KR20220075189A - 비오틴 모이어티, 지방산 모이어티 또는 이의 조합이 결합된 생리활성 물질 접합체의 경구 제형 - Google Patents

비오틴 모이어티, 지방산 모이어티 또는 이의 조합이 결합된 생리활성 물질 접합체의 경구 제형 Download PDF

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Abstract

본 발명은 (i) 비오틴 모이어티, 지방산 모이어티 또는 이의 조합과 결합된 생리활성 물질 결합된 생리활성 물질 접합체 및 (ii) 부형제를 포함하는 경구용 약학 제제로써, 생리활성 물질의 흡수율을 현저히 상승시킴으로써 단백질 또는 펩티드와 같은 종래 경구투여가 어려운 약물의 경구투여가 가능하도록 하는, 경구투여용 약학 제제에 관한 것이다.

Description

비오틴 모이어티, 지방산 모이어티 또는 이의 조합이 결합된 생리활성 물질 접합체의 경구 제형{Oral formulation of physiological active material conjugate linked with biotin moiety, fatty acid moiety or a combination thereof}
본 발명은 비오틴 모이어티, 지방산 모이어티 또는 이의 조합이 결합된 생리활성 물질 접합체의 경구 제형에 관한 것으로, 보다 상세하게는 (i) 비오틴 모이어티, 지방산 모이어티 또는 이의 조합이 결합된 생리활성 물질 접합체 및 (ii) 부형제를 포함하는 경구용 약학 제제에 관한 것이다.
약물이 효과적으로 작용하기 위해서는 높은 생체이용률이 확보되어야 한다. 생체이용율은 약물 투여후 목적 부위에서 이용되는 약물의 정도를 의미하는 것으로, 투여 방식, 표적 환경 등에 의해 그 정도가 상이하다. 약물은 투여된 위치에서 표적까지 전달되는 과정에서 소실되거나, 분해될 수 있고 이는 투여 방식에 따라 달리 나타난다.
일반적으로, 단백질, 폴리펩티드 등을 포함하는 치료제의 약물 전달은 비경구 투여방식과 경구 투여방식으로 나누어 진다. 비경구 투여방식은 정맥주사, 근육주사, 피하주사, 설하투여 등이 있으며, 경구 투여방식은 입으로 약물을 섭취하는 것을 의미한다. 대부분의 단백질, 폴리펩티드 등의 치료제는 생체이용률, 표적 환경, 전달 과정 등을 고려하여 비경구 방식에 의해 투여되고 있으며, 비경구 투여방식이 직접적으로 신속한 효과를 나타내는 것으로 알려져 있다. 다만, 비경구 투여방식은 환자의 통증이나 불편함을 야기할 수 있고, 경로에 따라 주사감염, 공기색전 등의 부작용이 나타날 수 있다. 이에 비해 경구 투여방식의 경우, 입으로 직접 투여하는 방식에 의해 간편하며, 효과가 지속적으로 나타날 수 있다는 장점이 있다. 이에 많은 제약사들은 경구 투여방식에 의해 치료제를 투여하려는 시도가 이어오고 있으나, 경구 투여는 소화기관을 거치므로 산성 환경, 효소 분해 등의 저항이 요구된다는 문제가 있다. 특히, 단백질, 펩티드의 경우 경구투여되는 경우 0.1% 내외의 낮은 생체이용률을 갖는다고 알려져 있다.
경구 투여시의 문제를 해결하기 위하여, 계면활성제, 흡수 촉진제 등을 함께 사용하여 별도의 제제로 제조하거나 약물 입자의 미세화, 투여 횟수 조절 등의 방식으로 약물의 전달을 높이려는 시도가 이루어지고 있다. 이와 관련하여, 대형 제약사의 경구용 인슐린, 경구용 GLP-1 유사체 등이 개발되고 있으며, 그외에도 경구용 인터페론 알파 등의 경구 투여를 위한 다양한 연구개발이 진행중에 있다. 다만, 펩티드, 단백질 약물은 경구 투여가 어려운 물질로, 이를 해결하기 위하여 다양한 시도가 이루어지고 있으나 현재까지 명확하게 해결된 바 없다. 특히, 펩티드 및 단백질 약물은 경구 투여 시, 경구 흡수율이 높지 않은 문제가 있고, 그로 인해 제제화가 원활히 이루어지지 않는 경우 의약효과가 저조하다는 문제가 있어, 이러한 문제를 해결하기 위한 최적 경구제형화가 필요한 실정이다.
본 발명에서는 경구 흡수율이 우수한 비오틴 모이어티, 지방산 모이어티 또는 이의 조합이 결합된 생리활성 물질 접합체를 부형제와 혼합하여 경구용 약학 제제를 제공하는 것이다. 보다 상세하게는 비오틴 모이어티 및 지방산 모이어티가 결합된 생리활성 물질 접합체와 부형제를 포함하는 경구 제형을 통해 생리활성 물질의 체내 흡수율을 효율적으로 상승시키고자 한다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 (i) 비오틴 모이어티, 지방산 모이어티 또는 이의 조합이 결합된 생리활성 물질 접합체 및 (ii) 부형제를 포함하는 경구용 약학 제제를 제공한다.
본 발명의 다른 측면은 비오틴 모이어티 및 지방산 모이어티가 생리활성 물질에 결합된 생리활성 물질 접합체 및 부형제를 포함하는 경구용 약학 제제를 제공한다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 부형제는 담즙산, 이의 유도체, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함한다.
또한, 본 발명의 일 양태에서, 상기 담즙산은 글리코콜산(glycocholic acid), 글리코케노디옥시콜산(glycochenodeoxycholic acid), 타우로케노디옥시콜산 (taurochenodeoxycholic acid), 타우로콜산(taurocholic acid), 디옥시콜산(deoxycholic acid), 콜산(cholic acid), 케노디옥시콜산(chenodeoxycholic acid), 우르소디옥시콜산(ursodeoxycholic acid) 및 리토콜산(lithocholic acid)으로 구성된 군으로부터 선택된 1종 이상이다.
또한, 본 발명의 일 양태에서, 상기 부형제는 알파-토코페롤, 말산, 푸마르산, 아스코르브산, 부틸화 하이드록시아니솔, 부틸화 하이드록시 톨루엔, 소듐 포스페이트, 칼슘 포스페이트, 포타슘 포스페이트, 갈락토스, 글루코스, 말토오스, 갈릭산, 프로필 갈레이트 및 이의 약학적으로 허용가능한 염으로 구성된 군으로부터 선택된 1종 이상을 더 포함할 수 있다.
본 발명에서 비오틴 모이어티, 지방산 모이어티 또는 이의 조합이 결합된 생리활성 물질 및 부형제를 포함함으로써 체내 흡수율이 현저하게 상승되는 이점이 있다. 구체적으로, 본 발명은 부형제를 포함함에 따라 효소 안정성을 높여 체내 흡수율이 현저하게 상승되는 이점이 있다.
도 1은 본 발명의 일 실시형태에 따른 접합체 68, 69를 포함하는 경구 제형 및 hGH의 Caco-2 세포 내 축적량을 측정한 결과를 나타낸 도이다.
도 2는 본 발명의 일 실시형태에 따른 접합체 65를 포함하는 경구 제형 및 인슐린의 혈당 조절능을 측정한 결과를 나타낸 도이다.
도 3는 본 발명의 일 실시형태에 따른 접합체 65, 66를 포함하는 경구 제형 및 인슐린의 혈당 조절능을 측정한 결과를 나타낸 도이다.
도 4은 본 발명의 일 실시형태에 따른 접합체 33, 36, 39, 42, 61, 62, 63 또는 64를 포함하는 경구 제형 및 아밀린의 체중감소 및 사료섭취량 감소효과를 측정한 결과를 나타낸 도이다.
도 5는 본 발명의 일 실시형태에 따른 접합체 52를 포함하는 경구 제형의 혈당 조절능을 측정한 결과를 나타낸 도이다.
이하, 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 본 발명을 실시할 수 있도록 본 발명의 구현예 및 실시예를 상세히 설명한다.
그러나 본 발명은 여러 가지 상이한 형태로 구현될 수 있으며 여기에서 설명하는 구현예 및 실시예에 한정되지 않는다. 본 발명의 명세서 전체에서, 어떤 부분이 어떤 구성 요소를 “포함”한다고 할 때, 이는 특별히 반대되는 기재가 없는 한 다른 구성 요소를 제외하는 것이 아니라 다른 구성요소를 더 포함할 수 있는 것을 의미한다.
본 발명의 명세서 전체에서 사용되는 정도의 용어 “약”, “실질적으로” 등은 언급된 의미에 고유한 제조 및 물질 허용오차가 제시될 때 그 수치에서 또는 그 수치에 근접한 의미로 사용되고, 본 발명의 이해를 돕기 위해 정확하거나 절대적인 수치가 언급된 개시 내용을 비양심적인 침해자가 부당하게 이용하는 것을 방지하기 위해 사용된다. 본 발명의 명세서 전체에서 사용되는 정도의 용어 “하는) 단계” 또는 “의 단계”는 “~ 를 위한 단계”를 의미하지 않는다.
본 발명의 명세서 전체에서, 마쿠시 형식의 표현에 포함된 “이들의 조합”의 용어는 마쿠시 형식의 표현에 기재된 구성 요소들로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 혼합 또는 조합을 의미하는 것으로서, 상기 구성 요소들로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상을 포함하는 것을 의미한다. 본 발명의 명세서 전체에서, “및/또는 B”의 기재는, “및 B, 또는 A 또는 B"를 의미한다.
본 발명은 (i) 비오틴 모이어티, 지방산 모이어티 또는 이의 조합이 결합된 생리활성 물질 접합체 및 (ii) 부형제를 포함하는, 경구용 약학 제제에 관한 것이다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 (i)는 비오틴 모이어티 및 지방산 모이어티가 결합된 생리활성 물질 접합체이다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 부형제는 담즙산, 이의 유도체, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이다.
또한, 본 발명의 일 양태에서, 상기 담즙산은 글리코콜산(glycocholic acid), 글리코케노디옥시콜산(glycochenodeoxycholic acid), 타우로케노디옥시콜산 (taurochenodeoxycholic acid), 디옥시콜산(deoxycholic acid), 콜산(cholic acid), 케노디옥시콜산(chenodeoxycholic acid), 우르소디옥시콜산(ursodeoxycholic acid) 및 리토콜산(lithocholic acid)으로 구성된 군으로부터 선택된 1종 이상이다.
또한, 본 발명의 일 양태에서, 상기 부형제는 알파-토코페롤, 말산, 푸마르산, 아스코르브산, 부틸화 하이드록시아니솔, 부틸화 하이드록시 톨루엔, 소듐 포스페이트, 칼슘 포스페이트, 포타슘 포스페이트, 갈락토스, 글루코스, 말토오스, 갈릭산, 프로필 갈레이트 및 이의 약학적으로 허용가능한 염으로 구성된 군으로부터 선택된 1종 이상을 더 포함할 수 있다.
일반적으로, 펩티드 및 단백질 약물은 고수용성으로 위장관 흡수 부위에 제약이 있는 BCS(Biopharmaceutical Classification System) 클래스 3에 해당한다. 펩티드 및 단백질 약물은 높은 친수성과 큰 분자량을 가지며, 낮은 pH의 위산에 의해 분해될 수 있고, 트립신과 같은 효소의 공격을 받아 장내 흡수율이 낮은 특성을 가진다. 일반적으로 펩티드 및 단백질 약물의 경구 흡수율(oral bioavailability, BA)이 0.1 % 내외로 약제학적 조성물로 사용되기 어려운 점이 있다. 이러한 문제점을 개선하기 위하여 장용 캡슐을 이용하여 위를 통과하는 기술이 사용되고 있으나, 펩티드 및 단백질의 흡수율을 근본적으로 개선하지 못하는 한계가 있다.
이에 반하여 본 발명의 일 실시형태에 따른 비오틴 모이어티, 지방산 모이어티 또는 이의 조합과 결합된 생리활성 물질 접합체는 장관막 투과를 증가시켜 장내에서 흡수가 촉진될 수 있다.
또한, 본 발명의 일 실시형태에 따른 비오틴 모이어티, 지방산 모이어티 또는 이의 조합과 결합된 생리활성 물질 접합체는 약물동태학적으로 우수한 효과를 나타낼 수 있다.
또한, 본 발명의 일 실시형태에 따른 비오틴 모이어티, 지방산 모이어티 또는 이의 조합과 결합된 생리활성 물질 접합체는 효소로부터 펩티드 등의 생리활성 물질이 분해되는 것을 방어할 수 있고, 궁극적으로 생리활성 물질이 장관 막을 투과하여 장내에서 흡수가 촉진될 수 있다.
또한, 본 발명의 일 실시형태에 따른 비오틴 모이어티, 지방산 모이어티 또는 이의 조합과 결합된 생리활성 물질 접합체는 수용성 비타민의 한 종류인 비오틴과 결합됨으로써 나트륨 의존성 멀티비타민 수송체를 통해 능동 수송으로 흡수될 수 있다.
또한, 본 발명의 일 실시형태에 따른 비오틴 모이어티, 지방산 모이어티 또는 이의 조합은 생리활성 물질의 활성 부위 또는 비활성 부위에 결합될 수 있고, 이에 따라 생리활성 물질의 활성을 저해시키지 않을 수 있다.
또한, 보다 구체적으로, 본 발명의 일 실시형태에 따른 비오틴 모이어티 및 지방산 모이어티와 결합된 생리활성 물질 접합체와 부형제를 함께 배합하여 경구용 제제를 제조함으로써, 펩티드 및 단백질의 흡수율을 보다 더 향상시킬 수 있다.
본 발명에서 "비치환되거나 치환된"은 비치환될 수 있거나 또는 치환될 수 있는 것을 의미하며, "치환된"은 1 이상의 치환기를 가지고, 치환기는 알킬렌, 헤테로알킬렌 등의 주 그룹의 임의원자와 공유결합되거나 융합된 화학적 부분을 의미한다.
본 발명에서 "할로"는 플루오린, 클로린, 브로민, 요오드 등을 의미한다.
본 발명에서 "알킬"은 지방족 또는 지환족, 포화 또는 불포화 탄화수소 화합물의 탄소 원자로부터 수소 원자를 제거하여 얻어진 1가 부분을 의미하는 것으로서, 예를 들면, 메틸, 에틸, 프로필, 부틸, 펜틸, 헥실, n-프로필, n-부틸, n-펜틸, 이소프로필, 이소부틸, sec-부틸, tert-부틸, 이소펜틸, 네오펜틸 등이 있다.
본 발명에서 “헤테로알킬”은 1 이상의 헤테로 원자를 포함하는 알킬로서, 헤테로 원자는 알킬의 임의의 탄소 원자 하나의 위치에 헤테로 원자가 위치하여, C, CH, CH2 또는 CH3를 대체한 것을 의미한다.
본 발명에서 "알킬렌"은 지방족 또는 지환족, 포화 또는 불포화 탄화수소 화합물의 탄소 원자로부터 수소 원자를 제거하여 얻어진 2가 부분을 의미한다.
본 발명에서 “헤테로알킬렌”은 1 이상의 헤테로 원자를 포함하는 알킬렌을 의미한다.
본 발명에서 "아릴"은 고리 원자를 갖는 방향족 화합물의 방향족 고리 원자로부터 수소 원자를 제거하여 얻어진 1가 부분을 의미한다. 예를 들어 "C5-10아릴"은 탄소가 5 내지 10 개의 고리 원자를 갖는 것으로서, 방향족 화합물의 방향족 고리 원자로부터 수소 원자를 제거함으로써 수득되는 1 가 부분을 의미한다. 아릴의 예로서, 벤젠, 아세나프텐, 플루오렌, 페날렌, 아세페난트렌 및 아세안트렌으로부터 유도된 기가 있다.
본 발명에서 "헤테로아릴"은 1 이상의 헤테로 원자를 포함하는 아릴로서, 예를 들면, 피리딘, 피리미딘, 벤조티오펜, 푸릴, 디옥살라닐, 피롤릴, 옥사졸릴, 피리딜, 피리다지닐, 피리미디닐, 이소벤조푸란, 인돌, 이소인돌, 인돌리진, 인돌린, 이소인돌린, 푸린, 벤조디옥산, 퀴놀린, 이소퀴놀린, 퀴놀리진, 벤족사진, 벤조디아진, 피리도피리딘, 퀴녹살린, 퀴나졸린, 신놀린, 프탈라진, 나프티리딘, 프테리딘, 페리미딘, 피리도인돌, 옥산트렌, 페녹사티인, 페나진, 페녹사진, 등이 있다.
본 발명에서 “아릴렌”은 고리 원자를 갖는 방향족 화합물의 방향족 고리 원자로부터 수소 원자를 제거하여 얻어진 2가 부분을 의미한다.
본 발명에서 “헤테로아릴렌”은 1 이상의 헤테로 원자를 포함하는 아릴렌을 의미한다.
본 발명에서 "알케닐"은 1 이상의 탄소-탄소 이중 결합을 갖는 알킬로서, 예를 들면, 바이닐(-CH=CH2), 1-프로페닐(-CH=CHCH3), 이소프로페닐, 부테닐, 펜테닐, 헥세닐 등이 있다.
본 발명에서 "알키닐"은 1 이상의 탄소-탄소 삼중 결합을 갖는 알킬기로서, 예를 들면 에티닐 및 2-프로피닐 등이 있다.
본 발명에서 일반식의 일부가 구체적인 화합물로 정의된 경우, 이는 해당 화합물이 다른 구성과 결합된 형태를 포함한다.
본 발명의 일 실시형태에 따르면, 비오틴 모이어티는 하기 일반식 A로 표시될 수 있다.
[일반식 A]
Figure pat00001
상기 일반식 A에서,
X는 생리활성 물질과 결합할 수 있는 작용기이고,
Y는 스페이서이며,
Z는 바인딩 유닛이고,
B는 하기 화학식 A-1로 표시될 수 있으며,
[화학식 A-1]
Figure pat00002
Z는 화학식 A-1의
Figure pat00003
와 연결되고,
T는 말단기이며,
m은 1 내지 10의 정수이고,
n은 0 또는 1 내지 10의 정수이며, n=0인 경우 Y는 B 또는 T에 직접결합하고,
p는 0 또는 1의 정수이다.
본 발명의 일 실시형태에 따르면, 상기 일반식 A에서, X는 생리활성 물질과 결합할 수 있는 작용기이다. 이에 제한되지 않으나, 상기 작용기는 티올기, 카복실기 및/또는 아민기와 반응할 수 있는 작용기, 예를 들면 말레이미드, 석신이미드, N-하이드록시석신이미드, 알데하이드, 카복실기, 카르복실 에스테르, 숙식이미딜 에스테르, 테트라플루오로페닐, -O-테트라플루오로페닐(TFP, 2,3,5,6-tetrafluorophenyl), 테트라플루오로페닐 에스테르, 펜타플루오로페닐(PFP), 펜타플루오로페닐 에스테르, -O-벤조트리아졸, 벤조트리아졸, 설포테트라플루오로페닐(STP), 설포디클로로페닐(SDP), 니트로페놀, 니트로페닐 카보네이트(NPC) 포함할 수 있다.
본 발명의 일 실시형태에서, 상기 작용기 X는 생리활성 물질과 결합할 때 구조가 유지되거나 탈락 또는 변형될 수 있다.
