JPH0671425B2 - ウリカ−ゼおよびその製造法 - Google Patents
ウリカ−ゼおよびその製造法Info
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- JPH0671425B2 JPH0671425B2 JP60120399A JP12039985A JPH0671425B2 JP H0671425 B2 JPH0671425 B2 JP H0671425B2 JP 60120399 A JP60120399 A JP 60120399A JP 12039985 A JP12039985 A JP 12039985A JP H0671425 B2 JPH0671425 B2 JP H0671425B2
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- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
- C12N9/0012—Oxidoreductases (1.) acting on nitrogen containing compounds as donors (1.4, 1.5, 1.6, 1.7)
- C12N9/0044—Oxidoreductases (1.) acting on nitrogen containing compounds as donors (1.4, 1.5, 1.6, 1.7) acting on other nitrogen compounds as donors (1.7)
- C12N9/0046—Oxidoreductases (1.) acting on nitrogen containing compounds as donors (1.4, 1.5, 1.6, 1.7) acting on other nitrogen compounds as donors (1.7) with oxygen as acceptor (1.7.3)
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- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
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- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
- Y10S435/832—Bacillus
Description
【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は新規ウリカーゼおよびその製造法に関する。ウ
リカーゼは尿酸の定量に使用されるが、本発明ではこの
用途に極めて適した性質を有するウリカーゼを好熱性微
生物を用いて製造する。
リカーゼは尿酸の定量に使用されるが、本発明ではこの
用途に極めて適した性質を有するウリカーゼを好熱性微
生物を用いて製造する。
ウリカーゼ（EC1.7.3.3）は動物の肝臓，腎臓やある種
の微生物に存在し、酸素の存在下で尿酸を酸化する酵素
であり、広く臨床検査の際に尿酸定量のために使用され
ている。
の微生物に存在し、酸素の存在下で尿酸を酸化する酵素
であり、広く臨床検査の際に尿酸定量のために使用され
ている。
ウリカーゼの微生物による生産は広く行われている（特
開昭55−81586,同56−124381,特公昭56−43230など）
が、使用される微生物はいずれも中温菌であり、培養期
間は１日から３日以上と長期間を要する。
開昭55−81586,同56−124381,特公昭56−43230など）
が、使用される微生物はいずれも中温菌であり、培養期
間は１日から３日以上と長期間を要する。
ところで、好熱性微生物は代謝および増殖が早いため、
培養時間を短縮できる可能性があるが、これまでは好熱
性微生物によるウリカーゼの生産は報告されていない。
しかし、ウリカーゼの給源として好熱性微生物を利用で
きれば、生産される酵素が安定性にすぐれていることが
期待できる。
培養時間を短縮できる可能性があるが、これまでは好熱
性微生物によるウリカーゼの生産は報告されていない。
しかし、ウリカーゼの給源として好熱性微生物を利用で
きれば、生産される酵素が安定性にすぐれていることが
期待できる。
一方、ウルカーゼの活性特性に着目すると、後述するよ
うに、臨床検査の際、共役的に使用するパーオキシダー
ゼの活性がpH6.5付近で最大であることから、このpH域
で活性の強いウリカーゼが酵素使用量の低減という立場
から望ましいが、従来広く用いられてきたウリカーゼは
至適pHが8.5〜9.0に存在し、pH6.5における活性が０％
（特公昭56−43230）から40％未満（Agric.Biol.Chem.4
4，（12）,2811（1980）等）と著しく低いものであつ
た。
うに、臨床検査の際、共役的に使用するパーオキシダー
ゼの活性がpH6.5付近で最大であることから、このpH域
で活性の強いウリカーゼが酵素使用量の低減という立場
から望ましいが、従来広く用いられてきたウリカーゼは
至適pHが8.5〜9.0に存在し、pH6.5における活性が０％
（特公昭56−43230）から40％未満（Agric.Biol.Chem.4
4，（12）,2811（1980）等）と著しく低いものであつ
た。
本発明者らは、上記の状況に鑑み、多くの土壌より好熱
性微生物を分離し、広い作用pH域を有するウリカーゼを
生産する菌株の検索を行なつた。その結果、好熱性バチ
ルス属に属する微生物、バチルス・エスピー（Bacillus
sp.）TB-90（以下、TB-90菌と称する。）が目的するウ
リカーゼを生産することを見出し、かかる知見に基いて
本発明を完成した。
性微生物を分離し、広い作用pH域を有するウリカーゼを
生産する菌株の検索を行なつた。その結果、好熱性バチ
ルス属に属する微生物、バチルス・エスピー（Bacillus
sp.）TB-90（以下、TB-90菌と称する。）が目的するウ
リカーゼを生産することを見出し、かかる知見に基いて
本発明を完成した。
すなわち本発明は、下記の特性を有するウリカーゼを提
供するものである。
供するものである。
作用 次の反応を触媒する。
至適温度 45〜50℃ 至適pHにおける最大活性の60％以上の活性を示す作用
pH ５〜10 pH安定性 ５〜９ さらに、本発明発明はバチルス属に属し、上記の特性を
有するウリカーゼ生産能を有する好熱性微生物を栄養培
