PT797579E - Derivados de 9-0-oxima de eritromicina a dotados de actividade antibiotica - Google Patents

Description

1

L

A

DESCRIÇÃO

Derivados de 9-0-»Yinifl de Eritromicina A dotados de actividade antibiótica A presente invenção refere-se a derivados de Eritromicina A dotados de actividade antibiótica, úteis no tratamento de doenças infecciosas e, mais particularmente, a derivados de 9-[0-(aminoalquil)oxima] de Eritromicina A dotados de actividade antibiótica contra os microrganismos Gram-positivos e Gram-negativos. A Eritromicina A [índice Merck, XI Ed., N° 3626] é um macrólido bem conhecido que ocorre naturalmente dotado de actividade antibiótica e que tem a seguinte estrutura

CH OCH 3 3

Além de ser activo contra alguns microrganismos não-bacterianos, tais como a rickettsiae e a micoplasmas, a Eritromicina A é dotada de actividade antibacteriana principalmente contra os microrganismos Gram-positivos, tais como os streptococcus, os stafilococcus e os pneumococcus, mas também é eficaz contra alguns microrganismos Gram-negativos, tais como, por exemplo, a gripe provocada pelo Haemophilus, a gonorreia Neisseria e a pertussis Bordetella. 2 6

ί4 P\ ^ J&t

Além da actividade bem conhecida contra os procariotes anteriormente mencionados, descobriu-se recentemente na literatura que a Erítromicina A e outros antibióticos de macrólidos são activos contra os parasitas eucarióticos [P. A. Lartey et al., Advances in Pharmacology, 28,307-343 (1994)].

Também no caso da Eritromicina A, bem como de outros fármacos antibacterianos, foram observados fenómenos de resistência com algumas estirpes bacterianas.

Em particular, observou-se o fenómeno no tratamento de infecções causadas pelos stafilicoccus a seguir à administração prolongada de Eritromicina A [A. Kucers e McK Bennett, The use of antibiotics, A Comprehensive Review with Clinicai Emphasis, William Heinemann Medicai, IV Ed., (1987) 851-882], O interesse em relação aos antibióticos de macrólidos deriva do seu uso em terapia clínica e veterinária no tratamento de várias doenças infecciosas, tais como, por exemplo, as infecções do tracto respiratório, do tracto gastrointestinal, do tracto urogenital e dos órgãos externos, tais como a pele, os olhos e,os ouvidos.

Devido à sua elevada instabilidade no meio acídico, a Eritromicina A é irreversivelmente convertida, por exemplo, no tracto gastrointestinal a seguir à administração oral, em derivados que não têm actividade antibiótica, conferindo assim uma fraca biodisponibilidade ao princípio activo [Η. A. Kirst, Annual Reports in Medicinal Chemistry, 25, 119-128 (1989)]. A fim de ultrapassar as desvantagens acima, a pesquisa foi dirigida a compostos que, ao mesmo tempo que mantêm as boas propriedades antibióticas da Eritromicina A, tiveram como resultado ser caracterizados por uma maior estabilidade aos ácidos e melhores propriedades farmacocinéticas, tais como, por exemplo, uma maior biodisponibilidade oral, uma concentração hemática, uma penetração nos tecidos e uma meia vida.

Dentro deste domínio, podemos citar, como exemplo, os carbamatos e os carbonatos de Eritromicina A ou de 9-0-oxima de Eritromicina A descritos nos pedidos de patente 3

Europeia N° 0216169 e N° 0284203 (ambos em nome de Beecham Group PLC) e os compostos descritos no pedido de patente Europeia N° 0033255 (Roussel-Uclaf). O pedido de patente Europeia N° 0033255, em particular, descreve derivados de 9-0--oxima de Eritromicina A de fórmula R-A-O-NHEry em que

Ery representa o resíduo de Eritromicina A em que o grupo oxima (-N=Ery) está em lugar do grupo carbonilo na posição 9 (0=Ery); A representa um grupo alquilo linear ou ramificado com de 1 a 6 átomos de carbono; R representa, inter alia, um grupo alcóxi opcionalmente substituído com de 1 a 6 átomos de carbono, ou um grupo [-N(Rj)R2] em que Ri e R2, sendo iguais ou diferentes, representam um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo opcionalmente substituído com de 1 a 6 átomos de carbono.

Os compostos descritos no pedido de patente Europeia N° 0033255, tais como, por exemplo, a 9-[0-[(2-metoxietoxi)metil]oxima] de Eritromicina A, conhecida com o Nome Genérico Internacional de Roxitromicina [índice Merck, XI Ed., N° 8253], a 9--[0-[(2-dimetilamino)etiI]oxima] de Eritromicina A e a 9-[0-[(2-dietilamino)etil]oxima] de Eritromicina A têm um espectro de actividade in vitro comparável com 0 da Eritromicina A mas são dotados de uma maior estabilidade aos ácidos e de melhores propriedades farmacocinéticas.

Por isso, os referidos compostos apresentam uma actividade antibiótica contra as bactérias Gram-positivas, tais como os stafilococcus, os streptococcus e os pneumococcus e contra algumas bactérias Gram-negativas, tais como, por exemplo, a gripe provocada pelos Haemophilus e a pertussis de Haemophilus.

Descobrimos agora compostos derivados de 9-0-oxima de Eritromicina A e, mais particularmente, compostos derivados de 9-[0-(aminoalquil)oxima] de Eritromicina A, parcialmente compreendidos mas não exemplificados no pedido de patente Europeia N° 0033255, que têm um espectro de actividade antibacteriana mais amplo contra os microrganismos Gram-positivos e, em particular, contra os microrganismos Gram--negativos, e melhores propriedades farmacocinéticas, tais como, por exemplo, uma maior duração de acção e uma maior meia-vida de eliminação nos tecidos, em relação aos compostos descritos no pedido de patente Europeia anteriormente mencionado. O objecto da presente invenção, por isso, são compostos de fórmula

Ri R2

I I

A-(CH2)„-N-(CH2)m-N-(CH2)r-0-N=M (I) em que A é um grupo fenilo ou um heterociclo com 5 ou 6 membros contendo 1 ou mais heteroátomos seleccionados de entre azoto, oxigénio e enxofre, opcionalmente substituídos por 1 a 3 grupos, iguais ou diferentes, seleccionados de entre grupos alquilo em C1-C4 ou alcóxi lineares ou ramificados, grupos alquilenodioxi em Cj--C2, grupos alquilsulfonilo em CpC^ grupos fenilo, fenoxi, hidroxi, carboxi, nitro, halogéneo e trifluormetilo ;

Ri e R2, iguais ou diferentes, representam um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo em C1-C4 linear ou ramificado; n é 1 ou 2; m é um número inteiro compreendido entre 1 e 8; r é um número inteiro compreendido entre 2 e 6; M representa um grupo de fórmula

I

I

em que R3 é um átomo de hidrogénio ou um grupo metilo; e seus sais farinaceuticamente aceitáveis.

As oximas de fórmula (I) podem ter a configuração Z ou E.

Por isso, objecto da presente invenção são os compostos de fórmula (I) tendo a configuração Z ou E, com uma preferência para estes últimos.

Os compostos de fórmula (I) são dotados de actividade antibiótica e são caracterizados por uma elevada estabilidade aos ácidos e por boas propriedades farmacocinéticas, sendo assim usados na terapia humana ou veterinária para o tratamento de várias doenças infecciosas, tais como, por exemplo, as infecções do sistema nervoso central, do tracto respiratório superior e inferior, do tracto gastrointestinal, do tracto urogenital, do tecido odontológico e dos órgãos externos, tais como a pele, os olhos e os ouvidos.

Na presente descrição, a não ser que se especifique de outra forma, pelo termo grupo alquilo em C1-C4 pretendemos significar um grupo alquilo em C1-C4 linear ou ramificado, tal como o grupo metilo, etilo, n.propilo, isopropilo, n.butilo, isobutilo, sec--butilo e terc-butilo; pelo termo grupo alcóxi em C1-C4 pretendemos significar um grupo alcóxi em C1-C4 linear ou ramificado, tal como 0 grupo metoxi, etoxi, n.propoxi, isopropoxi, n.butoxi, isobutoxi, sec-butoxi e terc-butoxi; pelo termo grupo alquilenodioxi em C]-C2 pretendemos significar um grupo metilenodioxi ou etilenodioxi.

Pelo termo heterociclo com 5 ou 6 membros contendo 1 ou mais heteroátomos \ seleccionados de entre azoto, oxigénio e enxofre, pretendemos significar um heterociclo, de preferência seleccionado de entre piridina, pirrolo, pirrolidina, furano, tetra-hidrofurano e tiofeno.

Os compostos preferidos são os compostos de fórmula (I) em que A representa um grupo fenilo ou um heterociclo seleccionado de entre piridina e furano, opcionalmente substituído por 1 a 3 grupos seleccionados de entre grupos hidroxi, metoxi, metilenodioxi, n.butoxi, fenoxi, fenilo, metilsulfonilo, nitro, halogéneo e trifluormetilo; Ri e R2, sendo iguais, representam um átomo de hidrogénio ou um grupo metilo; R3 representa um átomo de hidrogénio.

Os compostos ainda mais preferidos são os compostos de fórmula (I) em que A representa um grupo fenilo opcionalmente substituído por um grupo seleccionado de entre fenoxi, nitro e trifluormetilo; Ri e R2, sendo iguais, representam um átomo de hidrogénio ou um grupo metilo; n é igual a 1; m é igual a 6; r é igual a 2; R3 representa um átomo de hidrogénio.

Os sais farmaceuticamente aceitáveis dos compostos de fórmula (I) são os sais com ácidos orgânicos ou inorgânicos, tais como, por exemplo, 0 ácido clorídrico, bromídrico, iodídrico, nítrico, sulfurico, fosfórico, acético, tartárico, cítrico, benzoico, succínico e glutárico.

Exemplos específicos de compostos preferidos de fórmula (I) são: (E)-9-[0-[2-[6-(fenilmetilamino)hexilamino]etil]oxima] de Eritromicina A; (E)-9-[0-[2-[2-(fenilmetilamino)etilamino]etil]oxima] de Eritromicina A; 7 ! kj. (E)-9-[0-[6-[6-(fenilmetilamino)hexilamino]hexil]oxima] de Eritromicina A; (E)-9-[0-[6-[3-(fenilmetilamino)propilamino]hexil]oxima] de Eritromicina A; (E)-9-[0-[6-[5-(fenilmetilamino)pentilamino]hexil]oxima] de Eritromicina A; (E)-9-[0-[2-[8-(fenilmetilamino)octilamino]etil]oxima] de Eritromicina A; (E)-9-[0-[2-[5-(fenilmetilamino)pentilamino]etil]oxima] de Eritromicina A; (E)-9-[0-[5-[6-(fenilmetilamino)hexilamino]pentil]oxima] de Eritromicina A; (E)-9-[0-[3-[6-(fenilmetilamino)hexilamino]propil]oxima] de Eritromicina A; (E)-9-[0-[3-[4-(fenilmetilamino)butilamino]propil]oxima] de Eritromicina A; (E)-9-[0-[2-[N-metil-6-(N,-metil-N’-fenilmetilamino)hexilamino]etil]oxima] de Eritromicina A; (E)-9-[0-[2-[6-[(bifenil-4-il)metilamino]hexilamino]etil]oxima] de Eritromicina A; (E)-9-[0-[2-[6-[(3-fenoxifenil)metilamino]hexilamino]etil]oxima] de Eritromicina A; (E)-9-[0-[2-[6-[(4-fenoxifenil)metilamino]hexilamino]etil]oxima] de Eritromicina A; (E)-9-[0-[2-[6-(2-furilmetilamino)hexilamino]etil]oxima] de Eritromicina A; (E)-9-[0-[2-[6-(3-piridilmetilamino)hexilamino]etil]oxima] de Eritromicina A; (E)-9-[0-[2-[6-[(4-metoxifenil)metilamino]hexilamino]etil]oxima] de Eritromicina A; (E)-9-[0-[2-[6-[(4-n.butoxifenil)metilamino]hexilamino]etil]oxima] de Eritromicina A; \

s (E)-9.[0-[2-[6-[(3,4-metilenodioxifenil)metilamino]hexilamino]etil]oxima] de Eritromicina A; (E)-9-[0-[2-[6-[(4-metilsulfonilfenil)metilamino]hexilamino]etil]oxima] de Eritromicina A; (E)-9-[0-[2-[6-[(4-fluorfenil)metilamino]hexilamino]etil]oxima] de Eritromicina A; (E)-9-[0-[2-[6-[(2-trifluormetilfenil)metilamino]hexilamino]etil]oxima] de Eritromicina A; (E)-9-[0-[2-[6-[(3-trifluormetilfenil)metilamino]hexilamino]etil]oxima] de Eritromicina A; (E)-9-[0-[2-[6-[(4-trifluormetilfenil)metilamino]hexilamino]etil]oxima] de Eritromicina A; (E)-9-[0-[2-[6-[(2-hidroxifenil)metilamino]hexilamino]etil]oxima] de Eritromicina A; (E)-9-[0-[2-[6-[(3-hidroxifenil)metilamino]hexilamino]etil]oxima] de Eritromicina A; (E)-9-[0-[2-[6-[(4-hidroxifenil)metilamino]hexilamino]etil]oxima] de Eritromicina A; (E)-9- [0- [2- [6- [(3,5 -dicloro-2-hidroxifenil)metilamino]hexilamino] etil] oxima] de Eritromicina A; (E)-9-[0-[2-[6-[(2-nitrofenil)metilamino]hexilamino]etil]oxima] de Eritromicina A; (E)-9-[0-[2-[6-[(3-nitrofenil)metilamino]hexilamino]etil]oxima] de Eritromicina A; (E)-9-[0-[2-[6-[(4-nitrofenil)metilamino]hexilamino]etil]oxima] de Eritromicina A; 9 9