상기 Y는 스페이서로 체내에서 절단성을 가지는 구조일 수 있다. 이에 제한되는 것은 아니나, 예를 들면 Y는 직접결합에 해당하거나, 치환 또는 비치환된 알킬렌, -O-, -C(O)NR-, -C(O)O-또는 -C(O)-, -NR-, -NOR- 등을 포함할 수 있다. 보다 구체적으로 Y는 직접결합에 해당하거나, Y의 구조 내에 치환 또는 비치환된 C1-50 선형 알킬렌, 치환 또는 비치환된 C1-50 비선형 알킬렌, 치환 또는 비치환된 C1-50 선형 헤테로알킬렌, 치환 또는 비치환된 C1-50 비선형 헤테로알킬렌, 치환 또는 비치환된 C1-50 아릴렌, 치환 또는 비치환된 C1-50 헤테로아릴렌, -O-, -C(O), -C(O)NR-, -C(O)O-, -S-, -NR- 또는 -NOR-로 구성된 그룹으로부터 하나 이상을 포함할 수 있고, 여기에서 R은 수소, 치환 또는 비치환된 C1-50 알킬, 치환 또는 비치환된 C1-50 아릴, 또는 에틸렌글리콜 반복단위(-(CH2CH2O)n-, n은 1 이상 20이하의 정수)일 수 있다.
상기 Z는 B와 결합될 수 있는 바인딩 유닛으로, 이에 제한되지 않으나, 예를 들면, 아미노산, 폴리펩티드, 알킬렌, 아민, 또는 폴리아미도아민 구조를 포함할 수 있다.
이에 제한되지 않으나, 예를 들면, 상기 아미노산은 라이신, 5-하이드록시라이신, 4-옥살라이신, 4-티아라이신, 4-셀레나라이신, 4-티아호모라이신, 5,5-디메틸라이신, 5,5-디플루오로라이신, 트랜스-4-디하이드로라이신(trans-4-dehydrolysine), 2,6-디아미노-4-헥시노산, 시스-4-디하이드로라이신(cis-4-dehydrolysine), 6-N-메틸라이신, 다이미노피멜산, 오르니틴, 3-메틸오르니틴, α-메틸오르니틴, 시트룰린, 호모시트룰린, 아르기닌, 아스파테이트, 아스파라긴, 글루타메이트, 글루타민, 히스티딘, 오르니틴, 프롤린, 세린, 또는 트레오닌을 포함할 수 있다.
본 발명에서, 상기 n이 0인 경우 B 또는 T는, X 또는 Y(스페이서)와 직접 결합할 수 있다.
본 발명에서, 상기 T는 말단기로 이에 제한되지 않으나, 예를 들면 수소, 또는 NH2일 수 있다.
본 발명에서, 상기 p가 0인 경우 상기 B가 말단일 수 있다.
본 발명에서, 상기 X-Y가 함께 생리활성 물질 결합 부위를 형성할 수 있다.
본 발명의 일 실시형태에 따르면, 상기 일반식 A에서 m은 1 내지 10의 정수일 수 있으며, 구체적으로 1 내지 8, 1 내지 5, 1 내지 4의 정수일 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 X는 말레이미드, 석신이미드, N-하이드록시석신이미드, 석신이미딜 석시네이트, 석신이미딜 글루타레이트, 석신이미딜 메틸에스터, 석신이미딜 펜틸에스터, 석신이미딜 카보네이트, p-니트로페닐카보네이트, 알데하이드, 아민, 티올, 옥시아민, 아이오도아세트아마이드, 아미녹실, 하이드라지드, 하이드록시, 프로피오네이트, 피리딜, 알킬할라이드, 비닐술폰, 카복실, 하이드라지드, 할로겐 아세트아마이드, C2-5 알키닐, C6-20 아릴디설파이드, C5-20 헤테로아릴디설파이드, 이소시아네이트, 티오에스테르, 이미노에스테르, 및 이의 유도체로 이루어진 그룹으로부터 선택될 수 있다.
구체적인 본 발명이 일 양태에서, 상기 X는 말레이미드, N-하이드록시석신이미드, 석신이미딜 카보네이트, p-니트로페닐카보네이트, 티올, 아미녹실, 알데하이드 또는 아민이다.
구체적인 본 발명이 일 양태에서, 상기 X는 말레이미드, N-하이드록시석신이미드, 알데하이드 또는 아민이다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 Y는 부재하거나 치환되거나 비치환된 선형 또는 분지형 C1-50 알킬렌, 치환거나 비치환된 선형 또는 분지형 C1-50 헤테로알킬렌, 치환되거나 비치환된 C6-50 아릴렌, 또는 치환되거나 비치환된 C6-50 헤테로아릴렌이며, 치환된 경우 =O, -C(O)NH2, -OH, -COOH, -SH, =NH 및 -NH2로 구성된 그룹으로부터 선택된 하나 이상을 포함한다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 Y는 -C(O)-를 포함한다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 Y는 -C(O)NH-를 포함한다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 Y는 치환된 선형 또는 분지형 C1-50 헤테로알킬렌이고, 최소 하나 이상의 -C(O)-를 포함한다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 Y는 -(C(O))q-(CH2)r-(C(O)NH)s-(CH2)r-(OCH2CH2)t-(C(O))q-이고, 여기에서 q, r, s, t는 독립적으로 선택되며, q, s는 0 또는 1이고, r은 1 내지 20의 정수이며, t는 0 내지 20의 정수이다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 Y는 -(CH2)rC(O)NHNH-이고, 여기에서 r은 1 내지 20의 정수이다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 Y는 -C(O)-(OCH2CH2)u-NH-를 반복단위로 포함하고, 여기에서 u은 1 내지 20의 정수이다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 Y는 -C(O)-(OCH2CH2)u-NH-를 반복단위로 포함하고, 여기에서 u은 2 내지 4의 정수이다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 Y는 아미노산을 구성 일부로 포함한다.
구체적인 본 발명의 일 양태에서, 상기 Y는 글루탐산(glutamic acid), 글루타민(glutamine), 글리신(glycine), 이소류신(isoleucine), 또는 리신(Lysine)을 구성 일부로 포함하고, 여기에서 각 아미노산은 결합된 형태로 존재할 수 있다.
구체적인 본 발명의 일 양태에서, 상기 Y는 글루탐산 또는 리신을 구성 일부로 포함한다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 Y는 지방산을 구성 일부로 포함한다.
구체적인 본 발명의 일 양태에서, 상기 Y는 C12-24의 지방산을 포함하고, 지방산은 결합된 형태로 존재한다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 Y는 직접결합이다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 Z는 하기 중 어느 하나이고 각각 독립적으로 선택될 수 있다.
A) X와 함께 또는 X와 별도로, 아미노산 또는 이의 유도체를 형성하거나;
B) 치환되거나 비치환된 선형 또는 분지형 C1-50 헤테로알킬렌이며,
여기에서 치환된 경우, =O, -C(O)NH2, -OH, -COOH, -SH, =NH 및 -NH2로 구성된 그룹으로부터 선택된 하나 이상을 포함한다.
본 발명의 일 양태에서, Z는 B와 -NH-를 통해 연결되는 것이다.
본 발명의 일 양태에서, Z는 친수성 아미노산 또는 이의 유도체이다.
구체적인 본 발명의 일 양태에서, Z는 리신, 아르기닌, 히스티딘, 글루타민, 아스파라긴, 트레오닌, 시스테인, 세린 및 이의 유도체로 구성된 그룹으로부터 선택될 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, Z는 하나 이상의 글리세롤, 하나 이상의 폴리에틸렌 글리콜 또는 이의 결합을 포함한다.
본 발명의 일 양태에서, Z는
Figure pat00004
를 포함하고,
Figure pat00005
는 결합부위를 나타내며, 상기 결합부위의 하나 이상에
Figure pat00006
가 하나 이상 결합되고, 여기에서 u는 1 내지 20의 정수이다.
본 발명의 일 양태에서, Z는
Figure pat00007
을 포함하고,
Figure pat00008
에 -(CH2)3NH-가 더 결합된다.
본 발명의 일 양태에서, T는 아민, C1-8 알킬, C1-8 알케닐, 할로, 하이드록시, 티올, 설폰산, 카르복실, 페닐, 벤질, 알데하이드, 아자이드, 사이아네이트, 아이소사이아네이트, 티오사이아네이트, 아이소티오사이아네이트, 나이트릴 및 포스폰산으로 구성된 그룹으로부터 선택될 수 있다.
구체적인 본 발명의 일 양태에서, T는 아민이다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 비오틴 모이어티는
Figure pat00009
,
Figure pat00010
,
Figure pat00011
,
Figure pat00012
,
Figure pat00013
,
Figure pat00014
,
Figure pat00015
,
Figure pat00016
,
Figure pat00017
,
Figure pat00018
,
Figure pat00019
,
Figure pat00020
,
Figure pat00021
,
Figure pat00022
,
Figure pat00023
,
Figure pat00024
및
Figure pat00025
로 구성된 그룹으로부터 선택되는 것이다.
본 발명의 일 실시형태에 따르면, 지방산 모이어티는 하기 일반식 B로 표시될 수 있다.
[일반식 B]
X'-Y'-W
상기 식에서,
X'은 상기 생리활성 물질과 결합할 수 있는 작용기이고,
Y’은 스페이서이며,
W는 지방산이다.
본 명세서에서 지방산은 포화 또는 불포화된 긴 지방족 사슬을 가지고 있는 카복실산을 포함하며, 이에 제한되는 것은 아니나 예를 들면, 포화 지방산의 일종인 카프릴산(Caprylic acid), 라우르산(Lauric acid), 팔미트산(Palmitic acid), 스테아르산(Stearic acid), 아라키드산(Arachidic acid), 세로트산(Cerotic acid), 불포화 지방산의 일종인 미리스톨레산(Myristoleic acid), 팔미톨레산(Palmitoleic acid), 올레산(Oleic acid), 리놀레산(Linoleic acid), 알파-리놀렌산(alpha-Linolenic acid) 등을 포함한다.
본 발명의 일 실시형태에 따르면, 상기 일반식 B에서, X'은 생리활성 물질과 결합할 수 있는 작용기이다. 여기에서 X'은 상기 일반식 A에서 X와 동일하다. 따라서, 본 발명의 일 실시형태에서, 상기 작용기 X'은 생리활성 물질과 결합할 때 구조가 유지되거나 탈락 또는 변형될 수 있다.
본 발명의 일 실시형태에 따르면, 상기 일반식 B에서, W는 지방산에 해당할 수 있다. 여기에서 지방산은 단순 지방산을 포함하여, 변형, 부가, 삭제 등의 모든 변형 가능한 형태의 지방산을 포함한다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 Y’은 상기 일반식 A에서 Y와 동일하다. 따라서, 본 발명의 일 실시형태에서, 상기 스페이서 Y’은 직접결합에 해당하거나, Y의 구조 내에 치환 또는 비치환된 C1-50 선형 알킬렌, 치환 또는 비치환된 C1-50 비선형 알킬렌, 치환 또는 비치환된 C1-50 선형 헤테로알킬렌, 치환 또는 비치환된 C1-50 비선형 헤테로알킬렌, 치환 또는 비치환된 C1-50 아릴렌, 치환 또는 비치환된 C1-50 헤테로아릴렌, -O-, -C(O), -C(O)NR-, -C(O)O-, -S-, -NR- 또는 -NOR-로 구성된 그룹으로부터 하나 이상을 포함할 수 있고, 여기에서 R은 수소, 치환 또는 비치환된 C1-50 알킬, 치환 또는 비치환된 C1-50 아릴, 또는 에틸렌글리콜 반복단위(-(CH2CH2O)n-, n은 1 이상 20이하의 정수)일 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 W는 치환되거나 비치환된 선형 또는 분지형 C1-60 알킬렌, 치환되거나 비치환된 선형 또는 분지형 C1-60 알케닐렌, 치환되거나 비치환된 선형 또는 분지형 C1-60 헤테로알킬렌, 또는 치환되거나 비치환된 선형 또는 분지형 C1-60 헤테로알케닐렌이며, 치환된 경우 =O, -C(O)NH2, -OH, -COOH, -SH, =NH, -NH2, 및 할로로 구성된 그룹으로부터 선택된 하나 이상으로 치환될 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 W는 하나 이상이 치환된 C12-24 알킬렌 또는 하나 이상이 치환된 C36-48 헤테로알킬렌이고, 치환된 경우 =O 또는 -COOH를 포함할 수 있다.
구체적인 본 발명의 일 양태에서, 상기 하나 이상이 치환된 W는 치환되거나 비치환된 C12-24 포화 지방산이고, 치환된 경우 -COOH를 포함한다.
본 발명의 일 양태에서, 지방산 모이어티는 다음 일반식 B1의 화학식을 갖는 것일 수 있다.
[일반식 B1]
X' 1 -Y'-C(O)-F 1
상기 식에서,
X'1은 말레이미드, N-하이드록시석신이미드, 알데하이드, 아민, 테트라플루오로페닐 에스테르 또는 니트로페놀이고,
Y'은 스페이서이며,
F1은 C6-28 치환 또는 비치환된 선형 또는 분지형 알킬렌, 치환 또는 비치환된 선형 또는 분지형 헤테로 알킬렌이다.
본 발명의 일 실시형태에 따르면, 상기 일반식 B-1에서, X1은 상기 일반식 A에서 X와 동일한 의미를 가질 수 있다. 따라서, 본 발명의 일 실시형태에서, 상기 작용기 X1은 생리활성 물질과 결합할 때 구조가 유지되거나 탈락 또는 변형될 수 있다.
또한, 상기 일반식 B1에서, 상기 Y’은 상기 일반식 A, B에서 Y와 동일한 의미를 가질 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, Y’은 치환되거나 비치환된 C6-50의 선형 또는 분지형 헤테로 알킬렌이고, 치환된 경우, =O, -C(O)NH2, -OH, -COOH, -SH, =NH 및 -NH2로 구성된 그룹으로부터 선택된 하나 이상을 포함한다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 Y’은 -(CH2CH2O)-을 반복단위로 포함할 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 Y’은 -C(O)-(OCH2CH2)u-NH-를 반복단위로 포함하고, 여기에서 u은 1 내지 20의 정수이다.
구체적인 본 발명의 일 양태에서, 상기 Y’은 -C(O)-(OCH2CH2)u-NH-를 반복단위로 포함하고, 여기에서 u은 2 내지 4의 정수이다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 Y’은 아미노산 또는 이의 유도체를 구성 일부로 포함한다.
구체적인 본 발명의 일 양태에서, 상기 Y’은 글루탐산(glutamic acid), 글루타민(glutamine), 글리신(glycine), 이소류신(isoleucine), 또는 리신(Lysine)을 구성 일부로 포함하고, 여기에서 각 아미노산은 결합된 형태로 존재할 수 있다.
구체적인 본 발명의 일 양태에서, 상기 Y’은 글루탐산 또는 리신을 구성 일부로 포함한다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 F1은 치환 또는 비치환된 C10-28 선형 또는 분지형 알킬렌일 수 있다.
구체적인 본 발명의 일 양태에서, 상기 하나 이상이 치환된 W는 치환되거나 비치환된 C12-24 포화 지방산이고, 치환된 경우 -COOH를 포함한다.
구체적인 본 발명의 일 양태에서, 상기 F1은 -(CH2)v-COOH이고, v는 10 내지 20의 정수이다.
구체적인 본 발명의 일 양태에서, 상기 F1은 -C(O)-(CH2)v-COOH이고, v는 10 내지 20의 정수이다.
구체적인 본 발명의 일 양태에서, 상기 지방산 모이어티는
Figure pat00026
,
Figure pat00027
,
Figure pat00028
,
Figure pat00029
,
Figure pat00030
,
Figure pat00031
,
Figure pat00032
,
Figure pat00033
,
Figure pat00034
,
Figure pat00035
,
Figure pat00036
,
Figure pat00037
,
Figure pat00038
,
Figure pat00039
,
Figure pat00040
및
Figure pat00041
로 구성된 그룹으로부터 선택될 수 있다.
본 발명의 일 실시형태에 따르면, 비오틴 모이어티와 생리활성 물질은 다양한 결합으로 형성될 수 있다. 비오틴 모이어티의 작용기와 생리활성 물질의 작용기가 결합하여 형성될 수 있고, 이에 제한되지 않으나, 예를 들면, 티올-에테르 결합 또는 아미드 결합으로 형성될 수 있다.
일 구체예에서, 비오틴 모이어티와 생리활성 물질의 결합은 하기 반응식 1과 같은 방식에 의해 결합될 수 있다. 하기 반응식 1에서,
Figure pat00042
는 티올기를 포함하는 생리활성 물질을 나타내고, 본 발명의 일 실시형태에 따른 말레이미드를 포함하는 비오틴 모이어티와 생리활성 물질에 존재하는 시스테인 잔기의 티올기(-SH)와의 반응을 나타낸다.
Figure pat00043
[반응식 1]
일 구체예에서, 비오틴 모이어티와 생리활성 물질의 결합은 하기 반응식 2와 같은 방식에 의해 결합될 수 있다. 하기 반응식 2에서,
Figure pat00044
는 아민기를 포함하는 생리활성 물질을 나타내고, 본 발명의 일 실시형태에 따른 N-하이드록시석신이미드를 포함하는 비오틴 모이어티와 생리활성 물질에 존재하는 아민기(-NH2)와의 반응을 나타낸다.
Figure pat00045
[반응식 2]
본 발명의 일 실시형태에 따르면, 상기 생리활성 물질은 특별히 제한되지 않을 수 있다.
본 발명에서 생리활성 물질은 특정 목적을 위하여 체내에 투여될 수 있고, 체내에서 생리화학적 반응 또는 생화학적 반응을 일으키는 물질을 의미한다.
본 발명의 일 실시형태에 따르면, 상기 생리활성 물질은 약제학적 조성물에 사용되는 물질일 수 있다. 예를 들면, 당뇨병, 비만, 지방간 질환, 과민성 장 증후군, 신경퇴행성 질환, 골 질환, 골다공증, 인간 성장 호르몬 결핍증, 항암 또는 비알코올성 지방간질환의 예방 또는 치료에 사용되는 물질일 수 있다. 이는 예시적인 것으로, 상기 생리활성 물질의 종류에 따라 적응증을 달리할 수 있으므로, 상기 적응증에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 일 실시형태에 따르면, 상기 생리활성 물질은 이에 제한되지 않으나, 예를 들면, 폴리펩티드, 또는 비펩티드성 중합체일 수 있다. 이에 제한되지 않으나, 예를 들면, 폴리펩티드, 단백질, 다당류(polysaccharide) 또는 이들의 유도체일 수 있다. 이에 제한되지 않으나, 예를 들면, 상기 생리활성 물질은 글루카곤(Glugacon), GLP-1(Glucagon-like peptide-1), GLP-2(Glucagon-like peptide-2), GIP(glucose-dependent insulinotropic polypeptide), 엑센딘-4(exendin-4), 인슐린, 부갑상선 호르몬, 인터페론, 에리트로포이에틴, 칼시토닌, 아밀린, 세로토닌, 리툭시맙, 트라스트주맙, 우리카제, 조직 플라스미노겐 활성화제, 티모글로빈, 백신, 헤파린 또는 헤파린 유사체, 안티트롬빈 III, 필그라스팀, 프라믈린티드(pramlintide) 아세테이트, 엑세나티드, 에프티피바티드(eptifibatide), 안티베닌(antivenin), IgG, IgM, HGH, 티록신, 혈액 응고 인자 VII 및 VIII, 치료제로서 작용하는 당지질, 및 이들의 유도체일 수 있다.
본 발명의 일 실시형태에 따르면, 비오틴 모이어티에 결합될 수 있다.
비오틴 모이어티가 생리활성 물질에 결합하여 생리활성 물질의 생물학적 활성을 저해시키지 않을 수 있고, 이에 따라 생리활성 물질과 동일한 생물학적 활성 또는 향상된 생물학적 활성을 가질 수 있다.
