PL215157B1 - Wyizolowana urykaza, zawierajaca ja kompozycja farmaceutyczna, kodujacy ja wyizolowany kwas nukleinowy, zawierajacy go wektor i obejmujaca ten wektor komórka gospodarza oraz sposoby wytwarzania urykazy oraz zawierajacej urykaze kompozycji farmaceutycznej - Google Patents
Wyizolowana urykaza, zawierajaca ja kompozycja farmaceutyczna, kodujacy ja wyizolowany kwas nukleinowy, zawierajacy go wektor i obejmujaca ten wektor komórka gospodarza oraz sposoby wytwarzania urykazy oraz zawierajacej urykaze kompozycji farmaceutycznejInfo
- Publication number
- PL215157B1 PL215157B1 PL384263A PL38426306A PL215157B1 PL 215157 B1 PL215157 B1 PL 215157B1 PL 384263 A PL384263 A PL 384263A PL 38426306 A PL38426306 A PL 38426306A PL 215157 B1 PL215157 B1 PL 215157B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- uricase
- lys
- val
- thr
- much
- Prior art date
Links
- 108010092464 Urate Oxidase Proteins 0.000 title claims abstract description 282
- 229940005267 urate oxidase Drugs 0.000 title description 3
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 47
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims description 51
- LEHOTFFKMJEONL-UHFFFAOYSA-N Uric Acid Chemical compound N1C(=O)NC(=O)C2=C1NC(=O)N2 LEHOTFFKMJEONL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 40
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 25
- TVWHNULVHGKJHS-UHFFFAOYSA-N Uric acid Natural products N1C(=O)NC(=O)C2NC(=O)NC21 TVWHNULVHGKJHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 23
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims description 23
- 229940116269 uric acid Drugs 0.000 claims description 23
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 23
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 claims description 20
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 20
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 16
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 14
- 101150004298 osmB gene Proteins 0.000 claims description 14
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 11
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 11
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 9
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 9
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 9
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 claims description 8
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 claims description 6
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 claims description 6
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 claims description 6
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 claims description 6
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 claims description 6
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 claims description 6
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 6
- 229920003088 hydroxypropyl methyl cellulose Polymers 0.000 claims description 6
- 239000001866 hydroxypropyl methyl cellulose Substances 0.000 claims description 6
- 235000010979 hydroxypropyl methyl cellulose Nutrition 0.000 claims description 6
- UFVKGYZPFZQRLF-UHFFFAOYSA-N hydroxypropyl methyl cellulose Chemical compound OC1C(O)C(OC)OC(CO)C1OC1C(O)C(O)C(OC2C(C(O)C(OC3C(C(O)C(O)C(CO)O3)O)C(CO)O2)O)C(CO)O1 UFVKGYZPFZQRLF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 229920001451 polypropylene glycol Polymers 0.000 claims description 6
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 claims description 6
- 235000019422 polyvinyl alcohol Nutrition 0.000 claims description 6
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 claims description 6
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 claims description 6
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 claims description 6
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 2
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 9
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 abstract description 30
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 abstract description 19
- 102000035118 modified proteins Human genes 0.000 abstract description 2
- 108091005573 modified proteins Proteins 0.000 abstract description 2
- 108091006006 PEGylated Proteins Proteins 0.000 abstract 1
- 230000001751 uricolytic effect Effects 0.000 abstract 1
- 235000013351 cheese Nutrition 0.000 description 76
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 41
- 241001504519 Papio ursinus Species 0.000 description 35
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 33
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 32
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 30
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 29
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 29
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 26
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 26
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 26
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 19
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 18
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 18
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 17
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 17
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 description 15
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 13
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 13
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 13
- DRRXXZBXDMLGFC-IHRRRGAJSA-N Lys-Val-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN DRRXXZBXDMLGFC-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 11
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 11
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 11
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 11
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 11
- 239000013615 primer Substances 0.000 description 11
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 10
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 10
- 108010068701 Pegloticase Proteins 0.000 description 10
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 10
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 10
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 10
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 10
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 10
- 108010036320 valylleucine Proteins 0.000 description 10
- RZVAJINKPMORJF-UHFFFAOYSA-N Acetaminophen Chemical compound CC(=O)NC1=CC=C(O)C=C1 RZVAJINKPMORJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 9
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 9
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 9
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 9
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- POJWUDADGALRAB-UHFFFAOYSA-N allantoin Chemical compound NC(=O)NC1NC(=O)NC1=O POJWUDADGALRAB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 8
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 8
- JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N hydrocortisone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N 0.000 description 8
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 8
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 8
- 108010061238 threonyl-glycine Proteins 0.000 description 8
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 7
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 7
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 7
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 7
- 108010050848 glycylleucine Proteins 0.000 description 7
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 7
- 108010034529 leucyl-lysine Proteins 0.000 description 7
- 108010003700 lysyl aspartic acid Proteins 0.000 description 7
- 230000006320 pegylation Effects 0.000 description 7
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 7
- LRFVTYWOQMYALW-UHFFFAOYSA-N 9H-xanthine Chemical compound O=C1NC(=O)NC2=C1NC=N2 LRFVTYWOQMYALW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- KMSHNDWHPWXPEC-BQBZGAKWSA-N Arg-Asp-Gly Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(O)=O KMSHNDWHPWXPEC-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 6
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 6
- WZSHYFGOLPXPLL-RYUDHWBXSA-N Gly-Phe-Glu Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](Cc1ccccc1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O WZSHYFGOLPXPLL-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 6
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 6
- QUCDKEKDPYISNX-HJGDQZAQSA-N Lys-Asn-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O QUCDKEKDPYISNX-HJGDQZAQSA-N 0.000 description 6
- CIOWSLJGLSUOME-BQBZGAKWSA-N Lys-Asp Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O CIOWSLJGLSUOME-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 6
- IWWMPCPLFXFBAF-SRVKXCTJSA-N Lys-Asp-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O IWWMPCPLFXFBAF-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 6
- RPWTZTBIFGENIA-VOAKCMCISA-N Lys-Thr-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O RPWTZTBIFGENIA-VOAKCMCISA-N 0.000 description 6
- YFXXRYFWJFQAFW-JHYOHUSXSA-N Phe-Thr-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=CC=C1)N)O YFXXRYFWJFQAFW-JHYOHUSXSA-N 0.000 description 6
- QUBVFEANYYWBTM-VEVYYDQMSA-N Pro-Thr-Asp Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O QUBVFEANYYWBTM-VEVYYDQMSA-N 0.000 description 6
- 108010079005 RDV peptide Proteins 0.000 description 6
- JKUZFODWJGEQAP-KBPBESRZSA-N Tyr-Gly-Lys Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N)O JKUZFODWJGEQAP-KBPBESRZSA-N 0.000 description 6
- XCTHZFGSVQBHBW-IUCAKERBSA-N Val-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C([O-])=O)NC(=O)[C@@H]([NH3+])C(C)C XCTHZFGSVQBHBW-IUCAKERBSA-N 0.000 description 6
- CFIBZQOLUDURST-IHRRRGAJSA-N Val-Tyr-Cys Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N CFIBZQOLUDURST-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 6
- ZNGPROMGGGFOAA-JYJNAYRXSA-N Val-Tyr-Val Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 ZNGPROMGGGFOAA-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 6
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 6
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 6
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 6
- 239000000047 product Substances 0.000 description 6
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 6
- DQVAZKGVGKHQDS-UHFFFAOYSA-N 2-[[1-[2-[(2-amino-4-methylpentanoyl)amino]-4-methylpentanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-4-methylpentanoic acid Chemical compound CC(C)CC(N)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)N1CCCC1C(=O)NC(CC(C)C)C(O)=O DQVAZKGVGKHQDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- NONSEUUPKITYQT-BQBZGAKWSA-N Arg-Asn-Gly Chemical compound C(C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)NCC(=O)O)N)CN=C(N)N NONSEUUPKITYQT-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 5
- UGIBTKGQVWFTGX-BIIVOSGPSA-N Asp-Asn-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N)C(=O)O UGIBTKGQVWFTGX-BIIVOSGPSA-N 0.000 description 5
- 241001646716 Escherichia coli K-12 Species 0.000 description 5
- FYYSIASRLDJUNP-WHFBIAKZSA-N Glu-Asp Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O FYYSIASRLDJUNP-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 5
- CLODWIOAKCSBAN-BQBZGAKWSA-N Gly-Arg-Asp Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](NC(=O)CN)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O CLODWIOAKCSBAN-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 5
- DKEXFJVMVGETOO-LURJTMIESA-N Gly-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CN DKEXFJVMVGETOO-LURJTMIESA-N 0.000 description 5
- JBCLFWXMTIKCCB-UHFFFAOYSA-N H-Gly-Phe-OH Natural products NCC(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 JBCLFWXMTIKCCB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- KWTVLKBOQATPHJ-SRVKXCTJSA-N Leu-Ala-Lys Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N KWTVLKBOQATPHJ-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 5
- QWWPYKKLXWOITQ-VOAKCMCISA-N Leu-Thr-Leu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(C)C QWWPYKKLXWOITQ-VOAKCMCISA-N 0.000 description 5
- HQVDJTYKCMIWJP-YUMQZZPRSA-N Lys-Asn-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCC(O)=O HQVDJTYKCMIWJP-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 5
- ULUQBUKAPDUKOC-GVXVVHGQSA-N Lys-Glu-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O ULUQBUKAPDUKOC-GVXVVHGQSA-N 0.000 description 5
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 5
- AUJWXNGCAQWLEI-KBPBESRZSA-N Phe-Lys-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(O)=O AUJWXNGCAQWLEI-KBPBESRZSA-N 0.000 description 5
- DBOXBUDEAJVKRE-LSJOCFKGSA-N Val-Asn-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)O)N DBOXBUDEAJVKRE-LSJOCFKGSA-N 0.000 description 5
- HHSILIQTHXABKM-YDHLFZDLSA-N Val-Asp-Phe Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](Cc1ccccc1)C(O)=O HHSILIQTHXABKM-YDHLFZDLSA-N 0.000 description 5
- MLADEWAIYAPAAU-IHRRRGAJSA-N Val-Lys-His Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)N MLADEWAIYAPAAU-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 5
- 239000000739 antihistaminic agent Substances 0.000 description 5
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 5
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 5
- 229960003592 fexofenadine Drugs 0.000 description 5
- RWTNPBWLLIMQHL-UHFFFAOYSA-N fexofenadine Chemical compound C1=CC(C(C)(C(O)=O)C)=CC=C1C(O)CCCN1CCC(C(O)(C=2C=CC=CC=2)C=2C=CC=CC=2)CC1 RWTNPBWLLIMQHL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 108010063718 gamma-glutamylaspartic acid Proteins 0.000 description 5
- 108010081551 glycylphenylalanine Proteins 0.000 description 5
- 108010037850 glycylvaline Proteins 0.000 description 5
- 108010092114 histidylphenylalanine Proteins 0.000 description 5
- 210000003000 inclusion body Anatomy 0.000 description 5
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 5
- 125000001360 methionine group Chemical group N[C@@H](CCSC)C(=O)* 0.000 description 5
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 5
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 5
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 5
- 239000000041 non-steroidal anti-inflammatory agent Substances 0.000 description 5
- 229940021182 non-steroidal anti-inflammatory drug Drugs 0.000 description 5
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 5
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 5
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 5
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 5
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 5
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 5
- OMSKGWFGWCQFBD-KZVJFYERSA-N Ala-Val-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O OMSKGWFGWCQFBD-KZVJFYERSA-N 0.000 description 4
- POJWUDADGALRAB-PVQJCKRUSA-N Allantoin Natural products NC(=O)N[C@@H]1NC(=O)NC1=O POJWUDADGALRAB-PVQJCKRUSA-N 0.000 description 4
- LBOVBQONZJRWPV-YUMQZZPRSA-N Asp-Lys-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(O)=O LBOVBQONZJRWPV-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 4
- CPMKYMGGYUFOHS-FSPLSTOPSA-N Asp-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CPMKYMGGYUFOHS-FSPLSTOPSA-N 0.000 description 4
- FYBSCGZLICNOBA-XQXXSGGOSA-N Glu-Ala-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O FYBSCGZLICNOBA-XQXXSGGOSA-N 0.000 description 4
- QJCKNLPMTPXXEM-AUTRQRHGSA-N Glu-Glu-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O QJCKNLPMTPXXEM-AUTRQRHGSA-N 0.000 description 4
- CQGBSALYGOXQPE-HTUGSXCWSA-N Glu-Thr-Phe Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N)O CQGBSALYGOXQPE-HTUGSXCWSA-N 0.000 description 4
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 4
- 201000005569 Gout Diseases 0.000 description 4
- LHSGPCFBGJHPCY-UHFFFAOYSA-N L-leucine-L-tyrosine Natural products CC(C)CC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 LHSGPCFBGJHPCY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- RRVCZCNFXIFGRA-DCAQKATOSA-N Leu-Pro-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O RRVCZCNFXIFGRA-DCAQKATOSA-N 0.000 description 4
- ALEVUGKHINJNIF-QEJZJMRPSA-N Lys-Phe-Ala Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 ALEVUGKHINJNIF-QEJZJMRPSA-N 0.000 description 4
- CAVRAQIDHUPECU-UVOCVTCTSA-N Lys-Thr-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O CAVRAQIDHUPECU-UVOCVTCTSA-N 0.000 description 4
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 4
- SITLTJHOQZFJGG-UHFFFAOYSA-N N-L-alpha-glutamyl-L-valine Natural products CC(C)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCC(O)=O SITLTJHOQZFJGG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- KZNQNBZMBZJQJO-UHFFFAOYSA-N N-glycyl-L-proline Natural products NCC(=O)N1CCCC1C(O)=O KZNQNBZMBZJQJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- KBUAPZAZPWNYSW-SRVKXCTJSA-N Pro-Pro-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H]1NCCC1 KBUAPZAZPWNYSW-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 4
- FYXCBXDAMPEHIQ-FHWLQOOXSA-N Pro-Trp-Lys Chemical compound C1C[C@H](NC1)C(=O)N[C@@H](CC2=CNC3=CC=CC=C32)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O FYXCBXDAMPEHIQ-FHWLQOOXSA-N 0.000 description 4
- GUGOEEXESWIERI-UHFFFAOYSA-N Terfenadine Chemical compound C1=CC(C(C)(C)C)=CC=C1C(O)CCCN1CCC(C(O)(C=2C=CC=CC=2)C=2C=CC=CC=2)CC1 GUGOEEXESWIERI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- NKUIXQOJUAEIET-AQZXSJQPSA-N Trp-Asp-Thr Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(O)=O)=CNC2=C1 NKUIXQOJUAEIET-AQZXSJQPSA-N 0.000 description 4
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 4
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 4
- 108010047495 alanylglycine Proteins 0.000 description 4
- 229960000458 allantoin Drugs 0.000 description 4
- 230000001387 anti-histamine Effects 0.000 description 4
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 4
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 4
- 229960000890 hydrocortisone Drugs 0.000 description 4
- 108010057821 leucylproline Proteins 0.000 description 4
- 108010012058 leucyltyrosine Proteins 0.000 description 4
- 108010057952 lysyl-phenylalanyl-lysine Proteins 0.000 description 4
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 4
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 4
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 4
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 4
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 4
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 4
- 229960005489 paracetamol Drugs 0.000 description 4
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 description 4
- 108010070643 prolylglutamic acid Proteins 0.000 description 4
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 4
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 4
- 125000000341 threoninyl group Chemical group [H]OC([H])(C([H])([H])[H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 4
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 4
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 4
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 4
- 108010073969 valyllysine Proteins 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- KUFVXLQLDHJVOG-SHGPDSBTSA-N Ala-Thr-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](C)N)O KUFVXLQLDHJVOG-SHGPDSBTSA-N 0.000 description 3
- BBYTXXRNSFUOOX-IHRRRGAJSA-N Arg-Cys-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O BBYTXXRNSFUOOX-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 3
- DPLFNLDACGGBAK-KKUMJFAQSA-N Arg-Phe-Glu Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N DPLFNLDACGGBAK-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 3
- SUMJNGAMIQSNGX-TUAOUCFPSA-N Arg-Val-Pro Chemical compound CC(C)[C@H](NC(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(O)=O SUMJNGAMIQSNGX-TUAOUCFPSA-N 0.000 description 3
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 3
- 101100315624 Caenorhabditis elegans tyr-1 gene Proteins 0.000 description 3
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 3
- UUOYKFNULIOCGJ-GUBZILKMSA-N Cys-Glu-His Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)N UUOYKFNULIOCGJ-GUBZILKMSA-N 0.000 description 3
- 239000003155 DNA primer Substances 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- XQHSBNVACKQWAV-WHFBIAKZSA-N Gly-Asp-Asn Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O XQHSBNVACKQWAV-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 3
- JNGHLWWFPGIJER-STQMWFEESA-N Gly-Pro-Tyr Chemical compound NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 JNGHLWWFPGIJER-STQMWFEESA-N 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- MRVZCDSYLJXKKX-ACRUOGEOSA-N His-Tyr-Phe Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC2=CC=C(C=C2)O)NC(=O)[C@H](CC3=CN=CN3)N MRVZCDSYLJXKKX-ACRUOGEOSA-N 0.000 description 3
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 3
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- SJNZALDHDUYDBU-IHRRRGAJSA-N Lys-Arg-Lys Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O SJNZALDHDUYDBU-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 3
- RIJCHEVHFWMDKD-SRVKXCTJSA-N Lys-Lys-Asn Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O RIJCHEVHFWMDKD-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 3
- RYOLKFYZBHMYFW-WDSOQIARSA-N Lys-Trp-Arg Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@@H](N)CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O)=CNC2=C1 RYOLKFYZBHMYFW-WDSOQIARSA-N 0.000 description 3
- 108010002311 N-glycylglutamic acid Proteins 0.000 description 3
- 241000282515 Papio hamadryas Species 0.000 description 3
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000012614 Q-Sepharose Substances 0.000 description 3
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 3
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 3
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 3
- KBBRNEDOYWMIJP-KYNKHSRBSA-N Thr-Gly-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)O)N)O KBBRNEDOYWMIJP-KYNKHSRBSA-N 0.000 description 3
- GVMXJJAJLIEASL-ZJDVBMNYSA-N Thr-Pro-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O GVMXJJAJLIEASL-ZJDVBMNYSA-N 0.000 description 3
- DNOOLPROHJWCSQ-RCWTZXSCSA-N Val-Arg-Thr Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O DNOOLPROHJWCSQ-RCWTZXSCSA-N 0.000 description 3
- UPJONISHZRADBH-XPUUQOCRSA-N Val-Glu Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O UPJONISHZRADBH-XPUUQOCRSA-N 0.000 description 3
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 3
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 3
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 3
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229910021538 borax Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 3
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 3
- 238000004737 colorimetric analysis Methods 0.000 description 3
- 239000003246 corticosteroid Substances 0.000 description 3
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 3
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 3
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 3
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 3
- XBGGUPMXALFZOT-UHFFFAOYSA-N glycyl-L-tyrosine hemihydrate Natural products NCC(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 XBGGUPMXALFZOT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010077515 glycylproline Proteins 0.000 description 3
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 3
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 3
- 108010054155 lysyllysine Proteins 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 3
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 3
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 3
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 3
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 3
- 229960004618 prednisone Drugs 0.000 description 3
- XOFYZVNMUHMLCC-ZPOLXVRWSA-N prednisone Chemical compound O=C1C=C[C@]2(C)[C@H]3C(=O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 XOFYZVNMUHMLCC-ZPOLXVRWSA-N 0.000 description 3
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 3
- 125000003607 serino group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C(O[H])([H])[H] 0.000 description 3
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 description 3
- 235000010339 sodium tetraborate Nutrition 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 229960002180 tetracycline Drugs 0.000 description 3
- 229930101283 tetracycline Natural products 0.000 description 3
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 3
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 3
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 3
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 3
- BSVBQGMMJUBVOD-UHFFFAOYSA-N trisodium borate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]B([O-])[O-] BSVBQGMMJUBVOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229940075420 xanthine Drugs 0.000 description 3
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 2
- OBFSQMXGZIYMMN-UHFFFAOYSA-N 3-chloro-2-hexadecylpyridine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCC1=NC=CC=C1Cl OBFSQMXGZIYMMN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 2
- 102000004400 Aminopeptidases Human genes 0.000 description 2
- 108090000915 Aminopeptidases Proteins 0.000 description 2
- WVRUNFYJIHNFKD-WDSKDSINSA-N Arg-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N WVRUNFYJIHNFKD-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- UZSQXCMNUPKLCC-FJXKBIBVSA-N Arg-Thr-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(O)=O UZSQXCMNUPKLCC-FJXKBIBVSA-N 0.000 description 2
- XRLOBFSLPCHYLQ-ULQDDVLXSA-N Arg-Tyr-His Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC2=CN=CN2)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N)O XRLOBFSLPCHYLQ-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 2
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 2
- QJMCHPGWFZZRID-BQBZGAKWSA-N Asn-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O QJMCHPGWFZZRID-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 2
- FBODFHMLALOPHP-GUBZILKMSA-N Asn-Lys-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O FBODFHMLALOPHP-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- VGRHZPNRCLAHQA-IMJSIDKUSA-N Asp-Asn Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O VGRHZPNRCLAHQA-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 2
- YDJVIBMKAMQPPP-LAEOZQHASA-N Asp-Glu-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O YDJVIBMKAMQPPP-LAEOZQHASA-N 0.000 description 2
- NWAHPBGBDIFUFD-KKUMJFAQSA-N Asp-Tyr-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O NWAHPBGBDIFUFD-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 2
- BUXAPSQPMALTOY-WHFBIAKZSA-N Cys-Glu Chemical compound SC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O BUXAPSQPMALTOY-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 2
- KXTAGESXNQEZKB-DZKIICNBSA-N Glu-Phe-Val Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 KXTAGESXNQEZKB-DZKIICNBSA-N 0.000 description 2
- LZEUDRYSAZAJIO-AUTRQRHGSA-N Glu-Val-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O LZEUDRYSAZAJIO-AUTRQRHGSA-N 0.000 description 2
- ZYRXTRTUCAVNBQ-GVXVVHGQSA-N Glu-Val-Lys Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N ZYRXTRTUCAVNBQ-GVXVVHGQSA-N 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- LOEANKRDMMVOGZ-YUMQZZPRSA-N Gly-Lys-Asp Chemical compound NCCCC[C@H](NC(=O)CN)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O LOEANKRDMMVOGZ-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- RHRLHXQWHCNJKR-PMVVWTBXSA-N Gly-Thr-His Chemical compound NCC(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CN=CN1 RHRLHXQWHCNJKR-PMVVWTBXSA-N 0.000 description 2
- CUVBTVWFVIIDOC-YEPSODPASA-N Gly-Thr-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)CN CUVBTVWFVIIDOC-YEPSODPASA-N 0.000 description 2
- HQSKKSLNLSTONK-JTQLQIEISA-N Gly-Tyr-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)CC1=CC=C(O)C=C1 HQSKKSLNLSTONK-JTQLQIEISA-N 0.000 description 2
- RVKIPWVMZANZLI-UHFFFAOYSA-N H-Lys-Trp-OH Natural products C1=CC=C2C(CC(NC(=O)C(N)CCCCN)C(O)=O)=CNC2=C1 RVKIPWVMZANZLI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 2
- DAKSMIWQZPHRIB-BZSNNMDCSA-N His-Tyr-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O DAKSMIWQZPHRIB-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 2
- VTJUNIYRYIAIHF-IUCAKERBSA-N Leu-Pro Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O VTJUNIYRYIAIHF-IUCAKERBSA-N 0.000 description 2
- VULJUQZPSOASBZ-SRVKXCTJSA-N Leu-Pro-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O VULJUQZPSOASBZ-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- LRKCBIUDWAXNEG-CSMHCCOUSA-N Leu-Thr Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O LRKCBIUDWAXNEG-CSMHCCOUSA-N 0.000 description 2
- WALVCOOOKULCQM-ULQDDVLXSA-N Lys-Arg-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O WALVCOOOKULCQM-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 2
- 108010062166 Lys-Asn-Asp Proteins 0.000 description 2
- FLCMXEFCTLXBTL-DCAQKATOSA-N Lys-Asp-Arg Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)O)N FLCMXEFCTLXBTL-DCAQKATOSA-N 0.000 description 2
- NTBFKPBULZGXQL-KKUMJFAQSA-N Lys-Asp-Tyr Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 NTBFKPBULZGXQL-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 2
- PBIPLDMFHAICIP-DCAQKATOSA-N Lys-Glu-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O PBIPLDMFHAICIP-DCAQKATOSA-N 0.000 description 2
- NVGBPTNZLWRQSY-UWVGGRQHSA-N Lys-Lys Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN NVGBPTNZLWRQSY-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 2
- ALGGDNMLQNFVIZ-SRVKXCTJSA-N Lys-Lys-Asp Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)N ALGGDNMLQNFVIZ-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- PSVAVKGDUAKZKU-BZSNNMDCSA-N Lys-Tyr-His Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC2=CN=CN2)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)N)O PSVAVKGDUAKZKU-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 2
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 101710181812 Methionine aminopeptidase Proteins 0.000 description 2
- 102000016943 Muramidase Human genes 0.000 description 2
- 108010014251 Muramidase Proteins 0.000 description 2
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 description 2
- XZFYRXDAULDNFX-UHFFFAOYSA-N N-L-cysteinyl-L-phenylalanine Natural products SCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 XZFYRXDAULDNFX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010087066 N2-tryptophyllysine Proteins 0.000 description 2
- 108010085186 Peroxisomal Targeting Signals Proteins 0.000 description 2
- KKYHKZCMETTXEO-AVGNSLFASA-N Phe-Cys-Glu Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)N KKYHKZCMETTXEO-AVGNSLFASA-N 0.000 description 2
