PT1718608E - Inibidores da polimerase viral - Google Patents

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PT1718608E
PT1718608E PT57144578T PT05714457T PT1718608E PT 1718608 E PT1718608 E PT 1718608E PT 57144578 T PT57144578 T PT 57144578T PT 05714457 T PT05714457 T PT 05714457T PT 1718608 E PT1718608 E PT 1718608E
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PT57144578T
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Jean Rancourt
Martin Poirier
Youla S Tsantrizos
Christian Brochu
Catherine Chabot
Pierre Beaulieu
Timothy A Stammers
Bounkham Thavonekham
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Boehringer Ingelheim Int
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Description

DESCRIÇÃO "INIBIDORES DA POLIMERASE VIRAL"
CAMPO TÉCNICO DA INVENÇÃO A invenção refere-se a inibidores de polimerases de ARN dependentes de ARN, em particular aquelas polimerases virais dentro da família Flaviviridae, mais particularmente a polimerase do HCV.
ANTECEDENTES DA INVENÇÃO
Estima-se que ocorram cerca de 30000 novos casos de infecção pelo vírus da hepatite C (HCV) nos Estados Unidos a cada ano (Kolykhalov, A.A. ; Mihalik, K.; Feinstone, S. M. ; Rice, C.M. ; 2 0 0 0 ; J- Virol. 74: 2046-2051) . 0 HCV não é facilmente eliminado pelas defesas imunológicas dos hospedeiros ; cerca de 85% das pessoas infectadas pelo HCV tornam-se infectadas cronicamente. Muitas destas infecções persistentes resultam em doença hepática crónica, incluindo cirrose e carcinoma hepatocelular (Hoofnagle, J.H.; 1997; Hepatology 26: 15S-20S). Estima-se que existam 170 milhões de portadores de HCV em todo o mundo e a doença hepática de fase terminal associada ao HCV é hoje em dia a principal causa de transplante hepático. Apenas nos Estados Unidos, a hepatite C é responsável por 8000 a 10000 mortes por ano. Sem intervenção eficaz, prevê-se que o número triplique nos próximos 10 a 20 anos. Não há qualquer vacina para prevenir a infecção pelo HCV. 1
Actualmente, a única terapia aprovada para doentes infectados cronicamente pelo HCV é o tratamento com interferão ou uma associação de interferão e ribavirina. Recentemente foram aprovadas versões peguiladas de interferão (peginterferão alfa-2a (Pegasys™, Roche) e peginterferão alfa-2b (PEG-Intron™, Schering)) para serem comercializadas em alguns países para o tratamento da infecção crónica pela hepatite C, isoladas e em associação com ribavirina. No entanto, foi descrito que estas terapias conseguem uma resposta prolongada em menos de 60% dos casos. O HCV pertence à família Flaviviridae, género hepacivirus, a qual compreende três géneros de vírus de ARN de cadeia positiva com envelope pequeno (Rice, C.M.; 1996; "Flaviviridae: the viruses and their replication"; pp. 931-960 em Fields Virology; Fields, B.N.; Knipe, D.M.; Howley, P.M. (ed.); Lippincott-Raven Publishers, Philadelphia Pa.). O genoma de 9,6 kb do HCV consiste de uma grelha de leitura aberta (ORF) comprida flanqueada por regiões não traduzidas a 5' e 3' (NTR). A NTR a 5' de HCV tem 341 nucleótidos de comprimento e actua como um sítio interno de entrada de ribossoma para iniciação da tradução independente de cap (Lemon, S.H.; Honda, M.; 1997;
Semin. Virol. 8: 274-288). A poliproteína do HCV é dissociada co- e pós-tradução em pelo menos 10 polipéptidos individuais (Reed, K.E.; Rice, C.M.; 1999; Curr. Top. Microbiol. Immunol. 242 : 55-84) . As proteínas estruturais resultam de peptidases sinal na porção N-terminal da poliproteína. Duas proteases virais medeiam as dissociações a jusante para produzir proteínas não estruturais (NS) que actuam como componentes da replicase de ARN do HCV. A protease NS2-3 abrange a metade C-terminal da NS2 e o terço N-terminal da NS3 e catalisa a dissociação cis do 2 sítio NS2/3. A mesmo porção da NS3 também codifica o domínio catalítico da serina-protease de NS3-4A que dissocia em quatro sítios a jusante. Os dois terços C-terminais da NS3 são altamente conservados entre os isolados de HCV, com actividades de ligação de ARN, NTPase estimulada por ARN e desenrolamento de ARN. Apesar da NS4B e da fosfoproteína NS5A serem também componentes prováveis da replicase, os seus papéis específicos são desconhecidos. 0 produto de dissociação C-terminal da poliproteína, NS5B, é a subunidade de alongamento da replicase do HCV possuindo actividade polimerase de ARN dependente de ARN (RdRp) (Behrens, S.E.; Tomei, L.; DeFrancesco, R.; 1996; EMBO J. 15:12-22; e Lohmann, V.; Kõrner, F.; Herian, U.; Bartenschlager, R.; 1997; J. Virol. 71: 8416-8428). Foi recentemente demonstrado que mutações que destroem a actividade da NS5B anulam a infectividade do ARN num modelo em chimpanzé (Kolykhalov, A.A.; Mihalik, K.; Feinstone, S.M.; Rice, C.M.; 2000; J. Virol. 74: 2046-2051) . O desenvolvimento de novos e específicos tratamentos anti-HCV é uma alta prioridade e as funções específicas do vírus essenciais para a replicação são os alvos mais atractivos para o desenvolvimento de fármacos. A ausência de polimerases de ARN dependentes de ARN em mamíferos e o facto de que esta enzima parece ser essencial para a replicação virai, sugere que a polimerase NS5B é um alvo ideal para terapêutica anti-HCV. Os documentos WO 01/47883, WO 02/04425, WO 03/000254, WO 03/007945, WO 03/010140, WO 03/026587, WO 03/101993, WO 04/005286, WO 2004/064925, WO 2004/065367 e WO 2004/087714 descrevem inibidores de NS5B propostos para o tratamento de HCV. índoles inibidores da NS5B polimerase do HCV são divulgados no documento WO 03/010141. No entanto, os inibidores da invenção 3 diferem daqueles divulgados no documento WO 03/010141 dado que exibem uma actividade inesperadamente boa num ensaio de replicação de ARN de HCV baseado em células.
SUMÁRIO DA INVENÇÃO A presente invenção proporciona uma nova série de compostos possuindo actividade inibidora boa a muito boa contra a polimerase do HCV e/ou actividade inesperadamente boa num ensaio de replicação de ARN de HCV baseado em células.
Outros objectos desta invenção tornar-se-ão evidentes para um especialista na técnica a partir da descrição e dos exemplos que se seguem.
Num primeiro aspecto da invenção é proporcionado um composto seleccionado de
4
5
V" ο
6
7
/
ο ο
9
10 ο
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ou um seu sal ou éster. composto
Além disso, a presente invenção refere-se a um seleccionado de:
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ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
Além disso, a presente invenção refere-se a um composto seleccionado de:
18
ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
Além disso, a presente invenção refere-se a um composto seleccionado de:
19
20
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ΟΗ Ο 21
22
ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
Além disso, a presente invenção refere-se a um composto seleccionado de:
23
ou um Além possuindo . seu sal farmaceuticamente aceitável. disso, a presente invenção refere-se a um composto i estrutura
2 4 ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
Além disso, a presente invenção refere-se a um composto possuindo a estrutura
ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
Além disso, a presente invenção refere-se a um composto possuindo a estrutura
ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
Além disso, a presente invenção refere-se a um composto possuindo a estrutura
ou um seu sal farmaceuticamente aceitável. 25
Além disso a presente invenção refere-se a um composto possuindo a estrutura
ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
Além disso, a presente invenção refere-se a um composto possuindo a estrutura
ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
Além disso, é proporcionado um composto representado pela fórmula I, ou um enantiómero, diastereoisómero ou tautómero do mesmo, incluindo um seu sal ou éster:
26 em que: A ou B é N e o outro B ou A é C, em que-----entre dois átomos de C representa uma ligação dupla e-----entre um átomo de C e um átomo de N representa uma ligação simples; R1 é H ou alquilo (Ci_6) ; R2 é seleccionado de halogéneo, ciano, alquilo (Ci_6) , alcenilo (C2-6) ^ alcinilo (C2-6) r cicloalquilo (C3-7) , arilo e Het; estando os referidos arilo e Het opcionalmente substituídos com R21; em que R21 é um, dois ou três substituintes, cada, independentemente seleccionado de -OH, -CN, -N(Rn2)Rn1, halogéneo, alquilo (Ci-ε) , alcoxilo (Ci-ε) , alquiltio (Ci_6) , Het e -CO-N(Rn2)Rn1; em que os referidos alquilo (Ci-e) , alcoxilo (Ci-ε) e alquiltio (Ci_6) estão, cada, opcionalmente substituídos com um, dois ou três átomos de halogéneo; R3 é cicloalquilo (C5-6) , opcionalmente substituído com desde um até quatro átomos de halogéneo; de H, -nh2, R4 e R7 são, cada, independentemente seleccionados alquilo (Ci_6) , alcoxilo (Ci_6) , alquiltio (Ci_6) , -NHalquilo (Ci_6) , -N (alquilo (Ci_6) ) 2 e halogéneo;
Um de R5 e R6 é seleccionado de COOH, -CO-N (RN2) RN1; arilo, Het e alcenilo (C2-e) , em que arilo, Het, alcenilo (C2-e) e RN1 ou 27 estão, cada qualquer heterociclo formado entre RN2 e RN1 opcionalmente substituídos com R50; em que R50 é um, dois ou três substituintes, cada, independentemente seleccionado de alquilo (Ci-6) , -COOH, -OH, oxo, -N(Rn2)Rn1; -CO-N(Rn2)Rn1 e halogéneo, em que o alquilo(Ci-6) está opcionalmente substituído com arilo ou -N(Rn2)Rn1; e o outro de R5 e R6 é seleccionado de H, alquilo (Ci_6) , alcoxilo (Ci 6) , alquiltio (Ci-6) e N(Rn2)Rn1; R8 é alquilo (Ci_6) , cicloalquilo (C3_7) ou cicloalquil (C3_7) -alquil (Ci-6) em que os referidos alquilo, cicloalquilo e cicloalquil-alquilo estão, cada, opcionalmente substituídos com um, dois ou três substituintes, cada, independentemente seleccionado de halogéneo, alcoxilo (Ci-6) e alquiltio (Ci_6) ; ,10 são, cada, independentemente seleccionados de alquilo (Ci-6) ; ou R9 e R10 estão ligados em conjunto com o átomo de C ao qual estão ligados, para formar cicloalquilo (C3_7) , cicloalcenilo (C5_7) ou um heterociclo de 4, 5 ou 6 membros possuindo desde 1 a 3 heteroátomos, cada independentemente seleccionado de 0, N e S; em que o referido cicloalquilo, cicloalcenilo ou heterociclo está, em cada caso, opcionalmente substituído com alquilo (Ci_4) ; 28 RN1 é seleccionado de H, alquilo (Ci_6), cicloalquilo (C3-7), cicloalquil (C3-7)-alquil (C1-6 ) “» -CO-alquilo (C1-6) , -C0-0- alquilo (C1-6) e Het; em que as porções de alquilo e cicloalquilo de cada dos referidos alquilo (Ci-6) , cicloalquilo (C3_7) , cicloalquil (C3_7) -alquil (C1-6)-/ -CO-alquilo (Ci_6) e -CO-O-alquilo (Ci_6) estão, cada, opcionalmente substituídos com um, dois ou três substituintes, cada, independentemente seleccionado de halogéneo, alcoxilo (C1-6) e alquiltio (Ci-β) ; e
Rn2 é H ou alquilo (Ci_6 ) , ou
Rn2 e RN1 podem estar ligados em conjunto com o átomo de N ao qual estão ligados, para formar um heterociclo contendo N, saturado, insaturado ou aromático de 4, 5, 6 ou 7 membros ou um heterobiciclo contendo N, saturado, insaturado ou aromático de 8, 9, 10 ou 11 membros, possuindo, cada, opcionalmente mais desde 1 a 3 heteroátomos, cada independentemente seleccionado de O, Ne S; em que o heterociclo ou heterobiciclo formado por RN2 e RN1 está opcionalmente substituído com um, dois ou três substituintes, cada, independentemente seleccionado de halogéneo, alquilo (Ci-ε) , alcoxilo (Ci-δ) e alquiltio (Ci_6) ; em que Het é definido como um heterociclo de 4, 5, 6 ou 7 membros possuindo 1 a 4 heteroátomos, cada independentemente seleccionado de 0, N e S, o qual pode ser saturado, insaturado ou aromático, ou um heterobiciclo de 8, 9, 10 ou 11 membros possuindo 1 a 5 heteroátomos sempre que seja possível, cada 29 independentemente seleccionado de 0, N e S, o qual pode ser saturado, insaturado ou aromático.
Além disso, são proporcionados compostos da fórmula (I) como descritos acima, aos quais está ligado pelo menos um de uma "etiqueta detectável", uma "etiqueta de afinidade" e um "grupo fotorreactivo" .
Os compostos de acordo com esta invenção exibem geralmente uma actividade inibidora contra a polimerase do HCV. Em particular, os compostos de acordo com esta invenção inibem a síntese de ARN pela polimerase de ARN dependente de ARN do HCV, especialmente da enzima NS5B codificada pelo HCV. Além disso, os compostos de acordo com esta invenção exibem uma actividade inesperadamente boa num ensaio de replicação de ARN de HCV baseado em células. Uma outra vantagem dos compostos proporcionados por esta invenção é a sua actividade baixa a muito baixa ou mesmo não significativa contra outras polimerases.
Num segundo aspecto da invenção, é proporcionado um composto de acordo com esta invenção, ou um seu sal ou éster farmaceuticamente aceitável, ou uma sua composição, para ser utilizado como um inibidor da polimerase do HCV, de um modo preferido , como um inibidor da actividade de polimerase de ARN dependente de ARN da enzima NS5B, codificada pelo HCV. Num terceiro aspecto da invenção, é proporcionado um composto de acordo com esta invenção, ou um seu sal ou éster farmaceuticamente aceitável, , ou uma sua composição, para utilização como um inibidor da replicaçao do HCV. 30
Num quarto aspecto da invenção, é proporcionado um composto de acordo com esta invenção, ou um seu sal ou éster farmaceuticamente aceitável, ou uma sua composição, para utilização no tratamento ou prevenção de infecção pelo HCV num mamífero.
Num outro aspecto da invenção, é proporcionado um composto de acordo com esta invenção, ou um seu sal ou éster farmaceuticamente aceitável, ou uma sua composição, para utilização no tratamento ou prevenção de infecção pelo HCV num mamífero, em associação com outro agente antiviral.
Num quinto aspecto da invenção, é proporcionado um método
in vitro de inibição da actividade de polimerase de ARN dependente de ARN da enzima NS5B, codificada pelo HCV, compreendendo expor a enzima NS5B a uma quantidade eficaz de um composto de acordo com esta invenção sob condições em que é inibida a actividade de polimerase de ARN dependente de ARN da enzima NS5B.
Num sexto aspecto da invenção, é proporcionado um método in vitro de inibição da replicação do HCV, compreendendo expor uma célula infectada pelo HCV a uma quantidade eficaz de um composto de acordo com esta invenção sob condições em que é inibida a replicação do HCV.
Num sétimo aspecto da invenção, é proporcionado um sal ou éster farmaceuticamente aceitável de um composto de acordo com esta invenção, ou uma sua composição, para utilização num método de tratamento ou prevenção de infecção pelo HCV num mamífero, compreendendo administrar ao mamífero uma quantidade eficaz do sal ou éster farmaceuticamente aceitável, ou da composição. 31
Num oitavo aspecto da invenção, é proporcionado um sal ou éster farmaceuticamente aceitável de um composto de acordo com esta invenção, ou uma sua composição, para utilização num método de tratamento ou prevenção de infecção pelo HCV num mamífero, compreendendo administrar ao mamífero uma quantidade eficaz do sal ou éster farmaceuticamente aceitável, ou da composição, em associação com pelo menos um outro agente antiviral.
Num nono aspecto da invenção, é proporcionada uma composição farmacêutica para o tratamento ou prevenção de infecção pelo HCV, compreendendo uma quantidade eficaz de um composto de acordo com esta invenção, ou um seu sal ou éster farmaceuticamente aceitável, e um veículo farmaceuticamente aceitável.
De acordo com uma forma de realização específica, a composição farmacêutica desta invenção compreende adicionalmente uma quantidade terapeuticamente eficaz de um ou mais agentes antivirais. Os exemplos de agentes antivirais incluem, mas não estão limitados a, ribavirina e amantadina.
De acordo com uma outra forma de realização específica, a composição farmacêutica desta invenção compreende adicionalmente pelo menos um outro agente anti-HCV como um agente antiviral.
De acordo com uma forma de realização mais específica, a composição farmacêutica desta invenção compreende um agente imunomodulador adicional como um outro agente anti-HCV. Os exemplos de agentes imunomoduladores adicionais incluem mas não estão limitados a, α-, β-, δ-, γ-, τ- e ω-interferões e as suas formas peguiladas. 32
De acordo com outra forma de realização mais específica, a composição farmacêutica desta invenção compreende adicionalmente pelo menos um outro inibidor da polimerase do HCV como um outro agente anti-HCV.
De acordo com outra forma de realização mais específica, a composição farmacêutica desta invenção compreende adicionalmente pelo menos um inibidor da protease NS3 do HCV como um outro agente anti-HCV.
De acordo com ainda outra forma de realização mais específica, a composição farmacêutica desta invenção compreende adicionalmente pelo menos um inibidor de outro alvo no ciclo de vida do HCV como um outro agente anti-HCV. Os exemplos de tais inibidores de outros alvos incluem, mas não estão limitados a, agentes que inibem um alvo seleccionado de helicase do HCV, protease NS2/3 do HCV e IRES do HCV e agentes que interferem com a função de outros alvos virais incluindo mas não estando limitados a uma proteína NS5A.
Num décimo aspecto da invenção, é proporcionada uma utilização de um composto de acordo com esta invenção, ou de um seu sal ou éster farmaceuticamente aceitável, ou uma sua composição, para o fabrico de um medicamento para o tratamento e/ou a prevenção de uma infecção virai por Flaviviridae, de um modo preferid,o uma infecção pelo HCV.
Um décimo primeiro aspecto desta invenção refere-se a um artigo de fabrico compreendendo uma composição eficaz para tratar ou prevenir uma infecção pelo HCV ou para inibir a polimerase NS5B do HCV e um material de embalagem compreendendo 33 uma etiqueta que indica que a composição pode ser utilizada para tratar a infecção pelo virus da hepatite C, em que a referida composição compreende um composto de acordo com esta invenção ou um seu sal ou éster farmaceuticamente aceitável.
DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO
Definições
Salvo indicação em contrário, aplicam-se as seguintes definições:
Como aqui utilizado, o termo "alquilo (Ci_n) ", em que n é um número inteiro, sozinho ou em combinação com outro radical, pretende significar radicais alquilo aciclicos de cadeia linear ou ramificada contendo 1 a n átomos de carbono, respectivamente. Os exemplos de tais radicais incluem, mas não estão limitados a, metilo, etilo, n-propilo, 1-metiletilo (iso-propilo), n-butilo, 1-metilpropilo, 2-metilpropilo, 1,1-dimetiletilo (terc-butilo) , n-pentilo, etc. A seguir, o termo Me denota um grupo metilo.
Se um grupo alquilo está substituído com halogéneo, está de um modo preferido mono-, di- ou trissubstituído com flúor ou monossubstituído com cloro ou bromo.
Como aqui utilizado, o termo "alcenilo (C2-n) ", em que n é um número inteiro, sozinho ou em combinação com outro radical, pretende significar um radical acíclico, insaturado de cadeia linear ou ramificada contendo dois a n átomos de carbono, pelo menos dois dos quais estão ligados um ao outro por uma ligação dupla. Os exemplos de tais radicais incluem, mas não estão 34 limitados a, etenilo (vinilo), 1-propenilo, 2-propenilo, 1-butenilo, etc. Os isómeros cis e trans, e as misturas dos mesmos, do radical alcenilo(C2-n) estão abrangidos pelo termo. Um radical alcenilo (C2-n) pode estar substituído em quaisquer dos seus átomos de carbono, o qual de outro modo teria um átomo de hidrogénio.
Como aqui utilizado, o termo "alcinilo (C2-n) ", em que n é um número inteiro, sozinho ou em combinação com outro radical, significa um radical aciclico de cadeia linear ou ramificada contendo desde 2 a n átomos de carbono, pelo menos dois dos quais estão ligados por uma ligação tripla. Os exemplos de tais radicais incluem, mas não estão limitados a, etinilo, 1-propinilo, 2-propinilo e 1-butinilo. Um radical alcinilo(C2-n) pode estar substituído em quaisquer dos átomos de carbono do mesmo, o qual de outro modo teria um átomo de hidrogénio.
Como aqui utilizado, o termo "cicloalquilo (C3_n) ", em que n é um número inteiro, sozinho ou em combinação com outro radical, significa um radical cicloalquilo contendo desde três até n átomos de carbono. Os exemplos de tais radicais incluem, mas não estão limitados a, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclo-hexilo e ciclo-heptilo.
Como aqui utilizado, o termo "cicloalcenilo (Cs_n) ", em que n é um número inteiro, sozinho ou em combinação com outro radical, significa um radical cíclico insaturado contendo cinco a n átomos de carbono. Os exemplos incluem, mas não estão limitados a, ciclopentenilo e ciclo-hexenilo.
Como aqui utilizado o termo "cicloalquil (C3_m)-alquil (Ci_n)em que nem são números inteiros, sozinho ou em 35 combinação com outro radical, significa um radical alquilo de cadeia ramificada ou linear possuindo 1 a n átomos de carbono, ao qual está ligado covalentemente um radical cicloalquilo contendo desde três até m átomos de carbono. Os exemplos de cicloalquil (C3-7)-alquil (Ci-6) - incluem, mas não estão limitados a, ciclopropilmetilo, ciclobutilmetilo, ciclopentilmetilo, ciclo-hexilmetilo, 1-ciclopropiletilo, 2-ciclopropiletilo, 1- ciclobutiletilo, 2-ciclobutiletilo, 1-ciclopentiletilo, 2- ciclopentiletilo, 1-ciclo-hexiletilo, 2-ciclo-hexiletilo, etc.
Como aqui utilizado, o termo "grupo de protecção" define grupos de protecção que podem ser utilizados durante a transformação sintética, cujos exemplos são listados em Greene, "Protective Groups in Organic Chemistry", John Wiley & Sons, Nova Iorque (1981) e "The Peptides: Analysis, Synthesis, Biology", Vol. 3, Academic Press, Nova Iorque (1981).
Um grupo carboxilo é geralmente protegido como um éster que pode ser dissociado para dar o ácido carboxílico. Os grupos de protecção que podem ser utilizados incluem, mas não estão limitados a,: 1) ésteres de alquilo, tais como metilo, etilo, trimetilsililetilo e terc-butilo, 2) ésteres de aralquilo, tais como benzilo e benzilo substituído, ou 3) ésteres que podem ser dissociados por tratamento com base suave ou meios redutores suaves, tais como ésteres de tricloroetilo e fenacilo.
Como aqui utilizado, o termo "arilo" sozinho ou em combinação com outro radical significa um arilo de 6 ou 10 membros, i. e. um radical aromático contendo seis ou dez átomos de carbono. Os exemplos incluem, mas não estão limitados a, fenilo, 1-naftilo ou 2-naftilo. 36
Como aqui utilizado, o termo "Het" define um heterociclo de 4, 5, 6 ou 7 membros possuindo 1 a 4 heteroátomos, cada independentemente seleccionado de 0, N e S, o qual pode ser saturado, insaturado ou aromático, ou um heterobiciclo de 8, 9, 10 ou 11 membros possuindo 1 a 5 heteroátomos sempre que seja possível, cada independentemente seleccionado de O, N e S, o qual pode ser saturado, insaturado ou aromático, salvo indicação em contrário.
Como aqui utilizado o termo "heteroátomo" significa 0, S ou N.
Como aqui utilizado, o termo "heterociclo", sozinho ou em combinação com outro radical, significa um radical monovalente obtido por remoção de um hidrogénio a partir de um heterociclo saturado ou insaturado (incluindo aromático) de cinco, seis ou sete membros contendo desde um até quatro heteroátomos seleccionados de azoto, oxigénio e enxofre. Os exemplos de tais heterociclos incluem, mas não estão limitados a, azetidina, pirrolidina, tetra-hidrofurano, tiazolidina, pirrole, tiofeno, hidantoína, diazepina, lH-imidazole, isoxazole, tiazole, tetrazole, piperidina, piperazina, homopiperidina, homo-piperazina, 1,4-dioxano, 4-morfolina, 4-tiomorfolina, piridina, N-óxido de piridina ou pirimidina, ou os seguintes heterociclos:
I I
Como aqui utilizado, a expressão "heterobiciclo de 9 ou 10 membros" ou o termo "heterobiciclo", sozinho ou em combinação 37 com outro radical, significa um heterociclo como definido acima fundido com um ou mais de outros ciclos, seja este um heterociclo ou qualquer outro ciclo. Os exemplos de tais heterobiciclos incluem, mas não estão limitados a, indole, benzimidazole, tiazolo[4,5-b]-piridina, quinolina ou cumarina, ou os seguintes:
Como aqui utilizado, o termo "halo" ou "halogéneo" significa um átomo de halogéneo e inclui flúor, cloro, bromo e iodo.
Como aqui utilizado, o termo "OH" refere-se a um grupo hidroxilo. É bem conhecido para um especialista na técnica que os grupos hidroxilo podem estar substituídos por equivalentes de grupo funcional. Os exemplos de tais equivalentes de grupo funcional que são considerados por esta invenção incluem, mas não estão limitados a, éteres, sulfidrilos, tioéteres e aminas primárias, secundárias ou terciárias.
Como aqui utilizado, o termo "SH" refere-se a um grupo sulfidrilo. No âmbito da presente invenção pretende-se que, sempre que estiver presente um grupo "SH" ou "SR", este também possa estar substituído com qualquer outro estado de oxidação apropriado tal como SOR, S02R, ou S03R.
Como aqui utilizado, o termo "alcoxilo (Ci_n) " refere-se a um átomo de oxigénio adicionalmente ligado a um radical 38 alquilo (Ci-n) · Os exemplos de alcoxilo (Ci_6) incluem, mas não estão limitados a, metoxilo (CH30-) , etoxilo (CH3CH20-) , n-propoxilo (CH3CH2CH20-), 1-metiletoxilo (iso-propoxilo; (CH3)2CHO-), 1, 1-dimetiletoxilo (terc-butoxilo; (CH3)3CO-), etc. Quando um grupo alcoxilo (Ci_n) está substituído, entende-se que está substituído na sua porção de alquilo (Ci_n) .
Como aqui utilizado, o termo "alquiltio (Ci_n) " refere-se a um átomo de enxofre adicionalmente ligado a um radical alquilo (Ci-n) · Os exemplos de alquiltio (Ci_6) incluem, mas não estão limitados a, metiltio (CH3S-) , etiltio (CH3CH2S-) , n-propiltio (CH3CH2CH2S-), 1-metiletiltio (iso-propiltio; (CH3) 2CHS-), 1,1-dimetiletiltio (terc-butiltio (CH3)3CS-), etc. Quando um grupo alquiltio(Ci_n) está substituído, entende-se que está substituído na sua porção de alquilo (Ci_n) . 0 termo "oxo", como aqui utilizado, significa um átomo de oxigénio ligado a um átomo de carbono como um substituinte por uma ligação dupla (=0).
Pretende-se que quando o termo "substituído" é aplicado em conjunto com um radical possuindo mais do que uma unidade, tal como cicloalquil (C3_7)-alquil (Ci_6)-, tal substituição aplica-se a ambas as unidades i. e. qualquer uma ou ambas as unidades alquilo e cicloalquilo podem estar substituídas com os substituintes definidos.
Como aqui utilizado, o termo "COOH" refere-se a um grupo ácido carboxílico. É bem conhecido por um especialista na técnica que os grupos ácido carboxílico podem estar substituídos por equivalentes de grupo funcional. Os exemplos de tais equivalentes de grupo funcional que são considerados por esta 39 invenção incluem, mas não estão limitados a, ésteres, amidas, imidas, ácidos borónicos, ácidos fosfónicos, ácidos sulfónicos, tetrazoles, triazoles, N-acilsulfonildiamidas (RCONHSO2NR2) e N-acilsulfonamidas (RC0NHS02R) .
Como aqui utilizado, a ezpressão "equivalente de grupo funcional" pretende significar um elemento ou grupo ou um derivado substituído do mesmo que é substituível por outro elemento ou grupo que tem propriedades electrónicas, de hibridação ou de ligação semelhantes.
