粒制剂每天施用一次、两次、三次、四次或更多次。美洛昔康锌复合物微粒MVL或非MVL美洛昔康锌复合物微粒制剂也可以每天施用少于一次或以单剂量施用，例如每2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14天，或每1、2、3或4周施用一次，或由任意两个前述值定义的范围。在一些实施方案中，每天的施用次数是固定的(例如，每天一次)。在其它实施方案中，给药次数是可变的。施用次数可以根据剂量的有效性、观察到的副作用、滴定至期望剂量的需要、外部因素(例如，另一种药物的变化)或已施用的剂型的时间长度而改变。
在一些实施方案中，本文提供的制剂，例如包含包封在MVL中的美洛昔康锌复合物微粒的制剂在施用于个体后72小时，维持至少约100ng/mL、至少约200ng/mL、至少约300ng/mL、至少约400ng/mL、至少约500ng/mL、至少约750ng/mL、至少约1000ng/mL、至少约2000ng/mL、至少约3000ng/mL、至少约4000ng/mL、或至少约5000ng/mL的血浆美洛昔康浓度。在另外的实施方案中，本文提供的制剂，例如包含包封在MVL中的美洛昔康锌复合物微粒的制剂在施用于个体后，在血浆中或在作用部位维持美洛昔康的治疗水平至少约24小时、至少约48小时、至少约72小时、至少约96小时、至少约120小时、至少约144小时、或至少约168小时。
在一些实施方案中，本文提供的非MVL制剂，例如包含包封在单层脂质体中、多层囊泡中或通过一种或多种表面活性剂稳定的美洛昔康锌复合物微粒的制剂在施用于个体后72小时，维持至少约100ng/mL、至少约200ng/mL、至少约300ng/mL、至少约400ng/mL、至少约500ng/mL、至少约750ng/mL、至少约1000ng/mL、至少约2000ng/mL、至少约3000ng/mL、至少约4000ng/mL、或至少约5000ng/mL的血浆美洛昔康浓度。在另外的实施方案中，本文提供的非MVL制剂，例如包含包封在单层脂质体中、多层囊泡中或通过一种或多种表面活性剂稳定的美洛昔康锌复合物微粒的制剂在施用于个体后，在血浆中或在作用部位维持美洛昔康的治疗水平至少约24小时、至少约48小时、至少约72小时、至少约96小时、至少约120小时、至少约144小时、或至少约168小时。
实施例
虽然已经根据某些实施方案具体描述了本发明的某些治疗剂、组合物、制剂和方法，但以下实施例仅用于例示本发明的组合物和方法，并不旨在限制本发明的组合物和方法。
实施例1.DepoMLX的制备方法
DepoMLX由包封美洛昔康锌复合物微粒的多囊脂质体(MVL)颗粒组成。DepoMLX产物通过连续方法制备，所述连续方法由处理步骤组成，所述处理步骤包括制备第一乳液(油包水乳液)、第二乳液(水包油包水)、溶剂去除、渗滤和浓缩至最终效力。每个步骤在无菌条件下进行。每个步骤的组成总结在表1和表2中。一般方法描述于第2011/0250264号美国公开中，其通过引用整体并入本文。
含有MLX的第一水性悬浮液的制备：如上所述，水性形式的美洛昔康容易扩散穿过脂质膜。因此，不可能在MVL颗粒内实现美洛昔康的高度包封。通过用氯化锌溶液沉淀美洛昔康以形成美洛昔康锌复合物克服了该挑战，所述复合物在脂质和水溶液中具有低溶解度。中性形式的美洛昔康在MVL颗粒内部和外部建立平衡。由于颗粒内溶解的美洛昔康浓度低，颗粒外部溶解的美洛昔康的量也浓度低。用赖氨酸、酒石酸和蔗糖以如表1A所示的量制备MLX水溶液。将等体积的缓冲MLX水溶液与制剂1中含有组氨酸、酒石酸和蔗糖的氯化锌缓冲水溶液(“1:1方法”)混合，并且将2:1溶液体积比的美洛昔康溶液与氯化锌溶液用于制剂2和制剂3(“2:1方法”)。制剂1至制剂3的条件总结于表1A中。每种混合物导致形成悬浮微粒形式的美洛昔康锌复合物Zn(MLX)2。将每种混合物从约6.6的pH滴定至目标pH 5.8并且使其沉降，并且每种反应后的美洛昔康锌复合物微粒悬浮液的组成总结在表1B中。通过倾析进一步浓缩Zn(MLX)2微粒悬浮液，以分别获得制剂1、制剂2和制剂3的约12mg/mL、约15mg/mL和约9.5mg/mL的期望美洛昔康浓度。制剂1和至3的第一水性悬浮液的所得组合物提供于表1C中(在倾析和pH调节后)。美洛昔康锌微粒悬浮液可以原样施用，或者通过添加例如缓冲剂和/或表面活性剂，和/或在悬浮介质更换后施用。
第一乳液的制备：对于制剂1至制剂3中的每一种，将在有机溶剂(对于制剂1和制剂2为氯仿，对于制剂3为二氯甲烷)中的含有DEPC、DPPG、三辛酸甘油酯和胆固醇的脂质组合溶液与含有美洛昔康锌悬浮液的水性悬浮液混合以产生由DEPC和DPPG组成的磷脂单层稳定的油包水(w/o)液滴的均匀乳液，如表2总结。对于制剂3，第一乳液由约20L的每种水性悬浮液和脂质/有机相形成。
第二乳液的制备：对于制剂1和制剂2，使用三流体喷嘴将第一乳液与含有山梨糖醇/组氨酸/酒石酸的第二水相混合，以在连续流动过程中制备第二水包油包水(w/o/w)乳液。由于氮气离开喷嘴，第二乳液在喷雾室中分散成液滴。在喷雾室或容器内，引入加湿的氮气以减少第二乳液液滴中的氯仿的量。氯仿浓度的降低允许脂质分子自组装成MVL颗粒的膜结构。用连续喷射的冲洗溶液冲洗溶剂去除室的表面，以促进MVL颗粒流至溶剂去除容器的底部，并且帮助控制从溶剂去除容器的底部的出口孔收集的MVL悬浮液的pH和重量摩尔渗透压浓度。