I (E)-9-[0-[2-[6-[(4-hidroxi-3-mtrofenil)metilamino]hexilamino]etil]oxima] de Eritromicina A; (E)-9-[0-[2-[6-[(3-hídroxi-4-nitrofenil)metilamino]hexilamino]etil]oxima] de Eritromicina A; (E)-9-[0-[2-[N-metil-6-[N,-metil-N’-(4-trifluormetilfenil)metilamino]hexilamino]etil]-oxima] de Eritromicina A. A preparação dos compostos de fórmula (I), objecto da presente invenção, pode ser levada a cabo de acordo com o método sintético abaixo descrito. O método compreende, primeiro, a reacção de condensação entre um amino ácido apropriado de fórmula

Ri (Π) (ΙΠ)

HN-(CH2)m-i-COOH em que

Ri e m têm os significados acima referidos; com um cloreto de acilo de fórmula A-(CH2)n.rCOCl em que

Aen têm os significados acima referidos. A reacção de condensação é levada a cabo, de acordo com técnicas convencionais, no seio de um dissolvente inerte e na presença de uma base, tal como, por exemplo, um hidróxido de metal alcalino, para obter os compostos de fórmula (IV)

Ri

I A-(CH2)„-i-CON-(CH2)m.rCOOH em que A, R], n e m têm as significações acima referidas.

Os amino ácidos de N-acilo de fórmula (IV) assim obtidos são depois condensados, de acordo com técnicas convencionais, com um amino éster de fórmula R2 HN-(CH2)m-COOR4 (V) em que R2 e r têm as significações acima referidas; R4 representa um grupo metilo ou etilo; para se obterem os compostos de fórmula

Ri R2

I I A-(CH2)„-1 -CON-(CH2)n,. 1 -CON-(CH2)r_i -COOR4 (VI) em que A, Ri, R2, R4, n, m e r têm as significações acima referidas.

Trabalhando de acordo com técnicas convencionais, os compostos de fórmula (VI) são subsequentemente reduzidos, por exemplo, com boro hidreto de sódio na presença de ácidos, de alumínio hidreto de lítio, de sulforeto-borano de dimetilo ou por hidrogenação catalítica, nos correspondentes amino álcoois de fórmula

Ri R2 A-(CH2)n—N-(CH2)m—N-(CH2)r-OH (VII) em que ! !

11 A, Ri, R2, n, m e r têm as significações acima referidas.

Os amino álcoois de fórmula (VII) são então convertidos nos correspondentes derivados de sulfonilo de fórmula (VIII), por exemplo, por meio de cloreto de metano-sulfonilo ou cloreto de p.toluenò-sulfonilo e subsequentemente condensados com 9-0-oxima de Eritromicina A ou 9-0-oxima de 6-0-metileritromicina A, ambos representáveis de acordo com a fórmula (IX), para se obter os compostos de fórmula (I)

Ri R2 I I (VII)-► A-(CH2)n-N-(CH2)m-N-(CH2)r-OR5 M=N-OH (IX) ψ Ri R2 I I A-(CH2X,-N-(CH2)„-N-(CH2)rO-N=M (VIII) (I) em que A, Ri, R2, M, n, m e r têm as significações acima referidas; R5 representa um grupo mesilo ou tosilo. A reacção entre os compostos de fórmula (VÉU) e as oximas de fórmula (IX) é levada a cabo no seio de um dissolvente orgânico inerte, tal como, por exemplo, tetra--hidrofurano, éter etílico ou 1,2-dimetoxietano, na presença de terc-butilato de potássio e de éter 18-crown-6 como agente complexante. É claro para qualquer perito na matéria que quando a reacção de sulfonilação é levada a cabo usando os compostos de fórmula (VII) em que um ou ambos os substituintes de Ri e R2 representam um átomo de hidrogénio, pode ser necessário proteger 0 átomo ou átomos de azoto antes de levar a cabo a reacção de sulfonilação.

Nesse caso, a condensação dos derivados de sulfonilo N-protegidos assim obtidos com as oximas de fórmula (EX), de forma semelhante à que se referiu anteriormente, e a subsequente desprotecção levada a cabo de acordo com métodos convencionais, 12 jj

permitem obter os compostos de fórmula (I) em que um ou ambos os substituintes de Ri e R2 representam um átomo de hidrogénio.

Para uma referência bibliográfica para a protecção de aminas, veja-se [T. W. Greene e P. G. M. Wuts, Protective groups in organic synthesis, John Wiley & Sons, Inc., 2a Ed., (1991), 309-405],

Os compostos de fórmula (Π), (ΠΙ) e (V) são conhecidos ou podem ser facilmente preparados de acordo com métodos conhecidos.

Também as oximas de fórmula (IX) são compostos conhecidos e podem ser preparadas de acordo com métodos convencionais que compreendem, por exemplo, a reacção de Eritromicina A ou 6-0-metileritromicina A com cloridrato de hidroxilamina.

Os ésteres de fórmula (VI) podem ser opcionalmente preparados de acordo com um método sintético alternativo que compreende, primeiro, a condensação de um amino ácido apropriado de fórmula (Π) com um amino éster de fórmula (V), para obter os compostos de fórmula

Ri R2

I I HN-(CH2)m.rCON-(CH2)r.i-COOR, (X) em que

Ri, R2, R4. m e r têm as significações acima referidas. É claro para qualquer perito na matéria que antes de realizar a condensação entre o amino ácido de fórmula (Π) e 0 amino éster de fórmula (V), pode ser necessário proteger apropriadamente, de acordo com 0 que já foi. referido para a reacção de sulfonilação, 0 grupo amino do amino ácido de fórmula (II). 13 r< t;

A condensação seguinte dos compostos de fórmula (X) com um composto de fórmula (III), levada a cabo de acordo com técnicas convencionais e a desprotecção opcional permitem depois obter os compostos de fórmula (VI). A preparação dos compostos de fórmula (I), em que pelo menos um dos dois substituintes de Rj e R2 representa um grupo seleccionado de entre etilo, n.propilo, n.butilo e isobutilo, pode ser levada a cabo de acordo com um método sintético alternativo, que é adiante descrito. O referido método compreende, primeiro, a acilação do átomo ou átomos de azoto dos amino álcoois de fórmula VH) em que um ou ambos os substituintes de R] e R2 representam um átomo de hidrogénio.

Por exemplo, usando um composto de fórmula (VII) em que ambos os substituintes de Ri e R2 representam um átomo de hidrogénio e trabalhando de acordo com técnicas convencionais na presença de um cloreto de acilo apropriado (R’COCl), é possível obter os compostos de fórmula COR’ COR’

I I A-(CH2)n-N-(CH2)m-N-(CH2)r-OCOR’ (XI) em que A, n, m e r têm as significações acima referidas; R’ representa um grupo alquilo em C1-C3 de cadeia linear ou ramificada. A redução dos compostos de fórmula (XI), levada a cabo de acordo com métodos convencionais, permite a obtenção dos compostos de fórmula

Ri R2

I I A-(CH2)I1-N-(CH2)m-N-(CH2)r-OH (XII) em que A, n, m e r têm as significações acima referidas;

Ri e R2 representam grupos etilo, n.propilo, n.butilo ou isobutilo; 14 que, convertidos nos derivados de sulfonilo correspondentes e condensados com as oximas de fórmula (DC), de forma semelhante à que se referiu anteriormente, permitem obter os compostos de fórmula

Ri R.2

I I A-(CH;)„-N-(CH2)m-N-(CH2),-0-N"M (I) em que A, M, n, m e r têm as significações acima referidas;

Ri e R.2 representam grupos etilo, n.propilo, n butilo ou isobutilo.

Um processo sintético alternativo relativamente aos anteriormente referidos para a preparação dos compostos de fórmula (I), objecto da presente invenção, é descrito em seguida. O referido processo compreende, primeiro, a oxidação de um amino álcool N-protegido apropriado, tal como, por exemplo, um N-benziloxicarbonil-amino álcool de fórmula (ΧΠΓ), na presença de hipoclorito de sódio e do radical livre de 2,2,6,6-tetrametil-piperidinooxi (TEMPO), no seio de um dissolvente orgânico inerte, para obter os compostos de fórmula (XIV)

Z Z

I I

HN-(CH2)m-OH-----> HN-(CH2)m-i-CHO (XIII) (XIV) em que m tem as significações acima referidas; Z representa um grupo de protecção.

Exemplos de dissolventes orgânicos inertes que podem ser usados na reacção de oxidação são, por exemplo, o cloreto de meti leno, o clorofórmio, o tetracloreto de carbono, o 1,2-dicloroetano, o acetato de etilo, o benzeno e o tolueno. A aminação do aldeído assim obtido na presença de um amino álcool apropriado de fórmula (XV) e a redução do intermediário formado, por exemplo, na presença de boro hidreto de sódio, permite a obtenção dos amino álcoois de fórmula (XVI)

Z H

I I (XIV) + H2N-(CH2)r-OH - - -> HN-(CH2)m-N-(CH2)r-OH (XV) (XVI) em que Z, m e r têm as significações acima referidas. A posterior protecção dos compostos de fórmula (XVI) no amino azoto e, por esta ordem, a conversão nos derivados de sulfonilo correspondentes, a condensação com as oximas de fórmula (IX) e a desprotecção nos átomos de azoto, de forma semelhante à anteriormente referida, permitem a obtenção dos compostos de fórmula

H

I H2N-(CH2)m-N-(CH2)r-0-N=M (XVII) em que M,mer têm as significações acima referidas.

As oximas intermediárias de fórmula (XVH), condensadas com um aldeído apropriado de fórmula (XVIII) e reduzidas, por exemplo, por hidrogenação catalítica, permitem obter os compostos de fórmula (I) 16

Η H ^ 1 i - - ->A-(CH2)„-N-(CH2)m-N-(CH2)r-0-N=M (I)

(XVII) + A-(CH2)„-i-CHO (xvm) em que A,M,n,mer têm as significações referidas acima.

Os compostos de fórmula (ΧΠΙ), (XV) e (XVIII) são conhecidos ou podem ser facilmente preparados de acordo com métodos conhecidos.

Os compostos de fórmula (I) em que um ou ambos os substituintes de Ri e R2 representam um átomo de hidrogénio, preparados de acordo com um dos métodos anteriormente descritos, podem ser opcionalmente alquilados no átomo ou átomos de azoto do agrupamento di-amino, de acordo com métodos convencionais que compreendem, por exemplo, a condensação com um aldeído apropriado e a redução do intermediário obtido. São assim obtidos os compostos de fórmula (I) em que Ri e R2, iguais ou diferentes, representam um grupo alquilo em C1-C4 linear ou ramificado. A preparação dos compostos de fórmula (I) com a configuração Z ou E é levada a cabo de acordo com um dos esquemas sintéticos acima descritos, usando a oxima de fórmula (IX) na configuração desejada [J. C. Gasc. et al., The Journal of Antibiotics, 44, 313--330,(1991)].

