JPH02108699A - 上皮細胞成長因子誘導体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔発゛明の背景〕 技術分野 本発明は、新規な上皮細胞成長因子誘導体に関する。さ
らに詳細には、本発明は、ヒト上皮細胞成長因子とポリ
エチレングリコールとの複合体に関するものである。

先行技術 成長因子（Ｇｒｏｗｔｈ　ｆａｅｔｏｒ）とは、ｒｉｎ
ｖｉｖｏまたはＩｎ　ｖｌｔｒｏにおいて動物細胞の成
長を促進するものであって栄養物質でないもの」であり
、［：Ａｎｎ、　　Ｒｅｖ、　　Ｂｌｏｃｈｅｓ、、　
　４５，５３１−５５８（ｆ９７Ｂ））　　、　従来の
ホルモンやその担体なども成長因子の範時に入る。

このような因子は、現在、約４０種類知られている。

これらの成長因子のうち、上皮細胞成長因子はヒトや馬
の尿中からも、ウサギ、ラットおよびマウスの顎下腺か
らも単離され、補乳動物中にその種を越えて存在してい
ることが知られている（Ａｄｖ、　Ｍｃｔａｂ、　Ｄｉ
ｓ、、　８．２ｆｉ５（１９７５）、特開昭５６−２５
１１２号公報等〕。なかでも、ヒト上皮細胞成長因子（
ｈｕｍａｎ　Ｅｐｌｄｅｒｌａｌ　Ｇｒｏｗｔｈ　Ｆａ
−ｃｔｏｒ：ｈＥＧＰ）は、１９７５年にコーエン（Ｓ
、　Ｃｏｈｅｎ）らにより人尿中から単離された上皮組
織の増殖角化を促進するヒト由来の因子として紹介され
（Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、υＳ
＾、　７２．１３１７（１９７５）　）、また同年グレ
ゴリ−（Ｈ，Ｇｒｅｇｏｒｙ）らによって人尿中から単
離された胃酸分泌抑制作用をもつヒトウロガストロン（
ｈｕｓａｎ　Ｌｌｒｏｇａｓｔｒｏｎｅ：ｈ−ＬＩＧ）
として紹介された［Ｎａｔｕｒｅ、　２５７．３２５（
１９７５）　］ポポリペブチと同一物質であって、分子
量が約６０００で５３残基のアミノ酸によりなっていて
その分子中に３本のジスルフィド結合を有するポリペプ
チド〔代謝、１７．５１〜５ｇ　（１９８０）　）であ
るということが現在わかっている（以下上皮細胞成長因
子をＥＧＦと記す）。

そして、ＥＧＦの生理活性および薬理活性として現在ま
でに報告されているものは、胃酸分泌抑制作用（Ｃｕｔ
、１８．１８７７（１９７５）　、１ｄ１ｄ、、２３．
９５］（１９８２））　、抗潰瘍作用（Ｃｕｔ、２２．
９２７（１９８１）、Ｂｒ１ｄ。

Ｊ、Ｓｕｒｇ、、８４．８３０（１９７７））　、消化
管粘膜保護作用（特開昭６０−９６８６号公報）、ＤＮ
Ａ合成促進作用（Ｇｕｔ、２２．９２７（１９８１）、
Ｊ、Ｐｈｙｓｉｏｌ、、　３２５．３５（１９ｇ２）　
）　、角膜修復作用〔特開昭５９−６５０２０号公報〕
、カルシウム遊離促進作用（Ｅｎｄｏｃｒｌｎｏｌｏｇ
ｙ、１０７．２７０（１９８０））　、創傷治癒促進作
用（Ｐｌａｓｔ、　Ｒｌｃｏｎｓｔｒ、　Ｓｕｒｇ、、
　　８４．７［ｉ８　（１９７９）、Ｊ、　Ｓｕｒｇ、
　Ｒｅｓ、、３３．１６４（１９ｇ２））　、抗炎症作
用（特開昭６０−１１５７８４号公報）および鎮痛作用
（特開昭６０−１１５７８５号公報）等がある。