- ZIQQNOXKEFDPBE-BZSNNMDCSA-N Phe-Lys-His Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC2=CN=CN2)C(=O)O)N ZIQQNOXKEFDPBE-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 2
- VPEVBAUSTBWQHN-NHCYSSNCSA-N Pro-Glu-Val Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O VPEVBAUSTBWQHN-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 2
- 239000012564 Q sepharose fast flow resin Substances 0.000 description 2
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 108010006785 Taq Polymerase Proteins 0.000 description 2
- BIYXEUAFGLTAEM-WUJLRWPWSA-N Thr-Gly Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O BIYXEUAFGLTAEM-WUJLRWPWSA-N 0.000 description 2
- WCRFXRIWBFRZBR-GGVZMXCHSA-N Thr-Tyr Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 WCRFXRIWBFRZBR-GGVZMXCHSA-N 0.000 description 2
- MFEVVAXTBZELLL-GGVZMXCHSA-N Tyr-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 MFEVVAXTBZELLL-GGVZMXCHSA-N 0.000 description 2
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 description 2
- FEFZWCSXEMVSPO-LSJOCFKGSA-N Val-His-Ala Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](Cc1cnc[nH]1)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O FEFZWCSXEMVSPO-LSJOCFKGSA-N 0.000 description 2
- SYSWVVCYSXBVJG-RHYQMDGZSA-N Val-Leu-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C(C)C)N)O SYSWVVCYSXBVJG-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 2
- GVJUTBOZZBTBIG-AVGNSLFASA-N Val-Lys-Arg Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)O)N GVJUTBOZZBTBIG-AVGNSLFASA-N 0.000 description 2
- KTEZUXISLQTDDQ-NHCYSSNCSA-N Val-Lys-Asp Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)N KTEZUXISLQTDDQ-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 2
- NSUUANXHLKKHQB-BZSNNMDCSA-N Val-Pro-Trp Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CNC2=CC=CC=C12 NSUUANXHLKKHQB-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010062796 arginyllysine Proteins 0.000 description 2
- 108010068265 aspartyltyrosine Proteins 0.000 description 2
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 2
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 2
- 239000003093 cationic surfactant Substances 0.000 description 2
- 238000007398 colorimetric assay Methods 0.000 description 2
- 230000000593 degrading effect Effects 0.000 description 2
- ZZVUWRFHKOJYTH-UHFFFAOYSA-N diphenhydramine Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(OCCN(C)C)C1=CC=CC=C1 ZZVUWRFHKOJYTH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960000520 diphenhydramine Drugs 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 108010015792 glycyllysine Proteins 0.000 description 2
- 108010036413 histidylglycine Proteins 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- CGIGDMFJXJATDK-UHFFFAOYSA-N indomethacin Chemical compound CC1=C(CC(O)=O)C2=CC(OC)=CC=C2N1C(=O)C1=CC=C(Cl)C=C1 CGIGDMFJXJATDK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 2
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 2
- 229960000274 lysozyme Drugs 0.000 description 2
- 239000004325 lysozyme Substances 0.000 description 2
- 235000010335 lysozyme Nutrition 0.000 description 2
- 108091027963 non-coding RNA Proteins 0.000 description 2
- 102000042567 non-coding RNA Human genes 0.000 description 2
- 229960005205 prednisolone Drugs 0.000 description 2
- OIGNJSKKLXVSLS-VWUMJDOOSA-N prednisolone Chemical compound O=C1C=C[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 OIGNJSKKLXVSLS-VWUMJDOOSA-N 0.000 description 2
- 108010053725 prolylvaline Proteins 0.000 description 2
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 2
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 2
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 2
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 2
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 2
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 2
- ALBODLTZUXKBGZ-JUUVMNCLSA-N (2s)-2-amino-3-phenylpropanoic acid;(2s)-2,6-diaminohexanoic acid Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O.OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 ALBODLTZUXKBGZ-JUUVMNCLSA-N 0.000 description 1
- FUFLCEKSBBHCMO-UHFFFAOYSA-N 11-dehydrocorticosterone Natural products O=C1CCC2(C)C3C(=O)CC(C)(C(CC4)C(=O)CO)C4C3CCC2=C1 FUFLCEKSBBHCMO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- VHRSUDSXCMQTMA-PJHHCJLFSA-N 6alpha-methylprednisolone Chemical compound C([C@@]12C)=CC(=O)C=C1[C@@H](C)C[C@@H]1[C@@H]2[C@@H](O)C[C@]2(C)[C@@](O)(C(=O)CO)CC[C@H]21 VHRSUDSXCMQTMA-PJHHCJLFSA-N 0.000 description 1
- NFLLKCVHYJRNRH-UHFFFAOYSA-N 8-chloro-1,3-dimethyl-7H-purine-2,6-dione 2-(diphenylmethyl)oxy-N,N-dimethylethanamine Chemical compound O=C1N(C)C(=O)N(C)C2=C1NC(Cl)=N2.C=1C=CC=CC=1C(OCCN(C)C)C1=CC=CC=C1 NFLLKCVHYJRNRH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KUDREHRZRIVKHS-UWJYBYFXSA-N Ala-Asp-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O KUDREHRZRIVKHS-UWJYBYFXSA-N 0.000 description 1
- BUQICHWNXBIBOG-LMVFSUKVSA-N Ala-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)N BUQICHWNXBIBOG-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 1
- LTTLSZVJTDSACD-OWLDWWDNSA-N Ala-Thr-Trp Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(O)=O LTTLSZVJTDSACD-OWLDWWDNSA-N 0.000 description 1
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 1
- OTCJMMRQBVDQRK-DCAQKATOSA-N Arg-Asp-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O OTCJMMRQBVDQRK-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- VXXHDZKEQNGXNU-QXEWZRGKSA-N Arg-Asp-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N VXXHDZKEQNGXNU-QXEWZRGKSA-N 0.000 description 1
- OTZMRMHZCMZOJZ-SRVKXCTJSA-N Arg-Leu-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O OTZMRMHZCMZOJZ-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- CLICCYPMVFGUOF-IHRRRGAJSA-N Arg-Lys-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O CLICCYPMVFGUOF-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- PAXHINASXXXILC-SRVKXCTJSA-N Asn-Asp-Tyr Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N)O PAXHINASXXXILC-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- QNNBHTFDFFFHGC-KKUMJFAQSA-N Asn-Tyr-Lys Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N)O QNNBHTFDFFFHGC-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- ICAYWNTWHRRAQP-FXQIFTODSA-N Asp-Arg-Cys Chemical compound C(C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N)CN=C(N)N ICAYWNTWHRRAQP-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- PDECQIHABNQRHN-GUBZILKMSA-N Asp-Glu-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O PDECQIHABNQRHN-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- GWIJZUVQVDJHDI-AVGNSLFASA-N Asp-Phe-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O GWIJZUVQVDJHDI-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- NTQDELBZOMWXRS-IWGUZYHVSA-N Asp-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O NTQDELBZOMWXRS-IWGUZYHVSA-N 0.000 description 1
- 241000228197 Aspergillus flavus Species 0.000 description 1
- BSYNRYMUTXBXSQ-UHFFFAOYSA-N Aspirin Chemical compound CC(=O)OC1=CC=CC=C1C(O)=O BSYNRYMUTXBXSQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100021277 Beta-secretase 2 Human genes 0.000 description 1
- 101710150190 Beta-secretase 2 Proteins 0.000 description 1
- 238000009010 Bradford assay Methods 0.000 description 1
- 101000981883 Brevibacillus parabrevis ATP-dependent tryptophan/phenylalanine/tyrosine adenylase Proteins 0.000 description 1
- 101000981889 Brevibacillus parabrevis Linear gramicidin-PCP reductase Proteins 0.000 description 1
- VOVIALXJUBGFJZ-KWVAZRHASA-N Budesonide Chemical compound C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1C[C@H]3OC(CCC)O[C@@]3(C(=O)CO)[C@@]1(C)C[C@@H]2O VOVIALXJUBGFJZ-KWVAZRHASA-N 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100025570 Cancer/testis antigen 1 Human genes 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- ZKLPARSLTMPFCP-UHFFFAOYSA-N Cetirizine Chemical compound C1CN(CCOCC(=O)O)CCN1C(C=1C=CC(Cl)=CC=1)C1=CC=CC=C1 ZKLPARSLTMPFCP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101000906861 Chondromyces crocatus ATP-dependent tyrosine adenylase Proteins 0.000 description 1
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 1
- MFYSYFVPBJMHGN-ZPOLXVRWSA-N Cortisone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3C(=O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 MFYSYFVPBJMHGN-ZPOLXVRWSA-N 0.000 description 1
- MFYSYFVPBJMHGN-UHFFFAOYSA-N Cortisone Natural products O=C1CCC2(C)C3C(=O)CC(C)(C(CC4)(O)C(=O)CO)C4C3CCC2=C1 MFYSYFVPBJMHGN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VIRYODQIWJNWNU-NRPADANISA-N Cys-Glu-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)N VIRYODQIWJNWNU-NRPADANISA-N 0.000 description 1
- UIKLEGZPIOXFHJ-DLOVCJGASA-N Cys-Phe-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O UIKLEGZPIOXFHJ-DLOVCJGASA-N 0.000 description 1
- 230000004544 DNA amplification Effects 0.000 description 1
- 238000001712 DNA sequencing Methods 0.000 description 1
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 1
- 102000004163 DNA-directed RNA polymerases Human genes 0.000 description 1
- 108090000626 DNA-directed RNA polymerases Proteins 0.000 description 1
- 108090000204 Dipeptidase 1 Proteins 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001302584 Escherichia coli str. K-12 substr. W3110 Species 0.000 description 1
- 108090000371 Esterases Proteins 0.000 description 1
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940123583 Factor Xa inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 108700028146 Genetic Enhancer Elements Proteins 0.000 description 1
- 108700039691 Genetic Promoter Regions Proteins 0.000 description 1
- ATRHMOJQJWPVBQ-DRZSPHRISA-N Glu-Ala-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O ATRHMOJQJWPVBQ-DRZSPHRISA-N 0.000 description 1
- SWRVAQHFBRZVNX-GUBZILKMSA-N Glu-Lys-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O SWRVAQHFBRZVNX-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- YSWHPLCDIMUKFE-QWRGUYRKSA-N Glu-Tyr Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 YSWHPLCDIMUKFE-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- CUYLIWAAAYJKJH-RYUDHWBXSA-N Gly-Glu-Tyr Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 CUYLIWAAAYJKJH-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 1
- IBYOLNARKHMLBG-WHOFXGATSA-N Gly-Phe-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)CC1=CC=CC=C1 IBYOLNARKHMLBG-WHOFXGATSA-N 0.000 description 1
- OOCFXNOVSLSHAB-IUCAKERBSA-N Gly-Pro-Pro Chemical compound NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N1[C@H](C(O)=O)CCC1 OOCFXNOVSLSHAB-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- OLIFSFOFKGKIRH-WUJLRWPWSA-N Gly-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CN OLIFSFOFKGKIRH-WUJLRWPWSA-N 0.000 description 1
- YDIDLLVFCYSXNY-RCOVLWMOSA-N Gly-Val-Asn Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)CN YDIDLLVFCYSXNY-RCOVLWMOSA-N 0.000 description 1
- FNXSYBOHALPRHV-ONGXEEELSA-N Gly-Val-Lys Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN FNXSYBOHALPRHV-ONGXEEELSA-N 0.000 description 1
- 241001554831 Hamadryas <angiosperm> Species 0.000 description 1
- 102220483804 High mobility group protein B1_Y97H_mutation Human genes 0.000 description 1
- WPUAVVXYEJAWIV-KKUMJFAQSA-N His-Phe-Cys Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC2=CN=CN2)N WPUAVVXYEJAWIV-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- SVVULKPWDBIPCO-BZSNNMDCSA-N His-Phe-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O SVVULKPWDBIPCO-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 1
- FRDFAWHTPDKRHG-ULQDDVLXSA-N His-Tyr-Arg Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O)C1=CN=CN1 FRDFAWHTPDKRHG-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 1
- 101000856237 Homo sapiens Cancer/testis antigen 1 Proteins 0.000 description 1
- 201000001431 Hyperuricemia Diseases 0.000 description 1
- XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N IDUR Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(I)=C1 XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 1
- HEFNNWSXXWATRW-UHFFFAOYSA-N Ibuprofen Chemical compound CC(C)CC1=CC=C(C(C)C(O)=O)C=C1 HEFNNWSXXWATRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- FADYJNXDPBKVCA-UHFFFAOYSA-N L-Phenylalanyl-L-lysin Natural products NCCCCC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 FADYJNXDPBKVCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QLROSWPKSBORFJ-BQBZGAKWSA-N L-Prolyl-L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)CC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 QLROSWPKSBORFJ-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- SENJXOPIZNYLHU-UHFFFAOYSA-N L-leucyl-L-arginine Natural products CC(C)CC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CCCN=C(N)N SENJXOPIZNYLHU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SENJXOPIZNYLHU-IUCAKERBSA-N Leu-Arg Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N SENJXOPIZNYLHU-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- LESXFEZIFXFIQR-LURJTMIESA-N Leu-Gly Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O LESXFEZIFXFIQR-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- CFZZDVMBRYFFNU-QWRGUYRKSA-N Leu-His-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)NCC(O)=O CFZZDVMBRYFFNU-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- XVZCXCTYGHPNEM-UHFFFAOYSA-N Leu-Leu-Pro Natural products CC(C)CC(N)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)N1CCCC1C(O)=O XVZCXCTYGHPNEM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001625930 Luria Species 0.000 description 1
- BYPMOIFBQPEWOH-CIUDSAMLSA-N Lys-Asn-Asp Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)N BYPMOIFBQPEWOH-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- LCMWVZLBCUVDAZ-IUCAKERBSA-N Lys-Gly-Glu Chemical compound [NH3+]CCCC[C@H]([NH3+])C(=O)NCC(=O)N[C@H](C([O-])=O)CCC([O-])=O LCMWVZLBCUVDAZ-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- SPCHLZUWJTYZFC-IHRRRGAJSA-N Lys-His-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O SPCHLZUWJTYZFC-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- OIQSIMFSVLLWBX-VOAKCMCISA-N Lys-Leu-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O OIQSIMFSVLLWBX-VOAKCMCISA-N 0.000 description 1
- AZOFEHCPMBRNFD-BZSNNMDCSA-N Lys-Phe-Lys Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 AZOFEHCPMBRNFD-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 1
- MYAPQOBHGWJZOM-UWVGGRQHSA-N Met-Gly-Leu Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(C)C MYAPQOBHGWJZOM-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- JCMMNFZUKMMECJ-DCAQKATOSA-N Met-Lys-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O JCMMNFZUKMMECJ-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- NSMXRFMGZYTFEX-KJEVXHAQSA-N Met-Thr-Tyr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCSC)N)O NSMXRFMGZYTFEX-KJEVXHAQSA-N 0.000 description 1
- 108090000157 Metallothionein Proteins 0.000 description 1
- MDSUKZSLOATHMH-UHFFFAOYSA-N N-L-leucyl-L-valine Natural products CC(C)CC(N)C(=O)NC(C(C)C)C(O)=O MDSUKZSLOATHMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XMBSYZWANAQXEV-UHFFFAOYSA-N N-alpha-L-glutamyl-L-phenylalanine Natural products OC(=O)CCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 XMBSYZWANAQXEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000729 N-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- CMWTZPSULFXXJA-UHFFFAOYSA-N Naproxen Natural products C1=C(C(C)C(O)=O)C=CC2=CC(OC)=CC=C21 CMWTZPSULFXXJA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JAUOIFJMECXRGI-UHFFFAOYSA-N Neoclaritin Chemical compound C=1C(Cl)=CC=C2C=1CCC1=CC=CN=C1C2=C1CCNCC1 JAUOIFJMECXRGI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 description 1
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 description 1
- FPTXMUIBLMGTQH-ONGXEEELSA-N Phe-Ala-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 FPTXMUIBLMGTQH-ONGXEEELSA-N 0.000 description 1
- BKWJQWJPZMUWEG-LFSVMHDDSA-N Phe-Ala-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 BKWJQWJPZMUWEG-LFSVMHDDSA-N 0.000 description 1
- OXUMFAOVGFODPN-KKUMJFAQSA-N Phe-Asn-His Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CC2=CN=CN2)C(=O)O)N OXUMFAOVGFODPN-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- RFCVXVPWSPOMFJ-STQMWFEESA-N Phe-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 RFCVXVPWSPOMFJ-STQMWFEESA-N 0.000 description 1
- GLUYKHMBGKQBHE-JYJNAYRXSA-N Phe-Val-Arg Chemical compound NC(=N)NCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 GLUYKHMBGKQBHE-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- CLJLVCYFABNTHP-DCAQKATOSA-N Pro-Leu-Asp Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O CLJLVCYFABNTHP-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- GVUVRRPYYDHHGK-VQVTYTSYSA-N Pro-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 GVUVRRPYYDHHGK-VQVTYTSYSA-N 0.000 description 1
- DCHQYSOGURGJST-FJXKBIBVSA-N Pro-Thr-Gly Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(O)=O DCHQYSOGURGJST-FJXKBIBVSA-N 0.000 description 1
- CWZUFLWPEFHWEI-IHRRRGAJSA-N Pro-Tyr-Asp Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O CWZUFLWPEFHWEI-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- AWJGUZSYVIVZGP-YUMQZZPRSA-N Pro-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 AWJGUZSYVIVZGP-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- 102000002067 Protein Subunits Human genes 0.000 description 1
- 108010001267 Protein Subunits Proteins 0.000 description 1
- 241000714474 Rous sarcoma virus Species 0.000 description 1
- OZPDGESCTGGNAD-CIUDSAMLSA-N Ser-Ser-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CO OZPDGESCTGGNAD-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- 239000012505 Superdex™ Substances 0.000 description 1
- 101000608029 Sus scrofa Uricase Proteins 0.000 description 1
- 108020005038 Terminator Codon Proteins 0.000 description 1
- UDNVOQMPQBEITB-MEYUZBJRSA-N Thr-His-Phe Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O UDNVOQMPQBEITB-MEYUZBJRSA-N 0.000 description 1
- RFKVQLIXNVEOMB-WEDXCCLWSA-N Thr-Leu-Gly Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)O)N)O RFKVQLIXNVEOMB-WEDXCCLWSA-N 0.000 description 1
- WVVOFCVMHAXGLE-LFSVMHDDSA-N Thr-Phe-Ala Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O WVVOFCVMHAXGLE-LFSVMHDDSA-N 0.000 description 1
- SGAOHNPSEPVAFP-ZDLURKLDSA-N Thr-Ser-Gly Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(O)=O SGAOHNPSEPVAFP-ZDLURKLDSA-N 0.000 description 1
- DSGIVWSDDRDJIO-ZXXMMSQZSA-N Thr-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O DSGIVWSDDRDJIO-ZXXMMSQZSA-N 0.000 description 1
- LECUEEHKUFYOOV-ZJDVBMNYSA-N Thr-Thr-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@@H](N)[C@@H](C)O LECUEEHKUFYOOV-ZJDVBMNYSA-N 0.000 description 1
- CJEHCEOXPLASCK-MEYUZBJRSA-N Thr-Tyr-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)[C@H](O)C)CC1=CC=C(O)C=C1 CJEHCEOXPLASCK-MEYUZBJRSA-N 0.000 description 1
- CKHWEVXPLJBEOZ-VQVTYTSYSA-N Thr-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C([O-])=O)NC(=O)[C@@H]([NH3+])[C@@H](C)O CKHWEVXPLJBEOZ-VQVTYTSYSA-N 0.000 description 1
- PWONLXBUSVIZPH-RHYQMDGZSA-N Thr-Val-Lys Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N)O PWONLXBUSVIZPH-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 1
- 108091036066 Three prime untranslated region Proteins 0.000 description 1
- 102000006601 Thymidine Kinase Human genes 0.000 description 1
- 108020004440 Thymidine kinase Proteins 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- HQVKQINPFOCIIV-BVSLBCMMSA-N Trp-Arg-Tyr Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)N)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 HQVKQINPFOCIIV-BVSLBCMMSA-N 0.000 description 1
- JFDGVHXRCKEBAU-KKUMJFAQSA-N Tyr-Asp-Lys Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N)O JFDGVHXRCKEBAU-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- PMDWYLVWHRTJIW-STQMWFEESA-N Tyr-Gly-Arg Chemical compound NC(N)=NCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 PMDWYLVWHRTJIW-STQMWFEESA-N 0.000 description 1
- MVFQLSPDMMFCMW-KKUMJFAQSA-N Tyr-Leu-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O MVFQLSPDMMFCMW-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- YKCXQOBTISTQJD-BZSNNMDCSA-N Tyr-Leu-His Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC2=CC=C(C=C2)O)N YKCXQOBTISTQJD-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 1
- SCZJKZLFSSPJDP-ACRUOGEOSA-N Tyr-Phe-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O SCZJKZLFSSPJDP-ACRUOGEOSA-N 0.000 description 1
- AOIZTZRWMSPPAY-KAOXEZKKSA-N Tyr-Thr-Pro Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC2=CC=C(C=C2)O)N)O AOIZTZRWMSPPAY-KAOXEZKKSA-N 0.000 description 1
- LYERIXUFCYVFFX-GVXVVHGQSA-N Val-Leu-Glu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N LYERIXUFCYVFFX-GVXVVHGQSA-N 0.000 description 1
- WLHIIWDIDLQTKP-IHRRRGAJSA-N Val-Leu-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)C(C)C WLHIIWDIDLQTKP-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- VPGCVZRRBYOGCD-AVGNSLFASA-N Val-Lys-Val Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O VPGCVZRRBYOGCD-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- GIAZPLMMQOERPN-YUMQZZPRSA-N Val-Pro Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O GIAZPLMMQOERPN-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- RYQUMYBMOJYYDK-NHCYSSNCSA-N Val-Pro-Glu Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)N RYQUMYBMOJYYDK-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 1
- OIPILFWXSMYKGL-UHFFFAOYSA-N acetylcholine Chemical compound CC(=O)OCC[N+](C)(C)C OIPILFWXSMYKGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004373 acetylcholine Drugs 0.000 description 1
- 229960001138 acetylsalicylic acid Drugs 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- KOSRFJWDECSPRO-UHFFFAOYSA-N alpha-L-glutamyl-L-glutamic acid Natural products OC(=O)CCC(N)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(O)=O KOSRFJWDECSPRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 1
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- -1 and at position 301 Natural products 0.000 description 1
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 229940125715 antihistaminic agent Drugs 0.000 description 1
- 108010077245 asparaginyl-proline Proteins 0.000 description 1
- 108010038633 aspartylglutamate Proteins 0.000 description 1
- 108010092854 aspartyllysine Proteins 0.000 description 1
- 229960000383 azatadine Drugs 0.000 description 1
- SEBMTIQKRHYNIT-UHFFFAOYSA-N azatadine Chemical compound C1CN(C)CCC1=C1C2=NC=CC=C2CCC2=CC=CC=C21 SEBMTIQKRHYNIT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000013602 bacteriophage vector Substances 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 102000006635 beta-lactamase Human genes 0.000 description 1
- 229960002537 betamethasone Drugs 0.000 description 1
- UREBDLICKHMUKA-DVTGEIKXSA-N betamethasone Chemical compound C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@]2(F)[C@@H]1[C@@H]1C[C@H](C)[C@@](C(=O)CO)(O)[C@@]1(C)C[C@@H]2O UREBDLICKHMUKA-DVTGEIKXSA-N 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 229960000074 biopharmaceutical Drugs 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 229960000725 brompheniramine Drugs 0.000 description 1
- ZDIGNSYAACHWNL-UHFFFAOYSA-N brompheniramine Chemical compound C=1C=CC=NC=1C(CCN(C)C)C1=CC=C(Br)C=C1 ZDIGNSYAACHWNL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004436 budesonide Drugs 0.000 description 1
- 238000010805 cDNA synthesis kit Methods 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 229960000590 celecoxib Drugs 0.000 description 1
- RZEKVGVHFLEQIL-UHFFFAOYSA-N celecoxib Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1C1=CC(C(F)(F)F)=NN1C1=CC=C(S(N)(=O)=O)C=C1 RZEKVGVHFLEQIL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 108091092328 cellular RNA Proteins 0.000 description 1
- 229960001803 cetirizine Drugs 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- SOYKEARSMXGVTM-UHFFFAOYSA-N chlorphenamine Chemical compound C=1C=CC=NC=1C(CCN(C)C)C1=CC=C(Cl)C=C1 SOYKEARSMXGVTM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003291 chlorphenamine Drugs 0.000 description 1
- 238000011210 chromatographic step Methods 0.000 description 1
- YNNUSGIPVFPVBX-NHCUHLMSSA-N clemastine Chemical compound CN1CCC[C@@H]1CCO[C@@](C)(C=1C=CC(Cl)=CC=1)C1=CC=CC=C1 YNNUSGIPVFPVBX-NHCUHLMSSA-N 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 238000011443 conventional therapy Methods 0.000 description 1
- 229960001334 corticosteroids Drugs 0.000 description 1
- 229960004544 cortisone Drugs 0.000 description 1
- 229960001140 cyproheptadine Drugs 0.000 description 1
- JJCFRYNCJDLXIK-UHFFFAOYSA-N cyproheptadine Chemical compound C1CN(C)CCC1=C1C2=CC=CC=C2C=CC2=CC=CC=C21 JJCFRYNCJDLXIK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007857 degradation product Substances 0.000 description 1
- 229960001271 desloratadine Drugs 0.000 description 1
- 229960003957 dexamethasone Drugs 0.000 description 1
- UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N dexamethasone Chemical compound C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@]2(F)[C@@H]1[C@@H]1C[C@@H](C)[C@@](C(=O)CO)(O)[C@@]1(C)C[C@@H]2O UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N 0.000 description 1
- SOYKEARSMXGVTM-HNNXBMFYSA-N dexchlorpheniramine Chemical compound C1([C@H](CCN(C)C)C=2N=CC=CC=2)=CC=C(Cl)C=C1 SOYKEARSMXGVTM-HNNXBMFYSA-N 0.000 description 1
- 229960001882 dexchlorpheniramine Drugs 0.000 description 1
- 229960004993 dimenhydrinate Drugs 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- HCFDWZZGGLSKEP-UHFFFAOYSA-N doxylamine Chemical compound C=1C=CC=NC=1C(C)(OCCN(C)C)C1=CC=CC=C1 HCFDWZZGGLSKEP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005178 doxylamine Drugs 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000009585 enzyme analysis Methods 0.000 description 1
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- 108010089804 glycyl-threonine Proteins 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001680 ibuprofen Drugs 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 229960000905 indomethacin Drugs 0.000 description 1
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 1
- 230000026045 iodination Effects 0.000 description 1
- 238000006192 iodination reaction Methods 0.000 description 1
- 108010000761 leucylarginine Proteins 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 108010038320 lysylphenylalanine Proteins 0.000 description 1
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N methamphetamine Chemical compound CN[C@@H](C)CC1=CC=CC=C1 MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 150000002741 methionine derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 229960004584 methylprednisolone Drugs 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 229960002009 naproxen Drugs 0.000 description 1
- CMWTZPSULFXXJA-VIFPVBQESA-N naproxen Chemical compound C1=C([C@H](C)C(O)=O)C=CC2=CC(OC)=CC=C21 CMWTZPSULFXXJA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- OKXGHXHZNCJMSV-UHFFFAOYSA-N nitro phenyl carbonate Chemical compound [O-][N+](=O)OC(=O)OC1=CC=CC=C1 OKXGHXHZNCJMSV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010606 normalization Methods 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 230000002688 persistence Effects 0.000 description 1
- 108010024607 phenylalanylalanine Proteins 0.000 description 1
- 108010012581 phenylalanylglutamate Proteins 0.000 description 1
- 108010073101 phenylalanylleucine Proteins 0.000 description 1
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 229920002523 polyethylene Glycol 1000 Polymers 0.000 description 1
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 1
- 230000001323 posttranslational effect Effects 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 230000009465 prokaryotic expression Effects 0.000 description 1
- 108010079317 prolyl-tyrosine Proteins 0.000 description 1
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 description 1
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 1
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 1
- 230000006337 proteolytic cleavage Effects 0.000 description 1
- 150000003212 purines Chemical class 0.000 description 1
- 238000011552 rat model Methods 0.000 description 1
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 210000003705 ribosome Anatomy 0.000 description 1
- 238000004904 shortening Methods 0.000 description 1
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 229960005294 triamcinolone Drugs 0.000 description 1
- GFNANZIMVAIWHM-OBYCQNJPSA-N triamcinolone Chemical compound O=C1C=C[C@]2(C)[C@@]3(F)[C@@H](O)C[C@](C)([C@@]([C@H](O)C4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 GFNANZIMVAIWHM-OBYCQNJPSA-N 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012137 tryptone Substances 0.000 description 1
- 108010038745 tryptophylglycine Proteins 0.000 description 1
- 108010051110 tyrosyl-lysine Proteins 0.000 description 1
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 description 1
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 229960002004 valdecoxib Drugs 0.000 description 1
- LNPDTQAFDNKSHK-UHFFFAOYSA-N valdecoxib Chemical compound CC=1ON=C(C=2C=CC=CC=2)C=1C1=CC=C(S(N)(=O)=O)C=C1 LNPDTQAFDNKSHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
- C12N9/64—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue
- C12N9/6421—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue from mammals
- C12N9/6424—Serine endopeptidases (3.4.21)
- C12N9/6456—Plasminogen activators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
- A61K38/44—Oxidoreductases (1)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
- A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
- A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/06—Antigout agents, e.g. antihyperuricemic or uricosuric agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
- C12N9/0012—Oxidoreductases (1.) acting on nitrogen containing compounds as donors (1.4, 1.5, 1.6, 1.7)
- C12N9/0044—Oxidoreductases (1.) acting on nitrogen containing compounds as donors (1.4, 1.5, 1.6, 1.7) acting on other nitrogen compounds as donors (1.7)
- C12N9/0046—Oxidoreductases (1.) acting on nitrogen containing compounds as donors (1.4, 1.5, 1.6, 1.7) acting on other nitrogen compounds as donors (1.7) with oxygen as acceptor (1.7.3)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y107/00—Oxidoreductases acting on other nitrogenous compounds as donors (1.7)
- C12Y107/03—Oxidoreductases acting on other nitrogenous compounds as donors (1.7) with oxygen as acceptor (1.7.3)
- C12Y107/03003—Factor-independent urate hydroxylase (1.7.3.3), i.e. uricase
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Physical Education & Sports Medicine (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
- Hematology (AREA)
- Obesity (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Description
Opis wynalazku
Niniejsze zgłoszenie zastrzega pierwszeństwo i odnosi się do tymczasowego zgłoszenia USA, nr seryjny 60/670,541, złożonego 11 kwietnia, 2005, którego ujawnienie włącza się niniejszym jako odnośnik literaturowy.