地に培養し、培養物中に当該ウリカーゼを生成せしめ、
これを採取することを特徴とするウリカーゼの製造法を
提供するものである。
pH ５〜10 pH安定性 ５〜９ さらに、本発明発明はバチルス属に属し、上記の特性を
有するウリカーゼ生産能を有する好熱性微生物を栄養培
地に培養し、培養物中に当該ウリカーゼを生成せしめ、
これを採取することを特徴とするウリカーゼの製造法を
提供するものである。
本発明に用いるウリカーゼ生産菌としてはバチルス属に
属し、上記したウリカーゼを生産しうる好熱性微生物で
あればよい。したがつて、TB-90菌のほかに、その自然
的または人為的変異株ならびにこれら菌株の遺伝子を移
された各種生物も本発明のウリカーゼ生産能を有する限
り、本発明に使用することができる。
属し、上記したウリカーゼを生産しうる好熱性微生物で
あればよい。したがつて、TB-90菌のほかに、その自然
的または人為的変異株ならびにこれら菌株の遺伝子を移
された各種生物も本発明のウリカーゼ生産能を有する限
り、本発明に使用することができる。
次に、TB-90菌の菌学的性質を示す。なお、この菌学的
性質の検討には「微生物の分類と同定」（長谷川武治編
著、東京大学出版会）および「微生物同定法」（衛生技
術会）に記載されている方法，培地組成を用いた。
性質の検討には「微生物の分類と同定」（長谷川武治編
著、東京大学出版会）および「微生物同定法」（衛生技
術会）に記載されている方法，培地組成を用いた。
〔形態的所見〕（55℃,18時間培養） 1. 細胞の形及び大きさ：短桿状、0.5〜0.8×1.3〜２
μ 2. 多形性：なし 3. 運動性：なし 4. 胞子：円形の内生胞子を細胞中央に形成する。胞子
のうはふくれない。
μ 2. 多形性：なし 3. 運動性：なし 4. 胞子：円形の内生胞子を細胞中央に形成する。胞子
のうはふくれない。
5. グラム染色：陽性 6. 抗酸性：なし 7. カプセル：なし 8. 異染顆粒：なし 〔生育状態〕（555℃,18時間培養） 1. 肉汁寒天平板培養 形状：円形 周縁：平滑 隆起：扁平 光沢：やゝあり 表面：やゝ粗雑 色調：半透明 2. 肉汁寒天斜面培養 生育度：良好 形 状：糸状 3. 肉汁液体培養 表面生育：なし 濁 度：清澄 沈 渣：少量 着色，脱色：なし 4. 肉汁ゼラチン穿刺培養（ゼラチンは30％添加,55℃
で適時培養後、冷却して固化状態を判定） 生育良好で沈渣大量であるが、ゼラチンは液化しない。
で適時培養後、冷却して固化状態を判定） 生育良好で沈渣大量であるが、ゼラチンは液化しない。
5. 肉汁寒天穿刺培養 形状：念珠状（表面付近のみ） 表面生育：良好 6. リトマスミルク リトマス退色なく、pH不変化、ミルクの凝固，液化なし 〔生理学的性質〕（55℃,1〜２日培養） 1. 硝酸塩の還元の有無：なし 2. MRテスト：陰性 3. VPテスト：陰性 4. インドールの生成：なし 5. 硫化水素の生成：なし 6. デンプンの加水分解：あり 7. クエン酸の利用：なし 8. アンモニウム塩の利用：あり 9. 色素の生成：なし 10. オキシダーゼ活性：あり 11. カタラーゼ活性：あり 12. 生育pH:4.5〜7.5,至適pH範囲:5.0〜6.5 13. 生育温度:38〜62℃，至適生育温度範囲:50〜60℃ 14. 嫌気性培地における発育性：なし 15. サブ・デキストロース寒天培地における発育性：
良好 16. アジ化ナトリウム0.02％含有培地,55℃培養下にお
ける発育性：なし 17. リゾチーム0.001％存在下における発育性（45℃で
試験）：なし 18. フエニルアラニンの脱アミノ反応：なし 19. 塩化ナトリウムの耐性:3％では生育するが、５％
では生育しない 20. ビタミン要求性の有無：あり 21. チロジンの分解性：なし 〔炭素源の利用性〕 Ｄ−キシロース,D−グルコース,D−ガラクトース，トレ
ハロース，セロビオース，グリセリンを資化して増殖
し、酸を生成する。
良好 16. アジ化ナトリウム0.02％含有培地,55℃培養下にお
ける発育性：なし 17. リゾチーム0.001％存在下における発育性（45℃で
試験）：なし 18. フエニルアラニンの脱アミノ反応：なし 19. 塩化ナトリウムの耐性:3％では生育するが、５％
では生育しない 20. ビタミン要求性の有無：あり 21. チロジンの分解性：なし 〔炭素源の利用性〕 Ｄ−キシロース,D−グルコース,D−ガラクトース，トレ
ハロース，セロビオース，グリセリンを資化して増殖
し、酸を生成する。
アラビノース，マンノース，フラクトース，マルトー
ス，ジユークロース，ラクトース,D−ソルビトール,D−
マンニトール，デンプン,2−ケトーグルコネート，アド
ニトール，キシリトール，メチル−Ｄ−グルコシド,N−
アセチル−Ｄ−グルコサミン，メレチトース，ラフイノ
ースの利用は微弱またはなし。
ス，ジユークロース，ラクトース,D−ソルビトール,D−
マンニトール，デンプン,2−ケトーグルコネート，アド
ニトール，キシリトール，メチル−Ｄ−グルコシド,N−
アセチル−Ｄ−グルコサミン，メレチトース，ラフイノ
ースの利用は微弱またはなし。
以上の微生物の菌学適諸性質から、バージエイズ・マニ
ユアル・オブ・デタミナテイブ・バクテリオロジー（第
８版,1974年）〔Bergey's manual of Determinative Ba
cteriology 8th edition（1974）〕の分類方法に従つて
検索し、前記TB-90菌をバチルス属と同定した。次に、
公知のバチルス属の菌種と比較するとき、前記TB-90菌
はその生育温度範囲からバチルス・ステアロサーモフイ
ラス（Bacillus stearothermophilus），バチルス・コ
アギユランス（Bacillus coagulans）及びバチルス・ブ
レビス（Bacillus brevis）のいずれかと考えられる
が、TB-90菌は運動性がない点で上のいずれとも異つて
いる。更に、バチルス・ステアロサーモフイラスとはサ
ブロー・デキストロース培地で生育する点で、バチルス
・コアギユランスとは嫌気寒天培地及び0.02％アジ化ナ
トリウム存在下で生育しない点で、またバチルス・ブレ
ビスとはキシロースから酸を生成する点、VP培地でアル
カリを生産しない点、カゼイン及びチロシンを分解しな
い点でそれぞれ異なつている。更に、標準菌株バチルス
・ステアロサーモフイラスIAM 11001,11002,11003,1100
4,12043、バチルス・コアギユランスIAM1194,バチルス
・ブレビスIAM 1031（以上、東京大学応用微生物研究所
保管株）はいずれも後述の培養方法でありウリカーゼを
