JPH03148298A

JPH03148298A - 修飾ペプチドおよびその製造方法

Info

Publication number: JPH03148298A
Application number: JP1285927A
Authority: JP
Inventors: Akihiko Sano; 明彦佐野; Hiroo Maeda; 弘雄前田; Hiroyuki Kai; 甲斐　啓幸; Keiichi Ono; 圭一小野
Original assignee: Sumitomo Pharmaceuticals Co Ltd
Current assignee: Sumitomo Pharmaceuticals Co Ltd
Priority date: 1989-11-01
Filing date: 1989-11-01
Publication date: 1991-06-25

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】〔産業上の利用分野〕本発明は新規なポリエチレングリコール誘導体によって
修飾されたグアニジノ基を有する特定のペプチドおよび
その製造方法に関する。

〔従来の技術・発明が解決しようとする課題〕−近年、
蛋白質の研究の発展に伴い種々の作用を持つペプチド、
特に生理活性蛋白質が数多く発見されている。また、遺
伝子組み換え技術やペプチドの有機合成法の進歩により
これら生理活性ペプチド、またはその類似構造化合物を
大量に入手することが回旋となってきた。これらの特殊
な活性を持つペプチドには医薬品として非常に有用のも
のが多い。

しかしながら、循環系に投与されたペプチドのクリアラ
ンスは一般に非常に遠いことが知られているので、当該
ペプチドの持続性の改善が待望される。また、ペプチド
が異種動物から得られたものやペプチド・蛋白質工学に
て設計されたベプチ・ドのようにヒト由来のものとは構
造の異なるものである場合には、抗体が産生されて重篤
な症状を引き起こす危険性が懸念されるので、当該ペプ
チドの抗原性の改善が待望される。

これらのペプチドを医薬品として用いるためにはこれら
の抗原性や持続性に対する問題を解決しなければならな
い、このような問題点を解決する手段としてペプチドを
高分子化合物により化学的に修飾する方法はきわめて有
効な手段であることが知られている。

しかして、ポリエチレングリコール誘導体は、それ自体
免疫原性が無く、また水溶液中てペプチド（蛋白質）の
３次構造に影響を与えないという優れた特徴を持ってい
るため、ペプチドの高分子修飾試剤として多用されてい
る。

ポリエチレングリコール誘導体を用いてペプチドを修飾
するに際して、その活性化法としてはトリアジン誘導体
による活性化法〔稲田等Ｊｐａ、　Ｊ。

Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ、　（Ｇａｌ）、　ＴＶｍ　ｌ６
４４２７Ｇ　（１９８６）、　）、Ｎ−ヒドロキシコ八
り酸イミドによる活性ニスチル法〔レオナルド、エム等
Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ、　　４Ｌ１５８１−１５８４
　（１９８４）、　）　、カルボニルジイミダゾールに
よる活性化法〔チャールズ、オー、ピーチャム等＾ｍａ
ｌ　Ｉｌｉｏｃｂｅ−，１３１、２５−３３（１９８３
）、）　、アルデヒドによる活性化法〔勝野等、特開昭
６１−１７８９２６号公報〕等が一般的のものとして知
られている。

しかしながら、これらの修飾法はいずれもペプチドのＮ
末端またはりジン残基側鎖のアミノ基を修飾するもので
ある。

一方、ペプチドには生理活性の発現にＮ末端アミノ基や
リジン側鎖のアミノ基が重要な役割を持　　　つものが
敗多く存在する。従って、この様なペプチドの場合には
上記の様な活性化試剤を用いてアミノ基を修飾すること
は活性の低下につながるので好ましくない、また、リジ
ン残基のみを修飾するものではその修飾部位が限られて
しまう、ペプチドの性質をコントロールするためにはア
ミノ基以外の種々の部位を修飾することが効果的である
と考えられるので他の官能基を修飾する試剤を開発する
意義は極めて大きい、現在迄に知られている他の官能基
の修飾試剤としては、メルカプト基を修飾するマレイ−
ンイミド誘導体、カルボキシル基を修飾するアミノ誘導
体〔フランクＦ、デービス等、特公昭５０ー２３５８７
号公報〕等が知られている。しかしながら、メルカプト
基は分子表面にメルカプト基の形で存在しなければ修飾
困難であると考えられるが、その様な構造を持つペプチ
ドは非常に少ない。

また、アミノ誘導体による修飾の場合、ペプチド中のア
ミノ基による副反応が起きる為に修飾試剤のみを選択的
に反応させることが困難である。

一方、ペプチド中のグアニジノ基の低分子修飾試剤とし
ては、フェニルグリオキザール（ジャーナル・オブ・バ
イオロジカル・ケミストリー、２４８巻、６１７１　（
１９６８））、２．３−ブタンシオン（バイオケミスト
リー、１２ｊ４．３９１５　（１９７３））、１．２−
シクロヘキサンジオン（ジャーナル・オブ・バイオロジ
カル・ケミストリー、２５０巻、５５７　（１９７５）
）などが知られているが、ポリエチレングリコール誘導
体でペプチド中のグアニジノ基を修飾できる誘導体は、
未だ知られていない。

本発明の目的は、ペプチドのグアニジノ基を選択的に修
飾することのできるポリエチレングリコール誘導体を使
用することによって得られる特定の修飾ペプチドを提供
することである。

本発明の他の目的は、上記修飾ペプチドの製造方法を提
供することである。

〔課題を解決するための手段〕

本発明者らは上記目的を達成するために種々研究を重ね
て来たところ、下記ポリエチレングリコール誘導体（１
）が特定ペプチドにおけるグアニジノ基を選択的に修飾
することを知見し、さらに研究を重ねて本発明を完成す
るに至った。

本願の第１番目の発明は式％式％（）　（式中、Ｒは低級アルキル基を表し、ｎはポリエチレ
ングリコール部分の平均分子量が約ｔ、０００〜１２、
Ｇｏｏとなる任意の正の整数であることを表す、）で表
されるポリエチレングリコール誘導体（１）とカルシト
ニン遺伝子関連ペプチド、エラスターゼ、心房性ナトリ
ラふ利尿ペプチド、性腺刺激ホルモン放出ホルモン、α
−メラノトロピン、パラチロイドホルモン、ＩＧＦ−ｌ
ＩＩ、ウリカーゼおよびこれらの誘導体から選ばれるペ
プチドとを反応させることによって得られる修飾ペプチ
ドである。

零ＨＩＤ第２番目の発明は、ポリエチレングリコール誘
導体（１）とカルシトニン遺伝子関連ペプチド、エラス
ターゼ、心房性ナトリウム利尿ペプチド、性腺刺激ホル
モン放出ホルモン、α−メラノトロピン、パラチロイド
ホルモン、ＩＧＦ−［、ウリカーゼおよびこれらの誘導
体から選ばれるペプチドとを反応させることによって得
られる修飾ペプチドの製造方法である。