Niniejszy wynalazek dotyczy modyfikowanych genetycznie białek o zdolności rozkładu kwasu moczowego. Bardziej konkretnie, wynalazek dotyczy wyizolowanej urykazy, zawierającej ją kompozycji farmaceutycznej, kodującego ją wyizolowanego kwasu nukleinowego, zawierającego go wektora i obejmującej ten wektor komórki gospodarza oraz sposobów wytwarzania urykazy oraz zawierającej urykazę kompozycji farmaceutycznej.
Terminy oksydaza moczanowa i urykaza stosuje się w niniejszym opisie wymiennie. Oksydazy moczanowe (urykazy E.C. 1.7.3.3) są enzymami, które katalizują utlenianie kwasu moczowego do bardziej rozpuszczalnego produktu, alantoiny, metabolitu puryny, który jest łatwiej wydalany. Organizmy ludzkie nie wytwarzają enzymatycznie aktywnej urykazy na skutek kilku mutacji w genie urykazy, nabytych w trakcie ewolucji wyższych naczelnych. Wu, X, i wsp., (1992) J Mol Evol 34:78-84, włączone tu w całości jako odniesienie. W konsekwencji, u wrażliwych osobników, nadmierne stężenia kwasu moczowego we krwi (hiperurykemia) mogą prowadzić do bolesnego zapalenia stawów (dna), zniekształcających złogów moczanu (guzki dnawe) i niewydolności nerek. U niektórych dotkniętych osobników, dostępne leki, takie jak allopurinol (inhibitor syntezy kwasu moczowego), dają ograniczone do czasu leczenia efekty uboczne i nie łagodzą odpowiednio tych stanów. Hande, KR, i wsp., (1984) Am J Med 76:47-56; Fam, AG, (1990) Bailliere's Clin Rheumatol 4:177-192, każdy włączony tu w całości jako odniesienie. Zastrzyki z urykazy mogą zmniejszyć hiperurykemię i hiperurykozurię co najmniej przejściowo. Ponieważ urykaza jest dla ludzi białkiem obcym, nawet pierwsze wstrzyknięcie niezmodyfikowanego białka z Aspergillus flavus indukuje reakcje anafilaktyczne u kilku procent leczonych pacjentów (Pui, C-H, i wsp., (1997) Leukemia 11:1813-1816, włączony niniejszym w całości jako odnośnik literaturowy) i odpowiedzi immunologiczne ograniczają jej przydatność do długotrwałego lub przerywanego leczenia. Donadio, D, i wsp., (1981) Nouv Presse Med 10:711-712; Leaustic, M, i wsp., (1983) Rev Rhum Mal Osteoartic 50:553-554, każda publikacja włączona niniejszym jako odnośnik literaturowy.
Celem niniejszego wynalazku jest dostarczenie nowych skróconych zmutowanych rekombinowanych białek o zwiększonej stabilności strukturalnej.
Niniejszy wynalazek dostarcza zmutowanej rekombinowanej urykazy z grupy składającej się z urykazy składającej się z sekwencji aminokwasowej przedstawionej na SEK NR ID: 7, urykazy składającej się z sekwencji aminokwasowej przedstawionej na SEK NR ID: 8, urykazy składającej się z sekwencji aminokwasowej przedstawionej na SEK NR ID: 12 i urykazy składającej się z sekwencji aminokwasowej przedstawionej na SEK NR ID: 13.
Innym celem niniejszego wynalazku jest opracowanie sposobów metabolizowania kwasu moczowego obejmujących nowe rekombinowane białko urykazy mające aktywność rozkładania kwasu moczowego. Aktywność rozkładania kwasu moczowego jest tu stosowana w znaczeniu enzymatycznego przekształcania kwasu moczowego do alantoiny.
Zgodnie z korzystną postacią wykonania wynalazku urykaza według wynalazku jest urykazą PEG-ylowaną.
W jednym z praktycznych wykonań urykaza obejmuje sekwencję aminokwasową od pozycji 8 do pozycji 287 przedstawioną na SEK NR ID: 7 lub SEK NR ID: 12. Niniejszy opis ujawnia również urykazy obejmujące sekwencję aminokwasową przedstawioną na SEK NR ID: 8 lub SEK NR ID: 13. W jednym z kolejnych wykonań urykaza obejmuje aminokońcowy aminokwas, którym jest alanina, glicyna, prolina, seryna lub treonina. W jeszcze innym konkretnym wykonaniu aminokońcowym aminokwasem jest metionina.
Kolejnym przedmiotem wynalazku jest wyizolowany kwas nukleinowy obejmujący sekwencję kwasu nukleinowego, która koduje urykazę według wynalazku. Korzystnie, sekwencja kwasu nukleinowego jest połączona funkcjonalnie z heterologicznym promotorem, szczególnie korzystnie promotorem osmB.
Wynalazek dostarcza również wektor zbudowany z kwasu nukleinowego, który obejmuje kwas nukleinowy kodujący urykazę według wynalazku.
Kolejnym przedmiotem wynalazku jest komórka gospodarza obejmująca wektor według wynalazku.
PL 215 157 B1
Wynalazek dotyczy także sposobu wytwarzania urykazy, obejmującego etap hodowania komórki gospodarza według wynalazku w warunkach, w których sekwencja kwasu nukleinowego ulega ekspresji w komórce gospodarza, oraz etap izolowania wyrażonej urykazy.
Kolejnym przedmiotem wynalazku jest kompozycja farmaceutyczna zawierająca:
(a) wyizolowaną urykazę obejmującą sekwencję aminokwasową SEK. NR ID. 7 lub sekwencję aminokwasową SEK. NR ID. 8; oraz (b) dopuszczalny farmaceutycznie nośnik;
przy czym urykaza jest skoniugowana z polimerem.
W korzystnym wykonaniu niniejszego wynalazku polimer jest wybrany z grupy składającej się z glikolu polietylenowego, dekstranu, glikolu polipropylenowego, hydroksypropylometylocelulozy, karboksymetylocelulozy, poliwinylopirolidonu, alkoholu poliwinylowego, szczególnie korzystnie kompozycja obejmuje od 2 do 12 cząsteczek glikolu polietylenowego na każdą podjednostkę urykazy.
W korzystnej postaci wykonania kompozycja farmaceutyczna według wynalazku obejmuje od 3 do 10 cząsteczek glikolu polietylenowego na każdą podjednostkę urykazy.
W innej korzystnej postaci wykonania w kompozycji farmaceutycznej według wynalazku każda cząsteczka glikolu polietylenowego ma ciężar cząsteczkowy w zakresie od 1 kD do 100 kD, korzystniej każda cząsteczka glikolu polietylenowego ma ciężar cząsteczkowy w zakresie od 1 kD do 50 kD, szczególnie korzystnie każda cząsteczka glikolu polietylenowego ma ciężar cząsteczkowy w zakresie od 5 kD do 20 kD, a najkorzystniej - każda cząsteczka glikolu polietylenowego ma ciężar cząsteczkowy wynoszący około 10 kD.
Przedmiotem niniejszego wynalazku jest również sposób wytwarzania kompozycji farmaceutycznej do zmniejszania poziomów kwasu moczowego w płynach biologicznych u wymagającego tego osobnika obejmujący:
(a) wytwarzanie koniugatu urykazy o sekwencji aminokwasowej SEK. NR ID. 7 lub o sekwencji aminokwasowej SEK. NR ID. 8 z polimerem; oraz (b) dodawanie koniugatu urykazy do dopuszczalnego farmaceutycznie nośnika.
W korzystnej postaci wykonania sposobu według wynalazku płynem biologicznym jest krew.
W innej korzystnej realizacji sposobu polimer jest wybrany z grupy składającej się z glikolu polietylenowego, dekstranu, glikolu polipropylenowego, hydroksypropylometylocelulozy, karboksymetylocelulozy, poliwinylopirolidonu, alkoholu poliwinylowego.
Niniejszy wynalazek opisano poniżej bardzo szczegółowo i zilustrowano na Rysunku, na którym na Figurze 1 przedstawiona jest struktura plazmidu pOUR-P^N-ks-1. Numery obok miejsc restrykcyjnych wskazują na pozycję nukleotydową względem miejsca HaeII, oznaczonego jako 1. Miejsca restrykcyjne, które zostały utracone w czasie klonowania są zaznaczone nawiasami.
Na Figurze 2 przedstawiono DNA i wydedukowaną sekwencję aminokwasową urykazy Pig-KS-ΔΝ (odpowiednio, SEK NR ID: 9 i SEK NR ID: 7). Numeracja aminokwasów na Fig. 2 odnosi się do pełnej sekwencji urykazy świni. Po reszcie inicjacyjnej metioniny, treonina zastępuje kwas asparag inowy 7 w sekwencji urykazy świni. Wskazane są miejsca restrykcyjne, które są stosowane w różnych etapach subklonowania. Nie podlegająca translacji sekwencja 3' jest zaznaczona małymi literami. Kodon stop dla translacji jest zaznaczony gwiazdką.
Na Figurze 3 przedstawiono wzajemne dopasowanie wydedukowanych sekwencji aminokwasowych różnych rekombinowanych sekwencji urykazy, świni (SEK NR ID: 11), PBC-ANC (SEK NR ID: 12) i Pig-KS-ΔΝ (SEK NR ID: 7). Gwiazdki wskazują pozycje, w których występują różnice aminokwasowe w Pig-KS-ΔΝ w porównaniu z opublikowaną sekwencją urykazy świni; kółka wskazują pozycje, w których występują różnice aminokwasowe w Pig-KS-ΔΝ w porównaniu do PBC-ANC. Linie przerywane wskazują delecję aminokwasową.
Na Figurze 4 przedstawiono SDS-PAGE dla urykazy świni i wysoce oczyszczonych wariantów urykazy wytwarzanych według przykładów 1-3. Data wytworzenia (miesiąc/rok) i odpowiedni numer ścieżki dla każdej próbki jest wskazany w legendzie poniżej. Na osi Y są zaznaczone masy cząsteczkowe markerów, a na górze rysunku zaznaczone są numery ścieżek. Ścieżki są następujące: Ścieżka 1 markery mas cząsteczkowego; Ścieżka 2 - Pig-KS-ΔΝ (7/98); Ścieżka 3 - Pig (9/98); Ścieżka 4 - Pig KS (6/99); Ścieżka 5 - Pig KS (6/99); Ścieżka 6 - Pig-ΔΝ (6/99); Ścieżka 7 - Pig KS-ΔΝ (7/99); Ścieżka 8 Pig KS-ΔΝ (8/99).
Na Figurze 5 przedstawiono profile farmakokinetyczne PEGylowanej (9x10 kD) urykazy Pig-KS-ΔΝ u szczurów po wstrzyknięciu IM (domięśniowym), SC (podskórnym) i IV (dożylnym), określane przez śledzenie aktywności enzymatycznej w próbkach krwi. Aktywność enzymatyczną urykazy
PL 215 157 B1 w próbkach osocza, które zbiera się we wskazanych punktach czasowych, określa się stosując test kolorymetryczny. Wartości aktywności (mAU = jednostki miliabsorbancji) reprezentują szybkość reakcji enzymatycznej na 1 μΐ próbki osocza. Biodostępność (ilość leku osiągająca układ krążenia w stosunku do zastrzyku IV) wstrzykniętej urykazy obliczono z obszaru pod krzywą na wykresie.
Na Figurze 6 przedstawiono profile farmakokinetyczne PEGylowanej (9x10 kD) urykazy Pig-KSΔΝ u królików po wstrzyknięciu IM (domięśniowym), SC (podskórnym) i IV (dożylnym), określane przez śledzenie aktywności enzymatycznej w próbkach krwi. Aktywność enzymatyczną urykazy w próbkach osocza, które zbiera się we wskazanych punktach czasowych, określa się stosując test kolorymetryczny. Wartości aktywności (mAU = jednostki miliabsorbancji) reprezentują szybkość reakcji enzymatycznej na 1 μΐ próbki osocza. Biodostępność (ilość leku osiągająca układ krążenia w stosunku do zastrzyku IV) wstrzykniętej urykazy obliczono z obszaru pod krzywą na wykresie.
Na Figurze 7 przedstawiono profile farmakokinetyczne PEGylowanej (9x10 kD) urykazy Pig-KS-ΔΝ u psów po wstrzyknięciu IM (domięśniowym), SC (podskórnym) i IV (dożylnym), określone przez śledzenie aktywności enzymatycznej w próbkach krwi. Aktywność enzymatyczną urykazy w próbkach osocza, które zbiera się we wskazanych punktach czasowych, określa się stosując test kolorymetryczny. Wartości aktywności (mAU = jednostki miliabsorbancji) reprezentują szybkość reakcji enzymatycznej na 1 μΐ próbki osocza. Biodostępność (ilość leku osiągająca układ krążenia w stosunku do zastrzyku IV) wstrzykniętej urykazy obliczono z obszaru pod krzywą na wykresie.
na Figurze 8 przedstawiono profile farmakokinetyczne PEGylowanej (9x10 kD) urykazy Pig-KS-ΔΝ u świń po wstrzyknięciu IM (domięśniowym), SC (podskórnym) i IV (dożylnym), określone przez śledzenie aktywności enzymatycznej w próbkach krwi. Aktywność enzymatyczną urykazy w próbkach osocza, które zbiera się we wskazanych punktach czasowych, określa się stosując test kolorymetryczny. Wartości aktywności (mAU = jednostki miliabsorbancji) reprezentują szybkość reakcji enzymatycznej na 1 μl próbki osocza. Biodostępność (ilość leku osiągająca układ krążenia w stosunku do zastrzyku IV) wstrzykniętej urykazy obliczono z obszaru pod krzywą na wykresie.
Szczegółowy opis wynalazku
Wcześniejsze badania pokazały, że wówczas, gdy uzyskuje się znaczące zmniejszenie immunogenności i/lub antygenowości urykazy przez PEGylację, wiąże się to nieodmiennie z istotną utratą zdolności rozkładania kwasu moczowego. Bezpieczeństwo, wygoda i relacja pomiędzy kosztami a skutecznością biofarmaceutyków, na wszystko to niekorzystny wpływ ma zmniejszenie ich mocy i w rezultacie potrzeba zwiększania podawanej dawki. A zatem, w dziedzinie istnieje zapotrzebowanie na bezpieczne i skuteczne alternatywne sposoby zmniejszania podniesionych poziomów kwasu moczowego w płynach ciała, włączając w to krew. Niniejszy wynalazek dotyczy zmutowanej rekombinowanej urykazy zawierającej sekwencję aminokwasową przedstawioną na SEK NR ID: 7, SEK NR ID: 8, SEK NR ID: 12 lub SEK NR ID: 13.
Stosowane w niniejszym opisie określenie „urykaza obejmuje poszczególne podjednostki białka, jak również, o ile nie zaznaczono inaczej, tetrametr.
W konkretnym wykonaniu, urykaza obejmuje amino-końcową metioninę. Metionina ta może zostać usunięta przez potranslacyjną modyfikację. W pewnych wykonaniach, amino-końcowa metionina może zostać usunięta po wytworzeniu urykazy. W konkretnym wykonaniu metioninę usuwa się z zastosowaniem endogennej bakteryjnej aminopeptydazy. Przedostatni aminokwas może być tym aminokwasem, który umożliwia usunięcie N-końcowej metioniny przez bakteryjną aminopeptydazę metioninową (MAP). Aminokwasami umożliwiającymi najbardziej kompletne usunięcie N-końcowej metioniny są alanina, glicyna, prolina, seryna i treonina. W konkretnym wykonaniu urykaza zawiera dwa amino-końcowe aminokwasy, przy czym dwa amino-końcowe aminokwasy to metionina, po której następuje aminokwas wybrany z grupy składającej się z alaniny, glicyny, proliny, seryny i treoniny.
W pewnych konkretnych wykonaniach urykaza jest wyizolowana i oczyszczona.
W niniejszym opisie ujawniono sposób wytwarzania sekwencji kwasu nukleinowego kodującego urykazę, obejmujący modyfikację sekwencji kwasu nukleinowego kodującego urykazę technikami PCR (od ang. Polymerase Chain Reaction, reakcja łańcuchowa polimerazy). Dla specjalisty w dziedzinie będzie oczywistym, że pożądaną sekwencję kwasu nukleinowego otrzymuje się przez PCR przy zastosowaniu syntetycznych starterów oligonukleotydowych, które są komplementarne do regionów docelowego DNA (jeden dla każdej nici), który ma podlegać amplifikacji. Startery dodaje się do docelowego DNA (nie musi być czysty) w obecności nadmiaru deoksynukleotydów i polimerazy Taq, termostabilnej polimerazy DNA. W serii (typowo 30) cykli temperaturowych, docelowy DNA jest wielokrotnie: denaturowany (około 90°C), łączony ze starterami (typowo w 50-60°C) i nić potomna jest wyPL 215 157 B1 dłużana ze starterów (72°C). Jako że nici potomne same działają jako matryce do kolejnych cykli, fragmenty DNA pasujące do obydwu starterów są powielane wykładniczo, a nie liniowo.
Jednym z przedmiotów niniejszego wynalazku jest sposób wytwarzania zmutowanej rekombinowanej urykazy, obejmujący transfekowanie komórki gospodarza wektorem, która to komórka gospodarza wyraża urykazę, izolowanie zmutowanej rekombinowanej urykazy z komórki gospodarza, izolowanie oczyszczonej zmutowanej rekombinowanej urykazy, na przykład przez zastosowanie technik chromatograficznych i oczyszczanie zmutowanej rekombinowanej urykazy. Przykładowo, urykazę można wywarzać zgodnie ze sposobami opisanymi w publikacji międzynarodowego zgłoszenia patentowego nr WO 00/08196 i zgłoszenia USA nr 60/095,489, włączonymi niniejszym w całości jako odnośniki literaturowe.
W korzystnym wykonaniu komórkę gospodarza traktuje się tak, aby wywołać ekspresję zmutowanej rekombinowanej urykazy. Dla specjalisty w dziedzinie będzie oczywistym, że transfekcję komórek wektorem zwykle uzyskuje się stosując DNA wytrącony jonami wapniowymi, jakkolwiek można zastosować rozmaite inne metody (np. elektroporację).
Urykazę można wyizolować i/lub oczyścić stosując dowolne metody znane specjalistom w dziedzinie. Wyrażane polipeptydy według wynalazku izoluje się zazwyczaj w postaci zasadniczo czystej. Pożądane jest, jeżeli polipeptydy izoluje się do czystości wynoszącej co najmniej 80% wagowo, w szczególności co najmniej 95% wagowo, a zwłaszcza do czystości co najmniej 99%. Zasadniczo, taki stopień czystości można uzyskać na przykład standardowymi technikami frakcjonowania siarczanem amonu, elektroforezy SDS-PAGE i chromatografii powinowactwa. Korzystne jest, jeżeli urykazę izoluje się z zastosowaniem kationowego czynnika powierzchniowo czynnego na przykład chlorku cetylopirydynowego (CPC) zgodnie z metodą opisaną w rozpatrywanym jednocześnie zgłoszeniu patentowym USA, złożonym 11 kwietnia, 2005 o numerze zgłoszenia 60/670,520 i numerze nadanym przez rzecznika 103864.146644, zatytułowanym „Oczyszczanie białek przy zastosowaniu kationowych czynników powierzchniowo czynnych, włączonym tu w całości jako odniesienie.
