FI66879C - Foerfarande foer framstaellning av terapeutiskt anvaendbara olandomycinderivat - Google Patents

Description

«λΕμΠ ral Μ4, KUULUTUSjULKAISU

jöA M <11> UTLAGGNINGSSKItlFT 668 79 C ^ Pat-r.tti ^y”;inofcty 10 12 1934 (51) «Cw.lt/hfcO.3 C 07 H 17/08 SUOMI-FINLAND (M) 790005 (2¾ AMOknhe^c 02.01.79 ' ' (23) AHwpaM—GlklfhMdat 02.01.79 (41) TalhtΗΜμΜ—MvfcoffmtRg 04.07.79

Patentti- ja rekisteri Kali Itu· f1_ ...._______ . ||-ΤτΤπτ

Patent- och raglstarstyialsan 1 ' AMAteTod^d «UltrlfUn Frtttcararf 31.08.84 (32)(33)(31) nrrdstqr ·*«βΗΜ«·-β^ΙΝ prlertw 03.01.78 23.10.78 USA(US) 866890, 952411 (71) Pfizer Inc., 235 East 42nd Street, New York, New York, USA(US) (72) Gene Michael Bright, Groton, Connecticut, USA(US) (74) Oy Kolster Ab (54) Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisten oleandomysiinijohdannaisten valmistamiseksi - Förfarande för framställning av terapeutiskt användbara oleandomycinderivat

Keksintö koskee menetelmää terapeuttisesti käyttökelpoisten kaavan I mukaisen oleandomysiinijohdannaisten ja niiden farmaseuttisesti hyväksyttävien suolojen valmistamiseksi, -o ncch3>, r2°vA·,

h3c ^fX^LA

Ri° y"° ch l yXCR- H3CH3c\xor°r q o

|| nh-C-C-R

0 0CH3 2 66879 jossa kaavassa ja toisistaan riippumatta tarkoittavat vetyä tai C2_£“alkanoyyliä, Q on happi tai rikki ja Rg on tienyyli, fu-ryyli, pyridyyli, C-^-alkyyli tai

Ary Y

ryhmä—\Qy/ > jossa X ja Y toisistaan riippumatta tarkoittavat vetyä, klooria, bromia, fluoria, C^_4~alkyyliä tai C-^_1+-alkoksia tai toinen substituenteista X ja Y on nitro tai amino. Nämä yhdisteet ovat bakteerinvastaisia aineita.

Fermentoimalla tuotettu makrolidiantibiootti oleandomysiini kuvattiin ensimmäisen kerran US-patentissa 2 757 123. Sen kaava ja absoluuttinen konfiguraatio on seuraava: N(CH_)„ r-9 “Vk'

o V f J

Hgcj UCH3 o° CH3

HO "‘i'll |V

Jn. CHq Qi ^ 3h3c*‘Ov.....

Ύ CH3 OH

0 1 och3

Se koostuu kolmesta päärakenneosasta: L-oleandroosi-osasta, deso-samiini-osasta ja oleandolidi-osasta.

Oleandomysiinijohdannaisten valmistus on keskittynyt pääasiassa yhden tai useamman, asemissa 2', 4" ja 11 olevan hydrok-syyliryhmän esteröintiin. US-patentissa 3 033 219 on kuvattu mono-, di- ja triasyyliestereitä, joissa asyyliosa on johdettu 2-6 hiili-atomia sisältävästä alifaattisesta monokarboksyylihaposta.

Oleandomysiinin aminohydriinijohdannaisia ovat kuvanneet Kastrons et ai., Khim. Geterosikl Soedin (2), 168-71 (1974); C.A. 80, 145986η (1974). Yhdisteet, joille ei ole esitetty mitään käyttöä valmistetaan käsittelemällä oleandomysiiniä dialkyyliamiinil-la tai heterosyklisellä amiinilla suljetussa putkessa 20 tunnin ajan 30°C:ssa, jolloin asemassa 8 oleva epoksidiryhmä reagoi.

Nyt on havaittu, että kaavan I mukaisilla oleandomysiini- 3 66879 johdannaisilla ja niiden farmaseuttisesti hyväksyttävillä happo-additiosuoloilla on merkittävä bakteerinvastainen vaikutus in vitro ja että monilla näistä ilmenee in vivo -vaikutus annettaessa niitä parenteraalisesti tai oraalisesti etenkin grampositii-visia mikro-organismeja vastaan.

Esimerkkeinä kaavan I mukaisten yhdisteiden farmaseuttisesti hyväksyttävistä happoadditiosuoloista mainittakoon hydro-kloridi, hydrobromidi, fosfaatti, sulfaatti, formiaatti, asetaat-ti, propionaatti, butyraatti, sitraatti, glykolaatti, laktaatti, tartraatti, malaatti, maleaatti, fumaraatti, glukonaatti, stea-raatti, mandelaatti, pamoaatti, bentsoaatti, sukkinaatti, laktaatti, p-tolueenisulfonaatti ja aspartaatti.

Edullisia kaavan I mukaisia yhdisteitä ovat ne, joissa R^" on alkanoyyli tai vety, on vety ja Q:lla ja :11a on alla esitetyt arvot:

Q R3 X Y

0 ] -<©Vy H H

S J '—' Cl alkoksi S *7 tienyyli, furyyli, 0 J pyridyyli

Suositeltavimpia yhdisteitä ovat ne, joissa R-^ on asetyyli tai vety; R2 on vety ja Q:lla ja R^:11a on alla esitetyt arvot:

Q R3 X Y

; ] -4-’ * S 0 2-furyyli 0 J -tienyyli

Kaavan I mukaiset yhdisteet, niiden epimeeriset muodot mukaan lukien ja niiden farmaseuttisesti hyväksyttävät suolat ovat tehokkaita bakteerinvastaisia aineita grampositiivisten mikro-organismien, kuten organismien Staphylococcus aureus ja Streptococcus pyogenes in vitro ja monet niistä ovat aktiivisia in vivo parenteraalista tietä ja suun kautta annettaessa. Monet yhdis- " 66879 teistä ja niiden suoloista) ovat myös aktiivisia tiettyjä gramnega-tiivisia mikro-organismeja, kuten kokkeja Pasteurella multocida ja Neisseria sicca,vastaan.

Kaavan I mukaisia oleandomysiinijohdannaisia ja niiden farmaseuttisesti hyväksyttäviä happoadditiosuoloja voidaan valmistaa siten, että oleandomysiinijohdannainen, jonka kaava on — 0 N(CH ) Λ V r9o i h3c h3c 0CH3 jossa ja R2 tarkoittavat samaa kuin edellä, saatetaan reagoimaan inertissä liuottimessa asylointiaineen kanssa, joka sisältää Q o

M M

asyyliryhmän -C-C-R3, jossa Q ja R^ tarkoittavat samaa kuin edellä·, ja haluttaessa saatu kaavan I mukainen yhdiste, jossa toinen substituent eista X ja Y on nitro, hydrogenoidaan käyttäen jalometalli-katalysaattoria kaavan I mukaisen yhdisteen saamiseksi, jossa toinen substituenteista X ja Y on amino, ja/tai kaavan I mukaiselle yhdisteelle, jossa R2 on C2_g-alkanoyyli, suoritetaan solvolyy-si kaavan I mukaisen yhdisteen saamiseksi, jossa R2 on vety, ja/tai kaavan I mukainen yhdiste muutetaan farmaseuttisesti hyväksyttäväksi happoadditiosuolaksi.

Sopivia asylointiaineita ovat anhydridit, happoatsidit ja karboksyylihapot sekoitettuina karbodi-imidien tai alkoksiasetylee-nien tai muiden dehydratiivisten kytkentäaineiden kanssa, "aktivoidut esterit", kuten tioliesterit ja fenoliesterit, ja happohalo-genidit. Kun Q on happi, suositeltava asylointiaine on karboksyyli-happo dehydratiivisen kytkennän aikaan saavan aineen,kuten karbodi-imidin, alkoksiasetyleenin, N,N'-karbonyylidi-imidatsolin, N,N’-karbonyyli-s-triatsiinin, N-hydroksiftaali-imidin, N-hydroksisukkiini-imidin ja muiden alan asiantuntijoiden tuntemien aineiden läsnäollessa. Suositeltavia kytkentäaineita ovat karbodi-imidit, joista monet 5 66879 ovat helposti saatavissa. Disykloheksyylikarbodi-imidi on suositeltavin kytkentäaine, sillä reaktion sivutuote, disykloheksyyliurea ei liukene liuottimiin, kuten dioksaaniin, tetrahydrofuraaniin, kloroformiin ja dietyylieetteriin, ja on helposti poistettavissa reaktioseoksesta yksinkertaistaen siten halutun tuotteen talteenottoa ja eristämistä.

