JPH0117674B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は、改良されたグリセロールデヒドロゲ
ナーゼ酵素および該酵素の製法に係る。 グリセロールデヒドロゲナーゼ（GDH）酵素
は、臨床診断のための血清トリグリセライドの分
析の如き生化学分析および化粧品製造用ジヒドロ
キシアセトンの製造に有用である。しかし乍ら、
GDHの源は比較的少ししか知られておらず、然
も、従来公知で利用されている全てのGDT酵素
は、不安定であり、室温で溶液中２日間以下の半
減期を有するものである。たとえ凍結乾燥された
粉末であつても低温で貯蔵することが提唱されて
いる。 ある種の好熱性微生物が、室温又は高温下にお
いて溶液中で長期間安定であるGDH酵素を生産
することが知見された。 従つて、本発明は、アミノ酸組成：

【表】

【表】 及び、 (b)Ｎ末端アミノ酸配列：Ala¹ Ala Glu Thr
Val⁵ Phe Ile Ser Pro Ala¹⁰ Lys Tyr Valを有
し、50ｍＭのリン酸カリウムと10ｍＭのβ−メル
カプトエタノールと0.1ｍＭのフエニルメチルス
ルホニルフルオライド（PMSF）とから成るPH
6.8の緩衝溶液中３mg／mlの溶液として20℃で貯
蔵された場合、４日間以上の活性半減期（active
half−life）を有するグリセロールデヒドロゲナ
ーゼ酵素製剤を提供するものである。この酵素を
以下“耐熱性GDH酵素”と略称する。 本発明のグリセロールデヒドロゲナーゼは、バ
チルスステアロサーモフイラスRS93菌株の好熱
性微生物又はその好熱性GDH酵素を生産し得る
誘導菌（derivative）もしくは変異菌（mutant）
を培養し、次いで細胞を破壊して細胞破砕片から
該酵素を分離することによより生産され得る。前
記誘導菌又は前記変異菌としてSC7と記されたも
のを例示し得る。これらの菌株は、スコツトラン
ド、アバーデイーンのナシヨナルコレクシヨン
インダストリアル バクテリア（NCIB）に、登
録番号NCIB11400及びNCIB11401として既に寄
託されており、それぞれ工業技術院微生物工業技
術研究所（以下微工研と称する）に微生物保管委
託申請書受理番号（以下寄託受理番号と称する）
第4983号及び第4984号として寄託されている。 これらは、以下の諸性質により同定され得る。

【表】

【表】 ペフトン＋水中での成長 60℃で24時間。最終濃度５％（ｗ／ｖ）NaCl
まで塩化ナトリウムに耐性を有する。 生 産 カタラーゼ ＋ オキシターゼ ＋ 硝酸塩還元酵素 − 亜硝酸塩還元酵素 − 更に、本発明の菌株は、下記試験に示される、
バチルスステアロサーモフイラスNCIB11270（又
は他の好熱性桿菌）の成長を抑制し得るバクテリ
オシンの生産により確認され得る。 約10乃至20コロニー／プレートを含有して一晩
培養された希釈プレートを調製する。得られるコ
ロニーを２時間クロロホルム蒸気に露らしせ殺菌
し、次いでプレートに通気してクロロホルムを除
去する。マツトグロース（mat growth）を形成
するに充分な濃度のNCIB11270懸濁液でこれら
を浸潤し、60℃で一晩培養する。RS93又はSC7
の１つの死減コロニーは、NCIB11270によつて
形成されたマツト中の非成長（no−growth）明
瞭域で囲まれている。この抑制を惹起するバクテ
リオシン因子はサーモシンと呼称され、分子量約
13000ダルトンの耐熱性グリコプロテインである
ことが判明した。 これらの菌株は、前記サーモシン用コードと考
えられ得る約３ミリオンダルトンの大きさのプラ
スミツドを含有している。 GDH生産能を保持する誘導菌および変異株は、
環境圧力調整（environmental pressure）の如
き標準方法によつて製造され得るか、又は、培養
中に自然に発生し得る。これらは、プロパン−
１，２−ジオール（GDH用物質であつて、耐熱
性桿菌によつて通常生産されるグリセロキナーゼ
用物質ではない）とクロラムフエニコールとで培