式（１）においてＲで表される低級アルキル基は、直鎖
状、分岐状のいずれでもよく、たとえばメチル、エチル
、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル等の炭素数
ｌ〜４の低級アルキル基が好適である。

本発明のポリエチレングリコール誘導体（１）は以下の
方法にて容易に製造することができる。

即ち、式％式％）（式中、Ｒおよびｎは前記と同意義）で表されるモノアルコキシポリエチレングリコール（Ｉ
）と適当な活性化試薬とを好適には塩基の存在下て反応
させることにより、式％式％（１）〔式中、Ｘ′はアルキルスルホニルオキシ（たとえば、
メチルスルホニルオキシ、エチルスルホニルオキシ等の
炭素数１〜４の低級アルキルスルホニルオキシ）、芳香
族スルホニルオキシ（たとえば、トルエンスルホニルオ
キシ等）または八ロゲン（塩素、臭素等）を表す〕で表される活性体（１）に導び（。

この際用いられる活性化試薬としては、たとえば■アル
ヰルスルホニルクａリド（そのアルキル部分としては前
記と同様の低級アルキルが好ましく、たとえばメチルス
ルホニルクロリド、エチルスルホニルクロリド等が例示
される）　　（Ｒｏａａｌｄ　Ｋ。

Ｃｒｏｓｓｌａｎｄ　　等、Ｊ、　　Ｏｒｇ−Ｃｂｅ−
−３６３１９５（１９７０））　　、■芳香族スルホニ
ルクロリド（たとえば、トルエンスルホニルクロリド等
）　　（Ｖｌａｄｉｍｉｒ　Ｃ−Ｓｅｋｅｒａ等、Ｊ、
Ａｓ＋ｅｒ、Ｃｂｅｓ、　Ｓｏｃ、　５５５３４５　（
１９３３月、■五臭化リン（Ｊａｍｅｓ　Ｃａｓｏａ等
、Ｊ、　ｅｒｇ、　Ｃｈｅｓｓ、　２Ｌ３６４５　（１
９６１）　）などが挙げられ、さらに■式（Ｒ″）３Ｐ
〔式中、Ｒはアルキル基（たとえばオクチルなど）、ア
リル基（たとえばフェニルなど）またはジアルキルアミ
ノ基（たとえばジメチルアミノなど）を表す、〕で表さ
れる化合物の存在下で用いられる式Ｃ（Ｘ）、　［式中
、Ｘはハロゲン（たとえば、塩素、臭素等）を示す］で
表わされる化合物［Ｊ、Ｈ（１０２等、Ｃａｎ、　Ｊ、
　Ｃｈｅｍ−４６，８６（１９６Ｂ）　）等が挙げられ
る。

この際用いられる塩基としては、ピリジン、トリアルキ
ルアミン（たとえば、トリエチルアミン）のような三級
の有機塩基もしくは水酸化ナトリウム、水酸化カリウム
、炭酸ナトリウム、水素化ナトリウム等の無機塩基が挙
げられる。反応溶媒はＮ、Ｎ−ジメチルホルムアミド、
ベンゼン、トルエン、低級ジアルキルエーテル、四塩化
炭素、クロロホルム、塩化メチレン、ジオキサン、テト
ラヒドロフラン等自体不活性な溶媒であればいーずれで
もよく、またピリジンのように上記の塩基そのものを溶
媒にすることもできる。反応温度は、通常０℃〜１５０
℃の範囲である。

次いて活性体（１）をＮ、Ｎ−ジメチルホルムアミドや
テトラヒドロフラン等の適当な溶媒中で炭酸カリウム、
炭酸ナトリウム等の適当な無機塩基もしくはトリエチル
アミン、トリノルマルブチルアミン、ジアザビシクロ−
２，２，２−ウンデセン等の有機塩基を用いて６０〜１
２０℃の加熱下にてヒドロキシアセトフェノンと反応さ
せて式（式中、Ｒおよびｎは前記と同意義）で表されるアセトフェノン誘導体（ＩＶ）を得る。

得られたアセトフェノン誘導体（ＩＶ）を二酸化セレン
等の適当な酸化剤を用いてＮ、　Ｎ−ジメチルホルムア
ミド、ジオキサン等の反応に不活性な溶媒中、６０〜１
２０″Ｃにて酸化して目的とするポリエチレングリコー
ル誘導体（Ｉ）を製造することができる。

かくして製造されたポリエチレングリコール誘導体（１
）は自体既知の手段にて任意の純度のものとして単離、
精製することができる。

本発明において、前記ポリエチレングリコール誘導体（
１）にて修飾されるペプチドは、力）レシトニン遺伝子
関連ペプチド（例えば、Ｈａ　ｊｕｒ１６＋　並紅７４
６（１９８４））、エラスターゼ（例えば、Ｔｈｅ　！
ｎｚｙ＊ｅ（３ｒｄ　ａｄ、）　　３．３２３　（１９
７１））　、心房性ナトリウム利尿ペプチド（例えば、
Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｂｉｏｐｈｙｓ、　Ｒｅｓ。

Ｃｏｓｍｕｎ、、１１８．１３１　（１９８４））、性
腺刺激ホルモン放出ホルモン（例えば、Ｓｃｉｅｎｃｅ
、　１７３．１０３６　（１９７１））、α−メラノト
ロピン（例えば、Ｎａｔｕｒｅ、　１７９．１３４６（
１９５７））　、パラチロイドホルモン（例えば、Ｂｉ
ｏ−ｃｈｅｓｉｓｔｒｙ、１７．５７２３　（１９７８
））、ＩＧＦ−ｌｌ（例えば、ＦＥＢＳ　Ｌｅｔｔ−，
８９，２８３（１９７８））　、ウリカーゼ（例えば、
＾ｇｒｉｃ−Ｂｉｏ１、　Ｃｈｅｗ、。　３１、１２５
６　（１９６７））およびこれらの誘導体から選ばれる
ペプチドである。なお、本発明でいう誘導体とは、１個
以上のアミノ酸が置換、挿入または欠失されたものをさ
す。