이에 제한되지 않으나, 예를 들면, 상기 생리활성 물질은 노출된 -SH기를 함유하여 상기 -SH기에 비오틴 모이어티가 결합될 수 있다. 또한, 상기 생리활성 물질은 노출된 -NH3 +기 또는 -NH2기를 함유하여, 상기 노출된 -NH3 +기 또는 -NH2기에 비오틴 모이어티가 결합될 수 있다.
본 발명의 일 실시형태에 따르면, 비오틴 모이어티는 생리활성 물질과의 결합 위치가 조절되어 활성을 나타내는 위치를 피하여 결합될 수 있다.
또한, 본 발명의 일 실시형태에 따르면, 상기 지방산 모이어티는 생리활성 물질에 직접결합할 수 있다. 또한, 상기 지방산 모이어티의 일부는 비오틴 모이어티와 공통될 수 있다. 예를 들어, 하기 실시예의 일 양태에서, 비오틴 모이어티 B35, B36는 지방산 모이어티의 일부분인 지방산 부분을 공통적으로 포함한다. 다만, 이는 일 예시에 해당하는 것으로 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 일 실시형태에 따르면, 상기 지방산 모이어티는 생리활성 물질에 직접결합하고, 지방산 모이어티의 생리활성 물질에 결합하지 않은 말단과 비오틴 모이어티가 결합된 형태로 나타날 수 있다.
또한, 본 발명의 일 실시형태에 따르면, 상기 지방산 모이어티는 생리활성 물질에 결합되고, 상기 비오틴 모이어티가 결합된 생리활성 물질의 부위와 다른 부위에 결합된 것일 수 있다.
또한, 지방산 모이어티도 비오틴 모이어티와 동일하게 생리활성 물질의 활성 부위 또는 비활성 부위에 결합될 수 있으며, 상기 특성과 동일한 특성을 나타낼 수 있다.
본 발명의 일 실시형태에 따르면, 비오틴 모이어티와 지방산 모이어티가 모두 생리활성 물질과 결합될 수 있고, 비오틴 모이어티와 지방산 모이어티가 모두 결합된 생리활성 물질 접합체는 비오틴 모이어티 또는 지방산 모이어티가 단독 결합된 접합체와 비교하여, 경구흡수율, 약물동태, 효소분해억제, 장관 막 투과 등이 우수하게 나타날 수 있다.
본 발명의 일 실시형태에 따르면, 상기 생리활성 물질은 글루카곤, 칼시토닌, GLP-1, GLP-2, GIP, 엑센딘-4, 부갑상선 호르몬, 인슐린, 아밀린, 인간 성장 호르몬 또는 이의 유도체일 수 있다.
본 발명의 일 실시형태에 따르면, 상기 생리활성 물질은 하기 서열번호 1 내지 7 중 어느 하나의 아미노산 서열을 가지는 폴리펩티드 또는 이의 유도체일 수 있다. 구체적으로, 하기 서열번호 1 내지 7의 생리활성 물질은 각각 글루카곤 유도체(서열번호 1), GLP-1(서열번호 2), GLP-2(서열번호 3), GIP(서열번호 4), 엑센딘-4(서열번호 5), 부갑상선 호르몬(서열번호 6), 글루카곤 (서열번호 7)를 의미한다.
서열번호 1: H(Aib)QGTFTSDYSKYLDEQAAKEFVQWLMNT
서열번호 2: HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGR
서열번호 3: HADGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITD
서열번호 4: YAEGTFISDYSIAMDKIHQQDFVNWLLAQKGKKNDWKHNITQ
서열번호 5: HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS
서열번호 6: SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNF
서열번호 7: HSQGTFTSDYSKYLDSRRAQDFVQWLMNT
또한, 상기 생리활성 물질은 하기 서열번호 15 및 16의 아미노산 서열을 가지는 단백질 또는 서열번호 17 및 16의 아미노산 서열을 가지는 단백질일 수 있고, 여기서 단백질은 서열번호 15 또는 17의 6번째 및 11번째 시스테인, 서열번호 15 또는 17의 7번째 및 서열번호 16의 7번째 시스테인, 및 서열번호 15 또는 17의 20번째 및 서열번호 16의 19번째 시스테인 간 이황화결합으로 결합된다. 구체적으로, 하기 서열번호 15 및 16의 아미노산 서열을 가지는 단백질 또는 서열번호 17 및 16의 아미노산 서열을 가지는 생리활성 물질은 인슐린(서열번호 15(인슐린 A 사슬 유도체) 및 16(인슐린 B 사슬) / 서열번호 17(인슐린 A 사슬) 및 16(인슐린 B 사슬))를 의미한다
서열번호 15 GIVEQCCTSICSLEQLENYCN
서열번호 16: FVNQHLCGSHLVEALYLVCGERGFFYTPKT
서열번호 17: GIVEQCCTSICSLYQLENYCN
본 발명의 일 실시형태에 따르면, 비오틴 모이어티와의 결합 위치를 조절하기 위하여 폴리펩티드에 시스테인을 치환 또는 삽입할 수 있다.
이에 제한되지 않으나, 예를 들면, 상기 서열번호 1 내지 7로 표시되는 아미노산 서열로 이루어진 군으로부터 선택되는 폴리펩티드의 아미노산 중 어느 하나 이상이 시스테인 아미노산으로 치환 또는 삽입될 수 있다. 이때, 상기 시스테인 아미노산의 -SH기에 비오틴 모이어티가 결합된다.
또한, 상기 아미노산 서열로 이루어진 군으로부터 선택되는 폴리펩티드의 아미노산 중 어느 하나 이상이 리신 아미노산으로 치환 또는 삽입될 수 있다. 이때, 상기 리신 아미노산의 -NH2기에 비오틴 모이어티가 결합된다.
또한, 상기 시스테인 아미노산이 삽입된 폴리펩티드는 하기 서열번호 8 내지 14 중 어느 하나의 아미노산 서열을 가지는 폴리펩티드일 수 있다. 구체적으로, 하기 서열번호 8 내지 14의 생리활성 물질은 상기 서열번호 1 내지 7의 생리활성 물질로부터 시스테인 아미노산이 치환 또는 삽입된 생리활성 물질을 의미한다(예를 들면, 서열번호 8의 생리활성 물질은 서열번호 1의 생리활성 물질의 아미노산 중 어느 하나 이상이 시스테인으로 치환)
서열번호 8: H(Aib)QGTFTSDYSKYLDEQAAKEFVQWLMNTC
서열번호 9: HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRC
서열번호 10: HADGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDC
서열번호 11:
YAEGTFISDYSIAMDKIHQQDFVNWLLAQKGKKNDWKHNITQC
서열번호 12: HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPSC
서열번호 13: SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFC
서열번호 14: HSQGTFTSDYSKYLDSRRAQDFVQWLMNTC
본 발명의 일 실시형태에 따르면, 비오틴 모이어티와의 결합 위치를 조절하기 위하여 폴리펩티드의 일부를 치환할 수 있다.
또한, 본 발명의 일 실시형태에 따르면, 비오틴 모이어티와의 결합 위치를 조절하기 위하여 폴리펩티드에 리신 아미노산을 치환 또는 삽입할 수 있다.
이에 제한되지 않으나, 예를 들면, 상기 서열번호 5로 표시되는 아미노산 서열의 아미노산 중 어느 하나 이상이 리신 아미노산으로 치환 또는 삽입될 수 있다.
또한, 이에 제한되지 않으나, 예를 들면 상기 서열번호 5로 표시되는 아미노산 서열의 아미노산 중 어느 하나 이상이 2-아미노이소부티르산(2-Aminoisobutyric acid, Aib)로 치환되고, 리신 아미노산이 삽입될 수 있다. 이때, 상기 리신 아미노산의 -NH2기에 비오틴 모이어티가 결합된다.
또한, 상기 폴리펩티드의 일부가 치환되거나, 리신 아미노산이 치환 또는 삽입된 폴리펩티드는 하기 서열번호 18 내지 21 중 어느 하나의 아미노산 서열을 가지는 폴리펩티드일 수 있다. 구체적으로, 하기 서열번호 18 내지 21의 생리활성 물질은 상기 서열번호 5의 생리활성 물질로부터 아미노산 일부가 치환, 삽입된 것으로 엑센딘-4 유도체를 의미한다.
서열번호 18: HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPSK
서열번호 19:
HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPSKKK
서열번호 20:
H(Aib)EGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPSK
서열번호 21:
H(Aib)EGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPSKKK
본 발명의 일 실시형태에 따르면, 비오틴 모이어티와의 결합 위치를 조절하기 위하여 폴리펩티드에 시스테인을 치환 또는 삽입할 수 있다.
이에 제한되지 않으나, 예를 들면, 상기 서열번호 1 내지 7로 표시되는 아미노산 서열로 이루어진 군으로부터 선택되는 폴리펩티드의 아미노산 중 어느 하나 이상이 시스테인 아미노산으로 치환 또는 삽입될 수 있다. 이때, 상기 시스테인 아미노산의 -SH기에 비오틴 모이어티가 결합된다.
또한, 상기 아미노산 서열로 이루어진 군으로부터 선택되는 폴리펩티드의 아미노산 중 어느 하나 이상이 리신 아미노산으로 치환 또는 삽입될 수 있다. 이때, 상기 리신 아미노산의 -NH2기에 비오틴 모이어티가 결합된다.
또한, 상기 시스테인 아미노산이 삽입된 폴리펩티드는 하기 서열번호 8 내지 14 중 어느 하나의 아미노산 서열을 가지는 폴리펩티드일 수 있다. 구체적으로, 하기 서열번호 8 내지 14의 생리활성 물질은 상기 서열번호 1 내지 7의 생리활성 물질로부터 시스테인 아미노산이 치환 또는 삽입된 생리활성 물질을 의미한다(예를 들면, 서열번호 8의 생리활성 물질은 서열번호 1의 생리활성 물질의 아미노산 중 어느 하나 이상이 시스테인으로 치환)
서열번호 8: H(Aib)QGTFTSDYSKYLDEQAAKEFVQWLMNTC
서열번호 9: HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRC
서열번호 10: HADGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDC
서열번호 11:
YAEGTFISDYSIAMDKIHQQDFVNWLLAQKGKKNDWKHNITQC
서열번호 12: HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPSC
서열번호 13: SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFC
서열번호 14: HSQGTFTSDYSKYLDSRRAQDFVQWLMNTC
본 발명의 일 실시형태에 따르면, 비오틴 모이어티와의 결합 위치를 조절하기 위하여 폴리펩티드의 일부를 치환할 수 있다.
또한, 본 발명의 일 실시형태에 따르면, 비오틴 모이어티와의 결합 위치를 조절하기 위하여 폴리펩티드에 리신 아미노산을 치환 또는 삽입할 수 있다.
이에 제한되지 않으나, 예를 들면, 상기 서열번호 5로 표시되는 아미노산 서열의 아미노산 중 어느 하나 이상이 리신 아미노산으로 치환 또는 삽입될 수 있다.
또한, 이에 제한되지 않으나, 예를 들면 상기 서열번호 5로 표시되는 아미노산 서열의 아미노산 중 어느 하나 이상이 2-아미노이소부티르산(2-Aminoisobutyric acid, Aib)로 치환되고, 리신 아미노산이 삽입될 수 있다. 이때, 상기 리신 아미노산의 -NH2기에 비오틴 모이어티가 결합된다.
또한, 상기 폴리펩티드의 일부가 치환되거나, 리신 아미노산이 치환 또는 삽입된 폴리펩티드는 하기 서열번호 18 내지 21 중 어느 하나의 아미노산 서열을 가지는 폴리펩티드일 수 있다. 구체적으로, 하기 서열번호 18 내지 21의 생리활성 물질은 상기 서열번호 5의 생리활성 물질로부터 아미노산 일부가 치환, 삽입된 것으로 엑센딘-4 유도체를 의미한다.
서열번호 18: HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPSK
서열번호 19:
HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPSKKK
서열번호 20:
H(Aib)EGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPSK
서열번호 21:
H(Aib)EGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPSKKK
본 발명의 일 실시형태에 따르면, 상기 생리활성 물질은 하기 서열번호 22의 아미노산 서열을 가지는 폴리펩티드 또는 이의 유도체일 수 있다. 하기 서열번호 22의 생리활성 물질은 아밀린을 의미한다.
서열번호 22: KCNTATCATQRLANFLVHSSNNFGAILSSTNVGSNTY
본 발명의 일 실시형태에 따르면, 비오틴 모이어티와의 결합 위치를 조절하기 위하여 상기 서열번호 22로 표시되는 아미노산 서열의 일부를 치환 또는 삽입할 수 있다.
이에 제한되지 않으나, 예를 들면, 상기 서열번호 22로 표시되는 아미노산 서열의 아미노산 중 어느 하나 이상이 프롤린, 아스파르트산, 아르기닌 아미노산으로 치환될 수 있다. 또한, 이에 제한되지 않으나, 예를 들면, 상기 서열번호 22로 표시되는 아미노산 서열의 아미노산 중 어느 하나 이상이 리신 아미노산으로 치환 또는 삽입될 수 있다.
또한, 상기 서열번호 22로 표시되는 아미노산의 일부가 치환 또는 삽입된 폴리펩티드는 하기 서열번호 23 내지 31 중 어느 하나의 아미노산 서열을 가지는 폴리펩티드 일 수 있다. 구체적으로, 하기 서열번호 23 내지 31의 생리활성 물질은 상기 서열번호 22의 생리활성 물질로부터 아미노산 일부가 치환, 삽입된 것으로 아밀린 유도체를 의미한다.
서열번호 23: KCNTATCATQRLANFLVHSSNNFGAILSSTNVGSNTYK
서열번호 24: KCNTATCATQRLANFLVHSSNNFGPILPPTNVGSNTY
서열번호 25: KCNTATCATQRLANFLVHSSNNFGPILPPTNVGSNTYK
서열번호 26: KCNTATCATQRLADFLRHSSPNFGAIPSSTNVGSRTY
서열번호 27: KCNTATCATQRLADFLRHSSPNFGAIPSSTNVGSRTYK
서열번호 28: KCNTATCATQRLADFLRHSSNNFGAIPSSTNVGSRTY
서열번호 29: KCNTATCATQRLADFLRHSSNNFGAIPSSTNVGSRTYK
서열번호 30: RCNTATCATQRLADFLRHSSNNFGAIPSSTNVGSKTY
서열번호 31: RCNTATCATQRLADFLRHSSNNFGAIPSSTNVGSKTYK
본 발명의 일 실시형태에 따르면, 상기 생리활성 물질은 하기 서열번호 32의 아미노산 서열을 가지는 폴리펩티드 또는 이의 유도체일 수 있다. 구체적으로, 하기 서열번호 32의 생리활성 물질은 각각 엑센딘-4 유도체를 의미한다.
서열번호 32: H(Aib)QGTFTSDKSKYLDERAAQDFVQWLLDGGPSSGAPPPS
본 발명의 일 실시형태에 따르면, 비오틴 모이어티와의 결합 위치를 조절하기 위하여 상기 서열번호 32의 아미노산 서열의 일부를 삭제, 치환, 또는 삽입할 수 있다.
이에 제한되지 않으나, 예를 들면, 상기 서열번호 32로 표시되는 아미노산 서열의 아미노산 중 어느 하나 이상이 메티오닌, 리신, 이소루신, 트립토판, 글리신, 아미노산으로 치환될 수 있다. 또한, 이에 제한되지 않으나, 예를 들면, 상기 서열번호 32로 표시되는 아미노산 서열의 아미노산 중 어느 하나 이상이 삭제될 수 있다.
또한, 상기 서열번호 32로 표시되는 아미노산의 일부가 삭제, 치환 또는 삽입된 폴리펩티드는 하기 서열번호 32 내지 37 중 어느 하나의 아미노산 서열을 가지는 폴리펩티드 일 수 있다. 구체적으로, 하기 서열번호 33 내지 37의 생리활성 물질은 상기 서열번호 32의 생리활성 물질로부터 아미노산 일부가 삭제, 치환, 삽입된 것으로 엑센딘-4 유도체를 의미한다.
서열번호 33: H(Aib)QGTFTSDKSKYLDERAAQDFVQWLMDGGPSSGAPPPS
서열번호 34: H(Aib)QGTFTSDKSKYLDKIAAQDFVQWLIDGGPSSGAPPPS
서열번호 35: H(Aib)QGTFTSDKSWYLDKIAAQDFVQWLLGGGPSSGAPPPS
서열번호 36: H(Aib)QGTFTSDKSWYLDERAAQDFVQWLMGGGPSSGAPPPS
서열번호 37: H(Aib)QGTFTSDKSKWLDKIAAQDFVQWLIGGGPSSGAPPPS
본 발명의 일 실시형태에 따르면, 상기 서열번호 12로 표시되는 아미노산 서열의 아미노산 중 어느 하나 이상이 2-아미노이소부티르산(Aib)로 치환될 수 있다.
본 발명의 일 실시형태에 따르면, 상기 서열번호 12로 표시되는 아미노산 서열의 아미노산 중 어느 하나 이상이 2-아미노이소부티르산(Aib)로 치환되고, 하나 이상이 Des-amino-His(h)로 치환될 수 있는 폴리펩티드는 하기 서열번호 38 내지 39의 아미노산 서열을 가지는 폴리펩티드일 수 있다. 구체적으로, 하기 서열번호 38 또는 39의 생리활성 물질은 상기 서열번호 12의 생리활성 물질로부터 아미노산이 치환된 것으로, 엑센딘-4 유도체를 의미한다. 보다 더 구체적으로, 하기 서열번호 39의 아미노산 서열의 생리활성 물질은 아미노산 중 하나 이상이 Des-amino-His(h)로 치환된 생리활성 물질이다.
서열번호 38: H(Aib)EGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPSC
서열번호 39: h(Aib)EGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPSC
본 발명의 일 실시형태에 따르면, 상기 서열번호 8로 표시되는 아미노산 서열의 아미노산 중 어느 하나 이상이 리신(Lys) 또는 아르기닌(Arg)으로 치환될 수 있다.
상기 서열번호 8로 표시되는 아미노산 서열의 아미노산 중 어느 하나 이상이 리신 또는 아르기닌으로 치환된 폴리펩티드는 하기 서열번호 40 내지 41의 아미노산 서열을 가지는 폴리펩티드일 수 있다. 구체적으로, 하기 서열번호 40 또는 41의 생리활성 물질은 상기 서열번호 8의 생리활성 물질로부터 아미노산 일부가 치환된 것으로 글루카곤 유도체를 의미한다.
서열번호 40: H(Aib)QGTFTSDYSKYLDEQAAKEFVQWLMNTK
서열번호 41: H(Aib)QGTFTSDYSKYLDEKRAKEFVQWLMNTC
본 발명의 일 실시형태에 따르면, 상기 생리활성 물질은 하기 서열번호 42 의 아미노산 서열을 가지는 폴리펩티드 또는 이의 유도체일 수 있다. 구체적으로, 하기 서열번호 42의 생리활성 물질은 인간 성장 호르몬 유도체를 의미한다.
서열번호 42:
MFPTIPLSRLFDNAMLRAHRLHQLAFDTYQEFEEAYIPKEQKISFLQNPQTSLCFSESIPTPSNREETQQKSNLELLRISLLLIQSWLEPVQFLRSVFANSLVYGASDSNVYDLLKDLEEGIQTLMGRLEDGSPRTGQIFKQTYSKFDTNSHNDDALLKNYGLLYCFRKDMDKVETFLRIVQCRSVEGSCGF
본 발명의 일 실시형태에 따르면, 비오틴 모이어티, 지방산 모이어티 또는 이의 조합이 결합되는 생리활성 물질은 펩티드 및 비펩티드성 중합체, 지방산, 콜레스테롤, 항체, 항체 단편, 알부민 및 이의 단편, 뉴클레오티드, 피브로넥틴(fibronectin), 트렌스페린, FcRn 결합물질, 사카라이드(saccharide), 엘라스틴, 헤파린 및 이들의 유도체로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상과 공유결합하거나 봉입체(microsphere)를 형성할 수 있다.