对于制剂3，在搅拌下将第一乳液以间歇过程与含有山梨糖醇/组氨酸/酒石酸/EDTA的第二水相混合，以产生第二水包油包水(w/o/w)乳液。将第二乳液用氮气鼓泡以蒸发二氯甲烷溶剂，在此期间形成MVL颗粒。
渗滤：对于制剂1和制剂2，将形成的MVL悬浮液进行切向交叉流过滤，以得到含有包封的美洛昔康的稳定MVL颗粒在悬浮溶液中的稀释悬浮液。该系统首先进行切向交叉流过滤，以获得悬浮液的目标填充颗粒体积(PPV)值。然后，将其进行渗滤以用含有组氨酸和酒石酸的盐水溶液替换悬浮溶液，去除任何未包封的MLX、残留的氯仿和山梨糖醇。最后，通过倾析将悬浮液浓缩至目标PPV值。
对于制剂3，将MVL悬浮液针对pH为6的盐水/组氨酸/酒石酸溶液进行分批渗滤。最后，通过倾析将悬浮液浓缩至美洛昔康浓度值。
表1A.美洛昔康溶液和锌盐溶液的组成
表1B.美洛昔康锌复合物形成后的美洛昔康复合物微粒悬浮液的组成
表1C.第一水性悬浮液的组成
表2.美洛昔康锌复合物微粒MVL制剂1、2和3的组成
表3.最终的DepoMLX颗粒分析
实施例2.第一水性悬浮液的优化
在第一水性制剂期间，形成美洛昔康锌复合物Zn(MLX)2作为微粒悬浮液，由此根据实施例1中的描述制备缓冲的MLX溶液和缓冲的ZnCl2溶液，并且无菌过滤到第一水性容器中。将溶液混合以帮助Zn(MLX)2微粒形成。关闭混合器，使形成的微粒沉降。进行倾析步骤以去除上清液，以达到pH为约6.6的目标第一水性悬浮液体积。然后，用1M酒石酸进行第一水性悬浮液的滴定，以达到约5.8的pH。在连续制备过程中将悬浮液直接加入乳化系统中。
最初，用1:1体积比的MLX溶液和氯化锌溶液制备第一水性悬浮液。倾析步骤后的最终MLX浓度为12mg/mL。该浓度用于制备毒理学研究材料(实施例1中的制剂1)。进一步优化该程序以允许在第一水性制备容器内制备更大体积的第一水性悬浮液，并在第一水性悬浮液中获得更高的MLX浓度。将如实施例1中所述的2:1体积的MLX溶液:氯化锌溶液混合，滴定，然后沉降并倾析。这导致MLX浓度为约15mg/mL(实施例1中的制剂2)。通过进行PK研究证实了美洛昔康锌复合物在约12mg/mL和约15mg/mL下的等效性，其中MLX释放曲线对于两种复合物微粒制剂是相同的。
在一些情况下，在渗滤过程期间将形成的包封美洛昔康锌复合物微粒的MVL悬浮液暴露于低pH组氨酸缓冲液。
实施例3.各种美洛昔康金属复合物的比较
如实施例1中所述(即，1:1方法)，使用1:1体积的MLX溶液:金属二价阳离子盐溶液，已经使用各种金属盐制备美洛昔康复合物微粒。将pH 8.2的20mM的MLX溶液缓慢加入到pH 5.5的150mL 20mM ZnCl2、MgCl2或CuCl2溶液中，并且将混合物在室温下以300rpm搅拌3小时。观察到在每种溶液混合物中形成沉淀物。使用ZnCl2、MgCl2和CuCl2的反应的反应后上清液的pH分别为pH 6.65、pH 7.73和pH6.70。分离每个反应中的沉淀物用于进一步分析，并且结果总结在下表中。
(1)通过激光散射粒径分析仪(LA-950)上光穿过样品的透射率％确认在异丙醇中的溶解度
(2)通过a)在溶剂中目视观察沉淀物(或消失)；b)溶剂相着色，在氯仿和二氯甲烷中的溶解
当使用ZnCl2时，在上清液中仅检测到2％的游离美洛昔康，相比之下，对于MgCl2为71％，并且对于CuCl2为17％。因此，Zn2+产生最高产率的金属美洛昔康复合物。
在异丙醇、氯仿和二氯甲烷中测试分离的沉淀物的溶解度。在异丙醇中，通过在显微镜下微晶的存在/消失以及通过使绿色激光通过玻璃瓶中的样品以观察微晶的存在来确认溶解。通过a)在溶剂中目视观察沉淀物(或消失)；b)溶剂相着色来确认在氯仿和二氯甲烷中的溶解。在三种溶剂的每一种中，未观察到美洛昔康锌复合物微粒的溶解。特别地，即使在大的稀释度(即，300倍)下，美洛昔康锌复合物微粒基本上不溶于100％异丙醇。相反，美洛昔康镁或美洛昔康铜复合物部分或完全溶解在三种测试溶剂中。美洛昔康锌复合物微粒的溶解性是出乎意料的，因为它基本上不溶于水溶液或有机溶剂。它还通过包封美洛昔康锌复合微粒制备MVL提供了优越的优势，因为这种复合物不会溶解在脂质相或用于制备MVLS的溶剂中，从而导致美洛昔康的立即释放。
还尝试了CaCl2溶液，但它与所述方法不相容，因为缓冲的CaCl2溶液在接触MLX溶液之前形成沉淀物。
在添加认证平均直径为1.030μm±0.011μm的杜克标准微球尺寸标准(NIST可追踪平均直径)聚苯乙烯微球，获得各种金属美洛昔康复合物微晶的光学显微照片。美洛昔康锌复合物是微粒形式，其平均粒径为1微米至2微米。相反，美洛昔康镁复合物的粒径为约8微米至约40微米，并且平均最大粒径为约29微米。美洛昔康铜复合物的粒径为约7微米至约15微米，并且平均最大粒径为约14微米。因此，MgCl2和CuCl2都不能以微粒的形式形成相应的美洛昔康复合物。该证据进一步证明了锌(II)阳离子的独特性。MVL内的室的尺寸为约1-3μm，因此只有美洛昔康锌复合物微粒具有用于MVL中的包封的合适尺寸范围。
实施例4.大鼠中的比较药代动力学研究
在该实施例中，进行了几项比较药代动力学研究以比较美洛昔康在各种制剂中的生物利用度。在每项研究中，将单次1.5mg剂量的美洛昔康制剂皮下注射到3-6只大鼠中。