本発明において上記ペプチドは遺伝子工学産物、ヒトを
含む各種動物由来のもの、合成品等のいずれの方法で製
造されたものでもよい。

本発明の修飾ペプチドの製造は、ポリエチレングリコー
ル誘導体（１）と前記ペプチドとを反応させることによ
って行われる。

当該反応に際しては、ポリエチレングリコール誘導体（
１）を前記ペプチド中のグアニジノ基に対しｒｔ−ｔｏ
ｏ倍モル程度用いることが好ましい、ただし、低修飾率
のペプチドを得たい場合には１モル程度以下のもの（た
とえば、Ｑ、１倍モル〜１倍モル）も用いることができ
る。前記ペプチドとポリエチレングリコール誘導体（１
）のモル比、反応温度、ｐｎ等を調節することにより修
飾の程度を任意に選択することが出来る。また、反応に
用いる溶媒は反応を妨害しないものであればいずれでも
よく、たとえばトリス塩酸緩衝液、炭酸ナトリウム水溶
液、炭酸水素ナトリウム水溶液、Ｎ−エチルモルホリン
−酢酸緩衝液、マレイン酸ナトリウム緩衝液、酢酸ナト
リウム緩衝液等の緩衝液が挙げられる。また、前記ペプ
チドを失活させず、かつ反応に不活性な有機溶媒、たと
えばメタノール、エタノール、プロパノール等の低級ア
ルコールやアセトニトリル、ジオキサン、テトラヒ「ロ
フラン等を添加してもよい、反応のｐｌは一般的に６〜
１０の範囲て選択することが好ましいが、中性から弱塩
基性が特に好ましい、ただし、アミノ末端に保護されて
いないα−アミノ基を有するペプチドの場合は、やや酸
性側のｐＨ５，５〜６゜５が好ましい、反応温度は当該
ペプチドが失活しない温度であればいずれでもよく、た
とえば０〜２５℃の範囲が好ましい、反応は通常暗所で
行い、反応時間は３〜７２時間で充分である。

反応終了後、反応液を塩析やゲル濾過、イオン交換クロ
マトグラフィー、吸着クロマトグラフィー、アフィニテ
ィクロマトグラフィー、限外濾過、逆相ＨＰＬＣによる
分取等の通常の蛋白質の精製法で精製して目的の修飾ペ
プチドを得ることができる。

ところで、低分子修飾試剤であるフェニルグリオキザー
ルの研究において、試薬濃度を大きくするなど条件を過
酷にすると、アミノ末端のα−アミノ基が脱アミノ反応
を起こすという副反応が知られている、（生物化学実験
法１２、蛋白質の化学修飾（上）、６２〜６９頁、（学
会出版センター、１９８１）、ジャーナル・オブ・バイ
オロジカル・ケミストリー、２４８巻、６１７１　（１
９６Ｂ））本発明のポリエチレングリコール誘導体（１
）を用いた修飾においても同様の副反応の可能性が考え
られる。そこでこのような副反応が懸念される場合には
、グアニジノ基を有するペプチドのアミノ基を適当な保
護基で保護した後、ポリエチレングリコール誘導体（１
）と反応させ、続いてアミノ基の保護基を脱保護すると
いう方法によって、修飾ペプチドを製造する方が得策な
場合もある。アミノ基の保護基は、ポリエチレングリコ
ール誘導体（ｆ）と反応性がなく、さらに当該ペプチド
を失活させることなく脱保護されるものであれば良く、
例えば、スクシニル基、マレイル基、２−メチルマレイ
ル基、２．３−ジメチルマレイル基、エキソ−シス−３
，６−エンドオキソ−Δ４−テトラヒドロフタロイル基
、エキソ−シス−３，６−エンドオキシヘキサヒドロフ
タロイル基、テトラフルオロスクシニル基環が挙げられ
る。保護基の導入は、当該分野の公知の方法によって行
うことができる。導入試剤としては、相当する＃無水物
、酸ハロゲン化物、活性エステル等が用いられるが、一
般的には相当する酸無水物が多く用いられる。反応溶媒
としては、反応を妨害しないものであればいずれでもよ
く、たとえば、炭酸ナトリウム水溶液、炭酸水素ナトリ
ウム水溶液、Ｎ−エチルモルホリン−酢酸緩衝液、酢酸
ナトリウム緩衝液、リン酸緩衝液等が挙げられる。

また当該ペプチドを失活させず、かつ反応に不活性な有
機溶媒、たとえばメタノール、エタノール、プロパノー
ル等の低級アルコールやアセトニトリル、ジオキサン、
テトラヒドロフラン等を添加しても良い、反応のｐＨは
６〜１０の範囲で選択することが好ましいが、中性から
弱塩基性が特に好ましい、反応温度は当該ペプチドが失
活しない温度であれば、いずれでも良く、たとえば−５
〜２５℃の範囲が好ましい、反応時間は３０分〜３６時
間で充分である。

反応終了後、反応液を塩析やゲル濾過、イオン交換クロ
マトグラフィー、吸着クロマトグラフィー、アフィニテ
ィクロマトグラフィー、限外濾過、逆相ＨＰＬＣによる
分取等の通常のペプチドおよび蛋白質の精製法で精製し
て目的のアミノ基が保護されたペプチドを得ることがで
きるが、単層精製することなく引き続いてポリエチレン
グリコール誘導体（１）と反応させアミノ基が保護され
たポリエチレングリコール修飾ペプチドを得ることもで
きる。

アミノ基が保護されたグアニジノ基を有するペプチドと
ポリエチレングリコール誘導体（１）との反応および反
応終了後の精製は、前述の反応条件および精製法と同様
の反応条件および精製法で行うことができる。

アミノ基の保護基の脱保護は反応液を酸性に保つことに
よって行うことができる。反応のｐｉｔは１〜６の範囲
で選択することが好ましい、酸性に保　一つ方法として
は、当該ペプチドが失活しない方法ならばどのような方
法でも良く、たとえば酸（酢酸、トリフルオロ酢酸、有
機スルホン酸等の有機酸、塩酸等の無機酸等）を用いる
方法、ダウエックス５０Ｗ等の酸性樹脂を用いる方法、
リン酸緩衝液、クエン酸緩衝液、酢酸ナトリウム緩衝液
等の緩衝液を用いる方法、およびこれらを組み合わせた
方法等が挙げられる。反応は一般的には水溶液のみで行
うが、場合によっては、当該ペプチドを失活させず、か
つ反応に不活性な有機溶媒、たとえばメタノール、エタ
ノール、プロパノール等の低級アルコールやアセトニト
リル、ジオキサン、テトラヒドロフラン等を添加しても
良い、反応温度は当該ペプチドが失活しない温度であれ
ばいずれでも良く、たとえば０〜４０℃の範囲が好まし
い、反応時間は５分〜６０時間で充分である。

反応終了後、反応液を塩析やゲル濾過、イオン交換クロ
マトグラフィー、吸着クロマトグラフィー、アフィニテ
ィクロマトグラフィー、限外濾過、逆相ＨＰＬＣによる
分取等の通常の蛋白質の精製法で精製した目的の修飾ペ
プチドを得ることができる。

本修飾ペプチドは通常の製剤、たとえば皮下的、筋肉内
的もしくは静脈内的適用のための注射溶液のような適切
な通常の投与形態に調製することが出来る。かかる製剤
は自体既知の方法によって製造される。