Samoin etyylikarbodi-imidometyloidun polystyreenin käyttö (Synthesis, n:o 3, 208 /Abstract n:o **682.7 1976) kytkentäaineena tarjoaa mukavan tavan päästä haluttuihin asyylijohdannaisiin, sillä ei muodostu mitään asyyliureasivutuotetta monimutkaistamaan halutun asyylijohdannaisen talteenottoa.

Suositeltavia kytkentäaineita ovat myös monet alifaattiset karbodi-imidit, joilla on tertiäärisiä tai kvaternäärisiä amiini-substituentteja, jotka saavat aikaan sivutuote-ureajohdannaiset liukenemaan laimeaan happoon tai veteen ja helpottavat halutun reaktiotuotteen erottamista. Esimerkkejä sellaisista alifaattisis-ta karbodi-imideistä ovat l-sykloheksyyli-3-(4-dietyyliaminosyklo-heksyyli)-karbodi-imidi, 1,3-di-(H-dietyyliaminosykloheksyyli)kar-bodi-imidi, 1-sykloheksyyli- 3-(/3 -dietyyliaminoetyyli)karbodi-imidi , l-sykloheksyyli-3-(2-morfolinyyli-(4)-etyyli)karbodi-imidi ja vastaava meto-p-tolueenisulfonaatti.

Reaktio suoritetaan reaktion suhteen inertissä liuottimessa. Käytettäessä tertiäärisellä tai kvaternäärisellä amiinilla substi-tuoitua alifaattista karbodi-imidiä liuottimena, käytetään yleensä laimeaa happoa tai vettä. Puhdasta vettä voidaan käyttää liuottimena tai vaihtoehtoisesti veden ja veteen sekoittuvan liuottimen seosta. Sellaisissa tapauksissa vesi toimii rinnakkaisliuottimena. Ase-tonitriili on käyttökelpoinen liuotin, kun kytkentäaineena on kvaternäärisellä amiinilla substituoitu alifaattinen karbodi-imidi.

Kun kytkentäaine on muu karbodi-imidi kuin tertiäärisillä tai kva-ternäärisillä amiineilla substituoitu alifaattinen karbodi-imidi, on käytettävä orgaanista liuotinta. Sellaisille kytkentäaineille sopivia liuottimia ovat dietyylieetteri, bentseeni, dioksaani, tetrahydrofuraani, kloroformi ja metyleenikloridi. Alkoholeja voi myös käyttää liuottimena, mutta ne eivät ole yhtä suositeltavia niiden sivureaktioiden vuoksi karbodi-imidien kanssa.

Dehydratiiviset kytkentäreaktiot suoritetaan yleensä lie- 6 66879 vissä olosuhteissa; esimerkiksi lämpötiloissa, jotka vaihtelevat noin 20°C:sta noin 50°C:een. Dehydratoivan kytkentäaineen, asyloi-van aineen ja kaavan II amiinin moolisuhde vaihtelee välillä noin 1:1:1 - 1:1:1,5.

Kun Q on rikki, suositeltava asylointiaine on happokloridi, jolla on kaava R^-Ci=0)-C(=S)-C1, koska sellaiset aineet ovat suhteellisen helposti saatavissa. Suositeltava menettely käsittää reaktion suorittamisen reaktion suhteen inertissä liuottimessa hap-poakseptorin läsnäollessa. Kaavan II amiinin ylimäärää voidaan käyttää happoakseptorina. Vaihtoehtoisesti happoakseptorina voidaan käyttää tertiääristä alkyyliamiinia, kuten 3-12 hiiliatomia sisältävää trialkyyliamiinia ja mieluimmin trietyyliamiinia, tai muita yleisesti käytettyjä tertiäärisiä orgaanisia emäksiä, kuten pyridiiniä, N,N'-dimetyylianiliinia tai N-metyylimorfoliinia. Reaktio suoritetaan yleensä inertissä kaasussa, jotta vältettäisiin ilman hapen mahdolliset vaikutukset reagensseihin. Vaihtoehtoisesti kaavan II yhdisteen asylointi happohalogenidillä suoritetaan alan asiantuntijoiden hyvin tuntemissa Schotten-Baumann-olosuhteissa.

Asyylitioformyylikloridireagenssin moolisuhde kaavan II amiinireagenssiin nähden voi vaihdella laajalti, esim. noin 1:1 -noin 1:10. Moolisuhteita alle 1:1 vältetään taloudellisista syistä reagensseista tavallisesti vaikeimmin saatavissa olevan amiinirea-genssin mahdollisimman täydellisen reagoinnin varmistamiseksi. Suurempia suhteita kuin 1:10 käytetään harvoin, sillä ne eivät näytä parantavan lopullisen tuotteen saantoa. Käytettäessä muuta happo-akseptoria kuin kaavan II amiinireagenssia itseään, saadaan tyydyttäviä tuotesaantoja amiinireagenssin moolisuhteen ollessa noin 1:1 - noin 1:3 asyloivaan aineeseen nähden. Reaktio on oleellisesti asylointireaktio.

Sopivia reaktion suhteen inerttejä liuottimia (toisin sanoen sellaisia, jotka eivät merkittävässä määrin reagoi reagenssien tai tuotteiden kanssa) ovat etyleeniglykolin dimetyylieetteri, tetra-hydrofuraani, n-dibutyylieetteri , dietyylieetteri, tolueeni, aseto-nitriili ja metyleenikloridi. Liuottimen peruskriteerinä on se, että se pysyy nestemäisenä niissä suhteellisen alhaisissa lämpötiloissa, joissa reaktio suoritetaan, ja tietenkin se, että se liuottaa reagenssit huomattavassa määrin, ellei kokonaan.

66879

Reaktio suoritetaan lämpötiloissa noin -30 - 50°C:ssa. Tämä lämpötilaväli tarjoaa tyydyttävän reaktionopeuden ja eliminoi tai minimoi sivureaktioita.

Kaavan I yhdisteet, joissa on amino-substituoitu fenyyli-ryhmä, valmistetaan mukavasti pelkistämällä vastaava yhdiste, jossa Rg on nitro-substituoitu fenyyliryhmä. Reaktio saadaan helposti aikaan katalyyttisellä hydrauksella käyttäen jalometallikatalyyt-tiä, kuten palladiumia, etenkin palladium/hiili-seosta reaktion suhteen inertissä liuottimessa huoneen lämpötilassa.

Tarvittavat glyoksyylihapporeagenssit, joilla on kaava R^-C(=0)-C(=0)-OH, ovat tunnettuja yhdisteitä, tai ne ovat helposti valmistettavissa alan asiantuntijoiden tuntemilla menetelmillä. Sopivia menetelmiä yllä olevan kaavan mukaisen glyoksyylihapon tai ^-ketohappojen valmistamiseksi on käsitellyt Water julkaisussa Chemical Reviews, 41, 585-598 (1947).

Tarpeelliset asyylitioformyylikloridit, joilla on kaava Rg-C(=0)-C(=S)-C1, valmistetaan Oka'n et ai julkaisussa Tetrahedron Letters, 2783-2786 (1976) kuvaamalla menetelmällä, joka käsittää sopivan kaavan Rg-C( =0)-051^ mukaisen ketonin reaktion 10-15 mooli-ekvivalentin kanssa tionyylikloridia 0,02 pyridiinimooliekvivalen-tin läsnäollessa palautusjäähdytyslämpötilassa.

Siinä tapauksessa, että kaavan II mukainen lähtöaineamiini on epimeerien seos, yllä kuvatut asylointireaktiot tuottavat epimee-riseoksen (esitetty aaltoviivalla kaavan I mukaisissa yhdisteissä), jonka komponentit voidaan haluttaessa erottaa. Raakatuotteen kloro-formiliuoksen pylväskromatografia silikageelillä ja eluointi sopivilla liuottimilla, esim. kloroformi-3 % metanoli, tarjoaa mukavan menetelmän epimeerien erottamiseksi. Kyseisessä selostuksessa ja kuvauksissa on selvää, että vaikka yhdisteet on luetteloitu 4"-substituoiduiksi aminojohdannaisiksi, molemmat epimeerit ja niiden seokset lasketaan mukaan. Käytettäessä lähtöaineena jotain kaavan II mukaista „-epimeeriä, on asyloinnin tuloksena tietenkin vastaava kaavan I mukainen ,,-substituoitu yhdiste.

