PL203951B1 - Kompozycja adiuwantowa, kompozycja szczepionki oraz sposób jej wytwarzania, szczepionka oraz zastosowanie - Google Patents

Kompozycja adiuwantowa, kompozycja szczepionki oraz sposób jej wytwarzania, szczepionka oraz zastosowanie

Info

Publication number
PL203951B1
PL203951B1 PL351893A PL35189300A PL203951B1 PL 203951 B1 PL203951 B1 PL 203951B1 PL 351893 A PL351893 A PL 351893A PL 35189300 A PL35189300 A PL 35189300A PL 203951 B1 PL203951 B1 PL 203951B1
Authority
PL
Poland
Prior art keywords
saponin
antigen
vaccine
composition
cpg
Prior art date
Application number
PL351893A
Other languages
English (en)
Other versions
PL351893A1 (en
Inventor
Martin Friede
Nathalie Garcon
Philippe Hermand
Original Assignee
Smithkline Beecham Biolog
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=26315432&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=PL203951(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Priority claimed from GBGB9908885.8A external-priority patent/GB9908885D0/en
Priority claimed from US09/301,829 external-priority patent/US6558670B1/en
Application filed by Smithkline Beecham Biolog filed Critical Smithkline Beecham Biolog
Publication of PL351893A1 publication Critical patent/PL351893A1/xx
Publication of PL203951B1 publication Critical patent/PL203951B1/pl

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A61K39/0011—Cancer antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A61K39/0011—Cancer antigens
    • A61K39/001184—Cancer testis antigens, e.g. SSX, BAGE, GAGE or SAGE
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A61K39/0011—Cancer antigens
    • A61K39/001184—Cancer testis antigens, e.g. SSX, BAGE, GAGE or SAGE
    • A61K39/001186—MAGE
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A61K39/0011—Cancer antigens
    • A61K39/001184—Cancer testis antigens, e.g. SSX, BAGE, GAGE or SAGE
    • A61K39/001189—PRAME
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A61K39/0011—Cancer antigens
    • A61K39/00119—Melanoma antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A61P31/22—Antivirals for DNA viruses for herpes viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A61P33/02—Antiprotozoals, e.g. for leishmaniasis, trichomoniasis, toxoplasmosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A61P33/02—Antiprotozoals, e.g. for leishmaniasis, trichomoniasis, toxoplasmosis
    • A61P33/06—Antimalarials
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55505—Inorganic adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55555—Liposomes; Vesicles, e.g. nanoparticles; Spheres, e.g. nanospheres; Polymers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55561—CpG containing adjuvants; Oligonucleotide containing adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55566—Emulsions, e.g. Freund's adjuvant, MF59
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55577—Saponins; Quil A; QS21; ISCOMS
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55583—Polysaccharides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
    • A61K2039/6031—Proteins
    • A61K2039/6068—Other bacterial proteins, e.g. OMP
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Description

