RU2724436C1 - Способ получения промежуточного соединения конъюгата антитело-лекарственное средство - Google Patents

Способ получения промежуточного соединения конъюгата антитело-лекарственное средство Download PDF

Info

Publication number
RU2724436C1
RU2724436C1 RU2019142484A RU2019142484A RU2724436C1 RU 2724436 C1 RU2724436 C1 RU 2724436C1 RU 2019142484 A RU2019142484 A RU 2019142484A RU 2019142484 A RU2019142484 A RU 2019142484A RU 2724436 C1 RU2724436 C1 RU 2724436C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
reaction
pab
cit
val
maa
Prior art date
Application number
RU2019142484A
Other languages
English (en)
Inventor
Чанцзян ХУАН
Хой Е
Сюэцзин ЯО
Хаохуа ЦЗЕ
Шичжун ЧЖАЙ
Цзяньминь ФАН
Original Assignee
Ремеджен, Лтд.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ремеджен, Лтд. filed Critical Ремеджен, Лтд.
Application granted granted Critical
Publication of RU2724436C1 publication Critical patent/RU2724436C1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6889—Conjugates wherein the antibody being the modifying agent and wherein the linker, binder or spacer confers particular properties to the conjugates, e.g. peptidic enzyme-labile linkers or acid-labile linkers, providing for an acid-labile immuno conjugate wherein the drug may be released from its antibody conjugated part in an acidic, e.g. tumoural or environment
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7028—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages
    • A61K31/7034—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin
    • A61K31/704—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin attached to a condensed carbocyclic ring system, e.g. sennosides, thiocolchicosides, escin, daunorubicin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/07—Tetrapeptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/65—Peptidic linkers, binders or spacers, e.g. peptidic enzyme-labile linkers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/68031—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being an auristatin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/6807—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug or compound being a sugar, nucleoside, nucleotide, nucleic acid, e.g. RNA antisense
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/6811—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a protein or peptide, e.g. transferrin or bleomycin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A61K47/6869—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell the tumour determinant being from a cell of the reproductive system: ovaria, uterus, testes, prostate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

Изобретение относится к области медицины. Предложен способ получения промежуточного соединения конъюгата антитело–лекарственное средство, содержащего линкер и функциональный фрагмент лекарственного средства, в котором промежуточное соединение конъюгата антитело–лекарственное средство является Py–MAA–Val–Cit–PAB–D, Py–MAA–Val–Cit–PAB является линкером, D представляет собой присоединяемый функциональный фрагмент лекарственного средства и присоединяемый функциональный фрагмент лекарственного средства содержит свободную аминогруппу. Изобретение обеспечивает снижение потери функционального фрагмента лекарственного средства, т.к. функциональный фрагмент лекарственного средства используют на последней стадии реакции. 14 з.п. ф-лы, 2 табл., 3 пр.