상기 비펩티드성 중합체는 폴리에틸렌 글리콜(PEG), 폴리프로필렌 글리콜, 에틸렌 글리콜과 프로필렌 글리콜의 공중합체, 폴리옥시 에틸화 폴리올, 폴리비닐알콜(PVA), 폴리사카라이드, 덱스트란, 폴리비닐에틸 에테르, PLA(폴리락트산, polylactic acid), PLGA(폴리락틱-글리콜산, polylactic-glycolic acid), 지질 중합체, 키틴, 히알루론산 및 이들의 조합으로 구성된 군으로부터 선택될 수 있다.
본 발명에서, “유도체”는 화학구조의 일부가 삭제, 치환, 부가 등으로 인해 변화된 것을 의미한다.
본 발명에서 “약학적으로 허용가능한”이란 포함된 성분이 생물체를 상당히 자극하지 않고, 생물학적 활성 및 특성을 저해하지 않는 것을 의미한다.
본 발명에서 “약학적으로 허용가능한 염”이란 사람 또는 동물의 생물학적 활성 및 특성을 해치지 않는 바람직한 생물활성을 보유한 염으로서, 이에 한정되는 것은 아니나, 무기산염(염산, 황산, 인산, 질산), 유기산염(아세트산, 옥살산, 말레산, 푸마르산, 숙신산, 벤조산, 아스코르브산, 타닌산, 파모산, 알긴산, 트리에틸아민, 사이클로헥실아민, 피리딘), 알칼리금속염(나트륨염, 칼륨염), 알칼리토금속염(칼슘염), 암모늄염, 이들의 부가 염 형태 등을 포함한다.
본 발명에서, 담즙산은 양친매성을 가지는 분자로서, 생물학적 막을 통해 약물 투과를 촉진할 수 있다. 담즙산이 본 발명의 비오틴 모이어티, 지방산 모이어티 또는 이의 조합과 결합된 생리활성 물질과 결합된 형태로 흡수되어, 경구 투여시 생리활성 물질의 손실을 최소화하여 체내 흡수율을 향상시킬 수 있다.
또한, 세포 안정성, 세포독성, 체내 흡수율 등을 고려하여 담즙산의 일부가 치환, 삭제, 부가된 담즙산 유도체를 적절히 선택할 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 부형제는 담즙산, 이의 유도체, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함한다.
구체적인 본 발명의 일 양태에서, 상기 담즙산은 글리코콜산(glycocholic acid), 글리코케노디옥시콜산(glycochenodeoxycholic acid), 타우로케노디옥시콜산 (taurochenodeoxycholic acid), 타우로콜산(taurocholic acid), 디옥시콜산(deoxycholic acid), 콜산(cholic acid), 케노디옥시콜산(chenodeoxycholic acid), 우르소디옥시콜산(ursodeoxycholic acid) 및 리토콜산(lithocholic acid)으로 구성된 군으로부터 선택된 1종 이상이다.
구체적인 본 발명의 일 양태에서, 상기 담즙산은 케노디옥시콜산, 디옥시콜산, 콜산, 글리코콜산, 타우로콜산 및 우르소디옥시콜산으로 구성된 군으로부터 선택된 1종이다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 부형제는 알파-토코페롤, 말산, 푸마르산, 아스코르브산, 부틸화 하이드록시아니솔, 부틸화 하이드록시 톨루엔, 소듐 포스페이트, 칼슘 포스페이트, 포타슘 포스페이트, 갈락토스, 글루코스, 말토오스, 갈릭산, 프로필 갈레이트 및 이의 약학적으로 허용가능한 염으로 구성된 군으로부터 선택된 1종 이상을 더 포함한다.
구체적인 본 발명의 일 양태에서, 상기 부형제는 갈릭산, 프로필 갈레이트 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 더 포함할 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 부형제는 2종 이상의 담즙산 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함할 수 있다. 구체적인 본 발명의 일 양태에서, 상기 부형제는 케노디옥시콜산, 디옥시콜산, 우르소디옥시콜산 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염일 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 (i) 비오틴 모이어티와 결합된 생리활성 물질 및 (ii) 부형제의 중량비는 1 : 0.01 내지 1000이다. 상기 부형제 중량에서, 부형제가 2개 이상의 다른 종류의 부형제를 포함하는 경우, 모든 종류의 부형제를 포함한 중량을 의미한다.
구체적으로, 상기 중량비는 보다 더 구체적으로 1 : 0.01 내지 900, 1 : 0.015 내지 850, 1 : 0.018 내지 800, 1 : 0.02 내지 750, 1 : 0.025 내지 700, 1 : 0.028 내지 650, 1 : 0.03 내지 600, 1 : 0.035 내지 550, 1 : 0.038 내지 500, 1 : 0.04 내지 500, 1 : 0.042 내지 500, 1 : 0.045 내지 500, 1 : 0.048 내지 500, 1 : 0.05 내지 500, 1 : 0.05 내지 450, 1 : 0.05 내지 400, 1 : 0.05 내지 350, 1 : 0.05 내지 300, 1 : 0.05 내지 250일 수 있다.
보다 더 구체적인 본 발명의 일 양태에서, 상기 부형제는 담즙산 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염과 프로필 갈레이트 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함한다.
구체적으로, 담즙산 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염과 프로필 갈레이트 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 중량비는 1 : 0.01 내지 8일 수 있다. 보다 더 구체적으로, 상기 중량비는 1 : 0.015 내지 7.5, 1 : 0.018 내지 7.5, 1 : 0.02 내지 7, 1 : 0.025 내지 7, 1 : 0.028 내지 6.5, 1 : 0.03 내지 6.5, 1 : 0.035 내지 6, 1 : 0.038 내지 6, 1 : 0.04 내지 5.5, 1 : 0.042 내지 5.5, 1 : 0.045 내지 5, 1: 0.046 내지 5, 1: 0.047 내지 5, 1 : 0.048 내지 5, 1 : 0.049 내지 5, 1 : 0.05 내지 5일 수 있다.
구체적으로, 담즙산 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 중량은 1 mg 내지 1000 mg일 수 있다. 보다 더 구체적으로, 상기 중량은 25 mg 이상, 50 mg 이상, 100 mg이상, 150 mg 이상, 180 mg 이상, 200 mg 이상, 210 mg 이상, 220 mg 이상, 230 mg 이상, 240 mg 이상, 250 mg 이상일 수 있다. 다만, 상기 담즙산, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 중량은 환자의 몸무게, 투여 용량, 투여 횟수 등에 의해 적절히 조절될 수 있다.
구체적으로, 프로필 갈레이트 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 중량은 1 mg 내지 1000 mg일 수 있다. 보다 더 구체적으로, 상기 중량은 25 mg 이상, 50 mg 이상, 100 mg 이상, 150 mg 이상, 200 mg 이상, 250 mg 이상, 300 mg 이상, 310 mg 이상, 320 mg 이상, 330 mg 이상, 340 mg 이상, 350 mg 이상일 수 있다. 다만, 프로필 갈레이트 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 중량은 환자의 몸무게, 투여 용량, 투여 횟수 등에 의해 적절히 조절될 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 경구용 약학 제제는 부형제를 포함하지 않더라도, 비오틴 모이어티 및/또는 지방산 모이어티를 결합함으로써, 경구 흡수율이 향상될 수 있다.
구체적인 본 발명의 일 양태에서, 상기 경구용 약학 제제는 부형제를 사용하지 않은 경우와 비교하여 경구 흡수율이 1.5배 이상 향상된 것일 수 있다.
또한, 상기 경구용 약학 제제에서 부형제로 상기 담즙산, 이의 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 사용함으로써, 경구 흡수율이 1.5배 이상 향상될 수 있다.
보다 더 구체적인 본 발명의 일 양태에서, 상기 경구용 약학 제제에서 부형제로 프로필 갈레이트 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 더 포함함으로써, 경구 흡수율이 1.5배 이상 향상될 수 있다. 여기에서, 상기 프로필 갈레이트 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함한 경우, 생리활성 물질만 존재하는 경우와 비교하여 경구 흡수율 1.7배 이상, 비오틴 모이어티 및/또는 지방산 모이어티와 결합한 경우와 비교하여 경구 흡수율 1.8배 이상, 비오틴 모이어티 및/또는 지방산 모이어티와 결합하고 부형제로 담즙산을 포함한 경우와 비교하여 경구 흡수율 2배 이상 향상될 수 있다.
본 명세서에서 부형제는 통상적으로 약학적으로 허용가능한 부형제를 추가로 포함할 수 있다. 본 발명의 비오틴 모이어티와 결합된 생리활성 물질은 부형제를 이용하여 제형화될 수 있으며, 부형제는 이에 제한되는 것은 아니나, 안정제, 계면활성제, 가소제, 활택제, 가용화제, 완충제, 감미제, 기재, 흡착제, 교미제, 결합제, 현탁화제, 항산화제, 광택화제, 코팅제, 착향제, 향료, 습윤제, 습윤 조절제, 소포제, 저작제, 청량화제, 착색제, 당의제, 등장화제, pH 조절제, 연화제, 유화제, 점착제, 점착증강제, 점조제, 점조화제, 발포제, 부형제, 분산제, 분사제, 붕괴제, 붕괴보조제, 방향제, 방습제, 방부제, 보존제, 무통화제, 용제, 용해제, 용해보조제, 유동화제 등을 포함할 수 있다.
본 발명에서, 경구용 약학 제제는 고형 제제를 위한 전분, 칼슘 카보네이트 (Calcium carbonate), 수크로오스 (Sucrose) 또는 락토오스(Lactose), 젤라틴 등, 액상 제제를 위한 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등을 더 포함할 수 있고, 추가로 윤활제, 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등을 더 포함할 수 있다. 또한 증식성 질환 또는 자가면역질환의 치료제로서의 효능 증진을 위해 칼슘이나 비타민 D3를 더 첨가할 수 있다.
본 발명의 또 다른 측면은 상기에서 서술한 경구용 약학 제제의 용도를 제공하는 것이다. 약학적 조성물의 용도는 생리활성 물질의 종류에 따라 결정될 수 있다.
여기에서, 경구용 약학 제제의 용도는 생리활성 물질의 종류에 따라 결정될 수 있다.
본 발명의 일 실시형태에 따르면, 상기 제제는 당뇨병, 비만, 지방간 질환, 과민성 장 증후군, 신경퇴행성 질환, 골 질환, 골다공증, 인간 성장 호르몬 결핍증, 항암 또는 비알코올성 지방간질환의 예방 또는 치료에 이용될 수 있다.
본 발명의 일 실시형태에 따르면, 상기 생리활성 물질이 GLP-1, GLP-2, GIP, 인슐린, 아밀린 또는 이의 유도체인 경우, 상기 접합체는 당뇨병의 예방 또는 치료에 사용될 수 있다. 구체적으로, 상기 서열번호 12의 생리활성 물질을 포함하는 접합체는 당뇨병의 예방 또는 치료에 사용될 수 있다. 다만, 이는 예시적인 것으로 이에 제한되는 것은 아니다.
또한, 본 발명의 일 실시형태에 따르면, 상기 생리활성 물질이 부갑상선 호르몬 또는 이의 유도체인 경우, 상기 접합체는 골 질환의 예방 또는 치료에 사용될 수 있다. 구체적으로, 상기 서열번호 6의 생리활성 물질을 포함하는 접합체는 골 질환의 예방 또는 치료에 사용될 수 있다. 다만, 이는 예시적인 것으로 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 일 실시형태에 따르면, 상기 생리활성 물질이 hGH 또는 이의 유도체인 경우, 상기 접합체는 인간 성장 호르몬 결핍증의 예방 또는 치료에 사용될 수 있다. 구체적으로, 상기 서열번호 42의 생리활성 물질을 포함하는 접합체는 인간 성장 호르몬 결핍증의 예방 또는 치료에 사용될 수 있다. 다만, 이는 예시적인 것으로 이에 제한되는 것은 아니다.
이하, 본 발명을 실시예 및 실험예에 의해 상세히 설명한다. 단, 하기 실시예 및 실험예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예 및 실험예에 한정되는 것은 아니다.
[실시예]
<비오틴 모이어티 제조>
약어 목록
HBTU: 3-[비스(디메틸아미노)메틸륨일]-3H-벤코트리아졸-1-옥사이드 헥사플루오로포스페이트(: 3-[Bis(dimethylamino)methyliumyl]-3H-benzotriazol-1-oxide hexafluorophosphate)
DIEA: 에틸디이소프로필아민 (Ethyldiisopropylamine)
HATU: 1-[비스(디메틸아미노)메틸렌]-1H-1,2,3-트리아콜로[4,5-b]피리디늄-3옥사이드 헥사플루오로포스페이트 (1-[Bis(dimethylamino)methylene]-1H-1,2,3-triazolo[4,5-b]pyridinium 3-oxide hexafluorophosphate)
DIC: 디이소프로필카보디이미드 (Diisopropylcarbodiimide)
HOBt:: 1-하이드록시벤조트리아졸 (1-Hydroxybenzotriazole)
MBHA: 4-메틸벤즈히드릴아민 히드로클로라이드 (4-Methylbenzhydrylamine hydrochloride)
Fmoc: 9-플루오레닐메틸옥시카르보닐 (9-Fluorenylmethoxycarbonyl)
DMF: 디메틸포름아미드 (dimethylformamide)
SPPS: 고체상 펩티드 합성
HPLC: 고성능 액체 크로마토그래피
LCMS: 액체 크로마토그래피 질량분석
일반적인 SPPS 방법
일부 경우에서 펩티드의 고체상 합성은 산성 조건 하에서 절단될 수 있는 기, 예를 들어, 2-Fmoc-옥시-4-메톡시벤질, 또는 2,4,6-트라이메톡시벤질을 가진 디-펩티드 아미드 결합에서 보호된 디-펩티드의 사용에 의해 개선될 수 있다. 사용된 Fmoc-보호된 아미노산 유도체가 권장된 표준이었다: 예를 들어 Anaspec, Bachem, Iris Biotech, 또는 Novabiochem으로부터 공급된 Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Asp(OtBu)-OH, Fmoc-Cys(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Met-OH, Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Thr(tBu)-OH, Fmoc-Trp(Boc)-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH, 또는, Fmoc-Val-OH 등. N-말단 아미노산은 알파 아미노기에서 보호된 Boc였다. 예를 들어, Anaspec, Bachem, Iris Biotech, 또는 Novabiochem으로부터 공급된 Fmoc-8-아미노-3,6-다이옥사옥탄산, Fmoc-트라넥사민산, Fmoc-아이소니페코트산, Fmoc-Glu-OtBu, Fmoc-Lys(Fmoc)-OH를 사용하였다.
SPPS를 이용한 펩타이드 합성
펩타이드는 HBTU/DIEA, HATU/DIEA, 혹은 DIC/HOBt를 커플링 시약으로서 이용하여, 링크 아마이드 MBHA 수지에서 일반적인 Fmoc 화학을 이용하여 합성될 수 있다. 합성에 이용되는 반응물과 커플링 시약은 다음의 조합들을 포함한다.
# 반응물 커플링 시약
1 Fmoc-Lys (Biotin)-OH (1.5 eq) HBTU (1.42 eq) and DIEA (3.0 eq)
2 Fmoc-Lys (Biotin)-OH (2.0 eq) HBTU (1.9 eq) and DIEA (4.0 eq)
3 3-(2,5-dioxo-2,5-dihydro-1H-pyrrol-1-yl) propanoic acid (3.0 eq) DIC (3.0 eq) and HOBt (6.0 eq)
4 2,2-dimethyl-4-oxo-3,7,10,13,16,19,22-heptaoxapentacosan-25-oic acid (2.0 eq) HATU (1.9 eq) and DIEA (4.0 eq)
5 Fmoc-21-amino-4,7,10,13,16,19-hexaoxaheneicosanoic acid (2.0 eq) HATU (1.9 eq) and DIEA (4.0 eq)
SPPS를 이용한 펩타이드 합성 과정의 예시적인 프로토콜은 하기 내용을 포함한다. 1) 링크 아마이드 MBHA 수지를 포함하는 용기에 DMF를 첨가하여 2시간동안 팽창한다 (sub: 0.68 mmol/g, 1.0 mmol, 1.47 g 혹은 5 mmol, 7.35 g, sub: 0.68 mmol/g). 2) 20% piperidine/DMF를 첨가한 후, 30분간 섞는다. 3) 1)-2)의 용매를 제거 후 DMF을 이용하여 (30초 x 5번) 세척한다. 4) 반응물(#1~#5의 반응물 중 1가지)을 첨가하여 30초간 섞어준 뒤, 반응물에 해당하는 커플링 시약(#1~#5의 커플링 시약 중 1가지)을 첨가하여 1시간 동안 질소 버블링을 진행한다. 5) 20% piperidine/DMF를 첨가한 후, 30분간 섞는다.
상기 1)~5)의 예시적인 프로토콜은 #1~#5의 반응물과 커플링 시약의 조합을 한 번 이상 사용하여 반복적인 합성을 진행할 수 있다. Fmoc 제거를 위하여 20% piperidine/DMF 용액을 30분간 처리하였다.
펩타이드 정제 및 분석을 위한 일반적인 과정
미정제 펩타이드를 물과 TFA, ACN의 적당한 혼합물에 녹인 뒤, 분취 HPLC를 이용하여 정제한 후, 건조하여 정량하였다. 분취 HPLC를 이용한 정제 조건은 하기 표 2에 나타난 것을 포함한다.
정제 조건
용매 ACN/H2O
장비 SHIMADZU LC-8A, 혹은 Gilson GX-281
Mobile Phase A: H2O (0.075% TFA in H2O)
B: CH3CN
Gradient 15-35%-60 min. Retention time: 42min, 혹은
20-50%-60 min. Retention time: 45min, 혹은
5-35%-60 min. Retention time: 50 min
Column Luna25*200mm, C18, 10um, 110A+Gemin150*30mm, C18, 5um, 110A, 혹은
Luna50*25mm, C18, 10um, 100Å+Gemini®250*50mm, C8, 5um, 110Å
Flow Rate 80mL/Min 혹은 20 mL/Min
Wavelength 220/254 nm
Oven Tem. Room temperature
분취 HPLC를 이용한 정제 후에는 분석 HPLC, 또는 LCMS를 이용하여 최종 산물의 특성을 분석하였다.
분석결과, 하기 표 3에 따른 비오틴 모이어티를 수득하였다.
비오틴
모이어티		 명칭
B1 N-Biotinoyl-N'-(6-maleiidohexanoyl)hydrazide
B2 3-Maleimidopropionate-Lys(Biotin)-Lys(Biotin)-CONH2
B3 3-Maleimidopropionate-Lys(Biotin)-Lys(Biotin)-Lys(Biotin)-CONH2
B4 propionate-N-hydroxysuccinimide ester- PEG-Lys(Biotin)-Lys(Biotin)-Lys(Biotin)-CONH2
B5 3-Maleimidopropionate-PEG-Lys(Biotin)-Lys(Biotin)-Lys(Biotin)-CONH2
B1:
Figure pat00046
,
B2:
Figure pat00047
,
B3:
Figure pat00048
,
B4:
Figure pat00049
,
B5:
Figure pat00050
또한, 상기 SPPS를 이용한 펩타이드 합성1)~5)의 프로토콜, 정제 및 분석을 통해 하기의 비오틴 모이어티를 수득하였다. 하기 표 4에서 X, Y, Z 및 B는 본 명세서 일반식 A의 정의에 포함된다.