Os seguintes sinais ---- e são utilizados indistintamente nas subfórmulas para indicar a ligação, ou no caso de um grupo espirocíclico o átomo, o qual está ligado ao resto da molécula como definida.
Como aqui utilizado, a expressão "etiqueta detectável" significa qualquer grupo que pode estar ligado à polimerase ou a um composto da fórmula I de tal forma que quando o composto está associado ao alvo da polimerase, essa etiqueta permite o reconhecimento, directa ou indirectamente, do composto de modo que pode ser detectado, medido e quantificado. Os exemplos de tais "etiquetas" pretendem incluir, mas não estão limitados a, etiquetas fluorescentes, etiquetas quimioluminescentes, etiquetas colorimétricas, marcadores enzimáticos, isótopos radioactivos e etiquetas de afinidade tal como a biotina. Tais etiquetas são ligadas ao composto ou à polimerase por métodos bem conhecidos.
Como aqui utilizado, a expressão "etiqueta de afinidade" significa um ligando (que pode estar ligado à polimerase ou a um composto da fórmula I) cuja forte afinidade para um receptor 40 pode ser utilizada para extrair de uma solução a entidade à qual o ligando está ligado. Os exemplos de tais ligandos incluem, mas não estão limitados a biotina ou um seu derivado, um polipéptido de histidina, uma poliarginina, uma unidade de açúcar de amilose ou um epitopo definido reconhecível por um anticorpo específico. Tais etiquetas de afinidade são ligadas ao composto ou à polimerase por métodos bem conhecidos.
Como aqui utilizado, a expressão "grupo fotorreactivo" significa um grupo que é transformado, após activação pela luz, de um grupo inerte numa espécie reactiva, tal como um radical livre. Um grupo desse tipo pode ser utilizado como, por exemplo, uma etiqueta de fotoafinidade. Os exemplos de tais grupos incluem, mas não estão limitados a benzofenonas, azidas e semelhantes. 0 termo "seu sal" significa qualquer sal de adição de ácido e/ou base de um composto de acordo com a invenção; de um modo preferido um seu sal farmaceuticamente aceitável. A expressão "sal farmaceuticamente aceitável" significa um sal de um composto de acordo com a invenção que é, no âmbito de um parecer médico idóneo, adequado para utilização em contacto com os tecidos de humanos e animais inferiores sem toxicidade, irritação, resposta alérgica impróprias, e semelhantes, equilibrado com uma relação benefício/risco razoável, geralmente solúvel ou dispersível em água ou óleo, e eficaz para a sua utilização pretendida. A expressão inclui sais de adição de ácido farmaceuticamente aceitáveis e sais de adição de base farmaceuticamente aceitáveis. Os exemplos de sais adequados são encontrados em, e. g., S.M. Birge et ai., J. Pharm. Sei., 1977, 66, pp. 1-19. 41 A expressão "sal de adição de ácido farmaceuticamente aceitável" significa aqueles sais que retêm a eficácia e propriedades biológicas das bases livres e que não são, em termos biológicos ou de qualquer outro modo, indesejáveis preparados com ácidos inorgânicos, tais como ácido clorídrico, ácido bromídrico, ácido sulfúrico, ácido sulfâmico, ácido nítrico, ácido fosfórico, e semelhantes, e ácidos orgânicos, tais como ácido acético, ácido trifluoroacético, ácido adípico, ácido ascórbico, ácido aspártico, ácido benzenossulfónico, ácido benzóico, ácido butírico, ácido canfórico, ácido canforsulfónico, ácido cinâmico, ácido cítrico, ácido diglucónico, ácido etanossulfónico, ácido glutâmico, ácido glicólico, ácido glicerofosfórico, ácido hemissúlfico, ácido hexanóico, ácido fórmico, ácido fumárico, ácido 2-hidroxietano-sulfónico (ácido isetiónico), ácido láctico, ácido hidroximaleico, ácido málico, ácido malónico, ácido mandélico, ácido mesitilenossulfónico, ácido metanossulfónico, ácido naftalenossulfónico, ácido nicotínico, ácido 2-naftalenossulfónico, ácido oxálico, ácido pamóico, ácido pectínico, ácido fenilacético, ácido 3-fenilpropiónico, ácido piválico, ácido propiónico, ácido pirúvico, ácido salicílico, ácido esteárico, ácido succínico, ácido sulfanílico, ácido tartárico, ácido p-toluenossulfónico, ácido undecanóico e semelhantes. A expressão "sal de adição de base farmaceuticamente aceitável" significa aqueles sais que retêm a eficácia e propriedades biológicas dos ácidos livres e que não são, em termos biológicos ou de qualquer outro modo, indesejáveis, preparados com bases inorgânicas, tais como amónia ou hidróxido, carbonato ou bicarbonato de amónio ou um catião de metal, tais 42 como sódio, potássio, litio, cálcio, magnésio, ferro, zinco, cobre, manganês, alumínio e semelhantes. São particularmente preferidos os sais de amónio, potássio, sódio, cálcio e magnésio. Os sais derivados de bases orgânicas, não tóxicas farmaceuticamente aceitáveis incluem os sais de aminas primárias, secundárias e terciárias, compostos quaternários de amina, aminas substituídas incluindo aminas substituídas naturais, aminas cíclicas e resinas de troca iónica básicas, tais como metilamina, dimetilamina, trimetilamina, etilamina, dietilamina, trietilamina, isopropilamina, tripropilamina, tributilamina, etanolamina, dietanolamina, 2-dimetilaminoetanol, 2-dietilaminoetanol, diciclo-hexilamina, lisina, arginina, histidina, cafeína, hidrabamina, colina, betaína, etilenodiamina, glucosamina, metilglucamina, teobromina, purinas, piperazina, piperidina, N-etilpiperidina, compostos de tetrametilamónio, compostos de tetraetilamónio, piridina, N,N-dimetilanilina, N-metilpiperidina, N-metilmorfolina, diciclo-hexilamina, dibenzilamina, N,N-dibenzilfenetilamina, 1-efenamina, N, N'-dibenziletilenodiamina, resinas de poliamina e semelhantes. As bases orgânicas, não tóxicas particularmente preferidas são as isopropilamina, dietilamina, etanolamina, trimetilamina, diciclo-hexilamina, colina e cafeína. A expressão "seu éster" significa qualquer éster de um composto em que qualquer das funções carboxilo da molécula está substituída por uma função alcoxicarbonilo, incluindo mas não estando limitado aos seus ésteres farmaceuticamente aceitáveis. A expressão "éster farmaceuticamente aceitável", como aqui utilizada, sozinha ou em combinação com outro substituinte, significa ésteres do composto de acordo com a invenção em que qualquer das funções carboxilo da molécula, mas de um modo 43 preferido a extremidade carboxilo, está substituída por uma função alcoxicarbonilo:
O
OR em que a unidade R do éster é seleccionada de alquilo (e. g., metilo, etilo, n-propilo, terc-butilo, n-butilo); alcoxialquilo (e. g. metoximetilo); alcoxiacilo (e. g.r acetoximetilo); aralquilo (e. g., benzilo); ariloxialquilo (e. g., fenoximetilo); arilo (e. g., fenilo), opcionalmente substituído com halogéneo, alquilo (Ci_4) ou alcoxilo (C4-4) . Outros ésteres adequados podem ser encontrados em Design of prodrugs, Bundgaard, H. Ed. Elsevier (1985). Tais ésteres farmaceuticamente aceitáveis são geralmente hidrolisados in vivo quando injectados num mamífero e transformados na forma de ácido do composto de acordo com a invenção. No que diz respeito aos ésteres descritos acima, salvo indicação em contrário, qualquer unidade alquilo presente contém vantajosamente 1 a 16 átomos de carbono, particularmente 1 a 6 átomos de carbono. Qualquer unidade arilo presente em tais ésteres compreende vantajosamente um grupo fenilo. Em particular, os ésteres podem ser um éster de alquilo (Ci-i6) , um éster benzílico não substituído ou um éster benzílico substituído com pelo menos um halogéneo, alquilo (Ci_6) , alcoxilo (Ci_6) , nitro ou trif luorometilo . A expressão "agente antiviral", como aqui utilizada, significa um agente (composto ou produto biológico) que é eficaz para inibir a formação e/ou replicação de um vírus num mamífero. Isto inclui agentes que interferem com os mecanismos do hospedeiro ou virais necessários para a formação e/ou replicação 44 de um vírus num mamífero. Os agentes antivirais incluem, mas não estão limitados a ribavirina, amantadina, VX-497 (merimepodib, Vertex Pharmaceuticals), VX-498 (Vertex Pharmaceuticals), Levovirina, Viramidina, Ceplene (maxamina), XTL-001 e XTL-002 (XTL Biopharmaceuticals). A expressão "outro agente anti-HCV", como aqui utilizada, significa aqueles agentes que são eficazes para diminuir ou prevenir a progressão dos sintomas de doença relacionados com a hepatite C. Tais agentes podem ser seleccionados de: agentes imunomoduladores, inibidores da protease NS3 do HCV, outros inibidores da polimerase do HCV ou inibidores de outro alvo no ciclo de vida do HCV. A expressão "agente imunomodulador", como aqui utilizada, significa aqueles agentes (compostos ou produtos biológicos) que são eficazes para melhorar ou potenciar a resposta do sistema imunitário num mamífero. Os agentes imunomoduladores incluem, mas não estão limitados a, interferões de classe I (tais como α-, β-, δ- e ω-interferões, τ-interferões, interferões consenso e asialo-interferões), interferões de classe II (tais como γ-interferões) e suas formas peguiladas.
0 termo "inibidor da protease NS3 do HCV", como aqui utilizado, significa um agente (compostos ou produtos biológicos) que é eficaz para inibir a função da protease NS3 do HCV num mamífero. Os inibidores da protease NS3 do HCV incluem, mas não estão limitados àqueles compostos descritos nos documentos WO 99/07733, WO 99/07734, WO 00/09558, WO 00/09543, WO 00/59929, WO 02/060926, US 2002/0177725, WO 03/053349, WO 03/062265, WO 03/064416, WO 03/064455, WO 03/064456, WO 03/099316, WO 03/099274, WO 2004/032827, WO 2004/037855, WO 45 2004/043339, WO 2004/072243, WO 2004/093798, WO 2004/094452, WO 2004/101602, WO 2004/101605, WO 2004/103996, o candidato clínico da Boehringer Ingelheim identificado como BILN 2061 e o candidato clínico da Vertex identificado como VX-950. A expressão "outro inibidor da polimerase do HCV", como aqui utilizada, significa um agente (compostos ou produtos biológicos) que é eficaz para inibir a função da polimerase do HCV num mamífero, pelo que este agente tem uma estrutura diferente dos compostos de acordo com esta invenção e, de um modo preferido, liga-se a um sítio da polimerase do HCV diferente do sítio visado pelos compostos de acordo com esta invenção. Os outros inibidores da polimerase do HCV incluem não nucleósidos, por exemplo, aqueles compostos descritos nos documentos: WO 2004/087714 (IRBM), WO 04/005286 (Gilead), WO 04/002977 (Pharmacia), WO 04/002944 (Pharmacia), WO 04/002940 (Pharmacia), WO 03/101993 (Neogenesis), WO 03/099824 (Wyeth), WO 03/099275 (Wyeth), WO 03/099801 (GSK)), WO 03/097646 (GSK), WO 03/095441 (Pfizer), WO 03/090674 (Viropharma), WO 03/084953 (B&C Biopharm), WO 03/082265 (Fujisawa), WO 03/082848 (Pfizer), WO 03/062211 (Merck), WO 03/059356 (GSK), EP 1321463 (Shire), WO 03/040112 (Rigel), WO 03/037893 (GSK), WO 03/037894 (GSK), WO 03/037262 (GSK), WO 03/037895 (GSK), WO 03/026587 (BMS), WO 03/002518 (Dong Wha), WO 03/000254 (Japan Tobacco), WO 02/100846 AI (Shire), WO 02/100851 A2 (Shire), WO 02/098424 AI (GSK), WO 02/079187 (Dong Wha), WO 03/02/20497 (Shionogi), WO 02/06246 (Merck), WO 01/47883 (Japan Tobacco), WO 01/85172 AI (GSK), WO 01/85720 (GSK), WO 01/77091 (Tularik), WO 00/18231 (Viropharma), WO 00/13708 (Viropharma), WO 01/10573 (Viropharma) WO 00/06529 (Merck), EP 1 256 628 A2 (Agouron) , WO 02/04425 (Boehringer Ingelheim) WO 03/007945 (Boehringer Ingelheim), WO 03/010140 (Boehringer Ingelheim), WO 03/010141 (Boehringer 46
Ingelheim), WO 2004/064925 (Boehringer Ingelheim) e WO 2004/065367 (Boehringer Ingelheim). Além disso, os outros inibidores da polimerase do HCV incluem também análogos de nucleósidos, por exemplo, agueles compostos descritos nos documentos: WO 04/007512 (Merck/Isis), WO 04/003000 (Idenix), WO 04/002999 (Idenix), WO 04/0002422 (Idenix), WO 04/003138 (Merck), WO 03/105770 (Merck), WO 03/105770 (Merck), WO 03/093290 (Genelabs), WO 03/087298 (Biocryst) , WO 03/062256 (Ribapharm), WO 03/062255 (Ribapharm), WO 03/061385 (Ribapharm) , WO 03/026675 (Idenix), WO 03/026589 (Idenix), WO 03/020222 (Merck), WO 03/000713 (Glaxo), WO 02/100415 (Hoffmann-La Roche) , WO 02/1094289 (Hoffmann-La Roche), WO 02/051425 (Mitsubishi), WO 02/18404 (Hoffmann-La Roche), WO 02/069903 (Biocryst Pharmaceuticals Inc.)/ WO 02/057287 (Merck/Isis), WO 02/057425 (Merck/Isis), WO 01/90121 (Idenix), WO 01/60315 (Shire) e WO 01/32153 (Shire). A expressão "inibidor de outro alvo no ciclo de vida do HCV", como aqui utilizada, significa um agente (compostos ou produtos biológicos) que é eficaz para inibir a formação e/ou replicação do HCV num mamífero que não através da inibição da polimerase de ARN dependente de ARN do HCV. Isto inclui agentes que interferem com os mecanismos do hospedeiro ou virais do HCV necessários para a formação e/ou replicação do HCV num mamífero. Os inibidores de outro alvo no ciclo de vida do HCV incluem, mas não estão limitados a, agentes que inibem um alvo seleccionado de uma helicase do HCV, protease NS2/3 do HCV e IRES do HCV e agentes que interferem com a função de outros alvos virais incluindo mas não estando limitados a uma proteína NS5A. A expressão "inibidor de HIV", como aqui utilizada, significa um agente (compostos ou produtos biológicos) que é eficaz para inibir a formação e/ou replicação de HIV num mamífero. Isto inclui agentes que interferem com os mecanismos do hospedeiro ou virais necessários para a formação e/ou replicação de HIV num mamífero. Os inibidores de HIV incluem, mas não estão limitados a, inibidores nucleosídicos, inibidores não nucleosídicos, inibidores da protease, inibidores de fusão e inibidores de integrase. A expressão "inibidor do HAV", como aqui utilizada, significa um agente (compostos ou produtos biológicos) que é eficaz para inibir a formação e/ou replicação do HAV num mamífero. Isto inclui agentes que interferem com os mecanismos do hospedeiro ou virais necessários para a formação e/ou replicação do HAV num mamífero. Os inibidores do HAV incluem, mas não estão limitados a, vacinas contra a Hepatite A, por exemplo, Havrix® (GlaxoSmithKline), VAQTA® (Merck) e Avaxim® (Aventis Pasteur). A expressão "inibidor do HBV", como aqui utilizada, significa um agente (compostos ou produtos biológicos) que é eficaz para inibir a formação e/ou replicação do HBV num mamífero. Isto inclui agentes que interferem com os mecanismos do hospedeiro ou virais necessários para a formação e/ou replicação do HBV num mamífero. Os inibidores do HBV incluem agentes que inibem a polimerase de ADN virai do HBV ou as vacinas contra o HBV. Os exemplos específicos de inibidores do HBV incluem, mas não estão limitados a, Lamivudina (Epivir-HBV®), Adefovir Dipivoxil, Entecavir, FTC (Coviracil®), DAPD (DXG), L-FMAU (Clevudina®), AM365 (Amrad), Ldt (Telbivudina), monoval-
LdC (Valtorcitabina), ACH-126,443 (L-Fd4C) (Achillion), MCC478 (Eli Lilly), Racivir (RCV), Fluoro-L e nucleósidos D, 48
Robustaflavona, ICN 2001-3 (ICN), Bam 205 (Novelos), XTL-001 (XTL), Imino-Açúcares (Nonyl-DNJ) (Synergy), HepBzima; e produtos imunomoduladores tais como: interferão alfa 2b, HE2000 (Hollis-Eden), Theradigm (Epimmune), EHT899 (Enzo Biochem), Timosina alfa-1 (Zadaxin®), vacina de ADN de HBV (PowderJect) , vacina de ADN de HBV (Jefferon Center), antigénio de HBV (OraGen), BayHep B® (Bayer), Nabi-HB® (Nabi) e Anti-hepatite B (Cangene); e produtos de vacina contra o HBV tais como os seguintes: Engerix B, Recombivax HB, GenHevac B, Hepacare, Bio-Hep B, TwinRix, Comvax, Hexavac. A expressão "interferão de classe I", como aqui utilizada, significa um interferão seleccionado de um grupo de interferões que se ligam todos ao receptor tipo I. Isto inclui interferões de classe I produzidos natural e sinteticamente. Os exemplos de interferões de classe I incluem, mas não estão limitados a, a-, β-, δ-, ω-interferões, τ-interferões, interferões consenso, asialo-interferões e as suas formas peguiladas. A expressão "interferão de classe II", como aqui utilizada, significa um interferão seleccionado de um grupo de interferões que se ligam todos ao receptor tipo II. Os exemplos de interferões de classe II incluem, mas não estão limitados a, γ-interferões e as suas formas peguiladas.
Como discutido acima, é considerada a terapia de associação em que um composto de acordo com a invenção, ou um seu sal ou éster farmaceuticamente aceitável, é co-administrado com pelo menos um agente adicional seleccionado de: um agente antiviral, um agente imunomodulador, um inibidor da protease NS3 do HCV, outro inibidor da polimerase do HCV, um inibidor de outro alvo 49 no ciclo de vida do HCV, um inibidor de HIV, um inibidor do HAV e um inibidor do HBV. Exemplos de tais agentes são proporcionados na Secção de definições acima. Os exemplos preferidos específicos de tais agentes são listados abaixo: agentes antivirais: ribavirina ou amantadina; agentes imunomoduladores: interferões de classe I, interferões de classe II ou as suas formas peguiladas; inibidores da protease NS3 do HCV; outros inibidores da polimerase do HCV: inibidores nucleosidicos ou não nucleosídicos; um inibidor de outro alvo no ciclo de vida do HCV que inibe um alvo seleccionado de: helicase NS3, protease NS2/3 do HCV e sítio interno de entrada de ribossoma (IRES) ou um agente que interfere com a função de uma proteína NS5A; inibidores de HIV: inibidores nucleosídicos, inibidores não nucleosídicos, inibidores da protease, inibidores de fusão ou inibidores de integrase; ou inibidores do HBV: agentes que inibem a polimerase de ADN virai do HBV ou um agente que é uma vacina contra o HBV.
Estes agentes adicionais podem ser combinados com os compostos desta invenção para criar uma única forma de dosagem farmacêutica. Alternativamente, estes agentes adicionais podem ser administrados separadamente ao doente como parte de uma forma de dosagem múltipla, por exemplo, utilizando um kit. Estes agentes adicionais podem ser administrados ao doente antes, simultaneamente ou após a administração de um composto de fórmula (I), ou um seu sal ou éster farmaceuticamente aceitável. 50
Como aqui utilizado, o termo "tratamento" significa a administração de um composto ou composição de acordo com a presente invenção para aliviar ou eliminar os sintomas da doença de hepatite C e/ou para reduzir a carga virai num doente.
Como aqui utilizado, o termo "prevenção" significa a administração de um composto ou composição de acordo com a presente invenção após exposição do indivíduo ao vírus, mas antes do aparecimento dos sintomas da doença e/ou antes da detecção do vírus no sangue, para prevenir o aparecimento dos sintomas da doença e/ou para impedir que o vírus atinja níveis detectáveis no sangue.
Formas de realização preferidas da divulgação
Salvo indicação em contrário, todos os grupos e substituintes, incluindo mas não estando limitados a R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R21, R50, RN1, RN2, A, B e Het, têm as definições como definidas acima e a seguir. A seguir são descritas as formas de realização, grupos e substituintes preferidos da divulgação. Núcleo: São proporcionados compostos da fórmula Ia:
51 da
Alternativamente sao proporcionados
compostos R1:
De acordo com uma forma de realização preferida R1 é seleccionado do grupo consistindo de H, metilo e etilo.
De um modo mais preferido, R1 é metilo.
De um modo preferido R2 é seleccionado de halogéneo, ciano, alquilo (Ci_4) , alcenilo (C2-4) , alcinilo (C2-4) , cicloalquilo (C3_6) , fenilo e Het seleccionado do grupo de fórmulas:
» » I I I I II 52
em que os referidos fenilo e Het estão nao substituídos ou substituídos com R21, em que R21 é como aqui definido.
De um modo mais preferido, R2 é seleccionado de Br, Cl, ciano, metilo, etilo, propilo, 1-metiletilo, etenilo, 1-metiletenilo, etinilo, ciclopropilo, fenilo e Het seleccionado do grupo de fórmulas:
53
em que os referidos fenilo e Het estão não substituídos ou substituídos com R21, em que R21 é como aqui definido.
De um modo preferido, R21 é 1, 2 ou 3 substituintes, cada, independentemente seleccionado de: - 1 a 3 substituintes, cada, independentemente seleccionado de halogéneo; e - 1 a 2 substituintes, cada, independentemente seleccionado de: a) hidroxilo, alquilo (Ci_4) ou alcoxilo (Ci_4) ; em que os referidos alquilo e alcoxilo estão, cada, opcionalmente substituídos com um, dois ou três átomos de halogéneo; b) -NRn2Rn1 em que RN1 é seleccionado de H, alquilo (Ci_3) , -CO-alquilo (C1-3) , -CO-O-alquilo (C1-3) e Het; 54 em que as porções de alquilo de cada dos referidos alquilo (Ci_3) , -CO-alquilo (Ci_3) e -CO-O-alquilo (Ci_3) estão opcionalmente substituídas com um, dois ou três substituintes seleccionados de halogéneo e alcoxilo (C1-6) ; e em que o referido Het é um heterociclo monocíclico saturado, insaturado ou aromático de 5 ou 6 membros possuindo 1 ou 2 heteroátomos, cada independentemente seleccionado de N, 0 e S; e
Rn2 é H ou alquilo (Ci_3) ; c) -CONRn2Rn1, em que RN2 e RN1 são, cada, independentemente seleccionados de H e alquilo (C1-3) ; e d) Het, em que o referido Het é um heterociclo monocíclico de 5 ou 6 membros possuindo 1, 2 ou 3 heteroátomos, cada, independentemente seleccionado de N, 0 e S.
De um modo mais preferido, R21 é 1, 2 ou 3 substituintes, cada, independentemente seleccionado de: 1 a 2 substituintes, cada, independentemente seleccionado de flúor, cloro e bromo; e 1 a 2 substituintes, cada, independentemente seleccionado de: a) hidroxilo, metilo, etilo, propilo, 1-metiletilo, metoxilo, etoxilo, propoxilo ou 1-metiletoxilo; em que os referidos metilo, etilo, propilo, 1-metiletilo, metoxilo, etoxilo, propoxilo e 1-metiletoxilo estão, 55 cada, opcionalmente substituídos com um, dois ou três átomos de halogéneo; b) -N(CH3)2 ou -NHRn1 em que RN1 é seleccionado de H, metilo, etilo, propilo, 1-metiletilo, -CO-CH3, 2-piridilo, 3-piridilo e 4-piridilo; em que os referidos metilo, etilo, propilo e 1-metiletilo estão, cada, opcionalmente substituídos com um, dois ou três subst ituintes seleccionados de halogéneo e alcoxilo (C1-3) ; c) -CONH2, e d) 3-piridilo, 4-piridilo, 5-pirimidinilo, 2-furilo, 1-pirrolilo e 1-morfolino.
Por conseguinte, de um modo preferido, R2 é seleccionado de Br, Cl, ciano, metilo, etilo, propilo, 1-metiletilo, ciclopropilo, etenilo, 1-metiletenilo, etinilo,
56
57
De um ciclopropilo, modo mais preferido, etenilo, 1-metiletenilo, R2 é seleccionado de
58
seleccionado de:
De um modo muito preferido, R2 é o
Cl
Br
X
N e ci
De um modo preferido, R3 é ciclopentilo ou ciclo-hexilo, estando cada opcionalmente substituído com um ou dois átomos de flúor. 59
De um modo mais preferido, R3 é ciclopentilo ou ciclo-hexilo. R4 e R7:
De um modo preferido R4 é H ou halogéneo e R7 é H. De um modo mais preferido, R4 é H ou Cl e R7 é H. De um modo muito preferido, R4 e R7 são ambos H. R5 e R6:
De um modo preferido, um de R5 e R6 é seleccionado de: a) alcenilo (C2-4) substituído com COOH ou CONHRn1, em que RN1 é seleccionado de H e alquilo (Ci_3) , estando o referido alcenilo ainda opcionalmente substituído com um ou dois substituintes, cada, independentemente seleccionado de alquilo (Ci_3) e halogéneo; b) fenilo ou Het, estando cada opcionalmente substituído com um ou dois substituintes, cada, independentemente seleccionado de: i. -OH, oxo, COOH; ii. alquilo (C1-3) opcionalmente substituído com fenilo ou -N(Rn2)Rn1, em que RN1 e RN2 são, cada, independentemente seleccionados de H e 60 alquilo (Ci-3) ou RN1 e RN2 estão ligados, em conjunto com o átomo de N ao qual estão ligados, para formar um heterociclo monocíclico contendo N, saturado, insaturado ou aromático de 5 ou 6 membros, possuindo opcionalmente mais um ou dois heteroátomos, cada, independentemente seleccionado de N, 0 e S; e iii. -N(Rn2)Rn1; em que RN1 é seleccionado de H, alquilo (Ci_3) e -COalquilo (Ci_3) e RN2 é H ou alquilo (Ci_3) ; em que Het é um heterociclo monocíclico saturado, insaturado ou aromático de 5 ou 6 membros possuindo desde 1 a 3 heteroátomos, cada independentemente seleccionado de 0, Ne S; e c) C00H; e o outro de R5 e R6 é seleccionado de H, NHRn1, alquilo (Ci_3) e alcoxilo (Ci-3) , em que RN1 é seleccionado de H e -C0-0- alquilo (Ci-6) ·
De um modo mais preferido, um de R5 e R6 é seleccionado de: a) alcenilo (C2-4) substituído com C00H ou -C0NH2, e ainda opcionalmente substituído com um ou dois substituintes seleccionados de alquilo (Ci_3) e halogéneo; e b) fenilo ou Het, estando cada opcionalmente substituído com um ou dois substituintes, cada, independentemente seleccionado de: 61 i . -OH, oxo, COOH; ii. alquilo(Ci_3) opcionalmente substituído com fenilo, -N(CH3)2, ou e iii. -NH2, -N(CH3)2 e -NHCOCH3; em que Het é seleccionado das fórmulas:
c) COOH; e o outro de R5 e R6 é seleccionado de H, metilo, metoxilo, etoxilo, -NH2 e -NHCO-OCH(CH3)2.
De um modo ainda mais preferido, um de R5 e R6 é seleccionado de: 62 a) -CH-CH-COOH ou -CH-CH-CONH2, cada opcionalmente substituído com um ou dois substituintes seleccionados de metilo, etilo e fluoro; e b) fenilo opcionalmente substituído com NH2 ou Het opcionalmente substituído com um ou dois substituintes, cada, independentemente seleccionado de: i. -OH, oxo, COOH; ii. metilo ou etilo, cada opcionalmente substituído com fenilo, -N(CH3)2, ou
e iii. -NH2, -N(CH3)2 e -NHCOCH3; em que Het é seleccionado das fórmulas:
e e c) COOH; 63 H, metilo, metoxilo e o outro de R5 e R6 é seleccionado de etoxilo, -NH2 e -NHCO-OCH(CH3)2.
De um modo ainda mais preferido, um de R5 e R6 é seleccionado de -COOH,
COOH
COOH F COOH I f
COOH
HOOC H,C COOH
CONHj NH,
e o outro de R5 e R6 é seleccionado de H, metilo, metoxilo, etoxilo, -NH2 e -NHCO-OCH(CH3)2.
De um modo muito preferido, um de R5 e R6 é e o outro de R5 e R6 é H.