Description

ОБЛАСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[0001] Настоящее изобретение относится к области фармацевтических препаратов, в частности, способу получения промежуточного соединения конъюгата антитело–лекарственное средство.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
[0002] Конъюгат антитело–лекарственное средство (сокращенно обозначаемый как ADC) представляет собой класс противоопухолевых лекарственных средств, состоящих из трех компонентов: антитела, линкера и лекарственного средства. Количество лекарственных средств, присоединенных к антителу (соотношение лекарственного средства и антитела, DAR) определяет гомогенность конъюгата антитело–лекарственное средство. Избыточное количество присоединенных лекарственных средств будет приводить к нестабильной фармакодинамике, повышенному метаболизму лекарственного средства, сниженному времени полужизни и повышенной системной токсичности.
[0003] Значение DAR, главным образом, определяется линкером. Для классических ADC есть два способа сочетания: один из них является реакцией сочетания по аминогруппе, а другой – реакцией сочетания по тиоловой группе, являющийся в настоящее время наиболее общеупотребительным способом сочетания. Сочетание по аминогруппе является сочетанием лекарственного средства с остатком лизина (Lys) в антителе через линкер. Т.к. на одном антителе присутствует 80 лизинов, 30 из которых можно соединять, ADC, образованный посредством сочетания с лизином, имеет значение DAR от 0 до 30, и гомогенность продукта является очень плохой. Сочетание по тиоловой группе предназначено для раскрытия межцепочечных дисульфидных связей в антителе для получения свободных остатков цистеина (Cys) перед сочетанием с комплексом линкер–лекарственное средство, способных соединяться с остатками цистеина. Т.к. одно антитело содержит только 4 пары межцепочечных дисульфидных связей, после раскрытия всех межцепочечных дисульфидных связей можно получить только 8 свободных остатков цистеина. Таким образом, ADC, образованные посредством сочетания через остаток цистеина, имеют значения DAR от 0 до 8. Хотя посредством сочетания по тиоловой группе можно лучше контролировать количество связей на антитело, расщепление межцепочечной дисульфидной связи значительно снижает стабильность антитела.
[0004] В настоящее время, в дополнение к классическому сочетанию по аминогруппе и сочетанию по тиоловой группе, есть новый способ сочетания: мостиковое сочетание. Способ мостикового сочетания является новым способом сочетания, разработанным на основе реакции сочетания по тиоловой группе, в котором линкер одновременно сочетают с двумя свободными тиоловыми группами на антителе, и значение DAR полученного таким образом конъюгата антитело–лекарственное средство составляет от 0 до 4. Множество линкеров, которые можно ковалентно связывать с антителом посредством мостикового сочетания, описаны в китайской патентной публикации № CN107921030A, в которой описывают промежуточное соединение конъюгата антитело–лекарственное средство (Py–MAA–Val–Cit–PAB–MMAE) (где Py представляет собой триакрилоилгексагидротриазин, его CAS является 959–52–4, и оно доступно в J&K Scientific и Nanjing Chemlin Chemical Industry Co., Ltd.), как указано ниже на стр. 42 описания.
Figure 00000001
[0005] Кроме того, способ получения промежуточного соединения конъюгата антитело–лекарственное средство (Py–MAA–Val–Cit–PAB–MMAD), в котором лекарственное средство представляет собой MMAD (деметилдоластатин), также описан на стр. 32 патентной заявки:
Figure 00000002
Способ включает сначала сочетание Val–Cit–PAB с лекарственным средством (MMAD) с образованием конъюгата Val–Cit–PAB–MMAD, а затем реакцию с Py–MAA с образованием промежуточного соединения конъюгата антитело–лекарственное средство Py–MAA–Val–Cit–PAB–MMAD. В результате высокой стоимости лекарственного средства (такого как MMAD/MMAE или MMAF и т.д.), используемого в конъюгате антитело–лекарственное средство, и больших потерь при производстве лекарственного средства с использованием указанного выше способа, производственные затраты являются высокими, что делает этот способ неподходящим для массового промышленного производства.
СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[0006] Настоящее изобретение относится к способу получения промежуточного соединения конъюгата антитело–лекарственное средство, в частности, к способу получения промежуточного соединения конъюгата антитело–лекарственное средство, содержащего линкер и функциональный фрагмент лекарственного средства. Промежуточным соединением конъюгата антитело–лекарственное средство является Py–MAA–Val–Cit–PAB–D, в котором Py–MAA–Val–Cit–PAB является линкером, и D представляет собой присоединенный функциональный фрагмент лекарственного средства. Способ отличается тем, что он включает следующие реакции:
Figure 00000003
[0007] Кроме того, способ получения включает следующие реакции:
Реакцию A: растворение Py–MAA–Val–Cit–PAB–OH в растворителе, добавление бис(4–нитрофенил)карбоната, перемешивание до растворения или слабой мутности раствора, а затем добавление органического основания;
Реакцию B: после завершения реакции A, добавление триазольного катализатора, функционального фрагмента лекарственного средства D и органического основания и, после завершения реакции, осуществление очистки для получения Py–MAA–Val–Cit–PAB–D. Предпочтительно, для очистки используют препаративную колонку для ВЭЖХ.
[0008] Кроме того, функциональный фрагмент лекарственного средства D является цитотоксическим средством класса ауристатинов, цитотоксическим средством класса антрамицинов, цитотоксическим средством класса антрациклинов или цитотоксическим средством класса пуромицинов.
[0009] Предпочтительно, цитотоксическое средство класса ауристатинов выбрано из группы, состоящей из MMAE, MMAF, MMAD и их производных; цитотоксическое средство класса антрамицинов является антрамицином; цитотоксическое средство класса антрациклинов выбрано из группы, состоящей из даунорубицина, доксорубицина, эпирубицина, идарубицина, валрубицина и митоксантрона; и цитотоксическое средство класса пуромицинов является пуромицином.
[0010] Предпочтительно, Py–MAA–Val–Cit–PAB–D имеет структуры, представленные формулами (1–11):
Figure 00000004
Figure 00000005
Figure 00000006
Figure 00000007
Figure 00000008
Figure 00000009
Figure 00000010
Figure 00000011
Figure 00000012
Figure 00000013
Figure 00000014
.
[0011] Кроме того, растворитель является полярным растворителем и/или неполярным растворителем. Полярный растворитель является одним или более растворителями, выбранными из группы, состоящей из DMF, DMA и NMP; неполярный растворитель является одним или более растворителями, выбранными из группы, состоящей из дихлорметана и тетрахлорида углерода.
[0012] Кроме того, органическое основание является одним или более основаниями, выбранными из группы, состоящей из N,N–диизопропилэтиламина, триэтиламина и пиридина, предпочтительно, одним или двумя выбранными из группы, состоящей из N,N–диизопропилэтиламина и пиридина.
[0013] Кроме того, триазольный катализатор является одним или более катализаторами, выбранными из группы, состоящей из 1–гидроксибензотриазола, 1–гидрокси–7–азабензотриазола, этил–1–гидрокси–1H–1,2,3–триазол–4–карбоксилата, предпочтительно 1–гидроксибензотриазола.
[0014] Кроме того, температура реакции A составляет от 5 до 35°C, и продолжительность реакции составляет от 2 до 10 часов.
[0015] Предпочтительно, в реакции A контрольная температура реакционной системы должна находиться в диапазоне от 5 до 15°C перед добавлением бис(4–нитрофенил)карбоната, и более предпочтительно 10°C.
[0016] Предпочтительно, в реакции A контрольная температура реакционной системы должна находиться в диапазоне от 20 до 35°C после добавления органического основания, предпочтительно 30°C.