しかしながら、ＥＧＦが不安定であるため、体内に投与
した場合、血中ですみやかに代謝され、治療効果が充分
期待できず、医薬品化に至っていないのが現状である（
ＩｎＬ、Ｊ、Ｐｈａｒｍ、、　４８．１−９（１９Ｈ）
）そこで、血中での徐放化に伴う作用持続化が期待し得
る化合物が望まれるところである。

〔発明の概要〕

要旨 本発明は、上記問題を解決することを目的とし、鋭意研
究を重ねた結果、ＥＧＦにポリエチレングリコールを化
学的に結合させることにより、血清中で徐々にＥＧＦ様
活性を示すことを見出し、この知見をもとに新規な誘導
体を合成し、これを提供することにより上記目的を達成
しようとするものである。

従って、本発明によるＥＧＦ誘導体は、ｈ−ＥＧＦの３
個の１級アミノ基の少なくとも一つにポリエチレングリ
コールが結合してなること、を特徴とするものである。

また、本発明によるＥＧＦ誘導体の好ましい態様は、ポ
リエチレングリコールが分子量的１．０００〜１０，０
００のものであること、である。

効果 本発明によるＥＧＦ誘導体は、血清中で、容易に代謝さ
れるようなことがなく徐々にＥＧＦ様活性を示すため、
本誘導体単独で徐放性製剤および持続性製剤として応用
可能である。

また、水溶性および脂溶性の両親媒性を有するため任意
の製剤化が可能であり、更に、これによって体内吸収お
よび動態も改善されることより、幅広い治療効果が期待
できる。

ｈ−ＥＧＦにポリエチレングリコールを結合させること
によって得られるこのような効果は、思いがけなかった
ことと解される。

〔発明の詳細な説明〕

ＥＧＦ誘導体 本発明によるＥＧＦ誘導体は、ｈ−ＥＧＦの３個の１級
アミノ基の少なくとも一つにポリエチレングリコールが
化学的に結合した複合体である。

ポリエチレングリコールの結合はその一方の水酸基末端
側を介するものであるが、この結合部位のアミノ基は、
ｈ−ＥＧＦのＮ末端アミノ基、および２つのリジンの遊
離１級アミノ基のうちの１ケ所または複数ケ所のアミノ
基であり、結合様式は共有結合であればよい。

本発明におけるｈ−ＥＧＦとポリエチレングリコールと
の結合様式は、ｈ−ＥＧＦのアミノ基とポリエチレング
リコールの末端基が直接結合したもの、および間接的に
結合したもの、いずれをも含むものである。

この様な結合様式として、下記の様なものがある。

（１）　　　ポリエチレングリコールの水酸基とｈ−Ｅ
ＧＦのアミノ基とを後述するようなスペーサ−を介して
結合させた構造を有するもの ポリエチレングリコールを下式に示されるようなカルボ
ン酸誘導体（詳細後記）とし、このカルボキシル基とｈ
−ＥＧＦのアミノ基とを結合（アミド結合の形成）させ
た構造を有するもの Ｒ＋０ＣＨ２ＣＨ２＋。０ＣＨ２Ｃ００Ｈ式中ＲはＨｌ
または水酸基の保護基。