COOH
H,C COOH um de R5 e R6
Alternativamente, de um modo muito preferido, é seleccionado de: 64
e o outro de R5 e R6 é Η. rIl
De um modo preferido, R8 é seleccionado de alquilo (C1-5) > cicloalquilo (C4-6) e cicloalquil (C3-4)-alquilo (Ci-3) , em que o alquilo (C1-5) está opcionalmente substituído com alcoxilo (Ci_3) ou desde um até três átomos de flúor.
De um modo mais preferido, R8 é seleccionado de metilo, etilo, propilo, 1-metiletilo, 2-metilpropilo, 3-metilbutilo, ciclobutilo, ciclopropilmetilo, 2-fluoroetilo, 2,2,2-trifluoroetilo e 2-metoxietilo.
De um modo muito preferido R8 é metilo. R9 e R10: 1 9 10 ~
De um modo preferido, R e R sao, cada, independentemente seleccionados de alquilo (Ci_3) ou R9 e R10 estão ligados, em conjunto com o átomo de C ao qual estão ligados, para formar cicloalquilo (C3_6) , cicloalcenilo (C5_6) ou um heterociclo 65 monocíclico de 5 ou 6 membros possuindo desde 1 a 2 heteroátomos, cada independentemente seleccionado de 0 e N; em que o referido cicloalquilo, cicloalcenilo ou heterociclo está, cada, opcionalmente substituído com alquilo (Ci_4) . de:
De um modo mais preferido, o grupo
é seleccionado
r nh
De um modo ainda mais preferido, o grupo seleccionado de:
é
De um modo muito preferido, o grupo
Estão abrangidos compostos de fórmula I: 66
em que: A ou B é N e o outro B ou A é C, em que-----entre dois átomos de C representa uma ligação dupla e-----entre um átomo de C e um átomo de N representa uma ligação simples; R1 é H ou alquilo (Ci_6) ; R2 é halogéneo, arilo ou Het; estando os referidos arilo e Het opcionalmente substituído com R21; em que R21 é um, dois ou três substituintes, cada, independentemente seleccionado de -OH, -CN, -N(Rn2)Rn1, halogéneo, alquilo (Ci-6) , alcoxilo (Ci-ε) , alquiltio (Ci-6) , Het e -C0-N(Rn2)Rn1; em que os referidos alquilo, alcoxilo e alquiltio estão, cada, opcionalmente substituídos com um, dois ou três átomos de halogéneo; R3 é cicloalquilo (C5_6) , opcionalmente substituído com desde um até quatro átomos de halogéneo; R4 e R7 são, cada, independentemente seleccionados de H, alquilo (Ci-e) , alcoxilo (Ci_6) , alquiltio (Ci_6) , -NH2, -NHalquilo (Ci-e) , -N (alquilo (Ci_6) ) 2 e halogéneo; 67
Het e um de R5 e R6 é seleccionado de COOH, -CO-N (RN2) RN1, alcenilo (C2-6) ? em que Het, alcenilo (C2-6) e RN1 ou qualquer heterociclo formado entre RN2 e RN1 estão, cada, opcionalmente substituídos com R50; substituintes, cada, alquilo (C1-6) , -COOH, em que R50 é um, dois ou três independentemente seleccionado de -N(Rn2)Rn1; -CO-N (Rn2) Rn1; e halogéneo; e o outro de R5 e R6 é seleccionado de H, alquilo (Ci_6) , alcoxilo (Ci_6) , alquiltio (Ci_6) e N(Rn2)Rn1; R8 é alquilo (Ci_6) , cicloalquilo (C3_7) ou cicloalquil (C3_7) -alquil (C1-6) em que os referidos alquilo, cicloalquilo e cicloalquil-alquilo estão, cada, opcionalmente substituídos com um, dois ou três substituintes, cada, independentemente seleccionado de halogéneo, alcoxilo (Ci-6) e alquiltio (Ci_6) ; R9 e R10 são, cada, independentemente seleccionados de alquilo (Ci_ 6) ; ou R9 e R10 estão ligados em conjunto com o átomo de C ao qual estão ligados, para formar cicloalquilo (C3_7) , cicloalcenilo (C5_7) ou um heterociclo de 4, 5 ou 6 membros possuindo desde 1 a 3 heteroátomos, cada, independentemente seleccionado de 0, Ne S; em que o referido cicloalquilo, cicloalcenilo ou heterociclo está, cada, opcionalmente substituído com alquilo (Ci_4) ; 68 RN1 é seleccionado de H, alquilo (Ci_6), cicloalquilo (C3_7), cicloalquil (C3-7)-alquil (Ci_6)-CO-alquilo (Ci_6) , -C0-0-alquilo (C1-6) e Het; em que todos os referidos alquilo e cicloalquilo estão opcionalmente substituídos com um, dois ou três substituintes, cada, independentemente seleccionado de halogéneo, alcoxilo (Ci_6) e alquiltio (Ci-ε) ; e
Rn2 é H ou alquilo (Ci_6) , ou
Rn2 e RN1 podem estar ligados em conjunto com o átomo de N ao qual estão ligados, para formar um heterociclo contendo N saturado ou insaturado de 4, 5, 6 ou 7 membros ou um heterobiciclo contendo N de 8, 9, 10 ou 11 membros, possuindo cada adicionalmente desde 1 a 3 heteroátomos, cada independentemente seleccionado de O, N e S; em que o heterociclo ou heterobiciclo formado por RN2 e RN1 está opcionalmente substituído com um, dois ou três substituintes, cada, independentemente seleccionado de halogéneo, alquilo (Ci_6) , alcoxilo (Ci_6) e alquiltio (Ci-6) ; em que Het é definido como um heterociclo de 4, 5, 6 ou 7 membros possuindo 1 a 4 heteroátomos, cada independentemente seleccionado de O, N e S, o qual pode ser saturado, insaturado ou aromático, ou um heterobiciclo de 8, 9, 10 ou 11 membros possuindo 1 a 5 heteroátomos sempre que seja possível, cada, independentemente seleccionado de O, N e S, o qual pode ser saturado, insaturado ou aromático; ou um seu sal. 69
Também estão abrangidos compostos de fórmula I, em particular da fórmula Ia ou Ib, em que: R1 é seleccionado do grupo consistindo de H, metilo e etilo; R2 é seleccionado de halogéneo, ciano, alquilo (Ci_4) , alcenilo(C2-4), alcinilo (C2-4) ,· cicloalquilo (C3_6) , fenilo e Het seleccionado do grupo de fórmulas:
em que os referidos fenilo e Het estão não substituídos ou substituídos com R21, em que R21 é 1, 2 ou 3 substituintes, cada, independentemente seleccionado de: 70 1 2 ou 3 substituintes, cada, independentemente 2 seleccionado de halogéneo; e 1 ou 2 substituintes, cada, independentemente seleccionado de: a) hidroxilo, alquilo (Ci_4) ou alcoxilo (Ci_4) ; em que os referidos alquilo e alcoxilo estão, cada, opcionalmente substituídos com um, dois ou três átomos de halogéneo; b) -NRn2Rn1 em que RN1 é seleccionado de H, alquilo (Ci_3) , -CO-alquilo (Ci_3) , -CO-O-alquilo (Ci_3) e Het; em que as porções de alquilo de cada dos referidos alquilo (C1-3) , -CO-alquilo (C1-3) e -CO-O-alquilo (C1-3) estão opcionalmente substituídas com um, dois ou três substituintes seleccionados de halogéneo e alcoxilo (C1-6) ; e em que o referido Het é um heterociclo monocíclico saturado, insaturado ou aromático de 5 ou 6 membros possuindo 1 ou 2 heteroátomos, cada independentemente seleccionado de N, 0 e S; e
Rn2 é H ou alquilo (C1-3) ; c) -CONRN2RN1, em que RN2 e RN1 são, cada, independentemente seleccionados de H e alquilo (Ci_3) ; e d) Het, em que o referido Het é um heterociclo monocíclico de 5 ou 6 membros possuindo 1, 2 ou 3 heteroátomos, cada independentemente seleccionado de N, 0 e S; r3 é ciclopentilo ou ciclo-hexilo, cada opcionalmente substituído com um até quatro átomos de flúor; 71 R4 é H ou halogéneo e R7 é H; um de R5 e R6 é seleccionado de: a) alcenilo (C2-4) substituído com COOH ou CONHRn1, em que RN1 é seleccionado de H e alquilo (Ci_3) , estando o referido alcenilo ainda opcionalmente substituído com um ou dois substituintes, cada, independentemente seleccionado de alquilo (Ci_3) e halogéneo; b) fenilo ou Het, estando cada opcionalmente substituído com um ou dois substituintes, cada, independentemente seleccionado de: i. -OH, oxo, COOH; ii. alquilo (C1-3) opcionalmente substituído com fenilo ou -N(Rn2)Rn1, em que RN1 e RN2 são, cada, independentemente seleccionados de H e alquilo (C1-3) ou RN1 e RN2 estão ligados, em conjunto com o átomo de N ao qual estão ligados, para formar um heterociclo monocíclico contendo N, saturado, insaturado ou aromático de 5 ou 6 membros, possuindo opcionalmente mais um ou dois heteroátomos, cada, independentemente seleccionado de N, 0 e S; e iii. -N(RN2)Rn1; em que RN1 é seleccionado de H, alquilo (C1-3) e -COalquilo (C1-3) e RN2 é H ou alquilo (C^) ; 72 em que Het é um heterociclo monocíclico saturado, insaturado ou aromático de 5 ou 6 membros possuindo desde 1 a 3 heteroátomos, cada independentemente seleccionado de 0, N e S; e c) COOH; e o outro de R5 e R6 é seleccionado de H, NHRn1, alquilo (Ci_3) e alcoxilo (Ci_3), em que RN1 é seleccionado de H e -C0-0-alquilo (Ci_6) ; R8 é seleccionado de alquilo (C1-5) , cicloalquilo (C4_6) e cicloalquil (C3-4)-alquilo (C1-3) , em que o alquilo (C1-5) está opcionalmente substituído com alcoxilo(Ci_3) ou desde um até três átomos de flúor; e R9 e R10 são, cada, independentemente seleccionados de alquilo (Cx-3) ou R9 e R10 estão liqados, em conjunto com o átomo de C ao qual estão ligados, para formar cicloalquilo (C3_6) , cicloalcenilo(C5_6) ou um heterociclo de 5 ou 6 membros possuindo desde 1 a 2 heteroátomos seleccionados de 0 e N; em que o referido cicloalquilo, cicloalcenilo ou heterociclo está opcionalmente substituído com alquilo (C^) .
De um modo mais preferido, R1 é seleccionado do grupo consistindo de H, metilo e etilo; R2 é seleccionado de Br, Cl, ciano, metilo, etilo, propilo, 1-metiletilo, etenilo, 1-metiletenilo, etinilo, ciclopropilo, fenilo e Het seleccionado do grupo de fórmulas: 73
em que os referidos fenilo e Het estão não substituídos ou substituídos com R21, em que R21 é 1, 2 ou 3 substituintes, cada, independentemente seleccionado de: 1 a 2 substituintes, seleccionado de flúor; cloro e bromo; cada, e independentemente 1 a 2 substituintes, cada, independentemente seleccionado de: a) hidroxilo, metilo, etilo, propilo, 1-metiletilo, metoxilo, etoxilo, propoxilo ou 1-metiletoxilo; em que os referidos metilo, etilo, propilo, 1-metiletilo, metoxilo, etoxilo, propoxilo e 1-metiletoxilo estão, cada, opcionalmente substituídos com um, dois ou três átomos de halogéneo; 74 b) —N (CH3) 2 ou -NHRn1 em que RN1 é seleccionado de H, metilo, etilo, propilo, 1-metiletilo, -CO-CH3, 2-piridilo, 3-piridilo e 4-piridilo; em que os referidos metilo, etilo, propilo e 1-metiletilo estão, cada, opcionalmente substituídos com um, dois ou três substituintes seleccionados de halogéneo e alcoxilo (C1-3) ; c) -CONH2, e d) 3-piridilo, 4-piridilo, 5-pirimidinilo, 2-furilo, 1-pirrolilo e 1-morfolino; R3 é ciclopentilo ou ciclo-hexilo, cada opcionalmente substituído com um ou dois átomos de flúor; R4 é H ou halogéneo e R7 é H; um de R5 e R6 é seleccionado de: a) alcenilo (C2-4) substituído com COOH ou -CONH2, e ainda opcionalmente substituído com um ou dois substituintes seleccionados de alquilo (C1-3) e halogéneo; e b) fenilo ou Het, estando cada opcionalmente substituído com um ou dois substituintes, cada, independentemente seleccionado de: 75 í. 0X0, COOH; ii alquilo (Ci_3) opcionalmente substituído com fenilo /N^\ -N(CH3)2, ou e iii. -NH2, -N(CH3)2 e -NHCOCH3; em que Het é seleccionado das fórmulas:
c) COOH; e o outro de R5 e R6 é seleccionado de H, metilo, metoxilo etoxilo, -NH2 e -NHCO-OCH(CH3) 2; R8 é seleccionado de metilo, etilo, propilo, 1-metiletilo 2-metilpropilo, 3-metilbutilo, ciclobutilo, ciclopropilmetilo 2-fluoroetilo, 2,2,2-trifluoroetilo e 2-metoxietilo; e o grupo
é seleccionado de: X- ,
ΝΗ π /
H,C ΧΗ, • :.χ
ο ο U
De um modo ainda mais preferido R1 é seleccionado do grupo consistindo de H, metilo e etilo; R2 é seleccionado de Br, Cl, ciano, metilo, etilo, propilo, 1-metiletilo, etenilo, 1-metiletenilo, etinilo, ciclopropilo, fenilo e Het seleccionado do grupo de fórmulas:
77 em que os referidos fenilo e Het estão não substituídos ou substituídos com R21, em que R21 é 1, 2 ou 3 substituintes, cada, independentemente seleccionado de: 1 a 2 substituintes, cada, independentemente seleccionado de flúor; cloro e bromo; e 1 a 2 substituintes, cada, independentemente seleccionado de: a) hidroxilo, metilo, etilo, propilo, 1-metiletilo, metoxilo, etoxilo, propoxilo ou 1-metiletoxilo; em que os referidos metilo, etilo, propilo, 1-metiletilo, metoxilo, etoxilo, propoxilo e 1-metiletoxilo estão, cada, opcionalmente substituídos com um, dois ou três átomos de haloqéneo; b) -N (CH3) 2 ou -NHRn1 em que RN1 é seleccionado de H, metilo, etilo, propilo, 1-metiletilo, -CO-CH3, 2-piridilo, 3-piridilo e 4-piridilo; em que os referidos metilo, etilo, propilo e 1-metiletilo estão, cada, opcionalmente substituídos com um, dois ou três substituintes seleccionados de halogéneo e alcoxilo (C1-3) ; c) -CONH2; e d) 3-piridilo, 4-piridilo, 5-pirimidinilo, 2-furilo, 1-pirrolilo e 1-morfolino; 78 R3 é ciclopentilo ou ciclo-hexilo, cada opcionalmente substituído com um ou dois átomos de flúor; R4 é H ou Cl e R7 é H; 5 6 um de R e R e seleccionado de: a) b) -CH-CH-COOH ou -CH-CH-CONH2, cada opcionalmente substituído com um ou dois substituintes seleccionados de metilo, etilo e fluoro; e fenilo opcionalmente substituído com NH2 ou Het opcionalmente substituído com um ou dois substituintes, cada, independentemente seleccionado de: i. -OH, oxo, COOH; ii. metilo ou etilo, cada opcionalmente substituído com fenilo, -N(CH3)2 ou
> e iii. -NH2, -N(CH3)2 e -NHCOCH3; em que Het é seleccionado das fórmulas: 79
c) COOH; e o outro de R5 e R6 é seleccionado de H, metilo, metoxilo, etoxilo, -NH2 e -NHCO-OCH(CH3) 2; R8 é seleccionado de metilo, etilo, propilo, 1-metiletilo, 2-metilpropilo, 3-metilbutilo, ciclobutilo, ciclopropilmetilo, 2-fluoroetilo, 2,2,2-trifluoroetilo e 2-metoxietilo; e o grupo
é seleccionado de:
De um modo muito preferido, R1 é metilo; R2 é seleccionado de: 80
R3 é ciclopentilo ou ciclo-hexilo; R4 e R7 sao ambos H;
um de R5 e R6 é coohouh,c cooh^ ^ Q ou-|-ro de R5 e R6 é H R é metilo; e o grupo ll R10
Alternativamente, de um modo muito preferido, R1 é metilo; R é seleccionado de:
81 R3 é ciclopentilo ou ciclo-hexilo; R4 e R7 são ambos H;
R8 é metilo; e o grupo
é
No âmbito desta individual de fórmula I invenção está incluído cada composto como apresentado nos Quadros 1 a 4.
Actividade da Polimerase A aptidão dos compostos de acordo com esta invenção para inibir a síntese de ARN pela polimerase de ARN dependente de ARN do HCV pode ser demonstrada por qualquer ensaio capaz de medir a actividade da polimerase de ARN dependente de ARN do HCV. Um ensaio adequado é descrito nos exemplos. 82
Especificidade para a actividade da polimerase de ARN dependente de ARN
Para demonstrar que os compostos da invenção actuam por inibição especifica da polimerase do HCV, os compostos podem ser testados quanto à actividade inibidora num ensaio que mede a actividade de uma polimerase de ARN dependente de ARN que não a polimerase do HCV ou num ensaio de polimerase de ARN dependente de ADN.
Actividade de replicação do ARN de HCV baseada em células A aptidão dos compostos da invenção para inibir a replicação do ARN de HCV em células pode ser demonstrada testando os compostos quanto à actividade inibidora num ensaio de replicação de ARN de HCV baseado em células. Um ensaio adequado é descrito nos exemplos.
Quando um composto de acordo com esta invenção, ou um dos seus sais terapeuticamente aceitáveis, é utilizado como um agente antiviral, pode ser administrado por via oral, tópica ou sistémica a mamíferos, incluindo, mas não estando limitados a, humanos, gado bovino, porcos, cães, gatos, coelhos ou ratinhos, num veículo compreendendo um ou mais veículos farmaceuticamente aceitáveis, cuja proporção é determinado pela solubilidade e natureza química do composto, via de administração escolhida e prática biológica corrente.
Para administração oral, o composto ou um seu sal terapeuticamente aceitável pode ser formulado em formas de dosagem unitária tais como cápsulas ou comprimidos contendo, 83 cada, uma quantidade predeterminada do ingrediente activo, que varia desde cerca de 1 até cerca de 500 mg, num veiculo farmaceuticamente aceitável.
Para administração tópica, o composto pode ser formulado em veículos farmaceuticamente aceitáveis contendo cerca de 0,1 a cerca de 5 porcento, de um modo preferido cerca de 0,5 a cerca de 5 porcento, do agente activo. Tais formulações podem estar na forma de uma solução, creme ou loção.
Para administração sistémica, o composto de acordo com esta invenção pode ser administrado por injecção intravenosa, subcutânea ou intramuscular, em composições com veículos ou transportadores farmaceuticamente aceitáveis. Para administração por injecção, é preferido utilizar os compostos em solução num veiculo aquoso estéril, o qual também pode conter outros solutos tais como tampões ou conservantes bem como quantidades suficientes de sais farmaceuticamente aceitáveis ou de glucose para tornar a solução isotónica.
Os transportadores ou veículos adequados que podem ser utilizados nas formulações assinaladas acima são descritos em textos farmacêuticos, e. g., em "Remington's The Science and Practice of Pharmacy", 19a ed., Mack Publishing Company, Easton, Pa., 1995, ou em "Pharmaceutical Dosage Forms And Drugs Delivery Systems", 6a ed., H. C. Ansel et al.r Eds., Williams & Wilkins, Baltimore, Md., 1995. A dosagem do composto variará com a forma de administração e o agente activo particular escolhido. Além disso, variará com o hospedeiro particular sob tratamento. Geralmente, o tratamento é iniciado com pequenos incrementos até ser alcançado o efeito 84 óptimo nas circunstâncias. Em geral, o composto de acordo com esta invenção é, de forma muito desejável, administrado a um nível de concentração que geralmente proporcionará resultados antiviralmente eficazes sem originar quaisquer efeitos secundários prejudiciais ou perniciosos.
Para administração oral, o composto ou um sal terapeuticamente aceitável pode ser administrado na gama de cerca de 0,01 a cerca de 200 mg por quilograma de peso corporal por dia, com um gama preferida de cerca de 0,05 a cerca de 100 mg por quilograma.
Para administração sistémica, o composto de acordo com esta invenção pode ser administrado a uma dosagem de cerca de 0,01 mg a cerca de 100 mg por quilograma de peso corporal por dia, embora ocorram as variações supramencionadas. Um nível de dosagem que se situa na gama desde cerca de 0,05 mg a cerca de 50 mg por quilograma de peso corporal por dia é utilizada de forma muito desejável para se conseguir resultados eficazes.
Quando as composições desta invenção compreendem uma associação de um composto de acordo com esta invenção e um ou mais agentes terapêuticos ou profilácticos adicionais, o composto e o agente adicional devem estar presentes em níveis de dosagem entre cerca de 10 a 100% e, de um modo mais preferido, entre cerca de 10 e 80% da dosagem normalmente administrada num regime de monoterapia.
Quando estes compostos ou os seus sais farmaceuticamente aceitáveis são formulados em conjunto com um transportador farmaceuticamente aceitável, a composição resultante pode ser administrada in vivo a mamíferos, tal como humanos, para inibir 85 a polimerase do HCV ou para tratar ou prevenir a infecção pelo vírus de HCV. Este tratamento também pode ser conseguido utilizando os compostos desta invenção em associação com agentes que incluem, mas não estão limitados a: agentes imunomoduladores, incluindo mas não estando limitados a α-, β-, δ- γ-, τ- e ω-interferões ou as suas formas peguiladas; outros agentes antivirais tais como ribavirina, amantadina; outros inibidores da polimerase NS5B do HCV; inibidores de outros alvos no ciclo de vida do HCV, os quais incluem mas não estão limitados a, agentes que inibem um alvo incluindo, mas não estando limitado a, uma helicase do HCV, protease NS2/3 do HCV, protease NS3 do HCV e IRES do HCV e agentes que interferem com a função de outros alvos virais incluindo mas não estando limitados a uma proteína NS5A; ou associações dos mesmos. Os agentes adicionais podem ser combinados com os compostos desta invenção para criar uma forma de dosagem única. Alternativamente, estes agentes adicionais podem ser administrados separadamente a um mamífero como parte de uma forma de dosagem múltipla.
Metodologia e Síntese A síntese dos compostos de acordo com esta invenção é, de um modo preferido, realizada seguindo o procedimento geral delineado no Esquema 1 abaixo. 86
Esquema 1
II III
Os compostos de fórmula I, em que R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9 e R10 são definidos como acima, são de um modo preferido preparados acoplando ácidos carboxílicos de fórmula geral II com aminas de fórmula geral III, como ilustrado no Esquema 1 acima, utilizando reagentes de activação de carboxilo bem conhecidos pelos especialistas na técnica. Tais reagentes incluem, mas não estão limitados a, TBTU, HATU, BOP, BrOP, EDAC, DCC, cloroformato de isobutilo e semelhantes. Alternativamente, os ácidos carboxílicos de fórmula geral II podem ser convertidos nos cloretos de ácido correspondentes utilizando reagentes padrão e, em seguida, acoplados com derivados de amina da fórmula geral III. Nos casos em que R5 ou R6 contêm uma unidade de ácido carboxílico protegida com éster, é realizada uma reacção de saponificação (utilizando protocolos bem conhecidos pelos especialistas na técnica) para obter o produto inibidor final como o ácido carboxílico livre.
Os ácidos carboxílicos intermediários de fórmula II podem ser preparados pelos procedimentos descritos no documento WO 03/010141 ou por procedimentos descritos nos exemplos abaixo. As aminas intermediárias de fórmula III podem ser preparadas de acordo com os procedimentos gerais delineados nos Esquemas 2 e 3 abaixo. 87
Esquema 2 ,4
R
R' R IV
D R
Cl 2) AcOH, aquecimento
III
Os intermediários amina de fórmula geral III no Esquema 1 podem ser preparados a partir dos precursores diamina correspondentes de fórmula geral IV acoplando com os cloridratos de cloreto de aminoácido a, a-dissubstituido apropriados. A preparação dos cloridratos de cloreto de aminoácido a,α-dissubstituido apropriados a partir dos aminoácidos a,a-dissubstituidos correspondentes pode ser realizada como descrito no documento WO 03/007945 ou WO 03/010141, ou utilizando o procedimento, ou uma adaptação do mesmo, descrito por E.S. Uffelman et ai. (Org. Lett. 1999, 1, 1157). O intermediário amida que se formou na reacção de acoplamento é em seguida ciclizado aquecendo com ácido acético, para proporcionar os intermediários amina de fórmula geral III.
Esquema 3
IV 3) Desprotecção de Boc III
Alternativamente, os intermediários amina de fórmula geral III no Esquema 1 podem ser preparados a partir dos precursores diamina correspondentes de fórmula geral IV acoplando com o aminoácido a,a-dissubstituído protegido com Boc apropriado como ilustrado no Esquema 3, utilizando reagentes de acoplamento bem conhecidos por um especialista na técnica, tais como TBTU, HATU, BOP, BrOP, EDAC, DCC, cloroformato de isobutilo e semelhantes. Os aminoácidos a,a-dissubstituidos protegidos com Boc apropriados podem ser preparados a partir dos aminoácidos a,α-dissubstituidos livres, utilizando condições correntes bem conhecidas por um especialista na técnica, tal como reacção com B0C2O (dicarbonato de di-terc-butilo) na presença de uma amina terciária tal como trietilamina, e semelhantes. 0 intermediário amida que se formou na reacção de acoplamento é em seguida ciclizado aquecendo com ácido acético. A desprotecção do grupo Boc para proporcionar o intermediário amina de fórmula geral III no Esquema 1 é realizada utilizando reagentes padrão bem conhecidos para um especialista na técnica. Tais reagentes incluem, mas não estão limitados a ácido trifluoroacético, uma solução de HC1 em dioxano e semelhantes. A preparação dos precursores diamina de fórmula geral IV nos Esquemas 2 e 3 é de um modo preferido, realizada aplicando os procedimentos como delineados nos exemplos, incluindo qualquer adaptação destes procedimentos, e/ou aplicando passos sintéticos adicionais conhecidos do especialista na técnica.
Os intermediários amina de fórmula geral III no Esquema 1 em que um de R5 e R6 é -CH=C (R50a)-COOR, em que R50a é seleccionado de H, alquilo (C1-6) e halogéneo e em que R é, por exemplo, metilo ou etilo, podem ser preparados a partir dos intermediários amina 89 correspondentes de fórmula geral III, ou derivados adequadamente protegidos dos mesmos, em que um de R5 e R6 é -COOR, em que R é, por exemplo, metilo ou etilo, aplicando os procedimentos do Esquema 4 abaixo. Apesar do Esquema 4 ilustrar especificamente a preparação de intermediários amina de fórmula geral III em que R5 é -CH=C (R50a)-COOR, é entendido pelo especialista na técnica que quando R6 é -COOR, os procedimentos ilustrados, ou suas adaptações, resultarão num produto em que R6 é -CH=C (R50a)-COOR. De igual forma, é entendido pelo especialista na técnica que os procedimentos do Esquema 4, ou as suas adaptações, também podem ser utilizados quando se converte um precursor diamina de fórmula geral IV nos Esquemas 2 e 3 acima, ou um seu derivado adequadamente protegido, ou um intermediário adequado na sua preparação, em que um de R5 e R6 é -COOR, num precursor diamina de fórmula geral IV, ou um seu derivado adequadamente protegido, ou um intermediário adequado na sua preparação em que um de R5 e R6 é -CH=C (R50a)-COOR, em que R50a e R definidos como acima. 90
Esquema 4
Um intermediário amina adequadamente protegido de fórmula geral Illa no esquema 4 acima pode ser convertido num intermediário álcool de fórmula geral Illb por tratamento com um agente de redução adequado tal como DIBAL-H e semelhantes. Os grupos de protecção adequados (PG) incluem, mas não estão limitados a, grupos de protecção carbamato, tais como Boc (terc-butiloxicarbonilo) e semelhantes. A preparação de intermediários amina protegidos de fórmula geral Illa a partir dos intermediários amina de fórmula geral III no Esquema 1 acima pode ser realizada por procedimentos correntes bem conhecidos por um especialista na técnica. 0 intermediário álcool Illb pode ser convertido no intermediário aldeído IIIc, utilizando agentes oxidantes correntes bem conhecidos para um especialista na técnica, tal como 1,1,1-tris(acetiloxi-1,1-di-hidro-l,2-benziodoxol-3-(1H)- 91 ona (também conhecido como periodinano de Dess-Martin) e semelhantes. 0 intermediário aldeído IIIc pode ser convertido num intermediário amina de fórmula geral Illd utilizando um procedimento padrão de Horner-Emmons, ou procedimentos relacionados tais como os procedimentos de Wittig ou semelhantes, bem conhecidos para um especialista na técnica, seguida de desprotecção do grupo PG utilizando procedimentos correntes bem conhecidos. No caso em que o grupo PG é Boc, tais procedimentos incluem, mas não estão limitados a, tratamento com condições ácidas, tais como ácido trifluoroacético, HC1 dissolvido em dioxano e semelhantes.