調製された修飾ペプチドは医薬品組成物として哺乳動物
（ヒト、サル、ウシ、ウマ、イヌ、ブタ等）に投与する
ことができる。

その投与量は、たとえば実施例８で得た化学修飾ウリカ
ーゼを高尿酸血症の治療のために投与する場合には通常
５０〜ｌ　５０　Ｕ／ｄを、１日１回から数回に分けて
投与される。

〔作用・効果）本発明のポリエチレングリコール誘導体（１）は前記特
定のペプチド中のグアニジノ基を選択的に修飾すること
ができるものである。

当該ポリエチレングリコール誘導体（１）にて修飾され
た前記ペプチドは対応する非修飾ペプチドと比較すると
、非常に安定な化合物であり、さらに生体内クリアラン
スも著しく遅延（即ち、持続性が延長）され、長時間有
効にその生理活性を示す、しかも本修飾ペプチドは非修
飾ペプチドの有する生理活性をそのまま有するものであ
り、当該修飾ペプチドは医薬品として極めて有効である
〔実施例〕以下の実施例により本発明をより具体的に説明するが、
本発明はこれらによって制限されるものではない。

なお、以下の記載において各略号はそれぞれ次のことを
意味する。

＾ｓｘニアスパラギン酸またはアスパラギンＧｌｘ　￥
ニグルレタミン酸またはグルタミンＳｅｒ　＝セリン　
　　　ｓｔｙ　ニゲリシン１１５＝ヒスチジン　　Ａｒ
ｇ　：フルギニンＴｈｒ　：スレオニン　　＾ｌａ：ア
ラニンＰｒｏ　ニブロリン　　　Ｔｙｒ　：チロシンＶ
ａｌ　　：バリン　　　　Ｍｅｔ　：メチオ二ン■ｅ：
イソロイシン　Ｌｅｅ　：ロイシンＰｈｅ　　ニフェニ
ルアラニン　Ｌｙｓ、　：リジン参考例１（１）　　モノメトキシポリエチレングリコールトシレ
ート− ポリエチレングリコールモノメチルエーテル（平均分子
量ｓｏｏｏ、４０ｇ）をトルエン１６Ｇ−および塩化メ
チレン８０Ｉ４の混合溶媒に溶解した。

塩化パラトルエンスルホニル（Ｂ、Ｏｇ）、ついてトリ
エチルアミン５．８ｍを加え室温で６時間撹拌した。次
に塩化バラトルエンスルホニル（８，０ｇ）を追加し、
ｌＯ時間撹拌した。不溶物を濾別し濾液を減圧濃縮した
。得られた残液をシリカゲルカラムで精製し標記モノメ
トキシポリエチレングリコールトシレー）３２．４ｇを
得た、（収率７８．６％）　　、ｓ、ｐ、５５〜５７℃ 春Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｊ！ｓ　）、ＴＭＳ、９Ｇ　（Ｍ
Ｈｚ）、　　６２．１８（Ｓ）、　　６３．３８（ｓ）
。

６３．６２（Ｓ）、６７．３（ＡＢｑ）”＠　４−モノ
メトキシポリエチレングリコール−アセトフェノン υ （１）で得たモノメトキシポリエチレングリコールトシ
レート（２０ｇ）および４−ヒドロキシアセトフェノン
（５，６ｇ）をＮ、Ｎ−ジメチルホルムアミド２００−
に溶解した。炭酸カリウム（５，６ｇ　）を加え１２０
℃の油浴中７４時間撹拌した。

不溶物を濾別し濾液を減圧濃縮した。得られた残液をシ
リカゲルカラム精製し、標記４−モノメトキシポリエチ
レングリコール−アセトフェノン（１４，７ｇ）を得た
、（収率７３．９％）　、ｓ、ｐ、５５〜５７℃ ＨＮＭＲ（ＣＤＣｊ！ｉ　）、ＴＭＳ、９Ｇ　（ＭＨｚ
）、　δ１４２（ｓ）、　δ３．３２（Ｓ）。

６２．６４（ｓ）、δフー６４（ＡＢｑ）（２）　４−
モノメトキシポリエチレングリコール−フェニルグリオ
キザールの製造：（２）で得た４−モノメトキシポリエチレングリコール
−アセトフェノン（５０ｇ）を１．４−ジオキサン５０
０ｍｌに溶解した。二酸化セレン（１０，８ｇ）を加え
４時間還流した。不溶物を濾別し濾液を減圧ｍｉｓｔ、
た。得られた残渣をシリカゲルカラム精製し４−モノメ
トキシポリエチレングリコールーフェニルグフオキザー
ル２７ｇを得た、（収率５３．８％）、ｍ、ｐ、５５〜
５７℃ＨＮＭＲ（ＣＤＣｊ！ｓ　）、ＴＭＳ、９０　（
ＭＨｚ）、６３．３８（Ｓ）、６３．６６（ｓ）。

５７．４８（ＡＢｑ）実１１０− ポリエチレングリコール誘導体（１）修飾ヒトカルシト
ニン遺伝子関連ペプチド（ｈＣＧＲＰ）の製造：ｈＣＧＲＰ　（α５ｍｇ）の０．２　Ｍ　　Ｎ　ａ　Ｈ
ＣＯｓＯ，０２Ｍ　　Ｎ　ａ　ｍｃ　Ｏｘ　　（ｐＨ８
，９７、ｌｏＯｕｊ！）溶液に、室温で２０％２−メチ
ルマレイン酸無水物アセトン溶液（１０，Ｊ！）を１０
分間隔で２回加えた。この間ＩＮ　　ＮａＯＨを用いて
、反応液のｐ器を９〜１０にｇｉｒｔ、た。さらにＩＮ
　　ＮａＯＨでｐＨを９〜１０とし、１時間室温にて放
置した。

次いで参考例１で得た４−七ノメトキシポリエチレング
リコール−フェニルグリオキザール２．６■および０．
２　Ｍ　　Ｎ　ａ　ＨＣＯｓ　−Ｑ、　０２　Ｍ　　Ｎ
　ａ　ｔＣＯｓ　　（５０＃　ｊ！　）を加え、ＩＮ　
　ＮａＯＨでｐｎ９〜１０に調整し、遮光下室温にて２
０時間放置、した後、酢酸を加えｐＨ３とし、４０℃で
２０時間放置した。反応混合物をＴＳＫｇｅｌＧ３０α
ＯＳＷ（東ソー社製、７．５　ｍ５−Ｘ６０ｃｍ）を用
いたゲル濾過により精製し、目的物Ａを含む分画、目的
物Ｂを含む分画が得られた。各々の分画を凍結乾燥後、
遠心濾過チューブ（ミリポア社製、ウルトラフリーＣ３
ＬＧＣ）により、脱塩・濃縮することによって、目的物
Ａを含む水溶液５０ｔｊ！および目的物Ｂを含む水溶液
５０ｕ！を得た。