生産しなかつた。
ユアル・オブ・デタミナテイブ・バクテリオロジー（第
８版,1974年）〔Bergey's manual of Determinative Ba
cteriology 8th edition（1974）〕の分類方法に従つて
検索し、前記TB-90菌をバチルス属と同定した。次に、
公知のバチルス属の菌種と比較するとき、前記TB-90菌
はその生育温度範囲からバチルス・ステアロサーモフイ
ラス（Bacillus stearothermophilus），バチルス・コ
アギユランス（Bacillus coagulans）及びバチルス・ブ
レビス（Bacillus brevis）のいずれかと考えられる
が、TB-90菌は運動性がない点で上のいずれとも異つて
いる。更に、バチルス・ステアロサーモフイラスとはサ
ブロー・デキストロース培地で生育する点で、バチルス
・コアギユランスとは嫌気寒天培地及び0.02％アジ化ナ
トリウム存在下で生育しない点で、またバチルス・ブレ
ビスとはキシロースから酸を生成する点、VP培地でアル
カリを生産しない点、カゼイン及びチロシンを分解しな
い点でそれぞれ異なつている。更に、標準菌株バチルス
・ステアロサーモフイラスIAM 11001,11002,11003,1100
4,12043、バチルス・コアギユランスIAM1194,バチルス
・ブレビスIAM 1031（以上、東京大学応用微生物研究所
保管株）はいずれも後述の培養方法でありウリカーゼを
生産しなかつた。
以上の事項から明らかな通り、TB-90菌は、公知の菌種
と区別されるため、これを新菌種として設定することが
適当であると結論された。
と区別されるため、これを新菌種として設定することが
適当であると結論された。
TB-90金は工業技術院微生物工業技術研究所にFERM BP-7
95として寄託されている。
95として寄託されている。
本発明のウリカーゼ生産能を有する微生物を栄養培地に
培養し、培養物中に該ウリカーゼを生成せしめ、これを
採取することによつて目的とするウリカーゼが得られ
る。
培養し、培養物中に該ウリカーゼを生成せしめ、これを
採取することによつて目的とするウリカーゼが得られ
る。
本発明に使用する栄養培地としては、炭素源，窒素源，
無機物及び必要に応じ使用菌株の必要とする微量栄養素
を程よく含有するものであれば天然及び合成培地のいず
れでもよい。
無機物及び必要に応じ使用菌株の必要とする微量栄養素
を程よく含有するものであれば天然及び合成培地のいず
れでもよい。
炭素源としてはグルコース，キシロース，ガラクトー
ス，グリセリン等の炭水化物や尿酸などが用いられる。
ス，グリセリン等の炭水化物や尿酸などが用いられる。
窒素源としては硫安，塩安，硝酸ソーダ，尿素等の有機
化成品、グルタミン酸などのアミノ酸やペプチド，肉エ
キス，大豆粉等の含窒素天然物や尿酸などが使用出来
る。
化成品、グルタミン酸などのアミノ酸やペプチド，肉エ
キス，大豆粉等の含窒素天然物や尿酸などが使用出来
る。
その多無機物としては各種リン酸塩、硫酸マグネシウ
ム，硫酸第１鉄などの各種硫酸塩、塩化ナトリウム，塩
化カリウム等の各種塩酸塩やゼオライト，カオリン，そ
の他が用いられ，菌の増殖と酵素生成を促進する。
ム，硫酸第１鉄などの各種硫酸塩、塩化ナトリウム，塩
化カリウム等の各種塩酸塩やゼオライト，カオリン，そ
の他が用いられ，菌の増殖と酵素生成を促進する。
その他にビオチン，チアミン等の微量栄養素を必要に応
じて使用する。
じて使用する。
培養法としては、固体培養，液体培養のいずれも可能で
あるが、工業的には通気撹拌培養法が最も適している。
あるが、工業的には通気撹拌培養法が最も適している。
培養は38〜62℃の範囲の温度で行うことが出来るが、50
〜55℃が好適である。pHは中性乃至弱酸性が望ましい。
〜55℃が好適である。pHは中性乃至弱酸性が望ましい。
培養時間は条件によつて変つて来るが、通常は６時間か
ら20時間であり、ウリカーゼの生成が確認された時、好
ましくは生成が最大に達した時に培養を停止する。
ら20時間であり、ウリカーゼの生成が確認された時、好
ましくは生成が最大に達した時に培養を停止する。
本酵素は主として菌体中に生成されるが、培養後期には
培地中にも蓄積される。
培地中にも蓄積される。
培養物中からのウリカーゼの採取は適宜既知の方法を組
み合せて実施すればよい。たとえば培養終了後、培養物
中から菌体を遠心分離などにより取得し、ついでこの菌
体から適当な手段でウリカーゼを抽出する。遠心分離等
によつてこの抽出液を処理して不溶性成分を除去した
後、酸沈殿，有機溶媒沈殿，塩析，透析，更には各種ク
ロマトグラフイー（イオン交換法，ゲル過法，疏水ク
ロマト法等）によつて精製する。かくて、純度の極めて
高いウリカーゼを取得することが出来る。
み合せて実施すればよい。たとえば培養終了後、培養物
中から菌体を遠心分離などにより取得し、ついでこの菌
体から適当な手段でウリカーゼを抽出する。遠心分離等
によつてこの抽出液を処理して不溶性成分を除去した
後、酸沈殿，有機溶媒沈殿，塩析，透析，更には各種ク
ロマトグラフイー（イオン交換法，ゲル過法，疏水ク
ロマト法等）によつて精製する。かくて、純度の極めて
高いウリカーゼを取得することが出来る。
次に、本発明のウリカーゼの性質を示す。なお、標品と
しては後記実施例１で得られた酵素を使用した。
しては後記実施例１で得られた酵素を使用した。
ウリカーゼ活性の測定は、主として後述のUV法（尿酸の
吸収（293μｍ）の減少を測定する）によつた。また、
ウリカーゼ活性は後記測定条件下で１分間に１μmoleの
尿酸を分解する酵素力価をIU（ユニツト）とした。
吸収（293μｍ）の減少を測定する）によつた。また、
ウリカーゼ活性は後記測定条件下で１分間に１μmoleの
尿酸を分解する酵素力価をIU（ユニツト）とした。
計算式は次の通りである。
△0D＝反応中の293μｍの吸収の減少 12.2:尿酸のミリモル分子吸光係数（cm2/micromole） （１） 作用 本酵素は次の反応を触媒する。
（２） 至適pH 本発明の酵素標品及び対照として酵母由来のウリカーゼ
（東洋紡製）とコリネバクテリウム由来のウリカーゼ
（盛進製薬製）をそれぞれpH8.0,30℃でmU/mlになる酵
素量を用い、第１図に示した種々のpHのバツフアーに溶
解して反応させた。
（東洋紡製）とコリネバクテリウム由来のウリカーゼ
（盛進製薬製）をそれぞれpH8.0,30℃でmU/mlになる酵
素量を用い、第１図に示した種々のpHのバツフアーに溶
解して反応させた。
尿酸濃度は100μＭとし、バツフアーは50mMホウ酸緩衝