[0017] Кроме того, температура реакции B находится в диапазоне от 5 до 30°C, и продолжительность реакции находится в диапазоне от 15 до 48 часов.
[0018] Предпочтительно, в реакции B контрольная температура реакционной системы должна находиться в диапазоне от 5 до 15°C перед добавлением триазольного катализатора, предпочтительно 10°C.
[0019] Предпочтительно, в реакции B контрольная температура реакционной системы должна находиться в диапазоне от 15 до 30°C после добавления органического основания, предпочтительно 20°C. Кроме того, молярное соотношение Py–MAA–Val–Cit–PAB–OH, бис(4–нитрофенил)карбоната и органического основания в реакции A составляет 1:1–5:1–3.
[0020] Кроме того, молярное соотношение триазольного катализатора, MMAE, органического основания и Py–MAA–Val–Cit–PAB–OH в реакции B составляет 1–3:1–3:1,5–30:1.
[0021] Кроме того, настоящее изобретение также относится к применению любого из указанных выше способов получения для получения промежуточного соединения конъюгата антитело–лекарственное средство, представляющего собой Py–MAA–Val–Cit–PAB–MMAF, и его структура представлена формулой (2):
Figure 00000015
[0022] Кроме того, настоящее изобретение также относится к применению любого из указанных выше способов получения для получения промежуточного соединения конъюгата антитело–лекарственное средство, представляющего собой Py–MAA–Val–Cit–PAB–MMAD, и его структура представлена формулой (3):
Figure 00000016
[0023] Кроме того, настоящее изобретение также относится к применению любого из указанных выше способов получения для получения промежуточного соединения конъюгата антитело–лекарственное средство, имеющего структуру, представленную формулой (4):
Figure 00000017
[0024] Кроме того, настоящее изобретение также относится к применению любого из указанных выше способов получения для получения промежуточного соединения конъюгата антитело–лекарственное средство, имеющего структуру, представленную формулой (5):
Figure 00000018
[0025] Кроме того, настоящее изобретение также относится к применению любого из указанных выше способов получения для получения промежуточного соединения конъюгата антитело–лекарственное средство, имеющего структуру, представленную формулой (6):
Figure 00000019
[0026] Кроме того, настоящее изобретение также относится к применению любого из указанных выше способов получения для получения промежуточного соединения конъюгата антитело–лекарственное средство, имеющего структуру, представленную формулой (7):
Figure 00000020
[0027] Кроме того, настоящее изобретение также относится к применению любого из указанных выше способов получения для получения промежуточного соединения конъюгата антитело–лекарственное средство, имеющего структуру, представленную формулой (8):
Figure 00000021
[0028] Кроме того, настоящее изобретение также относится к применению любого из указанных выше способов получения для получения промежуточного соединения конъюгата антитело–лекарственное средство, имеющего структуру, представленную формулой (9):
Figure 00000022
[0029] Кроме того, настоящее изобретение также относится к применению любого из указанных выше способов получения для получения промежуточного соединения конъюгата антитело–лекарственное средство, имеющего структуру, представленную формулой (10):
Figure 00000023
[0030] Кроме того, настоящее изобретение также относится к применению любого из указанных выше способов получения для получения промежуточного соединения конъюгата антитело–лекарственное средство, имеющего структуру, представленную формулой (11):
Figure 00000024
[0031] В некоторых конкретных вариантах осуществления способ включает следующие стадии:
Реакция A: растворение Py–MAA–Val–Cit–PAB в DMF, добавление бис(p–нитрофенил)карбоната, перемешивание до растворения или небольшой мутности перед добавлением N,N–диизопропилэтиламина по каплям, разделение и очистка для получения Py–MAA–Val–Cit–PAB–PNP;
Реакция B: растворение Py–MAA–Val–Cit–PAB–PNP в DMF, добавление 1–гидроксибензотриазола, MMAE, N,N–диизопропилэтиламина и пиридина, осуществление очистки с помощью препаративной колонки для ВЭЖХ после завершения реакции с получением соединения Py–MAA–Val–Cit–PAB–MMAE, представленного формулой (1), где структура Py–MAA–Val–Cit–PAB–PNP представлена следующим образом:
Figure 00000025
[0032] Кроме того, разделение и очистку в указанном выше способе реакции можно осуществлять следующим образом:
(1) центрифугирование реакционного раствора для реакции A с получением супернатанта;
(2) добавление растворителя 1 к супернатанту и тщательное перемешивание;
(3) добавление растворителя 2 по каплям при температуре от 0 до 10°C и тщательное перемешивание;
(4) фильтрация под вакуумом с получением фильтровального осадка;
(5) повторное растворение фильтровального осадка в смешанном растворе растворителя 3 и растворителя 4;
(6) добавление полученной смеси по каплям к растворителю 5 при температуре от 0 до 10°C и перемешивание;
(7) фильтрация под вакуумом с получением грязно–белого порошка, являющегося очищенным Py–MAA–Val–Cit–PAB–PNP.
При этом растворитель 1 является умеренно полярным растворителем, предпочтительно, выбранным из группы, состоящей из этилацетата, дихлорметана, метанола, метил–трет–бутилового эфира и подобного, наиболее предпочтительно этилацетата;
растворитель 2 является слабо полярным растворителем, предпочтительно, выбранным из группы, состоящей из петролейного эфира, n–гексана, n–пентана, циклогексана и подобного, наиболее предпочтительно петролейного эфира;
растворители 3 и 4 являются растворителями, в которых легко растворяется Py–MAA–Val–Cit–PAB–PNP, предпочтительно, выбранными из группы, состоящей из уксусной кислоты, трифторуксусной кислоты, муравьиной кислоты, метанола, этанола и подобного, наиболее предпочтительно уксусной кислоты и метанола;
растворитель 5 является растворителем, в котором Py–MAA–Val–Cit–PAB–PNP плохо растворяется, предпочтительно, выбранным из группы, состоящей из ацетонитрила, этилацетата, дихлорметана, воды и подобного, наиболее предпочтительно воды.
Объемное/массовое соотношение растворителя 1, растворителя 2, растворителя 3 и растворителя 4 и Py–MAA–Val–Cit–PAB составляет 40–100:80–200:5–15:1–3:15–30:1.
[0033] В некоторых конкретных вариантах осуществления, указанные выше разделение и очистку можно осуществлять следующим образом:
(1) центрифугирование промежуточного продукта A с получением супернатанта;
(2) добавление этилацетата в супернатант и тщательное перемешивание;
(3) добавление петролейного эфира по каплям при температуре от 0 до 10°C и тщательное перемешивание;
(4) фильтрация под вакуумом и получение фильтровального осадка;
(5) перерастворение фильтровального осадка в смешанном растворе уксусной кислоты и метанола;
(6) добавление очищенной воды по каплям при температуре от 0 до 10°C и перемешивание;
(7) фильтрация под вакуумом с получением грязно–белого порошка, являющегося очищенным Py–MAA–Val–Cit–PAB–PNP.
[0034] По сравнению со способом получения промежуточного соединения конъюгата антитело–лекарственное средство (Py–MAA–Val–Cit–PAB–MMAD), описанным в китайской патентной публикации № CN107921030A на стр. 43 описания, с помощью способа получения промежуточного соединения конъюгата антитело–лекарственное средство по настоящему изобретению значительно снижают потери функционального фрагмента лекарственного средства (такого как MMAD/MMAE или MMAF и т.д.), т.к. функциональный фрагмент лекарственного средства используют на последней стадии реакции, таким образом, эффективно снижая производственные затраты, а также повышая эффективность производства. Кроме того, способ по настоящему изобретению является простым, экологически чистым и подходящим для крупномасштабного промышленного производства.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ
[0035] Сокращения
Сокращения Структура/название
Py
Figure 00000026