W jednym z wykonań wynalazku, wektor jest pod kontrolą promotora wrażliwego na ciśnienie osmotyczne. Promotorem jest region DNA, do którego wiąże się polimeraza RNA przed zapoczątkowaniem transkrypcji DNA do RNA. Promotor wrażliwy na ciśnienie osmotyczne rozpoczyna transkrypcję na skutek zwiększonego ciśnienia osmotycznego wyczuwanego przez komórkę.
Urykaza według wynalazku obejmuje urykazę, która jest połączona z polimerem, na przykład urykazę połączoną z glikolem polietylenowym, tj. urykazę PEGylowaną.
W innym wykonaniu wynalazku, dostarczona jest kompozycja farmaceutyczna zawierająca urykazę. W jednym z wykonań kompozycją jest roztwór urykazy. W korzystnym wykonaniu wynalazku roztwór jest jałowy i odpowiedni do zastrzyku. W jednym z wykonań taka kompozycja zawiera urykazę jako roztwór w soli fizjologicznej buforowanej fosforanem. W jednym z przykładowych wykonań kompozycja jest dostarczona w fiolce, ewentualnie mająca gumowe zamknięcie do zastrzyków. W konkretnych wykonaniach, kompozycja zawiera urykazę w roztworze w stężeniu od 2 do 16 miligramów urykazy na mililitr roztworu, od 4 do 12 miligramów na mililitr lub od 6 do 10 miligramów na mililitr. W korzystnym wykonaniu kompozycja zawiera urykazę w stężeniu 8 miligramów na mililitr. Korzystne jest, jeżeli masę urykazy mierzy się w odniesieniu do masy białka.
Sposoby skutecznego podawania kompozycji według wynalazku mogą być określone przez specjalistę w tej dziedzinie. Przydatne wskaźniki do badania skuteczności danego trybu są znane specjalistom w tej dziedzinie. Przykłady takich wskaźników obejmują normalizację albo obniżenie poziomów kwasu moczowego w osoczu (PUA, od ang. plasma uric acid) i obniżenie lub utrzymywanie się PUA do 6,8 mg/dl lub mniej, korzystnie 6 mg/dl lub mniej. W korzystnym wykonaniu osobnik leczony kompozycją według wynalazku ma PUA wynoszący 6 mg/ml lub mniej przez co najmniej 70%, co najmniej 80% lub co najmniej 90% całego okresu leczenia. Przykładowo, korzystne jest, jeżeli osobnik w trakcie 24 tygodni leczenia ma PUA wynoszący 6 mg/ml lub mniej przez co najmniej 80% 24-tygodniowego okresu leczenia tj. co najmniej przez czas równy ilości czasu w 134,4 dniach (24 tygodnie x 7 dni/tydzień x 0,8 = 134,4 dni).
W konkretnym wykonaniu, 0,5 do 24 mg urykazy w roztworze podaje się raz na 2 do 4 tygodni. Urykazę można podawać dowolną z dróg znanych specjaliście w dziedzinie, na przykład dożylnie, domięśniowo lub podskórnie. Przy podawaniu dożylnym korzystne jest podawanie 0,5 mg do 12 mg urykazy. Przy podawaniu podskórnym korzystne jest podawanie 4 do 24 mg urykazy. W korzystnym wykonaniu urykazę podaje się przez wlew dożylny przez okres 30 do 240 minut. W jednym z wykonań, 8 mg urykazy podaje się co dwa tygodnie. W konkretnym wykonaniu, wlew można przeprowadzić
PL 215 157 B1 przy użyciu 100 do 500 ml roztworu soli fizjologicznej. W jednym z wykonań 8 mg urykazy w roztworze podaje się przez okres 120 minut co dwa tygodnie albo co cztery tygodnie. Jest pożądanym, aby urykazę rozpuszczać w 250 ml roztworu soli fizjologicznej do wlewu. W pewnych wykonaniach, podawanie urykazy następuje w okresie leczenia trwającym 3 miesiące, 6 miesięcy, 8 miesięcy lub 12 miesięcy. W innych wykonaniach okresem leczenia jest 12 tygodni, 24 tygodnie, 36 tygodni lub 48 tygodni. W konkretnym wykonaniu, okres leczenia obejmuje dłuższy okres czasu np. 2 lata lub dłużej, aż do końca życia leczonego osobnika. Dodatkowo, można zastosować wielokrotne okresy leczenia oddzielone od siebie czasem bez leczenia, np. 6 miesięcy leczenia, po którym następują 3 miesiące bez leczenia, a następnie 6 dodatkowych miesięcy leczenia itd.
W niektórych wykonaniach związki przeciwzapalne można podawać profilaktycznie dla wyeliminowania albo zmniejszenia występowania reakcji na wlew na skutek podawania urykazy. W jednym z wykonań wraz z kompozycją podaje się również co najmniej jeden kortykosteroid, co najmniej jedną antyhistaminę, co najmniej jeden NSAID albo ich kombinację. Przydatne kortykosteroidy obejmują betametazon, budesonid, kortyzon, deksametazon, hydrokortyzon, metyloprednizolon, prednizolon, prednizon i triamcynolon. Przydatne NSAID obejmują ibuprofen, indometacynę, naproksen, aspirynę, acetominofen, celekoksib i waldekoksib. Przydatne antyhistaminy obejmują azatadynę, bromofeniraminę, cetyryzynę, chlorfeniraminę, klemastin, cyproheptadynę, desloratadynę, dekschlorfeniraminę, dimenhydrynat, difenhydraminę, doksylaminę, feksofenadynę, hydroksyzynę, Ioratadynę i fenindaminę.
W jednym wykonaniu, antyhistaminą jest feksofenadyna, NSAIDem jest acetaminofen, a kortykosteroidem jest hydrokortyzon i/lub prednizolon. Korzystne jest, jeżeli kombinację wszystkich trzech (niekoniecznie jednocześnie) podaje się przed wlewem roztworu urykazy. W korzystnym wykonaniu NSAID i antyhistaminę podaje się doustnie 1 do 4 godzin przed wlewem urykazy. Odpowiednia dawka feksofenadyny obejmuje około 30 do około 180 mg, około 40 do około 150 mg, około 50 do około 120 mg, około 60 do około 90 mg, około 60 mg, korzystnie, 60 mg. Odpowiednia dawka acetaminofenu obejmuje około 500 do około 1500 mg, około 700 do około 1200 mg, około 800 do około 1100 mg, około 1000 mg, korzystnie 1000 mg. Odpowiednia dawka hydrokortyzonu obejmuje około 100 do około 500 mg, około 150 do około 300 mg, około 200 mg, korzystnie 200 mg. W jednym z wykonań, antyhistaminą nie jest difenhydramina. W innym wykonaniu NSAIDem nie jest acetaminofen. W korzystnym wykonaniu 60 mg feksofenadyny podaje się doustnie noc przed wlewem urykazy; 60 mg feksofenadyny i 1000 mg acetaminofenu podaje się doustnie następnego dnia rano, a na koniec, 200 mg hydrokortyzonu podaje się tuż przed wlewem roztworu urykazy. W jednym z wykonań, prednizon podaje się w przeddzień, korzystnie wieczorem przed podaniem urykazy. Odpowiednia dawka prednizonu obejmuje 5 do 50 mg, korzystnie 20 mg. W niektórych wykonaniach te działania profilaktyczne stosuje się wobec osobników otrzymujących albo mających otrzymywać peptydy terapeutyczne inne niż urykaza, gdzie inne terapeutyczne peptydy są PEGylowane lub niePEGylowane.
W pewnym wykonaniu wynalazku kompozycja farmaceutyczna zawiera urykazę połączoną z polimerem i zmodyfikowana urykaza zachowuje aktywność rozkładania kwasu moczowego. W korzystnym wykonaniu urykazą jest urykaza PEGylowana.
W pewnym wykonaniu wynalazku kompozycja farmaceutyczna zawiera urykazę, która została zmodyfikowana przez połączenie z polimerem i zmodyfikowana urykaza zachowuje aktywność rozkładania kwasu moczowego. W konkretnym wykonaniu koniugaty polimer-urykaza są wytwarzane jak opisano w międzynarodowej publikacji patentowej nr WO 01/59078 i zgłoszeniu USA nr 09/501730, włączonych tu w całości jako odniesienie.
W jednym z wykonań wynalazku, polimer jest wybrany z grupy składającej się z glikolu polietylenowego, dekstranu, glikolu polipropylenowego, hydroksypropylometylocelulozy, karboksymetylocelulozy, poliwinylopirolidonu i alkoholu poliwinylowego. W korzystnym wykonaniu polimerem jest glikol polietylenowy, a urykazą jest urykaza PEGylowana.
W praktycznych korzystnych wykonaniach wynalazku kompozycja zawiera 2-12 cząsteczek polimeru na każdą podjednostkę urykazy, korzystnie 3 do 10 cząsteczek polimeru na podjednostkę. Korzystnie, w pewnym wykonaniu wynalazku każda cząsteczka polimeru ma masę cząsteczkową między około 1 kD i około 100 kD.
W innym korzystnym wykonaniu wynalazku każda cząsteczka polimeru ma masę cząsteczkową między około 1 kD i około 50 kD. W korzystnym wykonaniu wynalazku każda cząsteczka polimeru ma masę cząsteczkową między około 5 kD i około 20 kD, około 8 kD a około 15 kD, około 10 kD a 12 kD, korzystnie, około 10 kD. W korzystnym wykonaniu każda cząsteczka polimeru ma masę cząsteczkową
PL 215 157 B1 między około 5 kD i około 20 kD. W szczególnie korzystnym wykonaniu każda cząsteczka polimeru ma masę cząsteczkową 10 kD.
W pewnym wykonaniu wynalazku kompozycja jest odpowiednia do powtarzanego podawania kompozycji.
Wynalazek ten dostarcza sposobów metabolizowania kwasu moczowego przez urykazę.
Wynalazek niniejszy dotyczy również zastosowania kompozycji urykazy do zmniejszania poziomów kwasu moczowego w płynie biologicznym.
W pewnym wykonaniu wynalazku kompozycję urykazy stosuje się do zmniejszania poziomów kwasu moczowego w płynie biologicznym obejmującym krew.
Dostarczone są również nowe cząsteczki kwasu nukleinowego kodujące urykazę według wynalazku. Manipulacje, które prowadzą do ich wytwarzania są dobrze znane specjaliście w dziedzinie.
Przykładowo, sekwencje kwasów nukleinowych urykazy można modyfikować przy zastosowaniu licznych strategii znanych w dziedzinie (Maniatis, T., 1990, Molecular Cloning, Ά Laboratory Manual, wyd. 2., Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, N.Y.). Sekwencje mogą być przecinane w odpowiednich miejscach przez endonukleazę(y) restrykcyjną(e), a następnie, jeśli to pożądane, poddane dalszej modyfikacji enzymatycznej, izolowane i poddane ligacji in vitro. Przy wytwarzaniu genu kodującego urykazę, powinno się upewnić, że zmodyfikowany gen zachowuje odpowiednią ramkę odczytu dla translacji, nie przerwaną przez sygnały stop dla translacji.
Sekwencję nukleotydową kodującą białko urykazy można wstawić do odpowiedniego wektora ekspresyjnego, tj. wektora, który zawiera niezbędne elementy do transkrypcji i translacji wstawionej sekwencji kodującej białko. Obejmuje to między innymi ssacze systemy komórkowe zakażane wirusem (np. wirusem krowianki, adenowirusem, itd.), systemy komórek owadów zakażanych wirusem (np. bakulowirusem), mikroorganizmy, takie jak drożdże zawierające wektory drożdżowe albo bakterie transformowane DNA bakteriofagowym, DNA plazmidowym albo DNA kosmidowym. Elementy ekspresyjne tych wektorów mogą różnić się siłą i specyficznościami. W zależności od zastosowanego systemu gospodarz-wektor, można zastosować dowolny z wielu odpowiednich elementów transkrypcyjnych i translacyjnych.
Dla skonstruowania wektorów ekspresyjnych zawierających chimerowy gen składający się z odpowiednich sygnałów kontrolnych transkrypcyjnych/translacyjnych i sekwencji kodujących białko można zastosować dowolną ze znanych metod wstawiania fragmentów DNA do wektora. Metody te mogą obejmować techniki rekombinowania DNA in vitro i techniki syntetyczne oraz rekombinację in vivo (rekombinację genetyczną). Ekspresję sekwencji kwasu nukleinowego kodującego urykazę można regulować przez drugą sekwencję kwasu nukleinowego, tak że białko urykazy jest wyrażane w gospodarzu transformowanym zrekombinowaną cząsteczką DNA. Przykładowo, ekspresja urykazy może być pod kontrolą dowolnego elementu promotora/wzmacniacza znanych w tej dziedzinie. Promotory, które można zastosować do kontrolowania ekspresji urykazy obejmują między innymi region wczesnego promotora SV40 (Bernoist i Chambon, 1981, Nature 290:304-310), promotor zawarty w długich końcowych powtórzeniach 3' wirusa mięsaka Rousa (Yamamoto, i wsp., 1980, Cell 22:787-797), promotor kinazy tymidynowej opryszczki (Wagner i wsp., 1981, Proc. Natl. Acad. Sci . U.S.A. 78:144-1445), sekwencje regulacyjne genu metalotioneiny (Brinster i wsp., 1982, Nature 296:39-42); ekspresyjne wektory prokariotyczne, takie jak promotor β-laktamazy (Villa-Kamaroff, i wsp., 1978, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 75:3727-3731), promotor tac (DeBoer, i wsp., 1983, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 80:21-25) oraz promotor osmB. W konkretnych wykonaniach kwasy nukleinowe zawierają sekwencję kwasu nukleinowego kodującą urykazę połączoną funkcjonalnie z promotorem heterologicznym.
Po wytworzeniu i wyizolowaniu konkretnej cząsteczki DNA zawierającej kodującą sekwencję kwasu nukleinowego, można do jej namnażania zastosować kilka znanych w tej dziedzinie metod. Po opracowaniu odpowiedniego systemu gospodarza i warunków wzrostu, zrekombinowane wektory ekspresyjne można namnażać i uzyskiwać w dużych ilościach. Jak wcześniej wyjaśniono, wektory ekspresyjne, które można zastosować obejmują między innymi następujące wektory albo ich pochodne: ludzkie albo zwierzęce wirusy, aby wymienić kilka takie jak wirus krowianki lub adenowirus, wirusy owadów, takie jak bakulowirus, wektory drożdżowe, wektory bakteriofagowe (np. lambda) oraz wektory DNA plazmidowe i kosmidowe.
Dodatkowo, można wybrać szczep komórek gospodarza, który moduluje ekspresję wstawionych sekwencji albo modyfikuje i dokonuje obróbki produktu genu w specyficzny, pożądany sposób. Ekspresję z określonych promotorów można zwiększyć w obecności pewnych induktorów, a zatem
PL 215 157 B1 ekspresja poddanej zabiegom inżynierii genetycznej urykazy może być kontrolowana. Ponadto, różne szczepy gospodarzy mają właściwości i specyficzne mechanizmy translacyjnej i potranslacyjnej obróbki i modyfikacji (glikozylacja, cięcie) białek. Można wybrać odpowiednie linie komórkowe lub systemy gospodarzy dla zapewnienia pożądanej modyfikacji i obróbki wyrażonego obcego białka. Różne systemy ekspresyjne wektor/gospodarz mogą wpływać w różnym stopniu na reakcje obróbki, takie jak cięcia proteolityczne.
W konkretnych wykonaniach wynalazku ekspresję urykazy w E. coli przeprowadza się korzystnie przy użyciu wektorów, które zawierają promotor osmB.
P r z y k ł a d y
P r z y k ł a d 1. Konstrukcja genu i ekspresja plazmidu dla ekspresji urykazy
Rekombinowana świńska urykaza (oksydaza moczanowa), Pig-KS-ΔΝ (białko urykazy świni ze skróconym końcem aminowym, z zastąpieniem aminokwasów 291 i 301, odpowiednio, lizyną i seryną) wyrażono w szczepie E. coli K-12 W3110 F-. Skonstruowano serię plazmidów, z uzyskaniem na koniec pOUR-P-AN-ks-1, który, po transformacji komórek gospodarza E. coli był zdolny do kierowania wydajną ekspresją urykazy.
Izolacja i subklonowanie cDNA urykazy z wątroby świni i pawiana cDNA urykaz wytworzono z wątrób świń i pawianów przez izolację i klonowanie odpowiedniego RNA. Całkowity komórkowy RNA ekstrahowano z wątrób świń i pawianów (Erlich, H. A. (1989). PCR Technology; Principles and Application for DNA Amplification; Sambrook, J., i wsp. (1989). Molecular
Cloning: A Laboratory Manual, wydanie 2; Ausubel, F. M. i wsp. (1998). Current protocols in molecular
Biology), a następnie przepisywano przy zastosowaniu zestawu do syntezy pierwszej nici cDNA (First-Strand cDNA Synthesis Kit, Pharmacia Biotech). Amplifikację PCR przeprowadzono przy użyciu polimerazy DNA Taq (Gibco BRL, Life Technologies).
Syntetyczne startery oligonukleotydowe stosowane do amplifikacji PCR oksydaz moczanowych (urykaz) świni i pawiana są pokazane w Tabeli 1.
T a b e l a 1. Startery do amplifikacji przez PCR cDNA dla urykazy
Urykaza z wątroby świni:
sensowny 5' gcgcgaattccATGGCTCATTACCGTAATGACTACA 3' (SEK NR ID: 1) antysensowny 5' gcgctctagaagcttccatggTCACAGCCTTGAAGTCAGC
3' (SEK NR ID: 2)
Urykaza z wątroby pawiana (D3H): sensowny 5' gcgcgaattccATGGCCCACTACCATAACAACTAT 3' (SEK NR ID: 3) antysensowny 5' gcgcccatggtctagaTCACAGTCTTGAAGACAACTTCCT 3' (SEK NR ID: 4)
Sekwencjami enzymów restrykcyjnych wprowadzonymi na końcach starterów i zapisanymi m ałymi literami w Tabeli 1, były sensowne EcoRI i NcoI (świnia i pawian) i antysensowne NcoI, HindIII i XbaI (świnia), XbaI i NcoI (pawian). W starterze sensownym dla pawiana, trzeci kodon GAC (kwas asparaginowy) obecny w urykazie pawiana został zastąpiony CAC (histydyna), kodonem, który jest obecny w tej pozycji w sekwencji kodującej pseudogenu ludzkiej oksydazy moczanowej. Konstrukt dla rekombinowanej urykazy pawiana wytworzony przy użyciu tych starterów jest nazwany D3H Baboon Uricase.
PL 215 157 B1
Produkt PCR dla urykazy świni został strawiony EcoRI i HindIII i sklonowany w pUC18 z wytworzeniem pUC18-Pig Uricase. Produkt PCR dla D3H Baboon Uriease sklonowano bezpośrednio w wektorze pCR™II, stosując TA Cloning™ (Invitrogen, Carlsbad, CA), z wytworzeniem pCR™II-D3H Baboon Uricase.
Poddane ligacji cDNA zastosowano do transformacji szczepu E. coli XLl-Blue (Stratagene, La Jolla, CA). Wytworzono plazmidowy DNA zawierający sklonowane cDNA urykazy i klony, które posiadały opublikowaną sekwencję DNA kodującą urykazę (z różnicą polegającą na podstawieniu D3H w urykazie pawiana, pokazanej w Tabeli 1) wybrano i wyizolowano. W wybranym klonie pCR™II-D3H Baboon Uricase, sekwencje pCR™II znajdowały się obok kodonu stop urykazy, co było wynikiem delecji sekwencji wprowadzonej przez PCR. W konsekwencji, miejsca restrykcyjne XbaI i NcoI z nie podlegającego translacji regionu 3' zostały wyeliminowane, umożliwiając bezpośrednie klonowanie przy zastosowaniu NcoI na końcu 5' produktu PCR i BamHI, które pochodzi z wektora pCR™II.
Subklonowanie cDNA urykazy do wektorów ekspresyjnych pET
Subklonowanie urykazy pawiana cDNA D3H pawiana zawierający sekwencję kodującą pełnej długości dla urykazy wprowadzono do wektora ekspresyjnego pET-3d (Novagen, Madison, WI). pCR™II-D3H Baboon Uricase strawiono NcoI i BamHI i wyizolowamo fragment 960 bp. Plazmid ekspresyjny pET-3d strawiono NcoI i BamHI i wyizolowano fragment 4600 bp. Dwa fragmenty poddano ligacji z wytworzeniem pET-3d-D3H Baboon
Subklobowanie chimerowej urykazy świni-pawiana
Chimerową urykazę świni-pawiana (PBC, od ang. Pig-baboon chimera) skonstruowano w celu osiągnięcia wyższej ekspresji, stabilności i aktywności rekombinowanego genu. PBC skonstruowano przez wyizolowanie fragmentu NcoI-ApaI o wielkości 4936 bp z klonu pET-3d-D3H Baboon i poddania ligacji wyizolowanego fragmentu z fragmentem NcoI-ApaI o wielkości 624 bp wyizolowanym z pUC18-Pig Uricase, prowadząc do wytworzenia pET-3d-PBC. cDNA urykazy PBC składa się z kodonów 1-225 urykazy świni połączonych w ramce z kodonami 226-304 urykazy pawiana.
Subklonowanie cDNA urykazy Pig-KS
Urykazę Pig-KS skonstruowano w celu dodania jednej reszty lizyny, która może dostarczać dodatkowego miejsca PEGylacji. KS oznacza wstawienie aminokwasu lizyny do urykazy świni, w pozycji 291, w miejsce argininy (R291K). Dodatkowo, treonina w pozycji 301 została zastąpiona przez serynę (T301S). Plazmid z urykazą PigKS skonstruowano przez wyizolowanie fragmentu NcoI-NdeI o wielkości 4696 bp z pET-3d-D3H Baboon, a następnie ligację z fragmentem NcoI-NdeI o wielkości 864 bp wyizolowanym z pUC18-Pig Uricase, czego wynikiem było wytworzenie pET-3d-Pig-KS. Otrzymana w rezultacie sekwencja urykazy PigKS składa się z kodonów 1-288 połączonych w ramce z kodonami 289-304 urykazy pawiana.
Subklonowanie sekwencji urykazy regulowanej przez promotor osmB
Gen urykazy subklonowano w wektorze ekspresyjnym zawierającym promotor osmB (zgodnie ze wskazówkami patentu USA nr 5,795,776, włączonego tu w całości jako odniesienie). Wektor ten umożliwia indukcję ekspresji białka w odpowiedzi na wysokie ciśnienie osmotyczne albo starzenie się hodowli. Plazmid ekspresyjny pMFOA-18 zawierał promotor osmB, sekwencję miejsca wiązania rybosomów (rbs, od ang. ribosomal binding site) i sekwencję terminatora transkrypcji (ter). Nadaje on oporność na ampicylinę (AmpR) i wyraża rekombinowaną ludzką esterazę acetylocholiny (AChE, od ang. human acetylcholine esterase).
Subklonowanie D3H Babon Uricase
Plazmid pMFOA-18 strawiono NcoI i BamHI i wyizolowano duży fragment. Konstrukt pET-3d-D3H Babon Uricase strawiono NcoI i BamHI I i wyizolowano fragment o wielkości 960 bp, który zawierał gen D3H Babon Uricase. Te dwa fragmenty poddano ligacji z wytworzeniem pMFOU18.
Plazmid ekspresyjny pMFXT133 zawierał promotor osmB, rbs (operon deo E. coli), ter (TrypA E. coli), rekombinowany polipeptyd inhibitora czynnika Xa (FxaI), i niesie gen oporności na tetracyklinę (TetR). Gen urykazy pawiana wstawiono do tego plazmidu w celu zamiany genów oporności na antybiotyk. Plazmid pMFOU18 strawiono NcoI, wypełniono końce, a następnie strawiono XhoI i wyizolowano fragment o wielkości 1030 bp. Plazmid pMFXT133 strawiono NdeI, wypełniono końce, a następnie strawiono XhoI i wyizolowano duży fragment. Dwa fragmenty poddano ligacji z wytworzeniem wektora ekspresyjnego dla urykazy pawiana, pURBA16.
Subklonowanie chimerowej urykazy świni-pawiana
Plazmid pURBA16 strawiono ApaI i AlwNI i wyizolowano fragment o wielkości 2320 bp. Plazmid pMFXT133 strawiono NdeI, wypełniono końce, a następnie strawiono AlwNI i wyizolowano fragment
PL 215 157 B1 o wielkości 620 bp. Konstrukt pET-3d-PBC strawiono XbaI, wypełniono końce, a następnie strawiono ApaI i wyizolowano fragment o wielkości 710 bp. Trzy fragmenty poddano ligacji z wytworzeniem pURPB, plazmidu, który wyrażał urykazę PBC pod kontrolą promotora i rbs osmB, jak również rbs T7, który pochodził z wektora pET-3d.