目的物Ａの酸分解物（６Ｎ塩酸−フエノール、１１０℃
、２４時間処理後の分解物）中のアミノ酸分析値＾ｓｘ　　３．８　（４）　；　　Ｓａｒ　　２Ｊ　（
３）　：Ｇｌｙ　　４．４　（４）　：　　Ｉｌｉｓ　
　１．０　（１）　：＾ｒｇ　　０．８　（２）　：　
　τｈｒ　　３．４　（４）　：Ａｊａ”　　４　　（
４）　；　　Ｐｒｏ　　１．０　（１）　：Ｖａｌ　　
４．２　（５）　；　　Ｃｙｓ　　　　（２）　；Ｌｅ
ｕ　　２−０　（３）　：　　Ｐｈｅ　　１．９　（２
）　：Ｌｙｓ　　１．９　（２）　；申基準アミノ酸、（）内は理論値、−は未測定目的物へ
の高速液体クロマトグラフィーの挙動は以下の通りであ
る。

０高速ゲル瀘遇クロマトグラフィーカラム：ＴＳＫｇｅ　ｌＧ３０００ｓＷ（７，５■φｘ
６０ｃｍ）（東ソー社製）溶出液＝（ＬＩＭ食塩水（５
％エタノール含有）流速：０−７ｄ／分検出波長＝２１４ｎｍ保持時間：１９．６分目的物Ｂの酸分解物（６Ｎ塩酸−フエノール、１１０℃
、２４時間処理後の分解物）中のアミノ酸分析値Ａｓｘ　　３．８　（４）　：　　Ｓｅｒ　　２．７　
（３）　：にｌｙ　　４−４　（４）　：　　Ｉｌｉｓ
　　１．１　（１）　：Ａｒｇ　　Ｌ８　（２）　：　
　Ｔｈｒ　　３−４　（４）　；＾１ａ”　　４　　（
４）　：　　Ｐｒｏ　　１．０　（１）　：Ｖａｌ　　
４．２　（５）　：　　Ｃｙｓ　　−（２）　：Ｌｅｕ
　　３．０　（３）　：　　Ｐｂａ　　１．９　（２）
　：Ｌｙｓ　　１９　（２）　：本基準アミノ酸、（）内は理論値、−は未測定目的１ｆ
ｆＢの高速液体クロマトグラフィーの挙動は以下の通り
である。

０高速ゲル濾過クロマトグラフィーカラム：ＴＳＫｇｅｌＧ３０００ＳＷ　　　−（７，５
閤φＸ６ＧＣｌｌ）（東ソー社製）溶出液：　０．　ｌ
　Ｍ食塩水（５％エタノール含有）流速＝０．７ａｆ／
分検出波長＝２１４ｎｍ保持時間：２１．４分スｍポリエチレングリコール誘導体（１）修飾エラスターゼ
の製造：エラスターゼ（０−５ｍ　）の０．２　Ｍ　　Ｎ　ａ　
ＨＣＯｘａ　Ｏ２Ｍ　　Ｎ　ａ　＊ＣＯｓ　　（ｐＨ１
９７，１５０＃ｊ！）溶液に、室温でｌθ％２−メチル
マレイン酸無水物アセトン溶液（１０ｇｍ１）を５分間
隔で５回加えた。この間ＩＮ　　ＮａＯＨを用いて、反
応液の１を９〜１０に調節した。さらにＩＮ　　ＮａＯ
ＨてｐＨを９〜１Ｇとし、２．５時間室温にて放置した
。

次いで参考例１で得た４−モノメトキシポリエチレング
リコール−フェニルグリオキザール（Ｚ３■）を加え、
ＩＮ　　ＮａＯＨでｐＨ９〜１０に調整し、遮光下室温
にて１８時間放置した後、酢酸を加えｐＨ３とし、４０
℃で４時間放置した。反応混合物をＴＳＫｇｅｌＧ３０
００ＳＷ（東ソー社製、７、５　ｍφＸ６０ｃｍ）を用
いたゲル濾過により精製し、目的とする分画を凍結乾燥
後、遠心濾過チューブ（ミリポア社製、ウルトラフリー
Ｃ３ＬＧＣ）により、脱塩・濃縮することによって、目
的物の水溶液５０＃ｌを得た。

酸分解物（６Ｎ塩酸−フエノール、１１０℃、２４時間
処理後の分解物）中のアミノ酸分析値＾ｓｘ　　２２Ｊ
　（２４）　：　　Ｇｌｘ　　１７．６　（１９）　：
Ｓｓｒ　　１６Ｊ　（２２）　：　　Ｇｌｙ　　２７．
６　（２５）　；１１ｉｓ　　ロー９　（６）　　：　
　Ａｒｇ　　８．４３（１２）　：Ｔｈｒ　　１５．８
　（１９）　：　　＾ｌａ”　１７　　（１７）　；Ｐ
ｒｏ　　Ｌ９　（７）　　；　　Ｔｙｒ　　９．９　（
１１）　：Ｖａ１　２３．７　（２７）　；　　Ｍｅｔ
　　０．５　（２）　　：Ｃｙｓ　　−（８）　　：　
　ＩＩｓ　　８．３　（１０）　：Ｌｅａ　　１８．７
　（１ｇ）　；　　Ｐｈｅ　　３．２　（３）　　：Ｌ
ｙｓ　　２Ｊ　（３）　　：　　Ｔｒｐ　　−（７）　
　：＊基準アミノ酸、（）内は理論値、−は未測定目的
物の高速液体クロマトグラフィーの挙動は以下の通りで
ある。

Ｏ高速ゲル濾過クロマトグラフィーカラム：ＴＳＫｇｅ　ｌＧ４０００ＰＷＸＬ（７，８■
φＸ３０ｃｍ）２本連結十Ｔ　Ｓ　Ｋｇｕａｒｄｃｏｌｏ＊＠ｎ　Ｐ　Ｗ　ｘ　Ｌ
（６，ＯｗｍφＸ４ＣＩＩ）（東ソー社製）溶出液＝０
．２Ｍ　　ＮａＣｌ流速＝０．６ｄ／分検出波長＝２１４ａｍ保持時間：２４９分ｚ隻適ｌポリエチレングリコール誘導体（１）修飾ヒト心房性ナ
トリウム利尿ペプチド（ｈＡＮＰ）の製造：ｈＡＮＰ　（２１６ｚｇ）の（Ｌ　２　Ｍ　　Ｎ　ａ　
ＨＣＯｓＮ　ａ　露ＣＯｓ　　（ａｌ１８．９７．１０
０＃ｊ！）溶液に、室温でｌＯ％２−メチルマレイン酸
無水物含有アセトン溶液（９ｊす！）を５分間隔て２回
加えた。