Opis wynalazku
Przedmiotem wynalazku jest kompozycja adiuwantowa, kompozycja szczepionki i sposób jej wytwarzania, szczepionka oraz zastosowanie.
Niniejszy wynalazek dotyczy w ogólności nowych kompozycji adiuwantowych do zastosowania w szczepionkach. Ujawnione niniejszym kompozycje adiuwantowe zawierają kombinację saponiny i immunostymuluj ącego oligonukleotydu sformuł owane z nośnikiem. Niniejszy wynalazek dostarcza również szczepionek zawierających takie kompozycje adiuwantowe i co najmniej jeden antygen. Ponadto dostarczone są sposoby wytwarzania kompozycji szczepionek i ich zastosowania jako leków. Rozwiązania według wynalazku umożliwiają leczenie osobników podatnych albo cierpiących na choroby przez pozajelitowe albo śluzówkowe podawanie szczepionek według wynalazku.
Immunostymulujące oligonukleotydy zawierające niemetylowane dinukleotydy CpG („CpG) są znane w tej dziedzinie jako adiuwanty przy podawaniu zarówno drogami ogólnoustrojowymi, jak i śluzówkowymi (WO 96/02555, EP 468520, Davis i wsp., J. Immunol, 1998, 160(2):870-876; McCluskie i Davis, J. Immunol., 1998, 161(9):4463-6). CpG jest skrótem dla dinukleotydowego motywu cytozynaguanozyna obecnego w DNA. Historycznie, zaobserwowano, że frakcja BCG DNA może wykazywać efekt przeciwnowotworowy. W dalszych badaniach pokazano, że syntetyczne oligonukleotydy pochodzące z sekwencji genu BCG mają zdolność do indukowania efektu immunostymulatorowego (zarówno in vitro, jak i in vivo). Autorzy tych badań wyciągnęli wniosek, że niektóre sekwencje palindromiczne, włączając w to centralny motyw CG niosą tę aktywność. Centralna rola motywu CG w immunostymulacji została dalej wyjaśniona w publikacji Krieg, Nature 374, str. 546, 1995. Szczegółowa analiza pokazała, że motyw CG musi być w pewnym kontekście sekwencji i takie sekwencje są powszechne w bakteryjnym DNA, ale rzadkie w DNA kręgowców. Sekwencją o właściwościach immunostymulujących jest często: puryna, puryna, C, G, pirymidyna, pirymidyna; przy czym motyw dinukleotydu CG jest niemetylowany, ale wiadomo, że również inne niemetylowane sekwencje CpG są immunostymulatorami i mogą być stosowane w niniejszym wynalazku.
W pewnych kombinacjach sześ ciu nukleotydów wystę puje sekwencja palindromiczna. Kilka z tych motywów, bą d ź jako powtórzenia jednego motywu, bą d ź kombinacja róż nych motywów, może być obecna w tym samym oligonukleotydzie. Obecność jednej albo większej liczby oligonukleotydów zawierających te sekwencje o właściwościach immunostymulujących może aktywować różne podzestawy immunologiczne, włączając w to komórki-naturalnych zabójców (tzw. komórki NK) (które wytwarzają interferon γ i mają aktywność cytolityczną) i makrofagi (Wooldrige i wsp., tom 89 (nr 8), 1977. Jednakże wykazano obecnie, że czynnikami immunostymulującymi są także inne sekwencje zawierające niemetylowane CpG, a nie mające takiej zgodnej sekwencji.
Kiedy CpG wchodzi w skład szczepionek, podaje się go zazwyczaj w postaci wolnego roztworu razem z wolnym antygenem (WO 96/02555; McCluskie i Davis, jak wyżej) lub kowalencyjnie skoniugowany z antygenem (publikacja PCT nr WO 98/16247) albo formułowany z nośnikiem takim, jak wodorotlenek glinu ((powierzchniowy antygen wirusa zapalenia wątroby) Davis i wsp., jak wyżej; Brazolot-Millan i wsp., Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 1998, 95(26), 15553-8).
Saponiny są omówione w Lacaille-Dubois, M i Wagner H. (1996. A review of the biological and pharmacological activities of saponins. Phytomedicine tom 2 str. 363-386). Saponiny są glikozydami steroidowymi albo triterpenowymi szeroko rozpowszechnionymi w królestwach roślin i morskich zwierząt. Saponiny odznaczają się tworzeniem koloidalnych roztworów w wodzie, które pienią się w czasie wytrząsania, oraz wytrącaniem cholesterolu. Kiedy saponiny znajdują się w pobliżu błon komórkowych, tworzą struktury typu porów w błonie, które powodują rozerwanie błon. Hemoliza erytrocytów stanowiąca przykład tego zjawiska, jest właściwością niektórych, ale nie wszystkich saponin.
Saponiny są znane jako adiuwanty w szczepionkach do podawania ogólnoustrojowego. Aktywność adiuwantowa i hemolityczna poszczególnych saponin była intensywnie badana w tej dziedzinie (Lacaille-Dubois i Wagner, jak wyżej). Przykładowo, Quil-A (pochodząca z kory południowoamerykańskiego drzewa Quillaja Saponaria Molina) i jego frakcje są opisane w US 5,057,540 oraz „Saponins as vaccine adjuvants Kensil, C. R., Crit Rev Ther Drug Carrier Syst, 1996, 12 (1-2):1-55; oraz EP 0362279 B1.
Struktury cząstkowe, nazwane kompleksami stymulującymi układ immunologiczny (ang. Immune Stimulating Complexes, ISCOM), zawierające frakcje Quil-A są hemolityczne i zostały zastosowane do wytwarzania szczepionek (Morein, B., EP 0109942 B1). Istnieją doniesienia o aktywności adiuwantowej tych struktur (EP 0109942 B1; WO 96/11711).
PL 203 951 B1
Saponiny hemolityczne QS21 i QSI7 (frakcje Quil-A oczyszczone przez HPLC) opisano jako silne adiuwanty ogólnoustrojowe, a sposób ich wytwarzania jest ujawniony w patentach USA nr 5,057,540 i EP 0362279 B1. W tych pozycjach literaturowych opisane jest również zastosowanie QS7 (niehemolityczna frakcja Quil-A), która działa jako silny adiuwant w szczepionkach ogólnoustrojowych. Zastosowanie QS21 jest dalej opisane w Kensil i wsp. (1991, J. Immunology tom 146, 431-437). Znane są również kombinacje QS21 i polisorbatu albo cyklodekstryny (WO 99/10008). Cząstkowe systemy adiuwantowe zawierające frakcje Quil-A, takie jak QS21 i QS7 są opisane w WO 96/33739 i WO 96/11711.
Inne saponiny, które zostały zastosowane w badaniach nad szczepionkami ogólnoustrojowymi obejmują te pochodzące z innych gatunków roślin, takich jak Gypsophila i Saponaria (Bomford i wsp., Vaccine, 10(9):572-577, 1992).
Wiadomo, że saponiny stosowano również w badaniach nad szczepionkami stosowanymi przezśluzówkowo, które uwieńczone zostały w różnym stopniu sukcesem w indukowaniu odpowiedzi immunologicznej. Wykazano uprzednio, że saponina Quil-A nie ma wpływu na indukcję odpowiedzi immunologicznej kiedy antygen jest podawany donosowo (Gizurarson i wsp., 1994. Vaccine Research 3, 23-29). Jednakże inni autorzy stosowali ten adiuwant z powodzeniem (Maharaj i wsp., Can. J. Microbiol, 1986, 32 (5):414-20; Chavali i Campbell, Immunobiology, 174 (3):347-59). ISCOM zawierające saponinę Quil-A zastosowano w preparatach szczepionki dojelitowych oraz donosowych i wykazywały one aktywność adiuwantowa (McI Mowat i wsp., 1991, Immunology, 72, 317-322; McI Mowat i Donachie, Immunology Today, 12, 383-385).
QS21, nietoksyczna frakcja Quil-A została również opisana jako adiuwant doustny albo donosowy (Sumino i wsp., J. Virol, 1998, 72 (6):4931-9; WO 98/56415).
Opisano zastosowanie innych saponin w badaniach nad szczepieniem donosowym. Przykładowo, saponiny Chenopodium quinoa zostały zastosowane zarówno w szczepionkach donosowych, jak i dojelitowych (Estrada i wsp., Comp. Immunol. Microbiol. Infect. Dis., 1998, 21(3):225-36).
Niniejszy wynalazek dotyczy zaskakującego ujawnienia, że kombinacje immunostymulujących oligonukleotydów (CpG) i saponiny są wyjątkowo silnymi adiuwantami. A zatem dostarczona jest niniejszym kompozycja adiuwantowa zawierająca saponinę i immunostymulujący oligonukleotyd, w której saponina jest w postaci liposomu formuł owanego z cholesterolem i lipidem lub emulsji oleju w wodzie. Saponina i oligonukleotyd w kompozycjach adiuwantowych dział ają synergistycznie przy indukowaniu przeciwciała swoistego wobec antygenu i mają zdolność indukowania odpowiedzi immunologicznych zwykle związanych z układem immunologicznym typu Th1. A zatem, kombinacja adiuwantowa według wynalazku jest odpowiednia nie tylko w immunoprofilaktyce chorób, ale również, ku zaskoczeniu, w immunoterapii chorób, takich jak utrzymujące się infekcje wirusowe, bakteryjne i pasożytnicze, a także chorób przewlekłych, takich jak nowotwory.
Korzystnie immunostymulujący oligonukleotyd w kompozycji adiuwantowej według wynalazku zawiera sekwencję puryna, puryna, CG, pirymidyna, pirymidyna. Również korzystnie immunostymulujący oligonukleotyd w kompozycji według wynalazku zawiera co najmniej dwa niemetylowane powtórzenia CG oddzielone przez co najmniej 3 nukleotydy, a korzystniej co najmniej dwa niemetylowane powtórzenia CG oddzielone przez 6 nukleotydów.
Niniejszym opisane oligonukleotydy są typowo deoksynukleotydami, a nukleotydy rozdzielające w oligonukleotydzie to fosforoditionian, a korzystniej wi ą zanie fosforotionianowe, jakkolwiek wią zanie fosfodiestrowe i inne wiązania międzynukleotydowe są również możliwe, w tym również oligonukleotydy z mieszanymi wiązaniami miedzynukleotydowymi. Sposoby wytwarzania oligonukleotydów fosforotionianowych albo fosforoditionianowych są opisane w US 5,666,153, US 5,278,302 i WO95/26204.
Korzystnie w kompozycji według wynalazku immunostymulujący oligonukleotyd jest wybrany z grupy obejmują cej:
OLIGO 1 (SEK NR ID: 1): TCC ATG ACG TTC CTG ACG TT (CpG 1826)
OLIGO 2 (SEK NR ID: 2): TCT CCC AGC GTG CGC CAT (CpG 1758)
OLIGO 3 (SEK NR ID: 3): ACC GAT GAC GTC GCC GGT GAC GGC ACC ACG
OLIGO 4 (SEK NR ID: 4): TCG TCG TTT TGT CGT TTT GTC GTT (CpG 2006)
OLIGO 5 (SEK NR ID: 5): TCC ATG ACG TTC CTG ATG CT (CpG 1668)
Możliwe jest też zastosowanie oligonukleotydów CpG zawierających powyższe sekwencje z mało znaczącymi delecjami albo addycjami. Oligonukleotydy CpG zastosowane w rozwiązaniach według wynalazku można zsyntetyzować dowolną ze znanych w tej dziedzinie metod (np. EP 468520). Oligonukleotydy takie można zsyntetyzować przy zastosowaniu automatycznego syntetyzatora.
PL 203 951 B1
Oligonukleotydy są typowo deoksyrybonukleotydami. Wiązanie międzynukleotydowe w oligonukleotydzie jest wiązaniem fosforoditionianowym lub wiązaniem fosforotionianowym, jakkolwiek fosfodiestry również mogą znaleźć zastosowanie. Rozważane są również odmienne połączenia międzynukleotydowe, np. mieszane fosforotionianowe fosforodiestry. Można zastosować też inne wiązania międzynukleotydowe, które stabilizują oligonukleotyd.
Korzystnie saponiny stosowane w kompozycji adiuwantowej według wynalazku obejmują te pochodzące z kory Quillaja Saponaria Molina, nazywane Quil A oraz ich frakcje opisane w US 5,057,540 i „Saponins as vaccine adjuvants”, Kensil, C. R., Crit Rev Ther Drug Carrier Syst, 1996, 12 (1-2):1-55;
oraz EP 0362279 B1. Korzystniej pochodną Quil A w kompozycji adiuwantowej jest QS21. Innymi istotnymi frakcjami Quil A są QS7 i QSI7. β-escyna jest inną hemolityczną saponiną, która może być stosowana w kompozycjach adiuwantowych. Escyna jest opisana w indeksie Mercka (wyd. 12: pozycja 3737) jako mieszanina saponin występująca w nasionach kasztanowca (łac. Aesculus hippocastanum). Opisano jej wydzielenie oraz oczyszczanie przez chromatografię (Fiedler, Arzneimittel-Forsch. 4,213 (1953)) oraz przez zastosowanie żywic jonowymiennych (Erbring i wsp., US 3,238,190). Frakcje escyny, α i β, oczyszczono i pokazano, że są aktywne biologicznie (Yoshikawa M, i wsp. (Chem Pharm Bull (Tokyo) 1996 Sierpień; 44(8): 1454-1464). W języku angielskim β-escyna („β-escin) jest również znana pod nazwą „aescin.
Kolejną hemolityczną saponiną, która może znaleźć zastosowanie w rozwiązaniach według wynalazku jest digitonina. Digitonina jest opisana w indeksie Mercka (wyd. 12: pozycja 3704) jako saponina pochodząca z nasion Digitalis purpurea i oczyszczana zgodnie z procedurą opisaną w Gisvold i wsp., J. Am. Pharm. Assoc, 1934, 23, 664; oraz Ruhenstroth-Bauer, Physiol.Chem., 1955, 301, 621. Opisano jej zastosowanie jako odczynnika chemicznego do oznaczania cholesterolu.
Opisane niniejszym kombinacje adiuwantowe mogą zawierać ponadto nośnik, tak że saponina lub CpG, albo obydwa mogą być związane z nośnikiem w postaci cząstek w celu zwiększenia właściwości adiuwantowych kombinacji. W szczególności szczepionki ogólnoustrojowe mogą zawierać cząsteczkę nośnika.
Korzystnie saponina w kompozycji adiuwantowej według wynalazku jest w postaci liposomu albo w postaci emulsji oleju w wodzie. Jak opisano niniejszym CpG zastosowane w kombinacjach adiuwantowych mogą być w wolnym roztworze albo w kompleksie z nośnikiem w postaci cząstek, takim jak sole mineralne (na przykład, nieograniczająco, sole glinu albo wapnia), liposomy, ISCOM, emulsje (olej w wodzie, woda w oleju, woda w oleju w wodzie), polimery (na przykład, nieograniczająco, polikwas mlekowy, polikwas glikolowy, polifosfazyna, poliaminokwas, alginian, chitozan) albo mikrocząstki. W szczególności mogą być stosowane nośniki kationowe.
Przedmiotem wynalazku jest też kompozycja szczepionki zawierająca kompozycję adiuwantowa według wynalazku i ponadto zawierająca antygen.
Antygen w opisanych niniejszym szczepionkach może być związany z kompleksem CpG-nośnik, albo może nie być związany z kompleksem CpG-nośnik. W tym przypadku, antygen może być wolna zawiesiną albo może być związany z odrębnym nośnikiem.
Antygen w kompozycji szczepionki według wynalazku pochodzi z organizmu wybranego z grupy obejmującej: ludzkiego wirusa niedoboru odporności, wirusa ospy wietrznej i półpaśca, wirusa opryszczki zwykłej typu 1, wirusa opryszczki zwykłej typu 2, ludzkiego wirusa cytomegalii, wirusa dengi, wirusa zapalenia wątroby A, B, C lub E, syncytialnego wirusa oddechowego, ludzkiego papillomawirusa, wirusa grypy, Hib, wirusa wywołującego zapalenie opon, Salmonella, Neisseria, Borrelia, Chlamydia, Bordetella, Streptococcus, Mycoplasma, Mycobacteria, Haemophilus, zarodźca lub toksoplazmę; antygen stanowi dekapeptyd Stanworth'a, albo antygeny związane z nowotworem (ang. tumor associated antigen, TAA), MAGE, BAGE, GAGE, MUC-1, Her-2-neu, CEA, PSA, KSA lub PRAME, albo własny hormon peptydowy, GnRH. Korzystnie w kompoycji szczepionki według wynalazku antygen ten pochodzi z grupy obejmującej (a) antygeny związane z nowotworem PSMA, PSCA, tyrozynazę, surwiwinę, NY-ESO1, prostazę, PS 108, RAGE, LAGE, HAGE; albo (b) N-końcowy 39-43 aminokwasowy fragment (Abeta) prekursorowego białka amyloidowego; albo (c) antygeny związane z miażdżycą tętnic.
Saponiny w opisanych niniejszym kompozycjach mogą być wyodrębnione w postaci miceli albo mogą być w postaci dużych uporządkowanych struktur, takich jak ISCOM (EP 0109942 B1) albo liposomy (WO 96/33739), kiedy zostaną zmieszane z cholesterolem i lipidem, albo w postaci emulsji olej w wodzie (WO 95/17210). Korzystne jest, jeżeli saponiny są związane z solami metali, takimi jak wodorotlenek glinu albo fosforan glinu (WO 98/15287). Alternatywnie saponina może być połączona
PL 203 951 B1 z noś nikiem w postaci czą stek, takim jak chitozan. Saponina mo ż e być również w postaci suchej, takiej jak proszek. Korzystnie końcowe preparaty szczepionki w postaci, w której są one podawane na powierzchnię śluzówki, mają właściwości hemolityczne. Saponina może być albo nie być związana fizycznie z antygenem przez bezpośrednie wiązanie, bądź współoddziaływanie z tą samą cząsteczką nośnika będącego w postaci cząstek (GB 9822712.7; WO 98/16247). CpG i saponina w adiuwantach albo szczepionkach mogą występować oddzielnie albo w postaci asocjatów. Przykładowo, CpG i saponina mogą być w wolnej zawiesinie albo mogą być połączone za pośrednictwem nośnika, przykładowo nośnika w postaci cząstek, takiego jak wodorotlenek glinu albo przez kationowy liposom albo ISCOM.
Opisana niniejszym kombinacja adiuwantowa składa się z jednego lub większej liczby oligonukleotydów CpG zawierających co najmniej 3, korzystnie co najmniej 6 nukleotydów pomiędzy dwoma sąsiednimi motywami CG, łącznie z QS21 i nośnikiem w postaci cząstek wybranym z grupy obejmującej emulsję oleju w wodzie lub DQ. Kompozycja adiuwantowa może zawierać CpG 2006 (SEK NR ID: 4), lub CpG 1758 (SEK NR ID: 2) lub CpG 1826 (SEK Nr ID: 1) zmieszane z QS21 oraz nośnikiem w postaci czą stek wybranym z grupy obejmują cej emulsję oleju w wodzie lub DQ. A zatem szczepionki mogą zawierać taką kompozycję adiuwantowa i antygen.
Korzystnie kompozycja szczepionki według wynalazku jest przeznaczona do podawania ogólnoustrojowo. Szczepionka podawana danemu osobnikowi drogą ogólnoustrojową jest przeznaczona do wytworzenia ogólnoustrojowych odpowiedzi immunologicznych. Również korzystnie kompozycja szczepionki według wynalazku jest przeznaczona do podawania przez śluzówkę. Korzystniej w takim przypadku saponina w kompozycji adiuwantowej zawartej w kompozycji szczepionki według wynalazku jest hemolityczną
Opisane niniejszym kombinacje adiuwantowe można zastosować zarówno jako adiuwanty ogólnoustroj owe, jak i śluzówkowe. Ogólnoustrojową szczepionka może być podawana drogą ogólnoustrojową albo pozajelitową, taką jak podawanie domięśniowe, doskórne, przezskórne, podskórne, dootrzewnowe i dożylne. Przykładem przezskórnej drogi podawania są plastry skórne.
Rozwiązania według wynalazku można stosować do ochrony albo leczenia ssaka podatnego albo cierpiącego na chorobę, przez podawanie szczepionki ogólnoustrojowej drogą domięśniową, dootrzewnową, doskórną, przezskórną, dożylną lub podskórną. Sposoby podawania ogólnoustrojowego preparatów szczepionek mogą obejmować konwencjonalne strzykawki i igły albo urządzenia zaprojektowane do podawania balistycznego szczepionek stałych (WO 99/27961) albo urządzenia do bezigłowego wstrzykiwania płynu pod ciśnieniem (US 4,596,556; US 5,993,412) albo plastrów skórnych (WO 97/48440; WO 98/28037). Rozwiązania według wynalazku można również zastosować do wzmacniania immunogenności antygenów stosowanych na skórę (podawanie przezskórne albo przeznaskórkowe WO 98/20734; WO 98/28037). Zatem niniejszym opisano urządzenia do dostarczania ogólnoustrojowego, wstępnie wypełnionych kompozycją szczepionki albo kompozycją adiuwantowa według wynalazku. Zatem rozwiązania według wynalazku umożliwiają indukowanie odpowiedzi immunologicznej u osobnika przez podawanie osobnikowi szczepionki zawierającej antygen i immunostymulujący oligonukleotyd, saponinę oraz nośnik, przy czym szczepionka jest podawana drogą pozajelitową albo ogólnoustrojową. Niniejszym opisano też sposoby indukowania odpowiedzi immunologicznej obejmujące podawanie szczepionki zawierającej oligonukleotyd o SEK NR ID: 1, 2, 3, 4, lub 5 z saponiną pochodzącą z Quil A, taką jak QS21, oraz nośnik taki, jak emulsja oleju w wodzie, liposom zawierający cholesterol albo alum.
Alternatywnie, rozwiązania według wynalazku można stosować do ochrony albo leczenia ssaka podatnego albo cierpiącego na chorobę, przez podawanie szczepionki drogą śluzówkową, takąj ak droga doustna/pokarmowa albo donosowa. Alternatywnymi drogami śluzówkowymi są droga dopochwowa i doodbytnicza. Sluzówokową drogą podawania jest droga donosowa, nazywaną szczepieniem donosowym. Sposoby szczepienia donosowego są dobrze znane w dziedzinie, włączając w to podawanie szczepionki w kroplach, rozpylaczu albo w postaci suchego proszku do nosogardzieli osobnika, który ma być immunizowany. Kompozycje rozpylane albo w aerozolu są również odpowiednie dla rozwiązań według wynalazku. Ponadto odpowiednie są kompozycje dojelitowe, takie jak oporne na soki żołądkowe kapsułki i granulki do podawania doustnego, czopki do podawania doodbytniczego albo dopochwowego.
Ujawnione niniejszym kombinacje adiuwantowe reprezentują klasę adiuwantów śluzowkowych odpowiednich do podawania ludziom w celu zastąpienia szczepienia ogólnoustrojowego przez szczepienie śluzówkowe. Tak więc czyste saponiny, takie jak Quil A i ich pochodne, włączając w to QS21,
PL 203 951 B1 escynę, digitoninę lub saponiny z Gypsophila i Chenopodium quinoa w kombinacji z immunostymulującymi oligonukleotydami można zastosować jako adiuwanty do podawania śluzowkowego antygenów w celu uzyskania ogólnoustroj owej odpowiedzi immunologicznej.
Kombinacja adiuwantowa według wynalazku jest stosowana w kompozycjach szczepionek, przy czym szczepionki są podawane drogą ogólnoustrojową albo śluzówkową. Korzystnie szczepionki stosowane do podawania kompozycji adiuwantowych drogą śluzówkową zawierają saponinę hemolityczną.
Kompozycja według wynalazku do podawania śluzowkowego korzystnie zawiera saponinę hemolityczną. Hemolityczność saponiny albo preparatu saponiny w znaczeniu tego wynalazku ustala się na podstawie następującego testu.
1. Świeżą krew od świnki morskiej przepłukuje się trzykrotnie roztworem soli fizjologicznej buforowanym fosforanem (PBS) w wirówce stołowej. Po ponownym zawieszeniu w wyjściowej objętości krew rozcieńcza się 10-krotnie w PBS.
2. 50 μΐ zawiesiny krwi dodaje się do 800 μΐ PBS zawierającego dwukrotne rozcieńczenia związku powierzchniowo czynnego albo saponiny.
3. Po 8 godzinach hemolizę ocenia się wizualnie albo przez pomiar gęstości optycznej supernatantu. Obecność czerwonego supernatantu, który adsorbuje światło o długości 570 nm wskazuje na obecność hemolizy.
4. Wyniki wyraża się jako stężenie pierwszego rozcieńczenia saponiny przy którym hemoliza już nie następuje.
Dla celów niniejszego wynalazku preparat adiuwantowy saponiny jest hemolityczny, jeżeli lizie poddawane są erytrocyty w stężeniu mniejszym niż 0,1%. Jako przykłady, zasadniczo czyste próbki Quil A, QS21, QS7, digitoniny oraz β-escyny wszystkie są hemolitycznymi saponinami jak zdefiniowano w tym teście. Uwzględniając nieodłączną zmienność eksperymentalną takiego testu biologicznego, saponiny według niniejszego wynalazku mają korzystnie aktywność hemolityczną wynoszącą w przybliżeniu pomiędzy 0,5-0,00001%, korzystniej pomiędzy 0,05-0,00001%, jeszcze korzystniej pomiędzy 0,005-0,00001%, a najkorzystniej pomiędzy 0,001-0,0004%. Idealnie, takie saponiny będą miały aktywność hemolityczną podobną (tj. w zakresie 10-krotnej różnicy) do aktywności hemolitycznej QS21.
Ujawnione niniejszym szczepionki można również podawać drogą doustną. W takich przypadkach farmaceutycznie dopuszczalna zaróbka może również obejmować bufory alkaliczne albo kapsułki lub mikrogranulki jelitowe. Szczepionki można również podawać drogą dopochwową. W takich przypadkach farmaceutycznie dopuszczalne zarobki mogą również obejmować emulgatory, polimery takie jak CARBOPOL® i inne znane stabilizatory kremów i czopków dopochwowych. Szczepionki można również podawać drogą doodbytniczą. W takich przypadkach farmaceutycznie dopuszczalne zarobki mogą również obejmować woski i polimery znane w tej dziedzinie do formowania czopków doodbytniczych.
Preparaty więcej niż jednej saponiny w kombinacjach adiuwantowych również zostały niniejszym ujawnione. Przykładem jest tu kombinacja co najmniej dwóch z następującej grupy obejmującej QS21, QS7, Quil A, β-escynę i digitoninę. Dodatkowo, kompozycje adiuwantowe mogą zawierać kombinację więcej niż jednego immunostymulującego oligonukleotydu.
Kombinacja CpG/saponina do podawania ogólnoustrojowego i śluzowkowego może być ponadto łączona z innymi adiuwantami obejmującymi monofosforylolipid A i jego nietoksyczną pochodną - 3-de-O-acylowany monofosforylolipid A. Alternatywne preparaty saponin można łączyć z nośnikami szczepionkowymi składającymi się z chitozanu lub innych polimerów polikationowych, cząstek polilaktydowych i kopolimeru polilaktydu i glikolidu, podłóż polimerowych z poli-N-acetyloglukozaminy, cząstek składających się z polisacharydów albo chemicznie modyfikowanych polisacharydów, liposomów i cząstek wytworzonych z lipidów, cząstek składających się z monoestrów glicerolowych itd. Saponiny można również przygotowywać w obecności cholesterolu w celu wytworzenia struktur cząstkowych, takich jak liposomy albo ISCOM. Ponadto, saponiny można preparować z eterem lub estrem polioksyetylenowym zarówno w roztworze niecząstkowym, jak i zawiesinie, albo strukturami w postaci cząstek, takimi jak liposomy paucilamelarne lub ISCOM. Ponadto saponiny można również preparować z zaróbkami, takimi jak Carbopol w celu zwiększenia lepkości albo można wytwarzać jako suchy proszek z zaróbką w proszku, taką jak laktoza.