Os compostos de fórmula (I) são dotados de actividade antibacteriana contra vários microrganismos Gram-positivos e Gram-negativos, sendo úteis na terapia clínica e veterinária para 0 tratamento de várias doenças infecciosas, tais como, por exemplo, as infecções do sistema nervoso central, do tracto respiratório superior e inferior, do tracto gastrointestinal, do tracto urogenital, do tecido odontológico e dos órgãos externos, tais como a pele, os olhos e os ouvidos. 17

Além disso, os referidos compostos demonstraram ser eficazes relativamente a vários microrganismos Gram-positivos de interesse clínico, resistentes à Eritromicina A ou, mais em geral, a antibióticos de macrólidos caracterizados pela presença de uma macrolactona com 14 ou 15 membros. A actividade antibacteriana dos compostos de fórmula (I) contra microrganismos Gram--positivos, tais como o Streptococcus pyogenes, o Streptococcus pneumoniae, o Enterococcus faecalis e o Stafilococcus aureus, e os microrganismos Gram-negativos, tais como a Escherichia coli e a Klebsiella pneumoniae, foi avaliada por meio de ensaios in vitro apropriados para avaliar a concentração mínima de antibiótico que permite a inibição do crescimento bacteriano (MIC) (exemplo 23). Usaram-se Roxitromicina e Claritromicina como compostos de referência [índice Merck, XI Ed., N° 8253 e 2340, respectivamente], A actividade antibacteriana dos compostos de fórmula (I) contra microrganismos Gram--positivos resultou ser praticamente comparável à da Roxitromicina e à da Claritromicina, ambos os macrólidos caracterizados por uma elevada actividade antibacteriana invitro (tabela 1).

Relativamente aos microrganismos Gram-negativos e, em particular, contra as enterobactérias, tais como a Escherichia coli e a Klebsiella pneumoniae, os compostos de fórmula (I) resultaram ser notoriamente mais activos do que ambos os compostos de referência (tabela 2).

Nesta medida, é importante salientar que os compostos de fórmula (I), objecto da presente invenção, revelaram ser mais activos do que a Roxitromicina, descrita no pedido da patente Europeia N° 0033255 acima mencionado e escolhida como composto de eleição relativamente a vários outros derivados, tais como, por exemplo, a 9-[0-[(2--dimetilamino)etil]oxima] de Eritromicina A [J. C. Gasc et al., The Journal of Antibiotics, 44, 313-330, (1991)].

Além disso, os compostos de fórmula (I) revelaram ser activos in vivo (tabela 3). 18

A actividade antibactericida in vivo dos compostos de fórmula (I), expressa como média da dose de protecção DP50 (mg/kg), foi avaliada por meio da infecção pulmonar experimental provocada em ratinhos pelo Streptococcus piogenes (Exemplo 23).

Considerando os dados da actividade in vivo, é evidente que os compostos de fórmula (I) são caracterizados por uma duração de acção prolongada e uma longa meia-vida de eliminação nos tecidos.

De facto, depois da administração intraperitonal no ratinho, os compostos de fórmula (I) são rápida e amplamente distribuídos em todo 0 organismo e os níveis de tecido revelam ser superiores aos níveis plasmáticos.

Isto toma-se particularmente evidente considerando os valores de DP50 para os compostos de fórmula (I) administrados 24 horas antes ou 1 hora depois da infecção.

De facto, os referidos valores revelam ser substancialmente inalterados depois da administração 24 horas antes ou 1 hora depois da infecção.

No caso da infecção pulmonar experimental induzida no ratinho pelo Streptococcus piogenes, um patogene tradicionalmente responsável por doenças respiratórias, persistem a nível pulmonar, 24-48 horas depois da administração, concentrações eficazes dos compostos de fórmula (I) administradas intraperitonealmente.

Ao invés, os compostos de referência a Roxitromicina e a Claritromicina administrados 24 horas antes da infecção, revelaram ser inactivos.

Por isso, os compostos de fórmula (I) revelaram também ser dotados de uma selectividade pulmonar, podendo ser vantajosamente usados no tratamento das infecções do tracto respiratório. 19

η

Além da actividade acima referida contra microrganismos bacterianos, os compostos de fórmula (I), objecto da presente invenção, revelaram ser activos contra os patogenes eucarióticos. Em particular, revelaram ser notoriamente activos contra protozoas, tais como o Plasmodium falciparum, que é um parasita da malária bem conhecido.

Por isso, os compostos de fórmula (I) podem também ser vantajosamente usados no tratamento das doenças da malária.

Além de serem caracterizados por um amplo espectro de actividade antibiótica contra os microrganismos Gram-positivos e Gram-negativos e os protozoas, por uma boa estabilidade aos ácidos e por boas propriedades farmacòcinéticas, os compostos de fórmula (I) apresentam, no ratinho, uma toxicidade aguda comparável à da Roxitromicina. Por isso, ao serem caracterizados por uma elevada segurança de utilização, podem ser vantajosamente empregues na terapia humana e na terapia veterinária.

Os compostos de fórmula (I) serão preferencialmente usados numa forma farmaceuticamente apropriada útil para a administração por via oral, parentérica, em supositório ou tópica.

Por isso, são objecto da presente invenção as composições farmacêuticas que contêm uma quantidade terapeuticamente efectiva de um ou mais compostos de fórmula (I) em mistura com um agente veicular farmaceuticamente aceitável.

As referidas formas farmacêuticas compreendem comprimidos, cápsulas, xaropes, soluções injectáveis prontas a serem usadas ou a serem preparadas quando usadas por diluição de um liofilizado, supositórios, soluções, cremes, unguentos e loções para os olhos.

Para o uso veterinário, além das composições acima, é possível preparar concentrados sólidos ou líquidos a serem diluídos na comida ou na água de beber. 20

De acordo com o tipo de composição, além de uma quantidade terapeuticamente efectiva de um ou mais compostos de fórmula (I), estes conterão excipientes ou diluentes sólidos ou líquidos para uso farmacêutico ou veterinário e, opcionalmente, outros aditivos de uso em formulação normal, tais como, agentes espessantes, agregantes, lubrificantes, desintegrantes, agentes apaladantes e agentes corantes. A fim de tratar infecções em particular, o composto de fórmula (I) pode estar em associação com uma quantidade efectiva de outro ingrediente activo. A quantidade efectiva do composto de fórmula (I) pode variar de acordo com diferentes factores, tais como a gravidade e a fase da infecção, o órgão ou o sistema afectado, as características das espécies hospedeiras, a susceptibilidade das espécies bacterianas responsáveis pela infecção e a via de administração seleccionada. A dose terapêutica estará em geral compreendida entre 0,5 e 100 mg/kg do peso do corpo/dia e poderá ser administrada numa dose única ou em mais doses diárias.

Com o fim de ilustrar a presente invenção, sem a limitar, dão-se agora os seguintes exemplos.

As estruturas dos compostos de fórmula (I) e dos intermediários sintéticos para a sua preparação foram confirmadas por espectroscopia de RMN de ]H ou de RMN de 13C. Os valores dos sinais representativos dos intermediários mais avançados e dos compostos de fórmula (I) são referidos daqui em diante.

Exemplo 1 \

Preparação de ácido N-benzoil-6-amino-hexanoico

Adicionaram-se ao mesmo tempo uma solução de cloreto de benzoilo (0,18 moles) em éter etílico (160 ml) e uma solução de hidróxido de sódio IN (180 ml) a uma mistura de ácido 6-axnino-hexanoico (0,15 moles) em éter etílico (150 ml) e água (200 ml) contendo hidróxido de sódio (0,15 moles), mantida sob agitação a uma temperatura compreendida entre 0-5° C.

No fim das adições, levou-se a mistura reaccional para a temperatura ambiente e manteve-se sob agitação durante outras 4 horas.

Depois da separação das fases, lavou-se a fase aquosa com éter etílico (200 ml) e acidífícou-se em vermelho do Congo com ácido clorídrico concentrado.

Depois da extracção com acetato de etilo (3 x 200 ml)lavaram-se as fases orgânicas recolhidas com uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio (200 ml), secaram-se em sulfato de sódio e evaporaram-se sob pressão reduzida.

Obteve-se assim ácido N-benzoil-6-amino-hexanoico, usado como tal nas reacções subsequentes.

Trabalhando de forma semelhante, prepararam-se os seguintes compostos: Ácido N-benzoil-3-amino-propanoico; N-benzoil-glicina; Ácido N-benzoil-8-amino-octanoico: Ácido N-benzoil-4-amino-butanoico: Ácido N-fenilacetil-6-amino-hexanoico: N-fenilacetil-glicina; Ácido N-benzoil-N-isopropil-4-amino-butanoico; Ácido N-benzoil-N-isopropil-6-amino-hexanoico. 22

Exemplo 2

Preparação do éster de etilo de N-[6-(benzoilamino)hexanoill glicina

Adicionou-se gradualmente uma solução de diciclo-hexilcarbodiimida (112 mmoles) em tetra-hidrofurano anidro (44 ml) a uma suspensão de ácido N-benzoil-6-amino--hexanoico (93,5 mmoles), preparada tal como se descreveu no exemplo 1, cloridrato do éster de etil glicina (112 mmoles), trietilamina (112 mmoles) e 1-hidroxibenzotriazol anidro (112 mmoles) em tetra-hidrofurano (330 ml), mantido sob agitação a 0o C.

Levou-se a mistura reaccional para a temperatura ambiente e manteve-se sob agitação durante 16 horas.

No final, formou-se um precipitado que foi eliminado por filtração e evaporou-se o filtrado assim obtido sob pressão reduzida.

Recolheu-se o resíduo com acetato de etilo (300 ml) e lavou-se subsequentemente com uma solução de ácido clorídrico a 5% (2 x 100 ml), com uma solução saturada de cloreto de sódio (100 ml), com uma solução de bicarbonato de sódio a 5% (2 x 100 ml) e, por fim, com uma solução saturada de cloreto de sódio (100 ml).

Secou-se a fase orgânica sobre sulfato de sódio e evaporou-se até à secura sob pressão reduzida, obtendo-se assim éster de etilo de N-[6-(benzoilamino)hexanoil]glicina que foi usado nas reacções subsequentes.

Trabalhando de forma semelhante, píepararam-se os seguintes compostos: Éster de etilo de N-[(benzoilamino)acetil]glicina; Éster de etilo de N-f6-(fenilacetilamino)hexanoill glicina: Éster de etilo de N-f-ífenilacetilaminoiacetillglicina: 6-Í6-Íbenzoilaminolhexanoilaminolhexanoato de etilo; Éster de metilo de N-fS-fbenzoilaminolpentanoill glicina; Λ 6-r5-íben7QÍlamino)pentanoilamino1hexanoato de metilo: Éster de metilo de N-r7-fbenzoilamino~)heptanoillglicina: 5- r6-íbenzoilamino)hexanoilamino1pentanoato de metilo: ó-ífbenzoilamiriolacetilaminolhexanoato de metilo; 3- r6-fl3enzoilamino)hexanoilamino1propionato de metilo; 6- rN-isopropil-('fenilacetilamino)acetilamino1hexanoato de etilo: 6-r4-(benzoilaminolbutanoilamino1hexanoato de metilo; 4- rN-isopropil-4-fN,-isopropil-N’-benzoilamino)butanoilaminolbutanoato de metilo.

Exemplo 3

Preparação do éster de etilo de N-(6-amino-hexanoil)glicina a) Adicionou-se ácido 6-amino-hexanoico (100 g; 0,762 moles) e, gradualmente, uma solução de dicarbonato de di-terc-butilo (168 g; 0,762 moles) em metanol (140 ml) a uma solução de hidróxido de sódio (33,54 g; 0,831 moles) em água (840 ml) e metanol (400 ml).

Manteve-se a mistura reaccional sob agitação à temperatura ambiente durante 4 horas.

Depois disso, adicionou-se novamente dicarbonato de di-terc-butilo sólido (17,5 g; 0,08 moles), mantendo-se sob agitação durante mais 16 horas.