비오틴 모이어티 X Y Z B(Biotin) 개수
B6 Aldehyde propane Lysine 2
B7 Maleimide butyrate Glycerol and PEG 2
B8 Maleimide butyrate Glycerol and PEG 2
B9 N-hydroxysuccinimide butyrate Lysine 2
B10 N-hydroxysuccinimide glutarate Glycerol and PEG 2
B11 Maleimide PEG12 Lysine 3
B12 N-hydroxysuccinimide PEG12 Lysine 3
B13 amine - Lysine 3
B14 Aldehyde pentane Lysine 2
B15 Maleimide adipate Glycerol and PEG 2
B16 Maleimide suberate Glycerol and PEG 2
B17 Maleimide sebacate Glycerol and PEG 2
B18 N-hydroxysuccinimide adipate Glycerol and PEG 2
B19 N-hydroxysuccinimide suberate Lysine 4
B20 N-hydroxysuccinimide sebacate Lysine 4
B21 N-hydroxysuccinimide PEG6 Glycerol and PEG 2
B22 Succinimidyl carbonate PEG6 Lysine 2
B23 Succinimidyl carbonate PEG12 Lysine 3
B24 Succinimidyl carbonate pentane Lysine 3
B25 Succinimidyl carbonate hexane Lysine 3
B26 p-nitrophenyl carbonate PEG6 Lysine 3
B27 p-nitrophenyl carbonate PEG12 Lysine 4
B28 p-nitrophenyl carbonate propane Glycerol and PEG 2
B29 p-nitrophenyl carbonate pentane Glycerol and PEG 2
B30 amine - Glycerol and PEG 2
B31 thiol butyrate Lysine 2
B32 thiol glutarate Lysine 3
B33 aminoxy PEG6 Lysine 3
B34 iodoacetamide PEG6 Lysine 3
B35 Maleimide EG2-EG2-Glu-C18 Lysine 3
B36 Maleimide EG2-EG2-Glu-C18 Lysine 3
B37 Amine Lys-EG2 Lysine 3
B38 N-hydroxysuccinimide - - 1
B35:
Figure pat00051
B36:
Figure pat00052
B37:
Figure pat00053
B38:
Figure pat00054
<지방산 모이어티>
지방산 모이어티는 해당기술 분야에서 공지된 방법에 의해 제조되거나 상업적으로 수득된 물질을 사용할 수 있다.
지방산 모이어티는 하기 표 5에 따른 지방산 모이어티를 사용하였다.
지방산 모이어티 명칭
F1 C16-NHS
F2 C16-MAL
F3 C18-NHS
F4 C18-MAL
F5 C16-Glu-NHS
F6 C16-Glu-MAL
F7 C18-Glu-NHS
F8 C18-Glu-MAL
F9 C18-Glu-EG2-NHS
F10 C18-Glu-EG2-MAL
F11 C18-Glu-EG2-EG2-NHS
F12 C18-Glu-EG2-EG2-MAL
F13 C20-Glu-EG2-EG2-NHS
F14 C20-Glu-EG2-EG2-MAL
F15 C18-Glu-EG2-EG2-TFP
F16 C18-Glu-EG2-EG2-NPC
F1:
Figure pat00055
F2:
Figure pat00056
F3:
Figure pat00057
F4:
Figure pat00058
F5:
Figure pat00059
F6:
Figure pat00060
F7:
Figure pat00061
F8:
Figure pat00062
F9:
Figure pat00063
F10:
Figure pat00064
F11:
Figure pat00065
F12:
Figure pat00066
F13:
Figure pat00067
F14:
Figure pat00068
F15:
Figure pat00069
F16:
Figure pat00070
<생리활성 물질(폴리펩티드)>
생리활성 물질(폴리펩티드)은 해당 기술 분야에서 공지된 방법에 의해 제조되거나 상업적으로 수득된 물질을 사용할 수 있다. 본 발명에서 비오틴 모이어티, 지방산 모이어티 또는 이의 조합과 결합한 생리활성 물질의 서열은 하기 표 6에 나타난 바와 같다.
생리활성물질
(폴리펩티드)		 서열번호 아미노산 서열
P1 1 H(Aib)QGTFTSDYSKYLDEQAAKEFVQWLMNT
P2 2 HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGR
P3 3 HADGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITD
P4 4 YAEGTFISDYSIAMDKIHQQDFVNWLLAQKGKKNDWKHNITQ
P5 5 HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS
P6 6 SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNF
P7 7 HSQGTFTSDYSKYLDSRRAQDFVQWLMNT
P8 8 H(Aib)QGTFTSDYSKYLDEQAAKEFVQWLMNTC
P9 9 HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRC
P10 10 HADGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDC
P11 11 YAEGTFISDYSIAMDKIHQQDFVNWLLAQKGKKNDWKHNITQC
P12 12 HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPSC
P13 13 SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFC
P14 14 HSQGTFTSDYSKYLDSRRAQDFVQWLMNTC
P15 15 GIVEQCCTSICSLEQLENYCN
P16 16 FVNQHLCGSHLVEALYLVCGERGFFYTPKT
P17 17 GIVEQCCTSICSLYQLENYCN
P18 18 HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPSK
P19 19 HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPSKKK
P20 20 H(Aib)EGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPSK
P21 21 H(Aib)EGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPSKKK
P22 22 KCNTATCATQRLANFLVHSSNNFGAILSSTNVGSNTY
P23 23 KCNTATCATQRLANFLVHSSNNFGAILSSTNVGSNTYK
P24 24 KCNTATCATQRLANFLVHSSNNFGPILPPTNVGSNTY
P25 25 KCNTATCATQRLANFLVHSSNNFGPILPPTNVGSNTYK
P26 26 KCNTATCATQRLADFLRHSSPNFGAIPSSTNVGSRTY
P27 27 KCNTATCATQRLADFLRHSSPNFGAIPSSTNVGSRTYK
P28 28 KCNTATCATQRLADFLRHSSNNFGAIPSSTNVGSRTY
P29 29 KCNTATCATQRLADFLRHSSNNFGAIPSSTNVGSRTYK
P30 30 RCNTATCATQRLADFLRHSSNNFGAIPSSTNVGSKTY
P31 31 RCNTATCATQRLADFLRHSSNNFGAIPSSTNVGSKTYK
P32 32 H(Aib)QGTFTSDKSKYLDERAAQDFVQWLLDGGPSSGAPPPS
P33 33 H(Aib)QGTFTSDKSKYLDERAAQDFVQWLMDGGPSSGAPPPS
P34 34 H(Aib)QGTFTSDKSKYLDKIAAQDFVQWLIDGGPSSGAPPPS
P35 35 H(Aib)QGTFTSDKSWYLDKIAAQDFVQWLLGGGPSSGAPPPS
P36 36 H(Aib)QGTFTSDKSWYLDERAAQDFVQWLMGGGPSSGAPPPS
P37 37 H(Aib)QGTFTSDKSKWLDKIAAQDFVQWLIGGGPSSGAPPPS
P38 38 H(Aib)EGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPSC
P39 39 h(Aib)EGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPSC
P40 40 H(Aib)QGTFTSDYSKYLDEQAAKEFVQWLMNTK
P41 41 H(Aib)QGTFTSDYSKYLDEKRAKEFVQWLMNTC
P42 42 MFPTIPLSRLFDNAMLRAHRLHQLAFDTYQEFEEAYIPKEQKISFLQNPQTSLCFSESIPTPSNREETQQKSNLELLRISLLLIQSWLEPVQFLRSVFANSLVYGASDSNVYDLLKDLEEGIQTLMGRLEDGSPRTGQIFKQTYSKFDTNSHNDDALLKNYGLLYCFRKDMDKVETFLRIVQCRSVEGSCGF
<실시예: 비오틴 모이어티, 지방산 모이어티 또는 이의 조합과 결합된 생리활성 물질 제조>
[제조예]
반응 용매를 0.3 % 트리에틸아민 (TEA, Sigma사)이 첨가된 DMSO용액으로 하여, 상기 표 6의 폴리펩티드 및 상기 표 3 내지 표 4의 비오틴 모이어티를 몰 비율 1 : X(1 : 0.5~30)로 하여 혼합물을 실온에서 30분 이상 반응시켰다. 이후, 폴리펩티드-비오틴 모이어티 혼합물에 상기 표 5의 지방산 모이어티를 몰 비율 1 : Y(1 : 0.5~20)로 하여 혼합물을 제조하여 실온에서 90분 이상 반응시켰다. 반응은 혼합물의 부피와 같은 부피의 1% 트리플루오로아세트산 (Trifluoroacetic acid) 용액을 가하여 멈추게 하였다.
[분리 정제 및 확인]
상기 반응 생성물을 역상 고성능 액체 크로마토그래피 (high performance liquid chromatography)로 분리 및 정제하였다. 칼럼은 SUPERSIL ODS-1 column (10x250 mm, 5 μm, LB Science, South Korea)을 사용하였으며, 이동상 조건은 30-50 % 용매 B (0.1 % TFA가 첨가된 아세토나이트릴)과 용매 A(0.1 % TFA가 첨가된 증류수)로 4.7 ml/min 유속을 유지하면서 선형적으로 변화시켰다. UV흡광계 280 nm에서 모니터링하여 10분에서 20분 사이에 검출되는 피크를 수거하였다. 수거된 피크는 유기용매 및 TFA를 진공하에서 휘발시킨 후 적절한 분자량 컷오프를 가진 ultracentrifugal filter를 사용하여 농축, 정제하였다. 정제된 물질의 순도는 HPLC 분석법을 통해 확인하였다. 실온 부근의 일정 온도에서 Gemini C18 칼럼(4.6 x 250 mm, 5 μm; Phenomenex, CA, USA)을 사용하여 분석하였다. 분석은 트리플루오로아세트산시액: 아세토니트릴혼합액(혼합비를 변경되도록 한다)으로 이루어진 이동상을 사용하여 1 mL/min의 유속에서 gradient elution 방법에 의해 수행되었다. UV 흡광도는 280 nm에서 관찰하였다.
<실시예: 비오틴 모이어티, 지방산 모이어티 또는 이의 조합과 결합된 폴리펩티드>
비오틴 모이어티, 지방산 모이어티 및 폴리펩티드는 상기 기재된 물질을 사용하였으며, 비오틴 모이어티, 지방산 모이어티 또는 이의 조합과 폴리펩티드의 결합방법은 해당 기술 분야에서 공지된 방법 또는 상기 실시예의 방법에 의해 수행하였다.
비오틴 모이어티, 지방산 모이어티 또는 이의 조합이 결합된 폴리펩티드는 하기 표 7에 나타난 바와 같다. (여기에서, 분자량은 분자량 측정에 따라 측정된 분자량 또는 이론상 분자량을 나타낸다.)
접합체
(서열번호)		 폴리펩티드 비오틴 모이어티 지방산 모이어티 분자량
(g/mol)
서열
번호		 서열 번호 결합
위치		 번호 결합
위치
1 12 HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPSC B1 C40 - - 4744.5
2 12 HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPSC B2 C40 - - 5167.1
3 12 HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPSC B3 C40 - - 5521.6
4 8 H(Aib)QGTFTSDYSKYLDEQAAKEFVQWLMNTC B1 C30 - - 3963.5
5 8 H(Aib)QGTFTSDYSKYLDEQAAKEFVQWLMNTC B2 C30 - - 4386.1
6 8 H(Aib)QGTFTSDYSKYLDEQAAKEFVQWLMNTC B3 C30 - - 4740.6
7 13 SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFC B1 C35 - - 4675.4
8 13 SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFC B2 C35 - - 5098.0
9 13 SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFC B3 C35 - - 5452.5
10 5 HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS B4 K27 - - 5613.5
11 12 HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPSC B5 C40 - - 5857.0
12 15 GIVEQCCTSICSLEQLENYCN(A쇄) B4 B쇄의 K29 - - 7200.9
16 FVNQHLCGSHLVEALYLVCGERGFFYTPKT(B쇄) - -
13 15 GIVEQCCTSICSLEQLENYCN(A쇄) B4 B쇄의 F1/K29 - - 8627.8
16 FVNQHLCGSHLVEALYLVCGERGFFYTPKT(B쇄) - -
14 12 HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPSC B3 C40 F1 K27 5759.4
15 12 HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPSC B38 K12, K27 F2 C40 5120.9
16 12 HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPSC B3 C40 F11 K27 6237.2
17 12 HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPSC B38 K12, K27 F12 C40 5598.6
18 12 HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPSC B35 C40 - - 6208.4
19 12 HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPSC B36 C40 - - 6208.4
20 18 HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPSK B37 K40 - - 5565.4
21 19 HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPSKKK B K39, K40, K41 - - 5251.1
22 19 HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPSKKK B K39, K40, K41 F11 K27 6241.6
23 19 HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPSKKK B K39, K40, K41 F11 K12 6241.6
24 20 H(Aib)EGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPSK B37 K40 - - 5278.1
25 21 H(Aib)EGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPSKKK B K39, K40, K41 - - 5279.0
26 21 H(Aib)EGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPSKKK B K39, K40, K41 F11 K27 6241.6
27 21 H(Aib)EGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPSKKK B K39, K40, K41 F11 K12 5759.0
28 8 H(Aib)QGTFTSDYSKYLDEQAAKEFVQWLMNTC B2 K12 C30 F6 5259.0
29 8 H(Aib)QGTFTSDYSKYLDEQAAKEFVQWLMNTC B5 C30 K12 F5 4800.0
30 22 KCNTATCATQRLANFLVHSSNNFGAILSSTNVGSNTY B38 K1 - - 4129.6
31 22 KCNTATCATQRLANFLVHSSNNFGAILSSTNVGSNTY B39 K1 - - 5842.7
32 23 KCNTATCATQRLANFLVHSSNNFGAILSSTNVGSNTYK B2 K38 F11 K1 5627.5
33 24 KCNTATCATQRLANFLVHSSNNFGPILPPTNVGSNTY B38 K1 - - 4175.7
34 24 KCNTATCATQRLANFLVHSSNNFGPILPPTNVGSNTY B39 K1 - - 5888.8
35 25 KCNTATCATQRLANFLVHSSNNFGPILPPTNVGSNTYK B2 K38 F11 K1 5673.6
36 26 KCNTATCATQRLADFLRHSSPNFGAIPSSTNVGSRTY B38 K1 - - 4196.7
37 26 KCNTATCATQRLADFLRHSSPNFGAIPSSTNVGSRTY B39 K1 - - 5909.8
38 27 KCNTATCATQRLADFLRHSSPNFGAIPSSTNVGSRTYK B2 K38 F11 K1 5694.5
39 28 KCNTATCATQRLADFLRHSSNNFGAIPSSTNVGSRTY B38 K1 - - 4213.7
40 28 KCNTATCATQRLADFLRHSSNNFGAIPSSTNVGSRTY B39 K1 - - 5926.8
41 29 KCNTATCATQRLADFLRHSSNNFGAIPSSTNVGSRTYK B2 K38 F11 K1 5711.5
42 30 RCNTATCATQRLADFLRHSSNNFGAIPSSTNVGSKTY B38 K35 - - 4213.7
43 30 RCNTATCATQRLADFLRHSSNNFGAIPSSTNVGSKTY B39 K35 - - 5926.8
44 31 RCNTATCATQRLADFLRHSSNNFGAIPSSTNVGSKTYK B2 K35 F11 K38 5711.5
45 32 H(Aib)QGTFTSDKSKYLDERAAQDFVQWLLDGGPSSGAPPPS B38 K12 - - 6112.9
46 33 H(Aib)QGTFTSDKSKYLDERAAQDFVQWLMDGGPSSGAPPPS B39 K12 - - 6131.0
47 34 H(Aib)QGTFTSDKSKYLDKIAAQDFVQWLIDGGPSSGAPPPS B38 K10 - - 6069.0
48 35 H(Aib)QGTFTSDKSWYLDKIAAQDFVQWLLGGGPSSGAPPPS B39 K10 - - 6069.0
49 36 H(Aib)QGTFTSDKSWYLDERAAQDFVQWLMGGGPSSGAPPPS B3 K12 F11 K40 6142.0
50 37 H(Aib)QGTFTSDKSKWLDKIAAQDFVQWLIGGGPSSGAPPPS B3 K12 F12 C40 6220.2
51 20 H(Aib)EGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPSK B37 K40 F11 K27 6309.3
52 20 H(Aib)EGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPSK B38 K12, K27 F11 K40 5511.3
53 38 H(Aib)EGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPSC B38 K12, K27 F12 C40 5626.5
54 39 H(Aib)EGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPSC B38 K12, K27 F12 C40 5597.4
55 8 H(Aib)QGTFTSDYSKYLDEQAAKEFVQWLMNTC B38 K12 F12 C30 4591.3
56 40 H(Aib)QGTFTSDYSKYLDEQAAKEFVQWLMNTK B38 K12 F11 K30 4475.1
57 41 H(Aib)QGTFTSDYSKYLDEKRAKEFVQWLMNTC B38 K12 F12 C30 4647.6
58 8 H(Aib)QGTFTSDYSKYLDEQAAKEFVQWLMNTC B1 C30 F16 K12 4679.4
59 8 H(Aib)QGTFTSDYSKYLDEQAAKEFVQWLMNTC B38 K12 F14 C30 4619.4
60 22 KCNTATCATQRLANFLVHSSNNFGAILSSTNVGSNTY B38 K1 F11 K1 4845.5
61 24 KCNTATCATQRLANFLVHSSNNFGPILPPTNVGSNTY B38 K1 F11 K1 4891.6
62 26 KCNTATCATQRLADFLRHSSPNFGAIPSSTNVGSRTY B38 K1 F11 K1 4912.6
63 28 KCNTATCATQRLADFLRHSSNNFGAIPSSTNVGSRTY B38 K1 F11 K1 4929.6
64 30 RCNTATCATQRLADFLRHSSNNFGAIPSSTNVGSKTY B38 K35 F11 K1 4929.6
65 15 GIVEQCCTSICSLEQLENYCN(A쇄) B38 B쇄의 K29 - - 6000.3
66 16 FVNQHLCGSHLVEALYLVCGERGFFYTPKT(B쇄) B38
B38		 B쇄의 K29
B쇄의 K29		 -
F11		 -
B쇄의 F1		 6000.3
6716.2
15 GIVEQCCTSICSLEQLENYCN(A쇄)
67 16 FVNQHLCGSHLVEALYLVCGERGFFYTPKT(B쇄) B38
B38		 B쇄의 K29
K13, K26, K27		 F11
-		 B쇄의 F1
-		 6716.2
4796.7
13 SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNF
68 42 MFPTIPLSRLFDNAMLRAHRLHQLAFDTYQEFEEAYIPKEQKISFLQNPQTSLCFSESIPTPSNREETQQKSNLELLRISLLLIQSWLEPVQFLRSVFANSLVYGASDSNVYDLLKDLEEGIQTLMGRLEDGSPRTGQIFKQTYSKFDTNSHNDDALLKNYGLLYCFRKDMDKVETFLRIVQCRSVEGSCGF B38 Lys random - -
69 42 MFPTIPLSRLFDNAMLRAHRLHQLAFDTYQEFEEAYIPKEQKISFLQNPQTSLCFSESIPTPSNREETQQKSNLELLRISLLLIQSWLEPVQFLRSVFANSLVYGASDSNVYDLLKDLEEGIQTLMGRLEDGSPRTGQIFKQTYSKFDTNSHNDDALLKNYGLLYCFRKDMDKVETFLRIVQCRSVEGSCGF B38 Lys random F16 Lys random
70 5 HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS B38 K12, K27 - -
71 12 HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPSC - - F1 C40
72 12 HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPSC - - F12 C40
(상기 표에서 B는 Native biotin을 의미한다.)