液（1mM EDTA・2Na及び0.001％TritonX-100含有）を使
用した。反応は30℃で実施し、キユベツト中に撹拌子を
入れて撹拌混合しつつ吸光度（293μｍ）の減少を測定
した（UV法）。
液（1mM EDTA・2Na及び0.001％TritonX-100含有）を使
用した。反応は30℃で実施し、キユベツト中に撹拌子を
入れて撹拌混合しつつ吸光度（293μｍ）の減少を測定
した（UV法）。
各酵素の最大活性を示すpHでの活性を各々100とし、各p
Hにおける相対活性を第１図に示す。図から明らかなよ
うに、本発明の酵素標品は至適pHが８であるが、対照の
２酵素と比較して弱酸性においてもはるかに強い活性を
示し、しかもpH5〜10という広いpH域で活性を示した。
Hにおける相対活性を第１図に示す。図から明らかなよ
うに、本発明の酵素標品は至適pHが８であるが、対照の
２酵素と比較して弱酸性においてもはるかに強い活性を
示し、しかもpH5〜10という広いpH域で活性を示した。
（３） 安定pH範囲 酵素標品を第２図に示す種々のpHの50mMリン酸バツフア
ー（1mM EDTA・2Na,0.001％TritonX-100含有）に200uM/
ml（30℃,pH8.0で測定）になるよう溶解した。
ー（1mM EDTA・2Na,0.001％TritonX-100含有）に200uM/
ml（30℃,pH8.0で測定）になるよう溶解した。
ついで、各酵素溶液を30℃で15日間保つた後、50mMのホ
ウ酸バツフアー（pH8.0,1mM EDTA・2Na,0.001％TritonX
-100含有）を用いて20倍に希釈し、pH8.0付近とし、こ
れらの酵素溶液に100μＭの尿酸を加え、30℃で反応さ
せた。酵素活性はUV法で測定し、試験開始時（即ち、無
処理）の活性を100とし場合の各pHにおける相対残存活
性を第２図に示す。
ウ酸バツフアー（pH8.0,1mM EDTA・2Na,0.001％TritonX
-100含有）を用いて20倍に希釈し、pH8.0付近とし、こ
れらの酵素溶液に100μＭの尿酸を加え、30℃で反応さ
せた。酵素活性はUV法で測定し、試験開始時（即ち、無
処理）の活性を100とし場合の各pHにおける相対残存活
性を第２図に示す。
本酵素はpH5〜９の間で活性を完全に維持した。
（４） 至適温度 酵素標品を10mU/mlになるよう50mMホウ酸バツフアー（p
H8.0,1mM EDTA・2Na,0.001％TritonX-100を含有）に溶
解し、尿酸100μＭを基質として反応させた。反応温度
は第３図に示した。反応時間は６分間とし、UV法で測定
した。
H8.0,1mM EDTA・2Na,0.001％TritonX-100を含有）に溶
解し、尿酸100μＭを基質として反応させた。反応温度
は第３図に示した。反応時間は６分間とし、UV法で測定
した。
最も活性の高い値を100とした場合の各温度における相
対活性を第３図に示す。
対活性を第３図に示す。
本酵素の至適温度は45〜50℃であることが判明した。
（５） 安定温度範囲 酵素評品8mUを100μｌのホウ酸バツフアー（pH9.1,1mM
EDTA・2Na及び0.001％TritonX-100含有）に溶解し、第
４図に示す各温度に10分間保持した後、30℃としてUV法
で残存活性を測定した（pH8.0.尿酸100μＭ）。
EDTA・2Na及び0.001％TritonX-100含有）に溶解し、第
４図に示す各温度に10分間保持した後、30℃としてUV法
で残存活性を測定した（pH8.0.尿酸100μＭ）。
無処理の酵素活性を100として、各温度における相対活
性を第４図に示す。
性を第４図に示す。
本酵素は50℃以下では10分間の処理によつても失活は認
められず活性を100％維持していた。
められず活性を100％維持していた。
（６） 界面活性剤への抵抗性 各濃度のドデシル硫酸ナトリウムを含有するUV法の反応
液2mlに20mUの酵素評品あるいは対照として市販の酵母
由来ウリカーゼ（東洋紡製）またはコリネバクテリウム
由来ウリカーゼ（盛進製薬製）を加えて反応させた。酵
素活性はドデシル硫酸ナリウム無添加の場合を100とし
て第５図に示す。
液2mlに20mUの酵素評品あるいは対照として市販の酵母
由来ウリカーゼ（東洋紡製）またはコリネバクテリウム
由来ウリカーゼ（盛進製薬製）を加えて反応させた。酵
素活性はドデシル硫酸ナリウム無添加の場合を100とし
て第５図に示す。
本酵素の活性はドデシル硫酸ナトリウム0.08％迄阻害さ
れないが、対照の２酵素は活性を減じ、本酵素のタンパ
ク変性剤に対する抵抗性が明らかとなつた。
れないが、対照の２酵素は活性を減じ、本酵素のタンパ
ク変性剤に対する抵抗性が明らかとなつた。
（７） 基質特異性 本酵素評品の尿酸関連物質との反応性（具体的にはH2O2
生成性）を調べた。H2O2の検出にはパーオキシダーゼ法
を用いた。
生成性）を調べた。H2O2の検出にはパーオキシダーゼ法
を用いた。
酵素標品13mUを後述のパーオキシダーゼ法反応液（各基
質は200μＭ相当含有）2mlに溶解し、生成するH2O2を測
定した。尿酸を基質とする場合の活性を100としたとき
の各基質の相対活性を第１表に示す。本酵素はアデニ
ン，グアニン，キサンチン，ヒポキサンチン，テオブロ
ミン，テオフイリンには全く活性を示さなかつた。
質は200μＭ相当含有）2mlに溶解し、生成するH2O2を測
定した。尿酸を基質とする場合の活性を100としたとき
の各基質の相対活性を第１表に示す。本酵素はアデニ
ン，グアニン，キサンチン，ヒポキサンチン，テオブロ
ミン，テオフイリンには全く活性を示さなかつた。
次に、H2O2検出に用いたパーオキシダーゼ法の詳細を示
す。
す。
0.05％のTritonx-100,490μＭの４−アミノアンチピリ
ン,5.3mMの石炭酸及び6U/mlのパーオキシダーゼを含む5
0mMリン酸バツフアー（pH6.5）に供試した各基質200μ
Ｍ相当を溶解し、この反応液2.0mlに酵素標品13mUを添
加し、37℃で反応させ、生成した過酸化水素の量に比例
して生ずる色素（λmax500nm）の増加を測定した。な
お、反応時間は15時間とした。
ン,5.3mMの石炭酸及び6U/mlのパーオキシダーゼを含む5
0mMリン酸バツフアー（pH6.5）に供試した各基質200μ
Ｍ相当を溶解し、この反応液2.0mlに酵素標品13mUを添
加し、37℃で反応させ、生成した過酸化水素の量に比例
して生ずる色素（λmax500nm）の増加を測定した。な
お、反応時間は15時間とした。