Kaavan I mukaisten yhdisteiden happoadditiosuolat valmistetaan helposti käsittelemällä kaavan I mukaisia yhdisteitä vähintään ekvimolaarisella määrällä happoa kaavan I mukaiseen yhdisteeseen nähden reaktioinertissä liuottimessa. Kun kaavan I mukaisessa yhdisteessä on enemmän kuin yksi emäksinen ryhmä, kun emäksisen 8 66879 ryhmän tyydyttämiseen riittävän happomäärän lisääminen mahdollistaa polyhappoadditiosuolojen muodostumisen. Happoadditiosuolat otetaan talteen suodattamalla, mikäli ne eivät liukene reaktion suhteen inerttiin liuottimeen, saostamalla lisäämällä ainetta, johon mainittu suola ei liukene, tai haihduttamalla liuotin.

11-mono-alkanoyyli-, 2’-mono-alkanoyyli- ja 11,2'-dialkano-yyli-4"-deokso-4,,-amino-oleandomysiinireagenssit (kaava II) valmistetaan vastaavien 11-mono-alkanoyyli-, 2'-mono-alkanoyyli- ja 11,2’-dialkanoyyli-4"-deokso-4"-okso-oleandomysiinien pelkistäväl- aminoinnilla käyttäen palladium/hiili-seosta, vetyä (noin 0,7 -2 360 kg/cm ) ja ammoniumasetaattia sopivassa liuottimessa (CHgOH, i-C3H?0H). Vaihtoehtoisesti pelkistävänä aineena voidaan käyttää natriumsyanoboorihydridiä palladium/hiili-seoksen ja vedyn asemesta. De-esteröity johdannainen valmistetaan mukavasti vastaavien 2 ' -monoalkanoyyli-4"-deokso-4"-amino-oleandomysiinien solvolyysillä.

Kaavan I mukaisten bakteerinvastaisten yhdisteiden valmistuksessa käytettävien lähtöaineiden stereokemiallinen rakenne on sama kuin luonnon aineella. Oleandomysiinin, erythromysiinä A:n ja B:n, erythromysiini A:n, 11,12-karbonaatin 6,9-hemiketaalies-terin 4"-hydroksiryhmien hapettaminen ketoniksi ja mainitun keto-nin muuttaminen sitten 4"-amiineiksi tarjoaa 4"-substituentin ste-reokemialliselle rakenteelle tilaisuudet poiketa luonnontuotteen rakenteesta. Näin ollen muutettaessa 4"-okso-reagensseja amiineiksi, on mahdollista, että muodostuu epimeerisiä amiineja. Käytännössä havaitaan molempien epimeeristen amiinien olevan läsnä lopullisessa tuotteessa vaihtelevina suhteina riippuen synteesimenetelmän valinnasta. Mikäli erotettu tuote sisältää vallitsevasti yhtä epi-meeriä, mainittu epimeeri voidaan puhdistaa sellaisilla menetelmillä, kuten toistokiteytys sopivasta liuottimesta, kunnes vakio sulamispiste saavutetaan. Toinen epimeeri, jota oli vähäinen määrä alunperin erotetussa materiaalissa, on vallitsevana tuotteena emä-liuoksessa. Se voidaan ottaa sieltä talteen alan ammattimiehen tuntemilla menetelmillä, kuten haihduttamalla emäliuos ja kiteyttämällä jäännös toistuvasti, kunnes saavutetaan vakio sulamispiste, tai sitten kromatografisesti. Vaikkakin epimeeristen amiinien seos voidaan erottaa alan ammattimiehen tuntemilla menetelmillä, on käytännöllisistä syistä yleensä edullista käyttää mainittua seosta 9 66879 sellaisenaan reaktiosta erotettuna. H"-aminoreagenssien epimeeri-seosta käytettäessä saadaan tietenkin tulokseksi asyloitujen tuotteiden epimeerinen seos. Näin tuotettu epimeeriseos voidaan erottaa alan ammattimiehen tuntemilla menetelmillä. Tietyn yhdisteen molemmat epimeerit osoittavat kuitenkin samantyyppistä vaikutusta ja niiden erottaminen ei aina ole välttämätöntä, mutta toivottavaa.

Uusilla oleandomysiinijohdannaisilla on monia grampositii-visia mikro-organismeja vastustava in vitro vaikutus ja tiettyjä muodoltaan pallomaisia ja ellisoidisia gramnegatiivisia mikro-organismeja vastustava vaikutus. Niiden vaikutus eri mikro-organismeja vastaan on helppo osoittaa in vitro-testeillä aivo-sydän-infuusioväliaineessa tavallista kaksoislaimennustekniikkaa käyttäen. Niiden in vitro-vaikutus tekee ne käyttökelpoisiksi ulkonaiseen käyttöön salvoina, voiteina ja niiden kaltaisina; sterilointitar-koituksiin (esim. sairaalatarvikkeet) sekä teollisina mikrobien vastaisina aineina; esimerkiksi veden käsittelyssä, liejun määrän säätelyssä, maalina ja puun suoja-aineissa.

Seuraavassa taulukossa on esitetty eräiden kaavan I mukaisten yhdisteiden aktiivisuudet in vitro.

10 66879 n ·Η

CQH

Oi

·" >1 IX CM CM CM ID LO LO LD CT) LO LO

CO -H II iHiHOOl—IOlOOCMlOOlOOOOOOOOOOOOO »O CM O O

II Qj rH " »LO 1Λ «- LO ΟΙΛ •'»'LO »> LO •'lOlOlOlOLOlOLOLOlOCMLO «'lOlO

3 6 Oi Γθσ)ΛΛίηΑΗΛ(ΡΗΛΗΛΟΛΛΛΛΛΛΛΛΛΗΛΐΰΑΛ

•H

H

ro S

αί q

-^3 X LO LO LO 00 LO CO CT) 00 LO

CO MH II LnLOOOLnOr^OLOC^-OOOOa-OOOOOOOOO «Ό o o

III rH «'»'LOLO *> lO •'LO •'«'LO »-LO »M-OlOlOlOLOlOlOlOlOCMlOlOlOlO

3 CM oi i tr —l/\0/\r—|0/\0/\0/\/\/\/\/Ν/\/\/\/\(—| /N, CM /N, /X

£ IV H [0

OOH LO LO H

Oi >i CM CM jft

•'H 3 CO CTI OOtT)LOoOLO C9 LOLO

CO C M 0000000^0000 ^^00 «OOOOO OOOOOCMOOOO

il a) H »'•'i.olo mn •'lo OM o lm o lo •'lololoOlololololo •'lo »m m 3 Ή ai 0 0/\/\0/\0/\i—!, X| νίΛΟΑΛΛΖΛΛΛΛΛιΟΛΟΛΛ - ai H >, 00 o

«-\ Ό.Η >> X OO O in O CM rl H O OO id o H

,_i W C C O CNCMOOCM^CMH^OO^OLOOOOOOO LO o o o ·> tr II | CP H •'•'OO n CM •'«'OlOOOlOCNlOCMlOOCMO-JlOlOlO ·> cm o o o 3= 3 h- Ph ai o o CM CM o h o oo^\| h ά /m naamnnhaHcnVi bO -1-----------------------------

3 11 O ·Η, O

occ rH 1(0 w Oi-H >, ro -h •''g >, 3 coiflootflincn olo h ooooo loo

H eofgc O i—i LO O O LO CM H LO CM «Ό «ΌΟΟΟΟΟΟΟ OCMO

X III CP H » »CM CM «'•'•'CM *>CMOOOOOCMCMCMCM<MOOO •'CM

MH 3ls-CH ai Oi—I /X /X H LD O ΟΗΗνΐΓΜΓΜ(ΜΛΛΛΛΛιηιθΗώΛ

ΰ II ·Η ·Η O

3 oog H en 3 Oi p >, 00 en q >> X oooo m cm in m o m H o ooo co o o o • j_i en ,Q e cj HhooooHlo »m cm »Jo o o o o o o o ldoooo 3 II Id) H •'•OO«'''«'CM»'l «'OOOOCMOCMCMCMLOLO»'CMCMOCM| f* 3Η"4π PS OOHCMOOOHHO IDVl ΜΗΟΜΛΙΜΛΛΛΓΜΓΜγΗΛΛγΙΛ Ή . — — — —— — — — — — — — —H—— —--_____ __________ •H ·Η