この間ＩＮ　　ＮａＯＨを用いて、反応液のｐＨを８〜
９に調節した。１時間３０分後、参考例１で得た４−モ
ノメトキシポリエチレングリコール−フェニルグリオキ
ザール（０，８７■）を含む０．２ＭＮａＨＣＯｓ　　
Ｎａ＊ＣＯｓ　　（ｐＨ８，９７）水溶液（５０ｕＪ！
）を加え、ＩＮ　　ＮａＯＨでｐＨ８〜９とした後、遮
光下室温にて２時間３０分放置した。ＩＮ酢酸水にてｐ
ｌを２〜３とし、３７℃にて遮光下８時間３０分放置し
た。反応液をＴＳＫ。

ｅｌＧ３０００ｓＷ（東ソー社製、７．５ＭＩＩｄＸ６
０１）を用いたゲル濾過により精製し、目的物を含む分
画を限外濾過により、脱塩・ｉｌＩ縮することにより、
目的物を含む水溶液（６０＃Ｊ！）を得た。

目的物の酸分解物（６Ｎ塩酸−フエノール、１１０℃、
２４時間処理後の分解物）中のアミノ酸分析値Ａｓｘ　
　１．７　（２）　：　　Ｇｌｘ　　０．９　（１）　
：Ｓｅｔ　　３．７　（５）　：　　Ｇｌｙ　　４．９
　（５）　：Ａｒｇ　　２．４　（５）　：　　Ａｌａ
　　１．１　（１）　：Ｔｙｒ　　０．９　（１）　：
　　Ｉｌｅｔ　　Ｏ，４（１）　：１１ｅ　　１−０　
（１）　：　　Ｌｅｅ”　　２−０　（２）　：Ｐｈｅ
　　２．１　（２）　：　　Ｃｙｓ　　　−（２）　：
＊基準アミノ酸、（）内は理論値、−は未測定目的物の
高速液体クロマトグラフィーの挙動は以下の通りである
。

０高速ゲル謹遇クロマトグラフィーカラム：ＴＳＫｇｅ　ｌＧ３０００ｓＷ（７，５■φＸ
６００１）（東ソー社製）溶出液：０．１Ｍ食塩水（５
％エタノール含有）流速＝０．５ａｆ／分検出波長：２２０ｎｍ保持時間：２６．４２分裏胤医土ポリエチレングリコール誘導体（１）修飾性腺刺激ホル
モン放出ホルモン（ＬＨＲＩ（）の製造：ＬＨＲＨ２２
４ｕｇを含むＯ−２Ｍ　　Ｎ　ａ　ＨＣＯｘＮ　ａ　＊
ＣＯｓ　　（ｐＨ１９）　２００　ｕ　ｊ！の溶液に、
室温にて、参考例１で得た４−モノメトキシポリエチレ
ングリコール−フェニルグリオキザール１．９■を加え
、遮光下室温にて２４時間放置した。ＩＮ酢酸水にて１
を約７とした後、逆相高速液体クロマトグラフィー（Ｙ
ＭＣ−００５，４，ロー−Ｘ２５０■：溶出液Ａ液＝０
．１％ＴＦＡ水とＢ液＝アセトニトリル（０，１％ＴＦ
Ａ）を用いたグラジェント（初期８液濃度３０％、勾配
置％／分）：流速１ｍ／分〕により精製を行い、目的物
を含む分画を凍結乾燥した後、水６０ｔｓｌを加え、目
的物を含む水溶液として得た。

目的物の酸分解物（６Ｎ塩酸−フエノール、１１０℃、
２４時間処理後の分解物］中のアミノ酸分析値Ｇｌｘ　
　　１０　（１）　　：　　Ｓｅｒ　　　１．０　（１
）　：Ｇｌｙ　　２．３　（２）　：　　Ｈｉｓ　　　
１．０　（１）　：Ａｒｇ　　（Ｌ２　（１）　　＝　
　Ｐｒｏ　　　１．１　（１）　：Ｔｙｒ　　０．８　
（１）　；　　Ｌｅｅ＝　　１　　　（１）　：Ｔｒｐ
　　　　　　（１）　　：＊基準アミノ酸、（）内は理論値、−は未測定目的物の
高速液体クロマトグラフィーの挙動は以下の通りである
。

０高速ゲル濾過クロマトグラフィーカラＡ：ＴＳＫｇｅ　ＩＧ３０００ＳＷ（７，５−−Ｘ
６０ｃｍ）（東ソー社製）溶出液：０．１Ｍ食塩水（５
％エタノール含有）流速：ａ５ｄ／分検出波長：２２０ｎｍ保持時間：３４．４６分０逆相高速液体クロマトグラフィーｈうＬ：ＹＭＣ−００５，ＡＭ−３０３，５ｔｔ４．６
■φ×２５０■（山村化学社製）溶出液＝グラジェントＡ液：水（０，１％トリフルオロ酢酸）Ｂ液ニア七ト二
トリル（０，１％トリフルオロ酢酸）初期Ｂ液濃度＝３５％濃度勾配＝１％／分流速＝１ｍｌ／分検出波長：２２０ｎｍ保持時間＝ｌλフ１分１隻ＪＬＬポリエチレングリコール誘導体（Ｉ）修飾α−メラノト
ロピンの製造： α−メラノトロピン２２８ｕｇを含む０．２ＭＮａＨＣ
Ｏｓ　　Ｎａ＊ＣＯｓ　　（ｐＨ９）１−０ｕｊ！ノ溶
液に、室温にて、参考例１で得た４−モノメトキシポリ
エチレングリコール−フェニルグリオキザール６８５ｕ
ｇを含む０．２　Ｍ　　Ｎ　ａ　ＨＣ２ＭＮａＨＣＯｓ
　　（ｐＨ９）水溶液１００＃ｊ！を加え、遮光下室温
にて２４時間放置した。ＩＮ＃酸水にて１を約７とした
後、ＴＳＫｇｅｌＧ３０００ＳＷ（東ソー社製、７．５
閣φＸ６０ＣＩＩ）を用いたゲル濾過により精製し、目
的物を含む分画を脱塩し、凍結乾燥した後、水６０〃ｌ
を加え、目的物を含む水溶液として得た。