Триакрилоилгексагидротриазин
Py–MAA
Figure 00000027

Триакрилоилгексагидротриазин–меркаптоуксусная кислота
Py–MAA–Val–Cit–PAB–OH
Figure 00000028

Триакрилоилгексагидротриазин–меркаптоуксусная кислота–валин–цитруллин–p–аминобензиловый спирт
Py–MAA–Val–Cit–PAB–PNP
Figure 00000029

Триакрилоилгексагидротриазин–меркаптоуксусная кислота–валин–цитруллин–p–аминобензилоксикарбонил–p–нитрофениловый сложный эфир
Py–MAA–Val–Cit–PAB–MMAE
Figure 00000030

Триакрилоилгексагидротриазин–меркаптоуксусная кислота–валин–цитруллин–p–аминобензилоксикарбонилмонометил–ауристатин E
MMAE
Figure 00000031
MMAD
Figure 00000032
MMAF
Figure 00000033
NPC
Figure 00000034

Бис(4–нитрофенил)карбонат
Антрамицин
Figure 00000035
Даунорубицин
Figure 00000036
Доксорубицин
Figure 00000037
Эпирубицин
Figure 00000038
Идарубицин
Figure 00000039
Валрубицин
Figure 00000040
Митоксантрон
Figure 00000041
Пуромицин
Figure 00000042
[0036] Определения
[0037] Если не указано иначе, все технические и научные термины, используемые в настоящем описании, обладают значением, общепринято понятным специалисту в этой области.
[0038] Хотя числовые диапазоны и приблизительные значения параметров представлены в настоящем описании в широком объеме, числовые значения, представленные в конкретных вариантах осуществления, описаны настолько точно, насколько это возможно. Однако любое числовое значение по определению содержит некоторые ошибки по причине стандартного отклонения при соответствующем измерении. Кроме того, все диапазоны, представленные в настоящем описании, следует интерпретировать как включающие любые и все поддиапазоны. Например, указанный диапазон "от 1 до 10" следует считать включающим любые и все поддиапазоны от минимума 1 до максимума 10 (включая конечные точки); т.е. все поддиапазоны, начинающиеся с минимума 1 или более, такого как от 1 до 6,1, и поддиапазоны, заканчивающиеся максимумом 10 или менее, таким от как 5,5 до 10. Кроме того, любую ссылку, обозначаемую как "включенная в настоящем описании", интерпретируют как включенную в полном объеме.
[0039] Кроме того, следует отметить, что в рамках изобретения формы в единственном числе включают формы во множественном числе, если четко не указано иное. Термин "или" можно использовать взаимозаменяемо с термином "и/или", если контекст четко не указывает на иное.
[0040] В рамках изобретения термин "конъюгат антитело–лекарственное средство" относится к соединению, в котором антитело/функциональный фрагмент антитела, линкер и функциональный фрагмент лекарственного средства химически соединяют друг с другом, и его структура, как правило, состоит из трех частей: антитела или антительного лиганда, функционального фрагмента лекарственного средства и линкера, с помощью которого соединяют антитело или антительный лиганд и лекарственное средство. В настоящее время получение конъюгатов антитело–лекарственное средство, как правило, разделяют на две стадии: первой стадией является химическая реакция линкера с функциональным фрагментом лекарственного средства с образованием конъюгата "линкер–лекарственное средство", и второй стадией является ковалентное соединение линкерной части конъюгата "линкер–лекарственное средство" с антителом/функциональным фрагментом антитела с помощью тиоловой группы или аминогруппы. В рамках изобретения термин "промежуточное соединение конъюгата антитело–лекарственное средство" относится к конъюгату "линкер–лекарственное средство", как описано выше, и, кроме того, термин "промежуточное соединение конъюгата антитело–лекарственное средство" по изобретению, как правило, относится к конъюгату "линкер–лекарственное средство", в котором линкер и лекарственное средство соединяют с помощью связи "–CO–NH–" посредством аминной переэтерификации.
[0041] В рамках изобретения термины "линкер" и "линкерная часть" относятся к части конъюгата антитело–лекарственное средство, с помощью которой соединяют антитело с лекарственным средством, которая может являться расщепляемой или нерасщепляемой. Расщепляемый линкер (т.е. линкер, являющийся расщепляемым или биодеградируемым линкером) может расщепляться внутри или на клетке–мишени с высвобождением лекарственного средства. В некоторых вариантах осуществления линкер по настоящему изобретению выбран из расщепляемых линкеров, таких как линкер на основе дисульфида (селективно расщепляющийся в опухолевых клетках, имеющих более высокую концентрацию сульфгидрильных групп), пептидный линкер (расщепляемый ферментом в опухолевых клетках) или гидразоновый линкер. В других вариантах осуществления линкер по настоящему изобретению выбран из нерасщепляемых линкеров (т.е. линкеров, не являющихся расщепляемыми), таких как тиоэфирный линкер. В других вариантах осуществления линкер по настоящему изобретению представляет собой комбинацию расщепляемого линкера и нерасщепляемого линкера.
[0042] В рамках изобретения термины "лекарственное средство" и "функциональный фрагмент лекарственного средства", как правило, относятся к любому соединению, имеющему желаемую биологическую активность и реакционноспособную функциональную группу для получения конъюгатов по настоящему изобретению. Желаемая биологическая активность включает диагностику, излечение, облегчение, лечение, профилактику заболеваний у людей или других животных. Т.к. непрерывно открывают и разрабатывают новые лекарственные средства, эти новые лекарственные средства также следует включать в лекарственные средства по настоящему изобретению. В частности, лекарственное средство включает, в качестве неограничивающих примеров, цитотоксические лекарственные средства, факторы дифференцировки клеток, трофические факторы стволовых клеток, стероидные лекарственные средства, лекарственные средства для лечения аутоиммунных заболеваний, противовоспалительные лекарственные средства или лекарственные средства против инфекционных заболеваний. Более конкретно, лекарственное средство включает, в качестве неограничивающих примеров, ингибиторы тубулина или средства, повреждающие ДНК или РНК.
[0043] Примеры
[0044] Далее представлены примеры способов и композиций по настоящему изобретению. Следует понимать, что в свете представленных выше определений и общего описания можно осуществлять различные другие варианты осуществления.
[0045] Пример 1. Получение Py–MAA
Figure 00000043
[0046] Соединение Py (1,87 г, 7,51 ммоль) (CAS: 959–52–4) и Et3N (104 мкл, 0,75 ммоль) растворяли в безводном CH2Cl2 (40 мл), по каплям добавляли раствор тиогликолевой кислоты (103,9 мкл, 1,50 ммоль) в CH2Cl2 (40 мл). После завершения добавления температуру системы доводили до комнатной температуры и перемешивали систему в течение ночи. После завершения реакции растворитель удаляли под вакуумом и очищали неочищенный продукт посредством хроматографии на колонках для получения белого твердого Py–MAA (1,87 г, 40,1%).
[0047] Пример 2. Сравнительный пример: Получение Py–MAA–Val–Cit–PAB–MMAE (представляющий собой способ, описанный на стр. 32 описания китайской патентной публикации № CN107921030A).
[0048] Способ представлен ниже:
Figure 00000044
Figure 00000045
[0049] (1) Получение Fmoc–Val–Cit–PAB–MMAE
[0050] Fmoc–Val–Cit–PAB–PNP (388,4 мг, 0,507 ммоль) получали и растворяли в DMF (40 м) в защитной атмосфере азота при 0°C и добавляли HOBt (68,4 мг, 0,507 ммоль) и соединение MMAE (400,0 мг, 0,558 ммоль). Через 15 минут добавляли пиридин (8 мл) и DIPEA (106,2 мкл, 0,608 ммоль) и проводили реакцию при 0°C в течение 30 минут. Температуру повышали до комнатной температуры и перемешивали смесь в течение 3 часов. Реакционную смесь дополняли DIPEA (106,2 мкл, 0,608 ммоль) и реакцию продолжали при комнатной температуре в течение 24 часов. После завершения реакции смесь концентрировали под вакуумом. Неочищенный продукт очищали посредством хроматографии на колонках с получением белого твердого соединения Fmoc–Val–Cit–PAB–MMAE (325 мг, выход 47,7%).
[0051] (2) Получение Val–Cit–PAB–MMAE
[0052] Соединение Fmoc–Val–Cit–PAB–MMAE (325 мг, 0,289 ммоль) растворяли в DMF (6 мл) перед добавлением диэтиламина (3 мл) и реакцию продолжали с перемешиванием в течение 2,5 часов. После завершения реакции растворитель удаляли при пониженном давлении с получением неочищенного продукта Val–Cit–PAB–MMAE (220 мг, выход: 67,8%), который можно использовать для следующей реакции напрямую без очистки.