養し、次いでトリフエニルテトラゾリウムクロラ
イドで染色することにより同定され得る。 これらの菌株およびその誘導菌株もしくは変異
株は、一般に、グリセロール又はグリセロール類
を欠く培地においてさえもGDH酵素を生産する。
しかし乍ら、最大の生産量を得るためには、培養
基は、通常少なくとも0.05重量％以下好ましくは
4.0重量％以下のグリセロール又はグリセロール
類を含有している。最も好ましくは、培養基は
0.1乃至1.0重量％のグリセロール又はグリセロー
ル類を含有している。ここにいうグリセロール類
とは、多官能C₃アルコール特に２つの酸基を含
有する多官能C₃アルコールを包含るものであり、
例えばグリセリン酸、Ｌ−又はＤ−グリセルアル
デヒド、ジヒドロキシアセトン、３−メルカプト
プロパン−１，３−ジオール、プロパン−１，３
−ジオール又はプロパン−１，２−ジオールを指
称する。 いずれの場合に於いても、培養基は、天然物か
ら得られた栄養源例えばペプトン、酵母水解物、
牛肉エキス、カゼイン水解物等を含有する複合培
地か、又は無機および簡単な有機の栄養源を含有
する一定の塩培地でよい。 培地は、微生物が生長する温度、典型的には40
〜65℃特に50〜65℃、及びPH５〜８に調整され
る。又、培地は好気性下又は嫌気性下に調整され
得るが、しかし乍ら好気性下に調整されることが
好ましい。最適の培養期間がある（その後生産量
は低下する）ように思われる。最適の培養期間
は、使用される菌株及び培養条件に依存し、実験
によつて求められなければならない。しかし乍
ら、10乃至20時間の培養期間が適当であることが
判明した。 細胞破壊は、通常の技術例えば音波処理、ホモ
ゲナイゼイシヨン又は酵素処理等により行い得
る。その後、通常の酵素単離および精製技術が行
なわれ、例えばイオン−交換クロマトグラフイ
ー、リン酸カルシウムでの分別、硫酸アンモニウ
ム又は有機溶媒（例えば10〜20v／ｖ％濃度のエ
タノール）を使用する沈澱、デキストラン、アガ
ロース又はアガロースポリアクリルアミド上でで
のゲル過、及び／又はヌクレオチド誘導細胞間
質又はスルホン酸置換クロロトリアゾニル（“プ
ロシオン”−商標名）染料での親和クロマトグラ
フイー（affinity chromatography）等で行なわ
れる。 上記したバチルス ステアロサーモフイラスの
菌株から生産された耐熱性GDH酵素は、典型的
に、それぞれの分子量が約60000の４つの等しい
又は同じようなサブ−ユニツトから成り、全分子
量が約240000±30000ダルトンである構造を有す
る。下記分析方法により均質化して試験すると、
該酵素は、30℃、PH8.5で、蛋白質１mg当り少な
くとも５単位通常10〜30単位の比活性度を有して
いる。類似の基質に対して同じような条件下で試
験すると、グリセロール（100％）に対する活性
度（Vmax）は次のとおりである。 ３−メルカプト−プロパン−１，３−ジオール
49％ プロパン−１，６−ジオール 16％ プロパン−１，２−ジオール 165％ ジヒヒドロキシアセトン ＜10％ グリセリン酸 ＜10％ ブランクのため正確に測定することは不可能であ
つた。 活性は高濃度のNH₄ ⁺イオンにより阻害され
る。プロテアーゼによる破壊を避けるために、酵
素を低温（約４℃）で精製することが好ましい。
しかし乍ら、一坦精製した後は、酵素を室温で保
存することが好ましい。 本発明による酵素製剤は、粗な細胞抽出物又は
部分的に若しくは高度に精製された製剤である。
該製剤は、凍結乾燥物又は他の固形物形態とし
て、又は分析されるべきグリセロールのレベルに
応じて0.1〜50単位／ml含有する水溶液として提
供され得る。 酵素製剤は、血清および培養基を含む広範囲の
サンプル中の、既に存在しているか又はアルカリ
加水分解又は酵素（例えばリパーゼ）作用により
グリセライドから放出されるグリセロール又はグ
リセロール類を定量するために使用され得る。 更に、本発明の別の観点によれば、サンプル中
のグリセロール又はグリセロール類を定量するた