Lavou-se então a mistura reaccional com hexano (2 x 400 ml), acidificou-se para pH 1,5 com uma solução de bi-sulfato de potássio e extraiu-se com acetato de etilo (3 x 450 ml).

Secaram-se as fases orgânicas recolhidas sobre sulfato de sódio e evaporaram-se até à secura, originando assim ácido 6-(terc-butoxicarbonilamino)hexanoico sob a forma de um óleo (163 g). 24 24

um®* b) Trabalhando de forma semelhante à descrita no exemplo 2, condensou-se directamente ácido 6-(terc-butoxicarbonilamino)hexanoico (163 g) com cloridrato do éster de etil glicina (118 g; 0,845 moles), obtendo-se assim éster de etilo de N--[6-(terc-butoxicarbonilamino)hexanoil]glicina (285 g) sob a forma de um produto bruto que foi usado como tal na reacção subsequente. P.f. 76-77° C (éter isopropílico) c) Adicionou-se uma solução de ácido clorídrico 6N (150 ml) em acetato de etilo (150 ml) a uma solução de éster de etilo de N-[6-(terc-butoxicarbonil-amino)hexanoil]glicina (285 g) em acetato de etilo (500 ml) e manteve-se sob agitação à temperatura ambiente.

Depois de 24 horas, formou-se um precipitado que foi filtrado, lavado com acetato de etilo e éter etílico, e seco num forno (50° C) sob vácuo.

Obteve-se assim éster de etilo de N-(6-amino-hexanoil)glicina (93 g) sob a forma de um produto bruto que foi usado como tal nas reacções subsequentes. TLC (cloreto de metileno.metanol.amónia = 10:2:1) Rf = 0,2. v Exemplo 4

Preparação de éster de etilo de N-[6-K4-fluorbenzoiI)aminolhexanoillglicina

Adicionou-se gradualmente uma solução de cloreto de 4-flúorbenzoilo (47,4 mmoles) em cloreto de metileno (30 ml), a uma suspensão de éster de etilo de N-(6-amino--hexanoil)glicina (39,5 mmoles), preparada tal como se descreveu no exemplo 3, e trietilamina (87 mmoles) em cloreto de metileno (150 ml), e manteve-se sob agitação a 0° C.

Levou-se para a temperatura ambiente e manteve-se sob agitação a mistura assim preparada, à qual se adicionou subsequentemente trietilamina (2 ml). 25

I -· -i \ j

Depois de uma hora nestas condições, lavou-se a mistura reaccional com uma solução de ácido clorídrico a 5% (2 x 100 ml) e com uma solução saturada de cloreto de sódio (3 x 100 ml).

Secou-se a fase orgânica separada sobre sulfato de sódio e evaporou-se até à secura sob vácuo.

Obteve-se assim éster de etilo de N-[6-[(4-fluorbenzoil)amino]hexanoil]glicina sob a forma de um produto impuro, usado como tal nas reacções subsequentes. P.f. 121-122° C (acetato de etilo). TLC (acetato de etilo) Rf = 0,3

Trabalhando de forma semelhante, preparou-se o seguinte composto: Éster de etilo de N-Í6-Í2-furoilamino)hexanoill glictna P.f. 104-106° C (acetonitrilo/éter isopropílico) TLC (cloreto de metileno:metanol = 95:5) Rf= 0,3.

Exemplo 5

Preparação de éster de etilo de N-f6-f(4-metoxibenzoil)aminolhexanoillglicina

Trabalhando de forma semelhante à descrita no exemplo 2 e usando ácido 4-metoxi-benzoico (33 mmoles) e éster de etilo de N-(6-amino-hexanoil)glicina (39,5 mmoles), preparado tal como se descreveu no exemplo 3, obteve-se éster de etilo de N-[6-[(4--metoxibenzoil)amino]hexanoil]glicina sob a forma de um produto impuro, usado como tal nas reacções subsequentes.

P.f. 106-107° C TLC (cloreto de metileno:metanol = 90:10) Rf = 0,46

Trabalhando de forma semelhante, prepararam-se os seguintes compostos: éster de etilo de Ν-Γ6-íí3.4-metilenodioxibenzoinamino1hexanoil1 glicina TLC (cloreto de metileno:metanol = 90:10) Rf = 0,39;

éster de etilo de N- Γ6-Γ(A-metilsulfonilbenzoiLaminol hexanoill glicina P.f. 124-126° C TLC (cloreto de metileno:metanol = 96:4) Rf = 0,31;

éster de etilo de N-f6-íf3-trifluormetilbenzoinamino1hexanoillglicina P.f. 102-104° C TLC (cloreto de metileno:metanol = 95:5) Rf = 0,38.

Exemplo 6

Preparação de 2-í6-(Tenilmetilaminolhexilaminoletanol

Adicionou-se gradualmente ácido sulfúrico 6N em éter etílico (40,9 ml; 700 mmoles), preparado misturando ácido sulfúrico a 96% (33 ml) e éter etílico (100 ml), a uma suspensão de éster de etilo de N-[6-(benzoilamino)hexanoil]glicina (46,8 mmoles), preparado tal como se descreveu no exemplo 2, e boro hidreto de sódio (700 mmoles) em tetra-hidrofurano anidro (200 ml), mantido sob agitação a uma temperatura compreendida entre 15° C e 20° C.

Levou-se a mistura reaccional até à temperatura de ebulição durante 24 horas e, subsequentemente, arrefeceu-se a 0° C.

Adicionou-se depois metanol (150 ml) sob agitação.

Evaporou-se o dissolvente sob pressão reduzida e recolheu-se o resíduo com uma solução de hidróxido de sódio 6N (200 ml), mantendo a mistura resultante à temperatura de ebulição durante 24 horas. 27

Extraiu-se depois a mistura reaccional com tetra-hidrofurano (2 x 100 ml), arrefeceu-se à temperatura ambiente e evaporou-se a fase orgânica até à secura, recolheu-se com acetato de etilo e secou-se sobre sulfato de sódio.

Através da acidificação com uma solução etérea de ácido clorídrico, obteve-se um precipitado constituído por 2-[6-(fenilmetilamino)hexilamino]etanol sob a forma de sal de cloridrato. O produto assim obtido foi usado como tal nas reacções subsequentes.

Trabalhando de forma semelhante, prepararam-se os seguintes compostos: 2-[2-ífenilmetilamino)etilaminoletanol: 2-16-( 2-feniletilaminolhexilaminoletanol; 6-r6-ffenilmetilamino)hexilaminolhexanol: 2- 15-( fenilmetilaminoípentilaminoletanol: 2T8-(fenilmetilamino)octilaminoIetanol; 5- 16-( fenilmetilaminoíhexilammol pentanol; 6- 13-(fenihnetilaminolpropilammolhexanol; 3- 16-(fenilrnetilamino)hexilamino]propanol; 3- 14-( fenilmetilaminoibutilaminolpropanol: 6-12-( fenilmetilaminoietilaminol hexanol: 6- IN-isopropiM-l fenilmetilaminolbutilaminolhexanol: 2-[6-r(4-fluorfeni0metilaminolhexilaminoletanol; 2- Γ6-1( 4-metoxifenil)metilaminolhexilaminol etanol: 2-r6-r(3.4-metilenodioxifenil')metilaminolhexilamino1etanol: 2- Γ6-Γ( 3 -trifluormetilfenillmetilaminolhexilaminol etanol: 2 - Γ6-Κ 4-metilsulfonilfeniDmetilaminolhexilaminoletanol: 4- [N-isopropil-4-(N,-isopropil-N,-fenilmetilamino)butilamino1butanol.

Exemplo 7

Preparação de acetato de ó-fN-acetil-ó-fN^-acetil-N^fenilmetilamino)-hexilam inol hexilo

Adicionou-se gradualmente trietilamina (1,95 ml; 14 mmoles) e uma solução de cloreto de acetilo (0,62 ml; 8,69 mmoles) em cloreto de metileno (5 ml) a uma suspensão de 6--[6-(fenilmetilamino)hexilamino]hexanol (1 g; 2,6 mmoles), preparada tal como se descreveu no exemplo 6, em cloreto de metileno (15 ml), mantido sob agitação a 0o C.

Depois de uma hora sob agitação a 0o C, levou-se a mistura reaccional para a temperatura ambiente e manteve-se sob agitação durante mais 16 horas.

Lavou-se depois a mistura reaccional com uma solução de ácido clorídrico a 10% (10 ml) e com uma solução saturada de cloreto de sódio.

Depois da separação das fases, secou-se a fase orgânica sobre sulfato de sódio e evaporou-se até à secura sob vácuo, obtendo-se assim acetato de 6-[N-acetil-6-(N’--acetil-N’-fenilmetilamino)hexilamino]hexilo (1,18 g) sob a forma de um óleo, usado como tal nas reacções subsequentes.

Trabalhando de forma semelhante, preparou-se o composto seguinte:

Acetato de 2-fN-acetil-6-nsr-acetil-NV2-feniletiOaminolhexilamino1etilo.

Exemplo 8

Preparação de 6-ÍN-etil-6-fN’-etil-N’-fenilmetilammolhexilaminolhexanol

Trabalhando de forma semelhante à descrita no exemplo 6 e usando acetato de 6-[N--acetil-6-(N’-acetil-N’-fenilmetilamino)hexilamino]hexilo, preparado tal como se 29 β

descreveu no exemplo 7, preparou-se 6-[N-etil-6-(N’-etil-N’-fenilmetilamino)-hexilamino]hexanol.

Trabalhando de forma semelhante, preparou-se o seguinte composto: 2-IN-etil-6-IN’-etil-NV2-feniletiDaminolhexilamino1etanol.

Exemplo 9

Preparação de 2-ÍN-benziloxicarbonil-6-íN’-benziloxicarboniI-N’-fenilmetil-aminolhexilaminoletanol

Adicionou-se gradualmente e ao mesmo tempo uma solução de hidróxido de sódio IN (44,5 ml) e uma solução em tolueno a 50% de cloroformato de benzilo (44,5 mmoles) em acetato de etilo (33 ml) a uma solução de dicloridrato de 2-[6-(fenilmetilamino)-hexilaminojetanol (18,5 mmoles), preparada tal como se descreveu no exemplo 6, numa solução de hidróxido de sódio IN (37,1 ml) e acetato de etilo (40 ml), mantida sob agitação a uma temperatura de 0o C.

No final das adições, levou-se a mistura reaccional para a temperatura ambiente e manteve-se sob agitação durante 24 horas.

Depois da separação das fases, lavou-se a fase aquosa com acetato de etilo (2 x 50 ml).

Lavaram-se as fases orgânicas recolhidas com uma solução saturada de cloreto de sódio (50 ml), secaram-se sobre sulfato de sódio e evaporaram-se até à secura sob vácuo.