[0053] 3) Синтез Py–MAA–Val–Cit–PAB–MMAE
[0054] Соединение Py–MAA (80,2 мг, 0,235 ммоль), HOBt (31,8 мг, 0,235 ммоль) и DIC (29,6 мг, 0,235 ммоль) получали и растворяли в DMF (10 мл) и охлаждали до 0°C на ледяной бане. В реакционный раствор добавляли соединение Val–Cit–PAB–MMAE (220,0 мг, 0,196 ммоль) и DIPEA (25,3 мг, 0,196 ммоль), температуру доводили до комнатной температуры и проводили реакцию в течение 24 часов. После завершения реакции неочищенный продукт очищали посредством хроматографии на колонках (метанол:дихлорметан=60:1–30:1) с получением белого твердого соединения Py–MAA–Val–Cit–PAB–MMAE (147,4 мг, выход 52%). LCMS m/z(ES+), 1445,78 (M+H)+.
[0055] Py–MAA–Val–Cit–PAB–MMAE получали способом получения Py–MAA–Val–Cit–PAB–MMAD, как описано на стр. 32 описания китайской патентной публикации № CN107921030A. Исходное количество материала MMAE составляло 400 мг, а количество полученного Py–MAA–Val–Cit–PAB–MMAE – 147,4 мг.
[0056] Пример 3. Улучшенный способ получения Py–MAA–Val–Cit–PAB–MMAE
[0057] (1) Получение Py–MAA–Val–Cit–PAB
Figure 00000046
[0058] Соединение Py–MAA (10,00 г, 29,33 ммоль) помещали в тетрагидрофуран (200 мл) перед добавлением N,N'–карбонилдиимидазола (7,13 г, 44,00 ммоль) и Val–Cit–PAB–OH (13,34 г, 35,20 ммоль) и перемешивали при комнатной температуре в течение 24 часов. Добавляли петролейный эфир (200 мл), перемешивали в течение 0,5 часов и фильтровали с получением белого твердого вещества. Белое твердое вещество очищали посредством препаративной высокоэффективной жидкостной хроматографии, полученное вещество подвергали ротационному выпариванию с получением Py–MAA–Val–Cit–PAB–OH (6,67 г, 32,4%, белый твердый порошок).
[0059] (2) Получение Py–MAA–Val–Cit–PAB–PNP
Figure 00000047
[0060] Py–MAA–Val–Cit–PAB–OH (10,00 г, 1,0 экв.) и DMF (VDMF/WPy–MAA–Val–Cit–PAB=15–25 мл/г) добавляли в трехгорлую колбу в защитной атмосфере азота, перемешивали в защитной атмосфере азота до растворения твердого вещества или получения немного мутного раствора. Температуру в трехгорлой колбе снижали до 10°C, добавляли твердый NPC (1,5–2,5 экв., 6,50–10,83 г) в одну часть и перемешивали до растворения или получения немного мутного раствора. По каплям добавляли DIPEA (1,0–1,5 экв., 1,84–2,76 г) в защитной атмосфере азота. Температуру доводили до 30°C и осуществляли мониторинг реакции посредством UPLC до достижения чистоты Py–MAA–Val–Cit–PAB менее 5,0%, затем реакцию прекращали.
[0061] Реакционный раствор центрифугировали и супернатант наливали в лабораторный стакан подходящего размера, в который добавляли EA (VEA/WPy–MAA–Val–Cit–PAB=60±2) и перемешивали с помощью электрического миксера; по каплям добавляли PE (VPE/WPy–MAA–Val–Cit–PAB=120±2) при температуре от 0 до 6°C и после добавления по каплям перемешивали в течение от 20 до 30 минут. После фильтрации под вакуумом получали фильтровальный осадок и растворяли его уксусной кислотой (VAcOH/WPy–MAA–Val–Cit–PAB=7) и метанолом (VMeOH/WPy–MAA–Val–Cit–PAB) с получением раствора.
[0062] В лабораторный стакан подходящего размера наливали очищенную воду (Vвода/WPy–MAA–Val–Cit–PAB =21), механически перемешивали и охлаждали до приблизительно 3°C. Указанный выше раствор добавляли по каплям в очищенную воду и после добавления по каплям перемешивали в течение 15 минут. После фильтрации под вакуумом получали фильтровальный осадок и лиофилизировали с получением Py–MAA–Val–Cit–PAB–PNP (белого или грязно–белого порошка, 10,69 г, выход 86,54%).
[0063] (3) Получение Py–MAA–Val–Cit–PAB–MMAE
Figure 00000048
[0064] В реакционный раствор добавляли Py–MAA–Val–Cit–PAB–PNP (9,00 г, 1,0 экв.) и DMF (VDMF/WPy–MAA–Val–Cit–PAB–PNP=15,0–25,0 мл/г), перемешивали в защитной атмосфере азота до получения прозрачного или немного мутного раствора. Поддерживали внутреннюю температуру 10°C, одновременно добавляя HOBt (2,10 г, 1,5 экв.) и перемешивая в течение 20 минут. Добавляли MMAE (8,93 г, 1,2 экв.) и продолжали перемешивание в течение 20 минут. По каплям добавляли смешанный раствор DIPEA (1,34 г, 1,0 экв.) и пиридина (Vпиридин/VDIPEA=5) и доводили температуру для поддержания внутренней температуры 20°C. Через 36 часов реакции осуществляли мониторинг посредством UPLC раз в час и, когда чистота MMAE в реакционном растворе составляла <2,00%, реакцию останавливали.
[0065] Брали лабораторный стакан подходящего размера, в который добавляли насыщенный водный раствор хлорида натрия (обозначаемый как рассол, Vрассол/Vреакционный раствор=10), и снижали температуру до достижения внутренней температуры 5°C. В насыщенный раствор хлорида натрия по каплям добавляли реакционный раствор. Неочищенный продукт получали посредством центрифугирования и очищали посредством препаративной высокоэффективной жидкостной хроматографии. После лиофилизации получали Py–MAA–Val–Cit–PAB–MMAE (белый порошок, 9,79 г, выход 65,27%).
[0066] В этом примере исходное количество MMAE составляло 8,93 г, а полученное количество Py–MAA–Val–Cit–PAB–MMAE составляло 9,79 г.
[0067] При сравнении способов, представленных в примере 2 и примере 3 в терминах количества исходного MMAE и массы конечного продукта (результаты сравнения представлены в таблице 1), из таблицы 1 видно, что полученное количество конечного продукта Py–MAA–Val–Cit–PAB–MMAE, полученного способом получения из примера 2, составляло 147,4 мг, в то время как исходное количество MMAE составляло 400 мг; полученное количество конечного продукта Py–MAA–Val–Cit–PAB–MMAE, полученного способом получения из примера 3, составляло 9,79 г, в то время как исходное количество MMAE составляло 8,93 г.
Таблица 1. Сравнение количества исходного MMAE и полученного количества конечного продукта
Примеры Исходное количество MMAE Полученное количество конечного продукта Py–MAA–Val–Cit–PAB–MMAE Технологический коэффициент MMAE (исходное количество MMA/полученное количество конечного продукта Py–MAA–Val–Cit–PAB–MMAE Процент снижения исходного количества по сравнению со сравнительным примером (пример 2)
Пример 2 400 мг 147,4 мг 2,71 –
Пример 3 0,91 66,4%
[0068] Технологический коэффициент MMAE представляет собой то, как много единиц MMAE необходимо затратить для получения каждой единицы массы Py–MAA–Val–Cit–PAB–MMAE. Как видно из таблицы 1, при использовании способа из примера 2 необходимо 2,71 единицы массы MMAE для получения 1 единицы массы Py–MAA–Val–Cit–PAB–MMAE; в то время как при адаптации способа из примера 3 необходимо лишь 0,91 единиц массы MMAE. Исходное количество снижалось на 66,4%, что значительно снижает производственные затраты.
[0069] Выше описан только предпочтительный вариант осуществления, являющийся исключительно иллюстративным, а не ограничивающим комбинации признаков, необходимых для практического осуществления настоящего изобретения. Представленное название не предназначено для ограничения различных вариантов осуществления изобретения. Термины, такие как "содержащий" и "включающий", не предназначены для ограничения. Кроме того, если не указано иначе, в случае отсутствия числовой модификации включены формы во множественном числе, и термин "или" означает "и/или". Если в настоящем описании не указано иначе, все технические и научные термины, используемые в настоящем описании, обладают значением, общепринято понятным специалисту в этой области.
[0070] Все публикации и патенты, упомянутые в настоящей заявке, включены в нее, таким образом, в качестве ссылки. Специалисту в этой области очевидны многочисленные модификации и варианты описываемых способов и композиций по настоящему изобретению. Хотя настоящее изобретение описано с помощью конкретных предпочтительных вариантов осуществления, следует понимать, что настоящее изобретение, как указано в формуле изобретения, не должно быть чрезмерно ограничено этими конкретными вариантами осуществления. Фактически, эти многочисленные модификации и варианты, используемые для практического осуществления принципов настоящего изобретения, очевидных специалисту в этой области, предназначены для включения в объем формулы изобретения.