なお、このカルボン酸誘導体の詳細については「タンパ
ク質ハイブリッド」、稲田祐二編、共立出版発行、１９
８７．４．１発行（初版）を参照されたい。

（２）式で示されるポリエチレングリコール誘導体のカ
ルボキシル基とｈ−ＥＧＦのアミノ基とを後述するよう
なスペーサーを介して結合させた構造を有するもの （４）　　ｈ　−Ｅ　Ｇ　Ｆのアミノ基にエチレンオキ
サイドを順次付加させた構造を有するもの （５）　　ポリエチレングリコールの水酸基とｈ−ＥＧ
Ｆのアミノ基とが直接脱水結合した構造を有するもの この場合のスペーサーとしては、ｈ−ＥＧＦ側のアミノ
基とポリエチレングリコール側の水酸基または前記のカ
ルボキシル誘導体のカルボキシル基とを架橋可能な比較
的鎖長の短い二官能性化合物、がある。そのようなスペ
ーサーの具体例は、たとえば特開昭５８−１５２８４７
号、同６１−１１２０４２号公報、Ｊ、Ｉｉｍｕｎｏｌ
　、Ｍｅｔｈｏｄｓｌｏ、　１６１　（１９７１ｉ）、
Ｊ、Ｃｌ１ｎ、Ｅｎｄｅｒｉｎｏｌ、Ｍｅｔａｂｏｌｉ
ｓｍ、４４゜９１　（１９７７）、Ｂｌｏｃｈｅｍｊ、
、　３２．１１１９（１９３８）　、Ｊ、Ａｍ。

ＣｈｃＩｌ、Ｓｏｃ、、８Ｇ、１８３９（１９８４）　
、ＦＥＢＳ　ｔ、ｅｕ、、　１６．３９＜１９７１）、
ＵＳｐａｔ、３．Ｉｎ５４．０９０．１ｍａ＋ｕｎｏｃ
ｈｅｍｌｓｔｒｙ、６　。

５３（Ｉｎ２）、Ｊ、Ｈ１ｓｔｃｈｅ＋ｇ、Ｃｙｔｏｅ
ｈｃ＋ａ、、　２２．１０８４（１９７４）およびＪｏ
ｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、７８，
２３５（１９７５）に開示されている。本発明で好まし
いスペーサーとしては塩化シアヌルがある。

なお、ポリエチレングリコール分子におけるｈ−ＥＧＦ
と結合していない側の水酸基末端側は、必要に応じて、
水酸基の保護基たとえば炭化水素残基たとえばアルキル
基（好ましくは炭素数１〜３のアルキル基）またはアリ
ール基たとえばフェニル基または低級アルキル置換フェ
ニル基とエーテル結合した状態であってもよい。

本発明によるＥＧＦ誘導体は、任意の酸またはアルカリ
との塩であってもよい。この塩を形成する位置は、ＥＧ
Ｆにおける１級アミノ基または遊離のカルボキシル基の
部位である。

なお、本発明でｈ−ＥＧＦというときは、その生理活性
すなわち上皮細胞成長能を維持している限り、構成アミ
ノ酸の一部の欠失および他アミノ酸との置換により生じ
たその誘導体をも包含するものとする。

ｈ−ＥＧＦは、例えば生体成分より単離する方法〔特開
昭５８−９９４１８号、同５８−２１９１２４号、同５
９−２０４１２３号公報等、特公昭４４−１２７４４号
、同５３−４５２７号、同５９−５０３１５号、同５９
−５０３１６号、同５９−４２６５０号公報等〕や比学
的に合成する方法〔特開昭５９−２７８５８号公報等〕
および遺伝子工学的手法により造成する方法〔特開昭５
７−１２２０９６号、同５８−２１６６９７号、同５９
−４２６５０号公報等〕が提案されており、合目的的な
任意の方法により調製するこができる。このようにして
調製されたｈ−ＥＧＦは、高純度であることが好ましい
。

ｈ−ＥＧＦのアミノ酸配列は、例えば上記公報に開示さ
れている。

一方、本発明におけるポリエチレングリコールは、一般
式 ％式％ で示される分子量的２００〜４，０００，０００の一般
的に定義されるようなポリエーテルであるが、好ましく
は分子量的１，０００〜 １０．０００のものであり、さらに好ましくは分子量的
２，０００〜４，０００のものである。これらの化合物
は、いずれもフリーデル−クラフッ型触媒（たとえば塩
化アルミニウムなどの金属塩化物）、酸あるいはアルカ
リ触媒下でエチレンオキサイドを重合させるなど、合目
的的な任意の方法）により調製することができる。一端
の−ＯＨは前記Ｒによってエーテル化されていてもよい
ことは前記したところである。