Obteve-se deste modo 2-[N-benziloxicarbonil-6-(N’-benziloxicarbonil-N’-fenilmetil-amino)hexilamino]etanol sob a forma de um óleo, usado como tal nas reacções subsequentes. TLC (acetato de etilo:hexano = 50:50) Rf = 0,20. 30

Trabalhando de forma semelhante, obtiveram-se os seguintes compostos: 2-rN-benziloxicarbonil-2-(N,-benziloxicarbonil-N’-fenilmetilamino)etilaminoletanol TLC (acetato de etilo:hexano = 60:40) Rf = 0,25; 6-rN-benziloxicarbonil-6-ÍN’-benziloxicarbonil-N’-fenilmetilamino)hexilamino1- hexanol TLC (acetato de etilo:hexano = 50:50) Rf = 0,27; 6-rN-benziloxicarbonil-5-(N’-benziloxicarbonil-N,-fenilmetilamino)pentilamino1- hexanol: 2-fN-benziloxicarbonil-5-nSP-benziloxicarbonil-N’-fenihnetilamino)pentilamino1etanol: 2- rN-benziloxicarbonil-8-ÍN’-benziloxicarboml-N’-fenilmetilamino)octilaminoletanol: 5- IN-benziloxicarhoml-ó-fN^benziloxicarbonil-NP-ferulmetilaminoihexilaminol-pentanol; 6- ILLbenziloxicarbonil-3-(N’-benziloxicarbonil-N’-fenilmetilamino)propilaminol-hexanol; 3- rN-benziloxicarbonil-6-tN’-benziloxicarbonil-N’-fenilmetilamino)hexilaminol-propanol: 3-rN-benziloxicarbonil-4-fNf’-benziloxicarbonil-N’-fenilmetilamino)butilaminol- propanol; 6-rN-isopropil-2-ÍN’-benziloxicarbonil-N,-(2-feniletiDaminoletilamino1hexanol TLC (cloreto de metileno:metanol:amónia = 95:5:0,5) Rf 0,33; 6-ÍN-benziloxicarbonil-4-fNÍ’-isopropil-N’-fenilmetilamino^butilaminolhexanol * 31 η TLC (cloreto de metileno:metanol:amónia = 95:5:0,5) Rf 0,42; 2-rN-ben7Í1oxicarbonil-6-rN,-benziloxicarbonil-N’-f('4-fluorfenil)metillaminol- hexilaminoletanol TLC (acetato de etilo:hexano = 60:40) Rf 0,35; 2-rN-benziloxicarbonil-6-fN;-benziloxicarbonil-N’-íf4-metoxifenil)metillamjnol- hexilaminoletanol TLC (acetato de etilo:hexano = 50:50) Rf 0,2; 2-rN-benziloxicarbonil-6-rN’ -benziloxicarbonil-N’-IY3.4-metilenodioxifenil)metin - aminolhexilaminoletanol TLC (acetato de etilo:hexano = 60:40) Rf 0,26; 2-rN-ben2Íloxicarboml-6-rN,-benziloxicarbonil-N’-[Y3-trifluormetilfenil)metillaminol- hexilaminoletanol TLC (acetato de etilo:hexano = 50:50) Rf 0,25. 2-[N-benzi1oxicarbonil-6-fN’-benziloxicarbonil-N,-ff4-metilsulfomlfeniDmetinamino1- hexilaminoletanol TLC (acetato de etilo:hexano = 90:10) Rf 0,36.

Exemplo 10

Preparação de sulfonato de 2-lN-benziloxicarbonil-6-(N’-benziloxicarbonil-N’--fenilmetilamipolhexilaminoletil-metano

Adicionou-se gradualmente uma solução de cloreto de metano-sulfonilo (3,16 mmoles) em cloreto de metileno (5 ml) a uma solução de 2-[N-benziloxicarbonil-6-(N’--benziloxicarbonil-N’-fenilmetilamino)hexilamino]etanol (2,6 mmoles), preparado tal como se descreveu no exemplo 9, em cloreto de metileno (15 ml) contendo trietilamina (0,44 ml; 3,16 mmoles), sob agitação e a uma temperatura de 0o C.

Adicionou-se a mistura reaccional, levada à temperatura ambiente e mantida sob agitação durante 5 horas, a uma solução de ácido clorídrico a 5% (20 ml).

Depois da separação das fases, lavou-se a fase orgânica com ácido clorídrico a 5% (10 ml) e com uma solução saturada de cloreto de sódio (3x10 ml).

Secou-se depois a fase orgânica sobre sulfato de sódio e evaporou-se até à secura, originando deste modo sulfonato de 2-[N-benziloxicarbonil-6-(N’-benziloxicarbonil-N’--fenilmetilamino)hexilamino]etil-metano, usado como tal na reacção do exemplo seguinte.

Exemplo 11

f El-9-10- Γ2- ÍN-benziloxicarbonil-6-tN’-henziloxicarbonil-N’-fenilmetilaminoV hexilaminoletilloximal de Eritroraicina A

Adicionaram-se, respectivamente, (E)-9-0-oxima de Eritromicina A (627 mg; 0,84 mmoles), éter de 18-crown-6 (220 mg; 0,84 mmoles) e uma solução de sulfonato de 2-[N-benziloxicarboml-6-(N’-benziloxicarboml-N,-fenilmetilamino)hexilamino]etil--metano (0,84 mmoles), preparada tal como se descreveu no exemplo 10, em tetra-hidrofurano anidro (5 ml), a uma suspensão de terc-butilato de potássio (103 mg; 0,92 mmoles) em tetra-hidrofurano anidro (5 ml), mantido à temperatura ambiente sob agitação e sob uma atmosfera de azoto.

Manteve-se a mistura reaccional sob agitação à temperatura ambiente durante 20 horas e, seguidamente, evaporou-se sob pressão reduzida.

Recolheu-se o resíduo com acetato de etilo (10 ml) e lavou-se a mistura assim obtida com uma solução saturada de cloreto de sódio (10 ml).

Extraiu-se a fase aquosa com acetato de etilo (2 x 10 ml) e secaram-se as fases orgânicas recolhidas sobre sulfato de sódio e evaporaram-se até à secura.

Obteve-se assim (E)-9-[0-[2-[N-benziloxicarboml-6-(N,-benziloxicarbonil-N,-fenil-metilamino)hexilamino]etil]oxima] de Eritromicina A e foi usada como tal nas reacções subsequentes. TLC (cloreto de metileno:metanoί.amónia = 90:9:1) Rf= 0,58 Massa (C. I.) (M+H)+= 1250; RMN de Ή (200 MHz, CDC13): δ (ppm): 7,38-7,10 (m, 15H, aromáticos); 5,18-5,10 (m, 4H, 2 CHzPh); 3,30 (s, 3H, OCH3); 2,26 (s, 6H, 2 NCH3); 0,81 (t, 3H, CH3CH2).

Trabalhando de forma semelhante, prepararam-se os seguintes compostos:

ÍEV9-rO-r2-fN-benziloxicarbonil-2-ÍN,-benziloxicarbonil-N,-fenilmetilaminoV

etilaminoletilloximal de Eritromicina A TLC (cloreto de metileno:metanol:amónia = 90:10:1) Rf= 0,5; RMN de ‘H (200 MHz, CDC13): δ (ppm): 7,11-6,97 (m, 15H, aromáticos); 5,18-4,97 (m, 4H, 2 CH^Ph); 3,30 (s, 3H, OCH3); 2,25 (s, 6H, 2 NCH3); 0,82 (t, 3H, CH^Hz).

(EV9-fO-r6-rN-benziloxicarbonil-6-(N’-benziloxicarbonil-N’-fenilmetilaminoV

hexilaminolhexilloximal de Eritromicina A TLC (cloreto de metileno:metanol:amónia = 90:10:1) Rf = 0,6; RMN de 'H (200 MHz, CDC13): δ (ppm): 7,27-6,96 (m, 15H, aromáticos); 5,05-4,92 (m, 4H, 2 CHjPh); 3,17 (s, 3H, OCH3); 2,13 (s, 6H, 2 NCH3); 0,70 (t, 3H, CH3CH2). (E')-9-rO-r6-[N-ben7.ilnxicarbQnil-3-(N’-benziloxicarbonil-N,-femlmetilamino)-

propilaminolhexilloximal de Eritromicina A TLC (cloreto de metileno:metanol:amónia = 90:10:1) Rf = 0,65;

Massa (C. I.) (M+H)+ =1194; RMN de ‘H (200 MHz, CDC13): δ (ppm): 7,39-7,01 (m, 15H, aromáticos); 5,17-5,02 (m, 4H, 2 CHiPh); 3,30 (s, 3H, OCH3); 2,27 (s, 6H, 2 NCH3); 0,82 (t, 3H, CH3CH2). ('EV9-r0-r6-rN-benziloxicarbonil-5-(N’-benziloxicarbonil-N,-fenilmetilammo)-pentilaminolhexilloximal de Eritromicina A: (EV9-rO-r2-rN-henziloxicarbonil-8-(N’-benziloxicarbonil-N’-fenilmetilamino')-octilaminoletilloximal de Eritromicina A: fE)-9-rO-f2-fN-benziloxicarbonil-5-(N’-benziloxicarbonil-N,-fenilmetilamino)-pentilaminoletilloximal de Eritromicina A: (EV9- Γ 0-f5-rN-benziloxicarbonil-6-fN’-benziloxicarbonil-N’-fenilmetilaminoV hexilaminolpentilloximal de Eritromicina A: fEV9-ÍO-r3-[N-beiiziloxicarbonil-6-nsP-benziloxicarbonil-N’-fenilmetilamino)-hexilaminolpropilloximal de Eritromicina A: (E)-9-fO-r3-rNi-benziloxicarbonil-4-(N’ -benziloxicarbonil-N’ -fenilmetilamino)-butilaminolpropilloximal de Eritromicina A: fE>9-rO-r6-rN-benziloxicarbonil-2-fN’-benziloxicarbonil-N’-f2-feniletiDaminol-etilaminolhexilloximal de Eritromicina A:

P.f. 74-76° C

Massa (C. I.) (M+H)+= 1172 35

RMN de !H (200 MHz, CDCI3): δ (ppm): 7,38-7,03 (m, 10H, aromáticos); 5,13-5,03 (m, 2H, CHjPh); 3,29 (s, 3H, OCH3); 2,25 (s, 6H, 2 NCH3). ÍE)-9-r0-í6-rN-etil-6-(N’-etil-N,-fenilmetilaminolhexilamino1hexil'|oxima1 de Eritromicina A (Composto 1) P.f. 80-82° C (acetonitrilo)

Massa (C. I.) (M+H)+ =1094 RMN de 13C (50 MHz, CDC13): δ (ppm): 175,20; 171,35; 140,06; 128,86; 128,07; 126,62; 102,96; 96,27; 53,54. ('EV9-[0-r2-fN-etil-6-rN,-etil-N,-(2-feniletil)aminolhexilamino1etilloximal de Eritromicina A (Composto 2) TLC (clorofórmio:hexano:trietilamina = 45:45:10) Rf = 0,2;

Massa (C. I.) (M+H)+ =1052 RMN de JH (200 MHz, CDC13): δ (ppm): 7,26-7,04 (m, 5H, aromáticos); 3,22 (s, 3H, OCH3); 2,20 (s, 6H, 2 NCH3); 0,79 (t, 3H, CH3CH2). (EV9- Γ 0-f 6-|~N-benzi loxicarbonil-4-(N! -isopropil-N’ -fenilmetilaminolbutilaminol-hexilloximal de Eritromicina A \

P.f. 75-77° C RMN de *H (200 MHz, CDC13): δ (ppm): 7,47-7,12 (m, 10H, aromáticos); 5,18-4,97 (m, 4H, 2 CHzPh); 3,30 (s, 3H, OCH3); 2,25 (s, 6H, 2 NCH3); 0,82 (t, 3H, CH^CHi). (E)-9-r0-r2-IN-benziloxicarboml-6-nsr-benziloxicarbonil-N’-IY4-fluorfeninmetiH-

aminolhexilaminoletilloximal de Eritromicina A TLC (cloreto de metileno:metanol:amónia = 90:10:1) Rf = 0,62; RMN de Ή (200 MHz, CDC13): δ (ppm): 7,38-6,88 (m, 15H, aromáticos); 5,17-5,03 (m 2H, CH^Ph); 3,29 (s, 3H, OCH3); 2,26 (s, 6H, 2 NCH3); 0,81 (t, 3H, CH^CHz). (EV9-ÍO-r2-rN-benziloxicarbonil-6-rN,-benziloxicarbonil-N’-[f4-metoxifenil)metil1-

aminolhexilaminoletil 1 oximal de Eritromicina A TLC (cloreto de metileno:metanol:amónia = 45:45:10) Rf = 0,3; RMN de lR (200 MHz, CDC13): δ (ppm): 7,40-7,23 (m, 10H, 2 PhCH20); 7,20-6,75 (m 4H, PhOCH3); 5,52-5,17 (m, 4H, 2 CHjPh); 3,77 (s, 3H, PhOCHj); 3,29 (s, 3H, OCH3); 2,25 (s, 6H, 2 NCH3); 0,82 (t, 3H, CH3CH2). (EV9-r0-r2-fN-ben2Íloxicarbonil-6-(N’-benziloxicarbonil-N’-f(3.4-metilenodioxifenil)-

metillaminolhexilaminoletilloximal de Eritromicina A TLC (cloreto de metileno:metanol:amónia = 95:5:0,5) Rf = 0,31; RMN de Ή (200 MHz, CDC13): δ (ppm): 7,38-7,22 (m, 10H, 2 PhCH20); 6,78-6,55 (m, 3H, aromáticos); 5,90 (s, 2H, OCH20); 5,15-5,02 (m, 4H, 2 CH^Ph); 3,29 (s, 3H, OCH3); 2,26 (s, 6H, 2 NCH3); 0,82 (t, 3H, CH3CH2). fE)-9-rO-f2-rN-benziloxicarbonil-6-fN’-benziloxicarbonil-N’-r(3-trifluormetiIfeniD-

metillaminolhexilaminoletilloximal de Eritromicina A TLC (cloreto de metileno.metanol.amónia = 90:10:1) Rf = 0,65; RMN de ‘H (200 MHz, CDC13): δ (ppm): 7,54-7,15 (m, 14H, aromáticos); 5,20-5,03 (m, 4H, 2 CHzPh); 3,30 (s, 3H, OCH3); 2,26 (s, 6H, 2 NCH3); 0,82 (t, 3H, CH3CH2). (EV9-rO-r2-rN-benziloxicarbonil-6-(N,-benziloxicarbonil-N,-í(4-metilsulfonilfenil)-

metillaminolhexilaminoletilloximal de Eritromicina A TLC (cloreto de metileno:metanol:amónia = 95:5:0,5) Rf = 0,5; RMN de 'H (200 MHz, CDC13): δ (ppm): 7,90-7,79 (m, 4H, PhS02CH3); 7,48-7,15 (m, 10H, 2 PhCH20); 5,19-5,03 (m, 4H, 2 CH^Ph); 3,30 (s, 3H, OCH3); 3,02%, 3H, CH3S02); 2,27 (s, 6H, 2 NCH3); 0,82 (t, 3H, CH3CH2). 37 37