图6比较了游离MLX溶液(即，立即释放制剂)与美洛昔康的三种控释制剂的血浆美洛昔康浓度，所述美洛昔康的三种控释制剂包括(a)通过远程负载方法包封MLX的多囊脂质体，(b)包封Zn(MLX)2的DepoMLX和(c)未包封的Zn(MLX)2悬浮液。如下制备通过远程负载方法制备的MLX的多囊脂质体制剂：通过在温和搅拌下将pH调节的MLX溶液与空白MVL颗粒悬浮液一起孵育，将美洛昔康远程负载到空白MVL中。为了改善包封，还将10mM的CaCl2溶液和12.5％的环糊精加入到空白MVL颗粒的内部水溶液中。在使用pH梯度将美洛昔康分成空白MVL后，将悬浮液在生理盐水中洗涤以去除未包封的或游离的美洛昔康。Zn(MLX)2悬浮液通过如实施例1中所述的2:1体积的MLX溶液:氯化锌溶液法(即2:1方法)制备，并且还用于制备包封Zn(MLX)2的DepoMLX。
观察到与立即释放制剂相比，制剂(a)、(b)和(c)中的每一种提供了更好的生物利用度和更长的药物效力持续时间。尽管Ca2+还可以与美洛昔康形成金属络合物，但是与通过远程负载方法制备的美洛昔康包封的多囊脂质体相比，包封美洛昔康锌复合物微粒的多囊脂质体显示出更优异的持续释放性质。此外，出人意料地发现，当Zn(MLX)2微粒悬浮液未包封时，提供比通过远程负载方法获得的MVL制剂更好的释放曲线。
图7比较了1.4mg剂量的未包封的Zn(MLX)2悬浮液和1.4mg剂量的DepoMLX形式的相应包封的Zn(MLX)2的血浆美洛昔康浓度，其中美洛昔康锌复合物微粒通过如实施例1中所述的1:1体积的MLX溶液:氯化锌溶液(即，1:1方法)制备。与未包封的Zn(MLX)2相比，DepoMLX制剂提供了更好的美洛昔康的血浆Cmax和AUC。
图8比较了使用两种不同浓度(分别为9.75mg/mL和15mg/mL)的美洛昔康由2:1方法制备的未包封的Zn(MLX)2悬浮液和包封Zn(MLX)2的DepoMLX的血浆美洛昔康浓度，每种制剂中含有剂量为1.5mg的美洛昔康。观察到由高浓度的美洛昔康溶液制备的包封Zn(MLX)2的DepoMLX提供了最佳的持续释放性质。两种DepoMLX制剂在96小时具有改善的生物利用度和血浆浓度，表明效果持续时间更长。
实施例5.大鼠中的毒理学研究
在雄性大鼠中进行单剂量皮下毒性初步研究，以评估DepoMLX制剂的局部耐受性和毒性。以2mg/kg的等效剂量对10只雄性斯普拉格-杜勒大鼠的组皮下注射美洛昔康(参照)、具有式Zn(MLX)2的未包封的美洛昔康锌复合物微粒、或DepoMLX。监测死亡率检查、临床体征和体重。在注射后第4天(N＝5)和第18天(N＝5)对大鼠实施安乐死，并在肉眼和显微镜下检查。没有观察到与MLX、Zn(MLX)2或DepoMLX的施用相关的临床体征，对体重没有明显影响。
在尸检时，肉眼检查组织没有发生严重变化。在注射后第4天进行显微镜检查时，施用MLX或具有式Zn(MLX)2的未包封的美洛昔康锌复合物微粒的动物在注射部位具有混合细胞炎症(最小程度至轻度)以及最小程度至轻度坏死(仅Zn(MLX)2)，由于美洛昔康的局部刺激。这在第18天完全逆转。
在施用DepoMLX并在注射后第4天处死的动物中，在注射部位注意到主要由含有与脂质一致的泡沫细胞质材料的巨噬细胞片组成的肉芽肿性炎症。这被认为可能是由于制剂中基于脂质的MVL组分，其需要巨噬细胞进行清除。在给药后17天观察期后的第18天处死的大鼠中，仅在注射部位注意到最小程度至轻度混合细胞炎症，表明早期肉芽肿变化的持续逆转。
鉴于上述情况，在雄性大鼠中单次皮下注射施用参考MLX或具有式Zn(MLX)2的未包封的美洛昔康锌复合物微粒产生了注射时不适的证据。在给药后17天的观察期内，任何炎症变化均完全或部分逆转。
此外，评估DepoMLX的药代动力学并与游离MLX进行比较。结果总结在图9和图10中。图9比较了大鼠皮下注射后未包封的MLX与DepoMLX的持续时间。图10比较了皮下注射DepoMLX与未包封的MLX后血浆MLX的总AUC的累积百分比的时间分布。未包封的MLX PK曲线是一阶的，几乎87％的MLX仅在2天后递送。相反，DepoMLX Pk曲线几乎是线性的，并且MLX在至少4天的时间内递送。
实施例6.通过皮下注射的犬中的毒代动力学(TK)研究
测定重复剂量皮下(SC)注射DepoMLX的TK特征，并与参考MLX(用盐水稀释的注射用)比较，作为比格犬中4周重复剂量皮下毒理学研究的组分。对狗(n＝5/性别/组)每周给予一次，皮下注射盐水对照，DepoMLX为0.2、0.6或1mg/kg/周，或以1mg/kg/周的等同的高剂量的参考MLX。在给药后高达72小时收集血液样品，用于在研究第1天和第22天的最后一次给药后测定MLX的血浆浓度。对于复苏的动物，在第22天给药后TK采样延长至多240小时。使用经验证的符合GLP的LC-MS/MS测定法分析血浆样品的MLX水平。对于DepoMLX和MLX处理的动物，血浆浓度对时间的图以及雄性和雌性的所得动力学表明没有性别差异。因此，使用了组合性别的平均TK参数估计。
表4中显示了施用后第1天的平均毒代动力学参数，并且表5中显示了施用后第22天的平均毒代动力学参数。TK分析清楚地证明，在皮下注射后，DepoMLX给药材料中含有的高水平的MLX被吸收到外周循环中。对于DepoMLX和参考MLX，性别之间没有显著差异。血浆暴露(Cmax和曲线下面积[AUC])在第1天和第22天是等效的，表明没有累积。对于第1天和第22天的DepoMLX，AUC的增加与剂量成比例。与1.0mg/kg/周MLX组相比，复苏动物中的MLX血浆浓度显示1.0mg/kg/周DepoMLX组的暴露时间更长。