ＥＧＦ誘導体に製造法 本発明によるＥＧＦ誘導体は、上記ｈ−ＥＧＦとポリエ
チレングリコールとを前者のアミノ基および後者の一方
の水酸基末端側を介して結合させる任意の方法により調
製することができる。

この結果反応は、例えばアミノ基と水酸基とを架橋可能
な二価性のスペーサーを使用して行なうことができるこ
とは前記した通りである。

またこの結合反応は、例えば、ポリエチレングリコール
の水酸基の一方の水酸基末端側にカルボキシル基を導入
し、これをあらかじめオキザリルクロリド、チオニルク
ロリド、チオニルプロミド、ジシクロへキシルカルボジ
イミド、Ｎ、Ｎ’　　−ジスクシンイミジルカーボネー
ト、エチル−クロロカーボネート等で酸ハロゲン化物、
酸無水物、混合酸無水物あるいは活性ニス、チル化体等
の反応性酸誘導体とした後、これをｈ−ＥＧＦと反応さ
せるか（他方の水酸基は一般的な方法に従って前記のＲ
基で保護してもよい）、カルボキシル化したポリエチレ
ングリコールを、このように活性化型にしないで、アミ
ノ基とカルボキシル基とを縮合させることが可能な任意
の縮合剤（例えば、Ｎ。

Ｎ′　−ジシクロへキシルカルボジイミド、ＮｒＮ′　
−ジエチルカルボジイミド、塩酸１−エチル−３−（３
−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド、１−エト
キシカルボニル−２−エトキシ−１，２−ジヒドロキノ
リン、Ｎ、Ｎ’　　−ジスクシンイミジルカーボネート
などをあげることができる）の存在下で、ｈ−ＥＧＦと
ポリエチレングリコールとを縮合させることにより行う
ことができる。

好ましくは、カルボキシル化したポリエチレングリコー
ルを活性化型（反応性酸誘導体）としたもの、さらに好
ましくは、活性エステル基を導入したもの、を用いるの
がよい。活性エステル基としては、例えばフェニル系エ
ステル（たとえば２゜４．５−）リクロロフエ／−ル、
ｐ−二トロフェノール等のカルボン酸エステル等）およ
びＯ−アシルヒドロキシルアミン系のエステル（たとえ
ばＮ−オキシフタルイミド、Ｎ−オキシコハク酸イミド
のカルボン酸エステル等）が挙げられるが、通常Ｎ−オ
キシコハク酸イミドのカルボン酸エステル基等を用いる
ことができる。

本発明によるＥＧＦ誘導体はこのようにしてつくった場
合は、ｈ−ＥＧＦとポリエチレングリコールとがスペー
サー（すなわち−ＣＨ２Ｃ０−基）を介して結合したも
のといえる。

後記実験例では、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）の
反応性酸誘導体としてモノメトキシポリエチレングリコ
リル−Ｎ−スクシンイミジルサクシネートを用いた。

なお、これらの反応はいずれも、反応性水素を有しない
溶媒すなわちアプロチック溶媒中で行なうことが好まし
く、このような溶媒としては、例えばジクロロメタン、
クロロホルム、酢酸エチル、ベンゼン、アセトン、Ｎ、
Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド等を
使用することができる。

また、ｈ−ＥＧＦにポリエチレングリコールを結合させ
る方法として、ｈ−ＥＧＦのアミノ基にエチレンオキサ
イドを順次反応させていき、このアミノ基の部位にポリ
エチレングリコール分子を形成させる方法も可能である
。

以上のようにして製造した本発明によるＥＧＦ誘導体は
、任意の酸またはアルカリによって塩の形にすることも
できる。塩を形成する位置は、ＥＧＦにおける１級アミ
ノ基または遊離のカルボキシル基の部位であることは前
記した通りである。