目的物の酸分解物（６買塩酸−フエノール、１１０℃、
２４時間処理後の分解物）中のアミノ酸分析値Ｇｌｘ　
　０．９　（１）　：　　Ｓｅｒ　　２．０　（２）　
：Ｇｌｙ　　１１　（１）　：　　Ｈｉｓ　　１．０　
＜１）　：Ａｒｇ　　０．４　（１）　＝　　Ｐｒｏ　
　１．１　（１）　：Ｔｙｒ　　１．０　（１）　：　
　ｖａｌ　　１．１　（１）　：Ｎｅｔ　　０．９　（
１）　：　　Ｐｂｅ”　　１　　（１）　：Ｌｙｓ　　
０．９　（１）　：　　Ｔｒｐ　　　　（１）　：、本
基準アミノ酸、（）内は理論値、−は未測定目的物の高
速液体クロマトグラフィーの挙動は以下の選りである。

Ｑ高速ゲル濾過クロマトグラフィーカラム：ＴＳＫｇｅ　ＩＧ３０００ＳＷ（７，５閣φＸ
６ＧＣｌｌ）（東ソー社製）溶出液：　０．１　Ｍ食塩
水（５％エタノール含有）流速＝０．５ｄ／分検出波長：２２０ｎｍ保持時ｉｎ　＝　３４．４２分０逆相高速液体クロマトグラフィーカラム：ＹＭＣ−００５，ＡＭ−３０３，５ａ４、６　
ｍφｘ２５Ｇｍ（山村化学社製）溶出液；グラジェントＡ液：水（０，１％トリフルオロ酢酸）Ｂ液ニア七ト二
トリル（０，１％トリフルオロ酢酸）初期Ｂ液濃度：３５％濃度勾配：１％／分流速：１ｄ／分検出波長：２２０ｎｍ保持時間：ＩＬ７１分２亀ＩＬＬポリエチレングリコール誘導体（１）修飾パラチロイド
ホルモン（１−３４）　　（ＰＴＨ（１−３４））の製
造：ＰＴＨ（１−３４）２２４ｐｇを含む（Ｌ２ＭＮａＨＣ
Ｏｓ　　ＮａＨＣＯ３　　（ｐＨＬ９７）１０Ｇ＃ｌの
溶液に、室温にて１０％２−メチルマレイン酸無水物含
有アセトン溶液（９＃ｆｆｉ）を５分間隔て２回加えた
。この間ＩＮ　　ＮａＯＨを用いて、反応液のｐｌｆを
８〜９に調節した。１時間後、参考例１で得た４−モノ
メトキシポリエチレングリコール−フェニルグリオキザ
ール２１２ａｇを含む０．２Ｍ　　ＮａＨＣＯｓ　−Ｎ
ａｔＣＯｓ　　（ｐＨｌＬ９７）水溶液５０１１ｊ！を
加え、ＩＮ　　ＮａＯＨでｐＨを８〜９とした後、遮光
下室温にて２時間放置後、さらに修飾試剤２１０ａｇを
含む０．２Ｍ　　ＮａＨＣＯｓ　　Ｎ　ａ　ｍｃ　Ｏｓ
　　（ｐＨ１９）　）水溶液２５＃ｌを加え、遮光下室
温にて２時間３０分放置した。

ＩＮ＃酸水にてｐｉを２〜３とし、３７℃にて遮光下８
時間放置した。反応液をＴＳＫｇｅｌＧ３０００ＳＷ（
東ソー社製、７．５層φＸ６０ｃｍ）を用いたゲル濾過
により精製し、目的物を含む分画をさらに逆相高速液体
クロマトグラフィー（ＭＭＣ−ＯＤＳ、４．ローφＸ２
５０　ｗｍ　＝溶出液Ａｆｉ−０，１％ＴＦＡ水とＢｆ
ｉ−アセトニトリル（０，１％ＴＦＡ）を用いたグラジ
ェント（初ＮＢ液濃度２０％、勾配置％／分）；流速１
ｍ／分〕により精製を行った。目的物を含む分画を凍結
乾燥した後、水５０ｐｔを加え、目的物を含む水溶液と
して得た。

目的物の酸分解物（６に塩酸−フェノール、１１０℃、
２４時間処理後の分解物）中のアミノ酸分析値Ａ３Ｘ　
　３−８　（４）　：　　Ｇ１１４．５　（５）　：Ｓ
ｅｔ　　２．７　（３）　：　　Ｇｌｙ　　１．１　（
１）　：１１ｉｓ　　２．９　（３）　：　　ｌｌｒｇ
　　１．３　（２）　：１１ａ１２．８　（３）　：　
　ｌｌＩｅｔ　　０．８　（２）　：ＩＩｓ　　１．０
　（１）　：　　Ｌｅｗ＠５　　（５）　：Ｐｈｅ　　
１．０　（１）　：　　Ｌｙｓ　　２Ｊ　（３）　：τ
ｒｐ　　　−（１）　：＊基準アミノ酸、（）内は理論値、−は未測定目的物の
高速液体クロマトグラフィーの挙動は以下の通りである
。

０高速ゲル濾過クロマトグラフィーカラム：ＴＳＫｇｅ　ｌＧ３０００ｓＷ（７，５ｗｍφ
Ｘ６Ｇａｍ）（東ソー社ＩＩ）溶出液：　０．　Ｉ　Ｍ
食塩水（５％エタノール含有）流速：在５−／分検出波長：２２０ｎｍ保持時間：３４．０３分０逆相高速液体クロマトグラフィーカラム：ＹＭＣ−ＯＤＳ、ＡＭ−３０３，５＃４．６■
φメ２５０■（山村化学社製）溶出液ニゲラシエンドＡ液：水（０，１％トリフルオロ酢酸）Ｂ液ニア七ト二
トリル（０，１％トリフルオロ酢酸）初期Ｂ液濃度：３５％濃度勾配：１％／分流速　１ｍ／分検出波長：２２０ｎｍ保持時間！１１．８２分』裏施■１ポリエチレングリコール誘導体（１）修飾インシ、　り
ン様成長因子−ＩＩ　（ＩＧＦ−ｌｌ）　の製造：ＩＧ
Ｆ−Ｉ（２００１１ｇ）の０．２　Ｍ　　Ｎ　ａ　ＨＣ
ＯｘＮ　ａ　ｚ　ＣＯｓ　　（ｐＨ＆　９７．１００ｕ
ｊ！）溶液に、室温にてｌＯ％２−メチルマレイン酸無
水物含有アセトン溶液（９ｕｊ！）を５分間隔で２回加
えた。