4-i k I

v/ Il -P ·Η H q H oo I H H o 10 ai LD po H 00

*· " >) >>X LOUD 00 LO LO uO CO OOOOOOOOOOOOLOOOOO

O C0H--HCO lO LO O O i—I LO LO CM H OOOOOOOOOOOOO «ΌΟΟΟ

e. Il •'dJQJ H •'•OO •'•'•'•'•'lOCMCMCMCMCMCMCMCMCMCMCMCM' CM CM CM CM CM

4-1 3 OM E ^ Pi HHHCMOHHCOO Η/Χ/\/\/\/\/Χ/ΧΑ.(Αν/\/\/\Η/Χ/\/\.ΛΝ * Γ-i m , . --------- __ — __ - __ —— __ —_ — — - — __ —_ —— __ — — __ __ __ —_ _ — —-—

> I

π *H 1 *H o

e fTO ‘H rH CJ

l_p Oh I £-i ro

-3“ Q COCO CO LD CT) UD CP OOOOOOOOOOOOCNOOO

00 " o G O HrHOOr-1 LO ro CN OO OOJOOOOOOOOOOOHOOO

Il Ir-jQJ rH Λ r» LO LO * « ^ r* cl | CD rC^CMCNNCNCMCMCNCNCsJiN «(N CM CN I

g en X H pj__o o oholdo

H

en

Il Ai -H o

ooo H O

ai a >i oo ••'OI?', X OlCOODOllDOUOOl H OOOOO LOO o

CO g e O OOHOOOOlOOOCMCO O «OOOOOOOOOOlOCMOOO

Il I <P H » »CM CN •'•'•'•'•'IOOOOOCMCMCMCMCMOlOH •'CMOCMI

3 h- H oi oo1/\/\oholoo xyi χχχλλλλλχ lo |X cm /χ ai ai ai a; ai ai ai ai o

LOCMCnoHHOCDrOOHHCOLDLOJ-CnHLj-HCMOIOOHCMOOOO OlOOHHCOOOOCMOOOJlDCMOOOOLDOH-OHOHH-OO OOrHHi—lOL^OCMOOOCMCNr-jiHOOOOCMOOOOOOO

<<C<C<cQcQ<C<Coo<<C<;<i<ri<d<<oocciPQ<<<QOO

HHrlHHrlr-lcMCMCMLn^HHHCNcocnxxcooocooicoxxiD

OOOOOOOOOOO -CP LO lO LO LO L/0 LO LO lO LO LO LO LO LD CD LD LD

CO

a) -h ro 3 co

to h en lo cd C

en lo H 3 Ή -H t3 01 co

H Cfl -H Cp 4-> O rH ·Η cd nj Ή O (P

E 3 H e 5 -H C q en O m C 0) n) tn a> rd cp Sen nj 9 o ra cp o ocpaiido •H 9 O bO ω-H en <P jj bOH X 4-* O bfl o o

q 3 q p su h QsqqQpHqo^-H

ΐ : : : r : : iÖ >1 6·Η C ft: -H Q 3 S d 3 il O m bo >n ft= f» p h -h εεοΗ=εεωΉ q· _q i—4 tub edo* O X · · · 3 O 3 en ...... co

Dm Pm Pm O 0) o: : P4_igg P tr · m td q m ϋ cp ω OP rH rH co q 4-i Ί-* ή

-P PP >> · · ω H q q af rd a! Q> £ G <P

enr = = = = = 0000= smw: = PnAi= a,rEcncn= it,(nwwz 66879

H r—I

Il ϊ>! oo£ X Φ • •'•H χ CO 00 o oo cd oolocn

Op il r-r-oocMOiMLnHooHoooooooo o im cm o H o o

μ I |—| r ^ LO LO r LO «> r «HO LO plOlOlOlOlOlOlOIOlOlO ** LO ^ LO LO

3 CM X OO/m/MO/MOHO/V/mO/M/m/M/M/^/m/V/MCM/MOIO^CO/^/Ov

il H

ocH

Ph >1 LO

.»>, x omji οωσηΛΟ cm looocm cm

o £ II 00 OO O O CM LO 00 « CM O O O OOOOOOCMOM « O O O H

Il m r-H « "ΙΛ in « « «CM «LO LO «OlOlOlOLOlOLOlO « LO "rl in Λ in « 3 l|H X 00/\/\0i—lOi—ΙΟΛΛΟιηΐΜΛΛΛΛΛΑώΛΟΓΟΛΛΛίΟ j

Il ^ O

CMC O Ph O) oo •«•rl X orooomcooinH H o oo locm o top O CM CO O O CO [Τ'" CO CM « «o o o o o o o «Ho o o

Il |·Η H « « CM CM « « « «O IOOOOOCMOO<M<MLOLO<M « O O CM I

2 CM H C OO/M/MOOOCDi/l lO'/1<MlOH/mH<M/\/\CSI<MHCO<M<M^M

j — ~

Il Lh o coSo O X £ 00

•« 3 X 000 O CD O LO O H O OO CM O O H

top <P OOMOOCMlOOOCMOOOO «o o o o O O O H o o o «

Il | H H « «O o « « « « «ΙΟ OOOOO<MOO<M<MLOLOLO « <M O CM O

S CM H X OOCMIMOrlOiDOtM CMVI (ΜΓ|ΝΛιΛ(ΜΛΛίΜ(Μ(ΜΓΟΛΗΛ'/Ι

Il Ή O <rH O

X P oo O

« >i X OOOOOCDOlO oh o OO CM O OH

ra C O <M 00 O O CM CO CM « oo« O O O O O O HOOO«

Il <D H « « CM CM « « «CMOOCSIOOC^OCMOOCMCMLOOLO «CMOCMO

SP X OO^^OOOHlOH^s^IloloH/XHCM/N/MCMlOCMOO/NH/Sc/I

~ "-"rt------------------------------

I H

Il Ai So

ooO HO

X 4-j £ oo „ o ·« Q) (L> X ocnooocnOLOco Ho ooo locmo h OSpö OO OO Ο O CM OO OO «Γ'- O «O OOOOO «Hooo «

Il I -rl H « "CM CM « « «CM « OOCMlOlOOOCMCMCMlOlOCM «CMOOO

S h- ωχ ο o /\ /\ o o o i—i o Hi/iacmcmcmhaaacmcnhoahni/i -1-------------------------------

n So O

oo£ O

X O) 00 O O

•«•rl x OODOOCnCMOLOHO H O OO LOO o OP O coimoooohoocm «o «o oooooo «ooo

Il |tH H « « CM CM « « « « O CM LO O o O O OM O O CM CM O O O CM CM O CM I

S cm H X ooAAonoiDViACMi/iHncMACMNAAnnraHAHA

• rl I-1 il S o

0O>! O

x S-ι oo «3 X COCMOOCDOCMLOOO eno o ooo

Op O LO i—I O O LO O H « CM o ooooo----A> o o o ooo

Il I r—| " «CM CM «CM «CM «CMO «<MO<M ^OOOlOCMCMCmI

S CM X HOO/N/MH/NOOHO/\lOO/mCM/\ NCMiMINAAA

Il -H O

OOH O

X >1 00 o

·« >1 X OLO O O 00 CT) LO CO OH LO OO LO CD H

O £ O OI «OONMCOCMP 0« « O OO « lOO O «

Il QJ H « CM O CM « « « « «lOCMOlOCMLOOlOOCMCMOCMlO «OOOO

SP X OHiMA O O O CD O CM /\ M/| CmIhIcmIcmIomIuoI/SI/mIi-OIhIcmIHIcmIloIcmI,/ I

X|X X g X X X X o

LOCMOOHHOCDOOOHHCncDLnH-CnHH-HCMCHOOHlHOOOO

OlOOHHOOOOOOMOOIMCDCSIOOOOCDOH-OHOHH-OO

OOHHHOH-OCMOOOCMCmHHOOOOCMOOOOOOO

<d<;<c<rxx<;<;oo<<<;<;<r<c<<oomQQ<<<xo HHriHHHrioliNoiLniflrlHrloInmMoiticococncoooii) ooooooooooooLOLOLnLnuoLOLOi-OLriLnLnLncDcDcDco in

0) -H

iti 3 en •H en en rtf e • h en en en £ -H H Ό d) to H in *H Cl) *H O i—I Ή (ti <d Ή O Q) en £ h£p SP£fHwgcn£Q)iti •h φ ro a) iden id 3 ö 3 &> o o <u a> rd o £ £ O bO S. -H mu) H bO H x p O hO o o id 3 O O cl) H O £ L Q A Ηί-ιΟΦ-Η bO ifl: Ϊ : : : : n) >, φ-H C ft: ·3 n £ A £ 3 £ O en f-ι P ft= E P ·Η -H 66οΡ=ΒΕ0)Η o en x h bO · rd o · X ·· · X O £ en .... .. ω χ X a, O en a: : £ X P P S S ρ£··ω rd hau ΦωοΟΓΗΗωμρρ-Η p pp >i · · en h i d d <d ei) £ £ a> 00= = = = = = CO CO = SCQW = = X X = X X CO CO = x co w w x 12 66879