('EV9-rO-r4-rN-isoproDÍl-4-(N’-isopropil-N,-fenilmetilamino)butiIaminolbutil1oxima1 de Eritromicina A (Composto 3) P.f. 83-85° C (hexano)

Massa (C. I.) (M+H)+ = 1066 RMN de Ή (200 MHz, CDC13): δ (ppm): 7,37-7,10 (m, 5H, aromáticos); 3,50 (s, 2H, 2 CH^Ph); 3,30 (s, 3H, OCH3); 2,26 (s, 6H, 2 NCH3); 0,82 (t, 3H, CH2CH2).

Exemplo 12

Preparação de (E)-9-[(H2-f6-(feniImetilamino)hexilaminoletilloximal de Eritromicina A (Composto 4)

Adicionou-se paládio em carvão a 10% (750 mg) a uma solução de (Έ1-9-Γ0-Γ2-ΓΝ--benziloxicarbonil-6-(N’-ben2Íloxicarbonil-N’-fenilmetilamino)hexilamino1etilloximal de Eritromicina A (5,9 mmoles), preparada tal como se descreveu no exemplo 11, em etanol (150 ml).

Colocou-se a mistura assim preparada num hidrogenador de Parr carregado com hidrogénio (1 bar) e manteve-se sob agitação à temperatura ambiente.

Depois de 7 horas, filtrou-se o catalisador e evaporou-se a solução alcoólica até à secura.

Obteve-se assim (E)-9-f0-í2-f6-ífemlmetilamino)hexi1amino'jetil]oxima'l de Eritromicina A. purificada por cromatografia de gel de sílica (eluente cloreto de metileno:metanol:amónia = 90:10:1).

Massa (C. I.) (M+H)+= 982 RMN de 13C (50 MHz, CDC13): δ (ppm): 140,48; 128,39; 128,11; 126,88.

Trabalhando de forma semelhante, prepararam-se os seguintes compostos: ÍEV9-rO-f2-r2-('fenilmetilaminoN)etilaminoletilloximal de Eritromicina A (Composto 5) RMN de 13C (50 MHz, CDCI3): δ (ppm): 176,51; 172,36; 140,96; 129,08; 128,95; 127,67; 103,84; 96,86; 53,35. (EV9-[Q-r6-['6-(rfenilmetilaminos)hexilaminolhexinoximal de Eritromicina A (Composto 6)

Massa (C. I.) (M+H)+ = 1038 RMN de 13C (50 MHz, CDCI3): δ (ppm): 175,24; 171,31; 140,33; 128,37; 128,13; 126,89; 102,92; 96,27; 54,01. (H)-9-r0-r6-F3-(fenilmetilamino)propilaminolhexilloximal de Eritromicina A (Composto 7)

Massa (C. I.) (M+H)+= 995 RMN de 13C (50 MHz, CDC13): δ (ppm): 175,15; 171,37; 140,41; 128,38; 128,09; 126,89; 102,92; 96,27; 54,04. ('EV9-r0-r6-r5-(fenilmetilamino>)pentilaminolhexinoximal de Eritromicina A (Composto 8)

RMN de *H (200 MHz, CDCI3): δ (ppm): 7,35-7,15 (m, 5H, aromáticos); 3,75 (s, 2H, CH2Ph); 2,25 (s, 6H, 2 NCH3); 0,81 (t, 3H, CH.CHA ('EV9-rO-r2-r8-('fenilmetilamino)octilaminoletilloximal de Eritromicina A (Composto 9) RMN de lR (200 MHz, CDC13): δ (ppm): 7,40-7,15 (m, 5H, aromáticos); 3,75 (s, 2H, CH.Phl: 3,29 (s, 3H, OCH3); 2,25 (s, 6H, 2 NCH3); 0,82 (t, 3H, ÇH3CH2). fE>9-rO-r2-í5-(fenilmetilamino)pentilamino1etil1oxima1 de Eritromicina A (Composto 10) RMN de 13C (50 MHz, CDCI3): δ (ppm): 174,96; 172,00; 140,31; 128,39; 128,14; 126,93; 103,16; 96,20; 53,98. fE)-9-f0-r5-r6-ffenilmetilaminolhexilaminolpentilloximal de Eritromicina A (Composto 11) RMN de 13C (50 MHz, CDC13): δ (ppm): 175,24; 171,24; 140,41; 128,38; 128,13; 126,88; 102,97; 96,28; 54,06. rEV9-r0-r3-r6-('fenilmeti1aminolhexilamino1propilloxima1 de Eritromicina A (Composto 12) RMN de 13C (50 MHz, CDC13): δ (ppm): 175,23; 171,46; 140,45; 128,39; 128,13; 126,88; 102,99; 96,29; 50,06. íE)-9-rO-r3-r4-(fenilmetilamino)butilamino]propil]oxima1 de Eritromicina A (Composto 13) RMN de 13C (50 MHz, CDCI3): δ (ppm): 175,22; 171,45; 140,35; 128,39; 128,13; 126,90; 102,98; 96,26; 53,94. (E)-9-r0-r6-rN-isopropil-2-(2-feniletilamino)etilaminolhexil'|oxima1 de Eritromicina A (Composto 14)

P.f. 93-95° C

Massa (C. I.) (M+H)+ = 1038 RMN de ,3C (50 MHz, CDC13): δ (ppm): 174,92; 170,96; 139,71; 128,42; 128,10; 125,79; 102,62; 95,94; 50,93. 40

Zi ff $ Ή kiár*··' ÍEV9-rO-r6-r4-(lSÍ-isopropil-fenilmetilamino)butilamino1hexil1oxima1 de Eritromicina A (Composto 15)

P.f. 78-80°C

Massa (C. I.) (M+H)+= 1052 RMN de 13C (50MHz, CDC13): δ (ppm): 175,47; 171,30; 140,95; 128,61; 128,02; 126,70; 116,87; 102,94; 53,94. ÍEV94042464í4-fluorfeml)metilamino1hexilarninoletilloximal de Eritromicina A (Composto 16)

Massa (C. I.) (M+H)+ = 999,5 RMN de 13C (50MHz, CDCI3): δ (ppm): 161,88; 136,06; 129,65; 115,14. (EV9-[0-r2-r6-í(4-metoxifeninmetilamino1hexilaminoletilloximal de Eritromicina A (Composto 17)

Massa (C. I.) (M+H)+= 1011 RMN de 13C (50MHz, CDC13): δ (ppm): 158,57; 132,58; 129,31; 113,76. ('EV9-rO-r2-f6-r(3.4-metilenodioxifemllmetilaminolhexilaminoletilloxima1 de Eritromicina A (Composto 181 Massa (C. I.) (M+H)+ = 1025 RMN de 13C (50MHz, CDC13): δ (ppm): 147,65; 146,44; 134,39; 121,18; 108,66, 108,06. fEV9-rO-r2-r6-rf3-trifluormetilfeninmetilaminolhexilaminoletilloxima] de Eritromicina A (Composto 19)

Massa (C. I.) (M+H)+ = 1050 RMN de 13C (50MHz, CDC13): δ (ppm): 141,57; 131,40; 130,63; 128,76; 124,22; 124,72; 123,56. (EV9-rO-f2-f6-r(4-metilsulfonilfenil)metilamino1hexilamino1etinoximal de Eritromicina A (Composto 20)

Massa (C. I.) (M+H)+ = 1059 RMN de 13C (50MHz, CDC13): δ (ppm): 147,23; 138,97; 128,79; 127,49.

Exemplo 13

Preparação de N-benziloxiearboiiil-6-amino-hexanol

Adicionaram-se gradualmente e ao mesmo tempo cloroformato de benzilo (50% em tolueno; 84,8 ml; 0,256 moles) em acetato de etilo (171 ml) e uma solução de hidróxido de sódio IN (256 ml) a uma mistura de 6-amino-hexanol (25 g; 0,21 moles) em acetato de etilo (250 ml) e água (200 ml), mantida sob agitação a 0o C.

Levou-se a mistura reaccional (pH 9) para a temperatura ambiente e manteve-se sob agitação durante 5 horas.

Depois da separação das fases, lavou-se a fase aquosa com acetato de etilo (200 ml).

Lavaram-se depois as fases orgânicas recolhidas com uma solução saturada de cloreto de sódio (150 ml), secaram-se sobre sulfato de sódio e evaporaram-se até à secura.

Recolheu-se o resíduo com éter etílico (300 ml) e filtrou-se e secou-se o precipitado formado sob vácuo a 50° C, originando assim N-benziloxicarbonil-6-amino-hexanol (44,5 g). P.f. 80-82° C. 42 i

Exemplo 14

Preparação de N-benziloxicarbonil-6-amino-hexanal

Adicionou-se uma solução de brometo de potássio (1,89 g; 16 mmoles) em água (31 ml) a uma solução de N-benziloxicarbonil-6-amino-hexanol (40 g; 0,159 moles), preparada tal como se descreveu no exemplo 13, em cloreto de metileno (600 ml) contendo o radical livre 2,2,6,6-tetrametilpiperidinooxi (TEMPO) (0,248 g; 1,6 mmoles).

Adicionou-se gradualmente à mistura reaccional uma solução de hipoclorito de sódio (215 ml), preparada misturando uma solução de hipoclorito de sódio a 7% (240 ml) com bicarbonato de sódio (4,22 g) e ácido clorídrico a 5% (5 ml), a fim de atingir um pH 8,7 e manteve-se sob agitação a uma temperatura de 10° C.

No fim da adição, depois da separação das fases, lavou-se a fase orgânica com cloreto de metileno (2 x 200 ml), secou-se sobre sulfato de sódio e evaporou-se até à secura.

Obteve-se assim N-benziloxicarbonil-6-amino-hexanal (39,45 g) sob'a forma de um óleo. TLC (acetato de etilo:hexano = 1:1), Rf = 0,41.

Exemplo 15

Preparação de 2-f6-(benziloxicarbonilaminolhexilaminoletanol

Manteve-se sob agitação, à temperatura ambiente, durante duas horas, uma mistura constituída por N-benziloxicarbonil-6-amino-hexanal (35 g; 0,14 moles) e 2-amino-etanol (51,3 g; 0,84 moles) em etanol (250 ml), na presença de peneiros moleculares (3 A). 43

"SI

Filtrou-se depois a mistura reaccional sobre celite e adicionou-se boro hidreto de sódio (6,33 g; 0,168 moles) à solução resultante.

Depois de 4 horas sob agitação à temperatura ambiente, evaporou-se o dissolvente da reacção sob vácuo e recolheu-se o resíduo com água (500 ml) e acetato de etilo (500 ml).

Depois da separação das fases, extraiu-se novamente a fase aquosa com acetato de etilo (200 ml).