めの方法が提供される。該方法は、少なくとも７
のPH好ましくは８〜8.8のPHの緩衝溶液中で、サ
ンプルをグリセロールデヒドロゲナーゼ酵素製剤
及びニコチンアミドアデニンジヌクレオチド
（NAD）に混合し、約340nｍの光学密度の増加
を測定することから成る。次いで、光学密度の増
加率又は最終光学密度を標準溶液によつて得られ
たそれらと比較することにより、グリセロールが
算出される。増加率（△OD₃₄₀）を使用する場合
には、△OD₃₄₀の値が0.06〜0.12／分の範囲にな
るように、サンプルと標準とを希釈することが好
ましい。 分析を下記式に基づいて行なう。 グリセロール＋NADGDH ――――→ ジヒドロキシアセ
トン＋NADH この反応に基づく従来の分析に於いては、使用
されるPH値が高く（少なくとも９、通常10〜11）、
ジヒドロキシアセトンがエノール量体を形成して
酵素に関連のないNADの化学的還元を進行させ
るため、自触反応による不正確さを伴うという欠
点があつた。本発明の分析に於いては、低PHの使
用のための自触反応が避けられる。更に、緩衝系
がこの副反応の割合に影響を及ぼすことが知見さ
れた。この故に、緩衝剤は、アミン特にトリエタ
ノールアミン／HCl緩衝剤であることが好まし
い。勿論、リン酸塩の如き他の緩衝剤も使用し得
る。炭酸塩／重炭酸塩をも使用し得るが、むしろ
適当ではない。遊離のアンモニウムイオンは、上
記した阻止効果のため避けるべきである。 このように、本発明の酵素製剤は、試験キツト
の一部として有利に提供され得る。このキツト
は、乾燥物通常凍結乾燥粉又は水溶液としての酵
素を含有し、又、PHを８〜8.8の緩衝溶液とニコ
チンアミドアデニンジヌクレオチド（NAD）と
を含有する。キツトは、更に、標準グリセリン溶
液及びグリセリドから遊離グリセリドを放出する
ためのアルカリ性KOH若しくはリパーゼ溶液を
任意に含有し得る。 酵素が水溶液として存在する場合、その濃度
は、キツトの使用目的に応じて0.1〜50単位／ml
の範囲で広く変更し得、１種以上の酵素溶液が、
サンプル中の異なるグリセロールレベルを網羅す
るために、提供され得る。緩衝剤は、アミン特に
トリエタノールアミン緩衝剤であることが好まし
く、約8.5のPHを有していることが好ましい。
NAD溶液は適当な濃度であればよく、典型的に
10mg／mlの濃度である。 本発明の種々の観点の典型的具体例を実施例に
より詳説する。実施例に於いて使用する培地は次
のとおりである。バチルス ステアロサーモフイラス（BS）培地
ｇ／ トリプテイツクミートダイジエスト（バクトトリ
プトン） 20 酵母エキス 10 FeCl₃・6H₂O 0.014 NnCl₂・4H₂O 0.03 K₂SO₄ 2.6 MgSO₄・7H₂O 0.54 クエン酸 0.64 Na₂HPO₄・2H₂O 6.4変性BS培地 ｇ／ 下記の点において上記と異なる。 トリプトン 2.0 酵母エキス 50 K₂SO₄ 6.0 泡止め剤（FD泡止め剤） 2.5 10N・NaOHでPH7.1±7.1に調整TSBアガー トリプトン（Oxoid L42）、1.72；ソーヤペプ
トン（Oxoid L44）、3.0；グルコース、2.5；
NaCl、5.0；K₂HPO₄、2.5；及びアガー（Oxoid
NO：１）、15.0を含有する（ｇ／）。最終PHは
7.3である。CCl培地 NaH₂PO₄2H₂O、3.12；NH₄Cl、5.04；KCl、
0.37；Na₂SO₄・1OH₂O、3.22；クエン酸−水和
物、0.42；ZnO、0.002；FeCl₃6H₂O、0.027；
MnCl₂・4H₂O、0.01；CuCl₂2H₂O、0.00085；
CoCl₂・6H₂O、0.0024；H₃BO₃、0.00031；
MgO、0.05；CaCO₃、0.01及びNa₂MoO₄・
2H₂O、0.0024をHCl中に溶解（ｇ／）。最終濃
度は培地１当り0.295ml酸濃度である。PHを7.3
に調整。 使用する基本的菌株は、RS93と記される菌株
（NCIB11400および寄託受理番号第4983号として