In vitro-käyttöä varten, esim. ulkoiseen käyttöön, on usein mukavinta käyttää yhdisteitä yhdessä farmaseuttisesti hyväksyttävän kantaja-aineen, kuten kasvi- tai mineraaliöljyn tai pehmennys-voiteen kanssa. Ne voidaan liuottaa tai dispergoida nestemäisiin kantaja-aineisiin tai liuottimiin, kuten veteen, alkoholiin,glyko-leihin tai niiden seoksiin tai muuhun farmaseuttisesti hyväksyttävään inerttiin väliaineeseen; ts. väliaineeseen, jolla ei ole vahingollista vaikutusta aktiiviseen aineosaan. Sellaisia tarkoituksia varten on yleensä aktiivisten aineosien pitoisuuden hyvä olla noin 0,1 - 10 paino-% laskettuna koko yhdistelmän painosta.

Lisäksi monilla kaavan I mukaisilla yhdisteillä on gramposi-tiivisten tai tiettyjen gramnegatiivisten mikro-organismien vastainen vaikutus in vivo oraalisesti ja/tai parenteraalisesti annettuina. Niiden in vivo-vaikutus on rajoitetumpi herkkien organismien suhteen ja se määritetään tavallisella menetelmällä, joka käsittää suunnilleen samanpainoisten hiirien infektoinnin testiorganismilla ja niiden käsittelyn sen jälkeen oraalisesti tai subkutaanisesti testattavalla yhdisteellä. Käytännössä hiirille, esim. 10 kpl, annetaan intraperitoneaalisena rokotteena sopivasti laimennettuja viljelmiä, jotka sisältävät suunnilleen 1-10-kertaisena LD,nr,-mää-rän (alin 100-%:sesti kuoleman aiheuttava organismikonsentraatio). Samanaikaisesti suoritetaan kontrollitestit, joissa hiiret saavat rokotteen vähäisempinä laimennuksina testiorganismin tarttuvuuden mahdollisten vaihtelujen tarkkailemiseksi. Testattava yhdiste annetaan 0,5 tuntia rokotuksen jälkeen ja uudestaan 4, 24 ja 48 tuntia myö.hemmin. Henkiin jääneitä hiiriä pidetään neljä päivää viimeisen käsittelyn jälkeen ja henkiin jääneiden määrä merkitään muistiin.

In vivo-käytössä uusia yhdisteitä voidaan antaa oraalisesti tai parenteraalisesti, esimerkiksi subkutaanisesti tai lihaksensisäisenä ruiskeena annostuksen ollessa noin 1-200 mg ruumiin painokiloa kohden päivässä. Suositeltava annostusväli on noin 5-100 mg ruumiin painokiloa kohden päivässä ja suositeltavin väli on noin 5-50 mg ruumiin painokiloa kohden päivässä. Sopivat parenteraalisen ruiskeen kantaja-aineet ovat vettä sisältäviä, kuten vesi, isotoo-ninen suolaliuos, isotooninen dekstroosi ja Ringerin liuos, tai vettä sisältämättömiä, kuten kasvirasvaperäiset öljyt (puuvillansiemen-, maapähkinä-, maissi, seesamaöljy), dimetyylisulfoksidi sekä muut 13 66879 vettä sisältämättömät kantaja-aineet, jotka eivät vaikuta valmisteen terapeuttiseen tehoon ja ovat myrkyttömiä käytettyinä tilavuuksina ja pitoisuuksina (glyseroli, propyleeniglykoli, sorbitoli). Lisäksi voidaan varsin hyvin valmistaa seoksia, jotka soveltuvat juuri ennen annostusta suoritettavaan liuosten valmistamiseen. Sellaiset seokset voivat sisältää nestemäisiä laimennus-aineita; esimerkiksi propyleeniglykolia, dietyylikarbonaattia, glyserolia, sorbitolia, jne; puskurointlaineita, hyaluronidaasia, paikallispuudutusaineita ja epäorgaanisia suoloja haluttujen farmakologisten ominaisuuksien saamiseksi. Yhdisteet voidaan myös yhdistää erilaisiin farmaseuttisesti hyväksyttäviin inertteihin kantaja-aineisiin, joihin kuuluvat kiinteät laimentimet, vesipitoiset kantaja-aineet, myrkyttömät orgaaniset liuottimet kapseleiden, erilaisten tablettien, kuivien seosten, suspensioiden, liuosten, eliksiirien ja parenteraalisten liuosten tai suspensioiden muodossa. Yleensä yhdisteitä käytetään erilaisissa annostusmuodoissa pitoisuuden vaihdellessa noin 0,5 %:sta noin 90 %:iin koko seoksen painosta.

Tässä esitetyissä esimerkeissä ei ole pyritty ottamaan talteen saadun tuotteen maksimimäärää eikä optimoimaan minkään tietyn yhdisteen saantoa. Esimerkit ovat paremminkin menetelmää ja sillä saatavia tuotteita kuvailevia. Esimerkeissä 1, 2 ja 3 käytettiin kussakin lähtöaineena valmisteen A päätuotteena olevaa epimeeriä.

Esimerkki 1 11-asetyyli-4"-deoksi-4"-fenyyliglykoksamido-oleandomysiini N,N'-disykloheksyylikarbodi-imidiä (2,26 g, 11,0 mmoolia) liuotettuna kuivaan metyleenikloridiin (10 ml) lisätään kerralla liuokseen, joka sisältää ll-asetyyli-4"-deoksi-4"-amino-oleando-mysiiniä (4,0 g, 5,5 mmoolia) ja bentsoyylimuurahaishappoa (2,47 g, 16,5 mmoolia) kuivassa metyleenikloridissa (40 ml) huoneen lämpötilassa. Reaktioseosta sekoitetaan 24 tuntia huoneen lämpötilassa ja se suodatetaan sitten sivutuotteen, N,N'-disykloheksyyliurean poistamiseksi. Suodos haihdutetaan kuiviin alennetussa paineessa ja muodostunut vaahto kromatografioidaan silikageelillä käyttäen asetonia eluointlaineena. Eluaatin haihduttaminen antaa 1,89 g (40 %:n saanto) otsikon yhdistettä amorfisena kiinteänä aineena.

14 66879 1H NMR (60 MHz) e/'™!?, , n v . 9 kWQU . , . , CDClg (ppm): 2,43 (3H, s, asetyyli CH^-), 2.33 /6H, s, -N(CH3)27, 2,71 (2H, m, epoksidi), 3,51 (3H, s, -OCHg), aromaattiset protonit: multipletit (5H) alueilla 7,19 - 7,75 (3H) ja 8,26 - 8,49 (2H).

Toistamalla edellä kuvattu menettely, mutta korvaamalla bent-soyylimuurahaishappo sopivalla reagenssilla Rg-C(=0)-C(=0)-0H, saadaan seuraavat yhdisteet: ll-asetyyli-4Mdeoksi-4(2-furyyli)glyoksamido-oleandomysii-ni (saanto = 73 %) .

ΧΗ NMR (60 MHz) cf , n» N

CDClg (ppm): 2,08 (3H, s, asetyyli, CH3~), 2.30 Z6H, s, -N(CH3)27, 3,43 (3H, s, -OCHg), 6,64, 7,78, 8,16 (kukin 1H, m, aromaattiset protonit).

11-asetyyli-4"deoksi-4"-(2-tienyyli)glyoksamido-oleandomy-siini (saanto 44 %).

XH NMR (60 MHz) cf ™S , . 0 n„ ,otJ . , . , CDC13 (ppm): 2,07 (3H, s, asetyyli CH3~), 2.30 Z6H, s, -N(CH3)27, 2,65 (2H, m, epoksidi), 3,44 (3H, s, -OCHg), aromaattiset protonit: 7,20 (1H, dd, J-^ = 4 Hz, J2 = 4Hz), 7,82 (1H, d, J = 4 Hz), 8,42 (1H, d, J = 4 Hz).

11-asetyyli-4"deoksi-4"-(4-pyridyyli)glyoksamido-oleandomy- siini (saanto = 55 %).