実験例 １、化合物の合成 ＰＥＧ−ｈ−ＥＧＦ複合体 ａ、製法 ｈ　−Ｅ　Ｇ　Ｆ　（２０ｍｇ）に対して、平均分子量
３０００の活性化ポリエチレングリコール（商品名：サ
ンブライトＶＦＭ４１０１、日本油脂株式会社）（モノ
メトキシポリエチレングリコリル−Ｎ−スクシンイミジ
ルサクシネート）５００１１ｇをＰＢＳ　　ｐＨ７，２
，３ｍｌに溶解した。この混合液を静かに振り混ぜなが
ら、室温で３０分間反応させた。次に、この反応液を精
密濾過膜（商品名：マイレクスＧＶ、ポアサイズ：０．
２２μｍ）に通して不溶物を除去した。炉液を２倍に希
釈してＨＰＬＣ（逆相）で未反応物のｈ−ＥＧＦ、ポリ
エチレングリコールとＰＥＧ−ｈ−ＥＧＦ複合体を分離
し、複合体を分取した。この時に使用した条件を以下に
示した。

カラム：東洋曹達　０ＤＳ−１２０７ （φ４．６ｘ２５０） 移動相；グラジェント（１０％Ｂ→５０％Ｂ→８０％Ｂ
→８０％Ｂ）４０分　５分　　１５分 Ａ：１％アセトニトリル、０．０５％トリフルオロ酢酸
Ｂ：８０％アセトニトリル、０．０５％トリフルオロ酢
酸流　速二１１／分 温度：４０℃ 検　出：ＵＶ（多波長） ｂ、構造の確認 ＨＰＬＣ（逆相）の分析の結果（第１図参照）から複合
体は２種類合成（早く溶出したものをＡ、遅く溶出した
ものをＢ）されていた。これら２種類の複合体をＨＰＬ
Ｃ（分子篩）に付して分離したところ、Ｂ、Ａ、ｈ−Ｅ
ＧＦの順に溶出した（第２図参照）。また、これらＡ、
ＢをＰＢＳ（ｐＨ７，２）に１８μｇ／ｍｌ、１１μｇ
／ｌ含むように添加し、５０℃で９０分放置した。これ
らの反応液を同様にＨＰＬＣ（逆相または分子篩）で分
析した結果（第３〜６図参照）、Ａの場合、分解物はｈ
−ＥＧＦあるいはｈ−ＥＧＦの類似物であった。Ｂの場
合の分解物は、Ａの類似物、ｈ−ＥＧＦの類似物であっ
た。これらの結果を総合するとＡは１分子のＰＥＧによ
って修飾されており、Ｂは２分子のＰＥＧによって修飾
されていることが明らかとなった。

なお、第１図〜第６図中横軸は溶出時間、縦軸はピーク
高さを示す。

以下にＨＰＬＣ（分子篩）の条件を示した。

カラム：＾５ａｈｉｐａｋシリーズ（ＧＳ−５１０）移
動相：Ａ：Ｂ−３０ニア０ 温度二３０℃ 流速＝１１／分 検　出：ＵＶ（多波長） ２、化合物の評価 ｉｎ　ｖｉｔｒｏで、本発明におけるＰＥＧ−ｈ−ＥＧ
Ｆ複合体をプラズマ中で処理し、その分解速度、及び、
その分解物の生物学的活性（ＥＧＦレセプターへの結合
能）を測定し、更に、この結果よりこの製剤の血中動態
を予想した。

ａ、サンプルの調製 ＰＥＧ−ｈ−ＥＧＦ複合体−Ａ及びＢは、それぞれ、０
℃でサンプリングバッファー２０．０５Ｎ酢酸１０．２
５％Ｂ　Ｓ　Ａ／５ａｌｉｎｅｐＨ４，Ｏ（１００ｍｌ
の５ａｌｉｎｅ（大塚製薬工場（株）、霧に７に８８７
）に０．２５ｇのＢ　Ｓ　Ａ　（ＳＩＧＭＡ。