Rbs T7 został wycięty w dodatkowym etapie. pUR-PB strawiono NcoI, wypełniono końce, a następnie strawiono AlwNI i wyizolowano fragment o wielkości 3000 bp. Plazmid pMFXT133 strawiono NdeI, wypełniono końce, a następnie strawiono AlwNI i wyizolowano fragment o wielkości 620 bp. Te dwa fragmenty poddano ligacji z pDUR-PB, który wyraża PBC pod kontrolą promotora osmB.
Konstrukcja pOUR-PB-ANC
Wprowadzono kilka zmian w cDNA urykazy, które prowadzą do zasadniczego zwiększenia stabilności rekombinowanego enzymu. Skonstruowano plazmid pOUR-PBC-ANC, w którym N-końcowy peptyd dojrzewania złożony z sześciu reszt i tripeptyd na końcu C, który działa in vivo jako sygnał kierujący do peroksysomów, obydwa zostały usunięte. Przeprowadzono to z użyciem sekwencji PBC w plazmidzie pDUR-PB i specyficznych starterów oligonukleotydowych zamieszczonych w Tabeli 2, przy zastosowaniu amplifikacji w reakcji PCR.
T a b e l a 2. Startery do amplifikacji urykazy PBC-ANC w reakcji PCR
Urykaza PBC-ANC:
Sensowny
5’ gcgcatATGACTTACAAAAAGAATGATGAGGTAGAG 3’ (SEK NR ID: 5) Antysensowny
5' CCgtctagaTTAAGACAACTTCCTCTTGACTGTACCAGTAATTTTTCCGTATGG 3' (SEK NR ID: 6)
Sekwencje enzymów restrykcyjnych wprowadzone na końcach starterów pokazane jako wytłuszczenie i regiony niekodujące są pokazane w Tabeli 2 małymi literami. NdeI jest sensowny, a XbaI jest antysensowny. Starter sensowny zastosowano również w celu wyeliminowania wewnętrznego miejsca restrykcyjnego NdeI przez wprowadzenie mutacji punktowej (podkreślona), która nie wpływa na sekwencję aminokwasową, a zatem ułatwiała subklonowanie przy zastosowaniu NdeI.
Fragment o wielkości 900 par zasad wytworzony przez amplifikację w reakcji PCR pDUR-PB przecięto NdeI i XbaI i wyizolowano. Otrzymany fragment wprowadzono następnie do plazmidu ekspresyjnego deo, pDBAST-RAT-N, który niesie promotor deo-P1P2 i rbs pochodzący z E. coli i wyraża konstytutywnie prekursor ludzkiej rekombinowanej insuliny. Plazmid strawiono NdeI i XbaI i wyizolowano fragment o wielkości 4035 bp i poddano go ligacji z produktem PCR dla urykazy PBC. Otrzymany w rezultacie konstrukt, pDUR-PB-ANC, użyto do transformacji E. coli K-12 Sφ733 (F-cytR strA), która wyrażała wysokie poziomy aktywnej skróconej urykazy.
Podwójne skrócona sekwencja PBC-ANC została również wyrażona pod kontrolą promotora osmB. Plazmid pDUR-PB-ANC strawiono AlwNI - NdeI i wyizolowano fragment o wielkości 3459 bp. Plazmid pMFXT133, opisany powyżej, strawiono NdeI - AlwNI, i wyizolowano fragment o wielkości 660 bp. Fragmenty poddano następnie ligacji z wytworzeniem pOUR-PB-ANC, który został wprowadzony do szczepu E. coli K-12 W3110 F- i wyrażał wysokie poziomy aktywnej skróconej urykazy.
Konstrukcja plazmidu ekspresyjnego dla urykazy pOUR-P^N-ks-1
Plazmid ten skonstruowano w celu polepszenia stabilności rekombinowanego enzymu. Urykazę Pig-KS-ΔΝ skrócono jedynie na końcu N (ΔΝ), gdzie usunięty został N-końcowy peptyd dojrzewania złożony z sześciu reszt i zawierała ona mutatcje S46T, R291K i T301S. W pozycji 46 występowała reszta treoniny zamiast seryny na skutek mutacji konserwatywnej, która nastąpiła w czasie amplifikacji PCR i klonowania. W pozycji 291 lizyna zastąpiła argininę, a w pozycji 301 seryna została wstawiona zamiast treoniny. Obydwie reszty pochodziły z sekwencji urykazy pawiana. Modyfikacje R291K i T301S są oznaczone jako KS i były dyskutowane powyżej. Dodatkowa reszta lizyny dostarczała dodatkowego potencjalnego miejsca PEGylacji.
PL 215 157 B1
W celu skonstruowania pOUR-P-AN-ks-1 (Fig. 1), plazmid pOUR-PB-ANC strawiono ApaI XbaI i wyizolowano fragment o wielkości 3873 bp. Plazmid pET-3d-PKS (konstrukcja pokazana na Fig. 4) strawiono ApaI - SpeI i wyizolowano fragment o wielkości 270 bp. Cięcie SpeI pozostawia wystający w stronę 5' koniec CTAG, który był wydajnie łączony przez ligację z fragmentami DNA wytworzonymi przez XbaI. Te dwa fragmenty poddano ligacji z wytworzeniem pOUR-P-AN-ks-1. Po ligacji miejsca rozpoznawane przez enzymy SpeI i XbaI zostały utracone (ich miejsce jest pokazane w nawiasach na Fig. 9). Konstrukt pOUR-P-AN-ks-1 został wprowadzony do szczepu E. coli K-12 W3110 F-, prototroficznego, ATCC#27325. Otrzymana w rezultacie urykaza Pig-KS-ΔΝ, wyrażana pod kontrolą promotora osmB, dawała wysokie poziomy rekombinowanego enzymu mającego lepszą aktywność i stabilność.
Na Figurze 1 przedstawia strukturę plazmidu pOUR-P^N-ks-1. Numery obok miejsc restrykcyjnych wskazują pozycję nukleotydową w odniesieniu do miejsca HaeII, oznaczonego jako 1; miejsca restrykcyjne, które zostały utracone w czasie klonowania są zaznaczone nawiasami. Plazmid pOUR-P-AN-ks-1, kodujący urykazę Pig-KS-ΔΝ ma długość 4143 par zasad (bp) i zawiera następujące elementy:
1. Fragment DNA o długości 113 bp, rozciągający się od nukleotydu numer 1 do miejsca NdeI (w pozycji 113), który zawiera promotor osmB i miejsce wiązania rybosomów (rbs).
2. Fragment DNA o długości 932 bp, rozciągający się od NdeI (w pozycji 113) do styku Spel/Xbal (w pozycji 1045), który zawiera: 900 bp region kodujący Pig-KS-ΔΝ (sekwencja kwasu nukleinowego dla końca aminowego białka skróconej urykazy świni, w którym aminokwasy 291 i 301 są zastąpione, odpowiednio, lizyną seryną) i sekwencję flankującą o długości 32 bp pochodzącą z pCR™ II, z miejsca klonowania TA przed miejscem restrykcyjnym Spel/Xbal.
3. Sekwencję z wieloma miejscami do klonowania (MCS, od ang. multiple cloning sites) o wielkości 25 bp od styku Spel/Xbal (w pozycji 1045) do HindIII (w pozycji 1070).
4. Syntetyczny oligonukleotyd o wielkości 40 bp, zawierający terminator transktypcji TrpA (ter) z końcami HindIII (w pozycji 1070) i AatII (w pozycji 1110).
5. Fragment DNA o długości 1519 bp, rozciągający się od miejsca AatII (w pozycji 1110) do MscI/Scal (w pozycji 2629) na pBR322, który zawiera gen oporności na tetracyklinę (TetR).
6. Fragment DNA o długości 1514 bp, rozciągający się od miejsca Scal (w pozycji 2629) do HaeII (w pozycji 4143) na pBR322, który zawiera początek replikacji.
Na Figurze 2 pokazano DNA i wydedukowane sekwencje aminokwasowe urykazy Pig-KS-ΔΝ. Na tym rysunku numeracja aminokwasów jest według kompletnej sekwencji urykazy świni. Po reszcie inicjacyjnej metioniny wstawiona została treonina w miejsce kwasu asparaginowego w sekwencji urykazy świni. Ta reszta treoninowa umożliwiała usuwanie metioniny przez bakteryjną aminopeptydazę. Przerwa w sekwencji aminokwasowej przedstawia usunięty N-końcowy peptyd dojrzewania. Wskazane są miejsca restrykcyjne, które zostały wykorzystane na różnych etapach subklonowania różnych sekwencji urykazy (Apal, NdeI, BamHI, EcoRI i SpeI). Nie podlegająca translacji sekwencja 3', zapisana małymi literami, pochodziła z sekwencji pCR™II. Kodon stop dla translacji jest zaznaczony gwiazdką.
Na Figurze 3 pokazano dopasowanie sekwencji aminokwasowych różnych sekwencji rekombinowanych urykaz. Górna linia przedstawia urykazę świni, która obejmuje pełną sekwencję aminokwasową. Druga linia to sekwencja podwójnie skróconej chimerowej urykazy świni-pawiana (PBC-ANC). Trzecia linia pokazuje sekwencję urykazy Pig-KS-ΔΝ, która jest skrócona jedynie na końcu N i zawiera mutacje S46T i zmiany aminokwasowe R291K i T301S, obydwie odzwierciedlające pochodzenie z pawiana końca karboksylowego sekwencji kodującej urykazę. Gwiazdka wskazuje pozycję, w której występują różnice aminokwasów w urykazie Pig-KS-ΔΝ w porównaniu z opublikowaną sekwencją urykazy świni; kółka wskazują na pozycje, w których występują różnice aminokwasów w Pig-KS-ΔΝ w porównaniu z PBC-ΔΝ, chimerze ze świni-pawiana; a linie przerywane wskazują delecje aminokwasów.
cDNA z natywnej urykazy pawiana, świni i królika, z mutacją Y97H oraz chimery ze świni/pawiana (PBC) skonstruowano do klonowania w E. coli. Klony wyrażające wysokie poziomy wariantów urykazy skonstruowano i wyselekcjonowano tak, że wszystkie były w E. coli W3110 F-, a ekspresja była regulowana przez osmB. Plazmidowe DNA izolowano, sprawdzano przez sekwencjonowanie DNA i analizę enzymami restrykcyjnymi i komórki hodowano.
Konstrukcji skróconych urykaz, włączając w to pig-ΔΝ i Pig-KS-ΔΝ dokonano przez ligację krzyżową pomiędzy PBC-ANC i Pig-KS, a następnie cięcie endonukleazami restrykcyjnymi, odpowiednio, ApaI i XbaI oraz ApaI plus SpeI. Można było sądzić, że te skrócone mutanty zachowają aktywność,
PL 215 157 B1 ponieważ sześć N-końcowych reszt, peptyd „dojrzewania (1-2), i C-końcowy tri-peptyd, „sygnał kierowania do peroksysomów (3- 5), nie ma funkcji, która znacząco wpływa na aktywność enzymatyczną, a jest możliwe że te sekwencje mogą być immunogenne. Wybrano klony wyrażające bardzo wysokie poziomy urykazy.
P r z y k ł a d 2. Transformacja plazmidu ekspresyjnego do bakteryjnej komórki gospodarza
Plazmid ekspresyjny, pOUR-P-AN-ks-1, został wprowadzony do was szczepu E. coli K-12 W3110 F . Przygotowano komórki bakteryjne do transformacji, co obejmowało hodowanie do środka fazy logarytmicznej w buforze Luria (LB), następnie komórki zbierano przez wirowanie, przemywano zimną wodą i zawieszano w 10% glicerolu w wodzie w stężeniu około 3x1010 komórek na ml. Komórki przechowywano w porcjach w -70°C. Plazmidowy DNA wytrącano następnie etanolem i rozpuszczano w wodzie.
Komórki bakteryjne i plazmidowy DNA mieszano i przeprowadzano transformację przy zastosowaniu metody wysokonapięciowej elektroporacji z użyciem Gene Pulser II z BIO-RAD (Trevors i wsp. (1992). Electrotransformation of bacteria by plasmid DNA, w Guide to Electroporation and Electrofusion (D.C. Chang, B. M. Chassy, J. A. Saunders and A. E. Sowers, wyd.), str. 265-290, Academic Press Inc., San Diego, Hanahan i wsp. (1991) Meth. Enzymol., 204, 63-113). Transformowane komórki zawieszano w pożywce SOC (2% trypton, 0,5% ekstrakt drożdżowy, 10 mM NaCl, 2,5 mM KCl, 10 mM MgCl2, 10 mM MgSO4, 20 mM glukoza), inkubowano w 37°C przez 1 godzinę i poddawano selekcji pod kątem oporności na tetracyklinę. Wybrano klony o wysokiej ekspresji.
P r z y k ł a d 3. Wytwarzanie rekombinowanej urykazy
Bakterie, takie jak te transformowane (patrz wyżej), hodowano w pożywce zawierającej glukozę; pH utrzymywano na poziomie 7,2±0,2, w około 37°C.
W trakcie ostatnich 5-6 godzin hodowli, pożywka była uzupełniona KCl do końcowego stężenia 0,3 M. Hodowlę kontynuowano dla umożliwienia akumulacji urykazy.
Rekombinowana urykaza akumulowała się w komórkach bakteryjnych jako nierozpuszczalny precypitat podobny do ciał inkluzyjnych (IB, od ang. inclusion bodies). Zawiesinę komórek przemywano przez wirowanie i zawieszano 50 mM buforze Tris, pH 8,0 i 10 mM EDTA i doprowadzano do ostatecznej objętości około 40 razy sucha masa komórek.
IB zawierające rekombinowaną urykazę izolowano przez wirowanie po rozbiciu komórek bakteryjnych przy użyciu lizozymu i wysokiego ciśnienia. Traktowanie lizozymem (2000-3000 jednostek/ml) przeprowadzano przez 16-20 godzin przy pH 8,0 i 7±3°C, z mieszaniem. Osad przemywano wodą i przechowywano w -20°C do chwili użycia.
Wzbogacone IB poddawano dalszej obróbce po zawieszaniu w 50 mM buforze NaHCO3, pH 10,3±0,1. Zawiesinę inkubowano przez noc w temperaturze pokojowej w celu umożliwienia upłynnienia urykazy pochodzącej z IB, a następnie klarowano przez wirowanie.
Urykazę oczyszczano następnie przez kilka etapów chromatografii. Na początek chromatografię przeprowadzono na kolumnie Q-Sepharose FF. Załadowaną kolumnę przemywano buforem wodorowęglanowym zawierającym 150 mM NaCl i urykazę wymywano buforem wodorowęglanowym zawierającym 250 mM NaCl. Następnie zastosowano złoże ksantyna-agaroza, Xanthine Agarose (Sigma) w celu usunięcia z preparatu urykazy niewielkich zanieczyszczeń. Wyciek z Q-Sepharose FF rozcieńczano 50 mM buforem glicynowym, pH 10,3±0,1, do stężenia białka około 0,25 mg/ml i nakładano na kolumnę. Kolumnę przemywano buforem wodorowęglanowym, pH 10,3±0,1, zawierającym 100 mM NaCl, i urykazę wymywano tym samym buforem uzupełnionym 60 μΜ ksantyną. Na tym etapie urykaza była ponownie czyszczona przez chromatografię na Q-Sepharose w celu usunięcia form zagregowanych.
Czystość każdego preparatu urukazy jest większa niż 95%, co oceniano przez sączenie molekularne. W każdym preparacie wykrywano przy zastosowaniu kolumny Superdex 200 mniej niż 0,5% zagregowanych form.
Tabela 3 podsumowuje oczyszczenie urykazy Pig-KSAN z IB pochodzących z 25 I buforu fermentacyjnego.
T a b e l a 3. Oczyszczanie urykazy Pig-KSAN
Etap oczyszczania | Białko (mg) | Aktywność (jedn.) | Aktywność specyficzna (jedn./mg) |
Nierozpuszczalne IB | 12748 | 47226 | 3,7 |
Klarowany roztwór | 11045 | 44858 | 4,1 |
PL 215 157 B1 cd. tabeli 3
Q-Sepharose I - główna pula | 7590 | 32316 | 4,3 |
Xanthine Agarose - główna pula | 4860 | 26361 | 5,4 |
Q-Sepharose II - główna pula | 4438 | 22982 | 5,2 |
frakcja UF 30 kD | 4262 | 27556 | 6,5 |
P r z y k ł a d 4. Charakterystyka rekombinowanych urykaz
SDS-PAGE
Analiza SDS-PAGE wysoce oczyszczonych wariantów urykazy (Fig. 4) wykazała dość wyróżnialny wzór. Próbki przechowywano w 4°C, w buforze węglanowym, pH 10,3, do kilku miesięcy. Warianty pełnej długości, Pig, Pig-KS i PBC, wykazywały akumulację dwóch głównych produktów degradacji mających ciężar cząsteczkowy około 20 i 15 kD. Ta obserwacja sugeruje, że co najmniej pojedyncze cięcie dzieli cząsteczkę podjednostki urykazy. Inny wzór degradacji jest wykrywany dla klonów skróconych na końcu aminowym, a także dla urykazy królika, ale w mniejszej proporcji. Koniec aminowy królika przypomina ten dla skróconych klonów. Określono amino-końcowe sekwencje fragmentów urykazy wytworzone w czasie oczyszczania i przechowywania.
Sekwencjonowanie peptydów
N-końcowe sekwencjonowanie dużych preparatów urykazy przeprowadzono przy zastosowaniu metody degradacji Edmana. Przeprowadzono dziesięć cykli. Rekombinowana urykaza Pig (klon pełnej długości) dawała więcej fragmentów degradacji w porównaniu z urykazą Pig-KS-ΔΝ. Wydedukowane miejsca cięcia prowadzące do fragmentów degradacji są jak następuje:
1) Główne miejsce w pozycji 168 mające sekwencję:
--QSG i FEGFI-2) Drugorzędne miejsce w pozycji 142 mające sekwencję:
--IRN i GPPVI-Powyższe sekwencje nie sugerują żadnego znanego miejsca proteolitycznego. Pomimo tego, cięcie może nastąpić bądź na skutek proteolizy bądź jakiejś reakcji chemicznej. Urykazy skrócone na końcu aminowym są zaskakująco bardziej stabilne niż urykazy nie skrócone na końcu aminowym. PBC-ANC miała również stabilność podobną do innych cząsteczek ΔΝ i mniejszą niż PBC bez skrócenia aminowego.
Aktywność
Aktywność urykazy mierzono metodą UV. Szybkość reakcji enzymatycznej określano przez pomiar zmniejszenia absorbancji przy 292 nm będącej wynikiem utleniania kwasu moczowego do alantoiny. Jedna jednostka aktywności jest zdefiniowana jako ilość urykazy wymagana do utlenienia jednego μmola kwasu moczowego na minutę w 25°C, w podanych warunkach. Moc urykazy jest wyrażana w aktywnościach na mg białka (jedn./mg).
-1 -1
Współczynnik ekstynkcji 1 mM kwasu moczowego przy 292 nm wynosi 12,2 mM-1 cm-1. A zatem utlenienie 1 μmola kwasu moczowego na ml mieszaniny reakcyjnej prowadziło do zmniejszenia absorbancji wynoszącego 12,2 mA292. Zmiana absorbancji w czasie (ΔΑ292 na minutę) pochodziła z liniowej części krzywej.
Stężenie białka określano przy zastosowaniu zmodyfikowanej metody Bradford (Macart i Gerbaut (1982) Clin Chim Acta 122:93-101). Aktywność specyficzną (moc) urykazy obliczano dzieląc aktywność w jedn./ml przez stężenie w mg/ml. Wyniki aktywności enzymatycznej dla różnych rekombinowanych urykaz są zestawione w Tabeli 4. Wyniki preparatów handlowych są włączone do tej tabeli jako wartości odnośnikowe. Widać z tych wyników, że skrócenie białek urykazy nie ma znaczącego wpływu na ich aktywność enzymatyczną.
T a b e l a 4. Podsumowanie parametrów kinetycznych natywnych urykaz
Urykazy | Stężenie (1) roztworu podstawowego (mg/ml) | Aktywność specyficzna (jedn./mg)(2) | Km (4) (μίνΐ kwasu moczowego) | Kcat (5) (1/min.) |
Rekombinowana | ||||
Świni | 0,49 | 7,41 | 4,39 | 905 |
Pig-AN | 0,54 | 7,68 | 4,04 | 822 |
PL 215 157 B1 cd. tabeli 4
Pig-KS | 0,33 | 7,16 | 5,27 | 1085 |
Pig-KS-AN | 1,14 | 6,20 | 3,98 | 972 |
PBC | 0,76 | 3,86 | 4,87 | 662 |
PBC-ANC | 0,55 | 3,85 | 4,3 | 580 |
Królika | 0,44 | 3,07 | 4,14 | 522 |
Natywna | ||||
Świni (Sigma) | 2,70 | 3,26 (3) | 5,85 | 901 |
A. flavus (Merck) | 1,95 | 0,97 (3) | 23,54 | 671 |
Przypisy do Tabeli 4:
(1) Stężenie białka określano przez absorbancję mierzoną przy 278 nm, stosując współczynnik ekstynkcji 11,3 dla roztworu urykazy 10 mg/ml (Mahler, 1963).
(2) 1 jednostka aktywności urykazy jest zdefiniowana jako ilość enzymu, która utlenia 1 μmol kwasu moczowego do alantoiny na minutę, w 25°C.
(3) Wartości aktywności specyficznej pochodziły z wykresów Lineweaver-Burk przy stężeniu substratu równym 60 μΜ.
(4) Mieszaniny reakcyjne składały się z różnych kombinacji następujących roztworów podstawowych
100 mM buforu-boranu sodowego, pH 9,2
300 μΜ kwasu moczowego w 50 mM buforze-boranie sodowym, pH 9,2 mg/ml BSA w 50 mM buforze-boranie sodowym, pH 9,2 (5) Kcat obliczono przez podzielenie Vmax (obliczonej z odpowiednich wykresów Lineweaver-Burk) przez stężenie urykazy w mieszaninie reakcyjnej (wyrażone w równoważnikach molowych, w oparciu o masę cząsteczkową tetramerycznych urykaz).
P r z y k ł a d 5. Sprzęganie urykazy z m-PEG (PEGylacja)
Urykaza Pig-KS-ΔΝ była sprzęgana przy zastosowaniu m-PEG-NPC (węglan monometoksy-poli(etylenoglikolo)nitrofenylu). Ustalono warunki dające 2-12 nici 5, 10 lub 20 kD PEG na podjednostkę urykazy. m-PEG-NPC dodawano stopniowo do roztworu białka. Po zakończeniu dodawania PEG, mieszaninę reakcyjną urykaza/m-PEG-NPC inkubowano w 2-8°C przez 16-18 godzin, aż maksymalna liczba niezwiązanych nici m-PEG przyłączyła się do urykazy.
Liczbę nici PEG na monomer PEG-urykaza określano przez sączenie molekularne (SEC, od ang. size exclusion chromatography), na Superose 6, stosując jako standardy PEG i urykazę. Liczbę związanych nici PEG na podjednostkę określano przy zastosowaniu następującego równania:
Nici PEG 3,42 x Ilość PEG we wstrzykiwanej próbce (pg) /podjednostkę = Ilość białka we wstrzykiwanej próbce (pg)
Stężenie PEG i reszt białkowych w próbce PEG-urykaza ustalano przez sączenie molekularne (SEC) przy zastosowaniu detektorów nadfioletu (UV) i współczynnika załamania (RI) ustawionych szeregowo (opracowane przez Kunitani i wsp., 1991). Wytworzono trzy krzywe kalibracyjne: krzywą białkową (absorpcja mierzona przy 220 nm); krzywą białkową (mierzona przez RI) i krzywą PEG (mierzoną przez RI). Następnie próbki PEG-urykaza analizowano przy zastosowaniu tego samego systemu. Otrzymane w rezultacie wartości powierzchni pod pikami UV i RI próbek eksperymentalnych zastosowano do obliczenia stężeń PEG i białka w stosunku do krzywych kalibracyjnych. Współczynnik 3,42 to stosunek masy cząsteczkowej monomeru urykazy (34,192 Daltonów) do masy 10 kD PEG.
Przyłączenie PEG poprawiało rozpuszczalność urykazy w roztworach mających fizjologiczne wartości pH. Tabela 5 wskazuje na zróżnicowanie pomiędzy partiami produktu - PEGylowanej urykazy Pig-KS-ΔΝ. Generalnie, istnieje odwrotna proporcja pomiędzy liczbą przyłączonych nici PEG i zachowaniem specyficznej aktywności (SA) enzymu.