Os intermediários amina de fórmula geral III no Esquema 1 em que um de R5 e R6 é -C (R50) =CH-COOR, em que R50 é alquilo (Ci_6) e em que R é, por exemplo, metilo ou etilo, podem ser preparados a partir do intermediário IIIc no Esquema 4 acima aplicando os procedimentos do Esquema 5 abaixo. Apesar do Esquema 5 ilustrar especificamente a preparação de intermediários amina de fórmula geral III em que R5 é -C(R50)=CH-COOR, é entendido pelo especialista na técnica que quando R6 é -CHO, os procedimentos ilustrados, ou as suas adaptações, resultarão num produto em que R6 é -C (R50) =CH-COOR. De igual forma, é entendido pelo especialista na técnica que os procedimentos do Esquema 5, ou as suas adaptações, também podem ser utilizados quando se converte um precursor diamina de fórmula geral IV nos Esquemas 2 e 3 acima, ou um seu derivado adequadamente protegido, ou um intermediário adequado na sua preparação, em que um de R5 e R6 é -CHO, num precursor diamina de fórmula geral IV, ou um seu derivado adequadamente protegido, ou um intermediário adequado 92 na sua preparação, em que um de R5 e R6 é -C(R50)=CH-COOR, em que R50 e R definidos como acima.
Esquema 5
lllf llld 0 intermediário aldeído IIIc (do Esquema 4) pode ser convertido numa cetona de fórmula geral lllf por alquilação com um agente alquilante nucleófilo adequado, bem conhecido dos especialistas na técnica, tal como um alquil-lítio ou semelhantes, seguida de oxidação do álcool secundário intermediário à cetona, utilizando agentes oxidantes bem conhecidos para um especialista na técnica, tal como 1, 1, 1-tris(acetiloxi)-1,1-di-hidro-l,2-benziodoxol-3-(1H)-ona (também conhecido como periodinano de Dess-Martin) e semelhantes. A cetona lllf pode ser depois convertida num intermediário amina de fórmula geral llld utilizando um procedimento padrão de Horner-Emmons ou procedimentos relacionados, tal como os procedimentos de Wittig ou semelhantes, bem conhecidos por um especialista na técnica, seguido de desprotecção do grupo PG utilizando procedimentos correntes bem conhecidos. No caso em que o grupo PG é Boc, tais procedimentos incluem, mas não estão limitados a, tratamento com condições ácidas, tais como ácido trifluoroacético, HC1 dissolvido em dioxano e semelhantes. 93
Alternativamente, os intermediários amina de fórmula geral III no Esquema 1 em que um de R5 e R6 é -CH=C (R50a)-COOR, em que R50a é seleccionado de H, alquilo (Ci_6) e halogéneo e em que R é alquilo(Ci-6), podem ser preparados a partir dos intermediários amina correspondentes de fórmula geral III ou os seus derivados adequadamente protegidos, em que um de R5 e R6 é X, em que X é um grupo de saída, tais como um átomo de halogéneo, um éster de sulfonato, e semelhantes, aplicando as condições típicas da reacção de Heck, como apresentada no Esquema 6 e adicionalmente descrita nos exemplos abaixo. Apesar do Esquema 6 ilustrar especificamente a preparação de intermediários amina de fórmula geral III em que R5 é -CH=C (R50a) -COOR, é entendido pelo especialista na técnica que quando R6 é X, os procedimentos ilustrados, ou as suas adaptações, resultarão num produto em que R6 é -CH=C (R50a)-COOR. De igual forma, é entendido pelo especialista na técnica que os procedimentos do Esquema 6, ou as suas adaptações, também podem ser utilizados quando se converte um precursor diamina de fórmula geral IV nos Esquemas 2 e 3 acima, ou um seu derivado adequadamente protegido, ou um intermediário adequado na sua preparação, em que um de R5 e R6 é X, num precursor diamina de fórmula geral IV, ou um seu derivado adequadamente protegido, ou um intermediário adequado na sua preparação em que um de R5 e R6 é -CH=C (R50a)-COOR, em que R50a e R definidos como acima. 94
Esquema 6
reacção de Heck
llld
EXEMPLOS A presente invenção é ilustrada em mais pormenor pelos exemplos não limitativos que se seguem. Como é bem conhecido por um especialista na técnica, as reacções são realizadas numa atmosfera de azoto ou árgon, se necessário, para proteger os componentes da reacção do ar ou humidade. As temperaturas são dadas em graus Celsius. A cromatografia flash é realizada sobre silica gel. As percentagens ou proporções em solução expressam uma relação volume por volume, salvo indicação em contrário. As análises de espectros de massa são registadas utilizando espectrometria de massa de electropulverização. A HPLC analítica foi realizada sob condições correntes utilizando uma coluna de fase inversa Combiscreen ODS-AQ C18, YMC, 50x4,6 mm i.d., 5 μΜ, 120 Â a 220 nM, eluição com um gradiente linear como descrito no quadro seguinte (Solvente A é 0,1% de TFA em H2O; solvente B é 0,1% de TFA em CH3CN):
Tempo (min) Caudal (mL/min) Solvente A (%) Solvente B (%) 0 3, 0 95 5 0,5 3, 0 95 5 6,0 3, 0 50 50 10,5 3,5 0 100 95
Acima e a seguir sao utilizadas as seguintes abreviaturas ou símbolos:
AcOH: ácido acético; AC2O: anidrido acético; BOC ou Boc: terc-butiloxicarbonilo; BOP : hexafluorofosfato de benzotriazol-l-iloxi- tris(dimetilamino)fosfónio;
BroP: hexafluorofosfato de bromo tris(dimetilamino)fosfónio;
Bu: butilo; CPS: contagens por segundo; DAST: trifluoreto de (dietilamino)enxofre; dba: dibenzilidenoacetona; DCC: 1,3-Diciclo-hexilcarbodiimida; DCM: diclorometano; DCMA: diciclo-hexilmetilamina; DIBAL-H: hidreto de diiso-butil-aluminio 96 DMEM: Meio de Earle Modificado por Dulbecco; DMF: N,N-dimetilformamida; DMSO: dimetilsulfóxido; EC5o: concentração 50% eficaz; EDAC: ver EDC; EDC : cloridrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3 etilcarbodiimida; ES~: electrospray (ionização negativa); ES+: electrospray (ionização positiva);
Et: etilo;
Et20: éter dietilico;
AcOEt: acetato de etilo;
EtOH: etanol; FBS: soro fetal bovino;
Fmoc: 9-fluorenilmetoxicarbonilo; HATU: hexafluorofosfato de O-(7-azabenzotriazol-l-il) N,N,N',N'-tetrametilurónio; 97 HBTU: Hexafluorofosfato de O-benzotriazol-l-il-N,N,N',N'- tetrametilurónio; HOAT: l-hidroxi-7-azabenzotriazole; HOBt: 1-Hidroxibenzotriazole; HPLC: cromatografia líquida de alta eficiência; 2Pr ou i-Pr: iso-propilo;
Me: metilo;
MeCN: acetonitrilo;
MeOH: metanol; MS (ES): espectrometria de massa de electrospray; RMN: espectroscopia de ressonância magnética nuclear; PBS: soro fisiológico tamponado com fosfato;
Ph: fenilo; PG: grupo de protecçao; PVDF: fluoreto de polivinilideno; t.a.: temperatura ambiente (aproximadamente 25 °C); TBME: éter terc-butilmetílico; 98 TBTU : tetrafluoroborato de 2-(lH-benzotriazol-l-il) N,N,N',N'-tetrametilurónio; tBu: terc-butilo;
Tf: trifluorometilsulfonilo;
TfO: trifluorometilsulfonato; TFA: ácido trifluoroacético; THF: tetra-hidrofurano; TLC: cromatografia em camada fina; TMS: trimetilsililo;
Troe: tricloroetoxicarbonilo. 99 EXEMPLO 1 Éster metálico do ácido 3-(3,3-difluorociclopentil)-1-metil-lJí-indole-6-carboxílico
Passo 1: Ácido indole-6-carboxílico 1—1 (5,0 g, 31,0 iranol) foi dissolvido em MeOH (100 mL) , foi adicionada uma quantidade catalítica de H2S04 (1,0 mL) e a mistura reaccional foi agitada a refluxo durante 16 h. Foi adicionada uma pequena quantidade de K2C03 sólido, a fim de neutralizar o excesso de H2S04, e a agitação continuou à t.a. durante 1 h. A mistura reaccional foi concentrada sob vácuo para remover o MeOH, diluída com NaHC03 aquoso saturado ( — 50 mL) e extraída com AcOEt (-200 mL) . A camada orgânica foi lavada com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (100 mL) , seca sobre MgS04 anidro e concentrada até à secura. 0 resíduo resultante foi purificado por cromatografia em coluna flash, utilizando 30% AcOEt em hexano 100 como o eluente, para obter o éster metílico 1-2 puro (4,78 g, 88% de rendimento).
Passo 2: 0 éster metílico 1- -2 do passo 1 (3,31 g, 18,9 mmo 1) foi dissolvido em MeCN (50 mL) e foi adicionada uma quantidade catalítica de Yb(OTf)3 (586 mg, 0 ,9 5 mmo1) . Foi adicionada 2-ciclopenten-l-ona (7,76 mL, 94,5 iranol) e a mistura reaccional foi agitada a refluxo durante 16 h. 0 solvente MeCN foi removido sob vácuo, o residuo foi redissolvido em AcOEt (-200 mL) e extraido com NaHCCh aguoso saturado (-100 mL) , H20 (50 mL) e solução aquosa saturada de cloreto de sódio (50 mL). A camada orgânica foi seca sobre MgS04 anidro e concentrada até à secura sob vácuo. Após purificação do resíduo por cromatografia em coluna flash, utilizando 40% AcOEt em hexano como o gradiente de solvente, o produto de adição de ciclopentanona desejado 1-3 foi isolado como isolado como um pó de cor bege (3,4 g, 70% de rendimento).
Passo 3: A uma solução do intermediário de produto de adição de ciclopentanona 1-3 do passo 2 (3,81 g, 14,8 mmol) em DMF anidra (150 mL) a 0 °C, foi adicionado lentamente NaH (dispersão a 60% em óleo, 770 mg, 19,2 mmol) . A mistura reaccional foi agitada a 0 °C durante 5 min, em seguida, foi adicionado gota a gota Mel (1,2 mL, 19,2 mmol) e a agitação continuou a 0 °C durante 3 h. A mistura foi deixada aquecer até à t.a. e foi desactivada pela adição de NH4C1 aquoso saturado (200 mL) . A mistura foi extraída 101 com AcOEt (2x500 mL) e a camada orgânica foi lavada com NH4C1 aquoso saturado (2x200 mL), H20 (200 mL) e solução aquosa saturada de cloreto de sódio (200 mL) . As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre MgS04 anidro, evaporadas até à secura e o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna flash (utilizando 30% de AcOEt em hexano como o eluente) para isolar o intermediário de IV-metilindole 1-4 como um sólido bege (3,1 g, 77% de rendimento).
Passo 4:
Num tubo selado, o intermediário de N-metilindole 1—4 do passo 3 (1,4 g, 5,16 mmol) e DAST (2,7 mL, 20,6 mmol) foram dissolvidos em CH2CI2 (50 mL) e agitados a refluxo durante 3 dias. A mistura foi vertida lentamente para NaHC03 aquoso saturado (~50 mL) e assim que parou a libertação de C02, a mistura foi extraída com CH2C12 (2x100 mL) . As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (50 mL) , secas sobre MgS04 anidro e concentradas até à secura. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna flash (utilizando um gradiente de solvente desde 10% a 20% de AcOEt em hexano) para isolar o éster metilico do ácido 3- (3,3-dif luorociclopentil) -l-metil-lfí-indole-6-carboxílico 1-5 (750 mg, 50% de rendimento). O éster metilico do ácido 3-(3,3-difluorociclopentil)-1-metil-líí-indole-6-carboxí lico 1—5 é convertido nos intermediários de ácido carboxílico de fórmula lia, em que R2 é definido como acima, utilizando procedimentos descritos no documento WO 03/010141. Estes intermediários podem ser 102 convertidos nos compostos de fórmula geral I utilizando os procedimentos ilustrados no Esquema 1 acima e descritos no documento WO 03/010141. EXEMPLO 2 (E)-3-(3-amino-4-
Ester metílico do ácido metilaminofenil)acrílico
Passo 1:
Uma mistura de ácido 4-cloro-3-nitrocinâmico 2-1 (500 mg, 2,2 mmol) e uma solução de metilamina em THF (2 M, 8 mL, 16 mmol) foi aquecida num tubo selado a 80 °C durante 20 horas. A mistura foi então arrefecida até à temperatura ambiente e concentrada até um sólido laranja 2—2 que foi utilizado no passo seguinte sem mais purificação.
Será evidente para o especialista na técnica que outros intermediários diamina de fórmula geral IV nos Esquemas 2 e 3 acima, em que R8 é diferente de metilo, podem ser preparados 103 substituindo a metilamina (CH3NH2) no passo 1 acima pela R8-NH2 apropriada.
Passo 2: 0 intermediário ácido 4-metilamino-3-nitrocinâmico 2-2 em bruto do passo 1 (488 mg, 2,2 mmol) foi dissolvido em metanol (20 mL) e foi adicionada uma solução de diazometano em éter até a análise por HPLC ter indicado conversão completa do ácido em éster metílico. A solução foi concentrada até à secura para obter 540 mg do éster metílico 2-3 como um sólido laranja que foi utilizado no passo 3 sem mais purificação.
Passo 3: O éster metílico 2-3 em bruto do passo 2 (540 mg, ~2,2 mmol) e SnCl2 di-hidratado (2,25 g, 10 mmol) foram dissolvidos em etanol (20 mL) e a mistura foi agitada a 80 °C durante 4 horas. Depois desse período, a mistura foi arrefecida até à temperatura ambiente e foi lentamente adicionada a solução aquosa de NaHC03 saturado. A mistura reaccional foi extraída com acetato de etilo (100 mL) , a camada orgânica foi seca sobre MgS04 anidro e o solvente foi removido sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna flash, utilizando um gradiente de hexano em acetato de etilo (desde 50% a 30%) para dar éster metílico do ácido (E)-3-(3-amino-4- metilaminofenil)acrílico 2-4 como um sólido amarelo (245 mg). 104 EXEMPLO 3 Éster metílico do ácido (E)—3—[2—(1—aminociclobutil)—1— metil-lJí-benzimidazol-5-il] acrílico
Éster metílico do ácido (E)-3-(3-amino-4- metilaminofenil)acrílico 2-4 do Exemplo 2 (40 mg, 0,194 mmol) foi suspenso em CH2CI2 (3 mL) e foi adicionado cloridrato do cloreto do ácido 1-aminociclobutanocarboxílico, preparado a partir de ácido 1-aminociclobutanocarboxílico seguindo uma adaptação do procedimento descrito por E. S. Uffelman et al. (Org. Lett. 1999, I, 1157), (31 mg, 0,18 mmol). A mistura reaccional foi agitada à temperatura ambiente durante 2 horas e em seguida concentrada para obter um sólido branco. O sólido foi então dissolvido em ácido acético (5 mL) e aquecido até 60 °C durante 20 horas. A reacção em bruto foi diluída com NaHCCb aquoso saturado, extraída com CH2CI2 (2x50 mL) e solução aquosa saturada de cloreto de sódio, a camada orgânica foi seca sobre MgS04 anidro e o solvente foi removido sob pressão reduzida para dar éster metílico do ácido (E)-3-[2-(1-aminociclobutil)-1-metil-lH-benzimidazol-5-il]acrílico 3-1 como uma espuma castanha clara (53 mg). 105 EXEMPLO 4 ácido (E)-3-(2-{l-[(3-Ciclopentil-l-metil-2-piridin-2-il-lH-indole-6-carbonil)amino]ciclobutil}-l-metil-lH-benzimidazol-5-il)acrílico
Uma solução de ácido 3-ciclopentil-l-metil-2-piridin-2-il-lfí-indole-6-carboxí lico 4-1, preparado utilizando os procedimentos descritos no documento WO 03/010141 (31,1 mg, 0,97 mmol), éster metílico do ácido (E)-3-[2-(l-aminociclobutil)-l-metil-lií-benzimidazol-5-il]acrílico 4-2, preparado a partir do éster etílico análogo do composto 2—4, utilizando um procedimento análogo ao descrito no Exemplo 3 (27,7 mg, 0,97 mmol), HATU (47,9 mg, 0,126 mmol) e Et3N (58 pL, 0,42 mmol) em DMSO (2 mL) foi agitada à t.a. durante 3 h. Depois desse período, foi adicionado NaOH (280 pL, 2,5 N) e a mistura reaccional foi agitada à t.a. durante 16 h. A mistura reaccional foi neutralizada com a adição de algumas gotas de ácido acético e purificada sobre uma coluna semi-preparativa de HPLC de fase inversa Cis (utilizando um gradiente de solvente desde 5% a 100% de MeCN em H2O (todos os solventes contêm 0,1% de ácido trifluoroacético)) para isolar o inibidor final ácido (E)-3-(2-{1-[(3-ciclopentil-l-meti1-2-piridin-2-i1-1H-indole-6-carbonil)amino]ciclobutil}-1-metil-lH-benzimidazol-5-il)acrílico 106 4-3 (composto 4001, Quadro 4) como um sólido branco amorfo numa homogeneidade > 95% (45 mg, 78% de rendimento). RMN de 2H (400 MHz, DMSO ) : δ 1,48 OD LO \—1 1 (m, 2H) r 1, 75- 1,85 (m, 6H) , 1, 85- 1,95 (ir h 1H) , 2,05-2,15 (m, 1H) , 2, 69- -2, . 76 (m, 2H) , 2, 98-3, 10 (m, 3H ) , 3,63 (s, 3H), 3,82 (s, 3H ) , 6, , 59 (d, J = 16 Hz, 1H) , 7, 42 (dd, J = 0,8 & 5, 7 Hz, 1H) r 7, 51 (d, J = 7, 7 Hz, 1H) , 7,53 (d, , J = 8,5 Hz, 1H) , 7 , 65 (d, j = 8,5 Hz, 1H) , 7, 71 (d , J = 8,4 Hz, 1H) , 7,76 (d, J = 1 .6 Hz , 1H) , 7 , 82 (d, J = 8,4 Hz, 1H) , 7,92 (ddd, J = 1,6 & 7, ,8 Hz, 1H) , 8, 01 ( s, 1H) , 8,04 (s , 1H) , 8 ,73 (d, J = 4,1 Hz, 1H), 9,45 (s, 1H) . EXEMPLO 5 {1- [5- ( (E) -2-Carbamoiletenil) -l-metil-lií-benzimidazol-2-il]ciclobutiljamida do ácido 3-ciclopentil-l-metil-2-pirazin-2-il-l.ff-indole-6-carboxílico
107
Passo 1: Ácido 3-ciclopentil-l-metil-2-pirazin-2-il-lfí-indole-6- carboxílico 5-1 (preparado utilizando procedimentos descritos no documento WO 03/010141) e éster etílico do ácido (E)—3—[2 — (1 — aminociclobutil)-l-metil-lií-benzimidazol-5-il]acrílico 4—2 foram acoplados, seguido de saponificação do éster etílico, utilizando procedimentos análogos aos descritos no Exemplo 4 para dar Ácido (E) —3 — (2—{1— [ (3-ciclopentil-l-metil-2-pirazin-2-il-lfí-indole-6-carbonil)amino]ciclobutil}-l-metil-lH-benzimidazol-5-il)acrílico 5-2 (composto 4003, Quadro 4). RMN de ΤΗ (400 MHz, DMSO-d6): δ 1,50 -1,58 (m, 2H) , 1, 78 -1,20 (m 7H) , 2, 05-2,15 (m, 1H) , 2,65 -2, 75 (m, 2H), 2, 97- -3, 10 (m, 3H) 3,66 (s , 3H), 3,81 (s, 3H), 6, 57 (d, J = 16,0 Hz, 1H) , 7, 55 (dd J = 1,0 & 8, 4 Hz, 1H) , 7,68 ( ]2d , J = 8,4 Hz, 2H) , 7,75 (d, J 16,0 Hz , 1H) , 7, 78 (d, J = 11 ,0 Hz, 1H), 8,00 (s, 1H) , 8,07 (s 1H) , 8, 68 (d, J = 2,3 Hz, 1H ), 8, 7 8 (d, J = 1,2 Hz, 1H) , 8,8: (dd, J = 0, 8 & 2,2, 1H) , 9,44 (s 1, : 1H) .
Passo 2 (passo de referência):
Uma solução de ácido (E)-3-(2-{l-[(3-ciclopentil-l-metil-2-pirazin-2-il-lH-indole-6-carbonil)amino]ciclobutil}-l-meti1-1H-benzimidazol-5-il)acrílico 5-2 (composto 4003, Quadro 4; 60 mg, 0,087 mmol), TBTU (68 mg, 0,18 mmol), hidrogenocarbonato de amónio (20 mg, 0,26 mmol) e Et3N (36 pL, 0,26 mmol) em DMSO (3 mL) foi agitada à t.a. durante 3 h. A mistura reaccional foi neutralizada com a adição de algumas gotas de ácido acético e purificada sobre uma coluna semi-preparativa de HPLC de fase inversa Cis (utilizando um gradiente de solvente desde 5% a 100% 108 de MeCN em H20 (todos os solventes contêm 0,1% de ácido trifluoroacético)) para isolar o inibidor {1—[5—( (E)—2 — carbamoiletenil)-l-metil-lH-benzimidazol-2-il]ciclobutil}amida do ácido 3-ciclopentil-l-metil-2-pirazin-2-il-lil-indole-6-carboxilico 5-3 (composto 1005, Quadro 1) como um sólido amarelo pálido amorfo numa homogeneidade > 95% (17 mg, 34% de rendimento). RMN de 1H (400 MHz, DMSC >—d6) : δ 1,65-1,75 (m, 2H) , 1,92- 2,15 (m, 8H) , 2, 73 -2,82 (m, 2H) , 3,( 34-3,10 (m, 2H), 3,15- -3,25 (m, 1H) , 3,79 (s, 3H) , 3, 81 (s, 3H) , 6,65 (d, J = 15 , 8 Hz , 1H) , 7, 06 (s r-~ K \—1 1-1 , 53 (s 1, 3H) , - 7, 61 (d, J = 15 , 7 Hz, 1H) , 7 ,68 (dd, J = 1, 0 & 8,4 Hz f 1H) , 7, 80 (d, J = 8,4 Hz, 1H) , 7, 90 (s, 1H) , 8,20 (s, 1H) , 8, 80 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 8, 91 (d, J = 1, 2 Hz, 1H) , 8,95 (dd, J = 2,1 & 3, 7 , 1H), 9,23 (s, 1H) . 109 EXEMPLO 6 Éster metilico do (metilamino)benzóico ácido 4-amino-2-metil-5-
Passo 1:
Uma solução de ácido 2-metil-5-nitrobenzóico 6—1 (10,0 g, 55,2 mmol) em MeOH (200 mL) e H2S04 (1,0 mL) foi aquecida até refluxo enquanto era agitada durante ~3 dias. O solvente foi evaporado sob vácuo e o resíduo foi redissolvido em AcOEt (-200 mL) , lavado com H20 fria (-50 mL) , NaHCCq aquoso saturado frio (-50 mL) e solução aquosa saturada de cloreto de sódio fria (-50 mL) . A camada orgânica foi então seca sobre MgS04 anidro e concentrada até à secura para dar o éster metilico 6-2 como um sólido branco, o qual foi utilizado sem purificação no passo 2. 110
Passo 2: A uma solução do éster metílico 6—2 em bruto do passo 1 (-55,2 mmol) em MeOH (200 mL) foi adicionado catalisador de Pearlman (hidróxido de paládio a 20% sobre carvão, 1,0 g) e a mistura foi agitada sob uma atmosfera de H2 durante 20 h à t.a.. A mistura foi filtrada através de Celite e concentrada até à secura. 0 resíduo foi redissolvido em THF (200 mL), foi adicionado Ac20 (6,2 mL, 66 mmol) e a solução foi agitada à t.a. durante 3 h. A mistura reaccional foi concentrada até à secura sob vácuo e o resíduo foi redissolvido num volume mínimo de éter t-Bu-metílico (-150 mL) . A suspensão etérea foi agitada à t.a. durante 1 h antes de ter sido adicionado hexano (-100 mL) para precipitar o intermediário acetilado desejado como um sólido branco. 0 sólido foi lavado com hexano e seco para dar o composto acetilado 6-3 em alta pureza (10,1 g, 88% de rendimento).
Passo 3:
Uma solução do éster acetilado 6-3 do passo 2 (8,42 g,
40,6 mmol) e nitrato de potássio (5,0 g, 50 mmol) em Ac0H:H2S04 (proporção 1:1, 200 mL) foi agitada à t.a. durante 2 h e a 40 °C
durante mais duas horas. A mistura reaccional em bruto foi então vertida lentamente sobre gelo (-1 L) e misturada durante 20 min. O precipitado que se formou foi filtrado e lavado várias vezes com H20 para dar uma mistura de principalmente dois produtos, o isómero 4-nitro 6-4 desejado e o isómero 6-nitro 6-5 indesejado (proporção 1:2), os quais foram separados após cromatografia em coluna flash utilizando 30% de AcOEt em hexano como o eluente. O 111 isómero 4-nitro 6-4 puro foi isolado como um sólido amarelo (2,05 g, 20% de rendimento).
Passo 4: 0 Intermediário 4-nitro 6-4 do passo 3 (2,05 g, 8,13 mmol) foi dissolvido em THF (50 mL) e a solução foi arrefecida até 0 °C antes de terem sido adicionados lentamente Mel (2,51 mL, 40,6 mmol) e t-BuONa (4,46 g, 46,4 mmol). A mistura reaccional foi agitada à t.a. durante 15 h, foi adicionada H2O (-50 mL) e a mistura aquosa foi lavada com éter t-butilmetilico (—20 mL). A camada aquosa foi acidificada até pH 3 com HC1 1 N e em seguida extraída com AcOEt (-100 mL) . A camada orgânica foi lavada com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (-50 mL) , seca sobre MgSCh anidro e concentrada até à secura para dar o composto N-metilado 6-6 como uma espuma gomosa que foi utilizada directamente no passo 5 sem purificação.
Será evidente para o especialista na técnica que podem ser preparados outros intermediários diamina de fórmula geral IV nos Esquemas 2 e 3 acima, em que R8 é diferente de metilo, substituindo o iodeto de metilo (CH3I) no passo 4 acima pelo R8-X apropriado, em que X é um grupo de saída, tais como Cl, Br, I, metanossulfonato (mesilato), p-toluenossulfonato (tosilato), trifluorometanossulfonato (triflato) e semelhantes.
Passo 5:
Uma solução do derivado metilado 6-6 do passo 4 (-8 mmol) em MeOH (10 mL) e HC1 (8N, 15 mL) foi agitada a 70 °C durante 112 20 h. O solvente foi evaporado sob vácuo e o resíduo foi partilhado entre NaHC03 aquoso saturado (20 mL) e AcOEt (50 mL) . A camada orgânica foi lavada com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca sobre MgS04 anidro e concentrada para dar o éster metílico 6-7 como um sólido laranja (1,54 g), o qual foi utilizado no passo 6 sem purificação.