Lavaram-se as fases orgânicas recolhidas com uma solução saturada de cloreto de sódio (250 ml), secaram-se sobre sulfato de sódio e evaporaram-se até à secura, obtendo-se assim 2-[6-(benziloxicarbonilamino)hexilamino]etanol (38,36 g). TLC (acetato de etilo:metanol:amónia = 10:2:1), Rf = 0,4. £xemplo 16

Preparação de 2-ÍN-benziloxicarboniI-6-(benziloxicarbonilamino)-hexilaminol etanol

Trabalhando de forma semelhante à descrita no exemplo 9 e usando 2-[6-(benziloxi-carbonilamino)hexilamino]etanol (38,3 g; 0,13 moles), preparado tal como se descreveu no exemplo 15, obteve-se 2-[N-benziloxicarbonil-6-(benziloxicarbonilamino)-hexilaminojetanol sob a forma de um óleo. TLC (acetato de etilo.hexano = 65:35), Rf = 0,45

Exemplo 17

Preparação de metano-sulfonato de 2-fN-benzi]oxicarbonil-6-(benziloxicarbonil-aminolhexilaminoletilo

Trabalhando de forma semelhante à descrita no exemplo 10 e usando 2-[N-benziloxi-carbonil-6-(benziloxicarbonilamino)hexilamino]etanol (20 g; 47,8 mmoles), preparado tal como se descreveu no exemplo 16, obteve-se metano-sulfonato de 2-[N-benziloxi-carbonil-6-(benziloxicarbonilamino)hexilamino]etilo sob a forma de um óleo, usado como tal nas reacções subsequentes.

Exemplo 18

Preparação de (E)-9-fO-f2-fN-benziloxicarbonil-6-(benziloxicarbonilamino)-hexilaminoletilloxima de Eritromicina A

Trabalhando de forma semelhante à descrita no exemplo 11 e usando m-etano-sulfonato de 2-[N-benziloxicarbonil-6-(benziloxicarbonilamino)hexilamino]etilo (24,25 g; 47,8 mmoles), preparado tal como se descreveu no exemplo 17, depois de cromatografía de gel de sílica (eluente cloreto de metileno:metanol:amónia = 95:5:0,5), obteve-se (E)-9--[0-[2-[N-benziloxicarbonil-6-(benziloxicarbonilamino)hexilamino]etil]oxima] de Eritromicina A (36,1 g). TLC (cloreto de metileno:metanol:amónia = 85:15:1,5), Rf = 0,5. RMN de *H (200 MHz, CDC13): δ (ppm): 7,39-7,22 (m, 10H, aromáticos); 5,14-5,05 (m, 4H, 2 CH2 Ph); 3,29 (s, 3H, OCH3); 2,25 (s, 6H, 2 NCH3); 0,80 (t, 3H, O^CH2). 45 45

Exemplo 19

Preparação de (EV9-fO-f2-(6-ammo-hexilamiiio)etilloxima de Eritromicina A

Trabalhando de forma semelhante à descrita no exemplo 12 e usando (E)-9-[0-[2-[N--benziloxicarbonil-6-(benziloxicarbonilamino)hexilamino]etil]oxima] de Eritromicina A, preparado tal como se descreveu no exemplo 18, depois de cromatografía de gel de sílica (eluente cloreto de metileno:metanol:amónia = 85:15:1,5), obteve-se (E)-9-[0-[2--(6-amino-hexilamino)etil]oxima] de Eritromicina A. TLC (cloreto de metileno:metanol:amónia = 85:15:1,5), Rf = 0,2. RMN de I3C (50MHz, CDC13): δ (ppm): 175,18; 171,26; 102,96; 96,28.

Exemplo 20

Preparação de (E)-9-r0-f2-f6-[(2-trifluormetilfenil)metilammolhexilaminoletill-oxima de Eritromicina A (Composto 21)

Adicionaram-se 2-trifluormetilbenzaldeido (0,4 g) e peneiros moleculares (4,5 g; 3 A) a uma solução de (E)-9-[0-[2-(6-(amino-hexilamino)etil]oxima] de Eritromicina A (2 g; 2,24 mmoles), preparada tal como se descreveu no exemplo 19, em etanol (50 ml), mantido sob agitação à temperatura ambiente.

Depois de 2 horas, filtraram-se os peneiros moleculares e adicionou-se paládio em carvão a 10% (0,2 g) à solução resultante.

Colocou-se a mistura reaccional num hidrogenador de Parr que foi carregado com hidrogénio (1 bar).

Depois de uma hora, interrompeu-se a reacção de hidrogenação, filtrou-se o catalisador e evaporou-se o dissolvente. i 46

Purificou-se o resíduo por cromatografia de gel de sílica (eluente cloreto de metileno:metanol:amónia = 95:5:0,5), obtendo-se assim (E)-9-[0-[2-[6-[(2-trifluormetil-fenil)metilamino]hexilamino]etil]oxima] de Eritromicina A (2 g).

Massa (C. I.) (M+H)+= 1050 , RMN de 13C (50MHz, CDC13): δ (ppm): 139,14; 131,88; 130,38; 127,58; 126,81; 125,82.

Trabalhando de forma semelhante, prepararam-se os seguintes compostos: ('E)-9-rO-f2-r6-f3-piridiImetilaminolhexilaminoletilloxima1 de Eritromicina A (Composto 22).

Massa (C. I.) (M+H)+ = 982 RMN de 13C (50MHz, CDC13): δ (ppm): 149,66; 148,39; 135,81; 123,40. (ΈΊ-9-ΙΌ-Γ2-Γ6-IY4-trifluormetilfenil)metilaminolhexilaminoletilloximal de Eritromicina A (Composto 23).

Massa (C. I.) (M+H)+ = 1050 RMN de 13C (50MHz, CDC13): δ (ppm): 144,73; 128,23; 125,25; 124,26. ('E)-9-r0-í2-r6-r('2-hidroxifenil)metilaminolhexilaminoletilloximal de Eritromicina A (Composto 24).

Massa (C. I.) (M+H)+ = 997 ; RMN de 13C (50MHz, CDC13): δ (ppm): 158,37; 128,60, 128,19; 122,54; 118.88;116,32. (EV9-rO-f2-r6-r(3-hidroxifenil)metilamino1hexilamino1etinoxima1 de Eritromicina A (Composto 25).

Massa (C. I.) (M+H)+ = 997 RMNde 13C (50MHz, CDC13): δ (ppm): 157,28; 140,46; 129,56; 119,70; 115,55; 114,89. fEV9-í0-í2-r6-í(4-n.butoxifenil)metilamino1hexilaminoletilloximal de Eritromicina A (Composto 26).

Massa (C. I.) (M+H)+ = 1053 RMN de 13C (50MHz, CDC13): δ (ppm): 158,27; 131,65; 129,40; 114,40. (EV9-rO-r2-f6-r('3-fenoxifenil')metilaminolhexilaminoletinoximal de Eritromicina A (Composto 27).

Massa (C. I.) (M+H)+= 1073 RMN de 13C (50MHz, CDC13): δ (ppm): 157,32; 157,28; 142,69; 129,72; 129,64; 123,16; 122,91; 118,84; 118,52; 117,29. (EV9-í0-í2-[6-r('4-hidroxifenil)metilaminolhexilaminoletilloximal de Eritromicina A (Composto 28).

Massa (C. I.) (M+H)+= 997 RMN de 13C (50MHz, CDC13): δ (ppm): 156,49; 130,00; 128,87; 115,88. ÍEV9-r0-r2-r6-r(4-fenoxifenil'lmetilaminolhexilaminoletilloximal de Eritromicina A (Composto 29).

Massa (C. I.) (M+H)+ = 1073 RMN de 13C (50MHz, CDC13): δ (ppm): 157,43; 156,05; 135,43; 129,69; 129,49; 123,07; 118,92; 118,72; 118,67. (Ey9-r0-r2-r6-r(bifenil-4-il)metilaminolhexilaminoletilloximal de Eritromicina A (Composto 30).

Massa (C. I.) (M+H)+ = 1057 RMNde 13C (50MHz, CDCI3): δ (ppm): 140,94; 139,86; 139,40; 128,74; 128,58; 127,13; 127,03. ('EV9-f0-í2-r6-rr2-furilmetilamino>)hexilaminoletilloximal de Eritromicina A (Composto 31).

Massa (C. I.) (M+H)+ = 971 RMN de 13C (50MHz, CDCI3): δ (ppm): 153,92; 141,73; 110,08; 106,81.

Exemplo 21

Preparação de (EV9-f0-f2-f6-í(3.5-dicloro-2-hidroxifenil)metilamiPolhexiIamipol-etilloximal de Eritromicina A (Composto 32)

Adicionaram-se peneiros moleculares (6 g; 3 A) e 3,5-dicloro-2-hidroxibenzaldeido (0,535 g; 2,8 mmoles) a uma solução de (E)-9-[0-[2-(6-amino-hexiIamino)etil]oxima] de Eritromicina A (2,5 g; 2,8 mmoles), preparada tal como se descreveu no exemplo 19, em etanol anidro (100 ml).

Manteve-se a mistura reaccional sob agitação à temperatura ambiente e, depois de 2 horas, filtraram-se os peneiros moleculares e adicionou-se boro hidreto de sódio (0,106 g; 2,89 mmoles), gota a gota, à solução resultante.

Depois de 3 horas sob agitação, evaporou-se o dissolvente sob pressão reduzida e purificou-se o resíduo por cromatografía de gel de sílica (eluente cloreto de metileno:metanol:amónia = 85:15:1,5), obtendo-se assim (E)-9-[0-[2-[6-[(3,5-dicloro-2--hidroxifenil)metilamino]hexilamino]etil]oxima] de Eritromicina A (2,2 g).

Massa (C. I.) (M+H)+ = 1066 RMN de 13C (50MHz, CDC13): δ (ppm): 153,43; 128,43; 126,42; 124,41; 122,91; 121,61. 49

Trabalhando de forma semelhante, prepararam-se os seguintes compostos: ("EV9-[0-r2-í6-rr2-nitrofenils)metilamino1hexilaminoletilloxima] de Eritromicina A (Composto 33).

Massa (C. I.) (M+H)+ = 1027 RMN de 13C (50MHz, CDC13): δ (ppm): 149,14; 135,79; 133,13; 131,26; 127,87; 124,70. ('E')-9-r0-r2-r6-r(3-mtrofenil)metilaminolhexilaminoletilloximal de Eritromicina A (Composto 34).

Massa (C. I.) (M+H)+= 1027 RMN de 13C (50MHz, CDC13): 5 (ppm): 148,37; 142,87; 134,17; 129,22; 122,81; 121,96. fEV9-[0-[2-f6-r(4-nitrofenil)metilaminolhexilaminoletil1oximal de Eritromicina A (Composto 35).

Massa (C. I.) (M+H)+ = 1027 RMN de 13C (50MHz, CDC13): 5 (ppm): 148,41; 147,00; 128,59; 123,60. (EV9- Γ0- Γ2-Γ6-ΙΥ4-hidroxi-3-nitrofenil)metilamino1hexilaminoletil1 oximal de Eritromicina A (Composto 36).

Massa (C. I.) (M+H)+= 1043 RMN de 13C (50MHz, CDC13): δ (ppm): 157,29; 137,40; 134,05; 128,01; 125,23; 121,70; (E>9-rO-r2-r6-í(3-hidroxi-4-nitrofeniDmetilamino1hexilaminoletiHoximal de Eritromicina A (Composto 37).

Massa (C. I.) (M+H)+ = 1043 50

RMN de 13C (50MHz, CDC13): δ (ppm): 155,50; 151,98; 132,51; 125,13; 119,67; 118,59. £xemplo 22

Preparação de (El-9-[0-f2-ÍN-metil-6-(N’-metil-N’-feDÍlmetilaminolhexilaminol-etilloximal de Eritromicina A (Composto 38)

Adicionaram-se, por esta ordem, uma solução aquosa de formaldeído a 37% (2 ml; 26,6 mmoles) e paládio em carvão a 10% (0,82 g) a uma solução de (E)-9-[0-[2-[-6--(fenilmetilamino)hexilamino]etil]oxima] de Eritromicina A (2 g; 2 mmoles), preparada tal como se descreveu no exemplo 12, numa mistura de etanol:água = 1:1 (20 ml) mantida sob agitação à temperatura ambiente.