3-de-O-acylowany monofosforylolipid A jest dobrze znanym adiuwantem wytwarzanym przez Ribi Immunochem, Montana. Można go wytworzyć przy zastosowaniu metody przedstawionej w GB 2122204B. Korzystną postacią 3-de-O-acylowanego monofosforylolipidu A jest postać emulsji o niewielkich rozmiarach cząstek i średnicach mniejszych niż 0,2 μm (EP 0 689 454 B1). Szczególnie
PL 203 951 B1 korzystnymi adiuwantami są kombinacje 3D-MPL i QS21 (EP 0 671 948 B1), emulsje olej w wodzie zawierające 3D-MPL i QS21 (WO 95/17210, WO 98/56414) lub 3D-MPL spreparowany z innymi nośnikami (EP 0 689 454 B1).
W ogólnoś ci preparaty szczepionki zawierają antygen albo kompozycję antygenową zdolną do wywoływania odpowiedzi immunologicznej przeciw ludzkiemu patogenowi, przy czym antygen albo kompozycja antygenowa pochodzi z HIV-1 (przykładowo tat, nef, gp120 lub gp160), wirusa ludzkiej opryszczki, przykładowo gD lub jego pochodne albo najwcześniejsze białko, takie jak ICP27 z HSV1 lub HSV2, wirusa cytomegalii (w szczególności ludzkiego) (przykładowo gB lub jego pochodne), rotawirusa (przykładowo żywe, osłabione wirusy), wirusa Epsteina-Barra (przykładowo gp350 lub jego pochodne), wirusa ospy wietrznej i półpaśca (przykładowo gpl, II i IE63) lub z wirusa zapalenia wątroby, takiego jak zapalenie wątroby B (przykładowo antygen powierzchniowy zapalenia wątroby B lub jego pochodne), z wirusa zapalenia wątroby A, wirusa zapalenia wątroby C i wirusa zapalenia wątroby E albo z innych patogenów wirusowych, takich jak paramyksowirusy: syncytialny wirus oskrzelowy (przykł adowo białka F i G lub ich pochodne), wirus parainfluenzy, wirus odry, wirus świnki, ludzki papillomawirus (na przykład HPV6,11, 16, 18), flawiwirusy (np. wirus żółtej febry, wirus dengi, wirus kleszczowego zapalenia mózgu, wirus japońskiego zapalenia mózgu) albo wirus grypy (cały żywy albo inaktywowany, podzielony wirus grypy, hodowany w jajach albo komórkach MDCK lub całe wirusomy grypy (jak opisano przez R. Gluck, Vaccine, 1992, 10, 915-920) albo jego oczyszczone lub zrekombinowane białka, takie jak białko HA, NP, NA lub M albo ich kombinacja), albo pochodzi z bakteryjnych patogenów takich jak Neisseria spp., włączając w to N. gonorrhea i N. meningitidis (na przykład polisacharydy kapsularne i ich koniugaty, białka wiążące transferynę, białka wiążące laktoferynę, Pi1C, adhezyny); S. pyogenes (na przykład białka M lub ich fragmenty, proteaza C5A, kwasy lipotejchojowe), S. agalactiae, S. mutans; H. ducreyi; Moraxella spp, włączając w to M. catarrhalis, znaną także jako Branhamella catarrhalis (na przykład adhezyny o wysokiej i niskiej masie cząsteczkowej i inwazyny); Bordetella spp, łącznie z B. pertussis (na przykład pertaktyna, toksyna krztuśca lub jej pochodne, filamentarna hemaglutynina, cyklaza adenylanowa, fimbrie), B. parapertussis i B. bronchiseptica: Mycobacterium spp., łącznie z M. tuberculosis (na przykład ESAT6, antygen 85A, -B lub -C), M. bovis, M. leprae, M. avium, M. paratuberculosis, M. smegmatis; Legionella spp, łącznie z L. pneumophila; Escherichia spp, łącznie z enterotoksyczną E. coli (na przykład czynniki kolonizacji, toksyna wrażliwa na wysoką temperaturę lub jej pochodne, toksyna stabilna w wysokiej temperaturze lub jej pochodne), E. coli wywołującej krwawienie przewodu pokarmowego, enteropatogennej E. coli (na przykład toksyna podobna do toksyny shiga lub jej pochodne); Vibrio spp, łącznie z V. cholera (na przykład toksyna cholery lub jej pochodne); Shigella spp, łącznie z S. sonnei, S. dysenteriae, S. flexnerii; Yersinia spp., łącznie z Y. enterocolitica (na przykład białko Yop), Y. pestis, Y. pseudotuberculosis; Campylobacter spp., łącznie z C. jejuni (na przykład toksyny, adhezyny i inwazyny) i C. coli; Salmonella spp., włączając w to S. typhi, S. paratyphi, S. choleraesuis, S. enteritidis, Listeria spp., łącznie z L. monocytogenes; Helicobacter spp., łącznie z H. pylori (na przykład ureaza, katalaza toksyna wakuolizująca); Pseudomonas spp., łącznie z P. aeruginosa; Staphylococcus spp., łącznie z S. aureus, S. epidermidis; Enterococcus spp., łącznie z E. faecalis, E. faecium; Clostridium spp., łącznie z C. tetani (na przykład toksyna tężca i jej pochodne), C. botulinum (na przykład toksyna jadu kiełbasianego i jej pochodne), C. difficile (na przykład toksyny klostridium A lub B i ich pochodne); Bacillus spp., łącznie z B. anthracis (na przykład jad kiełbasiany i jego pochodne); Corynebacterium spp., łącznie z C. diphtheriae (na przykład toksyna błonnicy i jej pochodne); Borrelia spp., łącznie z B. burgdorferi (na przykład OspA, OspC, DbpA, DbpB), B. garinii (na przykład OspA, OspC, DbpA, DbpB), B. afzelii (na przykład OspA, OspC, DbpA, DbpB), B. andersonii (na przykład OspA, OspC, DbpA, DbpB), B. hermsii; Ehrlichia spp., łącznie z E. equi oraz czynnikiem ludzkiej granulocytarnej ehrlichiozy; Rickettsia spp, łącznie z R. rickettsii; Chlamydia spp., łącznie z C. trachomatis (na przykład MOMP, białka wiążące heparynę), C. pneumoniae (na przykład MOMP, białka wiążące heparynę), C. psittaci; Leptospira spp., łącznie z L. interrogans, Treponema spp., łącznie z T. pallidum (na przykład rzadkie biała błony zewnętrznej); T. denticola, T. hyodysenteriae; albo pochodzące z pasożytów, takich jak Plasmodium spp., łącznie z P. falciparum; Toxoplasma spp., łącznie z T. gondii (na przykład SAG2, SAG3, Tg34); Entamoeba spp., łącznie z E. histolytica; Babesia spp., włączając w to B. microti; Trypanosoma spp., łącznie z T. cruzi; Giardia spp., łącznie z G. lamblia; Leshmania spp., łącznie z L. major; Pneumocystis spp., łącznie z P. carinii; Trichomonas spp., łącznie z T. vaginalis; Schisostoma spp., łącznie z S. mansoni albo pochodzące z drożdży, takich jak Candida spp., łącznie z C. albicans; Cryptococcus spp., łącznie z C. neoformans.
PL 203 951 B1
Innymi korzystnymi swoistymi antygenami dla M. tuberculosis są, na przykład Tb Ra12, Tb H9, Tb Ra35, Tb38-1, Erd 14, DPV, MTI, MSL, mTTC2 i hTCCl (WO 99/51748). Białka dla M. tuberculosis obejmują również białka fuzyjne i ich warianty, przy czym co najmniej dwa, korzystnie trzy polipeptydy M. tuberculosis są połączone w większe białko. Korzystne fuzje obejmują Ra12-TbH9-Ra35, Erd14-DPV-MTI, DPV-MTI-MSL, Erd14-DPV-MTI-MSL-mTCC2, Erd14-DPV-MTI-MSL, DPV-MTI-MSLmTCC2, TbH9-DPV-MTI (WO 99/51748).
Najkorzystniejsze antygeny dla Chlamydia obejmują, na przykład białko o wysokiej masie cząsteczkowej (ang. High Molecular Weight Protein, HWMP) (WO 99/17741), ORF3 (EP 366 412) i przypuszczalne białka błonowe (ang. putative membranę proteins, Pmps). Inne antygeny Chlamydia do preparatów szczepionki można wybrać z grupy opisanej w WO 99/28475.
Korzystne szczepionki bakteryjne zawierają antygen pochodzący ze Streptococcus spp., łącznie z S. pneumoniae (na przykład polisacharydy kapsularne i ich koniugaty, PsaA, PspA, streptolizyna, białka wiążące cholinę) oraz antygen białkowy pneumolizynę (Biochem Biophys Acta, 1989, 67, 1007; Rubins i wsp., Microbial Pathogenesis, 25, 337-342) oraz ich zmutowane detoksyfikowane pochodne (WO 90/06951; WO 99/03884). Inne korzystne szczepionki bakteryjne zawierają antygeny pochodzące z Haemophilus spp., łącznie z H. influenzae typ B (na przykład PRP i jego koniugaty), nie podlegającej typowaniu H. influenzae, na przykład OMP26, adhezyny o wysokiej masie cząsteczkowej, P5, P6, białko D i lipoproteina D oraz fimbryna i peptydy pochodzące z fimbryny (US 5,843,464) lub ich wielokopiowe warianty albo ich białka fuzyjne.
Pochodne powierzchniowego antygenu zapalenia wątroby B są dobrze znane w dziedzinie i obejmuj ą miedzy innymi, antygeny PreS1, PreS2 S opisane w europejskich zgł oszeniach patentowych EP-A-414 374; EP-A-0304 578 i EP 198-474. W jednym z korzystnych aspektów kompozycja szczepionki zawiera antygen HIV-1, gp120, szczególnie, kiedy jest wyrażany w komórkach CHO. Preparat szczepionki może też zawierać gD2t jak zdefiniowano powyżej.
W skład szczepionki zawierającej adiuwant moż e wchodzić antygen pochodzący z ludzkiego papillomawirusa (ang. Humań Papilloma Virus, HPV) uważanego za odpowiedzialny za kłykciny genitalne (HpV 6 lub HPV 11 i inne) oraz wirusy HPV odpowiedzialne za raka szyjki macicy (HPV 16, HPV 18 i inne).
Szczególnie korzystne postacie profilaktycznych albo leczniczych szczepionek przeciw kłykcinom genitalnym zawierają cząstki L1 lub kapsomery i białka fuzyjne zawierające jeden albo większą liczbę antygenów wybranych spośród białek HPV 6 i HPV 11: E6, E7, L1 i L2.
Najkorzystniejszymi białkami fuzyjnymi są: L2E7 jak ujawniono w WO 96/26277 i białko D(1/3)-E7 ujawnione w GB 9717953.5 (PCT/EP98/05285).
W przypadku korzystnej profilaktycznej albo leczniczej szczepionki przeciw infekcjom lub nowotworowi szyjki macicy kompozycja może zawierać antygeny HPV 16 i 18, na przykład, antygenowe monomery, L1 lub L2, albo antygeny L1 lub L2 prezentowane razem jako cząstka wirusopodobna (ang. virus like particie, VLP) albo samo białko L1 prezentowane samodzielnie w VLP lub strukturze kapsomeru. Takie antygeny, cząsteczki wirusopodobne i kapsomery są jako takie znane. Patrz na przykład WO94/00152, WO94/20137, WO94/05792 i WO93/02184.
Dodatkowe wczesne białka mogą być zawarte w kompozycjach same albo jako białka fuzyjne, takie jak na przykład E7, E2 lub korzystnie E5; szczególnie korzystne postacie tego wykonania obejmują VLP zawierające fuzyjne białka L1E7 (WO 96/11272).
Szczególnie korzystne antygeny HPV 16 obejmują wczesne białka E6 lub E7 jako fuzje z nośnikiem - białkiem D - z wytworzeniem fuzji Białko D - E6 lub E7 z HPV 16, albo ich kombinacje; albo kombinacje E6 lub E7 z L2 (WO 96/26277).
Alternatywnie, wczesne białka E6 lub E7 z HPV 16 albo 18 mogą być prezentowane jako pojedyncza cząsteczka, korzystnie fuzja Białko D - E6/E7. Takie szczepionki zawierają ewentualnie jedno albo obydwa białka E6 i E7 z HPV 18, korzystnie w postaci białka fuzyjnego Białko D - E6 lub Białko D - E7 albo biał ka fuzyjnego Biał ko D E6/E7.
Szczepionka może dodatkowo zawierać antygeny z innych szczepów HPV, korzystnie ze szczepów HPV 31 lub 33.
Szczepionki mogą zawierać ponadto antygeny pochodzące z pasożytów, które wywołują malarię. Przykładowo, korzystne antygeny z Plasmodia falciparum obejmują RTS,S i TRAP. RTS jest hybrydowym białkiem zawierającym zasadniczo całą C-końcową cześć białka circumsporozoitu (CS) P. falciparum połączoną za pośrednictwem czterech aminokwasów części preS2 antygenu powierzchniowego zapalenia wątroby B z antygenem powierzchniowym wirusa zapalenia wątroby B (S). Jego
PL 203 951 B1 pełna struktura jest ujawniona w międzynarodowym zgłoszeniu patentowym PCT/EP92/02591, opublikowanym pod numerem WO 93/10152 zastrzegającym pierwszeństwo ze zgłoszenia patentowego UK Nr 9124390.7. Kiedy wyrażane w drożdżach RTS jest wytwarzane jako cząstka lipoproteinowa, a kiedy wyrażane jest wspólnie z antygenem S z HBV to wytwarzane jest jako cząstki mieszane znane jako RTS,S. Antygeny TRAP są opisane w międzynarodowym zgłoszeniu patentowym PCT/GB89/00895, opublikowanym jako WO 90/01496. Szczepionka przeciwko malarii może obejmować preparat antygenowy zawierający kombinację antygenów RTS,S i TRAP. Inne antygeny Plasmodium, które są dobrymi kandydatami na składniki szczepionki przeciwko malarii w różnych jej stadiach to MSP1, AMA1, MSP3, EBA, GLURP, RAP1, RAP2, sekwestryna, PfEMP1, Pf332, LSA1, LSA3, STARP, SALSA, PfEXP1, Pfs25, Pfs28, PFS27/25, Pfs16, Pfs48/45, Pfs230 z P. faciparum i ich analogi z Plasmodium spp.
Preparaty mogą również zawierać antygen przeciwnowotworowy i mogą być przydatne do immunoterapeutycznego traktowania nowotworów. Przykładowo, kompozycje adiuwantowe znajdują zastosowanie z antygenami odrzucania nowotworów, takich jak nowotwory prostaty, sutka, okrężnicy i odbytnicy, płuc, trzustki, nerki i czerniaka. Przykładowe antygeny obejmują antygeny MAGE 1 i MAGE 3 lub inne antygeny MAGE (do leczenia czerniaka), PRAME, BAGE lub GAGE (Robbins i Kawakami, 1996, Current Opinions in Immunology 8, str. 628-636; Van den Eynde i wsp., International Journal of Clinical & Laboratory Research (wysłany do druku 1997); Correale i wsp., (1997), Journal of the National Cancer Institute 89, str. 293). Rzeczywiście, antygeny te są wyrażane w znacznej liczbie nowotworów, takich jak czerniak, rak płuc, mięsak i mięsak pęcherza. Inne antygeny swoiste wobec nowotworów, odpowiednie do zastosowania z kompozycją adiuwantową według wynalazku, obejmują między innymi swoiste wobec nowotworu gangliozydy, antygen swoisty wobec prostaty (PSA) lub Her-2/neu, KSA (GA733), PAP, mammaglobinę, MUC-1, antygen kanceroembrionalny (ang. carcinoembryonic antigen, CEA). Tak więc dostarczona szczepionka może zawierać kompozycję adiuwantową według wynalazku i antygen odrzucania nowotworu.
Szczepionki zawierające antygen nowotworowy są zaskakująco silne w terapii nowotworów, takich jak nowotwory prostaty, sutka, okrężnicy i odbytnicy, płuc, trzustki, nerek, jajników i czerniaka. Zatem preparaty mogą zawierać antygen związany z nowotworem, jak również antygeny związane z mechanizmami podtrzymującymi nowotwory (np. angiogenezą, inwazją nowotworu). Dodatkowo, antygeny szczególnie odpowiednie do szczepionek w terapii nowotworu zawierają również antygen błonowy swoisty dla prostaty (ang. Prostate-specific membranę antigen, PSMA), antygen komórek macierzystych prostaty (ang. Prostate Stern Cell Antigen, PSCA), tyrozynazę, surwiwinę, NY-ESO1, prostazę, PS 108 (WO 98/50567), RAGE, LAGE, HAGE. Dodatkowo, taki antygen może być własnym hormonem białkowym, takim jak pełnej długości hormon uwalniający gonadotropinę (ang. Gonadotrophin hormone releasing hormon, GnRH, WO 95/20600), krótki 10 aminokwasowy peptyd przydatny w leczeniu wielu nowotworów albo immunokastracji.
Przewiduje się, że kompozycje według niniejszego wynalazku będą używane do wytwarzania szczepionek zawierających antygeny pochodzące z Borrelia spp. Przykładowo, antygeny mogą obejmować kwas nukleinowy, antygen albo preparaty antygenowe pochodzące z patogenu, białka i peptydy wytwarzane przez rekombinowanie DNA oraz chimerowe białka fuzyjne. W szczególności antygenem jest OspA. OspA może być całym dojrzałym białkiem w postaci lipidowanej za pośrednictwem komórki gospodarza (E. coli), nazwanym Lipo-OspA, albo pochodną nielipidowaną. Takie nielipidowane pochodne obejmują nielipidowane białko fuzyjne NSI-OspA, które ma pierwsze 81 N-końcowych aminokwasów niestrukturalnego białka (NSI) wirusa grypy i kompletne białko OspA, a inne, MDP-OspA jest nielipidowaną postacią OspA zawierającą 3 dodatkowe N-końcowe aminokwasy.
Szczepionki według niniejszego wynalazku mogą być przydatne w profilaktyce albo terapii alergii. Takie szczepionki będą zawierały antygeny swoiste wobec alergenu (na przykład Der p1) i nieswoiste wobec alergenu (na przykład peptydy pochodzące z ludzkiej IgE, łącznie z, ale nie ograniczając się do dekapeptydu Stanworth (EP 0 477 231 B1)).
Szczepionki według niniejszego wynalazku mogą być również przydatne do profilaktyki lub terapii przewlekłych chorób, takich jak choroby alergiczne, nowotworowe i zakaźne. Takimi chorobami przewlekłymi są choroby takie, jak miażdżyca tętnic i choroba Alzheimera.
Antygenami do profilaktyki i leczenia pacjentów podatnych albo cierpiących na neurodegeneracyjną chorobę Alzheimera są w szczególności N-końcowy 39-43 aminokwasowy fragment (AP) prekursorowego białka amyloidowego i mniejsze fragmenty. Antygen ten jest ujawniony w międzynarodowym zgłoszeniu patentowym WO 99/27944 (Athena Neurosciences).
PL 203 951 B1
Ilość białka w każdej dawce szczepionki jest wybrana z ilości, która w typowych szczepionkach indukuje ochronną odpowiedź immunologiczną bez znaczących szkodliwych skutków ubocznych.
Takie ilości będą różnić się zależnie od tego, który konkretny immunogen został użyty i jak jest on prezentowany. Ogólnie oczekuje się, że każda dawka będzie zawierała 1-1000 μg białka, korzystnie 1-500 μg, korzystniej 1-100 μg, najkorzystniej 1 do 50 μg. Optymalna ilość dla konkretnej szczepionki może zostać ustalona przez standardowe badania obejmujące obserwacje odpowiednich odpowiedzi immunologicznych w szczepionych osobnikach. Po wstępnym szczepieniu, osobnik może otrzymać jedną albo większą liczbę immunizacji przypominających w odpowiednich odstępach czasowych. Taka kompozycja szczepionki może być podawana na powierzchnię śluzowkową ssaka zarówno w przypadku pierwszego, jak i przypominającego szczepienia, albo alternatywnie może być podawana ogólnoustrojowo, na przykład drogą przezskórną, podskórną albo domięśniową.
Ilość CpG albo immunostymulujących oligonukleotydów w kompozycji adiuwantowej albo kompozycji szczepionki według niniejszego wynalazku jest generalnie bardzo mała, ale w zależności od preparatu szczepionki może być w okolicy 1-1000 μg na dawkę, korzystnie 1-500 μg na dawkę, a korzystniej między 1-100 μg na dawkę.
Ilość saponiny do zastosowania w adiuwantach według niniejszego wynalazku może być w okolicy 1-1000 μg na dawkę, korzystnie 1-500 μg na dawkę, korzystniej 1-250 μg na dawkę, a najkorzystniej pomiędzy 1 a 100 μg na dawkę. Proporcja CpG:saponina (wag./wag.) będzie zatem w zakresie od 1:1000 do 1000:1, a typowo będzie w zakresie od 1:100 do 100:1, a korzystnie w zakresie 1:10 do 1:1 lub 1:1 do 10:1, a najkorzystniej 1:1,4:1 lub 10:1.
Kompozycje według wynalazku można stosować zarówno w celach profilaktycznych jak i leczniczych. Przedmiotem wynalazku jest zatem zastosowanie kombinacji saponiny i cząsteczki CpG do wytwarzania szczepionki do zapobiegania i leczenia infekcji wirusowych, bakteryjnych, pasożytniczych, alergii, nowotworów lub innych chorób przewlekłych. Możliwe jest również stosowanie rozwiązań według wynalazku do leczenia innych chorób nieprzewlekłych. Niniejszym opisane zostały sposoby leczenia ssaka podatnego na albo cierpiącego na chorobę zakaźną albo nowotworową albo alergię albo chorobę autoimmunologiczną. W dalszym aspekcie niniejszego wynalazku dostarczona jest szczepionka do zastosowania jako lek. Wytwarzanie szczepionki jest generalnie opisane w New Trends and Developments in Vaccines, pod red. Voller i wsp., University Park Press, Baltimore, Maryland, USA 1978.
Przewiduje się, że kompozycje według wynalazku będą stosowane do wytwarzania szczepionek zawierających antygeny pochodzące z rozmaitych źródeł. Przykładowo, antygeny mogą obejmować ludzki, bakteryjny, albo wirusowy kwas nukleinowy, antygen albo preparaty antygenowe pochodzące z patogenu, antygen albo preparaty antygenowe pochodzące z nowotworu, antygeny pochodzące z gospodarza, włączając w to peptydy pochodzące z IgE, takie jak dekapeptyd IgE uwalniający histaminę (znany jako dekapeptyd Stanworth), białka i peptydy wytwarzane przez rekombinowanie DNA oraz chimerowe białka fuzyjne.
Niniejszy wynalazek dostarcza kompozycję szczepionki ogólnoustrojowej zawierającej antygen, saponinę i immunostymulujący oligonukleotyd. A zatem rozwiązania według wynalazku umożliwiają leczenie osobnika podatnego na albo cierpiącego na chorobę przez podawanie osobnikowi kompozycji zasadniczo tu opisanej drogą ogólnoustrojową. Możliwe jest również zapobieganie nabywaniu przez osobnika choroby wybranej z grupy obejmującej bakteryjne i wirusowe choroby zakaźne, choroby pasożytnicze, nowotwory prostaty, sutka, okrężnicy i odbytnicy, płuc, trzustki, nerek, jajników i czerniaka, nienowotworowe choroby przewlekłe, alergię, chorobę Alzheimera, miażdżycę tętnic, przez podawanie osobnikowi kompozycji zasadniczo tu opisanej drogą ogólnoustrojową.
Alternatywnie, niniejszy wynalazek dostarcza dośluzówkowej kompozycji szczepionki zawierającej antygen i hemolityczną saponinę. A zatem rozwiązania według wynalazku umożliwiają leczenie osobnika podatnego albo cierpiącego na chorobę przez podawanie osobnikowi kompozycji zasadniczo tu opisanej na powierzchnią śluzówkową tego osobnika.
Niniejszym opisany jest sposób indukowania ogólnoustrojowej, swoistej wobec antygenu odpowiedzi immunologicznej u ssaka, obejmujący podawanie na powierzchnią śluzówkową tego osobnika kompozycji szczepionki zawierającej antygen i hemolityczną saponinę.
Przedmiotem wynalazku jest również sposób wytwarzania kompozycji szczepionki według wynalazku obejmujący zmieszanie saponiny, immunostymulującego oligonukleotydu oraz antygenu, przy czym saponina jest w postaci liposomu formułowanego z cholesterolem i lipidem lub emulsji oleju w wodzie. Korzystnie sposób wytwarzania szczepionki według wynalazku obejmuje zmieszanie naPL 203 951 B1 stępujących składników: (a) saponiny, (b) immunostymulującego oligonukleotydu i (c) antygenu, przy czym saponina jest w postaci liposomu, a oligonukleotyd zawiera niemetylowany dinukleotyd CpG. Również korzystnie w sposób wytwarzania szczepionki obejmuje zmieszanie następujących składników: (a) saponiny, (b) immunostymulującego oligonukleotydu i (c) antygenu, przy czym saponina jest w postaci emulsji oleju w wodzie, a oligonukleotyd zawiera niemetylowany dinukleotyd CpG.
Przykłady odpowiednich farmaceutycznie dopuszczalnych zaróbek do zastosowania w rozwiązaniach według wynalazku obejmują wodę, buforowaną fosforanem sól fizjologiczną i buforowane roztwory izotoniczne.
Opis figur
Fig. 1: Miana IgG swoistych wobec OspA 14 dni po donosowym szczepieniu przypominającym.
Fig. 2: Miana LA2 swoistych wobec OspA 14 dni po donosowym szczepieniu przypominającym.
Fig. 3: Miana IgG swoistych wobec szczepu wirusa grypy w surowicy 14 dni po donosowym szczepieniu przypominającym.
Fig. 4: Miana HAI (hamowania hemaglutynacji) w surowicy swoistego wobec szczepu wirusa grypy 14 dni po donosowym szczepieniu przypominającym.
Fig. 5: Miana LA2 swoistych wobec OspA u myszy
Fig. 6: Aktywność komórek śledziony, powodująca proliferację limfocytów swoista wobec gp120 u immunizowanych myszy. Aktywność swoista wobec antygenu wyraż ono jako SI dla róż nych stężeń antygenów we wszystkich 4 grupach eksperymentalnych.
Fig. 7: Aktywność CTL komórek śledziony swoista wobec HBsAg u immunizowanych myszy. Aktywność komórek efektorowych badano w teście wykorzystującym uwalnianie 51Cr w komórkach P815 (pokazane jako niewypełnione kółka) oraz w s-transfekowanych komórkach P815 (pokazane jako wypełnione kółka).
Fig. 8: Odpowiedzi przeciwciał swoiste wobec HBsAg u immunizowanych myszy. Miana swoistych przeciwciał (wyrażone jako EU/ml) oraz profile izotypowe określono w testach ELISA. Wartości dla zlanych surowic pokazano w tabeli; rozkład izotypów przedstawiono również w postaci graficznej.
Fig. 9: Aktywność komórek śledziony powodująca proliferację limfocytów swoista wobec gp120 i HBSAg u immunizowanych myszy. Aktywność swoista wobec antygenów wyraż ono jako SI dla róż nych ich stężeń antygenu we wszystkich 4 grupach eksperymentalnych.
Fig. 10: Aktywność CTL komórek śledziony swoista wobec HBsAg i gp120 u immunizowanych myszy. Aktywność komórek efektorowych badano w teście wykorzystującym uwalnianie 51Cr w kontrolnych komórkach P815 (pokazane jako niewypełnione symbole) lub w komórkach P815 prezentujących epitopy dla HBsAg i gp120 (pokazane jako wypełnione symbole).
Fig. 11: Odpowiedzi przeciwciał swoiste wobec HBsAg i gp120 u immunizowanych myszy. Miana swoistych przeciwciał (wyrażone jako μ/ml) (fig. 11 A) oraz profile izotypowe określono w testach ELISA. Wartości dla zlanych surowic pokazano w tabeli; rozkład izotypów przedstawiono również w postaci graficznej. Fig 11B przedstawia wzór izotypowy przeciwciał swoistych dla gp120.
Fig. 12: Rozwój średniego wzrostu nowotworu w czasie w grupie 10 zwierząt.
Niniejszy wynalazek będzie zilustrowany nieograniczająco przez następujące przykłady.
P r z y k ł a d 1
Zastosowanie QS21 oraz CpG do donosowego szczepienia przypominającego dla ogólnoustrojowych przeciwciał skierowanych przeciw Lipo-OspA.