（８） 分子量 ゲル過法による本酵素の分子量は約100,000である。
前述したように、ウリカーゼは尿酸の定量に使用される
が、ウリカーゼを使用する尿酸の定量法としては下記の
方法がある。
が、ウリカーゼを使用する尿酸の定量法としては下記の
方法がある。
（ｉ） 尿酸とウリカーゼの反応させて生じる過酸化水
素を測定する方法、例えば イ 過酸化水素を４−アミノアンチピリンとフエノール
あるいはその誘導体とパーオキシダーゼの存在下反応さ
せて過酸化水素量に比例して生成する色素を吸光度から
定量する（酵素比色法中ウリカーゼ・パーオシダーゼ
法）、 （ロ） 過酸化水素とアルコールをカタラーゼの存在下
反応させ、生じたアルデヒドをアセチルアセトン及びア
ンモニアと縮合させて生成する色素を吸光度から定量す
る（酵素比色法中ウリカーゼ・カタラーゼ、 （ハ） 上記のカララーゼによる反応生成物のアルデヒ
ドと還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（NA
DH）をアルコールデヒドロゲナーゼの存在下反応させて
NADを生成せしめる。その際、減少するNADHを定量する
（紫外部吸収法）。
素を測定する方法、例えば イ 過酸化水素を４−アミノアンチピリンとフエノール
あるいはその誘導体とパーオキシダーゼの存在下反応さ
せて過酸化水素量に比例して生成する色素を吸光度から
定量する（酵素比色法中ウリカーゼ・パーオシダーゼ
法）、 （ロ） 過酸化水素とアルコールをカタラーゼの存在下
反応させ、生じたアルデヒドをアセチルアセトン及びア
ンモニアと縮合させて生成する色素を吸光度から定量す
る（酵素比色法中ウリカーゼ・カタラーゼ、 （ハ） 上記のカララーゼによる反応生成物のアルデヒ
ドと還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（NA
DH）をアルコールデヒドロゲナーゼの存在下反応させて
NADを生成せしめる。その際、減少するNADHを定量する
（紫外部吸収法）。
（ii） 尿酸をウリカーゼと反応させる際に消費される
酸素あるいは生成する炭酸ガスを測定する方法（電極
法）。
酸素あるいは生成する炭酸ガスを測定する方法（電極
法）。
（iii） 反応の前後における尿酸由来の紫外部吸収の
差を測定する方法（紫外部吸収法）。
差を測定する方法（紫外部吸収法）。
（IV） ウリカーゼ処理及び未処理の試料に化学的尿酸
定量法（例えばリンタングステン酸法）を適用する方法
等がある。
定量法（例えばリンタングステン酸法）を適用する方法
等がある。
この中でウリカーゼ・パーオキシダーゼ法は、広く用い
られている。この反応系のpHはウリカーゼのpH−活性特
性に従つて選択されるが、共役して用いるパーオキシダ
ーゼのpH−活性は弱酸性（pH6.0〜7.0）が最大であるこ
とや呈色試薬の安定性，定量感度のpH依存性を考慮する
ことが必要である。
られている。この反応系のpHはウリカーゼのpH−活性特
性に従つて選択されるが、共役して用いるパーオキシダ
ーゼのpH−活性は弱酸性（pH6.0〜7.0）が最大であるこ
とや呈色試薬の安定性，定量感度のpH依存性を考慮する
ことが必要である。
給源により差異があるが、一般にウリカーゼはアルカリ
性（pH8.0〜9.0）に最大活性を示し、中性あるいは弱酸
性での活性が皆無（特公昭56−43230）であるかまたは
極めて弱い（特開昭56−124381）。そのほか弱酸性で最
大活性を示すが、弱酸性での安定性が著しく劣る例（特
開昭56−81586）しか知られていない。
性（pH8.0〜9.0）に最大活性を示し、中性あるいは弱酸
性での活性が皆無（特公昭56−43230）であるかまたは
極めて弱い（特開昭56−124381）。そのほか弱酸性で最
大活性を示すが、弱酸性での安定性が著しく劣る例（特
開昭56−81586）しか知られていない。
一方、臨床検査では反応温度が37℃に設定されているの
が伝統であるので、温度−安定性、温度−活性も重要な
要素であり、ウリカーゼの反応速度、即ち尿酸定量反応
に要する時間及び必要とするウリカーゼの量が可及的に
少ないことがウリカーゼに要求される。
が伝統であるので、温度−安定性、温度−活性も重要な
要素であり、ウリカーゼの反応速度、即ち尿酸定量反応
に要する時間及び必要とするウリカーゼの量が可及的に
少ないことがウリカーゼに要求される。
次に、尿酸定量に用いた際の本酵素標品と既知市販酵素
（酵母由来、東洋紡製）の比較を述べる。尿酸定量に要
する反応時間は酵素使用量に反比例するが、この関係を
前述のパーオキシダーゼ法を用いて検討した。組成物中
の各成分の種類とその使用量ならびに組成物を用いての
実験操作は尿酸の量を37.2μＭに設定したこと以外は前
述の通りである。
（酵母由来、東洋紡製）の比較を述べる。尿酸定量に要
する反応時間は酵素使用量に反比例するが、この関係を
前述のパーオキシダーゼ法を用いて検討した。組成物中
の各成分の種類とその使用量ならびに組成物を用いての
実験操作は尿酸の量を37.2μＭに設定したこと以外は前
述の通りである。
必要反応時間は反応を開始してから過酸化水素の量に比
例して生ずる色素の量、すなわち500nmの吸光度が一定
になる（反応の終了）迄の時間で表わした。
例して生ずる色素の量、すなわち500nmの吸光度が一定
になる（反応の終了）迄の時間で表わした。
第６図に示したように、本酵素の使用量は対照酵素の20
％の力価（Ｕ）で済むことが理解される。なお、酵素活
性は本酵素標品の場合はpH8.0、対照酵素の場合はpH8.5
（いずれも至適pH）で30℃にてUV法により算出した。
％の力価（Ｕ）で済むことが理解される。なお、酵素活
性は本酵素標品の場合はpH8.0、対照酵素の場合はpH8.5
（いずれも至適pH）で30℃にてUV法により算出した。
本発明の酵素ウリカーゼは、好熱性微生物に由来するた
め、安定性にすぐれており、しかも広い作用pH域を有す
る、界面活性剤に対する抵抗性が大である等の性質を有
している。そのため、既知ウリカーゼよりも少量の使用
で尿酸の定量を行うことができる。本酵素による尿酸の
定量は様々な方法で実施しうるが、とりわけウリカーゼ
・パーオキシダーゼ法が好適である。
め、安定性にすぐれており、しかも広い作用pH域を有す
る、界面活性剤に対する抵抗性が大である等の性質を有
している。そのため、既知ウリカーゼよりも少量の使用
で尿酸の定量を行うことができる。本酵素による尿酸の
定量は様々な方法で実施しうるが、とりわけウリカーゼ
・パーオキシダーゼ法が好適である。
また、本酵素の製造は、好熱性微生物を用いているた
め、短時間で効率よく行うことができる。