比较1.0mg/kg DepoMLX组与1.0mg/kg参考游离MLX组之间的平均暴露，单剂量(第1天)或多剂量(第22天)后，对于游离MLX组的平均峰值(Cmax)暴露高1.5-1.6倍。对于游离MLX组，平均总体全身暴露(AUC0-72)也略微更大。然而，1.0mg/kg的DepoMLX组与1.0mg/kg的游离MLX组相比，半衰期和平均停留时间(MRT)明显更大，DepoMLX的MRT大约1.5倍(在第22天为51.0小时对比30.3小时)。
表4.在狗中皮下施用MLX和DepoMLX后在第1天的血浆毒代动力学参数
NRa＝未报告的。对于AUC0-inf，如果％外推的值>25％，则不报告数据。对于T1/2，如果末期的回归值<0.90，则不报告数据。
表5.在狗中皮下施用MLX和DepoMLX后在第22天的血浆毒代动力学参数
实施例7.通过伤口滴注的在犬中的毒代动力学(TK)研究
完成了在比格犬中单次手术伤口滴注后的14天毒性研究。美洛昔康溶液(本实施例的参考列出药物)是口服产品，但在本研究中用作注射用美洛昔康溶液。测定单剂量施用DepoMLX的TK特征，并与作为狗的单剂量(疝修补)伤口滴注毒理学研究的组分的参考MLX(参考，0.5％注射溶液)进行比较。在这项研究中，将狗(n＝5/性别/组)麻醉并切开皮肤以暴露腹股沟管，其在目标1分钟内，以0(盐水)、0.3或1.5mg/kg剂量单次施用DepoMLX或以0.3mg/kg等同剂量的参考MLX的单次施用滴注。
收集血样用于在滴注后0.5小时开始测定MLX的血浆浓度，并在计划第4天处死的动物中延长72小时。对于计划在第14天处死的复苏动物，TK出血在给药后延长至240小时。使用经验证的符合GLP的LC-MS/MS测定法分析血浆样品的MLX水平。
TK分析的结果清楚地证明，在剂量滴注后，DepoMLX给药材料中含有的高水平MLX被吸收到外周循环中。性别和DepoMLX之间没有显著差异，AUC的增加与剂量成比例。对于雄性和雌性，治疗结束时的平均TK参数分别显示在表6和表7中。由于主要研究动物在72小时时间点后进行尸检并且尚未进入末期消除期，因此仅在复苏动物中报告了AUC0-最后、AUC0-inf和平均终末消除半衰期(t1/2)的值，复苏动物在给药后放血达240小时。
表6.在将DepoMLX和游离MLX手术滴注到雄性犬后第1天的平均血浆毒代动力学参数(除非另有说明，否则为n＝5/性别)
a–来自N＝2的TK参数(仅复苏动物)，在给药后将动物放血至多240小时以包括计算中的末期消除阶段。
表7.在将DepoMLX和游离MLX手术滴注到雌性犬后第1天的平均血浆毒代动力学参数(除非另有说明，否则为n＝5/性别)
a–来自N＝2的TK参数(仅复苏动物)，在给药后将动物放血达240小时以包括计算中的末期消除阶段。
将0.3mg/kg剂量水平的DepoMLX与相同剂量水平的游离MLX进行比较，平均峰值暴露的时间(Tmax)被脂质体制剂的预期作用显著延迟。在DepoMLX处理后，在约18-19小时达到雄性和雌性的Tmax(范围为8-24小时，6只狗/10在24小时达到Tmax)，而游离MLX处理的动物的平均Tmax为约4-5小时(范围为2-8小时)。
DepoMLX处理与游离MLX处理后的平均Cmax略低。鉴于DepoMLX的预期作用，该结果是预期的。DepoMLX处理的雄性中的平均Cmax比游离MLX处理的雄性中的峰值水平低33％，并且雌性中的峰值水平低14％。DepoMLX组与游离MLX相比，雄性中的平均全身暴露(AUC)略低，雌性中略高。然而，DepoMLX与MLX组之间Cmax和AUC的差异可能归因于数据的可变性。AUC最后是更具代表性的全身暴露测量，因为它包括计算中的末期消除阶段(DepoMLX组尚未在24至72小时的末期消除阶段)，并且给予相同剂量的DepoMLX和MLX组的AUC最后与预期相当。对于两种处理之间的雄性(26.1小时对比23.0小时)和雌性(28.6小时对比27.9小时)的DepoMLX和游离MLX，半衰期的平均值分别相等。当比较这两组之间的MRT值时，DepoMLX在雄性和雌性中具有稍微更长的停留时间分别为39.1小时和40.4小时，而游离MLX组分别为31.2小时和31.3小时(约+25％更长)。
实施例8.通过关节内注射的犬的毒代动力学(TK)研究
在本研究中，测定重复关节内施用2.4mg/mL的DepoMLX溶液的TK特征，并与作为在狗中的4个循环关节内毒理学研究的组分的参考游离MLX(参考，0.5％注射溶液)进行比较。将狗(n＝5/性别/组)麻醉并每周给予两次(在研究第1、第4、第8和第12天)，单次关节内注射到右侧股胫关节0(生理盐水对照)，2或2.4mg(分别为0.5和1mL)的DepoMLX或2.4mg的相当高剂量的参照MLX。1mL的剂量体积是比格犬关节内空间的最大可行体积，因此基于10kg的比格犬重量，以重量计的高剂量的近似剂量为0.24mg/kg。在第1天和第12天剂量给药后收集血液样品，用于测定MLX的血浆浓度，从0.5小时开始并相对于第1天和第12天剂量给药延长72小时。由于主要研究动物在72小时时间点后进行尸体剖检并且尚未进入末期消除阶段，因此对于复苏动物在第12天给药后，TK出血延长至多240小时。使用经验证的符合GLP的LC-MS/MS测定法分析血浆样品的MLX水平。