W niniejszym przykładzie badano, czy lityczne saponiny, takie jak QS21, oraz czynniki immunostymulujące takie, jak CpG, są zdolne do wzmocnienia w sposób synergiczny ogólnoustrojowych odpowiedzi immunologiczych na donosowe szczepienie przypominające u myszy. Samice myszy Balb/c (po 5 zwierząt w grupie) w wieku 8 tygodni, immunizowano domięśniowo lipo-OspA (1 μg) przygotowanym w alumie (50 μg). Po 3 miesiącach myszy poddawano donosowemu szczepieniu przypominającemu (pod narkozą) 10 μl roztworu (po 5 μl na nozdrze, podawane kropelkowo pipetą), zawierającego 5 μg lipo-OspA w A: PBS; B: 20 μg CpG 1001 (TCC ATG AGC TTC CTG ACG TT, Krieg 1826); C: 5 μg QS21 (otrzymane z Cambridge Biotech, USA); D: 20 μg CpG 1001 + 5 (ag QS21 lub E: domięśniowemu zastrzykowi 1 (ag lipo-OspA zaadsorbowanemu na alumie (50 μg). Fig. 1 i fig. 2 przedstawiają miana IgG swoistych wobec OspA oraz miana LA2 14 dni po donosowym szczepieniu przypominającym.
PL 203 951 B1
Sposoby
Test ELISA w celu zmierzenia IgG swoistych wobec OspA w surowicy myszy
Płytki immunologiczne Maxisorp Nunc opłaszczono przez noc w 4°C, 50 μΐ na studzienkę, roztworu 1 μg/ml OspA rozcieńczonego w PBS (w rzędach od B do H płytki) lub 50 μl roztworu 5 μg/ml oczyszczonych kozich anty-mysich Ig (Boerhinger) w PBS (rząd A). Wolne miejsca tych płytek blokowano (1 godzina, 37°C) wykorzystując roztwór nasycający: PBS zawierający 1% BSA, 0,1% TWEEN 20 oraz 4% normalnej surowicy bydlęcej (NBS). Następnie, seryjne dwukrotne rozcieńczenia mieszaniny izotypowej IgG, rozcieńczonej w buforze nasycającym (50 μl na studzienkę), stosując je jako krzywą standardową (mieszanina mysich monoklonalnych przeciwciał IgG1, IgG2a i IgG2b z Sigma, począwszy od 200 ng/ml - rząd A) oraz próbki surowicy (począwszy od rozcieńczenia 1:100 - rzędy od B do H) inkubowano przez godzinę i 30 minut w 37°C. Następnie płytki przemywano (trzy razy) w roztworze do płukania (PBS, 0,1% TWEEN 20). Po czym inkubowano z biotynylowanymi kozimi przeciwciałami anty-mysimi IgG (Amersham), rozcieńczonymi 1:5000 w buforze nasycającym (50 μl na studzienkę) przez jedną godzinę i 30 minut w 37°C. Następnie po trzech płukaniach oraz dodaniu koniugatu streptawidyny z peroksydazą chrzanową (Amersham), płytki płukano pięciokrotnie i inkubowano przez 20 minut w temperaturze pokojowej z 50 μl na studzienkę buforu do wywoływania o składzie: OPDA 0,4 mg/ml (Sigma) i H2O2 0,03% w 50 mM pH 4,5 buforze cytrynianowym. Wywoływanie zatrzymywano przez dodanie 50 μl na studzienkę 2N H2SO4. Gęstość optyczną odczytywano przy 492 i 630 nm przy zastosowaniu immunoczytnika Biorad 3550. Miana przeciwciał obliczano metodą matematyczną z 4 parametrami, stosując oprogramowanie SoftMaxPro.
Test hamowania mierzący miana LA2-podobnych przeciwciał przeciw lipo-OspA w surowicy
Miana przeciwciał w szczepionkach badano pod kątem ich swoistości do przeciwciał LA2-podobnych. LA2 jest monoklonalnym mysim przeciwciałem, które rozpoznaje konformacyjny epitop OspA na powierzchni bakterii. Przeciwciało to ma zdolność do zabijania B. burgdorferi in vitro, jak również do ochrony myszy przed prowokowaniem laboratoryjnymi krętkami (Schaible UE i wsp. 1990, Proc Natl Acad Sci USA 87:3768-3772). Dodatkowo, udowodniono, że monoklonalne przeciwciała LA2 korelują z bakteriobójczymi przeciwciałami, poza tym w badaniach ludzkich surowic wykazano korelacje pomiędzy mianami IgG anty OspA oraz mianami LA2 (w testach ELISA).
Płytki immunologiczne Maxisorp Nunc opłaszczano przez noc w 4°C 50 μl na studzienkę 0,5 μg/ml lipo OspA w PBS. Wolne miejsca płytek blokowano buforem nasycającym (100 μ!/ studzienkę) przez 1 godzinę, w 37°C (bufor nasycający: PBS zawierający 1% BSA, 0,1% TWEEN 20 oraz 4% normalnej surowicy bydlęcej (NBS)). Następnie seryjne dwukrotne rozcieńczenia monoklonalnych przeciwciał LA2, począwszy od stężenia 4 ąg/ul przygotowano w buforze nasycającym (50 ąl na studzienkę), aby uzyskać krzywą standardową. Następnie dodano rozcieńczenia próbek surowicy ze szczepionych zwierząt (począwszy od rozcieńczenia 1:10) i inkubowano przez 2 godziny w 37°C. Po inkubacji płytki płukano trzykrotnie w PBS/TWEEN 20 (0,1%). Następnie do każdej studzienki dodano koniugat monoklonalnego przeciwciała LA2 z peroksydazą rozcieńczone (1:10000) w roztworze nasycającym (50 ąl na studzienkę) i inkubowano przez godzinę w 37°C. Po pięciu płukaniach płytki inkubowano przez 20 minut w temperaturze pokojowej (w ciemności) z 50 ąl na studzienkę buforu do wywoływania o składzie: OPDA 0,4 mg/ml (Sigma) i H2O2 0,03% w 50 mM bufor cytrynianowy pH 4,5. Wywoływanie zatrzymywano przez dodanie 50 ąl na studzienkę 2N H2SO4. Gęstość optyczną odczytywano przy 492 i 630 nm przy zastosowaniu immunoczytnika Biorad 3550. Miana LA-podobnych monoklonalnych przeciwciał obliczano metodą matematyczną z 4 parametrami stosując oprogramowanie SoftMaxPro, porównując z krzywą standardową.
Wyniki
Zarówno CpG, jak i QS21 w znaczący sposób poprawiały doszczepianie w przypadku ogólnoustrojowych przeciwciał przeciw Lipo-IspA przy szczepieniu donosowym. Dodatkowo przy zastosowaniu obu adiuwantów obserwowano efekt synergiczny, w szczególności w przypadku odpowiedzi przeciwciał LA2. Odpowiedzi humoralne wywołane w obecności QS21 i CpG były znacząco wyższe niż te indukowane przez rodzicielskie szczepienie przypominające. Podsumowując, uzyskane wyniki pokazują możliwości donosowych mieszanin zawierających lityczną saponinę oraz czynnik immunostymulujący.
PL 203 951 B1
P r z y k ł a d 2
Synergiczna kombinacja QS21 i CpG, wspomagająca donosowe szczepienie przypominające dla ogólnoustrojowych przeciwciał skierowanych przeciw wirusowi grypy.
W niniejszym przykładzie badano, czy hemolityczne saponiny, takie jak QS21, oraz czynniki immunostymulujące, takie jak CpG, są zdolne do wzmocnienia w sposób synergiczny (współdziałający) donosowego szczepienia przypominającego w przypadku ogólnoustrojowych przeciwciał u myszy traktowanych donosowo całym, nieaktywnym wirusem grypy.
Samice myszy Balb/c (po 10 zwierząt w grupie) w wieku 8 tygodni, immunizowano donosowo nieaktywnym (traktowanym β-propiolaktonem) wirusem grypy (A/Beijing/262/95; A/Johannes burg/33/94; B/Panama/45/90; 5 μg HA/szczep) w celu naśladowania naturalnego występowania u ludzi. Po 28 dniach myszy poddawano donosowemu szczepieniu przypominającemu (pod narkozą) 20 μl roztworu (po 10 μl na nozdrze, podawane kropelkowo pipetą) zawierającego 1,5 μg HA/nieaktywnego, całego wirusa grypy (te same szczepy, co w pierwotnych immunizacjach) w: A. PBS; B. 50 μg CpG (TCG TCG TTT TGT CGT TTT, GTC, GTT Krieg 2006); C. 4,5 μg QS21 (otrzymane z Cambridge Biotech, USA); D. 50 μg CpG 1001 + 4,5 μg QS21 lub E. oraz domięśniowy zastrzyk 1,5 μg HA/szczep nieaktywnego, rozdzielonego wirusa grypy (te same szczepy, co w immunizacjach pierwotnych). Antygeny grypy otrzymano z SSD GmBH (Drezno, Niemcy).
Fig. 3 i fig. 4 przedstawiają miana IgG swoistych wobec szczepów wirusa grypy oraz miana HAI (hamowanie hemaglutynacji) 14 dni po donosowym szczepieniu przypominającym.
Sposoby
Test ELISA w celu zmierzenia miana IgG skierowanego przeciw wirusowi grypy u myszy.
Płytki immunologiczne Maxisorp Nunc opłaszczano przez noc w 4°C, 50 μl na studzienkę antygenem całego wirusa grypy (1 μg/ml) w PBS (w rzędach od B do H płytki) oraz 50 μl roztworu 5 μg/ml oczyszczonych kozich anty-mysich Ig (Boerhinger) w PBS (rząd A). Wolne miejsca tych płytek blokowano (1 godzina, 37°C) wykorzystując roztwór nasycający: PBS zawierający 1% BSA, 0,1% TWEEN 20 oraz 4% normalnej surowicy bydlęcej (NBS). Następnie, seryjne dwukrotne rozcieńczenia mieszaniny izotypowej IgG, rozcieńczone w buforze nasycającym (50 μl na studzienkę) - stosowane jako krzywa standardowa (mieszanina mysich monoklonalnych przeciwciał IgG1, IgG2a i IgG2b z Sigma, począwszy od 200 ng/ml - rząd A) oraz próbki surowicy (począwszy od rozcieńczenia 1:100 - rzędy od B do H) inkubowano przez godzinę i 30 minut w 37°C. Następnie płytki przemywano (trzy razy) w buforze do płukania (PBS, 0,1 % TWEEN 20). Po czym inkubowano z biotynylowanymi kozimi przeciwciałami anty-mysimi IgG (Amersham) rozcieńczonymi 1:5000 w buforze nasycającym (50 μl na studzienkę) przez godzinę i 30 minut w 37°C. Następnie, po trzech płukaniach oraz dodaniu koniugatu streptawidyny z peroksydazą chrzanową (Amersham), płytki płukano pięciokrotnie i inkubowano przez 20 minut w temperaturze pokojowej z 50 μl na studzienkę buforu do wywoływania o składzie: OPDA 0,4 mg/ml (Sigma) i H2O2 0,03% w 50 mM buforze cytrynianowym pH 4,5. Wywoływanie zatrzymywano przez dodanie 50 μl na studzienkę 2N H2SO4. Gęstość optyczną odczytywano w 492 i 630 nm przy zastosowaniu immunoczytnika Biorad 3550. Miana przeciwciał obliczano metodą matematyczną z 4 parametrami stosując oprogramowanie SoftMaxPro. Całe wirusy grypy zastosowane do pokrycia płytek (szczep A/Beijing/262/95), nieaktywny - po traktowaniu β-propiolaktonem (BPL) otrzymano z SSD GmBH (Drezno, Niemcy). Aktywność HAI przeciwciał przeciw wirusowi grypy w surowicy myszy
Surowicę (25 μθ początkowo traktowano w temperaturze pokojowej (RT) przez 20 minut 100 μl buforu boranowego 0,5 M (pH 9) oraz 125 μl koalinu, zakupionej w Dade Behring. Po odwirowaniu (30 minut, 3000 RPM lub 860 g), 100 μl supernatantu (odpowiadającego 1:10 rozcieńczenia surowicy) pobrano i inkubowano przez 1 godzinę w 4°C w 0,5 % czerwonych krwinkach kurczaka. Następnie, pobrano supernatant po uprzednim wirowaniu przez 10 minut przy 3200 RPM (970 g). Obie procedury stosowano w celu wyeliminowania naturalnych czynników hemaglutynujących zawartych w surowicach. Następnie, 25 μl tak traktowanych surowic rozcieńczano w 25 μl PBS (seryjne dwukrotne rozcieńczenia począwszy od 1:20) na 96-studzienkowych płytkach Greiner. W następnym etapie dodano cały wirus grypy zinaktywowany BPL (25 μl na studzienkę) w stężeniu 4 jednostki hemaglutynacji (tj. w rozcieńczeniu 4-krotnie niższym niż ostatnie wywołujące aglutynację czerwonych krwinek) i inkubowano wytrząsając przez 30 minut w RT. W kolejnym kroku, dodawano czerwone krwinki kurczęcia (25 μl na studzienkę) i inkubowano godzinę w temperaturze pokojowej. Ostatecznie, płytki przed odczytaniem trzymano przez noc w 4°C. Miano HAI odpowiadało ostatniemu rozcieńczeniu surowicy, które hamowało indukowaną przez wirus hemaglutynację.
PL 203 951 B1
Wyniki
Zarówno CpG, jak i QS21 nie poprawiały przypominania w przypadku IgG oraz przeciwciał HAI przeciw szczepom grypy przy szczepieniu donosowym. Jednakże, przy zastosowaniu obu adiuwantów obserwowano efekt synergiczny, wywołujący powyższe odpowiedzi przeciwciał. Odpowiedzi HAI wywołane w obecności QS21 i CpG były podobne do tych indukowanych przez rodzicielskie szczepienie. Podsumowując, uzyskane wyniki pokazują możliwości donosowych mieszanin zawierających lityczną saponinę oraz czynnik immunostymulujący. Pokazują one również, że różne sekwencje CpG mogą być wydajne w tym zastosowaniu (Krieg 2006 w niniejszym przykładzie oraz Krieg 1826 w przykładach 3 i 5).
P r z y k ł a d 3
Synergiczna kombinacja β-escyny i CpG do wzmacniania donosowego szczepienia przypominającego dla ogólnoustrojowych przeciwciał przeciw Lipo-OspA.
W niniejszym przykładzie zbadano, czy współdziałanie podobne do zaobserwowanego pomiędzy QS21 i CpG może zachodzić z innymi saponinami hemolitycznymi (patrz przykład) takimi jak β-escyna. Badane są również niehemolityczne saponiny takie jak kwas glicyryzynowy.
Samice myszy Balb/c (po 6 zwierząt w grupie) w wieku 8 tygodni, immunizowano domięśniowo lipo-OspA (1 μg) przygotowanym w alumie (50 μg). Po 3 miesiącach myszy poddawano donosowemu szczepieniu przypominającemu (pod narkozą) 10 μl roztworu (po 5 μl na nozdrze, podawane kropelkowo pipetą) zawierającego 5 μg lipo-OspA w: A. PBS; B. 50 μg CpG 1001 (TCC ATG AGC TTC CTG ACG TT, Krieg 1826); C. 5 μg β-escyny (otrzymane z Sigma); D. 50 μg CpG 1001 + 5 μg β-escyny; E. 5 μg kwasu glicyryzynowego (zakupione z Sigma); F. 50 μg CpG 1001 + 5 μg kwasu glicyryzynowego i G. domięśniowemu zastrzykowi 1 μg lipo-OspA zaadsorbowanemu na alumie (50 μg). Fig. 5 przedstawia miana LA2 swoistych wobec OspA w 14 dni po donosowym szczepieniu przypominającym.
Sposoby
W niniejszym przykładzie stosowano sposoby takie same, jak w przykładzie 1.
Wyniki β-Escyna i CpG działają synergicznie przy wzmacnianiu donosowego szczepienia przypominającego w przypadku ogólnoustrojowych przeciwciał LA2. Odpowiedzi przeciwciał wywołane w obecności β-escyny i CpG są znacząco wyższe niż te indukowane przez rodzicielskie szczepienie przypominające. Jednocześnie, nie zaobserwowano współdziałania w przypadku kombinacji CpG i kwasu glicyryzynowego.
Powyższe wyniki, jak i przedstawione wcześniej w ramach patentu, pokazują zdolność CpG oraz różnych saponin hemolitycznych do wzmacniania odpowiedzi immunologicznych w sposób synergiczny.
P r z y k ł a d 4
Badanie immunogeniczności przy zastosowaniu P. falciparum RTS,S i HIV-1 gp120 przygotowanym z CpG i/lub DQS21
1. Plan eksperymentu
Przeprowadzono dwa badania immunogeniczności myszy w celu ustalenia potencjalnego addytywnego lub synergicznego efektu oligonukleotydów CpG i QS21. Grupy mysz immunizowano RTS,S oraz gp120, przygotowanymi z CpG lub QS21 oddzielnie lub w kombinacji. Wymienione adiuwanty badano również w obecności nośnika Al(OH)3 lub emulsji olej-woda (emulsja o/w).
Immunogeniczność powyższych kompozycji badano po dwóch immunizacjach pozajelitowych. Surowice analizowano pod kątem obecności przeciwciał swoistych wobec antygenu oraz pod kątem rozkładu izotypów przeciwciał. Komórek śledziony używano do określenia komórkowych odpowiedzi immunologicznych. Te komórki badano pod kątem obecności cytotoksycznych limfocytów T (CTL) i komórek limfoproliferacyjnych (proliferacja limfocytów).
T a b e l a 1
Grupy myszy w eksperymencie 1
Grupa Antygen Ad i u want
1 RTS,S/gp120 CpG/DQS21
2 RTS,S/gp120 DQS21
3 RTS,S/gp120 CpG/DQS21/Al(OH)3
4 RTS,S/gp120 CpG/Al(OH)3
PL 203 951 B1
T a b e l a 2
Grupy myszy w eksperymencie 2
Grupa Antygen Ad i u want
1 RTS,S/gp120 CpG
2 RTS,S/gp120 CpG/DQS21
3 RTS,S/gp120 CpG/QS21/emulsja o/w
2. Przygotowanie próbek
2.1 Eksperyment 1
Proces przygotowywania próbek:
Próbki przygotowywano na 3 dni przed wstrzyknięciem. W razie konieczności RTS,S (10 μg) oraz gp120 (10 μg) adsorbowano na 100 μg Al(OH)3. W razie konieczności, dodawano MPL (5 μg) i inkubowano 30 minut przed dodaniem roztworu w postaci 10-krotnie stężonego PBS pH 7,4 i H2O, z wyjątkiem grup bez DQ, dla których roztworem był PO4, NaCl 10:150 pH 6,8. Po 30 minutach, w razie konieczności, mieszano QS21 (5 μg) z liposomami w stosunku wagowym QS21 :cholesterol wynoszącym 1:5 (zwanym DQ) i dodawano do przygotowanej próbki. 30 minut później, dla próbek zawierających oligonukleotyd, dodawano 100 pg CpG, a następnie po 30 minutach dodawano tiomersal do stężenia 50 μg/ml - środek ochronny.
Al(OH)3+RTSS+gp120-1h-MPL-30min-premiks-30min-DQ-30min-CpG-30min-Thio
Wszystkie inkubacje przeprowadzono w temperaturze pokojowej z mieszaniem.
2.2. Eksperyment 2
Proces przygotowania próbek:
Próbki przygotowywano jednocześnie dla dwóch zastrzyków. Zastrzyki podawane jednej myszy miały objętość 100 μl Do próbek dodawano tiomersal do stężenia 50 μg/ml - środek ochronny.
Grupa 1: RTS,S (10 μg) i gp120 (10 μg) rozcieńczano w H2O i PBS pH 6,8, aby osiągnąć izotoniczność. Po 5 minutach próbkę adsorbowano na CpG 1856 (100 μg).
Grupa 2: RTS,S (10 μg) i gp120 (10 μg) rozcieńczano w H2O i PBS pH 7,4, aby osiągnąć izotoniczność. Po 30 minutach RTS,S i gp120 adsorbowano na DQ (5 μg). Następnie, po 30 minutach adsorpcji, próbkę adsorbowano na CpG 1856 (100 μg).
Grupa 3: RTS,S (10 μg) i gp120 (10 μg) rozcieńczano w H2O i PBS pH 6,8, aby osiągnąć izotoniczność. Po 5 minutach próbkę adsorbowano na emulsji o/w. Po 5 minutach adsorpcji próbkę adsorbowano na QS21 (5 μg) przed dodaniem CpG (100 μg).
3. Sposoby immunologiczne myszy (pokolenie F1 krzyżówki Balb/C x C57B1/6) w grupie otrzymało w tyle łapy po 2 zastrzyki (2 x 50 μβ w odstępach dwu tygodniowych. Po dwóch tygodniach pobrano próbki surowicy w celu określenia odpowiedzi przeciwciał, pobrano również komórki śledziony w celu określenia immunologicznej odpowiedzi komórkowej.
W celu przeprowadzenia analizy proliferacji limocytów, komórki wysiano w 4-krotnych powtórzeniach w 96-studzienkowej płytce do mikromiareczkowania ze studzienkami o okrągłych dnach w zagęszczeniu 2x106/ml. Komórki hodowano przez 72 lub 96 godzin w pożywce RPMI-1640, uzupełnionej antybiotykami, glutaminą oraz 1% (obj./obj.) zwykła surowicą mysią w obecności różnych stężeń RTS,S lub antygenu gp120. Komórki kontrolne hodowano bez antygenu. Następnie, komórkom podano przez noc 1 μCi/studzienkę [3H]-tymidynę, zebrano je i obliczono włączenie radioaktywności odpowiednim licznikiem. Wyniki przedstawiono jako średnią zliczeń na minutę (cpm).
W celu przeprowadzenia analizy CTL, komórki hodowano przez 7 dni na 6-studzienkowych płytkach, w obecności 10 μg/pl sztucznego peptydu pCMI003 (IPQSLDSWWTSL), który odpowiadał epitopowi HbsAg CTL (Schirmbeck i wsp., 1995), lub peptydu pCMI007 (GIHIGPGRAFYAARK), odpowiadającemu epitopowi gp120 CTL (Casement i wsp., 1995). Po hodowli, komórki efektorowe badano (w dwóch powtórzeniach) pod kątem aktywności cytolitycznej, swoistej dla HBsAg, w standardowym teście wykorzystującym uwalnianie [51Cr], wykorzystując komórki kontrolne i S-transfekowane komórki P815. Cytotoksyczność swoistą wobec gp120 mierzono wykorzystując komórki docelowe P815, nie traktowane oraz traktowane przez jedną godzinę peptydem pCMI007. Minimalne i maksymalne uwalnianie określano odpowiednio dla komórek docelowych bez komórek efektorowych oraz przez dodanie 3% (obj./obj.) Triton X-100. Wyniki przedstawiono jako % uwolnionego [51Cr] (cpm dla
PL 203 951 B1 hodowli - cpm uwalniania spontanicznego / cpm uwalniania maksymalnego - cpm uwalniania spontanicznego).
Miareczkowanie oraz określanie izotypów zlanych surowic przeprowadzano w standardowym teście ELISA, wykorzystując płytki pokryte HBsAg. Surowice rozcieńczano w PBS/BSA począwszy od 1:400. Biotynylowane przeciwciała drugorzędowe swoiste Ig lub izotypów IgG1, IgG2a i IgG2b oraz koniugatu streptawidyny z peroksydazą chrzanową używano przy wykrywaniu związanych przeciwciał. Miana ELISA obliczano względem standardu, wykorzystując SoftmaxPro, i wyrażano w jednostkach ELISA (EU/ml). Miana przeciwciał swoistych wobec gp120 określano w standardowym teście ELISA, wykorzystując płytki pokryte białkiem gp120. Surowice rozcieńczano w PBS/TWEEN20/BSA począwszy od 1:100. Biotynylowane przeciwciała drugorzędowe swoiste wobec Ig lub izotypów IgG1, IgG2a i IgG2b oraz koniugatu streptawidyny z peroksydazą chrzanową uż ywano przy wykrywaniu związanych przeciwciał. Miana obliczano odnosząc się do standardu mysich Ig i wyrażano jako μg/ml. 4.
Wyniki
Eksperyment 1
Analiza odpowiedzi powodującej proliferację limfocytów nie wykazała znaczących różnic w reaktywności na RTS,S pomiędzy grupami. Jednakże, grupy 1 i 3, zawierające zarówno CpG jak i DQ21, wykazywały lepszą odpowiedź limfoproliferacyjną swoistą wobec gp120 w porównaniu z grupami, zawierającymi oddzielnie CpG i DQS21 (fig. 6).
W opisywanym eksperymencie mierzono tylko CTL swoiste wobec HBsAg. Nie zaobserwowano znaczącej różnicy w indukcji CTL pomiędzy grupami 1 i 3, które otrzymały CpG i DQS21 w kombinacji, a grupami 2 i 4, immunizowanymi tylko jednym z dwóch adiuwantów, podczas gdy obecność Al(OH)3 obniżyła aktywność CTL zaobserwowanej w przypadku kombinacji CpG i DQS21 w grupie pierwszej (fig. 7). Jednakże, zaobserwowano tendencję polegającą na tym, że CpG i DQS21 działało lepiej niż samo DQS21, oraz fakt, że kombinacja indukowała więcej CTL w obecności Al(OH)3, w porównaniu z samym CpG (fig. 7).
Humoralną odpowiedź immunologiczną myszy badano tylko pod kątem obecności przeciwciał swoistych wobec HBsAg. Miana były takie same we wszystkich grupach, z wyjątkiem grupy trzeciej, gdzie zaobserwowano około 3-krotny wzrost, co świadczyło o tym, że w obecności Al(OH)3, kombinacja DQS21 i CpG jest bardziej immunogenna niż samo CpG (fig. 8). Rozkład izotypów był taki same dla grup 3 i 4 (zawierających Al(OH)3), podczas gdy przy braku Al(OH)3 kombinacja CpG i DQS21 powodowała lepszy wzór charakterystyczny dla izotypu TH1 niż samo DQS21 (fig. 8).
Eksperyment 2
Odpowiedzi polegające na proliferacji limfocytów swoiste wobec RTS,S i gp120 były bardzo podobne w opisywanym eksperymencie. Wyniki pokazują, że dodanie DQS21 (zarówno same, jak i z emulsją o/w) powoduje wzmocnione odpowiedzi limfoproliferacyjnej na oba antygeny (fig. 9).
Odpowiedzi CTL badano wykorzystując zarówno HBsAg, jak i gp120 peptydy epitopów CTL. W obu przypadkach wykryto odpowiedź CTL po immunizacji grupy 1 samym CpG (fig. 10). Jednakże, dodanie DQS21 powodowało znaczny wzrost odpowiedzi CTL dla obu antygenów (fig. 10). Obecność emulsji o/w neutralizowała pozytywny efekt DQS21 (gp120) lub zwiększała tło testu in vitro (HBsAg).
Odpowiedź przeciwciałowa na HBsAg i gp120 była wzmożona przez dodanie DQS21 do adiuwanta CpG (fig. 11 A). Dodatkowy wzrost obserwowano po dodaniu emulsji o/w do badanej próbki (fig. 11A). Dodanie DQS21 do CpG powodowało przesunięcie profili izotypu gp120 w stronę bardziej widocznego THi (fig. 1B), podczas gdy wpływ na profile izotypu HBsAg był mniej widoczny w niniejszym eksperymencie.
5. Wnioski
Immunizacja RTS,S i gp120 przygotowanym z kombinacją CpG i DQS21 powodowała silną odpowiedź immunologiczną swoistą wobec antygenu. Kombinacja adiuwantów CpG i DQS21:
- wzmacnia odpowiedzi limfoproliferacyjne
- wzmacnia aktywność CTL
- podnosi miana przeciwciał i wzór izotypu TH1 w porównaniu z zastosowaniem pojedynczych związków.
P r z y k ł a d 5
Potencjał terapeutyczny CpG i/lub DQS21 w modelu nowotworu TC1.
1. Plan eksperymentu grupy po 10 myszy C57b1/6 w dniu 0 otrzymały podskórnie w bok 106 (200 μθ komórek TC1 (komórki nowotworowe wyrażające E7).
PL 203 951 B1
Następnie myszy szczepiono dwukrotnie, w dniu 14 i 21 po prowokacji nowotworem, 5 μg PD1/3E7 HPV16, przez zastrzyk w poduszkę łapy. Rozwój nowotworu mierzono indywidualnie dwa razy w tygodniu.
Grupy myszy:
1. Nie szczepione
2. PD1/3E7 + CpG (10 μg ODN 2006)
3. PD1/3E7 + DQS21 (0,5 μβ)
4. PDl/3E7 + CpG + DQS21
Rozwój nowotworu mierzono indywidualnie dwa razy w tygodniu.
2. Przygotowanie próbek
Próbki przygotowywano w dniu szczepienia. Objętość zastrzyku dla jednej myszy wynosiła 100 μ! W razie konieczności, PD1/3E7 (5 μg) rozcieńczano w H2O i PBS pH 7,4, w celu osiągnięcia izotoniczności. Po 5 minutach, w razie konieczności, QS21 (0,5 μg) mieszano z liposomami w stosunku wagowym QS21:cholesterol wynoszącym 1:5 (zwane DQ) i dodawano do próbki. Po 30 minutach w przypadku próbek z oligonukleotydami dodawano 10 μg CpG (ODN 2006), a następnie po 30 minutach dodawano tiomersal do stężenia 1 μg/ml jako środek ochronny.
1H2Q + PBS pH7,4 + PD1/3E7-5min + DQ- 30min + CpG-30min - Thio
3. Wyniki
Średni wzrost nowotworu w grupach złożonych z 10 zwierząt w czasie jest pokazany na fig. 12. U 100% zwierząt, które prowokowano nowotworem (106 komórek TC1), nastąpił postępujący rozwój nowotworu.
70-80% nieszczepionych zwierząt lub zwierząt szczepionych białkiem E7 w DQS21 umarło przed 35 dniem eksperymentu.
Podwójne szczepienie białkiem E7 z DQS21 prawie nie miało wpływu na rozwój nowotworu. Z drugiej strony, 2 szczepienia (IFP, w dniach 14 i 21) 5 μg ProtD 1/3 E7 HPV16 z adiuwantem CpG powodowały regresję nowotworów i chroniły przed śmiercią: 70-80% myszy pozostało przy życiu w 35 dniu. Kombinacja dwóch czynników immunostymulujących (CpG i DQS21) w niewielkim stopniu poprawiała efekt działania samego CpG.
PL 203 951 B1
Lista sekwencji <110> Friede, Martin
Garcon, Nathalie Hermand Philippe <120> Preparaty adiuwantowe <130> B45181 <160> 5 <170> FastSEQ dla Windows wersja 3.0 <210> 1 <211> 20 <212> DNA <213> ludzkie <400> 1 tccatgacgt tcctgacgtt <210> 2 <211> 16 <212> DNA <213> ludzkie <400> 2 tctcccagcg tgcgccat <210> 3 <211> 30 <212> DNA <213> ludzkie <400> 3 <210> 4 <211> 24 <212> DNA <213> ludzkie <400> 4 tcgtcgtttt gtcgttttgt cgtt
<210> 5
<211> 20
<212> DNA
<213> ludzkie
<400> 5
tccatgacgt tcctgatgct