め、短時間で効率よく行うことができる。
次に、本発明を実施例により詳しく説明する。
実施例１ 種菌として、TB-90菌を使用した。
グルコース1g/dl,酵母エキス1g/dl,ペプトン1g/dl,KH2P
O41g/dl,K2HPO41g/dl,MgSO4・7H2O 0.5g/dl及び水道水
からなる種培養培地10mlを大型試験管に入れ、121℃で1
5分間滅菌後、該培地に前記菌株を１白金耳接種し、55
℃で６時間振盪培養した。
O41g/dl,K2HPO41g/dl,MgSO4・7H2O 0.5g/dl及び水道水
からなる種培養培地10mlを大型試験管に入れ、121℃で1
5分間滅菌後、該培地に前記菌株を１白金耳接種し、55
℃で６時間振盪培養した。
前記前培養30mlを５容のジヤー・フアーメンター中の
1.5の生産培地（グルコース3g/dl,酵母エキス1g/dl,
ペプトン0.5g/dl,尿酸4g/dl,KH2PO41g/dl,MgSO4・7H2O
0.5g/dl,大豆油0.5g/dl及び水道水からなる）に加え、5
5℃,300rpm,通気量１／培地の条件で本培養を行
い、13時間で培養を終了した。
1.5の生産培地（グルコース3g/dl,酵母エキス1g/dl,
ペプトン0.5g/dl,尿酸4g/dl,KH2PO41g/dl,MgSO4・7H2O
0.5g/dl,大豆油0.5g/dl及び水道水からなる）に加え、5
5℃,300rpm,通気量１／培地の条件で本培養を行
い、13時間で培養を終了した。
培養終了後、遠心分離により菌体を得、この菌体を１
の0.1％TritonX-100水溶液中に分散し、１晩７〜８℃で
放置してウリカーゼを抽出した。この抽出液を遠心分離
して上清液を得た。上清液中のウラカーゼ活性は10U/dl
であつた（上清液1.0，全活性100U）。
の0.1％TritonX-100水溶液中に分散し、１晩７〜８℃で
放置してウリカーゼを抽出した。この抽出液を遠心分離
して上清液を得た。上清液中のウラカーゼ活性は10U/dl
であつた（上清液1.0，全活性100U）。
この上清液に３規定の酢酸を加えてpH4.1とし、７〜８
℃で３〜４時間静置することによりウリカーゼを酸沈殿
物として回収した。具体的には傾斜法で上静液を除いた
後、更に遠心分離を行い酸沈殿物を回収した。
℃で３〜４時間静置することによりウリカーゼを酸沈殿
物として回収した。具体的には傾斜法で上静液を除いた
後、更に遠心分離を行い酸沈殿物を回収した。
この沈殿物を50mMのホウ酸バツフアー（pH8.0）100mlに
用いて溶解し、透析膜（セロフアンチユーブ）に入れ、
７〜８℃で１晩２の50mMリン酸バツフアー（pH6.0）
に対して透析した。透析内液を50mMリン酸バツフアー
（pH6.0）で予め平衡化したDEAE-バイオゲルＡ（弱塩基
性イオン交換体,Cl型、バイオラド社）のカラム（直径
2.5cm,実効長さ15cm）に通塔し、ウリカーゼを相体に吸
着させた。
用いて溶解し、透析膜（セロフアンチユーブ）に入れ、
７〜８℃で１晩２の50mMリン酸バツフアー（pH6.0）
に対して透析した。透析内液を50mMリン酸バツフアー
（pH6.0）で予め平衡化したDEAE-バイオゲルＡ（弱塩基
性イオン交換体,Cl型、バイオラド社）のカラム（直径
2.5cm,実効長さ15cm）に通塔し、ウリカーゼを相体に吸
着させた。
次いで、50mMリン酸バツフアー（pH6.0）500mlで洗浄
後、上記バツフアー500ml及びこれに0.2Mの食塩を加え
たバツフアー500mlを用いて直線濃度勾配溶出を行つ
た。溶出液を10gづつ分画し、ウリカーゼ溶出区分を集
め、硫安60％飽和として沈殿物を遠心分離により集め
た。
後、上記バツフアー500ml及びこれに0.2Mの食塩を加え
たバツフアー500mlを用いて直線濃度勾配溶出を行つ
た。溶出液を10gづつ分画し、ウリカーゼ溶出区分を集
め、硫安60％飽和として沈殿物を遠心分離により集め
た。
この沈殿物を少量の50mMリン酸バツフアー（pH8.0）に
溶解し、同バツフアーで平衡化したセフアデツクスＧ−
200（フアルマシア社製、直径2.5cm,実効長さ80cm）の
カラムにチヤージし、同バツフアーで溶出した。溶出液
を5gづつ分画し、ウリカーゼ溶出区分を硫安60％飽和と
し、生成する沈殿物を遠心分離により集めた。次に、こ
れを50mMのホウ酸バツフアー（pH8.0）に溶解し、同バ
ツフアー１に対してセロフアンチユーブを透析膜とし
て７〜８℃で一夜透析した。透析チューブ内液を凍結乾
燥し、ウリカーゼの粉末を得た（比活性3U/mgタンパ
ク）。菌体抽出液からの活性回収率は41％であつた。な
お、この酵素標品の性質は前記したとおりである。
溶解し、同バツフアーで平衡化したセフアデツクスＧ−
200（フアルマシア社製、直径2.5cm,実効長さ80cm）の
カラムにチヤージし、同バツフアーで溶出した。溶出液
を5gづつ分画し、ウリカーゼ溶出区分を硫安60％飽和と
し、生成する沈殿物を遠心分離により集めた。次に、こ
れを50mMのホウ酸バツフアー（pH8.0）に溶解し、同バ
ツフアー１に対してセロフアンチユーブを透析膜とし
て７〜８℃で一夜透析した。透析チューブ内液を凍結乾
燥し、ウリカーゼの粉末を得た（比活性3U/mgタンパ
ク）。菌体抽出液からの活性回収率は41％であつた。な
お、この酵素標品の性質は前記したとおりである。
第１図は本発明のウリカーゼの至適pHを、第２図は該ウ
リカーゼの安定pH範囲を、第３図は該ウリカーゼの作用
至適温度を、第４図は該ウリカーゼの安定温度範囲を、
第５図は該ウリカーゼのドデシル硫酸ナトリウムへの耐
性を、第６図はパーオキシダーゼ法による尿酸定量の際
の酵素使用量と必要反応時間の関係をそれぞれ示すもの
である。
リカーゼの安定pH範囲を、第３図は該ウリカーゼの作用
至適温度を、第４図は該ウリカーゼの安定温度範囲を、
第５図は該ウリカーゼのドデシル硫酸ナトリウムへの耐
性を、第６図はパーオキシダーゼ法による尿酸定量の際
の酵素使用量と必要反応時間の関係をそれぞれ示すもの
である。
Claims (3)
- 【請求項１】下記の特性を有するウリカーゼ。 作用 次の反応を触媒する。 至適温度 45〜50℃ 至適pHにおける最大活性の60％以上の活性を示す作用
pH ５〜10 pH安定性 ５〜９ - 【請求項２】バチルス属に属し、下記の特性を有するウ
リカーゼを生産する能力のある好熱性微生物を栄養培地
に培養し、培養物中に当該ウリカーゼを生成せしめ、こ
れを採取することを特徴とするウリカーゼの製造法。 作用 次の反応を触媒する。 至適温度 45〜50℃ 至適pHにおける最大活性の60％以上の活性を示す作用