<실시예. 비오틴 모이어티와 결합된 생리활성 물질의 제형화>
<제형화>
상기 실시예에 따라 제조된 비오틴 모이어티, 지방산 모이어티 또는 이의 조합과 결합된 폴리펩티드(생리활성 물질)인 접합체를 특정 부형제의 조성으로 Hanks Balanced Salt Solution (HBSS)에 녹여 제형화하였다.
제형 실시예 1. 접합체 3, 담즙산 1종 및 프로필 갈레이트(propyl gallate)를 함유하는 제형의 제조 및 제형 내 생리활성 물질의 Caco-2 세포막 투과도 측정
비오틴 모이어티와 결합된 생리활성 물질(폴리펩티드)인 접합체 3을 표 8에 나타낸 부형제의 조성으로 Hanks Balanced Salt Solution (HBSS)에 녹여 제형화 했으며, Caco-2 세포막 투과도를 측정하였다.
먼저, Caco-2 세포 단층막 형성을 위하여 12-트랜스웰 플레이트에 각 웰 당 1.5 x 105개의 세포를 분주하고 37 ℃CO2 조건에서 3~4주간 배양하였다. 처음 일주일 동안은 2일에 한번씩 배양배지를 갈아주었으며 그 후에는 3일 간격으로 배양배지를 갈아서 배양하였다. 실험에는 시딩(seeding) 후 3~4주 사이의 것을 사용하였다. 세포 단층막 형성을 검증하기 위하여 TEER 값 및 Lucifer yellow 값을 측정하여, TEER값이 300 Ω·㎠ 이상 그리고 Lucifer yellow의 투과도 측정값이 3% 이내인 세포 단층막만을 시험에 사용하였다. 각 시험에 사용할 트랜스웰을 Tranport media (HBSS)로 워싱 후 37℃CO2 배양기에서 1시간동안 배양한 후 조제한 약물과 부형제가 포함된 약물 및 투과성 마커(Permeability marker)를 정단부(apical side)에 200 μL씩 가하고 기저측부(basolateral side)에는 약물이 함유되지 않은 Transport media를 1 mL씩 처리한 후 37℃CO2 배양기에서 2시간동안 배양(incubation)시켰다. 2시간 후 기저측부(basolateral side)에서 각 1 mL씩 샘플링한 후 약물의 투과계수 (Papp value)는 효소결합 면역흡착검사 방법(ELISA)으로 측정하였다. 투과계수 (Papp) 값은 다음과 같이 계산하였으며, 분석 결과는 표 8에 나타난 바와 같다.
[ Papp(10-6, cm/s) = (dCr/dt) x Vr / (A x C0) ]
(* dCr-투과된 샘플의 농도, dt-약물 처리시간, Vr-기저측(basolateral) 용적, A-트랜스웰(Transwell) 면적, C0-초기 가한 약물농도)
시험물질 부형제 중량비
(생리활성 물질:부형제)		 투과 계수
(PermeabilityCoefficient)
(Papp)
접합체 용량
(μg/mL)		 종류 용량
(μg/mL)		 부형제 용량
(μg/mL)		 부형제 중량비
(담즙산:PG)
접합체 3 27.6 - - - - - 0.6
27.6 sDC 41.5 41.5 - 1:1.5 2.1
27.6 sDC 124.4 124.4 - 1:4.5 13.3
27.6 sDC 41.5 62.7 2:1 1:2.3 1.9
PG 21.2
27.6 sCA 43.1 43.1 - 1:1.6 0.7
27.6 sCA 430.6 430.6 - 1:15.6 3.0
27.6 sCA 43.1 64.3 2:1 1:2.3 0.9
PG 21.2
27.6 sGC 48.8 48.8 - 1:1.8 1
27.6 sGC 1462.8 1462.8 - 1:53 10.3
27.6 sGC 48.8 70 2.3:1 1:2.5 0.9
PG 21.2
27.6 sTC 53.8 53.8 - 1:1.9 3.8
27.6 sTC 1613.1 1613.1 - 1:58.4 11.4
27.6 sTC 53.8 75 2.5:1 1:2.7 1.1
PG 21.2
27.6 sCDC 41.5 41.5 - 1:1.5 7.2
27.6 sCDC 41.5 62.7 2:1 1:2.3 0.9
27.6 PG 21.2
27.6 sUDC 41.5 41.5 - 1:1.5 6.0
27.6 sUDC 414.6 414.6 - 1:15 6.3
27.6 sUDC 41.5 62.7 2:1 1:2.3 1.6
PG 21.2
(* PG: Propyl gallate, sCDC: Sodium chenodeoxycholate, sDC: Sodium deoxycholate, sCA: Sodium cholate, sUDC: Sodium ursodeoxycholate, sGC: Sodium glycocholate hydrate, sTC: Sodium taurocholate)
제형 실시예 2. 접합체(3, 17, 52, 70) 및 담즙산 1종을 함유하는 제형의 제조 및 제형 내 생리활성 물질의 Caco-2 세포막 투과도 측정
상기 실시예에 따라 제조된 비오틴 모이어티, 지방산 모이어티 또는 이의 조합과 결합된 생리활성 물질을 표 9에 나타낸 부형제의 조성으로 Hanks Balanced Salt Solution (HBSS)에 녹여 제형화 했으며, Caco-2 세포막 투과도를 측정하였다.
먼저, Caco-2 세포단층막 형성을 위하여 12-트랜스웰 플레이트에 각 웰 당 1.5 x 105개의 세포를 분주하고 37 ℃, CO2 조건에서 3~4주간 배양하였다. 처음 일주일 동안은 2일에 한번씩 배양배지를 갈아주었으며 그 후에는 3일 간격으로 배양배지를 갈아서 배양하였다. 실험에는 시딩(seeding) 후 3~4주 사이의 것을 사용하였다. 세포단층막 형성을 검증하기 위하여 TEER 값 및 Lucifer yellow 값을 측정하여, TEER값이 300 Ω·㎠ 이상 그리고 Lucifer yellow의 투과도 측정값이 3% 이내인 세포 단층막만을 시험에 사용하였다. 각 시험에 사용할 트랜스웰을 Tranport media (HBSS)로 워싱 후 37℃CO2배양기에서 1 시간동안 배양한 후 조제한 약물과 부형제가 포함된 약물 및 Permeability marker를 apical side에 200 μL씩 가하고 basolateral side에는 약물이 함유되지 않은 Transport media를 1 mL씩 처리한 후 37℃CO2 배양기에서 2시간동안 incubation 시켰다. 2시간 후 basolateral side에서 각 1 mL씩 샘플링한 후 약물의 투과계수 (Papp value)는 효소결합 면역 흡착 검사 방법 (ELISA)으로 측정하였다. 투과계수 (Papp) 값은 다음과 같이 계산하였으며, 분석결과는 표 9에 나타난 바와 같다.
[ Papp(10-6, cm/s) = (dCr/dt) x Vr / (A x C0) ]
(*dCr-투과된 샘플의 농도, dt-약물 처리시간, Vr-basolateral 용적, A-Transwell 면적, C0-초기 가한 약물농도)
시험물질 부형제 중량비
(생리활성물질
:부형제)		 투과 계수
(Permeability Coefficient)
(Papp, fold)
시험물질 용량
(μg/mL)		 종류 용량
(μg/mL)
폴리펩티드 서열번호 5 214.5 - - - 1
폴리펩티드 서열번호 5 214.5 sCDC 41.5 5.2:1 2
폴리펩티드 서열번호 5 214.5 sUDC 41.5 5.2:1 1
접합체 3 27.6 - - - 64
접합체 3 27.6 sCDC 41.5 1:1.5 358
접합체 3 27.6 sUDC 41.5 1:1.5 301
접합체 17 280.0 - - - 155
접합체 17 280.0 sCDC 41.5 6.7:1 272
접합체 52 275.6 - - - 133
접합체 52 275.6 sCDC 41.5 6.6:1 225
접합체 70 232.0 - - - 110
접합체 70 232.0 sCDC 41.5 5.6:1 147
(PG: Propyl gallate, sCDC: Sodium chenodeoxycholate, sDC: Sodium deoxycholate, sUDC: Sodium ursodeoxycholate)
제형 실시예 3. 접합체(68, 69), 담즙산 1종(소디움 케노디옥시콜레이트(sodium chenodeoxycholate))과 프로필 갈레이트를 함유하는 제형의 제조 및 제형 내 생리활성 물질의 Caco-2 세포 내 축적량 측정
상기 실시예에 따라 제조된 비오틴 모이어티, 지방산 모이어티 또는 이의 조합과 결합된 생리활성 물질을 표 11에 나타낸 부형제의 조성으로 Hanks Balanced Salt Solution (HBSS)에 녹여 제형화 했으며, Caco-2 세포 내 축적량을 측정하였다.
먼저, 세포내 축적양을 확인하기 위하여 Caco-2세포를 96웰 플레이트에 각 웰 당 7 x 104개로 분주하고 37 °C의 온도조건으로 CO2 배양기에서 배양한다. 24시간 이후, 각 웰의 배양액을 제거 후 HBSS로 워싱 후 조제한 약물 및 부형제가 포함된 약물을 100 μL씩 가하고 37 °C, CO2배양기에서 배양한다. 8분 후, 각 웰을 PBS로 워싱 한 후 10% 포르말린 100 μL씩 처리한 후 실온에서 반응시킨다. 10분 후, 각 웰을 PBS로 워싱 한 후 0.1% TRITON X-100을 100 μL씩 처리한 후 실온에서 반응시킨다. 10분 후, 각 웰을 PBS로 워싱 한 후 1% BSA로 1시간 블로킹(blocking)시킨다. 이후, HRP Anti-Growth Hormone antibody (1:1000)로 처리한다. 1시간 후, 각 웰을 PBST로 워싱 한 후 Ultra TMB substrate solution을 가한다. 10분 후, 각 웰에 2N HCL stop solution을 처리하고 450 nM에서 흡광도를 측정하여 각 물질의 세포내 축적양을 계산하였다.
결과는 서열번호 42 폴리펩티드를 100% 기준으로 하였으며, 측정결과는 표 10 및 도 1에 나타난 바와 같다.
시험물질 부형제 중량비
(생리활성물질:부형제)		 %
시험물질 용량
(μg/mL)		 종류 용량
(μg/mL)		 부형제 용량
(μg/mL)		 부형제 중량비
(담즙산:PG)
폴리펩티드 서열번호 42 0.66 - - - - - 100
접합체 68 0.69 - - - - - 110
접합체 69 0.74 - - - - - 707
폴리펩티드 서열번호 42 0.66 sCDC 41.5 43.6 19.8:1 1:66.1 743
(P<0.05)
PG 2.1
접합체 68 0.69 sCDC 41.5 43.6 19.8:1 1:63.2 1533
(P<0.01)
PG 2.1
접합체 69 0.74 sCDC 41.5 43.6 19.8:1 1:58.9 2011
(P<0.001)
PG 2.1
(PG: Propyl gallate, sCDC: Sodium chenodeoxycholate)
제형 실시예 4. 접합체(65, 66), 담즙산 1종(소디움 케노디옥시콜레이트(sodium chenodeoxycholate)과 프로필 갈레이트를 함유하는 제형의 제조 및 제형 내 생리활성 물질의 혈당 조절능 측정
상기 실시예에 따라 제조된 비오틴 모이어티, 지방산 모이어티 또는 이의 조합이 결합된 생리활성 물질을 표 11 및 표 12에 나타낸 부형제의 조성으로 vehicle(0.02% polysorbate 80 in 10 mM PBS (pH 7.4))에 녹여 제형화 했으며, 마우스에 경구 투여 후, 당부하 검사를 통해 혈당 조절 효능을 측정하였다.
측정 결과는 도 2에 나타난 바와 같다. 이 때, 상기 서열번호 15의 6번째 및 11번째 시스테인, 서열번호 15의 7번째 및 서열번호 16의 7번째 시스테인, 및 서열번호 15의 20번째 및 서열번호 16의 19번째 시스테인 간 이황화결합으로 결합된 폴리펩티드를 해당 vehicle에 녹인 것을 대조군1로 사용하였다. 또한, 동일한 폴리펩티드를 소디움케노디옥시콜레이트와 프로필 갈레이트를 함유하는 제형에 녹인 것을 대조군2로 사용하였다. 대조군3은 비오틴 모이어티가 결합된 생리활성 물질인 접합체 65을 담즙산 및 프로필 갈레이트가 포함되어 있지않은 인산염 완충용액에 녹인 것을 사용하였으며 대조군 1,2,3의 당부하 검사후 0분부터 120분까지의 혈당 강하효과를 비교하였다. 그 결과 도 2와 같이 담즙산 1종 및 프로필 갈레이트가 포함된 제형내의 접합체 65의 혈당저하효과가 우수함을 확인하였다.
측정 결과는 도 3에 나타난 바와 같다. 이 때, 상기 서열번호 15의 6번째 및 11번째 시스테인, 서열번호 15의 7번째 및 서열번호 16의 7번째 시스테인, 및 서열번호 15의 20번째 및 서열번호 16의 19번째 시스테인 간 이황화결합으로 결합된 폴리펩티드를 대조군으로 사용하였다. 측정결과 도 3에 나타난 바와 같이 무처리 군에 비해 대조군의 혈당 수치가 낮아졌다. 또한, 대조군에 비해 접합체 65, 접합체 66의 투여후 혈당(특히, 20~40분 후)이 현저하게 낮아진 것을 확인하였다.
구분 시험물질 부형제 중량비
(생리활성물질:부형제)
시험물질 투여용량
(mg/kg)		 sCDC
(mg/kg)		 PG
(mg/kg)		 부형제 용량
(mg/kg)		 부형제 중량비
(담즙산:PG)
Vehicle 1 무처리군1 - - - - - -
Vehicle 2 무처리군2 - 68 34 102 2:1 -
1 대조군1 1.4 - - - - -
2 대조군2 1.4 68 34 102 2:1 1:70.4
3 대조군3접합체 65 1.5 - - - - -
4 접합체 65 1.5 68 34 102 2:1 1:68
구분 시험물질 부형제 중량비
(생리활성물질:
부형제)
시험물질 투여용량
(mg/kg)		 sCDC
(mg/kg)		 PG
(mg/kg)		 부형제 용량
(mg/kg)		 부형제 중량비
(담즙산:PG)
Vehicle 무처리군 - 68 34 102 2:1 -
1 대조군 5.8 68 34 102 2:1 1:17.6
2 접합체 65 6.0 68 34 102 2:1 1:17
3 접합체 66 6.7 68 34 102 2:1 1:15.2
(PG: Propyl gallate, sCDC: Sodium chenodeoxycholate)
제형 실시예 5. 접합체(33, 36, 39, 42, 61 내지 64), 담즙산 1종(소디움 케노디옥시콜레이트(sodium chenodeoxycholate)과 프로필 갈레이트를 함유하는 제형의 제조 및 제형 내 생리활성 물질의 체중감소 및 사료섭취량 감소효과
상기 실시예에 따라 제조된 비오틴 모이어티, 지방산 모이어티 또는 이의 조합과 결합된 생리활성 물질을 표 13에 나타낸 부형제의 조성으로 해당 vehicle(0.02% polysorbate 80 in 10 mM PBS (pH 7.4))에 녹여 제형화 했으며, 마우스에 경구 투여 후, 24시간 동안의 체중감소 및 사료 섭취량을 측정하였다. 측정 결과는 표 14 및 도 4에 나타난 바와 같다.
구분 시험물질 부형제 중량비
(생리활성 물질:부형제)
시험물질 투여
용량
(mg/kg)		 sCDC
(mg/kg)		 PG
(mg/kg)		 부형제 용량
(mg/kg)		 부형제 중량비
(담즙산:PG)
Vehicle - - 68 34 102 2:1 -
1 폴리펩티드 서열번호 24 3.9 68 34 102 2:1 1:25.8
2 접합체 33 4.2 68 34 102 2:1 1:24.4
3 접합체 61 4.9 68 34 102 2:1 1:20.9
4 폴리펩티드 서열번호 26 4.0 68 34 102 2:1 1:25.7
5 접합체 36 4.2 68 34 102 2:1 1:24.3
6 접합체 62 4.9 68 34 102 2:1 1:20.8
7 폴리펩티드 서열번호 28 4.0 68 34 102 2:1 1:25.6
8 접합체 39 4.2 68 34 102 2:1 1:24.2
9 접합체 63 4.9 68 34 102 2:1 1:20.7
10 폴리펩티드 서열번호 30 4.0 68 34 102 2:1 1:25.6
11 접합체 42 4.2 68 34 102 2:1 1:24.2
12 접합체 64 4.9 68 34 102 2:1 1:20.7
(PG: Propyl gallate, sCDC: Sodium chenodeoxycholate)
구분 무처리군 대비 체중 감량(%)
폴리펩티드서열번호 24 -2.63±1.06
폴리펩티드서열번호 26 -3.13±1.05
폴리펩티드서열번호 28 -1.11±0.84
폴리펩티드서열번호 30 -1.17±0.76
접합체 33 -4.07±1.30
접합체 36 -4.53±0.86
접합체 39 -1.99±0.94
접합체 42 -2.60±0.62
접합체 61 -2.96±4.22
접합체 62 -3.32±1.31
접합체 63 -2.41±0.78
접합체 64 -3.38±1.26
Figure pat00071
제형 실시예 6. 접합체 3, 담즙산 1종 및 프로필 갈레이트 를 함유하는 제형의 제조 및 제형 내 생리활성 물질의 장내 흡수율 측정
비오틴 모이어티와 결합된 생리활성 물질인 접합체 3을 표 15에 나타낸 부형제의 조성으로 해당 vehicle(saline 또는 0.5% CMC in saline)에 녹여 제형화 했으며, 실험용 쥐 (SD rat)의 십이지장에 투여 후, 약학적 거동을 비교하였다. 결과는 하기 표 15에 나타난 바와 같다.