雄性和雌性在1.2mg和2.4mg(分别为第2组和第3组)的血浆浓度对时间的曲线图和TK分析的结果证明没有性别差异。在关节内注射后，DepoMLX给药材料中含有的高水平的MLX被吸收到外周循环中。血浆暴露(Cmax和曲线下面积[AUC])在第1天和第12天是等效的，证实没有累积。对于DepoMLX，当剂量从1.2mg/剂增加至2.4mg/剂时，峰值和总体全身暴露均成比例增加。
表8中显示了组合性别的治疗结束时的平均TK参数。由于主要研究动物在72小时时间点后进行尸检并且尚未进入末期消除期，因此在给药后放血达240小时的复苏动物中还报告了AUC0-最后的值、平均末期消除半衰期(t1/2)和平均停留时间(MRT)。
表8.在比格犬关节内施用MLX或DepoMLX后第12天的血浆毒代动力学参数(性别组合)(平均值(±标准偏差)参数(n＝10；5M/5F，除非另有说明)。
a.来自N＝2的TK参数(仅复苏动物)，在给药后将动物放血达240小时以包括计算中的末期消除阶段。
当与游离MLX组相比时，两种DepoMLX组的Tmax显著延迟。在第1天和第12天，DepoMLX的平均Tmax值为26-29小时，对比游离MLX为2小时，这是DepoMLX制剂的期望效果。比较2.4mg的DepoMLX组和2.4mg的游离MLX组之间的平均暴露，单剂量(第1天)或多剂量(第12天)后，对于游离MLX组的平均峰值(Cmax)暴露高出1.7至1.8倍。对于游离MLX组，平均总体全身暴露(AUC最后)也略微更大，但差异不显著并且归因于数据的可变性。当使用0-72窗口进行其估算时，DepoMLX处理的动物对比游离MLX的半衰期略大，但由于主要研究血液采样期并未完全涵盖DepoMLX和游离MLX组的终末期，这是对实际半衰期的糟糕估计。在第12天，虽然复苏动物的半衰期与DepoMLX和游离MLX相当，但2.4mg的DepoMLX组与游离MLX组的平均停留时间相比增加了1.4倍(在第12天复苏动物，52.7小时对比36.5小时)。
实施例9.包封的和未包封的Zn(MLX)2复合物的晶体数据
图14A和图14B分别示出了通过如实施例1中提供的1:1方法(图14A)和2:1方法(图14B)制备的微晶Zn(MLX)2微粒的XRPD光谱。图15示出了从根据实施例1的制剂1制备的DepoMLX制剂的MVL颗粒中提取的微晶Zn(MLX)2的XRPD光谱。在制备从其获得图15的样品时，使DepoMLX制剂沉降过夜，此时最底部的沉淀物从样品底部排出。然后，将MVL颗粒进行冻融循环，将得到的美洛昔康锌复合物微粒在水中洗涤，然后在甲醇中洗涤，然后在水中洗涤，最后冷冻干燥。将沉淀物用水洗涤并在分析之前冷冻干燥。图16提供了最底部Zn(MLX)2沉降的微粒的XRPD光谱。认为沉积物代表样品中未包封的Zn(MLX)2。图16的XRPD光谱包含与包封在MVL中的Zn(MLX)2相同的峰(参见图15)。因此，Zn(MLX)2的结晶形式在未包封的Zn(MLX)2和MVL包封的Zn(MLX)2中是相同的。对应于图15的Zn(MLX)2样品的XRPD光谱包括至少表9中确定的峰。
图17提供了从DepoMLX制剂(实线)和微晶Zn(MLX)2的MVL颗粒中提取的微晶Zn(MLX)2的比较XRPD光谱，其未包封在MVL中(虚线)。如在图17中可见，Zn(MLX)2的XRPD光谱在MVL中包封之前和之后是相同的。因此，Zn(MLX)2的结晶形式没有被包封在MVL中而改变。
使用标准XRPD方法，在具有X'celerator检测器的X'pert Pro仪器上以透射模式运行XRPD分析。使用Highscore Plus软件评估数据。使用透射样品架安装样品。将样品作为厚膜安装，以使用镀锡不锈钢垫片使Kapton膜(聚酰亚胺或其它合适的膜，例如Spectromembrane Cat.No.3021)之间的择优取向效应最小化，提供1mm厚且直径达1cm的压块。用于获得XRPD光谱的条件和参数列于表10中。
Zn(MLX)2和未复合的MLX分别使用差示扫描量热法(DSC)和热重分析(TGA)显示出明显的吸热和重量损失。图18A、图18B和图18C示出了根据实施例1通过1:1方法制备的微晶Zn(MLX)2的DSC和TGA数据。图18A提供了三个重叠图，示出了三个样品的DSC数据，图18B提供了TGA数据的图表，包括加热时损失的总重量损失和重量损失的导数。图18C是显示DSC和TGA数据的图。Zn(MLX)2的TGA/DSC覆盖表明观察到的两个吸热峰分别最可能与水解吸和脱水有关。
使用标准TGA方法在TA Q5000仪器上进行TGA分析。使用通用分析软件评估数据。TGA方法如下：加热速率为10℃/min，平衡吹扫气体为10mL/min，样品吹扫气体为25mL/min，温度范围为Amb℃至350℃，气体为氮气，样品量为2-20mg，并且盘是Al(打孔)非密封的。DSC分析在TA Q2000MDSC仪器上进行。进行标准DSC方法，且方法细节如下：平衡T 0℃，升温速率10℃/min，温度范围0℃-300℃，气体氮气，样品量通常为1-2mg，并且盘型是TA非密封的。
对单一Zn(MLX)2微晶进行X射线晶体学。晶体学显示Zn(MLX)2微晶由含有与一个Zn配位的两个美洛昔康分子的水合配位化合物组成。Zn(MLX)2晶体含有四个水分子：两个与锌结合，两个缔合。图19描绘了通过X射线晶体学测定的Zn(MLX)2.4(H2O)形式的微晶Zn(MLX)2的晶体结构。
表9.从根据实施例9和图15的DepoMLX制剂的MVL颗粒中提取的Zn(MLX)2样品的XRPD光谱中的峰的子集。
峰 2θ(度) 相对强度(％) 强度(a.u.)