PL 215 157 B1
T a b e l a 5
Aktywność enzymatyczna koniugatów PEGylowanej urykazy Pig-KS-ΔΝ
Partie koniugatu | PEG MW (kD) | Nici PEG na podjednostkę urykazy | SA urykazy (U/mg) | SA-procent kontroli |
Pig-KS-AN | - | - | 8,2 | 100 |
1-17 # | 5 | 9,7 | 5,8 | 70,4 |
LP-17 | 10 | 2,3 | 7,8 | 94,6 |
1-15 # | 10 | 5,1 | 6,4 | 77,9 |
13 # | 10 | 6,4 | 6,3 | 76,9 |
14 # | 10 | 6,5 | 6,4 | 77,5 |
5-15 # | 10 | 8,8 | 5,4 | 65,3 |
5-17 # | 10 | 11,3 | 4,5 | 55,3 |
4-17 # | 10 | 11,8 | 4,4 | 53,9 |
1-18 # | 20 | 11,5 | 4,5 | 54,4 |
P r z y k ł a d 6. PEGylacja urykazy przez PEG 1000 D i 100000 D
Urykaza Pig-KS-ΔΝ została połączona z m-PEG-NPC 1000 D i 100000 D, jak opisano w przykładzie 5. Zastosowano warunki, w których uzyskiwano 2-11 nici PEG na podjednostkę urykazy. Po zakończeniu dodawania PEG, mieszanina reakcyjna urykaza/m-PEG-NPC była inkubowana w 2-8°C przez 16-18 godzin, aż maksymalna liczba niezwiązanych nici m-PEG przyłączyła się do urykazy.
Liczbę nici PEG na monomer PEG-urykaza określono jak opisano powyżej.
Przyłączenie PEG poprawiało rozpuszczalność urykazy w roztworach mających fizjologiczne wartości pH.
P r z y k ł a d 7. Farmakokinetyka urykazy Pig-KS-ΔΝ połączonej z PEG
Przeprowadzono doświadczenia biologiczne w celu określenia optymalnego zakresu i wielkości PEGylacji niezbędnej dla dostarczenia korzyści terapeutycznej.
Badania farmakokinetyczne na szczurach, przy zastosowaniu zastrzyków dożylnych (i.v.) z 0,4 mg (2 jedn.) na kg wagi ciała niezmodyfikowanej urykazy, podawanej w dniu 1 i dniu 8, dawało okres półtrwania w obiegu około 10 minut. Jednakże badania szybkości kliransu u szczurów dla 2-11x10 kD urykazy PEG-Pig-KS-ΔΝ, po aż 9 cotygodniowych zastrzykach, wskazywały, że klirens nie zależy od liczby nici PEG (w tym zakresie) i pozostawał stosunkowo stały w trakcie okresu badania (patrz Tabela 6; z okresem półtrwania około 30 godzin). Różnice od tygodnia do tygodnia są w zakresie błędu eksperymentalnego. Ten sam wzór jest widoczny po dziewięciu wstrzyknięciach koniugatów 10x5kD PEG- i 10x20kD PEG-urykaza. Wyniki wskazują, że w modelu szczurzym niezależnie od stopnia PEGylacji urykazy, w tym zakresie, obserwowane były podobne efekty biologiczne.
T a b e l a 6. Okresy półtrwania preparatów PEGylowanej urykazy Pig-KS-ΔΝ u szczurów
Stopień modyfikacji (nici PEG na podjednostkę urykazy) | |||||||
5kD PEG | 10kD PEG | 20kD PEG | |||||
Tydzień | 10x | 2x | 5x | 7x | 9x | 11x | 10x |
1 | 25,7±1,7 | 29,4±3,4 | 37,7±3,1 | 37,6±3,9 | 36,9±4,3 | 31,4±4,3 | 21,6±1,5 |
(5) | (5) | (5) | (5) | (5) | (5) | (5) | |
2 | - | - | - | 26,7±3,0 (5) | 28,4±1,6 (5) | - | - |
3 | 27,5±3,8 | 29,0±2,6 | 29,9±11,7 | 32,7±11,1 | 26,3±4,7 | 11,8±3,3 | 14,5±2,7 |
(5) | (5) | (5) | (5) | (5) | (5) | (5) | |
4 | - | - | 27,1±5,3 (5) | 18,4±2,2 (4) | 19,7±5,6 (4) | - | - |
PL 215 157 B1 cd. tabeli
5 | 28,6±1,7 (5) | 22,5±2,7 (5) | 34,3±3,9 (4) | 37,3±3,0 (5) | 30,4±3,6 (5) | 30,5±1,3 (5) | 19,3±2,5 (5) |
6 | - | - | 35,4±3,1 (14) | 27,1 ±3,6 (13) | 30,7±2,9 (13) | - | - |
7 | 16,5±4,9 (5) | 32,5±4,3 (5) | - | - | - | 16,12±2,7 (5) | 25,8±2,5 (5) |
8 | - | - | - | - | - | - | - |
9 | 36,8±4,0 | 28,7±2,7 | 34,0±2,4 | 24,2±3,4 | 31,0±2,6 | 29,3±1,4 | 26,7±0,5 |
(15) | (15) | (13) | (13) | (13) | (15) | (15) |
Przypisy do Tabeli 4:
Wyniki są wskazane w godzinach ± błędy standardowe średniej. Numery w nawiasach wskazują na liczbę testowanych zwierząt.
Szczury otrzymywały co tydzień i.v. zastrzyki z 0,4 mg na kg wagi ciała urykazy Pig-KS-ΔΝ zmodyfikowanej jak wskazano w tabeli. Każda grupa wyjściowo obejmowała 15 szczurów, które były na kolejno skrwawiane w podgrupach po 5. Kilka szczurów zdechło w czasie tego badania na skutek znieczulenia. Okres półtrwania określano przez pomiar aktywności urykazy (test kolorymetryczny) w próbkach osocza zbieranych w 5 minucie, 6, 24 i 48 godzinie po zastrzyku.
Tabela 5 opisuje partie PEGylowanej urykazy użytej w tych badaniach.
Badania biodostępności dla urykazy 6x5 kD PEG-Pig-KS-ΔΝ u królików wskazują, że po pierwszym zastrzyku okres półtrwania w obiegu wynosi 98,2±1,8 godzin (i.v.), a biodostępność po wstrzyknięciu domięśniowym (i.m.) i podskórnym (s.c.) wynosiła, odpowiednio, 71% i 52%. Jednakże, wykrywano znaczące miana przeciwciała anty-urykaza po drugim zastrzyku i.m. i s.c. u wszystkich królików i klirans był przyspieszony po następnych zastrzykach. Wstrzyknięcie szczurom tych samych koniugatów prowadziło do czasu półtrwania 26±1,6 godzin (i.v.), a biodostępność po wstrzyknięciu i.m. i s.c. wynosiła, odpowiednio, 33% i 22%.
Badania na szczurach z urykazą 9x10 kD PEG-Pig-KS-ΔΝ wskazują, że okres półtrwania w obiegu po pierwszym zastrzyku w wynosi 42,4 godzin (i.v.), a biodostępność po wstrzyknięciu i.m. i s.c. wynosiła, odpowiednio, 28,9% i 14,5% patrz Fig. 5 i Tabela 7). Po czwartym zastrzyku okres półtrwania w obiegu wynosił 32,1± 2,4 godziny, a biodostępność po wstrzyknięciu i.m. i s.c. wynosiła, odpowiednio, 26,1% i 14,9%.
Podobne badania farmakokinetyczne, u królików dla urykazy 9x10 kD PEG-Pig-KS-ΔΝ wskazują, że nie obserwuje się przyspieszonego kliransu po wstrzyknięciu tego koniugatu (podawano 4 zastrzyki co dwa tygodnie). U tych zwierząt okres półtrwania w obiegu po pierwszym zastrzyku wynosił 88,5 godzin (i.v.), a biodostępność po wstrzyknięciu i.m. i s.c. wynosiła, odpowiednio, 98,3% i 84,4%. (patrz Fig. 6 i Tabela 7). Po czwartym zastrzyku okres półtrwania w obiegu wynosił 141,1±15,4 godziny, a biodostępność po wstrzyknięciu i.m. i s.c. wynosiła, odpowiednio, 85% i 83%.
Podobne badania farmakokinetyczne dla urykazy 9x10 kD PEG-Pig-KS-ΔΝ przeprowadzono w celu zbadania biodostępności u psów rasy beagle (2 samce i 2 samice w każdej grupie). Okres półtrwania w obiegu zanotowano jako 70±11,7 godzin po pierwszym zastrzyku i.v., a biodostępność po wstrzyknięciu i.m. i s.c. wynosiła, odpowiednio, 69,5% i 50,4% (patrz Fig. 7 i Tabela 7).
Badanie z preparatami urykazy 9x10 kD PEG-Pig-KS-ΔΝ przeprowadzono z użyciem świń. Trzy zwierzęta na grupę użyto do podawania drogami i.v., s.c. i i.m. Okres półtrwania w obiegu zanotowano jako 178±24 godzin po pierwszym zastrzyku i.v., a biodostępność po wstrzyknięciu i.m. i s.c. wynosiła, odpowiednio, 71,6% i 76,8% (patrz Fig. 8 i Tabela 7).
T a b e l a 7. Badania farmakokinetyczne z urykazą 9x10 kD PEG-Pig-KS-ΔΝ
Zastrzyk # | Okres półtrwania (godziny) | Biodostępność | |
i.v. | i.m. | s.c. | |
Szczury | |||
1 | 42,4±4,3 | 28,9% | 14,5% |
2 | 24,1±5,0 | 28,9% | 14,5% |
PL 215 157 B1 cd. tabeli 7
4 | 32,1 ±2,4 | 26,1% | 14,9% |
Króliki | |||
1 | 88,5±8,9 | 98,3% | 84,4% |
2 | 45,7±40,6 | 100% | 100% |
4 | 141,1±15,4 | 85% | 83% |
Psy | |||
1 | 70,0±11,7 | 69,5% | 50,4% |
Świnie | |||
1 | 178±24 | 71,6% | 76,8% |
Badania abspopcji, dystrybucji, metabolizmu i wydalania (ADME, od ang. Absorption, distribution, metabolism, and excretion) wykonano po jodowaniu urykazy 9x10 kD PEG-Pig-KS-ΔΝ stosując
125 metodę Bolton & Hunter przy użyciu 125I. Wyznakowany koniugat wstrzyknięto 7 grupom, każda po 4 szczury (2 samce i 2 samice). Dystrybucję radioaktywności analizowano po 1 godzinie i co 24 godziny przez 7 dni (z wyjątkiem dnia 5). Każdą grupę kolejno uśmiercano i różne narządy wycinano i analizowano. Siódmą grupę trzymano w klatce metabolicznej, z której zbierano mocz i kał. Dystrybucję materiału w ciele zwierzęcia oceniano przez pomiar całkowitej radioaktywności w każdym narządzie i frakcję zliczeń (nerka, wątroba, płuco i śledziona), która była dostępna do wtrącania TCA (tj.) związane białko, normalizowane w stosunku do rozmiaru narządu). Spośród narządów, które zostały wycięte, żaden nie miał wyższej radioaktywności specyficznej niż inne, a zatem nie obserwowano znaczącej akumulacji, na przykład w wątrobie albo nerce. 70% radioaktywności była wydalana przed upływem 7 dnia.
P r z y k ł a d 8. Wyniki testów klinicznych
Przeprowadzono randomizowane, otwarte, wieloośrodkowe, równoległe badania grupowe w celu zbadania odpowiedzi na moczan i profile bezpieczeństwa PEG-urykazy (Puricase®, Savient Pharmaceuticals) u pacjentów-ludzi z hiperurykemią i ostrą dną moczanową, którzy nie odpowiadali albo nie tolerowali konwencjonalnej terapii. Średni czas choroby wynosił 14 lat i 70 procent badanej populacji miało jeden albo więcej guzków dnawych.
W tym badaniu 41 pacjentów (średnia wieku 58,1 lat) randomizowano do 12 tygodni leczenia dożylną PEG-urykazą w jednym z czterech trybów dawkowania: 4 mg co dwa tygodnie (7 pacjentów); 8 mg co dwa tygodnie (8 pacjentów); 8 mg co dwa tygodnie (13 pacjentów); lub 12 mg co cztery tygodnie (13 pacjentów). Aktywność urykazy w osoczu i poziomy moczanu mierzono w określonych odstępach czasu. Parametry farmakokinetyczne, średnie stężenie moczanu w osoczu i procent czasu, kiedy poziom moczanu w osoczu był mniejszy niż lub równy 6 mg/dl pochodziły z analiz aktywności urykazy i poziomów moczanu .
Pacjenci, którzy otrzymywali 8 mg PEG-urykazy co dwa tygodnie mieli większe zmniejszenie PUA, z poziomami poniżej 6 mg/dl przez 92 procent czasu leczenia (poziom moczanu w osoczu sprzed leczenia 9,1 mg/dl vs. średni poziom moczanu w osoczu 1,4 mg/dl na przestrzeni 12 tygodni).
Zasadnicze i utrzymujące się niższe poziomy moczanu w osoczu obserwowano również w innych grupach dawek przy traktowaniu PEG-urykazą: PUA poniżej 6 mg/ml przez 86 procent czasu leczenia w grupie 8 mg co cztery tygodnie (poziom moczanu w osoczu sprzed leczenia 9,1 mg/dl vs. średni poziom moczanu w osoczu 1,4 mg/dl na przestrzeni 12 tygodni); PUA poniżej 6 mg/ml przez 84 procent czasu leczenia w grupie 12 mg co cztery tygodnie (poziom moczanu w osoczu sprzed leczenia 8,5 mg/dl vs. średni poziom moczanu w osoczu 2,6 mg/dl na przestrzeni 12 tygodni) i PUA poniżej 6 mg/ml przez 73 procent czasu leczenia w grupie 4 mg co cztery tygodnie (poziom moczanu w osoczu sprzed leczenia 7,6 mg/dl vs. średni poziom moczanu w osoczu 4,2 mg/dl na przestrzeni 12 tygodni).
Maksymalny procent zmniejszenia poziomu kwasu moczowego w osoczu w stosunku do poziomu podstawowego w czasie pierwszych 24 godzin podawania dawki PEG-urykazy wynosił 72% dla osobników otrzymujących 4 mg/2 tygodnie (p wynosi 0,0002); 94% dla osobników otrzymujących 8 mg/2 tygodnie (p mniej niż 0,0001); 87% dla osobników otrzymujących 8 mg/4 tygodnie (p mniej niż 0,0001); i 93% dla osobników otrzymujących 12 mg/4 tygodnie (p mniej niż 0,0001).
PL 215 157 B1
Procent zmniejszenia poziomu kwasu moczowego w osoczu w stosunku do poziomu podstawowego w okresie 12-tygodni leczenia wynosił 38% dla osobników otrzymujących 4 mg/2 tygodnie (p wynosi 0,0002); 86% dla osobników otrzymujących 8 mg/2 tygodnie (p mniej niż 0,0001); 58% dla osobników otrzymujących 8 mg/4 tygodnie (p mniej niż 0,0001); i 67% dla osobników otrzymujących 12 mg/4 tygodnie (p mniej niż 0,0001).
Ku zaskoczeniu, niektóre osoby otrzymujące PEG-urykazę doświadczały związanych z wlewem efektów ubocznych, tj. reakcji na wlew. Te reakcje następowały w 14% wszystkich wlewów.
Wszystkie zacytowane tu odnośniki są włączone w całości jako odniesienie i dla wszystkich celów w takim samym zakresie jak gdyby każda indywidualna publikacja albo zgłoszenie patentowe były konkretnie i indywidualnie wskazane aby zostać włączone jako odniesienie w całości dla wszystkich celów.
Można dokonać wielu modyfikacji i odmian niniejszego wynalazku bez odchodzenia od jego ducha i zakresu, co będzie oczywiste dla specjalistów tej dziedzinie. Konkretne opisane tu wykonania są oferowane jedynie jako przykład i wynalazek ma być ograniczony jedynie przez załączone zastrzeżenia, łącznie z pełnym zakresem równoważników, których te zastrzeżenia dotyczą.
PL 215 157 B1
Lista sekwencji
<110> | Savient Pharmaceuticals, Inc. Hartman, Jacob Mendelovitz, Simona |
<120> | Wariant oksydazy moczanowej i jego zastosowanie |
<130> | 103864-156066 |
<150> | US 60/670,541 |
<151> | 2005-04-11 |
<160> | 16 |
<170> | Patentin version 3.3 |
<210> | 1 |
<211> | 36 |
<212> | DNA |
<213> | Sekwencja sztuczna |
<220> <223> | Urykaza z wątroby świni (sensowna) |
<400> | 1 |
gcgcgaattc catggctcat taccgtaatg actaca 36 <210> 2 <211> 40 <212> DNA <213> Sekwencja sztuczna <220>
<223> Urykaza z wątroby świni (antysensowna) <400> 2 gcgctctaga agcttccatg gtcacagcct tgaagtcagc 40 <210> 3 <211> 35 <212> DNA <213> sekwencja sztuczna <220>
<223> urykaza z wątroby pawiana (D3H) (sensowna) <400> 3 gcgcgaattc catggcccac taccataaca actat 35 <210> 4 <211> 40 <212> DNA <213> Sekwencja sztuczna <22O>
<223> urykaza z wątroby pawiana (D3H) (antysensowna) <400> 4 gcgcccatgg tctagatcac agtcttgaag acaacttcct 40 <210> 5 <211> 36 <212> DNA <213> Sekwencja sztuczna
PL 215 157 B1 <220>
<223> Urykaza PBC-DeltaNC (sensowna) <400> 5 gcgcatatga cttacaaaaa gaatgatgag gtagag 36 <210> 6 <211> 54 <212> DNA <213> Sekwencja sztuczna <220>
<223> urykaza PBC-DeltaNC (antysensowna) <400> 6 ccgtctagat taagacaact tcctcttgac tgtaccagta atttttccgt atgg 54 <210> 7 <211> 299 <212> PRT <213> Sekwencja sztuczna <22O>
<223> Pig-KS-DeltaN <400> 7
Met Thr Tyr | Lys Lys Asn Asp Glu 5 | val | Glu 10 | Phe | val | Arg | Thr | Gly 15 | Tyr | ||||||
Gly | Lys | Asp | Met | Ile | Lys | val | Leu | His | Ile | Gin | Arg | Asp | Gly | Lys | Tyr |
20 | 25 | 30 | |||||||||||||
Hi s | Ser | Ile | Lys | Glu | Val | Ala | Thr | Thr | Val | Gin | Leu | Thr | Leu | Ser | Ser |
35 | 40 | 45 | |||||||||||||
Lys | Lys | Asp | Tyr | Leu | Hi s | Gly | Asp | Asn | Ser | Asp | Val | Ile | pro | Thr | Asp |
50 | 55 | 60 | |||||||||||||
Thr | Ile | Lys | Asn | Thr | val | Asn | Val | Leu | Al a | Lys | Phe | Lys | Gly | Ile | Lys |
65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||||
Ser | Ile | Gl u | Thr | Phe | Ala | Val | Thr | Ile | Cys | Glu | His | Phe | Leu | Ser | Ser |
85 | 90 | 95 | |||||||||||||
Phe | Lys | Hi s | Va1 | Ile | Arg | Al a | Gin | val | Tyr | Val | Glu | Gl u | val | Pro | Trp |
100 | 105 | 110 | |||||||||||||
Lys | Arg | Phe | Glu | Lys | Asn | Gly | Val | Lys | Hi s | Val | His | Ala | Phe | ile | Tyr |
115 | 120 | 125 | |||||||||||||
Thr | Pro | Thr | Gly | Thr | His | Phe | Cys | Gl u | Val | Glu | Gin | Ile | Arg | Asn | Gly |
130 | 13 5 | 140 | |||||||||||||
Pro | Pro | Val | Ile | Hi s | Ser | Gly | Ile | Lys | Asp | Leu | Lys | Val | Leu | Lys | Thr |
145 | 150 | 155 | 160 |
PL 215 157 B1
Thr | Gin Ser Gly | Phe Glu Gly Phe Ile Lys Asp Gin | Phe | Thr Thr 175 | Leu | ||||||||||
165 | 170 | ||||||||||||||
Pro | Glu | val | Lys | Asp | Arg | Cys | Phe | Al a | Thr | Gin | val | Tyr | cys | Lys | Trp |
180 | 185 | 190 | |||||||||||||
Arg | Tyr | His | Gin | Gly | Arg | Asp | Val | Asp | Phe | Glu | Ala | Thr | Trp | Asp | Thr |
195 | 200 | 205 | |||||||||||||
Val | Arg 210 | Ser | Ile | Val | Leu | Gl n 215 | Lys | Phe | Ala | Gly | pro 220 | Tyr | Asp | Lys | Gly |
Glu | Tyr | Ser | Pro | Ser | val | Gin | Lys | Thr | Leu | Tyr | Asp | Ile | Gin | val | Leu |
225 | 230 | 235 | 240 | ||||||||||||
Thr | Leu | Gly | Gin | Val | Pro | Glu | Ile | Glu | Asp | Met | Glu | Ile | Ser | Leu | Pro |
245 | 250 | 255 | |||||||||||||
Asn | ile | His | Tyr | Leu | Asn | Ile | Asp | Met | Ser | Lys | Met | Gly | Leu | Ile | Asn |
260 | 265 | 270 | |||||||||||||
Lys | Glu | Glu | Val | Leu | Leu | Pro | Leu | Asp | Asn | pro | Tyr | Gly | Lys | Ile | Thr |
275 | 280 | 285 | |||||||||||||
Gly | Thr | Val | Lys | Arg | Lys | Leu | Ser | Ser | Arg | Leu | |||||
290 | 295 | ||||||||||||||
<210> | 8 | ||||||||||||||
<211> | 298 | ||||||||||||||
<212> | PRT | ||||||||||||||
<213> | Sekwencji | a sztuczna |
<220>
<223> <400> Thr Tyr 1 | Pig-I 8 Lys | KS-DeltaN bez startowej Met | |||||||||||||
Lys | Asn 5 | Asp Glu | Val | Glu Phe Val 10 | Arg | Thr Gly | Tyr Gly 15 | ||||||||
Lys | Asp | Met | Ile | Lys | Val | Leu | Hi s | Ile | Gin | Arg | Asp | Gly | Lys | Tyr | His |
20 | 25 | 30 | |||||||||||||
Ser | ile | Lys | Glu | val | Ala | Thr | Thr | Val | Gin | Leu | Thr | Leu | Ser | Ser | Lys |
35 | 40 | 45 | |||||||||||||
Lys | Asp | Tyr | Leu | His | Gly | Asp | Asn | Ser | Asp | val | ile | pro | Thr | Asp | Thr |
50 | 55 | 60 | |||||||||||||
ile | Lys | Asn | Thr | val | Asn | val | Leu | Ala | Lys | Phe | Lys | Gly | Ile | Lys | Ser |
65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||||
ile | Glu | Thr | Phe | Ala | Val | Thr | Ile | Cys | Glu | His | Phe | Leu | Ser | Ser | Phe |
85 | 90 | 95 |
PL 215 157 B1
Lys | Hi s | Val | ile | Arg | Ala | Gin | Val | Tyr | val | Glu | Glu | val | Pro Trp | Lys |
100 | 105 | 110 | ||||||||||||
Arg | Phe | Glu | Lys | Asn | Gly | Val | Lys | His | val | Hi s | Ala | Phe | Ile Tyr | Thr |
115 | 120 | 12 5 | ||||||||||||
Pro | Thr | Gly | Thr | His | Phe | Cys | Glu | Val | Glu | Gin | ile | Arg | Asn Gly | Pro |
130 | 135 | 140 | ||||||||||||
Pro | val | Ile | His | Ser | Gly | Ile | Lys | Asp | Leu | Lys | val | Leu | Lys Thr | Thr |
145 | 150 | 155 | 160 | |||||||||||
Gin | Ser | Gly | Phe | Glu | Gly | Phe | Ile | Lys | Asp | Gin | Phe | Thr | Thr Leu | Pro |
165 | 170 | 175 | ||||||||||||
Glu | Val | Lys | Asp | Arg | cys | Phe | Ala | Thr | Gin | val | Tyr | Cys | Lys Trp | Arg |
180 | 185 | 190 | ||||||||||||
Tyr | His | Gin | Gly | Arg | Asp | Val | Asp | Phe | Glu | Ala | Thr | Trp | Asp Thr | val |
195 | 200 | 205 | ||||||||||||
Arg | Ser 210 | Ile | Val | Leu | Gin | Lys 215 | Phe | Ala | Gly | pro | Tyr 220 | Asp | Lys Gly | Glu |
Tyr | Ser | Pro | Ser | Val | Gin | Lys | Thr | Leu | Tyr | Asp | Ile | Gin | val Leu | Thr |
225 | 230 | 235 | 240 | |||||||||||
Leu | Gly | Gin | val | Pro | Gl U | Ile | Glu | Asp | Met | Glu | Ile | Ser | Leu Pro | Asn |