Claims (20)

  1. Zastrzeżenia patentowe
    1. Kompozycja adiuwantowa zawierająca saponinę i immunostymulujący oligonukleotyd, znamienna tym, że saponina jest w postaci liposomu formułowanego z cholesterolem i lipidem lub emulsji oleju w wodzie.
  2. 2. Kompozycja adiuwantowa według zastrz. 1, znamienna tym, że immunostymulujący oligonukleotyd zawiera sekwencję puryna, puryna, CG, pirymidyna, pirymidyna.
  3. 3. Kompozycja według zastrz. 1, znamienna tym, że immunostymulujący oligonukleotyd jest wybrany z grupy obejmującej:
    TCC ATG ACG TTC CTG ACG TT (SEK NR ID: 1);
    TCT CCC AGC GTG CGC CAT (SEK NR ID: 2);
    ACC GAT GAC GTC GCC GGT GAC GGC ACC ACG (SEK NR ID: 3);
    TCG TCG TTT TGT CGT TTT GTC GTT (SEK NR ID: 4);
    TCC ATG ACG TTC CTG ATG CT (SEK NR ID: 5).
  4. 4. Kompozycja adiuwantową według zastrz. 1, znamienna tym, że immunostymulujący oligonukleotyd zawiera co najmniej dwa niemetylowane powtórzenia CG oddzielone przez co najmniej 3 nukleotydy.
  5. 5. Kompozycja adiuwantową według zastrz. 4, znamienna tym, że immunostymulujący oligonukleotyd zawiera co najmniej dwa niemetylowane powtórzenia CG oddzielone przez 6 nukleotydów.
  6. 6. Kompozycja adiuwantową według zastrz. 1 do 5, znamienna tym, że saponina jest otrzymana z Qui1A.
  7. 7. Kompozycja adiuwantową według zastrz. 6, znamienna tym, że pochodną Qui1A jest QS21.
  8. 8. Kompozycja adiuwantową według zastrz. 1, znamienna tym, że saponina jest w postaci liposomu.
  9. 9. Kompozycja adiuwantową według zastrz. 1, znamienna tym, że saponina jest w postaci emulsji oleju w wodzie.
  10. 10. Kompozycja szczepionki, znamienna tym, że zawiera kompozycję adiuwantową określoną w zastrz. 1 do 9 i ponadto zawierająca antygen.
  11. 11. Kompozycja szczepionki według zastrz. 10, znamienna tym, że antygen pochodzi z organizmu wybranego z grupy obejmującej: ludzkiego wirusa niedoboru odporności, wirusa ospy wietrznej i półpaśca, wirusa opryszczki zwykłej typu 1, wirusa opryszczki zwykłej typu 2, ludzkiego wirusa cytomegalii, wirusa dengi, wirusa zapalenia wątroby A, B, C lub E, syncytialnego wirusa oddechowego, ludzkiego papillomawirusa, wirusa grypy, Hib, wirusa wywołującego zapalenie opon, Salmonella, Neisseria, Borrelia, Chlamydia, Bordetella, Streptococcus, Mycoplasma, Mycobacteria, Haemophilus, zarodźca lub toksoplazmę; antygen stanowi dekapeptyd Stanworth'a, albo antygeny związane z nowotworem (TAA), MAGE, BAGE, GAGE, MUC-1, Her-2-neu, CEA, PSA, KSA lub PRAME, albo własny hormon peptydowy, GnRH.
  12. 12. Kompozycja szczepionki według zastrz. 10, znamienna tym, że antygen pochodzi z grupy obejmującej (a) antygeny związane z nowotworem PSMA, PSCA, tyrozynazę, surwiwinę, NY-ESO1, prostazę, PSI08, RAGE, LAGE, HAGE; albo (b) N-końcowy 39-43 aminokwasowy fragment (Abeta) prekursorowego białka amyloidowego; albo (c) antygeny związane z miażdżycą tętnic.
  13. 13. Kompozycja szczepionki według zastrz. 10 do 13, znamienna tym, że jest przeznaczona do podawania ogólnoustrojowo.
  14. 14. Kompozycja szczepionki według zastrz. 10 do 13, znamienna tym, że jest przeznaczona do podawania przez śluzówkę.
  15. 15. Kompozycja szczepionki według zastrz. 14, znamienna tym, że saponina w kompozycji adiuwantowej jest hemolityczną.
  16. 16. Szczepionka według zastrz. 10 do 12 do zastosowania jako lek.
  17. 17. Zastosowanie kombinacji saponiny i cząsteczki CpG jak określono w zastrz. 10 do 12 do wytwarzania szczepionki do zapobiegania i leczenia infekcji wirusowych, bakteryjnych i pasożytniczych, alergii, nowotworów lub innych chorób przewlekłych.
  18. 18. Sposób wytwarzania kompozycji szczepionki określonej w zastrz. 10 do 15, znamienny tym, że obejmuje zmieszanie saponiny, immunostymulującego oligonukleotydu oraz antygenu, przy czym saponina jest w postaci liposomu formułowanego z cholesterolem i lipidem lub emulsji oleju w wodzie.
    PL 203 951 B1
  19. 19. Sposób wytwarzania szczepionki według zastrz. 18, znamienny tym, że obejmuje zmieszanie następujących składników: (a) saponiny, (b) immunostymulującego oligonukleotydu i (c) antygenu, przy czym saponina jest w postaci liposomu, a oligonukleotyd zawiera niemetylowany dinukleotyd CpG.
  20. 20. Sposób wytwarzania szczepionki według zastrz. 18, znamienny tym, że obejmuje zmieszanie następujących składników: (a) saponiny, (b) immunostymulującego oligonukleotydu i (c) antygenu, przy czym saponina jest w postaci emulsji oleju w wodzie, a oligonukleotyd zawiera niemetylowany dinukleotyd CpG.
PL351893A 1999-04-19 2000-04-04 Kompozycja adiuwantowa, kompozycja szczepionki oraz sposób jej wytwarzania, szczepionka oraz zastosowanie PL203951B1 (pl)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GBGB9908885.8A GB9908885D0 (en) 1999-04-19 1999-04-19 Vccine
US09/301,829 US6558670B1 (en) 1999-04-19 1999-04-29 Vaccine adjuvants
PCT/EP2000/002920 WO2000062800A2 (en) 1999-04-19 2000-04-04 Adjuvant composition comprising saponin and an immunostimulatory oligonucleotide