1 / TMR

H NMR (60 MHz) <f . nni,. 0 nil ,0 CDC13 (ppm): 2,04 (3H, s, asetyyli CHg-), 2.30 /6H, s, -N(CH3)2j?, 3,4 3 (3H, s, -0CH3), AB-rakenne H^ keskittyneenä 7,70:ssa, Hg 8,78:ssa (J^g = 6 Hz, 4H, aromaattiset protonit ) .

ll-asetyyli-4"-deoksi-4"-(4-metoksifenyyli)glyoksamido-oleandomysiini (saanto = 95 %).

XH NMR (60 MHz) </ (ppm): 2,10 (3H, s, asetyyli CHg-) , 2.33 /6H, s, -NH(CH,)«7, 2,683(2H, m, epoksidi), 3,47 (3H, s, -0CH3 C-4 :ssä), 3,81 (3H, s, -OCHg), AB-rakenne, H^ keskittyneenä 6,97:ssä, Hg 7,41:ssä (J^g = 9Hz, 4H, aromaattiset protonit ) .

15

Esimerkki 2 66879 11 -asetyyli-U"-deoksi-|4,,-bentsoyylitioformamido-oleandomysiini

Liuokseen, joka sisältää 11 -asetyyli-4"-deoksi-4"-amino-olean-domysiiniä (1,5 g, 2,1 mmoolia) ja trietyyliamiinia (0,29 ml, 2,1 mmoolia) metyleenikloridissa (30 ml), lisättään bentsoyylitioformyy-likloridia (0,38 g, 2,1 mmoolia) 25°C:ssa. Reaktioseosta sekoitetaan 15 minuuttia, minkä lopulla lisätään vielä 0,25 mooliekvivalenttia bentsoyylitioformyylikloridia ja trietyyliamiinia kutakin. Sekoittaminen ja asyylikloridin ja trietyyliamiinin lisääminen toistetaan vielä kolme kertaa. Reaktioseos laimennetaan sitten metyleeniklori-dilla (150 ml) ja vedellä (150 ml). Vesifaasin pH säädetään arvoon 8,5 natriumhydroksidin 1N vesiliuoksella, orgaaninen kerros erotetaan ja kuivataan (^280^) ja haihdutetaan kuiviin alennetussa paineessa, jolloin saadaan 1,9 g keltaista vaahtoa. Se puhdistetaan pylväskromatografisesti silikageelillä (4 x 40 cm:n pylväs) käyttäen asetonia eluointlaineena. Eluaatin haihduttaminen antaa otsikko- tuotteen kvantitatiivisen saannon amorfisena kiinteänä aineena.

1 ΤΜς i H NMR (60 MHz) 6cdci3 (PPm): 2’07 (3H> s’ asetyyli CH3~), 2.32 , s, -NH(CH3) , 2,68 (2H, m, epoksidi), 3,55 (3H, s, -0CH3), 7,30 - 7,68 (3H, m) ja 7,96 8,24 (2H, m, aromaattiset protonit ) .

Samalla tavalla valmistetaan seuraavat amorfiset kiinteät aineet korvaamalla bentsoyylitioformyylikloridi reagenssilla R3-C(=0)-C(=S)-C1: 11-asetyyli-4"-deoksi-4"-(2-furyyli)tioformamido-oleandomy- siini (saanto = 77 %).

I ΤΜς H NMR (60 MHz) f (ppm) : 2,09 (3H, s, asetyyli CH3~), 2,34 /15 H, s, -NH(CH3)27, 2,6$ (2H, m, epoksidi), 3,47 (3H, s, -0CH3), aromaattiset protonit: 6,62 (1H, dd, = 1Hz, J2 = 4Hz), 7,76 (1H, d, J = 1 Hz), 8,04 (1H, d, J = 4Hz).

II -asetyyli-4 "-deoksi-4 "- (2-tenoyyli )tioformamido-oleando- mysiini (saanto = 81 %).

1 ΤΜς H NMR (60 MHz) £ (ppm): 2,09 (3H, s, asetyyli CHg-), 2.33 /ΐ>Η, s, -NHiCHg^J, 2,69 (2H, m, epoksidi), 3,47 (3H, s, -OCHg), aromaattiset protonit: 7,21 (1H, dd, = 4Hz, ~ ^Hz), 7,84 OH, d, J = 4Hz) , 8,31 (1H, d, J = 4Hz).

ιβ 66879 11-asetyyli-U^-deoksi-U"-(4-metoksibentsoyyli)tioformamido-oleandomysiini (saanto = 89 %).

I ΤΜς 'H NHR (60 MHz) (ppm): 2,0 6 (3H, s, asetyyli CHg-), 2,31 /6H, s, -NH(CH3)27, 2,6$ (2H, m, epoksidi), 3,56 (3H, s, -OCHg C-4"), 3,90 (3H, s, -OCHg), AB-rakenne, H^ keskittyneenä 6,95:ssä,

Hg 8,15:ssä (J^g = 9Hz , 4H, aromaattiset protonit).

II -asetyyli-4"-deoksi-4"- (4-bromibentsoyyli)tioformamido-oleandomysiini (saanto = 20 %).

H NMR (60 MHz) J (ppm): 2,05 (3H, s, asetyyli CH3«) , 2.30 /"6H, s, -NH(CH3)27 , 2 ,65 (2H, m, epoksidi), 3,50 (3H, s, -OCHg), AB-rakenne, H^ keskittyneenä 7,55:ssä, Hg 7,91:ssä (J^g = 8Hz, 4H, aromaattiset protonit).

11-asetyyli-4"-deoksi-4"- (3 ,4-diklooribentsoyyli )tioformami-do-oleandomysiini (saanto = 60 %).

A ΦΜΟ H NMR (60 MHz) (ppm): 2,10 (3H, s, asetyyli CH3~), 2,35 fm, s, -NHiCHg)^, 2,71 (2H, m, epoksidi), 3,55 (3H, s, -OCHg), aromaattiset protonit: 7,53 (1H, d, J = 8Hz), 7,95 (1H, dd, = 8Hz, J2 = 1 Hz) , 8,19 (1H, d, J = 1Hz).

11-asetyyli-4"-deoksi-4(4-nitrobentsoyyli)tioformamido-oleandomysiini (saanto = 69 % raakatuotteena; ts. ei suoritettu pylväskromatografiaa).

1 TMQ

'H NMR (60 MHz) (ppm): 2,06 (3H, s, asetyyli CHg-), 2.30 /6H, s, -N(CH3)27, 2,66 (2H, m, epoksidi), 3,56 (3H, s, -OCHg), 8,26 (4H, s, aromaattiset protonit).

11-asetyyli-4"-deoksi-4"-(2,4,6-trimetyylibentsoyyli)tio-formamido-oleandomysiini (saanto = 93 %).

I TM9 'H NMR (60 MHz) (ppm): 2,13 (3H, s, asetyyli CHg-), 2,37 /Ί5Η, s, -N(CH3)2 ja aryyli CH, 2,74 (2H, m, epoksidi), 3,44 (3H, s, -OCHg), 6,92 (2H, s, aromaattiset protonit).

Esimerkki 3 ........

II -asetyyli-4 "-deoksi-4" (4-aminobentsoyy li) tiof ormamido-oleandomysiini

Liuosta, joka sisältää ll-asetyyli-V'-deoksi*4"-(4-nitro-________ bentsoyyli)tioformamido-oleandomysiiniä (830 mg, 0,9 mmoolia) 66879 17 etyyliasetaatissa (150 ml), hydrataan Parr-laitteessa paineen oi-lessa 40 paunaa/neliötuuma = 29 kg/cra ja lämpötilan 25°C kolmen tunnin ajan käyttäen katalysaattorina 500 mg 10-%:ista palladium/ hiili-seosta. Kolmen tunnin jakson lopulla lisätään vielä 500 mg katalysaattoria reaktioseokseen ja hydrausta jatketaan vielä kolme tuntia. Katalysaattori suodatetaan sitten pois reaktioseoksesta ja suodos haihdutetaan kuiviin alennetussa paineessa. Vaahtomaisel-la jäännöksellä suoritetaan kromatografia silikageelipylväällä (4 x 40 cm) käyttäen eluointiaineena kloroformi/metanoli-seosta (17/1). Eluaatin haihduttaminen antaa otsikkoyhdisteen värittömänä amorfisena kiinteänä aineena (3,33 mg, saanto 41 %).

XH NMR (60 MHz) </ . 0 ni , CDClg (ppm): 2,01 (3H, s, asetyylx CH^-), 2,32 Z^H, s, -NiCHg)^, 3,48 (3H, s, -OCHg), AB-rakenne, HA keskittyneenä 6,88:ssa, 7,81:ssä (J^g = 8 Hz, 3H, aromaattiset proto nit ) .