Claims (27)

1. Способ получения промежуточного соединения конъюгата антитело–лекарственное средство, содержащего линкер и функциональный фрагмент лекарственного средства, в котором промежуточное соединение конъюгата антитело–лекарственное средство является Py–MAA–Val–Cit–PAB–D, Py–MAA–Val–Cit–PAB в промежуточном соединении является линкером, и D в промежуточном соединении представляет собой присоединяемый функциональный фрагмент лекарственного средства, и присоединяемый функциональный фрагмент лекарственного средства содержит свободную аминогруппу, где способ включает следующие реакции:
Figure 00000049
.
2. Способ по п.1, где
Реакция A: растворение Py–MAA–Val–Cit–PAB–OH в растворителе, добавление бис(4–нитрофенил)карбоната, перемешивание до растворения или получения немного мутного раствора, а затем добавление органического основания;
Реакция B: после завершения реакции A, добавление триазольного катализатора, функционального фрагмента лекарственного средства D и органического основания и, после завершения реакции, осуществление очистки с получением Py–MAA–Val–Cit–PAB–D.
3. Способ по п.1 или 2, где функциональный фрагмент лекарственного средства D является цитотоксическим средством класса ауристатинов, цитотоксическим средством класса антрамицинов, цитотоксическим средством класса антрациклинов или цитотоксическим средством класса пуромицинов.
4. Способ по п.3, где цитотоксическое средство класса ауристатинов выбрано из группы, состоящей из MMAE, MMAF, MMAD и их производного; цитотоксическое средство класса антрамицинов является антрамицином или его производным; цитотоксическое средство класса антрациклинов выбрано из группы, состоящей из даунорубицина, доксорубицина, эпирубицина, идарубицина, валрубицина, митоксантрона и их производных; и цитотоксическое средство класса пуромицинов является пуромицином или его производным.
5. Способ по п.4, где структура Py–MAA–Val–Cit–PAB–D представлена формулами (1–11):
Figure 00000050
Figure 00000051
Figure 00000052
Figure 00000053
Figure 00000054
Figure 00000055
Figure 00000056
Figure 00000057
Figure 00000058
Figure 00000059
Figure 00000060
.
6. Способ по любому из предшествующих пунктов, где растворитель является полярным растворителем и/или неполярным растворителем, полярный растворитель является одним или более выбранными из группы, состоящей из DMF, DMA и NMP; неполярный растворитель является одним или более выбранными из группы, состоящей из дихлорметана и тетрахлорида углерода.
7. Способ по любому из предшествующих пунктов, где органическое основание является одним или более выбранными из группы, состоящей из N,N–диизопропилэтиламина, триэтиламина и пиридина, предпочтительно, одним или двумя выбранными из группы, состоящей из N,N–диизопропилэтиламина и пиридина.
8. Способ по любому из предшествующих пунктов, где триазольный катализатор является одним или более выбранными из группы, состоящей из 1–гидроксибензотриазола, 1–гидрокси–7–азабензотриазола и этил–1–гидрокси–1H–1,2,3–триазол–4–карбоксилата, предпочтительно 1–гидроксибензотриазола.
9. Способ по любому из предшествующих пунктов, включающий следующее: в реакции A контрольная температура реакционной системы должна находиться в диапазоне от 5 до 15°C перед добавлением бис(4–нитрофенил)карбоната, предпочтительно 10°C; и более предпочтительно в реакции A контрольная температура реакционной системы должна находиться в диапазоне от 20 до 35°C после добавления органического основания, предпочтительно 30°C.
10. Способ по любому из предшествующих пунктов, включающий следующее: в реакции B контрольная температура реакционной системы должна находиться в диапазоне от 5 до 15°C перед добавлением триазольного катализатора, предпочтительно 10°C; более предпочтительно, в реакции B контрольная температура реакционной системы должна находиться в диапазоне от 15 до 30°C после добавления органического основания, предпочтительно 20°C.
11. Способ получения по любому из предшествующих пунктов, где в реакции A молярное соотношение Py–MAA–Val–Cit–PAB–OH, бис(4–нитрофенил)карбоната и органического основания составляет 1:1–5:1–3.
12. Способ по любому из предшествующих пунктов, где в реакции B молярное соотношение триазольного катализатора, MMAE, органического основания и Py–MAA–Val–Cit–PAB–OH составляет 1–3:1–3:1,5–30:1.
13. Способ по любому из предшествующих пунктов, включающий после завершения реакции B осуществление очистки с помощью препаративной колонки для ВЭЖХ с получением Py–MAA–Val–Cit–PAB–D.
14. Способ по любому из предшествующих пунктов, где очистку осуществляют в реакции A следующим способом с получением Py–MAA–Val–Cit–PAB–PNP:
(1) центрифугирование реакционного раствора реакции A с получением супернатанта;
(2) добавление растворителя 1 к супернатанту и тщательное перемешивание;
(3) добавление растворителя 2 по каплям при температуре от 0 до 10°C и тщательное перемешивание;
(4) фильтрация под вакуумом с получением фильтровального осадка;
(5) повторное растворение фильтровального осадка в смешанном растворе растворителя 3 и растворителя 4;
(6) добавление полученного раствора по каплям к растворителю 5 при температуре от 0 до 10°C и перемешивание;
(7) фильтрация под вакуумом с получением грязно–белого порошка, являющегося очищенным Py–MAA–Val–Cit–PAB–PNP;
где растворитель 1 является умеренно полярным растворителем, предпочтительно, выбранным из группы, состоящей из этилацетата, дихлорметана, метанола, метил–трет–бутилового эфира и подобного, наиболее предпочтительно этилацетата; растворитель 2 является слабо полярным растворителем, предпочтительно, выбранным из группы, состоящей из петролейного эфира, n–гексана, n–пентана, циклогексана и подобного, наиболее предпочтительно петролейного эфира; растворитель 3 и растворитель 4 являются растворителями, в которых легко растворяется Py–MAA–Val–Cit–PAB–PNP, предпочтительно, выбранными из группы, состоящей из уксусной кислоты, трифторуксусной кислоты, муравьиной кислоты, метанола, этанола и подобного, наиболее предпочтительно уксусной кислоты и метанола; растворитель 5, предпочтительно, выбран из группы, состоящей из ацетонитрила, этилацетата, дихлорметана, воды и подобного, наиболее предпочтительно воды.
15. Способ по любому из предшествующих пунктов, где реакции осуществляют в защитной атмосфере азота.
RU2019142484A 2018-05-21 2019-05-20 Способ получения промежуточного соединения конъюгата антитело-лекарственное средство RU2724436C1 (ru)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810487856.4A CN110507824A (zh) 2018-05-21 2018-05-21 一种抗间皮素抗体及其抗体药物缀合物
CN201810487856.4 2018-05-21
PCT/CN2019/087641 WO2019223653A1 (zh) 2018-05-21 2019-05-20 一种抗体药物偶联物中间体的制备工艺