1 6.3 38 813
2 10.3 36 768
3 12.5 56 1192
4 13.7 100 2144
5 16.9 81 1741
6 23.1 47 1007
7 23.3 84 1809
8 25.3 87 1856
9 26.3 74 1596
10 31.3 37 803
11 39.9 45 962
12 42.4 49 1046
表10.用于获取XRPD光谱的仪器条件和参数。
实施例10.未包封的Zn(MLX)2和DepoMLX的溶解数据
在狗血浆(pH 7.4)中将Zn(MLX)2悬浮液稀释至42μg/mL。在温和搅拌下将血浆维持在37℃。测量360nm和660nm处的血浆的UV吸光度以分别测定溶解的MLX和未溶解的Zn(MLX)2的量。标准吸收曲线用于定量消失的未溶解的Zn(MLX)2复合物和出现的溶解的MLX。图20显示了在血浆孵育期间Zn(MLX)2的溶解和溶解的MLX的出现。图20提供了美洛昔康锌复合物微粒的溶解(正方形-■)，溶解和未复合的美洛昔康(菱形-◆)以及溶解和未溶解的美洛昔康的质量平衡(三角形-▲)的图。Zn(MLX)2在前3分钟内迅速溶解，然后在3分钟至35分钟之间缓慢溶解期。Zn(MLX)2溶解伴随着溶液中游离MLX的量的增加。在血浆中起始Zn(MLX)2的量与血浆中Zn(MLX)2和MLX浓度随时间的变化之间存在良好的质量平衡。
设计第二次溶解研究以比较Zn(MLX)2悬浮液和DepoMLX的溶解速率。根据实施例1的制剂3制备DepoMLX样品。将Zn(MLX)2复合物微粒和DepoMLX的悬浮液分别稀释到三种不同的缓冲液中，每种缓冲液调节至pH 7.4以模拟生理pH。每种缓冲液中的最终浓度为60-100μg/mL(低于MLX在pH 7.4下的溶解度极限)。将每种混合物在37℃下的缓冲液中孵育并通过摇动轻轻搅拌。在不同时间，取出样品并通过5000分子量截止(MWCO)旋转过滤器过滤。测定滤液以确定上清液中存在的溶解的MLX的量。来自悬浮的未包封的Zn(MLX)2的溶解的MLX的出现是快速的，而从DepoMLX在2-4天内仅出现约30％至50％的MLX。
因此，Zn(MLX)2悬浮液在稀释到调节至生理pH的缓冲液中后非常快速地溶解，而包封为DepoMLX的Zn(MLX)2在4天内非常缓慢地释放。这些发现支持这样的假设：DepoMLX将在体内施用后延长体内和/或血流中Zn(MLX)2的存在，并且从DepoMLX颗粒释放的Zn(MLX)2将溶解在生理环境中以产生药学活性MLX化合物。图21A、图21B和图21C示出了将DepoMLX形式(菱形-◆)和未包封的悬浮液形式(正方形-■)的美洛昔康锌复合物微粒溶解于pH 7.4的各种缓冲液中的比较数据。在图21A中，缓冲液是NaHPO4，在图21B中，缓冲液是50mMHisTA，而在图21C中，缓冲液是100mM HisTA。
实施例11.大鼠的药代动力学研究
在大鼠中进行根据实施例1的制剂1和制剂3制备的高效制剂(约2.4mg/ml，以50％ppv)的PK研究。给斯普拉格-杜勒大鼠皮下注射游离MLX、根据实施例1的制剂1制备的DepoMLX、或根据实施例1的制剂3制备的DepoMLX，但具有给定的MLX效力。测量进入血浆中的MLX的释放，并测定AUC。表11中提供了实验和结果的总结。MLX血浆浓度数据在图22A中示出。图22B提供了研究3、4和5的制剂随时间的AUC积累的数据。开发规模制剂以指定的效力产生0.6-0.8L的MVL，而商业规模的制剂以指定的效力产生40-50L的MVL。
此外，按照实施例1的制剂1通过1:1方法制备的美洛昔康锌复合物微粒以约10L的规模制备(参见表1A)。将未包封的美洛昔康锌复合物微粒皮下施用给大鼠，并测量进入血浆中的MLX的释放。表12中提供了与游离美洛昔康的释放相比的实验总结。该实验的MLX血浆浓度数据示于图22C中。
表11.确定在向大鼠皮下(SC)注射各种制剂后的游离和包封的美洛昔康释放到血浆中的研究。
表12.确定在向大鼠皮下(SC)注射后的游离和锌复合的美洛昔康释放到血浆中的研究。
实施例12.比格犬中的药代动力学研究
在比格犬中进行根据实施例1的制剂1和制剂3制备的高效制剂(2.4-3.0mg/ml，以50％ppv)的PK研究。给雄性比格犬皮下注射根据实施例1的制剂1制备的DepoMLX，或根据实施例1的制剂3制备的DepoMLX，但具有给定的MLX效力。测量MLX释放到血浆中。表13中提供了实验和结果的总结。MLX血浆浓度数据在图23中示出。开发规模制剂以指定的效力产生0.6-0.8L的MVL，而商业规模的制剂以指定的效力产生40-50L的MVL。
表13.对于各种制剂，确定在向比格犬皮下(SC)注射后，美洛昔康从DepoMLX释放到血浆中的研究。
尽管已经参考本发明的具体实施方案描述了本发明，但本领域技术人员应当理解，在不脱离本发明的真实主旨和范围的情况下，可以进行各种改变并且可以替换等同物。此外，可以进行许多修改以使特定情况、材料、物质组成、过程、过程步骤或多个步骤适应本发明的目的、主旨和范围。所有这些修改都在所附权利要求的范围内。
在另一个实施方案中，上述实施方案中的任一个可以单独使用或与任一个或多个上述实施方案组合使用。

Claims (82)

1.具有多个非同心内部隔室的多囊脂质体(MVL)制剂，包含：