Passo 6:
Uma solução do éster metílico 6-7 em bruto do passo 5 (1,54 g, 6,7 mmol) em MeOH (30 mL) foi tratada sob condições de hidrogenação catalítica utilizando Pd/C (10%, 150 mg) sob uma atmosfera de H2 à t.a. durante 2 h. A mistura reaccional foi filtrada através de Celite e concentrada para dar éster metílico do ácido 4-amino-2-metil-5-(metilamino)benzóico 6-8 como um sólido púrpura (1,33 g) , o qual era suficientemente puro (confirmado por RMN) para ser utilizado sem mais purificação. EXEMPLO 7 Éster metílico do ácido 2-(l-terc- butoxicarbonilaminociclobutil)-3,6-dimetil-3Jí-benzimidazole-5-carboxílico
113 Ácido 1-((1,1-dimetiletoxicarbonil)amino)ciclobutano- carboxílico (1,40 g, 6,5 mmol) foi dissolvido em CH2CI2 (45 mL) e feito reagir com TBTU na presença de Et3N durante um período de 30 min para pré-activar o ácido. Foi adicionada lentamente uma solução de éster metílico do ácido 4-amino-2-metil-5-(metilamino)benzóico 6-8 do Exemplo 6 (1,33 g, 6,85 mmol) em CH2CI2 (10 mL) ao longo de um período de 30 min e a agitação da mistura reaccional continuou durante 20 h. A mistura reaccional foi concentrada até à secura e o resíduo foi redissolvido em AcOH (10,0 mL) e agitado a 70 °C durante 2 h para conseguir a ciclização do anel de benzimidazole. A mistura reaccional foi concentrada até à secura e o resíduo foi dissolvido em AcOEt (-250 mL), extraído com NaHC03 aquoso saturado (2x100 mL) e solução aquosa saturada de cloreto de sódio (100 mL) . A camada orgânica foi seca sobre MgSCq anidro e evaporada até à secura. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna flash (utilizando um gradiente de solvente desde 40% a 50% de AcOEt em hexano) para obter o éster metílico do ácido 2-(l-te_rc-butoxicarbonilaminociclobutil)-3,6-dimetil-3/í-benzimidazole-5-carboxílico 7-1 puro como um sólido bege (1,41 g, 55% de rendimento) e recuperar algum do material de partida diamino por reagir. O éster metílico do ácido 2-(l-terc- butoxicarbonilaminociclobutil)-3,6-dimetil-3fí-benzimidazole-5-carboxílico 7-1 pode ser convertido num intermediário amina de fórmula geral III no Esquema 1 utilizando reagentes correntes bem conhecidos por um especialista na técnica. Tais reagentes incluem, mas não estão limitados a, ácido trifluoroacético, uma solução de HC1 em dioxano e semelhantes. O intermediário amina de fórmula geral III correspondente no Esquema 1 pode ser ainda 114 transformado em inibidores de fórmula geral I no Esquema 1 utilizando o procedimento do Exemplo 4. EXEMPLO 8 Éster etílico do ácido (E)-3-[2-(1—amino—ciclobutil)-3,6— dimetil—3Jí-benzimidazol—5—il] -2-metil-acrílico
Passo 1: Éster metílico do ácido 2 —(1-terc- butoxicarbonilaminociclobutil)-3,6-dimetil-3ií-benzimidazole-5-carboxílico 7-1 do Exemplo 7 (1,41 g, 3,8 mmol) foi dissolvido em THF (40 mL) e a solução foi arrefecida até 0 °C. Foi adicionada lentamente uma solução de DIBAL-H (18 mL, 1 M em THF, 18 mmol) e a mistura reaccional foi agitada a 0 °C durante lhe em seguida a 50 °C durante 4 h. A mistura reaccional foi 115 arrefecida até t.a., foi adicionada muito lentamente uma solução de tartrato de potássio e sódio (1 M, 50 mL) e a agitação continuou durante 1 h à t.a. A solução foi concentrada sob vácuo a fim de remover a maioria do THF e extraida com AcOEt (-200 mL). A camada orgânica foi lavada com NaHC03 aquoso saturado (50 mL) e solução aquosa saturada de cloreto de sódio (50 mL) , seca sobre MgSCq anidro e concentrada até à secura. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna flash, utilizando um gradiente de solvente desde 50% de AcOEt em hexano até AcOEt puro e, em seguida, até 3% de MeOH em AcOEt, para obter o álcool 8—1 puro como um sólido amarelo (1,09 g, 84% de rendimento).
Passo 2:
Uma solução do álcool 8-1 do passo 1 (1,09 g, 3,16 mmol) e periodinano de Dess-Martin (1,70 g, 4,0 mmol) em CH2CI2 (40 mL) foi agitada à t.a. durante 2 h. O solvente foi evaporado sob vácuo e o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna flash, utilizando AcOEt:hexano (proporção 1:1), para obter o aldeído 8-2 puro (605 mg, 56% de rendimento).
Passo 3:
Uma solução de 2-fosfonopropionato de trietilo (0,228 mL, 1,06 mmol) em THF (5,4 mL) foi arrefecida até 0 °C e foi adicionado NaH (42,5 mg, 60% em óleo, 1,06 mmol) . A mistura foi agitada a 0 °C durante 30 min, antes de ter sido adicionada lentamente uma solução do aldeído 8-2 do passo 2 (300 mg em 3 mL de THF, 0,874 mmol) e a agitação continuou à t.a. durante 20 h. A mistura foi diluída com AcOEt (-100 mL) e lavada com NaHC03 116 aquoso saturado (2x30 mL) e solução aquosa saturada de cloreto de sódio (30 mL) . A camada orgânica foi seca sobre MgS04 anidro e concentrada até um resíduo castanho que foi subsequentemente purificado por cromatografia em coluna flash, utilizando um gradiente de solvente desde 40% a 60% de AcOEt em hexano, para dar o éster protegido com IV-Boc 8-3 como uma espuma amarela (85 mg, 23% de rendimento).
Passo 4: A hidrólise do grupo de protecção Boc foi conseguida adicionando quantitativamente HC1 4 N em dioxano (2 mL) e agitando a solução à t.a. durante 1 h. Após evaporação do solvente sob vácuo foi isolado éster etílico do ácido (E)—3— [2 — (1-aminociclobutil) -3,6-dimetil-3ií-benzimidazol-5-il] -2-metilacrílico 8-4 puro como um sólido amarelo (79 mg).
Será evidente para o especialista na técnica que o 2-fosfonopropionato de trietilo utilizado no passo 3 deste procedimento pode estar substituído com derivados apropriadamente substituídos para preparar análogos da fórmula geral Ille no esquema acima, em que R50 é definido como acima. Além disso, os éster metílicos também podem ser preparados de uma maneira análoga utilizando o reagente apropriado. O composto 8-4 e os seus análogos de fórmula geral Ille acima podem ser ainda transformados em inibidores de fórmula geral I no Esquema 1 utilizando o procedimento do Exemplo 4. EXEMPLO 9 117 3-Fluoro-4-nitrobenzaldeído
CrOj, H2SO,
AcjO, AcOH
Passo 2 9-2 9-3
Passo 1
Passo 1:
Um balão de duas tubuladuras (munido de um termómetro interno) foi carregado com AcOH glacial (252 mL), anidrido acético (252,0 mL) e 2-fluoro-4-metil-l-nitrobenzeno 9-1 (25,0 g, 161 mmol) a -10 °C. À solução arrefecida foi adicionado, gota a gota ao longo de um período de 5 min, ácido sulfúrico concentrado (40 mL) , seguida de adição muito lenta de óxido de crómio (VI) (45 g, 450 mmol); a velocidade de adição tem de ser muito lenta (—1,5 h) para manter a temperatura abaixo de 10 °C. Após adição do CrC>3, a solução transparente incolor tornou-se âmbar e finalmente castanha escuro no final da adição. Depois de estar completa da adição, a reacção foi agitada durante mais 45 min (a análise por HPLC indicou -70% de conclusão da reacção). A suspensão parcial tipo alcatrão foi vertida sobre gelo (1,6 L) e a lama resultante foi diluída com H20 até um total de 3 L, altura em que o produto começou a precipitar. Após filtração, o sólido bege foi lavado com H20 fria para obter um sólido branco. O sólido foi então suspenso em NaHC03 a 2% frio (250 mL) , filtrado e novamente lavado com H20 fria para dar o diacetato 9-2 (22 g, contendo algum do material 118 de partida por reagir) como um sólido branco, o qual foi utilizado tal e qual no passo 2.
Passo 2:
Num frasquinho de tampa de rosca, o diacetato 9-2 do passo 1 (1,0 g, 3,7 mmol) foi dissolvido em ácido acético glacial (10,0 mL) , seguido de adição de H20 (1,0 mL) e HC1 concentrado (1,0 mL). A mistura parcialmente solúvel resultante foi aquecida a 115 °C durante 45 min. A maioria dos solventes foram removidos sob vácuo para dar um resíduo gomoso, o ácido e H20 remanescentes foram submetidos a evaporação azeotrópica duas vezes com CH2Cl2-hexano para dar o 3-f luoro-4-nitrobenzaldeído 9-3 semi-puro desejado como um sólido amarelo (600 mg). Este composto foi ainda purificado por cromatografia em coluna flash (utilizando 20% de AcOEt em hexanos como o eluente) para remover pequenas quantidades de 2-fluoro-4-metil-l-nitrobenzeno 9-1 por reagir (-35% de rendimento total). 119 EXEMPLO 10 Éster etílico do ácido (E)-3-(4—amino-3- (metilamino)fenil)acrílico
Passo 1: A uma solução de fosfonoacetato de trietilo (1,37 mL, 6,90 mmol) em THF (13 mL) a 0 °C, foi adicionado NaH (dispersão a 60% em óleo, 314 mg, 7,84 mmol) e a mistura foi agitada durante 30 min. Depois desse período foi adicionado 3-fluoro-4-nitrobenzaldeído 9-3 do Exemplo 9 (1,06 g, 6,27 mmol) e a agitação continuou à t.a. durante 16 h. A reacção foi desactivada pela adição de H20 (20 mL) e o produto foi extraído para AcOEt (2x100 mL) . As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secas sobre MgSCq anidro e concentradas para dar o éster de cinamato 10-1 como um sólido laranja claro, o qual foi utilizado no passo 2 sem purificação.
Será evidente para o especialista na técnica que podem ser preparados análogos que têm vários substituintes na ligação 120 dupla do cinamato substituindo o fosfonoacetato de trietilo utilizado neste procedimento com derivados apropriadamente substituídos ou substituindo o aldeído 9-3 por uma cetona apropriada. Além disso, os ésteres metílicos de cinamato também podem ser preparados de um modo análogo utilizando o reagente apropriado.
Passo 2: 0 éster de cinamato 10-1 do passo 1 (-6,27 mmol) e metilamina (2 M em THF, 6,3 mL, 12,5 mmol) foram dissolvidos em DMSO (6 mL) e a mistura reaccional foi agitada à t.a. durante 2 h. Depois desse período, a mistura foi diluída com AcOEt (100 mL) e a camada orgânica foi lavada com H2O (3x30 mL) e solução aquosa saturada de cloreto de sódio (50 mL), seca sobre MgS04 anidro e concentrada para dar o intermediário metilamino 10-2 em bruto como um sólido laranja. Este produto foi utilizado no passo 3 sem purificação.
Será evidente para o especialista na técnica que podem ser preparados outros intermediários diamina de fórmula geral IV nos Esquemas 2 e 3 acima, em que R8 é diferente de metilo, substituindo a metilamina (CH3NH2) no passo 2 acima pela R8-NH2 apropriada.
Passo 3: 0 éster de 3-metilamino-4-nitrocinamato 10-2 do passo 2 (2-2, -150 mg) e SnCl2 di-hidratado (950 mg, 4,2 mmol) foram
dissolvidos em etanol (10 mL) e a mistura foi agitada a 80 °C 121 durante 20 horas. A mistura foi arrefecida até à temperatura ambiente e concentrada até à secura. O residuo foi dissolvido em acetato de etilo (100 mL) e foi lentamente adicionado a uma solução aquosa de NaHCC>3 saturado e agitado durante 30 min. A camada orgânica foi então extraída com solução aquosa saturada de cloreto de sódio gelada, seca sobre MgS04 anidro e o solvente foi removido sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna flash (utilizando um gradiente desde 70% a 60% de hexano em acetato de etilo) para dar éster etílico do ácido (E)-3-(4-amino-3-(metilamino)fenil)acrílico 10-3 como um sólido amarelo (100 mg). 0 éster etílico do ácido (E)- -3- (4-amino- -3- (metilamino)fenil)acrílico pode ser convertido em derivados de amina de fórmula geral III no Esquema 1, seguindo os procedimentos dos Exemplos 3 ou 7 e ainda transformado em inibidores de fórmula geral I no Esquema 1 utilizando o procedimento do Exemplo 4. 122 EXEMPLO 11 Éster metálico do ácido 5-amino-2-metil-4- metilaminobenzóico
11-6 11-5 11-4
Passo 1:
Uma solução de 2-metil-4-nitrobenzonitrilo 11-1 (2,53 g, 15,6 mmol) em NaOH aquoso (10%, 31,0 mL) e H202 aquoso (10%, 16 mL) foi agitada a refluxo durante 2,5 h. A circulação de água no condensador de arrefecimento foi parada durante 5-10 min (para permitir a remoção da amónia dissolvido) e, em seguida, o caudal de água foi restabelecido e o refluxo continuou durante mais 1,5 h. A mistura reaccional foi arrefecida até t.a., foi adicionado gota a gota HC1 (concentrado) até o pH ser ~3, altura em que o ácido carboxilico 11-2 precipitou como um sólido de cor laranja (3,60 g) . O ácido carboxilico foi utilizado no passo 2 sem purificação. 123
Passo 2:
Uma solução do ácido 11-2 do passo 1 (3,60 g, 15,6 mmol) em MeOH (30 mL) e HC1 (HC1 4 N em dioxano, 2,0 mL) foi aquecida a refluxo durante 48 h. O solvente foi evaporado até à secura sob vácuo e o resíduo obtido foi redissolvido em AcOEt (200 mL) . A solução foi lavada com NaHC03 aquoso saturado (100 mL) e solução aquosa saturada de cloreto de sódio (100 mL), seca sobre MgSCU anidro e evaporada até à secura para dar o intermediário éster 11-3 como um sólido de cor amarela (2,38 g) . Este material foi utilizado no passo 3 sem purificação.
Passo 3: A uma solução do éster 11-3 do passo 2 (1,27 g, 6,5 mmol) em H2S04 (conc., 13,0 mL) , pré-arrefecida até 0 °C, foi adicionado muito lentamente KNO3 (760 mg, 7,5 mmol). Depois de alguns min de agitação, o banho de gelo foi retirado e a mistura reaccional foi agitada à t.a. durante 20 h. A mistura reaccional foi então vertida lentamente sobre gelo (~50 mL) e agitada até o gelo ter fundido, e o produto dinitro 11-4 desejado foi precipitado e filtrado (~1,55 g de sólido amarelo claro e ligeiramente húmido) . O composto foi utilizado tal e qual no passo 4.
Passo 4: A uma solução do intermediário dinitro 11—4 do passo 3 (1,55 g, 6,45 mmol) em THF (15,0 mL) a 0 °C foi adicionada uma solução de metilamina (2 M em THF, 15,2 mL, 32,3 mmol), o banho 124 de gelo foi retirado e a mistura reaccional foi agitada à t.a. durante 1,5 h. A solução foi concentrada para remover algum do THF e em seguida diluída com AcOEt (-100 mL) . A camada orgânica foi lavada com H20 (-50 mL) e solução aquosa saturada de cloreto de sódio (-50 mL), seca sobre MgS04 anidro e concentrada para dar o intermediário metilamino 11-5 como um sólido laranja (1,26 g) . O composto foi utilizado no passo 5 sem mais purificação.
Será evidente para o especialista na técnica que podem ser preparados outros intermediários diamina de fórmula geral IV nos Esquemas 2 e 3 acima, em que R8 é diferente de metilo, substituindo a metilamina (CH3NH2) no passo 4 acima pela R8-NH2 apropriada.
Passo 5: A uma solução do derivado de metilamino 11—5 do passo 4 (1,25 g, 5,58 mmol) em Et0H-H20 (110 mL, proporção 1:1), foram adicionados K2CC>3 (4,62 g, 33,5 mmol) e Na2S204 e a mistura foi agitada à t.a. durante 3 h. Foi adicionada mais H20 (-30 mL) e a mistura foi concentrada sob vácuo para remover a maioria do EtOH. A mistura reaccional foi então diluída com AcOEt (-200 mL) e a camada orgânica foi separada e extraída com solução aquosa saturada de cloreto de sódio. A camada orgânica foi seca sobre MgS04 anidro e concentrada sob vácuo para dar éster metílico do ácido 5-amino-2-metil-4-(metilamino)benzóico 11-6 (927 mg, 86% de rendimento) como um sólido de cor castanha. O composto 11-6 pode ser convertido nos intermediários amina de fórmula geral III correspondentes no Esquema 1, em que R6 é CH3 e R5 é -COOCH3, seguindo os procedimentos dos Exemplos 3 125 ou 7. Estes intermediários amina podem ser ainda convertidos em intermediários amina de fórmula geral III no Esquema 1, em que R é CH3 e R5 é -CH=C(R50)-COOR, seguindo o procedimento do Exemplo 8. Todos estes intermediários amina de fórmula geral III no Esquema 1 podem ser ainda transformados em inibidores de fórmula geral I no Esquema 1 utilizando o procedimento do Exemplo 4. EXEMPLO 12 (exemplo de referência) (E)-3-(5-amino-2-etoxi-4- Éster metilico do ácido (metilamino)fenil)acrílico
DIBAL-H OjN^^OEt XX. Ο,Ν OEt ,0
Passo 2
12-2 O
O II CHjNj
Passo 1
OiN^/wOEttX» 12-1 O
12-4 H
MeO-f—"COOMe MeO NaH xe COOMe
Passo 4 02fT ^ OEt 12-5 HIN>
XjC MeHN' OEt 12-8 KNO„ H,S04 ^.COOMe OjN^^^OEt Passo 5 . 12-6 Passo 6 I CHjNHj N32S2O41 KjCO» f XX MeHN^^^^OEt Passo 7 12-7
Passo 1: Ácido 2-etoxi-4-nitrobenzóico 12-1 (1,56 g; 7,38 mmol) foi dissolvido em metanol (15 mL) e a solução resultante agitada a 0 °C. Foi lentamente adicionada uma solução de diazometano em éter etílico até a cor amarela persistir e foi agitada durante mais 20 min. Os solventes foram evaporados para proporcionar o 126 éster metílico 12-2 como um sólido amarelo pálido (1,66 g, quant.) , o qual foi utilizado no passo 2 sem mais purificação.
Passo 2: 0 éster 12-2 do passo 1 (1,60 g; 7,10 mmol) foi dissolvido em tolueno seco e a solução arrefecida até -78 °C sob uma atmosfera de azoto. Foi adicionada uma solução de hidreto de diisobutil-aluminio em tetra-hidrofurano (1 M; 8 mL; 8 mmol) e a mistura reaccional deixada aquecer até à temperatura ambiente. Foram adicionadas deste modo duas porções adicionais de DIBAL-H (7 e 10 mL) após lhe mais 1,5 h. Decorridas 0,5 h após a última adição, a reacção foi arrefecida até 0 °C e foi lentamente adicionado HC1 1 N (25 mL) e a mistura agitada vigorosamente durante 0,5 h. Os solventes orgânicos foram então evaporados e o resíduo aquoso foi extraído com acetato de etilo (2x50 mL) e lavado com água (50 mL) e solução aquosa saturada de cloreto de sódio (50 mL) . Os extractos combinados foram em seguida secos sobre MgS04 e evaporados para proporcionar o álcool 12-3 como um sólido fibroso, amarelo pálido (1,40 g; quant.), o qual foi utilizado tal e qual no passo 3.
Passo 3:
Uma solução turva de 1,1,1-tris(acetiloxi-1,1-di-hidro-l,2-benziodoxol-3-(1H)-ona (periodinano de Dess-Martin) (2,32 g; 5,47 mmol) em diclorometano (40 mL + 5 mL de lavagem) foi adicionada a uma solução, mantida sob agitação, do álcool 12-3 do passo 2 (0,98 g; 4,97 mmol) em DCM (40 mL) e a reacção agitada à temperatura ambiente sob uma atmosfera de azoto. Após 127 4 h, foi adicionado NaHCCd saturado/Na2S2C>3 a 10% (1:1, 160 mL) e a mistura agitada vigorosamente até as fases ficarem transparentes (ca. 0,5 h). A fase orgânica foi separada e a fase aquosa foi extraída com diclorometano (50 mL) e lavada com NaHC03 saturado (2x150 mL) . As fases orgânicas combinadas foram em seguida secas sobre MgS04 e evaporadas para produzir o aldeído 12—4 como um sólido amarelo pálido (960 mg; 99%), o qual foi utilizado tal e qual no passo 4.
Passo 4:
Hidreto de sódio (pó seco a 95%; 158 mg; 6,25 mmol) foi
suspenso em THF anidro (10 mL) e adicionado, gota a gota a 0 °C, fosfonoacetato de trimetilo (0,945 mL; 5,84 mmol) sob uma atmosfera de azoto, resultando numa massa sólida branca que não podia ser agitada. Foi então adicionada, gota a gota, uma solução do aldeído 12-4 do passo 3 (950 mg; 4,87 mmol) em THF (7 mL + 3 mL de lavagem) resultando numa cor amarela e dissolução lenta da massa sólida branca. Após a adição, a reacção foi deixada aquecer até à temperatura ambiente. Após 15 h, a mistura turva reaccional foi evaporada até um sólido amarelo pálido que foi extraído com acetato de etilo (2x50 mL) e lavado com NaHC03 saturado (3x75 mL) . Os extractos combinados foram secos sobre MgS04 e evaporados para proporcionar o éster de cinamato 12-5 como sólido amarelo pálido (1,212 g; 99%), o qual foi utilizado no passo 5 sem mais purificação.
Será evidente para o especialista na técnica que o fosfonoacetato de trimetilo utilizado neste procedimento pode ser substituído com derivados apropriadamente substituídos para 128 preparar análogos que têm vários substituintes na ligação dupla do cinamato.
Passo 5: 0 4-nitro-2-etoxicinamato 12-5 do passo 4 (303 mg, 1,206 mmol), foi dissolvido em ácido sulfúrico concentrado (3 mL) e a solução arrefecida até 0 °C. Foi adicionado nitrato de potássio (128 mg, 1,27 mmol) e a mistura agitada durante 3,5 h à temperatura ambiente. Depois de estar completa, a mistura reaccional foi vertida sobre gelo e o sólido precipitado foi recolhido por filtração. O produto em bruto 12-6 foi lavado com água, seco sob vácuo e utilizado sem purificação no passo 6 (390 mg).
Passo 6: O derivado dinitro 12-6 do passo 5 (390 mg) foi dissolvido em THF (3 mL) e foi adicionada metilamina em THF (3,02 mL de uma solução 2 M em THF). Depois de agitar durante 30 min, os voláteis foram removidos sob pressão reduzida e o sólido laranja 12-7 utilizado tal e qual no passo 7.
Será evidente para o especialista na técnica que podem ser preparados outros intermediários diamina de fórmula geral IV nos Esquemas 2 e 3 acima, em que R8 é diferente de metilo, substituindo a metilamina (CH3NH2) no passo 6 acima pela R8-NH2 apropriada. 129
Passo 7: 0 nitro areno 12—7 do passo 6 foi suspenso numa mistura de EtOH (12 mL) e água (12 mL) e foi adicionado K2CO3 (1,00 g, 6 equivalentes) seguido de hidrossulfito de sódio (1,26 g, 6 equivalentes). A mistura foi agitada durante 4 h à temperatura ambiente e o EtOH foi removido sob pressão reduzida. O residuo foi extraído com AcOEt e a fase orgânica lavada com solução aquosa saturada de cloreto de sódio e seca (MgS04) . A remoção do solvente e purificação do residuo por cromatografia flash (50 a 75% de AcOEt em hexano) deu éster metilico do ácido (E)—3—(5— amino-2-etoxi-4-(metilamino)fenil)acrílico 12-8 (162 mg). 0 éster metilico do ácido (E)-3-(5-amino-2-etoxi-4-(metilamino)fenil)acrílico 12-8 pode ser convertido em intermediários amina de fórmula geral III no Exemplo 1 utilizando os procedimentos descritos nos Exemplos 3 ou 7 e ainda transformado em inibidores de fórmula geral I no Esquema 1 utilizando o procedimento do Exemplo 4.
Será também evidente para um especialista na técnica que os inibidores de fórmula geral I no Esquema I em que R6 é -OCH3 e R5 é -CH=C(R50)-COOR podem ser preparados utilizando o procedimento do Exemplo 12, mas partindo de um precursor idêntico ao composto 12-1, excepto que o grupo etoxilo foi substituído com um grupo metoxilo. 130 EXEMPLO 13 (exemplo de referência) Éster metílico do ácido 4-amino-2-metoxi-5- (metilamino)benzóico 0jN^^C0°XX».
COOMe Hj. Pd(OH)j / C Η,Ν^ν^ΧΟΟΜβ A0jO
AcHN, 13-1
I HN
XX COOMe
MeOH Passo 1 1.HCÍ8M, 100 °C OMe
XX COOMe 13-2
Passo 2 OMe 13-3 | Passo 3 I HNOj N yy COOH V 2. SOCI2. MeOH Ac' 'N^V' NaOtBu.Mel AcHN^^^s^COOMe
OjN v OMe 13-6 H2, Pd(OH)2/C| MeOH |I
Passos 5 e 6
Passo 7 HN'Ví0ÍSN^COOMe Η/ΐ'^^^ΟΜβ 13-7
O-N ΛΛ OMe 13-5
Passo 4 02N''^'"OMe 13-4
Passo 1: 2-Metoxi-5-nitrobenzoato de metilo 13-1 (6,21 g, 29,4 mmol) foi suspenso em MeOH (100 mL) e foi adicionado Pd(0H)2 a 20%/C (500 mg) . A mistura foi agitada sob uma atmosfera de hidrogénio (1 atm) durante 18 h. O catalisador foi removido por filtração e o solvente evaporado sob pressão reduzida para dar um resíduo do composto 13-2 (5, 256 g) , o qual foi utilizado tal e qual no passo 2.
Passo 2:
A anilina 13-2 do passo 1 (5,23 g) foi dissolvida em THF (50 mL) e foi adicionado anidrido acético (2, 984 g) . A mistura 131 foi agitada, de um dia para o outro, à temperatura ambiente. A suspensão branca foi concentrada sob pressão reduzida até uma pasta branca, foi adicionado éter terc-butilmetilico (TBME, 20 mL) e, enquanto era agitada, foi adicionado lentamente hexano (100 mL) . A suspensão foi então agitada durante mais 2 h e o sólido recolhido por filtração. O produto 13-3 foi lavado com hexano e seco ao ar (6,372 g).
Passo 3: Ácido nítrico a 90% (9 mL) foi diluído com água (9 mL) e arrefecido até 0 °C. A anilida 13-3 do passo 2 (5, 905 g) foi adicionada numa porção e a mistura agitada durante 30 min em banho de água com gelo. A mistura reaccional foi então adicionada gota a gota a gelo-água (700 mL) e o sólido amarelo precipitado foi recolhido por filtração, lavado com água e seco ao ar. Foi demonstrado por RMN de 1H que o sólido laranja (5,907 g) consiste de uma mistura de compostos 2:1. A extracção do filtrado aquoso acima com AcOEt deu mais 1 g de material que foi combinado com a primeira cultura e purificado por cromatografia flash sobre sílica gel utilizando 015% AcOEt em CHC13 como eluente. Foi obtido um sólido laranja 13-4 (4,11 g) (um isómero).
Passo 4: A nitroanilida 13-4 do passo 3 (3,580 g) foi dissolvida em THF (50 mL) e a solução arrefecida em gelo. Foram adicionados iodometano (4,155 mL, 66,7 mmol, 5 equivalentes) e terc-butóxido de sódio (6,414 g, 66,7 mmol, 5 equivalentes) em duas porções 132 num intervalo de 3,5 h. A agitação à temperatura ambiente continuou durante mais 20 h após a segunda adição. O THF foi evaporado sob pressão reduzida e foi adicionada água (100 mL). A solução vermelha escura foi lavada com TBME (100 mL) . A fase aquosa foi acidificada com HC1 conc. e extraída com AcOEt (2x100 mL). Os extractos orgânicos combinados foram secos e concentrados para dar o composto 13-5 como um pó vermelho escuro (3,78 g) que foi utilizado directamente no passo 5.
Será evidente para o especialista na técnica que podem ser preparados outros intermediários diamina de fórmula geral IV nos Esquemas 2 e 3 acima, em que R8 é diferente de metilo, substituindo o iodeto de metilo (CH3I) no passo 4 acima pelo R8-X apropriado, em que X é um grupo de saída, tais como Cl, Br, I, metanossulfonato (mesilato), p-toluenossulfonato (tosilato), trifluorometanossulfonato (triflato) e semelhantes.
Passo 5: O ácido carboxílico livre 13-5 do passo 4 (3,75 g) foi suspenso em HC1 8 M (100 mL) e a mistura agitada a 100 °C durante 8 h. Depois de arrefecer até à temperatura ambiente, os voláteis foram evaporados sob vácuo e o resíduo foi co-evaporado 3 vezes com MeOH.
Passo 6: O resíduo do passo 5 foi novamente suspenso em MeOH (100 mL) e arrefecido em gelo-água. Foi adicionado, gota a gota, cloreto de tionilo (5,10 mL, 5 equivalentes) e a suspensão 133 agitada a 65 °C durante 4 h. Os voláteis foram removidos sob pressão reduzida e o resíduo 13-6 co-evaporado duas vezes com MeOH (100 mL) e, em seguida, tolueno (2x100 mL).