Ｂｏｖｉｎｅ　ＡｌｂｕＩＩｌｉｎ）及び３００μＩの
酢酸（和光純薬工業（株）　、答ＥＰＧＯＯ１０）を加
えて、充分撹拌し溶解させた）に溶解して用いることと
した。

一方、プラズマは、ＳＤ系雌雄性ラット３匹２８Ｗ）の
腹部大動脈よりヘパリン加採血されたものを、１０　ｔ
ａＭＮ　ａ　ＨＰ　Ｏ４／　ｓａｌ　ｉｎｅ水溶液でｐ
Ｈ７，４に調整して用いることとした。

下表の通り、サンプリングバッファー２に溶解したサン
プル（５０μｌ）に、２ｏｏμｍのサンプリングバッフ
ｙ−１（ＰＢＳ　（）１０．２５％ＢＳＡ、ｐＨ７，４
（上記ＰＢＳ　（−）水溶液１００ｍ１に、０．２５ｇ
のＢ　Ｓ　Ａ　（ＳＩＧＭＡ、Ｂｏｖｉｎｅ−＾Ｉｕｂ
ｕｍｌｎ　、　Ｎｏ、ａ−８［１２２，１ｆ２７Ｆ−０
５９９）を溶解したｐＨ７，４のもの）を加え、サンプ
リング溶液とした。次に、この溶液に２００μｌのサン
プリングバッファー１または、プラズマを加え、３７℃
で下記の通りインキュベートした。

ｂ、ラジオ・レセプター・ア゛ツセイ（以下：（最終濃
度二μｇ／ＩＩＩ　） バッファー （時間） （サンプル数） 尚、インキュベート時の反応液のｐＨは７．４に調整し
た。

上記インキュベート終了後、サンプル溶液を直ちに０℃
に移し、パインディングバッファー（Ｍ１９９１０．２
５％ＢＳＡ、ｐＨ７，４（９，８ｇの１９９培地（白水
製薬（株）、コードＮｏ、０５９０９．＄０３５７０６
）及び、２．５ｇのＢＳＡ（上記同等品）をＩＬの蒸溜
水に加え、充分撹拌し溶解させた後、１０％Ｎ　ａ　Ｈ
ＣＯ３水溶液を適量加えｐＨ７，４に調整した）で１２
５倍に希釈した。次に、このうち４０μｌを分取しラジ
オ・レセプター・アッセイを行い、溶液中のＥＧＦ量を
７１）Ｊ定した。

アッセイの前日に、コンフレンド（単層）まで増殖した
Ａ４３１細胞をトリプシン／ＥＤＴＡ溶液で分散させ、
それを、２　Ｘ　１０５ｅｅｌ　Ｉｓ／ｖｅｌ　ｌずつ
２４穴のマルチプレートに植えた。この後、２４時間培
養した。

アッセイ当日、このプレートに植えられた細胞を約０．
５１のＰＢＳ（−）溶液で洗浄した後、０．５１のパイ
ンディングバッファーを加え１時間培養した。次に、こ
のバッファーを捨て、新たに４１０μｌのパインディン
グバッファーを加え氷上に移した。次に、４０μｌの上
記サンプル溶液を加え０．５時間、４℃（氷上）でイン
キュベートした。この後、５０μｌの１２５１−ＥＧＦ
溶液（約２．５万カウント）を加え１，５時間、４℃で
インキュベートした。こうして、競合反応させた後、フ
リーの１２５１−ＥＧＦを０．５１のパインディングバ
ッファーで４回洗浄した。最後に、０．５１の０．５Ｎ
　　ＮａＯＨ溶液を加え細胞に結合した１２５１−ＥＧ
Ｆを溶解した（−夜装置した）。この後、この溶液のカ
ウントをＲＩ実験室のγ−カウンタで１ｌｌ）Ｉ定した
。