pH ５〜10 pH安定性 ５〜９ - 【請求項３】バチルス属に属するウリカーゼ生産能を有
する好熱性微生物が、バチルス・エスピーTB-90（FERM
BP-795）である特許請求の範囲第２項記載の方法。
Priority Applications (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60120399A JPH0671425B2 (ja) | 1985-06-05 | 1985-06-05 | ウリカ−ゼおよびその製造法 |
| US06/866,572 US4882280A (en) | 1985-06-05 | 1986-05-22 | Uricase and a method for the preparation thereof |
| EP86107416A EP0204283B1 (en) | 1985-06-05 | 1986-06-02 | Uricase and a method for the preparation thereof |
| DE8686107416T DE3686597T2 (de) | 1985-06-05 | 1986-06-02 | Uricase und verfahren zu deren herstellung. |
| US07/391,432 US4987076A (en) | 1985-06-05 | 1989-08-09 | Uricase and a method for the preparation thereof |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60120399A JPH0671425B2 (ja) | 1985-06-05 | 1985-06-05 | ウリカ−ゼおよびその製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61280272A JPS61280272A (ja) | 1986-12-10 |
| JPH0671425B2 true JPH0671425B2 (ja) | 1994-09-14 |
Family
ID=14785246
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP60120399A Expired - Fee Related JPH0671425B2 (ja) | 1985-06-05 | 1985-06-05 | ウリカ−ゼおよびその製造法 |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US4882280A (ja) |
| EP (1) | EP0204283B1 (ja) |
| JP (1) | JPH0671425B2 (ja) |
| DE (1) | DE3686597T2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US8013623B2 (en) | 2004-09-13 | 2011-09-06 | Cascade Microtech, Inc. | Double sided probing structures |
Families Citing this family (19)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5955336A (en) * | 1988-08-17 | 1999-09-21 | Toyo Boseki Kabushiki Kaisha | DNA sequence for uricase and manufacturing process of uricase |
| US5728562A (en) * | 1988-08-17 | 1998-03-17 | Toyo Boseki Kabushiki Kaisha | Isolated recombinant uricase |
| JPH0671428B2 (ja) * | 1988-08-17 | 1994-09-14 | サッポロビール株式会社 | ウリカーゼのｄｎａ配列および製法 |
| US6212089B1 (en) * | 1996-03-19 | 2001-04-03 | Hitachi, Ltd. | Semiconductor memory device and defect remedying method thereof |
| JP2971218B2 (ja) * | 1991-12-04 | 1999-11-02 | 協和醗酵工業株式会社 | ウリカーゼ遺伝子およびウリカーゼの製造法 |
| ES2245114T3 (es) | 1998-08-06 | 2005-12-16 | Mountain View Pharmaceuticals, Inc. | Conjugados de peg-oxidasa de urato y su uso. |
| US7374905B2 (en) * | 2000-11-08 | 2008-05-20 | Oxyrase, Inc. | Medium composition, method and device for selectively enhancing the isolation of anaerobic microorganisms contained in a mixed sample with facultative microorganisms |
| US6913915B2 (en) * | 2001-08-02 | 2005-07-05 | Phoenix Pharmacologics, Inc. | PEG-modified uricase |
| US9534013B2 (en) * | 2006-04-12 | 2017-01-03 | Horizon Pharma Rheumatology Llc | Purification of proteins with cationic surfactant |
| US20080159976A1 (en) * | 2005-04-11 | 2008-07-03 | Jacob Hartman | Methods for lowering elevated uric acid levels using intravenous injections of PEG-uricase |
| CN101194016B (zh) | 2005-04-11 | 2012-09-05 | 萨文特医药公司 | 尿酸氧化酶的变体形式及其用途 |