Passo 7: O resíduo 13-6 do passo 6 foi então dissolvido em MeOH (200 mL), foi adicionado Pd(OH)2 a 20%/C (500 mg) e a mistura agitada, de um dia para o outro, sob 1 atm de hidrogénio gasoso. O catalisador foi então removido por filtração e a solução evaporada até à secura. O resíduo foi dissolvido em AcOEt e a solução lavada com NaHCC>3 aquoso e seca (MgS04) . A remoção dos solventes deu um sólido que foi suspenso em TBME (50 mL) e aquecido a 60 °C durante 30 min. Foi então lentamente adicionado um volume igual de hexano à solução quente e o éster metílico do ácido 4-amino-2-metoxi-5-(metilamino)benzóico 13-7 precipitado foi recolhido por filtração, lavado com TBME-hexano e seco (2,00 g) . O éster metílico do ácido 4-amino-2-metoxi-5-(metilamino)benzóico 13-7 pode ser convertido nos intermediários amina de fórmula geral III correspondentes no Esquema 1, seguindo os procedimentos dos Exemplos 3 ou 7. Estes intermediários amina podem ser ainda convertidos em intermediários amina de fórmula geral III no Esquema 1, em que R5 é -OCH3 e R6 é -CH=C (R50) -COOR, seguindo o procedimento do Exemplo 8. Todos estes intermediários amina de fórmula geral III no Esquema 1 podem ser ainda transformados em inibidores de fórmula geral I no Esquema 1 utilizando o procedimento do Exemplo 4. 134
Será evidente para um especialista na técnica que o procedimento do Exemplo 13 pode ser aplicado ao composto 12-2 do Exemplo 12, ou ao seu análogo em que o grupo etoxilo foi substituído por um grupo metoxilo, para produzir precursores diamina de fórmula geral IV no Esquema 2 ou 3, em que R6 é OCH3 ou OEt. Tais precursores diamina também podem ser convertidos em intermediários amina de fórmula geral III no Esquema 1, seguindo os procedimentos dos Exemplos 3 ou 7, e ainda transformados em inibidores de fórmula geral I no Esquema 1, utilizando o procedimento do Exemplo 4. EXEMPLO 14 W2-Metil-4- (lJí-[l, 2,3] triazol-4-il)benzeno-l, 2-diamina
Passo 1: 3-Fluoro-4-nitrobenzaldeído 9-3 do Exemplo 9 (2,0 g, 11,8 mmol) foi dissolvido em THF (30 mL) e foi adicionada metilamina em excesso (2 M em THF, ~21 mL, 42 mmol) . A mistura reaccional foi agitada à t.a. até ter sido confirmada conversão 135 completa por HPLC (~2-3 h) . A solução turva foi então evaporada até um sólido laranja que foi extraído com acetato de etilo (2x50 mL) e lavado com HC1 1 N (agitada até se dissipar a cor bordeaux escura; 100 mL) , água (100 mL) e solução aquosa saturada de cloreto de sódio (60 mL). Os extractos combinados foram secos sobre MgS04 anidro e evaporados para dar o intermediário metilamino 14-1 como um pó laranja, o qual foi utilizado no passo 2 sem qualquer purificação.
Será evidente para o especialista na técnica que podem ser preparados outros intermediários diamina de fórmula geral IV nos Esquemas 2 e 3 acima, em que R8 é diferente de metilo, substituindo a metilamina (CH3NH2) no passo 1 acima pela R8-NH2 apropriada.
Passo 2:
Uma solução de n-BuLi (2,5 M em THF, 14,4 mL, 36,0 mmol) em THF anidro (60 mL) foi adicionada lentamente a uma solução de TMS-diazometano (10% em hexano, 18 mL, 36,0 mmol) a -78 °C. A mistura foi agitada a -78 °C durante 30 min, antes de ter sido adicionada lentamente uma solução do intermediário metilamino 14-1 do passo 1 (2,16 g, 12,0 mmol, dissolvido em 2 mL de THF). A mistura reaccional foi agitada a -78 °C durante lhe, em seguida, deixada aquecer até à t.a. e agitada durante mais 3 h, antes de desactivação por adição de H20. A mistura em bruto foi partilhada entre NaHC03 aquoso saturado (30 mL) e AcOEt (60 mL) , a camada aquosa foi novamente extraída com AcOEt (2x60 mL) e as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secas sobre MgS04 anidro e 136 concentradas até à secura. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna flash (utilizando 20% de AcOEt em hexano como o eluente) para dar o alcino 14-2 desejado como um sólido castanho claro (445 mg, -21% de rendimento).
Passo 3:
Num tubo de pressão de parede espessa, o alcino 14-2 do passo 2 (260 mg, 1,48 mmol) foi dissolvido em DMSO seco (6,0 mL) e foi adicionada TMS-azida (0,392 mL, 2,96 mmol). A reacção foi aquecida a 140 °C durante 2 h, em seguida, arrefecida e extraída com AcOEt (50 mL) e lavada com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (2x50 mL) . A camada orgânica foi seca sobre MgS04 anidro e evaporada para obter o triazole 14-3 em bruto como um sólido amarelo-castanho, o qual foi utilizado no passo 4 sem mais purificação.
Passo 4: O intermediário triazole 14-3 em bruto do passo 3 (-1,10 mmol) foi dissolvido em EtOH (10 mL) e H20 (6 mL) o que resultou nalguma precipitação do material de partida, foram adicionados K2C03 (0,91 g, 6,58 mmol) e hidrossulfito de sódio (1,15 g, 6,58 mmol) e a mistura reaccional foi agitada durante 2 h à t.a.. A mistura reaccional foi então extraída com AcOEt (50 mL) , a camada orgânica foi lavada com H20 (50 mL) e solução aquosa saturada de cloreto de sódio (30 mL), seca sobre MgS04 anidro e evaporada até uma goma castanha que continha N2-metil-4-(1H-[1,2,3]triazol-4-il)benzeno-1,2-diamina 14-4 (entre outros produtos secundários). 137 A iV2-metil-4-(1H- [ 1,2,3 ] triazol-4-il) benzeno-1,2-diamina em bruto pode ser convertida, sem mais purificação, nos intermediários amina de fórmula geral III correspondentes no Esquema 1, seguindo os procedimentos dos Exemplos 3 ou 7, e ainda transformada em inibidores de fórmula geral I no Esquema 1, utilizando o procedimento do Exemplo 4. EXEMPLO 15 (exemplo de referência) W2-Metil-4-(4-metilpiperazin-l-il)benzeno-1,2-diamina
Passo 1: A uma solução de 4-cloro-2-fluoro-l-nitrobenzeno 15-1 (1,18 g, 6,72 mmol) em DMSO (7 mL) , foi adicionada uma solução de metilamina (2 M em THF, 13,6 mL, 26,9 mmol) e a mistura reaccional foi agitada à t.a. durante 24 h. A solução foi diluída com AcOEt (-300 mL) , a camada orgânica foi lavada com H20 (3x50 mL) e solução aquosa saturada de cloreto de sódio (50 mL), seca sobre MgS04 anidro e concentrada sob vácuo para dar o 138 derivado de metilamino 15-2 como um sólido amarelo (1,19 g) . 0 material em bruto foi utilizado no passo 2 sem purificação.
Será evidente para o especialista na técnica que podem ser preparados outros intermediários diamina de fórmula geral IV nos Esquemas 2 e 3 acima, em que R8 é diferente de metilo, substituindo a metilamina (CH3NH2) no passo 1 acima pela R8-NH2 apropriada.
Passo 2:
Uma mistura do derivado de metilamino 15—2 do passo 1 (105 mg, 0,56 mmol) e iV-metilpiperazina (0,5 mL) foi aquecida a 90 °C, enquanto se agitava durante 3 h e, em seguida, à t.a. durante mais 15 h. A mistura reaccional foi diluída com AcOEt (~50 mL) e a camada orgânica foi lavada com H20 (3x10 mL) e solução aquosa saturada de cloreto de sódio (20 mL) , seca sobre MgS04 anidro e concentrada sob vácuo para dar o derivado de piperazina 15-3 como um sólido amarelo (140 mg), o qual foi utilizado no passo 3 sem purificação.
Um especialista na técnica verá facilmente que podem ser facilmente utilizados derivados de piperazina que têm outros substituintes em vez da N-metilpiperazina no Passo 2 acima para preparar intermediários que levam a outros compostos de fórmula (I). 139
Passo 3: A uma solução do derivado de piperazina 15-3 do passo 2 (140 mg) em EtOH (6 mL) , foi adicionado Pd/C (10%, 25 mg) e a mistura foi agitada sob uma atmosfera de H2 à t.a. durante 15 h. A mistura reaccional foi filtrada e o solvente evaporado para dar uma amostra razoavelmente pura do produto desejado, A^-metil-4-(4-metilpiperazin-l-il)benzeno-1,2-diamina 15-4, como um óleo de cor púrpura (133 mg). A iV2-Metil-4-(4-metilpiperazin-l-il) benzeno-1,2-diamina 15—4 foi convertida, sem mais purificação, nos intermediários amina de fórmula geral III correspondentes no Esguema 1, seguindo os procedimentos dos Exemplos 3 ou 7, e ainda transformada em inibidores de fórmula geral I no Esquema 1, utilizando o procedimento do Exemplo 4. EXEMPLO 16 (exemplo de referência) 4-Imidazol-l-il-W2-metilbenzeno-l, 2-diamina
4-Imidazol-l-il-iV2-metilbenzeno-1,2-diamina 16-1 foi preparada utilizando o procedimento do Exemplo 15, excepto que foi utilizado imidazole em vez de IV-metilpiperazina no passo 2. A 4-imidazol-l-il-IV2-metilbenzeno-l, 2-diamina 16-1 pode ser convertida nos intermediários amina de fórmula geral III 140 correspondentes no Esquema 1, seguindo os procedimentos dos Exemplos 3 ou 7, e ainda transformada em inibidores de fórmula geral I no Esquema 1, utilizando o procedimento do Exemplo 4.
Exemplo 17 4- (2-Aminotiazol-4-il) -i^-metilbenzeno-l, 2-diamina
D Passo 3 ^ NH>
HN' 17-5 17-4
Passo 1
Uma mistura de 4-cloro-3-nitroacetofenona 17-1 (3,00 g, 15,0 mmol) e metilamina (15,0 mL, 2M em THF, 30,0 mmol) foi colocada num tubo de pressão selado e agitada a 80 °C durante 6 h e à t.a. durante 20 h. A mistura reaccional foi concentrada até à secura e o resíduo foi purificado por cromatograf ia em coluna flash (utilizando 20-30% de hexano em AcOEt) para isolar o produto puro desejado 17-2 como um sólido laranja (980 mg, 34% de rendimento). 141
Será evidente para o especialista na técnica que podem ser preparados outros intermediários diamina de fórmula geral IV nos Esquemas 2 e 3 acima, em que R8 é diferente de metilo, substituindo a metilamina (CH3NH2) no passo 1 acima pela R8-NH2 apropriada.
Passo 2: A uma solução do intermediário 4-metilamino-3-nitroacetof enona 17-2 do passo 1 ( 700 mg, 3,6 mmol) em dioxano:éter (10 mL, proporção 1:1), foi adicionado lentamente Br2 (0,20 mL, 3,96 mmol) e a mistura reaccional foi agitada à t.a. durante 20 h. A mistura reaccional foi concentrada até à secura e o resíduo foi redissolvido em AcOEt (200 mL) . A solução foi lavada com NaHCCb aquoso saturado (2x100 mL) e solução aquosa saturada de cloreto de sódio (100 mL) , seca sobre MgSCq anidro e concentrada até à secura para dar o intermediário bromocetona 17-3 em bruto (1,0 g) , o qual foi utilizado no passo 3 sem purificação.
Passo 3:
Uma solução do intermediário bromocetona 17-3 do passo 2 (1,0 g) e tioureia (548 mg, 7,2 mmol) em i-PrOH (30 mL) foi agitada a 70 °C durante 1 h. A mistura foi arrefecida até à t.a., e o precipitado que se formou foi filtrado, lavado com éter dietílico e seco para dar o intermediário aminotiazole 17-4 desejado como um sólido laranja ( — 1,0 g) . Este composto foi utilizado no passo 4 sem purificação. 142
Passo 4:
Uma solução do intermediário nitro 17-4 do passo 3 (500 mg, ~2 mmol) e SnCl2 di-hidratado (2,25 g, 10 mmol) em EtOH (15 mL) foi agitada a 80 °C durante 16 h. A mistura foi vertida lentamente sobre NaHCCU e agitada vigorosamente durante 30 min. A mistura foi extraída com CH2C12 (2x200 mL) e as camadas orgânicas combinadas foram secas sobre Na2S04 anidro e concentradas até à secura. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna flash (utilizando um gradiente de solvente desde 30% de hexano em AcOEt até 100% de AcOEt e, em seguida, até 3% de MeOH em AcOEt) para recuperar algum material de partida por reagir e o produto diamina puro, 4-(2-aminotiazol-4-il)-N1-metilbenzeno-1,2-diamina 17-5, (167 mg, 38% de rendimento). A 4-(2-aminotiazol-4-il)-iV1-metilbenzeno-l, 2-diamina 17-5 foi convertida nos intermediários amina de fórmula geral III correspondentes no Esquema 1, seguindo os procedimentos dos Exemplos 3 ou 7, e ainda transformada em inibidores de fórmula geral I no Esquema 1, utilizando o procedimento do Exemplo 4. A unidade amino livre do substituinte aminotiazole de um inibidor de fórmula geral I no Esquema 1, ou um intermediário adequado na sua preparação, pode ser alquilada utilizando procedimentos bem conhecidos dos especialistas na técnica, ou acetilada utilizando procedimentos bem conhecidos dos especialistas na técnica, tal como tratamento com anidrido acético, cloreto de acetilo, ou semelhantes. Alternativamente, a substituição da tioureia no passo 3 acima por uma tioureia substituída de um modo adequado no N dará intermediários em que a unidade amino livre foi substituída. 143 EXEMPLO 18 (exemplo de referência) Éster metilico do ácido 4-amino-2-(9H-fluoren-9-ilmetoxicarbonilamino)-5-(metilamino)benzóico o" ° o' o KNQj A* ^ !!· MeOH lii* Λ M* _hjS0^ ° TY °' -Hjs°- ° yy °'
Passo 1 Passo 2 18-2 18-3 18-1
Passo 3 CHjNHj
H’N'v/WNH=JCC
Tnoc-CI ELN ,»N'Y^sXNM> NH NaA°« K,CO, *2Me Passo 5 CO.Me
Passo 4 CH, 18-8 OI. /vVv HN'^Vví^X'COJMe
CLC
Passo 6
Íh, 18-4 Zn, AcOH Passo 7
Fmoc-CI piridina ci^c ov T T ° y-N'^A^^1V^COjMe o Íh. 18-7 T O N ji y^>í 0 A·»*. (V» v* <h vxY / «3 v Χ02Μθ 144
Passo 1: A uma solução de ácido m-clorobenzóico 18-1 (12,5 g, 79,8 mmol) em ácido sulfúrico (100 mL) a 40 °C, foi adicionado lentamente nitrato de potássio (aproximadamente metade da quantidade total; 22,0 g, 218 mmol), em porções, sob agitação, (temperatura mantida abaixo de 70 °C). A solução foi então aquecida lentamente até 105 °C, ο KNO3 remanescente foi adicionado lentamente (temperatura mantida abaixo de 110 °C), e finalmente a solução foi aquecida a 130 °C durante 15 min, deixada arrefecer de novo até à t.a. e vertida sobre gelo (-500 mL) . O sólido amarelo que se formou foi filtrado, lavado com água (50 mL) , seco ao ar durante 2 h para produzir 13,25 g (67%) de uma mistura 2:1 do produto desejado 18-2 e um produto secundário desconhecido. A mistura foi utilizado tal e qual no passo 2.
Passo 2: O ácido dinitro carboxilico 18—2 em bruto (-13 g) do passo 1 foi dissolvido em metanol (100 mL) e foi adicionado muito lentamente ácido sulfúrico (13,0 mL) , já que a reacção é muito exotérmica. A mistura reaccional foi agitada a refluxo durante 18 h. A solução foi vertida sobre gelo (-500 mL) e o produto foi extraído com AcOEt (2x100 mL). As camadas orgânicas foram lavadas com NaHC03 aquoso a 5% (3x100 mL) , secas sobre MgS04 anidro e evaporadas para dar o intermediário éster dinitro metílico 18—3 desejado (9,54 g, 69% de rendimento). 145
Passo 3: A uma solução do cloreto de dinitro arilo 18-3 acima (9,5 g, 36,5 mmol) em DMF (20 mL) a 0 °, foi adicionada metilamina (2 M em THF, 39,2 mL, 74,7 mmol) sob agitação. Após alguns minutos formou-se um sólido cristalino, a suspensão foi deixada aquecer até à t.a. e a agitação continuou durante 2 h. A mistura reaccional foi partilhada entre H2O (200 mL) e AcOEt (100 mL) . A solução orgânica foi lavada com NaHCC>3 aquoso a 5% (100 mL), solução aquosa saturada de cloreto de sódio (3x100 mL), seca sobre MgSCg anidro e o solvente foi evaporado até à secura para dar o produto desejado 18-4 como um sólido amarelo-laranja (7,09 g, 76% de rendimento).
Será evidente para o especialista na técnica que podem ser preparados outros intermediários diamina de fórmula geral IV nos Esquemas 2 e 3 acima, em que R8 é diferente de metilo, substituindo a metilamina (CH3NH2) no passo 3 acima pela R8-NH2 apropriada.
Passo 4: A uma suspensão do intermediário dinitro anilina 18-4 acima em Et0H/H20 (100 mL, proporção 1:1), foi adicionado K2C03 (10,3 g, 74,5 mmol) com agitação vigorosa, seguido da adição em porções de hidrossulfito de sódio (13,0 g, 74,5 mmol). A suspensão amarela ficou vermelho sangue em seguida preta, tornou-se mais homogénea (ligeiramente exotérmica), em seguida, bifásica e formou-se um precipitado branco. Após 30 minutos de agitação à t.a., o EtOH foi parcialmente evaporado e o residuo foi diluído com H20 (100 mL) . A mistura reaccional foi extraída 146 com AcOEt (2x75 mL), as camadas orgânicas combinadas foram secas sobre MgS04 anidro e evaporadas para produzir um sólido amorfo preto 18-5 (1,26 g, 55%), o qual foi utilizado tal e qual no passo 5.
Passo 5: A uma solução gelada, mantida sob agitação agitada, da trianilina 18-5 acima (400 mg, 2,05 mmol) em acetonitrilo (5 mL) sob azoto, foi adicionada trietilamina (0,57 mL) , seguida da adição, gota a gota, de TrocCl (0,282 mL, 2,05 mmol). A solução púrpura escura foi agitada e deixada aquecer até à t.a. ao longo de 2 h. O solvente foi evaporado, o resíduo tomado em AcOEt (30 mL), lavado com NaHC03 aquoso a 5% (2x20 mL) e solução aquosa saturada de cloreto de sódio (20 mL), seco sobre MgS04 anidro e o solvente evaporado até à secura. O resíduo foi purificado por cromatograf ia flash (utilizando sílica gel de tipo TLC e um gradiente de solvente desde 30% a 60% de AcOEt em hexano) para dar o produto desejado 18-6 como um sólido amorfo bege (459 mg, 60% de rendimento).
Passo 6: A uma solução, mantida sob agitação, de derivado de anilina protegido com Troe acima 18—6 (100 mg, 0,27 mmol) em CH2CI2 (1 mL) , foram adicionados piridina (0,032 mL, 0,4 mmol) seguida de Fmoc-Cl (80 mg, 0,31 mmol). A mistura reaccional foi agitada à t.a. durante 2 h. A mistura foi diluída com AcOEt (30 mL), a suspensão foi lavada com NaHC03 aquoso a 5% (2x10 mL) , seca sobre 147
MgS04 anidro e evaporada até à secura. 0 resíduo foi purificado por cromatografia flash (utilizando sílica gel de tipo TLC e eluindo com um gradiente de solvente desde 20% a 30% de AcOEt em hexano) para dar duas amostras do produto protegido com Fmoc 18-7 desejado; 47 mg de produto muito puro e 100 mg de pureza ligeiramente inferior.
Passo 7:
0 derivado trianinila duplamente protegido (protegido com Troe e Fmoc) 18-7 (100 mg, -0,17 mmol) foi dissolvido em THF (1 mL) e foram adicionados ácido acético (0,25 mL) seguido de zinco recentemente activado (20,0 mg, 0,31 mmol). A mistura reaccional foi agitada vigorosamente à t.a. sob azoto durante 2 h. A evolução da reacção foi seguida por HPLC e após 2 h foi observada apenas -30% de conversão, por conseguinte, foi adicionado mais zinco (15 mg) e a agitação continuou a 60 °C durante 4 h. A mistura reaccional foi diluída com AcOEt (30 mL), filtrada sobre Celite e o filtrado foi arrefecido num banho de gelo e lavado com NaHC03 aquoso a 5% (20 mL) ; deve ter-se cuidado para prevenir a acumulação de pressão excessiva. A camada orgânica foi lavada com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca sobre MgS04 anidro e o solvente foi evaporado para dar o intermediário éster metílico do ácido 4-amino-2-(9H-fluoren-9-ilmetoxicarbonilamino)-5-(metilamino)-benzóico mono- protegido 18-8 como um sólido cristalino branco (68 mg, 96% de rendimento). 0 composto 18-8 foi convertido nos intermediários amina de fórmula geral III protegidos com Fmoc correspondentes no 148
Esquema 1, seguindo os procedimentos dos Exemplos 3 ou 7, e ainda transformados em inibidores protegidos com Fmoc de fórmula geral Ic acima, utilizando o procedimento do Exemplo 4. Estes inibidores protegidos com Fmoc de fórmula geral Ic, ou apropriados intermediários amina protegidos com Fmoc, na sua síntese, também podem ser convertidos em inibidores protegidos com Fmoc de fórmula geral Id acima, utilizando os procedimentos dos passos 1, 2 e 3 do Exemplo 8. Em ambos os casos, a remoção do grupo de protecção Fmoc pode ser realizada por tratamento com piperidina, como é bem conhecido por um especialista na técnica, e a saponificação do grupo éster pode ser realizada sob condições básicas (seguindo protocolos bem conhecidos dos especialistas na técnica) para dar inibidores tais como os compostos 1032 (Quadro 1) e 3060 (Quadro 3). A unidade amina livre destes inibidores pode ser ainda feita reagir com reagentes geralmente conhecidos dos especialistas na técnica, tal como cloroformato de isopropilo e semelhantes, para formar inibidores tal como o composto 1033 (Quadro 1). EXEMPLO 19 Ácido 2-(5-bromopirimidin-2-il)-3-ciclopentil-l-metil-l.ff-indole-6-carboxílico
149
Passo 1: 0 bromoindole 19-1 (preparado como descrito no Exemplo 12 do documento WO 03/010141) (3,0 g, 8,9 mmol, 1 equiv.) foi dissolvido em DME anidro (20 mL) e tri-(2-furil) fosf ina (260 mg, 1.1 mmol, 0,12 equiv.) foram adicionados trietilamina (3,0 mL, 21,5 mmol, 2,4 equiv.) e Pd(0Ac)2 (65 mg, 0,2 8 mmol, 0,03 equiv.). A mistura foi purgada borbulhando Ar através da mesma durante 10 min e foi adicionado pinacolborano (4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolano; 3,0 mL, 20 mmol, 2.2 equiv.) com seringa. A mistura castanha escura resultante foi agitada a 68 °C durante 16 h sob uma atmosfera de árgon. A mistura reaccional foi então arrefecida até à t.a. e a 5-bromo-2-iodopirimidina (3,0 g, 10,5 mmol, 1,18 equiv.) foi adicionada como um sólido, seguida de adição lenta cuidadosa de uma suspensão arrefecida de K3PO4 (10,5 g, 47,1 mmol, 5,4 equiv.) em água (7 mL) . Alternativamente, a adição de K3PO4 pode anteceder a adição de 5-bromo-2-iodopirimidina. A mistura reaccional castanha escura foi então aquecida até 80 °C sob árgon durante 24 h. A mistura reaccional foi arrefecida até à t.a. e vertida para NaCl aquoso a 10% (100 mL) . A suspensão castanha foi extraída com AcOEt (150 mL) . O extracto foi lavado com água (2x50 mL) e solução aquosa saturada de cloreto de sódio (100 mL), seco e concentrado até 50 mL. O arrefecimento durante 2 h no frigorífico, deu um precipitado bege que foi recolhido por filtração, lavado com uma pequena quantidade de AcOEt e seco. O filtrado foi concentrado sob vácuo e o resíduo foi suspenso em acetona (20 mL), aquecido até ebulição e arrefecido no frigorífico de um dia para o outro. O sólido foi filtrado e os sólidos combinados foram ainda purificados por cromatografia 150 utilizando CHCI3 como solvente para dar o éster de indole 19-2 desejado como um sólido bege com 77% de rendimento.
Passo 2:
0 éster 19-2 (300 mg, 0, 72 mmol) foi suspenso em DMSO (10 mL) e a suspensão aquecida ligeiramente para dissolver o sólido. A solução amarela ligeiramente turva foi arrefecida e agitada enquanto era adicionado NaOH 2,5 N (2,0 mL, 5,0 mmol, 8,6 equiv.) e a agitação continuou durante 4 h à t.a. A mistura foi lentamente vertida para HC1 0,5 N (200 mL) . O precipitado amarelo foi recolhido por filtração, lavado com água e seco para dar o composto 19-3 (273 mg, 94% de rendimento, 100% de homogeneidade). EXEMPLO 20 (exemplo de referência) Ácido 3-ciclopentil-l,2-dimetil-6-indolecarboxílico
O derivado 2-bromoindole 19-1 (1,009 g, 3,00 mmol, preparado como descrito no Exemplo 12 do documento WO 03/010141) foi dissolvido em THF anidro (25 mL) sob uma atmosfera de árgon e a solução arrefecida até -78 °C. Foi adicionado, gota a gota, n-BuLi (2,0 M em hexano, 1,60 mL, 3,20 mmol) e a mistura agitada 151 durante 15 min. Foi adicionado Mel (0,37 mL, 2,00 mmol) e a agitação continuou durante mais 30 min. A mistura reaccional foi então aquecida até à t.a. e os voláteis removidos sob pressão reduzida. O residuo foi dissolvido em TBME (100 mL) e a solução lavada com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (2x25 mL). O extracto foi seco (MgS04) , concentrado sob pressão reduzida e o residuo purificado por cromatografia flash utilizando 0-15% de AcOEt em hexano como eluente. O derivado de 2-metilindole 20-1 desejado foi obtido como um sólido ceroso (0,658 g, 80% de rendimento): MS-ES m/z 272,1 (MH+) . O éster metilico 20-1 foi saponificado da forma habitual (NaOH/DMSO) para dar o ácido carboxilico correspondente 20-2 com 96% de rendimento: MS-ES m/z 258, 1 (MH+) . EXEMPLO 21 (exemplo de referência) Ácido 3-ciclopentil-2-etenil-l-metil-6-indolecarboxílico
O 2-bromoindole 19-1 (preparado como descrito no Exemplo 12 do documento WO 03/010141) (5,000 g, 14,87 mmol) foi dissolvido em dioxano seco (50 mL) e foi adicionado viniltributilestanho (4,82 mL, 16,50 mmol). A solução foi desgaseifiçada borbulhando N2 durante 15 min. Foi adicionado cloreto de bis(trifenilfosfina)paládio(II) (0,350 g, 0,50 mmol) e a mistura aquecida a 100 °C, de um dia para o outro, sob uma atmosfera de 152 azoto. Foi adicionado mais catalisador (0,350 g, 0,50 mmol) e o aquecimento retomado durante mais 48 h, altura em que a análise por TLC indicou que a reacção estava quase completa. A mistura reaccional foi arrefecida até à t.a. e filtrada através de uma pequena almofada de silica gel utilizando THF nas lavagens. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida e o resíduo purificado por cromatografia flash utilizando 5-15% de AcOEt em hexano como eluente. O éster de 2-vinilindole 21-1 desejado foi obtido como um sólido acastanhado (2,92 g, 69% de rendimento): MS-ES m/z 284, 1 (MH+) . O éster metílico 21-1 foi saponifiçado da forma habitual (NaOH/DMSO) para dar o ácido carboxílico correspondente 21—2 com 93% de rendimento: MS-ES m/z 270, 1 (MH+) . EXEMPLO 22 (exemplo de referência) Ácido 3-ciclopentil-2-etil-l-metil-6-indolecarboxílico
O éster de 2-vinilindole 21-1 (Exemplo 21) (0,250 g, 0,88 mmol) foi dissolvido em MeOH (15 mL) e a solução hidrogenada (1 atm de H2 gasoso) sobre Pd(OH)2 a 10%/C (50 mg) durante 18 h. O catalisador foi então removido por filtração e o filtrado evaporado sob pressão reduzida para dar o éster 22-1 em bruto. O resíduo foi dissolvido em DMSO e saponif içado com NaOH da forma habitual para dar o derivado de 2-etilindole 22-2 desejado como um sólido branco (0,211 g, 88% de rendimento): MS-ES m/z 272, 1 (MH+) . 153 EXEMPLO 23 (exemplo de referência) Ácido indolecarboxilico 3-ciclopentil-2-(2-propenil)-l-metil-6-
0 2-estanilindole 23-1 (1,280 g, 2,34 mmol; preparado utilizando os métodos descritos no documento WO 03/010141), trifenilfosfina (0,065 g, 0,25 mmol), Cul (0,045 g, 0,24 mmol), LiCl (0,200 g, 4,72 mmol) e 2-bromopropeno (0,444 mL, 5,00 mmol) foram dissolvidos em DMF (6 mL) e a suspensão desgaseif içada borbulhando Ar durante 20 min.