一方、ＥＧＦの濃度Ｍ１定用の検量線は以下の方法で作
製した。上記の方法で用意したプレート（氷上に移す時
）に、３５０μｍのパインディングバッファーを加え０
．５時間、４℃でインキュベートした。次に、１００μ
ｌの種々濃度のｈ−ＥＧＦ溶液を加え０．５時間、４℃
でインキュベートした。次に、５０μｌの１２５１−Ｅ
ＧＦ溶液を加え１．５時間、４℃でインキュベートした
。

こうして、競合反応させた後、上記同様に洗浄しγ−カ
ウンタで測定した。

このようにして測定した後、検量線よりサンプル中のＥ
ＧＦｍ度を決定した。

第７図に複合体−＾、第８図に複合体−Ｂのプラズマ中
での経時的な分解の度合い（特異的ＥＧＦレセプター結
合能のあるＥＧＦのリリース量）の結果を示した。この
時、横軸はインキュベート時間を、縦軸は各時間でのＰ
ＥＧ−ｈ−ＥＧＦ複合体よりリリースしたと思われるＥ
　Ｇ　Ｆ　ｍ　（添加した総量を１００％とした時のＥ
ＧＦ相当量）を示した。

第７図にあるように、複合体−＾はバッファー中と比べ
てプラズマ中で経時的に分解しＥＧＦを徐々にリリース
したことが示された。また複合体−Ｂはバッファー中と
比べてプラズマ中で緩やかではあるが分解が進行するこ
とが示された。なお、この実験において、複合体−Ａと
Ｂとを比較した場合、インキュベーション時間が２０時
間以内ではＡの方が経時的なリリース量が大きかった。

ＰＥＧ−ｈ−ＥＧＦ複合体の溶解性 ＰＥＧ−ｈ−ＥＧＦ複合体Ａの水に対する溶解性を検討
した結果、１ｍｇ／ｌの濃度でも均一な水溶液とするこ
とができた。また、アセトニトリル、メタノールおよび
エタノールの各有機溶媒に対する溶解性を同様に検討し
た結果、各々、１ｍｇ／ｍｌの濃度でも同様に均一な溶
液とすることができた。

以上のことより、本発明におけるＥＧＦ誘導体は、水お
よび有機溶媒の両溶媒に対して溶解性の高い両親媒性の
化合物であることが明らかとなりた。

【図面の簡単な説明】

第１図は、ＰＥＧ−ｈ−ＥＧＦ複合体合成反応液のＨＰ
ＬＣ（逆相系）によるクロマトグラフィーを示したもの
である。 第２図は、複合体Ａ、Ｂ、およびｈ−ＥＧＦの混合物の
ＨＰＬＣ（分子篩）によるクロマトグラフィーを示した
ものである。 第３図は、複合体への分解処理後のＨＰＬＣ（逆相系）
によるクロマトグラフィーを示したものである。 第４図は、複合体Ａの分解処理後のＨＰＬＣ（分子篩）
によるクロマトグラフィーを示したものである。 第５図は、複合体Ｂの分解処理後のＨＰＬＣ（逆相系）
によるクロマトグラフィーを示したものである。 第６図は、複合体Ｂの分解処理後のＨＰＬＣ（分子篩）
によるクロマトグラフィーを示したものである。 第７図は、複合体Ａのバッファーまたはプラズマ中での
、経時的なｈ−ＥＧＦの放出ｆｆ１（％）を示したグラ
フである。 第８図は、複合体Ｂのバッファーまたはプラズマ中での
、経時的なｈ−ＥＧＦの放出ｆｆ１（％）を示したグラ
フである。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、ヒト上皮細胞成長因子の３個の１級アミノ基の少な
   くとも一つにポリエチレングリコールが結合してなる上
   皮細胞成長因子誘導体。 ２、ポリエチレングリコールが分子量約 １，０００〜１０，０００のものである請求項１記載の
   上皮細胞成長因子誘導体。