| US8148123B2 (en) * | 2005-04-11 | 2012-04-03 | Savient Pharmaceuticals, Inc. | Methods for lowering elevated uric acid levels using intravenous injections of PEG-uricase |
| PT3321359T (pt) | 2005-04-11 | 2021-03-11 | Horizon Pharma Rheumatology Llc | Formas variantes de urato-oxidase e a sua utilização |
| JP2008545665A (ja) * | 2005-05-23 | 2008-12-18 | ユニベルシテ ドゥ ジュネーブ | 高体温による処置のための注入可能な超常磁性ナノ粒子および高体温インプラントを形成するための使用 |
| JP5010291B2 (ja) * | 2007-01-15 | 2012-08-29 | シーシーアイ株式会社 | 新規ウリカーゼの製造方法 |
| JP5053648B2 (ja) * | 2007-01-15 | 2012-10-17 | シーシーアイ株式会社 | 新規ウリカーゼの製造方法 |
| JP5022044B2 (ja) * | 2007-01-23 | 2012-09-12 | シーシーアイ株式会社 | 新規ウリカーゼの製造方法 |
| SG10201408480RA (en) | 2009-06-25 | 2015-02-27 | Crealta Pharmaceuticals Llc | Methods for preventing or predicting infusion reactions or antibody-mediated loss of response, by monitoring serum uric acid levels during pegylated uricase therapy |
| US9441210B2 (en) | 2013-06-26 | 2016-09-13 | Food Industry Research And Development Institute | Method of reducing levels of uric acid |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR1529675A (fr) * | 1967-03-29 | 1968-06-21 | Applic Biochimiques Soc Et | Urate oxydase à haute activité et sa préparation |
| GB1221235A (en) * | 1968-08-19 | 1971-02-03 | Novo Terapeutisk Labor As | A process for the production of uricase |
| IT1141061B (it) * | 1980-09-19 | 1986-10-01 | Anic Spa | Procedimento per la produzione di uricasi |
| US4394450A (en) * | 1982-03-01 | 1983-07-19 | Miles Laboratories, Inc. | Method for purification of uricase |
| JPH0657149B2 (ja) * | 1986-01-13 | 1994-08-03 | サッポロビール株式会社 | ウレア−ゼ及びその製造法 |
-
1985
- 1985-06-05 JP JP60120399A patent/JPH0671425B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
1986
- 1986-05-22 US US06/866,572 patent/US4882280A/en not_active Expired - Lifetime
- 1986-06-02 DE DE8686107416T patent/DE3686597T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1986-06-02 EP EP86107416A patent/EP0204283B1/en not_active Expired - Lifetime
-
1989
- 1989-08-09 US US07/391,432 patent/US4987076A/en not_active Expired - Lifetime
Non-Patent Citations (5)
| Title |
|---|
| AGRICULTURAL AND BIOLOGICAL CHEMISTRY=1980 * |
| AGRICULTURAL AND BIOROGICAL CHEMISTRY=1980 * |
| BIOCHIMICA ET BIOPHYSICA ACTA=1978 * |
| ENZYME NOMENCLATURE=1978 * |
| JOURNAL OF BIOCHEMISTRY=1981 * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US8013623B2 (en) | 2004-09-13 | 2011-09-06 | Cascade Microtech, Inc. | Double sided probing structures |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US4882280A (en) | 1989-11-21 |
| EP0204283B1 (en) | 1992-09-02 |
| US4987076A (en) | 1991-01-22 |
| EP0204283A3 (en) | 1988-07-20 |
| DE3686597T2 (de) | 1993-04-15 |
| JPS61280272A (ja) | 1986-12-10 |
| EP0204283A2 (en) | 1986-12-10 |
| DE3686597D1 (de) | 1992-10-08 |
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