Foi adicionado Pd2(dba)3 (0,035 g, 0,034 mmol) e depois de desgaseificar durante mais 10 min, a mistura reaccional foi aquecida até 100 °C de um dia para o outro. A suspensão foi então diluída com TBME (100 mL) e lavada com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (2x25 mL) . O extracto foi seco (MgS04) e concentrado sob pressão reduzida para dar um resíduo que foi purificado por cromatografia flash utilizando 5-10% de AcOEt em hexano como eluente. O 2-(2-propenil)indole 23-2 desejado foi obtido como sólido bege (0,57 g, 81% de rendimento) : MS-ES m/z 298,1 (MH+) . O éster metílico 23—2 foi saponificado da forma habitual (NaOH/DMSO) para dar o ácido carboxílico correspondente 23—3 com 96% de rendimento: MS-ES m/z 284, 1 (MH+) . 154 EXEMPLO 24 (exemplo de referência) Ácido 3-ciclopentil-2-isopropil-l-metil-6-indole- carboxílico
Seguindo um procedimento semelhante ao descrito no
Exemplo 22 para o análogo 2-etilo foi obtido o derivado de 2-isopropilindole 24-2 como um sólido branco (88% de rendimento) : MS-ES m/z 286, 1 (MH+) . EXEMPLO 25 (exemplo de referência) Ácido 3-ciclopentil-2-ciclopropil-l-metil-6- indolecarboxílico
Brometo de ciclopropilo (0,471 g, 3,90 mmol) foi dissolvido em THF anidro (20 mL) e a solução arrefecida até -78 °C sob uma atmosfera de Ar. Foi adicionado nBuLi (1,0 M em hexano, 3,60 mL, 155 3,60 mmol) e a mistura agitada durante 15 min. Foi então adicionado ZnBr2 ( 0, 878 g, 3,90 mmol) em THF (15 mL) , a mistura deixada aquecer até à t.a. e a reacção agitada durante 15 min. Foi adicionado o 2-bromoindole 19-1 (preparado como descrito no Exemplo 12 do documento WO 03/010141) (1,009 g, 3,00 mmol) em THF (15 mL), seguido de tetraquis(trifenilfosfina)paládio(0) (0,289 g, 0,25 mmol) . A mistura foi agitada 24 h a refluxo, altura em que ainda estava presente material de partida, mas a reacção foi desactivada por adição de AcOH (2 mL) . Os voláteis foram removidos sob pressão reduzida e o resíduo retomado em TBME (100 mL). O extracto foi lavado com NaHC03 aquoso saturado e seco (MgS04) . A evaporação sob pressão reduzida deu um resíduo que foi purificado por cromatografia flash utilizando 0-15% AcOEt em hexano como eluentes para dar o éster de 2-ciclopropilindole 25-1 desejado como um sólido verde claro (0,540 g, 60% de rendimento): MS-ES m/z 298, 1 (MH+) . O éster metílico 25-1 foi saponificado da forma habitual (NaOH/DMSO) para dar o ácido carboxílico correspondente 25-2 com 80% de rendimento: MS-ES m/z 284, 1 (MH+) . EXEMPLO 26 (exemplo de referência)
Acido indolecarboxilico 3-ciclopentil-l-metil-2-(1-pirazolil)-6-
156 0 2-bromoindole 19-1 (preparado como descrito no Exemplo 12 do documento WO 03/010141) (1,00 g, 2,97 mmol) e pirazole (2,00 g, 20,4 mmol, 9,9 equiv.) foram carregados num tubo selado e a mistura aquecida a 160 °C durante 72 h. A mistura reaccional foi então arrefecida até à t.a. e carregada numa coluna de cromatografia flash. O produto foi eluido com 40-100% AcOEt em hexano como eluentes. O material recuperado (1,60 g) , o qual estava contaminado com pirazole, foi dissolvido numa mistura de THF/MeOH/água e basificado com NaOH 1 N. Os orgânicos foram então evaporados sob pressão reduzida e o resíduo tratado com HC1 conc. para precipitar o ácido 2-pirazolilindole carboxílico 26-1 desejado (0,400 g, 43% de rendimento).
Os análogos contendo outros substituintes heterocíclicos ligados por N no C-2 do anel de índole foram preparados de uma forma semelhante, partindo de heterociclos baseados em azoto, tais como imidazoles e triazoles. EXEMPLO 27 Éster metilico do ácido (E)—3—[2—(1—aminociclobutil)—3— metil—3H—benzimidazol—5—il]acrílico
157
Passo 1: 2,4-Dicloronitrobenzeno (27-1) (61 g, 0,32 mol), trietilamina (68 mL, 0,48 mol) e metilamina 2,0 M em THF (500 mL, 1,0 mol) foram misturados num balão de fundo redondo de 3 L munido de um condensador de Graham sob pressão de árgon. A solução foi então aquecida até 40 °C sob agitação e começou a formar-se um sólido branco (Et3NH+Cl~) . Depois de aquecer durante ~6 h, a TLC (em 20% de acetato de etilo em hexano) mostrou que a reacção estava -60% concluída. Foram adicionados outros dois equivalentes da solução de metilamina em THF (330 mL) e a mistura foi aquecida a 40 °C sob agitação durante mais 16 horas. A TLC mostrou que todo o material de partida tinha sido consumido. A mistura reaccional foi deixada arrefecer até à temperatura ambiente e o sólido branco foi removido por filtração e lavado exaustivamente com THF. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida e redissolvido em 800 mL de diclorometano, lavado com água e solução aquosa saturada de cloreto de sódio, e seco sobre Na2S04. Os solventes foram removidos in vacuo para dar o composto 27-2 como um sólido laranja (59,5 g, quantitativo), o qual era suficientemente puro para utilização no passo seguinte.
Passo 2: foi adicionado o composto 27-2 (414 mg, 0,45 mmol), P(t-Bu)3 mL, 00 1 1 mmol) e N,N-diciclo- mmol) sob atmosfera de árgon. 16,5 mmol) foi desgaseifiçado com A um tubo de pressão seco (2,88 g, 15 mmol), Pd2(dba)3 (solução 0,1 M em dioxano, 18 hexilmetilamina (3,6 mL, 16,5 Acrilato de n-butilo (2,4 mL, 158 árgon durante 35 minutos, antes de ter sido adicionado à mistura. 0 tubo foi então selado e a mistura foi aquecida a 110 °C sob agitação ao longo do fim-de-semana. A reacção foi arrefecida até à temperatura ambiente e diluída com acetato de etilo (200 mL) . O resíduo sólido foi removido por filtração da mistura através de uma almofada de sílica gel e foi lavado com acetato de etilo (700 mL). O filtrado foi concentrado in vacuo e co-evaporado três vezes com hexano. O sólido vermelho foi então agitado com hexanos (40 mL) a 60 °C. A mistura foi arrefecida até 0 °C durante 15 minutos e o sólido vermelho foi recolhido por filtração e lavado com hexanos, e foi ainda seco sob alto vácuo (3,4 g, 81% de rendimento). O produto 27-3 estava cerca de 90% puro por RMN. Pode ser obtido mais produto a partir do filtrado por purificação em coluna flash.
Passo 3: O composto 27-3 foi convertido no composto 27-4 utilizando o método do Exemplo 11, passo 5.
Passo 4: O composto 27-4 foi convertido no composto 27-5 utilizando o método do Exemplo 3. 159 EXEMPLO 28 Éster metílico do ácido (E)-3-[2-(1-aminociclobutil)-7-cloro-3—metil-3Jí-benzimidazol-5-il] acrílico ο,ν^οοοη
M,N
0,N^^\^.COOH HjN
Passo 1 Cl 28-1 28-2
OjN^jrv^COOMe Η,Ν^^χ,ΟΟΟΜθ-► h2n^V -*- h2n^V Passo 2 Cl Passo 3 ® 28-3 28-4 NHBoc |—J-COOH Passo 4 BocHN T Passo 5 Cl 28-6
28-5 ς^Νγγ~0Η
BocHN - ^ Passo 6 28-7
Passo 7 COOMe h2n
Cl 28-8
Passo 1: Ácido 4-amino-3-nitrobenzóico 28-1 (15, 00 g, 82 iranol) foi dissolvido em AcOH (200 mL) e foi adicionado cloreto de sulfurilo (6,62 mL, 82 mmol). A mistura foi agitada durante 2 h à t.a., após o que foi adicionado mais cloreto de sulfurilo (1,5 mL) para completar a reacção. Depois de agitar durante mais 1 h à t.a., a mistura reaccional foi vertida sobre gelo e o sólido precipitado recolhido por filtração. O produto 28—2 foi lavado com água, seco ao ar e utilizado directamente no passo seguinte. 160
Passo 2: 0 produto 28-2 em bruto foi dissolvido em MeOH (300 mL) e foi adicionado H2S04 conc. (1 mL) . A mistura foi submetida a refluxo durante 2 dias após o que a conversão estava -75% concluída. Os voláteis foram removidos sob pressão reduzida e o resíduo foi partilhado entre AcOEt e água. A mistura foi basificada por adição lenta de Na2CC>3 aquoso saturado e a fase orgânica separada. O extracto foi lavado com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seco (Na2S04) e concentrado para dar 28-3 como um sólido bege (12,32 g) que foi utilizado directamente no passo seguinte.
Passo 3: A nitroanilina 28-3 (11,32 g, 49 mmol), hidrossulfito de sódio (35, 54 g, 204 mmol) e NaHCCb (17,15 g, 204 mmol) foram dissolvidos em EtOH-água 3:2 (600 mL) . A mistura laranja foi agitada durante 20 h à t.a.. O EtOH foi então removido sob pressão reduzida e o produto extraído com AcOEt. O extracto foi lavado com água e solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seco (Na2S04) e evaporado para dar o composto 28-4, um sólido castanho (4,60 g, 46% de rendimento) que foi utilizado sem purificação no passo seguinte.
Passo 4: A diamina 28-4 (1,00 g, 5,0 mmol), ácido N-Boc-1-
aminociclobutanocarboxílico (1,07 g, 5,0 mmol), HATU (2,20 g, 5,8 mmol) e Et2N (2,10 mL, 15,0 mmol) foram dissolvidos em DMF 161 (30 mL) e a mistura agitada durante 2 dias à t.a.. A mistura reaccional foi vertida sobre gelo e o sólido precipitado recolhido por filtração. O material foi lavado com água, dissolvido em AcOEt e o extracto lavado com solução aquosa saturada de cloreto de sódio. A solução foi então seca (Na2S04) e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em AcOH e aquecido a 80 °C durante 3 h. A análise por HPLC indicou conversão completa no derivado de benzimidazole desejado. O AcOH foi removido sob pressão reduzida, o resíduo retomado em AcOEt e a solução lavada com NaHC03 aquoso e solução aquosa saturada de cloreto de sódio. Após secagem (MgS04) , a remoção de solvente deu o composto 28-5 como um sólido laranja (563 mg) que foi utilizado directamente no passo seguinte.
Passo 5: O benzimidazole 28-5 (1,63 g, 4,29 mmol) e K2C03 (2, 96 g, 21,45 mmol) foram suspensos em DMF (10 mL) e foi adicionado iodometano (0,27 mL, 4,30 mmol). A mistura foi agitada durante 3 h à t.a.. A mistura reaccional foi então vertida sobre gelo e o sólido precipitado foi recolhido por filtração. O material foi lavado com água, dissolvido em AcOEt e a solução lavada duas vezes com ácido cítrico aquoso a 5% e solução aquosa saturada de cloreto de sódio. Após secagem (MgS04) e remoção dos voláteis sob pressão reduzida foi obtido o composto 28-6 como um sólido castanho (1,44 g) que foi utilizado directamente no passo seguinte. 162
Passo 6: 0 éster metílico 28—6 (1,22 g, 3,10 mmol) foi dissolvido em THF (30 mL) e foi adicionado LiBH4 (0,243 g, 11,14 mmol) em pequenas porções à t.a.. A mistura foi então agitada a 40 °C durante 16 h. Uma vez que a conversão ainda não estava concluída, foi adicionado mais LiBH4 (0,100 g, 4,6 mmol) e a mistura agitada durante mais 3 h a 70 °C. A mistura reaccional foi arrefecida até à t.a. e o resíduo diluído com AcOEt. Foi cuidadosamente adicionada água e a fase orgânica separada. 0 extracto foi lavado com água e solução aquosa saturada de cloreto de sódio, e seco (MgS04) . O álcool 28-7 em bruto (961 mg) foi combinado com outros lotes e purificado por cromatografia flash.
Passo 7: O álcool purificado 28-7 de cima (0, 450 g, 1,02 mmol) foi dissolvido em DCM (20 mL) e foi adicionado periodinano de Dess-Martin (0,551 g, 1,30 mmol). A mistura foi agitada durante 2 h à t.a. Foi então adicionado (carbetoximetileno)trifenilfosforano (0,550 g, 1,58 mmol) e a mistura foi submetida a refluxo durante 20 h. Os voláteis foram em seguida removidos sob pressão reduzida e o resíduo dissolvido em TFA-DCM 1:1 para efectuar a remoção do grupo de protecção Boc. Depois de agitar durante 1 h à t.a., os voláteis foram removidos sob pressão reduzida e o resíduo foi partilhado entre AcOEt e HC1 1 N. A fase aquosa contendo o produto foi separada, neutralizada com Na2C03 2 M e extraída 2x com AcOEt. O extracto foi seco (Na2S04) e concentrado para dar o composto 28-8 como uma espuma branca (212 mg) que foi purificado por cromatografia flash utilizando 80-100% de AcOEt 163 em hexano como eluentes. 0 fragmento de benzimidazole desejado foi obtido como um sólido branco (66 mg). EXEMPLO 29 5- [2- (1-Aminociclobutil) -3-metil-3.ff-benzimidazol-5-il] -3H-[1,3,4]oxadiazol-2-ona
OH 29-1
NH2NHj EtOH 85 °C 29-5
Passo 5
Passo 4
29-4 H NH,
/=N
'NH Λ.
NO, HC! conc. r*r O z \ MeNHj Cr ^NOj MeOH V THF v VN^ T I H Passo 1 o \ 29-2 Passo 2 29-3
Passo 3
Pd/C 10% EtOH-THF
Passo 1:
Foi adicionado HC1 10 N (2 mL) a uma solução de ácido 3-fluoro-4-nitro-benzóico (29-1) (10 g, 54,0 mmol) em 300 mL de MeOH e a solução foi submetida a refluxo durante 15 h. A mistura 164 foi então concentrada, o resíduo foi diluído com AcOEt e a fase orgânica foi lavada 2x com água e NaHC03 aquoso saturado, seca (MgS04) , filtrada e evaporada para dar 10,45 g (97% de rendimento) do composto 29-2 como um sólido branco. O composto foi utilizado tal e qual na reacção seguinte.
Passo 2:
Foi adicionada, gota a gota, metilamina (80 mL de uma solução 2 N em THF) a uma solução de composto 29-2 (10 g, 50,2 mmol) em 100 mL de THF a 0 °C. A mistura foi ainda agitada a 0 °C durante 20 min., em seguida, à temperatura ambiente durante 15 h. Os voláteis foram então evaporados e o resíduo foi diluído com AcOEt, e a fase orgânica foi lavada 2x com água,
NaHC03 aquoso saturado, seca (MgS04), filtrada e evaporada para dar 10,21 g (96% de rendimento) do composto 29-3 como um sólido laranja. O composto foi utilizado tal e qual na reacção seguinte.
Passo 3:
Foi adicionado paládio (10% sobre carvao, 1 g) a uma solução de composto 29-3 (10 g, 4 7,6 mmol) em 40 0 mL de uma mistura 1/1 de THF- -EtOH absoluto. A mistura foi agitada sob atmosfera de hidrogénio durante 16 h, em seguida, a solução foi filtrada para remover o catalisador e concentrada para dar 8,5 g (99% de rendimento) do composto 29-4 como um sólido esbranquiçado. 0 composto foi utilizado tal e qual na reacção seguinte. 165
Passo 4: 0 composto 29-4 foi convertido no composto 29-5 utilizando o método do Exemplo 7.
Passo 5:
Uma mistura do composto 29-5 (730 mg, 2,03 mmol) e mono- hidrato de hidrazina (500 pL, 10,3 mmol) em 5 mL de etanol foi aquecida num frasquinho com tampa de rosca a 85 °C durante 72 h. A solução foi então concentrada, diluida com CH2CI2 e a camada orgânica foi lavada com água. A camada orgânica foi seca (Na2S04) , filtrada e evaporada para produzir 642 mg (88%) de composto 29-6 como um sólido cinzento-branco, o qual foi utilizado tal e qual no passo seguinte.
Passo 6:
Foi adicionada trietilamina (190 pL, 1,36 mmo1) a uma solução de composto 29-6 (350 mg, 0, 97 mmol) e 1,1'-carbonildiimidazole (190 mg, 1,17 mmol) em THF (5 mL) . A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 15 h. Os voláteis foram removidos e o resíduo foi diluído com AcOEt, lavado com água, solução aquosa saturada de cloreto de sódio e a camada orgânica foi seca (Na2S04) , filtrada e evaporada para produzir 318 mg (85% de rendimento) do composto 29-7 como um sólido ceroso branco que foi utilizado tal e qual no passo seguinte. 166
Passo 7:
Foi adicionado, gota a gota, TFA (3 mL) a uma suspensão de composto 29-7 (150 mg, 0,39 mmol) em diclorometano (10 mL) e a solução resultante foi agitada durante 1 h. Os voláteis foram evaporados para produzir 150 mg (quant. rendimento) do sal de trifluoroacetato do composto 29-8 desejado como um sólido bege. EXEMPLO 30 (exemplo de referência) 5- [2- (1-Aminociclobutil) -3-metil-3.ff-benzimidazol-5-il] -3-metil-3Jí-l, 3,4-oxadiazol-2-ona
29-7
Foi adicionado carbonato de potássio (32 mg, 0,23 mmol) a uma solução de composto 29.7 (80 mg, 0,21 mmol) em DMF (1 mL) . A suspensão foi agitada à temperatura ambiente durante 15 min. Foi então adicionado iodometano (12,5 pL, 0,2 mmol) e a mistura foi agitada durante 3 h à temperatura ambiente. A mistura foi diluída com AcOEt, lavada com água (3x) , solução aquosa saturada de cloreto de sódio, em seguida a fase orgânica foi seca (MgS04) , filtrada e evaporada para produzir 67 mg (81% de rendimento) de um sólido bege. O tratamento com TFA como descrito no 167
Exemplo 29, passo 7 deu 57 mg (rendimento quant.) do sal de trifluoroacetato do composto desejado 30-1 como um sólido bege. 0 composto 30-1 pode ser acoplado a intermediários indole de fórmula geral II para dar compostos de fórmula I, utilizando os procedimentos dos Exemplos 4 e 34, passo 1. EXEMPLO 31 (exemplo de referência) 5- [2- (1-Aminociclobutil) -3-metil-3íí-benzimidazol-5—il] —2— metil-2Jí-pirazol-3-ol
NaOH THF/MeOH Passo 1
Passo 1:
Foi adicionado NaOH (10 N, 11 mL, 110 mmol) a uma solução de composto 29-5 (5,0 g, 13,9 mmol) numa mistura 3:2:1 de THF, MeOH e água (180 mL) e a solução foi agitada de um dia para o outro à temperatura ambiente. A mistura foi então concentrada, o 168 pH foi ajustado a 4 utilizando HC1 1 N e a mistura foi extraída com AcOEt. A camada orgânica foi lavada com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca (MgS04) , filtrada e evaporada para dar o composto 31-1 (3,94 g, 82% de rendimento) como um sólido branco. 0 composto foi utilizado tal e qual na reacção seguinte.
Passo 2:
Foi adicionado 1,1'-carbonildiimidazole (702 mg, 4,33 mmol) a uma solução de composto 31-1 (1 g, 2,90 mmol) em THF (24 mL) . A solução foi agitada durante 15 h e foi então adicionada, gota a gota, a uma solução do anião malonato (preparado via a adição de Et3N (0,81 mL, 5,80 mmol) e MgCl2 (690 mg, 7,25 mmol) a uma solução de monoetilmalonato de potássio (1 g, 5,96 mmol) em acetonitrilo (10 mL), seguido de agitação à temperatura ambiente durante 2,5 h) a 0 °C. A mistura resultante foi então aquecida lentamente até à temperatura ambiente e agitada durante um total de 48 h. A mistura foi concentrada e foi adicionado tolueno. A mistura foi arrefecida até 10-15 °C e hidrolisada lentamente via a adição de HC1 1 M até o pH atingir 3-4. As camadas foram em seguida separadas e a camada orgânica foi diluída com AcOEt, lavada com água, seca e evaporada para dar um óleo amarelo. O produto foi purificado por cromatografia flash (Eluente: Hexano:AcOEt 4:6 para dar 885 mg (74% de rendimento) do composto 31-2 como um sólido branco. 169
Passo 3:
Foi adicionada metil-hidrazina (29 μ]!,, 0,55 mmol) a uma solução de composto 31-2 (100 mg, 0,24 mmol) em EtOH (2,5 mL). A mistura foi agitada a 80 °C durante 15 h. A mistura foi então concentrada e foi adicionada água, seguida da adição de HC1 1 N para ajustar o pH a 6-7. A camada aquosa foi extraída 3 vezes com AcOEt, e a fase orgânica foi seca (MgS04) e concentrada para dar 94 mg (98% de rendimento) de um sólido amarelo pálido. O tratamento com TFA em diclorometano como descrito no Exemplo 29, passo 7, deu 93 mg (rendimento quant.) do sal de trifluoroacetato do composto 31-3. O composto 31-3 pode ser acoplado a intermediários indole de fórmula geral II para dar compostos de fórmula I, utilizando os procedimentos dos Exemplos 4 e 34, passo 1. 170 EXEMPLO 32 (exemplo de referência) 5- [2-(1-Aminociclobutil) -3-metil-3ií-benzimidazol-5-il] -3H-1,3, 4-tiadiazol-2-ona
ov
OEt h2n-h
TBTU
Et,N
DMF
Passo 1
Passo 1:
Foram adicionados TBTU (380 mg, 1,18 mmol) e trietilamina (380 pL, 380 2,73 mmol) a uma solução do composto 31-1 (350 mg, 1,01 mmol) e carbazato de etilo (120 mg, 1,15 mmol) em DMF (5 mL). A mistura foi agitada durante 15 h à temperatura ambiente e, em seguida, diluida com AcOEt. A suspensão orgânica resultante foi lavada 2x com água e lx com NaHCCMaq.) sat. Foi então adicionado THF à camada orgânica para obter uma solução que foi seca (MgSCq), filtrada e concentrada. 0 residuo foi triturado com AcOEt para dar 290 mg (66%) do composto 32-1 como um sólido bege. O composto foi utilizado tal e qual na reacção seguinte. 171
Passo 2:
Foi adicionado Reagente de Lawesson (70 mg, 0,17 mmol) a uma solução do composto 32-1 (150 mg, 0,35 mmol) em dioxano (10 mL) a 100 °C. A mistura resultante foi agitada a 100 °C durante 8 h. e em seguida a 140 °C durante 4 h. A mistura foi então arrefecida até 100 °C e foi adicionada mais uma porção de Reagente de Lawesson (70 mg, 0,17 mmol). A solução foi então aquecida a 100 °C durante 15 h. A mistura foi concentrada até à secura, e o resíduo sólido foi triturado com AcOEt e filtrado. O sólido bege resultante (100 mg) foi tratado com TFA como descrito no Exemplo 29, passo 7, para dar 93 mg do sal de trifluoroacetato do composto 32-2. 0 composto 32-2 pode ser acoplado a intermediários índole de fórmula geral II para dar compostos de fórmula I, utilizando os procedimentos dos Exemplos 4 e 34, passo 1. 172 EXEMPLO 33 Éster terc-butílico do ácido [1-(l-metil-6-pirimidin-2-il-lH-benzimidazol-2-il)ciclobutil]carbâmico
Passo 1: 1,3-Dibromobenzeno 33-1 comercialmente disponível (4,1 mL, 33.9 mmol) foi dissolvido em ácido sulfúrico concentrado (35 mL), o qual foi arrefecido num banho de gelo. Foi adicionado lentamente (em pequenas porções) nitrato de potássio (3,4 g, 33.9 mmol) de modo a manter a temperatura interna da reacção inferior a 10 °C. A mistura reaccional foi agitada durante mais 30 min e, em seguida, vertida para 1 L de gelo. O precipitado amarelo que se formou (33-2) foi filtrado e lavado com água, seco sob pressão reduzida e utilizado directamente no passo seguinte. 173
Passo 2:
Uma mistura do composto 33-2 (6,3 g, 22,4 mmol) e cloridrato de metilamina (3,0 g, 44,8 mmol) em DMF (50 mL) e arrefecida até 0 °C. Foi adicionada trietilamina (9,4 mL, 67 mmol) e a mistura foi deixada agitar à t.a. durante 3,5 h, em seguida aquecida a 70 °C, de um dia para o outro. A mistura foi vertida para água e o precipitado resultante foi filtrado. O filtrado foi extraido com AcOEt (3x) e o extracto foi lavado com água (3x) e NaCl saturado, seco (MgS04) , filtrado e concentrado para dar uma mistura de compostos 33-3 e 33-4 como um sólido laranja (4,8 g) , o qual foi utilizado tal e qual no passo seguinte.
Passo 3: A redução do composto nitro 33-3 com Na2S204/K2CC>3 foi realizada utilizando o método descrito no Exemplo 11, passo 5. O composto 33-5 (1,5 g, -20% de rendimento nos 3 passos) foi isolado a partir da mistura reaccional após cromatografia em coluna, utilizando um gradiente de solvente de AcOEt em hexanos de 17% a 25%.
Passo 4: A dianilina 33-5 foi convertida no composto 33-6, utilizando o método descrito no Exemplo 7. 174
Passo 5:
Foi borbulhado árgon através de uma mistura do composto 33-6 (300 mg, 0,79 mmol), cloreto de lítio (67 mg, 1,6 mmol), PPh3 (31 mg, 0,12 mmol) e 2-tributilestananilpirimidina (365 mg, 0,99 mmol) em DMF (6,0 mL) durante 15 minutos. Foram adicionados Pd(PPh3)4 (91 mg, 0,079 mmol) e Cul (15 mg, 0,079 mmol) e a mistura foi aquecida a 100 °C durante 24 h. A mistura foi diluída com AcOEt e a fase orgânica foi lavada com água e solução aquosa saturada de cloreto de sódio, em seguida seca (MgS04) e concentrada para dar um óleo amarelo, o qual foi purificado por cromatografia flash (hexano:AcOEt 3:7 a 2:8) para dar o composto 33-7 como um sólido amarelo (100 mg, 24%). O composto 33-7 pode ser desprotegido utilizando condições correntes como descritas no Exemplo 29, passo 7 e a amina resultante acoplada a intermediários indole de fórmula geral II para dar compostos de fórmula I, utilizando os procedimentos dos Exemplos 4 e 34, passo 1.