具有式Zn(MLX)2的美洛昔康锌复合物和包封在所述多囊脂质体的第一水相中的一种或多种pH调节剂；以及
脂质组分，其包含至少一种选自磷脂酰胆碱或其盐、磷脂酰甘油或其盐、或它们的组合的两亲性脂质，和至少一种中性脂质；
其中所述美洛昔康锌复合物基本上不溶于所述第一水相；以及
其中至少一些所述美洛昔康锌复合物在所述第一水相中形成微粒的悬浮液。
2.如权利要求1所述的制剂，其中所述美洛昔康锌复合物具有式Zn(MLX)2(OH2)2。
3.如权利要求1或2所述的制剂，其中所述美洛昔康锌复合物是至少部分微晶的。
4.如权利要求3所述的制剂，其中所述微晶美洛昔康锌复合物以Zn(MLX)2.4(H2O)存在。
5.如权利要求4所述的制剂，其中所述微粒的中值粒径为约0.2μm至约50μm。
6.如权利要求1至5中任一项所述的制剂，其中所述pH调节剂包括一种或多种有机酸、一种或多种有机碱、或其组合。
7.如权利要求6所述的制剂，其中所述一种或多种有机酸包括酒石酸。
8.如权利要求6所述的制剂，其中所述一种或多种有机碱包括赖氨酸或组氨酸，或两者。
9.如权利要求1至8中任一项所述的制剂，其中所述多囊脂质体的所述第一水相的pH为约5.4至约6.6。
10.如权利要求9所述的制剂，其中所述多囊脂质体的所述第一水相的pH为约5.8。
11.如权利要求1至10中任一项所述的制剂，其中所述多囊脂质体的所述第一水相还包含一种或多种张度剂。
12.如权利要求11所述的制剂，其中所述张度剂包括蔗糖。
13.如权利要求11或12所述的制剂，其中所述多囊脂质体的所述第一水相的重量摩尔渗透压浓度为约250mOsm/kg至约350mOsm/kg。
14.如权利要求13所述的制剂，其中所述多囊脂质体的所述第一水相的重量摩尔渗透压浓度为约280mOsm/kg至约320mOsm/kg。
15.如权利要求14所述的制剂，其中所述多囊脂质体的所述第一水相的重量摩尔渗透压浓度为约290mOsm/kg至约300mOsm/kg。
16.如权利要求1至15中任一项所述的制剂，具有40％至60％的填充颗粒体积。
17.如权利要求1至16中任一项所述的制剂，其中所述脂质组分包含至少一种甘油三酯。
18.如权利要求1至17中任一项所述的制剂，其中所述磷脂酰甘油是二棕榈酰基磷脂酰甘油(DPPG)。
19.如权利要求1至18中任一项所述的制剂，其中所述磷脂酰胆碱是二芥酰基磷脂酰胆碱(DEPC)。
20.如权利要求17所述的制剂，其中所述至少一种甘油三酯是三辛酸甘油酯。
21.如权利要求1至20中任一项所述的制剂，其中所述脂质组分还包含胆固醇。
22.如权利要求1至21中任一项所述的制剂，其中所述多囊脂质体的中值粒径为约10μm至约50μm。
23.如权利要求22所述的制剂，其中所述多囊脂质体的中值粒径为约15μm至约30μm。
24.如权利要求1至23中任一项所述的制剂，其中所述多囊脂质体制剂中的美洛昔康的浓度为约1mg/mL至约25mg/mL。
25.如权利要求24所述的制剂，其中所述多囊脂质体制剂中的美洛昔康的浓度为约2.0mg/mL至约7.0mg/mL。
26.如权利要求24所述的制剂，其中所述多囊脂质体制剂中的美洛昔康的浓度为约2.0mg/mL至约5.0mg/mL。
27.如权利要求24至26中任一项所述的制剂，其中所述多囊脂质体制剂中的美洛昔康的浓度为约2.0mg/mL至约3.5mg/mL。
28.如权利要求1至27中任一项所述的制剂，其中所述美洛昔康锌复合物为结晶形式，其在XRPD光谱中显示出约6.3°、约10.3°、约12.5°、约13.7°、约16.9°、约23.1°、约23.3°、约25.3°、约26.3°、约31.3°、约39.9°和约42.4°的2θ峰。
29.如权利要求1至28中任一项所述的制剂，其中所述制剂还包含未包封的美洛昔康锌复合物。
30.如权利要求1至29中任一项所述的制剂，还包含适于通过注射施用的药物可接受的载体。
31.治疗疼痛或炎症的方法，包括将权利要求1至30中任一项所述的制剂施用于有需要的个体。
32.如权利要求31所述的方法，其中所述个体患有来自手术部位的术后疼痛。
33.如权利要求31所述的方法，其中所述个体患有来自损伤的疼痛。
34.如权利要求31所述的方法，其中所述个体患有关节炎。
35.如权利要求31至34中任一项所述的方法，其中所述制剂通过关节内、肌肉内、皮下、腹膜内、眼内或鞘内注射而施用。
36.如权利要求31至34中任一项所述的方法，其中所述制剂被局部施用，或通过伤口浸润或滴注而施用。
37.用于制备具有多个非同心内部隔室的多囊脂质体制剂的方法，包括：
通过混合包含美洛昔康的第一溶液、包含锌盐的第二溶液和一种或多种pH调节剂以形成美洛昔康锌复合物微粒悬浮液，制备美洛昔康锌复合物微粒的第一水性悬浮液；
通过混合所述第一水性悬浮液与包含挥发性有机溶剂的水不混溶的有机溶剂相来制备第一乳液，所述有机溶剂相包含至少一种选自磷脂酰胆碱或其盐、磷脂酰甘油或其盐、或它们的组合的两亲性脂质和至少一种中性脂质；
将所述第一乳液和第二水相合并以提供第二乳液；以及
从所述第二乳液基本上去除所述有机溶剂。
38.如权利要求37所述的方法，其中通过将所述第二乳液分散到循环气氛中而基本上去除所述有机溶剂。
39.如权利要求37或38所述的方法，其中所述美洛昔康锌复合物具有式Zn(MLX)2。