Colocou-se a mistura reaccional num hidrogenador de Parr carregado com hidrogénio (1 bar). 2 Horas depois, filtrou-se a mistura reaccional para eliminar o catalisador e evaporou-se a solução resultante até à secura.

Purificou-se o resíduo obtido por cromatografia em gel de sílica (eluente cloreto de metileno:metanol:amónia = 90:10:1), originando (E)-9-[0-[2-[N-metil-6-(N,-metil-N’--fenilmetilamino)hexilamino]etil]oxima] de Eritromicina A (1,8 g).

Massa (C. I.) (M+H)+= 1009 RMN de 13C (50MHz, CDClj): 5 (ppm): 139,20; 129,04; 128,17; 126,86.

Trabalhando de forma semelhante, preparou-se 0 seguinte composto: rEV9-r0-r2-rN-metil-6-[N,-metil-N’-(4-trifluormetilfenil)metilaminolhexilaminol-etilloximal de Eritromicina A (Composto 39)

Massa (C. I.) (M+H)+= 1078 RMN de 13C (50MHz, CDC13): δ (ppm): 143,65; 129,12; 129,03; 125,10; 124,29.

Exemplo 23

Actividade farmacológica a) Actividade antibacteriana in vitro A determinação das concentrações de inibição mínimas (MIC), relativamente às bactérias Gram-positivas e Gram-negativas, foi levada a cabo através do micrométodo da diluição gradual do caldo em séries duplas [National Committee for Clinicai Laboratory Standards, 1990; Métodos para ensaios de diluição da susceptibilidade antimicrobiana relativamente a bactérias que crescem aerobicamente; Padrões aprovados M7-A2-NCCLS, Villanova, Pa.], usando o Caldo de Mueller Hinton (MHB) como meio de cultura.

No caso de bactérias exigentes, adicionou-se ao meio soro de cavalo a 5% (Streptococcus pneumoniae e Streptococcus piogenes).

Usaram-se como macrólidos de referência a Roxitromicina e a Claritromicina [índice Merck, IX Ed., N° 8253 e 2340, respectivamente].

Determinou-se o MIC, expresso como (pg/ml), depois da incubação das microplacas a 37° C durante 18 horas, avaliando-se a concentração antibiótica mais baixa que permite a inibição do desenvolvimento bacteriano. 52

b) Actividade antibacteriana in vivo

Avaliou-se a eficácia terapêutica , expressa como dose de protecção média (PD50), dos compostos considerados de fórmula (I), por meio da infecção pulmonar experimental induzida no ratinho pelo Streptococcus piogenes C 203.

Usaram-se ratinhos albinos Charles River (estirpe CD 1), com um peso de corpo compreendido entre 23-35 g, divididos em grupos de 6 por gaiola e alimentados normalmente com uma dieta padrão e água ad libitum.

Administrou-se por via intranasal uma suspensão de S. piogenes C 203 (correspondente a cerca de 108 UFC) em caldo de triptose (0,05 ml), a cada um dos ratinhos anestesiado com uma mistura de éter etílico e clorofórmio.

Os compostos em exame foram administrados por via intraperitoneal numa dose única, em suspensão Tween a 0,2%, 24 horas antes e 1 hora depois da infecção. A observação da mortalidade dos ratinhos prolongou-se até 10 dias desde a infecção. O cálculo do PD50, expresso como (mg/kg), foi levado a cabo através da análise de probit.

Para alguns compostos representativos de fórmula (I), a actividade antibacteriana in vitro contra os microrganismos Gram-positivos (tabela 1) e os microrganismos Gram-negativos (tabela 2), e os valores da actividade antibacteriana in vivo (tabela 3), são referidos a seguir.

Tabela 1

Actividade antibacteriana in vitro. expressa como concentração de inibição mínima MIC (pg/ml), dos compostos 2, 4-12, 16-19, 21, 23-38 e dos compostos de referência Roxitromicina e Claritromicina, contra os microrganismos Gram-positivos, tais como o Streptococcus pneumoniae BS 3, o Streptococcus pneumoniae BS 4, o Streptococcus piogenes A 26, o Streptococcus piogenes C 203, o Enterococcus faecalis ATCC 29212 e o Stafilococcus aureus PV 14. 54

MIC (pg/ml) composto S. pneumoniae BS 3 S. pneumoniae BS 4 S. piogenes A 26 S. piogenes C 203 E. faecalis ATCC 29212 S. aureus PV 14 2 0,0156 0,0312 0,0156 0,0312 8 1 4 0,0156 0,0156 0,0156 0,0039 4 0,25 5 0,0156 0,0312 0,0312 0,0156 4 1 6 0,0156 0,0312 0,0312 0,0156 8 0,25 7 0,0625 0,0625 0,0312 0,0156 4 0,5 8 0,25 0,5 0,0312 0,0078 8 0,5 9 0,0078 0,0078 0,0078 0,0039 4 0,25 10 0,0156 0,0156 0,0078 0,0039 4 0,5 11 0,25 0,5 0,0625 0,0312 16 0,5 12 0,25 0,5 0,0625 0,0312 16 0,25 16 0,0156 0,0156 0,0156 0,0039 4 0,25 17 0,0312 0,0625 0,0625 0,0039 4 0,25 18 0,0156 0,0312 0,0312 0,0078 2 0,25 19 0,0156 0,0078 0,0156 0,0156 2 1 21 0,0078 0,0039 0,0078 0,0156 2 1 23 0,0156 0,0078 0,0156 0,0156 2 1 24 0,0078 0,0156 0,0156 0,0039 4 0,25 25 0,25 0,25 0,125 0,0312 8 0,125 26 0,0156 0,0156 0,0312 0,0078 1 0,25 27 0,0078 0,0078 0,0156 0,0078 1 0,5 28 0,25 0,25 0,25 0,125 16 0,125 29 0,0078 0,0156 0,0312 0,0039 1 0,5 30 0,0156 0,0156 0,0156 0,0078 1 0,5 31 0,0078 0,0078 0,0078 0,0039 4 0,5 32 0,0625 0,0312 0,0625 0,0156 2 0,5 33 0,0039 0,0039 0,0039 0,00097 2 0,5 34 0,0019 0,0039 0,0078 0,0039 1 0,25 35 0,0039 0,0039 0,0078 0,0019 0,5 0,25 36 0,0625 0,0625 0,0625 0,0078 16 0,5 37 0,0312 0,0312 0,0312 0,0039 8 0,5 38 0,0078 0,0039 0,0156 0,0078 8 0,5 Roxitromicina 0,0312 0,0625 0,0625 0,0625 4 1 Claritromicina 0,0078 0,0156 0,0078 0,0078 1 0,25 55

I s|/ &

Os dados acima referidos indicam claramente que os compostos de fórmula (I), objecto da presente invenção, são dotados de uma actividade antibacteriana substancialmente comparável à da Claritromicina e Roxitromicina, relativamente aos microrganismos Gram-positivos.

Tabela 2

Actividade antibacteriana in vitro. expressa como concentração de inibição mínima MIC (pg/ml), dos compostos 2, 4-12, 16-19, 21, 23-38 e dos compostos de referência Roxitromicina e Claritromicina, contra os microrganismos Gram-negativos, tais como a Escherichia Coli ATCC 25922 e Klebsiella pneumoniae ZC 2. 56 c ^•íV-v·

'1 .O

Composto MIC ( pg/ml) E. coli ATCC 25922 K. pneumoniae ZC 2 2 16 64 4 4 16 5 8 32 6 4 16 7 4 16 8 4 16 9 4 16 10 4 16 11 8 16 12 8 32 16 2 8 17 4 16 18 2 ' 16 19 2 8 21 4 16 23 1 4 24 4 8 25 8 16 26 1 2 27 1 2 28 16 32 29 1 2 30 1 2 31 4 16 32 4 16 33 4 16 34 1 8 35 1 4 36 8 32 37 4 16 38 8 32 Roxitromicina 28 256 Claritromicina 64 128 s 57 •Λ A actividade antibacteriana dos compostos de fórmula (I) contra os microrganismos Gram-negativos, tais como a Escherichia coli e a Klebsiella pneumoniae acabou por ser marcadamente mais elevada do que a de ambos os compostos de referência.

Tabela 3

Actividade antibacteriana in vivo, expressa como dose de protecção média PD50 (mg/kg), 24 horas antes e 1 hora depois da infecção pulmonar experimental provocada no ratinho pelo Streptococcus piogenes C 203, dos compostos 4, 10, 16-19, 21, 23, 26--27, 29-30, 33-35 e 38 e dos compostos de referência Roxitromicina e Claritromicina.

Composto PD50 (mg/kg) Infecção pulmonar (S. piogenes C 203) 1 hora depois da infecção 24 horas antes da infecção 4 0,9 4,78 10 2,36 5,8 16 3,6 10,21 17 1,17 8,16 18 1,32 2,23 19 1,95 4,84 21 0,82 5,95 23 1,46 3,49 26 6,11 6,11 27 15,6 15,6 29 7,65 6,1 30 19,3 19,3 33 1,61 6,11 34 1,88 6,8 35 3,00 6,0 38 11,8 11,8 Roxitromicina 0,9 >25 Claritromicina 3,25 >50 58

Os compostos de fórmula (I) acabaram por ser activos in vivo e o seu perfil de actividade indica que os referidos compostos apresentam uma duração de acção e uma meia-vida de eliminação no tecido signifícativamente mais elevada do que a dos compostos de referência.

Lisboa, ~ 2 JUM. 2000 O Agente Oficial da Propriedade Industrial

Américo da Silva Corvalbo

Agente OSwP' Propri«:r&. :«itíusbial R. Castilho, 20'» - 3.' E - 1070 LÍS80A Telefs. 38513 39 - 38546 13.

Claims (5)

1. (I) Reivindicações 1) Composto de fórmula Ri R2 A-(CH2)„-N-(CH2)m-N-(CH2)r-0-N=M em que A é um grupo fenilo ou um heterociclo com 5 ou 6 membros contendo 1 ou mais heteroátomos seleccionados de entre azoto, oxigénio e enxofre, opcionalmente substituídos por 1 a 3 grupos, iguais ou diferentes, seleccionados de entre grupos alquilo em C1-C4 ou alcóxi lineares ou ramificados, grupos alquilenodioxi em Ci-C2, grupos alquilsulfonilo em Ci--C4, grupos fenilo, fenoxi, hidroxi, carboxi, nitro, halogéneo e trifluormetilo ; Ri e R2, iguais ou diferentes, representam um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo em C1-C4 linear ou ramificado; n é 1 ou 2; m é um número inteiro compreendido entre 1 e 8; r é um número inteiro compreendido entre 2 e 6; M representa um grupo de fórmula

   CH OCR CH 3 3 3 em que R3 é um átomo de hidrogénio ou um grupo metilo; e seus sais farmaceuticamente aceitáveis.
2. 2) Composto de acordo com a reivindicação 1, que têm a configuração E.
3. 3) Composto de acordo com a reivindicação 1, em que A representa um grupo fenilo ou um heterociclo seleccionado de entre piridina e furano, opcionalmente substituído por de 1 a 3 grupos seleccionados de entre grupos hidroxi, metoxi, metilenodioxi, n.butoxi, fenoxi, fenilo, metilsulfonilo, nitro, halogéneo e trifluormetilo; Ri e R2, sendo iguais, representam um átomo de hidrogénio ou um grupo metilo; R3 representa um átomo de hidrogénio.
4. 4) Composto de acordo com a reivindicação 1, em que A representa um grupo fenilo opcionalmente substituído por um grupo seleccionado de fenoxi, nitro e trifluormetilo; Ri e R2, que são iguais, representam um átomo de hidrogénio ou um grupo metilo; n é igual a 1; m é igual a 6; r é igual a 2; R3 representa um átomo de hidrogénio.
5. 5) Composição farmacêutica que contém uma quantidade terapeuticamente efectiva de um ou mais compostos de fórmula (I) em mistura com um agente veicular farmaceuticamente aceitável. Lisboa, - I JUN. 2000 O Agente Oficial de Propriedade Industrial

   Agente Oficiai de Propriedade industria! R.Casiiiiio, 201-3.’ E -10/0 LiSBGA Telefs. 38513 38 - 38545 13