Publications (2)

Publication Number Publication Date
PL351893A1 PL351893A1 (en) 2003-06-30
PL203951B1 true PL203951B1 (pl) 2009-11-30

Family

ID=26315432

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL351893A PL203951B1 (pl) 1999-04-19 2000-04-04 Kompozycja adiuwantowa, kompozycja szczepionki oraz sposób jej wytwarzania, szczepionka oraz zastosowanie

Country Status (22)

Country Link
US (4) US6544518B1 (pl)
EP (2) EP1187629B1 (pl)
JP (3) JP2002542203A (pl)
KR (1) KR100922031B1 (pl)
CN (1) CN1227030C (pl)
AT (1) ATE276758T1 (pl)
AU (1) AU764969B2 (pl)
BR (1) BRPI0010612B8 (pl)
CA (1) CA2370697C (pl)
CZ (1) CZ303515B6 (pl)
DE (1) DE60014076T2 (pl)
DK (1) DK1187629T3 (pl)
ES (1) ES2228497T3 (pl)
HK (1) HK1044484B (pl)
HU (1) HU229255B1 (pl)
IL (1) IL145982A0 (pl)
NO (1) NO331688B1 (pl)
PL (1) PL203951B1 (pl)
PT (1) PT1187629E (pl)
TR (1) TR200103018T2 (pl)
TW (1) TWI232753B (pl)
WO (1) WO2000062800A2 (pl)