245 | 250 | 255 | ||||||||||||
Ile | His | Tyr | Leu | Asn | Ile | Asp | Met | Ser | Lys | Met | Gly | Leu | Ile Asn | Lys |
260 | 265 | 270 | ||||||||||||
Glu | Gl u | Val | Leu | Leu | Pro | Leu | ASp | Asn | Pro | Tyr | Gly | Lys | Ile Thr | Gly |
275 | 280 | 285 | ||||||||||||
Thr | Val 290 | Lys | Arg | Lys | Leu | Ser 295 | Ser | Arg | Leu | |||||
<210> | 9 | |||||||||||||
<211> | 897 | |||||||||||||
<212> | DNA | |||||||||||||
<213> | Sekwencja sztuczna | |||||||||||||
<220> | ||||||||||||||
<223> | Pig- | KS-DeltaNA | ||||||||||||
<400> | 9 | |||||||||||||
atgacttaca | aaaagaatga tgaggtagag tttgtccgaa | ctggctatgg gaaggatatg | ||||||||||||
ataaaagttc | tccatattca gcgagatgga aaatatcaca | gcattaaaga ggtggcaact | ||||||||||||
acagtgcaac | tgactttgag ctccaaaaaa gattacctgc | atggagacaa ttcagatgtc |
PL 215 157 B1 atccctacag acaccatcaa gaacacagtt aatgtcctgg cgaagttcaa aggcatcaaa 240 agcatagaaa cttttgctgt gactatctgt gagcatttcc tttcttcctt caagcatgtc 300 atcagagctc aagtctatgt ggaagaagtt ccttggaagc gttttgaaaa gaatggagtt 360 aagcatgtcc atgcatttat ttatactcct actggaacgc acttctgtga ggttgaacag 420 ataaggaatg gacctccagt cattcattct ggaatcaaag acctaaaagt cttgaaaaca 480 acccagtctg gctttgaagg attcatcaag gaccagttca ccaccctccc tgaggtgaag 540 gaccggtgct ttgccaccca agtgtactgc aaatggcgct accaccaggg cagagatgtg 600 gactttgagg ccacctggga cactgttagg agcattgtcc tgcagaaatt tgctgggccc 660 tatgacaaag gcgagtactc gccctctgtc cagaagacac tctatgacat ccaggtgctc 720 accctgggcc aggttcctga gatagaagat atggaaatca gcctgccaaa tattcactac 780 ttaaacatag acatgtccaa aatgggactg atcaacaagg aagaggtctt gctaccttta 840 gacaatccat atggaaaaat tactggtaca gtcaagagga agttgtcttc aagactg 897 <210> 10 <211> 894 <212> DNA <213> Sekwencja sztuczna
<22O> | ||||||
<223> Pig- | KS-DeltaN bez startowej ATG | |||||
<400> 10 acttacaaaa | agaatgatga | ggtagagttt | gtccgaactg | gctatgggaa | ggatatgata | 60 |
aaagttctcc | atattcagcg | agatggaaaa | tatcacagca | ttaaagaggt | ggcaactaca | 120 |
gtgcaactga | ctttgagctc | caaaaaagat | tacctgcatg | gagacaattc | agatgtcatc | 180 |
cctacagaca | ccatcaagaa | cacagttaat | gtcctggcga | agttcaaagg | catcaaaagc | 240 |
atagaaactt | ttgctgtgac | tatctgtgag | catttccttt | cttccttcaa | gcatgtcatc | 300 |
agagctcaag | tctatgtgga | agaagttcct | tggaagcgtt | ttgaaaagaa | tggagttaag | 360 |
catgtccatg | catttattta | tactcctact | ggaacgcact | tctgtgaggt | tgaacagata | 420 |
aggaatggac | ctccagtcat | tcattctgga | atcaaagacc | taaaagtctt | gaaaacaacc | 480 |
cagtctggct | ttgaaggatt | catcaaggac | cagttcacca | ccctccctga | ggtgaaggac | 540 |
cggtgctttg | ccacccaagt | gtactgcaaa | tggcgctacc | accagggcag | agatgtggac | 600 |
tttgaggcca | cctgggacac | tgttaggagc | attgtcctgc | agaaatttgc | tgggccctat | 660 |
gacaaaggcg | agtactcgcc | ctctgtccag | aagacactct | atgacatcca | ggtgctcacc | 720 |
ctgggccagg | ttcctgagat | agaagatatg | gaaatcagcc | tgccaaatat | tcactactta | 780 |
aacatagaca | tgtccaaaat | gggactgatc | aacaaggaag | aggtcttgct | acctttagac | 840 |
aatccatatg | gaaaaattac | tggtacagtc | aagaggaagt | tgtcttcaag | actg | 894 |
<210> 11 <211> 304 <212> PRT <213> Sus scrofa
PL 215 157 B1 <400> 11
Met Ala 1 | His Tyr | Arg Asn Asp Tyr Lys Lys | Asn | Asp | Glu | val | Glu 15 | Phe | |||||||
5 | 10 | ||||||||||||||
Val | Arg | Thr | Gly | Tyr | Gly | Lys | Asp | Met | Ile | Lys | val | Leu | His | Ile | Gin |
20 | 25 | 30 | |||||||||||||
Arg | Asp | Gly | Lys | Tyr | His | Ser | ile | Lys | Glu | val | Ala | Thr | Ser | val | Gin |
35 | 40 | 45 | |||||||||||||
Leu | Thr 50 | Leu | Ser | Ser | Lys | Lys 55 | Asp | Tyr | Leu | Hi s | Gly 60 | Asp | Asn | ser | Asp |
val | Ile | Pro | Thr | Asp | Thr | ile | Lys | Asn | Thr | val | Asn | val | Leu | Ala | Lys |
65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||||
Phe | Lys | Gly | ile | Lys | Ser | ile | Glu | Thr | Phe | Ala | val | Thr | Ile | Cys | Glu |
85 | 90 | 95 | |||||||||||||
His | Phe | Leu | Ser | Ser | Phe | Lys | His | val | Ile | Arg | Al a | Gin | val | Tyr | val |
100 | 105 | 110 | |||||||||||||
Glu | Glu | val | pro | Trp | Lys | Arg | Phe | Glu | Lys | Asn | Gly | val | Lys | His | val |
115 | 120 | 12 5 | |||||||||||||
Hi s | Ala | Phe | ile | Tyr | Thr | Pro | Thr | Gly | Thr | His | Phe | Cys | Glu | Val | Glu |
130 | 135 | 140 | |||||||||||||
Gin | Ile | Arg | Asn | Gly | Pro | Pro | val | ile | Hi s | Ser | Gly | Ile | Lys | Asp | Leu |
145 | 150 | 155 | 160 | ||||||||||||
Lys | val | Leu | Lys | Thr | Thr | Gin | Ser | Gly | Phe | Glu | Gly | Phe | ile | Lys | Asp |
165 | 170 | 175 | |||||||||||||
Gin | Phe | Thr | Thr | Leu | Pro | Glu | val | Lys | Asp | Arg | cys | Phe | Ala | Thr | Gin |
180 | 185 | 190 | |||||||||||||
Val | Tyr | Cys | Lys | Trp | Arg | Tyr | Hi s | Gin | Gly | Arg | Asp | val | Asp | Phe | Glu |
195 | 200 | 205 | |||||||||||||
Ala | Thr 210 | Trp | Asp | Thr | Val | Arg 215 | Ser | ile | val | Leu | Gin 220 | Lys | Phe | Ala | Gly |
Pro | Tyr | Asp | Lys | Gly | Glu | Tyr | Ser | Pro | Ser | val | Gin | Lys | Thr | Leu | Tyr |
225 | 230 | 235 | 240 | ||||||||||||
Asp | Ile | Gin | val | Leu | Thr | Leu | Gly | Gin | val | Pro | Glu | ile | Glu | Asp | Met |
245 | 250 | 255 | |||||||||||||
Glu | ile | Ser | Leu | Pro | Asn | Ile | Hi s | Tyr | Leu | Asn | Ile | Asp | Met | Ser | Lys |
260 | 265 | 270 |
PL 215 157 B1
Met Gly Leu 275 | Ile Asn Lys | Glu Glu 280 | val | Leu Leu Pro Leu Asp Asn Pro 285 | ||||||||
Tyr Gly Arg | Ile | Thr | Gly | Thr | val | Lys | Arg | Lys | Leu | Thr | Ser | Arg Leu |
290 | 295 | 300 | ||||||||||
<210> 12 <211> 296 <212> PRT |
<213> Sekwencja sztuczna <220>
<223> PBC-DeltaNC | |||||||||||||||
<400> 12 | |||||||||||||||
Met | Thr | Tyr | Lys | Lys | Asn | Asp | Glu | val | Glu | Phe | Val | Arg | Thr | Gly | Tyr |
1 | 5 | 10 | 15 | ||||||||||||
Gly | Lys | Asp | Met | ile | Lys | Val | Leu | His | Ile | Gin | Arg | Asp | Gly | Lys | Tyr |
20 | 25 | 30 | |||||||||||||
His | Ser | Ile | Lys | Gl u | val | Al a | Thr | Thr | val | Gin | Leu | Thr | Leu | Ser | Ser |
35 | 40 | 45 | |||||||||||||
Lys | Lys | ASP | Tyr | Leu | His | Gly | Asp | Asn | Ser | Asp | val | Ile | Pro | Thr | Asp |
50 | 55 | 60 | |||||||||||||
Thr | Ile | Lys | Asn | Thr | Val | Asn | Val | Leu | Ala | Lys | Phe | Lys | Gly | Ile | Lys |
65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||||
Ser | Ile | Glu | Thr | Phe | Ala | Val | Thr | Ile | cys | Glu | His | phe | Leu | Ser | Ser |
85 | 90 | 95 | |||||||||||||
Phe | Lys | His | Val | Ile | Arg | Ala | Gl n | Val | Tyr | val | Glu | Gl u | val | pro | Trp |
100 | 105 | 110 | |||||||||||||
Lys | Arg | Phe | Gl u | Lys | Asn | Gly | Val | Lys | His | val | His | Al a | Phe | Ile | Tyr |
115 | 120 | 125 | |||||||||||||
Thr | Pro | Thr | Gly | Thr | His | Phe | Cys | Gl u | val | Glu | Gin | Ile | Arg | Asn | Gly |
130 | 13 5 | 140 | |||||||||||||
Pro | Pro | val | Ile | Hi s | Ser | Gly | Ile | Lys | Asp | Leu | Lys | val | Leu | Lys | Thr |
145 | 150 | 155 | 160 | ||||||||||||
Thr | Gin | Ser | Gly | Phe | Glu | Gly | Phe | Ile | Lys | Asp | Gin | Phe | Thr | Thr | Leu |
165 | 170 | 175 | |||||||||||||
Pro | Glu | Val | Lys | Asp | Arg | Cys | Phe | Ala | Thr | Gin | val | Tyr | Cys | Lys | Trp |
180 | 185 | 190 | |||||||||||||
Arg | Tyr | His | Gin | Gly | Arg | Asp | val | Asp | Phe | Glu | Ala | Thr | τ rp | Asp | Thr |
PL 215 157 B1
195 | 200 | 205 | |||||||||||||
Val | Arg | Ser | Ile | val | Leu | Gin | Lys | Phe | Ala | Gly | Pro | Tyr | Asp | Lys | Gly |
210 | 215 | 220 | |||||||||||||
Glu | Tyr | Ser | Pro | Ser | Val | Gin | Lys | Thr | Leu | Tyr | Asp | Ile | Gin | Val | Leu |
225 | 230 | 235 | 240 | ||||||||||||
Ser | Leu | Ser | Arg | Val | Pro | Glu | Ile | Glu | Asp | Met | Glu | Ile | Ser | Leu | Pro |
245 | 250 | 255 | |||||||||||||
Asn | Ile | His | Tyr | Phe | Asn | Ile | Asp | Met | Ser | Lys | Met | Gly | Leu | Ile | Asn |
260 | 265 | 270 | |||||||||||||
Lys | Glu | Glu | Val | Leu | Leu | Pro | Leu | Asp | Asn | pro | Tyr | Gly | Lys | Ile | Thr |
275 | 280 | 285 | |||||||||||||
Gly | Thr | Val | Lys | Arg | Lys | Leu | Ser |
290 295 <210> 13 <211> 295 <212> PRT <213> Sekwencja sztuczna <22O>
<223> PBC-DeltaNC bez startowej Met <400> 13
Thr Tyr 1 | Lys | Lys Asn Asp Glu 5 | Va1 | Glu | Phe val 10 | Arg | Thr | Gly | Tyr 15 | Gly | |||||
Lys | Asp | Met | Ile | Lys | val | Leu | Hi s | Ile | Gin | Arg | Asp | Gly | Lys | Tyr | Hi s |
20 | 25 | 30 | |||||||||||||
Ser | ile | Lys | Glu | val | Al a | Thr | Thr | val | Gin | Leu | Thr | Leu | Ser | Ser. | Lys |
35 | 40 | 45 | |||||||||||||
Lys | Asp | Tyr | Leu | Hi s | Gly | Asp | Asn | Ser | Asp | val | ile | pro | Thr | Asp | Thr |
50 | 55 | 60 | |||||||||||||
Ile | Lys | Asn | Thr | val | Asn | val | Leu | Ala | Lys | Phe | Lys | Gly | ile | Lys | Ser |
65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||||
Ile | Glu | Thr | Phe | Ala | val | Thr | Ile | Cys | Gl U | Hi s | phe | Leu | Ser | Ser | Phe |
85 | 90 | 95 | |||||||||||||
Lys | His | Val | Ile | Arg | Ala | Gin | Val | Tyr | Val | Glu | Glu | Val | Pro | Trp | Lys |
100 | 105 | 110 | |||||||||||||
Arg | Phe | Glu | Lys | Asn | Gly | Val | Lys | His | Val | His | Ala | Phe | Ile | Tyr | Thr |
115 | 120 | 125 |
PL 215 157 B1
pro Thr 130 | Gly Thr | Hi s | Phe Cys Glu Val 135 | Glu | Gin ile 140 | Arg | Asn | Gly | pro | ||||||
Pro | Val | Ile | His | Ser | Gly | Ile | Lys | Asp | Leu | Lys | val | Leu | Lys | Thr | Thr |
145 | 150 | 155 | 160 | ||||||||||||
Gin | Ser | Gly | Phe | Glu | Gly | Phe | Ile | Lys | Asp | Gin | Phe | Thr | Thr | Leu | Pro |
165 | 170 | 175 | |||||||||||||
Glu | Val | Lys | Asp 180 | Arg | Cys | Phe | Ala | Thr 185 | Gin | val | Tyr | Cys | Lys 190 | Trp | Arg |
Tyr | His | Gin | Gly | Arg | Asp | Val | Asp | Phe | Glu | Ala | Thr | Trp | Asp | Thr | Val |
195 | 200 | 205 | |||||||||||||
Arg | Ser | Ile | val | Leu | Gin | Lys | Phe | Ala | Gly | pro | Tyr | Asp | Lys | Gly | Glu |
210 | 215 | 220 | |||||||||||||
Tyr | Ser | Pro | Ser | Val | Gin | Lys | Thr | Leu | Tyr | Asp | Ile | Gin | val | Leu | Ser |
225 | 230 | 235 | 240 | ||||||||||||
Leu | Ser | Arg | val | Pro | Glu | ile | Glu | Asp | Met | Glu | Ile | Ser | Leu | Pro | Asn |
245 | 250 | 255 | |||||||||||||
Ile | His | Tyr | Phe | Asn | Ile | Asp | Met | Ser | Lys | Met | Gly | Leu | ile | Asn | Lys |
260 | 265 | 270 | |||||||||||||
Glu | Glu | val | Leu | Leu | pro | Leu | Asp | Asn | Pro | Tyr | Gly | Lys | ile | Thr | Gly |
275 | 280 | 285 | |||||||||||||
Thr | val | Lys | Arg | Lys | Leu | Ser | |||||||||
290 | 295 |
<210> 14 <211> 13 <212> PRT <213> Sekwencja sztuczna <220>
<223> PBC-DeltaNC (Fragment 44-56 z PBC-DeltaNC) <400> 14
Ala Thr Thr Val Gin Leu Thr Leu Ser Ser Lys Lys Asp 1 5 10 <210> 15 <211> 936 <212> DNA <213> Papio hamadryas (pawian hamadryas) <400> 15 ccagaagaaa atggccgact accataacaa ctataaaaag aatgatgaat tggagtttgt 60 ccgaactggc tatgggaagg atatggtaaa agttctccat attcagcgag atggaaaata 120 tcacagcatt aaagaggtgg caacttcagt gcaacttact ctgagttcca aaaaagatta 180
PL 215 157 B1
cctgcatgga | gataattcag | atatcatccc | tacagacacc | atcaagaaca | cagttcatgt | 240 |
cttggcaaag | tttaagggaa | tcaaaagcat | agaagccttt | ggtgtgaata | tttgtgagta | 300 |
ttttctttct | tcttttaacc | atgtaatccg | agctcaagtc | tacgtggaag | aaatcccttg | 360 |
gaagcgtctt | gaaaagaatg | gagttaagca | tgtccatgca | tttattcaca | ctcccactgg | 420 |
aacacacttc | tgtgaagttg | aacaactgag | aagtggaccc | cccgtcatta | cttctggaat | 480 |
caaagacctc | aaggtcttga | aaacaacaca | gtctggattt | gaaggtttca | tcaaggacca | 540 |
gttcaccacc | ctccctgagg | tgaaggaccg | atgctttgcc | acccaagtgt | actgcaagtg | 600 |
gcgctaccac | cagtgcaggg | atgtggactt | cgaggctacc | tggggcacca | ttcgggacct | 660 |
tgtcctggag | aaatttgctg | ggccctatga | caaaggcgag | tactcaccct | ctgtgcagaa | 720 |
gaccctctat | gatatccagg | tgctctccct | gagccgagtt | cctgagatag | aagatatgga | 780 |
aatcagcctg | ccaaacattc | actacttcaa | tatagacatg | tccaaaatgg | gtctgatcaa | 840 |
caaggaagag | gtcttgctgc | cattagacaa | tccatatgga | aaaattactg | gtacagtcaa | 900 |
gaggaagttg | tcttcaagac | tgtgacattg | tggcca | 936 |
<210> 16 <211> 304 <212> PRT <213> Paplo hamadryas (pawian hamadryas) <400> 16
Met 1 | Ala | Asp Tyr His Asn 5 | Asn Tyr | Lys | Lys Asn 10 | Asp | Glu | Leu | Glu 15 | Phe | |||||
Val | Arg | Thr | Gly | Tyr | Gly | Lys | Asp | Met | val | Lys | Val | Leu | His | Ile | Gin |
20 | 25 | 30 | |||||||||||||
Arg | Asp | Gly | Lys | Tyr | Hi s | Ser | Ile | Lys | Glu | Val | Ala | Thr | Ser | Val | Gin |
35 | 40 | 45 | |||||||||||||
Leu | Thr 50 | Leu | Ser | Ser | Lys | Lys 55 | Asp | Tyr | Leu | His | Gly 60 | Asp | Asn | Ser | Asp |
Ile | Ile | Pro | Thr | Asp | Thr | Ile | Lys | Asn | Thr | Val | Hi s | Val | Leu | Ala | Lys |
65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||||
Phe | Lys | Gly | Ile | Lys | Ser | Ile | Glu | Ala | Phe | Gly | val | Asn | Ile | Cys | Glu |
85 | 90 | 95 | |||||||||||||
Tyr | Phe | Leu | Ser | Ser | Phe | Asn | His | Val | ile | Arg | Ala | Gin | Val | Tyr | Val |
100 | 105 | 110 | |||||||||||||
Gl u | Glu | ile | Pro | Trp | Lys | Arg | Leu | Glu | Lys | Asn | Gly | val | Lys | His | Val |
115 | 120 | 125 | |||||||||||||
Hi s | Ala | Phe | Ile | Hi s | Thr | Pro | Thr | Gly | Thr | Hi 5 | Phe | Cys | Glu | val | Glu |
130 | 135 | 140 |
PL 215 157 B1
Gin Leu Arg ser Gly Pro | Pro val | ile Thr Ser Gly ile 155 | Lys | Asp | Leu 160 | ||||||||||
145 | 150 | ||||||||||||||
Lys | val | Leu | Lys | Thr | Thr | Gin | Ser | Gly | Phe | Glu | Gly | Phe | ile | Lys | Asp |
165 | 170 | 175 | |||||||||||||
Gin | Phe | Thr | Thr | Leu | Pro | Glu | val | Lys | Asp | Arg | Cys | Phe | Ala | Thr | Gin |
180 | 185 | 190 | |||||||||||||
val | Tyr | Cys | Lys | Trp | Arg | Tyr | His | Gin | cys | Arg | Asp | val | Asp | Phe | Glu |
195 | 200 | 205 | |||||||||||||
Ala | Thr | Trp | Gly | Thr | Ile | Arg | Asp | Leu | val | Leu | Glu | Lys | Phe | Al a | Gly |
210 | 215 | 220 | |||||||||||||
Pro | Tyr | Asp | Lys | Gly | Glu | Tyr | Ser | Pro | Ser | Val | Gl n | Lys | Thr | Leu | Tyr |
225 | 230 | 235 | 240 | ||||||||||||
Asp | Ile | Gin | val | Leu | Ser | Leu | Ser | Arg | val | Pro | Glu | Ile | Glu | Asp | Met |
245 | 250 | 255 | |||||||||||||
Glu | ile | Ser | Leu | Pro | Asn | Ile | His | Tyr | Phe | Asn | Ile | Asp | Met | Ser | Lys |
260 | 265 | 270 | |||||||||||||
Met | Gly | Leu | Ile | Asn | Lys | Glu | Gl u | Val | Leu | Leu | Pro | Leu | Asp | Asn | Pro |
275 | 280 | 285 | |||||||||||||
Tyr | Gly | Lys | ile | Thr | Gly | Thr | Val | Lys | Arg | Lys | Leu | Ser | Ser | Arg | Leu |
290 | 295 | 300 |
Zastrzeżenia patentowe
Claims (23)
- Zastrzeżenia patentowe1. Wyizolowana urykaza wybrana z grupy składającej się z urykazy składającej się z sekwencji aminokwasowej przedstawionej na SEK NR ID: 7, urykazy składającej się z sekwencji aminokwasowej przedstawionej na SEK NR ID: 8, urykazy składającej się z sekwencji aminokwasowej przedstawionej na SEK NR ID: 12 i urykazy składającej sie z sekwencji aminokwasowej przedstawionej na SEK NRID: 13.
- 2. Urykaza według zastrz. 1, znamienna tym, że jest urykazą PEG-ylowaną.
- 3. Wyizolowany kwas nukleinowy obejmujący sekwencję kwasu nukleinowego, która koduje urykazę określoną w zastrz. 1.
- 4. Wyizolowany kwas nukleinowy według zastrz. 3, znamienny tym, że sekwencja kwasu nukleinowego jest połączona funkcjonalnie z heterologicznym promotorem.
- 5. Kwas nukleinowy według zastrz. 3, znamienny tym, że promotorem jest promotor osmB.
- 6. Wektor zbudowany z kwasu nukleinowego, który obejmuje kwas nukleinowy określony w zastrz. 4.
- 7. Komórka gospodarza obejmująca wektor określony w zastrz. 6.
- 8. Sposób wytwarzania urykazy, znamienny tym, że obejmuje etap hodowania komórki gospodarza określonej w zastrz. 7, w warunkach, w których sekwencja kwasu nukleinowego ulega ekspresji w komórce gospodarza, oraz etap izolowania wyrażonej urykazy.
- 9. Kompozycja farmaceutyczna zawierająca:PL 215 157 B1 (a) wyizolowaną urykazę obejmującą sekwencję aminokwasową SEK. NR ID. 7; oraz (b) dopuszczalny farmaceutycznie nośnik;przy czym urykaza jest skoniugowana z polimerem.
- 10. Kompozycja farmaceutyczna zawierająca:(a) wyizolowaną urykazę obejmującą sekwencję aminokwasową SEK. NR ID. 8; oraz (b) dopuszczalny farmaceutycznie nośnik;przy czym urykaza jest skoniugowana z polimerem.
- 11. Kompozycja farmaceutyczna według dowolnego spośród zastrz. 9 i 10, znamienna tym, że polimer jest wybrany z grupy składającej się z glikolu polietylenowego, dekstranu, glikolu polipropylenowego, hydroksypropylometyIoceIulozy, karboksymetylocelulozy, poliwinylopirolidonu, alkoholu poliwinylowego.
- 12. Kompozycja farmaceutyczna według zastrz. 11, znamienna tym, że obejmuje od 2 do 12 cząsteczek glikolu polietylenowego na każdą podjednostkę urykazy.
- 13. Kompozycja farmaceutyczna według zastrz. 12, znamienna tym, że obejmuje od 3 do 10 cząsteczek glikolu polietylenowego na każdą podjednostkę urykazy.
- 14. Kompozycja farmaceutyczna według zastrz. 11, znamienna tym, że każda cząsteczka glikolu polietylenowego ma ciężar cząsteczkowy w zakresie od 1 000 do 100 000.
- 15. Kompozycja farmaceutyczna według zastrz. 14, znamienna tym, że każda cząsteczka glikolu polietylenowego ma ciężar cząsteczkowy w zakresie od 1 000 do 50 000.
- 16. Kompozycja farmaceutyczna według zastrz. 15, znamienna tym, że każda cząsteczka glikolu polietylenowego ma ciężar cząsteczkowy w zakresie od 5 000 do 20 000.
- 17. Kompozycja farmaceutyczna według zastrz. 16, znamienna tym, że każda cząsteczka glikolu polietylenowego ma ciężar cząsteczkowy wynoszący około 10 000.