Esimerkki 4 11,2' -diasetyyli-4"-deoksi-4"-fenyyliglyoksamido-oleandomy-siini (asetyloimalla 11-monoasetyylijohdannainen)

Lisätään asetanhydridiä (0,188 ml, 2,0 mmoolia) liuokseen, joka sisältää ll-monoasetyyli-4"-deoksi-4"-fenyyliglyoksamido-oleandomysiiniä (1,64 g, 2,0 mmoolia) bentseenissä (15 ml), typpikaasun läsnä ollessa huoneen lämpötilassa. Seosta sekoitetaan kolme tuntia ja sitten se kaadetaan veteen (25 ml), johon on lisätty kerros bentseeniä (25 ml). pH säädetään arvoon 9,5 NaOH:lla ja bentseenikerros erotetaan. Tämä pestään peräkkäin vedellä ja kyllästetyllä suolaliuoksella ja kuivataan sitten (NajSC^) ja konsentroidaan alennetussa paineessa vaahdoksi.

Samalla tavalla esimerkkien 1-2 11-monoalkanoyyliyhdisteet muutetaan vastaaviksi ll-alkanoyyli-2'-asetyylijohdannaisikseen ja korvaamalla asetanhydridi propionanhydridillä vastaaviksi ll-alkanoyyli-2 '-propionyylijohdannaisikseen.

Esimerkki 5 4"-deoksi-4"-bentsoyylitioformamido-oleandomysiini

Lisätään bentsoyylitioformyylikloridia (0,51 g, 2,7 mmoolia) 25°C:ssa liuokseen, joka sisältää 2 ,-asetyyli-4,,-deoksi-4"-amino-oleandomysiiniä (2,0 g, 2,7 mmoolia) ja trietyyliamiinia (0,38 ml, 66879 18 2.7 mmoolia) 50 ml:ssa kuivaa metyleenikloridia. Tunnin kuluttua reaktioseokseen lisätään vielä trietyyliamiinia (0,38 ml, 2,7 mmoo-lia) ja bentsoyylitioformyylikloridia (0,30 g, 1,6 mmoolia). Sitten lisätään vettä (150 ml) ja metyleenikloridia (100 ml) ja vesikerrok-sen pH säädetään arvoon 9,5 lisäämällä natriumhydroksidin IN vesi-liuosta. Orgaaninen kerros pestään 100 ml:11a vettä, kuivataan vedettömällä natriumsulfaatilla ja haihdutetaan pyörivällä haihdutti-mella, jolloin saadaan 2 '-asetyyli-4,,deoksi-*+,,-bentsoyylitioform-amido-oleandomysiinin raakatuote kellanruskena vaahtona (3,0 g). Raakatuote puhdistetaan kromatografisesti silikageelipylväällä (200 g silikageeliä; kloroformi/isopropanoli tilavuussuhde 9:1; pylvään mitat: 3,5 x 50 cm), jolloin saadaan puhdas 2*-asetyyli-4"-deoksi-4"-bentsoyylitioformamido-oleandomysiini värittömänä vaahtona (1,9 g; saanto 80 %).

1 r TM9 ^ H NMR (60 MHz) / (ppm) : 2,11 (3H, s, -0-C-CHg); 2,31 /6H, s, -NiCHg)^; 3,54 (3H, s, -OCH^); multipletit alueilla 7,4 -7,66 (3H) ja 7,95 - 8,15 (2H), aromaattiset protonit.

Kun 2’-asetyyliesteriä sekoitettiin yön yli 50 ml:ssa vedetöntä metanolia (25°C) ja kun sitten liuotin poistettiin tyhjössä, saatiin puhdasta 4"-deoksi-4"-bentsoyylitioformamido-oleandomysii-niä värittömänä vaahtona saannon ollessa kvantitatiivinen.

ΧΗ NMR (60 MHz) <f (ppm): 2,34 ^6H, s, -NiCHg)^; 3,51 (3H, s, -OCHg); multipletit alueilla 7,18 - 7,58 (3H) ja 7,88— 8.08 (2H), aromaattiset protonit.

Esimerkki 6 4 M-deoksi-4"-(2-tienyyli)glyoksamido-oleandomysiini

Lisätään N,N'-disykloheksyylikarbodi-imidiä (DCCL, 0,85 g, 4,1 mmoolia) 25°C:seen liuokseen, joka sisältää 2'-asetyyli-4M-de-oksi-4"-amino-oleandomysiiniä (2,0 g, 2,7 mmoolia) ja 2-tenoyyli-muurahaishappoa (1,7 g, 11,0 mmoolia) 50 ml:ssa vedetöntä metyleenikloridia. Sivutuotteena saatu N,N’-disykloheksyyliurea suodatetaan pois ja suodokseen lisätään 150 ml vettä ja 100 ml metyleenikloridia. Vesifaasin pH säädetään arvoon 9,5 natriumhydroksidin IN vesi-liuoksella. Orgaaninen kerros erotetaan, kuivataan vedettömällä natriumsulfaatilla, ja haihdutetaan pyörivällä haihduttimellä, jolloin saadaan 21-asetyyli-4"-deoksi-4"-(2-tienyyli)glyoksamido-oleandomy-siinin raakatuote, joka puhdistetaan kromatografisesti silikageelil- 19 66879 IS (200 g silikageeliä; pylvään mitat; 3,5 x 50 cm; kloroformi/iso-propanoli 9:1 eluenttina). Saanto 0,80 g (36 %).

λΕ NMR (60 MHz) </ (ppm): 2,28 /6H, s, -N(CH3)27; 3,40 (3H, s, -OCHg); multipletit alueella 7,16 (1H, 7,78 (1H) ja 8,36 (1H), tiofeenirenkaan protonit.

Seuraavat yhdisteet valmistettiin sopivista reagensseista samalla tavalla. Ne saadaan värittömänä vaahtona.

4"-deoksi-4"-fenyyliglyoksamido-oleandomysiini (saanto = 33 %).

1H NMR (60 MHz) / (ppm): 2,26 ΓβΗ, s, -NiCHg)^, 3,42 (3H, s, -0CH3), 7,01 - 7,61 (§H, m), 8,12 - 8,36 (2H, m), aromaattiset protonit.

‘+,,-deoksi-1+''-(2-furyyli)glyoksamido-oleandomysiini (saanto = 50 %) .

ΧΗ NMR (60 MHz) <f (ppm): 2,27 /'6H, s, -N(CH3)27, 3,40 (3H, s, -OCHg), multipletit kohdissa 6,60 (1H), 7,74 (1H), 8,11 (1H), furaanirenkaan protonit.

4"-deoksi-4"-metyyliglyoksamido-oleandomysiini (saanto = 71 %) .

1H NMR (60 MHz) (ppm): Γ6Η, s, -N(CH3)2^: 2,47 (3H, s, -C0-C0-CH3), 3,38 (3H, s, -O&Ig).

Esimerkki 7 Happoadditiösuolat

Liuokseen, joka sisältää ll-asetyyli-4"-deoksi-4"-bentsyyli-tioformamido-oleandomysiiniä (1,0 mmooli) metanolissa (50 ml), lisätään ekvimolaarinen määrä kloorivetyä ja reaktioseosta sekoitetaan huoneen lämpötilassa tunnin ajan. Poistettaessa liuotin haihduttamalla, saadaan hydrokloridisuola.

Samalla tavalla yllä mainittu yhdiste ja edellä kuvatut muut yhdisteet muutetaan hydrokloridi-, hydrobromidi-, sulfaatti-, ase-taatti-, butyraatti-, sitraatti-, glykolaatti-, tartraatti-, stea-raatti-, pamoaatti-, fumaraatti-, bentsoaatti- ja aspartaattisuo-loikseen.

Kun reagenssina on 11,2'-dialkanoyyli-4"-deoksi-4"-substitu-oitu amino-oleandomysiinijohdannainen, käytetään liuottimena isopropanolia .

Muut happoadditiosuolat valmistetaan lisäämällä riittävästi happoa kunkin läsnä olevan emäksisen ryhmän tyydyttämiseksi. Tällä tavalla valmistetaan tämän keksinnön yhdisteiden polyhappoadditio- 20 6 6 8 7 9 suolat.