40.如权利要求39所述的方法，其中所述美洛昔康锌复合物基本上不溶于所述第一水性悬浮液。
41.如权利要求37至40中任一项所述的方法，其中所述美洛昔康锌复合物微粒的中值粒径为约0.2μm至约50μm。
42.如权利要求37至41中任一项所述的方法，其中所述第一水性悬浮液的所述一种或多种pH调节剂包括一种或多种有机酸、一种或多种有机碱、或其组合。
43.如权利要求42所述的方法，其中所述第一水性悬浮液的所述一种或多种pH调节剂包括酒石酸、赖氨酸或组氨酸、或其组合。
44.如权利要求37至43中任一项所述的方法，其中所述第一水性悬浮液的pH为约5.6至约6.6。
45.如权利要求37至44中任一项所述的方法，其中所述有机溶剂相包括DPPG、DEPC或三辛酸甘油酯、或其组合。
46.如权利要求37至45中任一项所述的方法，其中所述美洛昔康锌复合物微粒悬浮液的pH为约6.55至约6.75。
47.如权利要求37至46中任一项所述的方法，其中所述有机溶剂相还包含胆固醇。
48.如权利要求37至46中任一项所述的方法，其中所述第二水相包含一种或多种有机酸、一种或多种有机碱、或其组合。
49.如权利要求48所述的方法，其中所述第二水相的所述一种或多种有机酸包括酒石酸。
50.如权利要求48所述的方法，其中所述第二水相的所述一种或多种有机碱包括组氨酸。
51.如权利要求37至50中任一项所述的方法，其中所述第二水相的pH为约5至约9.0。
52.如权利要求51所述的方法，其中所述第二水相的pH为约6.3至约8.4。
53.如权利要求37至52中任一项所述的方法，还包括将所述第二水相与pH为约6.1的悬浮介质进行交换。
54.如权利要求37至53中任一项所述的方法，其中所述多囊脂质体的中值粒径为约10μm至约50μm。
55.如权利要求54所述的方法，其中所述多囊脂质体的中值粒径为约15μm至约30μm。
56.如权利要求37至55中任一项所述的方法，其中所述多囊脂质体制剂中的美洛昔康的浓度为约1mg/mL至约25mg/mL。
57.如权利要求56所述的方法，其中所述多囊脂质体制剂中的美洛昔康的浓度为约2.0mg/mL至约3.5mg/mL。
58.如权利要求37至57中任一项所述的方法，其中所述方法的每个步骤在无菌环境中进行。
59.通过权利要求37至58中任一项所述的方法制备的多囊脂质体制剂。
60.美洛昔康锌复合物微粒，具有约50μm或更小的中值粒径。
61.如权利要求60所述的美洛昔康锌复合物微粒，具有约1μm至约10μm的中值粒径。
62.如权利要求60所述的美洛昔康锌复合物微粒，具有约1μm或更小的中值粒径。
63.制剂，包含权利要求60至62中任一项所述的美洛昔康锌复合物微粒和药物可接受的载体。
64.如权利要求63所述的制剂，还包含一种或多种脂质或表面活性剂。
65.如权利要求63或64所述的制剂，其中所述美洛昔康锌复合物微粒是未包封的。
66.如权利要求64所述的制剂，其中至少一部分所述美洛昔康锌复合物微粒被包封在由一种或多种脂质或表面活性剂形成的单层或多层囊泡中。
67.如权利要求64所述的制剂，其中至少一部分所述美洛昔康锌复合物微粒被包封在由一种或多种脂质或表面活性剂形成的多囊脂质体中。
68.如权利要求60至67中任一项所述的制剂，其中所述美洛昔康锌复合物具有式Zn(MLX)2。
69.治疗疼痛或炎症的方法，包括将权利要求63至68中任一项所述的美洛昔康锌复合物微粒制剂施用于有需要的个体。
70.如权利要求69所述的方法，其中所述制剂通过静脉内、腹膜内、关节内、肌肉内、皮下、眼内或鞘内注射而施用。
71.如权利要求69所述的方法，其中所述制剂通过伤口浸润或滴注而施用。
72.如权利要求69所述的方法，其中所述制剂被局部施用。
73.用于制备美洛昔康锌复合物的方法，包括混合包含锌盐的第一溶液和包含美洛昔康的第二溶液，其中所述第一溶液的pH为约4.5至约6.0，并且其中所述第二溶液的pH为约7.5至约10.0。
74.如权利要求73所述的方法，其中所述第一溶液的pH为约5.0至约5.5。
75.如权利要求73或74所述的方法，其中所述第二溶液的pH为约8.0至约9.0。
76.如权利要求73至75中任一项所述的方法，其中所述混合形成pH为约6.1至约7.1的美洛昔康锌复合物微粒悬浮液。
77.如权利要求73至75中任一项所述的方法，其中所述方法形成中值粒径为约50μm或更小的美洛昔康锌复合物微粒。
78.如权利要求73至77中任一项所述的方法，其中所述方法形成中值粒径为约1μm至约10μm的美洛昔康锌复合物微粒。
79.如权利要求73至77中任一项所述的方法，其中所述方法形成中值粒径为约1μm或更小的美洛昔康锌复合物微粒。
80.如权利要求73至76中任一项所述的方法，其中所述第一溶液和所述第二溶液是无菌的，并且进一步其中所述方法在无菌环境中进行。
81.如权利要求73至80中任一项所述的方法，其中所述美洛昔康锌复合物微粒包含微晶美洛昔康锌。
82.如权利要求81所述的方法，其中所述微晶以结晶形式存在，其在XRPD光谱中显示出约6.3°、约10.3°、约12.5°、约13.7°、约16.9°、约23.1°、约23.3°、约25.3°、约26.3°、约31.3°、约39.9°和约42.4°的2θ峰。
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