寄託済み）である。誘導菌株は次のようにして得
られる。 回転培養器中60℃、150rpmで一晩培養された、
0.4ｇ／100mlのグリセロールを含有するBS培地
中のRS93の200mlとうフラスコ液体培養から、い
くつかのTSBアガーの希釈プレートを調整した。
50〜100のコロニーを含む皿の複製プレートを、
ベルベチンパツド（velvetine pad）を使用して
調整した。次いで、最初のプレートを２時間クロ
ロホルム蒸気に露して殺菌した。次いで、これら
を、60℃で一晩培養すればマツトグロースを生起
するに充分な濃度のバチルス カルドリチカス
（B.caldolyticus）の懸濁液を含む水分の多いア
ガーで浸潤した。複製プレートもまた60℃で一晩
培養し、次いで１％（Ｖ／Ｖ）の１，２−プロパ
ンジオールと1.5％（Ｗ／Ｖ）のクロラムフエニ
コールの水溶液とで噴霧した。次いでプレートを
更に１時間60℃で培養し、PH7.5の1Mリン酸カリ
ウム緩衝液中10％トリ−フエニルテトラゾリウム
クロライド溶液で噴霧した。殺菌したプレートと
複製プレートとを比較し、阻止の最大域をもち且
つ深いピンク色に着色された単一のコロニーを複
製プレートから新しいプレートに移し、次いで一
晩培養した。これらのプレートを一規定生理食塩
中に懸濁して４％（Ｖ／Ｖ）グリセロール含有の
200mlBS培地に接種し、シエーカー上で60℃
150r.p.m.で一晩（16時間）培養した。細胞を４
℃で20分間13000ｇの遠心分離で集積し、β−メ
ルカプト−エタノールとPMSFとを含有するPH
7.5の100ｍＭトリス−HCl100ml中に懸濁し、再
び20分間13000ｇで遠心分離した。同じ緩衝溶液
50mlをを用いて第２回目の洗浄を行ない、前記と
同じPH7.5の10ｍＭトリス−HCl20ml中に懸濁し、
サンプルを氷浴中でできるだけ冷却して１分間の
音波処理を２回施した。各サンプルをGDH活性
および乾燥重量に対してチエツクした。最大の活
性度と細胞マス（cell mas）とを示す単離物を
保留し、SC7（NCIB11401、寄託受理番号第4984
号）と記した。 GDH生産能をもつ変異菌は、通常の環境圧力
調整技術（environmental pressure technique）
によつて発生し得、上記した酵素を生産すること
が判明した。 典型的な突然変異実験に於いて、SC7菌株を成
長するために使用されるBS培地のサンプルをア
ミノ酸分析した。このことから、菌株は、主とし
て、アミノ酸即ちアスパラギン酸、グルタミン
酸、アラニン、セリーンおよびグリシンを同化す
るものであることが判つた。従つて、アスパラギ
ン酸５ｍＭ、グルタミン酸５ｍＭ、アラニン５ｍ
Ｍ、セリーン２ｍＭ、グリシン１ｍＭおよびビオ
チン（１mg／）とグリセロール（２ｇ／）と
を含有するCCl培地を調整した。この培地を介す
るSC7のいくつかの連続的移転の後、培地をTSB
アガー上に載置すると形態学上の変異菌が発生す
ることが認められた。単一のコロニーを単離する
とGDHを生産することが認められたが、BS培地
での培養におるSC7形態はへの復帰の割合が高い
ので、生産量を算出することは困難であつた。 分析方法 GDH活性度に対する分析を次の方法で行なつ
た。本明細書中の活性度は、この分析によつて測
定された活性度である。 基本試薬： (i) 0.25Mトリエタノールアミン−HCl（PH8.5） (ii) 1Mグリセロール (iii) 10mg／mlNAD（ニコチンアミドアデニンジヌ
クレオチド） H₂O600μ、トリエタノールアミン−HCl溶液
200μ、NAD溶液25μおよび分析すべきサン
プル５〜200μを、つぼ（cuvette）（通路１cm）
内で混合した。30に予め平衡させた後、100μ
のグリセロール溶液を加えて反応を生起させた。 NADの還元を、スペクトル光度計手段で検知
し、340nｍの溶液の吸収を観察することにより
求めた。水又は試薬ブランクのいずれかを使用し
た。単位を△OD₃₄₀が0.06〜0.12／分の範囲にな