Lähtöaine A

ll-asetyyli-4"-deoksi-4"-amino-oleandomysiini

Suspensioon, joka sisältää 10 % palladium/hiiliseosta (10 g) metanolissa (100 ml), lisätään ammoniumasetaattia (21,2 g) ja saatua liejua käsitellään ll-asetyyli-4,'-deoksi-*4,,-okso-oleandomysii-nillä (20 g) liuotettuna 100 ml:aan samaa liuotinta. Suspensiota ravistellaan huoneen lämpötilassa vetykaasun läsnä ollessa lähtö- 2 paineen ollessa 36 kg/cm . 1,5 tunnin kuluttua katalysaattori suodatetaan pois ja suodos lisätään samalla sekoittaen veden ( 1200 ml) ja kloroformin (500 ml) seokseen. pH säädetään 6,4:stä 4,5:teen ja orgaaninen kerros erotetaan. Vesikerros, sen jälkeen, kun se on vielä uutettu kloroformilla (500 ml), käsitellään etyyliasetaatilla (500 ml) ja sen pH säädetään arvoon 9,5 IN natriumhydroksidillä. Etyyliasetaattikerros erotetaan ja vesikerros uutetaan jälleen etyyliasetaatilla. Etyyliasetaattiuutteet yhdistetään, kuivataan natriumsulfaatilla ja konsentroidaan keltaiseksi vaahdoksi (18,6 g), joka kiteytettynä di-isopropyylieetteristä antaa 6,85 g puhdasta tuotetta, sp. 157,5 - 160°C, jonka NMR-arvot ja ohutlevykromato-grafia (TLC) osoittavat olevan yksittäinen C-4"-aseman epimeeri. Käytetty TLC-järjestelmä on CHClg-CH^OHiNH^OH (9:2:0,1) silikageeli-levyillä. Kehitysseos vanilliini:H^PO^:C2HgOH (5 g:50 ml:100 ml) ruiskutetaan TLC-levyille, jotka on kuumennettu noin 80-100°C:seen. Vallitseva epimeeri on vähemmän poolinen kuin vähäisempi epimeeri.

NMR( (f , CDCL3): 3,41 (3H)s, 2,70 (2H)m, 2,36 (6H)s, ja 2,10 (3H)s .

Toinen epimeeri, jota vaahtomaisessa raakatuotteessa on 20-25 % saadaan emäliuosten asteittaisella konsentroinnilla ja suodattamisella.

Samalla tavalla valmistetaan seuraavat 4"-deoksi-4"-amino-oleandomysiinin mono-alkanoyyli- ja dialkanoyyliesterit (molemmat C-4"-epimeerit) sopivista mono-alkanoyyli- ja dialkanoyyli-4"-de-oksi-4"-okso-oleandomysiineistä. Valmistettaessa 2'-esteriä, käytetään liuottimena isopropanolia.

21 66879 11,2'-diasetyyli- 11-propionyyli- 2*-asetyyli- ll-asetyyli-2-propionyyli- 2'-propionyyli- ll-propionyyli-2-asetyyli- 11,21-dipropionyyli

Lähtöaine B

4 "-deoksi-4,,-amino-oleandomysiini

Liuosta, joka sisältää 2 '-asetyyli-4”-deoksi-4"-okso-olean-domysiiniä (20 g) metanolissa (125 ml), sekoitetaan yön yli huoneen lämpötilassa ja käsitellään sitä sitten ammoniumasetaatilla (21,2 g). Saatua liuosta jäähdytetään jäähauteessa ja käsitellään sitä nat-riumsyanoboorihydridillä (1,26 g). Poistetaan sitten jäähdytyshaude ja sekoitetaan reaktioseosta huoneen lämpötilassa kaksi tuntia. Reaktioseos kaadetaan veteen (600 ml) ja dietyylieetteriin (600 ml) ja pH säädetään 8,3:sta 7,5:een. Eetterikerros erotetaan ja vesi-faasi uutetaan etyyliasetaatilla. Uutteet siirretään sivuun ja vesi-faasin pH säädetään arvoon 8,25. Myöskin tässä pH:ssa tehdyt die-tyylieetteri- ja etyyliasetaattiuutteet siirretään sivuun ja pH kohotetaan 9,9:ään. Tässä pH:ssa saadut dietyylieetteri- ja etyyliasetaattiuutteet yhdistetään, pestään peräkkäin vedellä (lx) ja kyllästetyllä suolaliuoksella ja kuivataan natriumsulfaatilla. Jälkimmäiset pH:ssa 9,9 saadut uutteet konsentroidaan vaahdoksi ja puhdistetaan kromatografisesti silikageelillä (160 g) käyttäen kloroformia syöttöliuottimena ja alkueluenttina. Kun on otettu 11 fraktiota, 12 ml per fraktio, eluentiksi vaihdetaan 5 % metanolia ja 95 % kloroformia sisältävä seos. Fraktion 370 kohdalla eluentiksi vaihdetaan 10 % metanolia ja 90 % kloroformia sisältävä seos ja fraktion 440 kohdalla otetaan käyttöön 15 % metanolia ja 85 % kloroformia sisältävä seos. Fraktio 82-260 yhdistetään ja konsentroidaan tyhjössä kuiviin, jolloin saadaan 2,44 g haluttua tuotetta.

NMR (</, CDC13): 5,56 (lH)m, 3,36 (3H)s, 2,9 (2H)m, ja 2,26 (6H)s.

Claims (2)

1. 22 Patenttivaatimukset 66679 Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisten kaavan I mukaisten oleandomysiinijohdannaisten ja niiden farmaseuttisesti hyväksyttävien happoadditiosuolojen valmistamiseksi, Ri° "<·/ 3 /^CHo po h3ch Χ°'"Γ Ύ 3 Q o H3 J*. " " Tl NH-C-C-R3 0 °«3 jossa kaavassa R^ ja R2 toisistaan riippumatta tarkoittavat vetyä tai C2_g-alkanoyyliä, Q on happi tai rikki ja R^ on tienyyli, fu- ryyli, pyridyyli, C1 ,-alkyyli tai X ±_4 ryhmä -W , jossa X ja Y toisistaan riippumatta tarkoittavat vetyä, klooria, bromia, fluoria, C1_1+-alkyyliä tai C-^^-alkoksia tai toinen substituenteista X ja Y on nitro tai amino, tunnet-t u siitä, että oleandomysiinijohdannainen, jonka kaava on — 0 N(CHq)9 V, ± 3 2 I JL pu ^ Η3°^Ι f^OH^3Oy^CE3 3C f «aP m2 0CH3 jossa R^ ja R2 tarkoittavat samaa kuin edellä, saatetaan reagoimaan inertissä liuottimessa asylointiaineen kanssa, joka sisältää asyyli-Q 0 If II ryhmän -C-C-R^, jossa Q ja R^ tarkoittavat samaa kuin edellä; ja haluttaessa saatu kaavan I mukainen yhdiste, jossa toinen substituenteista X ja Y on nitro, hydrogenoidaan käyttäen jalometalli-katalysaattoria kaavan I mukaisen yhdisteen saamiseksi, jossa toinen substituenteista X ja Y on amino, ja/tai kaavan I mukaiselle 2 23 66879 yhdisteelle, jossa R on C^_g-alkanoyylx, suoritetaan solvolyysi kaavan I mukaisen yhdisteen saamiseksi, jossa R2 on vety, ja/tai kaavan I mukainen yhdiste muutetaan farmaseuttisesti hyväksyttäväksi happoadditiosuolaksi. 24 Patentkrav 6 6 8 79 Förfarande för framställning av terapeutiskt användbara oleandomycinderivat med formeln I och farmaceutiskt godtagbara syraadditionsalter därav, - o men ) "CVXX"’ s s n ^nh-c-c-r3 och3 i vilken formel R-^ och oberoende av varandra betecknar väte eller C^_3~alkanoyl, Q är syre eller svavel och R3 är tienyl, fu-ryl, pyridyl, C1_l+-alkyl eller /tv y en grupp , där X och Y oberoende av varandra betecknar väte, klor, brom, fluor, C^^-alkyl eller C-^_1+-alkoxi eller den ena av substituenterna X och Y är nitro eller amino, kanne-t e c k n a t därav, att ett oleandomycinderivat med formeln __.n N(CH„)„ 'V R2° 1 K ¥ 'j |[ 3 H3C Oi f' «3 H3c
2. 0 I 2 0CH3 där och betecknar samma som ovan, omsätts i ett inert lösningsmedel med ett acyleringsmedel innehällande acylgruppen Q 0 tl 11 -C-C-R3, där Q och R3 betecknar samma som ovan; och om sä önskas, hydrogeneras under användning av en ädelmetallkatalysator en