시험물질 부형제 중량비
(생리활성물질:
부형제)		 BA (%)
시험물질 투여용량
(mg/kg)		 담즙산 PG
(mg/kg)		 부형제 용량
(mg/kg)		 부형제 중량비
(담즙산:PG)
종류 투여량
(mg/kg)
접합체 3 0.55 sCDC 17 0 17 - 1:30.9 1.0
0.55 sCDC 34 0 34 - 1:61.8 1.7
0.55 sCDC 68 0 68 - 1:123.6 0.4
0.55 sCDC 17 8.5 25.5 2:1 1:46.4 3.4
0.55 sCDC 34 17 51 2:1 1:92.7 7.1
0.55 sCDC 68 34 102 2:1 1:185.5 7.8
0.55 sDC 16 0 16 - 1:29.1 0.1
0.55 sDC 32 0 32 - 1:58.2 0.2
0.55 sDC 65 0 65 - 1:118.2 0.3
0.55 sDC 16 8.5 24.5 1.9:1 1:44.5 7.8
0.55 sDC 32 17 49 1.9:1 1:89.1 13.1
0.55 sDC 65 34 99 1.9:1 1:180 16.3
0.55 sCA 35 0 35 - 1:63.6 0.1
0.55 sCA 71 0 71 - 1:129.1 0.5
0.55 sCA 18 8.5 26.5 2.1:1 1:48.2 1.0
0.55 sCA 35 17 52 2.1:1 1:94.5 3.1
0.55 sCA 71 34 105 2.1:1 1:190.9 12.4
0.55 sUDC 17 0 17 - 1:30.9 0.1
0.55 sUDC 34 0 34 - 1:61.8 0.2
0.55 sUDC 68 0 68 - 1:123.6 0.7
0.55 sUDC 17 8.5 25.5 2:1 1:46.4 0.3
0.55 sUDC 34 17 51 2:1 1:92.7 3.9
0.55 sUDC 68 34 102 2:1 1:185.5 6.9
0.55 sGC 21 0 21 - 1:38.2 0.1
0.55 sGC 42 0 42 - 1:76.4 0.1
0.55 sGC 83 0 83 - 1:150.9 0.2
0.55 sGC 21 8.5 29.5 2.5:1 1:53.6 0.1
0.55 sGC 42 17 59 2.5:1 1:107.3 0.3
0.55 sGC 83 34 117 2.4:1 1:212.7 4.4
0.55 sTC 22 0 22 - 1:40 0.4
0.55 sTC 44 0 44 - 1:80 0.1
0.55 sTC 88 0 88 - 1:160 0.8
0.55 sTC 44 17 61 2.6:1 1:110.9 1.5
0.55 sTC 88 34 122 2.6:1 1:221.8 0.9
(PG: Propyl gallate, sCDC: Sodium chenodeoxycholate, sDC: Sodium deoxycholate, sCA: Sodium cholate, sUDC: Sodium ursodeoxycholate, sGC: Sodium glycocholate hydrate, sTC: Sodium taurocholate
제형 실시예 7. 접합체(14, 16, 17, 18, 19), 담즙산 1종(소디움 케노디옥시콜레이트(sodium chenodeoxycholate))과 프로필 갈레이트를 함유하는 제형의 제조 및 제형 내 생리활성 물질의 장내 흡수율 측정
상기 실시예에 따라 제조된 비오틴 모이어티, 지방산 모이어티 또는 이의 조합과 결합된 생리활성 물질을 표 16에 나타낸 부형제의 조성으로 해당 vehicle(0.02% polysorbate 80 in saline)에 녹여 제형화 했으며, 실험용 쥐 (SD rat)의 십이지장에 투여 후, 약학적 거동을 비교하였다. 결과는 하기 표 16에 나타난 바와 같다.
시험물질 부형제 중량비
(생리활성 물질:부형제)		 AUClast
(hr*ng/mL)		 BA (%)
시험
물질		 투여
용량
(mg/kg)		 sCDC
(mg/kg)		 PG
(mg/kg)		 부형제 용량
(mg/kg)		 부형제 중량비
(sCDC:PG)
접합체 14 1.7 68 34 102 2:1 1:60 196.0
± 50		 -
접합체 16 1.9 68 34 102 2:1 1:53.7 12976.4 ± 7009 17.4
접합체 17 1.7 68 34 102 2:1 1:60 15506.1 ± 3709 5.2
접합체 18 1.9 68 34 102 2:1 1:53.7 6383.1 ± 1593 -
접합체 19 1.9 68 34 102 2:1 1:53.7 1273.4 ± 368 -
(PG: Propyl gallate, sCDC: Sodium chenodeoxycholate)
제형 실시예 8. 접합체 17, 담즙산 1종(소디움 케노디옥시콜레이트(sodium chenodeoxycholate))과 프로필 갈레이트를 함유하는 제형의 제조 및 제형 내 생리활성 물질의 장내 흡수율 측정
상기 실시예에 따라 제조된 비오틴 모이어티, 지방산 모이어티 또는 이의 조합과 결합된 생리활성 물질을 표 17에 나타낸 부형제의 조성으로 vehicle에 녹여 제형화했으며, 이 때 vehicle은 polysorbate80, propylene glycol, CMC, 식염수 또는 인산염 완충액을 적절히 혼합하여 제형화 하였다. 상기 제형을 실험용 쥐 (SD rat)의 십이지장에 투여 후, 약학적 거동을 비교하였다. 결과는 하기 표 17에 나타난 바와 같다.
시험물질 부형제 중량비
(생리활성 물질:부형제)		 BA (%)
시험물질 투여용량
(mg/kg)		 담즙산 PG
(mg/kg)		 부형제 용량
(mg/kg)		 부형제 중량비
(담즙산:PG)
종류 투여량
(mg/kg)
접합체 17 1.7 sCDC 34 - 34 　 1:20 0.9
1.7 sCDC 68 - 68 - 1:40 0.4
1.7 sUDC 68 - 68 - 1:40 0.8
1.7 sUDC 102 - 102 - 1:60 1.1
1.7 sCDC+sUDC 34+68 - 102 - 1:60 2.3
1.7 sCDC
+sUDC		 34+102 - 136 - 1:80 2.0
1.7 - - 68 68 - 1:40 0.6
1.7 sCDC 17 34 51 1:2 1:30 10.6
1.7 sCDC 17 68 85 1:4 1:50 2.4
1.7 sCDC 34 68 102 1:2 1:60 6.3
1.7 sCDC 34 68 102 1:2 1:60 4.0
1.7 sCDC 68 34 102 2:1 1:60 5.2
1.7 sUDC 34 34 68 1:1 1:40 7.0
1.7 sUDC 34 68 102 1:2 1:60 4.1
1.7 sUDC 68 17 85 4:1 1:50 6.3
1.7 sDC 17 34 51 1:2 1:30 2.9
1.7 sDC 34 68 102 1:2 1:60 6.4
1.7 sDC 68 34 102 2:1 1:60 3.9
1.7 sCDC+sUDC 34+68 17 119 6:1 1:70 3.2
1.7 sCDC+sUDC 34+68 34 136 3:1 1:80 5.9
1.7 sCDC
+sUDC		 34+68 68 170 1.5:1 1:100 7.4
(PG: Propyl gallate, sCDC: Sodium chenodeoxycholate, sDC: Sodium deoxycholate, sUDC: Sodium ursodeoxycholate)
제형 실시예 9. 접합체 67, 담즙산 1종(소디움 케노디옥시콜레이트(sodium chenodeoxycholate))과 프로필 갈레이트를 함유하는 제형의 제조 및 제형 내 생리활성 물질의 장내 흡수율 측정
비오틴 모이어티와 결합된 생리활성 물질인 접합체 67을 표 18에 나타낸 부형제의 조성으로 해당 vehicle(0.02% polysorbate 80 in 10 mM PBS (pH7.4))에 녹여 제형화 했으며, 실험용 쥐 (SD rat)의 십이지장에 투여 후, Tmax에서 생리활성 물질의 농도를 측정하였으며 이를 Cmax로 정리하였다. 해당 결과는 비오틴 모이어티가 결합되지 않은 생리활성 물질인 서열번호 6을 동일한 제형으로 투여하여 얻은 결과와 비교하였으며, 하기 표 18에 나타난 바와 같다.
시험물질 부형제 중량비
(생리활성 물질:부형제)		 Cmax (ng/mL)
시험물질 투여용량
(mg/kg)		 sCDC
(mg/kg)		 PG
(mg/kg)		 부형제 용량
(mg/kg)		 부형제 중량비
폴리펩티드 서열번호 6 5.4 68 34 102 2:1 1:18.9 30.0
접합체 67 6.2 68 34 102 2:1 1:16.4 198.1
(PG: Propyl gallate, sCDC: Sodium chenodeoxycholate)
제형 실시예 10. 접합체 52, 담즙산 1종과 프로필 갈레이트를 함유하는 고형제제의 제조 및 경구 흡수율 측정
비오틴 모이어티와 결합된 생리활성 물질인 접합체 52를 표 19에 나타낸 부형제의 조성으로 고형제를 제조하였으며, 비글견 (Beagle Dog)에 경구투여 후, 약동학적 거동을 비교하였다.
고형제는 생리활성 물질과 담즙산, 프로필 갈레이트(propyl gallate) 그리고 고형제를 생산하기 위하여 사용되는 일반적인 부형제(Mannitol, Crosspovidone, Stearate, 등)를 혼합하고 건식과립법을 이용하여 과립으로 제조한 뒤 타정기를 이용하여 정제로 제조하였으며, 이후 코팅기를 이용하여 장용코팅을 진행하였다. 정제는 결합제 및 붕해제의 양을 조절하여 속방정과 서방정으로 제조되었으며, 속방정은 용출 조건 (pH 6.8, 50 rpm, 37C)에서 60분 안에 생리활성 물질이 80%이상 용출되었으며, 서방정은 용출 조건 (pH 6.8, 50 rpm, 37C)에서 360분 안에 생리활성 물질이 80%이상 용출되었다.
구분 시험물질 부형제 중량비
(생리활성 물질:부형제)		 BA (%) CV (%)
시험물질 용량
(mg/tab)		 담즙산 PG
(mg/kg)		 용량
(mg/tab)		 부형제 중량비
(담즙산:PG)
종류 용량
(mg/tab)
서방 접합체 52
 10 sCDC 100 200 300 1:2 1:30 0.54 186
속방 10 sCDC 100 200 300 1:2 1:30 0.92 68
서방 10 CDC 100 200 300 1:2 1:30 2.18 107
속방 10 CDC 100 200 300 1:2 1:30 4.23 84
서방 10 sCDC 100 200 500 1:1 1:50 6.81 94
sUDC 200
속방 10 sCDC 100 200 500 1:1 1:50 10.08 117
sUDC 200
서방 10 CDC 100 200 500 1:1 1:50 2.79 175
UDC 200
속방 10 CDC 100 200 500 1:1 1:50 5.21 119
UDC 200
(PG : Propylgallate, sCDC : Sodium Chenodeoxycholate, sDC : Sodium deoxycholate, sCA : Sodium cholate, sUDC : Sodium ursodeoxycholate, sGC : Sodium glycocholate, sTC : Sodium taurocholate)
제형 실시예 11. 접합체 52, 담즙산 1종(소디움 케노디옥시콜레이트(sodium chenodeoxycholate)와 프로필 갈레이트를 함유하는 제형의 제조 및 제형 내 생리활성 물질의 혈당 조절능 측정
상기 실시예에 따라 제조된 비오틴 모이어티, 지방산 모이어티 또는 이의 조합과 결합된 생리활성 물질을 표 20에 나타낸 부형제의 조성으로 해당 vehicle(0.02% polysorbate 80 in 10 mM PBS (pH 7.4))에 녹여 제형화 했으며, 마우스에 경구 투여 후, 당부하 검사를 통해 혈당 조절 효능을 측정하였다.
측정 결과는 도 5에 나타난 바와 같다. 이 때, 접합체 52을 두 가지 용량으로 담즙산 및 프로필 갈레이트가 포함되어 있지 않은 인산염 완충용액에 녹인 것을 대조군으로 사용하였으며 당부하 검사후 0분부터 120분까지의 혈당 강하효과를 비교하였다. 그 결과 도 5와 같이 대조군에 비해 담즙산 1종 및 프로필 갈레이트가 포함된 제형내의 접합체 52의 투여후 용량 의존적인 혈당저하효과를 확인하였다.
구분 시험물질 부형제 중량비
(생리활성물질:부형제)
시험물질 투여용량
(mg/kg)		 sCDC
(mg/kg)		 PG
(mg/kg)		 부형제 용량
(mg/kg)		 부형제 중량비
(담즙산:PG)
Vehicle 1 무처리군1 - - - - - -
Vehicle 2 무처리군2 - 68 34 102 2:1 -
1 대조군접합체 52 5.51 - - - - -
2 접합체 52 5.51 68 34 102 2:1 1:18.5
제형 실시예 12. 접합체 3, 담즙산 1종(소디움 케노디옥시콜레이트(sodium chenodeoxycholate))과 프로필 갈레이트를 함유하는 제형 내 생리활성 물질의 항당뇨 효력 평가
상기 실시예에 따라 제조된 비오틴 모이어티가 결합된 생리활성 물질을 표 21에 나타낸 부형제의 조성으로 vehicle에 녹여 제형화 했으며, 마우스에 8주간 일 2회 경구 투여 후, 당화혈색소 변화를 측정하였다.
측정 결과는 표 21에 나타난 바와 같다. 이 때, 접합체 3을 두 가지 제형으로 녹인 것을 시험물질로 사용하였으며 8주 투여 후 당화혈색소 검사를 진행하였다. 그 결과 표 21와 같이 라브라졸 및 폴록사머188이 포함된 제형에 비해 담즙산 1종 및 프로필 갈레이트가 포함된 제형내의 접합체 3의 당화혈색소 저하효과가 우수함을 확인하였다.
구분 시험물질 부형제 Δ당화혈색소(%)
시험
물질
 투여용량
(mg/kg)		 라브라졸
(mg/kg)		 폴록사머188
(mg/kg)		 sCDC
(mg/kg)		 PG
(mg/kg)
Vehicle 1 무처리군1 - 100 0.4 - - +2.02
Vehicle 2 무처리군2 - - - 68 34 +2.38
1 접합체3 0.55 100 0.4 - - -1.40
2 접합체3 0.55 - - 68 34 -2.22
제형 실시예 13. 접합체 3, 담즙산 1종(소디움 케노디옥시콜레이트(sodium chenodeoxycholate))과 프로필 갈레이트를 함유하는 제형 내 생리활성 물질의 장내 흡수율 측정
비오틴 모이어티와 결합된 생리활성 물질인 접합체 3을 표 22에 나타낸 부형제의 조성으로 vehicle에 녹여 제형화 했으며, 실험용 비글의 십이지장에 투여 후, 약학적 거동을 비교하였다. 결과는 표 22에 나타난 바와 같다.
시험물질 부형제 생체이용율(%)
시험물질 투여용량
(mg/kg)		 라브라졸
(mg/kg)		 폴록사머188
(mg/kg)		 sCDC
(mg/kg)		 PG
(mg/kg)
접합체3 0.25 100 0.4 - - 0.32±0.06
접합체3 0.25 - - 68 34 1.61±0.81
제형 실시예 14. 접합체 56, 담즙산 1종(소디움 케노디옥시콜레이트(sodium chenodeoxycholate)와 프로필 갈레이트를 함유하는 제형 내 생리활성 물질의 항당뇨 효력 평가
상기 실시예에 따라 제조된 비오틴 모이어티가 결합된 생리활성 물질을 표 23에 나타낸 부형제의 조성으로 vehicle에 녹여 제형화 했으며, 마우스에 3주간 일 1회 경구 투여 후, 당화혈색소 변화를 측정하였다.
측정 결과는 표 23에 나타난 바와 같다. 3주 투여 후 당화혈색소 검사를 진행한 결과 담즙산 1종 및 프로필 갈레이트가 포함된 제형내의 접합체 56를 경구투여시 당화혈색소 감소효과가 나타남을 확인하였다.
구분 시험물질 부형제 Δ당화 혈색소(%)
시험물질
 투여용량
(mg/kg)		 sCDC
(mg/kg)		 PG
(mg/kg)
Vehicle 무처리군 - 68 34 + 0.20±0.48
1 접합체56 1.343 68 34 - 0.47±0.34
2 접합체56 4.475 68 34 - 0.98±0.67
<실시예: 비오틴 모이어티와 결합된 생리활성 물질 및 부형제가 포함된 약학 제제>
각 제형의 용해도 측정
상기 실시예에 따라 제조된 비오틴 모이어티가 결합된 생리활성 물질의 제형내 용해도를 측정하였다. 접합체 3을 2.2 mg/mL의 농도로 하기 표에 있는 vehicle(saline) 혹은 부형제에 녹인 후 용액을 여과하여 용액내 접합체 3의 농도를 HPLC로 정량하였다. 하기 표 24와 같이 접합체 3의 saline에서의 용해도는 0.081 mg/mL이었으며, 하기 부형제 조합에서 접합체 3의 용해도는 12배 내지 27배 증가한 것을 알 수 있다.
시험물질 부형제 용해도
(mg/mL)
접합체 시험 농도 종류 용량
접합체 3 2.2 mg/mL - - 0.081
접합체 3 2.2 mg/mL sCDC 27 mg/mL 2.2
PG 14 mg/mL
접합체 3 2.2 mg/mL sDC 26 mg/mL 2.2
PG 13 mg/mL
접합체 3 2.2 mg/mL sCA 28 mg/mL 1.4
PG 14 mg/mL
접합체 3 2.2 mg/mL sGC 33 mg/mL 1.0
PG 17 mg/mL
접합체 3 2.2 mg/mL sTC 35 mg/mL 1.0
PG 18 mg/mL
접합체 3 2.2 mg/mL sUDC 27 mg/mL 2.2
PG 14 mg/mL
당업자는 본 명세서에 기재된 본 발명의 특정 구체예에 대한 다수의 균등물에 대해, 단지 일상적 실험을 사용하여 이를 인식하거나, 또는 확인할 수 있을 것이다. 이러한 균등물은 다음의 청구범위에 포함되는 것으로 의도된다. 전술한 본원의 설명은 예시를 위한 것이며, 본원이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 자는 본원의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다. 예를 들어, 단일형으로 설명된 각 구성 요소는 분산되어 실시될 수도 있으며, 마찬가지로 분산된 것으로 설명된 구성 요소들도 결합된 형태로 실시될 수 있다. 후술하는 특허청구범위의 의미 및 범위, 그리고 그 균등 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석될 수 있다.