るように希釈して30℃で１分間当りに形成される
NADHのμmolで示した。 比較のため、トリエタノールアミン、リン酸塩
及び炭酸塩／重炭酸塩から成るPH８、8.5、９お
よび9.5の緩衝溶液中50μのサンプル（約0.5U／
ml）および酵素を含まない（ブランクを決定する
ため）50μの0.5Mジヒドロキシアセトンを使用
してこの方法を繰り返した。結果（△OD₃₄₀）を
第１に示す。

【表】 〓

50 μ 0.52U／ml 〓トリエタノールア
ミン／HCl 0.39 0.49 − −
この第１表から、“ブランク”は低PH及びトリ
エタノールアミン緩衝溶液中で非常に減じられて
いることが判る。サンプル反応は低PHで減じてい
るが、PH８でも充分である。 実施例 １ 400mlのフラスコ中で４ｇ／のグリセロール
を含有するBS培地（上記で定義した）100ml中
で、B.ステアロサーモフイラスRS93を60℃で12
〜16時間200rpmで振とうしながら生長させた。
得られた細胞物質を集積し、GDH活性の分析を
行つた。酵素の収率は８単位／ｇ乾燥細胞であ
り、0.03単位／ml培地であることが判明した。 実施例 ２ グリセロールを含有させずに、実施例１と同様
に行うと、酵素の生産量は２単位／ｇ乾燥細胞
（0.01単位／ml倍地）であつた。 実施例 ３及び４ B.ステアロサーモフイラスSC7菌株を用いて実
施例１及び２を繰り返した。生産量はそれぞれ
0.14単位／ml培地及び0.03単位／ml培地であつ
た。 実施例 ５ B.ステアロサーモフイラスSC7の１種培地
を、４ｇ／のグリセロールを含有する撹拌BS
培地中で60℃で調整した。これと同様の20種培
地の種づけのために使用した。 グリセロールを含有しない400の変性BS培地
が60℃で入つている400培地容器を、前記20
種培地で種づけした。培地が光学密度0.8を有す
るまで、60℃、7.0±0.2の調整PH、１分に300
の空気の通気、及び250rpmの撹拌下で微生物の
生長を続けた。 500ｇ／の水溶性グリセロール20を１時間
あたり1.5〜1.6の比率で600nｍの光学密度が1.3
〜1.4に達するまでに加えた。総培養時間が19時
間に達した後、培地を室温まで冷却し、細胞を
デ・ラバル遠心分離機（De Laval centrifuge）
で採取した。細胞をリン酸塩緩衝液
（KH₂PO₄534ｇ／Na₂HPO₄761ｇを200に調合
する）で洗滌する。8.0単位／ｇ湿潤細胞（35単
位／ｇ乾燥細胞）の比活性を示す細胞の総最終生
産量は湿つた状態で約16Kg（乾燥状態で４Kg）で
あり、400培地あたり128000単位の総収量であ
つた。 実施例 ６ （精製） B.ステアロサーモフイラスRS93の湿潤細胞ペ
ースト40ｇを40ｍＭリン酸カリウム（KP）、（PH
6.6）150mlで懸濁する。20Kサイクル／秒で５×
１分間の超音波処理により細胞を細砕する。
30000ｇで20分間遠心分離して細胞破砕物を除去
する。40ｍMKP（PH6.8）で新たにプレー平衡さ
せたDEAE−セルローズ（DE52；ワツトマン
バイオケミカルズ社製）で細胞抽出物をクロマト
グラフにかけた。細胞抽出物を１時間に60mlの割
合で110mlのカラム（14×3.2cm）に導入し、酵素
を直線状に変わる40から400ｍＭ KP（PH6.8）の
リン酸塩濃度勾配で、１時間に25mlの割合で総量
800mlを使用して溶離する。グリセロール デヒ
ドロゲナーゼは150から250ｍＭリン酸塩の濃度の
間に溶離される。活性分画を集め、10ｍＭ KP
（PH6.8）で透析する。さらに活性分を50ml（６×
32cm）のトリアジン染料−アガローゼカラム（例
えば、英国特許出願番号3505／78に記載）に１時
間100mlの割合で導入する。前記カラムは、セフ
アローズ4B（商標名）に1.0〜2.0mgdye／ｇセフア
ローゼの割合で結合したプロシオン（商標名）レ
ツドHE−3B又はプロシオンレツドHE−7B（プ
ロシオンレツド誘導体、カラーインデツクスNo.