- 18. Sposób wytwarzania kompozycji farmaceutycznej do zmniejszania poziomów kwasu moczowego w płynach biologicznych u wymagającego tego osobnika, znamienny tym, że obejmuje:(a) wytwarzanie koniugatu urykazy o sekwencji aminokwasowej SEK. NR ID. 7 z polimerem;oraz (b) dodawanie koniugatu urykazy do dopuszczalnego farmaceutycznie nośnika.
- 19. Sposób wytwarzania kompozycji farmaceutycznej do zmniejszania poziomów kwasu moczowego w płynach biologicznych u wymagającego tego osobnika, znamienny tym, że obejmuje:(a) wytwarzanie koniugatu urykazy o sekwencji aminokwasowej SEK. NR ID. 8 z polimerem;oraz (b) dodawanie koniugatu urykazy do dopuszczalnego farmaceutycznie nośnika.
- 20. Sposób według zastrz. 18, znamienny tym, że płynem biologicznym jest krew.
- 21. Sposób według zastrz. 19, znamienny tym, że płynem biologicznym jest krew.
- 22. Sposób według zastrz. 18, znamienny tym, że polimer jest wybrany z grupy składającej się z glikolu polietylenowego, dekstranu, glikolu polipropylenowego, hydroksypropylometylocelulozy, karboksymetylocelulozy, poliwinylopirolidonu, alkoholu poliwinylowego.
- 23. Sposób według zastrz. 19, znamienny tym, że polimer jest wybrany z grupy składającej się z glikolu polietylenowego, dekstranu, glikolu polipropylenowego, hydroksypropyIometylocelulozy, karboksymetylocelulozy, poliwinylopirolidonu, alkoholu poliwinylowego.
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US67054105P | 2005-04-11 | 2005-04-11 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
PL384263A1 PL384263A1 (pl) | 2008-07-21 |
PL215157B1 true PL215157B1 (pl) | 2013-10-31 |
Family
ID=37087650
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
PL384263A PL215157B1 (pl) | 2005-04-11 | 2006-04-11 | Wyizolowana urykaza, zawierajaca ja kompozycja farmaceutyczna, kodujacy ja wyizolowany kwas nukleinowy, zawierajacy go wektor i obejmujaca ten wektor komórka gospodarza oraz sposoby wytwarzania urykazy oraz zawierajacej urykaze kompozycji farmaceutycznej |
Country Status (18)
Country | Link |
---|---|
US (6) | US7811800B2 (pl) |
EP (2) | EP2918676B1 (pl) |
JP (3) | JP2008535499A (pl) |
KR (1) | KR101304289B1 (pl) |
CN (2) | CN102807973A (pl) |
AU (1) | AU2006235437B2 (pl) |
BR (1) | BRPI0612942A2 (pl) |
CA (1) | CA2604545A1 (pl) |
CZ (1) | CZ2007700A3 (pl) |
HU (1) | HU229626B1 (pl) |
IL (6) | IL186511A (pl) |
MX (1) | MX2007012548A (pl) |
NZ (1) | NZ562291A (pl) |
PL (1) | PL215157B1 (pl) |
RU (1) | RU2435847C2 (pl) |
SG (3) | SG161248A1 (pl) |
TW (1) | TW200716751A (pl) |
WO (1) | WO2006110761A2 (pl) |
Families Citing this family (32)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE69925917T2 (de) * | 1998-08-06 | 2006-05-11 | Mountain View Pharmaceuticals, Inc., Menlo Park | PEG-Urikase Konjugate und Verwendung davon |
US20080159976A1 (en) * | 2005-04-11 | 2008-07-03 | Jacob Hartman | Methods for lowering elevated uric acid levels using intravenous injections of PEG-uricase |
WO2006110819A2 (en) | 2005-04-11 | 2006-10-19 | Savient Pharmaceuticals, Inc. | Variant forms of urate oxidase and use thereof |
US8148123B2 (en) * | 2005-04-11 | 2012-04-03 | Savient Pharmaceuticals, Inc. | Methods for lowering elevated uric acid levels using intravenous injections of PEG-uricase |
EP2013225B1 (en) * | 2006-04-12 | 2014-12-17 | Crealta Pharmaceuticals LLC | Purification of proteins with cationic surfactant |
JP4890134B2 (ja) * | 2006-07-20 | 2012-03-07 | 東洋紡績株式会社 | ウリカーゼの安定性を向上させる方法、および安定性の向上した改変型ウリカーゼ |
JP4890132B2 (ja) * | 2006-07-20 | 2012-03-07 | 東洋紡績株式会社 | ウリカーゼの比活性を向上させる方法、および比活性の向上した改変型ウリカーゼ |
JP4890133B2 (ja) * | 2006-07-20 | 2012-03-07 | 東洋紡績株式会社 | 安定な尿酸測定試薬 |
CN102803954A (zh) | 2009-06-25 | 2012-11-28 | 萨文特制药公司 | 通过监测peg化尿酸酶治疗期间的血清尿酸预测输液反应风险和抗体介导的响应丧失的方法和试剂盒 |
CN102051348B (zh) * | 2009-10-27 | 2012-10-03 | 重庆富进生物医药有限公司 | 人源化重组尿酸酶及其突变体 |
WO2011127393A2 (en) | 2010-04-08 | 2011-10-13 | Georgia Tech Research Corporation | Variants of ancestral uricases and uses thereof |
CN102634492B (zh) | 2011-02-14 | 2015-06-10 | 重庆富进生物医药有限公司 | 聚乙二醇化犬源尿酸氧化酶类似物及其制备方法和应用 |
CN102827073A (zh) | 2011-06-17 | 2012-12-19 | 安吉奥斯医药品有限公司 | 治疗活性组合物和它们的使用方法 |
US9474779B2 (en) | 2012-01-19 | 2016-10-25 | Agios Pharmaceuticals, Inc. | Therapeutically active compositions and their methods of use |
WO2014170916A2 (en) | 2013-04-17 | 2014-10-23 | Council Of Scientific & Industrial Research | Novel uricase mutants |
WO2015003360A2 (en) | 2013-07-11 | 2015-01-15 | Agios Pharmaceuticals, Inc. | Therapeutically active compounds and their methods of use |
EP3019480B1 (en) | 2013-07-11 | 2020-05-06 | Agios Pharmaceuticals, Inc. | 2,4- or 4,6-diaminopyrimidine compounds as idh2 mutants inhibitors for the treatment of cancer |
US9579324B2 (en) | 2013-07-11 | 2017-02-28 | Agios Pharmaceuticals, Inc | Therapeutically active compounds and their methods of use |
WO2015003355A2 (en) | 2013-07-11 | 2015-01-15 | Agios Pharmaceuticals, Inc. | Therapeutically active compounds and their methods of use |
US20150031627A1 (en) | 2013-07-25 | 2015-01-29 | Agios Pharmaceuticals, Inc | Therapeutically active compounds and their methods of use |
US9968595B2 (en) | 2014-03-14 | 2018-05-15 | Agios Pharmaceuticals, Inc. | Pharmaceutical compositions of therapeutically active compounds |
RU2752497C2 (ru) | 2015-05-15 | 2021-07-28 | МЕДИММЬЮН, ЭлЭлСи | Улучшенные последовательности уриказы и способы лечения |
CN106554948B (zh) * | 2015-09-29 | 2019-06-25 | 上海生物制品研究所有限责任公司 | 突变型尿酸酶、peg修饰的突变型尿酸酶及其应用 |
BR122024000250A2 (pt) | 2015-10-15 | 2024-02-27 | Les Laboratoires Servier | Uso de um inibidor de desidrogenase isocitrato 1 (idh1) mutante e um agente desmetilante de dna |
DK3362065T3 (da) | 2015-10-15 | 2024-06-17 | Servier Lab | Kombinationsbehandling omfattende ivosidenib, cytarabin og daunorubicin eller idarubicin til behandling af akut myeloid leukæmi |
EP3538135A4 (en) | 2016-11-11 | 2020-07-29 | Horizon Pharma Rheumatology LLC | POLYTHERAPIES OF PREDNISONE AND URICASE MOLECULES AND THEIR USES |
US10980788B2 (en) | 2018-06-08 | 2021-04-20 | Agios Pharmaceuticals, Inc. | Therapy for treating malignancies |
CN109207479A (zh) * | 2018-09-07 | 2019-01-15 | 大连大学 | 海洋低温尿酸氧化酶启动子和终止子 |
CN111088268B (zh) * | 2019-03-05 | 2022-08-02 | 北京锦篮基因科技有限公司 | 一种高尿酸血症的基因治疗药物 |
CN113244412B (zh) * | 2021-06-25 | 2021-10-26 | 深圳市瑞吉生物科技有限公司 | 一种基于mRNA剂型的治疗高尿酸血症或痛风的药物及其制备方法 |
WO2023233034A1 (en) | 2022-06-03 | 2023-12-07 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Recombinant expression of myeloid-derived growth factor |
WO2024124142A2 (en) * | 2022-12-08 | 2024-06-13 | Insmed Incorporated | Uricase conjugates and methods of use thereof |
Family Cites Families (81)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3451996A (en) | 1968-02-12 | 1969-06-24 | Thompson Farms Co | Method for the preparation of heparin |
US3616231A (en) | 1968-11-14 | 1971-10-26 | Boehringer Mannheim Gmbh | Process for the production of uricase |
US3931399A (en) | 1970-12-22 | 1976-01-06 | Behringwerke Aktiengesellschaft | Process for isolating a fibrin-stabilizing factor |
US4179337A (en) | 1973-07-20 | 1979-12-18 | Davis Frank F | Non-immunogenic polypeptides |
US4169764A (en) | 1975-08-13 | 1979-10-02 | Ajinomoto Co., Inc. | Process for production of urokinase |
US4141973A (en) | 1975-10-17 | 1979-02-27 | Biotrics, Inc. | Ultrapure hyaluronic acid and the use thereof |
US4301153A (en) | 1977-03-21 | 1981-11-17 | Riker Laboratories, Inc. | Heparin preparation |
US4425431A (en) | 1978-04-20 | 1984-01-10 | Toyo Soda Manufacturing Co., Ltd. | Production of an allose-containing polysaccharide |
US4312979A (en) | 1978-04-20 | 1982-01-26 | Toyo Soda Manufacturing Co., Ltd. | Polysaccharides containing allose |
JPS6031472B2 (ja) | 1978-12-14 | 1985-07-22 | 協和醗酵工業株式会社 | 酸性ウリカ−ゼ |
JPS5599189A (en) | 1979-01-22 | 1980-07-28 | Mihama Hisaharu | Modified uricase free from antigenicity and its preparation |
DE2916711A1 (de) | 1979-04-25 | 1980-11-06 | Behringwerke Ag | Blutgerinnungsfaktoren und verfahren zu ihrer herstellung |
FR2475900A1 (fr) | 1980-02-20 | 1981-08-21 | Fabre Sa Pierre | Complexe vaccinal contenant un antigene specifique et vaccin le contenant |
JPS5740503A (en) | 1980-08-22 | 1982-03-06 | Seikagaku Kogyo Co Ltd | Separation of saccharides |
FR2497006A1 (fr) | 1980-12-24 | 1982-06-25 | Ind Electro Ste Gle | Contacts electriques pour cables coaxiaux et cables bifilaires |
DE3126759A1 (de) | 1981-07-07 | 1983-01-27 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Loesliche leber-uricase, verfahren zu ihrer herstellung und verwendung |
US4485176A (en) | 1982-06-28 | 1984-11-27 | E. I. Du Pont De Nemours & Company | Turbidimetric method for measuring protein in urine and cerebrospinal fluid |
EP0109688A3 (en) | 1982-11-23 | 1986-12-03 | The Wellcome Foundation Limited | Improved complexes, processes for obtaining them and formulations containing such complexes |
US4732863A (en) | 1984-12-31 | 1988-03-22 | University Of New Mexico | PEG-modified antibody with reduced affinity for cell surface Fc receptors |
JPH0671425B2 (ja) | 1985-06-05 | 1994-09-14 | サッポロビール株式会社 | ウリカ−ゼおよびその製造法 |
US4917888A (en) | 1985-06-26 | 1990-04-17 | Cetus Corporation | Solubilization of immunotoxins for pharmaceutical compositions using polymer conjugation |
US4766106A (en) | 1985-06-26 | 1988-08-23 | Cetus Corporation | Solubilization of proteins for pharmaceutical compositions using polymer conjugation |
AU597924B2 (en) | 1985-12-11 | 1990-06-14 | Natinco Nv | Solubilization of protein aggregates |
DD279486A1 (de) | 1986-03-10 | 1990-06-06 | Akad Wissenschaften Ddr | Verfahren zur aktivierung von hydroxylgruppenhaltigen polymeren verbindungen |
JPS6255079A (ja) | 1986-04-23 | 1987-03-10 | Mihama Hisaharu | 修飾ウリカ−ゼ |
AU612133B2 (en) | 1987-02-20 | 1991-07-04 | Natinco Nv | Production of proteins in active forms |
CA1305285C (en) | 1987-04-21 | 1992-07-14 | Malcolm Roy Brandon | Production of proteins in active forms |
AU609824B2 (en) | 1987-06-15 | 1991-05-09 | Southern Cross Biotech Pty Ltd. | Production of proteins in active forms |
US5080891A (en) | 1987-08-03 | 1992-01-14 | Ddi Pharmaceuticals, Inc. | Conjugates of superoxide dismutase coupled to high molecular weight polyalkylene glycols |
US4847325A (en) | 1988-01-20 | 1989-07-11 | Cetus Corporation | Conjugation of polymer to colony stimulating factor-1 |
US4945086A (en) | 1988-05-03 | 1990-07-31 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Smooth muscle cell growth inhibitor |
US5955336A (en) | 1988-08-17 | 1999-09-21 | Toyo Boseki Kabushiki Kaisha | DNA sequence for uricase and manufacturing process of uricase |
US5349052A (en) | 1988-10-20 | 1994-09-20 | Royal Free Hospital School Of Medicine | Process for fractionating polyethylene glycol (PEG)-protein adducts and an adduct for PEG and granulocyte-macrophage colony stimulating factor |
US5324844A (en) | 1989-04-19 | 1994-06-28 | Enzon, Inc. | Active carbonates of polyalkylene oxides for modification of polypeptides |
US5010183A (en) | 1989-07-07 | 1991-04-23 | Macfarlane Donald E | Process for purifying DNA and RNA using cationic detergents |
US5382518A (en) | 1989-07-13 | 1995-01-17 | Sanofi | Urate oxidase activity protein, recombinant gene coding therefor, expression vector, micro-organisms and transformed cells |
NZ234453A (en) | 1989-07-13 | 1993-01-27 | Sanofi Sa | Recombinant dna encoding urate oxidase, and vector, host, protein and pharmaceutical compositions associated therewith |
US5286637A (en) | 1989-08-07 | 1994-02-15 | Debiopharm, S.A. | Biologically active drug polymer derivatives and method for preparing same |
WO1991002977A1 (en) | 1989-08-23 | 1991-03-07 | Hadassah Medical Organization | Wound healing preparations containing heparanase |
JPH03148298A (ja) | 1989-11-01 | 1991-06-25 | Sumitomo Pharmaceut Co Ltd | 修飾ペプチドおよびその製造方法 |
US5766897A (en) | 1990-06-21 | 1998-06-16 | Incyte Pharmaceuticals, Inc. | Cysteine-pegylated proteins |
US5653974A (en) | 1990-10-18 | 1997-08-05 | Board Of Regents,The University Of Texas System | Preparation and characterization of liposomal formulations of tumor necrosis factor |
CA2444415A1 (en) | 1991-07-02 | 1993-01-21 | Nektar Therapeutics | Method and device for delivering aerosolized medicaments |
YU66892A (sh) | 1991-08-20 | 1995-10-24 | Hoechst Ag. | Fosfoinositolglikan - peptid sa delovanjem kao insulin |
US5298643A (en) | 1992-12-22 | 1994-03-29 | Enzon, Inc. | Aryl imidate activated polyalkylene oxides |
US5321095A (en) | 1993-02-02 | 1994-06-14 | Enzon, Inc. | Azlactone activated polyalkylene oxides |
AU6240494A (en) | 1993-02-16 | 1994-09-14 | Enzon, Inc. | Ribosome inactivating protein compositions having reduced antigenicity |
US6385312B1 (en) | 1993-02-22 | 2002-05-07 | Murex Securities, Ltd. | Automatic routing and information system for telephonic services |
JP3875730B2 (ja) | 1993-02-22 | 2007-01-31 | サノフィ・アベンティス株式会社 | 自己免疫疾患の予防治療剤 |
US5298410A (en) | 1993-02-25 | 1994-03-29 | Sterling Winthrop Inc. | Lyophilized formulation of polyethylene oxide modified proteins with increased shelf-life |
AU682361B2 (en) | 1993-04-09 | 1997-10-02 | Bio-Technology General Corporation | Novel polypeptide having factor XA inhibitory activity |
AU7113594A (en) | 1993-06-21 | 1995-01-17 | Enzon, Inc. | Site specific synthesis of conjugated peptides |
US5643575A (en) | 1993-10-27 | 1997-07-01 | Enzon, Inc. | Non-antigenic branched polymer conjugates |
US5919455A (en) | 1993-10-27 | 1999-07-06 | Enzon, Inc. | Non-antigenic branched polymer conjugates |
AU685187B2 (en) | 1993-10-29 | 1998-01-15 | Incyte Pharmaceuticals, Inc. | Chimeric proteins including protease nexin-1 variants |
US5795776A (en) | 1994-03-22 | 1998-08-18 | Bio-Technology General Corp. | Expression plasmids regulated by an OSMB promoter |
FI96317C (fi) | 1994-05-31 | 1996-06-10 | Exavena Oy | Menetelmä hienojakoisten ja muunnettujen tärkkelyksien valmistamiseksi |
DE4423131A1 (de) * | 1994-07-01 | 1996-01-04 | Bayer Ag | Neue hIL-4-Mutantenproteine als Antagonisten oder partielle Agonisten des humanen Interleukin 4 |
US5633227A (en) | 1994-09-12 | 1997-05-27 | Miles, Inc. | Secretory leukocyte protease inhibitor as an inhibitor of tryptase |
JPH10510516A (ja) | 1994-12-07 | 1998-10-13 | ノボ ノルディスク アクティーゼルスカブ | アレルゲン性を減らしたポリペプチド |
US5932462A (en) | 1995-01-10 | 1999-08-03 | Shearwater Polymers, Inc. | Multiarmed, monofunctional, polymer for coupling to molecules and surfaces |
IL116696A (en) | 1995-01-25 | 1999-08-17 | Bio Technology General Corp | Production of enzymatically active recombinant carboxypeptidase b |
FR2733914B1 (fr) | 1995-05-11 | 1997-08-01 | Sanofi Sa | Composition de liquide stable contenant de l'urate oxydase et composition lyophilisee pour sa preparation |
JPH09154581A (ja) | 1995-12-05 | 1997-06-17 | Asahi Chem Ind Co Ltd | ウリカーゼを生産する実質上純粋な微生物 |
US6006753A (en) | 1996-08-30 | 1999-12-28 | Eli Lilly And Company | Use of GLP-1 or analogs to abolish catabolic changes after surgery |
ES2275300T3 (es) | 1997-01-15 | 2007-06-01 | Phoenix Pharmacologics, Inc. | Factor de necrosis tumoral modificado. |
KR100369838B1 (ko) | 1997-02-26 | 2003-09-29 | 주식회사 엘지생명과학 | 한국형c형간염바이러스의비구조단백질3에서유래한단백질분해효소단백질및그의제조방법 |
JPH1175876A (ja) * | 1997-07-04 | 1999-03-23 | Ajinomoto Co Inc | 新規な微生物トランスグルタミナーゼの製造法 |
CA2333747C (en) | 1998-06-01 | 2008-02-19 | Genentech, Inc. | Separation of protein monomers by use of ion-exchange chromatography |
PT1100880E (pt) * | 1998-08-06 | 2011-01-13 | Univ Duke | Urato-oxidase |
HU226294B1 (en) | 1998-08-06 | 2008-08-28 | Mountain View Pharmaceuticals | Peg-urate oxidase conjugates and use thereof |
DE69925917T2 (de) | 1998-08-06 | 2006-05-11 | Mountain View Pharmaceuticals, Inc., Menlo Park | PEG-Urikase Konjugate und Verwendung davon |
US6783965B1 (en) | 2000-02-10 | 2004-08-31 | Mountain View Pharmaceuticals, Inc. | Aggregate-free urate oxidase for preparation of non-immunogenic polymer conjugates |
US6429860B1 (en) * | 1999-06-15 | 2002-08-06 | Visicomp, Inc. | Method and system for run-time visualization of the function and operation of a computer program |
EP1266338A2 (en) | 2000-02-14 | 2002-12-18 | First Opinion Corporation | Automated diagnostic system and method |
US6913915B2 (en) * | 2001-08-02 | 2005-07-05 | Phoenix Pharmacologics, Inc. | PEG-modified uricase |
KR20030043780A (ko) | 2001-11-28 | 2003-06-02 | 주식회사 바이오폴리메드 | 생체적합성 비항원성 공중합체와 그 결합체 및 이들의제조방법 |
WO2006110819A2 (en) * | 2005-04-11 | 2006-10-19 | Savient Pharmaceuticals, Inc. | Variant forms of urate oxidase and use thereof |
US8148123B2 (en) | 2005-04-11 | 2012-04-03 | Savient Pharmaceuticals, Inc. | Methods for lowering elevated uric acid levels using intravenous injections of PEG-uricase |
US20080159976A1 (en) | 2005-04-11 | 2008-07-03 | Jacob Hartman | Methods for lowering elevated uric acid levels using intravenous injections of PEG-uricase |
EP2013225B1 (en) | 2006-04-12 | 2014-12-17 | Crealta Pharmaceuticals LLC | Purification of proteins with cationic surfactant |
-
2006
- 2006-04-11 US US11/918,296 patent/US7811800B2/en active Active
- 2006-04-11 MX MX2007012548A patent/MX2007012548A/es active IP Right Grant
- 2006-04-11 SG SG201002408-1A patent/SG161248A1/en unknown
- 2006-04-11 CZ CZ20070700A patent/CZ2007700A3/cs unknown
- 2006-04-11 WO PCT/US2006/013502 patent/WO2006110761A2/en active Application Filing
- 2006-04-11 NZ NZ562291A patent/NZ562291A/en unknown
- 2006-04-11 SG SG2014009484A patent/SG2014009484A/en unknown
- 2006-04-11 JP JP2008505656A patent/JP2008535499A/ja active Pending
- 2006-04-11 CN CN2012102463263A patent/CN102807973A/zh active Pending
- 2006-04-11 PL PL384263A patent/PL215157B1/pl unknown
- 2006-04-11 BR BRPI0612942-0A patent/BRPI0612942A2/pt not_active Application Discontinuation
- 2006-04-11 CN CN2006800206898A patent/CN101194016B/zh active Active
- 2006-04-11 TW TW095112941A patent/TW200716751A/zh unknown
- 2006-04-11 HU HU0700729A patent/HU229626B1/hu unknown
- 2006-04-11 EP EP14192835.8A patent/EP2918676B1/en active Active
- 2006-04-11 EP EP06740863A patent/EP1871877A2/en not_active Ceased
- 2006-04-11 AU AU2006235437A patent/AU2006235437B2/en active Active
- 2006-04-11 KR KR1020077026114A patent/KR101304289B1/ko active IP Right Grant
- 2006-04-11 CA CA002604545A patent/CA2604545A1/en not_active Abandoned
- 2006-04-11 SG SG10201706384VA patent/SG10201706384VA/en unknown
- 2006-04-11 RU RU2007141683/10A patent/RU2435847C2/ru active
-
2007
- 2007-10-09 IL IL186511A patent/IL186511A/en active IP Right Grant
-
2010
- 2010-09-10 US US12/879,084 patent/US7964381B2/en active Active
- 2010-10-12 IL IL208643A patent/IL208643A0/en active IP Right Grant
-
2011
- 2011-05-13 US US13/107,498 patent/US8034594B2/en active Active
- 2011-09-07 US US13/226,891 patent/US8178334B2/en active Active
-
2012
- 2012-04-20 US US13/452,151 patent/US8293228B2/en active Active
- 2012-09-20 US US13/623,512 patent/US8465735B2/en active Active
- 2012-12-06 IL IL223477A patent/IL223477A/en active IP Right Grant
- 2012-12-06 IL IL223476A patent/IL223476A/en active IP Right Grant
-
2013
- 2013-01-23 JP JP2013009960A patent/JP2013090636A/ja not_active Withdrawn
-
2015
- 2015-01-07 JP JP2015001757A patent/JP2015077144A/ja not_active Withdrawn
-
2017
- 2017-12-06 IL IL256157A patent/IL256157B/en active IP Right Grant
-
2021
- 2021-03-03 IL IL281228A patent/IL281228A/en unknown
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US10160958B2 (en) | Variant forms of urate oxidase and use thereof | |
PL215157B1 (pl) | Wyizolowana urykaza, zawierajaca ja kompozycja farmaceutyczna, kodujacy ja wyizolowany kwas nukleinowy, zawierajacy go wektor i obejmujaca ten wektor komórka gospodarza oraz sposoby wytwarzania urykazy oraz zawierajacej urykaze kompozycji farmaceutycznej | |
AU2011257764B2 (en) | A variant form of urate oxidase and use thereof |