<110> D&D Pharmatech <120> Oral formulation of physiological active material conjugate linked with biotin moiety, fatty acid moiety or a combination thereof <130> KP2160535-DNDP <150> KR 10-2020-0163362 <151> 2020-11-27 <160> 42 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Glucagon derivative <220> <221> VARIANT <222> (2) <223> Xaa is 2-Aminoisobutyric acid <400> 1 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 2 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> GLP-1 <400> 2 His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg 20 25 30 <210> 3 <211> 33 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> GLP-2 <400> 3 His Ala Asp Gly Ser Phe Ser Asp Glu Met Asn Thr Ile Leu Asp Asn 1 5 10 15 Leu Ala Ala Arg Asp Phe Ile Asn Trp Leu Ile Gln Thr Lys Ile Thr 20 25 30 Asp <210> 4 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Trp Lys His Asn Ile Thr Gln Cys 35 40 <210> 12 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> EXENDIN-4 derivative <400> 12 His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Cys 35 40 <210> 13 <211> 35 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> PTH derivative <400> 13 Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 1 5 10 15 Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His 20 25 30 Asn Phe Cys 35 <210> 14 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Glucagon derivative <400> 14 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Cys 20 25 30 <210> 15 <211> 21 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Insulin chain A derivative <400> 15 Gly Ile Val Glu Gln Cys Cys Thr Ser Ile Cys Ser Leu Glu Gln Leu 1 5 10 15 Glu Asn Tyr Cys Asn 20 <210> 16 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Insulin chain B <400> 16 Phe Val Asn Gln His Leu Cys Gly Ser His Leu Val Glu Ala Leu Tyr 1 5 10 15 Leu Val Cys Gly Glu Arg Gly Phe Phe Tyr Thr Pro Lys Thr 20 25 30 <210> 17 <211> 21 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Insulin chain A <400> 17 Gly Ile Val Glu Gln Cys Cys Thr Ser Ile Cys Ser Leu Tyr Gln Leu 1 5 10 15 Glu Asn Tyr Cys Asn 20 <210> 18 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Exendin-4 derivative <400> 18 His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys 35 40 <210> 19 <211> 42 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Exendin-4 derivative <400> 19 His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys Lys Lys 35 40 <210> 20 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Exendin-4 derivative <220> <221> VARIANT <222> (2) <223> X is 2-Aminoisobutyric acid <400> 20 His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys 35 40 <210> 21 <211> 42 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Exendin-4 derivative <220> <221> VARIANT <222> (2) <223> X is 2-Aminoisobutyric acid <400> 21 His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys Lys Lys 35 40 <210> 22 <211> 37 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amylin <400> 22 Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu 1 5 10 15 Val His Ser Ser Asn Asn Phe Gly Ala Ile Leu Ser Ser Thr Asn Val 20 25 30 Gly Ser Asn Thr Tyr 35 <210> 23 <211> 38 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amylin derivative <400> 23 Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu 1 5 10 15 Val His Ser Ser Asn Asn Phe Gly Ala Ile Leu Ser Ser Thr Asn Val 20 25 30 Gly Ser Asn Thr Tyr Lys 35 <210> 24 <211> 37 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amylin derivative <400> 24 Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu 1 5 10 15 Val His Ser Ser Asn Asn Phe Gly Pro Ile Leu Pro Pro Thr Asn Val 20 25 30 Gly Ser Asn Thr Tyr 35 <210> 25 <211> 38 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amylin derivative <400> 25 Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu 1 5 10 15 Val His Ser Ser Asn Asn Phe Gly Pro Ile Leu Pro Pro Thr Asn Val 20 25 30 Gly Ser Asn Thr Tyr Lys 35 <210> 26 <211> 37 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amylin derivative <400> 26 Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asp Phe Leu 1 5 10 15 Arg His Ser Ser Pro Asn Phe Gly Ala Ile Pro Ser Ser Thr Asn Val 20 25 30 Gly Ser Arg Thr Tyr 35 <210> 27 <211> 38 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amylin derivative <400> 27 Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asp Phe Leu 1 5 10 15 Arg His Ser Ser Pro Asn Phe Gly Ala Ile Pro Ser Ser Thr Asn Val 20 25 30 Gly Ser Arg Thr Tyr Lys 35 <210> 28 <211> 37 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amylin derivative <400> 28 Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asp Phe Leu 1 5 10 15 Arg His Ser Ser Asn Asn Phe Gly Ala Ile Pro Ser Ser Thr Asn Val 20 25 30 Gly Ser Arg Thr Tyr 35 <210> 29 <211> 38 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amylin derivative <400> 29 Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asp Phe Leu 1 5 10 15 Arg His Ser Ser Asn Asn Phe Gly Ala Ile Pro Ser Ser Thr Asn Val 20 25 30 Gly Ser Arg Thr Tyr Lys 35 <210> 30 <211> 37 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amylin derivative <400> 30 Arg Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asp Phe Leu 1 5 10 15 Arg His Ser Ser Asn Asn Phe Gly Ala Ile Pro Ser Ser Thr Asn Val 20 25 30 Gly Ser Lys Thr Tyr 35 <210> 31 <211> 38 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amylin derivative <400> 31 Arg Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asp Phe Leu 1 5 10 15 Arg His Ser Ser Asn Asn Phe Gly Ala Ile Pro Ser Ser Thr Asn Val 20 25 30 Gly Ser Lys Thr Tyr Lys 35 <210> 32 <211> 39 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Exendin-4 derivative <220> <221> VARIANT <222> (2) <223> X is 2-Aminoisobutyric acid <400> 32 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Arg Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Leu Asp Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35 <210> 33 <211> 39 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Exendin-4 derivative <220> <221> VARIANT <222> (2) <223> X is 2-Aminoisobutyric acid <400> 33 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Arg Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asp Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35 <210> 34 <211> 39 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Exendin-4 derivative <220> <221> VARIANT <222> (2) <223> X is 2-Aminoisobutyric acid <400> 34 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Lys 1 5 10 15 Ile Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Ile Asp Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35 <210> 35 <211> 39 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Exendin-4 derivative <220> <221> VARIANT <222> (2) <223> X is 2-Aminoisobutyric acid <400> 35 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Trp Tyr Leu Asp Lys 1 5 10 15 Ile Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Leu Gly Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35 <210> 36 <211> 39 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Exendin-4 derivative <220> <221> VARIANT <222> (2) <223> X is 2-Aminoisobutyric acid <400> 36 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Trp Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Arg Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Gly Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35 <210> 37 <211> 39 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Exendin-4 derivative <220> <221> VARIANT <222> (2) <223> X is 2-Aminoisobutyric acid <400> 37 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Trp Leu Asp Lys 1 5 10 15 Ile Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Ile Gly Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35 <210> 38 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Exendin-4 derivative <220> <221> VARIANT <222> (2) <223> X is 2-Aminoisobutyric acid <400> 38 His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Cys 35 40 <210> 39 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Exendin-4 derivative <220> <221> VARIANT <222> (2) <223> X is 2-Aminoisobutyric acid <220> <221> VARIANT <222> (1) <223> H1 is Des-amino-His <400> 39 His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Cys 35 40 <210> 40 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Glucagon derivative <220> <221> VARIANT <222> (2) <223> X is 2-Aminoisobutyric acid <400> 40 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Lys 20 25 30 <210> 41 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Glucagon derivative <220> <221> VARIANT <222> (2) <223> X is 2-Aminoisobutyric acid <400> 41 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Lys Arg Ala Lys Glu Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Cys 20 25 30 <210> 42 <211> 192 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Human growth hormone derivative <400> 42 Met Phe Pro Thr Ile Pro Leu Ser Arg Leu Phe Asp Asn Ala Met Leu 1 5 10 15 Arg Ala His Arg Leu His Gln Leu Ala Phe Asp Thr Tyr Gln Glu Phe 20 25 30 Glu Glu Ala Tyr Ile Pro Lys Glu Gln Lys Ile Ser Phe Leu Gln Asn 35 40 45 Pro Gln Thr Ser Leu Cys Phe Ser Glu Ser Ile Pro Thr Pro Ser Asn 50 55 60 Arg Glu Glu Thr Gln Gln Lys Ser Asn Leu Glu Leu Leu Arg Ile Ser 65 70 75 80 Leu Leu Leu Ile Gln Ser Trp Leu Glu Pro Val Gln Phe Leu Arg Ser 85 90 95 Val Phe Ala Asn Ser Leu Val Tyr Gly Ala Ser Asp Ser Asn Val Tyr 100 105 110 Asp Leu Leu Lys Asp Leu Glu Glu Gly Ile Gln Thr Leu Met Gly Arg 115 120 125 Leu Glu Asp Gly Ser Pro Arg Thr Gly Gln Ile Phe Lys Gln Thr Tyr 130 135 140 Ser Lys Phe Asp Thr Asn Ser His Asn Asp Asp Ala Leu Leu Lys Asn 145 150 155 160 Tyr Gly Leu Leu Tyr Cys Phe Arg Lys Asp Met Asp Lys Val Glu Thr 165 170 175 Phe Leu Arg Ile Val Gln Cys Arg Ser Val Glu Gly Ser Cys Gly Phe 180 185 190

Claims (27)

  1. (i) 비오틴 모이어티, 지방산 모이어티 또는 이의 조합이 결합된 생리활성 물질 접합체, 및 (ii) 부형제를 포함하는, 경구용 약학 제제.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 (i) 비오틴 모이어티, 지방산 모이어티 또는 이의 조합과 결합된 생리활성 물질 접합체에서,
    생리활성 물질은, 글루카곤(Glugacon), GLP-1(Glucagon-like peptide-1), GLP-2(Glucagon-like peptide-2), GIP(glucose-dependent insulinotropic polypeptide), 엑센딘-4(exendin-4), 인슐린, 부갑상선 호르몬, 인터페론, 에리트로포이에틴, 칼시토닌, 아밀린, 세로토닌, 리툭시맙, 트라스트주맙, 우리카제, 조직 플라스미노겐 활성화제, 티모글로빈, 백신, 헤파린 또는 헤파린 유사체, 안티트롬빈 III, 필그라스팀, 프라믈린티드(pramlintide) 아세테이트, 엑세나티드, 에프티피바티드(eptifibatide), 안티베닌(antivenin), IgG, IgM, HGH, 티록신, 혈액 응고 인자 VII 및 VIII, 치료제로서 작용하는 당지질, 및 이들의 유도체로 이루어진 군에서 선택되는 것인, 경구용 약학 제제.
  3. 제1항에 있어서,
    상기 (i) 비오틴 모이어티, 지방산 모이어티 또는 이의 조합과 결합된 생리활성 물질 접합체에서, 생리활성 물질은 서열번호 1 내지 서열번호 14 및 서열번호 18 내지 42로 표시되는 아미노산 서열 또는 이의 유도체로 이루어진 폴리펩티드로 이루어진 군으로부터 선택된 1종인, 경구용 약학 제제.
  4. 제1항에 있어서,
    상기 (i) 비오틴 모이어티, 지방산 모이어티 또는 이의 조합과 결합된 생리활성 물질 접합체에서, 서열번호 15 및 서열번호 16으로 표시되는 아미노산 서열로 이루어진 폴리펩티드 또는 이의 유도체; 또는 서열번호 17 및 서열번호 16으로 표시되는 아미노산 서열로 이루어진 폴리펩티드 또는 이의 유도체인, 경구용 약학 제제.
  5. 제1항에 있어서,
    상기 (i) 비오틴 모이어티, 지방산 모이어티 또는 이의 조합과 결합된 생리활성 물질에서,
    비오틴 모이어티는 하기 일반식 A로 표시되는 것인, 경구용 약학 제제:
    [일반식 A]
    Figure pat00072

    상기 일반식 A에서,
    X는 상기 생리활성 물질과 결합할 수 있는 작용기이고,
    Y는 스페이서이며,
    Z는 바인딩 유닛이고,
    B는 하기 화학식 A-1로 표시되며,
    [화학식 A-1]
    Figure pat00073

    Z는 화학식 A-1의
    Figure pat00074
    와 연결되고,
    T는 말단기이며,
    m은 1 내지 10의 정수이고,
    n은 0 또는 1 내지 10의 정수이며, n=0인 경우 Y는 B 또는 T에 직접결합하고,
    p는 0 또는 1의 정수이다.
  6. 제5항에 있어서,
    상기 X는 말레이미드, 석신이미드, N-하이드록시석신이미드, 석신이미딜 석시네이트, 석신이미딜 글루타레이트, 석신이미딜 메틸에스터, 석신이미딜 펜틸에스터, 석신이미딜 카보네이트, p-니트로페닐카보네이트, 알데하이드, 아민, 티올, 옥시아민, 아이오도아세트아마이드, 아미녹실, 하이드라지드, 하이드록시, 프로피오네이트, 피리딜, 알킬할라이드, 비닐술폰, 카복실, 하이드라지드, 할로겐 아세트아마이드, C2-5 알키닐, C6-20 아릴디설파이드, C5-20 헤테로아릴디설파이드, 이소시아네이트, 티오에스테르, 이미노에스테르, 및 이의 유도체로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 것인, 경구용 약학 제제.
  7. 제5항에 있어서,
    상기 Y는 부재하거나 치환되거나 비치환된 선형 또는 분지형 C1-50 알킬렌, 치환되거나 비치환된 선형 또는 분지형 C1-50 헤테로알킬렌, 치환되거나 비치환된 C6-50 아릴렌, 또는 치환되거나 비치환된 C6-50 헤테로아릴렌이며,
    치환된 경우 =O, -C(O)NH2, -OH, -COOH, -SH, =NH 및 -NH2로 구성된 그룹으로부터 선택된 하나 이상을 포함하는 것인, 경구용 약학 제제.
  8. 제5항에 있어서,
    상기 Y는 -C(O)-(OCH2CH2)u-NH-를 반복단위로 포함하고, 여기에서 u은 1 내지 20의 정수인, 경구용 약학 제제.
  9. 제5항에 있어서,
    상기 Y는 글루탐산(glutamic acid), 글루타민(glutamine), 글리신(glycine), 이소류신(isoleucine), 또는 리신(Lysine)을 구성 일부로 포함하는, 경구용 약학 제제.
  10. 제5항에 있어서,
    상기 Z는 하기 중 어느 하나이고 각각 독립적으로 선택되는 것인, 경구용 약학 제제:
    A) X와 함께 또는 X와 별도로, 아미노산 또는 이의 유도체를 형성하거나;
    B) 치환되거나 비치환된 선형 또는 분지형 C1-50 헤테로알킬렌이며,
    여기에서 치환된 경우, =O, -C(O)NH2, -OH, -COOH, -SH, =NH 및 -NH2로 구성된 그룹으로부터 선택된 하나 이상을 포함한다.
  11. 제5항에 있어서,
    상기 T는 아민, C1-8 알킬, C1-8 알케닐, 할로, 하이드록시, 티올, 설폰산, 카르복실, 페닐, 벤질, 알데하이드, 아자이드, 사이아네이트, 아이소사이아네이트, 티오사이아네이트, 아이소티오사이아네이트, 나이트릴 및 포스폰산으로 구성된 그룹으로부터 선택되는 것인, 경구용 약학 제제.
  12. 제1항에 있어서,
    상기 (i) 비오틴 모이어티, 지방산 모이어티 또는 이의 조합과 결합된 생리활성 물질에서,
    비오틴 모이어티는,
    Figure pat00075
    ,
    Figure pat00076
    ,
    Figure pat00077
    ,
    Figure pat00078
    ,
    Figure pat00079
    ,
    Figure pat00080
    ,
    Figure pat00081
    ,
    Figure pat00082
    ,
    Figure pat00083
    ,
    Figure pat00084
    ,
    Figure pat00085
    ,
    Figure pat00086
    ,
    Figure pat00087
    ,
    Figure pat00088
    ,
    Figure pat00089
    ,
    Figure pat00090
    및
    Figure pat00091

    로 구성된 그룹으로부터 선택된 것인, 경구용 약학 제제.
  13. 제1항에 있어서,
    상기 (i) 비오틴 모이어티, 지방산 모이어티 또는 이의 조합과 결합된 생리활성 물질에서,
    지방산 모이어티는 하기 일반식 B로 표시되는 것인, 경구용 약학 제제:
    [일반식 B]
    X'-Y'-W
    상기 식에서,
    X'은 상기 생리활성 물질과 결합할 수 있는 작용기이고,
    Y’은 스페이서이며,
    W는 지방산이다.
  14. 제13항에 있어서,
    상기 X'은 말레이미드, 석신이미드, N-하이드록시석신이미드, 석신이미딜 석시네이트, 석신이미딜 글루타레이트, 석신이미딜 메틸에스터, 석신이미딜 펜틸에스터, 석신이미딜 카보네이트, p-니트로페닐카보네이트, 알데하이드, 아민, 티올, 옥시아민, 아이오도아세트아마이드, 아미녹실, 하이드라지드, 하이드록시, 프로피오네이트, 피리딜, 알킬할라이드, 비닐술폰, 카복실, 하이드라지드, 할로겐 아세트아마이드, C2-5 알키닐, C6-20 아릴디설파이드, C5-20 헤테로아릴디설파이드, 이소시아네이트, 티오에스테르, 이미노에스테르, 테트라플루오로페닐 에스테르, 니트로페닐 카보네이트, 니트로페닐 및 이의 유도체로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 것인, 경구용 약학 제제.
  15. 제13항에 있어서,
    상기 Y'는 직접결합에 해당하거나, Y의 구조 내에 치환 또는 비치환된 C1-50 선형 알킬렌, 치환 또는 비치환된 C1-50 비선형 알킬렌, 치환 또는 비치환된 C1-50 선형 헤테로알킬렌, 치환 또는 비치환된 C1-50 비선형 헤테로알킬렌, 치환 또는 비치환된 C1-50 아릴렌, 치환 또는 비치환된 C1-50 헤테로아릴렌, -O-, -C(O), -C(O)NR-, -C(O)O-, -S-, -NR- 또는 -NOR-로 구성된 그룹으로부터 하나 이상을 포함하고, 여기에서 R은 수소, 치환 또는 비치환된 C1-50 알킬, 치환 또는 비치환된 C1-50 아릴, 또는 에틸렌글리콜 반복단위(-(CH2CH2O)n-, n은 1 이상 20이하의 정수)인, 생리활성 물질 접합체.
  16. 제13항에 있어서,
    상기 Y'는 -C(O)-(OCH2CH2)u-NH-를 반복단위로 포함하고, 여기에서 u은 1 내지 20의 정수인, 생리활성 물질 접합체.
  17. 제13항에 있어서,
    상기 Y'는 글루탐산(glutamic acid), 글루타민(glutamine), 글리신(glycine), 이소류신(isoleucine), 또는 리신(Lysine)을 구성 일부로 포함하는, 생리활성 물질 접합체.
  18. 제1항에 있어서,
    상기 (i) 비오틴 모이어티, 지방산 모이어티 또는 이의 조합과 결합된 생리활성 물질에서,
    지방산 모이어티는
    Figure pat00092
    ,
    Figure pat00093
    ,
    Figure pat00094
    ,
    Figure pat00095
    ,
    Figure pat00096
    ,
    Figure pat00097
    ,
    Figure pat00098
    ,
    Figure pat00099
    ,
    Figure pat00100
    ,
    Figure pat00101
    ,
    Figure pat00102
    ,
    Figure pat00103
    ,
    Figure pat00104
    ,
    Figure pat00105
    ,
    Figure pat00106
    및
    Figure pat00107
    로 구성된 그룹으로부터 선택된 것인, 경구용 약학 제제.
  19. 제1항에 있어서,
    상기 부형제는 담즙산, 이의 유도체, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 것인, 경구용 약학 제제.
  20. 제19항에 있어서,
    상기 담즙산은 글리코콜산(glycocholic acid), 글리코케노디옥시콜산(glycochenodeoxycholic acid), 타우로케노디옥시콜산 (taurochenodeoxycholic acid), 타우로콜산(taurocholic acid), 디옥시콜산(deoxycholic acid), 콜산(cholic acid), 케노디옥시콜산(chenodeoxycholic acid), 우르소디옥시콜산(ursodeoxycholic acid) 및 리토콜산(lithocholic acid)으로 구성된 군으로부터 선택된 1종 이상인, 경구용 약학 제제.
  21. 제19항에 있어서,
    상기 담즙산은 케노디옥시콜산, 디옥시콜산, 콜산, 글리코콜산, 타우로콜산 및 우르소디옥시콜산으로 구성된 군으로부터 선택된 1종인, 경구용 약학 제제.
  22. 제19항에 있어서,
    상기 부형제는 알파-토코페롤, 말산, 푸마르산, 아스코르브산, 부틸화 하이드록시아니솔, 부틸화 하이드록시 톨루엔, 소듐 포스페이트, 칼슘 포스페이트, 포타슘 포스페이트, 갈락토스, 글루코스, 말토오스, 갈릭산, 프로필 갈레이트 및 이의 약학적으로 허용가능한 염으로 구성된 군으로부터 선택된 1종 이상을 더 포함하는 것인, 경구용 약학 제제.
  23. 제19항에 있어서,
    상기 부형제는 프로필 갈레이트 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 더 포함하는 것인, 경구용 약학 제제
  24. 제1항에 있어서,
    상기 (i) 비오틴 모이어티, 지방산 모이어티 또는 이의 조합과 결합된 생리활성 물질 및 (ii) 부형제의 중량비는 1 : 0.01 내지 1000인, 경구용 약학 제제.
  25. 제1항에 있어서,
    상기 (i) 비오틴 모이어티, 지방산 모이어티 또는 이의 조합과 결합된 생리활성 물질 및 (ii) 부형제의 중량비는 1 : 0.1 내지 500인, 경구용 약학 제제.
  26. 제1항에 있어서,
    상기 부형제는 담즙산, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염과 프로필 갈레이트 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하고,
    담즙산 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염과 프로필 갈레이트 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 중량비는 1 : 0.01 내지 8인, 경구용 약학 제제.
  27. 제1항에 있어서,
    상기 부형제는 담즙산, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염과 프로필 갈레이트 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하고,
    담즙산 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 1 내지 1000 mg이며
    프로필 갈레이트 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 1 내지 1000 mg인, 경구용 약학 제제.
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