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2724436C1 true RU2724436C1 (ru) 2020-06-23

Family

ID=68616215

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2020113275A RU2747995C1 (ru) 2018-05-21 2019-05-15 Анти-мезотелин антитело и его конъюгат с лекарственными средствами
RU2019142484A RU2724436C1 (ru) 2018-05-21 2019-05-20 Способ получения промежуточного соединения конъюгата антитело-лекарственное средство

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2020113275A RU2747995C1 (ru) 2018-05-21 2019-05-15 Анти-мезотелин антитело и его конъюгат с лекарственными средствами

Country Status (12)

Country Link
US (2) US20220056147A1 (ru)
EP (2) EP3695852A4 (ru)
JP (3) JP2021523874A (ru)
KR (3) KR20230135164A (ru)
CN (3) CN110507824A (ru)
AU (2) AU2019272250B2 (ru)
BR (2) BR112020014380A2 (ru)
CA (2) CA3082160C (ru)
RU (2) RU2747995C1 (ru)
SG (2) SG11202011159QA (ru)
TW (1) TWI714092B (ru)
WO (2) WO2019223579A1 (ru)

Families Citing this family (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR102440763B1 (ko) * 2019-05-20 2022-09-05 맙플렉스 인터내셔널 컴퍼니 리미티드 항체-약물 접합체의 중간체를 제조하는 원-포트 방법
WO2021248048A2 (en) 2020-06-05 2021-12-09 Development Center For Biotechnology Antibody-drug conjugates containing an anti-mesothelin antibody and uses thereof
CN111560072B (zh) * 2020-07-16 2020-12-11 上海恒润达生生物科技有限公司 抗人msln抗体以及靶向msln的免疫效应细胞
WO2022048521A1 (zh) 2020-09-01 2022-03-10 荣昌生物制药(烟台)股份有限公司 抗c-Met抗体药物偶联物及其应用
JP2023169444A (ja) * 2020-10-01 2023-11-30 株式会社Epsilon Molecular Engineering 標的タンパク質と結合し得る架橋ペプチド、当該架橋ペプチドの作製方法、及び当該架橋ペプチドを有効成分とする医薬組成物
IL307190A (en) * 2021-03-31 2023-11-01 Remegen Co Ltd Preparation and purification process of drug-antibody conjugate intermediate
CA3184403A1 (en) 2021-05-08 2022-11-17 Remegen Co., Ltd. Anti-claudin 18.2 antibody and antibody-drug conjugate thereof
CN117412991A (zh) * 2021-06-18 2024-01-16 南京再明医药有限公司 抗人msln人源化抗体及其应用
CN116410332A (zh) * 2021-12-29 2023-07-11 上海细胞治疗集团有限公司 抗间皮素纳米抗体嵌合抗原受体及其应用
AU2022441090A1 (en) * 2022-02-17 2024-08-22 Novelty Nobility Inc. Antibody-drug conjugate.
WO2024102954A1 (en) 2022-11-10 2024-05-16 Massachusetts Institute Of Technology Activation induced clipping system (aics)
CN117624284A (zh) * 2023-11-29 2024-03-01 成都普康唯新生物科技有限公司 连接子的液相合成方法及其合成产物
CN117843793B (zh) * 2024-03-07 2024-07-09 深圳真实生物医药科技有限公司 抗间皮素抗体、抗原结合片段及其用途