Families Citing this family (279)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5849719A (en) * 1993-08-26 1998-12-15 The Regents Of The University Of California Method for treating allergic lung disease
US6207646B1 (en) 1994-07-15 2001-03-27 University Of Iowa Research Foundation Immunostimulatory nucleic acid molecules
US20030026782A1 (en) * 1995-02-07 2003-02-06 Arthur M. Krieg Immunomodulatory oligonucleotides
US6429199B1 (en) * 1994-07-15 2002-08-06 University Of Iowa Research Foundation Immunostimulatory nucleic acid molecules for activating dendritic cells
GB2324093A (en) 1996-01-04 1998-10-14 Rican Limited Helicobacter pylori bacterioferritin
US20030078223A1 (en) * 1996-01-30 2003-04-24 Eyal Raz Compositions and methods for modulating an immune response
US6406705B1 (en) * 1997-03-10 2002-06-18 University Of Iowa Research Foundation Use of nucleic acids containing unmethylated CpG dinucleotide as an adjuvant
SI1077722T1 (sl) * 1998-05-22 2007-02-28 Ottawa Health Research Inst Metode in produkti za induciranje sluznicne imunosti
US6693086B1 (en) * 1998-06-25 2004-02-17 National Jewish Medical And Research Center Systemic immune activation method using nucleic acid-lipid complexes
US20030022854A1 (en) 1998-06-25 2003-01-30 Dow Steven W. Vaccines using nucleic acid-lipid complexes
US7049302B1 (en) 1998-08-10 2006-05-23 Antigenics Inc. Compositions of CPG and saponin adjuvants and uses thereof
NZ513935A (en) 1999-02-17 2004-02-27 Csl Ltd Immunogenic complexes and methods relating thereto
EP1154790B1 (en) * 1999-02-26 2004-10-20 Chiron S.r.l. Enhancement of bactericidal activity of neisseria antigens with oligonucleotides containing cg motifs
KR100922031B1 (ko) * 1999-04-19 2009-10-19 글락소스미스클라인 바이오로지칼즈 에스.에이. 백신
US20050002958A1 (en) * 1999-06-29 2005-01-06 Smithkline Beecham Biologicals Sa Vaccines
GB9915204D0 (en) * 1999-06-29 1999-09-01 Smithkline Beecham Biolog Vaccine
ATE306938T1 (de) * 1999-06-29 2005-11-15 Glaxosmithkline Biolog Sa Verwendung von cpg als adjuvans für hivimpstoff
UA77152C2 (en) * 1999-09-25 2006-11-15 Method for stimulation of immune response using nucleic acid-containing immunostimulating compositions, method for treatment of cancer and method for treatment or prophylaxis of allergy or asthma
US6949520B1 (en) * 1999-09-27 2005-09-27 Coley Pharmaceutical Group, Inc. Methods related to immunostimulatory nucleic acid-induced interferon
WO2001051083A2 (en) * 2000-01-13 2001-07-19 Antigenics Inc. Innate immunity-stimulating compositions of cpg and saponin and methods thereof
CA2396871A1 (en) * 2000-01-20 2001-12-20 Ottawa Health Research Institute Immunostimulatory nucleic acids for inducing a th2 immune response
KR100879810B1 (ko) * 2000-02-21 2009-01-22 하. 룬드벡 아크티에셀스카브 아밀로이드의 하향-조절을 위한 신규한 방법
JP5025871B2 (ja) * 2000-02-21 2012-09-12 エイチ．リュンドベック エイ／エス アミロイドの新規なダウン−レギュレート方法
US7129222B2 (en) * 2000-03-10 2006-10-31 Dynavax Technologies Corporation Immunomodulatory formulations and methods for use thereof
US20030129251A1 (en) 2000-03-10 2003-07-10 Gary Van Nest Biodegradable immunomodulatory formulations and methods for use thereof
ES2362715T3 (es) * 2000-03-30 2011-07-12 Dendreon Corporation Composiciones y métodos para inmunoterapia a base de células dendríticas.
CA2420499A1 (en) * 2000-08-25 2002-02-28 Yeda Research And Development Co. Ltd. Methods of treatment or prevention of autoimmune diseases with cpg-containing polynucleotide
HU229642B1 (en) * 2000-10-18 2014-03-28 Glaxosmithkline Beecham Biolog S A Vaccines against cancers
KR100831139B1 (ko) * 2000-10-18 2008-05-20 글락소스미스클라인 바이오로지칼즈 에스.에이. 백신
GB0025577D0 (en) * 2000-10-18 2000-12-06 Smithkline Beecham Biolog Vaccine
EP2189473A3 (en) 2000-10-27 2010-08-11 Novartis Vaccines and Diagnostics S.r.l. Nucleic and proteins from streptococcus groups A & B
WO2002046477A2 (en) 2000-12-07 2002-06-13 Chiron Corporation Endogenous retroviruses up-regulated in prostate cancer
AU2002248185A1 (en) * 2000-12-14 2002-07-16 Coley Pharmaceutical Group, Inc. Inhibition of angiogenesis by nucleic acids
US20040081655A1 (en) * 2001-01-05 2004-04-29 Karen Lingnau Methods and compositions comprising polycationic compounds
WO2002053184A2 (en) * 2001-01-05 2002-07-11 Intercell Ag Uses for polycationic compounds as vaccine adjuvants
US7244438B2 (en) 2001-01-05 2007-07-17 Intercell Ag Uses for polycationic compounds
EP1347776A2 (en) * 2001-01-05 2003-10-01 Intercell Biomedizinische Forschungs- und Entwicklungs AG Anti-inflammatory use of polycationic compounds
CA2434546C (en) * 2001-01-12 2012-09-11 Chiron Corporation Induction of immune response by a replication-defective venezuelan equine encephalitis-sindbis chimeric virus replicon particle encoding an antigen
US7713942B2 (en) 2001-04-04 2010-05-11 Nordic Vaccine Technology A/S Cage-like microparticle complexes comprising sterols and saponins for delivery of polynucleotides
US20100221284A1 (en) * 2001-05-30 2010-09-02 Saech-Sisches Serumwerk Dresden Novel vaccine composition
TWI228420B (en) * 2001-05-30 2005-03-01 Smithkline Beecham Pharma Gmbh Novel vaccine composition
GB0115176D0 (en) 2001-06-20 2001-08-15 Chiron Spa Capular polysaccharide solubilisation and combination vaccines
US8481043B2 (en) 2001-06-22 2013-07-09 Cpex Pharmaceuticals, Inc. Nasal immunization
EP1572124A4 (en) 2001-06-29 2007-11-28 Novartis Vaccines & Diagnostic HCV E1E2 VACCINE COMPOSITIONS
GB0118249D0 (en) 2001-07-26 2001-09-19 Chiron Spa Histidine vaccines
GB0121591D0 (en) 2001-09-06 2001-10-24 Chiron Spa Hybrid and tandem expression of neisserial proteins
US20030138434A1 (en) * 2001-08-13 2003-07-24 Campbell Robert L. Agents for enhancing the immune response
MY144532A (en) * 2001-08-20 2011-09-30 Lundbeck & Co As H Novel method for down-regulation of amyloid
DE60234375D1 (de) 2001-09-14 2009-12-24 Cytos Biotechnology Ag VERPACKUNG VON IMMUNSTIMULIERENDEM CpG IN VIRUSÄHNLICHEN PARTIKELN: HERSTELLUNGSVERFAHREN UND VERWENDUNG
CA2492823A1 (en) * 2001-09-14 2003-03-27 Martin F. Bachmann In vivo activation of antigen presenting cells for enhancement of immune responses induced by virus like particles
GB0123580D0 (en) * 2001-10-01 2001-11-21 Glaxosmithkline Biolog Sa Vaccine
AR045702A1 (es) 2001-10-03 2005-11-09 Chiron Corp Composiciones de adyuvantes.
US20050238660A1 (en) * 2001-10-06 2005-10-27 Babiuk Lorne A Cpg formulations and related methods
AU2006200116B2 (en) * 2001-11-27 2009-03-19 Schering Corporation Methods for treating cancer using a combination of a tumor-derived dendritic cell inhibitory factor antagonist and a toll-like receptor agonist
TW200303759A (en) * 2001-11-27 2003-09-16 Schering Corp Methods for treating cancer
EP1467755A1 (en) 2001-12-21 2004-10-20 Antigenics Inc. Compositions comprising immunoreactive reagents and saponins, and methods of use thereof
EP1531796B1 (en) 2002-02-20 2016-09-28 GlaxoSmithKline Biologicals SA Microparticles with adsorbed polypeptide-containing molecules
CA2388049A1 (en) 2002-05-30 2003-11-30 Immunotech S.A. Immunostimulatory oligonucleotides and uses thereof
EP1532161B1 (en) 2002-06-13 2012-02-15 Novartis Vaccines and Diagnostics, Inc. Vectors for expression of hml-2 polypeptides
US20040053880A1 (en) 2002-07-03 2004-03-18 Coley Pharmaceutical Group, Inc. Nucleic acid compositions for stimulating immune responses
US7807803B2 (en) 2002-07-03 2010-10-05 Coley Pharmaceutical Group, Inc. Nucleic acid compositions for stimulating immune responses
CA2494911A1 (en) 2002-08-12 2004-02-19 Dynavax Technologies Corporation Immunomodulatory compositions, methods of making, and methods of use thereof
GB0220194D0 (en) 2002-08-30 2002-10-09 Chiron Spa Improved vesicles
DE60332477D1 (de) 2002-11-15 2010-06-17 Novartis Vaccines & Diagnostic Unerwartete oberflächenproteine in neisseria meningitidis
GB0227346D0 (en) 2002-11-22 2002-12-31 Chiron Spa 741
AU2003300831A1 (en) * 2002-12-11 2004-06-30 Hawaii Biotech, Inc. Recombinant vaccine against flavivirus infection
CA2502015A1 (en) 2002-12-11 2004-06-24 Coley Pharmaceutical Group, Inc. 5' cpg nucleic acids and methods of use
CA2511512C (en) 2002-12-27 2013-10-29 Chiron Corporation Immunogenic compositions containing phospholipid
WO2004084938A1 (en) * 2003-03-24 2004-10-07 Intercell Ag Improved vaccines
RU2351362C2 (ru) 2003-03-26 2009-04-10 Цитос Байотекнолоджи Аг КОНЪЮГАТЫ ПЕПТИДА Melan-A, АНАЛОГА ВИРУСОПОДОБНОЙ ЧАСТИЦЫ
US7537767B2 (en) 2003-03-26 2009-05-26 Cytis Biotechnology Ag Melan-A- carrier conjugates
EP2258365B1 (en) 2003-03-28 2013-05-29 Novartis Vaccines and Diagnostics, Inc. Use of organic compounds for immunopotentiation
US20040235770A1 (en) * 2003-04-02 2004-11-25 Coley Pharmaceutical Group, Ltd. Immunostimulatory nucleic acid oil-in-water formulations and related methods of use
GB0308198D0 (en) 2003-04-09 2003-05-14 Chiron Srl ADP-ribosylating bacterial toxin
NZ543467A (en) 2003-04-10 2008-07-31 Novartis Vaccines & Diagnostic The severe acute respiratory syndrome coronavirus
PT1631264E (pt) 2003-06-02 2009-11-03 Novartis Vaccines & Diagnostic Composições imunogénicas à base de micropartículas biodegradáveis que compreendem um toxóide de difteria e do tétano
US20060035242A1 (en) 2004-08-13 2006-02-16 Michelitsch Melissa D Prion-specific peptide reagents
EP1670507A4 (en) * 2003-09-12 2007-10-17 Antigenics Inc VACCINE FOR THE TREATMENT AND PREVENTION OF INFECTION CAUSED BY HERPES SIMPLEX VIRUS
GB0323965D0 (en) * 2003-10-13 2003-11-19 Glaxosmithkline Biolog Sa Immunogenic compositions
GB0323968D0 (en) * 2003-10-13 2003-11-19 Glaxosmithkline Biolog Sa Immunogenic compositions
US20050239733A1 (en) * 2003-10-31 2005-10-27 Coley Pharmaceutical Gmbh Sequence requirements for inhibitory oligonucleotides
WO2005063286A1 (en) 2003-12-23 2005-07-14 Arbor Vita Corporation Antibodies for oncogenic strains of hpv and methods of their use
EP1550458A1 (en) * 2003-12-23 2005-07-06 Vectron Therapeutics AG Synergistic liposomal adjuvants
TWI235440B (en) * 2004-03-31 2005-07-01 Advanced Semiconductor Eng Method for making leadless semiconductor package
KR20070008625A (ko) * 2004-04-05 2007-01-17 화이자 프로덕츠 인코포레이티드 미세유체화된 수중유 유화액 및 백신 조성물
GB0411411D0 (en) * 2004-05-21 2004-06-23 Glaxosmithkline Biolog Sa Vaccines
WO2005117958A1 (en) 2004-05-28 2005-12-15 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Vaccine compositions comprising virosomes and a saponin adjuvant
WO2006002422A2 (en) 2004-06-24 2006-01-05 Novartis Vaccines And Diagnostics Inc. Compounds for immunopotentiation
AU2005333126A1 (en) * 2004-07-18 2006-12-21 Csl Limited Methods and compositions for inducing innate immune responses
EP1781325A2 (en) * 2004-07-18 2007-05-09 CSL Limited Immuno stimulating complex and oligonucleotide formulations for inducing enhanced interferon-gamma responses
DE102004038535B4 (de) * 2004-08-06 2012-10-04 Universitätsklinikum Schleswig-Holstein Zelluläre Einschleusung von Nukleinsäurewirkstoffen
WO2006076678A2 (en) * 2005-01-13 2006-07-20 The Johns Hopkins University Prostate stem cell antigen vaccines and uses thereof
NZ555937A (en) 2005-01-27 2009-05-31 Childrens Hosp & Res Ct Oak GNA1870-based vesicle vaccines for broad spectrum protection against diseases caused by Neisseria meningitidis
MX2007014390A (es) * 2005-05-19 2008-02-12 Glaxosmithkline Biolog Sa Composicion de vacuna que comprende subunidad b de termo toxina e. coli y antigeno y adyuvante.
US8703095B2 (en) * 2005-07-07 2014-04-22 Sanofi Pasteur S.A. Immuno-adjuvant emulsion
AR054822A1 (es) * 2005-07-07 2007-07-18 Sanofi Pasteur Emulsion inmuno adyuvante
FR2888117B1 (fr) * 2005-07-07 2009-10-09 Sanofi Pasteur Sa Composition vaccinale comprenant une emulsion thermoreversible
DK1909830T3 (da) * 2005-08-02 2011-12-19 Novartis Vaccines & Diagnostic Formindskelse af interferens mellem olieholdige adjuvanser og antigener indeholdende overfladeaktivt middel
US20090087456A1 (en) * 2005-09-07 2009-04-02 James Edward Eyles Adjuvanted vaccine
KR20080066712A (ko) * 2005-09-30 2008-07-16 티티아이 엘뷰 가부시키가이샤 관능화된 미세바늘 경피 약물 전달 시스템, 장치 및 방법
US20070078376A1 (en) * 2005-09-30 2007-04-05 Smith Gregory A Functionalized microneedles transdermal drug delivery systems, devices, and methods
US20070083186A1 (en) * 2005-09-30 2007-04-12 Darrick Carter Transdermal drug delivery systems, devices, and methods employing novel pharmaceutical vehicles
WO2007052163A2 (en) * 2005-11-01 2007-05-10 Novartis Vaccines And Diagnostics Gmbh & Co Kg Cell-derived viral vaccines with low levels of residual cell dna by beta-propiolactone treatment
US11707520B2 (en) 2005-11-03 2023-07-25 Seqirus UK Limited Adjuvanted vaccines with non-virion antigens prepared from influenza viruses grown in cell culture
EP2368572B1 (en) 2005-11-04 2020-03-04 Seqirus UK Limited Adjuvanted vaccines with non-virion antigens prepared from influenza viruses grown in cell culture
EP1951300B1 (en) * 2005-11-04 2011-06-22 Novartis Vaccines and Diagnostics S.r.l. Changing th1/th2 balance in split influenza vaccines with adjuvants
US20110180430A1 (en) * 2005-11-04 2011-07-28 Novartis Vaccines And Diagnostics Srl Adjuvanted influenza vaccines including cytokine-inducing agents
GB0524408D0 (en) * 2005-11-30 2006-01-11 Glaxosmithkline Biolog Sa Vaccines
GB0524409D0 (en) * 2005-11-30 2006-01-11 Glaxosmithkline Biolog Sa Vaccines
TWI457133B (zh) 2005-12-13 2014-10-21 Glaxosmithkline Biolog Sa 新穎組合物
EP1973608A1 (en) 2005-12-14 2008-10-01 Cytos Biotechnology AG Immunostimulatory nucleic acid packaged particles for the treatment of hypersensitivity
GB0607088D0 (en) 2006-04-07 2006-05-17 Glaxosmithkline Biolog Sa Vaccine
EP1973564B1 (en) 2005-12-22 2016-11-09 GlaxoSmithKline Biologicals S.A. Vaccine comprising streptococcus pneumoniae capsular polysaccharide conjugates
WO2007079190A2 (en) * 2005-12-29 2007-07-12 Tti Ellebeau, Inc. Device and method for enhancing immune response by electrical stimulation
FR2896162B1 (fr) * 2006-01-13 2008-02-15 Sanofi Pasteur Sa Emulsion huile dans eau thermoreversible
KR101541383B1 (ko) 2006-03-30 2015-08-03 글락소스미스클라인 바이오로지칼즈 에스.에이. 면역원성 조성물
SG173336A1 (en) 2006-03-31 2011-08-29 Novartis Ag Combined mucosal and parenteral immunization against hiv
EP2390358A1 (en) 2006-06-02 2011-11-30 GlaxoSmithKline Biologicals S.A. Method for identifying whether a patient will be responder or not to immunotherapy based on the differential expression of the GZMK gene
WO2007144150A1 (en) 2006-06-12 2007-12-21 Cytos Biotechnology Ag Processes for packaging oligonucleotides into virus-like particles of rna bacteriophages
US9364525B2 (en) 2006-07-18 2016-06-14 Glaxosmithkline Biologicals Sa Vaccines for malaria
WO2008012538A2 (en) 2006-07-25 2008-01-31 The Secretary Of State For Defence Live vaccine strains of francisella
US20090181078A1 (en) * 2006-09-26 2009-07-16 Infectious Disease Research Institute Vaccine composition containing synthetic adjuvant
ES2657392T3 (es) 2006-09-26 2018-03-05 Infectious Disease Research Institute Composición de vacuna que contiene un adyuvante sintético
WO2008057529A2 (en) * 2006-11-06 2008-05-15 Coley Pharmaceutical Group, Inc. Peptide-based vaccine compositions to endogenous cholesteryl ester transfer protein (cetp)
CN101563090B (zh) * 2006-11-20 2013-01-02 杜科姆公司 包含南美皂皮树皂苷的含脂质颗粒用于治疗癌症的用途
WO2008112125A1 (en) * 2007-03-09 2008-09-18 Merck & Co., Inc. Papillomavirus vaccine compositions
US8518903B2 (en) 2007-04-19 2013-08-27 University of Pittsburgh—of the Commonwealth System of Higher Education Use of toll-like receptor-9 agonists
KR20100010509A (ko) * 2007-05-17 2010-02-01 콜레이 파마시티컬 그룹, 인코포레이티드 면역자극 효과를 갖는 ａ 클래스 올리고뉴클레오타이드
US20100183662A1 (en) 2007-06-26 2010-07-22 Ralph Leon Biemans Vaccine comprising streptococcus pneumoniae capsular polysaccharide conjugates
WO2009027105A2 (en) 2007-08-31 2009-03-05 Neurimmune Therapeutics Ag Method of providing patient specific immune response in amyloidoses and protein aggregation disorders
EP2034022A1 (en) * 2007-09-10 2009-03-11 Universite Libre De Bruxelles Leukotriene B4 binding soluble lipocalin receptor from ixodes ricinus
PL2198007T3 (pl) 2007-09-14 2018-03-30 Sanofi Pasteur Biologics, Llc Kompozycje farmaceutyczne zawierające toksoidy A i B Clostridium difficile
CA2699853A1 (en) 2007-09-17 2009-03-26 Oncomethylome Sciences Sa Improved detection of mage-a expression
EP2197497B1 (en) 2007-09-27 2016-06-01 ImmunoVaccine Technologies Inc. Use of liposomes in a carrier comprising a continuous hydrophobic phase for delivery of polynucleotides in vivo
EP2045263A1 (en) 2007-10-02 2009-04-08 Universite Libre De Bruxelles Identification and molecular characterisation of salivary metalloproteases expressed in the tick salivary glands
US20100209452A1 (en) * 2007-10-03 2010-08-19 Immunovaccine Technologies, Inc Compositions comprising an antigen, an amphipathic compound and a hydrophobic carrier, and uses thereof
EP2244695A1 (en) 2007-12-07 2010-11-03 Novartis AG Compositions for inducing immune responses
WO2009105641A2 (en) 2008-02-20 2009-08-27 New York University Preventing and treating amyloid-beta deposition by stimulation of innate immunity
ES2557282T3 (es) 2008-03-10 2016-01-25 Children's Hospital & Research Center At Oakland Proteínas quiméricas de unión al factor H (fHBP) que contienen un dominio B heterólogo, y métodos de uso
EP2296696B1 (en) 2008-06-05 2014-08-27 ImmunoVaccine Technologies Inc. Compositions comprising liposomes, an antigen, a polynucleotide and a carrier comprising a continuous phase of a hydrophobic substance
JP5659332B2 (ja) 2008-06-27 2015-01-28 ゾエティス・エルエルシー 新規なアジュバント組成物
AU2012258478B2 (en) * 2008-06-27 2013-10-03 Zoetis Services Llc Novel adjuvant compositions
WO2010036293A1 (en) * 2008-09-24 2010-04-01 The Johns Hokins University Malaria vaccine
WO2010041143A2 (en) * 2008-10-08 2010-04-15 Immune Solutions Limited Oral vaccines for producing mucosal immunity
CN102245198B (zh) 2008-12-09 2016-08-17 辉瑞疫苗有限责任公司 IgE CH3肽疫苗
GB0901411D0 (en) 2009-01-29 2009-03-11 Secr Defence Treatment
GB0901423D0 (en) 2009-01-29 2009-03-11 Secr Defence Treatment
KR101825697B1 (ko) 2009-02-10 2018-02-05 노파르티스 아게 감소된 양의 스쿠알렌을 포함하는 인플루엔자 백신
SG2014014385A (en) * 2009-02-17 2014-04-28 Glaxosmithkline Biolog Sa Inactivated dengue virus vaccine with aluminium-free adjuvant
AU2014200047C1 (en) * 2009-02-17 2017-01-19 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Inactivated dengue virus vaccine with aluminium-free adjuvant
KR20120002534A (ko) 2009-03-17 2012-01-05 엠디엑스헬스 에스에이 유전자 발현의 향상된 검출
GB0906234D0 (en) 2009-04-14 2009-05-20 Secr Defence Vaccine
PT2437753T (pt) 2009-06-05 2016-11-23 Infectious Disease Res Inst Adjuvantes lipídicos de glucopiranosilo sintéticos e composições de vacina contendo os mesmos
RU2518291C2 (ru) 2009-07-30 2014-06-10 Пфайзер Вэксинс ЭлЭлСи Антигенные tau-пептиды и их применения
GB0913681D0 (en) 2009-08-05 2009-09-16 Glaxosmithkline Biolog Sa Immunogenic composition
GB0913680D0 (en) 2009-08-05 2009-09-16 Glaxosmithkline Biolog Sa Immunogenic composition
AU2010293059B2 (en) * 2009-08-26 2017-03-16 Selecta Biosciences, Inc. Compositions that induce T cell help
SG178447A1 (en) 2009-09-03 2012-03-29 Pfizer Vaccines Llc Pcsk9 vaccine
GB0917457D0 (en) 2009-10-06 2009-11-18 Glaxosmithkline Biolog Sa Method
US9234037B2 (en) 2009-10-27 2016-01-12 Ucb Biopharma Sprl Method to generate antibodies to ion channels
GB0922434D0 (en) 2009-12-22 2010-02-03 Ucb Pharma Sa antibodies and fragments thereof
CN102781963B (zh) 2009-10-27 2018-02-16 Ucb医药有限公司 功能修饰性NAv1.7抗体
US20130034573A1 (en) 2009-12-22 2013-02-07 Celldex Therapeutics, Inc. Vaccine compositions
WO2012020326A1 (en) * 2010-03-18 2012-02-16 Novartis Ag Adjuvanted vaccines for serogroup b meningococcus
WO2011126863A1 (en) 2010-03-30 2011-10-13 Children's Hospital & Research Center Oakland Factor h binding proteins (fhbp) with altered properties and methods of use thereof
EA201500857A1 (ru) 2010-05-26 2016-06-30 Селекта Байосайенсиз, Инк. Комбинированные вакцины с синтетическими наноносителями
EP2942061A3 (en) 2010-06-07 2016-01-13 Pfizer Vaccines LLC Ige ch3 peptide vaccine
WO2011154863A1 (en) 2010-06-07 2011-12-15 Pfizer Inc. Her-2 peptides and vaccines
US20130259948A1 (en) 2010-09-21 2013-10-03 National Institute Of Immunology Spray dried powder formulation for vaccines entrapping alum and the antigen in biodegradable polymer particles
US9072760B2 (en) 2010-09-24 2015-07-07 University of Pittsburgh—of the Commonwealth System of Higher Education TLR4 inhibitors for the treatment of human infectious and inflammatory disorders
US10668092B2 (en) 2010-09-24 2020-06-02 The John Hopkins University Compositions and methods for treatment of inflammatory disorders
EP2637687B1 (en) 2010-11-08 2021-01-06 Infectious Disease Research Institute Vaccines comprising non-specific nucleoside hydrolase and sterol 24-c-methyltransferase (smt) polypeptides for the treatment and diagnosis of leishmaniasis
WO2012088425A2 (en) 2010-12-22 2012-06-28 University Of Pittsburgh - Of The Commonwealth System Of Higher Education Gap junction-enhancing agents for treatment of necrotizing enterocolitis and inflammatory bowel disease
GB201022007D0 (en) 2010-12-24 2011-02-02 Imp Innovations Ltd DNA-sensor
CA2826920A1 (en) 2011-02-15 2012-08-23 Immune Design Corp. Methods for enhancing immunogen specific immune responses by vectored vaccines
WO2012131504A1 (en) 2011-03-02 2012-10-04 Pfizer Inc. Pcsk9 vaccine
MX350795B (es) 2011-04-08 2017-09-19 Inmune Design Corp Composiciones inmunogenicas y metodos para utilizar las composiciones para inducir respuestas inmunes humorales y celulares.
PL3505531T3 (pl) 2011-04-22 2024-03-11 Wyeth Llc Kompozycje związane ze zmutowaną toksyną Clostridium difficile i sposoby ich wytwarzania
AU2012257771C1 (en) 2011-05-17 2015-12-03 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Vaccine against Streptococcus pneumoniae
EA201490381A1 (ru) 2011-07-29 2014-06-30 Селекта Байосайенсиз, Инк. Синтетические наноносители, которые стимулируют формирование гуморального иммунного ответа и иммунного ответа, опосредованного цитотоксическими т-лимфоцитами (ctl)
GB201113570D0 (en) 2011-08-05 2011-09-21 Glaxosmithkline Biolog Sa Vaccine
CN103998058B (zh) 2011-10-06 2021-11-05 免疫疫苗技术有限公司 包括激活或增加tlr2活性的佐剂的脂质体组合物及其应用
MY184576A (en) 2011-11-23 2021-04-06 In3Bio Ltd Recombinant proteins and their therapeutic uses
LT2811981T (lt) 2012-02-07 2019-06-10 Infectious Disease Research Institute Pagerintos adjuvanto kompozicijos, apimančios tlr4 agonistus, ir jų panaudojimo būdai
EP2659906A1 (en) 2012-05-01 2013-11-06 Affiris AG Compositions
SG10201603896RA (en) 2012-05-04 2016-07-28 Pfizer Prostate-associated antigens and vaccine-based immunotherapy regimens
LT2850431T (lt) 2012-05-16 2018-06-25 Immune Design Corp. Vakcinos, skirtos hsv-2
US9562066B2 (en) * 2012-09-25 2017-02-07 University Of Pittsburgh-Of The Commonwealth System Of Higher Education Oral therapy of necrotizing enterocolitis
BR122016023101B1 (pt) 2012-10-21 2022-03-22 Pfizer Inc Polipeptídeo, composição imunogênica que o compreende, bem como célula recombinante derivada de clostridium difficile
JP2016502995A (ja) * 2012-12-17 2016-02-01 ユーロシネ ヴァクシンズ アクチエボラーグ 鼻腔内予防接種投薬レジメン
DK2961388T3 (da) * 2013-03-01 2019-07-08 Astex Pharmaceuticals Inc Kombinationer af lægemidler
BR112015023402A2 (pt) 2013-03-15 2017-08-22 Bioven 3 Ltd Proteínas sintéticas de automontagem
EP4059450A1 (en) * 2013-03-15 2022-09-21 Corium, Inc. Microstructure array for delivery of active agents
WO2014160987A2 (en) 2013-03-28 2014-10-02 Infectious Disease Research Institute Vaccines comprising leishmania polypeptides for the treatment and diagnosis of leishmaniasis
JP6426706B2 (ja) 2013-04-18 2018-11-21 イミューン デザイン コーポレイション がん処置で使用するためのｇｌａ単剤療法
AU2014385320B2 (en) 2013-05-15 2019-10-10 The Governors Of The University Of Alberta E1E2 HCV vaccines and methods of use
US9463198B2 (en) 2013-06-04 2016-10-11 Infectious Disease Research Institute Compositions and methods for reducing or preventing metastasis
CA2924526A1 (en) * 2013-09-19 2015-03-26 Paul Joseph Dominowski Water-in-oil emulsions comprising immunostimulatory oligonucleotides
KR102411781B1 (ko) 2013-12-31 2022-06-22 인펙셔스 디지즈 리서치 인스티튜트 (아이디알아이) 단일 바이알 백신 제형
NZ755769A (en) 2014-01-21 2023-06-30 Pfizer Immunogenic compositions comprising conjugated capsular saccharide antigens and uses thereof
US11160855B2 (en) 2014-01-21 2021-11-02 Pfizer Inc. Immunogenic compositions comprising conjugated capsular saccharide antigens and uses thereof
EP3104877B1 (en) 2014-02-11 2020-01-22 The USA, as represented by The Secretary, Department of Health and Human Services Pcsk9 vaccine and methods of using the same
CA2955015A1 (en) 2014-07-15 2016-01-21 Immune Design Corp. Prime-boost regimens with a tlr4 agonist adjuvant and a lentiviral vector
JP6796057B2 (ja) 2014-07-23 2020-12-02 チルドレンズ ホスピタル アンド リサーチ センター アット オークランド Ｈ因子結合タンパク質変異体及びその使用方法
IL252915B2 (en) 2015-01-15 2024-04-01 Pfizer Immunogenic preparations for use in pneumococcal vaccines
AR103427A1 (es) 2015-01-16 2017-05-10 Zoetis Services Llc Vacuna contra la fiebre aftosa
CN104857511B (zh) * 2015-02-13 2018-03-30 浙江大学 含人参皂甙的疫苗稀释剂
EP3078381A1 (en) * 2015-04-10 2016-10-12 Warszawski Uniwersytet Medyczny Horse chestnut extract or escins for the treatment of alzheimer's disease
AU2016271857B2 (en) 2015-06-03 2020-05-28 Affiris Ag IL-23-P19 vaccines
WO2017005851A1 (en) 2015-07-07 2017-01-12 Affiris Ag Vaccines for the treatment and prevention of ige mediated diseases
TWI756893B (zh) 2015-07-21 2022-03-01 美商輝瑞股份有限公司 包含經共軛之莢膜糖抗原的致免疫性組成物、包含該致免疫性組成物之套組及彼等之用途
JP6884145B2 (ja) 2015-11-20 2021-06-09 ファイザー・インク 肺炎連鎖球菌ワクチンにおいて用いるための免疫原性組成物
JP6820935B2 (ja) 2016-01-19 2021-01-27 ファイザー・インク がんワクチン
CN105770887A (zh) * 2016-03-04 2016-07-20 邓招红 一种用于hbv疫苗的佐剂及其制备方法
US11162945B2 (en) 2016-04-11 2021-11-02 Board Of Regents, The University Of Texas System Methods and compositions for detecting single T cell receptor affinity and sequence
JP7195147B2 (ja) 2016-05-16 2022-12-23 アクセス ツー アドバンスト ヘルス インスティチュート Ｐｅｇ化リポソームおよび使用方法
DK3458475T3 (da) 2016-05-16 2022-09-12 Access To Advanced Health Inst Formulering, der indeholder tlr-agonist, og anvendelsesfremgangsmåder
IL298227B2 (en) 2016-06-01 2024-09-01 Access To Advanced Health Inst Nanoalum particles containing a fixing factor
CA3036218A1 (en) 2016-09-16 2018-03-22 Infectious Disease Research Institute Vaccines comprising mycobacterium leprae polypeptides for the prevention, treatment, and diagnosis of leprosy
WO2018134693A1 (en) 2017-01-20 2018-07-26 Pfizer Inc. Immunogenic compositions for use in pneumococcal vaccines
SG11201909331UA (en) 2017-04-18 2019-11-28 Fujifilm Cellular Dynamics Inc Antigen-specific immune effector cells
JP2020524143A (ja) 2017-06-15 2020-08-13 インフェクシャス ディズィーズ リサーチ インスティチュート ナノ構造脂質担体、安定エマルジョン、およびその使用
MX2020000636A (es) 2017-07-18 2020-08-20 In3Bio Ltd Proteinas sinteticas y usos terapeuticos de las mismas.
EP3678695A1 (en) 2017-09-08 2020-07-15 Infectious Disease Research Institute Liposomal formulations comprising saponin and methods of use
US20200254081A1 (en) 2017-09-28 2020-08-13 Pfizer Inc. Compositions and methods for eliciting an immune response against clostridium difficile
US11633471B2 (en) 2018-03-06 2023-04-25 Unm Rainforest Innovations Compositions and methods for reducing serum triglycerides
US11260119B2 (en) 2018-08-24 2022-03-01 Pfizer Inc. Escherichia coli compositions and methods thereof
EP3856241A4 (en) * 2018-09-27 2022-10-05 Genocea Biosciences, Inc. TREATMENT PROCESSES
JP2022513076A (ja) 2018-11-19 2022-02-07 ボード オブ リージェンツ，ザ ユニバーシティ オブ テキサス システム Ｃａｒおよびｔｃｒ形質導入用のモジュール式ポリシストロニックベクター
AU2019386140A1 (en) 2018-11-28 2021-06-24 Board Of Regents, The University Of Texas System Multiplex genome editing of immune cells to enhance functionality and resistance to suppressive environment
BR112021010248A2 (pt) 2018-11-29 2021-08-17 Board Of Regents, The University Of Texas System métodos para expansão ex vivo de células naturais killer e uso dos mesmos
US20220016229A1 (en) 2018-12-12 2022-01-20 Pfizer Inc. Immunogenic Multiple Hetero-Antigen Polysaccharide-Protein Conjugates and uses thereof
GB201901608D0 (en) 2019-02-06 2019-03-27 Vib Vzw Vaccine adjuvant conjugates
JP7239509B6 (ja) 2019-02-22 2023-03-28 ファイザー・インク 細菌多糖類を精製するための方法
WO2020201985A1 (en) 2019-04-01 2020-10-08 Pfizer Inc. Compositions and methods for eliciting an immune response against clostridium difficile
US20220184199A1 (en) 2019-04-10 2022-06-16 Pfizer Inc. Immunogenic compositions comprising conjugated capsular saccharide antigens, kits comprising the same and uses thereof
WO2020232407A1 (en) * 2019-05-16 2020-11-19 Trustees Of Tufts College Peptide antibiotics and methods of use thereof
JP2022532944A (ja) 2019-05-25 2022-07-20 アクセス ツー アドバンスト ヘルス インスティチュート アジュバントワクチンエマルジョンを噴霧乾燥するための組成物および方法
EP3990010A1 (en) 2019-06-25 2022-05-04 In3Bio Ltd. Stabilized chimeric synthetic proteins and therapeutic uses thereof
CA3159573A1 (en) 2019-11-01 2021-05-06 Pfizer Inc. Escherichia coli compositions and methods thereof
US20220396797A1 (en) 2019-11-15 2022-12-15 Infectious Disease Research Institute Rig-i agonist and adjuvant formulation for tumor treatment
CN112972672B (zh) * 2019-12-13 2024-04-19 远大赛威信生命科学(南京)有限公司 药物组合物及其用途
CN111057738A (zh) * 2020-01-02 2020-04-24 浙江大学 C2c12细胞在疫苗佐剂机制研究中的用途和研究分析方法
CA3168337A1 (en) 2020-02-17 2021-08-26 Marie-Andree Forget Methods for expansion of tumor infiltrating lymphocytes and use thereof
WO2021165847A1 (en) 2020-02-21 2021-08-26 Pfizer Inc. Purification of saccharides
IL295632A (en) 2020-02-23 2022-10-01 Pfizer Escherichia coli preparations and their methods
AU2021252164A1 (en) 2020-04-09 2022-12-15 Finncure Oy Mimetic nanoparticles for preventing the spreading and lowering the infection rate of novel coronaviruses
EP4168032A2 (en) 2020-06-19 2023-04-26 Pfizer Inc. Immunogenic compositions against clostridioides (clostridium) difficile and methods thereof
EP4000603A4 (en) * 2020-06-30 2023-08-09 Eyegene, Inc. SAPONIN-INDUCED HEMOLYSIS INHIBITION COMPOSITION CONTAINING A CATIONIC LIPOSOME
US20230310569A1 (en) 2020-09-04 2023-10-05 Access To Advanced Health Institute Genetically-adjuvanted rna vaccines
CA3174411A1 (en) 2020-09-04 2022-03-10 Ryan M. Kramer Co-lyophilized rna and nanostructured lipid carrier
TW202227467A (zh) 2020-10-27 2022-07-16 美商輝瑞大藥廠 大腸桿菌組合物及其方法
IL302413A (en) 2020-11-04 2023-06-01 Pfizer Immunogenic preparations for use in pneumococcal vaccines
CA3200968A1 (en) 2020-11-10 2022-05-19 Pfizer Inc. Immunogenic compositions comprising conjugated capsular saccharide antigens and uses thereof
CA3201499A1 (en) 2020-11-13 2022-05-19 Catamaran Bio, Inc. Genetically modified natural killer cells and methods of use thereof
US20220162288A1 (en) 2020-11-25 2022-05-26 Catamaran Bio, Inc. Cellular therapeutics engineered with signal modulators and methods of use thereof
US20220202923A1 (en) 2020-12-23 2022-06-30 Pfizer Inc. E. coli fimh mutants and uses thereof
MX2023007648A (es) 2020-12-23 2023-08-29 Access To Advanced Health Inst Adyuvantes de vacuna de solanesol y métodos para prepararlos.
CA3211240A1 (en) 2021-02-19 2022-08-25 Sanofi Pasteur Inc. Meningococcal b recombinant vaccine
PE20240090A1 (es) 2021-05-28 2024-01-16 Pfizer Composiciones inmunogenas que comprenden antigenos de sacarido capsular conjugados y sus usos
EP4346893A2 (en) 2021-05-28 2024-04-10 Pfizer Inc. Immunogenic compositions comprising conjugated capsular saccharide antigens and uses thereof
CA3228262A1 (en) 2021-08-04 2023-02-09 The Regents Of The University Of Colorado, A Body Corporate Lat activating chimeric antigen receptor t cells and methods of use thereof
CN113797329A (zh) * 2021-10-19 2021-12-17 启锰生物科技(江苏)有限公司 一种二价锰佐剂和CpG佐剂的疫苗佐剂组合物及其制作方法
EP4433080A1 (en) 2021-11-18 2024-09-25 Matrivax, Inc. Immunogenic fusion protein compositions and methods of use thereof
WO2023089556A1 (en) 2021-11-22 2023-05-25 Pfizer Inc. Reducing risk of antigen mimicry in immunogenic medicaments
CN116212012A (zh) * 2021-12-02 2023-06-06 上海泽润生物科技有限公司 复合佐剂以及包含它的疫苗制剂
KR20240128715A (ko) 2022-01-13 2024-08-26 화이자 인코포레이티드 접합된 피막 사카라이드 항원을 포함하는 면역원성 조성물 및 그의 용도
WO2023161817A1 (en) 2022-02-25 2023-08-31 Pfizer Inc. Methods for incorporating azido groups in bacterial capsular polysaccharides
WO2023211972A1 (en) 2022-04-28 2023-11-02 Medical University Of South Carolina Chimeric antigen receptor modified regulatory t cells for treating cancer
WO2023218322A1 (en) 2022-05-11 2023-11-16 Pfizer Inc. Process for producing of vaccine formulations with preservatives
WO2024052882A1 (en) 2022-09-09 2024-03-14 Access To Advanced Health Institute Immunogenic vaccine composition incorporating a saponin
WO2024110827A1 (en) 2022-11-21 2024-05-30 Pfizer Inc. Methods for preparing conjugated capsular saccharide antigens and uses thereof
US20240181028A1 (en) 2022-11-22 2024-06-06 Pfizer Inc. Immunogenic compositions comprising conjugated capsular saccharide antigens and uses thereof
WO2024116096A1 (en) 2022-12-01 2024-06-06 Pfizer Inc. Pneumococcal conjugate vaccine formulations
US20240189410A1 (en) 2022-12-13 2024-06-13 Pfizer Inc. Immunogenic compositions and methods for eliciting an immune response against clostridioides (clostridium) difficile
CN116159134A (zh) * 2023-01-31 2023-05-26 四川大学 七叶皂苷和/或其盐化合物作为佐剂在疫苗中的应用
WO2024166008A1 (en) 2023-02-10 2024-08-15 Pfizer Inc. Immunogenic compositions comprising conjugated capsular saccharide antigens and uses thereof
WO2024201324A2 (en) 2023-03-30 2024-10-03 Pfizer Inc. Immunogenic compositions comprising conjugated capsular saccharide antigens and uses thereof
WO2024214016A1 (en) 2023-04-14 2024-10-17 Pfizer Inc. Immunogenic compositions comprising conjugated capsular saccharide antigens and uses thereof