Será evidente para um especialista na técnica que a preparação de intermediários análogos que têm unidades heterocíclicas ou aromáticas semelhantes pode ser realizada utilizando este procedimento ou as suas modificações. Alternativamente, a reacção de acoplamento do Passo 5 pode ser realizada utilizando as condições típicas da reacção de Suzuki bem conhecido (A. Suzuki, Puro Appl. Chem. (1994) 66, 213; N. Miyaura e A. Suzuki, Chem. Rev. (1995) 95, 2457.). 175 EXEMPLO 34 Ácido (E)-3-[2—(1—{[2-(5-bromopirimidin-2-il)-3- ciclopentil-l-metil-líT-indole-6-carbonil] -aminoj-ciclobutil) -3-metil-3Jí-benzimidazol-5-il] -acrílico
0 composto 19—3 (Exemplo 19) e composto 34—1 (preparado a partir do composto 10-2 utilizando o procedimento do Exemplo 3) foram acoplados utilizando o método do Exemplo 4 para dar o composto 34—2 (composto 3085, Quadro 3) como um sólido amarelo escuro (9,3%). RMN de (400 MHz, DMSO -d6 ), δ 1,63 (sl, 2H) , l,í 3 0 — 1, 95 (m, 6H) , 1,95 -2, 10 (m, 2H) , 2, 70 (ddd, J = 9,3 & 10,6 Hz , 2H ) , 2,99 (m, 2H) , 3, 65- -3,75 (m, 1H) , 3 , 76 (s, 3H) , 2 i, 85 (s, 3H) r 6,54 (d, J = 15, 6 Hz, 1H), 7, 52 (d, J = 8,4 Hz, 1H ), 7, 59 (d, j = 8,4 Hz, 1H) , 7, 64 (d, J = 8 , 2 H lz, 1H) , 7, 70 (d, J = 15, 9 Hz r 1H) , 7, 74 (d, J = = 8 ,4 Hz, 1H) , 7, 86 (s, 1H) , 8,12 (s, 1H) , 9, 18 (s, 2H) , 9,20 (s , 1H), 12,25 (s, 1H) • 176 EXEMPLO 35 {1-[l-Metil-6-(5-oxo-4,5-di-hidro-l,3,4-oxadiazol-2-il)-1H-benzimidazol-2-il]-ciclobutil}-amida do ácido 3-ciclopentil-l-metil-2-piridin-2—il-l.ff-indole-6-carboxilico
Passo 1:
Foram adicionados TBTU (350 mg, 1,09 mmol) e trietilamina (380 mL, 2,73 mmol) a uma solução do composto 35-1 (composto 1025, Quadro 1) (487 mg, 0,89 mmol) e carbazato de terc-butilo (130 mg, 0,98 mmol) em DMF (8 mL) . A mistura foi agitada durante 2 h à temperatura ambiente e, em seguida, diluída com AcOEt. A suspensão orgânica resultante foi lavada 2x com água e lx com NaHCCb aquoso saturado. Foi então adicionado THF à camada orgânica e a solução resultante foi seca (MgS04), filtrada e concentrada. O resíduo foi triturado com AcOEt para dar 421 mg (72%) do composto 35-2 como um sólido bege. O composto foi utilizado tal e qual na reacção seguinte. 177
Passo 2:
Foi adicionado TFA (3 mL) gota a gota a uma solução de composto 35-2 (200 mg, 0,3 mmol) em diclorometano (3 mL) e a solução resultante foi agitada durante 2 h. Os voláteis foram evaporados para produzir 170 mg (quant. rendimento) do sal de trifluoroacetato do composto 35-3, o qual foi utilizado sem mais purificação.
Passo 3:
Foi adicionado 1,1'-carbonildiimidazole (25 mg, 0,15 mmol) numa porção a uma solução do composto 35—3 (100 mg, 0,13 mmol) e trietilamina (80 pL, 0,57 mmol) em 2 mL de THF, e a solução resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 4 h. A mistura foi então concentrada sob pressão reduzida, diluída com 4 mL de DMSO e directamente purificada sobre uma coluna semi-preparativa de HPLC de fase inversa Cis (utilizando um gradiente de solvente desde 5% de H20 em MeCN até 100% de MeCN) para isolar o composto 35-4 (composto 1128, Quadro 1) como um sólido amarelo amorfo com homogeneidade > 95% (29 mg, 39% de rendimento). RMN de 1 H (400 MHz, DMSO): : δ 1, oo QO \—1 1 LO (m, 2H) , 1,79 -i, 93 (m, 6H) , 1, 94 -2, 05 (m, , ih; ) , 2, 09-2, 21 (m, 1H ) , 2,75-2 , 85 (m, 2H) , 3, 05 -3, 25 (m, 3 H) , 3,69 (s, 3H) , 3, 90 (s, 3H) , 7,49 (m, 1H) , 7, 57 -7, 72 (m, , 3h; ) , 7, 82-7, 92 (m, 2H ) , 7,94-8 , 02 (m, 1H) , 8, 06 -8, 15 (m, 2H) , 8, 78 (d, J = 3,9 H z, 1H) , 9,45 (s, 1H) , 12,62 (s f 1H) # 178 EXEMPLO 36 {1-[6-(5-Amino-l,3,4-oxadiazol-2-il)-1-metil-lH-benzimidazol-2-il]ciclobutiljamida do ácido 3-ciclopentil-l-metil-2-piridin-2-il-l.ff-indole-6-carboxílico
Foi adicionada C-(di-imidazol-l-il)-metilenoamina (25 mg, 0,16 mmol) numa porção única a uma solução do composto 35-3 (Exemplo 35) (80 mg, 0,14 mmol) em THF (4 mL) . A solução resultante foi aquecida até 70 °C durante 16 h, após o que foi observado um precipitado branco. A reacção foi então concentrada sob pressão reduzida, dissolvida em 4 mL de DMSO e directamente purificada sobre uma coluna semi-preparativa de HPLC de fase inversa Cig (utilizando um gradiente de solvente desde 5% de H2O em MeCN até 100% de MeCN) para isolar o composto 36-1 (composto 1129, Quadro 1) como um sólido amarelo amorfo com homogeneidade > 95% (19 mg, 23% de rendimento). RMN de ΤΗ (400 MHz, DMSO): δ 1,54-1,67 (m, 2H) , 1, 79-1, 94 (m, 6H), 1,95-2, 06 (m, 1H) , 2,11-2,23 (m, 1H) , 2, 74-2, 84 (m, 2H) , 3,19-3,05 (m, 3H), 3,69 (s, 3H), 3,91 (s, 3H), 7,49 (dd, J= 1,8 & 5,7 Hz, 1H), 7,59-7,71 (m, 3H) , 7, 86-7, 92 (m, 2H) 7,96-8,01 (m, 1H), 8,06-8,10 (m, 1H) , 8,10 (s, 1H) , 8,78 (d, J = 4,3 Hz, 1H), 9,51 (s, 1H) . 179 EXEMPLO 37 (exemplo de referência) [1—(1—Metil—6—1,3,4—oxadiazol—2—il—1H—benzimidazol—2— il)ciclobutil]amida do acido il-l.ff-indole-6-carboxílico 3-ciclopentil-l-metil-2-piridin-2-
Uma suspensão do composto 35-3 (Exemplo 27) (50 mg, 0,09 mmol) e ortoformato de trietilo (1 mL, 6 mmol) em dioxano (3 mL) foi aquecida a refluxo durante 18 h. A solução quase transparente resultante foi evaporada até à secura, e o resíduo foi dissolvido em DMSO (1 mL) e purificado sobre uma coluna semi-preparativa de HPLC de fase inversa Cis (utilizando um gradiente de solvente desde 5% H20 em MeCN até 100% de MeCN) para isolar o composto 37-1 (composto 1130, Quadro 1) como um sólido amarelo amorfo com homogeneidade > 95% (27 mg, 53% de rendimento). RMN de XH (400 MHz, DMSO): δ 1, 55-1,68 (m, 2H) , 1, 79-1, 93 (m, 6H), 1,95-2, 04 (m, 1H) , 2,12-2,20 (m, 1H) , 2, 82-2, 74 (m, 2H) , 3,15-3,05 (m, 3H), 3,69 (s, 3H), 3,92 (s, 3H) , 7,49 (dd, J= 2,2 & 5,3 Hz, 1H), 7,56-7, 73 (m, 3H) , 7, 93-8, 05 (m, 3H) , 8,11 (s, 1H), 8,33 (s, 1H), 8,79 (d, J= 4,3 Hz, 1H), 9,37 (s, 1H), 9,44 (s, 1H). 180 EXEMPLO 38 (Exemplo de referência) {1-[l-Metil-6-(5-oxo-4,5-di-hidro-l,3,4-oxadiazol-2—il)-1H— benzimidazol-2-il]-ciclobutilj-amida do ácido 3-ciclopentil-2-(5-f luoro-piridin-2-il) -l-metil-l.ff-indole-6-carboxilico
Foram adicionados TBTU (45 mg, 0,14 mmol) e trietilamina (49 mL, 0,35 mmol) a uma solução do composto 38-1 (preparado utilizando procedimentos descritos no documento WO 03/010141) (45 mg, 0,13 mmol) e do composto 29-8 (Exemplo 29) (45 mg, 0,11 mmol) em DMF. A solução foi agitada durante 15 h e directamente purificada sobre uma coluna semi-preparativa de HPLC de fase inversa CiS (utilizando um gradiente de solvente desde 5% H2O em MeCN até 100% MeCN) para isolar o composto 38-2 (composto 1143, Quadro 1) como um sólido amarelo amorfo com homogeneidade > 95% (23 mg, 34% de rendimento). RMN de ΤΗ (400 MHz , DMSO): 51,54-1,68 (m, 2H) , 1, 79- 1, 93 (m 6H) , 1,93-2,04 (m, 1H), 2,07-2,20 (m, 1H) , 2, 72 -2, 82 (m, 2H) 3, 00 -3,15 (m, 3H) , 3,67 (s, 3H), 3,89 (s, 3H) , 7, 57- 7, 72 (m 3H) , 7,79-7,95 (m, 3H), 8,10 (s, 2H), 8, 80 (d, J = 2,9 Hz, 1H) 9,45 (s, 1H), 12,63 (s, 1H). 181 EXEMPLO 39
Inibição da actividade da polimerase de ARN dependente de ARN NS5B
Os compostos da invenção foram testados quanto à actividade inibidora contra a polimerase dependente de ARN (NS5B) do virus da hepatite C, de acordo com o protocolo descrito no documento WO 03/010141. EXEMPLO 40
Especificidade da inibição da polimerase de ARN dependente de ARN NS5B
Os compostos da invenção foram testados quanto à actividade inibidora contra a polimerase de ARN dependente de ARN do virus da poliomielite no formato que é descrito para a polimerase do HCV, com a excepção de que foi utilizada a polimérase do virus da poliomielite em vez da polimerase NS5B do HCV, como é descrito no documento WO 03/010141. Os compostos foram também caracterizados quanto à inibição da polimerase de ARN dependente de ADN II do timo de vitelo num formato de ensaio anteriormente descrito (McKercher et al., 2004 Nucleic Acids Res. 32: 422- 431) . 182 EXEMPLO 41
Ensaio de Replicação do ARN de HCV com repórter de luciferase baseado em células
Cultura de células: Células Huh-7 com um replicão de HCV subgenómico estável que codifica um gene repórter de luciferase modificado (expressado como um gene de fusão de luciferase-FMDV2A-fosfotransferase de neomicina) foram estabelecidas como anteriormente descrito (Lohman et al., 1999. Science 285: 110- 113; Vroljik et al. , 2003 J. Virol Methods 110:201-209), com a excepção de que as células com o replicão foram seleccionadas com 0,25 mg/mL de G418. A quantidade de luciferase expressa pelas células seleccionadas correlaciona directamente com o nível de replicação do HCV. Estas células, designadas como células MP-1, são mantidas em meio de Earle Modificado por Dulbecco (DMEM) suplementado com 10% de FBS e 0,25 mg/mL de neomicina (meio padrão). As células são passadas por tripsinização e congeladas em 90% de FBS/10% de DMSO. Durante o ensaio foi utilizado meio DMEM suplementado com 10% de FBS, contendo 0,5% de DMSO e sem neomicina (Meio de ensaio) . No dia do ensaio, as células MP-1 foram tripsinizadas e diluídas até 100000 células/mL em meio de ensaio. Foram distribuídos 100 pL para cada poço de uma ViewPlate™ de 96 poços preta (Packard) . A placa foi então incubada a 37 °C com 5% de C02 durante duas horas. 183
Reagentes e Materiais:
Produto Empresa N° de Catálogo Conservação DMEM Wisent Inc. 10013CV O O DMSO Sigma D-2650 t. a. PBS de Dulbecco Gibco-BRL 14190-136 t. a. Soro fetal bovino Bio-Whittaker 14-901F -20 °C/4 °C Geneticina(G41 8) Gibco-BRL 10131-027 -20 °C/4 °C Tripsina-EDTA Gibco-BRL 25300-054 -20 °C/4 °C ViewPlate™-96, Preta Packard 6005182 t. a. Fita de suporte, Preta Packard 6005189 t. a. Unidade de Filtro PVDF 0,22 pm Millipore SLGV025LS t. a. Placa de Titulação de Polietileno de Poços Profundos Beckman 267007 t. a.
Preparação do composto de ensaio: 0 composto de ensaio em DMSO a 100% foi inicialmente diluido em meio de ensaio a uma concentração final de DMSO de 0,5%. A solução foi submetida a ultrassons durante 15 min e filtrada através de uma unidade de Filtro Millipore de 0,22 μΜ. Na coluna 3 de uma Placa de Titulação de Polipropileno de Poços Profundos, é transferido o volume apropriado em meio de ensaio para obter a concentração de partida (2x) a ser testada. Nas 184 colunas 2 e 4 a 12, adicionar 200 pL de meio de ensaio (contendo DMSO a 0,5%). São preparadas diluições sucessivas (1/2) transferindo 200 pL da coluna 3 para a coluna 4, em seguida, da coluna 4 para a coluna 5, sucessivamente até à coluna 11. As colunas 2 e 12 são os controlos de não inibição.
Adição do composto de ensaio às células:
Um volume de 100 pL de cada poço da placa de diluição do composto foi transferido para um poço correspondente da Placa de Células (Duas colunas serão utilizadas como o "Controlo sem inibição"; dez [10] colunas são utilizadas para a dose-resposta) . A placa de cultura de células foi incubada a 37 °C com 5% de CO2 durante 72 horas.
Ensaio de luciferase:
Após o período de incubação de 72 h, o meio foi aspirado da placa de ensaio de 96 poços e foi adicionado a cada poço um volume de 100 pL de Tampão de Lise Glo IX (Promega) previamente aquecido até à temperatura ambiente. A placa foi incubada à temperatura ambiente durante 10 min com agitação ocasional. Foi colocada uma fita preta no fundo da placa. A cada poço foram adicionados 100 pL de substrato de luciferase Bright-Glo (Promega) previamente aquecido até à temperatura ambiente, seguida de agitação suave. A luminescência foi determinada num instrumento Packard Topcount utilizando a Luminescência no Modo de Dados (CPS) com um atraso de contagem de 1 min e um tempo de contagem de 2 s. 185
Produto Empresa N° de Catálogo Conservação Tampão de Lise Glo Promega E266A O O Sistema de Tampão de Luciferase Bright-Glo Promega E2620 -20 °C A determinação da luminescência (CPS) em cada poço da placa de cultura foi uma medida da quantidade de replicação do ARN de HCV na presença de várias concentrações de inibidor. A % de inibição foi calculada com a seguinte equação: % de inibição = 100-[CPS (inibidor)/CPS (controlo) x 100]
Foi aplicada uma adaptação de curva não linear com o modelo de Hill aos dados de inibição-concentração e a concentração 50% eficaz (EC50) foi calculada através da utilização do software SAS (Statistical Software; SAS Institute, Inc. Cary, N.C.).
QUADROS DE COMPOSTOS
Foi determinado que todos os compostos listados nos Quadros 1 a 4 abaixo tinham actividade inesperadamente boa no ensaio de replicação de ARN de HCV baseado em células descrito no Exemplo 41.
Os tempos de retenção (tR) para cada composto foram medidos utilizando as condições de HPLC analítico padrão descritas nos Exemplos. Como é bem conhecido por um especialista na técnica, os valores de tempo de retenção são sensíveis às condições de medição específicas. Por conseguinte, mesmo se forem utilizadas condições idênticas de solvente, caudal, gradiente linear e 186 semelhantes, os valores de tempo de retenção podem variar quando medidos, por exemplo, em equipamentos de HPLC diferentes. Mesmo quando medidos no mesmo equipamento, os valores podem variar quando medidos, por exemplo, utilizando colunas de HPLC individuais diferentes, ou quando medidos no mesmo equipamento e na mesma coluna particular, os valores podem variar, por exemplo, entre medições individuais tiradas em ocasiões diferentes. QUADRO 1
2 3 5 6 9 10 em que R , R , R , R , R e R sao dados no quadro.
Comp. N° R2 R3 R5 R6 tR (min) MS (M+H)+ 1006 è ò & * ΝΗ2 H A 4, 6 602,3 1017 "b ò Λ COOH H & 6,4 575,3 1020 "b ò H "X H,C COOH A 6,0 577, 2 187 (continuação)
Comp. N° R2 R3 R5 R6 D* D10 A tR (min) MS (M+H)+ 1023 Α'Ν u δ Η 'Λ COOH / /— N & 4, 7 617, 4 1092 Α'Ν T F ό Η \ H3C COOH A- 5,9 620,3 1101 ό Η Λ COOH A- 5, 4 604,3 1115 o 4 F Η \ HjC COOH A- 5,4 613,3 1116 Ά o ό Η \ H3C COOH A 6,0 591,3 1122 T F ό Η \ N NH2 •A 5, 0 615,3 1129 (^jj1 ό Η Nk Ν-"Χ ΝΗ2 A- 4,4 587,3 1134 φ Cl ό Η H3C COOH A- 6, 4 623,3 1138 φ Br ό Η \ N nh2 A- 5,3 676.3 678.3 188 (continuação)
Comp. N° R2 R3 R5 R6 A tR (min) MS (M+H)+ 1140 φ Br d H k N I 'nA Η O A 6,3 667.3 669.3 1150 φ Br F F H \ N Nd nh2 A 5, 8 726.3 728.3 1151 φ Br d H k HN A 6,4 650.0 652.0 QUADRO 2
Ο Ο Γ Q Ί Λ em que R , R , R , R , R e R são dados no quadro,
Comp. N° R2 R3 R5 R6 A tR (min) MS (M+H)+ 2008 An ό H í COOH A 4,5 588,4 2011 o δ H Λ COOH A 6,2 577, 4 189 (continuação)
Comp. N° R2 R3 R5 R6 A tR (min) MS (M+H)+ 2012 o ό '1 COOH Η -A 6,2 577, 4 2017 T F ό Η Λ COOH -A 5,6 606,3 2023 T F ό Η 1 H3C COOH -A 5,9 620,3 2027 T F ό Η <Η VM Η A· 6,0 603,3 2032 A"N T F ό Η Λ COOH 6,3 618,3 2035 δ ό Η Λ COOH A- 6,1 587,3 2037 Vs\ ό Η Λ COOH A- 5,2 594,3 2039 b ό Η Λ COOH A 6,0 593,3 2041 b ό Η "X H3C COOH A 6,1 607,3 2060 ό Η Λ COOH A 5,2 606,2 190 (continuação)
Comp. N° R2 R3 R5 R6 Α tR (min) MS (Μ+Η)+ 2064 b ό Η Λ COOH Α 6,0 593,3 2073 b 1 δ Η Λ COOH ,Α 5,6 591,3 2074 V Cl ό Η Λ COOH Α· 6,5 623,4 625, 4 QUADRO 3
em que R2, R4, R5, R8, R9 e R10 sao dados no quadro.
Comp . Ν° R2 R4 R5 R8 A tR (min) MS (M+H)+ 3003 U Η Η ch3 •A 4, 9 574,3 3004 Αν Η Η ch3 A 5,2 575,2 191 (continuação)
Comp. N° R2 R4 R5 R8 A tR (min) MS (M+H)+ 3010 Vs\ H H ch3 ÷ 5, 1 580,2 3011 A o H H ch3 A 6,0 563,2 3012 A" N V F H H ch3 · 5,6 592,2 3019 H H ch3 W CH, > t 6,1 551,2 3023 H H ch3 9 6,3 575,3 3046 H H ch3 / ,R 5, 7 592,3 3054 A"N T Cl H H ch3 9 6,4 620,3 3055 φ Cl H H ch3 6,3 608,3 3063 H H ch3 A 6,2 579,3 3067 A H H ch3 A 5,9 579,2 192 (continuação)
Comp. N° R2 R4 R5 R8 tR (min) MS (M+H)+ 3082 ò H H ch3 ,A 6,0 573,3 3084 o o—! H H ch3 A· 5,9 617,3 3085 Φ Br H H ch3 A 5, 7 653,2 3126 Ν^'Ν V Cl H H ch3 •A 6,2 609,2 3128 V VN 1 H H ch3 A 5,6 577,3 3130 ò Cl H ch3 A 5, 4 608.3 610.3 3131 ό Br Cl H ch3 A 7, 1 689,3 687,6 193 QUADRO 4
1 Ο Ο Γ Λ «| Λ em que R, R, R, R, R, R eR são dados no quadro.
Comp. N° R1 R2 R3 R5 R6 Α tR (min) MS (Μ+Η)+ 4001 ch3 (Λ ό Λ COOH Η Λ 4, 7 574,3 4003 ch3 Α"Ν ό Λ COOH Η Α 5, 4 575, 4 4004 ch3 ό Η Λ COOH Α 5, 4 588,3 4005 ch3 ò ό Η Λ COOH Α 5, 8 589,3 4006 ch3 O ό Λ COOH Η Α 3,3 563,1 4008 H Ά o ό Η Λ COOH Α 6,1 563,3 4009 H Ά o ό Η Λ COOH Α 5,9 549,3 4011 ch3 O ό Η Λ COOH Α 6, 4 577, 4 194 (continuação)
Comp. N° R1 R2 R3 R5 R6 Α tR (min) MS (Μ+Η)+ 4012 ch3 Ά o δ Λ COOH Η Α 6,5 577, 4 4014 H 0 Η COOH Α 4,8 574,3 4015 H ό Λ COOH Η Α 4, 9 574,3 4016 H ά o ό Λ COOH Η Α 6,2 561,3 4019 ch3 VSN ό Λ COOH Η Α 5, 6 580,2 4020 ch3 V Cl ό Λ COOH Η Α 6,3 608,2 4021 ch3 (^jj* Cl ό Η Λ COOH Α 6,5 622,3 4030 ch3 [^jj1 F ό Η Λ COOH Α 5, 7 6 0 6,4 4032 ch3 o F Η Λ COOH Α 5,4 599,3 4035 H Φ F ό Η Λ COOH Α 6, 4 592,3 195 (continuação)
Comp. N° R1 R2 R3 R5 R6 A tR (min) MS (M+H)+ 4038 ch3 o Φ F F H Λ COOH A 5,4 613,2 4039 ch3 Φ Br ό H Λ COOH A· 6, 7 667.2 669.2 4040 ch3 F F H COOH A 5, 6 629,3 4041 ch3 φ Br Ê F F H Λ COOH A 6,2 703,3 4043 ch3 "0 ό H Λ COOH A 6, 9 593,4 4044 ch3 V Cl d Λ COOH H A 6, 4 609,4
Lisboa, 24 de Julho de 2013 196

Claims (32)

  1. REIVINDICAÇÕES 1. Composto seleccionado de F
    N
    OH
    1
    2
    ο
    3
    4
    5
    6
    ο Cl
    Br
    7
    8
    F
    9
    ou um seu sal ou éster.
  2. 2. Composto de acordo com a reivindicação 1 seleccionado de: 10
    11
    12
    13
    Cl
    ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
  3. 3. Composto de acordo com a reivindicação 1 seleccionado de: 14
    ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
  4. 4. Composto de acordo com a reivindicação 1 seleccionado de:
    15
    ο
    16
    17
    18
    ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
  5. 5. Composto de acordo com a reivindicação 1 seleccionado de:
    19
    ou um seu sal farmaceuticamente aceitável. 20
  6. 6. Composto de estrutura acordo com a reivindicação 1 possuindo a
    ou um seu sal farmaceuticamente aceitável. 1 possuindo a
  7. 7. Composto de acordo com a reivindicação estrutura
    ou um seu sal farmaceuticamente aceitável. 1 possuindo a
  8. 8. Composto de acordo com a reivindicação estrutura
    ou um seu sal farmaceuticamente aceitável. 21
  9. 9. Composto de estrutura acordo com a reivindicação 1 possuindo a
    ou um seu sal farmaceuticamente aceitável. possuindo a
  10. 10. Composto de acordo com a reivindicação estrutura
    ou um seu sal farmaceuticamente aceitável. possuindo a
  11. 11. Composto de acordo com a reivindicação estrutura
    ou um seu sal farmaceuticamente aceitável. 22
  12. 12. Composição farmacêutica para o tratamento ou prevenção de infecção pelo HCV, compreendendo uma quantidade eficaz de um composto de acordo com uma ou mais das reivindicações 1 a 11, ou um seu sal ou éster farmaceuticamente aceitável, e um veiculo farmaceuticamente aceitável.
  13. 13. Composição de acordo com a reivindicação 12 compreendendo ainda uma quantidade terapeuticamente eficaz de um ou mais agentes antivirais.
  14. 14. Composição de acordo com a reivindicação 13, em que o referido agente antiviral é seleccionado de: ribavirina e amantadina.
  15. 15. Composição de acordo com a reivindicação 13 em que o agente antiviral é um outro agente anti-HCV.
  16. 16. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 15, em que o outro agente anti-HCV é um agente imunomodulador seleccionado de α-, β-, δ-, γ-, τ- e ω-interferão e as suas formas peguiladas.
  17. 17. Composição de acordo com a reivindicação 15, em que o outro agente anti-HCV é outro inibidor da polimerase do HCV.
  18. 18. Composição de acordo com a reivindicação 15, em que o outro agente anti-HCV é um inibidor da protease NS3 do HCV.
  19. 19. Composição de acordo com a reivindicação 15, em que o outro agente anti-HCV é um inibidor de outro alvo no ciclo de vida do HCV. 23
  20. 20. Composição de acordo com a reivindicação 19, em que o referido inibidor de outro alvo no ciclo de vida do HCV é seleccionado de um agente que inibe um alvo seleccionado de helicase do HCV, protease NS2/3 do HCV e IRES do HCV, e um agente que interfere com a função de uma proteína NS5A.
  21. 21. Composto de acordo com uma ou mais das reivindicações 1 a 11, ou um seu sal ou éster farmaceuticamente aceitável, ou uma sua composição, para utilização como um inibidor da polimerase do HCV.
  22. 22. Composto de acordo com uma ou mais das reivindicações 1 a 11, ou um seu sal ou éster farmaceuticamente aceitável, ou uma sua composição, para utilização como um inibidor da actividade de polimerase de RNA dependente de RNA da enzima NS5B, codificada pelo HCV.
  23. 23. Composto de acordo com uma ou mais das reivindicações 1 a 11, ou um seu sal ou éster farmaceuticamente aceitável, ou uma sua composição, para utilização como um inibidor da replicação do HCV.
  24. 24. Composto de acordo com uma ou mais das reivindicações 1 a 11, ou um seu sal ou éster farmaceuticamente aceitável, ou uma sua composição, para utilização no tratamento ou prevenção de infecção pelo HCV num mamífero.
  25. 25. Composto de acordo com uma ou mais das reivindicações 1 a 11, ou um seu sal ou éster farmaceuticamente aceitável, ou uma sua composição, para utilização no tratamento ou prevenção de infecção pelo HCV num mamífero, em associação com outro agente antiviral. 24
  26. 26. Método in vitro de inibição da actividade de polimerase de ARN dependente de ARN da enzima NS5B, codificada pelo HCV, compreendendo expor a enzima NS5B a uma quantidade eficaz de um composto de acordo com uma ou mais das reivindicações 1 a 11 sob condições em que a actividade de polimerase de ARN dependente de ARN da enzima NS5B é inibida.
  27. 27. Método in vitro de inibição da replicação do HCV, compreendendo expor uma célula infectada pelo HCV a uma quantidade eficaz de um composto de acordo com uma ou mais das reivindicações 1 a 11 sob condições em que a replicação do HCV é inibida.
  28. 28. Sal ou éster farmaceuticamente aceitável de um composto de acordo com uma ou mais das reivindicações 1 a 11, ou uma sua composição, para utilização num método de tratamento ou prevenção de infecção pelo HCV num mamifero, compreendendo administrar ao mamifero uma quantidade eficaz do sal ou éster farmaceuticamente aceitável, ou da composição.
  29. 29. Sal ou éster farmaceuticamente aceitável de um composto de acordo com uma ou mais das reivindicações 1 a 11, ou uma sua composição, para utilização num método de tratamento ou prevenção de infecção pelo HCV num mamifero, compreendendo administrar ao mamifero uma quantidade eficaz de um sal ou éster farmaceuticamente aceitável, ou da composição, em associação com outro agente antiviral.
  30. 30. Utilização de um composto de acordo com uma ou mais das reivindicações 1 a 11, ou de um seu sal ou éster farmaceuticamente aceitável, ou uma sua composição, para o 25 fabrico de um medicamento para o tratamento e/ou prevenção de uma infecção virai por Flaviviridae.
  31. 31. Utilização de um composto de acordo com uma ou mais das reivindicações 1 a 11, ou de um seu sal ou éster farmaceuticamente aceitável, ou uma sua composição, para o fabrico de um medicamento para o tratamento e/ou prevenção de uma infecção pelo HCV.
  32. 32. Artigo fabricado compreendendo uma composição eficaz para tratar uma infecção pelo HCV ou para inibir a polimerase NS5B do HCV e material de embalagem compreendendo uma etiqueta que indica que a composição pode ser utilizada para tratar uma infecção pelo virus da hepatite C, em que a referida composição compreende um composto de acordo com uma ou mais das reivindicações 1 a 11 ou um seu sal ou éster farmaceuticamente aceitável. Lisboa, 24 de Julho de 2013 26
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