この間ＩＮ　　ＮａＯＨを用いて、反応液の９Ｈを８〜
９に調節した。３５分後、参考例１で得た４−モノメト
キシポリエチレングリコール−フェニルグリオキザール
（０−５［）を含む０．２　Ｍ　Ｎ　ａ　ＨＣＯｓＮ　
ａ　ｇｃ　Ｏｓ　　（ｐＨＩＬ９　）　）水溶液（５０
ｕｍ！）を加え、ＩＮ　　ＮａＯＨでｐＨを８〜９とし
た後、遮光下室温にて２時間４５分放置した。ＩＮ酢酸
水にてｐ「を２〜３とし、３７℃にて遮光下９時間放置
した。反応液をＴＳＫｇｅｌＧ３０００ＳＷ（東ソー社
製、７．５閤φＸ５Ｑｃｍ）を用いたゲル濾過により精
製し、目的物を含む分画を限外濾過により脱塩・濃縮す
ることにより、目的物を含む水溶液（５０＃ｊ！、蛋白
含量１５．４＃ｇ１５０ｕｌ）を得た。

目的物の酸分解物（６Ｎ塩酸−フエノール、１１０℃、
２４時間処理後の分解物）中のアミノ酸分析値＾ｓｘ　
　３．０　（３）　：　　ＧＩＸ　　ロー１　（７）　
：Ｓｅｔ　　６．７　（７）　：　　Ｇｌｙ　　５−８
　（５）　：Ａｒｇ　　５．４　（８）　：　　Ｔｂｒ
　　３．０　（４）　：Ａｌａ”　５．０　（５）　：
　　Ｐｒｏ　　２−４　（３）　：Ｔｙｒ　　２．４　
（３）　：　　Ｖａｌ　　３．２　（４）　：１１ｅ　
　　（１８（１）　　：　　Ｌｅｕ　　　４．７　　（
６）　　：Ｐｈｉ　　　３．３　（４）　　：　　Ｌｙ
ｓ　　　１．０　（１）　　：Ｃｙｓ　　　−（６）　
　：＊基準アミノ酸、（）内は理論値、−は未測定目的吻の
高速液体クロマトグラフィーの挙動は以下の通りである
。

０高速ゲル瀘遇クロマトグラフィーカラム：ＴＳＫｇｅ　ｌＧ３０００ｓＷ（７，５■φＸ
６０ｃｍ）（東ソー社製）溶出液：Ｏ，１Ｍ食塩水（５
％エタノール含有）流速：Ｏ，ｌｌ／分検出波長：２２０ｎｍ保持時間＝２ａ６７分亥隻ＩＬＬポリニーチレングリコール誘導体（１）修飾ウリカーゼ
の製造：ウリカーゼ（Ｑ、ｌ＋ｇ）のａ　２　Ｍ　　Ｎ　ａ　Ｈ
ＣＯｓＯ，０２Ｍ　　Ｎ　ａ　ｚｃ　Ｏｓ　　（ｐＨＩ
Ｌ９７．１００ｕＪ！）溶液に、室温で２０％２−メチ
ルマレイン酸無水物アセトン溶液（１０ｊｌＪ！　）を
５分間隔で３回加えた。この間ＩＮ　　ＮａＯＨを用い
て、反応液のｐｉを９〜１０に調節した。ざらにＩＮ　
　ＮａＯＨでｐＨを９〜１０とし６時間室温にて放置し
た。次いで、参考例１で得た４−モノメトキシポリエチ
レングリコール−フェニルグリオキザール１５１ｍｇお
よびＱ、２　Ｍ　　Ｎ　ａ　ＨＣＯｓ　　０．０２　Ｍ
　　Ｎ　ａ　ｔ　ＣＯｓ（５０＃Ｊ！）を加え、ＩＮ　
　ＮａＯＨでｐＨを９〜１０に調整し、遮光下室温にて
２４時間放置した後、酢酸を加え、ｐＨ３とし、４０℃
で３時間放置した。

反応混合物をＴＳＫｇｅ　ｌＧ４０００ＰＷｘＬ　（７
，８■φＸ３ＧＣｌｌ）　２本連結＋Ｔ　Ｓ　Ｋｇｕａ
ｒｄｃｏｌｕｓｎＰ　Ｗ　ｘ　Ｌゲル濾過により精製し
、目的とする分画を凍結乾燥後、遠心濾過チューブ（ミ
リポア社製、ウルトラフリー７Ｃ３ＬＧＣ）により、脱
塩・濃縮することによって、目的物の水溶液５０ｐ２を
得た。

目的物の高速液体クロマトグラフィーの挙動は以下の通
りである。

０高速ゲル瀘遇クロマトグラフィーカラム：ＴＳＫｇｅ　ｌＧ４０００ＰＷｘＬ（１−８ｓ
ｓφＸ３０Ｇｍ）２本連結十Ｔ　Ｓ　Ｋｇｕａｒｄｃｏ
ｌｏｗｍｕｎ　Ｐ　Ｗ　Ｘ　Ｌ（６，０閣φＸ４ｃｍ）
（東ソー社製）溶出液＝０．２Ｍ　　ＮａＣｌ流速：０−６Ｍ／１７分検出波長：２５４ｎｍ保持時間＝２４．６分

Claims

【特許請求の範囲】

（１）カルシトニン遺伝子関連ペプチド、エラスターゼ
、心房性ナトリウム利尿ペプチド、性腺刺激ホルモン放
出ホルモン、α−メラノトロピン、パラチロイドホルモ
ン、ＩＧＦ−II、ウリカーゼおよびこれらの誘導体から
選ばれるペプチド中のグアニジノ基が式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｒは低級アルキル基を表し、ｎはポリエチレン
グリコール部分の平均分子量が約１，０００〜１２，０
００となる任意の正の整数であることを表す。）で表さ
れるポリエチレングリコール誘導体によって修飾されて
いる修飾ペプチド。
（２）式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｒは低級アルキル基を表し、ｎはポリエチレン
グリコール部分の平均分子量が約１，０００〜１２，０
００となる任意の正の整数であることを表す。）で表さ
れるポリエチレングリコール誘導体とカルシトニン遺伝
子関連ペプチド、エラスターゼ、心房性ナトリウム利尿
ペプチド、性腺刺激ホルモン放出ホルモン、α−メラノ
トロピン、パラチロイドホルモン、ＩＧＦ−II、ウリカ
ーゼおよびこれらの誘導体から選ばれるペプチド中のグ
アニジノ基とを反応させることを特徴とする修飾ペプチ
ドの製造方法。
（３）カルシトニン遺伝子関連ペプチド、エラスターゼ
、心房性ナトリウム利尿ペプチド、性腺刺激ホルモン放
出ホルモン、α−メラノトロピン、パラチロイドホルモ
ン、ＩＧＦ−II、ウリカーゼおよびこれらの誘導体から
選ばれるペプチドのアミノ基を保護した後、式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｒは低級アルキル基を表し、ｎはポリエチレン
グリコール部分の平均分子量が約１，０００〜１２，０
００となる任意の正の整数であることを表す。）で表さ
れるポリエチレングリコール誘導体を反応させ、続いて
アミノ基の保護基を脱保護することを特徴とする修飾ペ
プチドの製造方法。