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2422157C2 (ru) * 2002-05-02 2011-06-27 Уайт Холдингз Корпорейшн Конъюгаты "производное калихеамицина-носитель"
RU2436796C9 (ru) * 2006-05-30 2013-12-27 Дженентек, Инк. Антитела и иммуноконъюгаты и их применения
RU2404810C9 (ru) * 2004-06-01 2015-06-20 Дженентек, Инк. Конъюгаты антитело-лекарственное средство и способы
CN107921030A (zh) * 2015-08-14 2018-04-17 Rc生物技术公司 抗体‑药物偶联物的共价连接子及其制备方法与应用

Family Cites Families (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DK2489364T3 (en) * 2003-11-06 2015-03-02 Seattle Genetics Inc Monomethylvaline compounds conjugated to antibodies
AR076284A1 (es) * 2009-04-29 2011-06-01 Bayer Schering Pharma Ag Inmunoconjugados de antimesotelina y usos de los mismos
KR20140014116A (ko) * 2010-12-20 2014-02-05 제넨테크, 인크. 항-메소텔린 항체 및 면역접합체
HUE031017T2 (en) * 2011-04-01 2017-06-28 Wyeth Llc Antibody Drug Conjugates
EP2844300B1 (en) * 2012-05-01 2018-10-17 Genentech, Inc. Anti-pmel17 antibodies and immunoconjugates
CN106279352B (zh) * 2015-05-29 2020-05-22 上海新理念生物医药科技有限公司 海兔毒素10的衍生物及其应用
WO2017172907A1 (en) * 2016-03-29 2017-10-05 Sorrento Therapeutics, Inc. Calicheamicin antibody drug conjugates linking an amidoacetyl group to a sugar moiety on calicheamicin
KR20180135460A (ko) * 2016-04-15 2018-12-20 자임워크스 인코포레이티드 면역치료제를 표적으로 하는 다중-특이적 항원-결합 작제물
JP6727052B2 (ja) * 2016-07-19 2020-07-22 株式会社日立製作所 生体分子分析用デバイス及び生体分子分析装置
CN106938051B (zh) * 2016-08-22 2019-10-11 复旦大学 靶向于组织因子的抗体-药物偶联物
MX2020004100A (es) * 2017-10-30 2020-07-24 Hoffmann La Roche Metodo para generacion in vivo de anticuerpos multiespecificos a partir de anticuerpos monoespecificos.

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2422157C2 (ru) * 2002-05-02 2011-06-27 Уайт Холдингз Корпорейшн Конъюгаты "производное калихеамицина-носитель"
RU2404810C9 (ru) * 2004-06-01 2015-06-20 Дженентек, Инк. Конъюгаты антитело-лекарственное средство и способы
RU2436796C9 (ru) * 2006-05-30 2013-12-27 Дженентек, Инк. Антитела и иммуноконъюгаты и их применения
CN107921030A (zh) * 2015-08-14 2018-04-17 Rc生物技术公司 抗体‑药物偶联物的共价连接子及其制备方法与应用

Also Published As

Publication number Publication date
JP6949206B2 (ja) 2021-10-13
US20220056147A1 (en) 2022-02-24
CA3082160C (en) 2023-12-12
KR20200098626A (ko) 2020-08-20
JP2020533398A (ja) 2020-11-19
BR112020005596A2 (pt) 2020-09-29
EP3797795A1 (en) 2021-03-31
KR102454638B1 (ko) 2022-10-14
AU2019272250A1 (en) 2020-03-19
TWI714092B (zh) 2020-12-21
JP2021523874A (ja) 2021-09-09
CA3062265A1 (en) 2019-11-21
WO2019223653A1 (zh) 2019-11-28
RU2747995C1 (ru) 2021-05-18
AU2019268215B2 (en) 2021-03-18
EP3695852A1 (en) 2020-08-19
CN110740754B (zh) 2023-04-28
WO2019223579A1 (zh) 2019-11-28
TW202003040A (zh) 2020-01-16
KR20230135164A (ko) 2023-09-22
KR20200120728A (ko) 2020-10-21
CA3062265C (en) 2022-03-22
AU2019272250B2 (en) 2022-01-13
CN110507824A (zh) 2019-11-29
CN110740753A (zh) 2020-01-31
EP3695852A4 (en) 2021-09-15
JP2023134472A (ja) 2023-09-27
US20200138968A1 (en) 2020-05-07
AU2019268215A1 (en) 2019-12-19
BR112020014380A2 (pt) 2020-12-29
SG11202011159QA (en) 2020-12-30
CN110740754A (zh) 2020-01-31
SG11202006515VA (en) 2020-08-28
EP3797795A4 (en) 2022-04-06
CA3082160A1 (en) 2019-11-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2724436C1 (ru) Способ получения промежуточного соединения конъюгата антитело-лекарственное средство
EP0781778B1 (en) Paclitaxel prodrugs, method for preparation as well as their use in selective chemotherapy
JP4082522B2 (ja) ペプチドと、その製造方法
EP0473084A2 (en) Polyethylene glycol derivatives, their modified peptides, methods for producing them and use of the modified peptides
CN111620927B (zh) 一种抗体药物偶联物中间体的一锅法制备工艺
EA001550B1 (ru) Лекарственный комплекс
RU2745738C1 (ru) Однореакторный способ получения промежуточного продукта конъюгата антитело-лекарственное средство
JPH04501121A (ja) 生物学的に活性な新規薬剤・ポリマー誘導体およびその製造方法
CN109928908B (zh) 一种用于抗体药物偶联物的药物-连接子mc-mmaf的制备方法及其中间体
WO2005070827A2 (en) Fullerene based amino acids
CN111670053B (zh) 一种抗体药物偶联物中间体的一锅法制备工艺
EP2405944B1 (en) Prodrugs
WO2022206871A1 (en) Preparation and purification method for antibody drug conjugate intermediate
TWI851072B (zh) 改質化合物及其製備方法
US20230331954A1 (en) Modified compound and manufacture method thereof
JP2002539132A (ja) ２０（ｓ）−カンプトテシンの糖−共役体の製造法
CA3076714C (en) Method for producing antibody-drug conjugate intermediate by addition of acid and use thereof
JPH02108699A (ja) 上皮細胞成長因子誘導体