Family Cites Families (38)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4436727A (en) 1982-05-26 1984-03-13 Ribi Immunochem Research, Inc. Refined detoxified endotoxin product
SE8205892D0 (sv) 1982-10-18 1982-10-18 Bror Morein Immunogent membranproteinkomplex, sett for framstellning och anvendning derav som immunstimulerande medel och sasom vaccin
US4806350A (en) * 1986-04-18 1989-02-21 Norden Laboratories, Inc. Vaccine formulation
CA1331443C (en) 1987-05-29 1994-08-16 Charlotte A. Kensil Saponin adjuvant
US5057540A (en) 1987-05-29 1991-10-15 Cambridge Biotech Corporation Saponin adjuvant
EP0468520A3 (en) 1990-07-27 1992-07-01 Mitsui Toatsu Chemicals, Inc. Immunostimulatory remedies containing palindromic dna sequences
UA40597C2 (uk) 1992-06-25 2001-08-15 Смітклайн Бічем Байолоджікалс С.А. Вакцинна композиція,спосіб лікування ссавців, що страждають або сприйнятливі до інфекції, спосіб лікування ссавців, що страждають на рак, спосіб одержання вакцинної композиції, композиція ад'ювантів
ES2162139T5 (es) 1993-03-23 2008-05-16 Smithkline Beecham Biologicals S.A. Composiciones de vacuna que contienen monofosforil-lipido a 3-o-desacilado.
GB9326253D0 (en) * 1993-12-23 1994-02-23 Smithkline Beecham Biolog Vaccines
CA2194761C (en) 1994-07-15 2006-12-19 Arthur M. Krieg Immunomodulatory oligonucleotides
US6207646B1 (en) * 1994-07-15 2001-03-27 University Of Iowa Research Foundation Immunostimulatory nucleic acid molecules
AUPM873294A0 (en) 1994-10-12 1994-11-03 Csl Limited Saponin preparations and use thereof in iscoms
GB9503863D0 (en) 1995-02-25 1995-04-19 Smithkline Beecham Biolog Vaccine compositions
GB9620795D0 (en) 1996-10-05 1996-11-20 Smithkline Beecham Plc Vaccines
UA56132C2 (uk) * 1995-04-25 2003-05-15 Смітклайн Бічем Байолоджікалс С.А. Композиція вакцини (варіанти), спосіб стабілізації qs21 відносно гідролізу (варіанти), спосіб приготування композиції вакцини
US6251405B1 (en) 1995-06-07 2001-06-26 Connaught Laboratories, Inc. Immunological combination compositions and methods
ES2241042T3 (es) 1996-10-11 2005-10-16 The Regents Of The University Of California Conjugados de polinucleotido inmunoestimulador/ molecula inmunomoduladora.
US5980898A (en) 1996-11-14 1999-11-09 The United States Of America As Represented By The U.S. Army Medical Research & Material Command Adjuvant for transcutaneous immunization
US6231859B1 (en) * 1996-12-02 2001-05-15 Aquila Biopharmaceuticals, Inc. Saponin adjuvant compositions
JP4153999B2 (ja) 1996-12-20 2008-09-24 アルザ・コーポレーション 経皮作用剤流量を強化するための組成物と方法
EP0855184A1 (en) * 1997-01-23 1998-07-29 Grayson B. Dr. Lipford Pharmaceutical composition comprising a polynucleotide and an antigen especially for vaccination
JP2001513776A (ja) * 1997-02-28 2001-09-04 ユニバーシティ オブ アイオワ リサーチ ファウンデーション ＬＰＳ関連障害の処置における非メチル化ＣｐＧジヌクレオチドを含む核酸の使用
US6406705B1 (en) 1997-03-10 2002-06-18 University Of Iowa Research Foundation Use of nucleic acids containing unmethylated CpG dinucleotide as an adjuvant
AU753688B2 (en) 1997-03-10 2002-10-24 Ottawa Civic Loeb Research Institute Use of nucleic acids containing unmethylated CpG dinucleotide as an adjuvant
US6627198B2 (en) * 1997-03-13 2003-09-30 Corixa Corporation Fusion proteins of Mycobacterium tuberculosis antigens and their uses
US6589940B1 (en) * 1997-06-06 2003-07-08 Dynavax Technologies Corporation Immunostimulatory oligonucleotides, compositions thereof and methods of use thereof
AU753172B2 (en) 1997-06-06 2002-10-10 Dynavax Technologies Corporation Immunostimulatory oligonucleotides, compositions thereof and methods of use thereof
GB9711990D0 (en) 1997-06-11 1997-08-06 Smithkline Beecham Biolog Vaccine
EP0988053A1 (en) * 1997-06-11 2000-03-29 Aquila Biopharmaceuticals, Inc. Purified saponins as oral adjuvants
CA2654522C (en) 1997-08-29 2014-01-28 Antigenics Inc. Compositions comprising the adjuvant qs-21 and polysorbate or cyclodextrin as exipient
GB9718901D0 (en) * 1997-09-05 1997-11-12 Smithkline Beecham Biolog Vaccine
GB9727262D0 (en) * 1997-12-24 1998-02-25 Smithkline Beecham Biolog Vaccine
SI1077722T1 (sl) * 1998-05-22 2007-02-28 Ottawa Health Research Inst Metode in produkti za induciranje sluznicne imunosti
US6562798B1 (en) 1998-06-05 2003-05-13 Dynavax Technologies Corp. Immunostimulatory oligonucleotides with modified bases and methods of use thereof
US7049302B1 (en) * 1998-08-10 2006-05-23 Antigenics Inc. Compositions of CPG and saponin adjuvants and uses thereof
KR100922031B1 (ko) * 1999-04-19 2009-10-19 글락소스미스클라인 바이오로지칼즈 에스.에이. 백신
WO2001051083A2 (en) * 2000-01-13 2001-07-19 Antigenics Inc. Innate immunity-stimulating compositions of cpg and saponin and methods thereof
CA2396871A1 (en) * 2000-01-20 2001-12-20 Ottawa Health Research Institute Immunostimulatory nucleic acids for inducing a th2 immune response

Also Published As

Publication number Publication date
US20030161834A1 (en) 2003-08-28
EP1187629A2 (en) 2002-03-20
CZ20013774A3 (cs) 2002-03-13
ES2228497T3 (es) 2005-04-16
NO20015073D0 (no) 2001-10-18
TR200103018T2 (tr) 2002-02-21
CN1372473A (zh) 2002-10-02
US6544518B1 (en) 2003-04-08
IL145982A0 (en) 2002-07-25
WO2000062800A3 (en) 2001-01-11
KR100922031B1 (ko) 2009-10-19
HK1044484B (zh) 2005-07-29
CA2370697C (en) 2012-03-06
JP2008063342A (ja) 2008-03-21
JP4897547B2 (ja) 2012-03-14
AU764969B2 (en) 2003-09-04
ATE276758T1 (de) 2004-10-15
TWI232753B (en) 2005-05-21
DE60014076T2 (de) 2005-10-13
BR0010612B1 (pt) 2014-02-18
JP2007191491A (ja) 2007-08-02
NO331688B1 (no) 2012-02-27
PT1187629E (pt) 2005-02-28
US7399472B2 (en) 2008-07-15
JP2002542203A (ja) 2002-12-10
NO20015073L (no) 2001-11-22
DE60014076D1 (de) 2004-10-28
EP1187629B1 (en) 2004-09-22
US20080095788A1 (en) 2008-04-24
KR20070114854A (ko) 2007-12-04
AU4114900A (en) 2000-11-02
CZ303515B6 (cs) 2012-11-07
PL351893A1 (en) 2003-06-30
BRPI0010612B8 (pt) 2021-05-25
US20080311156A1 (en) 2008-12-18
DK1187629T3 (da) 2005-01-17
HUP0200815A3 (en) 2004-07-28
JP4805242B2 (ja) 2011-11-02
BR0010612A (pt) 2002-02-13
EP2322210A1 (en) 2011-05-18
CA2370697A1 (en) 2000-10-26
HUP0200815A2 (en) 2002-08-28
WO2000062800A2 (en) 2000-10-26
CN1227030C (zh) 2005-11-16
HU229255B1 (en) 2013-10-28
HK1044484A1 (en) 2002-10-25

Similar Documents

Publication Publication Date Title
AU764969B2 (en) Vaccines
US6558670B1 (en) Vaccine adjuvants
EP1432442B1 (en) The use of liposomes containing saponins and sterols in the manufacture of intradermal vaccines
US20040047869A1 (en) Adjuvant composition comprising an immunostimulatory oligonucleotide and a tocol
AU3419799A (en) Adjuvant compositions
JP5307859B2 (ja) ワクチン
MXPA01010654A (en) Vaccines
MXPA00009887A (en) Adjuvant compositions
CZ20003732A3 (cs) Pomocný prostředek