C118159）から構成されている（英国特許出願番
号第3505／78参照）。カラムを10ｍＭ KP（PH
6.8）200mlで洗滌する。酵素を10ｍＭ KP（PH
6.8）中1MKCl100mlで溶離する。 或いは又、グリセロール、デヒドロゲナーゼ
を、それぞれPH6.8又は7.5で10ｍＭ KPのイオ
ン強度でプロシオン グリーンHE−4BD／セフ
アローゼ4B又はプロシオン レツドHE−3B／
セフアローゼ4Bに吸収させ得る。緩衝溶液でカ
ラムを洗滌後、酵素を、４ｍＭのNADを含有す
る10ｍＭ KPPH6.8又は7.5でそれぞれ溶離し得、
活性酵素を集め、限外ろ過膜（アミコン フラツ
トベツトPM10）で５mlの量まで濃縮する。次に
濃縮された酵素をゲルろ過するために交差結合ア
ガローゼ−ポリアクリルアミド共重合体（スウエ
ーデン国、LKB社製：ウルトロゲルAcA34）の
500mlカラム（100×2.5cm）へ１時間９mlの割合
で導入する。50ｍＭ KP（PH6.8）を展開溶媒と
し、分子量240000±30000のグリセロールデヒド
ロゲナーゼを採取する。プールした活性分画を
SDSポリアクリルアミドゲル電気泳動にかけると
58000±5000に単一たん白質帯が出現する。最終
精製酵素は５〜10単位／mgの比活性を有してい
る。顕著な各精製段階での比活性を表２に示す。

【表】 ーゼ プール
ACA 34 プール 55 7.8
実施例 ７ SC7菌株（実施例５）の細胞ペーストを使用し
て実施例６と同様におこなう。各段階の比活性を
表３に示す。 実施例 ８ 酵素はDEAEセルロースの古いサンプルや
EDAEデキストランゲル（セフアデツクス−商標
名）とは結合せず、新しい懸濁DEAEセルロース
と結することが知見された。ここでは、DEAE−
セルロースを使用しないこと以外は実施例７と同
様おこなう。PH7.5の30ｍＭ KPで細胞抽出物を
希釈し、次に30ｍＭ KP、PH7.5でプレー平衡さ
せたDEAE−デキストランゲル（セフアデツクス
Ａ−50−フアルマシア）の110mlカラムへ１分60
mlの割合で通す。 カラムを通過した活性酵素溶液を次に実施例６
と同様にトリアジン−アガロースカラムへ導入す
る。各段階の比活性を表３に示す。

【表】

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ (a) 下記のアミノ酸組成： 【表】 【表】 及び、 (b) Ｎ末端アミノ酸配列：Ala¹ Ala Glu Thr
   Val⁵ Phe Ile Ser Pro Ala¹⁰ Lys Tyr Val及
   び、 (c) 50ｍＭのリン酸カリウムと10ｍＭのβ−メル
   カプトエタノールと0.1ｍＭのフエニルメチル
   スルホニルフルオライドとからなるPH6.8の緩
   衝溶液中３mg／mlの溶液として20℃で貯蔵した
   場合の４日間以上の活性半減期、 を有することを特徴とするグリセロールデヒドロ
   ゲナーゼ酵素製剤。 ２ 30℃で蛋白質１mg当り少なくとも５単位の比
   活性度を有することを特徴とする特許請求の範囲
   第１項に記載の酵素製剤。 ３ 酵素活性量が0.1乃至50単位／mlである水溶
   液の形態にあることを特徴とする特許請求の範囲
   第１項又は第２項に記載の酵素製剤。 ４ 凍結乾燥物又は他の固体形態にあることを特
   徴とする特許請求の範囲第１項又は第２項に記載
   の酵素製剤。 ５ バチルスステアロサーモフイラス
   NCIB11400、NCIB11401又はそれらのグリセロ
   ールデヒドロゲナーゼ生産誘導菌株若しくは変異
   菌株から得られる特許請求の範囲第１項乃至第４
   項のいずれかに記載の酵素製剤。